(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体であって、前記ＬＣＶＲが、配列番号４または５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号６または７のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、を含み、かつ前記ＨＣＶＲが、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含む、抗体。
【請求項２】
ＬＣＤＲ１が、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２が、配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＬＣＤＲ１が、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２が、配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＬＣＶＲが、配列番号１０または１１のアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号１３または１４のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項１０】
２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含み、各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３または１４であり、各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
前記各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３であり、前記各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１４であり、前記各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
治療において使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５】
Ａβの沈着を特徴とする状態の治療に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態の治療に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態の治療に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態と診断された患者の認知低下または機能低下を遅らせるのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の認知低下または機能低下を遅らせるのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
脳Ａβアミロイドプラーク負荷を減少させるのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２１】
ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者におけるＡβの沈着を特徴とする状態を治療するのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する患者におけるＡβの沈着を特徴とする状態を治療するのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を治療するのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を治療するのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を予防するのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を予防するのに使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２７】
臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態の予防に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２８】
前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態の予防に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２９】
Ａβの沈着を特徴とする状態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３０】
臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３１】
前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３２】
臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態と診断された患者の認知低下または機能低下を遅らせるための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３３】
前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の認知低下または機能低下を遅らせるための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３４】
脳Ａβアミロイドプラーク負荷を減少させるための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３５】
ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者におけるＡβの沈着を特徴とする状態を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３６】
常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する患者におけるＡβの沈着を特徴とする状態を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３７】
ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３８】
常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項３９】
ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を予防するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４０】
常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を予防するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４１】
臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態を予防するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４２】
前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態を予防するための薬剤の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の有効量を含む、Ａβの沈着を特徴とする状態を治療するための薬学的組成物。
【請求項４４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の有効量を含む、臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態を治療するための薬学的組成物。
【請求項４５】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体の有効量を含む、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態を治療するための薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ヒトＮ３ｐＧｌｕアミロイドベータペプチドに結合する抗体、およびアミロイドベータ（本明細書ではＡβまたはＡベータと呼ぶ）ペプチドに関連する疾患の治療におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
アミロイド前駆体タンパク質の切断により、サイズが３８〜４３アミノ酸の範囲のＡβペプチドが得られる。可溶性形態から高βシート含有量を有する不溶性形態へのＡβの変換、および脳内の神経突起および脳血管プラークとしてのこれらの不溶性形態の沈着は、アルツハイマー病（ＡＤ）、ダウン症候群、および脳アミロイド血管障害（ＣＡＡ）を含む、多くの病気に関連している。
【０００３】
