(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＡＣ００９−Ｈ１）で表される化合物。
【化１】
0006896630.tif 000023
【請求項２】
式（ＡＣ０１２−Ｈ１）で表される化合物。
【化２】
0006896630.tif 000024
【請求項３】
癌の治療用の医薬組成物であって、該組成物は、治療に有効な量の化合物及び少なくとも一つの薬学的に許容されるキャリアとを含み、
前記化合物は、以下の式で表されるＡＣ０１１、ＡＣ００９−Ｈ１及びＡＣ０１２−Ｈ１からなる群から選択される少なくとも１種である癌の治療用の医薬組成物。
【化３】
0006896630.tif 000025
【請求項４】
前記キャリアは、賦形剤、希釈剤、増粘剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、油性及び非油性の基剤、界面活性剤、懸濁化剤、ゲル化剤、補助剤、防腐剤、酸化防止剤、安定剤、色素並びに香料の少なくとも１種を含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物は、癌細胞の増殖を抑制することにより治療効果を有する請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記医薬組成物は、静脈注射用の製剤、皮下注射用の製剤、経口投与用の製剤又は塗布用の製剤である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物は、溶液、乳剤、懸濁剤、粉末、錠剤、油剤、軟膏剤又はカプセルの剤形である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記癌は、前立腺癌、肝癌、黒色腫、脳腫瘍、大腸癌からなる群から選択される少なくとも１種である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記癌は大腸癌又は肝癌である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
牛樟芝菌糸体の生物活性を有する化合物の製造方法であって、
該方法は、
牛樟芝菌糸体をｎ−ヘキサンで、それぞれ一時間から三時間、二回還流抽出し、
真空濾過した後、二つのヘキサン抽出液を混合し、
シリカゲル（７０−２３０メッシュ）と菌糸体とでカラムを準備し、
ｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶液で溶出してＦ１、Ｆ２とＦ３の画分を得、勾配は、それぞれ、１７−２２％の酢酸エチル、２３−２７％の酢酸エチル及び２８−３３％の酢酸エチルであり、Ｆ３を保持時間によって三つの画分Ｆ３−１、Ｆ３−２、Ｆ３−３に連続して分離し、
画分Ｆ３−１を、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトンを用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０：１から２０：１の勾配溶出）で分離し、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４０：１−１５：１の画分を採取し、更に順相セミ分取ＨＰＬＣカラムにてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４：１）を用いて精製された下記ＡＣ００６を得、
【化４】
0006896630.tif 000026
画分Ｆ３−２を順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン勾配溶液（１００％：０％から７０％：３０％）を用いて分離し、９５％：５％から８５％：１５％までの画分を採取してＦ３−２−１、Ｆ３−２−２、Ｆ３−２−３の三つの画分に連続して分離し、
画分Ｆ３−２−３を、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０から７０／３０までの画分を採取し、さらに、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０の溶出溶液で下記ＡＣ００７を得、
【化５】
0006896630.tif 000027
画分Ｆ−３−３を、順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１００％：０％から０％：１００％）勾配溶出を用いて分離し、９０％：１０％から７０％：３０％までの画分を採取し、画分Ｆ３−３−１、Ｆ３−３−２、Ｆ３−３−３、Ｆ３−３−４、Ｆ３−３−５の五つに連続して分離し、
Ｆ−３−３−５（ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝７３／２７の画分）を、移動相としてｎ−ヘキサン／アセトン（９５％：５％から５０％：５０％）を用いたシリカゲルカラムで精製して、８５％：１５％から７０％：３０％の画分を採取し、画分Ｆ３−３−５−１、Ｆ３−３−５−２、Ｆ３−３−５−３、Ｆ３−３−５−４、Ｆ３−３−５−５に五つに連続して分離し、
画分Ｆ３−３−５−１（ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０−８０／２０）を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝３５／６５〜２０／８０勾配を用いて、逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラム精製により分離し、水中の１％蟻酸／メタノール＝２８／７２−２２／７８の画分を取って、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶出（８０％：２０％から５０％：５０％まで）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７５％：２５％−６５％：３５％）の溶出溶液で下記ＡＣ０１２を得、
【化６】
0006896630.tif 000028
画分Ｆ３−３−５−３を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５／７５の１５ｍＬ／ｍｉｎのイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、さらに、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルを用いてシリカゲル勾配溶液（１００％：０％から０％：１００％まで）で１３０から１７０分の保持時間の画分を精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル＝８０／２０−６０／４０の溶出溶液で下記ＡＣ００９を採取し、
【化７】
0006896630.tif 000029
画分Ｆ３−３−５−４（ｎ−ヘキサン／アセトン＝７６／２４）を分離し、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％：７５％及びイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィで精製し、下記ＡＣ０１１を得、
【化８】
