(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変（ＶＬ）領域及び重鎖可変（ＶＨ）領域を含むヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＶＬ  ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２及びＶＨ  ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ領域は、配列番号１１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＨ領域は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号２９を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号３０又は配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号３１又は配列番号３４を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３２を含む、
ヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
軽鎖可変（ＶＬ）領域及び重鎖可変（ＶＨ）領域を含むヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＶＬ  ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２及びＶＨ  ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ領域は、配列番号１４に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＨ領域は、配列番号１５に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号２９を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号３０又は配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号３１又は配列番号３４を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３２を含む、
ヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
軽鎖可変（ＶＬ）領域及び重鎖可変（ＶＨ）領域を含むヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＶＬ  ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２及びＶＨ  ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ領域は、配列番号１７に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＨ領域は、配列番号１８に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号２９を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号３０又は配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号３１又は配列番号３４を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３２を含む、
ヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
軽鎖可変（ＶＬ）領域及び重鎖可変（ＶＨ）領域を含むヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＶＬ  ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、かつ前記ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２及びＶＨ  ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ領域は、配列番号２０に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＨ領域は、配列番号２１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号２９を含み、
前記ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号３０又は配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号３１又は配列番号３４を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３２を含む、
ヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記ＶＬ領域は、
配列番号３６の７位、８位、１０位、１５位、２２位、４１位、４２位、４３位、４４位、４９位、７１位、７２位、７７位、７９位、８０位、８３位、８７位、１００位、及び／又は１０７位に相当する位置における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１〜４のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記ＶＬ領域における前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号３６の７位のＳｅｒへの置換、８位のＰｒｏへの置換、１５位のＶａｌへの置換、２２位のＴｈｒへの置換、４１位のＧｌｎへの置換、４２位のＬｙｓへの置換、４３位のＡｌａへの置換、７２位のＴｈｒへの置換、７７位のＳｅｒへの置換、７９位のＧｌｎへの置換、８０位のＰｒｏへの置換、及び／又は１０７位のＬｙｓへの置換から選択される、請求項５に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
前記ＶＨ領域は、
配列番号３７の１位、３位、５位、９位、１３位、１５位、１６位、１７位、１９位、２０位、２１位、２３位、２４位、３７位、４２位、４８位、６７位、６９位、７０位、７１位、７３位、７６位、７７位、７８位、７９位、８１位、８３位、８６位、８７位、８８位、９２位、及び／又は１１５位に相当する位置における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記ＶＨ領域における前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号３７の１位のＧｌｎへの置換、３位のＧｌｎへの置換、５位のＶａｌへの置換、９位のＧｌｙへの置換、１３位のＬｙｓへの置換、１３位のＧｌｎへの置換、１５位のＧｌｙへの置換、１６位のＡｒｇへの置換、１６位のＴｈｒへの置換、１７位のＴｈｒへの置換、１９位のＡｒｇへの置換、２０位のＬｅｕへの置換、２１位のＳｅｒへの置換、２４位のＡｌａへの置換、４２位のＧｌｙへの置換、４８位のＩｌｅへの置換、６７位のＰｈｅへの置換、７０位のＳｅｒへの置換、７１位のＡｒｇへの置換、７３位のＴｈｒへの置換、７６位のＡｓｎへの置換、７７位のＴｈｒへの置換、７８位のＬｅｕへの置換、７９位のＴｙｒへの置換、８１位のＧｌｎへの置換、８３位のＳｅｒへの置換、８６位のＴｈｒへの置換、８６位のＡｒｇへの置換、８７位のＡｌａへの置換、８８位のＧｌｕへの置換、８８位のＡｌａへの置換、９２位のＶａｌへの置換、及び／又は１１５位のＬｅｕへの置換から選択される、請求項７に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びシングルドメイン抗体（ｄＡＢ）からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖである、請求項９に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３１を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３４を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３４を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
前記ＶＬは、配列番号１４と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１５と少なくとも９９％同一である、請求項２に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
前記ＶＬは、配列番号１４を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号１５を含む、請求項２に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
前記ＶＬは、配列番号２０と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号２１と少なくとも９９％同一である、請求項４に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
前記ＶＬは、配列番号２０を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号２１を含む、請求項４に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】
