(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の性質をみたす、受託番号：NITE  P-03374で受託されている乳酸菌。
定常状態になるまで培養した乳酸菌液を、植物性飲食物に対して０．４％容量接種したものを３０℃で４８時間培養した時の到達生菌数が１０９ＣＦＵ/ml以上である。
【請求項２】
前記植物性飲食物は、果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュース、果物破砕物及び野菜破砕物からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の乳酸菌。
【請求項３】
以下の（a）(b)(c)のうち少なくともいずれかひとつの性質をみたす、請求項１又は２に記載の乳酸菌。
（a）Lactobacilli MRS Broth培地で定常状態になるまで３０℃で１６時間培養した乳酸菌液を、オレンジ、パインの１００％果汁、トマト、ニンジンの１００％野菜ジュース、野菜ミックスジュースに対してそれぞれ０．４％容量接種したものを３０℃で４８時間培養した時の到達生菌数が、共に１０９ＣＦＵ/ml以上である。
(b)Lactobacilli MRS Broth培地で定常状態になるまで３０℃で16時間培養した乳酸菌液を、イチゴ、ナシ、スイカ、メロン、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツの果物破砕物に対してそれぞれ０．４％容量接種したものを30℃で４８時間培養した時の到達生菌数が共に109CFU/ml以上である。
(c)Lactobacilli MRS Broth培地で定常状態になるまで３０℃で16時間培養した乳酸菌液を、トマト、ニンジン、キャベツ、レタス、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、芽キャベツ、ズッキーニ、にんにく、ゴボウ、レンコン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（シュクライ）（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）の野菜破砕物に対してそれぞれ0.4％容量接種したものを30℃で48時間培養した時の到達生菌数が共に109CFU/ml以上である。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の乳酸菌による発酵により得られた組成物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか1項に記載の乳酸菌、及び、食品素材を含む、組成物。
【請求項６】
前記食品素材は、植物に由来する素材である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記植物に由来する素材は、植物の葉、根、茎、花、つぼみ、果実、それらの抽出液、それらの破砕物、および/またはそれらの組み合わせである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記植物に由来する素材は、果物、野菜、それらの抽出液、それらの破砕物、および/またはそれらの組み合わせである、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物は、発酵物である、請求項４〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１〜３の何れかに記載の乳酸菌、または請求項４〜９のいずれか１項に記載の組成物を含む、飲食物。
【請求項１１】
食品素材に、請求項１〜３のいずれかに記載の乳酸菌を接種し、発酵させることを特徴とする組成物の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、様々な果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュース、果物破砕物、野菜破砕物の発酵にすぐれたラクトバチルス・プランタルムに属する新規乳酸菌、上記乳酸菌を含有する飲食物、上記乳酸菌により得られた発酵物、当該発酵物を含有させた飲食物、及び上記乳酸菌を用いた発酵物の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの腸内には１００兆個以上の菌が存在し、その種類も１０００種類以上あるといわれている。腸内環境の維持や改善効果をもつ菌種は、善玉菌とよばれる乳酸菌である。乳酸菌は腸内で乳酸を生産することによって大腸菌や病原菌の増殖を抑制して腸内環境を改善するだけでなく、便通の改善、免疫力の上昇による感染防御、抗アレルギー作用など生理的効果も示す。
【０００３】
このことから最近では、腸は第2の脳とよばれ、腸内環境を良好に保つことが身体全体の健康維持につながると言われてきている。
【０００４】
通常の日々の生活においても乳酸菌の摂取は重要であるが、ことにコロナ禍の今、日々乳酸菌を摂取して腸内環境を良好に保ち、免疫力を上昇させることが重要である。
【０００５】
しかしながら乳酸菌は、体内に摂取されて腸内で機能した後、体内に留まることなく体外に排出される。
【０００６】
こうしたことから、毎日乳酸菌を摂取することが腸内環境を良好に保つために必要となってくる。
【０００７】
従来日々乳酸菌を摂取するには動物性乳酸菌を使って乳を発酵させた乳酸菌飲料や発酵乳を摂取することが一般的になっている。
【０００８】
このような乳酸発酵物に使用されている乳酸菌は、乳原料の発酵に適した動物性乳酸菌で、具体的にはラクトコッカス・ラクティス、ラクトバチルス・ブルガリカス、ラクトバチルス・アシドフィリス、ストレプトコッカス・サーモフィリスなどである。
【０００９】
その一方、乳製品に対するアレルギーや乳製品によって消化不良を引き起こす人々が存在しており、そうした人々は乳酸菌を食品から効果的に摂取することが難しいという現状があり、乳製品以外を発酵させ効果的に乳酸菌を摂取することができる新しい乳酸菌株の開発が必要となってくる。
