【手続補正書】
【提出日】平成30年11月13日(2018.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップ：
（ａ）緩衝剤を含む緩衝溶液中で細胞毒性剤を以下の構造式によって表される二官能性架橋試薬：
【化１】
2018505128.tif 000001
またはその塩と反応させて、細胞毒性剤−リンカー化合物を含む第１の混合物を得ることであって、前記緩衝溶液は、高緩衝能を有する；
（ｂ）ステップ（ａ）から得られた前記第１の混合物中の前記細胞毒性剤−リンカー化合物を、４〜９のｐＨを有する溶液中の細胞結合剤と反応させて、前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む第２の混合物を得ること
を含む、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセス。
【請求項２】
前記細胞結合剤が、断片化される傾向がある、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記細胞毒性剤が、マイタンシノイドである、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記細胞毒性剤が、ＤＭ４である、請求項３に記載のプロセス。
【請求項５】
前記緩衝剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、１．５：１〜１２．５：１、２：１〜８：１、または４：１〜６：１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項６】
前記緩衝剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、５：１である、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記緩衝溶液が、４〜９、７．５〜８．５、７．９〜８．５、８．０〜８．４、または８．１〜８．３のｐＨを有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項８】
前記緩衝溶液が、８．２のｐＨを有する、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
前記緩衝剤が、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、及びリン酸緩衝液からなる群から選択される、または
前記緩衝剤が、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、
請求項１〜８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記緩衝溶液が、塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記緩衝溶液が、有機溶媒をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記二官能性架橋試薬に対してモル過剰量の前記細胞毒性剤をステップ（ａ）の前記反応で使用する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１３】
ステップ（ｂ）の前記溶液が、５．０〜９．０、５．５〜９．０、６．０〜９．０、６．５〜９．０、７．５〜８．５、８．０〜８．４、または８．１〜８．３のｐＨを有する、またはｐＨが８．２である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１４】
ステップ（ｂ）の前記溶液が、
クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、及びリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤、または
ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１５】
ステップ（ｂ）の前記溶液が、有機溶媒をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１６】
ステップ（ｂ）の前記溶液中の前記細胞結合剤の濃度が、５ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ〜４０ｇ／Ｌ、１５ｇ／Ｌ〜２５ｇ／Ｌ、１８ｇ／Ｌ〜２２ｇ／Ｌ、または１９ｇ／Ｌ〜２１ｇ／Ｌである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１７】
前記二官能性架橋試薬対前記細胞結合剤のモル比が、２〜１０、３〜６、３．５〜５、または４．０である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１８】
