(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
蝸牛シナプス変性の処置を必要としている患者において、蝸牛シナプス変性を処置するための組成物であって、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、
【化２１】
0006904612.tif 000017
からなる群から選択される化合物またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項２】
前記蝸牛シナプス変性が、隠れた難聴である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記蝸牛シナプス変性が、耳鳴である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴の処置を必要としている患者において、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴を処置するための組成物であって、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、
【化２２】
0006904612.tif 000018
からなる群から選択される化合物またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項５】
内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴の処置を必要としている患者において、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴を処置するための組成物であって、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、
【化２３】
0006904612.tif 000019
からなる群から選択される化合物またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項６】
難聴の処置を必要としている、正常なＡＢＲ閾値および／または正常なＤＰＯＡＥを示す患者において、難聴を処置するための組成物であって、
（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、
【化２４】
0006904612.tif 000020
からなる群から選択される化合物またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を含み、該患者がＡＢＲ閾値およびＤＰＯＡＥの明白な欠損を示さない、組成物。
【請求項７】
前記患者が、ＡＢＲ波Ｉ電位の振幅低下を示す、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステルまたは薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
【化２５】
0006904612.tif 000021
または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
【化２６】
0006904612.tif 000022
または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
【化２７】
0006904612.tif 000023
または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、経口経路により投与されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、鼓室内投与されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む、薬学的に許容される水溶液を含む医薬組成物であり、
前記化合物は、該水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記化合物が、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、経口経路により投与されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、鼓室内投与されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与されることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が、経口経路により投与されることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が、鼓室内投与されることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、経口経路により投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、鼓室内投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、経口経路により投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、鼓室内投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記組成物が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与されることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物が、経口経路により投与されることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項３３】
前記組成物が、鼓室内投与されることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記組成物が、
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む薬学的に許容される水溶液、および結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であり、
該結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、または薬学的に許容されるその塩は、該水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項３５】
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、または薬学的に許容されるその塩が、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在する、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物が、
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む薬学的に許容される水溶液、および結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であり、
該結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、または薬学的に許容されるその塩は、該水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、または薬学的に許容されるその塩が、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在する、請求項３７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
難聴
世界の人口の５％超が、支障を来す聴覚機能障害の何らかの形態に罹患している（ＷＨＯファクトシート第３００号、２０１５年３月に更新された「Ｄｅａｆｎｅｓｓ  ａｎｄ  Ｈｅａｒｉｎｇ  Ｌｏｓｓ」）。これらの症例の大部分は感音難聴（ＳＮＨＬ）に起因し、ＳＮＨＬは蝸牛および／または聴神経の機能の損傷または喪失に起因する機能障害を指す。ＳＮＨＬの大部分の症例は、数年から数十年にわたって発生する、聴力閾値の段階的な悪化を呈する。ＳＮＨＬは、耳での鳴り響き（耳鳴）、眩暈またはふらつき（めまい）などの他の症状を伴うことがある。ＳＮＨＬは、遺伝性または後天性（例えば、騒音誘発性）であり得る。ＳＮＨＬは、先天性である場合があり、または晩年に発症する場合がある。感音難聴の最も一般的な種類のものは、加齢性（老人性難聴）であり、騒音誘発性難聴（ＮＩＨＬ）が後に続く。
【０００２】
蝸牛内の有毛細胞への直接的な損傷により、ＳＮＨＬの多くの症例が説明される。この場合、蝸牛の流体が満たされたコンパートメントに音波が移動すると、内耳感覚有毛細胞が振動する。振動が十分に強いと、有毛細胞が損傷して死滅する恐れがある。これは、哺乳動物における不可逆的な過程であり、聴性脳幹反応（ＡＢＲ）閾値のシフト、および歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）の低下により容易に特定することができる。
【０００３】
加齢および騒音誘発性難聴に関する最近の仕事により、有毛細胞ではなくシナプスが、内耳の最も脆弱な構成要素となり得、聴力欠損に至ることが示されている（Ｋｕｊａｗａ  ＳＧおよびＬｉｂｅｒｍａｎ  ＭＣ、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００９年、２９巻（４５号）：１４０７７〜１４０８５頁）。これらの専用シナプスは、聴神経のらせん神経節細胞と内耳感覚有毛細胞との間の橋渡しを形成する（Ｓａｆｉｅｄｄｉｎｅ  Ｓら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１２年、３５巻：５０９〜５２８頁）。各らせん神経節ニューロン（ＳＧＮ）は、コルチ器官に単一末梢軸索を送り、ここで、単一末梢軸索は、コルチ器官内の単一無髄末端樹状突起を介して、単一内有毛細胞（ＩＨＣ）に接触する（Ｌｉｂｅｒｍａｎ  ＭＣ、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．  １９８０年、３巻（１号）：４５〜６３頁）。これらのシナプスへの喪失または損傷（蝸牛シナプス変性または聴覚シナプス変性とも呼ぶ）により、聴力に深刻な影響がもたらされる恐れがあり、感音難聴の重要な形態を呈する。蝸牛シナプス変性は、騒音中での発話（ｓｐｅｅｃｈ−ｉｎ−ｎｏｉｓｅ）の困難性を含めた、加齢に伴ってよく見られるおよび騒音曝露後の、様々な聴覚認知異常（Ｂｈａｒａｄｗａｊ  ＨＭら、Ｆｒｏｎｔ  Ｓｙｓｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１４年、８巻（２６号））、耳鳴および聴覚過敏（Ｇｕ  ＪＷら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１０年、１０４巻（６号）：３３６１〜７０頁；Ｓｃｈａｅｔｔｅ  ＲおよびＭｃＡｌｐｉｎｅ  Ｍ．、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１１年、３１巻（３８号）：１３４５２〜５７頁）への一因である可能性がある。外有毛細胞への損傷とは異なり、シナプスの喪失または損傷を有する対象は、正常なＡＢＲ閾値および正常なＤＰＯＡＥを示すが、聴覚脳幹（ＡＢＲ）波Ｉ振幅の持続的な欠損を示すことがある（Ｋｕｊａｗａ  ＳＧおよびＬｉｂｅｒｍａｎ  ＭＣ、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００９年、２９巻（４５号）：１４０７７〜１４０８５頁；Ｌｉｎ  ＨＷら、ＪＡＲＯ  ２０１１年、１２巻：６０５〜６１６頁）。蝸牛シナプス変性を有する対象は、正常な聴力図を示す（正常閾値で音を検出する能力を有する）が、閾値上音（ｓｕｐｒａｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｓｏｕｎｄ）、すなわち音周波数および強度の大きなダイナミックレンジにわたる音を分析する能力に欠ける。このような音処理は、発話または競合する背景騒音を超える他の音声内容の認識に重要である。劇的というほどではないシナプス喪失および神経喪失は、標準閾値に基づく評価によって明らかにはならないので、このようなタイプの難聴は、「隠れた難聴」（例えば、Ｗａｎ  ＧおよびＣｏｒｆａｓ  Ｇ．、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．  ２０１５年、３２９巻：１〜１０頁；Ｍｏｓｅｒ  ＴおよびＳｔａｒｒ  Ａ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２０１６年、１３５〜１４９頁を参照されたい）と呼ばれている。
【０００４】
現在、蝸牛シナプス変性を有する個体に対して承認された薬理学的または生物学的処置はない。最新の補聴器が、このようなタイプの聴覚欠損を管理する一助となり得るが、多数の患者は、補聴器に良好に応答しない。シナプス連結は、自然に回復しないので、シナプス連結の回復を目的とする新規薬理学的治療が必要とされている。最近の研究では、正円窓窩にニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）の送達を受けた騒音曝露マウスは、内有毛細胞シナプスを回復し、ＡＢＲ波１の振幅に対応して改善した（Ｓｕｚｕｋｉ  Ｊら、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ．  ２０１６年、Ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｓｒｅｐ２４９０７）。ＮＴ３は、ＴｒｋＣ受容体に結合する成長因子であり、ニューロンの生存およびシナプス形成に対するその効果について周知であるので、上記のことは驚くべきことではない。蝸牛シナプス変性を処置するためのＴｒｋアゴニストの使用は、２０１７年７月１３日に公開されたＷＯ２０１７１２０４６５に開示されている。
耳および聴力
【０００５】
耳は、３つの主要部分：外耳、中耳および内耳に分割される。外耳は、耳介、外耳道（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｃａｎａｌ）、および鼓膜（ｅａｒ  ｄｒｕｍ）としても知られている鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）の外側に面する部分からなる。外耳の機能は、一部には、音波を集めて、鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）および中耳の方に向かわせることである。
