(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化３８】
0006974487.tif 000043
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ３〜６シクロアルキルから選択され、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２であり、
ここで、
Ｒ２は、−ＮＲ１３Ｒ１４であり、ここで、
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、４員ヘテロシクリルを形成し、ここで、前記ヘテロシクリルは、−ＮＲ５Ｒ６およびＲ７で置換されていてもよく、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、あるいはＲ５およびＲ６は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、５または６員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７は、１個の窒素原子を含む５または６員ヘテロシクリルで置換されていてもよいＣ１〜３アルキルである］
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ５およびＲ６は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、酸素原子を含む５または６員ヘテロシクリルを形成する、請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１が、水素またはＣ１〜３アルキルである、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ１３およびＲ１４が、それらが結合した前記窒素原子と一緒になって、４員ヘテロシクリルを形成し、ここで、前記ヘテロシクリルは、−ＮＲ５Ｒ６およびＲ７で置換されていてもよく、そして
Ｒ５およびＲ６が、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、あるいはＲ５およびＲ６が、それらが結合した前記窒素原子と一緒になって、５または６員ヘテロシクリルを形成し、そして
Ｒ７が、ピロリジニルで置換されていてもよいＣ１〜３アルキルである、
請求項３に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
式（ＩＩａ）の化合物：
【化３９】
0006974487.tif 000044
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルであり、
ここで、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＲ５およびＲ６は、一緒になって、−（ＣＨ２）４〜５−を形成し、Ｒ７は、水素またはＣ１〜３アルキルである］
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ５およびＲ６が、Ｃ１〜３アルキルである、請求項５に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
前記化合物が、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
前記化合物が、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
前記化合物が、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
およびその薬学的に許容される塩から選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
式
【化４０】
0006974487.tif 000045
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
式
【化４１】
0006974487.tif 000046
の化合物。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１３】
式（ＩＩａ）の化合物：
【化４２】
0006974487.tif 000047
［式中、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、請求項５において定義されている通りである］、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、式１の化合物：
【化４３】
0006974487.tif 000048
を、式２ｂの化合物：
【化４４】
0006974487.tif 000049
と反応させて、式（ＩＩａ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供するステップを含む、方法。
【請求項１４】
哺乳動物における呼吸器疾患の処置において使用するための組成物であって、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物。
【請求項１５】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記呼吸器疾患が、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺移植片対宿主病または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
哺乳動物における肺移植拒絶反応の処置において使用するための組成物であって、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物。
【請求項１９】
前記肺移植拒絶反応が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶反応、リンパ球性細気管支炎または慢性肺同種移植片機能不全である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記肺移植拒絶反応が、急性肺移植拒絶反応である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２１】
前記肺移植拒絶反応が、慢性肺同種移植片機能不全である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２２】
前記肺移植拒絶反応が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全または好中球性同種移植片機能不全である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２３】
哺乳動物における呼吸器疾患の処置用医薬の製造のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項２４】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記呼吸器疾患が、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺移植片対宿主病または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
哺乳動物における肺移植拒絶反応の処置用医薬の製造のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項２８】
前記肺移植拒絶反応が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶反応、リンパ球性細気管支炎または慢性肺同種移植片機能不全である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記肺移植拒絶反応が、急性肺移植拒絶反応である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３０】
前記肺移植拒絶反応が、慢性肺同種移植片機能不全である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３１】
前記肺移植拒絶反応が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全または好中球性同種移植片機能不全である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３２】
哺乳動物における呼吸器疾患を処置するための医薬組成物であって、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項３３】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記呼吸器疾患が、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺移植片対宿主病または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
哺乳動物における肺移植拒絶反応を処置するための医薬組成物であって、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項３７】
前記肺移植拒絶反応が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶反応、リンパ球性細気管支炎または慢性肺同種移植片機能不全である、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記肺移植拒絶反応が、急性肺移植拒絶反応である、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記肺移植拒絶反応が、慢性肺同種移植片機能不全である、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記肺移植拒絶反応が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全または好中球性同種移植片機能不全である、請求項３６に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤として有用な化合物を対象にする。本発明は、そのような化合物を含む医薬組成物、そのような化合物を使用して呼吸器疾患を処置する方法、ならびにそのような化合物を調製するために有用なプロセスおよび中間体も対象にする。
【背景技術】
【０００２】
技術水準
喘息は、予防も治癒もない、気道の慢性疾患である。該疾患は、炎症、線維症、過敏応答性および気道のリモデリングを特徴とし、これらはすべて、気流制限に寄与する。世界中で推定３億人が喘息に罹患しており、喘息を持つ人々の数は、２０２５年までに１億人超増加するであろうと推定される。アメリカ合衆国において、喘息は、人口の約６％から８％を悩ませ、該国における最も一般的な慢性疾患の１つとなっている。ほとんどの患者は、ロイコトリエン修飾因子および／または長時間作用型ベータアゴニストと組み合わせられてよい吸入コルチコステロイドの使用により、喘息症状の制御を実現することができるが、疾患が従来の療法によって制御されない重症喘息を持つ患者のサブセットが残る。重症持続型喘息は、高用量の吸入コルチコステロイドで制御されないままである疾患として定義される。重症喘息は、全喘息罹患者のおよそ５％を占めると推定されるが、罹患率および死亡率の高いリスクを有し、喘息の中での医療資源利用の不均衡な配分の原因である。これらの患者を処置するための新規療法が依然として必要である。
【０００３】
サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカインおよび腫瘍壊死因子を含む細胞間シグナル伝達分子である。サイトカインは、通常の細胞増殖および免疫調節のために重大であるだけでなく、免疫媒介性疾患を推進し、悪性細胞の増殖にも寄与する。多くのサイトカインのレベル上昇は、喘息の炎症の病理学に関係するとされてきた。例えば、インターロイキン（ＩＬ）−５および１３を標的とする抗体ベース療法は、重症喘息患者のサブセットにおいて臨床的利益を提供することが示されている。喘息の炎症に関係するサイトカインの中でも、多くは、チロシンキナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）に依存するシグナル伝達経路を介して作用し、これは、転写因子のシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）ファミリーを介してシグナル伝達する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する、喘息の炎症に関係するサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−２７、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含む。
【０００４】
ＪＡＫファミリーは、４つのメンバー、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）を含む。サイトカインのＪＡＫ依存性サイトカイン受容体との結合は、ＪＡＫキナーゼ上のチロシン残基のリン酸化をもたらす受容体二量体化を誘発し、ＪＡＫ活性化を達成する。リン酸化ＪＡＫは、今度は、種々のＳＴＡＴタンパク質と結合してリン酸化し、これが、二量体化し、細胞核に内在化し、遺伝子転写を直接的に変調し、数ある効果の中でも、炎症性疾患に関連する下流効果につながる。ＪＡＫは通常、ホモ二量体またはヘテロ二量体として対になってサイトカイン受容体と会合する。特異的なサイトカインは、特異的なＪＡＫ対合に関連する。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーのそれぞれは、喘息の炎症に関連するサイトカインのうちの少なくとも１つのシグナル伝達に関係する。結果として、ＪＡＫファミリーのすべてのメンバーに対して汎活性を持つ化学阻害剤は、重症喘息に寄与する広範囲の炎症促進経路を変調することができる。
【０００５】
しかしながら、そのような阻害剤の幅広い抗炎症効果は、正常な免疫細胞機能を抑制することができ、潜在的に、感染症のリスクの増大につながる。感染症リスクの増大の証拠は、関節リウマチの処置のために経口的に投薬されるＪＡＫ阻害剤トファシチニブで観察されている。喘息において、炎症は、呼吸器官に局在化される。気道の炎症は、喘息に加えて、他の呼吸器疾患の特徴である。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎およびサルコイドーシスも、病態生理学がＪＡＫシグナル伝達サイトカインに関連していると考えられる呼吸器官疾患である。吸入による肺へのＪＡＫ阻害剤の局所投与は、強力な抗サイトカイン剤を作用部位へ直接的に送達し、全身曝露を限定し、したがって、有害な全身免疫抑制の潜在性を限定することによって、治療的に効果的である潜在性を提供する。呼吸器疾患の処置のための肺への局所投与に好適である、強力なＪＡＫ阻害剤が依然として必要である。
【０００６】
ＪＡＫシグナル伝達サイトカインは、多くの免疫プロセスの中核をなす免疫細胞のサブタイプであるＴ細胞の活性化においても主要な役割を果たす。病理学的Ｔ細胞活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において重大である。自己反応性Ｔ細胞は、閉塞性細気管支炎器質化肺炎（ＣＯＳとも称される）において役割を果たす。ＣＯＳと同様に、肺移植拒絶反応の病因は、移植ドナー肺によるレシピエントＴ細胞の異常なＴ細胞活性化と連関している。肺移植拒絶反応は、初期に原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶反応（ＡＲ）もしくはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）として出現し得るか、または肺移植数年後に慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）として出現し得る。ＣＬＡＤは、以前は閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として公知であったが、現在は、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）および好中球性同種移植片機能不全を含めた、異なる病理学的徴候を有し得る症候群とみなされている。慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）は、移植肺に機能性を漸進的に失わせることから、肺移植レシピエントの長期管理における主要課題である（Gauthierら、Curr  Transplant  Rep.、２０１６年、３巻（３号）、１８５〜１９１頁）。ＣＬＡＤは、処置に対して応答性が乏しく、したがって、この状態を予防するまたは処置することができる有効な化合物が依然として必要である。ＩＦＮγおよびＩＬ−５等のいくつかのＪＡＫ依存性サイトカインは、ＣＬＡＤおよび肺移植拒絶反応において上方調節される（Berasteguiら、Clin  Transplant.、２０１７年、３１巻、ｅ１２８９８）。その上、ＪＡＫ依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にあるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０等のＣＸＣＲ３ケモカインの高い肺レベルは、肺移植患者におけるより悪い転帰と連関している（Shinoら、PLOS  One、２０１７年、１２巻（７号）、ｅ０１８０２８１）。全身性ＪＡＫ阻害は、腎移植拒絶反応において有効であることが示されている（Vicentiら、American  Journal  of  Transplantation、２０１２年、１２巻、２４４６〜５６頁）。したがって、ＪＡＫ阻害剤は、肺移植拒絶反応およびＣＬＡＤを処置するまたは予防する際に有効である潜在性を有する。肺移植拒絶反応の基礎として記述されているのと同様のＴ細胞活性化事象も、造血幹細胞移植後に出現することができる肺移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の主な推進力とみなされる。ＣＬＡＤと同様に、肺ＧＶＨＤは、極めて乏しい転帰を持つ慢性進行状態であり、処置は現在のところ承認されていない。サルベージ療法として全身性ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを受けた、ステロイド不応性急性または慢性ＧＶＨＤを持つ９５人の患者の遡及的な多施設調査研究は、肺ＧＶＨＤを持つ人々を含む大多数の患者におけるルキソリチニブに対する完全または部分的な応答を実証した（Zeiserら、Leukemia、２０１５年、２９巻、１０号、２０６２〜６８頁）。全身性ＪＡＫ阻害は、重篤な有害事象および小さな治療指数に関連するため、肺移植拒絶反応または肺ＧＶＨＤを予防するおよび／または処置するために、吸入肺に向けられた非全身性ＪＡＫ阻害剤が依然として必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Gauthierら、Curr  Transplant  Rep.、２０１６年、３巻（３号）、１８５〜１９１頁
【非特許文献２】Berasteguiら、Clin  Transplant.、２０１７年、３１巻、ｅ１２８９８
【非特許文献３】Shinoら、PLOS  One、２０１７年、１２巻（７号）、ｅ０１８０２８１
【非特許文献４】Vicentiら、American  Journal  of  Transplantation、２０１２年、１２巻、２４４６〜５６頁
【非特許文献５】Zeiserら、Leukemia、２０１５年、２９巻、１０号、２０６２〜６８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様では、本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤としての活性を有する新規化合物を提供する。
【０００９】
したがって、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
0006974487.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ３〜６シクロアルキルから選択され、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２であり、
ここで、
Ｒ２は、−ＮＲ１３Ｒ１４であり、ここで、
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、４員ヘテロシクリルを形成し、ここで、ヘテロシクリルは、−ＮＲ５Ｒ６およびＲ７で必要に応じて置換されており、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、あるいはＲ５およびＲ６は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、酸素原子を必要に応じて含む５または６員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７は、１個の窒素原子を含む５または６員ヘテロシクリルで必要に応じて置換されているＣ１〜３アルキルである］
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１０】
以後使用される場合、語句「式（Ｉ）の化合物」は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を意味する。すなわち、この語句は、別段の指示がない限り、遊離塩基形態のまたは薬学的に許容される塩形態の式（Ｉ）の化合物を意味する。
【００１１】
本発明は、本発明の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物も提供する。
【００１２】
本発明は、哺乳動物における呼吸器疾患、特に喘息を処置する方法であって、哺乳動物に、治療有効量の本発明の化合物または医薬組成物を投与するステップを含む、方法も提供する。別個の明確な態様において、本発明は、本発明の化合物を調製するために有用な、本明細書において記述されている合成プロセスおよび中間体も提供する。
【００１３】
本発明は、医学療法において使用するための本明細書において記述されている通りの本発明の化合物、および哺乳動物における呼吸器疾患を処置するための製剤または医薬の製造における本発明の化合物の使用も提供する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
式（Ｉ）の化合物：
【化３０】
0006974487.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ３〜６シクロアルキルから選択され、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２であり、
ここで、
Ｒ２は、−ＮＲ１３Ｒ１４であり、ここで、
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、４員ヘテロシクリルを形成し、ここで、前記ヘテロシクリルは、−ＮＲ５Ｒ６およびＲ７で必要に応じて置換されており、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、あるいはＲ５およびＲ６は、それらが結合した窒素原子と一緒になって、酸素原子を必要に応じて含む５または６員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７は、１個の窒素原子を含む５または６員ヘテロシクリルで必要に応じて置換されているＣ１〜３アルキルである］
またはその薬学的に許容される塩。
（項目２）
Ｒ１が、水素またはＣ１〜３アルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ１３およびＲ１４が、それらが結合した前記窒素原子と一緒になって、４員ヘテロシクリルを形成し、ここで、前記ヘテロシクリルは、−ＮＲ５Ｒ６およびＲ７で必要に応じて置換されているか、あるいは
