(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タキサン粒子を含む組成物を、肺腫瘍を治療するのに有効な量で、前記肺腫瘍を伴う被検体に肺投与することを含む肺腫瘍の治療方法に使用するための、タキサン粒子を含む組成物であって、前記タキサン粒子が少なくとも９５％の前記タキサンを含み、０．１μｍ〜５μｍの平均粒子径（数）を有し、前記タキサン粒子は少なくとも１２ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有し、前記タキサン粒子は前記タキサン粒子と医薬的に許容される担体を含む懸濁液中に存在し、前記懸濁液は投与のためにエアロゾル化されており、前記肺投与が噴霧化を含み、前記噴霧化により前記タキサン粒子懸濁液のエアロゾル液滴が前記被検体に肺送達され、前記組成物の投与後、前記タキサンは少なくとも９６時間、被検体の肺組織において検出可能である、組成物。
【請求項２】
前記タキサン粒子が０．４μｍ〜３μｍの平均粒子径（数）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記タキサン粒子が０．４μｍ〜１．２μｍの平均粒子径（数）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記タキサン粒子が少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記懸濁液が、０．０１％ｖ／ｖ〜１．５％ｖ／ｖの濃度で前記懸濁液中に存在するポリソルベートをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記医薬的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記ポリソルベートがポリソルベート８０である、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記タキサンが、１ｍｇ／ｍｌ〜４０ｍｇ／ｍｌの濃度で前記懸濁液中に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記タキサン粒子およびその懸濁液がコートされておらず、脂質、ポリマー、タンパク質、ポリエトキシル化ヒマシ油、ならびに、モノ、ジおよびトリグリセリドとポリエチレングリコールのモノおよびジエステルとから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記タキサンが、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記タキサンが、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記タキサン粒子が、０．０５０ｇ／ｃｍ３〜０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記タキサンが、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記タキサンが、前記投与後少なくとも４日間、前記被検体の肺組織において検出可能なままである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記タキサン粒子が結晶形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記エアロゾル液滴が、０．５μｍ〜６μｍ直径の空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物の投与後、前記タキサン粒子が腫瘍部位に滞留し、前記被検体の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続時間、前記腫瘍を前記タキサン粒子に曝露し、それにより、殺腫瘍細胞が生成され、かつ、前記殺腫瘍細胞が前記腫瘍を治療するのに十分なレベルで前記腫瘍へ浸潤する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記持続時間が少なくとも４週間である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記殺腫瘍細胞がＴ細胞、Ｂ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物は、２回以上の別個の投与で投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物は、少なくとも２週間、週１回投与される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物は、少なくとも１週間、週２回投与され、前記２回以上の別個の投与を少なくとも１日空ける、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記腫瘍の治療が前記腫瘍の除去である、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１７年６月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５１９，２５７号、２０１８年２月９日に出願された米国仮特許出願第６２／６２８，５８２号、２０１８年４月６日に出願された米国仮特許出願第６２／６５３，９４２号および２０１８年５月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／６７８，３８７号に対する優先権を主張するものであり、それら各々の全内容を参照により本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００２】
肺癌は、２番目に多い癌であり、最も致命的な癌の１つである。外科的切除、放射線、化学療法などの従来の療法では、満足のいく長期生存率は得られていない。全身の薬物送達では、たとえ高用量であっても、肺腫瘍に到達するタキサン薬物の量は限られている。したがって、肺腫瘍を治療するための改善された方法が必要とされる。
【発明の概要】
【０００３】
１つの態様において、本発明は、タキサン粒子を含む組成物を、肺腫瘍または肺線維症などの肺障害を治療するのに有効な量で、当該肺障害を伴う被検体に肺投与することを含む肺障害の治療方法であって、当該タキサン粒子が少なくとも９５％の当該タキサンを含み、０．１μｍ〜５μｍの平均粒子径（数）を有する方法を提供する。一実施形態において、当該肺投与は噴霧化を含んでもよく、当該噴霧化により当該タキサン粒子またはその懸濁液のエアロゾル液滴が当該被検体に肺送達される。別の実施形態において、当該タキサン粒子は、０．４μｍ〜２μｍの平均粒子径（数）を有してもよい。更なる実施形態において、当該タキサン粒子は、約０．４μｍ〜約１．２μｍ、または約０．６μｍ〜約１．０μｍの平均粒子径（数）を有してもよい。
【０００４】
別の実施形態において、当該タキサン粒子は少なくとも１０ｍ２／ｇ、または少なくとも１２ｍ２／ｇ、１４ｍ２／ｇ、１６ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３２ｍ２／ｇ、３４ｍ２／ｇもしくは３５ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有してもよい、または、当該タキサン粒子は約１０ｍ２／ｇ〜約６０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。別の実施形態において、当該タキサン粒子は懸濁液中に存在していてもよく、当該懸濁液は、
（ａ）当該タキサン粒子と、
（ｂ）医薬的に許容される担体と、
（ｃ）約０．０１％ｖ／ｖ〜約１．５％ｖ／ｖ、または約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ、約０．１６ｖ／ｖ、または約０．２５％ｖ／ｖの濃度で当該記懸濁液中に存在するポリソルベートと、
を含む。一実施形態において、当該医薬的に許容される担体は、０．９％塩化ナトリウム溶液などの生理食塩水であってもよい。別の実施形態において、当該ポリソルベートはポリソルベート８０であってもよい。更なる実施形態において、当該タキサンは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、または約６ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で当該懸濁液中に存在してもよい。
【０００５】
別の実施形態において、当該タキサン粒子およびその懸濁液はコートされていなくてもよく、脂質、ポリマー、アルブミンなどのタンパク質、ポリエトキシル化ヒマシ油、ならびに／または、モノ、ジおよびトリグリセリドとポリエチレングリコールのモノおよびジエステルとから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外してもよい。
【０００６】
他の実施形態において、当該タキサンはパクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含んでもよい。一実施形態において、当該タキサンはパクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含んでもよく、この実施形態において、当該粒子は以下の特徴の１つ以上を有してもよい：
（ａ）約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３または約０．０６０ｇ／ｃｍ３〜約０．１１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップされていない）；
（ｂ）少なくとも１２ｍ２／ｇ、１５ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３２ｍ２／ｇ、３４ｍ２／ｇまたは３５ｍ２／ｇのＳＳＡ；
（ｃ）約２２ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇまたは約２５ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇまたは約３５ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇのＳＳＡ；および／または
（ｄ）７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃およびｐＨ７．０で、少なくとも４０％（ｗ／ｗ）の前記パクリタキセルが、５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液に、３０分以下で溶解する。
【０００７】
別の実施形態において、当該タキサンはドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含んでもよく、この実施形態において、当該粒子は以下の特徴の１つ以上を有してもよい：
（ａ）約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３または約０．０６ｇ／ｃｍ〜約０．１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップされていない）；
（ｂ）少なくとも１２ｍ２／ｇ、１５ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３５ｍ２／ｇ、４０ｍ２／ｇまたは４２ｍ２／ｇのＳＳＡ；
（ｃ）約２０ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇまたは約３５ｍ２／ｇ〜約４６ｍ２／ｇのＳＳＡ；および／または
（ｄ）７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃およびｐＨ７．０で、少なくとも２０％（ｗ／ｗ）の前記ドセタキセルが、１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液に、３０分以下で溶解する。
【０００８】
別の実施形態において、当該タキサン粒子は結晶形態であってもよい。更なる実施形態において、当該タキサン粒子またはその懸濁液を投与のためにエアロゾル化し、当該エアロゾル液滴が、約０．５μｍ〜約６μｍ直径、または約１μｍ〜約３μｍ直径、または約２μｍ〜約３μｍ直径の空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）を有する。
【０００９】
一実施形態において、当該タキサンは、当該投与後少なくとも４日間、当該被検体の肺組織において検出可能なままであってもよい。
【００１０】
いくつかの実施形態において、当該組成物の投与後、当該タキサン粒子が腫瘍部位に滞留し、当該被検体の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続時間、当該腫瘍を前記タキサン粒子に曝露し、それにより、殺腫瘍細胞が生成され、かつ、当該殺腫瘍細胞が当該腫瘍を治療するのに十分なレベルで当該腫瘍へ浸潤する。いくつかの実施形態において、当該内因性免疫系の刺激により、細胞性（細胞介在性）免疫応答が生じる。他の実施形態において、当該内因性免疫系の刺激により体液性免疫応答が生じる。いくつかの実施形態において、当該内因性免疫系の刺激により腫瘍ワクチンが生成される。いくつかの実施形態では、転移が低減または排除される。
【００１１】
一実施形態において、当該持続時間は少なくとも４週間である。
【００１２】
いくつかの実施形態において、当該殺腫瘍細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組み合わせを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、当該組成物は２回以上の別個の投与で投与される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、当該２種以上の別個の投与は少なくとも２週間、週１回投与される。
【００１５】
他の実施形態において、当該２回以上の別個の投与は少なくとも１週間、週２回投与され、当該２回以上の別個の投与は少なくとも１日空ける。
【００１６】
いくつかの実施形態において、当該腫瘍の治療は当該腫瘍の除去である。
【００１７】
本発明の文脈において、以下の実施形態１〜２５が開示される。
【００１８】
実施形態１は、タキサン粒子を含む組成物を、肺腫瘍または肺線維症を含むがこれに限定されない肺障害を治療するのに有効な量で、当該肺障害を伴う被検体に肺投与することを含む肺障害の治療方法であって、当該タキサン粒子が少なくとも９５％の当該タキサンを含み、０．１μｍ〜５μｍの平均粒子径（数）を有する、方法である。
【００１９】
実施形態２は、当該肺投与が噴霧化を含み、当該噴霧化により当該タキサン粒子またはその懸濁液のエアロゾル液滴が当該被検体に肺送達される、実施形態１に記載の方法である。
【００２０】
実施形態３は、当該タキサン粒子が０．４μｍ〜２μｍの平均粒子径（数）を有する、実施形態１または２に記載の方法である。
【００２１】
実施形態４は、当該タキサン粒子が約０．４μｍ〜約１．２μｍ、または約０．６μｍ〜約１．０μｍの平均粒子径（数）を有する、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の方法である。
【００２２】
実施形態５は、当該タキサン粒子が少なくとも１０ｍ２／ｇ、または少なくとも１２ｍ２／ｇ、１４ｍ２／ｇ、１６ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３２ｍ２／ｇ、３４ｍ２／ｇもしくは３５ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、または、当該タキサン粒子が約１０ｍ２／ｇ〜約６０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法である。
【００２３】
実施形態６は、当該タキサン粒子が懸濁液中に存在し、当該懸濁液が、
（ａ）当該タキサン粒子と、
（ｂ）医薬的に許容される担体と、
（ｃ）約０．０１％ｖ／ｖ〜約１．５％ｖ／ｖ、または約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ、約０．１６ｖ／ｖ、または約０．２５％ｖ／ｖの濃度で当該懸濁液中に存在するポリソルベートと、
を含む、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の方法である。
【００２４】
実施形態７は、当該医薬的に許容される担体が、０．９％塩化ナトリウム溶液などの生理食塩水である、実施形態６に記載の方法である。
【００２５】
実施形態８は、当該ポリソルベートがポリソルベート８０である、実施形態６または７に記載の方法である。
【００２６】
実施形態９は、当該タキサンが、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、または約６ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で当該懸濁液中に存在する、実施形態６〜８のいずれか１つに記載の方法である。
【００２７】
実施形態１０は、当該粒子およびその懸濁液がコートされておらず、脂質、ポリマー、アルブミンなどのタンパク質、ポリエトキシル化ヒマシ油、ならびに／または、モノ、ジおよびトリグリセリドとポリエチレングリコールのモノおよびジエステルとから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外する、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の方法である。
【００２８】
実施形態１１は、当該タキサンが、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含む、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の方法である。
【００２９】
実施形態１２は、当該タキサンが、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含む、実施形態１１に記載の方法。
【００３０】
実施形態１３は、当該粒子が以下の特徴の１つ以上を有する、実施形態１２に記載の方法である：
（ａ）約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３または約０．０６０ｇ／ｃｍ３〜約０．１１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップされていない）；
（ｂ）少なくとも１２ｍ２／ｇ、１５ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３２ｍ２／ｇ、３４ｍ２／ｇまたは３５ｍ２／ｇのＳＳＡ；
（ｃ）約２２ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇまたは約２５ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇまたは約３５ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇのＳＳＡ；および／または
（ｄ）７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃およびｐＨ７．０で、少なくとも４０％（ｗ／ｗ）の当該パクリタキセルが、５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液に、３０分以下で溶解する。
【００３１】
実施形態１４は、当該タキサンが、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩を含む、実施形態１１に記載の方法である。
【００３２】
実施形態１５は、当該粒子が以下の特徴の１つ以上を有する、実施形態１４に記載の方法である：
（ａ）約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３または約０．０６ｇ／ｃｍ３〜約０．１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップされていない）；
（ｂ）少なくとも１２ｍ２／ｇ、１５ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３５ｍ２／ｇ、４０ｍ２／ｇまたは４２ｍ２／ｇのＳＳＡ；
（ｃ）約２０ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇまたは約３５ｍ２／ｇ〜約４６ｍ２／ｇのＳＳＡ；および／または
（ｄ）７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃およびｐＨ７．０で、少なくとも２０％（ｗ／ｗ）の当該ドセタキセルが、１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液に、３０分以下で溶解する。
【００３３】
実施形態１６は、当該タキサンが、当該投与後少なくとも４日間、当該被検体の肺組織において検出可能なままである、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の方法である。
【００３４】
実施形態１７は、当該タキサン粒子が結晶形態である、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の方法である。
【００３５】
実施形態１８は、当該タキサン粒子またはその懸濁液を投与のためにエアロゾル化し、当該エアロゾル液滴が、約０．５μｍ〜約６μｍ直径、または約１μｍ〜約３μｍ直径、または約２μｍ〜約３μｍ直径の空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）を有する、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載の方法である。
【００３６】
実施形態１９は、当該肺障害が肺腫瘍を含み、当該組成物の投与後、当該タキサン粒子が腫瘍部位に滞留し、当該被検体の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続時間、当該肺腫瘍を当該タキサン粒子に曝露し、それにより、殺腫瘍細胞が生成され、かつ、当該殺腫瘍細胞が当該腫瘍を治療するのに十分なレベルで当該腫瘍へ浸潤する、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の方法である。
【００３７】
実施形態２０は、当該持続時間が少なくとも４週間である、実施形態１９に記載の方法である。
【００３８】
実施形態２１は、当該殺腫瘍細胞がＴ細胞、Ｂ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせを含む、実施形態１９または２０に記載の方法である。
【００３９】
実施形態２２は、当該組成物を２回以上の別個の投与で投与する、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の方法である。
【００４０】
実施形態２３は、当該２回以上の別個の投与が少なくとも２週間、週１回投与される、実施形態２２に記載の方法である。
【００４１】
実施形態２４は、当該２回以上の別個の投与が少なくとも１週間、週２回投与され、当該２回以上の別個の投与を少なくとも１日空ける、実施形態２２に記載の方法である。
【００４２】
