【手続補正書】
【提出日】平成30年6月1日(2018.6.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
長期周期的回収のための方法であって
バイオリアクターに組換えタンパク質を発現する哺乳類細胞を接種することによって細胞培養を確立すること、
新鮮な細胞培養培地を前記バイオリアクター内に灌流し、細胞培養物をフィルタに通し、及び透過物を収集することによって前記細胞培養を維持すること
を含み、
ヌル透過物が、第一の所定のパラメータに到達するまで最初に収集され、そのとき回収透過物は所定の時間にわたって収集され、
この後、第二の所定のパラメータに到達するまでヌル透過物を交互に収集し、次いで回収透過物を所定の時間にわたって収集し、
ヌル透過物及び回収透過物の前記交互収集が、前記細胞培養が終了するまで継続される、方法。
【請求項２】
前記所定のパラメータが、時間、生存細胞密度、血中血球容積又は力価から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第一の所定のパラメータが、前記細胞培養の前記確立の少なくとも１２時間〜２５日後である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第二の所定のパラメータが、前記回収透過物の前記収集の少なくとも１２〜７２時間後である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記所定の時間が、少なくとも１２〜７２時間である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ヌル透過物が収集されるとき、前記フィルタが、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持する孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記回収透過物が収集されるとき、前記フィルタが、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記フィルタが、単一ユニットフィルタシステムである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記透過物が、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタであるフィルタから収集されるとき、前記新鮮な細胞培養培地が、少なくとも５ｇ／Ｌの非イオン性ブロック共重合体を達成するように配合又は補充される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞培養プロセス中に試料を採取すること、前記組換えタンパク質及び／又は前記細胞培養プロセスの特徴を定量的に及び／又は定性的にモニターするために前記試料を評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記灌流が、連続灌流である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記灌流が、１日当たり１．０作業量以下の速度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記灌流が、蠕動ポンプ、ダブルダイヤフラムポンプ、低剪断力ポンプ又は交互接線流により達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法が、前記細胞培養物を温度変化に供することをさらに含み、前記細胞は、ａ）第一の期間にわたって第一の温度で、及びｂ）第二の期間にわたって第二の温度で培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記温度変化が、所定のパラメータに反応し、前記所定のパラメータを達成することが静電容量に基づくバイオマスプローブを使用して決定される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞培養が、前記バイオリアクターに少なくとも０．１×１０６生存細胞／ｍＬを接種することにより確立される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳類細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記組換えタンパク質が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え融合タンパク質、又はサイトカインからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記組換えタンパク質が、凝結、沈殿、遠心分離、深層ろ過、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ミックスモード陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー又はハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーの１つ又は複数によって前記回収透過物から精製される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記精製プロセス中に試料を採取すること、前記組換えタンパク質及び前記精製プロセスの特徴を定量的に及び／又は定性的にモニターするために前記試料を評価することをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記試料が、プロセス分析技術を使用して定量的に及び／又は定性的にモニターされる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組換えタンパク質が、医薬的に許容され得る製剤に製剤化される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の方法により産生される、組換えタンパク質。
【請求項２４】
組換えタンパク質を回収するための方法であって、
バイオリアクターに組換えタンパク質を発現する哺乳類細胞を接種することによって細胞培養を確立すること、
少なくとも２、３、４又は５ｇ／Ｌの濃度の非イオン性ブロック共重合体を達成するように配合又は補充された新鮮な細胞培養培地を細胞培養物に灌流することにより前記細胞培養を維持すること、
前記細胞培養物を、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタに通すこと、及び
前記組換えタンパク質を含有する透過物を収集すること
を含む、方法。
【請求項２５】
組換えタンパク質を回収するための方法であって、
バイオリアクターに組換えタンパク質を発現する哺乳類細胞を接種することによって細胞培養を確立すること、
少なくとも１ｇ／Ｌの濃度の非イオン性ブロック共重合体を達成するように配合又は補充された新鮮な細胞培養培地を細胞培養物に灌流し、前記細胞培養物を、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持する孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタに通すことによって前記細胞培養を維持すること、
一度所定のパラメータに到達したら、少なくとも２、３、４又は５ｇ／Ｌの濃度の非イオン性ブロック共重合体を達成するように配合又は補充された新鮮な細胞培養培地を前記細胞培養物に灌流すること、及び前記細胞培養を、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタに通すこと、ならびに、
前記組換えタンパク質を含有する透過物を収集すること
を含む、方法。
【請求項２６】
前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持する孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタ及び前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する前記中空糸フィルタが、単一ユニットフィルタシステムの構成要素である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
異なる孔径又は分子量カットオフの２つ以上の中空糸フィルタ構成要素を含む単一ユニットフィルタシステムであって、滅菌流路が前記個別の中空糸間で維持されるように前記中空糸フィルタ構成要素が互いに一連に固定され、それぞれの中空糸フィルタ構成要素から透過物を独立して除去することができるように、異なる孔径又は分子量カットオフの前記中空糸フィルタ構成要素が、そこから前記透過物が取り出されるそれらの中空シェル側に関して互いに単離される、前記単一ユニットフィルタシステム。
【請求項２８】
少なくとも１つの中空糸フィルタ構成要素が、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持する孔径又は分子量カットオフを有し、少なくとも１つの中空糸フィルタ構成要素が、前記組換えタンパク質を前記バイオリアクター内に保持しない孔径又は分子量カットオフを有する中空糸フィルタである孔径フィルタを有する、請求項２７に記載の単一ユニットフィルタシステム。
【請求項２９】
前記単一ユニットフィルタシステムが、筐体内に含有される、請求項２７に記載の単一ユニットフィルタシステム。
【請求項３０】
前記中空糸フィルタ構成要素の少なくとも２つの間にスペーサーをさらに含む、請求項２７に記載の単一ユニットフィルタシステム。
【請求項３１】
組換えタンパク質を発現する細胞を培養するための方法であって、
バイオリアクターに組換えタンパク質を発現する哺乳類細胞を接種することによって細胞培養を確立すること、
新鮮な細胞培養培地を前記バイオリアクター内に灌流し、細胞培養物を請求項２７に記載の単一ユニットフィルタシステムに通し、及び透過物を収集することによって前記細胞培養を維持すること
を含み、
前記単一ユニットフィルタシステムが前記バイオリアクターに取り付けられ、前記細胞培養物が、単一のポンプシステムにより前記バイオリアクターから取り出されて前記単一ユニットフィルタシステム内へと入り、前記細胞培養物が、前記単一ユニットフィルタシステムの前記中空糸の内腔側を通過し、前記バイオリアクター内に戻り、透過物が、前記中空糸フィルタ構成要素の１つ又は複数から取り出される、方法。
【請求項３２】
非イオン性ブロック共重合体が、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
非イオン性ブロック共重合体が、ポロクサマー１８８である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
細胞培養培地が、非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
細胞培養培地が、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコスル（ｇｌｙｃｏｓｌ）、アルキルポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）の共重合体、ポリ（プロピレンオキシド）の共重合体、ポリ（ビニルピロリドン）、アルキルポリグルコシド、脂肪族アルコール、又はコカミドをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
非イオン性界面ブロック共重合体が、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
非イオン性ブロック共重合体が、ポロクサマー１８８である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３８】
細胞培養培地が、非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３９】
細胞培養培地が、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコスル（ｇｌｙｃｏｓｌ）、アルキルポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）の共重合体、ポリ（プロピレンオキシド）の共重合体、ポリ（ビニルピロリドン）、アルキルポリグルコシド、脂肪族アルコール、又はコカミドをさらに含む、請求項２５に記載の方法。