【手続補正書】
【提出日】平成30年8月24日(2018.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
条件的活性型生物学的タンパク質を作製し、場合により更に条件的活性型生物学的タンパク質を修飾する方法であって、
ｉ．親生物学的タンパク質をコードするＤＮＡを１つ以上の発達的技術を用いて発達させて、変異ＤＮＡを作成する工程と、
ｉｉ．真核細胞産生宿主で前記変異ＤＮＡを発現させて、変異タンパク質を得る工程と、
ｉｉｉ．前記変異タンパク質を正常生理条件下での分析及び異常条件下での分析に供する工程と、
ｉｖ．異常条件下での活性と正常生理条件下での活性の比として少なくとも２：１を有する前記変異タンパク質から条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程と、
ｖ．工程（ｉｉ）で使用したのと同じ真核細胞産生宿主で前記条件的活性型生物学的タンパク質を作製する工程と
を含む方法。
【請求項２】
条件的活性型生物学的タンパク質の異常条件下での活性と条件的活性型生物学的タンパク質の正常生理条件下での活性の比が、少なくとも３：１、又は少なくとも４：１、又は少なくとも５：１、又は少なくとも６：１、又は少なくとも７：１、又は少なくとも８：１、又は少なくとも９：１、又は少なくとも１０：１、又は少なくとも１１：１、又は少なくとも１２：１、又は少なくとも１３：１、又は少なくとも１４：１、又は少なくとも１５：１、又は少なくとも１６：１、又は少なくとも１７：１、又は少なくとも１８：１、又は少なくとも１９：１、又は少なくとも２０：１、又は少なくとも３０：１、又は少なくとも４０：１、又は少なくとも５０：１、又は少なくとも６０：１、又は少なくとも７０：１、又は少なくとも８０：１、又は少なくとも９０：１、又は少なくとも１００：１である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記親生物学的タンパク質が抗体、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、レニン、ヒアルロニダーゼ、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ、血管作動性腸管ペプチド、バソプレシン、アンジオスタチン、標的細胞上の標的タンパク質と結合する別のタンパク質、及びＤＮＡ／ＲＮＡ修飾タンパク質から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記親生物学的タンパク質の正常生理条件下でのアッセイにおける活性と比較して、前記条件的活性型生物学的タンパク質は正常生理条件下での同じアッセイにおいて減少した活性を有する、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記正常生理条件が、温度、ｐＨ、浸透圧、重量オスモル濃度、酸化的ストレス及び電解質濃度のうちの１つ以上から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記正常生理条件が正常生理温度であり、前記条件的活性型生物学的タンパク質が前記正常生理温度で実質的に不活性であり、且つ前記正常生理温度より低い異常温度で活性である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記発達させる工程が、ＰＣＲ、エラープローンＰＣＲ、シャッフリング、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、アセンブリＰＣＲ、セクシャルＰＣＲ突然変異誘発、インビボ突然変異誘発、カセット突然変異誘発、再帰的アンサンブル突然変異誘発、指数関数的アンサンブル突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発、遺伝子リアセンブリ、遺伝子部位飽和突然変異誘発、インビトロ突然変異誘発、リガーゼ連鎖反応、オリゴヌクレオチド合成及びこれらの組み合わせからなる群から選択される技法を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
前記真核細胞産生宿主が、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞、アデノウイルス、及び植物細胞から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項９】
前記真菌細胞が、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、及びアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）由来の細胞から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記昆虫細胞が、ショウジョウバエ属（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）Ｓ２細胞及びスポドプテラ属（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記哺乳類細胞が、Ｂｏｗｅｓメラノーマ細胞、ＣＯＳ−７細胞、Ｃ１２７細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、３Ｔ３マウス線維芽細胞、ＢＨＫ２１シリアンハムスター線維芽細胞、ＭＤＣＫイヌ上皮細胞、ＰｔＫ１ネズミカンガルー上皮細胞、ＳＰ２／０マウス形質細胞、ＮＳ０マウス形質細胞、ＨＥＫ  ２９３ヒト胎児腎細胞、ＣＯＳサル腎細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ−Ｓ、Ｒ１マウス胚細胞、Ｅ１４．１マウス胚細胞、Ｈ１ヒト胚細胞、Ｈ９ヒト胚細胞、及びＰＥＲ  Ｃ．６、ヒト胚細胞から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳類細胞が、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０マウス形質細胞、及びＨＥＫ２９３ヒト胎児腎細胞から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記条件的活性型生物学的タンパク質が、条件的活性型抗体であり、サイトカイン、インターロイキン、酵素、ホルモン、成長因子、細胞傷害剤、化学療法薬、放射性粒子及び診断用薬剤から選択される分子に前記条件的活性型抗体をコンジュゲートする工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記コンジュゲートする工程が、前記条件的活性型抗体と前記分子との間に共有結合又は非共有結合を形成する工程を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記分子が前記条件的活性型抗体のＦｃ領域にコンジュゲートされる、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記作製する工程が前記条件的活性型生物学的タンパク質を製造することを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記条件的活性型生物学的タンパク質が、標的細胞上の標的タンパク質と結合するものであり、更に条件的活性型生物学的タンパク質をウイルス粒子中に遺伝子工学的に操作する工程を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記条件的活性型生物学的タンパク質が、標的細胞上の標的タンパク質と結合するものであり、更に条件的活性型生物学的タンパク質をキメラ抗原受容体に組み込む工程を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記真核細胞産生宿主が細胞傷害性細胞である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞傷害性細胞がＴ細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
正常生理条件が、患者の投与部位における又は作用部位の組織又は器官における正常範囲内であると考えられる温度、ｐＨ、浸透圧、オスモル濃度、酸化的ストレス及び電解質濃度から選択される条件であり、異常条件は、正常生理条件から逸脱した条件である、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法によって調製される条件的活性型生物学的タンパク質であって、正常生理条件で可逆的又は不可逆的に不活性化される条件的活性型生物学的タンパク質。
【請求項２３】
少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、請求項２２に記載の条件的活性型生物学的タンパク質。
【請求項２４】
請求項２２又は２３に記載の条件的活性型生物学的タンパク質を含むキメラ抗原受容体。
【請求項２５】
請求項２４に記載のキメラ抗原受容体を含む細胞傷害性細胞。