【手続補正書】
【提出日】平成30年6月4日(2018.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２６】
例示的な組換えタンパク質単離システム
本明細書に記載されている方法を行うのに有用で、ＭＣＣＳまたはＭＣＣＳ１およびＭＣＣＳ２を含む生物学的製造システムの例は、米国仮特許出願第６１／７７５，０６０号、米国仮特許出願第６１／８５６，３９０号、米国特許出願第１４／１９５，４８１号、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０１９９０９および米国仮特許出願第６１／９２８，９０６号に記載されている（参照により組み入れられている）。全体のシステムは、例えば、合計４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０のクロマトグラフィーカラムを含むことができる。例えば、ＭＣＣＳ、ＭＣＣＳ１および／またはＭＣＣＳ２は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つまたは１０のクロマトグラフィーカラムを含むことができる（または、それぞれが、含むことができる）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３２】
ＭＣＣＳまたはＭＣＣＳ１に存在しているクロマトグラフィーカラムおよび／またはクロマトグラフィー膜は接続されるか、または切り替え機構（例えば、カラムの切り替え機構）により、互いに移動される。ＭＣＣＳまたはＭＣＣＳ１はまた、１つまたはそれ以上（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）のポンプ（例えば、自動ポンプ、例えば自動ペリスタポンプ）も含むことができる。カラムの切り替え行為（ｅｖｅｎｔ）は、ＭＣＣＳまたはＭＣＣＳ１を通過する流体（例えば、ＭＣＣＳまたはＭＣＣＳ１におけるクロマトグラフィーカラムおよび／またはクロマトグラフィー膜の１つまたはそれ以上への流入物および／または溶離液）における組換えタンパク質のある種のレベルに対応するＵＶ吸光度によって検出される組換えタンパク質のレベルの検出、液体（例えば、緩衝液）の比体積、または特定の経過時間を契機とすることができる。カラムの切り替えは、一般に、ＭＣＣＳまたはＭＣＣＳ１における、少なくとも２つの異なるクロマトグラフィーカラムおよび／またはクロマトグラフィー膜（例えば、ＭＣＣＳ１またはＭＣＣＳに存在している、２つもしくはそれ以上の異なるクロマトグラフィーカラムおよび／またはクロマトグラ
フィー膜）が、この工程の少なくとも一部の間の実質的に同じ時間に、様々な工程（例えば、平衡、搭載、溶出または洗浄）を通過することが可能となる機構を意味する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シードトレイン法であって、
（ａ）槽内に含まれている第１の培養培地に複数の組換え哺乳動物細胞を加えて第１の細胞培養物を得る工程；
（ｂ）第１の細胞培養物を約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約５．０×１０６細胞／ｍＬの細胞密度範囲まで回分培養する工程；
（ｃ）潅流バイオリアクター内に含まれている第２の培養培地に、ある体積の工程（ｂ）の第１の細胞培養物を加えて、約０．２５×１０６細胞／ｍＬ〜約０．５×１０６細胞／ｍＬの範囲の初期細胞密度を有する第２の細胞培養物を得る工程；
（ｄ）第２の細胞培養物を約５×１０６細胞／ｍＬ〜約１２０×１０６細胞／ｍＬの間の細胞密度範囲まで潅流培養する工程；および
（ｅ）生産用バイオリアクター内に含まれている第３の培養培地に、ある体積の工程（ｄ）の第２の細胞培養物を加えて、約０．２５×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬの範囲の初期細胞密度を有する生産細胞培養物を得る工程
を含む前記シードトレイン法。
【請求項２】
（ａ）における複数の組換え哺乳動物細胞を加える工程は：
凍結細胞バンクを解凍する工程；および
第１の培養培地に、ある体積の解凍細胞バンクを加える工程
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）における複数の組換え哺乳動物細胞を加える工程は、第１の培養培地に複数の組換え哺乳動物細胞を含むある体積の第３の細胞培養物を加える工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
（１）槽内に含まれている第４の培養培地に複数の組換え哺乳動物細胞を加えて、第３の細胞培養物を得る工程；
（２）（１）の第３の細胞培養物を約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約５．０×１０６細胞／ｍＬの細胞密度範囲まで回分培養する工程
をさらに含み、
ある体積の（２）における第３の細胞培養物が（ａ）において第１の培養培地に加えられる、
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
（１）における複数の組換え哺乳動物細胞を加える工程は：
凍結細胞バンクを解凍する工程；および
第４の培養培地に、ある体積の解凍細胞バンクを加える工程
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）における第１の細胞培養物は、約１．０Ｌ〜約５０Ｌの体積範囲を有し；
