(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
養殖で使用するため、特に、幼魚に給餌するために餌生物を製造し、餌組成物を含む水性培地の中で生活環の少なくとも一部の間に前記餌生物を培養する方法であって、
前記餌組成物は少なくとも３０重量％のＤＨＡ含有量と、
少なくとも２であるＥＰＡに対するＤＨＡの重量比とを有し、
前記餌組成物は、
少なくとも２５重量％のリン脂質を含んだ２〜７５重量％の海洋動物のリン脂質の高含有成分と、
魚類ベースの供給源から得られ、少なくとも３０重量％の餌組成物におけるＤＨＡ含有量の合計となる量に組み入れられた更なる脂質成分とを有し、
遊離脂肪酸を１０％未満しか含んでいないことを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、
前記培養が、少なくとも５０％の前記培養された生物の中で総脂質含有量のうち前記ＤＨＡ含有量が１２重量％またはそれ以上になるまで、実行されることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法において、
前記培養された生物における総脂質含有量中の前記ＤＨＡ含有量が、少なくとも１５重量％であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法において、
前記培養された生物における総脂質含有量中の前記ＤＨＡ含有量が、少なくとも１７．５重量％であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項５】
請求項２に記載の方法において、
前記培養された生物における総脂質含有量中の前記ＤＨＡ含有量が、少なくとも２０重量％であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、
培養される前記生物が、アルテミア類、かいあし類、ミジンコ類、およびタマミジンコ類を含んだ甲殻類と、ワムシ類と、腕足動物類とから構成される集団から選択されることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、
前記甲殻類がアルテミア類であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法において、
前記アルテミア類が、ノープリウス期、メタノープリウス期、または成体期に水性培地中で培養されることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項９】
請求項６に記載の方法において、
前記生物がワムシ類または腕足動物類であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法において、
前記プランクトン類が、シオミズツボワムシ（Brachionus plicatilis）、海産ワムシ（Brachionus rotundiformi）、および、ルーベンスワムシ（Brachionus rubens）を含んだワムシ類から選択されることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法において、
魚類ベースの供給源から得られた前記更なる海洋の脂質成分が、少なくとも３０重量％含まれることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法において、
魚類ベースの供給源から得られた前記更なる海洋の脂質成分が、少なくとも４０重量％ＤＨＡ含有量を含むことを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法において、
魚類ベースの供給源から得られた前記更なる海洋の脂質成分が、少なくとも５０重量％ＤＨＡ含有量を含むことを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法において、
前記更なる脂質成分の量が、前記餌組成物で計算されると、５０〜９５重量％の範囲であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の方法において、
前記リン脂質の高含有成分の量が５〜５０重量％の範囲であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法において、
