(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示される構造を有する、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤として使用される化合物、又は薬学的に許容可能な溶媒和物若しくは塩
0006884863.tif 000139
（式中、Ｙは、置換されている若しくは置換されていないアリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒは、置換されている若しくは置換されていないアルケニル又はアルキニルから選択され、
Ｍは、以下の群：
0006884863.tif 000140
（上式中、Ｐは、ＣＲ５Ｒ６、Ｎ−Ｒ７、又はＯから選択され、
Ｒ７は、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキル又は
0006884863.tif 000141
であり、
Ｒ５、Ｒ６、及びＲ８は、独立して、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択される）から選択される、化合物。
【請求項２】
Ｍが以下の群：
0006884863.tif 000142
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒが、置換されている若しくは置換されていないアルケニル又はアルキニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒが、以下の群：
0006884863.tif 000143
（上式中、Ｒ’は、Ｈ、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ”は、Ｈ、ニトロ、ハロゲン又はシアノである）
から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｙが、置換されている若しくは置換されていないＣ５−１０アリール又はヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｙが、置換されているフェニルであり、フェニルの置換基が、置換されている又は置換されていないアミド、置換されている又は置換されていないアルキル、置換されている又は置換されていないエーテル基から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙが、以下の群：
0006884863.tif 000144
（上式中、Ｒ９は、トリフルオロメチル又はメチルであり、
Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は、独立して、置換されている若しくは置換されていないアリール又はヘテロアリールから選択される）
から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２が、独立して、置換されている若しくは置換されていないフェニル、ピリジル、ピペリジニル、ピペラジニル又はピリミジニルから選択され、
上記の群の置換基が、ニトロ、ヒドロキシ、メルカプト、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、置換されている又は置換されていないＣ１−１０アルキル、置換されている又は置換されていないＣ１−１０ヘテロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−１０シクロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−１０ヘテロシクロアルキルから選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
以下の構造：
0006884863.tif 000145
0006884863.tif 000146
0006884863.tif 000147
0006884863.tif 000148
0006884863.tif 000149
0006884863.tif 000150
0006884863.tif 000151
0006884863.tif 000152
0006884863.tif 000153
の何れか、又はその立体異性体若しくはシス−トランス異性体を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
以下の工程：
１）  ２−クロロピラジンを原料として使用して、塩基性化合物の作用下で、（３−クロロピラジン−２−イル）メタノールを調製する工程、
２）  （３−クロロピラジン−２−イル）メタノールからガブリエル合成により（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミンを調製する工程、
３）  （３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミンを式（ＩＩＩ）で示されるスピロ環式カルボン酸又は架橋環式カルボン酸と反応させて、アミド化合物を調製する工程、
４）  アミド化合物をオキシ塩化リンの作用下で閉環反応に供し、次いで、ＮＢＳ臭素化により式（ＩＶ）で示される化合物を得る工程、
５）  上記の式（ＩＶ）で示される化合物をアルコール及びアンモニア水の作用下でアミノ化反応に供する工程、
６）  上記のアミノ化反応により得られた生成物、及び式（Ｖ−１）で示されるボロン酸又は式（Ｖ−２）で示されるボロン酸エステルを鈴木カップリング反応に供して、式（ＶＩ）で示される化合物を得る工程、
７）  上記の式（ＶＩ）で示される化合物、及び置換されている又は置換されていない２−ブチン酸を縮合剤の作用下で縮合反応に供して、式（Ｉ−１）の化合物を得る工程、
あるいは、上記の式（ＶＩ）で示される化合物を、塩基の作用下で、直接縮合により、又は直接縮合した後に塩化水素を除去してオレフィン化することにより、３−クロロプロピオニル塩化物又は塩化アクリロイルと反応させて、式（Ｉ−２）で示される化合物を得る工程、
あるいは、上記の式（ＶＩ）で示される化合物を、縮合剤の作用下で、式（ＶＩＩ）で示されるオレフィン酸誘導体と反応させて、式（Ｉ−３）又は式（Ｉ−４）の化合物を得る工程であって、Ｒ”がそれぞれＨ又はフッ素、塩素、臭素、ヨウ素である工程、
あるいは、上記の式（ＶＩ）で示される化合物を、縮合剤の作用下で、シアノ酢酸又ニトロ酢酸と反応させて、アミド化合物を得、次いで、式（ＶＩＩＩ）に示されるアルデヒド化合物とのＫｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反応に供して、式（Ｉ−４）で示される化合物を得る工程であって、Ｒ”がニトロ又はシアノである工程を含み、
0006884863.tif 000154
0006884863.tif 000155
(上式中、Ｙは、置換されている若しくは置換されていないアリール又はヘテロアリールであり、
Ｍは、以下の群：
0006884863.tif 000156
（上式中、Ｐは、ＣＲ５Ｒ６、Ｎ−Ｒ７、又はＯから選択され、
Ｒ７は、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキル又は
0006884863.tif 000157
であり、
Ｒ５、Ｒ６、及びＲ８は、独立して、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択される）から選択され、
Ｒ’は、Ｈ、置換されている又は置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている又は置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキルである）
を含む、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物を調製する方法。
【請求項１１】
請求項１から９の何れか一項に記載の化合物若しくはその塩、又は請求項１０に記載の調製方法により調製された化合物若しくはその塩、及び薬学的に許容可能な担体、添加剤、希釈剤、補助剤、ビヒクル、若しくはそれらの組み合わせを含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
ＢＴＫ媒介疾患を治療又は緩和するための医薬の調製における、請求項１から９の何れか一項に記載の上記の化合物、又は請求項１０に記載の調製方法により調製された化合物、又は請求項１１に記載の薬学的組成物の使用であって、ＢＴＫ媒介疾患が、免疫性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患、アレルギー、感染症、増殖性状態及びがん性疾患、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される、使用。
【請求項１３】
ＢＴＫ媒介疾患が、関節リウマチ、感染性関節炎、催奇形関節炎、痛風性関節炎、脊椎炎、膵炎、慢性気管支炎、急性気管支炎、アレルギー性気管支炎、中毒性気管支炎、小児喘息、アレルギー性肺炎、アレルギー性又は非アレルギー性鼻炎、慢性鼻副鼻腔炎、嚢胞性繊維症又は粘液の粘性疾患、咳、肺気腫、間質性肺疾患、肺胞炎、鼻ポリープ、肺水腫、様々な原因の肺炎、エリテマトーデス、全身性強皮症、サルコイドーシス、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫のサブタイプ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、成熟Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、１７ｐ欠失慢性リンパ性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節内辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び原発性滲出性リンパ腫、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１月２０日に出願された、「ＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＵＳＥＤ  ＡＳ  ＢＲＵＴＯＮ’Ｓ  ＴＹＲＯＳＩＮＥ  ＫＩＮＡＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ  ＡＮＤ  ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ  ＭＥＴＨＯＤ  ＡＮＤ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ  ＴＨＥＲＥＯＦ」と題された中国特許出願第２０１７１００４４７７１．４号に対する優先権を主張し、本開示は、その全体が出典明示により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、医薬品化学の技術分野に、特に、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤として使用される化合物、並びにその調製方法及び応用に関する。
【背景技術】
【０００３】
イブルチニブが、２０１２年米国血液学会の会議において様々なＢ細胞リンパ腫に対して良好な治療効果を有すると報告されて以来、非受容体型タンパク質チロシンキナーゼファミリーのメンバーであるＢＴＫが、Ｔリンパ球及びナチュラルキラー細胞を除いた全ての造血細胞タイプで発現される鍵となるシグナル酵素であり、Ｂ細胞シグナル伝達経路において重大な役割を果たし、Ｂリンパ球の発生、分化、シグナル伝達、及び生存に密接に関係することが理解されている。Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達経路におけるＢＴＫの重要な役割によって、ＢＴＫが、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための魅力的な標的となる。
【０００４】
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、及びワルデンストレームマクログロブリン血症の治療において、イブルチニブは、特定の悪性腫瘍の生存時間を改善しており、従来の化学療法により引き起こされた様々な副作用を回避するが、臨床投与時に、容易に代謝され、バイオアベイラビリティが低く（７％−２３％のみ）、臨床的投与量が多く（１日当たり５６０ｍｇで、１回当たり４剤）、治療過程が長く（１つの治療過程が２８日であり、時には複数の治療過程が要求される）、投与後の短時間内に非常に強い薬物耐性が発生するというような問題や他の問題が依然として存在する。
【０００５】
加えて、イブルチニブの最も一般的な副作用は、出血、感染、血球減少、心房細動、続発性原発性悪性腫瘍、腫瘍崩壊症候群、胎芽、又は胎児毒性等である。上記の出血事象（硬膜下血腫、消化管出血、血尿症、及びポストプログラム出血など）の発生率は６％であり、その出血メカニズムは依然として不明である。少なくともグレード３の感染の可能性は１４％−２６％である。好中球減少症を含むグレード３又は４の血球減少（１９％−２９％）、血小板減少症（５％−１７％）、及び貧血症（０％−９％）が起こることもある。心房細動及び心房粗動の発生率は、特に心疾患、急性感染症、又は心房細動の病歴を有する患者に関して、６％−９％である。非皮膚癌（１％−３％）などの他の悪性腫瘍の発生率は５％−１４％であり、最も一般的なものは非黒色腫皮膚癌（４％−１１％）である。イブルチニブで治療された患者は、腫瘍崩壊症候群を呈する。
【０００６】
したがって、高い効率性、高い安全性、及び有害反応の最小化を維持しながら、患者のコンプライアンスを高めることができる新規なＢＴＫ阻害剤をさらに開発することが必要である。
【発明の概要】
【０００７】
上記の点から、本発明が解決しようとする技術的課題は、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤として使用される化合物、並びに調製方法及びその応用を提供することである。調製した化合物を既に市場に出回っているイブルチニブと比較して、本発明において開示されるいくつかのブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤化合物は、より良い活性及びより高い心臓安全性を有し、特に薬物動態学の観点から、動物における経口投与後の、血中濃度、曝露、半減期、及び経口バイオアベイラビリティなどのパラメーターにおける明白な利点がある。本出願において開示されるブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤化合物は、広い臨床応用の見込みがある。
【０００８】
定義及び一般的用語
本発明における「置換」は、所与の構造中の一又は複数の水素原子が、置換基により置換されることを意味する。置換基により所与の構造式中の複数の位置を置換できる場合、置換基は同じであるか、又は異なることもある。上記の置換基は、同じ又は異なる第２の置換基のうちの一又は複数により置換されていてもよい。本明細書に記載された第２の置換基は、それに限定されるものではないが、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、アミド、アルキルアミノアシル、アリール、ヘテロアリール等であってもよい。ヘテロアルキルは、それに限定されるものではないが、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、アルキルチオ等であってもよい。
【０００９】
本発明における「Ｎ含有スピロ環基」は、２つの環が１つの炭素原子を共有し、ここで、２つの環は独立して、炭素環式か又は複素環式であり、それらのうちの少なくとも１つは、Ｎ含有複素環であるすることを意味する。炭素環及び複素環は、独立して置換されてもよく、ここで、置換基は、それに限定されるものではないが、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、アミド、アルキルアミノアシル、アリール、ヘテロアリール等であってもよい。ヘテロアルキルは、それに限定されるものではないが、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、アルキルチオ等であってもよい。
【００１０】
本発明における「Ｎ含有架橋環基」は、２つ以上の共有された炭素原子を有する二環式又は多環式の複素環式化合物を意味する。複素環式化合物は、置換されてもよく、ここで、置換基は、それに限定されるものではないが、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、アミド、アルキルアミノアシル、アリール、ヘテロアリール等であってもよい。ヘテロアルキルは、それに限定されるものではないが、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、アルキルチオ等であってもよい。
【００１１】
本発明において記載された場合、置換基は、化学結合を介して環に結合して、環系を形成し（以下の図で示されるように）、置換基がその環上の任意の置換可能な位置で置換できることを示す。例えば、式ａは、Ｒ１が、スピロ環基上の任意の置換可能な位置、すなわち式ｂ中に示されるような、１位から７位の何れかを置換できることを示す。
0006884863.tif 000002
【００１２】
架橋原子は、化学結合を介して環に結合して、環系を形成し（以下の図で示されるように）、架橋原子が、その環に対して結合することが可能な、任意のＣ原子又はヘテロ原子に結合することができることを示す。例えば、式ｃは、架橋原子Ｅが、６員環上の、架橋原子と結合することができる任意のＣ原子又はヘテロ原子、すなわち１位−３位の何れかに結合することができることを示す。Ｘ又はＱが、Ｎ又はＣである場合、架橋原子Ｅは、式ｄ中に示されるような、Ｘ又はＱに結合することができる。
0006884863.tif 000003
【００１３】
化学結合は、環に直接結合し、（式ｅ中に示されたように）曲線により中断されており、化学結合が置換基に結合しており、任意の置換可能な位置に位置付けられてもよいことを示す。例えば、式ｅは、置換基が１位−３位の何れにもあってもよいことを示し、Ｘ又はＱが、Ｎ又はＣである場合、置換基は、Ｘ又はＱに結合することができる。