【０００６】
鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）の後ろに、小骨：槌骨、砧骨および鐙骨と呼ばれる３種の骨を含有する、空気が充填した空洞である中耳が位置する。耳小骨は、小さな靱帯を介して一緒に連結し、一方の端部で鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）につながっている槌骨、およびもう一方の端部で、内耳中の蝸牛の卵円窓につながっている鐙骨を有する、空隙空間に橋渡しを形成する。外耳からの音波は、まず、鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）を振動させる。この振動は、耳小骨および卵円窓を介して蝸牛に送られ、内耳中の流体に動きを移す。
【０００７】
流体が充填した内耳は、２つの主な構成成分：蝸牛および前庭器官からなる。前庭器官は、平衡器官である一方、蝸牛は、聴覚に関与する部分である。蝸牛は、カタツムリに似たコイル形状の管様構造である。蝸牛の内側は、前庭膜および基底膜の位置によって画定される３つの領域に分類される。前庭膜の上の部分は、前庭階であり、この前庭階は、卵円窓から蝸牛頂まで延在し、カリウム含量が低くかつナトリウム含量が高い水性液体である外リンパ液を含有する。基底膜は、鼓室階領域を画定し、この領域は、蝸牛頂から正円窓まで延在して、やはりまた外リンパ液を含有する。前庭階と鼓室階との間には、中央階が存在し、この中央階は、蝸牛頂において閉鎖された嚢として終端があり、その主要イオンとしてカリウムを有する外リンパ液を含有する。
【０００８】
蝸牛はまた、空間的に（ｔｏｎｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ）組織化されており、この組織化は、様々な周波数の音波が、構造上の様々な位置と相互作用することを意味する。このような内耳内の周波数調節は、基底膜の形状に一部、起因し、この基底膜は、先端部ではより幅広くかつより可撓性があり、基底部では、より狭くて堅い。高い周波数に応答する点は、基底膜の底部にあり、低い周波数に応答する点は、頂点にあり、周波数の地形マッピングが生じる（すなわち、周波数地図）。
【０００９】
神経信号への音振動の変換を可能にする、聴力に関する感覚器官であるコルチ器官は、基底膜上に位置し、有毛細胞として知られている聴覚感覚細胞を含む。２つのタイプの有毛細胞、内有毛細胞（ＩＨＣ）および外有毛細胞（ＯＨＣ）は、コルチ器官内にＩＨＣの１つの列およびＯＨＣの３つの列になって並んでいる。内耳に送信された音波は、圧力波を生成して蝸牛の流体中で伝播し（進行波）、基底膜（および、基底膜と共にコルチ器官）を上下に振動させる。この振動パターンは、入ってくる音の強度および周波数に依存する。基底膜の振動は、非常に静かな音でさえも知覚可能にするＯＨＣによって増幅される。ＯＨＣはまた、基底膜の周波数分解能を微調節する。ＯＨＣはまた、高感度マイクロホンを用いて外耳道（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｍｅａｔｕｓ）で検出可能な音を生成する。耳音響放射と呼ばれる、これらの内部に生成した音は、現在、新生児の難聴をスクリーニングするために使用されている。ＯＨＣは、傷害に非常に感受性が高く、その損傷は、最も一般的なタイプの難聴、すなわち中程度の感音難聴をもたらし、この場合、会話音声より低い柔らかい音を聞き取ることができないが、大きな音は、騒々しい音として認識される。
ＩＨＣは、機械的信号を電気的神経信号に変換することにより、聴神経に蝸牛における振動パターンにより信号化された情報を中継する一次聴覚感覚細胞である。ＩＨＣは、らせん神経節ニューロン（ＳＧＮ）の部分集団（タイプＩ）である、求心性ニューロンにより神経支配を受ける。「内有毛細胞求心性シナプス」は、ＩＨＣとＩ型ＳＧＮの求心性神経繊維との間のシナプス連結を指す。ＩＨＣはそれぞれ、Ｉ型ＳＧＮを有する上方向の２０のシナプス連結を形成することができる一方、各Ｉ型ＳＧＮは、たった１つのＩＨＣと連結部を形成する。シナプスの喪失は、正常な老化耳に起こる一方、騒音曝露は、このような喪失も引き起こし、最終的に、ＳＧＮの時間遅延喪失および恒久的な難聴をもたらす。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｋｕｊａｗａ  ＳＧおよびＬｉｂｅｒｍａｎ  ＭＣ、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００９年、２９巻（４５号）：１４０７７〜１４０８５頁
【非特許文献２】Ｓａｆｉｅｄｄｉｎｅ  Ｓら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１２年、３５巻：５０９〜５２８頁
【非特許文献３】Ｌｉｂｅｒｍａｎ  ＭＣ、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．  １９８０年、３巻（１号）：４５〜６３頁
【非特許文献４】Ｂｈａｒａｄｗａｊ  ＨＭら、Ｆｒｏｎｔ  Ｓｙｓｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１４年、８巻（２６号）
【非特許文献５】Ｇｕ  ＪＷら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１０年、１０４巻（６号）：３３６１〜７０頁
【非特許文献６】Ｓｃｈａｅｔｔｅ  ＲおよびＭｃＡｌｐｉｎｅ  Ｍ．、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１１年、３１巻（３８号）：１３４５２〜５７頁
【非特許文献７】Ｌｉｎ  ＨＷら、ＪＡＲＯ  ２０１１年、１２巻：６０５〜６１６頁
【非特許文献８】Ｗａｎ  ＧおよびＣｏｒｆａｓ  Ｇ．、Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．  ２０１５年、３２９巻：１〜１０頁
【非特許文献９】Ｍｏｓｅｒ  ＴおよびＳｔａｒｒ  Ａ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２０１６年、１３５〜１４９頁
【非特許文献１０】Ｓｕｚｕｋｉ  Ｊら、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ．  ２０１６年、Ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｓｒｅｐ２４９０７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
最近の動物の研究により、ニュートロフィン−３（ＮＴ−３）の局所送達は、蝸牛シナプス変性に対する潜在的処置となり得ることが示唆されるが、蝸牛シナプス変性の場合、現在のところ許容された処置はない。蝸牛におけるシナプス連結を回復する、新規薬理学的な治療法が必要とされている。
【００１２】
本出願は、一部には、ガンマセクレターゼ阻害剤（ＧＳＩ）およびガンマセクレターゼモジュレーター（ＧＳＭ）（まとめて、ＧＳＩ／Ｍと称する）は、病原性騒音レベルに曝露されている動物において、ＩＨＣシナプスを再生することができるという驚くべき予想外の発見を対象としている。このことは、ＧＳＩ／Ｍは、以下に限定されないが、隠れた難聴として記載される状態を含めた、ＩＨＣシナプス喪失に関連する状態を処置するのに有効となり得ることを示唆する。本出願はまた、ＧＳＩ／Ｍは、らせん神経節細胞を含有する培養アッセイにおいて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、神経突起伸長を引き起こすという驚くべき予想外の発見を一部、対象とする。したがって、本出願の一部の実施形態は、シナプスの喪失、特に蝸牛シナプスの喪失に関連する１つまたは複数の状態を処置および／または改善することに関する。
【００１３】
一部の実施形態は、蝸牛シナプス変性の処置を必要としている患者において、蝸牛シナプス変性を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、前記蝸牛シナプス変性は、隠れた難聴である。一部の実施形態では、前記蝸牛シナプス変性は、耳鳴である。
【００１４】
一部の実施形態は、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴の処置を必要としている患者において、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００１５】
一部の実施形態は、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴の処置を必要としている患者において、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００１６】
一部の実施形態は、難聴の処置を必要としている、正常なＡＢＲ閾値および／または正常なＤＰＯＡＥを示す患者において、難聴を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記患者が、ＡＢＲ閾値およびＤＰＯＡＥの明白な欠損を示さない、方法を提供する。
【００１７】
一部の実施形態では、前記患者は、正常聴力患者と比較して、ＡＢＲ波Ｉの電位の振幅の低下を示す。一部の実施形態では、前記患者は、背景騒音の増加に伴って、ＡＢＲ波Ｖの潜時のシフトを示す。一部の実施形態では、前記患者は、正常聴力患者と比較して、蝸電図法により決定される、高いＳＰ／ＡＰ比（活動電位に対する加重電位の比）を示す。一部の実施形態では、前記患者は、正常聴力患者と比較して、言語認識能力試験の遂行が一層不良である。
【００１８】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。
【００１９】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩は、
【化１】
0006904612.tif 000002
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００２０】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステルおよび（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００２１】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩は、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与される。
【００２２】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩は、経口経路により投与される。
【００２３】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩は、鼓室内に投与される。
【００２４】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターを投与することを含む。
【００２５】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩は、
【化２】
0006904612.tif 000003
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００２６】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤を投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００２７】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターを投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩は、
【化３】
0006904612.tif 000004
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００２８】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００２９】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターを投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターは、
【化４】
0006904612.tif 000005
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００３０】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を
投与することを含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００３１】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、以下：
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１重量％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む、薬学的に許容される水溶液を含む医薬組成物で投与され、前記ガンマセクレターゼ阻害剤は、前記水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する。
【００３２】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤は、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
【００３３】
一部の実施形態では、前記薬学的に許容される水溶液は、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む。
【００３４】
一部の実施形態では、前記薬学的に許容される水溶液は、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記ガンマセクレターゼ阻害剤が、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在し、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
【００３５】
一部の実施形態は、蝸牛シナプス変性を処置するための、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の使用を提供する。一部の実施形態では、前記蝸牛シナプス変性は、隠れた難聴である。一部の実施形態では、前記蝸牛シナプス変性は、耳鳴である。
