(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗体または抗体の断片であって、前記抗体または前記抗体の断片が、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質に対する特異性を有し、前記抗体または前記抗体の断片が、重鎖相補性決定領域、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域を備え、
前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２４０のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２４１のアミノ酸配列または配列番号３４７のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２４２のアミノ酸配列または配列番号３５４のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２４３のアミノ酸配列、配列番号３７６のアミノ酸配列または配列番号３３０のアミノ酸残基２４〜３９番のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２４４のアミノ酸配列を備え、かつ、
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２４５のアミノ酸配列または配列番号３７４のアミノ酸配列アミノ酸配列を備える、
抗体または抗体の断片。
【請求項２】
前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２４０のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２４１のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２４２のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２４３のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２４４のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２４５のアミノ酸配列を備える、
請求項１に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項３】
前記重鎖可変領域が配列番号２３８のアミノ酸配列を備え、
前記軽鎖可変領域が配列番号２３９のアミノ酸配列を備える、
請求項２に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項４】
前記重鎖可変領域が配列番号２５１、２５２、２５８および２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を備え、
前記軽鎖可変領域が配列番号２６０のアミノ酸配列を備える、
請求項２に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項５】
前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２４０のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３４７のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３５４のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号３３０のアミノ酸残基２４〜３９番のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２４４のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号３７４のアミノ酸配列を備える、
請求項１に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項６】
前記重鎖可変領域が配列番号３２９のアミノ酸配列を備え、
前記軽鎖可変領域が配列番号３３０のアミノ酸配列を備える、
請求項５に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項７】
前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２４０のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３４７のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３５４のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ１が、配列番号３７６のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２４４のアミノ酸配列を備え、
前記ＣＤＲＬ３が、配列番号３７４のアミノ酸配列を備える、
請求項１に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項８】
二重特異性を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項９】
前記二重特異性が、ＰＤ−Ｌ１に対する第２の特異性を備える、請求項８に記載の抗体または抗体の断片。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体または抗体の断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを備える、単離された細胞。
【請求項１１】
治療を必要とする患者において自己免疫疾患または炎症性疾患の治療に用いるための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体または抗体の断片を含む、組成物。
【請求項１２】
治療を必要とする患者において癌の治療に用いるための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体または抗体の断片を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、一般に、分子生物学およびタンパク質生化学の分野に関する。より具体的には、本開示は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）に結合する抗体およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）（ＣＤ２２３としても公知）は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーであり、ＣＤ４に密接に関連し、かつＴ細胞機能に様々に影響する。ＬＡＧ−３は、活性化Ｔ細胞、疲弊Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、および制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上に発現される。主要組織適合複合体２（ＭＨＣクラスＩＩ）と結合すると、ＬＡＧ−３／ＭＨＣクラスＩＩ相互作用は、Ｔ細胞増殖、活性化、およびホメオスタシスの負の調節を結果としてもたらす。
【０００３】
ＬＡＧ−３は、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）、プログラム細胞死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）、およびプログラム細胞死−１（ＰＤ−１）と同様に、癌における重要な免疫チェックポイントである。ＬＡＧ−３は、活性化／疲弊エフェクターＴ細胞上だけでなく制御性Ｔ細胞上にも発現される。ＬＡＧ３のアンタゴニズムは、エフェクターＴ細胞の活性化を促進できるだけでなく、制御性Ｔ細胞の抑制機能を遮断することもできる。したがって、ＬＡＧ−３は癌免疫療法の有望な標的であり、前臨床の証拠は、抗ＬＡＧ−３抗体により抗腫瘍応答を促進できることを示唆している。
【０００４】
上記に鑑みて、様々な癌および腫瘍細胞の成長を阻害する免疫応答を刺激する様式でＬＡＧ−３の活性をモジュレートする他に、自己免疫性、炎症性、またはウイルス性疾患の治療において有用である、新規の剤を開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質に結合することができる抗体およびその断片の他に、治療、診断および分析の状況におけるそれらの使用を提供する。実験による例において実証されるように、本明細書における抗ＬＡＧ−３抗体の開示は、公知の抗ＬＡＧ−３抗体では示されない活性を呈した。例えば、本開示の抗体は、ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合に加えて、ＬＡＧ−３タンパク質のガレクチン−３（ＬＧＡＬＳ３）およびＣ型レクチンドメインファミリー４メンバーＧ（ＬＳＥＣｔｉｎ）タンパク質への結合を阻害し得る。公知の抗ＬＡＧ−３抗体は、対照的に、ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合に対する阻害効果のみを示した。一部の実施形態では、本開示の抗体およびその断片は、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）に対する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害効果を後退させることができる。
【０００６】
一実施形態では、本開示は、単離された抗体またはその断片であって、抗体またはその断片が、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質に対する特異性を有し、抗体またはその断片が、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域を備え、ＣＤＲＨ１が、配列番号２４０のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４０に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ２が、配列番号２４１のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４１に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ３が、配列番号２４２のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４２に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ１が、配列番号２４３のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４３に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ２が、配列番号２４４のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４４に由来するアミノ酸配列を備え、かつ、ＣＤＲＬ３が、配列番号２４５のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４５に由来するアミノ酸配列を備える、抗体またはその断片を提供する。
【０００７】
一部の実施形態では、配列番号２４０からのアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、アミノ酸残基Ｙ２７、Ｔ２８、Ｔ３０、Ｇ３５、またはこれらの組合せにおけるものである。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ２７：Ｆ、Ｔ２８：Ｍ、もしくはＬ、Ｔ３０：Ｅ、Ｄ、もしくはＧ、またはＧ３５：Ｗ、もしくはＳから選択される。一部の実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号２４０および３３９〜３４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を備える。
【０００８】
一部の実施形態では、配列番号２４１からのアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、アミノ酸残基Ｄ５０、Ｙ５２、Ｙ５６、Ｎ５８、またはこれらの組合せにおけるものである。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｄ５０：Ｅ、Ｙ５２：Ｆ、Ｙ５６：Ｉ、Ｖ、Ｌ、もしくはＨ、またはＮ５８：Ｖ、もしくはＴから選択される。一部の実施形態では、アミノ酸置換はＮ５８Ｖを備える。一部の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号２４１および３４７〜３５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を備える。
【０００９】
一部の実施形態では、配列番号２４２からのアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、アミノ酸残基Ｎ９６、Ｇ９９、Ｙ１０２、またはこれらの組合せにおけるものである。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｎ９６：Ｄ、もしくはＧ、Ｇ９９：Ｋ、Ｒ、もしくはＱ、またはＹ１０２：Ｈから選択される。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｇ９９ＫまたはＹ１０２Ｈを備える。一部の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号２４２および３５４〜３６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を備える。
【００１０】
一部の実施形態では、配列番号２４３からのアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、アミノ酸残基Ｎ２８におけるものである。一部の実施形態では、アミノ酸置換はＮ２８Ｑを備える。一部の実施形態では、ＣＤＲＬ２は、配列番号３７６のアミノ酸配列を備える。
【００１１】
一部の実施形態では、配列番号２４４からのアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、アミノ酸残基Ｑ５０、Ｖ５１、Ｓ５２、Ｌ５４、Ｓ５６、またはこれらの組合せにおけるものである。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ５０：Ｈ、Ｖ５１：Ｋ、Ｓ５２：Ｄ、Ｌ５４：Ｒ、またはＳ５６：Ｒ、Ｖ、Ｌ、もしくはＴから選択される。一部の実施形態では、ＣＤＲＬ２は、配列番号２４４および３６２〜３６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を備える。
【００１２】
一部の実施形態では、配列番号２４５からのアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、アミノ酸残基Ａ８９、Ｎ９１、Ｌ９４、またはこれらの組合せにおけるものである。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ａ８９：Ｇ、Ｎ９１：Ｙ、またはＬ９４：Ｍ、もしくはＥから選択される。一部の実施形態では、アミノ酸置換はＮ９１Ｙを備える。一部の実施形態では、ＣＤＲＬ３は、配列番号２４５および３７０〜３７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を備える。
【００１３】
一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号２３８、２４６〜２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、および３３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２３８、２４６〜２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、および３３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００１４】
一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号２３９、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、および３３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２３９、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、および３３８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００１５】
復帰突然変異をヒト化抗体または断片に組み込むことができる。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、（ａ）位置７１におけるＡｌａ（Ａ）、（ｂ）位置６９におけるＬｅｕ（Ｌ）、（ｃ）位置６６におけるＬｙｓ（Ｋ）、（ｄ）位置６７におけるＡｌａ（Ａ）、（ｅ）位置４８におけるＩｌｅ（Ｉ）、（ｆ）位置３７におけるＩｌｅ（Ｉ）、（ｇ）位置３８におけるＬｙｓ（Ｋ）、（ｈ）位置９１におけるＰｈｅ（Ｆ）、および（ｉ）位置１におけるＧｌｕ（Ｅ）、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基を備える。
【００１６】
別の実施形態では、単離された抗体またはその断片であって、抗体またはその断片が、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質に対する特異性を有し、抗体またはその断片が、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域を備え、ＣＤＲＨ１が、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１もしくは２に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ２が、配列番号３もしくは４のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３もしくは４に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ３が、配列番号５〜４５からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５〜４５のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ１が、配列番号４６〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４６〜８０のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ２が、配列番号８１〜１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号８１〜１０３のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備え、かつ、ＣＤＲＬ３が、配列番号１０４〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１０４〜１３９のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備える、抗体または断片が提供される。
【００１７】
一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号１４０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域または配列番号１４０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号１８９〜２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域または配列番号１８９〜２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００１８】
免疫チェックポイントタンパク質または腫瘍抗原に対する第２の特異性をさらに備える二重特異性抗体もまた提供される。一部の実施形態では、二重特異性は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４−１ＢＢ、ＴＩＭ３、ＯＸ−４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＣＤ４７、ＣＤ７３、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＣＤ３３、ＣＤ１３３、ＣＥＡおよびＶＥＧＦからなる群から選択されるタンパク質標的に対する第２の特異性を備える。
【００１９】
自己免疫疾患または炎症性疾患、癌、および感染症の治療などの治療方法もまた提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】Ｄ１−Ｄ２ドメインはＬＡＧ−３の機能にとって重要である。野生型（ＷＴ）ＬＡＧ３細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合タンパク質（ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃ）断片はＤａｕｄｉ細胞に結合できるが、Ｄ１−Ｄ２切断ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃ断片はＤａｕｄｉ細胞に結合しない。
【００２１】
【図２】様々な種に由来するＬＡＧ３タンパク質へのヒト抗ＬＡＧ３抗体の結合。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を通じてヒト、ラット、およびマウスＬＡＧ３への結合特性について抗ＬＡＧ−３抗体を評価した。
【００２２】
【図３】活性化ヒト初代ＣＤ４＋  Ｔ細胞上の細胞表面ＬＡＧ−３抗原へのヒト抗ＬＡＧ３抗体の結合。様々な濃度（１０μｇ／ｍｌ、３．３３３μｇ／ｍｌ、１．１１１μｇ／ｍｌ、０．３７０μｇ／ｍｌ、０．１２３μｇ／ｍｌ、０．０４１μｇ／ｍｌ、０．０１４μｇ／ｍｌおよび０．００５μｇ／ｍｌ）における活性化ヒト初代ＣＤ４＋  Ｔ細胞上の細胞表面ＬＡＧ−３抗原への結合について抗ＬＡＧ−３抗体を評価した。
【００２３】
【図４】抗ＬＡＧ−３抗体によるＭＨＣクラスＩＩ受容体への可溶性ＬＡＧ−３（ｓＬＡＧ）の結合の阻害。ビオチン標識ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃＬＡＧ−３−Ｆｃ融合タンパク質、およびＭＨＣクラスＩＩ受容体を発現するＲａｊｉ細胞を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイにおいてＭＨＣクラスＩＩ受容体へのｓＬＡＧ−３の結合を遮断する能力について抗ＬＡＧ−３抗体を評価した。
【００２４】
【図５】抗ＬＡＧ−３抗体による末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＩＬ−２産生の刺激。２０μｇ／ｍｌから開始して６つの用量について１：３の段階希釈での様々な濃度において抗ＬＡＧ−３抗体をブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）刺激ＰＢＭＣに投与した。３日後に、培養上清中のＩＬ−２濃度を酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により評価した。
【００２５】
【図６】抗ＬＡＧ−３抗体を使用するエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）に対する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の抑制機能の後退。Ｔｅｆｆに対するＴｒｅｇの抑制効果を後退させる抗ＬＡＧ−３抗体の能力を評価するために、実施例１の抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔｒｅｇ抑制アッセイにおいて使用した。
【００２６】
【図７】抗ＬＡＧ３およびＰＤ−１抗体コンボ処理の相乗効果。ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイにおいてＰＤ−１抗体と組み合わせて抗ＬＡＧ３抗体を試験した。
【００２７】
【図８】抗ＬＡＧ−３抗体は、ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でヒトＴ細胞応答を増進させる。ヒト混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて抗ＬＡＧ３抗体を評価した。
【００２８】
【図９】ＬＡＧ３の全長細胞外ドメイン（Ｄ１−Ｄ４  ｈｕＦｃ）に結合するがＤ１−Ｄ２欠失ＬＡＧ３（△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃ）に結合しない抗体のＥＣ５０を示すＥＬＩＳＡの結果であり、１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０ＨはヒトＬＡＧ３のＤ１およびＤ２ドメインの強力かつ選択的な結合物質であることを実証する。
【００２９】
【図１０】１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈ抗体は、ＬＡＧ３のその受容体ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を用量依存的に阻害した。
【００３０】
【図１１】１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈマウスモノクローナル抗体は、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞によるＩＬ２産生を用量依存的に促進させた。
【００３１】
【図１２】ヒト化モノクローナル抗体１４７Ｈ−１３は、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞によるＩＬ２産生を用量依存的に促進させた。
【００３２】
【図１３】Ｊｕｒｋａｔ−ＬＡＧ３細胞および活性化ＣＤ４  Ｔ細胞に対する抗ＬＡＧ３抗体の結合曲線。
【００３３】
【図１４】Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞によるＩＬ２放出の刺激に対する親和性成熟抗ＬＡＧ３抗体の効果。
【００３４】
【図１５】ＬＡＧ３へのガレクチン−３またはＬＳＥＣｔｉｎの結合の遮断に対する抗ＬＡＧ３抗体の効果。
【００３５】
【図１６】抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた抗ＬＡＧ３抗体は、それぞれ単独よりも多くのＩＬ−２を有意に産生させた。
【００３６】
