(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲン加水分解物を含む、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤であって、前記コラーゲン加水分解物の平均分子量が３００〜９００である、剤。
【請求項２】
前記コラーゲン加水分解物が分子量４００以下の低分子画分を２０質量％以上含む、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
歯肉中毛細血管係蹄の拡張、屈曲および／またはねじれを予防および／または改善することにより、歯肉炎の発症が予防されおよび／または症状が改善される、請求項１または２に記載の剤。
【請求項４】
歯肉組織中コラーゲンの産生を亢進し、且つコラーゲン繊維の過形成または瘢痕化を抑制することにより、歯肉炎の発症が予防されおよび／または症状が改善される、請求項１から３のいずれか一項に記載の剤。
【請求項５】
歯肉炎に伴う歯肉からの出血を予防および／または改善する、請求項１から４のいずれか一項に記載の剤。
【請求項６】
歯肉炎に伴う歯肉組織中コラーゲンの消失を抑制する、請求項１から５のいずれか一項に記載の剤。
【請求項７】
歯肉炎の再発を予防する、請求項１から６のいずれか一項に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コラーゲン加水分解物を含む、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周組織とは歯を支える周辺組織の総称であり、歯肉、歯槽骨、歯根膜、セメント質で構成される。歯肉はその中で唯一外部から観察することが可能な組織であり、健常であるとピンク色や淡い赤色を呈する。歯周病の初期症状である歯肉炎は、歯の表面に沈着した歯垢中の歯周病原細菌により引き起こされる。歯肉は、歯や歯槽骨にしっかりと付着し非可動性の付着歯肉、歯の接触点下の下部歯間鼓形空隙を埋める乳頭歯肉、歯肉縁から遊離歯肉溝までを構成し、歯と付着しない辺縁歯肉（遊離歯肉）から成る。歯肉の約６割がコラーゲンから成り、歯茎の弾力や結びつきを担う。またコラーゲンの生合成は線維芽細胞が担う。
【０００３】
歯肉は血管が密集した組織でもある。歯肉の血管には、細動脈から細静脈にかけて中心毛細血管、真性毛細血管、細動静脈吻合の３つの経路がある。そしてこれらの血管は、分岐、吻合を繰り返しながら歯肉縁に向かって走り、血管網を形成する。そしてそこから外縁上皮に向けてヘアピン形の血管の係蹄が突出し、歯肉乳頭内へと入り込む。歯肉の微小循環系は、このような血管網が適切に作動することにより保たれている。歯肉炎の代表的な所見は歯肉の発赤や腫脹、出血であるが、これは毛細血管形態そのものに変化（毛細血管係蹄の拡張、屈曲、ねじれ）が生じることによる。
【０００４】
また炎症部では、炎症と同時にコラーゲン繊維の破壊・減少が起こる。まず炎症により線維芽細胞からのコラーゲンの分泌は抑制される。そして、線維芽細胞自身とマクロファージが分泌するｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅがコラーゲン繊維を切断し、この断片を種々の分解酵素がさらに小さな断片やアミノ酸に分解する。さらに線維芽細胞とマクロファージはコラーゲン原繊維を貪食し、細胞内でも消化する（非特許文献１）。これらの作用によりコラーゲン繊維の緻密で規則的な配列が破壊されると、歯肉の機能は低下し細菌からの防御力が低下する。炎症が歯周組織まで波及し歯周炎に至ると、病態はより深刻となる。歯肉炎では炎症により歯肉溝（歯周ポケット）に２〜３ｍｍの隙間ができるが、一般的にその原因菌は好気性菌であり、炎症も酸素がある表面付近に留まる。それに対し歯周炎の原因菌は嫌気性菌であり、歯周ポケットの奥深くで繁殖する。そして防御力の落ちた歯肉内へ深く侵入し、炎症を歯槽骨まで広げる。歯周ポケットの深さは４ｍｍ以上となり、最終的には歯槽骨も破壊され歯が抜け落ちてしまう。また歯茎の色も赤紫色に変色し、強い口臭が発生する場合もある。歯周炎に至り歯槽骨が吸収されると正常な状態への回復が困難になる（非特許文献２）ことから、歯肉炎の段階で早期に発見し、治療することが望ましい（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１９−９９４８６
【特許文献２】特開２０１９−６４９４１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】小原三和. サル歯肉線維芽細胞によるコラーゲン線維の貪食に関する研究. 日本歯周病学会会誌, 1982, 24.4: 530-550.
【非特許文献２】山木誠也, et al. 犬の歯肉炎に対するイヌインターフェロン α 製剤投与後の長期経過観察. 日本獣医師会雑誌, 2017, 70.9: 589-593.
【非特許文献３】神山義信, et al. ヒトの実験的歯肉炎における Bleeding Index について. 日本歯周病学会会誌, 1981, 23.3: 518-525.
【非特許文献４】小森英世, 姫野宏, 加藤熙, & 石川純. (1978). サルの歯肉炎に対するブラッシングの効果について. 日本歯周病学会会誌, 20(3), 246-259.
