【手続補正書】
【提出日】平成30年3月16日(2018.3.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するのに使用するための組成物であって、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に結合し、これを阻害する多特異性抗体または抗原結合フラグメントの有効量を含む、組成物。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１のシグナル伝達を阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アクチビンＡを実質的に阻害しない、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＡのシグナル伝達を実質的に阻害しない、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アクチビンＡに実質的に結合しない、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するのに使用するための組成物であって、前記組成物が、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１を阻害する作用因子群の組合せの有効量を含み、作用因子群の前記組合せが、
ａ）アクチビンＢに結合し、これを阻害する抗体またはその抗原結合フラグメント、および
ｂ）ＧＤＦ１１に結合し、これを阻害する抗体またはその抗原結合フラグメント
を含む、組成物。
【請求項７】
作用因子群の前記組合せが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１のシグナル伝達を阻害する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＡを実質的に阻害しない、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
作用因子群の前記組合せが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＡのシグナル伝達を実質的に阻害しない、請求項６から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＡに実質的に結合しない、請求項６から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のうちの１つまたは複数に結合し、これを阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含む、請求項６から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するための組成物であって、
ａ）作用因子または作用因子群の組合せであって、前記作用因子はアクチビンＢおよびＧＤＦ１１に結合し、これを阻害する多特異性抗体であり、作用因子群の前記組合せは、
ｉ）ＧＤＦ１１に結合し、これを阻害する抗体またはその抗原結合フラグメント、および
ｉｉ）アクチビンＢに結合する抗体またはその抗原結合フラグメント
である作用因子または作用因子群の組合せ、ならびに
ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合しＳｍａｄ２／３を介してシグナル伝達する１つまたは複数の追加のリガンドに結合し、これを阻害する抗体またはその抗原結合フラグメント
の有効量を含む、組成物。
【請求項１３】
前記１つまたは複数の追加のリガンドが、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ａ）アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に結合し、これを阻害する多特異性抗体、および
ｂ）ＡｃｔＲＩＩＢに結合しＳｍａｄ２／３を介してシグナル伝達する１つまたは複数の追加のリガンドに結合し、これを阻害する抗体またはその抗原結合フラグメント
の有効量を含む、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記対象が、骨髄異形成症候群を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記対象が、サラセミアを有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記対象が、鎌状赤血球貧血を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記対象が、骨髄線維症を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記多特異性抗体または抗原結合フラグメントが、さらにＧＤＦ８に結合し、これを阻害する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
一部の実施形態では、本開示の方法は、赤血球を増加させることを必要とする対象において、赤血球を増加させるための方法である。一部の実施形態では、方法は、貧血を処置または予防することを必要とする対象において、貧血を処置または予防するための方法である。一部の実施形態では、貧血は、多発性骨髄腫、慢性腎疾患もしくは急性腎疾患または慢性腎不全もしくは急性腎不全、対象の化学療法処置、骨髄異形成症候群、およびサラセミアのうちの１つまたは複数と関連する。一部の実施形態では、サラセミアは、ベータサラセミアである。一部の実施形態では、腎不全は、末期腎不全である。一部の実施形態では、対象は、鎌状赤血球貧血を有する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するための方法であって、赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防することを必要とする対象に、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１を阻害する作用因子の有効量を投与する工程を含む、方法。
（項目２）
前記作用因子が、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１のシグナル伝達を阻害する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記作用因子が、アクチビンＡを実質的に阻害しない、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記作用因子が、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＡのシグナル伝達を実質的に阻害しない、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記作用因子が、アクチビンＡに実質的に結合しない、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記作用因子が、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０のうちの１つまたは複数をさらに阻害する、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記作用因子が、多特異性抗体である、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記多特異性抗体が、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のうちの２つまたはこれより多くに結合する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記作用因子が、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に結合する二特異性抗体である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記二特異性抗体が、互いに会合した２つの異なる単一特異性抗体を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記抗体が、キメラ抗体である、項目７から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記抗体が、ヒト化抗体である、項目７から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記抗体が、ヒト抗体である、項目７から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記抗体が、単鎖抗体である、項目７から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記抗体が、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントである、項目７から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記抗体が、単鎖ダイアボディー、タンデム単鎖Ｆｖフラグメント、タンデム単鎖ダイアボディー、または単鎖ダイアボディーと免疫グロブリン重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む融合タンパク質である、項目７から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記抗体が、二重可変ドメイン免疫グロブリンである、項目７から１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記抗体が、異種部分を含む、項目７から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記異種部分が、糖、検出可能な標識、または安定化部分である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記作用因子が、