【手続補正書】
【提出日】平成30年9月18日(2018.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養物においてモグロール前駆体、モグロシド前駆体、および／またはモグロシド化合物を生産することができる組換え宿主細胞であって、
（ａ）スクアレンからオキシドスクアレンまたはジオキシドスクアレンを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｂ）オキシドスクアレンからククルビタジエノールまたはジオキシドスクアレンから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｃ）ククルビタジエノールから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールまたは１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｄ）ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールまたは２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｅ）１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールからモグロシド前駆体を合成することができる１以上のポリペプチドをコードする１以上の遺伝子；
（ｆ）シトクロムＰ４５０複合体を還元することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｇ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｈ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｉ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基およびＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｊ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−１１ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；
（ｋ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位のベータ−１，２−グリコシル化をすることができるポリペプチドをコードする遺伝子；および／または
（ｌ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースの、Ｃ２’位のベータ−１，２−グリコシル化および／またはＣ６’位のベータ−１，６−グリコシル化をすることができるポリペプチドをコードする遺伝子；
を含み、
ここで、遺伝子の少なくとも１つが組換え遺伝子である、
前記組換え宿主細胞。
【請求項２】
請求項１に記載の組換え宿主細胞であって、
（ａ）スクアレンからオキシドスクアレンまたはジオキシドスクアレンを合成することができるポリペプチドが、配列番号５４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）オキシドスクアレンからククルビタジエノールまたはジオキシドスクアレンから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチドが、配列番号４３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ククルビタジエノールから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノール、または１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチドが、配列番号７４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｄ）ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールまたは２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチドが、配列番号４４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｅ）１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールからモグロシド前駆体を合成することができる１以上のポリペプチドが、配列番号７４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドおよび配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するポリペプチドまたは配列番号４０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｆ）シトクロムＰ４５０複合体を還元することができるポリペプチドが、配列番号４６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｇ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドが、配列番号６２または６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｈ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドが、配列番号２１、２３、２４、または２５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号２２または４８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｉ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基およびＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドまたは配列番号６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｊ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−１１ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドが、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｋ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位のベータ−１，２−グリコシル化をすることができるポリペプチドが、配列番号５０または５３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む；および／または
（ｌ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースの、Ｃ２’位のベータ−１，２−グリコシル化および／またはＣ６’位のベータ−１，６−グリコシル化をすることができるポリペプチドが、配列番号５３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む、
前記組換え宿主細胞。
【請求項３】
部分（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、および（ｈ）〜（ｍ）を含む、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項４】
ラノステロールシンターゼ（ＥＲＧ７）ポリペプチドの発現を低減するように改変されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項５】
ＥＲＧ７ポリペプチドが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項４に記載の組換え宿主細胞。
【請求項６】
遺伝子の１以上が、融合タグをコードするヌクレオチドをさらに含む、配列請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項７】
融合タグがタンパク質またはポリペプチドである、請求項６に記載の組換え宿主細胞。
【請求項８】
融合タグが、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ヒトインフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ポリヒスチジンタグ（ＨＩＳタグ）、ＦＬＡＧタグ、葉緑体輸送ペプチド、ミトコンドリア輸送ペプチド、アミロプラストペプチド、シグナルペプチド、または分泌タグである、請求項７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項９】
遺伝子の１以上が、融合タンパク質として発現される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１０】
モグロール前駆体が、スクアレン、オキシドスクアレン、ジオキシドスクアレン、ククルビタジエノール、２４，２５エポキシククルビタジエノール、１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノール、１１−ヒドロキシ２４，２５−エポキシククルビタジエノールまたは１１−オキソ−モグロールである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１１】
モグロシド前駆体が、モグロール、または、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、もしくはテトラグリコシル化モグロールである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１２】
テトラグリコシル化モグロールが、モグロシドＩＶまたはシアメノシドＩである、請求項１１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１３】
モグロシド化合物が、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、テトラグリコシル化、またはペンタグリコシル化モグロシド化合物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組換え宿主細胞であって、
（ａ）グリコシル化モグロシド化合物が、モグロシドＩＡ１またはモグロシドＩＥ１である；
（ｂ）ジグリコシル化モグロシド化合物が、モグロシドＩＩＡ、モグロシドＩＩＡ１、モグロシドＩＩＡ２またはモグロシドＩＩＥである；
（ｃ）トリグリコシル化モグロシド化合物が、モグロシドＩＩＩＡ１、モグロシドＩＩＩＡ２、モグロシドＩＩＩまたはモグロシドＩＩＩＥである；
（ｄ）テトラグリコシル化モグロシド化合物が、モグロシドＩＶ、モグロシドＩＶＡまたはシアメノシドである；および
（ｅ）ペンタグリコシル化モグロシド化合物が、モグロシドＶである、
前記組換え宿主細胞。
【請求項１５】
植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を、遺伝子が発現される条件下で細胞培養物において培養することを含み、ここで、モグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物は組換え宿主細胞によって生産される、モグロール前駆体、モグロシド前駆体、および／またはモグロシド化合物を細胞培養物において生産する方法。
【請求項１７】
組換え宿主細胞が、一定の温度で一定の時間、発酵槽において増殖させられ、ここで、温度および時間は、モグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の生産を促進する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を細胞培養物から単離することをさらに含む、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、単離するステップが、細胞培養物の固相から細胞培養物の液相を分離して、生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を含む上清を得ることを含み、および
