【手続補正書】
【提出日】平成30年3月13日(2018.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物細胞において遺伝子変化を引き起こす方法であって、
前記細胞をＤＮＡ切断剤および修飾ＧＲＯＮに曝露するステップを含むか、あるいは
前記細胞をＤＮＡ切断剤ならびにＤＮＡおよびＲＮＡを含むＧＲＯＮに曝露するステップを含む、方法。
【請求項２】
ＤＮＡ切断剤および修飾ＧＲＯＮを含むか、あるいは
ＤＮＡおよびＲＮＡを含むＤＮＡ切断剤を含む、植物細胞。
【請求項３】
前記ＤＮＡ切断剤が、ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガー、メガヌクレアーゼ、およびＤＮＡ切断性抗生物質から選択される１つまたは複数であるか、
前記ＤＮＡ切断剤がＣＲＩＳＰＲまたはＴＡＬＥＮであるか、
前記ＤＮＡ切断剤がＣＲＩＳＰＲであるか、あるいは
前記ＤＮＡ切断剤がＴＡＬＥＮである、請求項１または２に記載の方法または細胞。
【請求項４】
前記ＤＮＡ切断剤が、ブレオマイシン、ゼオシン、フレオマイシン、タリソマイシンおよびペプレオマイシンからなる群から選択される１つまたは複数のＤＮＡ切断性抗生物質であるか、および／または
前記ＤＮＡ切断剤がゼオシンである、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項５】
前記ＧＲＯＮが１つ以上の蛍光色素の結合によって修飾されているか、
前記ＧＲＯＮが一本鎖であるか、あるいは
ＧＲＯＮが化学的に保護されたオリゴヌクレオチドである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項６】
ＧＲＯＮが、５’末端で保護された、化学的に保護されたオリゴヌクレオチドを含むか、
ＧＲＯＮが、３’末端で保護された、化学的に保護されたオリゴヌクレオチドを含むか、
ＧＲＯＮが、５’および３’末端で保護された、化学的に保護されたオリゴヌクレオチドを含むか、
ＧＲＯＮが、Ｃｙ３基、３ＰＳ基、および２’−Ｏ−メチル基から選択される１つまたは複数を含むか、
ＧＲＯＮがＣｙ３基を有するか、
ＧＲＯＮが２つ以上のＣｙ３基を含むか、
ＧＲＯＮが５’末端の第１の塩基にＣｙ３基を含むか、
ＧＲＯＮが３’末端の第１の塩基にＣｙ３基を含むか、
ＧＲＯＮが３ＰＳ基を含むか、
ＧＲＯＮが２個以上の３ＰＳ基を含むか、
ＧＲＯＮが５’末端の第１の塩基に３ＰＳ基を含むか、
ＧＲＯＮが３’末端の第１の塩基に３ＰＳ基を含むか、
ＧＲＯＮが２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが２個以上の２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の第１の塩基に２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の第１の塩基に２’−Ｏ−メチル基を有し、他の２’−Ｏ−メチル基を有さないか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の２個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の３個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の４個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の５個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の６個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の７個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の８個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の９個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端の最初の１０個以上の塩基のそれぞれに２’−Ｏ−メチル基を含むか、
ＧＲＯＮが、５’末端に１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＲＮＡ塩基を含むか、および／または
前記ＧＲＯＮが、遺伝子変化のための標的配列に対してゆらぎ塩基対を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項７】
前記ＧＲＯＮが１５〜６０ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが４１ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが５０〜１１０ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが１０１ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが１５０〜２１０ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが２０１ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが７０〜２１０ヌクレオチド長であるか、
前記ＧＲＯＮが７０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが１６５ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが１７５ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが１８５ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが１９５ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２１０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２２０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２３０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２４０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２５０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２６０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２７０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２８０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが２９０ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが３００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが４００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが５００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが６００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが７００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが８００ヌクレオチド長より長いか、
前記ＧＲＯＮが９００ヌクレオチド長より長いか、あるいは
前記ＧＲＯＮが１０００ヌクレオチド長より長い、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項８】
前記植物が、キャノーラ、ヒマワリ、コーン、タバコ、テンサイ、ワタ、メイズ、コムギ、オオムギ、イネ、アルファルファ、オオムギ、モロコシ、トマト、マンゴー、モモ、リンゴ、ナシ、イチゴ、バナナ、メロン、キャッサバ、ジャガイモ、ニンジン、レタス、タマネギ、ダイズ、ダイズ種、サトウキビ、マメ科植物、ヒヨコマメ、フィールドピー、ソラマメ、レンズマメ、カブ、スウェーデンカブ、芽キャベツ、ルピナス、カリフラワー、ケール、エンドウマメ、ポプラ、マツ、ユーカリノキ、ブドウ、カンキツ属、ライコムギ、アルファルファ、ライムギ、オートムギ、芝生と飼草、アマ、ナタネ、カラシナ、キュウリ、アサガオ、バルサム、コショウ、ナス、マリゴールド、ロータス属、キャベツ、デージー、カーネーション、チューリップ、アヤメ属、キャッサバ、およびユリからなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項９】
前記植物がキャノーラ、コーン、メイズ、イネ、モロコシ、ジャガイモ、ダイズ、アマ、ナタネ、キャッサバ、あるいはヒマワリである、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項１０】
植物細胞において遺伝子変化を引き起こす方法であって、前記細胞をＣＲＩＳＰＲおよび修飾ＧＲＯＮに曝露するステップを含む方法。
【請求項１１】
複数の遺伝子変化を生じる、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項１２】
２つ以上のガイドＲＮＡを使用する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項１３】
１より多いガイドＲＮＡのそれぞれが、遺伝子変化のための異なる標的と相補的である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項１４】
ＣＲＩＳＰＲがニッカーゼを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法または細胞。
【請求項１５】
ＤＮＡ切断剤が２つ以上のニッカーゼを含むか、
２つ以上のニッカーゼが標的核酸配列の反対の鎖上を切断するか、あるいは
２つ以上のニッカーゼが標的核酸配列の同じ鎖上を切断する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法または細胞。