(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示される構造を有する化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
0006840865.tif 000028
（式（Ｉ）中、
Ａは、ＣＨ又はＮから選択されるものであり、
ｎは、０、１、２又は３であり、
Ｒ１は、
0006840865.tif 000029
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立に、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、アミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１-Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１-Ｃ４アルキル基、ヘテロシクリル基で置換されたＣ１-Ｃ４アルキル基からなる群から選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれ独立に、Ｃ（Ｒ２）及びＮから選択されるものであり、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択され、
Ｗ及びＹは、それぞれ独立に、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓ、Ｃ１−Ｃ６アルキリデン基から選択されるものであり、且つ、ＷとＹのうち少なくとも１つは、Ｃ１−Ｃ６アルキリデンから選択されるものであり、
Ｒ６は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
Ａｒは、フェニル基又は５−６員のヘテロアリール基から選択されるものであり、前記フェニル基又は５−６員のヘテロアリール基は、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択される基によって置換されていてもよい。）
【請求項２】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれＣ（Ｒ２）から選択され、あるいは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４のうち、一つはＮであり、残りはそれぞれＣ（Ｒ２）から選択される請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項３】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれＣＨであり、あるいは
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４のうち、一つはＮであり、残りはそれぞれＣＨである請求項２に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項４】
前記化合物は、式（ＩＩ）で示される構造を有し、
0006840865.tif 000030
式（ＩＩ）中、
Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれ独立に、Ｃ（Ｒ７）及びＮから選択されるものであり、
Ｒ７は、Ｈ、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択される請求項１又は２に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項５】
Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれＣ（Ｒ７）から選択され、あるいは、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９のうち、一つはＮであり、残りはそれぞれＣ（Ｒ７）から選択されるものである請求項４に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項６】
Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれＣＨであり、あるいは、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９のうち、一つはＣ（Ｒ７）であり、残りはそれぞれＣＨであり、且つ、Ｒ７は、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択される請求項４に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項７】
ＷはＯ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓから選択されるものであり、Ｒ６はＨ又はＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、ＹはＣ１−Ｃ６アルキリデン基から選択されるものである請求項１から６の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項８】
ｎは１又は２であり、
0006840865.tif 000031
のキラル炭素はＳ配置である請求項１から７の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項９】
Ｒ１は、
0006840865.tif 000032
からなる群から選択される請求項１から８の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項１０】
Ｒ１は
0006840865.tif 000033
であり、
Ｒ３はＨであり、
Ｒ４はＨであり、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、５−６員の含窒素飽和ヘテロシクリル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基からなる群から選択される請求項１から９の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項１１】
Ｒ１は、
0006840865.tif 000034
であり、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基からなる群から選択される請求項１から９の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項１２】
ＡはＣＨであり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ１はＮであり、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ２はＮであり、Ｘ１、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ３はＮであり、Ｘ１、Ｘ２及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ４はＮであり、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれＣＨであり、
Ｗは、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓから選択されるものであり、Ｒ６は、Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキル基から選択されるものであり、
Ｙは、Ｃ１-Ｃ３アルキリデン基から選択されるものであり、
ｎは１であり、
Ｒ１は
0006840865.tif 000035
から選択されるものであり、
ここで、Ｒ３はＨであり、
Ｒ４はＨであり、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１-Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１-Ｃ４アルキル基、５−６員の含窒素飽和ヘテロシクリル基で置換されたＣ１-Ｃ４アルキル基からなる群から選択され、
Ａｒはフェニル基又は６員の含窒素ヘテロアリール基から選択されるものであり、前記フェニル基又は６員の含窒素ヘテロアリール基は、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択される基によって置換されていてもよい請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項１３】
前記化合物は、式（ＩＩＩ）で示される構造を有し、
0006840865.tif 000036
式（ＩＩＩ）中、
Ｘ１はＣＨ又はＮであり、
ＷはＯ、Ｓ、Ｎ（Ｒ６）から選択されるものであり、Ｒ６はＨ又はメチルから選択されるものであり、
Ｙは、メチレン基、１，１−エチリデン基、１，２−エチリデン基から選択されるものであり、
Ｘ６及びＸ７は、独立にＣ（Ｒ７）から選択されるものであり、Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、トリフルオロメチル基、メトキシ基からなる群から選択され、
Ｘ９はＣＨ又はＮから選択されるものであり、
Ｒ１は
0006840865.tif 000037
であり、ここで、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨであり、Ｒ５は、Ｈ、メトキシ基で置換されたメチル基、ジメチルアミノ基で置換されたメチル基、ピペリジニル基で置換されたメチル基からなる群から選択され、あるいは、
Ｒ１は
0006840865.tif 000038
であり、ここで、Ｒ５は、Ｈ、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基からなる群から選択され、あるいは、
Ｒ１は
0006840865.tif 000039
であり、ここで、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれＨである請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
【請求項１４】
前記化合物は、以下の化合物から選択される請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体。
0006840865.tif 000040
0006840865.tif 000041
0006840865.tif 000042
【請求項１５】
請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体を含む医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体の、被験者のブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状を予防及び／又は治療するための薬物の製造における使用。
【請求項１７】
前記ブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状は、腫瘍、炎症又は自己免疫疾患から選択されるものである請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記腫瘍は、リンパ腫、骨髄腫、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、肺がん、乳がん、前立腺がん、胃がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん及び結腸がんから選択されるものであり、前記炎症又は自己免疫疾患は、関節リウマチ、エリテマトーデス、ループス腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群及び潜在的な疾患である喘息から選択されるものである請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体の、細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するための製剤の製造における使用。
【請求項２０】
請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩又はその立体異性体を含み、且つ、取扱説明書をさらに含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療技術分野に属し、イミダゾピラジン類化合物、該化合物の製造方法、ならびに被験者のブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状を予防及び／又は治療するための薬物の製造における、該化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ，ＢＴＫ）は、Ｂ細胞受容体シグナル伝達複合体における肝心なシグナル伝達分子であり、リンパ細胞の生存と増殖の肝心なプロテインキナーゼである。ＢＴＫは、悪性Ｂ細胞の生存と拡散において重要な役割を果たす。
【０００３】
ＢＴＫ阻害剤は、腫瘍細胞のＢＴＫを阻害することで抗がんの機能を果たす。最初のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブ（Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ）は、４’−アミノピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン化合物（Ｈｏｎｉｇｂｅｒｇ  Ｌ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  １０７：  １３０７５，  ２０１０）であり、標的タンパク質のＢＴＫの活性部位にあるシステイン残基（Ｃｙｓ−４８１）と選択的に共有結合することにより、不可逆的にＢＴＫを阻害して、Ｂ細胞から腫瘍の成長環境に適するリンパ組織への腫瘍転移を効果的に阻止することができる。２０１３年以来、米国ＦＤＡは、難治性のマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、難治性の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、１７ｐ欠失を伴うＣＬＬ、及び原発性マクログロブリン血症の治療にイブルチニブを使用するのを承認した。
【０００４】
ＢＴＫ阻害剤として、イブルチニブに加えて、ＡＶＬ−２９２（ＣＣ２９２）、ＯＮＯ−４０５９、ＢＧＢ−３１１１及びアカラブルチニブ（Ａｃａｌａｂｒｕｔｉｎｉｂ、ＡＣＰ−１９６）も臨床開発に移行され、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、有毛細胞白血病、成人急性リンパ性白血病などの治療に使用される。イブルチニブと化学療法薬又は他の標的抗がん剤とを併用する療法は、腫瘍に対する治療有効性を高めることができる。臨床試験では、ＢＴＫ阻害剤と併用できる薬物として、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、レナリドマイド、フルダラビン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンが挙げられる。
【０００５】
正常な造血細胞と比べると、約８０％の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の患者の原始細胞のＢＴＫの活性が高まるため、細胞は、体外で経口投与のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブに対する感受性が出てくる（Ｍａｒｃｅｌ  Ｓｐａａｒｇａｒｅｎ  Ｍ．  Ｌａｎｃｅｔ  Ｈｅａｍａｔ．  ２：  ｅ１８０，  ２０１５）。イブルチニブを単独投与し又はシタラビンと並行投与することで急性骨髄性白血病を治療する臨床研究がＩＩ期臨床段階に入っている。
【０００６】
また、近年、ＢＴＫは、固形腫瘍（例えば、前立腺がん）の細胞及び組織に発現し、発現レベルはがんのクラスに関連することも見出された（Ｇｕｏ  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ．  ５：  ｅ１４０９，  ２０１４）。イブルチニブは、Ｂ細胞とマクロファージのＢＴＫを阻害し、Ｔ細胞依存性抗腫瘍免疫応答を回復させる（Ｇｕｎｄｅｒｓｏｎ  Ａ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ６：  ２７０，  ２０１６）。イブルチニブとアカラブルチニブ（Ａｃａｌａｂｒｕｔｉｎｉｂ）を多種の固形腫瘍（例えば、ＮＳＣＬＣ、乳がん、前立腺がん、胃がん、結腸がんなど）の治療に用るＩＩ期臨床試験が進められている（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ．  ｇｏｖ）。
【０００７】
正常なＢ細胞の成長と活性化において、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）のシグナル伝達系におけるＢＴＫの機能が非常に重要である。ＢＣＲシグナル伝達異常は、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ（ＲＡ））に関連している。さらに、ＢＴＫは、単球、マクロファージ、好中球、肥満細胞などの骨髄系細胞にも発現している。これらの細胞は、滑膜腔を浸して炎症性サイトカインを産生し、関節炎の症状を悪化させる。ＢＴＫ阻害剤は、Ｂ細胞受容体依存性細胞の増殖を阻止し、炎症性因子の産生を減少させる（Ｗｈａｎｇ  Ｊ．Ａ．，  Ｃｈａｎｇ  Ｂ．Ｙ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ．  １９：  １２００，  ２０１４）。前臨床研究により、ＢＴＫ阻害剤は関節リウマチなどの多種の炎症性疾患や自己免疫疾患の動物モデルに対しても有効であることことが判った。これらの薬物は、関節リウマチ及びエリテマトーデスの他、ループス腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、及び潜在的な疾患である喘息等の治療に使用される可能性がある。ＣＣ−２９２及びＨＭ７１２２４などのＢＴＫ阻害剤について、自己免疫疾患（例えば関節リウマチ）の治療に用いることが臨床試験段階に入っている。
【０００８】
アカラブルチニブ（ＡＣＰ−１９６）は、他のキナーゼよりＢＴＫに対する選択性が高い第二世代のＢＴＫ阻害剤である。アカラブルチニブは、ＥＧＦＲ、ＩＴＫ、及びＴＥＣを阻害せず、Ｙ１０６８とＹ１１７３部位でのＥＧＦＲのリン酸化には影響を及ぼさない。アカラブルチニブは、第一世代のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブと比べると、より高いＩＣ５０値を有する。前臨床及び臨床データにより、アカラブルチニブは、第一世代のＢＴＫ阻害剤とは異なり、正常なＥＧＦＲを影響することなく、そして血小板と免疫機能を維持する肝心な分子経路を乱すことなく、ＢＴＫ経路を選択的に遮断することができるため、がん治療に伴ういくつかの有害反応を回避又は減少することができることが見出された。
【０００９】
上記の研究により、ＢＴＫ阻害剤、特に選択的なＢＴＫ阻害剤は、腫瘍、多種の炎症及び自己免疫疾患を予防・治療するための薬物として、大きな潜在的な価値があることが判った。
【発明の概要】
【００１０】
本発明者らは、鋭意研究を行った結果、式（Ｉ）で示される化合物が、ＢＴＫに対する阻害活性を有するため、ＢＴＫ阻害剤として機能させることができ、例えば、ＢＴＫに関連する疾患（例えば、腫瘍、炎症及び自己免疫疾患）の予防及び／又は治療に適することを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、本発明の一態様は、式（Ｉ）で示される構造を有する化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体若しくはそのプロドラッグに関する。
