【手続補正書】
【提出日】平成30年1月24日(2018.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１０８】
2017518261.tif 000001
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物
［式中、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７およびＧ８はそれぞれの場合、独立に、水素、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルケニル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキニル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢであり、
Ｒはそれぞれの場合、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢから独立に選択され、
各ＲＡは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、
各ＲＢは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、あるいは２個のＲＢは、介在する窒素と一緒になって、複素環を形成し、
Ｇ４ａおよびＧ４ｂはそれぞれの場合、フルオロ、アルキル、アルコキシ、アリールオキシ、またはアルキニルであり、
アルキルおよびアルコキシ基は、非分岐飽和であり、１〜４個の炭素原子を有し、アリール基およびアリールオキシのアリール基は、炭素環式アリールまたは複素環式アリールのいずれかでよく、炭素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で６〜２０個の炭素原子を有し、複素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で５〜２０個の炭素原子を有し、カルボアルコキシ基は、カルボン酸のアルキルエステルであり、アルキル基は、上記に定義されている通りであり、各アルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、ベンゾ、およびカルボアルコキシは、独立に、非置換であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、アルキル置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、またはアリールであり、アリール置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキル、アリール、ニトロ、またはカルボキシルであり、ハロ置換基は、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０、１、２、３、または４である］。
【請求項２】
Ｇ１およびＧ３が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｇ５およびＧ７が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（ＩＩ）のもの、
【化１０９】
2017518261.tif 000002
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
表１から選択される式によって記載される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
【化１１０】
2017518261.tif 000003
からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
アルキン含有分子をイメージングする方法であって、
（ａ）前記分子のアルキン基への請求項１に記載の化合物のライゲーションのための条件下で、前記化合物と、前記アルキン含有分子を含有する試料とを接触させ、トリアゾール生成物を形成させるステップと、
（ｂ）前記トリアゾール生成物から放出される蛍光シグナルを測定するステップと
を含む、方法。
【請求項８】
前記接触ステップが、金属触媒の存在下で行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記金属触媒が、銅（Ｉ）である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物が、前記アルキン基に共有結合的に連結している、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記試料が、細胞を含有し、前記アルキン含有分子が、細胞表面上または前記細胞内に位置している、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が、表１から選択される式によって記載される、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が、請求項６に記載の化合物から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記アルキン含有分子が、生体分子である、請求項７から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記生体分子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質またはグリカンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記生体分子が、細胞の表面上または近くに位置している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記生体分子が、細胞内生体分子である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
試料中のアルキン含有分子を検出する方法であって、
（ａ）請求項１に記載の化合物と、アルキン含有分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物から放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記アルキン含有分子の存在を決定するステップと
を含み、前記分子の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、前記アルキン含有分子の存在を示す、方法。
