(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物であって、
【化１】
0006845939.tif 000029
式中、
ＸはＣＨおよびＮからなる群から選択され、
ＱはＣＨ３およびＨからなる群から選択され、
Ｒは、以下の式：
【化２】
0006845939.tif 000030
で示される基である、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ＸがＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＱがＨである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＱがＣＨ３である、請求項１または４に記載の化合物。
【請求項６】
３−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−６−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−７，８−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−５−オンである化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、希釈剤、および賦形剤からなる群から選択される少なくとも１つとを含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、イソキノリンおよびナフチドリン（ｎａｐｈｔｈｙｄｒｉｎ）化合物またはそれらの薬学的に許容される塩、ならびにそれらの化合物の治療用途を提供する。本発明のイソキノリンおよびナフチドリン化合物は、アポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）の阻害剤である。
【０００２】
ＡＳＫ１は、大きな分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼキナーゼキナーゼ（「ＭＡＰ３Ｋ」）ファミリーのメンバーである。ＡＳＫ１の活性化およびシグナル伝達は、広範囲の疾患と関連している。ＡＳＫ１を阻害する化合物が、ＡＳＫ１媒介症状の治療における使用に望まれている。
【０００３】
ＡＳＫ１を阻害する化合物が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療における使用に望まれている。非アルコール性脂肪性肝炎は、大滴性肝脂肪症、炎症性肝細胞風船様変性および線維症を特徴とする病因学的特定症状群を有する肝疾患である。現在、非アルコール性脂肪性肝炎の治療専用の承認された医薬品はない。非アルコール性脂肪性肝炎に罹患している患者に追加の治療選択肢を提供するための医薬品が必要とされている。
【０００４】
米国特許第８，７４２，１２６号は、ＡＳＫ１阻害剤としての５−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（６−（４−イソプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−イル）−２−フルオロ−４−メチルベンズアミドを開示している。
【０００５】
米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０３４２９４３号は、ＡＳＫ１阻害剤を使用して肝疾患を予防および／または治療する方法を開示している。
【０００６】
ＡＳＫ１阻害活性を有する化合物が必要とされている。
【０００７】
本発明は、式Ｉの化合物であって、
【化１】
0006845939.tif 000002
式中、
ＸはＣＨおよびＮからなる群から選択され、
ＱはＣＨ３およびＨからなる群から選択され、
Ｒは、
【化２】
0006845939.tif 000003
からなる群から選択される、化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００８】
一実施形態において、ＸはＣＨであり、ＱはＣＨ３である。
【０００９】
一実施形態において、ＸはＮであり、ＱはＨである。
【００１０】
一実施形態において、ＸはＣＨであり、ＱはＣＨ３であり、Ｒは
【化３】
0006845939.tif 000004
である。
【００１１】
一実施形態において、ＸはＣＨであり、ＱはＣＨ３であり、Ｒは
【化４】
0006845939.tif 000005
である。
【００１２】
一実施形態において、ＸはＮであり、ＱはＨであり、Ｒは
【化５】
0006845939.tif 000006
である。
【００１３】
一実施形態において、ＸはＮであり、ＱはＨであり、Ｒは
【化６】
0006845939.tif 000007
である。
【００１４】
一実施形態において、式Ｉの化合物は７−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−２−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−６−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−オンまたはその薬学的に許容される塩である。
【００１５】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、３−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−６−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−７，８−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−５−オン、またはその薬学的に許容される塩である。
【００１６】
本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物を提供する。
【００１７】
本発明は、治療を必要とする哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、ＡＳＫ１活性によって媒介される状態を治療する方法を提供する。本発明はまた、それを必要とする哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、肝疾患を治療する方法を提供する。本発明は、それを必要とする哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法を提供する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、治療に使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに、肝疾患の治療に使用するための本発明の化合物、その薬学的に許容される塩または薬学的組成物が提供される。さらに、ＮＡＳＨの治療に使用するための本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩または薬学的組成物が提供される。
【００１９】
別の実施形態では、肝疾患の治療用の医薬の製造に使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。好ましくは、医薬はＮＡＳＨの治療用である。
【００２０】
本発明の化合物は、好ましくは、化合物を生体利用可能にする任意の経路によって投与される薬学的組成物として製剤化される。より好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような薬学的組成物およびそれらを調製するための方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２）を参照されたい。
【００２１】
本発明の化合物は薬学的に許容される塩として提供することができる。「薬学的に許容される塩」とは、臨床的および／または獣医学的用途のために許容されると考えられる本発明の化合物の塩をいう。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）を参照されたい。
【００２２】
