【手続補正書】
【提出日】平成30年10月5日(2018.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し、その５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能であり、抗体−ＣＤ７３複合体の内部移行を実質的に誘導せず、Ｆｃドメインを介した、ヒトＣＤ１６ポリペプチド（ＦｃγＩＩＩ受容体）への結合を実質的に欠く、単離抗体。
【請求項２】
二価方式でＣＤ７３ポリペプチド二量体に結合する、請求項１に記載の単離抗体。
【請求項３】
Ｆｃドメインを介した、ヒトＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２ＢおよびＣＤ６４ポリペプチドへの結合を実質的に欠く、請求項１または２に記載の単離抗体。
【請求項４】
細胞により発現されるヒトＣＤ７３ポリペプチドのアロステリック阻害剤として作用する、請求項１〜３の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項５】
細胞により発現されるＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性の、少なくとも８０％の低下を引き起こすことが可能であり、ＣＤ７３の酵素活性の中和が、ＡＭＰからアデノシンへの加水分解を定量することによりＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中の５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することによって判定される、請求項１〜４の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項６】
可溶性ヒトＣＤ７３ポリペプチドの５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である、請求項１〜５の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項７】
細胞性ＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性の中和に対する、１μｇ／ｍＬを超えないＥＣ５０を特徴とし、ＣＤ７３の酵素活性の中和が、ＡＭＰからアデノシンへの加水分解を定量することによりＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中の５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することによって判定される、請求項１〜６の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項８】
アデノシン５’−（α，β−メチレン）二リン酸（ＡＰＣＰ）またはＡＭＰである基質に結合させられるＣＤ７３ポリペプチドに結合する、請求項１〜７の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項９】
ＣＤ７３ポリペプチド二量体に対して１０倍大きいモル濃度過剰で提供される場合、可溶性ヒト二量体のＣＤ７３ポリペプチドの５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である、請求項１〜８の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項１０】
配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＣＤ７３ポリペプチドとの間の結合と比較して、Ａ９９、Ｅ１２９、Ｋ１３３、Ｅ１３４およびＡ１３５（配列番号１に対する）からなる群から選択される残基において突然変異を含む突然変異体ＣＤ７３ポリペプチドへの結合が低下している、請求項１〜９の何れか１項に記載の抗体。
【請求項１１】
（ａ）（ｉ）配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号４の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖と、を含むモノクローナル抗体；
（ｂ）（ｉ）配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２１の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖と、を含むモノクローナル抗体；
（ｃ）（ｉ）配列番号２８の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２９の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖と、を含むモノクローナル抗体；および
（ｄ）（ｉ）配列番号３６の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号３７の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖と、を含むモノクローナル抗体
からなる群から選択される、請求項１〜１０の何れか１項に記載の単離抗体。
【請求項１２】
請求項１〜１１の何れか１項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１の何れか１項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする、核酸。
【請求項１４】
請求項１〜１１の何れか１項に記載の抗体を産生する、ハイブリドーマまたは組み換え宿主細胞。
【請求項１５】
癌の処置における使用のための、請求項１〜１１の何れか１項に記載の単離抗体を含む医薬組成物または請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
癌の処置または予防における使用のための、細胞表面でヒトＣＤ７３に結合し、その５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、ＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の結合を減少させるために修飾されているＦｃドメインを含むものである、医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１１の何れか１項に記載の抗体または請求項１５または１６に記載の医薬組成物であって、前記抗体がＩｇＧ１であり、残基２３４、２３５および３３１で、または２３４、２３５および３２２で（ＥＵ付番）、１、２または３個の置換を含む、抗体または医薬組成物。
【請求項１８】
癌の処置または予防を必要とする個体における癌の処置または予防のための診断を補助する方法であって、
ａ）腫瘍環境内で、任意選択により腫瘍内で、および／または隣接組織、任意選択により腫瘍細胞内で、細胞のＣＤ７３ポリペプチド状態を判定すること、および
