【手続補正書】
【提出日】平成30年7月5日(2018.7.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列
Ｖ１８Ｆ１９Ｆ２０Ａ２１Ｅ２２Ｄ２３Ｖ２４Ｇ２５Ｓ２６Ｎ２７Ｋ２８Ｇ２９Ａ３０Ｉ３１Ｉ３２Ｇ３３（配列番号２）と６２．５％以上、６８．７５％以上、７５％以上、８１．２５％以上、８７．５％以上、または９３．７５％以上の同一性を有するアミロイドβ（Ａβ）アミノ酸配列を含む免疫原性産物であって、
ｉ）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ寄託番号ＰＴＡ−７２４０により示されるハイブリドーマから得られるモノクローナル抗体７Ｃ６、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ寄託番号ＰＴＡ−７４０５により示されるハイブリドーマから得られるモノクローナル抗体４Ｄ１０またはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ寄託番号ＰＴＡ−７２４１により示されるハイブリドーマから得られるモノクローナル抗体５Ｆ７からなる群から選択されるモノクローナル抗体と反応性であり、該モノクローナル抗体は産物に、好ましくは１×１０−６ＭのＫＤもしくはより大きい親和性で結合し、かつ
ｉｉ）血小板因子４（ＰＦ−４）に対する交差反応性を全く有さないまたは低い交差反応性を有するポリクローナル抗血清を誘導することができる
免疫原性産物。
【請求項２】
さらに、以下の（ａ）−（ｅ）の特性の１以上により特徴づけられる、請求項１に記載の産物、
（ａ）ポリクローナル抗血清が、マウスまたはウサギに由来するポリクローナル抗血清である、
（ｂ）ポリクローナル抗血清が、産物に結合する抗体が富化された親和性精製抗血清である、
（ｃ）ＰＦ−４に対するポリクローナル抗血清の交差反応性が、ＰＦ−４に対する参照抗ＰＦ−４抗体の交差反応性より少なくとも１０倍、例えば、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍または少なくとも５０倍、より好ましくは少なくとも１００倍、例えば、少なくとも２００倍、少なくとも３００倍または少なくとも５００倍、さらにより好ましくは少なくとも１０００倍、例えば、少なくとも２０００倍、少なくとも３０００倍または少なくとも５０００倍、さらにより好ましくは少なくとも１００００倍、例えば、少なくとも２００００倍、少なくとも３００００倍または少なくとも５００００倍、最も好ましくは少なくとも１０００００倍小さい、
（ｄ）血小板因子４が、カニクイザル血漿中のＰＦ−４またはヒト血漿中のＰＦ−４である、または
（ｅ）交差反応性が、血漿ＰＦ−４に対する、固定化されているポリクローナル抗血清の結合である。
【請求項３】
ポリクローナル抗血清が、モノマーＡβ（１−４２）、モノマーＡβ（１−４０）、フィブリロマーＡβ（１−４２）およびフィブリロマーＡβ（１−４０）からなる群から選択される少なくとも１つのＡβ形態に対する抗血清の親和性より少なくとも２倍、例えば、少なくとも３倍または少なくとも５倍、好ましくは少なくとも１０倍、例えば、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍または少なくとも５０倍、より好ましくは少なくとも１００倍、例えば、少なくとも２００倍、少なくとも３００倍または少なくとも５００倍、さらにより好ましくは少なくとも１０００倍、例えば、少なくとも２０００倍、少なくとも３０００倍または少なくとも５０００倍、さらにより好ましくは少なくとも１００００倍、例えば、少なくとも２００００倍、少なくとも３００００倍または少なくとも５００００倍、最も好ましくは少なくとも１０００００倍大きいＡβグロブロマーに対する親和性を有し、該Ａβグロブロマーが好ましくはＡβ（１−４２）グロブロマー、Ａβ（１２−４２）グロブロマーおよびＡβ（２０−４２）グロブロマーから選択される、請求項１または２に記載の産物。
【請求項４】
ポリクローナル抗血清が、Ａβ（１−４２）グロブロマーおよびＡβ（１２−４２）グロブロマーからなる群から選択される少なくとも１つのＡβグロブロマーに対する抗血清の親和性より少なくとも２倍、例えば、少なくとも３倍または少なくとも５倍、好ましくは少なくとも１０倍、例えば、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍または少なくとも５０倍、より好ましくは少なくとも１００倍、例えば、少なくとも２００倍、少なくとも３００倍または少なくとも５００倍、さらにより好ましくは少なくとも１０００倍、例えば、少なくとも２０００倍、少なくとも３０００倍または少なくとも５０００倍、さらにより好ましくは少なくとも１００００倍、例えば、少なくとも２００００倍、少なくとも３００００倍または少なくとも５００００倍、最も好ましくは少なくとも１０００００倍大きいＡβ（２０−４２）グロブロマーに対する親和性を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の産物。