ヒトが好ましい哺乳動物である。本明細書中で使用される場合、「患者」とは、治療を必要とする哺乳動物を指す。本明細書で使用される場合、化合物の「有効量」または「治療有効量」という用語は、本明細書に記載のとおりＮＡＳＨ、慢性腎臓病、または糖尿病性腎症などの障害または疾患を治療するために有効な量または投薬量を指す。主治医の診断医は、当業者として、従来技術の使用によって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、有効量を容易に決定することができる。化合物の有効量または用量を決定する際に、投与される化合物、使用される場合は他の薬物の共投与、哺乳動物の種、そのサイズ、年齢、および全般的な健康状態、障害の程度または重症度、個々の患者の応答、投与の様式、投与される調製物の生物学的利用能特性、選択される投薬レジメン、他の併用薬の使用、およびその他の関連する状況を含むがこれらに限定されない多くの要因が考慮される。
【００２３】
薬学的組成物は、肝疾患、より具体的にはＮＡＳＨを治療するために有効な量で患者に投与される。患者を治療するために有効な適切な量または用量は、医療従事者によって決定され得る。
【００２４】
本明細書で使用される用語「治療」および「治療する」は、全てのプロセスを指すことを意図しており、既存の障害および／またはその症状の進行の遅延、中断、停止、制御、または停止があり得るが、必ずしも全ての症状の完全な排除を示すとは限らない。
【００２５】
本明細書で使用される「肝疾患」という用語は、ＡＳＫ１媒介に関連する肝臓の状態または症状、例えば代謝性肝疾患、脂肪症、肝線維症、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、肝硬変、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝虚血再灌流障害、および原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）を包含する。
【００２６】
用語「薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤」は、担体、希釈剤、および賦形剤が組成物の他の成分と薬学的に適合性であることを意味する。特定の実施形態では、薬学的組成物は経口投与用の錠剤またはカプセル剤として製剤化される。錠剤またはカプセル剤は、肝疾患、特にＮＡＳＨを治療するために有効な量で本発明の化合物を含み得る。
【００２７】
本明細書で使用される略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１，１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義される。「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指す。「ＡＤＰ」はアデノシン二リン酸を指す。「ＡＩＢＮ」はアゾビスイソブチロニトリルを指す。「ＡＴＰ」はアデノシン三リン酸を指す。「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指す。「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指す。「ＤＭＥＤＡ」は、Ｎ、Ｎ´−ジメチルエチレンジアミンを指す。「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコ改変イーグル培地を指す。「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指す。「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指す。「ＤＴＴ」はジチオトレイトールを指す。「ＥｔＯＨ」はエタノンまたはエチルアルコールを指す。「ＦＡ」はギ酸を指す。「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指す。「ＨＥＫ」はヒト胎児腎臓を指す。「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指す。「ＩＣ５０」は、その薬剤について可能な最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度を指す。「ＭＡＰ」は分裂促進因子活性化タンパク質を指す。「ＭｅＯＨ」はメタノールまたはメチルアルコールを指す。「ＭＯＰＳ」は（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）を指す。「ＮＢＳ」は、Ｎ−ブロモスクシンイミドを指す。「ＮＩＳ」は、Ｎ−ヨードスクシンヌードを指す。「ＮＰ−４０」は、ノニルフェノキシポリエトキシエタノールであるテルギトール型ＮＰ−４０を指す。「ｐＡＳＫ１」はリン酸化ＡＳＫ１を指す。「ＰＥ」は石油エーテルを指す。「ＴＢＡＦ」はフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムを指す。「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指す。「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。「ＴＭＳＣＮ」はトリメチルシリルシアニドを指す。「ｔ（Ｒ）」は保持時間を指す。
【００２８】
以下の調製物に記載されている中間体は、多数の窒素、ヒドロキシ、およびエステルなどの酸保護基を含み得る。可変保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に応じて、出現ごとに同じでも異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている。例えば、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｗｕｔｓ  ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．１９９１）を参照されたい。
【００２９】
本発明の化合物またはその塩は、当業者に周知の様々な手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下の調製物および実施例で説明されている。本発明の化合物またはその塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを異なる様式で組み合わせてもよい。各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、磨砕、および結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。他のものは、任意の新規な方法を含む以下の調製物および実施例に記載される方法および周知の構造的に類似の化合物の合成に類似する有機および複素環化学の標準的な技術によって製造できる。
【００３０】
全ての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義されたとおりである。試薬および出発物質は概して、当業者の１人にとって容易に入手可能である。他のものは、任意の新規な方法を含む以下の調製物および実施例に記載される方法および既知の構造的に類似の化合物の合成に類似する有機および複素環化学の標準的な技術によって製造できる。
【００３１】
調製物および実施例
調製物１
６−アミノピリジン−２−カルボヒドラジド
【化７】
0006845939.tif 000008
ＭｅＯＨ（１．５Ｌ）中のメチル６−アミノピリジン−２−カルボキシレート（１４５ｇ、９５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン水和物（１１８ｇ、２３１０ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を窒素雰囲気下の７５℃で１６時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、沈殿物を濾過により集め、真空下で乾かし、標題化合物（１３０ｇ、８９．７％）を白色の固体として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）δ９．１５（ｂｒ、１Ｈ）、７．５１（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．６０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．０７（ｂｒ、２Ｈ）、４．４７（ｂｒ、２Ｈ）。
