(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として以下の式２：
［式２］
【化１】
0006842073.tif 000007
によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、ヒスタミン作動性掻痒症又はクロロキンによる非ヒスタミン作動性掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物。
【請求項２】
前記掻痒症は、乾癬及び乾燥肌からなる群から選択される１つ以上の疾患によって誘導される掻痒症である、請求項１に記載の掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物。
【請求項３】
有効成分として以下の式２：
［式２］
【化２】
0006842073.tif 000008
によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、ヒスタミン作動性掻痒症又はクロロキンによる非ヒスタミン作動性掻痒症を予防又は軽減するための健康機能性食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分としてピラゾール誘導体を含有する、掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物、及びそれを検出するスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
掻痒症（又はかゆみ）は、各種皮膚疾患の症例において全身に出現する顕著な症状である。掻痒症は、虫、有毒植物又は他の有害な刺激から皮膚を防御するためにかゆみを引き起こす。しかしながら、掻痒症は、必ずしも上記のような有益な役割を果たすとは限らない。慢性のかゆみは、湿疹、腎臓疾患、肝硬変及び幾つかの癌を含む皮膚疾患に付随して起きる。多くの神経疾患もまた、重篤なかゆみを引き起こし、かかる神経疾患には例えば、多発性硬化症、糖尿病性ニューロパチー及び帯状疱疹後神経痛（帯状疱疹）等が挙げられる。掻痒症は、感覚神経細胞によって発症され、これらの細胞は、後根神経節において細胞体を有することが知られている。
【０００３】
様々なタイプの掻痒症は、ヒスタミンによって媒介されること（ヒスタミン作動性掻痒症）が知られている。抗マラリア剤であるクロロキンは、ヒスタミン非依存性掻痒症（非ヒスタミン作動性掻痒症）を引き起こすことが知られている。
【０００４】
Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体（Ｍｒｇｐｒ）は、末梢性感覚ニューロンにおいてのみ発現されるＧＰＣＲ（Ｇタンパク質共役受容体）としての非ヒスタミン作動性掻痒症受容体として知られている。これらの受容体は、成体の各種組織において、特にニューロンにおいて見出される（非特許文献１）。それらの中でも、Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１は、ヒト後根神経節に分布している。
【０００５】
ヒスタミン作動性掻痒症は、ヒトヒスタミン受容体１アンタゴニストによって防御されることが知られている（非特許文献２）。しかしながら、このアンタゴニストは、非ヒスタミン作動性掻痒症には効果がない。アレルギー性のかゆみは、ヒスタミンによって媒介され、掻痒症全体の３分の１を占めるに過ぎない。したがって、アレルギー性のかゆみは、抗ヒスタミン剤で治療することができるが、ほとんどのかゆみが、抗ヒスタミン剤では治療することができない。
【０００６】
掻痒症用の治療薬として、カラミンローション又は１％メントールローション、ステロイド及び抗ヒスタミン剤を含む、皮膚を冷却するための調製物が現在使用されている。しかしながら、皮膚を冷却するためのこれらの調製物は、一時的な効果を有するに過ぎない。他方で、ステロイドは、強力な抗炎症活性を示し、そのため、関節疾患、脳血管疾患、炎症性疾患及びアレルギー性疾患等の各種疾患の症状を軽減するのに優れているが、長期投与又は過量摂取による副作用のため、使用が制限されている。抗ヒスタミン剤は、主に経口投与用に製剤化される。概して、掻痒症に直接関与するＨ１受容体のみを阻害する薬物が開発されている。しかしながら、これらの薬物もまた、認知能力及び運動神経の全体的な低下のような副作用を引き起こすため、使用が制限されている。上記で説明するように、掻痒症に関する普遍的な治療方法は、いまだに存在しない。したがって、掻痒症のための安全で有効な薬物を開発する必要がある。
【０００７】
したがって、本発明者らは、ヒスタミン作動性掻痒症を治療するのに有効なだけでなく、非ヒスタミン作動性掻痒症においても有効な安全で有効な治療薬を開発するために研究してきた。研究の過程で、本発明者らは、ピラゾール誘導体化合物が、Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１及びｈＨ１Ｒ（ヒトヒスタミン受容体サブタイプ１）の活性を阻害するのに有効であることを確認し、本発明を完成させた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Dong et al. 2001
【非特許文献２】2009 Sensory neuron-specific GPCR Mrgprs are itch receptors mediating chloroquine-induced pruritus. Cell 139, 1353-1365 (2009)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、掻痒症を予防又は治療するための健康機能性食品組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の目的はまた、掻痒症を予防又は治療するための化合物のスクリーニング方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を達成するために、本発明は、掻痒症を予防又は治療するための、有効成分として以下の式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。
［式１］
【化１】
0006842073.tif 000002
（式１中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ａ、ｍ及びｎは、本明細書中で定義する通りである）。
【００１３】
本発明はまた、掻痒症を予防又は軽減するための、有効成分として以下の式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む健康機能性食品組成物を提供する。
［式１］
【化２】
0006842073.tif 000003
（式１中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ａ、ｍ及びｎは、本明細書中で定義する通りである）。
【００１４】
さらに、本発明は、下記の工程：
掻痒症誘導性物質で、ＭＲＧＰＲ  Ｘ１（Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体）を発現する細胞を処理して、該細胞を培養する工程（工程１）と、
候補物質で、掻痒症が誘導された細胞を処理して、ＭＲＧＰＲ  Ｘ１活性の阻害を測定する工程（工程２）と、
を含む、掻痒症を予防又は治療するための化合物のスクリーニング方法を提供する。
【００１５】
また、本発明は、下記の工程：
掻痒症誘導性物質で、ｈＨ１Ｒ（ヒトヒスタミン１受容体）を発現する細胞を処理して、該細胞を培養する工程（工程１）と、
候補物質で、掻痒症が誘導された細胞を処理して、ｈＨ１Ｒ活性の阻害を測定する工程（工程２）と、
を含む、掻痒症を予防又は治療するための活性物質のスクリーニング方法を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明による掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物は、細胞内Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１の活性を阻害することによって、掻痒症の症状を緩和することができるため、非ヒスタミン作動性掻痒症用の予防薬又は治療薬として有効に使用することができる。本発明による掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物は、細胞内ｈＨ１Ｒの活性を阻害することによって、掻痒症の症状を緩和することができるため、ヒスタミン作動性掻痒症用の予防薬又は治療薬として有効に使用することができる。さらに、乾燥肌マウスモデル実験から、上記組成物はまた、乾燥肌に対しても有意な軽減効果を有することが確認されており、それにより、乾燥肌を治療するための薬剤として使用可能である。さらに、本発明による医薬組成物は、乾癬によって引き起こされる掻痒症の症状を緩和することができ、それにより、乾癬を治療するための薬剤としても使用可能である。