【手続補正書】
【提出日】平成30年7月10日(2018.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＣＲが認識可能なペプチド配列を同定するための方法であって、
ｉ．複数の哺乳類細胞を提供すること、ここで
−  前記複数の哺乳類細胞の各々はライブラリーのメンバーを発現し；
−  前記ライブラリーの各メンバーはトランスジェニック抗原受容体をコードし；
−  前記トランスジェニック抗原受容体は：
・  ＭＨＣ１またはＭＨＣ２の細胞外部位、
・  前記細胞外部位内に含まれるオリゴペプチド、ここで該オリゴペプチドは該ライブラリーの各メンバーについて異なり、及びここで該オリゴペプチドはＴ細胞受容体による認識に適した方法で提示され、
・  Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の膜貫通部位、及び
・  ＴＣＲの細胞内部位、
を含み；
−  前記トランスジェニック抗原受容体はレポータータンパク質に機能的に連結しており、それによって、同種Ｔ細胞受容体の前記トランスジェニック抗原受容体への結合が前記レポーター遺伝子の活性化をもたらし、
ｉｉ．前記複数の哺乳類細胞をＴリンパ球の調製物と接触させること、
ｉｉｉ．前記レポータータンパク質の検出可能なレベルにしたがって、前記複数の哺乳類細胞から検出可能なレポータータンパク質を示す細胞を分離し、活性化細胞を得ること、
ｉｖ．前記活性化細胞からＤＮＡを単離すること、並びに
ｖ．前記トランスジェニック抗原受容体に含まれる前記オリゴペプチド配列の配列を決定すること、
を含む、ＴＣＲが認識可能なペプチド配列を同定するための方法。
【請求項２】
ＴＣＲが認識可能なペプチド配列を同定するための方法であって、
ｉ．哺乳類細胞を提供すること、ここで
−  前記哺乳類細胞はトランスジェニック抗原受容体を発現し；
−  前記トランスジェニック抗原受容体分子は
・  Ｔ細胞受容体による認識に適した方法で提示されたオリゴペプチドを含むＭＨＣ１またはＭＨＣ２の細胞外部位、
・  Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の膜貫通部位、及び
・  ＴＣＲの細胞内部位、
を含み；
−  前記トランスジェニック受容体は、レポータータンパク質と機能的に連結し、それによって、同種Ｔ細胞受容体の前記トランスジェニック抗原受容体への結合が前記レポーター遺伝子の活性化をもたらし、
ｉｉ．前記哺乳類細胞をＴリンパ球の調製物と接触させ、それによって、前記レポーター遺伝子の活性化により、活性化した哺乳類細胞を得ること、
ｉｉｉ．前記活性化した哺乳類細胞からＤＮＡを単離すること、並びに
ｉｖ．前記トランスジェニックキメラ抗原受容体中にコードされる前記オリゴペプチド配列の配列を決定すること、
を含む、ＴＣＲ認識ペプチド配列を同定するための方法。
【請求項３】
前記トランスジェニック抗原受容体が、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体であって、ここで
ａ．前記第１のポリペプチドは主要組織適合遺伝子複合体Ｉ（ＭＨＣクラスＩ）α鎖の細胞外部分を含み、及び前記第２のポリペプチドはβ２ミクログロブリン部位を含み、または、
ｂ．前記第１のポリペプチドは主要組織適合遺伝子複合体ＩＩ（ＭＨＣクラスＩＩ）α鎖の細胞外部分を含み、及び前記第２のポリペプチドは主要組織適合遺伝子複合体ＩＩ（ＭＨＣクラスＩＩ）β鎖の細胞外部分を含み、
ここで、前記第１及び前記第２のポリペプチド鎖の少なくとも１つは、さらに前記細胞外ＭＨＣ部位へ共有結合したオリゴペプチドを含み；前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの１つは、さらにＴ細胞受容体α鎖の細胞内部位または細胞内尾部、膜貫通部位、及びヒンジ領域を含み、並びに、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方は、Ｔ細胞受容体β鎖の細胞内部位、膜貫通部位及びヒンジ領域を含む、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体であって、ここで、
ａ．前記第１のポリペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体Ｉ（ＭＨＣクラスＩ）α鎖の細胞外部分を含み、及び前記第２のポリペプチドはβ２ミクログロブリン部位を含み、または、
ｂ．前記第１のポリペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体ＩＩ（ＭＨＣクラスＩＩ）α鎖の細胞外部分を含み、及び前記第２のポリペプチドは主要組織適合遺伝子複合体ＩＩ（ＭＨＣクラスＩＩ）β鎖の細胞外部分を含み、
前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの１つは、さらにＴ細胞受容体α鎖の細胞内部位または細胞内尾部、膜貫通部位及びヒンジ領域を含み、並びに、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方は、Ｔ細胞受容体β鎖の細胞内部位、膜貫通部位及びヒンジ領域を含む、
前記第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体。
【請求項５】
