(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又は配列番号5で表されるアミノ酸配列を含むその断片に配列番号１〜３からなる群から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列で表示される骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む、骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記融合ペプチドは骨組織形成を誘導することを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項３】
前記副甲状腺ホルモンは配列番号４のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項４】
前記骨組織選択性ペプチドは骨シアロタンパク質Ｉ来由であることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項５】
前記融合ペプチドは、副甲状腺ホルモン又は配列番号5で表されるアミノ酸配列を含むその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドのＮ末端が結合されていることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項６】
前記骨疾患は、骨粗鬆症、骨形成不全症、高カルシウム血症、骨軟化症、パジェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、癌による骨消失及び骨壊死症、骨関節炎、リウマチ関節炎、歯周疾患及び骨折からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項７】
静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、口腔、歯周ポケット、心臓内、骨髓内、硬膜内、経皮、腸管、皮下、舌下又は局所投与用に剤形化されることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項８】
注射剤、口腔粘膜投与剤、カプセル剤、フィルム、パッチ、経皮剤及びゲル剤からなる群から選択されるいずれか一つに剤形化されることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項９】
前記融合ペプチドの含量が１０〜１００μｇであることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
【請求項１０】
副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又は配列番号5で表されるアミノ酸配列を含むその断片に配列番号１〜３からなる群から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列で表示される骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された、生体材料。
【請求項１１】
前記融合ペプチドは骨組織形成を誘導することを特徴とする、請求項１０に記載の生体材料。
【請求項１２】
前記副甲状腺ホルモンは配列番号４のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、請求項１０に記載の生体材料。
【請求項１３】
前記融合ペプチドは副甲状腺ホルモン又は配列番号5で表されるアミノ酸配列を含むその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドのＮ末端が結合されていることを特徴とする、請求項１０に記載の生体材料。
【請求項１４】
前記生体材料は、骨移植材、遮蔽膜、インプラント及び高分子支持体からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、請求項１０に記載の生体材料。
【請求項１５】
前記骨移植材は、生物由来の骨ミネラル粉末及びその多孔性ブロック、合成ヒドロキシアパタイト粉末及びその多孔性ブロック、リン酸三カルシウム粉末及びその多孔性ブロック又はヒドロキシアパタイトとリン酸三カルシウムの混合粉末及びその多孔性ブロックを主成分として含むことを特徴とする、請求項１４に記載の生体材料。
【請求項１６】
前記遮蔽膜は、コラーゲン、キトサン、ゼラチン、ポリラクチド、ポリラクチドグリコリド及びポリカプロラクトンからなる群から選択されるいずれか一つから製造されることを特徴とする、請求項１４に記載の生体材料。
【請求項１７】
前記インプラントは、チタン合金（Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ａｌｌｏｙ）、酸化チタン（Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ｏｘｉｄｅ）及びジルコニア（Ｚｉｒｃｏｎｉａ）からなる群から選択されるいずれか一つから製造されることを特徴とする、請求項１４に記載の生体材料。
【請求項１８】
前記融合ペプチドは、生体材料の単位重量当たり（１ｇ）１〜１０ｍｇが含有されることを特徴とする、請求項１０に記載の生体材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含む骨疾患予防又は治療用薬学組成物及び生体材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）は副甲状腺から分泌される８４個のアミノ酸からなったペプチドホルモンである。主な作用部位は副腎皮質であり、副腎皮質膜に結合してｃＡＭＰとＩＰ３（イノシトールトリホスフェート）、ＤＡＧ（ジアシルグリセロール）の生産を増加させる生理活性物質である。ＰＴＨはカルシウムの骨吸収及び腎臓吸収を増加させることによって血液のカルシウム濃度を増加させる。また、間欠的に投与するＰＴＨは造骨細胞を刺激して骨形成を誘導する。
【０００３】
