【手続補正書】
【提出日】平成30年3月12日(2018.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳を含む組織への核酸の送達のためのナノ粒子製剤であって、
核酸と、
第１の親水性カチオン性ポリマーと、
ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシドおよびこれらのコポリマーからなる群から選択される第２の親水性中性電荷直鎖状または分岐状ポリマーと
を含み、
該カチオン性ポリマーの９０％〜７５％が、該親水性ポリマーにコンジュゲートされ、または該カチオン性ポリマーの少なくとも５０％が、分岐状親水性ポリマーにコンジュゲートされており、該核酸が、該ナノ粒子内に被包され、もしくは該ナノ粒子の表面に会合しており、該ナノ粒子が、ほぼ中性の電荷を付与し、該組織にわたる拡散率を増強する密度の該親水性ポリマーでコーティングされているナノ粒子製剤。
【請求項２】
前記脳実質内への送達のための、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項３】
１１４ｎｍ、１００ｎｍまたは５０ｎｍ未満のあるいは１１４ｎｍ、１００ｎｍまたは５０ｎｍに等しい直径を有する、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項４】
前記第１のカチオン性ポリマーまたは第２の中性電荷親水性ポリマーが、分岐している、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項５】
前記第２の親水性ポリマーが、１，０００ダルトン〜１０，０００ダルトンの間の分子量を有するポリエチレングリコールである、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項６】
前記ポリエチレングリコールが、５，０００ダルトンの分子量を有する、請求項５に記載のナノ粒子製剤。
【請求項７】
前記第１のカチオン性ポリマーが、１０，０００ダルトン〜５０，０００ダルトンの間の分子量を有する分岐状ポリエチレンイミンである、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項８】
第１のカチオン性ポリマーに対する第２の中性電荷親水性ポリマーのモル比が、８を超える、請求項７に記載のナノ粒子製剤。
【請求項９】
ポリマーに対する核酸のＮ対Ｐ比が、少なくとも２である、請求項８に記載のナノ粒子製剤。
【請求項１０】
前記第１のカチオン性ポリマーが、ポリ−Ｌリシンである、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項１１】
前記第２の中性電荷親水性ポリマーが、５，０００ダルトンの個々の分岐の分子量を有する分岐状ポリエチレングリコールである、請求項１０に記載のナノ粒子製剤。
【請求項１２】
前記ポリ−Ｌリシンの少なくとも５０％が、ポリエチレングリコールにコンジュゲートされている、請求項１１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項１３】
前記第２の中性電荷親水性ポリマーの質量が、前記粒子の質量の少なくとも１／１０，０００、１／７５００、１／５０００、１／４０００、１／３４００、１／２５００、１／２０００、１／１５００、１／１０００、１／５００、１／２５０、１／２００、１／１５０、１／１００、１／７５、１／５０、１／２５、１／２０、１／５、１／２または９／１０である、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項１４】
前記ナノ粒子が、マンニトールのような浸透圧媒体において製剤化されて、前記脳内への取り込みを増強する、請求項１に記載のナノ粒子製剤。
【請求項１５】
前記脳への治療剤の送達のための投薬製剤であって、
該脳への投与のための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の治療有効量のナノ粒子、および
該脳内への送達のための薬学的に許容される賦形剤
からなる製剤。
【請求項１６】
前記ナノ粒子が、対流増強送達を使用した前記脳への直接的投与のために製剤化されている、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１７】
前記ナノ粒子が、前記脳への全身性または鼻腔内投与のために製剤化されている、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１８】
前記ナノ粒子が、少なくとも１０分間、２０分間、３０分間、１時間、２時間、４時間（hour  hours）、６時間、１０時間、１日間、３日間、７日間、１０日間、２週間、１ヶ月間またはそれより長い期間にわたって、有効量の前記核酸を放出する、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１９】
前記脳への核酸の送達のための、親水性ポリマーで高密度にコーティングされたナノ粒子を作製する方法であって、
第１のカチオン性親水性ポリマーを、第２の中性電荷親水性ポリマーにコンジュゲートされた該第１のポリマーと混合することにより、ブレンドされたポリマーを調製するステップと、
該ブレンドされたポリマーに該核酸を添加するステップと、
該ナノ粒子を精製して、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のナノ粒子を生成するステップと
を含む方法。
【請求項２０】
前記脳の疾患または障害の１または複数の症状を処置するための製剤であって、該製剤は、
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の治療有効量のナノ粒子製剤
を含み、該製剤が該脳に投与されることを特徴とする、製剤。
【請求項２１】
前記製剤が、前記脳へと直接的に投与される、請求項２０に記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤が、全身性または鼻腔内に（intransally）投与される、請求項２０に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、前記粒子の血液脳関門の通過を容易にするための１または複数の技法と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項２０に記載の製剤。
【請求項２４】
前記技法が、局所注射、直接的植え込み、対流増強送達、電子常磁性共鳴、マイクロバブルを伴うまたは伴わない超音波処理および浸透圧剤の使用からなる群から選択される、請求項２３に記載の製剤。
【請求項２５】
前記疾患または障害が、腫瘍、神経学的障害および脳傷害または外傷からなる群から選択される、請求項２０に記載の製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