【請求項５】
さらに、以下の（ａ）−（ｃ）の特性の１以上により特徴づけられる、請求項１から４のいずれか一項に記載の産物、
（ａ）アミノ酸配列の少なくとも一部がループ、好ましくは、βヘアピンループを形成する、
（ｂ）Ｆ１９Ｆ２０Ａ２１（配列番号８）およびＡ３０Ｉ３１Ｉ３２（配列番号９）に対応する産物のアミノ酸配列部分が、逆平行に配向している、または
（ｃ）アミノ酸配列の一部が、Ｖ２４Ｇ２５Ｓ２６Ｎ２７（配列番号１０）およびＤ２３Ｖ２４Ｇ２５Ｓ２６Ｎ２７Ｋ２８（配列番号１１）から選択される配列を含むループを形成する。
【請求項６】
前記Ａβアミノ酸配列を複数、好ましくは２から４８個、含むオリゴマーである、請求項１から５のいずれか一項に記載の産物。
【請求項７】
（ａ）前記Ａβアミノ酸配列を含むＡβペプチドを溶媒に溶解するステップ、
（ｂ）両親媒性物質をＡβペプチドの溶液に加えるステップ、
（ｃ）得られた混合物をインキュベートして、オリゴマーを形成するステップ、および
（ｄ）任意に、オリゴマーをタンパク質分解的に切断するステップ
を含む方法により得られる、請求項１から６のいずれか一項に記載の産物。
【請求項８】
Ａβアミノ酸配列が、アミノ酸配列
Ｖ１８Ｆ１９Ｆ２０Ａ２１Ｅ２２Ｄ２３Ｖ２４Ｇ２５Ｓ２６Ｎ２７Ｋ２８Ｇ２９Ａ３０Ｉ３１Ｉ３２Ｇ３３Ｌ３４Ｍ３５Ｖ３６Ｇ３７Ｇ３８Ｖ３９（配列番号３）と７２％以上、７７％以上、８１％以上、８６％以上、９０％以上または９５％以上の同一性を有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の産物。
【請求項９】
さらに、以下の（ａ）−（ｃ）の特性の１以上により特徴づけられる、請求項８に記載の産物、
（ａ）第１のアミノ酸配列ＬＡ３４ＭＡ３５ＶＡ３６ＧＡ３７ＧＡ３８（配列番号５）が、第２のアミノ酸配列ＬＢ３４ＭＢ３５ＶＢ３６ＧＢ３７ＧＢ３８（配列番号５）と平行に配向し、ＭＡ３５（ＮＨ）−ＶＢ３６（ＮＨ）、ＧＡ３７（ＮＨ）−ＧＢ３８（ＮＨ）、ＬＡ３４（ＮＨ）−ＬＢ３４（ＣδＨ３）、ＭＡ３５（ＮＨ）−ＶＢ３６（ＣγＨ３）からなる群から選択される少なくとも１つの原子対のプロトン間距離が、好ましくは１．８から６．５オングストロームである、
（ｂ）第１のアミノ酸配列ＧＡ３３ＬＡ３４ＭＡ３５ＶＡ３６ＧＡ３７ＧＡ３８ＶＡ３９（配列番号６）が、第２のアミノ酸配列ＧＢ３３ＬＢ３４ＭＢ３５ＶＢ３６ＧＢ３７ＧＢ３８ＶＢ３９（配列番号６）と平行に配向して、ＧＡ３３（ＮＨ）−ＧＢ３４（ＮＨ）、ＭＡ３５（ＮＨ）−ＶＢ３６（ＮＨ）、ＧＡ３７（ＮＨ）−ＧＢ３８（ＮＨ）、ＬＡ３４（ＮＨ）−ＬＢ３４（ＣδＨ３）、ＭＡ３５（ＮＨ）−ＶＢ３６（ＣγＨ３）、ＧＡ３８（ＮＨ）−ＶＢ３９（ＣγＨ３）およびＶＡ３９（ＮＨ）−ＶＢ３９（ＣγＨ３）からなる群から選択される少なくとも１つの原子対のプロトン間距離が、好ましくは１．８から６．５オングストロームである、または
（ｃ）２つのＡβアミノ酸配列間の分子間平行βシートを含み、該分子間平行βシートは、好ましくは第１のアミノ酸配列ＧＡ３３ＬＡ３４ＭＡ３５ＶＡ３６ＧＡ３７ＧＡ３８ＶＡ３９（配列番号７）および第２のアミノ酸配列ＧＢ３３ＬＢ３４ＭＢ３５ＶＢ３６ＧＢ３７ＧＢ３８ＶＢ３９（配列番号７）を含み、好ましくは原子対ＧＡ３３（ＣＯ）−ＬＢ３４（Ｎ）、ＬＢ３４（ＣＯ）−ＭＡ３５（Ｎ）、ＭＡ３５（ＣＯ）−ＶＢ３６（Ｎ）、ＶＢ３６（ＣＯ）−ＧＡ３７（Ｎ）およびＧＢ３７（ＣＯ）−ＧＡ３８（Ｎ）が３．３±０．５Åの距離にあり、ＣＯが主鎖酸素原子を示し、残基のファイ（φ）角度が−１８０から−３０の範囲にあり、残基のプサイ（ψ）角度が約６０から１８０までまたは約−１８０から−１５０までの範囲にある。
【請求項１０】
Ａβアミノ酸配列が、アミノ酸配列
Ｖ１２Ｈ１３Ｈ１４Ｑ１５Ｋ１６Ｌ１７Ｖ１８Ｆ１９Ｆ２０Ａ２１Ｅ２２Ｄ２３Ｖ２４Ｇ２５Ｓ２６Ｎ２７Ｋ２８Ｇ２９Ａ３０Ｉ３１Ｉ３２Ｇ３３Ｌ３４Ｍ３５Ｖ３６Ｇ３７Ｇ３８Ｖ３９（配列番号４）の一部（Ｘ−Ｙ）と６２．５％以上、６４％以上、６７％以上、７１％以上、７５％以上、７８％以上、８２％以上、８５％以上、８９％以上、９２％以上または９６％以上の同一性を有し、Ｘが数１２．．１８からなる群から選択され、Ｙが数３３．．３９からなる群から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載の産物。
【請求項１１】