エストロゲン、カルシトニン、ビスフォスフォネートなどの骨粗鬆症治療剤は骨吸収を抑制する機転を持っている反面、ＰＴＨは骨形成を促進する機転を持っている。骨吸収を抑制する薬剤のみでは既に進行した骨粗鬆症患者の骨量を増加させるのに充分ではないが、ＰＴＨは骨形成を直接的に促進する機転を持っているから、骨再形成が減少した第２型骨粗鬆症又は既に進行した骨粗鬆症患者に有利である。現在、骨形成機転の骨粗鬆症治療剤として許可を受けた製品としては、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社のＦｏｒｔｅｏがあり、ＰＴＨの８４個のアミノ酸のうちＮ末端の３４個のアミノ酸からなったペプチドを用いる。しかし、半減期が１時間以下と短くて１日１回の皮下注射で投与しているので、患者の順応度が低い。また、副作用として高カルシウム血症（ｈｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ）を引き起こすことがあり、２年以上長期間使えば、骨肉腫（ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ）が発生する可能性が高いため、２年以上の使用を禁止している。
【０００４】
ＰＴＨの安全性を増加させるため、ＰＴＨにＰＥＧ（アメリカ特許第６，５０６，７３０号）又はアルブミン（ＰＣＴ国際特許公開第ＷＯ２０１０／０９２１３５号）を結合させて血中で長い循環（ｌｏｎｇ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）を誘導するか、アミノ酸を置換する方法（大韓民国特許登録第１０−１１８３２６２号）で酵素による分解を減少させる方法で安全性を増加させようとする研究があった。
【０００５】
また、歯科又は整形外科領域で使われる医療機器の骨再生及び骨融合を向上させるために、生理活性因子を導入しようとする試みがあった。歯科又は整形外科の領域で使われる医療機器としては、骨移植材、遮蔽膜、コラーゲンが含有された複合材料、金属インプラント、スクリューなどがある。しかし、生理活性因子が表面で遊離して分解されるから、その効果が大きくなかった。
【０００６】
したがって、本発明者は前記のような従来技術の問題点を解決するために鋭意研究努力した結果、ＰＴＨ又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含む薬学組成物及び生体材料を開発した。前記融合ペプチドを含む薬学組成物が骨粗鬆症、骨折のような骨再生治療に効果があることを確認し、前記融合ペプチドを歯科及び整形外科用医療機器の表面に結合させてから移植することによって骨再生効果を向上させることができることを確認し、本発明を完成した。
【０００７】
この背景技術部分に記載した前記情報はただ本発明の背景に対する理解を向上させるためのものであり、本発明が属する技術分野で通常の知識を有する者に既に知られた先行技術をなす情報を含まないことがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】アメリカ特許第６５０６７３０号明細書
【特許文献２】ＰＣＴ国際特許公開第ＷＯ２０１０／０９２１３５号明細書
【特許文献３】大韓民国特許登録第１０−１１８３２６２号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、安全性、骨組織に対する選択性及び骨再生効果が向上した融合ペプチドを有効成分として含む骨疾患予防又は治療用薬学組成物を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、安全性、骨組織に対する選択性及び骨再生効果が向上した融合ペプチドを有効成分として含む組成物を投与する段階を含む骨疾患の予防又は治療方法を提供することにある。
【００１１】
本発明のさらに他の目的は、安全性、骨組織に対する選択性及び骨再生効果が向上した融合ペプチドを有効成分として含む組成物を骨疾患の予防又は治療に使う用途を提供することにある。
【００１２】
本発明のさらに他の目的は、安全性、骨組織に対する選択性及び骨再生効果が向上した融合ペプチドが結合された生体材料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記目的を達成するために、本発明は、副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む骨疾患予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００１４】
また、本発明は、副甲状腺ホルモン又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む組成物を投与する段階を含む骨疾患の予防又は治療方法を提供する。
【００１５】
また、本発明は、副甲状腺ホルモン又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む組成物を骨疾患の予防又は治療に使う用途を提供する。
【００１６】
また、本発明は、副甲状腺ホルモン又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された生体材料を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】（Ａ）は皮下注射した場合、（Ｂ）は静脈注射した場合、ＰＴＨ及びＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの時間による血液内濃度を示したグラフである（■はＰＴＨ、●はＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチド）。
【００１８】
【図２】（Ａ）は骨粗鬆症誘発マウスにＰＴＨ及びＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを注入した後の大腿骨のマイクロシーティー（ｍｉｃｒｏＣＴ）イメージ、（Ｂ）は骨ミネラル密度（ＢＭＤ）の測定結果である（■は無処理、●はＰＴＨ、▲はＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチド）。
【００１９】
【図３】骨粗鬆症誘発マウスにＰＴＨ及びＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを注入した後の血液内カルシウム濃度の測定結果である（■は無処理、●はＰＴＨ、▲はＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチド）
【００２０】
【図４】兎の頭蓋骨にＰＴＨ及びＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された骨移植材を移植した後、新生骨の組織学的観察結果と組織計測学的結果である。
【００２１】
【図５】蛍光で標識したＰＴＨ及びＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドのインプラントの周囲骨組織への分布結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
