【手続補正書】
【提出日】平成30年2月2日(2018.2.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）免疫細胞において、抗原マーカーの発現または提示に関与する遺伝子を遺伝子不活化するかまたは変異させる工程であって、該抗原マーカーが該免疫細胞の表面と病的細胞の表面の両方に存在する、工程、
（b）該免疫細胞において、該病的細胞の表面に存在する該抗原マーカーに対して向けられたキメラ抗原受容体をコードするトランスジーンを発現させる工程
を含む、病的細胞に対する免疫療法のための免疫細胞、好ましくはT細胞を調製する方法。
【請求項２】
抗原マーカーが、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、CD3 gamma、CD3 delta、CD3 epsilon、CD4、CD5、CD7、CD8a、CD8b、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD13、CD14、CD15、CD16a、CD16b、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD31、CD33、CD37、CD38、CD40、CD43、CD44、CD45、CD45RA、CD45RB、CD45RO、CD46、CD47、CD48、CD52、CD53、CD55、CD56、CD57、CD58、CD59、CD60a、CD63、CD68、CD69、CD70、CD74、CD79a、CD79b、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD86、CD87、CD90、CD94、CD95、CD96、CD97、CD98、CD99、CD100、CD103、CD107a、CD107b、CD109、CD123、CD146、CD154、CD158a、CD158b、CD163、CD164、CD168、CD171、CD177、CD178、CD180、CD182、CD185、CD191、CD193、CD196、CD197、CD200、CD209、CD227、CD231、CD246、CD254、CD263、CD272、CD273、CD276、CD277、CD279、CD298、CD300a、CD300c、CD304、CD305、CD314、CD317 and CD319からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
抗原マーカーがCD38、CD70またはCD319(CS1)である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
工程（a）がレアカットエンドヌクレアーゼを用いて行われる、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
工程（a）がTAL-ヌクレアーゼまたはRNAガイドエンドヌクレアーゼを用いて行われる、請求項4記載の方法。
【請求項６】
エンドヌクレアーゼが、トランスフェクトされたmRNAから発現される、請求項4記載の方法。
【請求項７】
T細胞受容体（TCR）の成分をコードする遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
HLAの成分をコードする遺伝子、β2mをコードする遺伝子、CTLA4、PPP2CA、PPP2CB、PTPN6、PTPN22、PDCD1、LAG3、HAVCR2、BTLA、CD160、TIGIT、CD96、CRTAM、LAIR1、SIGLEC7、SIGLEC9、CD244、TNFRSF10B、TNFRSF10A、CASP8、CASP10、CASP3、CASP6、CASP7、FADD、FAS、TGFBRII、TGFRBRI、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD10、SKI、SKIL、TGIF1、IL10RA、IL10RB、HMOX2、IL6R、IL6ST、EIF2AK4、CSK、PAG1、SIT1、FOXP3、PRDM1、BATF、GUCY1A2、GUCY1A3、GUCY1B2、およびGUCY1B3より選択される免疫チェックポイントタンパク質をコードする遺伝子、もしくは化学療法または免疫抑制薬物に対する免疫細胞の感受性を付与する遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
工程（a）の免疫細胞が、炎症性Tリンパ球、細胞傷害性Tリンパ球、制御性Tリンパ球、またはヘルパーTリンパ球に由来する、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
病的細胞が悪性細胞または感染細胞より選択される、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
病的細胞がB細胞である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
病的細胞が固形腫瘍細胞である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか一項記載の方法によって入手可能な、操作された免疫細胞。
【請求項１４】
結果として表現型[CAR CD38]+[CD38]-が得られる、請求項13記載の操作された免疫細胞。