【００３６】
一部の実施形態は、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴を処置するための、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３７】
一部の実施形態は、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴を処置するための、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３８】
一部の実施形態は、難聴を処置するための、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の使用であって、前記難聴が、正常なＡＢＲ閾値および／または正常なＤＰＯＡＥを特徴とする、使用を提供する。一部の実施形態では、前記難聴は、ＡＢＲ波１振幅の持続性欠損を特徴とする。
【００３９】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩の使用を含む。
【００４０】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩の使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩は、
【化５】
0006904612.tif 000006
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４１】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩の使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステルおよび（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４２】
一部の実施形態では、前記使用は、前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与することを含む。
【００４３】
一部の実施形態では、前記使用は、前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を、経口経路により投与することを含む。
【００４４】
一部の実施形態では、前記使用は、前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を、鼓室内に投与することを含む。
【００４５】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターの使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩は、
【化６】
0006904612.tif 000007
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４６】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤の使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４７】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターの使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩は、
【化７】
0006904612.tif 000008
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４８】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩の使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４９】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼモジュレーターの使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼモジュレーターは、
【化８】
0006904612.tif 000009
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００５０】
一部の実施形態は、ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩の使用を含む。一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００５１】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、以下：
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１重量％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む、薬学的に許容される水溶液を含む医薬組成物として製剤化され、前記ガンマセクレターゼ阻害剤は、前記水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する。
【００５２】
一部の実施形態では、前記ガンマセクレターゼ阻害剤は、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
【００５３】
一部の実施形態では、前記薬学的に許容される水溶液は、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む。
【００５４】
一部の実施形態では、前記薬学的に許容される水溶液は、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記ガンマセクレターゼ阻害剤が、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在し、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
蝸牛シナプス変性の処置を必要としている患者において、蝸牛シナプス変性を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
(項目２)
前記蝸牛シナプス変性が、隠れた難聴である、項目１に記載の方法。
(項目３)
前記蝸牛シナプス変性が、耳鳴である、項目１に記載の方法。
(項目４)
内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴の処置を必要としている患者において、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴を処置する方法であって、該患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
(項目５)
内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴の処置を必要としている患者において、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する耳鳴を処置する方法であって、該患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
(項目６)
難聴の処置を必要としている、正常なＡＢＲ閾値および／または正常なＤＰＯＡＥを示す患者において、難聴を処置する方法であって、該患者に、治療有効量の、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含み、該患者がＡＢＲ閾値およびＤＰＯＡＥの明白な欠損を示さない、方法。
(項目７)
前記患者が、ＡＢＲ波Ｉ電位の振幅低下を示す、項目６に記載の方法。
(項目８)
ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目９)
ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１０)
前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩が、
【化１２】
0006904612.tif 000010
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１１)
ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１２)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩が、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステルおよび（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１３)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩が、蝸牛の正円窓またはその近傍に投与される、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１４)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩が、経口経路により投与される、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１５)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩が、鼓室内投与される、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目１６)
ガンマセクレターゼモジュレーターを投与することを含む、項目１３に記載の方法。
(項目１７)
前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩が、
【化１３】
0006904612.tif 000011
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１３に記載の方法。
(項目１８)
ガンマセクレターゼ阻害剤を投与することを含む、項目１３に記載の方法。
(項目１９)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩が、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１３に記載の方法。
(項目２０)
ガンマセクレターゼモジュレーターを投与することを含む、項目１４に記載の方法。
(項目２１)
前記ガンマセクレターゼモジュレーターまたは薬学的に許容されるその塩が、
【化１４】
0006904612.tif 000012
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
(項目２２)
ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、項目１４に記載の方法。
(項目２３)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩が、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
(項目２４)
ガンマセクレターゼモジュレーターを投与することを含む、項目１５に記載の方法。
(項目２５)
前記ガンマセクレターゼモジュレーターが、
【化１５】
0006904612.tif 000013
およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
(項目２６)
ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、項目１５に記載の方法。
(項目２７)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容される塩が、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
(項目２８)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩が、
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む、薬学的に許容される水溶液を含む医薬組成物で投与され、
該ガンマセクレターゼ阻害剤は、該水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
(項目２９)
前記ガンマセクレターゼ阻害剤が、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩から選択される、項目２８に記載の方法。
(項目３０)
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む、項目２８に記載の方法。
(項目３１)
前記薬学的に許容される水溶液が、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記ガンマセクレターゼ阻害剤が、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在し、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−マロンアミドおよびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩から選択される、項目２８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１−１】図１Ａ、１Ｂ、ＩＣおよびＩＤは、それぞれ、蝸牛、コルチ器官および内有毛細胞求心性シナプスからなる、耳の断面の解剖学的構造を示す。
【図１−２】図１Ａ、１Ｂ、ＩＣおよびＩＤは、それぞれ、蝸牛、コルチ器官および内有毛細胞求心性シナプスからなる、耳の断面の解剖学的構造を示す。
【図１−３】図１Ａ、１Ｂ、ＩＣおよびＩＤは、それぞれ、蝸牛、コルチ器官および内有毛細胞求心性シナプスからなる、耳の断面の解剖学的構造を示す。
【図１−４】図１Ａ、１Ｂ、ＩＣおよびＩＤは、それぞれ、蝸牛、コルチ器官および内有毛細胞求心性シナプスからなる、耳の断面の解剖学的構造を示す。
【００５６】
【図２−１】図２Ａおよび２Ｂは、それぞれ、ビヒクル処置試料よりも、ＧＳＭおよびＧＳＩで処置した脊髄および蝸牛のＤＣＣ  α−フラグメントレベルが高いことを示す。
【図２−２】図２Ａおよび２Ｂは、それぞれ、ビヒクル処置試料よりも、ＧＳＭおよびＧＳＩで処置した脊髄および蝸牛のＤＣＣ  α−フラグメントレベルが高いことを示す。
