【手続補正書】
【提出日】平成30年8月13日(2018.8.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする核酸変異体であって、
前記核酸変異体によってコードされるＦＶＩＩＩは、野性型ＦＶＩＩＩ発現と比較して発
現が多い、核酸変異体。
【請求項２】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする核酸変異体であって、
前記核酸変異体によってコードされるＦＶＩＩＩがＢドメイン欠損を含み、Ｂドメイン欠
損発現を含む野性型ＦＶＩＩＩと比較して発現が多い、核酸変異体。
【請求項３】
前記核酸変異体は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター中により効率的にゲノム組込
される、請求項１又は２に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項４】
前記核酸変異体によってコードされるＦＶＩＩＩが、野性型ＦＶＩＩＩと比較して又はＢ
ドメイン欠損を含む野性型ＦＶＩＩＩと比較してより大きな生物活性を示す、請求項１〜
３のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項５】
前記生物活性は、凝固分析、又は、ＦＶＩＩＩアッセイ若しくはＦＶＩＩＩ欠失モデルに
おける出血減少によって決定される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩ
ＩＩ。
【請求項６】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴ
Ａと対比してＣＴＧに変化した１つ以上のロイシンコドンを有する、請求項１〜４のいず
れか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項７】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴ
Ａロイシンコドンから変更された２−５、５−１０、１０−２０、２０−５０、５０−１
００、１００−２５０、２５０−５００、５００−７５０又は７５０−８５０個のＣＴＧ
ロイシンコドンを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項８】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴ
Ａロイシンコドンから変化した８５％超のＣＴＧロイシンコドンを有する、請求項１〜４
のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項９】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴ
Ａロイシンコドンから変化したすべてのＣＴＧロイシンコドンを有する、請求項１〜４の
いずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１０】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおいてＡＡＡリジンコドンと対照として１つ以上
のＡＡＧリジンコドンを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ
。
【請求項１１】
前記核酸変異体は、約５０−５９％、５０−５６％、又は５０−５３％のＧＣ含有量を有
する、請求項１に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１２】
前記核酸変異体は、野生型ヒトＦＶＩＩＩ核酸又はＢドメイン欠損を含む野生型ヒトＦＶ
ＩＩＩ核酸に対して少なくとも７５％同一である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の
変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１３】
前記核酸変異体がヒトＦＶＩＩＩであり、及び／又は、前記野性型ＦＶＩＩＩ又はＢドメ
イン欠損を含む野性型ＦＶＩＩＩがヒトＦＶＩＩＩである、請求項１〜４のいずれか１項
に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１４】
前記核酸変異体は配列番号１−７及び９のいずれかで構成される、請求項１に記載の変異
体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１５】
ＰＡＣＥ／フーリン切断部位をコードするコドンの１個、２個、３個又は４個すべてが欠
損している、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１６】
位置１６４５−１６４８からＨＨＱＲ又はＲＨＱＲと示されているＰＡＣＥ／フーリン切
断部位をコードするコドンの１個、２個、３個又は４個すべてが欠損している、請求項１
〜１４のいずれか１項に記載の変異体ＦＶＩＩＩ。
【請求項１７】
請求項１−１６のいずれかの変異体ＦＶＩＩＩを含む発現ベクター。
【請求項１８】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベク
ター、プラスミド又はレンチウイルスベクターからからなる群から選択される、請求項１
７に記載の発現ベクター。
【請求項１９】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６
、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４又はＡ
ＡＶ−２ｉ８ＡＡＶ血清型を含む、請求項１８に記載の発現ベクター。
【請求項２０】
イントロン、発現制御因子、１つ以上のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端リピー
ト（ＩＴＲ）、及び／又は、フィラーポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１７に
記載の発現ベクター。
【請求項２１】
前記イントロンが前記変異体ＦＶＩＩＩの内部若しくは前記変異体ＦＶＩＩＩに隣接して
