(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）で表されるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物であって、
【化１】
0006912602.tif 000047
前記一般式（Ｉ）において、
（１）Ｘは、
【化３】
0006912602.tif 000048
であり；
（２）Ｒ２は、水素であり、且つＲ３は、ハロゲンまたはアミノであり；または、
Ｒ３は、水素であり、且つＲ２は、ハロゲンまたはアミノであることを特徴とするα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項２】
前記ハロゲンは、放射性標識されたものであるか、または放射性標識されていないものであることを特徴とする請求項１に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項３】
前記ハロゲンは、Ｆまたは１８Ｆであることを特徴とする請求項２に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項４】
その構造式が、
【化８】
0006912602.tif 000049
であることを特徴とする請求項３に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項５】
前記リガンド化合物をα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬（ａｇｎｏｓｉｔ）とすることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項６】
前記リガンド化合物をα７ニコチン性アセチルコリン受容体の一部の作動薬とすることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項７】
認知障害予防用または認知障害治療用の医薬品製造に用いられる、請求項１乃至４のいずれか１項に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項８】
ＰＥＴ現像剤として用いられる、請求項４に記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物。
【請求項９】
治療に有効な量の請求項１乃至４のいずれか１つに記載のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物と、医薬上許容される担体とを含有する認知障害を予防または治療するための医薬品組成物。
【請求項１０】
前記認知障害は、初老期認知症、早期発症型アルツハイマー病、老年性認知症、アルツハイマー型認知症、レビー小体型認知症、微小梗塞性認知症、エイズ関連認知症、ＨＩＶ認知症、レビー小体関連認知症、ダウン症候群関連認知症、ピック病、軽度認知障害、加齢性記憶障害、近時短期記憶障害、加齢性認知障害、薬物関連認知障害、免疫不全症と関連した認知障害、血管疾患と関連した認知障害、統合失調症、注意力欠陥障害、注意欠陥多動性障害及び学習障害よりなる群から選ばれるものであることを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年５月２７日に中国専利局に提出された出願番号がＣＮ２０１７１０３９５５１３.０であり、名称が「α７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物及びその応用」である中国特許出願に基づいて優先権を主張し、その全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、医薬技術分野に関し、特にα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物及びその応用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）は、伝達物質依存性イオンチャネルであり、中枢神経系（ＣＮＳ）及び末梢神経系（ＰＮＳ）で広範囲に発見され、様々な生理機能に関わる。ｎＡＣｈＲは、様々な亜型を含み、通常、αサブユニット（例えばα２〜α１０）及びβサブユニット（β２〜β４）からなる。そのうち、α７ニコチン性アセチルコリン受容体（α７ｎＡＣｈＲ）は、５つの全く同じのαサブユニットからなるホモ五量体であり、主に、記憶、学習などに関わる海馬、視床及び大脳皮質などの重要領域に存在している。最近の臨床研究によって、アルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性疾患の患者の脳において、α７ｎＡＣｈＲのタンパク質の密度が低下することが発見された。さらに、遺伝子ノックアウト、亜型の選択性リガンドなどに対する研究によって、標的指向性を有するα７ｎＡＣｈＲリガンドにより認知機能及び聴覚ゲーティング機能を改善することができ、例えば、ＰＮＵ−２８２９８７、ＰＨＡ−５４３６１３及びＡ−５８２９４１などの高選択性のα７ｎＡＣｈＲ作動薬により感覚ゲーティング機能、作動記憶及び記憶固定などの認知機能を改善することができることが発見された。従って、α７ニコチン性アセチルコリン受容体作動薬と放射性リガンドの合成は、ますます広く注目を集めるようになっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本出願の一実施形態は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体と高親和性を有する放射性または非放射性のリガンド分子を得るためのα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物を提供することを目的とする。本実施形態は、以下の手段を採用する。
【０００５】
下記の一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表されるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物であって、
【化１】
0006912602.tif 000002
【化２】
0006912602.tif 000003
一般式（Ｉ）及び一般式（ＩＩ）において、
（１）Ｘは、
【化３】
0006912602.tif 000004
であり；Ｒ１は、
【化４】
0006912602.tif 000005
であり；Ｒ７は、ハロゲンであり、
（２）Ｒ２は、水素であり、且つＲ３は、ハロゲンまたはアミノであり；
または、Ｒ３は、水素であり、且つＲ２は、ハロゲンまたはアミノであり、
（３）Ｒ６は、水素であり、且つＲ４及びＲ５が結合して、
【化５】
0006912602.tif 000006
となり；
または、Ｒ４は、水素であり、且つＲ５及びＲ６が結合して、
【化６】
0006912602.tif 000007
となり；Ｒ８は、ハロゲンであり、
（４）Ｙは、窒素または炭素であり；Ｚは、
【化７】
0006912602.tif 000008
であり；Ｒ９とＲ１０は、それぞれハロゲンであり、
そのうち、
【化８】
0006912602.tif 000009
は、官能基と親部位との結合点である。
【０００６】
本願において、上記ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を含む。
【０００７】
一部の実施形態において、ハロゲンは、放射性標識されたものであり、または放射性標識されていないものである。
【０００８】
一部の実施形態において、前記ハロゲンは、Ｆまたは１８Ｆである。
【０００９】
一部の実施形態において、本開示におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物は、
【化９】
0006912602.tif 000010
から選択される。
【００１０】
一部の実施形態において、本開示におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物をα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬（ａｇｏｎｉｓｔ）とすることができる。
【００１１】
一部の実施形態において、本開示におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物をα７ニコチン性アセチルコリン受容体の一部の作動薬とすることができる。
【００１２】
本願明細書に記載の用語「作動薬」は、最も広範囲な意味であると理解され、すなわち、標的物質（例えば、α７ニコチン性アセチルコリン受容体）の少なくとも１つの生物学的活性を部分的または完全に活性化させる分子を含む。例えば、本開示におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の細胞外ドメインに特異的に結合して細胞内シグナル伝達を誘導することによって、認知障害の予防または治療、ならびに神経学的な回復において有効である。
【００１３】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体は、学習、記憶及び注意力を含む認知機能の改善において重要であることが知られている。例えば、α７ニコチン性アセチルコリン受容体は、軽度認知障害、アルツハイマー病、加齢性及び他の認知機能障害、統合失調症、注意力欠陥障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、注射及び代謝障害による認知症、レビー小体型認知症、てんかんを含む痙攣、多発性脳梗塞、気分障害、強迫及び嗜癖行動、炎症性疾患、ならびにこれらの障害による痛みの制御に関連する疾患及び症状と関連している。α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性は、α７受容体リガンドの投与により変更または調節することができ、前記α７受容体リガンドの非限定的な例は、拮抗薬、作動薬、部分作動薬及び逆作動薬である。α７受容体リガンドを、上記した各種認知機能障害及びその他の症状及び疾患の治療及び予防に用いることができ、その作動薬及び部分作動薬は、齧歯類、ヒト以外の霊長類、及びヒトにおける認知機能及び注意力を改善できることが知られている。
【００１４】
これに基づいて、本開示の他の態様は、認知障害予防用または認知障害治療用の医薬製造のためのα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物の用途である。
【００１５】
本願明細書に記載の用語「認知障害」は、動物の認知機能または認知的領域の広範囲、例えば、作業記憶、注意及び警戒、言語学習及び記憶、視覚的学習及び記憶、論理的思考及び問題解決、そしてとりわけ、例えば実行機能、課題処理速度及び／または社会的認知における退行を意味する。認知障害は、注意欠陥、支離滅裂な思考、遅い思考、理解力の障害、低い集中力、問題解決能力の喪失、不正確な記憶、考えを表現することにおける障害及び／または思考、感覚及び行動の統合における障害、または理不尽な思考の消去における障害を表すことが知られている。
【００１６】
用語「治療」は、認知機能障害により引き起こされる疾患、障害または症状を有していると診断されてはいないが、このような疾患、障害、または症状にかかりやすい傾向がある動物において、認知機能障害に関連する疾患、障害または症状を、予防、抑制、または軽減（退行）させることを含むものと解釈される。従って、用語「治療に有効な量」は、治療する疾患の症候を軽減または低減、予防するために必要な臨床マーカーの有効量、または該症候を低減もしくはその発症を遅延させるための有効な活性成分の有効量を意味し、該有効量は、治療する疾患の体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）及び／または体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）モデルにおいて当該化合物を試験することによって実験的に決定されてもよい。
【００１７】
本開示は、ハロゲンが放射性標識されたα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物のＰＥＴ（Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、陽電子放出断層撮影法）現像剤としての用途を提供する。
【００１８】
本出願は、さらに、治療に有効な量のα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物と、医薬上許容される担体とを有する認知障害を予防または治療するための医薬組成物を提供する。
【００１９】
一部の実施形態において、前記認知障害は、初老期認知症、早期発症型アルツハイマー病、老年性認知症、アルツハイマー型認知症、レビー小体型認知症、微小梗塞性認知症、エイズ関連認知症、ＨＩＶ認知症、レビー小体関連認知症、ダウン症候群関連認知症、ピック病、軽度認知障害、加齢性記憶障害、近時短期記憶障害、加齢性認知障害、薬物関連認知障害、免疫不全症と関連した認知障害、血管疾患と関連した認知障害、統合失調症、注意力欠陥障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）及び学習障害からなる群から選ばれる。
【発明の効果】
【００２０】
本開示による各リガンド化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体との親和性が比較的高く、α７ニコチン性アセチルコリン受容体に対する良好なリガンド化合物である。さらに、本開示によるα７ニコチン性アセチルコリン受容体のリガンド化合物は、放射性標識された後、ＰＥＴ現像剤とすることができ、親和性が優れ、特異性が強く、選択性が高く、脳吸収及び代謝速度が適当である特徴を有し、臨床応用価値がある。
【００２１】
本開示の実施例及び従来技術の技術案をより明瞭に説明するため、実施例及び従来技術の説明に必要な図面を簡単に説明する。下記の図面は、本出願の実施例の一部を示したものに過ぎず、当業者は、発明能力を用いなくても、これらの図面に基づいてその他の図面を得ることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】[１８Ｆ]ＩＩ−１５及びＩＩ−１５のＨＰＬＣ分析スペクトログラムを示す図である。
【図２】[１２５Ｉ]α−ｂｇｔとα７ｎＡＣｈＲｓ膜タンパク質との結合の特異的結合曲線を示す図である。
【図３】[１２５Ｉ]α−ｂｇｔと受容体膜タンパク質との結合のＨｉｌｌ直線を示す図である。
【図４】Ｓｃａｔｃｈａｒｄ直線を示す図である。
【図５】プロビットＹとＬｏｇＤ（Ｘ）との関係を表す曲線図である。
【図６】ウシ胎児血清及び生理食塩水における放射性リガンド[１８Ｆ]ＩＩ−１５の安定性分析のＨＰＬＣ図である。
【図７】マウス脳内の[１８Ｆ]ＩＩ−１５の選択性の試験結果である。
