(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
人に対する医療行為を除く、ヘリコバクター・ピロリ菌株の増殖を阻害する方法であって、ヘリコバクター・ピロリ菌株を、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗ以上の粘液酸ガレート、及び
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
を含有する組成物と接触させて、ヘリコバクター・ピロリ菌株の増殖を阻害する工程を含み、前記粘液酸ガレートが、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、方法。
【請求項２】
バチルス・コアギュランス菌株がバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
バチルス・コアギュランスの有効用量が単位用量当たり１×１０6〜１×１０14コロニー形成単位である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
バチルス・コアギュランスの有効用量が単位用量当たり２×１０9コロニー形成単位である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ菌株の症状および感染症を治療管理するための医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗ以上の粘液酸ガレート、及び
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
を含有し、ヘリコバクター・ピロリの症状および感染症の低下をもたらし、前記粘液酸ガレートが、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項６】
バチルス・コアギュランス菌株がバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
バチルス・コアギュランスの有効用量が単位用量当たり１×１０6〜１×１０14コロニー形成単位である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
バチルス・コアギュランスの有効用量が単位用量当たり２×１０9コロニー形成単位である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項９】
Ｈ．ピロリ感染症の症状が、胃炎、腹部の疼痛または灼熱痛、悪心、食欲不振、頻繁なおくび、腹部膨満、口臭、および意図しない体重減少からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
Ｈ．ピロリ菌株の感染症が、流行性胃炎、低酸症、胃十二指腸炎症、潰瘍、消化不良、胃癌および胃リンパ腫、胃食道逆流症および冠動脈性心疾患などの胃十二指腸外障害、酒さおよび特発性蕁麻疹などの皮膚障害、自己免疫性甲状腺疾患および血小板減少性紫斑病、鉄欠乏性貧血、レイノー現象、強皮症、片頭痛、ならびにギランバレー症候群からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記医薬組成物が、賦形剤、アジュバント、希釈剤、および担体から選択される１つ以上とともに製剤化されており、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、またはキャンディー剤の形態である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ菌株の症状および感染症を治療管理するためのキットであって、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗ以上の粘液酸ガレート、
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
を個別に含有し、ヘリコバクター・ピロリの症状および感染症の低下をもたらし、前記粘液酸ガレートが、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、キット。
【請求項１３】
非ヒト哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ菌株の症状および感染症を治療管理する方法であって、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗ以上の粘液酸ガレート、及び
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
を含有する組成物を前記非ヒト哺乳動物に投与して、ヘリコバクター・ピロリの症状および感染症の低下をもたらす工程を含み、前記粘液酸ガレートが、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、方法。
【請求項１４】
哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ菌株の症状および感染症を治療管理するための医薬であって、ヘリコバクター・ピロリの症状および感染症の低下をもたらす医薬を調製するための、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗ以上の粘液酸ガレート、ここで、前記粘液酸ガレートは、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、及び
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年６月６日に出願された米国仮出願第６２５１６０６６号の優先権を主張するＰＣＴ出願である。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般的に、抗菌組成物に関する。より具体的には、本発明は、プロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６およびβ−グルコガリンを含有する組成物を使用したヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）感染症の管理に関する。
【背景技術】