【化１】
0006840865.tif 000002
上式中、
Ａは、ＣＨ又はＮから選択されるものであり、
ｎは、０、１、２又は３であり、
Ｒ１は、
【化２】
0006840865.tif 000003
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立に、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、アミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ヘテロシクリル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基からなる群から選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれ独立に、Ｃ（Ｒ２）及びＮから選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択され、
Ｗ及びＹは、それぞれ独立に、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓ、Ｃ１−Ｃ６アルキリデン基から選択されるものであり、且つ、ＷとＹのうち少なくとも１つは、Ｃ１−Ｃ６アルキリデン基から選択されるものであり、
Ｒ６は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、
Ａｒは、フェニル基又は５−６員のヘテロアリール基（例えば、５−６員の含窒素ヘテロアリール基）から選択されるものであり、任意に、前記フェニル基又は５−６員のヘテロアリール基は、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択される基によって置換されたものである。
【００１２】
一実施例において、Ａは、ＣＨである。
一実施例において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれＣ（Ｒ２）であり、あるいは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４のうちの一つはＮであり、残りはそれぞれＣ（Ｒ２）である。
一実施例において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれＣＨである。
一実施例において、Ｘ１はＮであり、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣ（Ｒ２）であり、より好ましくは、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨである。
一実施例において、Ｘ２はＮであり、Ｘ１、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣ（Ｒ２）であり、より好ましくは、Ｘ１、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨである。
一実施例において、Ｘ３はＮであり、Ｘ１、Ｘ２及びＸ４はそれぞれＣ（Ｒ２）であり、より好ましくは、Ｘ１、Ｘ２及びＸ４はそれぞれＣＨである。
一実施例において、Ｘ４はＮであり、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれＣ（Ｒ２）であり、より好ましくは、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれＣＨである。
【００１３】
一実施例において、前記化合物は式（ＩＩ）で示される構造を有し、
【化３】
0006840865.tif 000004
ここで、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれ独立に、Ｃ（Ｒ７）或いはＮから選択されるものであり、
Ｒ７は、Ｈ、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択されるものである。
【００１４】
一実施例において、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９は、それぞれＣ（Ｒ７）であり、あるいは、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９のうちの一つはＮであり、残りはそれぞれＣ（Ｒ７）である。
一実施例において、Ｘ５はＮであり、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣ（Ｒ７）である。
一実施例において、Ｘ６はＮであり、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣ（Ｒ７）である。
一実施例において、Ｘ７はＮであり、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣ（Ｒ７）である。
一実施例において、Ｘ８はＮであり、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ９はそれぞれＣ（Ｒ７）である。
一実施例において、Ｘ９はＮであり、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８はそれぞれＣ（Ｒ７）である。
一実施例において、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣＨである。
一実施例において、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣＨであり、Ｘ５はＣ（Ｒ７）であり、且つ、Ｒ７はハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択されるものである。
一実施例において、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣＨであり、Ｘ６はＣ（Ｒ７）であり、且つ、Ｒ７はハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択されるものである。
一実施例において、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ８及びＸ９はそれぞれＣＨであり、Ｘ７はＣ（Ｒ７）であり、且つ、Ｒ７はハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択されるものである。
一実施例において、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ９はそれぞれＣＨであり、Ｘ８はＣ（Ｒ７）であり、且つ、Ｒ７はハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択されるものである。
一実施例において、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７及びＸ８はそれぞれＣＨであり、Ｘ９はＣ（Ｒ７）であり、且つ、Ｒ７はハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択されるものである。
【００１５】
一実施例において、Ｗは、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓから選択されるものであり、Ｒ６は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキル基から選択されるものであり、Ｙは、Ｃ１−Ｃ６アルキリデン基から選択されるものである。
一実施例において、Ｙは、Ｃ１−Ｃ３アルキリデン基、例えば、メチレン基、１，１−エチリデン基、１，２−エチリデン基などから選択されるものである。
一実施例において、ｎは、１又は２である。
一実施例において、ｎは、１である。
一実施例において、
【化４】
0006840865.tif 000005
におけるキラル炭素はＳ配置である。
一実施例において、Ｒ１は、
【化５】
0006840865.tif 000006
からなる群から選択される。
一実施例において、Ｒ１は、
【化６】
0006840865.tif 000007
から選択されるものである。
【００１６】
一実施例において、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、５−６員の含窒素飽和ヘテロシクリル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基からなる群から選択されるものである。
一実施例において、Ｒ１は
【化７】
0006840865.tif 000008
である。
一実施例において、Ｒ３はＨである。
一実施例において、Ｒ４はＨである。
一実施例において、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、５−６員の含窒素飽和ヘテロシクリル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基からなる群から選択されるものである。
一実施例において、Ｒ１は
【化８】
0006840865.tif 000009
である。
一実施例において、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基からなる群から選択されるものである。
【００１７】
一実施例において、ＡはＣＨであり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ１はＮであり、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ２はＮであり、Ｘ１、Ｘ３及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ３はＮであり、Ｘ１、Ｘ２及びＸ４はそれぞれＣＨであり、あるいは、
Ｘ４はＮであり、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれＣＨであり、
ＷはＯ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓから選択されるものであり、Ｒ６はＨ又はＣ１−Ｃ３アルキル基から選択されるものであり、
ＹはＣ１−Ｃ３アルキリデン基から選択されるものであり、
ｎは１であり、
Ｒ１は
【化９】
0006840865.tif 000010
から選択されるものであり、
ここで、Ｒ３はＨであり、
Ｒ４はＨであり、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、５−６員の含窒素飽和ヘテロシクリル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基からなる群から選択され、
Ａｒはフェニル基又は６員の含窒素ヘテロアリール基から選択されるものであり、任意に、前記フェニル基又は６員の含窒素ヘテロアリール基は、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基からなる群から選択される基によって置換される。
【００１８】
一実施例において、前記化合物は、式（ＩＩＩ）で示される構造を有し、
【化１０】
0006840865.tif 000011
ここで、Ｘ１はＣＨ又はＮであり、
Ｗは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ６）から選択されるものであり、Ｒ６は、Ｈ又はメチルから選択されるものであり、
Ｙは、メチレン基、１，１−エチリデン基、１，２−エチリデン基からなる群から選択されるものであり、
Ｘ６及びＸ７は、独立にＣ（Ｒ７）から選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｆ、トリフルオロメチル基、メトキシ基からなる群から選択され、
Ｘ９は、ＣＨ又はＮから選択されるものであり、
Ｒ１は
【化１１】
0006840865.tif 000012
であり、ここで、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨであり、Ｒ５は、Ｈ、メトキシ基で置換されたメチル基、ジメチルアミノ基で置換されたメチル基、ピペリジニル基で置換されたメチル基からなる群から選択され、あるいは、
Ｒ１は
【化１２】
0006840865.tif 000013
であり、ここで、Ｒ５は、Ｈ、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基からなる群から選択され、あるいは、
Ｒ１は
【化１３】
0006840865.tif 000014
であり、ここで、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれＨである。
【００１９】
一実施例において、本発明の化合物は、下記の化合物から選択される。
【化１４】
0006840865.tif 000015
【化１５】
0006840865.tif 000016
【化１６】
0006840865.tif 000017
【００２０】
本発明の一態様は、本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグ、を含む医薬組成物に関する。
【００２１】
本発明の医薬組成物は、任意に、さらに、一種又は複数の医薬アジュバントを含む。
本発明の医薬アジュバントとは、医薬品の製造や処方薬の調合の際に用いられる賦形剤と添加剤のことであり、即ち、安全性について合理的に評価されており、且つ医薬製剤に含まれる有効成分以外の物質である。医薬アジュバントは、賦形、キャリア、安定性向上の役割に加えて、さらに、界面活性剤による溶解補助、分子結合による溶解補助、及び放出制御などの重要な機能を有しており、医薬品の品質、安全性及び有効性に影響する可能性がある重要な成分である。医薬アジュバントは、由来によって、天然物、半合成物及び全合成物に分類され、機能及び用途によって、溶媒、噴射剤、溶剤性溶解補助剤、結合性溶解補助剤、乳化剤、着色剤、接着剤、崩壊剤、充填剤、滑沢剤、湿潤剤、浸透圧調整剤、安定剤、流動促進剤、矯味剤、防腐剤、懸濁剤、コーティング剤、芳香剤、抗粘着剤、抗酸化剤、キレート剤、浸透促進剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、可塑剤、界面活性剤、発泡剤、消泡剤、増粘剤、包接剤、保湿剤、吸着剤、希釈剤、凝集剤及び解膠剤、濾過助剤、遮断剤などに分類され、投与経路によって、経口、注射、粘膜、経皮又は局所投与、経鼻又は経口吸入投与及び眼投与のものに分類されることができる。同一の医薬アジュバントは、異なる投与経路の医薬製剤に用いられることができ、異なる効果と用途がある。
【００２２】
本発明の医薬組成物は、投与経路に応じて様々な適切な剤形に製造されることができる。
経口投与する場合、前記医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤、経口溶液剤、経口懸濁剤、及び経口乳剤などを含むがこれらに限定されない、任意の経口投与に許容される剤形に製造されることができる。そのうち、錠剤に用いられるキャリヤは、一般的に、乳糖とコーンスターチを含み、また、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤を添加してもよい。カプセル剤に用いられる希釈剤は、一般的に、乳糖と乾燥コーンスターチを含む。経口懸濁剤は、通常、活性成分と、適切な乳化剤及び懸濁剤とを混合することで製造される。任意に、上記の経口製剤には、さらに、いくつかの甘味料、芳香剤又は着色剤を添加してもよい。
【００２３】
経皮投与又は局所投与の場合、前記医薬組成物は、活性成分が一種又は複数のキャリヤに懸濁し又は溶解された適切な軟膏、ローション剤又はリニメント剤に製造されてよい。軟膏製剤に使えるキャリヤとして、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、乳化ワックス及び水が挙げられるが、これらに限定されない。ローション剤又はリニメント剤に使えるキャリヤとして、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ツイーン６０（Ｔｗｅｅｎ  ６０）、セチルエステルワックス、ヘキサデセン芳香族アルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水などが挙げられるが、これらに限定されない。
前記医薬組成物は、さらに、注射液、注射用無菌粉末、及び注射用濃縮溶液などの注射剤の形で投与されることもできる。ここで、利用できるキャリヤと溶媒は、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液を含む。また、滅菌した不揮発性油、例えば、モノグリセリド又はジグリセリドも、溶媒又は懸濁媒体として用いられることができる。
【００２４】
本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグは、任意に、第二治療剤と並行投与することができる。したがって、任意に、本発明の医薬組成物は、一種又は複数の第二治療剤をさらに含む。一実施例において、前記第二治療剤は、化学療法薬、標的抗がん剤又は免疫療法薬である。一実施例において、前記第二治療剤は、リツキシマブ、レナリドマイド、フルダラビン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾンから選択されるものである。
【００２５】
本発明的一態様は、本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグの、被験者のブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状を予防及び／又は治療するための薬物の製造における使用に関する。
【００２６】
一実施例において、前記、ブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状は、腫瘍（例えば、血液腫瘍又は固形腫瘍）、炎症又は自己免疫疾患から選択される。
一実施例において、前記血液腫瘍は、リンパ腫、骨髄腫、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病から選択される。
一実施例において、前記固形腫瘍は、肺がん、乳がん、前立腺がん、胃がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん、結腸がんから選択される。
一実施例において、前記炎症又は自己免疫疾患は、関節リウマチ、エリテマトーデス、ループス腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群及び潜在的な疾患である喘息から選択される。
【００２７】
一実施例において、前記被験者は、哺乳動物であり、例えば、ウシ科、ウマ科、ヒツジ科、ブタ科、イヌ科、ネコ科、げっ歯類、霊長類の動物であって、一例としてヒトである。
【００２８】
一実施例において、前記薬物は、一種又は複数の第二治療剤を更に含む。一実施例において、前記第二治療剤は、化学療法薬、標的抗がん剤又は免疫療法薬である。一実施例において、前記第二治療剤は、リツキシマブ、レナリドマイド、フルダラビン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾンから選択されるものである。
【００２９】
本発明の一態様は、被験者の、ブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状を予防及び／又は治療する方法であって、それを必要とする被験者に対して、予防上及び／又は治療上有効量の本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグ、又は本発明の医薬組成物を投与することを含む方法に関する。
【００３０】
一実施例において、前記ブルトン型チロシンキナーゼの過剰な活性に関連する疾患及び／又は症状は、腫瘍（例えば、血液腫瘍又は固形腫瘍）、炎症又は自己免疫疾患から選択されるものである。
