(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体においてがんを治療するための、有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、前記がんがＥＲ−α３６陽性がんである、組成物。
【請求項２】
前記がんが、乳がん、子宮内膜がん、肺がん、胃がん、結腸がん、膵臓がん、甲状腺がんおよび肝臓がんからなる群より選択される固形腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記がんが乳がんである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記がんがタモキシフェン耐性乳がんである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記がんがＥＧＦＲ陽性がんである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記がんがＥＧＦＲ陽性肺がんである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物と組み合わせて前記個体にＥＧＦＲキナーゼ阻害剤がさらに投与されることを特徴とする、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が同時に投与されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が逐次的に投与されることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩である、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記がんがＨＥＲ２陽性がんである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記がんがＨＥＲ２陽性乳がんまたはＨＥＲ２陽性胃がんである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物と組み合わせて前記個体にＨＥＲ２阻害剤が投与されることを特徴とする、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＨＥＲ２阻害剤が同時に投与されることを特徴とする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＨＥＲ２阻害剤が逐次的に投与されることを特徴とする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＨＥＲ２阻害剤が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブまたはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）である、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記がんにおけるＥＲ−α３６の発現が、ＥＲ−α３６ペプチドの存在により決定されることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＥＲ−α３６ペプチドが、免疫ハイブリダイゼーション法［例えば、ウエスタンブロッティング、免疫組織学的染色または免疫蛍光染色］により測定されることを特徴とする、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記がんにおけるＥＲ−α３６の発現が、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在により決定されることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡが、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑ−ＰＣＲ）により測定されることを特徴とする、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記個体にラソフォキシフェンが投与されることを特徴とする、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記個体がヒトである、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
（ｉ）ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物、および（ｉｉ）ＥＲ−α３６ペプチドまたはＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための剤を含む、個体においてＥＲ−α３６陽性がんを治療するためのキット。
【請求項２５】
ＥＲ−α３６ペプチドの存在を決定するための前記剤が、前記ＥＲ−α３６ペプチドを認識する抗体である、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための前記剤が、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの定量的測定のためのオリゴヌクレオチドである、請求項２４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラソフォキシフェン、またはプロテインキナーゼ阻害剤もしくはその機能的同等物（ゲフィチニブまたはトラスツズマブなど）とのラソフォキシフェンの組み合わせを使用してエストロゲン受容体アルファ−３６（ＥＲ−α３６）の発現が陽性のがんを治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
閉経後の女性におけるエストロゲンの産生の減少は、骨粗鬆症および脂肪肝などの症状に繋がる。これらの症状を治療するためにエストロゲン補充療法が利用されており、それは乳がんおよび子宮がんのリスクの増加を示した。ＥＲ＋乳がん患者を治療するためのエストロゲン受容体（ＥＲ）のアンタゴニストとして市販されているタモキシフェンもまた、ｄｅ  ｎｏｖｏのまたは獲得されたタモキシフェン耐性を誘導し、エストロゲン古典的核内経路、膜開始エストロゲン受容体およびそれらのシグナル伝達経路の発見を結果としてもたらす。
【０００３】
以前に、女性は、喫煙の効果を除外した後に男性と比較して非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のより高いリスクを有し、抗エストロゲン療法によって治療された乳がん患者と比較して肺がん死のより低いリスクを有することを疫学データは実証した。同様に、胃がん発生数の疫学研究は、閉経前の女性よりも男性において高い胃がんを指し示すが、閉経後、女性と男性との間で発生数に有意差はない。前立腺がん患者において、胃がんのより高いリスクが報告されており、これはそれらの患者を抗エストロゲン薬により治療した時に減少する。乳がんＥＲ＋患者において、患者をタモキシフェンにより治療した時に、その後の胃がんの有意に増加したリスクが報告された。加えて、卵巣摘出（ＯＶＸ）もまた、女性において胃がんのリスクを有意に増加させる。これらを合わせると、エストロゲンはＮＳＣＬＣおよび胃がんの発生に重要な役割を果たす可能性がある。
【０００４】
エストロゲン結合タンパク質をコードする３つの遺伝子：Ｇタンパク質共役型エストロゲン受容体１（ＧＰＥＲ１またはＧＰＲ３０）、エストロゲン受容体−α（ＥＲ−α）およびエストロゲン受容体−β（ＥＲ−β）が同定されており、これらは、活性化機能ドメイン１（ＡＦ−１）、ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）、二量体化ドメインおよび活性化機能ドメイン２（ＡＦ−２）（リガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）である）を含む、類似の構造および機能ドメインを有する。ＥＲ−αおよびＥＲ−βは共にリガンド依存性転写因子の核内スーパーファミリーに属し、古典的核内エストロゲン経路をモジュレートする高度に保存されたＤＢＤおよびＬＢＤ領域を有する。インスリン（ＩＬ）はインスリン受容体（ＩＲ）に結合し、インスリン受容体基質（ＩＲＳ）のリン酸化を刺激し、そのリン酸化されたＩＲＳは二量体エストロゲン−ＥＲ複合体と相互作用し、次にそれは核内にトランスロケーションしてエストロゲン応答エレメント（ＥＲＥ）配列と結合することにより、エストロゲン古典的核内経路を通じてＲＮＡ転写を調節することができる。抗アポトーシスファミリータンパク質の鍵となるメンバーであるＢｃｌ−２は、人間における多くの種類のがんに関連して過剰発現を有することが報告されている。Ｂｃｌ−２遺伝子のプロモーターはＥＲＥ配列を含有し、ＭＣＦ−７細胞におけるＢｃｌ−２  ｍＲＮＡの発現は、Ｅ２（エストロゲンである１７β−エストラジオール）により正に調節され、タモキシフェンにより阻害されることが発見されており、また、ＭＣＦ−７細胞の増殖はＩＬによりモジュレートされ、これらの細胞のタモキシフェンへの感受性は、培養培地からのＩＬの一時的な除去後にまたはＩＲＳ特異的ｓｉＲＮＡを使用してＩＲＳ発現を一過的にノックダウンした時に増加する。
【０００５】
ＥＲ−αおよびＥＲ−βはまた、膜開始エストロゲンシグナル伝達（ＭＩＥＳ）を通じて細胞の増殖、マトリックス／遊走、代謝およびグルコースホメオスタシスを調節し、それらのＬＢＤにおけるパルミトイル化相互作用により形質膜に結合する。ＥＲノックアウトマウスに関する先行する研究は、ＥＲ−βと比較した時にＥＲ−αはドミナントな機能的エストロゲン受容体であることを指し示す。臨床的に、ＥＲ陽性がんはＥＲ−α抗体により診断される。ＥＲ−α６６、４６および３６という３つの転写バリアントが発見されている。ＥＲ−α３６は、部分的なリガンド結合ドメインおよびパルミトイル化モチーフ（４４５〜４５３）を含有し、全長ＥＲ−αの典型的な１４０アミノ酸（４５６〜５９５）の代わりに独特のＣ末端２７アミノ酸配列を持つ。ＥＲ−α３６は、ＥＲ−α３６特異的抗体を使用して形質膜に主に位置することが発見されている。ＥＲ−α３６はＡＦ−１およびＡＦ−２ドメインを欠き、膜に結合する能力をなおも含有し、さらにタモキシフェン耐性乳がん細胞および子宮内膜上皮がん細胞において特有に発現されることが発見されているので、膜結合ＥＲ−α３６によりモジュレートされるＭＩＥＳは抗エストロゲン療法への耐性に関与すると考えられている。ＥＲ−α３６の発現は胃がん患者における腫瘍発生に影響する要因の１つであり得ることが先行する研究により実証された。さらに、以前に公知のＥＲ−α抗体はＥＲ−α３６を有効に認識できなかったので、ＥＲ−α３６特異的抗体が研究者らにより開発された。例えば、Ｗａｎｇ  Ｚ．Ｙ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００６年、１０３巻（２４号）：９０６３〜８頁を参照。ＥＲ−α３６特異的抗体を使用して、研究者らは、ＥＲ−α３６が、トリプルネガティブ乳がんおよび獲得されたまたはｄｅ  ｎｏｖｏのタモキシフェン耐性ＥＲ陽性乳がんにおいて過剰発現されることを発見した。Ｓｈｉら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２００９年、２７巻（３１号）、３４２３〜９頁を参照。
【０００６】
ＧＰＥＲ１は主に小胞体（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌａｒ）に見出される。それはＥ２と結合して、Ｇタンパク質アルファサブユニット（Ｇαｓ）を通じて高感度Ｃａ２＋シグナルをモジュレートする。Ｅ２−ＧＰＥＲ１複合体はＧαｓ／ＰＬＣ／イノシトール三リン酸（ＩＰ３）経路を活性化し、その後にイノシトール１，４，５−三リン酸受容体（ＩｎｓＰ３Ｒ）からのＣａ２＋放出を促進して細胞生物エネルギー論およびアポトーシス抵抗性を増進させる。ＧＰＥＲ１ノックアウトマウスは、生殖への明らかな効果なく、グルコース寛容減損、骨成長の低減、血圧増加、心臓血管へのエストラジオール刺激性のインスリン放出の除去を呈することが報告されている。したがって、ＧＰＥＲ１は、エストロゲン媒介性の代謝性シグナル伝達のモジュレーションに関与する。
【０００７】
ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、バゼドキシフェン、または機能的に同等の選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）が、閉経後の女性の骨粗鬆症を予防するために開発された。ランダム化対照試験のネットワークメタ解析は、これらのＳＥＲＭはアロマターゼ阻害剤およびタモキシフェンよりも良好な利益リスク比を有することを示した（Ｍｏｃｅｌｌｉｎら、Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．  ２０１６年、１０８巻（２号）：ｄｊｖ３１８）。
がん、特にタモキシフェン耐性がんの安全かつ有効な治療の必要性が依然として存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｗａｎｇ  Ｚ．Ｙ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．（２００６年）１０３巻（２４号）：９０６３〜８頁
【非特許文献２】Ｓｈｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２００９年）２７巻（３１号）、３４２３〜９頁
【非特許文献３】Ｍｏｃｅｌｌｉｎら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（２０１６年）１０８巻（２号）：ｄｊｖ３１８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様では、本発明は、個体においてがんを治療する方法であって、個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、がんがＥＲ−α３６陽性がんである、方法を提供する。
【００１０】
方法は、ＥＲ−α３６を発現する任意のがん、例えば、乳がん、子宮内膜がん、肺がん、胃がん、結腸がん、膵臓がん、甲状腺がんおよび肝臓がんが挙げられるがこれらに限定されないＥＲ−α３６を発現する任意の固形腫瘍、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）などのＥＲ−α３６を発現する任意の液状腫瘍を治療するための方法である。
【００１１】
一部の実施形態では、がんは乳がんである。一部の実施形態では、がんはタモキシフェン耐性乳がんであり、タモキシフェンへの耐性は、ｄｅ  ｎｏｖｏであるか、または獲得されたものであってよい。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性乳がんはトリプルネガティブ乳がんである。
【００１２】
一部の実施形態では、がんは肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施形態では、がんは子宮内膜がんである。一部の実施形態では、がんは胃がんである。一部の実施形態では、がんは結腸がんである。一部の実施形態では、がんは膵臓がんである。一部の実施形態では、がんは肝臓がんである。一部の実施形態では、がんは甲状腺がんである。一部の実施形態では、がんはＣＬＬである。
【００１３】
一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんはまた、ＥＧＦＲ陽性がん、例えば、ＥＧＦＲ陽性乳がんまたはＥＧＦＲ陽性肺がんである。ＥＲ−α３６陽性がんがＥＧＦＲ陽性でもある場合、方法は、個体にＥＧＦＲキナーゼ阻害剤を投与することをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は逐次的に投与される。任意のＥＧＦＲキナーゼ阻害剤をラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩と共投与することができ、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤としては、例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ（ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ（ｏｌｍｕｔｉｎｉｂ）、またはこれらの薬学的に許容される塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１４】
一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんはまた、ＨＥＲ２陽性がん、例えば、ＨＥＲ２陽性乳がんまたはＨＥＲ２陽性胃がんである。ＥＲ−α３６陽性がんがＨＥＲ２陽性でもある場合、方法は、個体にＨＥＲ２阻害剤を投与することをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＨＥＲ２阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＨＥＲ２阻害剤は逐次的に投与される。任意のＨＥＲ２阻害剤をラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩と共投与することができ、ＨＥＲ２阻害剤としては、例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブまたはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＨＥＲ２阻害剤は抗ＨＥＲ２抗体である。
【００１５】
個体においてＥＲ−α３６陽性がんを治療する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ）もしくはその機能的同等物、および上皮増殖因子受容体の阻害剤、例えばトラスツズマブ（例えば、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））もしくはその機能的同等物からなる群より選択される、方法も提供される。
【００１６】
一部の実施形態では、がんは、それらの細胞においてＥＲ−α３６の発現が陽性である、乳がん、子宮内膜がん、肺がん、膵臓がん、胃がん、結腸がん、肝臓がん、甲状腺がんおよびＣＬＬなどからなる群より選択される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性乳がんは、タモキシフェンを用いる治療に耐性である。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性子宮内膜がんは、タモキシフェンを用いる治療に耐性である。
【００１７】
ＥＲ−α３６陽性がんを治療する方法の一部の態様では、例えば、ＥＲ−α３６ペプチドの存在および／またはＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在により、がんにおけるＥＲ−α３６の発現を決定することをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、がんにおけるＥＲ−α３６の発現は、例えば、免疫ハイブリダイゼーション法（例えば、ウエスタンブロッティング、免疫組織学的染色または免疫蛍光染色）によって測定されるように、ＥＲ−α３６ペプチドの存在により決定される。一部の実施形態では、がんにおけるＥＲ−α３６の発現は、例えば、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑ−ＰＣＲ）によって測定されるように、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在により決定される。
【００１８】
一部の実施形態では、個体はヒトである。
【００１９】
有効量のラソフォキシフェン、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの追加の剤を含む医薬組成物であって、少なくとも１つの追加の剤が、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）もしくはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）もしくはその機能的同等物からなる群より選択される、医薬組成物がさらに提供される。
【００２０】
医薬組成物は、単位投与製剤、例えば経口単位投与製剤、例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、カプレット（ｃａｐｌｅｔ）、ゲル剤、液体（例えば、懸濁物、溶液、エマルション）、散剤または他の微粒子などとして存在することができる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンの投与量は、１日当たり約０．２５〜５０ｍｇである。
【００２１】
