【手続補正書】
【提出日】平成30年11月19日(2018.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のプロテアーゼ認識配列を含む非天然ベイト領域を含む組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドを含む組成物であって、前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが配列番号３に対して少なくとも８０％の配列同一性を含み、前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドは少なくとも５００アミノ酸を含む、組成物。
【請求項２】
前記非天然ベイト領域が、配列番号８４〜１４３からなる群から選択される配列を含まない配列を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも９５％または１００％の同一性を有する配列を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記非天然ベイト領域が、配列番号３１〜８３からなる群から選択されるプロテアーゼ認識配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、およびこれらの組合せからなる群から選択されるプロテアーゼの、野生型Ａ２Ｍタンパク質による前記プロテアーゼの阻害と比較して増強された阻害を特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記阻害の増強が、前記プロテアーゼに対して非特異的である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記非天然ベイト領域が、配列番号２０に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、非正常グリコシル化部位をさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、対象内に位置すると、野生型Ａ２Ｍタンパク質の半減期より長い半減期を有する、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、自殺型阻害因子を含むプロテアーゼ認識配列を含み、前記自殺型阻害因子が、プロテアーゼを、前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドに共有結合によって接合させるように作動可能である、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、配列番号４に対して少なくとも８０％、９０％、または１００％の同一性を有する配列を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、少なくとも１０００アミノ酸を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
治療によりヒトまたは動物の体を処置する方法における使用のための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、関節炎、骨関節炎、炎症性関節炎、がん、軟骨形成、軟骨傷害、慢性創傷、創傷、創傷の治癒、腱付着部症、腱障害、筋骨格疾患、変性疾患、骨の変性疾患、軟骨の変性疾患、腱の変性疾患、靭帯の変性疾患、炎症、その発症機序がプロテアーゼの活性を含む炎症性疾患、靭帯傷害、靭帯性傷害、腱傷害、骨傷害、軟骨変性、軟骨傷害、自己免疫疾患、背部痛、関節痛、関節変性、椎間板変性、脊椎変性、骨変性、外傷性疾患、術後状態、手術により引き起こされる関節炎症、手術により引き起こされる椎間板炎症、関節置換術により引き起こされる関節炎症、椎間板置換術により引き起こされる椎間板炎症、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される１または複数の状態を処置するのに用いられることを特徴とする、請求項１３に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記組換え変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、配列番号８２および８３からなる群から選択される配列を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
特定された新規の特色は、付属の特許請求の範囲に明示される。特色および利点についてのよりよい理解は、デバイス、方法、および組成物についての原理が活用される、例証的な実施形態を明示する、以下の詳細な記載、ならびに付属の図面を参照することにより得られるであろう。
本発明の実施形態の一部の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
複数のプロテアーゼ認識配列を含む非天然ベイト領域を含む変異体Ａ２Ｍポリペプチドを含む組成物であって、前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含む組成物。
（項目２）
前記非天然ベイト領域が、配列番号８４〜１４３からなる群から選択される配列を含まない配列を有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含む、項目１または２に記載の組成物。
（項目４）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む、項目１から４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む、項目１から４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、項目１から７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、項目１から８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列を含む、項目１から９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記非天然ベイト領域が、配列番号３１〜８１からなる群から選択されるプロテアーゼ認識配列を含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
前記非天然ベイト領域が、配列番号８２および８３からなる群から選択されるプロテアーゼ認識配列を含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、組換えである、項目１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、細菌細胞、酵母細胞、真菌細胞、昆虫細胞、もしくは哺乳動物細胞、または無細胞系からなる群から選択される宿主内で産生される、項目１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、およびこれらの組合せからなる群から選択されるプロテアーゼの、野生型Ａ２Ｍタンパク質による前記プロテアーゼの阻害と比較して増強された阻害を特徴とする、項目１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６）