配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
前記ＶＬは、配列番号１１と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１２と少なくとも９９％同一である、請求項１に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】
前記ＶＬは、配列番号１１を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号１２を含む、請求項１に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
前記ＶＬは、配列番号１７と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１８と少なくとも９９％同一である、請求項３に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
前記ＶＬは、配列番号１７を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号１８を含む、請求項３に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントを含むポリペプチド。
【請求項２７】
配列番号８のアミノ酸配列を含むＨｉｓタグを更に含む、請求項２６に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
前記ポリペプチドは、配列番号１０と少なくとも９５％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
前記ポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも９５％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
前記ポリペプチドは、配列番号１６と少なくとも９５％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
前記ポリペプチドは、配列番号１９と少なくとも９５％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
前記ポリペプチドは、配列番号１０と少なくとも９９％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
前記ポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも９９％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
前記ポリペプチドは、配列番号１６と少なくとも９９％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
前記ポリペプチドは、配列番号１９と少なくとも９９％同一である、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
前記ポリペプチドは、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、又は配列番号１９を含む、請求項２６又は２７に記載のポリペプチド。
【請求項３７】
前記ポリペプチドは、治療剤と連結されている、請求項２６〜３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
前記治療剤は、化学療法剤、サイトカイン、放射性原子、ｓｉＲＮＡ、又はトキシンである、請求項３７に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
前記治療剤は、化学療法剤である、請求項３８に記載のポリペプチド。
【請求項４０】
前記治療剤は、放射性原子である、請求項３８に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
（ｉ）抗原結合ドメインと、（ｉｉ）共刺激ドメインと、（ｉｉｉ）活性化ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、
前記共刺激ドメインは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含み、
前記抗原結合ドメインは、請求項２６に記載のポリペプチドを少なくとも含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
【請求項４２】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの断片又は組み合わせである、請求項４１に記載のＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項４３】
前記膜貫通ドメインは、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体のβ鎖、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの組み合わせである、請求項４１又は４２に記載のＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項４４】
前記細胞内ドメインは、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、免疫グロブリン様タンパク質、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４、ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらの組み合わせである、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載のＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項４５】
前記細胞外ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの断片又は組み合わせである、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載のＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項４６】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３ゼータ又はＣＤ３イプシロンである、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載のＣＡＲ又はＴＣＲ。
【請求項４７】
請求項１〜２５のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント、或いは、請求項４１〜４６のいずれかに記載のＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項４８】
前記ベクターは、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、ＤＮＡベクター、レンチウイルスベクター、プラスミド、レトロウイルスベクター、又はＲＮＡベクターである、請求項４７に記載のベクター。
【請求項４９】
前記ベクターは、レトロウイルスベクターである、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５０】
前記レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである、請求項４９に記載のベクター。
【請求項５１】
請求項１〜２５のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体若しくはその抗原結合フラグメント、請求項４７〜５０のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項４１〜４６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む細胞。
【請求項５２】
前記細胞は、Ｔ細胞である、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５３】
前記Ｔ細胞は、同種異系Ｔ細胞、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ）、又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項５２に記載の細胞。
【請求項５４】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項５３に記載の細胞。
【請求項５５】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項５３に記載の細胞。
【請求項５６】
前記細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞である、請求項５１〜５５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５７】
前記Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞である、請求項５２〜５６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５８】
前記細胞は、ヒトＣＤ１９への結合時に少なくともインターフェロンγ（ＩＦＮγ）を産生する、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５９】
請求項５１〜５８のいずれか一項に記載の細胞を複数含む組成物。
【請求項６０】
