(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピオグリタゾンを含む、Ｍ２マクロファージの増加およびＰＰＡＲγの発現増加を伴う皮膚の組織修復を促進させ、これにより毛髪の質の向上に用いるための組成物。
【請求項２】
ピオグリタゾンを含む、毛髪の太さを増加させることに用いるための組成物。
【請求項３】
ピオグリタゾンを含む、毛髪のキューティクルの配向を整える、または改善することに用いるための組成物。
【請求項４】
経口投与用の組成物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
皮膚への局所投与用の組成物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛髪改善のための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
男性ホルモンを抑制することによる増毛剤が開発されている。しかし、この治療は、治療している期間は増毛効果があるが、治療を終了すると増毛効果が消失する。これは、男性ホルモンを抑制することによる増毛効果は、対処療法的であり、組織再生を介した根本治療ではないことを示唆する。
【０００３】
皮膚に対してＰＰＡＲγを欠如させても表現型がないこと、ＰＰＡＲγアンタゴニスト処理された皮膚では、成長期に移行した毛髪が観察されなかったことが示されている（非特許文献１）。    
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｆｅｓｔａ  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ，  １４６：  ７６１−７７１，  ２０１１
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、毛髪改善のための組成物を提供する。
【０００６】
本発明者らは、ピオグリタゾンが、毛髪の質の向上に用い得ることを見出した。本発明は、これらの知見に基づくものである。
【０００７】
本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）ピオグリタゾンを含む、毛髪の質の向上に用いるための組成物。
（２）経口投与用の組成物である、上記（１）に記載の組成物。
（３）皮膚への局所投与用の組成物である、上記（１）に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ピオグリタゾンで処置した頭皮から生える毛髪の太さの変化を示す図である。上のパネルは、頭皮のハーフサイドのみを処置した場合の、処置側と非処置側の毛髪の太さの相違を示す。グラフ中、「＃１」は処置１ヶ月後を表し、「＃６」は処置６ヶ月後を示す。下のパネルは未治療側の太さに対しての変化率と治療側の太さに対しての変化率の割合の比較を示す。
【図２】図２は、ピオグリタゾンで処置した部分の頭皮と処置していない部分の頭皮の毛髪のキューティクルの電子顕微鏡写真を示す。
【図３】図３は、ピオグリタゾンで処置した部分の頭皮と処置していない部分の頭皮の毛髪のキューティクルに基づく髪質評価の結果を示す。
【図４】図４は、特定の遺伝子の発現に対するピオグリタゾン処置の効果を示す。
【図５】図５は、ヒト頭皮における特定の遺伝子の発現に対するピオグリタゾン処置の効果を示す。
【図６】図６は、実施例における白髪の減少に関するデータを示す。
【発明の具体的な説明】
【０００９】
本明細書では、「対象」とは、哺乳動物であり得、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、モルモット、ラットおよびリス等のペット；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、およびヤギ等の家畜；サル、チンパンジー、オランウータン、ゴリラ、ボノボ、およびヒト等の霊長類を含む。対象は、糖尿病または非糖尿病であり得、好ましくは、非糖尿病患者であり得る。
