(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される構造を有する化合物、又はそのラセミ体、立体異性体、幾何異性体、溶媒和物、水和物、若しくは薬学的に許容される塩である化合物。
【化１】
0006948680.tif 000055
（ここで、Ｒ1は、水素、置換又は非置換のアルキル基、又はハロゲンであり、
各Ｒ2は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、スルホン酸基及びカルボキシ基のいずれか１種又は複数種から選ばれ、
ｍは０、１、２、３又は４であり、
各Ｒ3は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、アリール基の１種又は複数種から選ばれ、
ｎは０、１、２、３又は４である。）
【請求項２】
前記Ｒ1は、水素、置換又は非置換のＣ1-5アルキル基、又はハロゲンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ1は、水素、フッ素、塩素、臭素、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のプロピル基、置換又は非置換のイソプロピル基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ2は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、ニトロ基、シアノ基、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のイソプロピル基の１種又は複数種から選ばれ、
前記ｍは０又は１であり、
前記Ｒ3は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基の１種又は複数種から選ばれ、
前記ｎは０又は１であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
以下の１つの化合物、又はその立体異性体、溶媒和物若しくは薬学的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【化２】
0006948680.tif 000056
【請求項６】
式（II）で表される構造を有する化合物、又はそのラセミ体、立体異性体、幾何異性体、溶媒和物、水和物、若しくは薬学的に許容される塩である化合物。
【化３】
0006948680.tif 000057
（ここで、Ｒ4は、水素、置換又は非置換のアルキル基、又はハロゲンであり、
Ｒ5は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、スルホン酸基及びカルボキシ基のいずれか１種又は複数種から選ばれ、
Ｒ6は、置換又は非置換のＣ1-5のアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又はシクロヘキシル基から選ばれ、
ｘは、０、１、２、３又は４であり、
ｙは、０又は１である。）
【請求項７】
前記Ｒ4は、水素、置換又は非置換のＣ1-6アルキル基、又はハロゲンであることを特徴とする請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記Ｒ4は、水素、フッ素、塩素、臭素、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のプロピル基、置換又は非置換のイソプロピル基であり、
前記Ｒ5は、それぞれ独立して、水素、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のイソプロピル基のいずれか１種又は複数種から選ばれ、
前記Ｒ6は、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のプロピル基、置換又は非置換のイソプロピル基、フェニル基、ピリジル基又はシクロヘキシル基から選ばれることを特徴とする請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
以下の１つの化合物、或いは立体異性体、溶媒和物又は薬学的に許容される塩である請求項６に記載の化合物。
【化４】
0006948680.tif 000058
【請求項１０】
化合物（１０）と化合物（１６）とを反応させ、式（Ｉ）で表される化合物を得るステップを含む請求項１に記載の化合物の製造方法。
【化５】
0006948680.tif 000059
（ここで、Ｒ1は、水素、置換又は非置換のアルキル基、又はハロゲンであり、
Ｒ2は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、スルホン酸基及びカルボキシ基のいずれか１種又は複数種から選ばれ、
ｍは０、１、２、３又は４であり、
Ｒ3は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、アリール基の１種又は複数種から選ばれ、
ｎは０、１、２、３又は４である。）
【請求項１１】
前記反応は、ｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリドの触媒作用で行い、前記反応の溶媒は、１，４−ジオキサンであることを特徴とする請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、アジュバント、媒介物又はそれらの組み合わせを含む医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物、又は請求項１２に記載の医薬組成物の、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５受容体介在性疾患を治療又は軽減するための医薬品の調製における使用。
【請求項１４】
前記ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５受容体介在性疾患は、慢性肝疾患、代謝性疾患又は門脈圧亢進症から選ばれることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記慢性肝疾患は、原発性胆汁うっ滞性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、肝線維症関連疾患、薬物による胆汁うっ滞、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、妊娠中の胆汁うっ滞、アルコール性肝疾患及び非アルコール性脂肪性肝疾患の１種又は複数種を含み、前記門脈圧亢進症は、肝線維症、肝硬変、脾腫或他の理由によって引き起こされる門脈圧上昇から選ばれ、前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、脂質異常症、コレステロール結石及び高トリグリセリド血症を含むことを特徴とする請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【相互参照】
【０００１】
本願は、２０１７年１２月１９日に中国特許庁へ提出された、出願番号が２０１７１１３７１７０２．０、発明の名称が「代謝性疾患治療用化合物及びその製造方法、並びに応用」である中国特許出願に基づき優先権を主張し、その全内容は、援用により本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、薬物化学の技術分野に関し、特に代謝性疾患治療用化合物及びその製造方法、並びに応用に関する。
【背景技術】
【０００３】
胆汁酸にはさまざまな生理学的機能があり、脂肪や脂溶性ビタミンの吸収、輸送、分布に重要な役割を果たすだけでなく、核内受容体を活性化して胆汁酸とコレステロールの代謝を調節するシグナル分子としても作用する。胆汁酸の腸肝循環は、胆汁酸合成の速度を調節する重要な調節メカニズムである。胆汁酸は肝臓から胆嚢に合成され、小腸に分泌され、回腸で再吸収され、門脈を通って肝臓に戻される。
【０００４】
胆汁うっ滞は主に妊娠中期および後期、肝線維症、肝硬変、胆道閉塞の患者に発生し、臨床症状には、掻痒、黄疸（Ｃｈｏｌｅｐｌａｎｉａ）、血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の上昇などが含まれる。胆汁うっ滞の治療薬は、臨床で最も一般的に使用されているのはウルソデスオキシコール酸（Ｕｒｓｏｄｅｓｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ，  ＵＤＣＡ）であり、それは、コール酸類似体であるステロイド化合物であり、胆嚢に有益な効果を有し、コレステロール結石を治療し、薬物誘発結石の形成を防ぐために使用されるが、ＵＤＣＡは胆汁酸核受容体ＦＸＲに対する活性化効果が低いため、胆汁うっ滞の治療に限界があり、一部の胆汁うっ滞症の患者は、ＵＤＣＡに対する感受性が低くなる。
【０００５】
研究により、ＦＸＲ受容体（ファルネソールＸ受容体）は、ホルモン核受容体スーパーファミリーに属する。典型的な核内受容体構造であって、アミノ酸末端の高度に保存されたＤＮＡ結合領域、カルボキシ末端リガンド結合領域、アミノ末端リガンド非依存性転写活性化機能領域及びカルボキシ末端のリガンド依存性活性化機能領域などを含むものを持つ。ＦＸＲは、肝臓腸系、腎臓、及び副腎で高度に発現され、心臓、肺、脂肪、及び胃でも低レベルで発現される。胆汁酸同化代謝に関連する肝臓、小腸、腎臓組織での多くのＦＸＲ標的遺伝子の発現が実証されている。胆汁酸の内因性ＦＸＲリガンドを説明する。ＦＸＲは胆汁酸受容体としても知られている。ＦＸＲは、胆汁酸受容体であり、多くの研究グループは、胆汁酸が生理学的条件下でＦＸＲの内因性リガンドであることを報告し、胆汁酸がＦＸＲに直接結合できるだけでなく、両方の相互作用が相乗的な活性化因子と共阻害剤の動員につながる可能性があることを発見し、これは、胆汁酸の内因性ＦＸＲリガンドであることを示しているため、ＦＸＲは胆汁酸受容体とも呼ばれる。胆汁酸受容体としてのＦＸＲは、胆汁酸代謝に関与する遺伝子の発現を調節することにより、内部環境での胆汁酸の安定性を維持することができる。ＦＸＲは、コレステロールの動的平衡、トリグリセリド合成及び脂肪生成の重要な調節因子である（Ｃｒａｗｌｅｙ、  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ  （２０１０）、２０（８）  ：１０４７−１０５７）。ＦＸＲ関連疾患は、肝疾患、糖尿病、ビタミンＤ関連疾患、薬物の治療による副作用、肝炎を含む。
【０００６】
ＴＧＲ５受容体（Ｇタンパク質共役型胆汁酸受容体５）は、Ｇ−タンパク質共役型受容体であり、胆汁酸に応答する細胞表面受容体として同定される。ＴＧＲ５は、発現及び機能で胆汁酸の核内受容体とは異なり、ＴＧＲ５遺伝子は一般にヒト及び動物で発現する。それは、９９３個の塩基対により３３０個のアミノ酸を含むタンパク質をコードし、７つのＧタンパク質共役型受容体ドメインを形成し、その相同性は、ヒト及び動物で高度に保存されている。ヒトでは、その遺伝子は染色体２ｑ３５に位置し、複数の組織で発現し、中でも、脾臓及び胎盤で最高レベルになり、肺、肝臓、小腸、骨髄で豊富に発現する。マウス肝臓では、ＴＧＲ５受容体は、肝類洞内皮細胞の原形質膜、胆管細胞の頂端膜及び一次繊毛、胆管上皮細胞及びＫｕｐｆｆｅｒ細胞に発現する。
ＴＧＲ５受容体アゴニストは、胆汁酸代謝、糖及びエネルギー代謝、炎症、免疫、腫瘍と密接に関連しているため、関連疾患の治療に大きな潜在能力を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであって、その解決しようとする技術問題は、代謝性疾患治療用化合物及びその製造方法、並びに応用を提供するとともに、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５受容体を標的にすることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、式（Ｉ）で表される構造を有する化合物、又はそのラセミ体、立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物、代謝物、薬学的に許容される塩又はそのプロドラッグを提供する。
【０００９】
【化１】
0006948680.tif 000002
【００１０】
ここで、Ｒ１は、水素、置換又は非置換のアルキル基、又はハロゲンである。幾つかの実施態様において、前記Ｒ１は、水素、置換又は非置換のＣ１−５アルキル基、又はハロゲンであり；他の幾つかの実施態様において、前記Ｒ１は、水素、フッ素、塩素、臭素、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のプロピル基、置換又は非置換のイソプロピル基である。本発明のある具体的な実施例において、前記Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基である。本発明の実施態様において、Ｒ１が置換のアルキル基である場合には、前記アルキル基は、直鎖アルキル基又は分岐鎖アルキル基であってもよく、前記Ｒ１の置換基は、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−３アルコキシ基である。
【００１１】
