(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧ二重特異性抗体であって、
ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域（ＨＣ１ＶＲ）を含む第１の重鎖（ＨＣ１）、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域（ＬＣ１ＶＲ）を含む第１の軽鎖（ＬＣ１）、
ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域（ＨＣ２ＶＲ）を含む第２の重鎖（ＨＣ１）、および
ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域（ＬＣ２ＶＲ）を含む第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、
ＨＣ１がＬＣ１と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ２がＬＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ１がＨＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、前記抗体が、ヒトカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）およびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する、ＩｇＧ二重特異性抗体。
【請求項２】
ＨＣ１およびＨＣ２がヒトＩｇＧ１  ＨＣであり、ＬＣ１がヒトカッパＬＣであり、ＬＣ２がヒトラムダ軽鎖であり、
ｉ）ＨＣ１が、ＨＣ１  ＣＨ１ドメイン（ＨＣ１ＣＨ１）の１２７位（Ｋａｂａｔ）のシステイン残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２８位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２２位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５６位（ＥＵ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５７位（ＥＵ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３６４位（ＥＵ）のグルタミン残基、およびＨＣ１  ＣＨ３ドメインの４０７位（ＥＵ）のアラニン残基を有し、
ｉｉ）ＨＣ２が、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１６６位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１７０位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３４９位（ＥＵ）のセリン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３６６位（ＥＵ）のメチオニン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３７０位（ＥＵ）のチロシン残基、およびＨＣ２  ＣＨ３ドメインの４０９位（ＥＵ）のバリン残基を有し、
ｉｉｉ）ＬＣ１がＬＣ１  ＣＬドメインの１２２位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基を有し、
ｉｖ）ＬＣ２がＬＣ２  ＣＬドメインの１３５位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、およびＬＣ２  ＣＬドメインの１７６位（Ｋａｂａｔ）のトリプトファン残基を有する、請求項１に記載のＩｇＧ二重特異性抗体。
【請求項３】
ＨＣ１がＨＣ１  ＣＨ２ドメインの２３４位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基およびＨＣ１  ＣＨ２ドメインの２３５位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基を有し、ＨＣ２がＨＣ２  ＣＨ２ドメインの２３４位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基およびＨＣ２  ＣＨ２ドメインの２３５位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基を有する、請求項２に記載のＩｇＧ二重特異性抗体。
【請求項４】
ＨＣ１およびＨＣ２がヒトＩｇＧ４  ＨＣであり、ＬＣ１がヒトカッパＬＣであり、ＬＣ２がヒトラムダ軽鎖であり、
ｉ）ＨＣ１が、ＨＣ１  ＣＨ１ドメイン（ＨＣ１ＣＨ１）の１２７位（Ｋａｂａｔ）のシステイン残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２８位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２２位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５６位（ＥＵ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５７位（ＥＵ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３６４位（ＥＵ）のグルタミン残基、およびＨＣ１  ＣＨ３ドメインの４０７位（ＥＵ）のアラニン残基を有し、
ｉｉ）ＨＣ２が、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１６６位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１７０位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３４９位（ＥＵ）のセリン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３６６位（ＥＵ）のメチオニン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３７０位（ＥＵ）のチロシン残基、およびＨＣ２  ＣＨ３ドメインの４０９位（ＥＵ）のバリン残基を有し、
ｉｉｉ）ＬＣ１がＬＣ１  ＣＬドメインの１２２位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基を有し、
ｉｖ）ＬＣ２がＬＣ２  ＣＬドメインの１３５位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、およびＬＣ２  ＣＬドメインの１７６位（Ｋａｂａｔ）のトリプトファン残基を有する、請求項１に記載のＩｇＧ二重特異性抗体。
【請求項５】
前記二重特異性抗体が
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有する第１のＨＣ（ＨＣ１）、
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を有する第１のＬＣ（ＬＣ１）、
ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を有する第２のＨＣ（ＨＣ２）、および
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第２のＬＣ（ＬＣ２）を含み、
前記ＨＣ１がＬＣ１と鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ２がＬＣ２と鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ１がＨＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、前記抗体が、ヒトカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）およびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する、請求項１または２に記載のＩｇＧ二重特異性抗体。
【請求項６】
配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子。
【請求項７】
配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子。
【請求項８】
配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子。
【請求項９】
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子。
【請求項１０】
配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子。
【請求項１１】
請求項５に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を発現することができる、請求項１０に記載のＤＮＡ分子を含む組み換え宿主細胞。
【請求項１２】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ細胞からなる群から選択される哺乳動物宿主細胞である、請求項１１に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項１３】
請求項５に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を産生するための方法であって、
ａ）前記二重特異性抗体が発現される条件下で請求項１１または１２に記載の組み換え宿主細胞を培養するステップと、
ｂ）前記発現された二重特異性抗体を前記宿主細胞から回収するステップと、を含む、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法によって産生されたＩｇＧ二重特異性抗体。
【請求項１５】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体、および許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療剤。
【請求項１７】
前記ＩＢＤがクローン病（ＣＤ）である、請求項１６に記載のＩＢＤの治療剤。
【請求項１８】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である、請求項１６に記載のＩＢＤの治療剤。
【請求項１９】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛の治療剤。
【請求項２０】
前記ＩＢＤがクローン病（ＣＤ）であり、前記疼痛がＣＤに関連する、請求項１９に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛の治療剤。
【請求項２１】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり、前記疼痛がＵＣに関連する、請求項１９に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛の治療剤。
【請求項２２】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、乾癬の治療剤。
【請求項２３】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、乾癬に関連する疼痛の治療剤。
【請求項２４】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、掌蹠膿疱症の治療剤。
【請求項２５】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、掌蹠膿疱症に関連する疼痛の治療剤。
【請求項２６】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）の治療剤。
【請求項２７】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）に関連する疼痛の治療剤。
【請求項２８】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、強直性脊椎炎（ＡＳ）の治療剤。
【請求項２９】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、強直性脊椎炎（ＡＳ）に関連する疼痛の治療剤。
【請求項３０】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）の治療剤。
【請求項３１】
請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載のＩｇＧ二重特異性抗体を含む、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）に関連する疼痛の治療剤。
【請求項３２】
治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３４】
前記炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病（ＣＤ）である、請求項３３に記載の使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３５】
前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である、請求項３３に記載の使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３７】
前記炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病（ＣＤ）であり、前記疼痛がＣＤに関連する、請求項３６に記載の使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３８】
前記炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり、前記疼痛がＵＣに関連する、請求項３６に記載の使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項３９】
乾癬の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４０】
乾癬に関連する疼痛の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４１】
掌蹠膿疱症の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４２】
掌蹠膿疱症に関連する疼痛の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４３】
乾癬性関節炎（ＰｓＡ）の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４４】
乾癬性関節炎（ＰｓＡ）に関連する疼痛の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４５】
強直性脊椎炎（ＡＳ）の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４６】
強直性脊椎炎（ＡＳ）に関連する疼痛の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４７】
アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項４８】
アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）に関連する疼痛の治療における使用のための請求項１〜５または１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学の分野、特にカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）およびインターロイキン−２３（ＩＬ−２３）を対象とする二重特異性抗体の新規分野にある。本発明の二重特異性抗体は、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ならびに乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）およびアトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）を含む他の自己免疫疾患を含む自己免疫性炎症性疾患を治療するのに有用であることが期待される。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患は、身体がそれ自身の組織に対する免疫応答を生成することから生じる。自己免疫疾患はしばしば慢性であり、衰弱性であり得、致命的でさえあり得る。一般的にＣＤおよびＵＣなどの障害の群を表すＩＢＤは、腸管炎症および上皮損傷により病理学的に特徴付けられる一般的な慢性再発性の自己免疫性炎症性疾患である。ＰｓＡ、ＡＳおよびＡｔＤなどの他の形態の慢性自己免疫疾患は、中軸骨格、末梢骨格および／または皮膚に影響を与え得る。
【０００３】
インターロイキン２３（ＩＬ−２３）は、慢性炎症の誘導に必要とされる様々な炎症細胞の活性化において重要であると考えられているヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−２２分泌の上流調節因子であると考えられているＩＬ−２３は、ｐ４０サブユニットに共有結合したｐ１９サブユニット（ＩＬ２３ｐ１９）からなる（ｐ４０サブユニットはまた、サイトカインＩＬ−１２とも共有される）。さらに、ＩＬ−２３は、メモリー／病原性Ｔ細胞による炎症応答において重要な役割を果たすこと、および自然リンパ球細胞の炎症活性の調節において役割を果たすことに関係があるとされている。サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−２２のＩＬ−２３による調節が、ＣＤおよびＵＣなどのＩＢＤを含む炎症性疾患、ならびに乾癬、ＰｓＡ、ＡＳおよびＡｔＤを含む他の自己免疫疾患に関連付けられるという証拠が存在する。
【０００４】
ＣＧＲＰは、中枢神経系および末梢神経系の神経によって分泌される３７アミノ酸の神経ペプチドである。ＣＧＲＰは、末梢神経系および中枢神経系の両方の感覚神経内に広く分布しており、多数の異なる生物学的活性を呈する。例えば、ＣＧＲＰは強力な血管拡張剤であり、微小血管系はこれに対して感受性が高い。三叉神経および他の神経線維から放出されるとき、ＣＧＲＰは、特定の細胞表面受容体に結合することによって、その生物学的応答を媒介すると考えられている。ＣＧＲＰは、疼痛シグナル伝達の調節および／または伝達において、ならびに神経原性炎症において役割を果たすと考えられている。ＣＧＲＰは感覚神経の刺激時に放出されるため、ＣＧＲＰは片頭痛において役割を果たすことが報告されている。三叉神経線維の刺激時、ＣＧＲＰの放出は、これらの線維によって神経支配される組織において血管透過性を増加させ、続いて血漿タンパク質漏出（血漿タンパク質の血管外漏出）を増加させる。加えて、片頭痛を患う患者におけるＣＧＲＰの注入が、片頭痛様症状をもたらしたことが研究により報告されている。
【０００５】
ＩＢＤなどの自己免疫疾患の現在ＦＤＡに認可されている治療法としては、急性炎症の治療にしばしば使用されるコルチコステロイド、およびバイオ製品が挙げられ、その多く（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、およびＨＵＭＩＲＡ（登録商標））は、体内のＴＮＦαの標的化および中和を試みる。ＰｓＡの治療用に認可されている別のバイオ製品としては、サイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−２３が共有するｐ４０サブユニットの標的化を試みるＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）が挙げられる。現在の治療は、一部の患者において、いくつかの自己免疫疾患の症状低減および進行の緩徐化に対する有効性を実証している。しかしながら、患者の大部分は、現在利用可能な治療法に対して非応答性である（例えば、寛解の誘導はＴＮＦαの中和により治療されたＣＤ患者のうちの３０〜５０％で生じるにすぎず、治療の１２ヶ月後にＴＮＦαの中和に対する応答の喪失が２３〜４６％の患者に生じる）。自己免疫疾患の代替療法としては、米国特許第９，０２３，３５８号に開示されるものなどのＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する抗体が挙げられる。
【０００６】
自己免疫疾患用に現在認可されている治療法が当該疾患の炎症的側面を治療する一方で、当該治療法は関連する疼痛の治療には効果がないことが判明している。抗ＴＮＦα療法に対して応答性であるＩＢＤ（ＣＤおよびＵＣ）を患う患者においてですら、疼痛は残存する。自己免疫疾患に関連する炎症は、疼痛に対する中枢性感作を駆動し、これにより痛覚過敏および異痛症を引き起こすと考えられている。結果として、炎症の鎮静後ですら疼痛が存在し得、高い割合の患者が鎮痛剤の服用を継続する。ＩＢＤを患う患者における疼痛の標準的療法は、ＮＳＡＩＤＳ、ＣＯＸ−２阻害剤、およびアヘン剤を含む鎮痛剤である。現在のところ、ＩＢＤを患う患者は、生物学的療法の導入前および導入後の両方で、同程度の数の鎮痛処方薬を調剤してもらっている。米国特許第９，０７３，９９１号に記載されるものなどのＣＧＲＰに結合する抗体が、片頭痛の治療薬として示唆されている。
【０００７】
そのような代替療法への１つのアプローチとしては、自己免疫疾患の異なる側面（例えば、疾患の病理および関連する疼痛）を治療する、２種の抗体の同時投与を挙げることができる。同時投与は、２種の別個の製品の注射または２種の異なる抗体の共製剤の単一注射を必要とする。２種の注射が用量およびタイミングの柔軟性を可能にする一方で、コンプライアンスおよび疼痛の両方のために、それは患者にとっては不都合である。さらに、共製剤は用量のいくらかの柔軟性を提供し得る一方で、２つの抗体の異なる分子特性のために、（比較的高濃度で）許容可能な粘度を有し、かつ両方の抗体の化学的および物理的安定性を促進する製剤条件を見出すことは、しばしば非常に困難または不可能である。さらに、同時投与および共製剤は２種の異なる薬物による療法の付加的費用を伴い、これは患者および／または支払者の費用を増加させ得る。
【０００８】
２種の異なる抗原に結合する二重特異性抗体は、同時投与および／または共製剤に関連する問題の解決策として提唱されてきた。ヒトＩＬ−１７およびヒトＩＬ−２３に結合する二重特異性抗体が、Ｍａｂｒｙ  Ｒら（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．  ２３，Ｎｏ．３，ｐａｇｅｓ  １１５−１２７，２０１０）により記載されているが、ヒトＩＬ−２３およびヒトＣＧＲＰを標的化する二重特異性抗体は、これまでに記載されていないようである。
【０００９】
したがって、疾患修飾特性および疼痛管理特性の両方を有する自己免疫疾患の治療のための代替療法が依然として必要とされており、好ましくはそのような代替療法は二重特異性抗体を含む。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、および第２の軽鎖（ＬＣ２）を含む免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）二重特異性抗体を提供し、ＨＣ１はＬＣ１と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ２はＬＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ１はＨＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、当該抗体はヒトカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）およびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する。
【００１１】
さらに本発明は、
ａ）第１の重鎖可変領域（ＨＣ１ＶＲ）を含む第１の重鎖（ＨＣ１）であって、当該ＨＣ１ＶＲがアミノ酸配列Ｈ１ＣＤＲ−１、Ｈ１ＣＤＲ−２およびＨ１ＣＤＲ−３を含み、Ｈ１ＣＤＲ−１が配列番号１２であり、Ｈ１ＣＤＲ−２が配列番号１４であり、Ｈ１ＣＤＲ−３が配列番号１６である第１の重鎖、
ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣ１ＶＲ）を含む第１の軽鎖（ＬＣ１）であって、当該ＬＣ１ＶＲがアミノ酸配列Ｌ１ＣＤＲ−１、Ｌ１ＣＤＲ−２およびＬ１ＣＤＲ−３を含み、Ｌ１ＣＤＲ−１が配列番号３４であり、Ｌ１ＣＤＲ−２が配列番号３６であり、Ｌ１ＣＤＲ−３が配列番号３８である第１の軽鎖、
ｃ）第２の重鎖可変領域（ＨＣ２ＶＲ）を含む第２の重鎖（ＨＣ２）であって、当該ＨＣ２ＶＲがアミノ酸配列Ｈ２ＣＤＲ−１、Ｈ２ＣＤＲ−２およびＨ２ＣＤＲ−３を含み、Ｈ２ＣＤＲ−１が配列番号２３であり、Ｈ２ＣＤＲ−２が配列番号２５であり、Ｈ２ＣＤＲ−３が配列番号２７である第２の重鎖、および
ｄ）第２の軽鎖可変領域（ＬＣ２ＶＲ）を含む第２の軽鎖（ＬＣ２）であって、当該ＬＣ２ＶＲがアミノ酸配列Ｌ２ＣＤＲ−１、Ｌ２ＣＤＲ−２およびＬ２ＣＤＲ−３を含み、Ｌ２ＣＤＲ−１が配列番号４２であり、Ｌ２ＣＤＲ−２が配列番号４４であり、Ｌ２ＣＤＲ−３が配列番号４６である第２の軽鎖を含むＩｇＧ二重特異性抗体を提供し、
ＨＣ１はＬＣ１と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ２はＬＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ１はＨＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、当該抗体はヒトカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）およびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する。
【００１２】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の好ましい実施形態では、ＨＣ１およびＨＣ２はヒトＩｇＧ１  ＨＣであり、ＬＣ１はヒトカッパＬＣであり、ＬＣ２はヒトラムダ軽鎖であり、
（ｉ）ＨＣ１は、ＨＣ１ＶＲの３９位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、ＨＣ１ＶＲの１０５位（Ｋａｂａｔ）のグルタミン、ＨＣ１  ＣＨ１ドメイン（ＨＣ１ＣＨ１）の１２７位（Ｋａｂａｔ）のシステイン残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２８位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２２位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５６位（ＥＵ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５７位（ＥＵ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３６４位（ＥＵ）のグルタミン残基、およびＨＣ１  ＣＨ３ドメインの４０７位（ＥＵ）のアラニン残基を有し、
（ｉｉ）ＨＣ２は、ＨＣ２ＶＲの３９位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１６６位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１７０位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３４９位（ＥＵ）のセリン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３６６位（ＥＵ）のメチオニン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３７０位（ＥＵ）のチロシン残基、およびＨＣ２  ＣＨ３ドメインの４０９位（ＥＵ）のバリン残基を有し、
（ｉｉｉ）ＬＣ１は、ＬＣ１ＶＲの３８位（Ｋａｂａｔ）のアルギニン残基、ＬＣ１ＶＲの４２位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、およびＬＣ１  ＣＬドメインの１２２位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基を有し、
（ｉｖ）ＬＣ２は、ＬＣ２ＶＲの１位（Ｋａｂａｔ）のアルギニン残基、ＬＣ２ＶＲの３８位のアスパラギン酸残基、ＬＣ２  ＣＬドメインの１３５位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、およびＬＣ２  ＣＬドメインの１７６位（Ｋａｂａｔ）のトリプトファン残基を有する。
【００１３】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体のさらに他の好ましい実施形態では、ＨＣ１はＨＣ１  ＣＨ２ドメインの２３４位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基およびＨＣ１  ＣＨ２ドメインの２３５位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基を有し、ＨＣ２はＨＣ２  ＣＨ２ドメインの２３４位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基およびＨＣ２  ＣＨ２ドメインの２３５（Ｋａｂａｔ）位のアラニン残基を有する。
【００１４】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の好ましい実施形態では、ＨＣ１およびＨＣ２はヒトＩｇＧ４  ＨＣであり、ＬＣ１はヒトカッパＬＣであり、ＬＣ２はヒトラムダ軽鎖であり、
（ｉ）ＨＣ１は、ＨＣ１ＶＲの３９位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、ＨＣ１ＶＲの１０５位（Ｋａｂａｔ）のグルタミン、ＨＣ１  ＣＨ１ドメイン（ＨＣ１ＣＨ１）の１２７位（Ｋａｂａｔ）のシステイン残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２８位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２２位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５６位（ＥＵ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５７位（ＥＵ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３６４位（ＥＵ）のグルタミン残基、およびＨＣ１  ＣＨ３ドメインの４０７位（ＥＵ）のアラニン残基を有し、
（ｉｉ）ＨＣ２は、ＨＣ２ＶＲの３９位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１６６位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１７０位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３４９位（ＥＵ）のセリン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３６６位（ＥＵ）のメチオニン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３７０位（ＥＵ）のチロシン残基、およびＨＣ２  ＣＨ３ドメインの４０９位（ＥＵ）のバリン残基を有し、
（ｉｉｉ）ＬＣ１は、ＬＣ１ＶＲの３８位（Ｋａｂａｔ）のアルギニン残基、ＬＣ１ＶＲの４２位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、およびＬＣ１  ＣＬドメインの１２２位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基を有し、
