【手続補正書】
【提出日】平成30年3月9日(2018.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料から末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）および末梢循環癌幹細胞（ＣＳＣ）を捕獲する方法であって、フローベース装置に前記試料を導入する工程を含み、装置は、固定化細胞ローリング薬剤、固定化ＣＴＣ特異的捕獲薬剤および固定化ＣＳＣ特異的捕獲薬剤を含み、および前記試料は、ＣＴＣおよびＣＳＣが細胞ローリング薬剤および捕獲薬剤に結合することを可能にする条件下で装置に導入される、方法。
【請求項２】
試料から末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）および末梢循環癌幹細胞（ＣＳＣ）を捕獲するためのマイクロ流体装置であって：
（ａ）細胞捕獲表面およびフロー可動化表面を含む第１の流路であり、ＣＴＣ特異的捕獲薬剤もしくはＣＳＣ特異的捕獲薬剤および細胞ローリング誘導薬剤は、細胞捕獲表面に固定される流路、
（ｂ）細胞捕獲表面およびフロー修正表面を含む第２の流路であり、ＣＴＣ特異的捕獲薬剤もしくはＣＳＣ特異的捕獲薬剤および細胞ローリング誘導薬剤は、細胞捕獲表面に固定される流路、
を含む、装置。
【請求項３】
請求項２の装置であって、第１および第２の流路は、接続し、それぞれの流路は、入口および出口を有する、装置。
【請求項４】
請求項１の方法または請求項２もしくは３の装置であって、捕獲薬剤は、抗体、抗体断片、操作された抗体、葉酸、トランスフェリン、ペプチドおよびアプタマーである、方法または装置。
【請求項５】
請求項１−４のいずれか１項の方法または装置であって、ＣＴＣに特異的な捕獲薬剤は、ＣＴＣ表面上の部分を特異的に結合するか、またはＣＳＣに特異的な捕獲薬剤は、ＣＳＣ表面上の部分を特異的に結合する、方法または装置。
【請求項６】
請求項５の方法または装置であって、捕獲薬剤は、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ヒト上皮成長因子受容体−２（ＨＥＲ−２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＣＤ２４および葉酸結合受容体（ＦＡＲ）に結合するか、捕獲薬剤は、ＲＧＤペプチドであるか、または捕獲薬剤は、ＣＤ４４、ＣＸＣＲ１、Ｎ−カドヘリン、ＣＤ１０、ＣＤ１２７およびＣＤ１３３に結合する、方法または装置。
【請求項７】
請求項１−６のいずれか１項の方法または装置であって、捕獲薬剤は、リンカーへの付着を介して固定され、前記リンカーは、装置の表面に付着している、方法または装置。
【請求項８】
請求項７の方法または装置であって、リンカーは、（ｉ）ポリエチレングリコールに共有結合した修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマー、または（ｉｉ）ポリエチレングリコールに共有結合したポリエステル−ｎ−カルボキシラート−１−アルキンデンドロン（ｎは、８、１６、３２、６４または１２８である）を含む重合体ナノリンカーである、方法または装置。
【請求項９】
請求項８の方法または装置であって、修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーは、世代３、世代４、世代５、世代６、世代７、世代８および世代９の修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーからなる群より選択される、方法または装置。
【請求項１０】
請求項１−９のいずれか１項の方法または装置であって、細胞ローリング誘導薬剤は、セレクチンまたはセレクチンのＣＴＣ結合断片である、方法または装置。
【請求項１１】
請求項１０の方法または装置であって、細胞ローリング誘導薬剤は、リンカーを介してマイクロ流体装置の表面に固定されるか、またはエポキシ基、カルボキシル基、チオール基、アルキン基、アジド基、マレイミド基、ヒドロキシル基、アミン基、アルデヒド基およびこれらの組み合わせからなる群より選択される化学的部分を介して表面に共有結合する、方法または装置。
【請求項１２】
請求項２−１１のいずれか１項の装置であって、細胞ローリング誘導薬剤および捕獲薬剤は、実質的に一定の様式で配置される、装置。
【請求項１３】
請求項１２の装置であって、細胞捕獲表面は、第１および第２の領域のパターンを含み、第１の領域は、細胞ローリング誘導薬剤を含み、および第２の領域は、捕獲薬剤を含む、装置。
【請求項１４】
請求項２−１３のいずれか１項の装置であって、第１および第２の領域は、交互のパターンで配置される、装置。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
