【手続補正書】
【提出日】平成30年11月5日(2018.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞と、組換えウイルスベクターを含有するウイルス粒子とを含むインプット組成物を遠心チャンバーの内部キャビティ内でインキュベーションする段階を含む形質導入方法であって；
該遠心チャンバーが、端壁、該端壁から延びる実質的に剛性の側壁、および1つまたは複数の開口部を含み、該側壁の少なくとも一部が該内部キャビティを取り囲み、かつ該1つまたは複数の開口部の少なくとも1つが、該内部キャビティ内への液体の取り入れおよび該キャビティからの液体の圧出を可能にすることができ；
該遠心チャンバーが、回転軸の周りを回転可能であり、かつ該インキュベーションの少なくとも一部の間、該回転軸の周りを回転中であり；かつ
該方法が、該ウイルスベクターを形質導入された複数の該細胞を含むアウトプット組成物を生成する；
前記形質導入方法。
【請求項２】
前記回転が、
前記キャビティの前記側壁の内部表面および/または前記細胞の表面層における、
600gもしくは約600g、800gもしくは約800g、1000gもしくは約1000g、1100gもしくは約1100g、1600gもしくは約1600g、2000gもしくは約2000g、2100gもしくは約2100g、2200gもしくは約2200g、2500gもしくは約2500g、または3000gもしくは約3000gの相対遠心力での回転；あるいは
少なくとも、600gもしくは約600g、800gもしくは約800g、1000gもしくは約1000g、1100gもしくは約1100g、1600gもしくは約1600g、2000gもしくは約2000g、2100gもしくは約2100g、2200gもしくは約2200g、2500gもしくは約2500g、または3000gもしくは約3000gの相対遠心力での回転；
を含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記チャンバーが回転中である、前記インキュベーションの前記少なくとも一部が、
約10分間もしくは10分間を上回る、約30分間もしくは30分間を上回る、または約60分間もしくは60分間を上回る；あるいは
5もしくは約5分間〜60もしくは約60分間である；
期間である、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
前記遠心チャンバーが可動部材をさらに含み、かつ前記内部キャビティが、前記端壁、前記実質的に剛性の側壁、および該可動部材によって画定される容積可変のキャビティであり、該可動部材が、該キャビティの内部容積を変動させるように該チャンバー内を移動することができる、請求項1〜3のいずれか一項記載の形質導入方法。
【請求項５】
前記インキュベーションの前または間に、前記可動部材の移動を実施し、それによって、前記内部キャビティの内部容積が増加する段階をさらに含み、任意で、該可動部材の移動が前記チャンバ―内で軸方向である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
前記可動部材がピストンであり；かつ/または
前記可動部材が、前記キャビティの内部容積を変動させるように前記チャンバー内を軸方向に移動することができる；
請求項4または5記載の方法。
【請求項７】
前記インキュベーション中に前記キャビティ内に存在する前記インプット組成物の平均液体体積が、該インキュベーション中の該キャビティの内部表面積1平方インチあたり多くても約5ミリリットル（mL）であるか；
前記インキュベーション中の任意の一時点における前記キャビティ内に存在する前記インプット組成物の最大液体体積が、該キャビティの最大内部表面積1平方インチあたり多くても約5mLであるか；
前記インキュベーション中の任意の一時点における前記キャビティ内に存在する前記インプット組成物の最大液体体積もしくは該インキュベーションの経過にわたる平均体積が、前記側壁の内部表面および/または前記細胞の表面層における1000gもしくは約1000gまたは2000gもしくは約2000gの力での前記チャンバーの回転中に該キャビティの内部表面上に形成される該細胞の単層の体積の、多くても、2倍もしくは約2倍であるか；あるいは
前記インプット組成物の液体体積が、多くても20mL、多くても40mL、多くても100mL、もしくは多くても200mLである；