Ｒ２は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、スルホン酸基、カルボキシ基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。幾つかの実施態様において、前記Ｒ２は、それぞれ独立して、Ｃ１−５アルキル基、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ基、ニトロ基、カルボキシ基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。幾つかの実施態様において、前記Ｒ２は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、ニトロ基、シアノ基、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のイソプロピル基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。本発明のある具体的な実施例において、前記Ｒ２は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、ニトロ基、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。本発明の実施態様において、Ｒ２が置換のアルキル基である場合には、前記アルキル基は、直鎖アルキル基又は分岐鎖アルキル基であってもよく、前記Ｒ２の置換基は、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−３アルコキシ基である。
【００１２】
ｍは０〜４的整数であり、即ち、ｍは０、１、２、３又は４である。本発明のある具体的な実施例において、ｍは０又は１である。
【００１３】
Ｒ３は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、アリール基から選ばれる１種又は複数種であり、幾つかの実施態様において、前記Ｒ３は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、Ｃ１−５アルキル基又はＣ６−１０アリール基から選ばれる。幾つかの実施態様において、前記Ｒ３は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基から選ばれる１種又は複数種である。本発明のある具体的な実施例において、前記Ｒ３は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。本発明に係る実施態様において、Ｒ３が置換のアルキル基である場合には、前記アルキル基は、直鎖アルキル基又は分岐鎖アルキル基であってもよく、前記Ｒ３の置換基はＤ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−３アルコキシ基である。
【００１４】
ｎは０〜４の整数であり、即ち、ｍは０、１、２、３又は４である。本発明のある具体的な実施例において、ｎは０又は１である。
【００１５】
本発明のある具体的な実施例において、前記式（Ｉ）に示される構造は、具体的には、以下の通りである。
【００１６】
【化２】
0006948680.tif 000003
、
【００１７】
本発明は、式（II）で表される構造を有する代謝性疾患治療用化合物、又はそのラセミ体、立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物、代謝物、薬学的に許容される塩又はそのプロドラッグを提供する。
【００１８】
【化３】
0006948680.tif 000004
【００１９】
ここで、Ｒ４は、水素、置換又は非置換のアルキル基、又はハロゲンである。幾つかの実施態様において、前記Ｒ４は、水素、置換又は非置換のＣ１−６アルキル基、又はハロゲンである。他の幾つかの実施態様において、前記Ｒ４は、水素、フッ素、塩素、臭素、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のプロピル基、置換又は非置換のイソプロピル基である。本発明のある具体的な実施例において、前記Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基である。本発明の実施態様において、Ｒ４が置換のアルキル基である場合には、前記アルキル基は、直鎖アルキル基又は分岐鎖アルキル基であってもよく、前記Ｒ４の置換基は、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−３アルコキシ基である。
【００２０】
Ｒ５は、それぞれ独立して、置換又は非置換のアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、スルホン酸基及びカルボキシ基から選ばれるいずれか１種又は複数種である。幾つかの実施態様において、前記Ｒ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−５アルキル基、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、カルボキシ基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。幾つかの実施態様において、前記Ｒ５は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、臭素、ニトロ基、シアノ基、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のイソプロピル基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。本発明のある具体的な実施例において、前記Ｒ５は、それぞれ独立して、フッ素、塩素、ニトロ基、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基のいずれか１種又は複数種から選ばれる。本発明の実施態様において、Ｒ５が置換のアルキル基である場合には、前記アルキル基は、直鎖アルキル基又は分岐鎖アルキル基であってもよく、前記Ｒ５の置換基は、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−３アルコキシ基である。
【００２１】
Ｒ６は、置換又は非置換のＣ１−５的アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又はシクロヘキシル基である。幾つかの実施態様において、前記Ｒ６は、置換又は非置換のメチル基、置換又は非置換のエチル基、置換又は非置換のプロピル基、置換又は非置換のイソプロピル基、フェニル基、ピリジル基又はシクロヘキシル基である。本発明の実施態様において、Ｒ６が置換のアルキル基である場合には、前記アルキル基は、直鎖アルキル基又は分岐鎖アルキル基であってもよく、前記Ｒ６の置換基は、Ｄ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、アミノ基又はＣ１−３アルコキシ基である。
【００２２】
ｘは０〜４的整数であり、即ち、ｘは０、１、２、３又は４である。本発明のある具体的な実施例において、ｘは、０又は１である。
ｙは、０又は１である。
【００２３】
本発明のある具体的な実施例において、前記式（II）の構造は、具体的には、以下のとおりである。
【００２４】
【化４】
0006948680.tif 000005
【００２５】
本発明は、さらに、化合物（１０）と化合物（１６）とを反応させることにより、式（Ｉ）で表される化合物を得るステップを含む、式（Ｉ）で表される化合物の製造方法を提供する。
【００２６】
【化５】
0006948680.tif 000006
【００２７】
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎｂの範囲は上記と同じであり、説明を省略する。
【００２８】
本発明のある具体的な実施例において、前記反応は、ｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリドの触媒作用で行い、前記反応の溶媒は、１，４−ジオキサンである。
本発明のある具体的な実施例において、前記反応の温度は６０〜８０℃であり、反応時間は１〜３ｈである。
【００２９】
本発明のある具体的な実施例において、前記化合物（１０）の合成経路は、以下の通りである。
【００３０】
【化６】
0006948680.tif 000007
【００３１】
本発明のある具体的な実施例において、前記化合物（１６）の合成経路は、以下の通りである。
【００３２】
【化７】
0006948680.tif 000008
【００３３】
本発明は、上記代謝性疾患治療用化合物又は上記製造方法で調製される化合物、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、アジュバント、媒介物又はそれらの組み合わせを含む医薬組成物を提供する。
本発明に係る医薬組成物は、経口投入、注射投入、噴霧吸入、局所投与、経直腸投与、経鼻、舌下投与、又は埋込型薬液注入装置による投与であってもよい。
本発明に係る医薬組成物の剤形は、経口剤形、例えば、カプセル、錠剤、丸剤、粉末剤、顆粒剤、水性懸濁液及び溶液などである。
【００３４】
本発明で提供される経口剤形は、圧縮錠剤、開発錠剤、チュアブルロゼンジ、インスタント錠剤、再圧縮錠剤、腸溶性錠剤、糖衣錠またはフィルムコーティング錠として提供することができる。腸溶性錠剤は、胃酸に耐性があるが腸で溶解または崩壊する物質でコーティングされた圧縮錠であり、それによって有効成分が胃の酸性環境に接触するのを防ぐ。腸溶性コーティングは、脂肪酸、脂肪、サリチル酸フェニル、ワックス、シェラック、アミノ化シェラック及び酢酸フタル酸セルロースを含むが、これらに限定されない。糖衣片は、糖衣で囲まれた圧縮錠剤であり、不快な味や臭いを隠し、錠剤の酸化を防ぐことができる。フィルムコーティング錠は、水溶性物質の薄層またはフィルムで覆われた圧縮錠剤である。フィルムコーティングは、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリエチレングリコール４０００及び酢酸フタル酸セルロースを含むが、これらに限定されない。フィルムコーティングは、糖衣と同じ一般的な特性を与える。再圧縮錠剤は、１回超えの圧縮サイクルを経て製造された圧縮錠剤であり、多層錠剤、圧縮コーティング錠または乾式コーティング錠が含まれる。錠剤剤形は、呈粉末、結晶又は顆粒状を示す活性成分から、単独で、又は本発明に記載の１種又は複数種の担体又は賦形剤と組み合わせて調製されることができ、前記担体及び賦形剤は、バインダー、崩壊剤、放出制御ポリマー、潤滑剤、希釈剤及び／又は着色剤が含まれる。本発明で提供される医薬組成物は、ゼラチン、メチルセルロース、デンプン又はアルギン酸カルシウムから調製できるソフトカプセル又はハードカプセルとして提供されることができる。経口投入用液体剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルが含まれるが、これらに限定されない。液体剤形は、活性化合物に加えて、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤といった周知の一般的な不活性希釈剤、例えば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブタンジオール、ジメチルホルムアミド、油脂（特に綿実、落花生、トウモロコシ、微生物、オリーブ、ヒマシ油、ゴマ油）、グリセロール、２−テトラヒドロフランメタノール、ポリエチレングリコール、ソルビタン脂肪酸エステル、及びそれらの混合物が含まれる。経口組成物は、不活性希釈剤に加えて、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤又は懸濁剤、甘味料、調味料及び香料も含むことができる。
本発明の医薬組成物は、坐剤又は適切な注腸剤の形態で直腸内投与することもできる。又は、注射剤として投与される。
上記剤形のアジュバントは、当業者の技術常識に従って選択することができる。
【００３５】
本発明の上記化合物、上記製造方法で調製される化合物又は上記医薬組成物は、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５介在性疾患を治療又は軽減する医薬品の調製に適用されるが、これらに限定されない。
本発明のある具体的な実施例において、前記ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５介在性疾患は、慢性肝疾患、代謝性疾患又は門脈圧亢進症などの疾患から選ばれるが、これらに限定されない。
本発明のある具体的な実施例において、前記慢性肝疾患は、原発性胆汁うっ滞性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、肝線維症関連疾患、薬物による胆汁うっ滞、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、妊娠中の胆汁うっ滞、アルコール性肝疾患及び非アルコール性脂肪性肝疾患の１種又は複数種を含み、前記門脈圧亢進症は、肝線維症、肝硬変、脾腫又は他の原因による門脈圧上昇から選ばれ、前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、脂質異常症、コレステロール結石、及び高トリグリセリド血症を含む。
【００３６】
本発明に係る化合物又は組成物は、上記慢性肝疾患、代謝性疾患又は門脈圧亢進症などの疾患を療または軽減するために、他の医薬品又は化合物と併用されることもできる。本発明の化合物は、単独した活性薬剤として投与されてもよく、又は他の治療剤と併用して投与されてもよく、同じまたは類似した治療活性を有し、そのような併用投与に対して安全且つ有効であると判定された他の化合物を含む。一つ側面では、本発明は、本発明に開示される化合物と１種又は複数種の治療活性剤との併用薬を安全な有効量で投与することを含む、疾患又は病状を治療、予防又は改善する方法を提供する。幾つかの実施態様において、併用薬は、１つ又は２つの他の治療剤を含む。
