【手続補正書】
【提出日】平成29年12月27日(2017.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．少なくとも１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）と、
ｂ．リボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲ又はリボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含む少なくとも１つの３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）と、
ｃ．更なる５’−末端エレメントとして５’−ＵＴＲとを含み、
前記５’−ＵＴＲが、５’−ＴＯＰ  ＵＴＲであり、５’ＴＯＰモチーフを含まないことを特徴とする人工核酸分子。
【請求項２】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、前記人工核酸分子からのタンパク質産生の増強、安定化、及び延長の少なくともいずれかを行う請求項１に記載の人工核酸分子。
【請求項３】
前記３’−ＵＴＲが、前記ＯＲＦと異種である請求項１から２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項４】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、真核生物のリボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲ、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲ、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲ、更により好ましくは霊長類のリボソームタンパク質遺伝子、特にヒトのリボソームタンパク質遺伝子、又はげっ歯類のリボソームタンパク質遺伝子、特にマウスのリボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項１から３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項５】
前記オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が、レポーター遺伝子をコードしておらず、レポーター遺伝子に由来してもおらず、前記レポーター遺伝子が、好ましくは、グロビンタンパク質（特にベータ−グロビン）、ルシフェラーゼタンパク質、ベータ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、及びＧＦＰタンパク質又はその変異体（好ましくはＥＧＦＰ）、又はグロビンタンパク質、ルシフェラーゼタンパク質、若しくはＧＦＰタンパク質に対して少なくとも７０％の配列同一性を示す変異体からなる群からは選択されず；
前記オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が、リボソームタンパク質、好ましくは、真核生物のリボソームタンパク質をコードしておらず、前記リボソームタンパク質が、好ましくはリボソームタンパク質Ｓ６（ＲＰＳ６）、リボソームタンパク質Ｌ３６ａ様（ＲＰＬ３６ＡＬ）、又はリボソームタンパク質Ｓ１６（ＲＰＳ１６）から選択されず；又は
前記３’−ＵＴＲが、ウイルスに由来していない請求項１から４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項６】
前記３’−ＵＴＲ、好ましくは、前記人工核酸分子が、ポリ（Ａ）配列もポリアデニル化シグナルも含まないか、又は
前記３’−ＵＴＲ、好ましくは、前記人工核酸分子が、ポリ（Ａ）配列及びポリアデニル化シグナルの少なくともいずれかを更に含み、前記ポリ（Ａ）配列又は前記ポリアデニル化シグナルが、好ましくは前記３’−ＵＴＲエレメントの３’末端に位置する請求項１から５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項７】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、リボソームタンパク質Ｌ９（ＲＰＬ９）、リボソームタンパク質Ｌ３（ＲＰＬ３）、リボソームタンパク質Ｌ４（ＲＰＬ４）、リボソームタンパク質Ｌ５（ＲＰＬ５）、リボソームタンパク質Ｌ６（ＲＰＬ６）、リボソームタンパク質Ｌ７（ＲＰＬ７）、リボソームタンパク質Ｌ７ａ（ＲＰＬ７Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ１１（ＲＰＬ１１）、リボソームタンパク質Ｌ１２（ＲＰＬ１２）、リボソームタンパク質Ｌ１３（ＲＰＬ１３）、リボソームタンパク質Ｌ２３（ＲＰＬ２３）、リボソームタンパク質Ｌ１８（ＲＰＬ１８）、リボソームタンパク質Ｌ１８ａ（ＲＰＬ１８Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ１９（ＲＰＬ１９）、リボソームタンパク質Ｌ２１（ＲＰＬ２１）、リボソームタンパク質Ｌ２２（ＲＰＬ２２）、リボソームタンパク質Ｌ２３ａ（ＲＰＬ２３Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ１７（ＲＰＬ１７）、リボソームタンパク質Ｌ２４（ＲＰＬ２４）、リボソームタンパク質Ｌ２６（ＲＰＬ２６）、リボソームタンパク質Ｌ２７（ＲＰＬ２７）、リボソームタンパク質Ｌ３０（ＲＰＬ３０）、リボソームタンパク質Ｌ２７ａ（ＲＰＬ２７Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ２８（ＲＰＬ２８）、リボソームタンパク質Ｌ２９（ＲＰＬ２９）、リボソームタンパク質Ｌ３１（ＲＰＬ３１）、リボソームタンパク質Ｌ３２（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質Ｌ３５ａ（ＲＰＬ３５Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ３７（ＲＰＬ３７）、リボソームタンパク質Ｌ３７ａ（ＲＰＬ３７Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ３８（ＲＰＬ３８）、リボソームタンパク質Ｌ３９（ＲＰＬ３９）、リボソームタンパク質、ラージ、Ｐ０（ＲＰＬＰ０）、リボソームタンパク質、ラージ、Ｐ１（ＲＰＬＰ１）、リボソームタンパク質、ラージ、Ｐ２（ＲＰＬＰ２）、リボソームタンパク質Ｓ３（ＲＰＳ３）、リボソームタンパク質Ｓ３Ａ（ＲＰＳ３Ａ）、リボソームタンパク質Ｓ４、Ｘ連鎖（ＲＰＳ４Ｘ）、リボソームタンパク質Ｓ４、Ｙ連鎖１（ＲＰＳ４Ｙ１）、リボソームタンパク質Ｓ５（ＲＰＳ５）、リボソームタンパク質Ｓ６（ＲＰＳ６）、リボソームタンパク質Ｓ７（ＲＰＳ７）、リボソームタンパク質Ｓ８（ＲＰＳ８）、リボソームタンパク質Ｓ９（ＲＰＳ９）、リボソームタンパク質Ｓ１０（ＲＰＳ１０）、リボソームタンパク質Ｓ１１（ＲＰＳ１１）、リボソームタンパク質Ｓ１２（ＲＰＳ１２）、リボソームタンパク質Ｓ１３（ＲＰＳ１３）、リボソームタンパク質Ｓ１５（ＲＰＳ１５）、リボソームタンパク質Ｓ１５ａ（ＲＰＳ１５Ａ）、リボソームタンパク質Ｓ１６（ＲＰＳ１６）、リボソームタンパク質Ｓ１９（ＲＰＳ１９）、リボソームタンパク質Ｓ２０（ＲＰＳ２０）、リボソームタンパク質Ｓ２１（ＲＰＳ２１）、リボソームタンパク質Ｓ２３（ＲＰＳ２３）、リボソームタンパク質Ｓ２５（ＲＰＳ２５）、リボソームタンパク質Ｓ２６（ＲＰＳ２６）、リボソームタンパク質Ｓ２７（ＲＰＳ２７）、リボソームタンパク質Ｓ２７ａ（ＲＰＳ２７ａ）、リボソームタンパク質Ｓ２８（ＲＰＳ２８）、リボソームタンパク質Ｓ２９（ＲＰＳ２９）、リボソームタンパク質Ｌ１５（ＲＰＬ１５）、リボソームタンパク質Ｓ２（ＲＰＳ２）、リボソームタンパク質Ｌ１４（ＲＰＬ１４）、リボソームタンパク質Ｓ１４（ＲＰＳ１４）、リボソームタンパク質Ｌ１０（ＲＰＬ１０）、リボソームタンパク質Ｌ１０ａ（ＲＰＬ１０Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ３５（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質Ｌ１３ａ（ＲＰＬ１３Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ３６（ＲＰＬ３６）、リボソームタンパク質Ｌ３６ａ（ＲＰＬ３６Ａ）、リボソームタンパク質Ｌ４１（ＲＰＬ４１）、リボソームタンパク質Ｓ１８（ＲＰＳ１８）、リボソームタンパク質Ｓ２４（ＲＰＳ２４）、リボソームタンパク質Ｌ８（ＲＰＬ８）、リボソームタンパク質Ｌ３４（ＲＰＬ３４）、リボソームタンパク質Ｓ１７（ＲＰＳ１７）、リボソームタンパク質ＳＡ（ＲＰＳＡ）、ユビキチンＡ−５２残基リボソームタンパク質融合生成物１（ＵＢＡ５２）、遍在的に発現するＦｉｎｋｅｌ−Ｂｉｓｋｉｓ−Ｒｅｉｌｌｙマウス肉腫ウイルス（ＦＢＲ−ＭｕＳＶ）（ＦＡＵ）、リボソームタンパク質Ｌ２２様１（ＲＰＬ２２Ｌ１）、リボソームタンパク質Ｓ１７（ＲＰＳ１７）、リボソームタンパク質Ｌ３９様（ＲＰＬ３９Ｌ）、リボソームタンパク質Ｌ１０様（ＲＰＬ１０Ｌ）、リボソームタンパク質Ｌ３６ａ様（ＲＰＬ３６ＡＬ）、リボソームタンパク質Ｌ３様（ＲＰＬ３Ｌ）、リボソームタンパク質Ｓ２７様（ＲＰＳ２７Ｌ）、リボソームタンパク質Ｌ２６様１（ＲＰＬ２６Ｌ１）、リボソームタンパク質Ｌ７様１（ＲＰＬ７Ｌ１）、リボソームタンパク質Ｌ１３ａシュードジーン（ＲＰＬ１３ＡＰ）、リボソームタンパク質Ｌ３７ａシュードジーン８（ＲＰＬ３７ＡＰ８）、リボソームタンパク質Ｓ１０シュードジーン５（ＲＰＳ１０Ｐ５）、リボソームタンパク質Ｓ２６シュードジーン１１（ＲＰＳ２６Ｐ１１）、リボソームタンパク質Ｌ３９シュードジーン５（ＲＰＬ３９Ｐ５）、リボソームタンパク質、ラージ、Ｐ０シュードジーン６（ＲＰＬＰ０Ｐ６）、及びリボソームタンパク質Ｌ３６シュードジーン１４（ＲＰＬ３６Ｐ１４）からなる群から選択される配列の３’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項１から６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項８】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１０〜配列番号２０５からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、又は少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなる、或いは、前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１０〜配列番号２０５からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、更により好ましくは少なくとも約９５％、更により好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むか又はからなる請求項１から７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項９】
５’−キャップ構造、ポリ（Ｃ）配列、ヒストンステムループ、及びＩＲＥＳモチーフの少なくともいずれかを更に含む請求項１から８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１０】
