【手続補正書】
【提出日】平成30年2月19日(2018.2.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式：
2017512210.tif 000001
を有する化合物又はその塩若しくは溶媒和物［式中、
Ｚは、Ｏ、Ｓ又はＮＲａであり、Ｒ１は、ホスフェートであり、又はＺＲ１は、ホスフェートであり、
Ｒ８は、−Ｃ（ＬＧ）（Ｒ５）（Ｒ３Ｒ４）、−Ｒ３Ｒ４又は−Ｃ（ＬＧ）（Ｒ５）（Ｒ６）であり、
Ｒ９、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素、ハロ、シアノ、脂肪族、アルコキシ、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｃ）２、アリール、ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｓ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｃ）２、−Ｒ３Ｒ４であるか、又は２つの隣接基は、共に脂肪族環若しくはアリール環を形成し、
Ｒ１０は、水素、ハロ、シアノ、脂肪族、アルコキシ、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｃ）２、アリール、ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｓ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｃ）２、−Ｒ３Ｒ４、−Ｃ（ＬＧ）（Ｒ５）（Ｒ６）であるか、又はＲ９若しくはＲ１１の一方と、脂肪族環若しくはアリール環を形成し、
ＬＧは、脱離基であり、又はＺＲ１及びＬＧは、共にホスホジエステルを形成し、
Ｒ３は、リンカー又は結合であり、
Ｒ４は、検出可能標識であり、
各Ｒ５は、独立して、水素、ハロ、シアノ、低級アルキル、低級ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｓ）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｃ又は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｃ）２であり、
各Ｒ６は、独立して、水素、ハロ、シアノ、低級アルキル、低級ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｓ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｃ又は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｃ）２であり、
Ｒａは、水素又は脂肪族であり、
各Ｒｃは、独立して、水素、アリール、脂肪族若しくはヘテロ脂肪族であり、又は２つのＲｃ部分は、共にヘテロ脂肪族環を形成し、
Ｒ８及びＲ１０の少なくとも一方は、ＬＧを含み、Ｒ８及びＲ１０の少なくとも一方は、Ｒ３Ｒ４を含み、
ＬＧがハロである場合、Ｒ５及びＲ６はハロではない］。
【請求項２】
下記の式：
2017512210.tif 000002
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＺがＯである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
ＺＲ１が、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又はその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
ＬＧが、ハロゲン化物、硫酸エステル、カルボキシレート、無機エステル、チオレート、アミン、アリールオキシ、アルコキシ又はヘテロアリールであり、
ここで、任意選択的に、ＬＧが、フッ化物、塩化物、アジド、酢酸エステル、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、フェノキシド、−ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３、−ＯＳ（Ｏ）２Ｃ６Ｈ４ＣＨ３、−ＯＳ（Ｏ）２Ｃ６Ｈ５、−ＯＳ（Ｏ）２Ｃ６Ｈ４ＣＸ３、−ＯＣ６Ｈ５、−Ｎ２＋、−ＮＨ３＋、−ＮＣ６Ｈ５＋、−Ｏ−アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−Ｎ（Ｒｂ）３＋又は１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンであり、
各Ｘが、独立して、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードであり、
各Ｒｂが、独立して、水素若しくは低級アルキルであり、又は２つのＲｂ部分が、共にヘテロ脂肪族環を形成する、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ−、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）ｎＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎＯ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯ−、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）ｎＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＳ−、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＳ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）ｎＳ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＮＨ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）ｎＮＨ−又は−Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）ｎＮＨ−であり、ここで各ｎが、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２である
請求項１又は２に記載の化合物、