本開示のその他の特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかし、本開示の精神および範囲内の種々の変更および修正が、この詳細な説明から当業者にとって明らかになるだろうゆえに、詳細な説明および具体的例が、本開示の好ましい態様を示すと共に、例として与えられることが理解されるべきである。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
試料から末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）および末梢循環癌幹細胞（ＣＳＣ）を捕獲する方法であって、フローベース装置に前記試料を導入する工程を含み、装置は、少なくとも２つのチャンバーを含み、第１のチャンバーは、固定化細胞ローリング薬剤および固定化ＣＴＣ特異的捕獲薬剤を含み、および第２のチャンバーは、固定化細胞ローリング薬剤および固定化ＣＳＣ特異的捕獲薬剤を含み、および前記試料は、ＣＴＣおよびＣＳＣが細胞ローリング薬剤および捕獲薬剤に結合することを可能にする条件下で装置に導入される、方法。
（項目２）
項目１の方法であって、捕獲薬剤は、抗体、抗体断片、操作された抗体、葉酸、トランスフェリン、ペプチドおよびアプタマーである、方法。
（項目３）
項目１または２の方法であって、ＣＴＣに特異的な捕獲薬剤は、ＣＴＣ表面上の部分を特異的に結合する、方法。
（項目４）
項目３の方法であって、捕獲薬剤は、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ヒト上皮成長因子受容体−２（ＨＥＲ−２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＣＤ２４および葉酸結合受容体（ＦＡＲ）に結合する、方法。
（項目５）
項目３の方法であって、捕獲薬剤は、ＲＧＤペプチドである、方法。
（項目６）
項目１−５のいずれか１項の方法であって、ＣＳＣに特異的な捕獲薬剤は、ＣＳＣ表面上の部分を特異的に結合する、方法。
（項目７）
項目６の方法であって、捕獲薬剤は、ＣＤ４４、ＣＸＣＲ１、Ｎ−カドヘリン、ＣＤ１０、ＣＤ１２７およびＣＤ１３３に結合する、方法。
（項目８）
項目１−７のいずれか１項の方法であって、捕獲薬剤は、装置の表面への付着を介して固定される、方法。
（項目９）
項目１−７のいずれかの方法であって、捕獲薬剤は、リンカーへの付着を介して固定され、前記リンカーは、装置の表面に付着している、方法。
（項目１０）
項目９の方法であって、リンカーは、重合体ナノリンカーである、方法。
（項目１１）
項目１０の方法であって、重合体ナノリンカーは、ポリエチレングリコールに共有結合した修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーを含む、方法。
（項目１２）
項目１１の方法であって、修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーは、世代３、世代４、世代５、世代６、世代７、世代８および世代９の修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーからなる群より選択される、方法。
（項目１３）
項目１１の方法であって、重合体ナノリンカーは、ポリエチレングリコールに共有結合したポリエステル−ｎ−カルボキシラート−１−アルキンデンドロンを含み、ｎは、８、１６、３２、６４または１２８である、方法。
（項目１４）
装置に導入される試料に．０５〜１０ｄｙｎ／ｃｍ２の間のせん断応力をかけることをさらに含む項目１−１３のいずれか１項の方法。
（項目１５）
項目１−１４のいずれか１項の方法であって、細胞ローリング誘導薬剤は、セレクチンまたはセレクチンのＣＴＣ結合断片である、方法。
（項目１６）
項目１５の方法であって、セレクチンは、Ｅセレクチン、ＰセレクチンおよびＬセレクチンからなる群より選択される、方法。
（項目１７）
項目１−１６のいずれか１項の方法であって、細胞ローリング誘導薬剤は、マイクロ流体装置の表面に共有結合する、方法。
（項目１８）
項目１７の方法であって、細胞ローリング誘導薬剤は、エポキシ基、カルボキシル基、チオール基、アルキン基、アジド基、マレイミド基、ヒドロキシル基、アミン基、アルデヒド基およびそれらの組み合わせからなる群より選択される化学的部分を介して表面に共有結合する、方法。
（項目１９）
項目１−１６のいずれかの方法であって、細胞ローリング誘導薬剤は、リンカーを介してマイクロ流体装置の表面に固定される、方法。
（項目２０）
項目１９の方法であって、リンカーは、デンドリマー、デンドロン、デキストラン、ポリエチレングリコール、ポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、方法。
（項目２１）
