【手続補正書】
【提出日】平成30年9月21日(2018.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３つのアンビセンスなゲノムセグメントであって、  
第１のゲノムセグメントは、Ｚタンパク質をコードするコード領域及びＬ  ＲｄＲｐタンパク質をコードするコード領域を含み、
第２のゲノムセグメントは、核タンパク質（ＮＰ）をコードするコード領域及び第１の制限酵素部位を含み、かつ
第３のゲノムセグメントは、糖タンパク質をコードするコード領域及び第２の制限酵素部位を含み、かつ  
前記ＮＰタンパク質は、配列番号：３に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ゲノムセグメント
を含む遺伝子組み換えされたピチンデウイルス。
【請求項２】
前記第２のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第１の制限酵素部位は、前記複数のクローニング部位の一部である、請求項１に記載のウイルス。
【請求項３】
前記第３のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第２の制限酵素部位は前記複数のクローニング部位の一部である、請求項１に記載のウイルス。
【請求項４】
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、請求項１に記載のウイルス。
【請求項５】
前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、請求項１に記載のウイルス。
【請求項６】
前記第２のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、請求項１に記載のウイルス。
【請求項７】
前記第１及び前記第２のタンパク質は、抗原及び検出可能なマーカーから選択される、請求項４、５、または６に記載のウイルス。
【請求項８】
前記抗原は、ウイルス性病原体、原核細胞病原体、または真核細胞病原体により発現されるタンパク質である、請求項７に記載のウイルス。
【請求項９】
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は異なっている、請求項６に記載のウイルス。
【請求項１０】
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は同一である、請求項６に記載のウイルス。
【請求項１１】
前記核タンパク質は、前記核タンパク質のエキソリボヌクレアーゼ活性を低下させる少なくとも１つの変異を含み、前記変異は、およそアミノ酸３８０におけるアスパラギン酸、およそアミノ酸３８２におけるグルタミン酸、およそアミノ酸５２５におけるアスパラギン酸、およそアミノ酸５２０におけるヒスチジン、及びおよそアミノ酸４５７におけるアスパラギン酸から選択され、前記アスパラギン酸、グルタミン酸、またはヒスチジンは、任意の他のアミノ酸で置換されている、請求項１に記載のウイルス。
【請求項１２】
前記糖タンパク質は、前記糖タンパク質の活性を変える少なくとも１つの変異を含み、前記変異はおよそアミノ酸２０におけるアスパラギン、及びおよそアミノ酸４０４におけるアスパラギンから選択され、前記アスパラギンは任意の他のアミノ酸で置換されている、請求項１に記載のウイルス。
【請求項１３】
請求項１に記載の３つのゲノムセグメントを含む感染性ウイルス粒子。
【請求項１４】
請求項１３に記載の単離した感染性ウイルス粒子を含む組成物。
【請求項１５】
Ｚタンパク質をコードするコード領域及びＬ  ＲｄＲｐタンパク質をコードするコード領域を含む第１のゲノムセグメントをコードする第１のベクターであって、前記第１のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第１のベクター、
核タンパク質（ＮＰ）をコードするコード領域及び第１の制限酵素部位を含む第２のゲノムセグメントをコードする第２のベクターであって、前記第２のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第２のベクター、ならびに
糖タンパク質をコードするコード領域及び第２の制限酵素部位を含む第３のゲノムセグメントをコードする第３のベクターであって、前記第３のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第３のベクター  
を含み、
前記ＮＰタンパク質は、配列番号：３に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
ベクターの集合体。
【請求項１６】
前記ベクターはプラスミドである、請求項１５に記載の集合体。
【請求項１７】
前記プラスミドはＴ７プロモーターを更に含む、請求項１５に記載の集合体。
【請求項１８】
前記第２のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第１の制限酵素部位は前記複数のクローニング部位の一部である、請求項１５に記載の集合体。
【請求項１９】
前記第３のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第２の制限酵素部位は前記複数のクローニング部位の一部である、請求項１５に記載の集合体。
【請求項２０】
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、請求項１５に記載の集合体。
【請求項２１】
前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、請求項１５に記載の集合体。
【請求項２２】
前記第２のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、請求項１５に記載の集合体。
【請求項２３】
前記第１及び前記第２のタンパク質は、抗原及び検出可能なマーカーから選択される、請求項２０、２１、または２２に記載の集合体。
【請求項２４】
前記抗原は、ウイルス性病原体、原核細胞病原体、もしくは真核細胞病原体により発現したタンパク質、またはその断片である、請求項２３に記載の集合体。
【請求項２５】
