(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｅ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｆ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｇ）配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｈ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体。
【請求項２】
ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号９のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、およびＣＨ３ドメインに配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を含む、前記ＨＣ１と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号４のアミノ酸配列を含む前記ＬＣＶＲおよび定常領域に配列番号１４のアミノ酸配列を含む、前記ＬＣ１と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号５のアミノ酸配列を含む前記ＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号１３のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、および前記ＣＨ３ドメインに配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１１のアミノ酸配列を含む、前記ＨＣ２と、
ｄ）Ｎ末端から順に、配列番号８のアミノ酸配列を含む前記ＬＣＶＲ、および定常領域に配列番号１５のアミノ酸配列を含む前記ＬＣ２と、を含み、ただし、配列番号１１のアミノ酸配列が、前記ＨＣ１のＣＨ３ドメインに存在する場合、配列番号１２のアミノ酸配列は、前記ＨＣ２の前記ＣＨ３ドメインに存在するか、または配列番号１２のアミノ酸配列が、前記ＨＣ１の前記ＣＨ３ドメインに存在する場合、配列番号１１のアミノ酸配列は、前記ＨＣ２の前記ＣＨ３ドメインに存在する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記ＨＣ１が、前記ＣＨ３ドメインに配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含む前記ＨＣＶＲを含み、前記ＨＣ２が、前記ＣＨ３ドメインに配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、およびＬＣ２が、それぞれ配列番号４９、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３４のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
前記ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、およびＬＣ２が、それぞれ配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、および配列番号３４のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号４９、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞が、請求項４に記載の抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
【請求項７】
配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞が、請求項５に記載の抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
【請求項８】
抗体が発現するような条件下で請求項６または７に記載の哺乳動物細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む、抗体を産生するためのプロセス。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体と、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体を含む、癌の治療における使用のための薬学的組成物。
【請求項１１】
前記癌が、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記癌が、ＮＳＣＬＣ、小細胞肺癌、または中皮腫である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤との同時、別々、または順次の組み合わせで投与される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野に関する。より具体的には、本発明は、ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）およびヒトＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する二重特異性抗体に関し、固形腫瘍および血液腫瘍を単独で、ならびに化学療法および他の癌治療剤と組み合わせて治療するのに有用であり得る。
【０００２】
免疫チェックポイント経路は、自己寛容の維持およびＴ細胞活性化の制御に使用されるが、癌細胞は、経路を使用して抗腫瘍応答を抑制し、それらの破壊を防止することができる。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路は、１つのそのような免疫チェックポイントである。ヒトＰＤ−１は、Ｔ細胞で見られ、ヒトＰＤ−Ｌ１は、様々な腫瘍タイプによって異常に発現し、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合は、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を阻害する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害軸は、抗腫瘍免疫応答の文脈で腫瘍の進化を形作る自然な選択的プロセスの一部として、腫瘍によって支配されている。
【０００３】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を標的とする治療剤は、臨床的に検証されており、癌の治療の重要な臨床的進歩につながっているが、患者のごく一部のみがそのような治療の恩恵を受けている（例えば、Ｓｈａｒｍａ，Ｐ．ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｔｏｗａｒｄ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｃｕｒａｔｉｖｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｃｅｌｌ．２０１５；１６１：２０１５−１４を参照されたい）。例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者の約２０％のみがＰＤ−１抗体治療に応答した。
【０００４】
ＰＤ−Ｌ１抗体およびＰＤ−１抗体の同時投与を含む臨床試験が現在進行中であるが（例えば、ＥＵＲＯＰＥＡＮ  ＳＯＣＩＥＴＹ  ＦＯＲ  ＭＥＤＩＣＡＬ  ＯＮＣＯＬＯＧＹ（ＥＳＭＯ）Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃２１３０；Ｏｃｔ．２０１６を参照されたい）、これらの治療レジメンは、各抗体について比較的高い投与量での２つの別々の抗体産物の注入を含む。さらに、そのような併用療法が単剤療法と比較して有害事象プロファイルを悪化させることなく有効性の改善を提供するかはまだ知られていない。
【発明の概要】
【０００５】
ＷＯ２０１７／０８７５４７は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を具体的に開示し、その中に記載されるＰＤ−Ｌ１結合剤および「第２の免疫療法剤」を含むヘテロ二量体分子（例えば、二重特異性薬剤）を一般に開示する。いくつかの実施形態では、第２の免疫療法剤は、「抗ＰＤ抗体」などの「免疫抑制機能をブロックする抗体」を含み得る。しかしながら、この刊行物には特定のＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１二重特異性薬剤は開示されていなかった。よって、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１を高親和性で結合し、全てのＰＤｘファミリーリガンドによるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１活性化を効果的に中和し、かつ／またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を標的とする既知の治療剤と比較して優れた活性を提供する二重特異性抗体、またはさらにそれらの組み合わせは、特定の癌についてより効果的な薬理学的介入として必要である。特に、ｉ）中程度または高いＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１発現レベルを有すると特徴付けられる癌をより効果的に治療し得、ｉｉ）インビボでの安定性、これらに限定されないが、癌の治療における開発および／または使用に許容される熱安定性、溶解性、低自己会合、および薬物動態特性を含む、物理的および化学的安定性を示す、そのような抗ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１二重特異性抗体が望ましい。
【０００６】
したがって、本発明は、２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖の単一ＩｇＧ様抗体への対合を介して、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１を同時に標的とすることができる新規ヘテロ二量体二重特異性抗体を提供する。さらに、本発明は、以下の特徴のうちの１つ以上を有する抗ヒトＰＤ−Ｌ１および抗ヒトＰＤ−１ヘテロ二量体二重特異性抗体を提供する：ＰＤ軸の３つの相互作用（ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合、およびＣＤ８０へのＰＤ−Ｌ１の結合）を全てブロックし、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１過剰発現細胞を架橋し、結合したＴ細胞および腫瘍細胞の近接によるＴ細胞活性化および腫瘍細胞殺滅を増加させ、中程度〜高いＰＤリガンド発現レベルで腫瘍細胞において驚くほど低い投与量で有意な抗腫瘍活性を示し、これらに限定されないが、インビボ安定性、熱安定性、溶解性、低自己会合、および薬物動態特性を含む、予想外の物理的および化学的安定性を示す。
【０００７】
したがって、本発明は、
ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体を提供する。
【０００８】
本発明は、ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、およびＬＣ２を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体を提供し、
ａ）そのＨＣ１は、ＨＣＶＲに配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、
ｂ）そのＬＣ１は、ＬＣＶＲに配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、
ｃ）そのＨＣ２は、ＨＣＶＲに配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２３または配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、
ｄ）そのＬＣ２は、ＬＣＶＲに配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、
ｅ）ＨＣ１のＣＨ１ドメインは、Ｓ１８３Ｋのアミノ酸置換を含み、
ｆ）ＬＣ１の定常領域は、Ｓ１７６ＥおよびＹ１７８Ｅのアミノ酸置換を含むヒトラムダバリアントであり、
ｇ）ＨＣ２のＣＨ１ドメインは、Ｌ１２８Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、およびＱ１７５Ｅのアミノ酸置換を含み、
ｈ）ＬＣ２の定常領域は、Ｓ１３１Ｒ、Ｖ１３３Ｇ、およびＳ１７６Ｒのアミノ酸置換を含むヒトカッパバリアントであり、
ｉ）ＨＣ１のＣＨ３ドメインは、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖのアミノ酸置換を含み、ＨＣ２のＣＨ３ドメインは、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、およびＴ３９４Ｗのアミノ酸置換を含むか、またはＨＣ１のＣＨ３ドメインは、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、およびＴ３９４Ｗのアミノ酸置換を含み、ＨＣ２のＣＨ３ドメインは、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖのアミノ酸置換を含み、
ｊ）ＨＣ１およびＨＣ２は、免疫エフェクター機能ヌルヒトＩｇＧ１  Ｆｃバリアントであり、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。好ましくは、ＨＣｌおよびＨＣ２は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＤ２６５Ｓのアミノ酸置換を含む。
【０００９】
本発明は、
ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号９のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、およびＣＨ３ドメインに配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を含む、ＨＣ１と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、および定常領域に配列番号１４のアミノ酸配列を含む、ＬＣ１と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号１３のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、およびＣＨ３ドメインに配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１１のアミノ酸配列を含む、ＨＣ２と、
ｄ）Ｎ末端から順に、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、および定常領域に配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ２と、を含み、ただし、配列番号１１のアミノ酸配列が、そのＨＣ１のＣＨ３ドメインに存在する場合、配列番号１２のアミノ酸配列は、そのＨＣ２のＣＨ３ドメインに存在するか、または配列番号１２のアミノ酸配列が、そのＨＣ１のＣＨ３ドメインに存在する場合、配列番号１１のアミノ酸配列は、そのＨＣ２のＣＨ３ドメインに存在する、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体を提供する。
【００１０】
本発明は、ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、およびＬＣ２を含む抗体をさらに提供し、
ａ）そのＨＣ１は、Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号９のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、およびＣＨ３ドメインに配列番号１１のアミノ酸配列を含み、
ｂ）そのＬＣ１は、Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、および定常領域に配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
ｃ）そのＨＣ２は、Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号１３のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインの領域に配列番号１０のアミノ酸配列、およびＣＨ３ドメインに配列番号１２のアミノ酸配列を含み、
ｄ）そのＬＣ２は、Ｎ末端から順に、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、および定常領域に配列番号１５のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
本発明は、
ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、
ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣ１と、
ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＣ２と、
ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣ２と、を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体を提供する。
【００１２】
本発明は、
ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、
ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣ１と、
ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ２と、
ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣ２と、を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体を提供する。
【００１３】
本発明は、
ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、
ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣ１と、
ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ２と、
ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣ２と、を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体を提供する。
【００１４】
本発明は、配列番号４９、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供し、細胞は、本発明の抗体を発現することができる。
【００１５】
本発明は、配列番号４９、配列番号３０、配列番号３３、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供し、細胞は、本発明の抗体を発現することができる。
【００１６】
本発明は、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供し、細胞は、本発明の抗体を発現することができる。
【００１７】
本発明は、抗体が発現するような条件下で本発明の哺乳動物細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む、本発明の抗体を産生するためのプロセスを提供する。
【００１８】
本発明は、本発明のプロセスによって産生される抗体を提供する。
【００１９】
本発明は、本発明の抗体、および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物を提供する。
【００２０】
本発明は、癌を治療することを必要とする患者に、有効量の本発明の抗体を投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、その方法は、それを必要とする患者に、有効量の本発明の抗体を投与することを含み、癌は、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である。
【００２１】
本発明は、癌を治療する方法を提供し、癌は、黒色腫である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、肺癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、肺癌は、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮および非扁平上皮）、小細胞肺癌、または中皮腫である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、頭頸部癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、肝臓癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、直腸結腸癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、膵臓癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、胃癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、腎臓癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、膀胱癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、前立腺癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、乳癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、卵巣癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、子宮内膜癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、食道癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、軟部組織肉腫である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、胆管癌である。本発明は、癌を治療する方法をさらに提供し、癌は、肝細胞癌である。
【００２２】
本発明は、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤との同時、別々、または順次の組み合わせでの有効量の本発明の抗体の投与を含む方法をさらに提供する。
【００２３】
本発明は、電離放射線との同時、別々、または順次の組み合わせを含む有効量の本発明の抗体の投与を含む方法をさらに提供する。
【００２４】
本発明は、療法における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供し、癌は、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である。
【００２５】
本発明は、黒色腫の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、肺癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、本発明の抗体をさらに提供し、肺癌は、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮および非扁平上皮）、小細胞肺癌、または中皮腫である。本発明は、頭頸部癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、肝臓癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、結腸直腸癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、膵臓癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、胃癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、腎臓癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、膀胱癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、前立腺癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、乳癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、卵巣癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、子宮内膜癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、食道癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、軟部組織肉腫の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、胆管癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。本発明は、肝細胞癌の治療における使用のための本発明の抗体を提供する。
【００２６】
本発明は、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤との同時、別々、または順次の組み合わせでの使用のための本発明の抗体を提供する。
【００２７】
本発明は、癌の治療における、電離放射線との同時、別々、または順次の組み合わせでの使用のための本発明の抗体を提供する。
【００２８】
本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、癌の治療における使用のための薬学的組成物をさらに提供し、癌は、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、癌の治療における使用のための薬学的組成物をさらに提供し、肺癌は、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮および非扁平上皮）、小細胞肺癌、または中皮腫である。
【００２９】
本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、黒色腫の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮および非扁平上皮）、小細胞肺癌、または中皮腫を含むが、これらに限定されない、肺癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、頭頸部癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、肝臓癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、結腸直腸癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、膵臓癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、胃癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、腎臓癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、前立腺癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、前立腺癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、乳癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、卵巣癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、子宮内膜癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、食道癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、軟部組織肉腫の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、胆管癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。本発明は、有効量の本発明の抗体を含む、肝細胞癌の治療における使用のための薬学的組成物を提供する。
【００３０】
本発明は、癌の治療における使用のための薬学的組成物をさらに提供し、その薬学的組成物は、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤との同時、別々、または順次の組み合わせで投与される。
【００３１】
本発明は、癌の治療における使用のための薬学的組成物をさらに提供し、その薬学的組成物は、電離放射線との同時、別々、または順次の組み合わせで投与される。
【００３２】
本発明は、癌の治療のための医薬品の製造のための、本発明の抗体の使用を提供する。本発明は、癌の治療のための医薬品の製造のための、本発明の抗体の使用をさらに提供し、癌は、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である。本発明は、癌の治療のための医薬品の製造のための、本発明の抗体の使用をさらに提供し、肺癌は、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮および非扁平上皮）、小細胞肺癌、または中皮腫である。
【００３３】
本発明は、癌の治療のための医薬品の製造における本発明の抗体の使用をさらに提供し、その医薬品は、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤と同時、別々、または順次に投与されるものである。
【００３４】
本発明は、癌の治療のための医薬品の製造における本発明の抗体の使用を提供し、その医薬品は、電離放射線と同時、別々、または順次に投与されるものである。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明の抗体は、操作された、天然に存在しないポリペプチド複合体である。本発明のＤＮＡ分子は、本発明の抗体中のポリペプチドのうちの１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、天然に存在しないＤＮＡ分子である。
【００３６】
本発明の抗体は、ＩｇＧタイプ抗体であり、鎖内および鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される「重」鎖および「軽」鎖を有する。各重鎖は、Ｎ末端ＨＣＶＲおよび重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）からなる。各軽鎖は、Ｎ末端ＬＣＶＲおよび軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。軽鎖はそれぞれ重鎖とジスルフィド結合を形成し、２つの重鎖は互いの間で２つのジスルフィド結合を形成する。
【００３７】
重鎖の定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含む。ＣＨ１は、ＨＣＶＲの後にあり、ＣＨ１およびＨＣＶＲは、Ｆａｂの重鎖部分を形成する。ＣＨ２は、ヒンジ領域の後にあり、ＣＨ３の前にある。ＣＨ３は、ＣＨ２の後にあり、重鎖のカルボキシ末端にある。
【００３８】
軽鎖の定常領域は、１つのドメイン、ＣＬを含む。ＣＬは、ＬＣＶＲの後にあり、ＣＬおよびＬＣＶＲは、Ｆａｂの軽鎖部分を形成する。
【００３９】
本発明の抗体は、抗体の各アームが、抗体を形成する２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖により、その同種抗原に対する選択的な一価の結合を示すという点で、ヘテロ二量体である。本発明において、抗体の一方のアームはヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）に結合し、他方のアームはヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する。そのようなポリペプチド鎖のＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインは、配列が同一である必要はなく、２つのポリペプチド鎖間の複合体形成を促進するように有利に改変される。例えば、アミノ酸置換（好ましくは、「ノブ」を形成するかさ高い側基を含むアミノ酸、例えば、トリプトファンでの置換）は、立体干渉が同様に変異されたドメインとの相互作用を防止し、変異されたドメインが、相補的または調節的変異が操作されたドメイン、すなわち、「穴」（例えば、グリシンでの置換）と対になることを強いるように、ＣＨ２またはＣＨ３ドメインに導入することができる。変異のそのようなセットは、Ｆｃ領域を形成するＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含むポリペプチドの任意の対に操作することができる。ホモ二量体化よりもヘテロ二量体化を好むタンパク質操作の方法は、特に免疫グロブリン様分子の操作に関して、当該技術分野で周知である（例えば、ＷＯ９６／２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、ＥＰ１８７０４５９、ＷＯ２００７／１１０２０５、ＷＯ２００７／１４７９０１、ＷＯ２００９／０８９００４、ＷＯ２０１０／１２９３０４、ＷＯ２０１１／９０７５４、ＷＯ２０１１／１４３５４５、ＷＯ２０１２／０５８７６８、ＷＯ２０１３／１５７９５４、ＷＯ２０１３／０９６２９１、ＥＰ１  ８７０  ４５９Ａ１、およびＲｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）”’Ｋｎｏｂｓ−Ｉｎｔｏ−Ｈｏｌｅｓ’Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＨ３  Ｄｏｍａｉｎｓ  Ｆｏｒ  Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｒ．９：６１７−６２１、Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）”Ｓｔａｂｌｅ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ  Ｆｒｏｍ  Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ  Ｕｓｉｎｇ  Ａ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６−３５、およびＸｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）”Ａ  Ｎｅｗ  Ｆｏｒｍａｔ  Ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ｈｉｇｈｌｙ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９６：９５−１０１を参照されたい）。典型的には、当該技術分野で知られているアプローチでは、第１の重鎖のＣＨ３ドメインおよび第２の重鎖のＣＨ３ドメインは、１つの操作されたＣＨ３ドメインを含む重鎖が、同じ構造の別の重鎖とホモ二量体化することができなくなる（例えば、ＣＨ３で操作された第１の重鎖が、別のＣＨ３で操作された第１の重鎖とホモ二量体化することができなくなり、ＣＨ３で操作された第２の重鎖が、別のＣＨ３で操作された第２の重鎖とホモ二量化することができなくなる）ように、共に相補的に操作される���それによって、１つの操作されたＣＨ３ドメインを含む重鎖は、ＣＨ３ドメインを含む別の重鎖とヘテロ二量体化することを強いられ、これは相補的に操作される。本発明のこの実施形態について、第１の重鎖のＣＨ３ドメインおよび第２の重鎖のＣＨ３ドメインは、第１の重鎖および第２の重鎖がヘテロ二量体化することを強いられるように、アミノ酸置換によって相補的に操作される一方で、第１の重鎖および第２の重鎖は、（例えば、立体的な理由で）ホモ二量体化することができなくなる。