【０００３】
先行技術の説明
ヘリコバクター・ピロリは、胃の内壁に感染し、胃潰瘍および腸潰瘍の大部分の原因となっている細菌である。世界の人口の半分以上に存在しているが、大半は、Ｈ．ピロリ感染症を患っていることに気づいておらず、Ｈ．ピロリに対する生来の抵抗性のために何の症状も示さない。症状が認められる場合、胃炎、腹部の疼痛または灼熱痛、悪心、食欲不振、頻繁なおくび、腹部膨満、口臭、および意図しない体重減少を呈する。Ｈ．ピロリは、流行性胃炎、低酸症、胃十二指腸炎症、潰瘍、消化不良、胃癌および胃リンパ腫、胃食道逆流症および冠動脈性心疾患などの胃十二指腸外障害、酒さおよび特発性蕁麻疹などの皮膚障害および自己免疫性甲状腺疾患および血小板減少性紫斑病、鉄欠乏性貧血、レイノー現象、強皮症、片頭痛、ならびにギランバレー症候群を含む多くの疾患状態に関連付けられる。
【０００４】
Ｈ．ピロリの感染症および病因が、以下の先行技術文献によって詳細に考察されている：
１．  Helicobacter pylori (H. pylori) infection, https://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/h-pylori/symptoms-causes/syc-20356171、２０１８年３月１日アクセス
２．  Taylor et al., (1991). The Epidemiology of Helicobacter pylori Infection, Epidemiologic Reviews 13(1):42-59
３．  Parsonnet et al., (1991). Helicobacter pylori Infection and the Risk of Gastric Carcinoma, N Engl J Med 325:1127-1131
４．  Kusters et al., (2006). Pathogenesis of Helicobacter pylori Infection, Clinical Microbiology Reviews, 19(3):449-490
Ｈ．ピロリの現在の処置には、オメプラゾール、アモキシシリン、およびクラリスロマイシン（ＯＡＣ）、１０日間；次サリチル酸ビスマス、メトロニダゾール、およびテトラサイクリン（ＢＭＴ）、１４日間；ならびに１０日間または１４日間のいずれかの処置が承認されているランソプラゾール、アモキシシリン、およびクラリスロマイシン（ＬＡＣ）を含む三剤治療を含む。しかし、他の処置方法と同様に、Ｈ．ピロリ感染症を処置するために投与される薬物は、下痢、頭痛、悪心、嘔吐、胃痛、口内の異常なまたは不快な味覚、便秘、濃い色の便、口内乾燥、口渇の増加、膣の痒みまたは分泌物を含む副作用を示す。したがって、安全で信頼できる代替法を見出す必要性がある。現在、Ｈ．ピロリ感染症に対して有効な天然分子の同定に関する研究が進行中である。Ｈ．ピロリ感染症の予防および処置における天然分子の役割が以下の先行技術文献に報告されている：
１．  Bonifacio et al., (2014). Antimicrobial activity of natural products against Helicobacter pylori: a review, Ann Clin Microbiol Antimicrob, 13:54
２．  Vetvika et al., (2016). Effects of curcumin on Helicobacter pylori infection, Ann Transl Med. 4(24): 479
３．  Hajimahmoodi et al., (2011). In vitro antibacterial activity of some Iranian medicinal plant extracts against Helicobacter pylori, Natural Product Research, 25(11):1059-1066
４．  Tharmalingam et al., (2014). Inhibitory effect of piperine on Helicobacter pylori growth and adhesion to gastric adenocarcinoma cells, Infect Agent Cancer, 9: 43
【０００５】
プロバイオティクス細菌は、三剤治療と組み合わせてＨ．ピロリの増殖を阻害することも報告されている（Wang et al., (2014) The clinical trial on the eradication of Helicobacter pylori using Bacillus coagulans tablets and triple therapy, Chinese Journal of Microecology, 2013-04, http://en.cnki.com.cn/Article_en/CJFDTOTAL-ZGWS201304014.htm、２０１８年５月２４日アクセス）。
【０００６】
Ｈ．ピロリの大半の菌株に対して有効である安全で信頼できる天然分子が欠けている。加えて、Ｈ．ピロリ感染症の処置において単独で使用することができるプロバイオティクス菌株も当然のことである。さらに、プロバイオティクスまたはその製品の生物学的効果は菌株特異的であり、属、種、および菌株間で一般化することができないことは科学技術分野において周知である（Probiotics: In Depth/NCCIH, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health）。したがって、Ｈ．ピロリ感染症の管理のために有効に使用することができる、優れたプロバイオティクス菌株、その細胞外産物、および／または天然植物分子を見出す必要性が存在する。本発明は、Ｈ．ピロリ感染症の管理のための、βグルコガリンおよびプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を個別にまたは組み合わせて含有する新規の非自明な組成物を開示することにより上記の問題を解決する。
本発明の主な目的は、Ｈ．ピロリの増殖を阻害するためのβグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ  ５８５６を含有する組成物を開示することである。