又は、Ｒ３が、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）５ＮＨ−、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）５ＮＨ−、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＮＨ−、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨ−、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（ＣＨ２）６ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）４ＮＨ−、
2017512210.tif 000003
である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４が、色素原、蛍光団、発光団、ハプテン又はこれらの組み合わせであり、
ここで、Ｒ４が、
2017512210.tif 000004
であってもよい、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項８】
化合物が、
2017512210.tif 000005
2017512210.tif 000006
2017512210.tif 000007
であり、
Ｒ４が、色素原、蛍光団、発光団又はハプテンである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
生物学的試料中の第１の標的を検出する方法であって、
生物学的試料を、第１の標的に特異的な第１の検出プローブと接触させることと、
生物学的試料を、第１の酵素を含む第１の標識コンジュゲートと接触させることと、
生物学的試料を、第１の酵素認識基と第１の検出可能標識とを含む第１のキノンメチドアナログ前駆体と接触させることであって、ここで、第１のキノンメチドアナログ前駆体が、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物であって、ここで第１の酵素が第１の酵素認識基を切断し、それによって第１のキノンメチドアナログ前駆体を、第１の反応性キノンメチドアナログに変換し、これが、生物学的試料に、第１の標的の近位において又は第１の標的に直接的に共有結合し、生物学的試料を接触させることが、
（ｉ）生物学的試料を、所望のレベルの増幅を与えるのに有効な前駆体濃度で第１のキノンメチドアナログ前駆体と接触させること、
（ｉｉ）生物学的試料を、７超から１４のｐＨで第１のキノンメチドアナログ前駆体と接触させること、
（ｉｉｉ）生物学的試料を、塩の存在下、０．１Ｍから２Ｍの塩濃度で第１のキノンメチドアナログ前駆体と接触させること、
（ｉｖ）生物学的試料を、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物と接触させること、又は
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含むことと、
第１の検出可能標識を検出することによって、第１の標的を検出することと
を含む方法。
【請求項１０】
塩が塩化マグネシウムである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第一のキノンメチドアナログ前駆体の濃度が０超から１ｍＭであり、任意選択的に、第一のキノンメチドアナログ前駆体の濃度が５０ｎＭから１００μＭであるか、又は、１００ｎＭから１μＭである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
生物学的試料が、ホルマリン固定パラフィン包埋組織を含み、請求項９から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
第１の検出プローブが、オリゴヌクレオチド、抗体又は抗体断片を含み、任意選択的に、第１の検出プローブが、ハプテン標識オリゴヌクレオチドを含む、請求項９から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
第１の標識コンジュゲートが、第１の酵素に結合した抗体を含み、任意選択的に、抗体が、抗種又は抗ハプテン抗体である、請求項９から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
第１の標識コンジュゲートが、直接的又は間接的に第１の検出プローブと会合する、請求項９から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
第１の検出プローブが、第１の抗種抗体を含み、第１の標識プローブが、第２の抗種抗体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
第１の検出プローブが、ハプテンを含み、第１の標識プローブが、抗ハプテン抗体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
第１の酵素が、ホスファターゼ又はホスホジエステラーゼであり、任意選択的に、第１の酵素が、アルカリホスファターゼである、請求項９から１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
生物学的試料を、第２の標的に特異的な第２の検出プローブと接触させることと、
生物学的試料を第２の酵素を含む、第２の標識コンジュゲートと接触させることと、
生物学的試料を、第２の酵素認識基と第２の検出可能標識を含む第２のキノンメチドアナログ前駆体と接触することであって、ここで、第２のキノンメチドアナログ前駆体が、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物であり、第２の酵素が第２の酵素認識基を切断し、それにより第２のキノンメチドアナログ前駆体を、第２の標的の近傍の生物学的試料に共有結合するか又は第２の標的に直接結合する反応性キノンメチドアナログに転換し、
第２の検出可能標識を検出することにより第２の標識を検出することと
を更に含む、請求項９に記載の方法。
【請求項２０】
第１の酵素及び第２の酵素が異なる酵素であり、第１の酵素が、第１のキノンメチドアナログ前駆体と選択的に反応し、第２の酵素が、第２の検出前駆化合物と選択的に反応する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
酵素抗体コンジュゲートと、
キノンメチドアナログ前駆体と、
溶媒混合物と、
ｐＨ調整溶液と
を含み、
ここで、キノンメチドアナログ前駆体が、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物である、
キット。
【請求項２２】
溶媒混合物が、ＤＭＳＯ及びｐＨ２のグリシンバッファーを含み、
ｐＨ調整溶液が、ｐＨ８からｐＨ１０のｐＨ範囲を有するＴｒｉｓバッファーであり、
塩化マグネシウムを０．５Ｍから１．２５Ｍの濃度で更に含む、
請求項２１に記載のキット。