【００１０】
最近、植物成分を発酵させることが可能な植物性乳酸菌が注目されている。植物性乳酸菌は、植物成分を発酵させるのみならず、酸性領域で生存、増殖することができるため、生きて腸まで届き、直接腸内環境の維持や改善効果をもつといわれている。これまでに乳原料以外を原料として植物成分を発酵できる乳酸菌が単離されており、豆乳を発酵できる植物性乳酸菌としてラクトバチルス・プランタルムに属する乳酸菌が知られている。たとえばラクトバチルス・プランタルムHOKKAIDO株は、豆乳を発酵基質として発酵させると凝固して固形のヨーグルト状になり、このヨーグルトは、免疫機能を刺激し、ストレスマーカーを減少させる（非許文献１）。また最近では豆乳を短時間で発酵凝固させるストレプトコッカス・サリバリウス  サクラ２も報告されている（特許文献１）。
【００１１】
しかしながら豆乳発酵製品の豆くささや豆乳に対するアレルギーの人も少なからず存在していることから、タンパク質含有量が低くアレルギーをひきおこしにくい植物性乳酸菌による第３の発酵原料として果物や野菜を発酵基質とする発酵物の開発が望まれていた。
【００１２】
ことに多種類の果物や野菜を発酵することができれば、ある特定の果物や野菜が苦手だったりアレルギーがあったりしても、他の果物や野菜の乳酸菌発酵物が摂取できるという選択肢が広がり、ほとんどすべての人々がなんらかの形で植物性乳酸菌発酵物を摂取することができるようになる。
【００１３】
これまで果物や野菜を発酵する能力に優れた乳酸菌としてはラクトバチルス・プランタルムに属する乳酸菌が知られている。例えばラクトバチルス・プランタルムATCC１４４３１は、濃縮人参汁を6倍希釈したものを発酵基質として、107CFU/ml以上の生菌数に到達することが知られている（特許文献２）。
【００１４】
また果汁での発酵に適した乳酸菌として、ラクトバチルス・プランタルムYIT０１３２、（ＦＥＲＭ  ＢＰ-１１３４９），YIT０１４８（FERM BP-11350）が知られている。
【００１５】
これらの乳酸菌は、グレープおよびオレンジ１００％果汁を発酵基質とした時の到達生菌数が,共に
１０８CFU/ml以上になることが知られている。（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開2020-61977号公報
【特許文献２】特開2001−252012号公報
【特許文献３】国際公開第2011/115114号
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Nishimura, et al. J Tradit Compliment Med.  2015  Aug 21；6（3）：275-80.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
しかしながら、これまで乳酸菌発酵物の製造に用いられていた上記乳酸菌では、果物や野菜を発酵基質とした場合、プロバイオティクスとしての効果を得るための高い到達生菌数を達成することができなかった。
【００１９】
また、これらのラクトバチルス・プランタルムに属する菌株は様々な果物や野菜に対して、常に高い到達生菌数濃度が得られるものではなかった。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
従って、本発明は、ラクトバチルス・プランタルムに属し、様々な果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュース、果物破砕物、野菜破砕物といった植物を発酵基質とした場合であっても高い到達生菌数となる優れた発酵能を有する新規な乳酸菌やこれを含有する飲食物等を提供することを課題とする。
【００２１】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ヤエザクラの花から分離したラクトバチルス・プランタルムに属する乳酸菌が、１００％果汁、１００％野菜ジュース、野菜ミックスジュースだけでなく、果物破砕物、野菜破砕物を発酵基質とした場合でも、到達生菌数がプロバイオティクスとしての機能を発揮することが可能な109CFU/ml以上になることを見出し、本発明を完成させた。
【００２２】
すなわち本発明は、以下の性質をみたす乳酸菌である。
定常状態になるまで培養した乳酸菌液を、植物性飲食物に対して０．４％容量接種したものを３０℃で４８時間培養した時の到達生菌数が１０９ＣＦＵ/ml以上である。
【００２３】
また本発明は、オレンジ、パインの１００％果汁、トマト、ニンジンの１００％野菜ジュース、野菜ミックスジュースを発酵基質とした時の到達生菌数が共に109CFU/ml以上であるラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum） に属する乳酸菌である。
【００２４】
また本発明は、イチゴ、ナシ、スイカ、メロン、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツの果物破砕物を発酵基質とした時の到達生菌数が共に109CFU/ml以上であるラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）に属する乳酸菌である。
【００２５】
さらに、本発明は、トマト、ニンジン、キャベツ、レタス、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、芽キャベツ、ズッキーニ、にんにく、ゴボウ、レンコン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）の野菜破砕物を発酵基質とした時の到達生菌数が共に１０９CFU/ml以上であるラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）に属する乳酸菌である。