【図８】雌ＣＤ−１ラットのＰＥＴ現像画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本開示の実施例の目的、技術案及び利点をより明瞭にするため、以下、本開示の実施例及び図面を参照しながら、本発明を詳しく説明する。説明される実施例が本開示の実施例の一部に過ぎず、すべての実施例ではないことは言うまでもない。本開示の実施例をもとに、当業者が発明能力を用いることなく得たすべてのその他の実施例は、いずれも本開示の保護範囲に属する。
【００２４】
実施例１
【化１０】
0006912602.tif 000011
の合成（以下、「化合物Ｉ−９」と称する）
化合物Ｉ−９の合成経路は、以下の通りである。
【化１１】
0006912602.tif 000012
【００２５】
（１）化合物Ｉ−２の合成
清潔、乾燥な反応容器に化合物Ｉ−１（５ｇ、３５.７ｍｍｏｌ）を入れ、５０ｍＬのメタノールで溶解させ、窒素置換を３回行った。その後、ナトリウムメトキシド（２.８９ｇ、５３.５ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１５ｍＬ）を反応系に滴下して、室温で３０分攪拌して反応させた。そして、反応系の温度を０℃まで降温させ、臭素（６.３ｇ、３９.４ｍｍｏｌ）を滴下して、反応系の温度を０〜５℃に保ちながら４ｈ反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝２５：１）、少量の１０％の亜硫酸ナトリウムの水溶液で反応を終了させ、そして、反応系の温度を−１５℃まで降温させた後、黄色の固体が析出するまで攪拌した。さらに、吸引ろ過を行った後、冷メタノール（２×５ｍＬ）でケーキを洗浄し、乾燥を行って、目的生成物であるＩ−２（４.２ｇ、５３％）を黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ７．８５（ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２１６．９７。
【００２６】
（２）化合物Ｉ−３の合成
化合物Ｉ−２（１ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を三口フラスコに入れ、２０ｍＬのエタノールで溶解させ、窒素置換を３回行った。その後、亜鉛粉末（１．５ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（２．４６ｇ、４６ｍｍｏｌ）を加え、さらに窒素置換を行った。そして、５０℃で１６時間反応させ、ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝２５：１）、反応液をろ過してろ液を収集した。そして、減圧濃縮を行ってから石油エーテル／酢酸エチル（５：１）でカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、目的生成物であるＩ−３（５２４ｍｇ、６０％）を黒灰色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ９．７０（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｓ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝１８８．９９。
【００２７】
（３）化合物Ｉ−５の合成
反応容器に化合物Ｉ−３（０.３ｇ、１.５９ｍｍｏｌ）を入れ、１０ｍＬのエタノールで溶解させて、攪拌しながら二硫化炭素（２.４２ｇ、３１.７ｍｍｏｌ）及び水酸化カリウム（１９１ｍｇ、４.７６ｍｍｏｌ）を加え、８０〜８５℃で１６時間反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝２５：１）、減圧濃縮でエタノール及び二硫化炭素を除去した。さらに、水を加え溶解させて、希塩酸で系のｐＨ値を約３に調整し、固体を析出させた後、ろ過乾燥することで０.２６ｇの化合物Ｉ−４の粗生成物を得た。それを用いて、次の反応を行った。
【００２８】
三口反応容器に化合物Ｉ−４（０.２６ｇ、１.１３ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１５６ｍｇ、１.１３ｍｍｏｌ）を入れ、１０ｍＬのＤＭＦで溶解させ、窒素置換を３回行った後、反応系の温度を０℃まで降温させた。そして、１７６ｍｇのヨードメタン（１.２４ｍｍｏｌ）を反応容器に滴下してから、０℃で攪拌して１０分反応させ、さらに室温で３時間反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝２５：１）、反応系に６０ｍＬの水及び２０ｍＬの酢酸エチルを加え、５分攪拌した後、静置した。そして、有機層を収集し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過して、減圧濃縮で溶媒を除去することで、Ｉ−５（１８０ｍｇ、６５％）を茶褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．０６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２４６．９３。
【００２９】
（４）化合物Ｉ−６の合成
反応容器に、順に、１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン（２００ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）、化合物Ｉ−５（４６６ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３２１ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）及び１０ｍＬのイソプロピルアルコールを入れ、攪拌しながら系の温度を１００℃まで加熱した。溶媒が揮発した後、引き続き攪拌し、一晩反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（酢酸エチル／メタノール＝１０：１）、溶出液として酢酸エチル（１％のメタノール及び０．１％のトリエチルアミンを含む）を用いてカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、Ｉ−６（２５０ｍｇ、４８．８％）を薄黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ７．６８（ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ，１Ｈ），４．４３−４．４２（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，２Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝５．７６Ｈｚ，２Ｈ），３．０４−２．９５（ｍ，４Ｈ），２．１０−２．０７（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．７６（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３２３．９０５。
【００３０】
（５）化合物Ｉ−９の合成
反応容器に化合物Ｉ−６（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、化合物Ｉ−７（７０ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３０３ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４５ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を入れ、反応系に対して窒素置換を３回行った後、再蒸留した１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）を加えた。そして、８５〜９０℃で反応させ、反応終了後、減圧濃縮で溶媒を除去し、溶出液として酢酸エチル／メタノール（１０：１）を用いてカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、生成物であるＩ−９（８９．４ｍｇ、８５％）を薄黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７２（ｔｄ，Ｊ＝８．８２Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｔ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，４．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．２４Ｈｚ，１．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔｄ，Ｊ＝５．９４Ｈｚ，２．０４Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｓ，１Ｈ），３．９９（ｍ，２Ｈ），３．２１−３．１３（ｍ，４Ｈ），３．０６−２．９９（ｍ，２Ｈ），２．１８−２．１６（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．８０（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６３．５４，１６１．８３，１５９．４５，１５８．７８，１４６．７２，１４６．０２，１４１．７２，１４１．０５，１２２．６３，１２２．３７，１２２．０１，１１６．３７，１１４．９２，５６．９６，５０．７３，４６．３２，４４．３３，２６．８２；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３４０．１５。
【００３１】
実施例２
【化１２】
0006912602.tif 000013
の合成（以下、「化合物Ｉ−１０」と称する）
化合物Ｉ−１０の合成経路は、以下の通りである。
【化１３】
0006912602.tif 000014
反応容器に化合物Ｉ−６（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、化合物Ｉ−８（４４ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３０３ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４５ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を入れ、反応系に対して窒素置換を３回行った後、再蒸留した１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）を加えた。そして、８５〜９０℃で反応させ、反応終了後、減圧濃縮で溶媒を除去し、溶出液として酢酸エチル／メタノール（１０：１）を用いてカラム精製を行うことで、生成物であるＩ−１０（５３ｍｇ、５０％）を薄黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．８０（ｄ，Ｊ＝２．３２Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｔｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．１６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．５２Ｈｚ，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝５．３６Ｈｚ，２Ｈ），３．２５−３．１９（ｍ，４Ｈ），３．１０−３．０４（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｍ，２Ｈ），１．９３−１．８６（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６４．８８，１６３．４８，１６２．４９，１５８．８８，１４９．０３，１４５．９０，１４１．０７，１３９．９６，１３３．４３，１１５．３７，１１２．２４，１０９．５１，１０９．１４，５５．８３，５０．５７，４６．３０，２６．４３，８．７０；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３４０．１５。
【００３２】
実施例３
【化１４】
0006912602.tif 000015
の合成（以下、「化合物ＩＩ−５」と称する）
化合物ＩＩ−５の合成経路は、以下の通りである。
【化１５】
0006912602.tif 000016
（１）化合物ＩＩ−２の合成
１０００ｍＬの反応容器に３０．０ｇの９−フルオレノン（ＩＩ−１）（０．１７ｍｏｌ）及び１００ｍＬの水を入れ、８０〜８５℃まで加熱して、３０分以内に臭素（３２．０ｇ、０．２ｍｏｌ）を反応容器に滴下し、滴下した後、引き続き８０〜８５℃で４時間反応させた。反応系の温度が室温まで降温した後、３００ｍＬの水を加え反応をクエンチしてから、３００ｍＬの１０％のＮａＨＳＯ３溶液を加え、３０分攪拌して吸引ろ過で薄黄色の固体物質を得た。さらに、該薄黄色の固体物質を３００ｍＬのエタノールに溶解させてから、８０℃で約１６時間、還流下で撹拌し、室温まで降温した後、吸引ろ過で薄黄色の固体を得、５０℃で真空乾燥を行うことで２−ブロモ−９−フルオレノン（ＩＩ−２）（３９．１ｇ、９０．４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７６（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１Ｈ），７．３４−７．３０（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２６０．９８。
【００３３】
（２）化合物ＩＩ−３の合成
１０００ｍＬの反応容器に２３．４ｇの２−ブロモ−９−フルオレノン（ＩＩ−２）（０．０９ｍｏｌ）及び１８０ｍＬの水を入れ、８０〜８５℃まで加熱した。そして、約３０分以内に１８０ｍＬの６５％の硝酸溶液（２．６ｍｏｌ）と１８０ｍＬの９８％の硫酸溶液（３．３ｍｏｌ）との混合溶液を反応系に滴下した。反応系の温度を１１０〜１２０℃まで昇温させ、４時間還流させて室温まで降温した後、３００ｍＬの水を加え反応をクエンチして、ろ過で黄色の固体を得た。得られた固体を水（３×１００ｍＬ）で洗浄した後、さらに２００ｍＬのメタノールを加えリスラリー洗浄し、ろ過で固体を収集した。そして、５０℃で真空乾燥を行うことで、２−ブロモ−７−ニトロ−９−フルオレノン（ＩＩ−３）（２１．０ｇ、７６．４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４９（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝８．１６Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３０６．０２。
【００３４】