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップであり、前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号１の７９位に酸性アミノ酸を含まない、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記作用因子が、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップであり、前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、アクチビンＢに１００ｐＭ未満のＫＤで結合する、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記作用因子が、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップであり、前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップのＧＤＦ１１に対するＫＤが、ＡｃｔＲＩＩＢ受容体の野生型リガンド結合ドメインのＫＤの多くとも２分の１未満である、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記作用因子が、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に、少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップであり、前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップのアクチビンＢに対するＫＤが、ＡｃｔＲＩＩＢ受容体の野生型リガンド結合ドメインのＫＤの多くとも２分の１未満である、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２０から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号１のアミノ酸２５〜１３１に、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２０から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号３または４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２０から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号５または６のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目２０から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、ＧＤＦ／アクチビンＢトラップポリペプチドドメインに加えて、インビボ半減期、インビトロ半減期、投与、組織局在または分布、タンパク質複合体の形成、および精製のうちの１つまたは複数を増強する、１つまたは複数の異種ポリペプチドドメインを含む融合タンパク質である、項目２０から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記融合タンパク質が、免疫グロブリンＦｃドメインおよび血清アルブミンより選択される、異種ポリペプチドドメインを含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
融合タンパク質が、前記トラップポリペプチドドメインと前記免疫グロブリンＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインをさらに含む、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３３）
前記リンカードメインが、ＴＧＧＧリンカーである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号４９のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目３０から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記作用因子が、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップである、項目１から６に記載の方法。
（項目３６）
前記作用因子が、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップであり、前記ＧＤＦ１１／アクチビントラップのＧＤＦ１１に対するＫＤが、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体の野生型リガンド結合ドメインのＫＤの多くとも２分の１未満である、項目１から６に記載の方法。
（項目３７）
前記作用因子が、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップであり、前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップのアクチビンＢに対するＫＤが、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体の野生型リガンド結合ドメインの結合アフィニティーの多くとも２分の１未満である、項目１から６に記載の方法。
（項目３８）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号１０のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号１１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、ＧＤＦ／アクチビンＢトラップポリペプチドドメインに加えて、インビボ半減期、インビトロ半減期、投与、組織局在または分布、タンパク質複合体の形成、および精製のうちの１つまたは複数を増強する、１つまたは複数の異種ポリペプチドドメインを含む融合タンパク質である、項目３５から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記融合タンパク質が、免疫グロブリンＦｃドメインおよび血清アルブミンより選択される、異種ポリペプチドドメインを含む、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、配列番号１６より選択されるアミノ酸配列を含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
融合タンパク質が、前記トラップポリペプチドドメインと前記免疫グロブリンＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインをさらに含む、項目４３または４４に記載の方法。
（項目４６）
前記リンカードメインが、ＴＧＧＧリンカーである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチニル化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸、有機誘導体化剤にコンジュゲートされたアミノ酸より選択される、１つまたは複数のアミノ酸修飾を含む、項目２０から４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、グリコシル化されており、哺乳動物グリコシル化パターンを有する、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記ＧＤＦ１１／アクチビンＢトラップが、チャイニーズハムスター卵巣細胞株から得ることができるグリコシル化パターンを有する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
赤血球を増加させることを必要とする対象において、赤血球を増加させるための、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
貧血を処置または予防することを必要とする対象において、貧血を処置または予防するための、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記貧血が、多発性骨髄腫、慢性腎疾患もしくは急性腎疾患または慢性腎不全もしくは急性腎不全、前記対象の化学療法処置、骨髄異形成症候群、およびサラセミアのうちの１つまたは複数と関連する、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記サラセミアが、ベータサラセミアである、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記腎不全が、末期腎不全である、項目５３に記載の方法。
（項目５６）
前記対象が、鎌状赤血球貧血を有する、項目１から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するための方法であって、赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防することを必要とする対象に、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１を阻害する作用因子群の組合せの有効量を投与する工程を含む、方法。
（項目５８）
作用因子群の前記組合せが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１のシグナル伝達を阻害する、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＡを実質的に阻害しない、項目５７または５８に記載の方法。
（項目６０）
