【手続補正書】
【提出日】平成30年7月9日(2018.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞バンクの解凍復元を改善する方法であって、凍結培地中でバンキングするためにＣＨＯ細胞を凍結させることを含み、前記凍結培地が、緩衝溶液及び凍結保護剤を含み、前記凍結培地のｐＨが、凍結前に約７．５〜約８．５のｐＨに調整されている、方法。
【請求項２】
保管のためにＣＨＯ細胞を凍結させる方法であって、凍結培地中でＣＨＯ細胞を凍結させることを含み、前記凍結培地が、緩衝溶液及び凍結保護剤を含み、前記凍結培地のｐＨが、凍結前に約７．５〜約８．５のｐＨに調整されている、方法。
【請求項３】
凍結培地のｐＨが、７．５のｐＨに調整されている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
細胞が、ｐＨ調整の前及び／または後に凍結培地と組み合わされる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
調整されたｐＨが、標的ｐＨまたは測定されたｐＨである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
標的ｐＨが、約７．５〜約８．３である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
測定されたｐＨが、約７．５〜約８．３である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
凍結培地のｐＨを調整する前に、細胞を含有する凍結培地の初期ｐＨを測定するステップを更に含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
凍結培地の調整されたｐＨを測定するステップを更に含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
凍結培地の測定されたｐＨが標的ｐＨ未満の場合、凍結培地の調整されたｐＨが約７．５〜約８．３になるまで、調整するステップ及び測定するステップを繰り返す、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ｐＨが、塩基を添加することにより調整される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
塩基が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳナトリウム塩、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
凍結培地のｐＨが、次の式、Ｖｂａｓｅ＝Ｃｂａｓｅ＊Ｖｐ（ｐＨｔ−ｐＨｉ）に従って、凍結培地に塩基を添加することにより調整され、式中、Ｃｂａｓｅが、塩基固有の係数であり、Ｖｂａｓｅが、凍結培地に添加する塩基の体積であり、Ｖｐが、凍結培地の体積であり、ｐＨｔが、標的ｐＨであり、ｐＨｉが、初期ｐＨである、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
凍結培地のｐＨが、次の式、ＶＮａ２ＣＯ３＝０．００８５Ｖｐ（ｐＨｔ−ｐＨｉ）に従って、凍結培地に炭酸ナトリウムを添加することにより調整され、式中、ＶＮａ２ＣＯ３が、凍結培地に添加する１Ｍ炭酸ナトリウムの体積であり、Ｖｐが、凍結培地の体積であり、ｐＨｔが、標的ｐＨであり、ｐＨｉが、初期ｐＨである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
標的ｐＨが、７．５である、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＨＯ細胞が、ＣＨＯ細胞が凍結培地と組み合わされる前に約６．２〜約６．６のｐＨを有する培地中にある、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
凍結保護剤が、ＤＭＳＯ、グリセロール、プロパンジオール、エチレングリコール、または糖である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
凍結保護剤が、ＤＭＳＯまたはグリセロールであり、凍結前の凍結培地中のＤＭＳＯまたはグリセロールが、約５体積％〜約１２．５体積％の濃度である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
細胞を凍結させる前の凍結培地中のＤＭＳＯまたはグリセロールが、約５体積％〜約１０体積％の濃度である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＨＯ細胞を含有する凍結培地が、凍結前に約８％〜約２８％血中血球容積（ＰＣＶ）の細胞密度を有する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
ＣＨＯ細胞が凍結培地と組み合わされる前の細胞収穫及び濃縮プロセスの間、細胞培養流体を冷却するステップを更に含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
細胞培養流体が、約２０℃以下の温度まで冷却される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
細胞培養流体が、約１０℃以下の温度まで冷却される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
保管のためにＣＨＯ細胞を凍結させる方法であって、（ａ）ＣＨＯ細胞を含有する凍結培地のｐＨを約７．５〜約８．５のｐＨに調整すること、及び（ｂ）ＣＨＯ細胞を凍結させることを含む、方法。
【請求項２５】
ｐＨが、約７．５〜約８．３のｐＨに調整される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ｐＨが、７．５のｐＨに調整される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
調整されたｐＨが、標的ｐＨまたは測定されたｐＨである、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
標的ｐＨが、約７．５〜約８．３である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
測定されたｐＨが、約７．５〜約８．３である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
凍結培地のｐＨを調整する前に、細胞を含有する凍結培地の初期ｐＨを測定するステップを更に含む、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
凍結培地の調整されたｐＨを測定するステップを更に含む、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
凍結培地の測定されたｐＨが標的ｐＨ未満の場合、凍結培地の調整されたｐＨが約７．５〜約８．５になるまで、調整するステップ及び測定するステップを繰り返す、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ｐＨが、塩基を添加することにより調整される、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
塩基が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳナトリウム塩、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
凍結培地のｐＨが、次の式、Ｖｂａｓｅ＝Ｃｂａｓｅ＊Ｖｐ（ｐＨｔ−ｐＨｉ）に従って、凍結培地に塩基を添加することにより調整され、式中、Ｃｂａｓｅが、塩基固有の係数であり、Ｖｂａｓｅが、凍結培地に添加する塩基の体積であり、Ｖｐが、凍結培地の体積であり、ｐＨｔが、標的ｐＨであり、ｐＨｉが、初期ｐＨである、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
