【手続補正書】
【提出日】平成30年11月2日(2018.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セミランダムグラフトコポリマーを作製する方法であって、
ステップ（ａ）：Ｗモルの遊離第１級アミノ基を含有する直鎖ポリアミン骨格を、水性溶媒に溶解するステップであって、容量Ｙを有する溶液Ａを提供するステップと、
Ｂ１またはＢ２とを含み、
Ｂ１が、
ステップ（ｂ）：３０〜５５ｍＭのＷ／（Ｙ＋Ｚ）比率で最終容量Ｚを有する溶液Ｂを得るために、０．５〜１．２×Ｗモルのカルボキシル基を含有する保護鎖を、ｐＨ４〜５．５の水性溶媒中で１．７〜７．０×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および１．５〜３．６×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）により、０〜３０分の間の期間にわたって活性化するステップであって、溶液Ｂを得るステップと、
ステップ（ｃ）：継続的に混合しながら溶液Ｂを溶液Ａに加えるステップであって、溶液Ｃを提供するステップと、
ステップ（ｄ）：溶液ＣのｐＨを６．５超に調整するステップと、
ステップ（ｅ）：２〜３時間後、０．５〜１．５×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩を溶液Ｃに加え、第１級アミノ基がＷモルの５５〜４０％となるまで待機するステップと、を含み、
Ｂ２が、
ステップ（ｂ〜ｄ）：０．５〜１．２×Ｗモルのカルボキシル基、１．７〜７．０×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および１．５〜３．６×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を含有する保護鎖を溶液Ａに加えるステップであって、溶液Ｃを得るステップと、
ステップ（ｅ）：２〜３時間後、０．５〜１．５×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を溶液Ｃに加え、残りの第１級アミノ基がＷモルの５５〜４０％となるまで待機するステップと、を含む、方法。
【請求項２】
ステップ（ａ）：Ｗモルの遊離の第１級アミノ基を含有する直鎖ポリアミン骨格を、ｐＨ７〜８を含む緩衝範囲で水性溶媒に溶解するステップであって、容量Ｙを有する溶液Ａを提供するステップと、
Ｂ１と、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の方法であって、
Ｃ１が、
ステップ（ｆ）：残りの第１級アミノ基がＷモルの５５〜４０％であるとき、溶液Ｃを冷凍および凍結乾燥するステップであって、１種または複数の有機溶媒中で前記凍結乾燥された物質を復元して溶液Ｄを提供するステップと、
ステップ（ｇ）：０．５〜６×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
ステップ（ｈ）：少なくとも０．７５×Ｗ当量の長鎖脂肪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、前記溶液を、少なくとも２時間、または残りの第１級アミノ基がＷモルの５％未満であるまで撹拌して粗製の最終生成物を得、これに続いて精製して最終生成物を提供するステップと、を含み、
Ｃ２が、
ステップ（ｆ）：少なくともＷモルの強い求核試薬を溶液Ｃに加えるステップであって、得られた中間反応生成物を精製し、前記中間反応生成物を、アセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたは１−メチル−２−ピロリジノン中に溶解して、溶液Ｄを提供するステップであって、ここで、前記強い求核試薬は、ヒドロキシルアミン、ＮａＯＲ、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＮＨ２、ＮａＮＨＲ、ＮａＮＲ２、ＮａＩ、ＬｉＢｒ、ＫＩおよびＮａＮ３（式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ２−Ｃ６アルケニルである）を含む、ステップと、
ステップ（ｇ）：０．５〜６×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
ステップ（ｈ）：少なくとも０．７５×Ｗモルの長鎖脂肪酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、溶液Ｅを、残りの第１級アミノ基がＷモルの５％未満であるまで、少なくとも２時間撹拌して粗製の最終生成物を得、これに続いて精製して最終生成物を得るステップと、を含み、
Ｃ３が、
ステップ（ｆ）：残りの第１級アミノ基がＷモルの５５〜４０％であるとき、１．０〜２．５容量当量のアセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたは１−メチル−２−ピロリジノンを加えることによって、溶液Ｄを得るために溶液Ｃの総量を増加するステップであって、溶液Ｄを少なくとも１０分間４０〜７０℃に加熱し、強い求核試薬を加え、次いで、メトキシポリエチレングリコールがグラフトされたポリリジン（ＰＬＰＥＧ）生成物を限外濾過法および凍結乾燥によって精製し、ここで、前記強い求核試薬は、ヒドロキシルアミン、ＮａＯＲ、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＮＨ２、ＮａＮＨＲ、ＮａＮＲ２、ＮａＩ、ＬｉＢｒ、ＫＩおよびＮａＮ３（式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ２−Ｃ６アルケニルである）のいずれか１つを含み、
そして、純粋な、メトキシポリエチレングリコールがグラフトされたポリリジン（ＰＬＰＥＧ）生成物を有する溶液Ｄを６６％アセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたは１−メチル−２−ピロリジノン中で復元するステップと、
ステップ（ｇ）：０．５〜６×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
ステップ（ｈ）：少なくとも０．７５×Ｗモルの長鎖脂肪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを提供し、溶液Ｅを少なくとも２時間、または残りの第１級アミノ基がＷモルの５％未満であるまで撹拌して粗製の最終生成物を得、これに続いて精製して最終生成物を得るステップと、を含み、
Ｃ４が、
ステップ（ｆ）：残りの第１級アミノ基がＷモルの５５〜４０％であるとき、１．０〜２．５または１．５〜２．０容量当量のアセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたは１−メチル−２−ピロリジノンを加えることによって、溶液Ｄを得るために溶液Ｃの総量を増加するステップであって、溶液Ｄを４０〜７０℃に加熱するステップと、
