【手続補正書】
【提出日】平成30年11月5日(2018.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a．真皮バイオインクを含む真皮層であって、真皮バイオインクが線維芽細胞を含む、真皮層；および
b．表皮バイオインクを含む表皮層であって、表皮バイオインクがケラチノサイトを含む、表皮層
を含む、三次元人工生体皮膚組織であって、
但し、該表皮層が該真皮層と接触して三次元人工生体皮膚組織を形成している、
三次元人工生体皮膚組織。
【請求項２】
表皮層が多層であり、ケラチノサイトの複数の層を含む、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項３】
表皮層が、真皮層のバイオプリントの直後に真皮層上へバイオプリントされた、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項４】
表皮層が真皮層と途切れることなく接触している、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項５】
真皮層が押し出し化合物を含む、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項６】
表皮層がメラノサイトを含む、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項７】
予め形成されたスキャフォールドを実質的に含まない、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項８】
少なくとも1つのバイオインクが複数のオルガノイドを含み、オルガノイドが腺細胞または毛包細胞（follicle cell）を含む、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項９】
試験物質を含み、試験物質が、該物質で処理されない皮膚組織と比較して皮膚組織において変化を誘発するその能力についての評価を受けている物質である、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項１０】
少なくとも1つの層の付着が、前の層の付着後に時間的に遅らされた、請求項1記載の皮膚組織。
【請求項１１】
インビトロアッセイ、薬物スクリーニングアッセイ、または化粧品アッセイを容易にするようにアレイに構成された、複数の請求項1記載の皮膚組織。
【請求項１２】
a．真皮線維芽細胞を含む真皮バイオインクを調製する工程；
b．ケラチノサイトを含む表皮バイオインクを調製する工程；
c．表面上に真皮バイオインクを付着させる工程；
d．表皮バイオインクが真皮バイオインクの少なくとも1つの表面上に層を形成するように、表皮バイオインクを付着させる工程；および
e．細胞を密着させて三次元人工生体皮膚組織を形成するように、前記付着されたバイオインクを細胞培養培地中で成熟させる工程
を含む、三次元人工生体皮膚組織を製造する方法。
【請求項１３】
真皮バイオインクを押し出しバイオプリントによって付着させる、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
表皮バイオインクをエアロゾルスプレーバイオプリントによって付着させる、請求項12記載の方法。
【請求項１５】
真皮層および表皮層と接触している基底層を付着させる工程を含み、基底層が、基底ケラチノサイトを含むバイオインクを含む、請求項12記載の方法。
【請求項１６】
組織をスキャフォールド上に付着させない、請求項12記載の方法。
【請求項１７】
試験物質を付着させる工程を含み、試験物質が、該物質で処理されない皮膚組織と比較して皮膚組織において変化を誘発するその能力についての評価を受けている物質である、請求項12記載の方法。
【請求項１８】
真皮バイオインク上への表皮バイオインクの付着において時間的遅延を含む、請求項12記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
別の局面において、本明細書に開示されるのは、三次元人工生体皮膚組織を製造する方法であり、方法は以下を含む：真皮線維芽細胞を含む真皮バイオインクを調製する工程であって、バイオインクが半固体または固体であり、真皮バイオインクの濃度が1 mL当たり500万〜5億個の細胞である、工程；ケラチノサイトを含む表皮バイオインクを調製する工程であって、バイオインクが半固体または固体であり、表皮バイオインクの濃度が1 mL当たり500万〜5億個の細胞である、工程；真皮バイオインクの押し出しによって表面上へ真皮バイオインクを付着させる工程；表皮バイオインクが真皮バイオインクの少なくとも1つの表面上に層を形成するように、表皮バイオインクの押し出しによって、表皮バイオインクを付着させる工程；および、細胞を密着させて三次元人工生体皮膚組織を形成するように、付着されたバイオインクを細胞培養培地中で成熟させる工程。
[本発明1001]
a．真皮バイオインクを含む真皮層であって、真皮バイオインクが線維芽細胞を含む、真皮層；および
b．表皮バイオインクを含む表皮層であって、表皮バイオインクがケラチノサイトを含む、表皮層
を含む、三次元人工生体皮膚組織であって、
但し、該表皮層が該真皮層と接触して三次元人工生体皮膚組織を形成している、
三次元人工生体皮膚組織。
[本発明1002]
真皮層が真皮線維芽細胞から本質的になる、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1003]
表皮層がケラチノサイトから本質的になる、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1004]
表皮層が初代ケラチノサイトから本質的になる、本発明1003の皮膚組織。
[本発明1005]
表皮層が初代ケラチノサイトを含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1006]
表皮層が実質的に単層である、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1007]
表皮層が多層であり、ケラチノサイトの複数の層を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1008]
表皮層が、バイオプリンターからのエアロゾルスプレー付着によって真皮層上へバイオプリントされた、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1009]
表皮層が、真皮層のバイオプリントの直後に真皮層上へバイオプリントされた、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1010]
表皮層が、真皮層のバイオプリントおよびその後の融合の後に真皮層上へバイオプリントされた、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1011]
表皮層が真皮層と途切れることなく接触している、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1012]
