【手続補正書】
【提出日】平成30年3月28日(2018.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲン７の１つ以上の機能的断片または少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するその変異体、に対応するアミノ酸配列を含み、前記機能的断片および前記変異体はＴＧＦ−β１に結合し、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２の活性を阻害する能力を維持する、単離されたポリペプチドであって、
ヒト皮膚の表皮層と表皮層の間の係留線維を形成することはできないが、ＴＧＦ−β１に結合し、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２の活性を阻害することはできる、
単離されたポリペプチド。
【請求項２】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域１、ＦＮＩＩＩ領域２、ＦＮＩＩＩ領域３、ＦＮＩＩＩ領域４、ＦＮＩＩＩ領域５、ＦＮＩＩＩ領域６、ＦＮＩＩＩ領域７、ＦＮＩＩＩ領域８、ＦＮＩＩＩ領域９、およびそれらの各々の変異体からなる群から選択される１つ以上の機能的断片に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
前記単離されたポリペプチドが、コラーゲン７のＮＣ１ドメインのすべてまたは前記ＮＣ１ドメインの変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
前記単離されたポリペプチドが、中央のコラーゲンらせんドメインの１００個未満、５０個未満、４０個未満、２０個未満、もしくは１０個未満のアミノ酸残基および／またはカルボキシ末端のＮＣ２ドメインの４０個未満、２０個未満、もしくは１０個未満のアミノ酸残基の断片に対応するアミノ酸配列をさらに含む、請求項３に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項５】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域１、ＦＮＩＩＩ領域５、およびＦＮＩＩＩ領域６、ＦＮＩＩＩ領域１の変異体、ＦＮＩＩＩ領域５の変異体、およびＦＮＩＩＩ領域６の変異体からなる群から選択される１つ以上の領域に対応するアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項６】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域１またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項７】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域５に対応するアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項８】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域６またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項９】
前記単離されたポリペプチドが、ＰＣＲ１またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１０】
前記単離されたポリペプチドが、ＰＣＲ２またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１１】
前記単離されたポリペプチドが、ＰＣＲ３またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１２】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＰ１５またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１３】
前記単離されたポリペプチドが、ＦＰ１６またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
前記単離されたポリペプチドが、ＴＧＦ−β１および／またはＴＧＦ−β２に対するコラーゲン７の結合部位に対応する１つ以上のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記ポリペプチドが、前記ポリペプチド配列に含めるために具体的に選択されたのではない任意のＦＮＩＩＩ領域、もしくは他の任意のＮＣ１領域、もしくはコラーゲン７のコラーゲンドメインもしくはＮＣ２ドメイン、またはこれらの組合せの何れかに対応するアミノ酸配列を含まない、請求項１〜１２の何れかに記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１〜１５の何れか１項に記載の１つ以上の単離されたポリペプチドおよび担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
それを必要とする患者の創傷治癒を速めるための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
それを必要とする患者の瘢痕化を予防、抑制、または軽減するための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
それを必要とする対象の線維症を予防、抑制、または軽減するための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
それを必要とする対象におけるＴＧＦ−βを阻害するための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
それを必要とする患者の瘢痕化を予防、抑制、または軽減するためのコラーゲン７を含む医薬組成物であって、前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、医薬組成物。
【請求項２６】
それを必要とする対象の線維症を予防、抑制、または軽減するためのコラーゲン７を含む医薬組成物であって、前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、医薬組成物。
【請求項２７】
それを必要とする対象におけるＴＧＦ−βを阻害するためのコラーゲン７を含む医薬組成物であって、前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、医薬組成物。
【請求項２８】
それを必要とする患者の瘢痕化を予防、抑制、または軽減するためのコラーゲン７を含む医薬組成物であって、局所的に投与される医薬組成物。
【請求項２９】
それを必要とする対象の線維症を予防、抑制、または軽減するためのコラーゲン７を含む医薬組成物であって、局所的に投与される医薬組成物。
【請求項３０】
それを必要とする対象におけるＴＧＦ−βを阻害するためのコラーゲン７を含む医薬組成物であって、局所的に投与される医薬組成物。
【請求項３１】
それを必要とする患者のＲＤＥＢを治療するための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
ＲＤＥＢ患者において瘢痕化または過剰な線維形成を予防するための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
ＲＤＥＢ患者において過剰収縮を軽減するための請求項１６に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
固相タンパク質結合アッセイ：
固定されたリガンド（ＴＧＦ−βアイソフォームまたは他の増殖因子）への可溶性コラーゲン７、ＮＣ１、およびＮＣ１の様々なサブドメインの結合とそれに続く比色酵素結合抗体反応を、以下に説明するように実施した。マルチウェルプレート（９６ウェル、Ｄｙｎａｔｅｃｈ、Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ、ＶＡ）を、１００ｍＭ炭酸緩衝液、ｐＨ９．３において３７℃で１時間、ＴＧＦ−β（１２５ｎｇ／ウェル）でコーティングした。次いで、これらのウェルを、リン酸緩衝化生理食塩水、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）に溶かした２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）によってブロックした。続いて、コーティングされたウェルを、指定濃度の精製された組換えＮＣ１、コラーゲン７、またはＮＣ１のサブドメインと共に室温で２時間、インキュベートした。１：２０００に希釈したポリクローナル抗ＮＣ１抗体または抗ＧＳＴ抗体と、それに続く、アルカリホスファターゼを結合させたヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：４００）（Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ−Ｃａｐｐｅｌ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）とのインキュベーションによって、各ＴＧＦ−βアイソフォームへのコラーゲン７の結合を検出した。ｐ−ニトロ−フェニルホスファート（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）を基質として用いる比色反応の発色を、４０５ｎｍでの生成物の吸光度を読み取ることによって（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  Ｍｕｌｔｉｓｏｆｔ、Ｆｉｎｌａｎｄ）測定した。対照波長は、６２０ｎｍで測定した。
