【誤訳訂正書】
【提出日】平成30年2月8日(2018.2.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性ポリマーを治療用タンパク質の酸化炭水化物部分へ複合化させる方法であって、複合化を可能にする条件下で、前記酸化炭水化物部分を活性化水溶性ポリマーと接触させることを含み、
前記水溶性ポリマーが、活性アミノオキシ基を含有し、炭水化物、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記炭水化物部分が、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤を含む緩衝液とともにインキュベーションすることによって酸化され、
オキシム連結が、前記酸化炭水化物部分と前記水溶性ポリマー上の前記活性アミノオキシ基との間に形成され、
前記オキシム連結形成が、ｍ−トルイジンによって触媒される、方法。
【請求項２】
前記ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（メトキシＰＥＧ）メタクリレート、またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記炭水化物が、多糖類を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記多糖類が、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デキストラン、またはカルボキシメチルデキストランを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法であって、
前記治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択される、方法。
【請求項６】
０．３ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍｇ／ｍＬの初期濃度の前記治療用タンパク質を含む溶液が、前記活性化水溶性ポリマーと接触させる前に、ｐＨ値が５．０〜８．０になるように調整される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記治療用タンパク質の前記初期濃度が、１．０ｍｇ／ｍＬであり、前記ｐＨが、６．０である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記治療用タンパク質が、所望の過剰濃度の活性化水溶性ポリマーによって接触され、前記過剰濃度が、１モル〜３００モル過剰である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記過剰濃度が、５０倍のモル過剰である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療用タンパク質が、０．５時間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、前記活性化水溶性ポリマーとともにインキュベートされる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記条件が、１２０分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ｍ−トルイジンが、０．１分〜３０分の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、１．０ｍＭ〜５０ｍＭのｍ−トルイジンの最終濃度をもたらす量で添加される、請求項５に記載の方法。
【請求項１３】
前記ｍ−トルイジンの前記最終濃度が、１０ｍＭであり、前記条件が、最大１５分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記酸化剤が、０．１分〜１２０分の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、５０μＭ〜１０００μＭの酸化剤の最終濃度をもたらす量で添加される、請求項５に記載の方法。
【請求項１５】
前記酸化剤の最終濃度が、４００μＭであり、前記条件が、１０分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分への前記水溶性ポリマーの前記複合化が、Ｌ−システイン、メチオニン、グルタチオン、グリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはそれらの誘導体、クレゾール、イミダゾール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反応停止剤の添加によって停止され、
前記反応停止剤が、５分〜１２０分の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、１ｍＭ〜１００ｍＭの反応停止剤の最終濃度をもたらす量で添加される、請求項５に記載の方法。
【請求項１７】
前記反応停止剤が、Ｌ−システインである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｌ−システインが、１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加され、前記条件が、６０分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ａ）ｐＨ値が５．０〜８．０になるように、前記治療用タンパク質を含む溶液の前記ｐＨ値を調整させることを含み、前記治療用タンパク質濃度が、０．３ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍｇ／ｍＬである、第１のステップと、
ｂ）前記治療用タンパク質において、１つ以上の炭水化物を酸化させることを含み、前記酸化剤が、０．１分〜１２０分の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、５０μＭ〜１０００μＭの最終濃度をもたらすように、前記第１のステップ中の前記溶液に添加される、第２のステップと、
ｃ）所望の過剰濃度の活性化水溶性ポリマーと前記治療用タンパク質を接触させることを含み、前記過剰濃度が、１モル過剰〜３００モル過剰であり、０．５時間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下である、第３のステップと、
ｄ）前記第３のステップの前記溶液に、前記ｍ−トルイジンを添加することを含み、前記ｍ−トルイジンが、０．１分〜３０分の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、１ｍＭ〜５０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第４のステップと、
ｅ）前記治療用タンパク質が、前記治療用タンパク質の１つ以上の酸化炭水化物への前記活性化水溶性ポリマーの前記複合化を可能にする条件下で、前記活性化水溶性ポリマーおよびｍ−トルイジンとともにインキュベートされ、前記条件が、０．５時間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、第５のステップと、
ｆ）第５のステップ中の前記治療用タンパク質の前記１つ以上の酸化炭水化物への前記水溶性ポリマーの前記複合化が、Ｌ−システイン、メチオニン、グルタチオン、グリセロール、Ｎａ２Ｓ２Ｏ５（メタ重亜硫酸ナトリウム）、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはそれらの誘導体、クレゾール、イミダゾール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反応停止剤の添加によって停止され、前記反応停止剤が、５分〜１２０分の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、１ｍＭ〜１００ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第６のステップと、を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項２０】
ａ）ｐＨ値が６．０になるように、前記治療用タンパク質を含む溶液の前記ｐＨ値を調整させることを含む第１のステップであって、前記治療用タンパク質の前記初期濃度が、１ｍｇ／ｍＬである、第１のステップと、
ｂ）前記治療用タンパク質において、１つ以上の炭水化物を酸化させることを含む第２のステップであって、前記酸化剤が、１０分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む条件下で、４００μＭの最終濃度をもたらすように、前記第１のステップ中の前記溶液に添加される、第２のステップと、
ｃ）１５分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む条件下で、所望の過剰濃度の活性化水溶性ポリマーと前記治療用タンパク質を接触させることを含む第３のステップであって、前記過剰濃度が、５０モル過剰である、第３のステップと、
ｄ）前記第３のステップの前記溶液に、前記ｍ−トルイジンを添加することを含む第４のステップであって、前記ｍ−トルイジンが、１５分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む条件下で、１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第４のステップと、
ｅ）前記治療用タンパク質が、前記治療用タンパク質の１つ以上の酸化炭水化物への前記活性化水溶性ポリマーの前記複合化を可能にする条件下で、前記活性化水溶性ポリマーおよびｍ−トルイジンとともにインキュベートされる第５のステップであって、前記条件が、２時間の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、第５のステップと、
ｆ）前記第５のステップ中の前記治療用タンパク質の前記１つ以上の酸化炭水化物への前記水溶性ポリマーの前記複合化が、Ｌ−システインの添加によって停止される第６のステップであって、前記Ｌ−システインが、６０分の期間、２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む条件下で、１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第６のステップと、
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項２１】
前記水溶性ポリマーがＰＳＡであり、１０〜３００個のシアル酸単位からなる、請求項５に記載の方法。
【請求項２２】
前記治療用タンパク質が血液凝固タンパク質である場合、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分が、前記血液凝固タンパク質の活性化ペプチド内に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＰＳＡが、活性化アミノオキシリンカーを、酸化ＰＳＡと反応させることによって、調製され、
前記アミノオキシリンカーが、
ａ）式：
【化２５】
2013536180.tif 000001
の３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンリンカー、
ｂ）式：
【化２６】
2013536180.tif 000002
の３，６，９−トリオキサ−ウンデカン−１，１１−ジオキシアミンリンカー、および
ｃ）式：
【化２７】
2013536180.tif 000003
の３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ（ｐｅｎａｔｏｘａ）−ヘプタデカン−１，１７−ジオキシアミンリンカーからなる群より選択され、
前記ＰＳＡが、酸化剤とともにインキュベーションすることによって酸化され、前記ＰＳＡの非還元末端において、末端アルデヒド基を形成する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記酸化剤が、ＮａＩＯ４である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｍ−トルイジンが、１ｍＭ〜５０ｍＭの濃度で提供される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ｍ−トルイジンが、１０ｍＭの濃度で、複合化反応において存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびＮａＢＨ３からなる群から選択される還元化合物を含む緩衝液中で前記複合化された治療用タンパク質をインキュベートすることによって、前記複合化された治療用タンパク質中のオキシム連結を還元するステップを更に含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記複合化された治療用タンパク質を精製するステップを更に含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記複合化された治療用タンパク質が、クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって精製される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記クロマトグラフィが、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィ（ＩＥＣ）、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）、親和性クロマトグラフィ、および逆相クロマトグラフィからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