Ｒ５およびＲ６が、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、あるいはＲ５およびＲ６が、それらが結合した前記窒素原子と一緒になって、５または６員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７が、ピロリジニルで必要に応じて置換されているＣ１〜３アルキルである、
項目２に記載の化合物。
（項目４）
式（ＩＩ）の化合物：
【化３１】
0006974487.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルであり、
Ｒ２は、
【化３２】
0006974487.tif 000005
であり、ここで、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＲ５およびＲ６は、一緒になって、−（ＣＨ２）４〜５−を形成し、Ｒ７は、水素またはＣ１〜３アルキルである］
またはその薬学的に許容される塩。
（項目５）
Ｒ５およびＲ６が、Ｃ１〜３アルキルである、項目４に記載の化合物。
（項目６）
前記化合物が、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［５，４−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである、項目４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目７）
前記化合物が、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［５，４−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである、項目４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目８）
前記化合物が、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
およびその薬学的に許容される塩から選択される、項目４に記載の化合物。
（項目９）
式
【化３３】
0006974487.tif 000006
の（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１０）
式
【化３４】
0006974487.tif 000007
の化合物。
（項目１１）
項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
（項目１２）
式（ＩＩ）の化合物：
【化３５】
0006974487.tif 000008
［式中、Ｒ１およびＲ２は、項目４において定義されている通りである］、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、式１の化合物：
【化３６】
0006974487.tif 000009
を、式２の化合物：
【化３７】
0006974487.tif 000010
と反応させて、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供するステップを含む、方法。
（項目１３）
哺乳動物における呼吸器疾患の処置において使用するための、項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１４）
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、項目１３に記載の化合物。
（項目１６）
前記呼吸器疾患が、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺移植片対宿主病または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、項目１３に記載の化合物。
（項目１７）
哺乳動物における肺移植拒絶反応の処置において使用するための、項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１８）
前記肺移植拒絶反応が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶反応、リンパ球性細気管支炎または慢性肺同種移植片機能不全である、項目１７に記載の化合物。
（項目１９）
前記肺移植拒絶反応が、急性肺移植拒絶反応である、項目１７に記載の化合物。
（項目２０）
前記肺移植拒絶反応が、慢性肺同種移植片機能不全である、項目１７に記載の化合物。
（項目２１）
前記肺移植拒絶反応が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全または好中球性同種移植片機能不全である、項目１７に記載の化合物。
（項目２２）
哺乳動物における呼吸器疾患の処置用医薬の製造のための、項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目２３）
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである、項目２２に記載の使用。
（項目２４）
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、項目２３に記載の使用。
（項目２５）
前記呼吸器疾患が、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺移植片対宿主病または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、項目２２に記載の使用。
（項目２６）
哺乳動物における肺移植拒絶反応の処置用医薬の製造のための、項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目２７）
前記肺移植拒絶反応が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶反応、リンパ球性細気管支炎または慢性肺同種移植片機能不全である、項目２６に記載の使用。
（項目２８）
前記肺移植拒絶反応が、急性肺移植拒絶反応である、項目２６に記載の使用。
（項目２９）
前記肺移植拒絶反応が、慢性肺同種移植片機能不全である、項目２６に記載の使用。
（項目３０）
前記肺移植拒絶反応が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全または好中球性同種移植片機能不全である、項目２６に記載の使用。
（項目３１）
哺乳動物における呼吸器疾患を処置する方法であって、前記哺乳動物に、項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目３２）
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記呼吸器疾患が、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺移植片対宿主病または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
哺乳動物における肺移植拒絶反応を処置する方法であって、前記哺乳動物に、項目１から１０のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目３６）
前記肺移植拒絶反応が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶反応、リンパ球性細気管支炎または慢性肺同種移植片機能不全である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記肺移植拒絶反応が、急性肺移植拒絶反応である、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
前記呼吸器疾患が、慢性肺同種移植片機能不全である、項目３５に記載の方法。
（項目３９）
前記呼吸器疾患が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全または好中球性同種移植片機能不全である、項目３５に記載の方法。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
数ある態様の中でも、本発明は、式（Ｉ）のＪＡＫキナーゼ阻害剤、その薬学的に許容される塩、およびそれらの調製のための中間体を提供する。下記の置換基および値は、本発明の種々の態様の代表例を提供することが意図されている。これらの代表的な値は、そのような態様をさらに定義することが意図されており、他の値を除外することも本発明の範囲を限定することも意図されていない。
【００１５】
ある具体的な態様では、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ３〜６シクロアルキルから選択される。
【００１６】
別の具体的な態様では、Ｒ１は、水素およびＣ１〜３アルキルから選択される。さらに別の具体的な態様では、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルである。
【００１７】
Ｒ１の具体的な値は、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルを含むがこれらに限定されない。
【００１８】
ある具体的な態様では、Ｒ１は、水素およびＣ１〜３アルキルから選択され、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２であり、ここで、Ｒ２は、
【化２】
0006974487.tif 000011
［式中、Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＲ５およびＲ６は、一緒になって、−（ＣＨ２）４〜５−を形成し、Ｒ７は、水素またはＣ１〜３アルキルである］
である。
【００１９】
別の具体的な態様では、Ｒ１は、水素およびＣ１〜３アルキルから選択され、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２であり、ここで、Ｒ２は、
【化３】
0006974487.tif 000012
［式中、Ｒ５およびＲ６は、いずれもメチルであるか、またはＲ５およびＲ６は、一緒になって、−（ＣＨ２）５−を形成し；Ｒ７は、水素またはメチルである］
である。
【００２０】
別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物：
【化４】
0006974487.tif 000013
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルであり、
Ｒ２は、
【化５】
0006974487.tif 000014
であり、ここで、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＲ５およびＲ６は、一緒になって、−（ＣＨ２）４〜５−を形成し、Ｒ７は、水素またはＣ１〜３アルキルである］
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００２１】
別の具体的な態様では、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルであり、
Ｒ２は、
【化６】
0006974487.tif 000015
［式中、
Ｒ５およびＲ６は、いずれもメチルであるか、またはＲ５およびＲ６は、一緒になって、−（ＣＨ２）５−を形成し、Ｒ７は、水素またはメチルである］
である。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［５，４−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００２３】
さらに別の態様では、本発明は、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［５，４−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである化合物を提供する。
【００２４】
さらに別の態様では、本発明は、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［５，４−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００２５】
さらに別の態様では、本発明は、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［５，４−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンである化合物を提供する。
【００２６】
さらに別の態様では、本発明は、下記の化合物：
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
およびその薬学的に許容される塩から選択される化合物を提供する。
【００２７】
さらに別の態様では、本発明は、下記の化合物：
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、および
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
から選択される化合物を提供する。
【００２８】
さらに別の態様では、本発明は、式
【化７】
0006974487.tif 000016
の（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００２９】
さらに別の態様では、本発明は、式
【化８】
0006974487.tif 000017
の化合物を提供する。
【００３０】
一態様では、本発明は、以下の実施例２、４、８および表１の化合物を提供する。
【００３１】
化学構造は、本明細書において、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）において実装される通り、ＩＵＰＡＣ規則に従って命名される。例えば、化合物：
【化９】
0006974487.tif 000018
は、（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノンとして指定される。
【００３２】
さらに、式（Ｉ）の構造におけるテトラヒドロイミダゾピリジン部分のイミダゾ部は、実施例１の化合物の断片について以下で例証される、互変異性形態で存在する。
【化１０】
0006974487.tif 000019
【００３３】
ＩＵＰＡＣ規則によれば、これらの表現は、イミダゾール部の原子の異なる番号付け：２−（１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（構造Ａ）対２−（１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（構造Ｂ）を生み出す。構造が特定の形態で示されている、または命名されているが、本発明は、それらの互変異性体も含むことが理解されるであろう。
【００３４】
本発明の化合物は、１つまたは複数のキラル中心を含有してよく、したがって、そのような化合物（およびそれらの中間体）は、ラセミ混合物、純粋な立体異性体（すなわち、鏡像異性体またはジアステレオマー）、立体異性体富化混合物等として存在することができる。キラル中心における定義された立体化学なしに本明細書において示されるまたは命名されるキラル化合物は、別段の指示がない限り、未定義の立体中心における任意のまたはすべての可能な立体異性体の変形形態を含むことが意図されている。特定の立体異性体の描写または命名は、指示されている立体中心が、別段の指示がない限り、少量の他の立体異性体も存在し得るという理解のもとに、指定された立体化学を有することを意味し、ただし、描写されたまたは命名された化合物の有用性は、別の立体異性体の存在によって排除されない。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物は、いくつかの塩基性基（例えば、アミノ基）も含有し、したがって、そのような化合物は、遊離塩基として、またはモノプロトン化塩形態、ジプロトン化塩形態、トリプロトン化塩形態もしくはそれらの混合物等の種々の塩形態で存在することができる。すべてのそのような形態は、別段の指示がない限り、本発明の範囲内に含まれる。
【００３６】
本発明は、式（Ｉ）の同位体標識化合物、すなわち、１個または複数の原子が、同じ原子番号を有するが自然界において優勢である原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置きかえられているまたは富化されている、式（Ｉ）の化合物も含む。式（Ｉ）の化合物に組み込まれ得る同位体の例は、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏを含むがこれらに限定されない。特に興味深いのは、三重水素または炭素−１４が富化されている式（Ｉ）の化合物であり、これらの化合物は、例えば、組織分布研究において使用され得る。同じく特に興味深いのは、とりわけ代謝部位において重水素が富化されている式（Ｉ）の化合物であり、これらの化合物は、より優れた代謝安定性を有することが期待される。加えて、特に興味深いのは、１１Ｃ、１５Ｏおよび１３Ｎ等の陽電子放出同位体が富化されている式（Ｉ）の化合物であり、これらの化合物は、例えば、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究において使用され得る。
【００３７】
定義
その種々の態様および実施形態を含む本発明について記述する場合、下記の用語は、別段の指示がない限り、下記の意味を有する。
【００３８】
用語「アルキル」は、直鎖状もしくは分枝鎖状またはそれらの組合せであってよい一価飽和炭化水素基を意味する。別段の定義がない限り、そのようなアルキル基は、典型的には、１から１０個までの炭素原子を含む。代表的なアルキル基は、例として、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎ−Ｐｒ）または（ｎＰｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）または（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎ−Ｂｕ）または（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）または（ｔＢｕ）、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−エチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２−プロピルペンチル等を含む。
【００３９】
特定の用語について具体的な数の炭素原子が意図されている場合、炭素原子の数は、該用語に先行して示される。例えば、用語「Ｃ１〜３アルキル」は、１から３個までの炭素原子を有するアルキル基を意味し、ここで、炭素原子は、直鎖状または分枝鎖状配置を含む任意の化学的に許容される配置である。
【００４０】
用語「シクロアルキル」は、単環式または多環式であってよい一価飽和炭素環式基を意味する。別段の定義がない限り、そのようなシクロアルキル基は、典型的には、３から１０個までの炭素原子を含む。代表的なシクロアルキル基は、例として、シクロプロピル（ｃＰｒ）、シクロブチル（ｃＢｕ）、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチル等を含む。
【００４１】
用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロ環」、「ヘテロ環式」または「ヘテロ環式環」は、３から１０個までの総環原子を有し、ここで、環が、２から９個までの炭素環原子ならびに窒素、酸素および硫黄から選択される１から４個までの環ヘテロ原子を含む、一価飽和または部分不飽和環式非芳香族基を意味する。ヘテロ環式基は、単環式または多環式（すなわち、縮合しているまたは架橋している）であってよい。代表的なヘテロシクリル基は、例として、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリル、インドリン−３−イル、２−イミダゾリニル、テトラヒドロピラニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル、キヌクリジニル、７−アザノルボルナニル、ノルトロパニル等を含み、ここで、結合点は、任意の利用可能な炭素または窒素環原子にある。文脈上ヘテロ環式基の結合点が明白である場合、そのような基は、代替として、非原子価種として、すなわち、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾール、テトラヒドロピラン等と称されてよい。
【００４２】
用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００４３】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与された場合に処置を達成するために十分な量を意味する。
【００４４】
用語「処置すること」または「処置」は、患者（特にヒト）において処置されている医学的状態、疾患または障害（例えば、呼吸器疾患）を、予防すること、寛解させることまたは抑制すること；あるいは医学的状態、疾患または障害の症状を緩和することを意味する。
【００４５】
用語「薬学的に許容される塩」は、患者またはヒト等の哺乳動物への投与に許容される塩（例えば、所与の投薬レジームのための許容される哺乳類の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に許容される塩は、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（glucoronic）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸等の塩を含む。
【００４６】
用語「その塩」は、酸の水素が金属カチオンまたは有機カチオン等のカチオンによって置きかえられた場合に形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、式（Ｉ）の化合物のプロトン化形態、すなわち、１つまたは複数のアミノ基が酸によってプロトン化された形態であることができる。典型的には、塩は、薬学的に許容される塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間化合物の塩には必要とされない。
【００４７】
用語「アミノ保護基」は、アミノ窒素における望ましくない反応を防止するために好適な保護基を意味する。代表的なアミノ保護基は、ホルミル；アシル基、例えば、アセチルおよびトリ−フルオロアセチル等のアルカノイル基；ｔｅｒｔブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）等のアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等のアリールメトキシカルボニル基；ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）および１，１−ジ−（４’−メトキシフェニル）メチル等のアリールメチル基；トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）等のシリル基等を含むがこれらに限定されない。
【００４８】
用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ基における望ましくない反応を防止するために好適な保護基を意味する。代表的なヒドロキシ保護基は、メチル、エチルおよびｔｅｒｔ−ブチル等のアルキル基；アシル基、例えば、アセチル等のアルカノイル基；ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）、９−フルオレニルメチル（Ｆｍ）およびジフェニルメチル（ベンズヒドリル、ＤＰＭ）等のアリールメチル基；トリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等のシリル基等を含むがこれらに限定されない。
多数の保護基ならびにそれらの導入および除去は、T.  W.  GreeneおよびP.G.M.  Wuts、Protecting  Groups  in  Organic  Synthesis、第３版、Wiley、New  Yorkにおいて記述されている。
【００４９】
一般的合成手順
