【手続補正書】
【提出日】平成30年4月9日(2018.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトンまたは大環状ケトンを調製するための化学酵素的プロセスであって、
少なくとも1種類の脂肪酸誘導体をインビボで産生するための、E.C. 1.14.15.3のω-ヒドロキシラーゼまたはオキシゲナーゼを含む改変された脂肪酸生合成経路を含む組換え微生物を培養する段階であって、該培養が、炭素系の原料とともに行われる、段階；および
ラクトンまたは大環状ケトンを生成させるのに十分な条件下で、該脂肪酸誘導体を試薬とエクスビボで接触させる段階
を含み、
該脂肪酸誘導体が、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸（ω-OH FA）、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和ω-OH FA）、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（ω-OH脂肪酸エステル）、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和ω-OH脂肪酸エステル）、3-ヒドロキシ脂肪酸（3-OH FA）、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和3-OH FA）、3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和3-OH脂肪酸エステル）、アルファ-オメガ-二酸（α,ω-二酸）、不飽和アルファ-オメガ二酸（不飽和α,ω-二酸）、アルファ-オメガ-二酸エステル（α,ω-二酸エステル）、および不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（不飽和α,ω-二酸エステル）、からなる群より選択される、プロセス。
【請求項２】
改変された脂肪酸生合成経路が、E.C. 3.1.2.-またはE.C. 2.1.1.5のチオエステラーゼを含み、好ましくはE.C. 2.3.1.20のエステルシンターゼをさらに含む、請求項1記載の化学酵素的プロセス。
【請求項３】
EC 1.1.1.1/2、EC 1.1.3.13、EC 1.1.3.20、EC 1.2.1.3/4/5またはEC 1.2.3.1のオキシダーゼまたはデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項1または2記載の化学酵素的プロセス。
【請求項４】
改変された脂肪酸生合成経路が微生物内部の不飽和脂肪酸誘導体の量を増加させる、請求項1記載の化学酵素的プロセス。
【請求項５】
接触段階の前に脂肪酸誘導体を単離する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項６】
脂肪酸誘導体が組換え微生物から分泌され、接触段階が、培養段階由来の脂肪酸誘導体を単離することなく行われる、請求項1記載の方法。
【請求項７】
試薬が、
(a) 塩酸、硫酸、リン酸および回収可能樹脂酸からなる群より選択されるプロトン酸を含む；
(b) ルイス酸を含み、好ましくはルイス酸が、有機スタンナンエステル交換触媒、銅塩または亜鉛塩、銀トリフラート、およびゼオライトからなる群より選択される；または
(c) ペプチドカップリング剤である
、請求項1記載の方法。
【請求項８】
芳香剤成分が、ガンマ-ラクトン（γ-ラクトン）、デルタ-ラクトン（δ-ラクトン）、またはそれらの組合せであり、好ましくは芳香剤成分がC8〜C18マクロラクトンである、請求項1記載の方法。
【請求項９】
オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和ω-OH FA）またはオメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和ω-OH脂肪酸エステル）が一不飽和性であり、好ましくは一不飽和オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（一不飽和ω-OH脂肪酸エステル）が、オメガ-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸メチルエステル（ω-OH一不飽和FAME）およびオメガ-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸エチルエステル（ω-OH一不飽和FAEE）からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）が、3-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（3-OH FAME）または3-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（3-OH FAEE）である、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（ω-OH脂肪酸エステル）が、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（ω-OH FAME）またはオメガ-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（ω-OH FAEE）である、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和3-OH FA）または3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和3-OH脂肪酸エステル）が一不飽和性であり、好ましくは一不飽和3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）が、3-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸メチルエステル（一不飽和3-OH FAME）または3-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸エチルエステル（一不飽和3-OH FAEE）である、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
不飽和アルファ-オメガ-二酸（不飽和α,ω-二酸）または不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（不飽和α,ω-二酸エステル）が一不飽和性であり、好ましくは一不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（一不飽和α,ω-二酸エステル）が、
(a) 酸半エステル（half-acid ester）であり、より好ましくは、メチルエステルまたはエチルエステルである；あるいは
(b) ジエステルであり、より好ましくは、メチルジエステルまたはエチルジエステルである
、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
接触段階が、脱水、ラクトン化、またはそれらの組合せを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
脂肪酸誘導体が、奇数炭素鎖、メチル分枝、またはそれらの組合せを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１６】
