【誤訳訂正書】
【提出日】平成29年11月21日(2017.11.21)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
血球形成のＢＭへの局在化は、原始造血細胞と、ＢＭ幹細胞ニッチの間質細胞介在性造血微小環境との間で発生的に調節された接着相互作用を含む。定常状態の条件下、ＨＳＣは、原始的造血祖先細胞のＢＭにおける生理学的保持をもたらす、間質要素（ＶＣＡＭ−１およびオステオポンチン（Ｏｐｎ）など）との接着相互作用によりＢＭニッチで保持される。接着相互作用の動揺は、ＢＭに保持されたＨＳＣの放出をもたらし、動員により幹細胞／祖先細胞を骨髄ニッチから、結局は循環系に放出することを惹起し得る。白血球の骨髄から最終的に末梢血への生理学的退出または動員、ならびに少数の幹細胞／祖先細胞の正常な骨髄環境から循環系への回避は理解に乏しい現象である。細胞が骨髄の血管外腔から循環系に移動するには、可逆的接着および遊走工程の一連の協調工程を必要とするかもしれない。このプロセスでは、骨髄中の幹細胞／祖先細胞により、あるいは間質細胞により発現される接着分子のレパートリーが重要である。多様な刺激により引き起こされる祖先細胞の接着および／または遊走における変化は、骨髄と末梢血との間でその除去または再分布をもたらす可能性がある。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
ＨＳＣの特定の集団を放出および動員することは、移植、遺伝子療法、白血病、乳がんを含む新生物がんなどのがんを含む疾患の治療、または組織および皮膚の修復を含む、種々の状況での使用を可能とし得る。しかしながら、ＨＳＣを動員するためには、ＨＳＣを最初にＢＭから除去し得る、迅速かつ選択的な動員レジメンを必要とする。ＨＳＣの特定の細胞集団をＢＭ幹細胞ニッチから除去および放出することは、より長期に及ぶ、多リニージ造血再構成を提供し得る。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
α４β１などのインテグリンがＨＳＣの動員と関連付けられる。具体的には、ＨＳＣにより発現されるα４β１（ＶＬＡ−４）およびα９β１の両方のインテグリンが、幹細胞の静止および骨内膜領域内でのＶＣＡＭ−１およびオステオポンチン（Ｏｐｎ）との結合を介するニッチ保持と関連付けられる。α９β１インテグリンのＨＳＣ動員における役割は不明であるが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を用いるＯｐｎのダウンレギュレーションにより、ならびにインテグリンα４またはＧ−ＣＳＦの選択的阻害により、Ｏｐｎ／ＶＣＡＭ−１とインテグリンとの結合が、ＨＳＣ動員について効果的な標的であること確認した。しかしながら、インテグリンなどの小分子との結合等の様々な特徴は、それらが明らかに異なる分子であることを示す。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
従って、Ｇ−ＣＳＦとは独立して、ＨＳＣの動員の改善をもたらす、ＨＳＣの除去および放出を強化するＨＳＣを迅速かつ選択的に除去し、かつ放出する化合物、およびレジメンを同定することが本発明の目的である。これらの化合物を特定のＨＳＣ集団に対して標的とすることにより、再構成および移植の成果が改善され得る。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
文書、行為、材料、装置、物品等の考察は、単に本発明の背景を提供する目的で、本明細書中に含まれるものである。これらのいずれの事項も、それが本願の各請求項の優先日より前に存在するとして、先行技術基準の一部を形成するか、本発明に関連する分野にて共通の一般的知識であったことを示唆または開示するものではない。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
好ましくは、ＨＳＣの移動は、ＨＳＣをＢＭからＰＢに動員させる、ＨＳＣのＢＭ幹細胞結合リガンドからの放出をもたらし、それによりＨＳＣの動員を促進する。動員のさらなる刺激が、ＨＳＣのＰＢへの動員をさらに強化する動員剤の使用により助成され得る。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
もう一つ別の実施態様において、該方法は、さらにα４インテグリンのアンタゴニストまたはその活性な部分を投与することを含む。好ましくは、α４インテグリンはα４β１アンタゴニストまたはその活性な部分である。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
本発明のさらなる態様において、対象における血液障害を治療するための方法であって、Ｇ−ＣＳＦの存在または不在下で該対象に、治療的に効果的な量の本明細書に記載されるようなα９インテグリンのアンタゴニストまたはその活性な部分、あるいは本明細書に記載されるようなα９インテグリンのアンタゴニストまたはその活性な部分を投与した対象から採取したＨＳＣを含む細胞組成物を投与し、ＨＳＣの、ＢＭからＰＢへの移動、放出または動員を強化することを含む、方法が提供される。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
【図１】ＬＮ１８−誘導細胞株の生成を示す。ヒトインテグリンα４β１およびα９β１を過剰発現する安定したＬＮ１８細胞が、ヒト神経膠芽細胞腫ＬＮ１８細胞株のレトロウイルス形質導入を介して生成された。親およびα９β１形質導入ＬＮ１８細胞におけるバックグラウンドα４発現のサイレンシングがα４ｓｈＲＮＡのレトロウイルスベクターの送達により達成された。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
【図４】Ｒ−ＢＣ１５４のカチオン依存性結合を示す。ＬＮ１８  α９β１細胞を、ＴＢＳ緩衝液のみ（黒棒）、１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋（赤棒）または１ｍＭ  Ｍｎ２＋（青棒）中にて所定の濃度のＲ−ＢＣ１５４で処理した。得られたデータは１回の実験からのものであり、％最大蛍光で表される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
【図５】Ｒ−ＢＣ１５４がＬＮ１８細胞と結合する動力学的測定結果を示す。Ｒ−ＢＣ１５４が（ａ）α４β１（丸−破線）および（ｂ）α９β１（四角−実線）のインテグリンと結合する会合速度を、ＴＢＳ緩衝液中、１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋（白記号）および１ｍＭ  Ｍｎ２＋（黒記号）の存在下で、細胞を５０ｎＭ  Ｒ−ＢＣ１５４で０、０.５、１、２、３、５、１０、１５および２０分間にわたって３７℃で処理することにより決定した。（ｃ）Ｒ−ＢＣ１５４とα４β１（丸−破線）およびα９β１（四角−実線）のインテグリンとの結合の解離速度の測定値が、ＴＢＳ緩衝液中、１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋（白記号）および１ｍＭ  Ｍｎ２＋（黒記号）の存在下で０、２.５、５、１５、３０、４５および６０分に決定された。示されるデータは最大蛍光の平均％±ＳＥＭ（ｎ＝３）で表され、時間の関数としてプロットされる。オン−レート（on-rate）データをすべての曲線について２相会合関数に適合させた（Ｒ２＞０.９９７）。２相の指数関数的に減衰する関数に適合させたオフ−レート（off-rate）データをα４β１（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋）を除いてすべての曲線について１相の指数関数的に減衰する関数に適合させた（Ｒ２＞０.９９９）。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