本発明の別の目的は、Ｈ．ピロリ感染症の管理のためのβグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を含有する組成物を開示することである。
本発明は、上記の態様を満たし、さらに関連する利点を提供する。
【０００７】
生物学的材料の寄託
本出願で言及されている受託番号ＭＴＣＣ５８５６を有する生物材料バチルス・コアギュランスは、２０１３年９月１９日に、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＆  Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ（ＭＴＣＣ）、ＣＳＩＲ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、セクター３９−Ａ（インド、チャンディーガル１６００３６）で寄託された。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、ヘリコバクター・ピロリの増殖を阻害し、その感染症を管理するための、少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）を含有する組成物を含有する組成物であって、さらに、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸を含む、約１０％ｗ／ｗから６０％ｗ／ｗを超える全粘液酸ガレート、ならびにプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を個別にまたは組み合わせて含む、組成物を開示する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ローン法（ｌａｗｎ  ｍｅｔｈｏｄ）においてスポットを追跡することにより、Ｈ．ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２に対するＢ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の抗菌活性を示す培養プレートの画像である。
【図２】ウェル拡散法（ｗｅｌｌ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）に従うことによる、Ｈ．ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２に対するＢ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の抗菌活性を示す培養プレートの画像である。
【図３】Ｂ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６およびβグルコガリンを含有する組合せによるＨ．ピロリの増殖の阻害を示すグラフ表示である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
最も好ましい実施形態では、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ菌株の増殖を阻害する方法であって、ヘリコバクター・ピロリ菌株を、ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗから６０％ｗ／ｗを超える総粘液酸ガレート、ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランスを個別にまたは組み合わせて含有する組成物と接触させて、ヘリコバクター・ピロリの増殖を阻害する工程を含む、方法を開示する。関連する実施形態では、Ｈ．ピロリの菌株は、ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ７００３９２を含む。別の関連する実施形態では、粘液酸ガレートは、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択する。さらに別の関連する実施形態では、バチルス・コアギュランス菌株は、好ましくはバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６である。一実施形態では、バチルス・コアギュランスの有効用量は、単位用量当たり１×１０6〜１×１０14コロニー形成単位である。別の関連する実施形態では、バチルス・コアギュランスの有効用量は、好ましくは単位用量当たり２×１０9コロニー形成単位である。
【００１１】
別の最も好ましい実施形態では、本発明は、哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ菌株の症状および感染症を治療管理する方法であって、ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗから６０％ｗ／ｗを超える総粘液酸ガレート、ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランスを個別でまたは組み合わせて含有する組成物を前記哺乳動物に投与して、ヘリコバクター・ピロリの症状および感染症の低下をもたらす工程を含む、方法を開示する。関連する実施形態では、ヘリコバクター・ピロリの菌株は、ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ７００３９２を含む。別の関連する実施形態では、粘液酸ガレートは、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択する。さらに別の関連する実施形態では、バチルス・コアギュランス菌株は、好ましくはバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６である。一実施形態では、バチルス・コアギュランスの有効用量は、単位用量当たり１×１０6〜１×１０14コロニー形成単位である。別の関連する実施形態では、バチルス・コアギュランスの有効用量は、好ましくは単位用量当たり２×１０9コロニー形成単位である。別の関連する実施形態では、Ｈピロリ感染症の症状は、胃炎、腹部の疼痛または灼熱痛、悪心、食欲不振、頻繁なおくび、腹部膨満、口臭、および意図しない体重減少からなる群から選択する。さらに別の関連する実施形態では、Ｈ．