プラークに見られる沈着物は、Ａβペプチドの不均一な混合物で構成されている。Ｎ３ｐＥ、ｐＥ３−Ｘ、またはＡβＰ３−Ｘとも呼ぶＮ３ｐＧｌｕ  Ａβは、ＡβペプチドのＮ末端切断型であり、主にプラークに見出される。Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβは、ヒトＡβのＮ末端に最初の２つのアミノ酸残基がなく、３番目のアミノ酸位置にグルタミン酸に由来するピログルタメートを持っている。Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβペプチドは脳に沈着したＡβの微量成分であるが、研究により、Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβペプチドは強い凝集特性を持ち、沈着カスケードの初期に蓄積することが示されている。
【０００４】
Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβに対する抗体は、当技術分野で知られている。例えば、米国特許第８，６７９，４９８号は、ヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体（例えば、Ｂ１２Ｌ、ＬＹ３００２８１３としても知られる）およびアルツハイマー病などの疾患を該抗体で治療する方法を開示している。臨床試験では、抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体に対する抗薬物抗体（ＬＹ３００２８１３）に関する懸念が示されている。この試験で治療されたほぼ全員の血漿中に抗薬物抗体が存在し、免疫反応に関連する問題はＬＹ３００２８１３の半減期の短縮であった。したがって、代替の抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体の必要性が依然として残っている。
【０００５】
本発明の抗体は、インビボで低級プラーク（Ａβ１−４２）であるＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合するが、減少した免疫原性も示す、抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体を提供しようとするものである。そのような抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、血漿タンパク質への非特異的結合の減少も示す場合がある。加えて、そのような抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、予測されるＴ依存性Ａｂ応答の減少ももたらし得る。そのような抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体はまた、より良い投与スケジュールのための薬物動態を有する有力なヒト治療薬についての抗体半減期の増加および安全性プロファイルの改善を提供し得る。本発明の範囲内の抗体は、これらの望ましい特徴の少なくとも１つを保有しようとするものである。
【０００６】
本発明は、ＬＣＶＲとＨＣＶＲとを含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、該ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、該ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、さらにアミノ酸配列が、ＬＣＤＲ１については配列番号４または５、ＬＣＤＲ２については配列番号６または７、ＬＣＤＲ３については配列番号８、ＨＣＤＲ１については配列番号１、ＨＣＤＲ２については配列番号２、およびＨＣＤＲ３については配列番号３である。特定の実施形態では、抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、ＬＣＤＲ１については配列番号４のアミノ酸配列、ＬＣＤＲ２については配列番号６のアミノ酸配列、ＬＣＤＲ３については配列番号８のアミノ酸配列、ＨＣＤＲ１については配列番号１のアミノ酸配列、ＨＣＤＲ２については配列番号２のアミノ酸配列、およびＨＣＤＲ３については配列番号３のアミノ酸配列、を含む。別の特定の実施形態では、抗Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、ＬＣＤＲ１については配列番号５のアミノ酸配列、ＬＣＤＲ２については配列番号７のアミノ酸配列、ＬＣＤＲ３については配列番号８のアミノ酸配列、ＨＣＤＲ１については配列番号１のアミノ酸配列、ＨＣＤＲ２については配列番号２のアミノ酸配列、およびＨＣＤＲ３については配列番号３のアミノ酸配列を含む。
【０００７】
本発明はまた、ヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号１０または配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む。特定の実施形態では、本発明は、ヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、該抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む。別の特定の実施形態では、本発明は、ヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、該抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む。
【０００８】
一実施形態では、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と、重鎖（ＨＣ）と、を含むヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１３または１４であり、ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１２である。より特定の実施形態では、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）と、を含むヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１３であり、ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１２である。別の特定の実施形態では、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）と、を含むヒトＮ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する抗体を提供し、ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１４であり、ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１２である。さらなる態様では、本発明は、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む抗体を提供し、各ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１３または１４であり、各ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１２である。より特定の実施形態では、本発明は、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む抗体を提供し、各ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１３であり、各ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１２である。より特定の態様では、本発明は、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む抗体を提供し、各ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１４であり、各ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１２である。
【０００９】
