【手続補正書】
【提出日】平成30年4月23日(2018.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織内の標的分析物を検出するための方法であって、
（ａ）前記標的分析物を含む前記組織を、ポリマー酵素／抗体コンジュゲートであって、複数の酵素分子、および前記標的分析物を認識する抗体を含む１つのポリマー酵素／抗体コンジュゲートを含む、ポリマー酵素／抗体コンジュゲートと接触させて、前記標的分析物および前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートを含む複合体を形成するステップと、
（ｂ）前記複合体を形成しない前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートを実質的に除去するステップと、
（ｃ）前記組織を前記複数の酵素分子の基質と接触させて、それにより、前記標的分析物を検出するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
ステップ（ａ）の前にブロッキングステップをさらに含み、前記ブロッキングステップが、前記組織をブロッキング剤と接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組織が、アルデヒドを含む固定液中に固定される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記固定液がホルマリンを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記組織がパラフィン包埋される、請求項１から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記組織が凍結組織である、請求項１から２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記組織が、組織切片、臨床塗抹標本、または培養細胞もしくは組織である、請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記組織切片が、哺乳動物の脳、副腎、結腸、小腸、胃、心臓、肝臓、皮膚、腎臓、肺、膵臓、精巣、卵巣、前立腺、子宮、甲状腺、および脾臓の組織切片からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記酵素分子が、ベータ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ラクタマーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ウリカーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、ルシフェラーゼ、ピルビン酸キナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、エンテロキナーゼ、チロシナーゼ、およびキサンチンオキシダーゼからなる群より選択される、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートが、ポリマー酵素／抗体コンジュゲート当たり少なくとも６個の酵素分子を含む、請求項１から９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートが、ポリマー酵素／抗体コンジュゲート当たり約６個から約８０個の間の酵素分子を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ａ）を約１５℃から約３７℃の間のインキュベーション温度で実施する、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ａ）を約３分間から約３０分間の間のインキュベーション期間で実施する、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記インキュベーション期間が約５分間から約１５分間の間である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ブロッキング剤が、脱脂乳、ＢＳＡ、冷水魚皮膚ゼラチン、カゼイン、または動物血清を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
ポリマー酵素／抗体コンジュゲートを作製する方法であって、
（ａ）複数の酵素分子を含むポリマー酵素と抗体をコンジュゲートするステップ
を含む、方法。
【請求項１７】
前記抗体が治療用抗体である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
疾患を有する個体を治療するための、薬剤を含む組成物であって、請求項１から１７までのいずれか一項に記載の方法に従って、標的分析物を認識する抗体とコンジュゲートした複数の酵素分子を含むポリマー酵素／抗体コンジュゲートを使用して、前記標的分析物が前記個体に由来する組織内で検出されていることを特徴とする、組成物。
【請求項１９】
前記薬剤が治療用抗体である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記標的分析物に特異的に結合する前記抗体と前記治療用抗体とが同じものである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
複数の酵素分子および治療用抗体を含むポリマー酵素／抗体コンジュゲート。
【請求項２２】
（ａ）請求項２１に記載のポリマー酵素／抗体コンジュゲート
を含むキット。
【請求項２３】
前記複数の酵素分子の基質をさらに含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
請求項１から１７までのいずれか一項に記載の方法において使用するための説明書をさらに含む、請求項２２または２３に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に記載されている。本発明の原理が利用されている例示的な実施形態が記載されている以下の発明の詳細な説明および添付の図面を参照することにより、本発明の特徴および利点がよりよく理解される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
組織内の標的分析物を検出するための方法であって、
（ａ）前記標的分析物を含む前記組織を、ポリマー酵素／抗体コンジュゲートであって、複数の酵素分子、および前記標的分析物を認識する抗体を含む１つのポリマー酵素／抗体コンジュゲートを含む、ポリマー酵素／抗体コンジュゲートと接触させて、前記標的分析物および前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートを含む複合体を形成するステップと、
（ｂ）前記複合体を形成しない前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートを実質的に除去するステップと、
（ｃ）前記組織を前記複数の酵素分子の基質と接触させて、それにより、前記標的分析物を検出するステップと
を含む、方法。
（項目２）
ステップ（ａ）の前にブロッキングステップをさらに含み、前記ブロッキングステップが、前記組織をブロッキング剤と接触させることを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記組織が、アルデヒドを含む固定液中に固定される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記固定液がホルマリンを含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記組織がパラフィン包埋される、項目１から４までのいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記組織が凍結組織である、項目１から２までのいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記組織が、組織切片、臨床塗抹標本、または培養細胞もしくは組織である、項目１から６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記組織切片が、哺乳動物の脳、副腎、結腸、小腸、胃、心臓、肝臓、皮膚、腎臓、肺、膵臓、精巣、卵巣、前立腺、子宮、甲状腺、および脾臓の組織切片からなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記酵素分子が、ベータ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ラクタマーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ウリカーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、ルシフェラーゼ、ピルビン酸キナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、エンテロキナーゼ、チロシナーゼ、およびキサンチンオキシダーゼからなる群より選択される、項目１から８までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートが、ポリマー酵素／抗体コンジュゲート当たり少なくとも６個の酵素分子を含む、項目１から９までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記ポリマー酵素／抗体コンジュゲートが、ポリマー酵素／抗体コンジュゲート当たり約６個から約８０個の間の酵素分子を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
ステップ（ａ）を約１５℃から約３７℃の間のインキュベーション温度で実施する、項目１から１１までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
ステップ（ａ）を約３分間から約３０分間の間のインキュベーション期間で実施する、項目１から１２までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記インキュベーション期間が約５分間から約１５分間の間である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記ブロッキング剤が、脱脂乳、ＢＳＡ、冷水魚皮膚ゼラチン、カゼイン、または動物血清を含む、項目２に記載の方法。
（項目１６）
ポリマー酵素／抗体コンジュゲートを作製する方法であって、
（ａ）複数の酵素分子を含むポリマー酵素と抗体をコンジュゲートするステップ
を含む、方法。
（項目１７）
前記抗体が治療用抗体である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
疾患を有する個体を、薬剤を用いて治療する方法であって、ａ）項目１から１７までのいずれか一項に記載の方法に従って、標的分析物の存在を、前記標的分析物を認識する抗体とコンジュゲートした複数の酵素分子を含むポリマー酵素／抗体コンジュゲートを使用して検出するステップを含む、方法。
（項目１９）
前記薬剤が治療用抗体である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記標的分析物に特異的に結合する前記抗体と前記治療用抗体とが同じものである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
複数の酵素分子および治療用抗体を含むポリマー酵素／抗体コンジュゲート。
（項目２２）
（ａ）項目２１に記載のポリマー酵素／抗体コンジュゲート
を含むキット。
（項目２３）
前記複数の酵素分子の基質をさらに含む、項目２２に記載のキット。
（項目２４）
項目１から２０までのいずれか一項に従った使用のための説明書をさらに含む、項目２２または２３に記載のキット。