前記餌組成物中における前記ＤＨＡの総含有量が少なくとも４０重量％であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法において、
前記餌組成物中における前記ＤＨＡの総含有量が、少なくとも５０重量％であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法において、
前記餌組成物中における前記ＤＨＡの総含有量が、少なくとも６０重量％であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法において、
前記更なる脂質成分が本質的にトリグリセリドであることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法において、
前記本質的なトリグリセリド成分が、カンディダアンタークティカ（Candida antarctica）によって産生されるリパーゼを含めたリパーゼのような酵素、または、触媒の存在下で、グリセロールとＤＨＡとの接触によって得られることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の方法において、
前記リン脂質の高含有成分が、イカ、魚卵、プランクトンバイオマス、または魚粉のような海洋生物材料からの分離によって得られることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の方法において、
前記水性培地が０．０１ｇ／Ｌ〜５ｇ／Ｌの前記餌組成物を含むことを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２３】
請求項１〜請求項２２のいずれか一項に記載の方法において、
前記餌組成物が前記水性培地中で乳化されることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法において、
前記餌組成物が、１〜１００μｍの範囲である平均最大寸法を有するミセル粒子の形態であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の方法において、
前記水性培地が海水であることを特徴とする餌生物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は養殖分野に関し、特に高度不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ）、特にドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の含有量が高い餌生物の製造分野に関する。また本発明は、上記餌生物に基づく給餌用組成物の提供に関する。
【０００２】
【従来の技術】
サケ、マス、オヒョウ、およびウナギのように、消費者の需要が高いシーフード類の消費は増加の一途をたどり、そして、この需要の高さと有限な天然資源とのために、そのような種を養殖する費用効率の高い養殖方法を開発することに多くの努力が費やされている。特に深刻な問題は、養殖されるべき魚類の孵化幼生の生存率を確実に高めることである。
【０００３】
養殖産業の発展にはいくつかの問題に取り組む必要があり、最も重大な問題の１つは、適切な栄養価の餌を幼生に与える生きた餌生物を供給する困難さである。自然界では幼生の魚類は、バランスの取れた栄養物を与える植物プランクトンの餌生物を混合した集団を消費している。しかしながら、養殖の需要を満たす十分な量の植物プランクトンを捕集することは実現不可能である。その代わりとして、餌生物のうち選択された種は、特にクルマムシおよびアルテミア類では現在培養され、そして餌として使用されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、一般に、そのように人工的に培養した餌生物は、適量のタンパク質およびエネルギーを与えるけれども、一定のＨＵＦＡの要件、特に幼生の最適な生存、成長、および発達に必須のＤＨＡおよびＥＰＡの要件を満たすに足りない脂質組成物を有する。詳細には、高含有量のＤＨＡが必要であること、および、餌生物中のＤＨＡとＥＰＡとの比は少なくとも１：１、好ましくは少なくとも２：１であるべきであることが示されている。ＨＵＦＡに関してそのような組成物を有する餌生物を与えるために、ＤＨＡの高い含有量、好適には少なくとも２０重量％と、餌生物内で目標とされる比率、たとえば少なくとも３：１の比率、好適にはそれより高い比率を越えたＤＨＡ：ＥＰＡの比率とを有する高濃度組成物の存在下で生物を培養することが必要である。
