【手続補正書】
【提出日】平成30年8月9日(2018.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
内部空間を含むリポソーム、
前記内部空間内に配置された生物活性抗葉酸剤、
リポソームの外部に付加されたＰＥＧ、及び
少なくとも１つの葉酸受容体に対する特異的親和性を有するタンパク質であって、前記ＰＥＧ及び前記リポソームの外部のうちの少なくとも一方に付加されているタンパク質
を含み、
前記リポソームのゼータ電位がゼロ以下であり、
前記ＰＥＧが、２００〜５０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有していてもよい、リポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項２】
リポソームが、生物活性抗葉酸剤及び薬学的に許容される水性担体を封入しており、
前記薬学的に許容される担体がトレハロースを含んでいてもよく、
前記薬学的に許容される担体が、５％〜２０％質量パーセントのトレハロースを含んでいてもよく、
前記薬学的に許容される担体が、５〜２００ｍＭの間の濃度及び２．８〜６の間のｐＨのクエン酸緩衝液を含んでいてもよく、
前記薬学的に許容される担体が、５０ｍＭ〜５００ｍＭの間の総濃度の酢酸ナトリウム及び酢酸カルシウムを含んでいてもよい、
請求項１に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項３】
ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−マレイミド、ＨＳＰＣ、ＨＳＰＣ−ＰＥＧ、コレステロール、コレステロール−ＰＥＧ及びコレステロール−マレイミドの少なくとも一つ、又は、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−マレイミド、コレステロール及びＨＳＰＣの少なくとも一つ、
水性溶液中の生物活性抗葉酸剤、
タンパク質
を含む混合物を形成するステップ、
前記混合物を均質化して、前記水性溶液中にリポソームを形成するステップ、及び
膜を通して前記混合物を押し出して、前記水性溶液中に前記生物活性抗葉酸剤を封入するリポソームを形成するステップ
を含み、
前記押出しステップ後に、前記水性溶液中の過剰な生物活性抗葉酸剤を前記リポソームの外部に除去するステップを含んでもよく、
前記除去ステップ後に、前記組成物を凍結乾燥させ、凍結乾燥組成物を形成するステップを含んでもよく、
前記凍結乾燥ステップ後に、前記凍結乾燥組成物を溶媒中に溶解させることにより、前記凍結乾燥組成物を復元するステップを含んでもよく、
前記溶媒が水性溶媒であってもよく、
前記混合物が、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、及びスクロースからなる群から選択される少なくとも１つを含んでいてもよい、
請求項１に記載の組成物を調製する方法。
【請求項４】
内部空間を含むリポソームを含む媒体、
前記内部空間内に配置された水性生物活性抗葉酸剤、
少なくとも１つの葉酸受容体に対する特異的親和性を有するタンパク質であって、前記リポソームの外部に配置されているタンパク質
を含み、
前記媒体は、水性溶液であってもよく、
前記媒体は、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、及びスクロースからなる群から選択される、少なくとも１つの抗凍結剤を含む水性溶液であってもよく、
前記リポソームの外部に付加された立体安定剤をさらに含み、前記タンパク質が、前記立体安定剤及び前記リポソームの外部のうちの少なくとも一方に付加されていてもよく、
前記立体安定剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、モノシアロガングリオシド（ＧＭ１）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（アクリルアミド）（ＰＡＡ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、ホスファチジルポリグリセロール、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、両親媒性ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、Ｌ−アミノ酸ベースポリマー及びポリビニルアルコールからなる群から選択される少なくとも１つであってもよく、
前記ＰＥＧが、２００〜５０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有していてもよい、
リポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項５】
前記立体安定剤及び前記リポソームの外部のうちの少なくとも一方に配置された免疫刺激剤及びマレイミドのうちの少なくとも１つをさらに含み、
前記免疫刺激剤が、前記立体安定剤及び前記リポソームの外部のうちの少なくとも一方と共有結合していてもよく、
前記免疫刺激剤が、ハプテン及びアジュバントからなる群から選択される少なくとも１つ、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、又は、フルオレセイン、ＤＮＰ、ベータグルカン、ベータ−１，３−グルカン及びベータ−１，６−グルカンからなる群から選択される少なくとも１つであってもよい、
