【手続補正書】
【提出日】平成30年1月29日(2018.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2017506622.tif 000001
の化合物またはその塩であって、
式中、
ＲAは、−（ＣＲ1Ｒ2）m−Ｎ（Ｒ3）Ｃ（Ｏ）Ｒ4、−（ＣＲ5Ｒ6）m−ＳＯ3Ｒ7及び−（ＣＲ10Ｒ11）m−ＣＯ2Ｒ12から成る群から選択され；
ｍは、各存在において、独立して２、３または４であり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ10、Ｒ11及びＲ12は、各存在において、独立して水素又はＣ1−Ｃ4アルキルであり；
Ｒ4は、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ4アルコキシ−Ｃ1−Ｃ4アルキル、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ及びＣ1−Ｃ4ハロアルキルから成る群から独立して選択される１、２、３、４、または５の置換基で任意に置換されているフェニル、
【化２】
2017506622.tif 000002
又は
【化３】
2017506622.tif 000003
であり、
Ｒ41、Ｒ42及びＲ44は、各存在において、それぞれ独立して、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ4アルキルであり；
Ｒ43及びＲ45はそれぞれ独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）アルキル及び
【化４】
2017506622.tif 000004
から成る群から選択され；
ｘ及びｙは、それぞれ独立して１〜２０から選択される整数であり；
ＲBは、−（ＣＲ46Ｒ47）t−ＮＲ48Ｒ49であり；
ｔは１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
Ｒ46及びＲ47は、各存在において、独立して水素又はＣ1−Ｃ4アルキルであり；
Ｒ48及びＲ49は、各存在において、独立して水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、−（ＣＲ50Ｒ51）z−ＯＣ（Ｏ）Ｒ52であるか、又は、
Ｒ48及びＲ49は、それらが連結される窒素原子と一緒にヘテロシクリルを形成し、その際、前記ヘテロシクリルは非置換であり、またはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルケニル、Ｃ1−Ｃ4アルキニル、−ＮＯ2、−ＣＮ、ハロゲン、オキソ、−ＯＲ96、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ97及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ116から成る群から独立して選択される１、２、３、４、５または６の置換基によって置換され；
Ｒ50及びＲ51は、各存在において、独立して水素又はＣ1−Ｃ4アルキルであり；
Ｒ52、Ｒ96、Ｒ97及びＲ116は、各存在において、独立して水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル又はアリールであり；
ｚは、１、２、３、または４であり；
ＲCは−（ＣＨ2）0-3−ＴまたはＣ1-5アルキルであり；その際、Ｔはアリール、ヘテロアリール、またはシクロアルキルであり、その際、前記アリール、ヘテロアリール、及びシクロアルキルはそれぞれ独立して非置換であり、またはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキルアミノアルキル）、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから成る群から独立して選択される１、２、または３の置換基によって置換され；
ＲDは水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、ベンジル、又はＣ3−Ｃ6シクロアルキルであり；
ＲEは水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジ（アルキル）アミノ、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、または−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）アルキルであり；
式中、破線の結合は一緒に式（Ｉ）の化合物における任意の６員環の存在を示し、任意の環は飽和または不飽和である、前記式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項２】
ＲAが、−（ＣＲ1Ｒ2）m−Ｎ（Ｒ3）Ｃ（Ｏ）Ｒ4であり、式中、ｍ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は請求項１で定義されたとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＲAが
【化５】
2017506622.tif 000005
【化６】
2017506622.tif 000006
及び
【化７】
2017506622.tif 000007
から成る群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＲBが
【化８】
2017506622.tif 000008
【化９】
2017506622.tif 000009
及び
【化１０】
2017506622.tif 000010