（ａ）上清を１以上の吸着樹脂に接触させて、生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の少なくとも一部を得ること；または
（ｂ）上清を１以上のイオン交換または逆相クロマトグラフィーカラムに接触させて、生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の少なくとも一部を得ること；または
（ｃ）生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を結晶化または抽出すること；
をさらに含み、
これによって、生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を単離する、
前記方法。
【請求項２０】
細胞培養物からモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を回収することをさらに含み、これによって、モグロシド組成物を提供する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
回収されたモグロシド組成物が、S. grosvenorii植物に由来するモグロシド組成物に対してモグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物について富化され、植物由来S. grosvenorii抽出物に対してS. grosvenorii植物由来成分の低減されたレベルを有する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
組換え宿主細胞の細胞培養培地における植物由来または合成モグロール前駆体またはモグロシド前駆体の全細胞生物変換を含み、これによって、モグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物生産する、モグロール前駆体、モグロシド前駆体、および／またはモグロシド化合物を生産する方法であって、当該組換え宿主細胞が、
（ａ）スクアレンからオキシドスクアレンまたはジオキシドスクアレンを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号５４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）オキシドスクアレンからククルビタジエノール、またはジオキシドスクアレンから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ククルビタジエノールから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノール、または１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは配列番号７４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｄ）ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノール、または２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチド；
ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｅ）１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールからモグロシド前駆体を合成することができる１以上のポリペプチド；ここで、当該１以上のポリペプチドは、配列番号７４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドおよび配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するポリペプチドまたは配列番号４０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｆ）シトクロムＰ４５０複合体を還元することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｇ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号６２または６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｈ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２１、２３、２４、または２５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号２２または４８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｉ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基およびＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｊ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−１１ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｋ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物の２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位のベータ−１，２−グリコシル化をすることができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号５０または５３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む；および／または
（ｌ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物の３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースの、Ｃ２’位のベータ−１，２−グリコシル化および／またはＣ６’位のベータ−１，６−グリコシル化をすることができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む；
ここで、ポリペプチドの少なくとも１つは、組換え宿主細胞において発現された組換えポリペプチドである；
を使用する、前記方法。
【請求項２３】
モグロール前駆体、モグロシド前駆体、および／またはモグロシド化合物をin vitroで生産する方法であって、
（ａ）スクアレンからオキシドスクアレンまたはジオキシドスクアレンを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号５４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）オキシドスクアレンからククルビタジエノール、またはジオキシドスクアレンから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ククルビタジエノールから２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノール、または１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｄ）ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノール、または２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールから１１−ヒドロキシ−２４，２５−エポキシ−ククルビタジエノールを合成することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｅ）１１−ヒドロキシ−ククルビタジエノールからモグロシド前駆体を合成することができる１以上のポリペプチド；ここで、当該１以上のポリペプチドは、配列番号７４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドおよび配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号４０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｆ）シトクロムＰ４５０複合体を還元することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｇ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号６２または６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｈ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２１、２３、２４、または２５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号２２または４８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｉ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基およびＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｊ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物をそのＣ−１１ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｋ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物の２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位のベータ−１，２−グリコシル化をすることができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号５０または５３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む；および／または
（ｌ）モグロールおよび／またはモグロシド化合物の３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースの、Ｃ２’位のベータ−１，２−グリコシル化および／またはＣ６’位のベータ−１，６−グリコシル化をすることができるポリペプチド；ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む；
および植物由来または合成モグロール前駆体またはモグロシド前駆体を反応混合物へ添加すること、
およびこれによってモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を生産すること
を含み、
ここで、ポリペプチドの少なくとも１つは組換えポリペプチドである、
前記方法。
【請求項２４】
糖部分を、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物のＣ−３ヒドロキシル基および／またはＣ−２４ヒドロキシル基、および／またはモグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位および／またはＣ６’位へ移動させるための方法であって、
糖部分のモグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物への移動のための適切な反応条件下で、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を、（ａ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を、Ｃ−３ヒドロキシル基および／またはＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化、および／または、３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位のベータ−１，２−グリコシル化および／またはＣ６’位のベータ−１，６−グリコシル化をすることができる組換えポリペプチド；および（ｂ）ＵＤＰ−糖に接触させることを含み、