請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項６】
前記リポソームが、３０〜１５０ｎｍの範囲の、好ましくは４０〜７０ｎｍの範囲の、直径を有する、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項７】
前記リポソームが、アニオン性リポソーム又は中性リポソームであり、
前記リポソームのゼータ電位がゼロ以下、好ましくは０〜−１５０ｍＶの範囲、より好ましくは−３０〜−５０ｍＶの範囲であってもよい、
請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項８】
アニオン性脂質及び中性脂質のうちの少なくとも１つ、
ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ、ＤＳＰＥ−マレイミド、ＨＳＰＣ、ＨＳＰＣ−ＰＥＧ、ＨＳＰＣ−マレイミド、コレステロール、コレステロール−ＰＥＧ及びコレステロール−マレイミドからなる群から選択されるすくなくとも１つ、及び
ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＦＩＴＣ、ＤＳＰＥ−マレイミド、コレステロール及びＨＳＰＣからなる群から選択される少なくとも１つ
から形成される、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項９】
前記リポソームが水性溶液を封入しており、
前記リポソームが生物活性抗葉酸剤及び薬学的に許容される水性担体を封入していてもよく、
前記薬学的に許容される担体がトレハロースを含んでいてもよく、
前記薬学的に許容される担体が、５％〜２０％質量パーセントのトレハロースを含んでいてもよく、
前記薬学的に許容される担体が、５〜２００ｍＭの間の濃度及び２．８〜６の間のｐＨのクエン酸緩衝液を含んでいてもよく、
前記薬学的に許容される担体が、５０ｍＭ〜５００ｍＭの間の総濃度の酢酸ナトリウム及び酢酸カルシウムを含んでいてもよい、
請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１０】
前記生物活性抗葉酸剤が水溶性である、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１１】
各リポソームが、２００，０００分子未満の、好ましくは１０，０００〜１００，０００分子の、前記生物活性抗葉酸剤を含む、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１２】
前記生物活性抗葉酸剤がペメトレキセド、ロメテレキソール、メトトレキセート、ラリトレキセド、アミノプテリン、プララトレキセート、ロメテレキソール、トリメトレキセド、ＬＹ３０９８８７、ＧＷ１８４３Ｕ８９、プログアニル、ピリメタミン、トリメトプリム、並びに、６−置換ピロロ及びチエノ［２，３−ｄ］ピロロピリミジンクラスのＧＡＲＦＴ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つであるである、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１３】
前記生物活性抗葉酸剤が５〜８の、好ましくは２〜６の、ｐＨである、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１４】
前記タンパク質が、マレイミド官能基を介して、立体安定剤分子に共有結合している、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１５】
前記タンパク質が、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、及び葉酸受容体デルタからなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、に対する特異的親和性を有する、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１６】
前記タンパク質が、腫瘍細胞には存在するが、非腫瘍細胞では存在しないか又は接触不能である、腫瘍細胞表面抗原上のエピトープに対する特異的親和性を有し、
前記腫瘍細胞が悪性細胞であってよく、
前記腫瘍細胞表面抗原が、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ及び葉酸受容体デルタからなる群から選択される少なくとも１つであってよい、
請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１７】
前記タンパク質が、抗体の抗原結合配列を含み、
前記抗体の抗原結合配列が、抗体由来の１つ又は複数の相補性決定領域を含んでいてもよく、
前記タンパク質は抗体を含んでいてもよい、
請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１８】
前記タンパク質が、抗体、ヒト化抗体、抗体の抗原結合断片、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、二重特異性抗体、合成抗体、ＰＥＧ化抗体、及び多量体抗体からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項１９】
各リポソームが、２００個までの、好ましくは３０個〜２００個の、ターゲッティング部分を含む、請求項１又は４に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物。
