【手続補正書】
【提出日】平成30年3月20日(2018.3.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
大きなカーゴを真核細胞に送達する方法であり、前記方法は、
多孔質膜の片側に配置された前記細胞を準備することと、
前記多孔質膜の反対側にあるリザーバ室に配置された溶液中の前記カーゴを準備することと、
前記カーゴを前記多孔質膜を構成する孔を通過させるのに十分な圧力を前記リザーバ室に印加することとを含み、前記カーゴは細胞膜を通って前記細胞に入る、前記方法。
【請求項２】
前記リザーバ室の容積は、約１０μＬから約５００μＬまで、または約４０μＬから約５００μＬまで、または約５０μＬから約４００μＬまで、または約６０μＬから約３００μＬまで、または約７０μＬから約２００μＬまで、または約８０μＬから約１５０μＬまで、または約１０μＬから約１００μＬまでに及ぶ、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記多孔質膜の厚さは、約５μｍから約３０μｍ、もしくは約５μｍから約２０μｍ、もしくは約５μｍから約１５μｍに及び；及び／または
前記多孔質膜の孔サイズの平均もしくは中央値は、約１００ｎｍから約２０μｍまでもしくは約２０μｍまで、もしくは約５００ｎｍから約８μｍまで、もしくは約１μｍから約５μｍまでに及び：及び／または
前記多孔質膜は、約１×１０５孔／ｃｍ２から最大約１×１０７孔／ｃｍ２、もしくは約５×１０５孔／ｃｍ２から最大約５×１０６、もしくは約１×１０５孔／ｃｍ２から最大約１×１０７孔／ｃｍ２を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記膜はポリマー膜を含み；並びに／または
前記膜は、ナイロン膜、ナイロンメッシュ、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）膜、延伸ポリテトラフルオロエチレン（ｅＰＴＦＥ）膜、ポリエステル膜、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）膜、延伸ポリエーテルエーテルケトン（ｅＰＥＥＫ）膜、ポリエチレン（ＰＥ）膜、ポリプロピレン（ＰＰ）膜、ポリビニリデンフルオライド（ＰＶＤＦ）膜、エチルビニルアセタート（ＥＶＡ）膜、熱可塑性ポリウレタン（ＴＰＵ）膜、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜、ポリカーボネート膜及びポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）膜からなる群から選択される材料を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記圧力を印加することは、前記多孔質膜のゆがみを引き起こす、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ゆがみは、約２０μｍから、または約５０μｍから、または約１００μｍから、または約５００μｍから約１ｃｍまで、または約５００ｍｍまで、または約３００ｍｍまで、または約１００ｍｍまでに及ぶ、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記圧力を印加することは、一時的な圧力を印加することを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記圧力を印加することは、ポートを通して前記リザーバ室の中へ圧力を印加することを含み；または
前記圧力を印加することは、前記リザーバ室が一杯で閉鎖されているときに前記リザーバ室の壁を撓ませることを含み；または
前記圧力を印加することは、前記リザーバ室の壁を通して溶液を注入することを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
リザーバ室に配置された溶液中の前記カーゴを準備することは、ポートを通して前記リザーバ室に前記溶液を導入することを含み；または
リザーバ室に配置された溶液中の前記カーゴを準備することは、前記カーゴ溶液を前記リザーバにピペットで入れることを含み；または
リザーバ室に配置された溶液中の前記カーゴを準備することは、前記多孔質膜を前記リバーザ室上もしくは内に置く前に前記リザーバ室に装填することを含み；または
リザーバ室に配置された溶液中の前記カーゴを準備することは、前記溶液を前記リザーバ室の壁を貫通する針を通して注入することを含み；または
リザーバ室に配置された溶液中の前記カーゴを準備することは、前記溶液を前記膜を通過させて前記リザーバ室に装填することを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記カーゴは、天然染色体もしくは染色体フラグメント、合成染色体、細菌、合成粒子、細胞内真菌、細胞内原生動物、リポソーム内にパッケージングされたＤＮＡ及び／またはＲＮＡ（例えば、リポフェクタミン）ならびに細胞小器官からなる群から選択される１つあるいは部分を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞は、脊椎動物細胞、真菌細胞及び酵母菌細胞からなる群から選択され；または
