(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列
Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３
（式中、
Ｘ１はＴｒｐであり；Ｘ２は（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅであり；Ｘ３は、１Ｎａｌ又は２Ｎａｌである）を有するアミノ酸ポリマーを含み、５〜５０アミノ酸を含む、ペプチド模倣体。
【請求項２】
配列
Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３
（式中、
Ｘ４は、ＤＧｌｕ、ＤＬｙｓ又はＬｅｕ、あるいは別の疎水性アミノ酸、又はタンパク質構成荷電アミノ酸であり、
Ｘ５は、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｔｙｒ、又はＰｒｏであり、
Ｘ６は、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＭｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸であり、
Ｘ７は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、β−Ａｌａ、又はＰｒｏである）
を有するアミノ酸ポリマーを含む、請求項１のペプチド模倣体。
【請求項３】
Ｘ４はＰｒｏであり、Ｘ６はＮｌｅである、請求項２のペプチド模倣体。
【請求項４】
Ｘ４とＸ５、Ｘ５とＸ６、Ｘ６とＸ７、Ｘ７とＸ１、Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＡｓｐ、及びＡｓｐとＸ３の間の結合（−）の少なくとも１つが、イソペプチド結合又は疑似ペプチド結合である、請求項１〜３のいずれか一項のペプチド模倣体。
【請求項５】
前記疑似ペプチド結合が、−ＣＯＮＣＨ３−、−ＮＨＣＯ−、又は−ＣＨ２ＮＨ−である、請求項４のペプチド模倣体。
【請求項６】
８〜１３アミノ酸を含む、請求項１〜５のいずれか一項のペプチド模倣体。
【請求項７】
レポーター基又は細胞毒性基を含む、請求項１〜６のいずれか一項のペプチド模倣体。
【請求項８】
前記レポーター基又は細胞毒性基が、ペプチド模倣体に含まれるキレート剤に配位しているか、あるいは、レポーター基又は細胞毒性基が、ペプチド模倣体に含まれる補欠分子族の一部である、請求項７のペプチド模倣体。
【請求項９】
前記レポーター基及び細胞毒性基が、放射性核種である、請求項７又は８のペプチド模倣体。
【請求項１０】
ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２であり；
前記ＤＯＴＡが、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６９Ｃｕ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、１５５Ｔｂ、１６１Ｔｂ、９９ｍＴｃ、８６Ｙ、９０Ｙ、１６９Ｙｂ及び１７５Ｙｂからなる群から選択される放射性核種を配位しており；
特記されない限り、前記アミノ酸はアミド結合を通して連結されている、
請求項９に記載のペプチド模倣体。
【請求項１１】
２２５Ａｃ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２、
６４Ｃｕ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２、
９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２、  又は
１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２である、
請求項１０に記載のペプチド模倣体。
【請求項１２】
９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２、
１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２、又は
１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２である、
請求項９のペプチド模倣体。
【請求項１３】
前記ペプチド模倣体を合成することを含む、請求項１〜１２にいずれか一項のペプチド模倣体を生成する方法。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項のペプチド模倣体を含む医薬組成物又は診断用組成物。
【請求項１５】
レポーター基又は細胞毒性基を細胞に送達するための請求項７〜１２のいずれか一項のペプチド模倣体のインビトロの使用。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか一項のペプチド模倣体を含む、細胞をイメージングする方法のための診断用組成物であって、
前記ペプチド模倣体はレポーター基を含み、
前記方法が、
ａ）細胞を、前記ペプチド模倣体と接触させる工程、及び
ｂ）細胞と接触している前記レポーター基を可視化する工程
を含む、診断用組成物。
【請求項１７】
前記接触させる工程ａ）が、前記ペプチド模倣体を、前記細胞を有する患者に投与する工程を含む、請求項１６の診断用組成物。
【請求項１８】
前記細胞が、がん細胞である、請求項１７の診断用組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか一項のペプチド模倣体を含む、治療法に使用するための医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１２のいずれか一項のペプチド模倣体を含む、がんの処置に使用するための医薬組成物。
【請求項２１】
前記がんが、がん細胞表面上にＣＣＫ２Ｒを発現しているがんである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
がんの処置又は診断のための医薬の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項のペプチド模倣体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明は、とりわけ、特定のコレシストキニン−２受容体（ＣＣＫ２Ｒ）への標的化について改善された特性を有するペプチド模倣体、並びにその診断使用及び治療使用に関する。コレシストキニン受容体は、ＣＣＫ１Ｒ及びＣＣＫ２Ｒという、２つの受容体サブタイプに分類される。ＣＣＫ２Ｒは、神経内分泌腫瘍、甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、平滑筋肉腫／平滑筋腫、消化管間質腫瘍、インスリノーマ、血管作動性腸管ペプチド分泌腫瘍、カルチノイド、星状細胞腫、間質卵巣癌、乳腺癌及び子宮内膜腺癌、並びにその他などの様々な腫瘍において同定されているが（Reubi JC et al., Cancer Res 1997, 57: 1377-1386; Reubi JC, Curr Top Med Chem 2007, 7: 1239-1242; Sanchez C et al. Mol Cell Endocrinol 2012, 349: 170-179）、ＣＣＫ１Ｒは、限られた数のヒト腫瘍においてしか発現されていない。様々な放射性標識されたペプチドプローブが、ＣＣＫ２Ｒ、コレシストキニン（ＣＣＫ）、又はガストリンに対する内因性リガンドに基づいて開発されている。ＣＣＫ及びガストリンという２つのペプチドは、ほぼ同じ親和性及び効力でＣＣＫ２Ｒに結合し、Ｃ末端における共通した生物活性領域である、Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅを共有し（Dufresne M et al., Physiol Rev 2006, 86: 805-847）、これは受容体への結合にとって必須であることが証明されている（Tracy HJ et al., Nature 1964, 204: 935-938）。親ペプチドの生理学的半減期が非常に短いために、医療への適用のために鎖状アミノ酸配列を代謝的に安定化させる該ペプチドの追加の合成による修飾が一般的に必要とされる（Fani M et al., Theranostics 2012, 2: 481-501）。このような修飾は、放射性標識されたＣＣＫ及びガストリン類似体についても探究されている（Roosenburg S et al., Amino Acids 2011, 41: 1049-1058）。Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ＣＣＫ８）及びＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ミニガストリン、ＭＧ）に基づいた放射性リガンドの他に、非ペプチド性リガンドも提案されている（Wayua C et al., J Nucl Med 2015, 56: 113-119）。ＣＣＫ２Ｒ特異的な腫瘍への取り込みが、蛍光ＣＣＫ２Ｒ標的化ＭＧ類似体（ｄＱ−ＭＧ−７５４）を用いての光学的イメージングによって、結腸直腸腺癌細胞から得られた腫瘍異種移植片を有するヌードマウスにおいても近年証明されている（Kossatz S et al., Biomaterials 2013, 34: 5172-5180）。細胞毒性薬物をＣＣＫ２Ｒ陽性腫瘍に選択的に送達するチューブリシンＢにコンジュゲートさせた強力なＣＣＫ２ＲリガンドのＺ−３６０を使用することによって、腫瘍の退縮を前臨床動物モデルにおいて観察することができた（Wayua C et al., Mol Pharm 2015, 12: 2477-2483）。
【０００２】
放射性標識された［ジエチレントリアミン五酢酸０、Ｄ−Ｇｌｕ１］ミニガストリン（ＤＴＰＡ−ＭＧ０）を使用して、良好な腫瘍標的化特性が得られたが、腎臓への非常に高い取り込みも観察され、これにより、９０Ｙで標識されたＤＴＰＡ−ＭＧ０を用いて処置された患者において深刻な腎臓の副作用が生じた（Behe M et al., Biopolymers 2002, 66: 399-418）。しかしながら、１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ−ＭＧ０は、ＭＴＣ及びＳＣＬＣの患者における腫瘍検出においては、ソマトスタチン受容体シンチグラフィー及び２−デオキシ−２−［１８Ｆ］フルオロ−Ｄ−グルコース陽電子放射断層撮影（ＦＤＧ ＰＥＴ）よりも優れていることが証明され、ソマトスタチン受容体発現が低い神経内分泌腫瘍においてもさらに価値があることが示されている（Gotthardt M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2006, 33: 1273-1279; Gotthardt M et al., Endocr Relat Cancer 2006, 13: 1203-1211）。
【０００３】
切断短縮された１１１Ｉｎ標識ペプチド類似体である［１，４，７，１０−テトラアザシクロドセカン−１，４，７，１０−四酢酸０、Ｄ−Ｇｌｕ１、ＤｅｓＧｌｕ２〜６］ミニガストリン（ＤＯＴＡ−ＭＧ１１）を用いて、有意に低減した腎臓への取り込みが動物試験において示され（Behe M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2005: 32, S78）、最初の臨床試験において確認された（Froberg AC et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2009, 36: 1265-1272）。しかしながら、酵素的分解に対する明らかに低減した安定性及びインビボにおける５分間未満という短い生物学的半減期のために（Breeman WA et al., Nucl Med Biol 2008, 35: 839-849）、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１では低い診断有効性しか観察されなかった。腎臓への滞留を低減させつつ、酵素に対する安定性を向上させ、特異的な受容体標的化を改善させるために、該ペプチドのＮ末端領域における、該ペプチド配列の様々な修飾が試みられている（Aloj L et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2011, 38: 1417-1425; Laverman P et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2011, 38: 1410-1416）。Ｃ末端領域においても非常に僅かな修飾しか試みられておらず、受容体の親和性の減少に関連したメチオニンの酸化を防ぐための、ノルロイシン又はホモプロパルギルグリシンなどの非天然アミノ酸によるメチオニンの置換に限定されている（Mather SJ et al., J Nucl Med 2007, 48: 615-622; Roosenburg S et al., Bioconjug Chem 2010, 21: 663-670）。しかしながら、１７７Ｌｕで標識されたこれらの様々な新規ペプチド類似体を注射したＢＡＬＢ/ｃマウスの血液及び尿の分析は、注射から１０分後にすでに、インタクトな放射性リガンドを全く検出することができなかったことを示した（Ocak M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2011, 38: 1426-1435）。また近年、非標準アミノ酸のメトキシニン（methoxinine）を使用して、酸化感受性のメチオニン残基を置換し、ＭＧ類似体を化学的に安定化させたが、しかしながら生物学的半減期は改善されなかった（Grob NM et al., J Pept Sci 2017, 23: 38-44）。上記試験により、これまでに採用された化学的修飾が、インビボにおける生物学的半減期及び標的化特性を改善することに成功していないことが明らかとなる。
【０００４】
本発明者らは以前、それぞれＭＧＳ１及びＭＧＳ４と称される、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−１Ｎａｌ−ＮＨ２及び111Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ―（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−Ａｓｐ―（Ｎ−Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＮＨ２という構造を有する、１１１Ｉｎで標識された２つのペプチド類似体を作製した（Klingler M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2017, 44: S228）。これらのペプチド類似体は、ＤＯＴＡ−ＭＧ１１と比べて血清中において向上した安定性を示した。しかしながら、細胞内への取り込み及び特異的な受容体標的化に関するさらなる改善が所望された。それ故、本発明者らは、さらなるペプチド模倣体を開発し、酵素に対するそれらの安定性、受容体への親和性、及び特異的な受容体標的化（インビトロにおける細胞内への取り込み及びインビボにおける腫瘍への取り込みを含み、腎臓における滞留も評価する）を調べた。本発明者らは驚くべきことに、ＣＣＫ２Ｒを標的化するペプチド模倣体の新規なグループが、酵素による分解に対して優れた安定性を有し、同時にインビボにおける改善された腫瘍への取り込み及び滞留を示すことを発見した。いずれかの特定の理論に束縛されるものではないが、改善された腫瘍への取り込み及び滞留は、少なくとも部分的には、改善された細胞への取り込みに起因すると現在考えられている。
【０００５】
発明の概要
本発明の目的は、ＣＣＫ２Ｒ標的化ペプチド模倣体の腎臓への少ない滞留を維持しつつ、血清中半減期、好ましくはまたインビボにおける安定性、細胞への取り込み、及び腫瘍標的化特性を改善させることである。この目的は、本発明に従って、本発明の以下の実施態様及び局面によって達成される。
【０００６】
第一の実施態様では、本発明は、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３配列（Ｘ１は、疎水性アミノ酸、例えばＰｈｅ又はＴｒｐであり、Ｘ２は、Ｍｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸、例えばＬｅｕ又はＮｌｅであり、Ｘ３は、Ｐｈｅとの構造的類似性を有する非天然疎水性アミノ酸、例えば１Ｎａｌ又は２Ｎａｌである）を有するアミノ酸ポリマーを含むペプチド模倣体を提供し、該ペプチド模倣体は、５〜５０アミノ酸長を有する。
【０００７】
好ましい実施態様では、本発明のペプチド模倣体は、Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３配列（Ｘ４は、Ｌｅｕ、又は別の疎水性アミノ酸、例えばＰｒｏ、又は任意のタンパク質構成荷電アミノ酸、例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、又はＧｌｕ、好ましくはＤ型のものであり、Ｘ５は、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｔｙｒ、又はＰｒｏであり、Ｘ６は、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＭｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸、例えばＬｅｕ又はＮｌｅであり、Ｘ７は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、β−Ａｌａ、又はＰｒｏである）を有するアミノ酸ポリマーを含む。さらなる実施態様では、Ｎ末端にコンジュゲートした化学基とＸ４、Ｘ４とＸ５、Ｘ５とＸ６、Ｘ６とＸ７、Ｘ７とＸ１、Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＡｓｐ、及びＡｓｐとＸ３の間の結合（−）の少なくとも１つは、イソペプチド結合又は疑似ペプチド結合、例えば−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＣＨ３−、又は−ＣＨ２ＮＨ−である。好ましくは、Ｃ末端はアミド化されている。好ましくは、該ペプチド模倣体は８〜１３アミノ酸を含む。いくつかの実施態様では、該ペプチド模倣体は、レポーター基又は細胞毒性基を含む。いくつかの実施態様では、レポーター基又は細胞毒性基は、ペプチド模倣体に含まれるキレート剤に配位している。いくつかの実施態様では、レポーター基又は細胞毒性基は、ペプチド模倣体に含まれる補欠分子族の一部である。好ましくは、レポーター基又は細胞毒性基は、放射性核種である。
