【手続補正書】
【提出日】平成30年5月25日(2018.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生存可能で頑丈な細菌を保存する方法であって、生物試料を安定化組成物と接触させることを含み、前記安定化組成物がキレート化剤、変性剤、塩を含み、６〜１１のｐＨを有する方法。
【請求項２】
前記頑丈な細菌がマイコバクテリア、炭疽菌、またはクロストリジウム・ディフィシレである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記マイコバクテリアが結核菌であり、前記炭疽菌が芽胞として安定化される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記頑丈な細菌の全てまたは一部が、室温、または環境温度または４℃〜４０℃の範囲内の温度で、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上または７日以上または１か月以上の貯蔵後に安定なままである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
生物試料を液化し、前記生物試料中の生存可能で頑丈な細菌を保存する方法であって、前記生物試料を安定化組成物と接触させることを含み、前記安定化組成物が、キレート化剤、変性剤、塩を含み、６〜１１のｐＨを有し、前記安定化組成物が前記生物試料中の前記生存可能で頑丈な細菌を保存する方法。
【請求項６】
生物試料中のマイクロバイオームを安定化する方法であって、前記生物試料を安定化組成物と接触させることを含み、前記安定化組成物が、キレート化剤、変性剤、塩を含み、６〜１１のｐＨを有する方法。
【請求項７】
前記安定化組成物が、生物試料中の頑丈な細菌を生存可能な状態で保存し、前記試料中のその他の微生物の増殖を減らすかまたはなくする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記生物試料が、粘液性生体液である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記生物試料が、喀痰または唾液である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記キレート化剤が、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン三酢酸（ＥＤＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシン、クエン酸塩無水物、クエン酸ナトリウム、クエン酸カルシウム、クエン酸アンモニウム、二クエン酸アンモニウム、クエン酸、クエン酸二アンモニウム、クエン酸鉄アンモニウム、クエン酸リチウム、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記変性剤が、アニオン洗剤、カチオン洗剤（または非イオン洗剤である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記アニオン洗剤がドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ドデシル硫酸リチウム、またはラウロイル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）であり、前記カチオン洗剤がセチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）であり、前記非イオン洗剤がツイーン２０（商標）、トリトンＸ１００（商標）、またはブリージ５８（商標）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が、（ｉ）２％ＳＤＳ、１２．５ｍＭのＣＤＴＡ、２５０ｍＭのＬｉＣｌ、５０ｍＭグリシンを含み、ｐＨ１０．５を有する、または（ｉｉ）４％ＳＤＳ、５０ｍＭのＣＤＴＡ、２５０ｍＭのＬｉＣｌ、１４０ｍＭのＬｉＯＨを含み、ｐＨ６．８を有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
生存可能で頑丈な細菌を含む生物試料中の前記生存可能で頑丈な細菌由来の細菌核酸のキャラクタリゼーション方法であって、
前記生物試料を安定化組成物と接触させること、および前記生物試料中の核酸を増幅することを含み、
前記安定化組成物がキレート化剤、変性剤、塩を含み、６〜１１のｐＨを有し、前記増幅ステップを行うのが収集の直後であっても、またはさらに後であっても、前記増幅された核酸のレベルが実質的に不変のままである方法。
【請求項１５】
前記生物試料が、粘液性生体液である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記生物試料が、喀痰または唾液である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記キレート化剤が、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン三酢酸（ＥＤＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシン、クエン酸塩無水物、クエン酸ナトリウム、クエン酸カルシウム、クエン酸アンモニウム、二クエン酸アンモニウム、クエン酸、クエン酸二アンモニウム、クエン酸鉄アンモニウム、クエン酸リチウム、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記変性剤が、アニオン洗剤、カチオン洗剤（または非イオン洗剤である、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記アニオン洗剤がドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ドデシル硫酸リチウム、またはラウロイル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）であり、前記カチオン洗剤がセチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）であり、前記非イオン洗剤がツイーン２０（商標）、トリトンＸ１００（商標）、またはブリージ５８（商標）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、（ｉ）２％ＳＤＳ、１２．５ｍＭのＣＤＴＡ、２５０ｍＭのＬｉＣｌ、５０ｍＭグリシンを含み、ｐＨ１０．５を有する、または（ｉｉ）４％ＳＤＳ、５０ｍＭのＣＤＴＡ、２５０ｍＭのＬｉＣｌ、１４０ｍＭのＬｉＯＨを含み、ｐＨ６．８を有する、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
キレート化剤、
変性剤、および
生存可能で頑丈な微生物、を含む組成物。
【請求項２２】
前記キレート化剤が、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン三酢酸（ＥＤＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシン、クエン酸塩無水物、クエン酸ナトリウム、クエン酸カルシウム、クエン酸アンモニウム、二クエン酸アンモニウム、クエン酸、クエン酸二アンモニウム、クエン酸鉄アンモニウム、クエン酸リチウム、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記変性剤が、アニオン洗剤、カチオン洗剤（または非イオン洗剤である、請求項２１または２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記アニオン洗剤がドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ドデシル硫酸リチウム、またはラウロイル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）であり、前記カチオン洗剤がセチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）であり、前記非イオン洗剤がツイーン２０（商標）、トリトンＸ１００（商標）、またはブリージ５８（商標）である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
（ｉ）２％ＳＤＳ、１２．５ｍＭのＣＤＴＡ、２５０ｍＭのＬｉＣｌ、５０ｍＭグリシンを含み、ｐＨ１０．５を有する、または（ｉｉ）４％ＳＤＳ、５０ｍＭのＣＤＴＡ、２５０ｍＭのＬｉＣｌを含み、１４０ｍＭのＬｉＯＨ、ｐＨ６．８を有する、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記頑丈な細菌がマイコバクテリア、炭疽菌、またはクロストリジウム・ディフィシレである、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記マイコバクテリアが結核菌であり、前記炭疽菌が芽胞の形態である、請求項２６に記載の組成物。