(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象のがん疾患の治療に使用するための、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であって、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有する前記対象に投与される医薬組成物。
【請求項２】
がん疾患が、胆道がん、大腸がん、膵臓がん、食道がん、乳がん、肺がん、前立腺がん、膀胱がん、脳腫瘍、胃がん、肝臓がん、皮膚がん、絨毛がん、腎がん、頭頚部がん、舌がん、転移性がん及び浸潤がんからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
がん疾患が、胆道がん、大腸がん、膵臓がん、食道がん及び乳がんからなる群から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
医薬組成物が、一定期間連続投与に続く一定期間の休薬を１サイクルとして投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
医薬組成物が、５日間の連続投与に続く９日間の計１４日の休薬を１サイクルとして投与される、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
医薬組成物が、１〜６０ｍｇ／ｍ２で対象に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
医薬組成物が、１２．５〜６０ｍｇ／ｍ２で対象に投与される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
医薬組成物が、１２．５〜２５ｍｇ／ｍ２で対象に投与される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
一定量の医薬組成物が、一定時間かけて静脈内持続投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
１００ｍＬの医薬組成物が、９０分かけて静脈内持続投与される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
肝機能障害の発生を低下させる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンが特定のがん疾患に効果を奏するかどうかを診断するために、対象のＮＡＴ２遺伝子において、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子を有するかどうかを判定するための、検体採取器具、及び試薬を含む遺伝子診断キットであって、
前記試薬は、ＮＡＴ２ＳＮＰ（ｒｓ１８０１２７９（１９１Ｇ＞Ａ）、ｒｓ１０４１９８３（２８２Ｃ＞Ｔ）、ｒｓ１８０１２８０（３４１Ｔ＞Ｃ）、ｒｓ１７９９９２９（４８１Ｃ＞Ｔ）、ｒｓ１７９９９３０（５９０Ｇ＞Ａ）、ｒｓ１２０８（８０３Ａ＞Ｇ）、およびｒｓ１７９９９３１（８５７Ｇ＞Ａ）からなる群から選択される少なくとも１以上を検出するプライマーを含む、キット。
【請求項１３】
請求項１２に記載の遺伝子診断キットと組み合わせて用いる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ＮＡＴ２遺伝子診断と組み合わせて用いる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＮＡＴ２阻害剤であるアセトアミノフェンと組み合わせて用いる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
対象におけるがんの治療に使用するための、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であって、下記レジメで投与されることを特徴とする、医薬組成物：
（１）  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有する前記対象を同定して選択し； 
（２）  含ホウ素化合物を、当該医薬組成物を投与する前に、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有すると同定された当該対象に投与し；そして
（３）  当該医薬組成物を、当該対象に投与する。
【請求項１７】
当該医薬組成物を投与後に、更に中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）によりがんを死滅させる、請求項１〜１１及び１３〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
肝機能障害の発生を低下させる、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
対象がヒトである、請求項１〜１１及び請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項１２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の遺伝子マーカーを有するがん等の患者に最適に用いられるＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物に関する。
【０００２】
更に、本発明は、特定の遺伝子マーカーを有するがん等の患者に対して、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を投与することを含む、がん等の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
イソニアジド神経毒性の個人差がＮ−アセチル化能力の遺伝的差異に起因することから、Ｎ−アセチル化多型が５０年以上前に発見されている。イソニアジドに加えて、スルファメタジンのような多くの芳香族アミン薬はアセチル化多型の影響を受け、多くの治療薬の治療効果と毒性に影響を及ぼす。Ｎ−アセチル化転移酵素２（ＮＡＴ２）は、アセチルＣｏＡのアセチル基を、本酵素の基質となる芳香族アミンやヒドラジン含有化合物に転移する酵素である。ＮＡＴ２は８７０−ｂｐ遺伝子（ＮＡＴ２）によってエンコードされ、また、ＮＡＴ２の遺伝的多型は、ヒトにおいて一般的である。
【０００４】
そして、ＮＡＴ２には、アセチル化速度の速いタイプ（Ｒａｐｉｄ）、中間タイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、および遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）の三つのタイプが存在することが知られている（ＳＮＰ；ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ、１３巻：３１−４１ページ、２０１２年）。これらのタイプは、その遺伝子多型によって判別できる。
【０００５】
ＮＡＴ２の遺伝子多型は、多数のアリールアミンおよびヒドラジン薬の有効性と毒性の両方を修正し、いくつかのアリールアミン発がん物質関連のがんに対するリスクを高めることが知られている。また、スルファサラジン（ＳＳＺ）という薬剤は、ＮＡＴ２によってアセチル化されるが、アセチル化が遅い患者においては、しばしば副作用が発生しやすいことが知られている（Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２００２年、Ｄｅｃ；２９（１２）：２４９２−２４９９）（Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｔｈｅ  ＮＡＴ２  ｇｅｎｅ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｐｌｏｔｙｐｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｂｅｆｏｒｅ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＳＺ  ｉｓ  ｌｉｋｅｌｙ  ｔｏ  ｒｅｄｕｃｅ  ｔｈｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＲＡ．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｒｈｅｕｍ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／２９／１２／２４９２）。
【０００６】