抗カオトロピック塩が、クロマトグラフィの負荷ステップおよびクロマトグラフィの洗浄ステップにおいて使用される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記クロマトグラフィが、カラムにおいて行われる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記カラムが、フェニル−セファロースＦＦおよびブチル−セファロースＦＦからなる群から選択されるクロマトグラフィ樹脂を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記樹脂が、５ｃｍ〜２０ｃｍの床高さでカラム中に存在する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記床高さが、１０ｃｍである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
流れ方向が、上向流に設定され、前記流速が、０．２ｃｍ／分〜６．７ｃｍ／分である、１つ以上の洗浄ステップを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記流速が、２ｃｍ／分である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
流れ方向が、下向流に設定され、前記流速が、０．１ｃｍ／分〜６．７ｃｍ／分である、１つ以上の溶出ステップを含む、請求項３２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記流速が、１ｃｍ／分である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって、前記複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、請求項２８〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記治療用タンパク質の前記最終濃度が、０．５〜３ｍｇ／ｍＬである、請求項２８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記治療用タンパク質が、５〜１１個の水溶性ポリマー部分を含む、請求項２８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記複合化された治療用タンパク質が、クロマトグラフィを用いて精製され、抗カオトロピック塩が、負荷ステップおよび洗浄ステップにおいて使用され、前記方法が、流れ方向が、上向流に設定され、前記流速が、０．２ｃｍ／分〜６．７ｃｍ／分である、１つ以上の洗浄ステップと、流れ方向が、下向流に設定され、前記流速が、０．２ｃｍ／分〜６．７ｃｍ／分である、１つ以上の溶出ステップと、を含み、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって、前記複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、請求項５に記載の方法。
【請求項４４】
前記クロマトグラフィが、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）であり、前記１つ以上の洗浄ステップの流速が、２ｃｍ／分であり、前記１つ以上の溶出ステップの流速が、１ｃｍ／分である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結の形成方法であって、
ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに前記タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、
ｂ）前記オキシム連結の形成を可能にする条件下で、ｍ−トルイジンの存在下で、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結を形成するステップであって、
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、炭水化物、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記オキシム連結形成が、ｍ−トルイジンによって触媒されるステップと、を含む、方法。
【請求項４６】
前記ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（メトキシＰＥＧ）メタクリレート、またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記炭水化物が、多糖類を含む、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記多糖類が、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デキストラン、またはカルボキシメチルデキストランを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結の形成方法であって、
ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに前記タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、
ｂ）前記ヒドラゾン連結の形成を可能にする条件下で、ｍ−トルイジンの存在下で、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する前記活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結を形成するステップであって、
活性ヒドラジド基を含有する前記水溶性ポリマーが、炭水化物、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記ヒドラゾン連結形成が、ｍ−トルイジンによって触媒されるステップと、を含む、方法。
【請求項５０】
前記ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（メトキシＰＥＧ）メタクリレート、またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記炭水化物が、多糖類を含む、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記多糖類が、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デキストラン、またはカルボキシメチルデキストランを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
請求項４５〜５２のいずれか１項に記載の方法であって、
前記治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択される、方法。
【請求項５４】
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、
ａ）１分間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したオキシム連結の形成を可能にする条件下で、活性アミノオキシ基を含む前記活性化アミノオキシリンカーとともに、前記酸化水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートし、それによって、活性アミノオキシ基を含有する水溶性ポリマーを形成することと、
ｂ）クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって、活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを精製することと、を含む、方法によって調製される、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
ステップａ）の後でかつステップｂ）の前にステップａ’）が行われるように、
ａ’）１分間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したアルコキサミン（ａｌｋｏｘａｍｉｎｅ）連結の形成を可能にする条件下で、還元剤とともに、ステップａ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすること、
をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
ステップａ）の後でかつステップｂ）の前にステップａ’）が行われるように、
ａ’）１分間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、ｍ−トルイジンとともに、ステップａ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすること、
をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
ステップａ’）の後でかつステップｂ）の前にステップａ”）が行われるように、
ａ”）１分間〜２４時間の期間、２℃〜３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、前記酸化水溶性ポリマーと前記活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したアルコキサミン（ａｌｋｏｘａｍｉｎｅ）連結の形成を可能にする条件下で、還元剤とともに、ステップｂ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすること、
をさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記酸化水溶性ポリマーが、炭水化物、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、前記水溶性ポリマーが、酸化剤とともにインキュベーションすることによって酸化され、前記水溶性ポリマーの非還元末端において、末端アルデヒド基を形成する、請求項５４〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（メトキシＰＥＧ）メタクリレート、またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記炭水化物が、多糖類を含む、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記多糖類が、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デキストラン、またはカルボキシメチルデキストランを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記酸化剤が、ＮａＩＯ４である、請求項５８〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記アミノオキシリンカーが、
ａ）式：
【化２８】
2013536180.tif 000004
の３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンリンカー、
ｂ）式：
【化２９】
2013536180.tif 000005
の３，６，９−トリオキサ−ウンデカン−１，１１−ジオキシアミンリンカー、および
ｃ）式：
【化３０】
2013536180.tif 000006
の３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ（ｐｅｎａｔｏｘａ）−ヘプタデカン−１，１７−ジオキシアミンリンカーからなる群から選択される、請求項５４〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記還元剤が、シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびＮａＢＨ３からなる群から選択される、請求項５５および５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ｍ−トルイジンが、１．０ｍＭ〜５０ｍＭのｍ−トルイジンの最終濃度をもたらす量で添加される、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項６６】
限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって、前記複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、請求項５４〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
ペプチドまたはタンパク質へのＰＥＧ誘導体の結合は、Ｒｏｂｅｒｔｓら  （Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ２００２；５４：４５９−７６）によって検討されている。治療用タンパク質への水溶性ポリマーの結合のための１つのアプローチは、タンパク質の炭水化物部分を介するポリマーの複合化である。タンパク質中の炭水化物の隣接ヒドロキシル（ＯＨ）基は、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）で容易に酸化され、活性アルデヒド基を形成することができる（Ｒｏｔｈｆｕｓ  ｅｔ  Ｓｍｉｔｈ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９６３；２３８：１４０２−１０、ｖａｎ  Ｌｅｎｔｅｎ  ｅｔ  Ａｓｈｗｅｌｌ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９７１；２４６：１８８９−９４）。その後、ポリマーは、例えば、活性ヒドラジド基を含有する試薬の使用によって、炭水化物のアルデヒド基に結合することができる（Ｗｉｌｃｈｅｋ  Ｍ  ａｎｄ  Ｂａｙｅｒ  ＥＡ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １９８７；１３８：４２９−４２）。より近年の技術は、アルデヒドと反応してオキシム連結を形成するアミノオキシ基を含有する試薬の使用である（特許文献２、特許文献３）。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