【００５７】
【図３】図３は、マウスにおける、ＧＳＩのｉｎ  ｖｉｖｏ施用後の、ＤＣＣ  α−フラグメントレベルが高いことを示す。
【００５８】
【図４−１】図４Ａ〜４Ｃは、それぞれ、ＧＳＭ  ＲＯ、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１による処置後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの用量依存増加を示す。図４Ｄは、ＧＳＭの神経突起延長効果を遮断する、ネトリンに対する抗体の添加を示す。
【図４−２】図４Ａ〜４Ｃは、それぞれ、ＧＳＭ  ＲＯ、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１による処置後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの用量依存増加を示す。図４Ｄは、ＧＳＭの神経突起延長効果を遮断する、ネトリンに対する抗体の添加を示す。
【図４−３】図４Ａ〜４Ｃは、それぞれ、ＧＳＭ  ＲＯ、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１による処置後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの用量依存増加を示す。図４Ｄは、ＧＳＭの神経突起延長効果を遮断する、ネトリンに対する抗体の添加を示す。
【図４−４】図４Ａ〜４Ｃは、それぞれ、ＧＳＭ  ＲＯ、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１による処置後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの用量依存増加を示す。図４Ｄは、ＧＳＭの神経突起延長効果を遮断する、ネトリンに対する抗体の添加を示す。
【００５９】
【図５】図５は、騒音誘発性の蝸牛シナプス変性マウスモデルにおける、ＲＯおよびＮＧＰ５５５の経口処置後のシナプス密度の増加を示す。
【００６０】
【図６−１】図６Ａは、ＧＳＩにより処置した後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの増加を示す。
【図６−２】図６Ｂは、ガンマセクレターゼ阻害剤である化合物Ｉおよび化合物ＩＩにより処置した後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの増加の用量依存性を示す。
【図６−３】図６Ｃは、ノッチスペアリング（Ｎｏｔｃｈ  ｓｐａｒｉｎｇ）ガンマセクレターゼ阻害剤、ＢＭＳ−７０８１６３（アバガセスタット）による処置後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの増加を示す。
【図６−４】図６Ｄは、ガンマセクレターゼ阻害剤である化合物Ｘにより処置した後の、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さの増加の用量依存性を示す。
【００６１】
【図７−１】図７Ａは、騒音誘発性の蝸牛シナプス変性マウスモデルにおける、ＧＳＩ処置後のシナプス密度の増加を示す。
【図７−２】図７Ｂは、騒音誘発性の蝸牛シナプス変性マウスモデルにおける、０．２％と２％の両方の投与量の化合物Ｉによる処置後の中間１領域（１６〜２４ｋＨｚ範囲に及ぶ）における、ほぼ完全なシナプス回復を示す。
【図７−３】図７Ｃは、騒音誘発性の蝸牛シナプス変性マウスモデルにおける、０．２％と２％の両方の投与量の化合物Ｉによる処置後の中間２領域（２４〜３２ｋＨｚ範囲に及ぶ）における、ほぼ完全なシナプス回復を示す。
【００６２】
【図８−１】図８は、マウスにおいて、化合物Ｉの局所投与が、騒音誘発性シナプス変性後のＩ波振幅を改善することを示す。
【図８−２】図８は、マウスにおいて、化合物Ｉの局所投与が、騒音誘発性シナプス変性後のＩ波振幅を改善することを示す。
【図８−３】図８は、マウスにおいて、化合物Ｉの局所投与が、騒音誘発性シナプス変性後のＩ波振幅を改善することを示す。
【図８−４】図８は、マウスにおいて、化合物Ｉの局所投与が、騒音誘発性シナプス変性後のＩ波振幅を改善することを示す。
【００６３】
【図９】図９は、カナマイシン誘発性蝸牛シナプス変性モルモットモデルにおける、ＧＳＩ処置後のシナプス密度の増加を示す。
【００６４】
【図１０−１】図１０は、ＧＳＩ試験化合物、およびＧＳＩの追加例の構造を示す。
【図１０−２】図１０は、ＧＳＩ試験化合物、およびＧＳＩの追加例の構造を示す。
【図１０−３】図１０は、ＧＳＩ試験化合物、およびＧＳＩの追加例の構造を示す。
【図１０−４】図１０は、ＧＳＩ試験化合物、およびＧＳＩの追加例の構造を示す。
【００６５】
【図１１−１】図１１は、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１を含めた、ＧＳＭの例の構造を示す。
【図１１−２】図１１は、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１を含めた、ＧＳＭの例の構造を示す。
【図１１−３】図１１は、ＮＧＰ５５５およびＰＦ−０６６４８６７１を含めた、ＧＳＭの例の構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
「蝸牛（または聴覚）シナプス変性」は、内有毛細胞と蝸牛求心性神経繊維との間のシナプスの喪失を指し、例えば、以下を含めた、様々な聴覚機能障害として現れることがある：
−  感音難聴（加齢に伴う難聴（老人性難聴としても知られている）など）、騒音誘発性難聴（突然の大きな音に対する曝露、および大きな音への長期または繰り返し曝露を含む）、耳毒素（ｏｔｏｔｏｘｉｎ）誘発性難聴（耳毒素は、ゲンタマイシン、カナマイシン、アミカシンなどのアミノグリコシド抗生物質、およびシスプラチンなどの白金化学治療剤を含む）、および騒音中での発話に対する難聴（隠れた難聴；騒音の多い環境における発声の理解が困難）；
−  耳鳴（外部音の非存在下での幻音の知覚、または耳内での共鳴）；
−  聴覚過敏（正常な環境音に対する耐性の崩壊）；および
−  メニエール病（閾値シフトの変動、めまいおよび耳鳴を特徴とする内耳障害）。
【００６７】
蝸牛シナプス変性に罹患している患者は、一般に、聴力閾値試験を使用して診断することができず、正常な聴性脳幹反応（ＡＢＲ）（頭皮に留置された電極により記録される神経電位により誘発される聴覚（ａｕｄｉｔｏｒｙ））を示すことがある。これは、騒音誘発性聴神経損傷が、ＡＢＲ閾値の回復後でさえも存在することがあるからであり（Ｆｕｒｍａｎら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２０１３年  １１０巻（３号）：５７７〜５８６頁）、聴力図などの一層一般的な閾値評価（聴力試験）は、聴神経およびシナプスへの損傷よりもむしろ、外有毛細胞損傷の検出に有用である（Ｋｕｊａｗａら、２００９年）。蝸牛シナプス変性を有する患者は、蝸牛シナプス変性を有していない患者と比べて、ＡＢＲ波Ｉ電位の振幅の低下を示し得る。（Ｓｃｈａｅｔｔｅら、２０１１年）。蝸牛シナプス変性を有する一部の患者は、蝸牛シナプス変性を有していない患者に比べて、それらの聴力図におけるＡＢＲ波Ｉ振幅の低下を示し得る。最近の研究により、蝸電図法から得たＳＰ／ＡＰ比（加重電位／活動電位）は、有用な検出／診断手段とすることができ、この場合、参照比と比べてＳＰ／ＡＰ比が高いことは、蝸牛シナプス変性の指標であること（Ｌｉｂｅｒｍａｎ  ＭＣら、ＰｌｏＳ  ＯＮＥ、２０１６年、１１巻（９号）：ｅ０１６２７２６頁；およびＷＯ２０１７１２７６１９）も示唆される。８ｋＨｚより高い、または８〜１６ｋＨｚの間の範囲の高い周波数閾値を測定する高周波数聴力試験が、蝸牛シナプス変性を同定する方法として示唆されている（Ｌｉｂｅｒｍａｎら、２０１６年）。
【００６８】
騒音中のＡＢＲ波Ｖの潜時はまた、聴神経喪失に影響を及ぼすことが実証されているので、診断マーカーとして使用することもできる（Ｍｅｈｒａｅｉ  Ｇら、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２０１６年、３６巻（１３号）：３７５５〜６４頁）。蝸牛シナプス変性はまた、騒音中の言語認識を使用して、または時間圧縮および反響（ｒｅｖｅｒｂｅｒａｔｉｏｎ）により、検出または診断することができる。騒音中でのヒアリング試験および騒音中での発話試験を使用して、蝸牛シナプス変性を有する患者を同定することができる。Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ聴力試験第６番（ＮＵ−６）、Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅａｆ（ＣＩＤ）  Ｗ−２２試験、Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ児童の発話知覚試験（Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｐｅｅｃｈ  ｔｅｓｔ）（ＮＵ−ＣＨＩＰＳ）、Ｃｉｔｙ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｎｏｎｓｅｎｓｅ音節試験、Ｎｏｎｓｅｎｓｅ音節試験、騒音下聴力試験（ＨＩＮＴ）、ＱｕｉｃｋＳＩＮ、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｓｅｎｔｅｎｃｅ特定試験（ＳＳＩ）、Ｓｐｅｅｃｈ  Ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎｏｉｓｅ試験（ＳＰＩＮ）およびＣｏｎｎｅｃｔｅｄ  Ｓｐｅｅｃｈ試験を含めた、言語認識能力試験の例。したがって、隠れた難聴などの蝸牛シナプス変性は、上記の手段の１つまたは組合せを使用して、検出およびまたは診断することができる。
【００６９】
ガンマセクレターゼ阻害剤およびガンマセクレターゼモジュレーターは、アルツハイマー病およびがんの潜在的な治療剤として、長らく研究されており、このような化合物の大多数は、特に、特許文献において報告されている。
ガンマセクレターゼ阻害剤（ＧＳＩ）
【００７０】
「Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｈｅａｒｉｎｇ  Ｌｏｓｓ」と題するＷＯ２０１４／０３９７８１は、ノッチ阻害剤、例えば、ガンマセクレターゼ阻害剤を使用する蝸牛有毛細胞の喪失に関連する難聴を処置するための方法を開示する。一般に、ガンマ−セクレターゼ阻害は、核へのノッチシグナル伝達の阻害をもたらし、Ａｔｏｈ１エンハンサー要素の解除、およびその後の有毛細胞の分化の重要な調節因子である、ＡＴＯＨ１の誘導をもたらす。ノッチシグナル伝達は、新しい内耳感覚有毛細胞の生成に関与することが示されているが、シナプス形成に関して、同じリンクは作られない。本発明者らは、ＩＨＣ求心性シナプスを再生する際の、ノッチシグナル伝達を阻害するガンマセクレターゼ阻害剤、およびノッチシグナル伝達を阻害しないガンマセクレターゼ阻害剤、いわゆるノッチスペアリングガンマセクレターゼ阻害剤（Ｎｏｔｃｈ  ｓｐａｒｉｎｇ  ｇａｍｍａ  ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を評価した。本発明者らの知見は、ＧＳＩの両方のタイプが等しく有効であることを示しており、これは、ノッチ阻害ではなく、ガンマセクレターゼ阻害が、内耳におけるシナプスの再生の機構である可能性があることを示唆している。
【００７１】
本開示の方法のいずれかにおいて使用するのに好適なガンマ−セクレターゼ阻害剤の例は、例えば、米国特許出願公開第２００４／００２９８６２号、同第２００４／００４９０３８号、同第２００４／０１８６１４７号、同第２００５／０２１５６０２号、同第２００５／０１８２１１１号、同第２００５／０１８２１０９号、同第２００５／０１４３３６９号、同第２００５／０１１９２９３号、同第２００８／００８３１６号および同第２０１１／００２０２３２号；米国特許第６，７５６，５１１号；同第６，８９０，９５６号；同第６，９８４，６２６号；同第７，０４９，２９６号；同第７，１０１，８９５号；同第７，１３８，４００号；同第７，１４４，９１０号；同第７，１６０，８７５号；同第７，１６６，５８７号；同第７，１８３，３０３号；同第７，２５３，１５８号；同第８，１８８，０６９号；同第８，０８４，４７７号；国際公開番号ＷＯ１９９８／２８２６８；ＷＯ２００１／７０６７７、ＷＯ２００２／０４９０３８、ＷＯ２００４／１８６１４７、ＷＯ２００３／０９３２５３、ＷＯ２００３／０９３２５１、ＷＯ２００３／０９３２５２、ＷＯ２００３／０９３２６４、ＷＯ２００５／０３０７３１、ＷＯ２００５／０１４５５３、ＷＯ２００４／０３９８００、ＷＯ２００４／０３９３７０およびＷＯ２０１７／００７７０２；およびＥＰ２２４４７１３に開示されており、その各々の開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。言及することができるいくつかの具体的なガンマセクレターゼ阻害剤としては、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル（本明細書において「化合物Ｉ」と呼ぶ）；（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド（本明細書において「化合物ＩＩ」と呼ぶ）；４，４，４−トリフルオロ−Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（９−メトキシ−３，３−ジメチル−５−オキソ−２，３，５，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｆ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−６−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ブタンアミド（本明細書において、「化合物Ｘ」と呼ぶ）；ＤＡＰＴ；Ｌ−６８５４５８；アバガセスタット；ＢＭＳ−２９９８９７；ＭＫ−０７５２；ＹＯ−０１０２７；ＬＹ４１１５７５；ＥＬＮ−４６７１９；ＰＦ−０３０８４０１４；セマガセスタット；ベガセスタット；ＭＲＫ−００３；ＭＲＫ−５６０；ＲＯ−４９２９０９７；ＪＬＫ６；ＡＬＸ−２６０−１２７が挙げられる。
【００７２】
一部の実施形態では、本開示の方法のいずれかに使用するためのガンマセクレターゼ阻害剤は、（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステルまたは（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドである。
ガンマセクレターゼモジュレーター（ＧＳＭ）
【００７３】
