【誤訳訂正書】
【提出日】平成30年3月5日(2018.3.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）と１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又は１，２５−ジヒドロキシビタミンＤの類似体との間で形成される複合体に特異的に結合する、モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体の重鎖可変ドメインのＣＤＲのアミノ酸配列が配列番号１、２、及び３であり、モノクローナル抗体の軽鎖可変ドメインのＣＤＲのアミノ酸配列が配列番号４、５、及び６である、モノクローナル抗体。
【請求項２】
前記重鎖可変ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号８を含む核酸配列によりコードされる、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１０を含む核酸配列によりコードされる、請求項１又は２に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
全長免疫グロブリン、又はＦ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ｖ）、Ｆ（ｄ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗体断片である、請求項１から３までのいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
生物学的流体試料中の１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（１，２５（ＯＨ）２Ｄ）又はその類似体を検出するための方法であって、
（ｉ）６から９の間に含まれる値に前記生物学的流体試料のｐＨを調整するステップ、同時に又は続いて、ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む受容体タンパク質を、前記生物学的流体試料に添加するステップであって、それによって、前記受容体タンパク質のＶＤＲ−ＬＢＤに１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体を結合させるステップと、
（ｉｉ）１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む前記受容体タンパク質を、ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）と１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体との間で形成される複合体に特異的に結合することができるモノクローナル抗体によって捕捉するステップであって、モノクローナル抗体の重鎖可変ドメインのＣＤＲのアミノ酸配列が配列番号１、２、及び３であり、モノクローナル抗体の軽鎖可変ドメインのＣＤＲのアミノ酸配列が配列番号４、５、及び６である、ステップと、
（ｉｉｉ）１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む捕捉された前記受容体タンパク質を検出するステップとを含む、上記方法。
【請求項６】
前記受容体タンパク質が、単離された形態又は操作された形態の完全体のビタミンＤ受容体タンパク質又はそのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ビタミンＤ類似体が、１９−ノル−１α−２５−ジヒドロキシビタミンＤ２、１α−ヒドロキシビタミンＤ２、１α−ヒドロキシエルゴカルシフェロール、又は２−メチレン−１９−ノル−（２０Ｓ）−１α，２５−（ＯＨ）２Ｄ３である、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
前記モノクローナル抗体が、請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体である、請求項５から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記モノクローナル抗体が、固体支持体上に固定される、請求項５から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物学的流体が、全血、血漿、血清、又は尿である、請求項５から９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｉ）において、前記生物学的流体試料のｐＨが、７から８．６の間に含まれる値に調整される、請求項５から１０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
サンドイッチイムノアッセイである、請求項５から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む捕捉された前記受容体タンパク質を検出するステップ（ｉｉｉ）が、標識された抗ＶＤＲ−ＬＢＤ検出抗体を用いて実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
生物学的流体試料中の１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体を検出するためのキットであって、
−  ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む受容体タンパク質；
−  ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）と１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体との間で形成される複合体に特異的に結合することができるモノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体の重鎖可変ドメインのＣＤＲのアミノ酸配列が配列番号１、２、及び３であり、モノクローナル抗体の軽鎖可変ドメインのＣＤＲのアミノ酸配列が配列番号４、５、及び６である、モノクローナル抗体、及び
−  ６から９の間に含まれるｐＨを有する結合緩衝液
を含む、上記キット。
【請求項１５】