【０００８】
別の実施態様では、本発明は、アミノ酸ポリマーを合成する工程を含む、本発明のペプチド模倣体を生成する方法を提供する。
【０００９】
さらに、本発明は、本発明のペプチド模倣体を含む医薬組成物又は診断用組成物を提供する。
【００１０】
本発明はまた、レポーター基又は細胞毒性基を細胞に送達するための、本発明のペプチド模倣体の使用を提供する。
【００１１】
別の局面では、本発明は、細胞を標的化及びイメージングする方法を提供し、ここでの該方法は、ａ）細胞を本発明のペプチド模倣体と接触させる工程（ここでのペプチド模倣体はレポーター基を含む）、及びｂ）細胞と接触しているレポーター基を可視化する工程を含む。
【００１２】
好ましい実施態様では、接触は、本発明のペプチド模倣体（該ペプチド模倣体はレポーター基を含む）を、患者に（好ましくは該患者はがんを有する）投与する工程を含む。
【００１３】
本発明はまた、治療法に使用するための本発明のペプチド模倣体を提供する。
【００１４】
本発明はまた、がん（好ましくは、該がんは腫瘍細胞表面上にＣＣＫ２Ｒを発現しているがんである）の処置に使用するための本発明のペプチド模倣体を提供する。
【００１５】
本発明はさらに、診断、好ましくはがんの診断、より好ましくは本明細書に記載の種類のがんの診断に使用するための、本発明のペプチド模倣体を提供する。
【００１６】
好ましい実施態様では、本発明のペプチド模倣体は、ＣＣＫ２Ｒに特異的に結合する。ＣＣＫ２Ｒへの特異的な結合は、ＣＣＫ２Ｒを発現していない細胞及び組織を上回る、ＣＣＫ２Ｒを発現している細胞及び組織の標的化を可能とする。本発明のペプチド模倣体のこの特徴は、診断及び治療の目的に、例えば、特定の種類のがん、特にＣＣＫ２Ｒを発現しているがんの診断及び処置に有用である。しかしながら、本発明の教義は、がんに限定されず、ＣＣＫ２Ｒの発現を伴うあらゆる疾患に関する。特に、本発明のペプチド模倣体は、診断及び治療の目的に有用である。なぜなら、それらはＣＣＫ２Ｒを発現している細胞による、細胞への高いレベルの取り込み（細胞内への内部移行）を示すからである。さらに、本発明のペプチド模倣体は、特に分解に対して、特にプロテアーゼによる血清中での分解に対して、好ましくはインビボにおける様々なタンパク質分解酵素による代謝による分解に対して安定であるために有用である。さらに、本発明のペプチド模倣体は、腎臓に蓄積しないために、又は本発明のペプチド模倣体を用いて処置された患者に有害ではない低いレベルまでしか腎臓に蓄積しないために、有用である。
【００１７】
上記の実施態様は、本発明の特に好ましい実施態様である。上記の実施態様の任意の組合せ、又はその中のそれぞれの技術的特色も、本明細書において本発明の一部として開示されることが強調される。当業者は、本発明は上記に明確に列挙されている実施態様だけに限定されず、上記又は下記において明示して開示されていない組合せも含むことを理解している。このような組合せは、例えば、上記の本発明の局面、実施態様、又は特色を、本発明の詳細な説明において以下に開示されている本発明の態様、実施態様、又は特色と組合せることから得られる。当業者は、事実、上記の実施態様が、以下にさらに示されている詳細な説明の対応する章と共に、並びに、本出願に示された実施例と共に考慮されるべきであることを理解するだろう。さらに、本明細書に示される任意の表題は、一般的に、表題の下で開示されている主題に限定されると捉えられるべきではなく、すなわち、ある表題の下で開示された主題は、異なる表題の下で記載された主題と組み合わせて解読され得る。
【００１８】
本発明の他の局面、実施態様、特色、及び利点は、以下の詳細な説明から明らかとなろう。しかしながら、詳細な説明及び具体的な実施例は、本発明の好ましい実施態様を示しているが、例証のためだけに示されていると理解されるべきである。なぜなら、本発明の精神及び範囲内で様々な変更及び改変が、詳細な説明から当業者には明らかとなろうからである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
本発明は、以下の章でより詳細に説明され、以下に示される添付図面において例証されるだろう。
【図１−１】ヒト血清中で１１１Ｉｎで標識された本発明のペプチド模倣体を２４時間インキュベートした後にラジオＨＰＬＣによって分析した場合の、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１と比較した、ヒト血清中の酵素的分解に対する安定性：放射性標識後の放射性化学物質の純度（点線）、ヒト血清中におけるインキュベート後のラジオＨＰＬＣ（実線）。
【図１−２】ヒト血清中で１１１Ｉｎで標識された本発明のペプチド模倣体を２４時間インキュベートした後にラジオＨＰＬＣによって分析した場合の、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１と比較した、ヒト血清中の酵素的分解に対する安定性：放射性標識後の放射性化学物質の純度（点線）、ヒト血清中におけるインキュベート後のラジオＨＰＬＣ（実線）。
【図２】Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ細胞及びＡ４３１モック細胞上で２時間インキュベートした後の、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１、１１１Ｉｎ−ＰＰ−Ｆ１１、１１１Ｉｎ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎ、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１、及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４と比較した、１１１Ｉｎで標識された本発明のペプチド模倣体の細胞内部移行。
【図３】Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ細胞及びＡ４３１モック細胞上で２時間インキュベートした後の、本発明のペプチド模倣体の細胞内部移行。Ａ）１１１Ｉｎ、６８Ｇａ、及び１７７Ｌｕで放射性標識されたＤＯＴＡ−ＭＧＳ５、並びに、９９ｍＴｃで標識されたＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５、並びに、Ｂ）１７７Ｌｕで放射性標識されたＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０、ＰＰ−Ｆ１１、及びＰＰ−Ｆ１１Ｎ、並びにＣ）６８Ｇａで放射性標識されたＤＯＴＡ−ＭＧＳ１２。
【図４】Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ及びＡ４３１モックの腫瘍異種移植片を有するヌードマウスにおける、注射の４時間後の１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４と比較した、選択された１１１Ｉｎで標識された本発明のペプチド模倣体の生体内分布。数値は、１ｇあたりに注射された活性の比率として表現される（％ＩＡ（injected activity）/ｇ；平均値±標準偏差、ｎ＝４；１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４、ｎ＝３）。
【図５】Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ及びＡ４３１モックの腫瘍異種移植片を有するヌードマウスにおける、注射の１時間後又は４時間後の様々な時点についての、１１１Ｉｎ、６８Ｇａ、及び１７７Ｌｕで放射性標識されたペプチド模倣体のＤＯＴＡ−ＭＧＳ５、並びに９９ｍＴｃで標識されたＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５の生体内分布。数値は、％ＩＡ/ｇとして表現される（平均値±標準偏差、ｎ＝４）。
【図６−１】注射の３０分後の１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１及び１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎと比較した、Ａ）注射の１０分後の１１１Ｉｎで標識された本発明のペプチド模倣体、及びＢ）例示的な１７７Ｌｕで標識された本発明のペプチド模倣体の静脈内注射後に、ＢＡＬＢ／ｃマウスから採取された血液試料のラジオＨＰＬＣによって分析した場合の、インビボにおける酵素的分解に対する安定性：放射性標識後の放射性化学物質の純度（点線）、血液試料のラジオＨＰＬＣ（実線）。
【図６−２】注射の３０分後の１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１及び１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎと比較した、Ａ）注射の１０分後の１１１Ｉｎで標識された本発明のペプチド模倣体、及びＢ）例示的な１７７Ｌｕで標識された本発明のペプチド模倣体の静脈内注射後に、ＢＡＬＢ／ｃマウスから採取された血液試料のラジオＨＰＬＣによって分析した場合の、インビボにおける酵素的分解に対する安定性：放射性標識後の放射性化学物質の純度（点線）、血液試料のラジオＨＰＬＣ（実線）。
【００２０】
発明の詳細な説明
本明細書において引用されている、特許、特許出願、及び科学的刊行物を含むがこれらに限定されない、全ての刊行物が、まるで各々の個々の刊行物が具体的にかつ個々に参照により組み入れられると示されているかのように、全ての目的のために参照により本明細書に組み入れられる。
【００２１】
「含んでいる」という用語並びに「含む」及び「含まれる」などの他の文法形の使用は、限定するものではない。「含んでいる」、「含む」、及び「含まれる」という用語は、本発明の実施態様の制限のない記載を言及していると理解されるべきであり、これは、明記された技術的特色の他に追加の技術的特色を含んでいてもよいが、含む必要はない。同じような意味で、「関与している」という用語並びに「関与する」及び「関与される」などの他のそれぞれの文法形は、限定するものではない。同じことが、「含んでいる」という用語及び他の文法形、例えば「含む」及び「含まれる」にも該当する。説明全体における章の表題は、構成目的のためだけのものである。特に、それらは、その中に記載されている様々な実施態様について限定するためのものではなく、ある副題の下に記載された実施態様（及びその中の特色）は、別の副題の下で記載された実施態様（及びその中の特色）と自由に組み合わせてもよいと理解されるべきである。さらに、「含んでいる」、「関与している」及び「含んでいる」という用語、及びその任意の文法形は、明確に列挙された特色に追加された特色を含む実施態様をもっぱら指すと解釈されるべきではない。これらの用語は同様に、明記されたそうした特色のみからなる実施態様も指す。
【００２２】
本明細書において使用する「ペプチド模倣体」、「ペプチド類似体」又は「ペプチド誘導体」又は「ペプチドコンジュゲート」という用語は、少なくとも１つの非天然アミノ酸、疑似ペプチド結合、又はアミノ酸とは異なる化学的部分、例えばレポーター基又は細胞毒性基（キレート剤、補欠分子族、リンカー、又は薬物動態修飾因子も含む）を含む、２つ以上のアミノ酸のポリマーを含む化合物を指す。本明細書において定義されているようなペプチド模倣体は一般的に、天然ペプチドの生物学的活性を模倣する。今回の場合では、本発明のペプチド模倣体は、ガストリンなどの天然ＣＣＫ２ＲリガンドがＣＣＫ２Ｒへの結合能を有するという意味での能力を模倣する。
【００２３】
本明細書において使用する「アミノ酸ポリマー」という用語は２つ以上のアミノ酸のポリマーを指す。
【００２４】
「ペプチド」という用語は、アミド結合によって接続された、Ｌ型の２つ以上のタンパク質構成アミノ酸のポリマーを指す。
【００２５】
本明細書において使用する「アミノ酸」という用語は、そのモノマー状態において少なくとも１つのアミン官能基（−ＮＨ２）と少なくとも１つのカルボキシル官能基（−ＣＯＯＨ）を含有している化合物を指す。ペプチド結合を通して別のアミノ酸に結合している場合、アミノ酸のアミン基又はカルボキシル基は、他のアミノ酸のアミン基又はカルボキシル基とアミド基−ＣＯＮＨ−を形成するだろう。アミノ酸が、以下に記載されているように、疑似ペプチド結合を通して、別のアミノ酸にコンジュゲートしている場合、アミン基又はカルボキシル基は、疑似ペプチド結合の性質に応じて、他の化学的部分によって置換されていてもよい。好ましくは、本明細書において使用する「アミノ酸」という用語は、α−アミノ酸又はβ−アミノ酸を指す。本明細書において使用する「アミノ酸」という用語は、タンパク質構成アミノ酸のアラニン（Ａｌａ）；アルギニン（Ａｒｇ）；アスパラギン（Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ａｓｐ）；システイン（Ｃｙｓ）；グルタミン（Ｇｌｎ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ）；グリシン（Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉｌｅ）；ロイシン（Ｌｅｕ）；リシン（Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐｒｏ）；セリン（Ｓｅｒ）；トレオニン（Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｔｒｐ）；チロシン（Ｔｙｒ）；バリン（Ｖａｌ）及びセレノシステイン（Ｓｅｃ）を含む。本明細書において使用する「アミノ酸」という用語は非天然アミノ酸も含む。
【００２６】
本出願の意味における「非天然アミノ酸」は、天然に存在しているか又は化学合成される非タンパク質構成アミノ酸、例えば、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メトキシニン、ホモプロパルギルグリシン、オルニチン、ノルバリン、ホモセリン、及び他のアミノ酸類似体、例えばLiu CC, Schultz PG, Annu Rev Biochem 2010, 79: 413-444及びLiu DR, Schultz PG, Proc Natl Acad Sci U S A 1999, 96: 4780-4785に記載されているものなどである。本明細書において使用する非天然アミノ酸は、例えば、Ｄ型のタンパク質構成アミノ酸、例えばＤＧｌｕであり得る。追加の考えられる非天然アミノ酸は、パラ−、オルト−、又はメタ−置換フェニルアラニン、例えばパラ−エチニルフェニルアラニン、４−Ｃｌ−フェニルアラニン（Ｃｐａ）、４−アミノ−フェニルアラニン、及び４−ＮＯ２−フェニルアラニン、ホモプロリン、ホモアラニン、β−アラニン、１−ナフチルアラニン（１Ｎａｌ）、２−ナフチルアラニン（２Ｎａｌ）、ｐ−ベンゾイル−フェニルアラニン（Ｂｐａ）、ビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ）、ホモプロパルギルグリシン（Ｈｐｇ）、アジドホモアラニン（Ａｈａ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、２−アミノブタン酸（Ａｂｕ）、アジドノルロイシン（Ａｎｌ）、ｔｅｒｔ−ロイシン（Ｔｌｅ）、４−アミノ−カルバモイル−フェニルアラニン（Ａｐｈ（Ｃｂｍ））、４−アミノ−ヒドロオロチル−フェニルアラニン（Ａｐｈ（Ｈｏｒ））、Ｓ−アセトアミドメチル−Ｌ−システイン（Ｃｙｓ（Ａｃｍ））、３−ベンゾチエニルアラニン、４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸（Ｓｔａ）である。これらの非天然アミノ酸の中のいくつかは、ソマトスタチン類似体及びボンベシン類似体についてすでに探究されている（Fani M et al., J Nucl Med 2011, 52: 1110-1118; Ginj M et al., Proc Natl Acad Sci U S A 2006, 103: 16436-16441; Ginj M et al., Clin Cancer Res 2005, 11: 1136-1145; Mansi R, J Med Chem 2015, 58: 682-691）。
【００２７】
本明細書において使用する「疎水性アミノ酸」という用語は、生理学的ｐＨ（約ｐＨ７．４）において正味ゼロの荷電を有するアミノ酸を指す。疎水性アミノ酸は、タンパク質構成性疎水性アミノ酸であっても又は非天然疎水性アミノ酸であってもよい。タンパク質構成性疎水性アミノ酸は、例えば、セリン、トレオニン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、又はトリプトファンである。好ましいタンパク質構成性疎水性アミノ酸は、プロリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンである。非天然疎水性アミノ酸は、例えば、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メトキシニン、ｔｅｒｔ−ロイシン（Ｔｌｅ）、１−ナフチルアラニン（１Ｎａｌ）、２−ナフチルアラニン（２Ｎａｌ）、３−ベンゾチエニルアラニン、ｐ−ベンゾイルーフェニルアラニン（Ｂｐａ）、ビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ）、ホモプロパルギルグリシン（Ｈｐｇ）、アジドホモアラニン（Ａｈａ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、２−アミノブタン酸（Ａｂｕ）、アジドノルロイシン（Ａｎｌ）、２−アミノオクチン酸（Ａｏａ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、パラ−エチニルフェニルアラニン、４−Ｃｌ−フェニルアラニン、ホモプロリン、及びホモアラニンである。
