【手続補正書】
【提出日】平成30年8月15日(2018.8.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液サンプルにおける赤血球集団の年齢構成を決定する方法であって、
前記集団内の個々の赤血球それぞれのヘモグロビン及びＨｂＡ１ｃ含有量を測定する工程と、
前記個々の赤血球それぞれの前記ＨｂＡ１ｃ含有量及び前記ヘモグロビン含有量から個々の細胞それぞれにおけるＨｂＡ１ｃの割合を決定する工程と、
前記個々の細胞におけるＨｂＡ１ｃの前記割合と基準細胞分画のＨｂＡ１ｃの平均割合とを比較することによって、前記赤血球集団を複数の分画に分画する工程であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む工程と、
各分画におけるＨｂＡ１ｃの平均割合を決定し、ＨｂＡ１ｃの前記平均割合を基準対照分画に関するＨｂＡ１ｃの平均割合と比較することによって、前記分画における前記赤血球の前記年齢を特定する工程と、を含む、方法。
【請求項２】
前記基準対照細胞の前記分画と比較して、特定のＨｂＡ１ｃ割合の分画に属する前記サンプル中の前記赤血球の密度を決定する工程を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記基準対照細胞は平均年齢が少なくとも２８日である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
個々の赤血球それぞれの前記ヘモグロビンを側方散乱により測定し、ＨｂＡ１ｃはＨｂＡ１ｃ又はその変種に特異的な検知可能に標識化された抗体を使用して測定される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記個々の細胞のＲＮＡ含有量を測定する工程を更に含み、ＲＮＡの存在は前記細胞を網状赤血球として識別する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＲＮＡは色素に結合することで測定される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記色素はアクリジン・オレンジである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記基準細胞分画は既知の割合のＨｂＡ１ｃを有する細胞を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
データを各分画から収集する工程を更に含み、前記データは赤血球の厳密な数、前記網状赤血球分画の平均ＨｂＡ１ｃ、及び前記サンプル中の個々の赤血球それぞれに関する蛍光と側方散乱単位での各分画の値を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
個々の細胞それぞれに関するＨｂＡ１ｃの前記割合は前記ＨｂＡ１ｃ含有量を前記細胞ヘモグロビン含有量で除算することで決定される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
赤血球集団の年齢を決定するシステムであって、個々の赤血球の側方散乱及び蛍光の検出器と、前記個々の赤血球の少なくとも１つの波長での前記測定された蛍光及び前記測定された側方散乱からのＨｂＡ１ｃ含有量割合の計算器と、基準対照分画のＨｂＡ１ｃの平均割合を使用する、前記赤血球集団の複数の分画への分割器であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む分割器と、各サンプルの寿命係数の計算器と、前記サンプルの前記分画の年齢の計算器と、を含む、システム。
【請求項１２】
前記サンプルの平均年齢の計算器を更に含み、前記サンプルの前記平均年齢を正常対照サンプルの平均年齢と比較する、請求項１１に記載のシステム。
【請求項１３】
方法の工程を実施するための命令を含む非一時的コンピュータ可読媒体を備えるシステムであって、前記方法は、サンプル中の個々の赤血球それぞれのヘモグロビン、ＨｂＡ１ｃ、及びＲＮＡ含有量を決定する工程と、前記個々の赤血球それぞれの前記ＨｂＡ１ｃ含有量及び前記ヘモグロビン含有量から個々の細胞それぞれにおけるＨｂＡ１ｃの割合を決定する工程と、前記個々の細胞におけるＨｂＡ１ｃの前記割合と前記サンプルにおける基準細胞分画のＨｂＡ１ｃの平均割合とを比較することによって、前記赤血球集団を複数の分画に分画する工程であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む工程と、各分画におけるＨｂＡ１ｃの平均割合を決定し、ＨｂＡ１ｃの前記平均割合を基準対照分画に関するＨｂＡ１ｃの平均割合と比較することによって、前記分画における前記赤血球の前記年齢を識別する工程とを含む、システム。
