(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物組織から抽出されたエタノールアミン型プラズマローゲンを含有し、該エタノールアミン型プラズマローゲンが、成人１日当たり２０，０００μｇ以下で投与されることを特徴とする脂肪肝改善用経口組成物。
【請求項２】
前記動物組織が、貝類、ホヤ及び鳥類から選ばれる動物の組織であることを特徴とする請求項１記載の脂肪肝改善用経口組成物。
【請求項３】
前記動物組織が、ホタテ類の組織であることを特徴とする請求項１又は２記載の脂肪肝改善用経口組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪肝を改善する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
プラズマローゲンは、抗酸化作用を有するリン脂質の一種で、グリセロリン脂質の一つである。プラズマローゲンは哺乳動物の全ての組織に存在し、人体のリン脂質の約１８％を占めるが、特に脳神経、心筋、骨格筋、白血球、精子に多いことが知られている。
【０００３】
プラズマローゲンは、神経新生の促進作用や、リポポリサッカロイド（ＬＰＳ）による神経炎症の抑制作用、脳内アミロイドβ（Ａβ）タンパクの蓄積の抑制作用等を有することが知られており、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病において効果があるといわれている。例えば、非特許文献１では、ホタテ由来精製プラズマローゲンを経口投与した患者において、軽度アルツハイマー病の記憶機能を改善することが報告されている。
【０００４】
一方、肝臓細胞に中性脂肪滴が沈着する脂肪肝は、様々な肝機能障害を引き起こすが、脂肪肝と診断される人は年々増加している。脂肪肝を放置すると、脂肪性肝炎や肝硬変を引き起こし、最悪の場合は、肝癌まで発展することもある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Fujino T.et al, “Efficacy and Blood Plasmalogen Changes by Oral Administration of Plasmalogen in Patients with Mild Alzheimer's Disease and Mild Cognitive Impairment: A Multicenter, Randomized, Double-blind, Placebo-controlled Trial” EBioMedicine, [17] (2017) 199-205
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のように、プラズマローゲンに関する種々の報告がなされているが、脂肪肝に対するプラズマローゲンの効果については検討がなされていない。
【０００７】
本発明の課題は、優れた脂肪肝改善効果を有する組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、プラズマローゲンが脂肪肝の改善に対して優れた効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下のとおりのものである。
［１］プラズマローゲンを含有することを特徴とする脂肪肝改善用組成物。
［２］前記プラズマローゲンが、動物組織から抽出されたプラズマローゲンであることを特徴とする上記［１］記載の脂肪肝改善用組成物。
［３］前記動物組織が、貝類、ホヤ及び鳥類から選ばれる動物の組織であることを特徴とする上記［２］記載の脂肪肝改善用組成物。
［４］前記動物組織が、ホタテ類の組織であることを特徴とする上記［２］又は［３］記載の脂肪肝改善用組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の組成物は、優れた脂肪肝改善効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】糖尿病ラットの肝臓組織における脂肪蓄積の様子を観察した顕微鏡写真である。