【図７】Ｒ−ＢＣ１５４は、優先的に、ネズミおよびヒト造血前駆細胞とインビトロにて結合することを示す。（ａ）Ｒ−ＢＣ１５４（１）の化学構造を示す。（ｂ）１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋の存在下で対照のＳｉＡ４（α４ノックダウン；黒色）、α４β１（赤色）およびα９β１（青色）を形質導入したＬＮ１８細胞株と結合するＲ−ＢＣ１５４の代表的フローサイトメトリーのヒストグラムプロットを示す。（ｃ）骨内膜（赤色）および中心（青色）ＢＭを示す大腿骨の斜視図、およびＢＭ  Ｌｉｎ−Ｓｃａ＋ｃ−ｋｉｔ＋（ＬＳＫ）およびＬＳＫＣＤ１５０＋ＣＤ４８−（ＬＳＫＳＬＡＭ）の代表的なフローサイトメトリーのプロットを示す。（ｄ）１０ｍＭ  ＥＤＴＡ（不活性化剤；黒色）および１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋（活性化剤；緑色）の存在下でＲ−ＢＣ１５４（１０ｎＭ）で染色されるＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭ細胞のヒストグラムプロットを示す。染色されていないＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭ細胞は灰色で示される。（ｅ）１０ｍＭ  ＥＤＴＡ（不活性化剤；黒色）および１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋（活性化剤；緑色）の存在下で染色した中心および骨内膜ＢＭから採取したＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭ細胞に結合しているＲ−ＢＣ１５４を示す。染色されていない細胞は灰色で示される。データは％最大平均蛍光強度（ＭＦＩ）±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表され、少なくとも３回の別個の試験の代表例である。（ｆ）カチオンの不在下にて中心（青色）および骨内膜（赤色）ＬＳＫ細胞に結合するＲ−ＢＣ１５４を示す。点網掛け曲線は染色されていないＬＳＫ細胞を示す。（ｇ）１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋の結合の存在下で中心（青色棒）および骨内膜（赤色棒）ＢＭからのリンパ球（Ｂ２２０＋およびＣＤ３＋）および骨髄性細胞（Ｇｒ１Ｍａｃ１＋）、ＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭ細胞に結合するＲ−ＢＣ１５４を比較して示す。データは２回の別個の実験の代表例である。一方向性ＡＮＯＶＡ  ｐ＜０.０００１である。（ｈ）ｗｔマウス（黒色棒）およびα４−／−／α９−／−条件付きＫＯマウス（白色棒）からの中心および骨内膜ＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭ細胞に結合するＲ−ＢＣ１５４を示す。（ｉ）１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋の存在（緑色；活性化されている）下、およびカチオンの不在（黒色；活性化されていない）下でのＲ−ＢＣ１５４とヒト単核細胞（ＭＮＣ）との用量応答結合を示す。（ｊ）ＣＤ３４＋およびＣＤ３８−を発現するヒトＭＮＣの代表的フローサイトメトリーのプロットを示す。ゲーテッド集団はリニージ委任細胞（Ｐ１＝ＣＤ３４−）、造血前駆細胞（Ｐ２＝ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋）および強化幹細胞および前駆細胞（Ｐ３＝ＣＤ３４＋ＣＤ３８−）を示す。（ｋ）１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋の存在（緑色；活性化剤）下、およびカチオンの不在（黒色；不活性化剤）下でＣＤ３４−、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−およびＣＤ３４＋ＣＤ３８−細胞に結合するＲ−ＢＣ１５４を示す。染色されていない細胞は灰色で示される。データは３人の臍帯血ドナーより由来し、正規化されたＭＦＩ（平均±ＳＥＭ）として表される。＊ｐ＜０.０５、＊＊ｐ＜０.０１、＊＊＊ｐ＜０.００５および＊＊＊＊ｐ＜０.００１
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
造血幹細胞動員は、造血幹細胞が骨髄腔（例えば、寛骨および胸骨）から血流に刺激されて出され、それでそれらが将来の補液のための収集に利用可能であるか、または骨髄から自然に放出され、体内を通って脾臓などの臓器に留まって血球を提供する、ところの工程である。種々の血液障害に付随して生じることが多い、この興味深い自然現象は、ＨＳＣの血流への動員を人為的に引き起こし、それで該ＨＳＣが移植などの目的のために集められ、使用され得る薬剤の発見を考えると、療法の有用な成分として適合されるかもしれない。Ｇ−ＣＳＦおよびＦＤＡ承認のＣＸＣＲ−４アンタゴニストであるＡＭＤ３１００などの化合物は、ＨＳＣを動員することが知られている。しかしながら、毒性問題および種々の副作用がこの治療から生じ得る。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
本発明者は、少なくともα９インテグリンを小分子のアンタゴニストで阻害することにより、ＨＳＣおよびその前駆細胞ならびにそれらの祖先細胞をＢＭ幹細胞ニッチから、好ましくは骨内膜ニッチに除去できる、あるいはＰＢに動員し、長期にわたって多リニージ生着の可能性のあることを見出した。意外にも、α９インテグリンに対するアンタゴニストまたはその活性な部分を用いることで、少なくともＣＤ３４＋幹細胞および前駆細胞の血液中への除去および放出が有意に増加することが見出された。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
本発明者らは、一連のＮ−フェニルスルホニルプロピンジペプチドをベースに、活性化されたヒトおよびネズミα９β１およびα４β１インテグリンならびにＢＭ  ＨＳＣおよび先駆細胞（図１ａ）と結合する、蛍光小分子のインテグリンアンタゴニスト、Ｒ−ＢＣ１５４（１）（図１ａ）を開発した。本発明者らは、このファミリーの化合物が骨内膜ＢＭ内でα９β１／α４β１およびＯｐｎの間の相互作用の制限に基づき、動員のために強力な骨内膜ＨＳＣを標的とすると仮定した。この度、Ｒ−ＢＣ１５４（１）およびその非標識化誘導体ＢＯＰ（２）が、インビボにおいて本質的に活性化されたα９β１／α４β１インテグリンを介して、マウスおよびヒトＨＳＣならびに先駆細胞に優先的に結合し、動員することが見出された。かくして、α９β１／α４β１インテグリン阻害剤を用いて骨内膜ＨＳＣを標的とする療法は、幹細胞の移植適用について、現行の動員手段に代わる有望な手段を提示する。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
インテグリンは、第一に細胞粘着および細胞シグナル伝達工程のメディエーターとして機能する、非共有的に連結するαβヘテロダイマーの膜貫通タンパク質である。哺乳動物にて、１８α−鎖および８β−鎖が同定されており、今日まで、少なくとも２４種の異なる、独特なαβの組み合わせが記載されている。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
α４β１インテグリン（最晩期抗原−４；ＶＬＡ−４）は主に白血球で発現され、血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）、フィブロネクチンおよびオステオポンチン（Ｏｐｎ）の受容体であることが知られている。α４β１インテグリンは白血球動員、移行および活性化の重要な調整物質であり、炎症および自己免疫疾患にて重要な役割がある。したがって、フェーズＩおよびＩＩの臨床試験にまで進行しているいくつかの候補があり、喘息、多発性硬化症およびクローン病を治療するために、著しい努力は、α４β１インテグリン機能の小分子阻害剤を開発することに焦点が当てられてきた。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
関連するβ１インテグリンの、α９β１と、α４β１とは、多くの構造的および機能的特性を共有し、ＶＣＡＭ−１およびＯｐｎを含む、同じリガンドのいくつかとも結合するが、インテグリンのα４β１とα９β１との間には両者を区別する違いがある。白血球に大きく発現が制限されるα４β１と異なり、α９β１の細胞発現は広範囲に及ぶ。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
以前に、α４β１およびα９β１インテグリンは共に造血幹細胞（ＨＳＣ）により発現されることが示された。インテグリンのα４β１およびα９β１は、主として、ＨＳＣを隔離し、それを骨髄に動員すること、ならびに長期に及ぶ再増殖の幹細胞のための重要な特性であるＨＳＣ静止の維持と関連付けられる。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