【０００５】
現在、この問題は、これらの必須の脂肪酸に関して、餌生物に栄養価を高めさせるのを許容する高濃度組成物の存在下で餌生物を培養することによって、取り組まれ続けている。しかしながら、販売名Ｓｅｌｃｏ（商標登録）で売られている乳濁液製品のように、その目的のために現在利用可能な市販の組成物は、ＤＨＡ含有量が相対的に低い点、および／または、ＤＨＡ：ＥＰＡの比が十分に高くないという点で上記の要件を満たしていない。かかる組成物を用いた、ＤＨＡ補給レベルが総脂質の３〜５％であるアルテミアが報告されており（ＭｃＥｖｏｙら、Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ１６３（１９８８）２３７〜２５０）、当該アルテミアを餌と使用すると魚類の生存率が１２〜１５％であると報告されている（上記ＭｃＥｖｏｙら；Ｎａｖａｒｒｏら、Ｊ．Ｆｉｓｈ  Ｂｉｏｌ．４３（１９９３）５０３〜５１５）。この文脈では、生存率は、変態を経て最初に餌を食べた時からの生存パーセントとして定義されている。費用対効果の高い養殖生産のためには、５０％、好適には、それ以上の幼生の生存率が得られるべきである。
【０００６】
餌生物強化のため他の商業的に利用可能な組成物は、ＤＨＡの１４重量％までを含む商品名Ａｌｇａｍａｃ（商標登録）で販売されている製品と、ＤＨＡの３０重量％までを含むマグロ眼窩油（ＴＯＯ）とである。
【０００７】
ＷＯ９９／３７１６６は、海藻油抽出における廃棄物の流れから得られたＨＵＦＡの乾燥セッケン粉末の使用に基づいて、魚類幼生に必須の栄養分を有する生きた餌生物を豊富にする方法を開示している。これらの粉末を提供する原材料はリン脂質と約２３重量％のＤＨＡを含むが、他のｎ−３脂肪酸を明らかに含まない。アルテミアＤＨＡを豊富にするレベルは乾燥重量で約２．７％のＤＨＡであることが開示されているが、養殖での使用および捕食幼生物の生存に関しては開示されていない。
【０００８】
養殖で使用する他の材料はＷＯ９９／０６５８５に開示されている。例として、２４重量％のＤＨＡが開示されているが、リン脂質の含有量が開示されていない。しかしながら、その材料は、遊離脂肪酸の高い比率（３２〜３７重量％）と、非脂質材料の高い含有量（約３９〜４４重量％）とを含み、それにより餌動物の脂質取り込み効率が減少されることもある。一般に、遊離脂肪酸の高い含有量は、幼生および稚魚に有害であると考えられている。
【０００９】
最後に記述された２つの材料はいずれも魚類ベースではなく、魚類内で発見された多くのＨＵＦＡを、たとえばＥＰＡおよび他ｎ−３脂肪酸を欠いている。
【００１０】
Sargent et al.（Aquaculture 179 (1999) 217-229）による最近のレビューでは、ＨＵＦＡに関しての要件に加えて、魚類幼生がリン脂質の餌要件を持つことが強調され、そして魚類幼生の理想的な餌が、卵の黄身と類似する組成物を備えた餌であることが強調されている。この著者によれば、魚卵の黄身は、約１７重量％のＤＨＡと約９重量％のＥＰＡとを含んだ約１０重量％（乾燥重量で）のリン脂質を含有する。この著者は、現在利用可能な材料から商業的規模にそのような餌を構築する方法に関して問題が残されているとレビューの中で結んでいる。
【００１１】
そこで、本発明者らはＨＵＦＡおよびリン脂質に関し魚卵の卵黄に非常に類似した組成物を有する養殖用強化餌生物を商業規模で供給可能であることを見出した。本発明に係る餌生物を用いることにより、オヒョウ幼生等の魚類幼生の最適な生存、成長、色素沈着、および形態発生の確保を図ることができる。本明細書において説明するように、本発明によれば、オヒョウ等の魚類に関し従来例と比較して幼生期での相当に高い生存率と高い品質特性を提供することができ、よって多くの高需要魚類の養殖をより経済的にかつ商業的に実施させることができる。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本願発明の第１の態様では、養殖用餌生物の製造方法であって、特に幼生期の魚類に給餌する養殖用餌生物の製造方法を提供する。この方法においては、餌生物を水生培地中で少なくともその生活環の一部において培養する工程を有し、水性培養地はＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％有する脂質成分を少なくとも一含んでいる。
