【手続補正書】
【提出日】平成30年7月3日(2018.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のペプチド鎖および第２のペプチド鎖を有し、それらを合わせた全体としての、配列番号３の配列および配列番号４の配列を組み合わせたものとの配列同一性が、少なくとも７０％である、単離されたヘテロ二量体タンパク質。
【請求項２】
全体としての、配列番号３の配列および配列番号４の配列を組み合わせたものとの配列同一性が、少なくとも７５％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、請求項１に記載の単離されたヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３】
全体としての、配列番号３のアミノ酸配列および配列番号４のアミノ酸配列を組み合わせたものとの配列同一性が、少なくとも７０％、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、一本鎖タンパク質。
【請求項４】
配列番号３の配列との配列同一性が少なくとも７０％、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、単離されたタンパク質。
【請求項５】
配列番号４の配列との配列同一性が少なくとも７０％、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、単離されたタンパク質。
【請求項６】
配列番号３の配列を有する第１のペプチド鎖および配列番号４の配列を有する第２のペプチド鎖を有するヘテロ二量体タンパク質のＩｇＥ抗体エピトープを少なくとも１つ有する、請求項１〜５のいずれかに記載のタンパク質のフラグメント。
【請求項７】
固体または可溶性の支持体に固定化されている、および／または検出可能な標識が付けられている、請求項１〜６のいずれかに記載のタンパク質またはタンパク質フラグメント。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれかに記載のタンパク質または請求項６に記載のタンパク質フラグメントをコードする核酸分子。
【請求項９】
請求項８に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１１】
・１型アレルギーを有することが疑われる患者からの免疫グロブリン含有体液サンプルを、請求項１〜６のいずれかに記載のタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントと接触させるステップ；および
・前記サンプルにおいて、前記タンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントに特異的に結合する抗体の存在を検出するステップ
を含み、
ここで、前記のように結合した抗体の存在は、前記患者が１型アレルギーを有することを示唆する、
１型アレルギーのインビトロ評価方法。
【請求項１２】
前記サンプルにおいて、前記タンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントに特異的に結合するＩｇＥ抗体および／またはＩｇＧ抗体の存在を検出することを含み、
ここで、特異的ＩｇＥ抗体の存在は、前記患者がウマに対する１型アレルギーを有することを示唆し、特異的ＩｇＧ抗体のレベルは、ウマに対する、生まれつきの、または環境的暴露もしくは免疫療法によって誘導された免疫寛容に関する情報を与える、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
・１型アレルギーを有することが疑われる患者からの免疫グロブリン含有体液サンプルを、ウマからのさらなる精製アレルゲンコンポーネント少なくとも１つと接触させるステップ；および
・前記サンプルにおいて、前記のウマからの精製アレルゲンコンポーネントに特異的に結合するＩｇＥ抗体の存在を検出するステップ
をさらに含み、
ここで、前記タンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントに特異的に結合するＩｇＥ抗体の存在と、前記のウマからのアレルゲンコンポーネントに特異的に結合するＩｇＥ抗体の不存在との組み合わせは、前記患者がネコに対する１型アレルギーを有することを示唆する、
請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記のウマからのさらなる精製アレルゲンコンポーネントが、天然および組換えのEqu c 1、Equ c 2、Equ c 3、Equ c 4/5およびEqu c 15kからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１１〜１４のいずれかに記載の方法を実施するためのキットであって、固体支持体上に固定化された請求項１〜６のいずれかに記載のタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントを含むキット。
【請求項１６】
ヒトまたは動物体に対して実施される処置または診断方法、例えば１型アレルギーの処置または診断方法において使用するための、請求項１〜６のいずれかに記載のタンパク質またはタンパク質フラグメント。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
本発明の側面はさらに、ヒトまたは動物体に対して実施される処置または診断方法、例えばヒトまたは動物体に対して実施される１型アレルギーの処置または診断方法における使用のための、本発明の前記側面のタンパク質またはタンパク質フラグメントを包含し、また、１型アレルギーの処置方法であって、そのような処置に感受性の個体に、本発明の前記側面のタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントを投与することを含む方法を包含する。
本発明の態様をさらに挙げる：
［１］  第１のペプチド鎖および第２のペプチド鎖を有し、それらを合わせた全体としての、配列番号３の配列および配列番号４の配列を組み合わせたものとの配列同一性が、少なくとも７０％である、単離されたヘテロ二量体タンパク質。
［２］  全体としての、配列番号３の配列および配列番号４の配列を組み合わせたものとの配列同一性が、少なくとも７５％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、上記項１に記載の単離されたヘテロ二量体タンパク質。
［３］  全体としての、配列番号３のアミノ酸配列および配列番号４のアミノ酸配列を組み合わせたものとの配列同一性が、少なくとも７０％、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、一本鎖タンパク質。
［４］  配列番号３の配列との配列同一性が少なくとも７０％、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、単離されたタンパク質。