請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記インプット組成物中の前記細胞の数が、前記側壁の内部表面および/または該細胞の表面層における1000gもしくは約1000gまたは2000gもしくは約2000gの力での前記遠心チャンバーの回転中に前記キャビティの表面上で単層を形成するのに十分な該細胞の数またはそれに近い数であり；かつ/あるいは
前記インプット組成物中の前記細胞の数が、前記側壁の内部表面および/または該細胞の表面層における1000gもしくは約1000gまたは2000gもしくは約2000gの力での前記遠心チャンバーの回転中に前記キャビティの表面上で単層を形成するのに十分な該細胞の数の多くても1.5倍または2倍である；かつ/あるいは
前記キャビティ内の前記インプット組成物が、少なくとも1×106個もしくは少なくとも約1×106個の前記細胞、少なくとも5×106個もしくは少なくとも約5×106個の前記細胞、少なくとも1×107個もしくは少なくとも約1×107個の前記細胞、または少なくとも1×108個もしくは少なくとも約1×108個の前記細胞を含む；
請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
前記インプット組成物が、前記細胞1個あたり、少なくとも1感染単位（IU）もしくは約1IUのウイルス粒子を含む、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
前記チャンバー内での前記インキュベーションの少なくとも一部の間または該チャンバーの前記回転中に、前記インプット組成物の液体体積が、該チャンバーの前記内部キャビティの容積の一部のみを占有し、該少なくとも一部の間または該回転中の該キャビティの容積が気体をさらに含み、該気体が、該インキュベーションの前または間に前記1つまたは複数の開口部の少なくとも1つを介して該キャビティ内に取り入れられる、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記遠心チャンバーが可動部材を含み、該遠心チャンバー内への気体の取り入れによって、該チャンバーの前記内部キャビティの容積を増加させるように該可動部材の移動がもたらされ、それによって、該遠心チャンバーの回転中に該キャビティ内に存在する前記インプット組成物の、該キャビティの内部表面積1平方インチあたりの総液体体積が、該チャンバー内に気体が存在しない場合に比べて減少する、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
前記遠心チャンバーが可動部材を含み、前記方法が、前記インキュベーションの前または間に、該可動部材の移動を実施し、それによって、前記内部キャビティの内部容積を増加させる段階、および前記内部キャビティ内への気体の取り入れを実施する段階をさらに含む、請求項10記載の方法。
【請求項１３】
形質導入方法であって、
a）少なくとも1×109μm2もしくは少なくとも約1×109μm2、または少なくとも1×1010μm2もしくは少なくとも約1×1010μm2の内部表面積を有する遠心チャンバーの内部キャビティに、
i）細胞と、組換えウイルスベクターを含むウイルス粒子とを含む、インプット組成物であって、
該インプット組成物中の細胞の数が少なくとも1×107個であり、かつ
該細胞1個あたり少なくとも1感染単位（IU）もしくは約1IUで該ウイルス粒子が該インプット組成物中に存在し、かつ
該インプット組成物が、該遠心チャンバーの該内部キャビティの最大容積より小さい液体体積を含む、前記インプット組成物；および
ii）最大で、該遠心チャンバーの該内部キャビティの最大容積の残りまでの体積の気体；
を供給する段階、ならびに
b）該インプット組成物をインキュベーションする段階であって、該インキュベーションの少なくとも一部が、該遠心チャンバーを回転させながら、該遠心チャンバーの該内部キャビティ内で実施される、段階
を含み、
該方法が、該ウイルスベクターを形質導入された複数の該細胞を含むアウトプット組成物を生成する、前記形質導入方法。
【請求項１４】
前記インプット組成物の液体体積が、200mL以下、100mL以下、50mL以下、もしくは20mL以下であり；かつ/または
