【手続補正書】
【提出日】平成30年9月3日(2018.9.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１８に示されるＣＴＣＦ結合部位配列を含む、インシュレーター。
【請求項２】
配列番号２４または配列番号２５を含む、請求項１に記載のインシュレーター。
【請求項３】
配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項２に記載のインシュレーター。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載のインシュレーター、およびβ−グロビン遺伝子座制御領域（ＬＣＲ）領域に作動可能に連結したグロビン遺伝子またはその機能的部分を含む、発現カセット。
【請求項５】
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、
ａ．Ｄｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−２（ＨＳ２）領域を含まず、必要に応じて、
ｉ．該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２のコア配列を含まない、かつ／もしくは
ｉｉ．該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２のエンハンサー活性を維持するＨＳ２領域を含まない、
ｂ．Ｄｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−１（ＨＳ１）領域、Ｄｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−３（ＨＳ３）領域およびＤｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−４（ＨＳ４）領域を含み、必要に応じて、該ＨＳ３領域が、該ＨＳ１領域と該ＨＳ４領域との間に置かれる、
ｃ．該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１領域を含まず、必要に応じて、
ｉ．該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１のコア配列を含まない、
ｉｉ．該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１の機能を維持するＨＳ１領域を含まない、および／または
ｉｉｉ．該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含み、必要に応じて、該ＨＳ３領域が、該グロビン遺伝子またはその機能的部分と該ＨＳ４領域との間に置かれる、かつ／または
ｄ．ＨＳ２領域、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含み、必要に応じて、ＨＳ１領域をさらに含む、
請求項４に記載の発現カセット。
【請求項６】
ＨＳ２の前記コア配列が、配列番号２０または配列番号２１に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項５に記載の発現カセット。
【請求項７】
前記ＨＳ１領域が約１．１ｋｂの長さ、約６００ｂｐの長さ、または約４９０ｂｐの長さである、請求項５または６に記載の発現カセット。
【請求項８】
前記ＨＳ１領域が、配列番号２、配列番号３または配列番号４に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項７に記載の発現カセット。
【請求項９】
ＨＳ１の前記コア配列が、配列番号２２または配列番号２３に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項５に記載の発現カセット。
【請求項１０】
前記ＨＳ３領域が約１３００ｂｐの長さである、請求項５から９のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項１１】
前記ＨＳ３領域が、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項１０に記載の発現カセット。
【請求項１２】
前記ＨＳ４領域が約１．１ｋｂの長さ、または約４５０ｂｐの長さである、請求項５から１１のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項１３】
前記ＨＳ４領域が、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項１２に記載の発現カセット。
【請求項１４】
ａ．前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１領域、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含み、Ｈ２領域を含まず、
ｉ．該ＨＳ１領域が配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ３領域が配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ４領域が配列番号６に示されるヌクレオチド配列を有する、
ｉｉ．該ＨＳ１領域が配列番号３に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ３領域が配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ４領域が配列番号８に示されるヌクレオチド配列を有する、もしくは
ｉｉｉ．該ＨＳ１領域が配列番号４に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ３領域が配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ４領域が配列番号８に示されるヌクレオチド配列を有する、または