（３）化合物ＩＩ−４の合成
５００ｍＬの反応容器に、順に、２−ブロモ−７−ニトロ−９−フルオレノン（ＩＩ−３）（９．０ｇ、０．０３ｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．６ｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１．３ｇ、２．０８７ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔ−ブトキシド（３．３ｇ、０．０３４３ｍｏｌ）、１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン（３．０ｇ、０．０２４ｍｏｌ）及び１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）を入れ、窒素置換を３回行った後、反応系の温度を８０〜８５℃まで加熱し、窒素ガスの雰囲気で１６時間反応させた。反応終了後、１５０ｍＬの酢酸エチルを加えてから、セライトを敷いた漏斗でろ過して不溶性物質を除去した。そして、ろ液に１０％のＫ２ＣＯ３溶液を加えｐＨ値を約８．０に調整してから、水層が無色となるまでＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して、減圧濃縮で青紫色の生成物（ＩＩ−４）（２．１ｇ、２０．４％）を得た。該生成物を用いて次の反応を行った。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５６（ｄ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝６．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１４−７．０９（ｍ，２Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．１６Ｈｚ，１Ｈ），４．１３−４．１１（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．５８（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．１４（ｍ，４Ｈ），３．０４（ｍ，２Ｈ），２．１４（ｍ，２Ｈ）、１．７８（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３５０．１６。
【００３５】
（４）化合物ＩＩ−５の合成
反応容器に、順に、化合物ＩＩ−４（２．１ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）、鉄粉（１．７ｇ、０．０３ｍｏｌ）、エタノール（８０ｍＬ）、水（５４ｍＬ）及び濃塩酸（１．８ｍＬ）を入れ、８０℃まで昇温させた。ＴＬＣで原料が完全に反応したことを検出した後（約５時間）、１０％のＫ２ＣＯ３溶液で系のｐＨ値を約８．０に調整した。そして、１５０ｍＬの酢酸エチルを加え、セライトを敷いた漏斗でろ過して、酢酸エチルでろ過物を洗浄した。有機層を合わせて、減圧濃縮で溶媒を除去し、さらに、固体をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させて、水で洗浄し、分離することで有機層を得た。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して、減圧濃縮で最終生成物であるＩＩ−５（１．５ｇ、８０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．１２（ｄ，Ｊ＝８．２４Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝２．４４Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．２４Ｈｚ，２．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，２．２４Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｍ，２Ｈ），３．５１−３．４８（ｍ，２Ｈ），３．１３−３．０６（ｍ，４Ｈ），３．０１−２．９４（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．６７（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９４．１８，１４８．１４，１４４．９９，１３５．０２，１３４．７９，１３４．５６，１３２．８５，１１９．００，１１８．９４，１１７．１１，１１０．３２，１０８．９４，５５．５９，５０．９１，４５．２６，４３．２５，２５．５０；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３２０．０。
【００３６】
実施例４
【化１６】
0006912602.tif 000017
の合成（以下、「化合物ＩＩ−６」と称する）
化合物ＩＩ−６の合成経路は、以下の通りである。
【化１７】
0006912602.tif 000018
反応容器に化合物ＩＩ−５（１．９ｇ、６ｍｍｏｌ）及びテトラフルオロホウ酸（３０ｍＬ）を入れ、反応系の温度が０〜５℃となるように、反応バイアルを氷浴に置いた。１５分以内に亜硝酸ナトリウムの水溶液（０．５ｇ、７．２ｍｍｏｌ、１５ｍＬ）を反応系に滴下し、滴下完了後、３０分反応させた。その後、攪拌を止め、吸引ろ過を行い、順に１５ｍＬのエタノール、１５ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルでろ過物を洗浄し、そしてｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルでリスラリー洗浄して、ろ過で固体を得た。固体を反応容器に入れ、１２０℃まで加熱し、ＴＬＣで原料が完全に反応したことを検出した後、反応系を室温まで降温させた。５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を加え溶解させ、ろ過することで不溶性固体を除去した。さらに、５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２でろ過物をリスラリー洗浄し、有機層を収集して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、ろ過して、減圧濃縮で溶媒を除去した。最後、ジクロロメタンとメタノールの勾配（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝２５：１）で粗生成物をカラムクロマトグラフィー精製することで、最終生成物ＩＩ−６（１．２ｇ、６７．３％）を紫色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２４−７．１９（ｍ，３Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝２．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄｄ，Ｊ＝８．３２Ｈｚ，２．５６Ｈｚ，１Ｈ），４．０４３７−４．０３９１（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．５２（ｍ，２Ｈ），３．１５−３．０７（ｍ，４Ｈ），３．０１−２．９４（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．７７−１．６８（ｍ，２Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９２．５１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），１６２．４９（ｓ），１６０．０３（ｓ），１４８．８８（ｓ），１４０．５５（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），１３０．５６（ｓ），１２０．１３（ｓ），１１９．８６（ｓ），１１９．６３（ｓ），１１８．９２（ｓ），１１８．８５（ｓ），１１６．７４（ｓ），１１０．８６（ｓ），１１０．６３（ｓ），１０８．６７（ｓ），５５．９７（ｓ），５０．７３（ｓ），４５．４８（ｓ），４３．４９（ｓ），２５．７６（ｓ）； １９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１１５．２１（ｓ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３２３．２。
【００３７】
実施例５
【化１８】
0006912602.tif 000019
の合成（以下、「化合物ＩＩ−１４」と称する）
化合物ＩＩ−１４の合成経路は、以下の通りである。
【化１９】
0006912602.tif 000020
【００３８】
（１）化合物ＩＩ−８の合成
酸化クロム（１３８．０ｇ、１．３８ｍｏｌ）を１２０ｍＬの水と８０ｍＬの酢酸との混合溶液に溶解させ、全て溶解するまで攪拌した。反応容器に４０．０ｇのフルオランテン（ＩＩ−７）（０．２ｍｏｌ）及び５００ｍＬの酢酸を入れ、反応系を８０〜８５℃に加熱してから、系の温度を８０〜８５℃に保ちながらそれに酸化クロム溶液を滴下した。滴下完了後、反応系を１１０〜１２０℃まで昇温させ、２時間反応させた。その後、室温まで降温させて、反応液を３Ｌの水に加えると、大量な黄色の固体が析出した。吸引ろ過を行った後、固体を６００ｍＬの２ＭのＮａＯＨ溶液に溶解させ、さらに吸引ろ過で不溶性不純物を除去し、５００ｍＬの水でろ過物を洗浄した。ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを加えて洗浄し、水層を分離した。最後、濃塩酸でそのｐＨ値を約１．０に調整し、黄色の固体を再び析出させ、吸引ろ過を行った後、６０℃で真空乾燥を行うことで、目的生成物であるＩＩ−８（９−フルオレノン−１−カルボン酸）（２９．５ｇ、６６．０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．７４−７．５３（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．１６Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２２５．１０。
【００３９】
（２）化合物ＩＩ−９の合成
反応容器に９−フルオレノン−１−カルボン酸（ＩＩ−８）（１５．０ｇ、０．０６７ｍｏｌ）及び３００ｍＬの水を入れ、反応系を８０〜８５℃まで加熱してから、１０ｍＬの臭素（０．２３ｍｏｌ）を滴下し、滴下完了後、引き続き１６時間反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝１０：１）、３００ｍＬの１０％の亜硫酸水素ナトリウムの水溶液を加え、３０分攪拌して、ろ過することで黄色の固体を得た。最後、５０℃で真空乾燥を行うことで、最終生成物ＩＩ−９（１９．５ｇ、９６．５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２２（ｄ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．７３−７．６６（ｍ，３Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．８４Ｈｚ，１Ｈ）。
【００４０】
（３）化合物ＩＩ−１０の合成
攪拌しながら、反応容器に順に、ＩＩ−９（６ｇ、１９．８７ｍｍｏｌ）、トルエン（６０ｍＬ）、トリエチルアミン（４．１ｍＬ、２９．８ｍｍｏｌ）、ＤＰＰＡ（６．４ｍＬ、２９．８ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１０ｍＬ）を入れ、反応系を１１０℃まで昇温させて還流下で反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後（原料、ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝５：１、中間体、石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）、溶媒を除去し、シリカゲルカラム精製（石油エーテル：酢酸エチル＝３０：１）を行うことで、生成物ＩＩ−１０（５．５ｇ、７４％）を黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝１．７２Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ＝７．４４Ｈｚ，８．３６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝７．１６Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｓ，９Ｈ）。
【００４１】
（４）化合物ＩＩ−１１の合成
化合物ＩＩ−１０（８０８ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのアセトニトリルに溶解させ、さらに２２ｍＬの１Ｍの塩酸（２１．６ｍｍｏｌ）を加え、８２℃で４時間加熱反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後、室温まで降温させ、反応系に適量の１ＭのＮａＯＨ溶液を加えてｐＨ値を強塩基性に調整した。酢酸エチルで抽出して有機層を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、さらにろ過して、減圧濃縮で溶剤を除去することで、生成物ＩＩ−１１（５００ｍｇ、８４．５％）を黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．５４（ｓ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２７３．９９。
【００４２】
（５）化合物ＩＩ−１２の合成
２５ｍＬの三口フラスコに１．７２９ｍＬの３０％の過酸化水素水（１６．９５ｍｍｏｌ）を入れ、氷浴にて０℃に降温した後、アルゴンガスの雰囲気下で、無水トリフルオロ酢酸（２．７３６ｍＬ、１９．６８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）溶液を滴下し、滴下完了後、０℃で１．５時間攪拌した（反応する混合物が無色から褐色に変わった）。そして、反応系に化合物ＩＩ−１１（５００ｍｇ、１．８２４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）溶液を滴下し、滴下完了後、室温まで昇温させ、攪拌して１時間反応させた。ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後、適量の水を加え反応をクエンチし、ジクロロメタンで抽出して有機層を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。さらに、ろ過し、エバポレートで溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）を行うことで、ＩＩ−１２（２１２ｍｇ、３８．２％）を黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）。