他に定義しない限り、本明細書で使用された全ての技術的及び科学的用語は本発明が属する技術分野で熟練した専門家によって通常的に理解されるものと同一の意味を有する。一般に、この明細書で使用された命名法は当該技術分野でよく知られており、通常的に使われるものである。
【００２３】
本発明の一実施例において、副甲状腺ホルモン又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含む薬学組成物を骨粗鬆症誘発マウスに注入することにより、副甲状腺ホルモンより骨密度が増加し、骨再生効果が向上したことを確認した。
【００２４】
したがって、本発明は、一観点で、副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む骨疾患予防又は治療用薬学組成物に関する。
【００２５】
本発明は、他の観点で、副甲状腺ホルモン又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む組成物を投与する段階を含む骨疾患の予防又は治療方法に関する。
【００２６】
本発明は、さらに他の観点で、副甲状腺ホルモン又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む組成物を骨疾患の予防又は治療に使う用途に関する。
【００２７】
本発明において、前記融合ペプチドは骨組織形成を誘導することを特徴とすることができる。
【００２８】
本発明において、前記ＰＴＨは配列番号４のアミノ酸配列で表示されることを特徴とすることができる。
【００２９】
本発明において、前記断片は配列番号５のアミノ酸配列で表示されることを特徴とすることができる。
【００３０】
配列番号４：ＳＶＳＥＩＱＬＭＨ  ＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥ  ＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱ  ＤＶＨＮＦＶＡＬＧＡ  ＰＬＡＰＲＤＡＧＳＱ  ＲＰＲＫＫＥＤＮＶＬ  ＶＥＳＨＥＫＳＬＧＥ  ＡＤＫＡＤＶＮＶＬＴ  ＫＡＫＳＱ
【００３１】
配列番号５：ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ
【００３２】
本発明において、前記ＰＴＨ又はその断片は大腸菌又は酵母で発現した組み換えＰＴＨ、ＰＴＨ関連ペプチド（ＰＴＨｒｐ）又はペプチド合成（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）方法で製造されたものを使うことができる（Hefti et al., Clinical Science, 62, 389-396(1982); Liu et al., J. Bone Miner. Res., 6: 10, 1071-1080(1991); Hock et al., J. Bone. Min. Res., 7: 1. 65-71(1992)）。
【００３３】
本発明において、前記骨組織選択性ペプチドは配列番号３のアミノ酸配列で表示されることを特徴とすることができる。
【００３４】
本発明において、前記骨組織選択性ペプチドは骨シアロタンパク質Ｉ来由であることを特徴とすることができるが、これに制限されるものではない。
【００３５】
本発明において、前記ＰＴＨに骨組織選択性を付与するペプチドは骨の主要構成成分であるコラーゲンとの結合力を有するペプチドである。骨組織はコラーゲン纎維にミネラル成分が沈着した構造を成している。よって、骨組織選択性ペプチドによってＰＴＨの骨組織内への移動を増加させる。
【００３６】
本発明の一実施例において、使用した骨組織選択性を付与するペプチドは細胞外基質を構成するタンパク質から活性部位のアミノ酸配列を分離抽出したものであり、抽出後に化学的修飾によって活性構造を維持するようにした。具体的に、前記ペプチドは人の骨シアロタンパク質Ｉ  １４９−１６９位置のアミノ酸配列ＹＧＬＲＳＫＳ（配列番号１）、ＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴ（配列番号２）、ＹＧＬＲＳＫＳＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴ（配列番号３）のいずれか一つのアミノ酸配列を必須に含むようにした。化学的にＰＴＨに結合しやすくするために、前記アミノ酸配列の中で選択されたアミノ酸配列のＮ末端部位にシステインをＣＧＧ−又はＣＧＧＧＧＧ−スペーサーの形態として付け加え、化学的に合成させることによってペプチドを製造した。
【００３７】
本発明において、前記融合ペプチドはＰＴＨ又はその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドのＮ末端が結合されていることを特徴とすることができる。
【００３８】
前記ＰＴＨ又はその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドを固相ペプチド合成法（ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）又は化学架橋剤を用いて連結することができるが、これに制限されるものではない。
【００３９】
本発明において、前記ＰＴＨ又はその断片のＣ末端と骨組織選択性ペプチドのＮ末端を連結するために、化学架橋剤を使うことができる。ここで、ペプチド末端のシステインと結合することができる官能基、例えばＳＨ基を導入するかアミン（Ａｍｉｎｅ、ＮＨ２）が形成されるように処理することで、今後の架橋剤による架橋反応に円滑に適用されるようにすることができる。
【００４０】
