【手続補正書】
【提出日】平成30年8月31日(2018.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
寄生生物熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）に対するヒトワクチンとして適した組換えタンパク質の混合物であって、寄生生物生活環の前赤内期、血液および有性の主な段階の熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）表面タンパク質に由来する複数の抗原を含み、
ａ）ＰｆＣＳＰの前赤内期抗原ＴＳＲ−ドメイン、
ｂ）血液段階抗原頂端膜抗原（ＰｆＡＭＡ１）の１種または複数の変異体または断片およびメロゾイト表面タンパク質ＰｆＭｓｐ１−１９およびＰｆＲｈ５由来のペプチド、
ｃ）有性段階、オーキネート抗原Ｐｆｓ２５
を含み、前記頂端膜抗原（ＰｆＡＭＡ１）の変異体または断片が、ＰｆＡＭＡ１、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ１、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ２、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ３の任意の野生型変異体からなる群から選択される、混合物。
【請求項２】
前記頂端膜抗原の変異体または断片が、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ１、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ２およびＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ３を含む、請求項１に記載の混合物。
【請求項３】
前記抗原が、１種または複数の組換え融合タンパク質中に含まれる、請求項１または２に記載の混合物。
【請求項４】
３種の組換え融合タンパク質を含み、前記異なる組換え融合タンパク質が、以下の抗原：
ａ）融合タンパク質１：ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ１、Ｐｆｓ２５およびＰｆＣＳＰ＿ＴＳＲ
ｂ）融合タンパク質２：ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ２、Ｐｆｓ２５およびＰｆＭＳＰ１−１９
ｃ）融合タンパク質３：ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ３、Ｐｆｓ２５およびＰｆＲｈ５由来のペプチド
を含む、請求項３に記載の混合物。
【請求項５】
前記３種の組換え融合タンパク質が、
ａ）融合タンパク質１：配列番号９、
ｂ）融合タンパク質２：配列番号１０、
ｃ）融合タンパク質３：配列番号１１、
または１個もしくは複数のアミノ酸残基の置換、挿入、付加もしくは欠失による組換えもしくは合成法によって生成されるその相同ポリペプチドのアミノ酸配列を有し、前記相同ポリペプチドが少なくとも８０％の配列同一性を有する、請求項４に記載の混合物。
【請求項６】
前記３種の組換え融合タンパク質が、
ｄ）融合タンパク質１：配列番号９、
ｅ）融合タンパク質２：配列番号１０、
ｆ）融合タンパク質３：配列番号１２、
または１個もしくは複数のアミノ酸残基の置換、挿入、付加もしくは欠失による組換えもしくは合成法によって生成されるその相同ポリペプチドのアミノ酸配列を有し、前記相同ポリペプチドが少なくとも８０％の配列同一性を有する、請求項４に記載の混合物。
【請求項７】
前記組換え融合タンパク質が、混合物中に等モル比で含まれる、請求項４から６のいずれか一項に記載の混合物。
【請求項８】
配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２の配列を有するポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
【請求項９】
請求項８に記載のヌクレオチド分子を含むベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載のベクターを含む宿主細胞であって、酵母細胞、特に、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）である、宿主細胞。
【請求項１１】
活性成分としての請求項１から７のいずれか一項に記載の混合物を含む、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）に対してヒト個体を免疫処理するのに適した、ワクチン組成物。
【請求項１２】
アジュバントをさらに含む、請求項１１に記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
請求項１から７のいずれか一項に記載の組換えタンパク質の混合物を生成する方法であって、（ａ）前記組換えタンパク質を生成するのに適した条件下、適した培養培地中で請求項１０に記載の宿主細胞を培養するステップと、（ｂ）前記生成された組換えタンパク質を得るステップと、任意選択で、（ｃ）前記組換えタンパク質をプロセシングするステップとを含む、方法。
【請求項１４】
請求項１から７のいずれか一項に記載の混合物中の種々の組換えタンパク質と結合する、種々の単離された抗体またはその断片を含む抗体組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
図６は、ＳＭＦＡから得た結果を示す。精製したウサギ免疫ＩｇＧを、１、０．３、０