前記細胞は、哺乳動物細胞、昆虫細胞及び無脊椎動物細胞からなる群から選択され；または
前記細胞はリンパ球もしくは幹細胞を含み；または
前記細胞は、成体幹細胞、胚性幹細胞、臍帯血幹細胞及び人工多能性幹細胞からなる群から選択される幹細胞を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞は、吸着、接着分子、遠心力及びゲルマトリックスの１つ以上によって前記多孔質膜に付着させられ；または
前記細胞は、前記多孔質膜上で培養され；または
前記細胞は、前記多孔質膜上で付着層として培養される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
多孔質膜と、
前記多孔質膜の片側にある容積が約５００μＬ未満のリザーバ室と
を備える大きなカーゴを真核細胞に送達するためのデバイス。
【請求項１４】
前記多孔質膜の厚さは、約５μｍから約３０μｍ、もしくは約５μｍから約２０μｍ、もしくは約５μｍから約１５μｍに及び；並びに／または
前記多孔質膜の孔サイズの平均もしくは中央値は、約１００ｎｍから約２０μｍまでもしくは約２０μｍまで、もしくは約５００ｎＭから約８μｍまで、もしくは約１μｍから約５μｍまでに及び；並びに／または
前記多孔質膜は、約１×１０５孔／ｃｍ２から最大約１×１０７孔／ｃｍ２、もしくは約５×１０５孔／ｃｍ２から最大約５×１０６、もしくは約１×１０５孔／ｃｍ２から最大約１×１０７孔／ｃｍ２を含む、請求項１３に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記膜はポリマー膜を含み；または
前記膜は、ナイロン膜、ナイロンメッシュ、フィルター膜、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）膜、延伸ポリテトラフルオロエチレン（ｅＰＴＦＥ）膜、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）膜、延伸ポリエーテルエーテルケトン（ｅＰＥＥＫ）膜、ポリエチレン（ＰＥ）膜、ポリプロピレン（ＰＰ）膜、ポリビニリデンフルオライド（ＰＶＤＦ）膜、エチルビニルアセタート（ＥＶＡ）膜、熱可塑性ポリウレタン（ＴＰＵ）膜及びポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜からなる群から選択される材料を含み；または
前記膜は、ポリエステル膜、ポリカーボネート膜もしくはポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）膜を含む、請求項１３または１４に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記リザーバ室は、溶液を前記リザーバ室に導入するよう構成されたポートもしくはチャネルと流体連結している；または
前記リザーバ室は閉鎖及び／もしくは密閉した（例えば、前記リザーバからの流れは前記多孔質膜を通してのみ生じることができる）、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１７】
リザーバ室は、前記真核細胞に送達されるカーゴを含む溶液を含有する、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１８】
真核細胞は、前記リザーバ室に近接する側と反対の前記多孔質膜の表面に配置される、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１９】
前記細胞は、前記多孔質膜上で培養され；及び／または
前記細胞は、前記多孔質膜上で付着層として培養され；及び／または
前記細胞は、前記多孔質膜上でコンフルエンスになるまで培養される、請求項１８に記載のデバイス。
【請求項２０】
請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の第１のデバイスと、
請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の第２のデバイスと
を含み、
前記第１のデバイス及び前記第２のデバイスが、前記第１のデバイス及び前記第２のデバイスを構成する前記リザーバ室と流体連結しているポート及び／またはチャンネルを備え、前記ポート及び／またはチャンネルは互いに流体連結しているか、あるいは前記第１のデバイス及び前記第２のデバイスが、前記第１のデバイス及び前記第２のデバイスを構成する前記リザーバ室と流体連結しているポート及び／またはチャンネルを備え、前記ポート及び／またはチャンネルは互いに流体連結していない、大きなカーゴを真核細胞に送達するためのシステム。