(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｉ）を有する化合物。
【化１】
0006940201.tif 000007
【請求項２】
式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応させて、前記式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
【化２】
0006940201.tif 000008
【請求項３】
前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、
前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物を、１：１〜１：１．３のモル比で反応容器中に入れる工程と、
有機溶媒および触媒量のＥＤＣを加えて、反応混合物を得る工程と、
前記反応混合物を６０〜９０℃で４〜８時間加熱する工程と、
前記反応混合物を濃縮して粗生成物を得る工程と、
溶離剤として石油エーテルおよび酢酸エチルを用いてシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラム上で前記粗生成物を精製して前記式（Ｉ）の化合物を得る工程と、を含む請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記有機溶媒はトルエン、テトラヒドロフランまたはアセトニトリルである、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比は１：１である、前記反応混合物を８０℃で加熱する、前記反応混合物を７時間加熱する、および、前記溶離剤は石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、
前記式（ＩＩ）の化合物、触媒、およびイオン性液体を窒素雰囲気下で反応容器中に入れる工程であって、前記触媒は１２−モリブド珪酸水和物（Ｈ６Ｍｏ１２Ｏ４１Ｓｉ）である、工程と、
前記式（ＩＩＩ）の化合物を前記反応容器に加えて反応混合物を形成する工程と、
前記反応混合物を３０〜６０℃で５〜１２時間加熱する工程と、
前記反応混合物を分液漏斗中に入れ、粗生成物を分離する工程と、
メタノール中で再結晶して前記粗生成物を精製し、前記式（Ｉ）の化合物を得る工程と、
前記イオン性液体をリサイクルする工程と、を含む請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記イオン性液体は１−ブチル−３−メチルイミダゾリウムテトラフルオロホウ酸塩（［ＢＭＩＭ］［ＢＦ４］）である、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物は１：１〜１：１．３のモル比を有する、前記反応混合物を２５℃で加熱する、および、前記反応混合物を８時間加熱する、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は食品化学、具体的にはヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステルおよびその調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
世界の健康調査では、心血管疾患、癌、糖尿病が人間の生命を脅かす三大疾患となっていることが示されている。複数の研究により、酸化ストレスが心血管疾患、癌およびアルツハイマー病の主な原因であることが示されている。酸化ストレスは身体が様々な有害な刺激を受けたときに、身体が非常に多くの高活性分子フリーラジカルを生成し、多数のフリーラジカルを蓄積し、酸化系と抗酸化系との間の不均衡をもたらすことを意味する。抗酸化剤および抗酸化機能性食品はフリーラジカルの酸化を効果的に抑制することができ、したがって、フリーラジカルに関連する様々な疾患の発生を効果的に防止することができる。しかしながら、ｔｅｒｔ−ブチルｐ−ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）およびジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）のような伝統的な合成酸化防止剤は潜在的に有毒であり、ヒトの健康に有害であり得る。したがって、新規の強力で安全な抗酸化剤が必要とされている。
【０００３】
ヒドロキシチロソールは種々の生物学的および薬理学的活性を有し、オリーブ油およびオリーブ油加工からの廃水に由来し得る天然ポリフェノール（式（ＩＩ）の化合物）の一種である。それは食品添加物として使用される。
【０００４】
ウルソデオキシコール酸（式（ＩＩＩ）の化合物）は、熊胆に由来する天然胆汁酸の単離物に対する化学物質である。これは、ケノデオキシコール酸のジアステレオマーである。その結石溶解効果、治癒効果はケノデオキシコール酸と同様であるが、治療経過は短く投与量も少ない。コレステロール結石、原発性胆汁性肝硬変、慢性肝炎、胆汁逆流性胃炎の治療や、肝移植の急性拒絶反応や反応の予防に用いることができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明では、ヒドロキシチロソールによりウルソデオキシコール酸を改変して、ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステルを得る。このエステルは優れた抗酸化活性を有し、抗酸化健康製品の分野において高い医学的研究および応用価値を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の概要
一実施形態では、本発明は、下記の式（Ｉ）を有する化合物を提供する。
【化１】
0006940201.tif 000002
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製する方法を提供する。この方法は、式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応させて前記式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む。
【化２】
0006940201.tif 000003
【０００８】