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は異なっている、請求項２２に記載の集合体。
【請求項２６】
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は同一である、請求項２２に記載の集合体。
【請求項２７】
請求項１５に記載のベクターの集合物を細胞内に導入すること、ならびに
前記細胞を、発現に好適な条件下にて培地内でインキュベーションすること及び前記第１、第２、及び第３のゲノムセグメントをパッケージングすること
を含む、遺伝子組み換えされたピチンデウイルスの作製方法。
【請求項２８】
前記培地から感染性ウイルス粒子を単離することを更に含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞はＴ７ポリメラーゼを発現する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
請求項２７に記載の、単離した感染性ウイルス粒子。
【請求項３１】
請求項３０に記載の単離した感染性ウイルス粒子を含む組成物。
【請求項３２】
３つのベクターを含む遺伝子組み換えされたピチンデウイルスを作製するためのリバースジェネティクス系であって、  
第１のベクターは、Ｚタンパク質をコードするコード領域及びＬ  ＲｄＲｐタンパク質をコードするコード領域を含む第１のゲノムセグメントをコードし、前記第１のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第１のベクター
第２のベクターは、核タンパク質（ＮＰ）をコードするコード領域及び第１の制限酵素部位を含む第２のゲノムセグメントをコードし、前記第２のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第２のベクター  
第３のベクターは、糖タンパク質をコードするコード領域及び第２の制限酵素部位を含む第３のゲノムセグメントをコードし、前記第３のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第３のベクター
を含み、
前記ＮＰタンパク質は、配列番号：３に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
前記リバースジェネティクス系。
【請求項３３】
各プラスミドはＴ７プロモーターを含む、請求項３２に記載のリバースジェネティクス系。
【請求項３４】
請求項２７に記載のゲノムセグメントの前記３つのベクターを細胞内に導入することと、
前記３つのゲノムセグメントの転写及び各ゲノムセグメントのコード領域の発現に好適な条件下にて前記細胞をインキュベーションすること
とを含む、リバースジェネティクス系の使用方法。
【請求項３５】
前記細胞により作製した感染性ウイルス粒子を単離することを更に含み、各感染性ウイルス粒子は前記３つのゲノムセグメントを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記導入することは、細胞に前記３つのゲノムセグメントをトランスフェクションすることを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記導入することは、前記細胞を、前記３つのゲノムセグメントを含む感染性ウイルス粒子を前記細胞と接触させることを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞はｅｘ  ｖｉｖｏである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記細胞は脊椎動物細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
前記脊椎動物細胞は哺乳動物細胞である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記哺乳動物細胞はヒト細胞である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記脊椎動物細胞はトリ細胞である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記トリ細胞はトリ胚線維芽細胞である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項１３または３０に記載の感染性ウイルス粒子を含み、
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１の抗原をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２の抗原をコードするコード領域を更に含む
対象において免疫応答を生み出すための組成物。
【請求項４５】
前記対象は脊椎動物である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記脊椎動物は哺乳類である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記哺乳類はヒトである、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記脊椎動物はトリである、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４９】
前記免疫応答は体液性免疫応答を含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５０】
前記免疫応答は細胞性免疫応答を含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５１】
前記抗原はウイルス性病原体、原核細胞病原体、または真核細胞病原体により発現されたタンパク質、またはその断片であり、前記対象は、前記ウイルス性病原体、前記原核細胞病原体、または前記真核細胞病原体に曝されるリスクを有する、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５２】
請求項１３または３０に記載の感染性ウイルス粒子の少なくとも２つの集団を含み、