炭素系の原料が単純な炭素源を含む、請求項1記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本開示のもう1つの局面は、脂肪酸誘導体の種類に、不飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸エステル、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸（ω-OH FA）、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和ω-OH FA）、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（ω-OH脂肪酸エステル）、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和ω-OH脂肪酸エステル）、3-ヒドロキシ脂肪酸（3-OH FA）、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和3-OH FA）、3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和3-OH脂肪酸エステル）、アルファ-オメガ-二酸（α,ω-二酸）、不飽和アルファ-オメガ二酸（不飽和α,ω-二酸）、アルファ-オメガ-二酸エステル（α,ω-二酸エステル）、不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（不飽和α,ω-二酸エステル）、およびそれらの組合せが非限定的に含まれる、化学酵素的プロセス（前記）を提供する。1つの態様において、不飽和脂肪酸は一不飽和性である。もう1つの態様において、不飽和脂肪酸エステルは一不飽和性である。もう1つの態様において、不飽和脂肪酸エステルは、不飽和脂肪酸メチルエステル（FAME）および不飽和脂肪酸エチルエステル（FAEE）を含む。もう1つの態様において、不飽和FAMEまたはFAEEは一不飽和性である。もう1つの態様において、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和ω-OH FA）は一不飽和性である。もう1つの態様において、不飽和脂肪酸エステルは、不飽和脂肪酸メチルエステル（FAME）および不飽和脂肪酸エチルエステル（FAEE）を含む。もう1つの態様において、3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）は、3-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（3-OH FAME）または3-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（3-OH FAEE）である。もう1つの態様において、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（ω-OH脂肪酸エステル）は、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（ω-OH FAME）またはオメガ-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（ω-OH FAEE）である。もう1つの態様において、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和ω-OH脂肪酸エステル）は一不飽和性である。もう1つの態様において、一不飽和オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（一不飽和ω-OH脂肪酸エステル）は、オメガ-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸メチルエステル（ω-OH一不飽和FAME）およびオメガ-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸エチルエステル（ω-OH一不飽和FAEE）を非限定的に含む。もう1つの態様において、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和3-OH FA）は一不飽和性である。もう1つの態様において、3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）は、3-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（3-OH FAME）または3-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（3-OH FAEE）である。もう1つの態様において、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和3-OH脂肪酸エステル）は一不飽和性である。もう1つの態様において、一不飽和3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）は、3-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸メチルエステル（一不飽和3-OH FAME）または3-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸エチルエステル（一不飽和3-OH FAEE）である。もう1つの態様において、不飽和アルファ-オメガ-二酸（不飽和α,ω-二酸）または不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（不飽和α,ω-二酸エステル）は一不飽和性である。もう1つの態様において、一不飽和（monounsatured）アルファ-オメガ-二酸エステル��一不飽和α,ω-二酸エステル）は、酸半エステル（half-acid ester）である。もう1つの態様において、酸半エステルはメチルエステルまたはエチルエステルである。もう1つの態様において、一不飽和（monounsatured）アルファ-オメガ-二酸エステル（一不飽和α,ω-二酸エステル）は、ジエステルである。なおもう1つの態様において、ジエステルはメチルジエステルまたはエチルジエステルである。
[本発明1001]
以下を含む、芳香剤成分を作り出すための化学酵素的プロセス：
代謝改変を含む組換え微生物を培養する段階であって、該微生物が、少なくとも1種類の脂肪酸誘導体をインビボで産生し、該培養が、炭素系の原料とともに行われる、段階；および
ラクトンまたは大環状ケトンを生成させるのに十分な条件下で、該脂肪酸誘導体を試薬とエクスビボで接触させる段階。
[本発明1002]
代謝改変が、変更された酵素機能を含む、本発明1001の化学酵素的プロセス。
[本発明1003]
変更された酵素機能が、E.C. 3.1.2.-またはE.C. 2.1.1.5のチオエステラーゼを含む、本発明1002の化学酵素的プロセス。
[本発明1004]
変更された酵素機能が、E.C. 2.3.1.20のエステルシンターゼをさらに含む、本発明1003の化学酵素的プロセス。
[本発明1005]
変更された酵素機能が、E.C. 1.14.15.3のω-ヒドロキシラーゼまたはオキシゲナーゼを含む、本発明1002の化学酵素的プロセス。
[本発明1006]
変更された酵素機能が、EC 1.1.1.1/2、EC 1.1.3.13、EC 1.1.3.20、EC 1.2.1.3/4/5またはEC 1.2.3.1のオキシダーゼまたはデヒドロゲナーゼをさらに含む、本発明1005の化学酵素的プロセス。
[本発明1007]
代謝改変が微生物内部の不飽和脂肪酸誘導体を増加させる、本発明1001の化学酵素的プロセス。
[本発明1008]
芳香剤成分がラクトンまたは大環状ケトンを含む、本発明1001の化学酵素的プロセス。
[本発明1009]
接触段階の前に脂肪酸誘導体を単離する段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
脂肪酸誘導体が組換え微生物から分泌され、接触段階が、培養段階由来の脂肪酸誘導体を単離することなく行われる、本発明1001の方法。
[本発明1011]
