【手続補正書】
【提出日】平成30年8月6日(2018.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＰＤ−１に結合し、下記（ａ）〜（ｗ）からなる群より選択される重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）の組み合わせを含む結合剤：
（ａ）それぞれ、配列番号１７、４０および６３で規定される相補性決定領域 （ＣＤＲ）１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８６、１０９および１３２で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｂ）それぞれ、配列番号８、３１および５４で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７７、１００および１２３で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｃ）それぞれ、配列番号１、２４および４７で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７０、９３および１１６で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｄ）それぞれ、配列番号２、２５および４８で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７１、９４および１１７で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｅ）それぞれ、配列番号３、２６および４９で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７２、９５および１１８で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｆ）それぞれ、配列番号４、２７および５０で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７３、９６および１１９で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｇ）それぞれ、配列番号５、２８および５１で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７４、９７および１２０で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｈ）それぞれ、配列番号６、２９および５２で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７５、９８および１２１で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｉ）それぞれ、配列番号７、３０および５３で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７６、９９および１２２で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｊ）それぞれ、配列番号９、３２および５５で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７８、１０１および１２４で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｋ）それぞれ、配列番号１０、３３および５６で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７９、１０２および１２５で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｌ）それぞれ、配列番号１１、３４および５７で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８０、１０３および１２６で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｍ）それぞれ、配列番号１２、３５および５８で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８１、１０４および１２７で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｎ）それぞれ、配列番号１３、３６および５９で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８２、１０５および１２８で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｏ）それぞれ、配列番号１４，３７および６０で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８３、１０６、１２９で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｐ）それぞれ、配列番号１５、３８および６１で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８４、１０７および１３０で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｑ）それぞれ、配列番号１６、３９および６２で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８５、１０８および１３１で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｒ）それぞれ、配列番号１８、４１および６４で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８７、１１０および１３３で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｓ）それぞれ、配列番号１９、４２および６５で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８８、１１１および１３４で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｔ）それぞれ、配列番号２０、４３および６６で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８９、１１２および１３５で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｕ）それぞれ、配列番号２１、４４および６７で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号９０、１１３および１３６で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、