前記組成物は、ＣＤ４＋細胞又はＣＤ８＋細胞を含む、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記組成物は、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞を含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
前記Ｔ細胞の２０％以上８０％以下はＣＤ４＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ８＋細胞である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
前記Ｔ細胞の３０％以上７０％以下はＣＤ４＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ８＋細胞である、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
前記Ｔ細胞の４０％以上６０％以下はＣＤ４＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ８＋細胞である、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
前記Ｔ細胞の５０％はＣＤ４＋細胞であり、かつ前記Ｔ細胞の５０％はＣＤ８＋細胞である、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
前記Ｔ細胞の２０％以上８０％以下はＣＤ８＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ４＋細胞である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６７】
前記Ｔ細胞の３０％以上７０％以下はＣＤ８＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ４＋細胞である、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記Ｔ細胞の４０％以上６０％以下はＣＤ８＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ４＋細胞である、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記複数の細胞における各細胞は、自己Ｔ細胞である、請求項５９〜６８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７０】
前記組成物は、少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤を含む、請求項５９〜６９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７１】
請求項１〜２５のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体若しくはその抗原結合フラグメント、請求項４７〜５０のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項４１〜４６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む組成物。
【請求項７２】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞を製造する方法であって、単離された細胞に、請求項６９に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項４７〜５０のいずれか一項に記載のベクターを形質導入する工程含む、方法。
【請求項７３】
前記細胞は、治療を必要とする患者から単離されたリンパ球である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記リンパ球は、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記細胞を、細胞増殖及び／又はＴ細胞活性化を促進する条件下で培養する工程を更に含む、請求項７２〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
所望のＴ細胞を単離する工程を更に含む、請求項７２〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記所望のＴ細胞を単離する工程は、培養の６日後に行われる、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記所望のＴ細胞は、ＣＤ４及び／又はＣＤ８を発現する、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
Ｂ細胞リンパ腫を治療するための、請求項５９〜７１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８０】
前記Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＬＫ陽性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病において生ずる大Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）及びワルデンシュトレームのマクログロブリン血症からなる群から選択される、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
前記Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）及び非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
前記Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である、請求項８１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年４月２４日付で出願された米国仮特許出願第６２／４８９，２５８号の利益を主張し、その開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。２０１７年４月２４日付けで作製された上記ＡＳＣＩＩコピーの名前はＫ−１０４６＿０１ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、４３３０５バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
ヒト癌は、本質的に正常細胞で構成され、この正常細胞が遺伝的又はエピジェネティックな変換を受けて異常な癌細胞となる。こうして、癌細胞は正常細胞によって発現されるものとは異なるタンパク質及びその他の抗原を発現し始め、及び／又はそれらのタンパク質は正常細胞によって発現されるよりも大幅に多量に発現される。
【０００４】
癌細胞が発現するタンパク質と相互作用し得る結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞が、特定のタンパク質を発現する癌細胞を標的とし、死滅させることを可能にする。同様に、治療剤にコンジュゲートされた抗体は、特定のタンパク質を発現する癌細胞に該治療剤を選択的に供給して、これらの癌細胞を死滅させることができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
癌細胞を標的とし、死滅させるためのヒト化抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、ＴＣＲ及び抗体が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ヒト化抗原結合ドメインを有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する操作された免疫細胞を含む組成物及び方法の提供により上記要求に取り組んでいる。これらのＣＡＲ及びＴＣＲは、癌細胞を特異的に標的とし、死滅させる。本発明はまた、癌細胞を特異的に標的とし、死滅させる抗体を含む組成物及び方法の提供により上記要求に取り組んでいる。
【０００７】
本発明の１つの態様は、ヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントである。上記抗体は、軽鎖可変（ＶＬ）領域及び重鎖可変（ＶＨ）領域を含み、ここでＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＶＬ  ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、かつＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ＶＬ領域は、配列番号３６に基づき得て、ＶＨ領域は、配列番号３７に基づき、ＶＬ領域及び／又はＶＨ領域は、フレームワーク領域に１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【０００８】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ領域が配列番号３６と比較して５個、１０個、１５個、２０個、２５個、又は３０個までのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその結合フラグメントが提供される。
【０００９】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ領域における前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号３６の７、８、１０、１５、２２、４１、４２、４３、４４、４９、７１、７２、７７、７９、８０、８３、８７、１００、及び／又は１０７に相当する位置に存在する。