本発明はさらに、本発明の抗体および１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。さらに、本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。別の実施形態では、本発明はＡβの沈着を特徴とする疾患を治療する方法であって、本発明の抗体の有効量を投与することを含む、方法を提供する。特に、本発明は、臨床的または前臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態を治療または予防する方法であって、本発明の抗体の有効量を該患者に投与することを含む、方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、臨床的または前臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡを治療または予防する方法であって、抗体を含む薬学的組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、前駆期ＡＤ（Ａβ関連軽度認知障害、またはＭＣＩとも呼ばれる）、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態を治療または予防する方法であって、本発明の抗体の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態を治療または予防する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、前臨床的アルツハイマー病、臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、または臨床的または前臨床的脳アミロイド血管障害と診断された患者の認知低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。より具体的には、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の認知低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法をさらに提供する。別のそのような実施形態では、本発明は、前臨床的アルツハイマー病、臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、または臨床的または前臨床的脳アミロイド血管障害と診断された患者の認知低下を遅らせる方法であって、有効量の抗体を投与することを含む、方法を提供する。より具体的には、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の認知低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体の有効量を投与することを含む、方法をさらに提供する。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、前臨床的アルツハイマー病または臨床的アルツハイマー病と診断された患者の機能低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。より具体的には、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の機能低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。別のそのような実施形態では、本発明は、前臨床的アルツハイマー病または臨床的アルツハイマー病と診断された患者の機能低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体の有効量を投与することを含む、方法を提供する。より具体的には、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の機能低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体の有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、前臨床的または臨床的アルツハイマー病と診断された患者の脳Ａβアミロイドプラーク負荷を減少させる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。より具体的には、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、または重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の脳Ａβアミロイドプラーク負荷を減少させる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００１３】
別の実施形態では、本発明は、無症候患者の記憶喪失または認知低下を予防する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物をその患者に投与することを含む、方法を提供する。好ましい実施形態では、患者は脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＡβ１−４２または脳内のＡβプラークのレベルが低い。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、アルツハイマー病の原因となる遺伝子突然変異を有することが知られている無症候患者を治療する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａアルツハイマー病の原因となる遺伝子突然変異（Ｐａｉｓａ突然変異）を有することが知られている無症候患者を治療する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。別の特定の実施形態では、本発明は、常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす、ＡＰＰ、ＰＳＥＮ１、またはＰＳＥＮ２遺伝子の突然変異などの遺伝子突然変異を有する無症候患者を治療する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００１５】
別の実施形態では、本発明は、アルツハイマー病の原因となる遺伝子突然変異を有することが知られている無症候患者の記憶喪失または認知低下を予防する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａアルツハイマー病の原因となる遺伝子突然変異（Ｐａｉｓａ突然変異）を有することが知られている無症候患者の記憶喪失または認知低下を予防する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。別の特定の実施形態では、本発明は、常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する無症候患者の記憶喪失または認知低下を予防する方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、アルツハイマー病の原因となる遺伝子突然変異を有することが知られている無症候患者の認知低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａアルツハイマー病の原因となる遺伝子突然変異（Ｐａｉｓａ突然変異）を有することが知られている無症候患者の認知低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。別の特定の実施形態では、本発明は、常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子突然変異を有する無症候患者の認知低下を遅らせる方法であって、本発明の抗体を含む薬学的組成物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００１７】
本発明はまた、治療に使用するための本発明の抗体を提供する。一実施形態では、本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、臨床的または前臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、または臨床的または前臨床的脳アミロイド血管障害の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、臨床的または前臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、または臨床的または前臨床的脳アミロイド血管障害と診断された患者の認知低下を遅らせるのに使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、または重度ＡＤと診断された患者の認知低下を遅らせるのに使用するための本発明の抗体を提供する。
【００１８】
本発明はまた、脳Ａβアミロイドプラーク負荷を減少させるのに使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者におけるＡβの沈着を特徴とする状態の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を治療するのに使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を予防するのに使用するための本発明の抗体を提供する。
【００１９】
本発明はまた、臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態の予防に使用するための本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態の予防に使用するための本発明の抗体を提供する。
【００２０】
さらに、本発明は、治療に使用するための本発明の抗体を含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療に使用するための抗体を含む薬学的組成物を提供する。
【００２１】