0006884863.tif 000004
【００１４】
本発明における「異性体」は、本発明に記載された構造式が、その全ての異性型（エナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何異性体（又は配座異性体）など）、例えば、不斉中心を含むＲ又はＳ構造、二重結合の（Ｚ）又は（Ｅ）異性体、及び（Ｚ）又は（Ｅ）の配座異性体を含むことを意味する。したがって、本発明の化合物の個々の立体化学異性体、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは幾何異性体（若しくは配座異性体）の混合物は、全てが本発明の範囲内にある。
【００１５】
本発明における「薬学的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の、有機酸塩及び無機酸塩を意味する。その塩を形成可能な薬学的に許容可能な酸は、それに限定されるものではないが、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸、硝酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、Ｌ−プロリン、酪酸、グリコール酸、酢酸、ヘキサン酸、ノニル酸、プロピオン酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、マロン酸、コハク酸、酒石酸、エチオン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、安息香酸、乳酸、ブタンジスルホン酸、アジピン酸、α−ケトグルタル酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、サリチル酸、アセチルサリチル酸、２−ナフタリンスルホン酸、ベンゼン酢酸、ニコチン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、樟脳酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、マンデル酸、ピクリン酸、ケイ皮酸、又はシュウ酸等を含む。
【００１６】
本発明における「溶媒和物」は、本発明の化合物を含む、一又は複数の溶媒分子により形成された関連物質を指す。溶媒形成溶媒は、それに限定されるものではないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、イソプロピルエーテル、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、酢酸、アミノエタノールを含む。
【００１７】
化合物
本発明により提供される化合物及びその医薬製剤は、ブルトン型チロシンキナーゼ、特にＢＴＫ受容体により調節された疾患又は状態を治療するための潜在的用途を有する。化合物は、式（Ｉ）で示される構造、又はその異性体、薬学的に許容可能な溶媒和物、若しくは塩を有し、
0006884863.tif 000005
式中、Ｙは、置換されている若しくは置換されていないアリール又はヘテロアリールから選択され、
Ｒは、置換されている若しくは置換されていないアルケニル又はアルキニルから選択され、
Ｍは、置換されている若しくは置換されていないＮ含有スピロ環基又はＮ含有架橋環基から選択され、Ｎ原子はカルボニル基に結合しているか、
あるいはＭは、式（ＩＩ）に示される群から選択され、
0006884863.tif 000006
Ａは、置換されている若しくは置換されていないスピロ環基又は架橋環基であり、アミノ基はカルボニル基に結合している。
【００１８】
式中、Ｍは、置換されている又は置換されていないＣ５−１５のＮ含有スピロ環基又はＮ含有架橋環基であることが好ましく、置換されている又は置換されていないＣ５−１２のＮ含有スピロ環基又はＮ含有架橋環基がより好ましく、置換されている又は置換されていないＣ５−Ｃ８のＮ含有スピロ環基又はＮ含有架橋環基がさらに好ましい。
【００１９】
本発明の特定の詳細な実施態様では、Ｍは、以下の群の何れか１つから選択され、
0006884863.tif 000007
式中、ｎ１、ｎ２、ｍは、独立して、０、１、又は２であり、
ｎは、１、２、又は３であり、
Ｘ及びＱは、独立して、ＣＲ２Ｒ３、Ｎ−Ｒ４、Ｏ、Ｓ、又はＳ（Ｏ）２から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、独立して、Ｈ、置換されている又は置換されていないＣ１−１０アルキル、置換されている又は置換されていないＣ１−１０ヘテロアルキル、Ｃ１−１０カルボニル、置換されている又は置換されていないＣ３−１０シクロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−１０ヘテロシクロアルキルから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、独立して、Ｈ、置換されている又は置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている又は置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、Ｃ１−８カルボニル、置換されている又は置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択されることが好ましい。
【００２０】
さらに、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、独立して、Ｈ、置換されている又は置換されていないＣ１−３アルキル、置換されている又は置換されていないＣ１−３ヘテロアルキル、Ｃ１−３カルボニル、置換されている又は置換されていないＣ３−６シクロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−６ヘテロシクロアルキルから選択される。
【００２１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、独立して、Ｈ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、アミノ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、アセチル、イソプロピル、トリフルオロアセチル、イソブチル、シクロプロピル、エポキシブチルから選択されることがより好ましい。
【００２２】
上記のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、それに限定されるものではないが、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、アミド、アルキルアミノアシル、アリール、ヘテロアリール等であってもよい第２の置換基によっても置換できる。ヘテロアルキルは、それに限定されるものではないが、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシル、アルキルチオール等であってもよい。
【００２３】
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｍは、以下の群から選択され、
0006884863.tif 000008
式中、Ｐが、ＣＲ５Ｒ６、Ｎ−Ｒ７、又はＯから選択され、
Ｒ７が、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキル、又は
0006884863.tif 000009
である。
【００２４】
Ｒ７は、置換されている若しくは置換されていないＣ１−６アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−６ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−６シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−６ヘテロシクロアルキル、又は
0006884863.tif 000010
であることが好ましい。
【００２５】
Ｒ７が、Ｈ、シアノ、メチル、エチル、イソプロピル、アセチル、トリフルオロアセチル、シクロプロピル、又はエポキシブチルであることがより好ましい。
【００２６】
Ｒ５、Ｒ６、及びＲ８は、独立して、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択される。
【００２７】
Ｒ５、Ｒ６、及びＲ８は、独立して、置換されている若しくは置換されていないＣ１−６アルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ１−６ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−６シクロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ３−６ヘテロシクロアルキルから選択されることが好ましい。
【００２８】
Ｒ５、Ｒ６、及びＲ８は、独立して、Ｈ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、アセチル、イソプロピル、トリフルオロアセチル、イソブチル、シクロプロピル、又はエポキシブチルから選択されることがより好ましい。
【００２９】
上記のＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、それに限定されるものではないが、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、アミド、アルキルアミノアシル、アリール、ヘテロアリール等であってもよい第２の置換基によっても置換できる。ヘテロアルキルは、それに限定されるものではないが、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、アルキルチオール等であってもよい。
【００３０】
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｍは以下の具体的な群から選択される。
0006884863.tif 000011
【００３１】
Ｒは、置換されている若しくは置換されていないアルケニル又はアルキニルである。以下の群が好ましく、
0006884863.tif 000012
式中、Ｒ’は、Ｈ、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−８シクロアルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ１−８ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ’は、Ｈ、置換されている若しくは置換されていないＣ１−６アルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−６ヘテロアルキル、置換されている若しくは置換されていないＣ１−６シクロアルキル、又は置換されている若しくは置換されていないＣ１−６ヘテロシクロアルキルであることが好ましく、
Ｒ’は、Ｈ、メチル、エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロプロピルメチル、メトキシメチル、エトキシメチル、トリフルオロメトキシメチル、Ｎ，Ｎ−ジシクロプロピルメチル、又はＮ−メチル−Ｎ−エチルメチルであることがより好ましい。
【００３２】
Ｒ”は、Ｈ、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、又はシアノである。
【００３３】
Ｙは、置換されている若しくは置換されていないアリール又はヘテロアリールであり、置換されている若しくは置換されていないＣ５−１０アリール又はヘテロアリールが好ましく、置換されている若しくは置換されていないＣ６−８アリール又はヘテロアリール基がより好ましい。
【００３４】
Ｙが置換されているフェニルである場合、フェニルの置換基は、置換されている又は置換されていないアミド、置換されている又は置換されていないアルキル、置換されている又は置換されていないエーテル基から選択される。
【００３５】
本発明の特定の詳細な実施態様では、Ｙは、以下の群から選択される。
0006884863.tif 000013
【００３６】
置換基は、オルト、メタ又はパラ位にあってもよい。
【００３７】
式中、Ｒ９は、トリフルオロメチル又はメチルであり、
Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は、独立して、置換されている若しくは置換されていないアリール又はヘテロアリールから選択される。
【００３８】
Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は、独立して、置換されている若しくは置換されていないＣ５−１０アリール又はヘテロアリールから独立して選択されるが、Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は、置換されている若しくは置換されていないＣ５−８アリール又はヘテロアリールから選択されることがより好ましい。
【００３９】
本発明の特定の詳細な実施態様では、独立して、Ｒ１０、Ｒ１１、及びＲ１２は、置換されている若しくは置換されていないフェニル、ピリジル、ピペリジニル、ピペラジニル又はピリミジニルから選択される。
【００４０】
上記の群の置換基は、ニトロ、ヒドロキシ、メルカプト、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ、置換されている又は置換されていないＣ１−１０アルキル、置換されている又は置換されていないＣ１−１０ヘテロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−１０シクロアルキル、置換されている又は置換されていないＣ３−１０ヘテロシクロアルキルから選択される。
【００４１】
Ａは、置換されている若しくは置換されていないスピロ環基又は架橋環基であるが、置換されている若しくは置換されていないＣ６−１５スピロ環基又は架橋環基であることが好ましい。本発明の特定の詳細な実施態様では、Ａはアダマンチルである。
【００４２】
本発明の特定の詳細な実施態様では、Ｙは、置換されている又は置換されていない２−アミノピリジルベンズアミドであり、Ｍは、Ｃ５−１０スピロ環基又は架橋環基であり、Ｒは、ビニル又はプロピニルである。本発明の特定の詳細な実施態様では、Ｙのピリジル上のＨは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、メチル又はトリフルオロメチルで置換されていてもよく、その置換は、オルト置換、メタ置換又はパラ置換であってもよい。
【００４３】
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｙは、ジフェニルエタノールであり、Ｍは、Ｃ５−１０スピロ環基又は架橋環基であり、Ｒは、ビニル又はプロピニルであり、
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｙは、ジフェニルエーテル基であり、Ｍは、Ｃ５−１０スピロ環基又は架橋環基であり、Ｒは、ビニル又はプロピニルであり、
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｙは、２−アミノピリジルベンズアミドであり、Ｍは、Ｃ５−１０架橋環基であり、Ｒは、ビニルであり、
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｙは、ジフェニルエタノールであり、Ｍは、Ｃ５−１０架橋環基であり、Ｒは、ビニルであり、
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｙは、ジフェニルエーテル基であり、Ｍは、Ｃ５−１０架橋環基であり、Ｒは、ビニルであり、
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、Ｙは、トリフルオロメチル置換２−アミノピリジルベンズアミドであり、Ｍは、Ｃ５−１０架橋環基であり、Ｒは、ビニルである。
【００４４】
本発明の特定の詳細な実施態様では、化合物は、以下の構造の何れか、又はそれらの立体異性体若しくはシス−トランス異性体を有する。
0006884863.tif 000014
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【００４５】
本発明は、上記の化合物を調製する方法であって、以下の工程：
１）  ２−クロロピラジンを原料として使用して、塩基性化合物の作用下で、（３−クロロピラジン−２−イル）メタノールを調製する工程、
２）  （３−クロロピラジン−２−イル）メタノールからガブリエル合成により（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミンを調製する工程、
３）  （３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミンを式（ＩＩＩ）で示されるスピロ環カルボン酸又は架橋環カルボン酸と反応させて、アミド化合物を調製する工程、
４）  アミド化合物をオキシ塩化リンの作用下で閉環反応に供し、次いで、ＮＢＳ臭素化により式（ＩＶ）で示される化合物を得る工程、
５）  上記の式（ＩＶ）で示される化合物をアルコール及びアンモニア水の作用下でアミノ化反応に供する工程、
６）  上記のアミノ化反応により得られた生成物、及び式（Ｖ−１）で示されるボロン酸又は式（Ｖ−２）で示されるボロン酸エステルを鈴木カップリング反応に供して、式（ＶＩ）で示される化合物を得る工程、
７）  上記の式（ＶＩ）で示される化合物、及び置換されている又は置換されていない２−ブチン酸を縮合剤の作用下で縮合反応に供して、式（Ｉ−１）の化合物を得る工程、
あるいは、上記の式（ＶＩ）で示される化合物を、塩基の作用下で、直接縮合により、又は直接縮合した後に塩化水素を除去してオレフィン化することにより、３−クロロプロピオニル塩化物又は塩化アクリロイルと反応させて、式（Ｉ−２）で示される化合物を得る工程、