一実施例において、前記血液腫瘍は、リンパ腫、骨髄腫、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病から選択されるものである。
一実施例において、前記固形腫瘍は、肺がん、乳がん、前立腺がん、胃がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん、結腸がんから選択されるものである。
一実施例において、前記炎症又は自己免疫疾患は、関節リウマチ、エリテマトーデス、ループス腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、及び潜在的な疾患である喘息から選択されるものである。
【００３１】
一実施例において、前記被験者は、哺乳動物であり、例えば、ウシ科、ウマ科、ヒツジ科、ブタ科、イヌ科、ネコ科、げっ歯類、霊長類の動物であって、一例としてヒトである。
【００３２】
一実施例において、前記方法は、前記被験者に一種または複数の第二治療剤を投与することをさらに含む。一実施例において、前記第二治療剤は、化学療法薬、標的抗がん剤又は免疫療法薬である。一実施例において、前記第二治療剤は、リツキシマブ、レナリドマイド、フルダラビン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾンから選択されるものである。
【００３３】
本発明の他の態様は、本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグの、細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するための製剤の製造における使用に関する。
【００３４】
一実施例において、前記製剤は、被験者体内の細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するように、被験者（例えば哺乳動物、例として、ウシ科、ウマ科、ヒツジ科、ブタ科、イヌ科、ネコ科、げっ歯類、霊長類の動物、一例としてヒト）の体内に投与され、あるいは、前記製剤は、体外の細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するように、体外の細胞（例えば、細胞系又は被験者から採取された細胞）に投与される。
【００３５】
一実施例において、前記細胞は、腫瘍細胞（例えば、固形腫瘍細胞、例として、肺がん細胞、乳がん細胞、前立腺がん細胞、胃がん細胞、肝臓がん細胞、膵臓がん細胞、卵巣がん細胞、結腸がん細胞）から選択されるものである。
一実施例において、前記細胞は、骨髄細胞又はリンパ球から選択されるものである。
一実施例において、前記細胞は、被験者から採取された初代細胞又はその培養物、若しくは樹立された細胞系である。
本発明の他の態様は、細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害する方法であって、前記細胞に有効量の本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグを投与することを含む方法に関する。
【００３６】
一実施例において、前記方法は、体内又は体外で実施される。好ましくは、前記方法は、体内で実施され、例えば、被験者体内の細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するように、被験者（例えば、哺乳動物、例として、ウシ科、ウマ科、ヒツジ科、ブタ科、イヌ科、ネコ科、げっ歯類、霊長類の動物、一例としてヒト）の体内に応用される。あるいは、前記方法は体外で実施され、例えば、体外の細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するように、体外の細胞（例えば、細胞系又は被験者から採取された細胞）に応用される。
【００３７】
一実施例において、前記細胞は、腫瘍細胞（例えば、固形腫瘍細胞、例として、肺がん細胞、乳がん細胞、前立腺がん細胞、胃がん細胞、肝臓がん細胞、膵臓がん細胞、卵巣がん細胞、結腸がん細胞）から選択されるものである。
一実施例において、前記細胞は、骨髄細胞又はリンパ球から選択されるものである。
一実施例において、前記細胞は、被験者から採取された初代細胞又はその培養物、若しくは樹立された細胞系である。
【００３８】
本発明の他の態様はキットであって、本発明の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その立体異性体、若しくはそのプロドラッグを含み、任意に、取扱説明書をさらに含むキットに関する。
一実施例において、前記キットは、細胞内のブルトン型チロシンキナーゼの活性を低減又は阻害するためのものである。
【００３９】
一実施例において、前記細胞は、腫瘍細胞（例えば固形腫瘍細胞、例として、肺がん細胞、乳がん細胞、前立腺がん細胞、胃がん細胞、肝臓がん細胞、膵臓がん細胞、卵巣がん細胞、結腸がん細胞）から選択されるものである。
一実施例において、前記細胞は、骨髄細胞又はリンパ球から選択されるものである。
一実施例において、前記細胞は、被験者から採取された初代細胞又はその培養物、若しくは樹立された細胞系である。
【００４０】
本発明において、特段説明がない限り、本明細書における科学関連及び技術関連の用語は、当業者に一般的に理解されている意味を持つものとする。さらに、本明細書で用いられる細胞培養及び免疫学的実験の操作手順は、該当技術分野で広く利用されている通常の手順である。また、本発明をよりよく理解されるために、関連用語の定義及び説明を以下に記述する。
【００４１】
本明細書で言う「立体異性体」とは、配座異性体及び配置異性体を含み、前記配置異性体は、主にシス・トランス異性体及び光学異性体を含む。本発明の化合物は、立体異性体として存在することができるから、あらゆる立体異性体、ならびにこれらの任意の組み合わせ又は任意の混合物を含んでいる。例えば、単一のエナンチオマー、単一のジアステレオマー、又はこれらの混合物である。本発明の化合物は、オレフィン性二重結合を含む場合、特段説明がない限り、シス異性体及びトランス異性体、ならびにこれらの任意の組み合わせを含むものとする。
【００４２】
本明細書で言う「薬学的に許容可能な塩」とは、（１）本発明の化合物に存在する酸性官能基（例えば、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＯ３Ｈなど）と適切な無機又は有機カチオン（塩基）とによって形成される塩、例えば、本発明の化合物とアルカリ金属又はアルカリ土類金属とによって形成される塩、本発明の化合物のアンモニウム塩、及び本発明の化合物と窒素を含む有機塩基とによって形成される塩を指し、及び（２）本発明の化合物に存在する塩基性官能基（例えば、−ＮＨ２など）と適切な無機又は有機アニオン（酸）とによって形成される塩、例えば、本発明の化合物と無機酸又は有機カルボン酸とによって形成される塩を指す。
したがって、本発明の化合物の「薬学的に許容可能な塩」は、下記の化合物を含むがこれらに限定されない：ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩などの他の金属塩；アンモニウム塩などの無機アルカリ塩；ｔｅｒｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルコサミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアミン塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩などの有機アルカリ塩；フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−ベンゼンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩；酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；グリシン塩、トリメチルグリシン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩。
【００４３】
本明細書で言う「プロドラッグ」とは、前駆体薬物、薬物前駆体、医薬前駆体とも呼ばれ、本発明の化合物を修飾することで得られる、体外で活性がない又は低いが、体内で酵素又は非酵素により変換され、活性薬物を放出して薬効を発揮する化合物である。プロドラッグの設計原理及び製造方法は当業者に知られているものである。
【００４４】
本明細書で言う「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」とは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基を指し、例えば、Ｃ１−Ｃ５アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ３アルキル基、Ｃ１−Ｃ２アルキル基、Ｃ１アルキル基、Ｃ２アルキル基、Ｃ３アルキル基、Ｃ４アルキル基、Ｃ５アルキル基又はＣ６アルキル基を意味する。具体例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、１，２−ジメチルプロピルなどを含むが、これらに限定されない。「Ｃ１−Ｃ４アルキル基」とは、Ｃ１−Ｃ６アルキル基のうち、１〜４個の炭素原子を有する具体例を指す。「Ｃ１−Ｃ３アルキル基」とは、Ｃ１−Ｃ６アルキル基のうち、１〜３個の炭素原子を有する具体例を指す。
【００４５】
本明細書で言う「Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基」とは、「Ｃ１−Ｃ６アルキル基−Ｏ−」の形に形成された基を指し、ここで、「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」の定義は上記の通りである。具体例は、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、２−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基などを含むが、これらに限定されない。「Ｃ１−Ｃ３アルキル基」とは、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基のうち、１〜３個の炭素原子を有する具体例を指す。
【００４６】
本明細書で言う「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、及びヨウ素原子を指す。
本発明に記載の「ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基」とは、Ｃ１−Ｃ６アルキル基の一つ又は複数の水素原子が一つ又は複数のハロゲン原子で置換されてなる基を指し、前記「ハロゲン原子」と「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」の定義は上記と同様である。本発明に記載の「ハロゲン化Ｃ１−Ｃ４アルキル基」とは、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル基のうち、１〜４個の炭素原子を有する具体例を指す。
【００４７】
本明細書で言う「Ｃ１−Ｃ３アルキルアミノ基」とは、「Ｃ１−Ｃ３アルキル基−ＮＨ−」の形に形成された基を指し、ここで、「Ｃ１−Ｃ３アルキル基」の定義は上記と同様である。具体例は、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基を含むが、これらに限定されない。
【００４８】
本明細書で言う「ジＣ１−Ｃ３アルキルアミノ基」とは、「２（Ｃ１−Ｃ３アルキル基）−Ｎ−」の形に形成された基を指し、ここで、「Ｃ１−Ｃ３アルキル基」の定義は上記と同様である。具体例は、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、メチルエチルアミノ基等を含むが、これらに限定されない。
【００４９】
本明細書で言う「Ｃ１−Ｃ６アルキリデン基」とは、Ｃ１−Ｃ６アルキル基から一つの水素原子が取り除かれてなる基を指し、例えば、Ｃ１−Ｃ３アルキリデン基、Ｃ１−Ｃ４アルキリデン基、Ｃ２−Ｃ４アルキリデン基を指すが、ここで、「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」の定義は上記の通りである。具体例は、メチレン基（−ＣＨ２−）、１，２−エチリデン基（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，１−エチリデン基（−ＣＨ（ＣＨ３）−）、トリメチレン基（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等を含むが、これらに限定されない。前記「Ｃ１−Ｃ３アルキリデン基」とは、上記の例中のうち、１〜３個の炭素原子を有する具体例を指す。
【００５０】
本明細書で言う「ヘテロシクリル基」とは、環原子のうち少なくとも一つがヘテロ原子（例えば、酸素原子、硫黄原子、窒素原子）である環式基を指し、例えば、３〜８員のヘテロシクリル基、５〜６員のヘテロシクリル基、含窒素ヘテロシクリル基、含酸素ヘテロシクリル基、含硫黄ヘテロシクリル基、飽和ヘテロシクリル基、不飽和ヘテロシクリル基、３〜８員の飽和ヘテロシクリル基、５〜６員の飽和ヘテロシクリル基、３〜８員の含窒素ヘテロシクリル基、３〜８員の含酸素ヘテロシクリル基、３〜８員の含硫黄ヘテロシクリル基、５〜６員の含窒素ヘテロシクリル基、３〜８員の含窒素飽和ヘテロシクリル基、５〜６員の含窒素飽和ヘテロシクリル基である。具体例は、アジリジン基、２Ｈ−アジリジン基、ジアジリジン基、３Ｈ−ジアジリジニル基、アゼチジン基、１，４−ジオキサン基、１，３−ジオキサン基、１，３−ジオキソリル基、１，４−ジオキサヘキサジエニル基、テトラヒドロフラニル基、ジヒドロピロリル基、ピロリジニル基、イミダゾリジニル基、４，５−ジヒドロイミダゾリル基、ピラゾリジニル基、４，５−ジヒドロピラゾリル基、２，５−ジヒドロチエニル基（、テトラヒドロチエニル基、４，５−ジヒドロチアゾール基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、ヘキサヒドロピリミジニル基、ヘキサヒドロピリダジニル基、４，５−ジヒドロオキサゾール基、４，５−ジヒドロイソオキサゾリル基、２，３−ジヒドロイソオキサゾリル基、２Ｈ−１，２−オキサジニル基、４Ｈ−１，２−オキサジニル基、６Ｈ−１，２−オキサジニル基、４Ｈ−１，３−オキサジニル基、６Ｈ−１，３−オキサジニル基、４Ｈ−１，４−オキサジニル基、４Ｈ−１，３−チアジニル基、６Ｈ−１，３−チアジニル基、２Ｈ−ピラニル基、２Ｈ−ピラン−２−オン基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニル基等を含むが、これらに限定されない。
【００５１】
本明細書で言う「アリール基」とは、芳香族性をもつ単環式又は多環式炭化水素基を指し、例えば、６〜１０員のアリール基などである。具体例は、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基などを含むが、これらに限定されない。
【００５２】
本明細書で言う「ヘテロアリール基」とは、窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子を少なくとも一つ含むアリール基を指し、例えば、６〜１０員のヘテロアリール基、５〜６員のヘテロアリール基、含窒素ヘテロアリール基、含酸素ヘテロアリール基、含硫黄ヘテロアリール基、５〜６員の含窒素ヘテロアリール基、６〜１０員の含酸素ヘテロアリール基である。具体例は、フラニル基、チエニル基、ピロリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、チアジアゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、１，２，３−トリアゾリル基、１，２，４−トリアゾリル基、１，２，３−オキサジアゾリル基、１，２，４−オキサジアゾリル基、１，２，５−オキサジアゾリル基、１，３，４−オキサジアゾリル基、ピリジル基、２−ピリドン基、４−ピリドン基、ピリミジニル基、２Ｈ−１，２−オキサジニル基、４Ｈ−１，２−オキサジニル基、６Ｈ−１，２−オキサジニル基、４Ｈ−１，３−オキサジニル基、６Ｈ−１，３−オキサジニル基、４Ｈ−１，４−オキサジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、１，２，３−トリアジニル基、１，３，５−トリアジニル基、１，２，４，５−テトラジニル基、アザシクロヘプタトリエニル基、１，３−ジアザシクロヘプタトリエニル基、ベンゾフラニル基、ベンゾイソフラニル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、インダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、キノリル基、２−キノリノン、４−キノリノン、１−イソキノリノン、イソキノリニル基、アクリジニル基、フェナントリジニル基、ベンゾピリダジニル基、フタラジニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、フェナジン基、プテリジニル基、プリニル基、ナフチリジニル基、フォノキサジン基、フェノチアジニル基等を含むが、これらに限定されない。
【００５３】
本明細書で言う「Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基」とは、３〜６個の環原子を有する単環式飽和アルキル基を指し、例えば、３〜４員のシクロアルキル基、３〜５員のシクロアルキル基、４〜６員のシクロアルキル基、５〜６員のシクロアルキル基、３員、４員、５員、６員のシクロアルキル基である。具体例は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などを含むが、これらに限定されない。
【発明の効果】
【００５４】
本発明による化合物は、ＢＴＫに対する阻害が強い一方、ＥＧＦＲ、Ｔｅｃ、Ｔｘｋ、ＩＴＫに対しては明らかな阻害がなく、用量依存的に腫瘍の成長を抑制することができる。本発明による化合物は、第一世代のＢＴＫ阻害剤と比べて選択性が良く、第二世代のＢＴＫ阻害剤と比べて薬物動態学的特性が優れており、より安全かつ有効である。
本発明による化合物は、ＢＴＫの関与する各種疾患の治療に利用することができ、特に、血液悪性腫瘍、固形腫瘍、炎症、および自己免疫疾患の治療において大きな応用価値がある。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】：化合物１とＡＣＰ−１９６がそれぞれラットに経口投与された後の、化合物１とＡＣＰ−１９６の血中薬物濃度−時間曲線を示す図である。図１に示されるように、化合物１は、より短い半減期及びより高い血中曝露量を呈した。
【図２】：ＴＭＤ−８リンパ腫細胞株移植腫瘍の成長を抑制する化合物１の用量―効果関係を示す図であり、図２Ａは、各群のマウスの腫瘍の体積変化を示す図であり、図２Ｂは、各群のマウスの体重変化を示す図である。その結果、化合物１は、経口投与により用量依存的にＴＭＤ−８移植腫瘍の成長を抑制することができる。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
以下、本発明の実施形態について実施例を参照しながら詳細に説明する。当業者にとって、下記の実施例は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではないと理解されるのが当然である。具体的な条件が特定されていない実施例は、通常の条件又はメーカに推奨されている条件で行われたものである。メーカが明記されていない試薬又は機器は、市販の通常製品である。
【００５７】
本発明による化合物は、下記の合成スキームによって製造することができる。
スキーム１
【化１７】
0006840865.tif 000018
スキーム２
【化１８】
0006840865.tif 000019
スキーム３
【化１９】
0006840865.tif 000020
【実施例】
【００５８】
実施例１：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物１）を製造した。