【００１０】
本明細書では、「処置」とは、治療的処置および予防的処置が含まれる意味で用いられる。本明細書では、治療とは、疾患もしくは状態の悪化の抑制、疾患もしくは状態の悪化の遅延、疾患もしくは状態の改善、または疾患もしくは状態の治癒を含む意味で用いられ得る。本明細書では、予防とは、疾患もしくは状態の発症の抑制、または疾患もしくは状態の発症の遅延を含む意味で用いられ得る。
【００１１】
本明細書で用いられる「医薬」とは、治療的効果および予防的効果などの臨床的効果を期待して用いられる製品を意味する。医薬としては、例えば、医薬組成物、および移植材料が挙げられる。本明細書で用いられる「皮膚科学的組成物」とは、皮膚に局所適用することに適した組成物を意味する。皮膚科学的組成物としては、皮膚に局所適用することに適した医薬、および、化粧品組成物が挙げられる。化粧品組成物としては、例えば、保湿剤、コンディショナー、老化防止剤、美白剤、日焼け止め剤、制汗剤、ひげそり用組成物、ひげそり後用組成物、ファンデーション、リップスティック、口紅、整髪料、石けん、シャンプー、洗浄剤、および潤滑剤などの肌に局所適用されるパーソナルケア組成物があげられる。パーソナルケア製品としては、パーソナルケア組成物に加えて、組成物形態を取らない構造物（例えば、下着、おむつ、ティッシュ、拭き取り布、マスク、パッチ等）が挙げられる。
【００１２】
ピオグリタゾンは、チアゾリジン系の経口血糖降下薬である。ピオグリタゾンは、以下の化学式を有する。
【化１】
0006925072.tif 000002
【００１３】
本発明によれば、ピオグリタゾンは、毛髪（例えば、頭髪）の質を向上させることができる。より具体的には、ピオグリタゾンは、毛髪のキューティクルを整え、白髪の本数もしくは割合を減少させ、および／または、毛髪の太さ（並びに、毛髪のつやおよびこし）を改善した。したがって、本発明によれば、ピオグリタゾンを含む、毛髪の質を向上させることに用いるための組成物が提供される。ある態様では、本発明によれば、ピオグリタゾンを含む、毛髪のキューティクルを整えること（キューティクルの配向を整える、または改善する）に用いるための組成物が提供される。ある態様では、本発明によれば、ピオグリタゾンを含む、白髪の本数または割合を減少させることに用いるための組成物が提供される。ある態様では、本発明によれば、ピオグリタゾンを含む、毛髪の太さ（並びに、毛髪のつやおよびこし）を増加させることに用いるための組成物が提供される。
【００１４】
本発明によれば、ピオグリタゾンは、対象に経口投与し得る。したがって、本発明によれば、ピオグリタゾンを含む組成物は、経口投与用組成物であり得る。経口投与用組成物は、例えば、散剤、顆粒剤、内服錠、カプセル剤、または丸剤であり得る。ピオグリタゾンは、薬学的に許容可能なその塩、例えば、ピオグリタゾン塩酸塩であり得る。
【００１５】
本発明によれば、ピオグリタゾンは、対象において皮膚に対して局所投与し得る。従って、本発明によれば、ピオグリタゾンを含む組成物は、皮膚科学的組成物、または皮膚に対する局所投与用の医薬組成物であり得る。皮膚に対する局所投与用の医薬組成物は、例えば、経皮投与、皮内投与、または皮下投与などの投与形態に適した剤形であり得る。皮膚科学的組成物は、経皮投与に適した剤形であり得る。皮膚科学的組成物、または皮膚に対する局所投与用の医薬組成物は、例えば、エレクトロポレーション等の浸透化技術によって経皮的に皮膚への浸透を高めてもよい。例えば、浸透性を高めるため、片手で濡れたガーゼを巻いたアースを握らせながら、ＭＥＴＡ−ＴＤＳ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ｍａｃｈｉｎｅ（ＣＴＰ−８０２，  Ｇｒａｎｄ  Ａｅｓｐｉｏ  Ｉｎｃ．，  ＫＯＲＥＡ）を用いて３Ｖ／６ｍＡの出力｛実測値｝で皮膚に有効成分を浸透させることが