【請求項１５】
結果として表現型[CAR CD70]+[CD70]-が得られる、請求項13記載の操作された免疫細胞。
【請求項１６】
結果として表現型[CAR CS1]+[CS1]-が得られる、請求項13記載の操作された免疫細胞。
【請求項１７】
免疫細胞と共通している特定の抗原マーカーを提示する病的細胞の存在について診断された患者を処置するための医薬の製造における、請求項13〜16のいずれか一項記載の操作された免疫細胞の使用。
【請求項１８】
必要とする患者において癌、免疫疾患、または感染症を処置するための医薬の製造における、請求項13〜16のいずれか一項記載の操作された免疫細胞の使用。
【請求項１９】
リンパ腫または白血病を処置するための医薬の製造における、請求項13〜16のいずれか一項記載の操作された免疫細胞の使用。
【請求項２０】
慢性リンパ性白血病（CLL）を処置するための医薬の製造における、請求項13〜16のいずれか一項記載の操作された免疫細胞の使用。
【請求項２１】
免疫細胞において抗原マーカーの発現または提示に関与する遺伝子を不活性化することが可能なレアカットエンドヌクレアーゼであって、該抗原マーカーが該免疫細胞の表面と病的細胞の表面の両方に存在する、レアカットエンドヌクレアーゼ。
【請求項２２】
メガヌクレアーゼ、転写活性化様（TAL）ヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）、RNA/DNAガイドエンドヌクレアーゼ、またはアルゴノート（Argonaute）である、請求項21に記載のレアカットエンドヌクレアーゼ。
【請求項２３】
CD38、CD70またはCS-1に対して特異的な転写アクチベーター様エフェクター（TALE）ヌクレアーゼである、請求項21に記載のレアカットエンドヌクレアーゼ。
【請求項２４】
SEQ ID NO：2およびSEQ ID NO：3の配列、またはSEQ ID NO：5およびSEQ ID NO：6の配列、またはSEQ ID NO：8およびSEQ ID NO：9の配列を含む、請求項21〜23のいずれか一項記載のレアカットエンドヌクレアーゼ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明による好ましい免疫細胞は、治療製品として使用するための、好ましくは、同種異系治療製品として使用するための、以下の表現型：
・ [表1の抗原マーカーを標的とするCAR]+[表1の抗原マーカー]-
になる免疫細胞、
例えば、以下の表現型になる免疫細胞である：
・ [CAR CD38]+[CD38]-、好ましくは、[TCR]ネガティブでもある、
・ [CAR CD70]+[CD70]-、好ましくは、[TCR]ネガティブでもある、
・ [CAR CS1]+[CS1]-、好ましくは、[TCR]ネガティブでもある。
[本発明1001]
（c）免疫細胞において、抗原マーカーの発現または提示に関与する遺伝子を遺伝子不活化するかまたは変異させる工程であって、該抗原マーカーが該免疫細胞の表面と病的細胞の表面の両方に存在する、工程、
（d）該免疫細胞において、該病的細胞の表面に存在する該抗原マーカーに対して向けられたキメラ抗原受容体をコードするトランスジーンを発現させる工程
を含む、病的細胞に対する免疫療法のための免疫細胞、好ましくはT細胞を調製する方法。
[本発明1002]
抗原マーカーが、表4に列挙した抗原マーカーより選択される、本発明1001の方法。
[本発明1003]
抗原マーカーがCD38またはその免疫反応性断片である、本発明1001の方法。
[本発明1004]
免疫細胞を活性化させかつ増殖させるさらなる工程を含む、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
細胞表面にマーカー抗原を提示する細胞を排除することによって結果として得られた免疫細胞を精製するさらなる工程を含む、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
ドナーから免疫細胞を獲得する先行する工程を含む、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
病的細胞の発生による影響を受けている患者から免疫細胞を獲得する先行する工程を含む、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1008]
免疫細胞が、初代幹細胞、iPS、またはhES細胞に由来する、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
免疫細胞が、病的細胞の発生による影響を受けている患者に由来するiPS細胞に由来する、本発明1008の方法。
[本発明1010]
工程（a）がレアカットエンドヌクレアーゼを用いて行われる、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
工程（a）がTAL-ヌクレアーゼを用いて行われる、本発明1010の方法。
[本発明1012]
工程（a）がRNAガイドエンドヌクレアーゼを用いて行われる、本発明1010の方法。
[本発明1013]
RNAガイドエンドヌクレアーゼがCas9である、本発明1012の方法。
[本発明1014]