【００４０】
当該技術分野で知られている重鎖ヘテロ二量体化を支持するための異なるアプローチは、本発明による二重特異性抗体において使用される異なる代替物として企図される。本発明のいくつかの実施形態では、変異は、ＣＨ１およびＣＨ３領域内の重鎖の配列ならびに軽鎖定常領域内の軽鎖の配列に組み込まれる。ＣＨ１およびＬＣ変異は、必要な軽鎖および重鎖の対の自然な対合を好み、軽鎖の誤対合を嫌うようになされる。ＣＨ３変異は、２つの異なる重鎖のヘテロ二量体対合を好み、ホモ二量体の形成を嫌うようになされる。
【００４１】
好ましくは、抗体の抗ＰＤ−Ｌ１部分のＣＨ３領域における変異がＥＵ番号付けにおける３５０、３５１、４０５、および４０７位を含む場合、抗体の抗ＰＤ−１部分のＣＨ３領域における変異は、ＥＵ番号付けにおける３５０、３６６、３９２、および３９４位を含み、抗体の抗ＰＤ−Ｌ１部分のＣＨ３領域における変異がＥＵ番号付けにおける３５０、３６６、３９２、および３９４位を含む場合、抗体の抗ＰＤ−１部分のＣＨ３領域における変異は、ＥＵ番号付けにおける３５０、３５１、３５６、４０５、および４０７位を含む（すぐ下に示される配列アライメントにおいて示される）。
野生型ヒトＩｇＧ１ならびに抗体ｖ３．２およびｖ１３８８４の重鎖の定常領域のアミノ酸配列のアライメント（好ましい改変には下線を引く）：
【表１】
0006953612.tif 000002
【００４２】
好ましくは、すぐ上のアラインメントにおいて下線を引いて示すように、抗体の抗ＰＤ−Ｌ１部分のＣＨ１領域における変異は、好ましくはＥＵ番号付けにおける１８３位を含む一方で、抗体の抗ＰＤ−１部分のＣＨ１領域における変異は、好ましくはＥＵ番号付けにおける１２８、１４７、および１７５位を含む。
【００４３】
抗体の抗ＰＤ−Ｌ１部分のＣＬ領域は、好ましくはヒトラムダサブタイプである。より好ましくは、抗体の抗ＰＤ−Ｌ１部分のＣＬ領域は、ＥＵ番号付けにおける１７６および１７８位のアミノ酸置換を含むヒトラムダバリアントである（以下のアラインメントを参照されたい）。
【００４４】
野生型ヒトラムダとｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４抗体のＰＤ−Ｌ１軽鎖またはＰＤ−１の定常領域とのアミノ酸配列のアライメント（好ましい改変には下線を引く）。
【表２】
0006953612.tif 000003
【００４５】
抗体の抗ＰＤ−１部分のＣＬ領域は、好ましくはヒトカッパサブタイプである。本発明の抗体の抗ＰＤ−１部分のＣＬ領域は、好ましくは、ＥＵ番号付けにおける１３１、１３３、および１７６位でのアミノ酸置換を含むヒトカッパバリアントである。
【００４６】
野生型ヒトカッパおよびＰＤ−１に対する抗体の軽鎖の定常領域のアミノ酸配列のアライメント（好ましい改変には下線を引く）。
【表３】
0006953612.tif 000004
【００４７】
本発明の特定の抗体において、重鎖ヘテロ二量体対合変異は、７８℃よりも大きなＣＨ３熱安定性をもたらす。
【００４８】
特定の生物学的系において発現する場合、Ｆｃ配列を有する抗体は、Ｆｃ領域においてグリコシル化される。典型的には、グリコシル化は、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位の抗体のＦｃ領域に生じる。Ｎ−グリカンは、典型的には、アスパラギンに結合する。抗体は、他の位置でもグリコシル化され得る。
【００４９】
好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１に由来するＦｃ部分バリアントを含む。ＩｇＧ１は、Ｆｃ−ガンマ受容体ファミリー（ＦｃγＲ）およびＣ１ｑに結合することがよく知られている。これらの受容体との相互作用は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導し得る。したがって、本発明の抗体について、免疫エフェクター機能を除去するために、特定のアミノ酸置換がヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域に導入される。抗体重鎖のＣＨ２領域における変異は、図１に示すように、免疫エフェクター機能を低減または排除するために、ＥＵ番号付けにおける２３４、２３５、および２６５位を含み得る。
【００５０】
ＨＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子またはそのバリアントに作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒトおよび他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。好ましくは、本発明の抗体について、重鎖の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１のバリアントである。
【００５１】
ＬＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子またはそのバリアントに作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子に変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。好ましくは、本発明の抗体について、抗体の抗ＰＤ−Ｌ１部分の軽鎖定常領域は、ラムダ軽鎖のバリアントであり、抗体の抗ＰＤ−１部分の軽鎖定常領域は、カッパ軽鎖のバリアントである。
【００５２】
本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主細胞において発現し得る。発現ベクターは、典型的には、エピソームまたは宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、グルタミンシンセターゼ、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有するであろう。
【００５３】
本発明の抗体は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞などの哺乳動物細胞において容易に産生され得る。宿主細胞は、当該技術分野において周知の技法を使用して培養される。
【００５４】
目的のポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて異なる周知の方法によって宿主細胞に導入され得る。
【００５５】
タンパク質精製の様々な方法が用いられ得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８２：８３−８９（１９９０）、およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。
【００５６】
本発明の別の実施形態では、抗体、または抗体をコードする核酸は、単離形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離」という用語は、細胞環境に見出される任意の他の高分子種を含まないか、または実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、または核酸を指す。「実質的に含まない」とは、本明細書で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチド、または核酸が存在する高分子種の（モル基準で）８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超を構成することを意味する。
【００５７】
本発明の抗体、または本発明の抗体を含む薬学的組成物は、非経口経路（例えば、皮下および静脈内）によって投与され得る。本発明の抗体は、単独で薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と一緒に単回用量または複数回用量で患者に投与され得る。本発明の薬学的組成物は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ）、本明細書に開示される抗体、および１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
【００５８】
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（または「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」）という用語は、既存の症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅延、妨害、抑制、緩和、停止、軽減、または反転させることを指す。
【００５９】
「結合する」とは、本明細書でヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）、ヒトＰＤ−１（配列番号２）、または両方に対する抗体の親和性に関連して使用する場合、別段の指示がない限り、本質的に本明細書に記載されるように３７℃で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーを使用することを含む、当該技術分野において既知の一般的な方法によって決定される、約１×１０−６Ｍ未満、好ましくは約１×１０−９Ｍ未満のＫＤを意味することを意図している。
【００６０】
「有効量」とは、研究者、医師、または他の臨床医によって求められている組織、系、動物、哺乳動物、またはヒトの生物学的もしくは医学的応答またはそれに対する所望の治療効果を誘発するであろう本発明の抗体または本発明の抗体を含む薬学的組成物の量を意味する。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの因子に応じて変動し得る。有効量はまた、抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。
【実施例】
【００６１】
本発明は、以下の非限定的な実施例によりさらに説明される。
【００６２】
実施例１：抗体発現および精製
重鎖および軽鎖の可変領域のポリペプチド、抗体ｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４の完全な重鎖および軽鎖アミノ酸配列、ならびにそれらをコードするヌクレオチド配列は、「アミノ酸およびヌクレオチド配列」と題するセクションにおいて以下に列挙される。加えて、抗体ｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４の軽鎖、重鎖、軽鎖可変領域、および重鎖可変領域のアミノ酸配列の配列番号は、以下の表１（ａ）に示される。さらに、抗体ｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４のＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１結合可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列の配列番号は、それぞれ、表１（ｂ）および表１（ｃ）に示される。
【００６３】
これらに限定されないが、抗体ｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４を含む、本発明の抗体は、本質的に以下のように作製および精製することができる。ＣＨＯなどの適切な宿主細胞は、クアッドベクター（すなわち、２つの軽鎖および２つの重鎖の発現をコードする単一ベクター）、デュアルベクター（すなわち、２つの異なる軽鎖および２つの異なる重鎖を一緒にコードする２つのベクター）、または４つの単一ベクター（その２つは異なる軽鎖をコードし、その２つは異なる重鎖をコードする）を使用して、抗体を分泌するための発現系で一時的または安定的のいずれかでトランスフェクトすることができる。抗体が分泌された培地は、多くの一般的に使用される技法のいずれかを使用して精製され得る。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）などの適合した緩衝液で平衡化された、Ｆａｂフラグメント用のＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用され得る。カラムは、非特異的結合構成成分を除去するために洗浄され得る。結合抗体は、例えば、ｐＨ勾配（２０ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液ｐＨ７〜１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ３．０、またはリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４〜１００ｍＭグリシン緩衝液ｐＨ３．０など）によって溶出され得る。抗体画分は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥなどによって検出され得、次いで、プールされてもよい。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技法によって効果的に除去され得る。抗体は、一般的な技法を用いて濃縮および／または滅菌濾過され得る。生成物は、−７０℃ですぐに凍結されてもよく、または凍結乾燥されてもよい。
【表４】
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【表５】
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【表６】
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【００６４】
実施例２：ＥＬＩＳＡによって測定されるヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の両方への結合
本発明の抗体がヒトＰＤ−Ｌ１およびヒトＰＤ−１の両方に結合する能力は、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定され得る。ＰＤ−１結合アッセイについて、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）は、ヒトＰＤ−１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔ．＃１０８６−ＰＤ）で一晩４℃でコーティングされ得る。ウェルは、ブロッキング緩衝液（５％脱脂粉乳を含むＰＢＳ）で２時間ブロックされ得る。ウェルは、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳで３回洗浄され得る。抗ＰＤ−１抗体または対照ＩｇＧ（１００μｌ）が次いで添加され得、プレートは次いで室温で１時間インキュベートされ得る。洗浄後、プレートは、１００μｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆ（ａｂ’）２−ＨＲＰコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓａｅｒｃｈ、ｃａｔ．＃１０９−０３５−０９７）と室温で１時間インキュベートされ得る。プレートは、洗浄され得、次いで１００μｌの３，３’，５，５’−テトラ−メチルベンジジンとインキュベートされ得る。４５０ｎｍでの吸光度は、マイクロプレートリーダーで読み取られ得る。半数効果濃度（ＥＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを用いて計算され得る。
【００６５】
ＰＤ−Ｌ１結合アッセイについて、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）がヒトＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔ＃１５６−Ｂ７）で一晩４℃でコーティングでされ得ることを除いて、同様の手順が適用され得る。
【００６６】