（ｉｖ）ＬＣ２は、ＬＣ２ＶＲの１位（Ｋａｂａｔ）のアルギニン残基、ＬＣ２ＶＲの３８位のアスパラギン酸残基、ＬＣ２  ＣＬドメインの１３５位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、およびＬＣ２  ＣＬドメインの１７６位（Ｋａｂａｔ）のトリプトファン残基を有する。
【００１５】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の更なる実施形態では、当該二重特異性抗体は、
ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域（ＨＣ１ＶＲ）を含む第１の重鎖（ＨＣ１）、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域（ＬＣ１ＶＲ）を含む第１の軽鎖（ＬＣ１）、
ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域（ＨＣ２ＶＲ）を含む第２の重鎖（ＨＣ２）、および
ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域（ＬＣ２ＶＲ）を含む第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、
ＨＣ１はＬＣ１と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ２はＬＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ１はＨＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、当該抗体はヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する。
【００１６】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の好ましい実施形態では、ＨＣ１およびＨＣ２はヒトＩｇＧ１  ＨＣであり、ＬＣ１はヒトカッパＬＣであり、ＬＣ２はヒトラムダＬＣであり、
（ｉ）ＨＣ１は、ＨＣ１  ＣＨ１ドメイン（ＨＣ１ＣＨ１）の１２７位（Ｋａｂａｔ）のシステイン残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２８位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２２位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５６位（ＥＵ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５７位（ＥＵ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３６４位（ＥＵ）のグルタミン残基、およびＨＣ１  ＣＨ３ドメインの４０７位（ＥＵ）のアラニン残基を有し、
（ｉｉ）ＨＣ２は、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１６６位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１７０位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３４９位（ＥＵ）のセリン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３６６位（ＥＵ）のメチオニン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３７０位（ＥＵ）のチロシン残基、およびＨＣ２  ＣＨ３ドメインの４０９位（ＥＵ）のバリン残基を有し
（ｉｉｉ）ＬＣ１は、ＬＣ１  ＣＬドメインの１２２位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基を有し、
（ｉｖ）ＬＣ２は、ＬＣ２  ＣＬドメインの１３５位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、およびＬＣ２  ＣＬドメインの１７６位（Ｋａｂａｔ）のトリプトファン残基を有する。
【００１７】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体のさらに他の好ましい実施形態では、ＨＣ１はＨＣ１  ＣＨ２ドメインの２３４位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基およびＨＣ１  ＣＨ２ドメインの２３５位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基を有し、ＨＣ２はＨＣ２  ＣＨ２ドメインの２３４位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基およびＨＣ２  ＣＨ２ドメインの２３５（Ｋａｂａｔ）位のアラニン残基を有する。
【００１８】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の好ましい実施形態では、ＨＣ１およびＨＣ２はヒトＩｇＧ４  ＨＣであり、ＬＣ１はヒトカッパＬＣであり、ＬＣ２はヒトラムダＬＣであり、
（ｉ）ＨＣ１は、ＨＣ１  ＣＨ１ドメイン（ＨＣ１ＣＨ１）の１２７位（Ｋａｂａｔ）のシステイン残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２８位（Ｋａｂａｔ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１ヒンジドメインの２２２位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５６位（ＥＵ）のグリシン残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３５７位（ＥＵ）のアスパラギン酸残基、ＨＣ１  ＣＨ３ドメインの３６４位（ＥＵ）のグルタミン残基、およびＨＣ１  ＣＨ３ドメインの４０７位（ＥＵ）のアラニン残基を有し、
（ｉｉ）ＨＣ２は、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１６６位（Ｋａｂａｔ）のアラニン残基、ＨＣ２  ＣＨ１ドメインの１７０位（Ｋａｂａｔ）のグリシン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３４９位（ＥＵ）のセリン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３６６位（ＥＵ）のメチオニン残基、ＨＣ２  ＣＨ３ドメインの３７０位（ＥＵ）のチロシン残基、およびＨＣ２  ＣＨ３ドメインの４０９位（ＥＵ）のバリン残基を有し
（ｉｉｉ）ＬＣ１は、ＬＣ１  ＣＬドメインの１２２位（Ｋａｂａｔ）のリジン残基を有し、
（ｉｖ）ＬＣ２は、ＬＣ２  ＣＬドメインの１３５位（Ｋａｂａｔ）のチロシン残基、およびＬＣ２  ＣＬドメインの１７６位（Ｋａｂａｔ）のトリプトファン残基を有する。
【００１９】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の更なる実施形態では、当該二重特異性抗体は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有する第１の重鎖（ＨＣ１）、
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖（ＬＣ１）、
ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を有する第２の重鎖（ＨＣ２）、および
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、
ＨＣ１はＬＣ１と鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ２はＬＣ２と鎖間ジスルフィド結合を形成し、ＨＣ１はＨＣ２と少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、当該抗体はヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する。
【００２０】
本発明の二重特異性抗体は、熱的に安定かつ物理的に安定である。さらに、本発明の二重特異性抗体はまた、低凝集性も呈し得る。さらにまた、本発明の二重特異性抗体は、ヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ２３ｐ１９（ＩＬ−２３のｐ１９サブユニット）を中和し得るだけでなく、両方のリガンドに同時に結合する。また本明細書にて特許請求される抗体により、２種の異なる別個の抗体の異なる分子特性に対応していなくてはならない製剤条件を見出すという課題も回避され得る。
【００２１】
さらに、ヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する、完全なＩｇＧ構造を有する二重特異性抗体を生成する能力は、抗体工学における課題である。具体的な問題としては、ＬＣ誤対合（例えば、抗ＩＬ−２３軽鎖の抗ＣＧＲＰ重鎖との誤対合および／または抗ＣＧＲＰ軽鎖の抗ＩＬ−２３重鎖との誤対合）およびハーフボディ形成が挙げられる。ＬＣ誤対合およびハーフボディ形成を最小限にするために、ＨＣＬＣ対に変異を導入し、重鎖−軽鎖可変ドメイン（ＶＨ／ＶＬ）、重鎖−軽鎖定常ドメイン（ＣＨ１／ＣＬ）および重鎖定常ドメイン（ＣＨ３）の界面に意図する残基を生じさせる。当該変異は、本発明のヘテロ二量体の二重特異性抗体の完全なＩｇＧ構造への適切な組み立てを引き起こす。
【００２２】
本明細書において提供されるアミノ酸配列が与えられれば、当業者はこの知識を使用して、上記の任意のＩｇＧ二重特異性抗体またはその断片をコードし、発現するＤＮＡ分子を設計することができる。したがって、本発明は、本発明による二重特異性抗体またはその断片をコードする全てのＤＮＡ配列を包含する。
【００２３】
特に、本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む重鎖（ＨＣ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２４】
さらに本発明は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２５】
またさらに本発明は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含むＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２６】
またさらに本発明は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２７】
またさらに本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２８】
またさらに本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２９】
またさらに本発明は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００３０】
またさらに本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００３１】
好ましい実施形態では、上記の本発明のポリヌクレオチドは、発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３２】
本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含むＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを提供し、当該ポリヌクレオチド配列は発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３３】
さらに本発明は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含むＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを提供し、当該ポリヌクレオチド配列は発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３４】
またさらに本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む第１のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む第１のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む第２のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む第２のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを提供し、当該ポリヌクレオチド配列は発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３５】
本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを提供し、当該ポリヌクレオチド配列は発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３６】
さらに本発明は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを提供し、当該ポリヌクレオチド配列は発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３７】
本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有する第１のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号８のアミノ酸配列を有する第１のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号９のアミノ酸配列を有する第２のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する第２のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターをまたさらに提供し、当該ポリヌクレオチド配列は発現制御配列に作動可能に連結される。
【００３８】
本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む第１のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列をコードするポリヌクレオチド配列、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む第１のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む第２のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む第２のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む組み換え宿主細胞を提供し、当該細胞は本発明の二重特異性抗体を発現することができ、第１のＨＣは第１のＬＣと少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、第２のＨＣは第２のＬＣと少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、第１のＨＣは第２のＨＣと少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、当該抗体はヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する。
【００３９】