【００２８】
本明細書において使用する「Ｍｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸」は、Ｍｅｔと同じような分子幾何学を有する及び／又はＭｅｔの生物学的等価体である、上記に定義されているような疎水性アミノ酸である。特に、本発明の脈絡において、Ｍｅｔとの構造的類似性を有する非天然疎水性アミノ酸を、細胞へのペプチド模倣体の十分な取り込みを維持しつつ、Ｘ２位及び／又はＸ６位に挿入することができる。細胞へのペプチド模倣体の取り込みが、実施例５に記載されているようなアッセイにおいて、全放射活性の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％である場合、細胞へのペプチド模倣体の十分な取り込みが維持されている。本明細書において使用する「Ｍｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸」は、タンパク質構成性疎水性アミノ酸又は非天然疎水性アミノ酸、好ましくはＮｌｅ又はＬｅｕであり得る。
【００２９】
本明細書において使用する「Ｐｈｅとの構造的類似性を有する非天然疎水性アミノ酸」は、Ｐｈｅと同じような分子幾何学を有する及び／又はＰｈｅの生物学的等価体である、上記に定義されているような非天然疎水性アミノ酸である。特に、本発明の脈絡において、Ｐｈｅとの構造的類似性を有する非天然疎水性アミノ酸を、細胞へのペプチド模倣体の十分な取り込みを維持しつつ、Ｘ３位に挿入することができる。細胞へのペプチド模倣体の取り込みが、実施例５に記載されているようなアッセイにおいて、全放射活性の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％である場合に、細胞へのペプチド模倣体の十分な取り込みが維持されている。好ましくは、本明細書において使用する「Ｐｈｅとの構造的類似性を有する非天然疎水性アミノ酸」は、１Ｎａｌ又は２Ｎａｌである。
【００３０】
いくつかの実施態様では、本発明のペプチド模倣体は、実施例５に記載されているようなアッセイにおいて、全放射活性の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％の程度まで、細胞への取り込み（すなわち、細胞膜への結合及び細胞内への内部移行）を示す。
【００３１】
いくつかの実施態様では、本発明のペプチド模倣体は、ＣＣＫ２Ｒに特異的に結合する。本発明のペプチド模倣体の結合親和性は、ＣＣＫ２Ｒに対する、ＣＣＫ８、ミニガストリン、又はペンタガストリンの結合親和性の少なくとも約２％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又は約１００％であり得る。本発明のいくつかの実施態様では、ペプチド模倣体の結合親和性は、ＣＣＫ２Ｒに対するＣＣＫ８、ミニガストリン、又はペンタガストリンの結合親和性より高くさえあり得、例えば、実施例４に記載されているようなアッセイにおいて、ＣＣＫ２Ｒに対する、ＣＣＫ８、ミニガストリン、又はペンタガストリンの結合親和性の少なくとも約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約１６０％、約１７０％、約１８０％、約１９０％、約２００％、約５００％、約１０００％、約１５００％、又は約２０００％であり得る。本発明の脈絡におけるＣＣＫ２Ｒに対する特異的結合は、ＣＣＫ２Ｒに対する、本発明のペプチド模倣体の結合を意味し、これはＣＣＫ２Ｒの同族リガンド、例えばガストリン、又は同族リガンドの放射性標識変異体、例えば［１２５Ｉ］Ｔｙｒ１２標識ガストリン−Ｉで置き換えられ得る。半最大阻害濃度（ＩＣ５０）は、上記において説明されているようなこの特異的結合の尺度であり、実施例４に記載のようなアッセイから得ることができる。
【００３２】
本発明による結合親和性は、半最大阻害濃度（ＩＣ５０）を測定することによって決定され、ここでの結合親和性とＩＣ５０値とは逆の相関を示し、このことは、結合親和性は、ＩＣ５０値が減少するにつれて増加し、結合親和性はＩＣ５０値が増加するにつれて減少することを意味する。それ故、約５０％の結合親和性は、ＩＣ５０値が、ＣＣＫ２Ｒに対するＣＣＫ８、ミニガストリン、又はペンタガストリンのＩＣ５０値の約２倍であることを意味する。
【００３３】
本明細書において使用する「荷電アミノ酸」という用語は、生理学的ｐＨ約７．４においてゼロではない正味荷電を有するアミノ酸を含み、タンパク質構成アミノ酸及び非天然アミノ酸、例えば、タンパク質構成アミノ酸のＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、及びＡｓｐを含む。
【００３４】
ペプチド模倣体の構造は、当業者には公知である３文字アミノ酸コードで示され、左にあるペプチド模倣体のＮ末端（アミノ末端）から始まり、右にあるペプチド模倣体のＣ末端で終わる。例えば、４つのアミノ酸Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、及びＸ７からなる、テトラペプチド模倣体又はペプチド「Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７」は、Ｎ末端にアミノ酸Ｘ４を有し、Ｃ末端にアミノ酸Ｘ７を有する。ハイフン「−」は、２つの個々のアミノ酸の間の、例えばＸ４とＸ５の間の化学結合を示す。
【００３５】
本発明のペプチド模倣体の２つのアミノ酸を接続する化学結合は、ペプチド結合、すなわちアミド結合（−ＣＯＮＨ−）であってもよい。本明細書において使用するペプチド結合は、あるアミノ酸のα炭素に付着したアミノ基と、別のアミノ酸のα炭素に付着したカルボキシル基との間に形成されてもよい。ペプチド結合はまた、アミノ基とカルボキシル基との間に形成されていてもよく、その中の１つはアミノ酸のα炭素に付着していないが、アミノ酸の側鎖に（イソペプチド結合）、例えばリシンの側鎖におけるアミノ基に付着している。化学結合はまた疑似ペプチド結合であってもよい。好ましい実施態様では、ペプチド模倣体の２つのアミノ酸を接続する化学結合は、アミド結合である。
【００３６】
本明細書において使用する「疑似ペプチド結合」という用語は２つのアミノ酸を接続し、かつアミド結合（−ＣＯＮＨ−）ではない、結合を指す。疑似ペプチド結合はまた、アミド化されたＣ末端に含まれていてもよい。当技術分野において公知である任意の疑似ペプチド結合、例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＯＮＲＣＨ２−、−ＣＯＮＣＨ３−（後者はＮ−Ｍｅとも称される）、又は−ＣＯＮＲ−が本発明の脈絡において考えられ、ここでのＲは、アルキル、好ましくはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、１−メチル−２−メチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、又は１−エチルプロピルである。
【００３７】
本明細書において、２つのアミノ酸間の化学結合の実体は、結合を通して接続されているアミノ酸間にある括弧又は角括弧で示され得る（例えばＸ４−（Ｎ−Ｍｅ）Ｘ５）。この場合、２つのアミノ酸Ｘ４及びＸ５は、−ＣＯＮＣＨ３−という構造で示される疑似ペプチド結合によって接続され、ここでのアミド窒素はメチル化されている。２つのアミノ酸Ｘ４とＸ５及び疑似ペプチド結合のＮ−Ｍｅについて例示的に示されている以下のスペルは、疑似ペプチド結合の性質を示すために、本明細書において互換的に使用されている：「Ｘ４−（Ｎ−Ｍｅ）−Ｘ５」、「Ｘ４−（Ｎ−Ｍｅ）Ｘ５」及び「Ｘ４（Ｎ−Ｍｅ）−Ｘ５」。アルキルエステル、アルキルエーテル、及び尿素結合も、疑似ペプチド結合として考えられる。他の疑似ペプチド結合、例えば１，２，３−トリアゾール（Mascarin A et al., Bioconjug Chem 2015, 26: 2143-2152）又は他のアミド結合の生物学的等価体も、ペプチド模倣体を安定化させ、腫瘍標的化を改善することが示されているが、これらも考えられる。
【００３８】
いくつかの実施態様では、疑似ペプチド結合の存在は、当技術分野において一般的に使用されているように「ｐｓｉ」という用語によって示される。例えば、Ｘ４−ｐｓｉ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｘ５」は、２つのアミノ酸Ｘ４及びＸ５が、疑似ペプチド結合である−ＣＨ２ＮＨ−を介して接続されていることを示す。いくつかの実施態様では、疑似ペプチド結合は、−ｐｓｉ［ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ］−、−ｐｓｉ［ＣＨ２ＮＨ］−、−ｐｓｉ［ＣＨ２ＣＨ２］−、−ｐｓｉ［ＣＳ−ＮＨ］−、又は−ｐｓｉ［Ｔｚ］−であり得る。
【００３９】
さらに好ましい疑似ペプチド結合は、−ＣＯＯ−、−ＣＯＳ−、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＳＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨＣＨ−、−ＣＣ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、及び−ＣＨ２Ｏ−である。
【００４０】
本発明の脈絡において、Ｌ−アミノ酸及びＤ−アミノ酸は同等に考えられる。本発明のどのアミノ酸も、特記しない限り、Ｌ型又はＤ型で存在し得る。Ｌ型は、アミノ酸の名称の直前に「Ｌ」を列記することによって示され、Ｄ型は、アミノ酸の名称の直前に「Ｄ」を列記することによって示される。例えば、「ＤＧｌｕ」は、Ｄ型のアミノ酸グルタメートを指し、「ＬＧｌｕ」は、Ｌ型のアミノ酸グルタメートを指す。好ましい実施態様では、ペプチド模倣体の１つの、それ以上の、又は全てのアミノ酸のエナンチオマー形はＬ型である。例えば、命名法が、例えば、「−Ａｓｐ−」の場合のように、両方のエナンチオマー形を包含している場合、好ましいエナンチオマー形はＬ型（「−ＬＡｓｐ−」におけるように）である。
【００４１】
本発明のペプチド模倣体の結晶形も考えられ、例えば、ペプチド模倣体は、Ｎ末端をＣ末端に、Ｎ末端若しくはＮ末端アミノ酸の側鎖をアミノ酸側鎖に、又は、Ｃ末端若しくはＣ末端アミノ酸の側鎖をアミノ酸側鎖若しくは２つの異なるアミノ酸の２つの側鎖に連結させることによって環状化させてもよい。
【００４２】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｎ末端は、リンカー、スペーサー、キレート剤、又は補欠分子族にコンジュゲートされ、Ｃ末端はアミド化されている。
【００４３】
「キレート剤」という用語は当技術分野におけるのと同様に使用され、金属イオンとキレート形成することのできる有機化合物を指す。
【００４４】
「補欠分子族」という用語は、二官能性標識剤とも称されるが、これは当技術分野におけるのと同様に使用され、例えば放射性核種を用いて容易に放射性標識され、かつ放射性標識前又は放射性標識後にアミノ酸ポリマーなどの生体分子にコンジュゲートされることができ、かつキレート剤ではない、有機低分子を指す。一般的に、補欠分子族は、生体分子内に存在する、アミン、チオール、又はカルボン酸の官能基にコンジュゲートしている。また、クリックケミストリーを介したコンジュゲーションも考えられる。
【００４５】
本発明の好ましい実施態様では、ペプチド模倣体のＣ末端（カルボキシ末端）は、例えば、タンパク質分解を低減させ、保存可能期間を延長させ、及び／又は細胞への取り込みを改善するために修飾されている。Ｃ末端は、例えば、−ＮＲ’Ｒ’’基を用いてアミド化され得、ここでのＲ’及びＲ’’は独立して、水素、又は本明細書において定義されているような置換されているか若しくは置換されていないアルキルである。いくつかの実施態様では、Ｒ’及びＲ’’は独立して、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、又はヘキシルである。いくつかの好ましい実施態様では、本発明のペプチド模倣体は、−ＮＨ２基によりＣ末端がアミド化されている。Ｃ末端はまた、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’’’という種類のエステルを用いて修飾されていてもよく、ここでのＲ’’’は、本明細書において定義されているような置換されているか又は置換されていないアルキル、例えば、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、又はヘキシルであり得る。
【００４６】
本明細書において使用する「アルキル」という用語は、１〜２０（Ｃ１〜Ｃ２０）、好ましくは１〜１５（Ｃ１〜Ｃ１５）、より好ましくは１〜１０（Ｃ１〜Ｃ１０）、最も好ましくは１〜５（Ｃ１〜Ｃ５）の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖の飽和脂肪族炭化水素を指す。例えば、「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、１−メチル−２−メチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、及び１−エチルプロピルを指し得る。
【００４７】
「アルキル」基は、例えば、ハロゲン、例えばフッ素、塩素、及び臭素、アミン、例えば一級アミン（−ＮＨ２）、一級アミド、ヒドロキシル（−ＯＨ）、さらに酸素含有官能基、硫黄含有官能基又は窒素含有官能基、ヘテロ環、又はアリール置換基、例えばフェニル及びナフチルで置換されていてもよい。
【００４８】
好ましい実施態様（実施態様Ａ）では、ペプチド模倣体のＸ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３におけるＡｓｐのエナンチオマー形は、Ｌ型（Ｘ１−Ｘ２−ＬＡｓｐ−Ｘ３）である。
【００４９】
別の好ましい実施態様（実施態様Ｂ）では、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３のＸ２とＡｓｐの間の結合は、−ＣＯＮＣＨ３−（Ｎ−Ｍｅ、ＮＭｅ）ではない。
【００５０】
さらに好ましい実施態様（実施態様Ｃ）では、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３のＸ２とＡｓｐの間の結合は、アミド結合である。
【００５１】
好ましい実施態様（実施態様Ｄ）では、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３のＸ１とＸ２の間の結合は、−ＣＯＮＣＨ３−（Ｎ−Ｍｅ、ＮＭｅ）である。
【００５２】
好ましい実施態様（実施態様Ｅ）では、Ｘ２はＮｌｅである。
【００５３】
特に好ましいのは、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３のＸ１とＸ２の間の結合が、−ＣＯＮＣＨ３−（Ｎ−Ｍｅ、ＮＭｅ）であり、Ｘ２がＮｌｅである実施態様（実施態様Ｆ）である。
【００５４】
好ましい実施態様（実施態様Ｇ）では、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３のＸ１とＸ２の間の結合は、−ＣＯＮＣＨ３−（Ｎ−Ｍｅ、ＮＭｅ）であり、Ｘ２はＮｌｅであり、Ｘ３は１Ｎａｌ又は２Ｎａｌ、好ましくは１Ｎａｌである。
【００５５】
別の好ましい実施態様（実施態様Ｈ）では、Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７におけるアミノ酸残基の１つ以上がＰｒｏである。
【００５６】
特に好ましいのは、実施態様Ｇと、実施態様Ａ、Ｂ、Ｃ、又はＨとの組合せである。
【００５７】
本発明は、実施態様Ａ〜Ｈの組合せであり、特に全ての実施態様Ａ〜Ｈの組合せである、ペプチド模倣体を包含する。これらの実施態様は、前の又は後続の実施態様のいずれかと組合せてもよい。特に、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３の配列を包含する任意の開示されているペプチド模倣体を、実施態様Ａ〜Ｈ、又はその任意の組合せと組み合わせてもよい。
【００５８】
特に好ましいのは、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３がＸ１−（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ−（ＣＯＮＨ）−ＬＡｓｐ−Ｘ３であり、Ｘ３が１Ｎａｌ又は２Ｎａｌである実施態様である。
【００５９】
本発明の好ましい実施態様では、ペプチド模倣体は、Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３の配列を有するアミノ酸ポリマーを含む。好ましくは、該ペプチド模倣体は、ペプチド模倣体のＣ末端にこのポリマーを含む。より好ましくは、上記しているように、ペプチド模倣体のＣ末端は、−ＮＨ２基を用いてアミド化されている。Ｘ４はＬｅｕ又は別の疎水性アミノ酸、例えばＰｒｏ、又は任意のタンパク質構成荷電アミノ酸、例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＧｌｕである。Ｘ５は、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｔｙｒ、又はＰｒｏである。Ｘ６は、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＭｅｔとの構造的類似性を有する疎水性非天然アミノ酸、例えばＮｌｅである。Ｘ７は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、β−Ａｌａ、又はＰｒｏである。アミノ酸Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、本明細書において定義されている通りである。アミノ酸Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３の上記又は下記されている実施態様から得られた任意の組合せが同等に本発明の脈絡において考えられる。