【図２】糖尿病ラットの肝臓組織における脂肪滴の１０，０００μｍ２あたりの数を示すグラフである。
【図３】正常ラットの肝臓組織における脂肪蓄積の様子を観察した顕微鏡写真である。
【図４】正常ラットの肝臓における脂肪滴の１０，０００μｍ２あたりの数を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の脂肪肝改善用組成物は、プラズマローゲンを含有することを特徴とする。
本発明における脂肪肝には、アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝の双方を含む。脂肪肝の改善とは、肝臓における脂肪蓄積及び沈着の予防、肝臓における脂肪蓄積及び沈着の低減を含む概念である。本発明の脂肪肝改善用組成物は、肝臓における脂肪蓄積及び沈着の低減を図ることができることから、脂肪肝に起因する脂肪性肝炎、肝硬変、肝癌の発生を抑制（予防）することができる。すなわち、脂肪性肝炎予防用組成物、肝硬変予防用組成物、肝癌予防用組成物としても用いることができる。
【００１３】
プラズマローゲンは、抗酸化作用を有するリン脂質の一種で、グリセロリン脂質の一つである。グリセロール骨格のｓｎ−１位にビニールエーテル結合を有することで特徴づけられるグリセロリン脂質に特有のサブクラスであり、多くの哺乳類の組織の細胞膜中に高濃度で確認されている。
【００１４】
本発明に用いるプラズマローゲンは、一般にプラズマローゲンに分類されるものであれば特に制限されるものではないが、例えば、コリン型プラズマローゲン、エタノールアミン型プラズマローゲン、イノシトール型プラズマローゲン、セリン型プラズマローゲンを挙げることができる。これらの中でも、コリン型プラズマローゲン、エタノールアミン型プラズマローゲンが好ましく、エタノールアミン型プラズマローゲンが特に好ましい。
【００１５】
本発明のプラズマローゲンは、動物組織から抽出することができる。動物組織としては、プラズマローゲンを含むものであれば特に制限されるものではなく、貝類、ホヤ、ナマコ、サケ、サンマ、カツオなどの水産動物や、鳥類等を挙げることができる。これらの中でも、貝類、ホヤ、鳥類が好ましく、貝類が特に好ましい。用いる部位としては、食用部位（可食部位）が好ましい。これらの動物組織は、切断物であってもよいが、より効率的にプラズマローゲンを抽出できることから、粉砕物を用いることが好ましい。
【００１６】
貝類としては、ホタテ類、ムールガイ、アワビ等の食用の二枚貝や巻貝を例示することができ、ホタテ類が特に好ましい。ホタテ類は、イタヤガイ科に属する食用の二枚貝であり、例えば、Ｍｉｚｕｈｏｐｅｃｔｅｎ属、Ｐｅｃｔｅｎ属に属するものを挙げることができる。具体的には、日本で採取されるホタテガイ（学名：Ｍｉｚｕｈｏｐｅｃｔｅｎｙｅｓｓｏｅｎｓｉｓ）や、ヨーロッパで採取されるヨーロッパホタテ（学名：Ｐｅｃｔｅｎｍａｘｉｍｕｓ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ））等を挙げることができる。食用部位としては、貝柱、ひも等を挙げることができる。
【００１７】
ホヤは、マボヤ科に属する食用の脊索動物であり、マボヤ属、アカボヤ属に属するものを挙げることができる。具体的には、マボヤ（学名：Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉａ ｒｏｒｅｔｚｉ）や、アカボヤ（学名：Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉａ ａｕｒａｎｔｉｕｍ）等を挙げることができる。食用部位としては、身の部分（筋膜体）を挙げることができる。
【００１８】
鳥類は、食用の鳥類であれば特に制限されるものではなく、例えば、鶏、烏骨鶏、鴨等を挙げることができる。食用部位としては、プラズマローゲンを豊富に含むムネ肉が好ましい。
【００１９】
プラズマローゲンの抽出は、水、有機溶媒、含水有機溶媒を用いて行うことができ、酵素処理を併用することが好ましい。例えば、エタノール抽出法や、ヘキサン抽出法を挙げることができ、エタノール抽出法が好ましい。