ｂ．前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含み、Ｈ１領域もＨ２領域も含まず、該ＨＳ３領域が配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ４領域が配列番号６に示されるヌクレオチド配列を有する、または
ｃ．前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２領域、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含み、該ＨＳ２領域が配列番号９に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ３領域が配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有し、該ＨＳ４領域が配列番号７に示されるヌクレオチド配列を有する、
請求項５に記載の発現カセット。
【請求項１５】
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２領域、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含み、該ＨＳ２領域が８６０ｂｐの長さである、かつ／または該ＨＳ３領域が約１３００ｂｐの長さである、かつ／またはＨＳ４領域が約１．１ｋｂの長さである、請求項５に記載の発現カセット。
【請求項１６】
前記ＨＳ２領域が、配列番号９に示されるヌクレオチド配列を含む、かつ／または前記ＨＳ３領域が、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を含む、かつ／または前記ＨＳ４領域が、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１５に記載の発現カセット。
【請求項１７】
前記グロビン遺伝子が、β−グロビン遺伝子、γ−グロビン遺伝子およびδ−グロビン遺伝子からなる群から選択される、請求項４から１６のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項１８】
前記グロビン遺伝子が、ヒトβ−グロビン遺伝子であり、必要に応じて、該ヒトβ−グロビン遺伝子が、野生型ヒトβ−グロビン遺伝子、イントロン配列の１つまたは複数の欠失を含む、欠失したヒトβ−グロビン遺伝子、および少なくとも１つの抗鎌状化アミノ酸残基をコードする、変異したヒトβ−グロビン遺伝子からなる群から選択される、請求項１７に記載の発現カセット。
【請求項１９】
前記ヒトβ−グロビン遺伝子が、コドン８７におけるスレオニンからグルタミンへの変異をコードするヒトβＡ−グロビン遺伝子（βＡ−Ｔ８７Ｑ）である、請求項１８に記載の発現カセット。
【請求項２０】
配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有するインシュレーターを１つ含む、または各々が配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有する前記インシュレーターを２つ含む、請求項４から１９のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項２１】
ａ．必要に応じて、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分と前記β−グロビンＬＣＲ領域との間に置かれる、β−グロビンプロモーター、
ｂ．必要に応じて、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分の上流に置かれる、ヒトβ−グロビン３’エンハンサー、および
ｃ．必要に応じて、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分とβ−グロビンＬＣＲ領域との間に置かれる、少なくとも１つ（例えば１、２または３つ）の赤血球系特異的エンハンサー
をさらに含む、請求項４から２０のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項２２】
ａ．前記β−グロビンプロモーターが、約６１０ｂｐの長さであるヒトβ−グロビンプロモーターであり、必要に応じて、配列番号１０に示されるヌクレオチド配列を有する、もしくは約２６５ｂｐの長さであり、必要に応じて、配列番号１１に示されるヌクレオチド配列を有する、
ｂ．前記ヒトβ−グロビン３’エンハンサーが、約８８０ｂｐの長さであり、必要に応じて、該ヒトβ−グロビン３’エンハンサーが配列番号１２に示されるヌクレオチド配列を有する、かつ／または
ｃ．前記少なくとも１つの赤血球系特異的エンハンサーが、配列番号１３、１４、１５、１６および１７に示されるヌクレオチド配列を有する、
請求項２１に記載の発現カセット。
【請求項２３】
哺乳動物における前記グロビン遺伝子またはその機能的部分の発現を可能にし、必要に応じて、該発現が赤血球系組織に限定される、請求項４から２２のいずれか一項に記載の発現カセット。
【請求項２４】
請求項４から２３のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、組換えベクターであって、必要に応じて、該組換えベクターは、レトロウイルスベクターであり、必要に応じて、該組換えベクターは、レンチウイルスベクターである、組換えベクター。
【請求項２５】
前記ベクターの３’長末端反復（ＬＴＲ）中にウッドチャック肝炎ポスト調節エレメント（ＷＰＲＥ）をさらに含む、かつ／または前記ベクターの３’長末端反復（ＬＴＲ）中にウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルをさらに含む、請求項２４に記載の組換えベクター。
【請求項２６】
