(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
レバミピドを有効成分として含む点眼剤組成物の製造方法であって、
（ａ）レバミピド又はその薬学的に許容可能な塩と、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースからなる群から選ばれた少なくとも一つの安定化剤に、塩基を加え、水に溶解して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１の水溶液点眼剤を得る工程；
（ｂ）前記工程（ａ）で得られた点眼剤に、アミノカプロン酸、アミノカプロン酸及びホウ酸から選ばれたいずれか一つの緩衝剤と、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、スクロース、グリセリンを含む非イオン性浸透圧調節剤から選ばれた少なくとも一つの浸透圧調節剤を加え、溶解し、酸でｐＨ７〜ｐＨ８に調整する工程； 
（ｃ）前記工程（ｂ）で得られた透明な溶液をシリンジフィルターでろ過して、無菌性に製造する工程；
を含むことを特徴とするドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【請求項２】
レバミピドは、０．５〜２．０ｗ／ｖ％の濃度で無色透明に可溶化されることを特徴とする請求項１に記載のドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【請求項３】
前記安定化剤の濃度は、０．２〜０．９ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項１に記載のドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【請求項４】
前記緩衝剤の濃度は、０．１〜０．５ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項１に記載のドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【請求項５】
緩衝剤の濃度は、０．２〜０．４ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項４に記載のドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【請求項６】
前記工程（ｂ）で得られた溶液の浸透圧が、１００〜３００ｍＯｓｍであることを特徴とする請求項１に記載のドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【請求項７】
前記工程（ｂ）で得られた溶液の浸透圧が、１３０〜２５０ｍＯｓｍであることを特徴とする請求項６に記載のドライアイ治療用レバミピド点眼剤組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レバミピドを安定に可溶化し、人体に安全な添加剤成分を含有しており、治療効果に優れたドライアイ治療用点眼剤水溶液製造及びその組成物に関するものである。
【０００２】
本発明の水溶液を用いて、ドライアイの治療を目的とした点眼剤組成物を提供することができる。完全な水溶液状態の点眼剤は、生体利用率が高く、利用者に拒否感なしで便利であり、無菌性の製造と品質管理が経済的で効率的である。点眼剤は、その製剤特性上、製造以降の流通と使用において、保管形態が冷蔵、室温、高温条件など多様である。従って、このような多様な条件で、最初設定された品質状態である溶液状態を維持することは安定性確保の鍵となる。また、実際の点眼剤投与経路で安全な添加剤を用いて製造することは、長期間使用による安全性確保に重要である。
【０００３】
そこで、本発明者らは、難溶性レバミピドを画期的に十分に高い濃度水準に可溶化し、点眼剤投与経路に適した安全な添加剤を用いて、長期間にわたって物理化学的に安定化した新規点眼水溶液を製造するに至った。
【背景技術】
【０００４】
国内ドライアイ患者は、毎年増加しつつあり、２００４年度１１０万人から２０１４年２１４万人へと増加する傾向にある。これにより、多くの患者が日常生活に不便を強いられており、生活の質が低下し、激しいときには、視力が失うなど苦痛を被っている。