前記阻害の増強が、前記プロテアーゼに対して非特異的である、項目１６に記載の組成物。
（項目１７）
前記阻害の増強が、前記プロテアーゼに対して特異的である、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、非正常グリコシル化部位をさらに含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１９）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、ＰＥＧを含む非正常グリコシル化部位をさらに含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、対象内に位置すると、野生型Ａ２Ｍタンパク質の半減期より長い半減期を有する、項目１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、対象内に位置すると、野生型Ａ２Ｍポリペプチドの半減期より、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１０９０％、１２０％、１４０％、１５０％、１６０％、１８０％、２００％、２２０％、２４０％、２６０％、２８０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、または５００％長い半減期を有する、項目１から２０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２２）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、野生型Ａ２Ｍタンパク質のプロテアーゼ阻害有効性と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１０９０％、１２０％、１４０％、１５０％、１６０％、１８０％、２００％、２２０％、２４０％、２６０％、２８０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、または５００％増大したプロテアーゼ阻害有効性を特徴とする、項目１から２１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２３）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、およびこれらの組合せからなる群から選択されるプロテアーゼについてのコンセンサス配列を含む、項目１から２２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２４）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、ＭＭＰ１（間質コラゲナーゼ）、ＭＭＰ２（ゼラチナーゼＡ）、ＭＭＰ３（ストロメリシン１）、ＭＭＰ７（マトリリシン、ＰＵＭＰ１）、ＭＭＰ８（好中球コラゲナーゼ）、ＭＭＰ９（ゼラチナーゼＢ）、ＭＭＰ１０（ストロメリシン２）、ＭＭＰ１１（ストロメリシン３）、ＭＭＰ１２（マクロファージメタロエラスターゼ）、ＭＭＰ１３（コラゲナーゼ３）、ＭＭＰ１４（ＭＴ１−ＭＭＰ）、ＭＭＰ１５（ＭＴ２−ＭＭＰ）、ＭＭＰ１６（ＭＴ３−ＭＭＰ）、ＭＭＰ１７（ＭＴ４−ＭＭＰ）、ＭＭＰ１８（コラゲナーゼ４、ｘｃｏｌ４、Ｘｅｎｏｐｕｓ属コラゲナーゼ）、ＭＭＰ１９（ＲＡＳＩ−１、ストロメリシン４）、ＭＭＰ２０（エナメリシン）、ＭＭＰ２１（Ｘ−ＭＭＰ）、ＭＭＰ２３Ａ（ＣＡ−ＭＭＰ）、ＭＭＰ２３Ｂ、ＭＭＰ２４（ＭＴ５−ＭＭＰ）、ＭＭＰ２５（ＭＴ６−ＭＭＰ）、ＭＭＰ２６（マトリリシン２、エンドメターゼ）、ＭＭＰ２７（ＭＭＰ−２２、Ｃ−ＭＭＰ）、ＭＭＰ２８（エピリシン）；ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ２、ＡＤＡＭＴＳ３、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５（ＡＤＡＭＴＳ１１）、ＡＤＡＭＴＳ６、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＤＡＭＴＳ８（ＭＥＴＨ−２）、ＡＤＡＭＴＳ９、ＡＤＡＭＴＳ１０、ＡＤＡＭＴＳ１２、ＡＤＡＭＴＳ１３、ＡＤＡＭＴＳ１４、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＡＤＡＭＴＳ１６、ＡＤＡＭＴＳ１７、ＡＤＡＭＴＳ１８、ＡＤＡＭＴＳ１９、ＡＤＡＭＴＳ２０などのＡＤＡＭＴＳ（Ａ  Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ  Ｍｏｔｉｆｓ）プロテアーゼ；キモトリプシン；トリプシン；エラスターゼ；補体因子；凝固因子；トロンビン；プラスミン；スブチリシン；ネプリリシン；プロコラーゲンペプチダーゼ；テルモリシン；妊娠関連血漿タンパク質Ａ；骨形成タンパク質１；リソスタフィン；インスリン分解酵素；ＺＭＰＳＴＥ２；ＺＭＰＳＴＥ４；ＺＭＰＳＴＥ２４；アセチルコリンエステラーゼ；およびこれらの組合せからなる群から選択されるプロテアーゼについてのコンセンサス配列を含む、項目１から２３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２５）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＭＭＰ１３、およびこれらの組合せからなる群から選択されるプロテアーゼについてのコンセンサス配列を含む、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、１または複数の生物に由来するプロテアーゼ認識コンセンサス配列を含む、項目１から２５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２７）
前記１または複数の生物が、哺乳動物、動物、植物、細菌、酵母、魚類、爬虫類、両生類、ウイルス、または真菌からなる群から選択される、項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、Ａ２Ｍ以外のタンパク質に由来するプロテアーゼ認識配列を含む、項目１から２７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２９）
Ａ２Ｍ以外のタンパク質に由来する前記プロテアーゼ認識配列のうちの２つまたはそれ超が、同じである、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
Ａ２Ｍ以外のタンパク質に由来する前記プロテアーゼ認識配列のうちの２つまたはそれ超が、異なる種に由来する、項目２８または２９に記載の組成物。
（項目３１）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、野生型Ａ２Ｍに由来するプロテアーゼ認識配列を含む、項目１から３０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３２）
野生型Ａ２Ｍに由来する前記プロテアーゼ認識配列のうちの２つまたはそれ超が、同じである、項目３１に記載の組成物。