一実施形態において、水溶性ポリマーを治療用タンパク質の酸化炭水化物部分に複合化させる方法が提供され、本方法は、複合化を可能にする条件下で、酸化炭水化物部分を活性化水溶性ポリマーと接触させることを含み、水溶性ポリマーは、活性アミノオキシ基を含有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、該炭水化物部分が、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤を含む緩衝液とともにインキュベーションすることによって酸化され、オキシム連結が、酸化炭水化物部分と水溶性ポリマー上の活性アミノオキシ基との間に形成され、前記オキシム連結の形成が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される求核触媒によって触媒される。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
別の実施形態において、水溶性ポリマーを治療用タンパク質の酸化炭水化物部分に複合化させる方法が提供され、本方法は、複合化を可能にする条件下で、酸化炭水化物部分を活性化水溶性ポリマーと接触させることを含み、該治療用タンパク質は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖��子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択され、水溶性ポリマーは、活性アミノオキシ基を含有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、該炭水化物部分は、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤を含む緩衝液とともにインキュベーションすることによって酸化され、オキシム連結が、酸化炭水化物部分と水溶性ポリマー上の活性アミノオキシ基との間に形成され、前記オキシム連結の形成は、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される求核触媒によって触媒される。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
更に別の実施形態において、酸化剤は、約０．１分〜１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約５０μＭ〜約１０００μＭの酸化剤の最終濃度をもたらす量で添加される、上述の方法が提供される。別の実施形態において、酸化剤の最終濃度は、約４００μＭであり、該条件は、約１０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
また別の実施形態において、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分への水溶性ポリマーの複合化が、Ｌ−システイン、メチオニン、グルタチオン、グリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはそれらの誘導体、クレゾール、イミダゾール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反応停止剤の添加によって停止され、該反応停止剤が、約５分〜約１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの反応停止剤の最終濃度をもたらす量で添加される、上述の方法が提供される。別の実施形態において、反応停止剤は、Ｌ−システインである。更に別の実施形態において、Ｌ−システインは、約１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加され、該条件は、約６０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
別の実施形態において、ａ）ｐＨ値が約５．０〜約８．０になるように、治療用タンパク質を含む溶液のｐＨ値を調整させることを含み、治療用タンパク質濃度が約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３．０ｍｇ／ｍＬである、第１のステップと、ｂ）治療用タンパク質において、１つ以上の炭水化物を酸化させることを含み、酸化剤が、約０．１分〜約１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約５０μＭ〜約１０００μＭの最終濃度をもたらすように、第１のステップ中の溶液に添加される、第２のステップと、ｃ）所望の過剰濃度の活性化水溶性ポリマーと治療用タンパク質を接触させることを含み、過剰濃度が約１モル過剰〜約３００モル過剰であり、約０．５時間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下である、第３のステップと、ｄ）第３のステップの溶液に、求核触媒を添加することを含み、求核触媒が、約０．１分〜約３０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１ｍＭ〜約５０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第４のステップと、ｅ）治療用タンパク質が、治療用タンパク質の１つ以上の酸化炭水化物への活性化水溶性ポリマーの複合化を可能にする条件下で、活性化水溶性ポリマーおよび求核触媒とともにインキュベートされ、該条件が、約０．５時間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、第５のステップと、ｆ）第５のステップ中の治療用タンパク質の１つ以上の酸化炭水化物への水溶性ポリマーの複合化が、Ｌ−システイン、メチオニン、グルタチオン、グリセロール、Ｎａ２Ｓ２Ｏ５（メタ重亜硫酸ナトリウム）、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはそれらの誘導体、クレゾール、イミダゾール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反応停止剤の添加によって停止され、反応停止剤が、約５分〜約１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第６のステップと、を含む、上述の方法が提供される。別の実施形態において、第１のステップ中の治療用タンパク質の初期濃度が約１ｍｇ／ｍＬであり、ｐＨが約６．０であり、第２のステップ中の酸化剤の最終濃度が約４００μＭであり、第２のステップ中の条件が、約１０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、第３のステップ中の過剰濃度が約５０モル過剰であり、第３のステップ中の条件が、約１５分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、第４のステップ中の求核触媒の最終濃度が約１０ｍＭであり、第４のステップ中の条件が、約１５分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、第５のステップ中の活性化水溶性ポリマーおよび求核触媒とともに治療用タンパク質をインキュベートする条件が、約２時間の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、第６のステップ中の反応停止剤がＬ−システインであり、Ｌ−システインが約１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加され、第６のステップ中の条件が、約６０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
また別の実施形態において、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）である、上述の方法が提供される。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
更に別の実施形態において、酸化剤はＮａＩＯ４である、上述の方法が提供される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
また別の実施形態において、シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびＮａＢＨ３からなる群から選択される還元化合物を含む緩衝液中で複合化された治療用タンパク質をインキュベートすることによって複合化された治療用タンパク質中のオキシム連結を還元するステップを更に含む、上述の方法が提供される。一実施形態において、還元化合物はシアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）である。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
更に別の実施形態において、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結の形成方法が提供され、本方法は、ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに該タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、ｂ）該オキシム連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結を形成するステップであって、活性アミノオキシ基を含有する該水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、該求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、オキシム連結を形成するステップと、を含む。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
また別の実施形態において、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結の形成方法が提供され、本方法は、ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともにタンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、ｂ）該オキシム連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結を形成するステップであって、治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細��増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択され、活性アミノオキシ基を含有する該水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、オキシム連結を形成するステップと、を含む。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
また別の実施形態において、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結の形成方法が提供され、本方法は、ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤を用いて該タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、ｂ）ヒドラゾン連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間の該ヒドラゾン連結を形成するステップであって、活性ヒドラジド基を含有する該水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、該求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、ヒドラゾン連結を形成するステップと、を含む。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
また別の実施形態において、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結の形成方法であって、本方法は、ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともにタンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、ｂ）ヒドラゾン連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間の該ヒドラゾン連結を形成するステップであって、治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細��増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択され、活性ヒドラジド基を含有する該水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、ヒドラゾン連結を形成するステップと、を含む。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