ドライアイの原因は、多様であるが、治療剤は限定的である。
【０００５】
ドライアイ治療剤は、免疫抑制剤であるシクロスポリン、粘液質分泌を促進するジクアホソルとレバミピド、眼の乾燥防止及び上皮細胞治癒を促進するヒアルロン酸点眼剤などが販売されている。
【０００６】
この中で、レバミピドは、ムチンを促進して粘液を分泌し、ドライアイに効果があると知られており、現在日本でＭＵＣＯＳＴＡ（登録商標）ＵＤ２％懸濁点眼剤として販売されている。
【０００７】
この製品は、白色の懸濁剤からなる製品であり、懸濁剤から発生する灼熱感、痛み、目のカスミなどの副作用が発生する問題がある。
【０００８】
また、製造においても溶液状態の製剤と比較して、ろ過滅菌や蒸気滅菌が不可能であることから、滅菌に必要な工程設計が複雑になり、無菌性の品質管理と保証が極めて困難である。
【０００９】
これを克服するために、安全、且つ有効な新規な溶液状態の点眼剤の開発が求められている。
【００１０】
このような溶液状態の点眼剤に対する特許文献１では、溶液状態の製造を記載しているが、別途の溶解添加剤を用いて、当該点眼剤のｐＨが８．３〜９．３であり、点眼投与時、刺激感と粘膜損傷の虞があることが記載されている。
【００１１】
通常の点眼剤のｐＨは、８を越えないのが好ましく、体液と同様のｐＨ７〜ｐＨ８の範囲が生体適合する。
【００１２】
レバミピドは、水ではほとんど溶解しなく、ｐＨが塩基性へと高まるほど溶解度が増大し、溶解しやすくなる。
【００１３】
しかし、塩基性で可溶化されたレバミピドは、生体範囲のｐＨに下げることになると、急激な溶解度減少によって沈殿が発生する。
【００１４】
特許文献２には、レバミピドを含む水溶液の安定性維持のために、粘度増強剤としてヒドロプロピルメチルセルロースを用い、等張化剤としてグリコール類を、緩衝剤として無機塩を用いる組成物が開示されている。
【００１５】
しかし、前記特許文献２の組成物も、弱アルカリ性で溶解され、長時間放置時、沈殿物が形成される問題がある。
【００１６】
特許文献３では、アミノ酸と、溶解補助剤であるポリビニルピロリドンと、マクロゴールなどを用いて製造した水溶液状態の点眼剤組成物を記載しているが、この主な添加剤であるマクロゴールは、点眼剤として使用され難い。
【００１７】
マクロゴールは、通常難溶性物質の可溶化に使用されているが、点眼用として使用時、眼粘膜に刺激感を与えることがあることから、少量だけを使用でき、安全性の側面で使用が排除された方が良い。
【００１８】
特に、ドライアイのように再発が容易であり、また長期間使用しなければならない製剤では、マクロゴールの使用を排除することが好ましい。
【００１９】
このような副作用を最小化するために、特許文献４では、レバミピドを塩基と共に水でｐＨ８．５以上に溶解させた後、再結晶防止剤としてシクロデキストリン類を用いて、レバミピドを抱接して透明な溶液状態を維持して、可溶化する製剤方法が掲示されている。
【００２０】
シクロデキストリンは、ＵＳＰに金属イオン封鎖剤として紹介されている。しかし、シクロデキストリン類は、米国、韓国規制当局から点眼剤の添加剤として許可されていなく、ヨーロッパで使用されている。
【００２１】
ヨーロッパのＦＤＡでも、シクロデキストリンは目に対する用量に応じる安全性が知られていない。
【００２２】
ヨーロッパのＦＤＡで許可されたＶｏｌｔａｒｅｎという製品は、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンを使用しており、含量は２％であり、Ｉｎｄｏｃｉｄ製品は、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを、主成分とモル比で２５倍、即ち、主成分０．１％の場合、４．３％のシクロデキストリンを使用することが記載されている（特許文献５）。
【００２３】
しかし、Jansen Tの非特許文献１では、シクロデキストリン類が５％以上で角膜に毒性を誘発する可能性があるので、眼科用製剤としては適しないと明らかにしている。
【００２４】