【図１７】抗ＰＤ−Ｌ１抗体と１４７Ｈ−１３との組合せは、ＭＣ３８腫瘍成長のロバストな阻害を実証した。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本開示は、ヒトＬＡＧ−３に結合し、望ましい機能的特性を有する単離された抗体、特にヒト抗体およびヒト化抗体に関する。一部の実施形態では、ＬＡＧ−３抗体は、ＬＡＧ−３に結合して他の分子へのその結合を阻害することができる。一部の実施形態では、他の分子としては、ガレクチン−３（ＬＧＡＬＳ３）、Ｃ型レクチンドメインファミリー４メンバーＧ（ＬＳＥＣｔｉｎ）タンパク質、およびＭＨＣクラスＩＩ分子が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３８】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、本明細書に開示されるある特定のＣＤＲ領域を備える。本開示は、単離された抗体、そのような抗体を調製する方法、そのような抗体を備えるイムノコンジュゲートおよび二重特異性分子ならびに本開示の抗体、イムノコンジュゲートまたは二重特異性分子を備える医薬組成物を提供する。本開示はまた、ＬＡＧ−３タンパク質の検出などのために抗体を使用する方法の他に、免疫応答を刺激するために、単独でまたは他の治療剤と組み合わせて、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体を使用する方法に関する。したがって、本開示はまた、例えば、腫瘍成長を阻害しまたはウイルス感染症を治療するために本開示の抗ＬＡＧ−３抗体を使用する方法を提供する。
【００３９】
本開示がより容易に理解され得るように、ある特定の用語を最初に定義する。追加の定義は、発明を実施するための形態の全体を通じて示される。
【００４０】
「ＬＡＧ−３」または「ＬＡＧ３」という用語はリンパ球活性化遺伝子３を指す。ＬＡＧ３タンパク質は免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属し、Ｄ１〜Ｄ４と称される４つの細胞外Ｉｇ様ドメインを有する５０３アミノ酸のＩ型膜貫通タンパク質を備える。本明細書に記載される場合、「ＬＡＧ−３」という用語は、バリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログ、およびパラログを含む。例えば、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的な抗体は、ある特定の場合には、ヒト以外の種のＬＡＧ−３タンパク質と交差反応してもよい。他の実施形態では、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的な抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に完全に特異的であってもよく、かつ種間もしくは他の種類の交差反応性を呈しなくてもよく、またはある特定の他の種のＬＡＧ−３と交差反応するが全ての他の種のＬＡＧ−３とは交差反応しないものであってもよい（例えば、サルＬＡＧ−３と交差反応するがマウスＬＡＧ−３とは交差反応しない）。「ヒトＬＡＧ−３」という用語は、ヒト配列のＬＡＧ−３、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７を有するヒトＬＡＧ−３の完全なアミノ酸配列を指す。「マウスＬＡＧ−３」という用語は、マウス配列のＬＡＧ−３、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ０３２５０５を有するマウスＬＡＧ−３の完全なアミノ酸配列を指す。ＬＡＧ−３は、当該技術分野において例えばＣＤ２２３としても公知である。ヒトＬＡＧ−３配列は、例えば、保存された突然変異または非保存領域中の突然変異を有することにより、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７のヒトＬＡＧ−３と異なっていてもよく、ＬＡＧ−３は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７のヒトＬＡＧ−３と実質的に同じ生物学的機能を有する。例えば、ヒトＬＡＧ−３の生物学的機能は、本開示の抗体が特異的に結合するＬＡＧ−３の細胞外ドメイン中のエピトープを有することであり、または、ヒトＬＡＧ−３の生物学的機能は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することである。
【００４１】
特定のヒトＬＡＧ−３配列は、一般に、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７のヒトＬＡＧ−３とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であり、かつ他の種（例えば、マウス）のＬＡＧ−３アミノ酸配列と比較した時にアミノ酸配列をヒトのものであると同定するアミノ酸残基を備える。ある特定の場合には、ヒトＬＡＧ−３は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７のＬＡＧ−３とアミノ酸配列が少なくとも９５％、またはさらには少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であり得る。ある特定の実施形態では、ヒトＬＡＧ−３配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７のＬＡＧ−３配列から１０個以下のアミノ酸の差異を示す。ある特定の実施形態では、ヒトＬＡＧ−３は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ００２２７７のＬＡＧ−３配列から５個以下、またはさらには４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸の差異を示し得る。同一性パーセントは、本明細書に記載される通りに決定することができる。
【００４２】
「免疫応答」という用語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および上記細胞または肝臓により産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、および補体など）の作用であって、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性細胞、または、自己免疫もしくは病的炎症の場合、正常なヒト細胞もしくは組織の選択的な損傷、破壊、またはヒト身体からの除去を結果としてもたらすものを指す。
【００４３】
「抗原特異的Ｔ細胞応答」は、Ｔ細胞が特異的である抗原によるＴ細胞の刺激の結果としてもたらされるＴ細胞による応答を指す。抗原特異的刺激時のＴ細胞による応答の非限定的な例としては、増殖およびサイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２産生）が挙げられる。
【００４４】
本明細書において言及される「抗体」という用語は、抗体全体およびその任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）または単鎖を含む。抗体全体は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を備える糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）および重鎖定常領域を備える。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を備える。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記される）および軽鎖定常領域を備える。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬを備える。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が挿入された、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに分割することができる。各ＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、これらはアミノ末端からカルボキシ末端へと、ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４という順序で並んでいる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを備える。抗体の定常領域は、宿主組織または因子、例えば、免疫系（例えば、エフェクター細胞）の様々な細胞および古典的補体システムの第１成分（Ｃｌｑ）への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００４５】
抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」または「断片」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、ＬＡＧ−３タンパク質）に特異的に結合する能力を保持した抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は全長抗体の断片により行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を備える二価断片であるＦ（ａｂ'）２断片、（ｉｉｉ）ヒンジ領域の部分を有する本質的にＦａｂであるＦａｂ'断片（ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ  ｅｄ．，３．ｓｕｐ．ｒｄ  ｅｄ．Ｉ９９３を参照）、（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６）、（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉｉ）単一の可変ドメインおよび２つの定常ドメインを備える重鎖可変領域であるナノボディが挙げられる。さらには、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされるが、それらは、組換え法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対形成して一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知であり、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉ９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照）を形成した単一のタンパク質鎖となることを可能とする合成リンカーにより連結させることができる。そのような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることが意図される。これらの抗体断片は当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【００４６】
「単離された抗体」は、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＬＡＧ−３タンパク質に特異的に結合する単離された抗体は、ＬＡＧ−３タンパク質以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ヒトＬＡＧ−３タンパク質に特異的に結合する単離された抗体は、他の種のＬＡＧ−３タンパク質などの他の抗原への交差反応性を有してもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まないものであり得る。
【００４７】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。
【００４８】
ヒト化抗体は、ヒトにおいて天然に産生される抗体バリアントへの類似性を増加させるようにタンパク質配列が改変された非ヒト種の抗体である。「ヒト化」の方法は、通常、ヒトへの投与のために開発されるモノクローナル抗体に適用される。
【００４９】
「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらには、抗体が定常領域を備える場合、定常領域もまたヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を備え得る（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムなもしくは部位特異的な突然変異生成によりまたはｉｎ  ｖｉｖｏで体細胞突然変異により導入された突然変異）。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むことは意図されない。
【００５０】
「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によりコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
【００５１】
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と本明細書において交換可能に使用される。
【００５２】
「ヒト抗体誘導体」という用語は、任意の改変型のヒト抗体、例えば、抗体と別の剤または抗体とのコンジュゲートを指す。「ヒト化抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を指すことが意図される。追加のフレームワーク領域の改変をヒトフレームワーク配列において行うことができる。
【００５３】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来しかつ定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来しかつ定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことが意図される。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合する」または「ヒトＬＡＧ−３への特異性を有する」抗体は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質（および場合により１つまたは複数の非ヒト種のＬＡＧ−３タンパク質）に結合するが非ＬＡＧ−３タンパク質に実質的に結合しない抗体を指すことが意図される。好ましくは、抗体は、「高親和性」で、すなわち、１×１０−７Ｍもしくはそれ未満、より好ましくは５×１０−８Ｍもしくはそれ未満、より好ましくは３×１０−８Ｍもしくはそれ未満、より好ましくは１×１０−８Ｍもしくはそれ未満、より好ましくは２５×１０−９Ｍもしくはそれ未満またはよりいっそう好ましくは１×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤでヒトＬＡＧ−３タンパク質に結合する。
【００５５】
タンパク質または細胞に「実質的に結合しない」という用語は、本明細書で使用される場合、タンパク質または細胞に結合しないまたは高親和性で結合しない、すなわち、１×１０−６Ｍまたはそれより高い、より好ましくは１×１０−５Ｍまたはそれより高い、より好ましくは１×１０−４Ｍまたはそれより高い、より好ましくは１×１０−３Ｍまたはそれより高い、よりいっそう好ましくは１×１０−２Ｍまたはそれより高いＫＤでタンパク質または細胞に結合することを意味する。「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指すことが意図され、「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｋａに対するＫｄの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことが意図される。抗体のＫＤ値は、当該技術分野において充分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定する好ましい方法は、好ましくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用して、表面プラズモン共鳴を使用することによる。
【００５６】
ＩｇＧ抗体についての「高親和性」という用語は、抗体が標的抗原について１×１０−７Ｍまたはそれ未満、より好ましくは５×１０−８Ｍまたはそれ未満、よりいっそう好ましくは１×１０−８Ｍまたはそれ未満、よりいっそう好ましくは５×１０−９Ｍまたはそれ未満、よりいっそう好ましくは１×１０−９Ｍまたはそれ未満のＫＤを有することを指す。しかしながら、「高親和性」の結合は、他の抗体アイソタイプについて異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプについての「高親和性」の結合は、抗体が１０−６Ｍまたはそれ未満、より好ましくは１０−７Ｍまたはそれ未満、よりいっそう好ましくは１０−８Ｍまたはそれ未満のＫＤを有することを指す。
【００５７】
「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類、および爬虫類を含むが、哺乳動物、例えば、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシおよびウマが好ましい。
【００５８】
本開示の様々な態様は、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記載される。
抗ＬＡＧ−３抗体および断片
【００５９】
本開示は、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質への特異性を有する抗体および断片を提供する。ＬＡＧ−３への高親和性の他に、結合と関連付けられる他の所望の活性を有するヒト抗体の他に、マウスおよびヒト化抗体が実証される。本開示の抗体は、抗体の特定の機能的特徴または特性により特徴付けられる。
【００６０】
抗ＬＡＧ−３抗体および断片の例示的な群は、マウス抗体１４７Ｈに由来する（表５を参照）。例示的なヒト化キメラ抗体が、復帰突然変異を有する多数のヒト化抗体断片と共に表６に示される。さらに、親和性成熟に基づいて、向上した特性を有する追加の抗体および断片を調製した（表７および８）。一部の実施形態では、単離された抗体またはその断片であって、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質に対する特異性を有し、かつ、配列番号２４０のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２４１のＶＨ  ＣＤＲ２、配列番号２４２のＶＨ  ＣＤＲ３、配列番号２４３のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号２４４のＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号２４５のＶＬ  ＣＤＲ３を備える、抗体またはその断片が提供される。
【００６１】
一実施形態では、抗体またはその断片は、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域を備え、ＣＤＲＨ１が、配列番号２４０のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４０に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ２が、配列番号２４１のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４１に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ３が、配列番号２４２のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４２に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ１が、配列番号２４３のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４３に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ２が、配列番号２４４のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４４に由来するアミノ酸配列を備え、かつ、ＣＤＲＬ３が、配列番号２４５のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２４５に由来するアミノ酸配列を備える、抗体またはその断片を提供する。
【００６２】
置換が為され得るアミノ酸残基の非限定的な例は表８に示される。例えば、ＣＤＲＨ２において、そのような残基としては、Ｄ５０、Ｙ５２、Ｙ５６およびＮ５８が挙げられる。好ましい実施形態では、ＣＤＲＨ２は、任意選択的に他の置換と共に、Ｎ５８Ｖの置換を備える（例えば、配列番号３４７）。別の例では、ＣＤＲＨ３の置換は、Ｎ９６、Ｇ９９またはＹ１０２において起こる。好ましい実施形態では、ＣＤＲＨ３は、置換Ｇ９９Ｋ、Ｙ１０２、または組合せを備える（例えば、配列番号３５４）。さらに別の例では、ＣＤＲＬ３の置換は、Ａ８９、Ｎ９１、またはＬ９４において起こる。好ましい実施形態では、ＣＨＲＬ３は、置換Ｎ９１Ｙを備える（例えば、配列番号３７４）。一実施形態では、抗体または断片は、任意選択的に他の置換と共に、Ｎ５８Ｖ、Ｇ９９Ｋ、Ｙ１０２、およびＮ９１Ｙの全てを備える。
【００６３】
一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号２３８、２４６〜２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、および３３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２３８、２４６〜２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、および３３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００６４】
一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号２３９、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、および３３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２３９、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、および３３８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００６５】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、またはこれらの組合せをさらに備える。一部の実施形態では、軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ鎖定常領域である。
【００６６】
限定するものではないが、抗体またはその断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全にヒトの抗体である。一態様では、抗体またはその断片はヒト化抗体である。
【００６７】
ヒト化抗体または断片について、ある特定の復帰突然変異を組み込むことができる。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、
（ａ）位置７１におけるＡｌａ（Ａ）、
（ｂ）位置６９におけるＬｅｕ（Ｌ）、
（ｃ）位置６６におけるＬｙｓ（Ｋ）、
（ｄ）位置６７におけるＡｌａ（Ａ）、
（ｅ）位置４８におけるＩｌｅ（Ｉ）、
（ｆ）位置３７におけるＩｌｅ（Ｉ）、
（ｇ）位置３８におけるＬｙｓ（Ｋ）、
（ｈ）位置９１におけるＰｈｅ（Ｆ）、および
（ｉ）位置１におけるＧｌｕ（Ｅ）、
ならびにこれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基を備える。
【００６８】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置７１におけるＡｌａ（Ａ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置６９におけるＬｅｕ（Ｌ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置６６におけるＬｙｓ（Ｋ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置６７におけるＡｌａ（Ａ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置４８におけるＩｌｅ（Ｉ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置３７におけるＩｌｅ（Ｉ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置３８におけるＬｙｓ（Ｋ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置９１におけるＰｈｅ（Ｆ）を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は位置１におけるＧｌｕ（Ｅ）を備える。
【００６９】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔのナンバリングにしたがって、
（ａ）位置７１におけるＡｌａ（Ａ）、
（ｂ）位置６９におけるＬｅｕ（Ｌ）、
（ｃ）位置６６におけるＬｙｓ（Ｋ）、
（ｄ）位置６７におけるＡｌａ（Ａ）、
（ｅ）位置４８におけるＩｌｅ（Ｉ）、
（ｆ）位置３７におけるＩｌｅ（Ｉ）、および
（ｇ）位置３８におけるＬｙｓ（Ｋ）、
ならびにこれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基を備える。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、上記の残基の全てを備える。
