【手続補正書】
【提出日】平成30年7月12日(2018.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、かつ配列番号１のアミノ酸配列に対して置換Ｄ１０９Ｃを含有するＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項２】
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する、請求項１に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項３】
１０９位におけるシステインに連結されたポリエチレングリコール部分を有し、該ポリエチレングリコール部分の分子量が、５〜４０ｋＤａの間である、請求項１に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項４】
ＩＬ−２変異体タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対してＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆからなる群から選択される置換のうちの少なくとも１つを含有する、請求項１に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項５】
配列番号１のアミノ酸配列に対して置換Ｃ１２５Ｓをさらに含む、請求項４に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項６】
配列番号１のアミノ酸配列に対して置換Ｎ８８Ｒおよび置換Ｃ１２５Ｓを含む、請求項３に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項７】
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する、請求項６に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項８】
請求項３に記載のＩＬ−２変異体タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項９】
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性、配列番号１のアミノ酸配列に対してＤ１０９Ｃの置換を有し、かつＴ細胞を活性化させる能力を有するヒトＩＬ−２変異体タンパク質の循環半減期を延長する方法であって、ポリエチレングリコール部分を、１０９位におけるシステイン残基に連結するステップを含む、方法。
【請求項１０】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリエチレングリコール部分が、５ｋＤａ〜４０ｋＤａの間の分子量を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対してＮ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆからなる群から選択される置換のうちの少なくとも１つを含有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対して置換Ｃ１２５Ｓをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対して置換Ｎ８８Ｒおよび置換Ｃ１２５Ｓを含有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、置換Ｎ８８Ｒ、Ｄ１０９ＣおよびＣ１２５Ｓを含有する配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
【請求項１７】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、置換Ｎ８８Ｒ、Ｄ１０９ＣおよびＣ１２５Ｓを含有する配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、かつ配列番号１のアミノ酸配列に対して置換Ｄ１０９Ｃを含有するＩＬ−２変異体タンパク質を含む、対象において自己免疫疾患を処置するための医薬組成物。
【請求項１９】
前記自己免疫疾患が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、移植片対宿主病および自己免疫性血管炎からなる群から選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記ＩＬ−２変異体タンパク質が、置換Ｎ８８Ｒ、Ｄ１０９ＣおよびＣ１２５Ｓを含有する配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１８または１９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
化学的に活性化させたＰＥＧであって、タンパク質へのコンジュゲーションのための、多数の異なる、化学的に反応性の基を伴い、第一級アミンを含有するアミノ酸残基またはチオール基へのコンジュゲーションを可能とするＰＥＧが開発されている。これらのうちで、システイン残基上に固有に存在するチオール基は、ＰＥＧの、タンパク質への、最も選択的なコンジュゲーションを可能とし、マレイミド反応性基またはヨードアセトアミド反応性基を伴うＰＥＧは、遊離システインのチオールと極めて選択的に反応する。細胞外タンパク質内の大半のシステイン残基は、タンパク質のコンフォメーションを安定化させるジスルフィド結合に関与するが、少数の遊離（不対合）システイン残基は通例、タンパク質の内部に埋もれている（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｍ．Ｔ．ら、１９９９年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、１９９９年、１２巻：５３５〜４８頁）。タンパク質内の遊離システイン残基へのＰＥＧコンジュゲーションは、天然の露出された遊離システイン残基、または新規の遊離システイン残基の導入を必要とする。新規の遊離システインの、タンパク質への工学的導入は、導入された新規のシステインが、他のシステインと共に、不適切な鎖内ジスルフィド結合を形成し、これによりタンパク質のミスフォールディングを引き起こしうる、または他の分子と共に鎖間ジスルフィド結合を形成し、これによりタンパク質の凝集を引き起こすしうる危険性を伴う。システイン残基を突然変異させたＩＬ−２変異体は、ジスルフィド結合の誤対合に起因して、活性の実質的な低減を呈しうる（Ｗａｎｇ，Ａ．ら、１９８４年、Ｓｃｉｅｎｃｅ．、２２４巻：１４３１〜３頁）。本明細書では、本発明は、新規の遊離システイン残基の、ＩＬ−２変異体タンパク質への工学的導入であって、適正なタンパク質フォールディングに適合性であり、チオール反応性ＰＥＧの部位特異的コンジュゲーションを可能とし、Ｔｒｅｇ上のＩＬ２Ｒαβγに結合し、これを活性化させる能力を保持するＩＬ−２−ＰＥＧコンジュゲートを結果としてもたらす工学的導入に焦点を絞る。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、置換Ｄ１０９Ｃを含有し、かつＴ細胞を活性化させる能力を有するＩＬ−２変異体タンパク質。
（項目２）
配列番号１に対して９８％超の配列同一性を有する、項目１に記載のタンパク質。
（項目３）
１０９位におけるシステインに連結されたポリエチレングリコール部分を有し、該ポリエチレングリコール部分の分子量が、５〜４０ｋＤａの間である、項目１に記載のタンパク質。
（項目４）
ＩＬ−２タンパク質が、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆからなる群から選択される置換のうちの少なくとも１つを含有する、項目１に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
（項目５）
置換Ｃ１２５Ｓをさらに含む、項目４に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
（項目６）
前記ＩＬ−２タンパク質の配列が、置換Ｎ８８Ｒおよび置換Ｃ１２５Ｓを含有する、項目３に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
（項目７）
配列番号１に対して９８％の配列同一性を有する、項目６に記載のＩＬ−２変異体タンパク質。
（項目８）
項目４に記載のＰＥＧ化タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目９）
配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性、Ｄ１０９Ｃの置換を有し、Ｔ細胞を活性化させる能力を有するヒトＩＬ−２変異体タンパク質の循環半減期を延長する方法であって、ポリエチレングリコール部分を、１０９位におけるシステイン残基に連結するステップを含み、該ポリエチレングリコール部分が、該タンパク質の循環半減期を、該ポリエチレングリコール部分を伴わない同じタンパク質と比較して延長するのに十分な長さである方法。
（項目１０）
前記タンパク質が、配列番号１に対して９８％超の配列同一性を有する、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記タンパク質が、１０９位におけるシステインに連結された、分子量が５ｋＤａ〜４０ｋＤａの間であるポリエチレングリコール部分を有する、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記タンパク質が、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆからなる群から選択される置換のうちの少なくとも１つを含有する、項目９に記載の方法。
（項目１３）
前記タンパク質が、置換Ｃ１２５Ｓをさらに含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記タンパク質が、置換Ｎ８８Ｒおよび置換Ｃ１２５Ｓを含有する、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記タンパク質が、配列番号１に対して９８％の配列同一性を有する、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
医薬組成物を、ヒト調節性Ｔ細胞濃度を刺激するのに十分な治療有効用量で投与する、項目９に記載の方法。