表皮層の90%超が真皮層と接触している、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1013]
表皮層の70%超が真皮層と接触している、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1014]
表皮層の50%超が真皮層と接触している、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1015]
表皮層が20〜500μm厚である、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1016]
表皮層が約150μm厚である、本発明1015の皮膚組織。
[本発明1017]
真皮層が10〜1000μm厚である、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1018]
真皮層が約500μm厚である、本発明1017の皮膚組織。
[本発明1019]
表皮層が押し出し化合物を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1020]
真皮層が押し出し化合物を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1021]
表皮層がメラノサイトを含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1022]
表皮層がケラチノサイトおよびメラノサイトから本質的になる、本発明1021の皮膚組織。
[本発明1023]
ケラチノサイトおよびメラノサイトが、約99:1〜約75:25 ケラチノサイト対メラノサイトの比率で表皮層中に存在する、本発明1021の皮膚組織。
[本発明1024]
ケラチノサイトおよびメラノサイトが、約90:10〜約99:1 ケラチノサイト対メラノサイトの比率で表皮層中に存在する、本発明1021の皮膚組織。
[本発明1025]
分泌細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1026]
分泌細胞が脂腺細胞を含む、本発明1025の皮膚組織。
[本発明1027]
免疫細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1028]
免疫細胞がランゲルハンス細胞を含む、本発明1027の皮膚組織。
[本発明1029]
毛包幹細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1030]
癌細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1031]
人工多能性幹細胞または胚性幹細胞由来の細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1032]
真皮層および表皮層と接触している基底層を含み、基底層が基底ケラチノサイトを含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1033]
基底層の細胞がKRT14(CK14)に対して陽性に染色される、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1034]
予め形成されたスキャフォールドを実質的に含まない、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1035]
線維芽細胞およびケラチノサイトがヒト細胞である、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1036]
真皮層が少なくとも30体積%の生細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1037]
真皮層が少なくとも70体積%の生細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1038]
真皮層の腹側にある皮下層を含み、皮下層が皮下バイオインクを含み、皮下バイオインクが内皮細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1039]
少なくとも1つのバイオインクが複数のオルガノイドを含み、オルガノイドが腺細胞または毛包細胞（follicle cell）を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1040]
表皮バイオインクが1 ml当たり5万〜5000万個の細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1041]
表皮バイオインクが1 ml当たり500万〜5億個の細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1042]
表皮バイオインクが1 ml当たり約1億5000万個の細胞を含む、本発明1040の皮膚組織。
[本発明1043]
真皮バイオインクが1 ml当たり5万〜5000万個の細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1044]
真皮バイオインクが1 ml当たり500万〜5億個の細胞を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1045]
真皮バイオインクが1 ml当たり約1億5000万個の細胞を含む、本発明1044の皮膚組織。
[本発明1046]
試験物質を含み、試験物質が、該物質で処理されない皮膚組織と比較して皮膚組織において変化を誘発するその能力についての評価を受けている物質である、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1047]
試験物質が、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって均一に存在する、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1048]
試験物質が、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって不均一に存在する、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1049]
試験物質が表皮層の頂端面と接触している、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1050]
試験物質が表皮層と真皮層との間にある、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1051]
試験物質が真皮層とプリント表面との間にある、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1052]
試験物質が外側表面と接触している、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1053]