から成る群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＲCがフリルメチル又はベンジルであり、
ＲDがベンジルであり、
ＲEが水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式（Ｉ−ｉ）：
【化１１】
2017506622.tif 000011
を有する化合物またはその塩であって、
式中、ＲA、ＲB、ＲC、ＲD、及びＲEが請求項１で定義されたとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式（Ｉ−ｉｖ）：
【化１２】
2017506622.tif 000012
を有する化合物またはその塩であって、
式中、Ｒ200がそれぞれ任意で、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ及びアミノから成る群から独立して選択される１、２または３の置換基によって置換されるアリールまたはヘテロアリールであり；
ＲA及びＲBが請求項１で定義されたとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式（Ｉ−ｘ）
【化１３】
2017506622.tif 000013
を有する化合物またはその塩であって、
式中、
ｓが１または２であり、
Ｒ201が、それぞれ任意で、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ及びアミノから成る群から独立して選択される１、２または３の置換基によって置換されるアリールまたはヘテロアリールであり；
ＲAが請求項１で定義されたとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
式（Ｉ−ｘｖｉｉ）：
【化１４】
2017506622.tif 000014
を有する化合物またはその塩であって、式中、ｑが１または２であり；ｓが１または２である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１０】
ＲAが
【化１５】
2017506622.tif 000015
又は
【化１６】
2017506622.tif 000016
であり、
式中、Ｒ41、Ｒ42、Ｒ43、Ｒ44、Ｒ45、ｘ及びｙは請求項１で定義されたとおりであり、
ＲBが
【化１７】
2017506622.tif 000017
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
【化１８】
2017506622.tif 000018
【化１９】
2017506622.tif 000019
【化２０】
2017506622.tif 000020
【化２１】
2017506622.tif 000021
【化２２】
2017506622.tif 000022
【化２３】
2017506622.tif 000023
及び
【化２４】
2017506622.tif 000024
またはその塩から成る群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）
【化２５】
2017506622.tif 000025
の少なくとも１つの化合物との混合物を含む組成物であって、式（ＩＩ）におけるＲC、ＲD及びＲEが請求項１で定義されたとおりである、前記組成物。
【請求項１３】
式（ＩＩ）の化合物が、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｉｉ）、（ＩＩ−ｉｉｉ）、（ＩＩ−ｉｖ）、及び（ＩＩ−ｖ）：
【化２６】
2017506622.tif 000026
またはそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
試料における発光酵素の検出方法であって、
（ａ）前記試料を請求項１に記載の化合物に接触させることと、
（ｂ）前記試料にて発光を検出することとを含み、
発光の検出が発光酵素の存在を示す、前記検出方法。
【請求項１５】
前記試料が細胞を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞が、前記発光酵素を含む、又は、前記発光酵素を発現する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が緩衝溶液中にある、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物が少なくとも部分的に加水分解されて前記試料との接触に先立って細胞透過性基質を遊離する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記緩衝溶液が前記化合物の自己ベースの触媒を調節するまたは促進するｐＨを有して前記細胞透過性基質を遊離する、
前記緩衝溶液が求核試薬溶液を含み、前記求核試薬溶液が式（Ｉ）の化合物と反応して前記細胞透過性基質を遊離するように構成された求核試薬を含む、又は
前記緩衝溶液が式（Ｉ）の前記化合物の細胞非透過性部分を切断して細胞透過性基質を遊離する非発光酵素を含む、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
工程（ａ）がさらに、式（Ｉ）の化合物と反応して細胞透過性基質を提供するように構成された求核試薬または非発光酵素に前記試料を接触させることを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞透過性基質が式（ＩＩ）
【化２７】
2017506622.tif 000027
の化合物であって、式（ＩＩ）におけるＲC、ＲD及びＲEが請求項１で定義されたとおりである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
