【手続補正書】
【提出日】平成30年10月30日(2018.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物を免疫細胞の細胞質ゾルに送達する方法であって、前記免疫細胞を含む細胞懸濁液を、マイクロ流体デバイスに通すこと、及び前記細胞懸濁液を前記化合物と接触させることを含み、前記マイクロ流体デバイスが、２μｍ〜１０μｍの直径を有する狭窄部を含む、前記方法。
【請求項２】
狭窄部が、１０μｍ〜３０μｍの長さを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
マイクロ流体デバイスを通過する前に、同時に、または後に、細胞懸濁液が化合物と接触する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
免疫細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ、好中球、顆粒球、自然リンパ細胞、好塩基球、好酸球、肥満細胞、または樹状細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
化合物が、
ａ）疾患関連抗原;
ｂ）腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、自己抗原、もしくは真菌抗原; 
ｃ）肝臓がん抗原、肺がん抗原、膀胱がん抗原、乳がん抗原、結腸がん抗原、直腸がん抗原、子宮内膜がん抗原、腎がん抗原、白血病抗原、メラノーマ抗原、非ホジキンリンパ腫抗原、膵臓がん抗原、前立腺がん抗原、甲状腺がん抗原、卵巣がん抗原、もしくは子宮がん抗原; 
ｄ）腫瘍細胞溶解物もしくは病原体に感染した組織由来の細胞溶解物； 
ｅ）ＨＩＶ抗原、エボラ抗原、ＨＰＶ抗原、もしくはＥＢＶ抗原; 
ｆ）キメラ抗原受容体、もしくはキメラ抗原受容体をコードする核酸；
ｇ）寛容誘発因子； 
ｈ）アジュバント； 
ｉ）核酸; 
ｊ）タンパク質もしくはペプチド; 
ｋ）小分子；及び/または
ｌ）ウイルスもしくはウイルス様粒子;を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ａ）化合物が、キメラ抗原受容体、もしくはキメラ抗原受容体をコードする核酸を含み、前記キメラ抗原受容体が、キメラＴ細胞受容体である；
ｂ）化合物が、核酸を含み、前記核酸が、i)ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓａＲＮＡ、もしくはｓｈＲＮＡであるか、または、それをコードする；ii)プラスミドもしくはトランスポゾンである；またはiii)ＭＨＣ複合体をコードする；及び/あるいは
ｃ）化合物が、タンパク質もしくはペプチドを含み、前記タンパク質が、ＴＡＬＥＮタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、ＣＲＥリコンビナーゼ、または転写因子を含む、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
化合物がＴ細胞機能を向上させる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
Ｔ細胞機能を向上させる化合物が、免疫チェックポイント経路阻害剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
免疫細胞が、休止状態にある、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
免疫細胞が休止状態にあるＢ細胞であり、かつ化合物が自己抗原を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
免疫細胞中のＣＤ２５、ＫＬＲＧ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＭＨＣ−Ｉ、ＭＨＣ−ＩＩ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１及びＣＸＣＲ５からなる群から選択される１種または２種以上のマーカーの発現が、化合物を前記免疫細胞に送達することにより調節される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
１種または２種以上のマーカーの発現が、減少する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１種または２種以上のマーカーの発現が、増加する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
免疫細胞が、ナイーブ免疫細胞または記憶免疫細胞である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
細胞懸濁液が、
ａ）全血、軟膜細胞、混合細胞集団、もしくは精製された細胞集団；及び/または