他の側面では、本発明は、本発明に開示される化合物、本発明の製造方法で調製される化合物又は本発明に開示される化合物の医薬組成物の治療有効量を、必要とする個体又は試料に投与することを含む、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５受容体を活性化する方法を提供する。本発明に係る化合物の「治療有効量」又は「有効量」は、２．５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。幾つかの実施例では、本発明に係る化合物の「治療有効量」又は「有効量」は、０．４ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇであってもよく、他の幾つかの実施例では、本発明に係る化合物の「治療有効量」は、０．２ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇであってもよい。
他の側面では、本発明は、本発明に開示される化合物、本発明製造方法で調製される化合物又は本発明に開示される化合物の医薬組成物の治療有効量を、必要とする個体に投与することを含む、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５受容体介在性疾患を予防、治療又は軽減する方法を提供する。
【００３７】
本発明のある具体的な実施例において、前記ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５受容体介在性疾患は、慢性肝疾患、代謝性疾患又は門脈圧亢進症等疾患から選ばれるが、これらに限定されない。
本発明のある具体的な実施例において、前記慢性肝疾患は、原発性胆汁うっ滞性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、肝線維症関連疾患、薬物による胆汁うっ滞、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、妊娠中の胆汁うっ滞、アルコール性肝疾患及び非アルコール性脂肪性肝疾患の１種又は複数種を含み、前記門脈圧亢進症は、肝線維症、肝硬変、脾腫或他の原因による門脈圧上昇から選ばれ、前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、脂質異常症、コレステロール結石、及び高トリグリセリド血症を含む。
本発明で使用される「治療有効量」又は「治療有効用量」という用語は、個人の生物学的または医学的反応（例えば、酵素またはタンパク質の活性を低減又は阻害させるか、受容体を活性化するか、受容体を拮抗するか、症状を改善させるか、病状を緩和させるか、病気の進展を抑え遅らせるか、疾患を予防することなど）を引き起こすことができる本発明の化合物又は組成物の量を意味する。
【００３８】
本発明に開示される化合物は、不斉又はキラル中心を含むことができるため、異なる立体異性体の形態で存在することができる。本発明は、ジアステレオマー、エナンチオマー、アトロプ異性体、及び幾何（或いは配座）異性体、及びそれらの混合物、例えば、ラセミ混合物を含むが、これらに限定されない。式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物の全ての立体異性体の形態を本発明の不可欠な部分にすることを目的とする。
本発明が開示される構造では、いずれか特定のキラル原子の立体化学が明示されていない場合には、該構造のいずれの立体異性体も本発明の範囲内にあると考えられるとともに、本発明に開示される化合物として本発明に含まれる。立体化学が特定の立体配置を示すくさび型線（ｓｏｌｉｄ  ｗｅｄｇｅ）又は破線で表記される場合には、該構造の立体異性体は、それに応じて明確、定義される。
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物は、異なる互変異性体として存在してもよく、且つ、これらすべての互変異性体は、本発明に係る互変異性体のように、本発明の範囲内に含まれる。
【００３９】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物は、塩として存在することができる。幾つかの実施態様において、前記塩とは、薬学的に許容される塩を指す。他の幾つかの実施態様において、前記塩は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物を調製及び／又は精製する、及び／又は本式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物のエナンチオマー中間体を分離するために適用することもできる。
本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、特に断りがない限り、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本発明に係るすべての特許及び刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。「包含」、「含み」という用語は、開放式の表記であり、即ち、本発明で指定された内容を含むが、他の側面の態様を除かない。
「立体異性体」とは、同じ化学構造を有するが、原子又は基の空間的な配置が異なる化合物を意味する。立体異性体は、エナンチオマー、ジアステレオマー、配座異性体（回転異性体）、幾何異性体（シス／トランス）異性体、アトロプ異性体などを含む。
【００４０】
「キラル」とは、その鏡像と重ね合わすことができない性質を有する分子を指し、「アキラル」とは、その鏡像と重ね合わすことができる分子を指す。
「エナンチオマー」とは、化合物の２つの重ね合わすことができないが、互いに鏡像になる関係にある異性体を指す。
「ジアステレオマー」とは、２つ又は複数のキラル中心を持ちながら、それらの分子が互いに鏡像ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性及び反応性を有する。ジアステレオマー混合物は、例えば、電気泳動及びＨＰＬＣのようなクロマトグラフィーのような高分解能の分析手段により分離できる。
【００４１】
本発明で用いられる立体化学の定義及び規則は、一般的にＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ、Ｅｄ．、ＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ａｎｄＥｌｉｅｌ、Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ、Ｓ．、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９４に従う。
多くの有机化合物は、光学的に活性な形態で存在し、即ち、それらは平面偏光の平面を回転させる能力を持つ。光学活性化合物の説明では、接頭辞Ｄ／Ｌ又はＲ／Ｓを使用して、１つ又は複数のキラル中心に関する分子の絶対配置を示す。接頭辞ｄ／ｌ又は（＋）／（-）は、化合物による平面偏光の回転を指定するために使用される記号であり、ここで、（-）又はｌは、化合物が左旋性であることを示す。接頭辞が（＋）又はｄである化合物は、右旋性である。具体的な立体異性体の１つは、エナンチオマーであり、このような異性体の混合物はエナンチオマーの混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０の混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と呼ばれ、化学反応又はプロセスでは立体選択性または立体特異性がない場合には、このような状況が発生する可能性がある。
本発明に開示される化合物のいずれの不斉原子（例えば、炭素など）も、ラセミ又はエナンチオマーが濃化した形態で存在することができ、例えば、（Ｒ）−、（Ｓ）−又は（Ｒ，Ｓ）−配置として存在することができる。ある実施形態において、各不斉原子は（Ｒ）−又は（Ｓ）−配置で少なくとも５０％のエナンチオマー過剰率であり、少なくとも６０％のエナンチオマー過剰率であり、少なくとも７０％のエナンチオマー過剰率であり、少なくとも８０％のエナンチオマー過剰率であり、少なくとも９０％のエナンチオマー過剰率であり、少なくとも９５％のエナンチオマー過剰率であり、或いは少なくとも９９％のエナンチオマー過剰率である。
【００４２】
「未置換」という用語は、指定された基が置換基を持っていないことを意味する。「置換の」という用語は、特定の構造中の置換されてもよい水素原子の１つ又は複数が具体的な置換基で置換されることを意味する。特に明記しない限り、置換された基は、その基の各置換可能な位置で置換された置換基を有してもよい。特定の構造式では１つ以上の位置が具体的な基から選ばれる１つ又は複数の置換基で置き換えられると、置換基は同じ又は異なる各位置で置換されることができる。本発明に係る置換基は、Ｄ、−ＯＨ、−ＮＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１−３アルキル基、シアノ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、Ｃ１−３アルコキシ基を含むが、これらに限定されない。
本発明で使用される「各……は、独立して、……である」と「……は、それぞれ独立して、……である」と「……は、独立して、……である」という記述方式は、互換されることができ、いずれも広い意味で理解されるべきである。それらは、異なる基では、同じ符号の間で表現された特定の選択は相互に影響しないことを意味してもよく、同じ基では、同じ符号の間で表現された特定の選択は相互に影響しないことを意味してもよい。
「ハロゲン」という用語は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）又はヨウ素（Ｉ）を指す。
「アルコキシ基」という用語は、アルキル基が酸素原子を介して分子の残りの部分に連結していることを意味し、ここで、アルキル基は本発明に記載の意味を有する。前記アルコキシ基は、特に断りがない限り、１〜１２個の炭素原子を含む。幾つかの実施態様において、アルコキシ基は、１〜６個の炭素原子を含み、他の幾つかの実施態様において、アルコキシ基は、１〜４個の炭素原子を含み、幾つかの実施態様において、アルコキシ基は、１〜３個の炭素原子を含む。前記アルコキシ基は、本発明に記載の置換基の１つ又は複数で任意に置換されることができる。
【００４３】
本発明に記載されるように、置換基から結合を描き中心環と連結している環系（式ａで示されるように）は、置換基が該環系でのすべての置換可能な位置から１つを選択して置換することを意味する。例えば、式ａは、置換基Ｒがピリジン環でのすべての置換可能な位置から１つを選択して置換することを意味し、例えば、式ｂ〜式ｄで示される。
【００４４】
【化８】
0006948680.tif 000009
【００４５】
本発明に記載されるように、置換基は、単結合を介して中心環に連結し、下付き文字を付き、形成される環系（式ｅで示されるように）は、置換基が該環系でのすべての置換可能な位置で置換することを意味する。
【００４６】
【化９】
0006948680.tif 000010
【００４７】
式中、ｎが０である場合には、置換基なし、即ち、未置換を意味する。
ｎが１である場合には、置換基が該環系でのすべての置換可能な位置から１つを選択して置換されることを意味する。
ｎが１を超え、例えば、２、３又は４である場合には、置換基が１つ以上であり、例えば、２個の置換基、３個の置換基又は４個の置換基を有し、各置換基は、異なる置換位置又は同じ置換位置を選択してもよく、且つ各置換基は、同じであっても異なっていてもよい。
上記波線は、連結する結合を示す。
【００４８】
「薬学的に許容される」という用語は、物質又は組成物が、製剤を包含する他の成分及び／又はそれで治療される哺乳動物と化学的及び／又は毒理学的に適合しなければならないことを意味する。
本発明に係る「薬学的に許容される塩」は、通常の化学的方法により親化合物、塩基性又は酸性部分から合成することができる。一般的に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を化学量論量の適切な塩基（例えば、Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇ又はＫの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）と反応させるか、これらの化合物の遊離塩基形態を化学量論量の適切な酸と反応させることにより調製される。このような反応は、通常、水、有機溶媒又は両方の混合物で行う。一般的に、適当な場合には、非水性媒体、例えば、ジエチルエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール又はアセトニトリルを使用する必要がある。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、（１９８５）；及び「医薬用塩のハンドブック：性質、選択及び応用（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ、ａｎｄ  Ｕｓｅ）」、Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ、２００２）には、他の適切な塩のリストを見つけることができる。