【００１３】
第２の態様では、幼生期および／または非幼生期の魚類への給餌用組成物であって、上記餌生物の総脂質含有量中、ＤＨＡ含有量が少なくとも１２重量％である餌生物を有する組成物を供給する。
【００１４】
更なる態様では、含水量が１０重量％未満の範囲を含む５０重量％未満の組成物の製造方法と、前記方法による生きた餌生物を産生する方法と、前記水性培地から前記培養生物を少なくとも部分的に分離する方法とを提供する。
【００１５】
更に別の態様では、上記組成物を幼生期および／または幼生後の水生生物に給餌用として使用する方法を提供する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明による方法は、養殖において使用する餌生物の製造方法であって、特に、ＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％の脂質成分を少なくとも一含む水生培地中で、該餌生物を少なくともその生活環の一部において培養する工程を含む幼生期の魚類への給餌用餌生物の製造方法である。
【００１７】
この文脈では、表現「餌生物」は、養殖施設で生産される海洋種の幼生用に生きた餌として使用可能な何らかの海洋生物をいう。そのような餌生物の一般的なレビューは、FAOから発行され、Lavens & Sorgeloos (eds.)「Manual on the production and use of live food for aquaculture（養殖用の生き餌の生産および使用のマニュアル）」の中に見出され、それは本明細書中で参考として援用されている。従って、殆ど一般に使用される餌生物は微細藻類、クルマムシ、アルテミア、および、動物プランクトンのうちの幾つかのクラスおよび属を含み、動物プランクトンはカイアシ類、枝角類、線虫類、およびトロコフォアの幼生を含んでいる。
【００１８】
本明細書中で使用されているように、用語「養殖」は、最も広義で理解されるべきであり、魚類、甲殻類、および軟体動物のような養殖条件下で生産される何らかの水生生物のうち何らかの製品を含んでいる。魚類は、サケ、マス、コイ、バス、ブリーム、ターボット、シーバス、シタビラメ、サバヒー、ボラ、ハタ、タイ、オヒョウ、カレイおよびアンコウを含み、甲殻類はエビ、ロブスター、ザリガニ、およびカニを含み、軟体動物は二枚貝を含んでいる。
【００１９】
これらの水生生物における共通の特徴は、生活環が非常に特定な栄養要件を有する１つ以上の幼生期を含むこと、従ってこの要件を満たす生きた餌生物を提供することが首尾の良い養殖生産のための必須の要素であることである。上記のように、１つのそのような特定の要件は、必須脂肪酸ＤＨＡの含有量が高いことであり、用語「必須」とは、餌生物がそのような化合物のデノボ合成できないことを意味する。
【００２０】
上記方法の有効な実施の形態においては、少なくとも５０％の培養生物におけるＤＨＡ含有量が総脂質容量の１２重量％以上になるまで餌生物の培養が行われる。好ましくは、培養生物の総脂質容量のＤＨＡ含有量が少なくとも１５重量％で、少なくとも１７．５重量％を含み、例えば少なくとも２０重量％で、少なくとも２５重量％を含んでいる。
【００２１】
本発明によれば、大規模商業化ベースでの上記餌用動物の育成により、幼生期において特に敏感で従来方法では養殖を成功させるのが困難とされていたオヒョウ等の魚類の商業的育成が可能である。
【００２２】
かかる方法によれば、培養される上記生物が養殖において育成し使用することができる餌生物の中から選択することができ、有用な実施の形態においてはかかる該生物が、アルテミア類、かいあし類、ミジンコ類、およびタマミジンコ類を含む甲殻類、ワムシ類、および腕足動物類の生物であるとして選択される。
【００２３】
アルテミア類を含む実施の形態は特に有用である。アルテミア類は培養することが可能であり、本発明の方法により幼生期、中生期、成体期でも用いることができる。
【００２４】