実施形態２５は、当該肺障害が肺腫瘍を含み、当該治療が当該腫瘍の除去を含む、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の方法である。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】吸入試験から得られたパクリタキセルの肺組織および血漿レベルの経時的グラフである。
【図２】吸入試験から得られた６．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤の空気動力学的直径のプロットである。
【図３】吸入試験から得られた２０．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤の空気動力学的直径のプロットである。
【図４】吸入試験から得られたパクリタキセルの血漿レベルの経時的グラフである。
【図５】吸入試験から得られたパクリタキセルの肺組織レベルの経時的グラフである。
【図６】吸入試験から得られたパクリタキセルの肺組織および血漿レベルの経時的グラフである。
【図７】圧縮空気ジェットＨｏｓｐｉｔａｋネブライザーの図である。
【図８】同所性肺癌試験から得られた動物の体重の経時的グラフである。
【図９】同所性肺癌試験から得られた動物の体重の経時的グラフである。
【図１０】同所性肺癌試験からの動物の肺重量のプロットである。
【図１１】同所性肺癌試験から得られた動物の肺：体重比のプロットである。
【図１２】同所性肺癌試験から得られた動物の肺：脳重量比のプロットである。
【図１３】同所性肺癌試験から得られた平均腫瘍面積のグラフである。
【図１４】同所性肺癌試験から得られた平均腫瘍面積のプロットである。
【図１５】同所性肺癌試験から得られた腫瘍退縮のプロットである。
【図１６】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊の主要な特徴。（２×）。
【図１７】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６対照、腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊内の未分化細胞の主要な特徴。
【図１８】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊内の未分化細胞の主要な特徴。
【図１９】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺胞腔内の塊を示す肺腫瘍塊内の未分化細胞の主要な特徴。ａ（２０×）
【図２０】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊内の原始細胞の主要な特徴。ｂ（１０×）。
【図２１】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊内の原始細胞の主要な特徴。ｂ２０×。
【図２２】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊内の原始細胞の主要な特徴。ｂ（４０×）。
【図２３】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊内の原始細胞の主要な特徴。ｂ（４０×）。
【図２４】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０細気管支。細気管支内を示す未分化細胞の主要な特徴。ｃ（２０×）。
【図２５】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０腺。肺腫瘍塊内の腺房腺分化の主要な特徴。ｄ（１０×）。
【図２６】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０腺。肺腫瘍塊内の腺房腺分化の主要な特徴。ｄ（２０×）。
【図２７】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００１（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−２、原始−１、退縮−０。細気管支下を押圧し血管内浸潤の徴候を示さない肺腫瘍塊の主要な特徴（２×）。
【図２８】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００１（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−２、原始−１、退縮−０。細気管支下を押圧し血管内浸潤の徴候を示さない肺腫瘍塊の主要な特徴（４×）。
【図２９】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００１（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−２、原始−１、退縮−０。細気管支下を押圧する肺腫瘍塊の主要な特徴（１０×）。
【図３０】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴（４×）。
【図３１】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴（１０×）。
【図３２】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴（２０×）。
【図３３】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴。縁部に沿ったリンパ球およびマクロファージに留意。１（４０×）。
【図３４】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴。縁部に沿ったリンパ球およびマクロファージ。２（４０×）。
【図３５】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴。より大きな泡沫状の着色されたマクロファージに留意。２，２×（４０×）。
【図３６】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２０１０（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊の主要な特徴。（２×）
【図３７】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２０１０（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊の主要な特徴。（２０×）
【図３８】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−２０１０（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−３、原始−１、退縮−０。肺腫瘍塊の主要な特徴。縁部に沿ったマクロファージの細かい徴候に留意。（４０×）。
【図３９】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−４００９（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、１×、高）腺癌−０、原始−０、退縮−４。完全な退縮を受けた肺腫瘍塊の特徴。（２×）
【図４０】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−４００９（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、１×、高）腺癌−０、原始−０、退縮−４。完全な退縮を受けた肺腫瘍塊の特徴。間質性線維症に留意。（１０×）。
【図４１】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−４００９（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、１×、高）腺癌−０、原始−０、退縮−４。完全な退縮を受けた肺腫瘍塊の特徴。間質性線維症、ならびに縁部に沿ったリンパ球およびマクロファージに留意。（４０×）。
【図４２】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−５０１０（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、低）腺癌−１、原始−０、退縮−３。退縮を受ける肺腫瘍塊の特徴。（２×）。
【図４３】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−５０１０（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、低）腺癌−１、原始−０、退縮−３。退縮を受けている肺腫瘍塊の特徴。（１０×）。
【図４４】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−５０１０（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、低）腺癌−１、原始−０、退縮−３。退縮を受けている肺腫瘍塊の特徴。（２０×）。
【図４５】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−５０１０（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、低）腺癌−１、原始−０、退縮−３。退縮を受けている肺腫瘍塊の特徴。（４０×）。
【図４６】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−６００５（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。退縮を受けている肺腫瘍塊の特徴。（２×）。
【図４７】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−６００５（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。退縮を受けている肺腫瘍塊の特徴。間質性線維症、ならびに縁部に沿ったリンパ球およびマクロファージに留意。（１０×）。
【図４８】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−６００５（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。退縮を受けている肺腫瘍塊の特徴。縁部に沿ったリンパ球およびマクロファージに留意。（２０×）。
【図４９】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−６００５（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。縁部に沿ったリンパ球およびマクロファージに留意。（４０×）。
【図５０】同所性肺癌組織スライドの顕微鏡写真である−６００５（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。肺胞内における残留腫瘍細胞の焦点領域の存在に留意。２（４０×）。
【図５１】吸入試験から得られた動物の体重の経時的グラフである。
【図５２】吸入試験から得られた動物の体重変化の経時的グラフである。
【図５３】吸入試験から得られたパクリタキセルの血漿レベルの経時的グラフである。
【図５４】吸入試験から得られたパクリタキセルの肺組織レベルの経時的グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本明細書で使用する際、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、文脈で別段の指示がない限り、複数の指示対象が含まれる。本明細書で使用する際、「および」は、特に明記しない限り、「または」と交換可能に使用される。
【００４５】
本明細書で使用する際、「約（ａｂｏｕｔ）」は、記載された測定単位の＋／−５パーセント（５％）を意味する。
【００４６】
本発明の任意の態様の全ての実施形態は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、組み合わせて使用することができる。
【００４７】
文脈がそうでないことを明確に要求しない限り、詳細な説明および特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの単語は、排他的または網羅的な意味ではなく包括的な意味、つまり、「包含するが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」という意味で解釈されるべきである。また、単数または複数を使用する単語には、それぞれ複数と単数が含まれる。さらに、本明細書で使用する際、「本明細書中に（ｈｅｒｅｉｎ）」、「先に（ａｂｏｖｅ）」、および「以下に（ｂｅｌｏｗ）」という単語および同様の意味の単語は、本出願全体を指し、本出願の特定の部分を指すものではない。組成物およびそれらの使用方法は、本明細書を通して開示される成分または工程のいずれかを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）」ことができる。
【００４８】
本開示の実施形態の説明は、網羅的であること、または開示された正確な形態に限定することを意図していない。本明細書では、本開示の特定の実施形態および実施例を例示の目的で説明しているが、当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な均等の修正が可能である。
【００４９】
第一の態様において、本発明は、タキサン粒子を含む組成物を、肺腫瘍を治療するのに有効な量で、肺障害を伴う被検体に肺投与することを含む肺障害の治療方法であって、タキサン粒子が少なくとも９５％のタキサンを含み、０．１μｍ〜５μｍの平均粒子径（数）を有する方法を提供する。
【００５０】
本発明者らは、驚くべきことに、本発明の方法によるタキサン粒子の肺投与により、その他のタキサン製剤を使用して以前に可能であったよりもはるかに長い肺内タキサン滞留時間をもたらすことを発見した。以下の実施例に示されるように、タキサンは、投与後少なくとも９６時間、被検体の肺組織において検出可能なままである。様々な更なる実施形態において、タキサンは、投与後少なくとも１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、３２４、または３３６時間、被検体の肺組織内で検出可能なままである。したがって、本方法は、タキサン粒子が有効な治療となりうる肺腫瘍、中皮腫、肺線維症などの拘束性肺疾患、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの閉塞性肺疾患を含むがこれらに限定されないあらゆる肺障害の治療に使用することができる。
【００５１】
本発明の別の態様において、本方法はまた、組成物の投与後、タキサン粒子が被検体の内因性免疫系を刺激するのに十分な持続時間、肺腫瘍のタキサン粒子への曝露を可能にし、それにより、殺腫瘍細胞が生成され、かつ、殺腫瘍細胞が当該腫瘍を治療するのに十分なレベルで腫瘍へ浸潤する。いくつかの実施形態において、内因性免疫系の刺激により、細胞性（細胞介在性）免疫応答が生じる。他の実施形態において、内因性免疫系の刺激により体液性免疫応答が生じる。いくつかの実施形態において、内因性免疫系の刺激により腫瘍ワクチンが生成される。いくつかの実施形態では、転移が低減または排除される。殺腫瘍細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。いくつかの実施形態において、持続曝露時間量は、少なくとも１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、３２４、または３３６時間である。様々な更なる実施形態において、持続曝露時間量は少なくとも３、４、５、６、７または８週間である。組成物は、単回用量の単回投与（サイクル）、または単回投与の２回以上の別個の投与（２回以上のサイクル）での肺投与により投与することができる。いくつかの実施形態では、２回以上の別個の投与は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１４日間隔で又は少なくともその日数間隔で投与される。いくつかの実施形態では、２回以上の別個の投与は、２〜１２、２〜１１、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１２、３〜１１、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、３〜４、４〜１２、４〜１１、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、４〜５、５〜１２、５〜１１、５〜１０、５〜９、５〜８、５〜７、５〜６、６〜１２、６〜１１、６〜１０、６〜９、６〜８、６〜７、７〜１２、７〜１１、７〜１０、７〜９、７〜８、８〜１２、８〜１１、８〜１０、８〜９、９〜１２、９〜１１、９〜１０、１０〜１２、１０〜１１、１１〜１２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２週間間隔で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、２〜５、２〜４、２〜３、３〜５、３〜４、２、３、４、５またはそれ以上の別個の投与で投与される。いくつかの実施形態において、２回以上の別個の投与は２〜１２週間間隔で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、２〜５回の別個の投与で投与される。いくつかの実施形態において、当該２回以上の別個の投与は少なくとも２週間、週１回投与される。他の実施形態において、当該２回以上の別個の投与は少なくとも１週間、週２回投与され、当該２回以上の別個の投与は少なくとも１日空ける。いくつかの実施形態において、治療方法により、腫瘍が除去（根絶）される。いくつかの実施形態において、組成物は１、２、３、４、５、６回またはそれ以上の別個の投与で投与される。他の実施形態において、組成物は７回以上の別個の投与で投与される。
【００５２】
本明細書で使用する際、「タキサン粒子」は、平均粒子径（数）が０．１μｍ〜５μｍのタキサンから本質的になる（すなわち、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のタキサン）粒子である。本発明で使用するためのタキサン粒子はコーティングされておらず、固体賦形剤内に包埋、含有、封入またはカプセル化されていない。しかしながら、本発明のタキサン粒子は、タキサンの調製中に典型的に見られる不純物および副産物を含んでもよい。そうであっても、タキサン粒子は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のタキサンを含む。これは、タキサン粒子が実質的に純粋なタキサンからなる、または本質的になることを意味する。
【００５３】
タキサンは、非常に水難溶性であるタキサジエンコアを含有するジテルペノイドのクラスである。本発明のタキサン粒子は、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、タキサジエン、バッカチンＩＩＩ、タクスキニンＡ、ブレビホリオールおよびタクスピンＤ、それらの組み合わせ、またはそれらの医薬的に許容される塩を含むがこれらに限定されない、任意の適切なタキサンであり得る。一実施形態において、タキサンは、パクリタキセル、ドセタキセルおよびカバジタキセル、またはそれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択される。
【００５４】
パクリタキセルおよびドセタキセル活性医薬成分（ＡＰＩ）は、Ｐｈｙｔｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＬＬＣ（カナダ、バンクーバー）から市販されている。ドセタキセルＡＰＩには、無水の無溶媒基準で計算されたドセタキセルが９５％以上または９７．５％以上含有されている。パクリタキセルＡＰＩは、無水の無溶媒基準で計算されたパクリタキセルが９５％以上または９７％以上含有されている。いくつかの実施形態において、パクリタキセルＡＰＩおよびドセタキセルＡＰＩは、ＵＳＰおよび／またはＥＰグレードである。パクリタキセルＡＰＩは、半合成の化学プロセスから、または植物細胞などの天然源の発酵または抽出から調製することができる。
【００５５】
肺腫瘍は、肺内に存在する任意の腫瘍であり、原発性または転移性肺腫瘍であり得る。肺腫瘍の非限定的例として、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）が挙げられる。一実施形態において、肺腫瘍はＳＣＬＣである。別の実施形態では、肺腫瘍はＮＳＣＬＣである。被験体は、肺腫瘍を有する、ヒトおよび他の霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギなどを含むがこれらに限定されない任意の哺乳類被験体であり得る。
【００５６】
タキサン粒子の「有効量」は、関連する全ての要因に基づいて主治医により決定することができる。タキサン粒子は、投与される唯一のタキサンであってもよく、または全ての状況を考慮して主治医が適切と考える他の治療薬とともに投与されてもよい。一実施形態において、本方法は、静脈内化学療法、放射線療法、外科的切除などの、治療される腫瘍の治療標準で被検体を治療することをさらに含む。
【００５７】
本明細書で使用する際、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、以下の１つ以上を達成することを意味する：（ａ）腫瘍または線維化のサイズの縮小；（ｂ）腫瘍増殖率の低下；（ｃ）腫瘍または線維症の除去；（ｄ）転移の発生および／もしくはまん延の低減もしくは制限、または転移の除去。いくつかの実施形態において、治療は腫瘍または線維症の除去である。
【００５８】
本発明の特定の一実施形態において、肺投与は、鼻腔内、経口吸入、またはその両方などによるタキサン粒子の単回用量の吸入を含む。タキサン粒子は、２回以上の別個の投与（用量）で投与することができる。この実施形態において、タキサン粒子は、エアロゾル（すなわち、気体媒体中の抗腫瘍性粒子の安定な分散液または懸濁液の液滴）として製剤化することができる。エアロゾルによって送達されるタキサン粒子は、重力沈降、慣性衝突および／または拡散によって気道に堆積する場合がある。圧力計吸入器（ｐＭＤＩ）、ネブライザー、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）およびソフトミスト吸入器を含むが、これらに限定されない、エアロゾルを生成するための任意の適切なデバイスを使用してもよい。
【００５９】
特定の一実施形態において、本方法は、噴霧化によってエアロゾル化されたタキサン粒子の吸入を含む。ネブライザーは一般に、圧縮空気または超音波パワーを使用して、タキサン粒子またはその懸濁液の吸入可能なエアロゾル液滴を作製する。この実施形態において、噴霧化により、タキサン粒子またはその懸濁液のエアロゾル液滴を被検体に肺送達する。
【００６０】
別の実施形態において、本方法は、ｐＭＤＩを介してエアロゾル化されたタキサン粒子の吸入を含み、タキサン粒子またはその懸濁液は、計量バルブで密閉された加圧容器に少なくとも１つの液化ガスを含有する適切な推薬システム（ハイドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）を含むがこれに限定されない）に懸濁される。弁の作動は、タキサン粒子またはその懸濁液のエアロゾルスプレーの計量された用量の送達をもたらす。
【００６１】
