【手続補正書】
【提出日】平成30年4月26日(2018.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
条件的活性型生物学的タンパク質を調製する方法であって、
ｉ．親生物学的タンパク質を選択する工程と、
ｉｉ．前記親生物学的タンパク質をコードするＤＮＡを１つ以上の発達的技術を用いて発達させて、変異ＤＮＡを作成する工程と、
ｉｉｉ．前記変異ＤＮＡを発現させて、変異生物学的タンパク質を得る工程と、
ｉｖ．前記変異生物学的タンパク質及び前記親生物学的タンパク質を、滑液、幹細胞ニッチ及び罹患組織の細胞質からなる群から選択される第一位置の生理条件から選択される第一生理条件下での分析と、前記第一位置と異なる体内の第二位置の生理条件から選択される第二生理条件下での分析とに供する工程と、
ｖ．（ａ）前記第一生理条件下での前記分析における前記親生物学的タンパク質と比較して増加した活性と、（ｂ）前記第二生理条件下での前記分析における前記親生物学的タンパク質と比較して低下した活性との両方を呈する前記変異生物学的タンパク質から前記条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程と
を含む方法。
【請求項２】
前記タンパク質が抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記条件的活性型生物学的タンパク質を分子にコンジュゲートする工程をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記条件的活性型抗体を分子にコンジュゲートする工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
コンジュゲートすることが、前記条件的活性型抗体と前記分子との間に共有結合を形成することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
コンジュゲートすることが、前記条件的活性型抗体と前記分子との間に非共有結合を形成することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記分子が、サイトカイン、インターロイキン、酵素、ホルモン、成長因子、細胞傷害剤、化学療法薬、放射性粒子及び診断用薬剤からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
分子が前記条件的活性型抗体のＦｃ領域にコンジュゲートされる、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記条件的活性型抗体のＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸置換を導入する工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのアミノ酸置換が２つ以上のアミノ酸置換である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
多重特異性となるように前記条件的活性型抗体を操作する工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記操作された条件的活性型抗体が少なくとも２つの抗原に特異的に結合することができる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記親生物学的タンパク質が抗体であり、且つ前記発達させる工程が、前記抗体のＦｃ領域を突然変異させる工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法によって調製される条件的活性型生物学的タンパク質。
【請求項１５】
前記第二生理条件下で可逆的に不活性化される、請求項１４に記載の条件的活性型生物学的タンパク質。
【請求項１６】
条件的活性型生物学的タンパク質が、前記第一生理条件下で遊離する分子にコンジュゲートされる、請求項１４に記載の条件的活性型生物学的タンパク質。
【請求項１７】
単一光子放射型コンピュータ断層撮影法、磁気共鳴イメージング、光学イメージング、蛍光イメージング、陽電子放射断層撮影法、コンピュータ断層撮影法、Ｘ線イメージング、ガンマ線イメージング、及びそれらの組み合わせから選択されるイメージング技術によって検出されうる診断用薬剤にコンジュゲートされる、請求項１４に記載の条件的活性型生物学的タンパク質。
【請求項１８】
血液脳関門を通過するための条件的活性型抗体を調製する方法であって、
ｉ．血液脳関門受容体に対する親抗体を選択する工程と、
ｉｉ．前記親抗体をコードするＤＮＡを１つ以上の発達的技術を用いて発達させて、変異ＤＮＡを作成する工程と、
ｉｉｉ．前記変異ＤＮＡを発現させて、変異抗体を得る工程と、
ｉｖ．前記変異抗体及び前記親抗体を血漿中における第一生理条件下での分析と、脳細胞外液中における第二生理条件下での分析とに供する工程と、
ｖ．（ａ）前記第一生理条件下での前記分析における前記血液脳関門受容体に対する親和性と、（ｂ）前記第一生理条件下での前記分析における親和性との比較において、前記第二生理条件下での前記分析における前記血液脳関門受容体に対する低下した親和性と前記第二生理条件下での前記分析における前記血液脳関門受容体に対する欠如した親和性とからなる群から選択される親和性との両方を呈する前記変異抗体から前記条件的活性型抗体を選択する工程と
を含む方法。
【請求項１９】
