【手続補正書】
【提出日】平成30年7月26日(2018.7.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
−細胞外ＲＯＲ１リガンド結合ドメインに融合された高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）のアルファ鎖由来の膜貫通ポリペプチド；
−シグナル伝達ドメインに融合されたＦｃεＲＩのガンマ鎖由来の第２の膜貫通ポリペプチド、
−共刺激ドメインを含むＦｃεＲＩのベータ鎖由来の第３の膜貫通ポリペプチド
を含み、
ＦｃεＲＩの前記アルファ鎖に融合された前記ＲＯＲ１リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１に対する特異性を付与する重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）を含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり、
前記ＶＨが、配列番号：２８（Ｄ１０）、配列番号：１２（２Ａ２）、配列番号：２０（４Ａ５）、配列番号：３６（Ｇ６）、配列番号：４４（Ｇ３）、配列番号：５２（Ｈ１０）、配列番号：６０（２Ａ４）および配列番号：６８（１Ｃ１１）から選択される１つと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を示すポリペプチド配列を含み、ならびに
前記ＶＬが、配列番号：３２（Ｄ１０）、配列番号：１６（２Ａ２）、配列番号：２４（４Ａ５）、配列番号：４０（Ｇ６）、配列番号：４８（Ｇ３）、配列番号：５６（Ｈ１０）、配列番号：６４（２Ａ４）および配列番号：７２（１Ｃ１１）から選択される１つと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を示すポリペプチドを含む、
ＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体（ｍｃＣＡＲ）。
【請求項２】
前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ配列番号：２８および配列番号：３２（Ｄ１０）と、ならびにそれぞれ配列番号：１２もしくは配列番号：１６（２Ａ２）と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を示すポリペプチド配列を含む、請求項１に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項３】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、
−配列番号：２９（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号：３０（ＣＤＲ−Ｈ２）および配列番号：３１（ＣＤＲ−Ｈ３）のマウスモノクローナル抗体Ｄ１０由来のＣＤＲを含むＶＨ鎖、ならびに配列番号３３（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号：３４（ＣＤＲ−Ｌ２）および配列番号：３５（ＣＤＲ−Ｌ３）のマウスモノクローナル抗体Ｄ１０由来のＣＤＲを含むＶＬ鎖、
または
−配列番号：１３（ＣＤＲ−Ｈ１）、配列番号：１４（ＣＤＲ−Ｈ２）および配列番号：１５（ＣＤＲ−Ｈ３）のマウスモノクローナル抗体２Ａ２由来のＣＤＲを含むＶＨ鎖、ならびに配列番号：１７（ＣＤＲ−Ｌ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ−Ｌ２）および配列番号：１９（ＣＤＲ−Ｌ３）のマウスモノクローナル抗体２Ａ２由来のＣＤＲを含むＶＬ鎖、
を含む、請求項１または請求項２に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項４】
ＦｃεＲＩの前記アルファ鎖が、ＣＤ８α、ＩｇＧ１またはＦｃγＲＩＩＩαタンパク質由来のヒンジによって、前記細胞外リガンド結合ドメインに融合されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項５】
前記ヒンジが、配列番号：２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を示すポリペプチド配列を含む、請求項４に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項６】
ＦｃεＲＩのガンマ鎖に融合された前記シグナル伝達ドメインが、ＴＣＲゼータ鎖、ＦＣεＲβ鎖、ＦｃεＲＩγ鎖に由来し、または免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項７】
前記シグナル伝達ドメインがＣＤ３ゼータに由来する、請求項６に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項８】
前記シグナル伝達ドメインが、配列番号：９と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を示すポリペプチド配列を含む、請求項７に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項９】
前記第２または第３のポリペプチドが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ８、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、およびそれらの任意の組み合わせから選択される共刺激分子の細胞質ドメイン由来の共刺激ドメインを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項１０】
前記共刺激ドメインが４−１ＢＢに由来し、配列番号：６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を示すポリペプチド配列を含む、請求項９に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体をコードするポリペプチドであって、
配列番号：７８（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  Ｄ１０）、配列番号：７６（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  ２Ａ２）、配列番号：７７（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  ４Ａ５）、配列番号：７９（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  Ｇ６）、配列番号：８０（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  Ｇ３）、配列番号：８１（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  Ｈ１０）、配列番号：８２（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  ２Ａ４）および配列番号：８３（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  １Ｃ１１）の全長アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を示すポリペプチド配列を含む、ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号：７８（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  Ｄ１０）および配列番号：７６（抗ＲＯＲ１  ｍｃＣＡＲ  ２Ａ２）の全長アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を示すポリペプチド配列を含む、請求項１１に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体をコードするポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体をコードする核酸を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
免疫細胞を操作する方法であって、
（ａ）免疫細胞を提供すること、
（ｂ）前記細胞の表面において、少なくとも１つの請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体を発現させること
を含む、方法。
【請求項１５】
少なくとも１つの請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＲＯＲ１特異的多重鎖キメラ抗原受容体を含む、単離された免疫細胞。
【請求項１６】
ＮＫ細胞、炎症性Ｔリンパ球、細胞傷害性Ｔリンパ球、制御性Ｔリンパ球またはヘルパーＴリンパ球に由来する、請求項１５に記載の単離された免疫細胞。
【請求項１７】
白血病などのＲＯＲ１発現細胞により特徴付けられる前悪性または悪性の癌状態を治療のための医薬を製造するための、請求項１５または１６に記載の単離された免疫細胞の使用。
【請求項１８】
前悪性または悪性の癌状態が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）およびｔ（１；１９）染色体転座を有する急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）からなる群から選択される血液の癌状態である、請求項１７に記載の単離された免疫細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
【表６】
2017522893.tif 000001
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
適切な膜貫通ポリペプチドの顕著な特徴は、免疫細胞、特に、リンパ球細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面において発現され、所定の標的細胞に対する免疫細胞の細胞応答を指令するために一緒に相互作用する能力を含む。細胞外リガンド結合ドメインおよび／またはシグナル伝達ドメインを含む本発明の多重鎖ＣＡＲの異なる膜貫通ポリペプチドは、一緒に相互作用して、標的リガンドとの結合後のシグナル伝達に関与し、免疫応答を誘導する。膜貫通ドメインは、天然起源に由来し得るか、または合成起源に由来し得る。膜貫通ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来し得る。非限定的な例として、膜貫通ポリペプチドは、α、β、γ、もしくはδなどのＴ細胞受容体のサブユニット、ＣＤ３複合体を構成するポリペプチド、ＩＬ２受容体のｐ５５（α鎖）、ｐ７５（β鎖）、もしくはγ鎖、Ｆｃ受容体、特に、Ｆｃγ受容体ＩＩＩのサブユニット鎖またはＣＤタンパク質であり得る。あるいは、膜貫通ドメインは、合成であってもよく、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含み得る。