【非特許文献５】今里憲弘; 山本未陶; 筒井昭仁. 自己管理スキルを応用した成人の歯周疾患予防に影響する歯科保健行動調査. 日本健康教育学会誌, 2012, 20.Special: s8-s16.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
歯肉炎の予防法・治療法としては、歯垢を取り除くことが最も有効である。すなわち定期的な歯科医院の受診、適切なブラッシングといった日々の歯科保健行動が不可欠である（非特許文献４）。これら歯科保健行動等によって炎症の原因が取り除かれると、歯肉の発赤や腫脹が消失し、ブラッシングの際の歯肉からの出血も軽快する。歯肉内では毛細血管の形態が改善し、コラーゲン繊維の量も回復する。しかし、日々の歯科保健行動の適切な実行が難しい場合もある。
【０００８】
なおコラーゲン繊維の消失は老化によっても進行しやすく、口腔用組成物及びコラーゲン合成促進剤を開示する特許文献１、正常ヒト歯肉線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進剤及び口腔用剤を開示する特許文献２ではそのコラーゲン産生を高める手段が提供されている。しかし、上述の通り歯周病には感染源、炎症、血管の形態異常などコラーゲン繊維の消失以外にも多くの要素が関わることから、コラーゲン産生を促進させることだけで健常歯肉を回復することはできないと考えられる。しかもコラーゲン産生の過剰な促進によるコラーゲンの過形成には注意が必要である。過形成により生じた組織は従来のコラーゲン線維の配列と異なった方向に形成され、その後瘢痕化するので、コラーゲン原繊維配列にはモザイク構造が生じる。瘢痕は血管も少なく、血流が悪い上、一見して健常であってもモザイク構造の隙間からの再感染が起こりやすく、歯肉炎が再発しやすい。
【０００９】
厚生労働省「平成２９年患者調査の概況」によると、歯肉炎および歯周疾患の総患者数は３９８万人と、高血圧疾患に次いで２番目に罹患者数が多い疾患である上、調査のたびに増加しており、歯科保健行動の啓蒙が功を奏していないことを示唆する。その最大の理由として、歯科保健行動が技術的な側面と自己管理力の２面から構成されるため（非特許文献５）、個人の生活環境、自覚性、習得力などの生活要因を受けやすく、個人差が生じやすいという点が挙げられる。さらに、叢生、ドライマウス、喫煙、老化、ストレスによる免疫力の低下、糖尿病をはじめとする疾病などは口腔内環境の悪化を招きやすく、歯肉炎を発症しやすくなる。そのため、口腔内環境の悪化による歯肉炎を予防し、症状を改善する手段が必要とされている。
よって、本発明の課題は、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、平均分子量３００〜９００を有するコラーゲン加水分解物を２ヶ月間毎日経口投与したイヌの歯肉炎モデルでは、非投与群と比較して、歯肉の毛細血管係蹄の形態が正常に回復し、さらにコラーゲン繊維の面積が大きくなり、瘢痕化することなく正常に回復することが明らかとなった。このような知見に基づいて本発明は完成された。
【００１１】
本発明によれば、以下の発明が提供される。
［１］  コラーゲン加水分解物を含む、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤であって、前記コラーゲン加水分解物の平均分子量が３００〜９００である、剤。
［２］  前記コラーゲン加水分解物が分子量４００以下の低分子画分を２０質量％以上含む、［１］に記載の剤。
［３］  歯肉中毛細血管係蹄の拡張、屈曲および／またはねじれを予防および／または改善することにより、歯肉炎の発症が予防されおよび／または症状が改善される、［１］または［２］に記載の剤。
［４］  歯肉組織中コラーゲンの産生を亢進し、且つコラーゲン繊維の過形成または瘢痕化を抑制することにより、歯肉炎の発症が予防されおよび／または症状が改善される、［１］から［３］のいずれか一に記載の剤。
［５］  歯肉炎に伴う歯肉からの出血を予防および／または改善する、［１］から［４］のいずれか一に記載の剤。
［６］  歯肉炎に伴う歯肉組織中コラーゲンの消失を抑制する、［１］から［５］のいずれか一に記載の剤。
［７］歯肉炎の再発を予防する、［１］から［６］のいずれか一に記載の剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、歯肉への炎症細胞の浸潤を抑制し、歯肉の毛細血管係蹄の形態を回復し、および／または歯肉のコラーゲン繊維の産生を正常に促進することにより、歯肉炎の発症を予防し、および／または症状を改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、コラーゲン加水分解物を摂取させる前、および２ヶ月間摂取させた後の歯肉炎モデルの歯肉の毛細血管係蹄の画像である。コントロール群はコラーゲン加水分解物を摂取させなかった群であり、ＣＴＰ群はコラーゲン加水分解物を摂取させた群である。
【図２】図２は、歯肉中毛細血管係蹄の形態の初期値（投与開始前の形態）からの変化をスコア化したレーダーチャートである。
【図３】図３は、歯肉炎モデルの辺縁歯肉の代表的なエラスティカ・マッソン染色画像、および画像から炎症部位のみを抜き出した解析用画像である。
【図４】図４は、歯肉炎モデルの歯肉における膠原繊維（コラーゲン繊維）の面積の割合を示す。コントロール群はコラーゲン加水分解物を摂取させなかった群であり、ＣＴＰ群はコラーゲン加水分解物を摂取させた群である。
【図５】図５は、歯肉炎モデルの歯肉における、コラーゲン繊維における毛細血管領域の個数を示す。コントロール群はコラーゲン加水分解物を摂取させなかった群であり、ＣＴＰ群はコラーゲン加水分解物を摂取させた群である。
【図６】図６に、歯肉炎モデルの歯肉における、炎症組織中の溶血する血管の個数を示す。コントロール群はコラーゲン加水分解物を摂取させなかった群であり、ＣＴＰ群はコラーゲン加水分解物を摂取させた群である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下に記載する本発明の説明は、代表的な実施形態や具体例に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではない。なお、本明細書において「〜」を用いて表される数値範囲は「〜」の前後に記載される数値を下限値および上限値として含む範囲を意味する。本明細書中、コラーゲン加水分解のペプチド含有率（％）は、ＬＣ−ＭＳ法を用いて絶対検量線法にて求めた。