あるいは、上記の式（ＶＩ）で示される化合物を、縮合剤の作用下で、式（ＶＩＩ）で示されるオレフィン酸誘導体と反応させて、式（Ｉ−３）又は式（Ｉ−４）の化合物を得る工程であって、Ｒ”がそれぞれＨ、又はフッ素、塩素、臭素、ヨウ素である工程、
あるいは、上記の式（ＶＩ）で示される化合物を、縮合剤の作用下で、シアノ酢酸又ニトロ酢酸と反応させて、アミド化合物を得、次いで、式（ＶＩＩＩ）で示されるアルデヒド化合物とのＫｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ反応に供して、式（Ｉ−４）で示される化合物を得る工程であって、Ｒ”がニトロ又はシアノである工程を含む方法を提供する。
0006884863.tif 000023
0006884863.tif 000024
【００４６】
上記のＹ、Ｍ、及びＲ’の範囲は、上記されたものと同じであり、ここでは繰り返さない。
【００４７】
本発明は、上記の化合物若しくはその塩、又は上記の調製方法により調製された化合物若しくはその塩、及び薬学的に許容可能な担体、添加剤、希釈剤、補助剤、ビヒクル若しくはそれらの組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。
【００４８】
本発明は、ＢＴＫ媒介疾患を治療又は緩和するための医薬の調製における、上記の化合物、又は上記の調製方法若しくは上記の薬学的組成物により調製された化合物の使用も提供する。
【００４９】
本発明の特定の詳細な実施態様では、ＢＴＫ媒介疾患は、免疫性、自己免疫性、炎症性の疾患、アレルギー、感染症、増殖性状態、及び癌性疾患、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００５０】
本発明のさらに他の詳細な実施態様では、ＢＴＫ媒介疾患は、関節リウマチ、感染性関節炎、催奇形関節炎、痛風性関節炎、脊椎炎、膵炎、慢性気管支炎、急性気管支炎、アレルギー性気管支炎、中毒性気管支炎、小児喘息、アレルギー性肺炎、アレルギー性又は非アレルギー性鼻炎、慢性鼻副鼻腔炎、嚢胞性繊維症又は粘液の粘性疾患、咳、肺気腫、間質性肺疾患、肺胞炎、鼻ポリープ、肺水腫、様々な原因の肺炎、エリテマトーデス、全身性強皮症、サルコイドーシス、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫のサブタイプ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、成熟Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、１７ｐ欠失慢性リンパ性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節内辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、及び原発性滲出性リンパ腫、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００５１】
本発明の上記の化合物又は組成物は、ＢＴＫ媒介疾患を治療又は緩和するための医薬の調製に応用された場合、単独で又は他の薬物と組み合わせて使用できる。
【００５２】
先行技術と比較して、本発明は、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤として使用するための、式（Ｉ）の構造を有する化合物、又はその異性体、薬学的に許容可能な溶媒和物、若しくは塩を提供し、その化合物は、ＢＴＫに対する比較的高い阻害活性を有する一方で、悪影響が小さい。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本発明をさらに例示するために、本発明により提供されたブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤として使用される化合物、並びにその調製方法及び応用を、例に関して以下に詳細に記載する。
【００５４】
以下の略語は、以下の意味を有する。
ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを表し、
ＮＢＳは、Ｎ−ブロモスクシンイミドを表し、
ＤＣＭは、ジクロロメタンを表し、
ＴＥＡは、トリエチルアミンを表し、
ＴＨＦは、テトラヒドロフランを表し、
ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸を表し、
ＥＡは、酢酸エチルを表し、
ＰＥは、石油エーテルを表し、
ＭｅＯＨは、メタノールを表し、
ＥｔＯＨは、エタノールを表し、
Ｅｔ２Ｏは、ジエチルエーテルを表し、
ＤＩＥＡは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを表し、
ＨＢＴＵは、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル尿素ヘキサフルオロリン酸塩を表し、
ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィーを表し、
ＫＯＡｃは、酢酸カリウムを表し、
Ｘ−ｐｈｏｓは、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２，４，６−トリイソプロピルビフェニルを表し、
Ｐｄ２（ｄｂａ）３は、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムを表し、
Ｐｄ（ｐｐｈ３）４は、トリフェニルホスフィンパラジウムを表し、
ｎ−ＢｕＬｉは、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムを表し、
ＥＤＣＩは、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を表し、
ＤＩＰＥＡは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを表し、
２−ＢｕＯＨは、イソブタノールを表し、
ＳＴＡＢは、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを表し、
ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシドを表し、
ＦＡＭは、カルボキシフルオレスセインを表し、
ＡＴＰは、アデノシン三リン酸を表し、
ＭＥＭは、最少必須培地を表し、
ＦＢＳは、ウシ胎仔血清を表し、
ＩＭＤＭは、イスコフ改変ダルベッコ培地を表し、
ＰＳは、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液を表し、
ＲＰＭＩ１６４０培地は、ロズウェルパーク記念研究所１６４０培養培地を表し、
ＨＥＰＥＳは、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を表し、
ＥＧＴＡは、エチレングリコールジエチルエーテルジアミン四酢酸を表す。
Ｎａ−ＡＴＰは、アデノシン三リン酸ナトリウムを表す。
【実施例】
【００５５】
実施例１：  （Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−（ブタ−２−イノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
合成工程は以下の通りである。
0006884863.tif 000025
【００５６】
工程１：  （３−クロロピラジン−２−イル）メタノールの調製
0006884863.tif 000026
窒素の保護下で、無水ＴＨＦ５００ｍＬ中の２，２，６，６−テトラメチルピペリジン（７２．８ｇ、５１６．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（３４６ｍＬ、５５３．７ｍｍｏｌ、ＴＨＦ１．６ｍｏｌ／Ｌ）を、−７８℃でゆっくり滴下添加し、添加後に、反応混合物を０℃まで自然に温め、反応物を２０分間撹拌し、その後、反応混合物を−７８℃まで冷却させ、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の２−クロロピラジン（５０ｇ、４３６．３ｍｍｏｌ）の溶液を、３０分内に、反応混合物に滴下添加した。反応混合物の色を、淡黄色から暗褐色まで変化させ、反応物を、−７８℃で１０分間撹拌した。ＤＭＦ（８４ｍＬ、１０９２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、生じた溶液を、１０分以内に、反応混合物に滴下添加し、反応系の温度を、−７０℃から−７８℃までの範囲内に制御した。−７８℃で２時間撹拌しながら反応を行った。その後、ＭｅＯＨ（８００ｍＬ）を反応混合物に添加し、添加後、ＮａＢＨ４（３３ｇ、８６８ｍｍｏｌ）を、反応混合物に、少しずつ添加した。添加後、反応混合物を室温まで自然に温めて、２時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を、飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチし、ＤＣＭ（１Ｌ×３）を用いて３回抽出した。有機相を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、シリカゲルカラム（ＰＥ／ＥＡ＝１００／１〜５／１）により精製して、黄色の油性物質であった目標化合物６０ｇを得た。
【００５７】
工程２：  ２−（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）イソインドリン−１，３−ジオンの調製
0006884863.tif 000027
窒素の保護下で、ＴＨＦ５００ｍＬ中の、（３−クロロピラジン−２−イル）メタノール（６０ｇ、４１４．９ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１３０．４ｇ、４９７．９ｍｍｏｌ）、及びフタルイミド（７３．２ｇ、４９７．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＡＤ（１００．６ｇ、４９７．９ｍｍｏｌ）を、−５℃でゆっくり滴下添加した。添加後、反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。反応が完了したことをＴＬＣが示した後、水を反応混合物に添加した。その後、生じた混合物をＥＡ（１Ｌ×３）で抽出し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、高速クロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝３０／ｌ）により精製して、白色の固体であった目標化合物９０．８ｇを得た。
【００５８】
工程３：  （３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミンの調製
0006884863.tif 000028
窒素の保護下で、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８００ｍＬ／４００ｍＬ）中の２−（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）イソインドリン−１，３−ジオン（９０ｇ、３２８．５ｍｍｏｌ）の混合溶液に、ヒドラジン水和物（４１．１ｇ、８２１．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌し、大量の白色の固体を反応系において形成させ、その反応系を吸引濾過にかけた。濾過ケーキを酢酸エチルで洗浄し、ろ液を濃縮し、その後、生じた混合物を吸引濾過に再びかけた。濾過ケーキを酢酸エチルで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４でろ液を十分に乾燥させ、生じた混合物を真空下で蒸発させて、黄色の油性物質であった目標化合物３８．２ｇを得た。
【００５９】
工程４：  ６−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000029
窒素の保護下で、ＤＭＦ３０ｍＬ（０℃）中の、（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミン（２．８６ｇ、２０ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−６−カルボン酸（４．８２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．５１ｇ、２６ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（３．６４ｇ、３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（４．９７ｇ、２６ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を終夜、室温で撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応物を水でクエンチし、ＥＡ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５／１−３／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物６．４ｇを得た。
【００６０】
工程５：  ６−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
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氷塩浴中で、ＤＭＦ／ＥＡ（７．５ｍＬ／５０ｍＬ）中の（Ｓ）−６−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６．３ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）の混合溶液に、ＰＯＣｌ３（１２．６ｍＬ、１０３．０８ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下添加した。添加後、反応混合物を室温で２時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応溶液を、Ｎａ２ＣＯ３（６ｍｏｌ／Ｌ）の溶液にゆっくり添加し、ｐＨを８よりも高く維持し、有機相を分離させた。水性相をＥＡ（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相をプールし、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝３／１）により精製して、白色の固体であった目標化合物５．５２ｇを得た。
【００６１】
工程６：  ６−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000031
氷塩浴中で、ＤＭＦ５０ｍＬ中の６−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（５．５ｇ、１５．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（２．９５ｇ、１６．５６ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を、氷塩浴中で１時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応溶液を、ＮａＨＣＯ３（１ｍｏｌ／Ｌ）溶液にゆっくり添加して、クエンチし、ＥＡ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５／１）により精製して、赤褐色の固体であった目標化合物６．０７ｇを得た。
【００６２】
工程７：  ６−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
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室温で、６−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（５．５ｇ、１２．８６ｍｍｏｌ）を含む高圧反応装置に、２−ＢｕＯＨ１５ｍＬ及びアンモニア水３０ｍＬを添加し、反応混合物を９０℃で１５時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を真空下で濃縮して、固体の粗生成物を生じた。ＥＡ／ＰＥ（５／１）で粗生成物をパルプ状にして、淡黄色の固体であった純粋な目標化合物３．９４ｇを得た。
【００６３】
工程８：  ６−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルカルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000033
窒素の保護下で、ＤＭＦ５０ｍＬ（０℃）中の、２−アミノピリジン（５ｇ、５３．１９ｍｍｏｌ）及び４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）安息香酸（１３．２０ｇ、５３．１９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１３．７２ｇ、１０６．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（２６．２１ｇ、６９．１５ｍｍｏｌ）を、少しずつ添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２０／１）により精製して、灰白色の固体であった目標化合物１３．１ｇを得た。
0006884863.tif 000034
【００６４】
窒素の保護下で、ジオキサン／ＥｔＯＨ／水（３６ｍＬ／１２ｍＬ／１２ｍＬ）中の、６−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（３．５ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）、Ｎ−（ピリジン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（３．３３ｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３、（１．８２ｇ、１７．１４ｍｍｏｌ）の混合溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４９６．８９ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、９０℃で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（４０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物２．７１ｇを得た。