前記化学的架橋剤は、１，４−ｂｉｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔａｎｅ（ＢＭＢ）、１，１１−ｂｉｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｔｅｔｒａｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ（ＢＭ［ＰＥＯ］４）、１−ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＥＤＣ）、ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−４−［Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙ−［６−ａｍｉｄｏｃａｐｒｏａｔｅ］］（ＳＭＣＣ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）、ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ６−［３−（２−ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）−ｐｒｏｐｉｏｎａｍｉｄｏ］ｈｅｘａｎｏａｔｅ］（ＳＰＤＰ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＰＤＰ）、ｍ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｅｓｔｅｒ（ＭＢＳ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＭＢＳ）、ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ［４−（ｐ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔｙｒａｔｅ］（ＳＭＰＢ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＰＢ）などを使うことができるが、これに制限されるものではない。
【００４１】
ＰＴＨと骨組織選択性ペプチドの結合反応後に架橋剤を除去するために、限外濾過のような精製過程を経なければならなく、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドは純度が９０％以上、より好ましくは純度９８％以上でなければならない。
【００４２】
本発明において、前記骨疾患は、骨粗鬆症、骨形成不全症、高カルシウム血症、骨軟化症、パジェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、癌による骨消失及び骨壊死症、骨関節炎、リウマチ関節炎、歯周疾患及び骨折からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とすることができるが、これに制限されるものではない。
【００４３】
本発明において、前記骨疾患予防又は治療用薬学組成物は、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、口腔、歯周ポケット、心臓内、骨髓内、硬膜内、経皮、腸管、皮下、舌下又は局所投与用に剤形化することを特徴とすることができるが、これに制限されるものではない。
【００４４】
本発明において、前記骨疾患予防又は治療用薬学組成物は、注射剤、口腔粘膜投与剤、カプセル剤、フィルム、パッチ、経皮剤及びゲル剤からなる群から選択されるいずれか一つに剤形化することを特徴とすることができるが、これに制限されるものではない。前記薬学組成物は局所、皮下注射、静脈注射又は非経口で投与されることができ、一般的に活性成分として本発明によるＰＴＨ又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを治療有効量で含むことを特徴とすることができる。
【００４５】
本発明において、前記薬学組成物は薬学的に許容される不活性無機又は有機賦形剤を使う公知の方法で製造することができる。注射液の製造において賦形剤としては、水、アルコール、グリセロール、ポリオール、植物性オイルなどがあるが、これに制限されるものではない。注射剤は保存剤、無痛化剤、可溶化剤及び安定化剤を混合して使うことができる。局所投与用製剤の場合には、ゲル形又はフィルム形に製造することができ、ゲル基材としては、コラーゲン、キトサン、ヒアルロン酸、アルギン酸、プロピレングリコール、プロピレングリコールアルギン酸、ポロキサマー、コンドロイチン硫酸などを使うことが好ましい。
【００４６】
本発明において、前記薬学組成物は、前記融合ペプチドの含量が１０〜１００μｇであることを特徴とすることができる。ＰＴＨ又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを１０〜１００μｇの容量で１回に使われる皮下注射又は静脈注射に使うことができる。
【００４７】
本発明の一実施例において、ＰＴＨ又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された骨移植材を用いて骨再生効果を確認した。
【００４８】
したがって、本発明は、さらに他の観点で、副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された生体材料に関する。
【００４９】
本発明において、前記融合ペプチドは骨組織形成を誘導することを特徴とすることができる。
【００５０】
本発明において、前記ＰＴＨは配列番号４のアミノ酸配列で表示されることを特徴とすることができる。
【００５１】
本発明において、前記断片は配列番号５のアミノ酸配列で表示されることを特徴とすることができる。
【００５２】
本発明において、前記骨組織選択性ペプチドは配列番号３のアミノ酸配列で表示されることを特徴とすることができる。
【００５３】
本発明において、前記融合ペプチドはＰＴＨ又はその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドのＮ末端が結合されていることを特徴とすることができる。
【００５４】
本発明において、前記ＰＴＨ又はその断片と骨組織選択性ペプチドは架橋剤によって結合されることを特徴とすることができる。前記架橋剤は、１，４−ｂｉｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔａｎｅ（ＢＭＢ）、１，１１−ｂｉｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｔｅｔｒａｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ（ＢＭ［ＰＥＯ］４）、１−ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＥＤＣ）、ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−４−［Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙ−［６−ａｍｉｄｏｃａｐｒｏａｔｅ］］（ＳＭＣＣ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）、ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ６−［３−（２−ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）−ｐｒｏｐｉｏｎａｍｉｄｏ］ｈｅｘａｎｏａｔｅ］（ＳＰＤＰ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＰＤＰ）、ｍ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｅｓｔｅｒ（ＭＢＳ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＭＢＳ）、ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ［４−（ｐ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔｙｒａｔｅ］（ＳＭＰＢ）及びそのスルホン化塩（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＰＢ）からなる群から選択されることを特徴とすることができるが、これに制限されるものではない。
【００５５】
本発明において、前記生体材料は、骨移植材、遮蔽膜、インプラント及び高分子支持体からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とすることができる。当該分野で使う全ての種類及び形態の骨移植材、遮蔽膜、インプラント、高分子支持体を使うことができる。
【００５６】
前記骨移植材は、好ましくは自己骨、牛骨及び豚骨から起因する生物由来の骨ミネラル粉末及びその多孔性ブロック、合成ヒドロキシアパタイト粉末及びその多孔性ブロック、リン酸三カルシウム粉末及びその多孔性ブロック又はヒドロキシアパタイトとリン酸三カルシウムの混合粉末及びその多孔性ブロックを主成分として含むことを特徴とすることができる。
【００５７】
前記遮蔽膜は、好ましくはコラーゲン、キトサン、ゼラチン、ポリラクチド、ポリラクチドグリコリド又はポリカプロラクトンから製造することができるが、これに制限されるものではない。
【００５８】
前記インプラントは、チタン合金（Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ａｌｌｏｙ）、酸化チタン（Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ｏｘｉｄｅ）又はジルコニア（Ｚｉｒｃｏｎｉａ）から製造されることを特徴とすることができるが、これに制限されるものではない。歯科用インプラント及び整形外科用インプラントを含み、整形外科用インプラントは、骨節合用板（ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  ｆｉｘａｔｉｏｎ  ｐｌａｔｅ）、骨節合用ネジ（ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  ｂｏｎｅ  ｓｃｒｅｗ）、骨髓内固定棒（ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  ｂｏｎｅ  ｎａｉｌ）などを含む。
【００５９】
本発明において、前記融合ペプチドの容量は生体材料の単位重量当たり（１ｇ）１〜１０ｍｇが含有されることを特徴とすることができる。より好ましくは、生体材料の単位重量当たり２〜８ｍｇが含有されることを特徴とすることができる。
【００６０】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例はただ本発明を例示するためのもので、本発明の範囲がこれら実施例によって制限されるものと解釈されないことは当該分野で通常の知識を有する者に明らかであろう。
【００６１】
製造例１：固相ペプチド合成によるＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの製造
【００６２】
Ｎ末端から順に骨組織選択性ペプチド（配列番号３）とＰＴＨ断片（配列番号５）を連結してＦ−ｍｏｃ固相化学合成方法でペプチドを合成した。合成されたペプチド配列はレジンから切断し、洗浄過程を経て凍結乾燥した後、液体クロマトグラフィーによって分離精製した。精製されたペプチドはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析によって分子量を確認した。
【００６３】
対照例１：ＰＴＨ断片の製造
【００６４】
ＰＴＨ断片（配列番号５）を連結してＦ−ｍｏｃ固相化学合成方法でペプチドを合成した。合成されたペプチド配列はレジンから切断し、洗浄過程を経て凍結乾燥した後、液体クロマトグラフィーによって分離精製した。精製されたペプチドはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析によって分子量を確認した。
【００６５】
製造例２：架橋反応によるＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの製造
【００６６】
ＰＴＨ断片（配列番号５）１ｍｇを共役反応バッファー（１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０２％アジ化ナトリウム、１ｍＭ  ＥＤＴＡ）１ｍｌに溶解した。Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、４．８ｍｇ／ｍｌ）溶液４０μｌをＰＴＨに少量ずつ加え、常温で１時間又は２時間遮光して反応させた。分画分子量５００ｋＤａのメンブレインで限外濾過を実施して未反応のｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣを除去した。これに配列番号３のペプチドを１ｍｇ／ｍｌで共役バッファーに溶かした溶液を加え、４〜８時間遮光して反応させた。ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを分画分子量３０００ｋＤａのメンブレインで限外濾過して未反応の配列番号３のペプチドを除去した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦとＳＤＳ−ＰＡＧＥを用い、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの分子量を確認した。ＰＴＨ断片の分子量４１１７．８、骨組織選択性ペプチドの分子量２３６５、Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣによって増加する分子量２１９．０９を考慮するとき、理論的な分子量は６７０１．８９以上でなければならない。
