【手続補正書】
【提出日】平成30年8月6日(2018.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌｒｐ５／６とフリズルド（Ｆｚｄ）受容体を二量体化させる水溶性カノニカルＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項２】
カノニカルＷｎｔシグナリングを直接的に活性化する、請求項１に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項３】
前記アゴニストがポリペプチドを含む、請求項２に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項４】
前記アゴニストが、１種または複数種のＦｚｄタンパク質に対し高親和性を有する結合ドメインと、Ｌｒｐ５およびＬｒｐ６タンパク質の一方または両方に対し高親和性を有する結合ドメインとを含むポリペプチドを含み、ここで、該結合ドメインは、直接的に接続されている、またはリンカーを介して接続されている、請求項３に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項５】
前記アゴニストが、中立物質または陰性対照によって誘導されるβ−カテニンシグナリングと比較して、ヒト細胞におけるβ−カテニンシグナリングを少なくとも５０％増強し、任意選択で、中立物質または陰性対照によって誘導されるβ−カテニンシグナリングと比較して、ヒト細胞におけるβ−カテニンシグナリングを少なくとも１０倍増強する、請求項１から４のいずれかに記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項６】
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、少なくとも約１×１０−７ＭのＫＤで、１種または複数種のＦｚｄタンパク質に結合する、および／またはＬｒｐ５／６結合ドメインが、Ｌｒｐ５およびＬｒｐ６タンパク質の一方または両方に対して少なくとも約１×１０−７ＭのＫＤで結合する、請求項４に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項７】
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、ｄｅ  ｎｏｖｏ設計されたＦｚｄ結合ドメイン、ノッチンを操作した足場、またはノリンタンパク質もしくはそれに由来する結合性断片である、請求項４に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項８】
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、抗体由来の結合タンパク質、任意選択で、抗Ｆｚｄ抗体の６個のＣＤＲ領域を含むｓｃＦｖであり、任意選択で、該Ｆｚｄ抗体が、汎特異的フリズルド抗体ＯＭＰ−１８Ｒ５またはナノボディ由来の結合ドメインである、請求項４に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項９】
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、２種またはそれを超える異なるフリズルドタンパク質に結合する、または目的のフリズルドタンパク質に対し選択的である、請求項４に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項１０】
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ｄｅ  ｎｏｖｏ設計されたＦｚｄ結合ドメイン、ノッチンを操作した足場、またはＤＫＫタンパク質の結合部分、任意選択で、ヒトＤＫＫ１のＣ末端ドメインである、請求項４に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項１１】
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、抗体由来の結合タンパク質であり、任意選択で、ナノボディ由来の結合ドメインである、請求項４に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項１２】
前記結合ドメイン同士が、２〜１００アミノ酸を含むペプチドリンカーによって接続されている、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項１３】
前記リンカーが、約１００オングストローム未満の結合ドメイン間の距離を強制する、請求項１２に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか一項に記載のＷｎｔシグナリングアゴニストと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
Ｗｎｔシグナリングを活性化または増強するための組成物であって、前記組成物は、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＷｎｔシグナリングアゴニストを含み、フリズルド受容体を発現する細胞と接触されることを特徴とする、組成物。
【請求項１６】
請求項１から１３のいずれか一項に記載のＷｎｔシグナリングアゴニストを含む、疾患または障害を処置または防止することを必要とする被験体における疾患または障害を処置または防止するための組成物であって、任意選択で、該疾患または障害は、Ｗｎｔシグナリング低下に関連する、組成物。
【請求項１７】
前記被験体が、放射線照射／化学療法傷害、粘膜炎、炎症性腸疾患、短腸症候群、遺伝性腸障害、セリアック病、代謝性疾患、遺伝性症候群、ウイルス感染症（例えば、ｈｅｐＢ／Ｃ）、中毒状態、アルコール性肝臓、脂肪肝、肝硬変、感染症、悪性貧血、潰瘍、糖尿病、糖尿病性足部潰瘍（例えば、難治性糖尿病性足部潰瘍）、島細胞の破壊、骨質量の損失（骨粗鬆症）、機能的皮膚の損失、毛髪の損失、機能的肺組織の損失、腎臓組織の損失（例えば、急性細管壊死）、内耳における感覚性細胞の損失、関節障害、骨粗鬆症および関連する骨疾患、禿頭症ならびに移植片対宿主病から選択される疾患または障害を有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１から１３のいずれか一項に記載のＷｎｔシグナリングアゴニストを含む、創傷治癒および／または組織生成を増強することを必要とする被験体における創傷治癒および／または組織生成を増強するための組成物。
【請求項１９】
オルガノイドまたは組織を成長させるための方法であって、幹細胞を、Ｌｒｐ５／６とフリズルド（Ｆｚｄ）受容体を二量体化させる水溶性カノニカルＷｎｔシグナリングアゴニストを含む細胞培養培地中で培養するステップを含む、方法。
【請求項２０】
Ｌｒｐ５／６とフリズルド（Ｆｚｄ）受容体を二量体化させる水溶性カノニカルＷｎｔシグナリングアゴニストを含む培養培地であって、任意選択で、該培養培地は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子−アルファ（ＴＧＦ−アルファ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、例えば塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ヒト増殖因子（ＨＧＦ）およびケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）からなる群より選択される増殖因子をさらに含む、培養培地。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の一部の態様では、それを必要とする被験体における創傷治癒および／または組織生成を増強するための方法であって、有効量のｗｎｔシグナリングアゴニストを被験体に与えるステップを含む方法が提供される。本発明の組成物および方法の利益は、標的化の特異性およびシグナリングアゴニストの水溶性であり、このようなｗｎｔシグナリングアゴニストは、ネイティブｗｎｔタンパク質と同じ細胞を標的とすることができる、または所望の組織におけるｗｎｔシグナリングを選択的に活性化することができる。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
Ｌｒｐ５／６とフリズルド（Ｆｚｄ）受容体を二量体化させる水溶性カノニカルＷｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２）
カノニカルｗｎｔシグナリングを直接的に活性化する、項目１に記載のＷｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目３）
分子がポリペプチドを含む、項目２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目４）
前記ポリペプチドが、１種または複数種のＦｚｄタンパク質に対し高親和性を有する結合ドメインと、Ｌｒｐ５およびＬｒｐ６タンパク質の一方または両方に対し高親和性を有する結合ドメインとを含む、項目３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目５）
前記結合ドメイン同士が、直接的に接続されている、項目４に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目６）
前記結合ドメイン同士が、リンカーを介して接続されている、項目４に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目７）