本発明はまた、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療のための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、臨床的または前臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的脳アミロイド血管障害の治療のための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。一実施形態において、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、または重度ＡＤの治療のための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、臨床的または前臨床的アルツハイマー病、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的脳アミロイド血管障害から選択される状態と診断された患者の認知低下を遅らせるための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態と診断された患者の認知低下を遅らせるための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。
【００２２】
本発明はまた、脳Ａβアミロイドプラーク負荷を減少させるための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者におけるＡβの沈着を特徴とする状態を治療するための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する患者の記憶喪失または認知低下を治療するための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、患者の記憶喪失または認知低下を予防するための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。好ましい実施形態では、患者はＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａ遺伝子突然変異を有する。別の実施形態では、本発明は、臨床的または前臨床的ＡＤ、ダウン症候群、および臨床的または前臨床的ＣＡＡから選択される状態を予防するための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、および重度ＡＤから選択される状態を予防するための薬剤の製造における本発明の抗体の使用を提供する。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、かつ配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子を提供する。別の実施形態では、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、かつ配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子を提供する。別の実施形態では、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、を提供する。別の実施形態では、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、を提供する。特定の実施形態では、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号１５であり、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号１６である。特定の実施形態では、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号１５であり、配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号１７であり、および配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は配列番号１６である。
【００２４】
さらに、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、配列番号１３または１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、を含む哺乳動物細胞を提供する。好ましくは、哺乳動物細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、をコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。別の実施形態では、哺乳動物細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、をコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。一実施形態において、哺乳動物細胞株は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）またはハムスター胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株である。
【００２５】
本発明はまた、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子および／または配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞を提供し、この細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣと、を含む抗体を発現することができる。好ましくは、哺乳動物細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、をコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。本発明はまた、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子および／または配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞を提供し、この細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣを含む抗体と、を発現することができる。好ましくは、哺乳動物細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、を含むＤＮＡ分子を含む。一実施形態では、哺乳動物細胞株は、ＣＨＯまたはＨＥＫ細胞株である。
【００２６】
別の実施形態において、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む抗体を産生するためのプロセスを提供し、このプロセスは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲをコードするＤＮＡおよび／または配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲをコードするＤＮＡを含む哺乳動物細胞を、抗体が発現するような条件下で培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む。本発明は、直前に記載された本発明の方法により得られる抗体を含む。本発明はまた、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む抗体を産生するためのプロセスを提供し、プロセスは、抗体が発現されるような条件下で、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび／または配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲをコードするＤＮＡを含む哺乳動物細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む。本発明は、直前に記載された本発明の方法により得られる抗体を含む。
【００２７】
別の実施形態では、本発明は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む抗体を産生するためのプロセスを提供し、このプロセスは、抗体が発現されるような条件下で、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣおよび／または配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣをコードするＤＮＡを含む哺乳動物細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む。本発明は、直前に記載された本発明の方法により得られる抗体を含む。本発明はまた、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む抗体を産生するためのプロセスを提供し、このプロセスは、抗体が発現されるような条件下で、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣおよび／または配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣをコードするＤＮＡを含む哺乳動物細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む。本発明は、直前に記載された本発明の方法により得られる抗体を含む。
【００２８】