ステップ（ｇ）：０．５〜６×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
ステップ（ｈ）：少なくとも０．７５×Ｗモルの長鎖脂肪酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、溶液Ｅを少なくとも２時間、または残りの第１級アミノ基がＷモルの５％未満であるまで撹拌して粗製の生成物を得、これに続いて精製して最終生成物を得るステップと、を含む、方法。
【請求項４】
前記直鎖ポリアミン骨格が、３５〜１５０の重合度を有するポリリジンであると光散乱または核磁気共鳴分析によって決定され、
前記保護鎖が、単一のカルボキシル末端を有するメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）鎖であり、４〜１２ｋＤａの数平均分子量を有するとゲル浸透クロマトグラフィーによって決定される、または
ポリリジンの前記重合度が、光散乱または核磁気共鳴分析に基づき、３５〜８５であり、前記保護鎖が、４〜６ｋＤａの数平均分子量を有するとゲル浸透クロマトグラフィーによって決定され、
長鎖脂肪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）が、存在する場合、ステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）である、
請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｅ）において、０．５〜１．２×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩ＥＤＣが溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ（ｆ）のＣ３およびＣ４において、残りの第１級アミノ基がＷモルの５５〜４０％に到達したとき、Ｃの１．５〜２．０容量当量のアセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたは１−メチル−２−ピロリジノンが加えられる、請求項３または請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．５〜１．１×Ｗモルのカルボキシル基、１．７〜３．７×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、１．５〜３．３×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ（ｅ）において、０．５〜１．１×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、または
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．５〜１．０×Ｗモルのカルボキシル基、１．７〜３．４×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、および１．５〜３．０×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ（ｅ）において、０．５〜１．０×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ａ）において溶液Ａが、０．１〜０．１４Ｍの間の濃度の第１級アミン基を有し、
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．８５〜０．９５×Ｗモルのカルボキシル基、１．７〜３．４×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、および２．５〜２．９×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有する、またはステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．９×Ｗモルのカルボキシル基、２．７×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、および２．７×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
溶液ＢのｐＨが４．５〜４．９であり、
ステップ（ｂ）において、保護鎖の活性化が１８〜２２分の間進行され、
溶液ＣのｐＨが７〜８に調整され、
ステップ（ｅ）において、０．８〜１．１×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、またはステップ（ｅ）において、０．９×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ（ｇ）において、１〜３×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンが溶液Ｄに加えられる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．７５〜０．８５×Ｗモルのカルボキシル基、２．３〜２．８×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および２．３〜２．６×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有する、または
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．８×Ｗモルのカルボキシル基、２．４×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および２．４×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
溶液ＢのｐＨが４．５〜４．９であり、
ステップ（ｂ）において、保護鎖の活性化が１８〜２２分の間進行され、
溶液ＣのｐＨが７〜８に調整され、
ステップ（ｅ）において、０．７５〜０．８５×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
ステップ（ｇ）において、存在する場合、１〜３×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンが溶液Ｄに加えられ、
ステップ（ｈ）において、存在する場合、少なくとも０．７５×Ｗモルのステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ａ）において、溶液Ａが、第１級アミンの濃度０．１０〜０．１４Ｍを有し、
