【手続補正書】
【提出日】平成30年2月15日(2018.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(A)fHbp v2アミノ酸配列突然変異体を含むポリペプチドであって、(a)アミノ酸配列が、配列番号5に対して少なくとも80%の配列同一性を有する、および/もしくは少なくとも7アミノ酸長である配列番号5の断片を含み、配列番号5に由来するS32を含有するが、(b)アミノ酸配列が、残基S32において配列番号5とは異なり、ただし、fHbp v2アミノ酸配列突然変異体が残基32のみに置換を含む場合、この置換はアラニンとの置換ではないか、もしくは以下の残基：V33、L39、L41、F69、V100、I113、F122、L123、V124、S125、G126、L127、G128、S151、H239、および/もしくはE240の少なくとも1つが置換される、前記ポリペプチド；または
(B)fHbp v3アミノ酸配列突然変異体を含むポリペプチドであって、(a)アミノ酸配列が、配列番号17に対して少なくとも80%の配列同一性を有する、および/もしくは少なくとも7アミノ酸長である配列番号17の断片を含み、配列番号17に由来するS32を含有するが、(b)アミノ酸配列が、残基S32において配列番号17とは異なり、ただし、fHbp v3アミノ酸配列突然変異体が残基32のみに置換を含む場合、この置換はアラニンとの置換ではないか、もしくは以下の残基：I33、L39、L41、F72、V103、T116、F125、L126、V127、S128、G129、L130、G131、S154、H242、および/またはE243の少なくとも1つが置換される、前記ポリペプチド
である、v3またはv2 fHbp突然変異体。
【請求項２】
(A)アミノ酸配列が、S32ならびにV33、L39、L41、F69、V100、I113、F122、L123、V124、S125、G126、L127、G128、S151、H239、および/もしくはE240の1つ以上における置換により配列番号5と異なる、またはアミノ酸配列が、S32V; V33C; L39C; L41C; F69C; V100T; I113S; F122C; L123R; V124I; S125GもしくはS125T; G126D; L127I; G128A; S151C; H239R; E240Hからなる群から選択される置換により配列番号5と異なる；あるいは(B)アミノ酸配列が、S32ならびにI33、L39、L41、F72、V103、T116、F125、L126、V127、S128、G129、L130、G131、S154、H242、および/もしくはE243の1つ以上における置換により配列番号17と異なる；またはアミノ酸配列が、S32V; I33C; L39C; L41C; F72C; V103T; T116S; F125C; L126R; V127I; S128GもしくはS128T; G129D; L130I; G131A; S154C; H242R; およびE243Hからなる群から選択される置換により配列番号17と異なる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
複数の残基が、以下のような2B、2I、2Jまたは2O群：
2B：残基32および123；
2I：残基32および125；
2J：残基32、123および125；または
2O：残基32、123、124、125、126、127および128
から選択される、複数の残基に置換を含む、請求項１(A)に記載のポリペプチド。
【請求項４】
配列番号5と比較してS32VおよびL123R置換を含み、場合により、V124I、S125G、G126D、L127I、G128A置換をさらに含んでもよい、
あるいは、配列番号20または配列番号45または配列番号58を含む、
請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
複数の残基が、以下のような3B、3I、3Jまたは3O群：
3B：残基32および126；
3I：残基32および128；
3J：残基32、126および128；または
3O：残基32、126、127、128、129、130および131
から選択される、複数の残基に置換を含む、請求項１(B)に記載のポリペプチド。
【請求項６】
配列番号17と比較してS32VおよびL126R置換を含み、場合により、V127I、S128G、G129D、L130I、G131A置換をさらに含んでもよい、
あるいは、配列番号44または配列番号61を含む、
請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
ヒトH因子に結合するポリペプチドの能力を破壊する1つ以上のさらなる突然変異も含む、
あるいは、v2中では、R73、D203、E210、G228、S121、F122、A192、E194、V199、I200、L201、T213、H215、F219、T231、およびE240残基の1つ以上における置換、またはv3中では、Q35、I178、L87、A88、V127、V202、E213、T216、H218、T234、V241、E243、およびG248残基の1つ以上における置換を含む、
請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
下記：
・配列番号45のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有してもよく、該ポリペプチドが、配列番号2のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであるか、または
1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号45のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、配列番号2のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであり、
ただし該ポリペプチドは、V32もしくはR123残基において突然変異されていない、該ポリペプチド；
・配列番号44のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有してもよく、該ポリペプチドが配列番号40のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであるか、または
1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号44のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、配列番号40のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであり、
ただし該ポリペプチドは、V32もしくはR126残基において突然変異されていない、該ポリペプチド；
・配列番号58のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有してもよく、該ポリペプチドが、配列番号2のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであるか、または