【００６７】
製造例３：ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含む薬学組成物の製造
【００６８】
製造例２のＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む薬学組成物を製造した（表１）。
【００６９】
【表１】
0006874124.tif 000002
【００７０】
対照例２：ＰＴＨを含む薬学組成物の製造
【００７１】
対照例１のＰＴＨを有効成分として含む薬学組成物を製造した（表２）。
【００７２】
【表２】
0006874124.tif 000003
【００７３】
製造例４：ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを結合させた骨移植材の製造
【００７４】
牛骨来由の骨移植材１ｇをヘキサンに溶解した３−アミノプロピルトリエトキシシラン（３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ、ＡＰＴＥＳ、１％）に放置した後、ヘキサンで３回洗浄した。これによって表面にアミン残基が形成され、これに架橋剤ＢＭＢを添加して結合させた。架橋剤が結合された骨移植材粒子１ｇを製造例２のＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチド２０ｍｇと１２時間反応させた後、メタノールで３回洗浄し、精製水で１０回洗浄することにより、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが固定された骨移植材を得た。
【００７５】
対照例３：ＰＴＨを結合させた骨移植材の製造
【００７６】
牛骨来由の骨移植材１ｇをヘキサンに溶解した３−アミノプロピルトリエトキシシラン（３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ、ＡＰＴＥＳ、１％）に放置した後、ヘキサンで３回洗浄した。これによって表面にアミン残基が形成され、これに架橋剤ＢＭＢを添加して結合させた。架橋剤が結合された骨移植材粒子１ｇを対照例１のＰＴＨ２０ｍｇと１２時間反応させた後、メタノールで３回洗浄し、精製水で１０回洗浄することにより、ＰＴＨが固定された骨移植材を得た。
【００７７】
製造例５：ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドのゲル型組成物の製造
【００７８】
製造例２のＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチド２０ｍｇと２％コラーゲン溶液１ｍｌを均一に混合し、注射器に充填した。
【００７９】
対照例４：ＰＴＨのゲル型組成物の製造
【００８０】
対照例１のＰＴＨ２０ｍｇと１〜３％コラーゲン溶液１ｍｌを均一に混合し、注射器に充填した。
【００８１】
実施例１：ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの半減期確認試験
【００８２】
対照例２のＰＴＨを含む組成物と製造例３のＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含む組成物をＳＤ（Ｓｐｒａｕｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）雄性ラット（体重３００〜３５０ｇ）に１００μｇ／ｋｇの濃度で皮下投与し、０、２、５、１０、２０、３０、６０、１８０、３６０、７２０、１４４０分に血液を採取した。また、１００μｇ／ｋｇの濃度で頚静脈に投与し、０、５、１０、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０及び３６０分に血液を採取し、１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して血漿を分離した。ＰＴＨの濃度は酵素免疫分析法（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ（Ｉｍｍｕｔｏｐｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｃｌｅｍｅｎｔｅ，ＣＡ）を用いて測定した。
【００８３】
図１はＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの時間による血液内濃度を示した結果である。皮下注射した場合、ＰＴＨは３６０分後には測定されなかったが、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドは１４４０分まで測定された。静脈注射した場合、ＰＴＨは１８０分後には測定されなかったが、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドは３６０分まで測定された。これは、ＰＴＨよりはＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの半減期が増加したことを意味する。
【００８４】
実施例２：ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの骨粗鬆症動物における効能試験
【００８５】
６週齢のＩＣＲマウスの大腿部にキシラジン（Ｒｏｍｐｕｎ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ社、大韓民国）１０ｍｇ／ｋｇ、ケタミン（Ｋｅｔａｌａｒ（登録商標）、柳韓洋行、大韓民国）１００ｍｇ／ｋｇを混合して筋肉注射で全身痲酔した後、両側腎臓の下方に存在する卵巣を用心深く除去した。通常の方法で縫合し、ゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ、中外製薬、大韓民国）３ｍｇ／ｋｇを筋肉注射した。
【００８６】
卵巣切除３ヶ月後、骨消失有無を確認し、対照例２のＰＴＨを含む薬学組成物は２０μｇ／ｋｇで毎日３ヶ月間投与し、製造例３のＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含む薬学組成物は８０μｇ／ｋｇで週１回６ヶ月間投与した。骨粗鬆症は誘発したが、治療しなかった群に比べ、以後に起こる骨密度の変化を評価した。
【００８７】