【００７０】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２３８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２３８と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２３９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２３９と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７１】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２４６〜２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域または配列番号２４６〜２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２３９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７２】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２４６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７３】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２４７と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７４】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２４８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２４８と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７５】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２４９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２４９と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７６】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７７】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５１と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７８】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５２と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００７９】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５３と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８０】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５４と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８１】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５５と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８２】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５６と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８３】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５７と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８４】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５８と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８５】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２５９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または配列番号２５９と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号２６０と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【００８６】
これらの例示的な任意の重鎖可変または軽鎖可変領域において、ＣＤＲは、表８に示されるように改変されてもよく、または表８に示されるような例示的な改変ＣＤＲにより置換されてもよい。
【００８７】
様々な実施形態では、本開示の抗体は、本明細書に記載される好ましい抗体のアミノ酸配列に相同的なアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を備え、かつ、抗体は、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体の所望の機能的特性を保持する。例えば、抗体は、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合し、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ分子、ガレクチン−３およびＬＳＥＣｔｉｎへのＬＡＧ−３の結合を遮断し、免疫応答を刺激し、かつエフェクター細胞に対する制御性Ｔ細胞の阻害効果を後退させる。
【００８８】
さらに、またはあるいは、抗体は、上記で論じた以下の機能的特性、例えば、ヒトＬＡＧ−３への高親和性結合、サルＬＡＧ−３への結合、マウスＬＡＧ−３への結合の欠如、ＭＨＣクラスＩＩ分子へのＬＡＧ−３の結合を阻害する能力および／または抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する能力のうちの１つまたは複数を有し得る。
【００８９】
様々な実施形態では、抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。他の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬのアミノ酸配列は、上記の配列に８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同であり得る。上記の配列のＶＨおよびＶＬ領域に高い（すなわち、８０％またはより高い）相同性を有するＶＨおよびＶＬ領域を備える抗体は、ＶＨおよび／またはＶＬのアミノ酸配列の核酸の突然変異生成（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介突然変異生成）の後に、本明細書に記載される機能アッセイを使用して保持された機能（すなわち、上記の機能）についてコードされる変化した抗体を試験することにより得ることができる。
【００９０】
本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントと同等である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮に入れて、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性％＝同一の位置の＃／位置の総＃×１００）。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な例に記載されるように数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。
【００９１】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、１２のギャップ長さペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−７，１９８８）を使用して決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み付けおよび１、２、３、４、５、または６の長さ重み付けを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−５３，１９７０）のアルゴリズムを使用して決定することができる。
【００９２】
さらに、またはあるいは、本開示のタンパク質配列は、例えば、関連配列を同定するために、公的データベースに対して検索を行うための「クエリ配列」としてさらに使用することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０，１９９０）のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本開示の抗体分子に相同的なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行うことができる。比較目的のためにギャップアライメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜４０２，１９９７）に記載されるようにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各々のプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメーターが有用である。
【００９３】
一部の実施形態では、配列同一性は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％である。一部の実施形態では、配列同一性は、１０個の残基のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９個のアミノ酸置換、欠失または付加を包含する。そのような置換は、一部の実施形態では、保存的置換である。
【００９４】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基により置換されるアミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当該技術分野において定義されており、これには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、免疫グロブリンポリペプチド中の非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基により置換される。別の実施形態では、アミノ酸の連なりが、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似の連なりにより置換され得る。
【００９５】
保存的アミノ酸置換の非限定的な例を以下の表において提供し、０またはより高い類似性スコアは、２つのアミノ酸の間の保存的置換を指し示す。
アミノ酸の類似性マトリックス
【表１】
0006929951.tif 000002
保存的アミノ酸置換
【表２】
0006929951.tif 000003
【００９６】
ヒト抗体もまた本明細書において調製された。ヒト抗体または断片は、表２に示すような重鎖ＣＤＲを備えてもよい。重鎖可変領域の例を表１に示す。ヒト抗体または断片は、表４に示すような軽鎖ＣＤＲを備えてもよい。重鎖可変領域の例を表３に示す。
【００９７】
一実施形態では、したがって、単離された抗体またはその断片であって、抗体またはその断片が、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）タンパク質に対する特異性を有し、抗体またはその断片が、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する軽鎖可変領域を備え、ＣＤＲＨ１が、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１もしくは２に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ２が、配列番号３もしくは４のアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３もしくは４に由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＨ３が、配列番号５〜４５からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５〜４５のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ１が、配列番号４６〜８０からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４６〜８０のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備え、ＣＤＲＬ２が、配列番号８１〜１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号８１〜１０３のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備え、かつ、ＣＤＲＬ３が、配列番号１０４〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１０４〜１３９のいずれか１つに由来するアミノ酸配列を備える、抗体またはその断片が提供される。
【００９８】
一部の実施形態では、抗体または断片は、表２に示す組合せの１つと同じ３つの重鎖ＣＤＲを備える。例えば、重鎖は、第１行に示すように、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号３のＣＤＲＨ２および配列番号５のＣＤＲＨ３を備えてもよい。一部の実施形態では、抗体または断片は、表４に示す組合せの１つと同じ３つの軽鎖ＣＤＲを備える。例えば、軽鎖は、第１行に示すように、配列番号４６のＣＤＲＬ１、配列番号８１のＣＤＲＬ２および配列番号１０４のＣＤＲＬ３を備えてもよい。
【００９９】
一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号１４０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域または配列番号１４０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。一部の実施形態では、抗体または断片は、配列番号１８９〜２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域または配列番号１８９〜２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを備える。
【０１００】
一部の実施形態では、配列同一性は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％である。一部の実施形態では、配列同一性は、１０個の残基のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９個のアミノ酸置換、欠失または付加を包含する。そのような置換は、一部の実施形態では、保存的置換である。
【０１０１】
本開示の抗体は、抗体の特定の機能的特徴または特性により特徴付けられる。例えば、抗体はヒトＬＡＧ−３に特異的に結合し、かつある特定の他の種のＬＡＧ−３、例えば、サルＬＡＧ−３、例えば、マカクザル、アカゲザルに結合するものであってもよいが、ある特定の他の種のＬＡＧ−３、例えばマウスＬＡＧ−３に実質的に結合しないものであってもよい。好ましくは、本開示の抗体は、ヒトＬＡＧ−３に高親和性で結合する。
【０１０２】
抗原特異的Ｔ細胞応答などの免疫応答を刺激する抗体の能力は、例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答においてインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を刺激する抗体の能力により指し示され得る。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＬＡＧ−３に結合し、かつ抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する能力を呈する。他の実施形態では、本開示の抗体はヒトＬＡＧ−３に結合するが、抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する能力を呈さない。免疫応答を刺激する抗体の能力を評価するための他の手段としては、ｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍移植モデルなどにおいて腫瘍成長を阻害する抗体能力または自己免疫応答を刺激する抗体の能力、例えば、自己免疫モデルにおいて自己免疫疾患の発症を促進する能力、例えば、ＮＯＤマウスモデルにおいて糖尿病の発症を促進する能力が挙げられる。
【０１０３】
ＬＡＧ−３への本開示の抗体の結合は、当該技術分野において充分に確立された１つまたは複数の技術を使用して評価することができる。例えば、好ましい実施形態では、抗体は、細胞表面上にＬＡＧ−３、例えば、ヒトＬＡＧ−３、またはサルＬＡＧ−３、例えば、アカゲザルもしくはマカクザルまたはマウスＬＡＧ−３を発現するようにトランスフェクトされたＣＨＯ細胞などのヒトＬＡＧ−３を発現する細胞株と抗体を反応させるフローサイトメトリーアッセイにより試験することができる。フローサイトメトリーアッセイにおいて使用するための他の好適な細胞としては、天然ＬＡＧ−３を発現する抗ＣＤ３刺激ＣＤ４＋活性化Ｔ細胞が挙げられる。さらに、またはあるいは、結合キネティクス（例えば、ＫＤ値）などの抗体の結合性は、ＢＩＡｃｏｒｅ結合アッセイにおいて試験することができる。また他の好適な結合アッセイとしては、例えば組換えＬＡＧ−３タンパク質を使用する、ＥＬＩＳＡアッセイが挙げられる。好ましくは、本開示の抗体は、５×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、２×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、５×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、４×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、３×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、２×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、１２５×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、５×１０−１０Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合し、または１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満のＫＤでＬＡＧ−３タンパク質に結合する。
【０１０４】
本開示の好ましい抗体は、［実施例２〜８］に記載されるように単離され、構造的に特徴付けられたヒトモノクローナル抗体Ｓ２７、Ｓ３１、Ｔ９９、およびＳ１１９である。Ｓ２７、Ｓ３１、Ｔ９９およびＳ１１９のＶＨアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５８、および配列番号１６２に示される。Ｓ２７、Ｓ３１、Ｔ９９、およびＳ１１９のＶＬアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２０７、および配列番号２１１に示される。
【０１０５】
これらの抗体のそれぞれがヒトＬＡＧ−３に結合できることを考慮すると、ＶＨおよびＶＬ配列を「混合およびマッチ」させて本開示の他の抗ＬＡＧ−３結合分子を作出することができる。好ましくは、ＶＨおよびＶＬ鎖を混合およびマッチさせた時に、特定のＶＨ／ＶＬペアリングからのＶＨ配列は、構造的に類似のＶＨ配列により置換される。同様に、好ましくは、特定のＶＨ／ＶＬペアリングからのＶＬ配列は、構造的に類似のＶＬ配列により置換される。
【０１０６】
したがって、一態様では、本開示は、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分であって、
（ａ）配列番号１４０〜配列番号１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および
（ｂ）配列番号１８９〜配列番号２３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を備え、
抗体が、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合する、抗体、またはその抗原結合部分を提供する。
好ましい可変重鎖および可変軽鎖の組合せとしては、
（ａ）配列番号１４９のアミノ酸配列を備える重鎖可変領域および配列番号１９８のアミノ酸配列を備える軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１５０のアミノ酸配列を備える重鎖可変領域および配列番号１９９のアミノ酸配列を備える軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を備える重鎖可変領域および配列番号２０７のアミノ酸配列を備える軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号１６２のアミノ酸配列を備える重鎖可変領域および配列番号２１１のアミノ酸配列を備える軽鎖可変領域
が挙げられる。
【０１０７】
ＣＤＲ３ドメインは、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２ドメインから独立して単独で、コグネイト抗原に対する抗体の結合特異性を決定できること、および、共通のＣＤＲ３配列に基づいて同じ結合特異性を有する複数の抗体を生成できると予測されることが当該技術分野において周知である。例えば、Ｋｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔ．Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎ．８３（２）：２５２−６０，２０００、Ｂｅｉｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３−４９，２０００、Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９５：８９１０−１５，１９９８、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＣＳ１１６：２１６１−２，２９９１４、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ９２：２５２９−３３，１９９５、Ｄｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：７３９−４９，１９９６、Ｂｅｒｅｚｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＩＡＪｏｕｒｎａｌ８（１）：Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ，２００１、Ｉｇａｒａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ１１７：４５２−７，１９９５、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８０７−１０，１９９８、Ｌｅｖｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ９０：４３７４−８，１９９３、Ｐｏｌｙｍｅｎｉｓ  ａｎｄ  Ｓｔｏｌｌｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５２１８−３２９，１９９４、およびＸｕ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１３：３７−４５，２０００を参照。米国特許第６，９５１，６４６号明細書、同第６，９１４，１２８号明細書、同第６，０９０，３８２号明細書、同第６，８１８，２１６号明細書、同第６，１５６，３１３号明細書、同第６，８２７，９２５号明細書、同第５，８３３，９４３号明細書、同第５，７６２，９０５号明細書および同第５，７６０，１８５号明細書も参照。これらの参考文献のそれぞれは、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０８】
したがって、本開示は、ヒトまたは非ヒト動物に由来する抗体の１つまたは複数の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３ドメインを備え、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合することができるモノクローナル抗体を提供する。ある特定の態様では、本開示は、マウスまたはラット抗体などの非ヒト抗体の１つまたは複数の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３ドメインを備え、ＬＡＧ−３に特異的に結合することができるモノクローナル抗体を提供する。一部の実施形態では、非ヒト抗体の１つまたは複数の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３ドメインを備えるそのような本発明の抗体は、対応する親非ヒト抗体と（ａ）結合について競合することができ、（ｂ）機能的特徴を保持し、（ｃ）同じエピトープに結合し、かつ／または（ｄ）類似の結合親和性を有する。他の態様では、本開示は、例えば、非ヒト動物から得られるヒト抗体などのヒト抗体の１つまたは複数の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３ドメインを備え、ヒト抗体が、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合することができる、モノクローナル抗体を提供する。他の態様では、本開示は、例えば、非ヒト動物から得られるヒト抗体などの第１のヒト抗体の１つまたは複数の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３ドメインを備え、第１のヒト抗体が、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合することができ、かつ、第１のヒト抗体のＣＤＲ３ドメインが、ＬＡＧ−３に対する結合特異性を欠くヒト抗体中のＣＤＲ３ドメインを置換して、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合することができる第２のヒト抗体を生成する、モノクローナル抗体を提供する。一部の実施形態では、第１のヒト抗体の１つまたは複数の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３ドメインを備えるそのような本発明の抗体は、対応する親の第１のヒト抗体と（ａ）結合について競合することができ、（ｂ）機能的特徴を保持し、（ｃ）同じエピトープに結合し、かつ／または（ｄ）類似の結合親和性を有する。
操作されたおよび改変された抗体
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「ヒト化された」および「ヒト化」などの用語は、本明細書に開示されるマウスモノクローナル抗体のＣＤＲをヒトＦＲおよび定常領域にグラフトすることを指す。以下に論じるように、様々な抗体特性を向上させるために、例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら（Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６（１）：２５−３４，２００５）およびＨｏｕら（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４４（１）：１１５−２０，２００８）にそれぞれ開示される方法によるマウスＣＤＲ、およびヒトＦＲへの可能なさらなる改変もまたこれらの用語に包含される。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「ＦＲ」または「フレームワーク配列」という用語は、ＦＲ１〜４のいずれか１つを指す。本開示に包含されるヒト化抗体および抗原結合断片としては、ＦＲ１〜４のいずれか１つまたは複数が実質的または完全にヒトのものである分子、すなわち、個々の実質的にまたは完全にヒトのＦＲ１〜４の可能な組合せのいずれかが存在する分子が挙げられる。例えば、これは、ＦＲ１およびＦＲ２、ＦＲ１およびＦＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３などが実質的または完全にヒトのものである分子を含む。実質的にヒトのフレームワークは、公知のヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、本明細書に開示されるフレームワーク配列、または公知のヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【０１１１】
