【手続補正書】
【提出日】平成30年3月14日(2018.3.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞からの抗体重鎖及び／または抗体軽鎖の分泌の増加方法であって、（１）抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結された第一シグナルペプチドをコードする第一ポリヌクレオチドであって、前記シグナルペプチドの平均疎水性は約０．５超である、前記第一ポリヌクレオチド；及び／または（２）抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結された第二シグナルペプチドをコードする第二ポリヌクレオチドであって、前記第二シグナルペプチドの平均疎水性は約０．５超である前記第二ポリヌクレオチド、を含むポリヌクレオチドを含み、そうすることにより、宿主細胞での抗体の発現に際して、前記重鎖及び軽鎖が折り畳まれ構築されて、生物学的に活性な抗体を形成する、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項２】
前記第一及び／または第二シグナルペプチドは、変異型共翻訳シグナルペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第一及び／または第二シグナルペプチドは、変異型ＤｓｂＡシグナルペプチドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記変異型ＤｓｂＡシグナルペプチドは、残基Ｌ１１及び／またはＳ１８に変異を含み、前記変異型ＤｓｂＡシグナルペプチドは、配列番号３の野生型ＤｓｂＡシグナルペプチドよりも高い平均疎水性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記第一及び／または第二シグナルペプチドは、Ｓｆｍｃシグナルペプチドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記宿主細胞中の前記ポリヌクレオチドは、さらに、プロモーターを含む、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記プロモーターは、ｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌｐｐ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、及びＴ７プロモーターからなる群より選択される原核生物プロモーターである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞は、内因性プロテアーゼ活性が欠損した株のものである、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記宿主細胞は、さらに、ＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＧ、及びＦｋｐＡからなる群より選択される少なくとも１種の原核生物ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記モノクローナル抗体は、キメラ抗体、親和性成熟抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
配列番号３のＤｓｂＡシグナルペプチドよりも高い平均疎水性を有する、残基Ｌ１１及び／またはＳ１８に変異を含む変異型ＤｓｂＡシグナルペプチド。
【請求項１３】
配列番号１のＳＴＩＩシグナルペプチドよりも高い平均疎水性を有する、残基Ｓ１１に変異を含む変異型ＳＴＩＩシグナルペプチド。
【請求項１４】
配列番号８、１１、１３、１５、３１、または３３の配列からなる、本質的にその配列からなる、またはその配列を含む、変異型シグナルペプチド。
【請求項１５】
異種タンパク質と融合した、請求項１２または１３に記載の変異型シグナルペプチド。
【請求項１６】
前記異種ポリペプチドは、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体軽鎖及び抗体重鎖、多量体ポリペプチド、及びイムノアドヘシンからなる群から選択される、請求項１５に記載の変異型シグナルペプチド。
【請求項１７】
請求項１２または１３に記載の変異型シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項１８】
異種ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結した請求項１７に記載のポリヌクレオチドであって、それにより、宿主細胞中での前記異種ポリペプチドの発現に際して、前記異種ポリペプチドは折り畳まれ構築されて、生物学的に活性な異種ポリペプチドを形成する、ポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記宿主細胞は、原核生物宿主細胞である、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２０】
抗体をコードするポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチドは、（１）抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結した第一シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び（２）抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結した第二シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、それにより、宿主細胞中での前記抗体発現の際に、前記重鎖及び軽鎖が折り畳まれ構築されて、生物学的に活性な抗体を形成し、前記第一及び／または第二シグナルペプチドは請求項１２または１３に記載の変異型シグナルペプチドであるか、または前記第一及び／または第二シグナルペプチドは、配列番号８、１１、１３、１５、３１、３３、または４２の配列からなる、本質的にその配列からなる、またはその配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項２１】
抗体をコードする前記ポリヌクレオチドは、（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結した第三シグナルペプチドをコードするポリペプチドをさらに含む、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】
前記第三シグナルペプチドは、請求項１２または１３に記載の変異型シグナルペプチドであるか、あるいは前記第三シグナルペプチドは、配列番号８、１１、１３、１５、３１、３３、または４２の配列からなる、本質的にその配列からなる、またはその配列を含む、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】
前記異種ポリペプチドと作動可能に連結したプロモーターをさらに含む、請求項１８から２２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記プロモーターは、ｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌｐｐ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、ｔｒｐ、及びＴ７プロモーターからなる群より選択される原核生物プロモーターである、請求項２３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
（ａ）第一プロモーターであって、軽鎖と作動可能に連結している前記第一プロモーター、及び（ｂ）第二プロモーターであって、重鎖と作動可能に連結している前記第二プロモーター、をさらに含む、請求項１８から２４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
（ｃ）第三プロモーターであって、Ｆｃポリペプチドと作動可能に連結している前記第三プロモーター、をさらに含む、請求項２５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記異種ポリペプチドは、プロテアーゼ、イムノアドヘシン、受容体の細胞外ドメイン、ヘテロ多量体タンパク質、または抗体である、請求項１８または１９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項２０から２６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
前記モノクローナル抗体は、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、抗体断片、一本腕抗体断片、またはヒト抗体である、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
請求項１８から２９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３１】
請求項１８から３０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、組成物。
【請求項３２】
請求項１７から２９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
【請求項３３】
原核細胞である、請求項３２に記載の宿主細胞。
【請求項３４】
原核生物シャペロンタンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項３２または３３に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
原核生物シャペロンタンパク質を過剰発現する、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３６】
異種ポリペプチド（抗体重鎖及び／または軽鎖など）の作成方法であって、請求項３２から３５のいずれか１項に記載の宿主細胞を、核酸が発現されるように培養することを含み、それにより、宿主細胞中での前記ポリヌクレオチドの発現の際に、前記異種ポリペプチドが折り畳まれて生物学的に活性な異種ポリペプチドを形成する、方法。
【請求項３７】
細胞からの異種ポリペプチド（抗体重鎖及び／または軽鎖など）の分泌方法であって、請求項３２から３５のいずれか１項に記載の宿主細胞を、核酸が発現され、かつ前記異種ポリペプチドが分泌されるように培養することを含む、方法。
【請求項３８】
細胞からの異種ポリペプチド（抗体重鎖及び／または軽鎖など）の移行方法であって、請求項３２から３５のいずれか１項に記載の宿主細胞を、核酸が発現され、かつ前記異種ポリペプチドが移行されるように培養することを含む、方法。
【請求項３９】
請求項３６から３８のいずれか１項に記載の方法により得られる異種ポリペプチド。
【請求項４０】
抗体である、請求項３９に記載のポリペプチド。