式（Ｉ）の化合物の一連の実施態様において、Ｘは−ＳＯ２−である。かかる実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化７】
2017538715.tif 000001
［式中：
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、所望により置換されてもよいアリールおよび所望により置換されてもよいヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ２は、Ｈおよび置換基からなる群より選択され；
Ｒ３は、ＨおよびＣ１−Ｃ４アルキルからなる群より選択され；
Ｒ４は、Ｈおよび−ＯＲ６からなる群より選択され；
Ｒ５は、Ｈおよび−ＯＲ７からなる群より選択される；
ただし、Ｒ４がＨである場合、Ｒ５は−ＯＲ７であって、Ｒ４が−ＯＲ６である場合、Ｒ５はＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ９および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５からなる群より選択され；
Ｒ８は、所望により置換されてもよいアルキル、所望により置換されてもよいアリール、所望により置換されてもよいヘテロアリール、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）および−ＣＮからなる群より選択され；
Ｒ９は、所望により置換されてもよいシクロアルキル、所望により置換されてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されてもよいアリール、および所望により置換されてもよいヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、それらが結合する窒素と一緒になって、所望により置換されてもよいヘテロシクロアルキル環を形成し；
Ｒ１２は、所望により置換されてもよいアルキル、所望により置換されてもよいアリール、所望により置換されてもよいヘテロアリール、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）および−ＣＮからなる群より選択され；
Ｒ１３は、所望により置換されてもよいシクロアルキル、所望により置換されてもよいアリール、および所望により置換されてもよいヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ１４およびＲ１５は、各々、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよび所望により置換されてもよいアリールからなる群より独立して選択されるか、または
Ｒ１４およびＲ１５は、それらが結合する窒素と一緒になって、所望により置換されてもよいヘテロシクロアルキル環を形成し；および
ｎは、各々、１〜３の範囲の整数である］
で示される構造を有し得る。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０９】
一連の実施態様において、Ｒ２は、所望により置換されてもよいヘテロアリール、所望により置換されてもよいヘテロシクロアルキル、所望により置換されてもよいシクロアルキル、ヒドロキシ、アミノおよびアジドからなる群より選択される置換基であるか、あるいはＲ２は、式（Ａ）：
【化１９】
2017538715.tif 000002
［式中
Ｙは、所望により置換されてもよいヘテロアリールまたは所望により置換されてもよいヘテロアリール−（Ｏ）ＮＨ−であり；
リンカーは、−（ＣＨ２）ｐ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−からなる群より選択されるか、またはそのいずれかの組み合わせであり；
ｐは、各々、１〜４の範囲にある整数であり；および
Ｚはフルオロフォア（好ましくは、ローダミン基）である］
で示される構造の置換基である。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１７】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩＩ）または（ＶＩＩＩ）の化合物のある実施態様において、Ｒ２は式（Ａ）：
【化２０】
2017538715.tif 000003
［式中
Ｙは、所望により置換されてもよいヘテロアリール、または所望により置換されてもよいヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり；
リンカーは、−（ＣＨ２）ｐ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−からなる群より選択されるか、またはそのいずれかの組み合わせであり；
ｐは、各々、１〜４の範囲にある整数であり；および
Ｚはフルオロフォア（好ましくは、ローダミン基）である］
で示される構造の置換基である。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２２】
式（Ａ）、（Ａ１）、（Ａ２）、（Ａ３）または（Ａ４）のある実施態様において、Ｚはローダミンフルオロフォアであり、それは以下の群：
【化２３】
2017538715.tif 000004
より選択される。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３３】
「シクロアルキル」は、特記されない限り、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等などの飽和単環式、または縮合もしくはスピロ多環式炭素環、好ましくは環に付き３ないし９個の炭素を含有する炭素環をいう。その環は、単環系（シクロヘキシルなど）、デカリンなどの二環系、およびアダマンタンなどの多環系を包含する。シクロアルキル基は、典型的には、Ｃ３−Ｃ１２アルキル基である。該基は末端基であっても架橋基であってもよい。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４１】
「医薬的に許容される塩」なる語は、上記される化合物の所望の生物活性を保持する塩をいい、医薬的に許容される酸付加塩および塩基付加塩を包含する。式（Ｉ）の化合物の適切な医薬的に許容される塩は、無機酸または有機酸から調製されてもよい。かかる無機酸の例は、塩酸、硫酸およびリン酸である。適切な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、ヘテロ環式、炭酸およびスルホン酸基種の有機酸より選択されてもよく、その例が、ギ酸、酢酸、プロパン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、アルキルスルホン酸、およびアリールスルホン酸である。同様に、塩基付加塩は、有機または無機塩基を用いて当業者に周知の方法により調製されてもよい。適切な有機塩基の例として、メチルアミン、エチルアミン、トリエチルアミン等などの単純なアミンが挙げられる。適切な無機塩基の例として、ＮａＯＨ、ＫＯＨ等が挙げられる。医薬的に許容される塩のさらなる情報は、R emington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Edition, Mack Publishing Co., Easton, PA 1995で見ることができる。試剤が固体である場合には、当業者であれば、本発明の化合物、試剤、および塩は、異なる結晶または多形の形態にて存在してもよく、そのすべてが本発明の化合物および具体的な式で示される化合物の範囲内にあるものとする、ことを理解する。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５０】
除去、放出または動員される細胞の型はまた、ＢＭ誘導性祖先細胞に富むＬｉｎ−Ｓｃａ−１＋ｃｋｉｔ＋（本明細書にて、「ＬＳＫ」と称される）細胞、あるいは幹細胞に富むＬＳＫＣＤ１５０＋ＣＤ４８−細胞（本明細書にて、「ＬＳＫＳＬＡＭ」と称される）を含む群より選択されるネズミ集団で見つけることもできる。これらの均等なネズミ集団は、α９インテグリンのアンタゴニストまたはその活性な部分を用いることにより、ＢＭ幹細胞ニッチより除去、放出または動員され得る細胞型の適用を提供する。好ましくは、細胞型は幹細胞に富むＬＳＫＣＤ１５０＋ＣＤ４８−細胞（ＬＳＫＳＬＡＭ）に見られる型と均等である。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６７】