完全にヒトのフレームワークは、公知のヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と同一のものである。ヒトＦＲ生殖細胞系列配列は、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベースおよびＭａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  ＬｅｆｒａｎｃおよびＧｅｒａｒｄ  ＬｅｆｒａｎｃによるＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００１（その内容は参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）から得ることができる。
【０１１２】
本開示に包含されるＣＤＲとしては、本明細書に具体的に開示されるものだけでなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性の配列同一性を有するＣＤＲ配列が挙げられる。あるいは、本開示に包含されるＣＤＲとしては、本明細書に具体的に開示されるものだけでなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と比較して対応する位置において１、２、３、４、または５アミノ酸の変化を有するＣＤＲ配列が挙げられる。そのような配列同一性の、またはアミノ酸改変された、ＣＤＲは、好ましくは、インタクトな抗体により認識される抗原に結合する。
【０１１３】
本開示によるヒト化抗体、および類似の機能的特性を呈する本明細書に開示されるものは、いくつもの異なる方法を使用して生成させることができる  Ａｌｍａｇｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｊａｎ  １（１３）：１６１９−３３，２００８）。１つのアプローチでは、親抗体化合物のＣＤＲが、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークにグラフトされる。新たなフレームワークの配列同一性は、一般に、親抗体化合物中の対応するフレームワークの配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性である。１００未満のアミノ酸残基を有するフレームワークの場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸残基を変化させることができる。このグラフト化は、親抗体の結合親和性と比較して結合親和性の低減を結果としてもたらし得る。これが該当する場合、Ｑｕｅｅｎら（ＰＮＡＳ８８：２８６９，１９９１）により開示された特定の基準に基づいてフレームワークをある特定の位置において親フレームワークに復帰突然変異させることができる。相同性および復帰突然変異に基づいてヒト化バリアントを生成させるための有用な方法を記載する追加の参考文献としては、Ｏｌｉｍｐｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｆｅｂ  １；３１（３）：４３４−５，２０１５）ならびに米国特許第４，８１６，３９７号明細書、同第５，２２５，５３９号明細書、および同第５，６９３，７６１号明細書に記載されているもの、ならびにＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５，１９９６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−７，１９８８、およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−６，１９８８）が挙げられる。
【０１１４】
本開示の抗体は、例えば標準的なＥＬＩＳＡにより、ヒトＬＡＧ−３への結合について試験することができる。抗ＬＡＧ−３ヒトＩｇＧ抗体は、ウエスタンブロッティングにより、ＬＡＧ−３抗原との反応性についてさらに試験することができる。本開示の抗体の結合特異性はまた、例えばフローサイトメトリーで、ＬＡＧ−３タンパク質を発現する細胞への抗体の結合をモニターすることにより決定することができる。これらの方法は当該技術分野において公知である。例えば、上掲のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）を参照。
二機能性分子
【０１１５】
本開示の抗体を治療剤に共役させて、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）などのイムノコンジュゲートを形成させることができる。好適な治療剤としては、代謝拮抗物質、アルキル化剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ架橋剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、核外輸送阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質、および抗有糸分裂剤が挙げられる。ＡＤＣにおいて、抗体および治療剤は、好ましくは、ペプチジル、ジスルフィド、またはヒドラゾンリンカーなどの切断可能なリンカーを介して共役される。より好ましくは、リンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｓｅｒ、またはＧｌｕなどのペプチジルリンカーである。ＡＤＣは、米国特許第７，０８７，６００号明細書、同第６，９８９，４５２号明細書、および同第７，１２９，２６１号明細書、ＰＣＴ国際公開ＷＯ０２／０９６９１０、ＷＯ０７／０３８６５８、ＷＯ０７／０５１０８１、ＷＯ０７／０５９４０４、ＷＯ０８／０８３３１２、およびＷＯ０８／１０３６９３、米国特許出願公開第２００６００２４３１７号明細書、同第２００６０００４０８１号明細書、および同第２００６０２４７２９５号明細書（これらの開示は参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載されている通りに調製することができる。
【０１１６】
別の態様では、本開示は、少なくとも１つの他の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、別の抗体または受容体のリガンド）に連結されて少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成した抗ＬＡＧ−３抗体を備える二重特異性分子を特徴とする。したがって、本明細書で使用される場合、「二重特異性分子」は、３つまたはより多くの特異性を有する分子を含む。好ましい実施形態では、二重特異性分子は、ＬＡＧ−３に対する第１の結合特異性およびＬＡＧ−３発現標的細胞を殺傷できる細胞傷害性エフェクター細胞を誘引する誘発性分子に対する第２の結合特異性を備える。好適な誘発性分子の例は、ＣＤ６４、ＣＤ８９、ＣＤ１６、およびＣＤ３である。例えば、Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（５）：２３８−４４，２００４を参照。
【０１１７】
一実施形態では、二重特異性分子は、抗Ｆｃ結合特異性および抗ＬＡＧ−３結合特異性に加えて、第３の特異性を有する。第３の特異性は、抗増進因子（ａｎｔｉ−ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ）（ＥＦ）、例えば、細胞傷害活性に関与する表面タンパク質に結合することにより標的細胞に対する免疫応答を増加させる分子に対するものであり得る。例えば、抗増進因子は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤＳ、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ４０、またはＩＣＡＭ−１を介して）、他の免疫調節分子（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１２２、４−１ＢＢ、ＴＩＭ３、ＯＸ−４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＣＤ４７またはＣＤ７３を介して）または他の免疫細胞に結合して、標的細胞に対する免疫応答の増加を結果としてもたらすことができる。
【０１１８】
免疫受容体モジュレーターとして、ＬＡＧ−３に特異的な抗体または抗原結合断片を腫瘍抗原に特異的な第２の抗原結合断片と組み合わせて、二重特異性抗体を生成させることができる。「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞中で産生される抗原物質であり、すなわち、それは宿主中で免疫応答を誘発する。腫瘍抗原は、腫瘍細胞の同定において有用であり、癌療法において使用するための潜在的な候補である。身体中の正常タンパク質は抗原性ではない。しかしながら、ある特定のタンパク質は、腫瘍発生の際に産生または過剰発現され、身体にとって「異物」となる。これは、免疫系から充分に隔離される正常タンパク質、通常は極めて小量で産生されるタンパク質、通常は発生のある特定のステージにおいてのみ産生されるタンパク質、または突然変異に起因して構造が改変されるタンパク質を含み得る。
【０１１９】
多数の腫瘍抗原が当該技術分野において公知であり、新たな腫瘍抗原がスクリーニングにより容易に同定され得る。腫瘍抗原の非限定的な例としては、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ−７２、ＣＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン、αＶβ３、α５β１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰおよびテネイシンが挙げられる。
【０１２０】
一部の態様では、一価単位は、対応する非腫瘍細胞と比較して腫瘍細胞上で過剰発現されるタンパク質に対して特異性を有する。本明細書において使用される「対応する非腫瘍細胞」は、腫瘍細胞の起源と同じ細胞種の非腫瘍細胞を指す。そのようなタンパク質は腫瘍抗原と必ずしも異ならないことが留意される。非限定的な例としては、ほとんどの結腸癌、直腸癌、乳癌、肺癌、膵臓癌および胃腸管癌において過剰発現される癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、乳癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、前立腺癌および子宮頸癌において頻繁に過剰発現されるヘレグリン受容体（ＨＥＲ−２、ｎｅｕまたはｃ−ｅｒｂＢ−２）、乳房、頭頸部、非小細胞肺および前立腺の固形腫瘍などの広範な固形腫瘍において高発現される上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、アシアロ糖タンパク質受容体、トランスフェリン受容体、肝細胞上に発現されるセルピン酵素複合体受容体、膵管腺癌細胞上に過剰発現される線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）、抗血管新生遺伝子療法のための血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、９０％の非ムチン性卵巣癌において選択的に過剰発現される葉酸受容体、細胞表面グリコカリックス、炭水化物受容体、および呼吸器系上皮細胞への遺伝子送達のために有用でありかつ嚢胞性線維症などの肺疾患の治療のために魅力的な多量体免疫グロブリン受容体が挙げられる。これに関して二重特異性の非限定的な例としては、ＬＡＧ−３／ＥＧＦＲ、ＬＡＧ−３／Ｈｅｒ２、ＬＡＧ−３／ＣＤ３３、ＬＡＧ−３／ＣＤ１３３、ＬＡＧ−３／ＣＥＡおよびＬＡＧ−３／ＶＥＧＦが挙げられる。
【０１２１】
異なる形式の二重特異性抗体もまた提供される。一部の実施形態では、抗ＬＡＧ−３断片および第２の断片のそれぞれは、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態では、二重特異性抗体はＦｃ断片をさらに含む。
【０１２２】
抗体または抗原結合断片のみを含むものではない二機能性分子もまた提供される。腫瘍抗原標的化分子として、本明細書に記載されるものなどのＬＡＧ−３に特異的な抗体または抗原結合断片は、任意選択的にペプチドリンカーを通じて、免疫サイトカインまたはリガンドと組み合わせることができる。連結される免疫サイトカインまたはリガンドとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴおよびＧＩＴＲＬが挙げられるがこれらに限定されない。そのような二機能性分子は、免疫チェックポイント遮断効果を腫瘍部位局所的免疫モジュレーションと組み合わせることができる。
【０１２３】
二重特異性分子は、多くの異なる形式およびサイズであり得る。サイズ範囲の一端において、二重特異性分子は、同一特異性の２つの結合アームを有する代わりに異なる特異性をそれぞれ有する２つの結合アームを有することを除いて、伝統的な抗体形式を保持する。他の極端な場合には、ペプチド鎖により連結された２つの単鎖抗体断片からなる二重特異性分子（ｓｃＦｖ'ｓ）、いわゆるＢｓ（ｓｃＦｖ）２コンストラクトがある。中間サイズの二重特異性分子としては、ペプチジルリンカーにより連結された２つの異なるＦ（ａｂ）断片が挙げられる。これらおよび他の形式の二重特異性分子は、遺伝子操作、体細胞ハイブリダイゼーション、または化学的方法により調製することができる。例えば、上掲のＫｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｏ  ａｎｄ  Ｓｕｒｅｓｈ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．９（６）：６３５−４４，１９８８、およびｖａｎ  Ｓｐｒｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ２１（８）：３９１−７，２０００、ならびにそれらにおいて参照される参考文献を参照。
医薬組成物
【０１２４】
別の態様では、本開示は、薬学的に許容される以前と共に配合された本開示の抗体を備える医薬組成物を提供する。それは、任意選択的に、別の抗体または薬物などの１つまたは複数の追加の薬学的に活性の成分を備えてもよい。本開示の医薬組成物はまた、例えば、別の免疫賦活剤、抗がん剤、抗ウイルス剤、または、抗ＬＡＧ−３抗体がワクチンに対する免疫応答を増進させるようにワクチンと共に併用療法において投与することができる。
【０１２５】
医薬組成物は、任意の数の賦形剤を含み得る。使用され得る賦形剤としては、担体、表面活性剤、増粘剤または乳化剤、固体結合剤、分散剤または懸濁補助剤、可溶化剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味剤、防腐剤、等張剤、およびこれらの組合せが挙げられる。好適な賦形剤の選択および使用は、Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ２００３）（その開示は参照することにより本明細書に組み込まれる）に教示されている。好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）のために好適である。投与経路に応じて、活性化合物は、それを不活化し得る酸および他の天然条件の作用からそれを保護するための材料中にコーティングすることができる。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による、経腸および外用投与以外の投与の方式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内の注射および注入が挙げられるがこれらに限定されない。あるいは、本開示の抗体は、外用、表皮または粘膜の投与経路などの非経口以外の経路、例えば、鼻腔内、経口的、経膣的、直腸内、舌下または局所的な経路を介して投与することができる。
【０１２６】
本開示の薬学的化合物は、薬学的に許容される塩の形態であり得る。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、いかなる望ましくない毒物学的効果も与えない塩を指す。そのような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性の無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの他に、非毒性の有機酸、例えば、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシルアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などに由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどの他に、非毒性の有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものが挙げられる。
【０１２７】
医薬組成物は、無菌の水溶液または分散液の形態であり得る。医薬組成物はまた、マイクロエマルション、リポソーム、または高薬物濃度にとって好適な他の秩序だった構造物中に配合され得る。
【０１２８】
単回剤形を製造するために担体材料と合わせられ得る活性成分の量は、治療されている対象および特定の投与方式に応じて異なり、一般に、治療効果を生じさせる組成物の量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、約０．０１％〜約９９パーセントの活性成分、好ましくは約０．１％〜約７０％、最も好ましくは約１％〜約３０％の活性成分の範囲内である。
【０１２９】
投与量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療奏功）を提供するために調整される。例えば、単一のボーラスを投与することができ、いくつもの分割された用量を時間をかけて投与することができ、または治療状況の緊急度により指し示される通りに用量を比例的に低減もしくは増加させることができる。投与の容易さおよび投与量の均一性のために投薬単位形態に非経口組成物を配合することが特に有利である。本明細書で使用される投与量単位形態は、治療される対象にとっての単位投与量として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体との関連で所望の治療効果を生じさせるように算出された予め決定された量の活性化合物を含有する。あるいは、抗体は、持続放出配合物として投与することができ、その場合、より頻度の少ない投与が必要とされる。
【０１３０】
抗体の投与のために、投与量は、宿主の体重の、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は０．０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジームは、１週間に１回、２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月毎に１回または３〜６ヶ月毎に１回の投与を伴う。本開示の抗ＬＡＧ−３抗体の好ましい投与量レジメンとしては、静脈内投与を介して１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重が挙げられ、抗体は、（ｉ）６つの投与量について４週毎の後、３ヶ月毎、（ｉｉ）３週毎、（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回の後、１ｍｇ／ｋｇ体重を３週毎の投薬スケジュールのうちの１つを使用して与えられる。一部の方法では、投与量は、約１〜１０００μｇ／ｍＬ、一部の方法では約２５〜３００μｇ／ｍＬの血漿抗体濃度を達成するように調整される。
【０１３１】
本開示の抗ＬＡＧ−３抗体の「治療的に効果的な投与量」は、好ましくは、疾患症状の重篤度の減少、疾患症状なしの期間の頻度および長さの増加、または疾病に起因する障害もしくは能力低下の予防を結果としてもたらす。例えば、腫瘍を有する対象について、「治療的に効果的な投与量」は、好ましくは、治療されていない対象と比べて少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、よりいっそう好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％腫瘍成長を阻害する。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させることができ、またはそれ以外に、典型的にヒトであるか、もしくは別の哺乳動物であり得る対象において症状を改善させることができる。
【０１３２】
医薬組成物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムなどの制御放出配合物であり得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照。
【０１３３】
治療用組成物は、医療用デバイス、例えば、（１）無針皮下注射デバイス（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号明細書、同第５，３８３，８５１号明細書、同第５，３１２，３３５号明細書、同第５，０６４，４１３号明細書、同第４，９４１，８８０号明細書、同第４，７９０，８２４号明細書、および同第４，５９６，５５６号明細書）、（２）マイクロ注入ポンプ（米国特許第４，４８７，６０３号明細書）、（３）経皮デバイス（米国特許第４，４８６，１９４号明細書）、（４）注入装置（米国特許第４，４４７，２３３号明細書および同第４，４４７，２２４号明細書）、および（５）浸透デバイス（米国特許第４，４３９，１９６号明細書および同第４，４７５，１９６号明細書）（これらの開示は参照することにより本明細書に組み込まれる）を介して投与することができる。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適切な分布を確実にするように配合され得る。例えば、本開示の治療用化合物が血液脳関門を越えることを確実にするために、それらをリポソーム中に配合することができ、リポソームは、特定の細胞または臓器への選択的輸送を増進させるために標的化部分を追加的に含んでもよい。例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書、同第５，３７４，５４８号明細書、同第５，４１６，０１６号明細書、および同第５，３９９，３３１号明細書、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５，１９８９、Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８、Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳＬｅｔｔ．３５７：１４０、Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０、Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４、Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｒｎ．２６９：９０９０、Ｋｅｉｎａｎｅｎ  ａｎｄ  Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３、およびＫｉｌｌｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ４：２７３を参照。
使用および方法
【０１３５】
本開示の抗体、抗体組成物および方法は、例えば、ＬＡＧ−３の検出またはＬＡＧ−３の遮断による免疫応答の増進を伴う多数のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの用途を有する。好ましい実施形態では、本開示の抗体はヒト抗体である。例えば、これらの分子は、様々な状況において免疫を増進させるために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ  ｖｉｖｏで培養物中の細胞に、または例えばｉｎ  ｖｉｖｏでヒト対象に投与することができる。したがって、一態様では、本開示は、対象において免疫応答を調節する方法であって、対象に本開示の抗体、またはその抗原結合部分を、対象において免疫応答が調節されるように投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、応答は、増進され、刺激され、または上方調節される。
【０１３６】
好ましい対象としては、免疫応答の増進を必要とするヒト患者が挙げられる。方法は、免疫応答（例えば、Ｔ細胞媒介性の免疫応答）を増大させることにより治療され得る障害を有するヒト患者を治療するために特に好適である。特定の実施形態では、方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの癌の治療のために特に好適である。免疫の抗原特異的な増進を達成するために、抗ＬＡＧ−３抗体を目的の抗原と共に投与することができ、または抗原は、治療される対象（例えば、腫瘍を有するまたはウイルスを有する対象）中に既に存在していてもよい。ＬＡＧ−３に対する抗体が別の剤と共に投与される場合、２つは、いずれかの順序においてまたは同時に投与され得る。
【０１３７】
本開示は、試料中のヒトＬＡＧ−３抗原の存在を検出する方法、またはヒトＬＡＧ−３抗原の量を測定する方法であって、試料、および対照試料を、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分と、抗体またはその部分とヒトＬＡＧ−３との複合体の形成を可能とする条件下で接触させることを含む方法をさらに提供する。次いで、複合体の形成が検出され、対照試料と比較した試料間の複合体形成の差異は、試料中のヒトＬＡＧ−３抗原の存在を指し示す。さらに、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体は、免疫親和性精製を介してヒトＬＡＧ−３を精製するために使用され得る。
【０１３８】
ＭＨＣクラスＩＩ分子へのＬＡＧ−３の結合を阻害し、かつ抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する本開示の抗ＬＡＧ−３抗体の能力を考慮すると、本開示はまた、抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激し、増進させまたは上方調節するために本開示の抗体を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの方法を提供する。例えば、本開示は、抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する方法であって、前記Ｔ細胞を本開示の抗体と、抗原特異的Ｔ細胞応答が刺激されるように接触させることを含む、方法を提供する。抗原特異的Ｔ細胞応答を測定するために抗原特異的Ｔ細胞応答の任意の好適な指標を使用することができる。そのような好適な指標の非限定的な例としては、抗体の存在下でのＴ細胞増殖の増加が挙げられ、かつ／または抗体の存在下でサイトカイン産生を増加させる。好ましい実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞によるインターロイキン−２の産生が刺激される。
【０１３９】
本開示はまた、対象において免疫応答（例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答）を刺激する方法であって、本開示の抗体を対象に、対象において免疫応答（例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答）が刺激されるように投与することを含む、方法を提供する。好ましい実施形態では、対象は、腫瘍を有する対象であり、かつ、腫瘍に対する免疫応答が刺激される。別の好ましい実施形態では、対象は、ウイルスを有する対象であり、かつ、ウイルスに対する免疫応答が刺激される。
【０１４０】
