【手続補正書】
【提出日】平成30年9月13日(2018.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における緑膿菌細菌を含むバイオフィルムの生存率をモニタリングする方法であって、
（ａ）患者からの流体試料を作用電極および参照電極を含有するマイクロ流体デバイスに導入すること、
（ｂ）流体試料中のピオシアニンを検出するために電気化学的測定を行うこと、
（ｃ）ピオシアニン濃度と作用電極を通る電流との間の予め決定された相関を用いて、流体試料中のピオシアニンの濃度を決定することを含み、
ここで、流体試料中のピオシアニン濃度が、バイオフィルムの生存率の尺度を提供する、前記方法。
【請求項２】
ステップ（ｃ）で決定されたピオシアニン濃度に基づいて、バイオフィルム中の緑膿菌の生存細胞数を推定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ピオシアニンの濃度が、作用電極を通る電流の線形関係に基づいて、ステップ（ｃ）において決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
作用電極を通る電流が１μＡ未満の場合、バイオフィルムが非生存または不存在とみなされる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
電気化学的測定が、矩形波ボルタンメトリー、線形掃引ボルタンメトリー、ステアケースボルタンメトリー、サイクリックボルタンメトリー、方形波パルスボルタンメトリー、微分パルスボルタンメトリー、およびクロノアンペロメトリーからなる群から選択され、好ましくは電気化学的測定が矩形波ボルタンメトリーであり、電流が１以上の矩形波電位に応答して測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
マイクロ流体デバイスは第２の作用電極を含み、
作用電極は酸化電極および還元電極の一方であり、第２作用電極は酸化電極および還元電極の他方であり、
ピオシアニンの濃度は、酸化電極および還元電極を通る電流として測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
１０μＬ以下の流体試料体積が導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ａ）において、流体試料をマイクロ流体デバイス中に連続的に導入することをさらに含む、またはステップ（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返すことをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
流体試料をデバイスへくみ出すためにマイクロ流体デバイスの入口またはその近傍にキャピラリまたは芯材を配置する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
マイクロ流体デバイスが患者によって着用されるか、または患者に埋め込まれる、または
マイクロ流体デバイスが創傷被覆材内、または創傷被覆材用の吸収パッド内または近傍に埋め込まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
マイクロ流体デバイスが創傷被覆材、包帯、外科用インプラント、カテーテル、人工呼吸器マスク、顔面マスク、外科用マスク、または挿管チューブ、コンタクトレンズケース、尿収集カップ、または尿バッグに存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
流体試料が、嚢胞性線維症、人工呼吸器関連肺炎、慢性創傷、火傷、外科用インプラント、または手術部位を有するヒト由来であるか、、または、創傷滲出液、気管支洗浄液、痰、尿、唾液、髄液、涙および血液からなる群から選択される体液である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
患者における緑膿菌感染の抗生物質処置の有効性をモニタリングする方法であって、
（ａ）患者からの流体試料を作用電極および参照電極を含むマイクロ流体デバイスに導入すること、
（ｂ）流体試料中のピオシアニンを検出するための電気化学的測定を行うこと、そして
（ｃ）ピオシアニンの既知の濃度と作用電極を通る電流との間の予め決定された相関を用いて、液体試料中のピオシアニンの濃度を決定することを含み、
ここで、流体試料中のピオシアニン濃度が、抗生物質処置の有効性の尺度を提供する、前記方法。
【請求項１４】
ピオシアニンの濃度が、閾値レベルを上回る場合か、または、ピオシアニンの濃度が所定の時間間隔後に閾値レベルを下回らない場合、抗生物質の増加した用量を投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ピオシアニンの閾値レベルが少なくとも５μＭの濃度である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