さらに、本発明による医薬組成物は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物投与中でさえ、有害反応を引き起こさずに、安定な活性を維持することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１細胞を、クロロキン単独で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【図２】Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１細胞を、クロロキンとともに実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【図３】ｈＨ１Ｒ細胞を、ヒスタミン単独で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【図４】ｈＨ１Ｒ細胞を、ヒスタミン及びジフェンヒドラミンで処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【図５】ｈＨ１Ｒ細胞を、ヒスタミンとともに実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【図６】ヒスタミンマウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【図７】クロロキンマウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【図８】乾燥肌マウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【図９】実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理したマウスを用いたロータロッド運動状態試験の結果を示すグラフである。
【図１０】乾癬性マウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１９】
本発明は、掻痒症を予防又は治療するための、有効成分として以下の式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。
［式１］
【化３】
0006842073.tif 000004
【００２０】
上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＲ４Ｒ５又は無置換若しくは置換Ｃ６〜Ｃ１２アリールであり、該置換Ｃ６〜Ｃ１２アリールは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＯ２及び−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、ここで、Ｒ４及びＲ５は独立して、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、水素、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６又はＮ、Ｏ及びＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する無置換若しくは置換３員〜１０員ヘテロシクロアルキル若しくはヘテロシクロアルケニルであり、ここで、Ｒ６は、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキルであってもよく、該置換ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニルは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル及び直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ａは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜８の整数であってもよい。
【００２１】
また、上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＲ４Ｒ５又は無置換若しくは置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールであり、該置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシ、−ＮＯ２及び−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、ここで、Ｒ４及びＲ５は独立して、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ３は、水素、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６又はＮ、Ｏ及びＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する無置換若しくは置換３員〜８員ヘテロシクロアルキル若しくはヘテロシクロアルケニルであり、ここで、Ｒ６は、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキルであってもよく、該置換ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニルは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル及び直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ａは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜６の整数であってもよい。
【００２２】
さらに、上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、−ＮＯ２、又は無置換若しくは置換フェニルであり、該置換フェニルは、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシ及び−ＮＯ２からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ｒ３は、水素、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６又はＮ、Ｏ及びＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する無置換若しくは置換５員〜７員ヘテロシクロアルキルであり、ここで、該置換ヘテロシクロアルキルは、１つ以上の直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されてもよく、
Ａは、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜５の整数であってもよい。
【００２３】
また、上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、メチル又は無置換若しくは置換フェニルであり、該置換フェニルは、メチル、メトキシ及び−ＮＯ２からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ｒ３は、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ又は１つ以上のメチル基で置換されるピペリジニルであり、
Ａは、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−又は−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜３の整数であってもよい。
【００２４】
上記掻痒症は、ヒスタミン作動性掻痒症、非ヒスタミン作動性掻痒症、クロロキンによって誘導される掻痒症、乾燥肌によって誘導される掻痒症又は乾癬性掻痒症（乾癬によって誘導される掻痒症）であり得る。掻痒症はまた、神経皮膚炎、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、毛虫皮膚炎、皮脂欠損症（皮脂欠乏症）、老人性掻痒肌、虫刺され、光過敏性皮膚炎、蕁麻疹、痒疹、疱疹、膿痂疹、湿疹、白癬、苔癬、疥癬又は尋常性座瘡によって誘導され得る。ここで、ヒスタミン作動性掻痒症の症例では、本発明の医薬組成物は、ｈＨ１Ｒ（ヒトヒスタミン１受容体）に対する可逆的／競合的拮抗作用によりヒスタミンの活性を阻止することによって、掻痒症を治療又は予防するのに有効であり得る。
【００２５】
本発明の医薬組成物はまた、ＭＲＧＰＲ  Ｘ１に対する可逆的／競合的拮抗作用によりクロロキンの活性を阻止することによって、クロロキンによって誘導される掻痒症を治療又は予防するのに有効であり得る。
【００２６】
