【手続補正書】
【提出日】平成30年9月11日(2018.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナイーブＴ細胞から抗原特異的Ｔ細胞集団を調製するための方法であって、
患者または適切なドナー由来のナイーブＴ細胞を含む試料を提供する段階と、
前記試料を、常磁性であり、かつ表面上にＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体およびリンパ球共刺激リガンドを含む粒子集団と接触させる段階であって、前記粒子が直径約１０〜約５００ｎｍである、前記段階と、
前記常磁性粒子に近接して磁場を配置する段階と、
前記常磁性粒子と会合した細胞を、前記常磁性粒子と会合しない細胞から分離する段階と、
前記常磁性粒子と会合した細胞を回収する段階と、
前記回収しされた細胞を１〜３週間培養下で増殖させて、抗原特異的Ｔ細胞が少なくとも１０００倍増殖している抗原特異的Ｔ細胞集団を調製する段階と
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記抗原特異的Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、または制御性Ｔ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗原特異的Ｔ細胞がＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｔ細胞が患者またはドナー由来であり、前記患者が癌患者である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記癌が固形腫瘍である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記癌が、黒色腫、結腸癌、十二指腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、腺管癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮内膜癌、精巣癌、胃癌、異形成口腔粘膜、ポリープ症、頭頸部癌、侵襲性口腔癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、移行細胞及び扁平細胞泌尿器癌、脳癌、神経芽腫、及び神経膠腫である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記癌が黒色腫である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記癌が血液学的悪性腫瘍である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記抗原特異的Ｔ細胞がＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球及び／またはＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｔ細胞が患者由来であり、前記患者が感染性疾患を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｔ細胞が制御性Ｔ細胞であり、前記患者が自己免疫疾患を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
Ｔ細胞を含む前記試料が、養子移入レシピエントとＨＬＡが適合する適切なドナー由来のものであり、前記回収された抗原特異的Ｔ細胞集団が、前記レシピエントへの養子移入に使用するためのものである、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｔ細胞を含む前記試料が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
Ｔ細胞を含む前記試料が、骨髄、リンパ節組織、脾臓組織、または腫瘍由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
Ｔ細胞を含む前記試料が、白血球取り出しによって単離される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記試料が、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、または制御性Ｔ細胞に関して濃縮されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１０６個のＣＤ８濃縮細胞が、接触させる段階、配置する段階、及び回収する段階によって、抗原特異的Ｔ細胞濃縮のために単離される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記常磁性粒子が、鉄デキストランビーズを含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗原提示複合体がＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ複合体である、請求項１〜１８
のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗原提示複合体が単量体または二量体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗原提示複合体が二量体であり、前記複合体が、ジスルフィド結合によって結合する免疫グロブリン重鎖配列とＭＨＣの融合を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫グロブリン重鎖配列がＩｇＧ配列である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＭＨＣが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、またはＨＬＡ−Ｅを含むＭＨＣクラスＩ複合体である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＭＨＣがＨＬＡ−Ａ２である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記免疫グロブリン配列が、ヒト化モノクローナル抗体配列である、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記リンパ球共刺激リガンドが、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８６（Ｂ７−２）、Ｂ７−Ｈ３、４−１ＢＢＬ、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０Ｌ）、Ｂ７ｈ（Ｂ７ＲＰ−１）、ＣＤ４０、ＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＣＤ４０Ｌに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、及び４−１ＢＢに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片から選択される１つ以上である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記共刺激リガンドが、モノクローナル抗体、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、及び一本鎖抗体からなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記モノクローナル抗体または断片がヒト化されている、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記共刺激リガンドが、ＣＤ２８に対するヒト化マウスモノクローナル抗体または完全ヒト抗体である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記共刺激リガンドがヒト化モノクローナル抗体９．３またはその抗原結合断片である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記常磁性粒子が、約２０〜約２００ｎｍ内のサイズを有する、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗原提示複合体及び前記共刺激リガンドが、前記常磁性粒子の前記表面に共有結合している、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
約３〜約１０の異なる抗原が、前記常磁性粒子集団において前記抗原提示複合体によって提示される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗原提示複合体が腫瘍関連抗原を提示する、請求項４に記載の方法。
【請求項３５】
前記回収された細胞が、抗原特異的ナイーブＴ細胞に関して濃縮されている、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗原特異的濃縮Ｔ細胞を、約１週間培養下で増殖させ、その後、任意で、第２のラウンドの濃縮及び増殖を行う、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも約５％の抗原特異的Ｔ細胞を生じる、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
少なくとも約１０％の抗原特異的Ｔ細胞、または少なくとも約１５％の抗原特異的Ｔ細胞、または少なくとも約２０％の抗原特異的Ｔ細胞、または少なくとも約２５％の抗原特異的Ｔ細胞を生じる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
少なくとも約１０６個、または少なくとも約１０７個の抗原特異的Ｔ細胞が得られる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記回収されたＴ細胞を表現型的に特徴付ける段階をさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗原提示複合体が、前記患者の腫瘍の遺伝子分析から予測されるネオ抗原を提示し、前記ネオ抗原が、パッセンジャー突然変異、ドライバー突然変異、癌遺伝子形成突然変異、及び腫瘍抑制因子破壊突然変異からなる群より選択される突然変異によって形成される、請求項４に記載の方法。
【請求項４２】
前記抗原特異的Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離する段階と、前記ｍＲＮＡまたは前記ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡに対して配列決定反応を実行する段階と、をさらに含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記常磁性粒子が検出可能に標識され、前記方法が、Ｔ細胞活性化マーカーの発現に関して、前記抗原特異的Ｔ細胞をアッセイすることをさらに含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記表現型の特徴付けが、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、Ｔｉｍ−３、Ｌａｇ−３、及びＩＣＳから選択されるマーカーに関してアッセイすることを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法によって調製された抗原特異的T細胞集団を含む、癌患者を治療するための医薬。
【請求項４６】
Ｔ細胞を含む前記試料が、養子移入レシピエントとＨＬＡが適合する適切なドナー由来のものである、請求項４５に記載の医薬。
【請求項４７】
少なくとも約１０６個、または少なくとも約１０７個の抗原特異的Ｔ細胞が、養子免疫療法として、患者レシピエントに投与されるように用いられることを特徴とする、請求項４５または４６に記載の医薬。
【請求項４８】