請求項４から２３のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、天然に存在しないまたは操作されたヌクレアーゼ。
【請求項２７】
前記ヌクレアーゼが、天然に存在しないまたは操作されたジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、天然に存在しないまたは操作されたメガヌクレアーゼ、および天然に存在しないまたは操作された転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）からなる群から選択され、かつ／またはＤＮＡ結合ドメインおよびヌクレアーゼ切断ドメインを含み、かつ／またはゲノムセーフハーバー部位に結合し、必要に応じて、
ａ．該ヌクレアーゼが、ゲノムセーフハーバー部位において二本鎖切断（ＤＳＢ）を引き起こす、
ｂ．該ゲノムセーフハーバー部位が、遺伝子外のゲノムセーフハーバー部位である、
ｃ．該ゲノムセーフハーバー部位が、第１染色体上に位置する、かつ／または
ｄ．該ゲノムセーフハーバー部位が、以下の５つの判定基準：（１）任意の遺伝子の５’末端から（例えば、該遺伝子の５’末端から）少なくとも５０ｋｂの距離、（ｉｉ）任意のがん関連遺伝子から少なくとも３００ｋｂの距離、（ｉｉｉ）開いた／アクセス可能なクロマチン構造内（天然のまたは操作されたヌクレアーゼによるＤＮＡ切断によって測定される）、（ｉｖ）遺伝子転写単位の外側の位置、および（ｖ）ヒトゲノムの超保存領域（ＵＣＲ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡまたは長い非コードＲＮＡの外側の位置のうち全てを満たす、
請求項２６に記載のヌクレアーゼ。
【請求項２８】
請求項４から２３のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、天然に存在しないまたは操作されたＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
【請求項２９】
前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系が、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓヌクレアーゼおよびシングルガイドＲＮＡを含み、必要に応じて、該ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系が、ゲノムセーフハーバー部位に結合する、請求項２８に記載の系。
【請求項３０】
請求項２６もしくは２７に記載のヌクレアーゼ、または請求項２８もしくは２９に記載のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項３１】
請求項３０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクターであって、必要に応じて、該ベクターは、レンチウイルスベクターである、ベクター。
【請求項３２】
請求項４から２３のいずれか一項に記載の発現カセット、請求項２４もしくは２５に記載の組換えベクター、請求項２６もしくは２７に記載のヌクレアーゼ、請求項２８もしくは２９に記載のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系、または請求項３１に記載のベクターで形質導入された、細胞。
【請求項３３】
前記細胞が、造血幹細胞、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞および造血内皮細胞からなる群から選択され、必要に応じて、前記細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで形質導入され、必要に応じて、該造血幹細胞がＣＤ３４＋造血幹細胞である、請求項３６に記載の細胞。
【請求項３４】
請求項３２または３３に記載の細胞の有効量、および薬学的に許容されるキャリアを含む、医薬組成物。
【請求項３５】
ヘモグロビン異常症の処置に使用するための、請求項３４に記載の医薬組成物であって、必要に応じて、該ヘモグロビン異常症が、ヘモグロビンＣ病、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、遺伝性貧血、サラセミア、β−サラセミア、重症型サラセミア、中間型サラセミア、α−サラセミアおよびヘモグロビンＨ病からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項３６】
請求項３２または３３に記載の細胞を含む、ヘモグロビン異常症を処置するためのキットであって、必要に応じて、ヘモグロビン異常症を有する被験体を処置するために前記細胞を使用するための書面の指示をさらに含み、かつ／または該ヘモグロビン異常症が、ヘモグロビンＣ病、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、遺伝性貧血、サラセミア、β−サラセミア、重症型サラセミア、中間型サラセミア、α−サラセミアおよびヘモグロビンＨ病からなる群から選択される、キット。
【請求項３７】
被験体においてヘモグロビン異常症を処置するため、または正常ヘモグロビンを含む赤血球を生成する該被験体の能力を回復させるための医薬の製造における、請求項３２または３３に記載の細胞の使用。
【請求項３８】
請求項３２または３３に記載の細胞を含む、被験体においてヘモグロビン異常症を処置するため、または正常ヘモグロビンを含む赤血球を生成する該被験体の能力を回復させるための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