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１の抗原をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２の抗原をコードするコード領域を更に含み、
感染性ウイルス粒子の各集団は異なる抗原をコードする、
対象において免疫応答を生み出すための組み合わせ物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本明細書で記載される感染性ウイルス粒子、及び本明細書で記載される感染性ウイルス粒子を含む組成物もまた、本明細書において提供する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
３つのアンビセンスなゲノムセグメントであって、  
第１のゲノムセグメントは、Ｚタンパク質をコードするコード領域及びＬ  ＲｄＲｐタンパク質をコードするコード領域を含み、
第２のゲノムセグメントは、核タンパク質（ＮＰ）をコードするコード領域及び第１の制限酵素部位を含み、かつ
第３のゲノムセグメントは、糖タンパク質をコードするコード領域及び第２の制限酵素部位を含み、かつ  
前記ＮＰタンパク質は、配列番号：３に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ゲノムセグメント
を含む遺伝子組み換えされたピチンデウイルス。
（項目２）
前記第２のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第１の制限酵素部位は、前記複数のクローニング部位の一部である、項目１に記載のウイルス。
（項目３）
前記第３のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第２の制限酵素部位は前記複数のクローニング部位の一部である、項目１に記載のウイルス。
（項目４）
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、項目１に記載のウイルス。
（項目５）
前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、項目１に記載のウイルス。
（項目６）
前記第２のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、項目１に記載のウイルス。
（項目７）
前記第１及び前記第２のタンパク質は、抗原及び検出可能なマーカーから選択される、項目４、５、または６に記載のウイルス。
（項目８）
前記抗原は、ウイルス性病原体、原核細胞病原体、または真核細胞病原体により発現されるタンパク質である、項目７に記載のウイルス。
（項目９）
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は異なっている、項目６に記載のウイルス。
（項目１０）
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は同一である、項目６に記載のウイルス。
（項目１１）
前記核タンパク質は、前記核タンパク質のエキソリボヌクレアーゼ活性を低下させる少なくとも１つの変異を含み、前記変異は、およそアミノ酸３８０におけるアスパラギン酸、およそアミノ酸３８２におけるグルタミン酸、およそアミノ酸５２５におけるアスパラギン酸、およそアミノ酸５２０におけるヒスチジン、及びおよそアミノ酸４５７におけるアスパラギン酸から選択され、前記アスパラギン酸、グルタミン酸、またはヒスチジンは、任意の他のアミノ酸で置換されている、項目１に記載のウイルス。
（項目１２）
前記糖タンパク質は、前記糖タンパク質の活性を変える少なくとも１つの変異を含み、前記変異はおよそアミノ酸２０におけるアスパラギン、及びおよそアミノ酸４０４におけるアスパラギンから選択され、前記アスパラギンは任意の他のアミノ酸で置換されている、項目１に記載のウイルス。
（項目１３）
項目１に記載の３つのゲノムセグメントを含む感染性ウイルス粒子。
（項目１４）
項目１３に記載の単離した感染性ウイルス粒子を含む組成物。
（項目１５）
Ｚタンパク質をコードするコード領域及びＬ  ＲｄＲｐタンパク質をコードするコード領域を含む第１のゲノムセグメントをコードする第１のベクターであって、前記第１のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第１のベクター、
核タンパク質（ＮＰ）をコードするコード領域及び第１の制限酵素部位を含む第２のゲノムセグメントをコードする第２のベクターであって、前記第２のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第２のベクター、ならびに
糖タンパク質をコードするコード領域及び第２の制限酵素部位を含む第３のゲノムセグメントをコードする第３のベクターであって、前記第３のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第３のベクター  
を含み、
前記ＮＰタンパク質は、配列番号：３に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
ベクターの集合体。
（項目１６）
前記ベクターはプラスミドである、項目１５に記載の集合体。
（項目１７）
前記プラスミドはＴ７プロモーターを更に含む、項目１５に記載の集合体。
（項目１８）
前記第２のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第１の制限酵素部位は前記複数のクローニング部位の一部である、項目１５に記載の集合体。
（項目１９）
前記第３のゲノムセグメントは複数のクローニング部位を含み、前記第２の制限酵素部位は前記複数のクローニング部位の一部である、項目１５に記載の集合体。
（項目２０）
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、項目１５に記載の集合体。
（項目２１）
前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、項目１５に記載の集合体。
（項目２２）
