(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
透明支持体上に、少なくとも吸水性ポリマーを含有するゼラチン薄膜からなる試薬層を設け、該試薬層中、前記吸水性ポリマーが、単位面積あたりのゼラチン量に対して、１０質量％を超えない量で存在し、該吸水性ポリマーの粒径が１０〜１００μｍであることを特徴とする乾式分析要素。
【請求項２】
前記試薬層中、前記吸水性ポリマーが、単位面積あたりのゼラチン量に対して、１〜５質量％で存在することを特徴とする請求項１に記載の乾式分析要素。
【請求項３】
前記試薬層中のゼラチン量が、２〜１００ｇ／ｍ２の範囲にあることを特徴とする請求項１または２に記載の乾式分析要素。
【請求項４】
前記試薬層が、少なくとも１種の界面活性剤を含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の乾式分析要素。
【請求項５】
前記試薬層中、前記界面活性剤が、単位面積あたりのゼラチン量に対して、８０質量％を超えない量で存在することを特徴とする請求項４に記載の乾式分析要素。
【請求項６】
前記界面活性剤が、シリコンを含有する化合物を含むことを特徴とする請求項４または５に記載の乾式分析要素。
【請求項７】
前記吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸塩系、デンプングラフト系、ポリビニルアルコール系、酢酸ビニル共重合体、無水マレイン酸共重合体、カルボキシメチルセルロース系およびエチレンオキサイド系からなる群から選択された高分子化合物の少なくとも１種であることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の乾式分析要素。
【請求項８】
前記試薬層が、ピロリン酸を無機リンに変換する試薬、及び変換された無機リンの量に応じた発色反応を行う試薬群を含有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の乾式分析要素。
【請求項９】
前記試薬層が、キサントシンまたはイノシン、無機ピロホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、キサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及び発色剤を含有することを特徴とする請求項８に記載の乾式分析要素。
【請求項１０】
前記発色剤がロイコ系色素であることを特徴とする請求項９に記載の乾式分析要素。
【請求項１１】
前記試薬層が、キサントシンまたはイノシン、無機ピロホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ及び発色剤を含有することを特徴とする請求項８に記載の乾式分析要素。
【請求項１２】
前記発色剤がホルマザン系色素であることを特徴とする請求項１１に記載の乾式分析要素。
【請求項１３】
前記試薬層が、マグネシウムイオンを含有することを特徴とする請求項８〜１２のいずれかに記載の乾式分析要素。
【請求項１４】
生体物質を含む液体試料を、前記試薬層に滴下し発色させ、反射測光あるいは透過測光による比色法により、前記生体物質の定量を行うために用いられることを特徴とする請求項１〜１３のいずれかに記載の乾式分析要素。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、微量な試料液中の生体物質を迅速・簡便に定量することが可能な乾式分析要素に関する。
【背景技術】
