【手続補正書】
【提出日】平成30年1月29日(2018.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１８】
アミノＬＮＡ−Ｔとそのオキソ類似体ＬＮＡ−Ｔとの比較は、アミノＬＮＡ−Ｔが、その相補体に対する安定性がＬＮＡ−Ｔよりも低いことを示している。同様に、アミノＥＮＡ−Ｔは、そのオキソ類似体のものよりも非常に低い二重鎖安定化効果を有するとようである。驚くべきことに、アミノＣＢＢＮ−ＴとそのオキソＣＢＢＮ−Ｔ類似体との比較は、アミノＣＢＢＮ修飾がオキソＣＢＢＮ−Ｔよりも２〜４℃／修飾だけ有意に安定にすることを示している（表３および図３Ｂを参照のこと）。理論に縛られるものではないが、ＬＮＡの２’−Ｏ（プロトン受容体）は、アミノＬＮＡの場合のように、それを２’位でプロトン供与体により置換する場合よりも、二重鎖水和および安定性に対する安定化効果が高いと仮定する。反対に、アミノＣＢＢＮは、そのオキソＣＢＢＮ類似体よりも、二重鎖水和および安定性に対するプラス効果がかなり高いようであり、いかなる他の２’４’−炭素−架橋二環式ヌクレオチドにおいても見られないＴｍの増強を提供する（図３Ａおよび３Ｂを参照のこと）。
【表３】
2017512774.tif 000001
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５３】
ＤＭＴｒ−ａＣ（Ｂｚ）（ｔｆａ）アミダイト（５８）
ＤＭＴｒ−ａＣ（Ｂｚ）（ｔｆａ）（０．３５ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を計量して、撹拌棒およびセプタムシールを有する１００ｍＬ丸底フラスコに入れた。フラスコにＤＣＭ（７ｍＬ）および２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホルジアミダイト（０．２７ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を充填した。４，５−ジシアノイミダゾール（５３ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を一度に添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×２０ｍＬ）およびブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をＴＥＡ処理した２５ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＮＡＰカラムにアプライし、９カラム容量のヘキサン中３０〜１００％酢酸エチル勾配で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、白色の泡状物質としてＤＭＴｒ−ａＣ（Ｂｚ）（ｔｆａ）アミダイト（０．３８ｇ、８６％）を得た。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
２’Ｃ−架橋二環式ヌクレオシドまたはヌクレオチドのβアノマーを生成するための方法であって、
ａ）核酸塩基をグリコシル化する工程であって、グリコシル供与体が、保護されたアルキルヒドロキシまたはアルキルアミンをその２’位に含有する、工程と、
ｂ）該グリコシル基の２’位および４’位で環化する工程と
を含む、方法。
（項目２）
前記２’Ｃ−架橋二環式ヌクレオシドまたはヌクレオチドの前記βアノマーを精製または回収する工程をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記２’Ｃ−架橋二環式ヌクレオシドまたはヌクレオチドが、式Ｉ：
【化４】
2017512774.tif 000002
（式中、
ＸはＮ、Ｓ、またはＯから選択され、
Ｗ１およびＷ２はそれぞれ、Ｈ、アルコール保護基、示されているＯを含むリン酸エステル、示されているＯを含むホスホロチオエートエステル、ジホスフェートもしくはトリホスフェート、またはホスホルアミダイトから独立して選択され、
Ｗ３は、ヌル、Ｈ、Ｏ、アミン保護基、ホスホルアミダイト、ＸがＮの場合にＮを含むホスホルアミデートエステル、ＸがＮの場合にＮを含むホスホルジアミデートエステル、メチル、アルキル、シクロアルキル、カルボキサミド、糖、脂肪酸、他の分子コンジュゲート、−Ｃ１（Ｏ）Ｒ、もしくは−ＣＯＯＲから独立して選択され、ここで、Ｒは、アリール、直鎖状、分岐状もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、糖、脂肪酸、または他の分子コンジュゲート、例えば薬物コンジュゲートであり、
Ｂは核酸塩基である）
の構造を有するかまたはそのホスホルアミダイトである、項目１に記載の方法。
（項目４）
ＸがＮである、項目３に記載の方法。
（項目５）
ＸがＳである、項目３に記載の方法。
（項目６）
ＸがＯである、項目３に記載の方法。
（項目７）
前記核酸塩基がプリンである、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記核酸塩基が、アデニン、グアニン、またはその誘導体である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記核酸塩基がピリミジンである、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記核酸塩基が、チミン、シトシン、もしくはウラシル、またはその誘導体である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記核酸塩基が過シリル化されている、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記アルコール保護基が、４，４’−ジメトキシトリチル、エステル、シリル、または酸不安定エーテルから選択される、項目３から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記アミン保護基が、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルボニル（ＭｏｚまたはＭｅＯＺ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｎ）、またはトリフルオロアセチル（ｔｆａ）から選択される、項目３から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記グリコシル供与体が、アセチル保護されたメチルヒドロキシをその２’位に含有し、前記環化する工程が、アミン、マスクされたアミンまたは保護されたアミンで該ヒドロキシを置換し、該２’位および４’位を環化することを含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記グリコシル供与体が、保護されたメチルアミンまたはマスクされたメチルアミンをその２’位に含有し、前記環化する工程が、該２’位の保護されたメチルアミンまたはマスクされたメチルアミンおよびその４’位を直接環化することを含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記グリコシル供与体が、保護されたメチルヒドロキシまたはマスクされたメチルヒドロキシをその２’位に含有し、前記環化する工程が、該ヒドロキシをチオール、マスクされたチオールまたは保護されたチオールで置換し、該２’位および４’位を環化することを含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記グリコシル供与体が、アセチル保護されたメチルヒドロキシをその２’位に含有し、前記環化する工程が、該ヒドロキシを脱アセチル化し、該２’位および４’位を環化することを含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記グリコシル供与体が、アルコール保護基をその３’位に含有する、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記アルコール保護基がエーテルである、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記アルコール保護基が熱および酸安定性である、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記アルコール保護基が、４，４’−ジメトキシトリチル、アセチル、シリル、ベンジル、置換ベンジルまたは不安定エーテルから選択される、項目１８から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記グリコシル供与体が、置換されていてもよいペントースである、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記グリコシル供与体が、リボース、アラビノースまたはグルコース由来のものである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記グリコシル化する工程が、５０％を超えるβアノマー収率をもたらす、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記グリコシル化する工程が、７：３を超える、８：２を超える、または９：１を超えるβ：αアノマー比をもたらす、項目２４に記載の方法。