(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対して、キャプシドタンパク質のＧＨループ中にペプチド挿入を含む変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、ここで、前記キャプシドタンパク質が、前記対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、増加した筋肉細胞の感染性を感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオンにもたらし、ここで、前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）からなるか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）からなり、ここで、挿入部位が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間に位置する、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
【請求項２】
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１に対して１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
【請求項３】
前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）からなり、前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１に対して、Ｖ７０８Ｉアミノ酸置換、Ｓ１０９Ｔアミノ酸置換、Ｗ６９４Ｃアミノ酸置換、およびＷ６０６Ｃアミノ酸置換のうちの１つ以上をさらに含む、請求項２に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
【請求項４】
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列から本質的になる、請求項２に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
【請求項５】
前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）からなり、前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１に対して、Ｖ７０８Ｉアミノ酸置換、Ｓ１０９Ｔアミノ酸置換、Ｒ５８８Ｍアミノ酸置換、およびＡ５９３Ｅアミノ酸置換のうちの１つ以上をさらに含む、請求項２に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
【請求項６】
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４３に示されるアミノ酸配列から本質的になる、請求項２に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
【請求項７】
前記キャプシドタンパク質が、前記対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶと比較して、中和抗体による中和に対して増加した耐性を感染性ｒＡＡＶビリオンにさらにもたらす、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含む、感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオン。
【請求項１０】
遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸をさらに含む、請求項９に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１１】
前記遺伝子産物が、タンパク質、低分子干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、小ヘアピンＲＮＡ、または低分子干渉ＲＮＡである、請求項１０に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１２】
前記ｒＡＡＶビリオンが、αガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ）、フラタキシン（ＦＸＮ）、ジストロフィン（ＤＭＤ）またはその機能的断片、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）、およびグリコーゲンホスホリラーゼ、筋（ＰＹＧＭ）から選択される遺伝子産物をコードする異種核酸を含む、請求項１１に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１３】
前記変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列からなり、ここで、前記ＧＬＡをコードするヌクレオチド配列が、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１４】
前記変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列からなり、ここで、前記グリコーゲンホスホリラーゼ、筋（ＰＹＧＭ）をコードするヌクレオチド配列が、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１５】
前記変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列からなり、ここで、前記フラタキシタンパク質をコードするヌクレオチド配列が、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１６】
前記変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列からなり、ここで、前記ＧＡＡタンパク質をコードするヌクレオチド配列が、ＣＢＡプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオン。
【請求項１７】
請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のｒＡＡＶビリオンおよび薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項１８】
心筋細胞または骨格筋細胞に異種核酸を送達する方法において使用するための、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のｒＡＡＶビリオンまたは請求項１７に記載の薬学的組成物を含む、組成物。
【請求項１９】
医薬としての使用のための、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載のｒＡＡＶビリオンまたは請求項１７に記載の薬学的組成物を含む、組成物。
【請求項２０】
ファブリー病の治療における使用のための、請求項１４に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物。
【請求項２１】
ファブリー病の治療のための医薬の製造のための、請求項１４に記載のｒＡＡＶビリオン、あるいは請求項１４に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物の使用。
【請求項２２】
マッカードル病の治療における使用のための、請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物。
【請求項２３】
マッカードル病の治療のための医薬の製造のための、請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオン、あるいは請求項１２に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物の使用。
【請求項２４】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療における使用のための、請求項１５に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物。
【請求項２５】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療のための医薬の製造のための、請求項１５に記載のｒＡＡＶビリオン、あるいは請求項１５に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物の使用。
【請求項２６】
フリードライヒ運動失調症の治療における使用のための、請求項１６に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物。
【請求項２７】
フリードライヒ運動失調症の治療のための医薬の製造のための、請求項１６に記載のｒＡＡＶビリオン、あるいは請求項１６に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物の使用。
【請求項２８】
ポンペ病の治療における使用のための、請求項１７または１８に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物。
【請求項２９】
ポンペ病の治療のための医薬の製造のための、請求項１７または１８に記載のｒＡＡＶビリオン、あるいは請求項１７または１８に記載のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物の使用。
【請求項３０】
請求項１９に記載の組成物または請求項２０、２２、２４、２６および２８のいずれか１項に記載の薬学的組成物であって、前記組成物または前記薬学的組成物が、静脈内注射および／または筋肉内注射により投与されることを特徴とする、組成物または薬学的組成物。
【請求項３１】
請求項２１、２３、２５、２７および２９のいずれか１項に記載の使用であって、前記ｒＡＡＶビリオンまたは前記薬学的組成物が、静脈内注射および／または筋肉内注射に適したものである、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年９月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／５６０，９０１号の優先権を主張し、その全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書に開示される発明は、一般に、変異キャプシドタンパク質を含むアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ビリオン、および定向進化技術を使用したそのような変異キャプシドの生成の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
筋肉は、様々な重度の遺伝性疾患に関連している。筋肉は、多くの筋ジストロフィー疾患の遺伝子治療における標的組織であり、全身疾患を治療するための分泌因子を産生するためのバイオ工場としても利用することができる。ヒトの筋肉組織に治療用遺伝子を送達することは、筋肉関連疾患の治療における最も切迫する満たされていないニーズであることは間違いない。
【０００４】
筋肉定向（ｍｕｓｃｌｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ）遺伝子送達を達成するための１つのアプローチは、例えば、欠損遺伝子の代置、優性欠損遺伝子の矯正、または連続タンパク質療法のための鋳型の提供のために、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を用いて遺伝子を１つ以上の筋肉細胞に送達する、遺伝子ベースのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）仲介療法である。ＡＡＶベースの臨床遺伝子療法は増々成功を収めるようになっているが、例えば、所望の筋肉細胞を高い効率で標的化することを含む、ウイルスベクター特性に関する欠点を依然として伴う。したがって、疾患の治療のために筋肉細胞へのより効果的な遺伝子ベースの送達を提供する優れた形質導入能力を有する新規ＡＡＶ変異体のニーズが当該技術分野に存在する。当該技術分野で既知の野生型ＡＡＶおよびＡＡＶ変異体と比較して、いくつかの場合では広範に、他の場合ではある特定の細胞種に、優先的に増強された筋肉形質導入プロファイルを示すようなＡＡＶ変異体のニーズが当該技術分野に存在する。
【０００５】
天然に存在するＡＡＶは、３つのオープンリーディングフレームｒｅｐ、ｃａｐ、およびａａｐを含む一本鎖ＤＮＡウイルスである。第１の遺伝子ｒｅｐは、ゲノム複製に必要な４つのタンパク質（Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２、およびＲｅｐ４０）をコードし、第２のｃａｐは、アセンブルしてウイルスキャプシドを形成する３つの構造タンパク質（ＶＰ１〜３）を発現し、第３のものは、キャプシドのアセンブリに不可欠なアセンブリ活性化タンパク質（ＡＡＰ）を発現する。ＡＡＶは、能動的複製のためのアデノウイルスまたはヘルペスウイルスなどのヘルパーウイルスの存在に依存する。ヘルパーウイルスが存在しない場合、ＡＡＶは、そのゲノムがエピソームに維持されているか、またはＡＡＶＳ１座の宿主染色体に組み込まれる、潜伏状態を確立する。
【０００６】
インビトロおよびインビボ定向進化技法は、現在のＡＡＶベースの遺伝子送達ベクターを上回る改善をもたらすＡＡＶ変異体を選択するために使用し得る。そのような定向進化技法は、当該技術分野で既知であり、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１９４１３２号およびＫｏｔｔｅｒｍａｎ＆Ｓｃｈａｆｆｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ＡＯＰ，２０１４年５月２０日にオンライン公開；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｇ３７４２）で説明されている。定向進化は、遺伝的多様化および選択プロセスの反復ラウンドを介して自然進化を模倣し、それによってＡＡＶベースのビリオンなどの生体分子の機能を漸進的に改善する有益な突然変異の蓄積を可能にするキャプシド操作アプローチである。このアプローチでは、野生型ＡＡＶ  ｃａｐ遺伝子を多様化して、ウイルス粒子のライブラリーを生成するようにパッケージングされた大きな遺伝子ライブラリーを創出し、選択圧を適用して、遺伝子送達障壁を克服することができる優れた表現型を有する固有の変異体を単離する。
ＡＡＶ変異体は、例えば、米国特許第９，１９３，９５６号；同第９；１８６；４１９号；同第８，６３２，７６４号；同第８，６６３，６２４号；同第８，９２７，５１４号；同第８，６２８，９６６号；同第８，２６３，３９６号；同第８，７３４，８０９号；同第８，８８９，６４１号；同第８，６３２，７６４号；同第８，６９１，９４８号；同第８，２９９，２９５号；同第８，８０２，４４０号；同第８，４４５，２６７号；同第８，９０６，３０７号；同第８，５７４，５８３号；同第８，０６７，０１５号；同第７，５８８，７７２号；同第７，８６７，４８４号；同第８，１６３，５４３号；同第８，２８３，１５１号；同第８，９９９，６７８号；同第７，８９２，８０９号；同第７，９０６，１１１号；同第７，２５９，１５１号；同第７，６２９，３２２号；同第７，２２０，５７７号；同第８，８０２，０８０号；同第７，１９８，９５１号；同第８，３１８，４８０号；同第８，９６２，３３２号；同第７，７９０，４４９号；同第７，２８２，１９９号；同第８，９０６，６７５号；同第８，５２４，４４６号；同第７，７１２，８９３号；同第６，４９１，９０７号；同第８，６３７，２５５号；同第７，１８６，５２２号；同第７，１０５，３４５号；同第６，７５９，２３７号；同第６，９８４，５１７号；同第６，９６２，８１５号；同第７，７４９，４９２号；同第７，２５９，１５１号；および同第６，１５６，３０３号；米国出願公開第２０１３／０２９５６１４号；同第２０１５／００６５５６２号；同第２０１４／０３６４３３８号；同第２０１３／０３２３２２６号；同第２０１４／０３５９７９９号；同第２０１３／００５９７３２号；同第２０１４／００３７５８５号；同第２０１４／００５６８５４号；同第２０１３／０２９６４０９号；同第２０１４／０３３５０５４号；同２０１３／０１９５８０１号；同第２０１２／００７０８９９号；同第２０１１／０２７５５２９号；同第２０１１／０１７１２６２号；同第２００９／０２１５８７９号；同第２０１０／０２９７１７７号；同第２０１０／０２０３０８３号；同第２００９／０３１７４１７号；同第２００９／０２０２４９０号；同第２０１２／０２２０４９２号；同第２００６／０２９２１１７号；および同第２００４／０００２１５９；欧州公開第２６９２７３１Ａ１号；同第２３８３３４６Ｂ１号；同第２３５９８６５Ｂ１号；同第２３５９８６６Ｂ１号；同第２３５９８６７Ｂ１号；および同第２３５７０１０Ｂ１号；同第１７９１８５８Ｂ１号；同第１６６８１４３Ｂ１号；同第１６６０６７８Ｂ１号；同第１６６４３１４Ｂ１号；同第１４９６９４４Ｂ１号；同第１４５６３８３Ｂ１号；同第２３４１０６８Ｂ１号；同第２３３８９００Ｂ１号；同第１４５６４１９Ｂ１号；同第１３１０５７１Ｂ１号；同第１４５６３８３Ｂ１号；同第１６３３７７２Ｂ１号；および同第１１３５４６８Ｂ１；ならびに国際（ＰＣＴ）公開第ＷＯ２０１４／１２４２８２号；同第ＷＯ２０１３／１７００７８号；同第ＷＯ２０１４／１６００９２号；同第ＷＯ２０１４／１０３９５７号；同第ＷＯ２０１４／０５２７８９号；同第ＷＯ２０１３／１７４７６０号；同第ＷＯ２０１３／１２３５０３号；同第ＷＯ２０１１／０３８１８７号；および同第ＷＯ２００８／１２４０１５号；同第ＷＯ２００３／０５４１９７号に記載されているが、これらの参考文献のいずれも、本明細書に開示されるＡＡＶ変異体の物構造の実施形態および／または特徴および／または組成物を開示していない。
本明細書および参照された特許文書に引用される全ての文書および参考文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１４／１９４１３２号
【特許文献２】米国特許第９，１９３，９５６号明細書
【特許文献３】米国特許第９，１８６，４１９号明細書
【特許文献４】米国特許第８，６３２，７６４号明細書
【特許文献５】米国特許第８，６６３，６２４号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｋｏｔｔｅｒｍａｎ＆Ｓｃｈａｆｆｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ＡＯＰ，２０１４年５月２０日にオンライン公開；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｇ３７４２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書では、未修飾の親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、ＡＡＶビリオン中に存在する場合に１種以上の筋肉細胞の増加した感染性をもたらす、親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対してアミノ酸配列に１つ以上の修飾を有する変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質が提供される。本明細書に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含む組換えＡＡＶビリオンおよびその薬学的組成物、変異ｒＡＡＶキャプシドタンパク質およびビリオンの作製方法、ならびにこれらのｒＡＡＶキャプシドタンパク質およびビリオンを、研究および臨床診療のため、例えば、筋肉障害および疾患の治療のために１つ以上の筋肉細胞に核酸配列を送達することに使用するための方法も提供される。
【００１０】
本開示のいくつかの態様では、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質が提供され、これらの変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合に、アミノ酸配列修飾を含まない親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、１種以上の筋肉細胞（例えば、骨格筋細胞および／または心筋細胞）の増加した感染性をもたらす、親ＡＡＶキャプシドに対してアミノ酸配列における１つ以上の修飾を有する。本開示の関連する態様において、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合、抗ＡＡＶ抗体による中和に対する増強された耐性ももたらす。
【００１１】
本開示のいくつかの態様では、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオンが提供され、これらのｒＡＡＶビリオンは、本明細書に記載の変異キャプシドタンパク質を含み、ｒＡＡＶビリオンは、対応する未修飾の親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性に対して、１種以上の筋肉細胞（例えば、骨格筋細胞および／または心筋細胞）の増加した感染性を示す。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンに対して、全ての筋肉細胞の増加した感染性を示す。他の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンに対して、ある特定の筋肉細胞種の増加した感染性を示すが、他のものでは示さない。別の言い方をすれば、ｒＡＡＶビリオンは、ある特定の筋肉細胞種に対しては優先的な感染性を示すが、他のものでは示さず、例えば、ｒＡＡＶは、骨格筋繊維芽細胞、骨格筋サテライト細胞、心線維芽細胞、心臓前駆細胞、平滑筋、および／または横隔膜筋細胞から選択される１つ以上の細胞種の優先的に増加した感染性を示すが、全ての細胞種の増加した感染性を示さない。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは異種核酸を含む。いくつかのこのような実施形態では、異種核酸は、ポリペプチドをコードするＲＮＡをコードする。他のそのような実施形態では、異種核酸配列は、ポリペプチドをコードしていないＲＮＡをコードし、例えば、異種核酸配列は、ＲＮＡ干渉剤、ヌクレアーゼのためのガイドＲＮＡなどである。
【００１３】
本明細書では、主題の感染性ｒＡＡＶビリオンおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物も提供される。
【００１４】
標的細胞をｒＡＡＶビリオンと接触させることによって異種核酸を標的細胞（心筋細胞など）に送達する方法における本明細書に記載の変異キャプシドタンパク質を含むｒＡＡＶビリオンの使用も提供される。いくつかの実施形態では、標的細胞は、心血管障害の治療を必要とする個体の心臓などのインビボにある。他の実施形態では、標的細胞はインビトロである。
【００１５】
本明細書に記載の変異キャプシドタンパク質を含む有効量のｒＡＡＶビリオンまたは有効量のｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物を疾患の治療を必要とする対象に投与することによる、疾患（例えば、心筋または骨格筋障害）を治療する方法も提供される。
【００１６】
また、本明細書に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質をコードする配列を含む単離された核酸および単離された核酸を含む宿主細胞が提供される。さらに他の実施形態では、単離された核酸および／または単離された宿主細胞は、ｒＡＡＶを含む。
【００１７】
いくつかの態様では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対してキャプシドタンパク質のＧＨループに約５アミノ酸〜約２０アミノ酸の挿入（「異種ペプチド」または「ペプチド挿入」）を含み、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合に、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、筋肉細胞の増加した感染性をもたらす。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択される配列を含むか、または本質的にそれからなる。いくつかの好ましい実施形態では、ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）からなる群から選択される配列を含むか、または本質的にそれからなる。
【００１８】
いくつかの態様では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対して１つ以上のアミノ酸置換を含み、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合に、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、筋肉細胞の増加した感染性をもたらす。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対してＰ３６３Ｌ置換を含み、任意選択により、ＡＡＶ２に対してＥ３４７Ｋおよび／またはＶ７０８Ｉ置換をさらに含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。
【００２０】
関連する態様では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対してペプチド挿入および１つ以上のアミノ酸置換を含み、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合に、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、筋肉細胞の増加した感染性をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対してペプチド挿入およびＶ７０８Ｉ置換を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供され、ペプチド挿入は、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から、好ましくは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）からなる群から任意選択により選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対してペプチド挿入およびＰ３６３Ｌ置換を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供され、ペプチド挿入は、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、およびＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）からなる群から任意選択により選択される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）およびＶ７０８Ｉ置換を含み、任意選択によりＡＡＶ２に対してＡ５９３Ｅおよび／またはＳ１０９Ｔおよび／またはＴ３３０Ａおよび／またはＲ５８８Ｍ置換をさらに含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。他の実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）およびＡ３５Ｐ置換を含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。他の実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）ならびにアミノ酸置換Ｎ３１２Ｋ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、およびＬ７３５Ｑを含み、任意選択によりＡＡＶ２に対してＶ７０８Ｉ置換をさらに含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。
【００２２】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）およびＶ７０８Ｉ置換を含み、任意選択によりＡＡＶ２に対してＳ１０９Ｔおよび／またはＷ６９４Ｃおよび／またはＷ６０６Ｃ置換をさらに含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。他の実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）およびＩ６９８Ｖ置換を含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。他の実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）およびＮ３１２Ｋ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、およびＬ７３５Ｑ置換を含み、任意選択によりＡＡＶ２に対してＶ７０８Ｉ置換をさらに含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）およびＶ７０８Ｉ置換を含み、任意選択によりＡＡＶ２に対してＮ４４９Ｋおよび／またはＧ２２２Ｓ置換をさらに含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。他の実施形態では、ＡＡＶ２に対して異種ペプチドＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）ならびにＮ３１２Ｋ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、およびＬ７３５Ｑ置換を含み、任意選択によりＡＡＶ２に対してＶ７０８Ｉ置換をさらに含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対して本明細書の記載の異種ペプチドおよびＰ３６３Ｌ置換を含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が開示される。
【００２５】
本明細書では、変異ＡＡＶキャプシドを含むｒＡＡＶの作製および／または送達のための方法も開示される。加えて、本明細書では、本明細書に開示の変異ＡＡＶキャプシドを含むｒＡＡＶを含み、本明細書に記載の方法において使用するためのキットが提供される。
【００２６】
他の実施形態では、前段落における変異キャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンは、先行の実施形態または後続して開示される実施形態のうちのいずれを組み込んでもよい。実際に、明確にするために別個の実施形態の観点から記載されている本発明のある特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の観点から記載されている本発明の様々な特徴は、別々にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供されてもよい。本発明に係る実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、まさにありとあらゆる組み合わせが個々にかつ明示的に開示されているかのように、本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態およびそれらの要素の全ての部分的組み合わせも、本発明によって具体的に包含され、まさにありとあらゆるそのような部分的組み合わせが本明細書に個々にかつ明示的に開示されているかのように、本明細書に開示される。
【００２７】
本発明の要約は、特許請求の範囲を定義することを意図するものでも、いかなるようにも本発明の範囲を限定するものでもない。
本明細書に開示される発明の他の特徴および利点は、以下の図面、発明を実施するための形態、および特許請求の範囲から明らかとなる。
【００２８】
本発明は、添付の図面と併せて読むと以下の詳細な説明から最もよく理解される。本特許または出願ファイルには、少なくとも１つのカラー図面が含まれる。カラー図面を含む特許または特許出願公開のコピーは、請求および必要な費用の支払いにより、特許庁より提供される。一般的な慣行により、図面の様々な特徴は原寸ではないことが強調される。むしろ、様々な特徴の寸法は、明確にするために任意に拡大または縮小される。図面には以下の図が含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】定向進化法の実施形態を示す。ステップ（ａ）は、ＤＮＡ変異技法とキャプシド遺伝子との組み合わせを含むウイルスキャプシドライブラリーの生成を示す。ステップ（ｂ）は、各ウイルス粒子が、キャプシドをコードするキャプシド遺伝子を取り囲む変異キャプシドで構成され、精製されるような、ウイルスのパッケージングを示す。次いで、キャプシドライブラリーがインビトロまたはインビボで選択圧下に置かれる。定向進化技術のこの態様では、目的の組織または細胞物質は、その標的の感染に成功したＡＡＶ変異体の単離のために採取され、成功したウイルスが回収される。ステップ（ｃ）は、反復選択による成功したクローンの段階１の濃縮を示す。ステップ（ｄ）は、ウイルスの適合度を反復的に増加させるために再多様化およびさらなる選択ステップを経る選択されたキャプシド遺伝子の段階２の濃縮を示す。ステップ（ｅ）は、組換えＡＡＶベクターとして作製され、様々な細胞型および組織標的の形質導入レベルについて特性評価される、ベクター選択段階１および２の間にヒットとして同定された変異体を示す。ＡＡＶ定向進化プロセスの性質により、本明細書に開示される変異体は、選択プロセス中に筋肉細胞を形質導入し、ゲノム（変異キャプシド遺伝子をコードするゲノム）を送達する能力を既に実証している。
【図２】図２は、代表的な選択ラウンドの心筋組織および骨格筋組織由来のウイルスゲノムのＰＣＲ増幅を示す。赤いボックス内のバンドは、ウイルスゲノムの増幅に成功したことを示す。
【図３Ａ−３Ｃ】シーケンシング分析内のモチーフの発生頻度を示す。図３Ａは、心臓組織への静脈内送達の選択圧についてのラウンド４のシーケンシング分析を提供する。図３Ｂは、心臓組織に対する中和抗体の存在下での静脈内送達の選択圧についてのラウンド２のシーケンシング分析を提供する。図３Ｃは、骨格筋組織に対する静脈内送達の選択圧についてのラウンド３のシーケンシング分析を提供する。図３Ａは、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡモチーフ５７．４０％、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡモチーフ１６．９６％、Ａ５９３Ｅモチーフ７．３２％、その他７．３２％、Ｖ７０８Ｉモチーフ４．８８％、およびＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡモチーフ４．８８％を示している。図３Ｂは、その他２１．１４％、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡモチーフ２０．３３％、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡモチーフ１５．４５％、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡモチーフ１５．４５％、ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラモチーフ１５．４５％、およびＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡモチーフ１２．２０％を示している。図３Ｃは、Ａ５９３Ｅモチーフ４３．２１％、Ｐ３６３Ｌモチーフ４１．９８％、およびその他１４．８１％を示している。
【図４Ａ】図４Ａは、アミノ酸５８７の後のランダムヘプタマーおよびＶ７０８Ｉ置換を含むＡＡＶ２の代表的な三次元モデルである。図４Ｂは、Ｖ２２９Ｉ、Ａ４９０Ｔ、およびＡ５８１Ｔ置換を含むＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ（配列番号６２に示されるアミノ酸配列に対応する）の代表的な三次元モデルである。図４Ｃは、Ｐ３６３Ｌ置換を含むＡＡＶ２の代表的な三次元モデルである。
【図４Ｂ】同上。
【図４Ｃ】同上。
【図５−１】野生型（天然に存在する）血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、およびＡＡＶ４−１０の間のおよびそれらに渡るアミノ酸位置を示す野生型ＡＡＶ配列番号１〜１１のアラインメントを提供する。
【図５−２】同上。
【図５−３】同上。
【図５−４】同上。
【図５−５】同上。
【図６Ａ】それぞれがＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を発現する新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、および新規ＡＡＶ変異ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによる、インビトロでのヒト心筋細胞の形質導入に関するデータを提供する。図６Ａ：ヒト多能性幹細胞株から心筋細胞へと分化した細胞に、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、または野生型対照ＡＡＶ１．ＣＡＧ．ＧＦＰ、ＡＡＶ２．ＣＡＧ．ＧＦＰ、およびＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＧＦＰを２０、１００、５００、および２５００のＭＯＩで感染させた。全てのＭＯＩでの感染後６日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、またはＡＡＶ９キャプシドよりも良好に心筋細胞を形質導入することを実証している。図６Ｂ：フローサイトメトリーによる各培養物中のＧＦＰ陽性心筋細胞の割合の定量化により、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、またはＡＡＶ９キャプシドよりも形質導入された細胞数の有意な用量依存的改善をもたらすことが明らかである。＊ｐ＜０．０５  図６Ｃ〜６Ｄ：ウエスタンブロットによる各培養物中のＧＦＰ量の定量化により、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、またはＡＡＶ９キャプシドよりも導入遺伝子の発現の有意な改善をもたらすことが明らかである。ＮＴ＝形質導入なし。図６Ｅ：ヒト多能性細胞株から心筋細胞へと分化した細胞に、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、または野生型対照ＡＡＶ１．ＣＡＧ．ＧＦＰ、ＡＡＶ２．ＣＡＧ．ＧＦＰ、およびＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＧＦＰを感染させた。５００のＭＯＩでの感染後１、２、３、および５日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、またはＡＡＶ９キャプシドよりも良好に心筋細胞を形質導入し、かつより早くＧＦＰ導入遺伝子の発現を開始することを実証している。