本質的に上記でこの実施例２に記載されるように実施される実験では、抗体ｖ３．２は、０．０８０２ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−１に結合する。対照的に、親ＰＤ−１抗体（ＩｇＧ４−ＰＡＡホモ二量体として）の結合親和性は、０．１３１８ｎＭである。抗体ｖ３．２は、０．４５５４ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。対照的に、親ＰＤ−Ｌ１抗体（ＩｇＧ１−ＥＮホモ二量体として）の結合親和性は、０．４７０２ｎＭである。
【００６７】
実施例３：ＰＤ−１発現細胞とＰＤ−Ｌ１発現細胞との架橋
本発明の抗体がＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１発現細胞を架橋する能力は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１のいずれかを発現するトランスフェクトＣＨＯ細胞を用いたフローサイトメトリー分析によって決定された。簡潔に言えば、ＣＨＯ−ＰＤ１およびＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１過剰発現細胞は、ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル）（ＢＤ  Ｈｏｒｉｚｏｎ）またはＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｄｅｅｐ  Ｒｅｄ（ＣＴＤＲ／Ｔｈｅｒｍｏ）で差別的に標識され得る。ＣＨＯ−ＰＤ１およびＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１細胞は、抗体ｖ３．２（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０９％アジ化ナトリウム中の氷上）などの試験抗体と２時間別々にインキュベートされる。未結合抗体は、洗浄（２００μｌのＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０９％アジ化ナトリウムで２回）によって除去され得る。ＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１細胞は、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０９％アジ化ナトリウム中の氷上で４５μｇ／ｍｌの親ＰＤ−Ｌ１抗体またはｈＩｇＧ１対照と２時間インキュベートされる。ＣＨＯ−ＰＤ１細胞は、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０９％アジ化ナトリウム中の氷上で４５μｇ／ｍｌのＰＤ−１抗体またはｈｕＩｇＧ４−ＰＡＡの親と２時間インキュベートされる。ＣＨＯ−ＰＤ１／抗体ｖ３．２細胞は、ＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１＋親ＰＤ−Ｌ１抗体またはｈＩｇＧ１と２２．５ｕｇ／ｍｌの最終濃度で混合され得る。ＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１／抗体ｖ３．２細胞は、ＣＨＯ−ＰＤ１＋ＰＤ−１抗体またはｈｕＩｇＧ４−ＰＡＡの親と２２．５μｇ／ｍｌの最終濃度で混合され得る。約７２時間のインキュベーション（４℃で）後、細胞は、ＣＦＳＥおよびＣＴＤＲに適したチャネルにおいて（ＨＴＳサンプラーを備える）Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ２０で測定され得る。ｆｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を使用して、二重陽性事象（ＣＦＳＥ＋／ＣＴＤＲ＋）はゲート制御され得、合計事象の％は（２つの複製ウェルについて）計算および報告され得る。あてはめおよび統計は、非線形回帰（可変傾斜、４つのパラメータ）を使用してＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍで生成され得る。
【００６８】
本質的に上記でこの実施例３に記載されるように実施される実験では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体は、フローサイトメトリーによって二重陽性事象として検出され得る細胞架橋を媒介する。ＣＨＯ−ＰＤ１またはＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１細胞への抗体ｖ３．２の（その後の未結合の除去を伴う）結合、およびそれぞれＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１またはＣＨＯ−ＰＤ１細胞との混合は、バックグラウンドに対する二重陽性事象の用量依存的増加（緩衝液のみと比較して最大４倍の増加）を引き起こした。二重陽性事象のこの増加は、一致した非特異的ＩｇＧ対照ではなく、高濃度の過剰な競合ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１  ｍＡｂの添加によってブロックされ、標的抗原発現に対する特異性および依存性を示す。
【００６９】
実施例４：ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ１とＣＤ８０、およびＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１との相互作用のブロッキング
ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１ブロッキングアッセイは、様々な量の抗ＰＤ−１抗体または対照ＩｇＧを固定量のビオチン化ＰＤ−１−Ｆｃ融合タンパク質（１００ｎｇ／ｍＬ）と混合し、室温で約１時間インキュベートすることによって実施することができる。その後、混合物は、ＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ（１００ｎｇ／ウェル）またはＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ（１００ｎｇ／ウェル）でプレコーティングされた９６ウェルプレートに移され、次いで室温でさらに約１時間インキュベートされ得る。洗浄後、ストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲートが添加され得、４５０ｎｍでの吸光度が読み取られ得る。ＩＣ５０は、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１結合またはＰＤ−Ｌ２への結合の５０％阻害に必要な抗体濃度を表す。
【００７０】
同様に、ＰＤ−Ｌ１／Ｂ７−１ブロッキングアッセイは、１μｇ／ｍｌのＢ７−１−Ｆｃでコーティングされたプレート（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔ＃１４０−Ｂ１−１００）を使用して実施され得る。Ｂ７−１へのＰＤ−Ｌ１結合の５０％阻害に必要な抗体濃度（ＩＣ５０）は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いて計算される。
【００７１】
本質的に上記でこの実施例４に記載されるように実施される実験では、抗体ｖ３．２は、中および高濃度でＰＤ−１受容体とＰＤ−Ｌ１リガンドとの間の相互作用をブロックするように見え、低および中濃度で、天然リガンド−受容体相互作用よりも強い親和性で、受容体とリガンドとを二重結合で架橋するように見える。さらに、抗体ｖ３．２は、０．７５ｎＭのＩＣ５０でのＰＤ−Ｌ１とＢ７−１との相互作用、および２．２７ｎＭのＩＣ５０でのＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１との相互作用をブロックするように見えた。
【００７２】
実施例５：混合白血球反応（ＭＬＲ）における抗体のインビトロ機能分析
ＣＤ１４＋単球は、健康なドナーから得られた凍結ヒトＰＢＭＣ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ  ｃａｔ．＃ＰＢ００５Ｆ）からＭＡＣＳビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、ｃａｔ．＃１３０−０９１−１５３）で単離され得る。未成熟樹状細胞（ＤＣ）は、これらの単球を１２ｍｌの完全なＲＰＭＩ−１６４０培地において１０００ＩＵ／ｍｌのｈＧＭ−ＣＳＦおよび５００ＩＵ／ｍｌのｈＩＬ−４の存在下で４日間培養することによって生成され得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、異なる健康なドナーの新鮮なヒトＰＢＭＣ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ  ｃａｔ．＃ＰＢ００２）から陰性選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  １３０−０９６−５３３）によって精製され得る。次いで、２つのタイプの細胞は、９６ウェルプレートの個々のウェルにおいて、ウェルあたり５×１０４個のＣＤ４＋Ｔ細胞および４×１０３個の未成熟ＤＣを含む１００μｌの完全なＡＩＭ−Ｖ培地と混合され得る（Ｅ：Ｔ＝１２．５：１）。８複製（それぞれ３２ｎＭから３：１で段階希釈）においてヒトＩｇＧ１−ＥＮ、親抗ＰＤ−１抗体、親抗ＰＤ−１抗体、親抗体の組み合わせ、または抗体ｖ３．２を含む１００μｌの完全なＡＩＭ−Ｖ培地が添加され得る。３７℃、５％ＣＯ２で７２時間のインキュベーション後、上清は、採取され、次いでＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  ｃａｔ＃ＳＩＦ５０およびＲ＆Ｄ  ｃａｔ＃Ｓ２０５０）でヒトＩＦＮ−γおよびＩＬ−２について測定され得る。
【００７３】
本質的に上記でこの実施例５に記載されるように実施される実験では、同種ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＤＣの共培養への抗体ｖ３．２の添加は、それぞれ、親ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ、親ＰＤ−１  Ａｂ、および２つの組み合わせについての０．０２６ｎＭ、０．０２９ｎＭ、および０．１１５ｎＭと比較して、０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４  Ｔ細胞リンパ球に応答することによって、ＩＦＮ−γの増加した産生をもたらした。同様に、抗体ｖ３．２はまた、ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ、ＰＤ−１  Ａｂ、およびＰＤ−Ｌ１  Ａｂ＋ＰＤ−１  Ａｂの組み合わせ（それぞれ０．０３４ｎＭ、０．０２３ｎＭ、および０．０４６ｎＭ）と比較して、０．０１１ｎＭのＥＣ５０で共培養におけるＩＬ−２の産生を増加させた。結果は、抗体ｖ３．２が、親ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ単独、親ＰＤ−１  Ａｂ単独、またはそれらの組み合わせよりもインビトロでＴ細胞活性化を増強するその能力において優れていることを示す。
【００７４】
実施例６：Ｔ細胞の再活性化
ＰＤ−Ｌ１陽性ヒトＴアクチベーターＣＨＯＫ１細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ  ｐａｒｔ＃ＣＳ１８７１０８）およびＰＤ−Ｌ１陰性ヒトＴアクチベーターＣＨＯＫ１細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ  ｐａｒｔ＃ＣＳ１８７１１０）は、Ｐｒｏｍｅｇａから入手され得る。ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２二重陽性ヒトＴアクチベーターＣＨＯＫ１細胞は、ＰＤ−Ｌ１陽性ヒトＴアクチベーターＣＨＯＫ１細胞に完全長ＰＤ−Ｌ２をコードするベクターをトランスフェクトすることによって構築され得る。これらの細胞は、１００μＬの培地（１０％ＦＢＳ  Ｆ−１２、０．２ｍｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢ、および０．２ｍｇ／ｍｌのＧ４１８）においてウェルあたり４０，０００個の細胞で９６ウェルの白色不透明の組織培養プレートに播種され、一晩３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートされ得る。培地が翌日にアッセイプレートから除去され得、アッセイ緩衝液（２％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ）中の段階希釈試験および対照抗体がウェルあたり４０μｌで添加され得る。ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ  ＮＦＡＴ−ｌｕｃ２／ＰＤ１  Ｊｕｒｋａｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ  ｐａｒｔ＃ＣＳ１８７１０２）は、１．２５×１０６／ｍＬの濃度でアッセイ緩衝液に再懸濁され、ウェルあたり４０μｌでプレートに添加され得る。６時間の誘導後、アッセイプレートは、インキュベーターから取り出され、室温で５〜１０分間平衡化され得る。Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ７９４１）は、製造業者の指示に従って調製され、ウェルあたり８０μｌで添加され得る。次いで、プレートは、５〜１０分室温でインキュベートされ得る。発光は、プレートリーダーで測定され得、データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７を使用してデータを分析され得る。
【００７５】
本質的に上記でこの実施例６に記載されるように実施されるＰＤ−１／ＮＦＡＴレポーターＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞アッセイでは、ＰＤ−Ｌ１陽性ヒトＴ細胞アクチベーターＣＨＯ細胞は、Ｔ細胞活性化を抑制することが観察された。ＰＤ−１  ＡｂまたはＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ＰＤ−Ｌ１−ＰＤ−１媒介抑制を反転させることによってＴ細胞を再活性化した。しかしながら、抗体ｖ３．２は、Ｔ細胞を再活性化するその能力において、親ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ単独（１．９２ｎＭ）、親ＰＤ−１  Ａｂ単独（１．０１ｎＭ）、または親ＰＤ−１  Ａｂおよびの親ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ（０．７９６ｎＭ）の組み合わせのいずれかよりも優れて見えた（ＥＣ５０  ０．１２ｎＭ）。ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２二重陽性ヒトＴ細胞アクチベーターＣＨＯ細胞がこの系において使用された場合、ＰＤ−１陽性レポーターＴ細胞の活性化も抑制された。親ＰＤ−Ｌ１  Ａｂではなく親ＰＤ−１  Ａｂは、Ｔ細胞を再活性化することができた。しかしながら、抗体ｖ３．２は、Ｔ細胞を再活性化するその能力において、親ＰＤ−１  Ａｂ単独（０．９４６ｎＭ）、または親ＰＤ−１  Ａｂおよび親ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの組み合わせ（１．２５１ｎＭ）のいずれかよりも優れている（ＥＣ５０  ０．１８１ｎＭ）。
【００７６】
実施例７：インビボ有効性アッセイ
本発明の抗体の有効性は、同種抗原に対するＴ細胞応答の増強によってモデルにおいて構築された腫瘍を遅延または破壊する能力を評価するために、ヒト免疫細胞で再構成された免疫不全マウスにおける異種移植モデルにおいて試験され得る。全ての動物試験は、動物実験委員会によって承認され、米国農務省および国立衛生研究所の現在の規制および基準に従って実施される。
【００７７】
パートＡ：ＮＣＩ−Ｈ２９２ヒトＮＳＣＬＣ異種移植モデル
Ｊａｃｋｓｏｎ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＮＯＤｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウス（７週齢、雌、７〜８匹のマウス群で）の側腹部に、ＨＢＳＳ（総体積０．２ｍｌ）中の２×１０６個のＮＣＩ−Ｈ２９２細胞、または２×１０６個のＮＣＩ−Ｈ２９２細胞と１×１０６個のヒト新鮮単離ＰＢＭＣの混合物のいずれかを皮下移植する。１日目に開始して、マウスを、ヒトＩｇＧ１−ＥＮ（対照）、親抗ＰＤ−Ｌ１抗体（０．２５ｍｇ／ｋｇ）、もしくは親抗ＰＤ−１抗体（０．２５ｍｇ／ｋｇ）、または親抗体の組み合わせ（それぞれ０．２５ｍｇ／ｋｇ）、あるいは抗体ｖ３．０、ｖ３．２、またはｖ１３８４４（０．５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの週１回、３回用量の腹腔内注射で治療する。グルーミングおよび歩行を含む動物の健康および行動を週に少なくとも２回モニタリングする。体重および腫瘍体積を週に２回測定する。
【００７８】