本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有する第１のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列および配列番号８のアミノ酸配列を有する第１のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子、ならびに配列番号９のアミノ酸配列を有する第２のＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列および配列番号１０のアミノ酸配列を有する第２のＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む組み換え宿主細胞を提供し、当該細胞は本発明の二重特異性抗体を発現することができ、第１のＨＣは第１のＬＣと少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、第２のＨＣは第２のＬＣと少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、第１のＨＣは第２のＨＣと少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を形成し、当該抗体はヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合する。
【００４０】
また本発明は、本発明の二重特異性抗体を産生するための方法も提供し、当該方法は当該二重特異性抗体が発現されるような条件下で本発明の組み換え宿主細胞を培養するステップ、および発現された二重特異性抗体を回収するステップを含む。
【００４１】
また本発明は、上記方法によって産生される、本発明による二重特異性抗体も提供する。
【００４２】
好ましくは、本発明の組み換え宿主細胞は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ細胞からなる群から選択される哺乳動物宿主細胞である。
【００４３】
本発明は、本発明の二重特異性抗体、および許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００４４】
本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００４５】
好ましい実施形態では、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）である。
【００４６】
別の好ましい実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。
【００４７】
さらに本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛の方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００４８】
好ましい実施形態では、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）であり、疼痛はＣＤに関連する。
【００４９】
別の好ましい実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり、疼痛はＵＣに関連する。
【００５０】
またさらに本発明は、乾癬を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５１】
またさらに本発明は、乾癬に関連する疼痛を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５２】
またさらに本発明は、掌蹠膿疱症を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５３】
またさらに本発明は、掌蹠膿疱症に関連する疼痛を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５４】
またさらに本発明は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５５】
またさらに本発明は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）に関連する疼痛を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５６】
またさらに本発明は、強直性脊椎炎（ＡＳ）を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５７】
またさらに本発明は、強直性脊椎炎（ＡＳ）に関連する疼痛を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５８】
またさらに本発明は、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００５９】
またさらに本発明は、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）に関連する疼痛を治療する方法であって、それ必要とする患者に有効量の本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００６０】
またさらに本発明は、治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００６１】
またさらに本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００６２】
好ましい実施形態では、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）である。
【００６３】
別の好ましい実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。
【００６４】
またさらに本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００６５】
好ましい実施形態では、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）であり、疼痛はＣＤに関連する。
【００６６】
別の好ましい実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり、疼痛はＵＣに関連する。
【００６７】
またさらに本発明は、乾癬の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００６８】
またさらに本発明は、乾癬に関連する疼痛の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００６９】
またさらに本発明は、掌蹠膿疱症の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７０】
またさらに本発明は、掌蹠膿疱症に関連する疼痛の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７１】
またさらに本発明は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７２】
またさらに本発明は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）に関連する疼痛の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７３】
またさらに本発明は、強直性脊椎炎（ＡＳ）の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７４】
またさらに本発明は、強直性脊椎炎（ＡＳ）に関連する疼痛の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７５】
またさらに本発明は、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７６】
またさらに本発明は、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）に関連する疼痛の治療に使用するための本発明によるＩｇＧ二重特異性抗体を提供する。
【００７７】
本発明の別の実施形態は、自己免疫疾患を治療するための薬剤の製造における本発明の二重特異性抗体の使用を含む。
【００７８】
本発明のさらに他の実施形態は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００７９】
好ましい実施形態では、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）である。
【００８０】
別の好ましい実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。
【００８１】
本発明の更なる実施形態は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関連する疼痛を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００８２】
好ましい実施形態では、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）であり、疼痛はＣＤに関連する。
【００８３】
更なる好ましい実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり、疼痛はＵＣに関連する。
【００８４】
本発明の更なる実施形態は、乾癬を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００８５】
本発明の更なる実施形態は、乾癬に関連する疼痛を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００８６】
本発明の更なる実施形態は、掌蹠膿疱症を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００８７】
本発明の更なる実施形態は、掌蹠膿疱症に関連する疼痛を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００８８】
本発明の更なる実施形態は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００８９】
本発明の更なる実施形態は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）に関連する疼痛を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００９０】
本発明の更なる実施形態は、強直性脊椎炎（ＡＳ）を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００９１】
本発明の更なる実施形態は、強直性脊椎炎（ＡＳ）に関連する疼痛を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００９２】
本発明の更なる実施形態は、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【００９３】
本発明の更なる実施形態は、アトピー性皮膚炎（ＡｔＤ）に関連する疼痛を治療するための薬剤の製造における本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の使用を含む。
【発明を実施するための形態】
【００９４】
定義
本明細書において使用する場合、用語「二重特異性抗体」は、ヘテロ二量体のＩｇＧ分子またはその断片、すなわちＦ（ａｂ’）２断片を指し、抗体を形成している２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖により、ＩｇＧ抗体の各アームは、その同種抗原に対する選択的な一価の結合を示す。本発明において、図１に図示するように、抗体の一方のアームはヒトＣＧＲＰ（配列番号１）に結合し、他方のアームはヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニット（配列番号２）に結合する。
【００９５】
本発明の二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合するが、ＩＬ−１２と共有される、ヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットには結合しない。すなわち、当該二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−２３に結合するが、ヒトＩＬ−１２には結合しない。
【００９６】
本発明の抗体は、ＩｇＧタイプ抗体であり、鎖内ジスルフィド結合および鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される「重」鎖および「軽」鎖を有する。各重鎖は、Ｎ末端ＨＣＶＲおよび重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）からなる。各軽鎖は、ＬＣＶＲおよび軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。軽鎖はそれぞれ重鎖とジスルフィド結合を形成し、２つの重鎖はお互いの間で２つのジスルフィド結合を形成する。
【００９７】
重鎖の定常領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。ＣＨ１はＨＣＶＲの後にあり、ＣＨ１およびＨＣＶＲは、Ｆａｂの重鎖部分を形成する。ＣＨ２は、ヒンジ領域の後にあり、ＣＨ３の前にある。ＣＨ３は、ＣＨ２の後にあり、重鎖のカルボキシ末端にある。
【００９８】
軽鎖の定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ）を含む。ＣＬはＬＣＶＲの後にあり、ＣＬおよびＬＣＶＲは、Ｆａｂの軽鎖部分を形成する。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。
【００９９】
本明細書において互換的に使用される「親（ｐａｒｅｎｔ）抗体」または「親（ｐａｒｅｎｔａｌ）抗体」は、例えば、アミノ酸置換および構造改変によって、本発明の二重特異性抗体のＩｇＧの一方のアームの調製に使用されるアミノ酸配列によってコードされる抗体である。親抗体は、マウス、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体であり得る。
【０１００】
用語「Ｋａｂａｔ番号付け」または「Ｋａｂａｔ標識付け」は、本明細書において互換的に使用される。当該技術分野において認識されているこれらの用語は、ある抗体の重鎖および軽鎖可変領域内で他のアミノ酸残基よりも可変的である（すなわち、超可変である）アミノ酸残基を番号付けするシステムを指す（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１））。
【０１０１】
用語「ＥＵ番号付け」または「ＥＵ標識付け」は、本明細書において互換的に使用される。当該技術分野において認識されているこれらの用語は、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能なＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）に基づいて可変ドメインおよび定常ドメインのアミノ酸残基を番号付けするシステムを指す。
【０１０２】
「患者」、「対象」、および「個体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、動物を指し、好ましくはこの用語は、ヒトを指す。ある種の実施形態では、対象、好ましくはヒトは、ヒトＩＬ−２３およびヒトＣＧＲＰの両方のレベルの減少または生物活性の低下から恩恵を受ける、疾患または障害または病態（例えば、自己免疫障害）をさらに特徴とする。別の実施形態では、対象、好ましくはヒトは、ＩＬ−２３およびＣＧＲＰの両方のレベルの減少または生物活性の低下から恩恵を受ける、疾患または障害または病態（例えば、自己免疫障害）を発症するリスクがあることをさらに特徴とする。
【０１０３】
二重特異性抗体の遺伝子操作