【００３２】
調製物２
Ｎ，６‐ビス［（Ｅ）−ジメチルアミノメチレンアミノ］ピリジン‐２‐カルボアミド
【化８】
0006845939.tif 000009
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（６００ｇ、５０４０ｍｍｏｌ）中の６−アミノピリジン−２−カルボヒドラジド（６５．０ｇ、４２７ｍｍｏｌ）の混合物を９５℃で１６時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮して黄色の残渣を得る。残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に懸濁し、２５℃で３０分間撹拌する。生成した沈殿物を濾過によって集め、真空乾燥させることで標題化合物（９５．０ｇ、８４．８％）を白色の固体として得る。１  Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）δ８．８５（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０〜７．４５（ｍ、１Ｈ）、６．９１（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．１３（ｓ、３Ｈ）、３．００（ｓ、３Ｈ）、２．８６（ｓ、６Ｈ）
【００３３】
調製物３
６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−アミン
【化９】
0006845939.tif 000010
ＡＣＮ（４５０ｍＬ）および酢酸（１２０ｍＬ）中のＮ、６−ビス［（Ｅ）−ジメチルアミノメチレンアミノ］ピリジン−２−カルボキサミド（１０５．０ｇ、３６０ｍｍｏｌ）の溶液に、温度を３０℃未満に維持しながら、少量のプロパン−２−アミン（１００ｇ、１６９０ｍｍｏｌ）を添加する。得られた混合物を１１０℃で６０時間撹拌する。反応混合物を２５℃に冷却し、溶媒を減圧下で除去する。残渣を水（５００ｍＬ）に溶かし、ｐＨをＮａＯＨ水溶液（１Ｎ）で約１０に調整する。生じた沈殿物を濾過により集め、ＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶かし、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾かし、減圧下で濃縮して灰白色の残渣を得る。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に懸濁し、１５分間撹拌し、ＰＥ（２００ｍＬ）をゆっくり添加する。生じた沈殿物を濾過により集め、真空下で乾かし、標題化合物（４７．０ｇ、６２．９％）を灰白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０４．１（Ｍ＋Ｈ）、ＬＣＭＳ：ｔ（Ｒ）＝０〜３０％Ａ〜Ｂ中の０．５６５分、（Ｘｔｉｍａｔｅ  Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、３μｍ）。１  Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．７５（ｓ、１Ｈ）、７．５７（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．６５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．５２（ｓｐｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．５２（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）。
【００３４】
調製物４
２−クロロ−６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン
【化１０】
0006845939.tif 000011
ＤＣＭ（１２００ｍＬ）中の６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−アミン（６０．０ｇ、２８９．２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（１３３．２ｇ、５７８．４ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、０℃において亜硝酸ターシャリ−ブチル（１２４．８ｇ、１１５６．８ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を３０℃に温め、１７時間撹拌する。反応を、ＮａＨＣＯ３水溶液（１２００ｍＬ）の添加によりクエンチし、生成物をＤＣＭ（３×１５００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾かし、真空で濃縮して粗生成物（６４．３６３ｇ、２８９．２ｍｍｏｌ）を黄色の固体として得る。この物質を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から１％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、標題化合物（３６．４ｇ、５２．６％）を褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ：（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）２２３．０／２２５．０（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３７（ｓ、１Ｈ）、８．２６（ｄｄ、Ｊ＝０．８、７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３８（ｄｄ、Ｊ＝０．８、７．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．６７〜５．５７（ｍ、１Ｈ）、１．５９〜１．５４（ｍ、６Ｈ）および１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ＝１５０．６３、１５０．０３、１４８．３１、１４２．４９、１３９．８２、１２４．７２、１２２．３８、４９．１８、２３．７２。
【００３５】
調製物５
２−ブロモ−６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン
【化１１】
0006845939.tif 000012
ジブロモメタン（１５０ｍＬ）中の６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン−２−アミン（１０．０ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）の溶液に、２５℃においてベンジルトリエチルアンモニウムブロミド（４５．３ｇ、１９３ｍｍｏｌ）および亜硝酸ターシャリ−ブチル（４９．７ｇ、４８２ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を２５℃で６時間撹拌する。反応を、ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）の添加によりクエンチし、生成物をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾かし、真空中で濃縮する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の２．５％〜３．３％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、標題化合物（５．４ｇ、３７．７％）を黄色の固体として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３０（ｓ、１Ｈ）、８．２６〜８．１８（ｍ、１Ｈ）、７．６７〜７．６１（ｍ、１Ｈ）、７．４７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．６３〜５．４１（ｍ、１Ｈ）、１．５０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【００３６】