【００２６】
また、本発明は、上記乳酸菌による食品素材の発酵により得られた発酵物である。
【００２７】
さらに、本発明は、上記発酵物を含有する飲食物である。
【００２８】
またさらに、本発明は、上記乳酸菌を含有する飲食物である。
【００２９】
また、本発明は、食品素材に、上記乳酸菌を接種し、発酵させることを特徴とする発酵物の製造方法である。
【発明の効果】
【００３０】
本発明の乳酸菌は、さまざまな植物を発酵させることができ、さまざまな発酵基質をベースとするプロバイオティクスに用いられる飲料などの飲食物を調整することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、本発明の実施形態について説明する。以下の実施形態は、例示であって、本発明の範囲は、以下の実施形態で示すものに限定されない。なお、同様な内容については繰り返しの煩雑さをさけるため、摘示説明を省略する。
【００３２】
定義
便宜上、本願で使用される特定の用語は、ここに集めている。別途規定されない限り、本願で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当事者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。文脈で別途明記されない限り、単数形「a」,「an」及び「the」は複数の言及を含む。
【００３３】
本発明で示す数値範囲及びパラメーターは、近似値であるが、特定の実施例に示されている数値は可能な限り正確に記載している。しかしながら、いずれの数値も本質的に、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含んでいる。また、本明細書で使用する「約」という用語は、一般に、所与の値又は範囲の１０％、５％、１％、又は０，５％以内を意味する。或いは、用語「約」は、当業者が考慮する場合、許容可能な標準誤差内にあることを意味する。
【００３４】
本発明の「野菜」とは、食用の植物のことを意味し、植物の葉、根、茎、花、つぼみ、果実などの食することができる部位が含まれる。
【００３５】
本発明の「破砕物」とは、果物や野菜などの植物をそのままあるいは水を加えてジューサーなどにかけて粉砕したもので、固形成分と液体成分とが混合した状態のものを意味する。
【００３６】
本発明の「発酵物」とは、乳酸菌を用いて発酵したものを意味し、食品素材などの発酵基質を原料として発酵したものが含まれる。
【００３７】
本明細書において１００％果汁、１００％野菜ジュースとは、JAS法における果汁、野菜ジュース飲料品質表示基準において１００％ジュースの基準をみたすものを示す。
【００３８】
果汁の製法としては、果汁をしぼったものを加熱後冷凍保存する「ストレート果汁」、あるいは加熱により濃縮した後、冷凍保存する「濃縮還元果汁」のいずれでもよい。またJAS法における果汁飲料品質表示基準において１００％ジュースの基準をみたすものであれば、糖類、香料、酸化防腐剤などを添加してもよい。
【００３９】
野菜ミックスジュースは「充実野菜（伊藤園社製）」「１日分の野菜（伊藤園社製）」「きになる野菜（ヤクルト本社製）」「野菜１日これ１本（カゴメ社製）」「カゴメ野菜生活（カゴメ社製）」「４８種類の濃い野菜（キリン社製）」を使用した。
【００４０】
発明を実施するための形態
本実施形態にかかる乳酸菌は、以下の性質をみたす。
定常状態になるまで培養した乳酸菌液を、植物性飲食物に対して０．４％容量接種したものを３０℃で４８時間培養した時の到達生菌数が１０９ＣＦＵ/ml以上である。
【００４１】
到達生菌数は、1.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、1.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、2.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、2.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、3.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、3.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、4.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、4.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、5.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、5.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、6.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、6.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、7.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、7.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、8.0×１０９ＣＦＵ/ml以上、8.5×１０９ＣＦＵ/ml以上、9.0×１０９ＣＦＵ/ml以上または9.5×１０９ＣＦＵ/ml以上であってもよい。
【００４２】
植物性飲食物は、果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュース、果物破砕物、野菜破砕物からなる群より選択される少なくとも１つであってもよい。果汁は、１００％果汁であってもよく、１００％未満果汁であってもよい。野菜ジュースは、１００％野菜ジュースであってもよく、１００％未満野菜ジュースであってもよい。
【００４３】