ここで、モグロシド前駆体は、モグロール、または、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、もしくはテトラグリコシル化モグロールであり；および
ここで、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、テトラグリコシル化、もしくはペンタグリコシル化モグロシド化合物、その異性体、および／またはそのモグロシド組成物は、糖部分の移動により生産される、
前記方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、
（ａ）糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＡ１がグルコース部分のモグロールへの移動により生産される；
（ｂ）糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＥ１がグルコース部分のモグロールへの移動により生産される；
（ｃ）糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＥ１がグルコース部分のモグロールへの移動により生産される；
（ｄ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＡ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＡがグルコース部分の移動により生産される；
（ｅ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＡ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＡ２がグルコース部分の移動により生産される；
（ｆ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＡ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＥがグルコース部分の移動により生産される；
（ｇ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＡ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＩＡ１がグルコース部分の移動により生産される；
（ｈ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＥ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＥがグルコース部分の移動により生産される；
（ｉ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＥ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＡ１がグルコース部分の移動により生産される；
（ｊ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＡであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＩＡ１がグルコース部分の移動により生産される；
（ｋ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＩＡ１がグルコース部分の移動により生産される；
（ｌ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＩＡ２がグルコース部分の移動により生産される；
（ｍ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＩＥがグルコース部分の移動により生産される；
（ｎ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＩがグルコース部分の移動により生産される；
（ｏ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＶＡがグルコース部分の移動により生産される；
（ｐ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＶＡがグルコース部分の移動により生産される；
（ｑ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＶがグルコース部分の移動により生産される；
（ｒ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＶがグルコース部分の移動により生産される；
（ｓ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＩＥであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＩＡ２がグルコース部分の移動により生産される；
（ｔ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＩＡ２であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＶがグルコース部分の移動により生産される；
（ｕ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＩであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＩＶＡがグルコース部分の移動により生産される；
（ｖ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＩＩＡ１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびシアメノシド１がグルコース部分の移動により生産される；
（ｗ）モグロシド前駆体がモグロシドＩＶであり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびシアメノシド１がグルコース部分の移動により生産される；または
（ｘ）モグロシド前駆体がシアメノシド１であり、ここで、糖部分がグルコースであり、およびモグロシドＶがグルコース部分の移動により生産される、
前記方法。
【請求項２６】
ポリペプチドが、配列番号６２または６８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号２２または４８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号２１、２３、２４、２５、５０、または５３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチド、配列番号７２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するポリペプチド、および／または配列番号７０に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
モグロール、または、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、もしくはテトラグリコシル化モグロール、または、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、テトラグリコシル化、もしくはペンタグリコシル化モグロシド化合物、その異性体、および／またはそのモグロシド組成物が、細胞培養ブロスにおいて生産される、請求項２４に記載の方法であって、
（ｉ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；（ｉｉ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；（ｉｉｉ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−３ヒドロキシル基およびＣ−２４ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；（ｉｖ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物をそのＣ−１１ヒドロキシル基でグリコシル化することができるポリペプチドをコードする遺伝子；（ｖ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の２４−Ｏ−グルコースのＣ２’位のベータ−１，２−グリコシル化をすることができるポリペプチドをコードする遺伝子；および／または（ｖｉ）モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物の３−Ｏ−グルコースおよび／または２４−Ｏ−グルコースの、Ｃ２’位のベータ−１，２−グリコシル化および／またはＣ６’位のベータ−１，６−グリコシル化をすることができるポリペプチドをコードする遺伝子を含む組換え宿主細胞を、遺伝子の１以上が発現される条件下で培養すること
を含み、
ここで、遺伝子の少なくとも１つが組換え遺伝子である；および
ここで、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、またはテトラグリコシル化モグロールを組換えポリペプチドに接触させることが、グリコシル化、ジグリコシル化、トリグリコシル化、またはテトラグリコシル化モグロールを、組換え宿主細胞によって生産されたポリペプチドの少なくとも１つに接触させることを含む、
前記方法。
【請求項２８】
請求項１に記載の組換え宿主細胞を含む細胞培養物であって、
（ａ）組換え宿主細胞によって生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物；
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチル−グルコサミン；および
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、ＹＮＢ、および／またはアミノ酸を含む補助栄養素；
をさらに含み、
ここで、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物が、細胞培養物の少なくとも１ｍｇ／リットルの濃度で存在する；
ここで、細胞培養物が、S. grosvenorii植物に由来するモグロシド組成物に対してモグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物について富化されている；および
ここで、細胞培養物が、植物由来S. grosvenorii抽出物に対してS. grosvenorii植物由来成分の低減されたレベルを有する、
前記細胞培養物。
【請求項２９】
細胞培養物において培養された請求項１に記載の組換え宿主細胞に由来する細胞溶解物であって、
（ａ）組換え宿主細胞によって生産されたモグロール前駆体、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物；
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチル−グルコサミン；および
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、ＹＮＢ、および／またはアミノ酸を含む補助栄養素；
を含み、
ここで、モグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物が、細胞溶解物の少なくとも１ｍｇ／リットルの濃度で存在する、
前記細胞溶解物。
【請求項３０】
請求項１に記載の組換え宿主細胞によって生産されたモグロシド前駆体および／またはモグロシド化合物を含む、甘味料組成物。
【請求項３１】
請求項３０に記載の甘味料組成物を含む、食品。
【請求項３２】
請求項３０に記載の甘味料組成物を含む、飲料または飲料濃縮物。
【請求項３３】
Yarrowia lipolytica細胞である、請求項１に記載の組換え宿主細胞。