特定の形態における発明では、使用する脂質成分はトリグリセリドまたはリン脂質高含有成分である。上述のように、リン脂質はＤＨＡの含有に加えて、多種の養殖を成功させる重要な内容物である。したがって、有用な形態における方法においては、該生物が育成される水性培地は少なくとも２５重量％、例えば４０重量％のリン脂質、好ましくは少なくとも６０重量％、例えば７０重量％のリン脂質とからなる脂質含有成分を有し、該成分は少なくとも３０重量％のＤＨＡを含有する成分である。
【００２５】
この文脈では、用語「リン脂質」は、モノまたはジエステルとしてリン酸を含有する脂質のクラスを説明するために使用される。従って、リン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジン酸（ＰＡ）を含んでいる。また、用語「レシチン」は、上記のリン脂質の混合物のために一般的に使用される。
【００２６】
本発明の方法によれば、何らかのリン脂質の高含有成分を上記組成物に使用できる。しかしながら、現在好ましいリン脂質は、生の材料および乾燥材料を含めて、海洋生物材料から分離されたリン脂質である。生の材料は、たとえば、魚類および他の海洋動物の内蔵、魚肉、魚卵、イカ、軟体動物、および、プランクトンバイオマスを含んでいる。乾燥材料は、特に、ニシン、カラフトシシャモ、サバ、メンハーデン、イワシ、カタクチイワシ、アジ、および、アオギスのあらびき粉と、プランクトン生物のあらびき粉とを含んでいる。
【００２７】
本発明による魚類ベースの物質は、特に、豊富なＤＨＡを供給するばかりか、ＥＰＡと、１８：３、１８：４、２０：４、２２：５を含む魚特性の他のｎ−３ＰＵＦＡをも含有し、幼生魚の自然な食餌にある程度類似する点で好ましい。
【００２８】
有用な実施の形態では、リン脂質高含有成分により必要とされるＤＨＡ量が供給される。しかし、他の実施の形態ではリン脂質成分のＤＨＡ含有量が不十分な場合がある。その場合には、適量のＤＨＡを供給する少なくとも一の更なる脂質成分が組み合わされなければならない。典型的には、そのような更なる脂質成分は、少なくとも２０重量％のＤＨＡ、好適には少なくとも３０重量％のＤＨＡ、更に好適には少なくとも４０重量％のＤＨＡ、たとえば、少なくとも５０重量％のＤＨＡを含んでいる。好適な実施の形態では、更なる脂質成分は、少なくとも６０重量％のＤＨＡ、たとえば、少なくとも９０重量％のＤＨＡを含めて少なくとも７０重量％のＤＨＡを含んでいる。
【００２９】
必要な場合には、本発明の組成物では、更なるＤＨＡの高含有脂質成分が、少なくとも３０重量％の組成物におけるＤＨＡ含有量の合計に少なくともなる量に組み入れられている。リン脂質の高含有成分におけるＤＨＡ含有量に依存して、必要とされる更なる脂質成分の量が５〜９９重量％の範囲であることもある。本発明のある実施の形態では、更なる脂質成分の量は、５０〜９５重量％の範囲、たとえば約５０〜７０重量％以上の範囲である。
【００３０】
リン脂質高含有成分を補給してＤＨＡレベルを高める必要がある場合には、該成分の比率を約１〜９９重量％の範囲中、例えば５〜５０重量％を含む２〜７５重量％の範囲、例えば１０〜２０重量％を含む５〜２５重量％の範囲で比率を変更してもよい。
【００３１】
更なる脂質成分の供給源は、少なくとも２０重量％のＤＨＡを含む何らかの天然に現存する脂質であることもあり、化学的または酵素的に合成される何らかのそのような脂質であることもある。有用な実施の形態においては、更なる脂質成分は本質的にトリグリセリド等のグリセリドを含有する。そのようなＤＨＡ高含有成分は、トリグリセリドとして、化学的触媒作用の存在下で遊離脂肪酸およびグリセロールとしてＤＨＡに接触することによりグリセリドとして、または、カンディダ・アンタールクティカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）から分離されたリパーゼを含んだリパーゼのように、反応物質からグリセロールを形成できる酵素として提供することができる。遊離脂肪酸は魚餌生物用給餌成分の主成分としては概ね勧めることができない。従来技術において一般に検討されたように、高遊離脂肪酸成分は幼魚に有害である可能性がある。本発明の好ましい実施の形態における方法においては、餌食動物の給餌用脂質含有成分は、遊離脂肪酸を約１０重量％未満しか含んでおらず、好ましくは約５重量％未満、例えば約２重量％未満であることが好ましい。ある特定の実施の形態においては、上記理由により更なる脂質成分を得るために他の好ましいｎ−３ＨＵＦＡを追加で供給する魚類ベースのソースが使用される。
【００３２】
