【誤訳訂正書】
【提出日】平成30年8月23日(2018.8.23)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
【図１】図１Ａは、０μｌ／１０ｍｌ、５μｌ／１０ｍｌ、及び１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理された細胞に対する、乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ２３１を使用する細胞遊走のグラフである。ＭＤＡ−ＭＢ２３１浸潤性乳房腫瘍細胞の遊走における式Ｉ（ｎ）の影響を、膜浸潤培養システム（ＭＩＣＳ）チャンバを使用して試験した。膜浸潤培養システム（ＭＩＣＳ）チャンバに、１２時間ゼラチンに予め浸したＣｒｏｓｓｔｅｘ１０μｍポリカーボネート膜を取り付けた。下部のウェルに、１０％ＦＢＳ、及び０〜２０μｌ／１０ｍｌのメタノールで希釈した、０、５、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を追加したＤＭＥＭを十分に入れた。上部のウェルに、１ｍｌの血清不含フェノールレッド不含培地、及び対応する式Ｉ（ｎ）／メタノール溶液を入れた。１００，０００細胞／ウェルを入れ、チャンバを３７度で２４時間培養した。培養後、培地をチャンバの上方部分から取り出し、非遊走細胞を膜の上面からキムワイプで拭き取った。細胞を、１００％メタノールに浸漬することにより、膜上に固定した。細胞をエオシン溶液で２５秒間、クリスタルバイオレット溶液で３５秒間、染色した。膜を水で洗浄し、イマージョンオイルで前処理した顕微鏡スライド上に置き、カバーガラスで覆い、細胞を光学顕微鏡でカウントした。各サンプルを、３回測定した。実施例６に記載されているように、式Ｉ（ｎ）は、ＭＤＡ−ＭＢ２３１腫瘍細胞の遊走を著しく阻害した。図１Ｂは、０μｌ／１０ｍｌ、５μｌ／１０ｍｌ、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理された細胞に対する、乳癌細胞株Ｈｓ５７８Ｔを使用する細胞遊走のグラフである。Ｈｓ５７８Ｔ浸潤性乳房腫瘍細胞の遊走における式Ｉ（ｎ）の影響を、図１Ａに記載されている手順を用いて、膜浸潤培養システム（ＭＩＣＳ）チャンバを使用して試験した。実施例６に記載されているように、式Ｉ（ｎ）は、Ｈｓ５７８Ｔ腫瘍細胞の遊走を著しく阻害した。
【図２】図２Ａは、式Ｉ（ｎ）の処理のない０時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。包皮線維芽細胞（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）のコンフルエント状態の培養物に２００μｌのピペットチップの先端で引っかき傷を入れ、ＰＢＳで１回洗浄し、０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を含有する培地を血清不含培地に交換した。写真は、スクラッチの後必要とする時間（０、１２、または２４時間）で撮影され、遊走するへりの間の距離をピクセル単位で測定した。図２Ｂは、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した０時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を使用して、図２Ａに記載されているように実施した。図２Ｃは、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した０時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を使用して、図２Ａに記載されているように実施した。図２Ｄは、式Ｉ（ｎ）の処理のない１２時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、図２Ａに記載されているように実施した。図２Ｅは、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した１２時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を使用して、図２Ａに記載されているように実施した。実施例７に記載されているように、式Ｉ（ｎ）処理細胞は、遊走が低下することを示す。図２Ｆは、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した１２時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を使用して、図２Ａに記載されているように実施した。実施例７に記載されているように、式Ｉ（ｎ）処理細胞は、遊走が低下することを示す。図２Ｇは、式Ｉ（ｎ）の処理のない２４時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、図２Ａに記載されているように実施した。図２Ｈは、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した２４時間における、線維芽細胞の遊走を示す、線維芽細胞を使用するインビトロスクラッチアッセイの顕微鏡写真である。実験を、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）を使用して、図２Ａに記載されているように実施した。実施例７に記載されているように、式Ｉ（ｎ）処理細胞は、遊走が低下することを示す。
【図３】図３は、遊走するへりの間の距離（ピクセル単位で測定した）対式Ｉ（ｎ）の投与後の時間（時間）のグラフである。実験は、図２に記載されているように実施した。
【図４】図４Ａは、式Ｉ（ｎ）で処理していない、プレコンフルエント状態の新生児包皮線維芽細胞の顕微鏡写真である。モック処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｂは、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した、プレコンフルエント状態の新生児包皮線維芽細胞の顕微鏡写真である。処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｃは、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した、プレコンフルエント状態の新生児包皮線維芽細胞の顕微鏡写真である。処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｄは、式Ｉ（ｎ）で処理していない、コンフルエント状態のＭＤＡ−ＭＢ２３１乳癌細胞の顕微鏡写真である。モック処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｅは、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した、コンフルエント状態のＭＤＡ−ＭＢ２３１乳癌細胞の顕微鏡写真である。処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｆは、１０μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した、コンフルエント状態のＭＤＡ−ＭＢ２３１乳癌細胞の顕微鏡写真である。処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｇは、式Ｉ（ｎ）で処理していない、プレコンフルエント状態のＭＤＡ−ＭＢ２３１乳癌細胞の顕微鏡写真である。モック処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。図４Ｈは、５μｌ／１０ｍｌの式Ｉ（ｎ）で処理した、プレコンフルエント状態のＭＤＡ−ＭＢ２３１乳癌細胞の顕微鏡写真である。処理の２４時間後、細胞をファロイジン（アクチン−緑）、及びヨウ化プロピジウム（細胞核−赤）で染色した。