式１の化合物の薬学的に許容可能な塩は、当業者に既知の従来法によって作製することができる。例えば、薬学的に許容可能な塩として、塩酸、臭素酸、硫酸、硫酸水素ナトリウム、リン酸、硝酸及び炭酸等の無機酸の塩；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、安息香酸、クエン酸、マレイン酸、マロン酸、酒石酸、グルコン酸、乳酸、ゲンチジン酸、フマル酸、ラクトビオン酸、サリチル酸及びアセチルサリチル酸（アスピリン）等の有機酸の塩；グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、セリン、システイン、シスチン、アスパラギン酸、グルタミン、リジン、アルギニン、チロシン及びプロリン等のアミノ酸の塩；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸及びトルエンスルホン酸等のスルホン酸の塩；ナトリウム及びカリウム等のアルカリ金属との反応によって生成される金属塩又はアンモニウムイオン塩が挙げられる。
【００２７】
酸付加塩を、当業者に知られている従来の方法によって調製することができる。例えば、式１によって表される誘導体をメタノール、エタノール、アセトン、塩化メチレン及びアセトニトリル等の有機溶媒に溶解し、これに有機酸又は無機酸を添加して沈殿を誘導する。次いで、沈殿物を濾過し、乾燥させて塩を得る。或いは、溶媒及び過剰な酸を減圧下で留出させた後、乾燥させ、有機溶媒中で結晶化させて塩を得る。
【００２８】
また、薬学的に許容可能な金属塩を、塩基を使用して調製することができる。アルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩は以下のプロセスによって得られる：過剰なアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物の溶液中に化合物を溶解し、不溶性化合物塩を濾過し、残留する溶液を蒸発させ、それを乾燥させる。この時、金属塩は、ナトリウム、カリウム又はカルシウムの塩の薬学的に好適な形態で調製されることが好ましい。また、対応する銀塩は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩と適切な銀塩（例えば、硝酸銀）との反応によって調製される。
【００２９】
さらに、式１によって表される化合物は、その化合物から作製され得る溶媒和物、光学異性体、水和物等、及びその薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができる。
【００３０】
本発明の医薬組成物は、従来法に従って、無毒性で薬学的に許容可能な担体、補助剤及び賦形剤を添加することによって製剤化され得る。例えば、本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル、トローチ、溶液及び懸濁液等の形態の経口又は非経口投与用に製剤化され得る。
【００３１】
式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、臨床投与中に各種経口及び非経口製剤で投与することができる。式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩が製剤化される場合、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤及び界面活性剤等の一般的に使用される希釈剤又は賦形剤が使用される。経口投与用の固体製剤は、錠剤、丸剤、粉末、顆粒及びカプセルである。これらの固体製剤は、１つ以上の化合物を、デンプン、炭酸カルシウム、スクロース又はラクトース、ゼラチン等の１つ以上の適切な賦形剤と混合することによって作製される。簡素な賦形剤を除いて、滑沢剤、例えば、硫酸マグネシウム、タルク等を使用することができる。経口投与用の液体製剤は、懸濁液、溶液、エマルジョン及びシロップであり、上述の製剤は、水及び流動パラフィン等の一般的に使用される簡素な希釈剤の他に、湿潤剤、甘味料、芳香物質（aromatics）及び防腐剤等の各種賦形剤を含有することができる。非経口投与用の製剤は、滅菌水溶液、水不溶性賦形剤、懸濁液及びエマルジョンである。水不溶性賦形剤及び懸濁液は、単数又は複数の活性化合物の他に、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、オレイン酸エチル等の注射可能なエステル等を含有するこができる。
【００３２】
有効成分として式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物は、非経口的に投与することができ、非経口投与として、皮下注射、静脈内注射、筋内注射、又は胸腔内注射が挙げられる。
【００３３】
非経口投与用の製剤として式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を作製するために、式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を、水中で安定剤又は緩衝剤と混合して、溶液又は懸濁液を作り、続いて、それをアンプル又はバイアルとして製剤化する。本明細書中の組成物は、滅菌することができ、さらに、防腐剤、安定剤、湿潤可能な粉末又は乳化剤、浸透圧の調節用の塩及び／又は緩衝液、並びに他の治療上有用な物質を含有し、上記組成物は、従来の混合、造粒又はコーティング方法によって製剤化することができる。
【００３４】
経口投与用の製剤は、錠剤、丸剤、硬質／軟質カプセル、溶液、懸濁液、エマルジョン、シロップ、顆粒、エリキシル剤、及びトローチ等によって例示される。これらの製剤は、有効成分の他に、希釈剤（例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、及び／又はグリシン）及び滑沢剤（例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸及びそのマグネシウム若しくはカルシウム塩、及び／又はポリエチレングリコール）を含むことができる。錠剤は、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン等の結合剤を含むことができ、必要に応じて、デンプン、アガロース、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩等の崩壊剤、又は共沸混合物及び／又は吸収剤、着色料、香味料、及び甘味料等を更に含むことができる。
【００３５】
さらに、本発明による医薬組成物に使用することができる賦形剤として、甘味料、結合剤、可溶化剤、溶解助剤、湿潤剤、乳化剤、等張剤、吸着剤、崩壊剤、酸化防止剤、防腐剤、滑沢剤、充填剤、香料等が挙げられる。例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシン、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステリン、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、寒天、水、エタノール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、オレンジエッセンス、ストロベリーエッセンス、バニラ香味料等を、賦形剤として使用することができる。
【００３６】
本発明の医薬組成物の有効投与量は、年齢、体重、性別、投与方法、健康状態、及び疾患の重症度に従って決定することができる。投与量は、体重７０ｋｇの成人患者基準で、一般的に０．０１ｍｇ／日〜５０００ｍｇ／日であり、医師又は薬剤師の判断に応じて、或る特定の時間間隔で１日１回又は数回投与することができる。
【００３７】
また、本発明は、掻痒症を予防又は軽減するための、有効成分として以下の式１によって表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む健康機能性食品組成物を提供する。
［式１］
【化４】
0006842073.tif 000005
【００３８】
上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＲ４Ｒ５又は無置換若しくは置換Ｃ６〜Ｃ１２アリールであり、該置換Ｃ６〜Ｃ１２アリールは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＯ２及び−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、ここで、Ｒ４及びＲ５は独立して、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、水素、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６又はＮ、Ｏ及びＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する無置換若しくは置換３員〜１０員ヘテロシクロアルキル若しくはヘテロシクロアルケニルであり、ここで、Ｒ６は、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキルであってもよく、該置換ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニルは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル及び直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ａは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜８の整数であってもよい。