調製物６
６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン
【化１２】
0006845939.tif 000013
ＭｅＳＯ３Ｈ（１１８ｇ、１２２０ｍｍｏｌ、８０．０ｍＬ）を０℃でＤＣＭ（２００ｍＬ）中の５−ブロモインダン−１−オン（２５．０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）の混合物に添加する。ＮａＮ３（７．７８ｇ、１１８ｍｍｏｌ）をこの混合物に少しずつゆっくり添加する。次いで混合物をさらに３０分間撹拌する。反応混合物を２２℃で１６時間撹拌する。ＮａＯＨの水性混合物（２０重量％）でｐＨを１０に調整する。混合物をＤＣＭ（３×４５０ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を一体化させ、ＭｇＳＯ４上で乾かし、溶媒を減圧下で除去して粗製物質を黄色の油状物として得る。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＰＥ中の０％から５０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、標題化合物（１９．０ｇ、３４．８％）を黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）：２２５．８／２２７．８（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８（ｄｄ、Ｊ＝１．８、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、６．８４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、３．５７（ｄｔ、Ｊ＝２．８、６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．９８（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）。
【００３７】
調製物７
６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン
【化１３】
0006845939.tif 000014
１，４−ジオキサン（２００ｍＬ）および水（１０．０ｍＬ）中の６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（１９．０ｇ、８２．４ｍｍｏｌ）、ＣＨ３Ｂ（ＯＨ）２（２０．８ｇ、３２９ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（１８．４ｇ、１６５ｍｍｏｌ）の混合物に、窒素雰囲気下で［１，１´−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２．４６ｇ、３．２９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を窒素雰囲気下の１６時間１０５℃で撹拌する。懸濁液を珪藻土のパッドを通して濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（３×２５０ｍＬ）で洗浄する。一体化した濾液を水（１００ｍＬ）および食塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾かし、溶媒を減圧下で蒸発させる。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＰＥ中の０％から５０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、標題化合物（１３．０ｇ、９５．２％）を黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６２．０（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０２（ｓ、１Ｈ）、６．８９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、３．５５（ｄｔ、Ｊ＝２．９、６．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．９４（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、３Ｈ）。
【００３８】
調製物８
７−ヨード−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン
【化１４】
0006845939.tif 000015
Ｈ２ＳＯ４（２００ｍＬ）中の６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（１０．０ｇ、６０．３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＮＩＳ（１４．０ｇ、６０．３ｍｍｏｌ）を少しずつゆっくりと添加し、反応混合物を−１０℃で３０分間撹拌する。反応混合物を氷水（４５０ｍＬ）に注ぎ入れ、溶液をＥｔＯＡｃ（３×６００ｍＬ）で抽出する。一体化した有機抽出液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液と食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾かし、濾過し、濃縮して残渣とする。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＰＥ中の０％から５０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、標題化合物（２２．０ｇ）を黄色の固体として得る。固体をＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／２０（３００ｍＬ）で粉砕し、濾過して、標題化合物（７．５４ｇ、３３．０％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８８．０（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４５（ｓ、１Ｈ）、７．０９（ｓ、１Ｈ）、６．９３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、３．５４（ｄｔ、Ｊ＝２．８、６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．８９（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．４４（ｓ、３Ｈ）。
【００３９】
調製物９
７−（１−イソプロピルピラゾール−４−イル）−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン
【化１５】
0006845939.tif 000016
１，４−ジオキサン（５．５ｍＬ）および水（０．７ｍＬ）中の７−ヨード−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（１７８．０ｍｇ、０．５８９０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−イソプロピル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピラゾール（０．１１４７ｇ、０．４７１２ｍｍｏｌ）、１，１´−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）二塩化物ジクロロメタン錯体（０．０４９１ｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．１６３ｇ、１．１７８ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を窒素で脱気し、マイクロ波条件下、１００℃で２時間撹拌する。混合物を２ｃｍシリカゲルカートリッジで濾過し、溶媒を真空中で除去する。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から４％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、標題化合物（１４２．０ｍｇ、８５．０５％）を黄色の油状物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７０．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００４０】