（項目３３）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、非天然プロテアーゼ認識配列を含む、項目１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３４）
前記非天然プロテアーゼ認識配列のうちの２つまたはそれ超が、同じである、項目３３に記載の組成物。
（項目３５）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、自殺型阻害因子を含むプロテアーゼ認識配列を含み、前記自殺型阻害因子が、プロテアーゼを、前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドに共有結合によって接合させるように作動可能である、項目１から３４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３６）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、単離されている、項目１から３５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３７）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、精製されている、項目１から３６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３８）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、野生型Ａ２ＭによるＦＡＣの形成の阻害と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１４０％、１５０％、１６０％、１８０％、２００％、２２０％、２４０％、２６０％、２８０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、または５００％増強されたＦＡＣの形成の阻害を特徴とする、項目１から３７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３９）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、配列番号４に対して少なくとも８０％、９０％、または１００％の同一性を有する配列を含む、項目１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４０）
前記野生型Ａ２Ｍポリペプチドが、配列番号３に対して少なくとも８０％、９０％、または１００％の同一性を有する配列を含む、項目１から３９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４１）
前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドが、野生型Ａ２Ｍのベイト領域以外の配列を含む、項目１から４０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４２）
１または複数の状態を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、有効量の、項目１から４１のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
（項目４３）
前記対象における１または複数のプロテアーゼの非特異的阻害を増大させる、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記対象におけるアグリカンＧ３断片の形成の阻害を増大させる、項目４２または４３に記載の方法。
（項目４５）
前記対象におけるＦＡＣの形成の阻害を増大させる、項目４２から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記対象における、組織、軟骨、および椎間板の変性、滑膜炎症、またはこれらの組合せの速度を減少させる、項目４２から４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記１または複数の状態の重症度、発生、進行速度、またはこれらの組合せを低減する、項目４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
１または複数のさらなる担体または薬物を投与するステップをさらに含む、項目４２から４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記１または複数のさらなる担体または薬物が、ハイドロゲル、ヒアルロン酸調製物、ポリマーマイクロスフェア、コルチコステロイド、マイクロ粒子、キトサン、局所麻酔剤、増殖因子、サイトカイン、プロテアーゼ阻害剤、ステロイド、ヒアルロン酸（ＨＡ）、または他の生物学的に活性な自原性もしくは内因性のメディエーターを含む、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記１または複数の状態が、その発症機序がプロテアーゼの活性を含む、変性疾患、慢性創傷、創傷、外傷性疾患、炎症性疾患、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目４２から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記１または複数の状態が、骨関節炎、炎症性関節炎、軟骨形成、軟骨傷害、筋腱付着部症、腱障害、靭帯傷害、骨の変性疾患、軟骨の変性疾患、腱の変性疾患、靭帯の変性疾患、術後状態、創傷の治癒、筋骨格疾患、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目４２から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記１または複数の状態が、関節炎、炎症、靭帯傷害、腱傷害、骨傷害、軟骨変性、軟骨傷害、自己免疫疾患、背部痛、関節痛、関節変性、椎間板変性、脊椎変性、骨変性、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される、項目４２から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記１または複数の状態が、手術により引き起こされる関節炎症、手術により引き起こされる椎間板炎症、関節置換術により引き起こされる関節炎症、椎間板置換術により引き起こされる椎間板炎症、またはこれらの組合せからなる群から選択される、項目４２から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記１または複数の状態が、がんである、項目４２から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記対象が、ヒトである、項目４２から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記対象が、哺乳動物である、項目４２から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記対象が、ブタ、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