さらに、本発明に開示される化合物（それらの塩を含む）は、それらの水和物の形態又は溶媒（例えば、エタノール、ＤＭＳＯなど）を含む形態で得られることができ、それらの結晶のために用いられる。本発明に開示される化合物は、本質的にまたは設計により薬学的に許容される溶媒（水を含む）と溶媒和物を形成することができるため、本発明は、溶媒和及び非溶媒和の形態を含むことを目的とする。
【００４９】
さらに、本発明に開示される化合物は、プロドラッグとして投与されることができる。本発明において、本発明に開示される化合物の「プロドラッグ」は、患者に投与される時に、体内に本発明に開示される化合物を最終的に放出することができる機能的誘導体である。
本発明で使用される「プロドラッグ」という用語は、化合物がｉｎ  ｖｉｖｏで式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表される化合物に変換することを意味する。このような変換は、血液中のプロドラッグの加水分解、または血液または組織内の酵素による母体構造への変換の影響を受ける。本発明のプロドラッグ類化合物は、エステルであってもよく、従来の発明において、エステルのうち、プロドラッグとして使用できるものとして、フェニルエステル類、脂肪族（Ｃ１−Ｃ２４）エステル類、アシルオキシメチルエステル類、炭酸エステル、カルバメート類及びアミノ酸エステル類がある。例えば、本発明の化合物は、ヒドロキシ基を包含すると、それをアシル化してプロドラッグの形態の化合物を得ることができる。他のプロドラッグは、リン酸エステルを含み、これらのリン酸エステル類化合物は、母体のヒドロキシ基のリン酸化により得られるものである。
「代謝物」とは、特定の化合物又はその塩がｉｎ  ｖｉｖｏで代謝することにより得られる生成物を意味する。化合物の代謝物は、当技術分野で周知の技術により同定することができ、その活性は、本発明に記載の実験方法により特徴付けることができる。このような生成物は、投与する化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱脂、及び酵素的分解などの方法により得られる。従って、本発明は、化合物の代謝物を含み、本発明の化合物と哺乳動物との一定期間での十分な接触により生成される代謝物を含む。
【００５０】
本発明に係る「溶媒和物」とは、１つ又は複数の溶媒分子と本発明の化合物から形成される会合体を意味する。溶媒和物を形成する溶媒は、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、乙酸及びアミノエタノールを含むが、これらに限定されない。「水和物」という用語は、水である溶媒分子によって形成される会合体を意味する。前記溶媒が水である場合には、「水和物」という用語を使用することができる。幾つかの実施例では、本発明の化合物の分子は１つの水分子と結合することができ、例えば、一水和物であり、他の幾つかの実施例では、本発明の化合物の分子は、１つ以上の水分子と結合することができ、例えば、二水和物であり、さらに他の幾つかの実施例では、本発明に係る化合物の分子は、１つ未満の水分子と結合することができ、例えば、半水和物である。本発明に係る水和物は、非水合形態のかかる記化合物の生物学的有効性を保持することに留意すべきである。
本発明で使用される「薬学的に許容されるアジュバント」とは、投与する剤形又は医薬組成物の一致性に関連する薬学的に許容される材料、混合物又は溶媒を意味する。各々のアジュバントは、患者に投与される時に本発明に開示される化合物の効力の相互作用を大きく低減させ、薬学的に許容される医薬組成物ではない相互作用をもたらすことを避けるために、混合際に医薬組成物の他の成分と適合しなければならない。さらに、各種のアジュバントは、薬学的に許容されるものでなければならなく、例えば十分に高い純度である。適切な薬学的に許容されるアジュバントは、選ばれる具体的な剤形に応じて異なる。さらに、薬学的に許容されるアジュバントは、組成物での特定の機能に基づいて選択されることができる。例えば、均一な剤形の生成に寄与する特定の薬学的に許容されるアジュバントを選択することができる。安定な剤形の生成に寄与する特定の薬学的に許容されるアジュバントを選択することができる。患者に投与される時に本発明に開示される化合物を身体のある器官又は部分から身体の別の器官又は部分に運ぶまたは輸送するのに寄与する特定の薬学的に許容されるアジュバントを選択することができる。患者のコンプライアンスを増強させる特定の薬学的に許容されるアジュバントを選択することができる。適切な薬学的に許容されるアジュバントは、希釈剤、充填剤、バインダー、崩壊剤、潤滑剤、流動促進剤、造粒剤、コーティング剤、湿潤剤、溶媒、共溶媒、懸濁助剤、乳化剤、甘味料、矯味剤、苦味マスキング剤、着色剤、固化防止剤、保湿剤、キレート剤、可塑剤、増粘剤、酸化防止剤、防腐剤、安定剤、界面活性剤及び緩衝剤というアジュバントを含む。当業者は、ある薬学的に許容されるアジュバントが１つ以上の機能を与えるとともに、選択されてもよい機能も与えることができ、これは、製剤中に存在する該アジュバントの量及び製剤中にどの他のアジュバントが存在するかによるものであることを認識する。
【００５１】
「アリール基」という用語は、６〜１４個の環原子、又は６〜１２個の環原子、又は６〜１０個の環原子を含む単環式、二環式または三環式全炭素環系を意味し、ここで、少なくとも１つの環は、芳香族であり、且つ１つ又は複数の結合点が分子の残りの部分に連結する。アリール基の実例は、フェニル基、ナフチル基及びアントラセニル基を含むことができる。前記アリール基は、独立して、本発明に記載の置換基の１つ又は複数で任意に置換されることができる。
「ヘテロアリール基」という用語は、５〜１２個の環原子、又は５〜１０個の環原子、又は５〜６個の環原子を含む単環、二環または三環を意味し、ここで、少なくとも１つの環は、芳香族であり、且つ少なくとも１つの芳香族環は、１つ又は複数のヘテロ原子を含み、且つ１つ又は複数の結合点が分子の残りの部分に連結する。ヘテロアリール基の実例は、フリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピリダジニル基又はインドリル基等などを含むが、これらに限定されない。
【００５２】
本発明は、従来技術と比較して、式（Ｉ）又は式（II）で表される構造を有する化合物、又はそのラセミ体、立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物、代謝物、薬学的に許容される塩又はそのプロドラッグである代謝性疾患治療用化合物を提供する。本発明で提供される上記化合物は、ＦＸＲ及びＴＧＲ５を標的とし、ｉｎ  ｖｉｖｏで胆汁酸、コレステロール動的平衡、トリグリセリド合成及び脂肪生成を調節することができるため、胆汁酸、コレステロール、トリグリセリド代謝により引き起こす様々な疾患に適用でき、しかも、本発明の化合物は、肝臓標的化合物であり、類似化合物よりも高い効力を有し、副作用が低く、他の類似化合物の臨床的副作用を克服する。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、実施例１の化合物１４のマススペクトルである。
【図２】図２は、実施例１の化合物１６のマススペクトルである。
【図３】図３は、実施例１の化合物１６の１Ｈ-ＮＭＲスペクトルである。
【図４】図４は、実施例１の化合物１のマススペクトルである。
【図５】図５は、実施例１の化合物１の１Ｈ-ＮＭＲスペクトルである。
【図６】図６は、異なる群のラットの各時点での胆汁排出量を示す。
【図７】図７は、被験化合物１−Ｈの各用量群ラットの門脈圧の影響を示す。
【図８】図８は、被験化合物１−Ｈの各用量群ラットの門脈圧の平均変化百分率を示す。
【図９】図９は、被験化合物１−Ｈの各用量群ラットの肝臓及び脾臓の外観を示す。
【図１０】図１０は、被験化合物１−Ｈの各用量群ラットの血清学的パラメーターを示す。
【図１１】図１１は、被験化合物１−Ｈの各用量群ラットの肝臓病理切片のＭａｓｓｏｎ染色及びＨＥ染色を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
本発明をさらに説明するために、以下、実施例を参照して本発明で提供される代謝性疾患治療用化合物及びその製造方法、並びに応用を詳しく説明する。以下の実施例における溶媒の割合は、特に断りがない限り、いずれも体積比である。例えば、酢酸エチル：石油エーテル＝１：５とは、酢酸エチル：石油エーテルの体積比が１：５であることを意味する。
【００５５】
実施例１  化合物１（即ち、化合物１−Ｈ）の合成
１、化合物２の合成
【００５６】
【化１０】
0006948680.tif 000011
【００５７】
１０００ｍＬの丸底フラスコに、テトラヒドロフラン  ３００ｍＬを加え、その後、ケノデオキシコール酸（式ａで表される）３０ｇ（７６．４２ｍｍｏｌ）、過塩素酸３ｍＬを加え、室温で撹拌しながらギ酸１００ｍＬを加えた。温度が５０℃になるように制御し、１５時間撹拌しながら反応させ、減圧下で濃縮して溶媒を除去した。残留物に水４Ｌを加えて希釈し、ろ過し、固体を収集し、ジクロロメタン２Ｌを加えて固体を溶解させた。無水硫酸ナトリウムを加えて溶液を乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物に石油エーテル４Ｌを加えてスラリー化し、ろ過し、白色固体を収集し、化合物２  ３２．８ｇを収率９８％で得た。
２、化合物３の合成
【００５８】
【化１１】
0006948680.tif 000012
【００５９】
アルゴンガス保護下で、５Ｌの丸底フラスコに、化合物２  １００ｇ（２２２．９２ｍｍｏｌ）、四塩化炭素溶解固体  ３Ｌ、酢酸鉛  １９９．１ｇ（４４６．４１ｍｍｏｌ）、ヨウ素  １１３．６４ｇ（４４７．４０ｍｍｏｌ）を順に加え、得られた反応液をタングステンランプ（２５０Ｗ）の照射下、２０℃で２４時間撹拌しながら反応させ、飽和チオ硫酸ナトリウム  ３Ｌを加えて反応をクエンチし、ろ過し、固体を除去し、濾液にジクロロメタンを１回あたり３Ｌ加えて２回抽出した。有機相を合わせ、それぞれ飽和チオ硫酸ナトリウム２Ｌを加え、２回洗浄し、水２Ｌで１回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液２Ｌで１回洗浄した。有機相に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。淡黄色の固体化合物３  １１０ｇを収率９３％で得た。
３、化合物４の合成
【００６０】
【化１２】
0006948680.tif 000013
【００６１】
３Ｌの丸底フラスコに、室温で化合物３（２５０ｇ，４７１．２７ｍｍｏｌ）、安息香酸カリウム１５０．９ｇ（９４１．８８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド  ２Ｌを順に加えた。反応液を８０℃で１５時間撹拌しながら反応させ、減圧下で濃縮した。残留物をジクロロメタン３Ｌに溶解させた。溶液は、順に水１．６Ｌで２回洗浄し、飽和チオ硫酸ナトリウム１．６Ｌで１回洗浄し、飽和塩化ナトリウム１．６Ｌで１回洗浄した。有機相に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。茶色の化合物４を３１０ｇ得、精製せずに次の反応を行った。
４、化合物５の合成
【００６２】
【化１３】
0006948680.tif 000014
【００６３】
２Ｌの丸底フラスコに、メタノール１Ｌを加え、粗生成物化合物４  ３５ｇをメタノール（１０００ｍＬ）に溶解させた後、濃塩酸を２０ｍＬ加え、反応液を２０℃で２４時間撹拌しながら反応させ、減圧下で濃縮した。残留物をジクロロメタン３Ｌに溶解させ、溶液をそれぞれ飽和重炭酸ナトリウム水溶液８００ｍＬで２回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液８００ｍＬで１回洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝８０：１）により精製した。化合物５（収率６０％、黄色固体）を２２．８ｇ得た。
５、化合物６の合成
【００６４】
【化１４】
0006948680.tif 000015
【００６５】
２Ｌの丸底フラスコに、順次にクロロホルム１Ｌを加え、化合物５  ３５ｇ（７４．６８ｍｍｏｌ）をクロロホルム溶媒（１０５０ｍＬ）に溶解させ、次いで、クロロクロム酸ピリジニウム（１７．６８７ｇ，  ８２．３０ｍｍｏｌ）とシリカゲル（１４０ｇ）の混合物を加え、酢酸３５ｍＬを徐々に滴下した。反応液を２０℃で２４時間撹拌しながら反応させ、反応液をジクロロメタン４Ｌとメタノール４０ｍＬの混合溶液で希釈した。ろ過し、固体を得、濾液をそれぞれ水１．２Ｌで２回洗浄し、飽和塩化ナトリウム溶液１．２Ｌで１回洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：１）により精製し、化合物６（収率６６％、白色固体）を２３ｇ得た。
６、化合物７の合成
【００６６】
【化１５】
0006948680.tif 000016
【００６７】