試料における第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用の検出方法であって、
（ａ）試料と請求項１の前記化合物と接触させること、ここで前記試料は、
（ｉ）第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ここで前記第１の融合タンパク質は発光酵素の第１の断片と第１のタンパク質とを含む、及び
（ｉｉ）第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、ここで前記第２の融合タンパク質は、
ａ．発光酵素の第２の断片と第２のタンパク質、又は
ｂ．蛍光アクセプター分子と第２のタンパク質を含む、
を含む、並びに
（ｂ）前記第２の融合タンパク質が発光酵素の第２の断片と第２のタンパク質とを含む場合、前記試料における発光を検出することを含み、前記発光の検出が前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を示す、又は
前記第２の融合タンパク質が蛍光アクセプター分子と第２のタンパク質とを含む場合、前記試料における生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）検出することを含み、前記ＢＲＥＴの検出が、生物発光ドナーと蛍光アクセプターの相互作用または最近接を示す、前記検出方法。
【請求項２３】
生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
第１の標的タンパク質と生物発光ドナー分子とを含む第１の融合タンパク質、ここで前記生物発光ドナー分子が発光酵素である、
第２の標的タンパク質と蛍光アクセプター分子とを含む第２の融合タンパク質、及び
請求項１に記載の前記化合物
とを含む、前記生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２２】
さらに、本発明は本明細書で記載されている種々の実施形態の一部またはすべての任意のまたはすべての考えられる組み合わせを包含する。本出願で引用された特許、特許出願、科学論文及び他の参考文献はその中で引用された参考文献と共にそのいずれかまたはすべてが全体として参照によって本明細書に組み入れられる。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕式（Ｉ）
2017506622.tif 000028
の化合物またはその塩であって、
式中、
ＲAは細胞非透過性部分であり；
ＲBは−ＯＣ（Ｏ）ＮＲAＲBのカルボニル基と反応するように構成される官能基を含む部分であり；
ＲCは、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり、その際、前記アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、及びシクロアルキルアルキルはそれぞれ独立して非置換であり、または１以上の好適な置換基によって置換され；
ＲDは水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり；
ＲEは水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジ（アルキル）アミノ、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、または−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）アルキルであり；
式中、破線の結合は一緒に式（Ｉ）の化合物における任意の６員環の存在を示し、任意の環は飽和または不飽和である、前記式（Ｉ）の化合物またはその塩。
〔２〕ＲAが、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルから成る群から選択され、その際、前記アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルはそれぞれ独立して非置換であり、または１以上の好適な置換基で置換され；
ＲBが、アミノアルキルまたはチオアルキルであり、その際、前記アルキルは非置換であり、または１以上の好適な置換基で置換され、及びアミノアルキルの前記アミノは非置換であり、または１以上の好適な置換基で置換され、またはアミノアルキルの窒素原子が複素環基の一部を形成し、前記複素環基は非置換であり、または１以上の好適な置換基で置換され；
ＲCが、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり、その際、前記アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、及びシクロアルキルアルキルは、それぞれ独立して非置換であり、または１以上の好適な置換基で置換され；
ＲDが、水素、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり；
ＲEが、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジ（アルキル）アミノ、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、または−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）アルキルであり；
式中、破線の結合は一緒に式（Ｉ）の化合物における任意の６員環の存在を示し、任意の環は飽和または不飽和である前記〔１〕に記載の化合物。