【図６Ｂ】同上。
【図６Ｃ】同上。
【図６Ｄ】同上。
【図６Ｅ】同上。
【図７Ａ】ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによるインビトロでのヒト心筋細胞の形質導入に関するデータを提供する。図７Ａ：ヒト多能性幹細胞株から心筋細胞へと分化した細胞に、ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラキャプシドまたは野生型対照ＡＡＶ１．ＣＡＧ．ＧＦＰ、ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＧＦＰ、およびＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＧＦＰを１００、５００、および２５００のＭＯＩで感染させた。全てのＭＯＩでの感染後６日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９キャプシドよりも良好に心筋細胞を形質導入することを実証している。図７Ｂ：フローサイトメトリーによる各培養物中のＧＦＰ陽性心筋細胞の割合の定量化により、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９キャプシドよりも、形質導入された細胞数の有意な用量依存的改善をもたらすことが明らかである。＊ｐ＜０．０５  図７Ｃ〜７Ｄ：ウエスタンブロットによる各培養物中のＧＦＰ量の定量化により、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９キャプシドよりも導入遺伝子の発現の有意な改善をもたらすことが明らかである。ビヒクル：形質導入なし。図７Ｅ：ヒト多能性細胞株から心筋細胞へと分化した細胞に、新規ＡＡＶ変異ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キャプシド、または野生型対照ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＧＦＰを感染させた。２５００のＭＯＩでの感染後３、４、５、および６日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ８キャプシドよりも良好に心筋細胞を形質導入し、かつより早くＧＦＰ導入遺伝子の発現を開始することを実証している。
【図７Ｂ】同上。
【図７Ｃ】同上。
【図７Ｄ】同上。
【図７Ｅ】同上。
【図８Ａ】それぞれがＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を発現する新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、および新規ＡＡＶ変異ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによる、インビトロでのヒト骨格筋細胞の形質導入に関するデータを提供する。図８Ａ：ヒト初代筋芽細胞から骨格筋筋線維へと分化した細胞に、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、または野生型対照ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＧＦＰ、およびＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＧＦＰを１００、５００、および２５００のＭＯＩで感染させた。全てのＭＯＩでの感染後７日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが野生型ＡＡＶ８またはＡＡＶ９キャプシドよりも良好に骨格筋細胞を形質導入することを実証している。図８Ｂ：フローサイトメトリーによる各培養物中のＧＦＰ陽性心筋細胞の割合の定量化により、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ８またはＡＡＶ９キャプシドよりも、形質導入された細胞数の有意な用量依存的改善をもたらすことが明らかである。＊ｐ＜０．０５  図８Ｃ：ヒト初代筋芽細胞から骨格筋細胞へと分化した細胞に、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、または野生型対照ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＧＦＰおよびＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＧＦＰを感染させた。２５００のＭＯＩでの感染後２〜７日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが野生型ＡＡＶ８またはＡＡＶ９キャプシドよりも良好に心筋細胞を形質導入し、かつより早くＧＦＰ導入遺伝子の発現を開始することを実証している。
【図８Ｂ】同上。
【図８Ｃ】同上。
【図９Ａ】それぞれがＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を発現する新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、および新規ＡＡＶ変異ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによる、インビトロでのヒト筋肉前駆細胞の形質導入に関するデータを提供する。図９Ａ：ヒト多能性幹細胞から筋肉前駆細胞へと分化した細胞に、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、新規ＡＡＶ変異体ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ．ＣＡＧ．ＧＦＰ、または野生型対照ＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＧＦＰを５００のＭＯＩで感染させた。全てのＭＯＩでの感染後６日目の細胞培養物の免疫蛍光イメージングは、新規ＡＡＶ変異キャプシドが野生型ＡＡＶ９よりも良好に筋肉前駆細胞を形質導入することを実証している。図９Ｂ：フローサイトメトリーによる各培養物中のＧＦＰ陽性心筋細胞の割合の定量化により、新規ＡＡＶ変異キャプシドが、野生型ＡＡＶ９よりも、形質導入された細胞数の有意な用量依存的改善をもたらすことが明らかである。＊ｐ＜０．０５
【図９Ｂ】同上。
【図１０Ａ】それぞれがＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を発現する新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシド、および新規ＡＡＶ変異ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによる、インビトロでのヒト心筋細胞およびヒト骨格筋筋繊維の形質導入の改善の程度に関するデータを提供する。図１０Ａ：筋肉疾患の臨床応用で最も広く使用されている血清型である野生型ＡＡＶ８およびＡＡＶ９と比較して、新規ＡＡＶキャプシド変異体によるヒト心筋細胞の形質導入の倍数増加。図１０Ｂ：野生型ＡＡＶ８およびＡＡＶ９と比較して新規ＡＡＶキャプシド変異体によるヒト骨格筋筋線維の形質導入の倍数増加。
【図１０Ｂ】同上。
【図１１Ａ】ＣＡＧプロモーターの制御下でルシフェラーゼ導入遺伝子を発現する新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによる、インビボでのマウス組織の形質導入に関するデータを提供する。マウスに、動物あたり２×１０１１のウイルスゲノムの尾静脈を介した単回静脈内注射を与えた。図１１Ａ：投与後１４日目（左）および２８日目（右）のルシフェラーゼの生前イメージングは、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがインビボでマウス細胞を形質導入できることを実証している。図１１Ｂ：投与後５６日目の心臓、横隔膜、および大腿四頭筋におけるルシフェラーゼ活性は、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがインビトロでマウス心筋および骨格筋を形質導入できることを実証している。
【図１１Ｂ】同上。
【図１２Ａ】、ＣＡＧプロモーターの制御下でＧＦＰ導入遺伝子を発現する新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドを含む組換えＡＡＶウイルスによる、インビボでの非ヒト霊長類骨格筋の形質導入に関するデータを提供する。非ヒト霊長類に、左外側広筋にそれぞれ１０１１ウイルスゲノムの筋肉内注射を３回与え、筋肉組織を投与の４週間後に分析した。図１２Ａ：２倍、４倍、および２０倍の倍率での近位生検部位の断面図のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびに抗ＧＦＰ抗体染色の代表的なイメージは、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがインボビで霊長類骨格筋細胞を形質導入できることを示している。図１２Ｂ：２倍、４倍、および２０倍の倍率での近位生検部位の縦断面図のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびに抗ＧＦＰ抗体染色の代表的なイメージは、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがインボビで霊長類骨格筋細胞を形質導入できることを示している。
【図１２Ｂ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明の方法および組成物を記載する前に、本発明は記載される特定の方法または組成物に限定されず、そのため、変化し得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定することを意図するものではないことも理解されたい。
【００３１】
本明細書に開示される発明は、図面および説明に例示されている。しかしながら、特定の実施形態が図面に例示されているものの、本発明を、例示および／または開示された特定の実施形態（単数または複数）に限定する意図はない。むしろ、本明細書で開示される発明は、本発明の趣旨および範囲内に入る全ての修正、代替構成、および均等物を網羅することが意図されている。このように、図面は例示的なものであり、限定的なものではない。
【００３２】
ある範囲の値が提供される場合、その範囲の上限と下限との間に、文脈上明確に指示されない限り、下限の単位の１０分の１までの各介在値も具体的に開示されることが理解される。記載された範囲内の任意の記載された値または介在値と、その記載された範囲内の任意の他の記載された値または介在値との間のより小さい各範囲は、本発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立して範囲内に含まれても除外されてもよく、より小さい範囲に限界のいずれかが含まれる、限界のいずれも含まれない、または限界の両方が含まれる各範囲もまた、記載された範囲内の任意の具体的に除外された限界次第で、本発明に包含される。記載された範囲が限界の一方または両方を含む場合、これらの含まれる限界の一方または両方を除く範囲も本発明に含まれる。
【００３３】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似または等価の任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、いくつかの可能性のあるかつ好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書で言及される全ての刊行物は、刊行物が引用される方法および／または材料を開示および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。本開示は、矛盾が存在する限り、組み込まれた刊行物のいずれの開示にも優先することが理解される。
【００３４】
本開示を読むと当業者には明らかとなるように、本明細書に記載され図示される個々の実施形態の各々は、個別の構成要素および特徴を有し、これらは、本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく他のいくつかの実施形態のうちのいずれかの特徴と容易に分離させるかまたは組み合わせてもよい。いずれの列挙される方法も、列挙された事象の順序で、または論理的に可能な他の順序で実施することができる。
【００３５】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「組換えＡＡＶビリオン」への言及は、複数のそのようなビリオンを含み、「筋肉細胞」への言及は、１つ以上の筋肉細胞および当業者に既知のその等価物などへの言及を含む。特許請求の範囲は、いずれの任意選択の要素も排除するように作成され得ることにさらに留意されたい。このため、この記述は、特許請求された要素の列挙に関連した「専ら」、「のみ」などのような排他的な用語の使用、または「否定的」制限の使用に対する先行詞として機能することが意図される。
【００３６】
本明細書で考察される刊行物は、専ら本出願の出願日前のそれらの開示のために提供される。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明によりそのような刊行物に先行する資格を有さないことを認めるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供される公開日は、実際の公開日とは異なってもよく、これは自主的に確認する必要があり得る。
【００３７】
定義
アデノ関連ウイルスは、エンベロープを有しない２０面体キャプシド内の４．７ｋｂの一本鎖ＤＮＡゲノムからなる非病原性パルボウイルスである。このゲノムは、複製およびパッケージングシグナルのウイルス起源として機能する逆位末端反復配列（ＩＴＲ）に隣接する３つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。ｒｅｐ  ＯＲＦは、ウイルス複製、転写調節、部位特異的組込み、およびビリオンアセンブリにおいて役割を果たす４つの非構造タンパク質をコードする。ｃａｐ  ＯＲＦは、アセンブルされて６０ｍｅｒのウイルスキャプシドを形成する３つの構造タンパク質（ＶＰ１〜３）をコードする。最後に、ｃａｐ遺伝子内の代替リーディングフレームとして存在するＯＲＦは、ＡＡＶキャプシドタンパク質を核小体に局在させ、かつキャプシドアセンブリプロセスにおいて機能するウイルスタンパク質である、アセンブリ活性化タンパク質（ＡＡＰ）を産生する。
【００３８】
天然に存在する（「野生型」）血清型はいくつかあり、ＡＡＶの既知の変異体は１００種類超あり、それぞれ、アミノ酸配列、特にキャプシドタンパク質の超可変領域内、したがってその遺伝子送達特性が異なる。ＡＡＶはいずれのヒト疾患にも関連していないため、組換えＡＡＶは臨床用途に魅力的である。
【００３９】
本明細書の開示の目的のために、「ＡＡＶ」という用語は、アデノ関連ウイルスの略称であり、限定されないが、ウイルス自体およびその誘導体を含む。別途明記されない限り、この用語は、全てのサブタイプまたは血清型ならびに複製可能型および組換え型の両方を指す。「ＡＡＶ」という用語には、限定されないが、１型ＡＡＶ（ＡＡＶ−１またはＡＡＶ１）、２型ＡＡＶ（ＡＡＶ−２またはＡＡＶ２）、３Ａ型ＡＡＶ（ＡＡＶ−３ＡまたはＡＡＶ３Ａ）、３Ｂ型ＡＡＶ（ＡＡＶ−３ＢまたはＡＡＶ３Ｂ）、４型ＡＡＶ（ＡＡＶ−４またはＡＡＶ４）、５型ＡＡＶ（ＡＡＶ−５またはＡＡＶ５）、６型ＡＡＶ（ＡＡＶ−６またはＡＡＶ６）、７型ＡＡＶ（ＡＡＶ−７またはＡＡＶ７）、８型ＡＡＶ（ＡＡＶ−８またはＡＡＶ８）、９型ＡＡＶ（ＡＡＶ−９またはＡＡＶ９）、１０型ＡＡＶ（ＡＡＶ−１０またはＡＡＶ１０またはＡＡＶｒｈ１０）、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、ウマＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、およびヒツジＡＡＶが含まれる。「霊長類ＡＡＶ」は霊長類に感染するＡＡＶを指し、「非霊長類ＡＡＶ」は非霊長類哺乳動物に感染するＡＡＶを指し、「ウシＡＡＶ」はウシ哺乳動物に感染するＡＡＶを指す。
【００４０】
ＡＡＶの様々な血清型のゲノム配列、ならびに天然末端反復配列（ＴＲ）、Ｒｅｐタンパク質、およびキャプシドサブユニットの配列は、当該技術分野で既知である。このような配列は、文献またはＧｅｎＢａｎｋなどの公開データベースにおいて見出され得る。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００２０７７．１（ＡＡＶ１）、ＡＦ０６３４９７．１（ＡＡＶ１）、ＮＣ＿００１４０１．２（ＡＡＶ２）、ＡＦ０４３３０３．１（ＡＡＶ２）、Ｊ０１９０１．１（ＡＡＶ２）、Ｕ４８７０４．１（ＡＡＶ３Ａ）、ＮＣ＿００１７２９．１（ＡＡＶ３Ａ）、ＡＦ０２８７０５．１（ＡＡＶ３Ｂ）、ＮＣ＿００１８２９．１（ＡＡＶ４）、Ｕ８９７９０．１（ＡＡＶ４）、ＮＣ＿００６１５２．１（ＡＡ５）、ＡＦ０８５７１６．１（ＡＡＶ−５）、ＡＦ０２８７０４．１（ＡＡＶ６）、ＮＣ＿００６２６０．１（ＡＡＶ７）、ＡＦ５１３８５１．１（ＡＡＶ７）、ＡＦ５１３８５２．１（ＡＡＶ８）ＮＣ＿００６２６１．１（ＡＡＶ−８）、ＡＹ５３０５７９．１（ＡＡＶ９）、ＡＡＴ４６３３７（ＡＡＶ１０）、およびＡＡＯ８８２０８（ＡＡＶｒｈ１０）を参照されたい。これらの開示は、ＡＡＶ核酸およびアミノ酸配列の教示のために参照により本明細書に組み込まれる。また、例えば、Ｓｒｉｖｉｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ４５：５５５；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７１：６８２３；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７３：１３０９；Ｂａｎｔｅｌ−Ｓｃｈａａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７３：９３９；Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７３：３９９４；Ｍｕｒａｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２２１：２０８；Ｓｈａｄｅ  ｅｔ．ａｌ．（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５８：９２１；Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：  １１８５４；Ｍｏｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３３：３７５−３８３；国際特許出願公開第ＷＯ  ００／２８０６１号、同ＷＯ９９／６１６０１号、同ＷＯ  ９８／１１２４４号；および米国特許第６，１５６，３０３号を参照のこと。
【００４１】
ＡＡＶ血清型に関連する天然に存在するｃａｐ（キャプシド）タンパク質の配列は、当該技術分野で既知であり、ＡＡＶ１（配列番号１）、ＡＡＶ２（配列番号２）、ＡＡＶ３Ａ（配列番号３）、ＡＡＶ３Ｂ（配列番号４）、ＡＡＶ４（配列番号５）、ＡＡＶ５（配列番号６）、ＡＡＶ６（配列番号７）、ＡＡＶ７（配列番号８）、ＡＡＶ８（配列番号９）、ＡＡＶ９（配列番号１０）、ＡＡＶ１０（配列番号１１）、およびＡＡＶｒｈ１０（配列番号１２）として本明細書で開示されるものを含む。「変異ＡＡＶキャプシドタンパク質」または「ＡＡＶ変異体」という用語は、天然に存在するまたは「野生型」ＡＡＶキャプシドタンパク質配列、例えば、本明細書において配列番号ｌ〜１２に示されるものに対して、少なくとも１つの修飾または置換（欠失、挿入、点変異などを含む）を含むアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質を指す。変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、野生型キャプシドタンパク質のアミノ酸配列に対して約８０％の同一性、例えば、野生型キャプシドタンパク質のアミノ酸配列に対して８５％以上の同一性、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、例えば、野生型キャプシドタンパク質に対して９８％または９９％の同一性を有し得る。変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、野生型キャプシドタンパク質ではない場合がある。
【００４２】
本明細書の開示の目的のために、「ＡＡＶビリオン」または「ＡＡＶウイルス粒子」は、少なくとも１つのＡＡＶキャプシドタンパク質およびキャプシド形成したＡＡＶポリヌクレオチドからなるウイルス粒子を指す。
【００４３】
本明細書の開示の目的のために、「ｒＡＡＶ」という用語は、組換えアデノ関連ウイルスを指す略称である。ポリヌクレオチドに適用される「組換え」は、ポリヌクレオチドが、クローニング、制限、またはライゲーションステップ、および天然に見られるポリヌクレオチドとは異なる構築物をもたらす他の手順の様々な組み合わせの産物であることを意味する。組換えウイルスは、組換えポリヌクレオチドを含むウイルス粒子である。これらの用語は、それぞれ、元のポリヌクレオチド構築物の複製物および元のウイルス構築物の子孫を含む。
【００４４】
「ｒＡＡＶベクター」という用語は、定義上ｒＡＡＶポリヌクレオチドを含むｒＡＡＶビリオン（すなわち、ｒＡＡＶウイルス粒子）（例えば、感染性ｒＡＡＶビリオン）を包含し、また、ｒＡＡＶをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｒＡＡＶをコードする一本鎖ポリヌクレオチド（ｓｓ−ｒＡＡＶ）、ｒＡＡＶをコードする二本鎖ポリヌクレオチド（ｄｓ−ｒＡＡＶ）、例えばｒＡＡＶをコードするプラスミドなど）も包含する。
【００４５】
ＡＡＶビリオンが、異種ポリヌクレオチド（すなわち、野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド、例えば、標的細胞に送達される導入遺伝子または標的細胞に送達されるＣＲＩＳＰＲ剤など）を含む場合、ＡＡＶビリオンは、典型的には、「組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオン」または「ｒＡＡＶウイルス粒子」と称される。一般的に、異種ポリヌクレオチドは、少なくとも１つ、一般的には２つのＡＡＶ逆位末端反復配列と隣接する。
【００４６】
「パッケージング」という用語は、ＡＡＶ粒子のアセンブリおよびキャプシド形成をもたらす一連の細胞内事象を指す。ＡＡＶ「ｒｅｐ」および「ｃａｐ」遺伝子は、アデノ関連ウイルスの複製およびキャプシド形成タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を指す。ＡＡＶ  ｒｅｐおよびｃａｐは、本明細書ではＡＡＶ「パッケージング遺伝子」と称される。
【００４７】
ＡＡＶに関する「ヘルパーウイルス」という用語は、ＡＡＶ（例えば、野生型ＡＡＶ）の哺乳動物細胞による複製およびパッケージングを可能にするウイルスを指す。アデノウイルス、ヘルペスウイルス、およびワクシニアなどのポックスウイルスを含む、多様なＡＡＶに関するそのようなヘルパーウイルスが当該技術分野で既知である。サブグループＣのアデノウイルス５型が最も一般的に使用されるが、アデノウイルスは多数の異なるサブグループを包含する。ヒト、非ヒト哺乳動物、およびトリ由来の多数のアデノウイルスが知られており、ＡＴＣＣなどの預託機関から入手可能である。ヘルペスファミリーのウイルスには、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）およびエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ならびにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）および仮性狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）が挙げられ、これらもＡＴＣＣなどの預託機関から入手可能である。
【００４８】
「ヘルパーウイルス機能（複数可）」という用語は、（本明細書に記載の複製およびパッケージングのための他の要件と併せて）ＡＡＶの複製およびパッケージングを可能にするヘルパーウイルスゲノムにコードされた機能（複数可）を指す。本明細書に記載されるように、「ヘルパーウイルス機能」は、トランスの産生細胞に、ヘルパーウイルスを提供すること、または例えば必要な機能（複数可）をコードするポリヌクレオチド配列を提供することを含む多数の方法で提供され得る。例えば、１つ以上のアデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むプラスミドまたは他の発現ベクターを、ｒＡＡＶベクターと共に産生細胞にトランスフェクトする。
【００４９】
「感染性」ウイルスまたはウイルス粒子という用語は、コンピテントにアセンブルされたキャプシドを含み、そのウイルス種が向性である細胞にポリヌクレオチド成分を送達することができるものである。この用語は、いずれかのウイルスの複製能力を必ずしも意味するものではない。感染性ウイルス粒子を計数するためのアッセイは、本開示の他箇所および当該技術分野において説明されている。ウイルス感染性は、感染性ウイルス粒子対全ウイルス粒子の比として表すことができる。感染性ウイルス粒子対全ウイルス粒子の比を決定する方法は、当該技術分野で既知である。Ｇｒａｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１１：  Ｓ３３７（ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ  ａ  ＴＣＩＤ５０  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｔｉｔｅｒ  ａｓｓａｙ）；およびＺｏｌｏｔｕｋｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．６：９７３を参照されたい。実施例も参照されたい。
【００５０】
本明細書で使用される「向性」という用語は、特定の宿主種の細胞または宿主種内の特定の細胞型のウイルス（例えば、ＡＡＶ）による優先的な標的化を指す。例えば、心臓、肺、肝臓、および筋肉の細胞に感染することができるウイルスは、肺細胞および筋肉細胞のみに感染することができるウイルスと比較して、より広い（すなわち、増大した）向性を有する。向性はまた、宿主の特定の種類の細胞表面分子に対するウイルスの依存性を含み得る。例えば、いくつかのウイルスは表面グリコサミノグリカンを有する細胞のみに感染することができる一方、他のウイルスはシアル酸を有する細胞のみに感染することができる（そのような依存性はウイルス感染の可能性のある宿主細胞として特定のクラスの分子を欠く様々な細胞株を用いて試験することができる）。いくつかの事例では、ウイルスの向性は、ウイルスの相対的選好を示す。例えば、第１のウイルスは、全ての細胞型に感染することができ得るが、表面グリコサミノグリカンを有する細胞を感染させる上ではるかに大きな成功を収める。第２のウイルスも同じ特徴を好む場合（例えば、第２のウイルスも、表面グリコサミノグリカンを有する細胞を感染させる上でより大きな成功を収める場合）、絶対的形質導入効率は類似していないとしても、第２のウイルスは第１のウイルスと類似の（または同一の）向性を有するとみなすことができる。例えば、第２のウイルスは、試験した全ての所定の細胞型を感染させる際に、第１のウイルスよりも効率的である可能性があるが、相対的選好が類似している（または同一である）場合、第２のウイルスは、依然として第１のウイルスと類似の（または同一の）向性を有するとみなすことができる。いくつかの実施形態では、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むビリオンの向性は、天然に存在するビリオンと比べて改変されていない。いくつかの実施形態では、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むビリオンの向性は、天然に存在するビリオンと比べて拡大されている（すなわち、広げられている）。いくつかの実施形態では、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むビリオンの向性は、天然に存在するビリオンと比べて低下している。
【００５１】
「複製コンピテントな」ウイルス（例えば、複製コンピテントなＡＡＶ）という用語は、感染性であり、また感染した細胞中で（すなわち、ヘルパーウイルスまたはヘルパーウイルス機能の存在下で）複製されることができる、表現型的に野生型のウイルスを指す。ＡＡＶの場合、複製能力は、一般に、機能的ＡＡＶパッケージング遺伝子の存在を必要とする。一般に、本明細書に記載のｒＡＡＶベクターは、１つ以上のＡＡＶパッケージング遺伝子の欠如のために、哺乳動物細胞（特にヒト細胞）において複製不能である。典型的には、そのようなｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶパッケージング遺伝子と移入されるｒＡＡＶベクターとの間の組換えによって複製コンピテントなＡＡＶが生成される可能性を最小限に抑えるために、一切のＡＡＶパッケージング遺伝子配列を欠いている。多くの実施形態では、本明細書に記載のｒＡＡＶベクター調製物は、あったとしてもわずかな複製コンピテントなＡＡＶ（ｒｃＡＡＶ、ＲＣＡとも称される）をほとんど含まないものである（例えば、ｒＡＡＶ粒子１０２個当たり約１個未満のｒｃＡＡＶ、ｒＡＡＶ粒子１０４個当たり約１個未満のｒｃＡＡＶ、ｒＡＡＶ粒子１０個当たり約１個未満のｒｃＡＡＶ、ｒＡＡＶ粒子１０１２個当たり約１個未満のｒｃＡＡＶ、またはｒｃＡＡＶなし）。
【００５２】
「ポリヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはその類似体を含む、任意の長さのヌクレオチドの多量体型を指す。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾されたヌクレオチドを含んでもよく、非ヌクレオチド成分によって妨害され得る。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は、ポリマーのアセンブリの前または後に付与され得る。ポリヌクレオチドという用語は、本明細書で使用される場合、二本鎖および一本鎖分子を同義に指す。別途指定されない限り、または必要とされない限り、ポリヌクレオチドを含む本明細書の任意の実施形態は、二本鎖形態と、二本鎖形態を構成することが分かっているかまたは予測される２つの相補的一本鎖形態の各々との両方を包含する。
【００５３】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対してある特定の率の「配列同一性」を有する。すなわち、整列したときに、これらの２つの配列を比較すると、塩基またはアミノ酸の率が同じである。配列の類似性は、多数の異なる様式で決定することができる。配列同一性を決定するために、配列は、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／のウェブ上で入手可能なＢＬＡＳＴを含む方法およびコンピュータープログラムを使用して整列させることができる。他のアラインメントアルゴリズムは、ＦＡＳＴＡであり、これは、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．の完全所有子会社であるＭａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡのＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージにおいて利用可能である。アラインメントのための他の技法は、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２６６：Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９９６），ｅｄ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ａ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｂｒａｃｅ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡに記載されている。特に興味深いのは、配列中のギャップを許容するアライメントプログラムである。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎは、配列アライメントのギャップを許容するアルゴリズムの一種である。Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７０：１７３−１８７（１９９７）を参照されたい。また、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアラインメント法を用いるＧＡＰプログラムを利用して配列のアラインメントを行うことができる。Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）を参照されたい。
【００５４】
「遺伝子」という用語は、細胞内で何らかの機能を果たすポリヌクレオチドを指す。例えば、遺伝子は、遺伝子産物をコードすることができるオープンリーディングフレームを含み得る。遺伝子産物の一例は、遺伝子から転写され翻訳されるタンパク質である。遺伝子産物の別の例は、転写されているが翻訳されていないＲＮＡ、例えば、機能的ＲＮＡ産物、例えばアプタマー、干渉ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、ヌクレアーゼのためのガイドＲＮＡなどである。
【００５５】
「遺伝子発現産物」または「遺伝子産物」という用語は、上で定義した特定の遺伝子の発現から生じる分子である。遺伝子発現産物には、例えば、ポリペプチド、アプタマー、干渉ＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）などが含まれる。
【００５６】
「ｓｉＲＮＡ剤」（「低分子干渉」または「短鎖干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ））は、目的の遺伝子（「標的遺伝子」）に標的化されるヌクレオチドのＲＮＡ二重鎖である。「ＲＮＡ二重鎖」は、ＲＮＡ分子の２つの領域間の相補的対形成によって形成され、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の領域を形成する構造を指す。ｓｉＲＮＡの二重鎖部分のヌクレオチド配列が標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的であるという点で、ｓｉＲＮＡは遺伝子に「標的化」される。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの二本鎖の長さは３０ヌクレオチド未満である。いくつかの実施形態では、二重鎖は、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、または１０ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、二本鎖の長さは、１９〜２５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ媒介性遺伝子標的化は、動物細胞の内因性ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を活性化するためにＤＮＡ構築物を利用する遺伝子サイレンシング技術であるＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）の使用によって達成される。そのようなＤＮＡ構築物は、処理されると、標的遺伝子（単数または複数）のサイレンシングを引き起こす、自己相補的な二本鎖ＲＮＡ、典型的には短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を発現するように設計される。内因性ｍＲＮＡまたはウイルスＲＮＡを含むいずれのＲＮＡも、所望のｍＲＮＡ標的に相補的な二本鎖ＲＮＡを発現する構築物を設計することによってサイレンシングされ得る。このように、ｓｉＲＮＡ剤のＲＮＡ二本鎖部分は、ｓｈＲＮＡと呼ばれる短鎖ヘアピン構造の一部であり得る。二重鎖部分に加えて、ヘアピン構造は、二本鎖を形成する２つの配列の間に位置するループ部分を含んでもよい。ループの長さは様々であり得る。いくつかの実施形態では、ループは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３ヌクレオチド長である。ヘアピン構造は、３’突出部分または５’突出部分も含み得る。いくつかの実施形態では、突出部は、０、１、２、３、４、または５ヌクレオチド長の３’または５’突出である。一般に、標的遺伝子の発現産物（例えば、ｍＲＮＡ、ポリペプチドなど）のレベルは、５’非翻訳（ＵＴ）領域、ＯＲＦ、または３’ＵＴ領域を含む、標的遺伝子転写産物の少なくとも１９〜２５ヌクレオチド長のセグメント（例えば、２０〜２１ヌクレオチド配列）に相補的である特定の二本鎖ヌクレオチド配列を含むｓｉＲＮＡ剤（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡなど）によって低下する。いくつかの実施形態では、短鎖干渉ＲＮＡは、長さが約１９〜２５ｎｔである。ｓｉＲＮＡ技術の記述については、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ００／４４８９５、ＷＯ９９／３２６１９、ＷＯ０１／７５１６４、ＷＯ０１／９２５１３、ＷＯ０１／２９０５８、ＷＯ０１／８９３０４、ＷＯ０２／１６６２０、およびＷＯ０２／２９８５８、ならびに米国特許出願公開第２００４／００２３３９０号を参照されたい。ｓｉＲＮＡおよび／またはｓｈＲＮＡは核酸配列によってコードされ得、この核酸配列はプロモーターも含み得る。核酸配列はポリアデニル化シグナルも含み得る。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化シグナルは、合成最小ポリアデニル化シグナルである。
【００５７】
「アンチセンスＲＮＡ」という用語は、遺伝子発現産物に相補的なＲＮＡを包含する。例えば、特定のｍＲＮＡを標的とするアンチセンスＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡのｍＲＮＡへのハイブリダイゼーションがｍＲＮＡの発現を変化させる（例えば、ＲＮＡの安定性を改変すること、ＲＮＡの翻訳を改変することなどを介して）、ｍＲＮＡに相補的なＲＮＡ系薬剤である（または修飾ＲＮＡであり得る）。「アンチセンスＲＮＡ」には、アンチセンスＲＮＡをコードする核酸も含まれる。
【００５８】
「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９剤」に関して、「ＣＲＩＳＰＲ」という用語は、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）を使用して侵入してくる核酸のサイレンシングを誘導することにより、ウイルスおよびプラスミドに対する適応免疫を細菌および古細菌に提供するように進化した、クラスター化され規則的に間隔が空いた短い回文構造の反復／ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）システムを包含する。Ｃａｓ９タンパク質（またはその機能的同等物および／または変異体、すなわち、Ｃａｓ９様タンパク質）は、ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡと呼ばれる２つの天然に存在するまたは合成のＲＮＡ分子（ガイドＲＮＡとも呼ばれる）とのタンパク質の会合に依存するＤＮＡエンドヌクレアーゼ活性を天然に含む。いくつかの場合には、２つの分子が共有結合して、単一分子（単一ガイドＲＮＡ（「ｓｇＲＮＡ」）とも呼ばれる）を形成する。このため、Ｃａｓ９またはＣａｓ９様タンパク質は、Ｃａｓ９またはＣａｓ９様タンパク質を活性化し、タンパク質を標的核酸配列に誘導するＤＮＡ標的化ＲＮＡ（本用語は、２分子ガイドＲＮＡ構成と単一分子ガイドＲＮＡ構成との両方を包含する）と会合する。
