(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝損傷を予防または治療する医薬組成物の調製における（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インまたはその医薬的に許容可能な塩、互変異性体、立体異性体または鏡像異性体の使用であって、該肝損傷は化学性肝炎、アルコール性肝炎、または脂肪性肝疾患である、使用。
【請求項２】
前記医薬組成物の使用剤形が、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁液、分散可能な粉末または顆粒、乳剤、ハードまたはソフトカプセル、シロップ剤またはエリキシル剤、あるいは注射剤からなる群の１つまたはその組合せから選択される、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝損傷を予防または治療する医薬組成物の調製における（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インまたはその医薬的に許容可能な塩、互変異性体、立体異性体または鏡像異性体の用途を提供している。
【背景技術】
【０００２】
肝疾患は台湾の国民病ということができ、これにはアルコール性肝炎、化学性肝炎、薬剤性肝炎、脂肪肝、ウイルス性肝炎、遺伝性肝疾患などが含まれ、これらの肝疾患により誘発される急性または慢性炎症による肝細胞の損傷は、長期的に肝硬変さらには肝臓がんを引き起こす可能性がある。現在、肝損傷に対する統一の定義はないが、いかなる原因も肝機能指数の異常を引き起こし、いずれも肝損傷の存在を示している。肝損傷後は、肝細胞の変性、壊死、線維組織の増殖を引き起こして正常な肝組織が変化し、さらには一連の病理変化および二次的疾患が誘発される。このため肝損傷の早期診断および養生、治療により、さらなる進行を阻止し、肝機能を正常に回復させることは極めて重要である。現在、市場には多くの肝臓に対する保健機能食品があるが、明らかに効果的で、価格がリーズナブルなものはない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】米国特許第４２５６１０８号明細書
【特許文献２】米国特許第４１６０４５２号明細書
【特許文献３】米国特許第４２６５８７４号明細書
【特許文献４】台湾特許出願公開第２０１６３６０３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、肝損傷の予防または治療に対する、化合物（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インの効果を開示している。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、肝損傷を予防または治療する医薬組成物の調製における（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インまたはその医薬的に許容可能な塩、互変異性体、立体異性体または鏡像異性体の用途を提供している。
【０００６】
本発明に記載の肝損傷は急性、慢性肝損傷を含み、これは化学性肝炎、アルコール性肝炎、脂肪性肝疾患、肝炎ウイルスもしくは非肝炎ウイルス感染、免疫機能の失調、肝線維症、または肝臓がんによるものを含む（がこれに限定されない）。
【０００７】
本発明に記載の化学性肝炎において、その誘発物質は、ジクロロエタン（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）、四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ  ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ）、プロピレンクロリド（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）、四臭化炭素（ｃａｒｂｏｎ  ｔｅｔｒａｂｒｏｍｉｄｅ）、テトラクロロエタン（１，１，２，２−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｅｔｈａｎｅ）、テトラブロモエタン（ａｃｅｔｙｌｅｎｅ  