〔３〕ＲAが、アルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、テトラアルキルアンモニウムアルキル、ピリジニウムアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、マレイミドアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルケニル、アルキニル、−（ＣＲ1Ｒ2）m−Ｎ（Ｒ3）Ｃ（Ｏ）Ｒ4、−（ＣＲ5Ｒ6）m−ＳＯ3Ｒ7、−（ＣＲ5Ｒ6）m−ＯＰＯ2Ｒ7、−（ＣＲ5Ｒ6）m−ＳＯ2Ｎ（Ｒ8）（Ｒ9）、−（ＣＲ10Ｒ11）m−ＣＯ2Ｒ12、−（ＣＲ13Ｒ14）m−ＣＯＮ（Ｒ15）（Ｒ16）、−（ＣＲ17Ｒ18）m−ＯＮ（Ｒ19）（Ｒ20）、−（ＣＲ21Ｒ22）m−ヘテロシクリル−（ＣＲ23Ｒ24）n−Ｒ25、−（ＣＲ26Ｒ27）m−ヘテロアリール−（ＣＲ28Ｒ29）n−Ｒ30、−（ＣＲ31Ｒ32）m−アリール−（ＣＲ33Ｒ34）n−Ｒ35、及び−（ＣＲ36Ｒ37）m−シクロアルキル−（ＣＲ38Ｒ39）n−Ｒ40から成る群から選択され；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ21、Ｒ22、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ31、Ｒ32、Ｒ33、Ｒ34、Ｒ36、Ｒ37、Ｒ38、及びＲ39は、それぞれ独立して水素及びアルキルから成る群から選択され；
Ｒ4、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ12、Ｒ16、Ｒ20、Ｒ25、Ｒ30、Ｒ35、及びＲ40は、それぞれ独立して水素、アルキル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルアルコキシルアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、ヒドロキシ−（モノまたはポリアルコキシ）アルキル、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシアルキル、スルホネートアルキル、テトラアルキルアンモニウムアルキル、ピリジニウムアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、シクロアルキルアルキル、
2017506622.tif 000029
及び
2017506622.tif 000030
から成る群から選択され、
その際、Ｒ4、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ12、Ｒ16、Ｒ20、Ｒ25、Ｒ30、Ｒ35及びＲ40の前記アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、及びシクロアルキルアルキルはそれぞれ独立して非置換であり、またはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから独立して選択される１、２、３、４、または５の置換基で置換され；
Ｒ41、Ｒ42、及びＲ44は、各存在ごとに、それぞれ独立して水素、アルキル、カルボキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、スルホネートアルキル、テトラアルキルアンモニウムアルキル、ピリジニウムアルキル、イミダゾリルアルキル、グアニジノールアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキサミドアルキル、チオアルキル、セラニルアルキル、ピロリジニル、メチルチオアルキル、フェニルアルキル、４−ヒドロキシフェニルアルキル、及びインドリルアルキルから成る群から選択され；
Ｒ43及びＲ45は、それぞれ独立して水素、−Ｃ（Ｏ）アルキル及び
2017506622.tif 000031
から成る群から選択され；
ｍ、及びｎはそれぞれ独立して１、２、３、４、５、または６であり；
ｘ、及びｙはそれぞれ独立して１〜２０から選択される整数であり；
ＲBが、−（ＣＲ46Ｒ47）t−ＮＲ48Ｒ49または−（ＣＲ53Ｒ54）Z−ＳＲ55であり；
Ｒ46及びＲ47は、各存在ごとに、それぞれ独立して水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから成る群から選択され；
Ｒ48及びＲ49は、それぞれ独立して水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、−（ＣＲ50Ｒ51）z−ＯＣ（Ｏ）Ｒ52、−（ＣＲ53Ｒ54）Z−ＳＲ55、−（ＣＲ56Ｒ57）z−Ｓ（Ｏ）Ｒ58、−（ＣＲ59Ｒ60）Z−Ｓ（Ｏ）2Ｒ61、−（ＣＲ62Ｒ63）Z−Ｎ（Ｒ64）（Ｒ65）、−（ＣＲ66Ｒ67）z−Ｎ（Ｒ68）Ｃ（Ｏ）Ｒ69、−（ＣＲ70Ｒ71）z−Ｎ（Ｒ72）Ｓ（Ｏ）2Ｒ73、−（ＣＲ74Ｒ75）z−Ｎ（Ｒ76）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ77）（Ｒ78）、−（ＣＲ79Ｒ80）z−Ｎ（Ｒ81）Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ82）（Ｒ83）、−（ＣＲ84Ｒ85）z−Ｃ（Ｏ）Ｒ86、−（ＣＲ87Ｒ88）z−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ89）、−（ＣＲ90Ｒ91）z−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ92）（Ｒ93）、及び−Ｃ（Ｒ94）＝Ｎ−ＯＲ95から選択され；