【００５９】
Ｃａｓ９またはＣａｓ９様タンパク質は、その天然の酵素機能を保持する場合、標的ＤＮＡを切断して、ゲノムの改変（すなわち、編集：欠失、挿入（ドナーポリヌクレオチドが存在する場合）、置換など）をもたらすことができる二本鎖破断を創出し、それによって遺伝子発現を改変する。Ｃａｓ９のいくつかの変異体（変異体はＣａｓ９様の用語に包含される）は、ＤＮＡ切断活性が低下するように改変されている（いくつかの場合には、標的ＤＮＡの両方の鎖の代わりに単一の鎖を切断するが、他の場合には、ＤＮＡ切断活性がなくなるまでに著しく減少した）。ＤＮＡ切断活性が減少した（さらにはＤＮＡ切断活性がない）Ｃａｓ９様タンパク質は、それでも標的ＤＮＡに誘導されて、ＲＮＡポリメラーゼ活性を阻止し得る。あるいは、Ｃａｓ９またはＣａｓ９様タンパク質は、ＶＰ６４転写活性化ドメインをＣａｓ９タンパク質に融合させ、融合タンパク質をテトラループおよびステムループでＭＳ２−Ｐ６５−ＨＳＦ１ヘルパータンパク質およびＭＳ２  ＲＮＡアプタマーを含む単一ガイドＲＮＡと共に共同輸送して、転写を活性化する細胞内にＳｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ（Ｃａｓ９−ＳＡＭ）複合体を形成させることによって、修飾されてもよい。このため、酵素的に不活性なＣａｓ９様タンパク質は、標的ＤＮＡの転写を阻止または活性化するために、ＤＮＡ標的化ＲＮＡによって標的ＤＮＡ中の特定の場所を標的とすることができる。本明細書で使用される「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９剤」という用語は、上記のような、または当該技術分野で既知であるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９の全ての形態を包含する。
【００６０】
ＣＲＩＳＰＲ剤に関する詳細な情報は、例えば、（ａ）Ｊｉｎｅｋ  ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１２  Ａｕｇ  １７；３３７（６０９６）：８１６−２１：“Ａ  ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  ｄｕａｌ−ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ＤＮＡ  ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ  ｉｎ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ”；（ｂ）Ｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．２０１３  Ｆｅｂ  ２８；１５２（５）：１１７３−８３：“Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ  ＣＲＩＳＰＲ  ａｓ  ａｎ  ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”、ならびに（ｃ）米国特許出願第１３／８４２，８５９号およびＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１３／３２５８９に見出すことができ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。このため、本明細書で使用される「ＣＲＩＳＰＲ剤」という用語は、Ｃａｓ９系システム（例えば、Ｃａｓ９またはＣａｓ９様タンパク質；ＤＮＡ標的化ＲＮＡの任意の成分、例えば、ｃｒＲＮＡ様ＲＮＡ、ｔｒａｃｒＲＮＡ様ＲＮＡ、単一ガイドＲＮＡなど；ドナーポリヌクレオチド；および同様のもの）において使用され得る、天然に存在するおよび／または合成の配列を含む任意の作用物質（またはそのような作用物質をコードする核酸）を包含する。
【００６１】
「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」（ＺＦＮ）は、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合することによって生成される人工ＤＮＡエンドヌクレアーゼを意味する。ＺＦＮは、所望のＤＮＡ配列を標的とするように操作することができ、これによりジンクフィンガーヌクレアーゼが固有の標的配列を切断することが可能になる。細胞に導入された場合、ＺＦＮを用いて、二本鎖破断を誘導することにより、細胞（例えば、細胞のゲノム）中の標的ＤＮＡを編集することができる。ＺＦＮの使用に関するさらなる情報については、例えば、Ａｓｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１２  Ｆｅｂ；２０（２）：３２９−３８；Ｂｉｂｉｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００３  Ｍａｙ  ２；３００（５６２０）：７６４；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１  Ｊｕｌ  １５；３３３（６０４０）：３０７；Ｏｃｈｉａｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｓ  Ｃｅｌｌｓ．２０１０  Ａｕｇ；１５（８）：８７５−８５；Ｔａｋａｓｕ  ｅｔ．ａｌ．，  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１０  Ｏｃｔ；４０（１０）：７５９−６５；Ｅｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ２００８  Ｓｕｍｍｅｒ；５（２）：  １２１−３；Ｙｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１１  Ａｐｒ  ２６；１０８（１７）：７０５２−７；Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ．２０１０  Ｍａｒ  ５；１４０（５）：６７８−９１；Ｇｅｕｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００９  Ｊｕｌ  ２４；３２５（５９３９）：４３３；Ｆｌｉｓｉｋｏｗｓｋａ  ｅｔ  ａｌ，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１１；６（６）：ｅ２１０４５．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２１０４５．Ｅｐｕｂ  ２０１１  Ｊｕｎ  １３；Ｈａｕｓｃｈｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１１  Ｊｕｌ  １９；１０８（２９）：  １２０１３−７；ａｎｄ  Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２０１１  Ｎｏｖ；２１（ｌ  １）：  １６３８−４０を参照されたい。これらの全ては、ＺＦＮに関連するこれらの教示について参照により本明細書に組み込まれる。「ＺＦＮ剤」という用語は、ジンクフィンガーヌクレアーゼおよび／またはジンクフィンガーヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを包含する。
【００６２】
「転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ」または「ＴＡＬＥＮ」は、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を指す。ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬ（転写活性化因子様）エフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合させることによって生成される人工ＤＮＡエンドヌクレアーゼである。ＴＡＬＥＮは、事実上いずれの所望のＤＮＡ配列にも結合するように迅速に操作することができ、細胞に導入した場合、ＴＡＬＥＮを使用して、二本鎖破断を誘導することによって細胞内の標的ＤＮＡ（例えば、細胞のゲノム）を編集することができる。ＴＡＬＥＮの使用に関するさらなる情報については、例えば、Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  Ｊｕｌ  ７；２９（８）：７３１−４；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１  Ｊｕｌ  １５；３３３（６０４０）：３０７；Ｔｅｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  Ａｕｇ  ５；２９（８）：６９５−６；ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ  ｅｔ．ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  Ａｕｇ  ５；２９（８）：６９９−７００を参照されたい。これらの全ては、ＴＡＬＥＮに関連するこれらの教示について、参照により本明細書に組み込まれる。「ＴＡＬＥＮ剤」という用語は、ＴＡＬＥＮおよび／またはＴＡＬＥＮをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを包含する。
【００６３】
「制御要素」または「制御配列」という用語は、ポリヌクレオチドの複製、重複、転写、スプライシング、翻訳、または分解を含む、ポリヌクレオチドの機能的調節に寄与する分子の相互作用に関与するヌクレオチド配列を指す。この調節は、プロセスの頻度、速度、または特異性に影響を及ぼし得、本来は増強性または阻害性であり得る。当該技術分野で既知の制御要素には、例えば、プロモーターおよびエンハンサーなどの転写調節配列が含まれる。プロモーターは、ある特定の条件下では、ＲＮＡポリメラーゼに結合し、通常はプロモーターの下流（３’方向）に位置するコード領域の転写を開始することができるＤＮＡ領域である。プロモーターは、普遍的作用性、すなわち、多くの細胞種、例えば、ＣＡＧまたはＣＭＶプロモーターにおいて活性であってもよく、または組織もしくは細胞特異性であってもよく、例えば、プロモーターは心筋細胞における発現に対して組織特異的であり得る。
【００６４】
「作動的に連結された」または「作動可能に連結された」という用語は、遺伝的要素の並置を指し、要素は、それらが予想される様式で作動することを可能にする関係にある。例えば、プロモーターがコード配列の転写の開始を助ける場合、プロモーターはコード領域に作動可能に連結される。この機能的関係が維持される限り、プロモーターとコード領域との間に介在残基が存在し得る。
【００６５】
「発現ベクター」という用語は、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド領域を含むベクターを包含し、意図された標的細胞におけるタンパク質の発現をもたらすために使用される。発現ベクターはまた、標的中のタンパク質の発現を促進するために、コード領域に作動可能に連結された制御要素を含んでもよい。制御要素と、それらが発現のために作動可能に連結されている遺伝子（単数または複数）との組み合わせは、「発現カセット」と呼ばれることもあり、その多くは当該技術分野で既知であり入手可能であるか、または当該技術分野で入手可能な構成要素から容易に構築することができる。
【００６６】
「異種」という用語は、それが比較されている残りの実体とは遺伝子型的に異なる実体に由来することを意味する。例えば、遺伝子工学技法によって異なる種に由来するプラスミドまたはベクターに導入されたポリヌクレオチドは、異種ポリヌクレオチドである。天然コード配列から除去され、天然には結合していないコード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、異種プロモーターである。このため、例えば、異種遺伝子産物をコードする異種核酸配列を含むｒＡＡＶは、天然に存在する野生型ＡＡＶに通常は含まれないポリヌクレオチドを含むｒＡＡＶであり、コードされた異種遺伝子産物は、天然に存在する野生型ＡＡＶによって通常はコードされない遺伝子産物である。
【００６７】
「遺伝子改変」および「遺伝子修飾」（およびその文法上の異形）は、本明細書では同義に用いられ、遺伝子要素（例えば、ポリヌクレオチド）が有糸分裂または減数分裂以外によって細胞に導入されるプロセスを指す。要素は、細胞に対して異種であってもよく、または細胞に既に存在する要素の追加のコピーまたは改良版であってもよい。遺伝子改変は、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、またはポリヌクレオチド−リポソーム複合体との接触など、当該技術分野で既知である任意のプロセスによって、細胞を組換えプラスミドまたは他のポリヌクレオチドでトランスフェクトすることによって行われ得る。遺伝子改変はまた、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡウイルスまたはウイルスベクターを用いる形質導入または感染によって行われてもよい。一般に、遺伝子要素は、細胞内の染色体またはミニ染色体に導入されるが、この用語には、細胞およびその子孫の表現型および／または遺伝子型を変化させる任意の改変が含まれる。
【００６８】
細胞修飾に関して、外因性ＤＮＡによって（例えば、組換えウイルスを介して）「遺伝子修飾された」または「形質転換された」または「トランスフェクトされた」または「形質導入された」という用語は、そのようなＤＮＡが細胞の内部に導入されたときを指す。外因性ＤＮＡの存在により、永続的または一時的な遺伝的変化がもたらされる。形質転換ＤＮＡは、細胞のゲノムに組み込まれる（共有結合している）場合もそうでない場合もある。「クローン」は、有糸分裂によって単一細胞または共通の祖先から誘導された細胞の集団である。「細胞株」は、多くの世代にわたってインビトロで安定して増殖することができる初代細胞のクローンである。
【００６９】
本明細書で使用される場合、配列がインビトロでの延長した細胞培養中および／またはインビボでの長期間にその機能を果たすために利用可能である場合、細胞は遺伝子配列によって「安定して」改変、形質導入、遺伝子修飾、または形質転換されると言われる。一般に、そのような細胞は、遺伝子改変が導入され、改変された細胞の子孫によっても継承可能であるため、「遺伝的に」改変（遺伝子修飾）される。
【００７０】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すように本明細書では同義に使用される。これらの用語は、修飾されたアミノ酸ポリマー、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、リン酸化、または標識化成分との抱合も包含する。哺乳動物対象に遺伝子産物を送達する状況において考察される場合、抗血管新生ポリペプチド、神経保護ポリペプチド、および同様のものなどのポリペプチド、ならびにそのための組成物は、それぞれのインタクトなポリペプチド、またはインタクトなタンパク質の所望の生化学的機能を保持するその任意の断片もしくは遺伝子操作された誘導体を指す。同様に、抗血管新生ポリペプチドをコードする核酸、神経保護ポリペプチドをコードする核酸、および哺乳動物対象への遺伝子産物の送達に使用するための他のそのような核酸（レシピエント細胞に送達されることになる「導入遺伝子」と称されてもよい）への言及は、インタクトなポリペプチドまたは所望の生化学的機能を保有する任意の断片もしくは遺伝子操作された誘導体をコードするポリヌクレオチドを含む。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「単離された」プラスミド、核酸、ベクター、ウイルス、ビリオン、宿主細胞、タンパク質、または他の物質は、物質または類似の物質が自然発生するか、または最初に調製される、存在し得る他の構成成分の少なくともいくつかが欠如した物質の調製物を指す。このため、例えば、単離された物質は、精製技法を用いてそれを源混合物から濃縮することによって調製されてもよい。濃縮は、溶液の体積当たりの重量などの絶対的な基準で測定することができ、または源混合物中に存在する干渉する可能性のある第２の物質との関連で測定することができる。本開示の実施形態の増々の濃縮は、増々のさらなる単離である。単離されたプラスミド、核酸、ベクター、ウイルス、宿主細胞、または他の物質は、いくつかの実施形態では、例えば、約８０％〜約９０％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、少なくとも約９８％純粋、または少なくとも約９９％以上純粋に精製される。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」などの用語は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを指す。この効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止するという点で予防的であり得、かつ／あるいは疾患および／または疾患に起因する有害作用の部分的または完全な治癒という点で治療であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を網羅し、（ａ）疾患（および／または疾患によって引き起こされる症状）が、疾患にかかりやすいかまたは疾患に罹患する危険性があるが、それを有するとまだ診断されていない対象において発生するのを防止すること、（ｂ）疾患（および／または疾患によって引き起こされる症状）を阻害すること、すなわち、その発展を阻害すること、ならびに（ｃ）疾患（および／または疾患によって引き起こされる症状）を軽減すること、すなわち、疾患（および／または疾患によって引き起こされる症状）の退行を引き起こすこと、すなわち、疾患および／または疾患の１つ以上の症状を緩和することを含む。例えば、主題の組成物および方法は、筋肉疾患の治療を対象とし得る。筋肉疾患およびその治療を評価するための非限定的な方法には、治療用タンパク質産生の測定（例えば、筋肉生検とそれに続く免疫組織化学、または血清サンプリングとそれに続くＥＬＩＳＡもしくは酵素活性アッセイ）、心不全の症状の測定（例えば、ニューヨーク心臓協会機能分類またはミネソタ心不全質問表）、機能的心臓状態（例えば、６分間の歩行テストまたはピーク最大酸素消費量）、バイオマーカー分析（例えば、Ｎ末端プロホルモン脳ナトリウム利尿ペプチド）、左心室機能／リモデリング（例えば、左心室駆出率または左心室拡張末期容積）、筋力（例えば、デュシェンヌ型ジストロフィーの医学調査評議会の臨床調査、ハンドヘルドダイナモメーター測定、または最大重量挙げ）、筋機能（例えば、Ｖｉｇｎｏｓスケール、時限機能テスト、ハンマースミス運動能力スコア、床からの時限上昇、歩行テスト、運動機能測定スケール、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ評価、９穴ペグテスト、または神経筋障害の小児病院フィラデルフィア小児検査）、筋疾患の症状（例えば、神経筋症状スコア（Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  Ｓｃｏｒｅ）または臨床全般印象（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ））、ミトコンドリア機能（例えば、３１Ｐ磁気共鳴分光法）、質問票に基づく生活の質の評価、患者から報告された結果、または毎日の活動が含まれる。
【００７３】
「個体」、「宿主」、「対象」、および「患者」という用語は、本明細書では同義に使用され、ヒト；サルを含む非ヒト霊長類；哺乳動物の競技動物（例えば、ウマ）；哺乳動物の家畜（例えば、ヒツジ、ヤギなど）；哺乳動物の愛玩動物（イヌ、ネコなど）、および齧歯動物（例えば、マウス、ラットなど）を含むがこれらに限定されない、哺乳動物を指す。
【００７４】
いくつかの実施形態では、個体は、以前に自然にＡＡＶに曝露されており、その結果、抗ＡＡＶ抗体（すなわち、ＡＡＶ中和抗体）を有するヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、以前にＡＡＶベクターを投与されており（その結果、抗ＡＡＶ抗体を保有し得る）、異なる状態の治療または同じ状態のさらなる治療のためにベクターの再投与を必要とするヒトである。このビヒクルに対する中和抗体によって影響される全ての組織、例えば、肝臓、筋肉、および網膜へのＡＡＶ遺伝子送達を伴う臨床試験における陽性結果に基づいて、そのような治療的用途／疾患標的が多数存在する。
【００７５】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量は１回以上の投与で投与することができる。本開示の目的のために、有効量の化合物（例えば、感染性ｒＡＡＶビリオン）は、特定の疾患状態（例えば、筋肉疾患）（および／またはその特定の疾患状態と関連付けられる症状）の進行を軽減、緩和、安定化、逆転、防止、減速、または遅延するのに十分な量である。したがって、有効量の感染性ｒＡＡＶビリオンは、異種核酸を個体の標的細胞（単数または複数）に効果的に送達することができる感染性ｒＡＡＶビリオンの量である。有効量は、当該技術分野において十分に理解されている技法、例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、蛍光法、または他のレポーター読出しなどを用いて異種核酸配列によってコードされる遺伝子産物（ＲＮＡ、タンパク質）を細胞または組織中で検出することによって、臨床前に決定され得る。有効量は、本明細書に記載されているようにまたは当該技術分野で既知であるように、当該技術分野で既知の方法、例えば、６分間の歩行テスト、左室駆出率、ハンドヘルドダイナモメーターによる測定、Ｖｉｇｎｏｓスケールなどを使用して、疾患の発症または進行の変化を検出することによって臨床的に決定され得る。
【００７６】
「筋肉細胞」または「筋肉組織」という用語は、本明細書において、例えば消化管、膀胱、および血管由来の骨格筋、心筋、平滑筋、ならびに横隔膜筋を含むがこれらに限定されない、あらゆる種類の筋肉に由来する細胞または細胞群を指す。そのような筋肉細胞は、筋芽細胞、筋細胞、筋管、心筋細胞、および心筋芽細胞など、分化または未分化であり得る。筋肉組織は循環系に容易にアクセスできるため、インビボで筋肉細胞および筋肉組織によって産生および分泌されるタンパク質は、全身的利益のために論理的には血流に入り、それにより、持続的な治療レベルの筋肉からのタンパク質分泌を提供する。
【００７７】
「定向進化」という用語は、遺伝的多様化および選択プロセスの反復ラウンドを介して自然進化を模倣し、それによって生体分子の機能を漸進的に改善する有益な突然変異を蓄積する、インビトロおよび／またはインビボでのキャプシド操作方法論を指す。定向進化は、変異体が目的の細胞または組織型のより効率的なレベルの感染性を保有するライブラリーからＡＡＶ変異体を選択するための「バイオパニング」と呼ばれるインビボ法を伴うことが多い。
（発明を実施するための形態）
【００７８】
アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）は、エンベロープを有しないキャプシドの内部に含まれる４．７ｋｂの一本鎖ＤＮＡゲノムを有するパルボウイルスのファミリーである。天然に存在するＡＡＶのウイルスゲノムは、２つの主要なオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）であるｒｅｐ（ウイルス複製、転写制御、部位特異的組込み、およびビリオンアセンブリにおいて機能を果たすコードタンパク質）とｃａｐとに隣接する、複製およびパッケージングシグナルのウイルス起源として機能する２つの逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）を有する。ｃａｐ  ＯＲＦは、アセンブルして６０ｍｅｒのウイルスキャプシドを形成する３つの構造タンパク質をコードする。多くの天然に存在するＡＡＶ変異体および血清型が単離されており、いずれもヒト疾患に関連付けられていない。
【００７９】
ＡＡＶの組換え型は遺伝子送達ベクターとして使用することができ、この場合、目的のマーカー遺伝子または治療用遺伝子をｒｅｐおよびｃａｐの代わりにＩＴＲ間に挿入する。これらのベクターは、インビトロおよびインビボで分裂細胞および非分裂細胞の両方に形質導入することが示されており、有糸分裂後の組織において何年も安定した導入遺伝子発現をもたらすことができる。例えば、Ｋｎｉｐｅ  ＤＭ，Ｈｏｗｌｅｙ  ＰＭ．Ｆｉｅｌｄｓ’  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，ＵＳＡ，２００７；Ｇａｏ  Ｇ−Ｐ，Ａｌｖｉｒａ  ＭＲ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｃａｌｃｅｄｏ  Ｒ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  Ｊ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＪＭ．Ｎｏｖｅｌ  ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｆｒｏｍ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ａｓ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２００２；９９：１１８５４−９；Ａｔｃｈｉｓｏｎ  ＲＷ，Ｃａｓｔｏ  ＢＣ，Ｈａｍｍｏｎ  ＷＭ．Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  Ｖｉｒｕｓ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９６５；１４９：７５４−６；Ｈｏｇｇａｎ  ＭＤ，Ｂｌａｃｋｌｏｗ  ＮＲ，Ｒｏｗｅ  ＷＰ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ＤＮＡ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｆｏｕｎｄ  ｉｎ  ｖａｒｉｏｕｓ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ：ｐｈｙｓｉｃａｌ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １９６６；５５：１４６７−７４；Ｂｌａｃｋｌｏｗ  ＮＲ，Ｈｏｇｇａｎ  ＭＤ，Ｒｏｗｅ  ＷＰ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｆｒｏｍ  ｍａｎ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １９６７；５８：  １４１０−５；Ｂａｎｔｅｌ−Ｓｃｈａａｌ  Ｕ，  ｚｕｒ  Ｈａｕｓｅｎ  Ｈ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＤＮＡ  ｏｆ  ａ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ｈｕｍａｎ  ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  ｇｅｎｉｔａｌ  ｓｉｔｅ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １９８４；１３４：５２−６３；Ｍａｙｏｒ  ＨＤ，Ｍｅｌｎｉｃｋ  ＪＬ．Ｓｍａｌｌ  ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｖｉｒｕｓｅｓ（ｐｉｃｏｄｎａｖｉｒｕｓ  ｇｒｏｕｐ）．Ｎａｔｕｒｅ  １９６６；２１０：３３１−２；Ｍｏｒｉ  Ｓ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｔ，Ｋａｎｄａ  Ｔ．Ｔｗｏ  ｎｏｖｅｌ  ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｆｒｏｍ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ：  ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｐｓｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２００４；３３０：３７５−８３；Ｆｌｏｔｔｅ  ＴＲ．Ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ：ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓ（ｒＡＡＶ）ｖｅｃｔｏｒｓ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００４；１１：８０５−１０を参��されたい。
【００８０】
組換えＡＡＶ（本明細書では単に「ＡＡＶ」と称する）は、益々増えている臨床試験数において有望な結果をもたらしている。しかし、抗キャプシド免疫応答、ある特定の組織の形質導入の低下、特定の細胞型への標的送達不能、および比較的低い運搬能など、ＡＡＶの有用性を制限し得る遺伝子送達の障害が存在する。多くの状況において、ＡＡＶを改善する能力を有する合理的設計を効果的に力づけるためには、機構的知識が十分ではない。代替として、定向進化が、特定の生物医学的ニーズを満たす新規のＡＡＶ変異体を創出する戦略として出現している。定向進化戦略は、生物分子の機能を漸進的に改善する有益な突然変異の蓄積を可能にする遺伝的多様化および選択プロセスを利用する。このプロセスでは、野生型ＡＡＶ  ｃａｐ遺伝子をいくつかのアプローチによって多様化して、ウイルス粒子のライブラリーを生成するようにパッケージングされた大きな遺伝子ライブラリーを創出し、次に、遺伝子送達障壁を克服することができる単離された新規の変異体に選択圧を適用する。重要なことに、機能の定向進化のために、遺伝子送達問題の根底にある機構的原理が知られている必要はないため、増強されたベクターの開発を加速することができる。
【００８１】
典型的には、本明細書に開示される変異体は、ＡＡＶライブラリー（単数および／または複数）の使用によって生成された。そのようなＡＡＶライブラリー（単数または複数）は、ＡＡＶキャプシドの構造タンパク質をコードする遺伝子であるｃａｐ遺伝子を、ウイルスゲノム操作の分野における当業者には既知であり容易に利用可能であるよって知られており容易に利用可能である様々な定向進化技術によって突然変異させることで生成される。例えば、Ｂａｒｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｇｅｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒ．１５ｔｈ  Ａｎｎｕ．Ｍｅｅｔ．２０，Ｓ１４０（２０１２）；Ｂｏｗｌｅｓ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７，４２３−４３２（２００３）；Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８，５７０−５７８（２０１０）；Ｇｒｉｍｍ，  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８２，５８８７−５９１１；Ｋｏｅｒｂｅｒ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６，１７０３−１７０９（２００８）；Ｌｉ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６，１２５２−１２６０（２００８）；Ｋｏｅｒｂｅｒ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４３４，１６１−１７０（２００８）；Ｋｏｅｒｂｅｒ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１８，３６７−３７８（２００７）；ａｎｄ  Ｋｏｅｒｂｅｒ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７，２０８８−２０９５（２００９）を参照されたい。そのような技法は、限定されるものではないが、以下の通りである：ｉ）ランダム点突然変異をＡＡＶ  ｃａｐオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）に所定の変更可能な速度で導入するためのエラープローンＰＣＲ；ｉｉ）複数のＡＡＶ血清型を有する遺伝子ライブラリーを得るために、ＡＡＶ  ｃａｐ遺伝子のランダムキメラを生成するためのインビトロまたはインビボウイルス組換えまたは「ＤＮＡシャッフリング」；ｉｉｉ）ｃａｐ  ＯＲＦ中の縮重オリゴヌクレオチドのライゲーションによるキャプシドの規定された部位におけるランダムペプチド挿入；ｉｖ）トランスポゾン突然変異誘発を用いたＡＡＶ  ｃａｐ  ＯＲＦのランダムな位置へのペプチドコード配列の定義された挿入；ｖ）「ループスワップ」ライブラリーを生成するための天然のＡＡＶ血清型および変異体の中の各アミノ酸位置の保存レベルに基づくバイオインフォマティクスによって設計されたペプチド配列のライブラリーによるＡＡＶキャプシドの表面ループの代置；ｖｉ）祖先変異体のライブラリーを生成するためのＡＡＶ血清型間の縮重の位置におけるランダムなアミノ酸置換（Ｓａｎｔｉａｇｏ−Ｏｒｔｉｚら、２０１５）、ならびにそのような技法の組み合わせ。
【００８２】
ＤＮＡシャフリングは、親の特性を、独自かつ多くの場合に有益な方法で組み合わせるキメラを生成する。しかし、パッケージングができないものもあり、これは事実上ライブラリーの多様性を減少させる。キャプシドの特定の領域へのライブラリーの多様性の集中は、限定されないが、上記のｉｉｉ）〜ｉｖ）などのペプチド挿入技法によって達成される。ライブラリーの多様性はまた、上記のｖ）などの技法におけるキャプシドの特定の領域に集中しており、そのような集中は、ＡＡＶキャプシドの表面に露出したループ上にある複数の超可変領域に向けられる。多くの技法が、キャプシドの小さな領域のみが変異した変異キャプシドを生成するが、これらの技法は、完全なキャプシドを修飾するためのさらなる突然変異誘発戦略と対にされ得る。
【００８３】
ＡＡＶライブラリー（単数または複数）が生成されると、各ＡＡＶ粒子がキャプシドをコードするｃａｐ遺伝子を囲む突然変異キャプシドで構成され、精製されるように、ウイルスがパッケージされる。次いで、ライブラリーの変異体は、ＡＡＶの分野の当業者には既知であり、容易に入手可能であるインビトロおよび／またはインビボの選択圧技法に供される。例えば、Ｍａｈｅｓｈｒｉ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４，１９８−２０４（２００６）；Ｄａｌｋａｒａ，  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．５，１８９ｒａ７６（２０１３）；Ｌｉｓｏｗｓｋｉ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．５０６，３８２−２８６（２０１３）、Ｙａｎｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ．１０６，３９４６−３９５１（２００９）；Ｇａｏ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１３，７７−８７（２００６）；およびＢｅｌｌ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．２２，９８５−９９７（２０１１）を参照されたい。例えば、限定されないが、ＡＡＶ変異体は、ｉ）異なる画分の溶出が変更された結合特性を有する変異体を生むアフィニティーカラム；ｉｉ）効率および／または組織特異性が増大したＡＡＶ変異体を生む、ヒト体内の細胞の挙動を模倣する組織試料または不死化細胞株から単離される一次細胞；ｉｉｉ）標的組織の感染に成功したＡＡＶ変異体を生む、臨床的遺伝子療法環境を模倣する動物モデル；ｉｖ）感染した移植されたヒト細胞を有するＡＡＶ変異体を生むヒト異種移植モデル；ならびに／またはそれらの選択技法の組み合わせを使用して選択され得る。
【００８４】
ウイルスが選択されると、それらは、限定されないが、アデノウイルス媒介性複製、ＰＣＲ増幅、次世代シークエンシングおよびクローニングなどのような既知の技法によって回収され得る。次いで、ウイルスクローンを選択技術の反復ラウンドにより濃縮し、ＡＡＶ  ＤＮＡを単離して、目的の選択された変異ｃａｐ遺伝子を回収する。そのような選択された変異体は、さらなる修飾または突然変異に供され得るため、ＡＡＶウイルス適合性を反復的に増加させるさらなる選択ステップのための新たな出発点として働く。しかし、ある特定の事例では、追加の突然変異なしにキャプシドの生成が成功している。
【００８５】
本明細書に開示されるＡＡＶ変異体は、静脈内投与後の霊長類心筋および骨格筋スクリーンの使用を含む、上記の技法などのインビボ定向進化方法の使用によって少なくとも一部生成された。したがって、本明細書に開示されるＡＡＶ変異キャプシドは、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質よりも効率的な霊長類筋肉細胞の形質導入をもたらす、アミノ酸配列における１つ以上の修飾を含む。本明細書で使用される場合、「対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質」は、対象の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質と同じ野生型または変異ＡＡＶ血清型であるが、対象の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質の１つ以上のアミノ酸配列修飾を含まない、ＡＡＶキャプシドタンパク質を指す。特定の実施形態では、本明細書に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶは、全身または組織標的投与後の身体全体の心筋および／または複数の骨格筋群に対する全身指向性を有する。
【００８６】