ｔｅｔｒａｂｒｏｍｉｄｅ）、ジブロモエタン（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｄｉｂｒｏｍｉｄｅ）などのハロゲン含有有機化合物；トリクロロナフタレン、テトラクロロナフタレン、ペンタクロロナフタレン、オクタクロロナフタレンなどの数種の塩素化ナフタレンのようなナフタレン化合物（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ）；ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、ジメチルアセトアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｍｉｄｅ）などのアミド系化合物；Ｎ−ニトロソジメチルアミン（Ｎ−ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）などのニトロソアミン化合物；テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）などのフラン系化合物；ニトロプロパン（２−ｎｉｔｒｏｐｒｏｐａｎｅ）などの脂肪族含窒素化合物；４，４’−ジアミノジフェニルメタン（４，４’−ｄｉａｍｉｎｏｄｉｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈａｎｅ）などの芳香族アミン化合物；トリニトロトルエン（２，４，６−ｔｒｉｎｉｔｒｏｔｏｌｕｅｎｅ）などの脂肪族アミン化合物；金属元素または化合物、例えばヒ素（ａｒｓｅｎｉｃ）、ベリリウム（ｂｅｒｙｌｌｉｕｍ）、タリウム（ｔｈａｌｌｉｕｍ）、銅（ｃｏｐｐｅｒ）、セレン（Ｓｅｌｅｎｉｕｍ）などの元素およびその化合物、またはクロム酸もしくはクロム塩（ｃｈｒｏｍａｔｅ）など；殺虫剤、除草剤または燻蒸剤などの農薬、例えばＤＤＴなどの塩素またはその他のハロゲンを含む有機化合物、パラコートなどのビピリジン化合物、ニトロフェノールまたはクロロフェノールなどを農薬として使用した化合物；塩化ビニル（ｖｉｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化ビニリデン（ｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ビニルトルエン（ｖｉｎｙｌ  ｔｏｌｕｅｎｅ）などのビニル化合物；およびその他の例えばビフェニル（ｄｉｐｈｅｎｙｌ）、ポリ塩化ビフェニル（ＰＣＢ）、アリルアルコール（ａｌｌｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）、塩素ガス、リン、エチレンオキシドなどを含む（がこれに限定されない）。
【０００８】
脂肪性肝疾患の治療における本発明に記載の調製した医薬組成物の用途において、該脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝炎による脂肪性肝疾患、肥満による脂肪性肝疾患、糖尿病による脂肪性肝疾患、インスリン抵抗性による脂肪性肝疾患、高トリグリセリド血症による脂肪性肝疾患、無βリポタンパク血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、ウォルマン病、急性妊娠脂肪肝およびリポジストロフィを含む（がこれに限定されない）。
【０００９】
血清中のアスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＧＯＴ／ＡＳＴ）およびアラニンアミノ基転移酵素（ＧＰＴ／ＡＬＴ）は、肝損傷の指標の測定に常用される。本発明のいくつかの実施例において、（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インは、四塩化炭素、アルコール、または高脂肪食により上昇する肝機能指数を低下させる。該肝機能指数は、アスパラギン酸アミノ基転移酵素およびアラニンアミノ基転移酵素を含む。
【００１０】
一実施例において、四塩化炭素により誘発された肝損傷の個体に（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インを用いる。結果は（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インが、化学性肝炎による肝細胞の損傷および組織の異常を効果的に治療することを示している。
【００１１】