またはＲ48及びＲ49はそれらが連結される窒素原子と一緒にヘテロシクリルを形成し、その際、前記ヘテロシクリルは非置換であり、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＮＯ2、−ＣＮ、ハロゲン、オキソ、−ＯＲ96、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ97、−ＳＲ98、−Ｓ（Ｏ）Ｒ99、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ100、−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ101）（Ｒ102）、−Ｎ（Ｒ103）（Ｒ104）、−Ｎ（Ｒ105）Ｃ（Ｏ）Ｒ106、−Ｎ（Ｒ107）Ｓ（Ｏ）2Ｒ108、−Ｎ（Ｒ109）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ110）（Ｒ112）、−Ｎ（Ｒ113）Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ114）（Ｒ115）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ116、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ117）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ118）（Ｒ119）、ハロアルキル、−（ＣＲ120Ｒ121）Z−ＣＮ、−（ＣＲ122Ｒ123）z−ＯＲ124、−（ＣＲ125Ｒ126）z−ＯＣ（Ｏ）Ｒ127、−（ＣＲ128Ｒ129）Z−ＳＲ130、−（ＣＲ131Ｒ132）z−Ｓ（Ｏ）Ｒ133、−（ＣＲ134Ｒ135）z−Ｓ（Ｏ）2Ｒ136、−（ＣＲ137Ｒ138）Z−Ｎ（Ｒ139）（Ｒ140）、−（ＣＲ141Ｒ142）Z−Ｎ（Ｒ143）Ｃ（Ｏ）Ｒ144、−（ＣＲ145Ｒ146）z−Ｎ（Ｒ147）Ｓ（Ｏ）2Ｒ148、−（ＣＲ149Ｒ150）z−Ｎ（Ｒ151）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ152）（Ｒ153）、−（ＣＲ154Ｒ155）z−Ｎ（Ｒ156）Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ157）（Ｒ158）、−（ＣＲ159Ｒ160）z−Ｃ（Ｏ）Ｒ161、−（ＣＲ162Ｒ163）z−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ164）及び−（ＣＲ165Ｒ166）z−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ167）（Ｒ168）から成る群から独立して選択される１、２、３、４、５または６の置換基によって置換され；
Ｒ52、Ｒ55、Ｒ64、Ｒ65、Ｒ68、Ｒ72、Ｒ69、Ｒ76、Ｒ77、Ｒ81、Ｒ82、Ｒ86、Ｒ89、Ｒ92、Ｒ93、Ｒ96、Ｒ97、Ｒ98、Ｒ101、Ｒ102、Ｒ103、Ｒ104、Ｒ105、Ｒ106、Ｒ107、Ｒ109、Ｒ110、Ｒ112、Ｒ113、Ｒ114、Ｒ115、Ｒ116、Ｒ117、Ｒ118、Ｒ119、Ｒ124、Ｒ127、Ｒ130、Ｒ139、Ｒ140、Ｒ143、Ｒ144、Ｒ147、Ｒ151、Ｒ152、Ｒ153、Ｒ156、Ｒ157、Ｒ158、Ｒ161、Ｒ164、Ｒ167、及びＲ168は、各存在ごとに、それぞれ独立して水素、アルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ハロアルコキシアルキル、及びハロアルキルから成る群から選択され；
Ｒ58、Ｒ61、Ｒ73、Ｒ99、Ｒ100、Ｒ108、Ｒ133、Ｒ136、及びＲ148は、各存在ごとに、それぞれ独立してアルキル及びハロアルキルから選択され；
Ｒ50、Ｒ51、Ｒ53、Ｒ54、Ｒ56、Ｒ57、Ｒ59、Ｒ60、Ｒ62、Ｒ63、Ｒ66、Ｒ67、Ｒ70、Ｒ71、Ｒ74、Ｒ75、Ｒ79、Ｒ80、Ｒ84、Ｒ85、Ｒ87、Ｒ88、Ｒ90、Ｒ91、Ｒ120、Ｒ121、Ｒ122、Ｒ123、Ｒ125、Ｒ126、Ｒ128、Ｒ129、Ｒ131、Ｒ132、Ｒ134、Ｒ135、Ｒ137、Ｒ138、Ｒ141、Ｒ142、Ｒ145、Ｒ146、Ｒ149、Ｒ150、Ｒ154、Ｒ155、Ｒ159、Ｒ160、Ｒ162、Ｒ163、Ｒ165、及びＲ166は、各存在ごとに、それぞれ独立して水素、ハロゲン、アルキル、及びハロアルキルから選択され；
Ｒ94及びＲ95は、各存在ごとに、それぞれ独立して水素及びアルキルから選択され；
ｔは、１、２、３、４、５、６、７、または８であり；
ｚは、各存在ごとに、それぞれ独立して１、２、３、または４であり；
ＲCは、−（ＣＨ2）0-3−ＴまたはＣ1-5アルキルであり；その際、Ｔはアリール、ヘテロアリール、またはシクロアルキルであり、その際、前記アリール、ヘテロアリール、及びシクロアルキルは、それぞれ独立して非置換であり、またはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキルアミノアルキル）、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから成る群から独立して選択される１、２、または３の置換基によって置換され；
ＲDが、水素、低級シクロアルキル、ベンジル、及びＣ1−Ｃ4−アルキルから成る群から選択され；および  
ＲEが、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）−Ｃ1−Ｃ7−アルキルまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−Ｃ1−Ｃ7−アルキルから成る群から選択され；
その際、式（Ｉ）の破線の結合は任意の環の存在を示し、それは飽和されてもよいし、または不飽和であってもよい前記〔１〕に記載の化合物。