【００１０】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ領域における前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号３６の位置７のＳｅｒ、位置８のＰｒｏ、位置１５のＶａｌ、位置２２のＴｈｒ、位置４１のＧｌｎ、位置４２のＬｙｓ、位置４３のＡｌａ、位置７２のＴｈｒ、位置７７のＳｅｒ、位置７９のＧｌｎ、位置８０のＰｒｏ、及び／又は位置１０７のＬｙｓから選択される。
【００１１】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨ領域は、配列番号３７と比較して５個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、又は５０個までのアミノ酸置換を含む。
【００１２】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨ領域における前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号３７の１、３、５、９、１３、１５、１６、１７、１９、２０、２１、２３、２４、３７、４２、４８、６７、６９、７０、７１、７３、７６、７７、７８、７９、８１、８３、８６、８７、８８、９２、及び／又は１１５に相当する位置に存在する。
【００１３】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨ領域における前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号３７の位置１のＧｌｎ、位置３のＧｌｎ、位置５のＶａｌ、位置９のＧｌｙ、位置１３のＬｙｓ、位置１３のＧｌｎ、位置１５のＧｌｙ、位置１６のＡｒｇ、位置１６のＴｈｒ、位置１７のＴｈｒ、位置１９のＡｒｇ、位置２０のＬｅｕ、位置２１のＳｅｒ、位置２４のＡｌａ、位置４２のＧｌｙ、位置４８のＩｌｅ、位置６７のＰｈｅ、位置７０のＳｅｒ、位置７１のＡｒｇ、位置７３のＴｈｒ、位置７６のＡｓｎ、位置７７のＴｈｒ、位置７８のＬｅｕ、位置７９のＴｙｒ、位置８１のＧｌｎ、位置８３のＳｅｒ、位置８６のＴｈｒ、位置８６のＡｒｇ、位置８７のＡｌａ、位置８８のＧｌｕ、位置８８のＡｌａ、位置９２のＶａｌ、及び／又はＬｅｕから選択される。
【００１４】
本発明の別の態様は、軽鎖可変（ＶＬ）領域及び重鎖可変（ＶＨ）領域を含むヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントである。ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域（ＣＤＲ）１（ＶＬ  ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、かつＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ＶＬ領域は、配列番号１４、配列番号２０、配列番号１１又は配列番号１７と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有し、及び／又はＶＨ領域は、配列番号１５、配列番号２１、配列番号１２又は配列番号１８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する。
【００１５】
幾つかの実施の形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びシングルドメイン抗体（ｄＡＢ）からなる群から選択される。幾つかの実施の形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖである。
【００１６】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８と少なくとも８０％同一であり、かつ前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９と少なくとも８０％同一である。
【００１７】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、かつ前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含む。
【００１８】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０又は配列番号３３と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３１又は配列番号３４と少なくとも８０％同一であり、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２と少なくとも８０％同一である。
【００１９】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０又は配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３１又は配列番号３４を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む。
【００２０】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０又は配列番号３３と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３１又は配列番号３４と少なくとも８０％同一であり、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２と少なくとも８０％同一である。
【００２１】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０又は配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３１又は配列番号３４を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む。
【００２２】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３１を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む。
【００２３】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３３を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３４を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む。
【００２４】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号２７を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号２８を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号２９を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号３０を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号３４を含み、かつ前記ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３２を含む。
【００２５】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１４と少なくとも８５％同一である。
【００２６】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨは、配列番号１５と少なくとも８５％同一である。
【００２７】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１４と少なくとも８５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１５と少なくとも８５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１４と少なくとも９０％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１５と少なくとも９０％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１４と少なくとも９５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１５と少なくとも９５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１４と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１５と少なくとも９９％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１４を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号１５を含む。
【００２８】
幾つかの実施の形態では、ポリペプチドは、配列番号２４を含む。
【００２９】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号２０と少なくとも８５％同一である。
【００３０】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨは、配列番号２１と少なくとも８５％同一である。