ピロリ菌株の感染症は、流行性胃炎、低酸症、胃十二指腸炎症、潰瘍、消化不良、胃癌および胃リンパ腫、胃食道逆流症および冠動脈性心疾患などの胃十二指腸外障害、酒さおよび特発性蕁麻疹などの皮膚障害、自己免疫性甲状腺疾患および血小板減少性紫斑病、鉄欠乏性貧血、レイノー現象、強皮症、片頭痛、ならびにギランバレー症候群からなる群から選択する。関連する実施形態では、組成物は、薬学的／栄養学的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体とともに製剤化されており、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディー剤、および食料品の形態で投与される。別の態様では、β−グルコガリンおよび／またはバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を含有する組成物は、単独で、またはＨ．ピロリ感染症を処置するために使用される標準的な薬物と組み合わせて投与する（三剤治療−オメプラゾール、アモキシシリン、およびクラリスロマイシン（ＯＡＣ）、１０日間、；次サリチル酸ビスマス、メトロニダゾール、およびテトラサイクリン（ＢＭＴ）、１４日間；ならびに１０日間または１４日間のいずれかの処置について承認されているランソプラゾール、アモキシシリン、およびクラリスロマイシン（ＬＡＣ）を含む）。一実施形態では、哺乳動物は好ましくはヒトである。
最も好ましい実施形態を明示する特定の例示的な実施例を、本明細書において以下に含む。
【実施例】
【００１２】
（例１）βグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスの抗ヘリコバクター・ピロリ活性
方法：細菌株および増殖条件
ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、米国バージニア州マナサス）から購入した。培養物を、７％（ｖ／ｖ）ヒツジ血液またはウシ胎仔血清を添加した脳心臓注入（ＢＨＩ）寒天／ブロス（ＨｉＭｅｄｉａ、インド、ムンバイ）中で増殖させ、嫌気性チャンバ（Ｉｍｓｅｔ、インド、ムンバイ）を使用して微好気性条件下（Ｎ2、８５％；Ｏ2、５％、ＣＯ2、１０％）でインキュベートした。バチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を、接種物（５％ｖ／ｖ）をＭＲＳブロスに加えることによりＭＲＳ培地中で増殖させ、３７℃で２４時間にわたりインキュベートした。２４時間後、培養物を遠心分離（５，０００×ｇ）して細胞を除去し、上清を回収し、凍結乾燥により１０倍に濃縮し、０．２２ミクロンフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、インド）を通してフィルター滅菌した。無細胞上清をＨ．ピロリに対して試験し、１０倍濃縮上清をＨ．ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２に対しても試験した。
【００１３】
抗菌活性試験
スポット・オン・ローン法（ｓｐｏｔ  ｏｎ−ｌａｗｎ  ｍｅｔｈｏｄ）
ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２の新鮮な増殖培養物を、７％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清を添加した脳心臓注入（ＢＨＩ）寒天（ＨｉＭｅｄｉａ、インド、ムンバイ）に加え、約２０ｍｌのこの懸濁液をペトリ皿に加え、プレート中で固化させた。さらに、Ｂ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の一晩増殖させた培養物（５０μｌ）を、ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４またはＡＴＣＣ７００３９２を含有する寒天プレートの上部にスポットした。プレートを室温で乾燥させ、次に嫌気性チャンバー（Ｉｍｓｅｔ、インド、ムンバイ）を使用して微好気条件下（Ｎ2、８５％；Ｏ2、５％；ＣＯ2、１０％）で３日間にわたり３７℃でインキュベートした。
【００１４】
ウェル拡散法
上記と同様に、ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４またはＡＴＣＣ７００３９２の菌株を含有する、７％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清を添加したＢＨＩ寒天プレートを調製した。さらに、ウェルを、ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４またはＡＴＣＣ７００３９２を含有するＢＨＩ寒天プレート中に作製した。１００μｌのＢ．コアギュランス上清（一晩増殖）またはその１０倍濃縮上清を各ウェルに加えた。同様に、クルクミン、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレート、ならびにピペリンの濃度を含有する１００μｌを各プレートに加えた。プレートを、嫌気性チャンバー（Ｉｍｓｅｔ、インド、ムンバイ）を使用して微好気性条件下（Ｎ2、８５％；Ｏ2、５％；ＣＯ2、１０％）で３日間にわたり３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、抗菌活性を、阻害ゾーンの直径を測定することにより評価した。実験を２連で２回繰り返し、阻害ゾーンの平均値をミリメートルで表す。
【００１５】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の決定