脳の疾患または障害の１または複数の症状を軽減するための治療有効量のナノ粒子と、脳内への送達のための薬学的に許容される賦形剤とを含む製剤を脳に投与するステップを含む、脳の疾患または障害を処置するための方法も提供される。本製剤は、脳へと直接的または間接的に投与することができる。一部の実施形態では、本製剤は、全身性に投与され、ナノ粒子は、血液脳関門を通過することにより脳に浸透する。粒子は、血液脳関門を迂回するための１または複数の技法と組み合わせて投与することができる。例示的な技法は、対流増強送達（ＣＥＤ）、電子常磁性共鳴、超音波およびマイクロバブルを伴う超音波適用を含む。脳内への取り込みを増加させる他の方法は、マンニトール等、浸透圧剤と共に製剤化するステップを含む。本方法は、腫瘍、神経学的障害および脳傷害または外傷が挙げられるがこれらに限定されない、疾患または障害の１または複数の症状の処置に有用であり得る。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
脳を含む組織への核酸の送達のためのナノ粒子製剤であって、
核酸と、
第１の親水性カチオン性ポリマーと、
ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシドおよびこれらのコポリマーからなる群から選択される第２の親水性中性電荷直鎖状または分岐状ポリマーと
を含み、
該カチオン性ポリマーの９０％〜７５％が、該親水性ポリマーにコンジュゲートされ、または該カチオン性ポリマーの少なくとも５０％が、分岐状親水性ポリマーにコンジュゲートされており、該核酸が、該ナノ粒子内に被包され、もしくは該ナノ粒子の表面に会合しており、該ナノ粒子が、ほぼ中性の電荷を付与し、該組織にわたる拡散率を増強する密度の該親水性ポリマーでコーティングされているナノ粒子製剤。
（項目２）
前記脳実質内への送達のための、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目３）
１１４ｎｍ、１００ｎｍまたは５０ｎｍ未満のあるいは１１４ｎｍ、１００ｎｍまたは５０ｎｍに等しい直径を有する、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目４）
前記第１のカチオン性ポリマーまたは第２の中性電荷親水性ポリマーが、分岐している、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目５）
前記第２の親水性ポリマーが、１，０００ダルトン〜１０，０００ダルトンの間の分子量を有するポリエチレングリコールである、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目６）
前記ポリエチレングリコールが、５，０００ダルトンの分子量を有する、項目５に記載のナノ粒子製剤。
（項目７）
前記第１のカチオン性ポリマーが、１０，０００ダルトン〜５０，０００ダルトンの間の分子量を有する分岐状ポリエチレンイミンである、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目８）
第１のカチオン性ポリマーに対する第２の中性電荷親水性ポリマーのモル比が、８を超える、項目７に記載のナノ粒子製剤。
（項目９）
ポリマーに対する核酸のＮ対Ｐ比が、少なくとも２である、項目８に記載のナノ粒子製剤。
（項目１０）
前記第１のカチオン性ポリマーが、ポリ−Ｌリシンである、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目１１）
前記第２の中性電荷親水性ポリマーが、５，０００ダルトンの個々の分岐の分子量を有する分岐状ポリエチレングリコールである、項目１０に記載のナノ粒子製剤。
（項目１２）
前記ポリ−Ｌリシンの少なくとも５０％が、ポリエチレングリコールにコンジュゲートされている、項目１１に記載のナノ粒子製剤。
（項目１３）
前記第２の中性電荷親水性ポリマーの質量が、前記粒子の質量の少なくとも１／１０，０００、１／７５００、１／５０００、１／４０００、１／３４００、１／２５００、１／２０００、１／１５００、１／１０００、１／５００、１／２５０、１／２００、１／１５０、１／１００、１／７５、１／５０、１／２５、１／２０、１／５、１／２または９／１０である、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目１４）
総ナノ粒子と比べた前記第２の親水性ポリマーの重量パーセントが、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％またはそれ超である、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目１５）
前記ナノ粒子が、マンニトールのような浸透圧媒体において製剤化されて、前記脳内への取り込みを増強する、項目１に記載のナノ粒子製剤。
（項目１６）
前記脳への治療剤の送達のための投薬製剤であって、
該脳への投与のための項目１〜１５のいずれか一項に記載の治療有効量のナノ粒子、および
該脳内への送達のための薬学的に許容される賦形剤
からなる製剤。
（項目１７）
前記ナノ粒子が、対流増強送達を使用した前記脳への直接的投与のために製剤化されている、項目１６に記載の製剤。
（項目１８）
前記ナノ粒子が、前記脳への全身性または鼻腔内投与のために製剤化されている、項目１６に記載の製剤。
（項目１９）
前記ナノ粒子が、少なくとも１０分間、２０分間、３０分間、１時間、２時間、４時間（hour  hours）、６時間、１０時間、１日間、３日間、７日間、１０日間、２週間、１ヶ月間またはそれより長い期間にわたって、有効量の前記核酸を放出する、項目１６に記載の製剤。
（項目２０）
前記脳への核酸の送達のための、親水性ポリマーで高密度にコーティングされたナノ粒子を作製する方法であって、
第１のカチオン性親水性ポリマーを、第２の中性電荷親水性ポリマーにコンジュゲートされた該第１のポリマーと混合することにより、ブレンドされたポリマーを調製するステップと、
該ブレンドされたポリマーに該核酸を添加するステップと、
該ナノ粒子を精製して、項目１〜１５のいずれか一項に記載のナノ粒子を生成するステップと
を含む方法。
（項目２１）
前記脳の疾患または障害の１または複数の症状を処置するための方法であって、
項目１〜１９のいずれか一項に記載の治療有効量のナノ粒子製剤
を含む製剤を該脳に投与するステップを含む方法。
（項目２２）
前記製剤が、前記脳へと直接的に投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記製剤が、全身性または鼻腔内に（intransally）投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記粒子が、該粒子の血液脳関門の通過を容易にするための１または複数の技法と組み合わせて投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
前記技法が、局所注射、直接的植え込み、対流増強送達、電子常磁性共鳴、マイクロバブルを伴うまたは伴わない超音波処理および浸透圧剤の使用からなる群から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記疾患または障害が、腫瘍、神経学的障害および脳傷害または外傷からなる群から選択される、項目２１に記載の方法。