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体は、当該抗体を形成している２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖により、当該抗体の各アームがその同種抗原に対する選択的な一価の結合を示すという点でヘテロ二量体であり、当該抗体の一方のアームはヒトＣＧＲＰ（配列番号１）に結合し、他方のアームはヒトＩＬ−２３（配列番号２）のｐ１９サブユニットに結合する。
【０１０４】
完全なＩｇＧ構造を有する二重特異性抗体を生成する能力は、抗体工学において長年にわたる課題であった。完全なＩｇＧ二重特異性抗体の生成に向けた１つの提案は、発現された時に集合して２種の異なるＦａｂを含む単一抗体を形成する２種の異なるＨＣ−ＬＣ対をコードする核酸の共発現を必要とする。しかし、このアプローチに伴う課題が残されている。具体的には、所望の各Ｆａｂの発現されたポリペプチドは、不適当に組み合わせされた副産物の生成を減少させるために良好な特異性をもって集合しなければならず、得られたヘテロ四量体は良好な安定性をもって集合しなければならない。ＨＣ−ＨＣ界面の領域に改変を導入することによって特定のＨＣ−ＨＣ対の組み立てを導くための手法が、当該技術分野において開示されている。（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．６，ｐａｇｅｓ  １ー１１，２０１２、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｖｏｌ．２４８，ｐａｇｅｓ  ７ー１５，２００１、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２８５，ｐａｇｅｓ  １９６３７ー１９６４６，２０１０、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．６，ｐａｇｅｓ  ７８１ー７８８，１９９７、およびＩｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，Ｖｏｌ．２３  ｐａｇｅｓ  ６６７ー６７７，２０１０を参照のこと）。しかし、代替の方法の必要性が依然として存在し、本発明の二重特異性抗体はその適切な組立を駆動するために遺伝子操作された。
【０１０５】
親抗ＣＧＲＰおよび抗ＩＬ−２３抗体は、ヒトカッパ軽鎖定常領域を有する。にもかかわらず、二重特異性抗体のＩＬ−２３部分をラムダ軽鎖定常領域に改変することが本発明の二重特異性抗体の適切な組立てを改善するということが発見された。したがって、本発明の二重特異性抗体について、当該抗体の抗ＣＧＲＰアームの軽鎖定常領域はカッパ軽鎖であり、当該抗体の抗ＩＬ−２３ｐ１９アームの軽鎖定常領域はラムダ軽鎖である。
【０１０６】
加えて、生殖細胞系列の参照配列に対する多数の遺伝子操作による変異により、特異的なヘテロ二量体化が駆動される。本発明の抗体の親抗ＣＧＲＰアームおよび本発明の抗体の改変された親抗ＩＬ−２３アーム（ラムダ軽鎖）の生殖細胞系列の参照配列は、以下の通りである。
【表１】
0006948457.tif 000002
【０１０７】
ヘテロ二量体化を駆動する遺伝子操作による変異を、以下の表１に要約する。アミノ酸の番号付けは、直線的番号付けを適用する。Ｋａｂａｔ／ＥＵ番号付けは括弧内に掲示され、異なる相補性決定領域（ＣＤＲ）長およびサブクラスを有する免疫グロブリン全体の比較を可能にする。具体的には、Ｋａｂａｔ番号付けは、ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、ヒンジおよびＣＬドメインにおいてなされる変異について括弧内に掲示され、ＥＵ番号付けは、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインにおいてなされる変異について括弧内に掲示される。
【表２】
0006948457.tif 000003
【０１０８】
上記の変異が、ＶＨ、ＣＨ１、ヒンジおよびＣＨ３ドメイン内の重鎖配列ならびにＶＬおよびＣＬドメイン内の軽鎖配列へと組み込まれる。ＶＨ、ＶＬ、ヒンジ、ＣＨ１およびＣＬの変異は、必要とされる重鎖と軽鎖の対の自然な対合を支持し、軽鎖の誤対合が回避されるようになされる。ＣＨ３の変異は、２種の異なる重鎖のヘテロ二量体対合を支持し、ホモダイマーの形成が回避されるようになされる。
【０１０９】
加えて、ＨＣおよびＬＣのＣ末端の短縮は、不均一性を低減し、安定性を改善し得る。上記に示した生殖細胞系列の参照配列に対して、抗ＣＧＲＰ  ＨＣを４４８位でのリジンの除去（ＥＵ番号付けにしたがって、脱４４８Ｋ、脱４４７Ｋ）によって切断してもよく、抗ＩＬ−２３  ＨＣを４４４位でのリジンの除去（ＥＵ番号付けにしたがって、脱４４４Ｋ、脱４４７Ｋ）によって切断してもよく、抗ＩＬ−２３  ＬＣを２１２位でのリジンの除去（ＥＵ番号付けにしたがって、脱Ｓ２１２、脱Ｓ２１５）によって切断してもよい。
【０１１０】
所望により、本発明のある種の抗体は、ヒトＩｇＧ１に由来するＦｃ部分を含む。ＩｇＧ１は、Ｆｃγ受容体ファミリー（ＦｃγＲ）のタンパク質およびＣ１ｑに結合することがよく知られている。これらの受容体との相互作用は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導し得る。したがって、本発明のある種の抗体について、免疫エフェクター機能を除去するためにある種のアミノ酸置換がＩｇＧ１  Ｆｃに導入される。本発明の抗体の抗ＣＧＲＰ部分のＣＨ２領域における変異は、２３６位および２３７位（Ｋａｂａｔ番号付けにしたがって、２３４および２３５）が挙げられる。上記に示した生殖細胞系列の参照配列に対する特定の変異としては、Ｌ２３６Ａ（Ｌ２３４Ａ）およびＬ２３７Ａ（Ｌ２３５Ａ）が挙げられる。本発明の抗体の抗ＩＬ−２３部分のＣＨ２領域における変異は、２３２位および２３３位（Ｋａｂａｔ番号付けにしたがって、２３４および２３５）が挙げられる。上記に示した生殖細胞系列の参照配列に対する特定の変異としては、Ｌ２３２Ａ（Ｌ２３４Ａ）およびＬ２３３Ａ（Ｌ２３５Ａ）が挙げられる。
【０１１１】
遺伝子操作による変異は上記に示した生殖細胞系列の参照配列に対して記載されるレベルであるが、指定されるアミノ酸が遺伝子操作された最終的なＩｇＧ二重特異性抗体の示される位置にある限り、当業者は代わりの生殖細胞系列配列を利用してもよいことを認めるであろう。例えば、本発明の二重特異性抗体は、以下のアミノ酸が、遺伝子操作された最終的なＩｇＧ二重特異性抗体におけるＫａｂａｔおよびＥＵ番号付けに従った以下の位置にある限り、異なるＩｇＧ１  ＨＣアロタイプまたはＩｇＧ４  ＨＣアイソタイプを有してもよい。
【表３】
0006948457.tif 000004
【０１１２】
同様に、本発明の二重特異性抗体は、以下のアミノ酸が、遺伝子操作された最終的なＩｇＧ二重特異性抗体におけるＫａｂａｔおよびＥＵ番号付けに従った以下の位置にある限り、異なるカッパまたはラムダＬＣアロタイプを有してもよい。
【表４】
0006948457.tif 000005
【０１１３】
ある種の生物学的系において発現される場合、Ｆｃ配列を有する抗体はＦｃ領域においてグリコシル化される。典型的には、グリコシル化は、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位の抗体のＦｃ領域に生じる。Ｎ−グリカンは典型的には、アスパラギンに結合する。抗体は、他の位置でもグリコシル化され得る。
【０１１４】
本発明の例証されるＩｇＧ二重特異性抗体の様々な領域の関係を、表２（ａ）および（ｂ）に示す。アミノ酸の番号付けは、直線的番号付けを適用する。Ｋａｂａｔ番号付け（ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、ヒンジおよびＣＬドメインについて）およびＥＵ（ＣＨ２およびＣＨ３ドメインについて）番号付けを、表２（ａ）および（ｂ）に記載の例証される二重特異性抗体における遺伝子操作による変異の位置を決定するために使用することができる。
【表５−１】
0006948457.tif 000006
【表５−２】
0006948457.tif 000007
【表６】
0006948457.tif 000008
【０１１５】
二重特異性抗体の結合および活性
本発明の二重特異性抗体は、ヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ２３ｐ１９の両方に結合し、インビトロまたはインビボにおいて少なくとも１つのヒトＣＧＲＰ生物活性および少なくとも１つのヒトＩＬ−２３生物活性を中和する。本発明の二重特異性抗体は、インビトロにおいてＣＧＲＰの存在および不在下でのＩＬ−２３の阻害剤である。本発明の二重特異性抗体は、インビトロにおいてＩＬ−２３の存在および不在下でのＣＧＲＰの阻害剤である。
【０１１６】
例証される本発明の第１の二重特異性抗体（抗体１）は、３７℃でのヒトＣＧＲＰに対する７．１±３．８ｐＭの範囲の結合親和性（ＫＤ）およびヒトＩＬ２３ｐ１９に対する０．６±０．１ｐＭの範囲の結合親和性（ＫＤ）を有することを特徴とする。
【０１１７】
本発明の二重特異性抗体はＣＧＲＰを効果的に中和し、この中和は飽和量のヒトＩＬ−２３の存在によって影響を受けない。本発明の二重特異性抗体はヒトＩＬ−２３を効果的に中和し、この中和は飽和量のヒトＣＧＲＰの存在によって影響を受けない。
【０１１８】
二重特異性抗体の発現
ＨＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、例えばＰＣＲ増幅によって得ることができる。
【０１１９】
ＬＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子に変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、ＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。好ましくは、本発明の抗体について、当該抗体の抗ＣＧＲＰ部分の軽鎖定常領域はカッパ軽鎖であり、当該抗体の抗ＩＬ−２３部分の軽鎖定常領域はラムダ軽鎖である。
【０１２０】
本発明のポリヌクレオチドは、当該配列が発現制御配列に作動可能に連結された後、宿主細胞において発現される。作動可能に連結されている遺伝子の発現を導くことができる発現ベクターは、当該技術分野において周知である。発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチド（複数可）の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチドであり得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。
【０１２１】
第１のＨＣポリペプチド鎖（抗ＣＧＲＰ）および第１のＬＣポリペプチド鎖（抗ＣＧＲＰ）は、１つのベクター内でそれらが作動可能に連結される異なるプロモーターから独立して発現されてもよく、あるいは、第１のＨＣおよびＬＣポリペプチド鎖（抗ＣＧＲＰ）は、２つのベクター（１つが第１のＨＣポリペプチド鎖（抗ＣＧＲＰ）を発現し、１つが第１のＬＣポリペプチド鎖（抗ＣＧＲＰ）を発現する）内でそれらが作動可能に連結される異なるプロモーターから独立して発現されてもよい。同様に、第２のＨＣポリペプチド鎖（抗ＩＬ−２３）および第２のＬＣポリペプチド鎖（抗ＩＬ−２３）は、１つのベクター内でそれらが作動可能に連結される異なるプロモーターから独立して発現されてもよく、あるいは、第２のＨＣおよびＬＣポリペプチド鎖（抗ＩＬ−２３）は、２つのベクター（１つが第２のＨＣポリペプチド鎖（抗ＩＬ−２３）を発現し、１つが第２のＬＣポリペプチド鎖（抗ＩＬ−２３）を発現する）内でそれらが作動可能に連結される異なるプロモーターから独立して発現されてもよい。
【０１２２】
宿主細胞は、第１のＨＣポリペプチド鎖、第１のＬＣポリペプチド鎖、第２のＨＣポリペプチド鎖および第２のＬＣポリペプチド鎖を発現する１つ以上の発現ベクターで安定的にまたは一過的にトランスフェクト、形質転換、形質導入、または感染した細胞を含む。本発明の二重特異性抗体を産生する宿主細胞株の作製および単離は、当該技術分野において既知の標準的技術を使用して達成され得る。哺乳動物細胞は、二重特異性抗体の発現に好ましい宿主細胞である。具体的な哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＤＧ−４４、およびＣＨＯである。好ましくは、二重特異性抗体は、宿主細胞が培養され、二重特異性抗体が回収または精製され得る培地中に分泌される。
【０１２３】
哺乳動物による抗体の発現がグリコシル化をもたらすことは、当該技術分野において周知である。典型的には、グリコシル化は、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位の抗体のＦｃ領域に生じる。Ｎ−グリカンは、典型的にはアスパラギンに結合する。一例として、表２（ａ）に示す例証される二重特異性抗体のＣＧＲＰアームのＨＣは、Ｎ２９９（ＥＵ番号付けにしたがってＮ２９７）でグリコシル化され、表２（ａ）に示す例証される二重特異性抗体のＩＬ−２３アームのＨＣは、Ｎ２９５（ＥＵ番号付けにしたがってＮ２９７）でグリコシル化される。
【０１２４】
二重特異性抗体が分泌されている培地は、従来の技術によって精製され得る。例えば、培地は、従来の方法を使用して、タンパク質ＡまたはＧカラムにアプライされ、そこから溶出され得る。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技術によって効率的に除去することができる。生成物を、例えば、−７０℃で直ちに凍結してもよく、冷蔵してもよく、または凍結乾燥してもよい。タンパク質精製の様々な方法が用いられ得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８２：８３−８９（１９９０）、およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。
【０１２５】
治療使用
本明細書で使用される場合、「治療」および／または「治療すること」は、本明細書に記載される障害の進行の緩徐化、妨害、抑止、制御、または停止が存在し得る全ての方法を指すことが意図されるが、全ての障害の症状の完全な消失を必ずしも示さない。治療は、ＣＧＲＰおよび／またはＩＬ−２３のレベルの低下またはＣＧＲＰおよび／またＩＬ−２３の生物活性の低下から恩恵を受ける哺乳動物、特にヒトにおける、疾患または病態の治療のための本発明の二重特異性抗体の投与を含み、（ａ）疾患の更なる進行を阻害すること、すなわち、その進展を抑止すること、および（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患または障害の後退を引き起こすか、またはその症状または合併症を緩和することを含む。
【０１２６】
本発明の二重特異性抗体は、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）などの自己免疫性炎症性疾患、ならびに乾癬性関節炎、強直性脊椎炎およびアトピー性皮膚炎を含む他の自己免疫疾患を含む自己免疫疾患を治療することが期待される。
【０１２７】
医薬組成物
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体は、患者への投与に好適な医薬組成物に組み込まれ得る。本発明のＩｇＧ二重特異性抗体は、患者に単独で投与してもよく、または単回用量または複数回用量で薬学的に許容される担体および／または希釈剤と共に投与してもよい。そのような医薬組成物は、選択された投与様式に適切であるように設計され、薬学的に許容される希釈剤、担体、ならびに／または賦形剤（例えば、分散剤、緩衝液、界面活性剤、保存剤、可溶化剤、等張剤、および安定剤）が必要に応じて使用される。当該組成物は、例えば、診療医にとって一般に公知の製剤技術の概要を提供する、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｏｙｄ  Ｖ，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２に開示される従来の技術にしたがって設計され得る。医薬組成物に好適な担体としては、本発明の二重特異性抗体と組み合わせた場合に分子の活性を保持し、かつ患者の免疫系とは非反応性である、任意の材料が挙げられる。本発明の医薬組成物は、ＩｇＧ二重特異性抗体、および１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
【０１２８】
本発明のＩｇＧ二重特異性抗体を含む医薬組成物は、本明細書に記載の疾患または障害のリスクがあるか、またはそれを呈する患者に、標準的な投与技術を使用して投与され得る。
