(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
養殖に使用される餌生物給餌用の組成物であって、
少なくとも２５重量％のリン脂質を含む２〜７５重量％の海洋生物リン脂質含有成分と、
少なくとも３０重量％の前記組成物における総ＤＨＡ含有量となる量のトリグリセリドおよび／またはジグリセリドを含む更なる脂質成分と、を備え、
前記組成物は、ＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％であり、ＥＰＡ含有量が２〜１５％の範囲であり、ＤＨＡおよびＥＰＡ以外のｎ−３ＨＵＦＡの含有量が２〜２５重量％の範囲であり、ＥＰＡに対するＤＨＡの重量比が少なくとも３であることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記海洋生物リン脂質含有成分が少なくとも５０重量％のリン脂質を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記海洋生物リン脂質含有成分が少なくとも７０重量％のリン脂質を含むことを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記トリグリセリドを含む更なる脂質成分のＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記トリグリセリドを含む更なる脂質成分のＤＨＡ含有量が少なくとも４０重量％であることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記トリグリセリドを含む更なる脂質成分のＤＨＡ含有量が少なくとも５０重量％であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記トリグリセリドを含む更なる脂質成分の量が前記組成物の５０〜９５重量％の範囲であることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記海洋生物リン脂質含有成分の量が５〜５０重量％の範囲であることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項９】
総ＤＨＡ含有量が少なくとも４０重量％であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
総ＤＨＡ含有量が少なくとも５０重量％であることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
総ＤＨＡ含有量が少なくとも６０重量％であることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記トリグリセリドを含む更なる脂質成分は、天然に現存する脂質と化学的または酵素的に合成される脂質とから選択されトリグリセリドまたはジグリセリドのようなグリセリドから成る供給源から得られることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記海洋生物リン脂質含有成分が魚粉から得られることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記魚粉が、カラフトシシャモ粉、ニシン粉、メンハーデン粉、サバ粉、カタクチイワシ粉、イワシ粉、アジ粉、およびアオギス粉からなる群から選択されることを特徴とする請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記海洋生物リン脂質含有成分が、魚卵、イカ外套膜、およびプランクトンバイオマスからなる群から選択される材料から得られることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、粉末、顆粒、ペースト及びフレークからなる群から選択される形態であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
油相として請求項１から請求項１４のいずれか１項に記載の組成物を含むことを特徴とするエマルジョン。
【請求項１８】
少なくとも５０重量％の請求項１に記載の組成物を含むことを特徴とする請求項１７に記載のエマルジョン。
【請求項１９】
前記ＨＵＦＡの総含有量が少なくとも４０重量％であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＨＵＦＡの総含有量が少なくとも５０重量％であることを特徴とする請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
ｎ−３ＨＵＦＡの総含有量が少なくとも５０重量％であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
遊離脂肪酸量が０重量％ではなく５重量％未満であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
海洋生物材料からトリグリセリドおよびリン脂質を含む粗脂質成分を分離する工程と、その後にトリグリセリドが沈殿しない温度で前記粗脂質成分に溶媒を添加するリン脂質補強工程と、前記混合物を冷却してトリグリセリドを沈殿させる工程と、前記沈殿物を除去して少なくとも２５重量％のリン脂質を含む前記リン脂質含有脂質成分を得る工程とを含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物の製造方法。