【００２０】
エタノール抽出法としては、エタノール（含水エタノールを含む）を用いて抽出する方法であれば特に制限されるものではなく、例えば、特開２０１９−１４０９１９号公報、特開２０１８−１３０１３０号公報、再表２０１２−０３９４７２号公報、特開２０１０−０６５１６７号公報、特開２０１０−０６３４０６号公報等に記載された方法を挙げることができる。
【００２１】
ヘキサン抽出法としては、ヘキサンを用いて抽出する方法であれば特に制限されるものではなく、例えば、再表２００９−１５４３０９号公報、再表２００８−１４６９４２号公報等に記載された方法を挙げることができる。
【００２２】
本発明の組成物は、例えば、医薬品（医薬部外品を含む）や、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品などの所定機関より効能の表示が認められた機能性食品等のいわゆる健康食品として用いることができる。
【００２３】
本発明の組成物を健康食品として用いる場合、本発明の組成物は、プラズマローゲンを含有し、脂肪肝改善に用いられる点において、製品として他の製品と区別することができるものであれば特に制限されるものではなく、例えば、本発明に係る製品の本体、包装、説明書、宣伝物のいずれかに、脂肪肝改善機能がある旨を表示したものが本発明の範囲に含まれる。
【００２４】
いわゆる健康食品においては、具体的に、「肝臓の中性脂肪を減らす」、「肝機能の改善」、「非アルコール性肝炎の予防」、「非アルコール性脂肪肝の予防」、「非アルコール性肝炎の改善」、「非アルコール性脂肪肝の改善」、「アルコール性肝障害の予防」、「アルコール性肝障害の改善」等を表示することができる。
【００２５】
本発明の組成物は、経口用であっても、注射、点滴等の非経口用であってもよいが、手軽に摂取できる点から、経口用であることが好ましい。経口用の場合、その形態としては、例えば、錠状、カプセル状、粉末状、顆粒状、液状、粒状、棒状、板状、ブロック状、固体状、丸状、ペースト状、クリーム状、カプレット状、ゲル状、チュアブル状、スティック状等を挙げることができる。これらの中でも、カプセル状の形態が好ましい。
【００２６】
本発明の組成物におけるプラズマローゲンの含有量としては、その効果の奏する範囲で適宜含有させればよい。その形態にもよるが、例えば、プラズマローゲンが、乾燥質量換算で、本発明の組成物全体の１０−１０質量％以上であることが好ましく、１０−５質量％以上であることがより好ましく、０．１質量％以上であることがさらに好ましく、１．０質量％以上であることが特に好ましい。
【００２７】
本発明の経口組成物の摂取量としては特に制限はないが、本発明の効果をより顕著に発揮させる観点から、プラズマローゲンの摂取量が、成人の１日当たり、１０−６μｇ／日以上となるように摂取することが好ましく、１μｇ／日以上となるように摂取することがより好ましく、５００μｇ／日以上となるように摂取することがさらに好ましく、１０００μｇ／日以上となるように摂取することが特に好ましい。その上限は、例えば、２０，０００μｇ／日であり、好ましくは１０，０００μｇ／日である。
【００２８】
本発明の経口組成物は、１日の摂取量が前記摂取量となるように、１つの容器に、又は例えば２〜３の複数の容器に分けて、１日分として収容することができる。
【００２９】
本発明の組成物は、必要に応じて、本発明の成分以外の他の成分を添加して、公知の方法によって製造することができる。本発明の成分以外の他の成分としては、例えば、ビタミン、ミネラル、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、動物性油、植物性油を挙げることができる。
【００３０】
以下、本発明を実施例に基づき詳細に説明する。
【実施例１】
【００３１】
糖尿病ラット及び正常ラットを用いた試験により、本発明の組成物の脂肪肝に対する効果を確認した。
【００３２】
［被験サンプル（本発明の組成物）］
（１）エタノール抽出エタノールアミン型プラズマローゲン（ｐｌ−ＰＥ）
エタノール抽出エタノールアミン型プラズマローゲンは、ホタテガイ（学名：Mizuhopecten yessoensis）から、以下の方法にて調製したものを用いた。