0006896630.tif 000030
前記ＡＣ００６、ＡＣ００７、ＡＣ００９、ＡＣ０１１、ＡＣ０１２は、牛樟芝菌糸体の生物活性を有する化合物である製造方法。
【請求項１１】
１モル当量のＮａＯＭｅで前記生物活性を有する化合物を加水分解し、
加水分解反応が終わった後、酸性アンバライトを加えて濾紙で濾過し、中間産物を得、
分離樹脂としてシリカゲルを、移動相としてヘキサンと酢酸エチルの勾配溶液を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより該中間産物を溶出し、ヘキサンと酢酸エチルとの溶出勾配を４：１から１：１までとして、勾配溶液が１：１の比率で生成物を溶出し、
Ｃ１８セミ分取カラムとイソクラティック溶出剤としてメタノール：０．１％ＦＡ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）＝７５：２５の溶液とを用いた逆相ＨＰＬＣによって前記生成物を精製して、前記生物活性を有する化合物のＣ４が水酸基である誘導体を製造する請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は牛樟芝から純化された化合物、その製造方法及び用途に関する。特に、該化合
物が癌細胞の増殖及び血管の新生を抑制し、それにより癌を治療することができる。
【背景技術】
【０００２】
牛樟芝（Antrodia camphorata、以前はAntrodia cinnamomeaと命名された）は牛樟樹（
Cinnamomum kanchirai Hayata、lauraceae）の空洞部に寄生するキノコで、台湾だけに生
息するキノコである。昔から伝承医療に、樟芝は優れた解毒剤として、食物中毒や農薬中
毒に適用でき、民間には肝炎や肝臓関連の病気の治療に用いる。樟芝は高度な薬用価値が
あり、栽培しにくくて成長は遅いため、今まで樟芝に対するゲノミクス及びメタボロミク
スは研究され（Lu et al. 2014 PNAS、Lin et al. 2011 J Agr Food Chem）、それによっ
て、牛樟芝の医薬用途及び栽培方法をより理解することを意図している。
【０００３】
牛樟芝には高分子の多糖類と小分子のトリテルペン類化合物などの多種類の生物活性を
有する物質がが含有され、それが薬物として利用できる。そのうち多糖類は様々な単糖が
結合したもので存在し、スペクトルで分析すると多糖類は1,3- β‐D‐グルカン（1,3-β
-D-glucan）という成分を有している。公表された牛樟芝多糖にある多種類の医療用途は
、血管新生を抑制すること（Yang et al. 2009 J Ethnopharmacol、Cheng et al. 2005 L
ife Sci）、免疫を抑制すること（Meng et al. 2012 Nutrition）、免疫反応を調節し且
つ喘息を抑制すること（Liu et al. 2010 Immunology）、Ｂ型肝炎ウイルスを抑制するこ
と（Lee et al. 2002 FEMS Microbiol Lett）、癌細胞の成長を抑制すること（Liu et al
. 2004 Toxicol Appl Pharmacol、Lee et al. 2014 Food Funct）などを含む。更にアン
トロダン（antrodan）は、牛樟芝から抽出された糖タンパク質（glycoprotein、protein-
bound polysaccharide）で、肝臓が受ける損傷を避ける機能を有する（Ker et al. 2014 
PLoS ONE、TW500628、US 7763723）。
【０００４】
また、トリテルペン類化合物（Triterpenoids）は牛樟芝の主要な医薬用化合物であり
、牛樟芝にある苦味の主な根源でもある。初期にはCherng et al.がエルゴスタン（ergos
tane）である三種類の新型なトリテルペン類化合物、antcins A-C(Ｃherng et al.1995 J
Nat Prod)及び四種類の新型なトリテルペン類化合物、antcins E-F、methyl antcinate 
G、methyl antcinate H(Cherng et al. 1996 Phytochemistry)を開示した。その後、何十
種類ものトリテルペン類化合物には、癌細胞の成長を抑制すること（Wu et al. 2010 J N
at Prod）、免疫反応を抑制すること（Liaw et al. 2013 J Nat Prod）、肝癌及び肝炎を
治療すること（Lien et al. 2014 Molecules）、疲労を低減すること（Huang et al. 201
2 Evid Based Complement Altern Med）などを含む医療効果があると発表された。
【０００５】
米国特許US7109232には牛樟芝から精製された五種類の新型な化合物及びその用途が開
示され、その用途は炎症及び腫瘍への抵抗を含む。US7732482には前記化合物が器官線維
症を抑制する効果を有することが開示された。US7342137には、多種類の癌細胞の成長を
抑制する効果を有する新規な牛樟芝化合物群が開示された。US7745647には子実体から分
離した新型なジテルペン類化合物が開示され、それは神経細胞を保護する効果を有する。
US7994158には牛樟芝から純化されたデヒドロスルフレン酸（dehydrosulphurenic acid）
が開示され、それは腫瘍細胞、特に白血病や膵癌を抑制する効果を有する。US7531627に
は分子量が29ｋDaである新型な牛樟芝タンパク質ACA1が開示され、それは免疫を促進する
効果及び癌を治療する潜在力を有する。
【０００６】
牛樟芝の癌を抑制するメカニズムは化合物の化学構造によって異なっている。Yeh et a
l.はセスキテルペンラクトンアントロシン（sesquiterpene lactone antrocin）がJAK２
／STAT３のメッセージ伝送経路を抑制し、それによりアポトーシス（apoptosis）を誘発
することを発表した（Yeh et al. 2013 Carcinogenesis）。Yang et al.は牛樟芝でHER-2
／neuのメッセージ伝送を抑制するほか、卵巣癌を抑制できることを発表した（Yang et a
l. 2013 J Ethnopharmacol）。Wang et al.はアントロキノノールD（antroquinonol D）
がDNAを脱メチル化し、且つ癌を抑制する潜在力を有することを発表した（Wang et al. 2
014 J Agric Food Chem）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
要約すると、牛樟芝は抗癌の可能性を有する物質を含み、多種類の癌に対して治療効果
があることがすでに検証されたが、まだ新型な化合物が存在しているかどうか及びどんな
化合物が抗癌効果を有するかということについてはほとんど知られていない。牛樟芝から
新型な化合物を精製する上で、その構造と効果を分析できれば、癌の治療に応用でき、新
薬の開発に有効である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の目的は、式（Ｉ）に示した化合物を提供することである。
【化１】
0006896630.tif 000002
R1は水素又はアセチル基である。
【０００９】