【００１５】
本発明は、コラーゲン加水分解物を含む、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤であって、前記コラーゲン加水分解物の平均分子量が３００〜９００である、剤を提供する。歯肉炎の発症を予防するとは、歯肉炎が顕在化する可能性を低減すること、および／または歯肉炎の発症を遅延させることを意味する。歯肉炎の症状を改善するとは、歯肉炎の症状を低減または除去することを意味する。
【００１６】
本明細書中「歯肉炎」は、歯肉に炎症がある状態を指し、歯と歯ぐきの境目が赤く腫れたり、触れると出血することもある。歯肉炎の歯ぐき（歯肉）が腫れて盛り上がると、歯肉溝が深くなる（仮性ポケット）。歯肉炎は、通常、歯の表面に沈着した歯垢中の歯周病原細菌により引き起こされる。さらに、歯肉炎がさらに進行すると歯周炎となる。歯肉炎は、歯ぐきの腫れや出血だけでなく、歯と歯ぐきの境目の部分が壊れて隙間が深くなり、歯周ポケット（真性ポケット）を形成する。プラークがさらにこの隙間に沿って侵入すると、根の先の方へとさらに破壊が進行する。
【００１７】
本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤に含有されるコラーゲン加水分解物は、特に製造方法が限定されるものではなく、例えば、タンパク質加水分解法、化学合成法、酵素法、発酵法などによって製造することができる。具体的には、ゼラチンまたはコラーゲンの酵素消化精製物であってもよいし、ゼラチンまたはコラーゲンの酵素消化精製物に化学合成したペプチドを添加したものであってよい。コラーゲン加水分解物は、例えば特許第３１４６２５１号公報に記載の方法で調製でき、ある程度精製したコラーゲンあるいは変性コラーゲン（ゼラチン）などを原材料として、プロテアーゼ、ペプチダーゼ等の酵素で加水分解することによって得られる。
【００１８】
本発明のコラーゲン加水分解物は、平均分子量３００〜９００を有することができる。平均分子量３００〜９００のコラーゲン加水分解物は、トリペプチド類及びジペプチド類を多く含み、これらが直接吸収、あるいは簡単な消化分解で吸収されるので、体内に取り入れられやすいという特徴を有する。コラーゲン加水分解物の平均分子量は、加水分解物処理に用いる酵素の種類、添加量、および／または反応時間を変えることにより、調整することができる。
【００１９】
本発明のコラーゲン加水分解物の平均分子量は、８５０以下、８００以下、７５０以下、７００以下、６５０以下、６００以下、５５０以下、５００以下または４５０以下であってもよい。さらに平均分子量の下限値は、３００以上、３５０以上、４００以上、４５０以上、５００以上または５５０以上であってもよい。
コラーゲン加水分解物の平均分子量（重量平均分子量値）は、標準品にＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐを加えた上で写真用ゼラチン試験法（ＰＡＧＩ法）第１０版に記載されている方法に沿って決定することが出来る。
【００２０】
本発明の実施形態の一つにおいて、本発明のコラーゲン加水分解物は分子量４００以下の低分子画分を２０質量％以上含むことができる。分子量４００以下の低分子画分は、主にトリペプチド類及びジペプチド類である。本発明のコラーゲン加水分解物は、分子量４００以下の低分子画分を２０質量％以上を含み、より好ましくは２５質量％以上、３０質量％以上、３５質量％以上、４０質量％以上、４５質量％以上、５０質量％以上含むことができる。コラーゲン加水分解物における分子量４００以下の低分子画分の含有率は、例えば２０〜８０質量％、２０〜７５質量％、２０〜７０質量％、２０〜６５質量％、２０〜６０質量％、２０〜５５質量％または２０〜５０質量％の範囲であってもよい。本発明のコラーゲン加水分解物は、分子量１５０〜４００の低分子画分を２０質量％以上を含み、より好ましくは２５質量％以上、３０質量％以上、３５質量％以上、４０質量％以上、４５質量％以上、５０質量％以上含むことができる。コラーゲン加水分解物における分子量１５０〜４００の低分子画分の含有率は、例えば２０〜８０質量％、２０〜７５質量％、２０〜７０質量％、２０〜６５質量％、２０〜６０質量％、２０〜５５質量％または２０〜５０質量％の範囲であってもよい。
【００２１】
コラーゲン加水分解物に含まれる各種ペプチドの含有率は、例えば、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）法により分析することができる。ＬＣ−ＭＳ法は、以下に記載の条件で実施することができる。装置としてＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＹＰＬＣ  Ｈ−Ｃｌａｓｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｗｉｔｈ  ＳＱ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ２（ウォーターズ社）、カラムとしてＡＣＣＱ−ＴＡＧ  ＵＬＴＡ  Ｃ１８（ウォーターズ社、直径２．１×１００ｍｍ、粒子径１．７μｍ）を用いることができる。溶媒Ａに０．１％ギ酸水溶液を、溶媒Ｂとして０．１％ギ酸を含む５０％アセトニトリル水溶液を用い、カラム温度４５℃の条件で０．６ｍＬ／ｍｉｎの速度で溶媒を流すことができる。グラジエント条件として、０〜５分まで溶媒Ａを１００％、５〜１０分まで溶媒Ｂを徐々に２５％まで上昇させることができる。これに０．１あるいは０．０２％で溶媒Ａに溶解したコラーゲン加水分解物水溶液を注入し、各トリペプチドの質量を検出し、それらの含有率を計算することで分析することができる。
【００２２】