５Ｌの三つ口フラスコに、テトラヒドロフラン１．２Ｌを加え、ジイソプロピルアミン（１８２  ｇ，  １．８０  ｍｏｌ）をテトラヒドロフランに溶解させ、−７８℃でｎ−ブチルリチウム２．５Ｍのテトラヒドロフラン溶液７２１ｍＬを徐々に滴下し、滴下終了後、−７８℃で３０分間撹拌した後、さらに−７８℃でトリメチルクロロシラン（１６０．３ｇ，１．５０ｍｏｌ）を徐々に滴下し、−７８℃で３０分間撹拌した。次に、−７８℃で上記溶液に化合物６（７０ｇ，０．１５ｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（９００ｍＬ）の混合溶液を徐々に滴下し、−７８℃で３０分間撹拌した。−７８℃でトリエチルアミン（２７２．３ｇ，２．７０ｍｏｌ）を滴下し、次いで、２０℃に昇温させ、２時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液２．１Ｌでクエンチした。反応液を酢酸エチル６Ｌで抽出し、有機相を合わせ、それぞれ水１．２Ｌで２回洗浄し、飽和塩化アンモニウム水溶液１．２Ｌで５回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液１．２Ｌで１回洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。化合物７粗生成物を１４５ｇ得、直接に次の反応に使用した。
７、化合物８の合成
【００６８】
【化１６】
0006948680.tif 000017
【００６９】
アルゴンガス保護下で、三つ口フラスコに化合物７（４０ｇ，６９．０７ｍｍｏｌ）とジクロロメタン（６００ｍＬ）の混合溶液を加え、溶液にアセトアルデヒド（６．５０６ｇ，１４７．８６ｍｍｏｌ）を加え、次いで、−６０℃で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル複合体（６９．９９ｇ，４９２．８９ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を２０℃で２４時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液で反応液のｐＨ値が７〜８になるように調整し、水１００ｍＬで反応液を希釈し、その後、ジクロロメタン７００ｍＬで３回抽出し、有機相を合わせた。有機相をそれぞれ水１Ｌで２回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液１Ｌで１回洗浄し、さらに無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：１）により精製し、化合物８（収率３７％、白色固体）を１０ｇ得た。
８、化合物９の合成
【００７０】
【化１７】
0006948680.tif 000018
【００７１】
窒素ガス保護下で、２５０ｍＬの三つ口フラスコに、それぞれテトラヒドロフラン  １００ｍＬ、化合物８（５ｇ，１２．８７ｍｍｏｌ）、メタノール２５ｍＬ、三塩化セリウム七水和物（１９．１７ｇ，５１．４６ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム（１．８５ｇ，５１．３９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を２０℃で２４時間反応させ、次いで、飽和塩化アンモニウム水溶液８０ｍＬでクエンチし、反応液を減圧下で濃縮した。残留物に水３００ｍＬを加えて希釈し、ジクロロメタン６００ｍＬで３回抽出し、有機相を合わせた。有機相をそれぞれ飽和重炭酸ナトリウム水溶液３００ｍＬで１回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液３００ｍＬで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。化合物９（収率９６％、黄色固体）を４．８ｇ得た。
９、化合物１０の合成
【００７２】
【化１８】
0006948680.tif 000019
【００７３】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、メタノール８０ｍＬ、化合物９（８ｇ，２０．４８ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（４ｇ，３．７７ｍｍｏｌ）を加え、水素ガスを導入し、４０℃で２４時間反応させた。反応液をろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：１）により精製し、化合物１０（収率７０％、白色固体）を５．６ｇ得た。
１０、化合物１１の合成
【００７４】
【化１９】
0006948680.tif 000020
【００７５】
アルゴンガス保護下で、５Ｌの三つ口フラスコに、（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロピオン酸（２５０ｇ，１．５１ｍｏｌ）と水３．５Ｌの混合溶液を加え、さらにギ酸（４９１．７５ｇ，６．０４ｍｏｌ）を加えた。２０℃で４％Ｐｄ／Ｃ（（２５０ｇ，９４．３４ｍｍｏｌ）を加えた。水素ガスを導入し、２０℃で４８時間反応させた後、ろ過し、濃縮した。粗生成物をメタノールで再結晶し、ろ過し、固体を収集し、化合物１１（収率６５％、白色固体）を１９０ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ：  （ＣＤ３ＯＤ，  ４００ＭＨｚ，  ｐｐｍ）：  ７．２５−７．４０（ｍ，５Ｈ），  ３．８６（ｔ，  Ｊ＝６．９Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３７−３．３１（ｍ，  １Ｈ），  ３．２４（ｄｄ，  Ｊ＝１４．６，  ６．８Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．８５（ｓ，  ６Ｈ）．
１１、化合物１２の合成
【００７６】
【化２０】
0006948680.tif 000021
【００７７】
窒素ガス保護下で、３Ｌの三つ口フラスコに、テトラヒドロフラン７００ｍＬとジイソプロピルアミン（１８８．６ｇ）の混合溶液を加え、−７８℃で３０分間以内にｎ-ブチルリチウム（２．５Ｍのテトラヒドロフラン溶液，７４６ｍＬ）を滴下した。反応を２０℃に昇温させ、２０分間撹拌した。次いで、−７８℃で３０分間かけて酢酸エチル（１６４．４ｇ，１．８７ｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）の混合溶液を滴下し、溶液を−７８℃で１時間撹拌した。溶液に、−７８℃で２５分間以内に４−ピリジルホルムアルデヒド（１００ｇ，９３３．６２ｍｍｏｌ）とテトラヒドロフラン２５０ｍＬの混合溶液を滴下し、反応を０℃に昇温させて１．５時間撹拌し、反応を濃度が１Ｎの塩酸３．６Ｌでクエンチした。溶液を酢酸エチル１Ｌで３回抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濾液を濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）により精製し、黄色の油状化合物１２（収率８０％、１４６ｇ）を得た。
化合物１３の合成
【００７８】
【化２１】
0006948680.tif 000022
【００７９】
窒素ガス保護下で、１Ｌの三つ口フラスコに、化合物１２（２９．７ｇ，１５３．６９ｍｍｏｌ）とジクロロメタン（３００ｍＬ）の混合溶液を加え、さらに、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（３６．９ｇ，１９２．４９ｍｍｏｌ）、４，４−ジメチルアミノピリジン（１．５６ｇ，１２．７７ｍｍｏｌ）、化合物１１（２５ｇ，１２８．０６ｍｍｏｌ）を順に加えた。溶液を２０℃で５時間撹拌し、反応終了後、ジクロロメタン３００ｍＬで反応液を希釈した。反応混合物を飽和炭酸ナトリウム水溶液５００ｍＬで２回洗浄し、水５００ｍＬで１回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液５００ｍＬで１回洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：５）により精製し、得られた粗生成物を、さらにＦｌａｓｈ−Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、石油エーテル（０．１％トリエチルアミン含有）／酢酸エチル（０．１％トリエチルアミン含有）＝３５：６５、酢酸エチル（０．１％トリエチルアミン含有）まで極性を増加させ、黄色固体として化合物１３（収率３２％、１５ｇ）を得た。
１３、化合物１４の合成
【００８０】
【化２２】
0006948680.tif 000023
【００８１】
窒素ガス保護下で、２Ｌの三つ口フラスコに、ジエチルエーテル９００ｍＬを加え、−２０℃まで降温し、水素化アルミニウムリチウム（１８．５ｇ，４８７．４８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、−２０℃で化合物１３（３０ｇ，８０．９８ｍｍｏｌ）とジエチルエーテル（３００ｍＬ）の混合溶液を加えた。反応液を−２０℃で３時間撹拌し、反応を酢酸エチル４００ｍＬでクエンチし、その後、飽和硫酸ナトリウム水溶液４０ｍＬ、メタノール１５０ｍＬを加えた。２０℃で１時間撹拌し、ろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）により精製し、粗生成物を酢酸エチルで再結晶し、白色固体として化合物１４（ＰＨ−ＭＫＡ−ＭＴ２００２−８、７．７４ｇ、収率６２％）を得た。
ＬＣＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：  １５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
そのマススペクトルは、図１に示した。
そのＨＰＬＣデータは、以下の表１に示した。
【００８２】
【表１】
0006948680.tif 000024
【００８３】
１４、化合物１５の合成
【００８４】
【化２３】
0006948680.tif 000025
【００８５】
アルゴンガス保護下で、３Ｌの三つ口フラスコに、テトラヒドロフラン４００ｍＬ、ジエチルエーテル２５０ｍＬを加え、塩化ホスホリル（７７．２ｇ，５０３．４９ｍｍｏｌ，１．００  ｅｑ．）を三つ口フラスコに加えた。−７８℃で４−ニトロフェノール（７０ｇ，５０３．２０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（５０．９６ｇ，５０３．６１ｍｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）とジエチルエーテル（２５０ｍＬ）の混合溶液を反応系に徐々に加え、反応液を２０℃に昇温させ、２４時間反応させ。固体をろ過し、濾液を濃縮した。粗生成物を減圧蒸留（５ｍｍ  Ｈｇ）により精製し、１８０℃の留分を収集し、明るい黄色の油状化合物１５（３８ｇ、収率２９％）を得た。
Ｐ−ＮＭＲ：  （ＣＤＣｌ３，１２１．５ＭＨｚ，ｐｐｍ）：３．３５。
１５、化合物１６の合成
【００８６】
【化２４】
0006948680.tif 000026
【００８７】
窒素ガス保護下で、１０００ｍＬの三つ口フラスコに、化合物１４（２７ｇ，１７６．２７ｍｍｏｌ）とピリジン（２１０ｍＬ）とトリエチルアミン（３．０２４ｇ，２９．８８ｍｍｏｌ）との混合溶液を加え、０℃〜５℃で化合物１５（４５ｇ，１７５．７９ｍｍｏｌ）とピリジン（３６０ｍＬ）との混合溶液を滴下し、反応液を２０℃で５時間撹拌した。原料が消失した後、４−ニトロフェノールナトリウム（１１３．４ｇ，７０４．３５ｍｍｏｌ，４．００  ｅｑｕｉｖ）を加えた後、４０℃で４時間撹拌し、２０℃に移し、さらに１６時間撹拌した。反応液を濃縮し、残留物を塩酸（２ｍｏｌ／Ｌ）１．５Ｌに溶解させ、酢酸エチル１．５Ｌで２回洗浄した。分離された水相を炭酸水素ナトリウムでｐＨ７〜８に調整し、その後、ジクロロメタン１．２Ｌで３回抽出し、有機相を合わせた。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をＦｌａｓｈ−Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、類白色固体として化合物１６（３５ｇ、収率５９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ：（ＥＳ，ｍ／ｚ）：３３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：８．６２−８．６２（ｍ、２Ｈ）、８．３５−８．３１（ｍ、２Ｈ）、７．５９−７．５７（ｍ、２Ｈ）、７．４４−７．４２（ｍ、２Ｈ）、５．９１（ｄｄ，Ｊ＝１０．１、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．７１−４．５６（ｍ、２Ｈ）、２．３２−２．１７（ｍ、２Ｈ）。
Ｐ−ＮＭＲ：  （ＤＭＳＯ、１６２ＭＨｚ、ｐｐｍ）：  -１４．０８。
そのマススペクトルは、図２に示した。
そのＨＰＬＣデータは、以下の表２に示した。
【００８８】
【表２】
0006948680.tif 000027
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、図３に示した。
【００８９】
１６、化合物１（即ち、化合物１−Ｈ）の合成
【００９０】
【化２５】
0006948680.tif 000028
【００９１】