そのうち、この化合物はAC007及びAC007-H1であり、下記に示される。
【化２】
0006896630.tif 000003
【００１０】
本発明は、また式（ＩＩ）に示した化合物を提供する。
【化３】
0006896630.tif 000004
R1は水素又はアセチル基である。
【００１１】
この化合物は、AC009及びAC009-H1であり、下記に示される。
【化４】
0006896630.tif 000005
【００１２】
本発明は、更に式（ＩＩＩ）に示した化合物を提供する。
【化５】
0006896630.tif 000006
R1は水素又はアセチル基である。
【００１３】
この化合物はAC012及びAC012-H1であり、下記に示される。
【化６】
0006896630.tif 000007
【００１４】
本発明は、また癌を治療するための医薬組成物を提供する。それには治療に有効な量の
化合物及び少なくとも一種類の薬学的に許容されるキャリア、塩類又はプロドラッグが含
まれる。この化合物はAC006、AC007、AC009、AC011、AC012、AC007-H1、AC009-H1及びAC0
12-H1からなるグループから選択されるか又は前記化合物の少なくとも二つから任意に組
み合わることができる。
【００１５】
キャリアは賦形剤、希釈剤、増粘剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、油性又は非油
性の基剤、界面活性剤、懸濁化剤、ゲル化剤、補助剤、防腐剤、酸化防止剤、安定剤、色
素、香料を含む。
【００１６】
医薬組成物は癌細胞の増殖を抑制することにより、治療に用いられる。
医薬組成物は静脈注射、皮下注射、経口又は塗布の方法で患者に投与される。
医薬組成物は溶液、乳剤、懸濁剤、粉末、錠剤、油剤、軟膏剤、経口剤、カプセルを含
む剤形を有する。
本発明はまた癌を治療する方法を提供し、有効な量の医薬組成物を投与し、該医薬組成
物は治療に有効な量の前記化合物を含む。
癌は前立腺癌、肝癌、黒色腫、脳腫瘍、大腸癌からなるグループから選択される。なか
でも、大腸癌及び肝癌に対して有効である。
医薬組成物は静脈注射、皮下注射、経口又は塗布の方法で患者に投与される。
【００１７】
本発明は更に牛樟芝菌糸体で生物活性を有する化合物及びその誘導体を製造する方法を提供し、それは以下のステップを含む。
牛樟芝菌糸体をｎ−ヘキサンで、それぞれ一時間から三時間、二回還流抽出し、
真空濾過した後、二つのヘキサン抽出液を混合し、
シリカゲル（７０−２３０メッシュ）と菌糸体でカラムを準備し、
ｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶液で溶出してＦ１、Ｆ２とＦ３の画分を得、勾配は、それぞれ、１７−２２％の酢酸エチル、２３−２７％の酢酸エチル及び２８−３３％の酢酸エチルであり、Ｆ３を保持時間によって三つの画分Ｆ３−１〜Ｆ３−３に分け、
画分Ｆ３−１を、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトンを用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０：１から２０：１の勾配溶出）で分離し、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４０：１−１５：１の画分を採取し、更に順相セミ分取ＨＰＬＣカラムにてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４：１）を用いて精製されたＡＣ００６を得、
画分Ｆ３−２を順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン勾配溶液（１００％：０％から７０％：３０％）を用いて分離し、９５％：５％から８５％：１５％までの画分を採取してＦ３−２−１からＦ３−２−３まで三つの画分に分離し、
画分Ｆ３−２−３を、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０から７０／３０までの画分を採取し、さらに、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０の溶出溶液でＡＣ００７を得、
画分Ｆ−３−３を、順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１００％：０％から０％：１００％）勾配溶出を用いて分離し、９０％：１０％から７０％：３０％までの画分を採取し、画分Ｆ３−３−１からＦ３−３−５まで五つに分離し、
Ｆ−３−３−５（ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝７３／２７の画分）を、移動相としてｎ−ヘキサン／アセトン（９５％：５％から５０％：５０％）を用いたシリカゲルカラムで精製して、８５％：１５％から７０％：３０％の画分を採取し、画分Ｆ３−３−５−１からＦ３−３−５−５まで五つに分離する。
【００１８】
画分Ｆ３−３−５−１（ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０−８０／２０）を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝３５／６５〜２０／８０勾配を用いて、逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラム精製により分離し、水中の１％蟻酸／メタノール＝２８／７２−２２／７８の画分を取って、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチルで勾配溶出（８０％：２０％から５０％：５０％まで）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７５％：２５％−６５％：３５％）の溶出溶液でＡＣ０１２を得、
画分Ｆ３−３−５−３を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５／７５の１５ｍＬ／ｍｉｎのイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、さらに、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルを用いてシリカゲル勾配溶液（１００％：０％から０％：１００％まで）で１３０から１７０分の保持時間の画分を精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル＝８０／２０−６０／４０の溶出溶液でＡＣ００９を採取し、
画分Ｆ３−３−５−４（ｎ−ヘキサン／アセトン＝７６／２４）を分離し、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％：７５％及びイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィで精製し、ＡＣ０１１を得、
前記ＡＣ００６、ＡＣ００７、ＡＣ００９、ＡＣ０１１、ＡＣ０１２は、牛樟芝菌糸体の生物活性を有する化合物である。
【００１９】
好ましい実施様態では、該生物活性を有する化合物を更にC4がヒドロキシル基である誘導体の製造に用いられ、下記ステップを含む。
