【誤訳訂正書】
【提出日】平成30年8月6日(2018.8.6)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フォルスコリンを分化前の前脂肪細胞におよび分化中の脂肪細胞にも別個に添加し、脂肪生成阻害のプロセスにおいてフォルスコリンを使用して、脂肪生成阻害潜在力を比較して評価する方法であって、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに非ヒト哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｃ）２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を前記ウェルに添加するステップと、
ｄ）ステップｃにおける脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーションの後に２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）、脂肪生成誘導培地（ステップｃ）および脂肪生成進行培地（ステップｄ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｅの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｇ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｆの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｈ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｆおよびｇの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｉ）ステップａのウェルに２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を添加するステップと、
ｊ）脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーション後、ステップｉのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を含む２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｋ）フォルスコリン（ステップｊ）、脂肪生成誘導培地（ステップｉ）および脂肪生成進行培地（ステップｊ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｌ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｋの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｍ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｌの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｎ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｌおよびｍの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｏ）ステップｈおよびｎの細胞において脂肪生成の阻害パーセントを比較するステップとを含む、方法。
【請求項２】
骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ−４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）からなる群から選択される、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の発現を定量的に決定し、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の前記発現が、フォルスコリンを分化中の脂肪細胞よりは前脂肪細胞に投与する（接触させる）場合に測定すると増強されるか否か確認する方法であって、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに非ヒト哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｃ）２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を前記ウェルに添加するステップと、
ｄ）ステップｃにおける脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーションの後に２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）、脂肪生成誘導培地（ステップｃ）および脂肪生成進行培地（ステップｄ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと、
ｇ）ステップａのウェルに２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を添加するステップと、
ｈ）脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーション後、ステップｇのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を含む２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｉ）フォルスコリン（ステップｈ）、脂肪生成誘導培地（ステップｇ）および脂肪生成進行培地（ステップｈ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｊ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと
を組み込む、方法。
【請求項３】
フォルスコリンを分化前の前脂肪細胞におよび分化中の脂肪細胞にも別個に添加し、脂肪生成阻害のプロセスにおいてフォルスコリンを使用して、脂肪生成阻害潜在力を比較して評価する方法であって、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに非ヒト哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｅの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｇ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｆの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｈ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｆおよびｇの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｊ）ステップａのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を添加するステップと、
ｋ）フォルスコリン（ステップｊ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｌ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｋの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｍ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｌの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｎ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｌおよびｍの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｏ）ステップｈおよびｎの細胞において脂肪生成の阻害パーセントを比較するステップとを含む、方法。
【請求項４】
骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ−４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）からなる群から選択される、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の発現を定量的に決定し、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の前記発現が、フォルスコリンを分化中の脂肪細胞よりは前脂肪細胞に投与する（接触させる）場合に測定すると増強されるか否か確認する方法であって、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに非ヒト哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと、
ｈ）ステップａのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を添加するステップと、
ｉ）フォルスコリン（ステップｈ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｊ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと
を組み込む、方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
もっとも好ましい実施形態では、本発明は、脂肪生成阻害潜在力を比較して評価するためにフォルスコリンを分化前の前脂肪細胞におよび成熟脂肪細胞にも別個に添加する、脂肪生成阻害のプロセスにおいてフォルスコリンを使用して哺乳動物エネルギーバランスを達成する方法であって、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｃ）２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地(Adipogenesis induction medium)をウェルに添加するステップと、
ｄ）ステップｃにおける脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーションの後に２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地(Adipogenesis progression medium)を添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）、脂肪生成誘導培地（ステップｃ）および脂肪生成進行培地（ステップｄ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｅの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｇ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｆの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｈ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｆおよびｇの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｉ）ステップａのウェルに２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を添加するステップと、
ｊ）脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーション後、ステップｉのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を含む２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｋ）フォルスコリン（ステップｊ）、脂肪生成誘導培地（ステップｉ）および脂肪生成進行培地（ステップｊ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｌ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｌの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｍ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｍの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｎ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｍおよびｎの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｏ）ステップｈおよびｏの細胞において脂肪生成の阻害パーセントを比較するステップとを含む、方法に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
別の非常に好ましい実施形態では、本発明は、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ−４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）のような、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の発現を促進するプロセスでフォルスコリンを使用する哺乳動物エネルギーバランスの方法であって、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の前記発現が、フォルスコリンを成熟脂肪細胞よりは前脂肪細胞に投与する（接触させる）場合に測定すると著しく増強され、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｃ）２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地をウェルに添加するステップと、
ｄ）ステップｃにおける脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーションの後に２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）、脂肪生成誘導培地（ステップｃ）および脂肪生成進行培地（ステップｄ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと、
ｇ）ステップａのウェルに２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を添加するステップと、
ｈ）脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーション後、ステップｇのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を含む２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｉ）フォルスコリン（ステップｈ）、脂肪生成誘導培地（ステップｇ）および脂肪生成進行培地（ステップｈ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｊ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと
を組み込む前記方法にも関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
前述の発明は、明確な理解を目的とする例証および例としてある程度詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲内である種の変更および修正を実行しうることは明白であろう。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕脂肪生成阻害潜在力を比較して評価するためにフォルスコリンを分化前の前脂肪細胞におよび成熟脂肪細胞にも別個に添加する、脂肪生成阻害のプロセスにおいてフォルスコリンを使用して哺乳動物エネルギーバランスを達成する方法であって、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｃ）２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を前記ウェルに添加するステップと、ｄ）ステップｃにおける脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーションの後に２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）、脂肪生成誘導培地（ステップｃ）および脂肪生成進行培地（ステップｄ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｅの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｇ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｆの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｈ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｆおよびｇの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｉ）ステップａのウェルに２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を添加するステップと、