クルクミン、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレート抽出物、ならびにピペリン抽出物のＭＩＣを、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（以前のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）のガイドラインに従って決定した。簡単には、細菌懸濁液（ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２）を、７２時間増殖させた細菌培養液を通常の滅菌生理食塩水（０．８９％ＮａＣｌ  ｗ／ｖ）中で懸濁することにより調製した。細菌懸濁液の濁度を、０．５マクファーランド標準（１．５×１０8コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌに相当）に調整した。クルクミン、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレート、ならびにピペリン抽出物ストック溶液を１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；Ｍｅｒｃｋ、インド、ムンバイ）中で調製し、２倍連続希釈液を、９６ウェルＵ底マイクロタイタープレート（Ｔａｒｓｏｎ、インド、ムンバイ）中に１００μｌの容量で７％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加した脳心臓注入（ＢＨＩ）ブロス（ＨｉＭｅｄｉａ、インド、ムンバイ）中で調製した。上記の細菌懸濁液をＢＨＩ−ＦＢＳ中でさらに希釈し、この希釈接種物の１００μｌ容量をプレートの各ウェルに加えて、ウェル中の１×１０6ＣＦＵ／ｍｌの最終接種物をもたらし、クルクミン、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレート抽出物、ならびにピペリン抽出物の最終濃度は３．９〜２０００μｇ／ｍｌの範囲であった。プレートを、７２時間にわたり５％Ｏ2、１０％ＣＯ2、および８５％Ｎ2のガス混合物（Ｉｍｓｅｔ、インド、ムンバイ）の微好気性条件下で、３７℃で７２時間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、プレートを濁度の有無について視覚的に読み取った。濁度を示さない化合物濃度の最小濃度をＭＩＣとして記録した。
【００１６】
結果
Ｈ．ピロリに対するβグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の抗菌活性を、他の周知の抗Ｈ．ピロリ薬剤に加えて評価した。結果を表１に示す。
【００１７】
【表１】
0006839329.tif 000002
【００１８】
結果は、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレート、ならびにプロバイオティクス細菌の両方がヘリコバクター・ピロリの増殖を阻害し、Ｈ．ピロリ感染症の処置のために有効な薬剤として使用することができることを示した。
植物抽出物のＭＩＣ値（表２）はまた、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレートが、Ｈ．ピロリの両方の菌株について１０００〜２０００（μｇ／ｍｌ）のＭＩＣ値でＨ．ピロリの増殖における有意な阻害を示すことを示した。
【００１９】
【表２】
0006839329.tif 000003
【００２０】
スポット・イン・ローン法（ｓｐｏｔ  ｉｎ  ｌａｗｎ  ｍｅｔｈｏｄ）（図１）およびウェル拡散法（図２）によるＨ．ピロリに対するバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の抗菌活性によって、プロバイオティクス細菌がＨ．ピロリの増殖を阻害し、Ｈ．ピロリ感染症の治療管理のための組成物中に含まれうることが明らかになった。
【００２１】
（例２）βグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を含有する組成物の相乗的抗ヘリコバクター・ピロリ活性
βグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を含有する組合せの相乗活性も評価した。
【００２２】
組合せ試験
ヘリコバクター・ピロリ菌株（ＡＴＣＣ４３５０４およびＡＴＣＣ７００３９２）の細菌懸濁液を、７２時間増殖させた細菌培養物を通常の滅菌生理食塩水（０．８９％ＮａＣｌ  ｗ／ｖ）中に懸濁することにより調製した。細菌懸濁液の濁度を０．５マクファーランド標準（１．５×１０8コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌに相当）に調整した。この細菌懸濁液１ｍｌを、１０％ウシ胎仔血清、５ｇ／Ｌ酵母エキス、２．５ｇ／Ｌの細菌学的ペプトンを含有する１００ｍｌのトリプシン大豆ブロスに加えた。さらに、Ｂ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の一晩増殖させた培養物の５ｍｌを各フラスコに加えた。同様に、異なる濃度のβ−グルコガリンおよび粘液酸ガレートを、Ｂ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６を伴うおよび伴わない、これらのフラスコに加えた。それぞれの対照を試験において取った。全てのフラスコを、７２時間にわたり、５％Ｏ2、１０％ＣＯ2、および８５％Ｎ2ガス混合物（Ｉｍｓｅｔ、インド、ムンバイ）の微好気性条件下で７２時間にわたり３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、１０ｍｇ／Ｌバンコマイシン、５ｍｇ／Ｌトリメトプリム、および３５００ＵポリミキシンＢ／Ｌを添加したＢＨＩ寒天プレート上で連続希釈法を使用して、Ｈ．ピロリの生菌数を決定した。実験は２連で実施し、２回繰り返した。結果を、Ｈ．ピロリの平均ｌｏｇ１０ｃｆｕ／ｍｌで表す。
【００２３】
結果
試験の結果によって、β−グルコガリンおよび粘液酸没食子酸ならびにプロバイオティクス菌株Ｂ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６の組合せが、７２時間のインキュベーション後のＨ．ピロリの増殖を阻害するのに有効であることがはっきりと明らかになった。さらに、Ｂ．コアギュランスＭＴＣＣ５８５６単独でもＨ．ピロリの増殖を阻害するのに有効であったが、しかし、β−グルコガリンおよび粘液酸ガレートとの組合せでは、有効性は個別よりも有意に良好であり、組成物の相乗効果を示した。
【００２４】
（例３）ヘリコバクター・ピロリ感染症の管理のためのβグルコガリンおよびバチルス・コアギュランスを含有する製剤
表３〜８には、ヘリコバクター・ピロリ感染症の管理のためのバチルス・コアギュランスおよびβ−グルコガリンを含有する製剤の例示的な例を示している。
【００２５】
【表３】