別の実施形態において、酸化水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、該水溶性ポリマーが、酸化剤とともにインキュベーションすることによって酸化され、該水溶性ポリマーの非還元末端において、末端アルデヒド基を形成する、上述の方法が提供される。一実施形態において、水溶性ポリマーはＰＳＡである。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
別の実施形態において、酸化剤はＮａＩＯ４である、上述の方法が提供される。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
また別の実施形態において、還元剤が、シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびＮａＢＨ３からなる群から選択される、上述の方法が提供される。一実施形態において、還元剤はシアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）である。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
別の実施形態において、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、上述の方法が提供される。
本願は特定の実施形態において例えば以下の項目を提供する：
（項目１）
水溶性ポリマーを治療用タンパク質の酸化炭水化物部分へ複合化させる方法であって、複合化を可能にする条件下で、前記酸化炭水化物部分を活性化水溶性ポリマーと接触させることを含み、
前記水溶性ポリマーが、活性アミノオキシ基を含有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記炭水化物部分が、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤を含む緩衝液とともにインキュベーションすることによって酸化され、
オキシム連結が、前記酸化炭水化物部分と前記水溶性ポリマー上の前記活性アミノオキシ基との間に形成され、
前記オキシム連結形成が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される求核触媒によって触媒される、方法。
（項目２）
水溶性ポリマーを治療用タンパク質の酸化炭水化物部分に複合化させる方法であって、複合化を可能にする条件下で、前記酸化炭水化物部分を活性化水溶性ポリマーと接触させることを含み、
前記治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択され、
前記水溶性ポリマーが活性アミノオキシ基を含有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記炭水化物部分が、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤を含む緩衝液とともにインキュベーションすることによって酸化され、
オキシム連結が、前記酸化炭水化物部分と前記水溶性ポリマー上の前記活性アミノオキシ基との間に形成され、前記オキシム連結中、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される求核触媒によって形成が触媒される、方法。
（項目３）
約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３．０ｍｇ／ｍＬの初期濃度の前記治療用タンパク質を含む溶液が、前記活性化水溶性ポリマーと接触させる前に、ｐＨ値が約５．０〜約８．０になるように調整される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記治療用タンパク質の前記初期濃度が、約１．０ｍｇ／ｍＬであり、前記ｐＨが、約６．０である、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記治療用タンパク質が、所望の過剰濃度の活性化水溶性ポリマーによって接触され、前記過剰濃度が、約１モル〜約３００モル過剰である、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記過剰濃度が、約５０倍のモル過剰である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記治療用タンパク質が、約０．５時間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、前記活性化水溶性ポリマーとともにインキュベートされる、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記条件が、約１２０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記求核触媒が、約０．１分〜約３０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１．０ｍＭ〜約５０ｍＭの求核触媒の最終濃度をもたらす量で添加される、項目２に記載の方法。
（項目１０）
前記求核触媒の前記最終濃度が、約１０ｍＭであり、前記条件が、最大約１５分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記酸化剤が、約０．１分〜１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約５０μＭ〜約１０００μＭの酸化剤の最終濃度をもたらす量で添加される、項目２に記載の方法。
（項目１２）
前記酸化剤の最終濃度が、約４００μＭであり、前記条件が、約１０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分への前記水溶性ポリマーの前記複合化が、Ｌ−システイン、メチオニン、グルタチオン、グリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはそれらの誘導体、クレゾール、イミダゾール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反応停止剤の添加によって停止され、
前記反応停止剤が、約５分〜約１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの反応停止剤の最終濃度をもたらす量で添加される、項目２に記載の方法。
（項目１４）
前記反応停止剤が、Ｌ−システインである、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記Ｌ−システインが、約１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加され、前記条件が、約６０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
ａ）ｐＨ値が約５．０〜約８．０になるように、前記治療用タンパク質を含む溶液の前記ｐＨ値を調整させることを含み、前記治療用タンパク質濃度が、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３．０ｍｇ／ｍＬである、第１のステップと、
ｂ）前記治療用タンパク質において、１つ以上の炭水化物を酸化させることを含み、前記酸化剤が、約０．１分〜約１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約５０μＭ〜約１０００μＭの最終濃度をもたらすように、前記第１のステップ中の前記溶液に添加される、第２のステップと、
ｃ）所望の過剰濃度の活性化水溶性ポリマーと前記治療用タンパク質を接触させることを含み、前記過剰濃度が、約１モル過剰〜約３００モル過剰であり、約０．５時間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下である、第３のステップと、
ｄ）前記第３のステップの前記溶液に、求核触媒を添加することを含み、前記求核触媒が、約０．１分〜約３０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１ｍＭ〜約５０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第４のステップと、
ｅ）前記治療用タンパク質が、前記治療用タンパク質の１つ以上の酸化炭水化物への前記活性化水溶性ポリマーの前記複合化を可能にする条件下で、前記活性化水溶性ポリマーおよび求核触媒とともにインキュベートされ、前記条件が、約０．５時間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、第５のステップと、
ｆ）第５のステップ中の前記治療用タンパク質の前記１つ以上の酸化炭水化物への前記水溶性ポリマーの前記複合化が、Ｌ−システイン、メチオニン、グルタチオン、グリセロール、Ｎａ２Ｓ２Ｏ５（メタ重亜硫酸ナトリウム）、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはそれらの誘導体、クレゾール、イミダゾール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反応停止剤の添加によって停止され、前記反応停止剤が、約５分〜約１２０分の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの最終濃度をもたらすように添加される、第６のステップと、を含む、項目２に記載の方法。
（項目１７）
前記第１のステップ中の前記治療用タンパク質の前記初期濃度が、約１ｍｇ／ｍＬであり、前記ｐＨが、約６．０であり、
前記第２のステップ中の前記酸化剤の最終濃度が、約４００μＭであり、前記第２のステップ中の前記条件が、約１０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、
前記第３のステップ中の前記過剰濃度が、約５０モル過剰であり、前記第３のステップ中の前記条件が、約１５分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、
前記第４のステップ中の前記求核触媒の前記最終濃度が、約１０ｍＭであり、前記第４のステップ中の前記条件が、約１５分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、
前記第５のステップ中の前記活性化水溶性ポリマーおよび求核触媒とともに前記治療用タンパク質をインキュベートする条件が、約２時間の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含み、
前記第６のステップ中の前記反応停止剤が、Ｌ−システインであり、前記Ｌ−システインが、約１０ｍＭの最終濃度をもたらすように添加され、前記第６のステップ中の前記条件が、約６０分の期間、約２２℃の温度、光の非存在下、および撹拌しながらを含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記水溶性ポリマーがＰＳＡである、項目２に記載の方法。
（項目１９）
前記水溶性ポリマーがＰＥＧである、項目２に記載の方法。
（項目２０）
前記水溶性ポリマーがＨＥＳである、項目２に記載の方法。
（項目２１）
前記水溶性ポリマーが、ＨＡＳである、項目２に記載の方法。
（項目２２）
前記ＰＳＡが約１０〜３００個のシアル酸単位からなる、項目１８に記載の方法。
（項目２３）
前記治療用タンパク質がＦＩＸである、項目２〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記治療用タンパク質がＦＶＩＩａである、項目２〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記治療用タンパク質がＦＶＩＩＩである、項目２〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記酸化剤が過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）である、項目２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分が、前記血液凝固タンパク質の活性化ペプチド内に位置する、項目２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記ＰＳＡが、活性化アミノオキシリンカーを、酸化ＰＳＡと反応させることによって、調製され、
前記アミノオキシリンカーが、
ａ）式：
【化２５】
2013536180.tif 000007
の３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンリンカー、
ｂ）式：
【化２６】
2013536180.tif 000008
の３，６，９−トリオキサ−ウンデカン−１，１１−ジオキシアミンリンカー、および
ｃ）式：
【化２７】
2013536180.tif 000009
の３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ（ｐｅｎａｔｏｘａ）−ヘプタデカン−１，１７−ジオキシアミンリンカーからなる群より選択され、
前記ＰＳＡが、酸化剤とともにインキュベーションすることによって酸化され、前記ＰＳＡの非還元末端において、末端アルデヒド基を形成する、項目１８に記載の方法。
（項目２９）