1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号58のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、配列番号2のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであり、
ただし該ポリペプチドは、V32残基において突然変異されていない、該ポリペプチド；
・配列番号61のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有してもよく、該ポリペプチドが配列番号2のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであるか、または
1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号61のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、配列番号2のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができるものであり、
ただし該ポリペプチドは、V32残基において突然変異されていない、該ポリペプチド；
・fHbp v3アミノ酸配列を含むポリペプチドであって、該v3アミノ酸配列が、配列番号17のLeu-126に対応するアミノ酸位置での突然変異を除いてv3野生型アミノ酸配列と同一であるが、ただし、該突然変異がアラニンへの置換ではないもしくは該突然変異がアルギニンへの置換である、該ポリペプチド；
・fHbp v2アミノ酸配列を含むポリペプチドであって、該v2アミノ酸配列が、配列番号5のLeu-123に対応するアミノ酸位置での突然変異を除いてv2野生型アミノ酸配列と同一であるが、ただし、該突然変異がアラニンへの置換ではないもしくは該突然変異がアルギニンへの置換である、該ポリペプチド；ならびに
・配列番号47のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有してもよく、該ポリペプチドが配列番号46のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチド；配列番号4のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチド；および配列番号40のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチドのそれぞれに結合する抗体を惹起することができるものであるか、または、
配列番号48のアミノ酸配列からなる該ポリペプチド、
からなる群より選択されるポリペプチド。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むプラスミドまたは他の核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載のプラスミドで形質転換された宿主細胞。
【請求項１１】
髄膜炎菌細胞である、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
前記細胞が、mltAの下方調節またはノックアウトを有し、また、場合により、(i)LPSのリピドA部分を毒性にするのに関与する少なくとも1つの遺伝子、もしくは、lpxl1遺伝子；ならびに/あるいは(ii)莢膜多糖合成もしくは輸出に関与する少なくとも1つの遺伝子、または、synXおよび/もしくはctrA遺伝子の下方調節またはノックアウトを有してもよい、髄膜炎菌細胞である、請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
ベシクルが請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の宿主細胞から調製される膜ベシクル。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチド、または請求項１３に記載のベシクルを含む免疫原性組成物。
【請求項１５】
哺乳動物に投与された場合、髄膜炎菌に対して殺菌性である抗体応答を惹起する、第2のポリペプチドをさらに含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
(i)髄膜炎菌血清群A、C、W135および/もしくはYに由来するコンジュゲート化莢膜糖ならびに/または(ii)肺炎連鎖球菌に由来するコンジュゲート化莢膜糖をさらに含む、請求項１４または１５に記載の組成物。
【請求項１７】
哺乳動物における抗体応答を生じさせるための請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５１】
【表１】
2017512060.tif 000001
本発明は以下の実施形態を包含する。   
[１]  (A)fHbp v2アミノ酸配列突然変異体を含むポリペプチドであって、(a)アミノ酸配列が、配列番号5に対して少なくとも80%の配列同一性を有する、および/もしくは少なくとも7アミノ酸長である配列番号5の断片を含み、配列番号5に由来するS32を含有するが、(b)アミノ酸配列が、残基S32において配列番号5とは異なり、ただし、fHbp v2アミノ酸配列突然変異体が残基32のみに置換を含む場合、この置換はアラニンとの置換ではないか、もしくは以下の残基：V33、L39、L41、F69、V100、I113、F122、L123、V124、S125、G126、L127、G128、S151、H239、および/もしくはE240の少なくとも1つが置換される、前記ポリペプチド；または
(B)fHbp v3アミノ酸配列突然変異体を含むポリペプチドであって、(a)アミノ酸配列が、配列番号17に対して少なくとも80%の配列同一性を有する、および/もしくは少なくとも7アミノ酸長である配列番号17の断片を含み、配列番号17に由来するS32を含有するが、(b)アミノ酸配列が、残基S32において配列番号17とは異なり、ただし、fHbp v3アミノ酸配列突然変異体が残基32のみに置換を含む場合、この置換はアラニンとの置換ではないか、もしくは以下の残基：I33、L39、L41、F72、V103、T116、F125、L126、V127、S128、G129、L130、G131、S154、H242、および/またはE243の少なくとも1つが置換される、前記ポリペプチド
である、v3またはv2 fHbp突然変異体。   
[２]  (A)アミノ酸配列が、S32ならびにV33、L39、L41、F69、V100、I113、F122、L123、V124、S125、G126、L127、G128、S151、H239、および/もしくはE240の1つ以上における置換により配列番号5と異なる、例えば、置換が、S32V; V33C; L39C; L41C; F69C; V100T; I113S; F122C; L123R; V124I; S125GもしくはS125T; G126D; L127I; G128A; S151C; H239R; E240Hからなる群から選択される；または(B)アミノ酸配列が、S32ならびにI33、L39、L41、F72、V103、T116、F125、L126、V127、S128、G129、L130、G131、S154、H242、および/もしくはE243の1つ以上における置換により配列番号17と異なる；例えば、置換が、S32V; I33C; L39C; L41C; F72C; V103T; T116S; F125C; L126R; V127I; S128GもしくはS128T; G129D; L130I; G131A; S154C; H242R; およびE243Hからなる群から選択される、１に記載のポリペプチド。   
