【手続補正書】
【提出日】平成30年7月4日(2018.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図４に記載のＶ３、Ｖ５、およびＶ１から選択されるポリペプチド構造の１つを有するＲＯＲ１（ＮＴＲＫＲ１）特異的キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、前記構造は、モノクローナル抗ＲＯＲ１抗体由来のＶＨおよびＶＬを含む細胞外リガンド結合ドメイン、ヒンジ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに４−１ＢＢ由来のＣＤ３ζシグナリングドメインおよび共刺激ドメインを含む細胞質ドメイン、を含む、ＲＯＲ１（ＮＴＲＫＲ１）特異的キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）。
【請求項２】
ヒンジが、ＣＤ８αヒンジ、ＩｇＧ１ヒンジ、およびＦｃγＲＩＩＩαヒンジから選択される、請求項１に記載のＲＯＲ１（ＮＴＲＫＲ１）特異的キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）。
【請求項３】
配列番号４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤ８α膜貫通ドメインとを含むポリペプチド構造Ｖ３を有する；または、
配列番号５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するＩｇＧ１ヒンジと、配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤ８α膜貫通ドメインとを含むポリペプチド構造Ｖ５を有する；または、
配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するＦｃγＲＩＩＩαヒンジと、配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤ８α膜貫通ドメインとを含むポリペプチド構造Ｖ１を有する、請求項１または２に記載のＲＯＲ１特異的ＣＡＲ。
【請求項４】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、
−  配列番号５４（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号５５（ＣＤＲ−Ｈ２）、および配列番号５６（ＣＤＲ−Ｈ３）のマウスモノクローナル抗体Ｈ１０由来のＣＤＲを含む可変重鎖ＶＨと、
−  配列番号５９（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号６０（ＣＤＲ−Ｌ２）、および配列番号６１（ＣＤＲ−Ｌ３）のマウスモノクローナル抗体Ｈ１０由来のＣＤＲを含む可変軽鎖ＶＬとを含む；または、
前記細胞外リガンド結合ドメインが、
−  配列番号２８（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号２９（ＣＤＲ−Ｈ２）、および配列番号３０（ＣＤＲ−Ｈ３）のマウスモノクローナル抗体Ｄ１０由来のＣＤＲを含む可変重鎖ＶＨと、
−  配列番号３３（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号３４（ＣＤＲ−Ｌ２）、および配列番号３５（ＣＤＲ−Ｌ３）のマウスモノクローナル抗体Ｄ１０由来のＣＤＲを含む可変軽鎖ＶＬとを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプター。
【請求項５】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含み、これらの鎖が、それぞれ配列番号５３（Ｈ１０−ＶＨ）および配列番号５８（Ｈ１０−ＶＬ）と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する；または、
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含み、これらの鎖が、それぞれ配列番号２７（Ｄ１０−ＶＨ）および配列番号３２（Ｄ１０−ＶＬ）と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプター。
【請求項６】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ヒト化されたＨ１０抗体またはＤ１０抗体由来のＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプター。
【請求項７】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含み、
−  ＶＨ鎖が、配列番号５７でコードされるポリペプチドを有し、
−  ＶＬ鎖が、配列番号６２でコードされるポリペプチドを有する；または、
前記細胞外リガンド結合ドメインが、
−  配列番号３１でコードされるポリペプチドを有するＶＨ鎖を有し、
−  配列番号３６でコードされるポリペプチドを有するＶＬ鎖を有する、請求項６に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプター。
【請求項８】
前記ＣＡＲポリペプチドが、配列番号１１７（Ｈ１０ｖ３−ＣＡＲ配列）と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有する；または、
前記ＣＡＲポリペプチドが、配列番号９３（Ｄ１０ｖ３−ＣＡＲ配列）と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプター。
【請求項９】