〔４〕ＲAが、−（ＣＲ1Ｒ2）m−Ｎ（Ｒ3）Ｃ（Ｏ）Ｒ4であり、式中、ｍは２、３または４であり；Ｒ1及びＲ2は、各存在ごとに、水素であり；Ｒ3は水素またはメチルであり；ならびにＲ4は上記で定義されたとおりである前記〔３〕に記載の化合物。
〔５〕Ｒ4がｔｅｒｔ−ブトキシ、フェニル、メチル、４−トリフルオロメチルフェニル、イソプロピル、４−メトキシフェニルまたは４−フルオロフェニルである前記〔４〕に記載の化合物。
〔６〕ＲAが
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2017506622.tif 000033
及び
2017506622.tif 000034
から成る群から選択される前記〔１〕に記載の化合物。
〔７〕ＲBがモルフォリニルアルキルである前記〔１〕に記載の化合物。
〔８〕ＲBが
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2017506622.tif 000036
及び
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から成る群から選択される前記〔１〕に記載の化合物。
〔９〕ＲCがフリルメチルである前記〔１〕に記載の化合物。
〔１０〕ＲCがベンジルである前記〔１〕に記載の化合物。
〔１１〕ＲDがベンジルである前記〔１〕に記載の化合物。
〔１２〕ＲEが水素である前記〔１〕に記載の化合物。
〔１３〕式（Ｉ−ｉ）：
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またはその塩を有し、
式中、ＲA、ＲB、ＲC、ＲD、及びＲEが上記で定義されたとおりである前記〔１〕に記載の化合物。
〔１４〕式（Ｉ−ｉｖ）：
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またはその塩を有し、
式中、Ｒ200がそれぞれ任意で、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ及びアミノから成る群から独立して選択される１、２または３の置換基によって置換されるアリールまたはヘテロアリールであり；
ＲA及びＲBが上記で定義されたとおりである前記〔１〕に記載の化合物。
〔１５〕式（Ｉ−ｘ）
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またはその塩を有し、
式中、
ｓが１または２であり、
Ｒ201が、それぞれ任意で、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ及びアミノから成る群から独立して選択される１、２または３の置換基によって置換されるアリールまたはヘテロアリールであり；
ＲAが上記で定義されたとおりである前記〔１〕に記載の化合物。
〔１６〕式（Ｉ−ｘｖｉｉ）：
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またはその塩を有し、式中、ｑが１または２であり；ｓが１または２であり；Ｒ4が上記で定義されたとおりである前記〔３〕に記載の化合物。
〔１７〕
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及び
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またはその塩から成る群から選択される前記〔１〕に記載の化合物。
〔１８〕前記〔１〕に記載の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）
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の少なくとも１つの化合物との混合物を含む組成物であって、式（ＩＩ）におけるＲC、ＲD及びＲEが上記で定義されたとおりである、前記組成物。
〔１９〕式（ＩＩ）の化合物が、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｉｉ）、（ＩＩ−ｉｉｉ）、（ＩＩ−ｉｖ）、及び（ＩＩ−ｖ）：
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またはそれらの組み合わせから成る群から選択される前記〔１８〕に記載の組成物。
〔２０〕試料における発光酵素の検出方法であって、
（ａ）前記試料を前記〔１〕に記載の化合物に接触させることと、
（ｂ）前記試料にて発光を検出することとを含み、
発光の検出が発光酵素の存在を示す、前記検出方法。
〔２１〕試料におけるプロモータの活性の測定方法であって、前記プロモータが発光酵素をコードする遺伝子に操作可能に連結され、
（ａ）試料を前記〔１〕に記載の化合物に接触させて反応混合物を作製することと、
（ｂ）前記反応混合物の発光を測定することによってプロモータの活性を決定することとを含み、前記試料が前記プロモータを含む、前記測定方法。
〔２２〕前記試料が細胞を含む前記〔２０〕または〔２１〕に記載の方法。
〔２３〕前記細胞が前記発光酵素を含む前記〔２３〕に記載の方法。
〔２４〕前記細胞が前記発光酵素を発現する前記〔２３〕に記載の方法。
〔２５〕前記〔１〕に記載の前記化合物が緩衝溶液中にある前記〔２０〕または〔２１〕に記載の方法。
〔２６〕前記〔１〕に記載の前記化合物が少なくとも部分的に加水分解されて前記試料との接触に先立って細胞透過性基質を遊離する前記〔２５〕に記載の方法。
〔２７〕前記緩衝溶液が前記〔１〕に記載の前記化合物の自己ベースの触媒を調節するまたは促進するｐＨを有して前記細胞透過性基質を遊離する前記〔２６〕に記載の方法。
〔２８〕前記緩衝溶液が求核試薬溶液を含み、前記求核試薬溶液が式（Ｉ）の化合物と反応して前記細胞透過性基質を遊離するように構成された求核試薬を含む前記〔２６〕に記載の方法。