（ｖ）それぞれ、配列番号２２、４５および６８で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号９１、１１４および１３７で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ、 および
（ｗ）それぞれ、配列番号２３、４６および６９で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号９２、１１５および１３８で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬ。
【請求項２】
それぞれ、配列番号１７、４０および６３で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号８６、１０９および１３２で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬを含む、請求項１に記載の結合剤。
【請求項３】
それぞれ、配列番号８、３１および５４で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７７、１００および１２３で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬを含む、請求項１に記載の結合剤。
【請求項４】
キメラ抗体である、請求項１に記載の結合剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の結合剤および医薬上許容される担体を含む組成物。
【請求項６】
請求項２に記載の結合剤と、
それぞれ、配列番号８、３１および５４で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＨ、およびそれぞれ、配列番号７７、１００および１２３で規定されるＣＤＲ１、２および３を含むＶＬを含む結合剤と、を含む組成物。
【請求項７】
細胞上のＰＤ−１に結合するためのものである、請求項１〜４のいずれかに記載の結合剤。
【請求項８】
細胞上のＰＤ−１に結合するためのものである、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項９】
ヒトにおける疾患を治療するためのものであって、該疾患が癌、自己免疫疾患および感染性疾患からなる群より選ばれる、請求項７に記載の結合剤。
【請求項１０】
前記癌が、乳癌、血液癌、大腸癌、胃癌、結腸癌、骨格組織癌、皮膚癌、脳腫瘍、肺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌および肝臓癌からなる群より選ばれる、請求項９に記載の結合剤。
【請求項１１】
前記感染性疾患がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による、請求項９に記載の結合剤。
【請求項１２】
ヒトにおける疾患を治療するためのものであって、該疾患が癌、自己免疫疾患および感染性疾患からなる群より選ばれる、請求項８に記載の組成物。
【請求項１３】
前記癌が、乳癌、血液癌、大腸癌、胃癌、結腸癌、骨格組織癌、皮膚癌、脳腫瘍、肺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌および肝臓癌からなる群より選ばれる、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記感染性疾患がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の結合剤をコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１に記載の結合剤をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１７】
請求項１に記載の結合剤をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む、宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
所定の実施形態について好ましい実施形態に関して記載してきたが、当業者は、変形および修飾を思い付くであろうと理解されている。このため、添付の特許請求項が以下の特許請求項の範囲内に含まれるそのような同等の変形全てに及ぶと意図されている。
本発明のさらなる態様例：
（１）配列番号１〜１３８からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸配列、および／または表１Ａおよび／または１Ｂに示される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ１）に結合する結合剤。
（２）単離モノクローナル抗体である、上記（１）の結合剤。
（３）配列番号１〜２３からなる群より選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む、上記（１）または（２）の結合剤。
（４）配列番号２４〜４６からなる群より選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む、上記（１）〜（３）いずれかの結合剤。
（５）配列番号４７〜６９からなる群より選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、上記（１）〜（４）いずれかの結合剤。
（６）配列番号７０〜９２からなる群より選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む、上記（１）〜（５）いずれかの結合剤。
（７）配列番号９３〜１１５からなる群より選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む、上記（１）〜（６）いずれかの結合剤。
（８）配列番号１１６〜１３８からなる群より選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、上記（１）〜（７）いずれかの結合剤。
（９）
【表５】
2017531028.tif 000001
からなる群より選択されるアミノ酸配列および／または
【表６】
2017531028.tif 000002
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、上記（１）〜（８）いずれかの結合剤。
（１０）配列番号１、２４、４７、７０、９３および１１６；
配列番号２、２５、４８、７１、９４および１１７；
配列番号３、２６、４９、７２、９５および１１８；
配列番号４、２７、５０、７３、９６および１１９；
配列番号５、２８、５１、７４、９７および１２０；
配列番号６、２９、５２、７５、９８および１２１；
配列番号７、３０、５３、７６、９９および１２２；
配列番号８、３１、５４、７７、１００および１２３；
配列番号９、３２、５５、７８、１０１および１２４；
配列番号１０、３３、５６、７９、１０２および１２５；
配列番号１１、３４、５７、８０、１０３および１２６；
配列番号１２、３５、５８、８１、１０４および１２７；
配列番号１３、３６、５９、８２、１０５および１２８；
配列番号１４、３７、６０、８３、１０６および１２９；
配列番号１５、３８、６１、８４、１０７および１３０；