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．６５〜０．７５×Ｗのカルボキシル基、２．０〜２．５×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および２．０〜２．３×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有する、またはステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．７×Ｗモルのカルボキシル基、２．１×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および２．１×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ（ｂ）において、保護鎖の活性化が１５〜２５分の間進行され、
ステップ（ｅ）において、２〜３時間後、０．６５〜０．７５×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ（ｇ）において、１〜３×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンが溶液Ｄに加えられ、
存在する場合、ステップ（ｈ）において、０．７５〜１．２５×Ｗモルのステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ａ）において、溶液Ａが第１級アミンの濃度０．１０〜０．１４Ｍを有し、
ステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．５５〜０．６５×Ｗモルのカルボキシル基、１．７〜２．２×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、１．７〜２．０×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有する、またはステップ（ｂ）において、溶液Ｂが、０．６×Ｗモルのカルボキシル基、１．８×ＷモルのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、１．８×Ｗモルの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ（ｂ）において、保護鎖の活性化が１５〜２５分の間進行され、
ステップ（ｅ）において、２〜３時間後、０．５５〜０．６５×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、またはステップ（ｅ）において、２〜３時間後、０．６×Ｗモルの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、
存在する場合、ステップ（ｆ）のＣ３およびＣ４において、１．６〜１．９容量当量のアセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたは１−メチル−２−ピロリジノンが加えられることによって、溶液Ｃの総量が増加され、
存在する場合、ステップ（ｇ）において、１〜３×ＷモルのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンが溶液Ｄに加えられ、
存在する場合、ステップ（ｈ）において、０．７５〜１．２５×Ｗモルのステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記最終生成物を得るための精製が、
ステップ（ｉ）：酢酸エチルおよび水を使用して、有機溶媒および過剰の脂肪酸を前記粗製の最終生成物から抽出するステップであって、前記酢酸エチルの抽出物を廃棄し、水層の抽出を少なくとも１回繰り返し、前記生成物を含有する水性溶液を提供するステップと、
ステップ（ｊ）：エタノールと水を少なくとも１０容量換えることで、前記生成物を含有する前記水層を限外濾過法で洗浄し、前記最終生成物を提供するステップ、または
ステップ（ｉ）：溶液Ｅ中の前記有機溶媒を交換し、水中に前記生成物を提供するステップと、
ステップ（ｊ）：エタノールと水を少なくとも１０容量換えることで、前記最終生成物を限外濾過法で洗浄し、前記最終生成物を提供するステップと、を含む、請求項３から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｋ）：前記最終生成物を凍結する、または前記最終生成物を凍結乾燥するステップ、をさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法により作製されるセミランダムグラフトコポリマーを含む組成物。
【請求項１４】
前記セミランダムグラフトコポリマーが、グルカゴン様ペプチド−１、心房性ナトリウム利尿ペプチド、それらの誘導体、およびそれらの組み合わせに結合することができる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１３または請求項１４に記載のセミランダムグラフトコポリマーを含む、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
別の態様では、本発明は、その生成物を、完全に化学的に特徴付けることが困難である、セミランダムグラフトコポリマーを調製するプロセスに関する。本発明の生成物は、１）ペプチドに結合すること、および２）生成物とペプチドを動物へ同時投与する際に、本発明の生成物なしのペプチド単独の場合と比較して、生成物は、血液循環時間を延長し、ペプチドのレベルを上昇させるという独特で、有用な特性を有する。生成物にこのような特性をもたらすプロセスは、本開示に記載されているプロセスと有意に異なる他のいかなるプロセスによっても複製することができない。おそらく本開示のプロセスにおいて化学反応が生じるにつれて、骨格ポリマーの立体構造変化に混乱が生じることから、骨格に沿ったグラフトコポリマーの位置はプロセスにより大きく左右される。得られた生成物は、プロセスおよびプロセス中に起こり得る立体構造変化をモニターできる新規技術を開発するという挑戦なしに、他のプロセスを使用して生成される生成物から確実に化学的に区別することはできない。このような技術は現在存在しない。しかし、生成物は、１）ペプチドへのその優れた結合、および２）動物へ投与される際に、前記ペプチドに上昇した濃度レベルおよびより長期の血液循環時間をもたらすその能力というその特性に基づき、これに最も近い同様の従来技術の生成物から区別することができる。本開示はまた、本明細書に記載されているこのようなプロセスにより生成される生成物に関する。本開示で特許請求されているこのプロダクトバイプロセスは、これを製造するために使用されるプロセスまたは方法（操作ステップ）の点から生成物を規定する。以下に記載されているような、それを行うための多くの実験および試みが行われてきたが、生成物およびその公知の特性は、今日までの任意の他の公知のプロセスにより生成することができない。米国特許出願第１１／６１３１８３号および米国特許出願第１１／９７１４８２号の生成物の特性を本開示のものと比較した。米国特許出願第１１／６１３１８３号および米国特許出願第１１／９７１４８２号の生成物は、本開示の生成物と同じペプチドに結合するが、本生成物は、同じペプチドへの結合、ならびに動物への投与の時点で前記ペプチドに上昇したレベルおよびより長期の血液循環時間をもたらすことの両方においてずっと優れた特性を有する。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