図２は骨粗鬆症誘発マウスにＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを注入した後、大腿骨のマイクロシーティー（ｍｉｃｒｏＣＴ）イメージと骨ミネラル密度（ＢＭＤ）の測定結果である。卵巣切除後に治療しなかった群（ｎｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）では有意的な骨消失によって骨密度が減少した。ＰＴＨを処理した群よりは、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを処理した群では骨密度が増加したように見えた（図２（Ａ））。全体大腿骨頭内のミネラル含有量である骨ミネラル密度（ＢＭＤ、Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｄｅｎｓｉｔｙ）の変化量を測定した結果（図２（Ｂ））、卵巣切除後に治療しなかった群（ｎｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）でＢＭＤの変化量は減少することが分かった。ＰＴＨ処理群は１ヶ月までＢＭＤ変化量が増加してから２ヶ月から減少した。ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドは６ヶ月までＢＭＤ値が増加することが分かった。これは、ＰＴＨよりは、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが骨再生にもっと効果があることを意味する。
【００８８】
図３は骨粗鬆症誘発マウスにＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを注入した後、血液内カルシウムの濃度変化を測定した結果である。血中カルシウム濃度はＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍＴＭ  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）を用いて測定した。ＰＴＨは１ヶ月にカルシウム濃度を増加させたが、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドは血中カルシウム濃度を増加させなかった。ＰＴＨが全身に影響を与える作用の一つが骨及び腎臓に影響を与えて血中カルシウム濃度を増加させることである。よって、ＰＴＨを長期間投与する場合、高カルシウム血症（ｈｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ）を誘発する副作用を引き起こす。しかし、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドは腎臓には影響がなく、骨組織にだけ影響を与えて、血中カルシウム濃度を増加させる作用をしないことを確認した。
【００８９】
実施例３：ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの骨再生試験
【００９０】
痲酔させた兎（Ｎｅｗｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ  ｒａｂｂｉｔ、種名：ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）の頭蓋骨部位に直径１０ｍｍの円形骨欠損部を形成させ、前記骨欠損部に製造例４及び対照例３で製造された骨移植材１００ｍｇを移植し、骨膜と皮膚を二重縫合した。移植３週後に動物を犠牲させ、採取した標本はホルマリン溶液に入れて固定させた後、組織を包埋して厚さ２０μｍの試片に製作した。製作された試片はヘマトキシリンエオジン（ヘマトキシリンエオジン）で染色して非脱灰標本を製作した。製作された標本は光学顕微鏡で観察して写真撮影を実施した。
【００９１】
図４は兎の頭蓋骨にＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された骨移植材を移植した後、新生骨の組織学的観察結果と組織計測学的結果である。ＰＴＨよりはＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの骨再生効果が増加した。したがって、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを表面に結合した骨移植材がＰＴＨを結合した骨移植材より骨再生効果が高いと期待される。
【００９２】
実施例４：ＰＴＨとＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの骨移行確認試験
【００９３】
製造例２のＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドにシアニン５．５を結合させ、未反応のシアニン５．５を除去した。シアニン５．５が標識されたＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを製造例５の方法で製造した。対照例１のＰＴＨをシアニン５．５と結合させ、未反応のシアニン５．５を除去した。対照群ではシアニン５．５が標識されたＰＴＨを対照例４の方法で製造した。
【００９４】
ビーグル犬の歯牙を抜歯してから８週後、インプラントを移植し、手術部位にシアニン５．５が標識されたＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを含むコラーゲンゲル１００μＬを注入し、縫合した。移植３週後に動物を犠牲させ、採取した標本はホルマリン溶液に入れて固定させた後、組織を包埋して厚さ２０μｍの試片に製作した。製作された試片はヘマトキシリンエオジンで染色して非脱灰標本を製作した。製作された標本は共焦点顕微鏡（Ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）で観察して写真撮影を実施し、インプラントの周囲の一定面積当たり蛍光強度を測定した。
【００９５】
図５は蛍光で標識したＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドのインプラントの周囲骨組織への分布を示す。ＰＴＨを移植したときは周辺骨組織に蛍光がほとんど観察されなかったが、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドの場合、周辺の骨組織に分布された蛍光が多く観察された。これは、ＰＴＨと比較するとき、ＰＴＨに骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが骨組織と選択的に結合することを証明するものである。
【産業上の利用可能性】
【００９６】