【００３１】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号２０と少なくとも８５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号２１と少なくとも８５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号２０と少なくとも９０％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号２１と少なくとも９０％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号２０と少なくとも９５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号２１と少なくとも９５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号２０と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号２１と少なくとも９９％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号２０を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号２１を含む。
【００３２】
幾つかの実施の形態では、ポリペプチドは、配列番号２６を含む。
【００３３】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１１と少なくとも８５％同一である。
【００３４】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨは、配列番号１２と少なくとも８５％同一である。
【００３５】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１１と少なくとも８５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１２と少なくとも８５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１１と少なくとも９０％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１２と少なくとも９０％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１１と少なくとも９５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１２と少なくとも９５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１１と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１２と少なくとも９９％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１１を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号１２を含む。
【００３６】
幾つかの実施の形態では、ポリペプチドは、配列番号２３を含む。
【００３７】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１７と少なくとも８５％同一である。
【００３８】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＨは、配列番号１８と少なくとも８５％同一である。
【００３９】
幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１７と少なくとも８５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１８と少なくとも８５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１７と少なくとも９０％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１８と少なくとも９０％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１７と少なくとも９５％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１８と少なくとも９５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１７と少なくとも９９％同一であり、かつ前記ＶＨは、配列番号１８と少なくとも９９％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ＶＬは、配列番号１７を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号１８を含む。
【００４０】
幾つかの実施の形態では、ポリペプチドは、配列番号２５を含む。
【００４１】
本発明の別の態様は、上に記載の態様又は実施の形態のヒト化抗ＣＤ１９抗体によってコードされるポリペプチドである。
【００４２】
幾つかの実施の形態では、ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨｉｓタグを含む。
【００４３】
幾つかの実施の形態では、前記ポリペプチドは、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、又は配列番号１９と少なくとも８５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ポリペプチドは、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、又は配列番号１９と少なくとも９０％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ポリペプチドは、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、又は配列番号１９と少なくとも９５％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ポリペプチドは、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、又は配列番号１９と少なくとも９９％同一である。幾つかの実施の形態では、前記ポリペプチドは、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、又は配列番号１９を含む。
【００４４】
幾つかの実施の形態では、前記ポリペプチドは、治療剤と連結されている。幾つかの実施の形態では、前記治療剤は、化学療法剤、サイトカイン、放射性原子、ｓｉＲＮＡ、又はトキシンである。幾つかの実施の形態では、前記治療剤は、化学療法剤である。
【００４５】
幾つかの実施の形態では、前記治療剤は、放射性原子である。
【００４６】
本発明の更に別の態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。ＣＡＲ又はＴＣＲは、（ｉ）抗原結合ドメインと、（ｉｉ）共刺激ドメインと、（ｉｉｉ）活性化ドメインとを含む。共刺激ドメインは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含み、抗原結合ドメインは、請求項５２に記載のポリペプチドを少なくとも含む。
【００４７】
幾つかの実施の形態では、前記共刺激ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの断片又は組み合わせに由来する、又はそれらに基づく。
【００４８】
幾つかの実施の形態では、前記膜貫通ドメインは、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体のβ鎖、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの組み合わせに由来する、又はそれらに基づく。
【００４９】
幾つかの実施の形態では、前記細胞内ドメインは、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、免疫グロブリン様タンパク質、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４、ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらの組み合わせに由来する、又はそれらに基づく。
【００５０】
幾つかの実施の形態では、前記細胞外ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの断片又は組み合わせに由来する、又はそれらに基づく。
【００５１】
幾つかの実施の形態では、前記活性化ドメインは、ＣＤ３ゼータ又はＣＤ３イプシロンに由来する、又はそれらに基づく。
【００５２】
本発明の１つの態様は、上に記載の態様又は実施の形態のＣＡＲ又はＴＣＲをコードする、ヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントである。
【００５３】
本発明の更に別の態様は、上に記載の態様又は実施の形態のヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメントを含むベクターである。
【００５４】
幾つかの実施の形態では、前記ベクターは、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、ＤＮＡベクター、レンチウイルスベクター、プラスミド、レトロウイルスベクター、又はＲＮＡベクターである。幾つかの実施の形態では、前記ベクターは、レトロウイルスベクターである。幾つかの実施の形態では、前記レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。
【００５５】
本発明の別の態様は、上に記載の態様又は実施の形態のベクターによってコードされるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【００５６】