本発明は、抗体が２つのＨＣおよび２つのＬＣを含む、抗体を産生するためのプロセスを含み、２つのＨＣのそれぞれのアミノ配列は配列番号１２であり、２つのＬＣのそれぞれのアミノ酸配列は配列番号１３であり、かつそのプロセスは、ａ）抗体が発現されるような条件下で、上記の本発明の哺乳動物細胞を培養することと、およびｂ）発現された抗体を回収することと、を含む。本発明は、直前に記載された本発明の方法により得られる抗体を含む。本発明はまた、抗体が２つのＨＣおよび２つのＬＣを含む、抗体を産生するためのプロセスを含み、２つのＨＣのそれぞれのアミノ配列は配列番号１２であり、２つのＬＣのそれぞれのアミノ酸配列は配列番号１４であり、かつそのプロセスは、ａ）抗体が発現されるような条件下で、上記の本発明の哺乳動物細胞を培養することと、ｂ）発現された抗体を回収することと、を含む。本発明は、直前に記載された本発明の方法により得られる抗体を含む。
【００２９】
本発明の抗体は、Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβに結合する。Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβの配列は、配列番号２２のアミノ酸配列、およびそのカルボキシル末端変異体である。Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβのカルボキシル末端変異体の例には、Ａβｐ３−４０およびＡβｐ３−４３が含まれる。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子を指す。各ＬＣおよびＨＣのアミノ末端部分には、そこに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識に関与する可変領域が含まれる。ＣＤＲには、フレームワーク領域と呼ばれる、より保存された領域が散在している。本発明の抗体のＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインへのアミノ酸の割り当ては、周知のＫａｂａｔ番号付け規則（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１））、およびＮｏｒｔｈ番号付け規則（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８−２５６（２０１１））に基づいている。
【００３１】
本発明の抗体には、カッパＬＣおよびＩｇＧ  ＨＣが含まれる。特定の実施形態では、本発明の抗体はＩｇＧ１である。
【００３２】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体（「ｍＡｂｓ」）である。
【００３３】
モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージ提示技術、合成技術、例えばＣＤＲ移植、またはそのような技術または当該技術分野で既知の他の技術の組み合わせにより産生することができる。本発明の別の実施形態では、抗体または抗体をコードする核酸は単離形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離」という用語は、細胞環境に見出される任意の他の高分子種を含まないか、または実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、または核酸を指す。「実質的に含まない」とは、本明細書中で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチド、または核酸が存在する高分子種の８０％超（モル基準で）、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超の含むことを意味する。
【００３４】
抗体の発現と分泌に続いて、細胞を除去するために培地を清澄化し、清澄化された培地は多くの一般的に使用される技術のいずれかを使用して精製される。精製抗体は、非経口投与用、特に皮下、くも膜下腔内、または静脈内投与用のタンパク質および抗体を製剤化するための周知の方法に従って薬学的組成物に製剤化することができる。抗体は、適切な薬学的に許容される賦形剤とともに凍結乾燥され、その後、使用前に水性希釈剤で再構成されてもよい。あるいは、抗体を水溶液に製剤化し、使用前に最大１〜３年間保存することもできる。いずれの場合も、抗体の薬学的組成物の保存形態および注射形態は、抗体以外の成分である薬学的に許容される賦形剤または複数の賦形剤を含むだろう。ある成分が薬学的に許容されるかどうかは、その安全性および有効性に対する効果、または薬学的組成物の純度、および効力に依存する。ある成分が、安全性または有効性（または純度または効力）に十分に好ましくない影響があると判断され、ヒトへの投与用の組成物に使用されないことが当然である場合、薬学的組成物に使用することは薬学的に許容されない。
【００３５】
本発明の抗体を含む薬学的組成物は、親経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内）により、本明細書に記載の疾患または障害のリスクがある、または示す患者に投与することができる。皮下および静脈内経路が好ましい。本発明の薬学的組成物は、「有効」量の本発明の抗体を含む。有効量とは、所望の治療結果を達成するために必要な量（投与量および期間および投与手段において）を指す。有効量の抗体は、個人の病状、年齢、性別、および体重、ならびに個人における所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて変動し得る。有効量は、当業者のような担当診断医者または医療専門家によって、既知の技法の使用によって、および結果を観察することによって、容易に決定され得る。投与の頻度は、ヒトの実際の薬物動態および薬力学に依存している。治療期間は多くの要因に応じて異なり、当技術分野の経験とスキルに基づいて、患者の診断医または治療を行う医療提供者によって決定される。治療の頻度と期間は適応症により異なる。「治療」、「治療すること」または「治療する」などの用語には、患者の既存の症状、状態、疾患、または障害の進行または重症度の抑制、遅延、または停止が含まれる。本明細書で使用される場合、「患者」という用語はヒトを指す。「予防する」および「予防すること」という用語は、患者が、ＡＤなどの神経変性疾患の症状または臨床的特徴を有しないようにするための、無症候患者への本発明の抗体の予防的投与を意味する。
【００３６】
「Ａβの沈着を特徴とする状態」という用語は、脳または脳血管系のＡβ沈着を病理学的に特徴とする疾患である。これには、アルツハイマー病、ダウン症候群、脳アミロイド血管障害などの疾患が含まれる。アルツハイマー病の臨床診断、病期分類または進行は、既知の技術を使用し、結果を観察することにより、当業者のような担当診断医または医療専門家によって容易に決定され得る。これには通常、何らかの形態の脳プラークイメージング、精神的または認知的評価（例えば、臨床的認知症重症度判定尺度の合計点数Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ−ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  ｂｏｘｅｓ（ＣＤＲ−ＳＢ））、簡易認知機能検査（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ））またはアルツハイマー病評価尺度の認知機能評価（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ−Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ（ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ）））または機能的評価（例えば、アルツハイマー病共同研究−日常生活動作評価（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｓｔｕｄｙ−Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｄａｉｌｙ  Ｌｉｖｉｎｇ（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ）））が含まれる。本明細書で使用される「臨床的アルツハイマー病」は、アルツハイマー病の診断された段階である。これには、前駆期アルツハイマー病、軽度アルツハイマー病、中等度アルツハイマー病および重度アルツハイマー病と診断された状態が含まれる。「前臨床的アルツハイマー病」という用語は、臨床的アルツハイマー病に先行する段階であり、バイオマーカーの測定可能な変化（ＣＳＦＡβ４２レベルまたはアミロイドＰＥＴによる沈着した脳プラーク負荷など）は、臨床的アルツハイマー病に進行する、アルツハイマー病の患者の最も初期の兆候を示す。これは通常、記憶喪失や混乱などの症状が顕著になる前である。
【００３７】
以下の実施例およびアッセイは、本発明の抗体が、アルツハイマー病、ダウン症候群、およびＣＡＡなどのＡβの沈着を特徴とする疾患の治療に有用であることを示している。しかしながら、以下の実施例は、限定ではなく例示として示されており、当業者によって様々な修正がなされ得ることが理解されるべきである。
【実施例】
【００３８】
改変Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体の発現および精製