【００６０】
本発明のペプチド模倣体は、５〜５０アミノ酸を含む。本明細書において使用する「５〜５０アミノ酸を含む」という用語は、該ペプチド模倣体が、５０を超えるアミノ酸を有さず、かつ５未満のアミノ酸を有さないことを意味する。さらに、含んでいるという言葉（「含んでいる」）は、該ペプチド模倣体が、明示して列挙されていない、さらなる成分、例えばキレート剤、補欠分子族、リンカー、スペーサー、薬物動態修飾因子、レポーター基、又は細胞毒性基を含有していてもよいことを意味する。
【００６１】
いくつかの実施態様では、前記ペプチド模倣体は、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、又は１３以下のアミノ酸を含む。特に好ましいのは、５〜１５アミノ酸を含むペプチド模倣体である。より好ましいのは、８〜１３アミノ酸を含むペプチド模倣体である。本発明のいくつかの実施態様では、該ペプチド模倣体は、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５アミノ酸を含む。ペプチド模倣体に含まれる上記の最大数のアミノ酸と最小数のアミノ酸の組合せから生じるあらゆる範囲も、本発明の脈絡において考えられ、例えば、いくつかの実施態様では、該ペプチド模倣体は、８〜３５、８〜２５、又は８〜２０アミノ酸を含む。同等に考えられるのは、範囲の上の終点と下の終点のどちらも除外されているか、範囲の上の終点と下の終点のどちらも含まれているか、下の終点が含まれ、上の終点が除外されているか、又は、下の終点が除外され、上の終点が含まれている、上記の範囲である。この解釈は、本出願に列挙されている全ての範囲に適用される。
【００６２】
本発明のいくつかの好ましい実施態様では、前記ペプチド模倣体は、８〜１３アミノ酸を含み、Ｘ１はＴｒｐであり、Ｘ２はＮｌｅであり、Ｘ３は１Ｎａｌ又は２Ｎａｌである。本発明のさらにより好ましい実施態様では、該ペプチド模倣体は８〜１３アミノ酸を含み、Ｘ１はＴｒｐであり、Ｘ２はＮｌｅであり、Ｘ３は１Ｎａｌ又は２Ｎａｌであり、Ｘ１とＸ２の間の結合は−ＣＯＮＣＨ３−であり、Ｃ末端は、−ＮＨ２基でアミド化されている。さらに好ましい実施態様では、該ペプチド模倣体は８〜１３アミノ酸を含み、Ｘ１はＴｒｐであり、Ｘ２はＮｌｅであり、Ｘ３は１Ｎａｌ又は２Ｎａｌであり、Ｘ１とＸ２の間の結合は−ＣＯＮＣＨ３−であり、Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３におけるＡｓｐは、Ｌ型であり、Ｘ２とＡｓｐとの間の結合はアミド結合（−ＣＯＮＨ−）であり、Ｃ末端はＮＨ２基でアミド化されている。好ましくは、本明細書に記載のこれら及び全ての他のペプチド模倣体は、Ｎ末端においてキレート剤のＤＯＴＡ又はＨＹＮＩＣを用いて修飾されている。
【００６３】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ１は疎水性アミノ酸である。好ましくは、Ｘ１はＰｈｅ又はＴｒｐである。最も好ましくは、Ｘ１はＴｒｐである。
【００６４】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ２は、Ｍｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸である。好ましくは、Ｘ２はＬｅｕ又はＮｌｅである。最も好ましくは、Ｘ２はＮｌｅである。
【００６５】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ３は、Ｐｈｅとの構造的類似性を有する非天然疎水性アミノ酸である。好ましくは、Ｘ３は１Ｎａｌ又は２Ｎａｌである。最も好ましくは、Ｘ３は１Ｎａｌである。
【００６６】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ４は、Ｌｅｕ又は別の疎水性アミノ酸、例えばＰｒｏ、又はタンパク質構成荷電アミノ酸である。好ましくは、Ｘ４は、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、又はＧｌｕである。好ましくは、Ｘ４は、Ｄ型のアミノ酸である。最も好ましくは、Ｘ４は、ＤＧｌｕ又はＤＬｙｓ、特にＤＧｌｕである。
【００６７】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ５は、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｔｙｒ、又はＰｒｏである。好ましくは、Ｘ５は、Ａｌａ、Ｔｙｒ、又はＰｒｏである。
【００６８】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ６は、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＭｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸、例えばＬｅｕ又はＮｌｅである。好ましくは、Ｘ６は、Ｔｙｒ又はＰｒｏである。
【００６９】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ７は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、β−Ａｌａ、又はＰｒｏである。好ましくは、Ｘ７は、Ｇｌｙ又はＰｒｏである。
【００７０】
以下の表は、本発明の特に好ましい実施態様を列挙する。特に好ましいのは、表１に列挙された配列を有するアミノ酸ポリマーを含むか又はからなるペプチド模倣体である。本発明の好ましい実施態様では、表１に列挙されたアミノ酸ポリマーは、該ペプチド模倣体のＣ末端に位置し、好ましくはＣ末端はアミド化されている。
【００７１】
【表１】
0006979180.tif 000002
【００７２】
同等に考えられるのは、表１のアミノ酸ポリマー配列の少なくとも４つの最もＣ末端にあるアミノ酸を含み、かつ５〜５０アミノ酸、好ましくは８〜１３アミノ酸を含む、ペプチド模倣体である。
【００７３】
本発明のいくつかの実施態様では、前記ペプチド模倣体はキレート剤を含む。いくつかの実施態様では、該キレート剤はＤＯＴＡ又はＨＹＮＩＣである。以下に示されている表２は、本発明のいくつかの好ましい実施態様を示す。本発明のいくつかの実施態様では、該ペプチド模倣体は、表２に示されるような構造の１つを含み得るか、又は表２に示されるような構造の１つからなり得る。
【００７４】
【表２】
0006979180.tif 000003
0006979180.tif 000004
【００７５】
表１又は２に列挙されているようなＸ３は、本明細書において使用されている通りであり、好ましくは１Ｎａｌ又は２Ｎａｌ、最も好ましくは１Ｎａｌである。
【００７６】
表１又は２に列挙されているようなＸ４、Ｘ５、Ｘ６、及びＸ７は、本明細書において使用されている通りであり、特にＸ４はＬｅｕ又は別の疎水性アミノ酸、例えばＰｒｏ、又は任意のタンパク質構成荷電アミノ酸、例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＧｌｕであり、Ｘ５は、Ａｌａ、β−Ａｌａ、Ｔｙｒ、又はＰｒｏであり、Ｘ６は、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＭｅｔとの構造的類似性を有する疎水性アミノ酸、例えばＬｅｕ又はＮｌｅであり、Ｘ７は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、β−Ａｌａ、又はＰｒｏである。
【００７７】
表１及び２に列挙されているペプチド模倣体は、例示を用いて示されており、明示して開示されていない表１又は２に記載されている異なる修飾の組合せも考えられることが理解されるべきである。表１及び２の好ましい実施態様を以下の表３に示す。
【００７８】
【表３】
0006979180.tif 000005
【００７９】
表１〜３では、特記されない限り、個々のアミノ酸はアミド結合を通して連結されている。好ましくは、表１〜３に示されている任意のアミノ酸は、Ｌ型であり、例えば表１〜３におけるＡｓｐは好ましくはＬＡｓｐである。
【００８０】
本発明のいくつかの実施態様では、前記ペプチド模倣体は、表２又は３に示されているような構造の１つを含み、ここでのキレート剤のＤＯＴＡ又はＨＹＮＩＣは、放射性核種、例えば金属放射性核種、例えば２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６９Ｃｕ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、１５５Ｔｂ、１６１Ｔｂ、９９ｍＴｃ、８６Ｙ、９０Ｙ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂと配位している。
【００８１】
本発明の特に好ましい実施態様では、前記ペプチド模倣体は、表２又は３に示されるような構造からなり、ここでは、表２又は３に提供された情報に加えて、ＤＯＴＡキレート剤は、放射性核種９０Ｙ、１１１Ｉｎ、６８Ｇａ、又は１７７Ｌｕと配位し、ＨＹＮＩＣキレート剤は、放射性核種９９ｍＴｃと配位している。
【００８２】
本発明のペプチド模倣体は、レポーター基、細胞毒性基、光増感剤、リンカー、及び／又は薬物動態修飾因子を含み得る。好ましくは、該ペプチド模倣体は、レポーター基又は細胞毒性基を含む。
【００８３】
レポーター基
本明細書において使用する「レポーター基」という用語は、イメージング法において直接的又は間接的にのいずれかで検出されることのできる任意の材料又は化学的部分であり得る。それ故、レポーター基を含むペプチド模倣体は、イメージング法に、例えば診断目的のために使用され得る。「レポーター基」という用語は、「レポーター剤」及び「標識」という用語と互換的に使用される。レポーター基は、検出可能な放射能を放出するか又は放出が引き起こされ得（例えば、放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起などによって）、局所的な電磁場に影響を及ぼし（例えば、常磁性種、超常磁性種、フェリ磁性種、又は強磁性種）、放射線エネルギー（例えば発色団及びフルオロフォア）、粒子（液体含有小胞を含む）、重金属及びその化合物、並びに検出可能な物質を発生する部分、及びその他を吸収又は散乱する、材料又は化学的部分であり得る。
【００８４】
イメージング法、例えばイメージング診断法、例えばコンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、シンチグラフィー、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、又は他の類似した技術などによって検出可能な多種多様な材料及び化学的部分が当技術分野から公知であり、レポーター基は、使用される予定のイメージング法に従って選択されるだろう。したがって、例えば、超音波イメージングでは、エコー源性材料、又はエコー源性材料を発生することのできる材料が通常選択されるだろう。
【００８５】
レポーター基は、フルオロフォアであってもよい。本明細書において定義されているようなフルオロフォアは、当技術分野において公知であり、当業者には入手可能であり、ａｌｅｘａファミリーの様々な全てのメンバー、ｂｉｍａｎｅ、ボディパイ、ニトロベンゾキサジアゾール、ダンシル、アクリロダン、フルオレセイン、ローダミン、ランタニド、及びＣｙｅ３／Ｃｙｅ５シリーズのメンバー（Filizola M, G Protein-Coupled Receptors in Drug Discovery, Humana Press, Springer Science+Business Media New York 2015）が挙げられるがこれらに限定されない。好ましいフルオロフォアは、例えば、近赤外線色素、例えばインドシアニングリーン、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、ＩＲＤｙｅ６５０、ＬＳ−２８８、又はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素（例えばＡＦ６４７、ＡＦ６８０、及びＡＦ４８８）、フルオレセイン、シアニン、及びヘミシアニン色素、例えばＤｙ４８８、Ｄｙ６７６、及びＤｙ７５４である。これらのフルオロフォアは、例えば、イメージング法において、蛍光顕微鏡検査又は蛍光誘導内視鏡検査又は蛍光誘導検査、及び光学的イメージングの脈絡において使用され得る。レポーター基はまた化学発光色素であってもよい。
【００８６】
レポーター基はまた、安定な同位体であっても、又は安定な同位体を含む化学的部分であってもよい。
【００８７】
レポーター基はさらに、特にＸ線イメージングによって検出されるための、重原子（例えば、原子重量３８又はそれ以上の）であり得るか又は重原子を含有し得る。レポーター基はまた、ゼロではない核スピンの同位体（例えば１９Ｆ）であり得るか、又は不対電子スピンを有し、したがって、磁気共鳴画像法にとって有用である、常磁性、超常磁性、フェリ磁性、又は強磁性特性を有する材料であり得る。レポーター基は、光イメージングにとって有用である、光散乱体（例えば着色した粒子又は未着色の粒子）、光吸収体又は発光体であり得る。磁気測定イメージングのためのレポーター基は、検出可能な磁気特性を有し；電気インピーダンスイメージングのためのレポーター基は、電気インピーダンスに影響を及ぼすだろう。レポーター基は、シンチグラフィー、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、又は他の類似した技術にとって有用である、放射性核種、又は放射性核種を含む化学的部分であり得る。
【００８８】
本発明の脈絡において使用され得る適切なレポーター基の例、例えば、磁気酸化鉄粒子、Ｘ線造影剤を含有している小胞、キレート化した常磁性金属（例えば、Ｇｄ、Ｄｙ、Ｍｎ、Ｆｅなど）は、診断イメージングの文献から広く知られている。例えば、米国特許第４，６４７，４４７号、ＰＣＴ／ＧＢ９７／０００６７号、米国特許第４，８６３，７１５号、米国特許第４，７７０，１８３号、国際公開公報第９６／０９８４０号、国際公開公報第８５／０２７７２号、国際公開公報第９２／１７２１２号、ＰＣＴ／ＧＢ９７／００４５９、ＥＰ−Ａ−５５４２１３号、米国特許第５，２２８，４４６号、国際公開公報第９１／１５２４３号、国際公開公報第９３／０５８１８号、国際公開公報第９６／２３５２４号、国際公開公報第９６／１７６２８号、米国特許第５，３８７，０８０号、国際公開公報第９５／２６２０５号、及び英国特許第９６２４９１８．０号を参照されたい。また、国際公開公報第９８／４７５４１号（６３〜６６頁及び７０〜８６頁)も参照されたい。
【００８９】
レポーター基として特に好ましいのは、特に巨大環状キレート剤とキレート化する場合には、キレート化した常磁性金属イオン、例えばＧｄ、Ｄｙ、Ｆｅ、及びＭｎである。
【００９０】
レポーター基は、（１）キレート可能な金属又は多原子金属含有イオン（すなわちＴｃＯなど）（ここでの金属は、高原子数の金属（例えば、３７を超える原子数）、常磁性種（例えば遷移金属又はランタニド）、又は放射性同位体である）、（２）不対電子部位である共有結合した非金属種（持続的なフリーラジカルの酸素又は炭素）、高原子数の非金属、又は放射性同位体、（３）協調的な磁気挙動（例えば超常磁性、フェリ磁性、又は強磁性）を示すか又は放射性核種を含有している、多原子クラスター又は高原子数の原子を含有している結晶、あるいは（４）発色団（この用語により蛍光性であるか又は燐光性である種が含まれる）、例えば無機若しくは有機構造、特に錯化金属イオン又は広範に非局在化した電子系を有する有機基、であり得る。
【００９１】
特に好ましいレポーター基の例を、以下においてより詳細に記載する。
【００９２】
好ましいレポーター基は、例えば、放射性核種、例えば金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光金属イオン、重金属イオン、及びクラスターイオンである。
【００９３】
本発明の放射性核種は、例えば、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｆ、Ｎａ、Ｐ、Ｓｃ、Ｔｉ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｇａ、Ｇｅ、Ａｓ、Ｓｅ、Ｂｒ、Ｒｂ、Ｓｒ、Ｙ、Ｚｒ、Ｍｏ、Ｔｃ、Ｒｕ、Ｒｈ、Ｐｄ、Ａｇ、Ｉｎ、Ｓｎ、Ｓｂ、Ｔｅ、Ｉ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、Ｔａ、Ｗ、Ｒｅ、Ｏｓ、Ｉｒ、Ｐｔ、Ａｕ、Ｈｇ、Ｔｌ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ｐｏ、Ａｔ、Ｒａ、Ａｃ、Ｔｈ、及びＦｍの放射性同位体から選択され得る。
【００９４】