一実施例において、アルコール（エタノール）により誘発された肝損傷の個体に（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インを用いる。結果は（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インが、アルコール性肝炎による肝細胞の損傷および組織の異常を効果的に治療することを示している。
【００１２】
一実施例において、高脂肪食により誘発された肝損傷の個体に（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インを用いる。結果は（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インが、脂肪性肝疾患による肝細胞の損傷および組織の異常を効果的に治療することを示している。
【００１３】
本発明の組成物は、固体、溶液、乳剤、分散体、マイクロビーズ、リポソーム、およびその他の本発明に含有される１つまたは複数の成分を活性成分とした組成物生成物でよく、あるいは有機もしくは無機担体または賦形剤と混合して、腸内または腸管外での使用に適用される。活性成分は混合することができる。例えば、薬学的に許容可能な通常無毒性の担体は、例えば錠剤、丸剤、カプセル、座薬、溶液、乳液、懸濁液、および使用することができるその他の適した剤形である。使用することができる担体は、グルコース、ラクトース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、でんぷん糊、三ケイ酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイダルシリカ、ジャガイモでんぷん、尿素、中鎖長のトリグリセリド、グルカン、および製剤、固体、半固体または液体剤形を調製するのに適したその他の担体を含む。他に、安定剤、増粘剤および着色剤および香料を補助として使用することもできる。
【００１４】
本発明の組成物は経口剤形とすることができ、例えば錠剤、トローチ剤、水性または油性の懸濁液、分散可能な粉末または顆粒、乳剤、ハードまたはソフトカプセル、あるいはシロップ剤またはエリキシル剤である。経口使用する組成物は、各種既知の医薬組成物の調製方法に基づいて調製することができ、この組成物はスクロース、ラクトースまたはサッカリンなどの甘味剤、薄荷、冬緑油またはサクランボなどの調味剤、着色剤および防腐剤を１つまたは複数含有して、製薬的な美観および食感を提供することができる。活性成分および薬学的に許容可能な無毒性賦形剤を混合した錠剤も、既知の方法により製造することができる。使用することができる賦形剤は、（１）炭酸カルシウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；（２）コーンスターチ、ジャガイモでんぷんまたはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；（３）トラガカントゴム、コーンスターチ、ゼラチンまたはアラビアゴムなどの接着剤；（４）ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどの潤滑剤などである。錠剤はコーティングしていなくても、または既知の技術によりコーティングしてもよく、コーティングして胃腸中での崩壊および吸収を遅らせることができ、これにより比較的長時間の持続作用を提供する。例えばモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンのような時間遅延材料はいずれも採用することができ、米国特許第４２５６１０８号明細書、第４１６０４５２号明細書および第４２６５８７４号明細書に記載の技術によりコーティングして、薬効、放出を制御した浸透性の治療錠剤を生成することもできる。
【００１５】
いくつかの状況において、経口使用する組成物はハードゼラチンカプセルの剤形でよく、このうち活性成分は、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンなどの不活性固体希釈剤と混合される。経口使用する組成物はソフトゼラチンカプセルの剤形でもよく、このうち活性成分は、例えば落花生油、液体パラフィンまたはオリーブオイルなどの水または油媒体と混合される。
【００１６】