本質的に上記で実施例７のパートＡに記載されるように実施される実験では、１０ｍｇ／ｋｇでの抗体ｖ３．０、ｖ３．２、およびｖ１３８４４は、体重および臨床観察によってモニタリングされるように十分に許容され、安全であった。ＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞とＰＢＭＣの混合物を移植したマウスでは、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは抗ＰＤ−１抗体、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体および抗ＰＤ−１抗体の組み合わせでの治療は全て、対照分子であるヒトＩｇＧ１−ＥＮでの治療と比較して、腫瘍成長を遅延させた。ＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞とＰＢＭＣの混合物を移植したマウスでは、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑｗのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体（ｖ１３８４４、ｖ３．０、またはｖ３．２）での治療は全て、併用療法（親ＰＤ−Ｌ１抗体＋親ＰＤ−１抗体）（２／８におけるＣＲ）よりも、それぞれ７／８、５／８、および５／８において完全退縮（ＣＲ）でより有効であった。
【００７９】
パートＢ：ＨＣＣ８２７ヒトＮＳＣＬＣ異種移植モデル
Ｊａｃｋｓｏｎ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＮＳＧマウス（７週齢、雌、８匹のマウス群で）の側腹部に、ＨＢＳＳ（総体積０．２ｍｌ）中の１０×１０６個のＨＣＣ８２７細胞を皮下移植する。全血（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離したバルクヒトＴ細胞を、Ｈｕｍａｎ  Ｔ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）を使用して１０日間増殖させ、凍結保存する。移植から４４日目に、Ｔ細胞を解凍し、洗浄し、計数し、ＨＣＣ８２７腫瘍保有マウスに静脈内注入する（マウスあたり０．２ｍｌのＰＢＳ中の３．５×１０６個のＴ細胞）。翌日に開始して、マウスを、それぞれ２ｍｇ／ｋｇでの、ヒトＩｇＧ１−ＥＮ（対照）、親抗ＰＤ−Ｌ１抗体、親抗ＰＤ−１抗体、もしくは親抗ＰＤ−Ｌ１抗体および親抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ、または３つの用量レベル（０．０２、０．２、または２ｍｇ／ｋｇ）での抗体ｖ３．２の、週１回、４週間の腹腔内注射で治療する。５６日目に、マウスに、増殖したＴ細胞（マウスあたり０．２ｍｌのＰＢＳ中の２．５×１０６個のＴ細胞）の２回目の注入を与える。グルーミングおよび歩行を含む動物の健康および行動を週に少なくとも２回モニタリングする。体重および腫瘍体積を週に２回測定する。腫瘍体積を、ＩＭ−Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔと題されたＳＯＰに記載されるように電子ノギスを使用して週に１回測定する。腫瘍体積を、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝π／６＊長さ＊幅２を用いて計算する。
【００８０】
本質的に上記で実施例７のパートＢに記載されるように実施される実験では、全ての３つの用量レベル（０．０２、０．２、または２ｍｇ／ｋｇ）の抗体ｖ３．２は、構築されたＨＣＣ８２７腫瘍モデルにおいて増殖したＴ細胞の存在下で同様の抗腫瘍応答を共有した。さらに、０．０２ｍｇ／ｋｇの抗体ｖ３．２は、腫瘍細胞移植後６９日目に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（２ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．０５）、抗ＰＤ−１抗体（２ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．００１）、および両方の薬剤の組み合わせ（それぞれ２ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．００１）よりも有意に腫瘍成長を遅延した（表２を参照されたい）。
【表７】
0006953612.tif 000008
【００８１】
アミノ酸およびヌクレオチド配列
配列番号１  （ヒトＰＤ−Ｌ１）
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ
配列番号２  （ヒトＰＤ−１）
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ
配列番号３  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号４  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＬＣＶＲ）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶＦＧＧＧＩＫＬＴＶＬＧ
配列番号５  （ＰＤ−１  Ａｂ−ＸａａのＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬＩＩＰＸａａＦＤＴＡＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
Ｘａａ：ＭまたはＳ
配列番号６  （ＰＤ−１  Ｘａａ−ＳのＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ  ＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬ  ＩＩＰＳＦＤＴＡＧＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩ  ＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥ  ＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００８２】
配列番号７  （ＰＤ−１  Ｘａａ−ＭのＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ  ＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬ  ＩＩＰＭＦＤＴＡＧＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩ  ＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥ  ＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８  （ＰＤ−１  ＡｂのＬＣＶＲ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＳＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＨＬＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９  （ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ  ｖ３．２およびｖ１３８４４  ＨＣのＣＨ１ドメインからの領域）
ＳＬＫＳＶ
配列番号１０  （ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ  ＨＣのＣＨ２ドメインからの領域）
ＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳ
配列番号１１  （ＰＤ−１  ｖ１３８４４およびＰＤ−Ｌ１  ｖ３．２のＨＣのＣＨ３ドメインの領域）
ＶＹＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＡＬＶ
配列番号１２  （ＰＤ−１  ｖ３．２およびＰＤ−Ｌ１  ｖ１３８４４のＨＣのＣＨ３ドメインの領域）
ＶＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＬＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＬＴＷ
配列番号１３  （ＰＤ−１  Ａｂ  ｖ３．２およびＰＤ−１  ｖ１３８４４  ＨＣのＣＨ１ドメインからの領域）
ＥＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＴＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＥ
配列番号１４  （ＰＤ−Ｌ１  ｖ３．２およびｖ１３８４４  ＡｂｓのＬＣ定常領域からの領域）
ＡＡＥＳＥＬＳ
配列番号１５  （ＰＤ−１  ｖ３．２およびｖ１３８４４  ＡｂのＬＣ定常領域からの領域）
ＲＶＧＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＲ
配列番号１６  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＨＣＤＲ１）
ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ
【００８３】
配列番号１７  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＨＣＤＲ２）
ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１８  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＨＣＤＲ３）
ＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶ
配列番号１９  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＬＣＤＲ１）
ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ
配列番号２０  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＬＣＤＲ２）
ＹＧＮＳＮＲＰＳ
配列番号２１  （ＰＤ−Ｌ１  ＡｂのＬＣＤＲ３）
ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶ
配列番号２２  （ＰＤ−１  ＡｂのＨＣＤＲ１）
ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ
配列番号２３  （ＰＤ−１  Ａｂ、ｖ３．２のＨＣＤＲ２）
ＬＩＩＰＳＦＤＴＡＧＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号２４  （ＰＤ−１  Ａｂ、ｖ３．０のＨＣＤＲ２）
ＬＩＩＰＭＦＤＴＡＧＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号２５  （ＰＤ−１  ＡｂのＨＣＤＲ３）
ＡＲＡＥＨＳＳＴＧＴＦＤＹ
配列番号２６  （ＰＤ−１  ＡｂのＬＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ
配列番号２７  （ＰＤ−１  ＡｂのＬＣＤＲ２）
ＳＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号２８  （ＰＤ−１  ＡｂのＬＣＤＲ３）
ＱＱＡＮＨＬＰＦＴ
配列番号２９  （ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ  ｖ１３８４４のＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＫＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＬＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００８４】
配列番号３０  （ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ  ｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４のＬＣ）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶＦＧＧＧＩＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＥＳＥＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＡＥＣＳ
配列番号３１  （ＰＤ−１  Ａｂ  ｖ３．２のＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ  ＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬ  ＩＩＰＳＦＤＴＡＧＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩ  ＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥ  ＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＥＡＰＳＳＫＳＴＳＧ  ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＴ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＥＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ  ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ  ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥ  ＬＴＫＮＱＶＳＬＬＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ  ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ  ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３２  （ＰＤ−１  ｖ３．０のＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ  ＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬ  ＩＩＰＭＦＤＴＡＧＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩ  ＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥ  ＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＥＡＰＳＳＫＳＴＳＧ  ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＴ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＥＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ  ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ  ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥ  ＬＴＫＮＱＶＳＬＬＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ  ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ  ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００８５】
配列番号３３  （ＰＤ−１  Ａｂ  ｖ１３８４４のＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ  ＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬ  ＩＩＰＭＦＤＴＡＧＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩ  ＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥ  ＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＥＡＰＳＳＫＳＴＳＧ  ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＴ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＥＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ  ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ  ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＶＹＰＰＳＲＤＥ  ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＡＬＶ  ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ  ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３４  （ＰＤ−１  Ａｂ  ｖ３．２、ｖ３．０、およびｖ１３８４４のＬＣ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ  ＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳ  ＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＫＡＰＫＬＬＩＳＡ  ＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ  ＡＮＨＬＰＦＴＦＧＧ  ＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ  ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ  ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ  ＲＶＧＣＬＬＮＮＦＹ  ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ  ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ  ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ  ＳＴＹＳＬＲＳＴＬＴ  ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ  ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ  ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ  ＲＧＥＣ