前記アミノオキシリンカーが、３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンである、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記酸化剤が、ＮａＩＯ４である、項目１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記求核触媒が、約１ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で提供される、項目１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記求核触媒が、ｍ−トルイジンである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記ｍ−トルイジンが、約１０ｍＭの濃度で、複合化反応において存在する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびＮａＢＨ３からなる群から選択される還元化合物を含む緩衝液中で前記複合化された治療用タンパク質をインキュベートすることによって、前記複合化された治療用タンパク質中のオキシム連結を還元するステップを更に含む、項目１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記還元化合物が、シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）である、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記複合化された治療用タンパク質を精製するステップを更に含む、項目１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記複合化された治療用タンパク質が、クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって精製される、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記クロマトグラフィが、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィ（ＩＥＣ）、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）、親和性クロマトグラフィ、および逆相クロマトグラフィからなる群から選択される、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
抗カオトロピック塩が、クロマトグラフィの負荷ステップおよびクロマトグラフィの洗浄ステップにおいて使用される、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記クロマトグラフィが、カラムにおいて行われる、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
前記カラムが、フェニル−セファロースＦＦおよびブチル−セファロースＦＦからなる群から選択されるクロマトグラフィ樹脂を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記樹脂が、約５ｃｍ〜約２０ｃｍの床高さでカラム中に存在する、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記床高さが、約１０ｃｍである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
流れ方向が、上向流に設定され、前記流速が、約０．２ｃｍ／分〜約６．７ｃｍ／分である、１つ以上の洗浄ステップを含む、項目４０に記載の方法。
（項目４５）
前記流速が、約２ｃｍ／分である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
流れ方向が、下向流に設定され、前記流速が、約０．１ｃｍ／分〜約６．７ｃｍ／分である、１つ以上の溶出ステップを含む、項目４０〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記流速が、約１ｃｍ／分である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって、前記複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、項目３６〜４７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
前記治療用タンパク質の前記最終濃度が、約０．５〜約３ｍｇ／ｍＬである、項目３６〜４８のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記治療用タンパク質が、約５〜約１１個の水溶性ポリマー部分を含む、項目３６〜４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
前記複合化された治療用タンパク質が、クロマトグラフィを用いて精製され、抗カオトロピック塩が、負荷ステップおよび洗浄ステップにおいて使用され、前記方法が、流れ方向が、上向流に設定され、前記流速が、約０．２ｃｍ／分〜約６．７ｃｍ／分である、１つ以上の洗浄ステップと、流れ方向が、下向流に設定され、前記流速が、約０．２ｃｍ／分〜約６．７ｃｍ／分である、１つ以上の溶出ステップと、を含み、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって、前記複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、項目２に記載の方法。
（項目５２）
前記クロマトグラフィが、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）であり、前記１つ以上の洗浄ステップの流速が、約２ｃｍ／分であり、前記１つ以上の溶出ステップの流速が、約１ｃｍ／分である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
項目１〜５２のいずれか１項に記載の方法によって産生される、修飾された治療用タンパク質。
（項目５４）
治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結の形成方法であって、
ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに前記タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、
ｂ）前記オキシム連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結を形成するステップであって、
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、オキシム連結を形成するステップと、を含む、方法。
（項目５５）
治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結の形成方法であって、
ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに前記タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、
ｂ）前記オキシム連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分と、活性アミノオキシ基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のオキシム連結を形成するステップであって、
前記治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択され、
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、オキシム連結を形成するステップと、を含む、方法。
（項目５６）
治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結の形成方法であって、
ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに前記タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、
ｂ）前記ヒドラゾン連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する前記活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結を形成するステップであって、
活性ヒドラジド基を含有する前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、ヒドラゾン連結を形成するステップと、を含む、方法。
（項目５７）
治療用タンパク質の酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結の形成方法であって、
ａ）過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）からなる群から選択される酸化剤とともに前記タンパク質をインキュベートすることによって、治療用タンパク質の炭水化物成分を酸化させるステップと、
ｂ）前記ヒドラゾン連結の形成を可能にする条件下で、求核触媒の存在下で、前記治療用タンパク質の前記酸化炭水化物部分と活性ヒドラジド基を含有する前記活性化水溶性ポリマーとの間のヒドラゾン連結を形成するステップであって、
前記治療用タンパク質が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２α、ＩＬ−３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形態形成タンパク質１、骨形態形成タンパク質２、骨形態形成タンパク質３、骨形態形成タンパク質４、骨形態形成タンパク質５、骨形態形成タンパク質６、骨形態形成タンパク質７、骨形態形成タンパク質８、骨形態形成タンパク質９、骨形態形成タンパク質１０、骨形態形成タンパク質１１、骨形態形成タンパク質１２、骨形態形成タンパク質１３、骨形態形成タンパク質１４、骨形態形成タンパク質１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン−１、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体、クリプト、クリプティック、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮増殖因子、エピゲン、エピレグリン、上皮誘導好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α１、グリア細胞株誘導好中球因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経増殖因子  神経増殖因子受容体、ニューロポエチン、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、形質転換増殖因子α、形質転換増殖因子β、形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β１．２、形質転換増殖因子β２、形質転換増殖因子β３、形質転換増殖因子β５、潜伏形質転換増殖因子β１、形質転換増殖因子β結合タンパク質Ｉ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、形質転換増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、Ｉ型腫瘍壊死因子受容体、ＩＩ型腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性剤受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチン  リシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ＤＮＡｓｅ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｅｎｂｒｅｌ（エタネルセプト）、表１中のタンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体からなる群から選択され、
活性ヒドラジド基を含有する前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、
前記求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、ヒドラゾン連結を形成するステップと、を含む、方法。
（項目５８）
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、
ａ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したオキシム連結の形成を可能にする条件下で、活性アミノオキシ基を含む前記活性化アミノオキシリンカーとともに、前記酸化水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートし、それによって、活性アミノオキシ基を含有する水溶性ポリマーを形成することと、
ｂ）クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって、活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを精製することと、を含む、方法によって調製される、項目１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目５９）
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、
ａ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したオキシム連結の形成を可能にする条件下で、活性アミノオキシ基を含む前記活性化アミノオキシリンカーとともに、前記酸化水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートし、それによって、活性アミノオキシ基を含有する水溶性ポリマーを形成することと、
ｂ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したアルコキサミン（ａｌｋｏｘａｍｉｎｅ）連結の形成を可能にする条件下で、還元剤とともに、ステップａ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすることと、