【０００２】  生体内における一般生化学物質、酵素その他の物質を定量するために用いられる乾式分析要素（多層分析要素、乾式分析素子、多層分析素子を全て含む）として、例えば特許文献１および特許文献２等に記載の技術がある。これらは、生体試料、例えば血液、リンパ液、髄液、尿等に含まれる成分の定量分析を行うための乾式分析要素に関するものである。【０００３】  また、これら生体試料中の一般生化学物質、酵素等に限らず、非常に多くの生体内外における生合成反応には、ピロリン酸の放出及びピロリン酸の分解が含まれる。このため、生合成反応を熱力学的な観点から調べる場合には、ピロリン酸の定量が有効である。例えば、核酸合成は、ＤＮＡポリメラーゼによりデオキシヌクレオシド３リン酸の重合を触媒しながら進行する。その際、核酸合成の副産物としてピロリン酸が放出される。核酸合成において、このピロリン酸の放出はエネルギー的に非常に重要である。また、このピロリン酸を検出することで、核酸合成が行われたか否かを確認することも重要である。例えば、核酸の増幅反応後の反応液について、ピロリン酸の定量を行うことにより、増幅が実際に行われた否かを確認することもしばしば行われる。【０００４】  このような生体内外の液体試料中において、ピロリン酸を定量するのに使用される乾式分析要素の技術として、例えば特許文献３に記載があり、これは乾式分析要素中でピロリン酸（ＰＰｉ）を無機ピロホスファターゼ（ＰＰａｓｅ）により無機リン（Ｐｉ）に変換し、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）により無機リン（Ｐｉ）をキサントシンまたはイノシンと反応させ、生じたキサンチンまたはヒポキサンチンをキサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）により酸化して尿酸を生成させ、この酸化過程で生じる過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を用いてペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）により発色剤（ロイコ色素等の色素前駆体）を発色させ、これを比色するものである。
また、ピロリン酸を測定するための反応系としては、キサンチンまたはヒポキサンチンが生成する反応以降において、例えばキサンチンデヒドロゲナーゼ（ＸＤＨ）を用いて生じるＮＡＤＨと、ジアホラーゼ（ＤＩ）により発色剤（例えばニトロテトラゾリウムブルー等のホルマゼン系色素）を発色させ、これを比色することも知られている。【０００５】  ここで使用可能な乾式分析要素とは、透明支持体上に一層または複数層の機能層を設けたものであって、その少なくとも一層に（または複数の層に渡って）検出試薬を含有させ、液体試料を一定量滴下後に、層内での反応により生じた生成色素を、分析要素の外から反射光あるいは透過光により比色定量するものである。【０００６】  一定量の液体試料を滴下後、乾式分析要素を適当な時間、一定温度に保って（インキュベーション）発色反応を十分に進行させた後、例えば透明支持体側から照明光を照射し、特定波長域で反射光量あるいは透過光量を測定して、反射光学濃度あるいは透過光学濃度を求め、予め求めておいた検量線に基づいて定量分析を行う。【０００７】  従来の、例えば特許文献３に記載のピロリン酸定量用乾式分析要素や、特許文献４に記載の乾式分析要素は、酵素、色材、基質等の発色反応に必要な試薬を含有する層、および透明支持体の他に、滴下された液体試料を保持し迅速に展開させる目的で展開層を設ける場合があった。この場合、展開層としては、メンブランフィルター（ブラッシュポリマー）、ポリマービーズを水で膨潤しないポリマー接着剤で点接触状に接触してなる三次元格子粒状構造物、織物等が使用可能である。【０００８】
【特許文献１】特開昭６０−８２８５９号公報
【特許文献２】特開昭６０−２２２７７０号公報
【特許文献３】特開２００４−１５６９８３号公報
【特許文献４】特開２００３−２７０２４９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】  ところが、上記特許文献３，４のように上記物質よりなる展開層を設けると、透過測光した場合に乾式分析要素内に入射した光が減衰・散乱などの影響を受け、正確な測定に支障をきたすおそれがある。一方、展開層を取り除くと、透過測光には有利であるが、今度は滴下された液体試料の機能層への液浸透速度が遅くなり、迅速な定量に適さなくなる。