配列番号１６、３９、６２、８５、１０８および１３１；
配列番号１７、４０、６３、８６、１０９および１３２；
配列番号１８、４１、６４、８７、１１０および１３３；
配列番号１９、４２、６５、８８、１１１および１３４；
配列番号２０、４３、６６、８９、１１２および１３５；
配列番号２１、４４、６７、９０、１１３および１３６；
配列番号２２、４５、６８、９１、１１４および１３７；および
配列番号２３、４６、６９、９２、１１５および１３８
からなる群より選択されるアミノ酸配列の組合せを含む、上記（９）の結合剤。
（１１）ヒト抗体、ヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ２ａ、ヒトＩｇＧ２ｂ、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＡ、ヒトＩｇＡ１、ヒトＩｇＡ２、ヒトＩｇＤ、ヒトＩｇＥ、イヌ抗体、イヌＩｇＧＡ、イヌＩｇＧＢ、イヌＩｇＧＣ、イヌＩｇＧＤ、ニワトリ抗体、ニワトリＩｇＡ、ニワトリＩｇＤ、ニワトリＩｇＥ、ニワトリＩｇＧ、ニワトリＩｇＭ、ニワトリＩｇＹ、ヤギ抗体、ヤギＩｇＧ、マウス抗体、マウスＩｇＧ、ブタ抗体またはラット抗体に由来する、上記（１）〜（１０）いずれかの結合剤。
（１２）上記（１）〜（１１）いずれかの結合剤の誘導体。
（１３）Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’一本鎖抗体、Ｆｖ，一本鎖、単一特異性抗体、二重特異性抗体、三量体抗体、多重特異性抗体、多価抗体、キメラ抗体、イヌ−ヒトキメラ抗体、イヌ−マウスキメラ抗体、イヌＦｃを含む抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、イヌ化抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、サメ抗体、ナノボディおよびラクダ抗体からなる群より選択される、上記（１２）記載の誘導体。
（１４）少なくとも第１および第２の特異性を有し、前記第１の特異性はＰＤ−１に対するものであり、および前記第２の特異性は異なる抗原に対するものである、上記（１）〜（１３）いずれかの結合剤もしくは誘導体または（３８）〜（４０）いずれかの組合せ。
（１５）前記第２の特異性は、感染性因子の抗原または腫瘍抗原に対するものである、上記（１４）の結合剤または誘導体。
（１６）前記感染性因子はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、上記（１５）の結合剤または誘導体。
（１７）前記抗原はＨＩＶ  ｅｎｖである、上記（１６）の結合剤または誘導体。
（１８）固定的に付着した検出可能な標識を含む、上記（１）〜（１７）いずれかの結合剤またはその誘導体。
（１９）前記検出可能な標識は、フルオロセイン、ＤｙＬｉｇｈｔ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、ＦＩＴＣ、ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５、ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７、５−カルボキシ−２，７−ジクロロフルオレセイン、５−カルボキシフルオレセイン、５−ＦＡＭ、ヒドロキシトリプタミン、５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＡＴ）、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、ＦＩＴＣ、６−カルボキシ−１，４−ジクロロ−２’，７’−ジクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、６−カルボキシ−１，４−ジクロロ−２’，４’、５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（６−ＪＯＥ）、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ３５０、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ４０５、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ４３０、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ４８８、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５００、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５１４、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５３２、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５４６、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５５５、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５６８、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ５９４、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６１０、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６３３、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６３５、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６４７、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６６０、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６８０、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ７００、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ７５０、ＢＯＤＩＰＹ蛍光体、ＢＯＤＩＰＹ  ４９２／５１５、ＢＯＤＩＰＹ  ４９３／５０３、ＢＯＤＩＰＹ  ５００／５１０、ＢＯＤＩＰＹ  ５０５／５１５、ＢＯＤＩＰＹ  ５３０／５５０、ＢＯＤＩＰＹ  ５４２／５６３、ＢＯＤＩＰＹ  ５５８／５６８、ＢＯＤＩＰＹ  ５６４／５７０、ＢＯＤＩＰＹ  ５７６／５８９、ＢＯＤＩＰＹ  ５８１／５９１、ＢＯＤＩＰＹ  ６３０／６５０−Ｘ、ＢＯＤＩＰＹ  ６５０／６６５−Ｘ、ＢＯＤＩＰＹ  ６６５／６７６、ＦＬ、ＦＬ  ＡＴＰ、ＦＩ−セラミド、Ｒ６Ｇ  ＳＥ、ＴＭＲ、ＴＭＲ−Ｘ複合体、ＴＭＲ−Ｘ、ＳＥ、ＴＲ、ＴＲ  ＡＴＰ、ＴＲ−Ｘ  ＳＥ、ローダミン、ローダミン１１０、ローダミン１２３、ローダミンＢ、ローダミンＢ  ２００、ローダミンＢＢ、ローダミンＢＧ、ローダミンＢ  ｅｘｔｒａ、５−カルボキシテトラメチルローダミン（５−ＴＡＭＲＡ）、５  ＧＬＤ、６−カルボキシローダミン６Ｇ、リサミン、リサミンローダミンＢ、ファリシジン、ファロイジン、ローダミンレッド、Ｒｈｏｄ−２、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、カルボキシ−Ｘ−ローダミン（５−ＲＯＸ）、スルホローダミンＢ  ｃａｎ  Ｃ、スルホローダミンＧ  Ｅｘｔｒａ、６−カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン（ＴＲＩＴＣ）、ローダミンＷＴ、テキサスレッドおよびテキサスレッド−Ｘからなる群より選択される、上記（１８）の結合剤。