他の実施形態において、タキサン粒子は、０．２μｍまたは０．３μｍより大きい平均粒子径（数）を有する。別の実施形態において、タキサン粒子は、少なくとも０．４μｍの平均粒子径（数）を有する。更なる実施形態において、タキサン粒子は、０．４μｍ〜２μｍ、または０．５μｍ〜１．５μｍ、または０．２μｍ〜１μｍ、または０．２μｍ〜１μｍ未満の平均粒子径（数）を有する。
【００６２】
更なる実施形態では、タキサン粒子は、約０．４μｍ〜約５μｍ、約０．４μｍ〜約３μｍ、約０．５μｍ〜約１．４μｍ、約０．４μｍ〜約０．８μｍ、約０．４μｍ〜約０．７μｍ、または約０．５μｍ〜約０．７μｍの範囲の平均粒子径数を有することができる。更なる実施形態では、タキサン粒子は、約０．４μｍ〜約１．２μｍ、または約０．６μｍ〜約１．０μｍの平均粒子径数を有する。別の実施形態において、タキサン粒子は、０．６μｍ〜０．８６１μｍ、または約０．５μｍ〜約０．７μｍ、または約０．２μｍ〜約１μｍ、または約０．２μｍ〜１μｍ未満、または約０．３μｍ〜約１μｍ、または約０．３μｍ〜１μｍ未満、または約０．４μｍ〜約１μｍ、または約０．４μｍ〜１μｍ未満の平均粒子径数を有する。
【００６３】
タキサン粒子の粒子径は、粒子径分析機器によって決定することができ、測定値は数分布（数）に基づく平均直径として表される。適切な粒子径分析機器は、フォトゾーンまたは単一粒子光学センシング（ＳＰＯＳ）とも呼ばれる光遮蔽の分析技術を使用するものである。適切な光遮蔽粒子径分析機器は、Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（フロリダ州、ポートリッチー）から入手可能なＡＣＣＵＳＩＺＥＲ  ７８０  ＳＩＳなどのＡＣＣＵＳＩＺＥＲである。別の適切な粒子経分析機器は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＡＬＤ−７１０１などのレーザー回折を使用するものである。
【００６４】
投与のためにタキサン粒子をエアロゾル化する実施形態では、タキサン粒子またはその懸濁液のエアロゾル液滴の空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）は、本発明での使用に適した任意の直径であり得る。一実施形態において、エアロゾル液滴は、約０．５μｍ〜約６μｍの直径のＭＭＡＤを有する。様々な更なる実施形態において、エアロゾル液滴は、約０．５μｍ〜約５．５μｍ直径、約０．５μｍ〜約５μｍ直径、約０．５μｍ〜約４．５μｍ直径、約０．５μｍ〜約４μｍ直径、０．５μｍ〜３．５μｍ直径、約０．５μｍ〜約３μｍ直径、約０．５μｍ〜約２．５μｍ直径、約０．５μｍ〜約２μｍ直径、約１μｍ〜約５．５μｍ直径、約１μｍ〜約５μｍ、約１μｍ〜約４．５μｍ直径、約１μｍ〜約４μｍ直径、約１μｍ〜約３．５μｍ直径、約１μｍ〜約３μｍ直径、約１μｍ〜約２．５μｍ直径、約１μｍ〜約２μｍ直径、約１．５μｍ〜約５．５μｍ直径、約１．５μｍ〜約５μｍ直径、約１．５μｍ〜約４．５μｍ直径、約１．５μｍ〜約４μｍ直径、約１．５μｍ〜約３．５μｍ直径、約１．５μｍ〜約３μｍ直径、約１．５μｍ〜約２．５μｍ直径、約１．５μｍ〜約２μｍ直径、約２μｍ〜約５．５μｍ直径、約２μｍ〜約５μｍ直径、約２μｍ〜約４．５μｍ直径、約２μｍ〜約４μｍ直径、約２μｍ〜約３．５μｍ直径、約２μｍ〜約３μｍ、および約２μｍ〜約２．５μｍ直径のＭＭＡＤを有する。エアロゾル液滴の空気力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）および幾何標準偏差（ＧＳＤ）を測定するのに適した機器は、マーサースタイルカスケードインパクター（Ｍｅｒｃｅｒ−Ｓｔｙｌｅ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ）などの７段階のエアロゾルサンプラーである。
【００６５】
別の実施形態において、タキサン粒子は少なくとも１０ｍ２／ｇ、または少なくとも１２ｍ２／ｇ、１４ｍ２／ｇ、１６ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３２ｍ２／ｇ、３４ｍ２／ｇもしくは３５ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、または、タキサン粒子は約１０ｍ２／ｇ〜約６０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。
【００６６】
様々な実施形態において、タキサン粒子は、米国特許第５８７４０２９号、第５８３３８９１号、第６１１３７９５号、第７７４４９２３号、第８７７８１８１号、第９２３３３４８号および第５８７４０２９号、第５８３３８９１号、第９２３３３４８号；米国公報第２０１５／０３７５１５３号、第２０１６／０３５４３３６号、第２０１６／０３７４９５３号；および国際特許出願公開第２０１６／１９７０９１号、第２０１６／１９７１００号および第２０１６／１９７１０１号（これらは全て参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるような「圧縮逆溶媒による沈殿」（ＰＣＡ）により作製される。
【００６７】
超臨界二酸化炭素、超臨界二酸化炭素（逆溶媒）および溶媒を使用したＰＣＡ粒子径縮小方法では、例えば、アセトンまたはエタノールを使用して、十分に特性決定された粒径分布内で０．１〜５ミクロン程の小さなコーティングされていないタキサン粒子を生成する。処理中に二酸化炭素と溶媒が除去され（最大０．５％の残留溶媒が残存することがある）、タキサン粒子が粉末として残る。安定性試験により、パクリタキセル粒子粉末を、室温で最大５９か月間、加速条件下（４０°Ｃ／７５％相対湿度）で最大６か月間保管した場合、バイアル剤形で安定していることが示されている。
【００６８】
様々な超臨界二酸化炭素粒子径縮小方法によって生成されたタキサン粒子は、物理的衝撃または粉砕（ｇｒｉｎｄｉｎｇ）、例えば、湿式または乾式粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）、微粉化、崩壊、粉末化、微小流動化または細粉化を使用する従来の粒子径縮小方法によって生成されたタキサン粒子と比較して、独自の物理的特性を有し得る。米国公開第２０１６／０３７４９５３号（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、そのような独特な特性には、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３の嵩密度（組成物中の粒子全体の質量を、メスシリンダーをタップすることなく、メスシリンダーに注ぐときに粒子が占有する総容量で割ったものであり、総容量は、粒子容量、粒子間空隙容量および内部細孔容量を含む）、および米国公開第２０１６／０３７４９５３号に記載され、以下に記載される超臨界二酸化炭素粒子径縮小方法によって生成されるタキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）粒子の少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）が含まれる。この嵩密度範囲は一般に、従来手段によって生成されたタキサン粒子の嵩密度よりも低く、ＳＳＡは一般に従来手段によって生成されたタキサン粒子のＳＳＡよりも広い。これらの独特な特性により、従来の手段で生成されたタキサンと比較して、水／メタノール媒体の溶解速度が大幅に増大する。本明細書で使用する際、「比表面積」（ＳＳＡ）は、以下の方法によりブルナウアー−エメット−テラー（「ＢＥＴ」）等温線によって測定されるタキサン質量単位あたりのタキサン粒子の総表面積である：２００〜３００ｍｇの既知の質量の分析物を３０ｍＬのサンプルチューブに添加する。次に、装填したチューブをＰｏｒｏｕｓ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｉｎｃ．のＳＯＲＰＴＯＭＥＴＥＲ（登録商標）、モデルＢＥＴ−２０２Ａに取り付ける。その後、ＢＥＴＷＩＮ（登録商標）ソフトウェアパッケージを使用して自動試験を実行し、その後、各サンプルの表面積を計算する。当業者によって理解されるように、「タキサン粒子」は、凝集タキサン粒子と非凝集タキサン粒子の両方を含むことができる。ＳＳＡはグラム単位で決定されるため、組成物中の凝集および非凝集タキサン粒子の両方が考慮される。ＢＥＴ比表面積試験手順は、米国薬局方および欧州薬局方の両方に含まれる公定法である。嵩密度の測定は、室温でタップすることなく、メスシリンダーにタキサン粒子を注ぎ、質量および容量を測定し、嵩密度を計算することで実施することができる。
【００６９】
米国公開第２０１６／０３７４９５３号に開示されているように、試験により、５ｍｍのボールサイズを使用した（ｓｕｉｎｇ）Ｄｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルで６００ＲＰＭ、室温で６０分間パクリタキセルを粉砕することにより作製したパクリタキセル粒子のＳＳＡが１５．０ｍ２／ｇであり、嵩密度が０．３１ｇ／ｃｍ３であることが示された。また、米国公開第２０１６／０３７４９５３号に開示されているように、１ロットのパクリタキセル粒子は、次の方法を使用した超臨界二酸化炭素法で生成された場合、３７．７ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．０８５ｇ／ｃｍ３の嵩密度を有していた：パクリタキセル６５ｍｇ／ｍＬの溶液をアセトンで調製した。ＢＥＴＥ  ＭｉｃｒｏＷｈｉｒｌ（登録商標）フォグノズル（ＢＥＴＥ  Ｆｏｇ  Ｎｏｚｚｌｅ，Ｉｎｃ．）および音波プローブ（Ｑｓｏｎｉｃａ、モデル番号Ｑ７００）を約８ｍｍ離して結晶化チャンバー内に配置した。約１００ｎｍの穴を持つステンレス鋼メッシュフィルターを結晶化チャンバーに取り付けて、沈殿したパクリタキセル粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の結晶化チャンバーに入れ、約３８℃、流量２４ｋｇ／時間でおよそ１２００ｐｓｉとした。音波プローブは、２０ｋＨｚの周波数で総出力の６０％に調整した。パクリタキセルを含有するアセトン溶液を、およそ３６時間、４．５ｍＬ／分の流量でノズルからポンプで送出した。上記の超臨界二酸化炭素法によって生成した更なるロットのパクリタキセル粒子のＳＳＡ値は次のとおりである：２２．２７ｍ２／ｇ、２３．９０ｍ２／ｇ、２６．１９ｍ２／ｇ、３０．０２ｍ２／ｇ、３１．１６ｍ２／ｇ、３１．７０ｍ２／ｇ、３２．５９ｍ２／ｇ、３３．８２ｍ２／ｇ、３５．９０ｍ２／ｇ、３８．２２ｍ２／ｇおよび３８．５２ｍ２／ｇ。
【００７０】
米国公開第２０１６／０３７４９５３号に開示されているように、試験により、５ｍｍのボールサイズを使用した（ｓｕｉｎｇ）Ｄｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルで６００ＲＰＭ、室温で６０分間ドセタキセルを粉砕することにより作製したドセタキセル粒子のＳＳＡが１５．２ｍ２／ｇであり、嵩密度が０．４４ｇ／ｃｍ３であることが示された。また、米国公開第２０１６／０３７４９５３号に開示されているように、ドセタキセル粒子は、次の方法を使用した超臨界二酸化炭素法で生成された場合、４４．２ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．０７９ｇ／ｃｍ３の嵩密度を有していた：ドセタキセル７９．３２ｍｇ／ｍＬの溶液をアセトンで調製した。ノズルおよび音波プローブを、およそ９ｍｍ離れた加圧可能なチャンバー内に配置した。約１００ｎｍの穴を持つステンレス鋼メッシュフィルターを加圧可能なチャンバーに取り付けて、沈殿したドセタキセル粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の加圧可能なチャンバーに入れ、約３８℃、流量６８ｓｌｐｍでおよそ１２００ｐｓｉとした。音波プローブは、２０ｋＨｚの周波数で総出力の６０％に調整した。ドセタキセルを含有するエタノール溶液を、およそ９５分間、２ｍＬ／分の流量でノズルからポンプで送出した。）次いで、ステンレス鋼メッシュフィルターを通して混合物をポンプで送出するときに、沈殿したドセタキセル凝集体および粒子を超臨界二酸化炭素から収集した。ドセタキセルの粒子を含有するフィルターを開け、得られた生成物をフィルターから収集した。
【００７１】
米国公開第２０１６／０３７４９５３号に開示されているように、溶解試験により、室温で６０分間、６００ＲＰＭで５ｍｍのボールサイズの（ｓｕｉｎｇ）Ｄｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルを使用してパクリタキセルおよびドセタキセルを粉砕することによって作製したパクリタキセルおよびドセタキセル粒子と比較して、米国公開第２０１６／０３７４９５３号に記載された超臨界二酸化炭素法によって作製したパクリタキセルおよびドセタキセル粒子のメタノール／水媒体への溶解速度が増大したことが示された。溶解速度の決定に使用される手順は次のとおりである。パクリタキセルの場合、およそ５０ｍｇの材料と１．５グラムの１ｍｍガラスビーズをバイアル内でおよそ１時間回転させて、材料をビーズにコーティングした。ビーズをステンレス鋼メッシュ容器に移し、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水５０／５０（ｖ／ｖ）培地、および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ装置ＩＩ（パドル）を含有する溶解浴に入れた。１０、２０、３０、６０および９０分で、５ｍＬのアリコートを取り出し、０．２２μｍフィルターでろ過し、２２７ｎｍでＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。サンプルの吸光度値を、溶解媒体で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。ドセタキセルの場合、およそ５０ｍｇの材料を、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水１５／８５（ｖ／ｖ）培地、および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ装置ＩＩ（パドル）を含有する溶解浴に直接入れた。５、１５、３０、６０、１２０および２２５分で、５ｍＬのアリコートを取り出し、０．２２μｍフィルターでろ過し、２３２ｎｍでＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。サンプルの吸光度値を、溶解媒体で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。パクリタキセルの場合、溶解速度は、超臨界二酸化炭素法で作製した粒子は３０分で４７％溶解したのに対し、粉砕により作製した粒子は３０分で３２％溶解した。ドセタキセルの場合、溶解速度は、超臨界二酸化炭素法で作製した粒子は３０分で２７％溶解したのに対し、粉砕により作製した粒子は３０分で９％溶解した。
【００７２】
いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する  。一実施形態において、抗腫瘍性粒子は、約１０ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍性粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．２０ｇ／ｃｍ３の嵩密度（タップなし）を有する。
【００７３】
更なる実施形態において、抗腫瘍性粒子は以下のＳＳＡを有する：
（ａ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｂ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｃ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｄ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｅ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｆ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｇ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｈ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｉ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｊ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｋ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｌ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ；
（ｍ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ；
（ｈ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ；
（ｉ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ；
（ｊ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ；
（ｋ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ；
（ｌ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ；
（ｍ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ；
（ｎ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ；
（ｏ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ；
（ｐ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ；
（ｑ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ；または
（ｒ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ。
【００７４】
いくつかの実施形態において、タキサン粒子はパクリタキセル粒子であり、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。他の実施形態では、パクリタキセル粒子は、１８ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または１８ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２０ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇまたは３０ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または１８ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２０ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。
【００７５】
いくつかの実施形態において、パクリタキセル粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３、または０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．２０ｇ／ｃｍ３の嵩密度（タップなし）を有する。
【００７６】
いくつかの実施形態において、パクリタキセル粒子は、少なくとも４０％ｗ／ｗの溶解速度を有し、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃、ｐＨ７で５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液に３０分以下で溶解する。
【００７７】
別の実施形態において、パクリタキセル粒子は、以下の特徴のうちの１つ以上を有する：
（ａ）約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３または約０．０６０ｇ／ｃｍ３〜約０．１１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップされていない）；
（ｂ）少なくとも１２ｍ２／ｇ、１５ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３２ｍ２／ｇ、３４ｍ２／ｇまたは３５ｍ２／ｇのＳＳＡ；
（ｃ）約２２ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇまたは約２５ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇまたは約３５ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇのＳＳＡ；および／または
（ｄ）７５ＰＲＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃およびｐＨ７．０で、少なくとも４０％（ｗ／ｗ）の前記パクリタキセルが、５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液に、３０分以下で溶解する。
【００７８】
一実施形態において、パクリタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも３０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。別の実施形態において、パクリタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。一実施形態において、パクリタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および約３０ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。別の実施形態において、パクリタキセル粒子は、約０．０６０ｇ／ｃｍ３〜約０．１１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および約３０ｍ２／ｇ〜約４０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。別の実施形態において、パクリタキセル粒子は、約０．０６０ｇ／ｃｍ３〜約０．１１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも３０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。更なる実施形態において、パクリタキセル粒子は、約０．０６０ｇ／ｃｍ３〜約０．１１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。
【００７９】
別の実施形態において、組成物のパクリタキセル粒子中の少なくとも４０％（ｗ／ｗ）のパクリタキセルは、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液に３０分以下で溶解する。ｐＨ７を使用し、タキサンの溶解度はｐＨの影響を受けない。別の実施形態において、溶解試験は３７℃で実施される。
