【手続補正書】
【提出日】平成30年7月6日(2018.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を封入して、被封入核酸ナノ粒子を提供する方法であって、
１つまたは複数の核酸流を供給するステップであって、前記１つまたは複数の核酸流が、第１の水溶液中に核酸の混合物を含み、かつ約１．５メートル／秒よりも大きいか、またはそれに等しい複合線速度を有する、ステップと、
１つまたは複数の脂質流を供給するステップであって、前記１つまたは複数の脂質流が、有機溶媒中に１つまたは複数の脂質の混合物を含み、かつ約１．５メートル／秒よりも大きいか、またはそれに等しい複合線速度を有する、ステップと、
第１の交差ポイントで前記１つまたは複数の脂質流を前記１つまたは複数の核酸流と合流させて、第１の合流した流れを供給するステップと、
第１の方向で前記第１の合流した流れを流動させ、それらの構成成分を混合して、前記被封入核酸ナノ粒子を含む第１の出口溶液を供給するステップと
を含み、前記第１の水溶液および前記有機溶媒が混和性であり、前記第１の水溶液または前記有機溶媒のうちの片方が、緩衝液を含有し、前記第１の出口溶液中の前記有機溶媒の濃度が、３３％未満である、方法。
【請求項２】
前記第１の水溶液が、アルカリ金属塩の水溶液を含む第１の緩衝溶液であり、
前記有機溶媒が、アルコール溶媒を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の合流した流れを、第２の緩衝溶液および水から選択される希釈溶媒で希釈して、第１の出口流を供給するステップ
をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記アルカリ金属塩が、ＮａＣｌおよびクエン酸ナトリウムの１つまたは複数から選択され、
前記有機溶媒がエタノールを含む、
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の出口溶液中の前記有機溶媒の濃度が、約２０〜約２５％である、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記１つまたは複数の脂質流の複合線速度が、約１．５〜約４．５メートル／秒であり、
前記１つまたは複数の核酸流の複合線速度が、約３〜約１４メートル／秒である、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１つまたは複数の脂質流の複合線速度が、約３〜約４メートル／秒であり、
前記１つまたは複数の核酸流の複合線速度が、約９〜約１４メートル／秒である、
請求項１または３〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記第１の合流した流れを、希釈溶媒で希釈するステップが、
希釈流を供給するステップであって、前記希釈流が、第２の緩衝溶液および水から選択される水性溶媒を含む、ステップと、
前記第１の合流した流れを前記希釈流と合流させて、前記第１の出口流を供給するステップと
を含み、前記１つまたは複数の脂質流の複合線速度が、約３〜約４メートル／秒であり、前記１つまたは複数の核酸流の複合線速度が、約６〜約８メートル／秒である、請求項２〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の出口溶液をインキュベートするステップをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記インキュベートした第１の出口溶液を、第３の緩衝溶液および水から選択される第２の希釈溶媒で希釈して、第２の出口溶液を供給するステップと、
前記第２の出口溶液を濃縮するステップおよび透析するステップ
をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記濃縮するステップが、タンジェンシャルフローフィルトレーションにより濃縮するステップを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
濃縮した透析溶液を滅菌ろ過するステップをさらに含む、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記核酸がｓｉＲＮＡである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記核酸がｍＲＮＡである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記脂質ナノ粒子ホストが、
((5-((ジメチルアミノ)メチル)-1,3-フェニレン)ビス(オキシ))ビス(オクタン-8,1-ジイル)ビス(デカノエート)；
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((4-(((3-(ジメチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)ヘキサデカノイル)オキシ)プロパン-1,3-ジイル ビス(オクタデカ-9,12-ジエノエート)；
(9Z,12Z)-3-((4,4-ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)-2-((((3-(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピル オクタデカ-9,12-ジエノエート；
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((ジメチルアミノ)メチル)-1,3-フェニレン)ビス(オキシ))ビス(ブタン-4,1-ジイル) ビス(オクタデカ-9,12-ジエノエート)；
PEG-ジミリスチルグリセリン；および
2,3-ビス(テトラデシルオキシ)プロピル (158-ヒドロキシ-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78,81,84,87,90,93,96,99,102,105,108,111,114,117,120,123,126,129,132,135,138,141,144,147,150,153,156-ドペンタコンタオキサオクタペンタコンタヘクチル)カルバメート
から選択される脂質の１つまたは複数を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記被封入核酸ナノ粒子が、約３０ｎｍ〜約８０ｎｍの平均粒径直径（average particle size diameter）を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記被封入核酸ナノ粒子が、約４０ｎｍ〜約７０ｎｍの平均粒径直径、および動的光散乱により決定される場合の約０．１未満の多分散指数を有する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
脂質：核酸の質量による比が、約１５〜２０：１である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記１つまたは複数の核酸流中の核酸の濃度が、約０．１〜約１．５ｍｇ／ｍＬであり、前記１つまたは複数の脂質流中の脂質の濃度が、約１０〜約２５ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の出口溶液中のエタノールの濃度が、約１０〜１５％である、請求項９〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
２つの核酸流および１つの脂質流を供給するステップと、
十字コネクターで前記２つの核酸流を前記１つの脂質流と合流させて、前記第１の合流した流れを供給するステップと
を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記２つの核酸流が、互いに対して約１８０°で反対方向から前記十字コネクターに入り、前記脂質流が、前記２つの核酸流に対して約９０°で前記十字コネクターに入る、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の方向での前記第１の合流した流れを流動させるステップが、前記脂質流と実質的に同じ方向で、かつ前記２つの核酸流に対して約９０°で前記十字コネクターから外へ前記第１の合流した流れを流動させるステップを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１の合流した流れを前記希釈流と合流させるステップが、前記第１の合流した流れを、前記第１の合流した流れの方向に対して約９０°から前記希釈流と交差させるステップを含む、請求項８〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記核酸流由来の核酸の約９０％超が、前記第１の出口溶液中に封入される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
薬学的に許容される担体、ならびに
脂質ナノ粒子ホストおよび核酸を含む被封入核酸ナノ粒子であって、前記核酸が、前記脂質ナノ粒子ホスト中に封入されている、被封入核酸ナノ粒子
を含む被封入核酸ナノ粒子組成物であって、前記被封入核酸ナノ粒子が、約４０ｎｍ〜約７０ｎｍの平均粒径、および動的光散乱により決定される場合の約０．１未満の多分散指数を有する、被封入核酸ナノ粒子組成物。
【請求項２７】
前記脂質ナノ粒子ホストが、生分解性陽イオン性脂質、脂質付加されたポリエチレングリコール、コレステロールおよび１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項２６に記載の組成物。