（ｃ）における第２の細胞培養物は、約５Ｌ〜約６００Ｌの体積範囲を有し；および／または
（ｅ）における生産細胞培養物は、約５０Ｌ〜約２０，０００Ｌの体積範囲を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
（ａ）における槽は、約１．５Ｌ〜約１００Ｌの内部容積範囲を有し；
（ｃ）における潅流バイオリアクターは、約７．５Ｌ〜約１，０００Ｌの内部容積範囲を有し；および／または
（ｅ）における生産用バイオリアクターは、約１５０Ｌ〜約２５，０００Ｌの内部容積範囲を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（ｅ）における初期細胞密度は、約２．０×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬの範囲にあり；および／または
（ｅ）における初期細胞密度は定常状態の生産細胞密度の少なくとも１０％である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
組換えタンパク質を生産する方法であって：
（ａ）槽内に含まれている第１の培養培地に複数の組換え哺乳動物細胞を加えて第１の細胞培養物を得る工程；
（ｂ）第１の細胞培養物を約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約５．０×１０６細胞／ｍＬの細胞密度範囲まで回分培養する工程
（ｃ）潅流バイオリアクター内に含まれている第２の培養培地に、ある体積の工程（ｂ）の第１の細胞培養培地を加えて、約０．２５×１０６細胞／ｍＬ〜約０．５×１０６細胞／ｍＬの範囲の初期細胞密度を有する第２の細胞培養物を得る工程；
（ｄ）第２の細胞培養物を約５×１０６細胞／ｍＬ〜約６０×１０６細胞／ｍＬの間の細胞密度範囲まで潅流培養する工程；
（ｅ）生産用バイオリアクター中に含まれる第３の培養培地に、ある体積の工程（ｄ）の第２の細胞培養物を加えて、約０．２５×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬの範囲の初期細胞密度を有する生産細胞培養物を得る工程；
（ｆ）組換え哺乳動物細胞が組換えタンパク質を分泌することが可能となる条件下で、生産細胞培養物を潅流培養する工程；および
（ｇ）生産細胞培養物から組換えタンパク質を収穫する工程
を含む前記方法。
【請求項１０】
（ａ）における複数の組換え哺乳動物細胞を加える工程は：
凍結細胞バンクを解凍する工程；および
第１の培養培地に、ある体積の解凍細胞バンクを加える工程
を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）における複数の組換え哺乳動物細胞を加える工程は、第１の培養培地に複数の組換え哺乳動物細胞を含むある体積の第３の細胞培養物を加える工程を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
（１）槽内に含まれている第４の培養培地に複数の組換え哺乳動物細胞を加えて、第３の細胞培養物を得る工程；
（２）（１）の第３の細胞培養物を約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約５．０×１０６細胞／ｍＬの細胞密度範囲まで回分培養する工程
をさらに含み、
ある体積の（２）における第３の細胞培養物が（ａ）において第１の培養培地に加えられる、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（１）における複数の組換え哺乳動物細胞を加える工程は：
凍結細胞バンクを解凍する工程；および
第４の培養培地に、ある体積の解凍細胞バンクを加える工程
を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）における第１の細胞培養物は、約１．０Ｌ〜約５０Ｌの体積範囲を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）における槽は、約１．５Ｌ〜約１００Ｌの内部容積範囲を有し；
（ｃ）における潅流バイオリアクターは、約７．５Ｌ〜約１，０００Ｌの内部容積範囲を有し；および／または
（ｅ）における生産用バイオリアクターは、約１５０Ｌ〜約２５，０００Ｌの内部容積範囲を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
（ｅ）における初期細胞密度は、約２．０×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬの範囲にあり；および／または
（ｅ）における初期細胞密度は定常状態の生産細胞密度の少なくとも１０％である、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
（ｆ）における潅流培養により、生産細胞培養物は、約１日間〜約１０日間の間の期間で定常状態の生産細胞密度に到達する、請求項９に記載の方法。
【請求項１８】
（ｇ）における収穫は、生産用バイオリアクターからの培養培地を抜き取る工程を含む、請求項９に記載の方法
【請求項１９】
取り出された培養培地から組換えタンパク質を単離する工程をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
単離は、統合された連続法を使用して行われる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
単離組換えタンパク質を医薬剤に製剤化する工程をさらに含む、請求項１９に記載の方法。