一の実施態様において、一度採取された細胞は、患者の造血前駆細胞集団を補完または補充するために体内に戻すことができ（同種または自家移植）、あるいはまた別の患者の造血前駆細胞集団を補完または補充するためにその別の患者に移植され得る（異種または同種移植）と考えられる。これは、個体が化学療法を受けていた期間の経過後に、利点がある。さらには、ＨＳＣおよびＨＰＣの数が減少するところの、地中海貧血、鎌状赤血球貧血、先天性異角化症、シュワッハマン・ダイアモンド症候群、およびダイアモンド・ブラックファン貧血などの特定の遺伝子疾患がある。かくして、ＨＳＣの除去、放出または動員の強化における本発明の方法は、有用であり、適用可能である。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６９】
典型的には、効果的な量のα９β１インテグリンアンタゴニスト、より好ましくはα９β１／α４β１インテグリンアンタゴニストなどのα９インテグリンアンタゴニストがドナーに投与され、ＨＳＣのＢＭからの除去、放出または好ましくは動員を誘発し、そしてＰＢに放出かつ動員される。ＨＳＣがＰＢに動員されると、血液の収集およびＧＳＣの分離が、献血にて一般的に利用可能な方法、例えば、限定されないが、血液銀行にて利用される技法を用いて進められ得る。ある実施態様において、ＰＢまたはＢＭが本明細書に記載のα９インテグリンのアンタゴニストを用いて治療されたことのある対象から得られると、ＨＳＣはアフェレーシスまたは白血球除去などの標準的方法を用いて、そこから単離され得る。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７１】
除去、放出、または好ましくは動員は、α９インテグリンアンタゴニストの使用量に応じて、直ちに生じるかもしれない。しかしながら、ＨＳＣは投与した約１時間後に採取されてもよい。実際の時間およびα９インテグリンアンタゴニストの実際の量は、対象の生理学的状態（年齢、性別、疾患の型および段階、一般的身体状態、所定の投与量に対する応答、所望の臨床効果を含む）および投与経路を含むが、これらに限定されない、種々の要因に応じて変化してもよい。臨床および薬理学の分野における当業者は、日常的な実験およびコントロール曲線の使用を通して効果的な量を決定できるであろう。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８４】
本明細書にて使用される「治療的に効果的な量」は、治療される対象において所望の効果を達成するのに十分な、特定の組成物、または組成物中の活性剤の量をいう。例えば、この量は、ＨＳＣの遊走を強化するために、組織を補充、修復または活性化させる効果的な量とすることができる。もう一つ別の実施態様において、「治療的に効果的な量」は、血流中の幹細胞の循環レベルを上げることにより説明され得るような、ＨＳＣの放出の向上などの、ＨＳＣのトラフィッキングを強化するのに効果的な量である。さらにもう一つ別の実施態様において、「治療的に効果的な量」は、血流中に循環しているＨＳＣのレベルが低いこと、および／またはホーミングおよび遊走と関連付けられる表面マーカーの発現で説明され得るような、ＨＳＣの循環系から種々の組織または器官へのホーミングおよび遊走を強化するのに効果的な量である。治療的に効果的な量は、対象の生理学的状態（年齢、性別、疾患の型および段階、一般的身体状態、所定の投与量に対する応答、所望する臨床効果を含む）および投与経路を含むが、これらに限定されない、種々の要因に応じて変化してもよい。臨床学および薬理学の分野の当業者は、日常的な実験を通して、治療的に効果的な量を決定することができるであろう。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８７】
組成物の投与量、毒性および治療効果は、標準的な製薬手順、例えば、細胞培養、または、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％にて治療的に効果的な用量）を測定するための実験動物により決定され得る。毒性と治療効果の間の用量比が治療指数であり、それはＬＤ５０／ＥＤ５０比として表され得る。治療指数の高い化合物が好ましい。毒性の副作用を示す化合物を用いることもできるが、その場合、非感染細胞に与える損傷の可能性を最小限とし、それによって副作用を減らすために、かかる化合物で罹患組織の部位を標的とするデリバリーシステムを設計するように注意しなければならない。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９１】
本発明は、α９インテグリンアンタゴニストを患者に直接投与し、それ自身のＨＳＣを動員させること、またはＨＳＣが採取されたα９インテグリンアンタゴニストで処理した別のドナーから由来のＨＳＣを用いることを含む。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９５】
ある実施態様において、ＨＳＣ、ＰＢまたはＢＭを用いて治療するのに有用であり得る対象は、骨髄または幹細胞移植で一般的に治療され得るいずれの対象も、例えば、がん、例えば神経芽腫（未成熟神経細胞に生じ、ほとんどが乳幼児を襲うがん）、骨髄異形成、骨髄線維症、乳がん、腎細胞がん、または多発性骨髄腫の対象を包含する。例えば、該細胞は、一例として、がんの治療に、またはＨＳＣを動員するためのＧ−ＣＳＦ処置に対して応答しない者に用いられる高量の化学療法および／または放射線療法により破壊された幹細胞を修復するのに、放射線療法または化学療法での治療に耐性のあるがんの対象に移植され得る。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９７】
ある実施態様において、ＢＭ、ＰＢまたはＨＳＣを用い、自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、自己免疫性神経障害、強皮症、再生不良性貧血、および全身性エリトマトーデスの対象を治療する。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０８】
文書、行為、材料、装置、物品等の考察は、単に本発明の背景を提供する目的で、本明細書中に含まれるものである。これらのいずれの事項も、それが本願の各請求項の優先日より前に存在するとして、先行技術基準の一部を形成するか、本発明に関連する分野にて共通の一般的知識であったことを示唆または開示するものではない。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３５】
（ｘｖ）低−および高−増殖能コロニー形成細胞アッセイ
低−および高−増殖能コロニー形成細胞（各々、ＬＰＰ−ＣＦＣおよびＨＰＰ−ＣＦＣ）を、J. Grassingerら、Cytokine, 2012, 58, 218-225およびBartelmez, S. H.ら、Experimental Hematology 17, 240-245（1989）において以前に記載されるようにアッセイした。簡単には、動員したＰＢを溶解させ、４０００ＷＢＣを３５ｍｍ径ペトリ皿に入れた二層のニュートリエント寒天培養系（組換えマウス幹細胞因子および組換えヒトコロニー刺激因子−１、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）およびＩＬ−３を含有する）に置いた。培養物をヒト化インキュベーター中の５％Ｏ２、１０％ＣＯ２、８５％Ｎ２にて３７℃でインキュベートした。ＬＰＰ−ＣＦＣおよびＨＰＰ−ＣＦＣをJ. Grassingerら（2012）において以前に記載されるように１４日間のインキュベーションで計数した。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３６】
（ｘｖｉ）長期移植アッセイ
（ａ）限界希釈分析
ＲＦＰマウスをＢＯＰ（ｎ＝１５）で処理し、１時間後にＰＢを採取した。処理群当たりの各ドナーのマウスからのＰＢをプールし、溶解させ、最初の血液容量の１／３でＰＢＳに入れた。放射線照射したＷＢＭフィラー細胞（２ｘ１０５／マウス）を特定された移植片容量で溶解したＰＢのアリコートに加え、次にＰＢＳをいっぱいになるまで注ぎ足し、２００μｌ／マウスとした。放射線照射したＣ５７ＢＬ／６マウスに尾静脈注射を介して投与し、多リニージＲＦＰ生着を移植した６、１２および２０週間後に評価した。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３８】