【０１２９】
本発明の医薬組成物は、「有効」量の本発明のＩｇＧ二重特異性抗体を含有する。有効量とは、所望の治療結果を達成するために必要な量（投与量および期間および投与手段において）を指す。有効量の二重特異性抗体は、疾患の状態、個体の年齢、性別、体重、ならびに抗体または抗体部分が個体において所望される応答を誘発する能力などの要因にしたがって変動し得る。また有効量は、治療上有益な効果が本発明のＩｇＧ二重特異性抗体の任意の毒性または有害効果に勝る量である。
【実施例】
【０１３０】
以下の実施例により、本発明をさらに説明する。しかし、実施例は例証として記載され、限定としては記載さないこと、および当業者により様々な改変がなされ得ることが理解されよう。
【０１３１】
二重特異性抗体の産生
二重特異性抗体１は２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、第１の重鎖は配列番号７に示すアミノ酸配列を有し、第１の軽鎖は配列番号８に示すアミノ酸配列を有し、第２の重鎖は配列番号９に示すアミノ酸配列を有し、第２の軽鎖は配列番号１０に示すアミノ酸配列を有する。二重特異性抗体１は、以下の通りに作製し、精製することができる。
【０１３２】
最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比率、または重鎖（配列番号７および９）および軽鎖（配列番号８および１０）の両方をコードする単一のベクターシステムを使用して二重特異性抗体を分泌するための発現システムでＨＥＫ２９３またはＣＨＯなどの適切な宿主細胞を、一過的にまたは安定的にトランスフェクトする。抗体が分泌された清澄化培地を、多くの一般的に使用される技術のいずれかを使用して精製する。例えば、例証される二重特異性抗体１が分泌された清澄化培地を、２０ｍＭのＴＲＩＳ（ｐＨ８．０）などの適合性緩衝液で平衡化したタンパク質Ａ親和性カラムにアプライする。カラムを２０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．０）で洗浄して非特異的結合成分を除去し、続いて、高濃度塩洗浄により非特異的成分をさらに除去する。カラムを２０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．０）に再平衡化し、次いで、例えば、２０ｍＭのクエン酸（ｐＨ３．０）などのｐＨステップまたは勾配によって結合した二重特異性抗体を溶出させ、Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）緩衝液で中和する。二重特異性抗体１を、２８０ｎｍでの吸光度によって検出し、それに応じて回収する。タンパク質Ａにより捕捉された物質の特徴付けは、ＬＣ誤組み立て（２％）、ＨＭＷポリマーが少ない（４％）ことを示す。誤組み立て二重特異性抗体１、可溶性凝集体および多量体は、疎水性相互作用クロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去され得る。例えば、ＬＣ誤組み立ておよび低いＨＭＷポリマー形成のレベルは、疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用した第２の精製カラムを使用して、それぞれ０．６％および１％まで低減される。一般的な技術を使用して、二重特異性抗体１を濃縮および／または無菌濾過する。これらのクロマトグラフィーステップ後の二重特異性抗体１の純度は、９８．０％を超える（単量体）。二重特異性抗体１は、−７０℃で直ちに凍結されてもよく、４℃で数ヶ月間保存されてもよい。
【０１３３】
ヒトＩＬ−２３およびヒトＣＧＲＰに対する二重特異性抗体１の結合親和性
ヒト、カニクイザル、マウス、ラットおよびウサギのＩＬ−２３に対する二重特異性抗体１の親和性および動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ、ウプサラ、スウェーデン）を使用して測定する。要約すると、プロテインＡを結合させたＣＭ５チップを、標準的なアミンカップリングプロトコールを使用して作製する。二重特異性抗体１をランニング緩衝液で１μｇ／ｍＬまで希釈し、約１００ＲＵをチップ表面に捕捉させる。各リガンドの濃度系列を１００μＬ／分で１８０秒間全てのフローセルに注入し、続いて９００秒間の解離相とし、続いてチップを再生した。データを、０ｎＭのブランク減算と共にフローセル１の参照減算によってＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（バージョン１．０）で分析する。ヒト、カニクイザルおよびウサギＩＬ−２３のデータを「１：１（ラングミュア）結合」結合モデルを使用してグローバルフィッティングし、各リガンドについてオンレート（ｋｏｎ）およびオフレート（ｋｏｆｆ）を決定する。以下の関係にしたがって結合動態から親和性（ＫＤ）を算出する。
【数１】
0006948457.tif 000009
マウスＩＬ−２３の結合データを「定常状態親和性」結合モデルを使用して適合させ、親和性（ＫＤ）を決定する。結合の化学量論性を、以下の関係にしたがって算出する。結合の化学量論性を、以下の関係にしたがって算出する。
【数２】
0006948457.tif 000010
（式中、ＭＷ抗原はヒトＩＬ−２３の分子量であり、ＭＷ二重特異性抗体１は１５０ｋＤａである）。
【０１３４】
様々な種に由来するＩＬ−２３は、二重特異性抗体１との濃度依存的な結合反応を引き起こす。様々なＩＬ−２３分子に対する二重特異性抗体１のオンレート（ｋｏｎ）、オフレート（ｋｏｆｆ）、親和性（ＫＤ）および化学量論を表３（ａ）にまとめる。二重特異性抗体１は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−２３に対する同程度の親和性を示す。二重特異性抗体１は、マウス、ラットおよびウサギＩＬ−２３に対する非常に弱い親和性を示すか、親和性を示さない。ヒトＩＬ−２３について二重特異性抗体１のＫＤは、３７℃で０．６±０．１×１０−９Ｍ（ｎ＝４）であり、カニクイザルＩＬ−２３については、３７℃で１．３±０．１×１０−９Ｍ（ｎ＝２）であり、マウスＩＬ−２３については、３７℃で＞１００×１０−９Ｍである、ラットＩＬ−２３については、３７℃では識別可能な結合は観察されず、ウサギＩＬ−２３については、３７℃で１，０１６×１０−９Ｍである。
【表７】
0006948457.tif 000011
【０１３５】
ヒト／カニクイザル、マウス／ラットおよびウサギのＣＧＲＰに対する二重特異性抗体１の親和性および動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００またはＴ２００機器（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ、ウプサラ、スウェーデン）を使用して測定する。要約すると、プロテインＡを結合させたＣＭ５チップを、標準的なアミンカップリングプロトコールを使用して作製する。ＣＧＲＰに対する親和性および動態について、二重特異性抗体１をランニング緩衝液で２０μｇ／ｍＬまで希釈し、約１０００〜１６００ＲＵをチップ表面に捕捉させる。各リガンドの濃度系列を７０〜１００μＬ／分で１８０秒間全てのフローセルに注入し、続いて１５００〜１８００秒間の解離相とし、続いてチップを再生する。
【０１３６】
全ての親和性および動態の測定値を、３７℃で得る。データを、０ｎＭのブランク減算と共にフローセル１の参照減算によって分析する。各リガンドについてオンレート（ｋｏｎ）およびオフレート（ｋｏｆｆ）を「１：１（ラングミュア）結合」結合モデルを使用してグローバルフィッティングする。以下の関係にしたがって結合動態から親和性（ＫＤ）を算出する。
【数３】
0006948457.tif 000012
結合の化学量論性を、以下の関係にしたがって算出する。
【数４】
0006948457.tif 000013
（式中、ＭＷ抗原はヒトＣＧＲＰの分子量であり、ＭＷ二重特異性抗体１は１５０ｋＤａである）。
【０１３７】
様々な種に由来するＣＧＲＰは、二重特異性抗体１との濃度依存的な結合反応を引き起こす。様々なＣＧＲＰ分子に対する二重特異性抗体１のオンレート（ｋｏｎ）、オフレート（ｋｏｆｆ）および親和性（ＫＤ）を表３（ｂ）にまとめる。二重特異性抗体１は、ヒト／カニクイザルおよびウサギのＣＧＲＰに対して強い親和性を示すが、マウス／ラットに対してはわずかに弱い親和性を示す。ヒト／カニクイザルＣＧＲＰについて二重特異性抗体１のＫＤは、３７℃で７．１±３．８×１０−１２Ｍ（ｎ＝３）であり、マウス／ラットＣＧＲＰについては、３７℃で１６９×１０−１２Ｍであり、ウサギＣＧＲＰについては、３７℃で２１×１０−１２Ｍである。
【表８】
0006948457.tif 000014
【０１３８】
ヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３の同時結合
二重特異性抗体１が同時にヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３の両方に結合することができるかどうか調べるため、飽和量の一方のリガンドを捕捉された二重特異性抗体に結合させ、次いで第２のリガンドを結合を試験するために注入するＢＩＡｃｏｒｅ実験を実施する。ＳＰＲシグナルの強度はモル濃度ではなく分子量に依存しているため、２つのリガンドからの応答の大きさは、大きく異なると思われる（１５倍、ヒトＣＧＲＰは約４ｋＤａであるのに対し、ヒトＩＬ−２３は約６０ｋＤａである）。
【０１３９】
ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、二重特異性抗体１が、ヒトＩＬ−２３およびヒトＣＧＲＰの両方に同時に結合することができるかどうかを決定する。ＣＭ５チップ（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｐ／Ｎ  ＢＲ−１００５−３０）を、製造者のＥＤＣ／ＮＨＳアミンカップリング法（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｐ／Ｎ  ＢＲ−１０００−５０）を使用して作製する。要約すると、ＥＤＣ／ＮＨＳの１：１混合物を１０μＬ／分で７分間注入することによって４つ全てのフローセルの表面を活性化させる。タンパク質Ａ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐ／Ｎ  ５３９２０２）を、ｐＨ４．５の１０ｍＭ酢酸緩衝液で５０μｇ／ｍＬまで希釈し、１０μＬ／分の流速で３分間の注入によって４つ全てのフローセル上に約１３００ＲＵまで固定化する。未反応部位を、１０μＬ／分で７分間のエタノールアミンの注入によってブロッキングする。ｐＨ１．５のグリシンを１０μＬ／分の３０秒間の注入を１０回行うことにより、任意の非共有結合したタンパク質を除去し、チップをコンディショニングする。ランニング緩衝液は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のポリソルビン酸２０（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｐ／Ｎ  ＢＲ−１００６−６９）である。
【０１４０】
二重特異性抗体１をランニング緩衝液で２μｇ／ｍＬまで希釈し、約１２００ＲＵをフローセル（Ｆｃ）２上に捕捉する（ＲＵ二重特異性抗体１）。ヒトＣＧＲＰをランニング緩衝液で４０ｎＭまで希釈し、次いで、ランニング緩衝液で１０ｎＭまで２倍に連続希釈する。ヒトＩＬ−２３を、ランニング緩衝液で１５０ｎＭまで希釈する。ヒトＣＧＲＰ希釈物を、濃度を増加させて逐次的に注入して二重特異性抗体１の全てのヒトＣＧＲＰ結合部位をブロッキングする。ヒトＩＬ−２３を、ヒトＣＧＲＰ注入直後に注入する。データを、フローセル１の参照減算によって分析する。ヒトＣＧＲＰ結合部位が飽和するのを確実にするために、結合の化学量論性を以下の関係にしたがって算出する。
【数５】
0006948457.tif 000015
（式中、ヒトＣＧＲＰおよび抗体のＭＷはそれぞれ３．８ｋＤａおよび１５０ｋＤａである）。結合の測定値は、２５℃で得る。
【０１４１】
化学量論性およびヒトＣＧＲＰ濃度の増加に伴うＳＰＲシグナルの増加がないことにより、二重特異性抗体１上の全ての結合部位が飽和していることを確認する。その後のヒトＩＬ−２３の注入により、二重特異性抗体１が両方のリガンドに同時に結合することを実証する結合反応が引き起こされる。ヒトＣＧＲＰ飽和後の二重特異性抗体１のヒトＩＬ−２３への結合を表４にまとめる。ヒトＣＧＲＰ濃度の増加により２０ｎＭの注入後には更なる結合が観察されず、全ての利用可能な結合部位が占められていることを示す。ＣＧＲＰ注入後のヒトＣＧＲＰの二重特異性抗体１に対する化学量論性は０．８であり、二重特異性抗体１のヒトＣＧＲＰ結合部位が飽和しているか、または飽和に非常に近いことを示す。その後のヒトＩＬ−２３注入は、結合反応を引き起こし、二重特異性抗体１がヒトＣＧＲＰおよびヒトＩＬ−２３リガンドの両方に同時に結合していることと一致する。
【表９】
0006948457.tif 000016
【０１４２】
二重特異性抗体１は、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２７またはヒトＩＬ−３５に結合しない
ヒトＩＬ−２３は、ｐ１９サブユニットおよびｐ４０サブユニットから成るジスルフィド結合したヘテロ二量体サイトカインである。ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２７およびヒトＩＬ−３５と共に、ヒトＩＬ−２３は、サイトカインのＩＬ−１２ファミリーの一部であり、ＩＬ−１２とｐ４０サブユニットおよび１つの受容体サブユニットを共有する。ＢＩＡｃｏｒｅバイオセンサー２０００を使用して、二重特異性抗体１がヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２７またはヒトＩＬ−３５に結合しないことを実証する。
【０１４３】
捕捉タンパク質（タンパク質Ａ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、Ｎ−エチル−Ｎ−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物を使用して、ＣＭ５バイオセンサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のフローセル１、２、３および４のカルボキシル基に遊離アミン基を介して結合させる。フローセルを、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０を含有する緩衝液を使用して３０μＬ／分の流速でモニタリングする。二重特異性抗体１を、フローセル２、３および４上に捕捉して、合計１００〜１５０の応答単位を生じさせる（ＲＵ、結果はフローセル１を引いたフローセル２、３または４を反映する）。各サイクル間では結合試験の後にグリシン−塩酸（ｐＨ  １．５）を使用した再生ステップが続く。フローセル１を対照として使用して、試験される分析物の非特異的結合をモニタリングする。二重特異性抗体１は、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２７またはヒトＩＬ−３５でそれぞれ２回試験される（全て４００ｎＭ）。
【０１４４】
二重特異性抗体１は、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２７またはヒトＩＬ−３５に対する測定可能な結合を示さない（全てＩＬ−２３の飽和濃度の約４０ｘである４００ｎＭで試験した）。
【０１４５】
二重特異性抗体１の溶解性および安定性分析
溶解性
二重特異性抗体１を、１０ｍＭのクエン酸（ｐＨ６、１５０ｍＭのＮａＣｌを有するおよび有さない（それぞれＣ６およびＣ６Ｎと省略））中に透析する。分子量フィルター（Ａｍｉｃｏｎ  ３０ｋＤａ限外濾過フィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＵＦＣ９０３０２４）を通した遠心分離によって、５０または約１００ｍｇ／ｍＬのいずれかまで試料を濃縮する。両方の試料の一部分に、０．０２体積％の最終濃度になるまでＴｗｅｅｎ−８０を添加する（それぞれＣ６ＴおよびＣ６ＮＴとさらに省略）。冷蔵条件および室温条件下での溶解性、凍結解凍安定性、および保存安定性について、選択した製剤を分析する。
【０１４６】