本明細書で開示される主題によれば、上記ヘモグロビン異常症は、ヘモグロビンＣ病（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  Ｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ｓｉｃｋｌｅ  ｃｅｌｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、遺伝性貧血、サラセミア、β−サラセミア、重症型サラセミア（ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ  ｍａｊｏｒ）、中間型サラセミア（ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、α−サラセミアおよびヘモグロビンＨ病（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  Ｈ  ｄｉｓｅａｓｅ）からなる群から選択され得る。非限定的な一実施形態では、このヘモグロビン異常症は、β−サラセミアである。別の非限定的な実施形態では、このヘモグロビン異常症は、鎌状赤血球貧血である。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
配列番号１８に示されるＣＴＣＦ結合部位配列を含む、インシュレーター。
（項目２）
配列番号２４または配列番号２５を含む、項目１に記載のインシュレーター。
（項目３）
配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有する、項目２に記載のインシュレーター。
（項目４）
項目１から３のいずれかに記載のインシュレーター、およびβ−グロビン遺伝子座制御領域（ＬＣＲ）領域に作動可能に連結したグロビン遺伝子またはその機能的部分を含む、発現カセット。
（項目５）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、Ｄｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−２（ＨＳ２）領域を含まない、項目４に記載の発現カセット。
（項目６）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２のコア配列を含まない、項目５に記載の発現カセット。
（項目７）
ＨＳ２の前記コア配列が、配列番号２０に示されるヌクレオチド配列を有する、項目６に記載の発現カセット。
（項目８）
ＨＳ２の前記コア配列が、配列番号２１に示されるヌクレオチド配列を有する、項目６に記載の発現カセット。
（項目９）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２のエンハンサー活性を維持するＨＳ２領域を含まない、項目４に記載の発現カセット。
（項目１０）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、Ｄｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−１（ＨＳ１）領域、Ｄｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−３（ＨＳ３）領域およびＤｎａｓｅ  Ｉ高感受性部位−４（ＨＳ４）領域を含む、項目４から９のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目１１）
前記ＨＳ３領域が、前記ＨＳ１領域と前記ＨＳ４領域との間に置かれる、項目１０に記載の発現カセット。
（項目１２）
前記ＨＳ１領域が約１．１ｋｂの長さである、項目１０または１１に記載の発現カセット。
（項目１３）
前記ＨＳ１領域が、配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する、項目１２に記載の発現カセット。
（項目１４）
前記ＨＳ１領域が約６００ｂｐの長さである、項目１０または１１に記載の発現カセット。
（項目１５）
前記ＨＳ１領域が６０２ｂｐの長さである、項目１４に記載の発現カセット。
（項目１６）
前記ＨＳ１領域が、配列番号３に示されるヌクレオチド配列を有する、項目１５に記載の発現カセット。
（項目１７）
前記ＨＳ１領域が約４９０ｂｐの長さである、項目１０または１１に記載の発現カセット。
（項目１８）
前記ＨＳ１領域が４８９ｂｐの長さである、項目１７に記載の発現カセット。
（項目１９）
前記ＨＳ１領域が、配列番号４に示されるヌクレオチド配列を有する、項目１８に記載の発現カセット。
（項目２０）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１領域を含まない、項目４または５に記載の発現カセット。
（項目２１）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１のコア配列を含まない、項目２０に記載の発現カセット。
（項目２２）
ＨＳ１の前記コア配列が、配列番号２２に示されるヌクレオチド配列を有する、項目２１に記載の発現カセット。
（項目２３）
ＨＳ１の前記コア配列が、配列番号２３に示されるヌクレオチド配列を有する、項目２１に記載の発現カセット。
（項目２４）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１の機能を維持するＨＳ１領域を含まない、項目２０に記載の発現カセット。
（項目２５）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含む、項目２０から２４のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目２６）
前記ＨＳ３領域が、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分と前記ＨＳ４領域との間に置かれる、項目２５に記載の発現カセット。
（項目２７）
前記ＨＳ３領域が約１３００ｂｐの長さである、項目１０から２６のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目２８）
