【手続補正書】
【提出日】平成30年6月22日(2018.6.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質であって、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されている、融合タンパク質。
【請求項２】
ａ．前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列と比べてＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｃ１２５Ｓ、Ｑ１２６ＬおよびＱ１２６Ｆからなる群より選択される置換を伴うヒトＩＬ−２を含み、
ｂ．前記ペプチドリンカードメインが、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインが、配列番号２のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ改変体、および配列番号３のヒトＩｇＧ２  Ｆｃからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列と比べてＮ２９７Ａ変異を含むＩｇＧ１  Ｆｃタンパク質を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
前記融合タンパク質が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質をコードする核酸であって、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されている、核酸。
【請求項７】
２つの同一な鎖を含む二量体タンパク質であって、各鎖は、
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質を含み、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されている、二量体タンパク質。
【請求項８】
ｉ）前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列と比べてＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｃ１２５Ｓ、Ｑ１２６ＬおよびＱ１２６Ｆからなる群より選択される少なくとも１つの変異を含み、
ｉｉ）前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインが、
ａ．配列番号２のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ改変体、および配列番号３のヒトＩｇＧ２  Ｆｃからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．システイン残基を含み、
ｉｉｉ）前記２つの同一な鎖が、前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記システイン残基を介して互いに連結されている、
請求項７に記載の二量体タンパク質。
【請求項９】
各鎖が、配列番号９である、請求項７に記載の二量体タンパク質。
【請求項１０】
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質を含む医薬組成物であって、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されている、医薬組成物。
【請求項１１】
ａ．前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列と比べてＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｃ１２５Ｓ、Ｑ１２６ＬおよびＱ１２６Ｆからなる群より選択される置換を伴うヒトＩＬ−２を含み、
ｂ．前記ペプチドリンカードメインが、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインが、配列番号２のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ改変体、および配列番号３のヒトＩｇＧ２  Ｆｃからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列と比べてＮ２９７Ａ変異を含むＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃタンパク質を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記融合タンパク質が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、前記組成物は、
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質を含み、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されている、医薬組成物。
【請求項１６】
前記自己免疫疾患が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、移植片対宿主病および自己免疫性血管炎からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記融合タンパク質が、配列番号９を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が２つの同一な鎖を含む二量体タンパク質を含み、各鎖は、
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質を含み、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
各鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
調節性Ｔ細胞を選択的に活性化するための医薬組成物であって、前記組成物は、
ａ．ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインと、
ｂ．ペプチドリンカードメインと、
ｃ．ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインと
を含む融合タンパク質を含み、
各ドメインは、アミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）を有し、前記融合タンパク質は、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質ドメインの前記Ｃ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｎ末端に融合され、かつ前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質ドメインの前記Ｎ末端がペプチド結合を介して前記ペプチドリンカードメインの前記Ｃ末端に融合されるように構成されており、