本発明の更に別の態様は、上に記載の態様若しくは実施の形態のヒト化抗ＣＤ１９抗体若しくはその抗原結合フラグメント、上に記載の態様若しくは実施の形態のベクター、又は上に記載の態様若しくは実施の形態のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む細胞である。
【００５７】
幾つかの実施の形態では、上記細胞はＴ細胞である。
【００５８】
幾つかの実施の形態では、上記Ｔ細胞は、同種異系Ｔ細胞、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ）、又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。
【００５９】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【００６０】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【００６１】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞である。
【００６２】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である。
【００６３】
幾つかの実施の形態では、前記細胞は、ヒトＣＤ１９への結合時に少なくともインターフェロンγ（ＩＦＮγ）を産生する。
【００６４】
本発明の１つの態様は、上に記載の態様又は実施の形態の複数の細胞を含む組成物である。
【００６５】
幾つかの実施の形態では、前記組成物は、ＣＤ４＋細胞又はＣＤ８＋細胞を含む。幾つかの実施の形態では、前記組成物は、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞を含む。幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞の約２０％から８０％の間はＣＤ４＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ８＋細胞である。幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞の約３０％から７０％の間はＣＤ４＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ８＋細胞である。幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞の約４０％から６０％の間はＣＤ４＋細胞であり、残りのＴ細胞はＣＤ８＋細胞である。幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞の約５０％はＣＤ４＋細胞であり、かつ前記Ｔ細胞の約５０％はＣＤ８＋細胞である。
【００６６】
幾つかの実施の形態では、前記複数の細胞における各細胞は、自己Ｔ細胞である。
【００６７】
幾つかの実施の形態では、前記組成物は、少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【００６８】
本発明の別の態様は、上に記載の態様若しくは実施の形態のヒト化抗ＣＤ１９抗体若しくはその抗原結合フラグメント、上に記載の態様若しくは実施の形態のベクター、又は上に記載の態様若しくは実施の形態のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む組成物である。
【００６９】
本発明の更に別の態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞を製造する方法である。本方法は、細胞に、上に記載の態様若しくは実施の形態のヒト化抗ＣＤ１９抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は上に記載の態様若しくは実施の形態のベクターを形質導入する工程を含む。
【００７０】
幾つかの実施の形態では、前記細胞は、治療を必要とする患者から単離されたリンパ球である。
【００７１】
幾つかの実施の形態では、前記リンパ球は、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞である。
【００７２】
幾つかの実施の形態では、本方法は、前記細胞を、細胞増殖及び／又はＴ細胞活性化を促進する条件下で培養する工程を更に含む。
【００７３】
幾つかの実施の形態では、本方法は、所望のＴ細胞を単離する工程を更に含む。
【００７４】
幾つかの実施の形態では、前記所望のＴ細胞を単離する工程は、培養の約６日後に行われる。
【００７５】
幾つかの実施の形態では、前記所望のＴ細胞は、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋を発現する。
【００７６】
本発明の更に別の態様は、Ｂ細胞リンパ腫を治療する方法であって、上に記載の態様若しくは実施の形態の細胞、又は上に記載の態様若しくは実施の形態の組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法である。
【００７７】
幾つかの実施の形態では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＬＫ陽性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病において生ずる大Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）及びワルデンシュトレームのマクログロブリン血症からなる群から選択される。幾つかの実施の形態では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）及び非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。幾つかの実施の形態では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【００７８】
概して、本発明は、養子細胞移植としても知られるｅＡＣＴ（商標）と略記される操作された自己細胞療法（Engineered Autologous Cell Therapy）に関する。ｅＡＣＴ（商標）は、患者自身のＴ細胞を収集し、続いて１つ以上の癌に特異的な兆候である細胞表面上に発現される１つ以上の抗原を認識して標的とするように遺伝子操作する方法である。Ｔ細胞は、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作され得る。図１Ａ、図１Ｂ及び図２を参照のこと。ＣＡＲ陽性（ＣＡＲ＋）Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現するように操作される。ＣＡＲは、例えば特定の腫瘍抗原、例えばヒトＣＤ１９に対して特異性を有するヒト化単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み得る。ｓｃＦｖは、更に少なくとも１つの活性化ドメインに直接又は間接に連結される少なくとも１つの共刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達部分に直接又は間接に連結され得る。それらのＣＡＲの成分は、任意の順序で配列され得る。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法及びコンストラクトの例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号、米国仮特許出願第６２／４７０，７０３号及び同第６２／３１７，２５８号、国際公開第２０１２０３３８８５号、国際公開第２０１２０７９０００号、国際公開第２０１４１２７２６１号、国際公開第２０１４１８６４６９号、国際公開第２０１５０８０９８１号、国際公開第２０１５１４２６７５号、国際公開第２０１６０４４７４５号、及び国際公開第２０１６０９０３６９号、並びにRosenberg and Restifo, Cancer Immunology and Immunotherapy, 348: 62-68 (2015)に記載され、各々は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす。
【００７９】
さらに、本発明は概して、ヒトＣＤ１９に対して特異性を有するヒト化単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）に関する。ヒト化ｓｃＦｖ抗ヒトＣＤ１９  ｓｃＦｖは、癌細胞に結合し、その癌細胞へと治療剤を送達して、ヒトＣＤ１９を発現する癌細胞を死滅させるために、治療剤（例えば、化学療法剤及び放射性原子）に結合（例えば連結）され得る。
【００８０】
本明細書に記載される任意の態様又は実施の形態は、本明細書に開示される任意の他の態様又は実施の形態と組み合わせられ得る。本発明はその詳細な説明と併せて記載されているが、上述の記載は解説を意図するものであって、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではない。他の態様、利点、及び変更形態は、添付の特許請求の範囲に含まれる。
【００８１】
本明細書で言及される特許及び科学文献は、当業者に利用可能な知識を確立する。本明細書で引用される米国特許、及び公開又は未公開の米国特許出願はいずれも、引用することにより本発明の一部をなす。本明細書で引用される公開された外国の特許及び特許出願はいずれも引用することにより本明細書の一部をなす。本明細書で引用される他の公開された参照文献、辞書、文書、原稿及び科学文献はいずれも、引用することにより本明細書の一部をなす。
【００８２】
本発明の他の特徴及び利点は、図面、及び実施例を含む以下の詳細な説明、並びに特許請求の範囲から明らかとなる。
【００８３】