前記ＨＳ３領域が１３０１ｂｐの長さである、項目２７に記載の発現カセット。
（項目２９）
前記ＨＳ３領域が、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有する、項目２８に記載の発現カセット。
（項目３０）
前記ＨＳ４領域が約１．１ｋｂの長さである、項目１０から２９のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目３１）
前記ＨＳ４領域が１０６５ｂｐの長さである、項目３０に記載の発現カセット。
（項目３２）
前記ＨＳ４領域が、配列番号６に示されるヌクレオチド配列を有する、項目３１に記載の発現カセット。
（項目３３）
前記ＨＳ４領域が、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を有する、項目３１に記載の発現カセット。
（項目３４）
前記ＨＳ４領域が約４５０ｂｐの長さである、項目１０から２９のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目３５）
前記ＨＳ４領域が４４６ｂｐの長さである、項目３４に記載の発現カセット。
（項目３６）
前記ＨＳ４領域が、配列番号８に示されるヌクレオチド配列を有する、項目３５に記載の発現カセット。
（項目３７）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ１領域、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ３領域および配列番号６に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ４領域を含み、該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２領域を含まない、項目５から１１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目３８）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、配列番号３に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ１領域、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ３領域および配列番号８に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ４領域を含み、該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２領域を含まない、項目５から１１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目３９）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、配列番号４に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ１領域、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ３領域および配列番号８に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ４領域を含み、該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２領域を含まない、項目５から１１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目４０）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ３領域および配列番号６に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ４領域を含み、該β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１領域もＨＳ２領域も含まない、項目２０から２５のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目４１）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ２領域、ＨＳ３領域およびＨＳ４領域を含む、項目４に記載の発現カセット。
（項目４２）
前記ＨＳ２領域が８６０ｂｐの長さである、項目４１に記載の発現カセット。
（項目４３）
前記ＨＳ２領域が、配列番号９に示されるヌクレオチド配列を有する、項目４２に記載の発現カセット。
（項目４４）
前記ＨＳ３領域が約１３００ｂｐの長さである、項目４１から４２のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目４５）
前記ＨＳ３領域が１３０１ｂｐの長さである、項目４４に記載の発現カセット。
（項目４６）
前記ＨＳ３領域が、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有する、項目４５に記載の発現カセット。
（項目４７）
前記ＨＳ４領域が約１．１ｋｂの長さである、項目４１から４６のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目４８）
前記ＨＳ４領域が１０６５ｂｐの長さである、項目４７に記載の発現カセット。
（項目４９）
前記ＨＳ４領域が、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を有する、項目４９に記載の発現カセット。