調製物１０
７−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン
【化１６】
0006845939.tif 000017
ＤＭＳＯ（２．５ｍＬ）中の７−ヨード−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（４４６．０ｍｇ、１．４７６ｍｍｏｌ）、４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール（２１８．４ｍｇ、１．９１９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｋ２ＣＯ３（０．４０８ｇ、２．９５２ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をＮ２流で５分間脱気する。Ｌ−プロリン（０．０３４ｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（０．０５６２ｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）を順次添加し、得られた混合物をマイクロ波条件下、１３０℃で５時間撹拌する。反応混合物を水（３０ｍＬ）でゆっくりクエンチする。水相をＥｔＯＡｃ（２×８０ｍＬ）で抽出し、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、蒸発乾固させる。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から４％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、標題化合物（０．１９８ｇ、４７．６８％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６８．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００４１】
調製物１１
５−ブロモ−２−（ブロモメチル）ピリジン−３−カルボン酸エチル
【化１７】
0006845939.tif 000018
ＣＣｌ４（１００ｍＬ）中の５−ブロモ−２−メチル−ピリジン−３−カルボン酸エチル（９．００ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）およびＮＢＳ（６．６３ｇ、３７．２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ２雰囲気下でＡＩＢＮ（６０５ｍｇ、３．６９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、８０℃で１６時間撹拌する。反応を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２００ｍＬ）でクエンチし、混合物をＤＣＭ（３×３５０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＰＥ中の０％から５％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、標題化合物（８．３０ｇ、６４．８％）を赤色の半固体として得る。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）：３２１．８／３２３．８／３２５．８（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．７４（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．３９（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．９８（ｓ、２Ｈ）、４．４４（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．４４（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【００４２】
調製物１２
５−ブロモ−２−（シアノメチル）ピリジン−３−カルボン酸エチル
【化１８】
0006845939.tif 000019
ＣＨ３ＣＮ（１００ｍＬ）中のエチル５−ブロモ−２−（ブロモメチル）ピリジン−３−カルボキシレート（７．２０ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＴＭＳＣＮ（３．１５ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（３１．１ｍＬ、３１．１ｍｍｏｌ）中のＴＢＡＦ（１．０ｍｏｌ／Ｌ）を添加する。反応混合物を２０℃で２時間撹拌する。混合物を水（１００ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾かし、溶媒を減圧下で除去する。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＰＥ中の０％から１０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、標題化合物（５．００ｇ、５４．０％、純度約６５％）を白色の半固体として得る。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）：２６８．９／２７０．９（Ｍ＋Ｈ）。
【００４３】
調製物１３
３−ブロモ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン
【化１９】
0006845939.tif 000020
ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）中のエチル５−ブロモ−２−（シアノメチル）ピリジン−３−カルボキシレート（４．６４ｇ、１０．４ｍｍｏｌ、６０．２質量％）の混合物に、ラネーニッケル（水中の５０質量％、０．４６４ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を水素（１０３ｋＰａ）下の５０℃で２時間撹拌する。懸濁液を珪藻土のパッドを通して濾過し、濾過ケーキをＥｔＯＨ（３×１２０ｍＬ）で洗浄する。濾液を濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から３．３％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、残渣（３．５ｇ）を黄色の固体として得る。この物質を分取ＨＰＬＣによりさらに精製する。ＬＣカラム：  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ２５０×５０ｍｍ×１０μｍ。Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）。Ｂ：ＡＣＮ、勾配：Ａ中５〜３５％Ｂ。カラム温度：室温。流速：１１０ｍＬ／分。分取ＨＰＬＣ精製後、溶離液を蒸発させて有機溶媒を除去する。残留水溶液のｐＨをＮａ２ＣＯ３（固体）でｐＨ約１０に調整し、ＤＣＭ（３×２００ｍＬ）で抽出する。一体化した有機抽出物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、濃縮して標題化合物（８００ｍｇ、３１．２％）を黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）：２２６．９／２２８．９（Ｍ＋Ｈ）、ＬＣＭＳ：ｔ（Ｒ）＝１．５５２分、（Ｘｔｉｍａｔｅ  Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、３μｍ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．６９（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．４５（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．５０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、３．６６（ｄｔ、Ｊ＝２．８、６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．１７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）。