ｃ）クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって、活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを精製することと、を含む、方法によって調製される、項目１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、
ａ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したオキシム連結の形成を可能にする条件下で、活性アミノオキシ基を含む前記活性化アミノオキシリンカーとともに、前記酸化水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートし、それによって、活性アミノオキシ基を含有する水溶性ポリマーを形成することと、
ｂ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、求核触媒とともに、ステップａ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすることと、
ｃ）クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって、活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを精製することと、を含む、方法によって調製される、項目１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーが、
ａ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、酸化水溶性ポリマーと活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したオキシム連結の形成を可能にする条件下で、活性アミノオキシ基を含む前記活性化アミノオキシリンカーとともに、前記酸化水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートし、それによって、活性アミノオキシ基を含有する水溶性ポリマーを形成することと、
ｂ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む条件下で、求核触媒とともに、ステップａ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすることと、
ｃ）約１分間〜約２４時間の期間、約２℃〜約３７℃の温度、光の存在または非存在下、および撹拌しながらまたは撹拌なしを含む、前記酸化水溶性ポリマーと前記活性化アミノオキシリンカーとの間の安定したアルコキサミン（ａｌｋｏｘａｍｉｎｅ）連結の形成を可能にする条件下で、還元剤とともに、ステップｂ）の活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを含む溶液をインキュベートすることと、
ｄ）クロマトグラフィ、濾過、および沈殿からなる群から選択される方法によって、活性アミノオキシ基を含有する前記水溶性ポリマーを精製することと、を含む、方法によって調製される、項目１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
前記酸化水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ＰｏｌｙＰＥＧ（登録商標）（Ｗａｒｗｉｃｋ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｃｏｖｅｎｔｒｙ，ＵＫ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、デンプン、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）からなる群から選択され、前記水溶性ポリマーが、酸化剤とともにインキュベーションすることによって酸化され、前記水溶性ポリマーの非還元末端において、末端アルデヒド基を形成する、項目５８〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
前記水溶性ポリマーが、ＰＳＡである、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記酸化剤が、ＮａＩＯ４である、項目６２に記載の方法。
（項目６５）
前記アミノオキシリンカーが、
ａ）式：
【化２８】
2013536180.tif 000010
の３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンリンカー、
ｂ）式：
【化２９】
2013536180.tif 000011
の３，６，９−トリオキサ−ウンデカン−１，１１−ジオキシアミンリンカー、および
ｃ）式：
【化３０】
2013536180.tif 000012
の３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ（ｐｅｎａｔｏｘａ）−ヘプタデカン−１，１７−ジオキシアミンリンカーからなる群から選択される、項目５８〜６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記還元剤が、シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびＮａＢＨ３からなる群から選択される、項目５９および６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６７）
前記還元剤が、シアノホウ化水素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）である、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記求核触媒が、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、スルファニル酸、ｏ−アミノベンズアミド、ｏ−トルイジン、ｍ−トルイジン、ｐ−トルイジン、ｏ−アニシジン、ｍ−アニシジン、およびｐ−アニシジンからなる群から選択される、項目６０および６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
前記求核触媒が、ｍ−トルイジンである、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記求核触媒が、約１．０ｍＭ〜約５０ｍＭの求核触媒の最終濃度をもたらす量で添加される、項目６８〜６９のいずれか１項に記載の方法。
（項目７１）
限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって、前記複合化された治療用タンパク質を濃縮させることを更に含む、項目５８〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
治療用タンパク質の薬理学的および免疫学的特性は、化学修飾、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）等のポリマー化合物との複合化によって改善することができる。得られる複合体の特性は、一般に、ポリマーの構造および大きさに強く左右される。したがって、画定された狭い大きさの分布を有するポリマーが、通常、当該技術分野において好ましいとされる。ＰＥＧ等の合成ポリマーは、狭い大きさの分布で容易に製造することができ、一方、ＰＳＡは、狭い大きさの分布を有する最終ＰＳＡ調製をもたらすような様式で精製することができる。加えて、画定されたポリマー鎖および狭い大きさの分布を有するＰＥＧ化試薬は、市場に出回っており、手頃な価格で市販されている。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３０】
また、本発明の治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドとしては、（１）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に説明される参照アミノ酸配列をコードする核酸、およびその保存的に修飾された変異体に特異的にハイブリダイズする、（２）少なくとも約２５、約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約５００、約１０００、またはそれ以上のヌクレオチド（最大、成熟タンパク質の１２１８ヌクレオチドの完全長配列）の領域にわたって、本明細書に説明される参照核酸配列と、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、またはそれ以上より高いのヌクレオチド配列同一性を有する、核酸配列を有するポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な「ストリンジェントなハイブリダイゼーション」条件は、５０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ、２０ｍＭのＮａ  ＰＯ４、ｐＨ６．８中の４２℃でのハイブリダイゼーション、および３０分間、５５℃での１×ＳＳＣの洗浄を含む。これらの例示的な条件の変化は、ハイブリダイズされる配列の長さおよびＧＣヌクレオチド含有量に基づき行うことができることを理解されたい。当該技術分野における標準的な式は、適切なハイブリダイゼーション条件を決定するために適切である。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）§§９．４７−９．５１を参照。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３９】
さらなる態様として、本発明は、対象に投与するためのその使用を促進する様式で梱包された本発明の組成物を含むキットを含む。一実施形態において、かかるキットは、本明細書に説明される化合物または組成物（例えば、複合化された治療用タンパク質を含む組成物）を含み、それは密封ボトルまたは器等の容器に梱包され、方法を実践する上での化合物または組成物の使用法を説明するラベルがその容器に貼られているか、パッケージに含まれる。一実施形態において、キットは、複合化された治療用タンパク質を含む組成物を有する第１の容器、および第１の容器内の組成物のための生理的に許容される再構成溶液を有する第２の容器を含有する。一態様では、化合物または組成物は、単位容量形態で梱包される。キットは、特定の投与経路に従い組成物を投与するための好適な装置を更に含んでもよい。好ましくは、キットは、治療用タンパク質またはペプチド組成物の使用法を説明するラベルを含有する。
水溶性ポリマー
一態様では、提供される治療用タンパク質誘導体（即ち、複合化された治療用タンパク質）分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）が挙げられるが、これらに限定されない、水溶性ポリマーに結合される。本発明の一実施形態において、水溶性ポリマーは、３５０〜１２０，０００、５００〜１００，０００、１０００〜８０，０００、１５００〜６０，０００、２，０００〜４５，０００Ｄａ、３，０００〜３５，０００Ｄａ、および５，０００〜２５，０００Ｄａの範囲の分子量を有する、シアル酸分子からなる。水溶性ポリマーの結合は、タンパク質への直接結合によって、またはリンカー分子を介して実行することができる。化学的リンカーの一例は、炭水化物−選択的ヒドラジドおよびスルフヒドリル反応マレイミド基を含有する、ＭＢＰＨ（４−［４−Ｎ−マイレインイミドフェニル］酪酸ヒドラジド）である（Ｃｈａｍｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９２；２６７：１５９１６−２２）。他の例示的および好ましいリンカーは、下に説明される。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７６】
種々の方法が米国特許第５，８４６，９５１号の７列、１５行〜８列、５行に開示される（参照によりその全体が組み込まれる）。例示的な技術は、血液凝固タンパク質または多糖類のうちのいずれかの上のカルボキシル基と、血液凝固タンパク質または多糖のアミン基との間のペプチド結合、または血液凝固タンパク質または多糖のカルボキシル基と、治療用タンパク質または多糖類のヒドロキシル基との間のエステル連結を介する連結を含む。治療用タンパク質が多糖類化合物に共有結合される、別の連結は、過ヨウ素酸塩酸化によって多糖類の非還元末端において形成されたアルデヒド基と反応させられる血液凝固タンパク質上の遊離アミノ基の間のシッフ塩基を介する（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ  ＨＪ  ａｎｄ  Ｌｕｇｏｗｓｋｉ  Ｃ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８１；１２７：１０１１−８、Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ  ＡＩ  ａｎｄ  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  Ｇ，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１９９７；１３４１；２６−３４）。一態様では、生成されたシッフ塩基は、ＮａＣＮＢＨ３での特異的還元によって安定化され、二級アミンを形成する。代替のアプローチは、前酸化後のＮＨ４Ｃｌでの還元アミノ化によるＰＳＡ内の末端遊離アミノ基の生成である。二官能性試薬を、２つのアミノ基または２つのヒドロキシル基に連結するために使用することができる。例えば、アミノ基を含有するＰＳＡが、ＢＳ３（ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸／Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）等の試薬で、タンパク質のアミノ基に結合される。加えて、スルホ−ＥＭＣＳ（Ｎ−ε−マレインイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル／Ｐｉｅｒｃｅ）等のヘテロ二官能性架橋連結試薬を使用して、例えば、アミン基およびチオール基を連結する。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８１】