二重特異性抗体１は、Ｃ６およびＣ６Ｎ製剤中でそれぞれ少なくとも１３１ｍｇ／ｍＬまたは１７６ｍｇ／ｍＬまで濃縮することができる。上述のように濃縮した後、沈殿または相分離について試料を室温で目視検査し、その後、暗所で、４℃にて１週間保存し、再目視検査する。−５℃でさらに１週間、および−１０℃でさらに１週間保管した後、同一の試料に対してこの手順を繰り返す（溶解した物質の濃度のために、試料は凍結しないことに留意されたい）。溶解性分析の結果を、表５（ａ）に示す。二重特異性抗体１は、いずれの製剤または保存温度においても、目に見える沈殿または相分離も示さなかった。
【表１０】
0006948457.tif 000017
【０１４７】
化学的安定性
１ｍｇ／ｍｌでの化学安定性を、ｐＨ４〜７にわたって１ｐＨ単位間隔で特徴付ける。これらの試料に４、２５および４０℃にて４数週間ストレスを与えて、分解をＳＥＣ、ＣＥＸおよびＬＣ−ＭＳによって定量化する。化学安定性は、ｐＨ６で最大であることがわかる。４０℃にて４週間後のｐＨ６の試料でのＬＣ−ＭＳにより、ＣＤＲ内での低レベルの分解が確認される。具体的には、抗ＣＧＲＰ  ＨＣ（配列番号７）内のトリプトファン残基３３（Ｔｒｐ３３）、メチオニン残基３４（Ｍｅｔ３４）またはトリプトファン残基３６（Ｔｒｐ３６）での１．１％の酸化、および抗ＩＬ−２３  ＨＣ（配列番号９）内のアスパラギン酸残基５６（Ａｓｐ５６）での３．９％の異性化／ラセミ化が観察される。
【０１４８】
凍結解凍安定性
二重特異性抗体１を、高濃度での凍結解凍安定性について試験する。Ｃ６ＴおよびＣ６ＮＴ中、５０および１００ｍｇ／ｍＬの製剤を３回の緩徐な凍結解凍サイクルに供する。凍結および解凍の速度は、より大きな製造容器内で生じる速度を模倣するように制御する。真空下にない棚式凍結乾燥機を使用して、温度サイクルを表５（ｂ）に示すように制御する。
【表１１】
0006948457.tif 000018
【０１４９】
３回のサイクル後、材料を高分子量（ＨＭＷ）ポリマー形成についてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、およびＡｃｃｕＳｉｚｅｒ  ７８０  ＳＩＳ（Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して１０ミクロンより大きい粒子について光遮蔽によって分析する。結果を、表５（ｃ）に示す。二重特異性抗体１は、試験される全ての条件下で、ＨＭＷポリマーの低い百分率および低い粒子増加を一貫して示す。
【表１２】
0006948457.tif 000019
【０１５０】
冷蔵および室温安定性
一般的な医薬品（ＤＰ）製剤、１０ｍＭのクエン酸、０．０２％のＴｗｅｅｎ−８０（ｐＨ６．０、１５０ｍＭのＮａＣｌを有するおよび有さない（それぞれＣ６ＴおよびＣ６ＮＴと省略））下の冷蔵および室温安定性を、２および４週間の保持時間後、ＳＥＣおよび粒子計数によって評価する。結果を、それぞれ表５（ｄ）および（ｅ）に示す。データは、二重特異性抗体１がインキュベーション後の可溶性（ＨＭＷ％）および不溶性（≧１０ミクロンの粒子数）の低い増加を有することを実証する。
【表１３】
0006948457.tif 000020
【表１４】
0006948457.tif 000021
【０１５１】
粘度
４つの製剤（Ｃ６、Ｃ６Ｎ、Ｃ６Ｔ、およびＣ６ＮＴ）中１００ｍｇ／ｍＬでの二重特異性抗体１の室温での粘度を分析する。２５℃にて１０００／  秒の剪断速度を使用して、ｍ−ＶＲＯＣ（Ｒｈｅｏｓｅｎｓｅ）で測定を行う。結果が表５（ｆ）に示され、１５０ｍＭの塩を含有する製剤（Ｃ６ＮおよびＣ６ＮＴ）における二重特異性抗体１の低い粘度を示す。
【表１５】
0006948457.tif 000022
【０１５２】
光安定性
二重特異性抗体１の光安定性を、１つの製剤条件（Ｃ６ＮＴ）下、５０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で特徴付ける。この製剤を、２０％のＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＩＣＨ）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ推奨の曝露レベル（Ｑ１Ｂ−Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ：Ｐｈｏｔｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｎｏｖ  １９９６）に曝露する。これは、可視光の２４０，０００ルクス時間、および４０ワット時間／ｍ２の近ＵＶ光に等しい。カタログ０４０３０−３０７−ＣＷ可視ランプおよび０４０３０−３０８ＵＶ近ＵＶランプを備えたＢａｈｎｓｏｎ  ＥＳ２０００光チャンバ（Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｂａｈｎｓｏｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用する。８，０００ルクスの強度の可視光に３０時間、および１０ワット／ｍ２の近ＵＶ光に４時間、試料を曝露する。全ての曝露は、タイプＩホウケイ酸ガラスのＨＰＬＣバイアル内、２５℃である。曝露後、ＨＭＷポリマー形成パーセントをＳＥＣによって決定し、表５（ｇ）に示す。
【表１６】
0006948457.tif 000023
【０１５３】
Ｋｉｔ２２５細胞内のインビトロでのＩＬ−２３により媒介されるＳｔａｔ３活性の阻害
Ｋｉｔ２２５は、Ｔ細胞慢性リンパ性白血病を有する患者から確立されたヒトＴ細胞株である。これらの細胞はＩＬ−２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒβ１を天然に発現し、ヒトＩＬ−２３に対するこれらの応答は、リン酸化およびＳｔａｔ３経路の活性化をもたらす。ヒトＩＬ−２３のＳｔａｔ３経路を活性化する能力は、Ｓｔａｔ３ルシフェラーゼ構築物で安定的にトランスフェクトされたＫｉｔ２２５細胞内のルシフェラーゼ活性を測定することによって評価される。
【０１５４】
Ｋｉｔ２２５−Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ（クローン３）細胞を、アッセイ培地内で通例通り培養する。アッセイ当日、遠心分離によって細胞を収集し、大容量の無血清培地で洗浄し、無血清ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地中に再懸濁する。Ｋｉｔ２２５細胞（５０，０００個）を、白色／クリアボトムのＴＣ処理した９６ウェルプレートのウェルに添加し、ヒトＩＬ−２３の存在下、関心対象の薬剤（二重特異性抗体１）で処理する。０〜２０８９５０ｐＭの二重特異性抗体１の用量範囲を評価する。ヒトＩＬ−２３を、５０ｐＭの最終濃度になるまで各ウェルに添加する。「培地単独」および「ｈＩＬ−２３単独」対照では、アッセイ培地を単独で使用する。
【０１５５】
ＩＬ−２３中和抗体（０〜１０００００ｐＭの用量範囲で試験する）を陽性対照としてアッセイに使用する。０〜１２６，７９０ｐＭの用量範囲で試験したアイソタイプ対照抗体を陰性対照として使用する。試験は三度繰り返して実施する。プレートを組織培養インキュベーター内に４時間置く。Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏルシフェラーゼ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加して、処理時にアッセイを停止させる。ルミノメーター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ３）を使用して、プレートを読み取る。結果を二重特異性抗体１または陽性対照抗体によってＩＬ−２３により誘発されたＳｔａｔ３活性の５０％が阻害される濃度（ＩＣ５０）として表し、データの４パラメータのシグモイド曲線フィットを使用して計算する（Ｓｉｇｍａプロット）。一部の実験では、５０ｎＭのヒトＣＧＲＰをウェルに添加する。
【０１５６】
結果は、二重特異性抗体１が、濃度依存的な様式で、Ｋｉｔ２２５細胞内のヒトＩＬ−２３により誘発されたＳｔａｔ３活性を阻害することを実証する。二重特異性抗体１はヒトＩＬ−２３に結合する結合部位を１つしか有さないため、観察された阻害はヒトＩＬ−２３に対する２つの結合部位を有する陽性対照抗体で見られる阻害より小さく、陽性対照抗体について４６６±３１ｐＭであるに対して二重特異性抗体１については１８５６．５±３８４．５ｐＭのＩＣ５０である。陰性アイソタイプ対照抗体は、いかなる試験濃度でも、Ｋｉｔ２２５細胞内のＳｔａｔ３活性を阻害しない。
【０１５７】
ヒトＣＧＲＰ（１１９３ｐＭ）の存在下のＩＣ５０は上述のものと同等であるため、アッセイへの５０ｎＭのヒトＣＧＲＰの添加は、二重特異性抗体１の活性を改変しない。陰性アイソタイプ対照抗体は、いかなる試験濃度でも、Ｋｉｔ２２５細胞内のＳｔａｔ３活性を阻害しない。
【０１５８】
二重特異性抗体１はヒトＩＬ−２３の機能を効果的に中和し、ＩＬ−２３の阻害はヒトＣＧＲＰの存在によっては影響されない。
【０１５９】
インビトロでのＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞内のＣＧＲＰによって誘導されるｃＡＭＰ産生の阻害
ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞は、ＣＧＲＰ受容体を内因的に発現するヒト神経芽細胞腫細胞株である。この受容体は、細胞内Ｇαｓタンパク質と機能的に共役している。この受容体を、その天然アゴニストであるヒトＣＧＲＰペプチドにより刺激すると、ｃＡＭＰ合成の増加をもたらす。細胞内に存在するｃＡＭＰの量は、標準的なインビトロ技術を使用して検出することができるため、このパラメータを受容体活性の尺度として使用する。
【０１６０】
培養したＳＫ−Ｎ−ＭＣを、１０％の熱失活ＦＢＳ、非必須アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、および１０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンで補助したＭＥＭ内で、約７０％のコンフルエンスになるまで成長させる。新鮮な培地を提供した後、細胞を３７℃で一晩インキュベートする。アッセイ当日、Ａｃｃｕｔａｓｅを使用して細胞を剥離させ、アッセイ緩衝液（Ｍｇ＋＋およびＣａ＋＋を１：２で混合したＨＢＳＳ／ＤＰＢＳ、３．３ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．０３％のＢＳＡ、０．５ｍＭのＩＢＭＸ）中に再懸濁し、３０００〜５０００個／ウェルで、３８４ウェルのポリＤ−リジンコートの白色プレートに播種する。
【０１６１】
二重特異性抗体１を、１０ｎＭから０．５ｐＭまでアッセイ緩衝液で３倍希釈する（二重特異性抗体のＭＷは１５０ｋＤａである）。希釈した二重特異性抗体１、陽性対照抗体（米国特許出願番号第２０１１／３０５７１１Ａ号に記載のＣＧＲＰ中和抗体）、またはアイソタイプ対照抗体を、ヒトＩＬ−２３（１０ｎＭ、最終濃度）または等容量の緩衝液と混合するか、または混合せずに細胞と共に室温で３０分間インキュベートする。ヒトＣＧＲＰペプチド（Ｂａｃｈｅｍ  Ｈ−１４７０）をそのＥＣ８０濃度（０．８ｎＭ）で添加し、プレートを室温で６０分間インキュベートする。
【０１６２】
１０ｎＭの強力な低分子参照アゴニスト（Ｋｂ＝０．０１ｎＭ）であるＢＩＢＮ４０９６（Ｔｏｃｒｉｓ）を使用して、シグナル域を決定する。ＨＴＲＦ技術（ホモジニアス時間分解蛍光法、Ｃｉｓｂｉｏ）を販売者の使用説明書にしたがって使用して、細胞内ｃＡＭＰの量を定量化する。要約すると、溶解緩衝液中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体および抗ｃＡＭＰ−クリプテート結合体を、処理した細胞と共に室温で６０〜９０分間インキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を使用してＨＴＲＦシグナルを直ちに検出して、６６５〜６２０ｎＭでの蛍光の比率を計算する。各実験のために生成したｃＡＭＰ検量線を使用して、生データをｃＡＭＰ量（ピコモル／ウェル）に変換する。４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２またはＧｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ  ｖ１２．０．４）を使用して、濃度応答曲線の上下範囲から相対ＥＣ５０値を算出し、以下の等式を使用して、アゴニスト補正ＩＣ５０値としてＫｂ値を推定する。
【数６】
0006948457.tif 000024
【０１６３】
結果は、二重特異性抗体１が、用量依存的な様式で、ＣＧＲＰに刺激されたｃＡＭＰ生成を阻害することを実証し、推定Ｋｂは０．０４ｎＭであり、最大効果は陽性対照抗体によって引き起こされたものに等しい（表６）。１０ｎＭのヒトＩＬ−２３の存在は、二重特異性抗体１または陽性対照抗体による阻害には影響を与えない。対称的に、アイソタイプ対照抗体は、いかなる試験濃度でも、ＣＧＲＰによって誘発されたｃＡＭＰ生成を阻害しない。
【表１７】
0006948457.tif 000025
【０１６４】
インビボでのヒトＩＬ−２３によって誘発されたマウスＩＬ−２２生成の阻害
ヒトＩＬ−２３の投与は、正常なＢａｌｂ／ｃマウスにおいてインビボでのマウスＩＬ−２２の生成を引き起こす。二重特異性抗体１が、インビボでのマウスＩＬ−２２のヒトＩＬ−２３によって誘発された生成を阻害するかどうかを理解するために、正常なＢａｌｂ／ｃマウス（Ｎ＝５）に、０．３１２、１．２５または５ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗体１、または２．５ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−２３抗体（陽性対照）、または５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体をＩＰ注射する。注射の２日後、マウスを５０ｎｍｏｌ／ｋｇのヒトＩＬ−２３のＩＰ注射によって曝露する。ヒトＩＬ−２３への曝露の５時間後、マウスを屠殺し、血清を収集する。市販のＥＬＩＳＡを使用して血清をマウスＩＬ−２２生成について、および抗体の曝露について分析される。
【０１６５】
結果は、二重特異性抗体１による処理が濃度依存的な様式でヒトＩＬ−２３の機能を無効にし、全ての用量でアイソタイプ対照と比較して統計的に有意な阻害を引き起こすことを実証する。二重特異性抗体１によって観察される結果は、陽性対照抗体による阻害と同等である。陰性対照抗体は、ヒトＩＬ−２３によって誘発されるマウスＩＬ−２２生成の増加を阻害しない。
【０１６６】
この実験は、二重特異性抗体１がインビボでヒトＩＬ−２３機能の無効化によってマウスＩＬ−２２の生成を阻害することを実証する。
【０１６７】
カプサイシンによって誘発されるラット皮膚血流の増加の阻害
カプサイシン誘発性レーザードップラーイメージング（ＬＤＩ）血流法は、皮膚に局所的に適用され、ＬＤＩを使用してモニタリングできる皮膚血流（ＤＢＦ）の局所的変化を引き起こすカプサイシン溶液に基づく。この方法は、一過性受容器電位陽イオンチャネルサブファミリーＶメンバー１（ＴＲＰＶ１）受容体のカプサイシンによる活性化、その後の皮膚の血管でのＣＧＲＰの局所的放出およびＣＧＲＰ受容体の活性化に依存する。カプサイシン誘発性皮膚血管拡張モデルは、前臨床モデルにおける標的の関与を評価するために適用されており、臨床への橋渡しである。
【０１６８】
二重特異性抗体１、陽性対照（米国特許出願番号第ＵＳ２０１１／３０５７１１Ａ号に記載の抗ＣＧＲＰ中和抗体）、およびアイソタイプ対照（ヒトＩｇＧ１）を、ＰＢＳ中に調製する。ＬＤＩ測定の５日前に、ルイスラット（１群あたりｎ＝８）に８、４および１ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗体１、４ｍｇ／ｋｇの陽性対照またはアイソタイプ対照をＳＣ投与し、実験前に一晩絶食させる。実験操作者は、処置について盲検である。
【０１６９】