【００３９】
また、上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＲ４Ｒ５又は無置換若しくは置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールであり、該置換Ｃ６〜Ｃ１０アリールは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシ、−ＮＯ２及び−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、ここで、Ｒ４及びＲ５は独立して、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ３は、水素、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６又はＮ、Ｏ及びＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する無置換若しくは置換３員〜８員ヘテロシクロアルキル若しくはヘテロシクロアルケニルであり、ここで、Ｒ６は、水素又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキルであってもよく、該置換ヘテロシクロアルキル又はヘテロシクロアルケニルは、ハロゲン、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル及び直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ａは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜６の整数であってもよい。
【００４０】
さらに、上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、−ＮＯ２、又は無置換若しくは置換フェニルであり、該置換フェニルは、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル、直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルコキシ及び−ＮＯ２からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ｒ３は、水素、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６又はＮ、Ｏ及びＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する無置換若しくは置換５員〜７員ヘテロシクロアルキルであり、ここで、該置換ヘテロシクロアルキルは、１つ以上の直鎖又は分岐鎖のＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されてもよく、
Ａは、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−又は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜５の整数であってもよい。
【００４１】
また、上記の式１中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、メチル又は無置換若しくは置換フェニルであり、該置換フェニルは、メチル、メトキシ及び−ＮＯ２からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよく、
Ｒ３は、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ又は１つ以上のメチル基で置換されるピペリジニルであり、
Ａは、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−又は−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
ｍ及びｎは独立して、０〜３の整数であってもよい。
【００４２】
本発明による健康機能性食品組成物は、掻痒症を予防又は軽減する目的で、上記式１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を、食品又は飲料に添加することによって作製することができる。
【００４３】
本明細書中の食品は限定されない。例えば、本発明の組成物は、飲み物、肉類、ソーセージ、パン、ビスケット、餅、チョコレート、キャンディー、スナック、ピザ、ラーメン（ramyuns）、その他麺類、ガム、アイスクリームを含む乳製品、スープ、飲料、アルコール飲料及び複合ビタミン剤等に添加することができ、広い意味では、ほぼ全ての健康機能性食品が含まれ得る。
【００４４】
本発明の式１によって表される化合物は、食品添加物として使用することができる。その場合、上記化合物は、そのままで、又は従来法に従って他の食品構成成分と混合して、添加することができる。有効成分の混合比は、使用の目的（予防又は軽減）に従って調節することができる。概して、本発明の式１によって表される化合物は、総食品重量の０．１重量部〜９０重量部で添加することができる。しかしながら、保健衛生に、又は健康状態を調節するのに、長期投与が必要とされる場合、含有量は、上記よりも低い可能性があるが、化合物は非常に安全であると証明されているため、より高い含有量も同様に許容され得る。
【００４５】
本発明の健康飲料用の組成物は、上記化合物の他に、他の飲料のように、各種香味料又は天然炭水化物等を更に含むことができる。上記天然炭水化物は、グルコース及びフルクトース等の単糖類；マルトース及びスクロース等の二糖類；デキストリン及びシクロデキストリン等の多糖類；並びにキシリトール、ソルビトール及びエリスリトール等の糖アルコールのうちの１つであり得る。さらに、天然甘味料（タウマチン、ステビア抽出物、例えば、レバウディオサイドＡ、グリチルリチン等）及び合成甘味料（サッカリン、アスパルテーム等）を、甘味料として含むことができる。天然炭水化物の含有量は、本発明の組成物１００ｇ中に、好ましくは１ｇ〜２０ｇ、より好ましくは５ｇ〜１２ｇである。
【００４６】
上述の成分の他に、本発明の式１によって表される化合物は、様々な栄養分、ビタミン、ミネラル（電解質）、天然香味料及び合成香味料を含む香味料、着色剤及び増量剤（チーズ、チョコレート等）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド増粘剤（viscosifiers）、ｐＨ調節剤、安定剤、消毒剤、グリセリン、アルコール、ソーダに添加するのに使用されるカーボネーター（carbonators：炭酸化剤）等を含むことができる。本発明の式１によって表されるピラゾール誘導体はまた、野菜飲料に添加可能な天然果汁、果実飲料及び果肉（fruit flesh）を含むことができる。上述の成分は全て、単独で又は一緒に添加することができる。それらの成分の混合比は、実際に問題ではないが、一般に、それぞれ、本発明の式１によって表されるピラゾール誘導体１００重量部当たり、０．１重量部〜２０重量部で添加することができる。
【００４７】
さらに、本発明は、下記の工程：
掻痒症誘導性物質で、ＭＲＧＰＲ  Ｘ１（Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体）を発現する細胞を処理して、該細胞を培養する工程（工程１）と、
候補物質で、掻痒症が誘導された細胞を処理して、ＭＲＧＰＲ  Ｘ１活性の阻害を測定する工程（工程２）と、
を含む、掻痒症を予防又は治療するための化合物のスクリーニング方法を提供する。
【００４８】
ここで、工程１の掻痒症誘導性物質は、クロロキンであってもよく、ヒスタミンによって媒介されない任意のヒスタミン非依存性掻痒症誘導性物質は、限定されずに使用することができる。他方で、掻痒症誘導性物質は、急性掻痒症誘導性物質であり得る。
【００４９】
また、本発明は、下記の工程：
掻痒症誘導性物質で、ｈＨ１Ｒ（ヒトヒスタミン１受容体）を発現する細胞を処理して、該細胞を培養する工程（工程１）と、
候補物質で、掻痒症が誘導された細胞を処理して、ｈＨ１Ｒ活性の阻害を測定する工程（工程２）と、
を含む、掻痒症を予防又は治療するための活性物質のスクリーニング方法を提供する。
【００５０】
ここで、工程１の掻痒症誘導性物質は、ヒスタミン、インターロイキン−１、サイトカイン、セロトニン、アセチルコリン、サブスタンスＰ、ロイコトリエン及びプロスタグランジンからなる群から選択される１つ以上の物質であってもよく、任意のヒスタミン依存性掻痒症誘導性物質は、限定されずに使用することができる。
【００５１】