【請求項２４】
前記海洋生物材料が、魚粉、魚卵、イカ外套膜、およびプランクトンバイオマスからなる群から選択されることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記魚粉が、カラフトシシャモ粉、ニシン粉、メンハーデン粉、サバ粉、カタクチイワシ粉、イワシ粉、アジ粉、およびアオギス粉からなる群から選択されることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記リン脂質含有脂質成分にＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％である更なる脂質成分を混合する工程を含むことを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記更なる脂質成分が、グリセリドまたはグリセリド混合物が形成できる条件下で、グリセロールとＨＵＦＡとを結合することができる触媒または酵素の存在下でグリセロールとＨＵＦＡとを接触させる工程を含む工程によって得られることを特徴とする請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記酵素がカンディダ・アンタールクティカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）が生産するリパーゼを含むリパーゼであることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記リン脂質含有脂質成分のリン脂質含有量が少なくとも５０重量％であることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記リン脂質含有脂質成分のリン脂質含有量が少なくとも７５重量％であることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
薬学的活性物質をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３２】
前記薬学的活性物質が、抗菌剤およびワクチンを含む免疫学的活性物質およびその組合せからなる群から選択されることを特徴とする請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記免疫活性化物質がワクチンであることを特徴とする請求項３２記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は養殖分野であり、特に、魚類の幼生、および、甲殻類および二枚貝の幼生の餌として使用される餌生物に給餌する脂質組成物を提供する。更に詳細には、本発明は、高度不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ）の含有量、特に、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の含有量の中で高濃度であり、そしてＤＨＡの高含有リン脂質を有する海洋脂質組成物を提供する。
【０００２】
【従来の技術】
サケ、マス、オヒョウ、およびウナギのように、消費者の需要が高いシーフード類の消費は増加の一途をたどり、そして、この需要の高さと有限な天然資源とのために、そのような種を養殖する費用効率の高い養殖方法を開発することに多くの努力が費やされている。特に深刻な問題は、養殖されるべき魚類の孵化幼生の生存率を確実に高めることである。
【０００３】
養殖産業の発展にはいくつかの問題に取り組む必要があり、最も重大な問題の１つは、適切な栄養価の餌を幼生に与える生きた餌生物を供給する困難さである。自然界では幼生の魚類は、バランスの取れた栄養物を与える植物プランクトンの餌生物を混合した集団を食べ尽くしている。しかしながら、養殖の需要を満たす十分な量の植物プランクトンを捕集することは実現不可能である。その代わりとして、餌生物のうち選択された種は、特にクルマムシおよびアルテミア類では現在培養され、そして餌として使用されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、一般に、そのように人工的に培養した餌生物は、適量のタンパク質およびエネルギーを与えるけれども、一定のＨＵＦＡの要件、特に幼生の最適な生存、成長、および発達に必須のＤＨＡおよびＥＰＡの要件を満たすに足りない脂質組成物を有する。詳細には、高含有量のＤＨＡが必要であること、および、餌生物中のＤＨＡとＥＰＡとの比は少なくとも１：１、好ましくは少なくとも２：１であるべきであることが示されている。ＨＵＦＡに関してそのような組成物を有する餌生物を与えるために、ＤＨＡの高い含有量、好適には少なくとも２０重量％と、餌生物内で目標とされる比率、たとえば少なくとも３：１の比率、好適にはそれより高い比率を越えたＤＨＡ：ＥＰＡの比率とを有する高濃度組成物の存在下で生物を培養することが必要である。
【０００５】
現在、この問題は、これらの必須の脂肪酸に関して、餌生物に栄養価を高めさせるのを許容する高濃度組成物の存在下で餌生物を培養することによって、取り組まれ続けている。しかしながら、販売名Ｓｅｌｃｏ（商標登録）で売られている乳濁液製品のように、その目的のために現在利用可能な市販の組成物は、ＤＨＡ含有量が相対的に低い点、および／または、ＤＨＡ：ＥＰＡの比が十分に高くないという点で上記の要件を満たしていない。これらの市販の組成物で栄養価を高められたアルテミアを使用すると、魚類幼生の生存率が１２〜１５％であると報告されている（McEvoy et al. Aquaculture 163(1998) 237-250; Navarro et al. J. Fish Boil. 43(1993) 503-515）。この文脈では、生存率は、変態を経て最初に餌を食べた時からの生存パーセントとして定義されている。費用効果の高い養殖生産のために、５０％、好適には、それ以上の幼生の生存率が得られるべきである。
【０００６】
餌生物強化のため他の商業的に利用可能な組成物は、ＤＨＡの１４重量％までを含む商品名Ａｌｇａｍａｃ（商標登録）で販売されている製品と、ＤＨＡの３０重量％までを含むマグロ眼窩油（ＴＯＯ）とである。
【０００７】
ＷＯ９９／３７１６６は、海藻油抽出における廃棄物の流れから得られたＨＵＦＡの乾燥脂肪酸セッケン粉末の使用に基づいて、魚類幼生に必須の栄養分を有する生きた餌生物を豊富にする方法を開示している。これらの粉末を提供する原材料はリン脂質と約２８重量％の遊離脂肪酸とを含み、そして約２３重量％のＤＨＡを含むが、他のｎ−３脂肪酸を明らかに含まない。アルテミアを豊富にするレベルは乾燥重量で約２．７％のＤＨＡでることが開示されている。
【０００８】
養殖で使用する他の材料はＷＯ９９／０６５８５に開示されている。例として、２４重量％のＤＨＡが開示されているが、リン脂質の含有量が開示されていない。しかしながら、その材料は、遊離脂肪酸の高い比率（３２〜３７重量％）と、非脂質材料の高い含有量（約３９〜４４重量％）とを含み、それにより餌動物の脂質取り込み効率が減少されることもある。一般に、遊離脂肪酸の高い含有量は、幼生および稚魚に有害であると考えられている。
【０００９】
最後に記述された２つの材料はいずれも魚類ベースではなく、魚類内で発見された多くのＨＵＦＡを、たとえばＥＰＡおよび他ｎ−３脂肪酸を欠いている。
【００１０】
Sargent et al.（Aquaculture 179 (1999) 217-229）による最近のレビューでは、ＨＵＦＡに関しての要件に加えて、魚類幼生がリン脂質の餌要件を持つことが強調され、そして魚類幼生の理想的な餌が、卵の黄身と類似する組成物を備えた餌であることが強調されている。この著者によれば、魚卵の黄身は、約１７重量％のＤＨＡと約９重量％のＥＰＡとを含んだ約１０重量％（乾燥重量で）のリン脂質を含有する。この著者は、現在利用可能な材料から商業的規模にそのような餌を構築する方法に関して問題が残されているとレビューの中で結んでいる。
【００１１】
本発明者らの知る限りでは、上記の市販の餌組成物、または、他の先行技術の実験的組成物を使用して、アルテミアの中に理想的な卵黄類似の餌に近いＤＨＡ栄養価レベルを得ることは不可能であった。
【００１２】
そこで、魚のあらびき粉のように豊富で利用可能な海洋生物材料から分離されたＤＨＡの豊富なリン脂質の使用に基づいて、養殖用の餌生物を豊富にする脂質組成物を提供することが可能であることが見出された。この出発材料を使用することにより、商業的規模で栄養価の高い組成物を提供することが可能となり、それによって、ＨＵＦＡおよびリン脂質に関して、魚卵の黄身に非常に近い組成物を有し、それ故にオヒョウ幼生のような魚類幼生における最適な生存、成長、色素沈着、および形態発生を非常に適切に確保できる餌生物を提供できる。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
従って、最初の態様では、本発明は、養殖で使用するための餌生物に給餌し、少なくとも２５重量％のリン脂質から成り、少なくとも３０重量％のＤＨＡ含有量を提供する組成物に関する。有用な態様では、リン脂質の高含有脂質成分の供給源は、魚粉のように豊富に利用可能な海洋生物材料である。本発明に係る組成物は、魚類幼生に適切な脂質組成物を有するアルテミア類およびクルマムシを提供するのに特に有用である。
【００１４】
更なる態様では、本発明は、油相として上記の組成物を含んだ乳濁液を提供する。
【００１５】
更なる別の態様では、本発明は、上記で定義されたような組成物を製造し、トリグリセリドおよびリン脂質を含んだ粗脂質成分を海洋生物材料から分離する工程と、それに続けて、トリグリセリドが沈殿しない温度で粗脂質成分に溶媒を加え、混合物を冷却してトリグリセリドを沈殿させ、リン脂質の少なくとも２５重量％を含んだ脂質分留を得ることから成るリン脂質富化工程とを有する方法に関する。
【００１６】
また、リン脂質の少なくとも５０重量％を含んだ海洋脂質組成物も提供する。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本発明による餌生物給餌用の組成物は、主成分としてリン脂質の高含有成分を含んでいる。
【００１８】