本発明の組成物の実施例は、滅菌注射用懸濁液の剤形でもよい。この懸濁液は、既知の方法に基づいて、適した分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して調製することができる。滅菌注射用製剤は、無毒性の非経口で許容可能な希釈剤または溶媒中に溶解した無菌の注射可能溶液または懸濁液でもよく、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液とする。滅菌した不揮発性油は、通常、溶媒または懸濁媒体として用いられる。この目的のため、温かい固定油はいずれも使用することができ、これには合成したモノまたはジグリセリド、脂肪酸（オレイン酸を含む）、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの天然に存在する植物油、あるいはオレイン酸エチルまたは類似物のような合成の脂肪酸担体を含む。緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤などを需要に基づいて組み合わせることができる。
【００１７】
本発明の組成物の実施例は、直腸腔に投与する座薬の剤形でもよい。薬剤および適した非刺激性の賦形剤、例えばカカオ脂またはポリエチレングリコールの合成グリセリドを混合してなる組成物について、この組成物は常温下で固体であるが、直腸腔で液化および／または溶解し、薬剤を放出する。
【００１８】
個別の被験者は症状の深刻さの程度により幅広い変化を示す可能性があり、各種薬物はいずれも独特の治療的特徴を有する。本発明の組成物の実施は、医師が治療に対する被験者の反応を確定して、投薬量を相応に変更するべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、四塩化炭素による肝機能指数の異常をＴＹが低下させることを示す。四塩化炭素による急性肝炎ラットの血清内の（Ａ）ＧＯＴ／ＡＳＴおよび（Ｂ）ＧＰＴ／ＡＬＴを測定する。各群の実験は３匹のオスＷｉｓｔａｒラットを含む。
【図２】図２は、四塩化炭素による肝細胞の損傷、壊死をＴＹが低下させることを示す。Ｈ＆Ｅ染色により、四塩化炭素による急性肝炎ラットの肝細胞の組織形態を観察する。各群の実験は３匹のオスＷｉｓｔａｒラットを含む。
【図３】図３は、エタノールによる肝機能指数の異常をＴＹが低下させることを示す。エタノールによる急性肝炎ラットの血清内の（Ａ）ＧＯＴ／ＡＳＴおよび（Ｂ）ＧＰＴ／ＡＬＴを測定する。各群の実験は３匹のオスＷｉｓｔａｒラットを含む。
【図４】図４は、エタノールによる肝細胞の損傷および異常をＴＹが低下させることを示す。Ｈ＆Ｅ染色により、エタノールによる急性肝炎ラットの肝細胞の組織形態を観察する。各群の実験は３匹のオスＷｉｓｔａｒラットを含む。
【図５】図５は、高脂肪飼料により誘発される脂肪性肝疾患による肝機能の異常をＴＹが低下させることを示す。高脂肪飼料による慢性肝炎マウスの血清内の（Ａ）ＧＯＴ／ＡＳＴおよび（Ｂ）ＧＰＴ／ＡＬＴを測定する。各群の実験は４〜５匹のオスＢ６マウスを含む。
【図６】図６は、高脂肪飼料により誘発される脂肪性肝疾患マウスの血清内のトリグリセリド含量をＴＹが低下させることを示す。高脂肪飼料による慢性肝炎マウスの血清内のトリグリセリド含量を測定する。各群の実験は４〜５匹のオスＢ６マウスを含む。
【図７】図７は、高脂肪飼料により誘発される脂肪性肝疾患による肝細胞の損傷および異常をＴＹが治療することを示す。Ｈ＆Ｅ染色により、高脂肪飼料による慢性肝炎マウスの肝細胞の組織形態を観察する。各群の実験は４〜５匹のオスＢ６マウスを含む。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
前文、後文に他に明確に説明していなければ、本明細書および特許請求の範囲で使用する単数形の「一」および「該」は複数の対象物を含む。例を挙げると、言及した「一誘導体」は複数の該誘導体を含み、言及した「一個体」は言及した１つまたは複数の個体を含むなどである。
【００２１】
また、他に説明していなければ、「または」は「および／または」を意味する。同じように、「含む」、「包含する」は互換して使用することができ、制限する意図はない。
【００２２】
さらに理解すべきこととして、各実施例の記載で「含む」という用語を使用するとき、当業者はいくつかの特定の状況下で、「基本的に…からなる」または「…からなる」という語を使用して実施例を説明することができることを理解しなければならない。