【請求項１９】
前記接触ステップが、金属触媒の存在下で行われる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記金属触媒が、銅（Ｉ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記試料が、細胞を含有し、前記アルキン含有分子が、細胞の表面上もしくは近く、または細胞内に位置している、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物が、表１から選択される式によって記載される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物が、請求項６に記載の化合物から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記アルキン含有分子が、生体分子である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記生体分子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質またはグリカンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記生体分子が、細胞の表面上または近くに位置している、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記生体分子が、細胞内生体分子である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
細胞におけるデュアル蛍光イメージングのための前記化合物の使用を含む、請求項７または１８に記載の方法。
【請求項２９】
式（Ｖ）または式（ＶＩ）の化合物：
【化１１３】
2017518261.tif 000004
（式中、Ｌは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ウンベリフェリル、ハロゲン、クマリンオキシド、トリフレート、メシレート、トシレート、ハロゲン、アルコキシ、フェノキシ、ベンゾエート、ペンタフルオロフェノキシ、または４−ニトロフェノキシからなる群から選択される）。
【請求項３０】
Ｌが、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｌが、ウンベリフェリルである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３２】
化合物６０１：
【化１１６】
2017518261.tif 000005
である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
シアリダーゼ酵素の活性部位をイメージングする方法であって、
（ａ）前記シアリダーゼ酵素の前記活性部位への請求項２９に記載の化合物のライゲーションのための条件下で、前記化合物と、前記シアリダーゼ酵素を含むことが疑われる試料とを接触させ、共有結合生成物を形成させるステップと、
（ｂ）前記共有結合生成物と、式（Ｉ）のアジド含有蛍光発生プローブとを接触させて、蛍光発生トリアゾール生成物を形成させるステップと、
（ｃ）前記トリアゾール生成物から放出される蛍光シグナルを測定するステップと
を含み、
前記式（Ｉ）のアジド含有蛍光発生プローブは、以下の式：
【化１１７】
2017518261.tif 000006
［式中、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７およびＧ８はそれぞれの場合、独立に、水素、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルケニル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキニル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢであり、
各ＲＡは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、
各ＲＢは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、あるいは２個のＲＢは、介在する窒素と一緒になって、複素環を形成し、
Ｇ４ａおよびＧ４ｂはそれぞれの場合、フルオロ、アルキル、アルコキシ、アリールオキシ、またはアルキニルであり、
アルキルおよびアルコキシ基は、非分岐飽和であり、１〜４個の炭素原子を有し、アリール基およびアリールオキシのアリール基は、炭素環式アリールまたは複素環式アリールのいずれかでよく、炭素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で６〜２０個の炭素原子を有し、複素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で５〜２０個の炭素原子を有し、カルボアルコキシ基は、カルボン酸のアルキルエステルであり、アルキル基は、上記に定義されている通りであり、各アルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、ベンゾ、およびカルボアルコキシは、独立に、非置換であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、アルキル置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、またはアリールであり、アリール置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキル、アリール、ニトロ、またはカルボキシルであり、ハロ置換基は、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０、１、２、３、または４である］
を有する、方法。
【請求項３４】
試料中のシアリダーゼ酵素の活性部位を検出する方法であって、
（ａ）請求項２９に記載の化合物と、シアリダーゼ酵素分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物中のクマジンから放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記シアリダーゼ酵素分子の存在を決定するステップと
を含み、
前記化合物の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、アジド含有分子の存在を示す、方法。
【請求項３５】
