【手続補正書】
【提出日】平成30年6月12日(2018.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象が、１つ又は複数の心血管系（ＣＶ）合併症を発症するリスクを有するかどうかを判定するためのデータを収集する方法であって、
（ａ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度を測定するステップであって、
【化１】
2017519989.tif 000001
(I)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２５個を有する飽和アルキル鎖である）
前記生体サンプルが、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又はそれから取得されたリポタンパク質分画である前記ステップと、
（ｂ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式（ＩＩ）のセラミドの濃度を測定するステップと、
【化２】
2017519989.tif 000002
(II)
（式中、
Ｒ1は、直鎖状の炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個若しくは２５個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
（ｃ）前記少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度、及び前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップと、
（ｄ）前記コントロールサンプルと比較して、前記生体サンプルが含有する前記少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度が低下しており、且つ前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度が増加している場合には、前記対象は、１つ又は複数のＣＶ合併症を発症するリスクが高まっていると判定するステップと、
を含む前記方法。
【請求項２】
ヒト対象が、１つ又は複数のＣＶ合併症を発症するリスクを有するかどうかを判定するためのデータを収集する方法であって、
（ａ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度を測定するステップであって、
【化３】
2017519989.tif 000003
(III)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２３個又は２５個を有する飽和アルキル鎖である）
前記生体サンプルが、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又はそれから取得されたリポタンパク質分画である前記ステップと、
（ｂ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を測定するステップと、
【化４】
2017519989.tif 000004
(IV)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である、或いは、
式中、
Ｒ1は、炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
（ｃ）前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度、及び前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップと、
（ｄ）前記コントロールサンプルと比較して、前記生体サンプルが含有する前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度が低下しており、且つ前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度が増加している場合には、前記ヒト対象は、１つ又は複数のＣＶ合併症を発症するリスクが高まっていると判定するステップと、
を含む前記方法。
【請求項３】
ヒト対象において、ＣＶＤ及び／又はその合併症のうちの１つ又は複数に対する治療の有効性を評価するためのデータを収集する方法であって、
（ａ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度を測定するステップであって、
【化５】
2017519989.tif 000005
(I)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２５個を有する飽和アルキル鎖である）
前記生体サンプルが、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又はそれから取得されたリポタンパク質分画である、前記ステップと、
（ｂ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度を測定するステップと、
【化６】
2017519989.tif 000006
(II)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個若しくは２５個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
（ｃ）前記少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度、及び前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップと、
（ｄ）前記コントロールサンプルと比較して、前記サンプルが含有する前記少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度が増加しており、且つ前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度が低下している場合には、治療は有効であると判定するステップと、
を含む前記方法。
【請求項４】
ヒト対象において、ＣＶＤ及び／又はその合併症のうちの１つ又は複数に対する治療の有効性を評価するためのデータを収集する方法であって、
（ａ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度を測定するステップであって、
【化７】
2017519989.tif 000007
(III)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２３個又は２５個を有する飽和アルキル鎖である）
前記生体サンプルが、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又はそれから取得されたリポタンパク質分画である前記ステップと、
（ｂ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を測定するステップと、
【化８】
2017519989.tif 000008
(IV)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である、或いは、
式中、
Ｒ1は、炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
（ｃ）前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度、及び前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップと、
（ｄ）前記コントロールサンプルと比較して、前記サンプルが含有する前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度が増加しており、且つ前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度が低下している場合には、治療は有効であると判定するステップと、
を含む前記方法。
【請求項５】
ヒト対象において、ＣＶＤ及び／又はその合併症のうちの１つ又は複数について、適切な治療を選択するためのデータを収集する方法であって、
（ａ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度を測定するステップであって、
【化９】
2017519989.tif 000009
(I)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２５個を有する飽和アルキル鎖である）
前記生体サンプルが、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又はそれから取得されたリポタンパク質分画である前記ステップと、
（ｂ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度を測定するステップと、
【化１０】
2017519989.tif 000010
(II)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個若しくは２５個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
（ｃ）前記少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度、及び前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップと、
（ｄ）前記コントロールサンプルと比較して、前記サンプルが含有する前記少なくとも１つの式Ｉのセラミドの濃度が低下しており、且つ前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度が増加している場合には、前記ヒト対象が、治療を必要とする、又はすでに実施されている治療の変更若しくは補充を必要とすると判定するステップと、
を含む前記方法。
【請求項６】
ヒト対象において、ＣＶＤ及び／又はその合併症の１つ又は複数について、適切な治療を選択するためのデータを収集する方法であって、
（ａ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度を測定するステップであって、