【００２３】
他に定義していなければ、本文中で使用するすべての技術および科学用語は、いずれも当業者が理解するのと同じ意味を有する。本文中に記載する方法および物質と類似する、または同等の方法および物質は、開示した方法および組成物を実施するのに用いることができるが、本文中には例示的な方法、装置および物質についてのみ記載する。
【００２４】
前文および文章全体で言及した開示案は、本出願の出願日より前に開示された内容についてのみ提供する。本文のすべての面において、該開示案が以前の開示案のために優先権を有する権利がないと本発明者が認めるとは理解されるべきではない。
【００２５】
本発明は、肝損傷を予防または治療する医薬組成物の調製における（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インまたはその医薬的に許容可能な塩、互変異性体、立体異性体または鏡像異性体の用途を提供している。
【００２６】
本開示に記載の（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インの調製方法は、台湾特許出願公開第２０１６３６０３９号公報を参考にすることができる。約１１．９キログラムの未成熟のアボカド果実をスライスし、５０℃のオーブンで乾燥させて乾燥アボカド試料を得る。重量は約２．３キログラムである。乾燥アボカド試料を室温下でメタノール抽出し、抽出工程を３回繰り返して純度が比較的高いメタノール抽出物を得る。酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ、ＥｔＯＡｃ）水溶液（ＥｔＯＡｃ：Ｈ２Ｏ＝１：１）を添加して、メタノール抽出物を酢酸エチル可溶性画分（ＥｔＯＡｃ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）、および水溶性画分（Ｈ２Ｏ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）に分離する。約１００グラムの酢酸エチル可溶性画分を、コロイダルシリカを充填したカラム（７０〜２３０、Ｍｅｒｃｋ）に添加してクロマトグラフィおよび精製を行う。溶出液（ｅｌｕｔｉｏｎ）ノルマルヘキサン−酢酸エチル（ｎ−ｈｅｘａｎｅ−ＥｔＯＡｃ）を利用して濃度勾配溶出を行うと、１２個のフラクション（ｆｒａｃｔｉｏｎ）（Ａ−１〜Ａ−１２）が得られる。続いて１０．５グラムのＡ−１２分離液をノルマルヘキサンで新たに結晶化し、結晶（Ａ−１２−Ｃ）および母液（Ａ−１２−Ｍ）を得る。続いて、１０グラムのＡ−１２−Ｍに対して、コロイダルシリカを充填したカラム（２３０〜４００ｍｅｓｈ、Ｍｅｒｃｋ）でクロマトグラフィを行う。溶出液ノルマルヘキサン−酢酸エチルを利用して濃度勾配溶出を行うと、７つのフラクション（Ａ−１２−Ｍ−１〜Ａ−１２−Ｍ−７）が得られる。続いて、７．３ｇのＡ−１２−Ｍ−４に対して、ＲＰ−Ｃ１８カラム（ｓｐｈｅｒｉｃａｌ  Ｃ１８  １００Ａ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ−ｐｈａｓｅ  ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ（ＲＰ−１８）、２０〜４０μＭ、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）でクロマトグラフィを行い、さらにアセトン−水（１：１）で溶出を行う。核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＮＭＲ）で分析および比較し、約１１３ミリグラムの（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インを得ることができ、式（Ｉ）に示す通りである。
【００２７】
【化１】
0006830158.tif 000002
【００２８】
説明を便利にするため、以降の記載では（２Ｒ，４Ｒ）−１，２，４−トリヒドロキシヘプタデカ−１６−インをＴＹと略称する。
【００２９】
以下の実施例は用途を限定するものではなく、本発明のいくつかの状態を表しているに過ぎない。
【００３０】