【００４３】
（６）化合物ＩＩ−１３の合成
化合物ＩＩ−１２（１００ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）、１、４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン（１２５ｍｇ、０．９８９ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（４２６ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を２ｍＬの再蒸留した無水トルエンに溶解させて置いた。そして、アルゴンガスの雰囲気で、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）及び（±）−ＢＩＮＡＰ（６１ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を２ｍＬの再蒸留した無水トルエンに溶解させ、９０℃で１５分攪拌した後（反応する混合物が濃紫色の混濁液からオレンジ色の清澄液に変わった）、室温まで降温させた。上記の溶液を該反応系に加え、アルゴンガスの雰囲気下、６０℃で１４時間攪拌した後（反応する混合物がオレンジ色の清澄液から赤褐色の液体に変わった）、室温まで降温させ、１０ｍＬの水を加え反応をクエンチした。ジクロロメタンで抽出して有機層を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。最後、ろ過して、エバポレートで溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製（ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ＝２０：１）を行うことで、ＩＩ−１３（４８ｍｇ、４１．８％）を黒紫色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４９−７．５２（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｓ，１Ｈ），３．６２−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．０４−３．１８（ｍ，６Ｈ），２．３１（ｓ，２Ｈ），１．８２−１．８３（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ  （Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３５０．３７。
【００４４】
（７）化合物ＩＩ−１４の合成
反応容器に順にＩＩ−１２（２．１ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）、鉄粉（１．７ｇ、０．０３ｍｏｌ）、エタノール（８０ｍＬ）、水（５４ｍＬ）及び濃塩酸（１．８ｍＬ）を入れ、８０℃まで昇温させて５時間反応させた。ＴＬＣで原料が完全に反応したことを検出した後、１０％のＫ２ＣＯ３溶液でｐＨ値を約８．０に調整して、１５０ｍＬの酢酸エチルを加えた。さらに、セライトを敷いた漏斗でろ過し、有機層を合わせて、減圧濃縮で溶媒を除去した後、固体をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、水を加え洗浄し、有機層を分離した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して、減圧濃縮で最終生成物ＩＩ−１４（１．５ｇ、８０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３０（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝２．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，２．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，１Ｈ），５．４３（ｓ，２Ｈ），４．１０（ｓ，１Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝５．４８Ｈｚ，２Ｈ），３．１９−３．１３（ｍ，３Ｈ），３．０７−３．００（ｍ，２Ｈ），２．１４−２．１１（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．７４（ｍ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９５．６６（ｓ），１５０．２０（ｓ），１４７．１８（ｓ），１３７．０２−１３６．７３（ｍ），１３６．３７（ｓ），１３１．２２（ｓ），１２１．４２（ｓ），１１６．５５（ｓ），１１５．３９（ｓ），１０８．５８（ｓ），１０８．４８（ｓ），５７．０６（ｓ），５１．８７（ｓ），４６．５６（ｓ），４４．６４（ｓ），２６．９１（ｓ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３２０．１６。
【００４５】
実施例６
【化２０】
0006912602.tif 000021
の合成（以下、「化合物ＩＩ−１５」と称する）
化合物ＩＩ−１５の合成経路は、以下の通りである。
【化２１】
0006912602.tif 000022
反応容器に化合物ＩＩ−１４（１．３ｇ、４．０７ｍｍｏｌ）及びテトラフルオロホウ酸（２０ｍＬ）を入れ、氷浴にて温度が０〜５℃に降温した後、それにＮａＮＯ２溶液（０．４ｇ、５．８ｍｍｏｌ、１０ｍＬ）を滴下し、滴下完了後、引き続き３０分反応させた。その後、攪拌を止め、吸引ろ過を行い、順に１５ｍＬのエタノール、１５ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルでろ過物を洗浄し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルでリスラリー洗浄して、ろ過で固体を得た。固体を反応容器に入れ、１２０℃まで加熱し、ＴＬＣで反応が完了したことを検出した後、室温まで降温させた。５０ｍＬのジクロロメタンを加え溶解させ、ろ過することで不溶性固体を除去した。さらに、５０ｍＬのジクロロメタンでケーキをリスラリー洗浄し、有機層を合わせて、減圧濃縮で溶媒を除去することで、粗生成物を得た。最後、ジクロロメタン及びメタノール（２５：１）によるカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、ＩＩ−１５（４４６ｍｇ、３４．０％）を紫色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３９−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．３６Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．３６Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝２．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．８０−６．７４（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．７６Ｈｚ，２Ｈ），３．１９−３．１２（ｍ，４Ｈ），３．０５−２．９９（ｍ，２Ｈ），２．１５−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７３（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９１．１７（ｓ），１５８．０８（ｓ），１５０．５４（ｓ），１３７．２２（ｓ），１３７．１４（ｓ），１３５．８２（ｓ），１３０．９７（ｓ），１２１．７６（ｓ），１１７．２７（ｓ），１１５．３３（ｓ），１１５．１２（ｓ），１１４．９８（ｓ），１０９．２６（ｓ），５６．８５（ｓ），５１．６２（ｓ），４６．３６（ｓ），４４．３９（ｓ），２９．７０（ｓ），２６．６５（ｓ）； １９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１１４．１１（ｓ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３２３．２。
【００４６】
実施例７
【化２２】
0006912602.tif 000023
の合成（以下、「化合物ＩＩＩ−５」と称する）
化合物ＩＩＩ−５の合成経路は、以下のようである。
【化２３】
0006912602.tif 000024
【００４７】
（１）化合物ＩＩＩ−２の合成
５−ヒドロキシインドール（ＩＩＩ−１）（１０ｇ、７５．１ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのアセトニトリルに溶解させ、該溶液に二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４９．２ｇ、２２５．３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（９１７ｍｇ、７．５１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮して、４００ｍＬのメタノールを加え溶解させた。その後、さらにＫ２ＣＯ３（５１．９ｇ、３７５．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。完全に反応した後、酢酸でｐＨ値を中性に調整して、Ｈ２Ｏを加えて希釈した。さらに、有機層（酢酸エチルを抽出溶媒とする）を抽出し、溶媒を除去して、カラム分離（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）を行うことで、生成物である化合物ＩＩＩ−２（１２．５ｇ、７１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９９（ｄ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．８４Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝２．４４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝３．６４Ｈｚ，１Ｈ），１．６６（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（Ｍ−Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２３２．１１。
【００４８】
（２）化合物ＩＩＩ−３の合成
化合物ＩＩＩ−２（３．２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（１．７７ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を１２０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、さらに両者を混合した。混合溶液を徐々にトリホスゲン（１．３ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）溶液に加え、室温で１時間攪拌した。１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン（１．７２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を徐々にそれに加え、室温で４時間反応させた。反応終了後、Ｈ２Ｏを加え希釈し、ＣＨＣｌ３で抽出し、有機層を収集した。さらに、ＮａＣｌの飽和水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去することで、粗生成物を得た。最後、ＣＨＣｌ３−ＣＨ３ＯＨ（９０：１０）を展開溶媒としてカラム分離を行うことで、生成物であるＩＩＩ−３（２．４ｇ、４５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．９６Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５２−４．４１（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝５．４８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝５．６８Ｈｚ，１Ｈ），３．２０−３．０６（ｍ，６Ｈ），２．１４−２．１１（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．６６（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３８６．２１。
【００４９】
（３）化合物ＩＩＩ−４の合成
化合物ＩＩＩ−３（２．４ｇ、６．２３ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、反応液が０℃に降温した後、１０ｍＬのトリフルオロ酢酸を加え、３０℃で２時間攪拌した。反応終了後、反応液を濃縮し、水を加え希釈して、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。さらに飽和ＮａＨＣＯ３溶液で水層のｐＨ値を８〜９に調整してから、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。最後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去することで、生成物であるＩＩＩ−４（３６０ｍｇ、２０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１１．１６（ｓ，１Ｈ），７．３８−７．２６（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），４．５３−４．３３（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｍ，１Ｈ），３．３０（ｍ，６Ｈ），２．２０−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．９３（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２８６．１５。
【００５０】
（４）化合物ＩＩＩ−５の合成