この文脈では、表現「餌生物」は、養殖施設で生産される海洋種の幼生用に生きた餌として使用可能な何らかの海洋生物をいう。そのような餌生物の一般的なレビューは、FAOから発行され、Lavens & Sorgeloos (eds.)「Manual on the production and use of live food for aquaculture（養殖用の生き餌の生産および使用のマニュアル）」の中に見出され、それは本明細書中で参考として援用されている。従って、殆ど一般に使用される餌生物は微細藻類、クルマムシ、アルテミア、および、動物プランクトンのうちの幾つかのクラスおよび属を含み、動物プランクトンはカイアシ類、枝角類、線虫類、およびトロコフォアの幼生を含んでいる。
【００１９】
本明細書中で使用されているように、用語「養殖」は、最も広義で理解されるべきであり、魚類、甲殻類、および軟体動物のような養殖条件下で生産される何らかの水生生物のうち何らかの製品を含んでいる。魚類は、サケ、マス、コイ、バス、タイ、ターボット、シタビラメ、サバヒー、ボラ、ハタ、タイ、およびオヒョウを含み、甲殻類はエビ、ロブスター、ザリガニ、およびカニを含み、軟体動物は二枚貝を含んでいる。
【００２０】
これらの水生生物における共通の特徴は、生活環が非常に特定な栄養要件を有する１つ以上の幼生期を含むこと、従ってこの要件を満たす生きた餌生物を提供することが首尾の良い養殖生産のための必須の要素であることである。上記のように、１つのそのような特定の要件は、必須脂肪酸ＤＨＡの含有量が高いことであり、用語「必須」とは、餌生物がそのような化合物のデノボ合成できないことを意味する。本発明の組成物は、ＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％、たとえば、約３０〜３５重量％または約３５〜４０重量％の範囲、好適には少なくとも４０重量％、たとえば、少なくとも６０重％を含めて少なくとも５０重量％を有する。
【００２１】
このＤＨＡ含有量の高い組成物を提供するために、組成物の脂質成分を選択して所望のＤＨＡ量を提供するようにしなければならない。有用な実施の形態では、リン脂質の高含有成分は、ＤＨＡの必要とされる量を提供する。しかしながら、他の実施の形態では、リン脂質の成分におけるＤＨＡ含有量が十分ではないこともある。そのような場合には、適量のＤＨＡを提供する少なくとも１つの更なる脂質成分が組み合わされなければならない。典型的には、そのような更なる脂質成分は、少なくとも２０重量％のＤＨＡ、好適には少なくとも３０重量％のＤＨＡ、更に好適には少なくとも４０重量％のＤＨＡ、たとえば、少なくとも５０重量％のＤＨＡを含んでいる。好適な実施の形態では、更なる脂質成分は、少なくとも６０重量％のＤＨＡ、たとえば、少なくとも９０重量％のＤＨＡを含めて少なくとも７０重量％のＤＨＡを含んでいる。
【００２２】
必要な場合には、本発明の組成物では、更なるＤＨＡの高含有脂質成分が、少なくとも３０重量％の組成物におけるＤＨＡ含有量の合計に少なくともなる量に組み入れられている。リン脂質の高含有成分におけるＤＨＡ含有量に依存して、必要とされる更なる脂質成分の量が５〜９９重量％の範囲であることもある。本発明のある実施の形態では、更なる脂質成分の量は、５０〜９５重量％の範囲、たとえば約６０〜８０重量％の範囲、たとえば７０〜７５重量％である。
【００２３】
更なる脂質成分の供給源は、少なくとも２０重量％のＤＨＡを含む何らかの天然に現存する脂質（好適には、トリグリセリドまたはジグリセリドのようなグリセリドから成る）であることもあり、および、化学的または酵素的に合成される何らかのそのような脂質であることもある。天然に現存するＤＨＡの高含有脂質の例はマグロ眼窩油（ＴＯＯ）、および、ある酵母類や藻類のようなＤＨＡの含有量が高い微生物細胞から分離された脂質である。藻類はクロレラおよびペリジニウメ目（Crypthecodinium）類を含み、ある酵母類はサッカロミセス、モルテリーナ（Morteriella）、ヤブレツボカビ（Schizochytrium）族、およびストラトキトリウム（Thraustochytrium）のようなものである。天然に現存するＤＨＡの高含有脂質を使用する代わりに、そのような脂質を化学的または酵素的に合成できる。本発明の有用な実施の形態では、そのような脂質は、化学的触媒作用の存在下で遊離脂肪酸およびグリセロールとしてＤＨＡに接触することによりグリセリドとして、または、カンディダアンタークティカ（Candida antarctica）から分離されたリパーゼを含んだリパーゼのように、反応物質からグリセロールを形成できる酵素として提供される。
【００２４】
本発明に係る組成物の脂質供給源（たとえば、化合物、更なるＤＨＡの高含有成分、または、その両方を含むリン脂質供給源）として魚類ベースの材料を使用することが、特に有用であると見出された。また、ＤＨＡに加えて、そのような材料は、他の価値のあるＨＩＦＡ（特に、ｎ−３ＨＵＦＡ）を提供し、魚類を養殖するため餌生物を首尾良く豊かにすると考えられている。他の価値のあるＨＩＦＡは、魚類の特徴（たとえば、２０：５（ＥＰＡ）、１８：３、１８：４、および２０：４の脂肪酸）を示し、魚類幼生の天然の食餌と魚卵の黄身との中に発見されている。有利な実施の形態では、栄養価を高める組成物は、ＨＵＦＡの合計含有量が少なくとも３０重量％、たとえば少なくとも４０重量％、好適には少なくとも５０重量％、たとえば少なくとも６０重量％である。そのような組成物では、ＥＰＡは、好適には２〜１５重量％の範囲、たとえば５〜１０重量％の範囲、そして、ＤＨＡおよびＥＰＡ以外のｎ−３ＨＵＦＡは、好適には２〜２５重量％の範囲、好適には約５〜１５重量％の範囲、たとえば約１０重量％である。更に有利な実施の形態では、ｎ−３ＨＵＦＡの総含有量は、少なくとも５０重量％、たとえば少なくとも６０重量％である。
