(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性腸疾患の治療又は補助治療用の医薬を製造するためのアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用であって、前記アルテミシニン誘導体は以下の化合物からなる群より選ばれることを特徴とする使用。
【化１】
0006905140.tif 000006
【化２】
0006905140.tif 000007
【化３】
0006905140.tif 000008
【請求項２】
結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制する、及び、結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートするための医薬を製造するためのアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用であって、前記アルテミシニン誘導体が以下の化合物からなる群より選ばれることを特徴とする使用。
【化４】
0006905140.tif 000009
【化５】
0006905140.tif 000010
【化６】
0006905140.tif 000011
【請求項３】
前記アルテミシニン誘導体の薬学的に許容される塩は、以下の化合物である、請求項１又は２に記載の使用。
【化７】
0006905140.tif 000012
【請求項４】
前記医薬は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、経口又は浣腸液製剤、又は静脈内若しくは筋肉内注射剤である、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項５】
前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性腸炎を含む、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬分野に関し、具体的に、抗炎症性免疫抑制活性を有する４つのアルテミシニン誘導体の、炎症性腸疾患を治療するための新しい医学的使用を提供する。デキストラン硫酸（ＤＳＳ）によって誘発される潰瘍性大腸炎のマウスモデルでの実験的研究の結果として、前記化合物の胃内投与により、実験動物の体重減少、下痢、便中の血液のような潰瘍性大腸炎の臨床的症状を効果的に改善し、結腸組織の病理学的損傷を軽減し、結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制し、関連する炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートすることができることを実証した。薬効薬理学的研究は、このような化合物が良好な免疫抑制活性と高い安全性を有し、炎症性腸疾患の治療及び補助治療のための医薬及び医療用途として使用できる。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、回腸、直腸、及び結腸が関与する特発性の慢性腸炎症性疾患であって、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）とクローン病（ＣＤ）等を含み、合併症も多い。近年、このような疾患の発生率と有病率は全体的に上昇している傾向にある。慢性大腸炎、潰瘍性大腸炎は、病因が明らかでない慢性非特異的腸炎症性疾患であり、その病変が直腸及び結腸に関与し、繰り返して発作する。主な臨床症状は、下痢、腹痛、粘血便がある。このような疾患は、患者の生活の質に影響を与えるだけでなく、さらに結腸直腸癌を誘発しやすくなる。現在、炎症性腸疾患の臨床治療薬は、主に、アミノサリチル酸系、ホルモン、シクロスポリン及び腫瘍壊死因子モノクローナル抗体を含む、抗炎症性及び免疫抑制性の化合物又は生物製剤である。このような薬物に伴う腎毒性やステロール依存性などの副作用は、臨床応用の制限につながる。したがって、炎症性腸疾患の治療のための高効率で低毒性の医薬の開発は、幅広く臨床的に求められる。
【０００３】
アルテミシニンは、優れた抗マラリア効果があるだけでなく、優れた抗炎症性免疫抑制活性もあると発見された。２０００年以来、アルテミシニン化合物に関して、免疫抑制活性を標的とする薬物化学と生物学と連携する体系的な研究を実施し、複数のシリーズの新しいアルテミシニン誘導体を合成し、一連のより強力な抗炎症性免疫抑制活性及び良好な経口投与服従性を有する新しい誘導体を発見した。上記の研究に応じて、２つの特許出願を提出し、特許された。そのうち、中国特許第２００６８０００２３６８．５号は、アルテミシニン誘導体、その製造方法及び用途、並びにそれを含む医薬組成物を開示した。中国特許第２００６８００２６３２５．０号は、水溶性アルテミシニン誘導体、製造方法、医薬組成物及び用途を開示した。
【０００４】