ガンマセクレターゼモジュレーター（ＧＳＭ）は、ＡＢ生成の総量に影響を及ぼすことなく、病原性アミロイドベータ４２ペプチド（Ａ４２）の形成を選択的に低下させる低分子化合物であり（Ｗｅｇｇｅｎ  Ｓら、Ｎａｔｕｒｅ．  ２００１年、４１４巻、２１２〜２１４頁）、アルツハイマー病を処置するための有望な治療剤として現れた。このクラスの低分子は、ガンマセクレターゼ活性を低下させるプロテアーゼ阻害剤として機能するガンマセクレターゼ阻害剤（ＧＳＩ）からの重要な展開物であり、全ＡＢ生成の低下をもたらす。ＧＳＩは、ノッチプロセッシングの阻害に直接関係する機構に基づいた毒性を有することが発見された。ごく最近、ノッチスペアリングＧＳＩが記載されている（Ｆｒａｅｒｉｎｇ  ＰＣら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２００５年、２８０巻（５１号）：４１９８７〜９６頁）。しかし、毒性を回避するため、それらが、ノッチシグナル伝達に関して十分な選択性を有するかどうかは、未だ分かっていない。対照的に、ＧＳＭは、通常、ノッチ阻害よりもＡＢ４２の低下に対してかなり高い選択性をもたらし、したがって、治療的レベルでＧＳＩに関連する毒性を潜在的に回避することができる。ＧＳＭは、Ｃｈｅｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．、２０１３年、２３巻：６４４７〜６４５４頁およびＪｕｎｇら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ２０１３年、２７巻（９号）：３７７５〜３７８５頁に記載されているものなどの、当分野において公知のスクリーニング方法を使用して同定することができる。ＧＳＭは、アルツハイマー病を処置することが記載されているが、難聴の処置のためにそれを使用することは報告されていない。さらに、難聴を処置するためのその使用は、まったく予期せぬものであるか、または文献中で現在、入手可能ないかなるデータによっても予期できるものではないと思われる。
【００７４】
本開示の方法のいずれかにおいて使用するのに好適なガンマ−セクレターゼモジュレーターの例は、例えば、Ｂｕｒｓａｖｉｃｈら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２０１６年、５９巻：７３８９〜７４０９頁；Ｃｒｕｍｐら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２０１３年、５２巻（１９号）：３１９７〜２１６頁、およびその中に引用されている参照文献に開示されている。ガンマセクレターゼモジュレーターを開示する他の刊行物は、例えば、ＵＳ７２４４７３９、ＷＯ２０１５０７０５８、ＷＯ２０１６２０１１６８、ＷＯ２０１４０４５１５６、ＷＯ２０１２１１６９６５、ＵＳ２０１５０２７４７２１であり、それらの各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる。命名され得る一部のガンマセクレターゼモジュレーターが、図１１に提示されている。
【００７５】
一部の実施形態では、本開示の方法のいずれかにおいて使用するためのガンマセクレターゼモジュレーターは、
【化９】
0006904612.tif 000014
およびこれらいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
【００７６】
一部の実施形態では、本開示の方法のいずれかにおいて使用するためのガンマセクレターゼモジュレーターは、
【化１０】
0006904612.tif 000015
および薬学的に許容されるその塩である。
【００７７】
実施例に記載されているものなどの、当分野で公知のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ、すなわち、それぞれ、マウスおよびモルモットにおける、ＧＳＩ／Ｍへの曝露後のＳＧＮ神経突起成長量を測定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、騒音誘発性および耳毒誘発性シナプス変性において、ＧＳＩ／Ｍにより処置した後の、シナプス密度の回復を評価するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを使用して、本開示の使用のためにＧＳＩ／Ｍを評価することができる。
医薬組成物
【００７８】
医薬組成物は、通常、薬学的に許容される担体を含む。用語「薬学的に許容される担体」は、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩と一緒に、患者に投与されてもよい担体またはアジュバントであって、その薬理学的活性を破壊せず、かつ治療量の該化合物を送達するのに十分な用量で投与しても非毒性である、担体またはアジュバントを指す。
【００７９】
用語「組成物」は、本明細書で使用する場合、指定成分を含む生成物、および指定成分の組合せから直接的にまたは間接的に生じる任意の生成物を包含することが意図されている。医薬組成物に関するこのような用語は、活性成分（複数可）、および担体を構成する不活性成分（複数可）、ならびに任意の２種もしくはそれより多い成分の組合せ物、複合体または凝集物、または１つもしくは複数の成分の解離、または１つもしくは複数の成分の他のタイプの反応もしくは相互作用に、直接的または間接的に由来する任意の生成物を含む生成物を包含することが意図されている。したがって、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体を混合することにより作製された任意の組成物を包含する。「薬学的に許容される」とは、担体、希釈剤または賦形剤は、製剤の他の成分と適合しなければならず、そのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
【００８０】
本医薬組成物は、経口的に、非経口的に（例えば、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、鞘内、病巣内に、および頭蓋内注射または注入技法による）、埋め込まれたレザーバーを介して、または注射によるなどの全身投与のために製剤化することができる。本医薬組成物は、全身性曝露を制限しながら、薬物曝露を局部的に最適化するよう局所投与向けに製剤化され得る。
【００８１】
一部の実施形態では、本開示の活性成分は、約０．０１ｍｇ〜１，０００ｍｇ、約２ｍｇ〜９００ｍｇ、約３ｍｇ〜８００ｍｇ、約４ｍｇ〜７００ｍｇ、約５ｍｇ〜６００ｍｇ、約１０ｍｇ〜５００ｍｇ、約５０ｍｇ〜４００ｍｇ、約１００ｍｇ〜３００ｍｇ、約１５０ｍｇ〜２５０ｍｇまたはその間のいずれかの値で投与される。一部の実施形態では、毎日の投与量の合計を１日の間で分割して、例えば、１日１回、１日２回、１日３回または１日４回で分割して投与してもよい。一部の実施形態では、合計投与量は、１週間あたり１回、１週間あたり２回、１週間あたり３回、１週間あたり４回、１週間あたり５回、または１週間あたり６回、投与することができる。投与頻度は、持続放出組成物を使用する場合、例えば、２週間ごとに１回、１か月に１回、３か月ごとに１回（ｏｎｃｅ  ｑｕａｒｔｅｒｌｙ）などに減らしてもよい。
【００８２】
一部の実施形態では、注射向けの本開示の医薬組成物は、薬学的に許容される滅菌水溶液もしくは非水溶液、分散液、懸濁液またはエマルション、および使用直前に、注射用滅菌溶液または分散液中で再構成するための滅菌粉末を含む。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）および好適なそれらの混合物、植物油（オリーブ油など）、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用により、分散液の場合、必要な粒子サイズの維持により、および界面活性剤の使用により維持され得る。
【００８３】
一部の実施形態では、本医薬組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有することもできる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール  ソルビン酸などの含有によって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことがやはり望ましいことがある。モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる作用剤を含ませることにより、注射可能な医薬品形態の長期吸収をもたらすことができる。所望の場合、および一層有効な分布のために、本化合物は、ポリマーマトリックス、リポソームおよびマイクロスフィアなどの、遅延放出系または標的送達系に組み入れることができる。
【００８４】
一部の実施形態では、注射可能な製剤である医薬組成物は、例えば、細菌保持フィルターでろ過することにより、または使用直前に、滅菌水もしくは他の滅菌注射可能媒体中に溶解または分散することができる、滅菌の固体医薬組成物の形態の滅菌剤を組み入れることにより、滅菌することができる。
【００８５】
一部の実施形態では、経口投与向けの本医薬組成物の固形剤形。一部の実施形態では、経口剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤・散剤（ｐｏｗｄｅｒ）および顆粒剤を含む。このような固形剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される賦形剤または担体、ならびに／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸などの充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、バレイショデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケートおよび炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤、ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイトクレイなどの吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムなどの滑沢剤、およびそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、これらの剤形はまた、緩衝剤を含んでもよい。
【００８６】
同様のタイプの固体医薬組成物はまた、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル中で、ラクトースまたは乳糖、および高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用する、充填剤として用いることができる。
【００８７】
錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤である本医薬組成物の固形剤形は、医薬調合分野において周知の、腸溶コーティング剤および他のコーティング剤などのコーティング剤およびシェルを用いて調製することができる。それらは、乳白剤を必要に応じて含んでもよく、これらは、腸管のある部分において、必要に応じて遅延させて、活性成分（複数可）のみをまたは活性成分（複数可）を優先的に放出するような製剤とすることもできる。使用することができる医薬組成物を埋め込む例には、ポリマー物質およびワックスが含まれる。
【００８８】
活性化合物はまた、適切な場合、１種または複数の上述の賦形剤と一緒になった、マイクロ封入形態にあることができる。
【００８９】
一部の実施形態は、経口投与向けの本医薬組成物の液状剤形を提供する。一部の実施形態では、液体投与物（ｌｉｑｕｉｄ  ｄｏｓａｇｅ）には、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性化合物に加えて、液状剤形は、例えば、水、またはエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などの他の溶媒、可溶化剤ならびに乳化剤などの、当分野において一般に使用される不活性希釈剤を含有することができる。
【００９０】
不活性な希釈剤の他に、経口医薬組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、着香剤および芳香剤などのアジュバントを含むことができる。
【００９１】
本化合物の懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物として、懸濁化剤を含有してもよい。
【００９２】
一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は、内耳送達するために製剤化される。内耳への薬物送達は、以下にまとめられており、その内容物は、参照により本明細書に組み込まれる：
１．Ｓａｌｔ  ＡＮおよびＰｌｏｎｔｋｅ  ＳＫＲ、Ｌｏｃａｌ  Ｉｎｎｅｒ−Ｅａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、２００５年、１０巻（１９号）：１２９９〜１３０６頁。
２．Ｌｉｕら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｉｎｎｅｒ  Ｅａｒ．  Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ  Ｂ、２０１３年、３巻（２号）：８６〜９６頁。
３．Ｌｅａｒｙ  Ｓｗａｎ  ＥＥら、Ｉｎｎｅｒ  Ｅａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｆｏｒ  Ａｕｄｉｔｏｒｙ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．    Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ、２００８年、６０巻（１５号）：１５８３〜１５９９頁。
【００９３】
一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は、蝸牛の正円窓膜に、またはその近傍に送達する液体製剤またはゲル製剤などの、鼓室内投与向けに製剤化される。一部の実施形態では、鼓室内投与向けの医薬組成物は、中耳における活性剤の持続放出をもたらす。徐放性製剤は、通常、ポリマーを含む。明記され得る本開示の好適なポリマーには、以下に限定されないが、ゼラチン、ヒアルロン酸／ヒアルロネート、キトサンおよびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレントリブロックコポリマーが含まれる［例えば、Ｌｉｕら、Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ  Ｂ、２０１３年、１３巻（２号）：８６〜９６頁およびＳｗａｎら、Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  Ｒｅｖ．、２００８年、６０巻（１５号）：１５８３〜１５９９頁を参照されたい］。