ＮＡＴ２の遺伝子多型の代表的なものは、（ｉ）１９１Ｇ＞Ａ（ｒｓ１８０１２７９）、（ｉｉ）２８２Ｃ＞Ｔ（ｒｓ１０４１９８３）、（ｉｉｉ）３４１Ｔ＞Ｃ（ｒｓ１８０１２８０）、（ｉｖ）４８１Ｃ＞Ｔ（ｒｓ１７９９９２９）、（ｖ）５９０Ｇ＞Ａ（ｒｓ１７９９９３０）、（ｖｉ）８０３Ａ＞Ｇ（ｒｓ１２０８）、（ｖｉｉ）８５７Ｇ＞Ａ（ｒｓ１７９９９３１）の７個のＳＮＰである。それらの中で（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）のＳＮＰが、アミノ酸の変化をもたらす（即ち、（ｉ）１９１Ｇ＞Ａがアルギニンからグルタミン酸、（ｉｉｉ）３４１Ｔ＞Ｃがイソロイシンからトレオニン、（ｖ）５９０Ｇ＞Ａがアルギニンからグルタミン、（ｖｉ）８０３Ａ＞Ｇがリジンからアルギニン、（ｖｉｉ）８５７Ｇ＞Ａがグリシンからグルタミン酸）。
【０００７】
一方、胆道がんは、近年本邦において増加傾向にある。２０１６年の死亡者数は約１８，０００人であり、がん死亡原因の７位となっている。胆道がんは発生部位によって治療方針、化学療法の効果が異なる。化学療法としては現状ではゲムシタビン、シスプラチン併用療法が標準化学療法と位置づけられる。しかしながら、現時点では、標準化学療法が無効な胆道がん患者に対して推奨される２次療法は確立しておらず、２次療法としての化学療法に対する臨床的ニーズは高い。
【０００８】
Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン（以下、「ＪＰＨ２０３」ということがある）は、がん細胞に特異的発現するＬタイプ−アミノ酸トランスポーター１（ＬＡＴ１）の選択的阻害作用を有することから新しい抗腫瘍剤での効果が期待されている（特許文献１）。現在、ＪＰＨ２０３は、出願人により胆道がん患者を対象に国内第ＩＩ相試験が行われているところである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００８／０８１５３７号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ、１３巻：３１−４１ページ、２０１２年
【非特許文献２】Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．２０１２年；２７（１）：１５５−６１ページ
【非特許文献３】Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２００２年、Ｄｅｃ；２９（１２）：２４９２−２４９９ページ
【非特許文献４】Ｊｕｔａｂｈａら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｖｏｌｕｍｅ  １３０，  Ｉｓｓｕｅ  ３，  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（第８９回日本薬理学会年会抄録集）３−Ｏ−８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
発明者らは、標準化学療法が無効な胆道がん患者に対する新たな２次化学療法について検討中、ＪＰＨ２０３の国内第Ｉ相試験で得られた薬物動態パラメーター解析結果から、体表面積当たりで同じ投与量を投与した被験者間において、血液中ＪＰＨ２０３濃度に比べて、血中並びに尿中のＮアセチル化体濃度の個人差が大きいことを見出し、更に研究を続け、ＮＡＴ２の遺伝子多型におけるアセチル化速度の相違と、ＪＰＨ２０３の安全性及び薬効との間に関連があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
すなわち本発明は、対象における疾患の治療に使用するための、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であって、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有する前記対象に投与される医薬組成物を提供する。
【００１３】
また、本発明は、対象における疾患の治療方法であって、前記対象がＮｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有すると同定された後、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む、治療方法を提供する。
【００１４】
加えて、本発明は、対象における疾患の治療に用いる医薬の製造において使用するための、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン、または薬学的に許容されるその塩の使用であって、ここで、前記対象が、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有すると同定された後に、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を前記対象に投与することを特徴とする、前記使用を提供する。
【００１５】
更に、本発明は、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンが特定のがん等の対象に効果を奏するかどうかを予測する方法であって、対象のＮＡＴ２遺伝子において、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有するかどうかを判定することによる、方法を提供する。
【００１６】
また本発明は、特定疾患の治療用の医薬を製造するための、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩の使用であって、ここで、特定疾患の該医薬による治療前に、対象のＮＡＴ２遺伝子において、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有するかどうかを判定し、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンが特定疾患の対象に効果を奏するかどうかを予測することを含む、前記使用を提供する。
【００１７】
本発明は、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンが特定の疾患に効果を奏するかどうかを診断するために、対象のＮＡＴ２遺伝子において、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子を有するかどうかを判定するための遺伝子診断キット、並びにかかるキットあるいはＮＡＴ２遺伝子診断と組み合わせて用いる、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
用語「対象」及び「患者」は、本発明において互換的に使用され、好ましくはヒトである。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の医薬組成物により、薬剤の安全性を高め、且つ、効果の奏効性を向上させたがん等の治療を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＪＰＨ２０３とＮＡＴ２阻害剤とを併用した場合の、ラット血中のＮａｃ−ＪＰＨ２０３／ＪＰＨ２０３比を示す。
【図２】膵がん由来細胞Ｔ３Ｍ４にホウ素化フェニルアラニン（ＢＰＡ）を添加し、１５分後に１０μＭ  ＪＰＨ２０３を添加し、細胞内に封じ込められたＢＰＡ濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００２２】
Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン（ＪＰＨ２０３）
本発明の有効成分であるＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンは、特許文献１に開示された化合物であり、現在出願人らによる第ＩＩ相試験が進行中のものである。
【００２３】
尚、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシン（ＪＰＨ２０３）は、静脈内投与後、主に肝臓ＮＡＴ２によって代謝（アセチル化）されアセチル体（Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３）となり、その生理活性が大きく低減する（Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．２０１２年；２７（１）：１５５−６１ページ）。
【００２４】