前記ＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体に、腫瘍関連抗原から選択される1種以上の抗原性ペプチドが負荷されている、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項４９】
前記癌が、血液学的悪性腫瘍である、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
[本発明1001]
抗原特異的Ｔ細胞集団を調製するための方法であって、
患者または適切なドナー由来のＴ細胞を含む試料を提供する段階と、
前記試料を、常磁性であり、かつ表面上にＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含む第1の粒子集団と接触させる段階であって、前記粒子が直径約10〜約500ｎｍである、前記段階と、
前記常磁性粒子に近接して磁場を配置する段階と、
前記磁気粒子と会合した抗原特異的Ｔ細胞を回収する段階と
を含む、前記方法。
[本発明1002]
前記抗原特異的Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、または制御性Ｔ細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記抗原特異的Ｔ細胞がＣＤ8＋細胞傷害性Ｔリンパ球である、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記Ｔ細胞が患者由来であり、前記患者が癌患者である、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記癌が固形腫瘍である、本発明1004の方法。
[本発明1006]
前記癌が、黒色腫、結腸癌、十二指腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、腺管癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮内膜癌、精巣癌、胃癌、異形成口腔粘膜、ポリープ症、頭頸部癌、侵襲性口腔癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、移行細胞及び扁平細胞泌尿器癌、脳癌、神経芽腫、及び神経膠腫である、本発明1004の方法。
[本発明1007]
前記癌が黒色腫である、本発明1004の方法。
[本発明1008]
前記癌が血液学的悪性腫瘍である、本発明1004の方法。
[本発明1009]
前記抗原特異的Ｔ細胞がＣＤ8＋細胞傷害性Ｔリンパ球及び／またはＣＤ4＋ヘルパーＴ細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1010]
前記Ｔ細胞が患者由来であり、前記患者が感染性疾患を有する、本発明1009の方法。
[本発明1011]
前記Ｔ細胞が制御性Ｔ細胞であり、前記患者が自己免疫疾患を有する、本発明1001の方法。
[本発明1012]
Ｔ細胞を含む前記試料が、養子移入レシピエントとＨＬＡが適合する適切なドナー由来のものであり、前記回収された抗原特異的Ｔ細胞が前記レシピエントに養子移入される、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
Ｔ細胞を含む前記試料が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料、記憶Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、以前活性化されたＴ細胞、及び腫瘍浸潤性リンパ球からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1014]
Ｔ細胞を含む前記試料が、骨髄、リンパ節組織、脾臓組織、または腫瘍由来である、本発明1001の方法。
[本発明1015]
Ｔ細胞を含む前記試料が、白血球取り出しによって単離される、本発明1001の方法。
[本発明1016]
前記試料が、ＣＤ8＋細胞、ＣＤ4＋細胞、または制御性Ｔ細胞に関して濃縮されている、本発明1001のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記試料が、ＣＤ8＋抗原特異的Ｔ細胞に関して、前記細胞を磁場に置くことによって濃縮される、本発明1016の方法。
[本発明1018]
少なくとも106個のＣＤ8濃縮細胞が、接触させる段階、配置する段階、及び回収する段階によって、抗原特異的Ｔ細胞濃縮のために単離される、本発明1016の方法。
[本発明1019]
表面上にＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含む前記常磁性粒子が、鉄デキストランビーズを含む、本発明1001〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
表面上にＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含む前記常磁性粒子が、リンパ球共刺激リガンドをさらに含む、本発明1001〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記抗原提示複合体がＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ複合体である、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
前記抗原提示複合体が単量体または二量体である、本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記抗原提示複合体が二量体であり、前記複合体が、ジスルフィド結合によって結合する免疫グロブリン重鎖配列とＭＨＣの融合を含む、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記免疫グロブリン配列がＩｇＧ配列である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記ＭＨＣが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、またはＨＬＡ−Ｅを含むＭＨＣクラスＩ複合体である、本発明1021〜1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