本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、本質的に以下のように発現および精製することができる。配列番号１３または１４のＬＣアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列と、配列番号１２のＨＣアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列とを含むグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）発現ベクターを使用して、チャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）をエレクトロポレーションによりトランスフェクトする。この発現ベクターは、ＳＶ初期（Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ４０Ｅ）プロモーターおよびＧＳの遺伝子をコードする。トランスフェクション後、細胞について、０〜５０μＭのＬ−メチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）を用いてバルク選択（ｂｕｌｋ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）を行う。次に、選択したバルク細胞またはマスターウェルを、産生に使用する無血清懸濁培養でスケールアップする。
【００３９】
抗体が分泌されている清澄化培地を、リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）などの適合緩衝液で平衡化したプロテインＡアフィニティーカラムに加える。カラムを１Ｍ  ＮａＣｌで洗浄して、非特異的結合成分を除去する。結合したＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、たとえばｐＨ（約）３．５のクエン酸ナトリウムで溶出し、画分を１Ｍ  Ｔｒｉｓ緩衝液で中和する。Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは分析的サイズ排除などによって検出し、プールする。本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体を、ｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液または１０ｍＭのクエン酸Ｎａ緩衝液、ｐＨ約６の１５０ｍＭのＮａＣｌのいずれかで濃縮する。最終材料は、一般的な手法を使用して滅菌ろ過できる。Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体の純度は９５％以上である。本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、−７０℃で直ちに凍結することができ、または４℃で数ヶ月間保存することができる。本発明の例示的な抗体のアミノ酸配列番号を以下に示す。
表１．例示されたＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体のアミノ酸配列。
【表１】
0006900500.tif 000002
【表２】
0006900500.tif 000003
【表３】
0006900500.tif 000004
【００４０】
結合キネティクスおよび結合親和性
Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体のｐＥ３−４２Ａβペプチドへの結合キネティクスと結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴により測定される。結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＣＭ５チップ上のアミンカップリングを介して約１２０  ＲＵ  ｐＥ３−４２Ａβペプチドを固定し、２倍連続希釈で５００ｎＭから開始して１５．６ｎＭまでＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体を流すことで測定する。実験は、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＢＲ１００６６９、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）中、２５℃で行う。各サイクルで、２５０μＬの抗体試料をフローセル１および２に５０μｌ／分で流し、１０分間解離させる。チップ表面を、１０μＬ／ｍＬの流量でｐＨ１．５のグリシン緩衝液を５μＬ注入することで再生させる。データを１：１のＬａｎｇｍｉｕｒバインディングモデルに適合させてｋｏｎ、ｋｏｆｆを導き出し、ＫＤを計算する。基本的に上記の手順に従って、次のパラメーター（表２に示す）が観察された。
表２．結合キネティクスおよび結合親和性。
【表４】
0006900500.tif 000005
【００４１】
これらのデータは、本発明の抗体がｐＥ３−４２Ａβに結合することを示している。
【００４２】
エクスビボ標的エンゲージメント
固定されたＰＤＡＰＰ脳からの脳切片上のエクスビボ標的エンゲージメントを決定するために、本発明の外因的に添加されたＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体または２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体を用いて免疫組織化学分析を実施した。２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体は２０１ｃ抗体と１つのアミノ酸で異なり、この違いは重鎖ＨＣＤＲ３にある（２０１ｃ  ＨＣＤＲ３の位置１０のＴｙｒは２０１ｃ  Ｈ３ＢではＰｈｅである）。２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体は、配列番号２０で示される重鎖アミノ酸配列と配列番号１３で示される軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００４３】
老齢ＰＤＡＰＰマウス（２６または２０ヶ月齢）からのクライオスタット連続冠状切片を、５μｇ／ｍＬまたは２０μｇ／ｍＬの本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体（２０１ｃまたは２０１ｃＹＤ）とともにインキュベートする。ヒトＩｇＧに特異的な二次ＨＲＰ試薬を使用し、沈着したプラークをＤＡＢ−Ｐｌｕｓ（ＤＡＫＯ）で視覚化する。ビオチン化マウス３Ｄ６抗体とそれに続くＳｔｅｐ−ＨＲＰ二次抗体を陽性対照として使用する。
【００４４】
本発明の例示されたＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体は、これらの脳切片中の沈着Ａβを標識した。しかし、外因性２０μｇ／ｍｌ濃度での２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体ではより高いバックグラウンド染色が観察された。これらの組織学的研究は、例示された本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体がエクスビボで沈着したＡβ標的にエンゲージすることを示した。
【００４５】
エクスビボ食作用
本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体がプラークのミクログリア食作用を促進できるかどうかを調べるために、エクスビボ食作用アッセイを実施する。ヒトアルツハイマーの脳からの凍結切片（２０μｍ）を、１０μｇ／ｍＬの本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体（２０１ｃまたは２０１ｃＹＤ）、対照、または２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体とともに、３７℃で１時間、２４ウェルプレート中で、プレインキュベートする。１処理あたり４つのウェルである。次に、初代マウスミクログリア細胞（８ｘ１０５、Ｃ５７／ＢＬ６）を添加し、２４時間インキュベートする。各ウェルの組織を５．２Ｍグアニジン緩衝液で均質化し、Ａβ１−４２含有量をＥＬＩＳＡで評価する。Ａβの含有量は複数の切片範囲にわたって変化する可能性があるため、すべての試験ウェルに対して姉妹切片対照が装備され、試験ウェルの内容は姉妹切片の内容に正規化される。
【００４６】
陽性対照試料と比較して、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体（２０１ｃおよび２０１ｃＹＤ）と２０１ｃ  Ｈ３Ｂは、Ａβ１−４２を有意に減少させた。陰性対照試料では、沈着したＡβ１−４２のクリアランスはごくわずかであった。したがって、エクスビボの食作用分析は、本発明の例示されたＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体が食作用によってエクスビボでプラークを除去できることを示している。
【００４７】
インビボ標的エンゲージメント
血液脳関門を通過し、沈着したプラークにインビボで結合する、本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体の能力を測定する。老齢ＰＤＡＰＰトランスジェニックマウス（１８．５〜３２ヶ月齢）にＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体（２０１ｃ）または陰性対照ＩｇＧを腹腔内注射する。１群あたり６匹のマウスは、１日目と３日目に抗体の４０ｍｇ／ｋｇ注射を１回受ける。マウスを屠殺し、組織化学分析のために脳を収集する６日目に、インビボでの標的エンゲージメントを決定する。