前記第１及び前記第２のポリペプチド鎖の少なくとも１つは、さらにＴ細胞受容体によって認識可能なオリゴペプチドを含み、前記オリゴペプチドは前記細胞外ＭＨＣ部位へ共有結合で連結する、請求項４に記載の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体。
【請求項６】
ＭＨＣ分子の細胞外部分が、
ｉ．前記第１のポリペプチド部分を形成するＭＨＣクラスＩα１、α２及びα３の各々、または、
ｉｉ．前記第１のポリペプチド部分を形成するＭＨＣクラスＩＩα１及びＭＨＣクラスＩＩα２、並びに前記第２のポリペプチド部分を形成するＭＨＣクラスＩＩβ１及びＭＨＣクラスＩＩβ２部位、及び／または、
ｉｉｉ．ここでＭＨＣ分子の細胞外部分は、ＩＭＧＴ  ＨＬＡデータベースに記載されているヒト主要組織適合遺伝子複合体遺伝子ファミリーＨＬＡのメンバーから選択される、
を含む、請求項４又は５に記載のキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体。
【請求項７】
前記オリゴペプチド配列が、
ａ．該ＭＨＣα１部位配列の１、２、３、４又は５アミノ酸後に挿入され、及び／または
ｂ．前記オリゴペプチドが、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０または４０アミノ酸である、
請求項４〜６のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体。
【請求項８】
配列番号００７に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド及び配列番号００８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む、請求項４〜７のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体。
【請求項９】
請求項４〜８のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体をコードする核酸分子。
【請求項１０】
細胞であって、
ｉ．請求項４〜８のいずれか１項に記載の該キメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体、及び
ｉｉ．前記キメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体に機能的に連結したエフェクター機能、を含む、前記細胞。
【請求項１１】
前記エフェクター機能が：
ｉ．レポータータンパク質、及び／または
ｉｉ．該キメラ抗原受容体ポリペプチドへ結合した細胞において、細胞死を誘導することができるタンパク質、
である、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１２】
前記レポータータンパク質が：
ｉｉｉ．蛍光タンパク質、または
ｉｖ．ルシフェラーゼタンパク質、または
ｖ．抗生物質耐性遺伝子、または
ｖｉ．Ｃｒｅリコンビナーゼ、または
ｖｉｉ．ＣＡＳ−９ヌクレアーゼ、または
ｖｉｉｉ．ＣＡＳ−９キメラ転写抑制因子または転写活性化因子
から選択される、
請求項１１に記載の細胞。
【請求項１３】
抗原に対して反応性が低下しているＴリンパ球の調製物を得る方法であって、
ｉ．患者から得られたＴリンパ球の調製物を提供すること、
ｉｉ．前記Ｔリンパ球の調製物を、キメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体を含む請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の細胞の調製物と接触させること、
ここで、前記細胞は、キメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体へ結合した細胞において、エフェクター機能が細胞死を誘導することを特徴とする、
上記工程を含む、抗原に対して反応性が低下しているＴリンパ球の調製物を得る方法。
【請求項１４】
移植拒絶、１型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチ、クローン病及び炎症性腸症候群を含む、自己免疫疾患または免疫機能不全の治療または予防に使用するための請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１５】
患者の抗原ペプチドに対する免疫応答を検出するための方法であって、
ｉ．請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の細胞を提供すること、ここで前記細胞は、前記キメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体へ機能的に連結するレポータータンパク質を含み、
ｉｉ．前記患者の血液試料をエクスビボで提供すること、
ｉｉｉ．前記哺乳類細胞を前記血液試料へ接触させること、及び
ｉｖ．前記哺乳類細胞中の前記レポータータンパク質を検出すること、
上記工程を含む、
患者の抗原ペプチドに対する免疫応答を検出するための方法。
【請求項１６】
ｉ．レポータータンパク質の発現にしたがって、該哺乳類細胞を分離すること、
ｉｉ．前記分離した哺乳類細胞からＤＮＡを単離すること、及び
ｉｉｉ．請求項４〜８のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体ポリペプチドヘテロ二量体中にコードされた抗原−ペプチドの配列を決定すること、
上記工程をさらに含む、
請求項１５に記載の方法。