【手続補正書】
【提出日】平成30年8月10日(2018.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（CAR）をコードする単離された核酸分子またはキメラ抗原受容体（CAR）ポリペプチドであって、該CARが抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、該抗原結合ドメインがグリコシル-ホスファチジルイノシトール（GPI）結合型GDNFファミリーα-受容体4（GFRα4）細胞表面受容体、好ましくはGFRα4aもしくはGFRα4b、またはGFRα4aおよびGFRα4bと結合する、前記単離された核酸分子またはキメラ抗原受容体（CAR）ポリペプチド。
【請求項２】
抗原結合ドメインが抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、該抗体または抗原結合フラグメントは好ましくはヒト抗体またはヒト化抗体またはそれらのフラグメントから選択され、および該抗原結合フラグメントが好ましくはFab、単鎖可変フラグメント（scFv）または単一ドメイン抗体から選択される、請求項1記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項３】
抗原結合ドメインが、表2に列記されたいずれかの重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域1（HC CDR1）、重鎖相補性決定領域2（HC CDR2）、および重鎖相補性決定領域3（HC CDR3）を含み、および／または、該抗原結合ドメインが表2に列記されたいずれかの軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域1（LC CDR1）、軽鎖相補性決定領域2（LC CDR2）および軽鎖相補性決定領域3（LC CDR3）をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項４】
CARが、
（i）表2に列記されたいずれかの軽鎖可変領域のアミノ酸配列；または
（ii）表2に提示された軽鎖可変領域のいずれかのアミノ酸配列の少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが20個もしくは10個を上回らない改変を有するアミノ酸配列；または
（iii）表2に提示された軽鎖可変領域のいずれかのアミノ酸配列に対して95〜99％の同一性を有するアミノ酸配列、および／または
（iv）表2に列記されたいずれかの重鎖可変領域のアミノ酸配列；または
（v）表2に提示された重鎖可変領域のいずれかのアミノ酸配列の少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが20個もしくは10個を上回らない改変を有するアミノ酸配列；または
（vi）表2に提示された重鎖可変領域のいずれかのアミノ酸配列に対して95〜99％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項５】
抗原結合ドメインが、
（i）SEQ ID NO：59もしくはSEQ ID NO：79から選択されるアミノ酸配列；または
（ii）SEQ ID NO：59もしくはSEQ ID NO：79に対して少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが30個、20個もしくは10個を上回らない改変を有するアミノ酸配列；または
（iii）SEQ ID NO：59もしくはSEQ ID NO：79に対して95〜99％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（iv）SEQ ID NO：56、57、76もしくは77から選択されるヌクレオチド配列、またはそれらに対して95〜99％の同一性を有する配列によってコードされるアミノ酸配列
を含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項６】
CARが、T細胞受容体のα鎖、β鎖またはζ鎖、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137およびCD154からなる群より選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含み、
膜貫通ドメインが、好ましくは
（i）SEQ ID NO：6のアミノ酸配列、またはSEQ ID NO：6のアミノ酸配列の少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが5個を上回らない改変を含むアミノ酸配列、またはSEQ ID NO：6のアミノ酸配列に対して95〜99％の同一性を有する配列；または
（ii）SEQ ID NO：17のヌクレオチド配列、またはそれに対して95〜99％の同一性を有する配列によってコードされるアミノ酸配列
を含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項７】
抗原結合ドメインがヒンジ領域によって膜貫通ドメインと接続されており、該ヒンジ領域が、好ましくは
（i）SEQ ID NO：2のアミノ酸配列、もしくはそれに対して95〜99％の同一性を有する配列；または
（ii）SEQ ID NO：13のヌクレオチド配列、もしくはそれに対して95〜99％の同一性を有する配列によってコードされるアミノ酸配列
を含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項８】
細胞内シグナル伝達ドメインが、MHCクラスI分子、TNF受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達性リンパ球活性化分子（SLAMタンパク質）、活性化NK細胞受容体、BTLA、Tollリガンド受容体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1（CD11a／CD18）、4-1BB（CD137）、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS（CD278）、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM（LIGHTR）、KIRDS2、SLAMF7、NKp80（KLRF1）、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE／RANKL、DNAM1（CD226）、SLAMF4（CD244、2B4）、CD84、CD96（Tactile）、CEACAM1、CRTAM、Ly9（CD229）、CD160（BY55）、PSGL1、CD100（SEMA4D）、CD69、SLAMF6（NTB-A、Ly108）、SLAM（SLAMF1、CD150、IPO-3）、BLAME（SLAMF8）、SELPLG（CD162）、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG／Cbp、CD19a、およびCD83と特異的に結合するリガンドからなる群より選択されるタンパク質由来の機能的シグナル伝達ドメインを含み；
該細胞内シグナル伝達ドメインが、好ましくは
（i）SEQ ID NO：7のアミノ酸配列、またはSEQ ID NO：7のアミノ酸配列の少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが10個もしくは5個を上回らない改変を有するアミノ酸配列、またはSEQ ID NO：7のアミノ酸配列に対して95〜99％の同一性を有するアミノ酸配列、または
（ii）SEQ ID NO：18のヌクレオチド配列、またはそれに対して95〜99％の同一性を有する配列によってコードされるアミノ酸配列
を含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項９】
