【手続補正書】
【提出日】平成30年10月9日(2018.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する二特異性抗体であって、
ａ）ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する第１の抗体の第１の軽鎖および第１の重鎖と；
ｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖および第２の重鎖であって、前記第２の抗体の前記第２の軽鎖および第２の重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられている、第２の軽鎖および第２の重鎖とを含み；
ａ）の前記第１の軽鎖の定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、ａ）の前記第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする二特異性抗体。
【請求項２】
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する二特異性抗体であって、
ａ）ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する第１の抗体の第１の軽鎖および第１の重鎖と；
ｂ）ヒトＣＤ３εに特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖および第２の重鎖であって、前記第２の抗体の前記第２の軽鎖および第２の重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられている、第２の軽鎖および第２の重鎖とを含み；
ｂ）の前記第２の軽鎖の定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、ｂ）の前記第２の重鎖の定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする二特異性抗体。
【請求項３】
前記第１の抗体のＦａｂ断片（さらにまた、「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」とも称する）を含み、前記ＲＯＲ１−Ｆａｂの定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、前記ＲＯＲ１−Ｆａｂの定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
、任意選択で、前記二特異性抗体が、さらに、前記第１の抗体の第２のＦａｂ断片（「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」）を含むことを特徴とする、請求項１に記載の二特異性抗体。
【請求項４】
ヒトＣＤ３εに特異的に結合する抗体部分、好ましくは、前記Ｆａｂ断片が、
（ａ）配列番号２３、２４および２５の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨを含み、前記可変ドメインＶＬが、配列番号２６、２７および２８の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬにより置きかえられており、任意選択で、前記可変ドメインが、配列番号２１および２２に示される配列を有するか；または
（ｂ）配列番号１２、１３および１４の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨと、配列番号１５、１６および１７の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬとを含み、任意選択で、前記可変ドメインが、配列番号１０および１１に示される配列を有する、
ことを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項５】
前記定常ドメインＣＬ内の１２４位における前記アミノ酸の置きかえに加えて、１２３位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されていることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項６】
アミノ酸１２４がＫであり、アミノ酸１４７がＥであり、アミノ酸２１３がＥであり、およびアミノ酸１２３がカッパ軽鎖についてはＲであり、ラムダ軽鎖についてはＫであることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項７】
一方の重鎖のＣＨ３ドメインおよび他方の重鎖のＣＨ３ドメインの各々が、抗体のＣＨ３ドメインの間の、元の界面を含む界面において向かい合い、前記界面が、前記二特異性抗体の形成を促進するように変更されていることを特徴とし、前記変更が、
ａ）前記二特異性抗体内の前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記元の界面と向かい合う、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記元の界面内で、アミノ酸残基が、より大きい側鎖体積を有するアミノ酸残基で置きかえられ、これにより、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記界面内に、前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記界面内の空洞にはまる突起が作出されるように、一方の重鎖のＣＨ３ドメインが変更されていることと、
ｂ）前記二特異性抗体内の前記第１のＣＨ３ドメインの前記元の界面と向かい合う、前記第２のＣＨ３ドメインの前記元の界面内で、アミノ酸残基が、より小さい側鎖体積を有するアミノ酸残基で置きかえられ、これにより、前記第２のＣＨ３ドメインの前記界面内に、前記第１のＣＨ３ドメインの前記界面内の突起がはまる空洞が作出されるように、前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインが変更されていることと
