【手続補正書】
【提出日】平成30年10月4日(2018.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号８の変種である、ＤＮＡ依存性ＡＴＰａｓｅ（Ｄｄａ）ヘリカーゼであって、
（ａ）Ｆ９８が置換されており、
（ｂ）膜貫通ポアと相互作用するヘリカーゼの部分が１つまたは複数の修飾を含み、膜貫通ポアと相互作用するヘリカーゼの部分が、配列番号８中の位置１、２、３、４、５、６、５１、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８５、１８９、１９１、１９３、１９４、１９５、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１６、２１９、２２０、２２１、２２３、２２４、２２６、２２７、２２８、２２９、２４７、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２９８、３００、３０４、３０８、３１８、３１９、３２１、３３７、３４７、３５０、３５１、４０５、４１５、４２２、４３４、４３７、４３８を含み、
ポリヌクレオチドの移動を制御する能力を有する、ヘリカーゼ。
【請求項２】
さらに、Ｈ８２、Ｎ８８、Ｐ８９、Ｄ１２１、Ｖ１５０、Ｐ１５２、Ｆ２４０、Ｆ２７６、Ｓ２８７、Ｈ３９６およびＹ４１５の少なくとも１つが置換されており、並びに／またはＨ６４、Ｔ８０、Ｓ８３、Ｎ２４２、Ｋ２４３、Ｎ２９３、Ｔ３９４およびＫ３９７の少なくとも１つが置換されている、請求項１に記載のＤＮＡ依存性ＡＴＰａｓｅ（Ｄｄａ）ヘリカーゼ。
【請求項３】
Ｈ８２、Ｎ８８、Ｐ８９、Ｆ９８、Ｄ１２１、Ｖ１５０、Ｐ１５２、Ｆ２４０、Ｆ２７６、Ｓ２８７、Ｈ３９６およびＹ４１５の少なくとも１つのアミノ酸がより大きな側鎖（Ｒ基）を含むアミノ酸で置換されており、前記より大きな側鎖（Ｒ基）は、増加した数の炭素原子を含有し、増加した長さを有し、増加した分子体積を有し、および／または増加したファンデルワールス体積を有し、場合により、前記より大きな側鎖（Ｒ基）は、前記少なくとも１つのアミノ酸とｓｓＤＮＡ中の前記１つまたは複数のヌクレオチドとの間の（ｉ）静電気的相互作用、（ｉｉ）水素結合および／または（ｉｉｉ）カチオンｐｉ（カチオンπ）相互作用を増加させる、請求項１または２に記載のヘリカーゼ。
【請求項４】
Ｈ８２、Ｎ８８、Ｐ８９、Ｄ１２１、Ｖ１５０、Ｐ１５２、Ｆ２４０、Ｆ２７６、Ｓ２８７、Ｈ３９６およびＹ４１５の少なくとも１つが置換されており、
ヒスチジン（Ｈ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）グルタミン（Ｑ）もしくはアスパラギン（Ｎ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）もしくはトリプトファン（Ｗ）で置換されており；
アスパラギン（Ｎ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）グルタミン（Ｑ）もしくはヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）もしくはトリプトファン（Ｗ）で置換されており；
プロリン（Ｐ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、スレオニン（Ｔ）もしくはヒスチジン（Ｈ）、（ｉｉｉ）チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）もしくはトリプトファン（Ｗ）または（ｉｖ）ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）もしくはイソロイシン（Ｉ）で置換されており；
フェニルアラニン（Ｆ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）ヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）チロシン（Ｙ）もしくはトリプトファン（Ｗ）で置換されており；
アスパラギン酸（Ｄ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）もしくはヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）もしくはトリプトファン（Ｗ）で置換されており；
バリン（Ｖ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）もしくはヒスチジン（Ｈ）、（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）もしくはトリプトファン（Ｗ）または（ｉｖ）イソロイシン（Ｉ）もしくはロイシン（Ｌ）で置換されており；
セリン（Ｓ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）もしくはヒスチジン（Ｈ）、（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）もしくはトリプトファン（Ｗ）または（ｉｖ）イソロイシン（Ｉ）もしくはロイシン（Ｌ）で置換されており；および／あるいは
チロシン（Ｙ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）または（ｉｉｉ）トリプトファン（Ｗ）で置換されている、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項５】
配列番号８の変種であり：
−Ｈ８２Ｎ；
−Ｈ８２Ｑ；
−Ｈ８２Ｗ；
−Ｎ８８Ｒ；
−Ｎ８８Ｈ；
−Ｎ８８Ｗ；
−Ｎ８８Ｙ；
−Ｐ８９Ｌ；
−Ｐ８９Ｖ；
−Ｐ８９Ｉ；
−Ｐ８９Ｅ；
−Ｐ８９Ｔ；
−Ｐ８９Ｆ；
−Ｄ１２１Ｈ；
−Ｄ１２１Ｙ；
−Ｄ１２１Ｋ；
−Ｖ１５０Ｉ；
−Ｖ１５０Ｌ；
−Ｖ１５０Ｎ；
−Ｖ１５０Ｗ；
−Ｖ１５０Ｈ；
−Ｐ１５２Ｗ；
−Ｐ１５２Ｆ；
−Ｐ１５２Ｙ；
−Ｐ１５２Ｈ；
−Ｐ１５２Ｉ；
−Ｐ１５２Ｌ；
−Ｐ１５２Ｖ；
−Ｆ２４０Ｗ；
−Ｆ２４０Ｙ；
−Ｆ２４０Ｈ；
−Ｆ２７６Ｗ；
−Ｆ２７６Ｒ；
−Ｆ２７６Ｋ；
−Ｆ２７６Ｈ；
−Ｓ２８７Ｋ；
−Ｓ２８７Ｒ；
−Ｓ２８７Ｗ；
−Ｓ２８７Ｆ；
−Ｈ３９６Ｙ；
−Ｈ３９６Ｆ；
−Ｈ３９６Ｑ；
−Ｈ３９６Ｋ；
−Ｙ４１５Ｗ；
−Ｙ４１５Ｒ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｈ８２Ｎ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｈ８２Ｑ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｈ８２Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｒ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｈ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｙ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｌ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｖ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｉ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｔ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｆ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｄ１２１Ｈ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｄ１２１Ｙ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｄ１２１Ｋ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｉ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｌ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｎ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｈ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｆ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｙ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｈ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｉ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｌ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｖ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２４０Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２４０Ｙ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２４０Ｈ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２７６Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２７６Ｒ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２７６Ｋ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｆ２７６Ｈ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｓ２８７Ｋ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｓ２８７Ｒ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｓ２８７Ｗ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｓ２８７Ｆ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｙ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｆ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｑ；
−Ｆ９８Ｗ／Ｙ４１５Ｗ；または
−Ｆ９８Ｗ／Ｙ４１５Ｒ
を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項６】
Ｈ６４、Ｔ８０、Ｓ８３、Ｎ２４２、Ｋ２４３、Ｎ２９３、Ｔ３９４およびＫ３９７の少なくとも１つが置換されており、前記Ｈ６４、Ｔ８０、Ｓ８３、Ｎ２４２、Ｋ２４３、Ｎ２９３、Ｔ３９４およびＫ３９７の少なくとも１つの置換が前記少なくとも１つのアミノ酸とｓｓＤＮＡ中の前記１つまたは複数のリン酸基との間の（ｉ）静電気的相互作用、（ｉｉ）水素結合および／または（ｉｉｉ）カチオンｐｉ（カチオンπ）相互作用を増加させ、場合により、前記置換が前記位置の正味の正電荷を増加させる、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項７】
Ｈ６４、Ｔ８０、Ｓ８３、Ｎ２４２、Ｋ２４３、Ｎ２９３、Ｔ３９４およびＫ３９７の少なくとも１つが置換されており、
ヒスチジン（Ｈ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、グルタミン（Ｑ）もしくはスレオニン（Ｔ）、（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）もしくはチロシン（Ｙ）で置換されており；
スレオニン（Ｔ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、グルタミン（Ｑ）もしくはヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）もしくはヒスチジン（Ｈ）で置換されており；
セリン（ｓ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、スレオニン（Ｔ）もしくはヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）もしくはヒスチジン（Ｈ）で置換されており；
アスパラギン（Ｎ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）もしくはリシン（Ｋ）、（ｉｉ）セリン（Ｓ）、グルタミン（Ｑ）、スレオニン（Ｔ）もしくはヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）もしくはヒスチジン（Ｈ）で置換されており；および／あるいは
リシン（Ｋ）が（ｉ）アルギニン（Ｒ）もしくはヒスチジン（Ｈ）、（ｉｉ）アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、グルタミン（Ｑ）、スレオニン（Ｔ）もしくはヒスチジン（Ｈ）または（ｉｉｉ）フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）もしくはヒスチジン（Ｈ）で置換されている、請求項６に記載のヘリカーゼ。
【請求項８】
（ａ）Ｈ６４Ｎ、Ｈ６４Ｑ、Ｈ６４ＫまたはＨ６４Ｆ、（ｂ）Ｔ８０Ｋ、Ｔ８０ＱまたはＴ８０Ｎ、（ｃ）Ｓ８３Ｈ、Ｓ８３Ｎ、Ｓ８３Ｋ、Ｓ８３Ｔ、Ｓ８３ＲまたはＳ８３Ｑ、（ｄ）Ｎ２４２ＨまたはＮ２４２Ｑ、（ｅ）Ｋ２４３ＱまたはＫ２４３Ｈ、（ｆ）Ｎ２９３Ｑ、Ｎ２９３ＫまたはＮ２９３Ｈ、（ｇ）Ｔ３９４Ｋ、Ｔ３９４ＨまたはＴ３９４Ｎおよび（ｈ）Ｋ３９７Ｒ、Ｋ３９７ＨまたはＫ３９７Ｙの１つまたは複数を含む配列番号８の変種である、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項９】
