【手続補正書】
【提出日】平成30年7月17日(2018.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する第1軽鎖および第1重鎖であって、第1軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目および123番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、KおよびRから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、かつ第1重鎖の定常ドメインCH1において、147番目および213番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う）は、EまたはDから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換されている、第1軽鎖および第1重鎖、ならびに
b）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する第2軽鎖および第2重鎖であって、第2軽鎖では、可変ドメインVLが第2重鎖の可変ドメインVHで置き換えられ、定常ドメインCLが第2重鎖の定常ドメインCH1で置き換えられており、かつ第2重鎖では、可変ドメインVHが第2軽鎖の可変ドメインVLで置き換えられ、定常ドメインCH1が第2軽鎖の定常ドメインCLで置き換えられている、第2軽鎖および第2重鎖
を含む、多重特異性抗体。
【請求項２】
・第1軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目および123番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、KおよびRから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、第1重鎖の定常ドメインCH1において、147番目および213番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う）は、EまたはDから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換されており、かつ
・第2重鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸で置換されている、
請求項1に記載の多重特異性抗体。
【請求項３】
i）第1軽鎖の可変ドメインVLにおいて、38番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で置換され、
第1重鎖の可変ドメインVHにおいて、39番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸で置換されており、かつ
ii）第2重鎖の可変ドメインVLにおいて、38番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸（好ましい一態様ではE）で置換され、かつ、第2軽鎖の可変ドメインVHにおいて、39番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で（好ましい一態様ではKまたはRで、一態様ではKで）置換されている、
請求項1または2のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【請求項４】
抗体の三次構造において、第1重鎖のCH3ドメインと第2重鎖のCH3ドメインとが、それぞれの抗体CH3ドメインの間に位置する境界面を形成し、
第1重鎖のCH3ドメインと第2重鎖のCH3ドメインのそれぞれのアミノ酸配列はそれぞれが、抗体の三次構造において該境界面内に位置する一組のアミノ酸を含み、
一方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する前記一組のアミノ酸のうち、少なくとも1つのアミノ酸残基は、元のアミノ酸残基より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換されており、それによって、境界面内で他方の重鎖のCH3ドメイン中に位置するくぼみ内に配置されうる前記一方の重鎖のCH3ドメイン内に位置する突起を、境界面内に生成しており、かつ
他方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する前記一組のアミノ酸のうち、少なくとも1つのアミノ酸残基は、元のアミノ酸残基より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、それによって、前記一方の重鎖のCH3ドメイン中に位置する境界面内の突起がその中に配置されうる前記他方の重鎖のCH3ドメイン中に位置するくぼみを、境界面内に生成している、
請求項1〜3のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【請求項５】
元のアミノ酸残基より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基は、R、F、Y、およびWから選択され、かつ
元のアミノ酸残基より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基は、A、S、T、およびVから選択される、
請求項4に記載の多重特異性抗体。
【請求項６】
導入されたシステイン残基によって一方の重鎖のCH3ドメインと他方の重鎖のCH3ドメインとの間にジスルフィド架橋が形成されうるように、
一方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する一組のアミノ酸のうち、第1のアミノ酸がシステインで置換され、かつ
他方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する一組のアミノ酸のうち、境界面内で前記第1のアミノ酸に面している第2のアミノ酸がシステインで置換されている、
請求項4または5に記載の多重特異性抗体。
【請求項７】
a）SEQ ID NO:32の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH Ang2＞）およびSEQ ID NO:33の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL Ang2＞）を含み、かつ
b）SEQ ID NO:31の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH VEGF＞）およびSEQ ID NO:30の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL VEGF＞）を含む、
ヒトアンジオポエチン-2およびヒトVEGFに特異的に結合する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【請求項８】
a）SEQ ID NO:36の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH IL17＞）およびSEQ ID NO:37の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL IL17＞）を含み、かつ
b）SEQ ID NO:35の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH TWEAK＞）およびSEQ ID NO:34の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL TWEAK＞）を含む、
ヒトTWEAKおよびヒトIL17に特異的に結合する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【請求項９】