できる。この態様において、医薬組成物は、懸濁されたピオグリタゾンを含み得る。ある態様では、医薬組成物は、溶解したピオグリタゾンを含み得る。ある態様では、医薬組成物は、ピオグリタゾンを含む懸濁液であり得る。ある態様では、医薬組成物は、ピオグリタゾンを含む、乳液、クリーム、またはオイルであり得る。
【００１６】
本発明の組成物は、パーソナルケア組成物および医薬組成物などの組成物であり得る。
【００１７】
医薬組成物としては、例えば、局所投与用の医薬組成物が挙げられ、本発明に用いることができる。局所投与用の医薬組成物は、粘膜適用または体表適用のための医薬組成物であり得、例えば、点眼剤、眼軟膏剤、舌下錠、バッカル錠、トローチ剤、含そう剤、スプレー剤、エアロゾル剤、および吸入剤；液剤、灌注剤、グリセリン剤、酒精剤、水剤、および塗布剤などの溶液製剤；乳剤、懸濁剤、リニメント剤、ローション、スプレー剤、およびリポソーム剤などの分散製剤；軟膏剤、硬膏剤、貼付剤、粘着テープ剤、パスタ剤、パップ剤、クリーム剤、油剤、およびスティック剤などの半固形製剤；並びに、エキス剤（軟エキス剤、乾燥エキス剤）、およびチンキ剤などの浸出製剤が挙げられる。
【００１８】
本発明によれば、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を含んでいてもよい。薬学的に許容可能な賦形剤としては、溶剤、基剤、希釈剤、増量剤、充填剤、および補形剤；溶解補助剤、可溶化剤、緩衝剤、等張化剤、乳化剤、懸濁化剤、分散剤、増粘剤、ゲル化剤、硬化剤、吸収剤、粘着剤、弾性剤、可塑剤、徐放化剤、および噴射剤；抗酸化剤、保存剤、保湿剤、遮光剤、帯電防止剤、芳香剤、着香剤、着色剤、および緩和剤が挙げられる。
【００１９】
パーソナルケア組成物としては、例えば、スキンケア、制汗剤、脱臭剤、美容品、化粧品、およびヘアケア製品が挙げられる。パーソナルケア組成物としては、保湿剤、コンディショナー、老化防止剤、美白剤、日焼け止め剤、制汗剤、ひげそり用組成物、ひげそり後用組成物、ファンデーション、リップスティック、口紅、整髪料、シャンプー、洗浄剤、および潤滑剤が挙げられる。パーソナルケア組成物は、パーソナルケア製品に用いられ得る。パーソナルケア製品としては、下着、おむつ、ティッシュ、拭き取り布、マスク、パッチ等が挙げられる。組成物は、有効成分に加えて賦形剤を含んでいてもよい。組成物は、例えば、静脈投与、経皮投与、経口投与、経腸投与、および腹腔内投与などの投与形態に適した剤形にすることができる。皮膚炎の予防および／または治療に関しては、経皮投与により本発明の組成物を投与してもよく、例えば、ゲル、エマルション、クリーム、液体、ペースト、ローション、リポソームクリーム等の形態（例えば、皮膚科学的組成物）であり得る。ある態様では、組成物は、軟膏であり得る。経皮投与の場合には、賦形剤としては、皮膚科学的に許容可能な賦形剤を用いることができ、これに適した剤形を用いることができる。経粘膜投与の場合には、賦形剤としては、粘膜適用上許容可能な賦形剤を用いることができ、これに適した剤形を用いることができる。
【００２０】
本発明によれば、その必要のある対象において髪質を改善するための方法であって、当該対象にピオグリタゾンを投与することを含む、方法が提供される。本発明によれば、投与は局所投与であり得る。本発明によれば、投与は、髪質を改善する必要がある頭皮に対してなされる。
【００２１】
本発明によれば、髪質を改善するためのピオグリタゾンが提供される。本発明によれば、髪質を改善することに用いるための医薬の製造におけるピオグリタゾンの使用が提供される。
【実施例】
【００２２】
実施例１：毛髪の太さの変化
ピオグリタゾンとしては、ピオグリタゾン錠１５ｍｇ「ＮＰ」を用いた。１錠のピオグリタゾンをすり鉢で粉砕し、３ｍＬの注射用水ＰＬ「フソー」に懸濁して用いた。女性患者３人（６９歳、４８歳、６５歳の患者）を対象とした。患者の両側の外眼角を頭側に延長し、両耳と頭頂を結ぶ線と交差する２点に墨汁で刺青をし、マーキングを中心に同一条件下で撮影した。頭皮のハーフサイド全体に対して、ピオグリタゾンの懸濁液を塗った。浸透性を高めるため、ＭＥＴＡ−ＴＤＳ，  ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ｍａｃｈｉｎｅ（ＣＴＰ−８０２，Ｇｒａｎｄ  Ａｅｓｐｉｏ  Ｉｎｃ．，  ＫＯＲＥＡ）を用いて３Ｖ／６ｍＡの出力（実測値）で皮膚にピオグリタゾンを浸透させた。この処置を２週間おきに１度の頻度で１２回（すなわち、６ヶ月間）行った。検査部位は、頭部の正中線から左右ともに５１mm平均であった。治療開始から６カ月目（１２回治療後）に、ｄ