一連のアルテミシニン誘導体の抗炎症性免疫抑制活性を評価することにより、２００６年に、自己免疫疾患である全身性エリテマトーデスを治療する新薬候補として、代表的な化合物であるマレイン酸β−アミノアルテエーテル（β−aminoarteether maleate、ＳＭ９３４）を最終的に特定した。ＳＭ９３４は、強力な免疫抑制作用と新しい作用機序を有する水溶性アルテミシニン誘導体である。ＳＭ９３４は、効果が高く、毒性が低く、経口吸収性が良好で、製剤性が高く、将来の応用に適する見通しがある。ＳＭ９３４に関して、２つの中国特許、２つの米国特許、１つの日本特許を取得した。当該研究は、世界中の同業者の注目を集めた。Mini−Reviews in Medicinal Chemistry (2007, 7, 411−422．)によれば、我らにより開発されたアルテミシニン誘導体は、毒性が低く、副作用がほとんどなく、作用メカニズムがＣｓＡ及びＦＫ５０６とはまったく異なるものであり、将来の見通しがある免疫抑制薬であると認定された。Chemical Society Reviews． (2010, 39(2): 435−454)によれば、水溶性アルテミシニンの発見は、免疫学の分野におけるアルテミシニン化合物の成功した拡大応用であると認定された。メカニズム研究により、アルテミシニン化合物は、Ｔｈ１７細胞機能を作用の中心として、免疫細胞の異常な活性化シグナル伝達経路を相互的に調節することが確認された。この研究は、自己知的財産権を持つ新しい免疫抑制薬を開発するだけでなく、中国におけるアルテミシニンの資源的優位性を発揮し、アルテミシニン化合物の応用範囲を拡大するため、重要な科学的意義と応用価値を持っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】中国特許第２００６８０００２３６８．５号
【特許文献２】中国特許第２００６８００２６３２５．０号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Mini−Reviews in Medicinal Chemistry, 2007, 7, 411−422
【非特許文献２】Chemical Society Reviews．, 2010, 39(2): 435−454
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、炎症性腸疾患の治療又は補助治療用の医薬を製造するためのアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用を発見及び提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様では、本発明は、アルテミシニン誘導体が以下の化合物からなる群より選ばれる、炎症性腸疾患の治療又は補助治療用の医薬を製造するためのアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０００９】
【化１】
0006905140.tif 000002
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実験中の各群のマウスの疾患活動性指数スコアを示すグラフである。
【図２Ａ】実験終了時のマウスの各群の結腸組織の写真である。
【図２Ｂ】実験終了時のマウスの各群の結腸長さを示すグラフである。モデル対照群と比較して、*，ｐ＜０．０５；**，ｐ＜０．０１。
【図２Ｃ】実験終了時のマウスの結腸組織をとり、遠位結腸をホルマリンにおいて固定し、パラフィン包埋切片し、Ｈ＆Ｅ染色により作成された病理切片のグラフである。
【図３】実験終了時に各群の腸間膜リンパ節と脾臓を取って単一細胞懸濁液を調製し、細胞を対応する蛍光抗体で標識して、フローサイトメトリー分析による結果を示すグラフである。図３Ａでは単離された腸間膜リンパ節細胞に対して、図３Ｂでは単離された脾臓リンパ球に対して、それぞれ抗Ｆ４／８０抗体＋抗ＣＤ１１ｂ抗体による染色（二重陽性細胞がマクロファージとして認識される）と、抗Ｇｒ−１抗体＋抗ＣＤ１１ｂ抗体による染色（二重陽性細胞が好中球として認識される）を行った結果である。
【図４】実験終了時に各群のマウスの結腸中央部を凍結切片した後、ＤＡＰＩ蛍光抗体により細胞核を染色し、抗ＣＤ１１ｂ抗体により単核リンパ球を染色し、共焦点蛍光顕微鏡により写真撮影及び分析の結果を示すグラフである。
【図５】各群のマウスの結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルの検出結果を示すグラフである。モデル対照群と比較して、*，ｐ＜０．０５；**，ｐ＜０．０１；***，ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の研究により、上記のアルテミシニン誘導体が、結腸組織への炎症細胞の浸潤を効果的に抑制し、結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートすることができ、炎症性腸疾患の治療又は補助治療用の医薬を製造するために使用可能であると実証した。
【００１２】