（項目５０）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、配列番号９に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ２領域、配列番号５に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ３領域および配列番号７に示されるヌクレオチド配列を有するＨＳ４領域を含む、項目４１に記載の発現カセット。
（項目５１）
前記β−グロビンＬＣＲ領域が、ＨＳ１領域をさらに含む、項目４１から５０のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目５２）
前記グロビン遺伝子が、β−グロビン遺伝子、γ−グロビン遺伝子およびδ−グロビン遺伝子からなる群から選択される、項目４から５１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目５３）
前記グロビン遺伝子が、ヒトβ−グロビン遺伝子である、項目５２に記載の発現カセット。
（項目５４）
前記ヒトβ−グロビン遺伝子が、野生型ヒトβ−グロビン遺伝子、イントロン配列の１つまたは複数の欠失を含む、欠失したヒトβ−グロビン遺伝子、および少なくとも１つの抗鎌状化アミノ酸残基をコードする、変異したヒトβ−グロビン遺伝子からなる群から選択される、項目５３に記載の発現カセット。
（項目５５）
前記ヒトβ−グロビン遺伝子が、コドン８７におけるスレオニンからグルタミンへの変異をコードするヒトβＡ−グロビン遺伝子（βＡ−Ｔ８７Ｑ）である、項目５４に記載の発現カセット。
（項目５６）
配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有するインシュレーターを１つ含む、項目４から５５のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目５７）
配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有する前記インシュレーターを２つ含む、項目４から５５のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目５８）
β−グロビンプロモーターをさらに含む、項目４から５７のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目５９）
前記β−グロビンプロモーターが、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分と前記β−グロビンＬＣＲ領域との間に置かれる、項目５８に記載の発現カセット。
（項目６０）
前記β−グロビンプロモーターが、約６１３ｂｐの長さであるヒトβ−グロビンプロモーターである、項目５８または５９に記載の発現カセット。
（項目６１）
前記ヒトβ−グロビンプロモーターが、配列番号１０に示されるヌクレオチド配列を有する、項目６０に記載の発現カセット。
（項目６２）
前記β−グロビンプロモーターが、約２６５ｂｐの長さであるヒトβ−グロビンプロモーターである、項目５８または５９に記載の発現カセット。
（項目６３）
前記ヒトβ−グロビンプロモーターが、配列番号１１に示されるヌクレオチド配列を有する、項目６２に記載の発現カセット。
（項目６４）
ヒトβ−グロビン３’エンハンサーをさらに含む、項目４から６３のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目６５）
前記ヒトβ−グロビン３’エンハンサーが、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分の上流に置かれる、項目６４に記載の発現カセット。
（項目６６）
前記ヒトβ−グロビン３’エンハンサーが約８７９ｂｐの長さである、項目６４または６５に記載の発現カセット。
（項目６７）
前記ヒトβ−グロビン３’エンハンサーが、配列番号１２に示されるヌクレオチド配列を有する、項目６６に記載の発現カセット。
（項目６８）
少なくとも１つの赤血球系特異的エンハンサーをさらに含む、項目５から６７のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目６９）
前記少なくとも１つの赤血球系特異的エンハンサーが、前記グロビン遺伝子またはその機能的部分とβ−グロビンＬＣＲ領域との間に置かれる、項目６８に記載の発現カセット。
（項目７０）
前記少なくとも１つの赤血球系特異的エンハンサーが、配列番号１３、１４、１５、１６および１７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する、項目６８または６９に記載の発現カセット。
（項目７１）
１、２または３つの赤血球系特異的エンハンサーを含む、項目６８から７０のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目７２）
哺乳動物における前記グロビン遺伝子またはその機能的部分の発現を可能にする、項目４から７１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目７３）
ヒトβ−グロビン遺伝子の発現を可能にする、項目７２に記載の発現カセット。
（項目７４）
前記グロビン遺伝子またはその機能的部分の発現が、赤血球系組織に限定される、項目７１または７２に記載の発現カセット。
（項目７５）
項目４から７４のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、組換えベクター。
（項目７６）
レトロウイルスベクターである、項目７５に記載の組換えベクター。
（項目７７）
前記レトロウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、項目７６に記載の組換えベクター。
（項目７８）
前記発現カセットが、配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有するインシュレーターを１つ含む、項目７５から７７のいずれか一項に記載の組換えベクター。
