(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
0006912667.tif 000058
（Ｉ）
（式中、Ｒは３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニル、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル、３−（トリフルオロメトキシ）フェニルからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒが３−（トリフルオロメトキシ）フェニルである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
ＢＲａｆの活性を阻害する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
５未満の光刺激因子（ＰＩＦ）を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
０．１５未満の平均光効果（ＭＰＥ）を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
式（Ｉ）の化合物：
0006912667.tif 000059
（Ｉ）
（式中、Ｒは３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニル、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル、３−（トリフルオロメトキシ）フェニルからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と；
薬学的に許容される担体または賦形剤と
を含む医薬組成物であって、
十分な量の組成物は、Ｒがｐ−クロロフェニルである式（Ｉ）の化合物を含む組成物のマイトジェン活性化プロテインキナーゼの活性と比較して、マイトジェン活性化プロテインキナーゼの活性を少なくとも２倍増加させる、医薬組成物。
【請求項７】
Ｒが３−（トリフルオロメトキシ）フェニルである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
全身投与用に製剤化される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
局所投与用に製剤化される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤または散剤の形態で経口投与される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ゲル、ヒドロゲル、軟膏、クリーム、フォーム、スプレー、ローション、液剤または皮膚パッチの形態である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記化合物が組成物の総重量の１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの濃度で存在する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記化合物が前記組成物の総重量の５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗの濃度で存在する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療および／または改善するための治療薬を製造するための、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物を含む請求項６に記載の医薬組成物の使用であって、
十分な量の前記医薬組成物は、Ｒがｐ−クロロフェニルである式（Ｉ）の化合物を含む組成物のマイトジェン活性化プロテインキナーゼの活性と比較して、マイトジェン活性化プロテインキナーゼの活性を少なくとも２倍増加させ、
前記皮膚有害反応は、ざ瘡様発疹、丘疹膿疱性発疹、異常な頭皮毛の成長、異常な顔の毛の成長、異常な毛の成長、異常なまつげの成長、化膿性肉芽腫および毛細血管拡張症を伴うまたは伴わない爪囲炎、ならびにこれらの組み合わせから選択される、
使用。
【請求項１５】
Ｒが３−（トリフルオロメトキシ）フェニルである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記皮膚有害反応がざ瘡様発疹である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
前記対象が、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物の投与前に、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせで治療される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＥＧＦＲ阻害剤が、Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）（ゲフィチニブ）、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）、Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）（ラパチニブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）、Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）（バンデタニブ）、Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（登録商標）（ネシツムマブ）、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（登録商標）（オシメルチニブ）およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１９】
前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＧＤＣ−０９８０（アピトリシブ）、ＧＤＣ−０９４１（ピクチリシブ）、ＢＡＹ  ８０−６９４６（コパンリシブ）、ＢＫＭ１２０（ブパルリシブ）、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５（ダクトリシブ）、ＩＰＩ  １４５（デュベリシブ）、イデラリシブ（ＧＳ−１１０１またはＣＡＬ−１０１）、ワートマニンおよびＬＹ２９４００２、ならびにこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項２０】
前記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、コビメチニブ（ＸＬ５１８）、ビニメチニブ（ＭＥＫ１６２）、セルメチニブ、ＰＤ−３２５９０１、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３５９０１、ＵＯ１２６、ＴＡＫ−７３３およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項２１】
前記医薬組成物が局所投与される、請求項１４に記載の使用。
【請求項２２】
前記局所投与される組成物が、ゲル、ヒドロゲル、軟膏、クリーム、スプレー、皮膚パッチ、フォーム、ローションまたは液剤の形態である、請求項１４に記載の使用。
【請求項２３】
前記医薬組成物が全身投与され、前記全身投与が経腸投与および非経口投与から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項２４】
前記皮膚有害反応の重症度を減少させる、または前記皮膚有害反応の増大を予防する、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年７月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／５３８６７５号に基づく優先権を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼＢ−Ｒａｆ（以下「Ｂ−Ｒａｆ」または「ＢＲａｆ」）の阻害剤、ならびにその組成物および使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の異常な活性化は、種々の疾患、特に肺がん、結腸直腸がん、頭頸部がんおよび膵臓がんなどのいくつかの種類のがんに関与している。モノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ）および小分子チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ）などのＥＧＦＲアンタゴニストが、多くのＥＧＦＲ媒介がんを治療するために使用されている。これらのＥＧＦＲアンタゴニストはがんの治療に有用であるが、重篤な副作用も伴う。ＥＧＦＲアンタゴニストのこのような有害効果の１つは皮膚反応である。ＥＧＦＲ阻害剤に対する皮膚有害反応には、ざ瘡様（丘疹膿疱性）発疹、異常な頭皮、顔の毛および／またはまつげの成長、化膿性肉芽腫および毛細血管拡張症を伴うまたは伴わない爪囲炎が含まれる。
【０００４】
ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ  ３−キナーゼ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）、ならびにＭＥＫおよびＭＫＫなどのＭＡＰＫの上流のキナーゼなどの種々のキナーゼは、ＥＧＦＲおよび他の多くの受容体チロシンキナーゼの下流エフェクターとして作用し、細胞の成長、増殖、分化、運動性、生存および細胞内輸送などの細胞機能に関与している。これらの経路を標的とする治療薬も、黒色腫、肺がん、結腸直腸がん、脳がん、多発性骨髄腫、膵臓がんおよび神経線維腫症などのいくつかの増殖性疾患の治療に使用されている。これらの経路を標的とする例示的な治療薬には、トラメチニブおよびコビメチニブなどのキナーゼ阻害剤が含まれる。しかし、これらのキナーゼの阻害剤も、有害な副作用を伴う。例えば、ＭＥＫ阻害剤によって引き起こされる皮膚有害事象が報告されており、これには、ざ瘡様（丘疹膿疱性）発疹、異常な頭皮、顔の毛および／またはまつげの成長、化膿性肉芽腫および毛細血管拡張症を伴うまたは伴わない爪囲炎が含まれる。
【０００５】
ＢＲａｆは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達経路の調節に関与するプロテインキナーゼである。ＢＲａｆの突然変異は、ＭＡＰＫ経路を通した構成的シグナル伝達を誘導し、無制御の細胞増殖をもたらし得る。ＢＲａｆ阻害剤の使用は、ＢＲａｆの下流エフェクターであるリン酸化ＥＲＫのレベルの低下によって決定され得るように、ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害に関連することが実証されている。しかし、ＢＲａｆ阻害剤は、（リン酸化ＥＲＫのレベルの上昇によって決定されるように）ＢＲａｆ野生型細胞でＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する逆効果を逆説的に誘導することができることが観察されている。逆説的ＭＡＰＫ活性化の根底にある機構は、野生型ＢＲａｆとｃ−Ｒａｆの二量体化、および後続のＭＡＰＫ経路活性化につながる非阻害Ｒａｆタンパク質のトランス活性化に起因している。
【０００６】
皮膚有害反応を引き起こす１つまたは複数の根底にある機構にもかかわらず、これらの有害反応はＥＧＦＲ、ＰＩ３Ｋおよび／またはＭＥＫ阻害剤による治療の重大な欠点であり、治療中断および／または患者のコンプライアンス不良につながり得る。
【０００７】
Ｃａｒｎａｈａｎ  Ｊ．ら（Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．９（８）Ａｕｇｕｓｔ  ２０１０）は、選択的かつ強力なＲａｆ阻害剤が正常な細胞増殖を逆説的に刺激できることを発見した。Ｓｍｉｔｈ  Ａ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，５２，６１８９−６１９２によって開示されている一連の経口で生物学的に利用可能なキナーゼ阻害剤は、強力な生化学的活性を示した。例えば、シリーズ（Ｃ−１）の化合物１は有意な効力を示した（ＷＴＢ−Ｒａｆ  Ｋｉ＝１ｎｍｏｌ／Ｌ、Ｖ６００ＥＢ−Ｒａｆ  Ｋｉ＝１ｎｍｏｌ／ＬおよびＣ−Ｒａｆ  Ｋｉ＝０．３ｎｍｏｌ／Ｌ）。
【０００８】
Ｃａｒｎａｈａｎらは、野生型Ｂ−Ｒａｆおよび突然変異型Ｋ−ｒａｓを有する細胞では、Ｒａｆ阻害剤への曝露によって、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達の用量依存的かつ持続的な逆説的活性化が生じることを発見した。Ｒａｆ阻害は、細胞周期への進入および増殖促進をもたらした。
【０００９】
Ｎ．Ｓｈｅｌａｃｈは、「皮膚反応を治療するためのＢＲａｆ阻害剤の使用」と題した同時係属中の特許出願ＰＣＴ／ＩＬ２０１７／０５０３０１で、ＭＡＰＫのこの逆説的活性化をＥＧＦＲまたはＰＩ３Ｋ阻害剤による治療によって誘発される皮膚有害反応の治療に使用することができることを示した。
【００１０】
ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの投与に関連する前記皮膚有害反応の軽減を助けるための、新規な治療化合物、組成物および治療方法の開発が依然として当技術分野で必要である。
【発明の概要】
【００１１】
本開示は、本明細書で定義される式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のＢＲａｆ阻害剤を提供する。本開示はまた、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物を含む組成物、ならびに本開示の化合物および組成物を使用して、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせなどの化学療法剤によって誘発される皮膚有害反応を治療する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】化合物−ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５およびＬＵＴ０１７によってＨＥＫａ細胞で誘導されたＥＲＫリン酸化を示す図である。
【図１Ａ】０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図１Ｂ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図２Ａのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【図１Ｃ】１μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図１Ｄ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図１Ｃのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【図２】化合物−ＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１６およびＣ−１によってＨＥＫａで誘導されたＥＲＫリン酸化を示す図である。
【図２Ａ】０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図２Ｂ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図２Ａのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【図２Ｃ】１μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図２Ｄ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図２Ｃのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【図３】化合物−ＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１３、ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５、ＬＵＴ０１６、ＬＵＴ０１７、ＬＵＴ０２０およびＣ−１によってＨＥＫａで誘導されたＥＲＫリン酸化を示す図である。
【図３Ａ】０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図３Ｂ】１μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図３Ｃ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図３Ａおよび図３Ｂのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【図４】化合物−ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１７およびＣ−１によってＨＥＫａで誘導されたＥＲＫリン酸化を示す図である。
【図４Ａ】０．００３μＭ、０．０３μＭおよび０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す図である。
【図４Ｂ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図４Ａのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【図５Ａ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−Ｃ−１の効果を示す図である。
【図５Ｂ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１２の効果を示す図である。
【図５Ｃ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１４の効果を示す図である。
【図５Ｄ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ベムラフェニブの効果を示す図である。
【図５Ｅ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１３の効果を示す図である。
【図５Ｆ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１５の効果を示す図である。
【図５Ｇ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１６の効果を示す図である。
【図５Ｈ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１９の効果を示す図である。
【図５Ｉ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０１７の効果を示す図である。