ｂ）哺乳類細胞；
を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
細胞が、哺乳類細胞であり、かつ前記哺乳類細胞が、ヒト、マウス、イヌ、ウマ、ネコ、サル、またはラット細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
免疫細胞に化合物を送達するための、少なくとも１つのマイクロ流体チャンネルを含むデバイスであって、２μｍ〜１０μｍの幅を有する狭窄部を含む、前記デバイス。
【請求項１８】
ａ）狭窄部が、１０μｍ〜３０μｍの長さを有する；及び／または
ｂ）狭窄部が、３μｍ〜６μｍの幅を有する、
請求項１６に記載のデバイス。
【請求項１９】
免疫細胞中の免疫細胞機能の操作方法であって、化合物の、前記免疫細胞を、２μｍ〜１０μｍの直径を有する狭窄部を含むマイクロ流体デバイスに通し、前記免疫細胞を前記化合物と接触させることによる、細胞内送達を含む、前記方法。
【請求項２０】
免疫細胞が、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、またはＴ細胞である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
化合物が、
ａ）抗原を含み、かつ、免疫細胞が、前記抗原を処理して、前記免疫細胞の表面に前記抗原の処理された形態を表示する、及び／または
ｂ）分化因子を含む、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗原が、完全長の未処理タンパク質を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
免疫細胞が、前記免疫細胞の表面上に抗原のクラスＩまたはクラスII組織適合性抗原制限処理された形態を表示する、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｔ細胞上に抗原提示表現型を付与する方法であって、Ｔ細胞の細胞質ゾルに、前記Ｔ細胞をマイクロ流体デバイスに通すことにより、抗原を送達することを含み、前記マイクロ流体デバイスが、２μｍ〜１０μｍの直径を有する狭窄部を含み、かつ前記Ｔ細胞が、前記マイクロ流体デバイスを通過した後に、前記免疫細胞の表面上に前記抗原のクラスＩまたはクラスII組織適合性抗原制限処理された形態を含む、前記方法。
【請求項２５】
免疫細胞がさらに寛容原と接触する、請求項１〜１６及び１９〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
免疫細胞にホーミング表現型を付与する方法であって、前記免疫細胞をマイクロ流体デバイスに通すことにより化合物をＴ細胞の細胞質ゾルに送達することを含み、前記マイクロ流体デバイスが、２μｍ〜１０μｍの直径を有する狭窄部を含み、かつ前記化合物が前記免疫細胞にホーミング表現型の発現を付与する、前記方法。
【請求項２７】
免疫細胞に寛容原性表現型を付与する方法であって、前記免疫細胞をマイクロ流体デバイスに通すことによりＴ細胞の細胞質ゾルに化合物を送達することを含み、前記マイクロ流体デバイスが、２μｍ〜１０μｍの直径を有する狭窄部を含み、かつ前記化合物が、前記免疫細胞の寛容原性表現型を有する細胞への分化を誘導する、前記方法。
【請求項２８】
カミカゼ免疫細胞を生じさせる方法であって、免疫細胞をマイクロ流体デバイスに通すことにより前記免疫細胞の細胞質ゾルに自己増幅ＲＮＡを送達することを含み、前記マイクロ流体デバイスが、２μｍ〜１０μｍの直径を有する狭窄部を含み、かつ前記自己増幅ＲＮＡが、コードされたタンパク質の連続産生をコードする、前記方法。
【請求項２９】
免疫細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ、好中球、顆粒球、好塩基球、好酸球、肥満細胞、または樹状細胞である、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
個人における治療に使用するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法に従い修飾された免疫細胞。
【請求項３１】
ａ）治療が、免疫療法である；
ｂ）治療が、免疫抑制療法である；
ｃ）治療が、免疫チェックポイント阻害剤の投与をさらに含む、
請求項３０に記載の使用のための免疫細胞。
【請求項３２】
免疫細胞が、個人から単離される、請求項３１に記載の免疫細胞。
【請求項３３】
ワクチン開発のために抗原をスクリーニングするための使用のための、請求項１〜１６、及び１９〜３２のいずれか１項に記載の方法に従って修飾された免疫細胞。
【請求項３４】
個人内のＴ細胞輸送を決定する方法における使用のための、請求項１に記載の方法に従って、標識を含むために修飾されたＴ細胞であって、前記方法が、前記Ｔ細胞を前記個人に投与すること、及び前記個人内で前記標識を検出することを含む、前記Ｔ細胞。