【００６５】
工程９：  （Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000035
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の６−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルカルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２．７１ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（３ｍＬ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を濃縮し、ｐＨをＮａ２ＣＯ３（３ｍｏｌ／Ｌ）で８に調整した。反応混合物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１−１０／１）により精製して、白色の固体であった目標化合物１．９８ｇを得た。
【００６６】
工程１０：  （Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−（ブタ−２−イノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000036
窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（９０ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）、２−ブチン酸（１９．６ｍｇ、０．２３３ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（８２ｍｇ、０．６３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（９６．４ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で１時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物５５ｍｇを得た。
【００６７】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.58-0.77 (4H, m), 1.58 (1H, s), 1.99 (2H, s), 2.24-2.33 (2H, m), 3.51 (0.4H, d, J = 16.4 Hz), 3.61 (0.4H, d, J = 11.6 Hz), 3.61 (0.6H, d, J = 10.8 Hz), 3.84 (0.6H, d, J = 10.8 Hz), 5.56-5.59 (0.6H, m), 5.79-5.82 (0.4H, m), 6.14-6.20 (2H, m), 7.11-7.20 (2H, m), 7.73-7.79 (2.6H, m), 7.84-7.89 (1.4H, m), 8.16 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 2.8 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.2 Hz), 10.85 (1H, s).
EM (計算値): 491.2；MS(ESI) m/e (M+1H)+: 492.2.
【００６８】
本出願により調製された化合物は、上記の反応スキーム中の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【００６９】
実施例２：  （Ｓ）−４−（３−（５−アクリロイル−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000037
窒素の保護下で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１２０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１１３．１２ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、３−クロロプロピオニル塩化物（３５．６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物４０ｍｇを得た。
【００７０】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.56-0.76 (4H, m), 2.24-2.26 (1.5H, m), 3.61-3.66 (1.5H, m), 3.87 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.60-5.68 (2H, m), 6.05-6.20 (3H, m), 6.55 (1H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.11-7.20 (2H, m), 7.66-7.74 (2H, m), 7.83-7.88 (2H, m), 8.15 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.22 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, d, J = 3.6 Hz), 10.84 (1H, s).
EM (計算値): 479.2；MS(ESI) m/e (M+1H)+: 480.2.
【００７１】
本出願により調製された化合物は、上記の反応スキームの化合物と同じ構造を有することがわかる。
【００７２】
実施例３−２１
原料として以下の化合物を使用し、以下の化合物を、実施例１又は実施例２の調製方法により調製した。化合物の構造及び核磁気特性分析データを表１に示す。表１は、本出願の実施例３から２１において調製された化合物の、構造及び構造分析データの概要を示す。
【００７３】
0006884863.tif 000038
を、文献Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５７（２０１６）５９９−６０２に従って調製し、
0006884863.tif 000039
を、文献Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５７（２０１６）５９９−６０２に従って調製し、
0006884863.tif 000040
を、文献Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １４（２００４）６１０７−６１１１に従って調製し、
0006884863.tif 000041
を、特許国際公開第２０１４／１４００８１号Ａ１に従って調製し、
0006884863.tif 000042
を、特許国際公開第２０１１／３５３３２号に従って調製し、
0006884863.tif 000043
を、文献Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｖｏｌ．５９；ｎｂ．２；（１９９４）；ｐ．２７６−２７７に従って調製し、
他の鍵となる中間体フラグメントは、直接購入するか、又は特注合成する。
0006884863.tif 000044
0006884863.tif 000045
0006884863.tif 000046
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0006884863.tif 000048
0006884863.tif 000049
0006884863.tif 000050
【００７４】
実施例２２：  ４−（３−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アクリロイル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-３−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
合成工程は以下の通りである。
0006884863.tif 000051
【００７５】
工程１：  ３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000052
窒素の保護下で、ＤＭＦ３０ｍＬ（０℃）中の、（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミン（３．４３ｇ、２４ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（５．８０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４．２１ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（４．３７ｇ、４３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（５．９７ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５／１−３／１）により精製して、褐色の固体であった目標化合物８．０ｇを得た。
【００７６】
工程２：  ３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000053
氷塩浴中で、ＤＭＦ／ＥＡ（７．５ｍＬ／５０ｍＬ）中の３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（６．３ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）の混合溶液に、ＰＯＣｌ３（１２．６ｍＬ、１０３．０８ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下添加した。添加後、反応混合物を、２時間室温で撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を、Ｎａ２ＣＯ３（６ｍｏｌ／Ｌ）の溶液にゆっくり添加し、ｐＨを８よりも大きく維持した。有機相を分離し、水性相をＥＡ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相をプールし、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝３／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物５．６ｇを得た。
【００７７】
工程３：  ３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000054
氷塩浴中で、ＤＭＦ５０ｍＬ中の３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４．９５ｇ、１４．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（２．６６ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を、氷塩浴中で１時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を、Ｎａ２ＨＣＯ３（１ｍｏｌ／Ｌ）の溶液にゆっくり添加して、反応物をクエンチし、反応混合物を、ＥＡ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物５．２ｇを得た。
【００７８】
工程４：  ３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000055
室温で、３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４．４ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）の高圧反応装置に、２−ＢｕＯＨ１５ｍＬ及びアンモニア水３０ｍＬを添加した。反応混合物を９０℃で１５時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を真空下で濃縮して、固体の粗生成物を得た。ＥＡ／ＰＥ（５／１）で粗生成物をパルプ状にして、淡黄色の固体であった純粋な目標化合物３．２ｇを得た。
【００７９】
工程５：  ３−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルカルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000056
窒素の保護下で、ジオキサン／ＥｔＯＨ／水（３６ｍＬ／１２ｍＬ／１２ｍＬ）中の、３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（３．５ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）、Ｎ−（ピリジン−２−イル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（３．３３ｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．８２ｇ、１７．１４ｍｍｏｌ）の混合溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４９６．８９ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、９０℃で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（４０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物２．８ｇを得た。
【００８０】
工程６：  ４−（８−アミノ−３−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000057
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の３−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−イルカルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２．９８ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（３．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を濃縮し、ｐＨをＮａ２ＣＯ３（３ｍｏｌ／Ｌ）で８に調整した。反応混合物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１−１０／１）により精製して、白色の固体であった目標化合物２．０ｇを得た。
【００８１】
工程７：  ４−（３−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アクリロイル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-３−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000058
窒素の保護下で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の、４−（８−アミノ−３−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１８０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１７０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、３−クロロプロピオニル塩化物（５３．４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物４８ｍｇを得た。
【００８２】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.49-1.55 (2H, m), 1.74-1.80 (3H, m), 2.57-2.58 (1H, m), 2.67-2.73 (1H, m), 4.66 (0.2H, s), 4.74 (0.8H, s), 5.04 (0.2H, s), 5.25 (0.8H, s), 5.44-5.47 (0.2H, m), 5.65-5.68 (0.8H, m), 5.85 (0.2H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 6.06-6.13 (3H, m), 6.76 (0.8H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.13 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.16-7.20 (1H, m), 7.71 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 4.0 Hz), 7.82-7.88 (1H, m), 7.92 (1H, d, J = 5.2 Hz), 8.15 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.22 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40-8.41 (1H, m), 10.84-10.85 (1H, m).