【００８０】
いくつかの実施形態では、タキサン粒子はドセタキセル粒子であり、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、または少なくとも４２ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。他の実施形態では、ドセタキセル粒子は、１８ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または４０ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または１８ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または４０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。
【００８１】
いくつかの実施形態において、ドセタキセル粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３の嵩密度（タップなし）を有する。
【００８２】
いくつかの実施形態では、ドセタキセル粒子は、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃、ｐＨ７で１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液に３０分以下で溶解する少なくとも２０％ｗ／ｗの溶解速度を有する。
【００８３】
別の実施形態において、ドセタキセル粒子は、以下の特徴のうちの１つ以上を有する：
（ａ）約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３または約０．０６ｇ／ｃｍ３〜約０．１ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップされていない）；
（ｂ）少なくとも１２ｍ２／ｇ、１５ｍ２／ｇ、１８ｍ２／ｇ、２０ｍ２／ｇ、２５ｍ２／ｇ、３０ｍ２／ｇ、３５ｍ２／ｇ、４０ｍ２／ｇまたは４２ｍ２／ｇのＳＳＡ；
（ｃ）約２０ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇまたは約３５ｍ２／ｇ〜約４６ｍ２／ｇのＳＳＡ；および／または
（ｄ）７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、３７℃およびｐＨ７．０で、少なくとも２０％（ｗ／ｗ）の前記ドセタキセルが、１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液に、３０分以下で溶解する。
【００８４】
一実施形態において、ドセタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも３０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。別の実施形態において、ドセタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。更なる実施形態において、ドセタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および少なくとも４０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。一実施形態において、ドセタキセル粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．１２ｇ／ｃｍ３の平均嵩密度（タップなし）および約２０ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。別の実施形態において、ドセタキセル粒子の平均嵩密度（タップなし）は約０．０６ｇ／ｃｍ３〜約０．１ｇ／ｃｍ３であり、ＳＳＡは約３０ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇである。別の実施形態において、ドセタキセル粒子の平均嵩密度（タップなし）は約０．０６ｇ／ｃｍ３〜約０．１ｇ／ｃｍ３であり、ＳＳＡは約３５ｍ２／ｇ〜約５０ｍ２／ｇである。別の実施形態において、ドセタキセル粒子の平均嵩密度（タップされていない）は約０．０６ｇ／ｃｍ３〜約０．１ｇ／ｃｍ３であり、ＳＳＡは約３５ｍ２／ｇ〜約４５ｍ２／ｇである。
【００８５】
別の実施形態において、ドセタキセルの少なくとも２０％（ｗ／ｗ）は、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置において、１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液に３０分以下で溶解される。タキサンの溶解度がｐＨにより影響を受けない中性ｐＨを使用した。別の実施形態において、溶解試験は３７℃で実施される。
【００８６】
これらの様々な実施形態のいずれにおいても、タキサン粒子は、タキサン粒子当たり少なくとも４．１６×１０−１３グラムのタキサン、またはその医薬的に許容される塩を含んでもよい。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、凝集していない個々の粒子であり、複数のタキサン粒子のクラスターではない。
【００８７】
本発明の様々な実施形態において、タキサン粒子はコーティングされていない（ニートな）個々の粒子である。タキサン粒子は、いかなる物質にも結合またはコンジュゲートしていない。いかなる物質もタキサン粒子の表面に吸収または吸着されない。タキサン粒子はいかなる物質にもカプセル化されていない。タキサン粒子はいかなる物質にもコーティングされていない。タキサン粒子は、タキサンのマイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミクロスフェア、またはリポソームではない。および／またはタキサン粒子は、モノマー、ポリマー（または生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤またはアルブミンに結合、付着、カプセル化またはコーティングされていない。いくつかの実施形態において、モノマー、ポリマー（または生体適合性ポリマー）、コポリマー、タンパク質、界面活性剤またはアルブミンは、タキサン粒子の表面に吸収または吸着されない。いくつかの実施形態において、組成物は、ポリマー／コポリマーまたは生体適合性ポリマー／コポリマーを含まない／包含しない、または含有しない。いくつかの実施形態において、組成物はタンパク質を含まない／包含しない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物はアルブミンを含まない／包含しない、または含有しない。本発明のいくつかの態様では、組成物はヒアルロン酸を含まない／包含しない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸とタキサンのコンジュゲートを含まない／包含しない、または含有しない。本発明のいくつかの態様では、組成物は、ヒアルロン酸とパクリタキセルのコンジュゲートを含まない／包含しない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ポロキサマー、ポリアニオン、ポリカチオン、修飾ポリアニオン、修飾ポリカチオン、キトサン、キトサン誘導体、金属イオン、ナノベクター、ポリ−ガンマ−グルタミン酸（ＰＧＡ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）、アルギン酸（ＡＬＧ）、ビタミンＥ−ＴＰＧＳ、ジメチルイソソルビド（ＤＭＩ）、メトキシＰＥＧ  ３５０、クエン酸、抗ＶＥＧＦ抗体、エチルセルロース、ポリスチレン、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリエステル、ポリアミド、多糖類、ポリタンパク質、スチレン−イソブチレン−スチレン（ＳＩＢＳ）、ポリ無水物共重合体、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ビス（Ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン−セバシン酸、ポリ（ｄ、ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（ｄｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＡＧＡ）、および／またはポリ（Ｄ、Ｌ乳酸−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）含まない／包含しない、または含有しない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は結晶形態である。他の実施形態において、タキサン粒子は、非晶質形態、または結晶形態と非晶質形態の両方の組み合わせである。
【００８８】
一実施形態において、投与用のタキサン粒子は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌのタキサンの懸濁液中（すなわち、医薬的に許容される担体と共に、および／またはエアロゾル製剤中）のタキサンの剤形を含む。様々の更なる実施形態では、剤形は、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、もしくは約４ｍｇ／ｍｌ〜約６ｍｇ／ｍｌのタキサン、または少なくとも約０．１、０．５、１、１０、２０、２５、５０、７５、または１００ｍｇ／ｍｌタキサンであってもよい。
【００８９】
一実施形態において、タキサン粒子は、エアロゾル化の前に液体担体中に存在する。水性液体担体などの、任意の適切な液体担体を使用してもよい。注射用０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ）などの０．９％生理食塩水（通常の生理食塩水）を含むが、これに限定されない、任意の適切な水性液体担体を使用することができる。別の実施形態において、タキサン粒子は、エアロゾル化の前に懸濁液中に存在する。いくつかの実施形態において、懸濁液は水性担体を含む。担体は、緩衝剤、水中の浸透塩および／または界面活性剤、ならびにｐＨ、等張性および粘度を調整するための他の薬剤を含むことができる。水性担体を使用する一実施形態では、界面活性剤の濃度は、ｗ／ｗまたはｗ／ｖ基準で１％未満であり、他の実施形態では、０．５％未満、０．２５％未満または約０．１％である。他の実施形態では、水性担体は、界面活性剤ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）（モノ、ジおよびトリグリセリドおよびポリエチレングリコールのモノおよびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリド）および／またはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）（ポリエトキシル化ヒマシ油）を除外できる。いくつかの実施形態において、組成物または懸濁液は、ポリマー、タンパク質（アルブミンなど）、ポリエトキシル化ヒマシ油、ならびに／またはモノ、ジおよびトリグリセリドおよびポリエチレングリコールのモノおよびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外する。
【００９０】
いくつかの実施形態では、懸濁液は、水、および任意で、緩衝剤、張性調整剤、防腐剤、粘滑剤、粘度調整剤、浸透剤、界面活性剤、酸化防止剤、アルカリ化剤、酸性化剤、消泡剤および着色料からなる群から選択される１つ以上の賦形剤を含むことができる。例えば、懸濁液は、タキサン粒子、水、緩衝液および塩を含むことができる。懸濁液は、場合によりさらに界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、懸濁液は、水、水に懸濁したパクリタキセル粒子および緩衝液から本質的になるか、またはそれらからなる。懸濁液は、浸透塩をさらに含むことができる。
【００９１】
懸濁液は、１つ以上の界面活性剤を含むことができる。適切な界面活性剤には、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩、アセチル化モノグリセリド、ジアセチル化モノグリセリドおよびポロキサマーが例として限定するものではなく含まれる。ポリソルベートは、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであり、それらはソルビトールとその無水物の一連の部分脂肪酸エステルであり、ソルビトールとその無水物のモルごとにおよそ２０、５または４モルのエチレンオキシドと共重合される。ポリソルベートの非限定的な例は、ポリソルベート２０、ポリソルベート２１、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６１、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５およびポリソルベート１２０である。およそ２０モルのエチレンオキシドを含有するポリソルベートは、親水性の非イオン性界面活性剤である。約２０モルのエチレンオキシドを含むポリソルベートの例としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５およびポリソルベート１２０が挙げられる。ポリソルベートは、ＴＷＥＥＮ（商標）の商品名でＣｒｏｄａから市販されている。ポリソルベートの番号指定は、ＴＷＥＥＮの番号指定に対応する。たとえば、ポリソルベート２０はＴＷＥＥＮ  ２０であり、ポリソルベート４０はＴＷＥＥＮ  ４０であり、ポリソルベート６０はＴＷＥＥＮ  ６０であり、ポリソルベート８０はＴＷＥＥＮ  ８０である。ＵＳＰ／ＮＦグレードのポリソルベートにはポリソルベート２０  ＮＦ、ポリソルベート４０  ＮＦ、ポリソルベート６０  ＮＦおよびポリソルベート８０  ＮＦが含まれる。ポリソルベートは、ＰｈＥｕｒグレード（欧州薬局方）、ＢＰグレードおよびＪＰグレードでも入手可能である。「ポリソルベート」という用語は、一般名称である。ポリソルベート２０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレートである。ポリソルベート４０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノパルミテートである。ポリソルベート６０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノステアレートである。ポリソルベート８０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレアートである。いくつかの実施形態において、懸濁液はポリソルベートの混合物を含むことができる。いくつかの実施形態において、懸濁液は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５および／またはポリソルベート１２０を含む。他の実施形態において、懸濁液は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０および／またはポリソルベート８０を含む。一実施形態において、懸濁液はポリソルベート８０を含む。
【００９２】
懸濁液は、１つ以上の張性調整剤を含むことができる。適切な張度調整剤には、例として限定するものではないが、１つ以上の無機塩、電解質、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、ナトリウム、硫酸カリウム、重炭酸ナトリウムおよびカリウム、ならびにアルカリ土類金属無機塩などのアルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩、マンニトール、デキストロース、グリセリン、プロピレングリコール、ならびにそれらの混合物が含まれる。
【００９３】
懸濁液は、１つ以上の緩衝剤を含むことができる。適切な緩衝剤としては、例として限定するものではないが、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム塩酸、水酸化ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒドロキシメチル）メタン、および炭酸水素ナトリウム、ならびに当業者に知られている他のものが挙げられる。緩衝液は、腹腔内での使用に望ましい範囲にｐＨを調整するために一般的に使用される。通常、約５〜９、５〜８、６〜７．４、６．５〜７．５または６．９〜７．４のｐＨが望ましい。
【００９４】
懸濁液は、１つ以上の粘滑剤を含むことができる。粘滑剤は、腹膜やその中の臓器を覆う膜などの、粘膜上に鎮静膜（ｓｏｏｔｈｉｎｇ  ｆｉｌｍ）を形成する薬剤である。粘滑剤は軽度の痛みや炎症を和らげる場合があり、粘膜保護剤と呼ばれることもある。適切な粘滑剤には、本明細書に記載される別の高分子粘滑剤と共に使用される場合、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびメチルセルロースなど、約０．２〜約２．５％の範囲のセルロース誘導体；約０．０１％のゼラチン；約０．０５％〜約１％のポリオール、またグリセリン、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００およびプロピレングリコールなどを含む、約０．０５〜約１％のポリオール；約０．１〜約４％のポリビニルアルコール；約０．１〜約２％のポビドン；および約０．１％のデキストラン７０が含まれる。
【００９５】
懸濁液は、ｐＨを調整するために１つ以上のアルカリ化剤を含むことができる。本明細書で使用する場合、用語「アルカリ化剤」は、アルカリ性媒体を提供するために使用される化合物を意味することが意図されている。そのような化合物には、例として限定するものではないが、アンモニア溶液、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウム、ならびに当業者に知られている他のものが含まれる。
【００９６】
懸濁液は、ｐＨを調整するために１つ以上の酸性化剤を含むことができる。本明細書で使用する場合、用語「酸性化剤」は、酸性媒体を提供するために使用される化合物を意味することが意図されている。そのような化合物には、例として限定するものではないが、酢酸、アミノ酸、クエン酸、硝酸、フマル酸および他のアルファヒドロキシ酸、塩酸、アスコルビン酸および硝酸、ならびに当業者に知られている他のものが含まれる。
【００９７】
懸濁液は、１つ以上の消泡剤を含むことができる。本明細書で使用する際、用語「消泡剤」は、充填組成物の表面に形成される発泡の量を防止または低減する化合物を意味することが意図されている。適切な消泡剤には、例として限定するものではないが、ジメチコン、シメチコン（ＳＩＭＥＴＨＩＣＯＮＥ）、オクトキシノールおよび当業者に知られている他のものが含まれる。
【００９８】
懸濁液は、懸濁液の粘度を増加または減少させる１つ以上の粘度調整剤を含むことができる。適切な粘度調整剤には、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マンニトールおよびポリビニルピロリドンが含まれる。
【００９９】
いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、ポリソルベートをさらに含む懸濁液中に存在する。特定の一実施形態において、タキサン粒子は、ポリソルベートをさらに含む懸濁液中に存在し、ポリソルベートはポリソルベート８０である。他の実施形態において、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１．５％ｖ／ｖの濃度で懸濁液中に存在する。驚くべきことに、本発明者らは、記載した非常に少量のポリソルベート８０が、タキサン粒子と懸濁液中の水性担体（生理食塩水など）との界面での表面張力を低下させることを発見した。いくつかの実施形態では、粒子はポリソルベートまたはポリソルベート８０でコーティングされていてもよく、他の実施形態では、粒子はポリソルベートまたはポリソルベート８０でコーティングされていない。様々な他の実施形態では、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ、約０．１６ｖ／ｖまたは約０．２５％ｖ／ｖの濃度で懸濁液中に存在する。更なる実施形態において、パクリタキセルなどのタキサンは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、または約６ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で懸濁液中に存在する。様々な更なる実施形態では、タキサンは、約６ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌまたは約１５ｍｇ／ｍｌの濃度で懸濁液中に存在する。様々な更なる実施形態において、組成物中の水性担体は、約０．９％塩化ナトリウムなどの生理食塩水であってもよい。
【０１００】
実施例１  懸濁液中のパクリタキセル粒子（すなわち、実施例１、２、３および４で使用される、本明細書に開示されるようなパクリタキセル粒子であって、、０．８３ミクロンの平均粒子径（数）、２７．９ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．０８０５ｇ／ｃｍ３の嵩密度（タップなし）を有するパクリタキセルおよそ９８％）−安全性および有効性の開発プログラム−Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットのパイロット薬物動態試験
【０１０１】
試験番号：ＦＹ１７−００８Ａ。
【０１０２】
実施の概要（ＥＸＥＣＵＴＩＶＥ  ＳＵＭＭＡＲＹ）
このパイロット試験の目的は、パクリタキセル粒子懸濁液製剤を使用した完全な薬物動態（ＰＫ）試験のサンプリング時点を定義することであった。パクリタキセル粒子製剤が肺での保持を増加させる可能性があるため、０．５〜１６８時間の９つの時点を評価して、完全な薬物動態試験のための適切なサンプリング戦略を決定した。
【０１０３】
１６匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、一度だけ鼻のみからの吸入によりパクリタキセル粒子製剤（０．３７ｍｇ／ｋｇの目標用量）に曝露した。２匹の動物（ｎ＝２）を、曝露後０．５、６、１２、２４、４８、７２、１２０、および１６８時間の指定された時点で安楽死させた。血液（血漿）および肺組織のサンプルを収集した。
【０１０４】
曝露当日、パクリタキセル粒子製剤（６ｍｇ／ｍＬ）をスポンサーによる指示に従って調製した。
【０１０５】
総エアロゾル曝露時間は、全ての動物について６３分であった。鼻のみの曝露チャンバーの呼吸ゾーンに配置した４７ｍｍ  ＧＦ／Ａフィルター上に蓄積された製剤の量を測定することにより、６３分間のパクリタキセル粒子製剤エアロゾル曝露全体にわたってエアロゾル濃度を監視した。エアロゾル粒子径（液滴サイズ）は、曝露チャンバーの動物呼吸ゾーンからマーサースタイルカスケードインパクターを使用して測定した。
【０１０６】
パクリタキセル粒子懸濁液製剤は、２つのＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーを使用してエアロゾル化した（平均パクリタキセルエアロゾル濃度：目標８２．６５μｇ／Ｌ）。ＧＦ／Ａフィルターから測定した全体の平均エアロゾル濃度は０．２４ｍｇ／Ｌであり、平均パクリタキセルエアロゾル濃度は７３．５μｇ／ｍＬであった。粒度分布は、２．２のＧＳＤで２．０μｍのＭＭＡＤと測定された。測定された平均パクリタキセルエアロゾル濃度７３．５μｇ／Ｌは、目標の平均パクリタキセルエアロゾル濃度８２．６５μｇ／Ｌから約１１％低くなった（分析アッセイの精度／回収性能基準±１５％以内）。酸素および温度は、パクリタキセル粒子製剤のエアロゾルへの曝露全体を通して監視した。記録された酸素および温度の範囲は、それぞれ１９．７％〜２０．９％および２０．４℃〜２０．８℃であった。