【図５Ｊ】ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ−０２０の効果を示す図である。
【図６】ＬＵＴ０１４（Ｃ１７０７１４７９−Ｆ）を調製するための改善されたスケールアップ合成方法の流れ図である。
【図７】ＥＧＦＲの投与後のホスホ‐ＥＲＫに対するＬＵ０１４の効果（インビトロ結果）を示す図である。
【図７Ａ】試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫを示す図である。
【図７Ｂ】試験化合物で処理した際の総ＥＲＫを示す図である。
【図７Ｃ】ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図７Ａおよび図７Ｂのブロットの濃度測定分析を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物ならびにこれらを含む組成物が本明細書で提供される。本開示の化合物および組成物を使用して皮膚有害反応を治療する方法も提供される。
【００１４】
化合物
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物：
0006912667.tif 000002
（Ｉ）
（式中、Ｒは３−エチニルフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニル、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル、３−（トリフルオロメトキシ）フェニル、３，５−ジヒドロキシフェニルまたはフェニル−３−スルホンアミドからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が本明細書で提供される。
【００１５】
別の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物：
0006912667.tif 000003
（ＩＩ）
（式中、ＲはＮＨＲ１であり、Ｒ１は２−フルオロ−４−ヨードフェニルである）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が本明細書で提供される。
【００１６】
別の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物：
0006912667.tif 000004
（ＩＩＩ）
（式中、ＲはＮＨＲ１であり、Ｒ１は３‐エチニルフェニル、３‐クロロ‐４‐フルオロフェニル、２‐フルオロ‐４‐ヨードフェニルまたは４‐クロロ‐３‐（トリフルオロメチル）フェニルである）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が本明細書で提供される。
【００１７】
一実施形態では、本開示の化合物がＢＲａｆの活性を阻害する。一実施形態では、本開示の化合物が、約０．５×１０‐８Ｍ〜約５×１０‐８Ｍ、約１×１０‐８Ｍ〜約５×１０‐８Ｍ、約１×１０‐８Ｍ〜約３．５×１０−８Ｍまたは約１ｘ１０−８Ｍ〜約３ｘ１０−８ＭのＢＲａｆに対するＩＣ５０を有し得る。
【００１８】
一実施形態では、本開示の化合物が、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性を増加させる。
【００１９】
一実施形態では、本開示の化合物が、ＭＡＰＫの活性を増加させ、同時にＢＲａｆの活性を阻害する。
【００２０】
一実施形態では、ＭＡＰＫの活性が、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化を測定し、ホスホＥＲＫと総ＥＲＫの比を計算することによって決定される。
【００２１】
一実施形態では、本開示の化合物が、ホスホＥＲＫと総ＥＲＫの比を、未処理または対照処理細胞と比較して、少なくとも約１．０２５倍、１．０５倍、１．１０倍、１．１５倍、１．２０倍、１．２５倍、１．３０倍、１．３５倍、１．４０倍、１．４５倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、２倍、２．２５倍、２．５倍、２．７５倍、３倍、３．２５倍、３．５倍、３．７５倍、４倍、４．２５倍、４．５倍、４．７５倍、５倍、５．２５倍、５．５０倍、５．７５倍、６倍、６．２５倍、６．５０倍、６．７５倍、７倍、７．２５倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、１００倍、１５０倍または約２００倍（その間の値および範囲を含む）増加させる。
【００２２】
一実施形態では、本開示の化合物が、ホスホ‐ＥＲＫと総ＥＲＫの比を、未処理または対照処理細胞と比較して、約１．５倍〜約５０倍、約１．５倍〜約２５倍、１．５倍〜約２０倍、約１．５倍〜約１５倍、約２．５倍〜約１５倍、約２．５倍〜約１０倍、約３倍〜約２０倍、約３倍〜約１５倍、約４倍〜約２０倍、約４倍〜約１５倍、約４倍〜約１０倍、約５倍〜約２０倍、約５倍〜約１５倍（その間の値および範囲を含む）増加させる。
【００２３】
一実施形態では、本開示の化合物が、総ＥＲＫに対するホスホ‐ＥＲＫのレベルを、未処理または対照処理細胞と比較して、少なくとも約２．５％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３２５％、３５０％、３７５％、４００％、４２５％、４５０％、４７５％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％、１１００％、１２００％、１３００％、１４００％、１５００％、１６００％、１７００％、１８００％、１９００％、２０００％、２２５０％、２５００％、２７５０％、３０００％、３２５０％、３５００％、４０００％、４５００％、４７５０％、５０００％、５５００％、６０００％、６５００％、７０００％、７５００％、８０００％、９０００％または１００００％（その間の値および範囲を含む）増加させる。
【００２４】
一実施形態では、本開示の化合物が、光毒性を示さない、または減少した光毒性を示す。光毒性のレベルは、光刺激因子（ＰＩＦ）または平均光効果（ＭＰＥ）を測定することによって決定することができる。
【００２５】
一実施形態では、ＰＩＦを、以下の式を使用して計算することができる：ＰＩＦ＝ＩＣ５０（‐Ｉｒｒ）／ＩＣ５０（＋Ｉｒｒ）（式中、ＰＩＦ＞５は光毒性を示し；２＜ＰＩＦ＜５は光毒性の可能性を示し；ＰＩＦ＜２は光毒性がないことを示す）。一実施形態では、本開示の化合物が５未満のＰＩＦを有する。別の実施形態では、本開示の化合物が２未満のＰＩＦを有する。
【００２６】
一実施形態では、完全な濃度反応曲線を比較することによって、ＭＰＥを計算することができる。ＭＰＥは、ＩＣ５０のシフトによって正規化された等価用量の応答の差の加重平均である。ＭＰＥ＞０．１５は光毒性を示し；０．１＜ＭＰＥ＜０．１５は光毒性の可能性を示し；ＭＰＥ＜０．１は光毒性がないことを示す。一実施形態では、本開示の化合物が０．１５未満のＭＰＥを有する。別の実施形態では、本開示の化合物が０．１未満のＭＰＥを有する。
【００２７】
組成物
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物：
0006912667.tif 000005
（Ｉ）
（式中、Ｒはｐ−クロロフェニル、３−エチニルフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニル、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル、３−（トリフルオロメトキシ）フェニル、３，５−ジヒドロキシフェニル、フェニル−３−スルホンアミドまたは３−（トリフルオロメチル）フェニルからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせと；薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【００２８】
一実施形態では、式（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【００２９】
別の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【００３０】
一実施形態では、医薬組成物が、組成物の総重量に基づいて、約１％ｗ／ｗ〜約５％ｗ／ｗの式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせを含み得る。例えば、医薬組成物は、約１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．０％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３．０％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４％、４．１％、４．２％、４．３％、４．４％、４．５％、４．６％、４．７％、４．８％、４．９％または５％ｗ／ｗ（その間の値および範囲を含む）の本明細書に開示される化合物のいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物が、約１％〜約３％、約１％〜約４％、約１．５％〜約５％、約１．５％〜約４．５％、約１．５％〜３．５％、約１．５％〜約３％、約２％〜約５％、約２％〜約４．５％、約２％〜約４％、約２．５％〜約５％、約２．５％〜約４．５％、約２．５％〜約４％、約３％〜約５％、約３．５％〜約５％ｗ／ｗ（その間の値および範囲を含む）の本明細書に開示される化合物のいずれかを含み得る。
【００３１】
一実施形態では、医薬組成物が、組成物の総重量に基づいて、約５％ｗ／ｗ〜約１０％ｗ／ｗの式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせを含み得る。例えば、医薬組成物は、約５％、５．１％、５．２％、５．３％、５．４％、５．５％、５．６％、５．７％、５．８％、５．９％、６％、６．１％、６．２％、６．３％、６．４％、６．５％、６．６％、６．７％、６．８％、６．９％、７％、７．１％、７．２％、７．３％、７．４％、７．５％、７．６％、７．７％、７．８％、７．９％、８％、８．１％、８．２％、８．３％、８．４％、８．５％、８．６％、８．７％、８．８％、８．９％、９％、９．１％、９．２％、９．３％、９．４％、９．５％、９．６％、９．７％、９．８％、９．９％または１０％ｗ／ｗ（その間の値および範囲を含む）の本明細書に開示される化合物のいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物が、約５％〜約９％、約５％〜約８．５％、約５％〜約８％、約５％〜約７．５％、約５％〜約７％、約６％〜約１０％、約６％〜約９％、約６％〜約８．５％、約６％〜約８％、約７％〜約１０％、約７％〜約９．５％、約７％〜約８．５％、約７．５％〜約１０％、約８％〜約１０％ｗ／ｗ（その間の値および範囲を含む）の本明細書に開示される化合物のいずれかを含み得る。
【００３２】
いくつかの他の実施形態では、医薬組成物が、約１％〜約１０％、約１％〜約８％、約１％〜約７％、約２％〜約８％、約２％〜約７％、約２％〜約６％、約２．５％〜約７．５％、約２．５％〜約５．５％、約３％〜約８％、約３％〜約７％、約４％〜約８％、約４％〜約７％、約４．５％〜約７．５％、約４．５％〜約７％または約４．５％〜約６．５％ｗ／ｗ（その間の値および範囲を含む）の本明細書に開示される化合物のいずれかを含み得る。
【００３３】
一実施形態では、本明細書に開示される化合物のいずれか１つを含む医薬組成物が、全身投与用に製剤化される。全身投与は、経腸または非経口投与経路を介することができる。一実施形態では、全身投与が経口投与であり、医薬組成物が経口投与用に製剤化される（経口医薬組成物）。
【００３４】
一実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む経口医薬組成物が本明細書で提供される。本開示の経口医薬組成物は、固体剤形または液体剤形の形態であり得、本明細書に記載される量のいずれかの１つまたは複数の開示される化合物のいずれかを含み得る。
【００３５】
一実施形態では、本明細書に開示される化合物のいずれか１つを含む医薬組成物が、局所投与用に製剤化される。局所投与は、対象の皮膚、爪、目、まつげ、眼瞼および／または毛への組成物の局所施用を含む。
【００３６】
一実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む局所医薬組成物が本明細書で提供される。局所投与用組成物（局所組成物）は、ゲル、ヒドロゲル、軟膏、クリーム、フォーム、スプレー、ローション、液剤または皮膚パッチの形態であり得、本明細書に記載される量のいずれかの１つまたは複数の開示される化合物のいずれかを含み得る。
【００３７】
一実施形態では、経口または局所医薬組成物が、本明細書に開示される量のいずれかの式：
0006912667.tif 000006
ＬＵＴ０１４
の化合物と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む。
【００３８】
一実施形態では、本明細書に開示されるｗ／ｗ％量のいずれかのＬＵＴ０１４と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む局所医薬組成物が本明細書で提供される。ＬＵＴ０１４を含む局所組成物は、軟膏、クリーム、ゲル、ヒドロゲル、フォーム、スプレー、ローション、液剤および皮膚パッチから選択される剤形に製剤化され得る。
【００３９】
一実施形態では、本明細書に開示されるｗ／ｗ％量のいずれかのＬＵＴ０１４と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む経口医薬組成物が本明細書で提供される。ＬＵＴ０１４を含む経口医薬組成物は、固体剤形または液体剤形の形態であり得る。
【００４０】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、散剤および顆粒剤が含まれる。このような固体剤形では、活性化合物が、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの不活性賦形剤（もしくは担体）、または（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびケイ酸；（ｂ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシア；（ｃ）保湿剤、例えばグリセロール；（ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、一定の複合ケイ酸塩および炭酸ナトリウム；（ａ）溶解遅延剤、例えばパラフィン；（ｆ）吸収促進剤、例えば四級アンモニウム化合物；（ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート；（ｈ）吸着剤、例えばカオリンおよびベントナイト；ならびに（ｉ）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物と混和される。カプセル剤および錠剤の場合、剤形が緩衝剤も含み得る。
【００４１】
例示的なカプセル剤形は、１つまたは複数の本開示の化合物と、ラクトースまたは乳糖、高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤とを含む軟または硬充填ゼラチンカプセルを含み得る。
【００４２】
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップおよびエリキシルが含まれる。活性化合物に加えて、液体剤形は、水もしくは他の溶媒などの当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、特に綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物などを含有し得る。
【００４３】
このような不活性希釈剤に加えて、液体剤形は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤および芳香剤などのアジュバントも含むことができる。懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、またはこれらの物質の混合物などの懸濁化剤を含有し得る。
【００４４】
経口投与用の例示的な液体剤形は、１つまたは複数の本開示の化合物と、グリセロール、プロピレングリコールおよびスクロースなどの賦形剤とを含むシロップを含み得る。
【００４５】
本開示で有用な局所組成物は、液剤として製剤化され得る。このような組成物は皮膚軟化剤を含んでもよく、好ましくは約１％〜約５０％の１つまたは複数の皮膚軟化剤を含有する。本明細書で使用される場合、「皮膚軟化剤」という用語は、乾燥の予防または軽減、ならびに皮膚の保護に使用される材料を指す。いくつかの適切な皮膚軟化剤が知られており、本開示で使用することができる。例えば、Ｓａｇａｒｉｎ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．３２−４３（１９７２）およびＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，ｅｄｓ．Ｗｅｎｎｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  ＭｃＥｗｅｎ，ｐｐ．１６５６−６１，１６２６，ａｎｄ  １６５４−５５（Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９７）（以下「ＩＣＩ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」）は、適切な材料の多数の例を含む。
【００４６】
ローションは、このような液剤から作成することができる。ローションは、典型的には、約１％〜約２０％（例えば、約５％〜約１０％）の１つまたは複数の皮膚軟化剤と、約５０％〜約９０％（例えば、約６０％〜約８０％）の水とを含む。
【００４７】
溶剤から製剤化され得る別のタイプの製品はクリームである。クリームは、典型的には、約５％〜約５０％（例えば、約１０％〜約２０％）の１つまたは複数の皮膚軟化剤と、約４５％〜約８５％（例えば、約５０％〜約７５％）の水とを含む。
【００４８】
液剤から製剤化され得るさらに別のタイプの製品は軟膏である。軟膏は、動物油または植物油または半固体炭化水素の単純な基剤を含み得る。軟膏は、約２％〜約１０％の１つまたは複数の皮膚軟化剤に加えて約０．１％〜約２％の１つまたは複数の増粘剤を含み得る。本明細書で有用な増粘剤または粘度増加剤のより完全な開示は、Ｓａｇａｒｉｎ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．７２−７３（１９７２）およびＩＣＩ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  １６９３〜１６９７頁に見出すことができる。
【００４９】