いくつかの実施形態では、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対してＡＡＶキャプシドタンパク質のＧＨループまたはループＩＶに共有結合によって挿入された約５アミノ酸〜約２０アミノ酸の異種ペプチドを含む。ＡＡＶキャプシドタンパク質の「ＧＨループ」またはループＩＶは、当該技術分野では、ＡＡＶキャプシドタンパク質のＧＨループまたはループＩＶと称される溶媒露出部分を意味する。ＡＡＶキャプシドのＧＨループ／ループＩＶについては、例えば、ｖａｎ  Ｖｌｉｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：８０９；Ｐａｄｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９：５０４７；ａｎｄ  Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５：１９５５を参照されたい。したがって、例えば、挿入部位は、ＡＡＶ  ＶＰ１キャプシドタンパク質のおよそアミノ酸４１１〜６５０内にあり得る。例えば、挿入部位は、ＡＡＶ１  ＶＰ１のアミノ酸５７１〜６１２内、ＡＡＶ２  ＶＰ１のアミノ酸５７０〜６１１、ＡＡＶ３Ａ  ＶＰ１のアミノ酸内５７１〜６１２内、ＡＡＶ３Ｂ  ＶＰ１のアミノ酸５７１〜６１２内、ＡＡＶ４  ＶＰ１のアミノ酸５６９〜６１０内、ＡＡＶ５  ＶＰ１のアミノ酸５６０〜６０１内、ＡＡＶ６  ＶＰ１のアミノ酸５７１〜６１２内、ＡＡＶ７  ＶＰ１のアミノ酸５７２〜６１３内、ＡＡＶ８  ＶＰ１のアミノ酸５７３〜６１４内、ＡＡＶ９  ＶＰ１のアミノ酸５７１〜６１２内、もしくはＡＡＶ１０  ＶＰ１のアミノ酸５７３〜６１４内、またはそれらの任意の変異体の対応するアミノ酸内にあり得る。当業者は、様々なＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較に基づいて、「ＡＡＶ２のアミノ酸に対応する」挿入部位が任意の所与のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質に存在するであろうことを理解するであろう。野生型（天然に存在する）血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、およびＡＡＶ４−１０の間のおよびそれらに渡るアミノ酸位置を提供する野生型ＡＡＶ配列番号１〜１１のアラインメントについては、図６も参照されたい。
【００８７】
ある特定の実施形態では、挿入部位は、任意の野生型ＡＡＶ血清型またはＡＡＶ変異体のＶＰ１のアミノ酸５７０〜６１４の間に位置する２つの隣接アミノ酸間の単一の挿入部位であり、例えば、挿入部位は、任意のＡＡＶ血清型または変異体のＶＰ１のアミノ酸５７０〜６１０、アミノ酸５８０〜６００、アミノ酸５７０〜５７５、アミノ酸５７５〜５８０、アミノ酸５８０〜５８５、アミノ酸５８５〜５９０、アミノ酸５９０〜６００、またはアミノ酸６００〜６１４に位置する２つの隣接アミノ酸間にある。例えば、挿入部位は、アミノ酸５８０と５８１、アミノ酸５８１と５８２、アミノ酸５８３と５８４、アミノ酸５８４と５８５、アミノ酸５８５と５８６、アミノ酸５８６と５８７、アミノ酸５８７と５８８、アミノ酸５８８と５８９、またはアミノ酸５８９と５９０との間にあり得る。挿入部位は、アミノ酸５７５と５７６、アミノ酸５７６と５７７、アミノ酸５７７と５７８、アミノ酸５７８と５７９、またはアミノ酸５７９と５８０との間にあり得る。挿入部位は、アミノ酸５９０と５９１、アミノ酸５９１と５９２、アミノ酸５９２と５９３、アミノ酸５９３と５９４、アミノ酸５９４と５９５、アミノ酸５９５と５９６、アミノ酸５９６と５９７、アミノ酸５９７と５９８、アミノ酸５９８と５９９、またはアミノ酸５９９と６００との間にあり得る。例えば、挿入部位は、ＡＡＶ２のアミノ酸５８７と５８８との間、ＡＡＶ１のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ３Ａのアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ３Ｂのアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ４のアミノ酸５８４と５８５との間、ＡＡＶ５のアミノ酸５７５と５７６との間、ＡＡＶ６のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ７のアミノ酸５８９と５９０との間、ＡＡＶ８のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ９のアミノ酸５８８と５８９との間、またはＡＡＶ１０のアミノ酸５８８と５８９との間にあり得る。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチド挿入は、長さが、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸である。別の実施形態では、本明細書に開示されるペプチド挿入は、本明細書に開示されるペプチド挿入のうちのいずれか１つのアミノ末端（Ｎ末端）および／またはカルボキシル末端（Ｃ末端）に１〜４個のスペーサーアミノ酸を含む。例示的なスペーサーアミノ酸には、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、およびプロリン（Ｐ）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、ペプチド挿入は、Ｎ末端に２個のスペーサーアミノ酸を含み、Ｃ末端に２個のスペーサーアミノ酸を含む。他の実施形態では、ペプチド挿入は、Ｎ末端に２個のスペーサーアミノ酸を含み、Ｃ末端に１個のスペーサーアミノ酸を含む。
【００８９】
本明細書に開示されるペプチド挿入は、以前に説明されておらず、かつ／またはＡＡＶキャプシドに挿入されていない。理論に束縛されることを望むものではないが、開示されるペプチド挿入のうちのいずれかの存在は、ウイルス形質導入経路内の細胞外または細胞内工程を変更し得るヘパリン硫酸に対する変異キャプシドの親和性を低下させるように作用し得る。さらに、本明細書に開示されるペプチド挿入モチーフは、細胞表面受容体結合ドメインの追加により、筋肉細胞（例えば心筋細胞）の増強された形質導入をもたらし得る。
【００９０】
いくつかの好ましい実施形態では、挿入ペプチドは、以下の式のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【００９１】
いくつかの態様では、挿入ペプチドは、式１ａの長さ７〜１０アミノ酸のペプチドであり得、
Ｙ１Ｙ２Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ３
式中、Ｙ１〜Ｙ３の各々は、存在する場合、独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏから選択され、
Ｘ１は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、およびＡｓｐから選択され、
Ｘ２は、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、およびＧｌｎから選択され、
Ｘ３は、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、およびＡｒｇから選択され、
Ｘ４は、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、およびＴｙｒから選択され、
Ｘ５は、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、およびＧｌｎから選択され、
Ｘ６は、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｒｇ、およびＰｒｏから選択され、
Ｘ７は、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、およびＳｅｒから選択される。
【００９２】
ある特定の実施形態では、式１ａの挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、およびＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）から選択されるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、式１ａの挿入ペプチドは、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、およびＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００９３】
他の態様では、挿入ペプチドは、式１ｂの長さ７〜１０アミノ酸のペプチドであり得、
Ｙ１Ｙ２Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ３
式中、Ｙ１〜Ｙ３の各々は、存在する場合、独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏから選択され、
Ｘ１は、ＴｈｒおよびＡｓｎから選択され、
Ｘ２は、ＡｓｎおよびＬｙｓから選択され、
Ｘ３は、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、およびＴｈｒから選択され、
Ｘ４は、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、およびＴｈｒから選択され、
Ｘ５は、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、およびＡｓｎから選択され、
Ｘ６は、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、およびＬｙｓから選択され、
Ｘ７は、ＴｈｒおよびＡｓｐから選択される。
【００９４】
ある特定の実施形態では、式１ｂの挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）から選択されるアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、式１ａの挿入ペプチドは、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含まない。
【００９５】
他の態様では、挿入ペプチドは、式１ｃの長さ７〜１０アミノ酸のペプチドであり得、
Ｙ１Ｙ２Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ３
式中、Ｙ１〜Ｙ３の各々は、存在する場合、独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏから選択され、
Ｘ１は、ＴｈｒおよびＡｓｎから選択され、
Ｘ２は、ＡｓｎおよびＬｙｓから選択され、
Ｘ３は、ＬｙｓおよびＩｌｅから選択され、
Ｘ４は、ＩｌｅおよびＧｌｎから選択され、
Ｘ５は、ＧｌｙおよびＡｒｇから選択され、
Ｘ６は、ＶａｌおよびＴｈｒから選択され、
Ｘ７は、ＴｈｒおよびＡｓｐから選択される。
【００９６】
ある特定の実施形態では、式１ｃの挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００９７】
他の態様では、挿入ペプチドは、式１ｄの長さ７〜１０アミノ酸のペプチドであり得、
Ｙ１Ｙ２Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ３
式中、Ｙ１〜Ｙ３の各々は、存在する場合、独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏから選択され、
Ｘ１は、ＡｓｎおよびＴｈｒから選択され、
Ｘ２は、ＡｓｎおよびＬｙｓから選択され、
Ｘ３は、ＬｙｓおよびＴｈｒから選択され、
Ｘ４は、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択される。
Ｘ５は、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、およびＴｈｒから選択され、
Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＶａｌから選択され、
Ｘ７は、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、およびＡｓｎから選択される。
【００９８】
ある特定の実施形態では、式１ｄの挿入ペプチドは、アミノ酸配列ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含む。
【００９９】
他の実施形態では、挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）から選択されるアミノ酸配列を含む。関連する実施形態では、挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態では、挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、およびＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１０１】
他の好ましい実施形態では、挿入ペプチドは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、およびＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）から選択されるアミノ酸配列のアミノ末端および／またはカルボキシル末端に１〜３個のスペーサーアミノ酸（Ｙ１〜Ｙ３）を有する。ある特定のそのような実施形態では、挿入ペプチドは、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択される。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＧＨループまたはループＩＶにおける約５アミノ酸〜約２０アミノ酸のペプチド挿入以外、いずれの他のアミノ酸配列修飾も含まない。例えば、いくつかの実施形態では、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド挿入を含み、変異ＡＡＶキャプシドは、任意の他のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含まない（すなわち、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、該挿入を含むか、または他の点では対応するＡＡＶキャプシドタンパク質と同一である）。換言すれば、該挿入を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、他の点では、ペプチドが挿入された親ＡＡＶキャプシドタンパク質と同一である。別の例として、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）から選択されるアミノ酸配列を有するペプチド挿入を含み、ペプチド挿入は、ＡＡＶ２キャプシドのＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ９、またはＡＡＶ１０のＶＰ１のアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ７のＶＰ１のアミノ酸５８９と５９０との間、ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、またはＡＡＶ８のＶＰ１のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ４のＶＰ１のアミノ酸５８４と５８５との間、またはＡＡＶ５のアミノ酸５７５と５７６との間に位置し、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質配列は、他の点では、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列、例えば配列番号１〜１２のうちのいずれかと同一である。
【０１０３】
他の実施形態では、例えば、本明細書に開示されているかまたは当該技術分野で既知であるようにペプチド挿入をＧＨループに含むことに加えて、主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、親ＡＡＶキャプシドタンパク質と比較して、約１〜約１００個のアミノ酸置換または欠失、例えば、１〜約５、約２〜約４、約２〜約５、約５〜約１０、約１０〜約１５、約１５〜約２０、約２０〜約２５、約２５〜５０、約５０〜１００個のアミノ酸置換または欠失を含む。したがって、いくつかの実施形態では、主題の変異キャプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶキャプシド、例えば、配列番号１〜１２に示される野生型キャプシドタンパク質に対して、８５％以上、９０％以上、９５％以上、または９８％以上、例えばまたは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
さらなる実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、ペプチドの挿入前の番号付けで、ＡＡＶ２  ＶＰ１キャプシドタンパク質のアミノ酸残基３５、１０９、１９５、２１３、２２２、２２９、３１２、３１９、３３０、３３３、３４７、３６３、４２７、４４７、４４９、４５３、４９０、５２７、５５１、５８１、５８５、５８８、５９３、６０６、６４９、６５１、６９４、６９８、７０８、および／または７３５、または別のＡＡＶキャプシドタンパク質の対応するアミノ酸残基にある。いくつかのそのような実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、ペプチドの挿入前の番号付けで、ＡＡＶ２  ＶＰ１キャプシドタンパク質のＡ３５Ｐ、Ｓ１０９Ｔ、Ｐ１９５Ｌ、Ｄ２１３Ｎ、Ｇ２２２Ｓ、Ｖ２２９Ｉ、Ｎ３１２Ｋ、Ａ３１９Ｔ、Ｔ３３０Ａ、Ａ３３３Ｓ、Ｅ３４７Ｋ、Ｐ３６３Ｌ、Ａ４２７Ｄ、Ｖ４４７Ｆ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ４４９Ｋ、Ｇ４５３Ｒ、Ａ４９０Ｔ、Ｋ５２７Ｑ、Ｎ５５１Ｓ、Ａ５８１Ｔ、Ｙ５８５Ｓ、Ｒ５８８Ｍ、Ａ５９３Ｅ、Ｗ６０６Ｃ、Ｋ６４９Ｅ、Ｒ６５１Ｈ、Ｗ６９４Ｃ、Ｉ６９８Ｖ、Ｖ７０８Ｉ、およびＬ７３５Ｑ、または別のＡＡＶキャプシドタンパク質の対応するアミノ酸残基からなる群から選択される。
【０１０５】
好ましい実施形態では、ａ）キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入であって、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５））から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド挿入と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列（配列番号２）と比較して、以下のアミノ酸置換：Ａ３５Ｐ、Ｓ１０９Ｔ、Ｐ１９５Ｌ、Ｄ２１３Ｎ、Ｇ２２２Ｓ、Ｖ２２９Ｉ、Ｎ３１２Ｋ、Ａ３１９Ｔ、Ｔ３３０Ａ、Ａ３３３Ｓ、Ｅ３４７Ｋ、Ｐ３６３Ｌ、Ａ４２７Ｄ、Ｖ４４７Ｆ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ４４９Ｋ、Ｇ４５３Ｒ、Ａ４９０Ｔ、Ｋ５２７Ｑ、Ｎ５５１Ｓ、Ａ５８１Ｔ、Ｙ５８５Ｓ、Ｒ５８８Ｍ、Ａ５９３Ｅ、Ｗ６０６Ｃ、Ｋ６４９Ｅ、Ｒ６５１Ｈ、Ｗ６９４Ｃ、Ｉ６９８Ｖ、Ｖ７０８Ｉ、Ｌ７３５Ｑおよびそれらの組み合わせのうちの１つ以上、または別のＡＡＶ親血清型（すなわち、ＡＡＶ２以外）における対応する置換であって、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない、置換と、を含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ７０８Ｉ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｔ３３０Ａ、Ａ３５Ｐ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｒ５８８Ｍ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６０６Ｃ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６９４Ｃ、Ｉ６９８Ｖ、Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑ、Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｖ７０８Ｉ＋Ｌ７３５Ｑ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｎ４４９Ｋ、およびＶ７０８Ｉ＋Ｇ２２２Ｓからなる群から選択される。好ましくは、挿入部位は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ９、もしくはＡＡＶ１０キャプシドのアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ７キャプシドのアミノ酸５８９と５９０との間、ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、もしくはＡＡＶ８キャプシドのアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ４キャプシドのアミノ酸５８４と５８５との間、またはＡＡＶ５キャプシドのアミノ酸５７５と５７６との間に位置する。
【０１０６】
特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）を含むか、もしくはそれから本質的になるか、もしくはそれからなるペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対して残基７０８におけるＶ７０８Ｉアミノ酸置換をさらに含み、ＡＡＶ２に対してＡ５９３Ｅおよび／もしくはＳ１０９Ｔおよび／もしくはＴ３３０Ａおよび／もしくはＲ５８８Ｍ置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換を任意選択によりさらに含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。別の特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）を含むか、もしくはそれから本質的になるか、もしくはそれからなるペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対して残基３５におけるＡ３５Ｐアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換をさらに含む。変異ＡＡＶキャプシドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列または対応する親ＡＡＶキャプシドの全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有し得る。特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＩＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号４３）
【０１０７】
別の特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドタンパク質のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質の対応する位置に、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）を含むか、もしくはそれから本質的になるか、もしくはそれからなるペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したＮ３１２Ｋアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換をさらに含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較した（ｉ）Ｎ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、およびＬ７３５Ｑもしくは（ｉｉ）Ｎ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、Ｌ７３５Ｑ、およびＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換を任意選択によりさらに含む。変異ＡＡＶキャプシドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％以上のアミノ酸配列同一性を有し得る。特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＫＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＤＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＳＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＱ（配列番号４４）
【０１０８】
別の実施形態では、ａ）ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ９、もしくはＡＡＶ１０のＶＰ１のアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ７のアミノ酸５８９と５９０との間、ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、もしくはＡＡＶ８のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ４のアミノ酸５８４と５８５との間、またはＡＡＶ５のアミノ酸５７５と５７６との間に位置するペプチド挿入であって、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）およびＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド挿入と、ｂ）ＡＡＶ３ＡもしくＡＡＶ３Ｂのアミノ酸７０９におけるバリンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ１もしくＡＡＶ６の７０９位におけるアラニンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ４のアミノ酸７０７もしくＡＡＶ９のアミノ酸７０９におけるアスパラギンからイソロイシンへの置換、またはＡＡＶ７のアミノ酸７１０もしくＡＡＶ８もしくはＡＡＶ１０のアミノ酸７１１におけるトレオニンからイソロイシンへの置換、あるいはＡＡＶ５のアミノ酸６９７におけるグルタミンからイソロイシンへの置換と、を含み、任意選択により、他の点では、配列番号１および３〜１２のうちのいずれか１つと同一である、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供される。好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換と、を含み、変異キャプシドタンパク質は、２〜５個、５〜１０個、または１０〜１５個のアミノ酸置換を含む。
【０１０９】
さらに別の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換と、を含み、他の点では、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。
【０１１０】
さらに別の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入を含み、他の点では、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号４５）
【０１１１】
別の特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドタンパク質のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質における対応する位置に、アミノ酸配列ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）またはＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）を含むか、もしくはそれから本質的になるか、もしくはそれからなるペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換を含み、ＡＡＶ２に対してＮ４４９Ｋおよび／もしくはＧ２２２Ｓ置換または別のＡＡＶ親血清型のキャプシドタンパク質における対応する置換を任意選択によりさらに含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。別の好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質における対応する位置に、アミノ酸配列ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）またはＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）を含むか、もしくはそれから本質的になるか、もしくはそれからなるペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＮ３１２Ｋ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、およびＬ７３５Ｑおよび任意選択によりＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型のキャプシドタンパク質における対応する置換をさらに含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。変異ＡＡＶキャプシドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％以上のアミノ酸配列同一性を有し得る。特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＩＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号４６）
【０１１２】
別の実施形態では、ａ）ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ９、もしくはＡＡＶ１０のＶＰ１のアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ７のアミノ酸５８９と５９０との間、ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、もしくＡＡＶ８のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ４のアミノ酸５８４と５８５との間、またはＡＡＶ５のアミノ酸５７５と５７６との間に位置するペプチド挿入であって、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド挿入と、ｂ）ＡＡＶ３ＡもしくはＡＡＶ３Ｂのアミノ酸７０９におけるバリンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ１もしくはＡＡＶ６の７０９位におけるアラニンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ４のアミノ酸７０７もしくはＡＡＶ９のアミノ酸７０９におけるアスパラギンからイソロイシンへの置換、またはＡＡＶ７のアミノ酸７１０もしくはＡＡＶ８もしくはＡＡＶ１０のアミノ酸７１１におけるトレオニンからイソロイシンへの置換、またはＡＡＶ５のアミノ酸６９７におけるグルタミンからイソロイシンへの置換と、を含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供される。好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）もしくはＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換（Ｖ７０８Ｉ）を含み、変異キャプシドタンパク質は、２〜５個、５〜１０個、または１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、好ましくは、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％以上のアミノ酸配列同一性である。
【０１１３】
さらに別の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）もしくはＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換と、を含み、他の点では、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。
【０１１４】
さらに別の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）もしくはＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入を含み、他の点では、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
【０１１５】
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号４７）
【０１１６】
別の好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２キャプシド質のアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）またはＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）を含むペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対して残基７０８におけるＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ血清型における対応する置換をさらに含み、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＳ１０９Ｔおよび／もしくはＷ６９４Ｃおよび／もしくはＷ６０６Ｃアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換を任意選択によりさらに含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。別の特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）を含むか、本質的にそれらからなるか、もしくはそれらからなる、ペプチド挿入物を含み、さらに、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対して残基６９８または別のＡＡＶキャプシドの対応する残基におけるＩ６９８Ｖアミノ酸置換をさらに含む。変異ＡＡＶキャプシドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列または対応する親ＡＡＶキャプシドの全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％以上のアミノ酸配列同一性を有し得る。特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＩＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号４８）
【０１１７】
別の特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドタンパク質のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質における対応する位置に、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したＮ３１２Ｋアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＮ４４９Ｄ、Ｎ５５１Ｓ、Ｉ６９８Ｖ、およびＬ７３５Ｑならびに任意選択によりＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換をさらに含む。変異ＡＡＶキャプシドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％以上のアミノ酸配列同一性を有し得る。特に好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＫＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＤＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＳＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＱ（配列番号４９）
【０１１８】
別の実施形態では、ａ）ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ９、もしくはＡＡＶ１０のＶＰ１のアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ７のアミノ酸５８９と５９０との間、ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、もしくはＡＡＶ８のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ４のアミノ酸５８４と５８５との間、またはＡＡＶ５のアミノ酸５７５と５７６との間に位置するペプチド挿入であって、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）およびＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド挿入と、ｂ）ＡＡＶ３ＡもしくはＡＡＶ３Ｂのアミノ酸７０９におけるバリンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ１もしくはＡＡＶ６の７０９位におけるアラニンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ４のアミノ酸７０７もしくはＡＡＶ９のアミノ酸７０９におけるアスパラギンからイソロイシンへの置換、またはＡＡＶ７のアミノ酸７１０もしくはＡＡＶ８もしくはＡＡＶ１０のアミノ酸７１１におけるトレオニンからイソロイシンへの置換、またはＡＡＶ５のアミノ酸６９７におけるグルタミンからイソロイシンへの置換とを含み、かつ任意選択により他の点では、配列番号１、および３〜１２のうちのいずれか１つと同一である、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供される。好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換と、を含み、変異キャプシドタンパク質は、２〜５個、５〜１０個、または１０〜１５個のアミノ酸置換を含む。
【０１１９】
さらに別の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ａ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換と、を含み、他の点では、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。
【０１２０】
別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５０）
【０１２１】