前記ＣＡＲポリペプチドが、それぞれ配列番号９５（Ｄ１０ｖ５−ＣＡＲ配列）と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプター。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のキメラ抗原レセプターをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項１０に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のＲＯＲ１特異的キメラ抗原レセプターを、細胞の表面膜に発現する、遺伝子操作された免疫細胞。
【請求項１３】
炎症性Ｔリンパ球、細胞障害性Ｔリンパ球、調節性Ｔリンパ球、またはヘルパーＴリンパ球に由来する、請求項１２に記載の遺伝子操作された免疫細胞。
【請求項１４】
前記免疫細胞において、ＴＣＲの発現が抑制されている、および／または、前記細胞が少なくとも１つの免疫抑制薬または化学療法薬に対する耐性を付与するよう変異されている、請求項１２または１３に記載の遺伝子操作された免疫細胞。
【請求項１５】
ＲＯＲ１発現細胞によって特徴づけられる前悪性または悪性のがん状態の治療のための、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の遺伝子操作された免疫細胞の使用。
【請求項１６】
前悪性または悪性のがん状態が、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｔ（１；１９）染色体転座を伴う急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）からなる群から選ばれる血液がんの状態である、請求項１５に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト化抗体」は、ヒト化重鎖可変領域およびヒト化軽鎖可変領域を含むポリペプチドを意味する。例えば、ポリペプチドには、ヒト抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域のフレームワーク（ＦＲ）領域が含まれ得るが、ポリペプチドは、実質的に親モノクローナル抗体の抗原結合特性を保持している。ヒト化重鎖可変領域および／またはヒト化軽鎖可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を除き、少なくとも約８７％ヒト化、少なくとも約９０％ヒト化、少なくとも約９５％ヒト化、少なくとも約９８％ヒト化、または少なくとも約１００％ヒト化されている。抗原結合ポリペプチド分子は、モノクローナル抗体ドナー（例えば、マウスモノクローナル抗体ドナー）に由来していてもよく、抗原結合ポリペプチド分子にはモノクローナル抗体由来のＣＤＲ（例えば、マウスモノクローナルＣＤＲ）が含まれ得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
本発明によるＣＡＲは、細胞の表面膜上に発現する。よって、このようなＣＡＲは、さらに膜貫通ドメインを含む。適切な膜貫通ドメインの著しい特徴としては、細胞表面に、本発明において好ましくは免疫細胞表面に、特にリンパ球またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞表面に発現する能力、および免疫細胞の細胞応答を既定の標的細胞に対して方向付けるために互いに相互作用する能力があげられる。膜貫通ドメインは、天然起源または合成起源のいずれに由来してもよい。膜貫通ドメインは、いかなる膜結合または膜貫通タンパク質に由来してもよい。非限定的な例として、膜貫通ポリペプチドは、α、β、γ、もしくはδなどのＴ細胞レセプターのサブユニット、ＣＤ３複合体を構成するポリペプチド、ＩＬ２レセプターｐ５５（α鎖）、ｐ７５（β鎖）、もしくはγ鎖、またはＦｃレセプターのサブユニット鎖であってもよく、特にＦｃγレセプターＩＩＩまたはＣＤタンパク質であってもよい。あるいは、膜貫通ドメインは、合成物であってもよく、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主として含んでいてもよい。好ましい実施形態において、前記膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８α鎖（例えば、ＮＰ＿００１１３９３４５．１）由来である。膜貫通ドメインは、前記細胞外リガンド結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域をさらに含んでいてもよい。本明細書で用いられる用語「ヒンジ領域」は、一般に、膜貫通ドメインを細胞外リガンド結合ドメインに結合させる機能を果たすあらゆるオリゴペプチドまたはポリペプチドを意味する。特に、ヒンジ領域は、細胞外リガンド結合ドメインにさらなる柔軟性と接近性を与えるために用いられる。ヒンジ領域は、アミノ酸を、３００アミノ酸まで、好ましくは１０〜１００アミノ酸、最も好ましくは２５〜５０アミノ酸含んでいてもよい。ヒンジ領域は、天然型分子の全体もしくは一部、例えば、ＣＤ８、ＣＤ４もしくはＣＤ２８の細胞外領域の全体もしくは一部、または抗体の定常領域の全体もしくは一部に由来していてもよい。あるいは、ヒンジ領域は、天然型ヒンジ配列に対応する合成配列であってもよく、完全な合成ヒンジ配列であってもよい。好ましい実施形態において、前記ヒンジドメインには、本明細書において、それぞれ配列番号３、配列番号４、および配列番号５、またはこれらのポリペプチドと好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９５％、９７％、もしくは９９％の配列同一性を示すヒンジポリペプチドと呼ばれる、ヒトＣＤ８α鎖、ＦｃγＲＩＩＩαレセプター、またはＩｇＧ１の部分が含まれる。