【００５９】
ステップ１ａ、（３−クロロピラジン−２−イル）メタンアミン塩酸塩（（３−ｃｈｌｏｒｏｐｙｒａｚｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈａｎａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）（化合物１０２）の製造：３−クロロピラジン−２−カルボニトリル（化合物１０１）（６．００ｇ、４３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の酢酸溶液（５０ｍＬ）にラネーニッケル（４．００ｇ）を加え、水素環境中、室温で１．５日間反応させた。反応液を濾過し、濾液をスピン乾燥し、残留物を順次、トルエン（４０ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）、トルエン（４０ｍＬ）で回転させた。残留物をテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）で超音波によって溶解し、濾過し、フィルターケーキをスピン乾燥した後、黒い固体である（３−クロロピラジン−２−イル）メタンアミン塩酸塩（８．７５ｇ、収率：１００％））を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １４４  ［Ｍ＋１］＋。
【００６０】
ステップ１ｂ、ベンジル（Ｓ）−２−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｂｅｎｚｙｌ（Ｓ）−２−（（（３−ｃｈｌｏｒｏｐｙｒａｚｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）ｃａｒｂａｍｏｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０４）の製造：０℃で、（３−クロロピラジン−２−イル）メタンアミン塩酸塩（化合物１０２）（２．４８ｇ、１３．８ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（８０ｍＬ）に、トリエチルアミン（５．５８ｇ、５５．２ｍｍｏｌ、４．０当量）及び（（ベンジルオキシ）カルボニル）−Ｌ−プロリン（化合物１０３）（３．４３ｇ、１３．８ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、０℃で１５分間撹拌した。そして、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、５．５０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加え、反応液を０℃〜室温の温度で５分間反応させた。反応液をジクロロメタン（２００ｍＬ）で希釈し、順に、塩化アンモニウム溶液（２００ｍＬ×１）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ×１）、飽和食塩水（２００ｍＬ×１）で洗った。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、濾液をスピン乾燥した。残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝８０：１）で精製して、薄茶色油状物であるベンジル（Ｓ）−２−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（２．８５ｇ、収率：５５．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３７５  ［Ｍ＋１］＋。
【００６１】
ステップ１ｃ、ベンジル（Ｓ）−２−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｂｅｎｚｙｌ（Ｓ）−２−（８−ｃｈｌｏｒｏｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０６）の製造：０℃で、ベンジル（Ｓ）−２−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１０４）（２．８５ｇ、７．６ｍｍｏｌ、１．０当量）のアセトニトリル溶液（６０ｍＬ）に１，３−ジメチルイミダゾリジノン（化合物１０５）（２．６０ｇ、２２．８ｍｍｏｌ、３．０当量）を加え、その後、オキシ塩化リン（４．６６ｇ、３０．４ｍｍｏｌ、４．０当量）をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で５分間反応させた後、温度を室温まで回復させた。そして、窒素の保護下で、６５℃まで加熱し、２日間還流させる。反応液をアンモニア−氷水（１５０ｍＬ−３００ｍＬ）にゆっくりと入れ、１５分間撹拌し、酢酸エチル（３００ｍＬ×２）で抽出した後、有機相を合併してスピン乾燥した。残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝  ５００：６）で精製して、薄茶色油状物であるベンジル（Ｓ）−２−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（２．０６ｇ、収率：７６．３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３５７  ［Ｍ＋１］＋。
【００６２】
ステップ１ｄ、ベンジル（Ｓ）−２−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｂｅｎｚｙｌ（Ｓ）−２−（１−ｂｒｏｍｏ−８−ｃｈｌｏｒｏｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０７）の製造：ベンジル（Ｓ）−２−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１０６）（２．０６ｇ、５．８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（２４ｍＬ）にＮ−ブロモスクシンイミド（１．０３ｇ、５．８ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、反応液を室温で３時間反応させた。反応液を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、半飽和食塩水（３００ｍＬ×３）で洗い、有機相をシリカゲルとミキシングしスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝１００：１）で精製して、ピンク色の固体であるベンジル（Ｓ）−２−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１．７６ｇ、収率：６９．６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４３５  ［Ｍ＋１］＋。
【００６３】
ステップ１ｅ、ベンジル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｂｅｎｚｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−ｂｒｏｍｏｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１０８）の製造：密閉チューブに、ベンジル（Ｓ）−２−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１０７）（１．７６ｇ、４．０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、イソプロパノール（３０ｍＬ）と、アンモニア水（１０ｍＬ）とを加え、窒素の保護下で、１１０℃まで加熱し、一晩反応させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をメタノールに溶解した後、スピン乾燥した。そして、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝１００：１）で精製して、白い泡状であるベンジル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１．３２ｇ、収率：７９．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１６  ［Ｍ＋１］＋。
【００６４】
ステップ１ｆ、（Ｓ）−１−ブロモ−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン臭化水素酸塩（（Ｓ）−１−ｂｒｏｍｏ−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ）（化合物１０９）の製造：反応フラスコに、ベンジル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１０８）（１．３２ｇ、３．２ｍｍｏｌ、１．０当量）と、３３％臭化水素酸の酢酸溶液（１２ｍＬ）とを加え、超音波により溶解し、室温で２０分間反応させた。反応液をジクロロメタン溶液（１００ｍＬ）に入れ、固体を析出させ、濾過し、フィルターケーキをメタノールで３回回転させ、スピン乾燥した後、薄茶色の固体である（Ｓ）−１−ブロモ−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン臭化水素酸塩（１．１６ｇ、収率：〜１００％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２８２  ［Ｍ＋１］＋。
【００６５】
ステップ１ｇ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−ｂｒｏｍｏｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物１１０）の製造：０℃で、（Ｓ）−１−ブロモ−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン臭化水素酸塩（化合物１０９）（１．１６ｇ、３．２ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（３０ｍＬ）にトリエチルアミン（０．８１ｇ、８．０ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、更に、ＢＯＣ無水物（０．７２ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で２５分間反応させた。反応液をジクロロメタン（１５０ｍＬ）で希釈し、食塩水（１００ｍＬ×２）で洗い、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液をスピン乾燥した。残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝８０：１）で精製して、白い泡状のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１．０８ｇ、収率：８８．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３８２  ［Ｍ＋１］＋。
【００６６】
ステップ１ｈ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−１）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．８６ｇ、２．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（３６ｍＬ）に、４−ベンジルオキシベンゼンボロン酸（０．７７ｇ、３．４ｍｍｏｌ、１．５当量）と、炭酸カリウム（０．９５ｇ、６．９ｍｍｏｌ、３．０当量）の水（１２ｍＬ）溶液と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．１７ｇ、０．２３ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加えた。窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝６０：１）で精製して、薄茶色で泡状のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．９５ｇ、収率：８５．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４８６  ［Ｍ＋１］＋。
【００６７】
ステップ１ｉ、（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−１−（４−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−１）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物３０１−１）（０．９５ｇ、１．９６ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（４．０ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を飽和炭酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）に入れ、ジクロロメタン（１００ｍＬ×４）で抽出した後、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液をスピン乾燥した。カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール：トリエチルアミン＝１５：１：０．０５）で精製して、淡黄色固体の（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（０．５７ｇ、収率：７５．４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３８６  ［Ｍ＋１］＋。
【００６８】
ステップ１ｊ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物１）の製造：０℃で、２−ブチン酸（０．１４ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１．１当量）のジクロロメタン溶液（１７ｍＬ）に、トリエチルアミン（０．２２ｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．５当量）と、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、０．６２ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加え、更に、（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−１）（０．５７ｇ、１．４８ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で２５分間反応させた。反応液をジクロロメタンで希釈し、カラムクロマトグラフィー法（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝６０：１）で精製して、淡黄色固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（５４５ｍｇ、収率：８１．３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４５２  ［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．７５−７．７６（ｍ，１Ｈ），７．５３−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．４６（ｍ，５Ｈ），７．０５−７．１０（ｍ，３Ｈ），５．４２−５．４５（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），５．０９−５．２５（ｍ，２Ｈ），３．８２−３．９１（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．５５（ｍ，３Ｈ），２．０１−２．０４（ｍ，１Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ）。
【００６９】
実施例２：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物２）を製造した。
ステップ２ａ、１−ブロモ−４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゼン（１−ｂｒｏｍｏ−４−（（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｂｅｎｚｅｎｅ）（化合物２０４−２）の製造：１００ｍＬのなす型フラスコに、ｐ−トリフルオロメチルベンジルブロミド（化合物２０１−２）（１．２０ｇ、５ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ｐ−ブロモフェノール（化合物２０３−２）（０．９５ｇ、５．５ｍｍｏｌ、１．１当量）と、炭酸カリウム（１．３８ｇ、１０ｍｍｏｌ、２．０当量）と、アセトニトリル（５０ｍＬ）とを加え、加熱し、３時間還流させた。反応液を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）で精製して、無色固体の１−ブロモ−４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゼン（１．６０ｇ、収率：９７．０％）を得た。
【００７０】
ステップ２ｂ、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（４，４，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−２−（４−（（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）−１，３，２−ｄｉｏｘａｂｏｒｏｌａｎｅ）（化合物２０６−２）の製造：１−ブロモ−４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゼン（２０４−２）（１．６０ｇ、４．８０ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（５００ｍＬ）に、ビス（ピナコラト）ジボロン（化合物２０５）（１．３５ｇ、５．３０ｍｍｏｌ、１．１当量）と、酢酸カリウム（０．９８ｇ、９．６０ｍｍｏｌ、２．０当量）と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．３７ｇ、０．５０ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加え、窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）で精製して、無色固体の４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１．３２ｇ、収率：７３％）を得た。
【００７１】
ステップ２ｃ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−２）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．０８ｇ、０．２１ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（１２ｍＬ）に、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（化合物２０６−２）（０．１１９ｇ、０．３１ｍｍｏｌ、１．５当量）と、炭酸カリウム（０．０８７ｇ、０．６３ｍｍｏｌ、３．０当量）の水溶液（３ｍＬ）と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．０１５ｇ、０．０２ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加えた。窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝４０：１）で精製して、薄茶色泡状のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．１００ｇ、収率：８６．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ５５４  ［Ｍ＋１］＋。