以下に、本願の出願当初の請求項を実施の態様として付記する。
［１］  コラーゲン７の１つ以上の機能的断片またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
［２］  前記単離されたポリペプチドが、ヒト皮膚の表皮層と表皮層の間の係留線維を形成することはできないが、ＴＧＦ−β１に結合し、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２の活性を阻害することはできる、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［３］  前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域１、ＦＮＩＩＩ領域２、ＦＮＩＩＩ領域３、ＦＮＩＩＩ領域４、ＦＮＩＩＩ領域５、ＦＮＩＩＩ領域６、ＦＮＩＩＩ領域７、ＦＮＩＩＩ領域８、ＦＮＩＩＩ領域９、およびそれらの各々の変異体からなる群から選択される１つ以上の機能的断片に対応するアミノ酸配列を含む、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［４］  前記単離されたポリペプチドが、コラーゲン７のＮＣ１ドメインのすべてまたは前記ＮＣ１ドメインの変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［３］に記載の単離されたポリペプチド。
［５］  前記単離されたポリペプチドが、中央のコラーゲンらせんドメインの１００個未満、５０個未満、４０個未満、２０個未満、もしくは１０個未満のアミノ酸残基および／またはカルボキシ末端のＮＣ２ドメインの４０個未満、２０個未満、もしくは１０個未満のアミノ酸残基の断片に対応するアミノ酸配列をさらに含む、［４］に記載の単離されたポリペプチド。
［６］  前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域１、ＦＮＩＩＩ領域５、およびＦＮＩＩＩ領域６、ＦＮＩＩＩ領域１の変異体、ＦＮＩＩＩ領域５の変異体、およびＦＮＩＩＩ領域６の変異体からなる群から選択される１つ以上の領域に対応するアミノ酸配列を含む、［３］に記載の単離されたポリペプチド。
［７］  したがって、前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域１またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［６］に記載の単離されたポリペプチド。
［８］  したがって、前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域５に対応するアミノ酸配列を含む、［６］に記載の単離されたポリペプチド。
［９］  したがって、前記単離されたポリペプチドが、ＦＮＩＩＩ領域６またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［６］に記載の単離されたポリペプチド。
［１０］  したがって、前記単離されたポリペプチドが、ＰＣＲ１またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［１１］  したがって、前記単離されたポリペプチドが、ＰＣＲ２またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［１２］  本発明の別の態様は、ＰＣＲ３またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドである。
［１３］  前記単離されたポリペプチドが、ＦＰ１５またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［１４］  前記単離されたポリペプチドが、ＦＰ１６またはその変異体に対応するアミノ酸配列を含む、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［１５］  前記単離されたポリペプチドが、ＴＧＦ−β１および／またはＴＧＦ−β２に対するコラーゲン７の結合部位に対応する１つ以上のアミノ酸配列を含む、［１］に記載の単離されたポリペプチド。
［１６］  前記ポリペプチドが、前記ポリペプチド配列に含めるために具体的に選択されたのではない任意のＦＮＩＩＩ領域、もしくは他の任意のＮＣ１領域、もしくはコラーゲン７のコラーゲンドメインもしくはＮＣ２ドメイン、またはこれらの組合せの何れかに対応するアミノ酸配列を含まない、［１］〜［１３］の何れかに記載の単離されたポリペプチド。
［１７］  ［１］〜［１６］の何れか１項に記載の１つ以上の単離されたポリペプチドおよび担体を含む医薬組成物。
［１９］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、創傷治癒を速める方法。
［２０］  治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、［１９］に記載の方法。
［２１］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、瘢痕化を予防、抑制、または軽減する方法。
［２２］  治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、［２１］に記載の方法。
［２３］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、線維症を予防、抑制、または軽減する方法。
［２４］  治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、［２３］に記載の方法。
［２５］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、ＴＧＦ−βを阻害する方法。
［２６］  治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、［２２］に記載の方法。
［２７］  コラーゲン７を含む有効量の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、瘢痕化を予防、抑制、または軽減する方法であって、治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、方法。
［２８］  コラーゲン７を含む有効量の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、線維症を予防、抑制、または軽減する方法であって、治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、方法。
［２９］  コラーゲン７を含む有効量の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、ＴＧＦ−βを阻害する方法であって、治療を必要とする前記対象が、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子中に変異を有していない、方法。
［３０］  コラーゲン７を含む有効量の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、瘢痕化を予防、抑制、または軽減する方法であって、前記医薬組成物を局所的に投与する方法。
［３１］  コラーゲン７を含む有効量の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、線維症を予防、抑制、または軽減する方法であって、前記医薬組成物を局所的に投与する方法。
［３２］  コラーゲン７を含む有効量の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、ＴＧＦ−βを阻害する方法であって、前記医薬組成物を局所的に投与する方法。
［３３］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＲＤＥＢを治療する方法。
［３４］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＲＤＥＢ患者において瘢痕化または過剰な線維形成を予防する方法。
［３５］  有効量の［１７］に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＲＤＥＢ患者において過剰収縮を軽減する方法。