を特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項８】
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンもしくはアルギニンによるアミノ酸置換、ならびに／またはＬｅｕ２３４のアラニンによる置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによる置換を含むことを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項９】
構築物ＲＯＲ１  Ｆａｂ−Ｆｃ−ＣＤ３  Ｆａｂ−ＲＯＲ１  Ｆａｂであり、前記抗ＣＤ３ε抗体のＦａｂ断片内にＶＬ／ＶＨクロスオーバーを含むこと、ならびに、前記ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンによるアミノ酸置換、Ｌｅｕ２３４のアラニンによるアミノ酸置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによるアミノ酸置換を含むこと、
任意選択で、両方のＲＯＲ１  Ｆａｂの定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸がリシン（Ｋ）により置換されており、１２３位におけるアミノ酸がカッパ軽鎖についてはアルギニン（Ｒ）により置換されており、ラムダ軽鎖についてはリシン（Ｋ）により置換されており、前記定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されていることを特徴とする、請求項８に記載の二特異性抗体。
【請求項１０】
前記二特異性抗体が、細胞ベースのアッセイにおいて、ＲＯＲ１陽性初代Ｂ−ＣＬＬ細胞を使用し、１ｎＭの抗体濃度で使用した場合、３７℃で２時間の間に内部化しないことを特徴とし、内部化しないとは、０時間において測定される、フローサイトメトリーにより検出される前記二特異性抗体のＲＯＲ１陽性初代Ｂ−ＣＬＬ細胞への結合の際における平均蛍光強度（ＭＦＩ）が、３７℃で２時間のインキュベーション後の再測定のときに、５０％を超えて低減しないか、好ましくは３０％を超えて低減しないことを意味する、請求項１から９のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の二特異性抗体を調製するための方法であって、
ａ）宿主細胞を、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
ｂ）前記宿主細胞を、前記抗体分子の合成を可能とする条件下で培養するステップと、
ｃ）前記抗体分子を、前記培養物から回収するステップと
を含む方法。
【請求項１２】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の二特異性抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の二特異性抗体および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１４】
医薬としての使用のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の二特異性抗体を含む組成物、または請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＲＯＲ１陽性血液悪性腫瘍、ＲＯＲ１陽性固形腫瘍または形質細胞障害の処置における医薬としての使用のための請求項１４に記載の組成物または医薬組成物であって、前記ＲＯＲ１陽性血液悪性腫瘍が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞系系統の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（Ｂ−ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、および腫瘍細胞の表面上にＲＯＲ１を有する他の血液悪性腫瘍からなる群から選択され、前記ＲＯＲ１陽性固形腫瘍が、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がんおよび膵がんからなる群から選択され、任意選択で、前記形質細胞障害が、多発性骨髄腫またはＲＯＲ１を発現する他のＢ細胞障害から選択される、請求項１４に記載の組成物または医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
二特異性抗体の安定性は、実際的な条件および臨床適用の影響を受ける可能性がある。近年における抗体操作の改善にも拘らず、一部の組換えタンパク質および分子フォーマット（例えば、ｓｃＦＶ断片）は、ストレス条件下で、他の組換えタンパク質および分子フォーマットより容易に変性し、凝集物を形成する傾向がある（WornおよびPluckthun.  J  Mol  Biol  ２００１年：３０５巻、９８９〜１０１０頁）。本発明に従う抗体は、標準的な製剤緩衝液中、３７℃で、好ましくは、４０℃で、１０日間、好ましくは、最長２週間、好ましくは、最長４週間、保存された前記抗体が、高分子量（ＨＭＷ）分子種および／または低分子量（ＬＭＷ）分子種および／または単量体含量の、同じ製剤緩衝液中、−８０℃で同じ保存期間保存された前記抗体と比較して、１０％を超える変化（Δ）、好ましくは、５％を超える変化（Δ）を結果としてもたらさないことを特徴とすることが好ましい。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する、二価または三価の二特異性抗体であって、軽鎖およびそれぞれの重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられており、定常ドメインＣＬを含むことを特徴とし、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、それぞれの定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）二特異性抗体。
（項目２）
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する二特異性抗体であって、