０℃で、化合物ＩＩＩ−４（３５０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に水素化ナトリウム（５９ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を加え、２０分攪拌した後、１−フルオロ−２−ヨードエタン（３２１ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を徐々に加え、室温で２時間反応させた。反応終了後、それに塩化アンモニウム溶液を加え希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機層を収集した。最後、ＣＨＣｌ３−ＣＨ３ＯＨ（９５：５、２０滴の水酸化アンモニウムを含む）によるカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、生成物であるＩＩＩ−５（５０ｍｇ、１２．３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝３．０４Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．７６Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｔ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｔ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｍ，１Ｈ），４．３９（ｔ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｔ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝５．７２Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１７−３．０１（ｍ，６Ｈ），２．１３−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．６９（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３３２．１９。
【００５１】
実施例８
【化２４】
0006912602.tif 000025
の合成（以下、「化合物ＩＩＩ−１２」と称する）
化合物ＩＩＩ−１２の合成経路は、以下の通りである。
【化２５】
0006912602.tif 000026
【００５２】
（１）化合物ＩＩＩ−９の合成
６−ヒドロキシインドール（ＩＩＩ−８）（１０ｇ、７５．１ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのアセトニトリルに溶解させ、該溶液に二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４９．２ｇ、２２５．３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（９１７ｍｇ、７．５１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮して、４００ｍＬのメタノールを加え溶解させた。その後、さらにＫ２ＣＯ３（５１．９ｇ、３７５．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。完全に反応した後、酢酸でｐＨの値を中性に調整して、Ｈ２Ｏを加え希釈した。さらに、有機層（酢酸エチルを抽出溶媒とする）を抽出収集し、溶媒を除去した後、カラムクロマトグラフィー分離（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）を行うことで、生成物であるＩＩＩ−９（１２．５ｇ、７１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６８（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝３．１６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝３．６８Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ−Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２３２．１１。
【００５３】
（２）化合物ＩＩＩ−１０の合成
化合物ＩＩＩ−９（３．２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（１．７７ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を１２０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、さらに両者を混合した。そして、混合溶液を徐々にトリホスゲン（１．３ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）溶液に加え、室温で１時間攪拌した。その後、１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン（１．７２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を徐々にそれに加え、室温で４時間反応させた。完全に反応した後、Ｈ２Ｏを加え希釈し、ＣＨＣｌ３で抽出し、有機層を収集した。さらに、ＮａＣｌの飽和水溶液で洗浄し、無水ＮａＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去することで、粗生成物を得た。最後、ＣＨＣｌ３及びＣＨ３ＯＨ（９０：１０）を展開溶媒としてカラム分離を行うことで、生成物であるＩＩＩ−１０（２．４ｇ、４５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９７（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝  ８．４４Ｈｚ，１Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝３．６４Ｈｚ，１Ｈ），４．５０−４．４０（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝５．６４Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１８−３．０２（ｍ，６Ｈ），２．１３−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８１−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３８６．２１。
【００５４】
（３）化合物ＩＩＩ−１１の合成
化合物ＩＩＩ−１０（２．４ｇ、６．２３ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、反応液が０℃に降温した後、１０ｍＬのトリフルオロ酢酸を加え、３０℃で２時間攪拌した。反応終了後、反応液を濃縮し、さらに水を加え希釈して、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。さらにＮａＨＣＯ３の飽和溶液で水層のｐＨ値を８〜９に調整してから、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。最後、無水ＮａＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去することで、生成物であるＩＩＩ−１１（３６０ｍｇ、２０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２７（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２．３６Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｍ，１Ｈ），４．５４−４．４４（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝５．７２Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝５．７２Ｈｚ，１Ｈ），３．２２−３．０８（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．１３（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．７４（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２８６．１６。
【００５５】
（４）化合物ＩＩＩ−１２の合成
０℃で、化合物ＩＩＩ−１１（３５０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に水素化ナトリウム（５９ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を加え、２０分攪拌した後、１−フルオロ−２−ヨードエタン（３２１ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を徐々にそれに加え、そして室温で２時間反応させた。反応終了後、ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機層を収集した。最後、ＣＨＣｌ３−ＣＨ３ＯＨ（９５：５、２０滴の水酸化アンモニウムを含む）によるカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、生成物であるＩＩＩ−１２（５０ｍｇ、１２．３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５７（ｄ，Ｊ＝８．４８Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．１１（ｍ，２Ｈ），６．９０−６．８７（ｍ，１Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝３．０４Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝４．８４Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝４．９２Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｍ，１Ｈ），４．３８（ｔ，Ｊ＝４．９２Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｔ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝５．６４Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝５．６８Ｈｚ，１Ｈ），３．１８−３．０１（ｍ，６Ｈ），２．１３−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８１−１．６９（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３３２．１８。
【００５６】
実施例９
【化２６】
0006912602.tif 000027
の合成（以下、「化合物ＩＩＩ−１９」と称する）
化合物ＩＩＩ−１９の合成経路は、以下の通りである。
【化２７】
0006912602.tif 000028
【００５７】
（１）化合物ＩＩＩ−１５の合成
化合物ＩＩＩ−１４（２ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ）、３−ブロモピリジン（３ｇ、１８．９９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、ｒａｃ−ＢＩＮＡＰ（６６０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔ−ブトキシド（１．８３ｇ、１９．０４ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのトルエンに溶解させ、８５℃で１６時間加熱反応させた。反応終了後、冷却し、減圧濃縮で溶媒を除去し、粗生成物に対してＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ（０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）＝１０：１によるカラム分離を行うことで、目的生成物であるＩＩＩ−１５（２．２ｇ、６８％）を褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．０５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝４．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．１２−７．０９（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，１Ｈ），３．４３−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．２３−３．２０（ｍ，２Ｈ），３．００２５−２．９９６０（ｍ，２Ｈ），２．７６−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．５０−２．４７（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２０４．１５。
【００５８】
（２）化合物ＩＩＩ−１６の合成
０℃で、化合物ＩＩＩ−１５（２．２ｇ、１０．８２ｍｍｏｌ）を８０ｍＬのアセトニトリルに溶解させ、そして３０分以内にＮ−ブロモスクシンイミド（１．９３ｇ、１０．８２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液を滴下し、３０分攪拌した後、室温まで昇温させた。４０ｍＬの水で反応をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×４０ｍＬ）を加え抽出して、有機層を収集した。最後、ＮａＣｌの飽和溶液で洗浄し、無水ＮａＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮で溶媒を除去し後、粗生成物に対してＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ（０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）＝１５：１によるカラム精製を行うことで目的生成物であるＩＩＩ−１６（１．４ｇ、４６％）を淡褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７４（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，１Ｈ），３．４３−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．１８−３．１６（ｍ，２Ｈ），３．００（ｍ，２Ｈ），２．６９−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．５４−２．５１（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２８２．０６。