実施例１、四塩化炭素による急性肝炎の治療に対するＴＹの効果を測定する。オスのＷｉｓｔａｒラット（２００〜２５０グラム）９匹を無作為に３群に分け、各群３匹のＷｉｓｔａｒラットは、それぞれ１．健常対照群：ＴＹと同体積の薬品の溶媒を摂取させ、オリーブオイル（２．５ミリグラム／キログラム）を腹腔注射する；２．陰性対照群（四塩化炭素および生理食塩水）：ＴＹと同体積の生理食塩水を摂取させ、２０％四塩化炭素／オリーブオイルを腹腔注射する；３．実験群（四塩化炭素およびＴＹ１００ミリグラム／キログラム／日）：ＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させ、２０％四塩化炭素／オリーブオイルを腹腔注射する；である。まず、薬品の溶媒またはＴＹを毎日１回摂取させる。１回目の摂取を１日目と定義し、４日目の摂取後１時間で、第１群にオリーブオイル（２．５ミリグラム／キログラム）を腹腔注射し、第２〜３群にそれぞれ２０％四塩化炭素／オリーブオイル（２．５ミリグラム／キログラム）を腹腔注射する。注射後１２時間は絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＷｉｓｔａｒラットを犠牲にする。犠牲にする前、心臓から採血して血液を得、さらに血清を分離して肝臓の生化学機能を分析する。図１Ａおよび１Ｂは、四塩化炭素がＷｉｓｔａｒラットの肝機能指数ＧＯＴ／ＡＳＴおよびＧＰＴ／ＡＬＴを明らかに上昇させ、ＴＹは四塩化炭素により上昇した肝機能指数ＧＯＴ／ＡＳＴおよびＧＰＴ／ＡＬＴを明らかに低下させることができることを示している。この結果は、四塩化炭素による肝機能の異常をＴＹが治療することを表す。
【００３１】
実施例２、ＴＹは四塩化炭素による肝細胞の損傷、壊死を治療する。オスのＷｉｓｔａｒラット（２００〜２５０グラム）９匹を無作為に３群に分け、各群３匹のＷｉｓｔａｒラットは、それぞれ１．健常対照群：ＴＹと同体積の薬品の溶媒を摂取させ、オリーブオイル（２．５ミリグラム／キログラム）を腹腔注射する；２．陰性対照群（四塩化炭素および生理食塩水）：ＴＹと同体積の生理食塩水を摂取させ、２０％四塩化炭素／オリーブオイルを腹腔注射する；３．実験群（四塩化炭素およびＴＹ１００ミリグラム／キログラム／日）：ＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させ、２０％四塩化炭素／オリーブオイルを腹腔注射する；である。まず、生理食塩水またはＴＹを毎日１回摂取させる。１回目の摂取を１日目と定義し、４日目の摂取後１時間で、第１群にオリーブオイル（２．５ミリグラム／キログラム）を腹腔注射し、第２〜３群にそれぞれ２０％四塩化炭素／オリーブオイル（２．５ミリグラム／キログラム）を腹腔注射する。注射後１２時間は絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＷｉｓｔａｒラットを犠牲にする。ラットを犠牲にした後、肝臓を採取してホルマリンに浸漬し、続いてＨ＆Ｅ染色剤により染色を行い、さらに顕微鏡で観察および撮影する。図２は、ラットに四塩化炭素を注射して明らかな肝損傷が生じることを示している（健常対照群との比較）。Ｈ＆Ｅ染色は中心静脈付近の肝細胞が壊死し、組織構造全体が乱れ、ＴＹが四塩化炭素による中心静脈付近の肝細胞の壊死を効果的に低下させることができることを示している。
【００３２】
実施例３、アルコール（エタノール）による急性肝炎の治療に対するＴＹの効果を測定する。オスのＷｉｓｔａｒラット（２００〜２５０グラム）９匹を３群に分け、各群３匹のＷｉｓｔａｒラットは、それぞれ１．健常対照群：ＴＹと同体積の生理食塩水（２．５ミリグラム／キログラム）を摂取させる；２．陰性対照群（エタノールおよび生理食塩水）：ＴＹと同体積の生理食塩水を摂取させ、５０％エタノールを摂取させる；３．実験群（エタノールおよびＴＹ１００ミリグラム／キログラム／日）：ＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させ、５０％エタノールを摂取させる；である。まず、薬品の溶媒またはＴＹを毎日１回摂取させる。１回目の摂取を１日目と定義し、４日目の摂取後１時間で、第１群に生理食塩水（２．５ミリグラム／キログラム）を摂取させ、第２〜３群にそれぞれ５０％エタノール（２．５ミリグラム／キログラム）を注射で摂取させる。１回目の摂取後１２時間でさらに１回エタノールを摂取させ、２回目の摂取後１２時間は絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＷｉｓｔａｒラットを犠牲にする。犠牲にする前、心臓から採血して血液を得、さらに血清を分離して肝臓の生化学機能を分析する。図３Ａおよび３Ｂは、エタノールがＷｉｓｔａｒラットの肝機能指数ＧＯＴ／ＡＳＴおよびＧＰＴ／ＡＬＴを明らかに上昇させ、ＴＹはエタノールにより上昇した肝機能指数ＧＯＴ／ＡＳＴおよびＧＰＴ／ＡＬＴを明らかに低下させることができることを示している。この結果は、エタノールによる肝機能の異常をＴＹが治療することを表す。