別の態様では、本開示は、対象において腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、対象に本開示の抗体を、腫瘍の成長が対象において阻害されるように投与することを含む、方法を提供する。さらに別の態様では、本開示は、対象においてウイルス感染症を治療する方法であって、対象に本開示の抗体を、ウイルス感染症が対象において治療されるように投与することを含む、方法を提供する。
【０１４１】
本開示のこれらおよび他の方法が以下にさらに詳細に議論される。
癌
【０１４２】
抗体によるＬＡＧ−３の遮断は、患者においてがん性細胞への免疫応答を増進させ得る。一態様では、本開示は、がん性腫瘍の成長が阻害されるように抗ＬＡＧ−３抗体を使用するｉｎ  ｖｉｖｏでの対象の治療に関する。抗ＬＡＧ−３抗体は、がん性腫瘍の成長を阻害するために単独で使用することができる。あるいは、抗ＬＡＧ−３抗体は、以下に記載されるように、他の免疫原性剤、標準癌治療、または他の抗体と組み合わせて使用することができる。
【０１４３】
したがって、一実施形態では、本開示は、対象において腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、対象に治療有効量の抗ＬＡＧ−３抗体、またはその抗原結合部分を投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、抗体はヒト抗ＬＡＧ−３抗体（本明細書に記載される任意のヒト抗ヒトＬＡＧ−３抗体など）である。さらにまたはあるいは、抗体は、キメラまたはヒト化抗ＬＡＧ−３抗体であり得る。
【０１４４】
本開示の抗体を使用して成長が阻害され得る好ましいがんとしては、典型的に免疫療法に応答性の癌が挙げられる。治療のための好ましい癌の非限定的な例としては、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン難治性前立腺癌）、乳癌、結腸癌および肺癌（例えば、非小細胞肺癌）が挙げられる。さらに、本開示は、本開示の抗体を使用して成長が阻害され得る難治性または再発性悪性腫瘍を含む。本開示の方法を使用して治療され得る他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域癌、胃がん、精巣癌、卵管の癌腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎がん、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性または急性白血病、例えば、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹部神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境により誘導される癌、例えば、アスベストにより誘導される癌、ならびに前記癌の組合せが挙げられる。本開示はまた、転移癌、特に、ＰＤ−Ｌ１を発現する転移癌（Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）の治療のために有用である。
【０１４５】
任意選択的に、ＬＡＧ−３に対する抗体は、免疫原性剤、例えば、がん性細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、および炭水化物分子など）、細胞、および免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトされた細胞と組み合わせることができる（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：４９１９−２８）。使用され得る腫瘍ワクチンの非限定的な例としては、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴＩおよび／もしくはチロシナーゼのペプチド、またはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞が挙げられる（以下にさらに議論される）。
【０１４６】
ヒトにおいて、黒色腫などの一部の腫瘍は免疫原性であることが示されている。ＬＡＧ−３の遮断によるＴ細胞活性化の閾値を上昇させることにより、宿主における腫瘍応答を活性化させることができる。
【０１４７】
ＬＡＧ−３の遮断は、ワクチン接種プロトコールと組み合わせた時により効果的である可能性がある。腫瘍に対するワクチン接種のための多くの実験戦略が考案されている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，２０００，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：６０−６２、Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ，Ｃ．，２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：３００−３０２、Ｋｈａｙａｔ，Ｄ．２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：４１４−４２８、Ｆｏｏｎ，Ｋ．２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：７３０−７３８を参照。Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｎ．ａｎｄ  Ｓｚｎｏｌ，Ｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｃｈ．６１，ｐｐ．３０２３−３０４３  ｉｎ  ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９７，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎも参照）。これらの戦略の１つでは、ワクチンは、自己または同種腫瘍細胞を使用して調製される。これらの細胞ワクチンは、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように腫瘍細胞に形質導入を行った時に最も効果的であることが示されている。ＧＭ−ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力な活性化因子であることが示されている（Ｄｒａｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：３５３９−４３）。
【０１４８】
様々な腫瘍における遺伝子発現および大規模な遺伝子発現パターンの研究は、いわゆる腫瘍特異的抗原の定義に繋がった（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，ＳＡ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１０：２８１−７）。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍中および腫瘍が発生する細胞中に発現される分化抗原、例えば、メラノサイト抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、およびＴｒｐ−２である。より重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主中に見出される腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であることが示され得る。ＬＡＧ−３の遮断は、これらのタンパク質に対する免疫応答を生成させるために組換えタンパク質および／または腫瘍中で発現されるペプチドの集まりと組み合わせて使用することができる。これらのタンパク質は、通常、自己抗原として免疫系によりみなされ、したがって、それらにとって寛容的である。腫瘍抗原は、染色体のテロメアの合成のために必要とされ、８５％より多くのヒト癌および限られた数の体細胞組織においてのみ発現されるタンパク質テロメラーゼを含み得る（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６６：２０１１−２０１３）。（これらの体細胞組織は、様々な手段により免疫攻撃から保護され得る）。腫瘍抗原はまた、タンパク質配列を変化させまたは２つの無関連配列間の融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体中のｂｃｒ−ａｂｌ）、もしくはＢ細胞腫瘍のイディオタイプを作出する体細胞突然変異のため、癌細胞中で発現される「ネオ抗原」であり得る。
【０１４９】
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などのヒト癌に関与するウイルスからのタンパク質を含み得る。ＬＡＧ−３の遮断と組み合わせて使用され得る腫瘍特異的抗原の別の形態は、腫瘍組織自体から単離された精製された熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）である。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞からのタンパク質の断片を含有し、これらのＨＳＰは、腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞への送達において高度に効率的である（Ｓｕｏｔ＆Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：１５８５−１５８８、Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７８：１１７−１２０）。
【０１５０】
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答をプライムするために使用され得る強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、ｅｘ  ｖｉｖｏで製造されて、様々なタンパク質およびペプチド抗原の他に腫瘍細胞抽出物を積み込まれ得る（Ｎｅｓｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ４：３２８−３３２）。ＤＣはまた、これらの腫瘍抗原も発現するように遺伝学的手段により形質導入され得る。ＤＣはまた、免疫化の目的のために腫瘍細胞に直接的に融合されている（Ｋｕｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ６：３３２−３３６）。ワクチン接種の方法として、ＤＣ免疫化は、より強力な抗腫瘍応答を活性化させるためにＬＡＧ−３の遮断と効果的に組み合わせることができる。
【０１５１】
ＬＡＧ−３の遮断はまた、標準癌治療と組み合わせることができる。ＬＡＧ−３の遮断は、化学療法レジームと効果的に組み合わせることができる。これらの場合において、投与される化学療法試薬の用量を低減させることが可能であり得る（Ｍｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５８：５３０１−５３０４）。そのような組合せの例は、黒色腫の治療のためのデカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）と組み合わせた抗ＬＡＧ−３抗体である。そのような組合せの別の例は、黒色腫の治療のためのインターロイキン−２（ＩＬ−２）と組み合わせた抗ＬＡＧ−３抗体である。ＬＡＧ−３の遮断および化学療法の併用の背景にある科学的合理性は、ほとんどの化学療法化合物の細胞傷害作用の帰結である細胞死は、抗原提示経路中の腫瘍抗原のレベルの増加を結果としてもたらすはずであるということである。細胞死を通じてＬＡＧ−３の遮断との相乗作用を結果としてもたらし得る他の組合せ療法は、放射線、手術、およびホルモン枯渇である。これらのプロトコールのそれぞれは、宿主における腫瘍抗原の供給源を作出する。血管新生阻害剤もまたＬＡＧ−３の遮断と組み合わせることができる。血管新生の阻害は、腫瘍抗原を宿主の抗原提示経路に供給し得る腫瘍細胞死に繋がる。
【０１５２】
ＬＡＧ−３遮断抗体もまた、ＦｃａまたはＦｅｙ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化する二重特異性抗体と組み合わせて使用することができる（例えば、米国特許第５，９２２，８４５号明細書および同第５，８３７，２４３号明細書を参照）。二重特異性抗体は、２つの別々の抗原を標的化するために使用することができる。例えば、マクロファージを腫瘍の部位に標的化するために抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例えば、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）二重特異性抗体が使用されている。この標的化は、より効果的に腫瘍特異的応答を活性化させ得る。これらの応答のＴ細胞アームは、ＬＡＧ−３の遮断の使用により増大する。あるいは、腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーに結合する二重特異性抗体の使用により抗原をＤＣに直接的に送達してもよい。
【０１５３】
腫瘍は、多様な機序により宿主の免疫サーベイランスを回避する。これらの機序の多くは、腫瘍により発現される免疫抑制性のタンパク質の不活性化により克服され得る。これらとしては、特に、ＴＧＦ−β（Ｋｅｈｒｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６３：１０３７−１０５０）、ＩＬ−１０（Ｈｏｗａｒｄ＆Ｏ'Ｇａｒｒａ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ１３：１９８−２００）、およびＦａｓリガンド（Ｈａｈｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ４：１３６３−１３６５）が挙げられる。これらの各実体に対する抗体を抗ＬＡＧ−３と組み合わせて使用して、免疫抑制剤の効果に対抗しかつ宿主による腫瘍免疫応答に有利に働くようにすることができる。
【０１５４】
宿主の免疫応答性を活性化させる他の抗体を抗ＬＡＧ−３と組み合わせて使用することができる。これらとしては、ＤＣ機能および抗原提示を活性化させる樹状細胞の表面上の分子が挙げられる。抗ＣＤ４０抗体は、Ｔ細胞ヘルパー活性を効果的に代替することができ（Ｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ３９３：４７４−４７８）、ＬＡＧ−３抗体と組み合わせて使用することができる（Ｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ２０１（５）５２７−４０）。ＣＴＬＡ−４（例えば、米国特許第５，８１１，０９７号明細書）、ＯＸ−４０（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：２１６０−２１６９）、４−１ＢＢ（Ｍｅｌｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３：６８２−６８５（１９９７）、およびＩＣＯＳ（Ｈｕｔｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ３９７：２６２−２６６）などのＴ細胞共刺激分子に対する抗体を活性化させることもまた、Ｔ細胞活性化のレベルの増加を提供し得る。
【０１５５】
骨髄移植は、造血起源の様々な腫瘍を治療するために現在使用されている。移植片対宿主病はこの治療の帰結であるが、治療的利益が移植片対腫瘍応答から得られ得る。ＬＡＧ−３の遮断を使用して、ドナー移植腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増加させることができる。
【０１５６】
抗原特異的Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ活性化および増殖ならびに腫瘍に対して抗原特異的なＴ細胞を刺激するためにこれらの細胞のレシピエントへの養子導入を伴ういくつもの実験的治療プロトコールも存在する（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ＆Ｒｉｄｄｅｌｌ（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２８５：５４６−５１）。これらの方法もまた、ＣＭＶなどの感染性因子へのＴ細胞応答を活性化させるために使用することができる。抗ＬＡＧ−３抗体の存在下でのｅｘ  ｖｉｖｏ活性化は、養子導入されたＴ細胞の頻度および活性を増加させ得る。
【０１５７】
細胞療法、より具体的には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法もまた本開示において提供される。好適なＴ細胞を使用することができ、それを本開示の抗ＬＡＧ−３抗体と接触させる（またはあるいは本開示の抗ＬＡＧ−３抗体を発現するように操作される）。そのような接触または操作をしたら、次いで、Ｔ細胞を、治療を必要とする癌患者に導入することができる。癌患者は、本明細書に開示されるような任意の種類の癌を有してもよい。Ｔ細胞は、例えば、腫瘍浸潤性Ｔリンパ球、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、またはこれらの組合せであり得るが、これらに限定されない。
【０１５８】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、癌患者自身から単離された。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ドナーによりまたは細胞バンクから提供された。Ｔ細胞が癌患者から単離される場合、望ましくない免疫反応が最小化され得る。
感染性疾患
【０１５９】
特定の毒素または病原体に曝露された患者を治療するために本開示の他の方法が使用される。したがって、本開示の別の態様は、対象において感染性疾患を治療する方法であって、対象に抗ＬＡＧ−３抗体、またはその抗原結合部分を、対象が感染性疾患について治療されるように投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、抗体は、ヒト抗ヒトＬＡＧ−３抗体（本明細書に記載される任意のヒト抗ＬＡＧ−３抗体など）である。さらにまたはあるいは、抗体は、キメラまたはヒト化抗体であり得る。
【０１６０】
上記で論じた腫瘍への応用に類似して、抗体媒介性のＬＡＧ−３の遮断は、病原体、毒素、および自己抗原に対する免疫応答を刺激するために、単独で、またはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて、使用することができる。この治療アプローチが特に有用であり得る病原体の例としては、効果的なワクチンが現在存在しない病原体、または従来のワクチンが完全には効果的でない病原体が挙げられる。これらとしては、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、およびＣ）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、シュードモナス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられるがこれらに限定されない。ＬＡＧ−３の遮断は、感染症の経過にわたって変化した抗原を提示するＨＩＶなどの因子による確立された感染症に対して特に有用である。これらの新規のエピトープは、抗ヒトＬＡＧ−３投与の時点において異物として認識され、したがってＬＡＧ−３を通じた負のシグナルにより減弱されない強いＴ細胞応答を惹起する。
【０１６１】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性ウイルスの一部の例としては、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１，ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−１１、およびＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、おたふく風邪ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬ−Ｖウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス性脳炎ウイルスが挙げられる。
【０１６２】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性細菌の一部の例としては、クラミジア、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ属菌、プロテウス属菌、セラチア属菌、シュードモナス属菌、レジオネラ属菌、ジフテリア菌、サルモネラ属菌、バチルス属菌、コレラ菌、破傷風菌、ボツリヌス症菌、炭疽菌、ペスト菌、レプトスピラ症菌、およびライム病菌が挙げられる。
【０１６３】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性真菌の一部の例としては、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラータ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス属（フミガーツス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ属（ケカビ（ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾープス（ｒｈｉｚｏｐｕｓ））、スポロトリックス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）が挙げられる。
【０１６４】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性寄生虫の一部の例としては、エントアメーバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ種（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ  ｓｐ．）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム種（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラスマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、ニッポストロンギルス・ブラシリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）が挙げられる。
【０１６５】
上記方法の全てにおいて、ＬＡＧ−３の遮断は、他の形態の免疫療法、例えば、サイトカイン治療（例えば、インターフェロン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−２）、または腫瘍抗原の提示の増進を提供する二重特異性抗体療法と組み合わせることができる（例えば、Ｂｏｌｌｉｇｅｒ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８、Ｐｏｌｊａｋ（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１−１１２３を参照）。
自己免疫反応
【０１６６】
抗ＬＡＧ−３抗体は、自己免疫応答を惹起および増幅し得る。実際、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを使用する抗腫瘍応答の誘導は、多くの抗腫瘍応答が抗自己反応性を伴うことを明らかにしている（ｖａｎ  Ｅｌｓａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．１１２  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：４８１−４８９、Ｏｖｅｒｗｉｊｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６：２９８２−２９８７、Ｈｕｒｗｉｔｚ，（２０００）上掲、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ＆Ｗｈｉｔｅ（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｅｍｐｈａｓｉｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９（１）：８１−４）。したがって、疾患治療のためにこれらの自己タンパク質に対する免疫応答を効率的に生成するためのワクチン接種プロトコールを考案するために、様々な自己タンパク質と組み合わせて抗ＬＡＧ−３の遮断を使用することを考慮することが可能である。例えば、アルツハイマー病は、脳内のアミロイド沈着におけるＡβペプチドの不適切な蓄積を伴い、アミロイドに対する抗体応答は、これらのアミロイド沈着を除去することができる（Ｓｃｈｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ４００：１７３−１７７）。
【０１６７】
アレルギーおよび喘息の治療のためのＩｇＥ、および関節リウマチのためのＴＮＦαなど、他の自己タンパク質もまた、標的として使用することができる。最後に、様々なホルモンに対する抗体応答が、抗ＬＡＧ−３抗体の使用により誘導され得る。生殖ホルモンに対する中和抗体応答を避妊のために使用することができる。特定の腫瘍の成長のために必要とされるホルモンおよび他の可溶性因子に対する中和抗体応答もまた、ワクチン接種のあり得る標的として考慮することができる。
【０１６８】
抗ＬＡＧ−３抗体の使用について上記したものと類似の方法を、アルツハイマー病におけるＡβなどのアミロイド沈着、ＴＮＦαなどのサイトカイン、およびＩｇＥなどの他の自己抗原の不適切な蓄積を有する患者を治療するための治療的な自己免疫応答の誘導のために使用することができる。
ワクチン
【０１６９】
抗ＬＡＧ−３抗体は、目的の抗原（例えば、ワクチン）との抗ＬＡＧ−３抗体の併用投与により抗原特異的な免疫応答を刺激するために使用することができる。したがって、別の態様では、本開示は、対象において抗原に対する免疫応答を増進させる方法であって、対象に、（ｉ）抗原、および（ｉｉ）抗ＬＡＧ−３抗体、またはその抗原結合部分を、対象において抗原に対する免疫応答が増進されるように投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、抗体は、ヒト抗ヒトＬＡＧ−３抗体（本明細書に記載される任意のヒト抗ＬＡＧ−３抗体など）である。さらにまたはあるいは、抗体は、キメラまたはヒト化抗体であり得る。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または病原体からの抗原であり得る。そのような抗原の非限定的な例としては、上記のセクションにおいて論じたもの、例えば、上記で論じた腫瘍抗原（または腫瘍ワクチン）、または上記したウイルス、細菌もしくは他の病原体からの抗原が挙げられる。
【０１７０】
ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏで本開示の抗体組成物（例えば、ヒトモノクローナル抗体、多重特異性および二重特異性分子ならびにイムノコンジュゲート）を投与する好適な経路は、当該技術分野において周知であり、当業者により選択され得る。例えば、抗体組成物は、注射（例えば、静脈内または皮下）により投与することができる。使用される分子の好適な投与量は、対象の年齢および体重ならびに抗体組成物の濃度および／または配合に依存する。
【０１７１】
