【手続補正書】
【提出日】平成30年10月24日(2018.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおいて手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルスからの１つ以上の抗原を含有する手足口病の免疫原性組成物又はワクチンであって、前記１つ以上の抗原は、少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含む、前記免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項２】
ａ．前記少なくとも１つのウイルスがＥＶ７１であるか、又は、
ｂ．前記１つ以上の抗原がＥＶ７１由来である、  請求項１に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項３】
前記１つ以上の抗原が、
ａ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有する、
ｂ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位で、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位に相当する位置で、発生する、
ｃ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位で、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位に相当する位置で、発生し、配列番号１の７位の前記突然変異又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときに配列番号１の７位に相当する位置の前記突然変異は、バリンからメチオニンへの置換である、
ｄ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位、１４位、１４５位及び２８２位のうちの２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位、１４位、１４５位又は２８２位に相当する位置の２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで、発生する、
ｅ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位、１４位、１４５位及び２８２位のうちの２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位、１４位、１４５位又は２８２位に相当する位置の２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで発生しており、及び配列番号１の１４位の前記突然変異、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させた場合には、配列番号１の１４位に相当する位置の前記突然変異が、アスパラギン酸からアスパラギンへの置換であり、配列番号１の１４５位の前記突然変異、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させた場合には、配列番号１の１４５位に相当する位置の前記突然変異が、グルタミン酸からグルタミンへの置換であり、又は配列番号１の２８２位の前記突然変異、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させた場合には、配列番号１の２８２位に相当する位置の前記突然変異が、アスパラギンからアスパラギン酸への置換である、又は  
ｆ．上記（ａ）〜（ｅ）の任意の組み合わせ、  を含有する、請求項１又は２に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項４】
前記少なくとも１つのウイルスが、
ａ．ベータ−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、
ｂ．ホルマリン、
ｃ．ＢＰＬとホルマリンの組み合わせ、又は
ｄ．バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）  のうちの１つ以上で化学的に不活化された、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項５】
ＢＰＬにより不活化された前記少なくとも１つのウイルスが１つ以上の改変を含有しており、この場合において、任意選択で、
ａ．前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であるか、又は  
ｂ．前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、任意選択で前記改変ポリペプチドが、システイン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、リシン、セリン、及びスレオニンのうちの１つ以上から選択される改変アミノ酸残基を含む、  請求項４に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項６】
ホルマリンにより不活化された前記少なくとも１つのウイルスが、１つ以上の改変を含有しており、任意選択で前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、及び任意選択で前記１つ以上の改変が、架橋ポリペプチドを含有し、及び任意選択で前記免疫原性組成物又はワクチンがホルマリンをさらに含有する、請求項４に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項７】
ＢＥＩにより不活化された前記少なくとも１つのウイルスが、１つ以上の改変を含有しており、任意選択で前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、及び任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であり、及び任意選択で反応しなかったＢＥＩが、チオ硫酸ナトリウムを用いて加水分解された、請求項４に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項８】
ヒトにおいて手足口病を引き起こす少なくとも１つの不活化ウイルスからの１つ以上の抗原を含有する手足口病の免疫原性組成物又はワクチンであって、前記少なくとも１つのウイルスはＥＶ７１であり、前記少なくとも１つのウイルスがベータ−プロピオラクトン（ＢＰＬ）で不活化されている、前記免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項９】
前記少なくとも１つの不活化ウイルスが、１つ以上の改変を含有し、この場合において、任意選択で、
ａ．前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であるか、又は