別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物を、１：１〜１：１．３のモル比で、反応容器中に入れる工程と、有機溶媒および触媒量のＥＤＣを加えて反応混合物を得る工程と、前記反応混合物を６０〜９０℃で４〜８時間加熱する工程と、前記反応混合物を濃縮して粗生成物を得る工程と、前記粗生成物を、溶離剤として石油エーテルおよび酢酸エチルを用いてシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラムで精製して、前記式（Ｉ）の化合物を得る工程と、を含む。
【０００９】
別の実施形態では、前記有機溶媒は、トルエン、テトラヒドロフランまたはアセトニトリルである。
【００１０】
別の実施形態では、前記有機溶媒はアセトニトリルである。
【００１１】
別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比は１：１．１である。
【００１２】
別の実施形態では、前記反応混合物を８０℃で加熱する。
【００１３】
別の実施形態では、前記反応混合物を７時間加熱する。
【００１４】
別の実施形態では、前記溶離剤は石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０である。
【００１５】
別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、前記式（ＩＩ）の化合物、触媒、およびイオン性液体を窒素雰囲気下で反応容器中に入れる工程であって、前記触媒は１２−モリブド珪酸水和物（Ｈ６Ｍｏ１２Ｏ４１Ｓｉ）である工程と、前記式（ＩＩＩ）の化合物を前記反応容器に加えて反応混合物を形成する工程と、前記反応混合物を３０〜６０℃で５〜１２時間加熱する工程と、前記反応混合物を分液漏斗中に入れて粗生成物を分離する工程と、メタノール中での再結晶によって前記粗生成物を精製して式（Ｉ）の化合物を得る工程と、前記イオン性液体をリサイクルする工程と、を含む。
【００１６】
別の実施形態では、前記イオン性液体は１−ブチル−３−メチルイミダゾリウムテトラフルオロホウ酸塩（［ＢＭＩＭ］［ＢＦ４］）である。
【００１７】
別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物および前記（ＩＩＩ）の化合物は、１：１〜１：１．３のモル比を有する。
【００１８】
別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比は１：１．１である。
【００１９】
別の実施形態では、前記反応混合物を２５℃で加熱する。
【００２０】
別の実施形態では、前記反応混合物を８時間加熱する。
【００２１】
前述した一般的な説明と、下記の詳細な説明とは、どちらも例示的および説明的であり、特許請求される本発明のさらなる説明を提供するように意図されていることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
本発明のさらなる理解を提供するために含まれ、本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は本発明の実施形態を示し、説明と共に本発明の原理を説明するのに役立つ。
【図１】図１は、様々な濃度での式（Ｉ）の化合物および対照溶液の消去活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
図示の実施形態の詳細な説明
次に、本発明の実施形態を詳細に参照し、その例を添付の図面に示す。下記の実施例は本発明を説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００２４】
実施例１
（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエート（式（Ｉ）の化合物）の調製
【００２５】
２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソールおよび９５．８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）を、窒素雰囲気下で５０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸を９０ｍＬのアセトニトリルに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、８０℃まで昇温し、７時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水中で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、溶離剤として石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、２１０．９ｍｇの表題化合物を収率７９．８５％で得た。
【００２６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：６．８６（１Ｈ、ｓ）、６．６６（１Ｈ、ｓ）、６．６５（１Ｈ、ｓ）、５．０８（２Ｈ、ｓ）、４．２１（２Ｈ、ｔ）、３．４２（２Ｈ，ｄ）３．１３（２Ｈ、ｓ）、２．９０（２Ｈ、ｔ）、２．１５（２Ｈ、ｔ）、１．８１（２Ｈ、ｔ）、１．６０〜１．３１（１６Ｈ、ｔ）、１．３１〜１．０６（６Ｈ、ｓ）、１．０６（６Ｈ、ｓ）、１．００（３Ｈ、ｄ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１７５．３、１４５．３、１４３．７、１３０．６、１１９．８、１１６．７、７０．２、６９．９、６３．０、５６．３、４０．４、３９．２、３８．１、３５．２、３１．２、２８．５、２３．７、１８．７、１２．４。
【００２７】
実施例２
（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００２８】