果汁としては、特に限定されないが、グレープフルーツ、オレンジ、パイン、アップルなどの果汁が好ましく、特にオレンジ、パインの果汁が好ましい。
【００４４】
野菜ジュースとしては、特に限定されないが、トマト、ニンジン、などの野菜ジュースが好ましい。
【００４５】
果物破砕物の原料となる果物は、特に限定されないが、リンゴ、イチゴ、ナシ、スイカ、メロン、キウイ、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツなどの果物が好ましく、特にイチゴ、ナシ、スイカ、メロン、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツの果物が好ましい。
【００４６】
野菜破砕物の原料となる野菜は特に限定されないが、トマト、ニンジン、キャベツ、レタス、キュウリ、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、ブロッコリー、アスパラガス、ミズナ、シュンギク、ホウレンソウ、コマツナ、チンゲンサイ、ナノハナ、パセリ、セリ、豆苗、芽キャベツ、ゴーヤ、ズッキーニ、ショウガ、ニンニク、ゴボウ、レンコン、クレソン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）などの野菜が好ましく、特にトマト、ニンジン、キャベツ、レタス、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、芽キャベツ、ズッキーニ、ニンニク、ゴボウ、レンコン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）の野菜が好ましい。
【００４７】
乳酸菌液は、Lactobacilli MRS Broth培地での培養で取得してもよい。培養条件は、例えば、３０℃で１６時間である。
【００４８】
ある実施形態において、上記乳酸菌は、以下の（a）(b)(c)のうち少なくともいずれかひとつの性質をみたす。
（a）Lactobacilli MRS Broth培地で定常状態になるまで３０℃で１６時間培養した乳酸菌液を、オレンジ、パインの１００％果汁、トマト、ニンジンの１００％野菜ジュース、野菜ミックスジュースに対してそれぞれ０．４％容量接種したものを３０℃で４８時間培養した時の到達生菌数が、共に１０９ＣＦＵ/ml以上である。
(b)Lactobacilli MRS Broth培地で定常状態になるまで３０℃で16時間培養した乳酸菌液を、イチゴ、ナシ、スイカ、メロン、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツの果物破砕物に対してそれぞれ０．４％容量接種したものを30℃で４８時間培養した時の到達生菌数が共に109CFU/ml以上である。
(c)Lactobacilli MRS Broth培地で定常状態になるまで３０℃で16時間培養した乳酸菌液を、トマト、ニンジン、キャベツ、レタス、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、芽キャベツ、ズッキーニ、にんにく、ゴボウ、レンコン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（シュクライ）（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）の野菜破砕物に対してそれぞれ0.4％容量接種したものを30℃で48時間培養した時の到達生菌数が共に109CFU/ml以上である。
【００４９】
果物破砕物は以下のように調整した。
リンゴ破砕物はリンゴ２００ｇに水５０ml、イチゴ破砕物は、イチゴ１００ｇ、ナシ破砕物は、ナシ１００ｇ、スイカ破砕物は、スイカ１００ｇ、メロン破砕物は、メロン１００ｇ、キウイ破砕物は、キウイ２００ｇ、マンゴー破砕物は、マンゴー２００ｇに水１００ml、パパイヤ破砕物は、パパイヤ破砕物２００ｇに水１００ml、レッドドラゴンフルーツ破砕物は、レッドドラゴンフルーツ１５０ｇをそれぞれジューサーで処理したものを８５℃で３０分間処理して滅菌して調整した。
【００５０】
野菜破砕物は以下のように調整した。
トマト破砕物は、トマト２００ｇ、ニンジン破砕物はニンジン１００ｇに水１００ml、キャベツ破砕物は、キャべツ２００ｇに水１００ml、レタス破砕物は、レタス２００ｇ、キュウリ破砕物は、キュウリ２００ｇ、タマネギ破砕物はタマネギ１５０ｇ、ナガネギ破砕物は、ナガネギ２００ｇに水１００ml、セロリ破砕物は、セロリ１００ｇに水５０ml、ハクサイ破砕物は、ハクサイ１５０ｇに水１５０ml、ダイコン砕砕物は、ダイコン２００ｇに水１００ｍｌ、カブ破砕物は、カブ１００ｇに水５０ml、赤カブ破砕物は、赤カブ１００ｇに水１００ｍｌ、ピーマン破砕物は、ピーマン１５０ｇ、黄パプリカ破砕物は、黄パプリカ２００ｇ、ブロッコリー破砕物は、ブロッコリー１００ｇに水１００ml、アスパラガス破砕物は、アスパラガス２００ｇに水１００ml、ミズナ破砕物は、ミズナ１５０ｇに水１５０ml、シュンギク破砕物は、シュンギク１５０ｇに水１５０ml、ホウレンソウ破砕物は、ホウレンソウ２００ｇ、コマツナ破砕物は、コマツナ２００ｇ、チンゲンサイ破砕物は、チンゲンサイ１００ｇに水１００ml、ナノハナ破砕物は、ナノハナ１００ｇに水１５０ml、パセリ破砕物は、パセリ１００ｇに水１００ml、セリ破砕物は、セリ７０ｇに水７０ml、豆苗破砕物は、豆苗６０ｇに水６０ml、芽キャベツ破砕物は、芽キャベツ１００ｇに.水１５０ml、ゴーヤ破砕物は、ゴーヤ２００ｇに水５０ml、ズッキーニ破砕物は、ズッキーニ１００ｇに水５０ml、ショウガ破砕物は、ショウガ１００ｇに水５０ml、ニンニク破砕物は、ニンニク１００ｇに水１００ml、ゴボウ破砕物は、ゴボウ１００ｇに水１００ml、レンコン破砕物は、レンコン１００ｇに水１００ml、クレソン破砕物は、クレソン１００ｇに水１００ml、大和まな破砕物は、大和まな７０ｇに水７０ml、しろ菜破砕物は、しろ菜１００ｇに水１００ml、宇陀金ごぼう破砕物は、宇陀金ごぼう１００ｇに水１００ml、祝蕾破砕物は、祝蕾１００ｇに水５０ml、片平あかね砕砕物は、片平あかね１５０ｇに水１５０ｍｌ、をそれぞれジューサーで処理したものを、８５℃で３０分間処理して滅菌して調整した。