コラーゲン加水分解物は、Ｉ型コラーゲンのペプチド結合をグリシンのアミノ末端で切断する細菌コラゲナーゼを用いて加水分解することによって得てもよい。コラーゲン加水分解物に含まれるアミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙからなるトリペプチドの種類は、加水分解の原料となるコラーゲンの種類や加水分解に使用するコラゲナーゼの種類や加水分解条件等により変化しうる。本発明のコラーゲン加水分解物は、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を、２０質量％以上を含み、より好ましくは２５質量％以上、３０質量％以上、３５質量％以上、４０質量％以上、４５質量％以上、５０質量％以上含むことができる。コラーゲン加水分解物中上記トリペプチドの含有率は、例えば２０〜８０質量％、２０〜７５質量％、２０〜７０質量％、２０〜６５質量％、２０〜６０質量％、２０〜５５質量％または２０〜５０質量％の範囲であってもよい。コラーゲン加水分解物中のトリペプチド含有率は、例えば特許第４０９９５４１号公報に記載の方法を用いて、高めることができる。
【００２３】
本発明の一態様では、トリペプチドのアミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙにおいて、Ｘはアミノ酸残基Ｐｒｏ又はＡｌａを示し、ＹはＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示すトリペプチドであってもよい。コラーゲンのアミノ酸組成は、グリシン（Ｇｌｙ）が全アミノ酸残基の約１／３を占め、次にプロリン（Ｐｒｏ）とアラニン（Ａｌａ）が多いため、上記アミノ酸配列の位置Ｘのアミノ酸残基は、プロリン（Ｐｒｏ）又はアラニン（Ａｌａ）であることが多い。
【００２４】
本発明のコラーゲン加水分解物は、トリペプチドＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｙはアミノ酸配列であり、ＹはＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を、１０質量％以上を含み、より好ましくは１５質量％以上、２０質量％以上、２５質量％以上、３０質量％以上、３５質量％以上、４０質量％以上含むことができる。コラーゲン加水分解物中上記トリペプチドの含有率は、例えば１０〜７０質量％、１０〜６５質量％、１０〜６０質量％、１０〜５５質量％または１０〜５０質量％の範囲であってもよい。
【００２５】
本発明のコラーゲン加水分解物は、例えば、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＡｌａおよびＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐなどのトリペプチド、並びにＰｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−ＡｌａおよびＣｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）などのジペプチドなどを含むことができるが、これらに限定されない。Ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）は、（以下ｃＧＰと記載する場合がある）は、グリシンとプロリンが縮合結合した構造を保有する環状のジペプチドである。
【００２６】
本発明の一態様では、本発明のコラーゲン加水分解物中、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＨｙｐおよびＧｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐの含有率は、それぞれ１から２０質量％であり、好ましくは２から１５質量％であり、より好ましくは３から１０質量％である。本発明の一態様では、本発明のコラーゲン加水分解物中、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＰｒｏおよびＣｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）の含有率は、それぞれ０．１から１０質量％であり、好ましくは０．２から８質量％であり、より好ましくは０．３から６質量％である。本発明の一態様では、本発明のコラーゲン加水分解物中、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＡｌａおよびＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐの含有率は、それぞれ０．０１から５質量％である。
【００２７】
コラーゲン加水分解物に含まれるトリペプチド又はジペプチドの同定は、特に限定されないが、例えば、ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して行うことができる。
【００２８】
本発明のコラーゲン加水分解物は、非抗原性および低アレルゲン性コラーゲン加水分解物であるが、さらに種々の方法による精製処理に供することもできる。（Shinmoto H. et al., 2001, Food Sci. Technol. Res., Vol 7, No. 4, 331-332）。
【００２９】
コラーゲン由来の配列を保有するトリペプチド類やジペプチド類を摂取した場合、トリペプチド類やジペプチド類が高い血中移行性を示すことに加えて、摂取されたトリペプチド類の消化分解により生成した代謝物ジペプチドも高濃度で血中に出現することが報告されている（Yamamoto S. et al., 2015, Bioscience,Biotechnology, and Biochemistry, Vol. 79, No. 12, 2026-2033; Yamamoto S. et al.,2016, Biol. Pharm. Bull. 39, 428-434; Sontakke S. B. et al., 2016, J. Agric. Food Chem. 64, 7127-7133）。すなわち、コラーゲン加水分解物を摂取すると、血中代謝物としてトリペプチド類及びジペプチド類が出現し、次にそれらが組織へと移行して生理活性を発揮することで薬理作用が現れることから、はじめからトリペプチド類などを含有するコラーゲン加水分解物では、トリペプチド類及びジペプチド類の吸収性がより向上することで、より高い薬理活性が得られると考えられる。
【００３０】