以前に記載したように、本開示のヒト抗ＬＡＧ−３抗体は、１つまたは他のより多くの治療剤、例えば、細胞傷害剤、放射性毒性剤または免疫抑制剤と併用投与することができる。抗体は、剤に連結させることができ（免疫複合体として）、または剤とは別々に投与することができる。後者（別々の投与）の場合、抗体は、剤の前、後もしくは並行して投与することができ、または、他の公知の療法、例えば、抗がん療法、例えば放射線と併用投与することができる。そのような治療剤としては、特に、抗新生物剤、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチン  硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、ダカルバジンおよびシクロホスファミド  ヒドロキシウレアが挙げられ、これらは、これら自体では、患者にとって毒性または準毒性のレベルにおいてのみ効果的である。シスプラチンは、４週毎に１回１００ｍｇ／ｍＬの用量で静脈内投与され、アドリアマイシンは、２１日毎に１回６０〜７５ｍｇ／ｍＬの用量で静脈内投与される。化学療法剤との本開示のヒト抗ＬＡＧ−３抗体、またはその抗原結合断片の併用投与は、ヒト腫瘍細胞に対して細胞傷害効果をもたらす異なる機序を介して機能する２つの抗がん剤を提供する。そのような併用投与は、薬物への抵抗性の発生または抗体に対して非反応性にする腫瘍細胞の抗原性の変化に起因する問題を解決し得る。
【０１７２】
本開示の抗体組成物（例えば、ヒト抗体、二重特異性もしくは多重特異性分子、またはイムノコンジュゲート）および使用のための説明書を備えるキットもまた本開示の範囲内である。キットは、少なくとも１つの追加の試薬、または１つまたは複数の追加の本開示のヒト抗体（例えば、第１のヒト抗体とは別個のＬＡＧ−３抗原中のエピトープに結合する相補的な活性を有するヒト抗体）をさらに含有し得る。キットは、典型的に、キットの内容物の意図される使用を指し示すラベルを備える。ラベルという用語は、キット上もしくはキットと共に供給される、またはそれ以外にキットに付随する任意の書面、または記録材料を含む。
神経系障害
【０１７３】
本開示の他の方法は、運動に影響する神経系の進行性障害を有する患者を治療するために使用される。一実施形態では、運動に影響する神経系の進行性障害はパーキンソン病である。したがって、本開示の別の態様は、対象においてパーキンソン病を治療する方法であって、対象に抗ＬＡＧ−３抗体、またはその抗原結合部分を、対象がパーキンソン病について治療されるように投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、抗体は、ヒト抗ヒトＬＡＧ−３抗体（本明細書に記載される任意のヒト抗ＬＡＧ−３抗体など）である。さらにまたはあるいは、抗体は、キメラまたはヒト化抗体であり得る。
【０１７４】
例えば胸腺および脾臓といった免疫系臓器に加えて、ＬＡＧ３は脳においても高濃度に存在する（Ｃ．Ｊ．Ｗｏｒｋｍａｎ（２００２），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２，２２５５−２２６３）。イムノブロット解析は、ＬＡＧ３は主にニューロンにおいて発現されることを指し示している。Ａｌｌｅｎ  Ｂｒａｉｎ  Ａｔｌａｓによれば、ＬＡＧ３は、ＤＡニューロンなどの中枢神経系（ＣＮＳ）の全体にわたるニューロンに局在する。Ｘ．Ｍａｏら（Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１６  Ｓｅｐ  ３０；３５３（６３０７））は、ＬＡＧ３は、主にそのＤ１ドメイン（２９〜１６７ＡＡ）を通じて高親和性でα−シヌクレイン（α−ｓｙｎ）のミスフォールディングした前形成原線維（ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  ｆｉｂｒｉｌｓ）（ＰＦＦ）に優先的に結合することを報告した。加えて、Ｄ２（１６８〜２５２ＡＡ）、Ｄ３（２６５〜３４３ＡＡ）、または細胞内ドメイン（ＩＣＤ、４７２〜５２５ＡＡ）の欠失は、α−ｓｙｎ  ＰＦＦへのＬＡＧ３の結合を実質的に弱め、Ｘ．Ｍａｏらは、ＬＡＧ３へのα−ｓｙｎ  ＰＦＦの結合はａ−ｓｙｎ  ＰＦＦのエンドサイトーシス、伝達、および毒性を開始させることを示した。新たに出てきた証拠は、パーキンソン病（ＰＤ）の病理発生は、ミスフォールディングしたα−ｓｙｎ  ＰＦＦの細胞間伝達に起因し得ることを指し示している。パーキンソン病（ＰＤ）は、２番目に多い神経変性障害であり、運動の緩慢、振戦、固縮、およびＰＤの後期ステージにおいては認知障害に繋がる。
病理学的には、ＰＤは、レビー小体および神経突起におけるａ−シヌクレインの蓄積により特徴付けられる。神経系の全体にわたってニューロンの変性があり、黒質緻密部においてドーパミンニューロンの変性を有して、これがＰＤの主な症状に繋がる。Ｄ１またはＤ２ドメインに特異的に結合する抗ＬＡＧ３抗体は、ａ−ｓｙｎ  ＰＦＦの毒性および細胞間伝達を低減させることができ、ＰＤ療法のためのその潜在能力を示唆する。実施例１に示すように、我々の抗体は、ＬＡＧ３タンパク質のＤ１またはＤ２ドメインに特異的に結合し得る。したがって、抗体をＰＤ療法のために使用することができる。
併用療法
【０１７５】
別の態様では、本開示は、免疫応答を刺激するために効果的な１つまたは複数の追加の抗体と抗ＬＡＧ−３抗体が併用投与され、それにより対象において免疫応答をさらに増進させ、刺激しまたは上方調節する、併用療法を提供する。例えば、本開示は、対象において免疫応答を刺激する方法であって、対象に抗ＬＡＧ−３抗体ならびに抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体などの１つまたは複数の追加の免疫賦活性抗体を、対象において免疫応答が刺激されて、例えば、腫瘍成長を阻害しまたは抗ウイルス応答を刺激するように投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、対象は、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＰＤ−１抗体を投与される。別の実施形態では、対象は、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与される。さらに別の実施形態では、対象は、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与される。一実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、本開示の抗体などのヒト抗体である。あるいは、抗ＬＡＧ−３抗体は、例えば、キメラまたはヒト化抗体（例えば、マウス抗ＬＡＧ−３ｍＡｂから調製される）であり得る。別の実施形態では、少なくとも１つの追加の免疫賦活性抗体（例えば、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体）はヒト抗体である。あるいは、少なくとも１つの追加の免疫賦活性抗体は、例えば、キメラまたはヒト化抗体（例えば、マウス抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体から調製される）であり得る。
【０１７６】
一実施形態では、本開示は、過剰増殖性疾患（例えば、癌）を治療する方法であって、ＬＡＧ−３抗体およびＣＴＬＡ−４抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は治療量以下の用量で投与され、抗ＣＴＬＡ−４抗体は治療量以下の用量で投与され、または両方は治療量以下の用量で投与される。別の実施形態では、本開示は、免疫賦活剤を用いる過剰増殖性疾患の治療に伴う有害事象を変化させる方法であって、抗ＬＡＧ−３抗体および治療量以下の用量の抗ＣＴＬＡ−４抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はヒト配列モノクローナル抗体１０Ｄ１（ＰＣＴ国際公開ＷＯ０１１１４４２４に記載されている）であり、かつ、抗ＬＡＧ−３抗体は、本明細書に記載されるＳ２７、Ｓ３１、Ｔ９９、またはＳ１１９などのヒト配列モノクローナル抗体である。本開示の方法により包含される他の抗ＣＴＬＡ−４抗体としては、例えば、ＷＯ９８／４２７５２、ＷＯ００／３７５０４、米国特許第６，２０７，１５６号明細書、Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５（１７）：１００６７−１００７１、Ｃａｍａｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．２５０５（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＰ−６７５２０６）、およびＭｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：５３０１−５３０４に開示されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４に５×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、ヒトＣＴＬＡ−４に１×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、ヒトＣＴＬＡ−４に５×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、またはヒトＣＴＬＡ−４に１×１０−８Ｍ〜１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合する。
【０１７７】
一実施形態では、本開示は、過剰増殖性疾患（例えば、癌）を治療する方法であって、ＬＡＧ−３抗体およびＰＤ−１抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は治療量以下の用量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は治療量以下の用量で投与され、または両方は治療量以下の用量で投与される。別の実施形態では、本開示は、免疫賦活剤を用いる過剰増殖性疾患の治療に伴う有害事象を変化させる方法であって、抗ＬＡＧ−３抗体および治療量以下の用量の抗ＰＤ−１抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体はヒト配列モノクローナル抗体であり、かつ、抗ＬＡＧ−３抗体は、本明細書に記載されるＳ２７、Ｓ３１、Ｔ９９、またはＳ１１９などのヒト配列モノクローナル抗体である。ヒト配列抗ＰＤ−１抗体の例としては、ＰＣＴ国際公開ＷＯ０６１１２１１６８に記載されている１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４および４Ａ１１が挙げられる。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１に５×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、ヒトＰＤ−１に１×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、ヒトＰＤ−１に５×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、またはヒトＰＤ−１に１×１０−８Ｍ〜１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合する。
【０１７８】
一実施形態では、本開示は、過剰増殖性疾患（例えば、癌）を治療する方法であって、ＬＡＧ−３抗体およびＰＤ−Ｌ１抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は治療量以下の用量で投与され、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は治療量以下の用量で投与され、または両方は治療量以下の用量で投与される。別の実施形態では、本開示は、免疫賦活剤を用いる過剰増殖性疾患の治療に伴う有害事象を変化させる方法であって、抗ＬＡＧ−３抗体および治療量以下の用量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はヒト配列モノクローナル抗体であり、かつ、抗ＬＡＧ−３抗体は、本明細書に記載されるＳ２７、Ｓ３１、Ｔ９９、またはＳ１１９などのヒト配列モノクローナル抗体である。ヒト配列抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例としては、ＰＣＴ国際公開ＷＯ０７／００５８７４に記載されている３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４が挙げられる。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１に５×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１に１×１０−８Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１に５×１０−９Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合し、またはヒトＰＤ−Ｌ１に１×１０−８Ｍ〜１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満のＫＤで結合する。
【０１７９】
抗体によるＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／もしくはＰＤ−１および／もしくはＰＤ−Ｌ１などの１つまたは複数の第２の標的抗原の遮断は、患者においてがん性細胞への免疫応答を増進させ得る。本開示の抗体を使用して成長が阻害され得るがんとしては、典型的に免疫療法に応答性の癌が挙げられる。本開示の併用療法を用いる治療のための癌の代表的な例としては、抗ＬＡＧ−３抗体を用いる単剤療法の議論において上に具体的に列記した癌が挙げられる。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、本明細書で論じる治療的抗体の組合せは、薬学的に許容される担体中の単一の組成物として並行して投与することができ、または薬学的に許容される担体中の各抗体を有する別々の組成物として並行して投与することができる。別の実施形態では、治療的抗体の組合せは、逐次的に投与され得る。例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＬＡＧ−３抗体は、逐次的に投与されてもよく、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体が最初に投与され、かつ抗ＬＡＧ−３抗体が２番目に投与されるか、または抗ＬＡＧ−３抗体が最初に投与され、かつ抗ＣＴＬＡ−４抗体が２番目に投与される。さらにまたはあるいは、抗ＰＤ−１抗体および抗ＬＡＧ−３抗体は、逐次的に投与されてもよく、例えば、抗ＰＤ−１抗体が最初に投与され、かつ抗ＬＡＧ−３抗体が２番目に投与されるか、または抗ＬＡＧ−３抗体が最初に投与され、かつ抗ＰＤ−１抗体が２番目に投与される。さらにまたはあるいは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および抗ＬＡＧ−３抗体は、逐次的に投与されてもよく、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が最初に投与され、かつ抗ＬＡＧ−３抗体が２番目に投与されるか、または抗ＬＡＧ−３抗体が最初に投与され、かつ抗ＰＤ−Ｌ１抗体が２番目に投与される。
【０１８１】
さらには、併用療法の１つより多くの用量が逐次的に投与される場合、投与の各時点において逐次投与の順序を反転させるかまたは同じ順序に保つことができ、逐次投与を並行投与、または任意のこれらの組合せと組み合わせることができる。例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＬＡＧ−３抗体の組合せの第１の投与は並行的なものであってもよく、第２の投与は、抗ＣＴＬＡ−４が最初でありかつ抗ＬＡＧ−３が２番目である逐次的なものであってもよく、かつ、第３の投与は、抗ＬＡＧ−３が最初でありかつ抗ＣＴＬＡ−４が２番目である逐次的なものであってもよい、などである。さらにまたはあるいは、抗ＰＤ−１抗体および抗ＬＡＧ−３抗体の組合せの第１の投与は並行的なものであってもよく、第２の投与は、抗ＰＤ−１が最初でありかつ抗ＬＡＧ−３が２番目である逐次的なものであってもよく、かつ、第３の投与は、抗ＬＡＧ−３が最初でありかつ抗ＰＤ−１が２番目である逐次的なものであってもよい、などである。さらにまたはあるいは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および抗ＬＡＧ−３抗体の組合せの第１の投与は並行的なものであってもよく、第２の投与は、抗ＰＤ−Ｌ１が最初でありかつ抗ＬＡＧ−３が２番目である逐次的なものであってもよく、かつ、第３の投与は、抗ＬＡＧ−３が最初でありかつ抗ＰＤ−Ｌ１が２番目である逐次的なものであってもよい、などである。別の代表的な投薬スキームは、抗ＬＡＧ−３が最初でありかつ抗ＣＴＬＡ−４（ならびに／または抗ＰＤ−１および／もしくは抗ＰＤ−Ｌ１）が２番目である逐次的な第１の投与を伴うことができ、かつ、その後の投与は並行的なものであってもよい。
【０１８２】
任意選択的に、抗ＬＡＧ−３と１つまたは複数の追加の抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）との組合せは、免疫原性剤、例えば、がん性細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、および炭水化物分子など）、細胞、および免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトされた細胞とさらに組み合わせることができる（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：４９１９−２８）。使用され得る腫瘍ワクチンの非限定的な例としては、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐｌ００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴＩおよび／もしくはチロシナーゼのペプチド、またはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞が挙げられる。組み合わせられたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌｌの遮断は、抗ＬＡＧ−３抗体を用いる単剤療法に関して上記に詳述した任意のワクチン接種プロトコールなどのワクチン接種プロトコールとさらに組み合わせることができる。
【０１８３】
組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断はまた、標準癌治療とさらに組み合わせることができる。例えば、組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断は、化学療法レジームと効果的に組み合わせることができる。これらの場合において、本開示の組合せと共に投与される他の化学療法試薬の用量を低減させることが可能である（Ｍｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：５３０１−５３０４）。そのような組合せの例は、黒色腫の治療のためにデカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）とさらに組み合わせた抗ＬＡＧ−３と抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組合せである。別の例は、黒色腫の治療のためにインターロイキン−２（ＩＬ−２）とさらに組み合わせた抗ＬＡＧ−３と抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組合せである。ＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断の化学療法との併用の背景にある科学的合理性は、ほとんどの化学療法化合物の細胞傷害作用の帰結である細胞死は、抗原提示経路中の腫瘍抗原のレベルの増加を結果としてもたらすはずであるということである。細胞死を通じて組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断との相乗作用を結果としてもたらし得る他の組合せ療法としては、放射線、手術、またはホルモン枯渇が挙げられる。これらのプロトコールのそれぞれは、宿主における腫瘍抗原の供給源を作出する。血管新生阻害剤もまた、組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断と組み合わせることができる。血管新生の阻害は腫瘍細胞死に繋がり、それは、宿主の抗原提示経路に供給される腫瘍抗原の供給源となり得る。
【０１８４】
ＬＡＧ−３遮断抗体とＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１遮断抗体との組合せはまた、ＦｃαまたはＦｃγ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化させる二重特異性抗体と組み合わせて使用することができる（例えば、米国特許第５，９２２，８４５号明細書および同第５，８３７，２４３号明細書を参照）。二重特異性抗体は、２つの別々の抗原を標的化するために使用することができる。これらの応答のＴ細胞アームは、組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断の使用により増大する。別の例では、抗ＬＡＧ−３抗体と抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組合せは、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブ）、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）、Ｌｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（登録商標）（エプルツズマブ（ｅｐｒｔｕｚｕｍａｂ））、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）、およびＴａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）などの抗新生物抗体と組み合わせて使用することができる。例としては、理論により縛られることを望まないが、抗がん抗体または毒素に共役させた抗がん抗体を用いる治療は、癌細胞死（例えば、腫瘍細胞）に繋がることができ、それが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＬＡＧ−３により媒介される免疫応答を増強する。例示的な実施形態では、過剰増殖性疾患（例えば、がん性腫瘍）の治療は、宿主による抗腫瘍免疫応答を増強し得る、抗ＬＡＧ−３抗体ならびに抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた抗がん抗体を、並行してもしくは逐次的にまたは任意のこれらの組合せで含み得る。
【０１８５】
腫瘍は、多様な機序により宿主の免疫サーベイランスを回避する。これらの機序の多くは、腫瘍により発現される免疫抑制性のタンパク質の不活性化により克服され得る。これらとしては、特に、ＴＧＦ−β（Ｋｅｈｒｌ  ｅｔａｌ．（１９８６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６３：１０３７−１０５０）、ＩＬ−１０（Ｈｏｗａｒｄ＆Ｏ'Ｇａｒｒａ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ１３：１９８−２００）、およびＦａｓリガンド（Ｈａｈｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７  ４：１３６３−１３６５）が挙げられる。別の例では、これらの各実体に対する抗体を抗ＬＡＧ−３抗体と抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組合せとさらに組み合わせて、免疫抑制剤の効果に対抗しかつ宿主による抗腫瘍免疫応答に有利に働くようにすることができる。
【０１８６】
宿主の免疫応答性を活性化させるために使用され得る他の抗体は、抗ＬＡＧ−３抗体と抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組合せと組み合わせてさらに使用することができる。これらとしては、ＤＣ機能および抗原提示を活性化させる樹状細胞の表面上の分子が挙げられる。抗ＣＤ４０抗体（Ｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．、上掲）は、抗ＬＡＧ−３と抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１との組合せにおいて使用することができる（Ｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．、上掲）。Ｔ細胞共刺激分子に対する他の活性化抗体  Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．、上掲、Ｍｅｌｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．、上掲、Ｈｕｔｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．、上掲）もまた、Ｔ細胞活性化のレベルの増加のために提供され得る。
【０１８７】
上記で論じたように、骨髄移植は、造血起源の様々な腫瘍を治療するために現在使用されている。組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断は、ドナー移植腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増加させるために使用することができる。
【０１８８】
いくつもの実験的治療プロトコールは、抗原特異的Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ活性化および増殖ならびに腫瘍に対して抗原特異的なＴ細胞のためにこれらの細胞のレシピエントへの養子導入を伴う（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ＆Ｒｉｄｄｅｌｌ、上掲）。これらの方法もまた、ＣＭＶなどの感染性因子へのＴ細胞応答を活性化させるために使用することができる。抗ＬＡＧ−３抗体ならびに抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でのｅｘ  ｖｉｖｏ活性化は、養子導入されたＴ細胞の頻度および活性を増加させることが期待され得る。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、本開示は、免疫賦活剤を用いる過剰増殖性疾患（例えば、癌）の治療に伴う有害事象を変化させる方法であって、抗ＬＡＧ−３抗体ならびに治療量以下の用量の抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を対象に投与することを含む、方法を提供する。例えば、本開示の方法は、患者に非吸収性ステロイドを投与することによる免疫賦活性の治療的抗体により誘導される大腸炎または下痢の発生を低減させる方法を提供する。免疫賦活性の治療的抗体を与えられるあらゆる患者は、そのような抗体により誘導される大腸炎または下痢を発症するリスクがあるので、この患者集団全体は本開示の方法による療法のために好適である。ステロイドは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するためおよびＩＢＤの増悪を予防するために投与されてきたが、それらは、ＩＢＤを有すると診断されていない患者においてＩＢＤを予防する（その発生を減少させる）ために使用されていない。ステロイド、さらには非吸収性ステロイドに伴う有意な副作用は、予防的使用をためらわせてきた。