他の実施形態では、ａ）キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入であって、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、およびＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド挿入と、ｂ）ＡＡＶ２のアミノ酸配列（配列番号２）と比較した、以下のアミノ酸置換：Ａ３５Ｐ、Ｓ１０９Ｔ、Ｐ１９５Ｌ、Ｄ２１３Ｎ、Ｇ２２２Ｓ、Ｖ２２９Ｉ、Ｎ３１２Ｋ、Ａ３１９Ｔ、Ｔ３３０Ａ、Ａ３３３Ｓ、Ｅ３４７Ｋ、Ｐ３６３Ｌ、Ａ４２７Ｄ、Ｖ４４７Ｆ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ４４９Ｋ、Ｇ４５３Ｒ、Ａ４９０Ｔ、Ｋ５２７Ｑ、Ｎ５５１Ｓ、Ａ５８１Ｔ、Ｙ５８５Ｓ、Ｒ５８８Ｍ、Ａ５９３Ｅ、Ｗ６０６Ｃ、Ｋ６４９Ｅ、Ｒ６５１Ｈ、Ｗ６９４Ｃ、Ｉ６９８Ｖ、Ｖ７０８Ｉ、Ｌ７３５Ｑ、およびそれらの組み合わせのうちの１つ以上、または別のＡＡＶ親血清型（すなわち、ＡＡＶ２以外）における対応する置換を含む、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質であって、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ７０８Ｉ、Ｓ１０９Ｔ、Ｒ６５１Ｈ、Ａ３１９Ｔ、Ｐ１９５Ｌ、Ｐ３６３Ｌ、Ｉ６９８Ｖ、Ｄ２１３Ｎ、Ｇ４５３Ｒ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの好ましい実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換には、少なくともＶ７０８Ｉおよび／もしくはＰ３６３Ｌアミノ酸置換、または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換が含まれる。好ましくは、ペプチド挿入部位は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質の対応する位置に位置する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質の対応する位置の間に、アミノ酸配列ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対して以下のアミノ酸置換：Ｖ７０８Ｉ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｒ６５１Ｈ、Ａ３１９Ｔ＋Ｐ１９５Ｌ、Ｐ３６３Ｌ、Ｐ３６３Ｌ＋Ｖ７０８Ｉのうちの１つ以上、または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換をさらに含む、ペプチド挿入を含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。いくつかの実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）または別のＡＡＶキャプシドの対応する残基に対してＶ７０８Ｉ置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは別のＡＡＶキャプシドの対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）または別のＡＡＶキャプシドの対応する残基に対してＰ３６３Ｌ置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは別のＡＡＶキャプシドの対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）または別のＡＡＶキャプシドの対応する残基に対してＲ６５１Ｈ置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは別のＡＡＶキャプシドの対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５１）
【０１２３】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、置換されたアミノ酸は、対応する位置において天然には存在せず、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５２）
【０１２４】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５３）
【０１２５】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＡＳＮＩＴＶＫＡＡ（配列番号３３）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＡＳＮＩＴＶＫＡＡ（配列番号３３）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５４）
【０１２６】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、置換されたアミノ酸は、対応する位置において天然には存在せず、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＩ６９８Ｖアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、置換されたアミノ酸は、対応する位置において天然には存在せず、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５５）
【０１２７】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５６）
【０１２８】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＩ６９８Ｖアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型（すなわち、ＡＡＶ２以外）における対応する置換と、を含み、置換されたアミノ酸は、対応する位置において天然には存在せず、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５７）
【０１２９】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸の間に、アミノ酸配列ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対して以下のアミノ酸置換：Ｖ７０８Ｉ、Ｄ２１３Ｎ、Ｐ３６３Ｌ、Ｇ４５３Ｒのうちの１つ以上、または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換をさらに含む、ペプチド挿入を含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＰ３６３Ｌアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＤ２１３Ｎアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＧ４５３Ｒアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５８）
【０１３０】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＩＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号５９）
【０１３１】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２のアミノ酸配列または対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号６０）
【０１３２】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、（ｉ）ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶキャプシドの対応するアミノ酸との間に、アミノ酸配列ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物と、（ｉｉ）ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）に対してＶ７０８Ｉアミノ酸置換または別のＡＡＶ親血清型における対応する置換と、を含み、置換されたアミノ酸は、対応する位置において天然には存在せず、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。別の実施形態では、変異キャプシドは、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸５８７と５８８との間に、アミノ酸配列ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）を含むか、またはアミノ酸配列ＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）を含むか、本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる、ペプチド挿入物を含み、他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ（配列番号６１）
【０１３３】
いくつかの態様では、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対して１つ以上のアミノ酸置換を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が提供され、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合に、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、筋肉細胞（例えば、骨格筋細胞または心筋細胞）の増加した感染性をもたらす。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したアミノ酸３６３または別の（すなわち、ＡＡＶ２以外）ＡＡＶ親血清型における対応する位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したアミノ酸３６３におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの好ましい実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシド（配列番号２）、ＡＡＶ３Ａキャプシド（配列番号３）、もしくはＡＡＶ３Ｂキャプシド（配列番号４）のアミノ酸配列と比較したＰ３６３Ｌアミノ酸置換；ＡＡＶ１キャプシド（配列番号１）もしくはＡＡＶ６キャプシド（配列番号７）のアミノ酸配列と比較したＰ３６４Ｌアミノ酸置換；ＡＡＶ４キャプシド（配列番号５）もしくはＡＡＶ５キャプシド（配列番号６）のアミノ酸配列と比較したＰ３５４Ｌアミノ酸置換；ＡＡＶ７キャプシド（配列番号８）もしくはＡＡＶ９キャプシド（配列番号１０）のアミノ酸配列と比較したＰ３６５Ｌアミノ酸置換；またはＡＡＶ８キャプシド（配列番号９）もしくはＡＡＶ１０キャプシド（配列番号１１）のアミノ酸配列と比較したＰ３６６Ｌアミノ酸置換を含む。いくつかの好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列と比較したＰ３６３Ｌ置換または配列番号１および３〜１２のいずれかと比較した対応する置換を含み、配列番号２または配列番号１および３〜１２のいずれかに示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２に示されるアミノ酸配列と比較したＰ３６３Ｌアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を含み、他の点では配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。関連する実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列と比較したＰ３６３Ｌアミノ酸置換または別の（すなわち、ＡＡＶ２以外）ＡＡＶ親血清型における対応する位置においてアミノ酸置換を含み、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２に示されるＡＡＶ２キャプシドタンパク質のアミノ酸配列と比較したまたは別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列と比較して、１〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を含む。別の好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列と比較したＰ３６３Ｌアミノ酸置換を含み、Ｅ３４７Ｋアミノ酸置換および／もしくはＶ７０８Ｉアミノ酸置換をさらに含み、または別の（すなわち、ＡＡＶ２以外）ＡＡＶ親血清型由来のキャプシドにおける対応する置換を含む。別の好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列と比較したＰ３６３Ｌアミノ酸置換、または別のＡＡＶ親血清型由来のキャプシドにおける対応する置換を含み、好ましくは、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ９、もしくはＡＡＶ１０のアミノ酸５８８と５８９との間、ＡＡＶ７のＶＰ１アミノ酸５８９と５９０、ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、もしくはＡＡＶ８のＶＰ１のアミノ酸５９０と５９１との間、ＡＡＶ４のＶＰ１のアミノ酸５８４と５８５との間、またはＡＡＶ５のアミノ酸５７５と５７６との間に位置するペプチド挿入をさらに含み、ペプチド挿入は、好ましくは、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）から選択される、より好ましくは、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、およびＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）から選択されるアミノ酸配列を含み、２〜５個、５〜１０個、もしくは１０〜１５個のアミノ酸置換を任意選択により含み、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列もしくは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質配列と同一である。
【０１３５】
他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したアミノ酸５９３、または別のＡＡＶ親血清型（すなわち、ＡＡＶ２以外）の対応する位置におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したアミノ酸５９３においてアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するか、または他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ６、もしくはＡＡＶ９のアミノ酸配列と比較したアミノ酸５９４、またはＡＡＶ５のアミノ酸５８３、またはＡＡＶ８もしくはＡＡＶ１０のアミノ酸５９６におけるグリシンからグルタミン酸塩へのアミノ酸置換、あるいはＡＡＶ３Ｂのアミノ酸５９４におけるアルギニンからグルタミン酸塩へのアミノ酸置換、あるいはＡＡＶ４のアミノ酸５９２におけるアスパラギン酸塩からグルタミン酸塩へのアミノ酸置換、あるいはＡＡＶ７の５９５位におけるグルタミンからグルタミン酸塩へのアミノ酸置換を含む。他の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＡ５９３Ｅアミノ酸置換を含み、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較した以下のアミノ酸置換のうちの１つ以上を含まない：Ｉ１９Ｖ、Ｖ３６９Ａ、Ｋ２６Ｒ、Ｎ２１５Ｄ、Ｇ３５５Ｓ、Ｖ４６Ａ、およびＳ１９６Ｐ。関連する実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＡ５９３ＥおよびＶ７０８Ｉアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。関連する実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＡ５９３ＥおよびＳ１０９Ｔアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。関連する実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＡ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ、およびＳ１０９Ｔアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２と同一である。他の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＡ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ、およびＮ５５１Ｓアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。他の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＡ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ、およびＫ６４９Ｅアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。他の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したＡ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ、Ｓ１０９Ｔ、およびＫ５２７Ｑアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２に示されるアミノ酸配列と同一である。
【０１３６】
他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したアミノ酸７０８、または別のＡＡＶ親血清型（すなわち、ＡＡＶ２以外）の対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、置換されたアミノ酸は対応する位置において天然に存在しない。好ましくは、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ２と比較したアミノ酸２５０、または別のＡＡＶ親血清型中の対応するアミノ酸におけるプロリンからセリンへの置換を含まない。いくつかの実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列（配列番号２）と比較したアミノ酸７０８においてアミノ酸置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％以上の同一性を有するか、または他の点では、配列番号２と同一である。好ましい実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２キャプシドのアミノ酸配列と比較したアミノ酸７０８におけるバリンからイソロイシン（Ｖ７０８Ｉ）への置換を含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するか、あるいは、他の点では配列番号２のアミノ酸配列と同一であり、Ｐ２５０Ｓアミノ酸置換を含まない。いくつかの実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ３ＡまたはＡＡＶ３Ｂのアミノ酸７０９におけるバリンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ１またはＡＡＶ６の７０９位におけるアラニンからイソロイシンへの置換、ＡＡＶ４のアミノ酸７０７またはＡＡＶ９のアミノ酸７０９におけるアスパラギンからイソロイシンへの置換、あるいはＡＡＶ７のアミノ酸７１０またはＡＡＶ８もしくはＡＡＶ１０のアミノ酸７１１におけるトレオニンからイソロイシンへの置換、あるいはＡＡＶ５のアミノ酸６９７におけるグルタミンからイソロイシンへの置換を含む。関連する実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＶ７０８Ｉアミノ酸置換を含み、２〜５個、５〜１０個、または１０〜１５個のアミノ酸置換を含み、Ｐ２５０Ｓアミノ酸置換を含まない。他の実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＶ７０８Ｉアミノ酸置換を含み、Ａ３３３Ｓおよび／またはＳ７２１Ｌアミノ酸置換も含む。他の関連する実施形態では、変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶ２のアミノ酸配列と比較したＶ７０８Ｉアミノ酸置換を含み、Ａ３３３Ｓおよび／またはＳ７２１Ｌアミノ酸置換も含み、配列番号２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するか、または他の点では、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。
【０１３７】
他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１１、および１２からなる群から選択される野生型ＡＡＶキャプシド配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含み、ｉ）Ａ３５Ｐ、Ｄ２１３Ｎ、Ａ３１９Ｔ＋Ｐ１９５Ｌ、Ｐ３６３Ｌ、Ｐ３６３Ｌ＋Ｖ７０８Ｉ、Ｇ４５３Ｒ、Ｒ６５１Ｈ、Ｉ６９８Ｖ、Ｖ７０８Ｉ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｔ３３０Ａ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｒ５８８Ｍ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６９４Ｃ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６０６Ｃ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｎ４４９Ｋ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｇ２２２Ｓ、Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑ、Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｖ７０８Ｉ＋Ｌ７３５Ｑからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換、および／または（ｉｉ）ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択されるペプチド挿入を含む。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、指定の１つ以上のアミノ酸置換および／またはペプチド挿入を含み、他の点では配列番号１〜１２からなる群から選択される配列と同一である。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、本明細書に記載の１つ以上のペプチド挿入および／またはアミノ酸置換を含む先祖キャプシドタンパク質である。先祖キャプシドタンパク質とは、今日自然に見出されるキャプシドタンパク質の進化的祖先、例えば、今日自然に見出されるＡＡＶキャプシドタンパク質間の縮退の位置におけるランダムアミノ酸置換によってｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで生成される、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３を意味する。
【０１３９】
他の実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、ＡＡＶ５キャプシド（配列番号６）のアミノ酸１３０〜７２５またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含むキメラである。
【０１４０】
いくつかの態様では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、（ｉ）ＡＡＶ６のアミノ酸１〜１２９（配列番号７）またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一のアミノ酸配列、および（ｉｉ）ＡＡＶ５のアミノ酸１３０〜７２５（配列番号６）またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含み、ＡＡＶ５の配列（配列番号６）に対してＶ２２９Ｉ、Ａ４９０ＴおよびＡ５８１Ｔと、任意選択によりＶ４４７ＦまたはＹ５８５Ｓのアミノ酸置換をさらに含む、キメラである。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＦＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＴＧＫＲＩＤＤＨＦＰＫＲＫＫＡＲＴＥＥＤＳＫＰＳＴＳＳＤＡＥＡＧＰＳＧＳＱＱＬＱＩＰＡＱＰＡＳＳＬＧＡＤＴＭＳＡＧＧＧＧＰＬＧＤＮＮＱＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＤＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＩＶＴＫＳＴＲＴＷＶＬＰＳＹＮＮＨＱＹＲＥＩＫＳＧＳＶＤＧＳＮＡＮＡＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＳＨＷＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＹＷＧＦＲＰＲＳＬＲＶＫＩＦＮＩＱＶＫＥＶＴＶＱＤＳＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＤＤＹＱＬＰＹＶＶＧＮＧＴＥＧＣＬＰＡＦＰＰＱＶＦＴＬＰＱＹＧＹＡＴＬＮＲＤＮＴＥＮＰＴＥＲＳＳＦＦＣＬＥＹＦＰＳＫＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＴＹＮＦＥＥＶＰＦＨＳＳＦＡＰＳＱＮＬＦＫＬＡＮＰＬＶＤＱＹＬＹＲＦＶＳＴＮＮＴＧＧＶＱＦＮＫＮＬＡＧＲＹＡＮＴＹＫＮＷＦＰＧＰＭＧＲＴＱＧＷＮＬＧＳＧＶＮＲＡＳＶＳＡＦＴＴＴＮＲＭＥＬＥＧＡＳＹＱＶＰＰＱＰＮＧＭＴＮＮＬＱＧＳＮＴＹＡＬＥＮＴＭＩＦＮＳＱＰＡＮＰＧＴＴＡＴＹＬＥＧＮＭＬＩＴＳＥＳＥＴＱＰＶＮＲＶＡＹＮＶＧＧＱＭＡＴＮＮＱＳＳＴＴＡＰＴＴＧＴＹＮＬＱＥＩＶＰＧＳＶＷＭＥＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＥＴＧＡＨＦＨＰＳＰＡＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＭＭＬＩＫＮＴＰＶＰＧＮＩＴＳＦＳＤＶＰＶＳＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＴＶＥＭＥＷＥＬＫＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＮＮＹＮＤＰＱＦＶＤＦＡＰＤＳＴＧＥＹＲＴＴＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ（配列番号６２）
【０１４１】
他の態様では、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質は、（ｉ）ＡＡＶ２のアミノ酸１〜６１（配列番号２）またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一のアミノ酸配列、（ｉｉ）ＡＡＶ６のアミノ酸６２〜１２９（配列番号７）またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一のアミノ酸配列、および（ｉｉｉ）ＡＡＶ５（配列番号６）のアミノ酸１３０〜７２５を含み、ＡＡＶ５の配列（配列番号６）に対してＶ２２９Ｉ、Ａ４９０ＴおよびＡ５８１Ｔアミノ酸置換をさらに含む、キメラである。いくつかの実施形態では、変異ＡＡＶキャプシドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％の配列同一性を有するか、またはそれと１００％同一である：
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＦＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＴＧＫＲＩＤＤＨＦＰＫＲＫＫＡＲＴＥＥＤＳＫＰＳＴＳＳＤＡＥＡＧＰＳＧＳＱＱＬＱＩＰＡＱＰＡＳＳＬＧＡＤＴＭＳＡＧＧＧＧＰＬＧＤＮＮＱＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＤＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＩＶＴＫＳＴＲＴＷＶＬＰＳＹＮＮＨＱＹＲＥＩＫＳＧＳＶＤＧＳＮＡＮＡＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＳＨＷＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＹＷＧＦＲＰＲＳＬＲＶＫＩＦＮＩＱＶＫＥＶＴＶＱＤＳＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＤＤＹＱＬＰＹＶＶＧＮＧＴＥＧＣＬＰＡＦＰＰＱＶＦＴＬＰＱＹＧＹＡＴＬＮＲＤＮＴＥＮＰＴＥＲＳＳＦＦＣＬＥＹＦＰＳＫＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＴＹＮＦＥＥＶＰＦＨＳＳＦＡＰＳＱＮＬＦＫＬＡＮＰＬＶＤＱＹＬＹＲＦＶＳＴＮＮＴＧＧＶＱＦＮＫＮＬＡＧＲＹＡＮＴＹＫＮＷＦＰＧＰＭＧＲＴＱＧＷＮＬＧＳＧＶＮＲＡＳＶＳＡＦＴＴＴＮＲＭＥＬＥＧＡＳＹＱＶＰＰＱＰＮＧＭＴＮＮＬＱＧＳＮＴＹＡＬＥＮＴＭＩＦＮＳＱＰＡＮＰＧＴＴＡＴＹＬＥＧＮＭＬＩＴＳＥＳＥＴＱＰＶＮＲＶＡＹＮＶＧＧＱＭＡＴＮＮＱＳＳＴＴＡＰＴＴＧＴＹＮＬＱＥＩＶＰＧＳＶＷＭＥＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＥＴＧＡＨＦＨＰＳＰＡＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＭＭＬＩＫＮＴＰＶＰＧＮＩＴＳＦＳＤＶＰＶＳＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＴＶＥＭＥＷＥＬＫＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＮＮＹＮＤＰＱＦＶＤＦＡＰＤＳＴＧＥＹＲＴＴＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ（配列番号６３）
【０１４２】
本明細書に開示されるＡＡＶ変異体は、静脈内投与後の霊長類心筋および骨格筋スクリーンの使用を伴うインビボ定向進化の使用によって生成された。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンまたは野生型ＡＡＶによる筋肉細胞の形質導入と比較して、筋肉細胞の形質導入の増加をもたらす。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質または野生型ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンよりも効率的な霊長類筋肉細胞の形質導入をもたらし、例えば、心筋細胞は、親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンまたは野生型ＡＡＶより多くの主題の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンを取り込む。いくつかのそのような実施形態では、ＡＡＶ変異ビリオンまたは変異ｒＡＡＶは、野生型ＡＡＶビリオンまたは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むｒＡＡＶによる筋肉細胞の形質導入と比較して、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、または５０倍超増加した筋肉細胞の形質導入を示す。好ましい実施形態では、ＡＡＶ変異ビリオンまたは変異ｒＡＡＶは、野生型ＡＡＶ８またはＡＡＶ９ビリオンによる筋肉細胞の形質導入と比較して、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、または１０００倍超増加した筋肉細胞の形質導入を示す。ある特定のそのような実施形態では、本明細書に開示される変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶビリオン中に存在する場合、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質または野生型ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンよりも広範な霊長類筋肉細胞の形質導入をもたらす。換言すれば、変異ＡＡＶビリオンは、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むビリオンによって形質導入されない細胞種を形質導入し、したがって、対応する親ＡＡＶビリオンより多くの種類の筋肉細胞を形質導入する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ変異ビリオンは、筋肉細胞を優先的に形質導入し、例えば、主題のｒＡＡＶビリオンは、別の筋肉細胞または非筋肉細胞よりも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、５０倍、または５０倍超の特異性で筋肉細胞を感染させる。いくつかの実施形態では、形質導入された筋肉細胞は、心筋細胞（ｃａｒｄｉａｃ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ）（例えば心筋細胞（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｔｅ）、心臓線維芽細胞、または心臓前駆細胞）である。いくつかの実施形態では、筋肉細胞は、骨格筋細胞（例えば、筋芽細胞、筋管細胞、またはサテライト細胞）である。筋肉細胞の形質導入の増加、例えば、形質導入効率の増加、より広範な形質導入、より優先的な形質導入などは、遺伝子発現測定の当該技術分野における任意の数の方法によってインビトロまたはインビボで容易に評価され得る。例えば、ＡＡＶ��、普遍的または組織特異的プロモーターの制御下で、レポーター遺伝子、例えば、蛍光タンパク質を含む発現カセットを含むゲノムと共にパッケージングされてもよく、形質導入の程度は、例えば蛍光顕微鏡法によって蛍光タンパク質を検出することによって評価される。別の例として、ＡＡＶは、バーコードされた核酸配列を含むゲノムと共にパッケージングされ得、形質導入の程度は、例えばＰＣＲによって核酸配列を検出することによって評価され得る。別の例として、ＡＡＶは、筋肉疾患の治療のための治療用遺伝子を含む発現カセットを含むゲノムと共にパッケージングされ得、形質導入の程度は、ＡＡＶを投与された罹患患者における筋肉疾患の治療を検出することによって評価され得る。
【０１４３】
本明細書に開示される変異ｒＡＡＶベクターもしくはビリオンおよび／または方法を使用して治療することができる疾患には、単一遺伝子疾患、複雑な遺伝病、および外傷性損傷が含まれるが、これらに限定されない。単一遺伝子疾患の例には、デュシェンヌ型、ベッカー型、先天性などの筋ジストロフィー（ベスレムミオパチー、ウールリッヒ型筋ジストロフィー、福山型筋ジストロフィー、インテグリン欠損筋、メロシン欠損型筋ジストロフィー、およびウォーカー・ワールブルク症候群が含まれるが、これらに限定されない）、遠位（Ｇｏｗｅｒｓ−Ｌａｉｎｇ型、三好型、および野中型を含むがこれらに限定されない）、エメリー・ドレイフス型、顔面肩甲上腕型、肢帯型、筋強直性、および筋ジストロフィー；先天性筋強直症および先天性パラミオトニア；筋細管ミオパシー；中心核ミオパチー；筋原線維性ミオパチー、デスミン関連；貧血；アンデルセン・タウィル症候群；ネマリンミオパチー；ブロディ病；リソソーム蓄積症、例えば、αマンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、βマンノシドーシス、シスチン症、ファーバー病、フコシドーシス、ゴーシェ病、ガラクトシアリドーシス、ガングリオシドーシス（ＡＢバリアント、アクチベーター欠損症、βガラクトシダーゼ欠損症、ファブリー病、サンドホフ病、およびシンドラー病を含むが、これらに限定されない）、グリコーゲン蓄積障害（アンダーセン病、コリ病、ダノン病、フォーブス病、グルコース−６−リン酸欠損症、ハース（Ｈｅｒｓ）病、乳酸デヒドロゲナーゼＡ欠損症、ポンペ病、垂井病、およびフォンギールケ病を含むが、これらに限定されない）、乳児型遊離シアル酸蓄積症、リソソーム酸リパーゼ欠損症、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症（ヒアルロニダーゼ欠損症、ハンター症候群、ハーラー症候群、ハーラー・シャイエ症候群、マロトー・ラミー症候群、モルキオ症候群、サンフィリポ症候群、シャイエ症候群、およびスライ症候群を含むが、これらに限定されない）、ムコリピドーシス（シアリドーシス、Ｉ細胞病、ムコリピジン１欠損症、および偽ハーラー多発性ジストロフィーを含むが、これらに限定されない）、多種スルファターゼ欠損症、ニーマン・ピック病、神経セロイドリポフスチン症（バッテン・スピルマイヤー・フォークト病、先天性カテプシンＤ欠損症、ドイツ／セルビア後期乳児型（Ｇｅｒｍａｎ／Ｓｅｒｂｉａｎ  Ｌａｔｅ  Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ）、ヤンスキー・ビールショースキー病、クーフス病、後期乳児（ｌａｔｅ  ｉｎｆａｎｔｉｌｅ）、後期乳児バリアント、北部てんかん、サンタボーリ・ハルシア病（Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ−Ｈａｌｔｉａ  ｄｉｓｅａｓｅ）、トルコ後期乳児型を含むが、これらに限定されない））、濃化異骨症、サラ病、サポシンＢ欠損症、テイ・サックス病、およびウォルマン病；代謝障害、例えば、アデノシン一リン酸デアミナーゼ欠損症、アルカプトン尿症、カルニチン欠損症、カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ欠損症、ハートナップ障害、ホモシスチン尿症、メープルシロップ尿病、ミオホスホリラーゼ欠損症、ホスホグリセリン酸キナーゼ欠損症、ホスホグリセリン酸ムターゼ欠損症、ホスホリラーゼ欠損症、およびタンジール���；フリードライヒ運動失調症；毛細血管拡張性運動失調症；ビタミンＥ単独欠乏性運動失調症；周期性麻痺、例えば、ガムストープ病および低カリウム血性周期性麻痺；ミトコンドリア障害、例えば、バース症候群、カーンズ・セイヤー症候群、ミトコンドリアミオパチー、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌスてんかん、およびピアソン症候群；家族性肥大型心筋症；拡張型心筋症；家族性先天性心疾患、例えば、家族性大動脈弁疾患、および先天性心疾患を伴う左室緻密化障害；家族性不整脈、例えば、アンダーソン心不整脈周期性麻痺、房室伝導障害を伴う心房中隔欠損症、ブルガダ症候群、心伝導障害、カテコールアミン誘発性多形性心室性頻拍、および先天性心ブロック；家族性血管障害、例えば、動脈蛇行症候群、皮質下梗塞および白質脳症を伴う常染色体優性脳動脈症、皮質下梗塞および白質脳症を伴う劣性優性脳動脈症、家族性大動脈瘤、マルファン症候群、エーラス・ダンロス症候群、ビールズ先天性拘縮性くも指症、ロイス・ディーツ症候群、および弾性線維性仮性黄色腫；不整脈原性右室心筋症；家族性不整脈原性右室異形成症；ナクソス病；左室緻密化障害；家族性心房細動；家族性心室性頻拍；家族性ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群；ＱＴ延長症候群；ＱＴ短縮症候群；洞不全症候群；リポタンパク疾患、例えば、無βリポタンパク血症、およびリポタンパクリパーゼ欠損症；α−１アンチトリプシン欠損症；凝固第ＶＩＩＩ因子欠損症（血友病Ａ）または凝固第ＩＸ因子欠損症（血友病Ｂ）；サラセミア；進行性骨化性線維異形成症；ラミノパシー；ハンチントン病；先天性筋無力症候群；ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群；ヌーナン症候群；先天性筋線維型不均衡ミオパチー；先天性外眼筋線維症；ミニコアミオパチー；波紋筋病；シュワルツ・ヤンペル症候群；管状凝集体ミオパチー；ならびにゼブラ小体ミオパチーが含まれるが、これらに限定されない。複雑な疾患の例には、心臓／心血管疾患（例えば、うっ血性心不全、心筋梗塞、狭心症、冠動脈疾患、虚血性心疾患、心筋症）；癌；糖尿病；および感染症が含まれるが、これらに限定されない。外傷性損傷の例には、筋肉のウイルス感染、筋肉裂傷、および筋肉挫傷が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、本明細書に開示される変異ｒＡＡＶベクターもしくはビリオンおよび／または方法は、ファブリー病、フリードライヒ運動失調症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、ポンペ病、ミオホスホリラーゼ欠損症、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、または筋強直性ジストロフィーを治療するために使用される。