a）SEQ ID NO:40の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH Her1Her3＞）およびSEQ ID NO:41の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL Her1Her3＞）を含み、かつ
b）SEQ ID NO:39の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH cMet＞）およびSEQ ID NO:38の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL cMet＞）を含む、
ヒトHer1、ヒトHer3、およびヒトcMetに特異的に結合する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【請求項１０】
・a）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する、請求項1〜9のいずれか一項に定義する第1軽鎖、
b）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する、請求項1〜9のいずれか一項に定義する第1重鎖、
c）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する、請求項1〜9のいずれか一項に定義する第2軽鎖、および
d）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する、請求項1〜9のいずれか一項に定義する第2重鎖
をコードする核酸を含むベクターで宿主細胞を形質転換する工程、
・該多重特異性抗体の合成を可能にする条件下で該宿主細胞を培養する工程、ならびに
・該宿主細胞培養から該多重特異性抗体を回収する工程
を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の多重特異性抗体を調製するための方法。
【請求項１１】
a）請求項1〜9のいずれか一項に定義する第1軽鎖、
b）請求項1〜9のいずれか一項に定義する第2軽鎖、
c）請求項1〜9のいずれか一項に定義する第1重鎖、または
d）請求項1〜9のいずれか一項に定義する第2重鎖
のアミノ酸配列をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項11に記載の核酸を含み、宿主細胞において該核酸を発現させる能力を有するベクター。
【請求項１３】
a）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する請求項1〜9のいずれか一項に定義する第1軽鎖をコードする核酸を含むベクター、
b）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する請求項1〜9のいずれか一項に定義する第1重鎖をコードする核酸を含むベクター、
c）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する請求項1〜9のいずれか一項に定義する第2軽鎖をコードする核酸を含むベクター、および
d）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する請求項1〜9のいずれか一項に定義する第2重鎖をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞。
【請求項１４】
少なくとも1種類の薬学的に許容される担体と組み合わされた請求項1〜9のいずれか一項に記載の多重特異性抗体を含む薬学的組成物。
【請求項１５】
医薬として使用するための、請求項1〜9のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
本発明によれば、反対の電荷を持つアミノ酸をCH1ドメインおよびCLドメイン中の特別な位置に導入することにより、多重特異性抗体を生産する際の望ましくない副生成物の形成を低減することができる。これにより、所望の多重特異性抗体の収量を増加させることができる。
[本発明1001]
a）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する第1軽鎖および第1重鎖、ならびに
b）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する第2軽鎖および第2重鎖であって、第2軽鎖では、可変ドメインVLが第2重鎖の可変ドメインVHで置き換えられ、定常ドメインCLが第2重鎖の定常ドメインCH1で置き換えられており、かつ第2重鎖では、可変ドメインVHが第2軽鎖の可変ドメインVLで置き換えられ、定常ドメインCH1が第2軽鎖の定常ドメインCLで置き換えられている、第2軽鎖および第2重鎖
を含み、
i）第1軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目および123番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、かつ第1重鎖の定常ドメインCH1において、147番目および213番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う）は、EまたはDから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換されているか、または
ii）第2重鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目および123番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、かつ第2軽鎖の定常ドメインCH1において、147番目および213番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う）は、EまたはDから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換されている、
多重特異性抗体。
[本発明1002]
i）第1軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目および123番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、第1重鎖の定常ドメインCH1において、147番目および213番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う）は、EまたはDから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換されており、かつ第2重鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸で置換されているか、または
ii）第2重鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目および123番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、第2軽鎖の定常ドメインCH1において、147番目および213番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatのEUインデックスに従う）は、EまたはDから選択されるアミノ酸で互いに独立して置換され、かつ第1軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸で置換されている、
本発明1001の多重特異性抗体。
[本発明1003]
iii）第1軽鎖の可変ドメインVLにおいて、38番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で置換され、
第1重鎖の可変ドメインVHにおいて、39番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸で置換されており、かつ