前記特許文献５では、シクロデキストリンが主成分の１．５〜６倍使用され、３％〜１２％が使用されると記載されている。これは、３％以上でのシクロデキストリン類の医薬品賦形剤として資料がないので、追加的な毒性資料を出さなければならない問題がある。また、実施例でもｐＨは８以上で製造することで、生体適合性の問題を依然として有していることが分かる。該当発明は、水溶液状態の点眼剤を開示しているが、その水溶液状態の安定性試験を一部条件に対して限定された期間のみを実施したため、完全な溶液状態の安定化を達成したと評価することは困難がある。従って、該当発明から十分に安全、且つ安定した点眼用水溶液が開発される必要性があると言える。
【００２５】
また、特許文献６にも、シクロデキストリン類とアミノ酸を用いた水溶液点眼組成物が記載されているが、前記特許と同様の問題点を有している。
【００２６】
本発明は、セルロース誘導体が、難溶性レバミピドを可溶化させた後、生体に適したｐＨ範囲に調整しても、長期間安定した状態を維持することができる点を見出し、セルロース誘導体類を安定化剤として選択して、本発明を完成しており、これらは安全あり、点眼剤使用に適したものである。
【００２７】
その他に、緩衝剤として用いる多様な物質中において、アミノカプロン酸は、主成分の沈殿防止で安定化剤と相乗的に抑制する特性があることが見出され、これを選択することによって、本発明に適用して製剤の安定性をさらに一層向上させた。
【００２８】
アミノカプロン酸は、抗塩効果のある化合物であり、点眼剤として最小使用量は１０ｍｇ／ｍＬの医薬品を１回２〜３滴を１日５〜６回投薬する。
【００２９】
アミノカプロン酸は、添加剤としての機能は、緩衝剤として知られており、最小点眼用医薬品使用量の１／５以内に使用すれば、安全性に対して懸念が全くなく、韓国の食品医薬安全庁からこのような事実が公知されている。
【００３０】
点眼剤は、その製剤特性上、利用者が冷蔵保管する事例が多く、季節的に冬と夏など気温差が激しい温度条件に露出されている。これら条件下で、その物理化学的安全性確保が非常に重要であり、特に難溶性薬物を可溶化したときには、なおさらそうである。
【００３１】
従って、本発明では、完全な点眼用水溶液状態に開発し、冷蔵、室温、加速及び交差保管時のいずれも安定した組成物を発明し、開示するに至った。
【００３２】
本発明の製剤は、実際の流通及び使用環境で露出され得る多様な保管条件において、物理化学的に安定し、沈殿発生などの不安定性を克服することができた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３３】
【特許文献１】韓国  特許第１０−０２８１８６５号
【特許文献２】ＷＯ２００８／０７４８５３号のパンフレット
【特許文献３】韓国  公開特許公報  第２０１１−００２７７８６号
【特許文献４】韓国  特許  第１０−１７１８７３３号
【特許文献５】ＵＳ０８／７０６，２６８
【特許文献６】韓国  公開特許公報  第２０１７−００３９３４７号
【非特許文献】
【００３４】
【非特許文献１】Lens Eye Toxic Res. 1990;7(3-4):459-68.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３５】
本発明は、従来のレバミピド懸濁剤及び溶液製剤の投与時に生じる副作用を最小化し、生体利用率を高めた水溶液状態の点眼剤発明に関するものであり、多様な保管条件においても長期間沈殿発生がなく安定し、点眼剤として使用が可能な安全な添加剤を用い、生体に適したｐＨ範囲を示す点眼剤組成物及びその可溶化及び安定化方法を提供することを目的とする。
【００３６】
本発明は、前記製剤技術によりドライアイ治療のための有効な製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００３７】
本発明には、前記先行技術の問題点を解決するために、別途の可溶化剤や溶解補助剤を用いず、レバミピドを可溶化するための塩基性物質を用いて、水溶液をｐＨ１０〜ｐＨ１１に調整して、レバミピドを水溶液状態に溶解し、人体に無害な安定化剤及び緩衝剤と非イオン性浸透圧調節剤を用いて本発明を完成した。
【００３８】