１モル当量のメタノールで前記生物活性を有する化合物を加水分解し、
加水分解反応が終わった後、酸性アンバライトを加えて濾紙で濾過し、中間産物を得、
分離樹脂としてシリカゲルを、移動相としてヘキサンと酢酸エチルとの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより該中間産物を溶出し、ヘキサンと酢酸エチルとの溶出勾配を４：１から１：１までとして、勾配溶液が１：１の比率で生成物を溶出し、
Ｃ１８セミ分取カラムとイソクラティック溶出剤としてメタノール：０．１％ＦＡ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）＝７５：２５の溶液を用いた逆相ＨＰＬＣによって前記生成物を精製して、前記生物活性を有する化合物のＣ４が水酸基である誘導体を得ることができる。
また、本発明は血管の新生と癌細胞の増殖を抑制する組成物を提供し、それは上記牛樟芝抗生物質、適当な希釈剤、賦形剤を含み、該組成物は高い増殖能力を持つ細胞の増殖を抑制できる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明の抽出物AC012のインビトロでの血管新生を抑制する能力を示す。それぞれはEPC細胞の培養に別々に、（A）対照群、(B)0.1μｇ／ｍｌのAC012、（C）0.3μｇ／ｍｌのAC012、（D）１μｇ／ｍｌのAC012を加えた。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本明細書に使用するあらゆる技術性及び科学専門用語は、別に定義されたものを除いて
、全部当業者が理解できる共通的意味を持つ。本発明は下記実施例で説明されるが、それ
らの例に限られない。別に説明されるものを除き、本発明が使用する材料は全部市販され
て取得しやすく、下記はただ取得できるルートの例を示す。
【００２２】
用語「治療」、「治療に用いる」及びそれに類似する用語は患者が患っている診断可能
な病気及び該病気による相関的な病症を遅延、改善、緩和又は逆転する方法及び該病気や
それが属するいずれかの病症を予防する方法を指す。
用語「薬学的に許容される」とは、物質及び組成物が、その薬学的な製剤にあるほかの
成分を含むことができ、患者の病症を悪化させないことを意味する。
本発明が提供する化合物及び組成物は当業者に知られている技術で、本発明が提供する
化合物及び組成物を、少なくとも一種類の薬学的に許容されるキャリア（vehicle）と組
み合わせ、本発明の組成物に適用する剤形を製造できるものを指す。剤形は溶液、乳剤、
懸濁液、粉末、錠剤、経口剤、タブレット、チューインガム、カプセル及びほかの類似物
、本発明に適用する剤形を含むがそれらに限定されない。
用語「薬学的に許容されるキャリア」は下記から選択される一種類又は多種類のタイプ
を含む。溶剤、乳化剤、懸濁剤、分解剤、結合剤、賦形剤、安定化剤、キレート剤、希釈
剤、ゲル化剤、防腐剤、潤滑剤、界面活性剤及びほかの類似物、本発明に適用するキャリ
ア等である。
【００２３】
前記組成物において、また必要により、一種類又は多種類の上記製剤分野で通常に使用
する溶解補助剤、緩衝剤、着色剤、調味剤などを適切に添加できる。
用語「薬学的に許容される賦形剤」はポリマー、樹脂、可塑剤、充填剤、潤滑剤、希釈
剤、結合剤、崩壊剤、溶媒、共溶媒、界面活性剤、防腐剤、甘味剤、香味剤、医薬グレー
ドの染料及び顔料ならびに増粘剤の少なくとも一つを含むが、それらに限定されない。
用語「医薬組成物」は固体又は液体組成物を指し、それは患者に投与しやすい適切な製
剤、濃度、純度を有し、投与された後、意図する生理的変化を誘発することができる。医
薬組成物は無菌及び／又は非発熱性のもの（non-pyrogenic）である。
用語「有効な量」は意図する生体反応を生じさせ、引き起こす必要な使用量を指すが、
治癒する必要な定量ではない。当業者には理解でき、医薬組成物の有効な量が下記原因で
変化する可能性はある。希望の生物終点、予定に提供する生物活性剤、カプセル化マトリ
ックス（encapsulating matrix）の組成、目的組織などである。
【００２４】
実施例１：牛樟芝化合物の製造
牛樟芝の液体発酵菌糸体をｎ−ヘキサンで、それぞれ一時間から三時間、二回還流抽出し、
真空濾過した後、二つのヘキサン抽出液を混合し、
シリカゲル（７０−２３０メッシュ）と菌糸体とでカラムを準備し、  ｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶液で溶出してＦ１、Ｆ２とＦ３の画分を得、勾配は、それぞれ、１７−２２％の酢酸エチル、２３−２７％の酢酸エチル及び２８−３３％の酢酸エチルであり、Ｆ３を保持時間によって三つの画分Ｆ３−１〜Ｆ３−３に分ける。
【００２５】
画分Ｆ３−１を、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトンを用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０：１から２０：１の勾配溶出）で分離し、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４０：１−１５：１の画分を採取し、更に順相セミ分取ＨＰＬＣカラムにてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４：１）を用いて精製して精製されたＡＣ００６を得る。
【００２６】
画分Ｆ３−２を順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン勾配溶液（１００％：０％から７０％：３０％）を用いて分離し、９５％：５％から８５％：１５％までの画分を採取してＦ３−２−１からＦ３−２−３まで三つの画分に分ける。
画分Ｆ３−２−３を、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０から７０／３０までの画分を採取し、さらに、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０の溶出溶液でＡＣ００７を得る。
【００２７】
画分Ｆ−３−３を、順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１００％：０％から０％：１００％）勾配溶出を用いて分離し、９０％：１０％から７０％：３０％までの画分を採取し、画分Ｆ３−３−１からＦ３−３−５まで五に分離し、さらに、Ｆ−３−３−５（ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝７３／２７の画分）移動相としてｎ−ヘキサン／アセトン（９５％：５％から５０％：５０％）を用いたシリカゲルカラムで精製して、８５％：１５％から７０％：３０％の画分を採取し、画分Ｆ３−３−５−１からＦ３−３−５−５まで五つに分離する。