好ましい放射性核種としては、２２５Ａｃ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、５１Ｃｒ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６９Ｃｕ、１５９Ｄｙ、１６６Ｄｙ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１９６Ｉｒ、１７７Ｌｕ、１８９ｍＯｓ、２０３Ｐｂ、１０９Ｐｄ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、９７Ｒｕ、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１５５Ｔｂ、１６１Ｔｂ、９９ｍＴｃ、１２７Ｔｅ、１６７Ｔｍ、８６Ｙ、９０Ｙ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、及び８９Ｚｒなどがあるがこれらに限定されない金属の放射性核種が挙げられるがこれらに限定されない。好ましいレポーター基は、ハロゲンの放射性核種、例えば１８Ｆ、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、及び１２５Ｉなどであるがこれらに限定されない。
【００９５】
診断に適用するためのγ線及び陽子線放出体としては、１１Ｃ、５１Ｃｒ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、５２Ｆｅ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１７７Ｌｕ、２４Ｎａ、２０３Ｐｂ、９７Ｒｕ、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、1６７Ｔｍ、８６Ｙ、及び８９Ｚｒが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９６】
治療に適用するための、α線及びβ線の放出並びにオージエ電子及び内部転換電子の放出を示す放射性核種としては、２２５Ａｃ、１１１Ａｇ、７７Ａｓ、２１１Ａｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、７７Ｂｒ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、６７Ｃｕ、１５２Ｄｙ、１５９Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６９Ｅｒ、２５５Ｆｍ、６７Ｇａ、１５９Ｇｄ、１９５Ｈｇ、１６１Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１９２Ｉｒ、１９４Ｉｒ、１９６Ｉｒ、１７７Ｌｕ、１８９ｍＯｓ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、１０９Ｐｄ、１４９Ｐｍ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、２２３Ｒａ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１０５Ｒｈ、１１９Ｓｂ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、８９Ｓｒ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、９９ｍＴｃ、１２７Ｔｅ、２２７Ｔｈ、２０１Ｔｌ及び９０Ｙが挙げられるがこれらに限定されない。好ましい常磁性金属イオンとしては、遷移金属及びランタニド金属（例えば、６〜９、２１〜２９、４２、４３、４４、又は５７〜７１の原子数を有する金属）のイオン、特にＣｒ、Ｖ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ及びＬｕのイオン、特にＭｎ、Ｃｒ、Ｆｅ、Ｇｄ，及びＤｙのイオン、より特定するとＧｄのイオンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９７】
本発明のいくつかの実施態様では、レポーター基は、特にペプチド模倣体に含まれる場合には、治療効果、例えば細胞毒性作用を全く有さない。いくつかの実施態様では、レポーター基は、治療に関連する程度までは細胞毒性作用を少なくとも有さない。当業者は、例えばイメージング法において検出されるのに十分であるが、治療効果を有さない程に十分に低い、レポーター基の投与量／放射線量を決定することができる。結果として、本発明のいくつかの実施態様、例えば、イメージング法及び任意の診断使用又は診断法において、検出には十分であるが、治療効果は有さない、レポーター基、特に放射性核種の用量が使用される。本明細書において使用する治療効果を有さないレポーター基は、「非治療的レポーター基」と称される。したがって、本発明はまた、上記のレポーター基の非治療的実施態様にも関する。例えば、本発明は、非治療的フルオロフォア、安定な同位体、又は安定な同位体を含む化学的部分、重原子、放射性核種、例えば金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光金属イオン、重金属イオン、及びクラスターイオンを含む。
【００９８】
イメージングに使用することのできる、放射性核種である好ましい非治療的レポーター基は、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、２０３Ｐｂ、９７Ｒｕ、４４Ｓｃ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、９９ｍＴｃ、１６７Ｔｍ、８６Ｙ、及び８９Ｚｒである。
【００９９】
細胞毒性基
いくつかの実施態様では、ペプチド模倣体は細胞毒性基を含む。本明細書において使用する「細胞毒性基」という用語は、細胞毒性基を含むペプチド模倣体が結合しているか又はそれが内部移行している細胞の死滅を直接的又は間接的に引き起こす、任意の材料又は化学的部分を指す。
【０１００】
細胞毒性基は、例えば、化学療法剤又は放射性核種であり得る。ペプチド模倣体に含まれる化学療法剤又は放射性核種が、ＣＣＫ２Ｒを発現している細胞に内部移行した場合、ＣＣＫ２Ｒ発現細胞は、化学療法剤又は放射性核種によって死滅する。いくつかの実施態様では、ペプチド模倣体が結合している細胞はまた、細胞毒性基を含むペプチド模倣体を内部移行しなくても死滅し得る。
【０１０１】
化学療法剤は、ビンブラスチンモノヒドラジド、チューブリシンＢヒドラジド、アクチノマイシン、全トランス型レチノイン酸、アザシチジン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イマチニブ、イリノテカン、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、インドテカン（indotecan）、インジミテカン（indimitecan）、メルタンシン、エムタンシン、バルルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンからなる群より選択され得る。
【０１０２】
細胞毒性基として使用され得る好ましい放射性核種としては、金属及びハロゲンの放射性核種が挙げられる。本発明の放射性核種は、例えば、Ｐ、Ｓｃ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｇａ、Ａｓ、Ｂｒ、Ｓｒ、Ｙ、Ｔｃ、Ｒｕ、Ｒｈ、Ｐｄ、Ａｇ、Ｉｎ、Ｓｎ、Ｓｂ、Ｔｅ、Ｉ、Ｐｒ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｌｕ、Ｔａ、Ｗ、Ｒｅ、Ｏｓ、Ｉｒ、Ａｕ、Ｈｇ、Ｔｌ、Ｐｂ、Ｂｉ、Ｐｏ、Ａｔ、Ｒａ、Ａｃ、Ｔｈ及びＦｍの放射性同位体から選択され得る。好ましい放射性核種としては、２２５Ａｃ、１１１Ａｇ、７７Ａｓ、２１１Ａｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、７７Ｂｒ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、６７Ｃｕ、１５２Ｄｙ、１５９Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６９Ｅｒ、２５５Ｆｍ、６７Ｇａ、１５９Ｇｄ、１９５Ｈｇ、１６１Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１９２Ｉｒ、１９４Ｉｒ、１９６Ｉｒ、１７７Ｌｕ、１８９ｍＯｓ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、１０９Ｐｄ、１４９Ｐｍ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、２２３Ｒａ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１０５Ｒｈ、１１９Ｓｂ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、８９Ｓｒ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、９９ｍＴｃ、１２７Ｔｅ、２２７Ｔｈ、２０１Ｔｌ及び９０Ｙが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０３】
光増感剤
本発明のいくつかの実施態様では、ペプチド模倣体は光増感剤を含む。
【０１０４】
本明細書において使用する「光増感剤」という用語は、光に曝露された時に、毒性となるか、又は、毒性物質、例えば細胞膜及び細胞構造をはじめとする細胞材料若しくは生体分子に傷害を与える一重項酸素若しくは他の酸化性ラジカルを放出する、材料又は化学的部分を指し、このような細胞傷害又は膜傷害は最終的に細胞を死滅させ得る。本明細書において定義されているような光増感剤は当技術分野において公知であり、当業者には入手可能である。光増感剤の細胞毒性作用は、新生物疾患を含む、様々な異常又は障害の処置に使用され得る。このような処置は、光線力学療法（ＰＤＴ）として知られ、これは生体の罹患部位への光増感剤の投与と、それに続く、光増感剤を活性化させ、それらを細胞毒性形へと変換する、活性化光への曝露を含み、これにより、罹患細胞は死滅するか又はそれらの増殖能は減少する。
【０１０５】
光増感剤は、直接的に又は間接的に、様々な機序によってそれらの効果を発揮する。したがって、例えば、ある光増感剤は、光によって活性化された時に直接的に毒性となり、一方、他の光増感剤は、毒性種、例えば、酸化性物質、例えば一重項酸素又は酸素由来フリーラジカルを発生するように作用し、これは細胞材料及び生体分子、例えば脂質、タンパク質、及び核酸などを破壊し、最終的には細胞を死滅させる。
【０１０６】
いくつかの実施態様では、光増感剤としては、例えば、プソラレン、ポルフィリン、クロリン、及びフタロシアニンが挙げられる。ポルフィリン光増感剤は、毒性酸素種の発生によって間接的に作用し、特に好ましい。ポルフィリンは、ヘムの合成における天然の前駆体である。特に、ヘムは、鉄（Ｆｅ２＋）が、フェロケラターゼ酵素の作用によってプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）に取り込まれると生成される。ＰｐＩＸは非常に強力な光増感剤である。本発明の脈絡において使用され得るさらなる光増感剤は、アミノレブリン酸（ＡＬＡ）、シリコンフタロシアニン（Ｐｃ４）、ｍ−テトラヒドロキシフェニルクロリン（ｍＴＨＰＣ）、及びモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６（ＮＰｅ６）、ポルフィマーナトリウム、ベルテポルフィン、テモポルフィン、アミノレブリン酸メチル、アミノレブリン酸ヘキシル、レザフィリン（−ＰＤＴ）、ＢＦ−２００ＡＬＡ、アンフィネックス（amphinex）、及びアザジピロメテンである。
【０１０７】
リンカー
本発明のペプチド模倣体は、本明細書において定義されているような配列を有するアミノ酸ポリマーを含む。ペプチド模倣体に含まれるアミノ酸の総数は、本明細書において定義されているように制限されている。アミノ酸ポリマーに加えて、本発明のペプチド模倣体は、レポーター基、細胞毒性基、光増感剤、キレート剤、補欠分子族、薬物動態修飾因子、リンカー、又はスペーサーなどのさらなる成分を含んでいてもよい。これらの個々の成分又は化学的部分は、共有結合、イオン結合、又は配位結合を通して、互いに又はアミノ酸ポリマーに直接接続していてもよく、例えば、レポーター基又は細胞毒性基は、配位結合を通してキレート剤と接続していてもよい。
【０１０８】
あるいは、上記成分は、互いに又はアミノ酸ポリマーにリンカーを通して間接的に接続していてもよい。本明細書において使用する「リンカー」という用語は、２つの個々の化学的部分を接続する化学的部分を指す。「リンカー」又は「スペーサー」という用語は、文献及び本明細書においてこのような化学的部分を説明するために互換的に使用される。リンカーは、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーのＮ末端に結合していても、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーのアミノ酸配列内に統合していても、又はペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーのアミノ酸の側鎖若しくは別の官能基にコンジュゲートしていてもよく、これは通常、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーとレポーター剤若しくは細胞毒性剤との間の分離剤として、又はペプチド模倣体の親水性及び薬物動態などに影響を及ぼす薬物動態修飾因子として使用される。例えば、本発明のレポーター基、細胞毒性基、光増感剤、キレート剤、補欠分子族、又は薬物動態修飾因子は、アミノ酸ポリマー、例えばＸ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ１−Ｘ２−Ａｓｐ−Ｘ３にリンカーを通して接続されていてもよい。該リンカーは、上記の任意の成分を、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーのＮ末端、Ｃ末端、又は任意の側鎖に接続することができる。いくつかの実施態様では、該リンカーはまた、上記の成分を互いに接続してもよく、例えば、該リンカーは薬物動態修飾因子をレポーター基に接続していてもよい。
【０１０９】
前記リンカーは、アミノ酸、例えばＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ（全てＬ型又はＤ型）、又はこれらの中の１つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸ポリマー、又は任意の他の化学的部分、例えばポリエチレングリコール又は糖質、並びに、アミノヘキサノイル部分又はアミノベンゾイル部分又はピペリジン部分であり得る。いくつかの実施態様では、該リンカーは、６−アミノヘキサン酸、４−アミノ酪酸、４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン若しくは尿素、又は、ペプチド模倣体に官能基を導入することを可能とする別の化学的部分であり得る。いくつかの実施態様では、該リンカーは上記のリンカーの組合せである。
【０１１０】
前記リンカーは、ペプチド模倣体の個々の成分の分離剤として使用され得る。該リンカーはまた、複数のペプチド模倣体の多量体コンジュゲートを形成するために使用されても、又は、例えば代替的な受容体を標的化する他のリガンドと組み合わせて使用されてもよい。該リンカーはさらに、複数のレポーター基又はレポーター基及び細胞毒性基の組合せを、該ペプチドに結合させるために使用され得る。このような例は、二価ガストリンペプチド模倣体ＤＯＴＡ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（スクシンイミドプロピオニル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ＤＯＴＡ−ＭＧＤ５）（Sosabowski JK et al., J Nucl Med 2009, 50: 2082-2089）によって、又は、ガストリン放出性ペプチド受容体のアンタゴニストを標的化するデュアルモダリティの蛍光及び放射性標識リガンドＤＯＴＡ−Ｌｙｓ（ＩＲＤｙｅ−６５０）−ＰＥＧ４−［Ｄ−Ｐｈｅ６，Ｓｔａ１３］−ボンベシン（６−１４）ＮＨ２（ＨＺ２２０）（Zhang H et al., J Nucl Med 2017, 58: 29-35）によって示される。ＤＯＴＡ−ＭＧＤ５は、マレイミドリンカーに基づいた二価ＭＧ類似体であり、腫瘍への高い取り込み及び腎臓への少ない滞留が前臨床試験において示されている。ガストリン放出性ペプチド（ＧＲＰ）受容体を標的化するガストリン放出性ペプチド受容体のアンタゴニストＨＺ２２０は、ボンベシン類似体に基づき、ここではリシンの中の２つのアミンが、キレート剤ＤＯＴＡと近赤外線蛍光（ＮＩＲＦ）色素ＩＲＤｙｅ６５０をコンジュゲートさせるために使用されている。６８Ｇａ標識ＨＺ２２０では、ＰＥＴ及び光学イメージングの両方において、バックグラウンドに対する腫瘍の高い対比を達成することができた。リンカーはまた、ペプチド配列に切断可能な基を導入するために使用することができ、これにより、ペプチドコンジュゲートの一部、例えばペプチド断片、細胞毒性基、又はレポーター基を放出する。このような例は、カテプシンＢ切断部位によって示される（Naqvi SA et al., Cancer Biother Radiopharm 2010, 25: 89-95; Albericio F and Kruger HG, Future Med Chem 2012, 4: 1527-1231）。また、ボンベシン誘導体の１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−Ｌｙｓ（グルコース）−４−アミノ安息香酸−ＢＢＳ７−１４において、グルコースと４−アミノ安息香酸の組合せなどのリンカーの組合せを使用することができる（Lim JC et al, Nucl Med Biol 2015, 42: 234-241）。
【０１１１】
本明細書において使用する「薬物動態修飾因子」は、ペプチド模倣体の薬物動態、例えば親水性、生分解、及びクリアランスに影響を及ぼす、化学的部分を意味する。例えば、薬物動態修飾因子は、血流中のペプチド模倣体の半減期を延長し得る。
【０１１２】