ｂ．前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、任意選択で前記改変ポリペプチドが、システイン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、リシン、セリン、及びスレオニンのうちの１つ以上から選択される改変アミノ酸残基を含む、  請求項８に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１０】
ａ．有効濃度の洗剤であって、任意選択で前記洗剤が、ポリソルベート［８０］を含有し、及び／又は前記有効濃度が、約０．００１％〜約０．０１％の範囲である、前記洗剤、ｂ．アジュバントであって、任意選択で前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）作動薬、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）、合成リピドＡ、リピドＡの模倣体又はアナログ、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロゾーム、コクリエート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマ粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から  選択される、アジュバント、
ｃ．アジュバントであって、前記アジュバントが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）である、前記アジュバント、
ｄ．アジュバントであって、前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ８５から選択されるアルミニウム塩アジュバントである、前記アジュバント、及び／又は、
ｅ．アジュバントであって、前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ８５から選択されるアルミニウム塩アジュバントであり、この場合において、前記抗原の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％が前記アジュバントに吸着されている、前記アジュバント、  をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１１】
ヒトにおいて手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルスからの１つ以上の抗原とアルミニウム塩アジュバントを含有する手足口病の免疫原性組成物又はワクチンであって、前記抗原の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％が前記アルミニウム塩アジュバントに吸着されている、前記免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１２】
前記アルミニウム塩アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ８５から選択される、請求項１１に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのウイルスが、ＥＶ７１である、請求項１１又は１２に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１４】
前記１つ以上の抗原が、少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有する、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１５】
前記非ヒト細胞が、サルの細胞又はＶｅｒｏ細胞株由来であり、この場合において任意選択で前記Ｖｅｒｏ細胞株が、ＷＨＯ  Ｖｅｒｏ  １０−８７、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−８１、Ｖｅｒｏ  ７６（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１５８７）およびＶｅｒｏ  Ｃ１００８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１５８６）から選択される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１６】
前記１つ以上の抗原が、前記非ヒト細胞を培養することにより作製され、及びこの場合において、任意選択で、前記細胞は無血清培地中で培養される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１７】
前記免疫原性組成物又はワクチンが、精製抗原免疫原性組成物もしくはワクチン、サブユニット免疫原性組成物もしくはワクチン、不活化全粒子ウイルス免疫原性組成物もしくはワクチン、又は弱毒化ウイルス免疫原性組成物もしくはワクチンである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
【請求項１８】
免疫反応の誘導の必要のある対象において免疫反応を誘導するための組成物、又は手足口病の治療もしくは予防の必要のある対象の手足口病を治療もしくは予防するための組成物であって、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチンの治療有効量を含む、前記組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、前記対象に防御的免疫反応を誘導する請求項１８の組成物であって、この場合において任意選択で、
ａ．前記免疫反応が、ＥＶ７１に対する免疫反応を含み、及び／又は
ｂ．前記免疫反応が、Ｂ２、Ｂ４、Ｂ５、Ｃ２、及びＣ４から選択されるＥＶ７１ウイルス遺伝子型の１つ以上に対する免疫反応を含む、  前記組成物。
【請求項２０】
（ａ）ワクチンとアルミニウム塩アジュバントを混合させる工程であって、前記ワクチンが、ヒトに手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルス由来の１つ以上の抗原を含む、工程、及び  
（ｂ）前記混合物を、約１６時間〜２４時間の範囲にわたる期間、適切な条件下でインキュベートする工程
を含む、アジュバント化された手足口病の免疫原性組成物又はワクチンを作製する方法であって、ここで、
前記抗原の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％が前記アルミニウム塩アジュバントに吸着しており、かつ
手足口病を引き起こす前記少なくとも１つのウイルスは、ＥＶ７１である、
前記方法。
【請求項２１】
前記混合物が、約２℃〜約８℃の範囲の温度でインキュベートされる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）１つ以上の非ヒト細胞から手足口病ウイルス調製物を単離する工程であって、この場合において前記細胞は前記ウイルス調製物の製造に用いられる、工程、
（ｂ）ベータ−プロピオラクトン（ＢＰＬ）の有効量を用いて前記ウイルス調製物を処置する工程、及び
（ｃ）ホルマリンの有効量を用いて前記ウイルス調製物を処置する工程
を含む、手足口病ウイルス調製物を不活化する方法であって、ここで、
前記ホルマリンを用いた処置工程が、工程（ｂ）と同時に、又は工程（ｂ）の後で行われ、かつ