【００４８】
姉妹切片での外因性３Ｄ６抗体免疫染色で定義される総プラーク領域で正規化されたインビボＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体エンゲージメントに対する陽性面積割合として、インビボ標的エンゲージメントの程度を定量化する（ＴＥ比）。ＴＥ比は、抗体が結合する面積の割合を測定し、可能性のある標的の面積の合計割合（姉妹切片上の陽性対照抗体（３Ｄ６）を用いた外因性免疫組織化学によって視覚化された総沈着Ａβ）に対して値を正規化することによって生成される。
【００４９】
基本的に上記の手順に従って、２０１ｃ抗体のＴＥ比は２．８％であった。２０１ｃ抗体は、海馬内および皮質内の限られた範囲で、インビボでの標的エンゲージメントを示したが、対照ＩｇＧを注射した動物はプラーク特異的染色を示さない。
【００５０】
インビボプラーククリアランス
老齢ＰＤＡＰＰマウスのインビボでのプラーククリアランスを評価するために、マウス定常カッパ領域およびＩｇＧ２ａ  Ｆｃに融合した２０１ｃまたは２０１ｃ  Ｈ３ＢのＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを有するキメラ代用抗体を用いて研究を行う。老齢ＰＤＡＰＰマウス（２１カ月齢、１群あたりｎ＝２３〜２５）に、７週間、週に１回、１２．５ｍｇ／ｋｇのキメラ２０１ｃ抗体、キメラ２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体、または対照ＩｇＧを皮下注射する。対照の老齢ＰＤＡＰＰマウス（研究の開始時に屠殺した）を使用して、治療的処置の前に既存の沈着のレベルを評価する。
【００５１】
研究の終わりに、血漿中の最終薬物レベルを測定し、Ａβ１−４２のレベルについてＥＬＩＳＡにより脳を評価する。対照ＩｇＧによる７週間の処置期間にわたってＡβ１−４２の有意でないさらなる増加によって証明されるように、老齢ＰＤＡＰＰマウスは、プラークの上限にある。２０１ｃキメラ抗体群および２０１ｃ  Ｈ３Ｂキメラ抗体群は、対照と比較してＡβ１−４２の有意な減少を示す（それぞれ２６％、ｐ＜０．０１８２および２６％、ｐ＝０．０１２１）。抗体曝露レベルは７週間の投与期間の終わりに測定され、２０１ｃキメラのレベルは９１μｇ／ｍＬ、２０１ｃ  Ｈ３Ｂのレベルは５６μｇ／ｍＬであった。この研究は、例示されたキメラＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体２０１ｃがインビボでプラーク（Ａβ１−４２）を低下させることができることを示した。
【００５２】
低親和性血漿結合の欠如
本発明の抗Ｎ３ＰＧ抗体（２０１ｃおよび２０１ｃＹＤ）と血漿タンパク質との潜在的な低親和性相互作用を調査するために、インビトロ研究を行う。抗体２０１ｃ、２０１ｃＹＤ、または２０１ｃ  Ｈ３Ｂをセファロースビーズに共有結合させ、カラムクロマトグラフィーを実行する前に１０ｍｌの正常ヒト血漿と３７℃で２時間インキュベートする。ビーズ／プラズマ混合物をカラムに詰めて洗浄した。選択的に結合したタンパク質は、異なる画分でグリシン（ｐＨ２．５）にて溶出される。その後、各画分を高分解能ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）勾配ゲル（４％〜１６％）で分析する。銀染色を使用してタンパク質を視覚化し、目的のバンドを切除して質量分析で分析した。並行して、複数の対照ヒトＩｇＧ１抗体を分析する。
【００５３】
基本的に上記の手順に従って、銀染色ゲルの視覚化により、対照ＩｇＧ１抗体と比較した２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体溶出からフラクション５にヒスチジンリッチ糖タンパク質（約６４ｋＤａバンド）、フィブリノゲンアルファ鎖（約６０ｋＤａバンド）、およびフィブリノゲンベータ鎖（約５０ｋＤａバンド）が存在することが示された。逆に、２０１ｃおよび２０１ｃＹＤ抗体は、対照ＩｇＧおよび２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体と比較して、ヒト血漿タンパク質へのかなり低い親和性結合を欠いていた。
【００５４】
エクスビボＴ細胞増殖ＥｐｉＳｃｒｅｅｎアッセイ
本発明（２０１ｃ）の例示Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体または２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体に応答したヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化（増殖、サイトカイン分泌）を測定するために、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）エクスビボヒトＴ細胞アッセイを使用する。ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）は、欧州／北米および世界人口で発現されるＨＬＡ−ＤＲおよびＤＱアロタイプの数や頻度を最も良く表す５０人の健康なドナーからの試料を利用する。アッセイに２つの陽性対照、ヒト化Ａ３３、診療所で高いレベルの免疫原性を示し（７３％）かつＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）アッセイで２０−３０％のＴ細胞応答を日常的に誘発する臨床ベンチマーク抗体と、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、新抗原を含むマイトジェン様タンパク質と、が含まれている。適合した緩衝液の陰性対照もアッセイに含まれている。
【００５５】
Ｔ細胞増殖の割合は、時間経過（５〜８日目）で観察されたすべての陽性ドナー応答の平均から計算される。Ｔ細胞増殖の割合は、陽性対照Ａ３３およびＫＬＨではそれぞれ２０％および９４％であり、２０１ｃ  Ｈ３Ｂでは２４％であった。ただし、Ｔ細胞の増殖率は２０１ｃで１０％であった。これらのデータは、２０１ｃ抗体が陽性対照および２０１ｃ  Ｈ３Ｂ抗体と比較してＴ細胞応答率が低いことを示している。
【００５６】
インシリコ免疫原性分析
ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（登録商標）アッセイは、潜在的なＴ細胞エピトープについてのタンパク質配列を走査し、免疫原性を予測するアルゴリズムを使用する。また、Ｔレジトープ（Ｔｒｅｇｉｔｏｐｅ）の含有量および免疫原性応答の負の調節への影響も考慮する。抗体２０１c、２０１ｃＹＤ、およびＢ１２Ｌ（抗体Ｂ１２Ｌは、配列番号２３によって示される軽鎖と配列番号２４によって示される重鎖とを含む）のアミノ酸配列はＥｐｉＭａｔｒｉｘ（登録商標）によって分析した。ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（登録商標）は、以下の表３に示すスコアを予測した。
表３．ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（登録商標）スコア。
【表５】
0006900500.tif 000006
【００５７】
これらのデータは、予測したＴ細胞依存性抗体応答が、Ｂ１２Ｌ抗体と比較して、本発明のＮ３ｐＧｌｕ  Ａβ抗体（２０１ｃおよび２０１ｃＹＤ）の方が低いことを示している。
【００５８】
抗薬物抗体（ＡＤＡ）認識の欠如
ＬＹ３００２８１３抗体に対する抗薬物抗体が２０１ｃまたは２０１ｃＹＤに結合できるかどうかを評価するために、ビオチンとルテニウムで標識された２０１ｃまたはビオチンとルテニウムで標識された２０１ｃＹＤを使用するＡｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｅｌｕｔｉｏｎ（ＡＣＥ）Ｂｒｉｄｇｅアッセイを実行する。
【００５９】
このアッセイ形式では、ＡＤＡは２つの標識抗体（例えば、ビオチンとルテニウムで標識された２０１ｃ）の間を橋渡しする。その後、複合体はストレプトアビジンでコーティングされたプレートに結合し（ビオチン標識抗体を介して）、検出はルテニウムを使用してメソスケールプラットフォームでシグナルを生成する。ＡＤＡが２０１ｃまたは２０１ｃＹＤ抗体を認識しない場合、シグナルは生成されない。ウサギ抗ヒトＩｇＧはＦｃに優先的に結合する可能性が最も高く、標識２０１ｃまたは２０１ｃＹＤが抗体に結合できることを示す陽性対照として使用される。
【００６０】
ＬＹ３００２８１３に対する抗体には、ＬＹ３００２８１３投与後の臨床試験（Ｉ５Ｔ−ＭＣ−ＡＡＣＣ  ＮＣＴ０１８３７６４１）からの２人の患者サンプルからアフィニティ精製された抗体が含まれる。これらの患者は、ＡＣＥブリッジの陽性結合シグナルで示されるように、ＬＹ３００２８１３のＡＤＡ応答を経時的に発達させていた。
【００６１】
基本的に上記の手順に従って、ＬＹ３００２８１３に対する抗体への２０１ｃまたは２０１ｃＹＤの結合を検出した場合、バックグラウンドを超えるシグナルは観察されなかった。これらのデータは、ヒトのＬＹ３００２８１３に対するＡＤＡが２０１ｃおよび２０１ｃＹＤを認識しないことを示している。
【００６２】
［配列表］