本開示で有用な局所組成物は乳剤として製剤化され得る。局所組成物の担体が乳剤である場合、担体の約１％〜約１０％（例えば、約２％〜約５％）が１つまたは複数の乳化剤で構成される。乳化剤は非イオン性、アニオン性またはカチオン性であり得る。適切な乳化剤は、例えば、Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．３１７−３２４（１９８６）およびＩＣＩ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１６７３〜１６８６頁に開示されている。
【００５０】
ローションおよびクリームは、乳剤として製剤化することができる。このようなローションは、０．５％〜約５％の１つまたは複数の乳化剤を含み得る。クリームは、約１％〜約２０％（例えば、約５％〜約１０％）の１つまたは複数の皮膚軟化剤と；約２０％〜約８０％（例えば、３０％〜約７０％）の水と；約１％〜約１０％（例えば、約２％〜約５％）の１つまたは複数の乳化剤とを含み得る。
【００５１】
本開示の局所組成物は、ゲル（例えば、１つまたは複数の適切なゲル化剤を使用した水性、アルコール、アルコール／水、または油ゲル）として製剤化することもできる。水性ゲルに適したゲル化剤には、それだけに限らないが、天然ゴム、アクリル酸およびアクリル酸ポリマーおよびコポリマー、ならびにセルロース誘導体（例えば、ヒドロキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロース）が含まれる。油に適したゲル化剤には、それだけに限らないが、水素化ブチレン／エチレン／スチレンコポリマーおよび水素化エチレン／プロピレン／スチレンコポリマーが含まれる。ゲル組成物は、約０．１重量％〜５重量％のこのようなゲル化剤を含み得る。
【００５２】
上記担体および賦形剤に加えて、グリセロールトリオレエート、アセチル化スクロースジステアレート、ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレン（１）モノステアレート、グリセロールモノオレエート、スクロースジステアレート、ポリエチレングリコール（５０）モノステアレート、オクチルフェノキシポリ（エチレンオキシ）エタノール、デカグリセリンペンタイソステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ヒドロキシル化ラノリン、ラノリン、トリグリセリルジイソステアレート、ポリオキシエチレン（２）オレイルエーテル、カルシウムステアロイル−２−ラクチレート、メチルグルコシドセスキステアレート、ソルビタンモノパルミテート、メトキシポリエチレングリコール−２２／ドデシルグリコールコポリマー（Ｅｌｆａｃｏｓ  Ｅ２００）、ポリエチレングリコール−４５／ドデシルグリコールコポリマー（Ｅｌｆａｃｏｓ  ＳＴ９）、ポリエチレングリコール４００ジステアレートおよびラノリン由来ステロール抽出物、グリコールステアレートおよびグリセロールステアレート；アルコール、例えばセチルアルコールおよびラノリンアルコール；ミリステート、例えばイソプロピルミリステート；セチルパルミテート；コレステロール；ステアリン酸；プロピレングリコール；グリセリン、ソルビトールなどを含む他の皮膚軟化剤および界面活性剤を局所組成物に組み込むことができる。
【００５３】
方法
皮膚科学的状態を治療、予防および／または改善する方法が本明細書で提供される。
【００５４】
一実施形態では、皮膚科学的状態が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせなどの化学療法剤によって誘発される皮膚科学的または皮膚有害反応である。
【００５５】
一実施形態では、それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療、改善および／または予防する方法であって、治療上有効量の、式（Ｉ）の化合物
0006912667.tif 000007
（Ｉ）
（式中、Ｒはｐ−クロロフェニル、３−エチニルフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニル、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル、３−（トリフルオロメトキシ）フェニル、３，５−ジヒドロキシフェニル、フェニル−３−スルホンアミドまたは３−（トリフルオロメチル）フェニルからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物；
式（ＩＩ）の化合物：
0006912667.tif 000008
（ＩＩ）
（式中、ＲはＮＨＲ１であり、Ｒ１は２−フルオロ−４−ヨードフェニルである）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物；
式（ＩＩＩ）の化合物：
0006912667.tif 000009
（ＩＩＩ）
（式中、ＲはＮＨＲ１であり、Ｒ１は３−エチニルフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニルまたは４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルである）
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物；
またはこれらの組み合わせと；薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物を投与するステップを含む方法が本明細書で提供される。
【００５６】
一実施形態では、それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療、改善および／または予防する方法が、治療上有効量の、Ｒがｐ−クロロフェニル、３−エチニルフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニル、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル、３−（トリフルオロメトキシ）フェニル、３，５−ジヒドロキシフェニル、フェニル−３−スルホンアミドまたは３−（トリフルオロメチル）フェニルである式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせと；薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物を投与するステップを含む。
【００５７】
一実施形態では、それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療、改善および／または予防する方法が、治療上有効量の、ＲがＮＨＲ１であり、Ｒ１が２−フルオロ−４−ヨードフェニルである式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と；薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物を投与するステップを含む。
【００５８】
一実施形態では、それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療、改善および／または予防する方法が、治療上有効量の、ＲがＮＨＲ１であり、Ｒ１が３−エチニルフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２−フルオロ−４−ヨードフェニルまたは４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルである式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはこれらの組み合わせと；薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物を投与するステップを含む。
【００５９】
一実施形態では、それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療、改善および／または予防する方法が、治療上有効量の、本明細書に開示される化合物のいずれかの組み合わせと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物を投与するステップを含む。
【００６０】
一実施形態では、それを必要とする対象のＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応を治療、改善および／または予防する方法が、治療上有効量の、本明細書に開示されるｗ／ｗ％量のいずれかの式
0006912667.tif 000010
ＬＵＴ０１４
の化合物と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物を投与するステップを含む。
【００６１】
ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせなどの化学療法薬によって誘発される皮膚科学的または皮膚有害反応には、ざ瘡様発疹、丘疹膿疱性発疹、異常な頭皮毛の成長、異常な顔の毛の成長、異常な毛の成長、異常なまつげの成長、乾燥症、掻痒、化膿性肉芽腫および毛細血管拡張症を伴うまたは伴わない爪囲炎が含まれる。本明細書に記載される方法は、これらの有害反応の１つまたは複数を治療、改善および／または予防する。
【００６２】
一実施形態では、本開示の化合物／組成物によって治療、改善および／または予防されるＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの皮膚有害反応が、ざ瘡様発疹である。
【００６３】
一実施形態では、対象がヒト、イヌおよび／またはネコなどの哺乳動物である。
【００６４】
一実施形態では、対象が、本開示の化合物／組成物の投与時に、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせを受けている。別の実施形態では、本開示の化合物／組成物が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはこれらの組み合わせの投与の前または後に対象に投与される。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、治療上有効量の本開示の化合物／組成物の全身投与または局所投与を含む。
【００６６】
局所投与を含む方法は、対象の皮膚、爪、目、まつげ、眼瞼および／または毛への本明細書に開示される組成物のいずれかの局所投与または施用を含む。いくつかの実施形態では、局所投与が、ゲル、ヒドロゲル、軟膏、クリーム、スプレー、皮膚パッチ、フォーム、ローションおよび液剤から選択される剤形に製剤化された組成物を局所投与することを含む。
【００６７】
全身投与は、経腸投与または非経口投与を含む。本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、全身投与が経口投与を含む。本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、経口投与が、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤および散剤から選択される経口剤形の投与を含む。
【００６８】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、約０．１ｍｇ／日〜約１ｍｇ／日の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、約０．１ｍｇ／日、約０．２ｍｇ／日、約０．３ｍｇ／日、約０．４ｍｇ／日、約０．５ｍｇ／日、約０．６ｍｇ／日、約０．７ｍｇ／日、約０．８ｍｇ／日、約０．９ｍｇ／日または約１ｍｇ／日（その間の値および範囲を含む）の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、約０．１ｍｇ／日〜約０．５ｍｇ／日、約０．２ｍｇ／日〜約０．８ｍｇ／日、約０．２ｍｇ／日〜約０．５ｍｇ／日または約０．５ｍｇ／日〜約１ｍｇ／日（その間の値および範囲を含む）の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。
【００６９】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、約１ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、約１ｍｇ／日、１．５ｍｇ／日、２ｍｇ／日、２．５ｍｇ／日、３ｍｇ／日、３．５ｍｇ／日、４ｍｇ／日、４．５ｍｇ／日または５ｍｇ／日（その間の値および範囲を含む）の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。
【００７０】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、約５ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、約５ｍｇ／日、約５．５ｍｇ／日、約６ｍｇ／日、約６．５ｍｇ／日、約７ｍｇ／日、約７．５ｍｇ／日、約８ｍｇ／日、約８．５ｍｇ／日、約９ｍｇ／日、約９．５ｍｇ／日または約１０ｍｇ／日（その間の値および範囲を含む）の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法が、約１ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日、約１ｍｇ／日〜約８ｍｇ／日、約２ｍｇ／日〜約８ｍｇ／日、約２．５ｍｇ／日〜約７．５ｍｇ／日、約３ｍｇ／日〜約８ｍｇ／日、約３ｍｇ／日〜約６ｍｇ／日または約４ｍｇ／日〜約８ｍｇ／日（その間の値および範囲を含む）の１つまたは複数の本開示の化合物を全身または局所投与することを含む。
【００７２】
一実施形態では、投与される化合物の量が、化合物の性質、投与様式および／または皮膚反応の重症度に依存する。患者に投与する必要がある治療上有効量は、当技術分野で知られている用量範囲臨床試験によって決定することができる。
【００７３】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤が、Ｉｒｅｓｓａ（ゲフィチニブ）、Ｔａｒｃｅｖａ（エルロチニブ）、Ｔｙｋｅｒｂ（ラパチニブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ｃａｐｒｅｌｓａ（バンデタニブ）、Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（ネシツムマブ）、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（オシメルチニブ）およびこれらの組み合わせから選択される。
【００７４】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＧＤＣ‐０９８０（アピトリシブ）、ＧＤＣ‐０９４１（ピクチリシブ）、ＢＡＹ  ８０‐６９４６（コパンリシブ）、ＢＫＭ１２０（プパルリシブ（Ｐｕｐａｒｌｉｓｉｂ））、ＮＶＰ‐ＢＥＺ２３５（ダクトリシブ）、ＩＰＩ  １４５（デュベリシブ）、イデラリシブ（ＧＳ−１１０１またはＣＡＬ−１０１）、ワートマニン、ＬＹ２９４００２およびこれらの組み合わせから選択される。
【００７５】
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、コビメチニブ（ＸＬ５１８）、ビニメチニブ（ＭＥＫ１６２）、セルメチニブ、ＰＤ−３２５９０１、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３５９０１、ＵＯ１２６、ＴＡＫ−７３３およびこれらの組み合わせから選択される。
【００７６】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、皮膚有害反応の重症度を軽減する。
【００７７】
皮膚有害反応の重症度を段階分けするために最も一般的に使用されるシステムは、国立がん研究所の有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０であり、これは以下の表１に示される４つのグレードを認識する。
（表１）
0006912667.tif 000011
【００７８】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、国立がん研究所有害事象共通用語規準（ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０によって定義した場合に、グレード４からグレード３、２、１または０まで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００７９】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ‐ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード３からグレード２、１または０まで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００８０】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ‐ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード２からグレード１または０まで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００８１】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ‐ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード１からグレード０まで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００８２】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、皮膚有害反応の発生を部分的または完全に予防する。
【００８３】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ‐ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード４、グレード３、グレード２またはグレード１の皮膚有害反応の発生を部分的または完全に予防する。
【００８４】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、皮膚有害反応の増大を予防する。例えば、一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード０からグレード１、２、３または４への皮膚有害反応の増大を予防する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード１からグレード２、３または４への皮膚有害反応の増大を予防する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード２からグレード３または４への皮膚有害反応の増大を予防する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法が、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥバージョン４．０によって定義した場合に、グレード３からグレード４への皮膚有害反応の増大を予防する。