種々の実施形態において、治療用タンパク質は、修飾されて、グリコシル化部位（即ち、天然のグリコシル化部位以外の部位）が導入される。かかる修飾は、当該技術分野で公知の標準分子生物学的技術を用いて達成されてもよい。その上、１つまたは複数の炭水化物部分を介する水溶性ポリマーへの複合化の前に、治療用タンパク質は、インビボまたはインビトロでグリコシル化されてもよい。これらのグリコシル化部位は、水溶性ポリマーとのタンパク質の複合化のための標的として機能することができる（米国特許出願第２００９００２８８２２号、米国特許出願第２００９／００９３３９９号、米国特許出願第２００９／００８１１８８号、米国特許出願第２００７／０２５４８３６号、米国特許出願第２００６／０１１１２７９号、およびＤｅＦｒｅｅｓ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，１６，９，８３３−４３）。例えば、インビボで天然にグリコシル化されないタンパク質（例えば糖タンパク質ではないタンパク質）は、上述の通り、修飾され得る。
Ｅ．アミノオキシ連結
本発明の一実施形態において、オキシム基を形成するための、アルデヒド（例えば過ヨウ素酸ナトリウムによる酸化後の炭水化物部分上）とのヒドロキシルアミンまたはヒドロキシルアミン誘導体の反応が、血液凝固タンパク質の複合体の調製に適用される。例えば、糖タンパク質（例えば本発明に従う治療用タンパク質）は、まず、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）等の酸化剤で酸化される（Ｒｏｔｈｆｕｓ  ＪＡ  ｅｔ  Ｓｍｉｔｈ  ＥＬ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９６３，２３８，１４０２−１０、およびＶａｎ  Ｌｅｎｔｅｎ  Ｌ  ａｎｄ  Ａｓｈｗｅｌｌ  Ｇ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９７１，２４６，１８８９−９４）。糖タンパク質の過ヨウ素酸塩酸化は、１９２８年の過ヨウ素酸塩との隣接ジオールの酸化に説明された古典的マラプラード反応に基づいて、活性アルデヒド基を形成する（Ｍａｌａｐｒａｄｅ  Ｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｂｕｌｌ  Ｓｏｃ  Ｃｈｉｍ  Ｆｒａｎｃｅ，１９２８，４３，６８３−９６）。かかる酸化剤のさらなる例は、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、酢酸マンガン（ＭｎＯ（Ａｃ）３）、酢酸コバルト（Ｃｏ（ＯＡｃ）２）、酢酸タリウム（ＴｌＯＡｃ）、硫酸セリウム（Ｃｅ（ＳＯ４）２）（米国特許第４，３６７，３０９号）、または過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）（Ｍａｒｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １９９７，１１９，１２６６１−２）である。「酸化剤」とは、炭水化物中の隣接ジオールを酸化し、それによって、生理学的反応条件下で、活性アルデヒド基を生成することが可能な温和な酸化化合物を意味する。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
第２のステップは、オキシム連結を形成するための、酸化炭水化物部分へのアミノオキシ基を含有するポリマーの結合である。本発明の一実施形態において、このステップは、触媒量の求核触媒アニリンまたはアニリン誘導体の存在下で実行することができる（Ｄｉｒｋｓｅｎ  Ａ  ｅｔ  Ｄａｗｓｏｎ  ＰＥ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２００８、Ｚｅｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００９；６：２０７−９）。アニリン触媒は、オキシムライゲーションを著しく加速させ、非常に低い濃度の試薬の使用を可能にする。本発明の別の実施形態において、オキシム連結は、ＮａＣＮＢＨ３での還元により安定化され、アルコキシアミン連結を形成する（図２）。さらなる触媒を以下に説明する。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８４】
本発明の種々の実施形態において、本明細書に説明するアミノオキシ技術に従う治療用タンパク質（例えば、ＦＶＩＩＩ、ＦＶＩＩａ、またはＦＩＸ）の酸化炭水化物部分に連結される水溶性ポリマーとしては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩、デンプン、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。
求核触媒
本明細書に説明される通り、治療用タンパク質への水溶性ポリマーの複合化は、アニリンによって触媒され得る。アニリンは、アルデヒドおよびケトンの水性反応を強く触媒し、ヒドラゾンおよびオキシム等の安定したイミンを形成する。以下の略図は、無触媒反応とアニリン触媒オキシムライゲーション反応を比較する（Ｋｏｈｌｅｒ  ＪＪ，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ  ２００９；１０：２１４７−５０）：
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８７】
本発明の求核触媒は、オキシムライゲーション（例えばアミノオキシ連結を使用）またはヒドラゾン形成（例えばヒドラジド化学を使用）において有用である。本発明の種々の実施形態において、求核触媒は、複合化反応において０．１、０．２、０．３、０．５、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０ｍＭの濃度で提供される。一実施形態において、求核触媒は、１〜１０ｍＭで提供される。本発明の種々の実施形態において、複合化反応のｐＨ範囲は、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、および７．５である。一実施形態において、ｐＨは、５．５〜６．５である。
複合化タンパク質の精製
種々の実施形態において、酸化剤でインキュベートされているタンパク質および／または本開示に従って水溶性ポリマーで複合化されている治療用タンパク質の精製が望ましい。多くの精製技術が、当該技術分野で知られており、これには、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、および親和性クロマトグラフィ、またはそれらの組み合わせ等のクロマトグラフ法、濾過法、ならびに沈殿法（Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ  ４６３（ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｂｕｒｇｅｓｓ  ＲＲ  ａｎｄ  Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ  ＭＰ），２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００９）が挙げられるが、これらに限定されない。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８８】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
エリスロポエチン（ＥＰＯ）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−ＥＰＯを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（ＭＷＣＯ  １０ｋＤ、８８ｃｍ２、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９５】
実施例１９
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＡｎｇ−２のポリシアル化
方法１：
出発濃度のアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９８】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０５】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するＰＳＡアミノオキシ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−Ａｎｇ−２−を含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０６】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。アンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するＰＳＡアミノオキシ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ  Ａｎｇ−２−を含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
Ａｎｇ−２を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１１】
実施例２０
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＶＥＧＦのポリシアル化
方法１：
出発濃度の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１４】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２０】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するＰＳＡアミノオキシ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−ＶＥＧＦ−を含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２１】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ−ＶＥＧＦを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
ＶＥＧＦを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２６】
実施例２１
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＥＧＦのポリシアル化
方法１：
出発濃度の上皮増殖因子（ＥＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２９】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。上皮増殖因子（ＥＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３５】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
上皮増殖因子（ＥＧＦ）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するＰＳＡアミノオキシ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−ＥＧＦ−を含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３６】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。上皮増殖因子（ＥＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するＰＳＡアミノオキシ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。複合体を含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
ＥＧＦを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４１】
実施例２２
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＮＧＦのポリシアル化
方法１：
出発濃度の神経増殖因子（ＮＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４４】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。神経増殖因子（ＮＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５０】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
神経増殖因子（ＮＧＦ）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−ＮＧＦを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５１】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。神経増殖因子（ＮＧＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。次いで、ＰＳＡ−ＮＧＦを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