前記第２のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１のタンパク質をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２のタンパク質をコードするコード領域を更に含む、項目１５に記載の集合体。
（項目２３）
前記第１及び前記第２のタンパク質は、抗原及び検出可能なマーカーから選択される、項目２０、２１、または２２に記載の集合体。
（項目２４）
前記抗原は、ウイルス性病原体、原核細胞病原体、もしくは真核細胞病原体により発現したタンパク質、またはその断片である、項目２３に記載の集合体。
（項目２５）
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は異なっている、項目２２に記載の集合体。
（項目２６）
前記第１のタンパク質及び前記第２のタンパク質は同一である、項目２２に記載の集合体。
（項目２７）
項目１５に記載のベクターの集合物を細胞内に導入すること、ならびに
前記細胞を、発現に好適な条件下にて培地内でインキュベーションすること及び前記第１、第２、及び第３のゲノムセグメントをパッケージングすること
を含む、遺伝子組み換えされたピチンデウイルスの作製方法。
（項目２８）
前記培地から感染性ウイルス粒子を単離することを更に含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記細胞はＴ７ポリメラーゼを発現する、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
項目２７に記載の、単離した感染性ウイルス粒子。
（項目３１）
項目３０に記載の単離した感染性ウイルス粒子を含む組成物。
（項目３２）
３つのベクターを含む遺伝子組み換えされたピチンデウイルスを作製するためのリバースジェネティクス系であって、  
第１のベクターは、Ｚタンパク質をコードするコード領域及びＬ  ＲｄＲｐタンパク質をコードするコード領域を含む第１のゲノムセグメントをコードし、前記第１のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第１のベクター
第２のベクターは、核タンパク質（ＮＰ）をコードするコード領域及び第１の制限酵素部位を含む第２のゲノムセグメントをコードし、前記第２のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第２のベクター  
第３のベクターは、糖タンパク質をコードするコード領域及び第２の制限酵素部位を含む第３のゲノムセグメントをコードし、前記第３のゲノムセグメントはアンチゲノム性である、前記第３のベクター
を含み、
前記ＮＰタンパク質は、配列番号：３に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
前記リバースジェネティクス系。
（項目３３）
各プラスミドはＴ７プロモーターを含む、項目３２に記載のリバースジェネティクス系。
（項目３４）
項目２７に記載のゲノムセグメントの前記３つのベクターを細胞内に導入することと、
前記３つのゲノムセグメントの転写及び各ゲノムセグメントのコード領域の発現に好適な条件下にて前記細胞をインキュベーションすること
とを含む、リバースジェネティクス系の使用方法。
（項目３５）
前記細胞により作製した感染性ウイルス粒子を単離することを更に含み、各感染性ウイルス粒子は前記３つのゲノムセグメントを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記導入することは、細胞に前記３つのゲノムセグメントをトランスフェクションすることを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記導入することは、前記細胞を、前記３つのゲノムセグメントを含む感染性ウイルス粒子を前記細胞と接触させることを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３８）
前記細胞はｅｘ  ｖｉｖｏである、項目３４に記載の方法。
（項目３９）
前記細胞は脊椎動物細胞である、項目３４に記載の方法。
（項目４０）
前記脊椎動物細胞は哺乳動物細胞である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記哺乳動物細胞はヒト細胞である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記脊椎動物細胞はトリ細胞である、項目３９に記載の方法。
（項目４３）
前記トリ細胞はトリ胚線維芽細胞である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
対象に、項目１３〜３０に記載の感染性ウイルス粒子を投与すること
を含み、
前記第２のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第１の抗原をコードするコード領域を更に含み、かつ、前記第３のゲノムセグメントは、前記第１の制限酵素切断部位に挿入される第２の抗原をコードするコード領域を更に含む
対象において免疫応答を生み出す方法。
（項目４５）
前記対象は脊椎動物である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記脊椎動物は哺乳類である、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記哺乳類はヒトである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記脊椎動物はトリである、項目４４に記載の方法。
（項目４９）
前記免疫応答は体液性免疫応答を含む、項目４４に記載の方法。
（項目５０）
前記免疫応答は細胞性免疫応答を含む、項目４４に記載の方法。
（項目５１）
前記抗原はウイルス性病原体、原核細胞病原体、または真核細胞病原体により発現されたタンパク質、またはその断片であり、前記対象は、前記ウイルス性病原体、前記原核細胞病原体、または前記真核細胞病原体に曝されるリスクを有する、項目４４に記載の方法。
（項目５２）
前記投与することは、少なくとも２つの感染性ウイルス粒子の集団を投与することを含み、感染性ウイルス粒子の各集団は異なる抗原をコードする、項目４４に記載の方法。