添付の図面と併せて考慮された場合、上記及び更なる特徴は以下の詳細な説明からより明確に理解される。しかしながら、図面は限定ではなく、解説の目的であるにすぎない。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１Ａ及び図１Ｂは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の製造及び使用の特徴を示す略画である。図１Ａは、ＣＡＲをコードする例示的なポリヌクレオチドと、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターと、該ウイルスベクターの患者のＴ細胞への形質導入と、宿主ゲノムへの組み込みと、形質導入（「ＣＡＲ操作」）されたＴ細胞の表面上でのＣＡＲの発現とを示す。図１Ｂは、癌細胞の表面上に位置する標的抗原を認識したＣＡＲ操作されたＴ細胞を示す。標的抗原の認識及び結合は、細胞溶解活性、サイトカイン放出及びＴ細胞増殖を含むＴ細胞内の機構を活性化し、これらの機構は癌細胞の死滅を促進する。
【図２】操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））の間に行われる主な工程を示す略図である。
【図３】図３Ａ及び図３Ｂは、Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋ヒトバーキットリンパ腫）細胞への結合に関して選択された７種のヒト化ｓｃＦｖについてのフローサイトメトリーデータを示すグラフである。ＲＳ、ＣＳ、ＢＳ、ＳＳ、ＪＳ、ＡＳ、ＡＳ−Ｒ及びＮＳは、ヒト化抗体についての本発明者の内部の命名規定を表し、ＷＴは野生型を表す。
【図４】図４Ａ〜図４Ｄは、ＮＳ、ＳＳ、ＪＳ及びＡＳのヒト化ｓｃＦｖのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を示すグラフである。このアッセイは、これらの抗体の可溶性凝集傾向を反映している。
【図５】図５Ａ及び図５Ｂは、ＮＳ、ＳＳ、ＪＳ及びＡＳのヒト化ｓｃＦｖを含むＣＡＲのポリペプチド安定性を測定するためのサーマルランピング（thermal ramping）を示すグラフである。図５Ａでは、熱安定性は５０ｍＭのＮａＣｌの存在下で測定され、図５ＢではＮａＣｌが省かれた。ｓｃＦｖのＡＳ（「□」）、ＳＳ（「△」）、ＪＳ（「◇」）及びＮＳ（「×」）に基づくＣＡＲが示される。
【図６】図６Ａ及び図６Ｂは、２人のドナー被験体５２４４（図６Ａ）及び５２７３（図６Ｂ）から取得されたＴ細胞の表面上に発現された本発明のＳＳを含むＣＡＲ、ＪＳを含むＣＡＲ、ＡＳを含むＣＡＲ及びＮＳを含むＣＡＲの検出を示す一連のプロットを含む。モックＣＡＲを発現するドナー細胞及び親抗体（「ＦＭＣ６３」）のｓｃＦｖを含むＣＡＲを発現するドナー細胞も準備した。
【図７】図７Ａ〜図７Ｄは、ドナー５２４４からのＣＡＲ又はモックが形質導入されたドナー細胞を用いた本発明のＣＡＲの細胞溶解活性を裏付ける一連の棒グラフを含む。ＣＡＲ又はモックが形質導入されたドナー細胞を、１：１又は４：１のエフェクター対標的比で添加した。４種の標的細胞型を使用した：Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋ヒトバーキットリンパ腫細胞；図７Ａ）、Ｎａｍａｌａｗａ（ＣＤ１９＋ヒトバーキットリンパ腫細胞；図７Ｂ）、Ｅｏｌ−１（ＣＤ１９−ヒト急性骨髄性（好酸球性）白血病細胞；図７Ｃ）及びＭｖ４１１（ＣＤ１９−ヒト二重表現型Ｂ骨髄単球性白血病細胞；図７Ｄ）。スタウロスポリン（「Ｓｔａｕｒｏ」）を、腫瘍細胞死滅のためのポジティブコントロールとして使用した。
【図８】図８Ａ〜図８Ｄは、ドナー５２７３からのＣＡＲ又はモックが形質導入されたドナー細胞を用いた本発明のＣＡＲの細胞溶解活性を裏付ける一連の棒グラフを含む。ＣＡＲ又はモックが形質導入されたドナー細胞を、１：１又は４：１のエフェクター対標的比で添加した。４種の標的細胞型を使用した：Ｒａｊｉ細胞（図８Ａ）、Ｎａｍａｌａｗａ細胞（図８Ｂ）、Ｅｏｌ−１細胞（図８Ｃ）及びＭｖ４１１細胞（図８Ｄ）を使用した。Ｓｔａｕｒｏを、腫瘍細胞死滅のためのポジティブコントロールとして使用した。
【図９】図９Ａ及び図９Ｂは、ＯＫＴ３による初期刺激後１０日間にわたって測定された追加のドナーからのＣＡＲ又はモックが形質導入されたＴ細胞の成長動態を示す。各ＣＡＲの観察された成長プロファイルは、図９Ａに示されている。次いで、ＣＡＲ又はモックが形質導入されたＴ細胞を再度刺激し、成長動態の差が図９Ｂに示されるように観察された。
【図１０】図１０Ａは、抗ＣＡＲ抗体及びＣＤ３を使用する１０日目でのＴ細胞集団のキャラクタリゼーションを示す。図１０Ｂは、ＣＡＲ  Ｔ細胞産生の間のＣＤ４／ＣＤ８染色を示す。
【図１１】図１１Ａ及び図１１Ｂは、ＣＤ１９＋のＮＡＭＡＬＷＡ（図１１Ａ）細胞又はＣＤ１９−のＥＯＬ−１（図１１Ｂ）細胞で実施された細胞毒性アッセイを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８５】
本発明は、ヒトＣＤ１９を認識して結合するヒト化抗原結合ドメインを含む新規ポリペプチド及び該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明の幾つかの態様は、ヒト化抗ヒトＣＤ１９抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドに関する。また、本発明は、かかるポリヌクレオチドを含むベクター（例えばウイルスベクター）、及びかかるベクターを含む組成物を提供する。本発明は、かかるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチド、及びかかるポリヌクレオチドを含む組成物を更に提供する。さらに、本発明は、かかるポリヌクレオチドを含む及び／又はかかるウイルスベクターによって形質導入された操作された細胞（例えばＴ細胞）、並びにかかる操作された細胞を含む組成物を提供する。本発明は、複数の操作されたＴ細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本発明は、かかる操作されたＴ細胞及び組成物を製造する方法、並びにかかる操作されたＴ細胞及び組成物の（例えばＢ細胞リンパ腫の治療における）使用を提供する。また、本発明は、本発明のポリヌクレオチド、ベクター、又はポリペプチドを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法を提供する。本発明の他の態様は、ＣＡＲ又はＴＣＲを含む細胞、Ｔ細胞療法、例えば癌に罹患した患者の治療に対する自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））におけるそれらの使用に関する。
【００８６】
定義
本発明がより容易に理解されるように、まず特定の用語を以下に定義する。以下の用語及び他の用語に対する更なる定義は、本明細書を通して記載される。
【００８７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、数量を特定していないもの（the singular forms "a," "an" and "the"）は、文脈より別段の明確な指示がない限り複数の指示対象を含む。
【００８８】
具体的に述べられない又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「又は」の用語は「又は」と「及び」の両方を含み、それらを包含すると理解される。
【００８９】
本明細書において使用される場合、「及び／又は」の用語は、２つの指定される特徴又は成分の各々ともう一方とを含む、又はもう一方を含まない具体的な開示として理解される。したがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される「及び／又は」の用語は、Ａ及びＢ；Ａ又はＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句において使用される「及び／又は」の用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の態様の各々を包含することが意図される。
【００９０】
本明細書で使用される「例えば」及び「すなわち」の用語は、限定を意図せずに例として使用されるにすぎず、本明細書において明らかに列挙されるそれらの項目のみを指すものと解釈されるべきではない。
【００９１】
「以上」、「少なくとも」、「それよりも多く」等の用語、例えば「少なくとも１つ」は、限定されないが、示される値よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００以上多い値を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
【００９２】
逆に、「以下」の用語は示される値よりも小さい各値を含む。例えば、「１００ヌクレオチド以下」は、１００個、９９個、９８個、９７個、９６個、９５個、９４個、９３個、９２個、９１個、９０個、８９個、８８個、８７個、８６個、８５個、８４個、８３個、８２個、８１個、８０個、７９個、７８個、７７個、７６個、７５個、７４個、７３個、７２個、７１個、７０個、６９個、６８個、６７個、６６個、６５個、６４個、６３個、６２個、６１個、６０個、５９個、５８個、５７個、５６個、５５個、５４個、５３個、５２個、５１個、５０個、４９個、４８個、４７個、４６個、４５個、４４個、４３個、４２個、４１個、４０個、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個及び０個のヌクレオチドを含む。また、任意のより小さな数、又はその間の分数も含まれる。
【００９３】
「複数」、「少なくとも２つ」、「２以上」、「少なくとも第２の」等の用語は、限定されないが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００以上を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
【００９４】