前記ウイルスがＥＶ７１である、前記方法。
【請求項２３】
前記方法が、前記ＢＰＬを加水分解するのに十分な期間、３７℃の温度で前記ウイルス調製物を加熱する工程をさらに含み、この場合において任意選択で前記期間は、約１時間〜約６時間の範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
不活化された前記ウイルス調製物が、１つ以上の改変を含有し、この場合において、任意選択で、
ａ．前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であるか、又は
ｂ．前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、この場合において、任意選択で前記改変ポリペプチドが、システイン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、リシン、セリン、及びスレオニンのうちの１つ以上から選択される改変アミノ酸残基を含む、  請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
（ａ）１つ以上の非ヒト細胞から手足口病ウイルス調製物を単離する工程であって、この場合において前記細胞は前記ウイルス調製物の製造に用いられる、工程、
（ｂ）ホルマリンの有効量を用いて前記ウイルス調製物を処置する工程、及び  
（ｃ）前記ホルマリンから前記ウイルス調製物を精製する工程
を含む、手足口病ウイルス調製物を不活化する方法であって、ここで、
前記ウイルスがＥＶ７１である、前記方法。
【請求項２６】
不活化された前記ウイルス調製物が、１つ以上の改変を含有しており、任意選択で前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、及び任意選択で前記１つ以上の改変が、架橋ポリペプチドを含有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記免疫原性組成物又はワクチンが、ホルマリンをさらに含有する、請求項２５又は２６に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本開示の他の態様は、ヒトに手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルス由来の１つ以上の抗原と、アルミニウム塩アジュバントを含有する手足口病のワクチンを提供するものであり、この場合において、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の抗原が当該アルミニウムアジュバントに吸着している。本開示の他の態様は、ヒトに手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルス由来の１つ以上の抗原と、アルミニウム塩アジュバントを含有する手足口病の免疫原性組成物を提供するものであり、この場合において、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の抗原が当該アルミニウムアジュバントに吸着している。本開示の他の態様は、その必要のある対象における手足口病を、本明細書に開示されるワクチン又は免疫原性組成物のいずれかの治療有効量を当該対象に投与することにより、治療又は予防する方法を提供するものである。本開示の他の態様は、その必要のある対象において免疫反応を、本明細書に開示されるワクチン又は免疫原性組成物のいずれかの免疫原性量を当該対象に投与することにより、誘導する方法を提供するものである。本開示の他の態様は、（ａ）ワクチンとアルミニウム塩アジュバントを混合させることであって、この場合において当該ワクチンは、ヒトに手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルス由来の１つ以上の抗原を含んでおり、及び（ｂ）当該混合物を、約１６時間〜約２４時間の範囲の期間、適切な条件下でインキュベートすることであって、この場合において少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の抗原が当該アルミニウム塩アジュバントに吸着しており、手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルスは、ＥＶ７１、ＣＡ６及びＣＡ１６のうちの１つ以上から選択されること、によりアジュバント化された手足口病のワクチンを作製する方法を提供するものである。本開示の他の態様は、（ａ）免疫原性組成物とアルミニウム塩アジュバントを混合させることであって、この場合において当該免疫原性組成物は、ヒトに手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルス由来の１つ以上の抗原を含んでおり、及び（ｂ）当該混合物を、約１６時間〜約２４時間の範囲の期間、適切な条件下でインキュベートすることであって、この場合において少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の抗原が当該アルミニウム塩アジュバントに吸着しており、手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルスは、ＥＶ７１、ＣＡ６及びＣＡ１６のうちの１つ以上から選択されること、によりアジュバント化された手足口病の免疫原性組成物を作製する方法を提供するものである。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ヒトにおいて手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルスからの１つ以上の抗原を含有する手足口病の免疫原性組成物又はワクチンであって、前記１つ以上の抗原は、少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含む、前記免疫原性組成物又はワクチン。
（項目２）
ａ．前記少なくとも１つのウイルスがＥＶ７１であるか、又は、
ｂ．前記１つ以上の抗原がＥＶ７１由来である、  項目１に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目３）
前記１つ以上の抗原が、
ａ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有する、
ｂ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位で、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位に相当する位置で、発生する、
ｃ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位で、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位に相当する位置で、発生し、配列番号１の７位の前記突然変異又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときに配列番号１の７位に相当する位置の前記突然変異は、バリンからメチオニンへの置換である、