試料中のシアリダーゼ酵素の活性部位を検出する方法であって、
（ａ）請求項３０に記載の化合物と、シアリダーゼ酵素分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物中のクマジンから放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記シアリダーゼ酵素分子の存在を決定するステップと
を含み、
前記化合物の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、アジド含有分子の存在を示す、方法。
【請求項３６】
試料中のシアリダーゼ酵素の活性部位を検出する方法であって、
（ａ）請求項３１に記載の化合物と、シアリダーゼ酵素分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物中のクマジンから放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記シアリダーゼ酵素分子の存在を決定するステップと
を含み、
前記化合物の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、アジド含有分子の存在を示す、方法。
【請求項３７】
試料中のシアリダーゼ酵素の活性部位を検出する方法であって、
（ａ）請求項３２に記載の化合物と、シアリダーゼ酵素分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物中のクマジンから放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記シアリダーゼ酵素分子の存在を決定するステップと
を含み、
前記化合物の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、アジド含有分子の存在を示す、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
ある特定の実施形態では、本開示は、
（ａ）請求項４４に記載の化合物と、シアリダーゼ酵素分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物中のクマジンから放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）試料中のシアリダーゼ酵素分子の存在を決定するステップと
を含む、試料中のシアリダーゼ酵素の活性部位を検出する方法であって、
分子の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、アジド含有分子の存在を示す、方法を提供する。
本発明の実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
式（Ｉ）の化合物：
【化１０８】
2017518261.tif 000007
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物
［式中、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７およびＧ８はそれぞれの場合、独立に、水素、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルケニル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキニル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢであり、
Ｒはそれぞれの場合、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢから独立に選択され、
各ＲＡは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、
各ＲＢは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、あるいは２個のＲＢは、介在する窒素と一緒になって、複素環を形成し、
Ｇ４ａおよびＧ４ｂはそれぞれの場合、フルオロ、アルキル、アルコキシ、アリールオキシ、またはアルキニルであり、
アルキルおよびアルコキシ基は、非分岐飽和であり、１〜４個の炭素原子を有し、アリール基およびアリールオキシのアリール基は、炭素環式アリールまたは複素環式アリールのいずれかでよく、炭素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で６〜２０個の炭素原子を有し、複素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で５〜２０個の炭素原子を有し、カルボアルコキシ基は、カルボン酸のアルキルエステルであり、アルキル基は、上記に定義されている通りであり、各アルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、ベンゾ、およびカルボアルコキシは、独立に、非置換であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、アルキル置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、またはアリールであり、アリール置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキル、アリール、ニトロ、またはカルボキシルであり、ハロ置換基は、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０、１、２、３、または４である］。
（項目２）
Ｇ１およびＧ３が、メチルである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｇ５およびＧ７が、メチルである、項目１に記載の化合物。
（項目４）
式（ＩＩ）のもの、
【化１０９】
2017518261.tif 000008
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物である、項目１から３のいずれか一項に記載の化合物。
（項目５）
表１から選択される式によって記載される、項目４に記載の化合物。
（項目６）
【化１１０】
2017518261.tif 000009
からなる群から選択される、項目４に記載の化合物。
（項目７）
アルキン含有分子をイメージングする方法であって、
（ａ）前記分子のアルキン基への項目１に記載の化合物のライゲーションのための条件下で、前記化合物と、前記アルキン含有分子を含有する試料とを接触させ、トリアゾール生成物を形成させるステップと、