【００３３】
１．  生ホタテヒモにコクラーゼＰ（三菱ケミカルフーズ株式会社製）を加え混和する。
２．  次に、エタノールを加え、吸引濾過する。
３．  ろ液をロータリーエバポレーターで乾固する。
【００３４】
（２）ヘキサン抽出エタノールアミン型プラズマローゲン（ｐｌ−ＰＥ）
ヘキサン抽出エタノールアミン型プラズマローゲンは、ホタテガイ（学名：Mizuhopecten yessoensis）から、以下の方法にて調製したものを用いた。
【００３５】
１．  生ホタテヒモにコクラーゼＰ（三菱ケミカルフーズ株式会社製）とホスホリパーゼＡ１（ＰＬＡ１）（三菱ケミカルフーズ株式会社製）を加え混和する。
２．  次に、ヘキサン／イソプロパノールを加え、上澄みを吸引濾過する。
３．  硫酸ナトリウム水溶液を加えてよく混和する。
４．  上層をロータリーエバポレーターで乾固する。 
５．  ４℃に冷却していたアセトンを加え混和する。
６．  ３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ，４℃で遠心する。
７．  上清を捨て、沈殿を回収する。 
８．  デシケータで一晩乾燥する。
【００３６】
［実験動物及び飼育条件］
実験動物としては、糖尿病モデルラット（系統名：ＺＤＦ−Ｌｅｐｒ＜ｆａ＞／ＣｒｌＣｒｌｊ、（株）ケービーティーオリエンタル）、及びＷｉｓｔａｒ正常ラット（系統名：Ｃｒｌｊ：ＷＩ、（株）ケービーティーオリエンタル）を用いた。
【００３７】
１１週齢雄糖尿病モデルラット３０匹を、４週間の予備飼育後、体重を基にランダムに３群に割付けをした。Ｉ群は、滅菌水を与えたコントロール対象群（ｎ＝１０）、II群は、ヘキサン抽出エタノールアミン型プラズマローゲンを与えたヘキサン抽出物対象群（ｎ＝１０）、III群は、エタノール抽出エタノールアミン型プラズマローゲンを与えたエタノール抽出物対象群（ｎ＝１０）とした。
【００３８】
一方、１１週齢雄Ｗｉｓｔａｒ正常ラット２０匹は、４週間の予備飼育後、体重を基にランダムに２群に割付けをした。ＩＶ群は、滅菌水を与えたコントロール対象群（ｎ＝１０）、Ｖ群は、エタノール抽出エタノールアミン型プラズマローゲンを与えたエタノール抽出物対象群（ｎ＝１０）とした。
【００３９】
ラットは、室温（２１〜２５℃）、照明時間１２時間（７：００〜１９：００）サイクルに自動調整された飼育室で、個別ステンレスケージの中で固形飼料ＭＦ、飲水ともに自由摂取とした。
【００４０】
［胃ゾンテ投与］
各群のラットに対して、被験サンプルの胃ゾンテ投与を２週間毎日行った。各群をそれぞれ半分に分けて、２週間ずらして投与した。
なお、コントロール対象群は、滅菌水を１ｍＬ投与した。ヘキサン抽出物対象群及びエタノール抽出物対象群は、プラズマローゲン濃度が１ｍｇ／ｍＬになるようにそれぞれ滅菌水でエマルジョンし、小分けして冷凍保管しておき、投与時は、温水（３７℃）で１５分間溶解し、再度１０秒間エマルジョンして、１ｍＬずつ投与した。
【００４１】
［肝臓組織の脂肪蓄積の確認］
ラットをイソフルラン麻酔下で開腹し、生理食塩水で灌流後、肝臓を採取した。採取した肝臓をＰＢＳ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄し、４％ＰＦＡ／ＰＢＳ入りチューブで４℃保存した。凍結した組織切片を厚さ１０μｍで切り取り、スライドガラス上に置いた。組織切片を１０％ホルマリンで１０分間固定し、３０分間風乾した。スライドをプロピレングリコールに２分間浸し、その後６０°Ｃのオーブンで１０分間、温かいオイルレッドＯ溶液（０．５％ｗ／ｖ、プロピレングリコール溶液）で染色した。スライドを新しい８５％プロピレングリコールで５分間洗浄した後、蒸留水で洗浄した。Ｍａｙｅｒｓヘマトキシリン染色を行った後、蒸留水で洗浄した。水性封入剤でスライドをマウントし、高解像度の光学顕微鏡で観察した。
【００４２】
（糖尿病ラット群）
糖尿病ラットの結果を図１及び２に示す。