【００８５】
皮膚有害反応の重症度を段階分けするために使用され得る別のシステムは、以下の表２に示されるラクチュール等級スケールである。
【００８６】
（表２）
0006912667.tif 000012
【００８７】
表２（続き）
0006912667.tif 000013
【００８８】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード４からグレード３Ｂ、３Ａ、２Ｂ、２Ａ、１Ｂまたは１Ａまで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００８９】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード３Ｂからグレード３Ａ、２Ｂ、２Ａ、１Ｂまたは１Ａまで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００９０】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード３Ａからグレード２Ｂ、２Ａ、１Ｂまたは１Ａまで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００９１】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード２Ｂからグレード２Ａ、１Ｂまたは１Ａまで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００９２】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード２Ａからグレード１Ｂまたは１Ａまで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００９３】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード１Ｂからグレード１Ａまで皮膚有害反応の重症度を減少させる。
【００９４】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード４、グレード３Ｂ、グレード３Ａ、グレード２Ｂ、グレード２Ａ、グレード１Ｂまたはグレード１Ａの皮膚有害反応の発生を部分的または完全に予防する。
【００９５】
一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード１Ａからグレード１Ｂ、２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂまたは４への皮膚有害反応の増大を予防する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード１Ｂからグレード２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂまたは４への皮膚有害反応の増大を予防する。一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード２Ａからグレード２Ｂ、３Ａ、３Ｂまたは４への皮膚有害反応の増大を予防する。一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード２Ｂからグレード３Ａ、３Ｂまたは４への皮膚有害反応の増大を予防する。一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード３Ａからグレード３Ｂまたは４への皮膚有害反応の増大を予防する。一実施形態では、本明細書に開示される方法が、ラクチュール等級スケールによって定義した場合に、グレード３Ｂからグレード４への皮膚有害反応の増大を予防する。
実施例
【００９６】
以下の実施例は、本発明の一定の実施形態を例示するものであるが、何ら特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。以下の実施例は、記載された発明をどのように作成および使用するかについての完全な開示および説明を当業者に提供するために示されており、発明者が発明とみなすものの範囲を限定することを意図したものではなく、また以下の実験が実施された全てのまたは唯一の実験であることを表すことを意図したものでもない。使用された数値（例えば、量、温度等）に関して正確性を確保するための努力がなされたが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。特に明記しない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧に近い。
【００９７】
式Ｉの化合物（ＬＵＴ０１２−ＬＵＴ０１７およびＬＵＴ０１９−ＬＵＴ０２０）を合成するための例示的な方法を、実施例１〜９に開示する。
【００９８】
既知の化合物Ｃ−１は、Ｓｍｉｔｈ  Ａ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，５２，６１８９−６１９２に詳述される合成手順に従って調製した。
【００９９】
実施例１
式Ｉ、Ｒ＝３−エチニルフェニルの化合物（化合物ＬＵＴ０１２）の合成
中間体３Ｂ−２の調製
0006912667.tif 000014
【０１００】
イソプロパノール（２０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（２．００ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０℃で化合物３Ｂ−３（１．２６ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．２当量）およびトリフルオロ酢酸（１．０２ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、６６５ｕＬ、１．０当量）を添加した。得られた混合物を９０℃に加熱し、９０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．２４）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を濾過し、濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄し、濾過ケークを回収し、真空中で乾燥させると、化合物３Ｂ−２（２．６０ｇ、８．５７ｍｍｏｌ、収率９５．４％）が黄色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−１−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＭｅＯＤ
δ  ８．７４（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．６０−７．７１（ｍ，４Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），２．６１（ｓ，３Ｈ）．
【０１０１】
中間体３Ｂの調製
0006912667.tif 000015
【０１０２】
エタノール（２６ｍＬ）中化合物３Ｂ−２（２．６０ｇ、８．５７ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（９．６７ｇ、４２．９ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を８５℃に加熱し、８５℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．３０）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を２０℃に冷却し、５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、５分間撹拌し、濾過し、水相をジクロロメタン（５０ｍＬ、２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、化合物３Ｂ（２．３０ｇ、粗）が褐色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−４−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  ８．９６（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．９０−７．９３（ｍ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．３１（ｍ，２Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），４．１３（ｓ，１Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ）．
【０１０３】
中間体４Ｂの調製
0006912667.tif 000016
【０１０４】
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中化合物３（１．００ｇ、３．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｂ（９１３ｍｇ、３．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１６．７ｍＬ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．２５、Ｒｆ−ＤＰ＝０．４０）は、反応が完了したことを示した。氷水（２ｍＬ）を０℃で滴加して反応混合物をクエンチし、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（５０ｍＬ）に懸濁し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄し、濾過して濾過ケークを得て、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｂ（１．１０ｇ、１．９９ｍｍｏｌ、収率５９．６％）が淡黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−９−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  １１．６９（ｓ，１Ｈ），９．６６（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），９．２８（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｓ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．９３−７．９６（ｍ，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｑ，Ｊ＝３．２  Ｈｚ，Ｊ＝０．８  Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），４．０２−４．１４（ｍ，１Ｈ），３．７４−３．７９（ｍ，１Ｈ），２．３６（ｓ，４Ｈ），１．９９−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．１０（ｓ，１Ｈ）．
【０１０５】
式Ｉ、Ｒ＝３−エチニルフェニルの化合物（化合物ＬＵＴ０１２）の調製
0006912667.tif 000017
【０１０６】
化合物４Ｂ（１．１０ｇ、１．９９ｍｍｏｌ、１．０当量）をＨＣｌ（０．５Ｍ、３５．８ｍＬ、９．０当量）に窒素下２０℃で懸濁した。混合物を１００℃に加熱し、１時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５２０１−１１−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。熱溶液を濾過し、沸騰水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を氷浴で冷却し、生成物を溶液から黄色固体として結晶化させた。固体を濾過し、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）に添加した。混合物を１０分間撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケークを水（５０ｍＬ）で洗浄し、粗生成物として回収した。粗生成物を分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１、Ｒｆ＝０．４）によって精製すると、ＬＵＴ０１２（１１０ｍｇ、２３０ｕｍｏｌ、収率１１．６％、純度９８．１％）が黄色固体として得られた。
１ＨＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−１１−Ｐ１Ａ２  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  １３．８４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１１．８４（ｓ，１Ｈ），９．７６（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），９．２５（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝４．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｑ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝５．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｑ，Ｊ＝４．８  Ｈｚ，Ｊ＝３．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｓ，１Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ）．
【０１０７】
実施例２
式Ｉ、Ｒ＝１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イルの化合物（ＬＵＴ０１３）の合成
中間体３Ｃ−２の調製
0006912667.tif 000018
【０１０８】
化合物３Ｂ−１（１．００ｇ、４．４９ｍｍｏｌ、１．０当量）、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−ピラゾール−３−アミン（１．３８ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８２．３ｍｇ、８９．８ｕｍｏｌ、０．０２当量）、ＤａｖｅＰｈｏｓ（７０．７ｍｇ、１８０  ｕｍｏｌ、０．０４当量）およびＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、９．１０ｍＬ、２．０当量）をマイクロ波管中ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解した。密封管をマイクロ波下１５０℃で３０分間加熱した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ＝０．７１）、ＬＣＭＳ（ＥＴ１５３００−１１−Ｐ１Ａ、生成物ＲＴ＝０．９７２）、ＬＣＭＳ（ＥＴ１５３００−１１−Ｐ１Ｂ、生成物ＲＴ＝０．９７３）は、出発材料が完全に消費されたことを示した。２つの反応混合物を合わせ、減圧下４０℃で濃縮した。残渣を、石油エーテル：酢酸エチル（８０：１〜０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）によって精製すると、化合物３Ｃ−２（１．００ｇ、２．９５ｍｍｏｌ、収率３２．８％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５３００−１１−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＣＤＣｌ３
δ  ８．１６（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．０８（ｓ，１Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，９Ｈ）．
【０１０９】
中間体３Ｃの調製
0006912667.tif 000019
【０１１０】
エチルアルコール（２０ｍＬ）中化合物３Ｃ−２（１．００ｇ、２．９５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（３．３２ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、５．０当量）を一度に添加した。次いで、反応混合物を１２時間８０℃に加熱した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．２４）およびＬＣＭＳ（ＥＴ１５３００−１２−Ｐ１Ａ、生成物：ＲＴ＝０．７９３）は、反応が完了したことを示した。混合物を４０℃に冷却し、減圧下４０℃で濃縮した。残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）に注ぎ入れた。合わせた有機相を５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、５分間撹拌し、混合物を濾過し、真空中で濃縮した。水相をジクロロメタン（２０ｍＬ、１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、石油エーテル：酢酸エチル（５０：１〜０：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）によって精製すると、粗化合物３Ｃ（７００ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ、収率７６．８％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５３００−１２−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＣＤＣｌ３
δ  ７．９５（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），４．０８（ｓ，２Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，９Ｈ）．
【０１１１】
中間体４Ｃの調製
0006912667.tif 000020
【０１１２】
化合物３Ｃ（３１０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．０当量）および化合物３（３００ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン（４．０ｍＬ）中溶液に、窒素下０℃で６０分間にわたってＬｉ−ＨＭＤＳ（１Ｍ、５．０ｍＬ、５．０当量）を滴加した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．３４）およびＬＣＭＳ（ＥＴ１５３００−１５−Ｐ１Ａ、生成物：ＲＴ＝０．９２２）は、反応が完了したことを示した。混合物を減圧下４０℃で濃縮すると、粗化合物４Ｃ（１．００ｇ、粗）が黄色固体として得られた。