ｅｒｍｏ  ｐｒｉｍｅ，  ｄｐｈａｒｒｉｓ（ＣＨＯＷＩＳ，  ＫＯＲＥＡ）を用いて各検査部位２枚をデジタル画像としてコンピュータに取り込み、毛髪の太いものから各画像３本（１検査画像２枚毛６本）を選別し、太さを自動計測した。その検査値（毛の太さ：ｍｍ）の平均値をもってグラフ化した。具体的には治療前を１００として治療後の太さを割合で示した。ハーフサイド治療の患者群では治療前後と左右差を比較した。図１に示されるように、左右で比較すると、毛髪は、治療後１ヶ月（経過＃１）、治療後６ヶ月（経過＃６）と治療回数が増えて行くにつれてピオグリタゾン処置側（ＰＧ処置側）において、陰性対照と比較して毛髪が太くなることが確かめられた。また、図１下段には、未治療側の変化率に対する治療側の変化率を示す。図１下段に示されるように、ＰＧ処置側の変化率は陰性対照の変化率に比べて変化の割合が高いことが確かめられた。
【００２３】
ところで、図１の上段に示される結果によれば、陰性対照（注射用水ＰＬの投与）によっても毛髪の太さが治療経過と共に増大する様子が確認された。これは、患者において、治療開始前数ヶ月にわたって毛髪の太さに変化が観察されなかったことを考慮すると、ＰＧ投与側（治療側）からの未治療側への治療効果の伝播によるものであると考えられた。
【００２４】
そこで、陰性対照として頭部の片側半分に生理食塩水を注入した（残りの半分は未処置とした）。６ヶ月間毎月頭部の片側に生理食塩水注入による毛髪の変化（１．４ｍｍ以上の毛髪本数）を観察したが、治療前と治療６ヶ月目の変化率は−０．８４％〜＋１．２４％、平均１．０３％であった。また生理食塩水注入した治療側と未治療側（何も注入しない）では治療６ヶ月目の変化は−０．９９％〜＋１．２５％、平均１．０６％であった（ｎ＝４）。６ヶ月間毎月頭部の片側に生理食塩水注入による毛髪の変化（１．４ｍｍ以上の毛髪の長さの総和）を観察したが、治療前と治療６ヶ月目の変化は−０．７９％〜＋１．３３％、平均１．０５％であった。また生理食塩水注入した治療側と未治療側では治療６ヶ月目の変化は−０．９５％〜＋１．２８％、平均１．０７％であった（ｎ＝４）。このように、陰性対照として生理食塩水を投与した群では剃毛後３日目に１．４ｍｍ以上の毛髪の有意な増加は認められなかった。剃毛後３日目に伸びが１．４ｍｍ未満の毛髪の太さは、平均で７５．３９μｍであった。１．４ｍｍ以上の毛髪では太さが平均で９７．４２μｍ以上となる傾向が示されている。
【００２５】
このように、ＰＧの代わりに生理食塩水を投与した群では、毛髪の太さに改善効果は認められなかった。
【００２６】
これらの結果から、ピオグリタゾンによる頭皮の改質は、毛髪の伸長速度の改善と、太くコシとハリのある毛髪の増加に繋がっていることが明らかとなった。また、頭皮のハーフサイド処置において、非処置側に毛髪の太さの改善効果が認められたが、これは、処置側から頭皮の改質効果が伝播したことによるものであることが示唆された。
【００２７】
実施例２：髪質の変化
本実施例では、髪のキューティクルについて処置前後で改善がみられたかを調べた。
【００２８】
実施例３のＰＧ投与群（月２回投与）の毛髪を採取し、患者の毛髪の伸長速度（１５ｍｍ／月）を考慮して、治療前２ヶ月から３カ月の間（２．５カ月付近）に相当する部位と、治療開始から４カ月から５カ月（４．５ヶ月付近）の部位を採取し、それぞれジップロック（登録商標）に密閉保存した。その後に検査部位の毛髪を固定板にレジンで接着固定させた。それらを密閉保存し、検査日に炭素固定し、同日に常法により走査電子顕微鏡により髪のキューティクルの状態を観察した。陰性対象として、同一患者の処置されなかった（ハーフサイド治療の未治療）部分の毛髪を用いた。そして、毛髪の新しく伸びた部分（根元側）と、既存の部分（先端側）とで比較した。代表的な例を図２に示す。