アルゴンガス保護下で、在２５ｍＬの三つ口フラスコに、化合物１０（５００ｍｇ，１．２７ｍｍｏｌ）と１，４−ジオキサン（６ｍＬ）の混合溶液を加え、２０℃でｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリド（６．３７ｍＬ、１ｍｏｌ／Ｌ）を滴下し、２０℃で４時間撹拌し、その後、６５℃で化合物１６（８５５．８ｍｇ，２．５５ｍｍｏｌ）と１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）の混合溶液を滴下し、６５℃で２時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウム溶液１００ｍＬでクエンチし、ジクロロメタン１００ｍＬで２回抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液１５０ｍＬで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）により精製し、粗生成物をＦｌａｓｈ−Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣで精製し、類白色固体として化合物１（即ち、化合物１−Ｈ，３０ｍｇ）を純度９６．８％で得た。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：５９０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：８．６０−８．５８（ｍ，２Ｈ），７．５１−７．４９（ｍ，２Ｈ），５．７６（ｍ，１Ｈ），４．６８（ｄｄｔ，Ｊ＝１５．０，７．２，４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５８−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．１９（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｔｔ，Ｊ＝１０．６，４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１２−３．０２（ｍ，１Ｈ），２．３４−２．２３（ｍ，２Ｈ），２．０８−１．７７（ｍ，６Ｈ），１．７４−１．４１（ｍ，９Ｈ），１．４１−１．０２（ｍ，１０Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．９５（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），０．７０（ｓ，３Ｈ）。
Ｐ−ＮＭＲ：（ＣＤ３ＯＤ，１６２ＭＨｚ，ｐｐｍ）：  −４．９９８。
そのマススペクトルは、図４に示した。
そのＨＰＬＣデータは、以下の表３に示した。
【００９２】
【表３】
0006948680.tif 000029
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、図５に示した。
【００９３】
実施例２    化合物２−０の合成
１．化合物２−１の合成
【００９４】
【化２６】
0006948680.tif 000030
【００９５】
三つ口フラスコに、一定体積の無水ジエチルエーテルを加え、その後、フェノール（１０００ｇ、１．０  ｅｑ）及びトリエチルアミン（１０７０ｇ，１．０  ｅｑ）を加え、０℃で撹拌しながら塩化ホスホリル（１６００ｇ、１．０  ｅｑ）を滴下し、窒素ガス保護下で３ｈ反応させた。次いで、自然に室温まで戻し、一晩静置した。反応終了後、トリエチルアミン塩を迅速に濾別し、濾液を収集して濃縮し、乾燥させ、油状生成物２−１  ８００ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用された。
２．化合物ＰＨ−ＭＩＫ−００１−２１の合成
【００９６】
【化２７】
0006948680.tif 000031
【００９７】
三つ口フラスコに、一定体積の無水ジクロロメタン２０Ｌを加えた後、トリエチルアミン（７７０ｇ，２．０  ｅｑ．）を加え、該反応系を−７８℃の環境でセットし、化合物２−１（８００ｇ，１．０  ｅｑ）を無水ジクロロメタンに溶解した溶液及び（Ｓ）−３−（クロロアミノ）−１−イソプロポキシブタン−２−オン（６８５ｇ，１．０  ｅｑ）を滴下し、滴下終了後、２ｈ反応させ、その後、自然に室温まで戻し、一晩静置した。溶媒を除去し、残留物を酢酸エチルで洗浄した後、ろ過し、濾液を濃縮して乾燥させ、化合物ＰＨ−ＭＩＫ−００１−２１（８００ｇ）を得、次の反応に直接使用した。
３．化合物２−３の合成
【００９８】
【化２８】
0006948680.tif 000032
【００９９】
テトラヒドロフラン溶媒に、化合物２−２  （７００ｇ，１．７３ｍｏｌ，１．００  ｅｑ．）を加え、−２５℃、窒素ガス雰囲気の保護下でＴＭＳＣｌ  （８４０ｇ，７．７９ｍｏｌ，４．５  ｅｑ）を滴下し、１ｈ反応させた後、ＬＤＡ  （５．２Ｌ，２．０ＭのＴＨＦ溶液，１．００  ｅｑ．）を約１ｈかけて滴下した。滴下終了後、同温度で２ｈ反応させた。反応終了後、予め冷却されたクエン酸水溶液で反応をクエンチした。水相を廃棄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して化合物２−３の黄色油状粗生成物８２０ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
４．化合物２−４の合成
【０１００】
【化２９】
0006948680.tif 000033
【０１０１】
粗生成物化合物２−３（８２０ｇ，１．４９ｍｏｌ，１．００  ｅｑ．）を無水ジクロロメタン４．５Ｌに加え、該反応系を撹拌しながら−６０℃でアセトアルデヒド（１２０ｇ，２．７２ｍｏｌ，１．８  ｅｑ．）を約１ｈかけて滴下し、その後、ＢＦ３．Ｅｔ２Ｏ  （６９５ｍＬ，３．６  ｅｑ．）を約１．５ｈかけて滴下した。滴下終了後、該反応系にその温度で２ｈ反応させ、その後、室温で３ｈ反応し続けた。次いで、０℃に冷却して５０％の水酸化ナトリウム水溶液（３２０ｍＬ）で反応をクエンチし、１０ｍｉｎ十分に撹拌した。最後に、水相を廃棄し、有機相を収集し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して化合物２−４の黄色油状粗生成物７５０ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
５．化合物２−５の合成
【０１０２】
【化３０】
0006948680.tif 000034
【０１０３】
粗生成物２−４をメタノール／水（２．５／０．５Ｌ）の混合溶液に溶解させ、室温で撹拌しながら水酸化ナトリウム溶液（５０％水酸化ナトリウム水溶液，１８０ｍＬ）に加えた。該反応系は５０℃で４ｈ反応した。反応終了後、メタノール溶液を濃縮し、クエン酸で酸性化し、酢酸エチルで２回抽出した。有機相を収集し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。最後に、酢酸エチルで再結晶し、黄色固体２−５  ４４０ｇを得、３つのステップの総収率が６０％である。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：４１５  ［Ｍ−Ｈ］−
６．化合物２−６の合成
【０１０４】
【化３１】
0006948680.tif 000035
【０１０５】
化合物２−５（１００ｇ，０．２４ｍｏｌ，１．００  ｅｑ．）を水（１０００ｍＬ）に溶解させ、撹拌しながら水酸化ナトリウム（１８ｇ，０．４５ｍｏｌ，１．８８ｅｑ．）を加え、よく撹拌して完全に溶解させた後、窒素ガス保護下でＰｄ／Ｃ  （１０％，１０ｇ，０．１  ｅｑ．）を加えた後、水素ガスで置き換えて水素圧５ａｔｍに維持して反応させ、１００℃で４ｈ反応させ、反応終了後、固体を濾別し、濾液を塩酸で酸性化し、酢酸エチルで２回抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。最後に、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル：ｎ−ヘキサン＝１：２で再結晶し、白色固体２−６を７５ｇ（収率７０％）得た。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：４１７  ［Ｍ−Ｈ］−
７．化合物２−７の合成
【０１０６】
【化３２】
0006948680.tif 000036
【０１０７】
化合物２−６（２１５ｇ，０．５１４ｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）をギ酸（２Ｌ）に溶解させ、撹拌しながら過塩素酸１５ｍＬを滴下した。該反応は４５℃で１６ｈ行った。反応終了後、室温まで冷却し、無水酢酸１．５Ｌを約１．０ｈかけて滴下し、滴下終了後、３０ｍｉｎよく撹拌した。該混合物をを氷水浴に注ぎ、ジエチルエーテルで２回抽出した。収集された有機相を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して黄色固体２−７  ２２０ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：４４５  ［Ｍ−Ｈ］−
８．化合物２−８の合成
【０１０８】
【化３３】
0006948680.tif 000037
【０１０９】
粗生成物２−７（２２０ｇ，０．４９ｍｏｌ，１．０ｅｑ．）をトリフルオロ酢酸１．５Ｌに溶解させ、撹拌しながら無水トリフルオロ酢酸（４２５ｍＬ，３．６７ｍｏｌ，７．５ｅｑ．）を滴下した。該反応系は０〜５℃で１．５ｈ反応した後、亜硝酸ナトリウム（１０３ｇ，１．４８ｍｍｏｌ，３．０ｅｑ．）を少しずつ加えた後、反応混合物を０〜５℃で１．５ｈ反応させ、次いで、４０℃で一晩静置した。反応終了後、反応系に２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を加えて反応を中和し、酢酸エチルで２回抽出し、収集された有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、黄色固体として化合物２−８  １６０ｇを得た。
９．化合物２−９の合成
【０１１０】
【化３４】
0006948680.tif 000038
【０１１１】
粗生成物２−８（１６０ｇ，０．３９ｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）をメタノール：水＝１：１の溶液に溶解させ、４０％水酸化カリウム水溶液を滴下し、滴下完后、該反応系は９０℃で７２ｈ反応し、反応終了後、６Ｎの塩酸水溶液で反応系を中和し、減圧下で濃縮し、メタノールを除去し、残留物を酢酸エチルで３回抽出し、収集された有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、類白色粗生成物として固体２−９  １５０ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：４０３  ［Ｍ−Ｈ］−
１０．化合物２−１０の合成
【０１１２】
【化３５】
0006948680.tif 000039
【０１１３】
粗生成物２−９  （１５０ｇ，０．３８ｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）をテトラヒドロフラン／水（２．５Ｌ、ｖ／ｖ＝４／１）に溶解させ、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（７２ｇ，１．９０ｍｏｌ，５．０ｅｑ．）を少しずつ加えた後、該反応系を室温で２ｈ反応させた。反応終了後、０℃で水及びメタノールを滴下して反応系をクエンチし、溶媒を濃縮し、水洗し、１Ｎ塩酸で酸性化し、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を収集した。飽和塩化ナトリウム水溶液で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、黄色固体として粗生成物２−１０  １３５ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：４０５  ［Ｍ−Ｈ］−
１１．化合物２−１１の合成
【０１１４】
【化３６】
0006948680.tif 000040
【０１１５】
粗生成物２−１０（１３５ｇ，０．３３ｍｏｌ，１．０ｅｑ．）を乾燥メタノール（２．５Ｌ）に加え、p-トルエンスルホン酸（２２７ｇ，１．３２ｍｏｌ，４．０  ｅｑ．）が加えられた。該反応混合物は、一晩よく撹拌された。反応終了後、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を中和した。溶媒を濃縮し、残留物を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を収集し、炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、黄色粘稠粗生成物２−１１  １２０ｇを得、さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：４２１  ［Ｍ＋Ｈ］＋
１２．化合物２−１２の合成
【０１１６】
【化３７】
0006948680.tif 000041
【０１１７】
粗生成物２−１１（１２０ｇ，０．２８６ｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）をジクロロメタン（２Ｌ）に溶解させ、０℃で２，６−ジメチルピリジン（１６０ｍＬ，１．４３ｍｏｌ，５．０  ｅｑ．）及びトリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ-ブチルジメチルシリル（１９０ｍＬ，０．８６ｍｏｌ，３．０  ｅｑ．）をそれぞれ滴下した。該反応系は、室温で２４ｈ撹拌し、反応終了後、中性になるまで硫酸水素ナトリウム水溶液でクエンチした。水相を分離し、ジクロロメタンで２回抽出し、有機相を硫酸水素ナトリウム水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、黄色粘稠粗生成物２−１２を１３５ｇ得た。
１３．化合物２−１３の合成