試験物質が、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方内に埋め込まれた不連続コンパートメント（discreet compartment）内にある、本発明1046の皮膚組織。
[本発明1054]
治療物質を含む、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1055]
治療物質が、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって均一に存在する、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1056]
治療物質が、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって不均一に存在する、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1057]
治療物質が表皮層の頂端面と接触している、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1058]
治療物質が表皮層と真皮層との間にある、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1059]
治療物質が真皮層とプリント表面との間にある、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1060]
治療物質が外側表面と接触している、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1061]
治療物質が、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方内に埋め込まれた不連続コンパートメント内にある、本発明1054の皮膚組織。
[本発明1062]
少なくとも1つの層の付着が、前の層の付着後に時間的に遅らされた、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1063]
時間的遅延が10ミリ秒を超える、本発明1062の皮膚組織。
[本発明1064]
皮膚組織が遺伝キメラである、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1065]
皮膚組織が種キメラである、本発明1001の皮膚組織。
[本発明1066]
インビトロアッセイ、薬物スクリーニングアッセイ、または化粧品アッセイを容易にするようにアレイに構成された、複数の本発明1001の皮膚組織。
[本発明1067]
各組織間に少なくとも20μmのスペースを空けるように構成された、本発明1066の複数の皮膚組織。
[本発明1068]
a．真皮線維芽細胞を含む真皮バイオインクを調製する工程；
b．ケラチノサイトを含む表皮バイオインクを調製する工程；
c．表面上に真皮バイオインクを付着させる工程；
d．表皮バイオインクが真皮バイオインクの少なくとも1つの表面上に層を形成するように、表皮バイオインクを付着させる工程；および
e．細胞を密着させて三次元人工生体皮膚組織を形成するように、前記付着されたバイオインクを細胞培養培地中で成熟させる工程
を含む、三次元人工生体皮膚組織を製造する方法。
[本発明1069]
真皮バイオインクを押し出しバイオプリントによって付着させる、本発明1068の方法。
[本発明1070]
表皮バイオインクをエアロゾルスプレーバイオプリントによって付着させる、本発明1068の方法。
[本発明1071]
真皮バイオインクをエアロゾルスプレーバイオプリントによって付着させる、本発明1068の方法。
[本発明1072]
支持材料をエアロゾルスプレーバイオプリントによって付着させる、本発明1068の方法。
[本発明1073]
真皮バイオインクが少なくとも30体積%、生細胞である、本発明1068の方法。
[本発明1074]
表皮バイオインクが少なくとも30体積%、生細胞である、本発明1068の方法。
[本発明1075]
表皮バイオインクが初代ケラチノサイトを含む、本発明1068の方法。
[本発明1076]
表皮バイオインクが初代ケラチノサイトから本質的になる、本発明1068の方法。
[本発明1077]
表皮バイオインクがメラノサイトを含む、本発明1068の方法。
[本発明1078]
表皮バイオインクがケラチノサイトおよびメラノサイトから本質的になる、本発明1077の方法。
[本発明1079]
ケラチノサイトおよびメラノサイトが、約99:1〜約75:25 ケラチノサイト対メラノサイトの比率で表皮バイオインク中に存在する、本発明1078の方法。
[本発明1080]
ケラチノサイトおよびメラノサイトが、約90:10〜約99:1 ケラチノサイト対メラノサイトの比率で表皮バイオインク中に存在する、本発明1078の方法。
[本発明1081]
真皮バイオインクまたは表皮バイオインクが癌細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1082]
真皮バイオインクまたは表皮バイオインクが、人工多能性幹細胞または胚性幹細胞由来の細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1083]
付着されたバイオインク中へ複数のオルガノイドを付着させる工程を含み、オルガノイドが腺細胞または毛包細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1084]
皮下バイオインクを調製する工程を含み、皮下バイオインクが内皮細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1085]
皮下バイオインクを少なくとも1つの表面上の表面上に付着させ、続いて真皮バイオインクを付着させる、本発明1084の方法。
[本発明1086]
表皮バイオインクが1 ml当たり5万〜5000万個の細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1087]
表皮バイオインクが1 ml当たり500万〜5億個の細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1088]
表皮バイオインクが1 ml当たり約1億5000万個の細胞を含む、本発明1087の方法。
[本発明1089]
真皮バイオインクが1 ml当たり5万〜5000万個の細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1090]
真皮バイオインクが1 ml当たり500万〜5億個の細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1091]
真皮バイオインクが1 ml当たり約1億5000万個の細胞を含む、本発明1090の方法。
[本発明1092]
真皮バイオインクが押し出し化合物を含む、本発明1068の方法。
[本発明1093]
表皮バイオインクが押し出し化合物を含む、本発明1068の方法。
[本発明1094]