回転中の前記キャビティの内部表面積もしくは該キャビティの最大内部表面積に対する前記インプット組成物の液体体積が、多くても50％、多くても40％、多くても30％、多くても20％、もしくは多くても10％である；
請求項13記載の方法。
【請求項１５】
前記気体の体積が、最大200mL、最大180mL、最大140mL、または最大100mLである、請求項13または14記載の方法。
【請求項１６】
前記回転が、
前記キャビティの前記側壁の内部表面または前記細胞の表面層における、少なくとも、600gもしくは約600g、1000gもしくは約1000g、または1600gもしくは約1600gの相対遠心力での回転
である、請求項13〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
形質導入方法であって、
細胞と、組換えウイルスベクターを含むウイルス粒子とを含むインプット組成物をインキュベーションする段階を含み、
該インキュベーションする段階の少なくとも一部が回転条件下で行われ、それによって、該ウイルスベクターを形質導入された複数の該細胞を含むアウトプット組成物が生成され、
該インプット組成物が、約20mLもしくは20mLを上回る体積を含み、かつ/あるいは該インプット組成物が、少なくとも1×108個の細胞を含み；かつ
該回転条件が、該細胞の表面層における、約800gを上回る、約1000gを上回る、または約1500gを上回る相対遠心力を含む、
前記形質導入方法。
【請求項１８】
前記インキュベーションが遠心チャンバーのキャビティ内で行われ、かつ前記インプット組成物中の前記細胞の数が、前記回転中に該キャビティの内部表面上に単層または二層を形成するのに十分な該細胞の数またはそれに近い数である、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
前記遠心チャンバーの外でかつ/または回転なしでインキュベーションのさらなる一部が行われ、該さらなる一部が、該チャンバー内でかつ/または回転ありで行われる前記少なくとも一部の後で行われる、請求項1〜18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記インキュベーションが、最長24時間行われ；
前記組成物中の細胞が、24時間を上回る時間、30℃を上回る温度には供されず；かつ/または
該インキュベーションが、刺激剤の存在下では実施されない、任意で該刺激剤が、T細胞、CD4+ T細胞、および/もしくはCD8+ T細胞の増殖を誘導することができる作用物質である、任意で該剤がIL-2、IL-15、およびIL-7の中から選択されるサイトカインである；
請求項19記載の方法。
【請求項２１】
形質導入された細胞を含有する前記アウトプット組成物が、少なくとも1×107個もしくは少なくとも約1×107個の細胞または少なくとも5×107個もしくは少なくとも約5×107個の細胞を含み；
1細胞あたり約1IUもしくは約2IUの比率でウイルスを含むインプット組成物に対して、前記方法が、該方法によって生成されるアウトプット組成物中の細胞のうちの少なくとも10％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、もしくは少なくとも75％が前記組換えウイルスベクターを含みかつ/または該ベクター内に含まれた組換え核酸の産物を発現する、前記アウトプット組成物を産生することができる；あるいは
前記アウトプット組成物中の、前記組換えウイルスベクターを含有する前記細胞もしくは該ウイルスベクターが組み込まれている該細胞の全てにおける、該組換えウイルスベクターの平均コピー数が、多くても約10、多くても約5、多くても約2.5、もしくは多くても約1.5であるか；または前記アウトプット組成物中の前記細胞における、前記ベクターの平均コピー数が、多くても約2、多くても約1.5、もしくは多くても約1である；
請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
前記遠心チャンバーが閉鎖システムに組み込まれており、該閉鎖システムが、
該チャンバーおよび少なくとも1つのコネクタを介して前記1つまたは複数の開口部の少なくとも1つに機能的に連結された少なくとも1本の配管ラインであって、該システムの少なくとも1つの構成において、前記キャビティと該少なくとも1本の配管ラインとの間を液体および気体が移動することができる、該チャンバーおよび該少なくとも1本の配管ライン；ならびに