【００５９】
（３）化合物ＩＩＩ−１８の合成
化合物ＩＩＩ−１６（１．３５ｇ、４．７８ｍｍｏｌ）、化合物ＩＩＩ−１７（１．１６ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）及びＰｄ２（ｄｂａ）３（５５３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を４０ｍＬの１，４−ジオキサンに溶解させ、１０分攪拌した後、１０ｍＬの炭酸ナトリウム（１．９３ｇ、１８．２１ｍｍｏｌ）溶液をそれに加えた。さらに、反応系を１１５℃まで昇温させて、２時間還流した。反応終了後、冷却して、水／酢酸エチル（５０：５０）の混合溶液を加えた。ろ過することで固体を収集し、３０ｍＬの酢酸エチルで洗浄することで、目的生成物であるＩＩＩ−１８（１．０ｇ、６６％）を薄黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２３（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｍ，２Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．４８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．０３−６．９９（ｍ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），３．４７−３．４３（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．２７（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｍ，２Ｈ），２．７９−２．７５（ｍ，２Ｈ），２．５０−２．４７（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３１９．１９。
【００６０】
（４）化合物ＩＩＩ−１９の合成
０℃で、９４ｍｇの水素化ナトリウム（２．３５ｍｍｏｌ）を化合物ＩＩＩ−１８（５００ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に加え、３０分攪拌した。その後、１−フルオロ−２−ヨードエタン（５４６ｍｇ、３．１４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を徐々にそれに加え、氷水浴を除去して室温まで昇温させて、２時間反応させた。完全に反応した後、ＮＨ４Ｃｌ溶液で反応系を希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２を加え抽出を行い、有機層を収集した。最後に、ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ（０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）＝１５：１によるカラム分離を行うことで目的生成物であるＩＩＩ−１９（１８０ｍｇ、３１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１６（ｓ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０３−７．００（ｍ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝２．８８Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｔ，Ｊ＝４．８４Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｔ，Ｊ＝４．８４Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝４．９２Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４５−３．４１（ｍ，２Ｈ），３．３１−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．０５（ｍ，２Ｈ），２．８８−２．８７（ｍ，２Ｈ），２．５２−２．５０（ｍ，２Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４７．６７，１４３．１３，１３５．９９，１３５．７１，１３１．９２，１２９．２２，１２８．６８，１２１．２１，１２０．６８，１２０．２８，１１８．６２，１０９．１９，１０２．６６，８３．２１，８１．５３，６３．１３，５４．４９，４２．３７，４１．８０；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３６５．２１。
【００６１】
実施例１０
【化２８】
0006912602.tif 000029
の合成（以下、「化合物ＩＩＩ−２４」と称する）
化合物ＩＩＩ−２４の合成経路は、以下の通りである。
【化２９】
0006912602.tif 000030
【００６２】
（１）化合物ＩＩＩ−２１の合成
２．２２ｍＬのＤＩＥＰＡ（１３．４ｍｍｏｌ）及び化合物ＩＩＩ−１４（８４７ｍｇ、６．７１ｍｍｏｌ）を化合物ＩＩＩ−２０（１ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）のオクタノール（２０ＭＬ）溶液に加え、１２０℃で一晩反応させた。完全に反応した後、減圧濃縮で溶媒を除去し、粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ（２Ｍ  ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）＝４：１を溶出液とするカラム精製を行うことで、目的生成物であるＩＩＩ−２１（１．２ｇ、７５％）を白色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．１６５（ｄ，Ｊ＝９．３６Ｈｚ，１Ｈ），６．６５６（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７２−３．６８（ｍ，２Ｈ），３．４７（ｍ，２Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），２．７６−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．５９−２．５７（ｍ，２Ｈ），２．３６６（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２３９．１１。
【００６３】
（２）化合物ＩＩＩ−２３の合成
室温で、化合物ＩＩＩ−２１（１．１ｇ、４．６１ｍｍｏｌ）及びＩＩＩ−２２（７６３ｍｇ、５．５３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８０ｍＬ）混合溶液にＰｄ２（ｄｂａ）３（４２１ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及び１，３−ビス（２，６−ジイソプロピルフェニル）イミダゾリウムクロリド（５８７ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を加えた。そして、窒素置換を３回行った後、２０％のＮａ２ＣＯ３（１０ｍＬ、１８．４ｍｍｏｌ）を加え、さらに窒素置換（４回）を行った。そして、窒素ガスの雰囲気下、８５℃で１９時間反応させ、反応終了後、冷却した。２００ｍＬの酢酸エチルを加え、セライトでろ過した。最後、ろ液を収集し、濃縮で溶媒を除去して、粗生成物に対してＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ（２Ｍ  ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）＝９：１によるカラムクロマトグラフィー精製を行うことで、目的生成物であるＩＩＩ−２３（８５０ｍｇ、６２％）を茶褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５９６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２３１（ｍ，１Ｈ），６．７２２（ｄ，Ｊ＝８．２４Ｈｚ，２Ｈ），６．３８８（ｄ，Ｊ＝９．４４Ｈｚ，１Ｈ），３．７２−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６８−３．５９（ｍ，２Ｈ），３．０９３（ｍ，２Ｈ），２．８８−２．８６（ｍ，２Ｈ），２．６７−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．４０７（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝２９７．１６。
【００６４】
（３）化合物ＩＩＩ−２４の合成
１−フルオロ−２−ヨードエタン（３５１ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、順にＫ２ＣＯ３（６５２ｍｇ、４．７２ｍｍｏｌ）及び化合物ＩＩＩ−２３（４００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で攪拌して一晩を経て、完全に反応した後、それに水と酢酸エチルを加え、有機層と水層を分離した。さらに、水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を収集して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、さらにろ過して、溶媒を除去した。粗生成物に対してＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ（２Ｍ  ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）＝９：１によるカラム分離を行うことで、目的生成物であるＩＩＩ−２４（１６０ｍｇ、３４．６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９４７（ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，２Ｈ），７．５８７（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０１４（ｄ，Ｊ＝８．７２Ｈｚ，２Ｈ），６．７５１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８４４（ｔ，Ｊ＝３．９２Ｈｚ，１Ｈ），４．７２６（ｔ，Ｊ＝４．０８Ｈｚ，１Ｈ），４．３０４（ｔ，Ｊ＝３．９６Ｈｚ，１Ｈ），４．２３４（ｔ，Ｊ＝４．１６Ｈｚ，１Ｈ），３．７６−３．７２（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．５７（ｍ，２Ｈ），３．１１６（ｍ，２Ｈ），２．９６−２．９０（ｍ，２Ｈ），２．６０−２．５８（ｍ，２Ｈ），２．４３１（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５８．２１，１４８．８７，１３９．３６，１３３．０７，１２１．３５，１２０．５５，１２０．０９，１１８．３３，１１０．１３，８２．７０，８１．０１，６３．０１，５４．７９，４２．２５，４１．７０；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｍ／ｚ＝３４３．１９。
【００６５】
実施例１１
【化３０】
0006912602.tif 000031
である放射性リガンドの合成（以下、「[１８Ｆ]ＩＩ−１５」と称する）
[１８Ｆ]ＩＩ−１５の合成経路は、以下のようである。
【化３１】
0006912602.tif 000032
【００６６】
１５ｍｇのＫｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２を０．７ｍＬの無水アセトニトリルに溶解させ、２ｍｇのＫ２Ｃ２Ｏ４を０．３ｍＬの水に溶解させて、両者を均一に混合させて、１．０ｍＬのＫｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２／Ｋ２Ｃ２Ｏ４の溶出液を調製した。該溶出液でＱＭＡカラムに吸着した１８Ｆ−を反応容器に溶出し、１００℃でＮ２ガスを吹きかけて反応容器における溶媒を液切りした後、０．５ｍＬの無水アセトニトリルを加え、さらに液切りした。反応容器における水分を十分除去すべく、上記工程を３回繰り返して実施した。標識前駆体であるＩＩ−１３（２ｍｇ）の無水ＤＭＳＯ溶液（０．３ｍＬ）を迅速に上記の反応容器に入れ、密封して、１６０℃で３０分反応させた。反応終了後、蒸留水（２×１０ｍＬ）を加え反応をクエンチして、注射器で反応液を吸い取って、予め活性化したＳｅｐ−ＰａｋＣ１８固相抽出カートリッジに通した。２ｍＬのアセトニトリルで該Ｃ１８カートリッジから反応生成物を溶出した。溶出液を収集して、減圧濃縮で溶媒を除去し、適量なアセトニトリルを加えて溶解させた後、アセトニトリル：水（０．２％の酢酸アンモニウムを含有）＝２８：７２の液体を移動相としてｒａｄｉｏ−ＨＰＬＣによって分離精製を行った。流速は４ｍＬ／分であり、波長は２８０ｎｍであり、セミ分取カラムはＩｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３型Ｃ１８逆相セミ分取カラム（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．５μｍ，１０ｍｍ×２５０ｍｍ）である。
【００６７】
ｒａｄｉｏ−ＨＰＬＣによって分離精製を行った後、該放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５の放射化学的純度は、９８％より大きくなり、放射性標識率が約１３．１％（減衰補正が未実施）であった。精製された［１８Ｆ］ＩＩ−１５と未標識の安定化合物ＩＩ−１５とを共に注射してＨＰＬＣ分析を行った。移動相がアセトニトリル：水（０．２％酢酸アンモニウムを含有）＝３０：７０であり、流速は１ｍＬ／分であり、波長は２８０ｎｍであり、分析カラムがＡｇｅｌａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖｅｎｕｓｉｌ  ＸＢＰ  Ｃ１８（Ｌ）、５μｍ、１５０オングストローム、４．６×２５０ｍｍである。図１は、分析結果を示す。［１８Ｆ］ＩＩ−１５とＩＩ−１５との保持時間は、それぞれ１４．０３７分、１３．４６６分であり、両者の保持時間が対応しているので、放射性リガンドの的確性を確認した。
