【手続補正書】
【提出日】平成29年12月18日(2017.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
可変重鎖ドメイン（ＶＨ）及び可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であり、二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬは共に対合して、第１のエピトープ及び第２のエピトープに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、該方法は
（ａ）ＶＨ及びＶＬを含む抗体を提供する工程であって、ＶＨ及びＶＬは共に対合して、第１のエピトープには結合するが第２のエピトープには結合しない抗原結合部位を形成し、かつ、前記抗体はＶＬの位置３２、５０、または９１において静電的または疎水性のアミノ酸を少なくとも一つ含む、工程、
（ｂ）工程（ａ）の抗体の前記ＶＨをコードする核酸配列を改変する工程であって、１個以上の溶媒接近可能なアミノ酸残基が改変される、工程、
（ｃ）ＶＬ及び工程（ｂ）で改変されたＶＨを発現させる工程、及び
（ｄ）ＶＬ及び工程（ｃ）で改変されたＶＨを含む二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片を選択する工程であって、ＶＨ及びＶＬは共に対合して、第１のエピトープ及び第２のエピトープに特異的に結合する抗原結合部位を形成する、工程
を含む、方法。
【請求項２】
位置３２、５０、または９１のアミノ酸の少なくとも２個は静電的または疎水性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
位置３２、５０及び９１の３アミノ酸すべてが、静電的または疎水性である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
静電的残基はチロシンである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
疎水性残基はトリプトファンである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＶＨをコードする核酸配列を、複数の天然に存在する重鎖アミノ酸配列の多様性に基づいて改変する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
溶媒露出残基の位置が、ＶＨの位置３３、３４、５０〜５８、及び９５〜９７からなる群から選択されるアミノ酸残基位置である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
工程（ａ）の抗体のＶＬをコードする核酸配列を改変し、ここで、１個以上の溶媒接近可能なアミノ酸残基を改変することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
溶媒露出残基の位置は、ＶＬの９３〜９６のアミノ酸から選択されるアミノ酸残基の位置である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｄ）の選択の間に、改変されたＶＨがＶＬと共にファージに提示される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ａ）の抗体が、軽鎖可変領域の相補性決定領域である、アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、及びアミノ酸配列ＱＱＤＹＴＳＰＷＴＦ（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ３を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ａ）の抗体が、重鎖可変領域の相補性決定領域である、アミノ酸配列ＤＹＳＭＨ（配列番号１３）を含むＣＤＲＨ１、アミノ酸配列ＶＷＩＮＴＥＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫ（配列番号１７）を含むＣＤＲＨ２、及びアミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ｄ）の二重特異性抗体の抗原結合部位が、前記第１のエピトープ及び第２のエピトープ双方を排他的に結合する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｄ）の二重特異性抗体の抗原結合部位が、前記第１のエピトープ及び第２のエピトープに同時に結合する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
第１のエピトープが１個の生物学的分子由来であり、第２のエピトープがその同じ生物学的分子由来である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
第１のエピトープが第１の生物学的分子由来であり、第２のエピトープが第２の生物学的分子由来である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
第１の生物学的分子及び第２の生物学的分子が、ＩＬ４／ＩＬ５、ＩＬ４／ＩＬ１３からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
第１の生物学的分子及び第２の生物学的分子が、サイトカインである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
第１または第２の生物学的分子が、ｉｎ  ｖｉｖｏで前記抗体に結合した場合に前記二重特異性抗体の半減期を延長できる分子である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
第１または第２の生物学的分子が、血清アルブミンまたは胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
第１または第２の生物学的分子が、ｉｎ  ｖｉｖｏで前記抗体に結合した場合に二重特異性抗体のエフェクター機能を高めることができる分子である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
第１または第２の生物学的分子が、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージ上の細胞表面タンパク質に結合する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