抗体２０１ｃ、抗体２０１ｃＹＤ、および抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＨＣＤＲ１（配列番号１）
ＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳ
抗体２０１ｃ、抗体２０１ｃＹＤ、および抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＨＣＤＲ２（配列番号２）
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃＹＤ  ＨＣＤＲ３（配列番号３）
ＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＬＣＤＲ１（配列番号４）
ＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡ
抗体２０１ｃＹＤ  ＬＣＤＲ１（配列番号５）
ＲＡＳＱＳＬＧＮＹＬＡ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＬＣＤＲ２（配列番号６）
ＹＱＡＳＴＬＥＳ
抗体２０１ｃＹＤ  ＬＣＤＲ２（配列番号７）
ＹＤＡＳＴＬＥＳ
抗体２０１ｃ、抗体２０１ｃＹＤ、および抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＬＣＤＲ３（配列番号８）
ＱＨＹＫＧＳＦＷＴ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃＹＤ  ＨＣＶＲ（配列番号９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＬＣＶＲ（配列番号１０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
抗体２０１ｃＹＤ  ＬＣＶＲ（配列番号１１）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃＹＤ重鎖（配列番号１２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
抗体２０１ｃおよび抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ軽鎖（配列番号１３）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
抗体２０１ｃＹＤ軽鎖（配列番号１４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１２の抗体重鎖を発現させるための例示的なＤＮＡ（配列番号１５）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｔｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｃｔｔｔａｇｃａｇｃｔａｔｃｃｔａｔｇａｇｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｔｃａｇｃｔａｔｔａｇｔｇｇｔａｇｔｇｇｔｇｇｔａｇｃａｃａｔａｃｔａｃｇｃａｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇｇｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｔｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇａｇｇｇｇｇｇｃｔｃａｇｇｇａｇｔｔａｔｔａｔａａｃｇｇｃｔｔｔｇａｔｔａｔｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａｇｃｃｔｃｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｇｃｔａｇｃａｃｃｃｔｃｃｔｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａａａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｃｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｃｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｔ
配列番号１３の抗体軽鎖を発現させるための例示的なＤＮＡ（配列番号１６）
Ｇａｃａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｔｔｃｃａｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔａｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃｇｇｇｃｃａｇｔｃａｇａｇｔｃｔｔｇｇｔａａｃｔｇｇｔｔｇｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａａａｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｔｃａｇｇｃｇｔｃｔａｃｔｔｔａｇａａｔｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇａｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｇｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａｔｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｔｔａｃｔｇｃｃａａｃａｔｔａｔａａａｇｇｔｔｃｔｔｔｔｔｇｇａｃｇｔｔｃｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇｇａｃｃｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｃ
配列番号１４の抗体軽鎖を発現させるための例示的なＤＮＡ（配列番号１７）
Ｇａｃａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｔｔｃｃａｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔａｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃｇｇｇｃｃａｇｔｃａｇａｇｔｃｔｔｇｇｔａａｃｔａｔｔｔｇｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａａａｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｔｇａｔｇｃｇｔｃｔａｃｔｔｔａｇａａｔｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇａｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｇｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａｔｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｔｔａｃｔｇｃｃａａｃａｔｔａｔａａａｇｇｔｔｃｔｔｔｔｔｇｇａｃｇｔｔｃｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇｇａｃｃｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｃ
抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＨＣＤＲ３（配列番号１８）
ＡＲＥＧＧＳＧＳＹＦＮＧＦＤＹ
抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ  ＨＣＶＲ（配列番号１９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＦＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
抗体２０１ｃ  Ｈ３Ｂ重鎖（配列番号２０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＦＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
配列番号２０の抗体重鎖を発現するための例示的なＤＮＡ（配列番号２１）
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Ｎ３ｐＧｌｕ  Ａβ（配列番号２２）
［ｐＥ］ＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ
抗体Ｂ１２Ｌ重鎖（配列番号２３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＩＴＶＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
抗体Ｂ１２Ｌ軽鎖（配列番号２４）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
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