EM (計算値): 479.2；MS (ESI) m/e (M+1H)+: 480.2
【００８３】
本出願により調製された化合物は、上記の反応スキーム中の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【００８４】
実施例２３：  ４−（８−アミノ−３−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ブタ−２−イノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000059
窒素の保護下で、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の、４−（８−アミノ−３−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１８０ｍｇ、０．４２４ｍｍｏｌ）、２−ブチン酸（３９．２ｍｇ、０．４６６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１６４ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（１９２．８ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で１時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物９５ｍｇを得た。
【００８５】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.46-1.50 (2H, m), 1.67-1.86 (4H, m), 2.03 (2H, s), 2.60-2.63 (2H, m), 4.56-4.63 (1H, m), 5.01-5.21 (1H, m), 6.15-6.20 (2H, m), 7.12-7.20 (2H, m), 7.71-7.76 (2H, m), 7.84-7.88 (2H, m), 8.15-8.18 (2H, m), 8.22 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40-8.42 (1H, m), 10.85-10.86 (1H, m).
EM (計算値): 491.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 492.2.
【００８６】
本出願により調製された化合物は、上記の反応スキーム中の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【００８７】
実施例２４−３９
以下の化合物を、実施例２２又は実施例２３の調製方法により調製した。化合物の構造及び核磁気特性分析データを表２に示す。表２は、本出願の実施例２４−３９において調製された化合物の、構造及び構造分析データを概説する。
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0006884863.tif 000065
【００８８】
実施例４０
（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−（ブタ−２−イノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル１）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
合成の工程は以下の通りである。
0006884863.tif 000066
0006884863.tif 000067
【００８９】
工程１：  ４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000068
窒素の保護下で、ＤＭＦ３０ｍＬ（０℃）中の、４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミン（４ｇ、２４．６９ｍｍｏｌ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）安息香酸（６．１３ｇ、２４．６９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（６．３７ｇ、４９．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（１１．２３ｇ、２９．６３ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２０／１）により精製して、灰白色の固体であった目標化合物７．７５ｇを得た。
【００９０】
工程２：  ６−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）カルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
0006884863.tif 000069
窒素の保護下で、ジオキサン／ＥｔＯＨ／水（３６ｍＬ／１２ｍＬ／１２ｍＬ）中の、６−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（３．５ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミド（４．０３ｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．８２ｇ、１７．１４ｍｍｏｌ）の混合溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４９６．８９ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、９０℃で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（４０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物３．２ｇを得た。
【００９１】
工程３：  （Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
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ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の６−（８−アミノ−１−（４−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）カルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（３．２ｇ、５．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（３ｍＬ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を濃縮し、ｐＨをＮａ２ＣＯ３（３ｍｏｌ／Ｌ）で８に調整した。反応混合物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１−１０／１）により精製して、白色の固体であった目標化合物２．５３ｇを得た。
【００９２】
工程４：  （Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−（ブタ−２−イノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル１）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000071
窒素の保護下で、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）、２−ブチン酸（２０．５ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（７８．５６ｍｇ、０．６０９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（９２．５ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で１時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物６０ｍｇを得た。
【００９３】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.58-0.79 (4H, m), 1.58 (1H, s), 1.97 (2H, s), 2.24-2.33 (2H, m), 3.50-3.85 (2H, m), 5.57-5.59 (0.65H, m), 5.80-5.82 (0.35H, m), 6.14-6.22 (2H, m), 7.14 (0.65H, d, J = 4.8 Hz), 7.18 (0.35H, d, J = 4.8 Hz), 7.58 (1H, d, J = 4.8 Hz), 7.74-7.79 (2H, m), 7.89-8.04 (1H, m), 8.17-8.20 (2H, m), 8.62 (1H, s), 8.70 (1H, d, J = 5.2 Hz), 10.82 (1H, s).
EM (計算値): 559.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 560.2
【００９４】
本出願により調製された化合物は、上記の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【００９５】
実施例４１
（Ｓ）−４−（３−（５−アクリロイル−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000072
窒素の保護下で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ、ＴＥＡ（１０３．１ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ））の溶液に、３−クロロプロピオニル塩化物（２５．８ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物３２ｍｇを得た。
【００９６】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.56-0.76 (4H, m), 2.24-2.28 (1.5H, m), 3.61-3.66 (1.5H, m), 3.87 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.60-5.66 (2H, m), 6.05-6.19 (3H, m), 6.57 (1H, dd, J = 16.4 Hz, 10.4 Hz), 7.15 (0.7H, d, J = 5.2 Hz), 7.19 (0.3H, d, J = 5.2 Hz), 7.52-7.56 (1H, m), 7.76 (2H, dd, J = 8.0 Hz, 4.0 Hz), 7.83 (0.7H, d, J = 5.2 Hz), 7.97 (0.3H, d, J = 5.2 Hz), 8.17 (2H, d, J = 8.0 Hz), 8.57 (1H, s), 8.71 (1H, d, J = 5.2 Hz), 11.12 (1H, s).
EM (計算値): 547.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 548.2
【００９７】
本出願により調製された化合物は、上記の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【００９８】
実施例４２−７２
以下の化合物を、類似の構造を有する化合物を出発材料として使用し、実施例４０又は実施例４１の調製方法により調製した。化合物の構造及び核磁気特性分析データを表３に示す。表３は、本出願の実施例４２から７２において調製された化合物の、構造及び構造分析データを概説する。
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【００９９】
実施例７３
１−（（６Ｓ）−６−（８−アミノ−１−（４−（１−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-５−イル）ブタ−２−イン−１−オンの調製
合成工程は以下の通りである。
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【０１００】
工程１：  １−（４−ブロモフェニル）−１−フェニルエタノールの調製
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窒素の保護下、−４５℃で、ＴＨＦ３０ｍＬ中の１−（４−ブロモフェニル）エタン−１−オン（５ｇ、２５．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化フェニルマグネシウム（１０．０５ｍＬ、３０．１５ｍｍｏｌ、Ｅｔ２Ｏ中３Ｍ）を滴下添加した。反応混合物を、撹拌の下、−４５℃で１時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応物を、飽和ＮＨ４Ｃｌをゆっくり添加することによりクエンチし、撹拌して、０．５時間反応させた。水性相をＥＡ（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を飽和ブラインでプールし、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝６０／１−１０／１）により精製して、目標化合物５．８ｇを得た。
【０１０１】
工程２：  １−フェニル−１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）エタノールの調製
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窒素の保護下で、ジオキサン溶液３０ｍＬ中の、１−（４−ブロモフェニル）−１−フェニルエタノール（５．２ｇ、１８．７６ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６．１９ｇ、２４．３９ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（３．６８ｇ、３７．５２ｍｍｏｌ）、及びＸ−Ｐｈｏｓ（８９４．２ｍｇ、１．８７６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８５８．９ｍｇ、０．９３８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、９０℃で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝６０／１−１０／１）により精製して、灰白色の固体であった目標化合物４．８ｇを得た。
【０１０２】
工程３：  （６Ｓ）−６−（８−アミノ−１−（４−（１−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸塩の調製
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窒素の保護下で、ジオキサン／ＥｔＯＨ／水（１２ｍＬ／４ｍＬ／４ｍＬ）中の、６−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）、１−フェニル−１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）エタノール（８７２．２ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（５１９．４ｍｇ、４．９ｍｍｏｌ）の混合溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１４１．５６ｍｇ、０．１２２５）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、９０℃で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応溶液を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１−３０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物８３７．１ｍｇを得た。
【０１０３】
工程４：  １−（４−（８−アミノ−３−（（Ｓ）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）フェニル）−１−フェニルエタノールの調製
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室温で、ＤＣＭ１５ｍＬ中の（６Ｓ）−６−（８−アミノ−１−（４−（１−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸塩（８３７ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）をゆっくり滴下添加した。反応混合物を、室温で３時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を濃縮し、濃縮した系のｐＨをＮａ２ＣＯ３（３ｍｏｌ／Ｌ）で８に調整し、得られた系をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、白色の固体であった目標化合物６４２．８ｍｇを得た。
【０１０４】
工程５：  １−（（６Ｓ）−６−（８−アミノ−１−（４−（１−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-５−イル）ブタ−２−イン−１−オンの調製
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窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、１−（４−（８−アミノ−３−（（Ｓ）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）フェニル）−１−フェニルエタノール（８０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）、２−ブチン酸（１９ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（７２．８ｍｇ、０．５６４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（８５．７ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で２時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物２０ｍｇを得た。
【０１０５】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.55-0.73 (4H, m), 1.58 (1H, s), 1.90 (3H, s), 2.01 (2H, s), 2.25-2.32 (2H, m), 3.52 (0.3H, d, J = 16.4 Hz), 3.62-3.65 (0.3H, m), 3.73 (0.7H, d, J = 10.8 Hz), 3.82 (0.7H, d, J = 10.8 Hz), 5.57-5.59 (1H, m), 5.71 (1H, s), 6.10-6.20 (2H, m), 7.08 (1H, d, J = 4.8 Hz), 7.12-7.18 (1H, m), 7.27-7.33 (2H, m), 7.44-7.55 (6H, m), 7.78 (0.3H, d, J = 4.8 Hz), 7.86 (0.7H, d, J = 4.8 Hz).
EM (計算値): 491.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 492.2
【０１０６】
本出願により調製された化合物は、上記の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【０１０７】
実施例７４
１−（（６Ｓ）−６−（８−アミノ−１−（４−（１−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-５−イル）プロパ−２−エン−１−オンの調製
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窒素の保護下で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の、１−（４−（８−アミノ−３−（（Ｓ）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）フェニル）−１−フェニルエタノール（８０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（９４．９ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、３−クロロプロピオニル塩化物（２３．９ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物１５ｍｇを得た。
【０１０８】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.58-0.73 (4H, m), 1.91 (3H, s), 2.22-2.32 (2H, m), 3.50-3.67 (0.6H, m), 3.75-3.80 (1.4H, d, J = 10.8 Hz), 5.57-5.60 (1H, m), 5.65-5.67 (1H, m), 5.71 (1H, s), 6.08-6.20 (3H, m), 6.76 (1H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.06 (1H, d, J = 4.8 Hz), 7.10-7.18 (1H, m), 7.28-7.33 (2H, m), 7.46-7.55 (6H, m), 7.77 (0.4H, d, J = 4.8 Hz), 7.86 (0.6H, d, J = 4.8 Hz).