別の態様では、本発明は、（ｉ）ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物、および（ｉｉ）ＥＲ−α３６ペプチドまたはＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための剤を含む、キットを提供する。一部の実施形態では、キットは、ＥＲ−α３６ペプチドの存在を決定するための剤、例えば、ＥＲ−α３６ペプチドを認識する抗体を含む。一部の実施形態では、キットは、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための剤、例えば、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの定量的測定のためのオリゴヌクレオチドを含む。
【００２２】
本明細書に詳述されるＥＲ−α３６陽性がんなどのＥＲ−α３６陽性がんを治療する方法において使用するための、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩も提供される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんを治療するための、タモキシフェンもしくはその機能的同等物、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ）もしくはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ）もしくはその機能的同等物からなる群より選択される別の剤とのラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせであって、がんがＥＧＦＲキナーゼまたはＨＥＲ２などのバイオマーカーも発現する、組み合わせが提供される。
【００２３】
本明細書に詳述されるＥＲ−α３６陽性がんなどのＥＲ−α３６陽性がんの治療のための医薬の製造における、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の使用も提供される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんを治療するための医薬の製造における、タモキシフェンもしくはその機能的同等物、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ）もしくはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ）もしくはその機能的同等物からなる群より選択される別の剤とのラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせの使用であって、がんがＥＧＦＲキナーゼまたはＨＥＲ２などのバイオマーカーも発現する、使用が提供される。
【００２４】
本発明のこれらのおよび他の態様および利点は、以後の詳細な説明および添付の特許請求の範囲から明らかとなるであろう。本明細書に記載される様々な実施形態の１つ、一部、または全ての特性を組み合わせて本発明の他の実施形態を形成してもよいことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、（２Ｓ，３Ｓ）−２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（Ｄ−酒石酸）とのラソフォキシフェンの共結晶構造を示す。
【００２６】
【図２】図２は、タモキシフェンと比較したラソフォキシフェンによるＭＣＦ−７細胞におけるＢｃｌ−２発現の阻害を示す。Ａ：ＭＣＦ−７細胞を１０％のＦＢＳ（通常）または５％のチャコール処理済みＦＢＳ（ＣＳ）を含有するいずれかのＥＭＥＭ培地中で７２時間培養した。ウエスタンブロッティングアッセイを行ってＢｃｌ−２発現を解析した（ＣＳ：チャコール処理済み）。Ｂ：ＭＣＦ−７細胞をインスリンおよび５％のチャコール処理済みＦＢＳを含有するＥＭＥＭ培地中で７２時間培養した後、ラソフォキシフェンおよびタモキシフェンにより４８時間処理した。ウエスタンブロッティングアッセイを行ってＢｃｌ−２発現を解析した。Ｃ．ＭＣＦ−７をインスリンおよび１０％のＦＢＳを含有するＥＭＥＭ培地中で７２時間培養した後、ラソフォキシフェンおよびタモキシフェンにより４８時間処理した。ウエスタンブロッティングアッセイを行ってＢｃｌ−２発現を解析した。Ｄ．投与量依存的なラソフォキシフェンで阻害されたＢｃｌ−２発現（パートＣと同じ条件）。Ｅ．パートＣの３回の繰返しの統計解析。Ｎ＝３×３。
【００２７】
【図３】図３は、タモキシフェンと比較したラソフォキシフェンによるＥＲ−α３６陽性ＭＣＦ−７がん細胞の増殖の阻害を示す。Ａ．ＭＣＦ−７細胞をインスリン非含有（ＩＬ−）培地中で３ヶ月生育させた。ウエスタンブロットを使用してＥＲ−α６６、ＥＲ−α３６、ＥＲ−βおよびＧＰＥＲの発現を試験した。Ｂ．インスリンを含むまたはインスリンを含まない培地のいずれかで培養後のＭＣＦ−７細胞をタモキシフェンまたはラソフォキシフェンで処理した。グラフは、両方の条件下でいずれかの薬物により処理したＭＣＦ−７細胞のＩＣ５０（μＭ）を示す。Ｃ．インスリンを含まない培地中での前培養の条件でのタモキシフェンまたはラソフォキシフェンに応答したＭＣＦ−７細胞のＩＣ５０（μＭ）を比較する。＊＊＊はＰ＜０．００１を指し示す。Ｄ．グラフは、インスリンを含む培地中での前培養の条件でのタモキシフェンまたはラソフォキシフェンに応答したＭＣＦ−７細胞のＩＣ５０（μＭ）を比較する。＊はＰ＜０．０５を指し示す。
【００２８】
【図４】図４は、ラソフォキシフェンによる獲得されたタモキシフェン耐性ＭＣＦ−７細胞の増殖の阻害を示す。Ａ．ＭＣＦ−７細胞をタモキシフェンで１０ヶ月処理した。ウエスタンブロットを使用してＥＲ−α６６、ＥＲ−α４６、ＥＲ−α３６、ＧＰＥＲ−１の発現を試験した。Ｂ．ＭＣＦ−７細胞をタモキシフェンで１０ヶ月処理した後、細胞を２μＭのタモキシフェンまたは２μＭのラソフォキシフェンのいずれかで処理した。ＭＣＦ−７の増殖が各処理の下で示された。＊＊はＰ＜０．０１を指し示す。
【００２９】
【図５−１】図５は、ラソフォキシフェンとゲフィチニブとの組み合わせによるＥＲ−α３６陽性／ＥＧＦＲ陽性肺がん細胞の増殖の阻害を示す。Ａ．細胞株ＨＢＥ、Ｈ１２９９およびＨ４６０を培養した。ウエスタンブロットを使用してＥＧＦＲ、ＥＲ−α６６、ＥＲ−α４６、ＥＲ−α３６、ＥＲ−β、ＧＰＥＲ−１の発現を試験した。Ｂ．ＨＢＥ細胞およびＨ４６０細胞を２μＭのタモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎｅ）または２μＭのラソフォキシフェンで処理した。各処理後のＨＢＥ細胞およびＨ４６０細胞の増殖を示した。Ｃ．Ｈ４６０細胞をビヒクルのみ、またはゲフィチニブ、もしくはラソフォキシフェン、もしくはゲフィチニブとラソフォキシフェンとの組み合わせで処理した。各処理後のＭＣＦ−７の増殖を示した。Ｄ．Ｈ１２９９をビヒクルのみ、またはゲフィチニブ、もしくはラソフォキシフェン、もしくはゲフィチニブとラソフォキシフェンとの組み合わせで処理した。各処理後の肺がん細胞の増殖を示した。Ｎ＝３×３；＊＊はＰ＜０．０１を意味する；ＮＳ：有意には異ならない；ＬＡＳ：ラソフォキシフェン；およびＧｅｆ：ゲフィチニブ。
【図５−２】図５は、ラソフォキシフェンとゲフィチニブとの組み合わせによるＥＲ−α３６陽性／ＥＧＦＲ陽性肺がん細胞の増殖の阻害を示す。Ａ．細胞株ＨＢＥ、Ｈ１２９９およびＨ４６０を培養した。ウエスタンブロットを使用してＥＧＦＲ、ＥＲ−α６６、ＥＲ−α４６、ＥＲ−α３６、ＥＲ−β、ＧＰＥＲ−１の発現を試験した。Ｂ．ＨＢＥ細胞およびＨ４６０細胞を２μＭのタモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎｅ）または２μＭのラソフォキシフェンで処理した。各処理後のＨＢＥ細胞およびＨ４６０細胞の増殖を示した。Ｃ．Ｈ４６０細胞をビヒクルのみ、またはゲフィチニブ、もしくはラソフォキシフェン、もしくはゲフィチニブとラソフォキシフェンとの組み合わせで処理した。各処理後のＭＣＦ−７の増殖を示した。Ｄ．Ｈ１２９９をビヒクルのみ、またはゲフィチニブ、もしくはラソフォキシフェン、もしくはゲフィチニブとラソフォキシフェンとの組み合わせで処理した。各処理後の肺がん細胞の増殖を示した。Ｎ＝３×３；＊＊はＰ＜０．０１を意味する；ＮＳ：有意には異ならない；ＬＡＳ：ラソフォキシフェン；およびＧｅｆ：ゲフィチニブ。
【００３０】
【図６】図６は、ラソフォキシフェンとゲフィチニブとの組み合わせによるＡ５４９肺がん細胞におけるＲａｓ変異の増殖の阻害を示す。Ｎ＝３×３；＊はＰ＜０．０５を意味する；ＮＳ：有意には異ならない。
【００３１】
【図７】図７は、ラソフォキシフェン（ＬＡＳ）および／またはゲフィチニブによるヌードマウスにおける異種移植ＥＲ−α３６＋／ＥＧＦＲ＋肺腫瘍（Ｈ４６０）の増殖の阻害に対する活性を示す。Ａ．ヌードマウスにＨ４６０細胞を移植した。ゲフィチニブ、マウスの体重１キログラム当たり３ｍｇのラソフォキシフェン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｌａｓ３．０）、マウスの体重１キログラム当たり１．５ｍｇのラソフォキシフェン（１．５ｍｇ／ｋｇ、Ｌａｓ１．５）、マウスの体重１キログラム当たり０．７５ｍｇのラソフォキシフェン（０．７５ｍｇ／ｋｇ、Ｌａｓ０．７５）、またはマウスの体重１キログラム当たりゲフィチニブと１．５ｍｇのラソフォキシフェンとの組み合わせ（Ｇｅｆ＋Ｌａｓ１．５）での処理後の腫瘍サイズを示した。Ｂ．２回の繰返し実験からの腫瘍量の統計による結果（ｎ≧６）。＊および＊＊はそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１を意味する。
【００３２】
【図８】図８は、ＥＲ−α３６陽性結腸および胃がん細胞の増殖の阻害を示す。Ａ：ＥＲ−α３６は結腸がん細胞において発現が陽性であった。Ｂ：ラソフォキシフェンは結腸がんの細胞分裂を阻害した。ＮＣＣ：正常結腸細胞。ＣＣＣ：結腸がん細胞。Ｃ：ＥＲ−α３６は胃がん細胞において発現が陽性であった。Ｄ：ラソフォキシフェンは胃がんの細胞分裂を阻害した。ＮＧＣ：正常胃細胞。ＧＣＣ：胃がん細胞。Ｎ＝３×３；＊＊＊はＰ＜０．００１を意味する。
【００３３】
【図９】図９は、ＥＲ−α３６陽性／トリプルネガティブＭＤＡ−ＭＢ２３１乳がん細胞の増殖の阻害を示す。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を１０％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中でラソフォキシフェンで処理した。Ｎ＝３×３；＊および＊＊はそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１を意味する。
【００３４】
【図１０】図１０は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ耐性ＢＴ４７４乳がん細胞の増殖の阻害を示す。ＢＴ４７４乳がん細胞を培地中の１０μｇ／ｍｌのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で３ヶ月処理した。Ａ．細胞はＥＲ−α３６の発現が陽性であり、ＨＥＲ２の発現レベルを減少させた。Ｂ．２μＭのラソフォキシフェンに対する感受性応答。ラソフォキシフェンとＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）との組み合わせ投与は、ラソフォキシフェンおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎのいずれかを使用した単独と比較してより効率的にＢＴ４７４細胞の増殖を阻害した。＊および＊＊はそれぞれＰ＜０．０１およびＰ＜０．００１を意味する。
【００３５】
【図１１】図１１は、ＧＰＥＲ１アゴニストとしてのラソフォキシフェンによる骨粗鬆症の予防を示す。Ａ．ＨＥＫ２９３細胞にＧＰＥＲ１−ＥＧＦＰまたは単独のＥＧＦＰのいずれかをトランスフェクトした。ウエスタンブロットを使用してＧＰＥＲ−１ＥＧＦＰおよびＥＧＦＰの発現が示された。Ｂ．ＧＰＥＲ１−ＥＧＦＰまたは単独のＥＧＦＰをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞をＥ２、ラソフォキシフェン（ＬＡＳ）、ラロキシフェン（ＲＡＬ）、またはＧ１５（ＧＰＥＲ１アンタゴニスト）で処理した。指示薬としてＦｕｒａ−ｒｅｄを使用してサイトゾルの［Ｃａ２＋］ｉを試験した。＊＊＊はＰ＜０．００１を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本開示は、ラソフォキシフェンを単独でまたはＥＲ−α３６誘導性の細胞の増殖シグナル経路の阻害を通じてがんを治療するための第２の剤との組み合わせで含む療法のため、および活性ＧＰＥＲ１を介して骨粗鬆症を低減させるための方法および組成物を提供する。
【００３７】
定義
本明細書に記載される方法は、一般的には、疾患の治療のために有用である。本明細書で使用される場合、「治療」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。例えば、がんの治療の場合、有益なまたは所望の臨床結果には以下のいずれか１つまたは複数が含まれるがこれらに限定されない：１つまたは複数の症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の拡大（例えば、転移、例えば肺またはリンパ節への転移）の予防または遅延、疾患の再発の予防または遅延、疾患進行の遅延または緩慢化、病態の改善、および寛解（部分寛解または完全寛解）。また、増殖性疾患の病理学的帰結の低減も「治療」に包含される。本発明の方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つまたは複数を企図する。
【００３８】
本明細書で使用される「トリプルネガティブ乳がん」を有する個体は、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）およびＨＥＲ２タンパク質の発現が臨床的に陰性である個体を指す。
【００３９】
「ｍＥＲ」は、膜結合型エストロゲン受容体を指す。ＥＲは、そのエストロゲン結合ドメイン（ＬＢＤ）のシステイン残基のパルミトイル化修飾を通じて形質膜に係留された。ＥＲ−α３６は切断型ＥＲ−αバリアントである。それはパルミトイル化モチーフ（４４５〜４５３）を残し、Ｃ末端において全長ＥＲ−αの１４０アミノ酸の領域（４５６〜５９５）の代わりに独特の２７アミノ酸を持つ。ＥＲ−α３６は部分的なＬＢＤを持ち、形質膜およびサイトゾルに主に局在するので、エストロゲンと結合せず、エストロゲン古典的経路をモジュレートする能力の喪失を結果としてもたらす。
【００４０】
本明細書で使用される「ｍＥＲ陽性」、「ＥＧＦＲ陽性」、「ＨＥＲ２陽性」は、それぞれ、膜結合型エストロゲン受容体、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、またはヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）が臨床的に陽性である個体を指す。本明細書で使用される「ＥＲ−α３６陽性」は、ＥＲ−α３６バリアントが臨床的に陽性である個体を指す。
【００４１】
個体の生検検体における腫瘍細胞中のバイオマーカーのレベルが、実験的に決定されるように、個体の生検検体における正常組織細胞中のレベルより高い場合、個体はバイオマーカーについて「臨床的に陽性」であるとみなされる。バイオマーカーのレベルを決定するための実験技術の非限定的な例としては、ｑＰＣＲ、免疫組織化学（ＩＨＣ）または免疫蛍光（ＩＦ）染色およびウエスタンブロッティング（ＷＢ）が挙げられる。例えば、ＥＲ−α３６陽性の個体において、個体の生検検体における腫瘍細胞中のＥＲ−α３６バリアントのレベルは、例えば、Ｓｈｉら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２００９年、２７巻（３１号）、３４２３〜９頁に記載の方法を使用して、実験的に決定されるように、個体の生検検体における正常組織細胞中のレベルより高い。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性の個体は、ＩＨＣ、ＩＦまたはＷＢ法によって測定されるように、生検検体における正常組織細胞中のＥＲ−α３６レベルより少なくとも２５％高い生検検体における腫瘍細胞中のＥＲ−α３６レベルを有する。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性の個体は、ｑＰＣＲによって測定されるように、生検検体における正常組織細胞中のＥＲ−α３６  ｍＲＮＡレベルより少なくとも５０％高い生検検体における腫瘍細胞中のＥＲ−α３６  ｍＲＮＡレベルを有する。低いレベルのＥＲ−α３６陽性の個体は、ＩＨＣ、ＩＦまたはＷＢ法によって測定されるように、生検検体における正常組織細胞中のＥＲ−α３６レベルより約２５％〜約１００％高い生検検体における腫瘍細胞中のＥＲ−α３６レベルを有し、または、ｑＰＣＲによって測定されるように、生検検体における正常組織細胞中のＥＲ−α３６  ｍＲＮＡレベルより約５０％〜約１００％高い生検検体における腫瘍細胞中のＥＲ−α３６  ｍＲＮＡレベルを有する。高いレベルのＥＲ−α３６陽性の個体は、ｑＰＣＲ、ＩＨＣ、ＩＦまたはＷＢ法によって測定されるように、生検検体における正常組織細胞中のＥＲ−α３６レベルより１００％またはそれより高い生検検体における腫瘍細胞中のＥＲ−α３６レベルを有する。
【００４２】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、特定の障害、状態または疾患を治療するため、例えば、その症状の１つまたは複数を改善し、軽減し、小さくし、および／または遅延させるために十分な化合物または組成物の量を指す。がんに関して、有効量は、腫瘍を縮小させおよび／もしくは腫瘍の増殖速度を減少させ（例えば、腫瘍成長を抑制する）または他の望ましくない細胞の増殖を予防もしくは遅延させるために十分な量を含む。
【００４３】
「個体」という用語は、ヒトなどの哺乳動物を指す。個体としては、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、齧歯類、または霊長類が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体はヒトである。
【００４４】
本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、「からなる」および／または「から本質的になる」態様および実施形態を含むことが理解される。
【００４５】
本明細書における「約」の値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とするバリエーションを包含（および記載）する。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を包含する。
【００４６】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ｏｒ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを規定しない限り、複数の指示対象を包含する。本明細書に記載される本発明の態様およびバリエーションは、「からなる」および／または「から本質的になる」態様およびバリエーションを包含することが理解される。
【００４７】
ラソフォキシフェン
ラソフォキシフェン、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、ＣＡＳ＃１８０９１６−１６−９は以下の化学構造：
【化１】
0006899504.tif 000002
を有する。
【００４８】
純粋なエナンチオマーが酒石酸分割法（Ｄ−酒石酸との共結晶化）によって得られている。絶対配置がＤ−酒石酸との共結晶のＸ線結晶構造解析法により確認されている。ラソフォキシフェンは選択的エストロゲン受容体モジュレーターであり、ＥＲ−αへの高い結合親和性を有する。
【００４９】
本明細書に詳述される方法および組成物の一部の実施形態では、ラソフォキシフェンの薬学的に許容される塩が使用される。「薬学的に許容される塩」は、患者、例えば哺乳動物への投与が許容される塩（所与の投薬レジメンについて許容される哺乳動物での安全性を有する対イオンとの塩）を意味する。そのような塩は、薬学的に許容される無機もしくは有機塩基および薬学的に許容される無機もしくは有機酸に由来し得る。薬学的に許容される対陽イオン（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｕｎｔｅｒ  ｉｏｎ）の非限定的な例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどが挙げられる。薬学的に許容される対陰イオン（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｕｎｔｅｒ  ｉｏｎ）の非限定的な例としては、塩化物、臭化物、ギ酸、酒石酸、ベシル酸、メシル酸、酢酸、マレイン酸、シュウ酸などが挙げられる。
【００５０】
方法
理論に縛られることを望まないが、本発明は、部分的に、ラソフォキシフェンおよびラロキシフェンなどの選択的エストロゲン膜開始モジュレーターの独特の特性および作用機序の発見に基づく。スクリーニング後、本発明者らは、驚くべきことに、ラソフォキシフェンが、がん細胞分裂を阻害するＥＲ−α３６のアンタゴニストであることを発見した。他方、ラソフォキシフェンおよびラロキシフェンは、骨における代謝シグナルをモジュレートするＧＰＥＲ１経路へのアゴニストとして機能することができる。したがって、ラソフォキシフェンの有益な効果は以下を含む：ｉ）ＥＲ−α３６などの膜結合型エストロゲン受容体アルファ（ＥＲ−α）により調節される悪性細胞の増殖の阻害、ｉｉ）骨粗鬆症などの閉経後の症状の低減に繋がるＧＰＥＲ１アゴニストとしてのエストロゲン代謝効果のモジュレーション。