（ｘｖｉｉ）統計解析
データを、そのデータセットに適するならば、スチューデントｔ−試験、一方向または二方向ＡＮＯＶＡを用いて分析した。幹細胞の再生頻度の測定については、Ｌ−ＣＡＬＣソフトウェア（Stem Cell Technologies）を用いるポアソン解析が行われた。対数ランク（Mantel-Cox）試験は生存曲線の比較に使用された。ｐ＜０.０５は有意であると考えられた。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４２】
【表５】
2017538715.tif 000005
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４３】
【表６】
2017538715.tif 000006
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４５】
出発材料、試剤、および溶媒はすべて、特記されない限り、商業的供給源より入手し、さらに精製することなく用いた。Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｏ−（tert−ブチルエーテル）チロシンメチルエステル２６はGenscriptより入手した。無水反応はすべて乾燥窒素雰囲気下で行われた。ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフランおよびトルエンは、Grubbsらによる当初の設計に基づき、J. C. Meyerによって構築された、ソルベント・ディスペンシング・システム（Solvent Dispensing System）の活性化中性アルミナの２連カラムを通すことにより乾燥させた。石油スピリットは、沸点が４０−６０℃の留分をいう。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はMerck製のプレコートされた０.２５ｍｍのシリカアルミニウムで裏打ちされたプレート上でなされ、ＵＶ光および／またはニンヒドリン溶液またはリンモリブデン酸溶液に浸し、つづいて加熱することで可視化された。反応生成物の精製は、Merck Silica Gel 60（２３０−４００メッシュ）または逆相Ｃ１８シリカゲルを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより実施された。融点はReichert-Jung Thermovarの加熱段階式顕微鏡融点装置に記録された。旋光度はPerkin Elmer Model 341旋光計に記録された。ＦＴＩＲスペクトルは、ダイヤモンドウィンドーを装備したSmartATR（減衰全反射）を利用するThermo Nicolet 6700分光計を用いて得られた。プロトン（１Ｈ）およびカーボン（１３Ｃ）ＮＭＲスペクトルは、BrukerAV400分光計に各々、４００および１００ＭＨｚで記録された。１Ｈ  ＮＭＲは、溶媒を内部標準（ＣＤＣｌ３、７.２６ｐｐｍ）として用いてｐｐｍで報告される。プロトンデカップルの１３Ｃ  ＮMＲ（１００ＭＨｚ）は、溶媒を内部標準（ＣＤＣｌ３、７７.１６ｐｐｍ）を用いてｐｐｍで報告される。高分解能質量分析は、Electrospray Ionisation（ＥＳＩ）を利用する、WATERS QTOF II（CMSE， Clayton, VIC 3168）またはFinniganハイブリッドLTQ-FT質量分析（Thermo Electron Corp., Bio 21 Institute, University of Melbourne, Parkville, VIC 3010）のいずれかで行われた。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４８】
２６のtert−ブチル保護基を、０℃でトリフルオロ酢酸を用いる脱保護に付して、フェノール２７を得、それをさらに精製することなく、水性後処理に供した後、次工程に用いた。フェノール２７と１−ピロリジンカルボニルクロリドとの反応は、炭酸カリウムの存在下でスムーズに進行し、カルバマート２８を２工程にわたって良好な収率（７４％）で得た。Ｃｂｚ保護基の水素化分解は３時間以内に終了し、その結果としてのアミンはフラッシュクロマトグラフィーに付した後に極めて良好な収率（８５％）にて得られた。次にアミン２９を塩基の存在下でベンゼンスルホニルクロリドと反応させ、スルホンアミド３０をフラッシュクロマトグラフィーに付した後で極めて良好な収率（９６％）で得た。最後に、３０のメチルエステル部分を水酸化ナトリウムを用いてケン化し、つづいてアンバーリスト樹脂上でイオン交換に供し、フラッシュクロマトグラフィーに付した後にＢＯＰを８１％収率にて得た。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５０】
工程１：Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｏ−チロシンメチルエステル（２７）
ＴＦＡ（１.２７ｍＬ、１６.６ミリモル）をＮ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｏ−（tert−ブチルエーテル）チロシンメチルエステル２６（０.８０ｇ、１.６６ミリモル；Genscriptからのカスタム合成ペプチド）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中０℃での懸濁液に滴下して加えた。その混合物をゆっくりと室温にまで加温し、３時間攪拌した。その時点でＴＬＣ（７０：３０  ＥｔＯＡｃ／石油スピリット）は出発材料が完全に消費されたことを示した。その混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させて、減圧下で濃縮した。残渣をトルエンと一緒に濃縮し（ｘ３）、粗Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｏ−チロシンメチルエステル２７（７００ｍｇ）を無色の油状物として得、それをさらに精製することなく、次工程に用いた。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５４】
工程５：Ｎ−（ベンゼンスルホニル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｏ−（１−ピロリジニルカルボニル）チロシン（ＢＯＰ）
０.１Ｍ  ＮａＯＨ（３.２ｍＬ、０.１６２ミリモル）をそのエステル３０（８６ｍｇ、０.１６２ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に加え、該混合物を室温で一夜攪拌した。該反応物をアンバーリスト樹脂（Ｈ＋形態）でクエンチさせ、濾過し、その濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）に付して精製し、生成物のＢＯＰ（６８ｍｇ、８１％）を無色のガラス状物として得た。δＨ（４００ＭＨｚ、ｄ４−ＭｅＯＨ）：１.４７−１.５５（１Ｈ，ｍ）、１.５９−１.７２（２Ｈ，ｍ）、１.７７−１.８５（１Ｈ，ｍ）、１.９３−２.００（４Ｈ，ｍ）、３.１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７.８、１３.７Ｈｚ）、３.１８−３.２４（１Ｈ，ｍ）、３.２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５.０、１３.７Ｈｚ）、３.３５−３.４４（３Ｈ，ｍ）、３.５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６.５Ｈｚ）、４.１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４.０、８.５Ｈｚ）、４.６９（１Ｈ，ｍ）、７.０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、７.２７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、７.６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ）、７.６９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.４Ｈｚ）、７.８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.４Ｈｚ）