【０１１３】
注：水との接触を避ける。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５３００−１５−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＭｅＯＤ
δ  ９．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．６  Ｈｚ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．９８−８．００（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｑ，Ｊ＝５．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．０７（ｓ，１Ｈ），５．９２（ｄｄ，Ｊ＝１０．８  Ｈｚ，Ｊ＝１３．２，１Ｈ），４．１５−４．１８（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．１４−２．１７（ｍ，２Ｈ），１．８４−２．１４（ｍ，２Ｈ），１．６４−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ）．
【０１１４】
式Ｉ、Ｒ＝１，１−ジメチルエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イルの化合物（ＬＵＴ０１３）の調製
0006912667.tif 000021
【０１１５】
ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４ｍＬ、４Ｍ）中化合物４Ｃ（２５０ｍｇ、４２５μｍｏｌ、１．０当量）の混合物を２０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１、Ｒｆ＝０．２４）およびＬＣＭＳ（ＥＴ１５３００−１８−Ｐ１Ａ、生成物ＲＴ＝２．３８４）は、出発材料が完全に消費されたことを示した。混合物を減圧下４０℃で濃縮した。ｐＨ値をＮａＨＣＯ３水溶液で９に調整し、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ）に注ぎ入れた。混合物を５分間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークをＨ２Ｏ  １０ｍＬで洗浄し、真空中で乾燥させた。濾過液を酢酸エチル（１０ｍＬ、６ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ＊５ｕｍ；移動相：［水（１０ｍｍ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％〜６０％、１２分）によって精製すると、ＬＵＴ０１３（１５０ｍｇ、２９５  ｕｍｏｌ、収率６９．６％、純度９９．４％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５３００−１８−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  １３．８３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１１．８０（ｓ，１Ｈ），９．７１（ｓ，１Ｈ），９．０９（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．８９−６．９２（ｍ，１Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｓ，９Ｈ）．
【０１１６】
実施例３
式Ｉ、Ｒ＝３−（トリフルオロメトキシ）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１４）の合成&#8211;実験室規模の方法
中間体３Ｄ−２の調製
0006912667.tif 000022
【０１１７】
イソプロパノール（２０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（２．００ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｄ−１（１．９１ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、窒素下、２０°ＣでＴＦＡ（１．０２ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）を一度に添加した。混合物を９０℃で１８時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ（ＥＴ１５０６０−２１−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。得られた懸濁液を冷却し、生成物を濾別し、少量のジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄すると、化合物３Ｄ−２（３．００ｇ、８．２６ｍｍｏｌ、収率９１．９％）が黄色固体として得られ、これを次のステップに直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−２１−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
９．６８（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．４，Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｔ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ）．
【０１１８】
中間体３Ｄの調製
0006912667.tif 000023
【０１１９】
エタノール（３０ｍＬ）中化合物３Ｄ−２（３．００ｇ、８．２６ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（９．３２ｇ、４１．３ｍｍｏｌ、５．０当量）を一度に添加した。混合物を８５℃で１６時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ（ＥＴ１５０６０−２４−Ｐ１Ａ）は、反応が完了したことを示した。暗色溶液を濃縮し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ水溶液（１．３０ｍｏｌ／Ｌ、４０ｍＬ）で洗浄した。混合物を１０分間撹拌し、濾過した。フィルターを分離し、水相をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、化合物３Ｄ（２．２０ｇ、６．６０ｍｍｏｌ、収率７９．９％）が赤色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−２４−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
９．１４（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．９２−７．９９（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝６．０，Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝８．４，Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．６，１Ｈ），５．５３（ｄ，２Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ）．
【０１２０】
中間体４Ｄの調製
0006912667.tif 000024
【０１２１】
テトラヒドロフラン（８．５０ｍＬ）中化合物３（８５０ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｄ（９４７ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１４．２ｍＬ、５．０当量）を滴加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１、Ｒｆ＝０．４８）は、反応が完了したことを示した。深赤色反応混合物を、水の滴加でクエンチし（１ｍＬ−氷浴冷却）、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（８０ｍＬ）に懸濁し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をＭＴＢＥ（１５ｍＬ）に懸濁し、１２時間攪拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｄ（１．５０ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、収率８６．２％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−３８−ｐ１ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１１．７７（ｓ，１Ｈ），９．７５（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），９．６４（ｓ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．４  Ｈｚ，２Ｈ），５．９７（ｄ，Ｊ＝１０．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｄ，Ｊ＝１２．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．８１−３．８８（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．４７（ｍ，４Ｈ），２．０６−２．１６（ｍ，３Ｈ），１．８３−１．８６（ｍ，１Ｈ）．
【０１２２】
式Ｉ、Ｒ＝３−（トリフルオロメトキシ）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１４）の調製
0006912667.tif 000025
【０１２３】
化合物４Ｄ（１．５０ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、１．０当量）をＨＣｌ水溶液（０．５Ｍ、４４．１ｍＬ、９．０当量）に懸濁し、１００℃に加熱し、２時間撹拌した。固体の大部分が溶解して、黄色溶液が得られた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＴ１５０６０−４２−Ｐ１Ａ２）は、反応が完了したことを示した。熱溶液を濾過し、沸騰水（２×５．０ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を氷浴で冷却すると、生成物が溶液から黄色固体として結晶化した。Ｎａ２ＣＯ３（固体）でｐＨ値を９に調整した。混合物を１０分間撹拌し、濾過し、濾過ケークを水（５．０ｍＬ）で洗浄し、回収した。固体にジクロロメタン：メタノール（１０：１、１５ｍＬ）を添加し、５分間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを回収すると、ＬＵＴ０１４（１５０ｍｇ、２７４ｕｍｏｌ、収率１１．２％、純度９６．７％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−４２−Ｐ１Ａ２  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１３．８４（ｓ，１Ｈ），１１．８５（ｓ，１Ｈ），９．７６（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．９４−７．９７（ｍ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８  Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）．
【０１２４】
実施例４
改善されたスケールアップ方法による式Ｉ、Ｒ＝３−（トリフルオロメトキシ）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１４またはＣ１７０７１４７９−Ｆ）の合成
実施例３は、実験室規模でのＬＵＴ０１４化合物の合成方法を開示している。
【０１２５】
改善された大規模製造方法を検証し、臨床研究の材料を提供するために、ＬＵＴ０１４を調製するための改善されたスケールアップ合成方法をマルチ−Ｋｇスケールで実行した。この例では、改善されたスケールアップ方法を開示する。
【０１２６】
改善されたスケールアップ合成方法は、１５０ｍｇをもたらした実施例３の上記実験室規模の方法と比較して、非常に大きなスケールアップである４０１５ＫｇのＬＵＴ０１４を生成した。図６の流れ図は、ＬＵＴ０１４（Ｃ１７０７１４７９−Ｆ）を調製するための改善されたスケールアップ方法、その段階、中間体およびＬＵＴ０１４（Ｃ１７０７１４７９−Ｆ）生成物の量、収率および純度を示している。
【０１２７】
この実施例は、多段階工程でのキログラム規模でのＬＵＴ０１４化合物の改善されたスケールアップ合成、引き続いて純度９９．３％の精製生成物をもたらす結晶化による精製を検証する。
【０１２８】
式Ｉ、Ｒ＝３−（トリフルオロメトキシ）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１４またはＣ１７０７１４７９−Ｆ）を製造するための改善されたスケールアップ方法の合成段階
段階１
0006912667.tif 000026
【０１２９】
段階２
0006912667.tif 000027
【０１３０】
段階３
0006912667.tif 000028
【０１３１】
段階４
0006912667.tif 000029
【０１３２】
段階５
0006912667.tif 000030
【０１３３】
段階６
0006912667.tif 000031
【０１３４】
この方法により、高純度（９９．３％）およびアッセイ９９．９％のＣ１７０７１４７９−Ｆ（化合物ＬＵＴ０１４）が得られた。
【０１３５】
実施例５
式Ｉ、Ｒ＝３−クロロ−４−フルオロフェニルの化合物（ＬＵＴ０１５）の合成
中間体３Ｅ−２の調製
0006912667.tif 000032
【０１３６】
イソプロパノール（２０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（２．００ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｂ−２（１．５７ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、窒素下、２０°ＣでＴＦＡ（１．０２ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）を一度に添加した。混合物を９０℃で１８時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１、Ｒｆ＝０．４３）は、反応が完了したことを示した。混合物を冷却し、混合物を濾過した。濾過ケークを少量のジクロロメタン（１０  ｍＬ）で洗浄すると、化合物３Ｅ−２（３．１０ｇ、粗）が黄色固体として得られ、これを次のステップに直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−４−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１０．７５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．９１（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄｄ，Ｊ＝６．４，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．８，Ｈｚ，１Ｈ），７．７２−７．７６（ｍ，１Ｈ），７．４９−７．５５（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ）．
【０１３７】
中間体３Ｅの調製
0006912667.tif 000033
【０１３８】
エタノール（３０ｍＬ）中化合物３Ｅ−２（３．１０ｇ、９．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（１０．５ｇ、４６．７ｍｍｏｌ、５．０当量）を一度に添加した。混合物を８５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−３４−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。暗色溶液を濃縮し、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ水溶液（１．３０ｍｏｌ／Ｌ、２５．０ｍＬ）で洗浄した。混合物を１０分間撹拌し、濾過した。有機相を分離し、水相をジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、化合物３Ｅ（２．５０ｇ、８．２９ｍｍｏｌ、収率８８．７％）が赤色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−３４−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
９．０１（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．８１−７．８７（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝６．０，Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），５．５０（ｓ，２Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ）．
【０１３９】
中間体４Ｅの調製
0006912667.tif 000034
【０１４０】