【００５１】
一態様では、本発明は、個体においてがんを治療する方法であって、個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、がんがＥＲ−α３６陽性がんである、方法を提供する。
【００５２】
方法は、ＥＲ−α３６を発現する任意のがん（またはＥＲ−α３６陽性がん）、例えば、乳がん、子宮内膜がん、肺がん、胃がん、結腸がん、膵臓がん、甲状腺がんおよび肝臓がんが挙げられるがこれらに限定されないＥＲ−α３６を発現する任意の固形腫瘍（またはＥＲ−α３６陽性の固形腫瘍）、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）などのＥＲ−α３６を発現する任意の液状腫瘍（またはＥＲ−α３６陽性の液状腫瘍）を治療するために有用である。
【００５３】
一部の実施形態では、がんは乳がんである。一部の実施形態では、がんはタモキシフェン耐性乳がんであり、タモキシフェンへの耐性は、ｄｅ  ｎｏｖｏであるか、または獲得されたものであってよい。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性乳がんはトリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態では、子宮内膜がんはタモキシフェン誘導性の子宮内膜がんである。
【００５４】
一部の実施形態では、がんは、肺がん（例えば、小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））である。一部の実施形態では、がんは子宮内膜がんである。一部の実施形態では、がんは胃がんである。一部の実施形態では、がんは結腸がんである。一部の実施形態では、がんは膵臓がんである。一部の実施形態では、がんは肝臓がんである。一部の実施形態では、がんは甲状腺がんである。一部の実施形態では、がんはＣＬＬである。
【００５５】
一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんはまた、ＥＧＦＲ陽性がん、例えば、ＥＧＦＲ陽性乳がんまたはＥＧＦＲ陽性肺がんである。ＥＲ−α３６陽性がんがＥＧＦＲ陽性でもある場合、方法は、個体にＥＧＦＲキナーゼ阻害剤を投与することをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は逐次的に投与される。任意のＥＧＦＲキナーゼ阻害剤をラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩と共投与することができ、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤としては、例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【００５６】
一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんはまた、ＨＥＲ２陽性がん、例えば、ＨＥＲ２陽性乳がんまたはＨＥＲ２陽性胃がんである。ＥＲ−α３６陽性がんがＨＥＲ２陽性でもある場合、方法は、個体にＨＥＲ２阻害剤を投与することをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＨＥＲ２阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩およびＨＥＲ２阻害剤は逐次的に投与される。任意のＨＥＲ２阻害剤をラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩と共投与することができ、ＨＥＲ２阻害剤としては、例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブまたはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＨＥＲ２阻害剤は抗ＨＥＲ２抗体である。
【００５７】
個体においてＥＲ−α３６陽性がんを治療する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法も提供される。一部の実施形態では、ＥＧＦＲリン酸化阻害剤は、ゲフィチニブまたはその薬学的に許容される塩である。一部の実施形態では、ＨＥＲ２阻害剤はトラスツズマブ（例えば、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））である。
【００５８】
一部の実施形態では、がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性およびＥＧＦＲ陽性がん）を治療する方法は、それを必要とする個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および有効量のＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物を投与することを含む。一部の実施形態では、がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性およびＥＧＦＲ陽性がん）を治療する方法は、それを必要とする個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および有効量のゲフィチニブまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【００５９】
一部の実施形態では、がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性およびＨＥＲ２陽性がん）を治療する方法は、それを必要とする個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および有効量のＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物を投与することを含む。一部の実施形態では、がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性およびＨＥＲ２陽性がん）を治療する方法は、それを必要とする個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および有効量のトラスツズマブ（例えば、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を投与することを含む。
【００６０】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物など）は逐次的に投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物など）は同時に投与される。
【００６１】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）は並行して投与される。例えば、一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与は、おおよそ同時（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日のいずれか１つ以内）に開始される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与は、おおよそ同時（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日のいずれか１つ以内）に終了する。一部の実施形態では、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の終了後に（例えば、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つにわたって）続けられる。一部の実施形態では、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の開始後（例えば、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つの後）に開始される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与は、おおよそ同時に開始および終了される。
【００６２】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）の投与はおおよそ同時に開始され、かつ、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の終了後に（例えば、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つにわたって）続けられる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与はおおよそ同時に中止され、かつ、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の開始後（例えば、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つの後）に開始される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与はおおよそ同時に中止され、かつ、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与は、他の剤の投与の開始後（例えば、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つの後）に開始される。
【００６３】
本明細書に記載される他の剤（ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物など）は、剤それ自体、その薬学的に許容される塩、およびその薬学的に許容されるエステルの他に、立体異性体、エナンチオマー、ラセミ混合物などであってよい。記載されるような他の剤（複数可）の他に、該剤を含有する医薬組成物であって、薬学的に許容される担体ビヒクルなどを含む医薬組成物を投与することができる。
【００６４】
本明細書に記載される方法は、有効量の、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および（存在する場合）他の剤の投与を必要とする。一部の実施形態では、有効量は、がんの発生を遅延させるために十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、再発を予防しまたは遅延させるために十分な量である。有効量は、１つまたは複数の投与で投与することができる。一部の実施形態では、有効量の薬物または組成物は、（ｉ）がん細胞の数を低減させ、（ｉｉ）腫瘍サイズを低減させ、（ｉｉｉ）末梢臓器へのがん細胞の浸潤をある程度まで阻害し、遅延させ、緩慢化させ、好ましくは停止させ、（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度まで緩慢化させ、好ましくは停止させ）、（ｖ）腫瘍成長を阻害し、（ｖｉ）腫瘍の再発を予防しまたは遅延させ、および／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状の１つまたは複数をある程度まで緩和するものであり得る。
【００６５】
したがって、一部の実施形態では、個体において細胞の増殖（腫瘍成長など）を阻害する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤は、細胞の増殖（腫瘍細胞増殖など）を相乗的に阻害する。一部の実施形態では、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかなど）の細胞の増殖が阻害される。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）はＥＲ−α３６陽性である。
【００６６】
一部の実施形態では、個体において腫瘍転移（乳がんの転移、肺転移またはリンパ節への転移など）を阻害する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェン、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、有効量のラソフォキシフェンおよび他の剤は、腫瘍転移を相乗的に阻害する。一部の実施形態では、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかなど）の転移が阻害される。一部の実施形態では、リンパ節への転移を阻害する方法が提供される。一部の実施形態では、肺への転移を阻害する方法が提供される。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）はＥＲ−α３６陽性である。
【００６７】
一部の実施形態では、個体において以前から存在する腫瘍転移（肺転移またはリンパ節への転移など）の発生率または負荷を低減させる方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェン、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）はＥＲ−α３６陽性である。
【００６８】
一部の実施形態では、個体において腫瘍サイズを低減させる方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェン、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、腫瘍サイズは、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかなど）低減される。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）はＥＲ−α３６陽性である。
【００６９】
一部の実施形態では、個体においてがんの疾患進行までの時間を延長する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェン、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週のいずれかだけ疾患進行までの時間を延長する。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）はＥＲ−α３６陽性である。
【００７０】
一部の実施形態では、増殖性疾患（ＥＲ−α３６陽性がんなど）を有する個体の生存を延長する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェン、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、または２４ヶ月のいずれかだけ個体の生存を延長する。
【００７１】
一部の実施形態では、方法は、原発性腫瘍（例えば、ＥＲ−α３６陽性腫瘍）を治療するために使用される。一部の実施形態では、転移がん（すなわち、原発性腫瘍から転移したがん）（例えば、ＥＲ−α３６陽性の転移がん（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃａｎｅｒ））を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、進行した疾患または低い腫瘍負荷などのより低い程度の疾患を治療するための方法である。一部の実施形態では、進行したステージのがん（例えば、ＥＲ−α３６陽性がん）を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、初期乳がんを治療するための方法である。方法は、アジュバント設定において実施され得る。本明細書で提供される方法はまた、ネオアジュバント設定としても実施することができ、すなわち、方法は、一次／根治療法の前に実行され得る。一部の実施形態では、方法は、治療の完了後の個体に手術を実行することをさらに含む。例えば、がんが乳がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性乳がん）である一部の実施形態では、ネオアジュバント化学療法の完了後の約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週以内に乳房温存手術または乳房切除術を実行することができる。
【００７２】
一部の実施形態では、個体は、以前に治療されている。一部の実施形態では、個体は、以前に治療されていない。一部の実施形態では、治療は第一選択療法である。一部の実施形態では、乳がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性乳がん）は、寛解後に再発したものである。
【００７３】
一部の実施形態では、がんは乳がんである。これらの方法を使用して、任意の種類またはステージの乳がん、例えば、初期乳がん、非転移性乳がん、進行した乳がん、ステージＩＶの乳がん、局所的に進行した乳がん、転移性乳がん、寛解した乳がん、アジュバント設定における乳がん、またはネオアジュバント設定における乳がんを、例えば、治療し、安定化させ、および／または遅延させることができる。一部の実施形態では、方法は、術前全身療法（ＰＳＴ）のために有用である。一部の実施形態では、乳がんはＥＲ−α３６陽性乳がんである。
【００７４】
一部の実施形態では、乳がん（ＨＥＲ２陽性またはＨＥＲ２陰性であり得る）、例えば、進行した乳がん、ステージＩＶの乳がん、局所的に進行した乳がん、および転移性乳がんなどを治療する方法が提供される。一部の実施形態では、乳がんはｌｕｍｉｎａｌ  Ｂ型乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは基底細胞乳がんである。一部の実施形態では、個体は、Ｔ２、Ｔ３、もしくはＴ４病変、またはステージＮ、Ｍ０もしくはＴ１ｃ、Ｎ１〜３およびＭ０と診断される。一部の実施形態では、個体は、０〜１のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを有する。一部の実施形態では、個体は、同側乳房への皮膚転移を有する。一部の実施形態では、個体は、事前治療（ホルモン療法など）を受けている。一部の実施形態では、個体は、事前治療（ホルモン療法など）を受けていない。一部の実施形態では、個体は、根治的手術を待っている。一部の実施形態では、乳がんは、切除される乳がんである。一部の実施形態では、乳がんは、切除されない乳がん、例えば、切除されないステージＩＩまたはＩＩＩの乳がんである。一部の実施形態では、乳がんはＥＲ−α３６陽性乳がんである。
【００７５】
一部の実施形態では、方法は、リスク因子を有しない個体よりも高い確率で乳がんの発症を結果としてもたらすリスク因子の１つまたは複数を有する個体を治療するための方法である。これらのリスク因子としては、年齢、性別、人種、食事、以前の疾患の履歴、前駆疾患の存在、遺伝学的（すなわち、遺伝の）検討事項、および環境上の曝露が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体は、乳がんを有すると診断されたまたは診断されていない、乳がんを発症する遺伝学的またはそれ以外の素因を持つヒトであり得る。乳がんのリスクがある個体としては、例えば、この疾患を経験した親族を有する個体、および遺伝学的または生化学的マーカーの解析によってそのリスクが決定された個体が挙げられる。例えば、個体は、乳がんに関連する遺伝子、遺伝子変異、もしくは多型（例えば、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＡＴＭ、ＣＨＥＫ２、ＲＡＤ５１、ＡＲ、ＤＩＲＡＳ３、ＥＲＢＢ２、および／またはＴＰ５３）を有するか、または乳がんに関連する遺伝子の１つまたは複数の余分のコピー（例えば、ＨＥＲ２遺伝子の１つまたは複数の余分のコピー）を有するヒトであり得る。一部の実施形態では、乳がんはＨＥＲ２陰性である。一部の実施形態では、乳がんはＥＲ陰性である。一部の実施形態では、乳がんはＰＲ陰性である。一部の実施形態では、乳がんはＥＲ陰性かつＨＥＲ２陰性である。一部の実施形態では、乳がんはＰＲ陰性かつＨＥＲ２陰性である。一部の実施形態では、乳がんはＥＲ陰性かつＰＲ陰性である。一部の実施形態では、乳がんはＥＲ陰性、ＰＲ陰性、かつＨＥＲ２陰性である。
【００７６】
本明細書に記載される方法はまた、他の固形腫瘍（進行した固形腫瘍など）を治療するためにも有用である。一部の実施形態では、肺がん、例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ、例えば進行したＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ、例えば進行したＳＣＬＣ）、および肺における進行した固形腫瘍悪性疾患などを治療する方法が提供される。一部の実施形態では、卵巣がん、子宮内膜がん、頭頸部がん、胃悪性疾患、黒色腫（転移性黒色腫および悪性黒色腫など）、卵巣がん、結腸直腸がん、および膵臓がんのいずれかを治療する方法が提供される。一部の実施形態では、上記に詳述されるがんはＥＲ−α３６陽性である。