【０１９０】
さらなる実施形態では、組み合わせたＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断（すなわち、免疫賦活性の治療的抗体である抗ＬＡＧ−３抗体ならびに抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１抗体および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）は、任意の非吸収性ステロイドの使用とさらに組み合わせることができる。本明細書において使用される場合、「非吸収性ステロイド」は、大規模な初回通過代謝を呈し、肝臓での代謝後のステロイドのバイオアベイラビリティが低い、すなわち約２０％未満であるグルココルチコイドである。本開示の一実施形態では、非吸収性ステロイドはブデソニドである。ブデソニドは局所作用性のグルココルチコステロイドであり、経口投与後に主に肝臓により大規模に代謝される。ＥＮＴＯＣＯＲＴ  ＥＣ（登録商標）（Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）は、回腸へのおよび結腸の全体を通じた薬物送達を最適化するために開発されたブデソニドのｐＨおよび時間依存的な経口配合物である。ＥＮＴＯＣＯＲＴ  ＥＣ（登録商標）は、回腸および／または上行結腸に関与する軽度〜中等度クローン病の治療のために米国において承認されている。クローン病の治療のためのＥＮＴＯＣＯＲＴ  ＥＣ（登録商標）の通常の経口投与量は６〜９ｍｇ／日である。ＥＮＴＯＣＯＲＴ  ＥＣ（登録商標）は、腸において放出された後に腸粘膜中に吸収および保持される。ＥＮＴＯＣＯＲＴ  ＥＣ（登録商標）は、腸粘膜標的組織を通過すると、肝臓におけるシトクロムＰ４５０系によりごくわずかなグルココルチコイド活性を有する代謝物に大規模に代謝される。したがって、バイオアベイラビリティは低い（約１０％）。ブデソニドの低いバイオアベイラビリティは、より小規模な初回通過代謝を有する他のグルココルチコイドと比較して向上した治療比（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒａｔｉｏ）を結果としてもたらす。ブデソニドは、全身作用性のコルチコステロイドよりも小さい視床下部−下垂体抑制などの、より少ない有害効果を結果としてもたらす。しかしながら、ＥＮＴＯＣＯＲＴ  ＥＣ（登録商標）の慢性投与は、副腎髄質機能亢進および副腎抑制などの全身性のグルココルチコイド効果を結果としてもたらし得る。ＰＤＲ  ５８ｔｈ  ｅｄ．２００４；６０８−６１０を参照。
【０１９１】
いっそうさらなる実施形態では、非吸収性ステロイドと組み合わせた組合せのＬＡＧ−３ならびにＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遮断（すなわち、免疫賦活性の治療的抗体である抗ＬＡＧ−３抗体ならびに抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）は、サリチル酸塩とさらに組み合わせることができる。サリチル酸塩としては、５−ＡＳＡ剤、例えば、スルファサラジン（ＡＺＵＬＦＩＤＩＮＥ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆ＵｐＪｏｈｎ）、オルサラジン（ＤＩＰＥＮＴＵＭ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆ＵｐＪｏｈｎ）、バルサラジド（ＣＯＬＡＺＡＬ（登録商標）、Ｓａｌｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、およびメサラミン（ＡＳＡＣＯＬ（登録商標）、Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＰＥＮＴＡＳＡ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ  ＵＳ、ＣＡＮＡＳＡ（登録商標）、Ａｘｃａｎ  Ｓｃａｎｄｉｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．、ＲＯＷ  ＡＳＡ（登録商標）'Ｓｏｌｖａｙ）が挙げられる。
【０１９２】
本開示の方法によれば、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体ならびに非吸収性ステロイドと組み合わせて投与されるサリチル酸塩は、免疫賦活性抗体により誘導される大腸炎の発生を減少させる目的のために、サリチル酸塩および非吸収性ステロイドの任意の重複するまたは逐次的な投与を含み得る。したがって、例えば、本開示による免疫賦活性抗体により誘導される大腸炎の発生を低減させる方法は、サリチル酸塩および非吸収性物質を並行してまたは逐次的に投与すること（例えば、サリチル酸塩は非吸収性ステロイドの６時間後に投与される）、または任意のこれらの組合せを包含する。さらに、本開示によれば、サリチル酸塩および非吸収性ステロイドは、同じ経路（例えば、両方は経口的に投与される）または異なる経路（例えば、サリチル酸塩は経口的に投与され、非吸収性ステロイドは直腸内に投与される）により投与されてもよく、これは抗ＬＡＧ−３抗体ならびに抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与するために使用される経路とは異なっていてもよい。
診断方法
【０１９３】
ＬＡＧ−３の過剰発現がある特定の腫瘍試料において観察され、ＬＡＧ−３過剰発現細胞を有する患者は、本開示の抗ＬＡＧ−３抗体を用いる治療に対して応答性の可能性がある。したがって、本開示の抗体はまた、診断および予後の目的のために使用することができる。
【０１９４】
好ましくは細胞を含む試料は、癌患者または診断を望む患者であり得る患者から得ることができる。細胞は、腫瘍組織もしくは腫瘍塊、血液試料、尿試料または患者からの任意の試料の細胞である。試料の任意選択の前処理の際に、試料を本開示の抗体と、試料中に存在する可能性があるＬＡＧ−３タンパク質と抗体が相互作用することを可能とする条件下でインキュベートすることができる。ＥＬＩＳＡなどの方法を使用することにより、抗ＬＡＧ−３抗体の利点を得て、試料中のＬＡＧ−３タンパク質の存在を検出することができる。
【０１９５】
試料中のＬＡＧ−３タンパク質の存在（任意選択的に量または濃度と共に）は、患者が抗体を用いる治療のために好適であるという指標として、または患者が癌治療に応答した（または応答しなかった）という指標として、癌の診断のために使用することができる。予後の方法のために、治療の進行を指し示すために、癌治療を開始してからある特定のステージにおいて１回、２回またはより多く検出を行うことができる。
【０１９６】
本開示を以下の実施例によりさらに説明するが、実施例はさらなる限定として解されるべきではない。全ての図面ならびに本出願の全体を通じて参照される全ての参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ配列、特許および特許出願公開の内容は、参照することにより本明細書に明示的に組み込まれる。特に、ＰＣＴ国際公開ＷＯ０９／０４５９５７、ＷＯ０９／０７３５３３、ＷＯ０９／０７３５４６、およびＷＯ０９／０５４８６３の開示は、参照することにより本明細書に明示的に組み込まれる。
【実施例】
【０１９７】
以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態を実証するために含めたものである。以下の実施例に開示される技術は、本開示の実施においてよく機能することが本発明者らにより発見された技術を表し、したがってその実施のための好ましい態様を構成すると考えることができると当業者により理解されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示される特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでもなお、本開示の概念、精神および範囲から離れることなく同様または類似の結果が得られることを理解するべきである。より具体的には、化学的および生理学的の両方で関連するある特定の剤は、同じまたは類似の結果を達成しながら、本明細書に記載される剤のために代替されてもよいことは明らかであろう。当業者に明らかな全てのそのような類似の代替物および改変は、添付の特許請求の範囲により定義される本開示の精神、範囲および概念の範囲内にあるものとみなされる。
【実施例１】
【０１９８】
ＬＡＧ−３に対する全長ヒトモノクローナル抗体のスクリーニング
全長ヒトＦａｂファージディスプレイをスクリーニングすることにより抗ＬＡＧ３ヒトモノクローナル抗体（α−ＬＡＧ−３ｍＡｂ）を生成させた。野生型ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃ断片はＤａｕｄｉ細胞に結合できるが、Ｄ１−Ｄ２切断ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃ断片はＤａｕｄｉ細胞に結合しない（図１）。結果として、Ｄ１−Ｄ２ドメインはＬＡＧ−３の機能にとって不可欠である。
【０１９９】
ファージディスプレイライブラリーのパニング用の抗原。ＬＡＧ−３は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属する１回貫通Ｉ型膜タンパク質であり、ドメイン（Ｄ）１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４の４つの細胞外Ｉｇ様ドメイン（ＥＣＤ）を含有する。２９３Ｔ細胞システムにおいて組換えヒトＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ヒトＩｇＧ１（ＬＡＧ−３−ｈｕＦｃ）融合タンパク質またはヒトＤ１−Ｄ２切断ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ヒトＩｇＧ１（ΔＤ１Ｄ２−ＬＡＧ−３−ｈｕＦｃ）融合タンパク質を発現させた。
【０２００】
ファージライブラリー。哺乳動物におけるＩｇ遺伝子セグメントは、可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、連結（Ｊ）、および定常（Ｃ）エクソンの群で並んでいる。ヒトＦａｂファージライブラリーは、１）全てのヒト可変カッパ（ＶＫ）レパートリー、ならびに２）健常ヒト対象からの遺伝学的に無作為化されたＣＤＲ３領域を有するそれぞれＶＨ３〜２３およびＶＨ１〜６９生殖細胞系列遺伝子のＶＨからなるファージベクターを使用して解釈された。
【０２０１】
抗原のスクリーニングおよび生成。Ｄ１−Ｄ２ドメイン特異的ファージ結合物質を選択するために、ファージライブラリーを抗原ベースのパニングに供した。
Ｉ）ＬＡＧ−３に対するファージライブラリー溶液のパニング
【０２０２】
Ｎ末端にＦＬＡＧタグを有するＤ１−Ｄ２欠失ＬＡＧ−３（ΔＤ１Ｄ２−ＬＡＧ−３）配列を含有するプラスミドを２９３Ｆ細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの３日後に、ΔＤ１Ｄ２−ＬＡＧ−３  ２９３Ｆ細胞をファージライブラリースクリーニングのために使用した。ファージライブラリーに逐次的なネガティブスクリーニングを行った：ストレプトアビジンビーズ、△Ｄ１Ｄ２−ＬＡＧ−３をトランスフェクトした２９３Ｆ細胞およびビオチン標識ヒトＩｇＧ１Ｆｃタンパク質。次いで、結果として得られたライブラリーを、動かしながら２時間ビオチン化ＬＡＧ−３−ｈｕＦｃ  ＬＡＧ−３と共にインキュベートした後、１００μＬのカゼインでブロッキングしたストレプトアビジン磁気ビーズと共に１５分間インキュベートした。未結合のファージを５〜２０回のＰＢＳを用いる洗浄により除去した。次いで、結合したファージを、新たに調製した１００ｍＭのトリエチルアミン（ＴＥＡ）を用いて溶出させ、トリス−ＨＣｌ緩衝液の添加により中和させた。結果として得られたファージをアウトプット１ファージライブラリーとラベルした。アウトプット１ファージライブラリーを上記と同じスクリーニングに供して、アウトプット２およびその後アウトプット３ファージライブラリーを生成させた。合計で３ラウンドのファージライブラリースクリーニングを行った。
ＩＩ）ＬＡＧ−３に対するファージライブラリーの免疫チューブパニング
【０２０３】
ファージライブラリーを使用して逐次的なネガティブスクリーニングを行った：カゼインでコーティングした免疫チューブ、ΔＤ１Ｄ２−ＬＡＧ−３をトランスフェクトした２９３Ｆ細胞およびヒトＩｇＧ１Ｆｃタンパク質。次いで、結果として得られたライブラリーを、動かしながら２時間ＬＡＧ３−ｈｕＦｃをコーティングした免疫チューブ中でインキュベートした。未結合のファージを５〜２０回のＰＢＳＴを用いる洗浄により除去した。細胞ベースのパニングと同様に、合計で３ラウンドのファージライブラリースクリーニングを行った。
【０２０４】
アウトプット３ファージライブラリーを希釈し、プレートして３７℃で８時間生育させ、抗カッパ抗体をコーティングしたフィルターにより２２℃で終夜捕捉した。ビオチン化ＬＡＧ−３−ｈｕＦｃ（５０ｎＭ）およびＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ−ＡＰコンジュゲートをフィルターに適用して抗原結合抗ＬＡＧ３ファージを検出した。陽性のファージプラークを選び取り、１００μＬのファージ溶出緩衝液中に溶出させた。次いで、約１０〜１５μＬの溶出したファージを使用して１ｍＬのＸＬ１−Ｂｌｕｅコンピテント細胞に感染させて、ファージシングルポイントＥＬＩＳＡ（ＳＰＥ）（５０ｎＭの試験した各タンパク質でコーティングした基体を固定化したＥＬＩＳＡ）のための高力価（ＨＴ）ファージを調製した。１×１０１０プラーク形成単位（ｐｆｕ）の各ファージヒットをＳＰＥの確認のために使用した。次いで、フィルターリフトから選び取った陽性クローンを、ＬＡＧ−３−ｈｕＦｃおよびΔＤ１Ｄ２−ＬＡＧ−３−ｈｕＦｃを用いてＬＡＧ−３抗原結合について試験した。Ｄ１−Ｄ２特異的結合物質をＰＣＲにより抗原陽性ファージから増幅させ、シークエンシングした。Ｉｇ軽鎖Ｖ遺伝子（ＶＬ）およびＶＨ配列を解析して独特の配列を同定し、配列多様性を決定した。
【０２０５】
全てのヒットのＶＬおよびＶＨ遺伝子配列を発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ（軽鎖、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ  商品番号ｐｆｕｓｅ２ｓｓ−ｈｃｌｋ）およびｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１（重鎖、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ  商品番号ｐｆｕｓｅｓｓ−ｈｃｈｇ１）中にクローニングした。抗体をＨＥＫ２９３細胞中で発現させ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＰＬＵＳ−Ａｇａｒｏｓｅを使用して精製した。抗体およびそれらのＣＤＲ領域の配列を以下の表に提供する。
表１．抗体重鎖可変領域
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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表２．重鎖ＣＤＲ
【表７】
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【表８】
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【表９】
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表３．軽鎖可変領域
【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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表４．軽鎖可変領域
【表１４】
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【表１５】
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【実施例２】
【０２０６】
様々な種に由来するＬＡＧ３タンパク質へのヒト抗ＬＡＧ３抗体の結合
ヒト、ラット、およびマウスＬＡＧ３に結合する抗ＬＡＧ−３抗体の能力を評価するために、実施例１において同定された抗体をＥＬＩＳＡを通じて結合特性について評価した。ヒト、ラットおよびマウスＬＡＧ３  ＥＣＤ−Ｆｃタンパク質を１００μｌ／ウェルで１μｇ／ｍｌにおいてＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。ＥＬＩＳＡ希釈緩衝液を用いて実施例１の抗体を段階希釈した。結合を評価するために、の様々な濃度１０μｇ／ｍｌ、３．３３３μｇ／ｍｌ、１．１１１μｇ／ｍｌ、０．３７０μｇ／ｍｌ、０．１２３μｇ／ｍｌ、０．０４１μｇ／ｍｌ、０．０１４μｇ／ｍｌ、０．００５μｇ／ｍｌ、０．００１５μｇ／ｍｌおよび０．０００５μｇ／ｍｌ）のＬＡＧ−３抗体をＬＡＧ３抗原をコーティングしたプレートに室温で１．５時間加えた。結果として得られたプレートを洗浄した後、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ）−ＨＲＰ抗体を用いて標識した。Ｓ３１のみがヒトＬＡＧ３に結合することができる。Ｓ２７およびＴ９９は、ヒトＬＡＧ３およびラット／マウスＬＡＧ３により低い力価で結合することができる。Ｓ１１９抗体はヒト、ラットおよびマウスＬＡＧ３に高い力価で結合することができる（図２）。
【実施例３】
【０２０７】
活性化ヒト初代ＣＤ４＋  Ｔ細胞上の細胞表面ＬＡＧ−３抗原へのヒト抗ＬＡＧ３抗体の結合
ＬＡＧ−３は、活性化または疲弊Ｔ細胞上に発現される。ＣＤ４磁気ビーズを使用してＣＤ４＋  Ｔ細胞を単離した。精製したヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞をＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｔ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８を用いて７２時間刺激した。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて実施例１の抗体を段階希釈した。次いで、結合を評価するために、様々な濃度（１０μｇ／ｍｌ、３．３３３μｇ／ｍｌ、１．１１１μｇ／ｍｌ、０．３７０μｇ／ｍｌ、０．１２３μｇ／ｍｌ、０．０４１μｇ／ｍｌ、０．０１４μｇ／ｍｌおよび０．００５μｇ／ｍｌ）のＬＡＧ−３抗体をマウス抗ヒトＬＡＧ３  ＰＥ抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローン：３ＤＳ２２３Ｈ）の存在下で氷上で３０分間活性化ヒトＣＤ４  Ｔ細胞に加えた。標識した細胞をＦＡＣＳ緩衝液を用いて洗浄した後、氷上で３０分間ＡＰＣ共役抗ヒトＩｇＧ抗体を用いて標識した。結果として得られた細胞をＦＡＣＳ緩衝液を用いて１回洗浄した。標識した細胞をＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）においてフローサイトメトリーにより蛍光強度について評価した。図３に示すように、Ｓ２７、Ｓ３１、Ｔ９９およびＳ１１９抗体は、活性化ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞上に発現されるＬＡＧ３に用量依存的に結合することができる。
【実施例４】
【０２０８】
ＭＨＣクラスＩＩ受容体への可溶性ＬＡＧ−３（ｓＬＡＧ）の結合の抗ＬＡＧ−３抗体による阻害
ＭＨＣクラスＩＩ受容体へのｓＬＡＧ−３の結合を遮断する抗ＬＡＧ−３抗体の能力を評価するために、ビオチン標識ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃ融合タンパク質およびＭＨＣクラスＩＩ受容体を発現するＲａｊｉ細胞を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイを設計した。実施例１の抗体をＦＡＣＳ緩衝液を用いて２０μｇ／ｍＬから段階希釈し、６μｇ／ｍＬのビオチン−ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃｃと共に室温で３０分間プレインキュベートした。次いで、抗体混合物をＦｃＲ遮断Ｒａｊｉ細胞に加え、氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液を用いて洗浄した後、ストレプトアビジンＰＥを用いて氷上で３０分間染色し、その後にＦＡＣＳ緩衝液を用いて１回洗浄した。標識した細胞をＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）においてフローサイトメトリーにより蛍光強度について評価した。図４に示すように、Ｓ２７、Ｓ３１、Ｓ１１９およびＴ９９抗体は、ＬＡＧ３のその受容体ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を用量依存的に阻害することができる。
【実施例５】
【０２０９】
抗ＬＡＧ−３抗体による末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＩＬ−２産生の刺激
ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）は、ＭＨＣクラスＩＩ抗原およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に同時に結合してそれらを一緒にすることにより、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を誘導するスーパー抗原である。６つの用量について１：３の段階希釈で２０μｇ／ｍｌから開始する様々な濃度の実施例１の抗体の存在下でＳＥＢを用いて２×１０５個のＰＢＭＣを刺激した。３日後、培養上清中のＩＬ−２濃度をＥＬＩＳＡにより評価した。図５に示すように、ＰＤ−１抗体と類似して、抗ＬＡＧ３抗体（Ｓ２４、Ｓ２７、Ｓ３１、Ｓ８７、Ｓ１１９、Ｔ９９およびＳ２０）は、ＳＥＢ刺激のみと比較して用量依存的にＩＬ−２産生を増進させることができる。
【実施例６】
【０２１０】
抗ＬＡＧ−３抗体を使用するエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）に対する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害の後退
ＬＡＧ−３はＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉ）上に高発現され、それらの抑制機能を媒介する（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１８４：６５４５−５１，２０１０）。エフェクターＴ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５−ＣＤ１２７ｈｉ）に対するＴｒｅｇの抑制効果の後退に対する抗ＬＡＧ−３抗体の能力を評価するために、実施例１の抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏ抑制アッセイにおいて使用した。最初に、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩシステムを使用することによりＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉＣＤ１２７ｌｏｗ）およびＴｅｆｆ（ＣＤ４＋ＣＤ２５−ＣＤ１２７ｈｉ）をＦＡＣＳ選別した。次いで、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）を用いてＴｅｆｆを標識し、プレート結合抗ＣＤ３抗体およびミトマイシンＣ処理した抗原提示細胞の存在下でＴｒｅｇと１：１の比で共培養した。次に、抗ＬＡＧ−３抗体を細胞培養物に加え、５日後にＴｅｆｆ細胞増殖を試験した。図６の結果は、ＴｒｅｇをエフェクターＴ細胞と共培養した時に、エフェクターＴ細胞の増殖およびサイトカイン産生は阻害されたことを指し示す。Ｓ１１９およびＴ９９は、ＴｒｅｇによるＴｅｆｆの阻害を後退させることができる。
【実施例７】
【０２１１】
抗ＬＡＧ３およびＰＤ−１抗体のコンボ処理の相乗効果
ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）は、ヒト免疫応答を刺激するスーパー抗原である。ＰＤ−１遮断抗体は、ＳＥＢ刺激性のＩＬ−２産生を増進させることができる。実施例５に示すように、抗ＬＡＧ３抗体もまたＳＥＢ媒介性のＩＬ−２産生を増進させることができる。ＰＤ−１抗体と組み合わせた抗ＬＡＧ３抗体の効果を調べるために、最適以下のＰＤ−１刺激の存在下でのＳＥＢ刺激に対する抗ＬＡＧ３抗体の効果を調べた。０．１μｇ／ｍｌのＰＤ−１抗体の存在下、段階希釈した抗ＬＡＧ３抗体をＳＥＢ培養物に加えた。７２時間後にＩＬ−２産生を評価した。図７の結果は、抗ＬＡＧ−３抗体は、最適以下のＰＤ−１処理の存在下で用量依存的な様式でＳＥＢ刺激性のＴ細胞応答を増進できることを指し示し、抗ＬＡＧ３および抗ＰＤ−１のコンボ処理が相乗効果を有することを示唆する。
【実施例８】
【０２１２】
抗ＬＡＧ−３抗体はＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でヒトＴ細胞応答を増進させる
ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた抗ＬＡＧ−３抗体の効果を評価するために、混合リンパ球反応の状況においてヒトＴ細胞の応答を評価した。ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４の存在下で７日間ヒトＤＣをＣＤ１４＋単球から分化させた。次いで、別のドナーから単離したＣＤ４＋  Ｔ細胞をＤＣならびに段階希釈した抗ＬＡＧ−３抗体およびＰＤ−Ｌ１遮断抗体と共培養した。混合培養の２日後に、ＩＬ−２産生について培養上清をアッセイした。図８の結果は、抗ＬＡＧ−３抗体はＰＤ−Ｌ１抗体との組合せでＩＬ−２産生を有意に促進できることを指し示す。
【実施例９】
【０２１３】
ＬＡＧ−３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ分析
組換えｈｉｓ−タグヒトＬＡＧ３−ＥＣＤタンパク質へのＳ２０、Ｓ２４、Ｓ２７、Ｓ３１、Ｓ８７、Ｓ１１９、Ｓ１２０、Ｓ１２８、Ｓ１３６、Ｓ１６１およびＴ９９抗体の結合を捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００により調べた。抗ヒトＦｃ抗体を使用して抗ＬＡＧ３抗体を捕捉した。抗ヒトＦｃ抗体をチップ上にコーティングした。段階濃度のｈｉｓタグヒトＬＡＧ３−ＥＣＤタンパク質（０〜４ｎＭ）を３０μｌ／分の流速で捕捉抗体上に注入した。解離期は９００ｓまたは５５０ｓであった。結果を以下の表に示す。抗ＬＡＧ３抗体についてのＢｉａｃｏｒｅの結果は、これらの抗ＬＡＧ３抗体はヒトＬＡＧ３に対して高親和性の結合物質であることを示した。
【表３６】
0006929951.tif 000017
【実施例１０】
【０２１４】
ヒトＬＡＧ３に対するマウスモノクローナル抗体の生成
この実施例は、ハイブリドーマ技術を使用して抗ヒト−ＬＡＧ３マウスモノクローナル抗体がどのように生成されたかを示す。
【０２１５】
抗原：組換えヒトＬＡＧ−３融合タンパク質を免疫原として使用して抗ヒトＬＡＧ−３抗体を産生させた。マウス免疫グロブリンＦｃドメイン（Ｄ１−Ｄ４  ｍＦｃ）に融合させたヒトＬＡＧ−３の細胞外領域全体（ドメイン１〜４）を含む融合タンパク質を免疫原として使用した。ＥＬＩＳＡ結合試験のために、ヒト免疫グロブリンＦｃドメインに融合させたヒトＬＡＧ−３の細胞外領域全体（ドメイン１〜４）またはＤ１−Ｄ２ドメインを含まない細胞外領域を含む融合タンパク質（それぞれＤ１−Ｄ４  ｈｕＦｃまたは△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃ）。標準的な組換えＤＮＡ技術を使用してＬＡＧ−３融合タンパク質を調製した。