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中化合物３（２．００ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｅ（２．０２ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、３３．４ｍＬ、５．０当量）を滴加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル、Ｒｆ＝０．４３）は、反応が完了したことを示した。深赤色反応混合物を、水の滴加でクエンチし（２ｍＬ−氷浴冷却）、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（２００ｍＬ）に懸濁し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をＭＴＢＥ（３０．０ｍＬ）に懸濁し、１２時間攪拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｅ（２．００ｇ、３．４４ｍｍｏｌ、収率５１．５％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−３９−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１１．６９（ｓ，１Ｈ），９．６８（ｄ，Ｊ＝１．６  Ｈｚ，１Ｈ），９．６６（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｓ，１Ｈ），９．１１（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９３−７．９５（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．６３（ｍ，１Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝４．８  Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｄ，Ｊ＝９．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．０４−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝１２．０  Ｈｚ，１Ｈ），２．３４−２．４１（ｍ，６Ｈ），２．０２−２．１０（ｍ，３Ｈ），１．７６−１．７９（ｍ，１Ｈ）．
【０１４１】
式Ｉ、Ｒ＝３−クロロ−４−フルオロフェニルの化合物（ＬＵＴ０１５）の調製
0006912667.tif 000035
【０１４２】
化合物４Ｅ（２．００ｇ、３．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）をＨＣｌ水溶液（０．５Ｍ、６２．０ｍＬ、９．０当量）に懸濁し、１００℃に加熱し、２時間撹拌した。固体の大部分が溶解して、黄色溶液が得られた。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−４３−Ｐ１Ａ２）は、反応が完了したことを示した。熱溶液を濾過し、沸騰水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。Ｎａ２ＣＯ３（固体）でｐＨ値を９に調整した。混合物を濾過し、濾過ケークを分取ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．４６）によって精製すると、ＬＵＴ０１５（１７０ｍｇ、３３２ｕｍｏｌ、収率９．６４％、純度９７．０％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−４３−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１３．８４（ｓ，１Ｈ），１１．８４（ｓ，１Ｈ），９．７５（ｓ，１Ｈ），９．３４（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝４．４，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．８５−７．８８（ｍ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝９．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８  Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）．
【０１４３】
実施例６
式Ｉ、Ｒ＝２−フルオロ−４−ヨードフェニルの化合物（ＬＵＴ０１６）の合成
中間体３Ｆ−２の調製
0006912667.tif 000036
【０１４４】
イソプロパノール（２０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（２．００ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０℃で化合物３Ｆ−３（２．５５ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．２当量）およびトリフルオロ酢酸（１．０２ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、６６５ｕＬ、１．０当量）を添加した。得られた混合物を９０℃に加熱し、９０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．２４）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を濾過し、濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄し、濾過ケークを回収し、真空中で乾燥させると、化合物３Ｆ−２（２．８０ｇ、６．６２ｍｍｏｌ、収率７３．７％）が淡黄色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−２−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＭｅＯＤ
δ  ８．７１（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９１−７．９５（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ）．
【０１４５】
中間体３Ｆの調製
0006912667.tif 000037
【０１４６】
エタノール（２８ｍＬ）中化合物３Ｆ−２（２．８０ｇ、６．６２ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（７．４７ｇ、３３．１ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を８５℃に加熱し、８５℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．３０）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を２０℃に冷却し、５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ）に注ぎ、３分間撹拌し、濾過し、濾液をジクロロメタン（２０ｍＬ、１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、化合物３Ｆ（２．２０ｇ、粗）が赤色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−６−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  ７．７４（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｓ，２Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ）．
【０１４７】
中間体３Ｆの調製
0006912667.tif 000038
【０１４８】
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中化合物３（１．００ｇ、３．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｆ（１．３１ｇ、３．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１６．７ｍＬ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．２５、Ｒｆ−ＤＰ＝０．４０）は、反応が完了したことを示した。氷水（２ｍＬ）を０℃で滴加して反応混合物をクエンチし、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（５０ｍＬ）に懸濁し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄し、濾過して濾過ケークを得て、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｆ（１．１０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、収率４９．０％）が淡黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−１０−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  １１．６８（ｓ，１Ｈ），９．６３−９．６７（ｍ，１Ｈ），９．０８−９．１２（ｍ，２Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．０５−８．０６（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．６０（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．４６（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｑ，Ｊ＝４．４  Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝１１．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝１２．８  Ｈｚ，１Ｈ），３．７４−３．８０（ｍ，１Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．０５（ｔ，Ｊ＝１３．６  Ｈｚ，２Ｈ），１．６３−１．６８（ｍ，３Ｈ），１．１１（ｓ，２Ｈ）．
【０１４９】
式Ｉ、Ｒ＝２−フルオロ−４−ヨードフェニルの化合物（ＬＵＴ０１６）の調製
0006912667.tif 000039
【０１５０】
化合物４Ｆ（１．１０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１．０当量）をＨＣｌ（０．５Ｍ、２９ｍＬ、９．０当量）に窒素下２０℃で懸濁した。混合物を１００℃に加熱し、１００℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５２０１−１２−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。熱溶液を濾過し、沸騰水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を氷浴で冷却し、生成物を溶液から黄色固体として結晶化させた。固体を濾過し、飽和ＮａＣＯ３（１００ｍＬ）水溶液に添加した。混合物を１０分間撹拌し、濾過し、濾過ケークを水（５０ｍＬ）で洗浄し、粗生成物として回収した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊２５  ５ｕ；移動相：［水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５０％〜８０％、１１分）によって精製すると、ＬＵＴ０１６（１２５ｍｇ、２１２ｕｍｏｌ、収率１２．９％、純度９９．６％）が黄色固体として得られた。
１ＨＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−１２−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  １３．８１（ｓ，１Ｈ），１１．７９（ｓ，１Ｈ），９．７１（ｓ，１Ｈ），９．０４（ｓ，２Ｈ），８．７２（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｑ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｑ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝４．８  Ｈｚ，Ｊ＝２．８  Ｈｚ，１Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ）．
【０１５１】
実施例７
式Ｉ、Ｒ＝４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１７）の合成
中間体３Ｇ−２の調製
0006912667.tif 000040
【０１５２】
イソプロパノール（２０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（２．００ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｇ−１（２．１１ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、窒素下、２０°ＣでＴＦＡ（１．０２ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）を一度に添加した。混合物を９０℃で１８時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−１９−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。混合物を２０℃に冷却し、混合物を濾過した。濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄し、生成物（３．２０ｇ、８．３８ｍｍｏｌ、収率９３．３％）として白色固体として回収し、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−３−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１０．２１（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ）．
【０１５３】
中間体３Ｇの調製
0006912667.tif 000041
【０１５４】
エタノール（３０ｍＬ）中化合物３Ｇ−２（３．２０ｇ、８．３８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（９．４６ｇ、４１．９ｍｍｏｌ、５．０当量）を一度に添加した。混合物を８５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−２２−Ｐ１Ａ）は、反応が完了したことを示した。暗色溶液を濃縮し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ水溶液（１．３０ｍｏｌ／Ｌ、５０ｍＬ）で洗浄した。混合物を１０分間撹拌し、濾過した。フィルターを分離し、水相をジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、化合物３Ｇ（２．５０ｇ、７．１１ｍｍｏｌ、収率８４．８％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−２２−ｐ１ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
９．３４（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝８．８，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６５−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），５．６０（ｓ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ）．
【０１５５】
中間体４Ｇの調製
0006912667.tif 000042
【０１５６】
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中化合物３（２．００ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｇ（２．３５ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、３３．４ｍＬ、５当量）を滴加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ＝０．４５）は、反応が完了したことを示した。氷水（３ｍＬ）を滴加して深赤色反応混合物をクエンチし、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（１５０ｍＬ）に懸濁し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をＭＴＢＥ（１５０ｍＬ）に懸濁し、１２時間攪拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｇ（１．５０ｇ、１．４７ｍｍｏｌ、収率２２．１％、純度６２．０％）が赤色固体として得られた（ＬＣＭＳ：ＥＴ１５０６０−３２−Ｐ１Ａ１）。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−３２−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１１．６９（ｓ，１Ｈ），９．６６（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），９．６４（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．３３−８．４１（ｍ，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．６４（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．２２（ｍ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝４．８  Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝１０．８  Ｈｚ，１Ｈ），４．０３−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．７３−３．７９（ｍ，１Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），１．９９−２．０７（ｍ，２Ｈ），１．６２−１．８０（ｍ，３Ｈ）．
【０１５７】
式Ｉ、Ｒ＝４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１７）の調製
0006912667.tif 000043
【０１５８】