前記プロセスが、前記溶液のｐＨを５以下に調整することによって、ステップ（ｂ）の前記反応を反応停止するステップをさらに含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１９】
前記細胞結合剤が、抗体、モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項２０】
前記抗体が、ｈｕＮ９０１、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、トラスツズマブ、ビバツズマブ、シブロツズマブ、ＣＮＴ０９５、ｈｕＤＳ６、リツキシマブ、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ２７Ｌ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、インテグリン標的化抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗葉酸受容体抗体、抗Ｈｅｒ３抗体、及び抗ＩＧＦＩＲ抗体から選択される、請求項１９に記載のプロセス。 
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
実施例２
配列番号１０のアミノ酸配列を持つ軽鎖と配列番号９のアミノ酸配列を持つ重鎖を有する抗体２、抗ＦＧＦＲ３抗体を３０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、透析濾過して、１０透析容量の反応緩衝液（５０ｍＭ  ＥＰＰＳ、２０ｍＭ塩化ナトリウム、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．２）にし、４５ｇ／Ｌにさらに濃縮した。スルホ−ＳＰＤＢ（１０ｍＭ）に対して１．２モル比のＤＭ４（１２ｍＭ）は、１６７ｍＭ  ＥＰＰＳ、６６．７ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．２、及び７０．０％（ｖ／ｖ）ＤＭＡ中の抗体に対して４．６８モル比のスルホ−ＳＰＤＢと反応させた。ｉｎ−ｓｉｔｕ反応を２０±３℃で１０±４時間実施した後、ＤＭＡを有する抗体２に添加し、５０ｍＭ  ＥＰＰＳ、２０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．２±０．２、及び５．０％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）中の２０ｍｇ／ｍＬの最終Ａｂ濃度を達成した。コンジュゲーション反応は、２０．０±３．０℃で１６±８時間実施した。反応後、６．５％（ｖ／ｖ）の１Ｍ酢酸を添加することによって、コンジュゲーション混合物のｐＨを５．０に迅速に調整した。ｐＨ調整した混合物を２０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、１６ダイア容量の基礎配合緩衝液（１０ｍＭ酢酸塩、ｐＨ５．０±０．１）に対して透析フィルター濾過した。精製されたコンジュゲートを、スクロース（４５％、ｗ／ｖ）及びポリソルベート−２０（１０％、ｗ／ｖ）の原液を用いて、１０ｍＭ酢酸塩、９％（ｗ／ｖ）スクロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート−２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）、ｐＨ５．０中に５．０ｍｇ／ｍＬで配合した。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［１］以下のステップ：
（ａ）緩衝剤を含む緩衝溶液中で細胞毒性剤を以下の構造式によって表される二官能性架橋試薬：
【化９】
2018505128.tif 000002
またはその塩と反応させて、細胞毒性剤−リンカー化合物を含む第１の混合物を得ること、前記緩衝溶液は、高緩衝能を有し；
（ｂ）ステップ（ａ）から得られた前記第１の混合物中の前記細胞毒性剤−リンカー化合物を、４〜９のｐＨを有する溶液中の細胞結合剤と反応させて、前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む第２の混合物を得ること
を含む、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセス。
［２］前記細胞結合剤が、断片化される傾向がある、［１］に記載のプロセス。
［３］前記細胞毒性剤が、マイタンシノイドである、［１］または［２］に記載のプロセス。
［４］前記細胞毒性剤が、ＤＭ４である、［３］に記載のプロセス。
［５］前記緩衝剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、１．５：１〜１２．５：１である、［１］〜［４］のいずれかに記載のプロセス。
［６］前記緩衝剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、２：１〜８：１である、［５］に記載のプロセス。