放射性標識されたＭＧ類似体のＤＯＴＡ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ａｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（Mather SJ et al., J Nucl Med 2007, 48: 615-622）はＭＧ１１から誘導され、該ペプチドのＮ末端部分に２つのＨｉｓ残基を含む。放射性標識されたＭＧ類似体のＤＯＴＡ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−Ａｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、ＤＯＴＡ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、ＤＯＴＡ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｎ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２及びＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２はＭＧ０から誘導され、該ペプチドのＮ末端部分に様々な数のＤＧｌｎ残基及びＤＧｌｕ残基を含む（Laverman P et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2011, 38: 1410-1416）。これらの新規ペプチド誘導体の設計は、ＭＧ０の腎臓への高い取り込みが、構造内の陰イオン性のペンタグルタミン酸配列によって引き起こされているという知識に基づいていた。正に荷電した残基及びＤ−アミノ酸残基の導入によって、腎臓への取り込みを低減させることができ、同時に腎臓に対する腫瘍の比率は改善された。イメージングにおけるバックグラウンドに対する高い腫瘍の対比を得るために、循環中からの放射性リガンドの迅速なクリアランスが望ましい。また、ＰＥＧ又はＤ−アミノ酸、例えばＤ−Ｓｅｒ及びＤ−Ｇｌｎを含む、様々な極性を有する他のスペーサーも、放射性リガンドの安定性及び腎臓に対する腫瘍の比を増加させる試みにおいて、ＭＧ類似体の薬物動態修飾因子として研究されている（Kolenc-Peitl P et al., J Med Chem 2011, 54: 2602-2609）。様々な長さの親水性かつ非荷電のスペーサーを導入することによって、血清中における安定性、腎臓への取り込み、及び腎臓に対する腫瘍の比に対する好ましい効果を観察することができた。
【０１１３】
レポーター基と細胞毒性基の連結
本発明のペプチド模倣体は、１つのレポーター基若しくは細胞毒性基、又は複数のレポーター基若しくは細胞毒性基を含み得る。いくつかの実施態様では、ペプチド模倣体はまた、レポーター基と細胞毒性基を含んでいてもよい。いくつかの実施態様では、レポーター基、細胞毒性基、又はその両方は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーに、例えば共有結合を通して直接連結されていてもよい。他の実施態様では、レポーター基、細胞毒性基、又はその両方は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーに間接的に連結されていてもよい。
【０１１４】
レポーター基、又は細胞毒性基、又はその両方が、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーに間接的に連結されている場合、それらは上記に定義されているようなリンカー若しくは薬物動態修飾因子を通して、又はキレート剤若しくは補欠分子族を通して、アミノ酸ポリマーに連結されている。例えば、フルオロフォアであるレポーター基は好ましくは、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーに、直接的に、又はリンカー若しくはスペーサー、例えばポリエチレングリコールを通してのいずれかで、共有結合で連結されている。一方、金属放射性核種などの放射性核種及び金属イオンは好ましくはペプチド模倣体にキレート剤を介して連結されている。ハロゲンの放射性核種は好ましくは、ペプチド模倣体に、補欠分子族を介して又はアミノ酸の側鎖の官能基を介して連結されている。
【０１１５】
レポーター基又は細胞毒性基は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーに、Ｎ末端、Ｃ末端を介して、又はアミノ酸側鎖、例えばリシン若しくはシステインを介して、又はリンカー若しくは薬物動態修飾因子の官能基を介して、直接的に又は間接的に連結されていてもよい。好ましくは、レポーター基又は細胞毒性基は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーにＮ末端を介して連結されている。本発明の好ましい実施態様では、レポーター基又は細胞毒性基は、ペプチドのＮ末端に、キレート剤又は補欠分子族を通して連結されている。特に、いくつかの実施態様では、放射性核種は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーに、該ペプチドのＮ末端を介して連結されている。リンカーはさらに、キレート剤又は補欠分子族を、該ペプチド配列内のＮ末端又はアミノ酸側鎖に接続するために使用され得る。レポーター基、例えば放射性核種は、キレート剤に配位していても、又は、ペプチドコンジュゲートとコンジュゲートする前若しくは後に補欠分子族に導入されていてもよい。
【０１１６】
キレート剤及び補欠分子族
レポーター基又は細胞毒性基の導入のために、ペプチド模倣体は、キレート剤又は補欠分子族を含むことができる。キレート剤又は補欠分子族は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーの、Ｎ末端、Ｃ末端、又は任意のアミノ酸側鎖に、又はリンカー若しくは薬物動態修飾因子に存在する官能基にコンジュゲートさせることができる。好ましくは、キレート剤又は補欠分子族は、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーのＮ末端にコンジュゲートしている。
【０１１７】
レポーター基又は細胞毒性基の、キレート剤又は補欠分子族への導入は、キレート剤又は補欠分子族とペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーのコンジュゲートの前又は後に実施され得る。
【０１１８】
いくつかの実施態様では、キレート剤は、レポーター基若しくは細胞毒性基としての、本明細書において記載されているような金属、例えば金属放射性核種と配位しているか、又は、補欠分子族は、レポーター基若しくは細胞毒性基としての、本明細書において記載されているようなハロゲン、例えばハロゲン放射性核種を含む。
【０１１９】
キレート剤は、金属錯体形成のための様々なドナー基、例えば酸素、窒素、硫黄、（カルボキシル、ホスホネート、ヒドロキサメート、アミン、チオール、チオカルボキシレート、又はその誘導体）を含有していてもよく、アクリル酸及び大環状キレート剤、例えばポリアミノポリカルボン酸リガンドを含む。
【０１２０】
いくつかの実施態様では、キレート剤は、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−トリス［メチレン（２−カルボキシエチル）］ホスフィン酸（ＴＲＡＰ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４−二酢酸（ＮＯＤＡ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）並びにその誘導体、例えばグルタル酸群を用いて官能基化されたＤＯＴＡ又はＮＯＴＡ（ＤＯＴＡＧＡ、ＮＯＴＡＧＡ）からなる群より選択される。他のキレート剤、特に放射性金属とキレート形成するためのキレート剤も考えられる。
【０１２１】
例えば９９ｍＴｃとキレート形成するのに考えられるさらなるキレート剤としては、ジアミドジチオール（Ｎ２Ｓ２）、トリアミドチオール（Ｎ３Ｓ）、テトラアミン（Ｎ４）、及びヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）が挙げられるがこれらに限定されない。ＨＹＮＩＣは通常、金属の配位圏と競合する共リガンドと組み合わせて使用され、この共リガンドとしては、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸（ＥＤＤＡ）及びトリシンが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施態様では、有機金属水イオン９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３を使用して、水分子を一座配位、二座配位、及び三座配位キレート剤と交換することによって、安定な錯体を形成することによって、トリカルボニル錯体を作製することができる（クリック・トゥ・キレート（click-to-chelate）法も含む）。
【０１２２】
例えばペプチド模倣体を６８Ｇａで標識するために有用であるさらなるキレート剤としては、Ｎ，Ｎ’−ビス［２−ヒドロキシ−５−（カルボキシエチル）ベンジル］エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸（ＨＢＥＤ−ＣＣ）、シデロホアに基づいたリガンド、例えばデスフェリオキサミン、ヒドロキシピリジノンリガンド、例えばデフェリプロン及びトリス（ヒドロキシピリジノン）（ＴＨＰ）及びその誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２３】
本発明の好ましい補欠分子族は、ヨウ素又はフッ素などのハロゲンの放射性核種、例えば本明細書において記載されているもので標識されている。いくつかの実施態様では、補欠分子族は、ボルトンハンター試薬、Ｎ−スクシンイミジル−５−（トリアルキルスタニル）−３−ピリジンカルボキシレート、又は放射性ヨウ素化のためのＮ−スクシンイミジル−４−［１３１Ｉ］ヨードベンゾエート（［１３１Ｉ］ＳＩＢ）からなる群より選択されるだろう。いくつかの実施態様では、補欠分子族は、４−［１８Ｆ］フルオロフェナシルブロミド、Ｎ−スクシンイミジル−４−［１８Ｆ］フルオロベンゾエート（［１８Ｆ］ＳＦＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−［１８Ｆ］フルオロメチル）ベンゾエート、４−［１８Ｆ］フルオロベンズアルデヒド、６−［１８Ｆ］フルオロニコチン酸テトラフルオロフェニルエステル（［１８Ｆ］Ｆ−Ｐｙ−ＴＦＰ）、ケイ素含有構築ブロック、例えばＮ−スクシンイミジル３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル［１８Ｆ］フルオロシリル）ベンゾエート（［１８Ｆ］ＳｉＦＢ）、糖質に基づいた補欠分子族、例えば［１８Ｆ］フルオロ−デオキシグルコース、好ましくは２−［１８Ｆ］フルオロ−２−デオキシグルコース（［１８Ｆ］ＦＤＧ）、及び［１８Ｆ］フルオロ−デオキシマンノース、好ましくは［１８Ｆ］２−フルオロ−２−デオキシマンノース、又はその誘導体、マレイミドを基盤とする及びヘテロ環メチルスルホンを基盤とする１８Ｆ−合成等価体、クリックケミストリーを介した標識を可能とする１８Ｆで標識された補欠分子族、例えば１８Ｆ−アジド又は１８Ｆ−アルキン、１８Ｆで標識された有機トリフルオロボラート及び［１８Ｆ］フルオロピリジンからなる群より選択されるがこれらに限定されない。いくつかの実施態様では、フッ化アルミニウム（Ａｌ１８Ｆ）を使用したキレート剤に基づく標識アプローチが、放射性フッ素化のために適用される。
【０１２４】
本発明のさらなる局面及び実施態様
本発明はまた、本明細書に記載のような本発明のペプチド模倣体の作製法に関する。本発明のペプチド模倣体の作製は、当業者には利用可能な標準的な有機化学法及び固相ペプチド合成法によって可能である。該方法は少なくとも、ペプチド模倣体のアミノ酸ポリマーを合成する工程を含む（Behrendt R et al., J Pept Sci 2016, 22: 4-27; Jones J, Amino Acid and Peptide Synthesis, Oxford University Press, New York 2002; Goodman M, Toniolo C, Moroder L, Felix A, Houben-Weyl Methods of Organic Chemistry, Synthesis of Peptides and Peptidomimetics, workbench edition set, Thieme Medical Publishers, 2004）。
【０１２５】
本発明はさらに、本明細書に記載のペプチド模倣体を含む、医薬組成物及び診断用組成物に関する。本発明による医薬組成物は、ＣＣＫ２Ｒ関連疾患、例えば、ＣＣＫ２Ｒの発現又は過剰発現によって特徴付けられる疾患の処置に使用され得る。いくつかの実施態様では、本発明の医薬組成物は、がん、特に、ＣＣＫ２Ｒの発現によって特徴付けられるようながんの処置に使用され得る。本発明のいくつかの実施態様では、本発明の医薬組成物は、化学療法剤又は放射性核種などの細胞毒性基を、ＣＣＫ２Ｒを発現している腫瘍細胞に送達するために使用され得る。したがって、本発明の医薬組成物は、標的化がん療法のために使用され得る。
【０１２６】
本発明はまた、本発明の１つ以上の成分、例えば、本発明による医薬組成物若しくは診断用組成物又は本発明によるペプチド模倣体を含む、キットに関する。該キットはさらに、本発明のペプチド模倣体、医薬組成物又は診断用組成物の調製法又は使用法の説明を提供する情報リーフレットも含み得る。１つの実施態様では、該キットは、すぐに使用できる本発明の医薬組成物又は診断用組成物を含む。さらなる実施態様では、該キットは、すぐに使用できる医薬組成物又は診断用組成物を調製するに十分な２つ以上の組成物を含む。例えば、１つの実施態様では、該キットは、キレート剤を含むペプチド模倣体を含む第一の組成物と、レポーター基又は細胞毒性基を含む第二の組成物を含み得る。最終の診断用組成物又は治療用組成物を調製するために、当業者は、該キットに備えられた情報リーフレットに従い、第一の組成物と第二の組成物を合わせて、すぐに使用できる診断用組成物又は治療用組成物を作製するだろう。
【０１２７】
本発明の診断用組成物は、診断目的で使用され得る。本発明の診断用組成物は、診断プロセスの一部として患者に投与されることにより、例えば、ＣＣＫ２Ｒ発現細胞又は組織、例えばＣＣＫ２Ｒ発現腫瘍細胞のイメージングが可能となり得る。本発明の診断用組成物は、本発明によるイメージング法などのイメージング法に、例えば腫瘍細胞のイメージング法に使用され得る。
【０１２８】
本発明はまた、本明細書に記載されているようなレポーター基又は細胞毒性基を細胞に送達するための、本明細書に記載の本発明のペプチド模倣体の使用に関する。好ましくは、レポーター基又は細胞毒性基は、ＣＣＫ２Ｒを発現する細胞、例えば、ＣＣＫ２Ｒを発現しているがん細胞に送達される。本発明のペプチド模倣体の使用はインビボ又はインビトロにおいてであり得る。例えば、本発明のペプチド模倣体は、レポーター基又は細胞毒性基をヒト又は動物、例えば哺乳動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスター、又は他の哺乳動物に送達するために使用され得る。本発明のいくつかの実施態様では、ペプチド模倣体は、レポーター基又は細胞毒性基をエクスビボにおいて細胞に、例えば、細胞培養液中で培養されている不死化細胞株又は初代細胞株に送達するために使用され得る。
【０１２９】
本発明はまた、本明細書に記載のような細胞のイメージング法にも関する。本明細書に記載の細胞のイメージング法は、本明細書に記載のペプチド模倣体を利用する。本発明のいくつかの実施態様では、細胞のイメージング法は、本明細書に記載のような非治療的ペプチド模倣体を利用する。本発明の細胞のイメージング法は、確立されたイメージング法、例えばコンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、シンチグラフィー、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、又は他の類似した技術を含み得るか又はこれらに基づき得る。使用される個々のイメージング法に基づいて、当業者は、適切なレポーター基を選択するだろう。本発明の細胞のイメージング法は、インビボ又はインビトロにおいて実施され得る。本発明のいくつかの実施態様では、細胞を本発明のペプチド模倣体に接触させる工程は、本明細書に記載のペプチド模倣体を患者に、例えばがん、例えばＣＣＫ２Ｒの発現を含むがんに罹患している患者に投与する工程を含む。いくつかの好ましい実施態様では、細胞は腫瘍細胞である。したがって、いくつかの好ましい実施態様では、腫瘍細胞をペプチド模倣体と接触させる。いくつかの好ましい実施態様では、腫瘍細胞はＣＣＫ２Ｒを発現している。
【０１３０】
いくつかの実施態様では、本発明はまた、ＣＣＫ２Ｒの発現を含む疾患、例えば腫瘍細胞におけるＣＣＫ２Ｒの発現によって特徴付けられるがんに罹患している患者の処置法にも関する。患者を処置するこのような方法は、患者への本発明のペプチド模倣体の投与を含む。
【０１３１】
いくつかの実施態様では、本発明は、治療法に使用するための本明細書に記載のペプチド模倣体に関する。本発明の好ましい実施態様では、ペプチド模倣体は、がんの処置に使用するためのものである。好ましくは、がんは、腫瘍細胞表面上にＣＣＫ２Ｒを発現するがんである。
【０１３２】
本発明のペプチド模倣体は、診断精密検査及び様々な種類のがん、例えば、甲状腺癌、例えば甲状腺髄様癌（ＭＴＣ）、肺癌、例えば小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、消化管間質腫瘍、神経系の腫瘍、例えば星状細胞腫及び髄膜腫、間質卵巣癌、消化管の癌、神経内分泌腫瘍、膵消化管腫瘍、神経芽細胞腫、生殖器系の腫瘍、例えば乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌及び前立腺癌、インスリノーマ、血管作動性腸管ペプチド分泌腫瘍、気管支及び回腸カルチノイド、平滑筋肉腫、平滑筋腫、及び肉芽腫細胞腫の治療に有用である。いくつかの好ましい実施態様では、上記の種類のがんはＣＣＫ２Ｒを発現する。
