【手続補正書】
【提出日】平成30年10月4日(2018.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上のポリペプチドをコードする１つ以上のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む、関節において１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる１つ以上のポリペプチドを発現させるための組成物であって、前記組成物は、対象の前記関節に投与され、前記ｍＲＮＡが関節内送達されることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
前記組成物が、前記関節に局所的に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記関節が、線維性関節、軟骨性関節、または滑膜関節である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記関節が、滑膜関節である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、前記滑膜腔に直接投与される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記１つ以上のポリペプチドの前記発現及び／または活性が、軟骨、靭帯、筋肉、滑膜内膜細胞、軟骨細胞、及び／または前記関節の滑液において検出されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記１つ以上のポリペプチドの前記発現及び／または活性が、投与後、少なくとも約６時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、４週、または１ヶ月で検出可能である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記１つ以上のｍＲＮＡのそれぞれが、約０．５ｋｂ、１ｋｂ、１．５ｋｂ、２ｋｂ、２．５ｋｂ、３ｋｂ、３．５ｋｂ、４ｋｂ、４．５ｋｂ、５ｋｂ、６ｋｂ、７ｋｂ、８ｋｂ、９ｋｂ、１０ｋｂ、１１ｋｂ、１２ｋｂ、１３ｋｂ、１４ｋｂ、または１５ｋｂを超える長さを有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる前記１つ以上のポリペプチドが、関節内で正常に機能する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる前記１つ以上のポリペプチドが、抗炎症性である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記１つ以上のｍＲＮＡが、抗体をコードする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗体が、完全型免疫グロブリン、（Ｆａｂ）２、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはｓｃＦｖである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記１つ以上のｍＲＮＡが、抗体重鎖、軽鎖、またはそれらの断片をコードする、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、それぞれ抗体重鎖及び軽鎖をコードする２つの別個のｍＲＮＡを含む、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる前記抗体が、抗ＴＮＦα抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＩＬ−１β抗体、抗ｓＴＮＦＲ−Ｉ抗体、抗−ｓＴＮＦＲ−ＩＩ抗体、抗ＩＬ−２抗体、抗ＩＦＮ−γ抗体、抗ＩＬ−１８抗体、抗ＩＬ−１２抗体、または抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体である、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記１つ以上のｍＲＮＡが、可溶性受容体をコードする、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
関節疾患、障害、または病状を治療するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記関節疾患、障害、または病状は、炎症性疾患、障害、または病状である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記炎症性疾患、障害、または病状が、関節炎である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記炎症性疾患、障害、または病状が、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、痛風、偽性痛風、腱炎、滑液包炎、手根管症候群、骨関節炎、滑膜炎、脊椎炎、アミロイドーシス、腰部脊椎管狭窄症、及び／または仙腸関節機能障害からなる群から選択される、請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、１週間に１回投与されることを特徴とする、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、１ヶ月に２回投与されることを特徴とする、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が、１ヶ月に１回投与されることを特徴とする、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記１つ以上のｍＲＮＡが、１つ以上のナノ粒子内に封入される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記１つ以上のナノ粒子が、脂質またはポリマーベースのナノ粒子である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記１つ以上のナノ粒子が、リポソームを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロールベースの脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２−２００、ＭＣ３、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾールベースの）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡならびにＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記１つ以上のカチオン性脂質は、ｃＫＫ−Ｅ１２：
【化５】
2018500303.tif 000001
を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチジルコリン）、ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記１つ以上のコレステロールベースの脂質が、コレステロールまたはペグ（ＰＥＧ）化コレステロールである、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、Ｃ６〜Ｃ２０の長さのアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合された最大５ｋＤａの長さのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、請求項２７〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記カチオン性脂質が、モル比で前記リポソームの約３０〜７０％を構成する、請求項２７〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを、約５０：２５：２０：５、５０：２０：２５：５、５０：２７：２０：３、４０：３０：２０：１０、４０：３０：２５：５、または４０：３２：２５：３の比で含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記リポソームが、Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記リポソームが、Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを、約５０：２５：２０：５、５０：２０：２５：５、５０：２７：２０：３、４０：３０：２０：１０、４０：３０：２５：５、または４０：３２：２５：３の比で含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記リポソームが、ＨＧＴ５００１、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記リポソームが、ＨＧＴ５００１、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを、約５０：２５：２０：５、５０：２０：２５：５、５０：２７：２０：３、４０：３０：２０：１０、４０：３０：２５：５、または４０：３２：２５：３の比で含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記ナノ粒子が、ポリマーベースのナノ粒子を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項４１】
前記ポリマーベースのナノ粒子が、ＰＥＩを含む、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ＰＥＩが、分岐鎖ＰＥＩである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記ナノ粒子が、約４０〜１００ｎｍ未満のサイズを有する、請求項２４〜４２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記１つ以上のｍＲＮＡが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
前記１つ以上の修飾ヌクレオチドが、プソイドウリジン、Ｎ−１−メチル−プソイドウリジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び／または２−チオシチジンを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記１つ以上のｍＲＮＡが、非修飾である、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