前記条件的活性型抗体を分子にコンジュゲートする工程をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記分子が、サイトカイン、インターロイキン、酵素、ホルモン、成長因子、細胞傷害剤、化学療法薬、放射性粒子、抗体及び診断用薬剤からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記分子が前記条件的活性型抗体のＦｃ領域にコンジュゲートされる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記血液脳関門受容体が、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質８、及びヘパリン結合上皮成長因子様成長因子からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記第一生理条件下での前記分析における前記血液脳関門受容体に対する前記親和性が、前記血液脳関門受容体の天然リガンドの結合の阻害についてのＩＣ５０によって計測され、前記条件的活性型抗体の前記ＩＣ５０が約１ｎＭ〜約１００μＭ、又は約５ｎＭ〜約１００μＭ、又は約５０ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１００ｎＭ〜約１００μＭである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１８に記載の方法によって調製される条件的活性型抗体。
【請求項２５】
前記発達させる工程が、ＰＣＲ、エラープローンＰＣＲ、シャッフリング、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、アセンブリＰＣＲ、セクシャルＰＣＲ突然変異誘発、インビボ突然変異誘発、カセット突然変異誘発、再帰的アンサンブル突然変異誘発、指数関数的アンサンブル突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発、遺伝子リアセンブリ、遺伝子部位飽和突然変異誘発、リガーゼ連鎖反応、インビトロ突然変異誘発、リガーゼ連鎖反応、オリゴヌクレオチド合成、及びそれらの組み合わせから選択される技術を含む、請求項１又は１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記発現工程が、細菌細胞、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞、アデノウイルス、及び植物細胞から選択される宿主細胞において前記変異ＤＮＡを発現させる工程を含む、請求項１又は１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記真菌細胞が、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ハンゼヌラ・プリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｌｙｍｏｒｐｈａ）、及びアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）由来の細胞から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記昆虫細胞が、ショウジョウバエ属（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）Ｓ２細胞及びスポドプテラ属（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記哺乳類細胞が、Ｂｏｗｅｓメラノーマ細胞、ＣＯＳ−７細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞及びＢＨＫ細胞から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
条件的活性型抗体コンジュゲートを調製する方法であって、
ｉ．野生型抗体を選択する工程と、
ｉｉ．前記野生型抗体をコードするＤＮＡを１つ以上の発達的技術を用いて発達させて、変異ＤＮＡを作成する工程と、
ｉｉｉ．前記変異ＤＮＡを発現させて、変異抗体を得る工程と、
ｉｖ．前記変異抗体及び前記野生型抗体を正常生理条件下での分析と、異常条件下での分析とに供する工程と、
ｖ．（ａ）前記正常生理条件下での前記分析における前記野生型抗体と比較した活性の低下と、（ｂ）前記異常条件下での前記分析における前記野生型抗体と比較した活性の増加との両方を呈する条件的活性型抗体を選択する工程と、
ｖｉ．前記条件的活性型抗体を分子にコンジュゲートして、前記条件的活性型抗体コンジュゲートを作製する工程と
を含む方法。
【請求項３１】
条件的活性型ウイルス粒子を調製する方法であって、
ｉ．標的細胞上の標的タンパク質と結合する野生型生物学的タンパク質を選択する工程と、
ｉｉ．前記野生型生物学的タンパク質をコードするＤＮＡを１つ以上の発達的技術を用いて発達させて、変異ＤＮＡを作成する工程と、
ｉｉｉ．前記変異ＤＮＡを発現させて、変異生物学的タンパク質を得る工程と、
ｉｖ．前記変異生物学的タンパク質及び前記野生型生物学的タンパク質を正常生理条件下での分析と、異常条件下での分析とに供する工程と、
ｖ．（ａ）前記正常生理条件での前記分析における前記野生型生物学的タンパク質と比較した前記標的タンパク質との結合親和性の低下と、（ｂ）前記異常条件下での前記分析における前記野生型生物学的タンパク質と比較した前記標的タンパク質との結合親和性の増加との両方を呈する条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程と、
ｖｉ．前記条件的活性型生物学的タンパク質をウイルス粒子に挿入して、前記条件的活性型ウイルス粒子を作製する工程と
を含む方法。