上記のように、魚類幼生の餌料にはＤＨＡの高含有量が必要とされるだけでなく、餌生物ではＤＨＡとＥＰＡとの間の比が養殖種の幼生における生存および発達に重要である。一般に、餌生物中のＤＨＡ：ＥＰＡの比が少なくとも１：１、好適には少なくとも２：１であることが認識されている。餌生物中でこの所望の比率を達成するために、非常に高い比率が餌生物用の栄養価の高い組成物では必要とされるかもしれない。従って、本発明の好ましい実施の形態においては、リン脂質含有組成物はＤＨＡ：ＥＰＡの重量比が１：１〜１０：１であり、たとえば４：１〜６：１の範囲を含め２：１〜８：１の範囲である。
【００３３】
上記より理解し得るように、本発明の方法において給餌組成物のＤＨＡの総含有量が高いことは、本発明の好ましい結果を達成するのに重要である。例えば少なくとも３０重量％の総含有量、好ましくは少なくとも４０重量％の範囲を含む少なくとも３５重量％の総含有量、より好ましくは少なくとも６０重量％の範囲を含む少なくとも５０重量％の総含有量、例えば７０重量％の総含有量が好ましい。
【００３４】
本発明に係る方法の水性培地中の脂質成分または脂質組成物の濃度に関しては、効果的な給餌とそれに伴う効果的な餌生物の強化に有用であれば如何なる濃度であってもよい。有用な実施の形態において、かかる濃度は脂質成分または脂質組成物の０．０１〜５ｇ／Ｌの範囲であり、０．０１〜１ｇ／Ｌの範囲を含み、例えば０．０１〜０．１ｇ／Ｌの範囲の濃度である。
【００３５】
好ましい実施の形態における脂質成分または脂質組成物は、水性培地においてエマルジョン形態であり、例えば、餌生物による摂取可能なサイズのミセル粒子形態であり、例えば、平均の最大寸法は１〜５０μｍの範囲を含む、１〜１００μｍの範囲である。
【００３６】
ある特定の有用な実施の形態において、水性培地は海水またはナトリウム塩化物等を加えた類似の海水である。
【００３７】
更なる態様において、本発明は幼生期および／または非幼生のレベルで海洋生物に給餌用組成物を供給し、当該組成物は総脂質成分の少なくとも１２重量％、好ましくは総脂質成分の１５重量％、より好ましくは少なくとも２５重量％を含む総脂質成分の２０重量％で、例えば少なくとも３０重量％かつ少なくとも３５重量％の総脂質成分をも含む値のＤＨＡ成分を含有する餌生物からなる。該生物は養殖において飼育に有用な餌生物であればよく、アルテミア類、かいあし類、ミジンコ類、およびタマミジンコ類を含む甲殻類、ワムシ類、腕足動物類、および線虫類を含む。
【００３８】
上記より推論できるように、当該組成物により有効なＤＨＡ量が供給できるようにするには、餌生物における総脂質成分が重要とされる必要があり、例えば乾燥状態で少なくとも２０重量％、好ましくは乾燥状態で３０重量％であることが重要である。上述のように、高度成分の遊離脂肪酸は幼魚その他の被養殖生物の給餌には好ましくない。本発明の餌生物においては、遊離脂肪酸は総脂質成分の約１０重量％未満であることが好ましい。
【００３９】
特定の実施の形態においては、組成物は少なくとも５０重量％の水相を有しており、該水相は例えば少なくとも０．５重量％濃度の塩化ナトリウム等の塩を含んでいても良い。組成物は、乾燥状態または略乾燥状態、例えば１０重量％の水分の範囲を含む５０重量％未満の水分、例えば１重量％未満の水分、例えば本質的に水分のない形態でもよい。乾燥または略乾燥状態の組成物は粉末、顆粒またはよびフレークの形態で供給してもよい。
【００４０】
本発明者らによりアルテミアを含む組成物が特に有効であることが見出された。アルテミアは幼生期、中生期または成体期のものでもよい。
【００４１】
本発明の更に他の形態においては、上述するように組成物の製造方法であって、上記に掲げた培養餌生物を当該培養生物が培養されている水性培地から少なくとも部分的に分離する工程を含むものである。本発明の方法に係る特定の形態においては、分離した餌生物を乾燥して上記の形態の組成物を得る工程を含む。
【００４２】
他の実施の形態において、本発明は幼生期および／または幼生後の水生生物に給餌するための、上記組成物の使用方法を提供する。水生生物は、サケ、マス、コイ、バス、タイ、ターボット、シタビラメ、サバヒー、ボラ、ハタ、ヒラメ、スズキ、タイ、タラ、ハドック、ヒラメ、ウナギを含む魚類と、エビ、ロブスター、ザリガニ、およびカニ等の甲殻類と、二枚貝などの軟体動物を含む養殖し得る生物であれば如何なる種であってもよい。
【００４３】
特定の形態において、本発明は観賞魚類および水槽魚類等、主に消費のために飼育されるものではない水生生物の給餌用組成物の使用方法を提供する。
（実施例１）
イカ外套膜からリン脂質の高含有の脂質成分を大規模に分離
挽いたイカ（１５０ｇｋ）を３００Ｌのイソプロパノールに加え、その混合物を４〜６時間いくらか強く撹拌し、一晩静置した。その後、その混合物を濾過し、３００Ｌのヘキサンを濾過物に加えて混合した。これにより、分離可能な２相が得られた。主にヘキサンおよびイソプロパノールからなる上相を分離し、５０Ｌの回転エバポレーターを使用して真空中で数回蒸留し、約６５％のリン脂質の含有量と、以下の合計粗脂肪酸の組成物と有する黄褐色ワックスとして２．２ｋｇのリン脂質の高含有分留を生じた（一番左の列の数字は脂質成分の脂肪酸中における炭素数と二重結合とを示し、ＤＨＡは２２：６であり、ＥＰＡは２０：５である）。
【００４４】
【表１】
0005096655.tif 000002
【００４５】
（実施例２）
魚類幼生の餌生物用に栄養価の高い組成物の調製
アルテミア類のような餌生物用の組成物を以下の成分の組合せおよび混合によって調製した。
【００４６】
【表２．１】
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【００４７】
組成物中のＤＨＡの高含有成分として使用されたＴＧ４０１０の材料は、ＤＨＡ用に含有量を高くされた魚油ベースの材料から得られ、それは４０重量％のＤＨＡ、約１０重量％のＥＰＡ、および、約１０重量％の他のｎ−３ＨＵＦＡから成る。脂肪酸は大部分トリグリセリドの形態であり、その材料の脂肪酸の含有量は非常に少ない。ＤＨＡの高含有成分の供給源として、たとえば、約５０重量％のＤＨＡ含有量と、酵素によってＤＨＡが非常に豊富なトリグリセリドとを有するＴＧ５０１０（クロダ（Ｃｒｏｄａ）からも）として、他の材料を試験した。
（実施例３）
アルテミアを培養するための栄養価の高い組成物の使用
アルテミア・シスト（Ａｒｔｅｍｉａ  ｃｙｓｔｓ）を最適な条件下（海水、２７〜２９℃、約ｐＨ８、酸素含有量４ｍｇ／Ｌ以上）で孵化した。新規に孵化したノープリウスアルテミアをリンスし、２５０Ｌのタンクに入れて２００、０００／Ｌの密度を与えた。温度を２５〜２８℃、酸素含有量を５〜６ｍｇ／Ｌに保持し、炭酸水素ナトリウム（２ｇ／Ｌ）を使ってｐＨを７．５に緩衝液で処理した。タンクの底で貫通したホースを介して大気中の空気を通すことより、タンクを空気に晒した。実例４に記載したような栄養価の高い組成物をタンクに加えて濃度を０．２ｇ／Ｌとし、１０時間後に同量を加えた。栄養価の高い組成物を第１に加えてから２４時間後に、アルテミアは次の脂質組成物を有する（３１重量％（乾燥重量）の脂質）。
【００４８】
【表３】
0005096655.tif 000004
【００４９】
このようにして得たアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度が非常に高くなるので、オヒョウ幼生のような魚類幼生の給餌に特に適切である。
（実施例４）
アルテミアを培養するための栄養価の高い組成物の使用
新規に孵化されたアルテミアを、実施例３で記載されたのと同一の条件下で２５０Ｌのタンクに入れた。アルテミアを、２重量％のクレモフォアＡ２５乳化剤によって混合された合成物で給餌した。脂質の組成物は、５０重量％の実施例１のリン脂質の組成物と、２５重量％の「ＤＨＡ−８０」、（米国特許第５，６０４，１１９号に記載された）カンディダ・アンタールクティカ（Ｃａｎｄｉｄａ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）からリパーゼを使用してグリセロールおよびＤＨＡ脂肪酸から酵素的に合成され、本質的には８０重量％のＤＨＡから成るトリグリセリドと、２５重量％のＬｙｓｉ−２２（ＴＭ）（Ｌｙｓｉ  ｈｆ社、アイスランド）、および、２２重量％のＤＨＡを含んだ魚油とを含んでいた。タンクに餌用組成物を加えて濃度を０．２ｇ／Ｌとし、１２時間後に同量を加えた。栄養価に富んだ組成物を最初に加えてから２４時間後に、アルテミアは以下の脂質組成物を有する（３４％ｄｗの脂質）。
【００５０】
【表４】
0005096655.tif 000005
【００５１】
得られたアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度（９．５重量％）のみならず、他の魚類に特徴的なｎ−３ＨＵＦＡの総濃度が非常に高くなるので、オヒョウ幼生のような魚類幼生の給餌に特に適している。