［７］前記緩衝剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、４：１〜６：１である、［５］に記載のプロセス。
［８］前記緩衝剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、５：１である、［５］に記載のプロセス。
［９］前記緩衝溶液が、４〜９のｐＨを有する、［１］〜［８］のいずれかに記載のプロセス。
［１０］前記緩衝溶液が、７．５〜８．５のｐＨを有する、［９］に記載のプロセス。
［１１］前記緩衝溶液が、７．９〜８．５、８．０〜８．４、または８．１〜８．３のｐＨを有する、［１０］に記載のプロセス。
［１２］前記緩衝溶液が、８．２のｐＨを有する、［９］に記載のプロセス。
［１３］前記緩衝剤が、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、及びリン酸緩衝液からなる群から選択される、［１］〜［１２］のいずれかに記載のプロセス。
［１４］前記緩衝剤が、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、［１］〜［１２］のいずれかに記載のプロセス。
［１５］前記緩衝剤が、ＥＰＰＳである、［１４］に記載のプロセス。
［１６］前記緩衝溶液が、塩化ナトリウムをさらに含む、［１］〜［１５］のいずれかに記載のプロセス。
［１７］前記緩衝溶液が、有機溶媒をさらに含む、［１］〜［１６］のいずれかに記載のプロセス。
［１８］前記有機溶媒が、ＤＭＡである、［１７］に記載のプロセス。
［１９］前記有機溶媒が、前記緩衝溶液の容量で、１〜９９％、５０％〜９９％、６０％〜９９％、または７０％〜９９％の量で存在する、［１７］または［１８］に記載のプロセス。
［２０］前記有機溶媒が、前記緩衝溶液の容量で、５０％〜９０％、５５％〜８５％、６０％〜８０％、または６５％〜７５％の量で存在する、［１９］に記載のプロセス。
［２１］前記有機溶媒が、前記緩衝溶液の容量で、７０％の量で存在する、［１９］に記載のプロセス。
［２２］前記二官能性架橋試薬に対してモル過剰量の前記細胞毒性剤をステップ（ａ）の前記反応で使用する、［１］〜［２１］のいずれかに記載のプロセス。
［２３］前記細胞毒性剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、１．１：１〜２０：１、１．１：１〜１０：１、１．１：１〜５：１、または１．１：１〜２：１である、［２２］に記載のプロセス。
［２４］前記細胞毒性剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、１：１：１〜１．３：１である、［２３］に記載のプロセス。
［２５］前記細胞毒性剤対前記二官能性架橋試薬のモル比が、１．２：１である、［２３に記載のプロセス。
［２６］ステップ（ａ）の前記反応を１時間〜２時間実施する、［１］〜［２５］のいずれかに記載のプロセス。
［２７］ステップ（ａ）の前記反応を２時間〜５時間実施する、［１］〜［２５］のいずれかに記載のプロセス。
［２８］ステップ（ａ）の前記反応を５時間〜２０時間実施する、［１］〜［２５］のいずれかに記載のプロセス。
［２９］ステップ（ａ）の前記反応を５時間〜１５時間実施する、［２８］に記載のプロセス。
［３０］ステップ（ａ）の前記反応を４時間〜８時間、または５時間〜７時間実施する、［２８］に記載のプロセス。
［３１］ステップ（ａ）の前記反応を６時間実施する、［２８］に記載のプロセス。
［３２］ステップ（ａ）の前記反応を１５℃〜２５℃の温度で実施する、［１］〜［３１］のいずれかに記載のプロセス。
［３３］ステップ（ａ）の前記反応を１７℃〜２３℃、１８℃〜２２℃、または１９℃〜２１℃の温度で実施する、［３２］に記載のプロセス。
［３４］ステップ（ａ）の前記反応を２０℃の温度で実施する、［３２］に記載のプロセス。
［３５］ステップ（ｂ）の前記溶液が、５．０〜９．０、５．５〜９．０、６．０〜９．０、または６．５〜９．０のｐＨを有する、［１］〜［３２］のいずれかに記載のプロセス。
［３６］ステップ（ｂ）の前記溶液が、７．５〜８．５のｐＨを有する、［３５］に記載のプロセス。
［３７］ステップ（ｂ）の前記溶液が、８．０〜８．４、または８．１〜８．３のｐＨを有する、［３５］に記載のプロセス。
［３８］ステップ（ｂ）の前記溶液が、８．２のｐＨを有する、［３５］に記載のプロセス。
［３９］ステップ（ｂ）の前記溶液が、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、及びリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤を含む、［１］〜［３８］のいずれかに記載のプロセス。
［４０］ステップ（ｂ）の前記溶液が、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤を含む、