いるか、又は、前記発現制御因子が前記変異体ＦＶＩＩＩに作用可能に連結しているか、
又は、前記ＡＡＶ  ＩＴＲが前記変異体ＦＶＩＩＩの５’末端若しくは３’末端に隣接し
ているか、又は、前記フィラーポリヌクレオチド配列が前記変異体ＦＶＩＩＩの５’末端
又は３’末端に隣接している、請求項２０に記載の発現ベクター。
【請求項２２】
前記発現制御因子は、構成的制御因子、若しくは、調節可能制御因子、又は、組織特異的
発現制御因子、若しくは、プロモーターを含む、請求項２０に記載の発現ベクター。
【請求項２３】
前記発現制御因子は、肝臓中の発現を与える因子を含む、請求項２０に記載の発現ベクタ
ー。
【請求項２４】
前記発現制御因子はＴＴＲプロモーターか変異体ＴＴＲプロモーターを含む、請求項２０
に記載の発現ベクター。
【請求項２５】
前記変異体ＴＴＲプロモーターは配列番号８で構成される、請求項２４に記載の発現ベク
ター。
【請求項２６】
前記ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ
７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、若しくは、Ａ
ＡＶ−２ｉ８ＡＡＶ血清型又はこれらの組み合わせのいずれかの１つ以上のＩＴＲを含む
、請求項２０に記載の発現ベクター。
【請求項２７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の核酸変異体又は請求項１７−２６のいずれかの発現ベ
クターを含む宿主細胞。
【請求項２８】
請求項１−１６のいずれかの核酸変異体又は請求項１７−２６のいずれかの発現ベクター
を含むＡＡＶベクター。
【請求項２９】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６
、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、又は
、ＡＡＶ−２ｉ８ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３配列に対して７５％以上の配列同
一性を有するＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３キャプシド配列を含む、請求項２８に記載
のＡＡＶベクター。
【請求項３０】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６
、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４及びＡ
ＡＶ−２ｉ８  ＡＡＶ血清型のいずれかから選択されるＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３
キャプシド配列を含む、請求項２８に記載のＡＡＶベクター。
【請求項３１】
生物学的適合性を有する担体又は賦形剤中に、請求項１〜１６のいずれかに記載の核酸変
異体、請求項１７〜２６のいずれかに記載の発現ベクター、又は、請求項３０−３２のい
ずれかのウイルス若しくはＡＡＶベクターを含み、空のカプシドＡＡＶを任意に含む、医
薬組成物。
【請求項３２】
哺乳動物又は哺乳動物細胞へ核酸配列を送達又は移動する方法であって、
前記哺乳動物又は哺乳動物細胞の中に請求項１〜１６のいずれかに記載の核酸変異体、請
求項１７〜２６のいずれかに記載の発現ベクター、又は、請求項２８〜３０のいずれかの
ウイルス若しくはＡＡＶベクターを投与し又は接触させ、それによってそれによって前記
核酸配列を哺乳動物又は哺乳動物細胞に送達又は移動するステップを含む方法。
【請求項３３】
第ＶＩＩＩ因子を必要とする哺乳動物を治療する方法であって、
（ａ）請求項１〜１６のいずれかに記載の核酸変異体、請求項１７〜２６のいずれかに記
載の発現ベクター又は請求項２８〜３０のいずれかのウイルス若しくはＡＡＶベクターを
提供するステップと、
（ｂ）請求項１−１６のいずれかに記載の核酸変異体、請求項１７−２６のいずれかに記
載の発現ベクター、あるいは哺乳動物に対する請求項２８〜３０のいずれかに記載のウイ
ルス若しくはＡＡＶベクターの所定量を投与するステップを含み、
前記第ＶＩＩＩ因子が哺乳動物中で発現される、方法。
【請求項３４】
前記第ＶＩＩＩ因子は、哺乳動物に対して有益な又は治療的な効果を有するレベルで発現
される、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記第ＶＩＩＩ因子は、前記哺乳動物の細胞、組織又は器官において発現される請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞が分泌細胞を含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記細胞が内分泌細胞又は内皮細胞を含む、請求項３２又は３３に記載の方法
【請求項３８】
前記細胞が肝細胞、シヌソイドの内皮細胞、巨核球、血小板細胞又は造血幹細胞を含む、
請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記哺乳動物の組織又は器官が肝臓を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記哺乳動物は、不十分な量の第ＶＩＩＩ因子タンパクを生産するか、又は、不完全若し
くは異常な第ＶＩＩＩ因子タンパクを生産する、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項４１】
前記哺乳動物には血友病Ａを有する、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項４２】
前記請求項１〜１６のいずれかに記載の核酸変異体、請求項１７〜２６のいずれかに記載
の発現ベクター、請求項２８〜３０のいずれかに記載のウイルス若しくはＡＡＶベクター
は、前記哺乳動物又は患者に対して、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腔内に、
又は、挿管若しくはテーテルによってに届けられる、請求項３２〜４１のいずれかに記載
の方法。
【請求項４３】
前記哺乳動物又は患者がヒトである、請求項３２〜４１のいずれかに記載の方法。