【００２９】
その結果、治療した毛髪については、先端側ではキューティクルが荒れているのに対して、新しく伸びた部分である根元側ではキューティクルが整っている様子が観察され、髪質の差が明らかに改善していた。これに対して、陰性対象の処置されなかった部分の毛髪では、根元の方が評点は高いが先端側もキューティクルの荒れが観察され、処置されなかった部分ではその質の改善効果は認められなかった。
【００３０】
より多くの患者（３名：女性：４８，６５，６９歳）に対して同様の評価を実施した（ＰＧ１５mg、月２回投与、計１２回、６月投与）。評価は、最後の投与から２０日後に、電子顕微鏡画像に基づいて下記の評点に基づいて行った。評価は、医師６名により行った。評点の平均値を求めた。
【００３１】
髪質評価の評点表
５点：キューティクルが整っており、荒れが見当たらない。
４点：平均よりもキューティクルが整っているが、多少の荒れが認められる。
３点：キューティクルの整い方が平均的である。
２点：平均よりもキューティクルが荒れており、多少の剥がれが認められる。
１点：キューティクルが全体的に荒れており、全体的に剥がれが認められる。
【００３２】
結果は、表１および図３に示される通りであった。
【００３３】
【表１】
0006925072.tif 000003
【００３４】
上述の通り、ＰＧ治療群では、投与後に髪質の変化が認められた。このことから、ピオグリタゾンは、毛髪の質に対して改善効果をもたらすことが明らかとなった。
【００３５】
実施例３：皮下投与後の組織における遺伝子発現の変化
次に、組織における遺伝子発現の変化を確認した。対象としては１２週齢ウイスターラット（雄）を用いた。２．５μｇ／箇所投与群に関しては、背部に頭部から尾部に対して３つの領域を設定し、さらに各領域を背骨の左右で２つの領域に分けることで、背部に計６個の領域を設定した。これらの投与群では、この６個の各領域の中央付近の２箇所ずつにＰＧを投与した。具体的には、２．５μｇ／箇所投与群（ｎ＝３）に関しては、１箇所あたり２．５μｇ（２０μＬ）のＰＧを投与した。また、０．１μｇ／箇所投与群および０．０２μｇ／箇所投与群に関しては、頭部から尾部に対して２つの領域を設定し、さらに各領域を背骨の左右で２つの領域に分けることで、背部に計４個の領域を設定した。これらの投与群では、この４個の各領域の中央付近の２箇所ずつにＰＧを投与した。具体的には、０．１μｇ／箇所投与群（ｎ＝３）に関しては、１箇所あたり０．１μｇ（２０μＬ）のＰＧを投与し、０．０２μｇ／箇所投与群（ｎ＝２）に関しては、０．０２μｇ（２０μＬ）のＰＧを投与した。なお、前記２箇所間の距離は１ｃｍとした。８週後に注入部中央上方を剃毛後３ｍｍパンチで組織採取した。
【００３６】
採取した組織片を液体窒素で凍結し、−８０℃で保存した。保存された組織片からのｔｏｔａｌ  ＲＮＡの精製と抽出は、２５  ｍｇの組織片を５個のステンレスビーズ（直径３  ｍｍ）と共にサンプルチューブに封入し、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  ＧｍｂＨ，  Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ  ＩＩ（ＱＩＡＧＥＮ  ＧｍｂＨ，  Ｈｉｌｄｅｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて組織片をホモゲナイズした後に、キットに付属のプロトコル通りにスピンカラムを利用して行った。