【００７７】
一部の実施形態では、方法は、以下：皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、白血病、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、および急性骨髄性白血病の１つまたは複数を治療するために有用である。一部の実施形態では、上記に詳述されるがんはＥＲ−α３６陽性である。
【００７８】
一部の実施形態では、がんは、以下：基底細胞癌、髄芽腫、膠芽腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病、膵臓がん、肺がん（小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん）、食道がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、胆道がん、前立腺がん、肝臓がん、肝細胞がん、胃腸がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、子宮内膜がん、卵巣がんおよび膀胱がんのいずれか１つである。一部の実施形態では、がんは、膵臓管腺癌（ｐａｎｃｒｅａｓ  ｄｕｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、結腸腺癌、子宮内膜がん、および卵巣嚢胞腺癌からなる群より選択される。一部の実施形態では、がんは膵臓管腺癌である。一部の実施形態では、がんは、灌流が乏しいおよび／または血管新生が乏しい腫瘍である。一部の実施形態では、上記に詳述されるがんはＥＲ−α３６陽性である。
【００７９】
一部の実施形態では、がんは、膵臓がん、例えば、膵臓腺癌、膵臓腺扁平上皮癌、膵臓扁平細胞癌、および膵臓巨細胞癌などである。一部の実施形態では、膵臓がんは外分泌膵臓がんである。一部の実施形態では、膵臓がんは内分泌膵臓がん（膵島細胞癌など）である。一部の実施形態では、膵臓がんは進行した転移性膵臓がんである。一部の実施形態では、上記に詳述される膵臓がんはＥＲ−α３６陽性の膵臓がんである。
【００８０】
本発明の方法によって治療され得るがんの他の例としては、副腎皮質癌（ａｄｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、原因不明骨髄様化生、ＡＩＤＳ関連がん（例えば、ＡＩＤＳ関連リンパ腫）、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫（例えば、小脳および大脳）、基底細胞癌、胆管がん（例えば、肝臓外）、膀胱がん、骨がん、（骨肉腫および悪性線維性組織球腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、脳幹部神経膠腫、小脳または大脳の星状細胞腫（例えば、重細胞性神経膠星状細胞腫、びまん性星状細胞腫、未分化（悪性）星状細胞腫）、悪性神経膠腫、上衣腫、乏突起膠腫（ｏｌｉｇｏｄｅｎｇｌｉｏｍａ）、髄膜腫、頭蓋咽頭腫、血管芽腫、髄芽腫、テント上未分化神経外胚葉性腫瘍、視路および視床下部神経膠腫、および膠芽腫）、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍（例えば、胃腸カルチノイド腫瘍）、原発未知の癌腫、中枢神経系リンパ腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、慢性骨髄増殖性障害、子宮内膜がん（例えば、子宮がん）、上衣腫、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍、目のがん（例えば、眼内黒色腫および網膜芽腫）、胆嚢がん、胃がん、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、生殖細胞腫瘍、（例えば、頭蓋外、性腺外、卵巣）、妊娠性絨毛腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん（例えば、肝臓癌およびヘパトーマ（ｈｅｐｔｏｍａ））、下咽頭がん、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、喉頭がん、喉頭がん、白血病、口唇口腔がん、口腔がん（ｏｒａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、および肺の扁平癌）、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）、髄芽腫、卵巣がん、中皮腫、転移性扁平上皮性頸部がん、口腔がん（ｍｏｕｔｈ  ｃａｎｃｅｒ）、多発性内分泌腺腫症候群、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽腫、神経内分泌がん、口腔咽頭がん、卵巣がん（例えば、卵巣上皮がん、卵巣生殖細胞腫瘍、境界悪性卵巣腫瘍）、膵臓がん、副甲状腺がん、陰茎がん、腹膜のがん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体芽腫およびテント上未分化神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、肺胸膜芽細胞腫（ｐｌｅｕｒｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｂｌａｓｔｏｍａ）、リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫（ミクログリオーマ）、肺リンパ管筋腫症、直腸がん、腎臓がん、腎盂および尿管がん（移行細胞がん）、横紋筋肉腫、唾液腺がん、皮膚がん（例えば、非黒色腫（例えば、扁平細胞癌）、黒色腫、およびメルケル細胞癌）、小腸がん、扁平細胞がん、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、結節硬化症、尿道がん、膣がん、外陰がん、ウィルムス腫瘍、および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、母斑症に関連する血管増殖異常、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、およびメーグス症候群が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８１】
一部の実施形態では、がんは固形腫瘍（進行した固形腫瘍など）である。固形腫瘍としては、肉腫および癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、カポジ肉腫、軟組織肉腫、子宮サクロノーマ滑膜腫（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｓａｃｒｏｎｏｍａｓｙｎｏｖｉｏｍａ）、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、子宮内膜がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌（例えば、腺癌、腎明細胞癌、乳頭状腎細胞癌、色素嫌性腎細胞癌、集合管腎細胞癌、顆粒腎細胞癌（ｇｒａｎｕｌａｒ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、混合型顆粒腎細胞癌（ｍｉｘｅｄ  ｇｒａｎｕｌａｒ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腎臓血管筋脂肪腫、または腎紡錘細胞癌（ｓｐｉｎｄｌｅ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）など）、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽腫、および網膜芽腫が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、上記に詳述されるがんはＥＲ−α３６陽性である。
【００８２】
一部の実施形態では、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）はＢ細胞新生物である。Ｂ細胞新生物の例としては、前駆Ｂ細胞新生物（例えば、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫）および末梢Ｂ細胞新生物（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／前リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ）、リンパ形質細胞様リンパ腫／免疫細胞腫（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍａ）、マントル細胞リンパ腫、濾胞中心リンパ腫（ｆｏｌｌｉｃｌｅ  ｃｅｎｔｅｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、濾胞性リンパ腫（例えば、細胞学的グレード：Ｉ（小細胞）、ＩＩ（小細胞および大細胞の混合）、ＩＩＩ（大細胞）および／またはサブタイプ：びまん性および小細胞優位型）、低グレード／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、中等度グレード／濾胞性ＮＨＬ、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、節外性（例えば、ＭＡＬＴ型＋／−単球様Ｂ細胞）および／またはＮｏｄａｌ（例えば、＋／−単球様Ｂ細胞））、脾辺縁帯リンパ腫（例えば、＋／−絨毛リンパ球）、有毛細胞白血病、形質細胞腫／形質細胞骨髄腫（例えば、骨髄腫および多発性骨髄腫）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（例えば、原発性縦隔（胸腺）Ｂ細胞リンパ腫）、中等度グレードびまん性ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、高グレードＢ細胞リンパ腫、バーキット様、高グレード免疫芽球性ＮＨＬ、高グレードリンパ芽球性ＮＨＬ、高グレード小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤ＮＨＬ、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、上記に詳述されるリンパ系新生物はＥＲ−α３６陽性である。
【００８３】
一部の実施形態では、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）は、Ｔ細胞および／または推定ＮＫ細胞新生物である。Ｔ細胞および／または推定ＮＫ細胞新生物の例としては、前駆Ｔ細胞新生物（前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病）ならびに末梢Ｔ細胞およびＮＫ細胞新生物（例えば、Ｔ細胞慢性リンパ性白血病／前リンパ性白血病、および大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）（例えば、Ｔ細胞型および／またはＮＫ細胞型）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉症／セザリー症候群）、不特定原発性Ｔ細胞リンパ腫（例えば、細胞学的カテゴリー（例えば、中型細胞、中型細胞および大細胞の混合）、大細胞、リンパ上皮細胞、サブタイプ肝脾γδ  Ｔ細胞リンパ腫、および皮下脂肪織炎Ｔ細胞リンパ腫）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＬＤ）、血管中心性リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫（例えば、＋／−腸症関連）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）（例えば、ＣＤ３０＋、Ｔおよびヌル細胞種）、未分化大細胞リンパ腫、およびホジキン様）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、上記に詳述されるリンパ系新生物はＥＲ−α３６陽性である。
【００８４】
一部の実施形態では、リンパ系新生物（例えば、リンパ腫）はホジキン病（例えば、ＥＲ−α３６陽性ホジキン病）である。例えば、ホジキン病は、リンパ球優勢、結節性硬化、混合細胞性、リンパ球枯渇、および／またはリンパ球富化であり得る。
【００８５】
一部の実施形態では、がんは白血病（例えば、ＥＲ−α３６陽性白血病）である。一部の実施形態では、白血病は慢性白血病である。慢性白血病の例としては、慢性骨髄球性Ｉ型（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、白血病は急性白血病である。急性白血病の例としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、および急性骨髄球性白血病（例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８６】
一部の実施形態では、がんは液状腫瘍または形質細胞腫である。形質細胞腫としては、骨髄腫が挙げられるがこれに限定されない。骨髄腫としては、髄外形質細胞腫、孤立性骨髄腫、および多発性骨髄腫が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、形質細胞腫は多発性骨髄腫である。
【００８７】
一部の実施形態では、がんは多発性骨髄腫（例えば、ＥＲ−α３６陽性多発性骨髄腫）である。多発性骨髄腫の例としては、ＩｇＧ多発性骨髄腫、ＩｇＡ多発性骨髄腫、ＩｇＤ多発性骨髄腫、ＩｇＥ多発性骨髄腫、および非分泌性多発性骨髄腫が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、多発性骨髄腫はＩｇＧ多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫はＩｇＡ多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、くすぶり型または無痛性多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は進行性多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、多発性骨髄腫は、薬物、例えば、以下に限定されないが、ボルテゾミブ、デキサメタゾン（Ｄｅｘ−）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ−）、およびメルファラン（ＬＲ）に耐性であり得る。
【００８８】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩により少なくとも１つの他の剤の副作用を低減させる方法であって、個体に他の剤と組み合わせて有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、他の剤が、タモキシフェン、ラロキシフェンまたはその機能的同等物、およびアロマターゼ阻害剤からなる群より選択される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体はＥＲ−α３６陽性である。一部の実施形態では、個体はＥＧＦＲ陽性である。一部の実施形態では、個体はＨＥＲ２陽性である。
【００８９】
一部の実施形態では、がんは、それらの細胞においてＥＲ−α３６の発現が陽性である、乳がん、子宮内膜がん、肺がん、膵臓がん、胃がん、結腸がん、肝臓がん、甲状腺がん、ＣＬＬなどからなる群より選択される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性乳がんは、タモキシフェンを用いる治療に耐性である。
【００９０】
ＥＲ−α３６陽性がんを治療する方法の一部の態様では、例えば、ＥＲ−α３６ペプチドの存在および／またはＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在により、がんにおけるＥＲ−α３６の発現を決定することをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、がんにおけるＥＲ−α３６の発現は、例えば、免疫ハイブリダイゼーション法（例えば、ウエスタンブロッティング、免疫組織学的染色または免疫蛍光染色）によって測定されるように、ＥＲ−α３６ペプチドの存在により決定される。一部の実施形態では、がんにおけるＥＲ−α３６の発現は、例えば、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑ−ＰＣＲ）によって測定されるように、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在により決定される。
【００９１】
一部の実施形態では、がん治療のための個体を選択する（またはがん治療において他の剤の副作用を低減させる）ための基準としてＥＲ−α３６の状態が使用される。例えば、以下のいずれか１つまたは複数における決定（および評価の補助）のためにＥＲ−α３６のレベルを使用することができる：ａ）最初に治療を与えることに個体が好適である可能性、ｂ）最初に治療を与えることに個体が好適でない可能性、ｃ）治療への応答性、ｄ）治療を与えるのを続けることに個体が好適である可能性、ｅ）治療を与えることに個体が好適でない可能性、ｆ）投与量の調整、ｇ）臨床的利益の尤度の予測。本出願は、これらの方法のいずれかを包含する。
【００９２】
例えば、一部の実施形態では、個体（ヒト個体など）においてがんを治療する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択され、個体がＥＲ−α３６陽性である（例えば、個体が、高レベルのＥＲ−α３６を有する）、方法が提供される。一部の実施形態では、個体（ヒト個体など）においてがんを治療する方法であって、個体に、ａ）有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および必要に応じてｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を投与することを含み、少なくとも１つの他の剤が、上皮増殖因子受容体のリン酸化キナーゼ阻害剤、例えばＥＧＦＲリン酸化阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択され、ＥＲ−α３６のレベルが治療のための個体を選択するための基準として使用される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、個体が高レベルのＥＲ−α３６を有する場合に治療のために選択される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６のレベルは免疫組織化学法により決定される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６のレベルはタンパク質の発現レベルに基づく。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６のレベルはｍＲＮＡレベルに基づく。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６のレベルは、エストロゲン刺激に応答したＣａ２＋シグナルに基づく。一部の実施形態では、方法は、治療の前にＥＲ−α３６のレベルを決定することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ＥＲ−α３６レベルに基づいて治療のための個体を選択することをさらに含む。
【００９３】
ＥＲ−α３６のレベルは、対照試料と比較して高いレベルまたは低いレベルであり得る。一部の実施形態では、個体におけるＥＲ−α３６のレベルは、対照試料におけるＥＲ−α３６のレベルと比較される。一部の実施形態では、被験体におけるＥＲ−α３６のレベルは、複数の対照試料におけるＥＲ−α３６のレベルと比較される。一部の実施形態では、統計量を生成するために複数の対照試料が使用され、該統計量は、がんを有する個体におけるＥＲ−α３６のレベルを分類するために使用される。
【００９４】
ＥＲ−α３６レベルの分類または順位付け（すなわち、高いまたは低い）を対照レベルの統計分布に対して決定してもよい。一部の実施形態では、分類または順位付けは、該個体から得られた対照試料に対するものである。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６のレベルは、対照レベルの統計分布に対して分類または順位付けされる。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６のレベルは、該被験体から得られた対照試料からのレベルに対して分類または順位付けされる。
【００９５】