本発明の化合物およびその中間体は、下記の一般的方法および手順に従い、市販されているまたは慣用的に調製される出発材料および試薬を使用して調製することができる。下記のスキームにおいて使用される置換基および変数（例えば、Ｒ１、Ｒ２等）は、別段の指示がない限り、本明細書の他の箇所で定義されているものと同じ意味を有する。加えて、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段の指示がない限り、塩として使用されてよいか、または生成されてよい（一部の事例において、特定の反応における塩の使用は、反応を行う前に、慣用的手順を使用して、塩の、非塩形態、例えば遊離塩基への変換を必要とすることになる）。
【００５０】
本発明の特定の実施形態が下記の手順において示され得るまたは記述され得るが、当業者ならば、そのような手順を使用して、または当業者に公知である他の方法、試薬および出発材料を使用することによって、本発明の他の実施形態または態様も調製できることを認識するであろう。特に、本発明の化合物は、反応物質を異なる順序で合わせて最終生成物を生成するまでの途中で異なる中間体を提供する、様々なプロセスルートによって調製されてよいことが分かるであろう。
【００５１】
変数Ｘが−Ｃ（Ｏ）Ｒ２として定義され、Ｒ１がＣ１〜３アルキルである、本発明の最終化合物を調製する一般的方法は、スキーム１において概して例証されている通りの主要中間体１および式２のアミン、特に例としてＲ２が
【化１１】
0006974487.tif 000020
として定義されているアミンを利用して、式（ＩＩ）の代表的なアミド最終生成物を具体的に例示する。
スキーム１
【化１２】
0006974487.tif 000021
【００５２】
式（ＩＩ）のアミド化合物を調製するために、式１のカルボン酸をアミン２と、典型的なアミド結合形成条件に従って反応させる。典型的には、カルボン酸１を、約１から約４当量の間のアミン２と、過剰の塩基の存在下で接触させる。以下の実施例に示されている通り、アミド結合形成反応は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）または当技術分野において公知である他のアミドカップリング剤等のカップリング剤を利用してよい。反応は、典型的には、室温で、約２から約２４時間の間、または反応が実質的に完了するまで、行われる。
【００５３】
式１のカルボン酸は、スキーム２
スキーム２
【化１３】
0006974487.tif 000022
［式中、Ｐｇ１は、ヒドロキシ保護基を表し、Ｐｇ２、Ｐｇ３およびＰｇ４は、異なるアミノ保護基を表す］において例証されている通りに調製されてよい。以下の例において記述されている通り、保護基の有用な選択肢は、Ｐｇ１としてのベンジルまたはメチル、Ｐｇ２としてのテトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、Ｐｇ３としてのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジル、およびＰｇ４としての［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）である。スキーム２の第１のステップは、中間体３と中間体４とのパラジウム触媒スティルカップリングであり、ここで、フェニル−イミダゾール中間体３はトリメチルスタンニル部分を有し、反応パートナー４はヨウ素置換されている。反応は、典型的には、昇温で、例えば、約８０℃から約１８０℃の間で、約１０から約２４時間にわたってまたは反応が実質的に完了するまで、行われる。
【００５４】
ベンジルがＰｇ１として使用される場合、次のステップにおいて、中間体５のメチルエステルは、５とベンジルアルコールとの反応によって中間体６におけるベンジルエステルに変換される。ベンジル保護基はいずれもパラジウム触媒水素化によって好都合に除去されて中間体７を提供し、これを、酸、典型的には塩酸との反応によって完全に脱保護してよい。最終ステップにおいて、試薬Ｒ１ａ［ここで、Ｒ１ａは、還元時にＲ１を生成するように定義されているアルデヒドまたはケトンである］を用いる中間体８の還元的アルキル化によって置換基Ｒ１を付加する。例えば、メチル置換基Ｒ１を付加するためには、ホルムアルデヒドを試薬Ｒ１ａとして使用し、イソプロピル部分を置換基Ｒ１として付加するためには、アセトンを試薬Ｒ１ａとして使用する。反応は、典型的には、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤の存在下、周囲温度で、約１０から約２４時間の期間にわたってまたは反応が実質的に完了するまで、行われる。
【００５５】
中間体３および４は、以下で詳細に記述される通り、市販のまたは容易に調製される出発材料から調製されてよい。特に、Ｐｇ１がベンジルであり、Ｐｇ２がＴＨＰである、中間体３を調製するためのプロセスは、化合物９と化合物１０との鈴木・宮浦カップリング、続いて、トリメチルスタンニル基を付加するための従来の反応を使用する。
【化１４】
0006974487.tif 000023
【００５６】
中間体４は、化合物１１から調製されてよく、これは、ラセミ形態および立体特異的形態で市販されており、ヒスチジンから調製されてもよい。
【００５７】
したがって、方法態様では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、スキーム１において例証される通り、式１の化合物を式２の化合物と反応させて、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供するステップを含む、方法を提供する。
【００５８】
さらなる方法態様では、本発明は、式１の化合物を調製する方法であって、式８の化合物を、Ｒ１ａ［ここで、Ｒ１ａは、還元的アルキル化時に置換基Ｒ１｛ここで、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルである｝が式８の化合物と結合するように定義されているアルデヒドまたはケトンである］と、還元剤の存在下で反応させて、式１の化合物を提供する、ステップを含む、方法を提供する。
【００５９】
追加の方法態様では、本発明は、式８の化合物を調製する方法であって、式７の化合物を脱保護するステップを含む、方法を提供する。
【００６０】
さらに別の態様では、本発明は、式１の化合物、ならびに式１の化合物を調製する際に有用な、式７および８の化合物を提供する。
【００６１】
医薬組成物
本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩は、典型的には、医薬組成物または製剤の形態で使用される。そのような医薬組成物は、有利にも、吸入によって患者に投与されてよい。加えて、医薬組成物は、経口、経直腸、鼻腔、局所（経皮を含む）および非経口投与モードを含むがこれらに限定されない、任意の許容される投与経路によって投与されてよい。
【００６２】
したがって、その組成物態様の１つでは、本発明は、薬学的に許容される担体または賦形剤と式（Ｉ）の化合物とを含む医薬組成物を対象にし、ここで、上記で定義した通り、「式（Ｉ）の化合物」は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を意味する。必要に応じて、そのような医薬組成物は、所望ならば、他の治療剤および／または製剤化剤を含有してよい。組成物およびその使用について論じる場合、「本発明の化合物」は、本明細書において、「活性剤」とも称され得る。本明細書において使用される場合、用語「本発明の化合物」は、式（Ｉ）によって網羅されるすべての化合物および式（ＩＩ）において具現化される種ならびにその薬学的に許容される塩を含むことが意図されている。
【００６３】
本発明の医薬組成物は、典型的には、治療有効量の本発明の化合物を含有する。しかしながら、当業者ならば、医薬組成物が、治療有効量を超える、すなわちバルク組成物、または治療有効量未満、すなわち治療有効量を実現するように複数回投与のために設計された個々の単位用量を含有してよいことを認識するであろう。
【００６４】
典型的には、そのような医薬組成物は、例えば、約０．０５から約３０重量％まで、および約０．１％から約１０重量％までの活性剤を含む、約０．０１から約９５重量％までの活性剤を含有することになる。
【００６５】
任意の従来の担体または賦形剤を、本発明の医薬組成物において使用してよい。特定の担体もしくは賦形剤、または担体もしくは賦形剤の組合せの選択は、特定の患者を処置するために使用されている投与モード、または医学的状態もしくは病状の種類によって決まることになる。これに関して、特定の投与モードに好適な医薬組成物の調製は、十分に医薬品分野の当業者の範囲内である。加えて、本発明の医薬組成物において使用される担体または賦形剤は、市販されている。さらなる例証として、従来の製剤化技術は、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２０版、Lippincott  Williams  &  White、Baltimore、Maryland（２０００年）；およびH.C.  Anselら、Pharmaceutical  Dosage  Forms  and  Drug  Delivery  Systems、第７版、Lippincott  Williams  &  White、Baltimore、Maryland（１９９９年）において記述されている。
【００６６】
薬学的に許容される担体としての働きをすることができる材料の代表的な例は、下記を含むがこれらに限定されない：ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプン等のデンプン；微結晶性セルロース等のセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤ワックス等の賦形剤；ラッカセイ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油等の油；プロピレングリコール等のグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール等のポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；ならびに医薬組成物において用いられる他の非毒性の適合性物質。
【００６７】
医薬組成物は、典型的には、活性剤を、薬学的に許容される担体および１つまたは複数の必要に応じた原料と、徹底的かつ密接に、混合するまたは混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物を、従来の手順および設備を使用して、錠剤、カプセル剤、丸剤等に成形するまたは充填することができる。
【００６８】
一態様では、医薬組成物は、吸入投与に好適である。吸入投与のための医薬組成物は、典型的には、エアゾールまたは粉末の形態である。そのような組成物は、概して、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）、ネブライザー吸入器または同様の送達デバイス等の吸入器送達デバイスを使用して投与される。
【００６９】
特定の実施形態では、医薬組成物は、乾燥粉末吸入器を使用する吸入によって投与される。そのような乾燥粉末吸入器は、典型的には、医薬組成物を、吸気中に患者の気流内に分散する流動性粉末として投与する。流動性粉末組成物を実現するために、治療剤は、典型的には、ラクトース、デンプン、マンニトール、デキストロース、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリラクチド−ｃｏ−グリコリド（ＰＬＧＡ）またはそれらの組合せ等の好適な賦形剤とともに製剤化される。典型的には、治療剤を、微粉化し、好適な担体と合わせて、吸入に好適な組成物を形成する。
【００７０】
乾燥粉末吸入器において使用するための代表的な医薬組成物は、ラクトースおよび本発明の化合物を微粉化形態で含む。そのような乾燥粉末組成物は、例えば、乾式粉砕ラクトースを治療剤と合わせ、次いで、これらの成分を乾式混和することによって作製することができる。次いで、組成物を、典型的には乾燥粉末ディスペンサーに、または乾燥粉末送達デバイスとともに使用するための吸入用カートリッジもしくはカプセルに、充填する。
【００７１】
吸入によって治療剤を投与するために好適な乾燥粉末吸入器送達デバイスは、当技術分野において記述されており、そのようなデバイスの例は、市販されている。例えば、代表的な乾燥粉末吸入器送達デバイスまたは製品は、エアロライザー（Ａｅｏｌｉｚｅｒ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、エアマックス（ＩＶＡＸ）、クリックヘイラー（Ｉｎｎｏｖａｔａ  Ｂｉｏｍｅｄ）、ディスクヘイラー（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ディスカス／アキュヘイラー（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、エリプタ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、イージーヘイラー（Ｏｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ）、エクリプス（Ａｖｅｎｔｉｓ）、フローキャップス（Ｈｏｖｉｏｎｅ）、ハンディヘイラー（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、パルビナール（Ｃｈｉｅｓｉ）、ロタヘイラー（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、スカイヘイラー（ＳｋｙｅＨａｌｅｒ）／サーティヘイラー（Ｃｅｒｔｉｈａｌｅｒ）（ＳｋｙｅＰｈａｒｍａ）、ツイストヘイラー（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、タービュヘイラー（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ウルトラヘイラー（Ａｖｅｎｔｉｓ）等を含む。
【００７２】
別の特定の実施形態では、医薬組成物は、定量吸入器を使用する吸入によって投与される。そのような定量吸入器は、典型的には、圧縮噴射剤ガスを使用して、測定量の治療剤を発射する。したがって、定量吸入器を使用して投与される医薬組成物は、典型的には、液化噴射剤中の治療剤の溶液または懸濁液を含む。１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ１３４ａ）および１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン（ＨＦＡ２２７）等のヒドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）、ならびにＣＣｌ３Ｆ等のクロロフルオロカーボンを含む、任意の好適な液化噴射剤を用いてよい。特定の実施形態では、噴射剤は、ヒドロフルオロアルカンである。一部の実施形態では、ヒドロフルオロアルカン製剤は、エタノールもしくはペンタン等の共溶媒、ならびに／またはソルビタントリオレエート、オレイン酸、レシチンおよびグリセリン等の界面活性剤を含有する。
【００７３】
定量吸入器において使用するための代表的な医薬組成物は、約０．０１％から約５重量％までの本発明の化合物、約０％から約２０重量％までのエタノールおよび約０％から約５重量％までの界面活性剤を含み、残りは、ＨＦＡ噴射剤である。そのような組成物は、典型的には、冷やしたまたは加圧したヒドロフルオロアルカンを、治療剤、エタノール（存在する場合）および界面活性剤（存在する場合）を含む好適な容器に添加することによって調製される。懸濁液を調製するためには、治療剤を微粉化し、次いで、噴射剤と合わせる。次いで、組成物をエアゾールキャニスターに充填し、これは、典型的には、定量吸入器デバイスの一部を形成する。
【００７４】
吸入によって治療剤を投与するために好適な定量吸入器デバイスは、当技術分野において記述されており、そのようなデバイスの例は、市販されている。例えば、代表的な定量吸入器デバイスまたは製品は、エアロビッド（ＡｅｒｏＢｉｄ）吸入器システム（Ｆｏｒｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アトロベント吸入エアゾール（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、フロベント（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、マックスエア吸入器（３Ｍ）、プロベンティル吸入器（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、セレベント吸入エアゾール（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）等を含む。
【００７５】
別の特定の態様では、医薬組成物は、ネブライザー吸入器を使用する吸入によって投与される。そのようなネブライザーデバイスは、典型的には、医薬組成物を、患者の呼吸器官に運ばれるミストとしてスプレーさせる、高速の空気の流れを生成する。したがって、ネブライザー吸入器において使用するために製剤化する場合、治療剤を好適な担体に溶解して、溶液を形成することができる。代替として、治療剤を微粉化またはナノ粉砕し、好適な担体と合わせて、懸濁液を形成することができる。
【００７６】
ネブライザー吸入器において使用するための代表的な医薬組成物は、約０．０５μｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬまでの本発明の化合物と、噴霧製剤に適合する賦形剤とを含む、溶液または懸濁液を含む。一実施形態では、溶液は、約３から約８のｐＨを有する。
【００７７】
吸入によって治療剤を投与するために好適なネブライザーデバイスは、当技術分野において記述されており、そのようなデバイスの例は、市販されている。例えば、代表的なネブライザーデバイスまたは製品は、レスピマットソフトミスト吸入器（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＡＥＲｘ肺送達システム（Ａｒａｄｉｇｍ  Ｃｏｒｐ．）、ＰＡＲＩ  ＬＣプラス再利用可能ネブライザー（Ｐａｒｉ  ＧｍｂＨ）等を含む。
【００７８】
さらに別の態様では、本発明の医薬組成物は、代替として、経口投与が意図された剤形で調製されてよい。経口投与に好適な医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、キャンディー剤、カシェ剤、糖衣錠剤、散剤、顆粒剤の形態；あるいは水性または非水性液体中の液剤または懸濁剤として；あるいは水中油型または油中水型液体乳剤として；あるいはエリキシル剤またはシロップ剤として等であってよく、それぞれが、所定量の本発明の化合物を活性原料として含有する。
【００７９】
固体剤形での経口投与が意図されている場合、本発明の医薬組成物は、典型的には、活性剤およびクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム等の１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含むことになる。必要に応じてまたは代替として、そのような固体剤形は、充填剤または増量剤、結合剤、保湿剤、溶液遅延剤、吸収加速剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤、着色剤および緩衝剤も含んでよい。放出剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味、香味および着香剤、保存剤ならびに酸化防止剤も、本発明の医薬組成物中に存在することができる。
【００８０】
代替的な製剤は、制御放出製剤、経口投与のための液体剤形、経皮パッチ剤および非経口製剤も含んでよい。そのような代替的な製剤の従来の賦形剤および調製方法は、例えば、上記Remingtonによる参考文献において記述されている。
【００８１】
下記の非限定的な例は、本発明の代表的な医薬組成物を例証する。
【００８２】
乾燥粉末組成物
微粉化した式（Ｉ）の化合物（１ｇ）を、粉砕ラクトース（２５ｇ）と混和する。次いで、この混和された混合物を、剥離可能なブリスターパックの個々のブリスターに、用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの間の式Ｉの化合物を提供するために十分な量で充填する。乾燥粉末吸入器を使用して、ブリスターの内容物を投与する。
【００８３】
乾燥粉末組成物
微粉化した式（Ｉ）の化合物（１ｇ）を、粉砕ラクトース（２０ｇ）と混和して、化合物の粉砕ラクトースに対する１：２０の重量比を有するバルク組成物を形成する。混和された組成物を、用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの間の式Ｉの化合物を送達することができる乾燥粉末吸入デバイスに詰める。
【００８４】
定量吸入器組成物
レシチン（０．２ｇ）を脱塩水（２００ｍＬ）に溶解することによって調製された溶液に、微粉化した式（Ｉ）の化合物（１０ｇ）を分散させる。得られた懸濁液をスプレードライし、次いで、微粉化して、約１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子を含む微粉化された組成物を形成する。次いで、微粉化された組成物を、定量吸入器によって投与された場合に用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの式Ｉの化合物を提供するために十分な量で、加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンを含有する定量吸入器カートリッジに充填する。
【００８５】
ネブライザー組成物
式（Ｉ）の化合物（２５ｍｇ）を、１．５〜２．５当量の塩酸を含有する溶液に溶解し、続いて、ｐＨを３．５から５．５に調整するための水酸化ナトリウムおよび３重量％のグリセロールを添加する。すべての成分が溶解するまで、溶液をよく撹拌する。用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの式Ｉの化合物を提供するネブライザーデバイスを使用して、溶液を投与する。
【００８６】
有用性
本発明のＪＡＫ阻害剤は、呼吸器官の炎症性および線維性疾患の処置のために設計された。特に、化合物は、全身曝露を制限しながら、肺の呼吸器疾患における作用部位への強力な抗サイトカイン剤の直接的送達を可能にするように設計された。
【００８７】
本発明の化合物は、ＪＡＫファミリーの酵素：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の強力阻害剤であることが示されている。加えて、化合物は、細胞アッセイにおいて細胞毒性を呈することなく、炎症促進性および線維化促進サイトカインの強力な阻害を実証してきた。ＪＡＫ阻害剤の幅広い抗炎症効果は、正常な免疫細胞機能を抑制し得、潜在的に、感染症のリスクの増大につながることが認識されている。本発明の化合物は、したがって、肺から血漿への吸収を制限するように最適化されてきており、故に、免疫抑制のリスクを最小化している。
【００８８】
以下の実験の項において記述される通り、典型的な化合物の吸収および分布は、前臨床アッセイにおいてプロファイルされている。マウスにおいて試験された選択化合物は、肺組織における高濃度および血漿への低吸収を同時に示した。マウスにおいて試験された化合物は、血漿における曝露よりも１から２桁大きい、肺における曝露を呈した。化合物は、約５時間よりも長い肺半減期によって証明される通り、マウス肺における有意な保持も呈した。重要なことには、マウス肺における試験化合物の濃度は、ＪＡＫ酵素阻害の予測された薬力学的効果と相関していることが示されている。本発明の化合物は、マウス肺組織において炎症促進性サイトカインＩＬ−１３の効果を阻害することが示されている。具体的には、化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの局所肺ＪＡＫ標的エンゲージメントの証拠を提供する、肺組織におけるＳＴＡＴ６のＩＬ−１３誘発性リン酸化の用量および濃度依存性阻害を実証している。この効果は、炎症促進性サイトカインＩＬ−１３が試験化合物の投与４時間後に投与された場合に観察されており、肺における有意な保持のさらなる証拠を提供している。
【００８９】
試験化合物は、細胞レベルでの強力な阻害活性および肺組織における有意な保持の両方を呈することが実証されている。本発明者らによる広範な調査は、細胞レベルで強力な化合物または肺における有意な保持を示す化合物を同定することは可能であるが、両方の望ましい特徴を同時に呈する化合物を発見することははるかに困難であることを決定した。