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【００２６】
【表４】
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【００２７】
【表５】
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【００２８】
【表６】
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【００２９】
【表７】
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【００３０】
【表８】
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【００３１】
上記の製剤は単なる例示的な例であり、前記目的のために意図された上記の活性成分を含有する任意の製剤は、等価と見なされるであろう。
本発明に対する他の改変形態および変形形態は、前述の開示および教示から当業者には明らかであろう。このように、本発明の特定の実施形態だけを本明細書で具体的に記載してきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく本発明に多数の改変がなされうることは明らかであろう。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲と併せてだけ解釈すべきである。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕ヘリコバクター・ピロリ菌株の増殖を阻害する方法であって、ヘリコバクター・ピロリ菌株を、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗから６０％ｗ／ｗを超える総粘液酸ガレート、
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
を個別にまたは組み合わせて含有する組成物と接触させて、ヘリコバクター・ピロリ菌株の増殖を阻害する工程を含む、方法。
〔２〕Ｈ．ピロリの菌株がヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ７００３９２を含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕粘液酸ガレートが、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔４〕バチルス・コアギュランス菌株が好ましくはバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６である、前記〔１〕に記載の方法。
〔５〕バチルス・コアギュランスの有効用量が単位用量当たり１×１０6〜１×１０14コロニー形成単位である、前記〔１〕に記載の方法。
〔６〕バチルス・コアギュランスの有効用量が好ましくは単位用量当たり２×１０9コロニー形成単位である、前記〔１〕に記載の方法。
〔７〕哺乳動物におけるヘリコバクター・ピロリ菌株の症状および感染症を治療管理する方法であって、
ａ）少なくとも１０％ｗ／ｗ以上の１−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（β−グルコガリン）および１０％ｗ／ｗから６０％ｗ／ｗを超える総粘液酸ガレート、
ｂ）有効用量のプロバイオティクス細菌バチルス・コアギュランス
を個別にまたは組み合わせて含有する組成物を前記哺乳動物に投与して、ヘリコバクター・ピロリの症状および感染症の低下をもたらす工程を含む、方法。
〔８〕Ｈ．ピロリの菌株がヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４およびヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ７００３９２を含む、前記〔７〕に記載の方法。
〔９〕粘液酸ガレートが、粘液酸１，４−ラクトン５−Ｏ−ガレート、粘液酸２−Ｏ−ガレート、粘液酸６−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、粘液酸１−メチルエステル２−Ｏ−ガレート、およびエラグ酸からなる群から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１０〕バチルス・コアギュランス菌株が好ましくはバチルス・コアギュランスＭＴＣＣ５８５６である、前記〔７〕に記載の方法。
〔１１〕バチルス・コアギュランスの有効用量が単位用量当たり１×１０6〜１×１０14コロニー形成単位である、前記〔７〕に記載の方法。
〔１２〕バチルス・コアギュランスの有効用量が好ましくは単位用量当たり２×１０9コロニー形成単位である、前記〔７〕に記載の方法。
〔１３〕Ｈ．ピロリ感染症の症状が、胃炎、腹部の疼痛または灼熱痛、悪心、食欲不振、頻繁なおくび、腹部膨満、口臭、および意図しない体重減少からなる群から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１４〕Ｈ．ピロリ菌株の感染症が、流行性胃炎、低酸症、胃十二指腸炎症、潰瘍、消化不良、胃癌および胃リンパ腫、胃食道逆流症および冠動脈性心疾患などの胃十二指腸外障害、酒さおよび特発性蕁麻疹などの皮膚障害、自己免疫性甲状腺疾患および血小板減少性紫斑病、鉄欠乏性貧血、レイノー現象、強皮症、片頭痛、ならびにギランバレー症候群からなる群から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１５〕組成物が、薬学的／栄養学的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体とともに製剤化されており、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディー剤、および食料品の形態で投与される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１６〕哺乳動物が好ましくはヒトである、前記〔７〕に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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