Ｆ３−３−５−１（ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０−８０／２０）を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝３５／６５〜２０／８０勾配を用いて、逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラム精製により取る。水中の１％蟻酸／メタノール＝２８／７２−２２／７８の画分を取って、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチルで勾配溶出（８０％：２０％から５０％：５０％まで）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７５％：２５％−６５％：３５％）の溶出溶液でＡＣ０１２を得る。
【００２８】
画分Ｆ３−３−５−３を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５／７５の１５ｍＬ／ｍｉｎのイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、ＡＣ００９のほとんどを含有する画分を得、さらに、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルを用いてシリカゲル勾配溶液（１００％：０％から０％：１００％まで）で１３０から１７０分の保持時間の画分を精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル＝８０／２０−６０／４０の溶出溶液でＡＣ００９を採取する。
【００２９】
Ｆ３−１を取り、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％：７５％イソクラティックを用いた逆相ＨＰＬＣ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィーで精製し、ＡＣ−０５−０１を得る。
【００３０】
Ｆ３−３−５−４（ｎ−ヘキサン／アセトン＝７６／２４）を取り、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％／７５％と、移動相としてイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＡＣ０１１を得た。
抽出物はＡＣ００６、ＡＣ００７、ＡＣ００９、ＡＣ０１１、ＡＣ０１２すなわち牛樟芝にある抗がん活性を有する化合物である。
【００３１】
実施例２：牛樟芝化合物の化学構造に対する分析
前記抽出された化合物は、スペクトル分析でその化学構造を識別し、１D/２D  NMR及び
質量分析計の使用が含まれる。この化合物の構造分析結果は下記のとおりである。
【００３２】
実施例２．１：AC006
【化７】
0006896630.tif 000008
【００３３】
EIMS, m/z 471.2701 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.77 (1H, d, J = 3.2 Hz
, H-4), 5.18 (1H, t, J = 5.6 Hz, H-12), 5.16 (1H, t, J = 6.4 Hz, H-8), 5.11 (1H,
dt, J = 1.6, 8.8 Hz, H-16), 4.43 (1H, q, J=6.8, H-15), 4.00 (3H, s, H-24), 3.62
(3H, s, H-23), 2.53 (1H, m, H-6), 2.29 (1H, m, H-7a), 2.24 (2H, m, H-14), 2.11 
(2H, m, H-11), 2.10 (3H, s, -OAc), 2.08 (1H, m, H-10a), 2.02 (1H, m, H-7b), 1.94
(1H, m, H-10b), 1.92 (1H, m, H-5), 1.71 (3H, d, J = 1.2 Hz, H-18), 1.66 (3H, d,
J = 1.2 Hz, H-19), 1.64 (3H, s, H-20), 1.58 (3H, s, H-21), 1.18 (3H, d, J = 6.8
Hz, H-22); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 199.2 (s, C-1), 171.6 (s, - COCH3), 160.
7 (s, C-3), 138.9 (s, C-2), 138.8 (s, C-9), 134.9 (s, C-17), 132.9 (s, C-13), 12
9.6 (d, C-16), 128.4 (d, C-12), 122.2 (d, C-8), 70.4 (d, C-4), 68.1 (d, C-15), 6
1.2 (q, C-23), 60.4 (q, C-24), 49.2 (t, C-14), 44.4 (d, C-5), 42.6 (d, C-6), 40.
9 (t, C-10), 28.1 (t, C-7), 27.6 (t, C-11), 26.1 (q, C-18), 21.0 (q, - COCH3), 1
8.5 (q, C-19), 16.8 (q, C-20), 16.5 (q, C-21), 13.3 (q, C-22).
【００３４】
実施例２．２：AC007
【化８】
0006896630.tif 000009
【００３５】
EIMS, m/z 471.2690 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.76 (1H, d, J = 3.1 Hz
, H-4), 5.57 (1H, m, H-16), 5.55 (1H, m, H-15), 5.16 (1H, t, J = 7.3 Hz, H-12), 
5.15 (1H, t, J = 7.1 Hz, H-8), 3.99 (3H, s, H-24), 3.61 (3H, s, H-23), 2.52 (1H,
m, H-6), 2.27 (1H, m, H-7a), 2.11 (2H, m, H-11), 2.10 (3H, s, -OAc), 2.02 (1H, 
m, H-7b), 2.00 (2H, m, H-10), 1.93 (1H, m, H-5), 1.59 (3H, s, H-20), 1.58 (2H, d
, J = 8.0 Hz, H-14), 1.57 (3H, s, H-21), 1.25 (3H, s, H-19), 1.25 (3H, s, H-18),
1.17 (3H, d, J = 7.0 Hz, H-22); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 199.1 (s, C-1), 171
.4 (s, - COCH3), 160.6 (s, C-3), 140.5 (d, C-16), 138.9 (s, C-2), 138.7 (s, C-9)
, 135.1 (s, C-13), 126.2 (d, C-15), 126.1 (d, C-12), 122.1 (d, C-8), 71.1 (s, C-
17), 70.3 (d, C-4), 61.1 (q, C-23), 60.2 (q, C-24), 44.2 (d, C-5), 43.5 (t, C-14
), 42.5 (d, C-6), 40.8 (t, C-10), 30.0 (q, C-18), 30.0 (q, C-19), 28.0 (t, C-7),
27.5 (t, C-11), 20.8 (q, - COCH3), 16.3 (q, C-21), 16.1 (q, C-20), 13.1 (q, C-2
2).