【００９０】
ＪＡＫ阻害剤の抗炎症活性は、喘息の前臨床モデルにおいて確実に実証されている（Malaviyaら、Int  Immunopharmacol、２０１０年、１０巻、８２９〜８３６頁；Matsunagaら、Biochem  and  Biophys  Res  Commun、２０１１年、４０４巻、２６１〜２６７頁；Kudlaczら、Eur  J  Pharmacol、２００８年、５８２巻、１５４〜１６１頁）。したがって、本発明の化合物は、炎症性呼吸器障害、特に、喘息の処置に有用であることが期待される。肺の炎症および線維症は、喘息に加えて、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎およびサルコイドーシス等の他の呼吸器疾患の特徴である。したがって、本発明の化合物は、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎およびサルコイドーシスの処置にも有用であることが期待される。
【００９１】
本開示の化合物は、ヒトＴ細胞活性化の阻害、炎症に関連するサイトカインの阻害、ならびにヒト好酸球に対するおよびげっ歯類肺好酸球増加症モデルにおける活性を実証している。したがって、本開示の化合物は、ある特定の具体的な呼吸器疾患の処置に有用である可能性がある。
【００９２】
好酸球性気道炎症は、好酸球性肺疾患と総称される疾患の特徴的特色である（Cottinら、Clin.  Chest.  Med.、２０１６年、３７巻（３号）、５３５〜５６頁）。好酸球性疾患は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＩＬ−５シグナル伝達に関連するとされてきた。好酸球性肺疾患は、感染症（とりわけ蠕虫感染症）、薬物誘発性肺臓炎（例えば、抗生物質、フェニトインまたはｌ−トリプトファン等の治療薬によって誘発されるもの）、真菌誘発性肺臓炎（例えば、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症）、過敏性肺臓炎および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（以前はチャーグ・ストラウス症候群として公知であった）を含む。未知の病因の好酸球性肺疾患は、特発性急性好酸球性肺炎（pneumoni）、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群およびレフレル症候群を含む。本開示の化合物は、げっ歯類気道モデルにおいて肺好酸球増加症を有意に低減させること、ならびに細胞アッセイにおいてＩＬ−１３、ＩＬ−４およびＩＬ−２シグナル伝達を強力に阻害することが示されている。加えて、実施例２の化合物は、ＩＬ−５媒介性ヒト好酸球の生存を強力に阻害することが実証されている。
【００９３】
ＩＬ−６遺伝子における多型は、ＩＬ−６レベル上昇および肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）を発症するリスクの増大に関連するとされてきた（Fangら、J  Am  Soc  Hypertens.、２０１７年、１１巻（３号）、１７１〜１７７頁）。ＰＡＨにおけるＩＬ−６の役割を裏付けるように、ＩＬ−６受容体鎖ｇｐ１３０の阻害は、ＰＡＨのラットモデルにおいて疾患を寛解させた（Huangら、Can  J  Cardiol.、２０１６年、３２巻（１１号）、１３５６．ｅ１〜１３５６．ｅ１０）。実施例２の化合物は、ＩＬ−６シグナル伝達を阻害することが示されている。
【００９４】
ＩＦＮγ、ＩＬ−１２およびＩＬ−６等のサイトカインは、サルコイドーシスおよびリンパ脈管筋腫症等の広範な非アレルギー性肺疾患に関係するとされてきた（El-Hashemiteら、Am.  J.  Respir.  Cell  Mol.  Biol.、２００５年、３３巻、２２７〜２３０頁およびEl-Hashemiteら、Cancer  Res.、２００４年、６４巻、３４３６〜３４４３頁）。実施例２の化合物は、ＩＬ−６およびＩＦＮγシグナル伝達を阻害することも示されている。
【００９５】
気管支拡張症および浸潤性肺疾患は、慢性好中球性炎症に関連する疾患である。実施例２の化合物は、好中球性炎症に関連するサイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＦＮγ）を阻害することが示されている。
【００９６】
病理学的Ｔ細胞活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において重大である。自己反応性Ｔ細胞は、閉塞性細気管支炎器質化肺炎（ＣＯＳとも称される）において役割を果たす。ＣＯＳと同様に、肺移植拒絶反応の病因は、移植ドナー肺によるレシピエントＴ細胞の異常なＴ細胞活性化と連関している。肺移植拒絶反応は、初期に原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶反応（ＡＲ）もしくはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）として出現し得るか、または肺移植数年後に慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）として出現し得る。ＣＬＡＤは、以前は閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として公知であったが、現在は、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）および好中球性同種移植片機能不全を含む異なる病理学的徴候を有し得る症候群とみなされている。慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）は、移植肺に機能性を漸進的に失わせることから、肺移植レシピエントの長期管理における主要課題である（Gauthierら、Curr  Transplant  Rep.、２０１６年、３巻（３号）、１８５〜１９１頁）。ＣＬＡＤは、処置に対して応答性が乏しく、したがって、この状態を予防するまたは処置することができる有効な化合物が依然として必要である。ＩＦＮγおよびＩＬ−５等のいくつかのＪＡＫ依存性サイトカインは、ＣＬＡＤおよび肺移植拒絶反応において上方調節される（Berasteguiら、Clin  Transplant.、２０１７年、３１巻、ｅ１２８９８）。その上、ＪＡＫ依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にあるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０等のＣＸＣＲ３ケモカインの高い肺レベルは、肺移植患者におけるより悪い転帰と連関している（Shinoら、PLOS  One、２０１７年、１２巻（７号）、ｅ０１８０２８１）。全身性ＪＡＫ阻害は、腎移植拒絶反応において有効であることが示されている（Vicentiら、American  Journal  of  Transplantation、２０１２年、１２巻、２４４６〜５６頁）。したがって、ＪＡＫ阻害剤は、肺移植拒絶反応およびＣＬＡＤを処置するまたは予防する際に有効である潜在性を有する。肺移植拒絶反応の基礎として記述されているのと同様のＴ細胞活性化事象も、造血幹細胞移植後に出現することができる肺移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の主な推進力とみなされる。ＣＬＡＤと同様に、肺ＧＶＨＤは、極めて乏しい転帰を持つ慢性進行状態であり、処置は現在のところ承認されていない。サルベージ療法として全身性ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを受けた、ステロイド不応性急性または慢性ＧＶＨＤを持つ９５人の患者の遡及的な多施設調査研究は、肺ＧＶＨＤを持つ人々を含む大多数の患者におけるルキソリチニブに対する完全または部分的な応答を実証した（Zeiserら、Leukemia、２０１５年、２９巻、１０号、２０６２〜６８頁）。全身性ＪＡＫ阻害は、重篤な有害事象および小さな治療指数に関連するため、肺移植拒絶反応または肺ＧＶＨＤを予防するおよび／または処置するために、吸入肺に向けられた非全身性ＪＡＫ阻害剤が依然として必要である。本開示の化合物は、この必要性を満たすために必要とされる特徴を有する。より最近では、別のＴ細胞媒介性肺疾患である免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎が、免疫チェックポイント阻害剤の使用増大とともに現れた。これらのＴ細胞刺激剤で処置されたがん患者において、致死的肺臓炎が発症し得る。実施例２の化合物は、活性化ヒト末梢血液単離Ｔ細胞からのＩＦＮγの抗ＣＤ３およびＩＬ−２誘発性放出ならびに気道上皮細胞におけるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０の産生を阻害することが示されており、故に、これらのサービス不行き届きの重篤な呼吸器疾患のための新規処置を提示する潜在性を有する。
【００９７】
したがって、一態様では、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における呼吸器疾患を処置する方法であって、哺乳動物に、治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容される担体と本発明の化合物とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９８】
一態様では、呼吸器疾患は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、肺気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである。別の態様では、呼吸器疾患は、喘息または慢性閉塞性肺疾患である。
【００９９】
一態様では、呼吸器疾患は、肺感染症、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性高血圧症、サルコイドーシス、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、急性および慢性肺移植拒絶反応（ＰＧＤ、ＯＰ、ＬＢ、ＡＲおよびＣＬＡＤ、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤおよび好中球性同種移植片機能不全を含む）、肺移植片対宿主病、閉塞性細気管支炎器質化肺炎、肺動脈性高血圧症、気管支拡張症または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である。
【０１００】
本発明は、哺乳動物における喘息を処置する方法であって、哺乳動物に、治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容される担体と本発明の化合物とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法をさらに提供する。
【０１０１】
喘息を処置するために使用される場合、本発明の化合物は、典型的には、１日当たり単回日用量または複数回用量で投与されることになるが、他の形態の投与を使用してもよい。用量当たりの投与される活性剤の量または１日当たりの投与される総量は、典型的には、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびその相対活性、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度等を含む関連の状況に照らして、医師によって決定されることになる。
【０１０２】
本発明は、哺乳動物における呼吸器疾患（本明細書において記述されている疾患を含むがこれらに限定されない）を処置する方法であって、哺乳動物に、治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容される担体と本発明の化合物とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法をさらに提供する。
【０１０３】
呼吸器疾患（本明細書において記述されている疾患を含むがこれらに限定されない）を処置するために使用される場合、本発明の化合物は、典型的には、１日当たり単回日用量または複数回用量で投与されることになるが、他の形態の投与を使用してもよい。用量当たりの投与される活性剤の量または１日当たりの投与される総量は、典型的には、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびその相対活性、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度等を含む関連の状況に照らして、医師によって決定されることになる。
【０１０４】
ＪＡＫ阻害剤として、本開示の化合物は、様々な他の疾患にも有用となり得る。本開示の化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、全結腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎を含むがこれらに限定されない様々な胃腸炎症の兆候に有用となり得る。潰瘍性大腸炎（Reimundら、J  Clin  Immunology、１９９６年、１６巻、１４４〜１５０頁）、クローン病（Woywodtら、Eur  J  Gastroenterology  Hepatology、１９９９年、１１巻、２６７〜２７６頁）、膠原線維性大腸炎（Kumawatら、Mol  Immunology、２０１３年、５５巻、３５５〜３６４頁）、リンパ球性大腸炎（Kumawatら、２０１３年）、好酸球性食道炎（Weinbrand-Goichbergら、Immunol  Res、２０１３年、５６巻、２４９〜２６０頁）、移植片対宿主病関連大腸炎（Coghillら、Blood、２００１年、１１７巻、３２６８〜３２７６頁）、感染性大腸炎（Stallmachら、Int  J  Colorectal  Dis、２００４年、１９巻、３０８〜３１５頁）、ベーチェット病（Zhouら、Autoimmun  Rev、２０１２年、１１巻、６９９〜７０４頁）、セリアック病（de  Nittoら、World  J  Gastroenterol、２００９年、１５巻、４６０９〜４６１４頁）、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ−４阻害剤誘発性大腸炎；（Yanoら、J  Translation  Med、２０１４年、１２巻、１９１頁）、ＰＤ−１−またはＰＤ−Ｌ１阻害剤誘発性大腸炎）および回腸炎（Yamamotoら、Dig  Liver  Dis、２００８年、４０巻、２５３〜２５９頁）は、ある特定の炎症促進性サイトカインレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインは、ＪＡＫ活性化を介してシグナル伝達するため、本願において記述されている化合物は、炎症を緩和し、症状軽減を提供することができる場合がある。特に、本開示の化合物は、潰瘍性大腸炎の鎮静の誘導および維持のため、ならびに、クローン病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、および移植片対宿主病における胃腸への有害作用の処置のために、有用となり得る。一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における胃腸の炎症性疾患を処置する方法であって、哺乳動物に、本開示の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または薬学的に許容される担体と本開示の化合物もしくはその薬学的に許容される塩とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０１０５】
アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症促進性サイトカインの上昇に関連するとされてきた。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、白斑、乾癬、皮膚筋炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Netchiporoukら、Cell  Cycle.、２０１４年、１３巻、３３３１〜３３３５頁）およびサブタイプ（セザリー症候群、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫性弛緩皮膚、リンパ腫様丘疹症、慢性苔癬状粃糠疹、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、ＣＤ３０＋皮膚Ｔ細胞リンパ腫、続発性皮膚ＣＤ３０＋大細胞型リンパ腫、非菌状息肉腫ＣＤ３０−皮膚大細胞型Ｔ細胞リンパ腫、多形性Ｔ細胞リンパ腫、レンネルトリンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫）、結節性痒疹、扁平苔癬、原発性限局性皮膚アミロイド症、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主病の皮膚徴候、類天疱瘡、円板状ループス、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰部／陰嚢／肛門そう痒症、硬化性苔癬、ヘルペス後神経痛そう痒、扁平毛孔性苔癬および脱毛性毛嚢炎（foliculitis  decalvans）を含むがこれらに限定されない、多数の皮膚炎症またはそう痒状態において有益となり得る。特に、アトピー性皮膚炎（Baoら、JAK-STAT、２０１３年、２巻、ｅ２４１３７）、円形脱毛症（Xingら、Nat  Med.、２０１４年、２０巻、１０４３〜１０４９頁）、白斑（Craiglowら、JAMA  Dermatol.、２０１５年、１５１巻、１１１０〜１１１２頁）、結節性痒疹（Sonkolyら、J  Allergy  Clin  Immunol.、２００６年、１１７巻、４１１〜４１７頁）、扁平苔癬（Welz-Kubiakら、J  Immunol  Res.、２０１５年、ＩＤ：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイド症（Tanakaら、Br  J  Dermatol.、２００９年、１６１巻、１２１７〜１２２４頁）、水疱性類天疱瘡（Felicianiら、Int  J  Immunopathol  Pharmacol.、１９９９年、１２巻、５５〜６１頁）および移植片対宿主病の皮膚徴候（Okiyamaら、J  Invest  Dermatol.、２０１４年、１３４巻、９９２〜１０００頁）は、ＪＡＫ活性化を介してシグナル伝達するある特定のサイトカインの上昇を特徴とする。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、これらのサイトカインによって推進された関連する皮膚炎症またはそう痒症を緩和することができる場合がある。特に、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患の処置に有用となることが期待され得る。一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における炎症性皮膚疾患を処置する方法であって、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩と、医薬担体とを含む医薬組成物を、哺乳動物の皮膚に塗布するステップを含む、方法を提供する。一態様では、炎症性皮膚疾患は、アトピー性皮膚炎である。
【０１０６】
多くの眼疾患は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症促進性サイトカインの上昇に関連すると示されてきた。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性およびアトピー性角結膜炎を含むがこれらに限定されない、多数の眼疾患の処置に有用となり得る。特に、ブドウ膜炎（HoraiおよびCaspi、J  Interferon  Cytokine  Res、２０１１年、３１巻、７３３〜７４４頁）、糖尿病性網膜症（Abcouwer、J  Clin  Cell  Immunol、２０１３年、付録１、１〜１２頁）、糖尿病性黄斑浮腫（Sohnら、American  Journal  of  Opthamology、２０１１年、１５２巻、６８６〜６９４頁）、ドライアイ疾患（Stevensonら、Arch  Ophthalmol、２０１２年、１３０巻、９０〜１００頁）および加齢黄斑変性（Knickelbeinら、Int  Ophthalmol  Clin、２０１５年、５５巻（３号）、６３〜７８頁）は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するある特定の炎症促進性サイトカインの上昇を特徴とする。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、関連する眼炎症を緩和し疾患進行を逆転させる、または症状軽減を提供することができる場合がある。一態様では、したがって、本発明は、哺乳動物における眼疾患を処置する方法であって、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩と、医薬担体とを含む医薬組成物を、哺乳動物の目に投与するステップを含む、方法を提供する。一態様では、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性またはアトピー性角結膜炎である。一態様では、方法は、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を、硝子体内注射によって投与するステップを含む。本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を、眼疾患に有用な１つまたは複数の化合物と組み合わせて使用してもよい。
【０１０７】
本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、他の炎症性疾患、自己免疫疾患またはがん等の他の疾患を処置するためにも有用となり得る。本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、移植拒絶反応、眼球乾燥症、乾癬性関節炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、運動ニューロン病、骨髄異形成症候群、疼痛、サルコペニア、悪液質、敗血性ショック、全身性エリテマトーデス、白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、強直性脊椎炎、骨髄線維症、Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌、ホジキン病、乳がん、多発性骨髄腫、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、卵巣明細胞癌、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、真性赤血球増加症、シェーグレン症候群、軟部組織肉腫、肉腫、脾腫、Ｔ細胞リンパ腫およびサラセミアメジャーのうちの１つまたは複数を処置するために有用となり得る。
【０１０８】
併用療法