図１は、糖尿病ラットのコントロール対象群（右上図）、ヘキサン抽出物対象群（左下図）、及びエタノール抽出物対象群（右下図）の肝臓組織の脂肪蓄積の様子を観察した顕微鏡写真である。なお、参考として、Ｗｉｓｔａｒ正常ラットのコントロール対象群の肝臓組織における脂肪蓄積の様子も示した（左上図）。
図２は、糖尿病ラットの肝臓組織における赤色に染色された脂肪滴の１０，０００μｍ２あたりの数を示すグラフである。
【００４３】
図１及び図２に示すように、実施例に係る糖尿病ラットのヘキサン抽出物対象群及びエタノール抽出物対象群においては、糖尿病ラットのコントロール対象群と比較して、明らかに脂肪蓄積が抑制された。特に、エタノール抽出物対象群においては、脂肪滴が、正常ラットのコントロール対象群よりも減少した。
【００４４】
（Ｗｉｓｔａｒ正常ラット群）
正常ラットの結果を図３及び４に示す。
図３は、正常ラットのコントロール対象群、及び実施例に係るエタノール抽出物対象群の肝臓組織の脂肪蓄積の様子を観察した顕微鏡写真である。
図４は、正常ラットの肝臓組織における赤色に染色された脂肪滴の１０，０００μｍ２当たりの数を示すグラフである。
【００４５】
図３及び図４に示すように、実施例に係る正常ラットのエタノール抽出物対象群においては、コントロール対象群と比較して脂肪滴が著しく減少した。
【実施例２】
【００４６】
肥満、脂肪肝と診断された患者（４７歳男性）に、ホタテ・エタノール抽出プラズマローゲン（４ｍｇ／日）を３か月間、ほぼ毎日投与した。
【００４７】
プラズマローゲン摂取前後の検査結果を表１、表２に示す。表１は、腹部エコーに関するデータを示し、表２は、血液生化学検査データを示す。
【００４８】
【表１】
0006859562.tif 000002
【００４９】
【表２】
0006859562.tif 000003
【００５０】
表１に示すように、腹部エコー、血液生化学検査で中等度脂肪肝と診断された患者は、プラズマローゲン摂取３か月後には、肝実質エコーレベルの上昇及び腹部エコーの減衰の値が改善され、医師総合判定でも、軽度脂肪肝となった。
また、表２に示すように、血液生化学検査データにおける脂肪肝関連指標は、ＢＭＩ（体重／身長２）の低下はないにもかかわらず何れも著明に改善した。
【実施例３】
【００５１】
脂肪肝、糖尿病と診断された患者（６３歳男性）に、ホタテ・エタノール抽出プラズマローゲン（２ｍｇ／日）を６か月間、ほぼ毎日投与した。
【００５２】
プラズマローゲン摂取前後の検査結果を表３、表４に示す。表３は、腹部エコーに関するデータを示し、表４は、血液生化学検査データを示す。
【００５３】
【表３】
0006859562.tif 000004
【００５４】
【表４】
0006859562.tif 000005
【００５５】
表３に示すように、腹部エコー、血液生化学検査で中等度脂肪肝と診断された患者は、プラズマローゲン摂取６ヶ月後には、肝実質エコーレベルの上昇及び腹部エコーの減衰の値が改善され、医師総合判定でも、軽度脂肪肝となった。
また、表４に示すように、血液生化学検査データにおける脂肪肝関連指標は、ＢＭＩ（体重／身長２）の低下はないにもかかわらず何れも著明に改善した。
【実施例４】
【００５６】
［配合例］
以下に示す配合により、ハードカプセル剤を製造した。
ホタテ抽出プラズマローゲン        ０．５ｍｇ
シクロデキストリン                ３．３ｍｇ
アミノ酸                          １．２ｍｇ
パインデックス                １８５．０ｍｇ
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明の脂肪肝改善用組成物は、健康食品等として用いることができるものであり、産業上有用である。
【要約】
【課題】脂肪肝改善効果を有する組成物を提供すること。
【解決手段】貝類、ホヤ及び鳥類等の組織から抽出されたプラズマローゲンを含有することを特徴とする脂肪肝改善用組成物である。
【選択図】図１【図１】
0006859562.tif 000006
【図２】
0006859562.tif 000007
【図３】
0006859562.tif 000008
【図４】
0006859562.tif 000009