ＪＰＨ２０３は、その薬理学的に許容される塩として使用することも可能である。例えば、ＪＰＨ２０３は、分子中のアミノ基が酸とともに塩を形成する。そのような塩としては、特に限定されないが、例えば、塩酸や硫酸等の無機酸、カルボン酸との塩が挙げられる。中でも、塩酸塩が好ましい。
【００２５】
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、有効成分としてＪＰＨ２０３またはその薬理学的に許容される塩を含む。また、必要に応じて医薬品添加物を含んでもよい。本発明の医薬組成物は、錠剤、顆粒剤、細粒剤、粉剤、カプセル剤などの固形製剤または液剤、ゼリー剤、シロップ剤などの形態で、経口投与することができ、あるいは、該医薬組成物薬は、注射剤、経鼻剤、坐剤、吸入剤、経皮剤などの形態で、非経口的に投与してもよい。
【００２６】
特に、本発明の医薬組成物は、抗がん剤等として使用可能であることから、好ましくは注射剤として製剤化される。そのような注射剤としては、本発明の有効成分にｐＨ調整剤、およびシクロデキストリン類を含むものが例示される。
【００２７】
具体的な注射剤としては、例えば、静脈、皮下、皮内、筋肉内注射剤、点滴静注剤が挙げられる。
【００２８】
本発明の注射剤に配合することができるｐＨ調整剤としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物、水素化ナトリウム、水素化カリウムのようなアルカリ金属水素化物、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩等が挙げられ、特に、水酸化ナトリウム、および炭酸ナトリウムが好ましく、水酸化ナトリウムがより好ましい。
【００２９】
前記注射剤は、ｐＨ調整剤を用いて適当なｐＨに適宜調整されうる。本実施形態に係る注射剤のｐＨは、３〜６であることが好ましく、３〜５であることがより好ましく、３〜４．５であることがさらに好ましく、３．５〜４．５であることが特に好ましい。
【００３０】
本発明の注射剤に配合することができるシクロデキストリン類としては、例えば、未修飾シクロデキストリン、修飾シクロデキストリンが挙げられる。未修飾シクロデキストリンとして、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等が挙げられる。また修飾シクロデキストリンとして、例えば、ジメチル−α−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−γ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−α−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−γ−シクロデキストリン、マルトシル−α−シクロデキストリン等が挙げられる。
【００３１】
シクロデキストリン類は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。シクロデキストリン類は、強酸性ではない水溶液に溶解した場合でも形成される不溶性微粒子数を低減できるという観点及び凍結乾燥製剤の強酸性でない水溶液に対する再溶解性を改善するという観点から、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、または、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンが好ましく、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンがより好ましい。
【００３２】
ここで、スルホブチルエーテル・シクロデキストリンは下記式１に示した構造であり、環状構造の内側は疎水性が高い。そのため、同じく疎水性の高いＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンと、疎水性相互作用により複合体を構成する。本明細書中における「スルホブチルエーテル・シクロデキストリン複合体」との言及は、上記した疎水性相互作用によるものを指す。
【化１】
0006894155.tif 000002
【００３３】
あるいは、有効成分であるＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンを、そのスルホブチルエーテル・シクロデキストリン複合体（以下、「ＪＰＨ２０３−ＳＢＥＣＤ」という）として注射剤中に使用してもよい。
【００３４】
本発明に係る注射剤には、更に、必要により緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤等を添加してもよい。
【００３５】
緩衝剤としては、例えば、ホウ酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、トリス緩衝剤等が挙げられる。
【００３６】
懸濁化剤としては、例えば、メチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、アルギン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００３７】
溶解補助剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、グリセリン脂肪酸エステル、リポアミノ酸（Ｌｉｐｏａｍｉｎｏａｃｉｄ）、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。
【００３８】
安定化剤としては、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウムなどが挙げられ、等張化剤としては、グリセリン、塩化ナトリウムなどが挙げられ、そして保存剤としては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸などが挙げられる。
【００３９】
凍結乾燥製剤を水に溶解した時のｐＨとしては、３〜６であることが好ましく、３〜５であることがより好ましく、３〜４．５であることがさらに好ましく、３．５〜４．５であることが特に好ましい。
【００４０】
前記凍結乾燥製剤は、従来公知の凍結乾燥製剤の製造方法により作製することができ、例えば、−２５℃以下の温度で凍結後、真空度を約２０Ｐａ以下に保ちながら、室温に到達するまで昇温させつつ乾燥させる方法等が挙げられる。
【００４１】
本発明に係る注射剤は、凍結乾燥製剤であってもよい。このような凍結乾燥製剤は、用時に、例えば、注射用蒸留水、輸液、電解液の１種、またはこれら２種以上の溶媒に溶解して用時溶解型注射剤として使用することができる。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、特定疾患の治療に用いることができ、対象となる疾患としては、例えば、線維腫、脂肪腫、粘液腫、軟骨腫、骨腫、血管腫、血管内皮腫、リンパ腫、骨髄腫、骨髄肉腫、細網腫、細網肉腫、黒色腫、筋腫、神経腫、神経膠腫、神経鞘腫、肉腫、骨肉種、筋種、線維肉腫、乳頭腫、腺腫、嚢腫、脳腫瘍、頚がん、舌がん、咽頭がん、喉頭がん、甲状腺がん、食道がん、肺がん、乳がん、胃がん、十二指腸・空腸・回腸等の小腸がん、結腸・盲腸・直腸等の大腸がん、膀胱がん、腎がん、胆嚢がん、前立腺がん、子宮体がん、子宮頸がん、卵巣がん、中皮腫、頭頚部がん、副腎がん、消化管間質腫瘍、虫垂がん、胆道がん、膵臓がん、肝臓がん、皮膚がん、絨毛がん、頭頚部がん、転移性がん、及び浸潤がん等のがん腫；及びこれらの混合腫瘍や転移腫瘍等；を挙げることができる。
【００４３】
なかでも、胆道がん、大腸がん、膵臓がん、食道がん、乳がん、肺がん、前立腺がん、膀胱がん、脳腫瘍、胃がん、肝臓がん、皮膚がん、絨毛がん、腎がん、頭頚部がん、舌がん、転移性がん、及び浸潤がん等が好ましく、更には、胆道がん、大腸がん、膵臓がん、食道がん、及び乳がんが推奨される。
【００４４】
投薬レジメ
本発明の医薬組成物が適用される投薬レジメは、患者のタイプ、人種、年齢、体重、性別および医学的状態；処置すべき状態の重症度；投与経路；ならびに患者の肝および腎機能をはじめとする様々な要因に従って選択される。医師は、その症状の進行を予防、阻止または停止させるために必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【００４５】
本発明の医薬組成物において、有効成分の投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与時期、投与間隔等に応じて適宜選択することができ、有効性および安全性の観点からは、１回、１ｍｇ／ｍ２〜６０ｍｇ／ｍ２（体表面積）が例示され、好ましくは、１２．５ｍｇ／ｍ２〜６０ｍｇ／ｍ２、１２．５ｍｇ／ｍ２〜２５ｍｇ／ｍ２、または１０ｍｇ／ｍ２〜４０ｍｇ／ｍ２（体表面積）が例示され、特に２５ｍｇ／ｍ２が推奨される。また、症状に応じて、１２．５ｍｇ／ｍ２等に減量してもよい。