【００６８】
実施例１２  リガンド化合物の体外競合的試験
（１）飽和結合試験
ａ）受容体タンパク質の調製及びその濃度の測定
試験に用いられる受容体タンパク質均は、雌ＳＤラット（１８０−２００ｇ）の大脳から分離採取したものである。雌ＳＤラット（１８０−２００ｇ）を断頭により死させた後、迅速にその大脳を摘出して氷上に置いた。さらに、氷冷した生理食塩水で血糸を洗いた後、大脳皮質（該部分においてα７ｎＡＣｈＲｓ受容体タンパク質が豊富）を摘出して、１０倍体積の氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ＝７．４、４℃）に入れた。そして、ビーカーを氷水浴に配置して手持ち型組織ホモジナイザーで該混合物を３０秒間ホモジネートした（Ｎｏ．６とする）。ホモジネートされた膜溶液を３等分して５０ｍＬの遠心管に入れ、低温高速遠心機で２０分（４℃、４８０００ｇ）遠心した。遠心した後、上澄み液を除去して、下層の沈殿物を１０倍体積の氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液に溶解させ、同様な方法で混合物をホモジネートして、遠心、洗浄した。上記工程を繰り返して３回実施して得た下層の沈殿物は、受容体膜タンパク質である。そして、それを１０倍体積の氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液に溶解させ、ホモジネートして十分均一に混合した。さらに、１０μＬの均一に混合した受容体膜タンパク質の溶液を取って、Ｌｏｗｒｙ法によってタンパク質の濃度を測定し、残った膜溶液をそれぞれ２ｍＬの遠心管に入れて、冷蔵庫において−８０℃で保存して置いた。
【００６９】
ｂ）受容体膜タンパク質の飽和結合試験
飽和結合試験は、放射性リガンドである［１２５Ｉ］α−ブンガロトキシン（単に［１２５Ｉ］α−ｂｇｔと称する）とマウスの大脳膜タンパク質との結合によって実施された。試験において、［１２５Ｉ］α−ｂｇｔに対して、異なる８つの濃度点（０．００５〜５ｎＭ）が設けられ、各濃度点に対して３組が設けられた。冷蔵庫において−８０℃で保存されている受容体膜タンパク質を取って、４℃で凍結融解し、凍結融解した後、測定したタンパク質の濃度に基づいて、適当な体積の氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ＝７．４、４℃）を加え希釈した。全結合において、反応混合物は、総容量５００μＬであり、１００μＬの膜タンパク質溶液（各試験管におけるタンパク質の量が１．５ｍｇである）と、１０μＬの各濃度の放射性リガンドである［１２５Ｉ］α−ｂｇｔと、３９０μＬの氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液とを含み、膜タンパク質、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液及び［１２５Ｉ］α−ｂｇｔをその順に加えた（表１）。非特異的結合は、２μＭの非標識のα−ｂｇｔによって確定された。試験管における反応混合物は、総容量が５００μＬであり、１００μＬの膜タンパク質溶液（各試験管におけるタンパク質の量が１．５ｍｇである）と、１０μＬの各濃度の放射性リガンドである［１２５Ｉ］α−ｂｇｔと、１００μＬの２μＭのα−ｂｇｔと、２９０μＬの氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液とを含み、膜タンパク質、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液、α−ｂｇｔ及び［１２５Ｉ］α−ｂｇｔをその順に加えた（表２）。アプライした後、封止膜で試験管を封止して、十分均一に混合するように数秒旋回してから、３７℃のインキュベータ一に入れて２．５時間インキュベーションした。インキュベーション完了後、試験管を取り出し氷水浴に入れて受容体タンパク質とリガンドとの結合を中止した。そして、４８ウェルプレートを用いて混合液をＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂろ紙（予め０．５％のポリエチレンイミン溶液に２．５時間浸漬した）にろ過した。さらに、ろ紙に対して５ｍＬの氷冷した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液で３回洗いた後、ろ紙をろ紙片になるように切り取って測定用のＰＥ管に入れて、γ−ｃｏｕｎｔｅｒでそのカウントを測定した。全結合（ＴＢ）と非特異的結合（ＮＳＢ）との差は、特異的結合（ＳＢ）であり、即ちＳＢ（ｃｐｍ）＝ＴＢ（ｃｐｍ）−ＮＳＢ（ｃｐｍ）である。
【００７０】
【表１】
0006912602.tif 000033
【表２】
0006912602.tif 000034
【００７１】
ｃ）試験結果
飽和結合試験において、放射性リガンドである［１２５Ｉ］α−ｂｇｔに対して、異なる８つの濃度（０．００５〜５ｎＭ）が設けられ、各濃度に対して３組が設けられて測定した。試験結果から分かるように、測定が行われる濃度範囲内に、［１２５Ｉ］α−ｂｇｔと受容体膜タンパク質との特異的結合は、速やかに飽和になった。図２は、その特異的結合の曲線を示す。特異的結合の曲線及び式ｌｏｇ［Ｂ／（Ｂｍａｘ−Ｂ）］＝ｎＨｌｏｇ［Ｌ］−１ｏｇＫｄに基づいてｌｏｇ［Ｂ／（Ｂｍａｘ−Ｂ）］とｌｏｇ［Ｌ］との関係を表す図を作成し、Ｈｉｌｌ直線（図３に示す）、つまりｙ＝１．０５８２８ｘ＋０．０８７３１（Ｒ＝０．９９０３１）を得た。その傾斜度は、Ｈｉｌｌ係数ｎＨである。ｎＨ＝１．０５８。上記から分かるように、［１２５Ｉ］α−ｂｇｔと受容体膜タンパク質の結合は、簡単な単一結合部位作用系である。
【００７２】
単一結合部位作用系のＳｃａｔｃｈａｒｄ方程式であるＢ／Ｆ＝−Ｂ／Ｋｄ＋Ｂｍａｘ／Ｋｄに基づいて、特異的結合量Ｂと対応するＢ／Ｆとの関係を表す図（図４）を作成し、線形回帰方程式であるｙ＝４６．４２８５７−１．２９８７ｘ（Ｒ＝１）を得た。該方程式によって、本試験の条件での［１２５Ｉ］α−ｂｇｔの平衡解離定数Ｋｄ＝０．７７±０．０８８ｎＭ（９５％信頼区間が０．３６〜１．１７２ｎＭである）となり、最大結合量Ｂｍａｘ＝３５．７５±４．６４ｆｍｏｌ／ｍｇタンパク質（９５％信頼区間が２９．８８〜４１．６２ｆｍｏｌ／ｍｇタンパク質である）となった。その試験結果と本明細書に記載のデータと対応していることから（Ｋｄ＝１．５±０．７ｎＭ、Ｂｍａｘ＝６３±１７ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質）、本明細書に記載の測定方法は、信頼でき、化合物の生物活性の測定に用いられることができる。
【００７３】
（２）競合的結合試験
ａ）試験方法
リガンド化合物とα７ｎＡＣｈＲｓとの親和性を定量的に測定するため、［１２５Ｉ］α−ｂｇｔを標準放射性物質とする体外競合的結合試験を行う。試験において、膜タンパク質溶液（各反応管におけるタンパク質の量が１．５ｍｇである）と０．４ｎＭの［１２５Ｉ］α−ｂｇｔ溶液及び一連の異なる８つの濃度（各濃度に対して３組を測定）の非標識リガンド溶液とをそれぞれ３７℃のインキュベータ一において２．５時間インキュベーションする。インキュベーション完了後、上記の飽和結合試験と同様な方法で試験を行い、γ−ｃｏｕｎｔｅｒでそのカウンタを測定する。また、該試験体系の的確性及び信頼性を確保するため、ＭＬＡ（既存のα７ｎＡＣｈＲｓの高選択性、高親和性のリガンド）を比較対象リガンドとして、マウス脳におけるα７ｎＡＣｈＲｓとの親和性を測定する。リガンド化合物の調製方法及びアプライ方法は、表３及び表４に示す。
【００７４】
【表３】
0006912602.tif 000035
【００７５】
【表４】
0006912602.tif 000036
【００７６】
ｂ）試験結果
比較のため、ＭＬＡを比較対象リガンドとした。同等な試験条件で、α７ｎＡＣｈＲｓに対するＭＬＡ及び設計された測定待ち化合物のそれぞれの親和性を測定した。
【００７７】
競合的結合試験において、比較対象リガンドであるＭＬＡと一連の測定待ち化合物に対して異なる８つの濃度（ＩＩ−１４が１０−６〜１０−１４ｍｏｌ／Ｌであり、ＩＩ−５が１０−５〜１０−１３ｍｏｌ／Ｌであり、それ以外の化合物が１０−３〜１０−１０ｍｏｌ／Ｌとして設けられ、０．４ｎＭの［１２５Ｉ］α−ｂｇｔ（Ｋｄ＝０．７７±０．０８８ｎＭ）とα７ｎＡＣｈＲｓとの結合を阻害することによってＩＣ５０値を測定した。そして、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆの式（Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／Ｋｄ））に基づいてそれぞれのＫｉ値を算出した。測定結果を表５に示す。本試験の条件で、ＭＬＡの結合阻害定数Ｋｉ＝２．８８±０．７８ｎＭとなり、本明細書に記載のＫｉ値（１．０９±０．０９ｎＭ）に近いので、本発明に用いられる試験方法が利用可能である。
【００７８】
表５から分かるように、各リガンド化合物がα７ｎＡＣｈＲ膜タンパク質に対して親和性を有し、結合阻害定数（Ｋｉ）が０．００５〜４５０ｎＭの範囲内に収まった。そのうち、［１２５Ｉ］α−ｂｇｔに対する化合物ＩＩ−１４、ＩＩ−５、ＩＩ−１５、ＩＩ−６及びＩ−９の阻害作用が強く、そのＫｉ値がそれぞれ０．００６９±０．００４ｎＭ、０．０６４±０．０５８ｎＭ、２．９８±１．４１ｎＭ、７．２４±１．０２ｎＭ及び２１．７６±１．２２ｎＭである。上記から分かるように、それらのα７ｎＡＣｈＲ対する親和性が強く、特に化合物ＩＩ−１４の親和性（Ｋｉ＝０．００６９±０．００４ｎＭ）が現在世界上の同類のリガンド分子の最高値（Ｋｉ＝０．０２３ｎＭ）を超えた。
【００７９】
【表５】
0006912602.tif 000037
【００８０】
実施例１３  体外のｈＥＲＧカルシウムチャネル阻害試験
ａ）試験方法
現在、医薬品のｈＥＲＧカルシウムチャネルに対する阻害作用の測定方法は、主に、全自動パッチクランプ技術、伝統的パッチクランプ技術及びＦｌｕｘＯＲＴＭ  Ｔｈａｌｌｉｕｍ  Ａｓｓａｙの３つがある。本発明において、伝統的パッチクランプ技術を用いて化合物のｈＥＲＧカルシウムチャネルに対する阻害作用を測定する。該方法は、心毒性研究の公的な方法であり、最も的確なの測定方法である。本試験において、シサプリド（Ｃｉｓａｐｒｉｄｅ、既存のｈＥＲＧカルシウムチャネルに対して強い阻害作用を有する化合物）を標準化合物として、測定待ちリガンド化合物のｈＥＲＧカルシウムチャネルに対する阻害作用を評価する。
【００８１】
３７℃で、ＤＭＥＭである培地（１０％ウシ胎児血清及び０．８ｍｇ／ＭｌのＧ４１８を含む）でｈＥＲＧカルシウムチャネル安定発見のＨＥＫ２９３細胞系（Ｃｒｅａｃｅｌｌ）（５％のＣＯ２）を培養する。継代培養した後、ＴｒｙｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ溶液で細胞を単離して、３×１０３の細胞をカバーガラスに置き、２４ウェルプレートに１８時間培養した後、細胞の電気生理活性を測定する。そして、ホールセル記録により得られたｈＥＲＧ電流が安定した後、医薬品試験を行う。本試験において、各測定待ちリガンド化合物に対してそれぞれ４つの濃度グラジエント（０．４μＭ〜５０μＭ）が設定され、隣り合う濃度の比が５であり、標準化合物であるシサプリドの濃度範囲は１ｎＭ〜１μＭであり、隣り合う濃度の比が１０である。測定する際に、各医薬品（リガンド化合物及びシサプリドを含む）の濃度に対して５分（または、電流が安定するまで継続に行う）測定し、その後、次の濃度に対する測定を行う。医薬品溶液は、重力灌流で低濃度から高濃度の順に記録チャンバーにおいて細胞に作用され、記録チャンバーにおいて液交換を行う。医薬試験を行う前に、ネガティブコントロール群を設け、試験群及びネガティブコントロール群に対してそれぞれ３回測定する。
【００８２】
ｂ）試験結果
データ処理を行うとき、ネガティブコントロール群の記録電流で測定待ち医薬品の各濃度に対応する作用電流を校正し（測定待ち医薬のテール電流のピーク値／ネガティブコントロール群のテール電流のピーク値）、そして、測定待ち医薬品の各濃度における阻害率（１−測定待ち医薬のテール電流のピーク値／ネガティブコントロール群のテール電流のピーク値）を算出した。３回の試験の平均値及び相対標準偏差を求めた後、以下の方程式を利用して各測定待ち化合物の半数阻害濃度ＩＣ５０値を算出した。
【００８３】
阻害率＝１／［１＋（ＩＣ５０／ｃ）ｈ］
但し、ｃが測定待ち医薬の濃度であり、ｈがＨｉｌｌ係数である。曲線のフィッティング及びＩＣ５０値の算出は、ＩＧＯＲソフトウェアを補助手段として完成される。
【００８４】
標準化合物であるシサプリド及び測定待ち化合物ＩＩ−１５、ＩＩ−１４、ＩＩ−６、ＩＩ−５のｈＥＲＧカルシウムチャネルに対する阻害作用の結果を、表６及び表７に示す。試験結果から分かるように、化合物ＩＩ−１４がｈＥＲＧカルシウムチャネルに対してほぼ阻害作用（ＩＣ５０＞１０μＭ）を有せず、化合物ＩＩ−５がｈＥＲＧカルシウムチャネルに対して中程度の阻害作用（１μＭ≦ＩＣ５０≦１０μＭ）を有し、化合物ＩＩ−１５及びＩＩ−６がｈＥＲＧカルシウムチャネルに対して比較的強い阻害作用（０．１μＭ≦ＩＣ５０≦１μＭ）を有する。しかしながら、それらの該イオンチャンネルタンパク質に対する親和性（ＩＣ５０の範囲が４６０ｎＭ〜２５００ｎＭである）は、α７ｎＡＣｈＲ膜タンパク質に対する親和性（ＩＣ５０の範囲が０．２１ｎＭ〜２１ｎＭである）より遥かに小さい（表８を参照）。なお、該測定方法は、ｈＥＲＧの毒性の研究に対する最適の方法であるが、体内における医薬品のｈＥＲＧカルシウム電流に対する阻害作用は、血液における医薬品の濃度などの生理的要因に関わるため、これらのリガンド分子を潜在的なα７ｎＡＣｈＲの作動薬として研究することができる。
【００８５】
【表６】
0006912602.tif 000038
【００８６】
【表７】
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【００８７】
【表８】
0006912602.tif 000040
【００８８】
実施例１４  リガンド化合物ＩＩ−１５の半数致死量ＬＤ５０の測定
ａ）試験方法
雌雄各３０匹の合計６０匹の昆明マウス（１８〜２０ｇ）を用意し、試験条件で３日間飼育した後、絶食、飲水で１２時間過ごさせた。その後、逐一に計量、記録し、体重に基づいて無作為に６群にグループ分け、各群に計１０匹（雌雄各５匹）を配する。予備実験により得た濃度範囲に基づいて異なる５つの濃度の溶液及びネガティブコントロール溶液を調製し、試験群における隣り合う濃度の比は０．９０〜０．９５である。尾静脈により各群のマウスに対して０．１ｍＬの医薬溶液またはネガティブコントロール溶液を注射した。注射完了後、濃度、雌雄に基づいてマウスを分けて飼育し、投薬後の０．５時間、１時間、３時間、６時間、１２時間及び２４時間内に密に経過観察してマウスの反応（活動が盛んになっているか否か、刺激反応状況、飲食状況、痙攣、躁状態、吐血、ふらつき等の病症）を記録する。死亡したマウスに対して直ちに解剖して各器官の異常状況を観察する。その後、毎日、定期的に観察し、連続１４日間観察する。また、投薬後の第２、４、６、８、１０、１２、１４日目、各群のマウスに対して体重を計量して記録する。観察期間内の各群のマウスの死亡率を算出し、そして各群の試験濃度及び死亡率に基づいて該化合物によるマウスの半数致死量ＬＤ５０を算出する。