対照試料は、非対照試料と同じ供給源および方法を使用して得ることができる。一部の実施形態では、対照試料は、異なる個体（例えば、がんを有しない個体ならびに／または類似の人種、年齢、および性別の正体を共有する個体）から得られる。一部の実施形態では、試料が腫瘍組織試料である場合、対照試料は、同じ個体からの非がん性試料であってよい。一部の実施形態では、（例えば、異なる個体からの）複数の対照試料を使用して、特定の組織、臓器、または細胞集団におけるＥＲ−α３６のレベルの範囲が決定される。一部の実施形態では、対照試料は、適切な対照であると決定された培養組織または細胞である。一部の実施形態では、対照は、ＥＲ−α３６を発現しない細胞である。一部の実施形態では、標準化試験において臨床的に認められる正常レベルが、ＥＲ−α３６レベルを決定するための対照レベルとして使用される。一部の実施形態では、被験体におけるＥＲ−α３６の参照レベルは、免疫組織化学ベースのスコア付けシステムなどのスコア付けシステムにしたがって高い、中等度または低いと分類される。
【００９６】
一部の実施形態では、ＥＲ−α３６レベルは、個体におけるＥＲ−α３６のレベルを測定し、対照または参照（例えば、所与の患者集団のメジアンレベルまたは第２の個体のレベル）と比較することによって決定される。例えば、単一個体についてのＥＲ−α３６のレベルが患者集団のメジアンレベルより高いと決定された場合、その個体はＥＲ−α３６の高い発現を有すると決定される。あるいは、単一個体についてのＥＲ−α３６のレベルが患者集団のメジアンレベルより低いと決定された場合、その個体はＥＲ−α３６の低い発現を有すると決定される。一部の実施形態では、個体は、治療に応答する第２の個体および／または患者集団と比較される。一部の実施形態では、個体は、治療に応答しない第２の個体および／または患者集団と比較される。本明細書における実施形態のいずれかでは、レベルは、ＥＲ−α３６のレベルを測定することによって決定される。例えば、単一個体についてのＥＲ−α３６をコードするｍＲＮＡのレベルが患者集団のメジアンレベルより高いと決定された場合、その個体はＥＲ−α３６をコードするｍＲＮＡの高いレベルを有すると決定される。あるいは、単一個体についてのＥＲ−α３６をコードするｍＲＮＡのレベルが患者集団のメジアンレベルより低いと決定された場合、その個体はＥＲ−α３６をコードするｍＲＮＡの低いレベルを有すると決定される。
【００９７】
一部の実施形態では、ＥＲ−α３６の参照レベルは、ＥＲ−α３６レベルの統計分布を得ることによって決定される。
【００９８】
一部の実施形態では、バイオインフォマティクス方法がＥＲ−α３６のレベルの決定および分類のために使用される。遺伝子発現プロファイリングデータを使用して遺伝子セットの発現プロファイルを評価するための多数の代替的なバイオインフォマティクスアプローチが開発されている。方法としては、Ｓｅｇａｌ，  Ｅ．ら、Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  ３４巻：６６〜１７６頁（２００３年）；Ｓｅｇａｌ，  Ｅ．ら、Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  ３６巻：１０９０〜１０９８頁（２００４年）；Ｂａｒｒｙ，  Ｗ．  Ｔ．ら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１巻：１９４３〜１９４９頁（２００５年）；Ｔｉａｎ，  Ｌ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０２巻：１３５４４〜１３５４９頁（２００５年）；Ｎｏｖａｋ  Ｂ  ＡおよびＪａｉｎ  Ａ  Ｎ．  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２２巻：２３３〜４１頁（２００６年）；Ｍａｇｌｉｅｔｔａ  Ｒら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２３巻：２０６３〜７２頁（２００７年）；Ｂｕｓｓｅｍａｋｅｒ  Ｈ  Ｊ、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ８巻、追補６号：Ｓ６（２００７年）に記載されたものが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９９】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡレベルが決定され、低いレベルは、臨床的に正常とみなされるレベルまたは対照から得られるレベルの約２、１．９、１．８、１．７、１．６または１．５倍未満のｍＲＮＡレベルである。一部の実施形態では、高いレベルは、臨床的に正常とみなされるレベルまたは対照試料から得られるレベルの約２、２．２、２．５、２．７、３、５、７、１０、２０、５０、７０、１００、２００、５００、１０００倍を超えるまたは１０００倍より高いｍＲＮＡレベルである。
【０１００】
一部の実施形態では、タンパク質の発現レベルは、例えば免疫組織化学によって決定される。例えば、低いまたは高いレベルの基準は、例えばＥＲ−α３６タンパク質を特異的に認識する抗体を使用することによる、陽性染色細胞の数および／または染色の強度に基づいて作ることができる。一部の実施形態では、約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％未満の細胞が陽性染色を有する場合、レベルは低い。一部の実施形態では、染色が、陽性対照染色より１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％低い強度である場合、レベルは低い。一部の実施形態では、腫瘍細胞についての陽性対照染色は、正常細胞の約２倍の強度を有する。
【０１０１】
一部の実施形態では、約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％より多くの細胞が陽性染色を有する場合、レベルは高い。一部の実施形態では、染色が陽性対照染色と同じ強度である場合、レベルは高い。一部の実施形態では、染色が陽性対照染色の８０％、８５％、または９０％ほどの強度である場合、レベルは高い。一部の実施形態では、腫瘍細胞についての陽性対照染色は、正常細胞の約２倍の強度を有する。
【０１０２】
一部の実施形態では、強い染色、中等度の染色、および弱い染色は、染色の軟正されたレベルであり、ここで範囲が確立され、かつ染色の強度が範囲内でビニングされる。一部の実施形態では、強い染色は強度範囲の７５パーセンタイルより高い染色であり、中等度の染色は強度範囲の２５〜７５パーセンタイルの染色であり、低い染色は強度範囲の２５パーセンタイルより低い染色である。一部の態様では、具体的な染色技術に精通した当業者は、ビンの大きさを調整し、染色のカテゴリーを定義する。
【０１０３】
一部の実施形態では、エストロゲン感受性レベルは、例えばＣａ２＋振動または電気生理学的パッチクランプによって決定される。例えば、低いまたは高いレベルの基準は、例えばエストロゲンを使用することにより、Ｃａ２＋濃度または陽性細胞の応答シグナルの変化に基づいて作ることができる。一部の実施形態では、約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％未満の細胞が陽性の感受性を有する場合、レベルは低い。一部の実施形態では、Ｃａ２＋濃度または応答シグナルの変化が陽性対照の感受性より１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％低い強度である場合、レベルは低い。一部の実施形態では、腫瘍細胞における陽性対照の感受性は、正常細胞の感受性の約２倍である。
【０１０４】
一部の実施形態では、約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％より多くの細胞が陽性の変化を有する場合、レベルは高い。一部の実施形態では、感受性が陽性対照の感受性と同じ強度である場合、レベルは高い。一部の実施形態では、変化が陽性対照の８０％、８５％、または９０％ほどの強度である場合、レベルは高い。一部の実施形態では、腫瘍細胞における陽性対照の感受性は、正常細胞の感受性の約２倍である。
【０１０５】
一部の実施形態では、最も高い感受性、中等度の感受性、および弱い感受性は、細胞におけるＣａ２＋シグナルの軟正されたレベルであり、ここで範囲が確立され、Ｃａ２＋シグナルの強度が範囲内でビニングされる。一部の実施形態では、最も高い感受性は強度範囲の７５パーセンタイルより高いＣａ２＋シグナルの変化であり、中等度の感受性は強度範囲の２５〜７５パーセンタイルのＣａ２＋シグナルの変化であり、低い感受性は強度範囲の２５パーセンタイルより低くに測定されるＣａ２＋シグナルの変化である。一部の態様では、具体的な灌流技術に精通した当業者は、ビンの大きさを調整し、シグナルの記録のカテゴリーを定義する。
【０１０６】
本明細書に詳述されるＥＲ−α３６陽性がんなどのＥＲ−α３６陽性がんを治療する方法において使用するための、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩も提供される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんを治療するための、別の剤とのラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせであって、別の剤が、タモキシフェンまたはその機能的同等物、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ）またはその機能的同等物からなる群より選択され、がんがＥＧＦＲキナーゼまたはＨＥＲ２などのバイオマーカーも発現する、組み合わせが提供される。
【０１０７】
本明細書に詳述されるＥＲ−α３６陽性がんなどのＥＲ−α３６陽性がんの治療のための医薬の製造における、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の使用がさらに提供される。一部の実施形態では、ＥＲ−α３６陽性がんを治療するための医薬の製造における、別の剤とのラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせの使用であって、別の剤が、タモキシフェンまたはその機能的同等物、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択され、がんがＥＧＦＲキナーゼまたはＨＥＲ２などのバイオマーカーも発現する、使用が提供される。
【０１０８】
ＥＲ−α３６陽性がんを治療するための本明細書に詳述される方法の一部の実施形態では、方法は、個体に有効量のラソフォキシフェンを投与することを含む。一部の実施形態では、個体はヒト（例えば、ＥＲ−α３６陽性のヒト）である。
【０１０９】
投与方式
併用療法の文脈において、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）を含む組成物は、同時に（すなわち、同時投与）および／または逐次的に（すなわち、逐次投与）投与することができる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（本明細書に記載される特定の剤など）は同時に投与される。本明細書で使用される場合、「同時投与」という用語は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩と他の剤とが、約１５分以下、例えば、約１０、５、または１分以下のいずれかの時間の分離で投与されることを意味する。薬物が同時に投与される場合、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤は、同じ組成物（例えば、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の両方を含む組成物、例えば本発明に含まれる医薬組成物）中に含有されてもよいし、別々の組成物中に含有されてもよい（例えば、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤は別々の組成物中に含有される）。
【０１１０】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）は逐次的に投与される。本明細書で使用される場合、「逐次投与」という用語は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩と他の剤とが、約１５分より長い、例えば、約２０、３０、４０、５０、６０分またはそれより長い時間のいずれかより長い時間の分離で投与されることを意味する。ラソフォキシフェンもしくはその薬学的に許容される塩または他の剤のいずれを最初に投与してもよい。ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤は、別々の組成物中に含有され、該組成物は同じまたは異なるパッケージ中に含有されてよい。
【０１１１】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）の投与は、並行的、すなわち、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与期間と他の剤の投与期間とが互いに重なる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩は、他の剤の投与の前に少なくとも１サイクル（例えば、少なくとも２、３、または４サイクルのいずれか）にわたって投与される。一部の実施形態では、他の剤は、少なくとも１、２、３、または４週のいずれかにわたって投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与は、おおよそ同時（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日のいずれか１つ以内）に開始される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与は、おおよそ同時（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日のいずれか１つ以内）に終了する。一部の実施形態では、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の終了後に（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つにわたって）続けられる。一部の実施形態では、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の開始後（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、またはｗｅヶ月のいずれか１つの後）に開始される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与は、おおよそ同時に開始および終了される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与はおおよそ同時に開始され、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の終了後に（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月のいずれか１つにわたって）続けられる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の投与はおおよそ同時に中止され、他の剤の投与は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与の開始後（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、またはｗｅヶ月のいずれか１つの後）に開始される。
【０１１２】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）の投薬頻度は、投与する臨床医の判断に基づいて、治療の過程にわたって調整することができる。別々に投与される場合、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤を異なる投薬頻度または間隔で投与することができる。例えば、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を毎週投与することができ、一方別の剤をより高いまたはより低い頻度で投与することができる。持続放出を達成するための様々な製剤およびデバイスが当該分野において公知である。例示的な投薬頻度は本明細書でさらに提供される。
【０１１３】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）は、同じ投与経路または異なる投与経路を使用して投与することができる。例示的な投与経路は本明細書でさらに提供される。（同時投与および逐次投与の両方について）一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤は、予め決定された比で投与される。例えば、一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の重量比は約１：１である。一部の実施形態では、重量比は、約０．００１：約１〜約１０００：約１、または約０．０１：約１〜１００：約１であってよい。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の重量比は、約１００：１、５０：１、３０：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、および１：１のいずれか未満である。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の重量比は、約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、３０：１、５０：１、１００：１のいずれかより高い。他の比が企図される。
【０１１４】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）のために必要とされる用量は、各剤が単独で投与される時に通常必要とされる用量より低いものであり得る（ただし、必ずしもそうではない）。したがって、一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤としての薬物の治療量以下の量が投与される。「治療量以下の量」または「治療量以下のレベル」は、治療的な量未満の量、すなわち、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤としての薬物が単独で投与される時に通常使用される量より少ない量を指す。低減は、所与の投与での投与量および／または所与の期間にわたる投与量（低減された頻度）の点で反映され得る。
【０１１５】
一部の実施形態では、同じ程度の治療をもたらすために必要とされるラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の通常の用量の、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれより多くのいずれかの低減を可能とするために十分な他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）が投与される。一部の実施形態では、同じ程度の治療をもたらすために必要とされる他の剤の通常の用量の、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれより多くのいずれかの低減を可能とするために十分なラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩が投与される。
【０１１６】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）の両方の用量は、単独で投与される場合のそれぞれの対応する通常の用量と比較して低減される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤の両方は、治療量以下のレベル、すなわち低減されたレベルで投与される。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤の用量は、確立された最大毒性用量（ＭＴＤ）より実質的に低い。例えば、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤の用量は、ＭＴＤの約５０％、４０％、３０％、２０％、または１０％未満である。
【０１１７】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の用量および／または他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）の用量は、各剤が単独で投与される場合に通常必要とされる用量より高い。例えば、一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤の用量は、ＭＴＤより実質的に高い。例えば、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および／または他の剤の用量は、単独で投与される場合の剤のＭＴＤの約５０％、４０％、３０％、２０％、または１０％より高い。