【図５】図５は、式Ｉ（ｎ）で処理されたＨｓ５７８Ｔ細胞の局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）のリン酸化を阻害することを示す、ウェスタンブロットである。ｐＴｙｒ５７６でリン酸化されるＦＡＫタンパク質を検出する抗体を、１：１０００（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｃ．（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）製のウサギ  抗−ＦＡＫ［ｐＴｙｒ５７６］）の希釈で使用した。実施例９に記載されているように、式Ｉ（ｎ）により、ＦＡＫ［Ｔｙｒ５７６］のリン酸化は、濃度に依存して減少する。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８５】
実施例９
式Ｉ（ｎ）処理細胞における、低下する局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）［Ｔｙｒ５７６］リン酸化
ＭＤＡ−ＭＢ２３１、Ｈｓ５７８Ｔ（Ｐａｙｎｅ  ＳＬ，Ｆｏｇｅｌｇｒｅｎ  Ｂ，Ｈｅｓｓ  ＡＲ，Ｓｅｆｔｏｒ  ＥＡ，Ｆｏｎｇ  ＳＦＴ，Ｃｓｉｓｚａｒ  Ｋ、Ｈｅｎｄｒｉｘ  ＭＪＣ，ａｎｄ  Ｋｉｒｓｃｈｍａｎｎ  ＤＡ．Ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：１１４２９−３６，２００５）、ならびに星細胞腫細胞（Ｌａｃｚｋｏ  Ｒ，Ｓｚａｕｔｅｒ  ＫＭ，Ｊａｎｓｅｎ  ＭＫ，Ｈｏｌｌｏｓｉ  Ｐ，Ｍｕｒａｎｙｉ  Ｍ，Ｍｏｌｎａｒ  Ｊ，Ｆｏｎｇ  ＫＳＫ，Ｈｉｎｅｋ  Ａ，Ｃｓｉｓｚａｒ  Ｋ．Ａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ（ＬＯＸ）ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ＦＡＫ／ｐａｘｉｌｌｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．３３：６３１−４３，２００７）を含む、種々の浸潤性乳房腫瘍細胞の遊走能の低下が、局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）の活性の低下ならびにＳＲＣ及び／またはパキシリンシグナル伝達の低減のためであったことは、以前に示している。式Ｉ（ｎ）処理細胞におけるＦＡＫ活性の状態を判定するために、５及び１０μｌの式Ｉ（ｎ）で処理されたＨｓ５７８Ｔ細胞におけるＦＡＫ［Ｔｙｒ５７６］のリン酸化状態を分析した。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における皮膚癌、皮膚の前癌性病変または固形腫瘍を治療するための医薬組成物であって、式ＩＩＩの化合物を含んでなり、
【化１】
2016515585.tif 000001
式中、
Ｒ１は、Ｃ１３−Ｃ１７を含む炭素鎖を有するアルキル基またはアルケニル基を表し、かつ、
前記式ＩＩＩの化合物は、９８％を超える純度を有し、
皮膚癌、皮膚の前癌性病変、または固形腫瘍が局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）を過剰発現している、医薬組成物。
【請求項２】
前記化合物が、
【化２】
2016515585.tif 000002
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記化合物が、
【化３】
2016515585.tif 000003
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記化合物が、
【化４】
2016515585.tif 000004
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記化合物が、
【化５】
2016515585.tif 000005
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化合物が、
【化６】
2016515585.tif 000006
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記化合物が、
【化７】
2016515585.tif 000007
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記化合物が、
【化８】
2016515585.tif 000008
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記化合物が、
【化９】
2016515585.tif 000009
である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物が、
【化１０】
2016515585.tif 000010
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
対象における皮膚癌、皮膚の前癌性病変または固形腫瘍を治療するための医薬組成物であって、下記式の化合物：
【化１１】
2016515585.tif 000011
を含んでなり、
皮膚癌、皮膚の前癌性病変、または固形腫瘍が局所接着キナーゼ（ＦＡＫ）を過剰発現している、医薬組成物。
【請求項１２】
前記対象がヒトである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記皮膚癌または皮膚の前癌性病変が、日光角化症、白斑症、扁平上皮細胞癌、及び基底細胞癌から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記固形腫瘍が、乳癌、肺癌および結腸癌から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。