【手続補正書】
【提出日】平成30年5月18日(2018.5.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における神経線維腫症(NF)を防ぐ、治療する、又は管理するための、或いは、NFと診断された対象における神経線維腫の成長を阻害するための医薬組成物であって、ヒトKIT受容体(配列番号:1)に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む、前記医薬組成物。
【請求項２】
対象における中枢神経系又は神経系の好酸球又はマスト細胞関連障害を防ぐ、治療する、又は管理するための医薬組成物であって、ヒトKIT受容体(配列番号:1)に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む、前記医薬組成物。
【請求項３】
中枢神経系又は神経系のマスト細胞関連障害と診断された対象における炎症を軽減、又は該対象におけるマスト細胞活性化を阻害するための医薬組成物であって、ヒトKIT受容体(配列番号:1)に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む、前記医薬組成物。
【請求項４】
前記中枢神経系又は神経系のマスト細胞関連障害が、多発性硬化症(MS)又はNFである、請求項2又は3記載の医薬組成物。 
【請求項５】
前記NFが、NF1、NF2、又は神経鞘腫症である、請求項1又は4記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項1〜5のいずれか1項記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記抗体が、配列番号:2〜4をそれぞれ含むVL CDR 1〜3を含む軽鎖可変領域(「VL」)、及び配列番号:5〜7をそれぞれ含むVH CDR 1〜3を含む重鎖可変領域(「VH」)を含む、請求項1〜6のいずれか1項記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗体が、配列番号:13、14、15、及び16からなる群から選択されるVL配列を含むVL;及び配列番号:8、9、10、11、及び12からなる群から選択されるVH配列を含むVHを含む、請求項7記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記対象が、ヒト成人である、請求項1〜8のいずれか1項記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記対象が、子供である、請求項1〜8のいずれか1項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ヒトKIT受容体(配列番号:1)に特異的に結合する抗体を含む、請求項1〜10のいずれか1項記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
凍結乾燥粉末は、本明細書に提供する抗体を適切な溶媒に溶解させることによって調製される。いくつかの実施態様では、凍結乾燥粉末は、滅菌されている。該溶媒は、粉末、又は粉末から調製された再構成された溶液の、安定性又は他の薬理学的要素を向上させる賦形剤を含有することができる。使用することができる賦形剤としては、限定はされないが、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、又は他の適切な薬剤が挙げられる。溶媒は、クエン酸塩、リン酸ナトリウム若しくはカリウム、又は、一実施態様では、約中性のpHの当業者に公知の他のこうした緩衝剤などの、緩衝剤を含有することもできる。その後の溶液の滅菌濾過、それに続く当業者に公知の標準の条件下での凍結乾燥によって、所望の製剤が提供される。一実施態様では、得られる溶液は、凍結乾燥用のバイアルに配分されることとなる。各バイアルは、単回投薬量又は複数回投薬量の化合物を含有することとなる。凍結乾燥粉末は、適当な条件下、例えば、約4℃から室温で保管することができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１５】