【００４６】
本発明の医薬組成物の投与レジメの例としては、例えば、
−医薬組成物が、一定期間連続投与に続く一定期間の休薬を１サイクルとして投与される、
−医薬組成物が、５日間の連続投与に続く９日間の休薬の計１４日を１サイクルとして投与される、
−一定量の医薬組成物が、一定時間かけて静脈内持続投与される、
−医薬組成物１００ｍＬが、９０分かけて静脈内持続投与される、
−患者に対して１〜６０ｍｇ／ｍ２で投与される、
−患者に対して１２．５〜６０ｍｇ／ｍ２で投与される、
−患者に対して１２．５〜２５ｍｇ／ｍ２で投与される、
−患者に対して２５ｍｇ／ｍ２で投与される、
等が挙げられ、必要に応じてこれらを組み合わせて適用可能である。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有する（即ち、ＮＡＴ２によるアセチル化の遅いタイプの）がん等の患者に投与された場合、高い効果を奏することが可能となる。本明細書において、「Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子」とは、ＮＡＴ２遺伝子のアセチル化速度の速いタイプ（Ｒａｐｉｄ）、中間タイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、および遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）の三つの表現型のうち、中間タイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、および遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）の表現型を意味する。
【００４８】
ＮＡＴ２の遺伝子多型を代表する７つのＳＮＰ（４８１Ｃ＞Ｔ，２８２Ｃ＞Ｔ，８５７Ｇ＞Ａ，８０３Ａ＞Ｇ，３４１Ｔ＞Ｃ，５９０Ｇ＞Ａ，１９１Ｇ＞Ａ）について、２−ＳＮＰ、３−ＳＮＰ、４−ＳＮＰの組み合わせ（表２−１）でＮＡＴ２のアセチル化の表現型（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）が解析され、ＳＮＰなし（標準）ハプロタイプであるＮＡＴ２＊４のホモ接合体で構成されるものが、アセチル化の速いタイプ（Ｒａｐｉｄ）とされ、いずれか一つのハプロタイプが変異したヘテロ接合体が、アセチル化速度が中間のタイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）とされ、そして、すべてが変異ハプロタイプのホモ接合体か二つまたはそれ以上の変異ハプロタイプのヘテロ接合体の組み合わせが、アセチル化の遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）とされている（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ，１３巻：３１−４１ページ，２０１２年）。ここで、「ＮＡＴ２＊４」アレルは、ＳＮＰなしハプロタイプを意味する。また、Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ，１３巻：３１−４１ページ，２０１２年によれば、Ｒａｐｉｄタイプは、「ＮＡＴ２＊４」以外にも、アミノ酸変異を起こさない「ＮＡＴ２＊１１，ＮＡＴ２＊１２，ＮＡＴ２＊１３」を有する患者もＲａｐｉｄタイプに分類されている。
【００４９】
具体的には、２つのＳＮＰが推測するＮＡＴ２アセチル化因子の表現型は、２つのＳＮＰの分析：ｒｓ１０４１９８３（２８２Ｃ＞Ｔ）およびｒｓ１８０１２８０（３４１Ｔ＞Ｃ）によって決定される。３つのＳＮＰが推測するＮＡＴ２アセチル化因子表現型は、３つのＳＮＰの分析：ｒｓ１７９９９２９（４８１Ｃ＞Ｔ）、ｒｓ１７９９９３０（５９０Ｇ＞Ａ）およびｒｓ１７９９９３１（８５７Ｇ＞Ａ）によって決定される。４つのＳＮＰ推定ＮＡＴ２アセチレーター表現型は、４つのＳＮＰの分析：ｒｓ１８０１２７９（１９１Ｇ＞Ａ）、ｒｓ１８０１２８０（３４１Ｔ＞Ｃ）、ｒｓ１７９９９３０（５９０Ｇ＞Ａ）、およびｒｓ１７９９９３１（８５７Ｇ＞Ａ）によって決定される。
【００５０】
ＪＰＨ２０３がＮＡＴ２によりアセチル化されると、そのがん細胞に対する阻害活性が低下する。しかし患者が、アセチル化を受けにくいＮＡＴ２遺伝子表現型を優占的に有している場合、即ち、がん等の患者のＮＡＴ２遺伝子において、アセチル化速度の中間タイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、および遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）の表現型を有する場合（Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子）は、ＪＰＨ２０３のアセチル化速度が遅くなるため、アセチル化されにくくなり、ＪＰＨ２０３の活性が長く続くことになる。
【００５１】
本発明におけるＮＡＴ２遺伝子多型の分析は、従来公知の方法で行うことが可能である。例えば、被験者の血液からＤＮＡを抽出し、マイクロアレイ法によりＤＮＡを処理し、次いで遺伝子型を読み込んで検査を行い、続いてデータ解析を行うことにより行うことが可能である。
【００５２】
よって、がん治療薬の安全性と奏効性を予測し適切ながん等の患者に治療薬を提供する目的で、本発明の医薬組成物のがん患者への投薬例は、適切には以下のように行われる。
【００５３】
がんに罹患した、あるいは罹患した疑いのあるヒト患者について、採血し、血液サンプルからＤＮＡを抽出し、ＮＡＴ２の遺伝子多型を確認する。ＮＡＴ２の遺伝子多型が、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型（即ち、アセチル化速度が中間のタイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、またはアセチル化の遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）であると判断される）を有すると判断された患者について、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンスルホブチルエーテル・シクロデキストリン複合体を、２５ｍｇ／ｍ２の濃度で１００ｍＬを９０分かけて静脈内持続投与する。この際、医薬組成物は、５日間の連続投与に続く９日間の休薬の計１４日を１サイクルとして投与する。
【００５４】
そして、患者のＮＡＴ２遺伝子診断において、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子を有するかどうかを判定することにより、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンが、特定疾患、例えばがん等の患者に効果を奏するかどうかを予測することが可能となる。
【００５５】
また、ＮＡＴ２の代謝能が正常な動物モデルに比べて、ＮＡＴ２の代謝能を抑えた動物モデルや動物種において、がん等の治療効果が良好になる可能性がある。このことは、ヒトにおいても適用可能である。
【００５６】
さらに、本発明の医薬組成物に関する投与方法を患者に適用することにより、薬剤の安全性を高め、且つ、効果の奏効性を向上させた、特定疾患、特にがん等に対する優れた治療を提供することが可能となる。
【００５７】
そして、本発明の更なる形態として、ＮＡＴ２遺伝子診断と組み合わせて用いる、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、特定疾患、特にがん等の治療に用いられるとき、その効果を高めることが可能となる。
【００５８】
尚、前記のとおり、ＮＡＴ２遺伝子診断は、ＮＡＴ２遺伝子多型の検査を行い、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子を有するかどうかを判定する。ＮＡＴ２遺伝子診断は、従来公知の診断方法、例えば後述するＮＡＴ２遺伝子多型の解析方法により行うことができる。または、ＮＡＴ２遺伝子診断は、遺伝子検査や遺伝子診断を提供する企業等検査機関のサービスを利用することができる。
【００５９】