更には、平均分子量５０００のゼラチン加水分解物を摂取した場合、血中には多様なトリペプチド類、あるいはジペプチド類が代謝物として出現することが報告されている（Iwai K. et al., J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 6531-6536; Ichikawa S. et al., International Journal of Food Sciences and Nutrition, February 2010; 61(1): 52-60）。それらの代謝物はゼラチン加水分解物中の高分子画分のペプチドから生成したものであると考えられる。
【００３１】
本発明の実施形態の一つにおいて、本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、歯肉中毛細血管係蹄の拡張、屈曲および／またはねじれを予防および／または改善することにより、歯肉炎の発症を予防し、および／または症状を改善することができる。本明細書中、歯肉中毛細血管係蹄の拡張とは、毛細血管係蹄が太くなっていることを意味する。歯肉中毛細血管係蹄の拡張が予防されるとは、歯肉中の毛細血管係蹄が太くなりにくいことを意味する。歯肉中毛細血管係蹄の拡張が改善されるとは、細くなっていることを意味する。歯肉中毛細血管係蹄の屈曲とは、毛細血管が係蹄部以外の場所で折れ曲がった状態を指す。歯肉中毛細血管係蹄のねじれとは、屈曲が複数個所で連なって生じ、血管が左右に蛇行したり折れ曲がった状態を指す。本明細書中、歯肉中毛細血管係蹄の拡張、屈曲および／またはねじれは、毛細血管血流スコープを使用して、例えば１００倍から４００倍に拡大して、観察し、計測することができる。本明細書中、歯肉中毛細血管係蹄の拡張、屈曲および／またはねじれが予防および／または改善されていることは、限定されないが、例えばコラーゲン加水分解物の投与前後の歯肉中毛細血管係蹄を比較観察することによりまたは正常部位と歯肉炎発症部位の歯肉中毛細血管係蹄を比較観察することにより、判断することができる。
【００３２】
歯肉炎の代表的な所見は歯肉の発赤や腫脹、出血であるが、これは毛細血管形態そのものに変化が生じることによる。歯肉炎で最も多いプラーク性歯肉炎（単純性歯肉炎）を例に挙げると、はじめに炎症に伴って内縁上皮直下の細動静脈が拡張して血管の透過性が増し、炎症性細胞の組織内への浸潤が起こる。侵襲が長く続くと、細動脈血管への血流は開大したままとなり、細胞の代謝に直接かかわっている真性毛細血管や中心毛細血管への血流が阻害されてしまう。すると停止した循環を補完するために、内縁上皮下血管網の拡張した血管から新たな係蹄が生じる。そしてこの新生係蹄の先端は拡張、屈曲、ねじれを示す。さらに炎症が波及すると外縁上皮でも血流障害に伴う毛細血管係蹄の屈曲、蛇行、ねじれが生じる。係蹄の数も増加し、毛細血管の形態は健常の歯肉とは異なった状態へと変化する（野坂洋一郎. 歯肉の微小循環. 岩手医科大学歯学雑誌, 1978, 3.1: 40-53.）。これらの変化により歯肉に充血やうっ血が起こり、発赤や腫脹を呈する。しかも炎症部の血管は脆弱であるため、ブラッシングによる刺激で出血しやすくなる。
【００３３】
中村ら（中村治郎; 原耕二; 橋口精範. 妊婦歯肉における毛細管顕微鏡所見と歯肉嚢内滲出液の観察. 口腔病学会雑誌, 1965, 32.2: 201-208.）が歯肉炎を有する歯肉と正常歯肉の毛細血管係蹄を毛細管顕微鏡にて撮影し、太さ、長さ、単位面積中の係蹄数、吻合および屈曲の度合いと係蹄の配置の６項目を比較したところ、歯肉炎では、係蹄がより太い、より長い、係蹄数が多い、吻合や屈曲などの形態変化、係蹄の配置が不規則、という異常が高頻度で起きていた。さらに、毛細血管係蹄に強い異常があるほど出血量が増加する傾向が観られた。すなわち歯肉の出血傾向は、中村ら（1965, 上掲）の指標でも評価することができる。
【００３４】
後記する実施例に示すように、歯肉炎モデルのイヌに、本発明のコラーゲン加水分解物を２か月間投与したところ、投与しない群と比較して、毛細血管がより細く、短くなり、吻合や屈曲が消え、配置も適切となった。辺縁歯肉の組織染色画像観察では、本発明のコラーゲン加水分解物を投与した群では、投与しない群と比較して、炎症性細胞の浸潤がより少なく、溶血を示唆する領域が小さいことが観察された。この結果は、本発明のコラーゲン加水分解物が、歯肉中毛細血管係蹄の拡張、屈曲および／またはねじれを予防および／または改善することにより、歯肉のうっ血や充血を解消し、出血しにくい健常な歯肉に回復させる効果を有することを示唆する。
【００３５】
本発明の実施形態の一つにおいて、本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、歯肉組織中コラーゲンの産生を亢進し、且つコラーゲン繊維の過形成または瘢痕化を抑制することにより、歯肉炎の発症を予防し、および／または症状を改善することができる。本明細書中、コラーゲン繊維の過形成とは、コラーゲンが過剰に産生されることを意味し、具体的には、例えば、炎症性サイトカインの過剰な産生が起こり、炎症性サイトカインにより活性化された線維芽細胞によって、コラーゲンが過剰に産生される。炎症性サイトカインの過剰な産生は、例えば細菌由来の内毒素により起こるが、これに限定されない。本明細書中、瘢痕化とは、炎症を受けた歯肉組織が、肉芽組織の形成を経て、過剰な膠原線維が蓄積した状態で不完全に修復されることを意味する。
【００３６】
歯周病には感染源、炎症、血管の形態異常などコラーゲン繊維の消失以外にも多くの要素が関わることから、コラーゲン産生を促進させることだけで健常歯肉を回復することはできないと考えられる。さらに、コラーゲン産生の過剰な促進によるコラーゲンの過形成には注意が必要である。過形成により生じた組織は従来のコラーゲン線維の配列と異なった方向に形成され、その後瘢痕化するので、コラーゲン原繊維配列にはモザイク構造が生じる。瘢痕は血管も少なく、血流が悪い上、一見して健常であってもモザイク構造の隙間からの再感染が起こりやすく、歯肉炎が再発しやすい。
【００３７】
後記する実施例では、歯肉炎モデルのイヌに、本発明のコラーゲン加水分解物を２か月間投与したところ、投与しない群と比較して、辺縁歯肉の組織染色画像観察において、炎症性細胞の浸潤がより少なく、溶血を示唆する領域もほとんど観られず、膠原繊維が広く明瞭な領域として観察され、さらに膠原繊維の間には毛細血管が侵入している様子が観られた。これは、コラーゲン産生を促進して線維を回復させ、しかもコラーゲン繊維は瘢痕化せずに血行の良い正常な線維が再生されていることを示唆する。この結果は、本発明のコラーゲン加水分解物が、歯肉組織中コラーゲンの産生を亢進し、且つコラーゲン繊維の過形成または瘢痕化を抑制していることを示す。