いくつかの実施形態において、１つ以上のｍＲＮＡは、非修飾である。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の関節内送達の方法であって、その送達を必要としている対象の関節に、１つ以上のポリペプチドをコードする１つ以上のｍＲＮＡを含む組成物を投与し、これにより、前記組成物の投与が、前記関節において１つ以上のｍＲＮＡによってコードされた前記１つ以上のポリペプチドの発現をもたらすことを含む、前記方法。
（項目２）
前記組成物が、前記関節に局所的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記関節が、線維性関節、軟骨性関節、または滑膜関節である、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記関節が、滑膜関節である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記組成物が、前記滑膜腔に直接投与される、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記１つ以上のポリペプチドの前記発現及び／または活性が、軟骨、靭帯、筋肉、滑膜内膜細胞、軟骨細胞、及び／または前記関節の滑液において検出される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記１つ以上のポリペプチドの前記発現及び／または活性が、投与後、少なくとも約６時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、４週、または１ヶ月で検出可能である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記１つ以上のｍＲＮＡのそれぞれが、約０．５ｋｂ、１ｋｂ、１．５ｋｂ、２ｋｂ、２．５ｋｂ、３ｋｂ、３．５ｋｂ、４ｋｂ、４．５ｋｂ、５ｋｂ、６ｋｂ、７ｋｂ、８ｋｂ、９ｋｂ、１０ｋｂ、１１ｋｂ、１２ｋｂ、１３ｋｂ、１４ｋｂ、または１５ｋｂを超える長さを有する、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる前記１つ以上のポリペプチドが、関節内で正常に機能する、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる前記１つ以上のポリペプチドが、抗炎症性である、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記１つ以上のｍＲＮＡが、抗体をコードする、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記抗体が、完全型免疫グロブリン、（Ｆａｂ）２、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはｓｃＦｖである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記１つ以上のｍＲＮＡが、抗体重鎖、軽鎖、またはそれらの断片をコードする、項目１１または１２に記載の方法。
（項目１４）
前記組成物が、それぞれ抗体重鎖及び軽鎖をコードする２つの別個のｍＲＮＡを含む、項目１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記１つ以上のｍＲＮＡによってコードされる前記抗体が、抗ＴＮＦα抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＩＬ−１β抗体、抗ｓＴＮＦＲ−Ｉ抗体、抗−ｓＴＮＦＲ−ＩＩ抗体、抗ＩＬ−２抗体、抗ＩＦＮ−γ抗体、抗ＩＬ−１８抗体、抗ＩＬ−１２抗体、または抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体である、項目１１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記１つ以上のｍＲＮＡが、可溶性受容体をコードする、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
関節疾患、障害、または病状を治療する方法であって、先行項目のいずれか１項に記載の方法を用いて、１つ以上のｍＲＮＡを送達することを含む、前記方法。
（項目１８）
前記関節疾患、障害、または病状は、炎症性疾患、障害、または病状である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記炎症性疾患、障害、または病状が、関節炎である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記炎症性疾患、障害、または病状が、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、痛風、偽性痛風、腱炎、滑液包炎、手根管症候群、骨関節炎、滑膜炎、脊椎炎、アミロイドーシス、腰部脊椎管狭窄症、及び／または仙腸関節機能障害からなる群から選択される、項目１８または１９に記載の方法。
（項目２１）
前記組成物が、１週間に１回投与される、項目１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記組成物が、１ヶ月に２回投与される、項目１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記組成物が、１ヶ月に１回投与される、項目１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記１つ以上のｍＲＮＡが、１つ以上のナノ粒子内に封入される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記１つ以上のナノ粒子が、脂質またはポリマーベースのナノ粒子である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記１つ以上のナノ粒子が、リポソームを含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロールベースの脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２−２００、ＭＣ３、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾールベースの）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡならびにＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記１つ以上のカチオン性脂質は、ｃＫＫ−Ｅ１２：
【化５】
2018500303.tif 000002
を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチジルコリン）、ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））、及びこれらの組み合わせから選択される、項目２７〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記１つ以上のコレステロールベースの脂質が、コレステロールまたはペグ（ＰＥＧ）化コレステロールである、項目２７〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、Ｃ６〜Ｃ２０の長さのアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合された最大５ｋＤａの長さのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、項目２７〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記カチオン性脂質が、モル比で前記リポソームの約３０〜７０％を構成する、項目２７〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、項目２７〜３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを、約５０：２５：２０：５、５０：２０：２５：５、５０：２７：２０：３、４０：３０：２０：１０、４０：３０：２５：５、または４０：３２：２５：３の比で含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記リポソームが、Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、項目２７〜３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記リポソームが、Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを、約５０：２５：２０：５、５０：２０：２５：５、５０：２７：２０：３、４０：３０：２０：１０、４０：３０：２５：５、または４０：３２：２５：３の比で含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記リポソームが、ＨＧＴ５００１、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、項目２７〜３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記リポソームが、ＨＧＴ５００１、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを、約５０：２５：２０：５、５０：２０：２５：５、５０：２７：２０：３、４０：３０：２０：１０、４０：３０：２５：５、または４０：３２：２５：３の比で含む、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記ナノ粒子が、ポリマーベースのナノ粒子を含む、項目２５に記載の方法。
（項目４１）
前記ポリマーベースのナノ粒子が、ＰＥＩを含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記ＰＥＩが、分岐鎖ＰＥＩである、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記ナノ粒子が、約４０〜１００ｎｍ未満のサイズを有する、項目２４〜４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記１つ以上のｍＲＮＡが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記１つ以上の修飾ヌクレオチドが、プソイドウリジン、Ｎ−１−メチル−プソイドウリジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び／または２−チオシチジンを含む、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記１つ以上のｍＲＮＡが、非修飾である、項目１〜４３のいずれか１項に記載の方法。