【００５１】
また本明細書において到達生菌数とは、前培養として１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌したLactobacilli MRS Broth(Difco社製)培地で種菌を３０〜３７℃で１６時間定常状態になるまで培養した後、０．４％容量の前培溶液を１００％果汁などの発酵基質に接種し、４８時間、３０℃または３７℃で培養後の生菌数を示す。なお生菌数の測定はMRS寒天平板を用いて行なう。また、到達生菌数を表す単位であるCFU/mlは、培養プレートにおいて１ｍｌ接種した時のコロニー形成能を示す。
【００５２】
ある実施形態において、上記乳酸菌は、ラクトバチルス属である。別の実施形態において上記乳酸菌はラクトバチルス・プランタルムに属する。別の実施形態において上記乳酸菌はラクトバチルス・プランタルム  サクラ６８に属する。
【００５３】
更に別の実施形態において、上記乳酸菌は、受託番号：NITE  P-03374で寄託されている乳酸菌である。
【００５４】
ある実施形態において、上記乳酸菌は、上記条件で生育可能な変異株も含まれる。
【００５５】
本発明乳酸菌の生理効果を得るために、例えば固体または液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬品製剤の形態としたものに利用することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散在、カプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられる。これらの製剤は製剤上の常套手段により調整することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、賦形剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００５６】
また、本発明乳酸菌は、上記のような製剤とするだけでなく、固形状、液状等のいずれの形態の飲食物に含有させることもできる。飲食物に含有させる場合は、そのまま、または種々の栄養成分と共に含有せしめればよい。具体的に本発明乳酸菌を飲食物に含有させる場合は、飲食物として使用可能な添加物を適宜使用し、慣用の手段を用いて食用に適した形態、すなわち、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペースト等に成形すればよい。飲食物の種類としては、例えば、ハム、ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ、ちくわ等の水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳等の食品や、水、果汁、牛乳、清涼飲料、茶飲料等の飲料が挙げられる。なお、飲食物には、動物の飼料も含まれる。
【００５７】
本実施形態において、上記乳酸菌による発酵により得られた組成物も提供される。本実施形態において、上記乳酸菌、及び、食品素材を含む、組成物も提供される。上記食品素材は、植物に由来する素材であってもよい。上記植物に由来する素材は、植物の葉、根、茎、花、つぼみ、果実、それらの抽出液、それらの破砕物、および/またはそれらの組み合わせであってもよい。上記植物に由来する素材は、果物、野菜、それらの抽出液、それらの破砕物、および/またはそれらの組み合わせであってもよい。
【００５８】
本実施形態において、上記乳酸菌、または上記組成物を含む、飲食物も提供される。本実施形態において、食品素材に、上記乳酸菌を接種し、発酵させることを特徴とする組成物の製造法も提供される。
【００５９】
本発明乳酸菌による食品素材の発酵により得られた発酵物、その発酵物を含む飲食物及び本発明乳酸菌を含む飲食物
本実施形態の発酵物は、本発明乳酸菌による食品素材の発酵により得られる。また、本実施形態の飲食物は、その発酵物を含む。本実施形態において、食品素材は、食品に用いられるものであれば特に限定されず、植物の葉、根、茎、花、つぼみ、果実、それらの抽出液（例えば、果汁）、それらの破砕物などが挙げられ、特に本発明乳酸菌により発酵できるものが好ましく、例えば、果物、野菜及び豆乳があげられる。本発明乳酸菌を用いて発酵果汁飲料を製造する場合には、まず使用する果汁に適した条件で殺菌した果汁に、本発明乳酸菌を単独または他の微生物と同時に接種培養し、これを均質化処理することで発酵果汁を得ることができる。果物、野菜又は豆乳の場合も、果汁と同様の方法により、発酵野菜ジュース、発酵果物破砕物、発酵野菜破砕物、発酵豆乳を得ることができる。
【００６０】
これら発酵物を未発酵果汁、未発酵野菜ジュース、未発酵果物破砕物、未発酵野菜破砕物や、アルコール等と混合し、さらに各種栄養素、ビタミン、フレーバー等を添加して最終製品とすることも可能である。これらは、本発明乳酸菌の生菌の状態で含有するので好ましい。
【００６１】
上記発酵果汁飲料の原料となる果汁としては、特に限定されないが、グレープフルーツ、オレンジ、パイン、アップルなどの果汁が好ましく、特にオレンジ、パインの果汁が好ましい。
【００６２】
上記発酵野菜ジュースの原料となる野菜ジュースとしては、特に限定されないが、トマト、ニンジン、などの野菜ジュースが好ましい。
【００６３】
上記発酵果物破砕物の原料となる果物は、特に限定されないが、リンゴ、イチゴ、ナシ、スイカ、メロン、キウイ、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツなどの果物が好ましく、特にイチゴ、ナシ、スイカ、メロン、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツの果物が好ましい。