前記受容体タンパク質が、単離された形態又は操作された形態の完全体のビタミンＤ受容体タンパク質又はそのリガンド結合ドメインである、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記モノクローナル抗体が、請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体である、請求項１４又は１５に記載のキット。
【請求項１７】
前記結合緩衝液が、７から８．６の間に含まれるｐＨを有している、請求項１４から１６までのいずれか一項に記載のキット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本発明は、全血試料、血漿試料、血清試料、又は尿試料などの生物学的流体試料中の全１，２５−ジヒドロキシビタミンＤを検出するための方法及びキットに関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
より具体的には、本発明は、２５−ヒドロキシビタミンＤなどの他の非活性型ビタミンＤと共に１，２５−ジヒドロキシビタミンＤを含有する場合がある生物学的流体試料中の全１，２５−ジヒドロキシビタミンＤを検出するのに適しているイムノアッセイ方法及びキット、並びに関連する抗体に関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
したがって、本発明の１つの態様は、出願時の請求項９で定義するような、生物学的流体試料中の１，２５（ＯＨ）２Ｄ又はその類似体を検出するための方法である。
また、出願時の請求項１８で定義するような、生物学的流体試料中の１，２５（ＯＨ）２Ｄ又はその類似体を検出するためのキットも、本発明の範囲内にある。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
前述したように、本発明の検出方法を特徴付ける特色は、検査される生物学的流体試料のｐＨが６より大きい、すなわち６から９の間に含まれる値に調整されることである。好ましいｐＨ値は、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、又は８．６など、７から８．６の間に含まれる。生物学的流体試料のｐＨを前述の値に調整するのに適した緩衝剤及び緩衝液は、当業者に周知である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
本発明の文脈において、好ましくは、生物学的流体試料は、全血、血清、血漿、及び尿からなる群から選択される。生物学的流体試料は、例えば、希釈剤、保存剤、安定化剤、及び／又は緩衝剤などさらに別の成分を任意で含んでよい。必要な場合は、当技術分野において公知の任意の適切な希釈用緩衝液を用いて、生物学的流体試料の希釈物が調製される。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
好ましい実施形態において、捕捉部分は、出願時の請求項１において定義される抗体であ
る。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
出願時の請求項１において定義される結合特異性を有する抗体が本発明者らによって初め
て利用可能にされたため、抗体それ自体も、本発明の範囲内に入る。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
生物学的流体試料とビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む受容体タンパク質との接触を可能にする任意のアッセイ形式が、本発明の検出方法を実施するのに適している。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
好ましい実施形態によれば、本発明の検出方法は、対象又は患者の生物学的流体試料に対して実施されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのイムノアッセイである。イムノアッセイには、均一系アッセイ及び不均一系アッセイの両方、並びに競合的サンドイッチアッセイ及び非競合的サンドイッチアッセイが含まれる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
図１の特定の実施形態において、アッセイ緩衝液を用いて生物学的流体試料のｐＨを調整するステップ及びＶＤＲ−ＬＢＤを含む受容体タンパク質を試料に添加するステップは、同時に実施される。図２の特定の実施形態において、このようなステップは、逐次的に実施される。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
前述したように、本発明の別の態様は、生物学的流体試料中の１，２５（ＯＨ）２Ｄ又はその類似体を検出するためのキットであって、受容体タンパク質及び方法に関連して上記に定義した捕捉部分、並びに６から９の間に含まれるｐＨを有する結合緩衝液を含むキットである。好ましいｐＨ値は、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、又は８．６など、７から８．６の間に含まれる。試験試料のｐＨを調整するための結合緩衝液の好ましいが非限定的な例としては、５０ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）緩衝液（ｐＨ７．４）、ヘペス（Ｈｅｐｅｓ）（６．５〜７．５）、ＰＢＳが挙げられる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
ＶＤＲ−ＬＢＤへの１，２５（ＯＨ）２Ｄの結合は、ＶＤＲ−ＬＢＤ分子の立体構造変化を誘発することが公知であることから、本発明者らは、様々な生物学的マトリックス中の未結合ＶＤＲ−ＬＢＤからＶＤＲ−ＬＢＤ／１，２５（ＯＨ）２Ｄ複合体を選択的に識別するために、複合体を形成していないＶＤＲ−ＬＢＤと交差反応せずに、１，２５（ＯＨ）２Ｄに結合したＶＤＲ−ＬＢＤを特異的に認識し結合することができる捕捉部分、例えば抗体を開発するための大規模な実験を実施した。このような立体構造特異的捕捉部分は、循環血中の活性型ビタミンＤの迅速且つ信頼性が高い検出のための大変貴重な手段となるため、特に有用である。
以下に本発明を示す。
［発明１］