ｊ）脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーション後、ステップｉのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を含む２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｋ）フォルスコリン（ステップｊ）、脂肪生成誘導培地（ステップｉ）および脂肪生成進行培地（ステップｊ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｌ）１００μｌの１０％ホルマリンを添加することによりステップｌの細胞を固定化し、オイルレッドＯ技法を使用して染色するステップと、
ｍ）マイクロプレートリーダーにおいて４９２ｎｍでステップｍの細胞の光学密度を読み取り、その結果をグラフパッドプリズムソフトウェアを使用して阻害濃度（ＩＣ５０）値として表すステップと、
ｎ）式Ｃ−Ｔ／Ｔ×１００（式中のＣは分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度であり、Ｔは試料処理された分化中の／未分化の細胞におけるオイルレッドＯの吸光度である）を使用してステップｍおよびｎの細胞における脂肪生成の阻害パーセントを計算するステップと、
ｏ）ステップｈおよびｏの細胞において脂肪生成の阻害パーセントを比較するステップとを含む、方法。
〔２〕骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ−４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）のような、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の発現を促進するプロセスでフォルスコリンを使用する哺乳動物エネルギーバランスの方法であって、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）を選択的に動員する分泌因子の前記発現が、フォルスコリンを成熟脂肪細胞よりは前脂肪細胞に投与する（接触させる）場合に測定すると著しく増強され、
ａ）おおよそ６０×１０4細胞が４８〜７２時間播種されて７０〜８０％コンフルエンスを得るマイクロプレートのウェルに哺乳動物脂肪細胞前駆細胞（前脂肪細胞）を播種するステップと、
ｂ）未分化前脂肪細胞からなるステップａの前播種されたマイクロプレートに５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度でフォルスコリンを添加するステップと、
ｃ）２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を前記ウェルに添加するステップと、ｄ）ステップｃにおける脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーションの後に２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｅ）フォルスコリン（ステップｂ）、脂肪生成誘導培地（ステップｃ）および脂肪生成進行培地（ステップｄ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｆ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと、
ｇ）ステップａのウェルに２００μｌの新たに調製した脂肪生成誘導培地を添加するステップと、
ｈ）脂肪生成誘導培地と一緒の７２時間のインキュベーション後、ステップｇのウェルに段階的濃度のフォルスコリン（それぞれ５０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌ）を含む２００μｌの新たに調製した脂肪生成進行培地を添加するステップと、
ｉ）フォルスコリン（ステップｈ）、脂肪生成誘導培地（ステップｇ）および脂肪生成進行培地（ステップｈ）で処理した細胞を５％ＣＯ2および９５％空気の加湿雰囲気（３７℃）で４８時間インキュベートするステップと、
ｊ）適切な免疫アッセイ技法により、細胞上澄み中のＢＭＰ−７、ＢＭＰ−４、ＶＥＧＦ−ＡおよびＵＣＰ−１の発現を定量的に決定するステップと
を組み込む、方法。
〔３〕哺乳動物脂肪細胞系におけるエネルギーバランスを達成する方法であって、哺乳動物前脂肪細胞を標的にして有効量でフォルスコリンを投与して（ａ）脂肪生成の阻害の増加および（ｂ）個別にまたは組み合わせて機能して褐色脂肪細胞または褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞を特異的に動員する分泌因子の発現の増加の効果を達成するステップを含む、方法。
〔４〕分泌因子が骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ−４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）からなる群から選択される、前記〔３〕に記載の方法。
〔５〕哺乳動物前脂肪細胞を標的にして有効量でフォルスコリンを投与して（ａ）脂肪生成の阻害の増加および（ｂ）個別にまたは組み合わせて機能して褐色脂肪細胞または褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞を特異的に動員する分泌因子の発現の増加の効果をもたらすことにより、哺乳動物脂肪細胞におけるエネルギーバランスを達成することを含む、肥満の療法において使用するためのフォルスコリン。
〔６〕分泌因子が骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質４（ＢＭＰ−４）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）からなる群から選択される、前記〔３〕に記載の方法。
〔７〕哺乳動物の白色脂肪細胞貯蔵場所において褐色様表現型（ベージュまたはブライト脂肪細胞）を誘導するための方法であって、完全に分化した白色脂肪細胞の貯蔵場所を有する肥満哺乳動物に有効量のフォルスコリンを投与して白色脂肪細胞貯蔵場所内で褐色様表現型（ベージュまたは褐色脂肪細胞）の発生をもたらす分泌因子の増加の効果を達成するステップを含む、方法。
〔８〕分泌因子が血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）である、前記〔７〕に記載の使用。
〔９〕フォルスコリンを哺乳動物白色脂肪細胞貯蔵場所を標的にして有効量で投与して、哺乳動物の白色脂肪細胞貯蔵場所において褐色様表現型（ベージュまたはブライト脂肪細胞）の発生を引き起こす分泌因子の、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）およびミトコンドリア脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）の発現が増加する効果を達成することを特徴とする、肥満の療法において使用するためのフォルスコリン。
〔１０〕哺乳動物脂肪細胞系においてエネルギーバランスを達成する方法であって、哺乳動物前脂肪細胞を標的にしてフォルスコリンを有効量で投与し、ミトコンドリア脱共役タンパク質１（ＵＣＰ−１）の発現が増強される効果をもたらして、分化した褐色脂肪細胞および褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞においてミトコンドリア熱産生を増加させるステップを含む、方法。
〔１１〕哺乳動物前脂肪細胞を標的にしてフォルスコリンを有効量で投与し、分泌因子ミトコンドリア脱共役タンパク質１（ＵＣＰ−１）の発現が増強される効果をもたらして、分化した褐色脂肪細胞および褐色様（ベージュまたはブライト）脂肪細胞においてミトコンドリア熱産生を増加させることにより、哺乳動物脂肪細胞においてエネルギーバランスを達成することを含む、肥満の療法において使用するためのフォルスコリン。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３】
2018508179.tif 000001