試薬が、塩酸、硫酸、リン酸および回収可能樹脂酸からなる群より選択されるプロトン酸を含む、本発明1001の方法。
[本発明1012]
試薬がルイス酸を含む、本発明1001の方法。
[本発明1013]
ルイス酸が、有機スタンナンエステル交換触媒、銅塩または亜鉛塩、銀トリフラート、およびゼオライトからなる群より選択される、本発明1012の方法。
[本発明1014]
試薬がペプチドカップリング剤である、本発明1001の方法。
[本発明1015]
芳香剤成分が、ガンマ-ラクトン（γ-ラクトン）、デルタ-ラクトン（δ-ラクトン）、またはそれらの組合せである、本発明1001の方法。
[本発明1016]
芳香剤成分がC8〜C18マクロラクトンである、本発明1001の方法。
[本発明1017]
脂肪酸誘導体が、不飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸エステル、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸（ω-OH FA）、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和ω-OH FA）、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（ω-OH脂肪酸エステル）、オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和ω-OH脂肪酸エステル）、3-ヒドロキシ脂肪酸（3-OH FA）、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和3-OH FA）、3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）、3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和3-OH脂肪酸エステル）、アルファ-オメガ-二酸（α,ω-二酸）、不飽和アルファ-オメガ二酸（不飽和α,ω-二酸）、アルファ-オメガ-二酸エステル（α,ω-二酸エステル）、不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（不飽和α,ω-二酸エステル）、およびそれらの組合せからなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1018]
不飽和脂肪酸が一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1019]
不飽和脂肪酸エステルが一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1020]
不飽和脂肪酸エステルが、不飽和脂肪酸メチルエステル（FAME）および不飽和脂肪酸エチルエステル（FAEE）からなる群より選択される、本発明1017の方法。
[本発明1021]
不飽和FAMEが一不飽和性である、本発明1020の方法。
[本発明1022]
不飽和FAEEが一不飽和性である、本発明1020の方法。
[本発明1023]
オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和ω-OH FA）が一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1024]
不飽和脂肪酸エステルが、不飽和脂肪酸メチルエステル（FAME）および不飽和脂肪酸エチルエステル（FAEE）からなる群より選択される、本発明1017の方法。
[本発明1025]
3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）が、3-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（3-OH FAME）または3-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（3-OH FAEE）である、本発明1017の方法。
[本発明1026]
オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（ω-OH脂肪酸エステル）が、オメガ-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（ω-OH FAME）またはオメガ-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（ω-OH FAEE）である、本発明1017の方法。
[本発明1027]
オメガ-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和ω-OH脂肪酸エステル）が一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1028]
一不飽和オメガ-ヒドロキシ脂肪酸エステル（一不飽和ω-OH脂肪酸エステル）が、オメガ-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸メチルエステル（ω-OH一不飽和FAME）およびオメガ-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸エチルエステル（ω-OH一不飽和FAEE）からなる群より選択される、本発明1027の方法。
[本発明1029]
3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸（不飽和3-OH FA）が一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1030]
3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）が、3-ヒドロキシ脂肪酸メチルエステル（3-OH FAME）または3-ヒドロキシ脂肪酸エチルエステル（3-OH FAEE）である、本発明1017の方法。
[本発明1031]
3-ヒドロキシ不飽和脂肪酸エステル（不飽和3-OH脂肪酸エステル）が一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1032]
一不飽和3-ヒドロキシ脂肪酸エステル（3-OH脂肪酸エステル）が、3-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸メチルエステル（一不飽和3-OH FAME）または3-ヒドロキシ一不飽和脂肪酸エチルエステル（一不飽和3-OH FAEE）である、本発明1031の方法。
[本発明1033]
不飽和アルファ-オメガ-二酸（不飽和α,ω-二酸）または不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（不飽和α,ω-二酸エステル）が一不飽和性である、本発明1017の方法。
[本発明1034]
一不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（一不飽和α,ω-二酸エステル）が、酸半エステル（half-acid ester）である、本発明1033の方法。
[本発明1035]
酸半エステルがメチルエステルまたはエチルエステルである、本発明1034の方法。
[本発明1036]
一不飽和アルファ-オメガ-二酸エステル（一不飽和α,ω-二酸エステル）がジエステルである、本発明1033の方法。
[本発明1037]
ジエステルがメチルジエステルまたはエチルジエステルである、本発明1036の方法。
[本発明1038]
接触段階が、脱水、ラクトン化、またはそれらの組合せを含む、本発明1001の方法。
[本発明1039]
脂肪酸誘導体が、奇数炭素鎖、メチル分枝、またはそれらの組合せを含む、本発明1001の方法。
[本発明1040]
炭素系の原料が単純な炭素源を含む、本発明1001の方法。
[本発明1041]
炭素系の原料が再生可能である、本発明1001の方法。