あるいは、ＮＡＴ２遺伝子診断は、ＮＡＴ２遺伝子診断キットにより行うこともできる。ＮＡＴ２遺伝子診断キットは、後述するＮＡＴ２遺伝子多型の解析方法を実施するために必要な検体採取器具や試薬をひとまとめにしたものである。キットに備える試薬としては例えば、ＰＣＲ酵素液、プライマー／プローブ、ｄＨ２Ｏ、陽性コントロールＤＮＡ、及びコントロール希釈用専用バッファー等が挙げられる。
【００６０】
別の実施態様として、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物は、ＮＡＴ２遺伝子診断または遺伝子診断キットと組み合わせて用いられる。これらを組み合わせて用いることにより、Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンの特定疾患に対する効果、特にがんを治療する際の効果を高めることが可能となる。
【００６１】
更なる実施態様として、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を、ＮＡＴ２遺伝子診断または遺伝子診断キットと組み合わせて用いることによる、特定疾患、例えばがん等の効果的な治療方法を提供する。
【００６２】
例えば、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物は、ＮＡＴ２遺伝子多型の測定と組み合わせて、以下の投与レジメでがんに罹患した対象に投与することができる。
【００６３】
（１）  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有する前記対象を同定して選択し；
（２）  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有すると同定された当該対象に当該医薬組成物を投与する。
【００６４】
更に、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物は、ＮＡＴ２阻害剤と併用して、疾患、例えばがんの治療に用いることができる。ＮＡＴ２阻害剤としては、例えば、アセトアミノフェンが例示される。
【００６５】
ＪＰＨ２０３は肝サイトゾルでＮＡＴ２により速やかにＮ−アセチル化を受け、Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３となるが、Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３はＪＰＨ２０３に比べて、ＬＡＴ１への選択性及び活性が低下することがわかっており、ＮＡＴ２阻害剤との併用により、ＪＰＨ２０３のアセチル化を抑え、ＪＰＨ２０３の効果の維持をはかるものである。
【００６６】
Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩とＮＡＴ２阻害剤の使用量としては、それぞれの有効量が用いられ、投与対象、投与ルート、疾患、組み合わせ等により適宜選択することができる。
【００６７】
Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩とＮＡＴ２阻害剤との投与時期は、特に限定されず、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩とＮＡＴ２阻害剤とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。
【００６８】
Ｏ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩をＮＡＴ２阻害剤と併用することにより、それぞれの投与量を軽減し得る、治療期間を長く設定し得る、相乗効果が得られ得る等の効果を奏する。
【００６９】
ＢＮＣＴ（Ｂｏｒｏｎ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、ホウ素中性子捕捉療法）との併用
更に、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたは薬学的に許容されるその塩は、ホウ素中性子捕捉療法と併用して、がんの治療に用いることができる。
【００７０】
ホウ素中性子捕捉療法に用いられる化合物としては、例えば、ホウ素化アミノ酸が挙げられ、特に、ホウ素化フェニルアラニン（ＢＰＡ）（商標名：ボロファランＢ１０）が推奨される。
【００７１】
ホウ素中性子捕捉療法は、ホウ素化アミノ酸を中性子線照射と併用するものである。この方法では、ホウ素化アミノ酸（例えばホウ素化フェニルアラニンＢＰＡ）を体内に注入し、がん細胞に取り込ませる。この際、ＢＰＡは、ＬＡＴ１を通ってがん細胞に取り込まれる。そこに、中性子線を照射すると、がん細胞内で核分裂が起こり、細胞破壊が起こる。しかしながら、ＢＰＡはがん細胞からＬＡＴ１を通って排出されやすいので、ＢＰＡの大量投与が必要となる。一方で、ＢＰＡは大量投与すると正常細胞にも取り込まれる。その結果、周囲の正常細胞に影響し、副作用を起こすとともに、代謝・排泄する臓器の腎臓にも影響を及ぼす。
【００７２】
そこで、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンをホウ素中性子捕捉療法と併用することで、ＢＰＡを効率的にがん細胞に封じ込め、それによりＢＰＡ投与量を減らし、正常細胞への影響（＝副作用）を低減することが可能となる（Ｊｕｔａｂｈａら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｖｏｌｕｍｅ  １３０，  Ｉｓｓｕｅ  ３，  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（第８９回日本薬理学会年会抄録集）３−Ｏ−８４）。
【００７３】
即ち、Ｊｕｔａｂｈａらの文献に記載の通り、ＢＰＡは、がん細胞表面のＬＡＴ１を通って、細胞内に取り込まれる。そのままではＢＰＡはＬＡＴ１により細胞外に排出もされる。ＢＰＡががん細胞に取り込まれた後、がん細胞から排出される前に、ＪＰＨ２０３を投与することで、ＬＡＴ１に蓋をしてＢＰＡをがん細胞内に封じ込めることができる（ＢＰＡとＪＰＨ２０３投与の時間差が重要となる）。そのため、ＢＰＡの投与量が少なくてもがん細胞を効率よく攻撃できる。すなわち、ＢＰＡの封じ込めに対してＪＰＨ２０３は効果がある。Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３はＪＰＨ２０３より細胞増殖抑制効果が低いことから、ＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ  ｔｙｐｅよりＮＡＴ２  ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ  ｔｙｐｅで効果が高いと考えられる。
【００７４】
現在の標準的なＢＰＡの投与方法は、静脈内点滴投与で、中性子照射前に２００ｍｇ／ｋｇ／ｈの速度で２時間投与し、照射中は、１００ｍｇ／ｋｇの量を照射終了時間に合わせて約１００ｍｇ／ｋｇ／ｈの一定速度で投与する。がん細胞内のＢＰＡを高い濃度に保つかに目標を設定するあまり、細胞外間質の濃度が高くなり、正常細胞への影響も増大する。ＪＰＨ２０３の投与のタイミングは中性子照射前にＢＰＡを１００〜２００ｍｇ／ｋｇ／ｈで３０分〜１時間の静脈内点滴投与を終了した後、直ちにＪＰＨ２０３を１０〜２５ｍｇ／ｋｇ／ｈの速度で静脈内点滴投与する。このＪＰＨ２０３投与開始１５〜３０分後から中性子線を照射する。
【００７５】
尚、ＢＰＡは、局所濃度が高くなると正常細胞表面のＬＡＴ２を通って正常細胞内にも取り込まれるが、ＬＡＴ１に比べてＬＡＴ２の取り込み効率は低い。ＪＰＨ２０３はＬＡＴ１だけにふたをするので、がん細胞内のＢＰＡは中性子照射開始時には十分に高い濃度で封じ込められ続ける。
【００７６】
本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンまたはそれを含む医薬組成物をホウ素中性子捕捉療法と併用する場合は、以下の投与レジメが推奨される。
【００７７】
例えば、がん患者に、ＢＰＡとして、１時間あたり２００ｍｇ／ｋｇの速度で１時間点滴静注する。ここでＢＰＡの投与を中止し、直ちに、ＪＰＨ２０３を１０〜２０ｍｇ／ｋｇ／ｈで静脈内投与を開始して、３０分後から中性子線の照射を開始し、照射中はＪＰＨ２０３の静脈内点滴投与は照射終了まで持続する。
【００７８】
更には、本発明のＯ−（５−アミノ−２−フェニルベンズオキサゾール−７−イル）メチル−３，５−ジクロロ−Ｌ−チロシンとホウ素中性子捕捉療法との組み合わせに対して、前記ＮＡＴ２遺伝子多型の測定方法を組み合わせてもよい。
【００７９】
そのような方法としては、以下の投薬レジメが挙げられる；