【０１４４】
別の実施形態では、本明細書に開示される変異キャプシドは、遺伝子産物、例えば、限定するものではないが、干渉ＲＮＡ、長鎖非コードＲＮＡ、短鎖非コードＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アプタマー、ポリペプチド、分泌型抗体、一本鎖抗体、ＶＨＨドメイン、可溶性受容体、アフィボディ、ノッチン、ＤＡＲＰｉｎ、センチュリン、シャペロン、遺伝子機能の部位特異的ノックダウンを提供する部位特異的ヌクレアーゼ、または転写の遺伝子特異的活性化を提供する修飾された部位特異的ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸を含む。
【０１４５】
本明細書に開示されるｒＡＡＶ変異ビリオンは、遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、もしくは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはそれらの前駆体もしくは模倣体である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、長鎖非コードＲＮＡである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、短鎖非コードＲＮＡである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、アンチセンスＲＮＡである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、アプタマーである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、分泌型抗体である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、一本鎖抗体である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、ＶＨＨドメインである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、可溶性受容体である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物はノッチン（ｋｎｏｔｔｉｎ）である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、ＤＡＲＰｉｎである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、センチュリン（ｃｅｎｔｕｒｉｎ）である。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、シャペロンである。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、遺伝子機能の部位特異的ノックダウンを提供する部位特異的ヌクレアーゼである。
【０１４６】
遺伝子産物の使用には、細胞における因子レベルの増強、因子の分泌による隣接細胞もしくは遠位細胞における因子レベルの増強、細胞における因子レベルの低下、または因子の分泌による隣接細胞もしくは遠位細胞における因子レベルの低下が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子産物は、欠けている遺伝子産物の欠損のレベルの補充、欠けている遺伝子産物の欠損のレベルの低下、新しい支持遺伝子産物の導入、支持遺伝子産物のレベルの補充、妨げる遺伝子産物のレベルの低下、または妨げる遺伝子産物のレベルの低下と支持遺伝子産物のレベルの補充との両方を行うように設計され得る。
【０１４７】
主題のＡＡＶ変異体によって送達される遺伝子産物は、筋肉疾患および外傷に直接的もしくは間接的に関連する遺伝子産物または遺伝子産物活性のレベルを変化させるために使用され得る。主題のＡＡＶ変異体が形質導入された骨格筋、心筋、または平滑筋は、遠隔臓器におけるトランスでの疾患の治療のための治療用タンパク質を産生および分泌するバイオ工場としても使用できる。遺伝子産物が遺伝的疾患に直接的または間接的に関連する遺伝子には、例えば、以下の遺伝子産物のいずれかをコードする遺伝子が含まれる：ミニジストロフィンおよびマイクロジストロフィンを含む、ジストロフィン（ＤＭＤ；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３９９７．１；配列番号６４）；タイチン（ＴＴＮ）；タイチンキャップ（ＴＣＡＰ）α−サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、β−サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、γ−サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、またはδ−サルコグリカン（ＳＧＣＤ）；α−１−アンチトリプシン（Ａ１−ＡＴ）；ミオシン重鎖６（ＭＹＨ６）；ミオシン重鎖７（ＭＹＨ７）；ミオシン重鎖１１（ＭＹＨ１１）；ミオシン軽鎖２（ＭＬ２）；ミオシン軽鎖３（ＭＬ３）；ミオシン軽鎖キナーゼ２（ＭＹＬＫ２）；ミオシン結合タンパク質Ｃ（ＭＹＢＰＣ３）；デスミン（ＤＥＳ）；ダイナミン２（ＤＮＭ２）；ラミニンα２（ＬＡＭＡ２）；ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）；ラミンＢ（ＬＭＮＢ）；ラミンＢ受容体（ＬＢＲ）；ジスフェリン（ＤＹＳＦ）；エメリン（ＥＭＤ）；インスリン；第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子を含むがこれらに限定されない、血液凝固因子；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）；筋小胞体Ｃａ２＋＋−ＡＴＰａｓｅ（ＳＥＲＣＡ２Ａ）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ１（Ｓ１００Ａ１）；ミオチューブラリン（ＭＴＭ）；ＤＭ１プロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＧ＿００９７８４．１；配列番号６５）；グリコーゲンホスホリラーゼＬ（ＰＹＧＬ）；グリコーゲンホスホリラーゼ、筋関連（ＰＹＧＭ、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５６００．１、配列番号６６）；グリコーゲンシンターゼ１（ＧＹＳ１）；グリコーゲンシンターゼ２（ＧＹＳ２）；α−ガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１６０．１；配列番号６７）；α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ（ＮＡＧＡ）；酸α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１４３．２；配列番号６８）、スフィンゴミエリナーゼホスホジエステラーゼ１（ＳＭＰＤ１）；リソソーム酸性リパーゼ（ＬＩＰＡ）；Ｉ型コラーゲンα１鎖（ＣＯＬ１Ａ１）；Ｉ型コラーゲンα２鎖（ＣＯＬ１Ａ２）；ＩＩＩ型コラーゲンα１鎖（ＣＯＬ３Ａ１）；Ｖ型コラーゲンα１鎖（ＣＯＬ５Ａ１）；Ｖ型コラーゲンα２鎖（ＣＯＬ５Ａ２）；ＶＩ型コラーゲンα１鎖（ＣＯＬ６Ａ１）；ＶＩ型コラーゲンＶＩα２鎖（ＣＯＬ６Ａ２）；ＶＩ型コラーゲンＶＩα３鎖（ＣＯＬ６Ａ３）；プロコラーゲン−リジン２−オキソグルタル酸５−ジオキシゲナーゼ（ＰＬＯＤ１）；リソソーム酸性リパーゼ（ＬＩＰＡ）；フラタキシン（ＦＸＮ；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３５．２��配列番号６９）；ミオスタチン（ＭＳＴＮ）；β−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼＡ（ＨＥＸＡ）；β−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼＢ（ＨＥＸＢ）；β−グルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）；アデノシン一リン酸デアミナーゼ１（ＡＭＰＤ１）；β−グロビン（ＨＢＢ）；イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）；イズロネート−２−スルファターゼ（ｉｄｕｒｏｎａｔｅ  ２−ｓｕｌｆａｔｅ）（ＩＤＳ）；トロポニン１（ＴＮＮＩ３）；トロポニンＴ２（ＴＮＮＴ２）；トロポニンＣ（ＴＮＮＣ１）；トロポミオシン１（ＴＰＭ１）；トロポミオシン３（ＴＰＭ３）；Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧＬＵ）；Ｎ−スルホグルコサミンスルホヒドロラーゼ（ＳＧＳＨ）；ヘパラン−α−グルコサミニドＮ−アセチルトランスフェラーゼ（ＨＧＳＮＡＴ）；インテグリンα７（ＩＧＴＡ７）；インテグリンα９（ＩＧＴＡ９）；グルコサミン（Ｎ−アセチル）−６−スルファターゼ（ＧＮＳ）；ガラクトサミン（Ｎ−アセチル）−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）；β−ガラクトシダーゼ（ＧＬＢ１）；β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）；ヒアルロノグルコサミニダーゼ１（ＨＹＡＬ１）；酸性セラミダーゼ（ＡＳＡＨ１）；ガラクトシルセルミダーゼ（ＧＡＬＣ）；カテプシンＡ（ＣＴＳＡ）；カテプシンＤ（ＣＴＳＡ）；カテプシンＫ（ＣＴＳＫ）；ＧＭ２ガングリオシドアクチβー（ＧＭ２Ａ）；アリールスルファターゼＡ（ＡＲＳＡ）；アリールスルファターゼＢ（ＡＲＳＢ）；ホルミルグリシン生成酵素（ＳＵＭＦ１）；ノイラミニダーゼ１（ＮＥＵ１）；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−リン酸トランスフェラーゼα（ＧＮＰＴＡ）；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−リン酸トランスフェラーゼβ（ＧＮＰＴＢ）；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−リン酸トランスフェラーゼγ（ＧＮＰＴＧ）；ムコリピン−１（ＭＣＯＬＮ１）；ＮＰＣ細胞内トランスポーター１（ＮＰＣ１）；ＮＰＣ細胞内トランスポーター２（ＮＰＣ２）；セロイドリポフスチン症５（ＣＬＮ５）；セロイドリポフスチン症６（ＣＬＮ６）；セロイドリポフスチン症８（ＣＬＮ８）；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）；トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）；バテニン（ＣＬＮ３）；ＤＮＡＪ熱ショックタンパク質ファミリー４０メンバーＣ５（ＤＮＡＪＣ５）；主要なファシリテータースーパーファミリードメイン含有８（ＭＦＳＤ８）；マンノシダーゼαクラス２Ｂメンバー１（ＭＡＮ２Ｂ１）；マンノシダーゼβ（ＭＡＮＢＡ）；アスパルチルグルコサミニダーゼ（ＡＧＡ）；α−Ｌ−フコシダーゼ（ＦＵＣＡ１）；シスチノシン、リソソームシステイントランスポーター（ＣＴＮＳ）；シアリン；溶質キャリアファミリー（ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｆａｍｉｌｙ）２メンバー１０（ＳＬＣ２Ａ１０）；溶質キャリアファミリー１７メンバー５（ＳＬＣ１７Ａ５）；溶質キャリアファミリー６メンバー１９（ＳＬＣ６Ａ１９）；溶質キャリアファミリー２２メンバー５（ＳＬＣ２２Ａ５）；溶質キャリアファミリー３７メンバー４（ＳＬＣ３７Ａ４）；リソソーム関連膜タンパク質２（ＬＡＭＰ２）；ナトリウム電位依存性チャネルαサブユニット４（ＳＣＮ４Ａ）；ナトリウム電位依存性チャネ��βサブユニット４（ＳＣＮ４Ｂ）；ナトリウム電位依存性チャネルαサブユニット５（ＳＣＮ５Ａ）；ナトリウム電位依存性チャネルαサブユニット４（ＳＣＮ４Ａ）；カルシウム電位依存性チャネルサブユニットα１ｃ（ＣＡＣＮＡ１Ｃ）；カルシウム電位依存性チャネルサブユニットα１ｓ（ＣＡＣＮＡ１Ｓ）；ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）；ホスホグリセリン酸ムターゼ２（ＰＧＡＭ２）；アミロ−α−１，６−グルコシダーゼ、４−α−グルカノトランスフェラーゼ（ＡＧＬ）；カリウム電位依存性チャネルＩＳＫ関連サブファミリーメンバー１（ＫＣＮＥ１）；カリウム電位依存性チャネルＩＳＫ関連サブファミリーメンバー２（ＫＣＮＥ２）；カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＪメンバー２（ＫＣＮＪ２）；カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＪメンバー５（ＫＣＮＪ５）；カリウム電位依存性チャネルサブファミリーＨメンバー２（ＫＣＮＨ２）；カリウム電位依存性チャネルＫＱＴ様サブファミリーメンバー１（ＫＣＮＱ１）；過分極活性化環状ヌクレオチド依存性カリウムチャネル４（ＨＣＮ４）；塩化物電圧依存性チャネル１（ＣＬＣＮ１）；カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１Ａ（ＣＰＴ１Ａ）；リアノジン受容体１（ＲＹＲ１）；リアノジン受容体２（ＲＹＲ２）；ブリッジングインテグレーター１（ｂｒｉｄｇｉｎｇ  ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ  １）（ＢＩＮ１）；大型キシロシルおよびグルクロニルトランスフェラーゼ１（ＬＡＲＧＥ１）；ドッキングタンパク質７（ＤＯＫ７）；フクチン（ＦＫＴＮ）；フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）；セレノプロテインＮ（ＳＥＬＥＮＯＮ）；タンパク質Ｏ−マンノシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）；タンパク質Ｏ−マンノシルトランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）；タンパク質Ｏ結合マンノースＮ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ１（ＰＯＭＧＮＴ１）；タンパク質Ｏ結合マンノースＮ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ２（ＰＯＭＧＮＴ２）；タンパク質−Ｏ−マンノースキナーゼ（ＰＯＭＫ）；（ＩＳＰＤ）を含むイソプレノイドシンターゼドメイン；プレクチン（ＰＬＥＣ）；コリン作動性受容体ニコチン性εサブユニット（ＣＨＲＮＥ）；コリンＯ−アセチルトランスフェラーゼ（ＣＨＡＴ）；コリンキナーゼβ（ＣＨＫＢ）；非対称アセチルコリンエステラーゼのコラーゲン様尾部サブユニット（ＣＯＬＱ）；シナプスの受容体関連タンパク質（ＲＡＰＳＮ）；フォーアンドハーフＬＩＭドメイン１（ｆｏｕｒ  ａｎｄ  ａ  ｈａｌｆ  ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ１）（ＦＨＬ１）；β−１，４−グルクロニルトランスフェラーゼ１（Ｂ４ＧＡＴ１）；β−１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ２（Ｂ３ＧＡＬＮＴ２）；ジストログリカン１（ＤＡＧ１）；膜貫通タンパク質５（ＴＭＥＭ５）；膜貫通タンパク質４３（ＴＭＥＭ４３）；ＳＥＣＩＳ結合タンパク質２（ＳＥＣＩＳＢＰ２）；グルコサミン（ＵＤＰ−Ｎ−アセチル）−２−エピメラーゼ／Ｎ−アセチルマンノサミンキナーゼ（ＧＮＥ）；アノオクタミン５（ＡＮＯ５）；ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  ｆｌｅｘｉｂｌｅ  ｈｉｎｇｅ  ｄｏｍａｉ��  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  １  （ＳＭＣＨＤ１）；乳酸脱水素酵素Ａ（ＬＤＨＡ）；乳酸脱水素酵素Ｂ（ＬＨＤＢ）；カルパイン３（ＣＡＰＮ３）；カベオリン３（ＣＡＶ３）；ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｍｏｔｉｆ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ３２（ＴＲＩＭ３２）；ＣＣＨＣ型ジンクフィンガー核酸結合タンパク質（ＣＮＢＰ）；ネブリン（ＮＥＢ）；アクチン，α１，骨格筋（ＡＣＴＡ１）；アクチン，α１，心筋（ＡＣＴＣ１）；アクチニンα２（ＡＣＴＮ２）；ポリ（Ａ）結合タンパク質核１（ＰＡＢＰＮ１）；ＬＥＭドメイン含有タンパク質３（ＬＥＭＤ３）；亜鉛メタロプロテイナーゼＳＴＥ２４（ＺＭＰＳＴＥ２４）；ミクロソームトリグリセリド転移タンパク質（ＭＴＴＰ）；コリン作動性受容体ニコチン性α１サブユニット（ＣＨＲＮＡ１）；コリン作動性受容体ニコチン性α２サブユニット（ＣＨＲＮＡ２）；コリン作動性受容体ニコチン性α３サブユニット（ＣＨＲＮＡ３）；コリン作動性受容体ニコチン性α４サブユニット（ＣＨＲＮＡ４）；コリン作動性受容体ニコチン性α５サブユニット（ＣＨＲＮＡ５）；コリン作動性受容体ニコチン性α６サブユニット（ＣＨＲＮＡ６）；コリン作動性受容体ニコチン性α７サブユニット（ＣＨＲＮＡ７）；コリン作動性受容体ニコチン性α８サブユニット（ＣＨＲＮＡ８）；コリン作動性受容体ニコチン性α９サブユニット（ＣＨＲＮＡ９）；コリン作動性受容体ニコチン性α１０サブユニット（ＣＨＲＮＡ１０）；コリン作動性受容体ニコチン性β１サブユニット（ＣＨＲＮＢ１）；コリン作動性受容体ニコチン性β２サブユニット（ＣＨＲＮＢ２）；コリン作動性受容体ニコチン性β３サブユニット（ＣＨＲＮＢ３）；コリン作動性受容体ニコチン性β４サブユニット（ＣＨＲＮＢ４）；コリン作動性受容体ニコチン性γサブユニット（ＣＨＲＮＧ１）；コリン作動性受容体ニコチン性∂サブユニット（ＣＨＲＮＤ）；コリン作動性受容体ニコチンサブユニット（ＣＨＲＮＥ１）；ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＡメンバー１（ＡＢＣＡ１）；ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＣメンバー６（ＡＢＣＣ６）；ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＣメンバー９（ＡＢＣＣ９）；ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＤメンバー１（ＡＢＣＤ１）；ＡＴＰａｓｅ筋小胞体／小胞体Ｃａ２＋輸送１（ＡＴＰ２Ａ１）；ＡＴＭセリン／スレオニンキナ
ーゼ（ＡＴＭ）；αトコフェロールトランスフェラーゼタンパク質（ＴＴＰＡ）；キネシンファミリーメンバー２１Ａ（ＫＩＦ２１Ａ）；ｐａｉｒｅｄ様ホメオボックス２ａ（ｐａｉｒｅｄ−ｌｉｋｅ  ｈｏｍｅｏｂｏｘ  ２ａ  （ＰＨＯＸ２Ａ）；ヘパラン硫酸プロテオグリカン２（ＨＳＰＧ２）；間質相互作用分子１（ＳＴＩＭ１）；ノッチ１（ＮＯＴＣＨ１）；ノッチ３（ＮＯＴＣＨ３）；ジストロブレビンα（ＤＴＮＡ）；プロテインキナーゼＡＭＰ活性化，非触媒γ２（ＰＲＫＡＧ２）；システインおよびグリシンに富むタンパク質３（ＣＳＲＰ３）；ビニキュリン（ＶＣＬ）；ミオゼニン２（ＭｙｏＺ２）；ミオパラディン（ＭＹＰＮ）；ジャンクトフィリン２（ＪＰＨ２）；ホスホランバン（ＰＬＮ）；カルレティキュリン３（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ３）（ＣＡＬＲ３）；ネキシリンＦ−アクチン結合タンパク質（ＮＥＸＮ）；ＬＩＭドメイン結合３（ＬＤＢ３）；ｅｙｅｓ  ａｂｓｅｎｔ  ４（ＥＹＡ４）；ハンチンチン（ＨＴＴ）；アンドロゲン受容体（ＡＲ）；プロテインチロシンホスフェート非受容体１１型（ＰＴＰＮ１１）；ジャンクションプラコグロビン（ＪＵＰ）；デスモプラキン（ＤＳＰ）；プラコフィリン２（ＰＫＰ２）；デスモグレイン２（ＤＳＧ２）；デスモコリン２（ＤＳＣ２）；カテニンα３（ＣＴＮＮＡ３）；ＮＫ２ホメオボックス５（ＮＫＸ２−５）；Ａキナーゼアンカータンパク質９（ＡＫＡＰ９）；Ａキナーゼアンカータンパク質１０（ＡＫＡＰ１０）；グアニンヌクレオチド結合タンパク質α阻害活性ポリペプチド２（ＧＮＡＩ２）；アンキリン２（ＡＮＫ２）；シントロフィンα−１（ＳＮＴＡ１）；カルモジュリン１（ＣＡＬＭ１）；カルモジュリン２（ＣＡＬＭ２）；ＨＴＲＡセリンペプチダーゼ１（ＨＴＲＡ１）；フィブリリン１（ＦＢＮ１）；フィブリリン２（ＦＢＮ２）；キシロシルトランスフェラーゼ１（ＸＹＬＴ１）；キシロシルトランスフェラーゼ２（ＸＹＬＴ２）；タファジン（ＴＡＺ）；ホモゲンチジン酸１，２−ジオキシゲナーゼ（ＨＧＤ）；グルコース−６−ホスファターゼ触媒サブユニット（Ｇ６ＰＣ）；１，４−α−グルカン酵素１（ＧＢＥ１）；ホスホフルクトキナーゼ，筋（ＰＦＫＭ）；ホスホリラーゼキナーゼ調節サブユニットα１（ＰＨＫＡ１）；ホスホリラーゼキナーゼ調節サブユニットα２（ＰＨＫＡ２）；ホスホリラーゼキナーゼ調節サブユニットβ（ＰＨＫＢ）；ホスホリラーゼキナーゼ触媒サブユニットγ２（ＰＨＫＧ２）；ホスホグリセリン酸ムターゼ２（ＰＧＡＭ２）；シスタチオニン−β−シンターゼ（ＣＢＳ）；メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素（ＭＴＨＦＲ）；５−メチルテトラヒドロ葉酸−ホモシステインメチルトランスフェラーゼ（ＭＴＲ）；５−メチルテトラヒドロ葉酸−ホモシステインメチルトランスフェラーゼレダクターゼ（ＭＴＲＲ）；メチルマロン酸尿症およびホモシスチン尿症，ｃｂｌＤ型（ｍｅｔｈｙｌｍａｌｏｎｉｃ  ａｃｉｄｕｒｉａ  ａｎｄ  ｈｏｍｏｃｙｓｔｉｎｕｒｉａ，ｃｂｌＤ  ｔｙｐｅ）（ＭＭＡＤＨＣ）；ミトコンドリアにコードされたＮＡＤＨ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｌｙ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ＮＡＤＨ）を含むがこれに限定されない、ミトコンドリアＤＮＡ：ユ��キノン酸化還元酵素コアサブユニット１（ＭＴ−ＮＤ１）；トコンドリアにコードされたＮＡＤＨ；ユビキノン酸化還元酵素コアサブユニット５（ＭＴ−ＮＤ５）；ミトコンドリアにコードされたｔＲＮＡグルタミン酸（ＭＴ−ＴＥ）；ミトコンドリアにコードされたｔＲＮＡヒスタジン（ＭＴ−ＴＨ）；ミトコンドリアにコードされたｔＲＮＡロイシン１（ＭＴ−ＴＬ１）；ミトコンドリアにコードされたｔＲＮＡリジン（ＭＴ−ＴＫ）；ミトコンドリアにコードされたｔＲＮＡセリン１（ＭＴ−ＴＳ１）；ミトコンドリアにコードされたｔＲＮＡバリン（ＭＴ−ＴＶ）；マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ１（ＭＡＰ２Ｋ１）；Ｂ−Ｒａｆ癌原遺伝子，セリン／スレオニンキナーゼ（ＢＲＡＦ）；ｒａｆ−１癌原遺伝子，セリン／スレオニンキナーゼ（ＲＡＦ１）；インスリン増殖因子１（ＩＧＦ−１）を含むがこれに限定されない増殖因子；トランスフォーミング増殖因子β３（ＴＧＦβ３）；トランスフォーミング増殖因子β受容体，Ｉ型（ＴＧＦβＲ１）；トランスフォーミング増殖因子β受容体，ＩＩ型（ＴＧＦβＲ２）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、線維芽細胞増殖因子４（ＦＧＦ４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）、血管内皮増殖因子Ｂ（ＶＥＧＦ−Ｂ）、血管内皮増殖因子Ｃ（ＶＥＧＦ−Ｃ）、血管内皮増殖因子Ｄ（ＶＥＧＦ−Ｄ）、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）、および血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；インターロイキン；イムノアドヘシン；サイトカイン；および抗体。
【０１４８】
好ましい実施形態では、主題のＡＡＶ変異体によって送達される遺伝子産物は、αガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ）、フラタキシン（ＦＸＮ）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）、およびグリコーゲンホスホリラーゼ，筋（ＰＹＧＭ）から選択される。いくつかの好ましい実施形態では、主題のＡＡＶ変異体は、（ｉ）配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＧＬＡポリペプチド、（ｉｉ）配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＦＸＮポリペプチド、（ｉｉｉ）配列番号６４に示されるアミノ酸配列の機能的断片（例えば、ミニジストロフィンまたはマイクロジストロフィン、好ましくは無傷のアクチン結合ドメイン、２４スペクトリン様反復のうちの少なくとも４つ、およびジストロフィン結合ドメインを含む）を含むかまたはそれからなるＤＭＤポリペプチド、（ｉｖ）配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＧＡＡポリペプチド、（ｖ）配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＰＹＧＭポリペプチド、（ｖｉ）または（ｖ）配列番号６４および６６〜６９のいずれか１つと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
別の好ましい実施形態では、主題のＡＡＶ変異体は、ＤＭＰＫの発現を低下させる干渉ＲＮＡ、例えばアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡをコードする導入遺伝子を含む。いくつかの態様では、干渉ＲＮＡは、配列番号６５として示されるヌクレオチド配列または配列番号６５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも少なくとも９５％同一である配列を有する核酸によってＤＭＰＫの発現を低下させる。
【０１５０】
遺伝子産物がアポトーシスを誘導または促進する遺伝子は、本明細書では「アポトーシス促進遺伝子」と称され、それらの遺伝子の産物（ｍＲＮＡ、タンパク質）は「アポトーシス促進遺伝子産物」と称される。アポトーシス促進標的には、例えば、Ｂａｘ  遺伝子産物、Ｂｉｄ  遺伝子産物、Ｂａｋ  遺伝子産物、Ｂａｄ  遺伝子産物、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−Ｘ１が含まれる。抗アポトーシス遺伝子産物には、アポトーシスのＸ連鎖阻害剤が含まれる。
【０１５１】
遺伝子産物が血管新生を誘導または促進する遺伝子は、本明細書では「血管新生促進遺伝子」と称され、それらの遺伝子の産物（ｍＲＮＡ、タンパク質）は「血管新生促進遺伝子産物」と称される。血管新生促進標的には、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦａ、ＶＥＧＦｂ、ＶＥＧＦｃ、ＶＥＧＦｄ）、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ１（Ｆｌｔ１）、胎盤増殖因子（ＰＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、アンジオポエチン、ソニックヘッジホッグが含まれる。遺伝子産物が血管新生を阻害する遺伝子は、本明細書では「抗血管新生遺伝子」と称され、それらの遺伝子の産物（ｍＲＮＡ、タンパク質）は、「抗血管新生遺伝子産物」と称される。抗血管新生遺伝子産物には、エンドスタチン、タムスタチン、アンギオスタチン、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）、ならびに血管新生促進標的および／またはその受容体に特異的な融合タンパク質または抗体、例えば、ＶＥＧＦ特異的抗体アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）（商標）などが含まれる。
【０１５２】
遺伝子産物が免疫モジュレーター、例えば、補体因子、トール様受容体として機能する遺伝子は、「免疫調節遺伝子」と称される。例示的な免疫調節遺伝子には、サイトカイン、ケモカイン、ならびにそれらおよび／またはそれらの受容体に特異的な融合タンパク質または抗体、例えば、抗ＩＬ−６融合タンパク質リロナセプト（Ｒｉｌｏｎａｃｅｐｔ）（商標）、補体因子Ｈ特異的抗体ランパリズマブ（ｌａｍｐａｍｉｚｕｍａｂ）などが含まれる。遺伝子産物が神経保護因子として機能する遺伝子には、例えば、インスリン増殖因子１（ＩＧＦ−１）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）が含まれる。
【０１５３】
いくつかの場合では、目的の遺伝子産物は、遺伝子機能の部位特異的ノックダウンを提供する部位特異的エンドヌクレアーゼであり、例えば、エンドヌクレアーゼが筋肉疾患に関連する対立遺伝子をノックアウトする。例えば、優性対立遺伝子が、野生型の場合には、筋肉構造タンパク質であり、および／または正常な筋肉機能を提供する遺伝子の欠損コピーをコードする場合、部位特異的エンドヌクレアーゼは、欠損対立遺伝子を標的にし、欠損対立遺伝子をノックアウトすることができる。
【０１５４】
欠損対立遺伝子をノックアウトすることに加えて、部位特異的ヌクレアーゼを用いて、欠損対立遺伝子によってコードされるタンパク質の機能的コピーをコードするドナーＤＮＡによる相同的組換えを刺激することもできる。したがって、例えば、主題のｒＡＡＶビリオンは、欠損対立遺伝子をノックアウトする部位特異的エンドヌクレアーゼの両方を送達するために使用することができ、欠損対立遺伝子の機能的コピーを送達するために使用することができ、これにより欠損対立遺伝子の修復がもたらされ、それにより機能的筋肉タンパク質（例えば、機能的ラミンＡ／Ｃ、機能的フィブリン、機能的ＶＩ型コラーゲンなど）の産生がもたらされる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｒＡＡＶビリオンは、部位特異的エンドヌクレアーゼをコードする異種ヌクレオチド配列と、機能的コピーが機能的レチナールタンパク質をコードする場合、欠損対立遺伝子の機能的コピーをコードする異種ヌクレオチド配列と、を含み、機能的コピーは機能的筋肉タンパク質をコードする。機能的筋肉タンパク質には、例えば、ラミンＡ／Ｃ、フィブリリン１、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、ＣＯＬ６Ａ３などが含まれる。
【０１５５】
使用に好適な部位特異的エンドヌクレアーゼには、例えば、メガヌクレアーゼ；ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）；転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）；およびそのような部位特異的エンドヌクレアーゼが天然に存在せず、特定の遺伝子を標的とするように修飾されている場合には、クラスター化され規則的に間隔が空いた短い回文構造の反復／ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）が含まれる。そのような部位特異的ヌクレアーゼは、ゲノム内のある特定の位置を切断するように操作することができ、その後、非相同末端接合により、いくつかのヌクレオチドを挿入または欠失させながら破断を修復することができる。そのような部位特異的エンドヌクレアーゼ（「ＩＮＤＥＬ」とも称される）は、その後、タンパク質を枠外に投げ出し、効果的に遺伝子をノックアウトする。例えば、米国特許出願公開第２０１１／０３０１０７３号を参照されたい。
【０１５６】
本明細書に開示される変異ｒＡＡＶベクターのいくつかの実施形態では、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、構成的プロモーターに作動可能に連結される。好適な構成的プロモーターには、例えば、サイトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ）（Ｓｔｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５５（２）：４３１−４４１）、ＣＭＶ早期エンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＢＡ）プロモーター／ウサギβ−グロビンイントロン（ＣＡＧ）（Ｍｉｙａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｇｅｎｅ  ７９（２）：２６９−２７７，ＣＢＳＢ（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １３（６）：１０７４−１０８４）、ヒト伸長因子１αプロモーター（ＥＦ１α）（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｇｅｎｅ  ９１（２）：２１７−２２３）、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼプロモーター（ＰＧＫ）（Ｓｉｎｇｅｒ−Ｓａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３２（３）：４０９−４１７）、ミトコンドリア重鎖プロモーター（Ｌｏｄｅｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＰＮＡＳ  １０９（１７）：６５１３−６５１８）、ユビキチンプロモーター（Ｗｕｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２６１：１０１−１０５）が含まれる。他の実施形態では、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、誘導性プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの事例では、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、組織特異的または細胞型特異的調節要素に作動可能に連結される。例えば、いくつかの場合では、目的の遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列は、筋肉特異的調節要素（例えば、心臓特定的プロモーターまたは骨格筋特異的プロモーター）、例えば、筋肉細胞における作動可能に連結された遺伝子の選択的発現をもたらす調節要素に作動可能に連結される。好適な筋肉特異的調節要素には、例えば、骨格筋α−アクチンプロモーター（Ｍｕｓｃａｔ  ａｎｄ  Ｋｅｄｅｓ（１９８７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：４０８９−４０９９）；心筋α−アクチンプロモーター（Ｍｉｎｔｙ  ａｎｄ  Ｋｅｄｅｓ（１９８６）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２１２５−２１３６）；平滑筋α−アクチンプロモーター（Ｎａｋａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｇｅｎｅ  ９９：２８５−２８９）；血管平滑筋α−アクチンプロモーター（Ｋｅｏｇｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ６（４）：６１６−６２８）；筋肉クレアチンキナーゼプロモーター（Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５（３）：４１１−４１９）；ミオシン軽鎖１およびミオシン軽鎖３プロモーター（Ｓｅｉｄｅｌ  ａｎｄ  Ａｒｎｏｌｄ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（２７）：１６１０９−１６１１７）；ミオシン軽鎖２ｖ（ＭＬＣ２ｖ）プロモーター（Ｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）ＰＮＡＳ  １０１（４６）：１６２８０−１６２８５）；マイオジェニン因子（ｍｙｏｇｅｎｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）５（Ｍｙｆ５）プロモーター（Ｆｕｊｉｍａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇ���ｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８９（１１）：７３９９−７４１２）；マイオジェニン分化（ｍｙｏｇｅｎｉｃ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）  １（Ｍｙｏｄ１）プロモーター（Ｚｉｎｇｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２（１２）：２２３４−２２４１）；マイオジェニン（Ｍｙｏｇ）プロモーター（Ｓａｌｍｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １１５（４）：９０５−９１７）；ｐａｉｒｅｄボックス遺伝子７（Ｐａｘ７）プロモーター（Ｍｕｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）ＢｉｏｌＣｈｅｍ．３８１（４）：３３１−３３５）；ｐａｉｒｅｄ様ホメオドメイン３（Ｐｉｔｘ３）プロモーター（Ｃｏｕｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８２：３３１９２−３３２００）；ＭＨＣＫ７プロモーター（Ｓａｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５（２）：３２０−３２９））；ＭＣＫ／ＳＶ４０プロモーター（Ｔａｋｅｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９：３０９−３１５）；Ｃ５−１２プロモーター（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １７：２４１−２４５）；ダブルおよびトリプルタンデムＭＣＫエンハンサー／プロモーター（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １５：１４８９−１４９９））；ミオシン重鎖７（ＭＹＨ７）プロモーター；（Ｉｗａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２１０４）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ９（４）：ｅ８８６１０））；ミオシン重鎖６（ＭＹＨ６）プロモーター（Ｐａｃａｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｇｅｎｅｔ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｔｈｅｒ．６：１３）；心臓トロポニンＴ（ＴＮＮＴ２）プロモーター（Ｆａｒｚａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．３０（６）：１２４７−５３）；α−トロポミオシンプロモーター（Ｈｅｌｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６（１１）：３５８２−３５９５）；心臓トロポニンＣ（ＴＮＮＣ１）プロモーター（Ｓｃｈｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３４（５）：２１２４７−２１２５３）；心筋ミオシン結合タンパク質Ｃプロモーター（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（７）：ｅ６９６７１）；心臓トロポニンＩ（ＴＮＮＩ３）プロモーター（Ｂｈａｖｓａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３５（１）：１１−２３）；デスミンプロモーター（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １０（５）：６５６２−６５７０）；ナトリウム−カルシウム交換体（ＮＣＸ１）プロモーター（Ｓｃｈｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７３（１３）：７６４３−７６４９）；心房性ナトリウム利尿因子プロモーター（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｍ���ｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １６（９）：４６４８−４６５５）；およびＳＭ２２αプロモーター（Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３１０（３）：１０３７−１０４３）が含まれる。