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５７】
ＢＯＰを蛍光標識する一般的方法は、後で蛍光タグをコンジュゲートさせるのに、ＢＯＰのＣ４位にトランス配置の二官能性ＰＥＧリンカーを組み込む、効率的な解決方法を基礎とした。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５９】
トリフラート９またはＰＥＧ誘導体１０のいずれかを形成する間に主たる副生成物は単離されなかったが、Ｎ−アルキル化反応の低収率に対する可能な合理化はトリフルオロメタンスルホニルイミダートの中間体の形成であった。従って、第二級アミドを欠く、簡略したシス−ヒドロキシ化合物１２も調査された。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６５】
意外にも、１５と１８とを、ＣｕＳＯ４、アスコルビン酸ナトリウムおよびＣｕ（Ｉ）安定化リガンドトリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（ＴＢＴＡ）を用いて反応させ、実質的には定量的収率で１,４−二置換トリアゾール１９を得た。メチルエステル１９を加水分解に付して酸２０を得、その後で水素化分解によりＣｂｚ基を除去し、完全に脱保護されたＰＥＧ官能基を付与したインテグリンアンタゴニスト２１を良好な収率（２工程にわたって８７％）で得た。最後に、アミン２１を水性条件下でＮＨＳ−ローダミンと反応させ、蛍光標識されたインテグリンアンタゴニスト２２を、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーにより精製した後、５−および６−カルボキシテトラメチルローダミンの位置異性体を５：１の混合物（収率３８％）として得た。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７６】
１８のアルコール８を介しての合成
メタンスルホニルクロリド（９２μＬ、１.１８ミリモル）をアルコール８（２５１ｍｇ、０.３９４ミリモル）およびトリエチルアミン（１７０μＬ、１.２２ミリモル）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中攪拌混合物にＮ２下の０℃で添加した。該反応物を０℃で１時間攪拌し、次に室温に加温し、さらに１時間攪拌した。その反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、５％ＨＣｌ、飽和水性ＮａＨＣＯ３およびブラインで続けて洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、減圧下で濃縮し、中間体のメシラート（４−（（Ｓ）−３−メトキシ−２−（（２Ｓ,４Ｓ）−４−（（メチルスルホニル）オキシ）−１−（フェニルスルホニル）ピロリジン−２−カルボキシアミド）−３−オキソプロピル）フェニル  ピロリジン−１−カルボキシラート）（２７０ｍｇ、定量的収量）を無色の泡沫体として得、それをさらに精製することなく用いた。［α］Ｄ  −１３.５（ｃ  １.０  ＣＨＣｌ３中）；δＨ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  １.８１（１Ｈ，ｍ）、１.８９−１.９６（４Ｈ，ｍ）、２.６３（１Ｈ，ｂｒｄ）、２.８２（３Ｈ，ｓ）、３.０６−３.１８（２Ｈ，ｍ）、３.４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.４Ｈｚ）、３.５０−３.５５（３Ｈ，ｍ）、３.６８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１.３、１２.５Ｈｚ）、３.７１（３Ｈ，ｓ）、４.６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.０、１０.１Ｈｚ）、４.７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６.７、１３.４Ｈｚ）、５.０２（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝１.４、４.７Ｈｚ）、７.０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６）、７.１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ）、７.５６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ）、７.６４−７.６８（１Ｈ，ｍ）、７.８１−７.８４（２Ｈ，ｍ）；δＣ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  ２５.１、２５.９、３５.５、３７.４、３８.９、４６.５、４６.５、５２.５、５４.０、５５.４、６１.０、７８.０、１２２.１（２Ｃ）、１２８.０（２Ｃ）、１２９.８（２Ｃ）、１３０.１（２Ｃ）、１３２.８、１３４.１、１３５.４、１５０.７、１５３.１、１６９.８、１７１.３；ν／ｃｍ−１  ３４０９、２９５４、２８８０、１７１５、１６７８、１５１１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）  ｍ／ｚ  ６４６.１４９７（Ｃ２７Ｈ３３ＮａＮ３Ｏ１０Ｓ２として、［Ｍ＋Ｎａ］＋：計算値  ６４６.１５０５）
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８０】
工程１２：５（６）−カルボキシテトラメチルローダミン標識の化合物（２２）
アミン２１（９.５ｍｇ、１１.３マイクロモル）の０.２Ｍ  ＮａＨＣＯ３（１ｍＬ）中混合物を５（６）−カルボキシテトラメチルローダミン  Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＮＨＳ−ローダミン、Thermo Scientific）（８.９ｍｇ、１６.９マイクロモル）で処理し、その混合物を室温で一夜攪拌させた。該反応物を酢酸でクエンチさせ、濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（５０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ→１００％ＭｅＯＨ）に付して精製し、ローダミン標識の化合物２２（５.３ｍｇ、３８％）を凍結乾燥後に紫色粉末として得た。化合物２２を位置異性体の混合物（５：１）として得た。δＨ（４００ＭＨｚ、ｄ４−メタノール）  主たる異性体：１.８０−１.９９（９Ｈ，ｍ）、２.３７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６.６、１３.５Ｈｚ）、２.７０（１Ｈ，ｍ）、３.０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７.５、１３.９Ｈｚ）、３.２２−３.２６（１Ｈ，ｍ）、３.２６（６Ｈ，ｓ）、３.２７（６Ｈ，ｓ）、３.３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.３Ｈｚ）、３.４３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.３Ｈｚ）、３.４８−３.６６（１７Ｈ，ｍ）、３.７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３.７、１２.０Ｈｚ）、３.９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６.０、１２.０Ｈｚ）、４.４５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.１Ｈｚ）、４.６１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５.６Ｈｚ）、４.９４（１Ｈ，ｍ）、６.８６（２Ｈ，ｂｒｓ）、６.９５−６.９９（４Ｈ，ｍ）、７.１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.５Ｈｚ）、７.２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ）、７.３５−７.４２（３Ｈ，ｍ）、７.５１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.３Ｈｚ）、７.６０−７.６３（２Ｈ，ｍ）、８.０６−８.０８（２Ｈ，ｍ）、８.５６（１Ｈ，ｓ）；δＣ（１００ＭＨｚ、ｄ４−メタノール）  従たる異性体：２５.９、２６.７、３０.４、３６.６、３８.０、３８.１、３８.９、４０.９（４Ｃ）、４７.４７、４７.５３、５５.９、６０.３、６２.３、７０.３、７０.５、７１.３５、７１.４、７１.６（２Ｃ）、９７.３（２Ｃ）、１１４.８（２Ｃ）、１１５.２（２Ｃ）、１２２.７（４Ｃ）、１２６.３、１２８.６（２Ｃ）、１３０.０、１３０.１、１３０.５（２Ｃ）、１３１.１、１３１.７（４Ｃ）、１３２.５（２Ｃ）、１３４.４（２Ｃ）、１３６.０、１３７.２、１３７.３、１３８.１、１４４.０、１５１.６、１５５.１、１５８.７（２Ｃ）、１５９.０（２Ｃ）、１６１.６、１６２.０、１６８.７、１７２.６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）  ｍ／ｚ  １２４１.４９７０（Ｃ６３Ｈ７２Ｎ１０Ｏ１５ＳＨとして、［Ｍ＋Ｈ］＋：計算値  １２４１.４９７２）