【請求項１４】
平均年齢が２８日の前記基準対照分画と比較したとき、特定のＨｂＡ１ｃ割合の分画に属する前記サンプル中の前記赤血球の密度を決定する工程を更に含む、請求項１３に記載のシステム。
【請求項１５】
サンプル中の赤血球集団の年齢構成を決定するキットであって、ａ）ＨｂＡ１Ｃ又はその変種と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと、ｂ）ＲＮＡと特異的に結合する色素と、ｃ）赤血球基準対照のサンプルと、を含む、キット。
【請求項１６】
前記赤血球基準対照の分画は既知の割合のＨｂＡ１Ｃを含む、請求項１５に記載のキッ
【請求項１７】
ＲＮＡと特異的に結合する前記色素はアクリジン・オレンジである、請求項１５〜１６のいずれか一項に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
更に別の実施形態において、本発明の方法は、更に、特定の年齢を有するサンプルの分画の平均細胞ヘモグロビン含有量を決定する工程と、異なる年齢の分画において平均細胞ヘモグロビン含有量に差があるか否かを判定する工程も含む。実施形態において、この差は、貧血、出血、又は輸血を示す。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
血液サンプルにおける赤血球集団の年齢構成を決定する方法であって、
前記集団内の個々の赤血球それぞれのヘモグロビン及びＨｂＡ１ｃ含有量を測定する工程と、
前記個々の赤血球それぞれの前記ＨｂＡ１ｃ含有量及び前記ヘモグロビン含有量から個々の細胞それぞれにおけるＨｂＡ１ｃの割合を決定する工程と、
前記個々の細胞におけるＨｂＡ１ｃの前記割合と基準細胞分画のＨｂＡ１ｃの平均割合とを比較することによって、前記赤血球集団を複数の分画に分画する工程であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む工程と、
各分画におけるＨｂＡ１ｃの平均割合を決定し、ＨｂＡ１ｃの前記平均割合を基準対照分画に関するＨｂＡ１ｃの平均割合と比較することによって、前記分画における前記赤血球の前記年齢を特定する工程と、を含む、方法。
（項目２）
前記基準対照細胞の前記分画と比較して、特定のＨｂＡ１ｃ割合の分画に属する前記サンプル中の前記赤血球の密度を決定する工程を更に含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記基準対照細胞は平均年齢が少なくとも２８日である、項目３に記載の方法。
（項目４）
個々の赤血球それぞれの前記ヘモグロビンを側方散乱により測定する、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
ＨｂＡ１ｃはＨｂＡ１ｃ又はその変種に特異的な検知可能に標識化された抗体を使用して測定される、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記抗体は蛍光部分で標識化される、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記個々の細胞のＲＮＡ含有量を測定する工程を更に含み、ＲＮＡの存在は前記細胞を網状赤血球として識別する、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
ＲＮＡは色素に結合することで測定される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記色素はアクリジン・オレンジである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記基準細胞分画は既知の割合のＨｂＡ１ｃを有する細胞を含む、項目１〜９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
データを各分画から収集する工程を更に含み、前記データは赤血球の厳密な数、前記網状赤血球分画の平均ＨｂＡ１ｃ、及び前記サンプル中の個々の赤血球それぞれに関する蛍光と側方散乱単位での各分画の値を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
個々の細胞それぞれに関するＨｂＡ１ｃの前記割合は前記ＨｂＡ１ｃ含有量を前記細胞ヘモグロビン含有量で除算することで決定される、項目１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記赤血球集団の前記年齢構成が基準細胞集団の年齢構成と比べたとき、より大きい数の細胞を多く含むか否かを、疾患状態を示すとして判定する工程を更に含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記サンプル中の細胞の平均年齢を決定し、前記平均年齢と正常対照サンプルの平均年齢とを比較する工程を更に含み、前記平均年齢の差は疾患又は疾患の状態を示す、項目１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記疾患は糖尿病である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