【００７２】
ステップ２ｄ、（Ｓ）−３−（ピロリジン−２−イル）−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）−１−（４−（（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−２）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（３０１−２）（０．１０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を飽和炭酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）に入れ、ジクロロメタン（１００ｍＬ×４）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液をスピン乾燥した。カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール：トリエチルアミン＝１５：１：０．０５）で精製して、淡黄色固体の（Ｓ）−３−（ピロリジン−２−イル）−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（０．０６５ｇ、収率：８０．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４５４  ［Ｍ＋１］＋。
【００７３】
ステップ２ｅ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物２）の製造：０℃で、２−ブチン酸（０．０１３ｇ、０．１５４ｍｍｏｌ、１．１当量）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に、トリエチルアミン（０．０２１ｇ、０．２１ｍｍｏｌ、１．５当量）と、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、０．０５９ｇ、０．１５４ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加え、更に（Ｓ）−３−（ピロリジン−２−イル）−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−２）（０．０６５ｇ、０．１４ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で２５分間反応させた。反応液をジクロロメタンで希釈し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で精製して、無色固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（５０ｍｇ、収率：６９．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ５２０  ［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．７８−７．７７（ｄ，１Ｈ），７．６７−７．６５（ｄ，２Ｈ），７．５８−７．５４（ｔ，４Ｈ），７．０９−７．００（ｍ，３Ｈ），５．４２−５．３９（ｍ，１Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），５．０９−５．２５（ｍ，２Ｈ），３．９１−３．８２（ｍ，２Ｈ），２．５５−２．３１（ｍ，３Ｈ），２．０７−２．０１（ｍ，１Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ）。
【００７４】
実施例３：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物３）を製造した。
【００７５】
ステップ３ａ、１−ブロモ−４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンゼン（１−ｂｒｏｍｏ−４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｂｅｎｚｅｎｅ）（化合物２０４−３）の製造：反応フラスコに、ｐ−ブロモフェノール（化合物２０３−２）（０．６０ｇ、３．４７ｍｍｏｌ、１．３当量）のアセトニトリル（１２ｍＬ）溶液を加え、更に炭酸カリウム（０．７４ｇ、５．３４ｍｍｏｌ、２．０当量）と、４−フルオロベンジルブロミド（化合物２０１−３）（０．５０ｇ、２．６７ｍｍｏｌ、１．０当量）とを加え、窒素の保護下で、反応液を８０℃まで加熱し、３．５時間還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で溶解し、水（１００ｍＬ）で洗い、有機相をシリカゲルとミキシングしてスピン乾燥した後、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル）で精製して、白い固体の１−ブロモ−４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンゼン（０．９２ｇ、収率：〜１００％）を得た。
【００７６】
ステップ３ｂ、２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（２−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）−４，４，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１，３，２−ｄｉｏｘａｂｏｒｏｌａｎｅ）（化合物２０６−３）の製造：１−ブロモ−４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンゼン（化合物２０４−３）（０．９２ｇ、３．２７ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（３０ｍＬ）に、ビス（ピナコラト）ジボロン（化合物２０５）（１．００ｇ、３．９３ｍｍｏｌ、１．２当量）と、酢酸カリウム（０．８０ｇ、８．１８ｍｍｏｌ、２．５当量）と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．２４ｇ、０．３３ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加えた。窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１）で精製して、淡黄色油状物の２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．９５ｇ、収率：８８．８％）を得た。
【００７７】
ステップ３ｃ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−３）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．１５ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（９ｍＬ）に、２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（化合物２０６−３）（０．１８ｇ、０．５５ｍｍｏｌ、１．４当量）と、炭酸カリウム（０．１６ｇ、１．１７ｍｍｏｌ、３．０当量）の水（３ｍＬ）溶液と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．０３ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加えた。窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、５時間還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝８０：１）で精製して、薄茶色固体のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．２１ｇ、収率：〜１００％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ５０４  ［Ｍ＋１］＋。
【００７８】
ステップ３ｄ、（Ｓ）−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−３）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物３０１−３）（０．２１ｇ、０．４２ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）を加え、室温で５０分間撹拌した。反応液を飽和炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）に入れ、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液をスピン乾燥した後、薄層クロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝５：１）で精製して、薄茶色固体の（Ｓ）−１−（４  −（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（０．１２ｇ、収率：７０．６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４０４  ［Ｍ＋１］＋。
【００７９】
ステップ３ｅ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物３）の製造：０℃で、２−ブチン酸（０．０３ｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．１当量）のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６ｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１．５当量）と、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、０．１３ｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加え、更に、（Ｓ）−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−３）（０．１２ｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で１５分間反応させた。反応液をジクロロメタンで希釈し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で精製して得た粗生成物を、薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で精製して、淡黄色固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（７５ｍｇ、収率：５３．６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４７０  ［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．７５−７．７７（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．５８（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．０３−７．１１（ｍ，５Ｈ），５．４１−５．４４（ｍ，１Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），３．７８−３．９４（ｍ，２Ｈ），２．５０−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３５（ｍ，１Ｈ），１．９８−２．０７（ｍ，２Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ）。
【００８０】
実施例４：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物５）を製造した。
【００８１】
ステップ４ａ、２−（（４−ブロモフェノキシ）メチル）ピリジン（２−（（４−ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（化合物２０４−５）の製造：０℃で、ｐ−ブロモフェノール（化合物２０３−２）（１．００ｇ、５．７８ｍｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン溶液（３０ｍＬ）に、２−ピリジンメタノール（化合物２０２−５）（０．６３ｇ、５．７８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、トリフェニルホスフィン（１．６７ｇ、６．３６ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加え、窒素の保護下で、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ、１．２９ｇ、６．３６ｍｍｏｌ、１．１当量）を更に滴下し、反応液を室温で２時間反応させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）で精製して、無色固体の２−（（４−ブロモフェノキシ）メチル）ピリジン（１．８７ｇ、収率：〜１００％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２６４  ［Ｍ＋１］＋。
【００８２】
ステップ４ｂ、２−（（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）メチル）ピリジン（２−（（４−（４，４，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１，３，２−ｄｉｏｘａｂｏｒｏｌａｎ−２−ｙｌ）ｐｈｅｎｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（化合物２０６−５）の製造：２−（（４−ブロモフェノキシ）メチル）ピリジン（２０４−５）（１．８７ｇ、７．０８ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（６０ｍＬ）に、ビス（ピナコラト）ジボロン（化合物２０５）（２．１６ｇ、８．５０ｍｍｏｌ、１．２当量）と、酢酸カリウム（１．７４ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ、２．５当量）と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．５２ｇ、０．７１ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加え、窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）で精製して、淡黄色油状物の２−（（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）メチル）ピリジン（１．８８ｇ、収率：８５．５％）を得た。
【００８３】
ステップ４ｃ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−５）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．２５ｇ、０．６５ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（９ｍＬ）に、２−（（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェノキシ）メチル）ピリジン（化合物２０６−５）（０．２８ｇ、０．９２ｍｍｏｌ、１．４当量）と、炭酸カリウム（０．２７ｇ、１．９５ｍｍｏｌ、３．０当量）の水（３ｍＬ）溶液と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．０５ｇ、０．０７ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加え、窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で精製して、薄茶色泡状のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．２８ｇ、収率：８７．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４８７  ［Ｍ＋１］＋。
【００８４】
ステップ４ｄ、（Ｓ）−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−１−（４−（ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−５）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物３０１−５）（０．２８ｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を飽和炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）に入れ、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液をスピン乾燥した。そして、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール：トリエチルアミン＝１５：１：０．１）で精製して、薄茶色泡状の（Ｓ）−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（０．２１ｇ、収率：９５．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３８７  ［Ｍ＋１］＋。
【００８５】
ステップ４ｅ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物５）の製造：０℃で、２−ブチン酸（０．０５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ、１．１当量）のジクロロメタン溶液（６ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１０ｇ、０．８１ｍｍｏｌ、１．５当量）と、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、０．２３ｇ、０．６０ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加え、（Ｓ）−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−５）（０．２１ｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を更にゆっくりと滴下し、反応液を０℃で１５分間反応させた。反応液をジクロロメタンで希釈し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で精製して、薄茶色泡状の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（２２３ｍｇ、収率：９２．６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４５３  ［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．６１−８．６２（ｍ，１Ｈ），７．７１−７．７５（ｍ，２Ｈ），７．５２−７．５７（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．３０（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．１２（ｍ，３Ｈ），５．４２−５．４５（ｍ，１Ｈ），５．２７（ｓ，２Ｈ），３．６８−３．８９（ｍ，２Ｈ），２．５１−２．５４（ｍ，２Ｈ），２．３１−２．３２（ｍ，１Ｈ），２．０３−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ）。