ｂ）腫瘍環境が、任意選択により参照レベルと比較して上昇しているレベルで、ＣＤ７３ポリペプチドを発現する細胞を含むと判定されると、前記個体が請求項１〜１１の何れか１項に記載の抗体または請求項１２、１５〜１７の何れか１項に記載の組成物を投与すべきと判定されること、
を含む、方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、前記腫瘍環境内のＣＤ７３ポリペプチド状態を判定することが、前記個体から得た癌組織および／または隣接組織を含む生体試料に含まれる細胞を、ＣＤ７３ポリペプチドに結合する抗体と接触させ、ＣＤ７３を発現する細胞を検出することを含む、方法。
【請求項２０】
前記腫瘍または癌が固形腫瘍である、請求項１５〜１７の何れか１項に記載の医薬組成物、または請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記腫瘍または癌が、白血病、膀胱癌、神経膠腫、神経膠芽腫、卵巣癌、メラノーマ、前立腺癌、甲状腺癌、食道癌または乳癌である、請求項１５〜１７の何れか１項に記載の医薬組成物、または請求項１８または１９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
ある実施形態において、ＣＤ７３中和抗体は、ＣＤ７３の細胞の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性の少なくとも６０％、７５％または８０％の低下を引き起こすことが可能であることを特徴とし得る。ある実施形態において、ＣＤ７３中和抗体は、１μｇ／ｍＬを超えない、任意選択により０．５μｇ／ｍＬを超えない、任意選択により０．２μｇ／ｍＬを超えない、細胞により発現されるＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性の阻害に対するＥＣ５０を特徴とし得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
任意選択により、細胞により発現されるＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性の阻害は、ＡＭＰからアデノシンへの加水分解を定量することによるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することによって判定される（例えば実施例５を参照）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
ある実施形態において、細胞表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し、可溶性ヒトＣＤ７３ポリペプチドの５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である単離抗体が提供される。ある実施形態において、本抗体は、可溶性ＣＤ７３のオリゴマー化を誘導しない。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
ある実施形態において、細胞表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し、細胞性ＣＤ７３（細胞により発現されるＣＤ７３）の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である単離抗体が提供される。ある実施形態において、特異的に結合し、細胞表面でヒトＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和し、ＣＤ７３への結合時にＣＤ７３発現細胞に内部移行されない単離抗体が提供される。本抗体は、ＣＤ７３のマルチマー化および続いて起こる内部移行を引き起こさない。ある実施形態において、溶液中で組み換えヒトＣＤ７３ポリペプチドに結合し、その酵素活性を阻害可能である抗体が提供され、この抗体は、ＣＤ７３発現細胞中に内部移行されない。ある実施形態において、非内部移行抗体は、ＣＤ７３に二価方式で結合する。ある実施形態において、この抗体は非枯渇抗体、例えばＦｃサイレント抗体である。この抗体は、さらにＣＤ７３ポリペプチド：抗ＣＤ７３抗体オリゴマーの誘導に依存することなく、溶液中で二量体のヒトＣＤ７３ポリペプチドの５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
ある態様において、ＡＭＰと予め温置した細胞の表面でヒトＣＤ７３に特異的に結合し、その５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和可能である単離抗体が提供される。任意選択により、５’−エクトヌクレオチダーゼ活性を中和することは、ＡＭＰからアデノシンへの加水分解を定量することによりＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における５’エクトヌクレオチダーゼ活性の中和を評価することによって、判定される（例えば実施例５を参照）。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４６】
抗体がＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ酵素活性を阻害する能力は、あるいはまたはさらに、細胞アッセイ（ＣＤ７３を発現する細胞を使用）でも試験し得る。有利に、ＣＤ７３の内部移行を引き起こすことによりＣＤ７３を阻害する抗体を選択する可能性を低下させるため、酵素の活性を遮断する抗体を同定するために最初に細胞不含アッセイにおいて抗体を試験またはスクリーニングし得、次いで細胞アッセイにおいて精製抗体として試験し得る。細胞アッセイは、本明細書中の実施例で示されるように行い得る。例えば、ＣＤ７３発現細胞株（例えばＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株）を抗ＣＤ７３抗体の存在下で平底９６ウェルプレートに播種し、温置する。ＡＭＰを細胞に添加し、４℃で温置する（ＣＤ７３下方調整を回避するため）。次いでプレートを遠心し、上清を平底９６ウェル培養プレートに移す。次に、ＡＭＰからアデノシンへの加水分解により生成した遊離リン酸を定量する。抗体存在下でのＡＭＰからアデノシンへの加水分解の減少は、その抗体が細胞性ＣＤ７３を阻害することを示す。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６４】
実施例５：細胞性ＣＤ７３活性遮断
パートＡ：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍細胞における遮断
抗ＣＤ７３抗体が細胞表面発現ＣＤ７３の５’−エクトヌクレオチダーゼ酵素活性を中和する能力を評価した。ＣＤ７３を発現するモデル腫瘍細胞株として、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍細胞株を使用した。