作用因子群の前記組合せが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＡのシグナル伝達を実質的に阻害しない、項目５７から５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＡに実質的に結合しない、項目５７から６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記作用因子群の１つまたは複数が、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０ののうちの１つまたは複数をさらに阻害する、項目５７から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ１１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである少なくとも１つの作用因子を含む、項目５７から６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＢに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである少なくとも１つの作用因子を含む、項目５７から６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のうちの１つまたは複数に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである少なくとも１つの作用因子を含む、項目５７から６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラ抗体またはそのフラグメントである、項目６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト化抗体またはそのフラグメントである、項目６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６８）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト抗体またはそのフラグメントである、項目６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、単鎖抗体である、項目６３から６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、およびＦｖからなる群より選択される、項目６３から６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、異種部分を含む、項目６３から７０のいずれか一項に記載の方法。
（項目７２）
前記異種部分が、糖、検出可能な標識、または安定化部分である、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ１１トラップである少なくとも１つの作用因子を含み、前記ＧＤＦ１１トラップが、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目５７から７２のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＢトラップである少なくとも１つの作用因子を含み、前記アクチビンＢトラップが、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目５７から７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ１１トラップである少なくとも１つの作用因子を含み、前記ＧＤＦ１１トラップが、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目５７から７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＢトラップである少なくとも１つの作用因子を含み、前記アクチビンＢトラップが、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目５７から７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、およびＧＤＦ８のうちの１つまたは複数の低分子アンタゴニストである少なくとも１つの作用因子を含む、項目５７から７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７８）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＢの低分子アンタゴニストである少なくとも１つの作用因子を含む、項目５７から７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ１１の低分子アンタゴニストである少なくとも１つの作用因子を含む、項目５７から７８のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のうちの１つまたは複数の発現を阻害する少なくとも１つのポリヌクレオチド配列を含む、項目５７から７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
前記ポリヌクレオチド配列が、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される遺伝子の転写物とハイブリダイズして、前記遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
作用因子群の前記組合せが、アクチビンＢの転写物とハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
作用因子群の前記組合せが、ＧＤＦ１１の転写物とハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、項目８１に記載の方法。
（項目８４）
前記ポリヌクレオチド配列が、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される遺伝子の転写物を標的とするＲＮＡｉ配列を含む、項目８０に記載の方法。
（項目８５）
ポリヌクレオチド分子が、アクチビンＢの転写物を標的とするＲＮＡｉ配列を含む、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記ポリヌクレオチド配列が、ＧＤＦ１１の転写物を標的とするＲＮＡｉ配列を含む、項目８４に記載の方法。
（項目８７）
前記ＲＮＡｉ配列が、ｓｉＲＮＡである、項目８４から８６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８８）
前記ｓｉＲＮＡが、約１９〜約４５ヌクレオチドの長さである、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記ｓｉＲＮＡが、約２５〜約３０ヌクレオチドの長さである、項目８７に記載の方法。
（項目９０）
前記ｓｉＲＮＡが、約１０〜約２０ヌクレオチドの長さである、項目８７に記載の方法。
（項目９１）
前記ＲＮＡｉ配列が、ｓｈＲＮＡである、項目８４から８６のいずれか一項に記載の方法。
（項目９２）
前記ｓｈＲＮＡが、１９〜２９ヌクレオチドのステム長を有する、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記ｓｈＲＮＡが、１９〜２３ヌクレオチドのステム長を有する、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
前記ｓｈＲＮＡのループ領域が、５〜９ヌクレオチドの長さを有する、項目９１から９３のいずれか一項に記載の方法。
（項目９５）
前記作用因子が、細胞ベースのアッセイにおいて、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＧＤＦ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のシグナル伝達のうちの１つまたは複数を阻害する、項目６に記載の方法。
（項目９６）
作用因子群の前記組合せが、細胞ベースのアッセイにおいて、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＧＤＦ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のシグナル伝達の１つまたは複数を阻害する、項目５７に記載の方法。
（項目９７）
前記作用因子または作用因子群の組合せが、Ｓｍａｄ２／３のシグナル伝達を阻害する、項目１から９６のいずれか一項に記載の方法。
（項目９８）
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するための方法であって、赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防することを必要とする対象に、ＧＤＦ１１と、ＡｃｔＲＩＩＢに結合しＳｍａｄ２／３を介してシグナル伝達する１つまたは複数の追加のリガンドとを阻害する作用因子または作用因子群の組合せの有効量を投与する工程を含む、方法。
（項目９９）
前記１つまたは複数の追加のリガンドが、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
対象において赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防するための方法であって、赤血球レベルを高めるかまたは貧血を処置もしくは予防することを必要とする対象に、アクチビンＢと、ＡｃｔＲＩＩＢに結合しＳｍａｄ２／３を介してシグナル伝達する１つまたは複数の追加のリガンドとを阻害する作用因子または作用因子の組合せの有効量を投与する工程を含む、方法。
（項目１０１）
前記１つまたは複数の追加のリガンドが、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、アクチビンＡ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される、項目１００に記載の方法。
（項目１０２）
前記作用因子または作用因子群の組合せが、アクチビンＡのシグナル伝達を実質的に阻害しない、項目９８から１０１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０３）