セミランダムグラフトコポリマーを調製する方法であって、
（ａ）Ｗモルの遊離第１級アミノ基を含有する直鎖ポリアミン骨格を、ｐＨ７〜ｐＨ８の緩衝範囲を有する水性緩衝液に溶解するステップであって、容量Ｙを有する溶液Ａを得るステップと、
ステップＢ１またはステップＢ２のいずれかを行うステップであって、
ステップＢ１が、
（ｂ）Ｗ／（Ｙ＋Ｚ）＝３０〜５５ｍＭとなるような最終容量Ｚを有する溶液Ｂを得るために、０．５〜１．２×Ｗのカルボキシル基を含有する保護鎖を、水性緩衝液、ｐＨ４〜５．５中で１．７〜７．０×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および１．５〜３．６×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）と混合することによって活性化することであって、前記活性化を０〜３０分の間進行させて、溶液Ｂを得ることと、
（ｃ）溶液Ｂを溶液Ａに加えることであって、溶液Ｃを生成することと、
（ｄ）溶液ＣのｐＨを６．５超に調整することと、を含み、
ステップＢ２が、
（ｂ〜ｄ）０．５〜１．２×Ｗのカルボキシル基、１．７〜７．０×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および１．５〜３．６×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を含有する保護鎖を溶液Ａに加えることであって、溶液Ｃを得ることと、
（ｅ）２〜３時間後、０．５〜１．５×Ｗの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を溶液Ｃに加え、残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５５〜４０％（４５〜６０％飽和）となるまで待機することと、を含む、方法。
（項目２）
項目１に記載のセミランダムグラフトコポリマーを調製する方法であって、
（ａ）Ｗの遊離の第１級アミノ基を含有する直鎖ポリアミン骨格を、ｐＨ７〜８を含む緩衝範囲で水性緩衝液に溶解するステップであって、容量Ｙを有する溶液Ａを得るステップと、
（ｂ）Ｗ／（Ｙ＋Ｚ）＝３０〜５５ｍＭとなるような最終容量Ｚを有する溶液Ｂを得るために、０．５〜１．２×Ｗのカルボキシル基を含有する保護鎖を、水性緩衝液、ｐＨ４〜５．５中で１．７〜７．０×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）および１．５〜３．６×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）と混合することによって活性化するステップであって、前記活性化を０〜３０分の間進行させて溶液Ｂを得るステップと、
（ｃ）継続的に混合しながら溶液Ｂを溶液Ａに加えるステップであって、溶液Ｃをもたらすステップと、
（ｄ）溶液ＣのｐＨを６．５超に調整するステップと、
（ｅ）１〜３時間後、０．５〜１．５×Ｗの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を溶液Ｃに加えるステップであって、残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５５〜４０％（４５〜６０％飽和）となるまで待機するステップと、を含む方法。
（項目３）
（ｆ）残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５５〜４０％であるとき、溶液Ｃを冷凍および凍結乾燥するステップであって、１種または複数の有機溶媒中で前記凍結乾燥された物質を復元して溶液Ｄを得るステップと、
（ｇ）０．５〜６×ＷのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
（ｈ）少なくとも０．７５×Ｗ当量の長鎖脂肪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、前記溶液を、室温で少なくとも２時間、または残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５％未満であるまで撹拌して粗製の最終生成物を得るステップと、をさらに含む、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４）
（ｆ）少なくともＷの強い求核試薬、例えば、ヒドロキシルアミンを溶液Ｃに加えるステップであって、生成物を限外濾過法で精製し、これに続いて凍結乾燥し、前記生成物をアセトニトリルに溶解して溶液Ｄを得るステップと、
（ｇ）０．５〜６×ＷのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
（ｈ）少なくとも０．７５×Ｗ当量の長鎖脂肪酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、溶液Ｅを、残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５％未満であるまで、室温で少なくとも２時間撹拌して粗製の最終生成物を得るステップと、をさらに含む、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５）
（ｆ）残りの第１級アミノ基が元のアミノの５５〜４０％であるとき、１．０〜２．５容量当量のアセトニトリルを加えることによって、溶液Ｄを得るために溶液Ｃの総量を増加するステップであって、溶液Ｄを少なくとも１０分間４０〜７０℃に加熱し、強い求核試薬を加え、次いで、メトキシポリエチレングリコールがグラフトされたポリリジン（ＰＬＰＥＧ）生成物を限外濾過法および凍結乾燥によって精製し、そして、純粋な、メトキシポリエチレングリコールがグラフトされたポリリジン（ＰＬＰＥＧ）生成物を有する溶液Ｄを６６％アセトニトリル中で復元するステップと、
（ｇ）０．５〜６×ＷのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
（ｈ）４０〜７０℃のアセトニトリル中の、少なくとも０．７５×Ｗ当量の長鎖脂肪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、溶液Ｅを室温で少なくとも２時間、または残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５％未満であるまで撹拌して粗製の最終生成物を得るステップと、をさらに含む、項目１または項目２に記載の方法。
