【手続補正書】
【提出日】平成29年12月19日(2017.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種または複数種の微生物細胞から１種または複数種の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手する方法であって、
（ａ）前記微生物油を含む前記細胞を溶解して溶解細胞組成物を形成する工程；
（ｂ）前記溶解細胞組成物を処理して油含有エマルションを形成する工程；
（ｃ）前記溶解細胞組成物から前記油含有エマルションを分離する工程；
（ｄ）前記油含有エマルションを解乳化する工程；および
（ｅ）前記油を回収する工程
を含む、方法。
【請求項２】
（ａ）または（ｂ）の少なくとも一方が、前記細胞または前記溶解細胞組成物のｐＨを上昇させる工程をさらに含み、好ましくは前記ｐＨを約７以上に上昇させる工程をさらに含み、より好ましくは前記ｐＨを約７から約１１に上昇させる工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）が、前記細胞の前記ｐＨを制御する工程をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞の前記ｐＨを制御する工程が、塩基を添加する工程を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）または（ｂ）の少なくとも一方が、
（ｆ）前記細胞または前記溶解細胞組成物を撹拌する工程；及び
（ｇ）前記細胞または前記溶解細胞組成物を少なくとも５０℃、好ましくは約５０℃から約１００℃に加熱する工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）が、酵素を細胞ブロスの約０．０５重量％〜約２０重量％の量で添加する工程をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
（ｂ）が、塩を前記細胞ブロスの約０．０５重量％〜約２０重量％の量で添加する工程をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記塩が、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、硫酸塩およびこれらの組み合わせからからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）の前記細胞が未洗浄である、及び／又は（ａ）の前記細胞が発酵ブロスに含まれている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
（ｃ）が、
（ｈ）前記油含有エマルションおよび前記溶解細胞組成物を少なくとも５０℃、好ましくは約５０℃から約１００℃に加熱する工程；及び
（ｉ）遠心分離する工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
（ｄ）が、
（ｊ）前記油含有エマルションを少なくとも５０℃、好ましくは約５０℃から約１００℃に加熱する工程；及び
（ｋ）酸を添加する工程であって、好ましくは、前記酸がクエン酸を含む工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
（ｄ）が、塩基を添加する工程であって、好ましくは、前記塩基が水酸化ナトリウムを含む工程、をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記多価不飽和脂肪酸が、ω−３脂肪酸、ω−６脂肪酸およびそれらの混合物から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記多価不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）、γ−リノール酸（ＧＬＡ）、ジホモ−γ−リノール酸（ＤＧＬＡ）、ステアリドン酸（ＳＤＡ）およびそれらの混合物から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記多価不飽和脂肪酸がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記多価不飽和脂肪酸がアラキドン酸（ＡＲＡ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記微生物細胞が、藻類、酵母、真菌類、抵抗または細菌の細胞である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記微生物細胞が、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、クリプテコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）属またはスラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）目に由来する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記微生物細胞が、トラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属またはそれらの混合物に由来する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記微生物細胞がモルティエレラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ  ａｌｐｉｎａ）に由来する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記溶解細胞組成物が、液体、細胞断片および微生物油を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記油を前記細胞から入手するために有機溶媒が使用されない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
（ｅ）が、
（ｌ）前記油を遠心分離する工程；及び
（ｍ）前記油を精製する工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記油が少なくとも３０重量％のアラキドン酸を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記油が少なくとも３０重量％のドコサヘキサエン酸を含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記油のアニシジン値が約５０未満である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記油のリン含量が約８ｐｐｍ以下である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記油の過酸化物値が約５ｍｅｑ／ｋｇ未満である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
（ａ）および（ｂ）が互いに結合されて、１工程の溶解および処理する工程を形成する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
１種または複数種の微生物細胞から１種または複数種の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手する方法であって、
（ａ）前記微生物油を含む前記細胞を溶解して溶解細胞組成物を形成する工程；
（ｂ）前記溶解細胞組成物を処理して油含有エマルションを形成する工程；
（ｃ）前記溶解細胞組成物から前記油含有エマルションを分離する工程；および
（ｄ）前記油含有エマルションを解乳化する工程；および
（ｅ）前記油を回収する工程
を含み、（ａ）および（ｂ）の少なくとも一方が、前記細胞または溶解細胞組成物のｐＨを上昇させる工程、前記細胞または溶解細胞組成物を撹拌する工程、および前記細胞または溶解細胞組成物を加熱する工程を含む、方法。
【請求項３１】
（ａ）が、酵素を細胞ブロスの約０．０５重量％〜約２０重量％の量で添加する工程をさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
（ｂ）が、塩を細胞ブロスの約０．０５重量％〜約２０重量％の量で添加する工程をさらに含む、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
（ｃ）が、
（ｆ）前記油含有エマルションおよび前記溶解細胞組成物を少なくとも５０℃に加熱する工程；及び
（ｇ）遠心分離する工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
（ｄ）が、少なくとも５０℃に加熱する工程、酸を添加する工程、および塩基を添加する工程の少なくとも１つをさらに含む、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
（ｅ）が、
（ｈ）前記油を遠心分離する工程；及び
（ｉ）前記油を精製する工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法により入手される油。