LAD2細胞(1条件あたり500,000個のLAD2細胞)を、SCFの非存在下で、StemPro Nutrient Supplement、1×ペニシリン、1×ストレプトマイシン、及び1×L-グルタミンを伴うStemPro-34無血清培地中で、標準の条件(37℃、5% CO2)下で一晩インキュベートした。ELISAプレートを調製するために、100ng/mLの抗KIT抗体(Neomarkers社、1mg/mL #MS-289-PABX)(100μLのPBS中)を、白色NUNCマキシソーププレートの各ウェルに、4℃で一晩結合させた。一晩のインキュベーション後、細胞を、イヌ科動物、ネコ科動物、サル、及びヒトKITの細胞外ドメインと結合するがマウスKITの細胞外ドメインとは結合しない、先の表1に表したCDRを含むIgG1抗体(本明細書では「抗KIT-1」ともいう)の段階希釈物と共に又は伴わずに、標準の条件下で4時間インキュベートした。抗体インキュベーションの間、ELISAプレートを、ウェルにつき100μLのブロッキング緩衝液(3%ウシ血清アルブミン、「BSA」、tweenを含むトリス緩衝生理食塩水すなわち「TBST」中)を用いて、室温で1時間ブロッキングした。次いで、ブロッキング緩衝液を除去し、プレートを、TBSTで1回洗浄した。洗浄後、各ウェルに、50μLの希釈緩衝液(1mM NaVO4を含むTBST中の1%BSA))を添加した。次に、細胞を、37℃で10分間、12μLの50μg/mL SCFと共に又は伴わずにインキュベートした。インキュベーション後、細胞及び上清を収集し、細胞をペレット化させ、200μLの溶解緩衝液(25mM Tris pH 7.4、150mM NaCl、1% Triton X-100、1mM EDTA、1mMオルトバナジン酸及びプロテアーゼ阻害剤に溶解した。50μLの溶解物を、ELISAプレートの適当なウェルに分注し、4℃で一晩インキュベートした。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１６】
ELISAプレートをTBSTで3回洗浄し、続いて、ウェルあたり100μLの抗リン酸化チロシン抗体(1% BSA及び1mM NaVO4を含むTBSTで1:1000希釈したもの)と共に、室温で2時間インキュベートした。次いで、プレートをTBSTで3回洗浄し、続いて、ウェルあたり100μLのImmunoPureストレプトアビジン-HRP抗体(Thermo Scientific社 cat #21126)(1% BSA及び 1mM NaVO4を含むTBSTで1:5000希釈したもの)と共に、1時間、インキュベートした。プレートをTBSTで3回洗浄した。最後に、各ウェルに100μLの1:1 Western Pico Reagentを添加し、BioTek社のSynergy HTプレートリーダー上で、Lumi Gloプログラムでプレートを読み取った。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１８】
LAD2細胞を、1×ペニシリンストレプトマイシン及びL-グルタミンを含有するStemPro-34-SFM Cytokine-Free Media(Life Technologies社によるGibco)中の100ng/mLのビオチン化ヒト骨髄腫IgEと共に、標準の条件下で一晩インキュベートした。次いで、細胞を37℃HEPES緩衝液(pH 7.4)で3回洗浄し、計数し、1ウェルにつき、70μLのHEPES緩衝液(pH 7.4)あたり10,000細胞で再懸濁し、2枚の96ウェルプレートに分注した。それに続く細胞のインキュベーションはすべて、CO2の非存在下で実施した。第1列及び2列の各ウェルに、それぞれ20μL及び10μLのHEPES緩衝液(pH 7.4)を添加し、プレートを37℃で10分間インキュベートした。続いて、細胞を、抗KIT-1抗体の段階希釈物と共に37℃で1時間インキュベートし、それに続いて10ng/mLのSCFで37℃で30分間刺激を行った。次に、細胞を、ストレプトアビジンの段階希釈物と共に37℃で30分間インキュベートした。続いて、細胞を、4℃で450×gで5分間遠心し、反応を停止及び細胞を沈降させた。350μgのp-ニトロフェニルN-アセチル-β-D-グルコサミド(PNAG)をクエン酸緩衝液に溶解したものを、2枚の96ウェルプレートに、ウェルあたり100μLで分注した。50μLの細胞を含まない上清を、100μL(350μg)のp-ニトロフェニルN-アセチル-β-D-グルコサミドをクエン酸緩衝液に溶解したものを含有する96ウェルプレートに添加し、37℃で90分間インキュベートした。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４８】
吸入器によってもたらされる肺力学を使用して、気管支誘発に対する気道応答を測定した。気管支誘発は、ギョウギシバアレルゲン(BGA)を用いて第0日に、また、メタコリンを用いて第28日に実施した。気道応答性を評価するために、BGAを用いた又はメタコリンを用いた気管支誘発に応答する、吸入器によって算出された気道抵抗測定値を収集した。気道応答性が、BGA及びメタコリンについてのベースラインの、それぞれ150%又は200%超に到達するまで、測定値を収集した。データを、ベースライン気道応答をそれぞれ150% 又は200%増大させるために必要とされる、有効な濃度のBGA又はメタコリンとして算出した。抗KIT-1抗体で治療されたネコについて、プラセボで治療されたネコと比較して、急性又は慢性期中、気道応答性の有意な低下は認められなかった。