本発明の目的は、液体試料中の例えば生体物質を迅速かつ簡便に分析することが可能な、展開層を設ける必要のない乾式分析要素を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】  本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、ゼラチン薄膜中に吸水性ポリマーを含有させることにより、展開層を設けなくても、液体試料のゼラチン薄膜中への浸透速度を速め、迅速な分析を実現可能な乾式分析要素を提供できることを見出し、本発明を完成するにいたった。【００１１】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）透明支持体上に、少なくとも吸水性ポリマーを含有するゼラチン薄膜からなる試薬層を設け、該試薬層中、前記吸水性ポリマーが、単位面積あたりのゼラチン量に対して、１０質量％を超えない量で存在し、該吸水性ポリマーの粒径が１０〜１００μｍであることを特徴とする乾式分析要素。
（２）前記試薬層中、前記吸水性ポリマーが、単位面積あたりのゼラチン量に対して、１〜５質量％で存在することを特徴とする前記（１）に記載の乾式分析要素。
（３）前記試薬層中のゼラチン量が、２〜１００ｇ／ｍ２の範囲にあることを特徴とする前記（１）または（２）に記載の乾式分析要素。
（４）前記試薬層が、少なくとも１種の界面活性剤を含有することを特徴とする前記（１）〜（３）のいずれかに記載の乾式分析要素。
（５）前記試薬層中、前記界面活性剤が、単位面積あたりのゼラチン量に対して、８０質量％を超えない量で存在することを特徴とする前記（４）に記載の乾式分析要素。
（６）前記界面活性剤が、シリコンを含有する化合物を含むことを特徴とする前記（４）または５）に記載の乾式分析要素。
（７）前記吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸塩系、デンプングラフト系、ポリビニルアルコール系、酢酸ビニル共重合体、無水マレイン酸共重合体、カルボキシメチルセルロース系およびエチレンオキサイド系からなる群から選択された高分子化合物の少なくとも１種であることを特徴とする前記（１）〜（６）のいずれかに記載の乾式分析要素。
（８）前記試薬層が、ピロリン酸を無機リンに変換する試薬、及び変換された無機リンの量に応じた発色反応を行う試薬群を含有することを特徴とする前記（１）〜（７）のいずれかに記載の乾式分析要素。
（９）前記試薬層が、キサントシンまたはイノシン、無機ピロホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、キサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及び発色剤を含有することを特徴とする前記（８）に記載の乾式分析要素。
（１０）前記発色剤が、ロイコ系色素を含有することを特徴とする前記（９）に記載の乾式分析要素。
（１１）前記試薬層が、キサントシンまたはイノシン、無機ピロホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ及び発色剤を含有することを特徴とする前記（８）に記載の乾式分析要素。
（１２）前記発色剤が、ホルマザン系色素を含有することを特徴とする前記（１１）に記載の乾式分析要素。
（１３）前記試薬層が、マグネシウムイオンを含有することを特徴とする前記（８）〜（１２）のいずれかに記載の乾式分析要素。
（１４）生体物質を含む液体試料を、前記試薬層に滴下し発色させ、反射測光あるいは透過測光による比色法により、前記生体物質の定量を行うために用いられることを特徴とする前記（１）〜（１３）のいずれかに記載の乾式分析要素。
本発明は上記（１）〜（１４）にかかるものであるが、参考のためその他の事項についても記載した。
１）透明支持体上に、少なくとも吸水性ポリマーを含有するゼラチン薄膜からなる試薬層を設けたことを特徴とする乾式分析要素。
２）前記試薬層中、前記吸水性ポリマーが、単位面積あたりのゼラチン量に対して、１０質量％を超えない量で存在することを特徴とする前記１）に記載の乾式分析要素。
３）前記試薬層中のゼラチン量が、２〜１００ｇ／ｍ２の範囲にあることを特徴とする前記１）または２）に記載の乾式分析要素。
４）前記試薬層が、少なくとも１種の界面活性剤を含有することを特徴とする前記１）〜３）のいずれかに記載の乾式分析要素。