ａ）ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する第１の抗体の第１の軽鎖および第１の重鎖と；
ｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖および第２の重鎖であって、前記第２の抗体の前記第２の軽鎖および第２の重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられている、第２の軽鎖および第２の重鎖とを含み；
ｃ）ａ）前記第１の軽鎖の定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、ａ）前記第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする二特異性抗体。
（項目３）
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する二特異性抗体であって、
ａ）ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する第１の抗体の第１の軽鎖および第１の重鎖と；
ｂ）ヒトＣＤ３εに特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖および第２の重鎖であって、前記第２の抗体の前記第２の軽鎖および第２の重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられている、第２の軽鎖および第２の重鎖とを含み；
ｃ）ｂ）下にある前記第２の軽鎖の定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、ｂ）下にある前記第２の重鎖の定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする二特異性抗体。
（項目４）
さらに、前記第１の抗体のＦａｂ断片（さらにまた、「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」とも称する）も含み、前記ＲＯＲ１−Ｆａｂの定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、前記ＲＯＲ１−Ｆａｂの定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする、項目２に記載の二特異性抗体。
（項目５）
さらに、前記第１の抗体の第２のＦａｂ断片（「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」）を含むことを特徴とする、項目３に記載の二特異性抗体。
（項目６）
ヒトＣＤ３εに特異的に結合する抗体の１つのＦａｂ断片（さらにまた、「ＣＤ３−Ｆａｂ」とも称する）と、ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体の１つのＦａｂ断片（さらにまた、「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」とも称する）と、Ｆｃパートとからなり、前記ＣＤ３−Ｆａｂおよび前記ＲＯＲ１−Ｆａｂが、それらのＣ末端を介して、前記Ｆｃパートのヒンジ領域へと連結されており、前記ＣＤ３−Ｆａｂまたは前記ＲＯＲ１−Ｆａｂのいずれかが、アミノ酸置換を含み、前記ＣＤ３−Ｆａｂが、クロスオーバーを含むことを特徴とする、項目１のいずれかに記載の二特異性抗体。
（項目７）
前記ＣＤ３−Ｆａｂおよび前記ＲＯＲ１−Ｆａｂが、それらのＣ末端を介して、前記Ｆｃパートのヒンジ領域へと連結されている、１つのＣＤ３−Ｆａｂと、１つのＲＯＲ１−Ｆａｂと、Ｆｃパートと、そのＣ末端により前記ＣＤ３−ＦａｂのＮ末端へと連結された第２のＲＯＲ１−Ｆａｂとからなり、前記ＣＤ３−Ｆａｂが、クロスオーバーを含み、前記ＣＤ３−Ｆａｂまたは両方のＲＯＲ１−Ｆａｂのいずれかが、アミノ酸置換を含むことを特徴とする、項目６に記載の二特異性抗体。
（項目８）
ＲＯＲ１−Ｆａｂ−Ｆｃ−ＣＤ３−Ｆａｂ−ＲＯＲ１−Ｆａｂからなり、両方のＲＯＲ１−Ｆａｂが、アミノ酸置換を含み、前記ＣＤ３−Ｆａｂが、ＶＬ／ＶＨクロスオーバーを含むことを特徴とする、項目７に記載の二特異性抗体。
（項目９）
それらのＣ末端を介して、前記Ｆｃパートのヒンジ領域へと連結されている２つのＲＯＲ１−Ｆａｂと、Ｆｃパートと、そのＣ末端により１つのＲＯＲ１−ＦａｂのＮ末端へと連結されているＣＤ３−Ｆａｂとからなり、前記ＣＤ３−Ｆａｂが、クロスオーバーを含み、前記ＣＤ３−Ｆａｂまたは両方のＲＯＲ１−Ｆａｂのいずれかが、アミノ酸置換を含むことを特徴とする、項目１に記載の二特異性抗体。
（項目１０）
そのＣ末端を介して、前記Ｆｃパートのヒンジ領域へと連結された、１つのＣＤ３−Ｆａｂと、そのＣ末端により、前記ＣＤ３−ＦａｂのＮ末端へと連結されたＲＯＲ１−Ｆａｂとからなり、前記ＣＤ３−Ｆａｂまたは前記ＲＯＲ１−Ｆａｂのいずれかが、アミノ酸置換を含むことを特徴とする、項目１から５のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１１）
そのＣ末端を介して、前記Ｆｃパートのヒンジ領域へと連結された、１つのＲＯＲ１−Ｆａｂと、そのＣ末端により、前記ＲＯＲ１−ＦａｂのＮ末端へと連結されたＣＤ３−Ｆａｂとからなり、前記ＣＤ３−Ｆａｂまたは前記ＲＯＲ１−Ｆａｂのいずれかが、アミノ酸置換を含むことを特徴とする、項目１から６のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１２）
抗ＲＯＲ１抗体ＭＡＢ１のＣＤＲ配列を含むことを特徴とする、項目１から１１のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１３）
抗ＲＯＲ１抗体ＭＡＢ１のＶＨおよびＶＬ配列を含むか、または抗ＲＯＲ１抗体ＭＡＢ１のＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、およびＣＬ配列を含む抗体であることを特徴とする、項目１から１２のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１４）
ヒトＣＤ３εに特異的に結合する抗体部分、好ましくは、前記Ｆａｂ断片が、