所定の時間間隔が少なくとも１２時間である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ピオシアニンの濃度が閾値レベル未満に低下した場合、抗生物質の減少した用量を投与量するか、または抗生物質を停止させることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
ピオシアニンの閾値レベルが少なくとも５μＭの濃度である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
抗生物質が硫酸コリスチンまたはシプロフロキサシンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
緑膿菌を含むバイオフィルムに対する抗生物質の有効性をスクリーニングする方法であって、
（ａ）作用電極および参照電極を含有するマイクロ流体デバイス内の増殖チャンバ内に緑膿菌を含む試料を導入すること、
（ｂ）緑膿菌を増殖させて増殖チャンバ内にバイオフィルムを形成させること、
（ｃ）選択された濃度の抗生物質をデバイスの増殖チャンバ内に導入すること、
（ｄ）流体試料中のピオシアニンを検出するための電気化学的測定を行うこと、
（ｅ）ピオシアニンの既知の濃度と作用電極を通る電流との間の予め決定された相関を使用することによって試料中のピオシアニンの濃度を決定することを含み、
ここで、閾値未満のピオシアニンの濃度は抗生物質の有効性を示し、
ここで、値レベルが、好ましくは少なくとも５μＭの濃度を含み；
および好ましくは1以上の：
ピオシアニンの濃度が閾値レベルを超える場合、緑膿菌の存在の指標を提供すること；または
ステップ（ａ）が、緑膿菌を含む試料を、マイクロ流体デバイス内の複数の増殖チャンバ内に導入することを含み、およびステップ（ｃ）が、複数の濃度の抗生物質の有効性をスクリーニングするために、選択された異なる濃度の抗生物質を各増殖チャンバ内に同時に導入することを含む；または
抗生物質の異なる濃度でステップ（ａ）〜ステップ（ｃ）を繰り返すこと；またはステップ（ｂ）において、抗生物質を増殖チャンバ内に連続的に導入することを含む、前記方法。
【請求項２１】
緑膿菌を含むバイオフィルムの生存率をモニタリングする方法であって、
（ａ）作用電極および参照電極を含むマイクロ流体デバイスに流体試料を導入すること、
（ｂ）流体試料中のピオシアニンを検出するための電気化学的測定を行うこと、
（ｃ）ピオシアニン濃度と作用電極を通る電流との間の予め決定された相関を用いて、流体試料中のピオシアニンの濃度を決定することを含み、
ここで、流体試料中のピオシアニン濃度は、バイオフィルムの生存率の尺度を提供し、；および
マイクロ流体デバイスが、好ましくは、コンタクトレンズケース、尿バッグ、尿収集カップ、投薬ポンプ、水パイプ、バイオリアクター、または水ポンプに配置される、前記方法。
【請求項２２】
緑膿菌を含むバイオフィルムの生存率をモニタリングするためのデバイスであって、
基板内に配置されたマイクロ流体またはナノマイクロ流体チャネル、マイクロ流体またはナノ流体チャネル内に配置された作用電極と、マイクロ流体またはナノ流体チャネル内に配置された参照電極とを含む、マイクロ流体またはナノ流体電極アセンブリを含むセンサと、
プロセッサおよびメモリ含む制御システムであって、メモリに記憶された機械可読命令がプロセッサによって実行されると、作用電極および参照電極における電圧を制御し、既知の濃度のピオシアニンと作用電極を通る電流との間の予め決定された相関関係を使用することによって、マイクロ流体またはナノ流体チャネル中の流体試料中のピオシアニンの濃度を決定する、前記制御システムとを含み；および、ここで
デバイスは、好ましくは約５μＭ〜約１ｍＭの範囲にわたるピオシアニンの濃度の指標を提供するように動作可能であるか、またはピオシアニンの濃度が約５μＭの閾値レベルを上回る場合に、緑膿菌の存在の指標を提供するように動作可能である；または、
ピオシアニンの濃度は、好ましくはメモリに記憶された作用電極を通る電流の線形関係から決定される；または
センサは、好ましくは使い捨てであるか、または
センサは、創傷被覆材に埋め込まれているか、創傷被覆材のための吸収パッドの内部または近傍に埋め込まれているか、または、創傷被覆材、外科用インプラント、カテーテル、人工呼吸器マスク、挿管チューブ、またはコンタクトレンズケース内に存在し；または
制御システムは、好ましくはプロセッサおよびセンサと通信するポテンシオスタットをさらに含み、ポテンシオスタットは、作用電極および参照電極における電圧を制御するように動作可能であり、ポテンシオスタットがバッテリー駆動であるか、またはケーブルによってポテンシオスタットに接続可能であり；または
制御システムは、好ましくは矩形波ボルタンメトリー、線形掃引ボルタンメトリー、ステアケースボルタンメトリー、サイクリックボルタンメトリー、方形波パルスボルタンメトリー、微分パルスボルタンメトリー、およびクロノアンペロメトリーからなる群から選択される、電気化学的測定を行うように動作可能であり、およびより好ましくは、電流は、１つ以上の矩形波電位に応答して測定される；または
制御システムは、好ましくは電気通信ネットワーク接続をさらに含有するか、または
制御システムは、好ましくは決定されたピオシアニン濃度、緑膿菌の存在の指標、および緑膿菌の細胞数の指標の１以上を表示するように動作可能なディスプレイと通信する、前記デバイス。