前記ＭＨＣがＨＬＡ−Ａ2である、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記免疫グロブリン配列が、ヒト化モノクローナル抗体配列である、本発明1023〜1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
前記リンパ球共刺激リガンドが、ＣＤ28、ＣＤ80（Ｂ7−1）、ＣＤ86（Ｂ7−2）、Ｂ7−Ｈ3、4−1ＢＢＬ、4−1ＢＢ、ＣＤ27、ＣＤ30、ＣＤ134（ＯＸ−40Ｌ）、Ｂ7ｈ（Ｂ7ＲＰ−1）、ＣＤ40、ＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＣＤ40Ｌに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＯＸ40に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、及び4−1ＢＢに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片からなる群より選択される1つ以上である、本発明1020の方法。
[本発明1029]
前記共刺激リガンドが、モノクローナル抗体、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、及び一本鎖抗体からなる群より選択される、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記モノクローナル抗体または断片がヒト化されている、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記共刺激リガンドが、ＣＤ28に対するヒト化マウスモノクローナル抗体または完全ヒト抗体である、本発明1020〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
前記共刺激リガンドがヒト化モノクローナル抗体9．3またはその抗原結合断片である、本発明1031の方法。
[本発明1033]
前記磁気粒子が、約20〜約200ｎｍ内のサイズを有する、本発明1001〜1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記抗原提示複合体及び前記共刺激リガンドが、前記常磁性粒子の前記表面に共有結合している、本発明1020〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
前記粒子が実質的に球状である、本発明1001〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
前記粒子が非球状である、本発明1001〜1034のいずれかの方法。
[本発明1037]
約3〜約10の異なる抗原が、前記常磁性粒子集団において前記抗原提示複合体によって提示される、本発明1001〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
前記抗原提示複合体が腫瘍関連抗原を提示する、本発明1004の方法。
[本発明1039]
前記回収された抗原特異的Ｔ細胞が、抗原特異的ナイーブＴ細胞に関して濃縮されている、本発明1001〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記回収された抗原特異的Ｔ細胞を、約2日間〜約9週間培養下で増殖させる、本発明1020〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
前記細胞を、磁場の存在下で培養下で増殖させる、本発明1040の方法。
[本発明1042]
前記抗原特異的Ｔ細胞を、約5日間〜約2週間、または約5日間〜約10日間、培養下で増殖させる、本発明1040の方法。
[本発明1043]
前記抗原特異的濃縮Ｔ細胞を、約1週間培養下で増殖させ、その後、任意で、第2のラウンドの濃縮及び増殖を行う、本発明1042の方法。
[本発明1044]
2、3、4、または5ラウンドの濃縮及び増殖を行う、本発明1040〜1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
少なくとも約5％の抗原特異的Ｔ細胞を生じる、本発明1001または1044の方法。
[本発明1046]
少なくとも約10％の抗原特異的Ｔ細胞、または少なくとも約15％の抗原特異的Ｔ細胞、または少なくとも約20％の抗原特異的Ｔ細胞、または少なくとも約25％の抗原特異的Ｔ細胞を生じる、本発明1045の方法。
[本発明1047]
少なくとも約106個、または少なくとも約107個の抗原特異的Ｔ細胞が得られる、本発明1046の方法。
[本発明1048]
前記少なくとも約106個、または少なくとも約107個の抗原特異的Ｔ細胞が、養子免疫療法として、患者レシピエントに投与される、本発明1047の方法。
[本発明1049]
Ｔ細胞抗原またはＴ細胞レパートリーの成分を同定するための方法であって、
対象由来のＴ細胞を含む試料を提供する段階と、
各々、その表面上にＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含む常磁性粒子のライブラリーに対して、単離されたＴ細胞をスクリーニングする段階であって、前記粒子が直径約10〜約500ｎｍであり、各粒子が候補ペプチド抗原を提示する、前記段階と、
前記対象のＴ細胞の活性化を引き起こす、1つ以上のペプチド抗原を同定する段階と
を含む、前記方法。
[本発明1050]
前記対象が癌患者である、本発明1049の方法。
[本発明1051]
前記候補ペプチドが、前記患者の癌の遺伝子分析から予測されるペプチド抗原を含む、本発明1050の方法。
[本発明1052]
前記スクリーニングする段階が、前記対象のＴ細胞及び前記常磁性粒子のライブラリーを、磁場の存在下でインキュベーションすることを含む、本発明1049〜1051のいずれかの方法。
[本発明1053]