ａ）配列番号１２、１３および１４の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体（ＣＤＲ  ＭＡＢ  ＣＤ３  Ｈ２Ｃ）の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨと、配列番号１５、１６および１７の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体（ＣＤＲ  ＭＡＢ  ＣＤ３  Ｈ２Ｃ）の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬとを含むか、または、
ｂ）配列番号２３、２４および２５の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨを含み、前記可変ドメインＶＬが、配列番号２６、２７および２８の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体（ＣＤＲ  ＭＡＢ  ＣＤ３  ＣＨ２５２７）の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬにより置きかえられていることを特徴とすることを特徴とする、項目１から１３のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１５）
ヒトＣＤ３εに特異的に結合する前記抗体部分が、
ａ）前記可変ドメインが、配列番号１０および１１（ＶＨＶＬ  ＭＡＢ  ＣＤ３  Ｈ２Ｃ）の可変ドメインであるか、または、
ｂ）前記可変ドメインが、配列番号２１および２２（ＶＨＶＬ  ＭＡＢ  ＣＤ３  ＣＨ２５２７）の可変ドメインであることを特徴とすることを特徴とする、項目１から１４のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１６）
ヒトＲＯＲ１に特異的に結合する前記Ｆａｂ断片が、重鎖ＣＤＲ、配列番号７のＣＤＲ１Ｈ、配列番号８のＣＤＲ２Ｈ、配列番号９のＣＤＲ３Ｈを含む可変ドメインＶＨを含むことと、軽鎖ＣＤＲ、配列番号３のＣＤＲ１Ｌ、配列番号４のＣＤＲ２Ｌ、配列番号５のＣＤＲ３Ｌを含む可変ドメインＶＬを含むこととを特徴とする（ＣＤＲ  ＭＡＢ１）ことを特徴とする、項目１から１５のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１７）
ヒトＲＯＲ１に特異的に結合する前記Ｆａｂ断片が、配列番号１０のＶＨと配列番号１１のＶＬとを含むことを特徴とする（ＶＨＶＬ  ＭＡＢ１）ことを特徴とする、項目１から１６のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１８）
前記定常ドメインＣＬ内の１２４位における前記アミノ酸の置きかえに加えて、１２３位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されていることを特徴とする、項目１から１７のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目１９）
アミノ酸１２４がＫであり、アミノ酸１４７がＥであり、アミノ酸２１３がＥであり、およびアミノ酸１２３がカッパ軽鎖についてはＲであり、ラムダ軽鎖についてはＫであることを特徴とする、項目１から１８のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
（項目２０）
ヒトＣＤ３ε、およびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する二特異性抗体であって、ポリペプチド、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、および配列番号４０からなる群、または、ポリペプチド、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、および配列番号４１からなる群から選択される、重鎖および軽鎖のセットを含むことを特徴とする二特異性抗体。
（項目２１）
ヒトＣＤ３εに特異的に結合する前記抗体部分内で、
ａ）配列番号１２、１３および１４の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨにより、前記可変ドメインＶＨが置きかえられ、配列番号１５、１６および１７の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬにより、前記可変ドメインＶＬが置きかえられること、または、
ｂ）配列番号２３、２４および２５の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨにより、前記可変ドメインＶＨが置きかえられ、配列番号２６、２７および２８の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬにより、前記可変ドメインＶＬが置きかえられることを特徴とする、項目２０に記載の抗体。
（項目２２）
一方の重鎖のＣＨ３ドメインおよび他方の重鎖のＣＨ３ドメインの各々が、抗体のＣＨ３ドメインの間の、元の界面を含む界面において向かい合い、前記界面が、前記二特異性抗体の形成を促進するように変更されていることを特徴とし、前記変更が、
ａ）前記二特異性抗体内の前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記元の界面と向かい合う、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記元の界面内で、アミノ酸残基が、より大きい側鎖体積を有するアミノ酸残基で置きかえられ、これにより、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記界面内に、前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記界面内の空洞にはまる突起が作出されるように、一方の重鎖のＣＨ３ドメインが変更されていることと、