【００３６】
実施例２．３：AC009
【化９】
0006896630.tif 000010
【００３７】
EIMS, m/z 471.26498 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.77 (1H, d, J = 3.2 H
z, H-4), 5.39 (1H, td, J = 7.2, 1.2 Hz, H-16), 5.16 (1H, td, J = 7.2, 0.8 Hz, H-
12), 5.16 (1H, td, J = 7.2, 0.8 Hz, H-8), 4.00 (3H, s, H-23), 3.91 (2H, s, H-18)
, 3.62 (3H, s, H-24), 2.53 (1H, m, H-6), 2.28 (1H, m, H-7a), 2.14 (2H, m, H-11),
2.14 (2H, m, H-15), 2.10 (3H, s, -OAc), 2.04 (1H, m, H-7b), 2.03 (2H, m, H-10),
2.03 (2H, m, H-14), 1.92 (1H, m, H-5), 1.64 (3H, s, H-19), 1.62 (3H, s, H-20), 
1.58 (3H, s, H-21), 1.18 (3H, d, J = 7.2 Hz, H-22); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 
199.2 (s, C-1), 171.6 (s, - COCH3), 160.8 (s, C-3), 138.9 (s, C-2), 138.8 (s, C-
9), 136.0 (s, C-13), 136.0 (s, C-17), 126.7 (d, C-16), 125.7 (d, C-12), 122.2 (d
, C-8), 70.5 (d, C-4), 69.1 (t, C-18), 61.3 (q, C-24), 60.4 (q, C-23), 44.4 (d, 
C-5), 42.6 (d, C-6), 41.0 (t, C-10), 40.7 (t, C-14), 28.1 (t, C-7), 27.6 (t, C-1
6), 27.5 (t, C-11), 21.0 (q, - COCH3), 16.5 (q, C-21), 16.3 (q, C-20), 13.9 (q, 
C-19), 13.1 (q, C-22).
【００３８】
実施例２．４：AC012
【化１０】
0006896630.tif 000011
【００３９】
EIMS, m/z 473.2846 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.77 (1H, d, J = 3.2 Hz
, H-4), 5.16 (1H, t, J = 7.6 Hz, H-8), 5.13 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-12), 4.00 (3H,
s, H-24), 3.62 (3H, s, H-23), 3.38 (1H, d, J = 10.2 Hz, H-18a), 3.31 (1H, d, J 
= 5.6 Hz, H-18b), 2.53 (1H, m, H-6), 2.26 (1H, m, H-7a), 2.13 (2H, m, H-11), 2.1
0 (3H, s, -OAc), 2.04 (1H, m, H-7b), 2.00 (2H, m, H-10), 1.96 (2H, m, H-14), 1.9
3 (1H, m, H-5), 1.60 (3H, s, H-20), 1.58 (3H, s, H-21), 1.56 (1H, m, H-17), 1.36
(2H, m, H-15), 1.06 (2H, m, H-16), 1.06 (3H, d, J = 4.8 Hz, H-22), 0.90 (3H, d,
J = 6.8 Hz, H-19); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 198.9 (s, C-1), 171.3 (s, - COCH
3), 160.5 (s, C-3), 138.7 (s, C-9), 138.6 (s, C-2), 136.2 (s, C-13),  125.3 (d, 
C-12), 122.0 (d, C-8), 70.3 (d, C-4), 68.4 (t, C-18), 61.1 (q, C-23), 60.2 (q, C
-24), 44.2 (d, C-5), 42.5 (d, C-6), 41.0 (t, C-14), 40.9 (t, C-10), 36.8 (d, C-1
7), 34.0 (t, C-16), 28.0 (t, C-7), 27.4 (t, C-11), 26.5 (t, C-15), 20.9 (q, - CO
CH3), 17.2 (q, C-19), 16.4 (q, C-21), 16.0 (q, C-20), 13.2 (q, C-22).
【００４０】
実施例２．５：AC011
【化１１】
0006896630.tif 000012
【００４１】
EIMS, m/z 475.2553 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.81 (1H, d, J = 3.2 Hz
, H-4), 5.57 (1H, m, H-16), 5.55 (1H, m, H-15), 5.15 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-12), 
5.12 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 3.99 (3H, s, H-23), 3.62 (3H, s, H-22), 2.66 (1H,
d, J = 5.2 Hz, H-14),  2.38 (2H, m, H-6), 2.09 (3H, s, -OAc), 2.05 (2H, m, H-11
), 2.03 (1H, m, H-7a), 2.01 (2H, m, H-10), 1.99 (1H, m, H-7b), 1.92 (1H, m, H-5)
, 1.58 (3H, s, H-20), 1.58 (3H, s, H-21), 1.25 (3H, s, H-19), 1.25 (3H, s, H-18)
; 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 197.1 (s, C-1), 171.6 (s, - COCH3), 161.8 (s, C-3)
, 140.5 (d, C-15), 139.5 (s, C-2), 135.2 (s, C-13), 126.2 (d, C-16), 126.0 (d, C
-12), 122.2 (d, C-8), 121.9 (s, C-9), 71.1 (s, C-17), 71.1 (d, C-4), 61.1 (q, C-
22), 60.0 (q, C-23), 43.5 (t, C-14), 40.8 (t, C-10), 39.2 (t, C-6), 38.3(d, C-5)
, 30.1 (t, C-7), 30.0 (q, C-18), 30.0 (q, C-19), 27.5 (t, C-11), 20.7 (q, - COCH
3), 16.3 (q, C-21), 16.2 (q, C-20).