５）前記試薬層中、前記界面活性剤が、単位面積あたりのゼラチン量に対して、８０質量％を超えない量で存在することを特徴とする前記４）に記載の乾式分析要素。
６）前記界面活性剤が、シリコンを含有する化合物を含むことを特徴とする前記４）または５）に記載の乾式分析要素。
７）前記吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸塩系、デンプングラフト系、ポリビニルアルコール系、酢酸ビニル共重合体、無水マレイン酸共重合体、カルボキシメチルセルロース系およびエチレンオキサイド系からなる群から選択された高分子化合物の少なくとも１種であることを特徴とする前記１）〜６）のいずれかに記載の乾式分析要素。
８）前記試薬層が、ピロリン酸を無機リンに変換する試薬、及び変換された無機リンの量に応じた発色反応を行う試薬群を含有することを特徴とする前記１）〜７）のいずれかに記載の乾式分析要素。
９）前記試薬層が、キサントシンまたはイノシン、無機ピロホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、キサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及び発色剤を含有することを特徴とする前記８）に記載の乾式分析要素。
１０）前記発色剤が、ロイコ系色素を含有することを特徴とする前記９）に記載の乾式分析要素。
１１）前記試薬層が、キサントシンまたはイノシン、無機ピロホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ及び発色剤を含有することを特徴とする前記８）に記載の乾式分析要素。
１２）前記発色剤が、ホルマザン系色素を含有することを特徴とする前記１１）に記載の乾式分析要素。
１３）前記試薬層が、マグネシウムイオンを含有することを特徴とする前記８）〜１２）のいずれかに記載の乾式分析要素。
１４）生体物質を含む液体試料を、前記試薬層に滴下し発色させ、反射測光あるいは透過測光による比色法により、前記生体物質の定量を行うために用いられることを特徴とする前記１）〜１３）のいずれかに記載の乾式分析要素。
【発明の効果】
【００１２】  本発明によれば、試薬層が、少なくとも吸水性ポリマーを含有するゼラチン薄膜からなるので、吸水性ポリマーの作用により液体試料がゼラチン薄膜中に迅速に浸透する。これにより、液体試料中の例えば生体物質を迅速かつ簡便に定量分析することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】  本発明に係る乾式分析要素の測定対象としては、生体物質であれば特に限定されず、たとえばピロリン酸、グルコース、ＧＰＴ、ＧＯＴ、尿酸、総コレステロール、中性脂肪、アルブミン等が挙げられる。
ピロリン酸を測定対象とする場合、例えば下記式１または式２に示す反応原理を用いることができる。下記式１または式２に示す反応系においては、ピロリン酸（ＰＰｉ）を無機ピロホスファターゼ（ＰＰａｓｅ）により無機リン（Ｐｉ）に変換し、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）により無機リン（Ｐｉ）をキサントシンまたはイノシンと反応させ、生じたキサンチンまたはヒポキサンチンをキサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）により酸化して尿酸を生成させ、この酸化過程で生じる過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を用いてペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）により発色剤を発色させ、これを比色するものである。
なお前記発色剤としては４−アミノアンチピリン等のＮ，Ｎ−ジ置換アニリンとフェノール類またはナフトール類、及びロイコ色素等が挙げられ、中でもロイコ色素等の色素前駆体が好ましい。【００１４】  あるいは、式３に示したように、キサンチンまたはヒポキサンチンが生成する反応以降において、例えばキサンチンデヒドロゲナーゼ（ＸＤＨ）を用いてＮＡＤの還元により生じるＮＡＤＨと、ジアホラーゼ（ＤＩ）により発色剤を発色させ、これを比色することも可能である。