iv）第2重鎖の可変ドメインVLにおいて、38番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、EおよびDから選択されるアミノ酸（好ましい一態様ではE）で置換され、かつ、第2軽鎖の可変ドメインVHにおいて、39番目のアミノ酸（ナンバリングはKabatに従う）は、K、R、およびHから選択されるアミノ酸で（好ましい一態様ではKまたはRで、一態様ではKで）置換されている、
前記本発明のいずれかの多重特異性抗体。
[本発明1004]
抗体の三次構造において、第1重鎖のCH3ドメインと第2重鎖のCH3ドメインとが、それぞれの抗体CH3ドメインの間に位置する境界面を形成し、
第1重鎖のCH3ドメインと第2重鎖のCH3ドメインのそれぞれのアミノ酸配列はそれぞれが、抗体の三次構造において該境界面内に位置する一組のアミノ酸を含み、
一方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する前記一組のアミノ酸のうち、少なくとも1つのアミノ酸残基は、元のアミノ酸残基より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換されており、それによって、境界面内で他方の重鎖のCH3ドメイン中に位置するくぼみ内に配置されうる前記一方の重鎖のCH3ドメイン内に位置する突起を、境界面内に生成しており、かつ
他方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する前記一組のアミノ酸のうち、少なくとも1つのアミノ酸残基は、元のアミノ酸残基より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、それによって、前記一方の重鎖のCH3ドメイン中に位置する境界面内の突起がその中に配置されうる前記他方の重鎖のCH3ドメイン中に位置するくぼみを、境界面内に生成している、
前記本発明のいずれかの多重特異性抗体。
[本発明1005]
元のアミノ酸残基より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基は、R、F、Y、およびWから選択され、かつ
元のアミノ酸残基より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基は、A、S、T、およびVから選択される、
本発明1004の多重特異性抗体。
[本発明1006]
導入されたシステイン残基によって一方の重鎖のCH3ドメインと他方の重鎖のCH3ドメインとの間にジスルフィド架橋が形成されうるように、
一方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する一組のアミノ酸のうち、第1のアミノ酸がシステインで置換され、かつ
他方の重鎖のCH3ドメイン中の境界面に位置する一組のアミノ酸のうち、境界面内で前記第1のアミノ酸に面している第2のアミノ酸がシステインで置換されている、
本発明1004または1005の多重特異性抗体。
[本発明1007]
a）SEQ ID NO:32の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH Ang2＞）およびSEQ ID NO:33の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL Ang2＞）を含み、かつ
b）SEQ ID NO:31の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH VEGF＞）およびSEQ ID NO:30の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL VEGF＞）を含む、
ヒトアンジオポエチン-2およびヒトVEGFに特異的に結合する、前記本発明のいずれかの多重特異性抗体。
[本発明1008]
a）SEQ ID NO:36の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH IL17＞）およびSEQ ID NO:37の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL IL17＞）を含み、かつ
b）SEQ ID NO:35の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH TWEAK＞）およびSEQ ID NO:34の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL TWEAK＞）を含む、
ヒトTWEAKおよびヒトIL17に特異的に結合する、本発明1001〜1006のいずれかの多重特異性抗体。
[本発明1009]
a）SEQ ID NO:40の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH Her1Her3＞）およびSEQ ID NO:41の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL Her1Her3＞）を含み、かつ
b）SEQ ID NO:39の可変重鎖ドメイン（VH）（＜VH cMet＞）およびSEQ ID NO:38の可変軽鎖ドメイン（VL）（＜VL cMet＞）を含む、
ヒトHer1、ヒトHer3、およびヒトcMetに特異的に結合する、本発明1001〜1006のいずれかの多重特異性抗体。
[本発明1010]
・a）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する、本発明1001〜1009のいずれかに定義する第1軽鎖、
b）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する、本発明1001〜1009のいずれかに定義する第1重鎖、
c）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する、本発明1001〜1009のいずれかに定義する第2軽鎖、および
d）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する、本発明1001〜1009のいずれかに定義する第2重鎖
をコードする核酸を含むベクターで宿主細胞を形質転換する工程、
・該多重特異性抗体の合成を可能にする条件下で該宿主細胞を培養する工程、ならびに
・該宿主細胞培養から該多重特異性抗体を回収する工程
を含む、本発明1001〜1009のいずれかの多重特異性抗体を調製するための方法。
[本発明1011]
a）本発明1001〜1009のいずれかに定義する第1軽鎖、
b）本発明1001〜1009のいずれかに定義する第2軽鎖、
c）本発明1001〜1009のいずれかに定義する第1重鎖、または
d）本発明1001〜1009のいずれかに定義する第2重鎖
のアミノ酸配列をコードする核酸。
[本発明1012]
本発明1011の核酸を含み、宿主細胞において該核酸を発現させる能力を有するベクター。
[本発明1013]
a）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する本発明1001〜1009のいずれかに定義する第1軽鎖をコードする核酸を含むベクター、
b）第1抗原に特異的に結合する第1抗体に由来する本発明1001〜1009のいずれかに定義する第1重鎖をコードする核酸を含むベクター、
c）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する本発明1001〜1009のいずれかに定義する第2軽鎖をコードする核酸を含むベクター、および
d）第2抗原に特異的に結合する第2抗体に由来する本発明1001〜1009のいずれかに定義する第2重鎖をコードする核酸を含むベクター
を含む宿主細胞。
[本発明1014]
少なくとも1種類の薬学的に許容される担体と組み合わされた本発明1001〜1009のいずれかの多重特異性抗体を含む薬学的組成物。
[本発明1015]
医薬として使用するための、本発明1001〜1009のいずれかの多重特異性抗体。