任意で、該少なくとも1本の配管ラインに機能的に連結された少なくとも1つの容器であって、この接続関係によって、該少なくとも1本の配管ラインを介して該少なくとも1つの容器と該1つまたは複数の開口部の少なくとも1つとの間を液体および/または気体が通過することができる、該少なくとも1つの容器
を含む、
請求項1〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも1つの容器が、それぞれが前記少なくとも1本の配管ラインおよび前記1つまたは複数の開口部を介して前記キャビティに接続された、前記ウイルスベクター粒子と前記細胞とを含む少なくとも1つのインプット容器、廃液容器、産物容器、および少なくとも1つの希釈液容器を含む、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
前記方法が、
前記インキュベーションの前および/または間に、前記キャビティ内への前記インプット組成物の取り入れを実施する段階であって、該取り入れが、前記少なくとも1つのインプット容器から前記1つまたは複数の開口部の少なくとも1つを通じて前記キャビティ内へと液体が流入する段階；かつ／あるいは
前記インキュベーションの前および/または間に、無菌条件下での前記キャビティ内への気体の取り入れを提供するかまたは実施する段階であって、該取り入れが、（a）気体を含む容器からの気体の流入、（b）微生物フィルターを介した、前記閉鎖システムの外部にある環境からの気体の流入、または（c）シリンジポートにおいて該システムに接続されたシリンジからの気体の流入によって実施される段階
をさらに含む、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
前記閉鎖システムが、
前記インキュベーション中の少なくとも一時点の前および/もしくは間に、前記キャビティ内への取り入れのために気体を含む少なくとも1つのさらなる容器；ならびに/または
前記遠心チャンバーの前記内部キャビティに気体を取り入れ得る微生物フィルター；ならびに/または
気体の取り入れを実施するためのシリンジポート
を含む、請求項22〜24のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
前記遠心チャンバーの前記内部キャビティ内への気体の取り入れを実施する段階が、該遠心チャンバーの該内部キャビティへの前記インプット組成物の取り入れを実施する段階と同時にもしくは一緒に行われる、または
前記気体の取り入れを実施する段階が、前記キャビティ内への前記インプット組成物の取り入れを実施する段階とは別個に、同時にもしくは逐次的のいずれかで行われる、
請求項24または25記載の方法。
【請求項２７】
前記気体が空気である、請求項10〜26のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
前記インキュベーションが連続的プロセスの一部であり、前記方法が、
該インキュベーションの少なくとも一部の間、前記チャンバーの回転中に前記キャビティ内への前記インプット組成物の連続的取り入れを実施する段階；および
該インキュベーションの一部の間、該チャンバーの回転中に前記1つまたは複数の開口部の少なくとも1つを通じての該キャビティからの液体の連続的圧出を実施する段階；
をさらに含む、請求項1〜27のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
前記インキュベーションが半連続的プロセスの一部であり、前記方法が、
該インキュベーションの前に、前記1つまたは複数の開口部の少なくとも1つを通じて前記キャビティ内への前記インプット組成物および任意で気体の取り入れを実施する段階；
該インキュベーションの後に、該キャビティからの液体および/または任意で気体の圧出を実施する段階；
該内部キャビティ内への、細胞と、組換えウイルスベクターを含有する前記ウイルス粒子とを含む別のインプット組成物、および任意で気体の取り入れを実施する段階；ならびに
該内部キャビティ内で該別のインプット組成物をインキュベーションする段階；
をさらに含み、
該方法が、該ウイルスベクターを形質導入された該別のインプット組成物の複数の細胞を含む別のアウトプット組成物を生成する、
請求項1〜28のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