細胞内シグナル伝達ドメインが、4-1BBの機能的シグナル伝達ドメインおよび／またはCD3ζの機能的シグナル伝達ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項１０】
細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO：7のアミノ酸配列および／またはSEQ ID NO：9もしくはSEQ ID NO：10の配列；またはSEQ ID NO：7のアミノ酸配列および／またはSEQ ID NO：9もしくはSEQ ID NO：10のアミノ酸配列の少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが10個もしくは5個を上回らない改変を有するアミノ酸配列；またはSEQ ID NO：7のアミノ酸配列および／またはSEQ ID NO：9もしくはSEQ ID NO：10のアミノ酸配列に対して95〜99％の同一性を有する配列を含む、
好ましくは該細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO：7のアミノ酸配列およびSEQ ID NO：9またはSEQ ID NO：10のアミノ酸配列を含み、該細胞内シグナル伝達ドメインを含むアミノ酸配列が単一のポリペプチド鎖として発現される、および／または
該細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列が、SEQ ID NO：18のヌクレオチド配列、もしくはそれに対して95〜99％の同一性を有する配列、および／またはSEQ ID NO：20もしくはSEQ ID NO：21のヌクレオチド配列、もしくはそれらに対して95〜99％の同一性を有する配列を含む、
前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項１１】
SEQ ID NO：1のアミノ酸配列をコードするまたはそれを含むリーダー配列をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項１２】
CARが
（i）SEQ ID NO：85、86、90、92、94、96、98、100、102もしくは104のいずれかのアミノ酸配列；
（ii）SEQ ID NO：85、86、90、92、94、96、98、100、102もしくは104のいずれかに対して少なくとも1個、2個もしくは3個の改変であるが30個、20個もしくは10個を上回らない改変を有するアミノ酸配列；または
（iii）SEQ ID NO：85、86、90、92、94、96、98、100、102もしくは104のいずれかに対して95〜99％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、好ましくは
CARをコードする単離された核酸分子がSEQ ID NO：89、91、93、95、97、99、101もしくは103のいずれかのヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO：89、91、93、95、97、99、101もしくは103のいずれかに対して95〜99％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、
前記請求項のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか一項記載の核酸分子を含む核酸分子を含むベクターであって、DNAベクター、RNAベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびレトロウイルスベクターからなる群より選択され、任意でSEQ ID NO：11の配列を含むEF-1プロモーターをさらに含む、前記ベクター。
【請求項１４】
請求項1〜12のいずれか一項記載の核酸分子またはCARポリペプチド、または請求項13記載のベクターを含む細胞であって、該細胞は好ましくはT細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、細胞傷害性Tリンパ球（CTL）および調節性T細胞からなる群より選択され、好ましくは該細胞は、細胞内シグナル伝達ドメイン由来の正のシグナルを構成する第2のポリペプチドに結合した、阻害分子の少なくとも一部分を含む第1のポリペプチドを含む阻害分子をさらに発現し、および、好ましくは第1のポリペプチドはPD-1の少なくとも一部分を含み、第2のポリペプチドは共刺激ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む、前記細胞。
【請求項１５】
請求項13記載のベクターを用いて免疫エフェクター細胞に形質導入を行う段階を含む、細胞、例えば免疫エフェクター細胞を作製する方法。
【請求項１６】
インビトロ転写されたRNAまたは合成RNAを細胞に導入する段階を含む、RNAが操作された細胞の集団を作製する方法であって、RNAが請求項1〜12のいずれか一項記載のCARポリペプチドをコードする核酸を含む、方法。
【請求項１７】
請求項1〜12のいずれか一項記載のCAR核酸分子またはCARポリペプチドを含む、有効量の細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含む、哺乳動物において甲状腺細胞集団に対するT細胞媒介性免疫応答を刺激するための薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項1〜12のいずれか一項記載のCAR核酸またはCARポリペプチドを含む、有効量の細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含む、哺乳動物において抗腫瘍免疫を与えるための薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項1〜12のいずれか一項記載のCAR核酸分子またはCARポリペプチドを含む、有効量の細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を含む、GFRα4細胞表面受容体の発現と関連する疾患を有する哺乳動物を治療するための薬学的組成物であって、GFRα4細胞表面受容体は好ましくはGFRα4aもしくはGFRα4b、またはGFRα4aおよびGFRα4bから選択される、前記薬学的組成物。
【請求項２０】
細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団が、以下のうち1つまたは複数と組み合わせて投与される、請求項17〜19のいずれか一項記載の薬学的組成物：
（i）CAR核酸もしくはCARポリペプチドを含む細胞の有効性を高める作用物質；
（ii）CAR核酸もしくはCARポリペプチドを含む細胞の投与に関連する1つもしくは複数の副作用を改善する作用物質； 
（iii）GFRα4細胞表面受容体と関連する疾患を治療する作用物質；または
（iv）抗腫瘍ワクチンであって、細胞と該抗腫瘍ワクチンが哺乳動物に同時投与されるか、または別々に投与される、前記抗腫瘍ワクチン。
【請求項２１】
GFRα4細胞表面受容体の発現と関連する疾患が癌である、好ましくは癌が甲状腺髄様癌（MTC）である、好ましくは哺乳動物がヒトである、請求項17〜20のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
医薬として用いるための、請求項1〜12のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド、請求項13記載のベクター、または請求項14記載の細胞。
【請求項２３】
甲状腺細胞抗原の発現と関連する疾患の治療に用いるための、請求項1〜12のいずれか一項記載のCARをコードする単離された核酸分子またはCARポリペプチド、請求項13記載のベクター、または請求項14記載の細胞。