EM (計算値): 479.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 480.2
【０１０９】
本出願により調製された化合物は、上記の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【０１１０】
実施例７５−９１
以下の化合物を、類似の構造を有する化合物を出発材料として使用し、実施例７３又は実施例７４の調製方法により調製した。化合物の構造及び核磁気特性分析データを表４に示す。表４は、本出願の実施例７５から９１において調製された化合物の、構造及び構造分析データを概説する。
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【０１１１】
実施例９２
（Ｓ）−１−（６−（８−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-５−イル）ブタ−２−イン−１−オンの調製
合成工程は以下の通りである。
0006884863.tif 000099
【０１１２】
工程１：  ６−（８−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルの調製
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窒素の保護下で、ジオキサン／ＥｔＯＨ／水（１２ｍＬ／４ｍＬ／４ｍＬ）中の、６−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４−フェノキシフェニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（７９６．７ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（５１９．４ｍｇ、４．９ｍｍｏｌ）の混合溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１４１．５６ｍｇ、０．１２２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、９０℃で３時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応溶液を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１−３０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物８６５．６ｍｇを得た。
【０１１３】
工程２：  （Ｓ）−１−（４−フェノキシフェニル）−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミンの調製
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室温で、ＤＣＭ１５ｍＬ中の６−（８−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン−５−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（８６５ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）をゆっくり添加した。反応混合物を、室温で３時間撹拌した。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を濃縮し、濃縮した系のｐＨをＮａ２ＣＯ３（３ｍｏｌ／Ｌ）で８に調整し、得られた系をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、白色の固体であった目標化合物６９０ｍｇを得た。
【０１１４】
工程３：  （Ｓ）−１−（６−（８−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-５−イル）ブタ−２−イン−１−オンの調製
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窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−１−（４−フェノキシフェニル）−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、２−ブチン酸（２０．２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（７７．４ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（９１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で２時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２５／１）により精製して、白色の固体であった目標化合物３０ｍｇを得た。
【０１１５】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.55-0.76 (4H, m), 1.58 (1H, s), 2.00 (2H, s), 2.26-2.33 (2H, m), 3.51 (0.4H, d, J = 16.4 Hz), 3.63 (0.4H, d, J = 11.6 Hz), 3.70 (0.6H, d, J = 10.8 Hz), 3.84 (0.6H, d, J = 10.8 Hz), 5.57-5.59 (0.6H, m), 5.77-5.82 (0.4H, m), 6.14-6.21 (2H, m), 7.03-7.19 (6H, m), 7.41-7.44 (2H, m), 7.57-7.61 (2H, m), 7.82 (0.6H, d, J = 5.2 Hz), 7.97 (0.4H, d, J = 5.2 Hz).
EM (計算値): 463.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 464.2
【０１１６】
本出願により調製された化合物は、上記の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【０１１７】
実施例９３
（Ｓ）−１−（６−（８−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-５−イル）プロパ−２−エン−１−オンの調製
0006884863.tif 000103
窒素の保護下で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の、（Ｓ）−１−（４−フェノキシフェニル）−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン（８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１０１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、３−クロロプロピオニル塩化物（２５．４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で終夜反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２５／１）により精製して、白色の固体であった目標化合物２０ｍｇを得た。
【０１１８】
生成物の構造を、核磁気共鳴分析法及び質量分析法により特性決定し、その結果は以下の通りであった。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.25-1.54 (5H, m), 2.47-2.55 (1H, m), 2.68-2.70 (1H, m), 4.61 (0.25H, s), 4.73 (0.75H, s), 5.01 (0.75H, s), 5.19 (0.25H, s), 5.44 (0.25H, d, J = 10.4 Hz), 5.65 (0.75H, dd, J = 10.4 Hz, 2.4 Hz), 5.70 (0.25H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 6.04-6.15 (3H, m), 6.74 (0.75H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.03-7.19 (6H, m), 7.42-7.44 (2H, m), 7.55-7.61 (2H, m), 7.81 (0.75H, d, J = 5.2 Hz), 7.97 (0.25H, d, J = 5.2 Hz).
EM (計算値): 451.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 452.2
【０１１９】
本出願により調製された化合物は、上記の化合物と同じ構造を有することがわかる。
【０１２０】
実施例９４−１１１
以下の化合物を、類似の構造を有する化合物を出発材料として使用し、実施例９２又は実施例９３の調製方法により調製した。化合物の構造及び核磁気特性分析データを表５に示す。表５は、本出願の実施例９４から１１１において調製された化合物の、構造及び構造分析データを概説する。
0006884863.tif 000104
0006884863.tif 000105
0006884863.tif 000106
0006884863.tif 000107
0006884863.tif 000108
0006884863.tif 000109
【０１２１】
実施例１１２
（Ｓ，Ｅ）−４−（８−アミノ−３−（５−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000110
窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）、（Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテン酸塩酸塩（４６．７ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１２１．２６ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（１０６．９ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で３時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物２０ｍｇを得た。
【０１２２】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.56-0.73 (4H, m), 1.82 (2H, s), 2.13 (4H, s), 2.22-2.26 (1.5H, m), 3.05 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.62-3.66 (1.5H, m), 3.87 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.59-5.66 (1H, m), 6.03-6.15 (2H, m), 6.37-6.54 (2H, m), 7.14-7.21 (2H, m), 7.71 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.86-7.92 (2H, m), 8.15 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.24 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.8 Hz), 10.85 (1H, s).
EM (計算値): 536.3; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 537.3.
【０１２３】
実施例１１３
４−（８−アミノ−３−（（１Ｓ）−２−（（Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテノイル）オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000111
窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、４−（８−アミノ−３−（（１Ｓ）−オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）、（Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテン酸塩酸塩（４５．４ｍｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１１７．６ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（８６．４ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で３時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物２８ｍｇを得た。
【０１２４】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.45-1.60 (3H, m), 1.77-1.84 (3H, m), 1.85-2.03 (2H, m), 2.13 (4H, s), 2.68-2.71 (1H, m), 2.89-2.92 (1H, m), 3.05 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.63-3.67 (1H, m), 3.88-3.94 (1H, m), 5.43 (1H, d, J = 2.0 Hz), 6.03-6.18 (2H, m), 6.41-6.54 (2H, m), 7.15 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.18-7.20 (1H, m), 7.71 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.86-7.92 (2H, m), 8.13 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.42 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.8 Hz), 10.84 (1H, s).
EM (計算値):550.3; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 551.3
【０１２５】
実施例１１４
（Ｓ，Ｅ）−４−（８−アミノ−３−（５−（４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）−２−ブテノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの合成工程は、以下の通りである。
0006884863.tif 000112
0006884863.tif 000113
【０１２６】
工程１：  （Ｅ）−エチル−４−（シクロプロピルアミノ）ブタ−２−エン酸塩の調製
0006884863.tif 000114
室温で、ＴＨＦ２０ｍＬ中の、シクロプロピルアミン（２．２ｇ、３８．８５ｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３．６ｇ、２５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ブロモクロトン酸エチル（純度９０％、２．８ｇ、１２．９５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で終夜撹拌した。反応が完了したことをＴＬＣが検出した後、上記の反応混合物を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。その有機相をプールし、飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させて、さらに精製することなく次の工程の反応物のために使用できる目標化合物１．１ｇを得た。
【０１２７】
工程２：  ４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）ブタ−２−エン酸（Ｅ）−エチルの調製
0006884863.tif 000115
窒素の保護下で、ＤＣＭ中の（Ｅ）−エチル−４−（シクロプロピルアミノ）ブタ−２−エン酸塩（１．１ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、水性ホルムアルデヒド（３８ｗｔ％、２．６ｇ、３２．５）を添加した。氷塩浴中で、ＳＴＡＢ（４．１ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を室温まで自然に温め、３時間撹拌した。反応が完了したことをＴＬＣが検出した後、反応物を、水をゆっくり滴下添加することによりクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×４）で抽出した。その有機相をプールし、飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２０／１）により精製して、黄色の油性物質であった目標化合物８６０ｍｇを得た。
【０１２８】
工程３：  （Ｅ）−４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）−２−ブテン酸の調製
0006884863.tif 000116
室温で、ＴＨＦ／水（５ｍＬ／３ｍＬ）中の４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）ブタ−２−エン酸（Ｅ）−エチル（８６０ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）の混合溶液に、ＬｉＯＨ（４５１．２ｍｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で５時間撹拌した。反応が完了したことをＴＬＣが検出した後、反応混合物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１、１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で十分に乾燥させ、真空下で蒸発させ、白色の固体であった目標化合物７５０ｍｇを得た。
【０１２９】
工程４：  （Ｓ，Ｅ）−４−（８−アミノ−３−（５−（４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）−２−ブテノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000117
窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）、（Ｅ）−４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）−２−ブテン酸（４８．２ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１２１．２６ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（１０６．９ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で３時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物４５ｍｇを得た。
【０１３０】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.24-0.39 (4H, m), 0.56-0.69 (4H, m), 1.44-1.46 (1H, m), 2.24-2.27 (1.5H, m), 3.23 (3H, s), 3.62-3.75 (3.5H, m), 3.85 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.65-5.68 (1H, m), 6.05-6.17 (2H, m), 6.37-6.50 (2H, m), 7.11-7.22 (2H, m), 7.66-7.71 (2H, m), 7.83-7.87 (2H, m), 8.13 (2H, , J = 8.4 Hz), 8.20 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, d, J = 3.6 Hz), 10.86 (1H, s).
EM (計算値): 562.3; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 563.3
【０１３１】
実施例１１５
４−（８−アミノ−３−（（１Ｓ）−２−（（Ｅ）−４−（シクロプロピル（メチル）アミノ）−２−ブテノイル）オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000118
窒素の保護下で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、４−（８−アミノ−３−（（１Ｓ）−オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）、（Ｅ）−４−（シクロプロピル（メチル）アミノ−２−ブテン酸（４６．９ｍｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１１７．６ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（８６．４ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で３時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、淡黄色の固体であった目標化合物５５ｍｇを得た。
【０１３２】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.24-0.39 (4H, m), 1.48-1.59 (3H, m), 1.79-1.85 (3H, m), 1.91-2.03 (2H, m), 2.13 (2H, s), 2.67-2.71 (1H, m), 2.88-2.92 (1H, m), 3.04 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.63-3.66 (1H, m), 3.88-3.92 (1H, m), 5.45 (1H, d, J = 2.0 Hz), 6.03-6.15 (2H, m), 6.41-6.54 (2H, m), 7.14 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.17-7.20 (1H, m), 7.71 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.86-7.91 (2H, m), 8.13 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.25 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.42 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.8 Hz), 10.86 (1H, s).
EM (計算値): 576.3; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 577.3
【０１３３】
実施例１１６
（Ｓ，Ｚ）−４−（８−アミノ−３−（５−（２−シアノ−４−メチル−２−ペンテノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの合成工程は、以下の通りである。
0006884863.tif 000119
【０１３４】
工程１：  （Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−（２−シアノアセチル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000120
窒素の保護下で、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（３００ｍｇ、０．７０５ｍｍｏｌ）、２−シアノ酢酸（７１．９ｍｇ、０．８４６ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（２７２．８ｍｇ、２．１１５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＢＴＵ（３２０．６ｍｇ、０．８４６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で３時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＥＡ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和ブラインで逆洗し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１  ２０／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物１５０ｍｇを得た。
【０１３５】
工程２：  （Ｓ，Ｚ）−４−（８−アミノ−３−（５−（２−シアノ−４−メチル−２−ペンテノイル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000121
窒素の保護下で、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の、（Ｓ）−４−（８−アミノ−３−（５−（２−シアノアセチル）−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミド（１２０ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）及びピペリジン（２４．３ｍｇ、０．２９３ｍｍｏｌ）の溶液に、イソブチルアルデヒド（２６．４ｍｇ、０．３６６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、撹拌の下、室温で２６時間反応させた。原料が完全に反応したことをＴＬＣが示した後、反応系を水でクエンチし、ＤＣＭ（１５ｍＬ×３）で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させ、その後、シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により精製して、黄色の固体であった目標化合物３０ｍｇを得た。
【０１３６】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.56-0.76 (4H, m), 1.04-1.09 (6H, m), 2.24-2.26 (1.5H, m), 2.78-2.81 (1H, m), 3.61-3.66 (1.5H, m), 3.87 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.60-5.68 (1H, m), 6.05-6.20 (2H, m), 6.74-6.77 (1H, m), 7.11-7.20 (2H, m), 7.66-7.74 (2H, m), 7.83-7.88 (2H, m), 8.15 (2H, , J = 8.4 Hz), 8.22 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, d, J = 3.6 Hz), 10.84 (1H, s).