凍結培地のｐＨが、次の式、ＶＮａ２ＣＯ３＝０．００８５Ｖｐ（ｐＨｔ−ｐＨｉ）に従って、凍結培地に炭酸ナトリウムを添加することにより調整され、式中、ＶＮａ２ＣＯ３が、凍結培地に添加する１Ｍ炭酸ナトリウムの体積であり、Ｖｐが、凍結培地の体積であり、ｐＨｔが、標的ｐＨであり、ｐＨｉが、初期ｐＨである、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３７】
標的ｐＨが、７．５〜８．３である、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＣＨＯ細胞が、ＣＨＯ細胞が凍結培地と組み合わされる前に約６．２〜約６．６のｐＨを有する培地中にある、請求項２４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
凍結保護剤が、ＤＭＳＯ、グリセロール、プロパンジオール、エチレングリコール、または糖である、請求項２４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
凍結保護剤が、ＤＭＳＯまたはグリセロールであり、ＣＨＯ細胞を含有する凍結前の凍結培地中のＤＭＳＯまたはグリセロールが、約５体積％〜約１２．５体積％の濃度である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＣＨＯ細胞を含有する、細胞を凍結させる前の凍結培地中のＤＭＳＯまたはグリセロールが、約５体積％〜約１０体積％の濃度である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＣＨＯ細胞を含有する凍結培地が、凍結前に８％〜２８％血中血球容積（ＰＣＶ）の細胞密度を有する、請求項２４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
ＣＨＯ細胞が凍結培地と組み合わされる前の細胞収穫及び濃縮プロセスの間、細胞培養流体を冷却するステップを更に含む、請求項２４〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
細胞培養流体が、約２０℃以下の温度まで冷却される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
細胞培養流体が、約１０℃以下の温度まで冷却される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
保管のためにＣＨＯ細胞を凍結させる方法であって、（ａ）緩衝溶液及び凍結保護剤を含む凍結培地のｐＨを約７．５〜約８．５のｐＨに調整すること、（ｂ）ＣＨＯ細胞を前記凍結培地と組み合わせて、細胞プールを形成すること、及び（ｃ）前記細胞プール中でＣＨＯ細胞を凍結させることを含む、方法。
【請求項４７】
ｐＨが、７．５のｐＨに調整される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
調整されたｐＨが、標的ｐＨまたは測定されたｐＨである、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】
標的ｐＨが、７．５である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
測定されたｐＨが、約７．５〜約８．３である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
凍結培地の調整されたｐＨを測定するステップを更に含む、請求項４６〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
凍結培地の測定されたｐＨが標的ｐＨ未満の場合、凍結培地の調整されたｐＨが約７．５〜約８．５になるまで、調整するステップ及び測定するステップを繰り返す、請求項４８〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
ｐＨが、塩基を添加することにより調整される、請求項４６〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
塩基が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳナトリウム塩、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムからなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ＣＨＯ細胞が、ＣＨＯ細胞が凍結培地と組み合わされる前に約６．２〜約６．６のｐＨを有する培地中にある、請求項４６〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
凍結保護剤が、ＤＭＳＯ、グリセロール、プロパンジオール、エチレングリコール、または糖である、請求項４６〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
凍結保護剤が、ＤＭＳＯまたはグリセロールであり、細胞プール中のＤＭＳＯまたはグリセロールが、約５体積％〜約１２．５体積％の濃度である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記細胞プール中のＤＭＳＯまたはグリセロールが、約５体積％〜約１０体積％の濃度である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記細胞プールが、約８％〜約２８％血中血球容積（ＰＣＶ）の細胞密度でＣＨＯ細胞を含有する、請求項４６〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
ＣＨＯ細胞が凍結培地と組み合わされる前の細胞収穫及び濃縮プロセスの間、細胞培養流体を冷却するステップを更に含む、請求項４６〜５９のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
細胞培養流体が、約２０℃以下の温度まで冷却される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
細胞培養流体が、約１０℃以下の温度まで冷却される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
ＣＨＯ細胞が、ポリペプチドをコードする核酸を含む、請求項１〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
ポリペプチドが、治療用タンパク質である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
治療用タンパク質が、抗体、抗体断片、酵素、及び受容体融合タンパク質からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
緩衝溶液と、凍結保護剤と、ポリペプチドをコードする核酸を含むＣＨＯ細胞とを含む、ＣＨＯ細胞を凍結させるためのＣＨＯ細胞プールであって、培地が、細胞を凍結させる前に７．５〜８．５のｐＨを有する、細胞プール。
【請求項６７】
ＣＨＯ細胞が、ポリペプチドをコードする核酸を含む、請求項６６に記載の細胞プール。
【請求項６８】
ポリペプチドが、治療用タンパク質である、請求項６７に記載の細胞プール。
【請求項６９】
治療用タンパク質が、抗体、抗体断片、酵素、及び受容体融合タンパク質からなる群から選択される、請求項６８に記載の細胞プール。
【請求項７０】
複数の容器を含む細胞バンクであって、各容器が、（ａ）緩衝溶液及び凍結保護剤を含む凍結培地と、（ｂ）ポリペプチドをコードする核酸を含むＣＨＯ細胞とを収容し、凍結培地が、細胞を凍結させる前に約７．５〜約８．５のｐＨを有する、細胞バンク。
【請求項７１】
前記容器が、アンプルである、請求項７０に記載の細胞バンク。
【請求項７２】
ＣＨＯ細胞が、ポリペプチドをコードする核酸を含む、請求項７０または７１に記載の細胞バンク。
【請求項７３】
前記ポリペプチドが、治療用タンパク質である、請求項７２に記載の細胞バンク。
【請求項７４】
治療用タンパク質が、抗体、抗体断片、酵素、及び受容体融合タンパク質からなる群から選択される、請求項７３に記載の細胞バンク。