本発明の薬理成分であるレバミピドの濃度は、０．５〜２．０ｗ／ｖ％が好ましく、より好ましくは１．０〜１．５ｗ／ｖ％である。その濃度が０．５ｗ／ｖ％未満ときその薬効が落ちる虞あり、２．０ｗ／ｖ％を超えると結晶が生成される恐れがあり、それにより安定性が低下され、その薬効の上昇効果も小さい。
【００３９】
前記塩基性物質は、通常、塩基性の強いＯＨ基を有しており、これらを用いるときに、少量で効果的に可溶化を達成することができ、ＮａＯＨ、ＫＯＨなど点眼剤として使用が可能なものである。
【００４０】
可溶化されたレバミピドを生体水準にｐＨを調整して安定化させるための添加剤を含有しており、従来の多様な安定化剤の中から、人体に無害なキサンタンガム、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどからなる群から選ばれた水溶性乃至水膨潤性の少なくとも一つ以上のものを使用することを特徴とする。
【００４１】
好ましくは、セルロース誘導体であるヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースから選ばれた少なくとも一つ以上であってもよい。
【００４２】
前記安定化剤の使用濃度は、０．１〜１．０ｗ／ｖ％であり、好ましくは０．４〜０．６ｗ／ｖ％である。前記濃度が０．１ｗ／ｖ％未満のとき結晶が生成される虞があり、１．０ｗ／ｖ％を超えると副作用が生じる虞がある。
【００４３】
緩衝剤は、レバミピドを可溶化状態で生体に適したｐＨ範囲で保管時に維持できるように機能し、多様な緩衝剤のうち、アミノカプロン酸単独又はアミノカプロン酸とホウ酸とを混合して用いてもよく、前記緩衝剤の使用濃度は、０．１〜１．０ｗ／ｖ％であり、好ましくは０．２〜０．５ｗ／ｖ％である。その濃度が０．１ｗ／ｖ％未満のとき結晶化が生じる虞があり、１．０ｗ／ｖ％を超えると人体に副作用が生じる虞がある。
【００４４】
前記安定化剤と緩衝剤を使用することは、本発明者らが多様な安定化剤と緩衝剤の前記成分の組み合わせが、レバミピドの安定化に最も効果的であることを見出し、本発明を完成したものである。
【００４５】
浸透圧調節剤は、点眼剤の浸透圧調節のために用いられ、浸透性調節のために通常の浸透圧調節剤を使用してもよいが、特に、イオン性のＮａＣｌ、ＫＣｌなどは排除することを原則とし、好ましくは、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、スクロース、グリセリンなどを含む非イオン性浸透圧調節剤の中から少なくとも一つを選択して、使用することを特徴とする。
【００４６】
ＮａＣｌ、ＫＣｌなどの電解質性浸透圧調節剤を多量使用すれば保管中にレバミピドと塩を形成して、沈殿物を形成しやすくなることを見出し、これらの使用を排除した。
【００４７】
前記浸透圧調節剤の濃度は、０．５〜１０．０ｗ／ｖ％であり、好ましくは１．０〜４．０ｗ／ｖ％である。前記濃度が０．５ｗ／ｖ％未満のとき、浸透圧が非常に低くなり、粘膜に副作用が生じる虞があり、１０．０ｗ／ｖ％を超えると浸透圧が非常に高くなり、薬物の吸収力が低減し、人体に副作用の発生の虞がある。
【００４８】
最終的に、主成分、安定化剤、緩衝剤、浸透圧調節剤及び塩基性物質を全部添加して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１に可溶化し、生体に適した範囲であるｐＨ７〜ｐＨ８になるように適当量の酸を加えてｐＨを調節する。
【００４９】
可溶化時のｐＨが１０未満のとき、レバミピドの完全な溶解が難しくなる虞があり、ｐＨ１１を超えると、塩基性物質の使い過ぎによる中和などの問題が生じる虞がある。また、最終製品のｐＨ７未満のときに弱酸性を示し、生体と不適応が現れる虞があり、ｐＨ８を超えると粘膜に疼痛誘発や細胞の損傷が生じる虞がある。
【００５０】
このとき、用いられる塩基性物質としては、ＮａＯＨ、ＫＯＨが好ましく、酸としは、塩酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸などの薬学的に許容可能な無機及び有機酸が用いられる。酸は１Ｍ濃度溶液であって０．５％（ｖ／ｖ）未満で使用される。
【００５１】
本発明において、緩衝剤と浸透圧調節剤を合わせた濃度は、全点眼用水溶液の浸透圧が１００〜３００ｍＯｓｍ、好ましくは１３０〜２５０ｍＯｓｍであることを特徴とする。
【００５２】