【０１１８】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（単独でまたは別の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）と組み合わせて）の量は、以下の範囲のいずれかに含まれる：約０．１〜約０．５ｍｇ、約０．５〜約５ｍｇ、約５〜約１０ｍｇ、約１０〜約１５ｍｇ、約１５〜約２０ｍｇ、約２０〜約２５ｍｇ、約２０〜約５０ｍｇ、約２５〜約５０ｍｇ、約５０〜約７５ｍｇ、約５０〜約１００ｍｇ、約７５〜約１００ｍｇ、約１００〜約１２５ｍｇ、約１２５〜約１５０ｍｇ、約１５０〜約１７５ｍｇ、約１７５〜約２００ｍｇ、約２００〜約２２５ｍｇ、約２２５〜約２５０ｍｇ、約２５０〜約３００ｍｇ、約３００〜約３５０ｍｇ、約３５０〜約４００ｍｇ、約４００〜約４５０ｍｇ、または約４５０〜約５００ｍｇ。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（例えば、単位投与剤形）の量は、約５ｍｇ〜約５００ｍｇ、例えば、約３０ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲内である。
【０１１９】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（単独でまたは別の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）と組み合わせて）の量としては、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇのいずれかが挙げられる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（単独でまたは別の剤と組み合わせて）の量としては、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２５ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日または２０ｍｇ／ｋｇ／日のいずれかが挙げられる。
【０１２０】
一部の実施形態では、他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）の量としては、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇのいずれかが挙げられる。一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（単独でまたは別の剤と組み合わせて）の量としては、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２５ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日または２０ｍｇ／ｋｇ／日のいずれかが挙げられる。
【０１２１】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物））の例示的な投薬頻度としては、２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、６週毎に１回、または８週毎に１回が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、組成物は、１週当たり少なくとも約１回、２回、３回、４回、５回、６回、もしくは７回（すなわち、毎日）、または１日に３回、１日に２回のいずれかで投与される。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約６ヶ月、３ヶ月、１ヶ月、２０日、１５日、１２日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日、または１日のいずれか未満である。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、または１２ヶ月のいずれかより長い。一部の実施形態では、投薬スケジュールに休みはない。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１週以下である。
【０１２２】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物））の投与は、長期間、例えば、約１ヶ月から最大約７年に及ぶことができる。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、または８４ヶ月のいずれかの期間にわたって投与される。
【０１２３】
一部の実施形態では、個体は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のいずれかの治療サイクルにわたって治療される。
【０１２４】
他の剤の投薬頻度は、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投薬頻度と同じであってもよいし、異なっていてもよい。例示的な頻度は上記に提供される。
【０１２５】
本明細書に記載されるラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（および他の剤）は、様々な経路を介して個体（ヒトなど）に投与することができ、該経路としては、例えば、経口、静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、吸入、小胞内（ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃｕｌａｒ）、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、および経皮が挙げられる。一部の実施形態では、組成物の持続連続放出製剤を使用してもよい。
【０１２６】
本明細書に記載される投与の構成の組み合わせを使用することができる。本明細書に記載される併用療法の方法は、単独で、または手術、放射線、化学療法、免疫療法、遺伝子療法などの別の療法との組み合わせで行うことができる。さらに、増殖性疾患を発症する高いリスクを有する人には、疾患の発症を阻害しおよび／または遅延させるための治療を与えることができる。
【０１２７】
当業者によって理解されるように、他の剤の適切な用量は、概ね、他の剤が単独でまたは他の剤と組み合わせて投与される臨床療法において既に用いられているものであろう。投与量のバリエーションが、治療されている状態に応じて起こる可能性がある。上記に記載される通り、一部の実施形態では、他の剤は、低減されたレベルで投与され得る。
【０１２８】
組成物、キット、および薬
本発明はまた、本明細書に記載される方法のために有用な組成物（医薬組成物など）、薬、キット、および単位投与量も提供する。医薬としての使用および／または医薬の製造のための使用の文脈において本明細書に記載される任意の使用も提供される。
【０１２９】
有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの追加の剤を含む医薬組成物であって、少なくとも１つの追加の剤が、タモキシフェンまたはその機能的同等物、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、医薬組成物が提供される。
【０１３０】
一部の実施形態では、有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの追加の剤を含む医薬組成物であって、少なくとも１つの追加の剤が、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物、およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される、医薬組成物が提供される。
【０１３１】
一部の実施形態では、組成物は、単位投与剤形（経口単位投与剤形など）中に存在してもよい。好適な単位投与剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、カプレット、ゲル剤、液体（例えば、懸濁物、溶液、エマルション）、散剤または他の微粒子などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３２】
一部の実施形態では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の投与量は、１日当たり約０．２５〜５０ｍｇである。
【０１３３】
別の態様では、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤（例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物またはＨＥＲ２阻害剤もしくは本明細書に詳述される機能的同等物）を別々の容器中にまたは同じ容器中に含むキットが提供される。本発明のキットは、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩（または単位投与剤形および／もしくは製品）および／または少なくとも１つの他の剤を含む１つまたは複数の容器を含み、一部の実施形態では、本明細書に記載される方法のいずれかにしたがって使用するための指示をさらに含む。キットは、好適な個体または治療の選択に関する説明をさらに含んでもよい。本発明のキット中に供給される指示は、典型的に、ラベルまたは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙のシート）上の書面での指示であるが、機械読取り可能な指示（例えば、磁気または光学記憶ディスク上の指示）も許容される。
【０１３４】
一部の実施形態では、キットは、ａ）有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、およびｂ）有効量の少なくとも１つの他の剤を含み、少なくとも１つの他の剤は、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物およびＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブもしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはその薬学的に許容される塩）またはその機能的同等物からなる群より選択される。一部の実施形態では、キットは、がん（例えば、ＥＲ−α３６陽性がん）の治療（または本明細書に記載される他の使用）のために、ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤を、同時に、逐次的に、または並行して投与するための指示をさらに含む。
【０１３５】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および他の剤は、別々の容器中に存在してもよいし、単一の容器中に存在してもよい。キットは、１つの明確な組成物（ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および別の剤を含む単一の組成物）を含んでもよいし、１つの組成物がラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を含み、かつ１つの組成物が別の剤を含む２つまたはそれより多くの組成物を含んでもよいことが理解される。
【０１３６】
本発明のキットは、好適な包装中にある。好適な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、柔軟性包装（例えば、密閉されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられるがこれらに限定されない。キットは、必要に応じて、緩衝液および説明的情報などの追加の成分を提供してもよい。したがって、本出願は、バイアル（密閉されたバイアルなど）、ボトル、ジャー、柔軟性包装などを含む製品も提供する。
【０１３７】
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の使用に関する指示は、一般に、意図する治療のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）または部分単位用量（ｓｕｂ−ｕｎｉｔ  ｄｏｓｅ）であってよい。例えば、本明細書に開示されるラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩の十分な投与量を含有して長期間、例えば、１週、２週、３週、４週、６週、８週、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、またはそれより長く、のいずれかにわたって個体の有効な治療を提供するキットが提供され得る。キットはまた、複数の単位用量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および医薬組成物ならびに使用のための指示を含み、薬局、例えば、病院薬局および調剤薬局における貯蔵および使用のために十分な量で包装される。
【０１３８】
一態様では、本発明は、（ｉ）ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物、および（ｉｉ）ＥＲ−α３６ペプチドまたはＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための剤を含む、キットを提供する。一部の実施形態では、キットは、ＥＲ−α３６ペプチドの存在を決定するための剤、例えば、ＥＲ−α３６ペプチドを認識する抗体を含む。一部の実施形態では、キットは、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための剤、例えば、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの定量的測定のためのオリゴヌクレオチドを含む。
【実施例】
【０１３９】
本発明をある特定の程度の具体性で記載し、説明してきたが、本開示は単に例示的なものとして為されたものであり、特許請求の範囲に定義される本発明の趣旨および範囲から離れることなく、パーツの組み合わせおよび構成において多数の変更が当業者により為され得ることが理解される。
【０１４０】
（実施例１  ラソフォキシフェン（５，６，７，８−テトラヒドロ−６−フェニル−５−［４−［２−（１−ピロリジニル）エトキシ］フェニル］−２−ナフタレノール）の化学合成）
ラソフォキシフェンは、ＰＣＴ／ＣＺ２００８／００００５８、ＷＯ２００８／１４５０７５  Ａ２（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される通りに、または以下に詳述するステップを使用して調製することができる。
【化２】
0006899504.tif 000003
【０１４１】
ステップａ
グリニャール試薬の調製：マグネシウム（５．８３ｇ、２４０ｍｍｏｌ）および５０ｍｌの乾燥ＴＨＦを５００ｍＬの３口フラスコに加え、窒素雰囲気下で終夜撹拌した。ＴＨＦ中の４−［２−ピロリジノエトキシ］フェニルブロミド２の一部を滴下添加し、熱により反応を開始させた後、２の残り（６２．１ｇ、２３０ｍｍｏＬ）およびＴＨＦ（３５０ｍＬ）を２０〜３０℃でゆっくりと加えて、灰色溶液としてグリニャール試薬を得た。
【０１４２】
乾燥ＴＨＦ（１２０ｍＬ）中の６−（ベンジルオキシ）−３，４−ジヒドロ−１（２Ｈ）−ナフタレノン１（３４．２ｇ、１３６ｍｍｏｌ）の環流溶液に上記グリニャール試薬を３０分以内に加えた。結果として得られた混合物をさらに３０分環流させた後、室温まで冷却し、水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（４００ｍＬ）でクエンチした。混合物を酢酸エチル（１６０ｍＬ×２）で抽出し、合わせた抽出物を水（２０ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、最終的に蒸発させた。残留物を２．０Ｍの水性ＨＣｌに溶解し、イソプロピルエーテル（１２０ｍＬ×２）で抽出した。水相を合わせ、２Ｍの水性ＮａＯＨ（２１ｍＬ）でｐＨ１１〜１２に調整した後、酢酸エチル（１６０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、６−ベンジルオキシ−１−｛４−［２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ］フェニル｝−３，４−ジヒドロナフタレン３を油状物として得た。
【０１４３】
ステップｂ
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）中の５（３０．６ｇ、７２ｍｍｏｌ）の溶液にＣＨ２Ｃｌ２（１８６ｍｌ）中のｍ−ＣＰＢＡ（１８．６ｇ、１０８ｍｍｏｌ）の溶液を０〜５℃で１時間加え、１．５時間撹拌した。反応物をＮａ２ＳＯ３（５．１２ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）の水溶液でクエンチし、２Ｍの水性ＮａＯＨ（２１ｍＬ）でｐＨ１０〜１１まで塩基性にした。２つの層を分離し、有機層を飽和ブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４（１２．１ｇ）で乾燥させ、蒸発させて、６−ベンジルオキシ−１−［４−（２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ）フェニル］−３，４−ジヒドロナフタレン−２（１Ｈ）−オン４（２９．０ｇ、９０．０％）を得た。
【０１４４】
ステップｃ
ＴＨＦ（８０ｍＬ）中の塩化セリウム（１２．３ｇ、３３．０ｍｍｏｌ）の懸濁物にＴＨＦ（４５ｍＬ）中の化合物４（１２．８ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下０℃で加えた。結果として得られた混合物をその温度で１．５時間撹拌し、−１０〜−５℃にさらに冷却した。乾燥ＴＨＦ中のフェニルマグネシウムブロミドの溶液を加えた。［グリニャール試薬をＴＨＦ（４０ｍＬ）中のブロモベンゼン（５．２１ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）および削り屑状マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｔｕｒｎｉｎｇｓ）（０．８２０ｇ、３３．７ｍｍｏｌ）から新たに調製した］。混合物をさらに２時間撹拌し、水性ＮＨ４Ｃｌ（８０ｍＬ）でクエンチした。塩化セリウムを濾過により分離し、濾液をＣＨ２Ｃｌ２（１２０ｍＬ×２）で抽出し、合わせた有機層を飽和ブラインで洗浄した。抽出物を蒸発させて、黄ばんだ油状物を残し、それをＭｅＯＨ中のＤ−酒石酸で処理して６−ベンジルオキシ−２−フェニル−１−｛４−［２−（ピロリン−１−イル）エトキシ）］フェニル｝−３，４−ジヒドロナフタレン酒石酸塩６を固体として得た。
【０１４５】
ステップｄ
オートクレーブにＥｔＯＨとＭｅＯＨとの混合物中の６（１．５ｇ）、５％のＰｄ／Ｃ（０．３２ｇ）を入れた。容器を密閉した後、混合物を水素雰囲気（１０ａｔｍの圧力）下５０℃で１０時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトで濾過し、メタノール（２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、所望の生成物１−｛２−［４−（６−ベンジルオキシ−２−フェニル−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）−フェノキシ］エチル｝ピロリジンを得た。収率：０．７３６ｇ（８５％）。粗生成物をエタノール中で再結晶化して所望の生成物（ラソフォキシフェン）を得た。
【０１４６】
ステップｅ
ステップｄからの精製したラソフォキシフェン（２ｇ）を２０ｍＬの９５％エタノールに溶解し、７．８ｍＬの９５％エタノール中に溶解した０．７８ｇのＤ−酒石酸と一緒に混合した。混合溶液をわずかに環流するまで慎重に５分加熱した後、室温に冷却した。ラソフォキシフェンＤ−酒石酸塩の約１．４ｇの沈殿を得た（収率５０％）。
【０１４７】
ラソフォキシフェンＤ−酒石酸塩をＮＭＲ解析のためにＤＭＳＯ−ｄ６（５０ｍｇ／ｍＬ）に溶解した。1H NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ 1.71~1.85 (m, 5H), 2.08 (s, 1H), 2.90~2.99 (m, 6H),3.17 (br, 2H), 3.295 (m, 1H), 4.02~4.06 (m, 4H), 4.17(d, J = 3.6 Hz, lH)，4.43 (br, 2H), 6.6 (m, 5H),6.81 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.11 (s, 1H), 7.13 (s, 2H).  13C NMR(150 MHz,DMSO-d6) δ 174.26, 155.74, 155.36,144.12, 137.08, 135.37, 131.09, 130.97, 130.04, 127.83, 127.61, 125.87, 114.35,113.58, 112.91, 71.90, 64.07, 53.59, 53.100, 49.40, 44.41, 29.244, 22. 56, 22.41.