【００９４】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、高い粘度を有するゲルをｉｎ  ｓｉｔｕで形成する、周囲温度で粘度の低い液体として、中耳に送達することができる。このような組成物の利点には、（１）投与時に液体を取り扱う便利さ、および（２）一旦、ｉｎ  ｓｉｔｕでゲル化してからの、沈着部位における薬物の長時間の放出が含まれる。放出時間の増大は、長時間の治療有効性、および潜在的に薬物用量の低減をもたらす。このような組成物は、有利には、周囲温度で液体であり、哺乳動物のほぼ体温でゲルである特性を有する、熱可逆性ゲルを含む。
【００９５】
医薬品用途に好適な熱可逆性ゲルは、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ＰＥＧ）、またはＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧのトリブロックコポリマーを含めた、ポリマーを使用して調製することができる。キトサン−グリセロールリン酸塩溶液は、可逆性熱硬化性ゲルを形成することができる。糖をベースとするホスフェートを添加すると、キトサンは熱可逆性ゲル薬物送達系に変換される。熱可逆性ゲルの共通の群は、ポロキサマーとして一般に知られている、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレントリブロックコポリマーなどの、ポリオキシアルキレンをベースとするポリマーである。水溶液中のポロキサマーは、本開示に有利な熱可逆性特性を示す。したがって、ポロキサマーの水溶液は、温度の上昇につれて、液体状態からゲル状態に転移することができる。液体−ゲルの転移温度は、ポロキサマーの濃度を変えることにより、および粘度修飾剤などの他の賦形剤を添加することにより調節することができる。したがって、室温またはそれ未満において液体状態にあり、体温でゲル状態に転移するポロキサマーの溶液を調製することができる。本発明の組成物の一部の実施形態では、熱可逆性ゲルは、ポロキサマー４０７（例えば、ＢＡＳＦ、Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ、ＮＪにより上市されている、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７）である。ポロキサマーは、約１５〜約２５重量％、またはその間の任意の値の濃度で存在することができる。一部の実施形態では、ポロキサマー４０７濃度は、約１５〜約１８重量％またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、ポロキサマー４０７濃度は、約１６〜約１７重量％またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、ポロキサマーは、約１５もしくは１６もしくは１７もしくは１８重量％、またはその間の任意の値で存在する。一部の実施形態では、ポロキサマー４０７を含む本開示の医薬組成物は、４０〜１２０センチポアズ（ｃＰ）、またはそれらの間の任意の値の名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を、約０．５重量％〜４重量％、またはその間の任意の値の量で必要に応じて含むことができる。
【００９６】
一部の実施形態では、本開示の組成物は、（ａ）約０．５重量％〜８重量％のヒアルロン酸、または（ｂ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％のヒアルロン酸、および（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）を含む、活性剤および薬学的に許容される担体を含む、鼓室内投与向けの水性医薬組成物である。
【００９７】
鼓室内投与向けの水性医薬組成物では、活性剤の濃度は、一般に、約０．０１％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖである。この範囲は、約０．０５ｗ／ｖ〜約１５ｗ／ｖ、約０．１ｗ／ｖ〜約１０ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ〜約５％ｗ／ｖ、またはそれらの間の任意の値の部分範囲を含む。一部の実施形態では、活性剤の濃度は、約０．５％ｗ／ｖ〜約５％ｗ／ｖ、またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、活性剤の濃度は、約０．５〜約４％ｗ／ｖ、またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、活性剤の濃度は、約１〜約５％ｗ／ｖ、またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、活性剤の濃度は、約１〜約４％（ａｂｏｕｔ  １  ｔｏ  ａｂｏｕｔ  ｔｏ  ａｂｏｕｔ  ４％）、またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、活性剤の濃度は、約０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５もしくは５％ｗ／ｖ、またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、活性剤の濃度は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９もしくは１％ｗ／ｖ、またはその間の任意の値である。
【００９８】
本明細書において開示されている組成物は、任意の慣用的な非毒性の薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。一部の実施形態では、組成物のｐＨは、約６〜８、もしくは約６〜７もしくは約７〜８の間、またはその間の任意の値である。一部の実施形態では、本組成物は、リン酸一ナトリウムもしくはリン酸二ナトリウム、またはそれらの組合せなどのバッファを含むことができ、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）などのバッファとすることができる。バッファの量は、重量基準で、約０．１〜約０．５％、またはそれらの間の任意の値であってもよい。
【００９９】
一部の実施形態では、本開示の水性医薬組成物は、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ（Ｌｕｂｒｉｚｏｌ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ）などの粘度改質剤を含むことができる。一部の実施形態では、鼓室内投与向けの水性医薬組成物は、活性剤、およびポロキサマー４０７、およびＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐなどの粘度改質剤を含む薬学的に許容される担体を含む。一部の実施形態では、ポロキサマー４０７は、約１０％〜２０重量％で存在し、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐは、約０．１％〜約０．３重量％で存在する。他の共通の賦形剤は、メチルパラベンなどの保存料、および等張性をもたらすための塩化ナトリウムを含むことができる。本組成物は、それらが、ガンマセクレターゼのモジュレートを実現するのに十分な期間、活性剤の持続放出をもたらすように製剤化される。ガンマセクレターゼの持続モジュレートは、投与頻度を、毎週１回、２週間ごとに、毎月、２か月ごとに、３か月ごとに、半年ごとに、１年ごとになどまでに最小化する。一部の実施形態では、投与頻度は、２週ごとに１回、または１か月に２回、または毎月、または２か月に１回、または３か月ごとである。
【０１００】
本明細書において開示されている、活性剤および担体を含む水性医薬組成物は、従来の方法を使用して調製することができ、シリンジ中などの単回投与での使用向け、またはバイアル中などの複数回投与向けに包装することができる。代替的に、活性剤構成成分および水溶液構成成分は、個別に、個別のコンパートメント内に、または個別の容器に包装されてもよく、投与前に混合される。
【０１０１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されている水性医薬組成物のいずれも、ＮＴ−３をさらに含む。
【０１０２】
ガンマセクレターゼ阻害剤およびガンマセクレターゼモジュレーターの局所内耳投与に好適な組成物の例示的な例は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７０７５２６４に提示されている。いくつかの例は、以下：
（Ａ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、または
（Ｂ）（ｉ）約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）の、４０〜６０ｃＰまたはグレード８０〜１２０ｃＰの名目粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロース、または
（Ｃ）（ｉ）約１０重量％〜２０重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７、および
（ｉｉ）約０．１重量％〜０．３重量％（ｗ／ｗ）のＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、または
（Ｄ）（ｉ）約０．５重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、または
（Ｅ）（ｉ）約０．５重量％〜４重量％（ｗ／ｗ）のヒアルロン酸、および
（ｉｉ）約５体積％〜２０体積％のポリエチレングリコール４００
を含む、薬学的に許容される水溶液を含む医薬組成物を含み、前記ＧＳＩまたはＧＳＭは、前記水溶液の約０．０１％〜約２０％ｗ／ｖで存在する。一部の実施形態では、ガンマセクレターゼ阻害剤は、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］−アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステルおよび結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミドから選択される。一部の実施形態では、ガンマセクレターゼモジュレーターは、ＮＧＰ５５５およびＰＦ０６６４８６７１から選択される。一部の実施形態では、薬学的に許容される水溶液は、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含む。一部の実施形態では、薬学的に許容される水溶液は、約１５重量％〜２５重量％（ｗ／ｗ）のポロキサマー４０７を含み、前記ＧＳＩまたはＧＳＭが、約０．１％〜５％ｗ／ｖで存在し、結晶性（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−カルバミン酸（Ｓ）−１−（（Ｓ）−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イルカルバモイル）エチルエステル、結晶性（２Ｒ）−２−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［（Ｓ）−５−メチル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］アゼピン−７−イル］−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）マロンアミド、ＮＧＰ５５５およびＰＦ０６６４８６７１からなる群から選択される。
処置の使用および方法
【０１０３】
一部の実施形態は、蝸牛シナプス変性を処置する方法であって、治療有効量のガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を、蝸牛シナプス変性の処置を必要としている患者に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態は、蝸牛シナプス変性を処置するために、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の使用を提供する。用語「蝸牛シナプス変性」は、一般に、シナプスの喪失の原因にかかわらず、内有毛細胞と蝸牛求心性神経繊維との間のシナプスの喪失に起因する状態に関し、以下に限定されないが、感音難聴、耳鳴、聴覚過敏およびメニエール病を含む。したがって、一部の実施形態では、本開示は、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴（隠れた難聴を含む）または耳鳴を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量のガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーター、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を対象とする。同様に、一部の実施形態では、本開示は、内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する難聴（隠れた難聴を含む）または耳鳴を処置するための、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレーターまたはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の使用を対象とする。本明細書で使用する場合、「内有毛細胞求心性シナプスの喪失に起因する」難聴または耳鳴には、シナプスのそのような喪失に少なくとも一部、寄与する恐れがある、難聴または耳鳴を含む。
【０１０４】
感音難聴（ＳＮＨＬ）は、蝸牛への損傷、または蝸牛から脳への神経経路への損傷から発生し、加齢に伴う難聴、騒音誘発性難聴、耳毒性化学品により引き起こされる難聴、および騒音中での発話に対する難聴（隠れた難聴；騒音の多い環境における発話の理解困難）が含まれる。
【０１０５】
加齢に伴う難聴または老人性難聴は、加齢に起因する進行性難聴であり、通常、高い周波数ほど一層、大きくなる。騒音誘発性難聴は音の大きな音楽、重装置もしくは重機など慢性のかつ繰り返される音の大きな騒音への曝露により、または銃発射もしくは爆発などの短く高強度の音によって引き起こされる。難聴はまた、耳毒性薬物などの耳毒性化学品によって引き起こされることがある。公知の耳毒性薬物には、ゲンタマイシン、カナマイシン、アミカシンなどのアミノグリコシド抗生物質；フロセミドなどのループ利尿薬；シスプラチン、カルボプラチン、ブレオマイシンおよびビンクリスチンなどの化学治療剤が含まれる。騒音中での発話に対する難聴は、このような難聴が聴力図により測定することができないので、隠れた難聴としても知られており、騒音の多い環境における発話を理解するのが困難なことを指す。