【００６４】
上記発酵野菜破砕物の原料となる野菜は特に限定されないが、トマト、ニンジン、キャベツ、レタス、キュウリ、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、ブロッコリー、アスパラガス、ミズナ、シュンギク、ホウレンソウ、コマツナ、チンゲンサイ、ナノハナ、パセリ、セリ、豆苗、芽キャベツ、ゴーヤ、ズッキーニ、ショウガ、ニンニク、ゴボウ、レンコン、クレソン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）などの野菜が好ましく、特にトマト、ニンジン、キャベツ、レタス、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、芽キャベツ、ズッキーニ、ニンニク、ゴボウ、レンコン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）の野菜が好ましい。
【００６５】
本実施形態の飲食物は、溶液、固形状、粉末等、経口摂取可能な形態であればよく、特に限定するものではない。具体例としては、飲料（乳酸飲料、果汁飲料、豆乳飲料、野菜飲料、茶飲料、炭酸飲料、栄養飲料、スポーツ飲料、コーヒー飲料、スープ、アルコール飲料等）、乳製品（ヨーグルト、チーズ、バター、アイスクリーム等）、小麦粉製品（パン、麺、ケーキミックス等）、菓子（チョコレート、クッキー、キャンデー、キャラメル、ゼリー、ガム、和菓子等）、油脂食品（ドレッシング。マヨネーズ、クリーム等）、調味料（ソース、トマトケチャップ、酢、風味調味料、つゆのもと等）、即席食品（即席麺、即席スープ、味噌汁、缶詰、レトルト食品等）、サプリメント（錠剤、シロップ、顆粒剤、カプセル剤、速崩剤等）が挙げられる。
【００６６】
本実施形態の乳酸菌は、従来のプロバイオティクスに用いられる乳酸菌と同様に各種の用途に利用し、これを摂取することにより整腸作用、抗菌作用等の生理効果を期待できる。
【００６７】
本実施形態の乳酸菌をヒトや動物が摂取する場合、量に厳格な制限はないが、その好適な摂取量は生菌数として１回あたり１０６ＣＦＵから１０１４ＣＦＵが好ましい。また、本実施形態の乳酸菌は継続的に摂取することが好ましいが、これに限定されることはなく、例えば隔週、隔日のように摂取間隔を開けた場合や短い摂取期間でもよい。
【００６８】
上記飲食物および発酵物には、各種栄養素、各種ビタミン、各種ミネラル、甘味料、乳化剤などの安定剤、増粘剤、食物繊維、フレーバー等の任意成分を配合することができる。
【００６９】
栄養素としては、DHA EPA、アセチルグルコサミン、カテキン、ウコン、プロポリス、アガリスク、β―クリプトキサンチン、ケルセチン、アントシアニン等が挙げられる。各種ビタミンとしては、ビタミンＡ，ビタミンＢ１，ビタミンＢ２，ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２，ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、葉酸、ニコチンアミド、ビオチン、ビタミンＫが挙げられる。各種ミネラルとしては、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄、ナトリウム、カリウム等が挙げられる。甘味料としては、ショ糖、グルコース、フルクトース、トレハロース、キシロース、ラクトース、パラチノース、果糖ブドウ糖液糖、麦芽糖、果糖、蜂蜜などの糖類、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、ラクチトール、パラチニット、アスパルテーム、スクラロース、ステビア、アセスルファムＫ等の高甘味度甘味料が挙げられる。酸味料としてはクエン酸、乳酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、酪酸等があげられる。フレーバーとしてはオレンジ系、シトラス系、ベリー系、アップル系、ミント系、グレープ系、アプリコット系、シソ系、レモン系、グレープフルーツ系、ピーチ系、バナナ系、トロピカル系、ハーブ系、コーヒー系、お茶系等があげられる。
【００７０】
また、本実施形態の発酵物又は飲食物の製造の際には、本実施形態の乳酸菌以外の菌を併用することもできる。このよう菌類としては、例えばビフィッドバクテリウム、ビフィダム、ビフィッドバクテリウム、ラクティス、ビフィッドバクテリウム、ロンガム等のビフィッドバクテリウム属細菌、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ブレビィス、ラクトバチルス・ケフィア、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・ブルガリカス、ラクトバチルス・デルブルキィ、ラクトバチルス・ペントサス、ラクトバチルス・プランタルム等のラクトバチルス属細菌、ストレプトコッカス・サーモフィリス、ストレプトコッカス・サリバリウス等のストレプトコッカス属細菌、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシス・ラクティス、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシス・クレモリス等のラクトコッカス属細菌、エンテロコッカス・フェカリス等のエンテロコッカス属細菌、サッカロマイセス・セルビシエ、キャンデイダ・ケフィア等のサッカロマイセス属、キャンディダ属等に属する酵母があげられる。
【００７１】
以下、実施例をあげて本発明の内容を詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら制約されるものではない。
【実施例】
【００７２】
実施例１
実施例の乳酸菌の単離及び培養条件