以上の方法に従って製造することによって、本発明者らは新規でありながら、人体に安定性が高く、貯蔵安定性に優れ、生体に適した水溶液状態の点眼剤組成物を発明することができた。
【００５３】
本発明の可溶化と安定化のための製造方法は、以下の工程からなっている。
【００５４】
（ａ）レバミピド又はその薬学的に許容可能な塩と安定化剤に、塩基を加え、水に溶解して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１で得る工程；及び
【００５５】
（ｂ）緩衝剤と浸透圧調節剤を加え、溶解し、酸でｐＨ７〜ｐＨ８に調整する工程；からなる。
【００５６】
以降には、滅菌のためのろ過などの工程にさらに加えられていてもよい。
【００５７】
前記工程により製造された水溶液を、ドライアイが誘発されたマウスにドライアイ治療剤として使用される代表的な医薬品と比較した。
【００５８】
本発明により可溶化されたドライアイ治療用点眼剤が提供される。
【発明の効果】
【００５９】
本発明は、レバミピド溶液製剤の投与時に生じる副作用を最小化し、多様な保管条件においても生体に適したｐＨ範囲内で長期間沈殿発生がなく、安定した効果を奏する。
【００６０】
また、本発明は、ドライアイ治療のための有効な溶液製剤を、別途の添加剤を加えることなく、容易、且つ経済的に製造することができる効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】比較例３、比較例８及び実施例１０の保管条件による８週経過後の性状観察結果の写真である。
【図２】ドライアイモデルマウスにおける本発明と対照群との涙の生成確認結果を示すグラフ図である。
【図３】本発明と対照群の角膜表面屈曲性であり、正常群に比べて乾燥ストレス群で実体顕微鏡で反射された光繊維リングの形状を示す図である。
【図４】ドライアイモデルマウスにおける本発明と対照群との角膜表面屈曲性確認結果を示すグラフ図である。
【図５】ドライアイモデルマウスにおける本発明と陽性対照群とのムチン染色形状を示す図である。
【図６】ドライアイモデルマウスにおける本発明と陽性対照群とのムチン染色分析グラフ図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６２】
以下、本発明を実施例及び試験例により詳細に説明する。
しかし、下記実施例及び試験例は、本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらに制限されない。
【００６３】
［比較例１〜比較例８］レバミピドの可溶化に対する安定化剤の影響
【００６４】
【表１】
0006931257.tif 000002
【００６５】
＊ヒプロメロース：ヒドロキシプロピルメチルセルロース
１）蒸溜水８５ｍＬに、各比較例に該当する安定化剤を添加し、撹拌して溶解した後、主成分であるレバミピドを添加し、撹拌して懸濁させる。
２）前記１）の溶液に、各比較例に該当する可溶化剤である１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら滴加して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１になるように調整して、主成分を全部溶解させる。
３）前記２）で得られた透明な溶液に、ｐＨ調節剤である１Ｎ  ＨＣｌ溶液を滴下加して、ｐＨ７〜ｐＨ８の範囲に調整する。このとき、浸透圧は７０ｍＯｓｍol／ｋｇ〜９０ｍＯｓｍol／ｋｇである。
４）前記３）で得られた透明な溶液に、蒸溜水を添加し、全体積を１００ｍＬにして製造した。
【００６６】
［試験例１］比較例１〜比較例７の性状の変化
製造した比較例１と比較例２の場合は、製造中に薬物が可溶化されたが、ｐＨを調整しながら主成分及び高分子の沈殿が形成され、可溶化が不可能であった。
反面、比較例３から比較例７までの溶液は、レバミピドの水での溶解度（約０．０２５ｍｇ／ｍＬ）に比べて、６００倍以上顕著に増加した溶液状態で製造されており、比較例３〜７の性状の変化を表２に示した。
【００６７】
【表２】
0006931257.tif 000003
【００６８】
表２に示されるように、安定化剤としてセルロース誘導体が最も優れていることが分かる。
【００６９】