【００３８】
後記する実施例では、歯肉炎モデルのイヌに、本発明のコラーゲン加水分解物を２か月間投与したところ、コラーゲン線維の間には毛細血管が配しており、瘢痕化することなく正常に回復することが示唆され、さらに、歯肉への炎症細胞の浸潤が抑制されており、歯肉の毛細血管係蹄の形態も回復していた。これらの結果は、コラーゲンペプチドの摂取が単純に歯肉のコラーゲン繊維の産生を促進するだけでなく、歯肉炎の病態を改善し、なおかつ再感染が起こりにくい健常な歯肉（コラーゲン繊維）の再構築に寄与することを示している。そのため歯肉炎の再発が予防できると考えられる。よって本発明の実施形態の一つにおいて、本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、歯肉炎の再発を予防する。また、健常な歯肉炎の再構築に寄与することにより、歯肉炎に伴う歯肉からの出血を予防および／または改善されることができる。よって、本発明の実施形態の一つにおいて、本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、歯肉炎に伴う歯肉からの出血を予防および／または改善することができる。
【００３９】
本発明の実施形態の一つにおいて、本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、歯肉炎に伴う歯肉組織中コラーゲンの消失を抑制することができる。歯肉炎の炎症部では、炎症と同時にコラーゲン繊維の破壊・減少が起こる。まず炎症により線維芽細胞からのコラーゲンの分泌は抑制される。そして、線維芽細胞自身とマクロファージが分泌するｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅがコラーゲン繊維を切断し、この断片を種々の分解酵素がさらに小さな断片やアミノ酸に分解する。さらに線維芽細胞とマクロファージはコラーゲン原繊維を貪食し、細胞内でも消化する（非特許文献１）。これらの作用によりコラーゲン繊維の緻密で規則的な配列が破壊されると、歯肉の機能は低下し細菌からの防御力が低下する。後記する実施例に示すように、歯肉炎モデルのイヌに、本発明のコラーゲン加水分解物を２か月間投与したところ、コラーゲン産生が促進され線維の回復がより進んでおり、しかもコラーゲン繊維は瘢痕化せずに血行の良い正常な線維が再生されていることが示唆された。さらに炎症部位からの血管の撤退が進み、炎症自体もほぼ収まっており、より回復が進んでいることが示唆された。
【００４０】
本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、種々の剤型とすることができる。例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳化剤等の液剤、凍結乾燥剤等が挙げられる。局所薬としては、塗布や外用剤や噴霧剤が挙げられる。低分子ペプチドは皮膚や粘膜から吸収されるためである。本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、コラーゲン加水分解物のほかに医薬として許容される添加物を含むことができる。医薬として許容される添加物は、例えば安定化剤、滑剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、ｐＨ調整剤、保存剤等である。
【００４１】
本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、平均分子量３００〜９００を有するコラーゲン加水分解物を、１日につき体重１ｋｇあたり１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜３００ｍｇ、１日１回又は数回に分けて投与又は摂取することができる。本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、分子量４００以下の低分子画分に相当のコラーゲン加水分解物を、１日につき体重１ｋｇあたり１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜３００ｍｇ、１日１回又は数回に分けて投与又は摂取することができる。投与量は、対象の年齢、体重、症状の違い、症状の程度、剤型等により適宜調節することができる。投与又は摂取の期間は、特に制限されないが、２週間以上であることが好ましく、１か月以上、または２か月以上であることがより好ましい。
【００４２】
本発明の歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤は、経口摂取可能な任意の形態、（例えば、溶液、懸濁液、粉末、固体成形物など）の食品に加工することができる。任意の形態に加工された食品は、そのまま摂取してもよいし、コーヒーなど嗜好飲料やヨーグルトなど乳製品などに混ぜて摂取することもできる。
【００４３】
食品の例としては、本発明を限定するものではないが、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤及びドリンク剤等のサプリメント、あるいは炭水化物類（パン、麺、米飯、餅など）、菓子類（クッキー、ゼリー、チョコレート、チューインガム、キャンディーなど）、乳製品（チーズ、ヨーグルト、バターなど）、粉末食品（粉末スープ、粉末ムース、粉末ゼリー、粉末甘味料）、栄養食、ダイエット食、スポーツ用栄養食や、飲料（果汁含有飲料、果汁ジュース、野菜ジュース、サイダー、ジンジャーエール、アイソトニック飲料、アミノ酸飲料、ゼリー飲料、コーヒー飲料、緑茶、紅茶、ウーロン茶、麦茶、乳飲料、乳酸菌飲料、ココア、ビール、発泡酒、第三のビール、ノンアルコール飲料、ビール風味飲料、リキュール、チューハイ、清酒、果実酒、蒸留酒）を挙げることができる。本発明の一態様において食品は、機能性表示食品又は特定保健用食品である。
【００４４】
また、本発明のコラーゲン加水分解物、あるいは本発明のコラーゲン加水分解物に含有されるトリペプチド類、ジペプチド類は生体構成成分であると共に、すでに長年の食経験があるコラーゲン加水分解物に含有されている成分であることから、安全性が高いと考えられる。
【００４５】