【００２５】
上記のように、本発明の組成物は、主成分として、少なくとも２５重量％のリン脂質を含むリン脂質の高含有成分から成る。この文脈では、用語「リン脂質」は、モノまたはジエステルとしてリン酸を含有する脂質のクラスを説明するために使用される。従って、リン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジン酸（ＰＡ）を含んでいる。また、用語「レシチン」は、上記のリン脂質の混合物のために一般的に使用される。本発明の組成物が魚類幼生の高生存率と良好な色素沈着率とを確保する能力にリン脂質クラスのメンバーの分布が影響を与えることを本発明者らは発見した。特に、ニシンのあらびき粉の中におけるリン脂質の組成物によって、魚類幼生の正確な色素沈着率が特に高率で達成されるようであることが見出された。
【００２６】
本発明によれば、何らかのリン脂質の高含有成分を使用できる。しかしながら、現在好ましいリン脂質は、生の材料および乾燥材料を含めて、海洋生物材料から分離されたリン脂質である。生の材料は、たとえば、魚類および他の海洋動物の内蔵、魚肉、魚卵、イカ、軟体動物、および、プランクトンバイオマスを含んでいる。乾燥材料は、特に、ニシン、カラフトシシャモ、サバ、メンハーデン、イワシ、カタクチイワシ、アジ、および、アオギスのあらびき粉と、プランクトン生物のあらびき粉とを含んでいる。魚類供給源からのそのような海洋供給源の材料は、最初に記述したように、ＤＨＡの高含有量だけでなく、魚類の特徴を示すＥＰＡおよび他のｎ−３ＰＵＦＡも提供し、ある程度まで魚類幼生における天然の食餌と類似する。
【００２７】
周知なように、市販の魚粉の質をかなり変えることができる。特に、低品質の魚粉は、酸化および加水分解を含めて、脂質における多少の変質を進行させた。本発明の目的のために、リン脂質含有成分の供給源として高品質の市販の魚粉を使用することは特に好ましい。この文脈では、高品質の魚粉は、品質および鮮度に関する次の条件で定義されている：「総揮発窒素」（ＴＶＮ）は、Antonacopoulus, N. Hnadbuch der Lebensmittelcheme, 第III/2巻、Springer Veriag, Berlin (1968)の中で記載されているように測定された５０ｍｇ／１００ｇより少なくするべきである；そして、タンパク質のミンク消化率は少なくとも９０重量％であるべきである。
【００２８】
１つの好適な実施の形態では、リン脂質の含有成分は、リン脂質の含有量が少なくとも３０重量％、好適には少なくとも４０重量％、たとえば少なくとも５０重量％、たとえばリン脂質の少なくとも７０重量％またはそれ以上を含めて少なくとも６０重量％である。十分に高いＤＨＡの含有量を有するリン脂質の含有成分が選択された場合には、本発明の組成物は、唯一の脂質の含有成分としてこの成分を含むこともある。しかしながら、上記のように、リン脂質の含有成分の不足を、ＤＨＡの高い含有量を有する更なる脂質成分で補うことが必要とされることもある。その場合には、リン脂質の含有組成物の割合は１〜９９重量％の範囲であり、たとえば５〜５０重量％の範囲を含めて２〜７５重量％の範囲であり、たとえば約５重量％、約１０重量％、および約１５重量％を含めて５〜２５重量％の範囲、または、約２５〜５０重量％の範囲である。
【００２９】
上記のように、魚類幼生の餌料にはＤＨＡの高含有量が必要とされるだけでなく、餌生物ではＤＨＡとＥＰＡとの間の比が養殖種の幼生における生存および発達に重要である。一般に、餌生物中のＤＨＡ：ＥＰＡの比が少なくとも１：１、好適には少なくとも２：１であることが認識されている。しかしながら、餌生物中でこの所望の比率を達成するために、非常に高い比率が餌生物用の栄養価の高い組成物では必要とされ得ることが見出された。従って、本発明の栄養価を高める組成物は、ＤＨＡ：ＥＰＡの重量比が１：１〜１０：１であり、たとえば４：１〜６：１の範囲を含めて２：１〜８：１の範囲である。
【００３０】
上記にSargent et al.によって記載されたように、アラキドン酸のような他のＨＵＦＡが重量であることもある。従って、本発明の栄養価の高い組成物は、十分な量のアラキドン酸を含めて熟考される。必要な場合には、その組成物中のアラキドン酸の含有量は、総脂肪酸の１〜２０重量％の範囲、たとえば２〜１０重量％の範囲内であり得る。
【００３１】
技術事情の点で公知であることは、高含有率の遊離脂肪酸が稚魚に有害であることもある。本発明の組成物における好適な実施の形態では、遊離脂肪酸の含有量が低い、たとえば総含有量が約５重量％より小を含めて約１０重量％以下であり、更に好適には約３重量％以下であり、たとえば約１重量％以下である。
【００３２】
有用な実施の形態では、本発明の栄養価の高い組成物は、乳化剤、免疫賦活薬、ビタミン、抗酸化剤、ミネラル、および、アラキドン酸を含んだ付加的な成分から成り、免疫賦活薬はグルカンまたはアルコキシグリセロールのようなものである。適切な乳化剤は、ＢＡＳＦから利用可能なクレモフォアＡ２５（ＴＭ）、クローダ（Croda）から利用可能なＶＯＬＰＯ（ＴＭ）、ダイズレシチン、リン脂質、グリセロール、および、セッケンを含む脂肪酸である。
【００３３】
