【手続補正書】
【提出日】平成30年4月12日(2018.4.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３０】
上記の明細書に挙げられた総ての刊行物は引用することにより本明細書の一部とされる。記載される本発明の方法および系の様々な改変および変形が、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、当業者に自明である。本発明は特定の好ましい実施形態に関して記載されているが、特許請求される本発明はこのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないと理解されるべきである。実際に、分子生物学、ウイルス学または関連の分野の熟練者に自明である、本発明を実施するための記載の様式の様々な改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあるものとする。
本発明の実施形態として、例えば以下を挙げることができる。
(1)  非構造タンパク質（ｎｓｐ）−１０、ｎｓｐ−１４、ｎｓｐ−１５またはｎｓｐ−１６の１以上に突然変異を含んでなるポリタンパク質をコードする変異型レプリカーゼ遺伝子を含んでなる、弱毒化生コロナウイルス。
(2)  前記変異型レプリカーゼ遺伝子が、
配列番号６の８５位でのＰｒｏからＬｅｕ、
配列番号７の３９３位でのＶａｌからＬｅｕ、
配列番号８の１８３位でのＬｅｕからＩｌｅ、
配列番号９の２０９位でのＶａｌからＩｌｅ
のリストから選択される１以上のアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、(1)に記載のコロナウイルス。
(3)  前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号６の８５位でのＰｒｏからＬｅｕへのアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、(1)または(2)に記載のコロナウイルス。
(4)  前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号７の３９３位でのＶａｌからＬｅｕ、配列番号８の１８３位でのＬｅｕからＩｌｅ、および配列番号９の２０９位でのＶａｌからＩｌｅへのアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、(1)〜(3)のいずれかに記載のコロナウイルス。
(5)  前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号６の８５位でのＰｒｏからＬｅｕ、配列番号７の３９３位でのＶａｌからＬｅｕ、配列番号８の１８３位でのＬｅｕからＩｌｅ、および配列番号９の２０９位でのＶａｌからＩｌｅへのアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、(1)〜(4)のいずれかに記載のコロナウイルス。
(6)  前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号１として示される配列と比較して、
ヌクレオチド１２１３７位でのＣからＴ、
ヌクレオチド１８１１４位でのＧからＣ、
ヌクレオチド１９０４７位でのＴからＡ、および
ヌクレオチド２０１３９位でのＧからＡ
のリストから選択される１以上のヌクレオチド置換を含んでなる、(1)〜(5)のいずれかに記載のコロナウイルス。
(7)  伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）である、(1)〜(6)のいずれかに記載のコロナウイルス。
(8)  ＩＢＶ  Ｍ４１である、(1)〜(7)のいずれかに記載のコロナウイルス。
(9)  その少なくとも一部はＭ４１以外のＩＢＶ血清型由来のものであるＳタンパク質を含んでなる、(8)に記載のコロナウイルス。
(10)  前記Ｓ１サブユニットがＭ４１以外のＩＢＶ血清型由来のものである、(9)に記載のコロナウイルス。
(11)  前記Ｓタンパク質がＭ４１以外のＩＢＶ血清型由来のものである、(9)に記載のコロナウイルス。
(12)  ウイルスが発育卵に投与された際に、その胚に対して病原性を示さずにそれが複製可能であるように、対応する野生型レプリカーゼを発現するコロナウイルスと比較して病原性が低減されている、(1)〜(11)のいずれかに記載のコロナウイルス。
(13)  (1)〜(6)のいずれかに記載の変異型レプリカーゼ遺伝子。
(14)  (13)に記載の変異型コロナウイルスレプリカーゼ遺伝子によってコードされる、タンパク質。
(15)  (13)に記載のレプリカーゼ遺伝子を含んでなる、プラスミド。
(16)  (1)〜(12)のいずれかに記載のコロナウイルスを作製するための方法であって、次の工程：
（ｉ）(15)に記載のプラスミドを宿主細胞中にトランスフェクトする工程、
（ｉｉ）前記宿主細胞にレプリカーゼ遺伝子を有するコロナウイルス株のゲノムを含んでなる組換えウイルスを感染させる工程、
（ｉｉｉ）改変レプリカーゼ遺伝子を生成するために、前記プラスミド中のレプリカーゼ遺伝子配列と前記組換えウイルスゲノム中の対応する配列との間で相同組換えを起こさせる工程、および
（ｉｖ）前記改変レプリカーゼ遺伝子を含んでなる組換えウイルスについて選択する工程
を含んでなる、方法。
(17)  前記組換えウイルがワクシニアウイルスである、(16)に記載の方法。
(18)  （ｖ）工程（ｉｖ）からの組換えウイルスのＤＮＡから前記改変レプリカーゼ遺伝子を含んでなる組換えコロナウイルスを回収する工程をさらに含む、(16)または(17)に記載の方法。
(19)  (1)〜(12)のいずれかに記載のコロナウイルスを産生可能な細胞。
(20)  (1)〜(12)のいずれかに記載のコロナウイルスおよび薬学上許容可能な担体を含んでなる、ワクチン。
(21)  対象における疾患を治療および／または予防するための方法であって、(20)に記載のワクチンをその対象に投与する工程を含んでなる、方法。
(22)  対象における疾患の治療および／または予防における使用のための、(20)に記載のワクチン。
(23)  対象における疾患を治療および／または予防するためのワクチンの製造における、(1)〜(12)のいずれかに記載のコロナウイルスの使用。
(24)  前記疾患が伝染性気管支炎（ＩＢ）である、(21)、(22)または(23)に記載の方法、ワクチンまたは使用。
(25)  前記投与方法が、点眼投与、鼻腔内投与、飲水投与、孵化後注射および卵内注射からなる群から選択される、(21)に記載の方法。
(26)  前記ワクチン接種が卵内ワクチン接種である、(24)に記載の方法。