【請求項２０】
アニオン性脂質及び中性脂質のうちの少なくとも１つ、
ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ、ＤＳＰＥ−マレイミド、ＨＳＰＣ、ＨＳＰＣ−ＰＥＧ、ＨＳＰＣ−マレイミド、コレステロール、コレステロール−ＰＥＧ及びコレステロール−マレイミドからなる群から選択される少なくとも１つ、
水性溶液中の生物活性抗葉酸剤、
タンパク質
を含む混合物を形成するステップ、
前記混合物を均質化して、前記水性溶液中にリポソームを形成するステップ、及び
膜を通して前記混合物を押し出して、前記水性溶液中に前記生物活性抗葉酸剤を封入するリポソームを形成するステップ
を含み、
前記押出しステップ後に、前記水性溶液中の過剰な生物活性抗葉酸剤を前記リポソームの外部に除去するステップを含んでいてもよく、
前記除去ステップ後に、前記組成物を凍結乾燥させ、凍結乾燥組成物を形成するステップを含んでいてもよく、
前記凍結乾燥ステップ後に、前記凍結乾燥組成物を溶媒中に溶解させることにより、前記凍結乾燥組成物を復元するステップを含んでいてもよく、
前記混合物が、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、及びスクロースからなる群から選択される少なくとも１つを含んでいてもよく、
前記溶媒が水性溶媒であってもよい、
請求項１又は４に記載の組成物を調製する方法。
【請求項２１】
形成されたリポソームが、立体安定剤をさらに含み、
前記立体安定剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、モノシアロガングリオシド（ＧＭ１）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（アクリルアミド）（ＰＡＡ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、ホスファチジルポリグリセロール、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、両親媒性ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、Ｌ−アミノ酸ベースポリマー及びポリビニルアルコールからなる群から選択される少なくとも１つであってもよく、
前記ＰＥＧが、２００〜５０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有していてもよい、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
内部空間を含むリポソーム、
前記内部空間内に配置された生物活性剤、
前記リポソームの外部に付加された立体安定剤分子、及び
少なくとも１つの葉酸受容体に対する特異的親和性を有するタンパク質であって、前記立体安定剤及び前記リポソームの外部のうちの少なくとも一方に付加されているタンパク質
を含み、
前記立体安定剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、モノシアロガングリオシド（ＧＭ１）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（アクリルアミド）（ＰＡＡ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、ホスファチジルポリグリセロール、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、両親媒性ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、Ｌ−アミノ酸ベースポリマー、及びポリビニルアルコールからなる群から選択される少なくとも１つであってよく、
前記ＰＥＧが、２００〜５０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有していてもよく、
前記生物活性剤が、エリプチシン、パクリタキセル、ペメトレキセド、メトトレキセート、ラリトレキセド、アミノプテリン、プララトレキセート、ロメテレキソール、トリメトレキセド、ＬＹ３０９８８７、ＧＷ１８４３Ｕ８９、プログアニル、ピリメタミン、トリメトプリム、並びに、６−置換ピロロ及びチエノ［２，３−ｄ］ピロロピリミジンクラスのＧＡＲＦＴ阻害剤からなる群のうちの少なくとも１つを含んでいてもよい、
葉酸受容体を選択的に標的とする標的化リポソーム組成物。
【請求項２３】
癌治療薬を製造するための、請求項１、２、１４〜１９及び２２のいずれか一項に記載のリポソーム抗葉酸剤組成物の使用。
【請求項２４】
ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ、ＤＳＰＥ−マレイミド、ＨＳＰＣ、ＨＳＰＣ−ＰＥＧ、ＨＳＰＣ−マレイミド、コレステロール、コレステロール−ＰＥＧ及びコレステロール−マレイミドからなる群から選択されるすくなくとも１つ、及び、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ−ＦＩＴＣ、ＤＳＰＥ−マレイミド、コレステロール及びＨＳＰＣからなる群から選択される少なくとも１つ、及び
生物活性剤をカプセル化するための組成物を使用するための説明書、
を含み、
別の容器に入った、生物活性剤を含んでいてもよい、
請求項８に記載の組成物を提供するためのキット。