本発明によるスクリーニング方法において、工程２の測定は、蛍光アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ、生物発光共鳴エネルギー移動アッセイ、蛍光偏光アッセイ、ウェスタンブロッティング、免疫沈降アッセイ、二重ルシフェラーゼレポーターアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及び免疫組織化学からなる群から選択される１つ以上の方法によって実施することができ、当該技術分野で一般的に使用される任意の測定方法は、限定されずに使用することができる。
【００５２】
本発明の実際的な現時点で好ましい実施形態は、以下の実施例に示されるように例示的なものである。
【００５３】
しかしながら、当業者が本開示を検討することで、本発明の趣旨及び範囲内の変更及び改善を行い得ることが理解される。
【実施例】
【００５４】
＜実施例１＞掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物
掻痒症を予防又は治療するための、式２によって表されるピラゾール誘導体を含む医薬組成物を、実験実施例１で作製した。ここで、式２によって表されるピラゾール誘導体は、Com Genex（ＣＡＳ番号．２２３１３０３−８３−４）から購入した。
［式２］
【化５】
0006842073.tif 000006
【００５５】
＜実験実施例１＞掻痒症を予防又は治療するための活性物質のスクリーニング
掻痒症の予防又は治療に適した化合物を見つけるために、本発明のスクリーニング方法を使用して、下記の実験を実施した。
【００５６】
１．ＭＲＧＰＲ  Ｘ１安定な細胞系の作製
ヒトＭＲＧＰＲＸ１遺伝子を、ｐｃＤＮＡ５  ＦＲＴベクターにサブクローニングして、それをＨＥＫ  ２９３Ｔ  ＦＲＴ細胞にトランスフェクトした。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で４８時間培養した。
【００５７】
単一コロニーが十分に形成された量を確認するために、トランスフェクトした細胞を段階希釈して、続いて、１００ｍｍディシュ上に均等に移して、分配した。培地を、３日〜４日毎に、５０μｇ／ｍｌのハイグロマイシンを含有する新鮮な培地と交換した。コロニーが形成されるまで、細胞を培養した。
【００５８】
コロニーが形成されたら、単一コロニーのみを、２４ウェルプレートに移した後、培養した。続いて、十分に増殖した細胞を、６ウェルプレートに移した後、培養した。抗生物質選択を実施した。ゼオシン培地中では生存することが不可能であるが、ハイグロマイシン培地では十分に増殖した細胞を選択するために、細胞を６ウェルプレートに播種した。５０μｇ／ｍｌのゼオシンを含有する培地を、一方のプレートに添加して、５０μｇ／ｍｌのハイグロマイシンを含有する培地を、他方のプレートに添加した。ゼオシン培地では死滅したが、ハイグロマイシン培地では良好に増殖した細胞を選択し、それを用いて、ＰＣＲ及びβ−ガラクトシダーゼアッセイを行い、トランスフェクションの成功を確認した。
【００５９】
２．ＭＲＧＰＲ  Ｘ１スクリーニングアッセイ
上記で作製したＭｒｇｐｒ  Ｘ１安定細胞系を使用して、掻痒症において有効な物質を見つけるために、下記の実験を実施した。
【００６０】
まず、８０００個の細胞／ウェルとなるように、ＭＲＧＰＲ  Ｘ１安定細胞を計数した後、ポリ−Ｄ−リジンでコーティングしたプレート３８４ウェル黒色／透明プレートに播種した。続いて、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で一晩培養した。
【００６１】
Ｂｉｏｍｅｘ  ＦＸ（Beckman）を使用して、続く手順を行った。培地を除いた後、２．５μＭの濃度でＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液（５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＯＨ−ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２）中に溶解したｆｌｏ−３  ＡＭ色素をプレートに添加した（２５μｌ／ウェル）後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で３０分間培養した。
【００６２】
培養中、化合物プレートを準備した。特に、６ｍＭの元のストックプレート（９６プレート型）を十分に予め混合した後、中間プレートを準備した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを使用して、溶解した１ｍＭクロロキンを中に含有するＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液を、３８４透明Ｖ底プレートに分配した（４９μｌ／ウェル）。次に、元のストックプレート（６ｍＭ、１００％ＤＭＳＯ）から１μｌを採取して、それを中間プレートで希釈して（１２０μＭの化合物、１ｍＭクロロキン、２％ＤＭＳＯ）、最終的な化合物プレートを準備した。
【００６３】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを使用して、溶解した１ｍＭクロロキンを中に含有するＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液を、３８４透明プレートに分配して（４０μｌ／ウェル）、中間プレートから１０μｌを採取して、それを最終的な化合物プレートで希釈した（２４μＭの化合物、１ｍＭクロロキン、０．４％ＤＭＳＯ）。
【００６４】
インキュベーションが完了したら、色素を廃棄して、洗浄用にＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液をそこに添加して（２５μｌ／ウェル）、続いて、緩衝液を再びそこに添加した（２５μｌ／ウェル）。一次候補物質２５μｌを、緩衝液２５μｌを含有するアッセイプレートの各ウェルに添加した後、プレートを読み取った（最終的な１２μＭの化合物、５００μＭクロロキン、０．２％ＤＭＳＯ）。０．２％ＤＭＳＯ中に５００μＭクロロキンを溶解することによって、ビヒクルを処理した。
【００６５】
マイクロプレートリーダー（ＦｌｅｘｓｔａｉｏｎＩＩ３８４、Molecular Devices）を使用して、実験結果を分析した。蛍光アッセイは、３．２秒間隔で８０秒間実施した（Ｅｘ  ４８８ｎｍ、Ｅｍ  ５３５ｎｍ）。結果として、良好な試験結果を有する化合物を選別して、それに基づいて、掻痒症の治療用の９１０個の二次候補物質を選択した。
【００６６】
３．ヒトヒスタミン１受容体アンタゴニストアッセイ
上記ＭＲＧＰＲ  Ｘ１実験で選択された９１０個の二次候補物質を用いて、ヒトヒスタミン１受容体アンタゴニストアッセイを実施した。
【００６７】
ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞を、ヒトヒスタミン１受容体２μｇで一過的にトランスフェクトした後、４０００個の細胞／ウェルの密度で播種した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で４８時間培養した。
【００６８】
Ｂｉｏｍｅｘ  ＦＸを使用して、次の手順を実施した。培地を除いた後、２．５μＭの濃度でＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液（５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＯＨ−ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２）中に溶解したｆｌｏ−３  ＡＭ色素を、ビヒクル及び実験群のプレートに添加して（２５μｌ／ウェル）、２．５μＭの濃度で溶解した５μＭジフェンヒドラミンを中に含有するＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液中に溶解したｆｌｏ−３  ＡＭ色素を、対照群のプレートに添加した（２５μｌ／ウェル）後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で３０分間培養した。
【００６９】
培養中、化合物プレートを準備した。特に、６ｍＭの元のストックプレート（９６プレート型）を十分に予め混合した後、中間プレートを準備した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを使用して、溶解した２μＭヒスタミンを中に含有するＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液を、３８４透明Ｖ底プレートに分配した（４９μｌ／ウェル）。次に、元のストックプレート（６ｍＭ、１００％ＤＭＳＯ）から１μｌを採取して、それを中間プレートで希釈して（１２０μＭの化合物、２μＭヒスタミン、２％ＤＭＳＯ）、最終的な化合物プレートを準備した。
【００７０】
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを使用して、溶解した２μＭヒスタミンを中に含有するＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液を、３８４透明プレートに分配して（４０μｌ／ウェル）、中間プレートから１０μｌを採取して、それを最終的な化合物プレートで希釈した（２４μＭの化合物、２μＭヒスタミン、０．４％ＤＭＳＯ、対照群のウェルを除く）。