．１、０．０３および０．０１ｍｇ／ｍｌで使用した。プロットは、正常なウサギ血清か
ら精製された抗体に対する阻害パーセントを示す。阻害の明確な用量依存性が観察された
。
本発明は、以下の態様を包含しうる。
[１］
寄生生物熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）に対するヒトワクチンとして
適した組換えタンパク質の混合物であって、寄生生物生活環の前赤内期、血液および有性
の主な段階の熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）表面タンパク質に由来する
複数の抗原を含み、
ａ）ＰｆＣＳＰの前赤内期抗原ＴＳＲ−ドメインまたはその変異体もしくは断片、
ｂ）血液段階抗原頂端膜抗原（ＰｆＡＭＡ１）の１種または複数の変異体または断片お
よびメロゾイト表面タンパク質ＰｆＭｓｐ１−１９またはその変異体もしくは断片および
ＰｆＲｈ５由来のペプチドまたはその変異体、
ｃ）有性段階、オーキネート抗原Ｐｆｓ２５またはその変異体もしくは断片
を含む、混合物。
[２］
前記頂端膜抗原（ＰｆＡＭＡ１）の変異体または断片が、ＰｆＡＭＡ１、ＰｆＡＭＡ１
−ＤＩＣＯ１、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ２、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ３の任意の野生型変
異体ならびにその変異体もしくは断片からなる群から選択される、［１］に記載の混合
物。
[３］
前記頂端膜抗原の変異体または断片が、ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ１、ＰｆＡＭＡ１−Ｄ
ＩＣＯ２およびＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ３を含む、［１］から［２］のいずれか一項に記載
の混合物。
[４］
前記抗原が、１種または複数の組換え融合タンパク質中に含まれる、［１］から［３］の
いずれか一項に記載の混合物。
[５］
３種の組換え融合タンパク質を含み、前記異なる組換え融合タンパク質が、以下の抗原
：
ａ）融合タンパク質１：ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ１、Ｐｆｓ２５およびＰｆＣＳＰ＿Ｔ
ＳＲ
ｂ）融合タンパク質２：ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ２、Ｐｆｓ２５およびＰｆＭＳＰ１−
１９
ｃ）融合タンパク質３：ＰｆＡＭＡ１−ＤＩＣＯ３、Ｐｆｓ２５およびＰｆＲｈ５由来
のペプチド
を含む、［４］に記載の混合物。
[６］
前記３種の組換え融合タンパク質が、
ａ）融合タンパク質１：配列番号９、
ｂ）融合タンパク質２：配列番号１０、
ｃ）融合タンパク質３：配列番号１１、
または１個もしくは複数のアミノ酸残基の置換、挿入、付加もしくは欠失による組換えも
しくは合成法によって生成されるその相同ポリペプチド
のアミノ酸配列を有する、［５］に記載の混合物。
[７］
前記３種の組換え融合タンパク質が、
ａ）融合タンパク質１：配列番号９、
ｂ）融合タンパク質２：配列番号１０、
ｃ）融合タンパク質３：配列番号１２、
または１個もしくは複数のアミノ酸残基の置換、挿入、付加もしくは欠失による組換えも
しくは合成法によって生成されるその相同ポリペプチド
のアミノ酸配列を有する、［５］に記載の混合物。
[８］
前記組換え融合タンパク質が、混合物中に等モル比で含まれる、［５］から［７］のいず
れか一項に記載の混合物。
[９］
ａ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２の配列を有するポリ
ペプチドをコードする核酸分子、
ｂ）好ましくは、１個もしくは複数のアミノ酸残基が保存的に置換されている、配列番
号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２の配列を有する配列の修飾された
形態をコードする核酸分子、
ｃ）ストリンジェントな条件下でａ）〜ｂ）の核酸分子のいずれかとハイブリダイズ可
能である核酸分子、
ｄ）ストリンジェントな条件下でａ）〜ｃ）の核酸分子のいずれかの相補体とハイブリ
ダイズ可能である核酸分子、
ｅ）ａ）〜ｄ）の核酸分子のいずれかと少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸分
子、
ｆ）またはａ）〜ｅ）の核酸分子のいずれかの相補体
からなる群から選択される単離された核酸分子。
[１０］
［９］に記載のヌクレオチド分子を含むベクター。
[１１］
［１０］に記載のベクターを含む宿主細胞であって、酵母細胞、特に、ピキア・パス
トリス（Pichia pastoris）である、宿主細胞。
[１２］
活性成分としての［１］から［８］のいずれか一項に記載の混合物を含む、熱帯熱マラリ
ア原虫（Plasmodium falciparum）に対してヒト個体を免疫処理するのに適した、ワクチ
ン組成物。
[１３］
アジュバントをさらに含む、［１２］に記載のワクチン組成物。
[１４］
［１］から［８］のいずれか一項に記載の組換えタンパク質の混合物を生成する方法であ
って、（ａ）前記組換えタンパク質を生成するのに適した条件下、適した培養培地中で
［１１］に記載の宿主細胞を培養するステップと、（ｂ）前記生成された組換えタンパク
質を得るステップと、任意選択で、（ｃ）前記組換えタンパク質をプロセシングするステ
ップとを含む、方法。
[１５］
［１］から［８］のいずれか一項に記載の混合物中の種々の組換えタンパク質と結合する
、種々の単離された抗体またはその断片を含む抗体組成物。