［１］〜［３８］のいずれかに記載のプロセス。
［４１］前記緩衝剤が、ＥＰＰＳである、［４０］に記載のプロセス。
［４２］ステップ（ｂ）の前記溶液が、有機溶媒をさらに含む、［１］〜［４１］のいずれかに記載のプロセス。
［４３］前記有機溶媒が、ＤＭＡである、［４２］に記載のプロセス。
［４４］前記有機溶媒が、前記溶液の容量で、１〜２５％、２〜２０％、２〜１５％、または２〜１０％の量で存在する、［４２］または［４３］に記載のプロセス。
［４５］前記有機溶媒が、前記溶液の容量で、２．５〜７．５％、３〜７％、４〜６％、または４．５〜５．５％の量で存在する、［４４］に記載のプロセス。
［４６］前記有機溶媒が、前記溶液の容量で、５％の量で存在する、［４５］に記載のプロセス。
［４７］ステップ（ｂ）の前記溶液中の前記細胞結合剤の濃度が、５ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌである、［１］〜［４６］のいずれかに記載のプロセス。
［４８］前記細胞結合剤の濃度が、５ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌである、［４７］に記載のプロセス。
［４９］前記細胞結合剤の濃度が、１０ｇ／Ｌ〜４０ｇ／Ｌである、［４７］に記載のプロセス。
［５０］前記細胞結合剤の濃度が、１５ｇ／Ｌ〜２５ｇ／Ｌ、１８ｇ／Ｌ〜２２ｇ／Ｌ、または１９ｇ／Ｌ〜２１ｇ／Ｌである、［４７］に記載のプロセス。
［５１］前記細胞結合剤の濃度が、２０ｇ／Ｌである、［５０］に記載のプロセス。
［５２］ステップ（ｂ）の前記反応を１０時間〜３０時間実施する、［１］〜［５１］のいずれかに記載のプロセス。
［５３］ステップ（ｂ）の前記反応を１５時間〜２５時間実施する、［５２］に記載のプロセス。
［５４］ステップ（ｂ）の前記反応を８時間〜２４時間、１２時間〜２０時間、１４時間〜１８時間、または１５時間〜１７時間実施する、［５２］に記載のプロセス。
［５５］ステップ（ｂ）の前記反応を１６時間実施する、［５４］に記載のプロセス。
［５６］ステップ（ｂ）の前記反応を１８時間〜２６時間、２０時間〜２４時間、または１９時間〜２３時間実施する、［５２］に記載のプロセス。
［５７］ステップ（ｂ）の前記反応を２２時間実施する、［５２］に記載のプロセス。
［５８］ステップ（ｂ）の前記反応を１５℃〜２５℃の温度で実施する、［１］〜［５７］のいずれかに記載のプロセス。
［５９］ステップ（ｂ）の前記反応を２０℃の温度で実施する、［５８］に記載のプロセス。
［６０］前記二官能性架橋試薬対前記細胞結合剤のモル比が、２〜１０である、［１］〜［５９］のいずれかに記載のプロセス。
［６１］前記二官能性架橋試薬対前記細胞結合剤のモル比が、３〜６である、［６０］に記載のプロセス。
［６２］前記二官能性架橋試薬対前記細胞結合剤のモル比が、３．５〜５である、［６１］に記載のプロセス。
［６３］前記二官能性架橋試薬対前記細胞結合剤のモル比が、４．０である、［６２］に記載のプロセス。
［６４］前記プロセスが、前記溶液のｐＨを５以下に調整することによって、ステップ（ｂ）の前記反応を反応停止するステップをさらに含む、［１］〜［６３］のいずれかに記載のプロセス。
［６５］前記プロセスが、前記第２の混合物を精製して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを得ることをさらに含む、［１］〜［６４］のいずれかに記載のプロセス。
［６６］前記第２の混合物にタンジェント流濾過、選択的析出、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、非吸着クロマトグラフィー、またはそれらの組み合わせを施すことによって、前記混合物を精製する、［６５］に記載のプロセス。
［６７］前記第２の混合物にタンジェント流濾過を施すことによって、前記混合物を精製する、［６６］に記載のプロセス。
［６８］前記細胞結合剤が、抗体である、［１］〜［６７］のいずれかに記載のプロセス。
［６９］前記抗体が、モノクローナル抗体である、［６７］に記載のプロセス。
［７０］前記抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、［６９］に記載のプロセス。
［７１］前記抗体が、ｈｕＮ９０１、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、トラスツズマブ、ビバツズマブ、シブロツズマブ、ＣＮＴ０９５、ｈｕＤＳ６、リツキシマブ、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ２７Ｌ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、インテグリン標的化抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗葉酸受容体抗体、抗Ｈｅｒ３抗体、及び抗ＩＧＦＩＲ抗体から選択される、［７０］に記載のプロセス。