EM (計算値): 546.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 547.3
【０１３７】
実施例１１７
４−（８−アミノ−３−（（１Ｓ）−２−（（Ｚ）−２−シアノ−４−メチル−２−ペンテノイル）オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000122
合成方法は、実施例１１６のものと同じであった。目標化合物２０ｍｇは、黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１３８】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.04-1.10 (6H, m), 1.48-1.61 (3H, m), 1.76-1.79 (1H, m), 1.85-2.02 (2H, m), 2.65-2.69 (1H, m), 2.77-2.82 (1H, m), 2.90-2.93 (1H, m), 3.63-3.66 (1H, m), 3.91-4.00 (1H, m), 5.44-5.46 (1H, m), 6.08-6.17 (2H, m), 6.74-6.76 (1H, m), 7.13 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.20 (1H, dd, J = 6.8 Hz, 5.2 Hz), 7.70-7.73 (2H, m), 7.84-7.90 (2H, m), 8.13 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.22 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40 (1H, d, J = 4.0 Hz), 10.85 (1H, brs).
EM (計算値): 560.3; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 561.3
【０１３９】
実施例１１８
４−（３−（（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−７−アクリロイル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-２−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000123
合成方法は、実施例２のものと同じであった。目標化合物１５ｍｇは、灰白色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１４０】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.49-1.57 (2H, m), 1.74-1.85 (3H, m), 2.33-2.39 (1H, m), 4.56-4.74 (2H, m), 5.15-5.17 (0.3H, m), 5.28-5.32 (0.7H, m), 5.55-5.69 (1H, m), 6.06-6.18 (3H, m), 6.72 (1H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.13 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.16-7.21 (1H, m), 7.71 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 4.0 Hz), 7.83-7.87 (1H, m), 7.91 (1H, d, J = 5.2 Hz), 8.15 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.20 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40-8.42 (1H, m), 10.84 (1H, s).
EM (計算値): 479.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 479.2
【０１４１】
実施例１１９
４−（８−アミノ−３−（（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ）−７−（ブタ−２−イノイル）−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000124
合成方法は、実施例１のものと同じであった。目標化合物１２ｍｇは、灰白色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１４２】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.40-1.55 (3H, m), 1.73-1.82 (3H, m), 2.02 (2H, s), 2.33-2.40 (1H, m), 4.53-4.64 (2H, m), 5.13-5.17 (0.4H, m), 5.28-5.32 (0.6H, m), 6.11-6.23 (2H, m), 7.15 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.19-7.22 (1H, m), 7.71 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 4.0 Hz), 7.85-7.87 (1H, m), 7.93 (1H, d, J = 5.2 Hz), 8.15 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.24 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.39-8.42 (1H, m), 10.83 (1H, s).
EM (計算値): 491.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 492.2
【０１４３】
実施例１２０
４−（３−（２−アクリロイル−２−アザビシクロ［２．２．２］オクタノ−１−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000125
合成方法は、実施例２のものと同じであった。目標化合物１０ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得られた。
【０１４４】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.22-1.55 (3H, m), 1.74-1.80 (2H, m), 2.07-2.23 (3H, m), 2.37-2.41 (1H, m), 3.25-3.28 (1H, m), 3.81-3.84 (1H, m), 5.65-5.69 (1H, m), 6.06-6.20 (3H, m), 6.75 (1H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.13 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.16-7.21 (1H, m), 7.70 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 4.0 Hz), 7.83-7.88 (1H, m), 7.90 (1H, d, J = 5.2 Hz), 8.15 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.21 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.39-8.41 (1H, m), 10.84-10.85 (1H, m).
EM (計算値): 493.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 494.2
【０１４５】
実施例１２１
４−（８−アミノ−３−（２−（ブタ−２−イノイル）−２−アザビシクロ［２．２．２］オクタノ−１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000126
合成方法は、実施例１のものと同じであった。目標化合物１３ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１４６】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.25-1.53 (4H, m), 1.70-1.76 (2H, m), 2.01 (2H, s), 2.07-2.24 (3H, m), 2.35-2.41 (1H, m), 3.25-3.26 (1H, m), 3.81-3.84 (1H, m), 6.06-6.20 (2H, m), 7.14 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.15-7.23 (1H, m), 7.68 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 4.0 Hz), 7.81-7.85 (1H, m), 7.90 (1H, d, J = 5.2 Hz), 8.16 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.20 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.39-8.41 (1H, m), 10.86-10.88 (1H, m).
EM (計算値): 505.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 506.2
【０１４７】
実施例１２２
４−（３−（２−アクリロイル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-１−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000127
合成方法は、実施例２のものと同じであった。目標化合物２０ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１４８】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.25-1.51 (3H, m), 1.69-1.72 (1H, m), 1.90-1.93 (1H, m), 2.61-2.70 (2H, m), 3.03-3.07 (1H, m), 3.43-3.47 (1H, m), 5.61-5.68 (1H, m), 6.10-6.19 (3H, m), 6.73-6.75 (1H, m), 7.11-7.19 (2H, m), 7.73-7.86 (4H, m), 8.15 (2H, dd, J = 8.4 Hz, 2.8 Hz), 8.20 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, dd, J = 4.8 Hz, 1.2 Hz), 10.81 (1H, s).
EM (計算値): 479.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 480.2
【０１４９】
実施例１２３
４−（８−アミノ−３−（２−（ブタ−２−イノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン-１−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000128
合成方法は、実施例１のものと同じであった。目標化合物１５ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１５０】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.31-1.56 (4H, m), 1.66-1.72 (1H, m), 1.95-1.98 (1H, m), 2.02 (2H, s), 2.59-2.72 (2H, m), 3.07-3.09 (1H, m), 3.44-3.47 (1H, m), 6.10-6.19 (2H, m), 7.12-7.19 (2H, m), 7.71-7.76 (2H, m), 7.84-7.89 (2H, m), 8.15-8.17 (2H, m), 8.21 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40-8.42 (1H, m), 10.85-10.87 (1H, m).
EM (計算値): 491.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 492.2
【０１５１】
実施例１２４
（Ｓ）−３−（３−（５−アクリロイル−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000129
合成方法は、実施例２のものと同じであった。目標化合物２０ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１５２】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.58-0.72 (4H, m), 2.23-2.25 (1.6H, m), 3.63-3.66 (1.4H, m), 3.85 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.62-5.68 (2H, m), 6.05-6.17 (3H, m), 6.54 (1H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.12-7.20 (2H, m), 7.78-7.83 (3H, m), 7.83-7.86 (2H, m), 8.21 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.41 (1H, d, J = 3.6 Hz), 8.68 (1H, s), 10.82 (1H, s).
EM (計算値): 479.2; MS(ESI) m/e (M+1H)+: 480.2
【０１５３】
実施例１２５
（Ｓ）−２−（３−（５−アクリロイル−５−アザスピロ［２．４］ヘプタン-６−イル）−８−アミノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）ベンズアミドの調製
0006884863.tif 000130
合成方法は、実施例２のものと同じであった。目標化合物１８ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１５４】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0.55-0.76 (4H, m), 2.23-2.26 (1.5H, m), 3.61-3.65 (1.5H, m), 3.86 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.62-5.68 (2H, m), 6.07-6.19 (3H, m), 6.55 (1H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.13-7.20 (2H, m), 7.58-7.62 (2H, m), 7.70-7.72 (1H, m), 7.83-7.88 (2H, m), 8.12-8.14 (1H, m), 8.21 (1H, d, J = 8.4 Hz), 8.40 (1H, d, J = 3.6 Hz), 10.84 (1H, s).
EM (計算値): 479.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 480.2
【０１５５】
実施例１２６
（１Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−５−アクリロイル−６−（８−アミノ−１−（４−（ピリジン−２−カルバモイル）フェニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸塩の調製
0006884863.tif 000131
合成方法は、実施例２のものと同じであった。目標化合物２５ｍｇは、淡黄色の固体であり、それを分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）を用いて精製することによって得た。
【０１５６】
構造分析データ：
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1.47-1.52 (9H, m), 1.99-2.01 (1H, m), 2.82-2.84 (1H, m), 3.24-3.48 (2H, m), 4.38-4.52 (1H, m), 4.96-5.24 (2H, m), 5.46-5.52 (0.4H, m), 5.65-5.76 (1H, m), 6.00-6.30 (3H, m), 6.86 (0.6H, dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz), 7.17-7.25 (2H, m), 7.65-7.75 (3H, m), 7.84-7.88 (1H, m), 8.14-8.23 (3H, m), 8.40-8.42 (1H, m), 10.85 (1H, s).