〔２９〕前記緩衝溶液が式（Ｉ）の前記化合物の細胞非透過性部分を切断して細胞透過性基質を遊離する非発光酵素を含む前記〔２６〕に記載の方法。
〔３０〕工程（ａ）がさらに、式（Ｉ）の化合物と反応して細胞透過性基質を提供するように構成された求核試薬または非発光酵素に前記試料を接触させることを含む前記〔２０〕または〔２１〕に記載の方法。
〔３１〕前記細胞透過性基質が式（ＩＩ）
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の化合物であって、式（ＩＩ）におけるＲC、ＲD及びＲEが上記で定義されたとおりである前記〔２６〕〜〔３０〕のいずれか一項に記載の方法。
〔３２〕式（ＩＩ）の化合物が、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｉｉ）、（ＩＩ−ｉｉｉ）、（ＩＩ−ｉｖ）、及び（ＩＩ−ｖ）：
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またはそれらの組み合わせから成る群から選択される前記〔３１〕に記載の方法。
〔３３〕試料における第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用の検出方法であって、
（ａ）試料と前記〔１〕の前記化合物と接触させ、前記試料は、
（ｉ）第１の融合タンパク質は発光酵素の第１の断片と第１のタンパク質とを含み、前記第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと
（ｉｉ）第２の融合タンパク質は発光酵素の第２の断片と第２のタンパク質とを含み、前記第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドとを含み、
（ｂ）前記試料における発光を検出することとを含み、
前記発光の検出が前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用を示す、前記検出方法。
〔３４〕前記〔１〕に記載の前記化合物が少なくとも部分的に加水分解されて細胞透過性基質を遊離する前記〔３３〕に記載の方法。
〔３５〕前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質が相互作用すると、前記発光酵素の前記第１の断片と前記発光酵素の前記第２の断片が前記細胞透過性基質を安定して結合することが可能である完全長の酵素を再構成する前記〔３４〕に記載の方法。
〔３６〕試料における第１のタンパク質と第２のタンパク質との間の相互作用の検出方法であって、
（ａ）試料と前記〔１〕の前記化合物と接触させ、前記試料は、
（ｉ）第１の融合タンパク質が発光酵素と第１のタンパク質とを含み、前記第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと
（ｉｉ）第２の融合タンパク質が蛍光アクセプター分子と第２のタンパク質とを含み、前記第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドとを含み、
（ｂ）前記試料にて、生物発光ドナーと蛍光アクセプターの相互作用または最近接を示す生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）検出することとを含む、前記検出方法。
〔３７〕前記試料が細胞を含む前記〔３３〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の方法。
〔３８〕前記細胞が発光酵素を含む前記〔３７〕に記載の方法。
〔３９〕前記発光酵素がセレンテラジンを利用するルシフェラーゼ酵素である前記〔３８〕に記載の方法。
〔４０〕セレンテラジンを利用する酵素がＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ酵素またはその変異体または突然変異体である前記〔３９〕に記載の方法。
〔４１〕生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、生物発光ドナー分子が発光酵素である、前記生物発光ドナー分子と第１の標的タンパク質とを含む第１の融合タンパク質と、第２の標的タンパク質と蛍光アクセプター分子とを含む第２の融合タンパク質と、前記〔１〕に記載の前記化合物とを含む前記生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システム。
〔４２〕前記〔１〕に記載の化合物を含むキット。
〔４３〕試料における酵素の検出方法であって、
（ａ）式（Ｉ）の化合物、式（ａ）の化合物、式（ｂ）の化合物、式（ｃ）の化合物、式（ｄ）の化合物、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される化合物に前記試料を接触させることと、
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及び
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（式中、Ｒ’は、各存在ごとに、独立してハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから成る群から選択され；ｙ’は０、１、２、３、または４であり；ＲA、ＲB、ＲC、ＲD及びＲEは前記〔１〕で定義されたとおりである）；
（ｂ）前記試料にて発光を検出することとを含み、その際、式（Ｉ）の前記化合物、式（ａ）の前記化合物、式（ｂ）の前記化合物、式（ｃ）の前記化合物、式（ｄ）の前記化合物、またはそれらの前記組み合わせは、非発光酵素との反応を介して１以上の細胞透過性基質に変換される、前記検出方法。
〔４４〕前記非発光酵素が、ホスファターゼ、プロテアーゼ、エステラーゼまたはスルファターゼである前記〔４３〕に記載の方法。