本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩は、疾患を処置するために同じ機序によってまたは異なる機序によって作用する１つまたは複数の作用物質と組み合わせて使用してよい。異なる作用物質を、順次にまたは同時に、別個の組成物でまたは同じ組成物で投与してよい。併用療法のための作用物質の有用なクラスは、ベータ２アドレナリン受容体アゴニスト、ムスカリン性受容体アンタゴニスト、グルココルチコイドアゴニスト、Ｇタンパク質共役受容体−４４アンタゴニスト、ロイコトリエンＤ４アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ３受容体アンタゴニスト、ヒスタミンＨ１受容体アンタゴニスト、免疫グロブリンＥアンタゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ１受容体アンタゴニスト、ヒスタミン受容体アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＩＬ−５アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ベータアドレナリン受容体アゴニスト、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト、ＣＦＴＲ刺激剤、免疫グロブリン変調剤、インターロイキン３３リガンド阻害剤、ＰＤＥ３阻害剤、ホスホイノシチド−３キナーゼデルタ阻害剤、トロンボキサンＡ２アンタゴニスト、エラスターゼ阻害剤、Ｋｉｔチロシンキナーゼ阻害剤、ロイコトリエンＥ４アンタゴニスト、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＰＧＤ２アンタゴニスト、ＴＮＦアルファリガンド阻害剤、ＴＮＦ結合剤、補体カスケード阻害剤、エオタキシンリガンド阻害剤、グルタチオンレダクターゼ阻害剤、ヒスタミンＨ４受容体アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、ＩＬ２遺伝子刺激剤、免疫グロブリンガンマＦｃ受容体ＩＩＢ変調剤、インターフェロンガンマリガンド、インターロイキン１３リガンド阻害剤、インターロイキン１７リガンド阻害剤、Ｌ−セレクチンアンタゴニスト、白血球エラスターゼ阻害剤、ロイコトリエンＣ４アンタゴニスト、ロイコトリエンＣ４シンターゼ阻害剤、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、メタロプロテアーゼ−１２阻害剤、メタロプロテアーゼ−９阻害剤、ダニアレルゲン変調剤、ムスカリン性受容体変調剤、ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニスト、核内因子カッパＢ阻害剤、ｐ−セレクチンアンタゴニスト、ＰＤＥ５阻害剤、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、ホスホイノシチド−３キナーゼガンマ阻害剤、ＴＬＲ−７アゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、アセチルコリン受容体アンタゴニスト、酸性哺乳類キチナーゼ阻害剤、ＡＣＴＨ受容体アゴニスト、アクチン重合変調剤、アデノシンＡ１受容体アンタゴニスト、アデニル酸シクラーゼ刺激剤、アドレナリン受容体アンタゴニスト、副腎皮質刺激（adrenocorticotrophic）ホルモンリガンド、アルコールデヒドロゲナーゼ５阻害剤、アルファ１アンチトリプシン刺激剤、アルファ１プロテイナーゼ阻害剤、アンドロゲン受容体変調剤、アンジオテンシン変換酵素２刺激剤、ＡＮＰアゴニスト、Ｂｃｒタンパク質阻害剤、ベータ１アドレナリン受容体アンタゴニスト、ベータ２アドレナリン受容体アンタゴニスト、ベータ２アドレナリン受容体変調剤、ベータアミロイド変調剤、ＢＭＰ１０遺伝子阻害剤、ＢＭＰ１５遺伝子阻害剤、カルシウムチャネル阻害剤、カテプシンＧ阻害剤、ＣＣＬ２６遺伝���阻害剤、ＣＣＲ３ケモカイン変調剤、ＣＣＲ４ケモカインアンタゴニスト、細胞接着分子阻害剤、シャペロニン刺激剤、キチナーゼ阻害剤、コラーゲンＩアンタゴニスト、補体Ｃ３阻害剤、ＣＳＦ−１アンタゴニスト、ＣＸＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、サイトカイン受容体共通ベータ鎖変調剤、細胞毒性Ｔリンパ球タンパク質−４刺激剤、デオキシリボヌクレアーゼＩ刺激剤、デオキシリボヌクレアーゼ刺激剤、ジペプチジルペプチダーゼＩ阻害剤、ＤＮＡジャイレース阻害剤、ＤＰプロスタノイド受容体変調剤、Ｅ−セレクチンアンタゴニスト、ＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ受容体阻害剤、エラスチン変調剤、エンドセリンＥＴ−Ａアンタゴニスト、エンドセリンＥＴ−Ｂアンタゴニスト、エポキシドヒドロラーゼ阻害剤、ＦＧＦ３受容体アンタゴニスト、Ｆｙｎチロシンキナーゼ阻害剤、ＧＡＴＡ３転写因子阻害剤、グルコシルセラミダーゼ変調剤、グルタメート受容体変調剤、ＧＭ−ＣＳＦリガンド阻害剤、グアニル酸シクラーゼ刺激剤、Ｈ＋Ｋ＋ＡＴＰアーゼ阻害剤、ヘモグロビン変調剤、ヘパリンアゴニスト、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ−２刺激剤、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、Ｉ−カッパＢキナーゼベータ阻害剤、ＩＣＡＭ１遺伝子阻害剤、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１７受容体変調剤、ＩＬ−２３アンタゴニスト、ＩＬ−４受容体変調剤、免疫グロブリンＧ変調剤、免疫グロブリンＧ１アゴニスト、免疫グロブリンＧ１変調剤、免疫グロブリンイプシロンＦｃ受容体ＩＡアンタゴニスト、免疫グロブリンガンマＦｃ受容体ＩＩＢアンタゴニスト、免疫グロブリンカッパ変調剤、インスリン増感剤、インターフェロンベータリガンド、インターロイキン１様受容体アンタゴニスト、インターロイキン１８リガンド阻害剤、インターロイキン受容体１７Ａアンタゴニスト、インターロイキン−１ベータリガンド阻害剤、インターロイキン−５リガンド阻害剤、インターロイキン−６リガンド阻害剤、ＫＣＮＡ電位開口型カリウムチャネル−３阻害剤、Ｋｉｔリガンド阻害剤、ラミニン−５アゴニスト、ロイコトリエンＣｙｓＬＴ１受容体アンタゴニスト、ロイコトリエンＣｙｓＬＴ２受容体アンタゴニスト、ＬＯＸＬ２遺伝子阻害剤、Ｌｙｎチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＡＲＣＫＳタンパク質阻害剤、ＭＤＲ関連タンパク質４阻害剤、メタロプロテアーゼ−２変調剤、メタロプロテアーゼ−９変調剤、ミネラルコルチコイド受容体アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ２受容体アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ４受容体アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ５受容体アンタゴニスト、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ａアゴニスト、ナチュラルキラー細胞受容体変調剤、ニコチン性ＡＣｈ受容体アルファ７サブユニット刺激剤、ＮＫ細胞受容体変調剤、核内因子カッパＢ変調剤、オピオイド増殖因子受容体アゴニスト、Ｐ−糖タンパク質阻害剤、Ｐ２Ｘ３プリン受容体アンタゴニスト、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ペプチダーゼ１変調剤、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ホスホリパーゼＣ阻害剤、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤１阻害剤、血小板活性化因子受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、プロスタサイクリンアゴニスト、タンパク質チロ��ンキナーゼ阻害剤、ＳＨ２ドメインイノシトールホスファターゼ１刺激剤、シグナル変換阻害剤、ナトリウムチャネル阻害剤、ＳＴＡＴ−３変調剤、幹細胞抗原−１阻害剤、スーパーオキシドジスムターゼ変調剤、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８阻害剤、ＴＧＦベータアゴニスト、ＴＧＦベータアンタゴニスト、トロンボキサンシンテターゼ阻害剤、胸腺間質性リンパ球新生因子（lymphoprotein）リガンド阻害剤、チモシンアゴニスト、チモシンベータ４リガンド、ＴＬＲ−８アゴニスト、ＴＬＲ−９アゴニスト、ＴＬＲ９遺伝子刺激剤、トポイソメラーゼＩＶ阻害剤、トロポニンＩ速骨格筋刺激剤、トロポニンＴ速骨格筋刺激剤、Ｉ型ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＩ型ＴＮＦ受容体変調剤、イオンチャネル変調剤、ウテログロビン刺激剤およびＶＩＰアゴニストを含むがこれらに限定されない。
【０１０９】
本発明のＪＡＫ阻害剤化合物と組み合わせて使用され得る具体的な作用物質は、ロシプターアセテート（ｒｏｓｉｐｔｏｒ  ａｃｅｔａｔｅ）、臭化ウメクリジニウム、セクキヌマブ、メトエンケファリンアセテート（ｍｅｔｅｎｋｅｆａｌｉｎ  ａｃｅｔａｔｅ）、トリデカクチドアセテート（ｔｒｉｄｅｃａｃｔｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）、プロピオン酸フルチカゾン、アルファ−シクロデキストリン安定化スルフォラファン、テゼペルマブ、フランカルボン酸モメタゾン、ＢＩ−１４６７３３５、デュピルマブ、アクリジニウム、ホルモテロール、ＡＺＤ−１４１９、ＨＩ−１６４０Ｖ、リビパンセル、ＣＭＰ−００１、マンニトール、ＡＮＢ−０２０、オマリズマブ、トレガリズマブ、ミティザックス（Ｍｉｔｉｚａｘ）、ベンラリズマブ、ゴリムマブ、ロフルミラスト、イマチニブ、ＲＥＧＮ−３５００、マシチニブ、アプレミラスト、ＲＰＬ−５５４、アクティミューン、アダリムマブ、ルパタジン、パログレリル、ＭＫ−１０２９、ベクロメタゾンジプロピオネート、フマル酸ホルモテロール、モガムリズマブ、セラトロダスト、ＵＣＢ−４１４４、ネミラルシブ（ｎｅｍｉｒａｌｉｓｉｂ）、ＣＫ−２１２７１０７、フェビピプラント、ダニリキシン、ボセンタン、アバタセプト、ＥＣ−１８、デュベリシブ、ドシパルスタット（ｄｏｃｉｐａｒｓｔａｔ）、シプロフロキサシン、サルブタモールＨＦＡ、エルドステイン、ＰｒＥＰ−００１、ネドクロミル、ＣＤＸ−０１５８、サルブタモール、エノボサーム、Ｒ−ＴＰＲ−０２２、レンジルマブ、フランカルボン酸フルチカゾン、ビランテロールトリフェニル酢酸塩、プロピオン酸フルチカゾン、サルメテロール、ＰＴ−００７、ＰＲＳ−０６０、レメステムセル−Ｌ、シトルリン、ＲＰＣ−４０４６、一酸化窒素、ＤＳ−１０２、ゲリリムズマブ（ｇｅｒｉｌｉｍｚｕｍａｂ）、アシテア、フランカルボン酸フルチカゾン、ウメクリジニウム、ビランテロール、ＡＧ−ＮＰＰ７０９、ガムネックス、インフリキシマブ、アンピオン、アキュマピモド（ａｃｕｍａｐｉｍｏｄ）、カナキヌマブ、ＩＮＳ−１００７、ＣＹＰ−００１、シルクマブ、プロピオン酸フルチカゾン、メポリズマブ、ピタバスタチン、ソリスロマイシン、エタネルセプト、アイバカフトール、アナキンラ、ＭＰＣ−３００−ＩＶ、臭化グリコピロニウム、臭化アクリジニウム、ＦＰ−０２５、リサンキズマブ、グリコピロニウム、フマル酸ホルモテロール、アディポセル、ＹＰＬ−００１、臭化チオトロピウム、臭化グリコピロニウム、インダカテロールマレイン酸塩、アンデカリキシマブ、オロダテロール、エソメプラゾール、イエダニワクチン、ヨモギ花粉アレルゲンワクチン、バモロロン、ゲファピクサント、レベフェナシン、ゲフィチニブ、リジョイン（ＲｅＪｏｉｎ）、タイペルカスト、ベドラドリン、ＳＣＭ−ＣＧＨ、ＳＨＰ−６５２、ＲＮＳ−６０、ブロダルマブ、ＢＩＯ−１１００６、臭化ウメクリジニウム、ビランテロールトリフェニル酢酸塩、臭化イプラトロピウム、トラロキヌマブ、ＰＵＲ−１８００、ＶＸ−５６１、ＶＸ−３７１、オロパタジン、ツロブテロール、フマル酸ホルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レスリズマブ、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、フマル酸ホルモテロール、臭化チオトロピウム、リゲリズマブ、ＲＵＴＩ、ベルチリムマブ、オマリズマブ、臭化グリコピロニウム、ＳＥＮＳ−１１１、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ＣＨＦ−５９９２、ＬＴ−４００１、インダカテロール、臭化グリコピロニウム、フランカルボン酸モメタゾン、フェキソフェナジン、臭化グリコピロニウム、アジスロマイシン、ＡＺＤ−７５９４、ホルモテロール、ＣＨＦ−６００１、バテフェンテロール、ＯＡＴＤ−０１、オロダテロール、ＣＪＭ−１１２、ロシグリタゾン、サルメテロール、セチピプラント、吸入インターフェロンベータ、ＡＺＤ−８８７１、プレカナチド、フルチカゾン、サルメテロール、エイコサペンタエン酸モノグリセリド、レブリキズマブ、ＲＧ−６１４９、ＱＢＫＰＮ、モメタゾン、インダカテロール、ＡＺＤ−９８９８、ピルビン酸ナトリウム、ジレウトン、ＣＧ−２０１、イミダフェナシン、ＣＮＴＯ−６７８５、ＣＬＢＳ−０３、モメタゾン、ＲＧＮ−１３７、プロカテロール、ホルモテロール、ＣＣＩ−１５１０６、ＰＯＬ−６０１４、インダカテロール、ベクロメタゾン、ＭＶ−１３０、ＧＣ−１１１２、アレルゴバクデポー（Ａｌｌｅｒｇｏｖａｃ  ｄｅｐｏｔ）、ＭＥＤＩ−３５０６、ＱＢＷ−２５１、ＺＰＬ−３８９、ウデナフィル、ＧＳＫ−３７７２８４７、レボセチリジン、ＡＸＰ−１２７５、ＡＤＣ−３６８０、ティマピプラント（ｔｉｍａｐｉｐｒａｎｔ）、アベジテロール、ＡＺＤ−７５９４、臭化イプラトロピウム、硫酸サルブタモール、タデキニグアルファ、ＡＣＴ−７７４３１２、ドルナーゼアルファ、イロプロスト、バテフェンテロール、フランカルボン酸フルチカゾン、アリカホルセン、シクレソニド、エメラミド（ｅｍｅｒａｍｉｄｅ）、アルホルモテロール、ＳＢ−０１０、オザグレル、ＢＴＴ−１０２３、デクトレクマブ、レブアルブテロール、プランルカスト、ヒアルロン酸、ＧＳＫ−２２９２７６７、ホルモテロール、ＮＯＶ−１４、ルシナクタント、サルブタモール、プレドニゾロン、エバスチン、デキサメタゾンシペシル酸エステル、ＧＳＫ−２５８６８８１、ＢＩ−４４３６５１、ＧＳＫ−２２５６２９４、ＶＲ−１７９、ＶＲ−０９６、ｈｄｍ−ＡＳＩＴ＋、ブデソニド、ＧＳＫ−２２４５０３５、ＶＴＸ−１４６３、エメダスチン、デクスプラミペキソール、レブアルブテロール、Ｎ−６０２２、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、ＰＩＮ−２０１１０４、ＯＰＫ−００１８、ＴＥＶ−４８１０７、スプラタスト、ＢＩ−１０６０４６９、ゲミルカスト（Ｇｅｍｉｌｕｋａｓｔ）、インターフェロンガンマ、ダラザチド、ビラスチン、プロピオン酸フルチカゾン、キシナホ酸サルメテロール、ＲＰ−３１２８、臭化ベンシクロキジウム、レスリズマブ、ＰＢＦ−６８０、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、プランルカスト、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、臭化チオトロピウム一水和物、マシルカスト、ＲＧ−７９９０、ドキソフィリン、アベジテロール、臭化グリコピロニウム、ＴＥＶ−４６０１７、ＡＳＭ−０２４、プロピオン酸フルチカゾン、臭化グリコピロニウム、キシナホ酸サルメテロール、サルブタモ���ル、ＴＡ−２７０、フルニソリド、クロモグリク酸ナトリウム（sodium  chromoglycate）、イプシガム（Ｅｐｓｉ−ｇａｍ）、ＺＰＬ−５２１、サルブタモール、アビプタジル、ＴＲＮ−１５７、ザフィルルカスト、ステムピューセル（Ｓｔｅｍｐｅｕｃｅｌ）、ペミロラストナトリウム、ナドロール、プロピオン酸フルチカゾン＋キシナホ酸サルメテロール、ＲＶ−１７２９、硫酸サルブタモール、二酸化炭素＋ペルフルオロオクチルブロミド、ＡＰＬ−１、デクトレクマブ＋ＶＡＫ−６９４、アセチルサリチル酸リシン、ジレウトン、ＴＲ−４、ヒト同種（allogenic）脂肪由来間葉系前駆細胞療法、ＭＥＤＩ−９３１４、ＰＬ−３９９４、ＨＭＰ−３０１、ＴＤ−５４７１、ＮＫＴＴ−１２０、ペミロラスト、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、トランチンテロール、モノナトリウムアルファルミノール、ＩＭＤ−１０４１、ＡＭ−２１１、ＴＢＳ−５、ＡＲＲＹ−５０２、セラトロダスト、組換えミジスマーゼ、ＡＳＭ−８、デフラザコート、バンブテロール、ＲＢｘ−１００１７６０９、イプラトロピウム＋フェノテロール、フルチカゾン＋ホルモテロール、エピナスチン、ＷＩＮ−９０１Ｘ、ＶＡＬＥＲＧＥＮ−ＤＳ、オリゴＧ−ＣＯＰＤ−５／２０、ツロブテロール、オキシスタービュヘイラー、ＤＳＰ−３０２５、ＡＳＭ−０２４、ミゾラスチン、ブデソニド＋サルメテロール、ＬＨ−０１１、ＡＸＰ−Ｅ、ヒスタミンヒト免疫グロブリン、ＹＨＤ−００１、テオフィリン、アンブロキソール＋エルドステイン、ラマトロバン、モンテルカスト、プランルカスト、ＡＧ−１３２１００１、ツロブテロール、イプラトロピウム＋サルブタモール、トラニラスト、スレプタン酸メチルプレドニゾロン、コルホルシンダロパート、レピリナストおよびドキソフィリンを含むがこれらに限定されない。
【０１１０】
本明細書において、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つまたは複数の他の治療剤とを含む、医薬組成物も提供される。治療剤は、上記で指定した作用物質のクラスからおよび上述した具体的な作用物質のリストから、選択されてよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、肺への送達に好適である。一部の実施形態では、医薬組成物は、吸入または噴霧投与に好適である。一部の実施形態では、医薬組成物は、乾燥粉末または液体組成物である。
【０１１１】
さらに、方法態様では、本発明は、哺乳動物における疾患または障害を処置する方法であって、哺乳動物に、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩および１つまたは複数の他の治療剤を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０１１２】
併用療法において使用される場合、作用物質は、単一医薬組成物で製剤化されてもよく、あるいは、作用物質は、同時にまたは別個の時間に、同じまたは異なる投与経路によって投与される別個の組成物で提供されてもよい。そのような組成物は、別個に包装することができ、またはキットとして一緒に包装されてもよい。キット内の２つまたはそれよりも多くの治療剤は、同じ投与経路によってまたは異なる投与経路によって投与されてよい。
【０１１３】
本発明の化合物は、下記の実施例において記述される通り、酵素結合アッセイにおいてＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２酵素の強力阻害剤であること、細胞アッセイにおいて細胞毒性なしに強力な機能活性を有すること、ならびに前臨床モデルにおいてＪＡＫ阻害の薬力学的効果を発揮することが実証されている。
【実施例】
【０１１４】
下記の合成および生物学的実施例は、本発明を例証するために提供されるものであり、本発明の範囲をいかようにも限定するものとして解釈されるべきではない。以下の実施例において、下記の略語は、別段の指示がない限り、下記の意味を有する。以下で定義されていない略語は、それらの一般に認められている意味を有する。
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ｈ＝時間
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＩＰＡｃ＝酢酸イソプロピル
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｉｎ＝分
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４＝テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＲＴ＝室温
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラト）ジボロン＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
【０１１５】
試薬および溶媒は、商業供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａ等）から購入し、さらに精製することなく使用した。反応混合物の進行を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（分析用ＨＰＬＣ）および質量分析によってモニターした。反応混合物を、各反応において具体的に記述されている通りに後処理し、一般には、反応混合物を、抽出、ならびに、温度および溶媒依存性結晶化、および沈殿等の他の精製方法によって精製した。加えて、反応混合物を、カラムクロマトグラフィーによってまたは分取ＨＰＬＣによって、典型的には、Ｃ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離液を使用して、慣用的に精製した。典型的な分取ＨＰＬＣ条件を以下に記述する。
【０１１６】
反応生成物の特徴付けは、質量分析および１Ｈ−ＮＭＲ分光分析によって慣用的に行った。ＮＭＲ分析のために、試料を重水素化溶媒（ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３またはｄ６−ＤＭＳＯ等）に溶解し、標準的な観察条件下、Ｖａｒｉａｎジェミニ２０００機器（４００ＭＨｚ）で１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを獲得した。化合物の質量分析同定は、自動精製システムと接続された、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）モデルＡＰＩ１５０ＥＸ機器またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）３１００機器を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって実施した。
【０１１７】
分取ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８、５μｍ。２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ  ２１×２５０またはＣ１４、５μｍ  ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流量：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入体積：（１００〜１５００μＬ）
検出器波長：２１４ｎｍ
【０１１８】
粗化合物を、１：１  水：酢酸に、約５０ｍｇ／ｍＬで溶解した。２．１×５０ｍｍ  Ｃ１８カラムを使用して４分間の分析スケールテスト実行を、続いて、分析スケールテスト実行のＢ保持％に基づく勾配で１００μＬの注射を使用して１５または２０分間の分取スケール実行を行った。正確な勾配は、試料依存性であった。最良の分離のために、不純物が連なっている試料を２１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ  Ｃ１４カラムで確認した。所望生成物を含有する画分を、質量分光分析によって同定した。
【０１１９】
調製１：２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（９）
【化１５】
0006974487.tif 000024
（ａ）１−（ベンジルオキシ）−４−ブロモ−５−エチル−２−フルオロベンゼン（２１）
ＡＣＮ（２５０ｍＬ）中の４−ブロモ−５−エチル−２−フルオロフェノール（２０）（２０ｇ、９１０．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３１．５５ｇ、２２８．３ｍｍｏｌ）、続いて、臭化ベンジル（１３．１０ｍＬ、１０９．５８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られた反応混合物を８０℃で２時間にわたって撹拌した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し（３回）、合わせ、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、表題中間体を淡黄色の油性液体（２５ｇ、８９％収率）として生じさせた。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.48  -  7.30  (m,  5H),  7.27  (d,  J  =  10.5  Hz,  1H),  6.87  (d,  J  =  8.7  Hz,  1H),  5.12  (s,  2H),  2.66  (q,  J  =  7.5  Hz,  2H),  1.16  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H).