【０１０６】
耳鳴は、任意の外部刺激の非存在下で、音の知覚を特徴とする障害を指す。ある種の場合、耳鳴が、一方または両方の耳において、連続的または散発的に起こり、大部分の場合、共鳴音（ｒｉｎｇｉｎｇ  ｓｏｕｎｄ）として記載される。聴覚過敏は、正常な環境音に耐えるのが困難なことを指す。患者は、このような音を耐えがたく苦痛なほど大きいと感じ得る（ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｍａｙ  ｓｕｃｈ  ｓｏｕｎｄｓ  ｕｎｂｅａｒａｂｌｅ  ａｎｄ  ｐａｉｎｆｕｌｌｙ  ｌｏｕｄ）。メニエール病は、３〜２４時間、続くことがあるめまい、吐き気および嘔吐の突然の発作を特徴とする突発性状態であり、徐々におさまり得る。耳における進行性難聴、耳鳴および圧力感覚は、時間ととも疾患を併発する。
【０１０７】
一部の実施形態では、蝸牛シナプス変性は加齢に伴う難聴である。一部の実施形態では、蝸牛シナプス変性は、騒音誘発性聴覚騒音である。一部の実施形態では、蝸牛シナプス変性は、騒音中での発話の難聴である。一部の実施形態では、蝸牛シナプス変性は耳鳴である。一部の実施形態では、蝸牛シナプス変性は聴覚過敏である。一部の実施形態では、蝸牛シナプス変性はメニエール病である。一部の実施形態では、処置される患者は、ＡＢＲ閾値およびＤＰＯＡＥに明白な欠損を示さないが、ＡＢＲ波１振幅および／または波Ｖ潜時の持続的欠損を示す。一部の実施形態では、処置される患者は、基準ＳＰ／ＡＰ比と比べ、ＳＰ／ＡＰ比が高いことを示す。本明細書で使用する場合、用語「処置」または「治療法」または「処置すること」などは、処置される状態の進行を制御する、緩和する、逆転させるまたは減速させること、例えば、上記因子または他の因子によるさらなる難聴の軽減または停止、および上記因子または他の因子による部分的または深刻な難聴後の聴力の回復を含む。処置はまた、難聴の予防（例えば、難聴の発生の遅延、またはその発症リスクの低減）、およびゲンタマイシンなどのアミノグリコシド抗生物質またはシスプラチンなどの白金化学治療剤などの耳毒性化学品の投与前、その最中またはその後などの予防的使用を含む。
【０１０８】
本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」は、処置される疾患または障害における所望の効果または有益な効果を発揮するのに十分な活性剤の量を指す。予防の場合、この用語は、疾患もしくは障害の発生を予防する、または疾患もしくは障害の影響を軽減するのに十分な活性剤の量を指す。使用される量は、選択される活性剤、処置される疾患または障害の重症度、投与経路、および年齢などの患者特徴に依存する。
【０１０９】
本開示の一部の実施形態では、活性剤は、経口投与される。一部の実施形態では、ガンマセクレターゼモジュレーターは、経口用医薬組成物で投与される。一部の実施形態では、ガンマセクレターゼ阻害剤は、経口用医薬組成物で投与される。
【０１１０】
本開示の一部の実施形態では、活性剤は、中耳、内耳もしくは蝸牛またはそれらの組合せに、鼓室内注射によって耳に投与される。鼓室内はまた、経鼓室（ｔｒａｎｓｔｙｍｐａｎｉｃ）とも呼ばれ、どちらの用語も、本明細書において互換的に使用される。鼓室内注射は、鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）から中耳に治療剤を注射する技法であり、この場合、治療剤は、正円窓膜に分散して、内耳に到達することができる。それは、何年もの間、臨床実践に使用され、医師のオフィスで行うことができる、比較的軽度な介入である。繰り返し注射の場合、中耳換気チューブを鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）に挿入して、ここから、鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）の後ろの中耳空間へと医薬を投与して、中耳および／または内耳へと投薬することができる。一実施形態では、活性剤は、正円窓膜の近傍領域に、またはその上に鼓室内投与される。
【０１１１】
本方法の一部の実施形態では、活性剤は、熱可逆性ゲルを含む水性医薬組成物で投与される。このような組成物は、室温では液体であり（投与の容易さのため）、体温でゲルに変わり、こうして、医薬組成物は、耳管から迅速には排出されない。一部の実施形態では、本方法は、本明細書に記載されている医薬組成物を利用する。
【０１１２】
ガンマセクレターゼモジュレーター、ガンマセクレターゼ阻害剤およびこれらのいずれかの薬学的に許容される塩の局所中耳／内耳投与の用量は、使用される具体的な化合物、投与経路、処置される状態の重症度および患者特徴に依存する。この用量は、約０．０６ｍｇ〜約１００ｍｇを含む。この範囲は、約０．１ｍｇ〜約９０ｍｇ、０．２５ｍｇ〜約８０ｍｇ、０．４ｍｇ〜７０ｍｇ、０．６ｍｇ〜６０ｍｇ、０．８０ｍｇ〜５０ｍｇ、１．０ｍｇ〜４０ｍｇ、２ｍｇ〜３０ｍｇおよび３ｍｇ〜２０ｍｇの部分範囲を含む。用量は、水溶液を含む水性医薬組成物で投与されてもよく、投与される水溶液の体積は、約１００μＬ〜約５００μＬの体積の範囲を構成する。体積のこの範囲は、約１００μＬ〜１５０μＬ、１００μＬ〜２００μＬ、１００μＬ〜２５０μＬ、１００μＬ〜３００μＬ、１００μＬ〜３５０μＬ、１００μＬ〜４００μＬ、１００μＬ〜４５０μＬおよび１００μＬ〜５００μＬの部分範囲を含む。体積のこの範囲はまた、約２００μＬ〜２５０μＬ、２００μＬ〜３００μＬ、２００μＬ〜３５０μＬ、２００μＬ〜４００μＬ、２００μＬ〜４５０μＬおよび２００μＬ〜５００μＬの部分範囲を含む。体積のこの範囲はまた、約３００μＬ〜３５０μＬ、３００μＬ〜４００μＬ、３００μＬ〜４５０μＬ、および３００μＬ〜５００μＬの部分範囲を含む。体積のこの範囲はまた、約４００μＬ〜４５０μＬおよび４００μＬ〜５００μＬの部分範囲を含む。物理的制限により、水性医薬組成物に対する活性剤の割合は、２０重量％またはそれ未満であることが企図される。一部の実施形態では、ガンマセクレターゼ阻害剤は、中耳／内耳に投与される。一部の実施形態では、ガンマセクレターゼモジュレーターは、中耳／内耳に投与される。
【０１１３】
一態様では、本明細書において開示されている化合物は、ステロイド、例えばデキサメタゾンなどの１つまたは複数の追加剤と共投与されてもよい。一部の実施形態では、追加剤はＮＴ−３である。ある種の実施形態では、追加剤は、ＧＳＩまたはＧＳＭ（例えば、逐次、例えば異なる重複スケジュールで）から個別に投与されてもよい。他の実施形態では、これらの薬剤は、単一組成物中に、ＧＳＩまたはＧＳＭと一緒に混合した、単一剤形の一部とすることができる。さらに別の実施形態では、これらの薬剤は、ＧＳＩまたはＧＳＭが投与されるのとほぼ同時に投与される個別の用量として投与され得る。本明細書において開示されている組成物が、ＧＳＩまたはＧＳＭと、１つまたは複数の追加の治療剤または予防剤との組合せを含む場合、ＧＳＩおよびＧＳＭおよび追加剤はどれも、単剤療法レジメンで投与される投与量の、約１〜１００％の間、より好ましくは約５〜９５％の間の投与量レベルで存在することができる。
【実施例】
【０１１４】
本開示は、以下の実施例によりさらに例示され、これらは、特許請求の範囲を限定することを決して意図するものではない。
（実施例１）ＧＳＭおよびＧＳＩによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＤＣＣ（結腸直腸がんで欠失（Ｄｅｌｅｔｅｄ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ））研究
【０１１５】
これまでの報告により、ＤＣＣ（Ｄｅｌｅｔｅｄ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ）が、γ−セクレターゼ基質であることが示されている。ＤＣＣは、ガイダンス分子であるネトリンの受容体であり、その活性化は、神経細胞軸索伸長、軸索ターニングおよびシナプス形成をもたらす。処置されたプレセニリンノックアウトマウスの胚脊髄は、ＤＣＣ  α−断片の永続的発現を示す。これらの断片は、培養した運動ニューロンにおける軸索伸長を含めた、ネトリン−ＤＣＣ媒介性事象を増強することができる（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、２００３年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２７８巻：３０４２５〜３０４２８頁、およびＢａｉら、２０１１年、Ｃｅｌｌ、１４４巻（１号）：１０６〜１８頁）。以下の研究は、ＧＳＭである「ＲＯ」、およびＧＳＩである化合物Ｉを使用して行った。ＲＯは、以下の構造：
【化１１】
0006904612.tif 000016
を有する。
【０１１６】
ＲＯは、ＷＯ２０１２１１６９６５に開示されている方法に従い調製することができる（例えば、その実施例５のステップａの化合物を出発原料として使用し、その実施例６に記載されている手順と同様の手順を使用する）。
ｅｘ  ｖｉｖｏでのマウスの胚脊髄
【０１１７】
胎生１５日目のＣＤ−１マウスに由来する脊髄を採集して、１〜２ｍｍのセグメントに切り取り、１μＭのＲＯまたは１μＭの化合物Ｉを含む血清不含成長培地（ＤＭＥＭ−Ｆ１２、Ｎ２およびＢ２７血清補給物、ペニシリン／ストレプトマイシン）に移した。セグメントを２４時間（３７℃、５％ＣＯ２）、培養し、次に、ウエスタンブロット用に処理した。細胞内ドメインを認識するＤＣＣ抗体を用いて膜を調べ、バンドをアクチンに対して正規化した。ビヒクル群に比べ、ＧＳＭおよびＧＳＩ処置群の両方で、α−断片の増加が観察された（図２ａ）。
マウスのｅｘ  ｖｉｖｏ蝸牛
【０１１８】
蝸牛は、出生後２１日目のＣＤ−１マウスから得た。蝸牛頂点の骨に開口部を作製し、流体が流れるようにした。１μＭのＲＯまたは１μＭの化合物Ｉを含む血清不含成長培地（ＤＭＥＭ−Ｆ１２、Ｎ２およびＢ２７血清補給物、ペニシリン／ストレプトマイシン）中で、蝸牛をインキュベートした。２４時間後に、らせん神経節を単離し、ウエスタンブロット用に処理した。細胞内ドメインを認識するＤＣＣ抗体を用いて膜を調べ、バンドをアクチンに対して正規化した。ビヒクル群に比べ、ＧＳＭおよびＧＳＩ処置群の両方で、α−断片の増加が観察された（図２ｂ）。
（実施例２）ＧＳＩによりＤＣＣ  α−断片が増加する
ＤＣＣ  ａ−断片のウエスタンブロット
【０１１９】
化合物Ｉ（ビヒクル中２％、２μｌ）またはビヒクル（２μｌ）を、ＣＢＡ／Ｊマウスの正円窓に両側に送達した。１週間後、蝸牛を採集し、ウエスタンブロット用に処理した。２匹の動物からの蝸牛を両方使用して、各データ点を生成した。蝸牛を、５０μＬの放射免疫沈降アッセイ用緩衝液中でホモジナイズし、次に、さらに４℃で１時間、溶解させた。骨を回転させて、４×試料ロード用緩衝液を加えた。４〜１５％のＴＧＸグラジエントゲル（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）上で試料を泳動し、ニトロセルロース膜に転写し、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング用緩衝液（ＬＩ−ＣＯＲ、ＮＥ）によりブロッキングした。０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０を含有する、ブロッキング用緩衝液中、１：５００のマウスＤＣＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）、およびウサギアクチン（ロード対照）抗体（Ｌｉ−Ｃｏｒ、ＮＥ）によりブロットを調べた。膜をＰＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０および０．０１％  ＳＤＳを含有するブロッキング用緩衝液中に１：１０，０００に希釈した二次抗体（ヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ  ６８０ＬＴおよびヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ  ８００ＬＴ、どちらもＬＩ−ＣＯＲ、ＮＥから）においてインキュベートした。膜をＰＢＳ中で洗浄し、次に、ＬｉＣｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｃｌａｓｓｉｃスキャナで画像化し、ＩｍａｇｅＪを使用してＤＣＣ  α−断片を定量した。化合物Ｉにより処置した動物は、ビヒクル単独と比べて、ＤＣＣ  α−断片が約２倍、増加することを示した（図３）。
（実施例３）ＧＳＭにより、Ｉ型らせん神経節ニューロン神経突起伸長が増大する。
【０１２０】
Ｗｈｉｔｌｏｎ  ＤＳら、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１５年、５巻、１５９６０頁、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ１５９６０から適合した方法を使用して、出生後５日目のＣＤ−１マウス由来のらせん神経節ニューロン（ＳＧＮ）を培養した。ニューロンを解離し、成長培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｎ２およびＢ２７血清補給物およびペニシリン／ストレプトマイシン）中のコラーゲンをコーティングした９６ウェルプレートでプレート培養した。培養１８時間後、ニューロンを様々な濃度のＲＯまたはＮＧＰ−５５５で、２４時間、処理した。ニューロンを固定し、ウサギｂチューブリン（ｓｏｍａｔｏ−ａｘｏｎａｌマーカー）抗体、次いで、Ａｌｅｘａ５６８にコンジュゲートしたロバ抗ウサギ二次抗体で染色し、Ｈｏｅｃｈｓｔ青色蛍光色素で対比染色し、ＤＮＡを染色した。ニューロンは、ＩｎＣｅｌｌ２０００で画像化した。神経突起長さは、ＩｍａｇｅＪを使用して測定した。双極形態（Ｉ型ＳＧＮを示す）を示すβ−チューブリン＋細胞だけを定量した。ＲＯまたはＮＧＰ５５５のどちらか一方を使用し、神経突起伸長の用量依存的増加が観察された（ＲＯの場合、ＥＣ５０  ２４ｎＭ、ＮＧＰ５５５の場合、ＥＣ５０  ５２７ｐＭ、それぞれ図４Ａおよび４Ｂ）。同様に、ＰＦ−０６６４８６７１を評価し、３０３ｐＭのＥ５０を得た（図４Ｃ）。
【０１２１】
ネトリン−ＤＣＣ経路がＧＳＭ誘導性の神経突起伸長に関与しているかどうかを決定するため、１μＭの試験化合物の添加１時間前に、培地に機能阻害ネトリン抗体を適用した。２４時間後、β−チューブリンでニューロンを染色し、Ｉ型ニューロンに由来する神経突起だけを解析した。試験化合物とともにネトリン抗体を共適用する（ｃｏ−ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）と、神経突起伸長が有意に低下した（図４Ｄ）。