化合物４Ｇ（１．５０ｇ、２．３８ｍｍｏｌ、１．０当量）をＨＣｌ水溶液（０．５Ｍ、２８．５ｍＬ、６．０当量）に懸濁し、１００℃に加熱し、２時間撹拌した。固体の大部分が溶解して、黄色溶液が得られた。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−３６−Ｐ１Ａ２）は、反応が完了したことを示した。熱溶液を濾過し、沸騰水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。Ｎａ２ＣＯ３（固体）でｐＨ値を９に調整した。混合物を濾過し、濾過ケークを分取ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．６５）によって精製して固体０．３ｇを得た。固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ＊５ｕｍ；液相：［Ａ−Ｈ２Ｏ中１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３  ｉｎ；Ｂ−ＡＣＮ］  Ｂ％：５０％〜９５％、１２分］）によって精製すると、ＬＵＴ０１７（１５０ｍｇ、２６９ｕｍｏｌ、収率１１．３％、純度９８．０％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−３６−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１３．８４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１１．８３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），９．６０（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝７．６，４．８  Ｈｚ，２Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ）．
【０１５９】
実施例８
式Ｉ、Ｒ＝３，５−ジヒドロキシフェニルの化合物（ＬＵＴ０１９）の合成
中間体３Ｈ−２の調製
0006912667.tif 000044
【０１６０】
イソプロパノール（３０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（３．００ｇ、１３．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°Ｃで化合物３Ｈ−３（２．４８ｇ、１６．２ｍｍｏｌ、１．２当量）およびトリフルオロ酢酸（１．５４ｇ、１３．５ｍｍｏｌ、９９６ｍＬ、１．０当量）を添加した。得られた混合物を９０℃に加熱し、９０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．２４）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を濾過し、濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄し、濾過ケークを回収し、真空中で乾燥させると、化合物３Ｈ−２（４．５０ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、収率９８．４％）が黄色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−５−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＭｅＯＤ
δ  ８．７５（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，２Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），３．８６（ｓ，６Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．
【０１６１】
中間体３Ｈの調製
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【０１６２】
エタノール（４５ｍＬ）中化合物３Ｈ−２（４．５０ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（１５．０ｇ、６６．３ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を８５℃に加熱し、８５℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．３０）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を２０℃に冷却し、５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ）に注ぎ、５分間撹拌し、濾過し、濾液をジクロロメタン（２０ｍＬ、１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、化合物３Ｈ（３．８０ｇ、粗）が赤色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−７−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  ８．７７（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．２３−７．２７（ｍ，３Ｈ），６．１２（ｔ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），５．４８（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，６Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ）．
【０１６３】
中間体４Ｈの調製
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【０１６４】
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中化合物３（２．００ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｈ（２．０７ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、３３ｍＬ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ＳＭ＝０．４３、Ｒｆ−ＤＰ＝０．３０）は、反応が完了したことを示した。氷水（２．０ｍＬ）を０℃で滴加して反応混合物をクエンチし、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（５０ｍＬ）に懸濁し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄し、濾過して濾過ケークを得て、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｈ（２．３０ｇ、粗）が褐色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−１３−Ｐ１Ａ  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
δ  １１．６９（ｓ，１Ｈ），９．６６（ｄｄ，Ｊ＝６．０，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），９．１１（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．０４−８．０７（ｍ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝５．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．８９−６．９３（ｍ，１Ｈ），６．１５（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝１３．２  Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．９９−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．６３−１．８１（ｍ，３Ｈ），１．１０（ｓ，１Ｈ）．
【０１６５】
式Ｉ、Ｒ＝３，５−ジヒドロキシフェニルの化合物（ＬＵＴ０１９）の調製
0006912667.tif 000047
【０１６６】
化合物４Ｈ（１．２０ｇ、２．０４ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、窒素下０°ＣでＢＢｒ３（５．１１ｇ、２０．４ｍｍｏｌ、２．０ｍＬ、１０．０当量）を添加した。得られた混合物を２５℃に加温し、１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５２０１−１８−Ｐ１Ａ２）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を真空中で濃縮し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）に注ぎ入れ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊２５  ５ｕ；移動相：［水（０．０５％水酸化アンモニアｖ／ｖ）−ＭｅＯＨ］；Ｂ％：１５％〜５０％、１１分）によって精製すると、生成物ＬＵＴ０１９（２０．０ｍｇ、４０．８ｕｍｏｌ、収率２．００％、純度９７．１％）が黄色固体として得られた。
１ＨＮＭＲ：ＥＴ１５２０１−１８−Ｐ１Ａ２  ４００  ＭＨｚ  ＭｅＯＤ
δ  ９．６０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．０２（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄｄ，Ｊ＝３．２，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．９０−６．９３（ｍ，１Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，２Ｈ），６．０７（ｑ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）．
【０１６７】
実施例９
式Ｉ、Ｒ＝フェニル−３−スルホンアミドの化合物（ＬＵＴ０２０）の調製
中間体３Ｉ−２の調製
0006912667.tif 000048
【０１６８】
イソプロパノール（５０ｍＬ）中化合物３Ｂ−１（２．００ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）と３Ｉ−１（１．８６ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＴＦＡ（３．０７ｇ、２６．９ｍｍｏｌ、３．０当量）を一度に添加した。混合物を９０℃で１８時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−２０−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。混合物を２０℃に冷却し、混合物を濾過した。濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄し、回収すると、生成物化合物３Ｉ−２（３．２０ｇ、８．９３ｍｍｏｌ、収率９９．４％）が白色固体として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−５−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１０．１９（ｓ，１Ｈ），８．８２（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．８，Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５９（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ）．
【０１６９】
中間体３Ｉの調製
0006912667.tif 000049
【０１７０】
エタノール（３２ｍＬ）中化合物３Ｉ−２（３．２０ｇ、８．９３ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下２０°ＣでＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（１０．１ｇ、４４．７ｍｍｏｌ、５．０当量）を一度に添加した。混合物を８５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−２３−Ｐ１Ａ）は、反応が完了したことを示した。暗色溶液を濃縮し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＯＨ水溶液（１．３０ｍｏｌ／Ｌ、２０ｍＬ）で洗浄した。混合物を１０分間撹拌し、濾過した。フィルターを分離し、水相を真空中で濃縮した。固体をジクロロメタン：メタノール（８：１、２００ｍＬ）に溶解した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮すると、化合物３Ｉ（２．５０ｇ、７．６１ｍｍｏｌ、収率８５．３％）が赤色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−２３−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
８．９８（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝６．０，Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），５．４３（ｓ，２Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ）．
【０１７１】
中間体４Ｉの調製
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【０１７２】
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中化合物３（２．００ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物３Ｉ（２．１９ｇ、６．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素下０℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、３３．４ｍＬ、５．０当量）を滴加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．２０）は、反応が完了したことを示した。深赤色反応混合物を、水の滴加でクエンチし（３ｍＬ−氷浴冷却）、懸濁液中に白色固体を含有する淡オレンジ色溶液を得た。混合物を濃縮して黄色固体を得て、これを酢酸エチル（１００ｍＬ）に懸濁し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通して濾過して黄色溶液を得て、真空中で濃縮した。残渣をＭＴＢＥ（３０ｍＬ）に懸濁し、１２時間攪拌した。混合物を濾過し、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物４Ｉ（２．２０ｇ、粗）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−４０−Ｐ１Ａ１  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６（粗）
【０１７３】
式Ｉ、Ｒ＝フェニル−３−スルホンアミドの化合物（ＬＵＴ０２０）の調製
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【０１７４】
化合物４Ｉ（２．００ｇ、３．２９ｍｍｏｌ、１．０当量）をＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４１．１ｍＬ、５０当量）に懸濁し、３０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１５０６０−４５−Ｐ１Ａ１）は、反応が完了したことを示した。溶液を濾過し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で洗浄した。固体に水（１５ｍＬ）を添加した。Ｎａ２ＣＯ３（固体）でｐＨ値を９に調整した。混合物を濾過し、濾過ケークを分取ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．１０）によって精製して固体０．１９ｇを得た。固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ＊５ｕｍ；液相：［Ａ−Ｈ２Ｏ中１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３；Ｂ−ＡＣＮ］  Ｂ％：２５％〜５５％、１２分］によって精製すると、ＬＵＴ０２０（８５．０ｍｇ、１５９  ｕｍｏｌ、収率４．８３％、純度９８．０％）が黄色固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＥＴ１５０６０−４５−Ｐ１Ａ２  ４００  ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６
１３．８３（ｓ，１Ｈ），１１．８２（ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．４５−８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｓ，２Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８  Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）．
【０１７５】
実施例１０
本開示の化合物のＢＲａｆ阻害活性
このアッセイでは、Ｒが３−（トリフルオロメトキシ）フェニルである式Ｉの化合物（ＬＵＴ０１４）、およびＶ６００Ｅ突然変異を含むＢＲＡＦの既知の阻害剤であるベムラフェニブのＢＲａｆ阻害活性を、野生型ＢＲａｆおよびＶ６００Ｅ突然変異を含むＢＲＡＦで試験した。ＢＲａｆおよびＣＲａｆの既知の阻害剤であるＧＷ５０７４を、対照としてアッセイに含めた。ＬＵＴ０１４およびベムラフェニブは、１０μＭで始まる３倍連続希釈で１０用量ＩＣ５０モードで試験した。対照化合物のＧＷ５０７４は、２０μＭで始まる３倍連続希釈で１０用量ＩＣ５０モードで試験した。１０μＭ  ＡＴＰで反応を行った。
【０１７６】
このアッセイで得られたＩＣ５０値を以下の表に示す。
（表３）
0006912667.tif 000052
【０１７７】
実施例１１
初代ヒトケラチノサイトにおけるＥＲＫのリン酸化
一般的手順
理論に拘束されることを望まないが、発明者は、ケラチノサイトが皮膚副作用の部位である可能性が高く、ケラチノサイトにおけるＥＧＦＲおよび／またはその下流エフェクター（ＭＡＰＫ、ＭＥＫ、ＰＩ３Ｋなど）の阻害がこの副作用の根底にある機構である可能性が高いと考えている。この実験では、ヒトケラチノサイトにおけるＥＲＫリン酸化に対する本開示の化合物の効果を試験した。ＥＲＫのリン酸化は、その活性化を示す。