代替物が、中立物質または陰性対照によって誘導されるβ−カテニンシグナリングと比較して、β−カテニンシグナリングを少なくとも５０％増強する、項目１から６のいずれかに記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目８）
前記代替物が、中立物質または陰性対照によって誘導されるβ−カテニンシグナリングと比較して、β−カテニンシグナリングを少なくとも１０倍増強する、項目７に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目９）
前記代替物が、中立物質または陰性対照によって誘導されるβ−カテニンシグナリングと比較して、β−カテニンシグナリングを少なくとも１０００倍増強する、項目７に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１０）
前記代替物が、ヒト細胞におけるβ−カテニンシグナリングを増強する、項目７から９のいずれかに記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１１）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、少なくとも約１×１０−７ＭのＫＤで、１種または複数種のＦｚｄタンパク質に結合する、項目４に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１２）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、ポリペプチドである、項目１１に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１３）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、ｄｅ  ｎｏｖｏ設計されたＦｚｄ結合ドメインである、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１４）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、抗体由来の結合タンパク質である、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１５）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、ナノボディ由来の結合ドメインである、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１６）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、ノッチンを操作した足場である、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１７）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、ノリンタンパク質またはそれに由来する結合性断片である、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１８）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、所望の特異性のために親和性選択された、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目１９）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、２種またはそれを超える異なるフリズルドタンパク質に結合する、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２０）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、目的のフリズルドタンパク質に対し選択的である、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２１）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、抗Ｆｚｄ抗体の６個のＣＤＲ領域を含むｓｃＦｖである、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２２）
前記Ｆｚｄ結合ドメインが、汎特異的フリズルド抗体ＯＭＰ−１８Ｒ５の６個のＣＤＲ領域を含むｓｃＦｖである、項目１２に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２３）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、少なくとも約１×１０−７ＭのＫＤで、Ｌｒｐ５およびＬｒｐ６タンパク質の一方または両方に結合する、項目４に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２４）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ポリペプチドである、項目２３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２５）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ｄｅ  ｎｏｖｏ設計されたＦｚｄ結合ドメインである、項目２３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２６）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、抗体由来の結合タンパク質である、項目２３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２７）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ナノボディ由来の結合ドメインである、項目２３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２８）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ノッチンを操作した足場である、項目２３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目２９）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ＤＫＫタンパク質の結合部分を含む、項目２３に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目３０）
前記Ｌｒｐ５／６結合ドメインが、ヒトＤＫＫ１のＣ末端ドメインを含む、項目２９に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目３１）
前記結合ドメイン同士が、２〜１００アミノ酸を含むペプチドリンカーによって接続されている、項目１から３０のいずれか一項に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目３２）
前記リンカーが、約１００オングストローム未満の結合ドメイン間の距離を強制する、項目３１に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目３３）
前記結合ドメイン同士が、非ペプチドリンカーによって接続されている、項目１から３０のいずれか一項に記載のｗｎｔシグナリングアゴニスト。
（項目３４）
項目１から３３のいずれか一項に記載のｗｎｔシグナリングアゴニストと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目３５）
ｗｎｔシグナリングを活性化または増強する方法であって、有効用量の項目１から３３のいずれか一項に記載のｗｎｔシグナリングアゴニストと、フリズルド受容体を発現する細胞とを接触させるステップを含む方法。
（項目３６）
疾患または障害を処置または防止することを必要とする被験体における疾患または障害を処置または防止する方法であって、有効量の項目１から３３のいずれか一項に記載のｗｎｔシグナリングアゴニストを該被験体に与えるステップを含む方法。
（項目３７）
前記被験体が、ｗｎｔシグナリング低下に関連する疾患または障害を有する、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記被験体が、放射線照射／化学療法傷害、粘膜炎、炎症性腸疾患、短腸症候群、遺伝性腸障害、セリアック病、代謝性疾患、遺伝性症候群、ウイルス感染症（例えば、ｈｅｐＢ／Ｃ）、中毒状態、アルコール性肝臓、脂肪肝、肝硬変、感染症、悪性貧血、潰瘍、糖尿病、糖尿病性足部潰瘍（例えば、難治性糖尿病性足部潰瘍）、島細胞の破壊、骨質量の損失（骨粗鬆症）、機能的皮膚の損失、毛髪の損失、機能的肺組織の損失、腎臓組織の損失（例えば、急性細管壊死）、内耳における感覚性細胞の損失、関節障害、骨粗鬆症および関連する骨疾患、禿頭症ならびに移植片対宿主病から選択される疾患または障害を有する、項目３６または項目３７に記載の方法。
（項目３９）
創傷治癒および／または組織生成を増強することを必要とする被験体における創傷治癒および／または組織生成を増強する方法であって、有効量の項目１から３３のいずれか一項に記載のｗｎｔシグナリングアゴニストを該被験体に与えるステップを含む方法。