【０１０７】
肺へのパクリタキセル堆積量は、パクリタキセルの平均エアロゾル濃度７３．５μｇ／Ｌ、げっ歯類の平均体重３２６ｇ、想定堆積分率１０％および曝露時間６３分に基づいて計算した。達成されたげっ歯類の平均堆積量は０．３３ｍｇ／ｋｇと決定された。０．３７ｍｇ／ｋｇの目標堆積量と比較すると、達成された平均堆積量は約１１％少なかったが、噴霧化曝露の場合に予想される変動性（目標から±１５％）の範囲内であった。
【０１０８】
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。剖検時に、数匹の動物の肺にわずかな赤い変色が見られた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。剖検で得られた体重と肺重量から、全ての時点での動物の平均最終体重（標準偏差）は３４６．２６ｇ（２４．０１）であり、平均肺重量（標準偏差）は１．６０ｇ（０．１３）であった。
【０１０９】
全身血液（Ｋ２ＥＤＴＡからの血漿の形態）を液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）アッセイでアッセイし、肺組織を４．６章（生物学的分析）で簡潔に説明されるようにアッセイして、時間の関数としてパクリタキセルの量を定量した。肺組織分析は、１６８時間まで検出可能な量のパクリタキセルによる肺曝露を示した。全身血液は２４時間後に検出可能なパクリタキセル（１ｎｇ／ｍＬ未満）を示さなかった。これらのデータに基づいて、ＰＫ試験には次のサンプリング時点が推奨される：吸入曝露後、０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）１６８（±３０分）、２４０（±３０分）、３３６（±３０分）。
【０１１０】
目的
このパイロット試験の目的は、パクリタキセル粒子製剤を使用した完全な薬物動態（ＰＫ）試験のサンプリング時点を定義することであった。腹腔内（ＩＰ）注射で投与したパクリタキセル粒子製剤による予備データは、腹腔内での有意な保持時間を示す。パクリタキセル粒子製剤が肺での保持を増加させる可能性があるため、１６８時間までの時点を評価して、完全な薬物動態試験のための適切なサンプリング戦略を決定した。
【０１１１】
材料および方法
試験系
種／株：Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット  
試験開始時の動物の年齢：８〜１０週齢  
試験開始時の体重範囲：３０８〜３５３ｇ
試験ラット数／性別：雄１８匹（試験動物１６匹および予備２匹）
供給源：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ニューヨーク州、キングストン）
識別：パーマネントマーカーによる尾マーキング
【０１１２】
試験および対照品の製剤化および投与
パクリタキセル粒子懸濁液製剤（６ｍｇ／ｍＬ）を、スポンサーによる指示に従って調製した。簡潔には、パクリタキセル粒子（３０６ｍｇ）を含有するバイアルに５．０ｍＬの１％ポリソルベート８０を加えた。パクリタキセル粒子懸濁液バイアルを激しく振とうして反転させ、バイアル内に存在する全ての粒子を確実に濡らした。振とう直後に、４６ｍＬの０．９％塩化ナトリウムをバイアルに加え、バイアルを少なくとも１分間振とうして、十分な混合と懸濁液の適切な分散を確認した。得られた製剤は、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内の空気／泡を減らすために、少なくとも５分間そのままにしておいた。最終製剤を室温で保ち、再構成後３時間以内に使用した。
【０１１３】
実験設計
１６匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、一度だけ鼻のみからの吸入によりパクリタキセル粒子懸濁液製剤（０．３７ｍｇ／ｋｇの目標用量）に曝露した。２匹の動物（ｎ＝２）を、血液（血漿）および肺組織を収集するために、曝露後０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）および１６８（±３０分）時間で安楽死させた。特定のＰＫモデリングは行わず、逆に、データは、ＰＫ試験のための曝露後のパクリタキセルの検出可能な量の期間を定義する。
【０１１４】
飼畜、隔離、および試験への割り当て
雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（６〜８週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ニューヨーク州、キングストン）から入手し、１４日間隔離した。隔離の終わりに動物の体重を測定し、その後、試験への割り当てのために体重によって無作為化した。動物は、尾マーキングとケージカードによって識別した。標準的な手法を使用して、水、照明、湿度および温度制御を維持および監視した。非曝露時間中は、ラットに標準的なげっ歯類用食餌を自由に与えた。
【０１１５】
体重および毎日の観察
体重は、無作為化時、試験期間中毎日および安楽死時に収集した。試験時の各動物は、異常、瀕死または死亡の任意の臨床的兆候について、比較医学動物資源（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ：ＣＭＡＲ）要員によって１日２回観察した。
【０１１６】
鼻のみのエアロゾル曝露
馴化
標準的な技術を使用して、最大７０分間、鼻のみの曝露チューブに動物を馴化させた。曝露前の３日間で３つの順化セッションを行った。最初のセッションは３０分、２番目のセッションは６０分、３番目のセッションは７０分続けた。一時的な苦痛以上のものを経験しないことを保証するために、馴化期間中にわたって、かつ、曝露中、それらを綿密に監視した。
【０１１７】
曝露システム
吸入曝露システムは、２つの圧縮空気ジェットネブライザー（Ｈｏｓｐｉｔａｋ）およびげっ歯類の鼻のみの吸入曝露チャンバーからなるものであった。曝露中にわたって、曝露酸素レベル（％）を監視した。パクリタキセル粒子懸濁液製剤エアロゾルを、２０ｐｓｉの吸気圧で、２つの圧縮空気ジェットネブライザーのセット（最大４０（±１）分間使用し、その後、残りの曝露時間のために２つの圧縮空気ジェットネブライザーの第二のセットと交換）を用いて生成した。エアロゾルは、２４インチのステンレス鋼エアロゾル送達ライン（直径１．５３ｃｍ）を介して、鼻のみの曝露チャンバーに送った。
【０１１８】
濃度の監視
エアロゾル濃度の監視は、事前に計量されたＧＦ／Ａ  ４７ｍｍフィルター上にエアロゾルを収集することにより行った。フィルターは、げっ歯類への曝露を通して、鼻のみの曝露チャンバーのげっ歯類呼吸ゾーンからサンプリングした。ＧＦ／Ａフィルターを通過するエアロゾルのサンプリング流量は、１．０±０．５Ｌ／分に維持した。合計６個のＧＦ／Ａフィルターを収集した。１３分後に収集した最後のフィルターを除き、曝露時間全体で１０分ごとに１個のフィルターを収集した。サンプルの収集後、フィルターの重量を測定して、曝露システム内の総エアロゾル濃度を決定した。フィルターを抽出し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析して、各フィルター上に収集されたパクリタキセルの量を定量化した。エアロゾルの総量と収集されたパクリタキセルエアロゾルをフィルターを通過する総空気流で除算することにより、各フィルターの総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を計算した。平均パクリタキセルエアロゾル濃度を使用して、以下に示す式１を使用して、げっ歯類の肺に対するパクリタキセルの達成された平均堆積量を計算した。
【０１１９】
粒子径の決定
エアロゾルの粒径分布は、マーサースタイルの７段階カスケードインパクター（Ｉｎｔｏｘ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．、ニューメキシコ州、アルバカーキ）によって、鼻のみの曝露チャンバーのげっ歯類呼吸ゾーンから測定した。粒径分布は、空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）および幾何標準偏差（ＧＳＤ）に関して決定した。カスケードインパクターのサンプルは、流速２．０±０．１Ｌ／分で収集した。
【０１２０】
用量の決定
堆積量を、式１を使用して計算した。この計算では、ラットの平均群体重とともに、曝露から測定した平均エアロゾル濃度を使用した。このようにして、ラットの肺に堆積したパクリタキセルの推定量を、測定したパクリタキセルエアロゾル濃度を使用して計算した。
【数１】
0006840869.tif 000002
式中、
堆積量＝（ＤＤ）μｇ／ｋｇ
２毎分呼吸量（ＲＭＶ）＝０．６０８×ＢＷ０．８５２
エアロゾル曝露濃度（ＡＣ）＝パクリタキセルエアロゾル濃度（μｇ／Ｌ）
堆積分率（ＤＦ）＝想定堆積分率１０％
ＢＷ＝試験中の動物の平均体重（無作為化時、−１日目）（ｋｇ）
【０１２１】
安楽死および剖検
動物を、安楽死用溶液のＩＰ注射によりそれぞれの時点で安楽死させた。剖検中、血液（血漿用）を心臓穿刺によりＫ２ＥＤＴＡチューブ内に収集し、肺の重量を測定し、肺組織サンプルを収集し、生物学的分析のために液体窒素で瞬間凍結させた。さらに、資格のある剖検要員によって完全な肉眼検査を行った。身体の外面、開口部、ならびに、頭蓋腔、胸腔および腹腔の内容物を調べた。形態、量、形状、色、稠度および重症度に関する用語集一式を使用して、病変を記述および記録した。
【０１２２】
生物学的分析
全身血液（Ｋ２ＥＤＴＡからの血漿の形態）および肺組織を液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）アッセイでアッセイして、時間の関数としてパクリタキセルの量を定量化した。簡潔に言うと、このアッセイでは、超高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）アッセイを利用してパクリタキセルを定量化する。血漿サンプルはタンパク質沈殿法により抽出し、分離は逆相クロマトグラフィーにより達成される。肺サンプルを４：１（水：肺組織）の比にて水で均質化した。次いで、ホモジネートに対し、ＬＣＭＳでの分析の前に同様のタンパク質沈殿法を行った。マトリックスベースの検量線を使用して定量化を実施した。
【０１２３】
これらのデータに対しては薬物動態モデリングを実施しなかった。しかしながら、パクリタキセルがアッセイの感度限界（１ｎｇ／ｍＬ）を下回る濃度を使用して、主要なＰＫ試験のサンプリング時点を定義した。
【０１２４】
結果
臨床観察および生存
全ての動物は指定された剖検時点まで生存し、体重が増加した。研究期間を通して異常な臨床所見は認められなかった。
【０１２５】
パクリタキセル粒子の曝露
エアロゾル濃度
表１は、曝露中に各ＧＦ／Ａフィルターをサンプリングして測定した総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を示す。７３．５μｇ／Ｌの吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、８２．６５μｇ／Ｌの目標平均パクリタキセルエアロゾル濃度よりも約１１％低かった。平均曝露エアロゾル濃度は、噴霧化吸入曝露に関して予想される目標エアロゾル濃度の±１５％以内であった。
【表１】
0006840869.tif 000003
【０１２６】
酸素および温度
記録された酸素および温度の範囲は、それぞれ１９．７％〜２０．９％および２０．４℃〜２０．８℃であった。
【０１２７】
粒子径
カスケードインパクターを使用して６．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）についての粒径分布は、２．０（２．２）μｍと決定された。
【０１２８】
堆積量
パクリタキセルの平均エアロゾル濃度７３．５μｇ／Ｌ、平均げっ歯類−１日目（無作為化）体重３２６ｇ、想定堆積分率１０％、および曝露時間６３分に基づき、達成されたげっ歯類の平均堆積量は０．３３ｍｇ／ｋｇと決定された。達成された平均堆積量は、曝露平均エアロゾル濃度において予想される変動性（目標から±１５％）により、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標堆積量と比較して約１１％少なかった。
【０１２９】
剖検
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。剖検時に、いくつかの動物の肺にわずかな赤い変色が見られた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。個々および平均の肺重量、体重および比を決定した。平均終末体重（標準偏差）は３４６．２６ｇ（２４．０１）であった。平均肺重量（標準偏差）は１．６０ｇ（０．１３）であった。臓器肺重量および肺重量：体重比は、吸入物質に対するあり得る毒性学的反応を評価するために使用される一般的なパラメータである。全体として、データは履歴データと一致しており、これら終点のいずれでも応答がなかったことを示している。
【０１３０】
生物学的分析
結果を以下の表２および図１に要約する。血漿中の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で１６．７０５ｎｇ／ｍＬであったが、２４時間の時点で徐々に減少し、その後の全ての時点で定量下限（１ｎｇ／ｍＬ）を下回った。肺組織の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で２１９４０ｎｇ／ｇであり、１６８時間の時点までに４１９．６ｎｇ／ｇまで徐々に減少した。これは、最小限の全身曝露で肺にパクリタキセル粒子がかなり保持されていることを示している。
【表２】
0006840869.tif 000004
【０１３１】
結論
１６匹の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、一度だけ鼻のみからの吸入によりパクリタキセル粒子製剤エアロゾル（０．３７ｍｇ／ｋｇの目標用量）に曝露した。２匹の動物（ｎ＝２）を、血液（血漿）および肺組織を収集するために、曝露から０．５、６、１２、２４、４８、７２、１２０および１６８時間後に安楽死させた。
【０１３２】
６３分間の吸入曝露中の平均パクリタキセルエアロゾル濃度７３．５μｇ／Ｌは、目標の平均パクリタキセルエアロゾル濃度８２．６５μｇ／Ｌよりも約１１％低かった。平均曝露エアロゾル濃度は、噴霧化吸入曝露に関して予想される目標エアロゾル濃度の±１５％以内であった。カスケードインパクターを使用して６．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）についての粒径分布は、２．０（２．２）μｍと決定された。記録された酸素および温度の範囲は、それぞれ１９．７％〜２０．９％および２０．４℃〜２０．８℃であった。
【０１３３】
パクリタキセル堆積量は、パクリタキセルの平均エアロゾル濃度７３．５μｇ／Ｌ、げっ歯類の平均体重３２６ｇ、想定堆積分率１０％および曝露時間６３分に基づいて計算した。達成されたげっ歯類の平均堆積量は０．３３ｍｇ／ｋｇと決定された。予想される変動性（目標から±１５％）により、目標の堆積量０．３７ｍｇ／ｋｇと比較して、達成された平均堆積量は約１１％減少した。
【０１３４】
全ての動物は、予定された剖検時点まで生存した。剖検時に、数匹の動物の肺にわずかな赤い変色が見られた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。剖検で得られた体重と肺重量から、平均最終体重（標準偏差）は３４６．２６ｇ（２４．０１）であり、平均肺重量（標準偏差）は１．６０ｇ（０．１３）であった。臓器肺重量および肺重量：体重比は、吸入物質に対するあり得る毒性学的反応を評価するために使用される一般的なパラメータである。全体として、データはこれらのエンドポイントのいずれでも応答がなかったことを示している。
【０１３５】
血漿中の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で１６．７０５ｎｇ／ｍＬであったが、その後２４時間の時点で徐々に減少し、２４時間後の全ての時点で定量下限を下回った。肺組織の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で２１９４０ｎｇ／ｇであり、１６８時間の時点までに４１９．６ｎｇ／ｇまで徐々に減少した。これは、最小限の全身曝露で肺にパクリタキセル粒子がかなり保持されていることを示している。ＰＫ試験には、次のサンプリング時点が推奨される：曝露後、０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）１６８（±３０分）、２４０（±３０分）、３３６（±３０分）時間。
【０１３６】
実施例２：試験ＦＹ１７−００８Ｂ−パクリタキセル粒子エアロゾル吸入曝露試験
実施の概要
この作業の全体的な目的は、６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子懸濁液製剤で、雄ラットに鼻のみの吸入曝露を行うことであった。ラット吸入曝露を、それぞれ６５分間行った。
【０１３７】
６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子懸濁液製剤を、スポンサーによる指示に従って調製した。２つのＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーを２０ｐｓｉで同時に使用して、パクリタキセル粒子製剤をげっ歯類吸入曝露チャンバー内にエアロゾル化した。各曝露中に、１．０±０．５Ｌ／分の流量で４７ｍｍ  ＧＦ／Ａフィルターにサンプリングすることにより、動物呼吸ゾーンからエアロゾル濃度を測定した。２．０±０．１Ｌ／分の流量でマーサースタイルカスケードインパクターを使用して、動物呼吸ゾーンからエアロゾルをサンプリングすることにより、粒子径を決定した。フィルターを重量分析して総パクリタキセル粒子エアロゾル濃度を決定し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を介して各曝露のパクリタキセルエアロゾル濃度を決定した。吸入曝露中の酸素および温度を監視して記録した。
【０１３８】
平均総パクリタキセル粒子エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度は、６．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤で行われた吸入曝露について、それぞれＲＳＤ  ７．４３％で０．２５ｍｇ／Ｌ、およびＲＳＤ  １０．２３％で８５．６４μｇ／Ｌと決定した。カスケードインパクターを使用して測定された平均空気動力学的中央粒子径直（幾何学的標準偏差）は、６．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤エアロゾルで１．８（２．０）μｍであった。平均総パクリタキセル粒子エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度は、２０．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤で行われた吸入曝露について、それぞれＲＳＤ  １０．９５％で０．４６ｍｇ／Ｌ、およびＲＳＤ  １１．９９％で２６２．２７μｇ／Ｌと決定した。カスケードインパクターを使用して測定された平均空気動力学的中央粒子径（幾何学的標準偏差）は、２０．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤エアロゾルについて２．３（１．９）μｍであった。
【０１３９】
平均パクリタキセル堆積量０．３８ｍｇ／ｋｇおよび１．１８ｍｇ／ｋｇは、それぞれ、６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤の６５分間の曝露について、式１を使用して計算した。
【０１４０】
製剤化および吸入曝露
製剤の調製
材料
試験品
吸入曝露に使用した試験品を以下に示す。
パクリタキセル粒子
【表２−２】
0006840869.tif 000005
【０１４１】
製剤化および吸入曝露
製剤の調製
６．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤を次のように調製した：簡潔には、パクリタキセル粒子（３０６ｍｇ）を含有するバイアルに５．０ｍＬの１％ポリソルベート８０を加えた。バイアルを激しく振とうして反転させ、バイアル内に存在する全ての粒子を確実に濡らした。振とう直後に、４６ｍＬの０．９％塩化ナトリウム溶液をバイアルに加え、バイアルを少なくとも１分間振とうして、十分な混合と懸濁液の適切な分散を確認した。
【０１４２】
６．０ｍｇ／ｍＬ製剤のための上記のパクリタキセル粒子製剤手順を使用して、２０．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤を調製した。ただし、６．０ｍｇ／ｍＬ製剤のために４６ｍＬを使用したことに代えて、１０．３ｍＬの０．９％塩化ナトリウム溶液をバイアルに加えた。
【０１４３】
得られた製剤は、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内の空気／泡を減らすために、少なくとも５分間そのままにしておいた。６．０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を室温で保ち、再構成後２時間以内に噴霧化した。２０．０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を室温に保ち、再構成後３０分以内に噴霧化した。
【０１４４】
実験設計
３０匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを静脈内ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（パクリタキセル：目標用量５．０ｍｇ／ｋｇ）の単回「臨床基準」用量に曝露し、３０匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを本明細書に開示したパクリタキセル粒子製剤に曝露し（目標用量０．３７ｍｇ／ｋｇ）、そして３０匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、パクリタキセル粒子製剤（目標用量１．０ｍｇ／ｋｇ）に一度だけ鼻のみからの吸入により曝露した。３匹の動物（ｎ＝２）を、血液（血漿）および肺組織を収集するために、曝露後０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）、１６８（±３０分）、２４０（±３０分）および３３６（±３０分）時間で安楽死させた。血漿および肺組織に対して非コンパートメント分析を実施して、各用量群に関する曝露後のパクリタキセルの検出可能な量の持続時間を特定した。
曝露システムのセットアップ／エアロゾル生成：実施例１と同様
エアロゾル濃度の監視：実施例１と同様
粒径分布：実施例１と同様
堆積量の計算：実施例１と同様
【０１４５】
結果
曝露結果
エアロゾル濃度および粒子径