Ｖ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｑ１５、Ｋ１６、Ｌ１７、Ｖ１８、Ｆ１９、Ｆ２０、Ａ２１、Ｅ２２またはＤ２３に対応するアミノ酸残基の少なくとも１つおよびＫ２８、Ｇ２９、Ａ３０、Ｉ３１、Ｉ３２、Ｇ３３、Ｌ３４、Ｍ３５、Ｖ３６、Ｇ３７、Ｇ３８、Ｖ３９に対応するアミノ酸残基の少なくとも１つが、互いに共有結合している、請求項１０に記載の産物。
【請求項１２】
さらに、以下の（ａ）−（ｗ）の特性の１以上により特徴づけられる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の産物、
（ａ）Ｖ１８に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択される、
（ｂ）Ｆ１９に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、アラニン、グリシン、プロリン、バリン、ロイシン、メチオニンおよびイソロイシンからなる群から選択される、
（ｃ）Ｆ２０に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、メチオニンおよびイソロイシンからなる群から選択される、
（ｄ）Ａ２１に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、グリシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択される、
（ｅ）Ｅ２２に対応するアミノ酸が、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アラニン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、プロリンおよびグルタミンからなる群から選択される、
（ｆ）Ｄ２３に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニンおよびグルタミンからなる群から選択される、
（ｇ）Ｖ２４に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択される、
（ｈ）Ｇ２５に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群から選択される、
（ｉ）Ｓ２６に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンからなる群から選択される、
（ｊ）Ｎ２７に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群から選択される、
（ｋ）Ｋ２８に対応するアミノ酸が、アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニンおよびグルタミンからなる群から選択される、
（ｌ）Ｇ２９に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびプロリンからなる群から選択される、
（ｍ）Ａ３０に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、グリシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびプロリンからなる群から選択される、
（ｎ）Ｉ３１に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択される、
（ｏ）Ｉ３２に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択される、
（ｐ）Ｇ３３に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびプロリンからなる群から選択される、
（ｑ）Ｆ２０に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、メチオニンおよびイソロイシンからなる群から選択され、Ｅ２２に対応するアミノ酸が、アラニン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、イソロイシン、トリプトファン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、チロシンおよびロイシンからなる群から選択される、
（ｒ）Ｆ２０に対応するアミノ酸が、グリシンであり、Ｅ２２に対応するアミノ酸が、アラニンである、
（ｓ）Ｆ２０に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、メチオニンおよびイソロイシンからなる群から選択され、Ｉ３１に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択される、