（項目７９）
前記ベクターの３’長末端反復（ＬＴＲ）中にウッドチャック肝炎ポスト調節エレメント（ＷＰＲＥ）をさらに含む、項目７５から７７のいずれか一項に記載の組換えベクター。
（項目８０）
前記ベクターの３’長末端反復（ＬＴＲ）中にウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルをさらに含む、項目７９に記載の組換えベクター。
（項目８１）
項目４から７４のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、天然に存在しないまたは操作されたヌクレアーゼ。
（項目８２）
天然に存在しないまたは操作されたジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、天然に存在しないまたは操作されたメガヌクレアーゼ、および天然に存在しないまたは操作された転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）からなる群から選択される、項目８１に記載のヌクレアーゼ。
（項目８３）
ＤＮＡ結合ドメインおよびヌクレアーゼ切断ドメインを含む、項目８１または８２に記載のヌクレアーゼ。
（項目８４）
ゲノムセーフハーバー部位に結合する、項目８１から８３のいずれか一項に記載のヌクレアーゼ。
（項目８５）
前記ゲノムセーフハーバー部位において二本鎖切断（ＤＳＢ）を引き起こす、項目８４に記載のヌクレアーゼ。
（項目８６）
前記ゲノムセーフハーバー部位が、遺伝子外のゲノムセーフハーバー部位である、項目８４または８５に記載のヌクレアーゼ。
（項目８７）
前記ゲノムセーフハーバー部位が、第１染色体上に位置する、項目８４から８６のいずれか一項に記載のヌクレアーゼ。
（項目８８）
前記ゲノムセーフハーバー部位が、以下の５つの判定基準：（１）任意の遺伝子の５’末端から（例えば、該遺伝子の５’末端から）少なくとも５０ｋｂの距離、（ｉｉ）任意のがん関連遺伝子から少なくとも３００ｋｂの距離、（ｉｉｉ）開いた／アクセス可能なクロマチン構造内（天然のまたは操作されたヌクレアーゼによるＤＮＡ切断によって測定される）、（ｉｖ）遺伝子転写単位の外側の位置、および（ｖ）ヒトゲノムの超保存領域（ＵＣＲ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡまたは長い非コードＲＮＡの外側の位置のうち全てを満たす、項目８４から８６のいずれか一項に記載のヌクレアーゼ。
（項目８９）
前記発現カセットが、配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有する前記インシュレーターを２つ含む、項目８１から８８のいずれか一項に記載のヌクレアーゼ。
（項目９０）
前記発現カセットの標的化された送達を可能にする、項目８１から８９のいずれか一項に記載のヌクレアーゼ。
（項目９１）
項目８１から９０のいずれか一項に記載のヌクレアーゼをコードする、ポリヌクレオチド。
（項目９２）
項目９１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
（項目９３）
レンチウイルスベクターである、項目９２に記載のベクター。
（項目９４）
項目４から７４のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、天然に存在しないまたは操作されたＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系。
（項目９５）
前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系が、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓヌクレアーゼおよびシングルガイドＲＮＡを含む、項目９４に記載の系。
（項目９６）
前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系が、ゲノムセーフハーバー部位に結合する、項目９４または９５に記載の系。
（項目９７）
前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系が、前記ゲノムセーフハーバー部位において二本鎖切断（ＤＳＢ）を引き起こす、項目９６に記載の系。
（項目９８）
前記ゲノムセーフハーバー部位が、遺伝子外のゲノムセーフハーバー部位である、項目９６または９７に記載の系。
（項目９９）
前記ゲノムセーフハーバー部位が、第１染色体上に位置する、項目９６から９８のいずれか一項に記載の系。
（項目１００）
前記ゲノムセーフハーバー部位が、以下の５つの判定基準：（１）任意の遺伝子の５’末端から（例えば、該遺伝子の５’末端から）少なくとも５０ｋｂの距離、（ｉｉ）任意のがん関連遺伝子から少なくとも３００ｋｂの距離、（ｉｉｉ）開いた／アクセス可能なクロマチン構造内（天然のまたは操作されたヌクレアーゼによるＤＮＡ切断によって測定される）、（ｉｖ）遺伝子転写単位の外側の位置、および（ｖ）ヒトゲノムの超保存領域（ＵＣＲ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡまたは長い非コードＲＮＡの外側の位置のうち全てを満たす、項目９６から９９のいずれか一項に記載の系。
（項目１０１）
前記発現カセットが、配列番号１に示されるヌクレオチド配列を有する前記インシュレーターを２つ含む、項目９４から１００のいずれか一項に記載の系。
（項目１０２）
前記発現カセットの標的化された送達を可能にする、項目９４から１０１のいずれか一項に記載の系。
（項目１０３）
項目９４から１０２のいずれか一項に記載のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系をコードする、ポリヌクレオチド。
（項目１０４）
項目１０３に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