【０１７８】
ヒト正常ケラチノサイト細胞ＨＥＫａをＧｉｂｃｏ  Ｒｈｅｎｉｕｍから購入し、１０ｃｍ皿に播種し（３０００００個細胞／皿）、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌朝、培地を２時間飢餓培地に交換し、次いで、細胞を試験化合物でさらに２時間処理した。インキュベーション後、細胞をＲＩＰＡで溶解し、タンパク質抽出物をホスホ−ＥＲＫおよび総ＥＲＫについてウエスタンブロットによって分析した。未処理細胞および０．１％ＤＭＳＯ処理細胞を陰性対照として使用した。ＨＫＧＳ成長因子を陽性対照として使用した。
【０１７９】
ウエスタンブロット：総抽出物７．５μｇを１０％アクリルアミドゲルにローディングした。転写後、膜をＴＢＳＴ／５％脱脂乳でブロッキングし、次いで、マウス抗ホスホ−ＥＲＫ（ＴＢＳＴ  ５％ＢＳＡ中１：１０００、４°ＣでＯＮ）およびヤギ抗マウスＨＲＰ（ＴＢＳＴ  ５％ＢＳＡ中１：１００００、室温で１時間）とインキュベートした。ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅを使用して膜を露出させた。
【０１８０】
次いで、膜を０．５％アジ化ナトリウムと１時間インキュベートすることによって、ＨＲＰを不活性化した。洗浄およびＥＣＬ暴露後、シグナルが確実に存在しないように、膜をＴＢＳＴ／５％脱脂乳で１５分間再ブロッキングし、次いで、ウサギ抗総ＥＲＫ２（ＴＢＳＴ  ５％ＢＳＡ中１：５００、４°ＣでＯＮ）、ヤギ抗ウサギＨＲＰ（ＴＢＳＴ  ５％ＢＳＡ中１：５，０００、室温で１時間）とインキュベートし、最後に、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅを使用して露出させた。フィルムをスキャンし、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用してシグナルを定量化した。結果を、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫとして計算した。
【０１８１】
実施例１２
本開示の化合物−ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５、ＬＵＴ０１７によって誘導されるＥＲＫリン酸化
ＨＥＫａ細胞を、実施例１１に記載されるように０．３μＭおよび１μＭのＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５、ＬＵＴ０１７およびベムラフェニブで処理し、ＨＥＫａ細胞溶解物のウエスタンブロット分析を行った。ＨＫＧＳ成長因子を陽性対照として使用した。図１Ａは、０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図１Ｂは、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図１Ａのブロットの濃度測定分析を示す。図１Ｃは、１μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図１Ｄは、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図１Ｃのブロットの濃度測定分析を示す。
【０１８２】
実施例１３
化合物ＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１６およびＣ−１によって誘導されるＥＲＫリン酸化
ＨＥＫａ細胞を、実施例１１に記載されるように０．３μＭおよび１μＭのＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１６ならびに既知の化合物であるベムラフェニブおよびＣ−１（旧バッチおよび新バッチ）で処理し、ＨＥＫａ細胞溶解物のウエスタンブロット分析を行った。ＨＫＧＳ成長因子を陽性対照として使用した。化合物Ｃ−１は以下の構造を有する：
0006912667.tif 000053
C-1
【０１８３】
図２Ａは、０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図２Ｂは、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図２Ａのブロットの濃度測定分析を示す。図２Ｃは、１μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図２Ｄは、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図２Ｃのブロットの濃度測定分析を示す。
【０１８４】
実施例１４
化合物ＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１３、ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５、ＬＵＴ０１６、ＬＵＴ０１７、ＬＵＴ０２０およびＣ−１によって誘導されるＥＲＫリン酸化
ＨＥＫａ細胞を、実施例１１に記載されるように０．３μＭおよび１μＭのベムラフェニブ、Ｃ−１、ＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１３、ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５、ＬＵＴ０１６、ＬＵＴ０１７およびＬＵＴ０２０で処理し、ＨＥＫａ細胞溶解物のウエスタンブロット分析を行った。ＨＫＧＳ成長因子を陽性対照として使用した。図３Ａは、０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図３Ｂは、１μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図３Ｃは、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図３Ａおよび図３Ｂのブロットの濃度測定分析を示す。
【０１８５】
実施例１５
新規な化合物ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１７対Ｃ−１によって誘導されるＥＲＫリン酸化
ＨＥＫａ細胞を、実施例１１に記載されるように、０．００３μＭ、０．０３μＭおよび０．３μＭの濃度のＣ−１、ＬＵＴ０１４およびＬＵＴ０１７で処理し、ＨＥＫａ細胞溶解物のウエスタンブロット分析を行った。ＨＫＧＳ成長因子を陽性対照として使用した。図４Ａは、０．００３μＭ、０．０３μＭおよび０．３μＭの試験化合物で処理した際のホスホ−ＥＲＫ（上のパネル）および総ＥＲＫ（下のパネル）を示す。図４Ｂは、ホスホ−ＥＲＫ／総ＥＲＫ比の計算に基づく図４Ａのブロットの濃度測定分析を示す。
【０１８６】
実施例１６
ＭＩＡ  ＰａＣａ細胞の増殖に対する化合物−ＬＵＴ０１２、ＬＵＴ０１３、ＬＵＴ０１４、ＬＵＴ０１５、ＬＵＴ０１６、ＬＵＴ０１７、ＬＵＴ−０１９、ＬＵＴ０２０、Ｃ−１およびベムラフェニブの効果
この例では、ＭＩＡ  ＰａＣａ２  Ｋ−ｒａｓ細胞の増殖に対する化合物の効果を試験した。ＥＲＫリン酸化を誘導する化合物は、Ｍｉａ  ＰａＣａ細胞の増殖も誘導すると予想された。
【０１８７】
細胞を、９６ウェルプレートに５０００個細胞／ウェルで３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、飢餓培地に播種した。試験化合物を、０．００２μＭ〜１０μＭに及ぶさまざまな濃度で添加した。対照は、未処理細胞および０．１％ＤＭＳＯのビヒクルとした。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートし、次いで、ＡＴＰｌｉｔｅ増殖キット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を使用して増殖を試験した。各結果は６つのウェルの平均を表す。結果を、ＤＭＳＯ対照と比較した過剰増殖の％として示す。図５を参照されたい。
【０１８８】
最高の増殖をもたらした化合物の濃度をＤＭＳＯと比較した。ＤＭＳＯを１００％として計算した。７２時間後、Ｃ−１によって誘導されたＤＭＳＯ対照と比較した増殖％は３０％、ＬＵＴ０１３は１７３％、ＬＵＴ０１４は１１６％、ＬＵＴ０１５は２９％、ＬＵＴ０１６は１１０％、ＬＵＴ０１７は１７４％、ＬＵＴ０１２は２０％、ＬＵＴ０１９は７％、ＬＵＴ０２０は１２％であった。ベムラフェニブは、ＤＭＳＯと比較して１２％の増殖を示した。
【０１８９】
実施例１７
化合物Ｉ、Ｒ＝３−（トリフルオロメトキシ）フェニル（ＬＵＴ０１４）のキナーゼ選択性アッセイ試験
化合物調製およびアッセイ対照
全ての化合物を、１００％ＤＭＳＯ中５０倍の最終アッセイ濃度に調製した。化合物のこの使用ストックを、反応の最初の成分としてアッセイウェルに添加し、引き続いて残りの成分を添加した。標準ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）サービスでは、反応の開始前の化合物とキナーゼの間のプレインキュベーションステップはない。陽性対照ウェルは、目的の化合物を除く、反応の全ての成分を含有する；ただし、溶媒効果を制御するために、ＤＭＳＯ（最終濃度２％）をこれらのウェルに含める。ブランクウェルは、反応の全ての成分を含有し、目的の化合物を参照阻害剤に置き換えている。これにより、キナーゼ活性が消失し、ベースラインが確立される（キナーゼ活性０％が残る）。結果を表４に示す。
【０１９０】
（表４）−式Ｉ、Ｒ＝３−（トリフルオロメトキシ）フェニルの化合物（ＬＵＴ０１４）のキナーゼ選択性アッセイ試験
0006912667.tif 000054
【０１９１】
実施例１８
光毒性についての化合物のスクリーニング
一定のＢＲａｆ阻害剤は、光毒性を示すことが知られている。したがって、本開示の化合物を、３Ｔ３ナチュラルレッド取り込みアッセイ（ｎａｔｕｒａｌ  ｒｅｄ  ｕｐｔａｋｅ  ａｓｓａｙ）を使用して、光毒性についてスクリーニングした。
【０１９２】
手短に言えば、ＢＡＬＢ／ｃ−３Ｔ３マウス線維芽細胞（元々ＡＴＣＣから入手）を９６ウェルプレートに１ウェル当たり１２０００個細胞で播種し、２４時間増殖させた。試験化合物および陽性対照（クロルプロマジン）を可溶化し、ＤＭＳＯに連続希釈した。陰性対照（ヒスチジン）を可溶化し、ＨＢＳＳに希釈した。次いで、全ての試験品の希釈を最終試験濃度でＨＢＳＳに行った。アッセイの開始時に、増殖培地をプレートから除去し、試験薬剤希釈物で置き換えた。各濃度について６連で行った。細胞を試験品と暗所で１時間インキュベートし、ＵＶＡ光に曝露し（１８分間にわたって２．５Ｊ／ｃｍ２）、暗所で２４時間インキュベートした。並行した非照射プレートも、照射ではなく暗所で保管したことを除いて、同様に処理した。
【０１９３】
ニュートラルレッド染色のために、培地を除去し、２５μｇ／ｍＬのニュートラルレッド（Ｓｉｇｍａ）を含有する新鮮な培地を添加した。３時間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで洗浄し、細胞色素を５０％エタノール中１％酢酸で可溶化した。細胞ニュートラルレッドを、５４０ｎｍでの吸光度によって測定した。
【０１９４】
データ分析：ＩＣ５０（生存率を５０％低下させる濃度）を直線補間によって各条件について計算した。
【０１９５】
光刺激因子（ＰＩＦ）を計算した：ＰＩＦ＝ＩＣ５０（−Ｉｒｒ）／ＩＣ５０（＋Ｉｒｒ）
ＰＩＦ＞５は光毒性を示し；２＜ＰＩＦ＜５は光毒性の可能性を示し；ＰＩＦ＜２は光毒性がないことを示す
【０１９６】
さらに、完全な濃度−反応曲線を比較することによって、平均光効果（ＭＰＥ）を計算した。ＭＰＥは、ＩＣ５０のシフトによって正規化された等価用量の応答の差の加重平均である。
【０１９７】
ＭＰＥ＞０．１５は光毒性を示し；０．１＜ＭＰＥ＜０．１５は光毒性の可能性を示し；ＭＰＥ＜０．１は光毒性がないことを示す。
【０１９８】
（表５）：光毒性の評価
0006912667.tif 000055
【０１９９】
Ｃ−１５およびＣ−１９は光毒性を示した。Ｃ−１およびＬＵＴ−１０４は光毒性を示さなかった。
【０２００】
実施例１９
ＥＧＦＲ阻害剤の投与後のホスホ−ＥＲＫに対するＬＵＴ０１４のインビトロ効果
ＨＥＫａ細胞を、実施例１１に記載されるように、ＬＵＴ０１４およびＥＧＦＲ阻害剤、エルロチニブおよびセツキシマブで処理した。ＨＫＧＳを陽性対照として使用した。ホスホ−ＥＲＫに対するＬＵＴ０１４およびＥＧＦＲ阻害剤の効果を、実施例１１に記載されるようにウエスタンブロットによって測定した。
【０２０１】
図７および表６は、ＥＧＦＲ阻害剤の投与後のホスホ−ＥＲＫに対するＬＵＴ０１４の効果の結果を示す。
【０２０２】
（表６）−ホスホＥＲＫに対するＬＵＴ０１４およびＥＧＦＲＩの効果
0006912667.tif 000056
【０２０３】
ＬＵＴ０１４はＤＭＳＯ処理細胞と比較してホスホ−ＥＲＫを２００〜８００％増加させた。エルロチニブは、ＨＫＧＳ処理細胞と比較してホスホＥＲＫを減少させた。ＬＵＴ０１４は、エルロチニブで処理した細胞に添加すると、ホスホＥＲＫを増加させた。ＬＵＴ０１４は、セツキシマブで処理した細胞に添加すると、ホスホＥＲＫを増加させた。
【０２０４】
実施例２０
ＬＵＴ０１４を含む局所組成物を使用した透過試験
ＬＵＴ−０１４を含む局所組成物のエキソビボ透過および浸透実験を、ＭｅｄＦｌｕｘ−ＨＴ（商標）連続フロースルー拡散セルを使用して行った。拡散セルのドナー区画とレセプター区画との間に皮膚試料を配置した。局所組成物の拡散を、レセプター溶液として０．０１％Ｂｒｉｊを含むクエン酸／リン酸緩衝液（ｐＨ４．０）を使用して測定した。皮膚試料に透過したＬＵＴ０１４を、抽出溶媒として９０／１０アセトニトリル／水を使用して抽出した。
【０２０５】
２４時間後にレセプター溶液で観察されたＬＵＴ０１４の最大累積レベルは２ｎｇ／ｍＬ未満であった。
【０２０６】
実施例２１
例示的な化合物としてＬＵＴ０１４を使用した本化合物についての毒性試験を実行した。結果を以下に要約する。
【０２０７】
ＬＵＴ０１４を７日間、２５０、５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルでＷｉｓｔａｒラットに経口投与しても、死亡には至らなかった。
【０２０８】
ＬＵＴ０１４の経皮投与は、最大６日間、５ｍｇ／ｋｇ／日のレベルで、ミニブタで十分許容された。
【０２０９】
インビトロエイムス試験の結果は、ＬＵＴ０１４がネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の復帰突然変異アッセイおよび大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）の復帰突然変異アッセイで変異原性ではないことを示した。
【０２１０】
ＬＵＴ０１４は３以下のＩＶＩＳを誘発したため、ＢＣＯＰ試験で観察されたように、目の刺激にも重度の目の損傷にも分類は必要ない。
【０２１１】
ＬＵＴ０１４は非光毒性（３Ｔ３  ＮＲＵ）として分類される
【０２１２】
（表７）−毒性試験
0006912667.tif 000057
【０２１３】
実施例２２
第１／２相他施設２相試験を考案した。
【０２１４】
主要目的：
ＥＧＦＲ阻害剤を投与されている結腸直腸がん患者におけるＬＵＴ０１４の安全性および薬物動態を評価する。
【０２１５】
副次目的：
ＥＧＦＲ阻害剤を投与されている結腸直腸がん患者に発生するグレード１および２のざ瘡様病変の治療におけるＬＵＴ０１４の有効性を推定する。
【０２１６】
患者集団：
ざ瘡様病変を発症したＥＧＦＲ阻害剤を投与されている結腸直腸がん患者。
【０２１７】
方法論：
これは、最大耐量（ＭＴＤ）を決定し、ＬＵＴ０１４の薬物動態を確立し、ＥＧＦＲ阻害剤療法を受けており、ざ瘡様病変を発症した患者の治療におけるＬＵＴ０１４の有効性を推定する多施設、非盲検、用量漸増試験である。
【０２１８】
登録は、最初に、従来の３＋３漸増用量設計の３人の対象のコホートで行われる。ＥＧＦＲ阻害剤を投与されており、グレード１または２のざ瘡様病変を発症した患者を、ＬＵＴ０１４で４週間処置する。ＬＵＴ０１４ゲルを、入浴またはシャワー後に毎朝施用する。顔ならびに前胸部および後胸部の上部に施用する。ゲルの薄層を施用する。
【０２１９】
最初の３人の患者に用量制限毒性（ＤＬＴ）が発生しなかった場合、ＬＵＴ０１４の最初のコホート、または４週間の治療中にこのコホートが６人の患者になった場合の６人に１人の患者で、２番目のコホートを開始する。この第２の投与レジメンでは、患者は、４週間、入浴後に毎日、ＬＵＴ０１４を再び顔、さらに上前胸部および後胸部に施用する。このコホートで処置された最初の３人の患者でＤＬＴが観察されなかった場合、または第２のコホートが６人の患者になった場合の６人に１人の患者で、３人の患者の第３のコホート、またはこの第３のコホートが６人の患者になった場合６人の患者を処置する。これらの患者も、４週間、入浴後毎日、ＬＵＴ０１４を顔、前胸部および後胸部に施用する。
【０２２０】
各投与コホートについて、グレード３以上の毒性を構成する、国立がん研究所（ＮＣＩ）有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）ｖ４．０３に基づいてＤＬＴを経験する対象がいない場合、その後の３人の対象の群は次に高いＬＵＴ０１４投薬レジメンを受ける。ただし、３人の初期対象のうちの１人がＤＬＴを経験した場合、その投与レジメンの対象のコホートを６人の対象に拡大する。６人の対象のうちの少なくとも２人がＤＬＴを経験した場合、これを非耐量とみなす。
【０２２１】
ＭＴＤは、２人未満（最大６人のコホートのうち）の対象がＤＬＴを経験するＬＵＴ０１４の最高投与濃度として定義される。
【０２２２】
ＤＬＴの決定には、グレード３以上の毒性が発生し、独立した安全審査委員会により、もしかしたら、多分または絶対に試験薬物に関連すると判断される必要がある。
【０２２３】
試験の用量漸増段階の完了後、最大６０人の患者を登録し、ＭＴＤもしくはスポンサーが選択したより少ない用量のＬＵＴ０１４を受けるよう無作為化する、または同一に見えるビヒクルで処置する。ＬＵＴ０１４またはビヒクルを、ざ瘡様病変の証拠がある全ての領域にわたって皮膚に施用する。患者を４週間処置する。
【図１Ａ】
0006912667.tif 000060
【図１Ｂ】
0006912667.tif 000061
【図１Ｃ】
0006912667.tif 000062
【図１Ｄ】
0006912667.tif 000063
【図２Ａ】
0006912667.tif 000064
【図２Ｂ】
0006912667.tif 000065
【図２Ｃ】
0006912667.tif 000066
【図２Ｄ】
0006912667.tif 000067
【図３Ａ】
0006912667.tif 000068
【図３Ｂ】
0006912667.tif 000069
【図３Ｃ】
0006912667.tif 000070
【図４Ａ】
0006912667.tif 000071
【図４Ｂ】
0006912667.tif 000072
【図５−１】
0006912667.tif 000073
【図５−２】
0006912667.tif 000074
【図６】
0006912667.tif 000075
【図７Ａ】
0006912667.tif 000076
【図７Ｂ】
0006912667.tif 000077
【図７Ｃ】
0006912667.tif 000078