【００８６】
実施例５：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１）−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物６）を製造した。
【００８７】
ステップ５ａ、２−（ブロモメチル）−４−フルオロピリジン（２−（ｂｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌ）−４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）（化合物２０１−６）の製造：反応フラスコに、２−メチル−４−フルオロピリジン（０．４ｇ、３．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ＮＢＳ（０．６４ｇ、３．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ＡＩＢＮ（５９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、０．１当量）と、四塩化炭素（８ｍＬ）とを加え、８０℃まで加熱し、一晩反応させた。反応液をスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）で精製して、淡黄色油状液体の２−（ブロモメチル）−４−フルオロピリジン（０．１５２ｇ、収率：２２％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １９０  ［Ｍ＋１］＋。
【００８８】
ステップ５ｂ、２−（４−ブロモフェノキシメチル）−４−フルオロピリジン（２−（（４−ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ）−４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）（化合物２０４−６）の製造：反応フラスコに、ｐ−ブロモフェノール（化合物２０３−２）（０．１３８ｇ、０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、２−（ブロモメチル）−４−フルオロピリジン（化合物２０１−６）（０．１５２ｇ、０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、炭酸カリウム（０．１６６ｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．２当量）と、アセトニトリル（８ｍＬ）とを加え、８０℃まで加熱し、１．５時間反応させた。反応液をスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）で精製して、淡黄色固体の２−（４−ブロモフェノキシメチル）−４−フルオロピリジン（０．２２４ｇ、収率：９９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２８２  ［Ｍ＋１］＋。
【００８９】
ステップ５ｃ、４−（４−フルオロピリジン−２−メトキシ）ベンゼンボロン酸ピナコールエステル（４−（４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ−２−ｍｅｔｈｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ  ｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｉｎａｃｏｌ  ｅｓｔｅｒ）（化合物２０６−６）の調製：２−（４−ブロモフェノキシメチル）−４−フルオロピリジン（化合物２０４−６）（０．２２４ｇ、０．７９４ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ビス（ピナコラト）ジボロン（化合物２０５）（０．２２２ｇ、０．８７４ｍｍｏｌ、１．１当量）とを、ジオキサン（６ｍＬ）に溶解した後、酢酸カリウム（０．２３４ｇ、２．３８ｍｍｏｌ、３．０当量）と、［１，１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．０５８ｇ、０．０７９ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加えた。窒素で３回置換した後、１００℃で一晩反応させた。反応が完了した後、濃縮して粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）で精製して、淡黄色固体の４−（４−フルオロピリジン−２−メトキシ）ベンゼンボロン酸ピナコールエステル（０．２０ｇ、収率：７７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３３０  ［Ｍ＋１］＋。
【００９０】
ステップ５ｄ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−６）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモ）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．０９５ｇ、０．２４８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、４−（４−フルオロピリジン−２−メトキシ）ベンゼンボロン酸ピナコールエステル（化合物２０６−６）（０．０９８ｇ、０．２９８ｍｍｏｌ、１．２当量）とを、ジオキサン（６ｍＬ）及び水（２ｍＬ）に溶解した後、炭酸カリウム（０．１０３ｇ、０．７４４ｍｍｏｌ、３．０当量）と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（１８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加えた。窒素で３回置換した後、１００℃で１０時間反応させた。反応が完了した後、濃縮して粗生成物を得て、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で精製して、淡黄色固体のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．１２ｇ、収率：９６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ５０５［Ｍ＋１］＋。
【００９１】
ステップ５ｅ、（Ｓ）−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−６）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物３０１−６）（０．１２ｇ、０．２３８ｍｍｏｌ、１．０当量）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えた後、室温で０．５時間反応させた。反応混合液をジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、順に飽和炭酸ナトリウム溶液（３０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗い、次いで有機相をシリカゲルとミキシングしスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール：トリエチルアミン＝１００：１０：１）で精製して、淡黄色固体の（Ｓ）−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（９５ｍｇ、収率：９９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４０５［Ｍ＋１］＋。
【００９２】
ステップ５ｆ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（（４−ｆｌｕｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物６）の製造：（Ｓ）−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−６）（９５ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ、１．０当量）と、２−ブチン酸（２２ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ、１．１当量）と、ＨＡＴＵ（９８ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ、１．１当量）と、炭酸カリウム（４９ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ、１．５当量）とを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解した後、０℃で０．５時間反応させた。反応液を水（２０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で精製して、灰色固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（（４−フルオロピリジン−２−イル）メトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（１８ｍｇ、収率：１６％）を得た。融点：１６２．３−１６５．１℃。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４７１［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ８．６６−８．６２（ｍ，１Ｈ），７．７９−７．７２（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．４４（ｍ，３Ｈ），７．３４−７．３０（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０８−７．０３（ｍ，１Ｈ），６．０３−５．９７（ｍ，２Ｈ），５．６９−５．４３（ｍ，１Ｈ），５．２７（ｓ，２Ｈ），３．８２−３．７９（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．０８（ｍ，３Ｈ），２．０３−１．９４（ｍ，４Ｈ）。
【００９３】
実施例６：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（６−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物９）を製造した。
【００９４】
ステップ６ａ、２−（ベンジルオキシ）−５−ブロモピリジン（２−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）−５−ｂｒｏｍｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）（化合物２０４−９）の製造：０℃で、水素化ナトリウム（１．０４ｇ、２６．０ｍｍｏｌ、１．３当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）溶液にベンジルアルコール（２．５９ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、混合物を０℃で１時間撹拌した後、２，５−ジブロモピリジン（４．７４ｇ、２０ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、反応液を室温で一晩反応させた。反応液を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、半飽和食塩水（３００ｍＬ×４）で洗い、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を石油エーテルで３回回転させた。残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝２００：１）で精製して、無色油状物である２−（ベンジルオキシ）−５−ブロモピリジン（３．７６ｇ、収率：７１．２％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２６４  ［Ｍ＋１］＋。
【００９５】
ステップ６ｂ、２−（ベンジルオキシ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（２−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）−５−（４，４，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１，３，２−ｄｉｏｘａｂｏｒｏｌａｎ−２−ｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（化合物２０６−９）の製造：２−（ベンジルオキシ）−５−ブロモピリジン（２０４−９）（３．７６ｇ、１４．２ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（５０ｍＬ）に、ビス（ピナコラト）ジボロン（化合物２０５）（４．３４ｇ、１７．１ｍｍｏｌ、１．２当量）と、酢酸カリウム（３．４８ｇ、３５．５ｍｍｏｌ、２．５当量）と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（１．１６ｇ、１．４ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加え、窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、一晩還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：ジクロロメタン＝２：１）で精製して、白い固体の２−（ベンジルオキシ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（２．６３ｇ、収率：５９．５％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３１２  ［Ｍ＋１］＋。
【００９６】
ステップ６ｃ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（Ｓ）−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（６−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−９）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．２５ｇ、０．６５ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン溶液（９ｍＬ）に、２−（ベンジルオキシ）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（化合物２０６−９）（０．４１ｇ、１．３１ｍｍｏｌ、２．０当量）と、炭酸カリウム（０．２７ｇ、１．９５ｍｍｏｌ、３．０当量）の水（３ｍＬ）溶液と、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（０．０５ｇ、０．０７ｍｍｏｌ、０．１当量）とを加え、窒素の保護下で、反応液を１００℃まで加熱し、４時間還流させた。反応液をスピン乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝５０：１）で精製して、薄茶色泡状のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．２５ｇ、収率：７９．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ４８７  ［Ｍ＋１］＋。
【００９７】
ステップ６ｄ、（Ｓ）−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−１−（６−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）−３−（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−９）の製造：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物３０１−９）（０．２５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）にトリフルオロ酢酸（３．０  ｍＬ）を加え、室温で５０分間撹拌した。反応液を飽和炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）に入れ、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液をスピン乾燥した。そして、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール：トリエチルアミン＝１５：１：０．０５）で精製して粗生成物（０．１５ｇ）を得て、分取クロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝５：１）で精製して、白い固体の（Ｓ）−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（０．１４ｇ、収率：７１．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３８７  ［Ｍ＋１］＋。
【００９８】
ステップ６ｅ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（６−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物９）の製造：０℃で、２−ブチン酸（０．０３４ｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．１当量）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０７ｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）と、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．１５ｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加え、（Ｓ）−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−９）（０．１４ｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（１１ｍＬ）溶液を更にゆっくりと滴下し、反応液を０℃で１５分間反応させた。反応液をジクロロメタンで希釈し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で精製して、白い固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（１４０ｍｇ、収率：８５．９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４５３  ［Ｍ＋１］＋；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．４２−８．４３（ｍ，１Ｈ），７．７７−７．８９（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４９（ｍ，５Ｈ），６．９１−７．１３（ｍ，２Ｈ），５．４２−５．４６（ｍ，３Ｈ），３．６８−３．９０（ｍ，２Ｈ），２．０１−２．５３（ｍ，４Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ）。