−  Ｆ９８Ｗ／Ｈ６４Ｎ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ６４Ｑ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ６４ＫもしくはＦ９８Ｗ／Ｈ６４Ｆなどの、Ｆ９８／Ｈ６４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｔ８０Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｔ８０Ｑ、Ｆ９８Ｗ／Ｔ８０Ｎなどの、Ｆ９８／Ｔ８０における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｈ８２Ｎ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ８２ＱもしくはＦ９８Ｗ／Ｈ８２Ｗなどの、Ｆ９８／Ｈ８２における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｈ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｎ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｔ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３ＲもしくはＦ９８Ｗ／Ｓ８３Ｑなどの、Ｆ９８／Ｓ８３における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｎ２４２Ｈ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ２４２Ｑ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ２４３ＱもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ２４３Ｈなどの、Ｆ９８／Ｎ２４２における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｎ２９３Ｑ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ２９３Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ２９３Ｈ、Ｆ９８Ｗ／Ｔ３９４Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｔ３９４Ｈ、Ｆ９８Ｗ／Ｔ３９４Ｎ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｙ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｆ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６ＱもしくはＦ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｋなどの、Ｆ９８／Ｎ２９３における置換；または
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ３９７Ｒ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ３９７ＨもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ３９７Ｙなどの、Ｆ９８／Ｋ３９７における置換
を含む配列番号８の変種である、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項１０】
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ６４Ｎ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ６４Ｑ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ６４ＫもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ６４Ｆなどの、Ｆ９８／Ｋ１９４／Ｈ６４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｔ８０Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｔ８０ＱもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｔ８０Ｎなどの、Ｆ９８／Ｋ１９４／Ｔ８０における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ８２Ｎ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ８２ＱもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｈ８２Ｗなどの、Ｆ９８／Ｋ１９４／Ｈ８２における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｈ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｔ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｒ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｑ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｎ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｋ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｒ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｈ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ８８Ｗ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｎ８８Ｙ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｓ８３／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｓ８３Ｈ／Ｋ１９４Ｌ／Ｆ２７６Ｋなどの、Ｆ９８／Ｓ８３／Ｋ１９４／Ｆ２７６における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｌ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｖ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ８９Ｉ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｐ８９Ｔ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｐ８９／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｄ１２１Ｈ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｄ１２１Ｙ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｄ１２１Ｋ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｄ１２１／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｉ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｌ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｎ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｗ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｖ１５０Ｈ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｖ１５０／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｗ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｆ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｙ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｈ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｉ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｌ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｐ１５２Ｖ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｐ１５２／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｆ２４０Ｗ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｆ２４０Ｙ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｆ２４０Ｈ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｆ２４０／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｎ２４２Ｈ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｎ２４２Ｑ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｎ２４２／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｆ２７６Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｆ２７６Ｈ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｆ２７６ＷもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｆ２７６Ｒなどの、Ｆ９８／Ｋ１９４／Ｆ２７６における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｓ２８７Ｋ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｓ２８７Ｒ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｓ２８７ＷもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ１９４Ｌ／Ｓ２８７Ｆなどの、Ｆ９８／Ｋ１９４／Ｓ２８７における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｎ２９３Ｑ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｎ２９３Ｋ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｎ２９３Ｈ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｎ２９３／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｔ３９４Ｋ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｔ３９４Ｈ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｔ３９４Ｎ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｔ３９４／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｙ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｆ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｑ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｈ３９６Ｋ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｈ３９６／Ｋ１９４における置換；
−  Ｆ９８Ｗ／Ｋ３９７Ｒ／Ｋ１９４Ｌ、Ｆ９８Ｗ／Ｋ３９７Ｈ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｋ３９７Ｙ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｋ３９７／Ｋ１９４における置換；または
−  Ｆ９８Ｗ／Ｙ４１５Ｗ／Ｋ１９４ＬもしくはＦ９８Ｗ／Ｙ４１５Ｒ／Ｋ１９４Ｌなどの、Ｆ９８／Ｙ４１５／Ｋ１９４における置換
を含む配列番号８の変種である、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項１１】
（ａ）少なくとも１つのシステイン残基および／もしくは少なくとも１つの非天然アミノ酸が（ｉ）タワードメインおよび／もしくは（ｉｉ）ピンドメインおよび／もしくは（ｉｉｉ）１Ａ（ＲｅｃＡ様モーター）ドメインに導入されているか；
（ｂ）少なくとも１つのシステイン残基および／もしくは少なくとも１つの非天然アミノ酸がフックドメインおよび／もしくは２Ａ（ＲｅｃＡ様モーター）ドメインに導入されているか；または
（ｃ）その表面負電荷を低減するように修飾されている、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項１２】
配列番号８の変種であり、Ｅ９４Ｃ、Ｆ９８Ｗ、Ｃ１０９Ａ、Ｃ１３６Ａ、Ｋ１９４ＬおよびＡ３６０Ｃを含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼ。
【請求項１３】
前記請求項のいずれか一項に記載のヘリカーゼおよび追加的ポリヌクレオチド結合成分を含む構築物であって、前記ヘリカーゼが前記ポリヌクレオチド結合成分に付着しており、ポリヌクレオチドの移動を制御する能力を有する構築物。
【請求項１４】
標的ポリヌクレオチドを特性決定する方法であって、
（ａ）前記標的ポリヌクレオチドを膜貫通ポアおよび請求項１から１２のいずれか一項に記載のヘリカーゼまたは請求項１３に記載の構築物に、前記ヘリカーゼまたは構築物が前記ポアを通る前記標的ポリヌクレオチドの移動を制御するように接触させるステップ；ならびに
（ｂ）前記ポリヌクレオチドが前記ポアに対して移動する際に１つまたは複数の測定値を取るステップであって、前記測定値が前記標的ポリヌクレオチドの１つまたは複数の特性を示し、それにより前記標的ポリヌクレオチドを特性決定するステップ
を含む方法。
【請求項１５】
標的ポリヌクレオチドを特徴付けるためのセンサーであって、（ａ）ポアと、（ｂ）請求項１から１２のいずれか一項に記載のヘリカーゼまたは請求項１３に記載の構築物との間の複合体を含む、センサー。