(27)  (20)に記載のワクチンを生産するための方法であって、
(19)に記載の細胞に(1)〜(12)のいずれかに記載のコロナウイルスを感染させる工程を含んでなる、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非構造タンパク質（ｎｓｐ）−１０、ｎｓｐ−１４、ｎｓｐ−１５またはｎｓｐ−１６の１以上に突然変異を含んでなるポリタンパク質をコードする変異型レプリカーゼ遺伝子を含んでなる、弱毒化生コロナウイルス。
【請求項２】
前記変異型レプリカーゼ遺伝子が、
配列番号６の８５位でのＰｒｏからＬｅｕ、
配列番号７の３９３位でのＶａｌからＬｅｕ、
配列番号８の１８３位でのＬｅｕからＩｌｅ、
配列番号９の２０９位でのＶａｌからＩｌｅ
のリストから選択される１以上のアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、請求項１に記載のコロナウイルス。
【請求項３】
前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号６の８５位でのＰｒｏからＬｅｕへのアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、請求項１または２に記載のコロナウイルス。
【請求項４】
前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号７の３９３位でのＶａｌからＬｅｕ、配列番号８の１８３位でのＬｅｕからＩｌｅ、および配列番号９の２０９位でのＶａｌからＩｌｅへのアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、請求項１〜３のいずれか一項に記載のコロナウイルス。
【請求項５】
前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号６の８５位でのＰｒｏからＬｅｕ、配列番号７の３９３位でのＶａｌからＬｅｕ、配列番号８の１８３位でのＬｅｕからＩｌｅ、および配列番号９の２０９位でのＶａｌからＩｌｅへのアミノ酸突然変異を含んでなるタンパク質をコードする、請求項１〜４のいずれか一項に記載のコロナウイルス。
【請求項６】
前記レプリカーゼ遺伝子が、配列番号１として示される配列と比較して、
ヌクレオチド１２１３７位でのＣからＴ、
ヌクレオチド１８１１４位でのＧからＣ、
ヌクレオチド１９０４７位でのＴからＡ、および
ヌクレオチド２０１３９位でのＧからＡ
のリストから選択される１以上のヌクレオチド置換を含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載のコロナウイルス。
【請求項７】
伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコロナウイルス。
【請求項８】
ＩＢＶ  Ｍ４１である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のコロナウイルス。
【請求項９】
その少なくとも一部はＭ４１以外のＩＢＶ血清型由来のものであるＳタンパク質を含んでなる、請求項８に記載のコロナウイルス。
【請求項１０】
前記Ｓ１サブユニットがＭ４１以外のＩＢＶ血清型由来のものである、請求項９に記載のコロナウイルス。
【請求項１１】
前記Ｓタンパク質がＭ４１以外のＩＢＶ血清型由来のものである、請求項９に記載のコロナウイルス。
【請求項１２】
ウイルスが発育卵に投与された際に、その胚に対して病原性を示さずにそれが複製可能であるように、対応する野生型レプリカーゼを発現するコロナウイルスと比較して病原性が低減されている、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のコロナウイルス。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の変異型レプリカーゼ遺伝子。
【請求項１４】
請求項１３に記載の変異型コロナウイルスレプリカーゼ遺伝子によってコードされる、タンパク質。
【請求項１５】
請求項１３に記載のレプリカーゼ遺伝子を含んでなる、プラスミド。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のコロナウイルスを作製するための方法であって、次の工程：
（ｉ）請求項１５に記載のプラスミドを宿主細胞中にトランスフェクトする工程、
（ｉｉ）前記宿主細胞にレプリカーゼ遺伝子を有するコロナウイルス株のゲノムを含んでなる組換えウイルスを感染させる工程、
（ｉｉｉ）改変レプリカーゼ遺伝子を生成するために、前記プラスミド中のレプリカーゼ遺伝子配列と前記組換えウイルスゲノム中の対応する配列との間で相同組換えを起こさせる工程、および
（ｉｖ）前記改変レプリカーゼ遺伝子を含んでなる組換えウイルスについて選択する工程
を含んでなる、方法。
【請求項１７】
前記組換えウイルがワクシニアウイルスである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ｖ）工程（ｉｖ）からの組換えウイルスのＤＮＡから前記改変レプリカーゼ遺伝子を含んでなる組換えコロナウイルスを回収する工程をさらに含む、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のコロナウイルスを産生可能な細胞。
【請求項２０】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のコロナウイルスおよび薬学上許容可能な担体を含んでなる、ワクチン。
【請求項２１】
対象における疾患を治療および／または予防するための方法において使用するための請求項２０に記載のワクチンであって、前記方法が、前記ワクチンをその対象に投与する工程を含んでなる、ワクチン。
【請求項２２】
前記疾患が伝染性気管支炎（ＩＢ）である、請求項２１に記載のワクチン。
【請求項２３】
対象における疾患を治療および／または予防するためのワクチンの製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のコロナウイルスの使用。
【請求項２４】
前記疾患が伝染性気管支炎（ＩＢ）である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記投与方法が、点眼投与、鼻腔内投与、飲水投与、孵化後注射および卵内注射からなる群から選択される、請求項２１又は２２に記載のワクチン。
【請求項２６】
前記ワクチン接種が卵内ワクチン接種である、請求項２５に記載のワクチン。
【請求項２７】
請求項２０に記載のワクチンを生産するための方法であって、
請求項１９に記載の細胞に請求項１〜１２のいずれか一項に記載のコロナウイルスを感染させる工程を含んでなる、方法。