ｂ）前記二特異性抗体内の前記第１のＣＨ３ドメインの前記元の界面と向かい合う、前記第２のＣＨ３ドメインの前記元の界面内で、アミノ酸残基が、より小さい側鎖体積を有するアミノ酸残基で置きかえられ、これにより、前記第２のＣＨ３ドメインの前記界面内に、前記第１のＣＨ３ドメインの前記界面内の突起がはまる空洞が作出されるように、前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインが変更されていることと
を特徴とする、項目１から２１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２３）
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンもしくはアルギニンによるアミノ酸置換、ならびに／またはＬｅｕ２３４のアラニンによる置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによる置換を含むことを特徴とする、項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２４）
構築物ＲＯＲ１  Ｆａｂ−Ｆｃ−ＣＤ３  Ｆａｂ−ＲＯＲ１  Ｆａｂであり、前記抗ＣＤ３ε抗体のＦａｂ断片内にＶＬ／ＶＨクロスオーバーを含むこと、ならびに、前記ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンによるアミノ酸置換、Ｌｅｕ２３４のアラニンによるアミノ酸置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによるアミノ酸置換を含むことを特徴とする、項目２３に記載の抗体。
（項目２５）
ａ）構築物ＲＯＲ１  Ｆａｂ−Ｆｃ−ＣＤ３  Ｆａｂ−ＲＯＲ１  Ｆａｂの抗体であること、
ｂ）前記抗ＣＤ３ε抗体のＦａｂ断片内にＶＬ／ＶＨクロスオーバーを含むこと、
ｃ）ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパートを含むこと、
ｄ）前記Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンによる置換およびＬｅｕ２３４のアラニンによる置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによる置換を含むこと、ならびに、
ｅ）両方のＲＯＲ１  Ｆａｂの定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸がリシン（Ｋ）により置換されており、１２３位におけるアミノ酸がカッパ軽鎖についてはアルギニン（Ｒ）により置換されており、ラムダ軽鎖についてはリシン（Ｋ）により置換されており、前記定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されていることを特徴とする、項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２６）
初代Ｂ−ＣＬＬ細胞において、１ｎＭの濃度で、３７℃で２時間の間に内部化しないことを特徴とする、項目１から２５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２７）
前記二特異性抗体が、細胞ベースのアッセイにおいて、ＲＯＲ１陽性初代Ｂ−ＣＬＬ細胞を使用し、１ｎＭの抗体濃度で使用した場合、３７℃で２時間の間に内部化しないことを特徴とし、内部化しないとは、０時間において測定される、フローサイトメトリーにより検出される前記二特異性抗体のＲＯＲ１陽性初代Ｂ−ＣＬＬ細胞への結合の際における平均蛍光強度（ＭＦＩ）が、３７℃で２時間のインキュベーション後の再測定のときに、５０％を超えて低減しないか、好ましくは３０％を超えて低減しないことを意味する、項目１から２６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２８）
項目１から２７のいずれか一項に記載の二特異性抗体を調製するための方法であって、
ａ）宿主細胞を、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
ｂ）前記宿主細胞を、前記抗体分子の合成を可能とする条件下で培養するステップと、
ｃ）前記抗体分子を、前記培養物から回収するステップと
を含む方法。
（項目２９）
項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞。
（項目３０）
項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
（項目３１）
医薬としての使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体、または項目３０に記載の医薬組成物。
（項目３２）
慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、および潜在的に、腫瘍細胞の表面上にＲＯＲ１を有する他の血液悪性腫瘍を含むＲＯＲ１陽性血液悪性腫瘍の処置における医薬としての使用のため、ならびに乳がんおよび肺がんなどのＲＯＲ１陽性固形腫瘍の処置のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体、または項目３０に記載の医薬組成物。
（項目３３）
多発性骨髄腫の処置における医薬としての使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体、または項目３０に記載の医薬組成物。
（項目３４）
Ｂ細胞系系統の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（Ｂ−ＣＬＬ）の処置のため、および多発性骨髄腫ＭＭのような形質細胞障害、またはＲＯＲ１を発現する他のＢ細胞障害の処置における医薬としての使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体、または項目３０に記載の医薬組成物。
（項目３５）
卵巣がん、肺がん、乳がん、胃がん、および膵がんからなる群から選択される疾患の処置における医薬としての使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体、または項目３０に記載の医薬組成物。
（項目３６）
卵巣がんの処置における医薬としての使用のための、項目１から２７のいずれか一項に記載の抗体、または項目３０に記載の医薬組成物。