なお前記発色剤としてはホルマザン系色素が挙げられ、中でもニトロテトラゾリウムブルー等が好ましい。【００１５】
【化１】
0004866839.tif 000002
【００１６】
【化２】
0004866839.tif 000003
【００１７】
【化３】
0004866839.tif 000004
【００１８】  また、その他のピロリン酸定量用発色反応も使用可能である。例えば、ピロリン酸を無機ピロホスファターゼにより無機リンに変換した後、既知の無機リン定量用発色反応を用いることができる。無機リンに変換した後の反応以降については、上記特許文献３に記載のように、生化学検査分野で既知の無機リン定量法を用いることにより、無機リンの量に応じた発色反応を行わせることができる。【００１９】  ピロリン酸以外の生体物質についても、各々の物質の既知の定量用発色反応を本乾式分析要素に組み込むことで、簡便・迅速に定量可能である。ピロリン酸以外の生体物質については下記文献を参照することができる。
グルコース：特開平１−２３１８９７号公報
ＧＰＴ：特開昭５７−１４４９９６号公報
ＧＯＴ：特開昭６２−１９５２９９号公報
尿酸：特開昭６３−２１９４００号公報
総コレステロール：特開平２−１８１６５６号公報
中性脂肪：特開昭６３−１１９６９５号公報
アルブミン：特開昭６２−１３７５６４号公報【００２０】  本発明の乾式分析要素では、乾式法を用いており、分析を行うまでは乾燥状態で貯蔵・保管されるため、いわゆる湿式法のように試薬を用時調製する必要がなく、また一般に乾燥状態のほうが試薬の安定性が高いことから、湿式法より簡便性、迅速性に優れている。また、微量の液体試料で、精度の高い検査を迅速に行うことができる方法としても優れている。【００２１】  本発明における乾式分析要素は、公知の多種の乾式分析要素と同様の層構成とすることができる。乾式分析要素は、生体物質を測定するための酵素及び基質等の試薬が含まれる試薬群を含む試薬層の他、透明支持体、検出層、接着層、吸水層、下塗り層、ガス透過層、緩衝層、その他の層を含む多重層としてもよい。このような乾式分析要素として、例えば、特開昭４９−５３８８８号公報（対応米国特許３，９９２，１５８）、特開昭５１−４０１９１号公報（対応米国特許４，０４２，３３５）、及び特開昭５５−１６４３５６号公報（対応米国特許４，２９２，２７２）、特開昭６１−４９５９号公報（対応ＥＰＣ公開特許０１６６３６５Ａ）の各明細書に開示されたものがある。【００２２】  光透過性水不透過性支持体を用いる場合の乾式分析要素は、実用的に次のような構成をとり得る。但し、本発明の内容はこれに限定されない。
（１）支持体上に試薬層を有するもの。
（２）支持体上に検出層、試薬層をこの順に有するもの。
（３）支持体上に第２試薬層、第１試薬層をこの順に有するもの。
（４）支持体上に検出層、第２試薬層、第１試薬層をこの順に有するもの。【００２３】  上記（３）または（４）に示すように、試薬層は異なる複数の層からなってもよい。例えば、ピロリン酸を測定対象とした場合、第１試薬層ではピロホスファターゼ反応とＰＮＰ反応を、第２試薬層ではＸＯＤ反応とＰＯＤ反応を進行させてもよい。または、第１試薬層ではピロホスファターゼ反応とＰＮＰ反応とＸＯＤ反応を、第２試薬層でＰＯＤ反応を進行させてもよい。【００２４】  以下、各層について詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００２５】  支持体：いずれのものも使用可能であるが、光透過性でしかも水不透過性の支持体が好ましい。光透過性かつ水不透過性支持体の材料として好ましいものはポリエチレンテレフタレート、ポリスチレンである。親水性層を強固に接着させるため、通常はこれらの表面に下塗り層を設けるか、親水化処理を施す。支持体の厚さは特に制限されないが、１０〜１０００μｍ程度、好ましくは５０〜３００μｍの範囲が適当である。【００２６】  検出層：検出層は、少なくとも発色剤を含有し、測定対象がピロリン酸である場合には、そのピロリン酸量に応じた発色が行われる。