EM (計算値): 580.3; MS(ESI) m/e (M+1H)+: 581.3
【０１５７】
薬力学的試験
試験実施例１：  ＢＴＫキナーゼ活性を阻害するためのインビトロアッセイ
１：  試験原理：
移動度シフトアッセイは、マイクロ流体チップ技術であり、マイクロ流体環境にキャピラリー電気泳動の基本概念を応用する。実験のために使用された基質は、蛍光標識を有するポリペプチドである。反応系における酵素の作用の下で、基質は生成物へと転換され、基質が運ぶ電荷もそれに応じて変化する。移動度シフトアッセイに関与する基質と生成物との間の電荷差の使用により、その２つの分離が達成され、それらをそれぞれ試験する。試験結果を変換率により表現する。
【０１５８】
２：  試験方法：
（１）試験される試料の調製：  １００％のＤＭＳＯで、反応物の最終濃度の５０倍、すなわち２５μｍｏｌ／Ｌまで希釈した。
（２）希釈：  ２５μｍｏｌ／Ｌが初期濃度であり、その後、その濃度を４倍希釈し、１０の濃度勾配で希釈した。
（３）１００％ＤＭＳＯを、それぞれポジティブコントロールウェル及びネガティブコントロールウェルに添加した。
（４）１０の濃度で調製された化合物を、それぞれ１×キナーゼ緩衝液で１０倍希釈し、ここで、キナーゼ緩衝液には、５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度及びｐＨ７．５のヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸、０．０１％ドデシルポリエチレングリコールエーテル、塩化マグネシウム１０ｍｍｏｌ／Ｌ、ジチオスレイトール２ｍｍｏｌ／Ｌが含まれていた。
（５）２．５×酵素溶液の調製：  キナーゼを、１×キナーゼ緩衝液に添加して、２．５×酵素溶液を形成した。
（６）２．５×基質溶液の調製：  ＦＡＭ標識ポリペプチド及びＡＴＰを、１×キナーゼ緩衝液に添加して、２．５×基質溶液を形成した。
（７）３８４ウェルプレートへの酵素溶液の添加：  ５×化合物５μｌを、３８４ウェル反応プレートに含まれる１０％ＤＭＳＯに溶解し、その後、２．５×酵素溶液１０μｌを添加し、得られた系を１０分間室温でインキュベートした。
（８）３８４ウェルプレートへの基質溶液の添加：  ２．５×基質溶液１０μｌを、３８４ウェル反応プレートに添加した。
（９）キナーゼ反応及び停止反応：  ２８℃で１時間インキュベートした後に、停止溶液２５μｌを添加して、反応を停止させ、ここで、停止溶液には、１００ｍｍｏｌ／Ｌの濃度及びｐＨ７．５のヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸、０．０１５％ドデシルポリエチレングリコールエーテル、０．２％表面試薬Ｎｏ．３、エチレンジアミン四酢酸２０ｍｍｏｌ／Ｌが含まれていた。
（１０）Ｃａｌｉｐｅｒデータの読み取り：  変換率データをＣａｌｉｐｅｒから読み取った。
【０１５９】
試験実施例２：  異なる細胞株を使用する、化合物のインビトロにおける、細胞増殖阻害活性の阻害の測定
１：  培地の調製を表６に示す。
0006884863.tif 000132
【０１６０】
２：  化合物の調製：
試験する化合物をＤＭＳＯで希釈して、母液を、後で使用するために１０ｍＭの最終濃度で調製した。
【０１６１】
３：  ＩＣ５０測定
３．１．  ＣＣＫ−８法によるＴＭＤ８及びＯＣＩ−ｌｙ１０細胞の試験
対数増殖期細胞を採取し、集計し、完全培地中で再撹拌した。細胞濃度を、適切な濃度（細胞密度最適化試験結果に従って決定された）に調整し、９６ウェルプレートに播種し、細胞懸濁液１００μｌを、各ウェルに添加した。細胞を、３７℃、１００％相対湿度、及び５％ＣＯ２のインキュベータ内で、２４時間インキュベートした。
【０１６２】
試験される化合物を、設定された対応する作用濃度まで、培地で希釈し、細胞を２５μｌ／ウェルで添加した。細胞を、３７℃、１００％相対湿度、及び５％ＣＯ２のインキュベータ内で、７２時間インキュベートした。
【０１６３】
培地を吸引及び廃棄し、１０％の試験試薬を含む完全培地を添加し、得られた系を、３７℃のインキュベータ中で、１時間−４時間インキュベートした。穏やかに振盪した後に、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ上で、４５０ｎｍの波長の吸光度を測定し、６５０ｎｍの吸光度を基準として使用して、阻害率を算出した。
【０１６４】
３．２  ＣＴＧアッセイによるＤＯＨＨ２細胞の試験
対数増殖期細胞を採取し、集計し、完全培地中で再撹拌した。細胞濃度を、適切な濃度（細胞密度最適化試験結果に従って決定された）に調整し、９６ウェルプレートに播種し、細胞懸濁液１００μｌを、各ウェルに添加した。細胞を、３７℃、１００％相対湿度、及び５％ＣＯ２のインキュベータ内で、２４時間インキュベートした。
【０１６５】
試験される化合物を、設定された対応する作用濃度まで、培地で希釈し、細胞を１０μｌ／ウェルで添加した。細胞を、３７℃、１００％相対湿度、及び５％ＣＯ２で設定されたインキュベータ内で、７２時間インキュベートした。
【０１６６】
培地を吸引及び廃棄し、試験試薬３０μｌを添加した。プレートを光から離して穏やかに振盪させて、細胞を溶解させた。２分間室温でインキュベートした後、測定をＥｎｖｉｓｉｏｎで実施し、阻害率を算出した。
【０１６７】
４：  データ処理
腫瘍細胞増殖に対する薬物の阻害率を以下のように算出した：  腫瘍細胞増殖の阻害率％＝［（Ａｃ−Ａｓ）／（Ａｃ−Ａｂ）］×１００％
Ａｓ：  試料（細胞＋試験試薬＋試験化合物）のＯＡ
Ａｃ：  ネガティブコントロール（細胞＋試験試薬＋ＤＭＳＯ）のＯＡ
Ａｂ：  ポジティブコントロール（培地＋試験試薬＋ＤＭＳＯ）のＯＡ
【０１６８】
ＩＣ５０曲線の当てはめを、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５又はＸＬｆｉｔを使用して実施し、ＩＣ５０値を算出した。
【０１６９】
化合物の、インビトロにおけるＢＴＫキナーゼ活性及び細胞増殖活性に対する阻害の結果を、表７に示す。
0006884863.tif 000133
0006884863.tif 000134
0006884863.tif 000135
【０１７０】
試験実施例３：  潜在的心臓毒性を調査するｈＥＲＧ実験
１：  細胞培養
ＣＨＯ  ｈＥＲＧ細胞を、上記の培地を含む培養皿中で増殖させ、３７℃及び５％ＣＯ２のインキュベータ中で培養した。ＣＨＯ  ｈＥＲＧ細胞を、電気生理学的実験の２４−４８時間前に、培養皿に配置された円形スライドガラスに移し、上記のものと同じ培地及び培養条件下で増殖させた。各円形スライド上のＣＨＯ  ｈＥＲＧ細胞の密度は、大部分の細胞が独立しており、個々のものであるという要件を満たすものとする。
【０１７１】
２：  実験溶液の調製
0006884863.tif 000136
【０１７２】
３：  電気生理学的記録システム
手動のパッチクランプシステム（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、Ｇｅｒｍａｎｙから購入した、ＨＥＫＡ  ＥＰＣ−１０信号増幅器及びデジタル変換システム）を、全細胞電流記録のためのこの実験で使用する。その表面上で増殖したＣＨＯ  ｈＥＲＧ細胞を有する円形スライドを、倒立顕微鏡の下の電気生理学的記録タンクに配置した。細胞外液を、記録タンク中で連続的に灌流させた（毎分約１ｍＬ）。従来の全細胞パッチクランプ電流記録技術を、実験手順において使用した。特に明記しない限り、実験は、従来の室温（約２５℃）で実施した。細胞を、−８０ｍＶの電圧でクランプした。細胞のためのクランプ電圧を、＋２０ｍＶまで減極して、ｈＥＲＧカリウムチャネルを活性化させ、５秒後に、細胞を−５０ｍＶまでクランプして、不活性化を排除し、テール電流を生成した。テール電流ピークを、ｈＥＲＧ電流の大きさの値として使用した。上記の工程で記録されたｈＥＲＧカリウム電流が、記録タンクにおける連続的な細胞外液の灌流下で安定した後、試験される薬物を、ｈＥＲＧ電流に対する薬物の阻害効果が定常状態に達するまで、同時に灌流し、満たすことができる。通常は、最後の３つの逐次的な電流記録線の重ね合わせを、状態が安定していたかどうかを判断する基準として使用した。定常状態に達した後、細胞外液の灌流による洗浄を、薬物を添加する前の状態にｈＥＲＧが戻るまで行った。１つの細胞を、一又は複数の薬物、又は複数の濃度の同じ薬物を試験するために使用できるが、異なる薬物間で、細胞外液を用いて洗浄する必要がある。シサプリド（Ｓｉｇｍａから購入した）を、実験においてポジティブコントロールとして使用して、使用される細胞の質が正常であることを確認した。
【０１７３】
４：  化合物の処理及び希釈
ＩＣ５０の化合物を得るために、本発明者らは、試験のために以下の濃度（３０、１０、３、１、０．３、及び０．１μＭ）を選択した。試験前に、化合物を、ＤＭＳＯを用いる漸進的な希釈の方法により、１０、３、１、０．３、及び０．１ｍＭの原液まで最初に希釈し、その後、細胞外液を用いて最終的なμＭの試験濃度まで希釈した。他の化合物溶液の各々のＤＭＳＯの最終濃度は、化合物試験溶液３０μＭのＤＭＳＯ濃度が０．３％であったことを除き、０．１％であった。ポジティブコントロール（シサプリド）の試験濃度は、０．１μＭであった。全ての化合物溶液を、５から１０分のルーチンの間に超音波処理し、振盪させて、化合物の完全な溶解を確実にした。
【０１７４】
５：  データ処理
ＨＥＫＡ  Ｐａｔｃｈｍａｓｔｅｒ、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ、及びＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍにより提供されたデータ分析ソフトウェアにより、試験データを分析した。
【０１７５】
化合物のいくつかの心臓ｈＥＲＧカリウム電流の試験結果を、表８に示す。
0006884863.tif 000137
【０１７６】
試験実施例４：  本発明の化合物の薬物動態学的試験
ＳＤラット、雄（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓｉｐｐｒ−Ｂｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入された）、試験した各化合物を、薬物動態学的研究のために、経口投与（１０ｍｇ／ｋｇ、各群中の３匹のラット）及び静脈内投与（１ｍｇ／ｋｇ、各群中の３匹のラット）により、ＳＤラットに単回投与で投与した。試験した化合物を、ＤＭＳＯ／９％塩化ナトリウム注射液＝５／９５（Ｖ／Ｖ）を使用して溶解し、１分間ボルテックスにかけ、音波粉砕の１分後に、化合物を、投与のために溶液へと調合した。動物を経口投与の１６−１７時間前に絶食させ、給餌は投与の４時間後に戻した。経口及び静脈内投与後、薬物動態学的試料を、以下の時点で、頚静脈穿刺又は心臓穿刺によりＳＤラットから採取した：投与前、投与後５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、及び２４時間。各時点で３つの全血試料を採取し、採取量は約０．２ｍＬであり、採取試料の血液凝固を、ヘパリンナトリウムにより阻止した。採取後、血液サンプルを氷上に直ちに配置し、遠心分離機にかけて、３０分以内に血漿を分離した（遠心分離条件：  ８０００ｒｐｍ、６分、２−８℃）。採取された血漿を、分析前に−７０℃で保存した。血漿試料５０μＬを、１．５ｍＬ遠心分離管へと入れ、内部標準溶液２５０μＬ（内部標準は含まないが、添加されるメタノールと同じ体積のブランク）を添加し、ボルテックスで混ぜ合わせ、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離機にかけた。上澄み２００μＬを取り、９６ウェル試料プレートに添加し、その試料をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【０１７７】
本発明の化合物のいくつかの薬物動態学的試験結果を、下の表９に示す。
0006884863.tif 000138
【０１７８】
上記のドラッガビリティの研究データから、本発明の化合物が、ＢＴＫ活性に対し有意な阻害効果を有しており、既に市場に出回っている薬物、イブルチニブ、又は臨床フェーズＩＩＩのＡＣＰ−１９６と比較した場合、本発明の化合物が、極めて小さな心臓毒性、及び薬物動態学的態様からの明白な利点を有し、ＢＴＫ阻害剤として使用でき、そして悪性腫瘍疾患又は炎症性疾患に対する幅広い応用の見込みがあることがわかる。実施例の上の記載は、単に本発明の方法、及びその核となる観念の理解を支援するためである。当業者が、本発明の原理から逸脱することなく、本発明に対する様々な改善及び修正を行うことができ、そのような改善及び修正が、本発明の特許請求の範囲の保護範囲内にもあることに留意するべきである。