配列番号３５  ＰＤ−Ｌ１  ＬＣのＤＮＡ配列
ＣＡＧＴＣＣＧＴＣＣ  ＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣ  ＡＣＣＴＴＣＣＧＣＴ  ＡＧＣＧＧＴＡＣＣＣ  ＣＣＧＧＣＣＡＧＡＧ  ＡＧＴＧＡＣＡＡＴＣ  ＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧ  ＧＴＴＣＣＡＧＣＴＣ  ＴＡＡＣＡＴＴＧＧＣ  ＴＣＴＡＡＣＡＣＴＧ  ＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡ  ＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧ  ＣＣＡＧＧＡＡＣＣＧ  ＣＡＣＣＡＡＡＧＣＴ  ＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴ  ＧＧＡＡＡＣＴＣＡＡ  ＡＴＡＧＧＣＣＴＡＧ  ＣＧＧＧＧＴＧＣＣＡ  ＧＡＣＣＧＧＴＴＴＡ  ＧＣＧＧＡＴＣＴＡＡ  ＡＡＧＴＧＧＧＡＣＴ  ＴＣＡＧＣＴＴＣＣＣ  ＴＧＧＣＡＡＴＴＴＣ  ＴＧＧＡＣＴＧＣＡＧ  ＡＧＴＧＡＧＧＡＣＧ  ＡＡＧＣＴＧＡＴＴＡ  ＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧ  ＴＣＣＴＡＣＧＡＴＡ  ＧＴＴＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＧＧＴＴＣＣＧＴＧ  ＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧ  ＧＧＡＴＣＡＡＧＣＴ  ＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧ  ＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡ  ＡＧＧＴＧＡＧＴＴＣ  ＴＡＧＡＧＧＡＴＣＣ  ＡＴＣＴＧＧＧＡＴＡ  ＡＧＣＡＴＧＣＴＧＴ  ＴＴＴＣＴＧＴＣＴＧ  ＴＣＣＣＴＡＡＣＡＴ  ＧＣＣＣＴＧＴＧＡＴ  ＴＡＴＣＣＧＣＡＡＡ  ＣＡＡＣＡＣＡＣＣＣ  ＡＡＧＧＧＣＡＧＡＡ  ＣＴＴＴＧＴＴＡＣＴ  ＴＡＡＡＣＡＣＣＡＴ  ＣＣＴＧＴＴＴＧＣＴ  ＴＣＴＴＴＣＣＴＣＡ  ＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴ  ＴＣＣＧＴＧＡＣＴＣ  ＴＧＴＴＴＣＣＣＣＣ  ＴＴＣＣＡＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧ  ＣＣＡＡＴＡＡＧＧＣ  ＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧ  ＴＧＣＣＴＧＡＴＴＡ  ＧＣＧＡＣＴＴＣＴＡ  ＴＣＣＴＧＧＡＧＣＴ  ＧＴＧＡＣＡＧＴＣＧ  ＣＡＴＧＧＡＡＧＧＣ  ＣＧＡＴＴＣＴＡＧＴ  ＣＣＡＧＴＧＡＡＡＧ  ＣＡＧＧＧＧＴＣＧＡ  ＧＡＣＣＡＣＡＡＣＴ  ＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣ  ＡＧＡＧＣＡＡＣＡＡ  ＣＡＡＧＴＡＣＧＣＡ  ＧＣＣＧＡＧＴＣＴＧ  ＡＡＣＴＧＡＧＴＣＴ  ＧＡＣＣＣＣＡＧＡＡ  ＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴ  ＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧ  ＴＴＡＴＴＣＡＴＧＣ  ＣＡＧＧＴＧＡＣＣＣ  ＡＴＧＡＧＧＧＣＴＣ  ＣＡＣＡＧＴＧＧＡＧ  ＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧ  ＣＣＣＣＴＧＣＴＧＡ  ＧＴＧＴＡＧＣ
【００８６】
配列番号３６  ＰＤ−１  ＬＣのＤＮＡ配列
ＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＧＧＡ  ＣＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＧＴＡＴＴＴＣＴＡＧＴＴＧＧＣＴＧＧ  ＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＣＡＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＣＣＧＣＣ  ＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＧＣＣＣＴＣＴＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＴＡＧＴＧＧＣＴＣ  ＡＧＧＡＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧ  ＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＧＣＣＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＡ  ＧＧＧＡＣＡＡＡＡＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣＧＴＣＧＣＧＧＣＧＣＣＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＡＴ  ＴＴＴＴＣＣＣＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＴＧＧＧＣＴ  ＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＣＴＡＡＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＣ  ＧＡＴＡＡＣＧＣＡＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＡＡＴＴＣＴＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＧＡＣＴＧＡＡＣＡＧＧＡ  ＣＴＣＡＡＡＡＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＴＣＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧ  ＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＴＡＡＡＧＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＧ  ＣＴＧＡＧＴＴＣＡＣＣＡＧＴＣＡＣＡＡＡＡＴＣＡＴＴＣＡＡＣＡＧＡＧＧＧＧＡＧＴＧＣ
配列番号３７  ＰＤ−Ｌ１  ＨＣのＤＮＡ配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧ  ＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡ  ＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣ  ＣＣＧＧＴＡＧＣＡＧ  ＣＧＴＣＡＡＡＧＴＧ  ＴＣＡＴＧＴＡＡＡＧ  ＣＣＴＣＡＧＧＧＧＧ  ＡＡＣＡＴＴＣＴＣＣ  ＡＧＣＴＡＣＧＣＣＡ  ＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴ  ＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧ  ＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡ  ＡＴＣＡＴＣＣＣＴＡ  ＴＣＴＴＣＧＧＣＡＣ  ＣＧＣＣＡＡＣＴＡＣ  ＧＣＴＣＡＧＡＡＧＴ  ＴＴＣＡＧＧＧＣＣＧ  ＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣ  ＡＣＡＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣ  ＴＡＣＡＧＣＴＴＡＴ  ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴ  ＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧ  ＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣ  ＴＣＧＣＴＣＣＣＣＣ  ＧＡＣＴＡＣＡＧＣＣ  ＣＴＴＡＣＴＡＴＴＡ  ＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧ  ＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧ  ＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣ  ＣＡＣＡＧＴＧＡＣＣ  ＧＴＧＡＧＣＴＣＴＧ  ＣＴＡＧＣＡＣＡＡＡ  ＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣ  ＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣ  ＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣ  ＣＡＧＣＡＡＧＴＣＣ  ＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧ  ＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣ  ＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴ  ＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧ  ＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣ  ＡＧＡＧＣＣＡＧＴＧ  ＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴ  ＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣ  ＴＣＴＧＧＡＧＴＧＣ  ＡＣＡＣＡＴＴＴＣＣ  ＣＧＣＴＧＴＧＣＴＧ  ＣＡＧＴＣＴＴＣＣＧ  ＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣ  ＴＣＴＧＡＡＧＴＣＣ  ＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧ  ＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣ  ＴＴＣＣＣＴＧＧＧＣ  ＡＣＣＣＡＧＡＣＡＴ  ＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡ  ＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣ  ＡＡＧＣＣＴＴＣＣＡ  ＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴ  ＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧ  ＧＴＧＧＡＧＣＣＡＡ  ＡＧＡＧＣＴＧＴＧＡ  ＴＡＡＧＡＣＣＣＡＴ  ＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣ  ＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣ  ＴＣＣＡＧＡＧＧＣＴ  ＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣ  ＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴ  ＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡ  ＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡ  ＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴ  ＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴ  ＡＧＧＡＣＣＣＣＴＧ  ＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧ  ＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧ  ＴＣＣＧＴＧＴＣＣＣ  ＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣ  ＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧ  ＴＴＴＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧ  ＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧ  ＣＡＴＡＡＴＧＣＴＡ  ＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣ  ＴＡＧＧＧＡＧＧＡＧ  ＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡ  ＧＣＡＣＣＴＡＴＣＧ  ＧＧＴＧＧＴＧＴＣＴ  ＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧ  ＴＧＣＴＧＣＡＴＣＡ  ＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧ  ＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧ  ＣＡＡＧＧＴＧＴＣＴ  ＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣ  ＴＧＣＣＣＧＣＴＣＣ  ＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧ  ＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡ  ＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧ  ＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧ  ＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧ  ＴＧＴＡＣＧＴＧＣＴ  ＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣ  ＣＧＧＧＡＣＧＡＧＣ  ＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡ  ＣＣＡＧＧＴＧＴＣＴ  ＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣ  ＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧ  ＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡ  ＴＣＴＧＡＴＡＴＣＧ  ＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＡＧＴＣＣＡＡＴ  ＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡ  ＣＣＴＧＡＣＣＴＧＧ  ＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣ  ＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡ  ＴＧＧＣＴＣＴＴＴＣ  ＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴ  ＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣ  ＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧ  ＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣ  ＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡ  ＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣ  ＴＧＴＴＣＴＧＴＧＡ  ＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＡＡＴ  ＣＡＴＴＡＣＡＣＣＣ  ＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴ  ＧＴＣＡＣＴＧＡＧＣ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧ
【００８７】
配列番号３８  ＰＤ−１  ＨＣのＤＮＡ配列（ｖ３．２）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＧＣＡＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＡＧＣＴＣ  ＣＧＴＧＡＡＧＧＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＧＡＡＣＣＴＴＣＴＣＴＡＧＴＴＡＣＧＣＣＡ  ＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＣＴＧ  ＡＴＣＡＴＴＣＣＡＴＣＴＴＴＴＧＡＴＡＣＣＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＡＣＧ  ＧＧＴＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＧＴＣＧＡＴＧＡＧＴＣＡＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＴＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴ  ＣＡＡＧＣＣＴＧＣＧＧＴＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＧＧＧＣＣＧＡＡ  ＣＡＣＴＣＣＴＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＣＴＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  ＡＧＴＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＡＧＣＡＣＴＡＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＧＡＧＧＣＣＣＣＣＴ  ＣＴＡＧＴＡＡＡＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＣＣ  ＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＣＡＧＣＧＧＡＧＴＣＣＡＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＧＴＣＡＡＧＣＧＧＧＣＴＧＴＡＣＴ  ＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＧＡＣＣ  ＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＣＡＡＡＴＡＣＡＡＡＡＧＴＴＧＡＣＡＡＡＣＧ  ＴＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＧＧ  ＣＧＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴ  ＡＡＡＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＣＣＧＡＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴ  ＧＴＣＴＧＴＧＡＧＴＣＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧ  ＧＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＴＡＡＡＣＣＴＡＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣ  ＴＣＡＡＣＣＴＡＴＣＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴ  ＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＴＣ  ＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＧＣＧＡＡＣＣＡＣＡＧ  ＧＴＣＴＡＣＧＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＴＣ  ＴＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＡＧＴ  ＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＣＴＧＡＣＴＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＴＧ  ＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡ  ＡＡＧＴＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＡＡＴＧＴＣＴＴＴＡＧＴＴＧＴＴＣＡＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧ  ＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＣＧＧＡ��ＡＡ
【００８８】
配列番号３９  ＰＤ−１  ＨＣのＤＮＡ配列（ｖ１３８４４）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＧＣＡＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＴＡＧＣＴＣ  ＣＧＴＧＡＡＧＧＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＧＡＡＣＣＴＴＣＴＣＴＡＧＴＴＡＣＧＣＣＡ  ＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＣＴＧ  ＡＴＣＡＴＴＣＣＡＡＴＧＴＴＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＡＣＧ  ＧＧＴＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＧＴＣＧＡＴＧＡＧＴＣＡＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＴＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴ  ＣＡＡＧＣＣＴＧＣＧＧＴＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＧＧＧＣＣＧＡＡ  ＣＡＣＴＣＣＴＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＣＴＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  ＡＧＴＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＡＧＣＡＣＴＡＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＧＡＧＧＣＣＣＣＣＴ  ＣＴＡＧＴＡＡＡＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＧＣＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＣＣ  ＧＡＴＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＣＡＧＣＧＧＡＧＴＣＣＡＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＧＴＣＡＡＧＣＧＧＧＣＴＧＴＡＣＴ  ＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＧＡＣＣ  ＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＣＡＡＡＴＡＣＡＡＡＡＧＴＴＧＡＣＡＡＡＣＧ  ＴＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＡＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＧＧ  ＣＧＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴ  ＡＡＡＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＣＣＧＡＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴ  ＧＴＣＴＧＴＧＡＧＴＣＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧ  ＧＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＴＡＡＡＣＣＴＡＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣ  ＴＣＡＡＣＣＴＡＴＣＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴ  ＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＴＣ  ＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＴＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＧＣＧＡＡＣＣＡＣＡＧ  ＧＴＣＴＡＣＧＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＴＣ  ＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＴＡＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＡＴＣＧＣＴＧＴＧＧＡＧＴ  ＧＧＧＡＡＴＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＴＡＡＧＡＣＴＡＣＣＣＣＣＣＣＴＧＴＧ  ＣＴＧＧＡＣＡＧＴＧＡＴＧＧＧＴＣＡＴＴＣＧＣＡＣＴＧＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡ  ＡＴＣＴＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＡＡＴＧＴＣＴＴＴＴＣＡＴＧＴＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧ  ＣＡＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＴＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＧＧＡ��ＡＡ
配列番号４０  ＩｇＧ１  ＣＨ  ｗｔ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００８９】
配列番号４１  ｖ３．２  ＰＤ−Ｌ１  ＣＨ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＫＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＹＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＡＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号４２  ｖ１３８４４  ＰＤ−１  ＣＨ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＥＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＴＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＥＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＹＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＡＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号４３  ｖ３．２  ＰＤ−１  ＣＨ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＥＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＴＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＥＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＬＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号４４  ｖ１３８４４  ＰＤ−Ｌ１  ＣＨ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＫＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＬＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００９０】
配列番号４５  ＣＬ  ラムダ−野生型
ＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ配列番号４６  ＣＬ  ＰＤ−Ｌ１
ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＥＳＥＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＡＥＣＳ配列番号４７  ＣＬ  カッパ−野生型
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４８  ＣＬ  カッパ−ＰＤ−１
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＲＶＧＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＲＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４９  （ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ  ｖ３．２のＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＫＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＹＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＡＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００９１】
配列番号５０  ＰＤ−Ｌ１  ＬＣのＤＮＡ配列（コドンバリアント１）
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣ  ＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣ  ＡＣＣＴＴＣＣＧＣＣ  ＴＣＴＧＧＡＡＣＣＣ  ＣＡＧＧＡＣＡＧＡＧ  ＧＧＴＣＡＣＡＡＴＣ  ＡＧＴＴＧＣＴＣＡＧ  ＧＧＡＧＣＴＣＣＴＣ  ＴＡＡＣＡＴＴＧＧＡ  ＡＧＣＡＡＣＡＣＴＧ  ＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡ  ＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧ  ＣＣＴＧＧＧＡＣＣＧ  ＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴ  ＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴ  ＧＧＣＡＡＣＴＣＣＡ  ＡＴＣＧＡＣＣＡＴＣ  ＴＧＧＡＧＴＧＣＣＴ  ＧＡＣＣＧＧＴＴＣＡ  ＧＣＧＧＣＴＣＣＡＡ  ＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣ  ＡＧＴＧＣＴＴＣＡＣ  ＴＧＧＣＡＡＴＴＡＧ  ＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧ  ＴＣＣＧＡＧＧＡＣＧ  ＡＡＧＣＣＧＡＴＴＡ  ＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧ  ＡＧＣＴＡＣＧＡＴＡ  ＧＴＴＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＧＧＣＴＣＣＧＴＧ  ＴＴＣＧＧＣＧＧＧＧ  ＧＡＡＴＣＡＡＧＣＴ  ＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧ  ＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡ  ＡＡＧＣＧＧＣＧＣＣ  ＣＡＧＣＧＴＧＡＣＴ  ＣＴＧＴＴＴＣＣＡＣ  ＣＣＡＧＣＴＣＣＧＡ  ＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧ  ＧＣＣＡＡＴＡＡＧＧ  ＣＴＡＣＣＣＴＧＧＴ  ＣＴＧＴＣＴＧＡＴＴ  ＴＣＣＧＡＣＴＴＣＴ  ＡＣＣＣＣＧＧＧＧＣ  ＴＧＴＧＡＣＡＧＴＣ  ＧＣＡＴＧＧＡＡＧＧ  ＣＣＧＡＴＴＣＴＡＧ  ＴＣＣＴＧＴＧＡＡＡ  ＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧ  ＡＧＡＣＣＡＣＡＡＣ  ＴＣＣＡＴＣＡＡＡＧ  ＣＡＧＡＧＣＡＡＣＡ  ＡＣＡＡＧＴＡＣＧＣ  ＡＧＣＣＧＡＧＡＧＣ  ＧＡＧＣＴＧＴＣＴＣ  ＴＧＡＣＡＣＣＴＧＡ  ＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡ  ＡＧＣＣＡＣＣＧＧＴ  ＣＴＴＡＴＡＧＴＴＧ  ＴＣＡＧＧＴＧＡＣＴ  ＣＡＣＧＡＧＧＧＣＴ  ＣＡＡＣＡＧＴＧＧＡ  ＡＡＡＧＡＣＡＧＴＣ  ＧＣＡＣＣＣＧＣＡＧ  ＡＡＴＧＣＴＣＡ