【０１３３】
実施例
実施例１：本発明のペプチド模倣体の合成
本発明のペプチド模倣体の合成は、標準的な９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学を使用して実施された。
【０１３４】
ペプチド模倣体は、アルカリ媒体中の過剰のＦｍｏｃ保護アミノ酸、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、及び２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）を使用して、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中のＲｉｎｋアミドＭＢＨＡレジン（ノバビオケム、ホーエンブルン、ドイツ）上に構築された。アミノ酸の反応性側鎖を適切な保護基を用いてマスクした。所望のアミノ酸配列を構築した後、Ｂｏｃで保護されたＤＯＴＡ及びＨＹＮＩＣのカップリングを実施し、その後、酸に不安定な保護基の除去と同時にペプチド模倣体をレジンから切断し、ＨＰＬＣによる精製及び凍結乾燥後、ペプチド模倣体が、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによって確認したところ、２０％を超える収率で９５％以上の化学的純度で得られた。様々な放射性金属を用いての本発明のペプチド模倣体の放射性標識は、標準的な放射性標識プロトコールを使用して、２５〜５０％エタノールなどの水溶液中にペプチドを溶かし、該溶液を、放射性金属を含有している塩酸などの酸性溶液、及びｐＨ調整のための酢酸ナトリウム溶液又はアスコルビン酸溶液などの溶液と混合し、該混合物を高温（９０〜９５℃）で約３０分間インキュベートすることによって実施された。様々な放射性金属を用いての放射性標識により、高い標識収率及び放射性化学物質の純度が得られた。ペプチド模倣体及び放射性標識された誘導体のＨＰＬＣによる分析を、ダイオネクス社のＵｌｔｉＭａｔｅ３０００ポンプ（ダイオネクス社、ゲルメリング、ドイツ）、２８０nmにおけるＵＶ検出（ＵｌｔｉＭａｔｅ３０００可変波長ＵＶ検出器）及び放射線検出（Ｇａｂｉ Ｓｔａｒ、レイテスト社、ストラゥベンハルト、ドイツ）からなるダイオネクス社のクロマトグラフィーシステムで、フェノメネクス社のＪｕｐｉｔｅｒ４μＰｒｏｔｅｏ９０Ａ ２５０×４．６（Ｃ１２）カラム及び１mL/分の流速を、０．１％ＴＦＡを含有している水（溶媒Ａ）と０．１％ＴＦＡを含有しているアセトニトリル（溶媒Ｂ）の勾配系（０〜３分間は１０％のＢ、３〜１８分間は１０〜５５％のＢ、１８〜２０分間は８０％のＢ、２０〜２１分間は１０％のＢ、２１〜２５分間は１０％）と一緒に使用して実施された。
【０１３５】
以下のペプチド模倣体（表４）は、上記の方法に従って合成された：
【０１３６】
【表４】
0006979180.tif 000006
【０１３７】
実施例２：本発明のペプチド模倣体は、インビトロでヒト血清中において増加した安定性を有する
インビトロにおいて放射性標識されたペプチド模倣体を特徴付けるために、ヒト血清中の安定性を試験した。１１１Ｉｎで標識されたペプチド模倣体を、新鮮なヒト血清中で５００〜２０００pmol/mLの濃度で、３７℃で最大２４時間かけてインキュベートし、分解を、ラジオＨＰＬＣによって評価した。この目的のために、ヒト血清試料をＡＣＮを用いて沈降させ、２０００ｇで２分間遠心分離にかけ、水で希釈し（１：１/ｖ：ｖ）、その後、フェノメネクス社のＪｕｐｉｔｅｒ ＰｒｏｔｅｏＣ１２カラム（９０Å、４μm、２５０×４．６mm）又はＢｉｓｃｈｏｆｆ社のクロマトグラフィーヌクレオシルＣ１８カラム（１２０Å、５μm、２５０×４．６mm）を具備した、放射線検出及びＵＶ検出を含む、ダイオネクス社のクロマトグラフィーシステムで、様々な水／アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ勾配系を使用して、ＨＰＬＣ分析を行なった。図１に示されているように、ヒト血清中の放射性標識されたペプチド模倣体の安定性は、２４時間インキュベートした後に、それぞれ１６．１％（ｎ＝２）及び６０．１％（ｎ＝１）のインタクトな放射性標識されたペプチド模倣体を示した、１１１Ｉｎで標識されたＤＯＴＡ−ＭＧ１１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１と比較するとかなり増加した。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ９、及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０は同じ時点で、９４％を超える数値を示し、それ故、酵素による分解に対してはるかにより高い安定性を示した。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１２もまた、ヒト血清中において９４％を超えるインタクトな放射性ペプチドを示した。この安定化は、ＭＧのＣ末端受容体特異的配列内に少なくとも２つの置換を、好ましくは追加のＮ末端における置換と組み合わせて適用することによって達成される。本発明者らはさらに、Ｍｅｔを（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅで単一置換した１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１６を試験し、部分的な安定化が判明した（５３．１％のインタクトな放射性ペプチド、ｎ＝２）。このことは、例えば（Ｎ−Ｍｅ）Ｎｌｅ又は１Ｎａｌを用いての単一置換は、ペプチド模倣体を分解から完全に保護せず、本発明に記載のような、異なる位置における置換の組合せのみが、ペプチド模倣体の完全な安定化を可能とすることを確認する。
【０１３８】
実施例３：本発明のペプチド模倣体は、血清タンパク質に結合する
さらに、血清タンパク質へのタンパク質の結合を調べた。この目的のために、１１１Ｉｎで標識されたペプチド模倣体をデュプリケートで、新鮮なヒト血清中（５００pmol/mL）で３７℃でインキュベートし、セファデックスＧ−５０サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥヘルスケアＩｌｌｕｓｔｒａ、リトル・チャルフォント、英国）によって４時間後及び２４時間後に分析した。カラム及び溶出液を２４８０ウィザード２自動γカウンター（パーキンエルマーライフサイエンスアンドアナリティカルサイエンス社、トゥルク、フィンランド）で測定することによって、タンパク質結合率を決定した。結果を表５にまとめる。
【０１３９】
【表５】
0006979180.tif 000007
【０１４０】
２４時間インキュベートした後に１０％未満のタンパク質結合を示した１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１と比較すると、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４は、同じようなタンパク質結合を示した（約１２％）。本発明の放射性標識されたペプチド模倣体は、表５に示されているように、より高いタンパク質結合を示した。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ９、及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１１は、約３０％という中程度のタンパク質結合を示した。４つのペプチド模倣体を用いると、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１２では４０％を超える数値、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０では５０％を超える数値を示す、高いタンパク質結合が、２４時間インキュベートした後に観察された。
【０１４１】
実施例４：本発明のペプチド模倣体は、ＣＣＫ２Ｒに対して高い親和性を有する
ＣＣＫ２Ｒに対する親和性を、Luigi Aloj博士（Aloj L et al., J Nucl Med 2004, 45: 485-494）によって親切にも提供された、ヒトＣＣＫ２Ｒ（Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ）の完全コード配列を含有しているプラスミドｐＣＲ３．１が安定にトランスフェクトされたＡ４３１ヒト類表皮癌細胞において試験した。ペンタガストリン（Ｂｏｃ−β−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）、ＤＯＴＡ−ＭＧ１１、及びＰＰ−Ｆ１１（ペンタ−Ｇｌｕ配列を５つのＤ−グルタミン酸残基で置換することによってＭＧ０から誘導されたペプチド類似体）、並びにＤＯＴＡ−ＭＧＳ１及びＤＯＴＡ−ＭＧＳ４と比較した、［１２５Ｉ］Ｔｙｒ１２−ガストリン−Ｉに対する結合親和性を競合アッセイで試験した。ガストリン−Ｉの放射性ヨウ素化はクロラミンＴ法を使用して実施された。キャリアの添加されていない［１２５Ｉ］Ｔｙｒ１２−ガストリン−Ｉを、ＨＰＬＣによる精製によって得、分注して−２０℃で保存した。結合アッセイは、１０mMトリス／１３９mM ＮａＣｌ ｐＨ７．４（２×２５０μl）で前処理された９６ウェルフィルタープレート（マルチスクリーンＨＴＳ−ＦＢ、メルクグループ、ダルムシュタット、ドイツ）中で実施された。アッセイのために１ウェルあたり２００，０００〜４００，０００個の数のＡ４３１−ＣＣＫ２Ｒ細胞を、１０mM ＭｇＣｌ２、１４μMのバシトラシン、及び０．５％ＢＳＡを含有している３５mM ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）（細胞膜の完全性をかく乱する低張溶液）中で調製した。細胞をトリプリケートで、漸増濃度のペプチド模倣体（０．０００３〜１０，０００nM、例えば０．００１〜１０００nM）及び［１２５Ｉ］−Ｔｙｒ１２−ガストリン−I（２０，０００〜６０，０００cpm）と共に室温で１時間インキュベートした。インキュベーションを、培地のろ過及び氷冷１０mMのトリス／１３９mM ＮａＣｌ（ｐＨ７．４）（２×２００μl）を用いた迅速な濯ぎによって中断し、フィルターをγカウンターで計数した。半最大阻害濃度（ＩＣ５０）値を、オリジンソフトウェア（Microcal社のオリジン６．１、ノーサンプトン、マサチューセッツ州）を用いて非線形回帰に従って計算し、比較のために代表的なアッセイを選択した。表６に示されているように、低いナノモル範囲のＩＣ５０値を伴うＣＣＫ２Ｒに対する高い親和性を、試験された全てのペプチド模倣体について確認することができた。
【０１４２】
【表６】
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【０１４３】
実施例５：本発明のペプチド模倣体は、改善された細胞内への内部移行を示す
これらの試験は、以前に公表されたプロトコール（von Guggenberg E et al., Bioconjug Chem 2004, 15: 864-871）に従って、１００万個のＡ４３１−ＣＣＫ２Ｒ細胞、並びに、対照としての空ベクターのみがトランスフェクトされた同細胞株（Ａ４３１モック）を使用して実施された。１％（ｖ/ｖ）のウシ血清アルブミンの補充されたＤＭＥＭを内部移行用培地として使用し、遮断試験を実施する代わりに、非特異的な細胞への取り込みを、Ａ４３１モック細胞において試験した。細胞をトリプリケートで、１０，０００〜５００，０００cpm、例えば１０，０００〜３０，０００cpmの放射性標識されたペプチド模倣体（アッセイにおいて０．４nM及び約６００fmolの最終濃度の全ペプチド模倣体に相当する）と共にインキュベートし、３７℃で２時間インキュベートした。Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ細胞及びＡ４３１モック細胞において内部移行した画分を、添加された全放射活性に対して表現した（全体に対する％）。各々の放射性標識されたペプチド模倣体について、トリプリケートで実施された１つの代表的なアッセイの平均値が示されている。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４については、２つの独立したアッセイから得られた細胞への取り込みの平均値が考慮された。
【０１４４】
本発明の放射性標識された様々なペプチド模倣体の細胞内への内部移行を、ＰＰ−Ｆ１１及びＰＰ−Ｆ１１Ｎと比較した。これらの２つのペプチド誘導体は、ペンタ−Ｇｌｕ配列を５つのＤ−グルタミン酸残基で置換することによって、及びＰＰ−Ｆ１１ＮにおいてはさらにＭｅｔをＮｌｅで置換することによって、ＭＧ０から誘導されている。１１１Ｉｎ及び１７７Ｌｕで標識されたＰＰ−Ｆ１１及びＰＰ−Ｆ１１Ｎと比較して、本発明の全ての放射性標識されたペプチド模倣体は、増加した細胞内への内部移行を示す。１１１Ｉｎで標識されたペプチド模倣体について図２において示されているように、２時間インキュベートした後に内部移行した放射性リガンド画分は、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０、及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１２において最も高くなり、数値は４７〜６８％であった。これらのペプチド模倣体はまた、最も高いレベルのタンパク質結合も示した。中程度のタンパク質結合を示すペプチド模倣体は、幾分より低い細胞取り込みを示し、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ９では３７％の数値、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２では４５％の数値であった。細胞への全ての放射性標識ペプチド模倣体の取り込みが、参照化合物である１１１Ｉｎ−ＰＰ−Ｆ１１及び１１１Ｉｎ−Ｆ１１Ｎ（２４％未満の細胞内部移行を示す）、対照ペプチドである１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１（２９％）並びに以前に研究されていた２つのペプチド誘導体（Klingler M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2017, 44: S228）である１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４（２１〜２５％）と比較してかなり高かった。ＣＣＫ２Ｒの発現を伴わないＡ４３１モック細胞における無視できる取り込み（１％未満）により、受容体特異的な細胞への取り込みが確認される。
【０１４５】
さらなる細胞への取り込みについての試験を、本発明の様々なＤＯＴＡ及びＨＹＮＩＣにコンジュゲートさせたペプチド模倣体を用いて行なうことにより、他の放射性金属を用いた放射性標識についても、驚くべき程に高い細胞への取り込みを確認した。図３に示されているように、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、６８Ｇａ、又は９９ｍＴｃのいずれで放射性標識されたペプチド模倣体についても、細胞への非常に高い取り込みが観察された。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５については６８％、６８Ｇａ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５については５４％、９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５及び１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５については６３％の数値が測定された（図３Ａ）。１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０もまた、５０％を超える細胞内への内部移行を示し、一方、１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１及び１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎについてははるかに低い取り込み（３０％未満）が判明した（図３Ｂ）。６８Ｇａ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１２は、約４０％の細胞内への内部移行を示した（図３Ｃ）。Ａ４３１モック細胞における細胞への取り込みは、１．５％未満であった。
【０１４６】
実施例６：本発明のペプチド模倣体は、インビボにおいて改善された生体内分布を示す
