【手続補正書】
【提出日】平成30年9月19日(2018.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルブソシドからステビオシドおよびレバウジオシドＫＡの混合物を合成するための方法であって、
ルブソシドと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）およびウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）からなる群より選択される基質と、ＥＵＧＴ１１およびＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素からなる群から選択されるＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼとを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、ステビオシドおよびレバウジオシドＫＡの混合物を生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
グルコースが共有結合によりルブソシドのＣ２’−１９−Ｏ−グルコースにカップリングされ、グルコースが共有結合によりルブソシドのＣ２’−１３−Ｏ−グルコースにカップリングされ、ステビオシドが生成される、方法。
【請求項２】
ルブソシドからレバウジオシドＫＡを合成するための方法であって、
ルブソシドと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）およびウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）、およびＨＶ１からなる群より選択される基質とを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、レバウジオシドＫＡを生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
グルコースが共有結合によりルブソシドのＣ２’−１９−Ｏ−グルコースにカップリングされ、レバウジオシドＫＡが生成される、方法。
【請求項３】
ルブソシドからレバウジオシドＧを合成するための方法であって、
ルブソシドと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）およびウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）からなる群より選択される基質と、ＵＧＴ７６Ｇ１およびＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼシンターゼ融合酵素から選択されるＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼとを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、レバウジオシドＧを生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
グルコースが共有結合によりルブソシドのＣ３’−１３−Ｏ−グルコースにカップリングされ、レバウジオシドＧが生成される、方法。
【請求項４】
レバウジオシドＤからレバウジオシドＭを合成するための方法であって、
レバウジオシドＤと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、ウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される基質と、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウリジンジホスホ（ｄｉｐｏｓｐｈｏ）グリコシルトランスフェラーゼ（ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ）とを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、レバウジオシドＭを生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
グルコースが共有結合によりレバウジオシドＤにカップリングされ、レバウジオシドＭが生成される、
方法。
【請求項５】
レバウジオシドＥからレバウジオシドＭを合成するための方法であって、
レバウジオシドＥと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）およびウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される基質と、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウリジンジホスホ（ｄｉｐｏｓｐｈｏ）グリコシルトランスフェラーゼ（ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ）とを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、レバウジオシドＭを生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
グルコースが共有結合によりレバウジオシドＥにカップリングされレバウジオシドＤが生成され、グルコースが共有結合によりレバウジオシＤにカップリングされレバウジオシドＭが生成される、
方法。
【請求項６】
ステビオシドからレバウジオシドＭを生成するための方法であって、
ステビオシドと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、ウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される基質と、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＨＶ１、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウリジンジホスホ（ｄｉｐｏｓｐｈｏ）グリコシルトランスフェラーゼ（ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ）とを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、レバウジオシドＭを生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
ＵＧＴ７６Ｇ１または前記融合酵素によりグルコースが共有結合によりステビオシドにカップリングされ、レバウジオシドＡが生成され、ＨＶ１によりグルコースが共有結合によりレバウジオシドＡにカップリングされ、レバウジオシドＤが生成され、ＵＧＴ７６Ｇ１または前記融合酵素によりグルコースが共有結合によりレバウジオシドＤにカップリングされ、レバウジオシドＭが生成される、
方法。
【請求項７】
レバウジオシドＡからレバウジオシドＭを生成するための方法であって、
レバウジオシドＡと、スクロース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、ウリジン二リン酸−グルコース（ＵＤＰ−グルコース）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される基質と；ＵＧＴ７６Ｇ１、ＨＶ１、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるウリジンジホスホ（ｄｉｐｏｓｐｈｏ）グリコシルトランスフェラーゼ（ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ）とを含む反応混合物を調製することと、
前記反応混合物を、レバウジオシドＭを生成させるのに十分な時間の間インキュベートすることと
を含み、
ＨＶ１により、グルコースが共有結合により前記レバウジオシドＡにカップリングされ、レバウジオシドＤが生成され、ならびに、ＵＧＴ７６Ｇ１または前記融合酵素によりグルコースが共有結合により前記レバウジオシドＤにカップリングされ、レバウジオシドＭが生成される、
方法。
【請求項８】
スクロースシンターゼを前記反応混合物に添加することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記スクロースシンターゼが、シロイヌナズナ属スクロースシンターゼ１；シロイヌナズナ属スクロースシンターゼ３；ならびにリョクトウスクロースシンターゼからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記スクロースシンターゼがシロイヌナズナスクロースシンターゼ１である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素が、スクロースシンターゼドメインに結合されたＥＵＧＴ１１ウリジンジホスホグリコシルトランスフェラーゼドメインである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ融合酵素が、スクロースシンターゼドメインに結合されたＵＧＴ７６Ｇ１ウリジンジホスホグリコシルトランスフェラーゼドメインである、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記スクロースシンターゼドメインが、シロイヌナズナ属スクロースシンターゼ１；シロイヌナズナ属スクロースシンターゼ３；ならびにリョクトウスクロースシンターゼからなる群より選択される、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記スクロースシンターゼドメインがシロイヌナズナスクロースシンターゼ１である、請求項１３に記載の方法。