【０１２０】
（ｂ）２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（９）
ジオキサン（１００ｍＬ）中の前のステップの生成物（２１）（１２．５ｇ、４０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン（１５．４０ｇ、６０．６７ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（１１．９ｇ、１２１．３５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、窒素で１５分間にわたってパージし、続いて、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ），ジクロロメタンとの複合体（１．６５ｇ、２．０２３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を撹拌し、１１０℃で３時間にわたって加熱し、セライトに通して濾過し、残留物をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を過剰なＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）、続いてブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを、（１００〜２００）シリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製し、３〜５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、所望生成物をオフホワイトの固体（９．５０ｇ、６６％収率）として生じさせた。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.54  -  7.27  (m,  6H),  6.81  (d,  J  =  7.9  Hz,  1H),  5.16  (s,  2H),  2.84  (q,  J  =  7.5  Hz,  2H),  1.32  (s,  12H),  1.14  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H).
【０１２１】
調製２：６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３−（トリメチルスタンニル）−１Ｈ−インダゾール（３’）
【化１６】
0006974487.tif 000025
（ａ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（２２）
ＤＭＦ：Ｈ２Ｏ（４８０：１２０ｍＬ）中の６−ブロモ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（１０）（５０ｇ、１７８．５７ｍｍｏｌ）および２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（９）（７６．３ｇ、２１４．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ３ＰＯ４（９４．６４ｇ、４４６．８６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素で１５分間にわたって脱気し、次いで、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２触媒（６．２６ｇ、８．９３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を窒素で５分間にわたって再度脱気し、撹拌し、１００〜１１０℃で５時間にわたって加熱した。反応混合物をセライトに通して濾過し、残留物をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、冷水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、粗生成物を提供し、これを、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題中間体を白色固体（６５ｇ、８６％収率）として生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２７Ｈ２７ＦＮ２Ｏ２の計算値４３１．２１、実測値４３１．４６。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  8.06  -  7.98  (m,  2H),  7.70  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  7.51  -  7.32  (m,  5H),  7.08  (dd,  J  =  809.6,  8.3  Hz,  1H),  7.03  (d,  J  =  11.9  Hz,  1H),  6.95  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  5.76  -  5.64  (m,  1H),  5.20  (s,  2H),  4.04  (d,  J  =  10.1  Hz,  1H),  3.72  (t,  J  =  9.7  Hz,  1H),  2.52  (q,  J  =  7.5  Hz,  2H),  2.22  -  2.02  (m,  3H),  1.80  -  1.71  (m,  3H),  1.06  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H).
【０１２２】
（ｂ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−インダゾール（２３）
メタノール（７００ｍＬ）中の前のステップの生成物（２２）（６５ｇ、１５１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、濃ＨＣｌ（１２０ｍＬ）を添加し、得られた溶液を６０〜６５℃で３時間にわたって加熱し、室温に冷却し、真空で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および水で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮して、表題中間体を白色固体（５２ｇ、９９％（粗製物））として生じさせた。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  8.13  (s,  1H),  7.77  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.59  -  7.30  (m,  6H),  7.10  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.01  (d,  J  =  11.8  Hz,  1H),  6.96  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.21  (s,  2H),  2.53  (q,  J  =  7.5  Hz,  2H),  1.05  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H).
【０１２３】
（ｃ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−ヨード−１Ｈ−インダゾール（２４）
ＤＭＦ（４００ｍＬ）中の６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−インダゾール（２３）（５６ｇ、１６１．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨ（３６．２ｇ、６４７．３９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５分間にわたって撹拌した。ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のヨウ素（８２．２ｇ、３２３．６９ｍｍｏｌ）の溶液を０℃でゆっくりと添加し、室温で３０分間にわたって撹拌し、水（３×１５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液（３×２００ｍＬ）および水（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これを、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題中間体を帯褐色半固体（６４ｇ、８４％収率）として生じさせた。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  10.49  (s,  1H),  7.57  -  7.32  (m,  7H),  7.16  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.04  -  6.91  (m,  2H),  5.20  (s,  2H),  2.51  (q,  J  =  7.4  Hz,  2H),  1.04  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H).
【０１２４】
（ｄ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−ヨード−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（２５）
ＤＣＭ（７００ｍＬ）中の前のステップの生成物（２４）（６０ｇ、１２７．１２ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（p-toluensulfonic  acid）（４．８４ｇ、２５．４２３ｍｍｏｌ）、続いて、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１７．４３ｍＬ、１９０．６８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を提供し、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）によって精製して、表題中間体をオフホワイトの固体（６４ｇ、９１％収率）として生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２７Ｈ２６ＦＩＮ２Ｏ２の計算値５５７．１０、実測値５５７．３０。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.56  -  7.31  (m,  7H),  7.14  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.01  (d,  J  =  11.8  Hz,  1H),  6.95  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  5.68  (d,  J  =  9.3  Hz,  1H),  5.20  (s,  2H),  4.08  -  3.99  (m,  1H),  3.77  -  3.64  (m,  1H),  2.50  (q,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.23  -  1.97  (m,  3H),  1.81  -  1.68  (m,  3H),  1.06  (t,  J  =  7.4  Hz,  3H).
【０１２５】
（ｅ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３−（トリメチルスタンニル）−１Ｈ−インダゾール（３’）
トルエン（１５０ｍＬ）中の６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−ヨード−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（２５）（２０ｇ、３５．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサメチルジスズ（９．２ｍＬ、４３．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素で２０分間にわたって脱気し、続いて、テトラキス（２．０ｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、１００℃で２時間にわたって撹拌し、室温に冷却し、セライトに通して濾過し、残留物をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（中性アルミナ）によって精製し、２〜５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、表題化合物（１７．５０ｇ、８２％収率）を生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２７Ｈ２６ＦＩＮ２Ｏ２の計算値５５７．１０、実測値５５７．３０。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３０Ｈ３５ＦＮ２Ｏ２Ｓｎの計算値５９５．１７、５９３．１７、実測値５９５．４９、５９３．５５。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.68  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.57  -  7.29  (m,  6H),  7.13  -  7.00  (m,  2H),  6.96  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  5.81  -  5.68  (m,  1H),  5.21  (s,  2H),  4.13  -  4.00  (m,  1H),  3.81  -  3.66  (m,  1H),  2.54  (q,  J  =  7.3  Hz,  2H),  2.23  -  2.00  (m,  2H),  1.87  -  1.59  (m,  4H),  1.08  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H),  0.47  (s,  9H).
【０１２６】
調製３：５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３−（（２−トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（４’）
【化１７】
0006974487.tif 000026
（ａ）（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（１１）
水（４２０ｍＬ）中のＬ−ヒスチジン（２６）（５０ｇ、３２２．２４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、濃ＨＣｌ（２９ｍＬ）を０℃で滴下添加し、続いて、ホルムアルデヒド（５５ｍＬ、６７６．７２ｍｍｏｌ）を０℃で一度に添加した。得られた反応混合物を３０分間にわたって撹拌し、次いで、７５℃で６時間にわたって加熱し、濃縮した。得られた粗製物をジエチルエーテルとともに２時間にわたって撹拌し、濾過し、ＩＰＡ：ＴＨＦ（１００：３００ｍＬ）で洗浄して、表題中間体のＨＣｌ塩をオフホワイトの固体（７５ｇ  ９９％収率（粗製物））として提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ７Ｈ９Ｎ３Ｏ２の計算値１６８．０７、実測値１６８．１７。
【０１２７】
（ｂ）メチル（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボキシレート（２７）
メタノール（１５００ｍＬ）中の前のステップの生成物（１１）（７５．０ｇ、３１２．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＳＯＣｌ２（４５．６ｍＬ、６２５ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加し、室温で１６時間にわたって撹拌し、次いで、１時間にわたって還流状態まで加熱した（７０℃）。溶媒を蒸留によって除去し、粗生成物を、メタノール、続いて、ジエチルエーテルで磨砕して、表題中間体の粗ＨＣｌ塩をオフホワイトの固体（８０ｇ粗製物）として提供した。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  9.05  (s,  1H),  4.71  (dd,  J  =  9.4,  5.2  Hz,  1H),  4.36  (d,  J  =  15.5  Hz,  1H),  4.30  (d,  J  =  15.6  Hz,  1H),  3.82  (s,  3H),  3.44  -  3.21  (m,  2H).
【０１２８】
（ｃ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（２８）
メタノール（１０００ｍＬ）中の前のステップの生成物（２７）（８０．０ｇ、３１４．９６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２８２ｍＬ、１５７４ｍｍｏｌ）、続いて、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１７２ｍＬ、７８７．４８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１６時間にわたって撹拌し、次いで、液体ＮＨ３（１５０ｍＬ、水中２５％）を添加し、反応混合物を室温で１６時間にわたって再度撹拌し、メタノールを蒸留によって除去し、残留物をＤＣＭ（３×２００ｍＬ）中で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）によって精製し、５％ＭｅＯＨ：ＤＣＭで溶離して、表題中間体（４１ｇ、４６％収率）を生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１３Ｈ１９Ｎ３Ｏ４の計算値２８２．１４、実測値２８２．２１。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  11.85  (s,  1H),  7.50  (s,  1H),  5.18  (dd,  J  =  49.3,  5.1  Hz,  1H),  4.51  (t,  J  =  14.2  Hz,  1H),  4.09  (dd,  J  =  43.9,  16.1  Hz,  1H),  3.59  (s,  3H),  3.08  (d,  J  =  15.5  Hz,  1H),  2.94  (d,  J  =  15.1  Hz,  1H),  1.45  (s,  9H).
【０１２９】
（ｄ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（２９）
ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の前のステップの生成物（２９）（４１．０ｇ、１４５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（６６．０ｇ、２９１．８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、得られた溶液を室温で４時間にわたって撹拌し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機部分を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（３×２００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、表題化合物６０ｇ（粗製物）を提供し、これを、さらに精製することなく次のステップにおいて使用した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１３Ｈ１８ＩＮ３Ｏ４の計算値４０８．０３、実測値４０８．３１。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.48  (s,  1H),  5.34  -  4.97  (m,  1H),  4.67  -  4.35  (m,  1H),  4.12  -  3.95  (m,  1H),  3.60  (s,  3H),  3.14  -  2.82  (m,  2H),  1.44  (s,  9H).
【０１３０】
（ｅ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３−（（２−トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（４’）
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（２９）（４０ｇ、０．０９８ｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（３５．１ｍＬ、０．１９ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を１０分間にわたって撹拌し、次いで、２−（トリメチルシリル）−エトキシメチルクロリド（１９．１ｍＬ、０．１０ｍｏｌ）を０℃で滴下添加した。得られた反応混合物を室温で３時間にわたって撹拌した。４時間後、冷やした水を添加し、反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、２０〜３５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離して、表題生成物を淡黄色の粘性液体（２７ｇ）として生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ１９Ｈ３２ＩＮ３Ｏ５Ｓｉの計算値５３８．１２、実測値５３８．４２。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  5.33  -  5.04  (m,  3H),  4.79  -  4.56  (m,  1H),  4.54  -  4.14  (m,  1H),  3.60  (s,  3H),  3.47  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  3.31  -  3.16  (m,  1H),  2.97  (t,  J  =  18.9  Hz,  1H),  1.44  (s,  9H),  0.92  -  0.74  (m,  2H),  -0.03  (s,  9H).
【０１３１】
調製４：（６Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（７’）
【化１８】
0006974487.tif 000027
（ａ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（６Ｓ）−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（５’）
トルエン（５００ｍＬ）中の５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３−（（２−トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（４’）（１７．０ｇ、３１．６５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３−（トリメチルスタンニル）−１Ｈ−インダゾール（３’）（２０ｇ、３４．８２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで１５分間にわたってパージし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３．６ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（１．２０ｇ、６．３３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１２０℃で１６時間にわたって撹拌した。反応混合物をセライトに通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（レディセップ８０ｇカラム）によって精製し、ＤＣＭで１０分間にわたって、次いで、ヘキサン中１５〜２０％ＥｔＯＡｃで溶離して、表題中間体を黄色固体（１５．１０ｇ、５８％収率）として生じさせた。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ４６Ｈ５８ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値８４０．４１、実測値８４０．５４。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  8.43  (s,  1H),  7.54  -  7.33  (m,  6H),  7.20  (s,  1H),  7.05  (d,  J  =  11.4  Hz,  1H),  6.95  (d,  J  =  8.5  Hz,  1H),  6.09  -  5.69  (m,  3H),  5.59  -  5.36  (m,  1H),  5.20  (s,  2H),  4.97  -  4.80  (m,  1H),  4.12  -  3.90  (m,  1H),  3.68  (s,  3H),  3.57  -  3.47  (m,  2H),  3.40  (d,  1H),  3.21  -  3.05  (m,  1H),  2.74  -  2.34  (m,  4H),  2.25  -  2.07  (m,  2H),  1.94  -  1.65  (m,  4H),  1.54  (s,  9H),  1.12  -  0.99  (m,  3H),  0.91  -  0.75  (m,  2H),  -0.12  (s,  9H).