【０１１８】
【化３８】
0006948680.tif 000042
【０１１９】
粗生成物２−１２（１３５ｇ，０．２ｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）を乾燥テトラヒドロフラン（１．２Ｌ）に溶解させ、０℃、窒素ガス保護下で乾燥されたメタノール（２４ｍＬ）が加えられ、次いで、水素化ホウ素リチウム（２９０ｍＬ，２ＭのＴＨＦ溶液，０．６ｍｏｌ，３  ｅｑ．）を少しずつ加えた。該混合反応物は、室温で一晩反応した。反応終了後、該反応系に１ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えて反応をクエンチし、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を収集し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、黄色油状粗生成物２−１３  １２０ｇを得た。さらに精製せずに、次の反応に直接使用した。
１４．化合物２−１４の合成
【０１２０】
【化３９】
0006948680.tif 000043
【０１２１】
粗生成物２−１３（１２０ｇ，１９３ｍｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）及びＮ−メチルイミダゾール（１２６ｇ，８．０  ｅｑ）を無水テトラヒドロフラン（１４００ｍＬ）に加え、よく撹拌しながら無水テトラヒドロフランに溶解した化合物ＰＨ−ＭＩＫ−００１−２１（３８２．５ｇ，６．５ｅｑ）の溶液を滴下し、滴下終了後、該反応系は、室温で一晩撹拌した。反応終了後、減圧下で濃縮し、溶媒を除去し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、黄色油状物２−１４  ８０ｇを得た。
１５．化合物２−０の合成
【０１２２】
【化４０】
0006948680.tif 000044
【０１２３】
化合物２−１４（８０ｇ，８８ｍｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）を乾燥メタノール（１２００ｍＬ）に溶解させ、濃塩酸（２４２ｍＬ，２．９ｍｏｌ，２０  ｅｑ．）を上記反応系に滴下し、滴下終了後、該反応は、室温で４日行い、反応終了後、減圧下で濃縮し、メタノールを除去し、残りの反応系を水及び炭酸水素ナトリウムで中和し、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を収集し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をＦｌａｓｈ−Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、類白色固体として化合物２−０  ３５ｇ（純度９７．３％）を得た。
【０１２４】
実施例３
１．化合物ＰＨ−ＭＩＫ−００１−２２の合成
【０１２５】
【化４１】
0006948680.tif 000045
【０１２６】
三つ口フラスコに、一定体積の無水ジクロロメタン２０Ｌを加えた後、トリエチルアミン（７７０ｇ、２．０  ｅｑ．）を加え、該反応系は、−７８℃の環境でセットし、化合物２−１（実施例２の製造方法で調製、８００ｇ，１．０  ｅｑ．）を無水ジクロロメタンに溶解した溶液及び（Ｓ）−３−（クロロアミノ）−１−イソプロポキシブタン−２−オン（６３１ｇ，１．０  ｅｑ．）を滴下し、滴下終了後、２ｈ反応させ、次いで、自然に室温まで戻し、一晩静置した。溶媒を除去し、残留物を酢酸エチルで洗浄し、ろ過し、濾液を濃縮して乾燥させ、化合物ＰＨ−ＭＩＫ−００１−２２（７６０ｇ）を得、次の反応に直接使用した。
２．化合物３−１の合成
【０１２７】
【化４２】
0006948680.tif 000046
【０１２８】
粗生成物２−１３（１２０ｇ，１．０  ｅｑ．）及びＮ−メチルイミダゾール（１２６ｇ，８．０  ｅｑ．）を無水テトラヒドロフランに加え、よく撹拌しながら無水テトラヒドロフランに溶解した化合物ＰＨ−ＭＩＫ−００１−２２（４０１ｇ，６．５  ｅｑ．）溶液を滴下し、滴下終了後、この反応系を室温下で一晩撹拌した。反応終了後、減圧下で濃縮して溶媒を除去した、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し黄色油状物３−１を７５ｇ得た。
３．  化合物３−０の合成
【０１２９】
【化４３】
0006948680.tif 000047
【０１３０】
化合物３−１（７５ｇ，８８ｍｍｏｌ，１．０  ｅｑ．）を乾燥メタノール（１２００ｍＬ）に溶解させ、濃塩酸（２４２ｍＬ，２．９ｍｏｌ，２０  ｅｑ．）を上記反応系に滴下し、滴下終了後、該反応は、室温で４日行い、反応終了後、減圧下で濃縮し、メタノールを除去し、残りの反応系を水及び炭酸水素ナトリウムで中和し、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を収集し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をＦｌａｓｈ−Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製し、類白色固体として化合物３−０  ３５ｇ（純度９６．９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ：  （ＥＳ，ｍ／ｚ）：６６２．２１  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３１】
以上の具体的な調製手順を示した化合物の以外は、以下の表４における実施例化合物も、以上の実施例１〜３の製造方法に従って調製されたものであり、具体的な実験手順は省略され、必要な原料及び試薬は市場で購入できる。
【０１３２】
【表４】
0006948680.tif 000048
0006948680.tif 000049
0006948680.tif 000050
【０１３３】
実施例４    応用実施例
（一）１７α−エチニルエストラジオール（Ｅ２−１７α）により誘発されるラットの胆汁うっ滞に対する本発明の化合物の作用
１、被験品溶液及び試薬の調製
１．０％ＣＭＣ−Ｎａ溶液の調製：ＣＭＣ−Ｎａ粉末１ｐを秤量し、（５０℃）蒸留水１００ｍＬを加え、撹拌機で１ｈすばやく撹拌し、十分に膨潤させ、１％ＣＭＣ−Ｎａ溶液を調製した。
Ｅ２−１７αプロピレングリコール溶液の調製：Ｅ２−１７αを５４／０．９８＝５６ｍｐで秤量し、１，２−プロピレングリコール９ｍＬに溶解させ、シェーカーで１ｈ振とうし、７ｍｐ／ｍＬ  Ｅ２−１７α懸濁液を調製した。
【０１３４】
２、群分け及び投与方法
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ  ラットは、体重範囲２５０〜３５０ｇであり、空白対照群、Ｅ２−１７α群（モデル群）及び被験化合物群に無作為に分けられ、Ｅ２−１７α＋化合物１−Ｈ（５ｍｇ／Ｋｇ）群、Ｅ２−１７α＋化合物１−ＩＰ（５．１ｍｇ／Ｋｇ）群、Ｅ２−１７α＋化合物１−Ｃｌ（５．３ｍｇ／Ｋｇ）群、Ｅ２−１７α＋化合物１−Ｍｅ１（５．１ｍｇ／Ｋｇ）群、Ｅ２−１７α＋化合物２−０（５．１ｍｇ／Ｋｇ）群、Ｅ２−１７α＋化合物６−０（５．９ｍｇ／Ｋｇ）群、以及陽性対照Ｅ２−１７α＋ＵＤＣＡ（１５ｍｇ／ｋｇ）群及びオベチコール酸（ＯＣＡ，６ｍｇ／ｋｇ＋１０ｍｇ／ｋｇ）群を含む。ＵＤＣＡは、ウルソデスオキシコール酸であって、胆石、胆汁うっ滞性肝疾患、脂肪肝、及びさまざまなタイプの肝炎の治療のために販売されている胆汁酸誘導体薬物である。
【０１３５】
１７α−エチニルエストラジオール（Ｅ２−１７α）は、首の皮下に注射され、モデルを７日間かけて構築し、被験化合物を１％ＣＭＣ−Ｎａ溶液に懸濁し、７日間胃内投与し、Ｅ２−１７αの投与によるモデル構築と同期させた。群分けは、以下の表５に示した。
【０１３６】
【表５】
0006948680.tif 000051
（注：ｓ．ｃ、皮下注射；  ｉ．ｇ、胃内投与）注：以上の各投与群は、同時に１７α−エチニルエストラジオール（Ｅ２−１７α）も投与された。
【０１３７】
３、実験手順：
ラットにＥ２−１７αプロピレングリコールを７日間連続投与してモデルを構築し、異なる被験品のＣＭＣ−Ｎａ溶液を胃内投与し、８日目にラットを空腹時に１ｍＬ採血して血清生化学検査を行い、Ｅ２−１７αプロピレングリコールを引き続き投与してモデルを構築し、異なる被験品のＣＭＣ−Ｎａ溶液を胃内投与した。９日目に投与後０．５時間でラットの体重を秤量し、１０％ウレタン（１０ｍＬ／ｋｇ）を腹腔内に投与して麻酔した。麻酔後、ラットをコンソールに固定し、上腹部の剣状突起から下向きに腹部で正中切開を行い、切開部は、２〜３ｃｍ程度である。実験中、室内温度を維持し、ラットの体温を維持し、胆汁の流出を促進する必要がある。十二指腸と胃の接合部を見つけるために、眼科用鉗子のハンドルを使用して肝臓を上げた。接合部に糸（０号糸）を引き、用意した。十二指腸の幽門から約２ｃｍ程度の箇所に、十二指腸に垂直な黄色がかった透明な細い管が膵臓中を通過していることを見つけ、その細い管は、総胆管である。総胆管と十二指腸の接合部で、眼科用鉗子で総胆管を分離し、胆管の周りの小さな血管を壊さないように注意し、手で膵臓組織を刺激しないようにした。分離後、２本の糸を引き、腸端に近い糸を結紮し、牽引糸とし、眼科用ハサミを使用して管壁に斜めに小さな開口部を切り、作製された膵液収集チューブを小さな開口部に挿入し、挿入後、すぐに、黄色の胆汁と膵液の混合物が見られた。結紮し固定し、このチューブは胆汁を収集するために使用した。挿管完了後、皮膚が縫合され、胆管挿管の他の一方の端が引き出され、固定された０．５ｍＬの遠心チューブに流し込んだ。胆汁を８回連続収集し、１５分間ごとに１回採取し、合計１２０分間である。
【０１３８】
４、指標の測定：
１）胆汁の収集
挿管完了後、腹腔内の水分が蒸発しないように皮膚を縫合し、胆管挿管の他の一方の端が引き出され、固定された０．５ｍＬの収集チューブに流し込んだ。胆汁を８回連続収集し、１５分間ごとに１回採取し、合計１２０分間採取し、実験前に、分析天びんで胆汁収集チューブの重量を精密に秤量して記録し、実験の胆汁収集後に胆汁と収集チューブの全重を秤量し、減算してチューブ内の胆汁の重量を計算し、１ｇ／ｍＬで体積に換算した。胆汁収集後、下大静脈から血液を採取し、血清生化学的指標を測定した。
２）血清及び肝臓試料中の指標検出
血液サンプルを水浴中に３７℃で１０ｍｉｎ静置し、３０００  ｒｐｍ（１３６８ｇ）×１０ｍｉｎで遠心し、血清を常法に従い分離し、分注し、−２０℃で凍結保存した。血清試料の検査指標は、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰを含み、上記指標の検出方法は、いずれもキットの関連する説明書に従って実行した。
【０１３９】
５、統計処理
ＳＰＳＳ１８．０統計ソフトウェアを使用してデータを分析し、ｔ検定を使用して２つのグループ間で測定データを比較し、複数グループの平均値の比較は、単一因子分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びグループ間の多重比較を採用し、データの平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ．）又は平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＤ．）で表された。
６、試験結果
異なる時点での各群ラットの胆汁排泄速度は、表６に示した。
【０１４０】
【表６】
0006948680.tif 000052
注：以上の各投与群は、同時に１７α−エチニルエストラジオール（Ｅ２−１７α）も投与された。
【０１４１】
図６には、被験化合物１−Ｈの異なる用量群ラットの各時点での胆汁排出量を比較した。表６及び図６より示すように、対照群と比較して、モデル群の胆汁流速が低減し、Ｅ２−１７α群と比較して、化合物１−Ｈ、化合物１−ＩＰ、化合物１−Ｃｌ、化合物１−Ｍｅ１、化合物２−０及び化合物６−０群の胆汁流速は有意に向上した（Ｅ２−１７α群と比較して、＊Ｐ＜０．０５）。
表６のデータによれば、本発明の化合物の胆汁排泄促進作用は、現在市販されているウルソデスオキシコール酸（ＵＤＣＡ）と比較して、本発明の被験化合物は、５ｍｇ／ｋｇ〜５．６ｍｇ／ｋｇの用量でウルソデスオキシコール酸の１５ｍｇ／ｋｇの用量での胆汁排出量に相当し、投与後１０５分間後に、本発明の被験化合物１−Ｈ群及び化合物１−Ｃｌ群の胆汁排出量は、ウルソデスオキシコール酸群より有意に高くなる。本発明の化合物の胆汁排泄促進作用は、現在市販されているオベチコール酸（ＯＣＡ）と比較して、本発明の被験化合物は、５ｍｇ／ｋｇ〜５．６ｍｇ／ｋｇの用量での胆汁排出量は、オベチコール酸の１０ｍｇ／ｋｇの用量での胆汁排出量より高く、投与後の時間が長くなると、オベチコール酸の胆汁排泄促進作用は徐々に弱まりが、本発明の化合物の胆汁排出量は、投与後１２０分間後に、依然としてはモデル群（Ｅ２−１７α群）より高かった。本発明の化合物の胆汁排泄促進作用強度である胆汁排泄量は、オベチコール酸及びウルソデスオキシコール酸より良く、本発明の化合物の胆汁排泄促進作用時間はオベチコール酸及びウルソデスオキシコール酸よりも長い。
【０１４２】
各群ラットの胃内投与後の血清生化的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰレベルは表７に示した。
【０１４３】
【表７】
0006948680.tif 000053
【０１４４】