（項目６）
（ｆ）残りの第１級アミノ基が元のアミノの５５〜４０％であるとき、１．０〜２．５容量当量のアセトニトリルを加えることによって、溶液Ｄを得るために溶液Ｃの総量を増加するステップであって、溶液Ｄを４０〜７０℃に加熱するステップと、
（ｇ）０．５〜６×ＷのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンを溶液Ｄに加えるステップと、
（ｈ）４０〜７０℃のアセトニトリル中の、少なくとも０．７５×Ｗ当量の長鎖脂肪酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）を加えるステップであって、溶液Ｅを得て、溶液Ｅを室温で少なくとも２時間、または残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５％未満であるまで撹拌して粗製の最終生成物を得るステップと
をさらに含む、項目１または項目２に記載の方法。
（項目７）
前記直鎖ポリアミン骨格が、光散乱または核磁気共鳴分析に基づき、３５〜１５０の重合度を有するポリリジンであり、
保護鎖が、単一のカルボキシル末端を有するメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）鎖であり、ゲル浸透クロマトグラフィーに基づき、４〜１２ｋＤａの数平均分子量またはＭｎを有し、
長鎖脂肪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）が、存在する場合、ステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）である、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
ポリリジンの重合度が、光散乱または核磁気共鳴分析に基づき、３５〜８５であり、ＰＥＧ保護鎖が、ゲル浸透クロマトグラフィーに基づき、４〜６ｋＤａの数平均分子量またはＭｎを有する、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
ステップ「ｅ」において、０．５〜１．２×Ｗの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩ＥＤＣが溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ「ｆ」において、残りの第１級アミノ基が元の第１級アミノの５５〜４０％に到達したとき、Ｃの１．５〜２．０容量当量のアセトニトリルが加えられる、項目３から８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．５〜１．１×Ｗのカルボキシル基、１．７〜３．７×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、１．５〜３．３×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ「ｅ」において、０．５〜１．１×Ｗの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．５〜１．０×Ｗのカルボキシル基、１．７〜３．４×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、および１．５〜３．０×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ「ｅ」において、０．５〜１．０×Ｗの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
ステップ「ａ」において溶液Ａが、０．１〜０．１４Ｍの間の濃度の第１級アミンを有し、
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．８５〜０．９５×Ｗのカルボキシル基、２．６〜３．２×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、２．５〜２．９×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
溶液ＢのｐＨが４．５〜４．９であり、
活性化を１８〜２２分の間進行させ、
溶液ＣのｐＨが７〜８に調整され、
存在する場合、ステップ「ｅ」において、０．８５〜０．９５×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ「ｇ」において、１〜３×ＷのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンが溶液Ｄに加えられる、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．９×Ｗのカルボキシル基、２．７×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、２．７×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
ステップ「ｅ」において、０．９×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられる、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．７５〜０．８５×Ｗのカルボキシル基、２．３〜２．８×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、２．３〜２．６×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
溶液ＢのｐＨが４．５〜４．９であり、
活性化を１８〜２２分の間進行させ、
溶液ＣのｐＨが７〜８に調整され、
存在する場合、ステップ「ｅ」において、０．７５〜０．８５×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
ステップ「ｇ」において、存在する場合、１〜３×ＷのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または他の第３級アミンが溶液Ｄに加えられる、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．８×Ｗのカルボキシル基、２．４×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、２．４×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
溶液ＢのｐＨが４．５〜４．９であり、
活性化を１８〜２２分の間進行させ、
溶液ＣのｐＨが７〜８に調整され、
ステップ「ｅ」において、０．７５〜０．８５×Ｗの追加の１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