２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソールおよび９５．８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸を９０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、６０℃まで昇温し、８時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水中で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、溶離剤として石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、２０７．５ｍｇの表題化合物を収率７８．５５％で得た。
【００２９】
実施例３
（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００３０】
２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソールおよび９５．８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸を９０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、分液漏斗で反応混合物に徐々に滴下した。滴下終了後、８０℃まで昇温し、４時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水中で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、溶離剤として石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、１９１．３ｍｇの表題化合物を収率７２．４３％で得た。
【００３１】
実施例４
（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００３２】
２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソールおよび９５．８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のＥＤＣを５０ｍＬのトルエンに溶解し、窒素ガスを加えた。２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸を９０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗で反応液に徐々に滴下した。滴下終了後、７５℃まで昇温し、５時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水洗し、酢酸エチルで抽出、乾燥、濃縮し、粗ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体を得た。さらに、粗生成物を、溶離剤として石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって吸着精製し、溶離剤を減圧濃縮して乾燥し、ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体を得た。酸エステル誘導体は１８１．８ｍｇであり、総収率は６８．８３％であった。
【００３３】
実施例５
化合物（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００３４】
２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソールおよび９５．８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸を９０ｍＬのアセトニトリルに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、７０℃まで昇温し、６時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水中で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、溶離剤として石油エーテル：酢酸エチル＝１：６を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、１９６．９ｍｇの表題化合物を収率７４．５３％で得た。
【００３５】
実施例６
（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００３６】
２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソールおよび９５．８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸を９０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、分液漏斗で反応混合物に徐々に滴下した。滴下終了後、５０℃まで昇温し、７時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水中で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、溶離剤として石油エーテル：酢酸エチル＝１：６を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、１６９．５ｍｇの表題化合物を収率６４．１８％で得た。
【００３７】
実施例７
化合物（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００３８】
１００ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソール、２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸、９．２ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）のモリブド珪酸を５０ｍＬの１−エチル−３−メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホスフェートに溶解し、窒素ガスを加えた。完全に溶解した後、３０℃に昇温し、１０時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。反応混合物系を層に分離させて、粗ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体を得た。粗生成物を５０ｍＬのメタノールで再結晶し、乾燥させてヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体を得た。酸エステル誘導体は２３３．０ｍｇであり、総収率は８８．２１％であった。
【００３９】
実施例８
（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシフェネチル４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−８，１０，１３−トリメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタノエートの調製
【００４０】
１００ｍＬの三つ口フラスコ中で、７７．０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のヒドロキシチロソール、２１５．９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ）のウルソデオキシコール酸、９．２ｍｇ（０．００５ｍｍｏｌ）のモリブド珪酸を５０ｍＬの１−エチル−３−メチルイミダゾリウムヘキサフルオロホスフェートに溶解し、窒素ガスを加えた。完全に溶解した後、６０℃に昇温し、５時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。反応混合物系を層に分離させて、粗ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体を得た。粗生成物を５０ｍＬのメタノールで再結晶し、乾燥させてヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体を得た。酸エステル誘導体は２１５．５ｍｇであり、総収率は８１．５８％であった。
【００４１】
実施例９
ＤＰＰＨラジカル消去活性アッセイにより測定したヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体の抗酸化活性
【００４２】
２，２‐ジフェニル‐１‐ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）は安定な有機ラジカルからなる有機化合物である。ＤＰＰＨ分子では、多重電子求引性の−ＮＯ２とベンゼン環の大きなπ結合の存在により、窒素フリーラジカルが安定化する。そのメタノール溶液は紫色であり、５１７ｎｍに最大吸収ピークを有する。酸化防止剤の添加後、ＤＰＰＨは自由電子と対になる電子を捕獲し、紫色は退色し、黄色の物質に変わる。５１７ｎｍでの吸収は消失し、退色の程度は、それが捕獲する電子の数に定量的に関連する。この原理に基づいて、分光光度計を用いてＤＰＰＨラジカルおよび試料溶液の吸光度の変化を検出し、水素原子を提供しフリーラジカルを消去する試料の能力を測定することができる。
【００４３】
ＤＰＰＨ溶液の調製：
２，２−ジフェニル−１−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）の正確な量を測定し、トルエンに溶解して、０．２ｍｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ溶液を調製し、暗所にて０℃で保存する。
【００４４】
試験溶液の調製：
Ｖｃ（ビタミンＣ、陽性対照）、ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体（試料）、ヒドロキシチロソール（対照）およびウルソデオキシコール酸（対照）。試料溶液をトルエンで勾配希釈し、一定量のトルエンで３組の対照を別々に試験管に溶解し、試料と同じ濃度勾配を調製した。対応する３群の対照溶液を得た（勾配設定を表１に示す）。
【００４５】
【表１】
0006940201.tif 000004
【００４６】
具体的な工程：
試料液吸光度測定：
試料溶液（表１：Ｖｃ、Ａ、Ｂ、Ｃ）２ｍＬをとり、２×１０−４ｍｏＬ／Ｌの濃度のＤＰＰＨ溶液２ｍＬを加え、室温で３０分間暗所で混合して反応させ、トルエンでゼロに調整し、５１７ｎｍで測定する。吸光度Ａｉは、２ｍＬの試料溶液と混合した２ｍＬのトルエンの吸光度Ａｊと、２ｍＬのトルエンと混合した２ｍＬのＤＰＰＨ溶液の吸光度Ａｏとを同時に測定した（実験結果を表２に示す）。
【００４７】
【表２】
0006940201.tif 000005
【００４８】
クリアランス計算：クリアランス率（％）＝［１−（Ａｉ−Ａｊ）／Ａｏ］×１００％
【００４９】
【表３】
0006940201.tif 000006
【００５０】
図１および表１〜３の実験結果によれば、ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体（Ａ）の抗酸化活性は濃度依存的な関係を示し、ＤＰＰＨラジカルに対する化合物Ａの消去能力は濃度の増加と共に増加した。測定した濃度範囲において、ＤＰＰＨラジカルの最高消去率は９０．１１％であった。同時に、陽性対照Ｖｃ群と比較して、ヒドロキシチロソールウルソデオキシコール酸エステル誘導体（Ａ）の消去能力は弱かった。しかしながら、それは依然として明らかなクリアランス能力を有する。ヒドロキシチロソール（Ｂ）およびウルソデオキシコール酸（Ｃ）単独で処理された対照群と比較して、ＤＰＰＨフリーラジカルを消去するヒドロキシカゼオール（caseol）ウルソデオキシコール酸の誘導体である（Ａ）の消去能力は、同じ濃度でほとんどより良好であった。高濃度での抗酸化活性は、ヒドロキシチロソール（Ｂ）対照群およびウルソデオキシコール酸（Ｃ）対照群よりはるかに高かった。上記の実験結果は、化合物が優れた抗酸化活性を有し、および良好な適用見通しを有することを証明する。
【要約】      （修正有）【課題】フリーラジカルに関連する様々な疾患の発生を効果的に防止することが可能な、新規の強力で安全な抗酸化剤、及びその調製方法を提供する。【解決手段】下記式（Ｉ）で表される化合物、及びウルソデオキシコール酸とヒドロキシチロソールを反応させる工程を含む、前記式（Ｉ）で表される化合物の調製方法を提供する。0006940201.tif 000009【選択図】なし【図１】
0006940201.tif 000010