、カエル、ウマまたはヤギである、項目４２から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記対象が、前記１または複数の状態を有すると既に診断されている、項目４２から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記組成物を、前記１または複数の状態の病態に関係する解剖学的部位に投与する、項目４２から５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記投与が、中空管デバイスまたは可撓性カテーテルによる注射を含む、項目４２から５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記中空管デバイスが、注射針、シリンジ、またはこれらの組合せを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記投与を、手術手順中に行う、項目４２から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
単離変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドが、複数のプロテアーゼ認識配列を含む非天然ベイト領域をコードし、前記非天然ベイト領域が、配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を有する組成物。
（項目６４）
前記非天然ベイト領域が、アミノ酸配列番号６〜３０のうちのいずれか１つからなる群から選択される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９８％、９９．９９％、または１００％の同一性を有する配列をコードする配列を有する、項目６３に記載の組成物。
（項目６５）
前記非天然ベイト領域が、配列番号３１〜８３からなる群から選択されるプロテアーゼ認識アミノ酸配列をコードする、項目６３または６４に記載の組成物。
（項目６６）
前記非天然ベイト領域が、野生型Ａ２Ｍ内に存在しないプロテアーゼ認識アミノ酸配列をコードする、項目６３から６５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６７）
前記変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドが、配列番号２に対して少なくとも９０％、９５％、または１００％の同一性を含む、項目６３から６６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６８）
野生型Ａ２Ｍポリヌクレオチドが、配列番号１に対して少なくとも９０％、９５％、または１００％の同一性を含む、項目６３から６７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６９）
前記変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドが、発現ベクター内にある、項目６３から６８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７０）
変異体Ａ２Ｍポリペプチドによるプロテアーゼの阻害の増強を決定する方法であって、
（ａ）配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９８％、９９．９９％、または１００％の同一性を有する配列を含む変異体Ａ２Ｍポリペプチドを用意するステップと；
（ｂ）前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドを、前記プロテアーゼおよび前記プロテアーゼにより切断される基質と接触させるステップと；
（ｃ）野生型Ａ２Ｍポリペプチドを、前記プロテアーゼおよび前記プロテアーゼにより切断される前記基質と接触させるステップと；
（ｄ）（ｂ）による前記基質の切断量を、（ｃ）による前記基質の切断量と比較し、これにより、前記変異体Ａ２Ｍポリペプチドによる前記プロテアーゼの阻害の前記増強を決定するステップと
を含む方法。
（項目７１）
変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドを製作する方法であって、
（ａ）配列番号２に対して少なくとも９０％、９５％、または１００％の同一性を有する配列を含む変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドを含有するベクターを用意するステップと；
（ｂ）前記ベクターを制限酵素で消化して、直鎖状ベクターを形成するステップと；
（ｃ）配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９８％、９９．９９％、または１００％の同一性を有する非天然ベイト配列をコードする配列を含むポリヌクレオチドの一方の端部を前記直鎖状ベクターの一方の端部にライゲーションするステップと；
（ｄ）配列番号６〜３０からなる群から選択される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９８％、９９．９９％、または１００％の同一性を有する非天然ベイト配列をコードする配列を含む前記ポリヌクレオチドの他方の端部を前記直鎖状ベクターの他方の端部にライゲーションし、これにより、前記変異体Ａ２Ｍポリヌクレオチドを形成するステップと
を含む方法。
（項目７２）
治療における使用のための、項目１から４１または６３から６９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７３）
非自家療法における使用のための、項目７２に記載の組成物。
（項目７４）
慢性創傷、がん、関節炎、炎症、靭帯傷害、腱傷害、骨傷害、軟骨変性、軟骨傷害、自己免疫疾患、背部痛、関節痛、関節変性、椎間板変性、脊椎変性、骨変性、またはこれらの任意の組合せの処置における使用のための組成物であり、炎症が、手術により引き起こされる関節炎症もしくは椎間板炎症、関節置換術もしくは椎間板置換術により引き起こされる関節炎症もしくは椎間板炎症、またはこれらの組合せを含む、項目７２または７３に記載の組成物。
（項目７５）
治療における使用のための医薬を製造するための、項目１から４１または６３から６９に記載の組成物の使用。
（項目７６）
前記医薬が、非自家療法における使用のための医薬である、項目７５に記載の使用。
（項目７７）
前記医薬が、慢性創傷、がん、関節炎、炎症、靭帯傷害、腱傷害、骨傷害、軟骨変性、軟骨傷害、自己免疫疾患、背部痛、関節痛、関節変性、椎間板変性、脊椎変性、骨変性、手術により引き起こされる関節炎症もしくは椎間板炎症、関節置換術もしくは椎間板置換術により引き起こされる関節炎症もしくは椎間板炎症、またはこれらの任意の組合せの処置における使用のための医薬である、項目７５または７６に記載の使用。
（項目７８）
医薬を製造する方法であって、創傷の治癒を促進するのに有効な量の、項目１から４１または６３から６９に記載の変異体Ａ２Ｍポリペプチド組成物と、薬学的に許容される担体とを一体にするステップを含む方法。
（項目７９）
治療有効量の、項目１から４１または６３から６９に記載の変異体Ａ２Ｍポリペプチド組成物と、対象の創傷の処置における使用のための指示書とを含むパッケージ材料を含む製品。