ステップ「ｅ」において、少なくとも０．７５×Ｗのステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられる、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
ステップ「ａ」において、溶液Ａが、第１級アミンの濃度０．１０〜０．１４Ｍを有し、ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．６５〜０．７５×Ｗのカルボキシル基、２．０〜２．５×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、２．０〜２．３×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
活性化を１５〜２５分の間進行させ、
存在する場合、ステップ「ｅ」において、１〜３時間後、０．６５〜０．７５×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ「ｇ」において、１〜３×Ｗの第３級アミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）が溶液Ｄに加えられ、
前記方法が、０．７５〜１．２５×Ｗ当量のステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられるステップ「ｈ」をさらに含む、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
ステップ「ａ」において、溶液Ａが第１級アミンの濃度０．１０〜０．１４Ｍを有し、
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．７×Ｗのカルボキシル基、２．１×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、２．１×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
活性化を１５〜２５分の間進行させ、
ステップ「ｅ」において、１〜３時間後、０．６５〜０．７５×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
ステップ「ｈ」において、０．７５〜１．２５×Ｗ当量のステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられる、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
ステップ「ａ」において、溶液Ａが第１級アミンの濃度０．１０〜０．１４Ｍを有し、
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．５５〜０．６５×Ｗのカルボキシル基、１．７〜２．２×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、１．７〜２．０×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
活性化を１５〜２５分の間進行させ、
存在する場合、ステップ「ｅ」において、１〜３時間後、０．５５〜０．６５×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
存在する場合、ステップ「ｆ」において、１．６〜１．９容量当量のアセトニトリルが加えられ、
存在する場合、ステップ「ｇ」において、１〜３×Ｗの第３級アミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）が溶液Ｄに加えられ、
前記方法が、０．７５〜１．２５×Ｗ当量のステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられるステップ「ｈ」をさらに含む、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
ステップ「ａ」において、溶液Ａが第１級アミンの濃度０．１０〜０．１４Ｍを有し、
ステップ「ｂ」において、溶液Ｂが、０．６×Ｗのカルボキシル基、１．８×ＷのＮ−ヒドロキシスクシンイミドスルフェート（ＮＨＳＳ）、１．８×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を有し、
活性化を１５〜２５分の間進行させ
ステップ「ｅ」において、１〜３時間後、０．６×Ｗの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）が溶液Ｃに加えられ、
ステップ「ｆ」において、１．６〜１．９容量当量のアセトニトリルが加えられ、
ステップ「ｈ」において、０．７５〜１．２５×Ｗ当量のステアリン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｃ１８−ＮＨＳ）が溶液Ｄに加えられる、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
（ｉ）酢酸エチルを使用して、前記アセトニトリルおよび過剰の脂肪酸を溶液Ｅ中の前記粗製の最終生成物から抽出するステップであって、前記酢酸エチルの層を廃棄し、水層の抽出を少なくとも１回繰り返すステップと、
（ｊ）エタノールと水を少なくとも１０容量換えることによって、前記最終生成物を含有する前記水層を限外濾過法で洗浄するステップと、をさらに含む、項目３から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記最終生成物を凍結するステップ（ｋ）をさらに含む、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記最終生成物を凍結乾燥するステップ（ｋ）をさらに含む、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
（ｉ）前記最終生成物を含有する溶液Ｅ中の前記有機溶媒を、水に交換するステップと、（ｊ）エタノールと水を少なくとも１０容量換えることによって、前記最終生成物を限外濾過法で洗浄するステップと、をさらに含む、項目３から１９、２１、および２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
項目１から２３のいずれか一項に記載の方法により得ることが可能なセミランダムグラフトコポリマーを含む組成物。
（項目２５）
前記セミランダムグラフトコポリマーが、グルカゴン様ペプチド−１および／または心房性ナトリウム利尿ペプチド、およびそれらの誘導体への結合に基づき選択される、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
項目２４または項目２５に記載のセミランダムグラフトコポリマーを含む、医薬組成物。