組成物に組み込まれることもあるビタミンは、ビタミンＢおよびビタミンＣのような何らかの水溶性ビタミン、そして、何らかの不溶性ビタミンＡ、ビタミンＤ、およびビタミンＥを含んでいる。高含有量のビタミンＣは、幼生捕食動物の生存および発達に関して栄養価の高い組成物の成果に重要な影響を与えていることが見出されている（Merchie, G.; Lavens, P.; Sorgeloos, P. Effects of dietary vitamin C on fish and crustacean larvae, Processings Larvi'95, Ghent (1995); Merchie, G. Nutritional Effect of Vitamin C on the growth and physiological condition of the larvae of aquaculture organisms, Thesis, 1995, University in Ghent; Merchie, G, et al. Aquaculture, 134 (1995) 325-337）。従って、有用な実施の形態では、ビタミンＣの含有量は１〜１５重量％の範囲、たとえば、５〜１０重量％の範囲であることもある。有用な酸化防止剤はＴＢＨＱ、エトキシキン、ＢＨＴ、ＢＨＡ、ビタミンＥ、および、ビタミンＣを含んでいる。
【００３４】
当業者によって理解されることは、本発明の栄養価の高い組成物が、抗菌薬剤、および、バクテリアまたはウイルス感染に対するワクチン、および、両者の何らかの混合物のような薬剤活性化物質にとって便利なキャリアとして使用され得ることである。
【００３５】
本発明に係る組成物が、液体または注入可能な乳濁液としてペースト形態または乾燥形態で提供され、たとえば顆粒、粉末、または、フレークとして提供され得る。組成物が乳濁液として、好適には水中脂質乳濁液（lipid-in-water emulsion）として提供された時に、組成物が相対的に濃縮された形態であることが好ましい。また、そのような濃縮された乳濁液形態は、最終的に栄養価の高い培地を餌生物に提供するために水溶性培地の中で１回以上のステップにより希釈されるので、前乳濁液と言われ得る。好適な実施の形態では、そのような前乳濁液は、脂質相として、本発明に係る栄養価の高い成分の少なくとも５０重量％から成る。
【００３６】
上記から現れるように、栄養価の高い組成物は、本質的なＨＵＦＡおよびリン脂質に関して、養殖用餌生物を豊富にするために利用され得る。
【００３７】
更なる態様では、本発明は、上記のような栄養価の高い組成物を製造する方法を提供する。その方法は、第１ステップでは、上記で定義されたように海洋生物材料から粗脂質成分を分離することから成る。エタノールおよびプロパノールを含んだアルコールのような有機溶媒；炭化水素溶媒、たとえばペンタン、ヘキサン、または、アルカンまたは環式または芳香族炭化水素の溶媒の混合物のようなアルカン：エーテル；エステル、または、これらまたは適切だと思われる他の溶媒の混合物を含めて、何らかの適切な溶媒を使った抽出のように、生物材料から脂質を分離する何らかの従来の方法によって分離を達成できる。また、超臨界抽出の使用も熟考されている。供給源材料からのリン脂質を分離する他の手段は、クロマトグラフィー、遠心分離、圧縮、熱処理、または、それらの何らかの組合せを含むこともある。第２ステップでは、トリグリセリド分留のうち少なくとも部分的な沈殿または凝固を生じる処理に脂質成分を被らせることによって粗脂質成分のリン脂質分留が向上され、それにより順次除去され得る。その処理は、有利には、適切な溶媒を添加することから成り、たとえば、グリセリドの重要な部分が沈殿する温度まで脂質／溶媒混合物を冷却する前にトリグリセリドが沈殿しない温度で、粗脂質成分に関して上述されたもののうちの１つから成る。次いで、沈殿を除去し、溶媒相を蒸発させてリン脂質に富んだ成分を得る。この処理を１回以上繰り返し、リン脂質に富んだ成分から生じたアリコートを化合させることができる。リン脂質の豊富な成分を提供するために適切な原材料は、上記のような海洋生物材料を含んでいる。
【００３８】
上記のように、リン脂質成分の不足を、ＤＨＡの高い含有量を有する更なる脂質成分で補うことが必要とされることもある。従って、本発明の方法は、リン脂質成分が、上述されたようなＤＨＡの高い含有成分に組合わされる実施の形態を含んでいる。
【００３９】
更なる態様では、本発明は、上記の方法によって製造し得るリン脂質の少なくとも５０重量％から成る新規の海洋脂質組成物を提供する。そのような組成物は、少なくとも７５重量％のリン脂質、そして少なくとも９０重量％のリン脂質さえ含むこともある。そのような組成物は、上記のように、本発明の栄養価の高い組成物の中で使用されることもある。しかしながら、そのような組成物の他の使用は、たとえば、特殊調整粉乳、および、注射でまたはチューブを介して与える栄養成分を含めて食品成分として、または、薬剤活性薬および化粧品内成分として熟考される。
【００４０】
本発明に係る海洋脂質組成物は、栄養価の高い組成物を求めて上記の形態を含む何らかの適切な形態の中で提供され得る。
【００４１】
実例１
カラフトシシャモの魚粉からリン脂質の高含有成分を実験室規模で分離