【００４２】
実施例２．６：AC-05-01
【化１２】
0006896630.tif 000013
【００４３】
EIMS, m/z 385.2379 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.25 (1H, t, J = 4.3 Hz
, H-12), 5.20 (1H, t, J = 4.8 Hz, H-8), 4.69 (1H, m, H-15), 4.16 (1H, q, J = 4.1
Hz, H-4), 2.73 (1H, m, H-17), 2.36 (1H, m , H-14a), 2.31 (1H, m, H-6), 2.29 (1H
, m, H-7a), 2.27 (2H, m, H-3), 2.23 (1H, m, H-14b), 2.19 (1H, m, H-16a), 2.16 (2
H, m, H-11), 2.08 (2H, m, H-10), 2.02 (1H, m, H-7b), 1.98 (1H, m, H-16b), 1.88 (
2H, m, H-2), 1.67 (3H, s, H-20), 1.65 (3H, s, H-21), 1.41 (1H, m, H-5), 1.23 (3H
, d, J = 4.9 Hz, H-19), 1.06 (3H, d, J = 4.3 Hz, H-22); 13C NMR (100 MHz, CD3OD)
δ 213.8 (s, C-1), 182.7 (s, H-18), 137.9 (s, C-9), 131.8 (s, C-13), 129.3 (d, 
C-12), 122.7 (d, C-8), 78.8 (d, C-15), 76.2 (d, C-4), 48.6 (d, C-6), 48.2 (d, C-
5), 46.0 (t, C-14), 40.6 (t, C-10), 36.6 (t, C-3), 35.7 (t, C-16), 35.1 (d, C-17
), 32.9 (t, C-7), 29.6 (t, C-2), 27.5 (t, C-11), 16.5 (q, C-20), 16.3 (q, C-21),
16.0 (q, C-19), 11.8 (q, C-22).
【００４４】
実施例３：牛樟芝化合物の置換基修飾
前記牛樟芝化合物の化学構造を分析した後、そのＣ３とＣ４置換基を修飾する。その置換基で改造された産物がＣ４に水酸基（−ＯＨ）で置換されたものは、Ｈ１で標識される。その置換基で改造された産物がＣ４に水酸基で置換され且つＣ３にジメトキシ（ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ）基で置換されたものは、Ｈ２で標識される。
【００４５】
１モル当量のＮａＯＭｅ（Ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔｈｏｘｉｄｅ）及び無水メタノールを溶剤としてＡＣ０１２を加水分解反応させる。加水分解プロセスをＴＬＣ（ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）で監視測定し、完全に反応した後、酸性のアンバーライト（ａｃｉｄｉｃ  ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）を加えて中和反応させ、濾紙で濾過した後、中間産物を得る。
【００４６】
分離樹脂としてシリカゲルを、移動相としてヘキサン及び酢酸エチルの勾配を用いて順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより該中間産物を抽出する。ここで、溶出比例はヘキサン／酢酸エチル＝４：１から１：１までである。溶出プロセスをＴＬＣで監視測定し、ＡＣ０１２−Ｈ１とＡＣ０１２−Ｈ２の混合物はｈｅｘａｎｅ：ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ＝１：１である時点に溶出され、それを収集して濃縮し、濃縮された産物を得る。
【００４７】
濃縮された該産物を逆相HPLCで最後に純化し、C18でステンレス製カラムを分取し、移動相であるエタノール：0.1％のリン酸緩衝生理食塩水（phosphate buffered saline）＝75：25を用いて単一比例で溶出する。
AC012-1の保持時間（retention time）は約31分から25分までである。AC012-H2は39分から43分までである。
【００４８】
AC012-H1及びAC012-H2の化学構造は下記に示すとおりである。
【化１３】
0006896630.tif 000014
【００４９】
同じ置換基の加水分解方法は本発明が提供する他の牛樟芝化合物にも適用できる。
初期半応物がAC007であれば、AC007-H1の保持時間は36‐43分であり、AC007-H2の保持
時間は47‐53分である。
初期反応物がAC009であれば、AC009-H1の保持時間は27‐32分であり、AC009-H2の保持
時間は35‐40分である。
【００５０】
実施例４：牛樟芝化合物が血管新生を抑制する効果
本発明はSR8試験及び血管形成試験（matrigel capillary tube formation assay）を使用し、牛樟芝から精製された化合物が血管新生を抑制することを確認する。
SRB試験はヒト内皮前駆細胞（EPC、endothelial progenitor cells）を5*103の細胞/培養皿ウェル（cell/well）の数量比例で96ウェルの培養皿に置き、且つそれを無血清（serum free）の培地に置いて48時間飢餓状態にさせた後、10％のFBS培地及び異なる濃度のAC012に入れて48時間培養する。AC012の濃度はそれぞれ0.1、0.3、1、3、10と30マイクログラム/ミリリットル（μg/ml）である。処理薬物で培養した後の培地を取り出して、培養皿のウェルに100マイクロリットル（μl）10％のトリクロロ酢酸（trichloroacetic acid）（ｗ/ｖ）を加え、4℃で1時間放置することで細胞を固定する。培養皿を脱イオン水で洗浄して乾燥する。それぞれのウェルに50マイクロリットル0.4％のスルホローダミンB (SRB) (w/v)（また1％の酢酸を含む）を加えて室温で5分放置する。次に1％の酢酸で細胞と結合しないSRBを洗浄してから乾燥する。細胞と結合したSRBを100マイクロリットル10ｍMのTrisバッファ（ｐHは10.5）で溶解し、且つ光度計で495ｎｍに定量する。