（ｔ）Ａ２１に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、グリシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択され、Ｅ２２に対応するアミノ酸が、アラニン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、イソロイシン、トリプトファン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、チロシンおよびロイシンからなる群から選択される、
（ｕ）Ａ２１に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、グリシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群から選択され、Ｄ２３に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニンおよびグルタミンからなる群から選択される、
（ｖ）Ｅ２２に対応するアミノ酸が、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アラニン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、プロリンおよびグルタミンからなる群から選択され、Ｇ２５に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群から選択される、または
（ｗ）Ｅ２２に対応するアミノ酸が、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アラニン、システイン、アスパラギン、セリン、トレオニン、プロリンおよびグルタミンからなる群から選択され、Ｓ２６に対応するアミノ酸が、ヒスチジン、アルギニン、リシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンからなる群から選択される。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の産物を含む組成物。
【請求項１４】
アミロイド症の治療または防止に使用する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の産物。
【請求項１５】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の産物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるアミロイド症を治療または防止する方法。
【請求項１６】
産物が、能動免疫のためのものである、請求項１４に記載の使用のための産物または請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アミロイド症の診断に使用する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の産物。
【請求項１８】
アミロイド症を有すると疑われる対象からの試料を準備すること、試料を請求項１から１２のいずれか一項に記載の産物と、産物および抗体を含む複合体の形成に十分な時間および条件下で接触させることを含み、複合体の存在が、対象がアミロイド症を有することを示す、アミロイド症を診断する方法。
【請求項１９】
アミロイド症が、アルツハイマー病またはダウン症候群のアミロイド症である、請求項１４、１６および１７のいずれか一項に記載の使用のための産物、請求項１５、１６および１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の産物に結合することができる作用物を同定する方法であって、ａ）目的の１つ以上の作用物を、１つ以上の作用物が産物に結合するのに十分な時間および条件下で、産物に曝露するステップならびにｂ）産物に結合する作用物を同定するステップを含む方法であって、該作用物が、好ましくは、抗体、非抗体結合分子、アプタマーおよび低分子量化合物から選択される方法。
【請求項２１】
【化１】
2017532289.tif 000001
2017532289.tif 000002
からなる群から選択されるアミノ酸配列の一部（Ｘ−Ｙ）と同じアミノ酸配列を含み、Ｘが数１．．１８、４．．１８または１２．．１８または１８からなる群から選択され、Ｙが数３３．．４３、３３．．４２、３３．．４１または３３．．４０からなる群から選択され、（Ｘ−Ｙ）は好ましくは、（１−４２）、（４−４２）、（１２−４２）または（１８−４２）からなる群から選択される分子、または前記アミノ酸配列の少なくとも２つの非隣接残基が互いに共有結合している、そのクロスリンクされた誘導体。