【００８９】
ｂ）試験結果
１．観察期間内のマウスの反応状況
試験において投薬した後死亡したマウスは、観察段階においていずれも痙攣が現れ、一部のマウスは震え、吐血、ふらつき、躁状態が現れた。死亡したマウスを解剖して、各群の臓器を観察したところ、いずれも異常を発見しなかった。すべての投薬されたマウスは、投薬後の１時間内に、いずれも食欲不振の現象が現れ、後ほど正常に回復した。試験群における生きたマウスとネガティブコントロール群マウスは、観察期間内に、体重が正常に増加し、濃度の差異及び雌雄の差異で各群マウスの体重が著しく変化することがなかった。観察期間内のマウスの反応状況を、表９に示す。
【００９０】
【表９】
0006912602.tif 000041
【００９１】
２．半数致死量ＬＤ５０の算出
ＬＤ５０の算出方法として、様々があり、そのうち、Ｂｌｉｓｓ開発されその後発展した重み付けプロビット法は、最も厳密、正確なものであるので、標準のＬＤ５０算出方法となった。本願において、該算出方法を用いて測定待ち化合物のマウス対するＬＤ５０値を求める。
【００９２】
【表１０】
0006912602.tif 000042
【００９３】
プロビットＹとＬｏｇＤ（Ｘ）との関係を表す図を作成し、方程式ｙ＝１４．７６ｘ−２０．５３（図５に示す）を得た。死亡率が５０％となるとき、表を参照してプロビットＹが５．００であることを分かった。方程式に代入してｘ＝ｍ＝ＬｏｇＤ＝１．７３、Ｄ＝５３．７０ｍｇ／ｋｇと算出した。
【数１】
0006912602.tif 000043
【００９４】
上記式によって、標準偏差Ｓｍ２＝０．０００１９７７５７７、Ｓｍ＝０．０１４と算出した。ｍ±１．９６Ｓｍ＝１．７３±０．０２７４４となり、つまり１．７０２５６〜１．７５７４４となる。さらに、それぞれの逆対数を求め、ＬＤ５０の９５％信頼空間を５０．４１５０〜５７．２０５８ｍｇ／ｋｇとする。従って、化合物ＩＩ−１５のＬＤ５０値が５３．７０ｍｇ／ｋｇである。
【００９５】
上記のように、化合物ＩＩ−１５の半数致死量ＬＤ５０値は、ｍｇ／ｋｇオーダーであり、臨床において１回のＰＥＴで注射される使用量より遥かに多いので、化合物ＩＩ−１５を１８Ｆで標識して得た放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５の体内応用は、安全である。
【００９６】
実施例１５  ［１８Ｆ］ＩＩ−１５の脂質／水層間における分配係数の測定
【００９７】
大部分の神経用医薬の研究において、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する能力を考慮すべきである。医薬分子が血液脳関門を通過することができるか否かは、その脂溶性に緊密に関わる。通常、リガンド分子は、その脂溶性（ｌｏｇＰ）の数値範囲が１．０〜３．０となる場合、血液脳関門を通過することができると認められる。
【００９８】
オクタノールとｐＨ＝７．４のＰＢＳとの混合系において、［１８Ｆ］ＩＩ−１５の脂質／水分配係数（ｌｏｇＰ）を測定する。具体的な試験方法は、以下のようである。９００μＬのＰＢＳ（予めオクタノールで飽和させる）及び１０００μＬのオクタノール（予めＰＢＳで飽和させる）を含む１０ｍＬの遠心管に１００μＬ、１０μＣｉの放射性リガンド（生理食塩水溶液）を加える。そして、混合溶液を５分間旋回した後、遠心机に置いて５分（７０００ｒｍｐ／分）遠心する。遠心した後、有機層及び水層を、それぞれ１００μＬ取得してＰＥ試験管に入れ、放射能カウントを測定する。さらに、各組に対して別途１００μＬの有機相を取得して１０ｍＬの遠心管に入れて、９００μＬのオクタノール及び１０００μＬのＰＢＳを加え、上記のように旋回して遠心した後、放射能カウントを測定する。このように、３回実施して、平均値を求める。ｌｏｇＰ＝ｌｏｇ（有機層のカウント／水層のカウント）。
【００９９】
測定により分かるように、放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５の脂質／水分配係数ｌｏｇＰ値が１．６４±０．１２であり、該数値は、医薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して脳に入る脂溶性の範囲内にある。
【０１００】
実施例１６  ［１８Ｆ］ＩＩ−１５の体外安定性試験
【０１０１】
放射性リガンドの体外安定性は、体内研究に対して重要である。通常、体外安定性研究は、生理食塩水及び動物血清を用いて行われる。具体的な方法は、以下の通りである。１０μＣｉのＨＰＬＣによる精製が行われた放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５と１００μＬのウシ胎児血清を、３７℃でそれぞれ１時間及び２時間インキュベーションする。インキュベーション終了後、２００μＬのアセトニトリルを加え、タンパク質を十分沈殿させる。そして、４℃で５分（７０００ｒｐｍ）を遠心して、上澄み液を収集し、ろ過膜を介してろ過した後、１００μＬを取得してＨＰＬＣ分析を行う。さらに、別途１０μＣｉのＨＰＬＣによる精製が行われた放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５と１００μＬの生理食塩水を、室温でそれぞれ１ｈ及び２ｈ培養し、その直後に、ＨＰＬＣ分析を行う。
【０１０２】
放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５の体外安定性試験は、図６に示す。図６から分かるように、［１８Ｆ］ＩＩ−１５の生理食塩水及びウシ胎児血清における安定性がよい。３７℃でウシ胎児血清において１時間（図６におけるＡ）及び２時間（図６におけるＢ）インキュベーションした後、その放射化学的純度は、いずれも９８％より大きい。室温で生理食塩水において１時間（図６におけるＣ）及び２時間（図６におけるＤ）培養した後、その放射化学的純度は、相変わらず９８％より大きい。
【０１０３】
実施例１７  ［１８Ｆ］ＩＩ−１５の動物の体内分布試験
ＨＰＬＣによる精製が行われた［１８Ｆ］ＩＩ−１５（１０μＣｉであり、０．１ｍＬの生理食塩水に溶解され、５％のＤＭＳＯを含む）を尾静脈により正常な昆明マウス体内（１８〜２２ｇ、雌、ｎ＝５）に注射する。５分、１５分、３０分、６０分、９０分となるとき、マウスを断頭により死させた後、解剖により血液、脳、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、筋肉、骨格及び尾を摘出し、各器官の湿重量を計量しγ−ｃｏｕｎｔｅｒでそのカウントを測定する。各組織の吸収状況は、％ＩＤ／ｇで表される。％ＩＤ／ｇ＝ＩＤ／ｇ÷１％、但し、ＩＤ／ｇ＝組織の放射能カウント（ｃｏｕｎｔｓ）÷組織質量（ｍｇ）、１％＝各時相の１％ＩＤの平均値−尾部放射能カウント／１００。該放射性リガンドの体内分布結果を、表１１に示す。
【０１０４】
【表１１】
0006912602.tif 000044
【０１０５】
表１１から分かるように、１８Ｆ標識の放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５に対するマウス脳の初期吸収量が非常に高く、注射してから５分後、その吸収量が８．９８±０．４１％ＩＤ／ｇに達し、１５分後、最高の脳吸収量である１１．６０±０．１４％ＩＤ／ｇに達した。そして、該放射性リガンドの脳からの除去速度は、適宜であり、投薬してから６０分及び９０分後、脳の吸収量が、それぞれ５．４６±０．２７％ＩＤ／ｇ及び３．６３±０．２５％ＩＤ／ｇまでに下降した。上記から分かるように、該化合物は、脳内運動学的性質に適する性質を有する。その結果により、従来の臨床試験段階に入る［１８Ｆ］ＡＳＥＭ（その最高の脳吸収量は、投薬してから５分後に現れ、７．５％ＩＤ／ｇである）に比べて、明らかに優れている。また、［１８Ｆ］ＩＩ−１５の血液の吸収量は、非常に低い。脳／血の比は、非常に高く、５分及び１５分のとき、それぞれ９．３５及び９．５７となる。
【０１０６】
放射性リガンドの体内脱フッ素化も、Ｆ−１８標識の現像剤を研究する際に考えなければならないことである。上記の表の試験結果から分かるように、［１８Ｆ］ＩＩ−１５の骨格の吸収値は、試験を実施する時間範囲内、増加しつつあるが、増加速度及び増加幅がそれほど大きくない。上記からわかるように、該化合物の体内脱フッ素化が比較的に弱く、放射性リガンドの体内現像研究に対して大きく干渉することがないと推測される。また、その他の組織器官の放射性吸収も比較的に高く、例えば、腎臓及び肺の放射性リガンドの初期吸収量が非常に高いが、時間経過に従い、その吸収量が徐々に低くなり、除去速度が非常に速い。該放射性リガンドは、［１８Ｆ］ＡＳＥＭと比べて、よりよい脳吸収特性を有する。
【０１０７】
実施例１８  ［１８Ｆ］ＩＩ−１５の脳内分布試験
ＨＰＬＣによる精製が行われた［１８Ｆ］ＩＩ−１５（１０μＣｉであり、０．１ｍＬの生理食塩水に溶解させ、５％のＤＭＳＯを含む）を尾静脈により正常な昆明マウス体内（２８〜３２ｇ、雌、ｎ＝５）に注射する。投薬してから５分、１５分、３０分、６０分、９０分となるとき、頸椎脱臼法によりマウスを死亡させた後、迅速に脳を解剖して氷に置く。そして、氷冷した生理食塩水で血痕を除去して、解剖により皮質、線条体、海馬、上丘、下丘、視床、小脳及び残りの脳部を摘出し、各脳領域の湿重量を計量し、γ−ｃｏｕｎｔｅｒでその放射能カウントを測定する。各領域の放射性リガンドに対する吸収状況は、％ＩＤ／ｇで表される。％ＩＤ／ｇ＝ＩＤ／ｇ÷１％、、但し、ＩＤ／ｇ＝組織の放射能カウント（ｃｏｕｎｔｓ）÷組織質量（ｍｇ）、１％＝各時相の１％ＩＤの平均値。該放射性リガンドの脳内分布状況を、表１２に示す。
【０１０８】
表１２から分かるように、１０μＣｉの［１８Ｆ］ＩＩ−１５をマウスの体内に注射した後、該放射性リガンドは、α７ｎＡＣｈＲが最も豊富な皮質、線条体及び海馬において比較的に高く吸収され、投薬してから３０分後、ピークになり、それぞれ９．３９±０．２４％ＩＤ／ｇ、８．３７±０．２７％ＩＤ／ｇ及び６．３１±０．８２％ＩＤ／ｇとなる。観察期間の経過に従い、これらの領域の吸収量が、徐々に下降した。中程度吸収の領域は、上丘、下丘及び視床であり、吸収が最も低い領域は、小脳（α７ｎＡＣｈＲが最も少ないマウス脳の領域）である。その脳内分布特徴は、［１８Ｆ］ＡＳＥＭと類似し、そして本明細書に記載のα７ｎＡＣｈＲの体内、体外の分布状況と一致する。さらに、α７ｎＡＣｈＲが豊富な領域の吸収量は、投薬してから５分のとき最高になり、皮質、線条体及び海馬の吸収量がそれぞれ７．２％ＩＤ／ｇ、６．０％ＩＤ／ｇ及び５．０％ＩＤ／ｇである［１８Ｆ］ＡＳＥＭと比べて優れている。試験において、組織／小脳の比が徐々に増加し、投薬してから９０分後、２．５（皮質）、２．９（線条体）及び３．６（海馬）に達する（表１３）。上記から分かるように、該放射性リガンドが比較的高い脳吸収性を有するとともに、より良い脳領域選択性も有する。
【０１０９】
【表１２】
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【０１１０】
【表１３】
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【０１１１】
実施例１９  ［１８Ｆ］ＩＩ−１５のマウス脳内の選択性試験
放射性リガンドのα４β２  ｎＡＣｈＲに対する選択性研究は、５分早期に１ｍｇ／ｋｇのｃｙｔｉｓｉｎｅ（シチシン）（０．１ｍＬであり、等体積の生理食塩水及び１，２−プロパンジオールを溶媒とする）を皮下注射して行われる。５−ヒドロキシトリプタミン受容体に対する選択性研究は、１０分早期に２ｍｇ／ｋｇのｏｎｄａｎｓｔｒｏｎ（オンダンセトロン）（０．１ｍＬであり、生理食塩水：ＤＭＳＯ＝５：１（Ｖ：Ｖ）を溶媒とする）を皮下注射して行われる。試験において、２群のマウス（ｎ＝５、昆明マウス、雌、２８〜３０ｇ）に対して尾静脈により０．１ｍＬ（６０μＣｉ）の［１８Ｆ］ＩＩ−１５を注射し、ネガティブコントロール群マウスに対して同じ方法で０．１ｍＬの対応する溶媒を注射する。投薬してから６０分後、マウス断頭により死亡させ、そして迅速に大脳を解剖して氷に置く。さらに、氷冷した生理食塩水で血痕を除去した後、解剖により皮質、線条体、海馬、上丘、下丘、視床、小脳及び残りの脳部を摘出して、各領域の質量及び放射能カウントを測定する。吸収状況は、％ＩＤ／ｇで表される。
【０１１２】
ｃｙｔｉｓｉｎｅは、α４β２  ｎＡＣｈＲの選択性作動薬であり、ｏｎｄａｎｓｔｒｏｎは、５−ヒドロキシトリプタミン受容体の選択性拮抗薬である。図７から分かるように、試験群及びネガティブコントロール群の放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５に対する吸収は明らかな差がない。上記から分かるように、［１８Ｆ］ＩＩ−１５は、α４β２  ｎＡＣｈＲ及び５−ヒドロキシトリプタミン受容体とほぼ結合せず、該放射性リガンドは、α７ｎＡＣｈＲに対してよい選択性を有する。
【０１１３】
実施例２０  ［１８Ｆ］ＩＩ−１５のラットＰＥＴ現像
【０１１４】
尾静脈により放射性リガンドである［１８Ｆ］ＩＩ−１５（０．３ｍＬ、２００μＣｉ）を雌のＣＤ−１ラット（１８０−２００ｇ）の体内に注射し、その後、３％のイソフルランを用いてラットを昏迷になるように麻酔する。そして、伏臥の姿勢でラットを小動物用ｍｉｃｒｏ−ＰＥＴ／ＣＴ装置（Ｓｕｐｅｒ  Ａｒｇｕｓ  ＰＥＴ  ４Ｒ  Ｌ／ＣＴ１８０）に固定する。スキャン、現像する際に、１％のイソフルランを用いてラットの麻酔状態を維持する。そして、投薬してから１５分、３０分及び６０分後に、撮像して、［１８Ｆ］ＩＩ−１５のラット脳内の分布状況を観察する。
【０１１５】
図８は、雌ＣＤ−１ラットに対して［１８Ｆ］ＩＩ−１５を注射してから１５分、３０分及び６０分後の脳部の冠状断面、矢状断面、体軸断面のｍｉｃｒｏ−ＰＥＴ現像画像である。図８から分かるように、ラット脳の［１８Ｆ］ＩＩ−１５に対する吸収が高く、脳内の分布状況は、動物の体内分布試験結果とほぼ一致する。つまり、１５分のときの吸収が最も高く、時間経過に従い、放射性リガンドの濃度が徐々に下降する。そして、脳内の滞在も適宜であり、投薬してから６０分後、依然として一定濃度を有する。上記の良好な現像結果によって、［１８Ｆ］ＩＩ−１５は、α７ｎＡＣｈＲ  ＰＥＴの現像剤としての使用に適する。
【０１１６】
以上は、本出願の好ましい実施例に過ぎず、本出願を限定するものではない。本出願の要旨を逸脱しない範囲内で行われた修正、均等置換え、改良などは、いずれも本出願の保護範囲内に属する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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