（実施例５）
クルマムシ（Brachionus plichatilis）を培養するための栄養価の高い組成物の使用
実施例３に記載されたのと類似の条件下でクルマムシを育て、イソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）プランクトンおよび酵母で養い、クロダ（Ｃｒｏｄａ）４０の代わりにクロダ５０を使用することを除いて、実施例２に記載されたように２７℃で６時間培養した。クロダ５０は約５０重量％のＤＨＡを含んでいる。クルマムシは以下の脂質組成物（２２％ｄｗの脂質）を有していた。
【００５２】
【表５】
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【００５３】
得られたクルマムシは、ＤＨＡが非常に高い総濃度を有し、異なるリン脂質クラスに区分されると分析され、本発明の有効性が立証される。
（実施例６）
アルテミアを培養するための栄養価の高い組成物の比較
アルテミア・シストが実施例３のように孵化され、実例３のように条件（温度が幾らか異なることを除いて、表を参照）を維持した培養タンクに移された。栄養価の高い組成物を実施例２で記載されたのと同様に調製し、すなわち表２．１で加えられたのと同一の添加剤を、たとえば、乳化剤とビタミンと実例３で記載されたイカ外套からの約１０％のリン脂質の高含有成分とを使って調整した。調製物のバルク成分（約８０％）は、表に列挙した市販の脂質組成物であった。これらは、ＡｌｇａＭａｃ２０００（商標登録）、ＤＨＡ  Ｓｅｌｃｏ（商標登録）、ＤＣ  ＤＨＡ（商標登録）、および、餌等級付きのタラ肝油（Ｌｙｓｉ社、アイスランド）である。タンクに調製物を加えて、濃度を２．０ｇ／Ｌとし、１０時間後に同量を加えた。栄養価の高い組成物を最初に加えてから２４時間後に、アルテミアは以下の脂質組成物を有する。
【００５４】
【表６】
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【００５５】
本発明の好適な組成物で豊富にされたアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度が明らかに高いので、オヒョウ幼生のような魚類幼生を給餌するのに特に適している。
（実施例７）
オヒョウを養殖するためのＨＵＦＡおよびリン脂質の豊富なアルテミアの使用
オヒョウ幼生に、最初に２３０〜２５０°ｄ（「°ｄ」：孵化からの温度（℃）と日数との積の記号）で給餌した。３．５または７ｍ3のいずれかの循環式養殖タンクを使用した。幼生を１１℃の養殖温度および３００〜５００ｌｕｘの光量まで段階的に順応させた。幼生にアルテミアを１日に２回、朝および午後遅くに給餌した。アルテミアは、朝の給餌２４時間前に、本発明に係る栄養価の高い組成物でその栄養価を高められ、それから、午後の給餌のために更に７〜８時間、１３〜１５℃で貯蔵された。アルテミアの良好な消化を可能にするために、餌の配給量が調整された。微小藻類（イソクリシス（Ｉｓｏｃｒｙｓｉｓ）類）を養殖水に添加してストレスを減少させ、最大摂取速度を促進した。タンクの中央で僅かな空気に晒されると、水質および餌粒子を均質化してしまった。幼生を分散させるために、流入口を用いて僅かな循環の流れが必要とされた。水の交換が、最初には２４時間毎に１．２回から最後には２４時間ごとに３．３回に増加させられた。幼生養殖タンクは毎日清潔にされた。
【００５６】
給餌開始から幼生期の終わりまでに１つのタンクでの８０％以上の生存率が認められ（「ミルガイ」（顎が変形した幼生）を除いて９０％）、頻繁に６５〜７５％の生存率が認められた。平均約８０％の稚魚で正確な色素沈着が認められたが、１つのタンクでは９６％までの正確な色素沈着が認められた。正確な色素沈着は、眼のある側面での正常な色素沈着と、眼のない側面での不存在の色素沈着として定義されている。平均で稚魚の約６５％であるが１つのタンク内で約８０％までが、正確な眼の移動を示し、すなわち、眼のある側面に両眼を有していた。継続中の実験により、更に高い平均生存率および色素沈着率を得ることが示されている。
【００５７】
この結果は、本発明に係るＤＨＡの高含有の餌生物が、オヒョウのような水生生物を高生存率かつ高品質で養殖することに特に適していることを示している。