【手続補正書】
【提出日】平成29年12月19日(2017.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上の微生物細胞から１種以上の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手するための方法であって：
（ａ）溶解細胞組成物を形成するために前記微生物油を含む前記細胞を溶解する工程；
（ｂ）解乳化溶解細胞組成物を形成するために前記溶解細胞組成物を解乳化する工程；
（ｃ）前記解乳化溶解細胞組成物から前記油を分離する工程；および
（ｄ）前記油を回収する工程
を含み、（ｂ）は前記溶解細胞組成物のｐＨを低下させる工程を含む、方法。
【請求項２】
（ａ）または（ｂ）の少なくとも１つは、前記細胞または前記組成物を少なくとも７０℃、好ましくは約７０℃〜約１００℃へ加熱する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｂ）は、
（ｅ）前記溶解細胞組成物に乳化剤を添加する工程；
（ｆ）前記ｐＨを約６以下、好ましくは約０．５〜約６へ低下させる工程；
（ｇ）溶解細胞組成物の重量で約０．５％〜約２０％の量で酸を添加する工程；
（ｈ）前記溶解細胞組成物の重量で約０．０５％〜約２０％の量で塩を添加する工程；及び
（ｉ）前記溶解細胞組成物を攪拌する工程
のうちの少なくとも１の工程をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
（ａ）は、前記細胞を撹拌する工程をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記酸は、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、フルオロ硫酸硝酸、フルオロアンチモン酸、フルオロホウ酸、ヘキサフルオロリン酸、クロム酸、ホウ酸、酢酸、クエン酸、ギ酸およびそれらの組み合わせから選択される、請求項３又４に記載の方法。
【請求項６】
前記酸は、硫酸である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
（ａ）の前記細胞は、未洗浄である、及び／又は、（ａ）の前記細胞は、発酵ブロス内に含有されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
（ｃ）は、前記溶解細胞組成物を遠心分離する工程をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記多価不飽和脂肪酸は、ω−３脂肪酸、ω−６脂肪酸およびそれらの混合物から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）、γ−リノール酸（ＧＬＡ）、ジホモ−γ−リノール酸（ＤＧＬＡ）、ステアリドン酸（ＳＤＡ）およびそれらの混合物から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記多価不飽和脂肪酸は、アラキドン酸（ＡＲＡ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記微生物細胞は、藻類、酵母、真菌、原生生物または細菌細胞である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記微生物細胞は、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、クリプトコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）属またはスラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）目に由来する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記微生物細胞は、スラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属またはそれらの混合物に由来する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記微生物細胞は、モルティエレラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ  ａｌｐｉｎａ）に由来する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記溶解細胞組成物は、液体、細胞断片および微生物油を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
有機溶媒は、前記細胞から前記油を入手するためには使用されない、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記解乳化溶解細胞組成物の平均粒径は、２５ミクロン以下である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記乳化剤は、イオン性乳化剤であり、好ましくは、前記イオン性乳化剤は、アニオン性硫酸塩乳化剤、アニオン性スルホン酸塩乳化剤、アニオン性リン酸塩乳化剤、アニオン性カルボン酸塩乳化剤およびそれらの組み合わせから選択されるアニオン性乳化剤である、請求項３〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記イオン性乳化剤は、ラウリル硫酸アンモニウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ミレス硫酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせから選択されるアニオン性硫酸塩乳化剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記乳化剤は、前記溶解細胞組成物の重量で０．２％〜１０％の量で添加される、請求項３〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、硫酸塩およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
（ｄ）の前記油は、原油である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
（ｄ）は、精製油を入手するために前記原油を精製する工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記油は、少なくとも３０重量％のアラキドン酸を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記油は、少なくとも３０重量％のドコサヘキサエン酸を含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記油は、約５０未満のアニシジン値を有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記油は、約８ｐｐｍ以下のリン含量を有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記油は、約５ｍｅｑ／ｋｇ未満のペルオキシド値を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
（ａ）および（ｂ）は、１工程の溶解および解乳化する工程を形成するために一緒に結合される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
（ｃ）は、前記解乳化溶解細胞組成物の前記ｐＨを上昇させる工程をさらに含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
１つ以上の微生物細胞から１種以上の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手するための方法であって：
（ａ）溶解細胞組成物を形成するために前記微生物油を含む前記細胞を溶解する工程；
（ｂ）解乳化溶解細胞組成物を形成するために前記溶解細胞組成物を解乳化する工程；
（ｃ）前記解乳化溶解細胞組成物から前記油を分離する工程；および
（ｄ）前記油を回収する工程
を含み、（ａ）および（ｂ）は、前記ｐＨを上昇させる工程を含む１工程の溶解および解乳化する工程を形成するために一緒に結合され、好ましくは、前記１工程の溶解および解乳化する工程は、前記ｐＨを約８以上へ上昇させる工程を含む、方法。
【請求項３４】
前記１工程の溶解および解乳化する工程は、前記ｐＨを約８以上へ上昇させるために塩基を添加する工程を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法によって入手される油。