【００４４】
調製物１４
３−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン
【化２０】
0006845939.tif 000021
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の３−ブロモ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン（０．１００ｇ、０．４３７ｍｍｏｌ）および４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール（０．０７０９ｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．１８１ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をＮ２流で５分間脱気する。ＤＭＥＤＡ（０．０１９３ｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（０．０８３２ｇ、０．４３７ｍｍｏｌ）を順次添加し、得られた混合物をＮ２下の１１０℃で１６時間撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍＬ）で抽出し、飽和食塩水（３×２５ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、蒸発乾固させる。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から５％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、標題化合物（０．０６０ｇ、４８．６％）を薄緑色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５５．０（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．７４（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．３３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．８１（ｓ、１Ｈ）、７．１０（ｓ、１Ｈ）、６．３１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、３．７３（ｄｔ、Ｊ＝３．２、６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．３９〜３．１５（ｍ、２Ｈ）、１．９９〜１．９０（ｍ、１Ｈ）、０．９６−０．８８（ｍ、４Ｈ）
【００４５】
調製物１５
３−（１−イソプロピルピラゾール−４−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン
【化２１】
0006845939.tif 000022
１，４−ジオキサン（４．００ｍＬ）および水（１．００ｍＬ）中の３−ブロモ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン（０．０７５０ｇ、０．３２８ｍｍｏｌ）および１−イソプロピル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピラゾール（０．１１６ｇ、０．４９２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（０．１０４ｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）および  Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０７５９ｇ、０．０６５５ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をＮ２下の１１０℃で１６時間撹拌する。混合物をＤＣＭ（２×７５ｍＬ）で抽出し、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、蒸発乾固させる。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から３．３％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、標題化合物（０．０８００ｇ、９０．５％）を白色の固体として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．７１（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．３１（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｓ、１Ｈ）、６．００（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．４９（ｓｐｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．６１（ｄｔ、Ｊ＝３．２、６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．１４（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．５０（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【００４６】
実施例１
７−（１−イソプロピルピラゾール−４−イル）−２−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−６−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−オン
【化２２】
0006845939.tif 000023
２−クロロ−６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（１５０．４ｍｇ、０．６０１１ｍｍｏｌ）、７−（１−イソプロピルピラゾール−４−イル）−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（１４２．０ｍｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）、ＸａｎｔＰｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ３（０．０５００１ｇ、０．０５００９ｍｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（ＸａｎｔＰｈｏｓ）（０．０２９９ｇ、０．０５００９ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（０．２８５６ｇ、０．８７６６ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（４．０ｍＬ）と一緒に添加する。得られた混合物を１１０℃に加熱し、マイクロ波条件下で３時間撹拌する。混合物を２ｃｍシリカゲルカートリッジで濾過し、溶媒を真空中で除去する。残渣を分取ＨＰＬＣによりさらに精製する：ＬＣカラム：ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８  ３０×１００ｍｍ  ５μｍ。Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＦＡ）。Ｂ：ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、勾配：０〜１０分におけるＡ中の３８〜５３％Ｂ、１７分で停止。カラム温度：室温。流速：３０ｍＬ／分、ｔ（Ｒ）＝８．８分（ＵＶ）。物質を水に溶かし、凍結乾燥させて標題化合物（１３０．０ｍｇ、５４．１１％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６．３（Ｍ＋Ｈ）。