【０１４８】
ステップｆ
混合物が透明になるまで５ｍＬの９５％水性エタノール中の２０ｍｇのラソフォキシフェンＤ−酒石酸塩の懸濁物を１口フラスコ中で６０℃に加熱した。溶液を６０℃で慎重に濾過した。濾液を２日暗所に置いた。形成された微細な結晶をＸ線解析のために収集した。
【０１４９】
（実施例２  生物学的実験のための一般的な材料および方法）
ＥＲ−α６６、ＥＲ−βおよびＧＰＥＲ１抗体はｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ（ＣＳＴ）およびｓａｎｔａ  ｃｌｕｚから購入した。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、培地およびＬ−グルタミン、抗真菌および抗生物質はｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅから購入した。タモキシフェン（ＭＰＧ  ＵＳＰ  ＧＲＡＤＥ）はＯｋａｈａｔａ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｔｒａｄｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．より供与された。全ての化合物はＳｉｇｍａまたはＡｌａｄｄｉｎから購入した。マウスの食餌は、Ｔｒｏｐｈｉｃ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆｅｅｄ  Ｈｉｇｈ−ｔｅｃｈ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ、Ｎａｎｔｏｎｇ、Ｃｈｉｎａにより作られた。ヌードマウスはＢＫ  ａｎｉｍａｌ  Ｉｎｃ．から購入した。
【０１５０】
ＥＲ−α３６抗体およびプラスミドの調製
ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｉｎｃ．（Ｃｈｉｎａ）によりＥＲ−α３６の最後の２７アミノ酸を合成し、ＢＳＡで架橋した。抗ウサギ血清はＡｂｇｅｎｔ（Ｃｈｉｎａ）により調製された。ｐＥＧＦＰ−ＧＰＥＲ１プラスミドの構築は以前に記載された。
【０１５１】
細胞培養、細胞溶解物の抽出およびウエスタンブロッティングアッセイ
ＨＥＫ−２９３、ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＨＢＥ、Ｈ１２９９およびＨ４６０細胞をＡＴＣＣプロトコールにしたがって生育させた。ウエスタンブロッティングを使用してエストロゲン結合受容体の発現レベルを測定した。簡潔に述べれば、８０〜９０％コンフルエンスの細胞を回収し、ＲＩＰＡ緩衝液または１％のｔｒｉｔｏｎ−ｘ−１００およびプロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する１×ＰＢＳ中に溶解させた。Ｂｉｏ−ｒａｄのタンパク質染色色素を使用して総タンパク質濃度を測定した。ニトロセルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）およびＢｉｏ−ｒａｄのセミドライトランスファーシステムを使用して標準的なプロトコールにしたがってウエスタンブロッティングを行った。細胞溶解物からの等量の総タンパク質をウエスタンブロッティングのためにＳＤＳ−ＰＡＧＥにロードした。抗体を使用してＥＲ−α３６および６６、ＥＲ−βおよびＧＰＥＲ１の発現レベルを測定した。
【０１５２】
サイトゾルＣａ２＋濃度の測定
以下の通りにアッセイを行った。簡潔に述べれば、倒立共焦点顕微鏡（Ａｎｄｏｒ）のステージにマウントしたガラス底の灌流チャンバー上で細胞を生育した後、通常の培養培地中３７℃で６０分２μＭのＦｕｒａ−ｒｅｄ  ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、ＵＳＡ）とインキュベートした。次に、１．８ｍＭのＣａＣｌ２および０．８ｍＭのＭｇＣｌ２を含有するｐＨ７．４のハンクス平衡塩溶液（Ｓｉｇｍａ）で細胞を連続的に灌流させた。Ｃａ２＋濃度が変化したことがデータから明らかになった時に蛍光密度を記録した。フェノールレッドを含まない完全培養培地で細胞を灌流させ、Ｆｕｒａ−ｒｅｄを５７２ｎｍで励起させた。次に、６５７ｎｍで放出された蛍光を収集し、ＣＣＤベースのイメージングシステムランニングソフトウェア（Ａｎｄｏｒ）を使用して記録した。
【０１５３】
細胞分裂を阻害する薬物活性の測定
培養培地を含む２４ウェルプレートに細胞を接種し、指定した濃度の薬物を使用して処理した。細胞計数器（Ｃｏｕｎｔ  Ｓｔａｒ）を使用して細胞数を計数した。総細胞数および移動を含む細胞の生物挙動をリアルタイム細胞モニタリングシステムを使用して測定した。簡潔に述べれば、画像を５分間隔で６６時間捕捉した。各個々の細胞の細胞形態学的パラメーターおよび移動を製造者の指示にしたがって算出した。
【０１５４】
タモキシフェン耐性ＭＣＦ−７細胞の誘導
１０％のＦＢＳ、抗生物質および０．１μＭのタモキシフェンを含有するＥＭＥＭ培地中でＭＣＦ−７細胞を３ヶ月生育した。次に、タモキシフェン濃度をさらに３ヶ月にわたって０．５μＭに増加させ、最終的に、１０％のＦＢＳ、抗生物質および１μＭのタモキシフェンを含有するＥＭＥＭ培地中でＭＣＦ−７細胞を４ヶ月生育した。細胞を高濃度タモキシフェン中で生育させた時の細胞の増殖速度を計数することにより、タモキシフェン耐性ＭＣＦ−７細胞を試験した。
【０１５５】
ヌードマウスにおける異種移植腫瘍の生成および薬物阻害アッセイ
１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中でＨ４６０細胞を生育させた。細胞が７０〜８０％コンフルエントとなり、実験の準備ができた時に、培地を新鮮な培地と３時間交換する。培地を除去し、ＦＢＳを含まない培地で細胞を３回洗浄する。次に、細胞をトリプシン処理し、培地中に懸濁し、等しい体積の細胞およびサポートゲルを各注射のために最大２００μｌまで混合した。４〜６週齢のヌードマウスの皮下（ｓ．ｃ．）に細胞を注射した。１．０〜２．０×１０６個のＨ４６０細胞を各ヌードマウスに投与した。腫瘍が約５０〜６０ｍｍ３の平均体積に達した時に、薬物を胃内に毎日投与した。式：体積＝（幅）２×長さ／２により腫瘍サイズを算出した。
【０１５６】
動物
ヌードマウスはＳｈａｎｇｈａｉ  ＢＫ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌ  Ｉｎｃ．  Ｌｔｄ．、Ｃｈｉｎａから購入した。動物実験プロトコールは、２０１１年に中国政府より発行された動物実験の第５８８規制にしたがって、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｐｌａｎｎｅｄ  Ｐａｒｅｎｔｈｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈの動物倫理委員会により承認された（ＳＩＰＰＲ規制＃２０１５−１３）。全ての動物実験はＳＩＰＰＲ動物倫理委員会の監査の下で行われた。
【０１５７】
統計解析
表および図面において、結果を平均±ＳＤとして表した。アスタリスクは、少なくとも３回の繰返しまたはＮ≧６からの両側のスチューデントｔ検定を使用して算出された統計的有意差を指し示す。
【０１５８】
（実施例３  ラソフォキシフェンはタモキシフェンと比較して弱くエストロゲン古典的核内経路を阻害した）
エストロゲンおよびＥＲ複合体は染色体中のエストロゲン応答エレメント（ＥＲＥ）に結合してＲＮＡ転写を調節する。Ｂｃｌ−２は、抗アポトーシスファミリータンパク質の鍵となるメンバーである。その過剰発現は、人間における多くの種類のがんに関連付けられている。Ｂｃｌ−２プロモーターはＥＲＥ配列を含有し、ＭＣＦ−７細胞におけるＢｃｌ−２  ｍＲＮＡの発現は、Ｅ２により正に調節され、タモキシフェンにより阻害されることが発見されている（Ｇｅｎｎａｒｉ  Ｌ．  Ｄｒｕｇ  Ｔｏｄａｙ（Ｂａｒｃ）、２００６年６月；４２巻（６号）：３５５〜６７頁）。ラソフォキシフェンは、ラロキシフェンおよびタモキシフェンについて報告されたものより少なくとも１０倍高い親和性で両方のエストロゲン受容体サブタイプ（ＥＲ−αまたはＥＲ−β）に選択的に結合する（Ｇｅｎｎａｒｉ  Ｌ．  Ｄｒｕｇ  Ｔｏｄａｙ（Ｂａｒｃ）、２００６年６月；４２巻（６号）：３５５〜６７頁）。本発明者らは最初に、ラソフォキシフェンがタモキシフェンと比較してより高い効率でＢｃｌ−２発現を阻害するかどうかを評価した。インスリンおよび１０％のＦＢＳまたは５％のチャコール処理済みＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中で７２時間ＭＣＦ−７細胞を生育させた。次に、細胞をラソフォキシフェンおよびタモキシフェンにより４８時間処理した。Ｂｃｌ−２タンパク質の発現は、チャコール処理済み（ＣＳ）ＦＢＳを含有するものと比較してエストロゲンを含有する培養培地により増進されるという先行する研究を本発明者らは確認した（図２ＡおよびＢ、ブランク）。驚くべきことに、ラソフォキシフェンは、タモキシフェンと比較してＢｃｌ−２発現を阻害するより弱い活性を示した（図２Ｃ、２．５μＭのＴＡＭ：２．５μＭのＬＡＳ）。重要なことに、タモキシフェンおよびラソフォキシフェンのいずれも、エストロゲンを含まない培地中で培養された細胞中で小胞（ブランク）と比較してＢｃｌ−２発現に影響しなかった（フェノールレッド（ＰＲ）を含まないＥＭＥＭ培地中のチャコール処理済み（ＣＳ）ＦＢＳ；図２Ｂ、ＣＳ  ＦＢＳのパネル）。これらの結果は、ラソフォキシフェンはタモキシフェンと比較して弱くエストロゲン古典的核内経路をブロックすること、および、ラソフォキシフェンは、エストロゲンによりモジュレートされる異なる経路を介してＭＣＦ−７細胞の増殖を阻害し得ることを指し示した。
【０１５９】
（実施例４  ラソフォキシフェンは、ＥＲ−α３６の発現が陽性である時にタモキシフェンと比較してより鋭敏にＭＣＦ−７細胞の増殖を阻害した）
ＥＲ−α３６の転写バリアントはＡＦ−１およびＡＦ２ドメインを欠く。それは、部分的なリガンド結合ドメインおよびパルミトイル化モチーフ（４４５〜４５３）を含有し、全長ＥＲ−αの典型的な１４０アミノ酸（４５６〜５９５）の代わりに独特のＣ末端２７アミノ酸配列を持つ。それは形質膜およびサイトゾルに位置して発見された（Ｂｏｏｎｙａｒａｔａｎａｋｏｒｎｋｉｔ，  Ｖ．、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ、２０１１年８月；７６巻（９号）：８７７〜８４頁）。ＥＲ−α３６はＭＩＥＳをモジュレートするように拘束されており、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１などのタモキシフェン耐性がん細胞において特有に発現されることが発見されたので、ＥＲ−α３６はタモキシフェン耐性に関与すると考えられる（Ｋａｎｇ  Ｌら、Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、２０１０年４月；２４巻（４号）：７０９〜２１頁；Ｒａｏ  Ｊら、Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．、２０１１年１１月；１２７巻（３−５号）：２３１〜７頁）。さらに、インスリン（ＩＬ）はインスリン受容体（ＩＲ）に結合し、インスリン受容体基質（ＩＲＳ）のリン酸化を刺激する。リン酸化されたＩＲＳは二量体エストロゲン−ＥＲ複合体と相互作用し、次にそれは核内にトランスロケーションしてＥＲＥ配列と結合することにより、エストロゲン古典的核内経路を通じてＲＮＡ転写を調節することができる。ＭＣＦ−７細胞の増殖はＩＬによりモジュレートされ、タモキシフェンに対するこれらの細胞の感受性は、培養培地からのＩＬの一時的な除去後に（Ｂｕｔｌｅｒ  ＷＢら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １９８１年１月；４１巻（１号）：８２〜８頁）、またはＩＲＳ特異的ｓｉＲＮＡを使用してＩＲＳ発現を一過的にノックダウンした時に（Ｃｅｓａｒｏｎｅ  Ｇら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２００６年５月１５日；９８巻（２号）：４４０〜５０頁）増加する。以上を合わせると、インスリンはＭＣＦ−７細胞においてタモキシフェン感受性を調節し得ることが指し示される。本発明者らはＭＣＦ−７細胞をインスリン非含有培地中で３ヶ月生育させ、ＥＲ−α３６の転写バリアントがインスリン非含有培地中で上方調節されることを発見した。対照的に、他のエストロゲン受容体の発現レベルは影響されなかった（図３Ａ）。ＩＬを含むまたは含まない培地中で生育させたＭＣＦ−７細胞は、ＭＣＦ−７細胞のＩＣ５０（μＭ）により示されるラソフォキシフェンまたはタモキシフェンの処理に応答する別個のパターンを示した。（図３Ｂ〜Ｄ）ラソフォキシフェンは、ＥＲ−α３６の発現が陽性であるＭＣＦ−７細胞の分裂をより有効に阻害した（図３Ｂ、右）。他方、タモキシフェンは反対の効果を及ぼした（図３Ｂ、左）。ＭＣＦ−７細胞によるＥＲ−α３６の発現が陽性である場合（ＭＣＦ−７）、ラソフォキシフェンはタモキシフェンと比較してＥＲ−α３６＋のＭＣＦ−７細胞分裂をより有効に阻害した。（図３Ｃ）他方、ＭＣＦ−７細胞がＥＲ−α３６を発現しない場合（ＭＣＦ−７／ＩＬ）、ラソフォキシフェンは、タモキシフェンと比較してＭＣＦ−７細胞分裂を阻害するより低い活性を呈し、過剰発現されたＥＲ−α３６バリアントは獲得されたまたはｄｅ  ｎｏｖｏのタモキシフェン耐性を結果としてもたらし得ることを指し示した。
【０１６０】
ＭＣＦ−７細胞をインスリン非含有培地中で３ヶ月生育させた。ウエスタンブロッティングを使用してエストロゲン結合受容体の発現レベルを測定した。簡潔に述べれば、８０〜９０％コンフルエンスの細胞を回収し、ＲＩＰＡ緩衝液または１％のｔｒｉｔｏｎ−ｘ−１００およびプロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する１×ＰＢＳ中に溶解させた。Ｂｉｏ−ｒａｄのタンパク質染色色素を使用して総タンパク質濃度を測定した。ニトロセルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）およびＢｉｏ−ｒａｄのセミドライトランスファーシステムを使用して標準的なプロトコールにしたがってウエスタンブロッティングを行った。細胞溶解物からの等量の総タンパク質をウエスタンブロッティングのためにＳＤＳ−ＰＡＧＥにロードした。Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ（ＣＳＴ）およびＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚから購入した抗体を使用してＥＲ−α３６、ＥＲ−α６６、ＥＲ−βおよびＧＰＥＲ１の発現レベルを測定した。
【０１６１】
（実施例５  ラソフォキシフェンによる獲得されたタモキシフェン耐性ＭＣＦ−７細胞の増殖の阻害）
過剰発現されたＥＲ−α３６バリアントは獲得されたｄｅ  ｎｏｖｏのタモキシフェン耐性を結果としてもたらし得るという本発明者らの仮説を検証するために、タモキシフェンを使用してＭＣＦ−７細胞を１０ヶ月誘導した。ＥＲ−α６６の発現が減少したことを本発明者らは発見した（図３Ａ、上パネル）。対照的に、ＥＲ−α３６の発現レベルは増進された（図４Ａ、中パネル）。ＧＰＥＲ１の発現レベルは影響されなかった（図４Ａ、下パネル）。２μＭのタモキシフェンは１０ヶ月にわたってタモキシフェンにより誘導されたＭＣＦ−７細胞の増殖を阻害しなかった。対照的に、２μＭのラソフォキシフェンは、同じ試験条件下で５０％を上回る阻害活性を示した（図４Ｂ）。ラソフォキシフェンがＥＲ−α３６アンタゴニストであり、タモキシフェン耐性およびＥＲ−α３６＋乳がんの増殖を阻害することが指し示された。
（実施例６）
ラソフォキシフェンは（ｄｅ  ｎｏｖｏのまたは獲得された）ＥＲ−α３６を発現する腫瘍細胞の増殖を阻害した
【０１６２】