【化１１】
2017519989.tif 000011
(III)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２３個又は２５個を有する飽和アルキル鎖である）
前記生体サンプルが、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又はそれから取得されたリポタンパク質分画である前記ステップと、
（ｂ）前記ヒト対象から得られた生体サンプル中で、少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を測定するステップと、
【化１２】
2017519989.tif 000012
(IV)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である、或いは、
式中、
Ｒ1は、炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
（ｃ）前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度、及び前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップと、
（ｄ）前記コントロールサンプルと比較して、前記サンプルが含有する前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミドの濃度が低下しており、且つ前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度が増加している場合には、前記ヒト対象が、治療を必要とする、又はすでに実施されている治療の変更若しくは補充を必要とすると判定するステップと、
を含む前記方法。
【請求項７】
対象から得られた生体サンプル中で、式（ＩＩ）のセラミド、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１６：０）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）、及びＣｅｒ（ｄ１８：１／２４：１）のうち、その少なくとも１つの濃度を検出する方法。
【請求項８】
式（Ｉ）のセラミド、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２４：０）の濃度を測定するステップを更に含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度、又は式Ｉのセラミドの濃度を、コントロールサンプルと比較するステップを更に含む、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
マススペクトロメトリーを用いて、前記少なくとも１つの式（Ｉ）のセラミド及び前記少なくとも１つの式（ＩＩ）のセラミドの濃度、又は前記少なくとも１つの式（ＩＩＩ）のセラミド及び前記少なくとも１つの式（ＩＶ）のセラミドの濃度が測定される、請求項１から９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
直接サンプル注入法又は高性能分離法と連結したマススペクトロメトリー装置を用いて、前記少なくとも１つの式（Ｉ）のセラミド及び前記少なくとも１つの式（ＩＩ）のセラミドの濃度、又は前記少なくとも１つの式（ＩＩＩ）のセラミド及び前記少なくとも１つの式（ＩＶ）のセラミドの濃度が測定される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも２つ若しくは少なくとも３つの式（Ｉ）のセラミドの濃度、又は少なくとも２つ若しくは少なくとも３つの式（ＩＩＩ）のセラミドの濃度が測定される、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも２つ若しくは少なくとも３つの式（ＩＩ）のセラミドの濃度、又は少なくとも２つ若しくは少なくとも３つの式（ＩＶ）のセラミドの濃度が測定される、請求項１から１２までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
Ｚ＝（式Ｉのセラミド）a／（式ＩＩのセラミド）b、又はＺ＝（式ＩＩＩのセラミド）a／（式ＩＶのセラミド）bの式（式中、ａ、ｂ∈Ｒである）により、前記コントロールサンプルと比較して前記生体サンプルが有するＺ値が高い場合に、前記対象は１つ又は複数のＣＶ合併症を発症するリスクが高まっている、請求項１から１３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
式（ＩＩ）のセラミド、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１６：０）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）、及びＣｅｒ（ｄ１８：１／２４：１）の濃度が測定される、請求項１、３、５、及び１０から１４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
式（Ｉ）のセラミド、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２４：０）の濃度が測定される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記１つ又は複数のＣＶ合併症が、ＡＭＩ（急性心筋梗塞）、ＡＣＳ（急性冠状動脈症候群）、脳卒中、又はＣＶ死のうちの１つ又は複数である、請求項１から６、及び１０から１６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの式Ｉのセラミド及び前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度、又は前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミド及び前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を測定する前に、前記生体サンプルから脂質を抽出するステップを更に含む、請求項１から１７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの式Ｉのセラミド及び前記少なくとも１つの式ＩＩのセラミドの濃度を測定する前に、少なくとも１つの同位体標識された式Ｉのセラミド及び少なくとも１つの同位体標識された式ＩＩのセラミドで、前記生体サンプルをスパイクするステップを更に含む、請求項１、３、５、及び７から１８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの式ＩＩＩのセラミド及び前記少なくとも１つの式ＩＶのセラミドの濃度を測定する前に、少なくとも１つの同位体標識された式ＩＩＩのセラミド及び少なくとも１つの同位体標識された式ＩＶのセラミドで、前記生体サンプルをスパイクするステップを更に含む、請求項２、４、６、及び７から１８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの同位体標識されたセラミドの同位体が、重水素である、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＶ合併症を予測するための組成物又はキットであって、
（ａ）少なくとも１つの同位体標識された式（Ｉ）のセラミドと、
【化１３】
2017519989.tif 000013
(I)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２５個を有する飽和アルキル鎖である）
（ｂ）少なくとも１つの同位体標識された式（ＩＩ）のセラミドと、
【化１４】
2017519989.tif 000014
(II)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有する飽和、モノ不飽和、若しくはジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個若しくは２５個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
を含む前記組成物又はキット。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの同位体標識された式（ＩＩ）のセラミドが、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１６：０）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）、及びＣｅｒ（ｄ１８：１／２４：１）である、請求項２２に記載の組成物又はキット。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの同位体標識された式（Ｉ）のセラミドが、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２４：０）である、請求項２３に記載の組成物又はキット。
【請求項２５】
ＣＶ合併症を予測するための組成物又はキットであって、
（ａ）少なくとも１つの同位体標識された式ＩＩＩのセラミドと、
【化１５】
2017519989.tif 000015
(III)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子２１〜２３個又は２５個を有する飽和アルキル鎖である）
（ｂ）少なくとも１つの同位体標識された式ＩＶのセラミドと、
【化１６】
2017519989.tif 000016
(IV)
（式中、
Ｒ1は、炭素原子１３個を有するモノ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である、或いは、
式中、
Ｒ1は、炭素原子１５個を有するジ不飽和アルキル鎖であり、
Ｒ2は、炭素原子１５個若しくは１７個を有する飽和アルキル鎖、炭素原子２１〜２３個を有するモノ不飽和アルキル鎖、又は炭素原子２３個を有するジ不飽和アルキル鎖である）
を含む前記組成物又はキット。
【請求項２６】
前記少なくとも１つの同位体標識されたセラミドの同位体が、重水素である、請求項２２から２５までのいずれか１項に記載の組成物又はキット。