【００３３】
実施例４、ＴＹはアルコール（エタノール）による肝細胞の損傷および異常を治療する。オスのＷｉｓｔａｒラット（２００〜２５０グラム）９匹を無作為に３群に分け、各群３匹のＷｉｓｔａｒラットは、それぞれ１．健常対照群：ＴＹと同体積の薬品の溶媒を摂取させ、生理食塩水（２．５ミリグラム／キログラム）を摂取させる；２．陰性対照群（エタノールおよび生理食塩水）：ＴＹと同体積の生理食塩水を摂取させ、５０％エタノールを摂取させる；３．実験群（エタノールおよびＴＹ１００ミリグラム／キログラム／日）：ＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させ、５０％エタノールを摂取させる；である。まず、薬品の溶媒またはＴＹを毎日１回摂取させる。１回目の摂取を１日目と定義し、４日目の摂取後１時間で、第１群に生理食塩水（２．５ミリグラム／キログラム）を摂取させ、第２〜３群にそれぞれ５０％エタノール（２．５ミリグラム／キログラム）を注射で摂取させる。１回目の摂取後１２時間でさらに１回エタノールを摂取させ、２回目の摂取後１２時間は絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＷｉｓｔａｒラットを犠牲にする。ラットを犠牲にした後、肝臓を採取してホルマリンに浸漬し、続いてＨ＆Ｅ染色剤で染色を行い、さらに顕微鏡で観察および撮影する。図４は、ラットがエタノールを摂取することにより明らかな肝損傷および組織の異常が生じることを示す（健常対照群との比較。青い丸内の白色の明点）。Ｈ＆Ｅ染色は肝細胞が損傷し、組織構造全体が乱れ、ＴＹがエタノールによる肝損傷および組織の異常を効果的に低下させることができることを示している。
【００３４】
実施例５、ＴＹは高脂肪飼料により誘発された脂肪性肝疾患の慢性肝炎を治療する効果を有する。８〜１０週齢、オスのＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス（２０〜２２グラム）１５匹を無作為に３群に分け、各群４〜５匹のＢ６マウスは、それぞれ１．健常対照群：正常な飼料（脂質熱量比率５〜６％）を摂取させる；２．陰性対照群：高脂肪飼料（脂質熱量比率６０％）を摂取させ、生理食塩水を摂取させる；３．実験群：動物に陰性対照群と全く同じ高脂肪飼料を与えて処理し、さらにＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させる；である。高脂肪飼料が肝損傷を誘発する１週間前から、実験試料を毎日与える。実験試料として、それぞれ第１群および第２群にＴＹと同体積の薬品の溶媒を毎日摂取させ、第３群にＴＹを１００ミリグラム／キログラムで毎日摂取させる。１週間後、第２群および第３群に高脂肪飼料を与え始め、さらにそれぞれＴＹと同体積の薬品の溶媒およびＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で毎日摂取させ続ける。期間は１８週であり、マウスを１８週目に絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＢ６マウスを犠牲にする。犠牲にする前、心臓から採血して血液を得、さらに血清を分離して肝臓の生化学機能を分析する。図５Ａおよび５Ｂは、高脂肪飼料がＢ６マウスの肝機能指数ＧＯＴ／ＡＳＴおよびＧＰＴ／ＡＬＴを明らかに上昇させ、ＴＹは高脂肪飼料により上昇した肝機能指数ＧＯＴ／ＡＳＴおよびＧＰＴ／ＡＬＴを明らかに低下させることができることを示している。この結果は、高脂肪飼料により脂肪性肝疾患が誘発されたことによる肝機能の異常をＴＹが治療することを表す。
【００３５】