コラーゲンはグリシン（Ｇｌｙ）が３残基ごとに繰り返す配列であるので、トリペプチド代謝物としては、Ｇｌｙ−Ｘａａ−Ｙａａ、Ｘａａ−Ｙａａ−Ｇｌｙ、Ｙａａ−Ｇｌｙ−Ｙａａ（Ｘａａ、Ｙａａは任意のアミノ酸）といった配列が生成し、ジペプチド代謝物としてはＧｌｙ−Ｘａａ、Ｘａａ−Ｙａａ、Ｙａａ−Ｇｌｙといった配列が生成する。また、酵素で素材を低分子化することにより、はじめから上記の配列を含む素材も存在する。例えばコラーゲン・トリペプチド（ＣＴＰ）製品群であるＨＡＣＰ−５０、ＨＡＣＰ−０１、ＨＡＣＰ−ＴＦ、ＨＡＣＰ−ＣＦ（ゼライス株式会社）などは、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＨｙｐをはじめとするＧｌｙ−Ｘａａ−Ｙａａ配列のペプチドを合わせて５〜９０％、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙといったＧｌｙ−Ｘａａ、Ｘａａ−Ｙａａ、Ｙａａ−Ｇｌｙ配列を合わせて０．０１〜２％含む。そのほかの製品には、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｔｒｉｐｅｐ２０Ｓ（Ａｍｉｃｏｇｅｎ社）、ＧＦＦ−０１（ニッピ）、ＤＦＦ−０１（ニッピ）などがある。いずれの素材も単一の配列の低分子ペプチドのみを含有するということはなく、様々な配列のペプチド群を含有する。一般的にこれら低分子ペプチドの血中吸収性は優れており、血中濃度も摂取量依存的に上昇する。例えば、分子量４００以下の低分子ペプチドを５０％含有する素材と、分子量４００以下の低分子ペプチドをほとんど含まないコラーゲンペプチドを摂取したとき、両者の主要代謝物の血中濃度の差異は４〜５倍程度である（YAMAMOTO, Shoko, et al. Absorption and urinary excretion of peptides after collagen tripeptide ingestion in humans. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2016, 39.3: 428-434.）。
以上のように、コラーゲンを摂取すると、高分子ペプチドの消化、あるいは低分子ペプチドの直接移行によって、血中には様々な代謝物が生じる。後記する実施例の結果から、これらのペプチドの生理活性の総合力によって歯肉のホメオスタシスが正常化され、病態を改善させると考えられる。
【００４６】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除および置換を行うことができる。
【実施例】
【００４７】
＜実施例１＞
（１）コラーゲン加水分解物に含まれるペプチド分析
試験物質としてコラーゲン加水分解物「ＨＡＣＰ−５０」（ゼライス株式会社にて作成）を使用した。上記コラーゲン加水分解物の平均分子量は約６００である。
ＬＣ−ＭＳ法により、上記コラーゲン加水分解物に含まれるペプチドを分析した。分析は７ロットについて独立して行った。実験条件は以下のとおりである。装置としてＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＹＰＬＣ  Ｈ−Ｃｌａｓｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｗｉｔｈ  ＳＱ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ２（ウォーターズ社）、カラムとしてＡＣＣＱ−ＴＡＧ  ＵＬＴＡ  Ｃ１８（ウォーターズ社、直径２．１×１００ｍｍ、粒子径１．７μｍ）を用いた。溶媒Ａに０．１％ギ酸水溶液を、溶媒Ｂとして０．１％ギ酸を含む５０％アセトニトリル水溶液を用い、カラム温度４５℃の条件で０．６ｍＬ／ｍｉｎの速度で溶媒を流した。グラジエント条件として、０〜５分まで溶媒Ａを１００％、５〜１０分まで溶媒Ｂを徐々に２５％まで上昇させた。これに０．１あるいは０．０２％で溶媒Ａに溶解したコラーゲン加水分解物水溶液を注入し、各トリペプチドの質量を検出することで分析した。
【００４８】
ＬＣ−ＭＳ法により、表１に記載のトリペプチド類及びジペプチド類が検出された。表１の含量比（％）は、７ロットで観察された、コラーゲン加水分解物に対する各ペプチドの含量比の範囲である。
【表１】
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コラーゲン・トリペプチド（ＨＡＣＰ−５０）（ゼライス株式会社）は、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＨｙｐをはじめとするＧｌｙ−Ｘａａ−Ｙａａ配列のペプチドを合わせて５〜９０％、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−ＧｌｙといったＧｌｙ−Ｘａａ、Ｘａａ−Ｙａａ、Ｙａａ−Ｇｌｙ配列を合わせて０．０１〜２％含むことが示された。さらに、Ａｌａ−Ｈｙｐ−ＧｌｙといったＸａａ−Ｙａａ−Ｇｌｙ配列のペプチドを合わせて０．１〜０．４％含むことが示された。さらに、Ｇｌｙ−Ｘａａ配列の環状化体としてＣｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）を含むことが示された。
【００４９】
＜実施例２＞
歯肉炎モデルの作製：ビーグル犬８頭（３１〜３２ヶ月齢）に対し、上顎両側の犬歯、前歯と、下顎の両側犬歯（上下合わせて６歯）にフロスを巻き付け、スーパーボンドで固定した。このまま２か月間、軟食（Ｐｅｄｉｇｒｅｅ  成犬用  ビーフ、マースジャパンリミテッド、およびＨｉｌｌ‘ｓ  ＳＣＩＥＮＳ  ＤＩＥＴ  アダルト１歳〜６歳  成犬用  チキン、日本ヒルズ・コルゲート株式会社）を与えて飼育し、歯頚部の炎症を惹起させた。
【００５０】
コラーゲン・トリペプチド  タブレット（ゼライス株式会社）を動物に投与した。コラーゲン・トリペプチド  タブレット（ゼライス株式会社）は、コラーゲン加水分解物として、コラーゲン・トリペプチド（ＨＡＣＰ−５０）を含む。コラーゲン・トリペプチド  タブレット（ゼライス株式会社）を投与した群をＣＴＰ群と記載する。
【００５１】
ＣＴＰの投与：上記８頭のビーグル犬を２群に分け、一方をＣＴＰ群、もう一方をコントロール群とした。ＣＴＰ群にのみに、ＣＴＰを含む錠剤（コラーゲン・トリペプチド  タブレット、ゼライス株式会社）を毎日２か月間投与した。投与量はコラーゲンペプチドとして１６０ｍｇ／ｋｇ体重、（分子量４００以下の低分子画分として８０ｍｇ／ｋｇ体重）であった。なおＣＴＰ投与期間については両群とも固形餌（イヌ用 ＣＬＥＡ Ｄｏｇ Ｄｉｅｔ ＣＤ-５Ｍ（繁殖・飼育用）、日本クレア株式会社）とした。試験の全期間を通して、ブラッシング、スケーリングは実施しなかった。
