【手続補正書】
【提出日】平成30年6月22日(2018.6.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管が張り巡らされている中空器官を作製する方法であって、
ａ）ヒト腸オルガノイド（ＨＩＯ）を免疫不全の生物（ヒトを除く）、好ましくは哺乳類（ヒトを除く）、好ましくは免疫反応を有さない哺乳類（ヒトを除く）、好ましくは重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）を有する哺乳類（ヒトを除く）に移植する工程
を有し、前記ＨＩＯはヒト胚幹細胞（ＥＳＣ）及び／または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から得られ、
前記移植する工程の間に前記ＨＩＯが成熟腸組織を形成する、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、前記ヒト腸オルガノイド（ＨＩＯ）が、ヒトＥＳＣ、もしくはｉＰＳＣ、またはそれらの組合せから作製される、方法。
【請求項３】
請求項１〜２のいずれか記載の方法において、前記移植する工程が、前記免疫不全の生物（ヒトを除く）の腎被膜への前記ＨＩＯの移植を有する、方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか記載の方法において、前記移植する工程が、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約５週間、もしくは少なくとも約６週間、または最大で約３ヶ月、もしくは最大で約４ヶ月、もしくは最大で約５ヶ月、もしくは最大で約６ヶ月の期間にわたり実施される、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか記載の方法において、前記移植する工程は、前記腸組織が、
支持間葉に包囲される円柱腸上皮を有すること、
直径１〜３ｃｍの成長、
機能的腸細胞を有する絨毛及び陰窩の形成、
粘膜下及び腸筋層間に平滑筋線維層を有すること、
並びにこれらの組合せ
から選択される１つまたはそれより多い基準を満たすまで実施される、方法。
【請求項６】
機能的腸神経系（ＥＮＳ）を含有するヒト腸組織を作製する方法であって、
ａ）ヒトＥＳ細胞及び／またはｉＰＳ細胞（ＩＰＣ）に由来する迷走神経様神経堤細胞（ＮＣＣ）を三次元ヒト腸オルガノイド（ＨＩＯ）に接触させる工程と、
ｃ）前記ＨＩＯをｉｎ  ｖｉｖｏで移植する工程と
を有する、方法。
【請求項７】
請求項６記載の方法において、前記ＮＣＣは、後部化を引き起こすため、ヒトＥＳ細胞及び／またはｉＰＳ細胞をレチノイン酸に接触させる工程によって取得され、好ましくは、前記レチノイン酸が前記ヒトＥＳ細胞及び／またはｉＰＳ細胞と約１〜約２日間、好ましくは約２日間の期間にわたって接触される、方法。
【請求項８】
請求項６または７記載の方法において、前記レチノイン酸に接触させる工程が、ニューロスフェアステージにおいて約２日間にわたって、またはＨＯＸＢ３、ＨＯＸｂ５、及び／もしくはＨＯＸｂ７の実質的な発現が観察されるまで実行される、方法。
【請求項９】
請求項６〜８のいずれか記載の方法において、前記移植する工程が、神経及び／または神経膠の検出を可能にするのに十分な期間にわたって実施される、方法。
【請求項１０】
請求項６〜９のいずれか記載の方法において、前記神経がＢＩＩＩ−チューブリンを有する、方法。
【請求項１１】
請求項６〜１０のいずれか記載の方法において、前記神経膠がＳ１００を有する、方法。
【請求項１２】
請求項６〜１１のいずれか記載の方法において、前記神経及び神経膠が、平滑筋層（デスミン＋細胞）に統合する、方法。
【請求項１３】
請求項６〜１２のいずれか記載の方法において、前記移植する工程が、ｎＮＯＳ＋抑制性神経の形成を可能にするのに十分な期間にわたって実施される、方法。
【請求項１４】
請求項６〜１３のいずれか記載の方法において、前記機能的腸神経系（ＥＮＳ）を含有するヒト腸組織が、収縮活動が可能なものである、方法。
【請求項１５】
患者の胃腸管の一部の置換を必要とする患者を治療するためのヒト腸組織を作製するための、ヒト腸オルガノイド（ＨＩＯ）の使用であって、前記ＨＩＯ由来のヒト腸組織によって前記一部が置換される、使用。
【請求項１６】
ヒト腸管に対する治療の効果を決定するためのヒト腸組織を作製するための、ヒト腸オルガノイド（ＨＩＯ）の使用であって、前記治療は前記ＨＩＯ由来のヒト腸組織に接触される、使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
現在、血管が張り巡らされている中空器官、とくに腸神経系（ＥＮＳ）腸生物学の研究のためのモデルを作製するための方法ための技術に、需要がある。さらに、機能的腸神経系を有する腸組織を作製する方法のための技術に、需要がある。現在、ヒト腸を研究するための方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養システムを主に必要とし、あるいは動物モデルに依存してきた。しかしながら、これらの研究は必ずしも上手くヒトでの研究に置き換えが効かない。腸幹細胞、及びヒト上皮培養がこれらの問題のいくらかには取り組んできたものの、上皮培養のｉｎ  ｖｉｖｏ移植の成功は、支持間葉が必要であることゆえ、課題であり続けている。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１）  国際公開第２０１０／１４３７４７号