（実施例４）マウスの騒音誘発性蝸牛シナプス変性
【０１２２】
雌のＣＢＡ／Ｊマウスに、２時間、９８ｄＢの８〜１６ｋＨｚのフィルターをかけた騒音に曝露した。３週間後、ビヒクル（０．５％のメチルセルロース、ｂ．ｉ．ｄ．）、ＮＧＰ−５５５（５０ｍｇ／ｋｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）またはＲＯ（１０ｍｇ／ｋｇ、ｑ．ｄ．）を強制飼養（ｏｒａｌ  ｇａｖａｇｅ）により与えた。１４日後、マウスを安楽死して、蝸牛を取り出し、次に、組織を４％パラホルムアルデヒドによる灌流により固定した。蝸牛は、カルシウム／マグネシウム不含ＰＢＳにより洗浄し、次に、３日間、１２．５ｍＭのＥＤＴＡ中で脱灰した。蝸牛を、卵円窓から頂点まで中央蝸牛軸（ｍｉｄｍｏｄｉｏｌａｒ）切開で二分した。次に、個々のねじれ体（ｔｕｒｎ）を分離し、Ｍｙｏ６およびＣｔＢＰ２に対する抗体で染色した。内有毛細胞ごとのシナプスを、３２ｋＨｚの領域を含むねじれ体について定量した。文献と一致して、９８ｄＢの傷害後に、シナプス密度の低下（しかし、内有毛細胞または外有毛細胞数の低下はない）が観察された。経口ＮＧＰ−５５５による処置によって、内有毛細胞のシナプス数が有意に増加し（図５）、シナプス変性の処置にＧＳＭが有効であることが実証された。
（実施例５）ガンマセクレターゼ阻害剤により、Ｉ型らせん神経節ニューロン神経突起伸長が増大する
【０１２３】
マウスらせん神経節ニューロン（ＳＧＮ）をＣＤ−１マウス（生後３〜５日目）から採取して分離し、血清不含培地中のコラーゲンＩ上で培養した。細胞を０．１％ＤＭＳＯ中の試験化合物で２４〜４８時間、処理し、次に、神経突起マーカーＴｕｊ１により免疫染色し、画像化した。神経突起長さをＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量した（ＮＩＨにより開発され、公に入手可能である）。Ｉ型ＳＧＮの明瞭な双極形態特性を有するＴｕｊ１＋細胞だけを定量した。試験化合物は、化合物Ｉ、化合物ＩＩおよびＲＯ４９２９０９７、ならびにノッチスペアリングＧＳＩ、ＢＭＳ−７０８１６３とした。ＮＴ−３を陽性対照として含めた。これらの結果が、図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃに示されている。試験化合物は、用量依存的に、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さが有意に増加することを示す（図６Ａおよび図６Ｂ）。さらに、ＢＭＳ−７０８１６３、ノッチスペアリングＧＳＩおよび化合物Ｉ、ノッチ阻害性ＧＳＩはどれも、Ｉ型ＳＧＮ神経突起伸長が増加した（図６Ｃ）。さらなるＧＳＩである化合物Ｘ（ＷＯ２０１７００７７０２、その中の化合物１を参照されたい）をこのアッセイで評価し、この化合物は、Ｉ型ＳＧＮ神経突起の長さが用量依存的に増加することをやはり示す（図６Ｄ）。
（実施例６）マウスの騒音誘発性蝸牛シナプス変性
【０１２４】
このプロトコルを使用して、個別の２つの実験を行った。実験１（図７Ａ）では、化合物Ｉによる処置をＮＴ３と比較し、実験２（図７Ｂ、７Ｃおよび図８）では、本発明者らは、化合物Ｉの２つの用量レベルを評価した。両方の実験に関して、雌の６週齢のＣＢＡ／Ｊマウス（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）を、残響音曝露ボックス中で、９８ｄＢ  ＳＰＬで２時間、フィルターをかけたオクターブバンド騒音（８〜１６ｋＨｚ）に曝露させ、おこし、および自由にさせた。高密度４インチ発泡体の上に置き、該発泡体の上に１インチワイヤ床を備えるカスタム設計したワイヤケージ内にマウスを入れた。騒音波形を生成し、ＴＤＴ  ＲＺ６プレ増幅器（Ｔｕｃｋｅｒ  Ｄａｖｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａｌａｃｈｕａ、ＦＬ）でフィルターにかけ、Ｃｒｏｗｎ  ＸＬＳ１０００パワーアンプにより増幅し、ＪＢＬ２７３０Ａホーンに連結したＪＢＬ２４２６Ｈコンプレッションドライバにより送達した。各曝露前に１／４インチコンデンサマイクロホン（ＰＣＢ  Ｐｉｅｚｏｔｒｏｎｉｃｓ、Ｄｅｐｅｗ、ＮＹ）を使用して、音レベルをケージの中央で確認した。騒音曝露の１日および１４日後にＡＢＲを収集し、永続的閾値シフトのない、一時的閾値シフトとなることを確かめた。騒音の１７日後に、マウスに、結晶性化合物Ｉ（ＰＦ１０＊中２％）またはＮＴ３（１５０ｎｇ／μＬを２μＬ）（実験１）；結晶性化合物Ｉ（ＰＦ１０中、２％および０．２％）（実験２）を両側に投与した。ＡＢＲは、投与の１４日後に収集した。ビヒクル対照動物に、ＰＦ１０の両側注射を投与した。年齢が一致するナイーブな対照動物も使用した。
【０１２５】
ＡＢＲ波Ｉ分析：聴性脳幹反応（ＡＢＲ）波形は、一組の波を含む（標識Ｉ〜Ｖ）。マウスをケタミンおよびキシラジンで麻酔した。Ｔｕｃｋｅｒ−Ｄａｖｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＲＺ６  Ａｕｄｉｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒを使用して、ＡＢＲ波形を収集した。使用した刺激は、２１／秒の交互極性で送信した、４、８、１６、２４および３２ｋＨｚからの周波数で５ｍ秒トーン（２ｍ秒、ｃｏｓ２上昇−下降）とした。頭蓋の中央の接地基準を用いて、耳介の頂点および腹側端の針電極を介して電気応答を収集し、３〜１００Ｈｚの通過帯域で２０×に増幅し、各ＳＰＬにおいて５１２の応答で平均した。９０ｄＢ  ＳＰＬから１０ｄＢ  ＳＰＬまで、１０ｄＢ刻みの刺激レベルに対する応答を収集した。ＡＢＲ閾値は、再現可能な波形を観察することができる、最低音レベルとして定義した。検出可能な応答が、９０ｄＢ  ＳＰＬで観察されなかった場合、この閾値は、１００ｄＢ  ＳＰＬとして定義した。波Ｉ振幅によるシナプス変性の機能的尺度を、ボルトで表した。波Ｉのピーク振幅は、未加工の波形電圧平均値を抜き出し、波Ｉのピークが現れる窓または潜時を決定することにより決定した。トラフに対するピークの測定値を使用して、波Ｉ振幅を算出した。各デシベルレベルに関する処置後の波Ｉ振幅（選択周波数において）を１４日目の値に正規化して、波Ｉ振幅を評価した。
【０１２６】
免疫組織化学：最後のＡＢＲの直後に、断頭術によって動物を屠殺し、免疫組織化学のための処理をした。手短に言えば、蝸牛を除去し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）の嚢内灌流（ｉｎｔｒａｓｃａｌａｒ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）により固定した。蝸牛を一晩、固定し、次に、脱灰のためにＰＦＡを１２５ｍＭのＥＤＴＡの溶液に交換した（少なくとも７２時間）。骨を取り除き、コルチ器官を、頂点（ほぼ初め〜１６ｋＨｚ）、中部１（約１６〜２４ｋＨｚ）、中部２（約２４〜３２ｋＨｚ）、および基底（約３２ｋＨｚから終わり）ねじれ体へと横方向に切り、免疫染色するため、ＤＢＰＳを含有する９６ウェルプレートに移した。蝸牛組織を、ＤＰＢＳおよび０．３％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中の５％ウマ血清により室温で１時間、ブロッキングし、次いで、以下の一次抗体：有毛細胞を明確に示すための、１：２００でのマウス（ＩｇＧ１）抗ＣｔＢＰ２（Ｃ末端結合タンパク質）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１：２５０でのウサギミオシン６（Ｐｒｏｔｅｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｒａｍｏｎａ、ＣＡ）と共に３７℃で一晩のインキュベートを行った。蝸牛片を洗浄し、次に、種に適切な二次抗体：１：５００のＣＦ６４７ヤギ抗マウスＩｇＧ１（Ｂｉｏｔｉｕｍ）、１：５００のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５６８−コンジュゲートロバ抗ウサギ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）中、室温で６０分間、インキュベートした。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を核対比染色として使用した。染色された蝸牛片をスライドにマウントし、ＮＩＳエレメンツソフトウェア（バージョン４．２０、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）を使用するＮｉｋｏｎ  Ｃ２共焦点顕微鏡を使用して画像化した。
【０１２７】
分析：画像は、ｚ軸上に０．５μｍ刻みの４０×油対物レンズを使用して撮影した。内有毛細胞あたり、ＣｔＢＰ２＋シナプスを手作業で定量した。内有毛細胞および外有毛細胞は、ミオシン６免疫反応性および位置によって特徴づけ、手作業で定量した。
【０１２８】
統計的評価：：データをＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して解析し、両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定または一元配置ＡＮＯＶＡ、次いで適切な場合、事後解析により統計的有意性を決定した。
（実施例７）モルモットカナマイシンモデル
【０１２９】
０日目に始めて、雄のＨａｒｔｌｅｙモルモット（４５０〜５００ｇ）に、毎日１回、１０日間、連続して投与した、カナマイシン（４００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により聴力を失わせた。これらの条件は、外有毛細胞の進行性喪失、および基底から頂点までの勾配で起こるＡＢＲ閾値の対応する悪化をもたらすことを実証した。このモデルにおけるシナプス密度の喪失は、以前に、記載されていない。１５日目に、動物は、ビヒクル（３０μｌ）、結晶性化合物Ｉ（ビヒクル中２％を３０μｌ）または結晶性化合物ＩＩ（ビヒクル中２％を３０μｌ）の両側経鼓室注射を受けた。試験物品の投与の３か月後、動物を安楽死させ、蝸牛を採集して、ファロイジン、ならびにＣｔＢＰ２およびＮＦ−２００に対する抗体で染色した。ＣｔＢＰ２＋／ＮＦ−２００＋シナプスの数を定量し、内有毛細胞数に正規化してシナプス密度を得た。カナマイシン処置することにより、蝸牛頂から１４．７ｍｍおよび１７．３ｍｍにおけるシナプス密度は低下し、これは、モルモットの蝸牛では、それぞれ、Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ周波数マップに従い、１６ｋＨｚおよび３２ｋＨｚと音調的に相関する。シナプス密度は、図９に示されている通り、ガンマセクレターゼ処置により増加した。これらのデータは、ガンマセクレターゼ阻害剤によりシナプス密度が回復した最初の証拠であり、この処置パラダイムは、シナプス変性の処置に有益となり得ることを示唆するものである。
【０１３０】
実施例６および７に使用したビヒクル（ＰＦ１０）およびビヒクル中のＧＳＩは、以下の通り調製した：１２９ｍＬの滅菌水に、０．９６ｇの塩化ナトリウム、０．５９ｇのリン酸水素二ナトリウムおよび０．１４ｇのリン酸二水素ナトリウムを加えた。この溶液を周囲温度で撹拌し、２５．６ｇのポロキサマー４０７を加え、一晩、撹拌して、濁りのない溶液を得た。この溶液を滅菌ろ過して、上記の溶液１ｍＬを２０ｍｇの結晶性化合物Ｉまたは２０ｍｇの結晶性化合物ＩＩに加え、この懸濁液を６０分間、ボルテックスし、均一懸濁液を得た。結晶性化合物Ｉ、結晶性化合物ＩＩおよびそれらの調製は、２０１５年１０月３０日出願の米国仮特許出願第６２／２４８６２５号、および２０１６年１０月２７日出願のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ１６／５９１９４、現在は２０１７年５月４日公開のＷＯ２０１７０７５２６４に記載されており、そのそれぞれが、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３１】
別の実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれか１つを単独で、または上記の実施形態のいずれか１つもしくは複数と組み合わせて使用することができる。
【０１３２】
上記は、明確性および理解を目的とするため、例示および実施例によって一部詳細に記載されているが、本開示の趣旨から逸脱することなく、多数の様々な修正がなされ得ることが当業者には理解される。したがって、本明細書において開示されている形態は単なる例示に過ぎないこと、および本開示の範囲を限定することを意図するものではなく、むしろ、本発明の真の範囲および趣旨を伴うすべての修正および代替をやはり包含することを明確に理解すべきである。
【図１−１】
0006904612.tif 000024
【図１−２】
0006904612.tif 000025
【図１−３】
0006904612.tif 000026
【図１−４】
0006904612.tif 000027
【図２−１】
0006904612.tif 000028
【図２−２】
0006904612.tif 000029
【図３】
0006904612.tif 000030
【図４−１】
0006904612.tif 000031
【図４−２】
0006904612.tif 000032
【図４−３】
0006904612.tif 000033
【図４−４】
0006904612.tif 000034
【図５】
0006904612.tif 000035
【図６−１】
0006904612.tif 000036
【図６−２】
0006904612.tif 000037
【図６−３】
0006904612.tif 000038
【図６−４】
0006904612.tif 000039
【図７−１】
0006904612.tif 000040
【図７−２】
0006904612.tif 000041
【図７−３】
0006904612.tif 000042
【図８−１】
0006904612.tif 000043
【図８−２】
0006904612.tif 000044
【図８−３】
0006904612.tif 000045
【図８−４】
0006904612.tif 000046
【図９】
0006904612.tif 000047
【図１０−１】
0006904612.tif 000048
【図１０−２】
0006904612.tif 000049
【図１０−３】
0006904612.tif 000050
【図１０−４】
0006904612.tif 000051
【図１１−１】
0006904612.tif 000052
【図１１−２】
0006904612.tif 000053
【図１１−３】
0006904612.tif 000054