【手続補正書】
【提出日】平成30年5月14日(2018.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたエキソソームであって、
（ｉ）単離されたエキソソームが、ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５からなる群から選択される１個以上のマーカーを含み；および／または
（ｉｉ）単離されたエキソソームが、ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される１個以上のマーカーを含まない、
前記単離されたエキソソーム。
【請求項２】
肺障害、心血管障害、腎障害または虚血性神経障害の処置における使用のための単離されたエキソソームであって、
（ｉ）ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５からなる群から選択される１個以上のマーカーを含み；および／または
（ｉｉ）ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される１個以上のマーカーを含まない、
前記単離されたエキソソーム。
【請求項３】
肺障害が、炎症性肺疾患、肺血管疾患、または急性肺損傷であり、任意に、炎症性肺疾患が、低酸素誘導性肺炎症、肺高血圧、喘息、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、アレルギーもしくは特発性肺線維症であり、任意に、急性肺損傷が、敗血症と関連するか、もしくは人工呼吸器誘導性急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）である、あるいは、ここで心血管障害が、心筋梗塞、心血管疾患、高血圧、アテローム性動脈硬化症または心不全である、あるいは、ここで腎障害が、腎障害は、虚血性腎損傷、急性腎不全または腎線維症である、あるいは、ここで虚血性神経障害が、低酸素性虚血性脳症または虚血性脳卒中である、請求項２に記載の使用のための単離されたエキソソーム。
【請求項４】
馴化培地を生産するために細胞を培養すること；および
馴化培地からエキソソームを単離すること；
を含む、エキソソームを生産するための方法であって、
（ｉ）単離されたエキソソームが、ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５からなる群から選択される１個以上のマーカーを含み；および／または
（ｉｉ）単離されたエキソソームが、ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される１個以上のマーカーを含まない、
前記方法。
【請求項５】
培養が、二次元（２Ｄ）または三次元（３Ｄ）培養であり、任意に、３Ｄ培養が、懸滴培養、マトリックス上での培養、マイクロキャリア上での培養、合成細胞外スキャフォールド上での培養、キトサン膜上での培養、磁気浮揚下での培養、回転式バイオリアクター中の懸濁培養または非接触阻害条件下の培養を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
培養が、ＴＧＦβスーパーファミリー（ＴＧＦβ１、アクチビン、ＢＭＰ、ＧＤＦ、ＧＤＮＦ、インヒビン、Ｎｏｄａｌ、Ｌｅｆｔｙ、ＭＩＳ）、ＥＧＦ、ＰＤＧＦおよびＦＧＦから選択される１以上の増殖因子の使用を含む、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される１個以上のマーカーを含むエキソソームと比較して、ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５から選択される１個以上のマーカーを含むエキソソームの生産を増大させ、任意に、増大が、ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される１個以上のマーカーを含むエキソソームと比較して、ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５から選択される１個以上のマーカーを含むエキソソームの生産の１．５倍、２．０倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４．０倍、４．５倍もしくは５．０倍、６．０倍、７．０倍、８．０倍、９．０倍または１０．０倍以上の増加を含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
エキソソームがＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５からなる群から選択される、２、３、４、５、６、７または８個のマーカーを含み、かつ任意に、エキソソームがマーカーＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５を含む、あるいはエキソソームがＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される、２、３、４、５、６または７個のマーカーを含まない、かつ任意に、エキソソームがマーカーＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２を含まない、請求項１に記載の単離されたエキソソーム、請求項２または３に記載の使用のための単離されたエキソソーム、または請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
エキソソームが、球状形態を有し、かつ透過型電子顕微鏡におけるネガティブ染色において放射線透過性を示し、任意に、ネガティブ染色透過型電子顕微鏡においてカップ状形態を有さない、請求項１もしくは請求項８に記載の単離されたエキソソーム、請求項２または３に記載の使用のための単離されたエキソソーム、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法、
【請求項１０】
エキソソームが、約１０〜１５０ｎｍの直径を有し、任意に、エキソソームが、約３０〜１００ｎｍの直径を有する、請求項１、８および９のいずれか一項に記載の単離されたエキソソーム、請求項２または３に記載の使用のための単離されたエキソソーム、または請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
エキソソームが、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、線維芽細胞またはマクロファージから単離され、任意に、ＭＳＣ、線維芽細胞またはマクロファージが、ヒトＭＳＣ、ヒト線維芽細胞またはヒトマクロファージであり、任意に、ＭＳＣが、ウォートンゼリー、臍帯血、胎盤、末梢血、骨髄または脂肪組織から単離される、請求項１および８〜１０のいずれか一項に記載の単離されたエキソソーム、請求項２または３に記載の使用のための単離されたエキソソーム、または請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１および８〜１１のいずれか一項に記載の単離されたエキソソームを含む、組成物または医薬組成物。
【請求項１３】
単離されたエキソソームであって、
（ｉ）単離されたエキソソームが、ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される１個以上のマーカーを含み；および／または
（ｉｉ）単離されたエキソソームが、ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５からなる群から選択される１個以上のマーカーを含まない、
前記単離されたエキソソーム。
【請求項１４】
エキソソームが、ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２からなる群から選択される、２、３、４、５、６または７個のマーカーを含み、かつ任意に、エキソソームが、マーカーＦＬＯＴ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＡＶ１、ＥＧＦＲ、ＡＫＴ１およびＡＫＴ２を含む、あるいは、エキソソームが、ＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５からなる群から選択される、２、３、４、５、６、７または８個のマーカーを含まない、かつ任意に、マーカーＡＬＩＸ、ＴＳＧ１０１、ＴＧＦＢＲ２、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５およびＣＤ１０５を含まない、請求項１３に記載の単離されたエキソソーム。
【請求項１５】
エキソソームが、ネガティブ染色透過型電子顕微鏡においてカップ状形態を有し、任意に、エキソソームが、ネガティブ染色透過型電子顕微鏡において球状形態を有さない、請求項１４に記載の単離されたエキソソーム。
【請求項１６】
エキソソームが、約１０〜２５０ｎｍの直径を有し、任意に、エキソソームが、約３０〜２００ｎｍの直径を有する、請求項１４または１５に記載のエキソソーム。