【手続補正書】
【提出日】平成30年5月24日(2018.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列とを含む単離された抗体であって、アミノ酸配列ＫＨＳＤＳＫＥＤＤＧＱＥＩＡ（配列番号１）を含むヒトＢ７−Ｈ３のエピトープに結合し、かつ／又は少なくとも６．７×１０−１１Ｍの半数効果濃度（ＥＣ５０）を有し、
（ａ）  ＨＣがＲＡＰＶＶＳＴＳＭＴＦＮＩ（配列番号４）若しくはＴＶＶＧＧＷＧＹＡＬＤＬ（配列番号１０）のＣＤＲ３配列を含むか；又は
（ｂ）  ＬＣがＣＤＲ３配列ＱＧＥＦＴＣＳＧＡＤＣＧＡ（配列番号７）を含むか：又は
（ｃ）  ＨＣがＲＡＰＶＶＳＴＳＭＴＦＮＩ（配列番号４）若しくはＴＶＶＧＧＷＧＹＡＬＤＬ（配列番号１０）のＣＤＲ３配列を含み、且つＬＣがＣＤＲ３配列ＱＧＥＦＴＣＳＧＡＤＣＧＡ（配列番号７）を含む、
請求項１に記載の抗体。
【請求項２】
ＨＣがＧＳＧＫＲＧＮＰＹＹＡＳＷＡＫＳ（配列番号３）若しくはＣＩＹＡＧＳＳＬＮＴＹＹＡＰＷＡＫＧ（配列番号９）のＣＤＲ２配列、及び／又はＳＹＧＶＳ（配列番号２）若しくはＳＳＹＷＩＣ（配列番号８）のＣＤＲ１配列をさらに含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＬＣがＣＤＲ２配列ＥＡＳＴＬＡＳ（配列番号６）及び／又は、ＣＤＲ１配列ＱＡＳＱＳＶＹＮＮＫＮＬＳ（配列番号５）をさらに含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項４】
ＨＣが
（ａ）  アミノ酸配列ＳＹＧＶＳ（配列番号２）を含むＨＣ  ＣＤＲ１；及び／若しくは
（ｂ）  アミノ酸配列ＧＳＧＫＲＧＮＰＹＹＡＳＷＡＫＳ（配列番号３）を含むＨＣ  ＣＤＲ２；及び／若しくは
（ｃ）  アミノ酸配列ＲＡＰＶＶＳＴＳＭＴＦＮＩ（配列番号４）を含むＨＣ  ＣＤＲ３
を含み；かつ／又は
ＬＣが
（ａ）  アミノ酸配列ＱＡＳＱＳＶＹＮＮＫＮＬＳ（配列番号５）を含むＬＣ  ＣＤＲ１；及び／若しくは
（ｂ）  アミノ酸配列ＥＡＳＴＬＡＳ（配列番号６）を含むＬＣ  ＣＤＲ２；及び／若しくは
（ｃ）  アミノ酸配列ＱＧＥＦＴＣＳＧＡＤＣＧＡ（配列番号７）を含むＬＣ  ＣＤＲ３
を含む、
請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
ＨＣが
（ａ）  アミノ酸配列ＳＳＹＷＩＣ（配列番号８）を含むＨＣ  ＣＤＲ１；及び／若しくは
（ｂ）  アミノ酸配列ＣＩＹＡＧＳＳＬＮＴＹＹＡＰＷＡＫＧ（配列番号９）を含むＨＣ  ＣＤＲ２；及び／若しくは
（ｃ）  アミノ酸配列ＴＶＶＧＧＷＧＹＡＬＤＬ（配列番号１０）を含むＨＣ  ＣＤＲ３
を含み；かつ／又は
ＬＣが、
（ａ）  アミノ酸配列ＱＡＳＱＳＶＹＮＮＫＮＬＳ（配列番号５）を含むＬＣ  ＣＤＲ１；及び／若しくは
（ｂ）  アミノ酸配列ＥＡＳＴＬＡＳ（配列番号６）を含むＬＣ  ＣＤＲ２；及び／若しくは
（ｃ）  アミノ酸配列ＱＧＥＦＴＣＳＧＡＤＣＧＡ（配列番号７）を含むＬＣ  ＣＤＲ３
を含む、
請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
ＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列が配列番号１１若しくは１３のアミノ酸配列を含み、かつ／又は
ＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列が配列番号１２若しくは１４のアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
抗体がモノクローナル抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体からなる群より選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
抗原結合断片がＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及びＦｖからなる群より選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体の抗原結合断片。
【請求項９】
生物学的試料中のＢ７−Ｈ３を検出する方法であって、試料を請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体又は請求項８に記載の抗原結合断片と接触させることと、抗体又は抗原結合断片のＢ７−Ｈ３への結合により形成される複合体を検出することとを含み、任意で、試料が細胞試料又は組織試料を含む、方法。
【請求項１０】
試料ががんに罹患していると診断されるか、罹患していることが疑われるか、又はがんに罹患するリスクがある対象から得られており、がんが膀胱移行上皮細胞癌、腎細胞癌、及び肺扁平上皮癌からなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
