【手続補正書】
【提出日】平成30年10月5日(2018.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト化重鎖可変領域（ＶＨ）とヒト化軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む単離された抗体又はその断片であって、
前記ＶＨが、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含み、
前記ＶＬが、
（ｄ）配列番号２９の残基２４〜３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号２９の残基５０〜５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び
（ｆ）配列番号２９の残基８９〜９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含み、且つ
前記抗体又はその断片がヒトＯＸ４０に特異的に結合することができる、単離された抗体又はその断片。
【請求項２】
ヒト化重鎖可変領域（ＶＨ）とヒト化軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＨがアミノ酸配列、配列番号５９を含み、前記ＶＬがアミノ酸配列、配列番号２９を含み、且つ前記抗体又はその断片がヒトＯＸ４０に特異的に結合することができる、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
重鎖アミノ酸配列、配列番号７１及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号３０を含む、請求項２に記載の抗体又はその断片。
【請求項４】
前記抗原結合断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｄｓＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、又はｓｃ（Ｆｖ）２断片、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１に記載の抗体又は断片。
【請求項５】
請求項１に記載の抗体又はその断片と担体とを含む組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の抗体又はその断片をコードする核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項７】
配列番号６０の核酸、配列番号３１の核酸、配列番号７２の核酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項９】
請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項１０】
抗体又はその断片の作製方法であって、前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記抗体又はその断片が発現する条件下で請求項９に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記抗体又はその断片を回収するステップとを含む方法。
【請求項１１】
請求項８に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
配列番号９１のアミノ酸１０８〜１４６の範囲内にあるヒトＯＸ４０のエピトープに結合する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記エピトープが少なくとも配列番号９１のアミノ酸ロイシン１１６及びアラニン１２６を含む、請求項１２に記載の抗体又はその断片。
【請求項１４】
治療を必要としている対象に、ヒト化重鎖可変領域（ＶＨ）とヒト化軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体又はその断片の有効量を投与するステップを含む、対象の癌を治療する方法であって、
前記ＶＨが、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含み、
前記ＶＬが、
（ｄ）配列番号２９の残基２４〜３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号２９の残基５０〜５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び
（ｆ）配列番号２９の残基８９〜９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含み、且つ
前記抗体又はその断片はヒトＯＸ４０に特異的に結合することができる、前記方法。
【請求項１５】
前記癌が固形腫瘍である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体若しくはその断片又は組成物の投与により腫瘍成長を阻害することができるか、腫瘍縮小を促進することができるか、又は両方である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
腫瘍成長阻害がＴ細胞の存在下で実現する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体又はその抗原結合断片がヒト化重鎖可変領域（ＶＨ）とヒト化軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨはアミノ酸配列、配列番号５９を含み、前記ＶＬはアミノ酸配列、配列番号２９を含み、且つ前記抗体又はその断片はヒトＯＸ４０に特異的に結合することができる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体又は断片が、重鎖アミノ酸配列、配列番号７１及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号３０を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗原結合断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｄｓＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、又はｓｃ（Ｆｖ）２断片、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