【００４７】
実施例２
７−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−２−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−６−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１−オン
【化２３】
0006845939.tif 000024
２−クロロ−６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（９９．２ｍｇ、０．３９７ｍｍｏｌ）、７−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−６−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（９３．０ｍｇ、０．３３１ｍｍｏｌ）、ＸａｎｔＰｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ３（０．０３３ｇ、０．０３３１ｍｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（ＸａｎｔＰｈｏｓ）（０．０２０１ｇ、０．０３３１ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（０．１８８ｇ、０．５７８ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（３．０ｍＬ）中で一緒に添加する。得られた混合物を１１０℃に加熱し、マイクロ波条件下で３時間撹拌する。混合物を２ｃｍシリカゲルカートリッジで濾過し、溶媒を真空中で除去する。残渣を分取ＨＰＬＣによりさらに精製する：ＬＣカラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３０×１００ｍｍ  ５μｍ。Ａ：Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）。Ｂ：ＡＣＮ、勾配：０〜１２分におけるＡ中の２７〜４２％Ｂ、１７分で停止。カラム温度：室温。流速：３５ｍＬ／分、ｔ（Ｒ）＝７．９分（ＵＶ）。この物質を水に溶かし、凍結乾燥させて標題化合物（５０．０ｍｇ、３１．７％）を白色の固形物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５４．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００４８】
実施例３
３−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−６−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−７，８−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−５−オン。塩酸塩
【化２４】
0006845939.tif 000025
１，４−ジオキサン（４．００ｍＬ）中の２−ブロモ−６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（０．０８１９ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）、３−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン（０．０６０ｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（０．２０８ｇ、０．６３７ｍｍｏｌ）の溶液をＮ２下で１分間撹拌する。ＸａｎｔＰｈｏｓ（０．０３６８ｇ、０．０６３７ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０２００ｇ、０．０２１２ｍｍｏｌ）を順次添加し、得られた混合物をＮ２下の１１０℃で５時間撹拌する。混合物をＤＣＭ（２×７５ｍＬ）で希釈し、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、蒸発乾固させる。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりＤＣＭ中の０％から５％のＭｅＯＨの勾配で溶出して精製し、残渣を得る。この物質を分取ＨＰＬＣによりさらに精製する：ＬＣカラム：ＹＭＣ−アクタストライアートＣ１８  １５０×３０  ５μｍ；Ａ：Ｈ２Ｏ（０．０５％ＨＣｌ）。Ｂ：ＡＣＮ、勾配：Ａ中０〜７０％Ｂ。カラム温度：室温。流速：２５ｍＬ／分。物質を水に溶かし、凍結乾燥させて標題化合物（０．０４６８ｇ、４４．６％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１．０（Ｍ＋Ｈ）、ＬＣＭＳ：ｔ（Ｒ）＝１０〜８０％Ａ〜Ｂ中１．３０３分、４分クロマトグラフィー（Ｘｔｉｍａｔｅ  Ｃ１８  ２．１×３０ｍｍ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ９．８４（ｓ、１Ｈ）、９．５２（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、９．０９（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．７８（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．２５〜８．２１（ｍ、１Ｈ）、８．１７（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．１１〜８．０７（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｓ、１Ｈ）、５．７０（ｔｄ、Ｊ＝６．４、１３．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５１（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．１６〜２．０１（ｍ、１Ｈ）、１．７１（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）、１．２２〜１．１５（ｍ、２Ｈ）、０．９９−０．９３（ｍ、２Ｈ）
【００４９】
実施例４
３−（１−イソプロピルピラゾール−４−イル）−６−［６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−２−ピリジル］−７，８−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−５−オン
【化２５】
0006845939.tif 000026