免疫化：
【０２１６】
標準的な組換えＤＮＡ技術を使用してＬＡＧ−３融合タンパク質を調製した。腹腔内（ＩＰ）および／または皮下（ＳＣ）によりマウスを免疫化した。マウスを最初に５０ｍｇの免疫原でＳＣにより免疫化した後、２５μｇの免疫原を用いて隔週でＩＰにより免疫化した。後眼窩の出血により免疫応答をモニターした。ＥＬＩＳＡおよび細胞ベースの受容体遮断アッセイ（以下に記載する）により血漿をスクリーニングした。充分な力価の抗ＬＡＧ−３  Ｄ１−Ｄ２ドメイン免疫グロブリンおよび機能的なＬＡＧ３阻害因子を有するマウスを融合のために使用した。屠殺および脾臓の除去の前に、２５μｇの抗原を用いてマウスを腹腔内によりブーストした後、μｇの抗原を用いてその後のブーストを行った。脾臓を融合のために使用した。細胞ベースの受容体遮断アッセイにより、抗ＬＡＧ−３  Ｄ１−Ｄ２ドメインの結合およびＬＡＧ３のその受容体への結合を遮断する機能についてハイブリドーマ上清を試験した。
抗ＬＡＧ３遮断抗体を産生するマウスの選択
【０２１７】
抗ＬＡＧ３遮断抗体を産生するマウスを選択するために、免疫化マウスからの血清をＥＬＩＳＡによりＤ１−Ｄ２ドメインへの結合について試験した。簡潔に述べれば、Ｄ１−Ｄ４  ｈｕＦｃへの結合について血清を評価し、△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃへの結合をカウンタースクリーニングとした。簡潔に述べれば、Ｄ１−Ｄ４  ｈｕＦｃまたは△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃを０．５μｇ／ｍｌで終夜コーティングした後、ＰＢＳ中の５％のＢＳＡによりブロッキングした。段階希釈した血清を室温で１時間、コーティングした抗原と共にインキュベートした。結果として得られたプレートをＰＢＳ／Ｔを用いて洗浄し、室温で１時間ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰと共にインキュベートした。ＴＭＢ基質を用いてプレートを顕色させ、ＯＤ  ４５０〜６３０ｎｍで分光光度計により分析した。並行して、実施例４に記載されるようにＲａｊｉ細胞上に発現されるＭＨＣＩＩ分子へのＬＡＧ３の結合を遮断する機能について血清を評価した。ＬＡＧ３  Ｄ１−Ｄ２ドメインに特異的な高力価を有し、かつＲａｊｉ細胞へのＬＡＧ３の結合を遮断する機能を有するマウスを融合およびさらなるスクリーニングのために選択した。
【０２１８】
ハイブリドーマクローン１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈをさらなる解析およびシークエンシングのために選択した。
【実施例１１】
【０２１９】
抗ＬＡＧ３マウスモノクローナル抗体の結合特性
この実施例では、ＬＡＧ３タンパク質への抗ＬＡＧ３マウス抗体の結合特性を試験した。
Ｄ１−Ｄ２特異的結合物質：
【０２２０】
結合特異性を評価するために、精製した１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈマウスモノクローナル抗体をＤ１−Ｄ４  ｈｕＦｃおよび△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃ抗原についてのＥＬＩＳＡ結合試験に供した。簡潔に述べれば、Ｄ１−Ｄ４  ｈｕＦｃまたは△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃを０．５μｇ／ｍｌで終夜コーティングした後、ＰＢＳ中の５％のＢＳＡによりブロッキングした。段階希釈した抗体（１μｇ／ｍｌから開始して１０個の用量について１：３の段階希釈）を室温で１時間、コーティングした抗原と共にインキュベートした。結果として得られたプレートをＰＢＳ／Ｔを用いて洗浄し、室温で１時間ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰと共にインキュベートした。ＴＭＢ基質を用いてプレートを顕色させ、ＯＤ  ４５０〜６３０ｎｍで分光光度計により分析した。
【０２２１】
ＥＬＩＳＡの結果を図９に要約し、これはＬＡＧ３の全長細胞外ドメイン（Ｄ１−Ｄ４  ｈｕＦｃ）への強い結合を示すがＤ１−Ｄ２欠失ＬＡＧ３（△Ｄ１−Ｄ２  ｈｕＦｃ）への強い結合を示さず、１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈは、ヒトＬＡＧ３のＤ１およびＤ２ドメインについての強力かつ選択的な結合物質であることを裏付ける。
【実施例１２】
【０２２２】
抗ＬＡＧ３マウスモノクローナル抗体の機能的特性
ＬＡＧ３のその受容体への結合の遮断
ＭＨＣクラスＩＩ受容体へのｓＬＡＧ−３の結合を遮断する抗ＬＡＧ−３抗体の能力を評価するために、ビオチン標識ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃ融合タンパク質およびＭＨＣクラスＩＩ受容体を発現するＲａｊｉ細胞を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイを設計した。１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈマウスモノクローナル抗体をＦＡＣＳ緩衝液を用いて２０μｇ／ｍＬから段階希釈し（６つの用量について１：５）、室温で３０分間６μｇ／ｍＬのビオチン−ＬＡＧ−３−ＥＣＤ−ｈｕＦｃと共にプレインキュベートした。次いで、抗体混合物をＦｃＲ遮断Ｒａｊｉ細胞に加え、氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液を用いて洗浄した後、ストレプトアビジンＰＥを用いて氷上で３０分間染色し、その後にＦＡＣＳ緩衝液を用いて１回洗浄した。標識した細胞をＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）においてフローサイトメトリーにより蛍光強度について評価した。図１０に示すように、１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈ抗体は、ＬＡＧ３のその受容体ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を用量依存的に阻害することができる。
抗ＬＡＧ３抗体によるヒトＴ細胞応答の刺激
【０２２３】
Ｔ細胞応答を刺激する抗ＬＡＧ３抗体の能力を試験するために、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞刺激アッセイを使用した。Ｊｕｒｋａｔは、ＴＣＲ刺激によりＩＬ２を産生できるヒトＴ細胞白血病細胞株である。このアッセイでは、レンチウイルスによりヒトＬＡＧ３遺伝子をトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ細胞をレスポンダー細胞として使用した。ＭＨＣＩＩを発現するＲａｊｉ細胞を抗原提示細胞（ＡＰＣ）として使用した。ブドウ球菌エンテロトキシン（ＳＥ）は、ＭＨＣＩＩ分子およびＴ細胞受容体ベータ（ＴＣＲＶβ）を架橋し、Ｔ細胞応答を刺激することができるスーパー抗原である。ＳＥをこのアッセイにおける刺激因子として使用した。この系では、異所的に発現されたｈｕＬＡＧ３は、Ｊｕｒｋａｔ細胞によるＳＥ刺激性ＩＬ−２産生を抑制できるが、抗ＬＡＧ３抗体はＩＬ−２産生を後退させることができる。簡潔に述べれば、ＡＰＣ（２．５×１０４）をＳＥ刺激の存在下でＬＡＧ３発現Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞（１×１０５）と共培養した。抗ＬＡＧ３抗体（２０ｕｇ／ｍｌから開始して６つの用量について１：５の段階希釈）を培養の開始時に加えた。４８時間後、ＥＬＩＳＡによりＩＬ２産生について培養上清を評価した。図１１に示すように、１２２Ｈ、１４７Ｈおよび１７０Ｈマウスモノクローナル抗体は、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞によるＩＬ２産生を用量依存的に促進させることができ、それらがＴ細胞へのＬＡＧ３シグナルを抑制することによりＴＣＲ刺激を刺激できることを示唆する。
【実施例１３】
【０２２４】
１４７ＨマウスｍＡｂのヒト化の設計
ヒト化ｍＡｂを作出するためにｍＡｂ１４７Ｈ可変領域遺伝子を用いた。この方法の最初のステップでは、ｍＡｂ１４７ＨのＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列をヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースに対して比較して、全体的な最良マッチのヒト生殖細胞系列Ｉｇ遺伝子配列を見出した。軽鎖について、最も近いヒトマッチはＡ１９／ＪＫ４遺伝子であり、重鎖について最も近いヒトマッチはＶＨ１−ｆ／ＪＨ６遺伝子であった。次いで、１４７Ｈ軽鎖のＣＤＲ１（配列番号２４３）、２（配列番号２４４）および３（配列番号２４５）がＡ１９／ＪＫ４遺伝子のフレームワーク配列にグラフトされ、かつ１４７Ｈ  ＶＨのＣＤＲ１（配列番号２４０）、２（配列番号２４１）、および３（配列番号２４２）配列がＶＨ１−ｆ／ＪＨ６遺伝子のフレームワーク配列にグラフトされたヒト化可変ドメイン配列を設計した。次いで、３Ｄモデルを生成して、マウスアミノ酸のヒトアミノ酸への置換が結合および／またはＣＤＲコンホメーションに影響し得るフレームワーク位置があるかどうかを決定した。重鎖の場合、ヒトフレームワーク中のＲ７１、Ｍ６９、Ｒ６６、Ｖ６７、Ｍ４８、Ｖ３７、Ｒ３８、Ｙ９１およびＱ１（Ｋａｂａｔのナンバリング）が同定され、これらをマウスの対応アミノ酸への復帰突然変異、すなわち、Ｒ７１Ａ、Ｍ６９Ｌ、Ｒ６６Ｋ、Ｖ６７Ａ、Ｍ４８Ｉ、Ｖ３７Ｉ、Ｒ３８Ｋ、Ｙ９１ＦおよびＱ１Ｅに供した。
表５．マウス抗体配列
【表１６】
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【０２２５】
ヒト化抗体のアミノ酸配列を列記すると、１４７Ｈ−１、１４７Ｈ−２、１４７Ｈ−３、１４７Ｈ−４、１４７Ｈ−５、１４７Ｈ−６、１４７Ｈ−７、１４７Ｈ−８、１４７Ｈ−９、１４７Ｈ−１０、１４７Ｈ−１１、１４７Ｈ−１２、１４７Ｈ−１３、および１４７Ｈ−１４であり、これらはそれぞれ異なる重鎖を有するが、いずれも共通の軽鎖を共有する。
表６．ヒト化抗体および復帰突然変異
【表１７】
0006929951.tif 000019
【表１８】
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【０２２６】
ヒト化ＶＨおよびＶＫ遺伝子を合成により製造した後、ヒトガンマ１およびヒトカッパ定常ドメインを含有するベクター中にそれぞれをクローニングした。ヒトＶＨおよびヒトＶＫのペアリングは、４０個のヒト化抗体を作出した。
【実施例１４】
【０２２７】
抗ＬＡＧ３  １４７Ｈヒト化モノクローナル抗体の結合特性
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６システムによるヒト化抗体の親和性の順位付け
ヒト化抗体の結合キネティクスを調べるために、この実施例では、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６を使用することにより親和性の順位付けを行った。以下の表に示すように、１４７Ｈ−６、１４７Ｈ−７、１４７Ｈ−１３および１４７Ｈ−１４はより良好な親和性を示す。
【表１９】
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Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６システムによるヒト化抗体の全速度論的親和性
【０２２８】
ヒト化抗体の結合キネティクスを調べるために、この実施例では、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６を使用することにより様々な用量の抗原（５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．１５ｎＭ、３．１２５ｎＭ）で行うことにより全速度論的親和性試験をさらに行った。結合親和性はＯｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６システムのソフトウェアにより算出した。表に示すように、１４７Ｈ−６、１４７Ｈ−７、１４７Ｈ−１３および１４７Ｈ−１４は、１４７Ｈキメラ抗体と同等の親和性を示した。
【表２０】
0006929951.tif 000022
【実施例１５】
【０２２９】
抗ＬＡＧ３マウスモノクローナル抗体の機能的特性
抗ＬＡＧ３抗体によるヒトＴ細胞応答の刺激
刺激されたＴ細胞応答への抗ＬＡＧ３抗体の能力を試験するために、実施例１２に記載されるように、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞刺激アッセイを使用した。抗ＬＡＧ３抗体（３０μｇ／ｍｌから開始して６つの用量について１：３の段階希釈）を培養の開始時に加えた。４８時間後、ＥＬＩＳＡによりＩＬ２産生について培養上清を評価した。図１２に示すように、１４７Ｈ−１３ヒト化モノクローナル抗体は、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞によるＩＬ２産生を用量依存的に促進させることができ、それらがＴ細胞へのＬＡＧ３シグナルを抑制することによりＴＣＲ刺激を刺激できることを示唆する。
【実施例１６】
【０２３０】
抗ＬＡＧ３  １４７Ｈヒト化モノクローナル抗体の親和性成熟
抗原結合親和性を向上させるために、この実施例では、ファージディスプレイ技術を使用して１４７Ｈ４〜１３の親和性成熟を行った。戦略１：１４７Ｈ−１３のＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ３をコドンベースの突然変異生成のために標的化した。ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ３をそれぞれ位置Ｈ９５〜Ｈ１０２およびＬ８９〜Ｌ９７（Ｋａｂａｔのナンバリング）において無作為化した。戦略２：各ＣＤＲをＣＤＲウォーキングのアプローチを使用する単一コドンベースの突然変異生成のために標的化した。次いで、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＬ１をライブラリー１に組み合わせた。ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３をライブラリー２に組み合わせた。
【０２３１】
両方の戦略において、各ラウンドにおいて減少させた濃度の抗原を用いて、ライブラリーを３または４ラウンドの親和性ベースの溶液相ファージディスプレイ選択に供した。比較的高い抗原濃度（１０ｎＭ）を第１のラウンドのために使用した。高親和性バリアントを選択するために、抗原濃度をその後の３ラウンドにおいて各１０倍、またはその後の２ラウンドにおいて各１００倍減少させた。最終ラウンドからの個々のバリアントをＥＬＩＳＡスクリーニングにより抗原への陽性結合について試験した。個々のバリアントの解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）の順位付けをＯｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、ＵＳＡ）により決定した。向上した親和性を有する突然変異を組み合わせて新たなＬＡＧ３抗体を生成させた。親和性をＢｉａｃｏｒｅによりさらに確認したところ、ＣＤＲ  Ｈ２のＮ５８ＶはＫｏｆｆを有意に増加させた一方、ＣＤＲ  Ｌ３のＮ９１ＹはＫｏｎを向上させたことが示唆された。
表７．抗体親和性成熟
【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【表２７】
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【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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表８．突然変異および突然変異したＣＤＲ領域の要約
【表３１】
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【実施例１７】
【０２３２】
親和性成熟抗ＬＡＧ３  １４７Ｈヒト化モノクローナル抗体の結合特性
組換えｈｉｓタグヒトＬＡＧ３−ＥＣＤタンパク質への親和性成熟抗体の結合キネティクスを実施例９に述べたようにＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００により調べた。結果を以下の表に示した。Ｂｉａｃｏｒｅの結果は、これらの抗ＬＡＧ３抗体は親１４７Ｈ−１３より良好な親和性を有することを示した。
【表３２】
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【０２３３】
ヒトＬＡＧ３への親和性成熟抗ＬＡＧ−３抗体の結合能力を確認するために、親抗体１４７Ｈ−１３と共に最も高い親和性を有する２つの抗体（Ｂ３８０７およびＢ３８１０）を実施例２に記載したＥＬＩＳＡを使用して評価した。親抗体と共にＢ３８０７、Ｂ３８１０のＥＣ５０を以下の表に示した。３８０７およびＢ３８１０の両方は、親抗体１４７Ｈ−１３よりも優れた結合能力を示した。
【表３３】
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【０２３４】
親和性成熟抗ＬＡＧ−３抗体が細胞由来ヒトＬＡＧ３に結合し得ることをさらに確認するために、誘導性ｈＬＡＧ３発現Ｊｕｒｋａｔ細胞および活性化ＰＢＭＣの両方を使用してＢ３８０７およびＢ３８１０の結合能力を試験した。簡潔に述べれば、Ｊｕｒｋａｔ細胞をＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。抗ＬＡＧ３抗体およびアイソタイプ対照を２０ｎＭ〜３０ｐＭの用量範囲のＦＡＣＳ緩衝液中に４倍で段階希釈した。段階希釈した抗体を細胞懸濁液に加え、氷上で３０分間インキュベートした。次いで、未結合の抗体を除去した後、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３を共役させた抗ヒトＩｇＧ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ａ２１０９１）を用いて染色した。蛍光測定値をＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメーターにより取得し、Ｆｌｏｗｊｏにより解析して平均蛍光強度（ＭＦＩ）を決定した。天然ヒトＬＡＧ３への抗ＬＡＧ３抗体の結合能力を試験するために、健康ドナーからのＰＢＭＣを共に１ｕｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＤ３（ＢＤ、５５５３３６）および抗ＣＤ２８（ＢＤ、５５５７２５）を用いて刺激した。３日の刺激後に細胞を回収し、氷上で３０分間抗ＬＡＧ３抗体と共にインキュベートした。抗ヒトＣＤ４および抗ヒトＩｇＧを用いて細胞を染色した。ＣＤ４＋細胞への抗体結合の分析はＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメトリーにより実行した。サイトメトリー分析の結果を、細胞由来ヒトＬＡＧ３への抗体結合のＥＣ５０を示す以下の表に要約した。図１３は、抗ＬＡＧ３抗体の結合曲線を示すグラフである。試験した抗体のＥＣ５０を以下に示した。
【表３４】
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【実施例１８】
【０２３５】
ＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ３の結合の遮断
ヒトＬＡＧ３とＭＨＣＩＩとの相互作用を遮断する抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体の能力を測定するために、キット製造者により提供されるプロトコールにしたがって均一ＴＲ−ＦＲＥＴ技術を利用してＬＡＧ３およびＭＨＣ  ＩＩ結合アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ、６４ＩＣＰ０３ＰＥＧ）を行った。抗ヒトＬＡＧ３抗体を１００ｎＭ〜５ｐＭ（１０ポイント）の範囲内で３倍に希釈した。蛍光データをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーにより取得し、４パラメーター用量応答曲線をフィッティングして各抗体のＩＣ５０を得た。試験した抗体のＩＣ５０を以下の表に示した。
【表３５】
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【実施例１９】
【０２３６】
抗ＬＡＧ３抗体によるヒトＴ細胞応答の刺激
Ｔ細胞応答を刺激する抗ＬＡＧ３抗体の能力を試験するために、実施例１３に記載したようにｈＬＡＧ３発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を使用した。同様に、９６ウェルプレートの各ウェルにおいてＪｕｒｋａｔ細胞（１×１０５）を０．１ｎｇ／ｍｌのＳＥの存在下でＲａｊｉ細胞（１×１０４）と共にインキュベートした。抗ＬＡＧ３抗体を３倍に希釈し、１００ｎＭ〜５ｐｍの範囲内の最終濃度で細胞に加えた。４８時間後、均一ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを使用して培養培地からのＩＬ２を測定した。（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＴＲＦ１２２１Ｍ）図１４は、ＩＬ２放出の刺激における抗ＬＡＧ３抗体の曲線を示す。親和性成熟クローンはＴ細胞応答の刺激においてより良好な力価を示した。
【実施例２０】
【０２３７】
ＬＡＧ３へのガレクチン−３またはＬＳＥＣｔｉｎの結合の遮断に対する抗ＬＡＧ３抗体の効果
ＬＡＧ３はガレクチン−３（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５；３：４１２−４２３．）およびＬＳＥＣｔｉｎ（（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００４；２７９：１８７４８−１８７５８）などの他のリガンドを有することが報告されている。これらの２つの潜在的な代替のリガンドとの相互作用は、特に、腫瘍微環境におけるＣＤ８＋  Ｔ細胞に対するＬＡＧ３の内在性の役割に関して、Ｔ細胞機能に対するＬＡＧ３の影響力を広げることに役立ち得る。組換えガレクチン−３またはＬＳＥＣｔｉｎを４℃で終夜９６ウェルプレートにコーティングした。段階希釈した抗ＬＡＧ３抗体（１０μｇ／ｍｌから開始して１：３の希釈）およびビオチン標識ＬＡＧ３−Ｆｃタンパク質を室温で２時間、Ｇｌｅｃｔｉｎ−３またはＬＳＥＣｔｉｎをコーティングしたウェルを用いてインキュベートした。洗浄緩衝液を用いる大規模な洗浄後、ストレプトアビジン−ＨＲＰを加えた。図１５に示すように、１４７Ｈ、Ｓ２７およびＳ１１９抗体は、ＬＡＧ３タンパク質へのガレクチン−３またはＬＳＥＣｔｉｎの結合を用量依存的に阻害した。
【実施例２１】
【０２３８】
抗ヒトＬＡＧ３および抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の併用治療の相乗効果
ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた抗ＬＡＧ−３抗体の効果を評価するために、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞刺激アッセイを使用した。Ｊｕｒｋａｔ細胞においてヒトＬＡＧ３およびヒトＰＤ−１を過剰発現させ、内因性にＭＨＣＩＩを発現するＲａｊｉ細胞にヒトＰＤ−Ｌ１をトランスフェクトした。ＳＥをこのアッセイにおける刺激因子として使用した。簡潔に述べれば、ＰＤ−Ｌ１発現Ｒａｊｉ（１×１０４）をＳＥ刺激の存在下でＬＡＧ３−ＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞（１×１０５）と共培養した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体と共にまたはそれを伴わずに抗ＬＡＧ３抗体を段階希釈し、培養の開始時に加えた。４８時間後、ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＴＲＦ１２２１Ｍ）を使用するＩＬ２放出のために培養上清を回収した。図１６に示すように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた抗ＬＡＧ３抗体は、その対応するモノ抗体より多くのＩＬ−２を有意に産生することができる。
【０２３９】
ヒトＰＤ−１およびヒトＬＡＧ３の細胞外ドメインを発現する二重ヒト化マウスを使用した。ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するようにマウス結腸腺癌細胞（ＭＣ３８）を操作した。０日目に二重ヒト化マウス（ｈＬＡＧ３／ｈＰＤ−１）の皮下に５×１０５個のＭＣ３８−ｈＰＤ−Ｌ１細胞を移植した。１０日目に、１３７ｍｍ３の平均腫瘍体積を有するマウスを選択し、４つの処置群（Ｎ＝７匹／群）に無作為化した。１０日目に開始して１日毎に８つの用量について、マウスにアイソタイプ対照（５ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、抗ＬＡＧ３抗体１４７Ｈ−１３（５ｍｇ／ｋｇ）および抗ＰＤ−Ｌ１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＬＡＧ３抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。この実施例において使用した抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、高親和性でヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１との相互作用を遮断する。実験の継続時間（２９日）にわたり週に２回キャリパー測定により腫瘍体積をモニターした。ＰＤ−Ｌ１抗体および１４７Ｈ−１３のいずれも５ｍｇ／ｋｇにおいて腫瘍の阻害を示さなかった。対照的に、ＰＤ−Ｌ１抗体と１４７Ｈ−１３との組合せは、ＭＣ３８腫瘍成長のロバストな阻害を実証し、実験の終了時に７４．２％のＴＧＩであった（図１７）。したがって、確立されたＭＣ３８結腸腺癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＬＡＧ３抗体の併用処置は、対応する単剤療法よりも有意に有効であった。
【０２４０】
本開示は、本開示の個々の態様の１つの説明を意図する記載された特定の実施形態により範囲を限定されず、機能的に同等の任意の組成物または方法は本開示の範囲内である。本開示の精神または範囲から離れることなく本開示の方法および組成物において様々な改良および改変を行い得ることは当業者に明らかであろう。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等の範囲内である限り、本開示の改良および改変をカバーすることが意図される。
【０２４１】
本明細書において言及した全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が参照することにより組み込まれることを具体的かつ個々に指し示されたのと同じ程度まで、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０２４２】
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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