検出層と試薬層は分かれていてもよいが、検出層と試薬層が一体であってもよい。また、検出層には発色剤の他に、酵素等の発色反応を行う試薬群を含んでいてもよい。検出層を構成する材質は特に制限されないが、好ましくはゼラチンが適当である。検出層の厚さは特に制限されないが、塗布層として設ける場合には、約１〜約５００μｍ程度、好ましくは約１０〜約１００μｍの範囲が適当である。ラミネート等による積層など、塗布以外の方法による場合、厚さは数十μｍから数百μｍの範囲で大きく変化し得る。検出層中のゼラチン量は２〜１００ｇ／ｍ２、好ましくは５〜５０ｇ／ｍ２の範囲である。【００２７】  試薬層：試薬層は少なくとも吸水性ポリマーを含有するゼラチン薄膜からなり、例えば上述のようなピロリン酸を無機リンに変換する試薬、及び変換された無機リンの量に応じた発色反応を行う試薬群を含有する。
試薬層に含まれるゼラチンは、誘導体（例えばフタル化ゼラチン）も使用できる。試薬層の厚さは特に制限されないが、塗布層として設ける場合には、約１〜約５００μｍ程度、好ましくは約１０〜約１００μｍの範囲が適当である。ラミネート等による積層など、塗布以外の方法による場合、厚さは数十μｍから数百μｍの範囲で大きく変化し得る。
試薬層中のゼラチン量は２〜１００ｇ／ｍ２、好ましくは５〜５０ｇ／ｍ２の範囲である。【００２８】  吸水性ポリマーは、滴下された液体試料をいったん保持し、その後速やかに試薬層中へ浸透させるために試薬層中に添加する。このため、本発明の乾式分析要素では、前述のような生体試料を含む液体試料を拡散・浸透させる展開層を試薬層上に設けなくても、迅速に測定することができる。吸水性ポリマーは、ポリアクリル酸塩系、デンプングラフト系、ポリビニルアルコール系、酢酸ビニル共重合体、無水マレイン酸共重合体、カルボキシメチルセルロース系、エチレンオキサイド系等、一般に入手可能なものを使用することができるが、特にポリアクリル酸塩系が好ましい。また、重合法及び粉砕法どちらの方法によって製造された吸水性ポリマーでも使用可能である。【００２９】  吸水性ポリマーの粒径については、中心粒径が約１０〜約８００μｍのものを使用することが好ましいが、約１０〜約１００μｍのものがより好ましい。さらに修飾等により、高架橋されたタイプや耐塩性を高めたタイプの吸水性ポリマーも使用することができる。
吸水性ポリマーは、試薬層中の単位面積あたりのゼラチン量に対して１０質量％を超えない量を使用することができる。また、吸水性ポリマーの添加量としては、０．１質量％以上であることが好ましい。より好ましい吸水性ポリマーの使用量は、単位面積あたりのゼラチン量に対して、１〜５質量％である。【００３０】  本発明における吸水性ポリマーの効果を高めるため、すなわち液体試料をいったん保持し、その後速やかに試薬層中へ浸透させる効果をさらに高めるために、界面活性剤を試薬層に添加することができる。とくにシリコン含有界面活性剤が好ましい。さらに、非反応性のポリエーテル変性シリコンオイルが界面活性剤として好ましい。Ｈ．Ｌ．Ｂとして４〜１６の範囲のものが使用可能であるが、特に好ましいのは７〜１２の範囲のものである。界面活性剤は、試薬層中の単位面積あたりのゼラチン量に対して８０質量％を超えない量で使用することができる。また、界面活性剤の添加量としては、１質量％以上であることが好ましい。さらに好ましくは界面活性剤の使用量は、試薬層中の単位面積あたりのゼラチン量に対して５〜５０質量％である。
なお、シリコン含有界面活性剤とその他の界面活性剤とを併用することもできる。【００３１】  また本発明では、試薬層がマグネシウムイオンを含有することにより、検体が滴下された後の第一段階目のピロホスファターゼ反応がスムーズに進行するという効果が得られるため好ましい。マグネシウムイオンを試薬層に導入するには、通常ＭｇＣｌ２のようなマグネシウム塩を試薬層に水とともに含有させればよい。マグネシウムイオンの含有量は、試薬層中の単位面積あたりのゼラチン量に対して１〜７５質量％であることが好ましく、５〜５５質量％であることがより好ましい。【００３２】  試薬層には、上記の各種成分の他に、塗布特性、拡散性化合物の拡散性、反応性、保存性等の諸性能の向上を目的として、酵素の活性化剤や安定化剤、補酵素、界面活性剤、ｐＨ緩衝剤組成物、微粉末、酸化防止剤、その他、有機物あるいは無機物からなる各種添加剤を加えることができる。