【００９２】
配列番号５１  ＰＤ−Ｌ１  ＨＣのＤＮＡ配列（コドンバリアント１）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧ  ＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡ  ＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣ  ＣＡＧＧＣＡＧＣＴＣ  ＣＧＴＣＡＡＧＧＴＧ  ＴＣＡＴＧＣＡＡＡＧ  ＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧ  ＧＡＣＴＴＴＣＴＣＴ  ＡＧＴＴＡＣＧＣＴＡ  ＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴ  ＧＡＧＡＣＡＧＧＣＡ  ＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧ  ＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡ  ＡＴＣＡＴＴＣＣＴＡ  ＴＣＴＴＣＧＧＧＡＣ  ＡＧＣＴＡＡＣＴＡＣ  ＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴ  ＴＴＣＡＧＧＧＡＡＧ  ＧＧＴＧＡＣＴＡＴＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＡＴＣＴＡＣＡＡＧ  ＴＡＣＴＧＣＴＴＡＴ  ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴ  ＣＡＡＧＣＣＴＧＡＧ  ＧＡＧＣＧＡＡＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＣＴＣＣＣＣＣ  ＧＡＣＴＡＣＴＣＴＣ  ＣＴＴＡＣＴＡＴＴＡ  ＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧ  ＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧ  ＧＧＣＡＧＧＧＡＡＣ  ＣＡＣＡＧＴＣＡＣＡ  ＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧ  ＣＣＡＧＣＡＣＴＡＡ  ＧＧＧＧＣＣＴＴＣＡ  ＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣ  ＴＧＧＣＡＣＣＣＡＧ  ＴＴＣＡＡＡＡＴＣＡ  ＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧ  ＧＡＡＣＴＧＣＣＧＣ  ＴＣＴＧＧＧＡＴＧＴ  ＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧ  ＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣ  ＡＧＡＧＣＣＡＧＴＣ  ＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴ  ＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧ  ＣＧＣＡＣＴＧＡＣＴ  ＴＣＣＧＧＡＧＴＣＣ  ＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣ  ＡＧＣＣＧＴＧＣＴＧ  ＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧ  ＧＡＣＴＧＴＡＣＴＣ  ＴＣＴＧＡＡＧＡＧＴ  ＧＴＧＧＴＣＡＣＡＧ  ＴＧＣＣＴＴＣＡＡＧ  ＣＴＣＣＣＴＧＧＧＣ  ＡＣＣＣＡＧＡＣＡＴ  ＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡ  ＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣ  ＡＡＧＣＣＴＡＧＴＡ  ＡＴＡＣＴＡＡＧＧＴ  ＴＧＡＣＡＡＡＣＧＴ  ＧＴＧＧＡＡＣＣＡＡ  ＡＧＡＧＣＴＧＴＧＡ  ＴＡＡＡＡＣＴＣＡＴ  ＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣ  ＣＴＴＧＴＣＣＧＧＣ  ＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡ  ＧＣＡＧＧＡＧＧＡＣ  ＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴ  ＣＣＴＧＴＴＴＣＣＡ  ＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡ  ＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴ  ＧＡＴＧＡＴＴＡＧＣ  ＣＧＡＡＣＣＣＣＴＧ  ＡＡＧＴＣＡＣＡＴＧ  ＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧ  ＴＣＣＧＴＧＴＣＴＣ  ＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣ  ＡＧＡＡＧＴＣＡＡＧ  ＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧ  ＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧ  ＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡ  ＡＧＡＣＡＡＡＡＣＣ  ＣＣＧＧＧＡＧＧＡＡ  ＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡ  ＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧ  ＡＧＴＣＧＴＧＴＣＣ  ＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧ  ＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡ  ＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧ  ＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＡＡＴＡＴＡＡＧＴＧ  ＣＡＡＡＧＴＧＴＣＣ  ＡＡＴＡＡＧＧＣＣＣ  ＴＧＣＣＣＧＣＴＣＣ  ＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡ  ＡＣＣＡＴＴＴＣＴＡ  ＡＧＧＣＡＡＡＡＧＧ  ＣＣＡＧＣＣＴＣＧＣ  ＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧ  ＴＣＴＡＣＧＴＧＴＡ  ＴＣＣＴＣＣＡＡＧＣ  ＣＧＧＧＡＣＧＡＧＣ  ＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡ  ＣＣＡＧＧＴＣＴＣＣ  ＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣ  ＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧ  ＧＴＴＴＴＡＣＣＣＴ  ＡＧＴＧＡＴＡＴＣＧ  ＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＡＡＴＣＡＡＡＴ  ＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧ  ＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡ  ＴＡＡＧＡＣＴＡＣＣ  ＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣ  ＴＧＧＡＣＡＧＴＧＡ  ＴＧＧＧＴＣＡＴＴＣ  ＧＣＡＣＴＧＧＴＣＴ  ＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣ  ＡＧＴＧＧＡＣＡＡＡ  ＴＣＴＣＧＧＴＧＧＣ  ＡＧＣＡＧＧＧＡＡＡ  ＴＧＴＣＴＴＴＴＣＡ  ＴＧＴＡＧＣＧＴＧＡ  ＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＡＡＣ  ＣＡＴＴＡＣＡＣＣＣ  ＡＧＡＡＧＴＣＡＣＴ  ＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡ  ＣＣＡＧＧＡＡＡＡ
また、本発明は以下を提供する。
［１］
ｅ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｆ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｇ）配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｈ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびヒトＰＤ−１（配列番号２）に結合する抗体。
［２］
ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号９のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、およびＣＨ３ドメインに配列番号１１または配列番号１２のアミノ酸配列を含む、前記ＨＣ１と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号４のアミノ酸配列を含む前記ＬＣＶＲおよび定常領域に配列番号１４のアミノ酸配列を含む、前記ＬＣ１と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端の順に、配列番号５のアミノ酸配列を含む前記ＨＣＶＲ、ＣＨ１ドメインに配列番号１３のアミノ酸配列、ＣＨ２ドメインに配列番号１０のアミノ酸配列、および前記ＣＨ３ドメインに配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１１のアミノ酸配列を含む、前記ＨＣ２と、
ｄ）Ｎ末端から順に、配列番号８のアミノ酸配列を含む前記ＬＣＶＲ、および定常領域に配列番号１５のアミノ酸配列を含む前記ＬＣ２と、を含み、ただし、配列番号１１のアミノ酸配列が、前記ＨＣ１のＣＨ３ドメインに存在する場合、配列番号１２のアミノ酸配列は、前記ＨＣ２の前記ＣＨ３ドメインに存在するか、または配列番号１２のアミノ酸配列が、前記ＨＣ１の前記ＣＨ３ドメインに存在する場合、配列番号１１のアミノ酸配列は、前記ＨＣ２の前記ＣＨ３ドメインに存在する、［１］に記載の抗体。
［３］
前記ＨＣ１が、前記ＣＨ３ドメインに配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含む前記ＨＣＶＲを含み、前記ＨＣ２が、前記ＣＨ３ドメインに配列番号１２のアミノ酸配列を含む、［２］に記載の抗体。
［４］
前記ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、およびＬＣ２が、それぞれ配列番号４９、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３４のアミノ酸配列を含む、［３］に記載の抗体。
［５］
前記ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、およびＬＣ２が、それぞれ配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、および配列番号３４のアミノ酸配列を含む、［３］に記載の抗体。
［６］
配列番号４９、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞が、［４］に記載の抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
［７］
配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、および配列番号３４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞が、［５］に記載の抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
［８］
抗体が発現するような条件下で［６］または［７］に記載の哺乳動物細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む、抗体を産生するためのプロセス。
［９］
［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体と、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
［１０］
癌を治療することを必要とする患者に、有効量の［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体を投与することを含む、癌を治療する方法。
［１１］
前記癌が、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である、［１０］に記載の方法。
［１２］
前記肺癌が、ＮＳＣＬＣ、小細胞肺癌、または中皮腫である、［１１］に記載の方法。
［１３］
シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤を同時、別々、または順次に投与することをさらに含む、［１０］〜［１２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４］
療法における使用のための、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体。
［１５］
癌の治療における使用のための、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体。
［１６］
前記癌が、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である、［１５］に記載の使用のための抗体。
［１７］
前記癌が、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、または中皮腫である、［１６］に記載の使用のための抗体。
［１８］
シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤との同時、別々、または順次の組み合わせでの使用のための、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体。
［１９］
有効量の［１］〜［５］のいずれか一項に記載の抗体を含む、癌の治療における使用のための薬学的組成物。
［２０］
前記癌が、ホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、腎臓癌、肺癌、膀胱癌、胃および食道癌、結腸直腸癌、肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、膵臓癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、軟部組織肉腫、または多形性膠芽腫である、［１９］に記載の使用のための組成物。
［２１］
前記癌が、ＮＳＣＬＣ、小細胞肺癌、または中皮腫である、［２０］に記載の使用のための組成物。
［２２］
シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソームイリノテカン、ペメトレキセド、セツキシマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、およびデュルバルマブからなる群から選択される１つ以上の抗腫瘍剤との同時、別々、または順次の組み合わせで投与される、［１９］〜［２２］のいずれか一項に記載の組成物。
【配列表】
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