［比較例８〜比較例１１及び実施例１〜実施例８］レバミピド可溶化による１．５％点眼剤の製造
【００７０】
【表３】
0006931257.tif 000004
【００７１】
１）蒸溜水８５ｍＬに実施例に該当する安定化剤を添加し、撹拌して溶解した後、各比較例と実施例に該当する主成分であるレバミピドを添加し、撹拌して懸濁させる。
２）前記１）の溶液に可溶化剤である１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら滴加して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１になるように調整し、主成分を全部溶解させる。
３）前記２）の溶液に、各比較例と実施例に該当する緩衝剤を添加し、撹拌して全部溶解させる。
４）前記３）の溶液に、各比較例と実施例に該当する浸透圧調節剤を添加し、撹拌して、２８０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調整し、体液と等張性にする。
５）前記４）で得られた透明な溶液に、各比較例と実施例に該当するｐＨ調節剤である１Ｎ  ＨＣｌ溶液を滴加して、ｐＨ７〜ｐＨ８に調整する。
６）前記５）で得られた透明な溶液に蒸溜水を添加し、全体積を１００ｍＬにして、透明な溶液を得た。
７）前記４）で得られた透明な溶液を０．２μｍの孔径を有するシリンジフィルターでろ過して、無菌性に製造した。
以上のように製造された比較例８〜１１及び実施例１〜８の溶液は、製造時、きれいで透明な水溶液状態で製造が可能であり、緩衝剤と浸透圧調節剤を使用して、点眼剤として使用可能な範囲のｐＨと浸透圧に調整が可能であり、安定した溶液状態で製造した。
【００７２】
［試験例２］比較例８〜１１及び実施例１〜８の性状、ｐＨ及び含量の変化
比較例８〜１１及び実施例１〜８のｐＨ及び含量変化を表４に示した。
性状評価を行った実施例水溶液全て２５℃で試験期間である４週間保管時に有意なｐＨ変化は確認されなかった。
また、実施例１〜８は５週間の間有意な含量変化がなく、沈殿発生もない安定した状態を維持した。
【００７３】
【表４】
0006931257.tif 000005
【００７４】
表４に示されるように、緩衝剤としてアミノカプロン酸を用い、浸透圧調節剤として非イオン性化合物を用いることによって、長期間安定性が維持されることが分かる。
【００７５】
［実施例９〜実施例１８］レバミピド可溶化による１．５％点眼剤の製造
【００７６】
【表５】
0006931257.tif 000006
【００７７】
１）蒸溜水８５ｍＬに、各実施例に該当する安定化剤を添加し、撹拌して溶解した後、主成分であるレバミピドを添加し、撹拌して懸濁させる。
２）前記１）の溶液に可溶化剤である１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら滴加して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１になるように調整して、主成分を全部溶解させる。
３）前記２）の溶液に、各実施例に該当する緩衝剤を添加し、撹拌して全部溶解させる。
４）前記３）の溶液に、各実施例に該当する浸透圧調節剤を添加し、撹拌して点眼剤として利用可能な範囲の貯蔵性である２２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調整する。
５）前記４）で得られた透明な溶液に、各実施例に該当するｐＨ調節剤である１Ｎ  ＨＣｌ溶液を滴加して、ｐＨ７〜ｐＨ８に調整する。
６）前記５）で得られた透明な溶液に、蒸溜水を添加して、全体積を１００ｍＬにして、透明な溶液を得た。
７）前記４）で得られた透明な溶液を０．２μｍの孔径を有するシリンジフィルターでろ過して、無菌性に製造した。
以上のように製造した実施例９〜１８の溶液は製造時、きれいで透明な水溶液状態で製造することができた。
実施例９〜１８の性状評価は、４℃、２５℃、４０℃保管及び交差保管試験を通じて溶液の沈殿が最初開始される時期を記録した。
交差保管試験は、毎日２回午前と午後に、４℃／室温で交互に保管しながら沈殿物形成を観察及び記録した。
その結果、前述した全管条件で、最小１４週以上沈殿がなく、安定した溶液状態を維持することを確認した。