ＮＧＦを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、それに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５７】
出発濃度のヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６０】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。本明細書に説明されるように、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）のアミノ酸配列は、まず、少なくとも１つのグリコシル化部位を組み込むように修飾される。精製後、ＨＧＨは、当該技術分野で公知の方法に従ってインビトロでグリコシル化される。ＨＧＨを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６８】
ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ  ＨＧＨを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６９】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。本明細書に説明されるように、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）のアミノ酸配列は、まず、少なくとも１つのグリコシル化部位を組み込むように修飾される。精製後、ＨＧＨは、当該技術分野で公知の方法に従ってインビトロでグリコシル化される。ＨＧＨを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。次いで、ＰＳＡ−ＨＧＨを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
本明細書に説明されるように、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）のアミノ酸配列は、まず、少なくとも１つのグリコシル化部位を組み込むように修飾される。精製後、ＨＧＨは、当該技術分野で公知の方法に従ってインビトロでグリコシル化される。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７５】
実施例２４
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＴＮＦ−αのポリシアル化
出発濃度の腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７８】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８３】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈し、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−ＴＮＦ−αを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８４】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ−ＴＮＦ−αを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
ＴＮＦ−αを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８９】
実施例２５
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するインスリンのポリシアル化
方法１：
本明細書に説明されるように、インスリンのアミノ酸配列は、まず、少なくとも１つのグリコシル化部位を組み込むように修飾される。精製後、インスリンは、当該技術分野で公知の方法に従ってインビトロでグリコシル化される。出発濃度のインスリンを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３９２】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。本明細書に説明されるように、インスリンのアミノ酸配列は、まず、少なくとも１つのグリコシル化部位を組み込むように修飾される。精製後、インスリンは、当該技術分野で公知の方法に従ってインビトロでグリコシル化される。インスリンを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４００】
インスリンを、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−インスリンを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０２】
インスリンを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ−インスリンを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
本明細書に説明されるように、インスリンのアミノ酸配列は、まず、少なくとも１つのグリコシル化部位を組み込むように修飾される。精製後、インスリンは、当該技術分野で公知の方法に従ってインビトロでグリコシル化される。
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０８】
実施例２６
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するインターフェロンαのポリシアル化
方法１：
出発濃度のインターフェロンαを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１１】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。インターフェロンαを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１６】
得られたＰＳＡ−インターフェロンα複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって更に精製する。ＰＳＡ−インターフェロンα複合体を含有する画分を収集し、適切な分子量カットオフを有する再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜を使用する限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）によって濃縮する。
方法３：
インターフェロンαを、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するＰＳＡアミノオキシ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−インターフェロンαを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１７】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。インターフェロンαを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ−インターフェロンαを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
インターフェロンαを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３１】
実施例２８
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＧ−ＣＳＦのポリシアル化
方法１：
出発濃度の顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３４】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３９】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−Ｇ−ＣＳＦを含有する画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４０】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ−Ｇ−ＣＳＦを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
Ｇ−ＣＳＦを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４５】
実施例２９
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するヒュミラ（Ｈｕｍｉｒａ）のポリシアル化
方法１：
出発濃度のヒュミラを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４８】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法１を実行する。ヒュミラを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。
【誤訳訂正６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５３】
この手順の使用によって調製された複合体を、総タンパク質、生物活性の測定、およびＰＳＡ含有量の測定によるポリシアル化の度合いの決定（レゾルシノールアッセイ）によって分析的に特徴付ける。
方法３：
ヒュミラを、反応緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。次いで、反応混合物の伝導率を、酢酸アンモニウム（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、８Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ６．９）を含有する緩衝液を添加することによって調整し、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２．５Ｍの酢酸アンモニウム、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９で事前に平衡化したフェニルセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＣＴ）で充填したカラム上に負荷する。続いて、その複合体を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５で溶出する。最後に、ＰＳＡ−ヒュミラを含有す+る画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
【誤訳訂正６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５４】
代替的な実施形態において、以下の通りに方法３を実行する。ヒュミラを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。５０倍モル過剰の２０ｋＤの分子量を有するアミノオキシ−ＰＳＡ試薬（上述）を添加し、続いて、求核触媒としてｍ−トルイジン（１０ｍＭの最終濃度）およびＮａＩＯ４（最終濃度：４００μＭ）を添加する。カップリング反応を、暗室で、穏やかな振とう下で、室温で２時間行う。続いて、反応物を、システイン（システイン濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行い、その複合体を、イオン交換クロマトグラフィによって精製する。ＰＳＡ−ヒュミラを含有する溶出液の画分を収集し、再生成されたセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から作製された膜の使用によって限外濾過／透析濾過に供する。調製物を、当該技術分野で公知の方法に従う総タンパク質（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および生物活性の測定によって分析的に特徴付ける。
方法４：
ヒュミラを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）中に溶解するか、またはそれに移して、１．０＋／−０．２５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を得る。次いで、溶液のｐＨを、０．５ＮのＨＣｌ水溶液の滴加によって６．０に修正する。
【誤訳訂正６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５９】
実施例３０
アミノオキシ−ＰＳＡおよび求核触媒としてｍ−トルイジンを使用するＰｒｏｌｉａのポリシアル化
方法１：
出発濃度のＰｒｏｌｉａを、反応緩衝液（例えば５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、３５０ｍＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ６．０）に移し、希釈して、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を得る。この溶液に、ＮａＩＯ４を添加して、２００μＭの最終濃度を得る。暗室で、穏やかな振とう下で、室温で３０分間酸化を行う。次いで、反応物を、システイン（最終濃度：１０ｍＭ）を使用して、室温で６０分間反応停止処理を行う。