したがって、本発明は、さらに、結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制し、結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートするための医薬を製造するための上記アルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１３】
好ましくは、上記の使用において、前記アルテミシニン誘導体の薬学的に許容される塩は、以下の化合物からなる群より選択される。
【００１４】
【化２】
0006905140.tif 000003
【００１５】
好ましくは、上記の使用において、前記医薬は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、経口又は浣腸液製剤、又は静脈内若しくは筋肉内注射剤などの剤形であってもよい。
【００１６】
また、本発明は、治療的有効量の上記アルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に提供することを含む、炎症性腸疾患を治療又は補助治療する方法を提供する。
【００１７】
また、本発明は、治療的有効量の上記アルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に提供することを含む、結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制する、及び、結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートする方法を提供する。
【００１８】
本発明は、さらに、炎症性腸疾患の治療又は補助治療用の上記アルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩に関する。
【００１９】
本発明は、さらに、結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制する、及び、結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートするための上記アルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩に関する。
【００２０】
本発明は、さらに、上記のアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、炎症性腸疾患の治療又は補助治療用の医薬組成物に関する。
【００２１】
本発明は、さらに、上記のアルテミシニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制する、及び、結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートするための医薬組成物に関する。
【００２２】
本発明では、好ましくは、前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎、クローン病、及び慢性腸炎などの慢性腸炎症性疾患を含んでも良い。
【実施例】
【００２３】
＜実験実施例＞
４つのアルテミシニン誘導体（ＳＭ９３４、ＳＭ９０５、ＳＭ９３３、ＳＭ７３５）に対して、慢性炎症性腸疾患の薬力学と関連メカニズムに関する研究を行った。
【００２４】
【化３】
0006905140.tif 000004
【００２５】
一、実験材料
実験動物：純Ｂａｌｂ／ｃメスマウス、約８週齢、Shanghai SLAC Laboratory Animal Co．,Ltd。
試薬：硫酸デキストラン（ＤＳＳ、米国MP Biomedicals社製）、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ、中国医薬品生物製剤検定所製）、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ、Sigma−Aldrich社製）、フローサイトメトリー抗体（BD Pharmingen社から購入された）。
ＳＭ９３４及びＳＭ９０５の具体的な製造方法は、本発明者らの先行特許（中国特許番号ZL８９１０９５６２．４、ZL９３１１２４５４．９）及び発表された論文J． Med． Chem, 2000, 43: 1635−1640を参照することができる。
ＳＭ９３４：
マレイン酸と塩を形成した。白い結晶。融点：１３９〜１４１℃
元素分析（Ｃ２１Ｈ３３ＮＯ９）：
計算値：Ｃ  ５６．８７  Ｈ  ７．５０  Ｎ  ３．１６
実測値：Ｃ  ５６．８４  Ｈ  ７．５９  Ｎ  ３．１０
ＳＭ９０５：
マレイン酸と塩を形成した。白い結晶。融点：１７１〜１７３℃
元素分析（Ｃ２６Ｈ４３ＮＯ１０）：
計算値：Ｃ  ５８．９６  Ｈ  ８．１８  Ｎ  ２．６４
実測値：Ｃ  ５８．９２  Ｈ  ７．９１  Ｎ  ２．５９
ＳＭ９３３及びＳＭ７３５の具体的な製造方法は、本発明者らの先行特許（中国特許番号ＺＬ９４１１３９８２．４、ＺＬ０１１１３４７０．０）及び中国特許出願番号９９８０７４１６の内容を参照することができる。
ＳＭ７３５：
元素分析（Ｃ２５Ｈ３２Ｏ９・１／２Ｈ２Ｏ）：
計算値：Ｃ  ６１．８４   Ｈ  ６．８５
実測値：Ｃ  ６２．０９   Ｈ  ６．８６
ＳＭ９３３：