前記インキュベーションの前および/または間に前記遠心チャンバーの回転を実施する段階；
該インキュベーションの後に前記キャビティから前記廃液容器内への液体の圧出を実施する段階；
前記1つまたは複数の開口部の少なくとも1つを介して前記少なくとも1つの希釈液容器から該キャビティ内への液体の圧出を実施し、かつ該キャビティの内容物の混合を実施する段階；ならびに
該キャビティから前記産物容器内への液体の圧出を実施する段階であって、それによって、前記ウイルスベクターを形質導入された細胞が該産物容器内へと移される、段階
をさらに含む、請求項24〜29のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
（a）前記インキュベーションの前に、遠心チャンバーの内部キャビティ内で、前記細胞を含む生物学的サンプルを洗浄する段階；ならびに/または
（b）生物学的サンプルから前記細胞を単離する段階であって、該単離する段階の少なくとも一部が、前記インキュベーションの前に遠心チャンバーの内部キャビティ内で実施される、段階；ならびに/または
（c）前記インキュベーションの前および/もしくは間に細胞を刺激する段階であって、該刺激する段階が、該細胞を刺激条件に曝露することを含み、それによって前記インプット組成物の細胞の活性化および/もしくは増殖が誘導され、該刺激する段階の少なくとも一部が遠心チャンバーの内部キャビティ内で実施される、段階；
をさらに含む、請求項1〜30のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
前記方法によって形質導入された細胞を、遠心チャンバーの内部キャビティ内で、薬学的に許容されるバッファー中で製剤化する段階をさらに含み、それによって、製剤化された組成物が産生される段階、ならびに
任意で、1つまたは複数の容器への該製剤化された組成物の圧出を実施する段階
をさらに含む、請求項1〜31のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
前記インプット組成物中の前記細胞が浮遊細胞を含み；
前記インプット組成物中の前記細胞が白血球を含み；かつ/または
前記インプット組成物中の前記細胞がT細胞もしくはNK細胞を含み、かつ
任意で、該インプット組成物中の前記細胞が、分画されていないT細胞、単離されたCD8+ T細胞、もしくは単離されたCD4+ T細胞である、
請求項1〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
前記チャンバーが前記可動部材を含み、かつ前記遠心チャンバーが、前記インキュベーション中に遠心機内に位置しかつセンサーおよび制御回路と関連付けられ、該センサーが、該可動部材の位置をモニターすることができ、該制御回路が、該センサーからの情報を受信および送信することができ、かつ該可動部材の移動、前記1つまたは複数の開口部を介した前記キャビティへのおよび該キャビティからの液体および/または気体の取り入れおよび圧出、ならびに該遠心機による該チャンバーの回転を引き起こすことができる、請求項4〜6、11、および12のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
前記組換えウイルスベクターが組換え受容体をコードし、それによって該組換え受容体が前記アウトプット組成物の細胞によって発現され、任意で、該組換え受容体が機能的非T細胞受容体（例えば、キメラ抗原受容体（CAR））などの組換え抗原受容体である、または任意で、該組換え抗原受容体がトランスジェニックT細胞受容体（TCR）である、請求項1〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
（a）混合条件下にて遠心チャンバーの内部キャビティ内で選択試薬と初代細胞とをインキュベーションする段階であって、それによって複数の該初代細胞が該選択試薬に結合する、段階；および
（b）該選択試薬への結合性に基づいて、該複数の初代細胞を該初代細胞のうちの別の1つまたは複数から分離する段階であって、それによって該選択試薬への結合性に基づいて該初代細胞を濃縮する、段階；
を含む選択のための方法であって、
該遠心チャンバーが回転軸の周りを回転可能であり、かつ該内部キャビティが、少なくとも50、少なくとも100、または少なくとも200mLの最大容積を有する、