本発明によれば、ＰＴＨ又はその断片に骨組織選択性を有するペプチドを導入して骨組織に対する選択性を増加させ、骨再生効果を増加させることができる。また、ＰＴＨの半減期を増加させ、結果的に投与間隔を増加させることにより、患者の順応度を増加させることができる骨疾患予防又は治療用薬学組成物を開発することができる。また、歯科又は整形外科領域で使われる生体材料に骨組織選択性ペプチドが結合されているＰＴＨを適用して骨再生効果をもっと増加させるのに有用である。
【００９７】
以上で本発明内容の特定部分を詳細に記述したが、当該分野で通常の知識を有する者にとってこのような具体的記述はただ好適な実施様態であるだけ、これによって本発明の範囲が制限されるものではない点は明らかであろう。よって、本発明の実質的な範囲は添付の請求範囲及びその等価物によって定義されると言える。
本発明は、一態様において以下を提供する。
[項目１]
副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドを有効成分として含む、骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目２]
前記融合ペプチドは骨組織形成を誘導することを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目３]
前記副甲状腺ホルモンは配列番号４のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目４]
前記断片は配列番号５のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目５]
前記骨組織選択性ペプチドは配列番号３のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目６]
前記骨組織選択性ペプチドは骨シアロタンパク質Ｉ来由であることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目７]
前記融合ペプチドは、副甲状腺ホルモン又はその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドのＮ末端が結合されていることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目８]
前記骨疾患は、骨粗鬆症、骨形成不全症、高カルシウム血症、骨軟化症、パジェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、癌による骨消失及び骨壊死症、骨関節炎、リウマチ関節炎、歯周疾患及び骨折からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目９]
静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、口腔、歯周ポケット、心臓内、骨髓内、硬膜内、経皮、腸管、皮下、舌下又は局所投与用に剤形化されることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目１０]
注射剤、口腔粘膜投与剤、カプセル剤、フィルム、パッチ、経皮剤及びゲル剤からなる群から選択されるいずれか一つに剤形化されることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目１１]
前記融合ペプチドの含量が１０〜１００μｇであることを特徴とする、項目１に記載の骨疾患予防又は治療用薬学組成物。
[項目１２]
副甲状腺ホルモン（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ、ＰＴＨ）又はその断片に骨組織選択性ペプチドが結合されている融合ペプチドが結合された、生体材料。
[項目１３]
前記融合ペプチドは骨組織形成を誘導することを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
[項目１４]
前記副甲状腺ホルモンは配列番号４のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
[項目１５]
前記断片は配列番号５のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
[項目１６]
前記骨組織選択性ペプチドは配列番号３のアミノ酸配列で表示されることを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
[項目１７]
前記融合ペプチドは副甲状腺ホルモン又はその断片のＣ末端に骨組織選択性ペプチドのＮ末端が結合されていることを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
[項目１８]
前記生体材料は、骨移植材、遮蔽膜、インプラント及び高分子支持体からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
[項目１９]
前記骨移植材は、生物由来の骨ミネラル粉末及びその多孔性ブロック、合成ヒドロキシアパタイト粉末及びその多孔性ブロック、リン酸三カルシウム粉末及びその多孔性ブロック又はヒドロキシアパタイトとリン酸三カルシウムの混合粉末及びその多孔性ブロックを主成分として含むことを特徴とする、項目１８に記載の生体材料。
[項目２０]
前記遮蔽膜は、コラーゲン、キトサン、ゼラチン、ポリラクチド、ポリラクチドグリコリド及びポリカプロラクトンからなる群から選択されるいずれか一つから製造されることを特徴とする、項目１８に記載の生体材料。
[項目２１]
前記インプラントは、チタン合金（Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ａｌｌｏｙ）、酸化チタン（Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ｏｘｉｄｅ）及びジルコニア（Ｚｉｒｃｏｎｉａ）からなる群から選択されるいずれか一つから製造されることを特徴とする、項目１８に記載の生体材料。
[項目２２]
前記融合ペプチドの容量は、生体材料の単位重量当たり（１ｇ）１〜１０ｍｇが含有されることを特徴とする、項目１２に記載の生体材料。
【図１】
0006874124.tif 000004
【図２】
0006874124.tif 000005
【図３】
0006874124.tif 000006
【図４】
0006874124.tif 000007
【図５】
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【配列表】
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