RNAガイドエンドヌクレアーゼが少なくとも2つのポリペプチドに分割され、一つのポリペプチドがRuvCを含み、別のポリペプチドがHNHを含む、本発明1012の方法。
[本発明1015]
エンドヌクレアーゼが、トランスフェクトされたmRNAから発現される、本発明1010の方法。
[本発明1016]
T細胞受容体（TCR）の成分をコードする遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
T細胞受容体の成分がTCRαである、本発明1016の方法。
[本発明1018]
HLAの成分をコードする遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1019]
β2mをコードする遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1020]
CTLA4、PPP2CA、PPP2CB、PTPN6、PTPN22、PDCD1、LAG3、HAVCR2、BTLA、CD160、TIGIT、CD96、CRTAM、LAIR1、SIGLEC7、SIGLEC9、CD244、TNFRSF10B、TNFRSF10A、CASP8、CASP10、CASP3、CASP6、CASP7、FADD、FAS、TGFBRII、TGFRBRI、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD10、SKI、SKIL、TGIF1、IL10RA、IL10RB、HMOX2、IL6R、IL6ST、EIF2AK4、CSK、PAG1、SIT1、FOXP3、PRDM1、BATF、GUCY1A2、GUCY1A3、GUCY1B2、およびGUCY1B3より選択される免疫チェックポイントタンパク質をコードする遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1021]
遺伝子座がPD1遺伝子またはCTLA-4遺伝子の発現に関与する、本発明1020の方法。
[本発明1022]
化学療法または免疫抑制薬物に対する免疫細胞の感受性を付与する遺伝子を不活化するさらなる工程を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1023]
さらなる遺伝子がCD52をコードする、本発明1022の方法。
[本発明1024]
さらなる遺伝子がヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（HPRT）である、本発明1022の方法。
[本発明1025]
さらなる遺伝子がグルココルチコイド受容体（GR）をコードする、本発明1022の方法。
[本発明1026]
さらなる遺伝子がDCK調節経路、特にDCK発現に関与する、本発明1022の方法。
[本発明1027]
工程（a）の免疫細胞が、炎症性Tリンパ球、細胞傷害性Tリンパ球、制御性Tリンパ球、またはヘルパーTリンパ球に由来する、本発明1001〜1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
T細胞がCD4+Tリンパ球および/またはCD8+Tリンパ球に由来する、本発明1027の方法。
[本発明1029]
形質転換された免疫細胞をインビトロで増殖させる、本発明1001〜1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
形質転換された免疫細胞をインビボで増殖させる、本発明1001〜1028のいずれかの方法。
[本発明1031]
病的細胞が悪性細胞または感染細胞より選択される、本発明1001〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
病的細胞がB細胞である、本発明1001〜1030のいずれかの方法。
[本発明1033]
病的細胞が固形腫瘍細胞である、本発明1001〜1030のいずれかの方法。
[本発明1034]
医用薬剤として用いるよう免疫細胞を調製するための、本発明1001〜1030のいずれかの方法。
[本発明1035]
必要とする患者において癌、免疫疾患、または感染症を処置するための免疫細胞を調製するための、本発明1031の方法。
[本発明1036]
リンパ腫を処置するための、本発明1032の方法。
[本発明1037]
白血病を処置するための、本発明1032の方法。
[本発明1038]
慢性リンパ性白血病（CLL）を処置するための、本発明1034の方法。
[本発明1039]
本発明1001〜1035のいずれかの方法によって入手可能な、操作された免疫細胞。
[本発明1040]
結果として表現型[CAR CD38]+[CD38]-が得られる、本発明1039の操作された免疫細胞。
[本発明1041]
結果として表現型[CAR CD70]+[CD70]-が得られる、本発明1039の操作された免疫細胞。
[本発明1042]
結果として表現型[CAR CS1]+[CS1]-が得られる、本発明1039の操作された免疫細胞。
[本発明1043]
（a）免疫細胞と共通している特定の抗原マーカーを提示する病的細胞の存在について患者を診断する工程、
（b）本発明1038〜1042の操作された免疫細胞の集団を調製する工程、または本発明1001〜1035のいずれかの方法に従って操作された免疫細胞の集団を調製する工程、および
（c）該操作された免疫細胞を、該病的細胞について診断された該患者に投与する工程
を含む、患者を処置するための方法。