【００７８】
［試験例３］実施例９〜１８のｐＨ及び含量の変化
実施例９〜１８の４℃、２５℃、４０℃及び交差保管時、ｐＨ変化と性状観察の結果、２５℃、４０℃保管中に水溶液の含量変化を表６に示した。
実施例９〜１８は、１２週間、全保管条件で有意なｐＨ及び含量変化がなかった。また、１５週間、全保管条件で物理化学的に安定した。
【００７９】
【表６】
0006931257.tif 000007
【００８０】
表６に示されるように緩衝剤としてホウ酸とアミノカプロン酸を混合使用しても同じ効果を示しており、長期間安定性を維持した。
【００８１】
［実施例１９〜実施例２２］レバミピド可溶化による１．５％点眼剤の製造
【００８２】
【表７】
0006931257.tif 000008
【００８３】
１）蒸溜水８５ｍＬに、安定化剤を添加し、撹拌しながら溶解した後、主成分であるレバミピドを添加し、撹拌して懸濁させる。
２）前記１）の溶液に可溶化剤である１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら滴加して、ｐＨ１０〜ｐＨ１１になるように調整して、主成分を全部溶解させる。
３）前記２）の溶液に、各実施例に該当する緩衝剤を添加し、撹拌して、全部溶解させる。
４）前記３）の溶液に、各実施例に該当する浸透圧調節剤を添加し、撹拌して貯蔵性である１７０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜１９０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調整する。
５）前記４）で得られた透明な溶液に、各実施例に該当するｐＨ調節剤である１Ｎ  ＨＣｌ溶液を滴加して、ｐＨ７〜ｐＨ８に調整する。
６）前記５）で得られた透明な溶液に、蒸溜水を添加して、全体積を１００ｍＬにして、透明な溶液を得た。
７）前記４）で得られた透明な溶液を０．２μｍの孔径を有するシリンジフィルターでろ過して、無菌性に製造した。
以上のように製造された実施例１９〜２２の溶液は製造時、きれいで透明な水溶液状態で製造が可能であった。
実施例１９〜２２の性状評価は、４℃、２５℃、４０℃保管及び交差保管試験によって、溶液の沈殿が最初開始される時期を記録した。
その結果、前述した全保管条件で最小１５週間以上沈殿がなく、安定した溶液状態を維持することを確認した。
【００８４】
［試験例４］実施例１９〜２２のｐＨ及び含量の変化
実施例１９〜２２の４℃、２５℃、４０℃及び交差保管時のｐＨ変化と性状観察の結果、２５℃、４０℃保管中の水溶液の含量変化を表８に示した。
実施例１９〜実２２は４週間、全保管条件で有意なｐＨ及び含量変化がなかった。最小８週間の全保管条件で物理化学的に安定した。
【００８５】
【表８】
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【００８６】
以上の試験結果によって、本発明の組成物は、最小限１５週間以上の保管においても、物理化学的に安定しており、比較例は４週間以上の溶液状態に維持されなかった。これに対する性状観察の結果を図１に図示した。
【００８７】
［試験例５］１、１．５％レバミピド水溶液のドライアイモデルでの効果
実施例２の方法により製造された１、１．５％レバミピド水溶液をドライアイが誘発されたマウスに、陽性対照群及び用法を１％は１日６回、１．５％は１日４回で投薬して効力を確認した。
６〜８週齢のＮＯＤ．Ｂ１０−Ｈ２ｂマウスをJackson Laboratoryから購入後、飼育して、１２週齢以上のマウスを対象に１０日間乾燥ストレスを行った。
乾燥ストレスは、毎日４回（午前８時、午後１１時、２時、５時）にわたって、０．５ｍｇ／０．２ｍＬのスコポラミンヒドロブロミドを大腿部に皮下注射及び飼育環境を湿度４０％以下に維持した。
１０日後、涙生成及び角膜表面の屈曲性を測定して、ドライアイが作られたマウスモデルだけを対象に以下の試験を行った。
涙生成は、正常群（０．２１５±０．０２８μＬ）と比べて、乾燥ストレス群（０．０３４±０．０１６μＬ）で有意な水準に減少された（図２参照）。