対象から単離された試料中の病的細胞を検出する方法であって、
（ａ）  生物学的試料中のＢ７−Ｈ３に結合する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体又は請求項８に記載の抗原結合断片により形成された複合体を検出することによって、対象からの生物学的試料中のＢ７−Ｈ３のレベルを検出すること；及び
（ｂ）  工程（ａ）で観察されたＢ７−Ｈ３のレベルを対照生物学的試料中で観察されたＢ７−Ｈ３のレベルと比較すること
を含み、
Ｂ７−Ｈ３のレベルが対照生物学的試料中で観察されるレベルと比較して上昇する場合に病的細胞が検出される、方法。
【請求項１２】
対象の生物学的試料が膀胱、腎臓又は肺から単離された一又は複数の試料を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
検出が免疫細胞化学（ＩＣＣ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー又はＥＬＩＳＡのうちの一又は複数を含む、請求項９から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
対象が哺乳動物であり、任意で、哺乳動物がネズミ、ネコ、イヌ、ヒツジ、ウシ、サル、及びヒトの群から選択される、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体又は請求項８に記載の抗原結合断片、及び使用説明書を含む、Ｂ７−Ｈ３を検出するためのキット。
【請求項１６】
腫瘍試料中のＢ７−Ｈ３を検出する方法であって、
（ａ）  重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体又は抗体の抗原結合断片と試料を接触させることであって、ここで抗体はアミノ酸配列ＫＨＳＤＳＫＥＤＤＧＱＥＩＡ（配列番号１）を含むヒトＢ７−Ｈ３のエピトープに結合し、かつ／又は少なくとも６．７×１０−１１Ｍの半数効果濃度（ＥＣ５０）を有し、
ＨＣは
（ｉ）  アミノ酸配列ＳＹＧＶＳ（配列番号２）を含むＨＣ  ＣＤＲ１；
（ｉｉ）  アミノ酸配列ＧＳＧＫＲＧＮＰＹＹＡＳＷＡＫＳ（配列番号３）を含むＨＣ  ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）  アミノ酸配列ＲＡＰＶＶＳＴＳＭＴＦＮＩ（配列番号４）を含むＨＣ  ＣＤＲ３
を含み；かつ
ＬＣは
（ｉ）  アミノ酸配列ＱＡＳＱＳＶＹＮＮＫＮＬＳ（配列番号５）を含むＬＣ  ＣＤＲ１；
（ｉｉ）  アミノ酸配列ＥＡＳＴＬＡＳ（配列番号６）を含むＬＣ  ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）  アミノ酸配列ＱＧＥＦＴＣＳＧＡＤＣＧＡ（配列番号７）を含むＬＣ  ＣＤＲ３；
を含むこと；並びに
（ｂ）  抗体又は抗原結合断片のＢ７−Ｈ３への結合により形成された複合体を検出すること
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
一態様では、本開示は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列とを含む単離された抗体であって、アミノ酸配列ＫＨＳＤＳＫＥＤＤＧＱＥＩＡ（配列番号１）を含むヒトＢ７−Ｈ３のエピトープに結合し、かつ／又は少なくとも６．７×１０−１１Ｍの半数効果濃度（ＥＣ５０）を有する抗体を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
また、腫瘍試料中のＢ７−Ｈ３を検出する方法であって、（ａ）該試料を抗体又は抗体の抗原結合断片と接触させることであって、該抗体は本明細書に開示の通り、例えば重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、アミノ酸配列ＫＨＳＤＳＫＥＤＤＧＱＥＩＡ（配列番号１）を含むヒトＢ７−Ｈ３のエピトープに結合し、かつ／又は少なくとも６．７×１０−１１Ｍの半数効果濃度（ＥＣ５０）を有し、ＨＣは（ｉ）アミノ酸配列ＳＹＧＶＳ（配列番号２）を含むＨＣ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）アミノ酸配列ＧＳＧＫＲＧＮＰＹＹＡＳＷＡＫＳ（配列番号３）を含むＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＲＡＰＶＶＳＴＳＭＴＦＮＩ（配列番号４）を含むＨＣ  ＣＤＲ３を含み、かつＬＣは（ｉ）アミノ酸配列ＱＡＳＱＳＶＹＮＮＫＮＬＳ（配列番号５）を含むＬＣ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）アミノ酸配列ＥＡＳＴＬＡＳ（配列番号６）を含むＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＧＥＦＴＣＳＧＡＤＣＧＡ（配列番号７）を含むＬＣ  ＣＤＲ３を含むこと；並びに（ｂ）抗体又は抗原結合断片のＢ７−Ｈ３への結合により形成された複合体を検出することを含む方法も提供される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