ｄ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位、１４位、１４５位及び２８２位のうちの２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位、１４位、１４５位又は２８２位に相当する位置の２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで、発生する、
ｅ．ＥＶ７１のＶＰ１ポリペプチドであって、前記ＶＰ１ポリペプチドが、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有しており、及び前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異が、配列番号１の７位、１４位、１４５位及び２８２位のうちの２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させたときには配列番号１の７位、１４位、１４５位又は２８２位に相当する位置の２つ以上、３つ以上、又は４つ全てで発生しており、及び配列番号１の１４位の前記突然変異、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させた場合には、配列番号１の１４位に相当する位置の前記突然変異が、アスパラギン酸からアスパラギンへの置換であり、配列番号１の１４５位の前記突然変異、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させた場合には、配列番号１の１４５位に相当する位置の前記突然変異が、グルタミン酸からグルタミンへの置換であり、又は配列番号１の２８２位の前記突然変異、又はペアワイズアライメントアルゴリズムを用いて配列番号１に対して整列させた場合には、配列番号１の２８２位に相当する位置の前記突然変異が、アスパラギンからアスパラギン酸への置換である、又は  
ｆ．上記（ａ）〜（ｅ）の任意の組み合わせ、  を含有する、項目１又は２に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目４）
前記少なくとも１つのウイルスが、
ａ．ベータ−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、
ｂ．ホルマリン、
ｃ．ＢＰＬとホルマリンの組み合わせ、又は
ｄ．バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）  のうちの１つ以上で化学的に不活化された、項目１〜３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目５）
ＢＰＬにより不活化された前記少なくとも１つのウイルスが１つ以上の改変を含有しており、この場合において、任意選択で、
ａ．前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であるか、又は  
ｂ．前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、任意選択で前記改変ポリペプチドが、システイン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、リシン、セリン、及びスレオニンのうちの１つ以上から選択される改変アミノ酸残基を含む、項目４に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目６）
ホルマリンにより不活化された前記少なくとも１つのウイルスが、１つ以上の改変を含有しており、任意選択で前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、及び任意選択で前記１つ以上の改変が、架橋ポリペプチドを含有し、及び任意選択で前記免疫原性組成物又はワクチンがホルマリンをさらに含有する、項目４に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目７）
ＢＥＩにより不活化された前記少なくとも１つのウイルスが、１つ以上の改変を含有しており、任意選択で前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、及び任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であり、及び任意選択で反応しなかったＢＥＩが、チオ硫酸ナトリウムを用いて加水分解された、項目４に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目８）
ヒトにおいて手足口病を引き起こす少なくとも１つの不活化ウイルスからの１つ以上の抗原を含有する手足口病の免疫原性組成物又はワクチンであって、前記少なくとも１つのウイルスはＥＶ７１であり、前記少なくとも１つのウイルスがベータ−プロピオラクトン（ＢＰＬ）で不活化されている、前記免疫原性組成物又はワクチン。
（項目９）
前記少なくとも１つの不活化ウイルスが、１つ以上の改変を含有し、この場合において、任意選択で、
ａ．前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であるか、又は
ｂ．前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、任意選択で前記改変ポリペプチドが、システイン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、リシン、セリン、及びスレオニンのうちの１つ以上から選択される改変アミノ酸残基を含む、  項目８に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１０）
ａ．有効濃度の洗剤であって、任意選択で前記洗剤が、ポリソルベート［８０］を含有し、及び／又は前記有効濃度が、約０．００１％〜約０．０１％の範囲である、前記洗剤、ｂ．アジュバントであって、任意選択で前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）作動薬、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）、合成リピドＡ、リピドＡの模倣体又はアナログ、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロゾーム、コクリエート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマ粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から  選択される、アジュバント、
ｃ．アジュバントであって、前記アジュバントが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）である、前記アジュバント、
ｄ．アジュバントであって、前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ８５から選択されるアルミニウム塩アジュバントである、前記アジュバント、及び／又は、