（１）  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有する前記対象を同定して選択し；
（２）  含ホウ素化合物を、当該医薬組成物を投与する前に、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及び／またはＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）型のＮＡＴ２遺伝子を有すると同定された当該対象に投与し；そして
（３）  当該医薬組成物を、当該対象に投与する。
【実施例】
【００８０】
以下に具体的な実施形態を挙げて本発明を説明するが、本発明はその実施形態に限定されるものではなく、それらにおける様々な変更および改変が当業者によって、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく実行され得ることが理解される。
【００８１】
実施例１
使用薬剤：ＪＰＨ２０３−ＳＢＥＣＤ（有効成分として５０ｍｇ）を注射用水９．７ｍｌに溶解させ、５０ｍｇ／１０ｍｌ濃度とし、最終的に患者の体表面積に従い、全量１００ｍｌとする。
【００８２】
標準的治療法が無効あるいは不耐の状態にある進行期の固形がん患者を対象とし、ＪＰＨ２０３−ＳＢＥＣＤ（１２、２５、４０、６０、８５ｍｇ／ｍ２）の安全性の評価および次相における推奨用量の決定並びに薬物動態の解析を目的に、非対照非盲検国内第Ｉ相試験を実施した。治験薬は１２ｍｇ／ｍ２を初回投与量としてＦｉｂｏｎａｃｃｉ変法に準じて増量する５レベル（１２、２５、４０、６０、８５ｍｇ／ｍ２）を設定した。同意取得から２８日以内に登録された３名の被験者をレベル毎に対象とし、登録後４日以内に単回投与を行った。１例目の被験者が単回投与を受けた後、最初の７日間反復投与（サイクル１）の１日目の投与開始前検査の結果から安全性に問題がないことが確認された時点で、２例目以降の投与を開始した。
【００８３】
単回投与を受け、健康状態に問題がないと判断できる被験者を対象として、単回投与の７日後以降から中止基準に至るまで、治験薬を反復投与するサイクルを継続した。また、１例目の被験者がサイクル１の７日目の投与開始後４９．５時間の安全性に問題がないことが確認された時点で、２例目以降の投与を開始した。
【００８４】
被験者は単回投与およびサイクル１（１日１回、７日間）では、全量を１００ｍＬの生理食塩水、リンゲル液等適切な輸液剤とした際に目的の用量となるよう調製された治験薬を、ファイナルフィルター（ポアサイズ０．２２μｍ）を含む点滴回路および定量ポンプを介して９０分かけて静脈内に持続投与を受けた。サイクル２以降も同様に、被験者は１日１回、７日間、サイクル１と同じ用法・用量にて目的の濃度となるよう生理食塩水、リンゲル液等適切な輸液剤にて調製された治験薬の投与を受けた。
【００８５】
その結果、胆道がん患者５例に対して部分奏効（ＰＲ）１例、安定（ＳＤ）２例（全奏効率２０．０％、病勢コントロール率６０．０％）が認められ、胆道がん患者に対する本剤の有効性が示唆されている。安全性では臨床的に問題となる有害事象および副作用は認められなかった。これらの結果から、忍容性に問題はなく、胆道がん患者に対する一定の有効性が期待できるものと考えられた。
【００８６】
国内第Ｉ相試験で得られた薬物動態パラメーター解析結果から、体表面積当たりで同じ投与量を投与した被験者間において、血液及び尿中のＮアセチル化体（Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３）濃度の個人差が大きいことが確認された。ＪＰＨ２０３は静脈内投与された後、肝トランスポーターである有機アニオントランスポーター（ＯＡＴＰ）によって肝細胞中に取り込まれる。肝細胞に取り込まれたＪＰＨ２０３は肝細胞中のＮＡＴ２によりＮａｃ−ＪＰＨ２０３へ変化し、胆汁排泄トランスポーターにより胆汁中に排泄されると考えられた。従って、尿中のＮａｃ−ＪＰＨ２０３濃度の個人差は、ＪＰＨ２０３の生体内代謝の大部分を担っていると考えられるＮＡＴ２のアセチル化の速さの違いによるものであると推察された。
【００８７】
薬物動態解析
被験者から、血液（全血）及び尿を採取した。濃度測定に用いた全血は、投与開始から０．５、１、１．５、２、３、４．５、６、１２、２５．５、４９．５時間後に採取した。濃度測定に用いた尿は、投与開始から０−３、３−６、６−１２、１２−２５．５時間ごとに蓄尿で採取した。血中・尿中のＪＨＰ２０３濃度およびそのアセチル体であるＮａｃ−ＪＰＨ２０３濃度を、バリデーションされたＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定系を用いて測定した。
【００８８】
血中ＪＰＨ２０３濃度およびＮａｃ−ＪＰＨ２０３濃度を用いて、薬物動態パラメーターを算出した。そのうちＡＵＣ０−∞を用いて、各被験者の血中のＮａｃ−ＪＰＨ２０３とＪＰＨ２０３の比を求めた。また被験者ごとに、投与開始から２５．５時間までに採取した尿中に含まれるＪＰＨ２０３およびＮａｃ−ＪＰＨ２０３の質量の合計を求め、各被験者における尿中のＮａｃ−ＪＰＨ２０３とＪＰＨ２０３の比を求めた。
【００８９】
ＮＡＴ２遺伝子多型の測定
ＮＡＴ２遺伝子多型の測定は、以下のリアルタイムＰＣＲ法またはＬｕｍｉｎｅｘ  Ｓｙｓｔｅｍを用いる方法のいずれかの方法で実施することができる。いずれの方法においても、ＮＡＴ２に関して下記の７種類のＳＮＰｓを解析対象とする。
【００９０】
【表１】
0006894155.tif 000003
【００９１】
リアルタイムＰＣＲ法
下記の方法に従いリアルタイムＰＣＲ法で測定する。なお、プロトコルの詳細については適宜変更することができる。
（ｉ）  ＮＡＴ２のＤＮＡ濃度を測定した後、解析対象ＳＮＰｓ７種を含む領域を増幅できるＦｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ２種およびＲｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ１種を設計する。
（ｉｉ）  これらのＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ条件を検討し、最終的に使用するＰＣＲプライマーセットおよびＰＣＲ条件を決定する。その後、決定した条件により、ゲノムＤＮＡについてサンガーシーケンス法による配列解析を実施する。
（ｉｉｉ）  ＰＣＲ後、ＰＣＲ産物の精製およびキャピラリーシーケンサーによる測定を行う。シーケンスプライマーにはＰＣＲ  プライマーを使用し、ＰＣＲ  産物の両側よりシーケンスを実施する。
【００９２】
Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｓｙｓｔｅｍを用いる方法
下記の方法に従いＬｕｍｉｎｅｘ  Ｓｙｓｔｅｍ法で測定する。なお、プロトコルの詳細については適宜変更も可能とする。
（ｉ） ＮＡＴ２の解析対象とする７ＳＮＰｓに対応するプローブ固相ビーズを作成する。
（ｉｉ）ビオチン標識プライマーでＮＡＴ２遺伝子を増幅させる。このＰＣＲ増幅産物をプローブと結合させ、ＳＡ−ＰＥで蛍光標識する。
（ｉｉｉ）Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｓｙｓｔｅｍでデータを取得し、解析ソフトウェアでＮＡＴ２遺伝子のタイプを表示する。
【００９３】
ＮＡＴ２遺伝子多型の解析
ＮＡＴ２遺伝子多型の検査は以下のように実施した。第Ｉ相試験時の血液サンプルからＤＮＡを抽出し、ＮＡＴ２の遺伝子多型に応じて、各ＳＮＰの情報からＰｈｅｎｏｔｙｐｅを分類した。方法の概要は以下のとおりである；
ＤＮＡの抽出は、全血２００μＬをＡＥ  ｂｕｆｆｅｒ  １００μＬに溶出後、ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（登録商標）（株式会社キアゲン）を用いて行った。ＮＡＴ２をコードする部位にあるＳＮＰと関連するアレーおよびハプロタイプの測定には、超微量分光光度計（Ｎａｎｏ  Ｄｒｏｐ  ２０００（登録商標）、サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いた（濃度は５ｎｇ／μＬに調整）。遺伝子多型解析はＴａｑＭａｎ（登録商標）ＳＮＰ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ａｓｓａｙを用いた（反応容量５μＬ）。ＳＮＰを検出するために必要なＰＣＲプライマーと蛍光プローブはＰｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いてデザインした。蛍光プローブはリポーター色素（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎあるいはＶＩＣ（登録商標），Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によってラベルしておき、７つのＮＡＴ２ＳＮＰ（ｒｓ１８０１２７９（１９１Ｇ＞Ａ），ｒｓ１０４１９８３（２８２Ｃ＞Ｔ），ｒｓ１８０１２８０（３４１Ｔ＞Ｃ），ｒｓ１７９９９２９（４８１Ｃ＞Ｔ），ｒｓ１７９９９３０（５９０Ｇ＞Ａ），ｒｓ１２０８（８０３Ａ＞Ｇ）およびｒｓ１７９９９３１（８５７Ｇ＞Ａ））にある２つの塩基のうちの１つに特異的に反応するようにした。ＰＣＲの反応条件は、９５℃で１０分に続いて、９２℃で１５秒と６０℃で９０秒を５０サイクル行った。