【００７１】
インキュベーションが完了したら、色素を廃棄して、洗浄用にＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液をそこに添加して（２５μｌ／ウェル）、続いて、緩衝液を再びそこに添加した（２５μｌ／ウェル）（対照群のウェルを除く）。溶解した５μＭジフェンヒドラミン及び２μＭヒスタミンを中に含有するＮａ−ＨＥＰＥＳ緩衝液を、対照群ウェルに添加した（２５μｌ／ウェル）。最終的に、化合物２５μｌを、緩衝液２５μｌを含有するアッセイプレートの各ウェルに添加した後、プレートを読み取った（最終的な１２μＭの化合物、１μＭヒスタミン、０．２％ＤＭＳＯ）。
【００７２】
マイクロプレートリーダー（ＦｌｅｘｓｔａｉｏｎＩＩ３８４、Molecular Devices）を使用して、実験結果を分析した。蛍光アッセイは、３．２秒間隔で８０秒間実施した（Ｅｘ  ４８８ｎｍ、Ｅｍ  ５３５ｎｍ）。結果として、優れた効果を有する２５個の化合物を、上記で選択した９１０個の化合物から選択した。それらの構造において類似性を示す数種のスキャフォールドを同定した。それらの中でも、代表的な構造を有する４種の化合物を導き出した。最終的に、掻痒症を治療するのに優れていると確認され、同時に血中で優れた溶解度を有する化合物＃３を、掻痒症用の最終的な治療物質として選択した。化合物＃３は、実施例１の式２によって表される化合物である。
【００７３】
４．実験結果の分析
掻痒症用の最終的な治療物質である化合物＃３によるＭｒｇｐｒ  Ｘ１発現細胞及びｈＨ１Ｒ発現細胞の活性を評価するために、上記実験から収集したデータを比較及び分析した。
【００７４】
図１は、Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１細胞を、クロロキン単独で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフであり、
図２は、Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１細胞を、クロロキンとともに実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【００７５】
図１及び図２に示すように、蛍光分析結果は、本発明の医薬組成物をクロロキンと同時処理すると、クロロキンを単独で処理した場合に比べて、およそ５４％低下した。
【００７６】
したがって、本発明による掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物は、細胞内Ｍｒｇｐｒ  Ｘ１の活性を阻害することによって、掻痒症の症状を緩和することができるため、非ヒスタミン作動性掻痒症用の予防薬又は治療薬として有効に使用することができる。
【００７７】
図３は、ｈＨ１Ｒ細胞を、ヒスタミン単独で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフであり、
図４は、ｈＨ１Ｒ細胞を、ヒスタミン及びジフェンヒドラミンで処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフであり、
図５は、ｈＨ１Ｒ細胞を、ヒスタミンとともに実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した後に実施した蛍光分析の結果を示すグラフである。
【００７８】
図３〜図５に示すように、本発明の医薬組成物は、ヒスタミン及びジフェンヒドラミン（Ｈ１受容体アンタゴニスト）を一緒に処理した場合の阻害効果を１００％とすると、およそ９４％低減することが可能であった。
【００７９】
したがって、本発明による掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物は、細胞内ｈＨ１Ｒの活性を阻害することによって、掻痒症の症状を緩和することができるため、ヒスタミン作動性掻痒症用の予防薬又は治療薬として有効に使用することができる。
【００８０】
＜実験実施例２＞本発明の掻痒症用の治療薬の動物モデル実験
本発明の掻痒症を治療するための医薬組成物のｉｎ  ｖｉｖｏでの治療効果を確認するために、ヒスタミンマウスモデルにおける掻痒症評価、クロロキンマウスモデルにおける掻痒症評価、乾燥肌マウスモデルにおける掻痒症評価、乾癬マウスモデルにおける掻痒症評価及びマウス運動能力試験を実施した。
【００８１】
１．ヒスタミンマウスモデルにおける掻痒症評価
ヒスタミンマウスモデルにおける実施例１の医薬組成物の掻痒症治療効果を評価するために、下記の通りに実験を行った。
【００８２】
７週齢のＣ５７ＢＬ６マウスを、新たなケージに入れ、３０分間順応させた後、実験を開始した。対照群に関しては、３％ＤＭＳＯを生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解し、それを腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。動物モデルマウスに、３％ＤＭＳＯを含有する生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した実施例１の医薬組成物（３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。このマウスもまた、上記の同じケージに３０分間入れた。
【００８３】
次に、対照及び動物モデルマウスに、ヒスタミン５００μｇ／５０μｌを背面に皮下注射し、その行動をデジタルビデオカメラで３０分間記録した。コンピューター上で、記録したビデオファイルを再生しながら、引っ掻き（scratches）の回数を記録した。マウスが後足を床から離したときから、マウスが後足を床に戻したときまでの皮膚を引っ掻く連続的な動作を、１回の引っ掻きとみなし、３０分間計数した引っ掻きの回数を、掻痒症を評価するための指標として使用した。
【００８４】
図６は、ヒスタミンマウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【００８５】
図６に示すように、対照群における３０分間蓄積された総引っ掻きの平均回数は、１１８．３８回であり、本発明の医薬組成物を投与した実験群における引っ掻きの平均回数は、３９．９０回であった。
【００８６】
したがって、本発明によるピラゾール誘導体を含む医薬組成物は、ヒスタミン作動性掻痒症を低減する効果を示したため、掻痒症を治療又は予防するための医薬組成物として有効に使用することができる。
【００８７】
２．クロロキンマウスモデルにおける掻痒症評価
クロロキンマウスモデルにおける実施例１の医薬組成物の掻痒症治療効果を評価するために、下記の通りに実験を行った。
【００８８】
７週齢のＣ５７ＢＬ６マウスを、新たなケージに入れ、３０分間順応させた後、実験を開始した。対照群に関しては、３％ＤＭＳＯを生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解し、それを腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。動物モデルマウスに、３％ＤＭＳＯを含有する生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した実施例１の医薬組成物（３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。このマウスもまた、上記の同じケージに３０分間入れた。
【００８９】
次に、対照及び動物モデルマウスに、クロロキン２００μｇ／５０μｌを背面に皮下注射し、その行動をデジタルビデオカメラで３０分間記録した。コンピューター上で、記録したビデオファイルを再生しながら、引っ掻きの回数を記録した。マウスが後足を床から離したときから、マウスが後足を床に戻したときまでの皮膚を引っ掻く連続的な動作を、１回の引っ掻きとみなし、３０分間計数した引っ掻きの回数を、掻痒症を評価するための指標として使用した。
【００９０】
図７は、クロロキンマウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【００９１】
図７に示すように、対照群における３０分間蓄積された総引っ掻きの平均回数は、４２５．００回であり、本発明の医薬組成物を投与した実験群における引っ掻きの平均回数は、１５０．５０回であった。
【００９２】
したがって、上記結果から、本発明によるピラゾール誘導体化合物を含む医薬組成物は、ヒスタミン作動性掻痒症を軽減するだけでなく、非ヒスタミン作動性掻痒症も軽減するのに非常に有効であることが確認され、本発明の組成物は、非ヒスタミン作動性掻痒症の治療に有効に使用することができることを示唆した。
【００９３】
３．乾燥肌マウスモデルにおける掻痒症評価
乾燥肌マウスモデルにおける実施例１の医薬組成物の掻痒症治療効果を評価するために、下記の通りに実験を行った。
【００９４】