細胞表面タンパク質がＦｃ受容体またはＣ１ｑである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬが共に対合して、第１のエピトープまたは第２のエピトープに１０−６以下のＫＤで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬが共に対合して、第１のエピトープまたは第２のエピトープに１０−９以下のＫＤで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬが共に対合して、第１のエピトープまたは第２のエピトープに１０−１２以下のＫＤで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬが共に対合して、第１のエピトープ及び第２のエピトープに１０−６以下のＫＤで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬが共に対合して、第１のエピトープ及び第２のエピトープに１０−９以下のＫＤで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
二重特異性抗体のＶＨ及びＶＬが共に対合して、第１のエピトープ及び第２のエピトープに１０−１２以下のＫＤで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
第１の生物学的分子及び第２の生物学的分子が、構造的に類似していない、請求項１５〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
選択工程（ｄ）が、ディープシークエンシング（ｄｅｅｐ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１に記載の方法により作製される、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３３】
二重特異性抗体がモノクローナル抗体である、請求項３２に記載の単離された二重特異性抗体。
【請求項３４】
断片がＦａｂまたはｓｃＦｖである、請求項３２に記載の単離された二重特異性抗体。
【請求項３５】
二重特異性抗体がＩｇＧである、請求項３２に記載の単離された二重特異性抗体。
【請求項３６】
図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、７Ａ、７Ｃ、または７Ｄの抗体のいずれか１抗体のアミノ酸配列を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３７】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＴＳＰＷＴＦ（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＤＩＨ（配列番号１４）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＶＷＩＮＴＥＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫ（配列番号１７）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＥＩＬＦＹＧＭＤＹ（配列番号２１）を含むＣＤＲＨ３
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３８】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＴＳＰＷＴＦ（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＦＩＨ（配列番号１５）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＡＧＩＶＹＤＡＴＧＦＴＴＹＡＤＤＦＫ（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３９】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＴＰＦＰＬＴＦ（配列番号１２）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＬＭＨ（配列番号１６）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＡＶＩＶＳＩＴＧＲＴＹＹＡＤＤＦＫ（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４０】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＴＳＰＷＴＦ（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＳＭＨ（配列番号１３）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＧＶＩＦＱＳＧＡＴＹＹＡＤＤＦＫ（配列番号２２）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＴＳＰＷＴＦ（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＳＭＨ（配列番号１３）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＧＩＩＦＹＴＧＨＴＹＹＡＤＤＦＫ（配列番号２３）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４２】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＸ１Ｘ２ＰＷＴＦ（配列番号２４）を含むＣＤＲＬ３、ここで、Ｘ１はＴｈｒ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、またはＬｙｓであり、Ｘ２はＳｅｒまたはＨｉｓである、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＦＩＨ（配列番号１５）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列Ｘ１ＧＩＶＹＤＡＴＧＦＴＸ２ＹＡＸ３Ｘ４ＦＫ（配列番号２５）を含むＣＤＲＨ２、ここで、Ｘ１はＡｌａまたはＧｌｙ、Ｘ２はＴｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、またはＡｌａ、Ｘ３はＡｓｐ、Ｖａｌ、またはＧｌｕ、かつ、Ｘ４はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、またはＰｈｅである、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４３】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＴＨＰＷＴＦ（配列番号２７）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＦＩＨ（配列番号１５）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＧＧＩＶＹＤＡＴＧＦＴＴＹＡＥＥＦＫ（配列番号２８）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む、請求項４１に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４４】
以下の６つのＣＤＲ：