（ｂ）前記トリアゾール生成物から放出される蛍光シグナルを測定するステップと
を含む、方法。
（項目８）
前記接触ステップが、金属触媒の存在下で行われる、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記金属触媒が、銅（Ｉ）である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記化合物が、前記アルキン基に共有結合的に連結している、項目７に記載の方法。
（項目１１）
前記試料が、細胞を含有し、前記アルキン含有分子が、細胞表面上または前記細胞内に位置している、項目７に記載の方法。
（項目１２）
前記化合物が、表１から選択される式によって記載される、項目７に記載の方法。
（項目１３）
前記化合物が、項目６に記載の化合物から選択される、項目７に記載の方法。
（項目１４）
前記アルキン含有分子が、生体分子である、項目７から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記生体分子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質またはグリカンである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記生体分子が、細胞の表面上または近くに位置している、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記生体分子が、細胞内生体分子である、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
試料中のアルキン含有分子を検出する方法であって、
（ａ）項目１に記載の化合物と、アルキン含有分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物から放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記アルキン含有分子の存在を決定するステップと
を含み、前記分子の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、前記アルキン含有分子の存在を示す、方法。
（項目１９）
前記接触ステップが、金属触媒の存在下で行われる、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記金属触媒が、銅（Ｉ）である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記試料が、細胞を含有し、前記アルキン含有分子が、細胞の表面上もしくは近く、または細胞内に位置している、項目１８から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記化合物が、表１から選択される式によって記載される、項目１８に記載の方法。
（項目２３）
前記化合物が、項目６に記載の化合物から選択される、項目１８に記載の方法。
（項目２４）
前記アルキン含有分子が、生体分子である、項目１８に記載の方法。
（項目２５）
前記生体分子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質またはグリカンである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記生体分子が、細胞の表面上または近くに位置している、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記生体分子が、細胞内生体分子である、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
細胞におけるデュアル蛍光イメージングのための前記化合物の使用を含む、項目７または１８に記載の方法。
（項目２９）
式（ＩＶ）の化合物：
【化１１１】
2017518261.tif 000010
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物
［式中、
Ｇ９、Ｇ１０、Ｇ１１、Ｇ１２、Ｇ１３、Ｇ１４、Ｇ１５、Ｇ１６、Ｇ１７およびＧ１８はそれぞれの場合、独立に、水素、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキル、任意選択で置換されているＣ１〜６アルケニル、任意選択でハロゲン、任意選択でニトロソ、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキニル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢであり、
Ｒはそれぞれの場合、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているアシル、−ＯＲＡ、−ＣＨ２ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ３ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、および−ＮＨＳＯ２ＲＢから独立に選択され、
各ＲＡは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、
各ＲＢは、水素、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、および任意選択で置換されているアリールから独立に選択され、あるいは２個のＲＢは、介在する窒素と一緒になって、複素環を形成し、
Ｇ９およびＧ１０はそれぞれの場合、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、ニトロソ、アルキル、アルコキシ、アリールオキシ、またはアルキニルであり、
アルキルおよびアルコキシ基は、非分岐飽和であり、１〜４個の炭素原子を有し、アリールオキシのアリール基およびアリール基は、炭素環式アリールまたは複素環式アリールのいずれかでよく、炭素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で６〜２０個の炭素原子を有し、複素環式アリール基は、置換基の炭素原子を含めて全部で５〜２０個の炭素原子を有し、カルボアルコキシ基は、カルボン酸のアルキルエステルであり、アルキル基は、上記に定義されている通りであり、各アルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、ベンゾ、およびカルボアルコキシは、独立に、非置換であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、アルキル置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、またはアリールであり、アリール置換基は、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキル、アリール、ニトロ、またはカルボキシルであり、ハロ置換基は、フルオロまたはクロロであり、