［５］  配列番号４の配列との配列同一性が少なくとも７０％、例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％である、単離されたタンパク質。
［６］  配列番号３の配列を有する第１のペプチド鎖および配列番号４の配列を有する第２のペプチド鎖を有するヘテロ二量体タンパク質のＩｇＥ抗体エピトープを少なくとも１つ有する、上記項１〜５のいずれかに記載のタンパク質のフラグメント。
［７］  固体または可溶性の支持体に固定化されている、上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質またはタンパク質フラグメント。
［８］  検出可能な標識が付けられている、上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質またはタンパク質フラグメント。
［９］  上記項１〜５のいずれかに記載のタンパク質または上記項６に記載のタンパク質フラグメントをコードする核酸分子。
［１０］  配列番号９の配列との同一性が少なくとも８０％であるヌクレオチド配列を含む、上記項９に記載の核酸分子。
［１１］  配列番号１０の配列との同一性が少なくとも８０％であるヌクレオチド配列を含む、上記項９に記載の核酸分子。
［１２］  上記項３に記載の一本鎖タンパク質をコードし、配列番号９の配列および配列番号１０の配列を組み合わせたものとの全体としての配列同一性が少なくとも８０％であるヌクレオチド配列を含む、上記項９に記載の核酸分子。
［１３］  上記項９〜１２のいずれかに記載の核酸分子を含むベクター。
［１４］  上記項１３に記載のベクターを含む宿主細胞。
［１５］  上記項１〜５のいずれかに記載のタンパク質または上記項６に記載のタンパク質フラグメントの組換え産生方法であって、上記項１４に記載の宿主細胞を、該タンパク質の発現に適当な条件下に培養することを含む、方法。
［１６］・１型アレルギーを有することが疑われる患者からの免疫グロブリン含有体液サンプルを、上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントと接触させるステップ；および
・前記サンプルにおいて、前記タンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントに特異的に結合する抗体の存在を検出するステップ
を含み、
ここで、前記のように結合した抗体の存在は、前記患者が１型アレルギーを有することを示唆する、
１型アレルギーのインビトロ評価方法。
［１７］  前記サンプルにおいて、前記タンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントに特異的に結合するＩｇＥ抗体および／またはＩｇＧ抗体の存在を検出することを含み、
ここで、特異的ＩｇＥ抗体の存在は、前記患者がウマに対する１型アレルギーを有することを示唆し、特異的ＩｇＧ抗体のレベルは、ウマに対する、生まれつきの、または環境的暴露もしくは免疫療法によって誘導された免疫寛容に関する情報を与える、
上記項１６に記載の方法。
［１８］・１型アレルギーを有することが疑われる患者からの免疫グロブリン含有体液サンプルを、ウマからのさらなる精製アレルゲンコンポーネント少なくとも１つと接触させるステップ；および
・前記サンプルにおいて、前記のウマからの精製アレルゲンコンポーネントに特異的に結合するＩｇＥ抗体の存在を検出するステップ
をさらに含み、
ここで、前記タンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントに特異的に結合するＩｇＥ抗体の存在と、前記のウマからのアレルゲンコンポーネントに特異的に結合するＩｇＥ抗体の不存在との組み合わせは、前記患者がネコに対する１型アレルギーを有することを示唆する、
上記項１６または１７に記載の方法。
［１９］  前記のウマからのさらなる精製アレルゲンコンポーネントが、天然および組換えのEqu c 1、Equ c 2、Equ c 3、Equ c 4/5およびEqu c 15kからなる群から選択される、上記項１８に記載の方法。
［２０］  上記項１６〜１９のいずれかに記載の方法を実施するためのキットであって、固体支持体上に固定化された上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントを含むキット。
［２１］  固体支持体が、ニトロセルロース、ガラス、シリコンおよびプラスチックの群から選択される、上記項２０に記載のキット。
［２２］  固体支持体がマイクロアレイチップである、上記項２０または２１に記載のキット。
［２３］  固定化されたタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントと結合した抗体に結合することができる検出試薬をさらに含む、上記項２０〜２２のいずれかに記載のキット。
［２４］  検出試薬が、ＩｇＧ抗体および／またはＩｇＥ抗体に結合することができる、上記項２３に記載のキット。
［２５］  ヒトまたは動物体に対して実施される処置または診断方法において使用するための、上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質またはタンパク質フラグメント。
［２６］  ヒトまたは動物体に対して実施される１型アレルギーの処置または診断方法において使用するための、上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質またはタンパク質フラグメント。
［２７］  １型アレルギーの処置方法であって、処置に感受性の個体に、上記項１〜６のいずれかに記載のタンパク質、ペプチド鎖またはタンパク質フラグメントを投与することを含んでなる方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
上記の選択された血清において、ウマ皮屑抽出物に対する結合を阻害することができたのはFel d 1およびEqu c sのみであったので、Equ c sは確かに、それら血清の結合を説明できるウマ皮屑抽出物中の未知タンパク質であることが示された（表１１Ａ）。Fel d 1 immunoCAPに対する結合は、Fel d 1自体によって阻害されたが、Equ c sによっては阻害されず（表１１Ｂ）、Equ c sに対する結合はFel d 1およびEqu c sのいずれによっても阻害された（表１１Ｃ）。このことは、これら２つのタンパク質の配列は同一性が高いこと（図６ｃおよび図７ｃ）とウマ皮屑感作血清集団に対するＩｇＥ結合の相関性が高いこととの両方により示唆されるとおりに、Fel d 1とEqu c sとの間でＩｇＥ結合は確かに交差反応性であることを示す。さらに、ウマ皮屑感作血清集団においてFel d 1はEqu c s固相への結合を阻害するがEqu c sはFel d 1への結合を阻害しないという事実、また、Fel d 1に対するＩｇＥ結合はEqu c sに対する結合よりも常に高いという事実から、それら血清が元々Fel d 1に感作されており、Equ c sに対する結合は交差反応性の結果であったことが示唆された。