鼻のみの曝露チャンバーの動物呼吸ゾーンから４７ｍｍのＧＦ／Ａフィルターを使用して、各パクリタキセル粒子製剤エアロゾル曝露中にわたってエアロゾル濃度を監視した。各曝露中に７個の４７ｍｍ  ＧＦ／Ａフィルターをサンプリングした。それぞれの低用量群と高用量群で、ＦＳ−１からＦＳ−６までのフィルターをそれぞれ１０分間サンプリングし、ＦＳ−７フィルターを５分間サンプリングした。粒子径は、曝露チャンバーの動物呼吸ゾーンからマーサースタイルカスケードインパクターを使用して測定した。表３および４は、それぞれ低用量および高用量の曝露中にＧＦ／Ａフィルターをサンプリングして測定した総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を示す。
【表３】
0006840869.tif 000006
【表４】
0006840869.tif 000007
【０１４６】
粒子径（エアロゾルの液滴サイズ）分布は、カスケードインパクターを使用して、各パクリタキセル粒子製剤エアロゾルに関する、ＭＭＡＤ（空気動力学的直径に対する浮遊粒子質量の分布の中央値）（ＧＳＤ；粒径分布の変動性を特性決定するためのＭＭＡＤ測定に付随）によって決定した。６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの場合、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）はそれぞれ１．８（２．０）μｍおよび２．３（１．９）μｍと決定された。図２および３は、それぞれ６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの粒径分布を示す。
【０１４７】
堆積量
パクリタキセルの堆積量は、式１を使用して、低用量および高用量パクリタキセル粒子製剤曝露それぞれについてのパクリタキセルの平均エアロゾル濃度、平均ラット体重、想定堆積分率１０％、および曝露時間６５分に基づいて計算した。表５は、各曝露についての、平均パクリタキセルエアロゾル濃度、平均ラット体重、曝露時間、および堆積量を示す。達成されたげっ歯類の平均堆積量は、６．０ｍｇ／ｋｇおよび２０．０ｍｇ／ｋｇのパクリタキセル粒子製剤曝露で、それぞれ０．３８ｍｇ／ｋｇおよび１．１８ｍｇ／ｋｇと決定された。
【表５】
0006840869.tif 000008
【０１４８】
酸素および温度
酸素および温度は、パクリタキセル粒子製剤のエアロゾルへの曝露全体を通して監視した。記録された酸素および温度範囲は、６．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤への曝露について、それぞれ１９．８％〜２０．９％および２０．７℃〜２０．８℃であった。２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤の曝露では、記録された酸素値は曝露全体を通して１９．８％であり、温度範囲は２０．７℃〜２０．８℃であった。
【０１４９】
予備データを図４〜６に示す。
【０１５０】
実施例３  ヌードラット同所性肺癌モデルにおける吸入パクリタキセル粒子製剤の有効性の評価−試験ＦＹ１７−０９５
【０１５１】
実施の概要
−１日目に１２７匹のＮＩＨ−ｒｎｕヌードラットにＸ線を照射して免疫抑制を誘導した。０日目に、動物に気管内（ＩＴ）注入によりＣａｌｕ３腫瘍細胞を投与した。動物は３週間の増殖期間を経た。３週目に、体重の層別化により、動物を５つの試験群に無作為化した。４週目から、群２の動物には、２２、２９および３６日目に静脈内（ＩＶ）投与（５ｍｇ／ｋｇ）により、週１回、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）を投与した。群３および４の動物には、それぞれ週１回（月曜日）、吸入（ＩＮＨ）用量のパクリタキセル粒子製剤を、低（０．５ｍｇ／ｋｇ）および高（１．０ｍｇ／ｋｇ）目標用量で投与した。群５および６の動物には、それぞれ週２回（月曜日および木曜日）、目標吸入用量のパクリタキセル粒子製剤を、低（０．５０ｍｇ／ｋｇ）および高（１．０ｍｇ／ｋｇまで）用量で投与した。群１の動物は、正常な腫瘍細胞増殖の対照として未処置のままにした。８週目に全ての動物を剖検した。
【０１５２】
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。このモデルに関して、皮膚発疹および呼吸困難が臨床的に観察された。全ての群で、試験の過程全体にわたってほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０１５３】
週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群と週２回の低用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ２７０．５１μｇ／Ｌと２６３．５６μｇ／Ｌであった。週１回の高用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ２４４．８２μｇ／Ｌおよび２４５．７６μｇ／Ｌであった。
【０１５４】
用量は、平均エアロゾルパクリタキセル濃度、最新の群平均体重、１０％の推定堆積分率、および３３（低用量）または６５（高用量）分の曝露時間に基づいている。４週間の治療中、週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の低用量パクリタキセル粒子製剤群についての、達成されたげっ歯類の平均堆積量は、それぞれ０．６５５ｍｇ／ｋｇおよび０．６４０ｍｇ／ｋｇ（１．２８ｍｇ／ｋｇ／週）であった。週１回の高用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群についての、達成されたげっ歯類の平均堆積量は、それぞれ１．１６６ｍｇ／ｋｇおよび１．１７６ｍｇ／ｋｇ（２．３５２ｍｇ／ｋｇ／週）であった。ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、２２、２９および３６日目の平均用量は、それぞれ４．９４、４．６４および４．４６ｍｇ／ｋｇであった。
【０１５５】
予定された剖検で、各群からの大多数の動物は、肺に黄褐色の結節および／または肺の赤または黄褐色の斑状変色を有していた。他の単発的観察には、ある動物の腹部ヘルニアおよび別の動物の心膜結節が含まれていた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。
【０１５６】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）で処置した動物の肺重量では、肺：ＢＷ比および肺：脳重量比は、未処置の対照と比較して有意に低かった。週１回のパクリタキセル粒子製剤の高用量群は、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）群と同等の体重であり、未処置の対照群と比較して肺の重量と肺：脳比が有意に低かった。
【０１５７】
組織学的には、全ての群における大多数の動物の肺には、腫瘍形成の何らかの徴候が含まれていた。腫瘍形成は、肺実質内にランダムに散在する膨張性の様々なサイズの小さな塊と、肺実質の最大７５％まで、より小さな気道や血管を除去したそれより大きな膨張した癒着塊（ｃｏａｌｅｓｃｉｎｇ  ｍａｓｓｅｓ）の存在を特徴としていた。より大きな塊は主に肺門領域に分布しているか、軸方向の気道に並んでおり、小さな塊は一般に末梢に位置していた。
【０１５８】
肺腫瘍塊の主要な形態学的細胞特性は、肺の腺癌の未分化パターンの存在からかなり分化したパターンまで様々であった。主要な腫瘍細胞タイプは、未分化腺癌の形態を示した。細胞は多形性で、大きく、退生で、淡色の両染性染色（ｐａｌｅ  ａｍｐｈｏｐｈｉｌｉｃ−ｓｔａｉｎｉｎｇ）を有し、ムコイド小胞に似た微細な細胞質内液胞を有し、中等度〜顕著な核大小不同を示し、個別化されまたはシート状に増殖し、腺癌への分化に向けた明確な特徴を欠いていることが観察された。しかしながら、他の塊内で観察された、または前述の未分化塊内で増殖した細胞の形態的特徴は、より組織化され、明確な腺房分化を実証する高分化肺腺癌と一致していた。これらの両染性染色腫瘍細胞は、主に巣または腺パターンに配置され、肺胞中隔に結合していることが観察された。この腫瘍細胞集団では、有糸分裂像はめったに観察されなかった。これらの塊内であまり頻繁に観察されなかったのは、少量〜中程度の量の淡く好塩基性染色された細胞質、卵形体および可変胞核、ならびに中等度の核大小不同を伴う初期に出現する比較的小さな原始腫瘍細胞（Ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ）の焦点領域であった。これらの原始腫瘍細胞は、ランダムにシート状に増殖していることが観察された。有糸分裂像およびアポトーシス小体の数の増加は、この好塩基性原始腫瘍細胞集団で最も頻繁に認められた。間質性線維症を伴う混合炎症細胞（主に好酸球、リンパ球、泡沫状マクロファージおよび偶発的（ｏｃｃａｓｉｏｎａｌ）巨大細胞）浸潤を特徴とする炎症が一般的に観察された。重要な実質壊死がないのはまれであった。
【０１５９】
病理学者は、腫瘍細胞の漸進的な欠如から肺実質の残留線維化結合組織足場を伴う腫瘍細胞の完全な欠如を特徴とし、かつ、泡沫状マクロファージの浸潤を伴う個々の腫瘍塊の縁部のスカロッピングの存在が、腫瘍退縮の徴候であると考えた。
【０１６０】
陽性対照群１およびＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）処置比較群２と比べて、腺癌腫瘤塊および原始腫瘍細胞集団の重症度の低下、ならびに腫瘍退縮の徴候を特徴とするパクリタキセル粒子製剤処置群（群３〜６）では肺腫瘍の全体的な負荷が減少した。他の治療関連の病変または所見は観察されなかった。吸入によりパクリタキセル粒子製剤を投与された動物の肺では、広範な単核細胞浸潤が観察された。使用したモデルはＴ細胞が欠損しているため、細胞はＢ細胞またはＮＫ細胞である可能性が高い。局所的な、そしておそらくはより高濃度でのパクリタキセル粒子への腫瘍の曝露が腫瘍に影響を与え、環境の変化につながり、単核細胞の浸潤物が肺に導入されるものと仮定されている。
【０１６１】
目的
この試験の目的は、肺癌の同所性モデルにおける腫瘍負荷の軽減において、吸入パクリタキセル粒子製剤の静脈内投与の、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）の臨床基準用量と比較した有効性を評価することであった。
【０１６２】
材料および方法
試験系
種／株：ＮＩＨ−ｒｎｕヌードラット
試験開始時の動物の年齢：３〜５週齢
試験開始時の体重範囲：およそ１５０〜２００ｇ
試験ラット数／性別：雄１２７匹（試験動物１２０匹および予備７匹）
供給源：Ｅｎｖｉｇｏ
識別：パーマネントマーカーによる尾マーキング
【０１６３】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）製剤
ＩＶ製剤に使用する臨床基準材料は、製剤ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）であった。製剤は、投与当日に生理食塩水で５．０ｍｇ／ｍＬに再構成され、製造元の指示に従って保存した。
【０１６４】
パクリタキセル粒子製剤
曝露用の２０．０ｍｇ／ｍｌパクリタキセル粒子製剤は、スポンサーの推奨事項に従って調製した。具体的には、パクリタキセル粒子を１％ポリソルベート８０で再構成した。全ての粒子が濡れるまでバイアルを手で振とうした。追加の注射用０．９％塩化ナトリウムを（所望の濃度目標まで）添加し、バイアルをさらに１分間手で振とうした。大きな塊が見えなくなり、懸濁液が適切に分散するまで振とうを続けた。
【０１６５】
得られた製剤は、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内の空気／泡を減らすために、少なくとも５分間そのままにしておいた。最終製剤を室温に保ち、再構成後２時間以内に噴霧化した。最終の２０．０ｍｇ／ｍＬを室温で保ち、再構成後３０（＋５）分以内に噴霧化した。
【０１６６】
実験設計
試験には１２７匹の動物を使用した。Ｘ線照射および腫瘍細胞の投与の前に、７匹の動物を予備として指定した（予備動物には照射も細胞株点滴も行わなかった）。−１日目に、全ての試験動物にＸ線を照射して免疫抑制を誘導した。０日目に、動物に気管内（ＩＴ）注入によりＣａｌｕ３腫瘍細胞を投与した。動物は３週間の増殖期間を経た。３週目に、体重の層別化により、動物を以下の表６に概説する群に無作為化した。４週目から、群２の動物は、静脈内（ＩＶ）投与（５ｍｇ／ｋｇ）により、週１回、目標用量のＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）を与えられた。群３および４の動物には、それぞれ週１回（月曜日）、吸入（ＩＮＨ）目標用量のパクリタキセル粒子製剤を、低（０．５ｍｇ／ｋｇ）および高（１．０ｍｇ／ｋｇ）用量で投与した。群５および６の動物には、それぞれ週２回（月曜日および木曜日）、吸入目標用量のパクリタキセル粒子製剤を、低（０．５０ｍｇ／ｋｇ）および高（１．０ｍｇ／ｋｇ）用量で投与した。群１の動物は、正常な腫瘍細胞増殖の対照として未処置のままにした。８週目に全ての動物を剖検した。
【表６】
0006840869.tif 000009
【０１６７】
飼畜、隔離、および試験への割り当て
隔離後、全ての動物の体重を測定し、体重に基づいて無作為化して７匹のスペアを除いた。１週目から３週目までは、ケージカード（ＬＣ番号）と尾のマーキングによって動物を識別した。
【０１６８】
治療開始する３週前に、動物の体重を測定し、体重の層別化により上記の群に無作為化し、試験ＩＤを割り当てた。この時点からは、動物をケージカードおよびシャーピー（ｓｈａｒｐｉｅ）尾マーキングによって識別した。
【０１６９】
免疫抑制および照射
−１日目、動物は、２５０ｋＶｐ、１５ｍＡおよび線源から物体までの距離１００ｃｍに設定した約５００ラドでの全身Ｘ線曝露（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＲＴ  ２５０  Ｘ−ｒａｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｕｎｉｔ，、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（コネチカット州、シェルトン））を受けた。動物を、パイのスライス当たり２〜３匹としてパイチャンバーユニットに入れた。照射プロセスには約１０〜１５分かかった。
【０１７０】
腫瘍細胞の移植
０日目に、動物は、ＩＴにより投与した腫瘍細胞（Ｃａｌｕ３）を受けた。簡潔には、誘導チャンバー内で３〜５％イソフルランで麻酔した後、傾斜した吊り下げ式点滴プラットフォームに上切歯を引っ掛けて動物を載置した。スタイレットがちょうど喉頭を過ぎて気管に挿入されている間、動物の舌を軽く固定した。ＥＤＴＡ懸濁液中の細胞の容量（目標投与量：５００μＬ；濃度：０．５ｍＬあたりおよそ２０ｘ１０６）を気管内注入により肺に送達した。注入後、動物の呼吸と動きを注意深く監視した。腫瘍細胞の移植後、動物は、腫瘍細胞の生着と肺癌の発生を可能にするために、治療のおよそ３週間前に腫瘍増殖期間を経た。
【０１７１】
Ｃａｌｕ３の増殖および調製
Ｃａｌｕ３細胞を、細胞培養フラスコ内にて５％ＣＯ２で３７℃にて増殖させた。細胞を、８０％コンフルエンスになるまで、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０培地で増殖させた。細胞は点滴の当日まで維持した。点滴の前に、ＰＢＳで洗浄することにより細胞を回収し、トリプシンを添加してフラスコから細胞を除去した。１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で細胞を中和した。その後、細胞を１００ｘｇで５分間遠心分離し、培地を除去し、細胞を４５０μＬの無血清ＲＰＭＩで２，０００万個細胞の濃度に再懸濁した。点滴の前に、５０μＬの７０μＭ  ＥＤＴＡを細胞懸濁液に添加して、ラット当たりの総ＩＴ投与量を５００μＬにした。
【０１７２】
体重および毎日の観察
無作為化のために、３週目は週１回、４週目から試験の終わりまでは週２回、および剖検時に体重を収集した。
【０１７３】
試験中の各動物を、異常、罹病率または死亡のいかなる臨床的兆候について１日２回観察した。技術者は、投薬および体重のセッション中に動物を観察した。
【０１７４】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）投与ＩＶ−尾静脈注射
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（５ｍｇ／ｍＬ、最大投与量２５０μＬ）を、２２、２９および３６日目にＩＶ尾静脈注射により群２の動物に投与した。
【０１７５】
パクリタキセル粒子製剤の投与−鼻のみのエアロゾル曝露
馴化
最大７０分間、鼻のみの曝露チューブに動物を馴化させた。曝露前の３日間で３つの馴化セッションを行った。最初のセッションは３０分、２番目のセッションは６０分、３番目のセッションは７０分続けた。一時的な苦痛以上のものを経験しないことを保証するために、順応期間中にわたって、かつ、曝露中、それらを綿密に監視した。
【０１７６】
曝露システム
エアロゾルは、２０ｐｓｉのネブライザー圧力で、図７に示すように、２つの圧縮空気ジェットＨｏｓｐｉｔａｋネブライザーで生成した。２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子懸濁液製剤を、低用量および高用量の曝露に使用した。エアロゾルを、送達ラインを介して３２ポートの鼻のみの曝露チャンバーに送った。げっ歯類の吸入曝露は３３または６５分間行った。パクリタキセル粒子懸濁液エアロゾルを、２つのＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーのセット（最大４０（±１）分間使用）で生成し、その後、残りの曝露時間、２つのＨｏｓｐｉｔａｋネブライザーの第二のセットと交換した。各吸入曝露全体にわたって酸素および温度を監視して記録した。
【０１７７】
濃度の監視
エアロゾル濃度の監視は、事前に計量されたＧＦ／Ａ  ４７ｍｍフィルター上にエアロゾルを収集することにより行った。フィルターは、各吸入曝露全体にわたって鼻のみの曝露チャンバーの動物呼吸ゾーンからサンプリングした。ＧＦ／Ａフィルターを通過するエアロゾルのサンプリング流量は、１．０±０．５Ｌ／分に維持した。フィルターは、最後のフィルターを除き、各露出期間全体にわたって１０分ごとに収集した。３３分続く低容量曝露（群３および５）では、１３分後に最終フィルターを収集し、６５分続く高用量曝露（群４および６）では、１５分後に最終フィルターを収集した。サンプルの収集後、フィルターの重量を測定して、曝露システム内の総エアロゾル濃度を決定した。
【０１７８】
計量後、各フィルターを７ｍＬガラスバイアルに入れた。ガラスバイアル内のフィルターを抽出し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析して、フィルター上に収集されたパクリタキセルの量を定量化した。エアロゾルの総量と収集されたパクリタキセルエアロゾルをフィルターを通過する総空気流で除算することにより、各フィルターの総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を計算した。平均パクリタキセルエアロゾル濃度を使用して、以下の章「用量の決定」に示す式１を使用して、げっ歯類の肺に対するパクリタキセルの達成された平均堆積量を計算した。
【０１７９】
用量の決定
堆積量を、式１を使用して計算した。この計算では、ラットの平均群体重とともに、曝露から測定した平均エアロゾル濃度を使用した。このようにして、ラットの肺に堆積したパクリタキセルの推定量を、測定したパクリタキセルエアロゾル濃度を使用して計算した。
【数２】
0006840869.tif 000010
式中、
堆積量＝（ＤＤ）μｇ／ｋｇ
２毎分呼吸量（ＲＭＶ）＝０．６０８  ｘ  ＢＷ０．８５２  
エアロゾル曝露濃度（ＡＣ）＝パクリタキセルエアロゾル濃度（μｇ／Ｌ）
堆積分率（ＤＦ）＝想定堆積分率１０％
ＢＷ＝試験中の動物の平均体重（無作為化時、−１日目）（ｋｇ）
【０１８０】
安楽死および剖検
予定された剖検で、過剰用量のバルビツール酸塩系鎮静剤の腹腔内注射により動物を安楽死させた。
【０１８１】
血液および組織の収集
全ての剖検について、最終体重および脳重量を収集した。予定された安楽死のために、（血漿用の）血液を心臓穿刺によりＫ２ＥＤＴＡチューブに収集した。肺を摘出し、重量を測定した。腫瘍、気管気管支リンパ節を含む肺組織の切片を、あり得る今後の分析のために液体窒素で凍結した。残りの肺を、あり得る組織病理のために固定した。
【０１８２】
組織病理
固定した左肺葉を「パン（ｂｒｅａｄ  ｌｏａｆ）」の方法でトリミングし、交互の切片を２つのカセットに入れて、それぞれ左肺の３つの代表的な切片を含む２つのスライドを得た。組織を常套的に処理し、パラフィン包埋し、約４μｍの切片とし、取り付けて、顕微鏡検査のためにヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。所見を、主観的、半定量的に評価した。
【０１８３】
縦方向にトリミングされた、試験中の１２０匹の処理されたヌードラットのうち６０匹から得られた肺の切片（１〜４／動物）を、光学顕微鏡評価のためにＨ＆Ｅステンドグラススライドに加工した。
【０１８４】
この検査中、顕微鏡所見を記録し、電子病理報告システム（ＰＤＳ−Ａｓｃｅｎｔｏｓ−１．２．０、Ｖ．１．２）に転送した。このシステムは、肺負荷特性データの発生率および重症度をまとめ、結果を表にし、個々の動物データを生成した。６０匹のヌードラットの肺を組織学的に検査した：群１［１００１−１０１０］、群２［２００１−２０１０］、群３［３００１−３０１０］、群４［４００１−４０１０］、群５［５００１−５０１０］、群６［６００１−６０１０］）。これらの肺の腫瘍量のレベルを評価するために、肺を組織病理学的検査中に評価し、採点した。各累積肺負荷特性診断のために：１）腺癌（未分化および分化）、２）原始腫瘍細胞（低分化多形細胞）および３）腫瘍退縮について、次のように提供される肺組織全体の関与率（％）を示す４点評価尺度を使用して、肺を半定量的に評価した：０＝徴候なし、１＝最小（関与する肺切片の総面積の約１〜２５％）、２＝軽度（関与する肺切片の総面積の約２５〜５０％）、３＝中程度（関与する肺切片の総面積の約５０〜７５％）、および４＝顕著（関与する肺切片の総面積の約７５〜１００％）。
【０１８５】
組織形態計測
組織形態計測分析は、各群の最初の１０匹の動物の固定した左肺葉を使用して実施した。形態計測（「パンスライス」）スタイルのトリムを使用して、組織をトリミングした。簡潔に言うと、トリミングは肺の頭蓋端から２〜４ｍｍのランダムなポイントから始めた。各肺切片は約４ｍｍの厚さに切断した。奇数番号の切片は尾側を下にしてカセット１に配置し、偶数番号の切片はカセット２に配置した。次に、組織切片を処理し、パラフィン包埋し、４μｍｍの切片とし、検査のためにヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）で染色した。両方のスライド（奇数および偶数のスライス）を使用して、動物当たりの平均腫瘍分率を決定した。
【０１８６】
Ｌｏｖｅｌａｃｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌによる指定動物から得られたヘマトキシリンおよびエオシン（ＨＥ）で染色した肺組織の形態計測分析を実施した。スライド全体（左肺全体の横断切片を含む、動物１匹当たり２枚）を、Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒを使用してスキャンした。スキャンは、Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（ＶＩＳ、バージョン２０１７．２．５．３８５７）で分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５（バージョン５．０４）で腫瘍面積分率の統計分析を実施した。