【００５１】
Matrigel capillary tube formation試験は下記ステップを含む。Matrigelを10μl/wel
lで15ウェルの培養皿に加え、37℃で30min放置してゲル層を形成する。その後、5*103のE
PC細胞、VEGF(vascular endothelia growth factor)及び濃度が異なっているAC012（0、0
.1、0.3、1μg/ml）を培養皿のウェルに入れ、37℃、5％の二酸化炭素という条件で16時
間放置する。その後、位相差顕微鏡（inverted contrast phase microscope (Nikon, Jap
an)）で細胞の生成を観察する。
【００５２】
AC012が血管新生を抑制する効果
IC50は29μg/ml；1μg/mlのAC012は31.89％の血管新生を抑制できる。
【００５３】
実施例５  牛樟芝化合物が癌細胞の増殖を抑制する効果
SRB試験で牛樟芝から精製された化合物及びその誘導体が癌細胞の増殖を抑制する効果
を確認する。
この実施例はすなわちAC006、AC007、AC009、AC011とAC012及びその加水分解で置換基
を改造した生成物が、多種類の癌細胞株の増殖を抑制するかどうかを確認する。
【００５４】
それぞれの細胞株を5*103cell/wellsの数量比例で96ウェルの培養皿に置き、且つそれ
を無血清（serum free）の培地で48時間飢餓状態にさせた後、10％のFBS培地及び0.1、0.
3、1、3、10及び30μg/mlなどの濃度のAC006、AC007、AC009、AC011、AC012に入れて48時
間培養する。処理薬物で培養した後の培地を取り出して培養皿のウェルに100マイクロリ
ットル（μl）10％のトリクロロ酢酸（trichloroacetic acid）（ｗ/ｖ）を加え、4℃で1
時間放置することで細胞を固定する。培養皿を脱イオン水で洗浄して乾燥する。それぞれ
のウェルに50マイクロリットル0.4％のSulforhodamine B (SRB) (w/v)（また1％の酢酸を
含む）を加えて室温で5min放置し、次に1％の酢酸で細胞と結合しないSRBを洗浄してから
乾燥する。細胞と結合したSRBを100マイクロリットル10ｍMのTris緩衝液（ｐHは10.5）で
溶解し、且つ光度計で495ｎｍに定量する。
【００５５】
実施例5.1：AC006の抑制効果
AC006で4種類の異なる癌をテストする。7種類の異なる癌細胞株が含まれ、それは半数
の癌細胞の増殖を抑制できる有効な濃度、すなわちIC50効果である。
その結果をは表１に示す。
【表１】
0006896630.tif 000015
【００５６】
実施例5.2：AC007及びその誘導体の抑制効果
AC007で5種類の異なる癌をテストする。7種類の異なる癌細胞株が含まれている。
そのIC50効果を表２及び３に示す。
【表２】
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【表３】
0006896630.tif 000017
【００５７】
実施例5.3：AC009及びその誘導体の抑制効果
AC009及びその誘導体で4種類の異なる癌をテストしり。10種類の異なる癌細胞株が含ま
れている。そのIC50効果を表４及び５に示す。
【表４】
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【表５】
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【００５８】
実施例5.4：AC011の抑制効果
AC011で4種類の異なる癌細胞株をテストする。IC50の結果を表６に示す。
【表６】
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【００５９】
実施例5.4：AC012及びその誘導体の抑制効果
AC012及びその誘導体で5種類の異なる癌をテストする。8種類の異なる癌細胞株が含ま
れる。そのIC50効果を表７及び８に示す。
【表７】
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【表８】
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【００６０】
実施例から、本発明は牛樟芝化合物及びその抽出方法を提供し、且つその化学構造を分
析し、それが低濃度で血管新生を抑制する効果を開示する。該牛樟芝化合物に基づき、本
発明も化学的に新規な化合物を合成する方法を提供する。本発明に開示された新規な抽出
方法は該化合物を大量に精製することができ、牛樟芝子実体を培養するコストを軽減する
。
本発明は、また、該化合物が癌細胞の増殖を抑制できる効果を有することを開示し、癌
治療用薬物の製造に適用できる。その他、牛樟芝化合物の加水分解により、その置換基を
改造して得る新規な化合物H１は、化合物が癌細胞、特に大腸癌細胞株の増殖を抑制する
効果を効果的に向上させることができる。ここでHCT116は低い表現量を特徴とするBax（W
ang et al. 2012)、及びgrowth factor(TGFα and EGFR)-independent (Howell et al. 1
998)である。更に、本発明で提供される化合物は肝癌細胞にとってもその増殖を抑制する
高度な効果を有し、特にアジア人からの上皮様肝癌細胞株（epithelial-like tumorigeni
c cells）であるHuh-7に対してHFE突然変異を特徴とする（Vecchi et al. 2009）。
本発明は牛樟芝化合物を精製する方法を提供し、その化学構造及びそれが血管新生及び
癌細胞の増殖を抑制する効果に関する。
【図１】
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