【手続補正書】
【提出日】平成30年9月25日(2018.9.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類染色体の標的座位を編集するエクスビボの方法であって、前記方法が、
ａ）アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質を含むＡＡＶキャプシド、及び
ｂ）（ａ）標的座位への組み込みのためのヌクレオチド間結合又はヌクレオチド配列から選択される編集エレメント、（ｂ）前記標的座位に対する前記哺乳類染色体の５’領域と相同性を有する、前記編集エレメントの５’側にある５’相同アームヌクレオチド配列、及び（ｃ）前記標的座位に対する前記哺乳類染色体の３’領域と相同性を有する、前記編集エレメントの３’側にある３’相同アームヌクレオチド配列を含む補正ゲノム
を含む複製欠損ＡＡＶで前記哺乳類染色体を含む哺乳類細胞を形質導入する工程を含み、
前記細胞が、外因性ヌクレアーゼ、又は外因性ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を同時形質導入することなく形質導入される、エクスビボの方法。
【請求項２】
（ａ）前記哺乳類細胞が、筋芽細胞、内皮細胞、肝細胞、線維芽細胞、乳房細胞、リンパ球、又は網膜細胞である、及び/又は、
（ｂ）前記哺乳類細胞が、幹細胞であり、場合により、前記幹細胞が、造血幹細胞、臍帯血幹細胞、又は末梢血幹細胞であり、さらに場合により、前記幹細胞が、ＣＤ３４＋造血幹細胞である、
請求項１に記載のエクスビボの方法。
【請求項３】
対象の疾患又は障害を治療する方法における使用のための複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）であって、
前記方法が、外因性ヌクレアーゼ、又は外因性ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を同時投与することなく、対象に前記複製欠損ＡＡＶを投与する工程を含み、
前記複製欠損ＡＡＶが、
ａ）ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質を含むＡＡＶキャプシド、及び
ｂ）（ａ）哺乳類染色体の標的座位への組み込みのためのヌクレオチド間結合又はヌクレオチド配列から選択される編集エレメント、（ｂ）前記標的座位に対する前記哺乳類染色体の５’領域と相同性を有する、前記編集エレメントの５’側にある５’相同アームヌクレオチド配列、及び（ｃ）前記標的座位に対する前記哺乳類染色体の３’領域と相同性を有する、前記編集エレメントの３’側にある３’相同アームヌクレオチド配列を含む補正ゲノム
を含む、複製欠損ＡＡＶ。
【請求項４】
前記補正ゲノムが、前記編集エレメントヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを欠いている、請求項１若しくは２に記載のエクスビボの方法又は請求項３に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項５】
前記補正ゲノムが、前記編集エレメントに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１若しくは２に記載のエクスビボの方法又は請求項３に記載のＡＡＶ。
【請求項６】
５’及び３’相同アームヌクレオチド配列のそれぞれが、独立して、約５０〜２０００ヌクレオチドのヌクレオチド長を有する、請求項１、２、４、及び５のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜５のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項７】
前記編集エレメントが、１つ以上のヌクレオチドの挿入、１つ以上のヌクレオチドの欠失、又は１つ以上のヌクレオチドの置換を含み、場合により、エキソン、イントロン、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、プロモーター、スプライスドナー、スプライスアクセプター、非コードＲＮＡに相当する配列、インスレーター、遺伝子若しくはその断片、遺伝子のコード配列、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１、２、及び４〜６のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜６のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項８】
前記哺乳類染色体の前記標的座位が、対応する野生型哺乳類染色体と比較して、１つ以上の変異ヌクレオチドを含む変異標的座位であり、場合により、
（ａ）前記変異標的座位が、無形質変異、新形質変異、反形質変異、常染色体優性変異、常染色体劣性変異、又はそれらの組み合わせを含み、且つ／又は、
（ｂ）前記変異標的座位が、プロモーター、エンハンサー、シグナル配列、イントロン、エキソン、スプライスドナー部位、スプライスアクセプター部位、内部リボソーム進入部位、逆エキソン、インスレーター、遺伝子又はその断片、染色体逆位、及び前記哺乳類染色体内における染色体転座から選択される、
請求項１、２、及び４〜７のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜７のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項９】
前記補正ゲノムが、
前記５’相同アームヌクレオチド配列の５’側にある５’末端逆位配列（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列、及び前記３’相同アームヌクレオチド配列の３’側にある３’末端逆位配列（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を含み、場合により、
（ａ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が配列番号３６と少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が配列番号３７と少なくとも９５％の配列同一性を有する、又は
（ｂ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が配列番号３８と少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が配列番号３９と少なくとも９５％の配列同一性を有する、
請求項１、２、及び４〜８のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜８のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項１０】
前記ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質が、配列番号２のアミノ酸２０３〜７３６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び４〜９のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜９のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項１１】
前記ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質が、配列番号２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、及び１７のいずれか１つのアミノ酸２０３〜７３６と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び４〜９のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜９のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項１２】
前記ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質が、配列番号２のアミノ酸１３８〜７３６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び４〜９のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜９のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項１３】
前記ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質が、配列番号２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、及び１７のいずれか１つのアミノ酸１３８〜７３６と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び４〜９のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜９のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項１４】
前記ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質が、配列番号２のアミノ酸１〜７３６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び４〜９のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜９のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。
【請求項１５】
前記ＡＡＶ  Ｃｌａｄｅ  Ｆキャプシドタンパク質が、配列番号２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、及び１７のいずれか１つのアミノ酸１〜７３６と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び４〜９のいずれか一項に記載のエクスビボの方法又は請求項３〜９のいずれか一項に記載の複製欠損ＡＡＶ。