【００９９】
実施例７：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−フェネトキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−ｐｈｅｎｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物１７）を製造した。
【０１００】
ステップ７ａ、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−フェネトキシフェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（４，４，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−２−（４−ｐｈｅｎｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−１，３，２−ｄｉｏｘａｂｏｒｏｌａｎｅ）（化合物２０６−１７）の製造：反応フラスコに、４−ヒドロキシフェニルボロン酸ピナコールエステル（１．１ｇ、５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、フェネチルアルコール（化合物２０２−１７）（０．６ｇ、５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、トリフェニルホスフィン（３．９３ｇ、１５．０ｍｍｏｌ、３．０当量）と、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（２．８７ｇ、１６．５ｍｏｌ、３．５当量）とを加え、室温で４時間反応させた。反応液をジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、半飽和食塩水（５０ｍＬ×３）で洗い、有機相をシリカゲルとミキシングしてスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：ｎ−ヘキサン＝１：２）で精製して、ピンク色固体の４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−フェネトキシフェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（０．９ｇ、収率５６．２％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２６［Ｍ＋１］＋。
【０１０１】
ステップ７ｂ、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（８−アミノ−１−（４−フェネトキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−ｐｈｅｎｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）（化合物３０１−１７）の製造：反応フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（化合物１１０）（０．５８ｇ、１．５ｍｍｏｌ、１．０当量）と、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−フェネトキシフェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（化合物２０６−１７）（０．５８ｇ、１．８ｍｍｏｌ、１．２当量）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．１７ｇ、０．１５ｍｍｏｌ、０．１当量）と、炭酸ナトリウム（０．３２ｇ、３ｍｏｌ、２．０当量）と、１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）と、水（３ｍＬ）とを加え、油浴で８０℃にし一晩反応させた。反応液をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、飽和食塩水（５０ｍＬ×３）で洗い、有機相をスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル：シクロヘキサン＝２：１）で精製して、黄色固体の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（８−アミノ−１−（４−フェネトキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．６ｇ、収率：８０．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ５００［Ｍ＋１］＋。
【０１０２】
ステップ７ｃ、（Ｓ）−１−（３−（４−フェネトキシフェニル）−ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（（Ｓ）−１−（３−（４−ｐｈｅｎｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−８−ａｍｉｎｅ）（化合物３０２−１７）の調製：反応フラスコに、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（８−アミノ−１−（４−フェネトキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（３０１−１７）（０．６ｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．０当量）と、トリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）と、ジクロロメタン（２０ｍＬ）とを加え、室温で１時間反応させた。反応液をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、ｐＨを飽和炭酸水素ナトリウムで中性或いは弱アルカリ性に調整し、有機相をスピン乾燥した後、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で精製して、黄色固体である（Ｓ）−１−（３−（４−フェネトキシフェニル）−ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（０．４ｇ、収率：８３．３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ５００［Ｍ＋１］＋。
【０１０３】
ステップ７ｄ、（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−フェネトキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−ｐｈｅｎｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔ−２−ｙｎ−１−ｏｎｅ）（化合物１７）の製造：反応フラスコに、（Ｓ）−１−（３−（４−フェネトキシフェニル）−ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−１７）（０．４０ｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、プロピオール酸（０．０８４ｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０当量）と、ＨＡＴＵ（０．４６ｇ、１．２ｍｏｌ、１．２当量）と、ＤＩＥＡ（０．２６ｇ、２．０ｍｍｏｌ、２．０当量）と、ジクロロメタン（１０ｍＬ）とを加え、氷水浴で１５分間反応させた。反応液をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で精製して、類白色の固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−フェネトキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）ブタ−２−イン−１−オン（２００ｍｇ、収率：４３％）を得た。融点：９１−９３℃。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４６６［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）：δ７．７６（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．７１（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ），δ７．４６（ｍ，５Ｈ），７．３３（ｍ，１０Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），７．０５（ｍ，６Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ），５．９０（ｍ，５Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），４．２５（ｍ，５Ｈ），３．７７（ｍ，３Ｈ），３．０６（ｍ，５Ｈ），２．００（ｓ，５Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ）。
【０１０４】
実施例８：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ）（化合物２１）を製造した。
【０１０５】
（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−１）（１６１ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、氷水浴で０℃まで冷却した。塩化アクリロイル（３５ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解した後、一滴ずつ加えた。滴下が完了した後、０℃で１０分間反応させた。反応が完了した後、濃縮して粗生成物を得て、薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で精製して、白い固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（３５ｍｇ、収率：１９％）を得た。融点：１００．２−１０３．１℃。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４４０［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．７９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５５−７．５２（ｍ，２Ｈ），７．４６−７．２６（ｍ，５Ｈ），７．０８−７．０６（ｍ，３Ｈ），６．４９−６．４３（ｍ，１Ｈ），６．３５−６．３１（ｍ，１Ｈ），５．６９−５．６６（ｍ，１Ｈ），５．４９−５．３３（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），３．９２−３．８７（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．７０（ｍ，１Ｈ），２．６９−２．６１（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．４３（ｍ，１Ｈ），２．３５−１．９８（ｍ，３Ｈ）。
【０１０６】
実施例９：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（６−（ｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ）（化合物２５）を製造した。
【０１０７】
０℃で、アクリル酸（０．０４ｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（５ｍＬ）に、４−ジメチルアミノピリジン（０．１８ｇ、１．４７ｍｍｏｌ、３．０当量）と、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．１４ｇ、０．７４ｍｍｏｌ、１．５当量）とを加え、それに、（Ｓ）−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−９）（０．１９ｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（７ｍＬ）をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で１５分間反応させた後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（８ｍＬ）を加え、反応液を室温で７時間反応させた。反応液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、半飽和食塩水（２００ｍＬ×３）で洗った。有機相をそれぞれ２％酢酸溶液（１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬ）、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗った。水相のｐＨを約７に調整して、得た有機相を酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出して飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗った。有機相を合併、スピン乾燥し、メタノールで再結晶させた。カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で精製して粗生成物（３０ｍｇ）を得て、薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で精製して、白い固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（６−（ベンジルオキシ）ピリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（２３ｍｇ、収率：１０．７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４４１  ［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．４２−８．４３（ｍ，１Ｈ），７．８１−７．８８（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４９（ｍ，５Ｈ），７．１１−７．１２（ｍ，１Ｈ），６．９１−６．９３（ｍ，１Ｈ），６．３１−６．５０（ｍ，２Ｈ），５．６７−５．７０（ｄｄ，１Ｈ），５．４７−５．５０（ｍ，１Ｈ），５．１０−５．４３（ｍ，４Ｈ），３．８８−３．９２（ｍ，１Ｈ），３．７３−３．７５（ｍ，１Ｈ），２．４２−２．４５（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３４（ｍ，１Ｈ），１．９９−２．１４（ｍ，２Ｈ）。
【０１０８】
実施例１０：（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（（Ｓ）−１−（２−（８−ａｍｉｎｏ−１−（４−（ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏ［１，５−ａ］ｐｙｒａｚｉｎ−３−ｙｌ）ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ）（化合物２９）を製造した。
【０１０９】
０℃で、アクリル酸（０．０３ｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．１当量）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１１ｇ、０．６６ｍｍｏｌ、１．５当量）と、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．１８ｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．１当量）とを加えた。そして、（Ｓ）−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）−３−（ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物３０２−５）（０．１７ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（２０ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）の混合溶液をゆっくりと滴下し、反応液を０℃で１５分間反応させた。反応液をジクロロメタンで希釈し、カラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で精製して粗生成物（９０ｍｇ）を得て、薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝８：１）で精製して、淡黄色固体の（Ｓ）−１−（２−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（６０ｍｇ、収率：３０．９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４４１  ［Ｍ＋１］＋，１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．６１−８．６２（ｍ，１Ｈ），７．７１−７．７９（ｍ，２Ｈ），７．４７−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．２５（ｍ，１Ｈ），７．０５−７．１１（ｍ，３Ｈ），６．３１−６．５０（ｍ，２Ｈ），５．６６−５．６９（ｄｄ，１Ｈ），５．４６−５．４９（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｓ，４Ｈ），３．８８−３．９１（ｍ，１Ｈ），３．７０−３．７６（ｍ，１Ｈ），２．６１−２．６６（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．４８（ｍ，１Ｈ），２．０５−２．１４（ｍ，２Ｈ）。
【０１１０】
実施例１−１０の製造方法により、本発明は、下記の化合物を更に合成した。
【化２０】
0006840865.tif 000021
【化２１】
0006840865.tif 000022
【０１１１】
実施例１１  生物活性試験
一、ＢＴＫ酵素活性阻害試験
１、実験方法