定量ＰＣＲによる遺伝子発現解析は、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ（Ｓｋｏｋｉｅ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）に遺伝子特異的プライマーおよびプローブの設計と合成を委託し、ＰｒｉｍｅＴｉｍｅ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ試薬（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ，  Ｓｋｏｋｉｅ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）とＲｏｔｏｒ−Ｇｅｎｅ  Ｑ  ＰＣＲ装置（ＱＩＡＧＥＮ  ＧｍｂＨ，  Ｈｉｌｄｅｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して、対象遺伝子の発現量を解析した。それぞれの検体に対して１遺伝子あたり２回または３回のＰＣＲ解析を実施した。
【００３７】
定量PCR（qPCR）による遺伝子発現解析に用いられた７種類のラット遺伝子の情報と、核遺伝子に対する合成されたプローブおよびプライマーセットの塩基配列は以下のとおりである。
１.) Ribosomal protein lateral stalk subunit P0 (RplP0), Rattus norvegicus: mRNA, 1,093 bp, NM_022402.2, GI: 310616731
Probe: 6-FAM/CCT GTC TTC /ZEN/CCT GGG CAT CAC G/3IABkFQ（配列番号１）
Primer-1: CAA TCC CTG ACG CAC CG（配列番号２）
Primer-2: TGT CTG CTC CCA CAA TGA AG（配列番号３）
２.) CD34, Rattus norvegicus: CD34 molecule (Cd34), mRNA 1,161 bp NM_001107202.2 GI: 169790781
Probe: 6-FAM/TCC CTG GAA /ZEN/GTA CCA GCC ACT ACT /3IABkFQ （配列番号４）
Primer-1: GGA GTA TTT CCA CCA GTT CCT AC（配列番号５）
Primer-2: GAT GGC TGG TGT GGT CTT ATT（配列番号６）
３.) Peroxisome proliferator-activated receptor gamma transcript variant 1, (PPARG), Rattus norvegicus: mRNA 1,805 bp NM_013124.3 GI: 223941861
Probe: 6-FAM/CCT GGG CGG /ZEN/TCT CCA CTG AGA ATA /3IABkFQ（配列番号７）
Primer-1: GAA TTA GAT GAC AGT GAC TTG GC（配列番号８）
Primer-2: AGC AGG TTG TCT TGG ATG TC（配列番号９）
４.) CD163 molecule (Cd163), Rattus norvegicus: mRNA 4,223 bp NM_001107887.1 GI: 157823808
Probe: 6-FAM/ACC CAA CGG /ZEN/CTT ACA GTT TCC TCA A/3IABkFQ/（配列番号１０）
Primer-1: TCA TCC GTC TTC GAA TCC ATC（配列番号１１）
Primer-2: TCT CAT TGC CTT CCT CTT GTG（配列番号１２）
５.) CD68 molecule (Cd68), Rattus norvegicus: mRNA 1,224 bp NM_001031638.1 GI: 72255506
Probe: 6-FAM/CTC TGA TGT /ZEN/CGG TCC TGT TTG AAT CCA /3IABkFQ/（配列番号１３）
Primer-1: TGA GAA TGT CCA CTG TGC TG（配列番号１４）
Primer-2: CAT TCC CTT ACG GAC AGC TTA C（配列番号１５）
【００３８】
Ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ  ＧｅｎｅｓであるＲｉｂｏｓｏｍａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｔａｌｋ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｐ０  （ＲｐｌＰ０）と目的遺伝子のｍＲＮＡの発現量（それぞれの遺伝子のｑＰＣＲ反応から得られたＣｔの平均値、各検体２回検査の３体平均）の差（ΔＣｔ）を算出し、さらに、解析の実験検体と対照（ＰＧの投与無し）におけるΔＣｔの差（ΔΔＣｔ）を算出した。このΔΔＣｔの値から目的遺伝子の相対的な遺伝子発現比（倍率）に変換し、その倍率をグラフ上に示した。
【００３９】
結果は、図４に示される通りであった。図４に示されるように、ピオグリタゾン投与群では、ＣＤ３４、およびＰＰＡＲγの発現の増加が認められた。また、図４に示されるように、ピオグリタゾン投与群の組織では、同時にＣＤ６８、およびＣＤ１６３の増加も認められた。このことは、ピオグリタゾン投与群の組織では、Ｍ２マクロファージの活性がＭ１マクロファージよりも高いことを示すものであると考えられ、すなわち、ピオグリタゾン投与群では、組織修復が促進されていることを示唆するものである。
【００４０】
ヒト対象においても確認をした。実施例２の通りピオグリタゾンの懸濁液を作製して懸濁液全量をヒト対象（４２歳男性）の頭部に塗った。ＰＧ処置は、頭皮全体に２カ月おきに１度の頻度で３回行った。治療前と３回の治療を行い、その２ヶ月後（初回治療から６ヶ月後）に３ｍｍパンチにて検査部付近の組織採取を行った。組織採取は半割にし、半分を１０％ホルマリンで固定し、冷蔵保存した。残りの半分をＲＮＡ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＲＮＡｌａｔｅｒ，  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｌｉｔｈｕａｎｉａ）に浸し、液体窒素で凍結し、−８０℃で保存した。その後ラット遺伝子発現解析と同様の手順で遺伝子発現解析を行った。
【００４１】
ハウスキーピング遺伝子であるＲｉｂｏｓｏｍａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｔａｌｋ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｐ０  （ＲｐｌＰ０）と目的遺伝子のｍＲＮＡの発現量（それぞれの遺伝子について３回のｑＰＣＲ反応から得られたＣｔの平均値）の差（ΔＣｔ）を算出し、さらに、被検者の治療前後の解析の対象となる検体と対照（未治療２人）におけるΔＣｔの差（ΔΔＣｔ）を算出した。このΔΔＣｔの値から目的遺伝子の相対的な発現比（治療前後での遺伝子発現変動）を求めてグラフ上に示した。
【００４２】
定量的ＰＣＲに用いたプローブとプライマーは以下の通りであった。
1)Homo sapiens ribosomal protein lateral stalk subunit P0 (RPLP0), transcript variant 1, mRNA, 1,105 bp
Accession: NM_001002.4 GI: 1519314286
Probe: 56-FAM/CCC TGT CTT /ZEN/CCC TGG GCA TCA C/3IABkFQ/（配列番号１６）
Primer-1: TGT CTG CTC CCA CAA TGA AAC（配列番号１７）
Primer-2: TCG TCT TTA AAC CCT GCG TG（配列番号１８）
2)Homo sapiens CD68 molecule (CD68), transcript variant 2, mRNA 1,790 bp
Accession: NM_001040059.1 GI: 91199549
Probe: 56-FAM/AGG TCC TGC /ZEN/ATG AAT CCA AAG CTG A/3IABkFQ/（配列番号１９）