治療を必要としている対象に、請求項１４に記載の抗体又はその断片と担体とを含む組成物の有効量を投与するステップを含む、対象の癌を治療する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本開示は、１００アミノ酸以下からなる単離ペプチドを更に提供し、このペプチドには、提供される抗体又はその断片が特異的に結合し得る。特定の態様において、ペプチドは配列番号９１のアミノ酸１１６〜１２６を含む。特定の態様において、ペプチドは、Ｌ１１６及びＡ１２６を除く任意の位置における１、２、３、４、５、又は６個の単一アミノ酸置換、欠失、又は挿入を除いて配列番号９１のアミノ酸１０８〜１４６を含む。
この発明はまた、以下に関する。
［１］
ヒト化重鎖可変領域（ＶＨ）とヒト化軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体又はその抗原結合断片であって、
前記ＶＨが、式：
ＨＦＷ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＷ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＷ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＷ４
（式中、ＨＦＷ１は配列番号６又は配列番号７であり、ＨＣＤＲ１は配列番号８であり、ＨＦＷ２は配列番号９であり、ＨＣＤＲ２は配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６であり、ＨＦＷ３は配列番号１７であり、ＨＣＤＲ３は配列番号２５、配列番号２６、又は配列番号２７であり、及びＨＦＷ４は配列番号２８である）を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＶＬがアミノ酸配列、配列番号２９又は配列番号３２を含み、及び
ヒトＯＸ４０に特異的に結合することができる抗体又はその断片。
［２］
前記ＨＦＷ２のアミノ酸配列が、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、又は配列番号１３である、［１］に記載の抗体又はその断片。
［３］
前記ＨＦＷ３のアミノ酸配列が、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、又は配列番号２４である、［１］又は［２］に記載の抗体又はその断片。
［４］
前記ＶＨがアミノ酸配列、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、又は配列番号６７を含む、［１］〜［３］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［５］
前記ＶＬがアミノ酸配列、配列番号２９を含み、且つ前記ＶＨがアミノ酸配列、配列番号５９を含む、［１］〜［４］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［６］
前記ＶＬのＣ末端に融合した軽鎖定常領域又はその断片を更に含む、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［７］
前記軽鎖定常領域がヒトκ定常領域である、［６］に記載の抗体又はその断片。
［８］
前記ＶＨのＣ末端に融合した重鎖定常領域又はその断片を更に含む、［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［９］
前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ１定常領域、ヒトＩｇＧ４Ｐ定常領域、ヒトＩｇＧ１ＴＭ定常領域又はマウスＩｇＧ１定常領域である、［８］に記載の抗体又はその断片。
［１０］
前記重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１定常領域である、［９］に記載の抗体又はその断片。
［１１］
重鎖アミノ酸配列、配列番号７１及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号３０を含む、［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［１２］
前記抗原結合断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｄｓＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、又はｓｃ（Ｆｖ）２断片、又はこれらの任意の組み合わせである、［１］〜［１１］のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
［１３］
カニクイザル、又はアカゲザルＯＸ４０に特異的に結合することができる、［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［１４］
ヒト、カニクイザル、アカゲザル、又はこれらの任意の組み合わせ由来のジャーカット細胞、初代活性化ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞上に発現するとおりのＯＸ４０に特異的に結合することができる、［１３］に記載の抗体又はその断片。
［１５］
マウス又はラットＯＸ４０に結合しない、［１］〜［１４］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［１６］
関連する腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）タンパク質と交差反応しない、［１］〜［１５］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［１７］
初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上に発現するヒトＯＸ４０に対する結合親和性が、フローサイトメトリーによって計測するとき約２５０ｐＭ〜約３７０ｐＭである、［１４］に記載の抗体又はその断片。
［１８］
前記結合親和性が約３１２ｐＭである、［１７］に記載の抗体又はその断片。
［１９］