試薬層に含有させることができる緩衝剤の例としては、日本化学会編「化学便覧  基礎」（丸善（株），１９６６年発行）１３１２−１３２０頁、Ｒ．Ｍ．Ｃ．Ｄａｗｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ編「Ｄａｔａ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」第２版（Ｏｘｆｏｒｄ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９６９年発行）４７６−５０８頁、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」５，４６７−４７７頁（１９６６年）、「Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」１０４，３００−３１０頁（１９８０年）に記載のｐＨ緩衝剤系がある。ｐＨ緩衝剤系の具体例としてホウ酸塩を含む緩衝剤；クエン酸またはクエン酸塩を含む緩衝剤；グリシンを含む緩衝剤；ビシン（Ｂｉｃｉｎｅ）を含む緩衝剤；ＨＥＰＥＳを含む緩衝剤；ＭＥＳを含む緩衝剤などのグッド緩衝剤等がある。なお、リン酸塩を含む緩衝剤は、ピロリン酸検出用乾式分析要素に使用することはできない。【００３３】  試薬層は、特公昭５３−２１６７７号公報（対応米国特許３，９９２，１５８）、特開昭５５−１６４３５６号公報（対応米国特許４，２９２，２７２）、特開昭５４−１０１３９８号公報（対応米国特許４，１３２，５２８）等の明細書に記載の方法に従って本発明における各種試薬とゼラチンを含む水溶液または水分散液を支持体または検出層等の他の層の上に塗布し乾燥することにより設けることができる。なお、試薬層は異なる複数の層からなってもよいことは、前述のとおりである。【００３４】  なお、本発明に係る乾式分析要素には、展開層は設けても設けなくてもよいが、透過測光に有利であることから展開層を設けないことが望ましい。展開層を設ける場合は、展開層はメンブランフィルター（ブラッシュポリマー）、ポリマービーズを水で膨潤しないポリマー接着剤で点接触状に接触してなる三次元格子粒状構造物、織物等から形成することができる。【００３５】  本発明の乾式分析要素は、前述の諸特許明細書に記載の公知の方法により調製することができる。乾式分析要素は、一辺約５ｍｍから約３０ｍｍの正方形またはほぼ同サイズの円形等、任意の小片に裁断し、特公昭５７−２８３３３１号公報（対応米国特許４，１６９，７５１）、実開昭５６−１４２４５４号公報（対応米国特許４，３８７，９９���）、特開昭５７−６３４５２号公報、実開昭５８−３２３５０号公報、特表昭５８−５０１１４４号公報（対応国際公開：ＷＯ８３／００３９１）等に記載のスライド枠に収めて化学分析スライドとして用いるか、または市販の９６穴式プレート（あるいはそれ以上のウェル数のプレート）の各ウェル底面に本乾式分析要素が保持された形態で用いることができる。
また、本発明の乾式分析要素としては、上記で説明したようなスライド形状のものが好ましいが、使用目的によっては、小片や長尺のテープ状でもよい。また、本発明の乾式分析要素は、裁断したものをそのまま用いてもよいが、カセット、マガジン、または開口のある容器内に収納した形態で用いてもよく、開口カードに貼付または収めて用いることもできる。【００３６】  本発明の乾式分析要素は、前述の諸特許明細書に記載の操作と同様の操作により、液体試料中の被験物の検出および定量ができる。例えば約２〜約３０μＬ、好ましくは４〜１５μＬの範囲の水性液体試料液を試薬層に滴下（点着）する。点着した分析要素を約１５〜４５℃の範囲の一定温度で、好ましくは約２０〜４０℃の範囲内の一定温度で１〜３０分間インキュベーションする。分析要素内の発色または変色を透明支持体側から反射測光、あるいは透過測光し、予め作成した検量線を用いて比色法の原理により被験物の量を求めることができる。点着する液体試料の量、インキュベーション時間及び温度を一定にすることにより定量分析を高精度に実施できる。【００３７】  測定操作は、特開昭６０−１２５５４３号公報、特開昭６０−２２０８６２号公報、特開昭６１−２９４３６７号公報、特開昭５８−１６１８６７号公報（対応米国特許４，４２４，１９１）などに記載の化学分析装置や市販のプレートリーダーにより極めて容易な操作で高精度の定量分析を実施できる。なお、目的や必要精度によっては目視により発色の度合いを判定して、半定量的な測定を行ってもよい。