女性は、抗エストロゲン療法により治療された乳がんを有する女性および喫煙の効果を除外した後に男性と比較して非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のより高いリスクおよび肺がん死のより低いリスクを有することを疫学データは実証する（Ｒａｍｃｈａｎｄｒａｎ  Ｋら、Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００９年、３６巻：５１６〜５２３頁；Ｋｉｙｏｈａｒａ  Ｃら、Ｇｅｎｄｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１０年、７巻：３８１〜４０１頁；Ｂｏｕｃｈａｒｄｙ  Ｃら、Ｃａｎｃｅｒ  ２０１１年、１１７巻：１２８８〜１２９５頁）。それは、ＥＲ−α３６が一部の肺がん細胞において過剰発現され得ることを指し示す。したがって、本発明者らは、肺がん細胞からのＥＲ−α３６の発現を試験した。ＥＲ−α６６、ＥＲ−α３６、ＧＰＥＲ１およびＥＧＦＲの発現のスクリーニング後に、ＨＢＥ細胞はＥＲ−α３６を発現しないことを本発明者らは発見した。Ｈ１２９９細胞は高レベルのＥＲ−α３６を発現したが、ＥＧＦＲを発現しなかった。Ｈ４６０細胞は、高レベルのＥＲ−α３６およびＥＧＦＲの両方を発現した（図５−Ａ）。Ｈ４６０およびＨ１２９９細胞の増殖は２μＭのラソフォキシフェンの処理の下で阻害された（図５−ＢおよびＤ）。対照的に、タモキシフェンは反対の効果を呈した（図５−Ｂ）。タモキシフェンおよびラソフォキシフェンもいずれも、ＨＢＥ細胞の増殖に影響しなかった（図５−Ｂ）。Ｈ１２９９細胞は、Ｈ４６０細胞と比較して弱くＥＧＦＲを発現し（図５Ａ）、ＥＧＦＲキナーゼの阻害剤であるゲフィチニブはＨ１２９９細胞の増殖を阻害しなかった（図５Ｄ）。対照的に、それは、ＥＧＦＲの発現が陽性であるＨ４６０の増殖を阻害した（図５Ｃ）。加えて、Ｈ４６０細胞は、ラソフォキシフェンおよびゲフィチニブの併用処理により感受性であった（図４Ｃ）。Ｈ１２９９細胞におけるラソフォキシフェンおよびゲフィチニブでの併用処理は、ラソフォキシフェン単独による処理と比較して類似の効果を示した（図４Ｄ）。加えて、結腸がん（図８−Ｂ）、胃がん（図８−Ｄ）、およびトリプルネガティブ乳がん（図９）などのＥＲ−α３６＋がんを治療するためにそれを使用した時にも、同じラソフォキシフェンの活性が発見された。これは、ラソフォキシフェンが、獲得されたおよびｄｅ  ｎｏｖｏのタモキシフェン耐性またはＥＲ−α３６＋がんの増殖を阻害できることを指し示した。
【０１６３】
（実施例７  ラソフォキシフェンは異種移植ヌードマウスにおいてＥＲ−α３６陽性がんの増殖を阻害した）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの結果を検証するために、本発明者らはヌードマウスにおいて異種移植Ｈ４６０腫瘍を構築した。腫瘍サイズはデジタルノギスを使用して測定した。腫瘍が６０〜７０ｍｍ３まで増大した時に、ゲフィチニブ、もしくはラソフォキシフェン、またはゲフィチニブとラソフォキシフェンとの組み合わせを２〜３週にわたって毎日マウスに投与した。ラソフォキシフェンは異種移植Ｈ４６０腫瘍の増殖を阻害したことを本発明者らは発見した（図７）。加えて、Ｅ２およびＥＧＦＲの両方は、ＥＲＫ／ＭＡＰＫおよびＡＫＴ／ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を活性化する。マウスにラソフォキシフェンとゲフィチニブとの組み合わせを投与した時に、阻害効果はラソフォキシフェンまたはゲフィチニブ単独による投与よりも一層顕著であった（図７−Ａ、Ｂ）。したがって、ラソフォキシフェンはＥＲ−α３６＋がんの増殖を阻害する。ラソフォキシフェンおよびゲフィチニブの併用投与は、ＥＲ−α３６＋がんの増殖に対する阻害効果を増進させた。
【０１６４】
（実施例８  ラソフォキシフェンはＧＰＥＲ１アゴニストを介して骨粗鬆症を予防する）
ラソフォキシフェンおよびラロキシフェンの両方は、閉経後の女性において骨粗鬆症を予防するエストロゲン剤として市販された。ラソフォキシフェンはＥＲ−α３６および古典的エストロゲン核内経路の阻害剤であること、およびＥ２はＧＰＥＲ１に結合し、Ｇαｓシグナルを調節してＩｎｓＰ３Ｒを通じてサイトゾル［Ｃａ２＋］の上昇の増進を結果としてもたらすことを本発明者らは既に実証したので、ラソフォキシフェンはＧＰＥＲ１アゴニストであるという仮説を立てる。ＧＰＥＲ１−ＥＧＦＰは、ＧＰＥＲ１−ＥＧＦＰプラスミドを一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞において過剰発現された（図１１Ａ）。本発明者らの結果は、ＧＰＥＲ１アンタゴニストであるＧ１５は、ＥＧＦＰベクターをトランスフェクトした細胞と比較してＧＰＥＲ１−ＥＧＦＰを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞においてサイトゾル［Ｃａ２＋］ｉを有意に変化させなかったことを示した（図７Ｂ）。ラソフォキシフェンおよびラロキシフェンは、ＧＰＥＲ１−ＥＧＦＰを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞においてサイトゾル［Ｃａ２＋］ｉを有意に増進させた（図１１Ｂ）。サイトゾル［Ｃａ２＋］ｉシグナルはＭＩＥＳのアゴニストと考えられ、またラソフォキシフェンおよびラロキシフェンはサイトゾル−Ｃａ２＋シグナルを上昇させたので、ラソフォキシフェンおよびラロキシフェンはＧＰＥＲ１のアゴニストと考えられた。したがって、ラソフォキシフェンおよびラロキシフェンは、骨においてＧＰＥＲ１シグナル伝達経路の活性化を介して骨粗鬆症を予防した。
【０１６５】
考察
ラソフォキシフェンは、骨粗鬆症を予防する選択的エストロゲン受容体モジュレーターとして開発および市販された。それはまた、乳がんを予防することが報告された。しかしながら、機序はいまだに報告されていない。ラソフォキシフェンは、タモキシフェンと比較して、エストロゲン古典的核内経路を介してＢｃｌ−２発現をブロックするより弱い阻害剤であることを本研究は指し示した。興味深いことに、ラソフォキシフェンはＥＲ−αＬＢＤに１．５ｎＭの結合親和性を有することが報告されており、ラソフォキシフェンはタモキシフェンと比較してより高い効率で膜結合ＥＲの生物学的機能を阻害し得ることを示唆する。ラソフォキシフェンはＥＲ−α３６陽性がん細胞の増殖をブロックするＥＲ−α３６アンタゴニストであることを本研究は指し示した。
【０１６６】
タモキシフェンは、ＥＲを高度に発現する乳がん患者を治療するためのエストロゲン受容体のアンタゴニストとして市販された。それはまた、薬物耐性および子宮内膜がんを誘導し、膜結合型エストロゲン受容体であるＥＲ−α３６およびＧＰＥＲ１の発見を結果としてもたらす。さらに、ＭＩＥＳはＥＲＫ／ＭＡＰＫおよびＡＫＴ／ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を活性化することが報告されており、ＭＩＥＳ誘導性のがんを考えるべきであることを指し示す。しかしながら、異なる膜結合型エストロゲン受容体を有する選択的モジュレーターとそれらのシグナル伝達経路との間の関与する分子メカニズムおよび干渉性クロストークの十分な理解を欠いていることが、ＥＲ−α３６とＧＰＥＲ１との間の生理学的機能を明らかにし、ＭＩＥＳ誘導性のがんを治療するための化合物を設計することを困難にしている。本研究は、ラソフォキシフェンがＥＲ−α３６陽性がんの増殖を阻害することを指し示し、ＭＩＥＳ誘導性のがんおよび獲得されたまたはｄｅ  ｎｏｖｏのタモキシフェン耐性を誘導するのはＧＰＥＲ１よりむしろＥＲ−α３６であることを指し示した。
【０１６７】
ラソフォキシフェンは、閉経後の女性において骨粗鬆症を予防するためのＳＥＲＭとして開発された。ラソフォキシフェンは、Ｅ２−ＧＰＥＲ１経路の活性化を介してイノシトール三リン酸受容体（ＩｎｓＰ３Ｒ）のＣａ２＋チャネルゲーティングを増進させるＧＰＥＲ１アゴニストであることを本研究は指し示した。ＧＰＥＲ１は主に小胞体に局在することが発見されている。先行する報告は、ＧＰＥＲ１とＩＬ−ＩＲ複合体とのクロストークに対して為された。また、ＩｎｓＰ３Ｒの増進された活性は、グルコース取込みを向上させることが報告された。エストロゲンはＧＰＥＲ１および活性Ｇαｓに結合し、ＩｎｓＰ３Ｒ  Ｃａ２＋チャネルの増進された活性を結果としてもたらすことが報告された。ミトコンドリア関連小胞体膜（ＭＡＭ）は細胞代謝の主要な機構である。したがって、ＧＰＥＲ１に結合するＥ２は細胞代謝シグナルをモジュレートする可能性がある。加えて、ＧＰＥＲ１ノックアウトマウスは、ＧＰＥＲ１が雌マウスにおいて正常な骨成長、グルコースホメオスタシス、および血圧のために必要とされることを実証した。したがって、ＧＰＥＲ１は、閉経後の女性における一部のエストロゲン関連の代謝性疾患の新規の治療に活用するための興味深い治療標的である。以上を合わせると、ラソフォキシフェンはＧＰＥＲ１アゴニストであるので、閉経後の女性において骨粗鬆症を予防する。
【０１６８】
要約すると、エストロゲンは、正常な哺乳動物の生理、加齢および多くの病態を調節する鍵となるホルモンである。エストロゲン核内受容体は、ホルモンで調節される組織および疾患においてゲノム効果を媒介するリガンド活性化転写因子として説明されると考察されるが、エストロゲンはまた、膜結合型エストロゲン受容体（ＥＲ−α３６）およびＧＰＥＲ１（Ｇタンパク質共役型エストロゲン受容体、以前はＧＰＲ３０）に伝統的に関連付けられてきた迅速なシグナル伝達事象も媒介する。多くの場合において、エストロゲンの保護的なまたは有益な効果は、エストロゲン媒介性の疾患を治療するためにＳＥＲＭによって模倣される。ＥＲ−α３６またはＧＰＥＲ１を標的化する治療薬への臨床的に新規の可能性を本発明者らは開発している。本発明者らのデータは、ラソフォキシフェンがＭＩＥＳ誘導性のがんのＥＲ−α３６アンタゴニストであるが、タモキシフェンと比較してエストロゲン古典的核内経路のより弱いアンタゴニストであることを指し示す。さらに、それはまた、閉経後の女性において骨粗鬆症を予防するＧＰＥＲ１アゴニストでもある。
【化３】
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【化４】
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【化５】
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【化６】
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【０１６９】
刊行物、特許、特許出願および特許出願公開などの本明細書の全体を通じた全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
理解を明確にする目的で、以上の発明を説明および例によりある程度詳細に記載したが、ある特定の軽微な変更および改良が実施されることは当業者に明らかである。したがって、説明および例が本発明の範囲を限定するものと解釈してはならない。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
個体においてがんを治療する方法であって、前記個体に有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記がんがＥＲ−α３６陽性がんである、方法。
（項目２）
前記がんが、乳がん、子宮内膜がん、肺がん、胃がん、結腸がん、膵臓がん、甲状腺がんおよび肝臓がんからなる群より選択される固形腫瘍である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記がんが乳がんである、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記がんがタモキシフェン耐性乳がんである、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記がんがトリプルネガティブ乳がんである、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記がんがＥＧＦＲ陽性がんである、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記がんがＥＧＦＲ陽性肺がんである、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記個体にＥＧＦＲキナーゼ阻害剤を投与することをさらに含む、項目６または７に記載の方法。
（項目９）
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が同時に投与される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が逐次的に投与される、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩である、項目８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記がんがＨＥＲ２陽性がんである、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記がんがＨＥＲ２陽性乳がんまたはＨＥＲ２陽性胃がんである、項目１６に記載の方法。
（項目１４）
前記個体にＨＥＲ２阻害剤を投与することをさらに含む、項目１２または１３に記載の方法。
（項目１５）
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＨＥＲ２阻害剤が同時に投与される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩および前記ＨＥＲ２阻害剤が逐次的に投与される、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記ＨＥＲ２阻害剤が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブまたはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）である、項目１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記がんにおけるＥＲ−α３６の発現が、ＥＲ−α３６ペプチドの存在により決定される、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記ＥＲ−α３６ペプチドが、免疫ハイブリダイゼーション法［例えば、ウエスタンブロッティング、免疫組織学的染色または免疫蛍光染色］により測定される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記がんにおけるＥＲ−α３６の発現が、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在により決定される、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡが、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑ−ＰＣＲ）により測定される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記個体に有効量のラソフォキシフェンを投与することを含む、項目１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記個体がヒトである、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
（ｉ）ラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物、および（ｉｉ）ＥＲ−α３６ペプチドまたはＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための剤を含む、キット。
（項目２５）
ＥＲ−α３６ペプチドの存在を決定するための前記剤が、前記ＥＲ−α３６ペプチドを認識する抗体である、項目２４に記載のキット。
（項目２６）
ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの存在を決定するための前記剤が、ＥＲ−α３６  ｍＲＮＡの定量的測定のためのオリゴヌクレオチドである、項目２４に記載のキット。
（項目２７）
有効量のラソフォキシフェンまたはその薬学的に許容される塩、ならびにＥＧＦＲキナーゼ阻害剤またはその機能的同等物およびＨＥＲ２阻害剤またはその機能的同等物からなる群より選択される少なくとも１つの追加の剤を含む、医薬組成物。
（項目２８）
前記ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ロシレチニブもしくはオルムチニブ、またはこれらの薬学的に許容される塩である、項目２７に記載の医薬組成物。
（項目２９）
前記ＨＥＲ２阻害剤が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、もしくはアドトラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、またはこれらの薬学的に許容される塩である、項目２７に記載の医薬組成物。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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