ｅ．アジュバントであって、前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ８５から選択されるアルミニウム塩アジュバントであり、この場合において、前記抗原の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％が前記アジュバントに吸着されている、前記アジュバント、  をさらに含む、項目１〜９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１１）
ヒトにおいて手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルスからの１つ以上の抗原とアルミニウム塩アジュバントを含有する手足口病の免疫原性組成物又はワクチンであって、前記抗原の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％が前記アルミニウム塩アジュバントに吸着されている、前記免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１２）
前記アルミニウム塩アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ８５から選択される、項目１１に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１３）
前記少なくとも１つのウイルスが、ＥＶ７１である、項目１１又は１２に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１４）
前記１つ以上の抗原が、少なくとも１つの非ヒト細胞適応突然変異を含有する、項目１１〜１３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１５）
前記非ヒト細胞が、サルの細胞又はＶｅｒｏ細胞株由来であり、この場合において任意選択で前記Ｖｅｒｏ細胞株が、ＷＨＯ  Ｖｅｒｏ  １０−８７、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−８１、Ｖｅｒｏ  ７６（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１５８７）およびＶｅｒｏ  Ｃ１００８（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１５８６）から選択される、項目１〜１４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１６）
前記１つ以上の抗原が、前記非ヒト細胞を培養することにより作製され、及びこの場合において、任意選択で、前記細胞は無血清培地中で培養される、項目１〜１５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１７）
前記免疫原性組成物又はワクチンが、精製抗原免疫原性組成物もしくはワクチン、サブユニット免疫原性組成物もしくはワクチン、不活化全粒子ウイルス免疫原性組成物もしくはワクチン、又は弱毒化ウイルス免疫原性組成物もしくはワクチンである、項目１〜１６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
（項目１８）
その必要のある対象において免疫反応を誘導する方法、又はその必要のある対象の手足口病を治療もしくは予防する方法であって、項目１〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物又はワクチンの治療有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目１９）
前記投与が、前記対象に防御的免疫反応を誘導する項目１８の方法であって、この場合において任意選択で、
ａ．前記免疫反応が、ＥＶ７１に対する免疫反応を含み、及び／又は
ｂ．前記免疫反応が、Ｂ２、Ｂ４、Ｂ５、Ｃ２、及びＣ４から選択されるＥＶ７１ウイルス遺伝子型の１つ以上に対する免疫反応を含む、  前記方法。
（項目２０）
（ａ）ワクチンとアルミニウム塩アジュバントを混合させる工程であって、前記ワクチンが、ヒトに手足口病を引き起こす少なくとも１つのウイルス由来の１つ以上の抗原を含む、工程、及び  
（ｂ）前記混合物を、約１６時間〜２４時間の範囲にわたる期間、適切な条件下でインキュベートする工程
を含む、アジュバント化された手足口病の免疫原性組成物又はワクチンを作製する方法であって、ここで、
前記抗原の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％が前記アルミニウム塩アジュバントに吸着しており、かつ
手足口病を引き起こす前記少なくとも１つのウイルスは、ＥＶ７１である、
前記方法。
（項目２１）
前記混合物が、約２℃〜約８℃の範囲の温度でインキュベートされる、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
（ａ）１つ以上の非ヒト細胞から手足口病ウイルス調製物を単離する工程であって、この場合において前記細胞は前記ウイルス調製物の製造に用いられる、工程、
（ｂ）ベータ−プロピオラクトン（ＢＰＬ）の有効量を用いて前記ウイルス調製物を処置する工程、及び
（ｃ）ホルマリンの有効量を用いて前記ウイルス調製物を処置する工程
を含む、手足口病ウイルス調製物を不活化する方法であって、ここで、
前記ホルマリンを用いた処置工程が、工程（ｂ）と同時に、又は工程（ｂ）の後で行われ、かつ
前記ウイルスがＥＶ７１である、前記方法。
（項目２３）
前記方法が、前記ＢＰＬを加水分解するのに十分な期間、３７℃の温度で前記ウイルス調製物を加熱する工程をさらに含み、この場合において任意選択で前記期間は、約１時間〜約６時間の範囲である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
不活化された前記ウイルス調製物が、１つ以上の改変を含有し、この場合において、任意選択で、
ａ．前記１つ以上の改変が、改変核酸を含有し、任意選択で前記改変核酸が、アルキル化核酸であるか、又は
ｂ．前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、この場合において、任意選択で前記改変ポリペプチドが、システイン、メチオニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、チロシン、リシン、セリン、及びスレオニンのうちの１つ以上から選択される改変アミノ酸残基を含む、  項目２２又は２３に記載の方法。
（項目２５）
（ａ）１つ以上の非ヒト細胞から手足口病ウイルス調製物を単離する工程であって、この場合において前記細胞は前記ウイルス調製物の製造に用いられる、工程、
（ｂ）ホルマリンの有効量を用いて前記ウイルス調製物を処置する工程、及び  
（ｃ）前記ホルマリンから前記ウイルス調製物を精製する工程
を含む、手足口病ウイルス調製物を不活化する方法であって、ここで、
前記ウイルスがＥＶ７１である、前記方法。
（項目２６）
不活化された前記ウイルス調製物が、１つ以上の改変を含有しており、任意選択で前記１つ以上の改変が、改変ポリペプチドを含有し、及び任意選択で前記１つ以上の改変が、架橋ポリペプチドを含有する、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記免疫原性組成物又はワクチンが、ホルマリンをさらに含有する、項目２５又は２６に記載の方法。