[３]  複数の残基が、以下のような2B、2I、2Jまたは2O群：
2B：残基32および123；
2I：残基32および125；
2J：残基32、123および125；または
2O：残基32、123、124、125、126、127および128
から選択される、複数の残基に置換を含む、１(A)に記載のポリペプチド。   
[４]  配列番号5と比較してS32VおよびL123R置換を含み、場合により、V124I、S125G、G126D、L127I、G128A置換をさらに含む、例えば、配列番号20または配列番号45または配列番号58を含む、３に記載のポリペプチド。   
[５]  複数の残基が、以下のような3B、3I、3Jまたは3O群：
3B：残基32および126；
3I：残基32および128；
3J：残基32、126および128；または
3O：残基32、126、127、128、129、130および131
から選択される、複数の残基に置換を含む、１(B)に記載のポリペプチド。   
[６]  配列番号17と比較してS32VおよびL126R置換を含み、場合により、V127I、S128G、G129D、L130I、G131A置換をさらに含む、例えば、配列番号44または配列番号61を含む、５に記載のポリペプチド。   
[７]  ヒトH因子に結合するポリペプチドの能力を破壊する1つ以上のさらなる突然変異も含む、例えば、v2中では、R73、D203、E210、G228、S121、F122、A192、E194、V199、I200、L201、T213、H215、F219、T231、およびE240残基の1つ以上における置換、またはv3中では、Q35、I178、L87、A88、V127、V202、E213、T216、H218、T234、V241、E243、およびG248残基の1つ以上における置換を含む、１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド。   
[８]  下記：
・場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有し、ポリペプチドが配列番号2(例えば、1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号45のアミノ酸配列を含む)のアミノ酸配列からなるが、V32もしくはR123残基において突然変異されていない髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができる、配列番号45のアミノ酸配列；
・場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有し、ポリペプチドが配列番号40(例えば、1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号44のアミノ酸配列を含む)のアミノ酸配列からなるが、V32もしくはR126残基において突然変異されていない髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができる、配列番号44のアミノ酸配列；
・場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有し、ポリペプチドが配列番号2(例えば、1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号58のアミノ酸配列を含む)のアミノ酸配列からなるが、V32残基において突然変異されていない髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができる、配列番号58のアミノ酸配列；
・場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有し、ポリペプチドが配列番号2(例えば、1、2、もしくは3個の単一アミノ酸置換を有する配列番号61のアミノ酸配列を含む)のアミノ酸配列からなるが、V32残基において突然変異されていない髄膜炎菌fHbpポリペプチドに結合する抗体を惹起することができる、配列番号61のアミノ酸配列；
・v3アミノ酸配列が、配列番号17のLeu-126に対応するアミノ酸位置での突然変異を除いてv3野生型アミノ酸配列と同一であるが、ただし、突然変異がアラニンへの置換ではない(例えば、突然変異がアルギニンへの置換である)、fHbp v3アミノ酸配列；
・v2アミノ酸配列が、配列番号5のLeu-123に対応するアミノ酸位置での突然変異を除いてv2野生型アミノ酸配列と同一であるが、ただし、突然変異がアラニンへの置換ではない(例えば、突然変異がアルギニンへの置換である)、fHbp v2アミノ酸配列；または
・場合により、1、2、3、4、もしくは5個の単一アミノ酸置換、欠失および/もしくは挿入を有し、ポリペプチドが配列番号46のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチド；配列番号4のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌fHbpポリペプチド；および配列番号40のアミノ酸配列からなる(例えば、配列番号48のアミノ酸配列からなる)髄膜炎菌fHbpポリペプチドのそれぞれに結合する抗体を惹起することができる、配列番号47のアミノ酸配列
を含むポリペプチド。   
[９]  １〜８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むプラスミドまたは他の核酸。   
[１０]  例えば、細胞が、mltAの下方調節またはノックアウトを有し、また、場合により、(i)LPSのリピドA部分を毒性にするのに関与する少なくとも1つの遺伝子、特に、lpxl1；および/または(ii)莢膜多糖合成もしくは輸出に関与する少なくとも1つの遺伝子、特に、synXおよび/もしくはctrAの下方調節またはノックアウトを有する髄膜炎菌細胞などの、髄膜炎菌細胞である、９に記載のプラスミドで形質転換された宿主細胞。   
[１１]  ベシクルが１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む、９に記載の宿主細胞から調製される膜ベシクル。   
[１２]  １〜８のいずれか一項に記載のポリペプチド、または１１に記載のベシクルを含む免疫原性組成物。   
[１３]  哺乳動物に投与された場合、髄膜炎菌に対して殺菌性である抗体応答を惹起する、第2のポリペプチドをさらに含む、１２に記載の組成物。   
[１４]  (i)髄膜炎菌血清群A、C、W135および/もしくはYに由来するコンジュゲート化莢膜糖ならびに/または(ii)肺炎連鎖球菌に由来するコンジュゲート化莢膜糖をさらに含む、１２または１３に記載の組成物。   
[１５]  １２〜１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与することを含む、哺乳動物における抗体応答を生じさせるための方法。