乾燥ストレス除去後、ビヒクル（０．１２４±０．０２１μＬ）、シクロスポリンＡ（０．１４３±０．０４４μＬ）、レバミピド１．５％（４回；０．２１±０．０３６μＬ）、ムコスタ（０．２４４±０．０３３μＬ）、ジクアホソル（０．２４９±０．０２７μＬ）、レバミピド１．０％（６回；０．２５１±０．０５１μＬ）処置群で１０日目に涙生成が、それぞれ３．７倍、４．２倍、６．２倍、７．２倍、７．４倍、７．５倍増加した。
レバミピド１．０％（６回）とレバミピド１．５％（４回）処置群はシクロスポリンＡ処置群よりも顕著に涙生成が増加することが観察されており、ムコスタとジクアホソル処置群と類似した水準に涙生成が増加した。
また、レバミピド１．０％（６回）とレバミピド１．５％（４回）処置群は、涙生成で有意な差が示されないことが観察された。
角膜表面屈曲性は、正常群と比べて、乾燥ストレス群から実体顕微鏡で反射された光繊維リング形状の深刻なゆがみが観察された（図３参照）。
乾燥ストレス以後、試験群であるレバミピド１．０％（６回）、レバミピド１．５％（４回）処置群と対照薬物群であるムコスタ処置群において、１０日目に光繊維リングのゆがみの改善が観察された。
角膜表面屈曲性点数は、正常群（０．０８３±０．２０４点）と比べて、乾燥ストレス群（３．６６７±０．４０８点）で各膜表面屈曲性が増加した（図４参照）。
乾燥ストレス除去後、点眼１０日目にシクロスポリンＡ（３．４１７±０．３７６点）、ビヒクル（３．２５±０．２７４点）、ジクアホソル（３．２５±０．２７４点）、レバミピド１．５％（４回；１．８３３±０．６８３点）、ムコスタ（１．６６７±０．５１６点）、レバミピド１．０％（６回；１．５±０．７７５点）処置群は、それぞれ６．８％、１１．４％、１１．４％、５０％、５４．５％、５９．１％角膜表面屈曲性が改善された。
また、レバミピド１．０％（６回）とレバミピド１．５％（４回）処置群は、シクロスポリンＡとジクアホソル処置群よりも角膜表面屈曲性が改善されることが観察でき、ムコスタと類似した水準に改善された。
レバミピド１．０％（６回）とレバミピド１．５％（４回）処置群間で有意な差が示されないことが観察された。
ドライアイモデル製作後、薬物処置によるマウス結膜のムチン分布を調べるためにムチン染色を行った（図５参照）。
正常群（１７．４２９±２．７２６セル／０．１ｍｍ２）と比べて、乾燥ストレス群（６．１９±１．１５５セル／０．１ｍｍ２）は、結膜のムチン分布が減少さえることが観察された。
乾燥ストレス群と比べて、ビヒクル（７．５２４±１．１５５セル／０．１ｍｍ２）、ジクアホソル（８．５７１±０．９９セル／０．１ｍｍ２）、シクロスポリンＡ（１８．９５２±１．３５cells/０．１mm２）、ムコスタ（１９．９０５±２．１６３セル／０．１ｍｍ２）、レバミピド１．０％（６回；２１．７１４±１．７８４セル／０．１ｍｍ２）、レバミピド１．５％（４回；２２．０９５±１．７２２セル／０．１ｍｍ２）処置群で、それぞれ１．２倍、１．４倍、３．１倍、３．２倍、３．５倍、３．６倍結膜のムチン分布が増加することを観察した（図６参照）。
また、結膜のムチン分布は、レバミピド１．０％（６回）とレバミピド１．５％（４回）処置群で、ジクアホソル処置群よりも増加し、ムコスタとシクロスポリンＡ処置群と類似した水準に増加された。
しかし、レバミピド１．０％（６回）とレバミピド１．５％（４回）処置群間で有意な差が示されないことが明らかになった。
【００８８】
以上で説明したように、本発明の水溶液製製剤は、従来の点眼剤よりも向上された薬効を示しており、その製造が容易で、安定性に優れた点眼剤を提供することができる有用な発明である。
【００８９】
前記発明の詳細な説明は、単に本発明の例示的なものに過ぎなく、これは単に本発明を説明するための目的で使用されたものであって、意味限定や特許請求範囲に記載された本発明の範囲を制限するために使用されたものではない。したがって、本技術分野における通常の知識を有した者であれば、これらから多様な変形及び均等の他の実施例が可能であろう。したがって、本発明の真の技術的保護範囲は添付された特許請求範囲の技術的思想によって決定される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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