Primer-1: CCA TGT AGC TCA GGT AGA CAA C（配列番号２０）
Primer-2: CCA CCT GCT TCT CTC ATT CC（配列番号２１）
3)Homo sapiens CD163 molecule (CD163), transcript variant 1, mRNA 4,190 bp
Accession: NM_004244.5 GI: 344179109
Probe: 56-FAM/ATC CAT CTG /ZEN/AGC AGG TCA CTC CAG/3IABkFQ/（配列番号２２）
Primer-1: CCA GAA CAC ATA TTC CCT CCA C（配列番号２３）
Primer-2: GCA TAG TAA CTG TAC TCA CCA ACA（配列番号２４）
4)Homo sapiens CD34 molecule (CD34), transcript variant 1, mRNA 2,621 bp
Accession: NM_001025109.1 GI: 68342037
Probe: 56-FAM/CCT TGC AAC /ZEN/ATC TCC CAC TAA ACC CT/3IABkFQ（配列番号２５）
Primer-1: TGC CTG AAC ATT TGA TTT CTG C（配列番号２６）
Primer-2: GAC CTT TCA ACC ACT AGC ACT（配列番号２７）
【００４３】
結果は図５に示される通りであった。ピオグリタゾン投与後の患者組織では、ラット同様にＣＤ６８、およびＣＤ１６３の増加も認められた。このことは、ピオグリタゾン治療後の組織では、Ｍ２マクロファージの活性がＭ１マクロファージよりも高いことを示すものであると考えられ、すなわち、ピオグリタゾン投与群では、組織修復が促進されていることを示唆するものである。
【００４４】
実施例４：白髪の変化
ピオグリタゾンとしては、ピオグリタゾン錠１５ｍｇ「ＮＰ」を用いた。患者は１５ｍｇのピオグリタゾンを含む錠剤１錠を午前１０時前後に毎日１回服用した。患者４人（男性２人：５４歳、５６歳、女性２名：５２歳、５３歳の患者）を対象とした。患者の両側の外眼角を頭側に延長し、両耳と頭頂を結ぶ線と交差する２点に入れ墨をし、マーキングを中心に同一条件下で撮影した。
【００４５】
５３歳男性患者は開始時に特定部位に白髪が無く、両耳を結ぶ線上の側頭部に入れ墨をし、マーキングを中心に同一条件下で撮影した。
【００４６】
ピオグリタゾンの内服は６ヶ月続け、２ヶ月毎に同様の検査を行った。
トリコグラムは、マーキングを中心に撮影（Canon Power Shot A520, Tokyo, Japan）し、撮影範囲に含まれる入れ墨を中心とした直径１１ｍｍの円（面積９５ｍｍ2）内の毛髪を、２方向で写真撮影し、目視で計量し、その２枚の平均を得た。
【００４７】
その結果、上記剃毛部において、治療前に白髪のある３人の患者のうちピオグリタゾン服用６ヶ月で３人全ての白髪が減少した。具体的には、上記剃毛部において平均１２．７本／９５ｍｍ2の白髪が減少するようすが観察された（ｎ＝３）。服用開始前を１００とした時と比べて２３．２％（ｎ＝３）の白髪の本数が減少した。
【００４８】
本実施例では、ピオグリタゾンによる毛髪の質の改善効果を認めた。ピオグリタゾンは、組織修復を誘導していることが遺伝子発現データから示唆され、毛髪の質の改善の効果は、ピオグリタゾンによる組織修復の結果であることが示唆された。
【要約】      （修正有）【課題】毛髪改善のための組成物を提供する。【解決手段】ピオグリタゾンを含む、毛髪の質の向上に用いるための組成物であって、経口投与用の組成物である。前記組成物は、皮膚への局所投与用の組成物であり得る。【選択図】なし【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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