ラクトバチルス・プランタルムに属する新規乳酸菌は、以下に示す酒粕濾過培地を用いて単離した。８００mlの蒸留水に２００ｇの酒粕を加え、弱火にかけ、よく攪拌して沸騰させて溶かす。火から下ろして５０℃ぐらいになるまで冷まし、キッチンペーパーで濾過し、Brixを５、０に調整して１２１℃で１５分間オートクレーブし、酒粕濾過培地として使用した。ヤエザクラの花に付着した菌類を酒粕濾過培地に接触させ、３０℃で２４時間培養し、生育した菌を単離した。単離後、１２１℃で１５分間オートクレーブしたLactobacilli MRS Broth(Difco社製)培地で３０℃で２４時間の条件において培養可能であった菌を以後の実験で用いた。かかる菌は、Lactobacilli MRS Broth(Difco社製)培地において円形で白色のコロニーを形成した。顕微鏡観察において、上記菌は、桿菌で運動性はなく、芽胞は形成しなかった。（不図示）。上記菌は、グラム染色試験において陽性を示し、カタラーゼ活性試験において活性を示さず、またガス発生が観察されなかった。（不図示）。また上記菌は、嫌気条件で増殖するが、空気存在下でも増殖することが確認されている。
【００７３】
16S rDNA塩基配列を用いた菌種同定
上記菌の菌種同定を16Ｓ  rDNA塩基配列に基づいて以下の方法で行った。ＭＲＳ培地を用いて３０℃で２４時間培養した培養用菌液を遠心分離した菌体ペレットから抽出したＤＮＡを鋳型として16S rDNA配列の全長をＰＣＲ法によって増幅し、増幅産物の塩基配列をDye Terminater法により決定した。その塩基配列を配列番号１に示す。得られた塩基配列をデータベースで検索して菌種を同定した。
【００７４】
その結果、前記乳酸菌の１６S rDNAの塩基配列は、ラクトバチルス・プランタルムおよびラクトバチルス・ペントサスの１６S rDNA塩基配列と９９．２％同一であることが確認できたが、ラクトバチルス・ペントサスはＤ−キシロースを資化できるのに対し、前記乳酸菌はＤ−キシロースを資化できないことから、上記乳酸菌は、ラクトバチルス・プランタルムに属する乳酸菌の新株と同定し、ラクトバチルス・プランタルム  サクラ６８と命名して（以後実施例１の乳酸菌）、２０２１年１月２９日に日本国千葉県木更津かずさ鎌足２−５−８に住所を有する独立行政法人製品評価基盤機構特許微生物寄託センターに寄託された。受託番号はNITE  P-03374である。
【００７５】
実施例の乳酸菌の糖資化性を表１(糖の発酵性状：ＡＰＩ５０ＣＨによる測定)に示す。
【００７６】
【表１】
0006921350.tif 000002
【００７７】
実施例２
ラクトバチルス・プランタルムによる果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュースの発酵試験
（１）菌株
比較例１の乳酸菌（対照群）としてラクトバチルス・プランタルムに属する２株YIT0132株(FERM BP-11349)（比較例１−１）、YIT0148(FERM BP-11350)（比較例１−２）を使用した。
【００７８】
（２）種菌と培養
比較例１−１、１−２の乳酸菌は、Lactobacilli  MRS Broth(Difco社製)を１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した後接種し、空気存在下で口をゆるめて３７℃で１６時間定常状態なるまで培養した。
【００７９】
実施例１の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタルム  サクラ６８）は、Lactobacilli MRS Broth(Difco社製)を１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した後接種し、空気存在下で口をゆるめて３０℃で１６時間、定常状態になるまで培養した。
【００８０】
（３）果汁、野菜ジュース、ミックス野菜ジュースでの増殖性
オレンジ（ヤクルト本社製）、オレンジ（キリン社製）、パイン（ヤクルト本社製）、パイン（キリン社製）、アップル（ヤクルト本社製）、アップル（キリン社製）、グレープフルーツ（キリン社製）の１００％果汁、ニンジン（キャロット１００、伊藤園社製）、トマト（高リコピン、カゴメ社製）、トマト（プレミアム、カゴメ社製）、トマト（理想のトマト、伊藤園社製）、トマト（完熟トマト、デルモンテ社製）、トマト（無塩無添加、デルモンテ社製）の１００％野菜ジュース、野菜ミックスジュース（きになる野菜、ヤクルト本社製）、野菜ミックスジュース（野菜１日これ１本、ヤクルト本社製）、野菜ミックスジュース（１日分の野菜、伊藤園社製）、野菜ミックスジュース（充実野菜、伊藤園社製）、野菜ミックスジュース（野菜生活、カゴメ社製）、野菜ミックスジュース（４８種類の濃い野菜、キリン社製）をそれぞれ無菌的に試験管に分注し、比較例１−１YIT0132(FERM BP-11349), 1-2 YIT0148(FERM BP-11350)の０．４％容量の菌液を接種し３７℃で４８時間培養した。
【００８１】
同上の市販の果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュースをそれぞれ無菌的に試験管に分注し、実施例１の乳酸菌の０．４％容量の菌液を接種し、３０℃で４８時間培養した。
【００８２】
（４）生菌数の測定
培養液を減菌した希釈液（０．１％酵母エキス溶液）にて適宜希釈後、スパラルシステムにてＭＲＳ寒天平板培地に塗布し生菌数を測定した。果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュースで増殖性を調べた結果を表２に示した。生菌数は３回の異なる実験を行なって、得られた数値を平均して算出した。
【００８３】
【表２】
0006921350.tif 000003
【００８４】
（５）果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュースにおける増殖性の検討
実施例１の乳酸菌は、比較例２株の乳酸菌と比較して、果汁、野菜ジュース、ミックス野菜ジュースすべてにおいて、約１、７倍から４倍の増殖能を示し、すぐれた増殖能をもつことが明らかとなった。