ｍは、１である］。
（項目３０）
Ｇ９およびＧ１０が、水素である、項目２９に記載の化合物。
（項目３１）
Ｇ９およびＧ１０が、ハロゲンである、項目２９に記載の化合物。
（項目３２）
Ｇ９およびＧ１０が、フッ素である、項目３１に記載の化合物。
（項目３３）
化合物１０１
【化１１２】
2017518261.tif 000011
である、項目２９に記載の化合物。
（項目３４）
アジド含有分子をイメージングする方法であって、
（ａ）前記分子のアジド基への項目２９に記載の化合物のライゲーションのための条件下で、前記化合物と、前記アジド含有分子を含有する試料とを接触させ、トリアゾール生成物を形成させるステップと、
（ｂ）前記トリアゾール生成物から放出される蛍光シグナルを測定するステップと
を含む、方法。
（項目３５）
試料中のアジド含有分子を検出する方法であって、
（ａ）項目２９に記載の化合物と、アジド含有分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物から放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記アジド含有分子の存在を決定するステップと
を含み、前記分子の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、前記アジド含有分子の存在を示す、方法。
（項目３６）
（ａ）１−ベンゾスベロンの８位における位置選択的ニトロ化；
（ｂ）１−ベンゾスベロンの８位におけるニトロ基の還元；
（ｃ）還元されたニトロ基の酸条件下でのジアゾ化およびヒドロキシル化による、アルコールの形成；
（ｄ）ベンジルエーテルとしての前記アルコール上のヒドロキシル基の保護；
（ｅ）ＢＦ３・ＯＥｔ２の存在下でのＴＭＳ−ジアゾメタンによる処理による環状ケトン上の環の拡張；
（ｆ）ＮａＢＨ４によるシクロオクタノン上のカルボニル基の還元；
（ｇ）前記還元されたカルボニル基のシリル化による、シリルエーテルの形成；
（ｈ）水素化による前記アルコール上のベンジル保護基の除去による、フェノールの形成；
（ｉ）Ｅｔ３ＮおよびＭｇＣｌ２の存在下での過剰なパラホルムアルデヒドによる前記フェノールの処理による、サリチルアルデヒドの形成；
（ｊ）新たに調製したケテニリデントリフェニルホスホランによる前記サリチルアルデヒドの処理；
（ｋ）前記ケテニリデントリフェニルホスホラン処理したサリチルアルデヒドの脱シリル化および酸化による、ケトンの形成、
（ｌ）エノールトリフレートへの前記ケトン中の前記カルボニル基の変換；
（ｍ）強塩基ＮａＨＭＤＳによる前記エノールトリフレートの処理による脱離反応、それによる最終生成物１０１の生成
を含む、項目３３に記載の化合物を生成する方法。
（項目３７）
式（Ｖ）の化合物：
【化１１３】
2017518261.tif 000012
（式中、Ｌは、ハロゲン、クマリンオキシド、トリフレート、メシレート、トシレート、ハロゲン、アルコキシ、フェノキシ、ペンタフルオロフェノキシ、または４−ニトロフェノキシからなる群から選択される）。
（項目３８）
Ｌが、ハロゲンである、項目３７に記載の化合物。
（項目３９）
Ｌが、フッ素である、項目３８に記載の化合物。
（項目４０）
クマリンである、項目３７に記載の化合物。
（項目４１）
式（ＶＩ）の化合物：
【化１１４】
2017518261.tif 000013
（式中、Ｌは、ハロゲン、アルコキシ、フェノキシ、ペンタフルオロフェノキシ、４−ニトロフェノキシ、ウンベリフェリル、アルカノエート、ベンゾエート、トリフレート、メシレート、またはトシレートからなる群から選択される）。
（項目４２）
Ｌが、ハロゲンである、項目４１に記載の化合物。
（項目４３）
Ｌが、化合物５０１である、項目４１に記載の化合物。
【化１１５】
2017518261.tif 000014
（項目４４）
化合物６０１である、項目４１に記載の化合物。
【化１１６】
2017518261.tif 000015
（項目４５）
シアリダーゼ酵素の活性部位をイメージングする方法であって、
（ａ）前記シアリダーゼ酵素の前記活性部位への項目４１に記載の化合物のライゲーションのための条件下で、前記化合物と、前記シアリダーゼ酵素を含むことが疑われる試料とを接触させ、共有結合生成物を形成させるステップと、
（ｂ）前記共有結合生成物と、本明細書に記載のようなアジド含有蛍光発生プローブとを接触させて、蛍光発生トリアゾール生成物を形成させるステップと、
（ｃ）前記トリアゾール生成物から放出される蛍光シグナルを測定するステップと
を含む、方法。
（項目４６）
試料中のシアリダーゼ酵素の活性部位を検出する方法であって、
（ａ）項目４１に記載の化合物と、シアリダーゼ酵素分子を有することが疑われる試料とを接触させるステップと、
（ｂ）試料混合物中のクマジンから放出される蛍光シグナルのレベルを測定するステップと、
（ｃ）前記試料中の前記シアリダーゼ酵素分子の存在を決定するステップと
を含み、
前記分子の非存在下での蛍光シグナルのレベルと比較した増強された蛍光シグナルは、アジド含有分子の存在を示す、方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
本開示は、機序に基づく阻害剤として３−フルオロシアリルフルオリドから、およびレポーターライゲーションのためにアルキン基を組み込むことによって調製される、一連の活性をベースとするシアリダーゼプローブであるＤＦＳＡ（５０１）、およびＣｏｕｍＦＳＡ（６０１）について記載する。ＤＦＳＡ（５０１）は、全ての試験したシアリダーゼの活性部位失活剤である。この報告において、本発明者らは、活性をベースとするシアリダーゼプローブであるＣｏｕｍＦＳＡ（６０１）、およびＤＦＳＡ（５０１）の化学合成を記載してきた。
【化２０−１】
2017518261.tif 000016
図１１．シアリダーゼプローブＤＦＳＡ５０１およびＣｏｕｍＦＳＡ６０１の構造。
【化２０−２】
2017518261.tif 000017
スキーム５００．ＣｏｕｍＦＳＡの化学合成。
【化２１】
2017518261.tif 000018
スキーム６００．ＤＦＳＡ（５０１）の化学合成。