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８３】
このように、メチルエステル１８をＮａＯＨで加水分解に供し、脱保護されたアジド阻害剤２３を得、その後でそれをＣｕＳＯ４、アスコルビン酸ナトリウムおよびＴＢＴＡの存在下でＮ−プロピニルスルホローダミンＢ２４と反応させ、蛍光標識された２５（Ｒ−ＢＣ１５４）をＨＰＬＣにより精製した後に収率４３％で得た（スキーム４）。
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８６】
工程２：Ｒ−ＢＣ１５４（２５）
アジド２３（１２ｍｇ、２２マイクロモル）およびＮ−プロピニルスルホローダミンＢ２４（１４ｍｇ、２４マイクロモル）／ＤＭＦ（２ｍＬ）をＣｕＳＯ４（８６μＬ、０.８６マイクロモル、Ｈ２Ｏ中０.０１Ｍ）、アスコルビン酸ナトリウム（４３０μＬ、４.３マイクロモル、Ｈ２Ｏ中０.０１Ｍ）およびトリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（ＴＢＴＡ）（１０８μＬ、１.０８マイクロモル、ＤＭＦ中０.０１Ｍ）で処理した。その混合物を６０℃で２時間攪拌し、その時点でＴＬＣは新たな蛍光性生成物の形成を示した。該混合物を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（４０：１０：１  ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ＋０.５％ＡｃＯＨ）に付して一部精製した。この材料をＨＰＬＣ（１５分間にわたって５０％−９８％勾配のＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ中０.１％）；Ｒｔ＝１４.９分間）に付してさらに精製し、純生成物２５（１０.６ｍｇ、４３％）を紫色のガラス状物として得た。δＨ（４００ＭＨｚ、ｄ４−メタノール）  １.２７−１.３１（１２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝７.０、３.５Ｈｚ）、１.９１−１.９８（４Ｈ，ｍ）、２.２９−２.３５（１Ｈ，ｍ）、２.７１−２.７８（１Ｈ，ｍ）、３.０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７.５、１３.８Ｈｚ）、３.２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５.３、１３.８Ｈｚ）、３.４１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.５Ｈｚ）、３.５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.５Ｈｚ）、３.６３−３.７０（８Ｈ，ｍ）、３.８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３.５、１２.０Ｈｚ）、３.９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５.６、１１.６Ｈｚ）、４.２１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１.４Ｈｚ）、４.４１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.３Ｈｚ）、４.７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５.４、７.５Ｈｚ）、５.０８（１Ｈ，ｍ）、６.９１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝２.２Ｈｚ）、６.９８−７.０４（４Ｈ，ｍ）、７.１１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝９.０Ｈｚ）、７.３０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ）、７.４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.５Ｈｚ）、７.５８−７.６８（４Ｈ，ｍ）、８.００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１.９、８.０Ｈｚ）、８.３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１.８Ｈｚ）；δＣ（１００ＭＨｚ、ｄ４−メタノール）  １２.９（４Ｃ）、２５.９、２６.７、３７.１、３７.６、３９.０、４６.８（４Ｃ）、４７.５、４７.６、５４.８、５５.７、６０.３、６２.１、９７.０（２Ｃ）、１１５.０（２Ｃ）、１１５.２６、１１５.２９、１２２.９（２Ｃ）、１２３.９、１２７.５、１２８.６（２Ｃ）、１２９.３、１３０.５（２Ｃ）、１３１.６（２Ｃ）、１３２.３、１３３.８、１３３.９、１３４.４、１３５.２６、１３５.３４、１３８.３、１４４.１、１４４.８、１４６.９、１５１.７、１５５.２、１５７.１６、１５７.１７、１５７.２、１５７.８、１５９.４、１７３.１、１７３.８；ν／ｃｍ−１  ３０８８−３４１８、２９７７、２８７６、１７１１、１６４９、１５８８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）  ｍ／ｚ  １１７４.３４４７（Ｃ５５Ｈ６１Ｎ９ＮａＯ１３Ｓ３として、［Ｍ＋Ｎａ］＋；計算値  １１７４.３４４３）。インビトロおよびインビボ試験のために、２５の遊離酸（１１.７ｍｇ、９.９７マイクロモル）を０.０１Ｍ  ＮａＯＨ（９９７μＬ、９.９７マイクロモル）に溶かし、その暗紫色溶液を０.４５μｍのシリンジフィルター���ニットを通して濾過した。生成物を凍結乾燥に供し、２５のナトリウム塩（１１.６ｍｇ、９９％）を綿毛のようにフワッとした紫色の粉末として得た。
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９４】
Ｒ−ＢＣ１５４結合のオフ−レート速度は、解離試験により測定された。Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋およびＭｎ２＋の両方の条件下で、解離速度は、Ｒ−ＢＣ１５４の一方のα９β１（ｋｏｆｆ＝０.０５４および＜０.０１分−１）と比べて、そのα４β１複合体（ｋｏｆｆ＝０.７１７および０.０１４分−１）について速かった（図５ｃおよび表３）。加えて、Ｒ−ＢＣ１５４のＭｎ２＋の存在下でα４β１およびα９β１インテグリンへの結合に対するｋｏｆｆ値は、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋条件と比べて、６０分後に６０％以上のＲ−ＢＣ１５４がなおも結合しており、有意にゆっくりとしたものであった（図５ｃ）。これらの条件下で観察されるゆっくりとしたオフ−レートは、Ｍｎ２＋がリガンド結合配置を安定化させるように作用し、放射性標識された基質を用いる以前の報告と一致することを示唆する。かくして、より速いオン−レートおよびオフ−レートがＣａ２＋／Ｍｇ２＋条件で観察されるが、Ｍｎ２＋の活性化はよりゆっくりとしたα４β１およびα９β１インテグリン結合と関連付けられる。結果的に、Ｍｎ２＋活性化下の極めて遅いオフ−レートでは、大変長いインキュベーション時間を必要とするため、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋条件下で小分子のインテグリン阻害剤をインビトロにてスクリーニングするためのＲ−ＢＣ１５４を用いる競合的阻害アッセイが好ましい。