【００９４】
ＮＡＴ２の遺伝子多型を代表する７つのＳＮＰ（４８１Ｃ＞Ｔ，２８２Ｃ＞Ｔ，８５７Ｇ＞Ａ，８０３Ａ＞Ｇ，３４１Ｔ＞Ｃ，５９０Ｇ＞Ａ，１９１Ｇ＞Ａ）について第Ｉ相試験に参加した１６例の遺伝子を分析した。
【００９５】
２−ＳＮＰ、３−ＳＮＰ、４−ＳＮＰの組み合わせ（表２−１）でＮＡＴ２のアセチル化の表現型（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を解析したところ、アセチル化の速いタイプ（Ｒａｐｉｄ）、はすべて、標準ハプロタイプであるＮＡＴ２＊４のホモ接合体で構成され、アセチル化速度が中間のタイプ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）はいずれか一つのハプロタイプが変異したヘテロ接合体、そしてアセチル化の遅いタイプ（Ｓｌｏｗ）はすべてが変異ハプロタイプのホモ接合体か２以上の変異ハプロタイプのヘテロ接合体の組み合わせである（表２−２）。
【００９６】
【表２−１】
0006894155.tif 000004
ＮＡＴ２遺伝子型解析による表現型の分類
【００９７】
ＮＡＴ２遺伝子型解析による表現型の分類
１６例の被験者のＮＡＴ２  ＳＮＰ表現型は、がん種（大腸がん、胆道がん、膵臓がん、食道がんおよび乳がん）にかかわらず、２−ＳＮＰ、３−ＳＮＰ、４−ＳＮＰのいずれの組み合わせでも一致した結果であった。表３にその結果の詳細を示す。
【００９８】
【表３】
0006894155.tif 000005
【００９９】
ＳＤ：安定（腫瘍の大きさが変化しない状態）
ＰＤ：部分奏効（腫瘍の大きさの和が２０％以上増加かつ絶対値でも５ｍｍ以上増加した状態、あるいは新病変が出現した状態）
ＰＡＡＤ：膵がん（Ｐａｎｃｒｅａｓ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）
ＣＨＯＬ：胆道がん（Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）
ＣＯＡＤ：大腸がん（Ｃｏｌｏｎ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）
ＢＲＣＡ：乳がん（Ｂｒｅａｓｔ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）
ＥＳＣＡ：食道がん（Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ）
【０１００】
ＮＡＴ２表現型と臨床結果（安全性、有効性）との関係
１６例の個体のＮａｃ−ＪＰＨ２０３／ＪＰＨ２０３濃度比のばらつきをＮＡＴ２のＲａｐｉｄタイプ、Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅタイプ、およびＳｌｏｗタイプに分類してみると、代謝物Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３が多いタイプはＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄタイプであり、逆に代謝物の少ない個体はＮＡＴ２  Ｓｌｏｗタイプであった。これらＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群のうちＮａｃ−ＪＰＨ２０３比率の高い４例で肝機能検査値の上昇が認められ、うち２例はＤＬＴ（Ｄｏｓｅ  Ｌｉｍｉｔｉｎｇ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ）と判断された。これらの患者は大腸がん２例、食道がん１例、すい臓がん１例であり、胆道がん患者は含まれなかった。
【０１０１】
すなわち、ＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄタイプを有するがん患者では、ＪＰＨ２０３投与による肝機能障害の値が高かった。
【０１０２】
ＪＰＨ２０３投与患者の臨床有効性をＤＣＲ（Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒａｔｅ）で評価したところ、改善（ＰＲまたはＳＤ）を示した患者数は、全１６例のうちＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群８例のうち１例（１２．５％）、ＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ（Ｓｌｏｗ及びＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）群８例のうち４例（５０％）であった。胆道がん患者のみ（ＢＤＣ：全５例）では、ＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群１例のうち０例（０％）、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群４例のうち３例（７５％）が改善を示した（表４）。
【０１０３】
無増悪生存期間（ＰＦＳ）に関しては、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法にて生存曲線を作成し、無増悪生存期間の中央値並びにその９５％信頼区間について算出した結果、中央値は３７．０日であった（ＣＳＲ  １１．４．１  有効性の解析）。このうちＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群のＰＦＳ中央値は３２日、ＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群は５８日であった。ちなみに胆道がん患者５例のうち４例のＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群のＰＦＳ中央値は９９．５日であった。全体生存期間（ＯＳ）では、１６例全体の中央値は３．５ヶ月、そのうちＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群では２．５ヶ月、ＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群（４例の胆道がん）では６か月であった。両群間に有意差を認めた。
【０１０４】
【表４】
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【０１０５】
ＪＰＨ２０３は肝臓に取込まれ代謝される。肝臓に取込まれたＪＰＨ２０３はアセチル化されてＮ−ａｃｅｔｙｌ−ＪＰＨ２０３（Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３）へ変換され、Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３は血流速度に依存して対外へ排出される。ＪＰＨ２０３もＮａｃ−ＪＰＨ２０３もＯＡＴＰ（有機アニオントランスポーター）によって肝細胞へ取込まれ、肝細胞からの排出はＭｒｐ２（多剤耐性蛋白質：ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２）によって行われる。ＯＡＴＰ１Ｂ１によるＪＰＨ２０３（Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３）の取込み速度はＭｒｐ２による排出速度より小さいので、ＪＰＨ２０３の代謝の律速となるのは取込み過程となると考えられるが（ラット）、ヒトでは肝血流速度との関係で肝細胞での滞留が多く、取込まれた後の細胞内での代謝（ＮＡＴ２によるアセチル化の過程）が律速段階となると考えられた。
【０１０６】