キャリパー移動度シフトアッセイ  （Ｃａｌｉｐｅｒ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｓｈｉｆｔ  ａｓｓａｙ）を用いて、ＢＴＫプロテインキナーゼの活性を測定した（Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  １４：３１，２００９参照）。本発明の化合物をＤＭＳＯで溶解した後、キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ｐＨ７．５、０．００１５％  Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ）で１０倍希釈した。３８４ウェルプレートに、１０％のＤＭＳＯで溶解され終濃度の５倍の化合物を５μｌ入れ、化合物無しのコントロールウェル及び酵素活性無しのコントロールウェルには、それぞれ１０％のＤＭＳＯを５μｌ入れた。終濃度の２．５倍のＢＴＫ酵素溶液（ＢＴＫ，Ｃａｔ．Ｎｏ．０８−０８０，Ｃａｒｎａ）を１０μｌ加えて、化合物と混合させた後、室温で１０分間インキュベートした。うち、酵素活性無しのコントロールウェルには、キナーゼ緩衝液を１０μｌ入れた。そして、２．５倍終濃度の基質ＦＡＭ−ｌａｂｅｌｅｄ  ＳＲＣｔｉｄｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  （Ｂｉｏｃｈｅｍ，  Ｃａｔ．Ｎｏ．１１２３９４）及びＡＴＰ（９０μＭ）の基質溶液を１０μｌ加えた後、反応を開始させた。その後、室温で１０分間インキュベートした。２８℃で１時間インキュベートした後、２５μｌの停止液（１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１５％  Ｂｒｉｊ−３５、０．２％  Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ＃３、５０ｍＭ  ＥＤＴＡ）を加えて反応を停止させた。Ｃａｌｉｐｅｒ  ＥＺ  Ｒｅａｄｅｒ  （Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でコンバージョン率データを読み出し、阻害率を計算した。計算式は、阻害率％＝（ｍａｘ−コンバージョン率）／（ｍａｘ−ｍｉｎ）×１００％とする。
【０１１２】
２、実験結果
本発明による化合物は、ＢＴＫ活性を強く阻害することができる。ＢＴＫアッセイにおける、本発明の代表的な化合物の活性は表１に示されている。これらのアッセイにおいて、下記のレベルが適用されている：ＩＣ５０に対して、Ｉ＞７５０ｎＭ、７５０ｎＭ＞ＩＩ＞３００ｎＭ、３００ｎＭ＞ＩＩＩ＞１００ｎＭ、ＩＶ＜１００ｎＭ。
【表１】
0006840865.tif 000023
【０１１３】
二、非特異的なキナーゼＥＧＦＲ、Ｔｅｃ、Ｔｘｋ、ＩＴＫ阻害試験
１、実験方法
（１）ＥＧＦＲ活性阻害試験
キャリパー移動度シフトアッセイ  （Ｃａｌｉｐｅｒ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｓｈｉｆｔ  ａｓｓａｙ）を用いて、Ｋｍ  ＡＴＰで、ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒプロテインキナーゼ活性を測定した（Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  １４：３１，２００９参照）。
実験方法：試験対象化合物をＤＭＳＯで溶解した後、キナーゼ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ｐＨ７．５、０．００１５％  Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ）で希釈した。３８４ウェルプレートに、１０％のＤＭＳＯで溶解され終濃度の５倍となった化合物を５μｌ入れ、化合物無しのコントロールウェルに１０％のＤＭＳＯを５μｌ入れ、酵素活性無しのコントロールウェルにキナーゼ緩衝液を５μｌ入れた。２．５倍希釈されたＥＧＦＲ（Ｃａｍａ，Ｃａｔ．Ｎｏ  ０８−１１５，Ｌｏｔ．１３−ＣＢＳ−０００５Ｍ）酵素溶液を１０μｌ加えた後、室温で１０分間インキュベートした。その後、２．５倍希釈された基質溶液Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＦＡＭ−Ｐ２２（ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｃａｔ．Ｎｏ．１１２３９３，Ｌｏｔ．Ｎｏ．Ｐ１３０４０８−ＺＢ１１２３９３）を１０μｌ加えた。２８℃で６０分間インキュベートした後、停止液（１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１５％  Ｂｒｉｊ−３５、０．２％  Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ＃３、５０ｍ  ＭＥＤＴＡ）を２５μｌ加えて反応を停止させた。Ｃａｌｉｐｅｒ  ＥＺ  Ｒｅａｄｅｒ  （Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でコンバージョン率データを読み出した。コンバージョン率を阻害率データに変換した。
【０１１４】
化合物濃度と阻害率をそれぞれ横、縦座標として、曲線を描いた。ＸＬＦｉｔ  ｅｘｃｅｌ  ａｄｄ−ｉｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．３．１というソフトウェアを用いて曲線をフィッティングし、Ｃ５０を計算した。阻害率％＝（ｍａｘ−コンバージョン率）／（ｍａｘ−ｍｉｎ）×１００％とする。ここで、ｍａｘは、化合物無しのＤＭＳＯコントロールウェルでのコンバージョン率を指し、ｍｉｎは、酵素活性無しのコントロールウェルでのコンバージョン率を指す。
【０１１５】
（２）Ｔｅｃ、Ｔｘｋ、ＩＴＫ活性阻害試験
ヒトＴｅｃ、Ｔｘｋ、ＩＴＫに対する化合物の阻害活性試験は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  Ｐｈａｒｍａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ＵＫ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（ＵＫ）によって行われた。Ｋｍ  ＡＴＰで、放射性プロテインキナーゼの方法によって測定された。反応前に、キナーゼを緩衝液（２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、５％Ｇｌｙｃｅｒｏｌ、０．１％  ６−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ、１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）で希釈した。化合物を、終濃度の５０倍となるように、１００％のＤＭＳＯで溶解した。
【０１１６】
ＩＴＫ反応液は８ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍＬのミエリン塩基性蛋白（ｍｙｅｌｉｎ  ｂａｓｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、及び［−−３３Ｐ］−ＡＴＰ（約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ）を含むが、ＡＴＰマグネシウムを２００μＭ加えて混合した後、反応を開始させ、室温で４０分間インキュベートした。その後、３％リン酸溶液を加えて反応を停止させた。１０μｌの反応液をＰ３０濾過膜に載置し、７５ｍＭのリン酸で５分間洗い、メタノールで一回乾燥した後、シンチレーション・カウンターで計数した。
【０１１７】
活性化型Ｔｅｃ反応液は８ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、５ｍＭのＮａ−６−グリセロリン酸と、４００μＭのＥＦＰＩＹＤＦＬＰＡＫＫＫ、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、及び［−−３３Ｐ］−ＡＴＰ（約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ）を含むが、１２０μＭのＡＴＰマグネシウムを加えて混合した後、反応を開始させ、室温で４０分間インキュベートした。その後、３％リン酸溶液を加えて反応を停止させた。１０μｌの反応液をＰ３０濾過膜に載置し、７５ｍＭのリン酸で５分間洗い、メタノールで一回乾燥した後、シンチレーション・カウンターで計数した。
【０１１８】
ＴｘＫ反応液は８ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、２５０μＭのＧＥＥＰＬＹＷＳＦＰＡＫＫＫ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、及び［−−３３Ｐ］−ＡＴＰ（約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ）を含むが、２００μＭのＡＴＰマグネシウムを加えて混合した後、反応を開始させ、室温で４０分間インキュベートした。その後、３％リン酸溶液を加えて反応を停止させた。１０μｌの反応液をＰ３０濾過膜に載置し、７５ｍＭのリン酸で５分間洗い、メタノールで一回乾燥した後、シンチレーション・カウンターで計数した。
【０１１９】
２、実験結果
ＥＧＦＲに対する化合物の阻害活性は表２に示されている。第一世代のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブは、活性が極めて高いＥＧＦＲ阻害剤であり、非選択的に野生型ＥＧＦＲを阻害する。それゆえ、該薬物はヒトの消化管副作用及び皮膚の丘疹などを引き起こすことになり得る。第二世代のＥＧＦＲ阻害剤であるＡＣＰ−１９６は、Ｙ１０６８及びＹ１１７３部位でのＥＧＦＲのリン酸化を影響しないため、高濃度の場合、ＥＧＦＲに対する阻害は明らかでない。ＡＣＰ−１９６と同様に、化合物１は、ＥＧＦＲを阻害せず、ＥＧＦＲ阻害に関連する毒性副作用を引き起こす可能性が低い。
【表２】
0006840865.tif 000024
【０１２０】
Ｉｔｋ、Ｔｅｃ及びＴｘｋに対する化合物１及びＡＣＰ−１９６の阻害活性は表３に示される。第一世代のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブは、ＢＴＫに対する阻害は非特異的であり、ＥＧＦＲを阻害することに加えて、ＩＴＫ、Ｔｅｃ及びＴｘｋなどのキナーゼの活性をも強く阻害する（Ｂｙｒｄ  Ｊ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７４：３２３，２０１６）。第二世代のＢＴＫ阻害剤であるＡＣＰ−１９６は、ＩＴＫ、Ｔｅｃ及びＴｘｋに対する阻害が明らかでないため、血小板と免疫機能を維持する他の肝心な分子経路を乱すことなく、ＢＴＫ経路を選択的に遮断することができるから、がん治療に伴ういくつかの有害反応を回避又は減少することができる。ＡＣＰ−１９６と同様に、化合物１は、ＩＴＫ、Ｔｅｃ及びＴｘＫに対する阻害活性が低い。
【表３】
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【０１２１】
三、腫脹細胞増殖抑制実験
１、実験方法
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，＃Ｇ７５７２，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の含有量を測定することにより、細胞の活力を評価した。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＴＭＤ−８とＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬ細胞株は、中国上海復旦ＢＳ細胞資源中心とアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）から購入されたものである。細胞を細胞培養プレートからパンクレアチンで剥離させ、ＤＰＢＳ培地で再懸濁させた後、Ｓｃｅｐｔｅｒ自動セルカウンター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，＃ＰＨＣＣ０００００）を用いて細胞密度を測定した。細胞を４４，０００個／ｍＬの細胞溶液に希釈した。密度調整後の細胞溶液を、９０μＬ／ウェルで細胞アッセイプレートに入れた。ウェルプレートを３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した後、濃度が異なる試験対象化合物を加えた。細胞を、１０％のウシ胎児血清の存在下で、化合物とともに７２時間培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ(R)  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（製品取扱書参照）を用いて、ＡＴＰの含有量を測定することにより、細胞成長に対する阻害を評価した。簡単に言えば、ウェルあたりに３０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ(R)試薬を加えて、１０分間振ることにより、細胞溶解を誘導し、そして蛍光／化学発光分析装置Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ  ＦＬ  （Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ  ＦＬ）を用いて蛍光信号を検出して記録した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で７２時間又は１２０時間処理された細胞から最大の信号値を取得した。単独の培地（細胞数はゼロ）から取得した最小の信号値を０とした。阻害率％＝（最大の信号値−化合物の信号値）／（最大の信号値−最小の信号値）×１００％。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｖ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ソフトウェアを用いてデータを処理した。Ｓ字形の投与量−反応曲線をフィッティングすることによりＣ５０値を計算した。
【０１２２】
２、実験結果
細胞のアッセイにおける本発明による化合物の細胞増殖抑制活性は表４に示されている。これらのアッセイにおいて、下記のレベルが適用された：ＩＣ５０に対して、Ｉ＞１０μＭ、１０μＭ＞ＩＩ＞１μＭ、１μＭ＞ＩＩＩ＞０．５μＭ、０．５μＭ＞ＩＶ＞０．１μＭ、Ｖ＜０．１μＭ。本発明による化合物は、ＴＭＤ−８などの腫瘍細胞に対して強い細胞増殖抑制活性を示している一方、ＨＣＣ８２７  ＮＳＣＬＣ細胞に対しては活性が弱く又はない。ＨＣＣ８２７細胞株は、ＥＧＦＲ  Ｅｘｏｎ  １９  ｄｅｌをもっており、ＥＧＦＲ阻害剤に対して感受性がある。実験の結果からわかるように、本発明による化合物は良好な選択性を示している。
【表４】
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【０１２３】
四、薬物動態学（ＰＫ）実験
１、実験方法
体重２５０−３００ｇの雄性ＳＤラットを用い、試験前に一晩禁食させた。試験対象化合物を、３０％スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ）に溶解し、ラットに２０ｍｇ／ｋｇの投与量で胃内投与した。投与後１５分間、３０分間、及び１、２、３、４、６、８、２４時間の時点で、それぞれ約０．３ｍＬの血液を採取した。血液サンプルをＫ２−ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸二カリウム）が入っている遠心チューブに入れて、遠心処理（２，０００ｇ、１０分間、４℃）して血漿を取り、−８０℃の超低温冷蔵庫に保存した。５０μＬの血漿サンプルを５μＬの内部標準（Ｓ）と混合させ、酢酸エチルで抽出した。真空乾燥した後、残留物をアセトニトリルに再度溶解した。サンプルを濾過し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入して分析した。
【０１２４】
２、実験結果
図１は、化合物１とＡＣＰ−１９６をそれぞれラットに経口投与した（２０ｍｇ／ｋｇ）後の、化合物１とＡＣＰ−１９６の血中薬物濃度−時間曲線を示す。表５は、ラット体内における化合物１とＡＣＰ−１９６の薬物動態パラメータを示す。
図１及び表５に示すように、ラット体内における化合物１の半減期は４．２時間であり、ＡＣＰ−１９６の半減期は７．９時間であり、化合物１のＣｍａｘ及びＡＵＣは、ＡＣＰ−１９６より１倍以上高くなった。化合物１は、ラット体内での吸収が良く、血中薬物濃度が高い。不可逆的ＢＴＫ阻害剤として、ＡＣＰ−１９６は、第一世代のＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブより、安全かつ有効である。これは、ＢＴＫに対するＡＣＰ−１９６の高い選択性に加えて、またＡＣＰ−１９６の短い半減期および高い血中薬物濃度も理由だと考えられている（Ｂｙｒｄ  Ｊ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７４：３２３，２０１６）。化合物１は、ＡＣＰ−１９６よりも短い半減期と高い血中薬物濃度を呈するため、もっと安全かつ有効であろう。
【表５】
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備考：上表において、Ｔｍａｘはピークに達した時点、Ｃｍａｘは最大の血中薬物濃度、ｔ１／２は半減期、ＡＵＣ０〜２４は０−２４時間の時間−血中濃度曲線下面積、ＡＵＣｉｎｆは０−ｎｆの時間−血中濃度曲線下面積を表す。
【０１２５】
五、腫瘍モデル薬力学実験
１、実験方法
本実験では、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株ＴＭＤ−８移植腫瘍モデルにおいて、腫瘍の成長を抑制する化合物の用量―効果関係を研究した。ＴＭＤ−８腫瘍の体積が約２００ｍｍ３に達すると、動物を４つの経口投与群に分け、即ち、賦形剤対照群、化合物１のそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、及び２００ｍｇ／ｋｇの経口投与群に分けた（ｎ＝８／群）。化合物１を、３０％スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ）及び１．０モル当量の塩酸（ｐＨ３−４）に溶解し、１０ｍＬ／ｋｇで１日１回で連続２１日間、胃内投与した。
腫瘍の体積を測定し、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）及び相対腫瘍体積の比（Ｔ／Ｃ）を計算した。ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０とするが、ここで、Ｖｔは各群に投与した後ｔ日目の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は群を分けた当日の腫瘍平均体積である。Ｔ／Ｃ＝治療群のＲＴＶ／対照群のＲＴＶ×１００％。
【０１２６】
２、実験結果
１８日間の投与後、賦形剤対照群の腫瘍の体積が３０００ｍｍ３を超えたため、実験を停止した。図２は、ＴＭＤ−８リンパ腫細胞株の移植腫瘍の成長を抑制する化合物１の用量―効果関係を示す図であり、図２Ａは、各群のマウスの腫瘍の体積変化を示す図であり、図２Ｂは、各群のマウスの体重変化を示す図である。図に示されるように、化合物１を１８日間投与した後、５０ｍｇ／ｋｇの投与量で腫瘍の成長を軽く抑制することができ（Ｔ／Ｃは７１％であり、ｐ＜０．０５）、１００ｍｇ／ｋｇの投与量で腫瘍の成長を停止させることができ（Ｔ／Ｃは７％であり、ｐ＜０．００１）、２００ｍｇ／ｋｇの投与量で腫瘍を大体消えさせることができる（Ｔ／Ｃは−９１％であり、ｐ＜０．００１）。各投与群の動物の体重は、投与前より増加した。賦形剤対照群及び低投与量群の体重がより著しく増加したが、腫瘍の急速な増大が理由である可能性がある。実験の結果によれば、化合物１は、経口投与により用量依存的にＴＭＤ−８移植腫瘍の成長を抑制することができる。
【０１２７】
本発明の具体的な実施形態を詳細に説明したが、当業者にとって、開示された示唆による様々な変形や置換も本発明の保護範囲に含まれると理解されるのが当然である。よって、本発明の保護範囲は特許請求の範囲及び任意の均等物によるものとする。
【図１】
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【図２】
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