放射性標識された本発明のＣＣＫ２Ｒ標的化ペプチド類似体の腫瘍への取り込みを評価する生体内分布試験を、７週令の雌無胸腺ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（チャールズリバー、スルツフェルト、ドイツ）において実施した。全ての動物実験は、オーストリア動物保護法を順守し、オーストリア科学技術省の承認を得て実施された。腫瘍異種移植片の導入のために、Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ細胞及びＡ４３１モック細胞を、それぞれ右側腹部及び左側腹部の皮下に注射した（２００μl中に２００万個の細胞）。腫瘍が約０．２mlのサイズに到達したら、生体内分布試験を実施した。４匹のマウスのグループに、外側尾静脈を介して、１１１Ｉｎ（約０．２ＭＢｑ及び０．０２nmolのペプチド模倣体）、６８Ｇａ（約０．８ＭＢｑ及び０．０２〜０．０３nmolのペプチド模倣体）、１７７Ｌｕ（約０．５ＭＢｑ及び０．０２nmolのペプチド模倣体）、又は９９ｍＴｃ（約０．３ＭＢｑ及び０．０２nmolのペプチド模倣体）で標識された本発明のペプチド模倣体を静注した。注射から１時間又は４時間の期間の後（p.i.）、動物を頸椎脱臼によって屠殺し、腫瘍及び他の組織（血液、肺、心臓、筋肉、骨、脾臓、腸、肝臓、腎臓、胃、膵臓）を取り出し、秤量し、それらの放射活性をγカウンターで測定した。結果は、組織１ｇあたりに注射された活性の比率（％ＩＡ/ｇ）として表現され、臓器に対する腫瘍の活性の比を、解体した組織において測定された活性から計算した。図４では、本発明の１１１Ｉｎ標識ペプチド模倣体についての、注射から４時間後における生体内分布試験の結果を、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４と比較してまとめる（Klingler M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2017, 44: S228）。図５では、異なる放射性金属で放射性標識された、ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５及びＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５という本発明のペプチド模倣体モデルについての結果が、注射から１時間後又は４時間後という異なる時点において示されている。迅速な血液からのクリアランス、主に腎からの排泄、及び大半の組織における低く非特異的な取り込み、及び腎臓における少ない滞留と共に全体的に非常に改善された生体内分布プロファイルが、全ての放射性リガンドについて観察された。１１１Ｉｎで標識された様々なペプチド模倣体は、ＣＣＫ２Ｒ発現組織である胃（約８％ＩＡ/ｇ）及び膵臓（約２％ＩＡ/ｇ）においてより高い取り込みを示した。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ９は、腸及び肝臓（約２％ＩＡ/ｇ）、特に腎臓（約２０％ＩＡ/ｇ）において幾分より高い取り込みを示した。ＣＣＫ２Ｒにより媒介される作用についての、主要なファルマコフォアとしてのＣ末端Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２テトラペプチドの決定的な重要性から（Stone SR et al., Peptides 2007, 28: 2211-2222）、この特定のアミノ酸配列内に２つの置換を有する本発明のペプチド模倣体が、インビボでＡ４３１−ＣＣＫ２Ｒ腫瘍異種移植片において非常に特異的な腫瘍標的化を示したことは非常に驚くべきことであった。本発明の全てのペプチド模倣体は、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１（１．３±０．１％ＩＡ/ｇ）及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ４（１０．２±２．０％ＩＡ/ｇ）と比較して、２〜４０倍、例えば２．３〜３５．６倍高���腫瘍への取り込みを示した（Klingler M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2017, 44: S228）。注射から４時間後にそれぞれ４２．８±２．３％ＩＡ/ｇ及び４６．３±８．２％ＩＡ/ｇの数値を示す、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０は、腫瘍への最も高い取り込みを示した。また、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ９を用いても、腫瘍への高い取り込みが観察され（３３．９±９．５％ＩＡ/ｇ）、これはしかしながら腎臓へのより高い取り込み（２０．７±４．４％ＩＡ/ｇ）も伴った。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５及び１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２は、それぞれ、２３．５±１．３％ＩＡ/ｇ及び２５．５±４．５％ＩＡ/ｇという腫瘍への取り込みを示した。１％未満のＩＡ/ｇの数値を示す、Ａ４３１モックの腫瘍異種移植片への取り込みは非常に少なく、これにより、受容体特異的な腫瘍への高い取り込みが確認された。理論により束縛されるものではないが、より高い安定性、より高いタンパク質結合、及び改善された細胞内への内部移行によってまた、インビボにおける腫瘍へのより高い取り込みがもたらされたと考えられる。それ故、高い安定性とインビボにおける増加したタンパク質結合との組合せにより、血中の酵素的分解から放射性リガンドが最適に保護されることになると考えられ、これにより、腫瘍への極めて高い取り込みに到達することが可能となる。この印象的な腫瘍への高い取り込みはまた、ペプチド模倣体モデルとしてＤＯＴＡ−ＭＧＳ５及びＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５を使用し、様々な放射性同位体を用いた放射性標識においても確認することができた。１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（２４．５±３．１％ＩＡ/ｇ）、６８Ｇａ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（２３．３±４．７％ＩＡ/ｇ）、及び９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５（２４．８±４．４％ＩＡ/ｇ）は、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（２３．５±１．３％ＩＡ/ｇ）と同等な腫瘍への取り込みを示した。６８Ｇａ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５は、血液、肺、及び心臓において、組織への幾分より高く非特異的な取り込み（１〜２％ＩＡ/ｇ）を示したが、一方、Ｌｕ−１７７、Ｇａ−６８、及びＩｎ−１１１で標識されたＤＯＴＡ−ＭＧＳ５の腎臓への取り込み（４〜６％ＩＡ/ｇ）並びにＣＣＫ２Ｒ発現臓器である胃（５〜８％ＩＡ/ｇ）及び膵臓（２〜３％ＩＡ/ｇ）への取り込みは同等であった。９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５は、全ての放射性同位体の中で最も高い腎臓への取り込み（８％ＩＡ/ｇ）、並びに胃（１３％ＩＡ/ｇ）及び膵臓（７％ＩＡ/ｇ）におけるより高い取り込み傾向を示した。Ａ４３１モックの腫瘍異種移植片では、１％未満のＩＤ/ｇという非常に低い取り込みが、全ての放射性リガンドについて観察され、このことから、Ａ４３１−ＣＣＫ２Ｒ腫瘍異種移植片への受容体特異的取り込みが確認された。
【０１４７】
腫瘍への非常に高い取り込みと経時的な腫瘍における滞留とを組み合わせた、血中及び正常組織への低い取り込みという例外的な組合せにより、特にペプチド模倣体のＤＯＴＡ−ＭＧＳ５、ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２、ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８、及びＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０について、臓器に対する腫瘍の活性の非常に好ましい比が得られた。１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８（１１．６±３．０）＞１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０（９．３±２．０）＞１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（６．４±０．６）＞１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２（６．０±０．９）の順で、腎臓に対する腫瘍の高い比が観察された。
【０１４８】
異なる放射性同位体で放射性標識されたペプチド模倣体モデルであるＭＧＳ５の腎臓に対する腫瘍の比を比較すると、１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（６．５±１．６）＞１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（６．４±０．６）＞６８Ｇａ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５（４．１±０．３）＞９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ＭＧＳ５（３．３±１．１）の順で腎臓に対する腫瘍の比に到達した。これらの印象的な生体内分布特性は文献において依然として比類がなかった。これまで、ＣＣＫ２Ｒ標的化ペプチドの標的化プロファイルにおける同じような改善は、酵素阻害剤の共投与によってのみ達成されていた（Kaloudi A et al., Q J Nucl Med Mol Imaging 2015, 59: 287-302; Nock BA et al., J Nucl Med 2014, 55: 121-127）。放射性標識されたＣＣＫ２Ｒ標的化ペプチド類似体のみの１回投与による、腫瘍標的化の同等な改善に関する、類似した報告は全く存在しない。それ故、本発明のペプチド模倣体は、傑出した特性を示す。同じ腫瘍モデルにおいて異なる１１１Ｉｎ標識ペプチド類似体を比較した場合、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ０は、９．９±２．０％ＩＤ/ｇの腫瘍への取り込みを示し、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧ１１は３．０４±１．３０％ＩＤ/ｇの腫瘍への取り込みを示した（Laverman P et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2011, 38: 1410-1416）。
【０１４９】
一連の放射性リガンドにおいて、６つのＤ−Ｇｌｕ残基を有するＭＧ類似体である試験された１１１Ｉｎ−ＰＰ−Ｆ１１は、１．２±０．５という腎臓に対する腫瘍の比と合わせて、最も好ましい腫瘍への滞留（注射から４時間後において６．３０±２．７５％のＩＤ/ｇ）を示した。腫瘍への同じような取り込みが、１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１（６．７０±０．６０％ＩＡ/ｇ）及び１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎ（６．９０±０．８０％ＩＡ/ｇ）についても報告されている（Sauter AW et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2016, 43: S238-S239）。
【０１５０】
本発明のペプチド模倣体は、比較すると、ＭＧ０のプラスの特色（腫瘍への高い取り込み）及びＭＧ１１（腎臓への低い滞留）と合わせて、非常に改善された腫瘍への取り込み及び腎臓に対する腫瘍の比を示し、腎臓に対する腫瘍の非常に好ましい比を示す。
【０１５１】
実施例７：本発明のペプチド模倣体は、インビボにおいて増加した安定性を有する
インビボにおける放射性標識されたペプチド模倣体の安定性をさらに特徴付けるために、１１１Ｉｎで標識されたペプチド模倣体及び１７７Ｌｕで標識されたペプチド模倣体が静注された５〜６週令の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（チャールズリバー、スルツフェルト、ドイツ）において代謝試験を実施した。全ての動物実験は、オーストリア動物保護法を順守し、オーストリア科学技術省の承認を得て実施された。ラジオＨＰＬＣによる代謝のモニタリングを可能とするために、マウスに、外側尾静脈を通してより高い量の放射能（１〜２nmolの全ペプチドに相当する、５〜１５ＭＢｑの１１１Ｉｎ及び２０〜４０ＭＢｑの１７７Ｌｕ）を注射し、頸椎脱臼によって注射から１０分後又は３０分後（p.i.）に安楽死させた。血液試料を収集し、分解をラジオＨＰＬＣによって評価した。この目的のために血液試料をＡＣＮを用いて沈降させ、２０００ｇで２分間遠心分離にかけ、水（１：１/ｖ：ｖ）で希釈し、その後、フェノメネクス社のＪｕｐｉｔｅｒ ＰｒｏｔｅｏＣ１２カラム（９０Å、４μm、２５０×４．６mm）又はＢｉｓｃｈｏｆｆ社のクロマトグラフィーヌクレオシルＣ１８カラム（１２０Å、５μm、２５０×４．６mm）を具備した、放射線検出及びＵＶ検出を含む、ダイオネクス社のクロマトグラフィーシステムを使用して、様々な水／アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ勾配系を使用して、ＨＰＬＣ分析を行なった。
【０１５２】
図６に示されているように、本発明の放射性標識されたペプチド模倣体は、インビボにおいて、酵素的分解に対する非常に高い安定性を示した。注射から１０分後に血中に存在するインタクトな放射性リガンドの比率は、全ての１１１Ｉｎで標識されたペプチド模倣体について８０％以上であった（ｎ＝２；１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５；８２．７±３．３％、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５−２：８８．４±０．４％、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８：８０．０±５．２％、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ９：９３．９±１．２％、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１０：８２．３±１．８％、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１１：９８．４±０．１％）。インビボにおける安定性は、注射から５分後において僅か５％のインタクトな放射性ペプチドしか示さなかった、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ１１と比較してかなり増加し、一方、インビボにおける安定性の同じような改善は、酵素阻害剤のホスホラミドンの共注射によってのみ達成可能であった（Nock BA et al., J Nucl Med 2014, 55: 121-127）。選択された１７７Ｌｕ標識ペプチド模倣体（ｎ＝１）を用いてもさらなる試験を実施し、類似の結果が判明した。１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ５については、血中に存在するインタクトな放射性リガンドは、注射から１０分後に８５．９％に達し、注射から３０分後には７７．０％に達し、１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＭＧＳ８についての数値の結果は、注射から１０分後及び３０分後にそれぞれ８０．５％及び５６．８％であった。
【０１５３】
比較のために、インビボにおける代謝試験を、Ｌｕ−１７７で標識されたＰＰ−Ｆ１１及びＰＰ−Ｆ１１Ｎ（ｎ＝１）についても実施した。
【０１５４】
ＰＰ−Ｆ１１：ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
ＰＰ−Ｆ１１Ｎ：ＤＯＴＡ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−ＤＧｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
【０１５５】
ＰＰ−Ｆ１１及びＰＰ−Ｆ１１Ｎにおける全ての結合（「−」）がアミド結合であり、そのエナンチオマー形が明確に示されていない全てのアミノ酸がＬ型である。
【０１５６】
これらの２つのペプチド誘導体は、ペンタ−Ｇｌｕ配列を５つのＤ−グルタミン酸残基で置換することによって、及びＰＰ−Ｆ１１ＮにおいてはさらにＭｅｔをＮｌｅで置換することによって、ＭＧ０から誘導されている。２つのペプチドコンジュゲートは、代謝安定性及び薬物動態を改善する目的で開発され、２０１２年に最初に記載された（Kroselj M et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 2012, 39: S533-S534 及び WO 2015/067473 A1）。注射から１０分後の同じ時点において、１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎについて酵素に対する低い安定性が確認され、２２．３％のインタクトな放射性リガンドが血中には存在していた。注射から３０分後に１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１及び１７７Ｌｕ−ＰＰ−Ｆ１１Ｎは、それぞれ５．５％及び１２．７％の数値を示し、結果としてほぼ完全に分解された。
【０１５７】
それ故、本発明のペプチド模倣体は、例えば、先行技術のＰＰ−Ｆ１１及びＰＰ−Ｆ１１Ｎと比較して、酵素分解に対するはるかに高い安定性を示す。驚くべきことには、本発明による異なる位置における置換の組合せは、ペプチド模倣体を完全に安定化させることを可能とする。
【０１５８】
いかなる特定の理論に束縛されるものではないが、改善された細胞内への取り込みの他に、インビボにおける安定性もまた、腫瘍への改善された取り込み及び滞留の原因となり得ると現在考えられている。腫瘍への極めて高い取り込み及び腫瘍への滞留、並びに、腎臓を含むバックグラウンドに対する腫瘍の活性の非常に好ましい比により、本発明のペプチド模倣体はがんなどのＣＣＫ２Ｒ関連疾患における診断使用及び治療使用にとって特に有用となる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【配列表】
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