表７より示すように、化合物１−Ｈ、化合物１−ＩＰ、化合物１−Ｃｌ、化合物１−Ｍｅ１、化合物２−０は、それぞれＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰの値を低減させたことを分かった。
【０１４５】
７、結論：本発明の実施例化合物１−Ｈ、化合物１−ＩＰ、化合物１−Ｃｌ、化合物１−Ｍｅ１、化合物２−０及び化合物６−０は、肝内胆汁うっ滞に対して明らかな改善効果を有し、胆汁排泄を促進できるため、胆汁排泄障害関連性疾患に対して治療作用を有し、本発明の実施例化合物は、同時にそれに応じてＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰの値を低減させることができるのは、本発明に係る実施例化合物が肝臓損傷の修復に一定の効果を有することを証明する。
【０１４６】
（二）肝硬変の門脈圧亢進に対する本発明の化合物の作用
１．被験品及び溶液の調製
１）ＴＡＡ生理塩水溶液の調製：チオアセトアミド（ＴＡＡ）１０ｇを秤量し、生理塩水１００ｍＬに溶解させた後、０．２２μｍ滅菌微多孔膜フィルターを通して滅菌ボトルにろ過した。
２）被験化合物の０．５％ＣＭＣ−Ｎａ懸濁液の調製：化合物１−Ｈ、化合物１−ＩＰ、化合物１−Ｃｌ、化合物１−Ｍｅ１及び化合物２−０を４００ｍｇ秤量して０．５％ＣＭＣ−Ｎａ溶液１００ｍＬに溶解させ、シェーカーで３０ｍｉｎ振とうし，２０ｍｇ／Ｋｇ（高用量）群で与える医薬品を作製した。即ち、４ｍｇ／ｍＬの化合物１−Ｈ、１−ＩＰ、１−Ｃｌ、１−Ｍｅ１及び２−０のＣＭＣ−Ｎａ懸濁液であった。中・低用量群については、医薬品の調製方法が同じであった。
【０１４７】
２．群分け及び投与方法
１）モデルの構築方法
ＴＡＡの腹腔内注射によりラット肝硬変の門脈圧亢進モデルを構築した。空白対照群に生理塩水を腹腔内注射する以外は、残りの動物に１０％チオアセトアミド（ＴＡＡ）の生理塩水溶液を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）してモデルを構築した。用量２００ｍｇ／Ｋｇ、投与容積２ｍＬ／Ｋｇであった。すべての実験動物に、ＴＡＡ又は同体積の生理塩水を３日ごとに１回腹腔内注射し、各回投与前に、ラットの削りくず状床敷きを事前にすっきり取り替え、ラットの体重は、モデル構築・投与の２回ごとに１回秤量し、ラット体重は、前回よりも１０％増加又は減少し、ＴＡＡ注射用量は対応して５０％増加又は減少し、個別の投与で毎匹の体重の変化を厳密に制御することにより、モデル構築の成功率及びモデルの均一性を効果的に向上させることができる。
【０１４８】
２）動物群分け
モデル化に成功した動物をランダムに群分けし、各群あたり１２匹であり、空白対照群は、２０匹のラットであり、群分けは、下表に示した。ラットＴＡＡは、門脈圧亢進症を誘発し、１３週間後に門脈圧亢進症モデルを作成し、被験化合物は、１０日間、１日１回投与し、具体的な群分けは、以下の通りである。
【０１４９】
【表８】
0006948680.tif 000054
【０１５０】
３）投与方法
胃内投与を採用し、具体的な操作は、胆汁うっ滞の実施例の胃内投与と同じである。
３．試験手順
試験期間では、動物のバイタルサイン及び行動を毎日観察し、胃腸反応の点で動物の一般的な状態の異常の有無を観察し、注射部位を毎日観察し、紅斑、浮腫、出血または塊状物などの症状があるかどうかを観察した。すべての動物は、投与前に１回秤量し、モデル構築及び投与期間のラット体重の全体的な変化を観察した。
投与終了、血液をラットの眼窩から採取し、３７℃で１０ｍｉｎ水浴し、３０００ｒ／ｍｉｎ（１３７０ｇ）で１０ｍｉｎ遠心し、上層血清を採取し、検査に直接送ったり、−８０℃にセットして短時間保存し、血清学的指標の測定のために用いられた。採血後に、３日間給餌・給水し、血液量を徐々に回復させ、その後の圧力測定のために用意した。
【０１５１】
１）門脈圧の測定
実験前にラットを１２時間絶食させ、１０％の抱水クロラールで腹腔内注射して麻酔し、麻酔剤の用量は、２．５ｍＬ／Ｋｇであった。動物を麻酔した后、手術台に固定した。腹部に白線に沿って約３ｃｍ程度の切開部を切出した。腹部を開いた後、十二指腸を裏返し、門脈を見つけ、Ｎｏ．４静脈内注射針を使用して圧力変換器を接続し、変換器のすべてのバルブを開き、針を静脈に刺し、血液が戻るのを待ち、約１ｃｍを挿入し続け、圧力が安定した後に、すべてのバルブを閉じ、安定化後の門脈圧力を測定した。圧力変換器は、生物学的機能テストシステム（ＢＬ−４２０Ｆ）に接続した。
２）平均動脈圧の測定。
ハサミで正中線に沿って首の皮膚を切り、片側の総頸動脈を分離し、総頸動脈に押管し、平均動脈圧を測定し、測定方法は門脈と同じである。
【０１５２】
４．検査指標
１）実験前に、血液１．５ｍＬを眼窩から採取し、上記の手順のように、血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、γ−ＧＴ及びＴＢＡ含有量を測定した。
２）ラット肝臓の同一部位で、０．７ｃｍ程度の小片を切り取り、１０％ホルムアルデヒド溶液に入れて固定し、組織切片の病理学的観察に使用した。肝臓を適切なサイズに切り取り、表面の血液を通常の生理食塩水ですばやくすすぎ、滅菌したＥＰチューブに入れ、液体窒素で冷凍保存し、後の実験に用意した。
【０１５３】
５．試験結果
１）門脈圧：空白対照群と比較して、ＴＡＡ群（モデル群）の門脈圧は、上昇し（∇Ｐ＜０．０１）、肝硬変の門脈圧亢進症がすでに現れていることを示し、ＴＡＡ群と比較して、各被験化合物の５ｍｇ／Ｋｇ群、１０ｍｇ／Ｋｇ群、２０ｍｇ／Ｋｇ群の門脈圧は有意に低減した（＃Ｐ＜０．０５，ΔＰ＜０．０１）。
図７は、異なる群のラット門脈圧に対する被験化合物１−Ｈの各用量群の影響を示す。
ＴＡＡ群の平均門脈圧に対する差の百分率を算出し、投与群の各成分の平均変化百分率（％）を得た。門脈圧の低下百分率≧１０％であり、臨床的意義があり、門脈圧亢進症のリスクに関連すると考えられる。図面から、化合物１−Ｈを投与して治療し、ＴＡＡ＋化合物１−Ｈ  ５ｍｇ／Ｋｇ群、ＴＡＡ＋化合物１−Ｈ  １０ｍｇ／Ｋｇ群、ＴＡＡ＋化合物１−Ｈ  ２０ｍｇ／Ｋｇ群の門脈圧平均変化百分率は、いずれも１０％を超えるため、化合物１−Ｈは門脈圧亢進症を減少させ、臨床的意義（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）があると考えることができる。図８は、被験化合物１−Ｈの各用量群におけるラットの門脈圧の平均変化百分率である。
２）肝臓の外観：被験化合物１−Ｈの各用量群のラット肝臓及び脾臓の外観は、図９に示した。図９（Ａ）は、Ｃｏｎｔｒｏｌ（空白対照）群であり、空白対照群のラット肝臓が鮮やかな赤い色になり、表面が滑らかで光沢のあり、境界が明瞭で、サイズ及び肝臓湿重量が正常である。図９（Ｂ）は、ＴＡＡ（模型）群であり、ＴＡＡ群のラットの肝臓は、赤褐色であり、境界が不明瞭であり、肝臓の表面が粗く不均一で、ラット肝臓の表面の一部が結節性過形成になり、多くの球状突起を形成し、肝硬変ラットの一部で肝葉のサイズが異常であり、主な表現としては、左外側葉、中葉、及び2つの円板状乳頭葉の体積が増加し、また、左中葉及び尾状葉が異なる程度で萎縮するが、全体的な体積が増加し、且つ湿重量が増加し、ほとんどのラットの脾臓のサイズは正常またはわずかに萎縮した。図９（Ｅ）は、ＴＡＡ＋５ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群であり、化合物１−Ｈを投与した後、ＴＡＡ群と比較して、ＴＡＡ＋５ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群は、ラット肝臓の肝硬変・結節性過形成がより軽く、突起が有意に減少し、肝葉の萎縮または過形成の変化が軽いが、空白対照群よりも表面がまだ平滑ではない。図９（Ｆ）は、ＴＡＡ＋１０ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈであり、図９（Ｇ）は、ＴＡＡ＋２０ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群であり、肝脾の外観はＴＡＡ＋５ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群と類似した。
【０１５４】
３）血生化指標：被験化合物１−Ｈの各用量群のラット血清学的パラメーターは図１０に示した。図１０（Ａ）は、各群のラットの血清ＡＬＴレベル（Ｍｅａｎ  ±  ＳＥＭ，ｎ＝１２）であり、空白対照群と比較して、ＴＡＡ群のＡＬＴレベルは増加し（＊Ｐ＜０．０５）、化合物１−Ｈ  ５ｍｇ／Ｋｇ群、化合物１−Ｈ  １０ｍｇ／Ｋｇ群、化合物１−  ２０ｍｇ／Ｋｇ群のＡＬＴレベルが低減した（＃Ｐ＜０．０５）。図１０（Ｂ）は、各群ラットの血清ＡＳＴレベル（Ｍｅａｎ  ±  ＳＥＭ，ｎ＝１２）である。空白対照群と比較して、ＴＡＡ群のＡＳＴレベルが増加し（＊Ｐ＜０．０５）、化合物１−Ｈ  ５ｍｇ／Ｋｇ群、化合物１−Ｈ  １０ｍｇ／Ｋｇ群、化合物１−Ｈ  ２０ｍｇ／Ｋｇ群のＡＳＴレベルが低減した（＃Ｐ＜０．０５）。図１０（Ｃ）は、各群ラットの血清ＡＬＰレベル（Ｍｅａｎ  ±  ＳＥＭ，ｎ＝１２）である。空白対照群と比較して、ＴＡＡ群のＡＬＰレベルは増加し（∇Ｐ＜０．０１）、すべての投与成分のＡＬＴレベルは低減した（＃Ｐ＜０．０５，ΔＰ＜０．０１）。図１０（Ｄ）は、各群ラットの血清ＡＬＢ含有量（Ｍｅａｎ  ±  ＳＥＭ，ｎ＝１２）である。図１０（Ｅ）は、各群ラットの血清γ−ＧＴレベル（Ｍｅａｎ  ±  ＳＥＭ，ｎ＝１２）である。空白対照群と比較して、ＴＡＡ群のγ−ＧＴレベルは増加し（∇Ｐ＜０．０１）、全部の投与治療群のγ−ＧＴレベルはいずれも低減した（＃Ｐ＜０．０５，ΔＰ＜０．０１）。図１０（Ｆ）は、各群ラットの血清ＴＢＡ含有量（Ｍｅａｎ  ±  ＳＥＭ，ｎ＝１２）である。空白対照群と比較して、ＴＡＡ群のＴＢＡレベルは増加し（∇Ｐ＜０．０１）、全部の投与群のＴＢＡレベルはいずれも低減した（ΔＰ＜０．０１）。
【０１５５】
４）肝臓組織切片：被験化合物１−Ｈの各用量群のラット肝臓病理切片のＭａｓｓｏｎ染色及びＨＥ染色画像は図１１に示した。（１）〜（３）は、それぞれ同一試料のＭａｓｓｏｎ染色（１００×視野）、ＨＥ染色（１００×視野）及びＨＥ染色（２００×視野）である。ここで、図１１（Ａ）は、Ｃｏｎｔｒｏｌ（空白対照）群の顕微鏡写真である。空白対照群は、肝線維組織の明らかな過形成はなく、門脈領域の形状は正常であり、胆管の過形成はなく。肝細胞の形態及び構造は正常であり、細胞壊死及び炎症性細胞浸潤は見られなかった。図１１（Ｂ）は、ＴＡＡ（モデル）群の顕微鏡写真である。空白対照群と比較して、ＴＡＡ群は、線維組織が増生して偽小葉を形成し、門脈領域の胆管に過形成が現れ、円形リンパ球浸潤を伴い、肝線維症の症状を示した。図１１（Ｃ）は、ＴＡＡ＋５ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群の顕微鏡写真である。該群は、主に線維組織の隙間がより薄く、細胞の形態構造が基本的に正常であり、炎症細胞の浸潤が少なく、門脈領域の胆管に多数の過形成が見られないことを示し、肝線維症の症状が軽減されたことを証明した。図１１（Ｄ）は、ＴＡＡ＋１０ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群の顕微鏡写真である。該群の病理形態学的構造は、ＴＡＡ＋５ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群と類似した。図１１（Ｅ）は、ＴＡＡ＋２０ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群の顕微鏡写真である。該群の病理形態学的構造は、ＴＡＡ＋５ｍｇ／Ｋｇ  化合物１−Ｈ群と類似した。病理学的指標は、化合物１−Ｈが線維組織の増生及び偽小葉の形成に一定の改善作用があり、主な表現として線維組織の隙間が薄くなることを示した。
【０１５６】
６．結論
ＴＡＡの腹腔内注射の方法は、ラット肝硬変の門脈圧亢進を誘導することに成功し、モデル構築を完了した後、本発明の実施例で調製された被験化合物を投与した。実験結果は、被験化合物は５ｍｇ／Ｋｇ、１０ｍｇ／Ｋｇ及び２０ｍｇ／Ｋｇの３つの用量でいずれも（１）ラットの門脈圧を低減させ、門脈圧の低下百分率≧１０％であり；（２）肝硬変の結節過形成、肝葉の萎縮または過形成を改善し；（３）ラットの血液中の各指標のレベルを改善し、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、ＡＬＢ、γ−ＧＴ及びＴＢＡはいずれも低減し；（４）組織形態が改善し、肝線維化病変が減少することができる。
上記の結果は、本発明の被験化合物がＦＸＲ及びＴＧＲ５受容体を活性化することにより、肝臓内血管収縮などの機能を緩和する機能では、肝臓内の高血流抵抗を改善するとともに、肝線維症などの器質的病変もある程度改善し、肝臓内の血流抵抗の低下を促進する。同時に、そのものの胆汁の分泌・排泄を増加させる作用により血清ＴＢＡ、ＡＬＰ及びγ−ＧＴレベルを低減させ、胆汁うっ滞後の毒性物質によって引き起こされる肝細胞への更なる損傷が減少し、ＡＬＴ及びＡＳＴのレベルを低減させる。
【０１５７】
以上、本発明の化合物は、ラット肝硬変の門脈圧亢進をよく改善させるとともに、肝線維症などの器質的病変もある程度改善することができる。
上記の実施例の説明は、本発明の方法及び主旨の理解を助けるためにのみ使用される。当業者にとっては、本発明の原理から逸脱することなく、本発明にもいくつかの改良及び修飾を行うことができ、これらの改良及び修飾も本発明の特許請求の範囲に含まれることを理解すべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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