【０１５７】
本発明の目的のために、本明細書の開示は、上記の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸を提供する。単離された核酸は、ＡＡＶベクター、例えば、組換えＡＡＶベクターであり得る。
【０１５８】
本明細書の開示はまた、筋肉疾患を治療する方法を提供し、方法は、それを必要とする個体に、上記のかつ本明細書に開示される目的の導入遺伝子を含む有効量のｒＡＡＶ変異ビリオンを投与することを含む。当業者は、主題のｒＡＡＶビリオンの有効量と、１つ以上の機能的または解剖学的パラメータの変化を測定すること、例えば、筋肉生検とそれに続く免疫組織化学、血清サンプリングとそれに続くＥＬＩＳＡもしくは酵素活性アッセイ、歩行検査、ピーク最大酸素消費量、バイオマーカー分析、左心室駆出率、左室収縮末期容積、ハンドヘルドダイナモメーター検査（ｈａｎｄ−ｈｅｌｄ  ｄｙｎａｍｏｍｅｔｒｙ）、最大重量リフト、時限機能（Ｔｉｍｅｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ）検査、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ運動機能評価尺度、床からの時限立ち上がり（ｔｉｍｅｄ  ｒｉｓｅ  ｆｒｏｍ  ｆｌｏｏｒ）、または９穴ペグ検査によって疾患が治療されていることと、を容易に決定することができるであろう。
【０１５９】
筋肉機能およびその変化を評価するための非限定的な方法には、歩行検査、ピーク最大酸素消費量、バイオマーカー分析、左心室駆出率、左室収縮末期容積、Ｖｉｇｎｏｓスケール、時限機能検査、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ運動機能評価尺度、床からの時限立ち上がり、運動能力尺度スケール、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ歩行評価、９穴ペグ検査、またはフィラデルフィア小児病院乳児神経筋疾患検査が含まれる。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、有効量の主題のｒＡＡＶビリオンは、筋肉機能、解剖学的完全性、または筋肉質量の喪失率の低減をもたらし、例えば、２倍、３倍、４倍、または５倍以上の損失率の低減およびそれに伴う疾患の進行の低減、例えば、１０倍以上の損失率の低減およびそれに伴う疾患の進行の低減をもたらす。いくつかの実施形態では、有効量の主題のｒＡＡＶビリオンは、筋肉機能の増大、筋力の増大、筋肉質量の増大、および／または解剖学的筋肉完全性もしくはバイオマーカーの改善をもたらし、例えば、２倍、３倍、４倍、または５倍以上の筋肉機能、筋力、筋肉質量の改善、および／または解剖学的筋肉完全性もしくはバイオマーカーの改善、例えば、１０倍以上の筋肉機能、筋力、筋肉質量の改善、および／または解剖学的筋肉完全性もしくはバイオマーカーの改善をもたらす。当業者によって容易に理解されるように、所望の治療効果を達成するのに必要な用量は、典型的には、１×１０８〜約１×１０１６の範囲の組換えビリオンであり、これは典型的には当業者によって、１×１０８〜約１×１０１６の「ベクターゲノム」と称され、好ましくは、１×１０１１〜約１×１０１５の範囲の組換えビリオンである。
【０１６１】
主題のｒＡＡＶビリオンは、血管内（静脈内または動脈内）投与、腹腔内投与、四肢灌流、および／もしくは直接的な筋肉内注射により、またはｒＡＡＶビリオンの骨格筋への送達をもたらす任意の他の好都合な投与様式または投与経路によって骨格筋に送達することができる。ｒＡＡＶビリオンは、血管内（静脈内または動脈内）投与、直接的な心臓注射（左心房、右心房、右心室、および／または中隔へ）、冠動脈への順行性または逆行性注入（左前下行枝または冠動脈左回旋枝を介する）、再循環、心膜内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｃａｒｄｉａｌ）注射、経心内膜（ｔｒａｎｓｅｎｄｏｃａｒｄｉａｌ）注射によって、または心筋へのｒＡＡＶビリオンの送達をもたらす任意の他の好都合な投与様式または投与経路によって、心筋に送達することができる。好ましい実施形態では、主題のｒＡＡＶビリオンは、全身静脈内投与により骨格筋および／または心筋に送達される。静脈内注射によって投与される場合、主題のｒＡＡＶビリオンは、循環系を通って移動することができ、野生型ＡＡＶビリオンまたは対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンの能力と比較して、より効率的に筋肉細胞を形質導入することができる。
【０１６２】
本明細書に開示される変異キャプシドタンパク質は、単離、例えば、精製される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される変異キャプシドタンパク質は、ＡＡＶベクターまたは組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオンに含まれる。他の実施形態では、そのようなＡＡＶ変異ベクターおよび／またはＡＡＶ変異ビリオンは、霊長類心筋または骨格筋における筋肉疾患を治療するインビボまたはエクスビボ方法において使用される。
【０１６３】
本明細書の開示は、さらに、宿主細胞、例えば、限定するものではないが、主題の核酸を含む単離された（遺伝子修飾された）宿主細胞を提供する。本明細書に開示される本発明に従う宿主細胞は、インビトロ細胞培養由来の細胞などの単離された細胞であり得る。そのような宿主細胞は、本明細書に記載されるように、主題のｒＡＡＶ変異ビリオンを産生するために有用である。一実施形態では、そのような宿主細胞は、核酸によって安定に遺伝子修飾される。他の実施形態では、宿主細胞は、核酸によって一過性に遺伝子修飾される。そのような核酸は、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、リポソーム媒介トランスフェクションなどを含むがこれらに限定されない確立された技術を用いて宿主細胞に安定にまたは一過性に導入される。安定な形質転換のために、核酸は、一般に、選択マーカー、例えば、ネオマイシン耐性などといったいくつかの周知の選択マーカーのいずれかをさらに含む。そのような宿主細胞は、多様な細胞、例えば、哺乳動物細胞（例えば、マウス細胞および霊長類細胞（例えば、ヒト細胞）を含む）のいずれかに核酸を導入することによって生成される。例示的な哺乳動物細胞には、初代細胞および細胞株が含まれるが、これらに限定されず、例示的な細胞株には、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、３Ｔ３マウス線維芽細胞、Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２線維芽細胞、ＣＨＯ細胞などが含まれるが、これらに限定されない。例示的な宿主細胞には、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが含まれるが、これらに限定されない。宿主細胞は、ＡＡＶを産生するＳｆ９細胞などの昆虫細胞に感染させるためにバキュロウイルスを使用して作製することもできる（例えば、米国特許第７，２７１，００２号、米国特許出願第１２／２９７，９５８号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾された宿主細胞は、上記のような変異ＡＡＶキャプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸に加えて、１つ以上のＡＡＶ  ｒｅｐタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む。他の実施形態では、宿主細胞は、ｒＡＡＶ変異ベクターをさらに含む。そのような宿主細胞を用いてｒＡＡＶ変異ビリオンを生成することができる。ｒＡＡＶビリオンを生成する方法は、例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９２２号および米国特許出願公開第２００９／０２０２４９０号に記載されている。
【０１６４】
本明細書の開示は、ａ）上に記載されかつ本明細書に開示されるｒＡＡＶ変異ビリオンと、ｂ）薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または緩衝剤とを含む薬学的組成物をさらに提供する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または緩衝剤は、ヒトまたは非ヒト患者における使用に好適である。そのような賦形剤、担体、希釈剤、および緩衝剤には、過度の毒性を伴わずに投与することができる任意の医薬品が含まれる。薬学的に許容される賦形剤には、限定されないが、水、生理食塩水、グリセロール、およびエタノールなどの液体が挙げられる。薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの無機酸塩；および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸の塩が含まれてもよい。加えて、補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などが、そのようなビヒクル中に存在してもよい。多種多様な薬学的に許容される賦形剤が当該技術分野で既知であり、本明細書で詳細に考察する必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含む、様々な刊行物に十分に記載されている。本発明のいくつかの態様では、本発明は、約１×１０８〜約１×１０１６の組換えウイルスまたは１×１０８〜約１×１０１６のベクターゲノムを含む薬学的組成物を提供し、該組換えウイルスの各々は、１つ以上の遺伝子産物をコードするゲノムを含む。
【０１６５】
本発明のいくつかの実施形態は、以下の項目１〜５４に例示されている：
１．変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、キャプシドタンパク質のＧＨループにペプチド挿入を含み、挿入が、ＡＡＶ２中、またはＡＡＶ２以外の野生型ＡＡＶ血清型もしくはＡＡＶ変異体のキャプシド部分の対応する位置にあり、ペプチド挿入が、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択される、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
２．キャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２に対して１つ以上の点変異または他の野生型ＡＡＶ血清型もしくはＡＡＶ変異体に対して１つ以上の対応する点変異を含む、項目１に記載の変異ＡＡＶ。
３．１つ以上の点変異が、Ａ３５Ｐ、Ｓ１０９Ｔ、Ｐ１９５Ｌ、Ｄ２１３Ｎ、Ｇ２２２Ｓ、Ｖ２２９Ｉ、Ｎ３１２Ｋ、Ａ３１９Ｔ、Ｔ３３０Ａ、Ａ３３３Ｓ、Ｅ３４７Ｋ、Ｐ３６３Ｌ、Ａ４２７Ｄ、Ｖ４４７Ｆ、Ｎ４４９Ｄ、Ｎ４４９Ｋ？、Ｇ４５３Ｒ、Ａ４９０Ｔ、Ｋ５２７Ｑ、Ｎ５５１Ｓ、Ａ５８１Ｔ、Ｙ５８５Ｓ、Ｒ５８８Ｍ、Ａ５９３Ｅ、Ｗ６０６Ｃ、Ｋ６４９Ｅ、Ｒ６５１Ｈ、Ｗ６９４Ｃ、Ｉ６９８Ｖ、Ｖ７０８Ｉ、およびＬ７３５Ｑからなる群から選択され、好ましくは、Ｖ７０８Ｉ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｔ３３０Ａ、Ａ３５Ｐ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｒ５８８Ｍ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６０６Ｃ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６９４Ｃ、Ｉ６９８Ｖ、Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑ、Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｖ７０８Ｉ＋Ｌ７３５Ｑ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｎ４４９Ｋ、およびＶ７０８Ｉ＋Ｇ２２２Ｓからなる群から選択される、項目２に記載の変異ＡＡＶ。
４．ペプチド挿入が、ＡＡＶ２のＶＰ１の５７０〜６７１位のアミノ酸のうちのいずれかの後、または別の野生型ＡＡＶ血清型もしくはＡＡＶ変異体における対応する位置の後に挿入される、項目１に記載の変異ＡＡＶ。
５．ペプチド挿入が、ＡＡＶ２のＶＰ１におけるアミノ酸５８７の後、または別のＡＡＶ血清型の対応する位置の後に挿入される、項目４に記載の変異ＡＡＶ。
６．（ａ）項目１〜５のいずれか１つに記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質、および異種核酸を含む、感染性組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオン。
７．異種核酸が、ＲＮＡ干渉剤またはポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、項目６に記載のｒＡＡＶ。
８．異種核酸を標的細胞に送達する方法であって、標的細胞を項目７に記載のｒＡＡＶビリオンと接触させることを含む、方法。
９．標的細胞が、心筋細胞または骨格筋細胞である、項目８に記載の方法。
１０．標的細胞が、インビトロである、項目８に記載の方法。
１１．標的細胞が、インビボである、項目８に記載の方法。
１２．変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、キャプシドタンパク質のＧＨループにペプチド挿入を含み、挿入が、ＡＡＶ２中、またはＡＡＶ２以外の野生型ＡＡＶ血清型もしくはＡＡＶ変異体のキャプシド部分の対応する位置にあり、ペプチド挿入が、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択される、単離された核酸。
１３．項目１２に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。
１４．ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５７０と６１１との間の位置にある２つの隣接するアミノ酸に対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対してペプチド挿入を含む変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、挿入が、アミノ酸配列Ｙ１Ｙ２Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ３を含み、Ｘ１が、ＴおよびＮから選択され、Ｘ２が、ＮおよびＫから選択され、Ｘ３が、Ｋ、Ｉ、およびＴから選択され、Ｘ４が、Ｉ、Ｑ、およびＴから選択され、Ｘ５が、Ｇ、Ｒ、およびＮから選択され、Ｘ６が、Ｖ、Ｔ、およびＫから選択され、Ｘ７が、ＴおよびＤから選択される、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
１５．ペプチド挿入が、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）からなる群から選択される、項目１４に記載の変異ＡＡＶ。
１６．ペプチド挿入が、Ｎ末端アミノ酸ＬＡおよびＣ末端アミノ酸Ａに隣接している、項目１５に記載の変異ＡＡＶ。
１７．ペプチド挿入が、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間、または別の野生型ＡＡＶ血清型もしくはＡＡＶ変異体の対応する位置にある、項目１５に記載の変異ＡＡＶ。
１８．（ａ）項目１４〜１７のいずれか１つに記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質、および異種核酸を含む、感染性組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオン。
１９．異種核酸が、ＲＮＡ干渉剤またはポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、項目１８に記載のｒＡＡＶ。
２０．異種核酸を標的細胞に送達する方法であって、標的細胞を項目１８に記載のｒＡＡＶビリオンと接触させることを含む、方法。
２１．標的細胞が、心臓細胞および／または骨格細胞である、項目２０に記載の方法。
２２．標的細胞が、インビトロまたはインビボである、項目２１に記載の方法。
２３．ｉ）配列番号１〜１０および１１からなる群より選択される野生型ＡＡＶと少なくとも９０％同一であるＡＡＶアミノ酸配列と、ｉｉ）Ｐ３６３Ｌ、Ｐ３６３Ｌ＋Ｖ７０８Ｉ、Ｐ３６３Ｌ＋Ｅ３４７Ｋ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ３３３Ｓ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ７２１Ｌ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｎ５５１Ｓ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｋ６４９Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｓ１０９Ｔ＋Ｋ５２７Ｑ、Ａ５９３Ｅ＋Ｓ１０９Ｔからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換と、を含み、１つ以上の置換が、ＡＡＶ２に対するものか、または他のＡＡＶ血清型に対する１つ以上の対応する置換である、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
２４．キャプシドタンパク質が、ペプチド挿入を含む、項目２３に記載の変異ＡＡＶ。
２５．ペプチド挿入が、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＧＮＬＴＫＧＮ（配列番号１６）、ＮＴＶＫＬＳＴ（配列番号１７）、ＳＮＴＶＫＡＩ（配列番号１８）、ＡＳＮＩＴＫＡ（配列番号１９）、ＤＮＴＶＴＲＳ（配列番号２０）、ＮＫＩＳＡＫＤ（配列番号２１）、ＮＱＤＹＴＫＴ（配列番号２２）、ＱＡＤＴＴＫＮ（配列番号２３）、ＴＮＲＴＳＰＤ（配列番号２４）、ＳＮＴＴＱＫＴ（配列番号２５）、ＡＳＤＳＴＫＡ（配列番号２６）、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２８）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２９）、ＬＡＧＮＬＴＫＧＮＡ（配列番号３０）、ＬＡＮＴＶＫＬＳＴＡ（配列番号３１）、ＬＡＳＮＴＶＫＡＩＡ（配列番号３２）、ＬＡＡＳＮＩＴＫＡＡ（配列番号３３）、ＬＡＤＮＴＶＴＲＳＡ（配列番号３４）、ＬＡＮＫＩＳＡＫＤＡ（配列番号３５）、ＬＡＮＱＤＹＴＫＴＡ（配列番号３６）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３７）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号３８）、ＬＡＱＡＤＴＴＫＮＡ（配列番号３９）、ＬＡＴＮＲＴＳＰＤＡ（配列番号４０）、ＬＡＳＮＴＴＱＫＴＡ（配列番号４１）、およびＬＡＡＳＤＳＴＫＡＡ（配列番号４２）からなる群から選択される、項目２４に記載の変異ＡＡＶ。
２６．ＡＡＶアミノ酸配列が、野生型ＡＡＶと少なくとも９５％同一である、項目２３に記載の変異ＡＡＶ。
２７．ＡＡＶアミノ酸配列が、野生型ＡＡＶと少なくとも９９％同一である、項目２３に記載の変異ＡＡＶ。
２８．キャプシドタンパク質が、祖先キャプシドタンパク質である、項目２３に記載の変異ＡＡＶ。
２９．（ａ）項目２３〜２８のいずれか１つに記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質、および異種核酸を含む、感染性組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオン。
３０．異種核酸が、ＲＮＡ干渉剤またはポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、項目２９に記載のｒＡＡＶ。
３１．異種核酸を標的細胞に送達する方法であって、標的細胞を項目２９に記載のｒＡＡＶビリオンと接触させることを含む、方法。
３２．標的細胞が、心筋細胞または骨格筋細胞である、項目３１に記載の方法。
３３．心臓細胞が、心筋細胞、心筋芽細胞、心臓線維芽細胞、および心臓前駆細胞からなる群より選択される、項目３２に記載の方法。
３４．標的細胞が、インビトロである、項目３１に記載の方法。
３５．標的細胞が、インビボである、項目３１に記載の方法。
３６．配列番号１〜１２からなる群から選択される野生型ＡＡＶまたはＡＡＶ変異体と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、（ｉｉ）Ｐ３６３Ｌ、Ｐ３６３Ｌ＋Ｖ７０８Ｉ、Ｐ３６３Ｌ＋Ｅ３４７Ｋ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ３３３Ｓ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ７２１Ｌ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｎ５５１Ｓ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｋ６４９Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ＋Ｓ１０９Ｔ＋Ｋ５２７Ｑ、Ａ５９３Ｅ＋Ｓ１０９Ｔからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換と、を含む、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
３７．項目３６に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。
３８．変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入を含み、１つ以上の点変異を任意選択により含み、ペプチド挿入が、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）およびＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２６）からなる群から選択される、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
３９．Ｖ７０８Ｉアミノ酸置換を含む、項目３８に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４０．Ｖ７０８Ｉ＋Ａ５９３Ｅ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｔ３３０Ａ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｒ５８８Ｍ、またはＶ７０８Ｉ＋Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑアミノ酸置換を含む、項目３９に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４１．Ａ３５Ｐアミノ酸置換を含む、項目３８に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４２．Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑアミノ酸置換を含む、項目３８に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４３．変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入を含み、１つ以上の点変異を任意選択により含み、ペプチド挿入が、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）およびＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２７）からなる群から選択される、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
４４．Ｖ７０８Ｉアミノ酸置換を含む、項目４３に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４５．Ｖ７０８Ｉ＋Ｓ１０９Ｔ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６９４Ｃ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｗ６０６Ｃ、またはＶ７０８Ｉ＋Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑアミノ酸置換を含む、項目４４に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４６．Ｉ６９８Ｖアミノ酸置換を含む、項目４３に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４７．Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑアミノ酸置換を含む、項目４６に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
４８．変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入を含み、１つ以上の点変異を任意選択により含み、ペプチド挿入が、ＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）、ＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ（配列番号２８）、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＳ（配列番号３６）からなる群から選択される、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
４９．Ｖ７０８Ｉアミノ酸置換を含む、項目４８に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
５０．Ｖ７０８Ｉ＋Ｎ４４９Ｋ、Ｖ７０８Ｉ＋Ｇ２２２Ｓ、またはＶ７０８Ｉ＋Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑアミノ酸置換を含む、項目４９に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
５１．Ｎ３１２Ｋ＋Ｎ４４９Ｄ＋Ｎ５５１Ｓ＋Ｉ６９８Ｖ＋Ｌ７３５Ｑアミノ酸置換を含む、項目４８に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
５２．配列番号６２の配列またはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、ＡＡＶ５キャプシドに対して以下のアミノ酸置換：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔを含む、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
５３．ＡＡ５キャプシドに対してＹ５８５ＳまたはＶ４４７Ｆアミノ酸置換をさらに含む、項目５２に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
５４．配列番号６３の配列またはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、ＡＡＶ５キャプシドに対して以下のアミノ酸置換：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４２７Ｄ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔを含む、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
【実施例】
【０１６６】
以下の実施例は、本発明を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために提示され、発明者が発明と見なすものの範囲を制限することを意図せず、また以下の実験が行われた全てまたは唯一の実験であると示すことを意図していない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力がなされているが、いくつかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別途指示がない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。
【０１６７】
分子生物学および細胞生化学における一般的な方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  １９９９）；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｂｏｌｌａｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  １９９６）；Ｎｏｎｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９９）；Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ（Ｋａｐｌｉｆｔ＆Ｌｏｅｗｙ  ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５）；Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ（Ｉ．Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９７）；および  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄｏｙｌｅ＆Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  １９９８）などの標準的な教科書に見出すことができ、それらの開示は参照により本明細書に組み入れられる。本開示において言及される遺伝子操作のための試薬、クローニングベクター、およびキットは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、およびＣｌｏｎＴｅｃｈなどの商用供給業者から入手可能である。
【０１６８】
実施例１
静脈内注射および組織採取。各選択ラウンドについて、３〜１０歳齢で体重少なくとも３ｋｇの１匹の雄カニクイザル（ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に、伏在静脈を介した硝子体内注射によって静脈内により投与した。動物に麻酔をかけ、いくつか場合では、３７℃で３０分間、ヒトＩＶＩＧとプレインキュベートした、１〜５ｍＬのライブラリー（最初のラウンドでは、ライブラリーは、図１Ａに記載の全ての変異誘発技術を使用して生成されたバリアントで構成され、その後の各選択ラウンドでは、変異体を前のラウンドから単離した）を投与した。
【０１６９】
安楽死は、訓練された獣医スタッフにより、１４日目±３日または２１日目±３日に１００ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウムの静脈内注射を用いて行った。大腿四頭筋から心筋組織および／または骨格筋組織を取り出し、組織からＤＮＡを分離した。いくつかの場合では、心臓組織をいくつかの領域：心房、心室中隔、左乳頭筋、右乳頭筋、左心室、および右心室に分割した。
【０１７０】
定向進化。定向進化プロセスを図１Ａ〜１Ｅに示す。端的には、ＤＮＡ突然変異技法とｃａｐ遺伝子との２０以上の独自の組み合わせを含むウイルスキャプシドライブラリーを創出する（図１Ａ）。次に、各粒子が、キャプシドをコードするｃａｐ遺伝子を取り囲む突然変異キャプシドから構成され、精製されるように、ウイルスをパッケージングする（図１Ｂ）。キャプシドライブラリーをインビボの選択圧下に置く。目的の組織または細胞物質を採取し、その標的の感染に成功したＡＡＶ変異体の単離し、成功したウイルスを回収する。成功したクローンを反復選択により濃縮する（ステージＩ−図１Ｄ）。次いで、選択されたｃａｐ遺伝子に独自の再多様化を行い、さらなる選択ステップによって濃縮して、反復的にウイルスの適合度を反復的に増加させる（ステージ２−図１Ｄ）。ベクター選択ステージ１および２中に同定された変異体は、霊長類筋肉細胞を形質導入する能力を示す（図１Ｅ）。
【０１７１】
ＡＡＶキャプシドゲノムの回復の成功。各選択ラウンドから回収されたキャプシドを用いて、注入されたライブラリーをパッケージングして、その後の選択ラウンドを開始した。組織からのキャプシド遺伝子の回収は、目的の組織へのライブラリーベクターの内在化の成功を表す。代表的な選択ラウンドの心筋および骨格筋組織からのウイルスゲノムの回収を図２に示す。ボックス内のバンドは、ウイルスゲノムの回収の成功を表す。
【０１７２】
シークエンシング分析。心臓組織または骨格筋組織への静脈内送達の選択圧を含む選択ラウンド３〜４および中和抗体存在下での心臓組織への静脈内送達の選択圧を含む選択ラウンド１〜２中に、ライブラリー内の個々のクローンについてシークエンシングを行い、集団内の変異体の発生頻度を決定した。変異体を、シークエンシングデータ内のモチーフの存在について評価した。変異体を、複数の配列で生じた統一的変異（例えば、キャプシド内の一貫した位置における特定の点突然変異または特異的なペプチド挿入配列）の存在に基づいてモチーフに分類した。２つ以上の選択ラウンドにおけるシークエンシングした集団の少なくとも５％、または１つ以上の選択ラウンドにおけるシークエンシングした集団の少なくとも１０％を表すモチーフを、図３Ａ（心臓組織への静脈内送達の選択圧についてのラウンド４シークエンシング分析）、図３Ｂ（中和抗体存在下での心臓組織への静脈内送達の選択圧についてのラウンド２シークエンシング分析）、および図３Ｃ（骨格筋組織への静脈内送達の選択圧についてのラウンド３シークエンシング分析）に表す。
【０１７３】
心筋細胞および／または骨格筋細胞の増加した感染性をもたらすと同定されたいくつかの代表的なクローンを以下の表１に列挙する（各クローンは、同定された置換および／またはペプチド挿入を含み、他の点では配列番号２と同一であり；選択ラウンド、配列番号、および発生頻度（括弧内）を各クローンについて列挙する）。
表１．心筋細胞および／または骨格筋細胞の増加した感染性をもたらすＡＡＶ  ＶＰ１キャプシドタンパク質に対するアミノ酸配列修飾。列２に列挙される置換は、野生型ＡＡＶ２のアミノ酸配列、すなわち、挿入されたペプチドの非存在下のアミノ酸配列に基づく。列５の「心臓＋ＮＡｂ」は、アミノ酸配列の修飾が、心筋細胞の増加した感染性に加えて、抗ＡＡＶ抗体による中和に対する抵抗性の増加をもたらすことを示している。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【０１７４】
以下のキメラはまた、心筋細胞の増加した感染性および抗ＡＡＶ抗体による中和に対する抵抗性の増加をもたらすキャプシドとして同定された：
【０１７５】
（ｉ）ＡＡＶ６のアミノ酸１〜１２９および（ｉｉ）ＡＡＶ５のアミノ酸１３０〜７２５を有し、ＡＡＶ５に対して以下のアミノ酸置換を有するキメラ：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔ（配列番号６２の配列）。