【０１８７】
各スライドに存在する腫瘍面積の量を定量化するように設計されたコンピューター化された画像定量化を、スライド全体のスキャンを使用して、全ての左肺組織で実行した。肺転移面積を定量化するＶｉｓｉｏｐｈａｒｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを使用して、細胞密度、染色強度、サイズおよび染色強度に基づいて腫瘍細胞を正常肺組織と区別した。単純なＨ＆Ｅ染色に基づくこの定量は完全ではないことに留意されたい（つまり、腫瘍組織、壊死性腫瘍および生存可能な腫瘍組織のタイプを完全に識別することはできず、一部の正常な構造が腫瘍として含まれる場合がある）。このプロセスをＨ＆Ｅ部分に適用する価値は、それが腫瘍の定量化への公平なアプローチであるということである。肺全体の面積を決定し、次いで、転移として特定された構造が占める面積を、総面積の割合として表す。肺外構造が除外され、肺全体が含まれることを確認するために分析される領域の微調整は、手動で実行することができる。他の手動操作は、全ての群で一貫性を確保し、偏る可能性を排除するために回避される。可能であれば、腫瘍組織のみを識別するための特定の免疫組織化学的染色を開発すると、この分析の特異性が高まる。
【０１８８】
採血および処理
剖検で収集した血液を、最低１３００ｇを４℃で１０分間遠心分離することにより血漿に処理した。血漿サンプルは、分析またはスポンサーへの出荷まで−７０〜−９０℃で保存した。
【０１８９】
結果
臨床観察、生存および体重
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。このモデルに関連する臨床的観察には、皮膚発疹および呼吸困難が含まれていた。１匹の動物に上腹部ヘルニアが認められた。獣医の推奨に従って、動物を、吸入曝露を受けない群１（未処置対照）に切り替えたため、曝露チューブの拘束は必要なかった。
【０１９０】
図８は、試験期間中の平均体重を示している。図９は、０日目からの平均体重の変化率を示している。全ての群で、試験の過程を通じてほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０１９１】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）ＩＶ尾静脈注射
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、２２、２９および３６日目の平均用量は、それぞれ４．９４、４．６４および４．４６ｍｇ／ｋｇであった。
【０１９２】
パクリタキセル粒子の曝露
エアロゾル濃度および堆積量
総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度は、各曝露中にＧＦ／Ａフィルターのサンプリングにより測定した。週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群と週２回の低用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ２７０．５１μｇ／Ｌと２６３．５６μｇ／Ｌであった。週１回の高用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ２４４．８２μｇ／Ｌおよび２４５．７６μｇ／Ｌであった。酸素および温度レベルは、各曝露全体にわたって監視した。
【０１９３】
用量は、平均エアロゾルパクリタキセル濃度、最新の群平均体重、１０％の推定堆積分率、および３３または６５分の曝露時間に基づいている。４週間の治療中、週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の低用量パクリタキセル粒子製剤群についての、達成されたげっ歯類の平均堆積量は、それぞれ０．６５５ｍｇ／ｋｇおよび０．６４０ｍｇ／ｋｇ（１．２８ｍｇ／ｋｇ／週）であった。
【０１９４】
週１回の高用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群についての、達成されたげっ歯類の平均蓄積量は、それぞれ１．１６６ｍｇ／ｋｇおよび１．１７６ｍｇ／ｋｇ（２．３５２ｍｇ／ｋｇ／週）であった。
【０１９５】
粒子径（ＭＭＡＤ＆ＧＳＤ）
粒径分布は、カスケードインパクターを使用して各パクリタキセル粒子製剤エアロゾルの空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）および幾何標準偏差（ＧＳＤ）に関して決定した。２０．０ｍｇ／ｍＬパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの場合、平均ＭＭＡＤは２．０１μｍ、ＧＳＤは１．８７であると決定された。
【０１９６】
剖検所見および臓器重量
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。剖検で、各群からの動物は、肺に黄褐色の結節および／または肺の赤または黄褐色の斑状変色を有していた。他の単発的観察には、ある動物の腹部ヘルニアおよび別の動物の心膜結節が含まれていた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。１匹の動物には、剖検時に目に見える腫瘍（結節）は認められなかった。
【０１９７】
個々の動物の臓器重量データを図１０、図１１および図１２にグラフで示す。ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）で処置した動物の肺重量では、肺：ＢＷ比および肺：脳重量比は、未処置の対照と比較して有意に低かった。週１回のパクリタキセル粒子製剤の高用量群は、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）群と同等の体重であり、未処置の対照群と比較して肺の重量と肺：脳比が有意に低かった。週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群、週２回の低用量および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群は、一般的に同様の平均肺重量および比を有していた。
【０１９８】
形態計測
全ての処置群は、対照群と比較して、平均肺腫瘍分率の減少を示した。しかしながら、群間に統計的に有意な差はなかった。断面肺スライドで検査した腫瘍面積分率に関して、ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）治療と任意のパクリタキセル粒子製剤治療レジメンのいずれかとの間に統計的に有意な差はなかった。このモデルに特有のものであるように、全ての群の動物間に腫瘍分率の広い変動があった。これらのデータは、最終解釈のための肺：脳重量比および標準的な組織病理などの、このモデルにおける肺腫瘍負荷の他の指標と組み合わせて考慮されるべきである。形態計測分析および組織病理学的検査は左肺葉の固定肺組織で行われ、肺組織に関する他の分析は右肺葉の凍結組織で行われる可能性があることに留意することが重要である。平均腫瘍面積は、図１３および図１４に示す。
【０１９９】
病理学結果
新生細胞の特定された集団のスライド検査の結果として、病理学者は以下を決定した：（１）  未処置の対照群１（２．１）と比較して、全ての処置群（群２（１．７）、群、３（１．８）、群４（１．７）、群５（１．６）および群６（１．６））で腺癌の全体的な肺腫瘍負荷（未分化および分化細胞）の重症度にわずかな減少があった。（２）対応する対照群１（０．９）および群２（１．０）および３と比較して、群３（０．３）、群４（０．３）、群５（０．２）および群６（０．２）では、重症度の低下によって明らかな原始腫瘍細胞集団の減少があった。３）対応する対照群１（０．０）および群２（０．１）と比較して、群３（０．６）、群４（１．０）、群５（０．８）および群６（１．０）では、腫瘍退縮が存在した。肺負荷特性データの発生率および重症度を表７および図１５にまとめる。スライドの顕微鏡写真を図１６〜５０に示す。
【表７】
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【０２００】
図１６〜５０の顕微鏡写真の組織学的概要
一般的な観察：
対照：細胞が増殖し、免疫細胞の浸潤がほとんど〜全くない、広範なレベルの生存腫瘍。
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）  ＩＶ：腫瘍退縮と共に一部のリンパ球反応を伴う、多くの生存しているように見える腫瘍塊。
パクリタキセル粒子製剤、週１回、高：生存腫瘍細胞がほとんど残っていない肺から腫瘍が排除されている。残っている塊は免疫細胞浸潤物と線維化のようである。
パクリタキセル粒子製剤、週２回、低：マクロファージや単核細胞などの免疫細胞浸潤物に囲まれたいくつかの残存腫瘍結節。
パクリタキセル粒子製剤、週２回、高：腫瘍に代わる免疫浸潤物および間質性線維症を伴う腫瘍結節はほとんどない。
【０２０１】
吸入によりパクリタキセル粒子製剤を投与された動物の肺では、広範な単核殺腫瘍細胞浸潤が観察された。使用されるモデルはＴ細胞が欠損しているため、細胞はＢ細胞またはＮＫ細胞、あるいはその両方である可能性がある。Ｂ細胞は抗体の産生を担い、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性を介して腫瘍細胞の殺傷に関与することができる（抗体はＦｃ受容体を発現する細胞に結合し、これらの細胞の殺傷能力を高める）。ＮＫ細胞は、腫瘍細胞の殺傷に重要な先天性リンパ系細胞である。腫瘍のある患者では、ＮＫ細胞の活性が低下し、腫瘍の増殖が可能となる。Ｔ細胞に加えて、ＮＫ細胞はいくつかのチェックポイント阻害剤の標的であり、それらの活性を増加させる。
【０２０２】
トリガー信号または阻害信号のいずれかを送達できる様々な表面受容体を使用することにより、ＮＫ細胞は環境内の細胞を監視して、細胞が異常（腫瘍またはウイルス感染している）であり、細胞毒性によって排除されるべきかどうかを確認する。
【０２０３】
ＮＫ細胞の細胞毒性および走化性は、腫瘍細胞およびそれらの副産物を含む多くの病理学的プロセスにより修正可能である。特定の信号に応じて、それらの機能は増強または強化される。様々なＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を使用することにより、いくつかの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に対応して、ＮＫ細胞は、サイトカイン産生および／または細胞溶解活性を高めることができる。ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８およびＩＦＮα／βなどのサイトカインもＮＫ細胞の活性を修正することができる。ＮＫ細胞は、様々な腫瘍細胞標的を殺傷することができる細胞溶解エフェクターのみの単純な細胞ではなく、むしろそれらは多様な環境の状況でそれらの活動を微調整できる不均一な集団を表す。
【０２０４】
パクリタキセル粒子製剤で治療した動物の肺では腫瘍負荷が著しく減少し、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）ＩＶの場合よりも低いようである。したがって、パクリタキセル粒子製剤の形態でのパクリタキセルの局所投与は、更なる効力を付与する。これは、長期にわたる化学療法へのより長い曝露と腫瘍部位への活発な細胞浸潤の両方による可能性が高い。この後者の反応は、投与密度（実際の用量および投与頻度）に依存しているようであった。
【０２０５】
特定の顕微鏡写真の観察：
図１６：被検体１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０。低倍率（２倍）。肺胞腔内または肺胞中隔の内側にある未分化で、多形性で、大きな退生腫瘍細胞の一般的な分布を示す。細胞の大部分は腺癌の特徴を持たず、連続する腫瘍のシートとして出現する。多くの細胞は好塩基性染色細胞質を有するが、他の細胞は大きく、退生であり、淡色の両染性染色を含む。肺胞マクロファージの既存の集団の存在と腫瘍退縮の欠如に留意されたい。
【０２０６】
図３０：被検体２００３（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−１、原始−１、退縮−１。低倍率（４倍）。主に末梢部にある腫瘍塊の一般的な分布、ならびに肺胞腔を充填する複数の小さな膨張性腫瘍塊を示す。腫瘍細胞は多形性で、大きく、退性で、淡色の両染性染色を有し、腺癌の未分化パターンから分化パターンまで様々である。腫瘍退縮の徴候は腫瘤の周辺に存在し、主にマクロファージの浸潤を特徴とする。
【０２０７】
図３６：被検体２０１０（ＩＶ  ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））腺癌−３、原始−１、退縮−０。低倍率（２倍）。大部分の肺胞腔を充填する大きな膨張性腫瘍塊の一般的な分布、ならびに末梢部にある新生細胞を示す。ほとんどの腫瘍細胞は、主に未分化で、多形性で、大きく、退生で、淡色の両染性染色を有する。原始細胞はより小さく卵形であり、可変性の小胞核を有する好塩基性染色細胞質をより多く有し、中等度〜顕著な核大小不同を有する。炎症性細胞浸潤は、主に好中球およびマクロファージである。この画像は、腫瘍退縮がないことを示している。
【０２０８】
図３９：被検体４００９（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、１×／週、高）腺癌−０、原始−０、退縮−４。低倍率（２倍）。以前に存在していた腫瘍塊の一般的な分布を示す。線維性結合組織、中心コラーゲン間質および線維細胞の複数の小さな領域の存在が末梢肺胞腔に見られ、肥厚した肺胞中隔が腫瘍退縮の徴候を裏付けている。さらに、肺胞腔は通常、腫瘍退縮の更なる徴候とともに、マクロファージおよびリンパ球の浸潤で充填されている。
【０２０９】
図４２：被検体５０１０（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×／週、低）腺癌−１、原始−０、退縮−３。低倍率（２倍）。以前に存在していた腫瘍塊の一般的な分布を示す。退縮塊は可変的に小さく、ランダムに分布している。線維性結合組織が肺胞腔を充填／置換するのが見られ、退縮している腺癌の病巣を示唆している。急性壊死、線維性結合足場、マクロファージの混合細胞浸潤、上皮内ならびに間質周辺の巨大細胞およびリンパ球は、腫瘍退縮の兆候である。
【０２１０】
図４６：被検体６００５（ＩＨパクリタキセル粒子製剤、２×／週、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。低倍率（２倍）。肺胞腔を充填／置換する線維性結合組織の複数の小さな領域に以前に存在した腫瘍塊の一般的な分布を示し、腺癌細胞の以前の浸潤物の病巣を示唆している。腫瘍退縮は、以前に存在していた腫瘍塊の線維化、肺胞腔を充填／置換する末梢の中心コラーゲン間質コアおよび線維性結合組織、中隔の肥厚、ならびにリンパ球およびマクロファージが浸潤した肺胞腔を充填する線維細胞の存在によって証明される。
【０２１１】
結論
−１日目に１２７匹のＮＩＨ−ｒｎｕヌードラットにＸ線を照射して免疫抑制を誘導した。０日目に、動物に気管内（ＩＴ）注入によりＣａｌｕ３腫瘍細胞を投与した。動物は３週間の増殖期間を経た。３週目に、体重の層別化により、動物を群に無作為化した。４週目から、群２の動物には、２２、２９および３６日目に静脈内（ＩＶ）投与（５ｍｇ／ｋｇ）により、週１回、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）を投与した。群３および４の動物には、それぞれ週１回（月曜日）、吸入（ＩＮＨ）用量のパクリタキセル粒子製剤を、低い（０．５ｍｇ／ｋｇ）および高い（１．０ｍｇ／ｋｇ）目標用量で投与した。群５および６の動物には、それぞれ週２回（月曜日および木曜日）、目標吸入用量のパクリタキセル粒子製剤を、低（０．５０ｍｇ／ｋｇ）および高（１．０ｍｇ／ｋｇ）用量で投与した。群１の動物は、正常な腫瘍細胞増殖の対照として未処置のままにした。８週目に全ての動物を剖検した。
【０２１２】
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。このモデルに関連する臨床的観察には、皮膚発疹、呼吸困難が含まれていた。全ての群で、試験の過程を通してほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０２１３】
週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群と週２回の低用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ２７０．５１μｇ／Ｌと２６３．５６μｇ／Ｌであった。週１回の高用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ２４４．８２μｇ／Ｌおよび２４５．７６μｇ／Ｌであった。
【０２１４】
用量は、平均エアロゾルパクリタキセル濃度、最新の群平均体重、１０％の推定堆積割合、および３３または６５分の曝露時間に基づいている。４週間の治療中、週１回の低用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の低用量パクリタキセル粒子製剤群についての、達成されたげっ歯類の平均堆積量は、それぞれ０．６５５ｍｇ／ｋｇおよび０．６４０ｍｇ／ｋｇ（１．２８ｍｇ／ｋｇ／週）であった。週１回の高用量パクリタキセル粒子製剤群および週２回の高用量パクリタキセル粒子製剤群についての、達成されたげっ歯類の平均堆積量は、それぞれ１．１６６ｍｇ／ｋｇおよび１．１７６ｍｇ／ｋｇ（２．３５２ｍｇ／ｋｇ／週）であった。ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、２２、２９および３６日目の平均用量は、それぞれ４．９４、４．６４および４．４６ｍｇ／ｋｇであった。
【０２１５】
予定された剖検で、各群からの大多数の動物は、肺に黄褐色の結節および／または肺の赤または黄褐色の斑状変色を有していた。他の単発的観察には、ある動物の腹部ヘルニアおよび別の動物の心膜結節が含まれていた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。
【０２１６】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）で処置した動物の肺重量では、肺：ＢＷ比および肺：脳重量比は、未処置の対照と比較して有意に低かった。週１回のパクリタキセル粒子製剤の高用量群は、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）群と同等の体重であり、未処置の対照群と比較して肺の重量と肺：脳比が有意に低かった。
【０２１７】
陽性対照群１およびＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）比較群２と比べて、明らかな有害事象を伴わない肺／脳重量比の低下および全体的な肺腫瘍負荷の低下により測定される治療効果があった。吸入パクリタキセル粒子製剤で処置した肺腫瘍負荷の組織学的分析は、腫瘍塊の減少、原始腫瘍細胞集団の減少、および腫瘍退縮の増加を示した。吸入によりパクリタキセル粒子製剤を投与された動物の肺では、広範な単核細胞浸潤が観察された。使用されるモデルはＴ細胞が欠損しているため、細胞はＢ細胞またはＮＫ細胞である可能性がある。局所的な、そしておそらくはより高濃度でのパクリタキセル粒子への腫瘍の曝露が腫瘍に影響を与え、環境の変化につながり、単核細胞の浸潤物が肺に導入されるものと仮定されている。
【０２１８】
実施例４：Ｓｔｕｄｙ  ＦＹ  １７−００８Ｂ−パクリタキセル粒子の薬物動態試験
実施の概要
９０匹の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、静脈内（ＩＶ）ボーラス注射により「臨床基準」用量のパクリタキセルであるＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（注射懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、別名ｎａｂ−パクリタキセル）に曝露するか、または一度だけ鼻のみからの吸入によりパクリタキセル粒子製剤（目標用量０．３７または１．０ｍｇ／ｋｇ）に曝露した。３匹の動物（ｎ＝３）を、血液（血漿）および肺組織を収集するために、曝露後０．５〜３３６時間の１０時点で安楽死させた。血漿および肺組織に対して非コンパートメント分析（ＮＣＡ）を実施して、各用量群に関する曝露後のパクリタキセルの検出可能な量の持続時間を特定した。全ての群から３３６時間の時点に指定された動物の右肺を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）分析のために収集し、一方、左肺には１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）を灌流し、あり得る組織病理のために保持した。比較組織病理を可能にするために、３３６時間の時点で３匹の予備動物（ナイーブ対照）を安楽死させ、同じ方法で肺収集を行った。他の全ての時点に指定された動物は、ＬＣＭＳ分析のために全ての肺を個別に凍結した。
【０２１９】
低用量および高用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ８５．６４μｇ／Ｌおよび２６２．２７μｇ／Ｌであった。平均曝露エアロゾル濃度は、噴霧化吸入曝露に関して予想される目標エアロゾル濃度の±１５％以内であった。カスケードインパクターを使用して各パクリタキセル粒子製剤エアロゾルの、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）についての粒径分布を決定した。６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの場合、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）はそれぞれ１．８（２．０）μｍおよび２．３（１．９）μｍと決定された。
【０２２０】
パクリタキセル堆積低用量は、パクリタキセルの平均エアロゾル濃度８５．６４μｇ／Ｌ、０日目の平均群体重４２０．４ｇ、想定堆積分率１０％、および曝露時間６５分に基づいて計算した。低用量パクリタキセル粒子製剤群の、達成されたげっ歯類の平均堆積量は０．３８ｍｇ／ｋｇと決定された。高用量パクリタキセル粒子製剤群の場合、パクリタキセルの平均エアロゾル濃度２６２．２７μｇ／Ｌ、０日目の群平均体重４２０．５ｇ、想定堆積分率１０％、および曝露時間６５分であり、達成されたげっ歯類の平均堆積量は１．１８ｍｇ／ｋｇと決定された。記録された酸素および温度範囲は、６．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤への曝露について、それぞれ１９．８％〜２０．９％および２０．７℃〜２０．８℃であった。２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤の曝露では、記録された酸素値は曝露全体を通して１９．８％であり、温度範囲は２０．７℃〜２０．８℃であった。
【０２２１】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、１日目の体重は３８６．１〜４７２．８ｇの範囲であった。これにより、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）の用量は２．６〜３．２ｍｇ／ｋｇであり、平均群用量は２．９ｍｇ／ｋｇであった。