前記組成物は、ヒト調節性Ｔ細胞濃度が所望のレベルに達するまで、治療有効用量で投与される、
医薬組成物。
【請求項２１】
ヒト血液細胞を１ｎＭから０．０１ｎＭの間の濃度の請求項１に記載の融合タンパク質と接触させる工程と、次いで、前記タンパク質と結合する細胞をフローサイトメトリーによって検出する工程とを含む、ヒト血液試料中の調節性Ｔ細胞の数を測定する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
ヒト血液細胞を１ｎＭから０．０１ｎＭの間の濃度の請求項１に記載の融合タンパク質
と接触させ、次いで、タンパク質と結合する細胞をフローサイトメトリーによって検出す
ることによって、ヒト血液試料中のＴｒｅｇ細胞の数を測定する方法。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ａ．Ｎ末端ヒトＩＬ−２改変体タンパク質部分と、
ｂ．Ｃ末端ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質部分と
を含む融合タンパク質であって、
前記ＩＬ−２融合タンパク質が、高親和性ＩＬ−２受容体を選択的に活性化し、それにより、ヒト調節性Ｔ細胞を選択的に活性化する能力を有する、融合タンパク質。
（項目２）
前記ＩＬ−２改変体タンパク質が、ヒトＩＬ２タンパク質（配列番号１）と比べてＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、Ｄ８４Ｇ、またはＤ８４Ｉからなる群より選択される置換を伴うヒトＩＬ−２を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目３）
前記ＩＬ−２改変体タンパク質が、置換Ｃ１２５Ｓを伴うヒトＩＬ−２を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目４）
前記ＩＬ−２改変体タンパク質と前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質の両方がＮ末端とＣ末端とを有し、前記ヒトＩＬ−２改変体タンパク質がそのＣ末端で前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質のＮ末端と融合している、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目５）
前記ＩＬ−２改変体タンパク質部分と前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質部分の間に位置するリンカーペプチドをさらに含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目６）
前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質が、前記融合タンパク質のＦｃ部分のエフェクター機能を低下させる１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目７）
ａ．ヒトＩＬ−２（配列番号１）と比べてアミノ酸置換Ｎ８８ＲおよびＣ１２５Ｓを有するＩＬ−２改変体タンパク質と、
ｂ．配列番号１５に記載のリンカーペプチドと、
ｃ．配列番号２に記載のヒトＩｇＧ１  Ｆｃタンパク質と
を含む融合タンパク質であって、
高親和性ＩＬ−２受容体を選択的に活性化し、それにより、ヒト調節性Ｔ細胞を選択的に活性化する能力を有する、融合タンパク質。
（項目８）
ａ．ヒトＩＬ−２（配列番号１）と比べてアミノ酸置換Ｎ８８ＲおよびＣ１２５Ｓを有するＩＬ−２改変体タンパク質と、
ｂ．配列番号２に記載のリンカーペプチドと、
ｃ．配列番号３に記載のヒトＩｇＧ２  Ｆｃタンパク質と
を含む融合タンパク質。
（項目９）
項目１に記載の融合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目１０）
ヒト調節性Ｔ細胞を選択的に活性化する方法であって、ヒトＩＬ−２（配列番号１）と比べてアミノ酸置換Ｎ８８ＲおよびＣ１２５Ｓを有するＩＬ−２改変体タンパク質と、配列番号１５に記載のリンカーペプチドと、配列番号３に記載のヒトＩｇＧ１  Ｆｃタンパク質とを含む医薬組成物を投与するステップを含み、ここで前記医薬組成物は、ヒト調節性Ｔ細胞濃度が所望のレベルに達するまで、治療有効用量で投与される、方法。
（項目１１）
ヒト調節性Ｔ細胞を選択的に活性化する方法であって、項目２に記載のＩＬ−２改変体タンパク質と、
ａ．配列番号２に記載のヒトＩｇＧ１  Ｆｃタンパク質または
ｂ．配列番号３に記載のヒトＩｇＧ２  Ｆｃタンパク質
のいずれかから選択されるヒトＩｇＧ  Ｆｃタンパク質とを含む医薬組成物を投与するステップを含み、ここで前記医薬組成物は、ヒト調節性Ｔ細胞濃度が所望のレベルに達するまで、治療有効用量で投与される、方法。
（項目１２）
ヒト血液細胞を１ｎＭから０．０１ｎＭの間の濃度の項目１に記載の融合タンパク質と接触させ、次いで、前記タンパク質と結合する細胞をフローサイトメトリーによって検出することによって、ヒト血液試料中のＴｒｅｇ細胞の数を測定する方法。
（項目１３）
２つの同一の鎖を含む二量体タンパク質であって、ここで各鎖がＮ末端ヒトＩＬ−２改変体タンパク質部分とＣ末端ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質部分とを含み、
前記Ｎ末端ヒトＩＬ−２改変体タンパク質部分が、
ａ．Ｎ末端とＣ末端とを有し、
ｂ．Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆからなる群より選択される少なくとも１つの置換によって配列番号１のヒトＩＬ−２野生型と異なり、
ｃ．配列番号１に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、そして
ｄ．Ｔｒｅｇ細胞上のＩＬ２Ｒαβγに結合することによってＴｒｅｇ細胞を活性化する能力を有し、
前記Ｎ末端ヒトＩＬ−２改変体タンパク質がそのＣ末端でアミノ酸残基６〜２０個のアミノ酸リンカーのＮ末端と接合しており、前記リンカーもＣ末端を有し、そして
前記アミノ酸リンカーのＣ末端が、配列番号３に対して９７％の配列同一性を有しかつシステイン残基を含むＩｇＧ  Ｆｃタンパク質部分のＮ末端と接合しており、前記２つの鎖が、前記ＩｇＧ  Ｆｃタンパク質部分のシステイン残基を通じて互いと連結している、
二量体タンパク質。
（項目１４）
前記ＩＬ−２改変体タンパク質が、置換Ｃ１２５Ｓを伴うヒトＩＬ−２をさらに含む、項目１３に記載の二量体タンパク質。
（項目１５）
前記アミノ酸リンカーが、グリシン残基、セリン残基、およびグリシン残基とセリン残基のミックスの群より選択されるリンカーからなる、項目１３に記載のタンパク質。
（項目１６）
前記ＩＬ−２改変体タンパク質部分が、置換Ｎ８８Ｒを有する、項目１３に記載のタンパク質。
（項目１７）
前記リンカーが、１２個から１７個の間のセリン残基とグリシン残基のミックスを含む、項目１３に記載のタンパク質。
（項目１８）
前記リンカーが、４：１の比率のグリシン残基とセリン残基を含む、項目１３に記載の融合タンパク質。
（項目１９）
項目１に記載の融合タンパク質をコードする核酸。