いずれかのバイオインクが分泌細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1095]
分泌細胞が脂腺細胞を含む、本発明1094の方法。
[本発明1096]
いずれかのバイオインクが免疫細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1097]
免疫細胞がランゲルハンス細胞を含む、本発明1096の方法。
[本発明1098]
いずれかのバイオインクが毛包幹細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1099]
いずれかのバイオインクが癌細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1100]
いずれかのバイオインクが、人工多能性幹細胞または胚性幹細胞由来の細胞を含む、本発明1068の方法。
[本発明1101]
真皮層および表皮層と接触している基底層を付着させる工程を含み、基底層が、基底ケラチノサイトを含むバイオインクを含む、本発明1068の方法。
[本発明1102]
組織をスキャフォールド上に付着させない、本発明1068の方法。
[本発明1103]
線維芽細胞およびケラチノサイトがヒト細胞である、本発明1068の方法。
[本発明1104]
試験物質を付着させる工程を含み、試験物質が、該物質で処理されない皮膚組織と比較して皮膚組織において変化を誘発するその能力についての評価を受けている物質である、本発明1068の方法。
[本発明1105]
試験物質を真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって均一に付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1106]
試験物質を真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって不均一に付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1107]
試験物質を、表皮層の頂端面と接触した状態で付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1108]
試験物質を表皮層と真皮層との間に付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1109]
試験物質を真皮層とプリント表面との間に付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1110]
試験物質を、外側表面と接触した状態で付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1111]
試験物質を、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方内に埋め込まれた不連続コンパートメント内に付着させる、本発明1104の方法。
[本発明1112]
治療物質を付着させる工程を含む、本発明1068の方法。
[本発明1113]
治療物質を真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって均一に付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1114]
治療物質を真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方の全体にわたって不均一に付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1115]
治療物質を、表皮層の頂端面と接触した状態で付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1116]
治療物質を表皮層と真皮層との間に付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1117]
治療物質を真皮層とプリント表面との間に付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1118]
治療物質を、外側表面と接触した状態で付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1119]
治療物質を、真皮層、表皮層、または真皮層および表皮層の両方内に埋め込まれた不連続コンパートメント内に付着させる、本発明1112の方法。
[本発明1120]
真皮バイオインク上への表皮バイオインクの付着において時間的遅延を含む、本発明1068の方法。
[本発明1121]
遅延が10ミリ秒を超える、本発明1120の方法。
[本発明1122]
a．人工皮膚組織である第1の人工組織であって、人工皮膚組織が：真皮バイオインクを含む真皮層であって、真皮バイオインクが真皮線維芽細胞を含む、真皮層と；表皮バイオインクを含む表皮層であって、表皮バイオインクがケラチノサイトを含む、表皮層とを含み、該表皮層が該真皮層と接触して人工皮膚組織を形成している、第1の人工組織；ならびに
b．皮膚組織ではない第2の人工組織であって、前記人工皮膚組織と物理的にまたは流体的に接触して多組織システムを形成しており、第2の組織の少なくとも1つのコンポーネントがバイオプリントされた、第2の人工組織
を含む、三次元人工生体多組織システム。
[本発明1123]
第1の人工組織の少なくとも1つのコンポーネントがバイオプリントされた、本発明1122の多組織システム。
[本発明1124]
第2の人工組織の少なくとも1つのコンポーネントがバイオプリントされた、本発明1122の多組織システム。
[本発明1125]
第2の人工組織が、肝臓組織、腎臓組織、骨組織、肺組織、脈管組織、脳組織、腸組織、胃組織、または食道組織である、本発明1122の多組織システム。
[本発明1126]
人工皮膚組織が、使用時に、予め形成されたスキャフォールドを実質的に含まない、本発明1122の多組織システム。
[本発明1127]
第2の人工組織が、使用時に、予め形成されたスキャフォールドを実質的に含まない、本発明1122の多組織システム。
[本発明1128]
真皮を含む三次元人工生体皮膚組織であって、真皮が真皮線維芽細胞を含み；但し、真皮は、真皮バイオインクからバイオプリントされ、そして融合して三次元人工生体皮膚組織を形成している、三次元人工生体皮膚組織。
[本発明1129]
表皮を含む三次元人工生体皮膚組織であって、表皮がケラチノサイトを含み；但し、表皮は、表皮バイオインクからバイオプリントされ、そして融合して三次元人工生体皮膚組織を形成している、三次元人工生体皮膚組。
[本発明1130]
a．真皮線維芽細胞を含む真皮バイオインクを調製する工程；
b．ケラチノサイトを含む表皮バイオインクを調製する工程；
c．表面上に真皮バイオインクを付着させる工程；
d．表皮バイオインクが真皮バイオインクの少なくとも1つの表面上に層を形成するように、表皮バイオインクを付着させる工程であって、表皮バイオインクの付着が、真皮バイオインクの付着後10ミリ秒を超えてかつ21日未満で生じる、工程
を含む、三次元人工生体皮膚組織を製造する方法。