１００ｇのカラフトシシャモの魚粉に、４００ｍＬのエタノール（約９９％ｖ／ｖ）を添加し、その混合物を室温で３時間撹拌した。魚粉残渣を濾過によって分離し、エタノール濾過物を回転エバポレーター上で真空下で蒸留して、次の成分のうち約８０重量％の脂質を含む粗脂質分留の１０〜１１ｇを得た：５４重量％のリン脂質（ＰＬ）、４重量％の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、および、４２重量％のトリグリセリド（ＴＧ）。分離された魚粉残渣について抽出手段が繰り返され、分離された魚粉残渣によって粗脂質の更なる１．５ｇがもたらされた。
【００４２】
１：５の重量：体積の比のエタノールの添加により混合された粗脂質分留を精製し、得られた上清を残して４℃で一晩静置し、トリグリセリドの実質的部分を沈殿させた。エタノール相を分離し、回転エバポレーターを使用して蒸留し、黄色がかった赤色の高密度なシロップ状の物質（６．５〜６．８ｇ；下で示された組成物中の約７１％の脂質を含む）としてリン脂質の豊富な分留を生じた。（一番左の列の数字は脂質成分の脂肪酸中における炭素数と二重結合とを示し、ＤＨＡは２２：６であり、ＥＰＡは２０：５である）：
【００４３】
【表１】
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【００４４】
実例２
ニシンの魚粉からリン脂質の高含有成分を実験室規模で分離
実例１と本質的に同一の手順を使用して、以下の脂質組成物を備えたニシンの魚粉からリン脂質の高含有組成物を得た。
【００４５】
【表２】
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【００４６】
上表から理解されるように、ニシンの魚粉は、本発明に係るリン脂質の高含有成分用の非常に好適な材料に、ＤＨＡリン脂質の含有率を提供する。
【００４７】
異なる媒体系を使って実例３内で記述されることと同様に、実例１および実例２におけるエタノール抽出処理が、当業者による従来の方法によりスケールアップされ得る。
【００４８】
実例３
イカ外套膜からリン脂質の高含有の脂質成分を大規模に分離
挽いたイカ（１５０ｇｋ）を３００Ｌのイソプロパノールに加え、その混合物を４〜６時間いくらか強く撹拌し、一晩静置した。その後、その混合物を濾過し、３００Ｌのヘキサンを濾過物に加えて混合した。これにより、分離可能な２相が得られた。主にヘキサンおよびイソプロパノールからなる上相を分離し、５０Ｌの回転エバポレーターを使用して真空中で数回蒸留し、約６５％のリン脂質の含有量と、以下の合計粗脂肪酸の組成物と有する黄褐色ワックスとして２．２ｋｇのリン脂質の高含有分留を生じた。
【００４９】
【表３】
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【００５０】
実例４
魚類幼生の餌生物用に栄養価の高い組成物の調製
アルテミア類のような餌生物用の組成物を以下の成分の組合せおよび混合によって調製した。
【００５１】
【表４．１】
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【００５２】
組成物中のＤＨＡの高含有成分として使用されたＴＧ４０１０の材料は、ＤＨＡ用に含有量を高くされた魚油ベースの材料から得られ、それは４０重量％のＤＨＡ、約１０重量％のＥＰＡ、および、約１０重量％の他のｎ−３ＨＵＦＡから成る。脂肪酸は大部分トリグリセリドの形態であり、その材料の脂肪酸の含有量は非常に少ない。ＤＨＡの高含有成分の供給源として、たとえば、約５０重量％のＤＨＡ含有量と、酵素によってＤＨＡが非常に豊富なトリグリセリドとを有するＴＧ５０１０（クローダ（Croda）からも）として、他の材料を試験した。
【００５３】
実施例５
アルテミアを培養するための栄養価の高い組成物の使用
アルテミアシスト（cysts）を最適な条件下（海水、２７〜２９℃、約ｐＨ８、酸素含有量４ｍｇ／Ｌ以上）で孵化した。新規に孵化したノープリウスアルテミアをリンスし、２５０Ｌのタンクに入れて２００、０００／Ｌの密度を与えた。温度を２５〜２８℃、酸素含有量を５〜６ｍｇ／Ｌに保持し、炭酸水素ナトリウム（２ｇ／Ｌ）を使ってｐＨを７．５に緩衝液で処理した。タンクの底で貫通したホースを介して大気中の空気を通すことより、タンクを空気に晒した。実例４に記載したような栄養価の高い組成物をタンクに加えて濃度を０．２ｇ／Ｌとし、１０時間後に同量を加えた。栄養価の高い組成物を第１に加えてから２４時間後に、アルテミアは次の脂質組成物を有する（３１重量％（乾燥重量）の脂質）。
【００５４】
【表５】
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【００５５】
このようにして得たアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度が非常に高くなるので、オヒョウ幼生のような魚類幼生の給餌に特に適切である。
【００５６】
実例６
アルテミアを培養するための栄養価の高い組成物の使用