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０１】
実施例４−Ｒ−ＢＣ１５４はインビトロにおいて優先的にマウスおよびヒト造血祖先細胞に結合する
上記した実施例において、Ｒ−ＢＣ１５４（図７ａ）は、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋またはＭｎ２＋などの二価の金属カチオンの存在下においてのみ、ヒトα９β１およびα４β１インテグリンを過剰発現するヒトグリア芽腫ＬＮ１８細胞と結合し（図７ｂ）、それがインビトロにおいて高アフィニティでインテグリン結合するのに必要とされる構造変化を誘発するように作用することが明らかにされた。中心および骨内膜のＢＭ祖先細胞（Ｌｉｎ−Ｓｃａ−１＋ｃｋｉｔ＋細胞；ＬＳＫ）およびＨＳＣ（ＬＳＫＣＤ１５０＋ＣＤ４８−細胞；ＬＳＫＳＬＡＭ）の両方に結合するのにインテグリンの活性化が必要とされるかどうかを決定するのに（図７ｃ）、Ｒ−ＢＣ１５４結合を１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋の存在下で評価した（図７ｄ）。これらの条件下にて、中心のＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭとの結合が、その骨内膜のカウンターパートとの関連で、より大きいことが観察された（ｐ＜０.００５）（図７ｅ）。ＥＤＴＡと共同して処置することにより表面にあるインテグリンを不活性化することで、Ｒ−ＢＣ１５４とＨＳＣおよび祖先細胞との効率的な結合のために、インテグリンの活性化の要件を示す活動を完全に除去した（図７ｅ）。活性化カチオンおよびＥＤＴＡの両方の不存在下では、Ｒ−ＢＣ１５４と骨内膜ＬＳＫ細胞とが結合していることは明らかであったが、中心ＬＳＫではそうではなかった（図７ｆ）。これらの結果は、骨内膜ＢＭより単離されたＨＳＣおよび祖先細胞より発現されたインテグリンが、採取後も活性化されたままであったことを示唆する。
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０４】
実施例５：Ｒ−ＢＣ１５４は、インサイチュにて骨内膜ニッチの範囲内にある本質的に活性化されたα４／α９インテグリンを通してＨＳＣおよび祖先細胞を標的とする
インテグリンは複数の活性化状態で存在し、幹細胞ニッチによるその調節は複雑であり、インビトロにて正確に模倣または再現できない。ＢＭの範囲内でＨＳＣおよび祖先細胞により発現されるα９β１／α４β１インテグリンが、インサイチュにて本質的かつ示差的に活性化されるかどうかを評価するために、ＬＳＫＳＬＡＭについて免疫標識を施す前に、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにＲ−ＢＣ１５４を注射した。中心および骨内膜の両方のＢＭ領域から由来のＬＳＫ細胞は，静脈内投与の後で、Ｒ−ＢＣ１５４で効果的に標識された（図９ａ）。しかしながら、骨内膜ＢＭの範囲内にあるＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭの両方の細胞は、その中心ＢＭカウンターパートと比べてＲ−ＢＣ１５４ｈｉ細胞の割合が大きく（図９ｂ）、活性化二価金属カチオンの不在下で行われたインビトロ実験と一致する（図７ｆを参照のこと）。リンパ球（Ｂ２２０＋およびＣＤ３＋）および骨髄細胞（Ｇｒ１＋およびＭａｃ１＋）の子孫もまた、骨内膜ＢＭの範囲内でＲ−ＢＣ１５４ｈｉ細胞の割合が大きく、これはインテグリン活性化の強化が原始的造血集団に限定されないことを示唆する（図９ｃ）。Ｒ−ＢＣ１５４の結合のないことはα４−／−／α９−／−ＬＳＫ細胞で明らかであり、これはインビボで活性させるためにα４およびα９インテグリンが要件であることを確認した（図９ｄ）。これらのデータはα９β１／α４β１インテグリンが必要とされるだけでなく、骨内膜ＢＭ領域内にある細胞に対してインサイチュにて本質的かつ示差的に活性化されることを示唆する。
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０６】
最初に、Ｒ−ＢＣ１５４の静脈内注射後の迅速なクリアランス（＜５分）は、他の投与経路の評価、皮下注射がインビボにおける持続的結合活性を付与し、かくして最大の動員効率を可能とするかどうかの評価を促した。静脈内注射とは対照的に、ＢＭおよびＬＳＫとの持続的結合が皮下処理の３０分後に観察された（図９ｅ）。最小の結合が、ＢＭカウンターパートと比べて、ＰＢ中のそのＬＳＫで観察され、それは幹細胞ニッチの効果的な活性化およびインテグリン依存的結合のための要件のさらなる証拠を提供するものであった（図９ｅ）。それでも、Ｒ−ＢＣ１５４で処理したマウスにて、ＰＢ中のＷＢＣ、ＬＳＫまたはＬＳＫＳＬＡＭの数が有意に増加することは見いだせなかった（図１０）。ＨＳＣのα９β１／α４β１インテグリン阻害剤による動員が、非蛍光標識のＢＯＰ（２）を用いてさらに研究された（図１１ａ）。Ｒ−ＢＣ１５４を用いる競合阻害アッセイに基づき、ＢＯＰがα９β１およびα４β１インテグリンの強力な阻害剤であり、ＬＮ１８細胞系を過剰発現し（図１１ｂ）、およびＶＣＡＭ−１とのインテグリン依存性付着およびトロンビン切断のＯｐｎを阻害しうることが分かった。加えて、ＢＯＰはα９β１およびα４β１インテグリンのＨＳＣおよび祖先細胞に対する結合を効果的に阻害し、そのことは活性化条件下でのＲ−ＢＣ１５４のＬＳＫおよびＬＳＫＳＬＡＭとの結合の競合的置換により証明された（図１１ｃ）。ＢＯＰ（１０ｍｇ／ｋｇ）をＣ５７ＢＬ／６マウスに最大９０分間まで投与し、セイライン対照と比べて、ＰＢのＷＢＣ（図１１ｄ）、ＬＳＫ（図１１ｅ）およびＬＳＫＳＬＡＭ（図１１ｆ）にて有意な増加を得た。Ｒ−ＢＣ１５４と異なり、おそらくは、そのより高い結合アフィニティおよびよりゆっくりとした分解速度に起因して、ＢＯＰでより大きな、かつより持続される動員が観察された。
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０９】
幹細胞ニッチの概念はSchofieldが１９７８年に最初に主張してから、骨内膜ＢＭの機能特性は十分に研究されてきた。かかる研究は骨内膜ニッチが低酸素環境にあると強調し、その環境では、骨芽細胞およびそれに関連する細胞外マトリックスタンパク質などの細胞成分がＨＳＣの維持および機能の重要なニッチ特異的レギュレータである。これらの例は、ＨＳＣおよび祖先細胞を含む骨内膜ニッチ内のＢＭ細胞が、中心髄質コンパートメント内にて観察されるものを越えてより高いアフィニティの結合状態にある、α９β１／α４β１インテグリンを発現することを示す。この特異的インテグリン活性の生理学的関連性は不明のままであるが、これらの観察はトロンビン切断Ｏｐｎ（ｔｒＯｐｎ）とα４β１およびα９β１インテグリンとの間のＨＳＣ依存性結合が骨内膜骨髄に限定されるというこれまでの報告と一致する。
【誤訳訂正５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１０】
骨内膜によるインテグリンの活性化の強化は、原始ＨＳＣおよび祖先細胞に特異的なものではなく、α９β１およびα４β１インテグリンだけに限定されそうにもない。理論により限定されるものではないが、骨内膜ＢＭ内で観察されるインテグリン活性化の強化について可能性のある１つの説明は、それが骨とごく接近してあることである。骨は、その鉱物含量が高いことに基づき、他の微小環境の細胞と区別され、カルシウムおよびマグネシウム、ならびにマンガンなどの微量金属の無機塩のプライマリー・ストレージ部位であり、そのいずれもがα９β１およびα４β１インテグリンを誘発し、より高いアフィニティリガンド結合構成を採用する。かくして、骨内膜表面から発出するＣａ２＋（およびおそらくは、Ｍｇ２＋およびＭｎ２＋）の高いイオン勾配が、観察されるインテグリン結合アフィニティの強化と関与しているとの事項は、依然としてもっともらしい。実際、この概念は、これまで、Ｇタンパク質共役型カルシウム感知受容体（ＣａＲ）を通して細胞外Ｃａ２＋を認識することを介し、骨内膜ＢＭ内にあるＨＳＣの優先的局在化を正当化するために用いられてきた。集約すると、これらの観察は、骨内膜ニッチの独特な特性、外見的に表現型が同じ細胞にて付与される特異的影響をさらに定義し、幹細胞療法のために幹細胞ニッチを治療標的とする確認を提供する。