試料から末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）および末梢循環癌幹細胞（ＣＳＣ）を捕獲するためのマイクロ流体装置であって：
（ａ）細胞捕獲表面およびフロー可動化表面を含む第１の流路であり、ＣＴＣ特異的捕獲薬剤および細胞ローリング誘導薬剤は、細胞捕獲表面に固定される流路、
（ｂ）細胞捕獲表面およびフロー修正表面を含む第２の流路であり、ＣＳＣ特異的捕獲薬剤および細胞ローリング誘導薬剤は、細胞捕獲表面に固定される流路、
を含む、装置。
（項目２２）
項目２１の装置であって、第１および第２の流路は、接続する、装置。
（項目２３）
項目２１の装置であって、それぞれの流路は、入口および出口を有する、装置。
（項目２４）
項目２１−２３のいずれか１項の装置であって、細胞ローリング誘導薬剤は、セレクチンまたはセレクチンのＣＴＣ結合断片である、装置。
（項目２５）
項目２１−２４のいずれか１項の装置であって、セレクチンは、Ｅセレクチン、ＰセレクチンおよびＬセレクチンからなる群より選択される、装置。
（項目２６）
項目２１−２５のいずれかの装置であって、捕獲薬剤は、抗体、抗体断片、操作された抗体、葉酸、トランスフェリン、ペプチドおよびアプタマーである、装置。
（項目２７）
項目２１−２６のいずれか１項の装置であって、ＣＴＣに特異的な捕獲薬剤は、ＣＴＣ表面上の部分を特異的に結合する、装置。
（項目２８）
項目２７の装置であって、捕獲薬剤は、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ヒト上皮成長因子受容体−２（ＨＥＲ−２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＣＤ２４および葉酸結合受容体（ＦＡＲ）に結合する、装置。
（項目２９）
項目２７の装置であって、捕獲薬剤は、ＲＧＤペプチドである、装置。
（項目３０）
項目２１−２９のいずれか１項の装置であって、ＣＳＣに特異的な捕獲薬剤は、ＣＳＣ表面上の部分を特異的に結合する、装置。
（項目３１）
項目３０の装置であって、捕獲薬剤は、ＣＤ４４、ＣＸＣＲ１、Ｎ−カドヘリン、ＣＤ１０、ＣＤ１２７およびＣＤ１３３に結合する、装置。
（項目３２）
項目２１−３１のいずれか１項の装置であって、捕獲薬剤は、細胞捕獲表面への直接の付着を介して細胞捕獲表面に固定される、装置。
（項目３３）
項目２１−３２のいずれか１項の装置であって、捕獲薬剤は、表面に直接付着したリンカーへの付着を介して細胞捕獲表面上に固定される、装置。
（項目３４）
項目３３の装置であって、リンカーは、重合体ナノリンカーである、装置。
（項目３５）
項目３４の装置であって、重合体ナノリンカーは、ポリエチレングリコールに共有結合した修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーを含む、装置。
（項目３６）
項目３４の装置であって、修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーは、世代３、世代４、世代５、世代６、世代７、世代８および世代９の修飾ポリ（アミドアミン）デンドリマーからなる群より選択される、装置。
（項目３７）
項目３４の方法であって、重合体ナノリンカーは、ポリエチレングリコールに共有結合したポリエステル−ｎ−カルボキシラート−１−アルキンデンドロンを含み、ｎは、８、１６、３２、６４または１２８である、方法。
（項目３８）
項目２１−３７の１つのいずれかの装置であって、細胞ローリング誘導薬剤および捕獲薬剤は、実質的に一定の様式で配置される、装置。
（項目３９）
項目３８の装置であって、細胞捕獲表面は、第１および第２の領域のパターンを含み、第１の領域は、細胞ローリング誘導薬剤を含み、および第２の領域は、捕獲薬剤を含む、装置。
（項目４０）
項目３９の装置であって、第１の領域は、捕獲薬剤をさらに含む、装置。
（項目４１）
項目３９または４０の装置であって、第１および第２の領域は、交互のパターンで配置される、装置。
（項目４２）
項目２１−４１のいずれか１項の装置であって、細胞ローリング誘導薬剤は、細胞捕獲表面に共有結合する、装置。
（項目４３）
項目４２の装置であって、共有結合は、エポキシ基、カルボキシル基、チオール基、アルキン基、アジド基、マレイミド基、ヒドロキシル基、アミン基、アルデヒド基およびこれらの組み合わせからなる群より選択される化学的部分を介する、装置。
（項目４４）
項目２１−４３のいずれか１項の装置であって、細胞ローリング誘導薬剤は、リンカーを介してマイクロ流体装置の表面に固定される、装置。
（項目４５）
項目４４の装置であって、リンカーは、デキストラン、デンドリマー、ポリエチレングリコール、ポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、装置。