前記ヒストンステムループが、配列番号５に係る配列を含む請求項１から９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１１】
前記人工核酸分子、好ましくは前記オープンリーディングフレームが、少なくとも部分的にＧ／Ｃ改変されており、好ましくは、前記オープンリーディングフレームのＧ／Ｃ含量が、野生型オープンリーディングフレームに比べて増加している、及び／又は
前記オープンリーディングフレームが、コドンが最適化されている領域を含み、好ましくは、前記オープンリーディングフレームのコドンが最適化されている請求項１から１０のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１２】
ＲＮＡ分子、好ましくはｍＲＮＡ分子である請求項１から１１のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１３】
ａ．オープンリーディングフレーム及びクローニングサイトの少なくともいずれかと、
ｂ．リボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲ又はリボソームタンパク質遺伝子の３’−ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含む少なくとも１つの３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）と、
ｃ．更なる５’−末端エレメントとして５’−ＵＴＲとを含み、
前記５’−ＵＴＲが、５’−ＴＯＰ  ＵＴＲであり、５’ＴＯＰモチーフを含まないことを特徴とするベクター。
【請求項１４】
前記オープンリーディングフレーム、前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント、及び／又は前記５’−ＵＴＲは、前記人工核酸分子に関して、請求項２から１２のいずれかで定義される特徴のいずれか１つによって特徴付けられる請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
プラスミドベクター又はウイルスベクター、好ましくは、プラスミドベクターである請求項１３から１４のいずれかに記載のベクター。
【請求項１６】
請求項２から１２のいずれかに記載の人工核酸分子を含む請求項１３から１５のいずれかに記載のベクター。
【請求項１７】
請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子又は請求項１３から１６のいずれかに記載のベクターを含むことを特徴とする細胞。
【請求項１８】
請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１３から１６のいずれかに記載のベクター、又は請求項１７に記載の細胞を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１９】
１以上の薬学的に許容できるビヒクル、希釈剤、賦形剤、及び１以上のアジュバントの少なくともいずれかを更に含む請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
医薬として使用するための請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１３から１６のいずれかに記載のベクター、請求項１７に記載の細胞、又は請求項１８から１９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ワクチンとして使用するための又は遺伝子治療において使用するための請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１３から１６のいずれかに記載のベクター、請求項１７に記載の細胞、又は請求項１８から１９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２２】
人工核酸分子（好ましくは、ｍＲＮＡ分子又はベクター）からのタンパク質産生の増強、安定化、及び延長の少なくともいずれかを行うインビトロにおける方法であって、前記核酸分子（好ましくは、ｍＲＮＡ分子又はベクター）と３’−ＵＴＲエレメントとを結合させる工程を含み、前記３’−ＵＴＲエレメントが、前記人工核酸分子に関して、請求項１から１２のいずれかで定義される特徴のいずれか１つによって特徴付けられることを特徴とする方法。
【請求項２３】
インビトロにおける核酸分子（好ましくは、ｍＲＮＡ分子又はベクター）からのタンパク質産生の増強、安定化、及び延長の少なくともいずれかを行うための３’−ＵＴＲエレメントの使用であって、前記３’−ＵＴＲエレメントが、前記人工核酸分子に関して、請求項１から１２のいずれかで定義される特徴のいずれか１つによって特徴付けられることを特徴とする使用。
【請求項２４】
請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１３から１６のいずれかに記載のベクター、請求項１７に記載の細胞、及び請求項１８から１９のいずれかに記載の医薬組成物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするキット又はキットオブパーツ。
【請求項２５】
使用説明書と、トランスフェクション用の細胞と、アジュバントと、医薬組成物の投与手段と、前記人工核酸分子、前記ベクター、前記細胞、又は前記医薬組成物を溶解又は希釈するための薬学的に許容できる担体及び薬学的に許容できる溶液の少なくともいずれかとを更に含む請求項２４に記載のキット。