ＬＤＩ測定の当日、ラットをイソフルランにより麻酔し、スキャニング前にラット腹部を剪毛する。ラットをレーザーヘッド下の温熱パッド上に置き、動物の体温を安定化すると共に、スキャニング前の約１５分間、約１％未満のイソフルラン麻酔下に置く。この安定化期間中、（可視の血管および高基礎血流範囲から離れた）３つのネオプレンＯリングの正確な位置付けのために、予備スキャンを得る。スキャンシリーズを２回のベースラインスキャンで開始する。第２のスキャンの完了後、８μＬ（２ｍｇ）のカプサイシン溶液を３つのＯリングのそれぞれに適用する（１２０μＬのＥｔＯＨ、８０μＬのＴｗｅｅｎ２０、および２００μＬの精製Ｈ２Ｏの溶液中１００ｍｇのカプサイシン）。２．５分毎のスキャンで、スキャニングをさらに２５分間継続する。スキャンの完了後、血清分析のために静脈血液試料を得る。生データを、ソフトウェアのｍｏｏｒＬＤＩ（バージョン５．３）で各Ｏリング内の関心対象の円形領域（ＲＯＩ）を選択することによって分析する。各ＲＯＩのピクセルの平均値を灌流単位（ＰＵ）で得て、各スキャンについて血流の相対変化を算出するために使用した。各シリーズにおける最初の２回のスキャンの平均をベースラインとして使用して、その後のスキャンは
【数７】
0006948457.tif 000026
を使用してベースライン値に正規化する。グラフ化のために分析したデータをＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ６に入力し、ＡＮＯＶＡを使用して統計解析する。カプサイシン投与後のＬＤＩ  Ｆｌｕｘ値の曲線（１０〜２５分）下の領域を、試験した抗体のＣＧＲＰ阻害効果を決定するために比較する。
【０１７０】
１、４および８ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗体１による処置は、全ての用量でアイソタイプ対照ＩｇＧと比較して統計的に有意な阻害を引き起こし、カプサイシン誘発性ＤＢＦをそれぞれ、８４．８％±４．７、８８．５％±６．０および６６．３％±１０．０減少させた。４ｍｇ／ｋｇの陽性対照による処置は、統計的に有意な８２．９％±５．６の阻害を引き起こす。いずれの用量においても二重特異性抗体１と抗ＣＧＲＰ陽性対照抗体との間には統計的有意差はない。
【０１７１】
結果は、全ての用量の二重特異性抗体１がＣＧＲＰによって媒介されるカプサイシン誘発性ＤＢＦを防止するが、対照的に、対照ＩｇＧ１は防止せず、阻害の程度は、陽性対照抗体によって得られるものと同等であることを示す。
【０１７２】
サルにおける二重特異性抗体１の非臨床薬物動態
雄のカニクイザルに、５ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗体１を静脈内（ＩＶ）（Ｎ＝１）または皮下（ＳＣ）（Ｎ＝２）投与する。二重特異性抗体１は、ＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）中に調製する。
【０１７３】
血液試料（約１ｍＬ）を、投与前ならびに投与の１、６、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、２４０、３３６、５０４、および６７２時間後に収集する。血液試料を、大腿静脈から（例えば、抗凝固剤を含有しない）血清分離チューブへと経静脈で収集し、血清へと処理する。
【０１７４】
血清試料を、総ＩｇＧについて定量的ＬＣ／ＭＳまたは抗原捕捉ＥＬＩＳＡによって分析する。抗原捕捉ＥＬＩＳＡのために、プレートをビオチン化ＣＧＲＰ（Ｂａｃｈｅｍ  ４０３８２１２．０５００）でコーティングする。マウス抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃワサビペルオキシダーゼ結合体（ＳＢ  ９０４０−０５）を使用して二重特異性抗体１を検出する。抗体の定量化範囲は、サル血清で１．５６〜１００ｎｇ／ｍＬである。定量的ＬＣ／ＭＳのために、ビオチン化ヤギ抗ｈＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、２０４９−０８）およびストレプトアビジンコーティングされた磁気ビーズで、試料を免疫沈降させる。免疫沈殿後、試料を還元し、アルキル化し、トリプシン消化する。選択されたトリプシンペプチドを抗体曝露の代替尺度として使用して、総ＩｇＧ濃度を決定する。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＬＣ／ＭＳシステムを使用して、データの検出および積分を実行する。抗体の定量化範囲は、サル血清で２５〜１２，８００ｎｇ／ｍＬである。
【０１７５】
薬物動態パラメータ（クリアランス値）を、ゼロ時間（抗体投与）から投与の６７２時間後までの濃度対時間プロファイルを使用して算出し、Ｐｈｏｅｎｉｘ（ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ６．４、Ｃｏｎｎｅｃｔ１．４）を使用したノンコンパートメント解析により決定する。結果を、表７にまとめる。
【表１８】
0006948457.tif 000027
配列
ヒトＣＧＲＰのアミノ酸配列（配列番号１）
ＡＣＤＴＡＴＣＶＴＨＲＬＡＧＬＬＳＲＳＧＧＶＶＫＮＮＦＶＰＴＮＶＧＳＫＡＦ
ヒトＩＬ−２３の成熟ｐ１９サブユニットのアミノ酸配列（配列番号２）
ＲＡＶＰＧＧＳＳＰＡＷＴＱＣＱＱＬＳＱＫＬＣＴＬＡＷＳＡＨＰＬＶＧＨＭＤＬＲＥＥＧＤＥＥＴＴＮＤＶＰＨＩＱＣＧＤＧＣＤＰＱＧＬＲＤＮＳＱＦＣＬＱＲＩＨＱＧＬＩＦＹＥＫＬＬＧＳＤＩＦＴＧＥＰＳＬＬＰＤＳＰＶＧＱＬＨＡＳＬＬＧＬＳＱＬＬＱＰＥＧＨＨＷＥＴＱＱＩＰＳＬＳＰＳＱＰＷＱＲＬＬＬＲＦＫＩＬＲＳＬＱＡＦＶＡＶＡＡＲＶＦＡＨＧＡＡＴＬＳＰ
第１の重鎖可変領域（抗ＣＧＲＰ）のアミノ酸配列（配列番号３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＲＧＴＴＶＴＶＳＳ
第１の軽鎖可変領域（抗ＣＧＲＰ）のアミノ酸配列（配列番号４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
第２の重鎖可変領域（抗ＩＬ−２３）のアミノ酸配列（配列番号５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＰＦＴＲＹＶＭＨＷＶＲＫＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＮＰＹＮＤＧＶＮＹＮＥＥＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＷＤＴＧＬＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
第２の軽鎖可変領域（抗ＩＬ−２３）のアミノ酸配列（配列番号６）
ＲＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＧＫＦＬＴＷＹＱＤＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＴＳＫＬＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）アミノ酸配列の（配列番号７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＲＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＧＤＭＴＫＮＱＶＱＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第１の軽鎖（抗ＣＧＲＰ）のアミノ酸配列（配列番号８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＫＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のアミノ酸配列（配列番号９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＰＦＴＲＹＶＭＨＷＶＲＫＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＮＰＹＮＤＧＶＮＹＮＥＥＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＷＤＴＧＬＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＳＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＭＣＬＶＹＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第２の軽鎖（抗ＩＬ−２３）のアミノ酸配列（配列番号１０）
ＲＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＧＫＦＬＴＷＹＱＤＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＴＳＫＬＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＹＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＷＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）のＣＤＲアミノ酸配列
Ｈ１ＣＤＲ−１（配列番号１２）
ＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ
Ｈ１ＣＤＲ−２（配列番号１４）
ＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤ
Ｈ１ＣＤＲ−３（配列番号１６）
ＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）のＦＲアミノ酸配列
Ｈ１ＦＲ−１（配列番号１１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣ
Ｈ１ＦＲ−２（配列番号１３）
ＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ
Ｈ１ＦＲ−３（配列番号１５）
ＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣ
Ｈ１ＦＲ−４（配列番号１７）
ＷＧＲＧＴＴＶＴＶＳＳ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）の定常領域（ＨＣ１ＣＲ）のアミノ酸配列（配列番号１８）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＧＤＭＴＫＮＱＶＱＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）のＣＨ１（Ｈ１ＣＨ１）のアミノ酸配列（配列番号１９）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）のヒンジ領域のアミノ酸配列（配列番号４９）
ＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）のＣＨ２（Ｈ１ＣＨ２）のアミノ酸配列（配列番号２０）
ＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
第１の重鎖（抗ＣＧＲＰ）のＣＨ３（Ｈ１ＣＨ３）のアミノ酸配列（配列番号２１）
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＧＤＭＴＫＮＱＶＱＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のＣＤＲアミノ酸配列
Ｈ２ＣＤＲ−１（配列番号２３）
ＫＡＳＧＹＰＦＴＲＹＶＭＨ
Ｈ２ＣＤＲ−２（配列番号２５）
ＹＩＮＰＹＮＤＧＶＮＹＮＥＥＦＫＧ
Ｈ２ＣＤＲ−３（配列番号２７）
ＡＲＮＷＤＴＧＬ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のＦＲアミノ酸配列
Ｈ２ＦＲ−１（配列番号２２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣ
Ｈ２ＦＲ−２（配列番号２４）
ＷＶＲＫＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ
Ｈ２ＦＲ−３（配列番号２６）
ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣ
Ｈ２ＦＲ−４（配列番号２８）
ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）の定常領域（ＨＣ２ＣＲ）のアミノ酸配列（配列番号２９）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＳＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＭＣＬＶＹＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のＣＨ１（Ｈ２ＣＨ１）のアミノ酸配列（配列番号３０）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のヒンジ領域のアミノ酸配列（配列番号５０）
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のＣＨ２（Ｈ２ＣＨ２）のアミノ酸配列（配列番号３１）
ＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
第２の重鎖（抗ＩＬ−２３）のＣＨ３（Ｈ２ＣＨ３）のアミノ酸配列（配列番号３２）
ＧＱＰＲＥＰＱＶＳＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＭＣＬＶＹＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
第１の軽鎖（抗ＣＧＲＰ）のＣＤＲアミノ酸配列
Ｌ１ＣＤＲ−１（配列番号３４）
ＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮ
Ｌ１ＣＤＲ−２（配列番号３６）
ＹＹＴＳＧＹＨＳ
Ｌ１ＣＤＲ−３（配列番号３８）
ＱＱＧＤＡＬＰＰＴ
第１の軽鎖（抗ＣＧＲＰ）のＦＲアミノ酸配列
Ｌ１ＦＲ−１（配列番号３３）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ
Ｌ１ＦＲ−２（配列番号３５）
ＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩ
Ｌ１ＦＲ−３（配列番号３７）
ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ
Ｌ１ＦＲ−４（配列番号３９）
ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
第１の軽鎖（抗ＣＧＲＰ）の定常領域（ＬＣ１ＣＲ）のアミノ酸配列（配列番号４０）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＫＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
第２の軽鎖（抗ＩＬ−２３）のＣＤＲアミノ酸配列
Ｌ２ＣＤＲ−１（配列番号４２）
ＫＡＳＤＨＩＧＫＦＬＴ
Ｌ２ＣＤＲ−２（配列番号４４）
ＹＧＡＴＳＫＬＴ
Ｌ２ＣＤＲ−３（配列番号４６）
ＱＱＹＷＳＴＰＦＴ
第２の軽鎖（抗ＩＬ２３）のＦＲアミノ酸配列
Ｌ２ＦＲ−１（配列番号４１）
ＲＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ
Ｌ２ＦＲ−２（配列番号４３）
ＷＹＱＤＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩ
Ｌ２ＦＲ−３（配列番号４５）
ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ
Ｌ２ＦＲ−４（配列番号４７）
ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
第２の軽鎖（抗ＩＬ２３）の定常領域（ＬＣ２ＣＲ）のアミノ酸配列（配列番号４８）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＹＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＷＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
原文に記載なし。
【図１】
0006948457.tif 000028
【配列表】
0006948457000001.app