フローサイトメトリーによって計測するとき、初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に対する２０％レセプター占有率（ＥＣ２０）を約６３〜約９３ｐＭで、初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に対する５０％レセプター占有率（ＥＣ５０）を約２５０〜約３７０ｐＭで、及び初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に対する９０％レセプター占有率（ＥＣ９０）を約２２９０〜約３３３０ｐＭで実現することができる、［１７］又は［１８］に記載の抗体又はその断片。
［２０］
ＥＣ２０が約７８ｐＭであり、ＥＣ５０が約３１２ｐＭであり、及びＥＣ９０が約２８１０ｐＭである、［１９］に記載の抗体又はその断片。
［２１］
ＯＸ４０過剰発現ジャーカット細胞上に発現するヒトＯＸ４０に対する結合親和性が、フローサイトメトリーによって計測するとき約２５０ｐＭ〜約６００ｐＭである、［１４］に記載の抗体又はその断片。
［２２］
前記結合親和性が約４２４ｐＭである、［２１］に記載の抗体又はその断片。
［２３］
フローサイトメトリーによって計測するとき、ＯＸ４０過剰発現ジャーカット細胞に対するＥＣ２０を約６０〜約１５０ｐＭで、ＯＸ４０過剰発現ジャーカット細胞に対するＥＣ５０を約２５０〜約６００ｐＭで、及びＯＸ４０過剰発現ジャーカット細胞に対するＥＣ９０を約２２６０〜約４３８０ｐＭで実現することができる、［２１］又は［２２］に記載の抗体又はその断片。
［２４］
ＥＣ２０が約１０６ｐＭであり、ＥＣ５０が約４２４ｐＭであり、及びＥＣ９０が約３８２０ｐＭである、［２３］に記載の抗体又はその断片。
［２５］
初代活性化カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞上に発現するカニクイザルＯＸ４０に対する結合親和性が、フローサイトメトリーによって計測するとき約３４０ｐＭ〜約８２０ｐＭである、［１４］に記載の抗体又はその断片。
［２６］
前記結合親和性が約５８０ｐＭである、［２５］に記載の抗体又はその断片。
［２７］
初代活性化アカゲザルＣＤ４＋Ｔ細胞上に発現するアカゲザルＯＸ４０に対する結合親和性が、フローサイトメトリーによって計測するとき約１３０ｐＭ〜約６００ｐＭである、［１４］に記載の抗体又はその断片。
［２８］
前記結合親和性が約３７０ｐＭである、［２７］に記載の抗体又はその断片。
［２９］
プレートベースのアッセイにおいて活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の用量依存的増殖及び初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞における用量依存的サイトカイン放出を誘導することができる、［１］〜［２８］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［３０］
全てフローサイトメトリーによって計測するとき、２０％最大増殖応答（ＥＣ２０）を初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞において約１４ｐＭ〜約２８ｐＭの抗体濃度で実現することができ、５０％最大増殖応答（ＥＣ５０）を初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞において約０．３ｐＭ〜約１３０ｐＭの抗体濃度で実現することができ、及び９０％最大増殖応答（ＥＣ９０）を初代活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞において約５０ｐＭ〜約９０ｐＭの抗体濃度で実現することができる、［２９］に記載の抗体又はその断片。
［３１］
ＥＣ２０が約２１ｐＭであり、ＥＣ５０が約２８ｐＭであり、及びＥＣ９０が約７２ｐＭである、［３０］に記載の抗体又はその断片。
［３２］
前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−８、ＩＬ−１２  ｐ７０、ＩＬ−１β、又はこれらの任意の組み合わせである、［２９］〜［３１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［３３］
前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、又はこれらの任意の組み合わせである、［３２］に記載の抗体又はその断片。
［３４］
初代活性化カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞及び初代活性化アカゲザルＣＤ４＋Ｔ細胞においてＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びサイトカイン放出を実現することができる、［１］〜［２８］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［３５］
ＦｃγＲ発現細胞の存在下でＯＸ４０発現Ｔ細胞のＮＦκＢ経路を活性化させることができる、［１］〜［３４］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［３６］
前記ＯＸ４０発現Ｔ細胞が、ＮＦκＢシグナル伝達経路の刺激に応答してルシフェラーゼを産生するＯＸ４０発現ジャーカットＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞である、［３５］に記載の抗体又はその断片。
［３７］
ＯＸ４０発現細胞に対する補体依存性又は抗体依存性細胞傷害を惹起することができる、［１］〜［３６］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［３８］
Ｃ１ｑに結合して、前記ＯＸ４０発現細胞に対するＮＫ媒介性抗体依存性細胞傷害を惹起することができる、［３７］に記載の抗体又はその断片。
［３９］
癌治療を必要としている対象に有効用量を投与すると、前記対象の腫瘍成長を阻害することができる、［１］〜［３８］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［４０］
前記腫瘍成長阻害がＴ細胞の存在下で実現する、［３９］に記載の抗体又はその断片。
［４１］
アイソタイプ対応対照抗体又はその断片の投与と比較して、腫瘍成長が少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、又は少なくとも７０％阻害される、［３９］又は［４０］に記載の抗体又はその断片。