【００５２】
１）毛細血管係蹄の形態の観察
中村ら（中村治郎; 原耕二; 橋口精範. 妊婦歯肉における毛細管顕微鏡所見と歯肉嚢内滲出液の観察. 口腔病学会雑誌, 1965, 32.2: 201-208.）に基づいて、毛細血管係蹄の形態を観察した。投与開始０および２ヶ月目に毛細血管血流スコープＧＯＫＯ  Ｂｓｃａｎ−Ｚ（ＧＯＫＯ株式会社）を用いて辺縁歯肉の毛細血管を倍率１０５倍で撮影した。投与開始時と投与２ヶ月目の形態の６項目、太さ、長さ、数、吻合、屈曲および配置の変化を、改善：１点、変化なし：０点、悪化：−１点としてスコア化した。具体的には、太さについて、太くなると悪化、細くなると改善と判断し、長さについて、長くなると悪化、短くなると改善と判断した。数については、単位面積中の血管数が減ると悪化、増えると改善と判断した。吻合については、単位面積中の吻合部が増えると悪化、減ると改善と判断し、屈曲については、単位面積中の屈曲が増えると悪化、減ると改善と判断し、配置については血管の配置が規則的でないと悪化、規則的となると改善と判断した。配置の判断について、実際の観察では規則的な場合と不規則な場合が非常に明確であった。特に、各血管のループ間距離を観察し、距離が均等でない場合には不規則、均等である場合には規則的と判断した。これらの６項目は、画像解析・計測ソフトウェア  ＷｉｎＲＯＯＦ２０１３（三谷商事株式会社）を用いて計測した。
【００５３】
２）辺縁歯肉の組織染色画像の評価
２か月間の投与ならびに測定の終了後、麻酔下にて辺縁歯肉を切除して回収し、ホルマリン溶液に含侵した後、辺縁歯肉の先端部の組織の切片プレパラートを作成し、これをエラスティカ・マッソン染色に供した。染色後の切片プレパラートを顕微鏡下で撮影し、歯肉の状態を目視で観察した。さらに、画像から炎症部位のみを抜き出したのち、画像解析・計測ソフトウェア  ＷｉｎＲＯＯＦ２０１３（三谷商事株式会社）にて炎症組織総面積に対する膠原繊維（コラーゲン繊維）面積の比率（％）を算出した。また、膠原繊維の血行を評価するため、膠原繊維中の毛細血管断面の個数をカウントした。炎症部位の充血の状態を評価するため、赤血球が集合した１０×２０μｍ以上のサイズの領域の個数をカウントした。
【００５４】
結果
１）毛細血管係蹄の形態観察の結果と考察
摂取０および２ヶ月目の代表的な毛細血管係蹄の画像を図１に示した。図１より、コントロール群では、２ヶ月間の間に毛細血管がより太く、長く、数も多くなり、吻合が増え、屈曲して蛇行やねじれを生じ、配置が乱れた様子が観察された。それに対しＣＴＰ群では、毛細血管がより細く、短くなり、吻合や屈曲が消え、配置も適切となった様子が観察された。
形態の初期値（投与開始前の形態）からの変化をスコア化した結果を表２に示し、さらにレーダーチャートとして図２に示す。
【表２】
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コントロール群では６項目全てで悪化しており、チャートは初期値を示す０ポイントよりも小さい範囲円を描いた。それに対しＣＴＰ群では、「数」を除いた５つの項目において現状維持以上の効果が観られ、コントロール群よりも顕著に大きい円を描いた。毛細血管の形態は歯肉炎の出血傾向を反映するので、本結果は、ＣＴＰの投与によって異常な毛細血管の形成の進行が抑制され、歯肉のうっ血や充血が解消し、出血しにくい健常な歯肉に回復していることを示唆する。
ＣＴＰ群の太さの項目が改善傾向を示していることから、拡張の予防や改善が生じることが示唆される。さらに、長さ、吻合および屈曲の項目が改善傾向の改善度から、血管の屈曲によるねじれの予防や改善が生じることが示唆される。さらに、全ての項目の総合点が改善していることは、ＣＴＰの投与によって異常な毛細血管の形成の進行が抑制され、それによって歯肉のうっ血や充血が解消し、出血しにくい健常な歯肉に回復していることを示唆する。
【００５５】
２）辺縁歯肉の組織染色画像の結果と考察
図３に、辺縁歯肉の代表的なエラスティカ・マッソン染色画像、ならびに画像から炎症部位のみを抜き出した解析用画像を示した。コントロール群では炎症性細胞の強い浸潤と、溶血を示唆する赤血球の集まった領域が多数観られた。膠原繊維は炎症の隙間にごく細い帯状に存在するのみであった。一方のＣＴＰ群は、炎症性細胞の浸潤がより少なく、溶血を示唆する領域もほとんど観られず、膠原繊維が広く明瞭な領域として観察された。さらに膠原繊維の間には毛細血管が侵入している様子が観られた。図４に、膠原繊維（コラーゲン繊維）の面積の割合を、図５にコラーゲン繊維における毛細血管領域の個数を、さらに図６には、炎症組織中の溶血する血管の個数を示した。
【００５６】
これらの結果によると、コントロール群では未だコラーゲン繊維が退縮した状態であり、炎症に伴う脆弱な新生血管が存在し炎症部位に炎症性細胞が供給され続けていると共に溶血が起こりやすい状態であるのに対し、ＣＴＰ群ではコラーゲン産生が促進され線維の回復がより進んでおり、しかもコラーゲン繊維は瘢痕化せずに血行の良い正常な線維が再生されていることが示唆された。さらに炎症部位からの血管の撤退が進み、炎症自体もほぼ収まっており、より回復が進んでいることが示唆された。
【００５７】
上記試験では試験期間を通してブラッシング、スケーリングなどの歯科保健的処置をしていないにも関わらず上記のような回復が観られた。すなわちコラーゲンペプチドの摂取は歯科保健行動の差異、体調・体質による口腔環境の悪化のしやすさから歯肉炎を予防や改善する有力な手段であると言える。
【要約】
【課題】本発明の課題は、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤を提供することである。
【解決手段】本発明によれば、コラーゲン加水分解物を含む、歯肉炎の発症予防剤および／または症状改善剤であって、前記コラーゲン加水分解物の平均分子量が３００〜９００である、剤が提供される。
【選択図】図２【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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