まず、乾燥肌マウスモデルを構築した。乾燥肌マウスモデルは、Jpn J Pharmacol. 2002 Mar;88(3):285-92に記載される指示に従って作製した。ＥＮＴＯＢＡＲ（商標）を、生理食塩水（０．９％食塩水）と１：１の比で混合し、それを７週齢のＣ５７ＢＬ６マウスに腹腔内注射して（２０μｌ／マウス）、マウスを麻酔した。次に、クリッパーを使用して、右頂部（nape：首筋）の毛を剪毛した。エチルエーテル及びアセトンを１：１の比で混合した。混合物を脱脂綿に浸して、右頂部を脱脂綿で１分間擦った。続いて、水に浸した脱脂綿を使用して、同様に擦った。このプロセスを、朝に１回、及び午後に１回、５日間行った。
【００９５】
次に、乾燥肌マウスモデルにおける掻痒症評価を実施した。５日目の午後に、対照群マウスに、生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した３％ＤＭＳＯを腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。動物モデルマウスに、３％ＤＭＳＯを含有する生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した実施例１の医薬組成物（３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。このマウスもまた、同じケージに３０分間入れた。３０分後、その行動をデジタルカメラで３０分間記録した。コンピューター上で、記録したビデオファイルを再生しながら、引っ掻きの回数を記録した。マウスが後足を床から離したときから、マウスが後足を床に戻したときまでの皮膚を引っ掻く連続的な動作を、１回の引っ掻きとみなし、３０分間計数した引っ掻きの回数を、掻痒症を評価するための指標として使用した。
【００９６】
図８は、乾燥肌マウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【００９７】
図８に示すように、対照群における３０分間蓄積された総引っ掻きの平均回数は、１３０．００回であり、本発明の医薬組成物を投与した実験群における総引っ掻きの平均回数は、１４．００回であった。
【００９８】
したがって、上記の結果から、本発明によるピラゾール誘導体化合物を含む医薬組成物は、乾燥肌によって誘導される掻痒症を軽減するのに非常に有効であることが確認され、本発明の組成物は、乾燥肌によって誘導される掻痒症又は乾燥肌の治療に有効に使用することができることを示唆した。
【００９９】
４．ロータロッド運動状態の評価
本発明による医薬組成物のｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を評価するために、マウスモデルを用いて、ロータロッド運動状態試験を実施した。
【０１００】
試験マウスをロータロッドデバイス上に置き、続いて、マウスが落ちるまで、速度を４から４０まで上昇させた。マウスが落ちたら、ケージに移動させた。この手順を１日３回、３日間連続で繰り返して、マウスをロータロッドデバイスに順応させた。順応の３日後に、マウスをケージに移動させ、そこで安定状態にした。
【０１０１】
対照群に関しては、３％ＤＭＳＯを生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解して、それを腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。動物モデルマウスに、３％ＤＭＳＯを含有する生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した実施例１の医薬組成物（３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。このマウスもまた、上記の同じケージに３０分間入れた。上記順応試験と同様に、上記実験を３回繰り返し、落下の平均時間を算出した。
【０１０２】
図９は、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理したマウスを用いたロータロッド運動状態試験の結果を示すグラフである。
【０１０３】
図９に示すように、対照群と、本発明の医薬組成物を投与した実験群との間の運動状態能力を比較すると、群間で有意な差は見られなかった。
【０１０４】
したがって、本発明によるピラゾール誘導体を含有する医薬組成物は、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与した場合に如何なる有害反応も引き起こさず、安定な活動を維持することが確認され、その結果、この組成物は、掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物として有効に使用することができる。
【０１０５】
５．乾癬性マウスモデルにおける掻痒症評価
乾癬性マウスモデルにおける実施例１の医薬組成物の掻痒症治療効果を評価するために、下記の通りに実験を行った。
【０１０６】
まず、乾癬性マウスモデルを構築した。乾癬性マウスモデルは、Pain. 2016 Nov; 2536-2543に記載される指示に従って作製した。ゾレチル（Zoletil）（１５ｍｇ／ｋｇ）を、食塩水と１：１の比で混合し、続いて、ロンプン（Rompun）（５ｍｇ／ｋｇ）と混合して、それを７週齢のＣ５７ＢＬ６マウスに腹腔内注射して、マウスを麻酔した。クリッパーを使用して、マウスの背中を２．５×２ｃｍのサイズで一次脱毛し、続いて、ストレートブレードを使用して、二次脱毛した。正常群の脱毛領域に、綿棒を使用してワセリンクリームを７日間擦り込んだ。対照群及び実験群の脱毛領域に、綿棒を使用してアルダラ（Aldara）クリーム（６２．５ｍｇ、５％イミキドモ）を７日間擦り込んだ。
【０１０７】
次に、乾癬性マウスモデルにおける掻痒症評価を実施した。８日目に、正常群及び対照群マウスに、生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した３％ＤＭＳＯを腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。実験群マウスに、３％ＤＭＳＯを含有する生理食塩水（０．９％食塩水）中に溶解した実施例１の医薬組成物（３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した（５０μｌ／マウス）。このマウスもまた、同じケージに３０分間入れた。３０分後、その行動をデジタルカメラで３０分間記録した。コンピューター上で、記録したビデオファイルを再生しながら、引っ掻きの回数を記録した。マウスが後足を床から離したときから、マウスが後足を床に戻したときまでの皮膚を引っ掻く連続的な動作を、１回の引っ掻きとみなし、３０分間計数した引っ掻きの回数を、掻痒症を評価するための指標として使用した。
【０１０８】
図１０は、乾癬性マウスモデルを、実施例１のピラゾール誘導体を含む医薬組成物で処理した場合の掻痒症治療効果の評価を示すグラフである。
【０１０９】
図１０に示すように、正常群における蓄積された総引っ掻きの平均回数は、２０．００回であり、対照群（アルダラクリーム処理群）における総引っ掻きの平均回数は、７１．００回であった。本発明によるピラゾール誘導体を含有する医薬組成物を投与した群では、総引っ掻きの平均回数は、１．００であり、引っ掻き回数が著しく低減することを示した。
【０１１０】
したがって、上記の結果から、本発明によるピラゾール誘導体を含む医薬組成物は、乾癬によって誘導される掻痒症を軽減するのに非常に有効であることが確認され、本発明の組成物は、乾癬によって誘導される掻痒症又は乾癬の治療に有効に使用することができることを示唆した。
【０１１１】
＜製造実施例１＞粉末の作製
式１によって表される化合物                                                ２ｇ
ラクトース                                                                １ｇ
【０１１２】
粉末を作製する従来法に従って、上記構成成分を全て混合することによって、粉末を作製し、気密パックに充填した。
【０１１３】
＜製造実施例２＞錠剤の作製
式１によって表される化合物                                          １００ｍｇ
コーンスターチ                                                      １００ｍｇ
ラクトース                                                          １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                                                ２ｍｇ
【０１１４】
錠剤を作製する従来法に従って、上記構成成分を全て混合することによって、錠剤を作製した。
【０１１５】
＜製造実施例３＞カプセルの作製
式１によって表される化合物                                          １００ｍｇ
コーンスターチ                                                      １００ｍｇ