【０１３２】
（ｂ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（６Ｓ）−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（６’）
丸底フラスコに、トルエン（４００ｍＬ）中の前のステップの生成物（５’）（１５．０ｇ、１７．８５ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（４６．３ｍＬ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（７．１５ｍＬ、３５．７０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４８時間にわたって激しく還流させ（１４０℃）、水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。懸濁液を濾過し、濾液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（レディセップ８０ｇカラム、ヘキサン中０〜５％ＥｔＯＡｃ）によって２０分間にわたって精製して、過剰なベンジルアルコールを除去し、次いで、ヘキサン中１０〜１５％ＥｔＯＡｃで溶離して、表題中間体を提供した。１Ｈ  ＮＭＲは構造と一致している。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ５２Ｈ６２ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値９１６．４４、実測値９１６．８６。
【０１３３】
（ｃ）（６Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（７’）
１：１  ＩＰＡ：ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の前のステップの生成物（６’）（２１．０ｇ、２２．９２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２（５．０ｇ）を添加した。反応混合物を、水素バルーン下、室温で１６時間にわたって撹拌し、セライトに通して濾過し、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（レディセップ８０ｇカラム、ヘキサン中２５〜４０％ＥｔＯＡｃで溶離）によって精製して、表題化合物（６．１ｇ、８．２９ｍｍｏｌ）をオフホワイトの固体として提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３８Ｈ５０ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値７３６．３５、実測値７３６．５。１Ｈ  ＮＭＲは構造と一致している。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３８Ｈ５０ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値７３６．３５、実測値７３６．５。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.94  (s,  1H),  9.86  (s,  1H),  8.34  (t,  J  =  7.6  Hz,  1H),  7.66  (s,  1H),  7.20  (d,  J  =  8.7  Hz,  1H),  7.03  (d,  J  =  11.8  Hz,  1H),  6.93  (d,  J  =  9.1  Hz,  1H),  6.11  -  5.77  (m,  3H),  5.33  -  5.06  (m,  1H),  4.87  -  4.56  (m,  1H),  4.52  -  4.14  (m,  1H),  3.97  -  3.69  (m,  2H),  3.53  -  3.40  (m,  2H),  3.23  -  3.11  (m,  1H),  3.11  -  2.93  (m,  1H),  2.47  -  2.44  (m,  2H),  2.13  -  1.96  (m,  2H),  1.68  (d,  J  =  70.9  Hz,  4H),  1.48  (s,  9H),  1.02  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H),  0.86  -  0.68  (m,  2H),  -0.17  (s,  9H).
【０１３４】
調製５：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（８’）
【化１９】
0006974487.tif 000028
５：１  ジオキサン：水（６０ｍＬ）中の（６Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）−メチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（７’）（５．７ｇ、７．７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、濃ＨＣｌ（２０ｍＬ）を０℃で滴下添加した。反応混合物を加温し、９０℃で１６時間にわたって撹拌し、真空下で蒸留して、粗残留物を提供し、これを、冷やしたジエチルエーテルおよびアセトニトリルで順次に磨砕して、表題化合物のＨＣｌ塩（３．６ｇ、９５％収率）を薄褐色固体として提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２２Ｈ２０ＦＮ５Ｏ３の計算値４２２．１６、実測値４２２．２４。1H  NMR  (400  MHz,  D20/DMSO-d6)  δ  8.22  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.49  (s,  1H),  7.19  (d,  J  =  8.1  Hz,  1  H),  6.99  (d,  J  =  11.9  Hz,  1  H),  6.91  (d,  J  =  9.0  Hz,  1H),  4.56  -  4.51  (m,  1H),  4.36  (d,  J  =  15.5  Hz,  1H),  4.30  (d,  J  =  15.5  Hz,  1H),  3.35  -  3.25  (m,  1H),  3.15  -  3.05  (m,  1H),  2.4  -  2.55  (m,  2H),  0.97  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H).
【０１３５】
調製６：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化２０】
0006974487.tif 000029
ＤＭＦ（７ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（４００ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）（８’）およびプロピオンアルデヒド（０．０９５ｍＬ、１．３１０ｍｍｏｌ）の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１６５ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（１７９ｍｇ、３７％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２５Ｈ２６ＦＮ５Ｏ３の計算値４６４．２０、実測値４６４．５。
【０１３６】
調製７：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化２１】
0006974487.tif 000030
ＤＭＦ（７ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（８’）（４００ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）、アセトン（０．１９２ｍＬ、２．６２ｍｍｏｌ）および酢酸（０．１５０ｍＬ、２．６２ｍｍｏｌ）の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２７４ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（１１５ｍｇ、２３％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２５Ｈ２６ＦＮ５Ｏ３の計算値４６４．２０、実測値４６４．５。
【０１３７】
調製８：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化２２】
0006974487.tif 000031
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（８’）（３００ｍｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）および水中３７ｗｔ．％ホルムアルデヒド（０．０５９ｍＬ、０．７８６ｍｍｏｌ）の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１６５ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（２５ｍｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１００ｇカラム、５〜７５％ＡＣＮ／水）によって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（８５ｍｇ、２４％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２３Ｈ２２ＦＮ５Ｏ３の計算値４３６．１７、実測値４３６．４５。
【０１３８】
調製９：（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化２３】
0006974487.tif 000032
ＤＭＦ（７ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（８’）（４５０ｍｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）およびアセトアルデヒド（０．０８３ｍＬ、１．４７４ｍｍｏｌ）の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２４７ｍｇ、３．９３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（１１２ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を濃縮し、１：１  酢酸：水＋３００μＬのＴＦＡ（７ｍＬ）に溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（１００ｇカラム、５〜６５％ＡＣＮ／水）によって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（１６５ｍｇ、０．２９３ｍｍｏｌ、３０％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２４Ｈ２４ＦＮ５Ｏ３の計算値４５０．１９、実測値４５０。
【０１３９】
（実施例２）
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化２４】
0006974487.tif 000033
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（１７９ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン，２ＨＣｌ（１０７ｍｇ、０．４６５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１６２ｍＬ  ０．９３０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（１７７ｍｇ、０．４６５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ヒドラジン（５当量）を添加し、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（６３ｍｇ、２６％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３０Ｈ３６ＦＮ７Ｏ２の計算値５４６．２９、実測値５４６．７。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.90 (s, 1H), 8.29 (dd, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.07 (d, 1H), 7.01 (d,1H), 6.89 (d, 1H), 4.35 - 4.18 (m, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 1H), 3.94 - 3.73 (m,3H), 3.70 - 3.57 (m, 2H), 3.06 - 2.94 (m, 2H), 2.87 - 2.66 (m, 2H), 2.48 - 2.40(m, 2H), 2.13 - 2.00 (m, 6H), 1.07 (t, 3H), 1.03 - 0.93 (m, 6H).
【０１４０】
（実施例４）
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化２５】
0006974487.tif 000034
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン，２ＨＣｌ（２７．０ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０６４ｍＬ、０．３６４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（２９．６ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ヒドラジン（５当量）を添加し、反応混合物を室温で１０分間にわたって撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（２９．６ｍｇ、７４％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３０Ｈ３６ＦＮ７Ｏ２の計算値５４６．２９、実測値５４６．６。
【０１４１】
（実施例８）
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化２６】
0006974487.tif 000035
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の、（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−３−トリメチルアゼチジン−３−アミン，２ＨＣｌ（２９．２ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７３ｍＬ、０．４１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（２９．６ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ヒドラジン（５当量）を添加し、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（２４．７ｍｇ、６０％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３１Ｈ３８ＦＮ７Ｏ２の計算値５６０．３１、実測値５６０．２。
【０１４２】
（実施例８−２２）
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化２７】
0006974487.tif 000036
（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン（１６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０３７ｍＬ、０．２１３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．０ｍｌ）に溶解し、次いで、ＨＡＴＵ（３０．４ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で６時間にわたって撹拌した。ヒドラジン（１５μＬ）を添加し、次いで、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（２７ｍｇ、６６％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２９Ｈ３４ＦＮ７Ｏ２の計算値５３２．６、実測値５３２．２。
【０１４３】
（実施例８−２３）
（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化２８】
0006974487.tif 000037
（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，３−トリメチルアゼチジン−３−アミン（１８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０３７ｍＬ、０．２１３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．０ｍｌ）に溶解し、次いで、ＨＡＴＵ（３０．４ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で６時間にわたって撹拌した。ヒドラジン（１５μＬ）を添加し、次いで、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（２８ｍｇ、６８％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３０Ｈ３６ＦＮ７Ｏ２の計算値５４６．７、実測値５４６．２。
【０１４４】
（実施例８−１４）
（Ｓ）−（５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（３−（ピペリジン−１−イル）アゼチジン−１−イル）メタノン，２ＴＦＡ
【化２９】
0006974487.tif 000038
（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（４０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）、１−（３−アゼチジニル）ピペリジン（２９．９ｍｇ、０．２１３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０５０ｍｌ、０．２８４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．５ｍｌ）に溶解し、次いで、ＨＡＴＵ（４０．５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間にわたって撹拌した。ヒドラジン（０．０１１ｍｌ、０．３５５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１０分間にわたって撹拌した。次いで、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（３６ｍｇ、６３％収率）を提供した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ３２Ｈ３８ＦＮ７Ｏ２の計算値５７２．７、実測値５７２．５。
【０１４５】
同様の合成方法を使用して、表１の化合物を調製した。下記の表において、任意の列における空白は、水素原子を示し、表の見出しとなる構造における＊は、キラル中心を示し、置換基の前の表記（Ｒ）または（Ｓ）は、その置換基が結合している炭素原子の配置を表示する。
【表１】
0006974487.tif 000039
【０１４６】
生物学的アッセイ
本発明の化合物を、下記の生物学的アッセイのうちの１つまたは複数において特徴付けた。
【０１４７】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
４つのランサスクリーンＪＡＫ生化学的アッセイ（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）のパネルを、共通のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）中で行った。組換えＧＳＴタグ付きＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ付きＳＴＡＴ１ペプチド基質を、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【０１４８】
連続希釈化合物を、４つのＪＡＫ酵素のそれぞれおよび基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、周囲温度で１時間にわたってプレインキュベートした。その後、ＡＴＰを、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積で添加して、キナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２についての最終酵素濃度は、それぞれ、４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり、使用した対応するＫｍ  ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであるのに対し、基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間にわたって進めさせた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（１０ｍＭ最終濃度）およびＴｂ抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２ｎＭ最終濃度）の１０μＬの調製物を添加した。プレートを周囲温度で１時間にわたってインキュベートさせた後、エンビジョンリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。放出比シグナル（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、ＤＭＳＯおよびバックグラウンド対照に基づくパーセント阻害値を算出するために利用した。
【０１４９】
用量応答分析のために、パーセント阻害データを化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を４パラメーターロバスト当てはめモデルからプリズムソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて決定した。結果をｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の対数）として表現し、その後、チェン−プルソフ式を使用して、ｐＫｉ（解離定数Ｋｉの負の対数）に変換した。
【０１５０】
４つのＪＡＫアッセイのそれぞれにおいて、より低いＫｉ値またはより高いｐＫｉ値を有する試験化合物は、ＪＡＫ活性のより大きい阻害を示す。
【０１５１】
アッセイ２：細胞ＪＡＫＩ効力アッセイ
アルファスクリーンＪＡＫＩ細胞効力アッセイを、ＢＥＡＳ−２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）におけるインターロイキン−１３（ＩＬ−１３、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）誘発性ＳＴＡＴ６リン酸化を測定することによって行った。抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、アルファスクリーンアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）とコンジュゲートさせたのに対し、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＥＺ−リンクスルホ−ＮＨＳ−ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してビオチン化した。
【０１５２】
ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ−１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、３７℃で増殖させた。アッセイの１日目、細胞を、２５μＬの培地を加えた白色ポリ−Ｄ−リシンコーティング３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に７，５００細胞／ウェル密度で播種し、インキュベーター内で終夜接着させた。アッセイの２日目、培地を除去し、用量応答の試験化合物を含有する１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩類溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）で置きかえた。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、培地中でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。細胞を、試験化合物とともに３７℃で１時間にわたってインキュベートし、続いて、１２μｌの予め温めておいたＩＬ−１３（アッセイ緩衝液中８０ｎｇ／ｍＬ）を刺激のために添加した。３７℃で３０分間にわたってインキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ−１３を含有）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、ならびにＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製のコンプリートウルトラミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰを補充）。プレートを周囲温度で３０分間にわたって振とうした後、検出試薬を添加した。ビオチン抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６コンジュゲートアクセプタービーズの混合物を最初に添加し、周囲温度で２時間にわたってインキュベートし、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加した。最低でも２時間のインキュベーション後、アッセイプレートをエンビジョンプレートリーダーで読み取った。アルファスクリーン発光シグナルを記録し、ＤＭＳＯおよびバックグラウンド対照に基づくパーセント阻害値を算出するために利用した。
【０１５３】
用量応答分析のために、パーセント阻害データを化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を４パラメーターロバスト当てはめモデルからプリズムソフトウェアを用いて決定した。結果を、ＩＣ５０値の負の対数であるｐＩＣ５０として表現してもよい。
【０１５４】
このアッセイにおいて、より低いＩＣ５０値またはより高いｐＩＣ５０値を有する試験化合物は、ＩＬ−１３誘発性ＳＴＡＴ６リン酸化のより大きい阻害を示す。
【０１５５】
Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏアッセイ結果
本発明の選択化合物を、４つのＪＡＫ酵素アッセイ；ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴｙｋ２、ならびに上述したＢＥＡＳ−２Ｂ細胞効力アッセイにおいて試験した。以下の表１９に示されている通り、ＪＡＫ１酵素効力は、ＢＥＡＳ−２Ｂアッセイにおいて汎ＪＡＫ酵素活性および細胞効力の両方を予測するものであることが観察された。したがって、作製された化合物すべてを、ＪＡＫ１酵素アッセイおよびＢＥＡＳ−２Ｂ細胞アッセイにおいて試験し、大多数をＪＡＫ３酵素アッセイにおいても試験した。化合物のすべてが、０．０４ｎＭから０．６ｎＭの間のＪＡＫ１  Ｋｉ値（９．２から１０．４の間のｐＫｉ）を呈した。ＪＡＫ３酵素アッセイにおいて試験した化合物は、０．０８ｎＭから０．５ｎＭの間のＫｉ値（９．３から１０．１の間のｐＫｉ）を呈した。試験した化合物は、ＢＥＡＳ−２Ｂアッセイにおいて、３ｎＭから１００ｎＭの間のＩＣ５０値（７から８．５の間のｐＩＣ５０）を呈した。