前記対象のＴ細胞の活性化が、任意で免疫化学若しくはＲＴ−ＰＣＲによって測定されるサイトカイン発現によって同定されるか、または前記対象のＴ細胞の活性化が、Ｔ細胞活性化を示す細胞内シグナル伝達を測定することによって同定される、本発明1049〜1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
選択されたペプチド抗原が人工的抗原提示細胞上に負荷され、前記患者に投与される、本発明1052または1053の方法。
[本発明1055]
前記同定された抗原を認識するＴ細胞をエクスビボで濃縮しかつ増殖させて、前記対象に投与する、本発明1049〜1054のいずれかの方法。
[本発明1056]
前記対象が免疫疾患を有することが疑われ、前記常磁性粒子が、自己免疫疾患及び／または免疫疾患を示す候補ペプチドのライブラリーを提示する、本発明1049の方法。
[本発明1057]
前記対象が感染性疾患を有することが疑われ、前記常磁性粒子が、感染性疾患を示す候補ペプチドのライブラリーを提示する、本発明1049の方法。
[本発明1058]
前記同定された抗原を認識するＴ細胞が、
患者または適切なドナー由来のＴ細胞を含む試料を提供するプロセスと、
密度勾配遠心分離またはフローサイトメトリーによって、抗原特異的Ｔ細胞を回収するプロセスと、によって濃縮される、本発明1055の方法。
[本発明1059]
前記回収されたＴ細胞を表現型的に特徴付ける段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1060]
前記回収されたＴ細胞を培養下で増殖させる段階をさらに含む、本発明1020の方法。
[本発明1061]
前記回収されたＴ細胞を前記磁気粒子から単離する段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1062]
前記単離されたＴ細胞を、疾患の治療のために、前記疾患を有するレシピエントに注射する段階をさらに含む、本発明1001または1061の方法。
[本発明1063]
前記回収されたＴ細胞をエクスビボで培養する、本発明1001の方法。
[本発明1064]
前記回収されたＴ細胞が、前記試料中に10−6個未満のＴ細胞を含む、本発明1001の方法。
[本発明1065]
前記試料が、養子移入レシピエントに対してＨＬＡ不適合である適切なドナー由来のＴ細胞を含み、前記回収された抗原特異的Ｔ細胞が前記レシピエントに養子移入される、本発明1048の方法。
[本発明1066]
前記抗原提示複合体及び前記共刺激リガンドが、抗体によって前記常磁性粒子の表面に結合される、本発明1020〜1033のいずれかの方法。
[本発明1067]
前記抗原提示複合体が、前記患者の腫瘍の遺伝子分析から予測されるネオ抗原を提示し、前記ネオ抗原が、パッセンジャー突然変異、ドライバー突然変異、癌遺伝子形成突然変異、及び腫瘍抑制因子破壊突然変異からなる群より選択される突然変異によって形成される、本発明1004の方法。
[本発明1068]
前記抗原提示複合体が、前記患者の腫瘍の遺伝子分析から予測される抗原を提示する、本発明1004の方法。
[本発明1069]
前記抗原を前記患者にワクチン接種する段階をさらに含む、本発明1068の方法。
[本発明1070]
前記抗原で前記患者のＴ細胞を刺激する段階をさらに含む、本発明1068の方法。
[本発明1071]
前記抗原特異的Ｔ細胞が1つ以上の活性化マーカーを発現する、本発明1020の方法。
[本発明1072]
前記常磁性粒子が、その表面上に、少なくとも5つのＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含む、本発明1020の方法。
[本発明1073]
前記常磁性粒子が、その表面上に、少なくとも10のＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含む、本発明1020の方法。
[本発明1074]
前記常磁性粒子が、その表面上に、少なくとも5つのリンパ球共刺激リガンド分子を含む、本発明1020の方法。
[本発明1075]
前記常磁性粒子が、その表面上に、少なくとも10のリンパ球共刺激リガンド分子を含む、本発明1020の方法。
[本発明1076]
前記常磁性粒子が、その表面上に、ＭＨＣ−ペプチド抗原提示複合体を含み、前記試料を、リンパ球共刺激リガンドを含む第2の粒子とさらに接触させる、本発明1001〜1048のいずれかの方法。
[本発明1077]
前記疾患が慢性感染性疾患である、本発明1062の方法。
[本発明1078]
前記接触させる段階が、前記集団の限界希釈を使用する、本発明1067の方法。
[本発明1079]
前記抗原特異的Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離する段階と、前記ｍＲＮＡまたは前記ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡに対して配列決定反応を実行する段階と、をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1080]
前記常磁性粒子が検出可能に標識され、前記方法が、Ｔ細胞活性化マーカーの発現に関して、前記抗原特異的Ｔ細胞をアッセイすることをさらに含む、本発明1071の方法。
[本発明1081]
前記抗原提示複合体及び前記共刺激リガンドが、ビオチン−アビジンまたはビオチン−ストレプトアビジン結合対によって、前記常磁性粒子の表面に結合される、本発明1020〜1033のいずれかの方法。
[本発明1082]
前記表現型の特徴付けが、ＣＤ62Ｌ、ＣＤ45ＲＡ、ＰＤ−1、ＣＴＬＡ−4、Ｔｉｍ−3、Ｌａｇ−3、及びＩＣＳからなる群より選択されるマーカーに関してアッセイすることを含む、本発明1059の方法。
[本発明1083]
前記スクリーニングする段階の前に、抗原に特異的である前記試料中のＴ細胞に関して濃縮する段階をさらに含む、本発明1049の方法。
本発明のさらなる態様及び実施形態は、以下の詳細な説明に基づいて、当業者に明らかであろう。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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