単離されたペプチドが全長Ｂ７−Ｈ３タンパク質ではないという条件で、配列番号１を含む単離されたペプチドもまた本明細書において提供される。別の態様では、本開示は、担体タンパク質に結合された配列番号１を含むヒトＢ７−Ｈ３の断片を含む融合タンパク質を提供する。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、１４から５０アミノ酸長である。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、１４から４０アミノ酸長である。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、１４から３０アミノ酸長である。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、１４から２５アミノ酸長である。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、１４から２０アミノ酸長である。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、配列番号１から本質的になる。融合タンパク質のいくつかの態様において、ヒトＢ７−Ｈ３の断片は、配列番号１からなる。追加的に又は代替的に、融合タンパク質のいくつかの態様において、担体タンパク質はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）である。別の態様では、単離されたペプチド又は融合タンパク質で免疫化された動物（マウス、ラット、ウサギ又はヤギなど）が提供される。別の態様では、前記免疫化された動物から得られる単離されたＢ細胞が提供され、前記単離されたＢ細胞は配列番号１を含むヒトＢ７−Ｈ３のエピトープに特異的に結合することができる抗体を産生し、かつ少なくとも６．７×１０−１１Ｍの半数効果濃度（ＥＣ５０）を有する。別の態様では、このような単離されたＢ細胞から産生されたハイブリドーマが提供される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
本明細書で使用する場合、「結合親和性」とは、特定の結合対の一方のメンバーの、特定の結合対のもう一方のメンバーに対する傾向のような、ある分子が別の分子と（典型的には非共有結合的に）結合する傾向を指す。結合親和性は、結合定数として測定することができ、特定の結合対（例えば抗体／抗原対）の結合親和性は、少なくとも１×１０−５Ｍ、少なくとも１×１０−６Ｍ、少なくとも１×１０−７Ｍ、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ又は少なくとも１×１０−１２Ｍでありうる。一態様では、結合親和性は、FrankelらのMol. Immunol., 16:101-106, 1979に記載のスキャッチャード法の修正形態によって計算される。別の態様では、結合親和性は抗原／抗体解離速度によって測定される。さらに別の態様では、高結合親和性は、競合ラジオイムノアッセイによって測定される。いくつかの実施例では、抗体／抗原対の高結合親和性は、少なくとも約１×１０−８Ｍである。他の態様では、高結合親和性は、少なくとも約１．５×１０−８Ｍ、少なくとも約２．０×１０−８Ｍ、少なくとも約２．５×１０−８Ｍ、少なくとも約３．０×１０−８Ｍ、少なくとも約３．５×１０−８Ｍ、少なくとも約４．０×１０−８Ｍ、少なくとも約４．５×１０−８Ｍ又は少なくとも約５．０×１０−８Ｍである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
一態様において、本開示で提供されるのは、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む単離抗体であり、ここで重鎖及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、アミノ酸配列ＫＨＳＤＳＫＥＤＤＧＱＥＩＡ（配列番号１）を含むヒトＢ７−Ｈ３のエピトープに結合する結合部位を形成し、かつ／又は少なくとも６．７×１０−１１Ｍの半数効果濃度（ＥＣ５０）を有する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１６】
固定化ペプチド免疫原（ヒトＢ７−Ｈ３  ａａ  ５２１−５３４）への結合を評価するために、ＳＰ２６５抗体でＥＬＩＳＡ試験を実施した。結果の要約を図６に示す。ＳＰ２６５抗体のＥＣ５０は６．７×１０−１１Ｍであり、したがってＢ７−Ｈ３エピトープへの結合に関して抗体の高い能力を実証している。