【表２】
0006974487.tif 000040
【０１５６】
アッセイ３：マウスの血漿および肺における薬物動態
試験化合物の血漿および肺レベルならびにそれらの比を、下記の様式で決定した。Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製のＢＡＬＢ／ｃマウスをアッセイにおいて使用した。試験化合物を、ｐＨ４クエン酸緩衝液中の２０％プロピレングリコール中、０．２ｍｇ／ｍＬの濃度で個々に製剤化し、５０μＬの投薬溶液を、経口吸引によってマウスの気管に導入した。投薬後種々の時点（典型的には、０．１６７、２、６、２４時間）で、心臓穿刺を介して血液試料を取り出し、無傷の肺をマウスから切除した。血液試料を、およそ１２，０００ｒｐｍにて４℃で４分間にわたって遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離、５８０４Ｒ）して、血漿を収集した。肺をパッドで乾燥させ（ｐａｄｄｅｄ  ｄｒｙ）、秤量し、滅菌水中１：３の希釈で均質化した。試験化合物の血漿および肺レベルを、試験マトリックスにおいて標準曲線に構築された分析標準に対するＬＣ−ＭＳ分析によって決定した。肺の血漿に対する比を、肺ＡＵＣ（単位μｇ時／ｇ）の血漿ＡＵＣ（単位μｇ時／ｍＬ）に対する比として決定し、ここで、ＡＵＣは、試験化合物濃度対時間の曲線下面積として慣例的に定義される。本発明の化合物は、マウスの血漿における曝露よりも１から２桁大きい、肺における曝露を呈した。このアッセイにおいてプロファイルされた化合物のすべてが、約４．５から約１４時間の間の半減期を呈した。
【０１５７】
アッセイ４：肺組織におけるＩＬ−１３誘発性ｐＳＴＡＴ６誘導のネズミ（マウス）モデル
Ｉｌ−１３は、喘息の病態生理学の根本にある重要なサイトカインである（Kudlaczら、Eur.  J.  Pharmacol、２００８年、５８２巻、１５４〜１６１頁）。ＩＬ−１３は、細胞表面受容体と結合して、キナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）のメンバーを活性化させ、次いでこれが、ＳＴＡＴ６をリン酸化し、その後、さらなる転写経路を活性化する。記述されているモデルにおいて、ある用量のＩＬ−１３を、マウスの肺に局所的に送達してＳＴＡＴ６のリン酸化（ｐＳＴＡＴ６）を誘発した。次いでこれを終点として測定する。
【０１５８】
Ｈａｒｌａｎ製の成体ｂａｌｂ／ｃマウスをアッセイにおいて使用した。研究１日目、動物にイソフルランで軽く麻酔をかけ、経口吸引を介してビヒクルまたは試験化合物（１ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸にわたって５０μＬの総体積）のいずれかを投与した。投薬後、動物を側臥位で寝かせ、麻酔からの完全な回復をモニターした後、ホームケージに戻した。４時間後、動物にもう一度短時間麻酔をかけ、経口吸引を介してビヒクルまたはＩＬ−１３（０．０３μｇの送達される総用量、５０μＬの総体積）のいずれかで負荷した後、麻酔からの回復をモニターし、ホームケージに戻した。ビヒクルまたはＩＬ−１３投与の１時間後、抗ｐＳＴＡＴ６  ＥＬＩＳＡ（ウサギｍＡｂ捕捉／コーティング抗体；マウスｍＡｂ検出／報告抗体：抗ｐＳＴＡＴ６−ｐＹ６４１；二次抗体：抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ）を使用する両方のｐＳＴＡＴ６検出のために肺を採取し、アッセイ３において上述した通り、総薬物濃度について分析した。
【０１５９】
本発明の選択化合物をアッセイにおいて試験した。モデルにおける活性は、ビヒクル処置したＩＬ−１３負荷対照動物と比較した、５時間での処置動物の肺において存在するｐＳＴＡＴ６のレベルの減少によって証明される。ビヒクル処置、ＩＬ−１３負荷した対照動物と、ビヒクル処置、ビヒクル負荷した対照動物との間の差異は、任意の所与の実験において、それぞれ０％および１００％阻害効果を決定付けた。本発明の例示的な化合物をアッセイにおいて試験し、以下で文書化される通り、ＩＬ−１３負荷後４時間でＳＴＡＴ６リン酸化の阻害を呈した。
【０１６０】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の気道炎症への関連を確認したら、ＩＬ１３誘発性ｐＳＴＡＴ６マウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ標的エンゲージメントを実証した化合物を、その後試験し、アレルゲン誘発性好酸球性炎症のマウスモデルにおいて効果的であることを立証する。
【０１６１】
Ｉｎ  Ｖｉｖｏアッセイ結果
本発明の選択化合物を、薬物動態アッセイ（アッセイ３）および薬力学的アッセイ（アッセイ４）の両方において特徴付けた。投薬後同様の時点での薬物動態アッセイおよび薬力学的アッセイにおいて決定された肺内の試験化合物濃度間には、良好な相関関係が観察された。薬力学的アッセイにおけるマウス肺内の有意な化合物濃度の観察により、ＩＬ−１３誘発性ｐＳＴＡＴ６誘導の観察された阻害が、試験化合物の活性の結果であることを確認した。
【０１６２】
下記の表において、肺曝露の血漿曝露に対する比（アッセイ３）について、Ａは、比１００〜２００を表示し、Ｂは、５０から１００の間の比を表示し、Ｃは、２０から５０の間の比を表示する。ＩＬ−１３誘発性ｐＳＴＡＴ６誘導のパーセント阻害（アッセイ４）について、Ａは、６０％から８０％の間の阻害を表し、Ｂは、４０％から６０％の間の阻害を表し、Ｃは、２５％から４０％の間の阻害を表す。
【表３】
0006974487.tif 000041
【０１６３】
アッセイ５：肺のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ誘発性好酸球性炎症のネズミモデル
気道好酸球増加症は、ヒト喘息の特質である。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａは、ヒトにおいて喘息を増悪させることができる真菌エアロアレルゲンであり、マウスの肺において好酸球性炎症を誘発する（Havauxら、Clin  Exp  Immunol.、２００５年２月；１３９巻（２号）：１７９〜８８頁）。マウスにおいて、ａｌｔｅｒｎａｒｉａは、肺における組織常在性２型自然リンパ球細胞を間接的に活性化し、これが（例えば、ＩＬ−２およびＩＬ−７）に応答して、ＪＡＫ依存性サイトカイン（例えば、ＩＬ−５およびＩＬ−１３）を放出し、好酸球性炎症と協調することが実証されている（Bartemesら、J  Immunol.、２０１２年２月１日；１８８巻（３号）：１５０３〜１３頁）。
【０１６４】
Ｔａｃｏｎｉｃ製の７〜９週齢の雄Ｃ５７マウスを研究において使用した。研究１日目、動物にイソフルランで軽く麻酔をかけ、口腔咽頭吸引を介してビヒクルまたは試験化合物（０．０３〜１．０ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸にわたって５０μＬの総体積）のいずれかを投与した。投薬後、動物を側臥位で寝かせ、麻酔からの完全な回復をモニターした後、ホームケージに戻した。１時間後、動物にもう一度短時間麻酔をかけ、口腔咽頭吸引を介してビヒクルまたはａｌｔｅｒｎａｒｉａ抽出物（２００ｕｇの送達される総抽出物、５０μＬの総体積）のいずれかで負荷した後、麻酔からの回復をモニターし、ホームケージに戻した。ａｌｔｅｒｎａｒｉａ投与の４８時間後、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を採取し、アドヴィア１２０血液学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を使用してＢＡＬＦ中の好酸球をカウントした。
【０１６５】
ＩＬ−１３−ｐＳＴＡＴ６薬力学的アッセイにおいてｉｎ  ｖｉｖｏ活性を実証している本発明の選択化合物を、このａｌｔｅｒｎａｒｉａアッセイにおいて試験した。モデルにおける活性は、ビヒクル処置したａｌｔｅｒｎａｒｉａ負荷対照動物と比較した、４８時間での処置動物のＢＡＬＦ中に存在する好酸球のレベルの減少によって証明される。データは、ビヒクル処置したａｌｔｅｒｎａｒｉａ負荷ＢＡＬＦ好酸球応答のパーセント阻害として表現される。パーセント阻害を算出するために、各条件についてのＢＡＬＦ好酸球の数を、ビヒクル処置したａｌｔｅｒｎａｒｉａ負荷ＢＡＬＦ好酸球の平均パーセントに変換し、１００パーセントから減算する。本発明の例示的な化合物をアッセイにおいて試験し、以下で文書化される通り、ａｌｔｅｒｎａｒｉａ負荷後４８時間でＢＡＬＦ好酸球カウントの阻害を呈した。
【０１６６】
Ｉｎ  Ｖｉｖｏアッセイ結果
試験した化合物はすべて、ａｌｔｅｒｎａｒｉａ誘発性ＢＡＬＦ好酸球の広範な阻害（７３％〜９３％）を実証した。下記の表は、好酸球誘導のビヒクル処置したａｌｔｅｒｎａｒｉａ負荷レベルの統計的に有意な最大パーセント阻害を反映している。
【表４】
0006974487.tif 000042
【０１６７】
アッセイ６：ＩＬ−５媒介性好酸球生存アッセイ
ＩＬ−５媒介性好酸球生存についての試験化合物の効力を、ヒト全血（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離されたヒト好酸球中で測定した。ＩＬ−５はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０１６８】
ヒト好酸球を、健康なドナーの新鮮なヒト全血（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離した。血液を、０．９％塩化ナトリウム溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中４．５％のデキストラン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合した。赤血球を３５分間にわたって沈降させておいた。白血球が豊富な上層を除去し、フィコール・パック（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の上に重ね、６００ｇで３０分間にわたって遠心分離した。血漿および単核細胞層を除去した後、顆粒球層を水で溶解させて、いかなる汚染赤血球も除去した。ヒト好酸球単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、好酸球をさらに精製した。精製された好酸球の画分を、抗ＣＤ１６  ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）とともに暗所にて４℃で１０分間にわたってインキュベートした。ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、純度を分析した。
【０１６９】
細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、培地（５０μＬ）中に１０，０００細胞／ウェルで播種した。プレートを３００ｇで５分間にわたって遠心分離し、上清を除去した。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、さらに５００倍希釈して、培地中２×最終アッセイ濃度とした。試験化合物（５０μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間にわたってインキュベートし、続いて、予め温めておいたアッセイ培地（５０μＬ）中のＩＬ−５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１ｎｇ／ｍＬおよび１０ｐｇ／ｍｌ）を７２時間にわたって添加した。
【０１７０】
サイトカイン刺激後、細胞を３００ｇで５分間にわたって遠心分離し、冷ＤＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で２回洗浄した。生存率およびアポトーシスにアクセスするために、細胞を、ヨウ化プロピジウム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびＡＰＣアネキシンＶ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とともにインキュベートし、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＩＣ５０値を、パーセント細胞生存率対化合物濃度の生存曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の１０進対数）値として表現される。実施例２の化合物は、１０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−５の存在下で７．６±０．５のｐＩＣ５０値および１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−５の存在下で６．２±０．１のｐＩＣ５０値を呈した。
【０１７１】
アッセイ７：ヒト３Ｄ気道培養物におけるＩＦＮγおよびＩＬ−２７誘発性ケモカインＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０の阻害
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ組織培養物を、Ｍａｔｔｅｋ（ＡＩＲ−１００）から入手した。培養物は、喘息ドナーに由来するものであった。細胞培養物インサートにおいて、ヒト由来気管／気管支上皮細胞を増殖させ、多孔膜支持体上で分化させて、細胞の下に温められた培養培地および上に気体試験雰囲気を持つ気液界面を可能にした。組織を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、維持培地（Ｍａｔｔｅｋ、ＡＩＲ−１００−ＭＭ）中で培養した。４人のドナーを試験した。０日目、組織培養物を、１０μＭ、１μＭおよび／または０．１μＭの試験化合物で処理した。化合物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ）中で０．１％の最終濃度に希釈した。０．１％のＤＭＳＯをビヒクル対照として使用した。試験化合物を、培養物とともに、３７℃、５％ＣＯ２で１時間にわたってインキュベートし、続いて、ＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＩＬ−２７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する予め温めておいた培地を、１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。組織培養物を８日間にわたって維持した。培地を、２日ごとに、化合物およびＩＦＮγまたはＩＬ−２７を含有する新鮮培地で置きかえた。８日目、組織培養物および上清を分析のために採取した。ルミネックス分析（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、上清試料をＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）およびＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）についてアッセイした。データは、％阻害＋／−標準偏差（±ＳＴＤＶ）として表現される。パーセント阻害を、ビヒクル処理細胞と比較したＩＦＮγまたはＩＬ−２７誘発性ＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ９分泌に対する化合物阻害効力によって決定した。データは、３または４人のドナーからの平均である。実施例２の化合物は、ビヒクル対照と比較した場合、１０１％±２．０（１０μＭで）、６５％±２９（μＭで）および６％±１１（０．１μＭで）だけ、ＩＦＮγ誘発性ＣＸＣＬ１０分泌を阻害することができた。実施例２の化合物は、ビヒクルと比較した場合、９３％±１３（１０μＭで）および２４％±４９（１μＭで）だけ、ＩＦＮγ誘発性ＣＸＣＬ９分泌を阻害することができた。実施例２の化合物は、ビヒクル対照と比較した場合、１０８％±１１（１０μＭで）、１０１％±６（１μＭで）および６９％±１０（０．１μＭで）だけ、ＩＬ−２７誘発性ＣＸＣＬ１０分泌を阻害することができた。実施例２の化合物は、ビヒクル対照と比較した場合、１００％±０（１０μＭで）、９７％±３．６（１μＭで）および５７％±２８（０．１μＭで）だけ、ＩＬ−２７誘発性ＣＸＣＬ９分泌を阻害することができた。
【０１７２】
アッセイ８：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−２／抗ＣＤ３刺激ＩＦＮγの阻害
インターロイキン−２（ＩＬ−２）／抗ＣＤ３刺激インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ−２はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０１７３】
（１）ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーのヒト全血から、フィコール勾配を使用して単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭグルタマックス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、培地（５０μＬ）中に２００，０００細胞／ウェルで播種し、１時間にわたって培養した。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、培地中でさらに５００倍希釈した（２×最終アッセイ濃度に）。試験化合物（１００μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間にわたってインキュベートし、続いて、予め温めておいたアッセイ培地（５０μＬ）中のＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；最終濃度１μｇ／ｍＬ）を２４時間にわたって添加した。
【０１７４】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を５００ｇで５分間にわたって遠心分離し、上清を除去し、−８０℃で冷凍した。ＩＬ−２／抗ＣＤ３に応答した試験化合物の阻害効力を決定するために、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を介して上清ＩＦＮγ濃度を測定した。ＩＣ５０値を、ＩＦＮγの濃度対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の１０進対数）値として表現される。実施例２の化合物は、このアッセイにおいて約７．１のｐＩＣ５０値を呈した。
【０１７５】
アッセイ９：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ−２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
インターロイキン−２（ＩＬ−２）／抗ＣＤ３刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）Ｔ細胞において、フローサイトメトリーを使用して測定した。ＩＬ−２はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０１７６】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、フィコエリトロビリン（ＰＥ）コンジュゲート抗ＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同定し、一方、アレクサフルオル６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ｐＹ６９４、クローン４７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ５リン酸化を検出した。
【０１７７】
（１）抗ＣＤ３によるサイトカイン刺激を２４時間の代わりに３０分間にわたって実施したことを除いて、アッセイ８段落（１）のプロトコールに準拠した。
【０１７８】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を、予め温めておいた固定溶液（２００μＬ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により、３７℃、５％ＣＯ２で１０分間にわたって固定し、ＤＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で２回洗浄し、氷冷パーム緩衝液ＩＩＩ（１０００μＬ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間にわたって再懸濁した。細胞を、ＤＰＢＳ中２％ＦＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）で２回洗浄し、次いで、抗ＣＤ４  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ＣＤ３アレクサフルオル６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に、暗所にて室温で６０分間にわたって再懸濁した。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄した後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＩＬ−２／抗ＣＤ３に応答した試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ５のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）をＣＤ４＋Ｔ細胞において測定した。ＩＣ５０値を、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の１０進対数）値として表現される。実施例２の化合物は、このアッセイにおいて約７．３のｐＩＣ５０値を呈した。
【０１７９】
アッセイ１０：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ−４刺激ｐＳＴＡＴ６の阻害
インターロイキン−４（ＩＬ−４）刺激ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）Ｔ細胞において、フローサイトメトリーを使用して測定した。ＩＬ−４はＪＡＫを介してシグナル伝達することから、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０１８０】
ＣＤ３＋Ｔ細胞を、フィコエリトロビリン（ＰＥ）コンジュゲート抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同定し、一方、アレクサフルオル６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ６抗体（ｐＹ６４１、クローン１８／Ｐ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ６リン酸化を検出した。
【０１８１】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、アッセイ８および９のように、健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、培地（２００μＬ）中に２５０，０００細胞／ウェルで播種し、１時間にわたって培養し、次いで、種々の濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭグルタマックス、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１×ペニシリンストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯ中で連続希釈し、次いで、アッセイ培地中でさらに５００倍希釈した（２×最終アッセイ濃度に）。試験化合物（５０μＬ）を、細胞とともに、３７℃、５％ＣＯ２で１時間にわたってインキュベートし、続いて、予め温めておいたアッセイ培地中のＩＬ−４（５０μＬ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を３０分間にわたって添加した。サイトカイン刺激後、細胞を、予め温めておいた固定溶液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により、３７℃、５％ＣＯ２で１０分間にわたって固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＤＰＢＳ中２％ＦＢＳ）で２回洗浄し、氷冷パーム緩衝液ＩＩＩ（１０００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間にわたって再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、抗ＣＤ３  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ｐＳＴＡＴ６アレクサフルオル６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に、暗所にて室温で６０分間にわたって再懸濁した。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄した後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【０１８２】
ＩＬ−４に応答した試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ６のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）をＣＤ３＋Ｔ細胞において測定した。ＩＣ５０値を、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の分析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の１０進対数）として表現される。実施例２の化合物は、このアッセイにおいて７．９のｐＩＣ５０値を呈した。
【０１８３】
アッセイ１１：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ−６刺激ｐＳＴＡＴ３の阻害
アッセイ１０のものに類似するプロトコールを使用して、インターロイキン−６（interleuken-6）（ＩＬ−６）刺激ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害についての試験化合物の効力を決定した。アレクサフルオル６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ３抗体（ｐＹ７０５、クローン４／Ｐ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ３リン酸化を検出した。
【０１８４】
実施例２の化合物は、このアッセイにおいて７．２のｐＩＣ５０値を呈した。
【０１８５】
結晶構造
ヒトＪＡＫ１と結合している実施例２の化合物の共結晶構造を、２．２８Åの分解能で取得した。リガンドは、ＡＴＰ結合部位において結合することが観察された。ドナーおよびアクセプター原子間の３．５Åまたはそれ未満の距離に基づき、７つの特異的な水素結合相互作用を同定した。特に留意すべきは、実施例２の化合物の環外アミドのカルボニルとＪＡＫ１のＡｒｇ８７９の側鎖との間で水素結合相互作用が同定されたことである。初期のモデリング研究において、この相互作用は、他のチロシンキナーゼよりもＪＡＫ１に対して選択性を提供する手法として提案されていたが、そうでなければ、密接に関連しているキナーゼ（例えば、ＴＲＫＡ、ＶＥＧＦＲ、ＡＢＬ１）は、同等の場所においてアルギニン残留物を保有しなかった。結晶構造における水素結合相互作用の観察結果および環外アミドを保有しないシリーズと比較したキノーム選択性の改善は、この設計仮説を立証する。
【０１８６】
本発明について、その具体的な態様または実施形態を参照して記述してきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更が為され得るまたは同等物で代用され得ることが、当業者には理解されるであろう。加えて、適用される特許法および規制によって許可される程度まで、本明細書において引用されているすべての刊行物、特許および特許出願は、各文書が参照により本明細書に個々に組み込まれたのと同程度まで、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。