複合体を形成していないビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）と交差反応せずに、ＶＤＲ−ＬＢＤと１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又は１，２５−ジヒドロキシビタミンＤの類似体との間で形成される複合体のＶＤＲ−ＬＢＤに特異的に結合する、抗体。
［発明２］
重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインが、配列番号１、２、及び３からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含むモノクローナル抗体である、発明１に記載の抗体。
［発明３］
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号４、５、及び６からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む、発明１から２までに記載の抗体。
［発明４］
前記重鎖可変ドメインが、配列番号１、２、及び３を含む、発明２に記載の抗体。
［発明５］
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号４、５、及び６を含む、発明３又は４に記載の抗体。
［発明６］
前記重鎖可変ドメインが、配列番号７を含むか、又は配列番号８を含む核酸配列によりコードされる、発明４に記載の抗体。
［発明７］
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９を含むか、又は配列番号１０を含む核酸配列によりコードされる、発明５又は６に記載の抗体。
［発明８］
全長免疫グロブリン、又はＦ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ｖ）、Ｆ（ｃ）、Ｆ（ｄ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗体断片である、発明１から７までのいずれか一項に記載の抗体。
［発明９］
生物学的流体試料中の１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（１，２５（ＯＨ）２Ｄ）又はその類似体を検出するための方法であって、
（ｉ）６から９の間に含まれる値に前記生物学的流体試料のｐＨを調整するステップ、同時に又は続いて、ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む受容体タンパク質を、前記生物学的流体試料に添加するステップであって、それによって、前記受容体タンパク質のＶＤＲ−ＬＢＤに１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体を結合させるステップと、
（ｉｉ）１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む前記受容体タンパク質を、複合体を形成していないＶＤＲ−ＬＢＤと交差反応せずに、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）に特異的に結合することができる捕捉部分によって捕捉するステップと、
（ｉｉｉ）１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む捕捉された前記受容体タンパク質を検出するステップとを含む、上記方法。
［発明１０］
前記受容体タンパク質が、単離された形態又は操作された形態の完全体のビタミンＤ受容体タンパク質又はそのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）である、発明９に記載の方法。
［発明１１］
前記ビタミンＤ類似体が、１９−ノル−１α−２５−ジヒドロキシビタミンＤ２、１α−ヒドロキシビタミンＤ２、１α−ヒドロキシエルゴカルシフェロール、又は２−メチレン−１９−ノル−（２０Ｓ）−１α，２５−（ＯＨ）２Ｄ３である、発明９又は１０に記載の方法。
［発明１２］
前記捕捉部分が、発明１から８までのいずれか一項に記載の抗体である、発明９から１１までのいずれか一項に記載の方法。
［発明１３］
前記捕捉部分が、固体支持体上に固定される、発明９から１２までのいずれか一項に記載の方法。
［発明１４］
前記生物学的流体が、全血、血漿、血清、又は尿である、発明９から１３までのいずれか一項に記載の方法。
［発明１５］
ステップ（ｉ）において、前記生物学的流体試料のｐＨが、７から８．６の間に含まれる値に調整される、発明９から１４までのいずれか一項に記載の方法。
［発明１６］
サンドイッチイムノアッセイである、発明９から１５までのいずれか一項に記載の方法。
［発明１７］
１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体に結合したビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む捕捉された前記受容体タンパク質を検出するステップ（ｉｉｉ）が、標識された抗ＶＤＲ−ＬＢＤ検出抗体を用いて実施される、発明１６に記載の方法。
［発明１８］
生物学的流体試料中の１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体を検出するためのキットであって、
−  ビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）を含む受容体タンパク質；
−  複合体を形成していないＶＤＲ−ＬＢＤと交差反応せずに、ＶＤＲ−ＬＢＤと１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ又はその類似体との間で形成される複合体のビタミンＤ受容体のリガンド結合ドメイン（ＶＤＲ−ＬＢＤ）に特異的に結合することができる捕捉部分、及び
−  ６から９の間に含まれるｐＨを有する結合緩衝液
を含む、上記キット。
［発明１９］
前記受容体タンパク質が、単離された形態又は操作された形態の完全体のビタミンＤ受容体タンパク質又はそのリガンド結合ドメインである、発明１８に記載のキット。
［発明２０］
前記捕捉部分が、発明１から８までのいずれか一項に記載の抗体である、発明１８又は１９に記載のキット。
［発明２１］
前記結合緩衝液が、７から８．６の間に含まれるｐＨを有している、発明１８から２０までのいずれか一項に記載のキット。