（項目１０５）
レンチウイルスベクターである、項目１０４に記載のベクター。
（項目１０６）
項目４から７４のいずれか一項に記載の発現カセットで形質導入された、細胞。
（項目１０７）
項目７５から８０のいずれか一項に記載の組換えベクターで形質導入された、細胞。
（項目１０８）
項目８１から９０のいずれか一項に記載のヌクレアーゼで形質導入された、細胞。
（項目１０９）
項目９４から１０２のいずれか一項に記載のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系で形質導入された、細胞。
（項目１１０）
項目９２、９３、１０４および１０５のいずれか一項に記載のベクターで形質導入された、細胞。
（項目１１１）
造血幹細胞、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞および造血内皮細胞からなる群から選択される、項目１０６から１１０のいずれか一項に記載の細胞。
（項目１１２）
前記造血幹細胞がＣＤ３４＋造血幹細胞である、項目１１１に記載の細胞。
（項目１１３）
ｅｘ  ｖｉｖｏで形質導入される、項目１０６から１１２のいずれか一項に記載の細胞。
（項目１１４）
項目１０６から１１３のいずれか一項に記載の細胞の有効量、および薬学的に許容されるキャリアを含む、医薬組成物。
（項目１１５）
項目１０６から１１３のいずれか一項に記載の細胞の有効量、および薬学的に許容されるキャリアを含む、ヘモグロビン異常症を処置するための医薬組成物。
（項目１１６）
前記ヘモグロビン異常症が、ヘモグロビンＣ病、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、遺伝性貧血、サラセミア、β−サラセミア、重症型サラセミア、中間型サラセミア、α−サラセミアおよびヘモグロビンＨ病からなる群から選択される、項目１１５に記載の医薬組成物。
（項目１１７）
前記ヘモグロビン異常症がβ−サラセミアである、項目１１６に記載の医薬組成物。
（項目１１８）
前記ヘモグロビン異常症が鎌状赤血球貧血である、項目１１６に記載の医薬組成物。
（項目１１９）
項目１０６から１１３のいずれか一項に記載の細胞を含む、ヘモグロビン異常症を処置するためのキット。
（項目１２０）
ヘモグロビン異常症を有する被験体を処置するために前記細胞を使用するための書面の指示をさらに含む、項目１１９に記載のキット。
（項目１２１）
前記ヘモグロビン異常症が、ヘモグロビンＣ病、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、遺伝性貧血、サラセミア、β−サラセミア、重症型サラセミア、中間型サラセミア、α−サラセミアおよびヘモグロビンＨ病からなる群から選択される、項目１１９または１２０に記載のキット。
（項目１２２）
前記ヘモグロビン異常症がβ−サラセミアである、項目１２１に記載のキット。
（項目１２３）
前記ヘモグロビン異常症が鎌状赤血球貧血である、項目１２１に記載のキット。
（項目１２４）
被験体においてヘモグロビン異常症を処置する方法であって、項目１０６から１１３のいずれか一項に記載の細胞の有効量を該被験体に投与するステップ、それによって、正常ヘモグロビンを含む赤血球を生成する該被験体の能力を回復させるステップを含む、方法。
（項目１２５）
前記細胞を前記被験体に投与するステップの後に、治療的に適切なレベルのヘモグロビンが該被験体において産生される、項目１２４に記載の方法。
（項目１２６）
項目７５から８０のいずれか一項に記載の組換えベクターで形質導入された細胞の有効量を投与するステップを含む、方法。
（項目１２７）
前記被験体において治療的に適切なレベルのヘモグロビンを提供する、前記細胞中の前記組換えベクターのベクターコピー数が、細胞１個当たり約０．５〜２ベクターコピー数である、項目１２６に記載の方法。
（項目１２８）
前記被験体において効果のない赤血球生成を修正する、項目１２４から１２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２９）
前記被験体に対する移植片対宿主病のリスクをきたさない、項目１２４から１２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３０）
免疫抑制剤を投与するステップを含まない、項目１２４から１２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３１）
前記ヘモグロビン異常症が、ヘモグロビンＣ病、ヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血、遺伝性貧血、サラセミア、β−サラセミア、重症型サラセミア、中間型サラセミア、α−サラセミアおよびヘモグロビンＨ病からなる群から選択される、項目１２４から１３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３２）
前記ヘモグロビン異常症がβ−サラセミアである、項目１３１に記載の方法。
（項目１３３）
前記ヘモグロビン異常症が鎌状赤血球貧血である、項目１３１に記載の方法。
（項目１３４）
前記細胞が、造血幹細胞、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞および造血内皮細胞からなる群から選択される、項目１２４から１３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３５）
前記被験体がヒトである、項目１２４から１３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３６）
前記細胞が前記被験体由来である、項目１２４から１３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３７）
前記細胞が、前記被験体の骨髄由来である、項目１３６に記載の方法。