特定の年齢を有する前記サンプルの分画の平均細胞ヘモグロビン含有量を決定する工程と、異なる年齢の分画において前記平均細胞ヘモグロビン含有量に差があるか否かを判定する工程とを更に含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記差は貧血、出血、又は輸血を示す、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
赤血球集団の年齢を決定するシステムであって、個々の赤血球の側方散乱及び蛍光の検出器と、前記個々の赤血球の少なくとも１つの波長での前記測定された蛍光及び前記測定された側方散乱からのＨｂＡ１ｃ含有量割合の計算器と、基準対照分画のＨｂＡ１ｃの平均割合を使用する、前記赤血球集団の複数の分画への分割器であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む分割器と、各サンプルの寿命係数の計算器と、前記サンプルの前記分画の年齢の計算器と、を含む、システム。
（項目１９）
前記サンプルの平均年齢の計算器を更に含み、前記サンプルの前記平均年齢を正常対照サンプルの平均年齢と比較する、項目１８に記載のシステム。
（項目２０）
ある年齢の細胞の平均細胞ヘモグロビンの計算器を更に含み、前記平均細胞ヘモグロビンが前記細胞の前記年齢に応じて変化するか否かを判定する、項目１８又は項目１９に記載のシステム。
（項目２１）
方法の工程を実施するための命令を含む非一時的コンピュータ可読媒体を備えるシステムであって、前記方法は、サンプル中の個々の赤血球それぞれのヘモグロビン、ＨｂＡ１ｃ、及びＲＮＡ含有量を決定する工程と、前記個々の赤血球それぞれの前記ＨｂＡ１ｃ含有量及び前記ヘモグロビン含有量から個々の細胞それぞれにおけるＨｂＡ１ｃの割合を決定する工程と、前記個々の細胞におけるＨｂＡ１ｃの前記割合と前記サンプルにおける基準細胞分画のＨｂＡ１ｃの平均割合とを比較することによって、前記赤血球集団を複数の分画に分画する工程であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む工程と、各分画におけるＨｂＡ１ｃの平均割合を決定し、ＨｂＡ１ｃの前記平均割合を基準対照分画に関するＨｂＡ１ｃの平均割合と比較することによって、前記分画における前記赤血球の前記年齢を識別する工程とを含む、システム。
（項目２２）
平均年齢が２８日の前記基準対照分画と比較したとき、特定のＨｂＡ１ｃ割合の分画に属する前記サンプル中の前記赤血球の密度を決定する工程を更に含む、項目２１に記載のシステム。
（項目２３）
サンプル中の赤血球集団の年齢構成を決定するキットであって、ａ）ＨｂＡ１Ｃ又はその変種と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと、ｂ）ＲＮＡと特異的に結合する色素と、ｃ）赤血球基準対照のサンプルと、を含む、キット。
（項目２４）
前記赤血球基準対照の分画は既知の割合のＨｂＡ１Ｃを含む、項目２３に記載のキット。
（項目２５）
前記抗体又は抗原結合フラグメントは検出可能に標識化される、項目２３〜２４のいずれか一項に記載のキット。
（項目２６）
前記標識は蛍光標識である、項目２５に記載のキット。
（項目２７）
ＲＮＡと特異的に結合する前記色素はアクリジン・オレンジである、項目２３〜２６のいずれか一項に記載のキット。
（項目２８）
命令を格納する非一時的コンピュータ可読媒体を更に含み、前記命令はコンピュータ装置によって実行された時、前記コンピュータ装置に対して、サンプル中の前記個々の赤血球それぞれのヘモグロビン、ＨｂＡ１ｃ、及びＲＮＡ含有量を決定する工程と、前記個々の赤血球のそれぞれの前記ＨｂＡ１ｃ含有量及び前記ヘモグロビン含有量から前記個々の細胞それぞれにおけるＨｂＡ１ｃの割合を決定する工程と、前記個々の細胞におけるＨｂＡ１ｃの前記割合と前記サンプルにおける基準細胞分画のＨｂＡ１ｃの平均割合とを比較することで、前記赤血球集団を複数の分画に分画する工程であって、各分画は実質的に等しい数の赤血球を含む工程と、各分画におけるＨｂＡ１ｃの平均割合を決定し、ＨｂＡ１ｃの前記平均割合を基準対照分画に関するＨｂＡ１ｃの平均割合と比較することによって、前記分画における前記赤血球の前記年齢を識別する工程と、を実行させる、項目２７に記載のキット。