（ｉ）アミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＩＮＤＡＡ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ１、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＹＴＳＨＲＹＴ（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ２、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＤＹＫＨＰＷＴＦ（配列番号３１）を含むＣＤＲＬ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＤＹＦＩＨ（配列番号１５）を含むＣＤＲＨ１、
（ｖ）アミノ酸配列ＡＧＩＶＹＤＡＴＧＦＴＶＹＡＤＤＦＫ（配列番号３２）を含むＣＤＲＨ２、及び
（ｖｉ）アミノ酸配列ＧＧＩＦＹＧＭＤＹ（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３
を含む、請求項４１に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４５】
アミノ酸配列ＧＲＸ１ＴＩＴＸ２ＤＸ３ＳＴＳＴＸ４（配列番号２６）を含むフレームワーク領域３（ＦＲ３）をさらに含み、ここで、Ｘ１はＶａｌまたはＰｈｅ、Ｘ２はＡｒｇまたはＩｌｅ、Ｘ３はＴｈｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、またはＰｒｏ、及びＸ４はＡｌａまたはＶａｌである、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４６】
配列番号１、５、２９、または３３のアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域及び配列番号２、３、４、６、７、８、３０、または３４から選択される重鎖可変領域を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４７】
前記抗体、またはその抗原結合性断片が、ＩＬ４を５００ｎＭ以下のＫｄで、また、ＩＬ５を約９００ｎＭ以下のＫｄで結合する、請求項３８、３９、及び４２〜４６のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４８】
前記抗体が、ＩＬ４を１００ｎＭ以下のＫｄで、また、ＩＬ５を約１００ｎＭ以下のＫｄで結合する、請求項３８、３９、及び４２〜４６のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項４９】
前記抗体が、ＩＬ４を１０ｎＭ以下のＫｄで、また、ＩＬ５を約５０ｎＭ以下のＫｄで結合する、請求項３８、３９、及び４２〜４６のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５０】
前記抗体が、ＩＬ４を５００ｎＭ以下のＫｄで、また、ＩＬ１３を約９００ｎＭ以下のＫｄで結合する、請求項４０、４１、及び４６のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５１】
前記抗体が、ＩＬ４を１００ｎＭ以下のＫｄで、また、ＩＬ１３を約１００ｎＭ以下のＫｄで結合する、請求項４０、４１、及び４６のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５２】
前記抗体が、ＩＬ４、ＩＬ５、またはＩＬ１３のその受容体への結合を阻害または阻止する、請求項３６〜５１のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５３】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３６〜５１のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５４】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項３６〜５１のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５５】
前記断片が、Ｆａｂ断片または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項３６〜５１のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５６】
フレームワーク配列の少なくとも一部がヒトのコンセンサスフレームワーク配列である、請求項３６〜５１のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５７】
抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である、請求項３２〜５１のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項５８】
請求項３２〜５７のいずれか一項に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項５９】
請求項３２〜５７のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド。
【請求項６０】
請求項５９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項６１】
請求項６０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６２】
請求項３２〜５７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、請求項６０に記載のベクターを含む宿主細胞を培養すること、及び前記抗体を回収すること、を含む方法。
【請求項６３】
被検体の喘息を治療するための医薬であって、請求項３２〜５７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗体断片を含み、ここで、該医薬は、前記被検体の前記喘息を治療または予防するのに十分な期間かつ量で投与される、医薬。
【請求項６４】
ＩｇＥ拮抗薬、抗ヒスタミン薬、テオフィリン、サルブタモール、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、クロモグリク酸ナトリウム、ステロイド、及び抗炎症剤からなる群から選択される、少なくとも一つの追加の喘息治療薬がさらに投与される、請求項６３に記載の医薬。
【請求項６５】
喘息がアレルギー性喘息である、請求項６３または６４に記載の医薬。
【請求項６６】
被検体の増殖性障害を治療するための医薬であって、請求項３２〜５７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗体断片を含み、ここで、該医薬は、前記被検体の前記増殖性障害を治療または予防するのに十分な期間かつ量で投与される、医薬。
【請求項６７】
前記増殖性障害が癌である、請求項６６に記載の医薬。
【請求項６８】
化学療法薬、細胞障害剤、及び抗血管新生薬からなる群から選択される追加の抗増殖剤が前記被検体にさらに投与される、請求項６７に記載の医薬。