【００８５】
実施例３
ラクトバチルス・プランタルムによる果物破砕物の発酵実験
（１）菌株
比較例１の乳酸菌（対照群）としてラクトバチルス・プランタルムに属する２株YIT0132株（FERM BP-11349）（比較例１−１）、YIT0148(FERM BP-11350)（比較例１−２）を使用した。
【００８６】
（２）種菌と培養
比較例１−１、１−２の乳酸菌は、Lactobacilli  MRS Broth(Difco社製)を１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した後接種し、空気存在下で口をゆるめて３７℃で１６時間定常状態なるまで培養した。
【００８７】
実施例１の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタルム  サクラ６８）は、Lactobacilli MRS Broth(Difco社製)を１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した後接種し、空気存在下で口をゆるめて３０℃で１６時間、定常状態になるまで培養した。
【００８８】
（３）果物破砕物での増殖性
リンゴ、イチゴ、ナシ、スイカ、メロン、キウイ、マンゴー、パパイヤ、レッドドラゴンフルーツの果物破砕物をそれぞれ無菌的に試験管に分注し、比較例１−１  ＹＩＴ０１３２（FERM BP-11349） ，１−２  YIT0１４８(FERM BP-11350)の０．４％容量の菌液をそれぞれに接種し、３７℃で４８時間培養した。同上の果物破砕物をそれぞれ無菌的に試験管に分注し、実施例１の乳酸菌の０・４％容量の菌液をそれぞれに接種して３０℃で４８時間培養した。
【００８９】
（４）生菌数の測定
培養液を減菌した希釈液（０．１％酵母エキス溶液）にて適宜希釈後、スパラルシステムにてＭＲＳ寒天平板培地に塗布し生菌数を測定した。果物破砕物での増殖性を調べた結果を表３に示した。生菌数は３回の異なる実験を行なって、得られた数値を平均して算出した。
【００９０】
【表３】
0006921350.tif 000004
【００９１】
（５）果物破砕物における増殖性の検討
実施例１の乳酸菌は、比較例の２株の乳酸菌と比較して、すべての果物破砕物において約１、６倍から１４倍の生菌数を示したことから、すぐれた増殖能をもつことが明らかとなった。
【００９２】
実施例４
ラクトバチルス・プランタルムによる野菜破砕物の発酵実験
（１）菌株
比較例１の乳酸菌（対照群）としてラクトバチルス・プランタルムに属する２株YIT0132株（FERM BP-11349）（比較例１−１）、YIT0148(FERM BP-11350)（比較例１−２）を使用した。
【００９３】
（２）種菌の培養
比較例１−１、１−２の乳酸菌は、Lactobacilli  MRS Broth(Difco社製)を１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した後接種し、空気存在下で口をゆるめて３７℃で１６時間定常状態なるまで培養した。
実施例１の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタルム  サクラ６８）は、Lactobacilli MRS Broth(Difco社製)を１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した後接種し、空気存在下で口をゆるめて３０℃で１６時間、定常状態になるまで培養した。
【００９４】
（３）野菜破砕物での増殖性
トマト、ニンジン、キャベツ、レタス、キュウリ、タマネギ、ナガネギ、セロリ、ハクサイ、ダイコン、カブ、赤カブ、ピーマン、黄パプリカ、ブロッコリー、アスパラガス、ミズナ、シュンギク、ホウレンソウ、コマツナ、チンゲンサイ、ナノハナ、パセリ、セリ、豆苗、芽キャベツ、ゴーヤ、ズッキーニ、ショウガ、ニンニク、ゴボウ、レンコン、クレソン、大和まな（大和野菜）、しろ菜（大和野菜）、宇陀金ごぼう（大和野菜）、祝蕾（大和野菜）、片平あかね（大和野菜）の野菜破砕物をそれぞれ無菌的に試験管に分注し、比較株例１−１  YIT ０１３２（FERM BP-11349）、１−２  YIT ０１４８(FERM BP-11350)の０．４％容量の菌液をそれぞれ接種し、３７℃で４８時間培養した。同上の野菜破砕物をそれぞれ無菌的に試験管に分注し、実施例１の乳酸菌の０．４％容量の菌液をそれぞれ接種し、３０℃で４８時間培養した。
【００９５】
（４）生菌数の測定
培養液を減菌した希釈液（０．１％酵母エキス溶液）にて適宜希釈後、スパラルシステムにてＭＲＳ寒天平板培地に塗布し生菌数を測定した。野菜破砕物での増殖性を調べた結果を表４に示した。生菌数は３回ずつ実験を行なって得られた数値を平均して算出した。
【００９６】
【表４】
0006921350.tif 000005
【００９７】
（５）結果
実施例１の乳酸菌は、比較例の２株の乳酸菌と比較して、すべての野菜破砕物において、約１．３倍から１３倍の生菌数を示したことから、すぐれた増殖能をもつことが明らかとなった。
【００９８】
表１、表２、表３に示した通り、実施例１の乳酸菌は、比較例１−１YIT ０１３２（FERM BP-11349）  １−２(FERM BP-11350)の乳酸菌と比較して、さまざまな果汁、野菜ジュース、野菜ミックスジュース、果物破砕物、野菜破砕物において、常に高い到達生菌数となり、すぐれた増殖能をもつことが明らかとなった。
【要約】
【課題】これまで乳酸菌発酵物の製造に用いられていた上記乳酸菌では、果物や野菜を発酵基質とした場合、プロバイオティクスとしての効果を得るための高い到達生菌数を達成することができなかった。
【解決手段】本発明は、定常状態になるまで培養した乳酸菌液を、植物性飲食物に対して０．４％容量接種したものを３０℃で４８時間培養した時の到達生菌数が１０９ＣＦＵ/ml以上である性質をみたす乳酸菌に関する。【配列表】
0006921350000001.app