新規に孵化されたアルテミアを、実例５で記載されたのと同一の条件下で２５０Ｌのタンクに入れた。アルテミアを、２重量％のクレモフォア(Chremophore)Ａ２５の乳化剤によって混合された合成物で給餌した。脂質の組成物は、５０重量％の実例３のリン脂質の組成物と、２５重量％の「ＤＨＡ−８０」、（米国特許第５，６０４，１１９号に記載された）カンディダアンタークティカ（Candida antarctica）からリパーゼを使用してグリセロールおよびＤＨＡ脂肪酸から酵素的に合成され、本質的には８０重量％のＤＨＡから成るトリグリセリドと、２５重量％のＬｙｓｉ−２２（ＴＭ）（Lysi hf, Iceland）、および、２２重量％のＤＨＡを含んだ魚油とを含んでいた。タンクに餌用組成物を加えて濃度を０．２ｇ／Ｌとし、１２時間後に同量を加えた。栄養価に富んだ組成物を最初に加えてから２４時間後に、アルテミアは以下の脂質組成物を有する（３４％ｄｗの脂質）。
【００５７】
【表６】
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【００５８】
得られたアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度（９．５重量％）のみならず、他の魚類に特徴的なｎ−３ＨＵＦＡの総濃度が非常に高くなるので、オヒョウ幼生のような魚類幼生の給餌に特に適している。
【００５９】
実例７
クルマムシ（Brachionus plichatilis）を培養するための栄養価の高い組成物の使用
実例５に記載されたのと類似の条件下でクルマムシを育て、イソグリシス（Isochrysis）プランクトンおよび酵母で養い、ＴＧ４０１０の代わりにクローダからのトリグリセリドＴＧ５０１０（ＴＭ）を使用することを除いて、実例４に記載されたように２７℃で６時間培養した。ＴＧ５０１０は約５０重量％のＤＨＡを含んでいる。クルマムシは以下の脂質組成物（２２％ｄｗの脂質）を有していた。
【００６０】
【表７】
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【００６１】
得られたクルマムシは、ＤＨＡが非常に高い総濃度を有するのみならず、他のｎ−３ＨＵＦＡも含んでいるので、本発明に係る組成物の有効性を例証する。
【００６２】
実例８
アルテミアを培養するための栄養価の高い組成物の比較
アルテミアシスト（cysts）が実例５のように孵化され、実例３のように条件（温度が幾らか異なることを除いて、表を参照）を維持した培養タンクに移された。栄養価の高い組成物を実例４で記載されたのと同様に調製し、すなわち表４．１で加えられたのと同一の添加剤を、たとえば、乳化剤とビタミンと実例３で記載されたイカ外套からの約１０％のリン脂質の高含有成分とを使って調整した。調製物のバルク成分（約８０％）は、表８．１に列挙した市販の脂質組成物であった。これらは、ＡｌｇａＭａｃ２０００（商標登録）、ＤＨＡ  Ｓｅｌｃｏ（商標登録）、ＤＣ  ＤＨＡ（商標登録）、および、餌等級付きのタラ肝油（Lysi, Icelandに由来）である。タンクに調製物を加えて、濃度を２．０ｇ／Ｌとし、１０時間後に同量を加えた。栄養価の高い組成物を最初に加えてから２４時間後に、アルテミアは以下の脂質組成物を有する。
【００６３】
【表８．１】
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【００６４】
本発明の好適な組成物で豊富にされたアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度が明らかに高いので、オヒョウ幼生のような魚類幼生を給餌するのに特に適している。
【００６５】
実例９
オヒョウを養殖するためのＨＵＦＡおよびリン脂質の豊富なアルテミアの使用
オヒョウ幼生に、最初に２３０〜２５０°ｄ（「°ｄ」：孵化たとえば５．２℃、２５０°ｄが４８日に対応するので、温度（℃）と日数との積の記号）で給餌した。３．５または７ｍ3のいずれかの循環式養殖タンクを使用した。幼生を１１℃の養殖温度および３００〜５００ｌｕｘの光量まで段階的に順応させた。幼生にアルテミアを１日に２回、朝および午後遅くに給餌した。アルテミアは、朝の給餌２４時間前に、本発明に係る栄養価の高い組成物でその栄養価を高められ、それから、午後の給餌のために更に７〜８時間、１３〜１５℃で貯蔵された。アルテミアの良好な消化を可能にするために、餌の配給量が調整された。微小藻類（イソグリシス類）を養殖水に添加してストレスを減少させ、最大摂取速度を促進した。タンクの中央で僅かな空気に晒されると、水質および餌粒子を均質化してしまった。幼生を分散させるために、流入口を用いて僅かな循環の流れが必要とされた。水の交換が、最初には２４時間毎に１．２回から最後には２４時間ごとに３．３回に増加させられた。幼生養殖タンクは毎日清潔にされた。
【００６６】
給餌開始から幼生期の終わりまでに１つのタンクでの８０％以上の生存率が認められ（「ミルガイ」（顎が変形した幼生）を除いて９０％）、頻繁に６５〜７５％の生存率が認められた。平均約８０％の稚魚で正確な色素沈着が認められたが、１つのタンクでは９６％までの正確な色素沈着が認められた。正確な色素沈着は、眼のある側面での正常な色素沈着と、眼のない側面での不存在の色素沈着として定義されている。平均で稚魚の約６５％であるが１つのタンク内で約８０％までが、正確な眼の移動を示し、すなわち、眼のある側面に両眼を有していた。継続中の実験により、更に高い平均生存率および色素沈着率を得ることが示されている。
【００６７】
この結果は、本発明に係るＤＨＡの高含有の餌生物が、オヒョウのような水生生物を高生存率かつ高品質で養殖することに特に適していることを示している。