実施例６、ＴＹは高脂肪飼料により誘発された脂肪性肝疾患マウスの血清内のトリグリセリド含量を低下させる。８〜１０週齢、オスのＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス（２０〜２２グラム）１５匹を無作為に３群に分け、各群４〜５匹のＢ６マウスは、それぞれ１．健常対照群：正常な飼料（脂質熱量比率５〜６％）を摂取させる；２．陰性対照群：高脂肪飼料（脂質熱量比率６０％）を摂取させ、生理食塩水を摂取させる（高脂肪飼料および生理食塩水）；３．実験群：動物に陰性対照群と完全に同じ高脂肪飼料を与えて処理し、さらにＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させる（高脂肪飼料およびＴＹ）；である。高脂肪飼料が肝損傷を誘発する１週間前から、実験試料を毎日与える。実験試料として、それぞれ第１群および第２群にＴＹと同体積の薬品の溶媒を毎日摂取させ、第３群にＴＹを１００ミリグラム／キログラムで毎日摂取させる。１週間後、第２群および第３群に高脂肪飼料を与え始め、さらにそれぞれＴＹと同体積の薬品の溶媒およびＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で毎日摂取させ続ける。期間は１８週であり、マウスを１８週目に絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＢ６マウスを犠牲にする。犠牲にする前、心臓から採血して血液を得、さらに血清を分離して血清内のトリグリセリド含量を分析する。図６は高脂肪飼料がＢ６マウスの血清内のトリグリセリド含量を明らかに上昇させ、ＴＹは高脂肪飼料により上昇した血清内のトリグリセリド含量を明らかに低下させることができることを示している。この結果は、高脂肪飼料により誘発された脂肪性肝疾患マウスの血清内のトリグリセリド含量をＴＹが低下させることを表す。
【００３６】
実施例７、ＴＹは高脂肪飼料により誘発された脂肪性肝疾患の肝細胞の損傷および異常を治療する。８〜１０週齢、オスのＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス（２０〜２２グラム）１５匹を無作為に３群に分け、各群４〜５匹のＢ６マウスは、それぞれ１．健常対照群：正常な飼料（脂質熱量比率５〜６％）を摂取させる；２．陰性対照群：高脂肪飼料（脂質熱量比率６０％）を摂取させ、生理食塩水を摂取させる；３．実験群：動物に陰性対照群と完全に同じ高脂肪飼料を与えて処理し、さらにＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で摂取させる（高脂肪飼料およびＴＹ）；である。高脂肪飼料が肝損傷を誘発する１週間前から、実験試料を毎日与える。実験試料として、それぞれ第１群および第２群にＴＹと同体積の薬品の溶媒を毎日摂取させ、第３群にＴＹを１００ミリグラム／キログラムで毎日摂取させる。１週間後、第２群および第３群に高脂肪飼料を与え始め、さらにそれぞれＴＹと同体積の薬品の溶媒およびＴＹを１００ミリグラム／キログラム／日で毎日摂取させ続ける。期間は１８週であり、マウスを１８週目に絶食させ、絶食後１２時間ですべてのＢ６マウスを犠牲にする。マウスを犠牲にした後、肝臓を採取してホルマリンに浸漬し、続いてＨ＆Ｅ染色剤により染色を行い、さらに顕微鏡で観察および撮影する。図７は、マウスが高脂肪飼料を食べることにより明らかな肝損傷および組織の異常が生じることを示している（健常対照群との比較）。Ｈ＆Ｅ染色は肝細胞が損傷し、組織構造全体が乱れ（多くの空胞が形成される）、ＴＹが高脂肪飼料による肝損傷および組織の異常を効果的に低下させることができることを示している。
【００３７】
当業者がこの技術を製作および使用する方法を理解することができるようにするため、本発明はすでに十分に詳細に例を挙げて説明した。しかしながら、各種の変形、修正または改良は、本発明の趣旨および範囲と等しいと見なすべきである。
【００３８】
当業者は本発明の目的を容易に理解して実現し、さらに先ほど言及した結果および利点を得る。本発明で使用する動物、材料、それらを生成する過程および方法は、最も好ましい実施例を示しているため、例示的なものであり、本発明の範囲を制限しない。当業者が本技術を製作または使用するとき、生じる修正またはその他の用途は、いずれも本発明の趣旨内に包含され、さらに特許請求の範囲により限定される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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