【０１７６】
（ｉ）ＡＡＶ２のアミノ酸１〜６１、（ｉｉ）ＡＡＶ６のアミノ酸６２〜１２９、および（ｉｉｉ）ＡＡＶ５のアミノ酸１３０〜７２５を有し、ＡＡＶ５に対して以下のアミノ酸置換を有するキメラ：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔ（配列番号６３の配列）。
【０１７７】
（ｉ）ＡＡＶ６のアミノ酸１〜１２９および（ｉｉ）ＡＡＶ５のアミノ酸１３０〜７２５を有し、ＡＡＶ５に対して以下のアミノ酸置換を有するキメラ：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔ＋Ｙ５８５Ｓ。
【０１７８】
（ｉ）ＡＡＶ６のアミノ酸１〜１２９および（ｉｉ）ＡＡＶ５のアミノ酸１３０〜７２５を有し、ＡＡＶ５に対して以下のアミノ酸置換を有するキメラ：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４４７Ｆ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔ。
【０１７９】
本明細書に開示されるＡＡＶ変異ビリオンは、ＡＡＶウイルスベクター操作の技術分野の当業者には容易に明らかである、妥当な合理的設計パラメータ、特徴、修正、利点、および変形を組み込み得る。
【０１８０】
実施例２
心筋細胞についての新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ（配列番号４３）、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ（配列番号４８）、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉ（配列番号４６）を含む組換えＡＡＶビリオンの細胞指向性を、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）から生成された心筋細胞を使用してインビトロで評価した。
【０１８１】
ＡＡＶ１キャプシド、ＡＡＶ２キャプシド、ＡＡＶ９キャプシド、新規変異キャプシドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、新規変異キャプシドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、新規変異キャプシドＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉのいずれかと、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結された緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）導入遺伝子を含むゲノムと、を含む組換えＡＡＶビリオン（それぞれ、ＡＡＶ１．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ２．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ）を標準的な方法を用いて作製した。心筋細胞は、小分子を使用したＷｎｔシグナル伝達の調節により、ヒト胚性幹細胞株ＥＳＩ−０１７から生成された。心臓中胚葉誘導の１４日後、グルコース欠乏により心筋細胞の培養物がさらに濃縮された。分化の約２４日後、大部分の細胞は、心筋細胞マーカーである心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）、および心室特異的マーカーであるＭＬＣ−２Ｖを発現した。生成された心筋細胞がベクターの特徴付けの前に成熟状態に到達したことを確認するために、ギャップ結合タンパク質コネキシン４３の発現、膜電位変動、カルシウム処理、および収縮機能について、生成された心筋細胞を評価した。
【０１８２】
ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、およびＡＡＶ９に対して、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉ変異体は、免疫蛍光法（図６Ａ）、フローサイトメトリー（図６Ｂ）、およびウエスタンブロット分析（図６Ｃ〜Ｄ）によって決定した際、感染の６日後のヒト心筋培養において導入遺伝子発現の有意に高い形質導入効率をもたらした。さらに、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、およびＡＡＶ９に対して、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＬＡＴＮＫＩＧＶＴＡ＋Ｖ７０８Ｉは、免疫蛍光法によって決定した際、ヒト心筋細胞培養において遺伝子発現のより早い開始をもたらした（図６Ｅ）。心筋および骨格筋細胞指向性を示すＡＡＶ８およびＡＡＶ９に対して、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８ＩおよびＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉでは、投与されたウイルスゲノムあたりの感染単位の数は数桁大きかった（図１０Ａ）。この研究は、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、およびＴＮＫＩＧＶＴ（配列番号１５）を含むＡＡＶキャプシド変異体の、心臓細胞に遺伝子を送達する優れた能力を示している。
【０１８３】
実施例３
心筋細胞についての新規ＡＡＶ変異ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラを含む組換えＡＡＶビリオンの細胞指向性を、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）から生成された心筋細胞を使用してインビボで評価した。
【０１８４】
ＡＡＶ１キャプシド、ＡＡＶ８キャプシド、ＡＡＶ９キャプシド、または新規変異キャプシドＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ（配列番号ＮＯ：６２）と、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結された緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）導入遺伝子を含むゲノムと、を含む組換えＡＡＶビリオン（それぞれ、ＡＡＶ１．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ）を標準的な方法を用いて作製した。心筋細胞は、小分子を使用したＷｎｔシグナル伝達の調節により、ヒト胚性幹細胞株ＥＳＩ−０１７から生成された。心臓中胚葉誘導の１４日後、グルコース欠乏により心筋細胞の培養物がさらに濃縮された。分化の約２４日後、大部分の細胞は、心筋細胞マーカーである心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）、および心室特異的マーカーであるＭＬＣ−２Ｖを発現した。生成された心筋細胞がベクターの特徴付けの前に成熟状態に到達したことを確認するために、ギャップ結合タンパク質コネキシン４３の発現、膜電位変動、カルシウム処理、および収縮機能について、生成された心筋細胞を評価した。
【０１８５】
ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、およびＡＡＶ９に対して、ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラは、免疫蛍光法（図７Ａ）、フローサイトメトリー（図７Ｂ）、およびウエスタンブロット分析（図７Ｃ〜Ｄ）によって決定した際、感染の６日後のヒト心筋培養物において導入遺伝子発現の有意に高い形質導入効率をもたらした。さらに、ＡＡＶ８に対して、ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラは、免疫蛍光法によって決定した際、ヒト心筋細胞培養において遺伝子発現のより早い開始をもたらした（図７Ｅ）。ＡＡＶ８およびＡＡＶ９に対して、ＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラでは、投与されたウイルスゲノムあたりの感染単位の数は数桁大きかった（図１０Ａ）。この研究は、配列番号６２を含むＡＡＶキャプシド変異体の、心臓細胞に遺伝子を送達する優れた能力を示している。
【０１８６】
実施例４
骨格筋線維についての新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラを含む組換えＡＡＶビリオンの細胞指向性を、初代ヒト筋芽細胞から生成された骨格筋線維を使用してインビボで評価した。
【０１８７】
ＡＡＶ８キャプシド、ＡＡＶ９キャプシド、新規変異キャプシドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、新規変異キャプシドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、または新規変異キャプシドＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラのいずれかと、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結された緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）導入遺伝子を含むゲノムと、を含む組換えＡＡＶビリオン（それぞれ、ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、およびＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ．ＣＡＧ．ＧＦＰ）を標準的な方法を用いて作製した。骨格筋線維は、健康な５１歳の男性（Ｃｏｏｋ  Ｍｙｏｓｉｔｅｓ）から得た初代ヒト骨格筋芽細胞から生成された。筋芽細胞を３０日間分化させて、成熟した多核骨格筋線維を形成させた。生成された骨格筋線維をミオシン重鎖（ＭＨＣ）およびジストロフィンの発現について評価し、生成された骨格筋線維の大部分がベクターの特徴付けの前に成熟状態に到達したことを確認した。
【０１８８】
ＡＡＶ８およびＡＡＶ９に対して、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラは、免疫蛍光法（図８Ａ）およびフローサイトメトリー（図８Ｂ）によって決定した際、感染の７日後のヒト骨格筋繊維において導入遺伝子発現の有意に高い形質導入効率をもたらした。さらに、ＡＡＶ８に対して、ＡＡＶ９、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉは、免疫蛍光法によって決定した際、ヒト骨格筋繊維培養において遺伝子発現のより早い開始をもたらした（図８Ｃ）。ＡＡＶ８およびＡＡＶ９に対して、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＡＡＶ６／５キメラでは、投与されたウイルスゲノムあたりの感染単位の数は数桁大きかった（図１０Ｂ）。この研究は、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、および配列番号６２を含む変異体の、骨格筋繊維に遺伝子を送達する優れた能力を示している。
【０１８９】
実施例５
骨格筋前駆細胞についての新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラを含む組換えＡＡＶビリオンの細胞向性を、線維芽細胞由来ヒト誘導多能性幹細胞（ＦＢ−ｉＰＳＣ）またはヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）から生成した骨格筋前駆細胞を使用してインビトロで評価した。
【０１９０】
ＡＡＶ９キャプシド、新規変異キャプシドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、新規変異キャプシドＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、または新規変異キャプシドＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラのいずれかと、  ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結された緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）導入遺伝子を含むゲノムと、を含む組換えＡＡＶビリオン（それぞれ、ＡＡＶ８．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＡＡＶ９．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＥＧＦＰ、およびＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラ．ＣＡＧ．ＧＦＰ）を標準的な方法を用いて作製した。骨格筋前駆体を、わずかな修正を加えたＳｈｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１６に記載された分化戦略に従って、ヒト胚性幹細胞株ＥＳＩ−０１７（ＥＳＩ−ＢＩＯ）から生成した。約４０日間の分化後、骨格筋前駆体への系統の制限は、ベクターの特徴付けに培養物を使用する前に、ＰＡＸ７およびＭｙｏＤの大部分の細胞の発現によって確認した。
【０１９１】
ＡＡＶ９に対して、ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、ＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ、およびＡＡＶ６／ＡＡＶ５キメラは、免疫蛍光法（図９Ａ）およびフローサイトメトリー（図９Ｂ）によって決定した際、感染の６日後のヒト骨格筋前駆体において導入遺伝子発現の有意に高い形質導入効率をもたらした。この研究は、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）、ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）、および配列番号６２を含むＡＡＶキャプシド変異体の、骨格筋前駆体に遺伝子を送達する優れた能力を示している。  
【０１９２】
【０１９３】
実施例６
定向進化を用いて、ヒトの心筋および骨格筋への遺伝子送達の他の方法よりも有意な利点を有する投与経路である静脈内（ＩＶ）投与後の心筋細胞および骨格筋細胞への優れた遺伝子送達を有する新規アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）変異体を発見した（実施例１）。Ｖ７０８Ｉ置換と、アミノ酸５８７と５８８との間に挿入されたペプチドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）と、を含む新規ＡＡＶ変異体（ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ；配列番号４３）を含む組換えＡＡＶビリオンの筋肉内投与後の細胞指向性を、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むＡＡＶキャプシド変異体の筋肉細胞を形質導入する能力の代表例として、マウスにおいてインビボで評価した。
【０１９４】
新規変異キャプシドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉと、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されたルシフェラーゼ導入遺伝子を含むゲノムと、を含む組換えＡＡＶビリオン（ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ルシフェラーゼ）を標準的な方法を使用して作製した。Ｂ６  Ａｌｂｉｎｏ（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスに、２×１０１２ｖｇを尾静脈の静脈内注射により注射し、生前ではルシフェラーゼイメージングにより、および死後では組織ルシフェラーゼ活性により形質導入を評価した。投与後１４日目（左）および２８日目（右）の生前のルシフェラーゼイメージングでは、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがマウス細胞をインビボで形質導入できることを実証している（図１１Ａ）。投与後５６日目の心臓、横隔膜、および大腿四頭筋におけるルシフェラーゼ活性は、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがマウスの心筋および骨格筋をインビボで形質導入できることを実証している（図１１Ｂ）。
【０１９５】
この研究は、いくつかの臨床的に許容される投与経路うちの１つに続く、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含む変異体による遺伝子送達を示している。類似の効力は、このペプチド挿入モチーフを含む他の変異体で達成可能である。同様に、同じ定向進化アプローチを用いて同定された本明細書に開示される他の変異体でも類似の効力が達成可能である。
【０１９６】
実施例７
定向進化を用いて、ヒトの心筋および骨格筋への遺伝子送達の他の方法よりも有意な利点を有する投与経路である静脈内（ＩＶ）投与後の心筋細胞および骨格筋細胞への優れた遺伝子送達を有する新規アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）変異体を発見した（実施例１）。Ｖ７０８Ｉ置換と、アミノ酸５８７と５８８との間に挿入されたペプチドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２７）と、を含む新規ＡＡＶ変異体（ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ；配列番号４３）を含む組換えＡＡＶビリオンの筋肉内投与後の細胞指向性を、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含むＡＡＶキャプシド変異体の筋肉細胞を形質導入する能力の代表例として、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）においてインビボで評価した。
【０１９７】
新規変異キャプシドＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉと、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結された緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）導入遺伝子を含むゲノムと、を含む組換えＡＡＶビリオン（ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉ．ＣＡＧ．ＧＦＰ）を、標準的な方法を使用して作製した。カニクイザルに、１×１０１１ｖｇを外側広筋の部位に３投与量のベクターで筋肉内注射により注射し、骨格筋細胞の形質導入を死後に免疫蛍光法イメージングにより評価した。２倍、４倍、および２０倍の倍率での近位生検部位の断面図のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびに抗ＧＦＰ抗体染色の代表的なイメージは、新規ＡＡＶ変異体ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがインボビで霊長類骨格筋細胞を形質導入できることを示している（図１２Ａ）。２倍、４倍、および２０倍の倍率での近位生検部位の縦断面図のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびに抗ＧＦＰ抗体染色の代表的なイメージは、新規ＡＡＶ変異ＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ＋Ｖ７０８Ｉキャプシドがインボビで霊長類骨格筋細胞を形質導入できることを示している（図１２Ｂ）。
【０１９８】
この研究は、いくつかの臨床的に許容される投与経路うちの１つに続く、ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）を含む変異体による遺伝子送達を示している。類似の効力は、このペプチド挿入モチーフを含む他の変異体で達成可能である。同様に、同じ定向進化アプローチを用いて同定された本明細書に開示される他の変異体でも類似の効力が達成可能である。
【０１９９】
上記は、本発明の原理を例解するものでしかない。当業者であれば、本明細書に明示的に記載または図示されていないが、本発明の原理を具現化し、その趣旨および範囲内に含まれる様々な構成を考案できることが理解されよう。さらに、本明細書に記載されている全ての例および条件付き言語は、主として、本発明の原理および発明者らが当該技術を促進することに寄与する概念を理解する上で読者を助けることを意図しているものであり、そのような具体的に記載される例および条件に限定されないことが企図されるものである。
【０２００】
さらに、本発明の原理、態様、および実施形態、ならびにそれらの具体例を記載する本明細書における全ての記述は、その構造的等価物および機能的等価物の両方を包含するように意図されている。さらに、そのような等価物は、現在知られている等価物および今後開発される等価物の両方、すなわち、構造にかかわらず同じ機能を果たす任意の開発された要素を含むことが意図される。したがって、本発明の範囲が、本明細書に図示および記載される例示的な実施形態に限定されることは意図されない。むしろ、本発明の範囲および趣旨は、添付の特許請求の範囲によって具体化される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
（ｉ）対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対してペプチド挿入を含むＡＡＶキャプシドタンパク質であって、前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）またはＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）を含み、挿入部位が、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５７０と６１１との間の位置または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質における対応する位置にある２つの隣接するアミノ酸の間に位置する、ＡＡＶキャプシドタンパク質、ならびに
（ｉｉ）（ａ）配列番号６２に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または１００％同一のアミノ酸配列、および（ｂ）ＡＡＶ５キャプシド（配列番号６）に対する以下のアミノ酸置換：Ｖ２２９Ｉ＋Ａ４９０Ｔ＋Ａ５８１Ｔを含む、ＡＡＶキャプシドタンパク質、
からなる群から選択される変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、
前記変異ＡＡＶキャプシドタンパク質が、野生型ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、増加した筋肉細胞の感染性を感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオンにもたらす、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質。
（項目２）
ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５７０と６１１との間の位置にある２つの隣接するアミノ酸に対応する、親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対するペプチド挿入を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質であって、前記挿入が、アミノ酸配列Ｙ１Ｙ２Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ３を含み、Ｙ１〜Ｙ３の各々が、存在する場合には、独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏから選択され、Ｘ１が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、およびＡｓｐから選択され、Ｘ２が、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、およびＧｌｎから選択され、Ｘ３が、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、およびＡｒｇから選択され、Ｘ４がＧｌｎ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、およびＴｙｒから選択され、Ｘ５が、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、およびＧｌｎから選択され、Ｘ６が、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｒｇ、およびＰｒｏから選択され、Ｘ７が、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、およびＳｅｒから選択される、変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目３）
Ｘ１が、ＴｈｒおよびＡｓｎから選択され、Ｘ２が、ＡｓｎおよびＬｙｓから選択され、Ｘ３が、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、およびＴｈｒから選択され、Ｘ４が、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、およびＴｈｒから選択され、Ｘ５が、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、およびＡｓｎから選択され、Ｘ６が、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、およびＬｙｓから選択され、Ｘ７が、ＴｈｒおよびＡｓｐから選択される、項目２に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目４）
前記キャプシドタンパク質が、ペプチド挿入を含み、挿入部位が、ＡＡＶ２のＶＰ１のアミノ酸５８７と５８８との間または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置に対応するアミノ酸の間に位置する、項目１〜３のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目５）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ペプチド挿入を含み、前記プチド挿入が、アミノ酸配列ＮＫＩＱＲＴＤ（配列番号１３）またはＬＡＮＫＩＱＲＴＤＡ（配列番号２６）を含む、項目１〜４のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目６）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置に対するＶ７０８Ｉアミノ酸置換を含む、項目５に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目７）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質の対応する位置に対するＳ１０９Ｔアミノ酸置換、Ｒ５８８Ｍアミノ酸置換、およびＡ５９３アミノ酸置換のうちの１つ以上をさらに含む、項目６に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目８）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置に対するＡ３５Ｐアミノ酸置換をさらに含む、項目６に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目９）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４３に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、項目６に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１０）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ペプチド挿入を含み、前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＮＫＴＴＮＫＤ（配列番号１４）またはＬＡＮＫＴＴＮＫＤＡ（配列番号２７）を含む、項目１〜４のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１１）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置に対するＶ７０８Ｉアミノ酸置換を含む、項目１０に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１２）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質の対応する位置に対するＳ１０９Ｔアミノ酸置換、Ｗ６０６Ｃアミノ酸置換、およびＷ６９４Ｃアミノ酸置換のうちの１つ以上をさらに含む、項目１１に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１３）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置に対するＩ６９８Ｖアミノ酸置換をさらに含む、項目１１に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１４）
前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列の全長に対して、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または１００％同一のアミノ酸配列を含む、項目１１に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１５）
前記キャプシドタンパク質が、野生型ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して、少なくとも２倍または少なくとも５倍増加した筋肉細胞の感染性を感染性ｒＡＡＶビリオンにもたらす、項目１〜１４のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシド。
（項目１６）
前記キャプシドタンパク質が、前記対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶと比較して、中和抗体による中和に対して増加した耐性、好ましくは少なくとも２倍または少なくとも５倍増加した耐性を感染性ｒＡＡＶビリオンにさらにもたらす、項目１〜１５のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質。
（項目１７）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
（項目１８）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含む、感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオン。
（項目１９）
異種核酸、好ましくは、遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸をさらに含む、項目１８に記載のｒＡＡＶビリオン。
（項目２０）
個体の筋肉細胞に遺伝子産物を送達する方法であって、項目１９に記載のｒＡＡＶビリオンを前記個体に投与することを含み、好ましくは前記ｒＡＡＶビリオンが静脈内投与されるか、または筋肉内注射により投与される、方法。
（項目２１）
前記筋肉細胞が、心筋細胞および／または骨格筋細胞である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記遺伝子産物が、タンパク質、低分子干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、小ヘアピンＲＮＡ、または低分子干渉ＲＮＡである、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
前記遺伝子産物が、αガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ）、フラタキシン（ＦＸＮ）、ジストロフィン（ＤＭＤ）またはその機能的断片、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）、およびグリコーゲンホスホリラーゼ、筋（ＰＹＧＭ）から選択されるタンパク質であり、好ましくは、前記タンパク質が、配列番号６４および６６〜６９のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号６４および６６〜６９のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、項目２０に記載の方法。
（項目２４）
前記個体が、ファブリー病、フリードライヒ運動失調症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、ポンペ病、ミオホスホリラーゼ欠損症、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、および筋強直性ジストロフィーから選択される疾患を有する、項目２０に記載の方法。
（項目２５）
項目１９に記載のｒＡＡＶビリオンおよび薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
（項目２６）
前記変異体またはキメラキャプシドタンパク質が、野生型ＡＡＶ９キャプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる心筋細胞または骨格筋細胞の感染性と比較して、少なくとも５０倍増加した心筋細胞の感染性および／または少なくとも２倍増加した骨格筋細胞の感染性を感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオンにもたらす、項目１５に記載の変異ＡＡＶキャプシド。
（項目２７）
配列番号４３に示されるアミノ酸配列の全長と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含み、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されたαガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ）をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオン。
（項目２８）
配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含む、項目２７に記載の感染性ｒＡＡＶ。
（項目２９）
哺乳動物にＧＬＡをコードするヌクレオチド配列を送達する方法であって、項目２７または２８に記載のｒＡＡＶを、前記哺乳動物で治療効果をもたらすレベルでＧＬＡの発現をもたらす条件下で前記哺乳動物に投与することを含む、方法。
（項目３０）
前記ｒＡＡＶが、前記哺乳動物に静脈内投与され、および／または筋肉内注射により投与される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記哺乳動物が、ファブリー病を有するヒトである、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６７に示されるアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一の配列を含むかまたはそれからなるＧＬＡポリペプチドをコードする、項目２７〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
配列番号４３に示されるアミノ酸配列の全長と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含み、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されたグリコーゲンホスホリラーゼ、筋（ＰＹＧＭ）をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、感染性組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ビリオン。
（項目３４）
配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含む変異ＡＡＶキャプシドタンパク質を含む、項目３３に記載の感染性ｒＡＡＶ。
（項目３５）
ＰＹＧＭをコードするヌクレオチド配列を哺乳動物に送達する方法であって、項目３３または３４に記載のｒＡＡＶを、前記哺乳動物で治療効果をもたらすレベルでＰＹＧＭの発現をもたらす条件下で前記哺乳動物に投与することを含む、方法。
（項目３６）
前記ｒＡＡＶが、前記哺乳動物に静脈内投与され、および／または筋肉内注射により投与される、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記哺乳動物が、ミオホスホリラーゼ欠損症（マッカードル病）を有するヒトである、項目３５または３６に記載の方法。
（項目３８）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６６に示されるアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一の配列を含むかまたはそれからなるＰＹＧＭポリペプチドをコードする、項目３３〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
項目２７、２８、３３、および３４のいずれか１項に記載のｒＡＡＶビリオンおよび薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ−３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５−１】
0006825167.tif 000012
【図５−２】
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【図５−３】
0006825167.tif 000014
【図５−４】
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【図５−５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
0006825167.tif 000018
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【配列表】
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