【０２２２】
全ての群で、試験の過程を通して体重が増加した。研究期間を通して異常な臨床所見は認められなかった。全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。全ての動物を、各時点を対象とした期間内で安楽死させた。
【０２２３】
剖検で、各群の動物の約半数で、肺に最小限から軽度の黄褐色の変色が見られた。このような観察は、吸入曝露に関連していることが多い。他の一時的な観察には、心臓の拡大（動物＃２０１６）および気管気管支リンパ節の拡大が含まれていた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。組織病理は、この試験の条件下で、試験および参照品で処置されたラットの肺および気管が正常範囲内であり、ナイーブラットの肺および気管と区別できないことを示した。投与から３３６時間後の屠殺時に、肺に堆積した外因性物質に対する生理学的に正常な反応として吸入試験で一般的なマクロファージの蓄積は、この試験で調べた治療動物の肺切片内では見られなかった。
【０２２４】
ＮＣＡは、曝露（濃度対時間曲線下面積［ＡＵＣ］）、最大濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、最大濃度（Ｃｍａｘ）、および可能であれば見かけの最終半減期（Ｔ１／２）を定量化するように設計されていた。
【０２２５】
新規パクリタキセル粒子製剤の仮説は、製剤により肺組織内でのパクリタキセルの保持が増加し、全身曝露が減少するというものであった。全身血漿内の半減期は、試験した製剤／用量では変化せず、肺組織内の半減期は、吸入により送達されたパクリタキセル粒子製剤で増加した。吸入によるパクリタキセル粒子製剤として送達された場合、肺組織への曝露（用量正規化ＡＵＣ）は増加した。
【０２２６】
まとめると、データは、ＩＶ「臨床基準」と比較すると、吸入により送達される場合に、肺組織内にパクリタキセル粒子が有意に保持されることを示している。
【０２２７】
目的
この研究の目的は、臨床基準用量のパクリタキセルと比較したパクリタキセル粒子製剤の薬物動態を決定することであった。吸入により投与されたパクリタキセル粒子製剤を用いたＬｏｖｅｌａｃｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌの試験ＦＹ  １７−００８Ａ（上記の実施例１）のパイロット薬物動態（ＰＫ）データは、肺組織での１６８時間を超える保持時間を示した。この試験では、単回低用量または高用量の鼻のみの吸入用パクリタキセル粒子製剤、または静脈内（ＩＶ）尾注射による単回臨床基準用量のパクリタキセルのいずれかを投与された動物の血漿および肺組織を、０．５〜３３６時間の時点で評価した。
【０２２８】
材料および方法
試験系
種／株：Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット  
試験開始時の動物の年齢：８〜１０週齢  
試験開始時の体重範囲：３４５〜４４７ｇ
試験ラット数／性別：雄９５匹（試験動物９０匹および予備５匹）
供給源：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ニューヨーク州、キングストン）
識別：パーマネントマーカーによる尾マーキング
【０２２９】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）製剤
ＩＶ製剤に使用する臨床基準材料は、医療品ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（製造元：Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ニュージャージー州、サミット）；ロット：６１１１８８０）であった。医療品は、投与当日に生理食塩水（製造元：Ｂａｘｔｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ｌｌ；ロット：Ｐ３５７８８９）で５．０ｍｇ／ｍＬに再構成され、製造元の指示に従って保存した。
【０２３０】
パクリタキセル粒子製剤
低用量群曝露用の６．０ｍｇ／ｍｌパクリタキセル粒子製剤および高用量群曝露用の２０．０ｍｇ／ｍｌパクリタキセル粒子製剤を、スポンサーの推奨に従って調製した。具体的には、パクリタキセル粒子を１％ポリソルベート８０で再構成した。全ての粒子が濡れるまでバイアルを手で振とうした。追加の注射用０．９％塩化ナトリウムを（所望の濃度目標まで）添加し、バイアルをさらに１分間手で振とうした。
【０２３１】
大きな塊が見えなくなり、懸濁液が適切に分散するまで振とうを続けた。得られた製剤は、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内の空気／泡を減らすために、少なくとも５分間そのままにしておいた。６．０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を室温で保ち、再構成後２時間以内に噴霧化した。２０．０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を室温で保ち、再構成後３０分以内に噴霧化した。
【０２３２】
実験設計
表８に示す群１の動物には、ＩＶ尾静脈注射により、単回「臨床基準」用量（製剤濃度：５ｍｇ／ｍＬ、目標用量：体重に基づいて５．０ｍｇ／ｋｇ、目標投与量：２５０μＬを超えない）のＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（注射懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子）を投与した。表９の群２および３の動物は、以下の実験設計ごとに一度だけ鼻のみの吸入（ＩＮＨ）によりパクリタキセル粒子製剤エアロゾル（目標用量０．３７または１．０ｍｇ／ｋｇ）に曝露した。３匹の動物（ｎ＝２）を、血液（血漿）および肺組織を収集するために、曝露後０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）、１６８（±３０分）、２４０（±３０分）および３３６（±３０分）時間で安楽死させた。血漿および肺組織に対して非コンパートメント分析を実施して、各用量群に関する曝露後のパクリタキセルの検出可能な量の持続時間を特定した。全ての群から３３６時間の時点に指定された動物の右肺をＬＣＭＳ分析のために個々に凍結し、一方、左肺には１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）を灌流し、あり得る組織病理のために保持した。比較組織病理を可能にするために、３３６時間の時点と共に３匹の予備動物（ナイーブ対照）も安楽死させ、同じ方法で肺収集を行った。
【表８】
0006840869.tif 000012
【０２３３】
飼畜、隔離、および試験への割り当て
雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（６〜８週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ニューヨーク州、キングストン）から入手し、１４日間隔離した。隔離の終わりに動物の体重を測定し、その後、試験への割り当てのために体重によって無作為化した。動物は、尾マーキングとケージカードによって識別した。適切なＳＯＰに従って、水、照明、湿度および温度制御を維持および監視した。非曝露時間中は、ラットに標準的なげっ歯類用食餌を自由に与えた。
【０２３４】
体重および毎日の観察
体重は、無作為化時、試験期間中毎日および安楽死時に収集した。試験時の各動物は、異常、瀕死または死亡の任意の臨床的兆候について、比較医学動物資源（ＣＭＡＲ）要員によって１日２回観察した。
【０２３５】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）投与ＩＶ−尾静脈注射
一度だけのＩＶ尾静脈注射により、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（濃度：５ｍｇ／ｍｌ；目標用量：体重に基づいて５．０ｍｇ／ｋｇ、投与量：２５０μＬを超えない）を群１の動物に投与した。
【０２３６】
パクリタキセル粒子の投与−鼻のみのエアロゾル曝露
馴化
最大７０分間、鼻のみの曝露チューブに動物を馴化させた。曝露前の３日間で３つの馴化セッションを行った。最初のセッションは３０分、２番目のセッションは６０分、３番目のセッションは７０分続けた。一時的な苦痛以上のものを経験しないことを保証するために、馴化期間中にわたって、かつ、曝露中、それらを綿密に監視した。
【０２３７】
曝露システム
エアロゾルは、２０ｐｓｉのネブライザー圧力で、上記図７に示すように（実施例３を参照）、２つの圧縮空気ジェットＨｏｓｐｉｔａｋネブライザーで生成した。６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子懸濁液製剤を、それぞれ低用量および高用量の曝露に使用した。両方の製剤を別々にエアロゾル化し、送達ラインを介して３２ポートの鼻のみの曝露チャンバーにエアロゾルを送った。げっ歯類の吸入曝露は各々６５分間行った。パクリタキセル粒子懸濁液エアロゾルを、２つのＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーのセット（最大４０（±１）分間使用）で生成し、その後、残りの曝露期間、２つのＨｏｓｐｉｔａｋネブライザーの第二のセットと交換した。各吸入曝露全体にわたって酸素および温度を監視して記録した。
【０２３８】
濃度の監視
実施例１と同様
【０２３９】
粒子径の決定
実施例１と同様
【０２４０】
用量の決定
実施例１と同様
【０２４１】
安楽死および剖検
上記の実験設計における時点で、安楽死用溶液の腹腔内（ＩＰ）注射により動物を安楽死させた。
【０２４２】
３３６時間の時点（および予備の動物、ｎ＝３）の場合：剖検中、（血漿用の）血液を心臓穿刺によりＫ２ＥＤＴＡチューブに収集した。全肺重量を収集し、左肺を縛り、中性緩衝ホルマリンを充填し、あり得る組織病理のために保存した。右肺葉の重量を個別に測定し、液体窒素で急速凍結し、生物学的分析のために−７０〜−９０℃で保存した。さらに、資格のある剖検要員によって完全な肉眼検査を行った。身体の外面、開口部、ならびに、頭蓋腔、胸腔および腹腔の内容物を調べた。形態、量、形状、色、稠度および重症度に関する用語集セットを使用して、病変を記述および記録した。
【０２４３】
他の全ての時点の場合：剖検中、（血漿用の）血液を心臓穿刺によりＫ２ＥＤＴＡチューブに収集した。全肺重量を収集し、肺葉の重量を個別に測定し、液体窒素で瞬間凍結し、生物学的分析のために−７０〜−９０℃で保存した。さらに、資格のある剖検要員によって完全な肉眼検査を行った。身体の外面、開口部、ならびに、頭蓋腔、胸腔および腹腔の内容物を調べた。形態、量、形状、色、稠度および重症度に関する用語集セットを使用して、病変を記述および記録した。
【０２４４】
組織病理
利用可能な固定組織をトリミングした。固定した左肺葉をトリミングして、気道を伴う典型的な毒性病理学スタイルの切片を作製した。組織を常套的に処理し、パラフィン包埋し、約４μｍの切片とし、取り付けて、顕微鏡検査のためにヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。所見は、１〜５のスケールで毒性病理学を経験した１人の病理学者によって半定量的に主観的に評価された（ｌ＝最小、２＝軽度、３＝中程度、４＝顕著、５＝重度）。Ｐｒｏｖａｎｔｉｓ（商標）（Ｉｎｓｔｅｍ  ＬＳＳ  Ｌｔｄ．、英国、スタッフォードシャー）コンピューターソフトウェア／データベースを、組織病理学データの取得、報告および分析に使用した。
【０２４５】
採血および処理
剖検で収集した血液を、最低１３００ｇを４℃で１０分間遠心分離することにより血漿に処理した。血漿サンプルは、分析まで−７０℃〜−９０℃で保存した。
【０２４６】
生物学的分析
全身血液（Ｋ２ＥＤＴＡからの血漿の形態）および肺組織を液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）アッセイでアッセイして、時間の関数としてパクリタキセルの量を定量化した。簡潔に言うと、このアッセイでは、超高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）アッセイを利用してパクリタキセルを定量化する。
【０２４７】
サンプルはタンパク質沈殿法により抽出し、分離は逆相クロマトグラフィーにより達成される。マトリックスベースの検量線を使用して定量化を実施した。
【０２４８】
非コンパートメント分析は、血漿および肺組織の濃度から得られたデータについて実施した。最低でも、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ＡＵＣおよび見かけの最終半減期が決定された。他のパラメータは、データに基づいて決定してもよい。
【０２４９】
結果
臨床観察、生存および体重
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。全ての動物を、各時点を対象とした期間内で安楽死させた。
【０２５０】
研究期間を通して異常な臨床所見は認められなかった。
【０２５１】
図５１および図５２は、試験期間中の平均体重を１日目からの変化率（％）として示している。全ての群で、試験の過程を通してほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０２５２】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）ＩＶ尾静脈注射
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、１日目の体重は３８６．１〜４７２．８ｇの範囲であった。これにより、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）の用量は２．６〜３．２ｍｇ／ｋｇであった。平均用量（標準偏差）は２．９（０．１６）ｍｇ／ｋｇであった。個々のＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）用量を表９に示す。
【表９】
0006840869.tif 000013
【０２５３】
パクリタキセル粒子の曝露
エアロゾル濃度および粒子径
実施例２の結果−エアロゾル濃度および粒子径を参照。
【０２５４】
酸素および温度
実施例２の結果−酸素および温度を参照。
【０２５５】
堆積量
実施例２の結果−堆積量を参照。
【０２５６】
剖検
全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。剖検で、各群の動物に、肺に最小限から軽度の黄褐色の変色が見られた（表１０）。このような観察は、吸入曝露に関連していることが多い。他の一時的な観察には、心臓の拡大（動物＃２０１６）および気管気管支リンパ節の拡大が含まれていた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。
【表１０】
0006840869.tif 000014
【０２５７】
組織病理
この試験のために調べた投与後３３６時間（〜１４日）の屠殺動物の気管および左肺内に顕著な異常は認められなかった。組織は、対照としての「予備」動物と顕微鏡的に区別がつかなかった。
【０２５８】
マクロファージの蓄積は、この試験で調べた治療動物の肺切片内では明らかではなかった。肺胞マクロファージのある程度の増加は、肺に堆積した外因性物質に対する生理学的に正常な反応として、吸入試験ではごく一般的である（また、未処置動物では、より低い程度の増加が比較的一般的な観察結果である）。この試験における吸入投与動物における明らかな欠如は、組織学的に調べた投与後の比較的遅い時点（３３６時間または約〜１４日）に一部関連している可能性がある。
【０２５９】
生物学的分析およびＰＫモデリング
結果を以下の表１１、１２および１３、ならびに図５３および図５４にまとめる。平均パクリタキセル血漿濃度対時間および平均パクリタキセル肺組織濃度対時間データは上記のようにモデル化され、結果は表１４および１５それぞれに示されている。
【表１１】
0006840869.tif 000015
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
0006840869.tif 000022
【０２６０】
モデリングは、各時点での平均血漿または肺組織濃度に基づいて、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎを使用して実施した。ＮＣＡは、曝露（濃度対時間曲線下面積［ＡＵＣ］）、最大濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、最大濃度（Ｃｍａｘ）、および可能であれば見かけの最終半減期（Ｔ１／２）を定量化するように設計されていた。
【０２６１】
全身血漿内の半減期は、試験した製剤／用量では変化せず、肺組織内の半減期は、吸入により送達されたパクリタキセル粒子製剤で増加した。吸入によるパクリタキセル粒子製剤として送達された場合、肺組織への曝露（用量正規化ＡＵＣ）は増加した。
【０２６２】
まとめると、データは、吸入により送達される場合に、肺組織内にパクリタキセル粒子が有意に保持されることを示している。
【０２６３】
結論
９０匹の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、静脈内（ＩＶ）ボーラス注射により「臨床参照」用量のパクリタキセルであるＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（注射懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子）に曝露するか、または一度だけ鼻のみからの吸入によりパクリタキセル粒子製剤（目標用量０．３７または１．０ｍｇ／ｋｇ）に曝露した。３匹の動物（ｎ＝３）を、血液（血漿）および肺組織を収集するために、曝露後０．５〜３３６時間の１０時点で安楽死させた。血漿および肺組織に対して非コンパートメント分析を実施して、各用量群に関する曝露後のパクリタキセルの検出可能な量の持続時間を特定した。全ての群から３３６時間の時点に指定された動物の右肺を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）分析のために収集し、一方、左肺には１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）を灌流し、あり得る組織病理のために保持した。比較組織病理学を可能にするために、３３６時間の時点で３匹の予備動物（ナイーブ対照）も安楽死させ、同じ方法で肺収集を行った。他の全ての時点に指定された動物は、ＬＣＭＳ分析のために全ての肺を個別に凍結した。
【０２６４】
低用量および高用量パクリタキセル粒子製剤群の吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、それぞれ８５．６４μｇ／Ｌおよび２６２．２７μｇ／Ｌであった。平均曝露エアロゾル濃度は、噴霧化吸入曝露に関して予想される目標エアロゾル濃度の±１５％以内であった。カスケードインパクターを使用して各パクリタキセル粒子製剤エアロゾルの、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）についての粒径分布を決定した。６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤エアロゾルの場合、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）はそれぞれ１．８（２．０）μｍおよび２．３（１．９）μｍと決定された。
【０２６５】
パクリタキセル堆積用量は、パクリタキセルの平均エアロゾル濃度８５．６４μｇ／Ｌ、０日目の平均群体重４２０．４ｇ、想定堆積分率１０％、および曝露時間６５分に基づいて計算した。低用量パクリタキセル粒子製剤群の、達成されたげっ歯類の平均堆積量は０．３８ｍｇ／ｋｇと決定された。高用量パクリタキセル粒子製剤群の場合、パクリタキセルの平均エアロゾル濃度２６２．２７μｇ／Ｌ、０日目の群平均体重４２０．５ｇ、想定堆積分率１０％、および曝露時間６５分であり、達成されたげっ歯類の平均堆積量は１．１８ｍｇ／ｋｇと決定された。記録された酸素および温度範囲は、６．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤への曝露について、それぞれ１９．８％〜２０．９％および２０．７℃〜２０．８℃であった。２０．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル粒子製剤の曝露では、記録された酸素値は曝露全体を通して１９．８％であり、温度範囲は２０．７℃〜２０．８℃であった。
【０２６６】
ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、１日目の体重は３８６．１〜４７２．８ｇの範囲であった。これにより、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）の用量は２．６〜３．２ｍｇ／ｋｇであり、平均群用量は２．９ｍｇ／ｋｇであった。
【０２６７】
全ての群で、試験の過程を通して体重が増加した。研究期間を通して異常な臨床所見は認められなかった。全ての動物は、指定された剖検時点まで生存した。全ての動物を、各時点を対象とした期間内で安楽死させた。
【０２６８】
剖検で、各群の動物の約半数で、肺に最小限から軽度の黄褐色の変色が見られた。このような観察は、吸入曝露に関連していることが多い。他の一時的な観察には、心臓の拡大（動物＃２０１６）および気管気管支リンパ節の拡大が含まれていた。剖検時に他の異常な巨視的観察は認められなかった。組織病理学は、この試験の条件下で、試験および参照品で処置されたラットの肺および気管が正常範囲内であり、ナイーブラットの肺および気管と区別できないことを示した。
【０２６９】
ＮＣＡは、曝露（濃度対時間曲線下面積［ＡＵＣ］）、最大濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、最大濃度（Ｃｍａｘ）、および可能であれば見かけの最終半減期（Ｔ１／２）を定量化するように設計されていた。
【０２７０】
新規パクリタキセル粒子製剤の仮説は、製剤により肺組織内でのパクリタキセルの保持が増加し、全身曝露が減少するというものであった。全身血漿内の半減期は、試験した製剤／用量では変化せず、肺組織内の半減期は、吸入により送達されたパクリタキセル粒子製剤で増加した。吸入によるパクリタキセル粒子製剤として送達された場合、肺組織への曝露（用量正規化ＡＵＣ）は増加した。
【０２７１】
まとめると、データは、ＩＶ「臨床基準」と比較すると、吸入により送達される場合に、肺組織内にパクリタキセル粒子が有意に保持されることを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0006840869.tif 000029
【図８】
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【図９】
0006840869.tif 000031
【図１０】
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【図１１】
0006840869.tif 000033
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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