前記選択のための方法。
【請求項３７】
刺激剤と初代細胞とを、該刺激剤が、複数の該初代細胞によって発現される分子に結合しかつ該複数の細胞が活性化または刺激される条件下で、インキュベーションする段階を含む細胞を刺激するための方法であって、
該インキュベーションの少なくとも一部が、混合条件下で遠心チャンバーの内部キャビティ内で行われ、
該遠心チャンバーが回転軸の周りを回転可能であり、かつ
該内部キャビティが、少なくとも50、少なくとも100、または少なくとも200mLの最大容積を有する、
前記細胞を刺激するための方法。
【請求項３８】
請求項1〜37のいずれか一項記載の方法によって産生された形質導入された細胞を含む、組成物であって、任意で、該細胞が初代細胞であり；かつ/またはヒト細胞であり；かつ/または白血球を含み；かつ/またはT細胞を含み；かつ/またはNK細胞を含む、組成物。
【請求項３９】
少なくとも、5×107個もしくは約5×107個、1×108個もしくは約1×108個、2×108個もしくは約2×108個、4×108個もしくは約4×108個、6×108個もしくは約6×108個、8×108個もしくは約8×108個、または1×109個もしくは約1×109個の細胞を含む、または
養子T細胞療法において使用するための治療上有効な数の細胞を含む、
請求項38に記載の組成物。
【請求項４０】
前記細胞がT細胞であり；かつ
形質導入の後、前記組成物中の前記細胞が刺激剤の存在下での細胞増殖に供されず、かつ/または該細胞が30℃を上回る温度で24時間を上回る時間インキュベーションされず、または該組成物がサイトカインを含有せず、または該組成物が、CD3もしくはTCR複合体に特異的に結合する刺激剤を含有しない、
請求項38または39記載の組成物。
【請求項４１】
ａ）少なくとも1×107個または少なくとも5×107個のT細胞を含む組成物であって、
該細胞の少なくとも複数が、組換えウイルスベクターを形質導入されているか、または組換え抗原受容体もしくは遺伝子操作された抗原受容体を発現し；
形質導入後に、該組成物中の該細胞が、刺激剤の存在下での細胞増殖に供されておらず；かつ/または
形質導入後に、該細胞が、30℃を上回る温度で24時間を上回る時間インキュベーションされていない；
組成物、あるいは
ｂ）少なくとも1×107個もしくは少なくとも5×107個の初代ヒトT細胞を含む組成物であって、該細胞の少なくとも複数が、組換えウイルスベクターを形質導入されているか、または組換え抗原受容体もしくは遺伝子操作された抗原受容体を発現し、該組成物中の該T細胞のうちの少なくとも、30％、40％、50％、60％、70％、80％、もしくは90％が、CD69および/もしくはTGF-β-IIの高発現を含む、組成物、あるいは
ｃ）少なくとも1×107個の細胞；および1細胞あたり少なくとも1感染単位（IU）または少なくとも約1IUの、組換えウイルスベクターを含むウイルス粒子を含む組成物。
【請求項４２】
前記組成物中の全細胞における、前記組換えウイルスベクターの平均コピー数が、多くても約10、多くても8、多くても6、多くても4、もしくは多くても約2であるか；または
前記組成物中の前記組換えウイルスベクターを形質導入された細胞における、該ベクターの平均コピー数が、多くても約10、多くても8、多くても6、多くても4、もしくは多くても約2である
請求項38〜41のいずれか一項記載の組成物。
【請求項４３】
1つまたは複数の容器を含む製品であって、該1つまたは複数の容器が、集合的に、請求項38〜42のいずれか一項記載の組成物を含有する、前記製品。
【請求項４４】
疾患もしくは病状の治療のための、または疾患もしくは病状の治療のための医薬の製造のための、請求項38〜42のいずれか一項記載の組成物の使用。
【請求項４５】
回転軸の周りを回転可能な遠心チャンバーであって、
請求項38〜42のいずれか一項記載の組成物を含む内部キャビティ、または
（a）組換えウイルスベクターを形質導入された少なくとも5×107個の初代T細胞を含有する組成物；および/もしくは（b）少なくとも5×107個の初代T細胞と、組換えウイルスベクターを含有するウイルス粒子とを含有する組成物；を含む内部キャビティ
を含む、前記遠心チャンバー。
【請求項４６】
請求項45記載の遠心チャンバーを含む閉鎖システムであって、任意で、1つまたは複数の容器に機能的に接続されたマルチウェイマニホールドを含む、前記閉鎖システム。