第Ｉ相試験に参加した被験者のＮＡＴ２を７つのＳＮＰで解析し、２−ＳＮＰｓ、３−ＳＮＰｓ、４−ＳＮＰｓのどの組み合わせで見ても被験者個々のＮＡＴ２のＰｈｅｎｏｔｙｐｅ（アセチル化速度：Ｒａｐｉｄ、Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ、およびＳｌｏｗ）は一致した結果を示した（表３）。
【０１０７】
今回第Ｉ相試験に参加した１７例のＮａｃ−ＪＰＨ２０３／ＪＰＨ２０３比率は血中と尿中でほぼ相関したことから、ＪＰＨ２０３は肝臓で代謝された後、その濃度に応じて血液中に排出され、腎臓から受動的に尿中へ排出されると推測される（尚、１例は、解析の段階で尿中の濃度結果が利用できなかったので除いている）。１６例のうちＮａｃ−ＪＰＨ２０３／ＪＰＨ２０３比の高い症例はすべてＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄタイプの患者であった。中でもＮａｃ−ＪＰＨ２０３産生比率の高かった上位４例では肝機能検査値の上昇が認められ、うち２例はＤＬＴと判断された。Ｎａｃ−ＪＰＨ２０３代謝物の毒性については未だ不明の部分が多いが、ラットやヒトに比べてＮＡＴ２が欠損しているイヌにおけるＪＰＨ２０３の４週間の反復投与試験で肝臓や腎臓などへの組織学的変化がラットに比べて軽微であったことは、この臨床成績を裏付ける結果である。
【０１０８】
一方、有効性に関して、ＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群８例のうち１例（大腸がん）がＳＤを示した（１２．５％）のに対して、ＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群８例のうち４例がＰＲまたはＳＤを示した（５０％）。全体生存期間はＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群に比べてＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群で有意に長く、無憎悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値もＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群に比べてＮＡＴ２  Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ群では約２倍長かった。これらの有効性が示唆された４症例のうち３例は胆道がんであったことから、ＮＡＴ２による代謝が徐々に進行し、ＪＰＨ２０３の局所濃度が一定以上に保たれる組織では、ＪＰＨ２０３の有効性がより効果的に発現している可能性が示唆された。ＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群の中でも症例１０２、４０３は最終的にはＰＤであったが、ＰＦＳはＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群の中では長かった。これらの症例の血液中のＮａｃ−ＪＰＨ２０３／ＪＰＨ２０３比率は比較的低く、ＪＰＨ２０３の安全性および有効性に関して、ＮＡＴ２  Ｒａｐｉｄ群の中においては優位にあったことが推測される。
【０１０９】
よって、ＮＡＴ２のＳＮＰ解析はＪＰＨ２０３の治療が有効な対象（がん等の患者）を特定し、その抗腫瘍活性を最大化するための「コンパニオン診断」として有用であることが示唆された。
【０１１０】
また、ＪＰＨ２０３の安全性および有効性に関して、Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄ型のＮＡＴ２遺伝子を有する患者への投与が優位であることは、更に、あらかじめ治療対象患者をＮｏｎ−Ｒａｐｉｄ型遺伝子を有する群と、Ｒａｐｉｄ型遺伝子を有する群に分類してから試験を行う無作為化比較対照試験によって確認することが可能である。
【０１１１】
このような試験において、ＪＰＨ２０３は、例えば、２５ｍｇ／ｍ２、５日間連続投与、９日間休薬、１４日を基本的な１サイクルとして投与され、被験者毎に割り付けられた治験薬を全量（１００ｍＬ）、シリンジポンプまたは輸液ポンプを用いて９０分かけて静脈内持続投与する。
【０１１２】
データ解析方法としては、例えば、盲検下独立中央評価に基づく無増悪生存期間について、治験薬を１回でも投与され、有効性データが存在する全ての被験者を対象として、ＮＡＴ２の代謝タイプ（Ｒａｐｉｄタイプ，Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄタイプ）別に、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを用いて各集団（Ｒａｐｉｄタイプ，Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄタイプ）におけるハザード比とその９５％信頼区間を算出し、さらに投与群とＮＡＴ２代謝タイプの交互作用項を含めたＣｏｘ比例ハザードモデルにより交互作用項に対するｐ値を算出することができる。
【０１１３】
また、全生存期間について、ＮＡＴ２の代謝タイプ（Ｒａｐｉｄタイプ，Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄタイプ）別に、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを用いて各集団（Ｒａｐｉｄタイプ，Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄタイプ）におけるハザード比とその９５％信頼区間を算出し、さらに投与群とＮＡＴ２代謝タイプの交互作用項を含めたＣｏｘ比例ハザードモデルにより交互作用項に対するｐ値を算出する。また、医師の評価に基づく無増悪生存期間について、ＮＡＴ２の代謝タイプ（Ｒａｐｉｄタイプ，Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄタイプ）別に、治験責任（分担）医師の評価に基づく無増悪生存期間（ＰＦＳ）について、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを用いて各集団（Ｒａｐｉｄタイプ，Ｎｏｎ−Ｒａｐｉｄタイプ）におけるハザード比とその９５％信頼区間を算出し、さらに投与群とＮＡＴ２代謝タイプの交互作用項を含めたＣｏｘ比例ハザードモデルにより交互作用項に対するｐ値を算出する。
【０１１４】
実施例２
ＪＰＨ２０３とＮＡＴ２阻害剤との併用実験
ＮＡＴ２阻害剤であるアセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）投与により、血漿中、肝臓中のＪＰＨ２０３濃度が上昇するか、またその代謝物であるＮａｃ−ＪＰＨ２０３濃度が低下するかを評価する。
【０１１５】
用いた動物は、雄のＳＤラット８週齢であり、１．２０ｎｍｏｌ／（分・ｋｇ）のＪＰＨ２０３を投与した。生理食塩水でこの濃度まで希釈し、投与速度は２０μＬ／分である。５００，１５００ｍｇ／ｋｇのアセトアミノフェンをＪＰＨ２０３の投与３０分前に投与した。（０．５％メチルセルロース水溶液）。採血時点は、ＪＰＨ２０３の投与後０（ブランク），３０，６０，１２０，１８０，２４０分とした。また、採取するサンプル量は、血漿として０．２ｍＬ、血液として約０．４ｍＬを採取し、肝臓、腎臓、脳そしてＣＳＦを採取した。
【０１１６】
結果を図１に示す。ＪＰＨ２０３とＮＡＴ２阻害剤との併用により、ＪＰＨ２０３単独での使用に比べて、ラット血中のＮａｃ−ＪＰＨ２０３／ＪＰＨ２０３の比が著しく低下し、ＪＰＨ２０３の代謝速度が遅くなり、ひいてはＪＰＨ２０３の血中濃度が高くなり、ＪＰＨ２０３の効果を維持可能となることがわかる。
【０１１７】
実施例３
代表的ながん細胞として膵がん由来細胞Ｔ３Ｍ４を用い、該細胞にＢＰＡを添加し、１５分後に１０μＭ  ＪＰＨ２０３を添加し、細胞内に封じ込められたＢＰＡ濃度を測定した。結果を図２に示す。ＪＰＨ２０３非添加（●）の場合、ＢＰＡは時間を追うごとに細胞から排出されるため細胞内濃度が減少する。一方でＪＰＨ２０３添加（■）の場合、ＪＰＨ２０３によりＢＰＡの排出が抑制されるため細胞内濃度が保たれ、３０分後では両者の細胞内濃度は１０倍程度の差がついていることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明の医薬組成物により、薬剤の安全性を高め、且つ、効果の奏効性を向上させたがん等の治療を提供することが可能となる。
【図１】
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【図２】
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