【実施例】
【００３８】  以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は下記例によって限定されるものではない。【００３９】（１）ピロリン酸定量用乾式分析要素
ゼラチン下塗り層が設けられている厚さ１８０μｍの無色透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）平滑フイルムシート（支持体）上に表１記載の組成（ａ）の水溶液を、以下の被覆率となるように塗布し、乾燥して試薬層を設けた。比較対照として表２記載の組成（ｂ）の水溶液を同様に塗布し、乾燥して試薬層を設けた。【００４０】
【表１】
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【００４１】
【表２】
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【００４２】  これらの乾式分析要素を直径約６ｍｍの円形状に裁断し、市販の９６穴式プレートの底面に貼り付けた。【００４３】測定例１：液体試料中のピロリン酸濃度とピロリン酸定量用乾式分析要素の発色の関係
純度を確認したピロリン酸カリウム（和光純薬製）を用いて、０；０．０５；０．１０；０．１５（ｍＭ）の各濃度のピロリン酸水溶液を調製し、実施例で作製した乾式分析要素に５μＬを点着した。乾式分析要素を２５℃にて１０分間インキュベーションした後、波長６５０ｎｍにて支持体側から透過濃度（ＯＤｔ）をプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製ＧＥＮｉｏｓ  Ｐｒｏ）にて測定した。結果を表３及び図１に示す。これから、本乾式分析要素を用いて液体試料中のピロリン酸量を定量的に測定できることがわかる。【００４４】
【表３】
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【００４５】測定例２：吸水性ポリマー及びシリコン含有界面活性剤添加の効果
本発明における実施例について、組成（ａ）及び対照として作製した組成（ｂ）の乾式分析要素について、純度を確認したピロリン酸カリウム（和光純薬製）を用いて、０；０．０５；０．１０（ｍＭ）の各濃度のピロリン酸水溶液を調製し、実施例で作成した乾式分析要素に５μＬを点着した。乾式分析要素を２５℃にて１０分間インキュベーションした後、波長６５０ｎｍにて支持体側から透過濃度（ＯＤｔ）をプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社製ＧＥＮｉｏｓ  Ｐｒｏ）にて測定した。発色反応のタイムコースの結果をＯＤｔとして表４に示す。組成（ｂ）は、組成（ａ）より、吸水性ポリマー及びシリコン含有界面活性剤を除いたものである。組成（ａ）と組成（ｂ）を比較すると、組成（ｂ）の方が０分におけるノイズが高く、また、被験液（ピロリン酸水溶液）５μＬ点着時に５分以上経過しても浸透が完了しなかったのに対して、組成（ａ）の乾式分析要素は、被験液５μＬ点着時に１５秒以内に浸透完了した。浸透速度を速めることにより、発色反応のタイムコースが改善されることが、３分と１０分のΔＯＤｔの差としてわかる。【００４６】
【表４】
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【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】液体試料中のピロリン酸濃度と１０分後の透過光学濃度（ＯＤｔ）の関係を示す図である。
【図１】
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