（２０）固定的に付着したエフェクター部分を含む、上記（１）〜（１９）いずれかの結合剤またはその誘導体。
（２１）前記エフェクター部分は、細胞傷害性薬、毒素、ジフテリアＡ鎖、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、クルシン、クロチン、フェノマイシン、エノマイシンおよび放射化学薬品からなる群より選択される、上記（２０）の結合剤または誘導体。
（２２）上記（１）〜（１７）いずれかの結合剤をコードする単離ポリヌクレオチド。
（２３）上記（２２）の１つ以上のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（２４）上記（２２）の単離ポリヌクレオチドおよび／または）上記（２３）の発現ベクターを含む、宿主細胞。
（２５）上記（１）〜（２１）いずれかの少なくとも１つの結合剤もしくは誘導体；上記（２２）の少なくとも１つの単離ポリヌクレオチド；上記（２３）の少なくとも１つの発現ベクター；および／または上記（２４）の少なくとも１つの宿主細胞；またはそれらの組合せ；および／または（３９）〜（４３）いずれかの組合せ；ならびに医薬上許容される担体を含む、組成物。
（２６）細胞上のＰＤ−１を検出する方法において、
試験生物学的サンプルを、上記（１）〜（２１）いずれかの結合剤もしくは誘導体および／または（３９）〜（４３）いずれかの組合せと接触させる工程、および
前記生物学的サンプルもしくはその成分に結合した前記結合剤を検出する工程、を含む、方法。
（２７）前記試験生物学的サンプルもしくはその成分に結合する量を、コントロール生物学的サンプルもしくはその成分に結合する量と比較する工程をさらに含み、前記コントロール生物学的サンプルもしくはその成分に結合する量と比較して、増加した試験生物学的サンプルもしくはその成分に結合する量は、試験生物学的サンプルにおけるＰＤ−１を発現する細胞の存在を示す、上記（２６）の方法。
（２８）前記試験生物学的サンプルは哺乳動物血液である、上記（２６）または（２７）の方法。
（２９）前記方法はｉｎ  ｖｉｖｏ法である、上記（２６）〜（２８）いずれかの方法。
（３０）前記方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏ法である、上記（２６）〜２８）いずれかの方法。
（３１）哺乳動物における感染性疾患、癌および／または自己免疫状態を治療、予防および／または改善する方法において、前記哺乳動物に、上記（１）〜２１）いずれかの結合剤もしくはその誘導体、および／または（３９）〜（４３）いずれかの組合せを含む、少なくとも１つの有効量の医薬組成物を投与する工程を含む、方法。
（３２）前記感染性疾患はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、上記（３１）の方法。
（３３）感染性疾患、ＨＩＶおよび／または癌を治療するために使用される前記結合剤および／またはその誘導体は、ＰＤ−１アンタゴニストである、上記（３１）または（３２）の方法。
（３４）自己免疫状態を治療するために使用される前記結合剤および／またはその誘導体は、ＰＤ−１アゴニストである、上記（３１）の方法。
（３５）前記動物に複数回投与される、上記（３１）〜（３４）いずれかの方法。
（３６）前記結合剤は、約１〜５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、上記（３１）〜（３５）いずれかの方法。
（３７）細胞内または細胞上でのＰＤ−１の発現を検出するためのキットにおいて、上記（１）〜２１）いずれかの結合剤もしくはその誘導体または組合せ、ならびに使用説明書を含む、キット。
（３８）前記結合剤、抗体または誘導体は、凍結乾燥形態にある、上記（３７）のキット。
（３９）ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断する第１結合剤、およびＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断しない第２結合剤を含む、結合剤の組合せ。
（４０）前記第２結合剤はＰＤ−１に結合する、上記（３９）の組合せ。
（４１）前記第１および／または第２結合剤は抗体である、上記（３９）の組合せ。
（４２）前記結合剤はモノクローナル抗体である、上記（４０）の組合せ。
（４３）前記第２結合剤は、配列番号２、２５、４８、７１、９４および１１７のアミノ酸配列、または配列番号１７、４０、６３、８６、１０９および１３２のアミノ酸配列を含む、上記（３９）の組合せ。
（４４）ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断する第１結合剤、およびＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断しない第２結合剤を組み合わせる工程を含む、上記（３９）〜（４３）いずれかの組合せを製造する方法。
（４５）前記第２結合剤はＰＤ−１に結合する、上記（４４）の方法。
（４６）前記第１および／または第２結合剤は抗体である、上記（４４）の方法。
（４７）前記結合剤はモノクローナル抗体である、上記（４４）の方法。
（４８）前記第２結合剤は、配列番号２、２５、４８、７１、９４および１１７のアミノ酸配列、または配列番号１７、４０、６３、８６、１０９および１３２のアミノ酸配列を含む、上記（４４）の方法。
（４９）医薬上許容される賦形剤の添加をさらに含む、上記（４４）〜（４８）いずれかの方法。
（５０）免疫細胞を上記（３９）〜（４３）いずれかの組合せと接触させることにより、抗原の存在下で免疫細胞の増殖を誘導する方法。
（５１）ＰＤ−１抗体結合剤を同定する方法において、
ａ）疲弊機能回復アッセイ（ＥＦＲＡ）により候補ＰＤ−１結合剤をアッセイする工程；
ｂ）ＰＤ−１に対する前記候補結合剤の親和性を決定する工程；および
ｃ）前記候補結合剤の相補性決定領域（ＣＤＲ）のヌクレオチド配列を決定する工程；を含む、方法。
（５２）上記（１）〜（１１）いずれかの結合剤を製造する方法において、
細胞において前記結合剤を発現させる工程；および
前記細胞または前記細胞の培養上清から前記結合剤を単離する工程；を含む、方法。
（５３）上記（１）〜（１１）いずれかの結合剤をコードする核酸を宿主細胞において発現させる工程をさらに含む、上記（５２）の方法。
（５４）単離後、前記結合剤を医薬上許容される賦形剤と組み合わせる工程をさらに含む、上記（５２）または（５３）の方法。