１，４−ジオキサン（６．００ｍＬ）中の３−（１−イソプロピルピラゾール−４−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−１，６−ナフチリジン−５−オン（０．０８００ｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）および２−ブロモ−６−（４−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン（０．１１４ｇ、０．３８６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．２４２ｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をＮ２流で５分間脱気する。ＸａｎｔＰｈｏｓ（０．０３４３ｇ、０．０５９３ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０２８０ｇ、０．０２９７ｍｍｏｌ）を順次添加し、得られた混合物をＮ２下、１１０℃で３時間撹拌する。混合物をＤＣＭ（２×７５ｍＬ）で抽出し、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾かし、濾過し、蒸発乾固させる。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、ＤＣＭ中の０％から５％ＭｅＯＨの勾配で溶出して精製する。残渣を水およびＣＨ３ＣＮから再結晶し、凍結乾燥により乾かし、標題化合物（０．１１６５ｇ、８５．６％）を明黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４３．１（Ｍ＋Ｈ）、ＬＣＭＳ：ｔ（Ｒ）＝１０〜８０％のＡ〜Ｂ中の１．９１８分  Ａ：Ｈ２Ｏ（０．０５％ＨＣｌ）。Ｂ：ＡＣＮ、４分間クロマトグラフィー（Ｘｔｉｍａｔｅ  Ｃ１８  ２．１×３０ｍｍ）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．８３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．５０（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．３８（ｓ、１Ｈ）、８．１４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．０６〜７．９９（ｍ、１Ｈ）、７．９６〜７．９１（ｍ、１Ｈ）、７．８８（ｓ、１Ｈ）、７．８１（ｓ、１Ｈ）、５．５２（クイン、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．６２〜４．５２（ｍ、１Ｈ）、４．３６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．３５（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．５８（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．５７（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、６Ｈ）
【００５０】
生物学的アッセイ
ＡＳＫ１酵素アッセイにより測定されたＡＳＫ１阻害剤の効果
このアッセイの目的は、ＡＳＫ１によるＡＤＰの生成に対するＡＳＫ１阻害剤の効果を決定することである。グルタチオンＳ−トランスフェラーゼでタグ付けされた組換えヒトＡＳＫ１（ｈＡＳＫ１）触媒ドメインが使用され、ヒスチジンタグ付き全長ヒトＭＡＰキナーゼキナーゼ６（ＭＫＫ６）およびＡＴＰは、それぞれ基質および補因子である。
【００５１】
以下の変更を加えて製造元のプロトコールに従ってＡＤＰ−Ｇｌｏ（商標）Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｖ９１０２）を使用し、アッセイを行う。簡単に説明すると、緩衝液（１０ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、１０ｍＭ酢酸Ｍｇ、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０２５％ＮＰ−４０、０．０５％ＢＳＡ、１．５％グリセロール）中のｈＡＳＫ１（０．２５ｎＭ）およびＭＫＫ６（３００ｎＭ）を、１５分間１０．００μＭから０．１７ｎＭの範囲の様々な濃度のＡＳＫ１阻害剤と一緒にインキュベートし、続いて室温で３０分間ＡＴＰ（１００μＭ）と一緒にインキュベートする。ＡＤＰ−Ｇｌｏ（商標）Ｒｅａｇｅｎｔを添加してキナーゼ反応を停止させ、残りのＡＴＰを使い果たす。次に、Ｋｉｎａｓｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔを添加してＡＤＰをＡＴＰに変換する。新しく合成されたＡＴＰをルシフェラーゼ／ルシフェリン反応を用いて測定し、発光をＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって決定する。１００％および０％の阻害についてＤＭＳＯビヒクルおよび標準として５−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−フルオロ−４−メチル−Ｎ−｛６−［４−（プロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリジン−２−イル｝ベンズアミド  の効果をそれぞれ用いて、発光強度をＧｅｎｅＤａｔａにより分析し、４パラメータ用量反応−阻害剤ロジスティック曲線に当てはめてＩＣ５０値を決定する。
【００５２】
本明細書中の実施例１〜４の化合物は、本質的に上記のとおりに試験され、以下の表１に示すとおりのＩＣ５０値を示す。
【表１】
0006845939.tif 000027
【００５３】
これらの結果は、実施例１−４の化合物が、表１に示すように、ＡＳＫ１酵素活性を阻害することを示している
【００５４】
ＡＳＫ１自己リン酸化（Ｔｈｒ８３８）アッセイにより決定されるＡＳＫ１阻害剤効果
このアッセイの目的は、ヒトＡＳＫ１を過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞におけるＴｈｒ８３８でのＨ２Ｏ２刺激ＡＳＫ１自己リン酸化に対するＡＳＫ１阻害剤の効果を決定することである。
【００５５】
ヒトインフルエンザヘマグルチニン−（ＨＡ−）標識全長ヒトＡＳＫ１を過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ中で３７℃および５％ＣＯ２において維持する。アッセイのために、細胞をマトリゲル被覆９６ウェルプレートに播種し（２５，０００細胞／ウェル）、一晩インキュベートする。細胞を１０．００μＭ〜０．１７ｎＭの範囲の様々な濃度のＡＳＫ１阻害剤で１時間処理し、続いて１ｍＭのＨ２Ｏ２で１０分間刺激する。次いで、細胞をホスファターゼ阻害剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｃａｔａｌｏｇ＃７８４３０）を含有するＨｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ−Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ（登録商標））溶解緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、Ｃａｔａｌｏｇ＃６４ＫＬ１ＦＤＦ）で溶解させる。それぞれ６２０および６６６ｎｍの発光および励起波長を備えたＥｎｖｉｓ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）において、Ｃｉｓｂｉｏによってカスタマイズされた抗ＨＡおよび抗ｐＡＳＫ１（Ｔｈｒ８３８）抗体対を使用して、ｐＡＳＫ１をＨＴＲＦ（登録商標）によって定量する。６６５ｎｍおよび６２０ｎｍでの蛍光強度の比をＧｅｎｅＤａｔａによって分析し、１００％および０％阻害としてのＤＭＳＯビヒクルおよび標準としての５−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−フルオロ−４−メチル−Ｎ−｛６−［４−（プロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリジン−２−イル｝ベンズアミドの効果をそれぞれ用いて、ＩＣ５０値を決定するために４パラメータ用量反応−阻害剤ロジスティック曲線に当てはめる。
【００５６】
本明細書中の実施例１−４の化合物は、本質的に上記のとおりに試験され、以下の表２に示すとおりのＩＣ５０値を示す。
【表２】
0006845939.tif 000028
【００５７】
これらの結果は、実施例１〜４の化合物が、上記表２に示すように、ＨＥＫ２９３細胞でＴｈｒ８３８でのＨ２Ｏ２刺激性ＡＳＫ１自己リン酸化を阻害することを示している。