［４２］
［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片と担体とを含む組成物。
［４３］
［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片、又は［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片のポリペプチドサブユニットをコードする核酸を含むポリヌクレオチド。
［４４］
配列番号６０の核酸、配列番号３１の核酸、配列番号７２の核酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む、［４３］に記載のポリヌクレオチド。
［４５］
［４３］又は［４４］に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［４６］
［４３］又は［４４］に記載のポリヌクレオチド又は［４５］に記載のベクターを含む宿主細胞。
［４７］
抗体又はその断片の作製方法であって、前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記抗体又はその断片が発現する条件下で［４６］に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記抗体又はその断片を回収するステップとを含む方法。
［４８］
活性化Ｔ細胞の生存又は増殖を促進する方法であって、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片を活性化Ｔ細胞と接触させるステップを含み、前記抗体又はその断片が前記Ｔ細胞の表面上のＯＸ４０に特異的に結合することができる、方法。
［４９］
活性化Ｔ細胞からのサイトカイン放出を誘導する方法であって、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片を活性化Ｔ細胞と接触させるステップを含み、前記抗体又はその断片が前記Ｔ細胞の表面上のＯＸ４０に特異的に結合することができる、方法。
［５０］
前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−８、ＩＬ−１２  ｐ７０、ＩＬ−１β、又はこれらの任意の組み合わせである、［４９］に記載の方法。
［５１］
前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、又はこれらの任意の組み合わせである、［５０］に記載の方法。
［５２］
前記活性化Ｔ細胞が、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はこれらの組み合わせである、［４８］〜［５１］のいずれか一項に記載の方法。
［５３］
前記活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞、カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞、アカゲザルＣＤ４＋Ｔ細胞、又はこれらの組み合わせである、［５２］に記載の方法。
［５４］
Ｔ細胞活性化を促進する方法であって、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片をＴ細胞と接触させるステップを含み、前記抗体又はその断片が前記Ｔ細胞の表面上のＯＸ４０に特異的に結合することができる、方法。
［５５］
ＮＦκＢシグナル伝達経路の刺激によってＴ細胞活性化を計測することができる、［５４］に記載の方法。
［５６］
前記Ｔ細胞が、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はこれらの組み合わせである、［５４］又は［５５］に記載の方法。
［５７］
前記活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞、カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞、アカゲザルＣＤ４＋Ｔ細胞、又はこれらの組み合わせである、［５６］に記載の方法。
［５８］
前記接触させるステップが、対象に前記抗体又はその断片の有効量を投与するステップを含む、［５４］〜［５７］のいずれか一項に記載の方法。
［５９］
対象の癌を治療する方法であって、治療を必要としている対象に、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片又は［４２］に記載の組成物の有効量を投与するステップを含む方法。
［６０］
前記癌が固形腫瘍である、［５９］に記載の方法。
［６１］
前記抗体若しくはその断片又は組成物の投与により腫瘍成長を阻害することができるか、腫瘍縮小を促進することができるか、又は両方である、［５９］又は［６０］に記載の方法。
［６２］
腫瘍成長阻害がＴ細胞の存在下で実現する、［６１］に記載の方法。
［６３］
対象の免疫応答を増強する方法であって、それを必要としている対象に、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、又は［４２］に記載の組成物の治療有効量を投与するステップを含む方法。
［６４］
前記対象がヒト対象である、［５９］〜［６３］のいずれか一項に記載の方法。
［６５］
配列番号９１のアミノ酸１０８〜１４６の範囲内にあるヒトＯＸ４０のエピトープに結合する、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
［６６］
前記エピトープが少なくとも配列番号９１のアミノ酸ロイシン１１６及びアラニン１２６を含む、［６５］に記載の抗体又はその断片。
［６７］
Ｑ１１３Ｌ突然変異及びＶ１２４Ａ突然変異を除いて配列番号９２を含むマウスＯＸ４０変異体に結合する、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体。
［６８］
１００アミノ酸以下からなる単離ペプチドであって、［１］〜［４１］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片が特異的に結合することのできるペプチド。
［６９］
配列番号９１のアミノ酸１１６〜１２６を含む、［６８］に記載のペプチド。
［７０］
Ｌ１１６及びＡ１２６を除く任意の位置における１、２、３、４、５、又は６個の単一アミノ酸置換、欠失、又は挿入を除いて配列番号９１のアミノ酸１０８〜１４６を含む、［６８］又は［６９］に記載のペプチド。