前記作用因子または作用因子群の組合せが、細胞ベースのアッセイにおいて、アクチビンＡのシグナル伝達を実質的に阻害しない、項目９８から１０２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０４）
前記作用因子または作用因子群の組合せが、アクチビンＡに実質的に結合しない、項目９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０５）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである少なくとも１つの作用因子を含む、項目９８から１０４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０６）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、アクチビンＢに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目９８から１０５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０７）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、アクチビンＣ、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、およびアクチビンＥのうちの１つまたは複数に結合する多特異性抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目９８から１０６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０８）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラ抗体またはそのフラグメントである、項目１０５から１０７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０９）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト化抗体またはそのフラグメントである、項目１０５から１０７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１０）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト抗体またはそのフラグメントである、項目１０５から１０７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１１）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、単鎖抗体である、項目１０５から１１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１２）
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、およびＦｖからなる群より選択される、項目１０５から１１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１３）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、異種部分を含む、項目１０５から１１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１４）
前記異種部分が、糖、検出可能な標識、または安定化部分である、項目１１３に記載の方法。
（項目１１５）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１トラップであり、前記ＧＤＦ１１トラップが、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目９８から１１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１６）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、アクチビンＢトラップであり、前記アクチビンＢトラップが、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目９８から１１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１７）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１トラップであり、前記ＧＤＦ１１トラップが、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目９８から１１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１８）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、アクチビンＢトラップであり、前記アクチビンＢトラップが、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０に少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目９８から１１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１９）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のうちの１つまたは複数の低分子アンタゴニストである、項目９８から１１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２０）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、アクチビンＢの低分子アンタゴニストである、項目９８から１１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２１）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１の低分子アンタゴニストである、項目９８から１２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２２）
前記作用因子、または前記作用因子群のうちの少なくとも１つが、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０のうちの１つまたは複数の発現を阻害するポリヌクレオチドを含む、項目９８から１２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２３）
前記ポリヌクレオチド、または少なくとも１つのポリヌクレオチドが、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される遺伝子の転写物とハイブリダイズして、前記遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目１２２に記載の方法。
（項目１２４）
前記ポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、アクチビンＢの転写物とハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目１２３に記載の方法。
（項目１２５）
前記ポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１の転写物とハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目１２３に記載の方法。
（項目１２６）
前記ポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３Ｂ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０より選択される遺伝子の転写物を標的とするＲＮＡｉ配列である、項目１２２に記載の方法。
（項目１２７）
前記ポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、アクチビンＢの前記転写物を標的とするＲＮＡｉ配列である、項目１２６に記載の方法。
（項目１２８）
前記ポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、ＧＤＦ１１の転写物を標的とするＲＮＡｉ配列である、項目１２６に記載の方法。
（項目１２９）
前記ＲＮＡｉ配列、または前記ＲＮＡｉ配列のうちの少なくとも１つが、ｓｉＲＮＡである、項目１２６から１２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３０）
前記ｓｉＲＮＡ配列、または前記ｓｉＲＮＡ配列のうちの少なくとも１つが、約１９〜約４５ヌクレオチドの長さである、項目１２９に記載の方法。
（項目１３１）
前記ｓｉＲＮＡ配列、または前記ｓｉＲＮＡ配列のうちの少なくとも１つが、約２５〜約３０ヌクレオチドの長さである、項目１３０に記載の方法。
（項目１３２）
前記ｓｉＲＮＡ配列、または前記ｓｉＲＮＡ配列のうちの少なくとも１つが、約１０〜約２０ヌクレオチドの長さである、項目１３０に記載の方法。
（項目１３３）
前記ＲＮＡｉ配列、または前記ＲＮＡｉ配列のうちの少なくとも１つが、ｓｈＲＮＡである、項目１２６から１２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３４）
前記ｓｈＲＮＡ配列、または前記ｓｈＲＮＡ配列のうちの少なくとも１つが、１９〜２９ヌクレオチドのステム長を有する、項目１３３に記載の方法。
（項目１３５）
前記ｓｈＲＮＡ配列、または前記ｓｈＲＮＡ配列のうちの少なくとも１つが、１９〜２３ヌクレオチドのステム長を有する、項目１３４に記載の方法。
（項目１３６）
前記ｓｈＲＮＡ配列、または前記ｓｈＲＮＡ配列のうちの少なくとも１つのループ領域が、５〜９ヌクレオチドの長さを有する、項目１３３から１３５のいずれか一項に記載の方法。