元素分析（Ｃ２６Ｈ３６Ｏ８）：
計算値：Ｃ  ６５．５３   Ｈ  ７．６１
実測値：Ｃ  ６５．４６   Ｈ  ７．６６
【００２６】
二、実験方法
［１］ＤＳＳ誘発性潰瘍性大腸炎のマウスモデルの作成と薬力学的評価
１．マウスを、各群あたり８匹で、ランダムに正常対照群、モデル群、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）（２０ｍｇ／ｋｇ）治療群、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）（５０ｍｇ／ｋｇ）治療群、及び抗炎症免疫抑制活性作用を有するアルテミシニン誘導体ＳＭ９３４、ＳＭ９０５、ＳＭ９３３及びＳＭ７３５（各１０ｍｇ／ｋｇ）治療群に分けた。正常対照群のマウスを除き、モデル群、シクロスポリンＡ治療群、５−アミノサリチル酸治療群、及び４つのアルテミシニン誘導体治療群を含む他の群の夫々は、腸炎症モデルの誘発のためにマウスの飲料水に７日間連続して５％ＤＳＳを加えた。
【００２７】
２．マウス誘導モデリング日から実験の終了まで、各治療群に、胃内投与により、シクロスポリンＡ、５−アミノサリチル酸５−ＡＳＡ、及び４つのアルテミシニン誘導体（１０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、治療的介入を実行した。
【００２８】
３．疾患活動性指標の評価
実験の期間中に、各群のマウスの体重を毎日測定し、糞便潜血重量を検出し、次の表に従って各マウスの疾患活動性を評点した。
【００２９】
【表１】
0006905140.tif 000005
【００３０】
［２］マウスの結腸組織の全体的及び顕微鏡的病理学的変化
実験終了の際に、マウスの結腸組織をとり、長さを測定した。遠位結腸をとり、ホルマリンにおいて固定し、パラフィン包埋切片し、Ｈ＆Ｅ染色により病理切片を作成した。
【００３１】
［３］炎症誘発性細胞の検出
１．実験終了の際に、マウスの脾臓とリンパ節をとり、単一細胞懸濁液を作製した。対応する蛍光抗体で細胞を標識し、フローサイトメトリー分析を行った。
２．結腸中央部を凍結切片した後、対応する蛍光抗体により染色し、共焦点蛍光顕微鏡により写真を撮影して分析した。
【００３２】
［４］結腸組織における炎症誘発性サイトカインのレベルの検出
１．マウスの各群から結腸組織の同じセグメントを取ってホモジナイゼーションし、遠心した後、ホモジネート上清をＢＣＡキットによりタンパク質定量化をした。
２．ＥＬＩＳＡ法により、上清中の炎症誘発性サイトカインの含有量を検出し、総タンパク質中のサイトカインの含有量として示した。
【００３３】
三、実験研究の発見と結果：
図１の実験結果から、本発明のアルテミシニン誘導体の胃内投与により、マウスのＤＳＳ誘発性炎症性腸疾患の症状が大幅に改善され、体重減少、下痢、便中の血液のような臨床的症状が改善されたことを示した。図２Ａ〜２Ｃの実験結果から、本発明のアルテミシニン誘導体の投与が、ＤＳＳ誘発性炎症に起因した結腸長さ短縮及び結腸病理学的損傷を有意に抑制できたことを示した。結腸病理切片のＨＥ染色により、腸炎群のマウスの結腸腺構造が乱れ、粘膜及び粘膜下への好中球及び単核細胞と多核細胞などの炎症細胞が浸潤し、粘膜が局部的に侵食され、陰窩のいくつかが破壊されたことが明らかになった。治療群のマウスにおいて、上記の変化は大幅に緩和された。図３Ａ及び図３Ｂから、ＳＭ９３４治療の投与により、腸間膜リンパ節及び脾臓におけるマクロファージ（抗Ｆ４／８０＋及びＣＤ１１ｂ＋二重陽性細胞）及び好中球（Ｇｒ−１＋及びＣＤ１１ｂ＋二重陽性細胞） の割合が減少したことを示した。図４の実験結果から、ＳＭ９３４の投与により、単核リンパ球（ＣＤ１１ｂ＋細胞）の結腸組織への浸潤が減少したことを示した。炎症誘発性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１７など）は、腸の炎症性免疫応答の調節に重要な役割を果たし、炎症性腸疾患の発症に関与した。図５の実験結果から、ＳＭ９３４の投与により、結腸組織の炎症誘発性サイトカインのレベルが低下したことを示した。
【００３４】
したがって、デキストラン硫酸（ＤＳＳ）誘発性炎症性腸疾患のマウス動物モデルにおいて、上記の代表的な化合物の実験研究結果として、胃内投与により、実験動物の体重減少、下痢、便中の血液のような潰瘍性大腸炎の臨床的症状を効果的に改善し、結腸組織の病理学的損傷を軽減し、結腸組織への炎症細胞の浸潤を抑制し、関連する炎症誘発性サイトカインのレベルをダウンレギュレートすることができることを実証した。薬効薬理学的研究は、このような化合物が良好な免疫抑制活性と高い安全性を有し、炎症性腸疾患の治療及び補助治療のための医薬及び医療用途として、優れた応用の見通しがある。
【図１】
0006905140.tif 000013
【図２Ａ】
0006905140.tif 000014
【図２Ｂ】
0006905140.tif 000015
【図２Ｃ】
0006905140.tif 000016
【図３】
0006905140.tif 000017
【図４】
0006905140.tif 000018
【図５】
0006905140.tif 000019