（非特許文献）
（非特許文献１）  ＴＡＫＡＫＩ  Ｍ  ＥＴ  ＡＬ："Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｔｅｒｉｃ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｉｎ  ａ  Ｇｕｔ−Ｌｉｋｅ  Ｏｒｇａｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ"．ＳＴＥＭ  ＣＥＬＬＳ．ｖｏｌ．２４，ｎｏ．６，９  Ｊｕｎｅ  ２００６  （２００６−０６−０９），ｐａｇｅｓ  １４１４−１４２２
（非特許文献２）  ＬＩＮＤＬＥＹ  Ｒ  Ｍ  ＥＴ  ＡＬ："Ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｎｔｅｒｉｃ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇａｎｇｌｉｏｎｉｃ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｄｉｓｔａｌ  Ｃｏｌｏｎ"．ＧＡＳＴＲＯＥＮＴＥＲＯＬＯＧＹ．ｖｏｌ．１３５，ｎｏ．１，Ｊｕｌｙ  ２００８（２００８−０７），ｐａｇｅｓ  ２０５−２１６
（非特許文献３）  ＷＥＬＬＳ  Ｊ  Ｍ  &  ＳＰＥＮＣＥ  Ｊ  Ｒ："Ｈｏｗ  ｔｏ  ｍａｋｅ  ａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ"，ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ，ｖｏｌ．１４１，ｎｏ．  ４，１５  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１４（２０１４−０２−１５）．ｐａｇｅｓ  ７５２−７６０
（非特許文献４）  ＳＰＥＮＣＥ  Ｊ  Ｒ  ＥＴ  ＡＬ："Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｔｏ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ"，ＮＡＴＵＲＥ，ｖｏｌ．４７０，ｎｏ．７３３２，３  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１１（２０１１−０２−０３），ｐａｇｅｓ  １０５−１０９
（非特許文献５）  ＭＣＣＲＡＣＫＥＮ  Ｋ  Ｗ  ＥＴ  ＡＬ："Ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｉｓｓｕｅ  ｆｒｏｍ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ"，ＮＡＴＵＲＥ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ，ｖｏｌ．６，ｎｏ．１２，１０  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１１（２０１１−１１−１０），ｐａｇｅｓ  １９２０−１９２８
（非特許文献６）  ＡＧＯＰＩＡＮ  Ｖ  Ｇ  ＥＴ  ＡＬ："Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｏｒｇａｎｏｉｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅｒａｔｅｓ  Ｎｅｏｍｕｃｏｓａ  ｉｎ  Ｄｏｇｓ"，ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＧＡＳＴＲＯＩＮＴＥＳＴＩＮＡＬ  ＳＵＲＧＥＲＹ，ｖｏｌ．１３，ｎｏ．５，２３  Ｊａｎｕａｒｙ  ２００９（２００９−０１−２３），ｐａｇｅｓ  ９７１−９８２
（非特許文献７）  ＡＶＡＮＳＩＮＯ  Ｊ  Ｒ  ＥＴ  ＡＬ："Ｏｒｔｈｏｔｏｐｉ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｏｒｇａｎｏｉｄｓ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔｓ"，ＳＵＲＧＥＲＹ，ｖｏｌ．１４０，ｎｏ．３，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００６（２００６−０９），ｐａｇｅｓ  ４２３−４３４
（非特許文献８）  ＷＡＴＳＯＮ  Ｃ  Ｌ  ＥＴ  ＡＬ："Ａｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  ｕｓｉｎｇ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ"，ＮＡＴＵＲＥ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ．，ｖｏｌ．２０，ｎｏ．１１，１９  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１４（２０１４−１０−１９），ｐａｇｅｓ  １３１０−１３１４