ラクトース                                                          １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                                                ２ｍｇ
【０１１６】
カプセルを作製する従来法によって、上記構成成分を全て混合し、ゼラチンカプセル中に充填することによって、カプセルを作製した。
【０１１７】
＜製造実施例４＞注射可能溶液の作製
式１によって表される化合物                                          １００ｍｇ
マンニトール                                                        １８０ｍｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ                                              ２６ｍｇ
蒸留水                                                            ２９７４ｍｇ
【０１１８】
注射可能な溶液を作製する従来法に従って、表示した量で上記構成成分を全て含有することによって、注射可能溶液を作製した。
【０１１９】
＜製造実施例５＞軟膏の作製
式１によって表される化合物                                                ５ｇ
パルミチン酸セチル                                                      ２０ｇ
セタノール                                                              ４０ｇ
ステアリルアルコール                                                    ４０ｇ
ミリスチン酸イソプロピル                                                ８０ｇ
ポリソルベート                                                          ６０ｇ
ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル                                            １ｇ
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル                                              １ｇ
リン酸及び精製水                                                          適量
【０１２０】
軟膏を作製する従来法に従って、表示した量で上記構成成分を全て含有することによって、軟膏を作製した。
【０１２１】
＜製造実施例６＞健康機能性食品の作製
式１によって表される化合物                                          ５００ｎｇ
ビタミンコンプレックス                                                    適量
ビタミンＡ酢酸エステル                                                ７０ｍｇ
ビタミンＥ                                                          １．０ｍｇ
ビタミン                                                          ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２                                                      ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６                                                        ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２                                                      ０．２ｍｇ
ビタミンＣ                                                            １０ｍｇ
ビオチン                                                              １０ｍｇ
ニコチンアミド                                                      １．７ｍｇ
葉酸                                                                  ５０ｍｇ
パントテン酸カルシウム                                              ０．５ｍｇ
ミネラル                                                                  適量
硫酸鉄（ＩＩ）                                                    １．７５ｍｇ
酸化亜鉛                                                          ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム                                                  ２５．３ｍｇ
リン酸カリウム                                                        １５ｍｇ
リン酸一水素カルシウム                                                ５５ｍｇ
クエン酸カリウム                                                      ９０ｍｇ
炭酸カルシウム                                                      １００ｍｇ
塩化マグネシウム                                                  ２４．８ｍｇ
【０１２２】
健康機能性食品に適したビタミン及びミネラルを、好ましい混合比に従って混合したが、組成比は、任意に調節することができる。健康機能性食品を作製する従来法に従って、上記構成成分を混合した後、顆粒を作製し、顆粒を、従来法に従って、健康機能性食品の作製に使用した。
【０１２３】
＜製造実施例７＞健康飲料の作製
式１によって表される化合物                                          ５００ｎｇ
クエン酸                                                          １０００ｍｇ
オリゴ糖                                                              １００ｇ
マエシル（ウメ）抽出物                                                    ２ｇ
タウリン                                                                  １ｇ
精製水                                                          最大９００ｍｌ
【０１２４】
健康飲料を作製する従来法に従って、上記成分を混合した。混合物を、攪拌しながら８５℃で１時間加熱した後、濾過した。濾液を２リットル容の滅菌溶液に入れて、密封して、再度滅菌し、健康飲料用の組成物の作製に使用するまで、冷蔵庫で保管した。
【０１２５】
人気の飲料に適した成分を、好ましい混合比に従って混合したが、組成比は、需要の種類（demand class）、需要国、及び使用目的等の地域的な嗜好及び民族的な嗜好に従って調節することができる。
【産業上の利用可能性】
【０１２６】
本発明による掻痒症を予防又は治療するための医薬組成物は、非ヒスタミン作動性掻痒症用の予防薬又は治療薬、ヒスタミン作動性掻痒症用の予防薬又は治療薬、乾燥肌用の治療薬及び乾癬用の治療薬として有効に使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
0006842073.tif 000016
【図９】
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【図１０】
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