明細書を通して、「含んでいる、含む（comprising）」の文言、又は「含む（comprises）」若しくは「含んでいる（comprising）」等の変化形は、示される要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を含むことを含意するが、任意の他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を排除しないと理解される。本明細書において「含んでいる、含む」の言葉と共に態様が記載される場合はいつでも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」の用語で記載される他の類似の態様も提供されると理解される。具体的に述べられておらず又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「約」の用語は、当業者によって決定される特定の値又は組成に対する許容可能な誤差範囲に含まれる値又は組成を指し、その値又は組成がどのように測定され又は決定されるのか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる（comprising essentially of）」は、当該技術分野における１回の実施当たりの１以上の標準偏差の範囲内を意味し得る。「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」は、最大１０％（すなわち±１０％）の範囲を意味し得る。したがって、「約」は、示される値よりも１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％、又は０．００１％大きい又は小さい範囲に含まれると理解され得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ〜５．５ｍｇの間の任意の量を含み得る。さらに、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、上記用語は、或る値の最大１０倍（up to an order of magnitude）又は最大５倍を意味する場合がある。特定の値又は組成が本開示で提供される場合、別段の指示がない限り、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」の意味は、その特定の値又は組成に対する許容可能な誤差の範囲に含まれるとされる。
【００９５】
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージの範囲、比率範囲、又は整数の範囲は、別段の指示がない限り、述べられる範囲に含まれる任意の整数、また適切な場合には、その分数（或る整数の１０分の１、及び１００分の１等）の値を含むものと理解される。
【００９６】
本明細書で使用される単位、接頭辞及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ：Systeme International de Unites）の容認される形態で提示される。数値範囲は、その範囲を規定する数字を含む。
【００９７】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press、"The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press、及び"The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Pressは、この開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【００９８】
「投与すること、投与する（Administering）」は、当業者に知られている様々な方法及び送達システムのいずれかを使用する、被験体に対する薬剤の物理的な導入を指す。本明細書に開示される製剤に対する例示的な投与経路として、例えば注射又は点滴による静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊柱又は他の非経口的な（parenteral：腸管外）投与経路が挙げられる。本明細書で使用される「非経口投与」の句は、経腸及び局所の投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び点滴、また同様にｉｎ  ｖｉｖｏ電気穿孔を含む。幾つかの実施形態では、上記製剤は、非経口的ではない経路、例えば経口で投与される。他の非経口的ではない経路として、局所、表皮、又は粘膜の投与経路、例えば、鼻腔内、経膣的、直腸、舌下又は局所的なものが挙げられる。また、投与は、例えば１回、複数回、及び／又は１以上の延長された期間に亘って行われ得る。
【００９９】
「抗体」（Ａｂ）の用語は、限定されず、抗原に特異的に結合する糖タンパク質免疫グロブリンを含む。一般に、抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖、又はそれらの抗原結合分子を含み得る。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメイン、すなわちＣＬを含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が介在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分され得る。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主の組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【０１００】
抗体として、例えば、モノクローナル抗体、組み換えにより生成された抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２本の重鎖分子及び２本の軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、イントラボディ（intrabodies）、抗体融合体（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称されることがある）、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ（affybodies）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば抗−抗−Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ（minibodies）、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称されることがある）、及び上記のいずれかの抗原結合フラグメントが挙げられ得る。或る特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。
【０１０１】
免疫グロブリンは、限定されないが、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含む、一般的に知られているアイソタイプのいずれかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスもまた、当業者に良く知られており、限定されないが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＡｂクラス又はサブクラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。「抗体」の用語は、例として、天然起源と非天然起源の両方のＡｂ、モノクローナル及びポリクローナルのＡｂ；キメラＡｂ及びヒト化Ａｂ；ヒトＡｂ又は非ヒトＡｂ；全合成Ａｂ；並びに単鎖Ａｂを含む。非ヒトＡｂは、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるため、組み換え法によってヒト化され得る。明確に述べられない場合、また別段の指示がない限り、「抗体」の用語は、前述の免疫グロブリンのいずれかの抗原結合フラグメント又は抗原結合部分も含み、一価及び二価のフラグメント又は部分、並びに単鎖Ａｂを含む。
【０１０２】
「抗体に基づくアミノ酸配列」は、抗体をコードするポリヌクレオチドの断片に物理的に基づく、例えば発現され得るか、又はｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで基づく、例えば、抗体（又はそのフラグメント）をコードすると決定されたヌクレオチド配列は、人工ポリヌクレオチド配列（又は断片）を合成するために使用され、その人工ポリヌクレオチド配列は、抗体又はそのフラグメントとして発現される。
【０１０３】
「抗原結合分子」、「抗原結合部分」又は「抗体フラグメント」は、抗体の抗原結合部（例えばＣＤＲ）を含む任意の分子を指し、この分子は該抗体に由来する。抗原結合分子は、抗原相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。抗体フラグメントの例として、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ｄＡｂ、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、並びに抗原結合分子から形成される多重特異性抗体が挙げられる。ペプチボディ（Peptibodies）（すなわち、ペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は腫瘍細胞上の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患（hyperproliferative disease）に関与する細胞上の抗原、又はウイルス若しくは細菌の抗原に結合する。或る特定の実施形態では、抗原結合分子はＣＤ１９に結合する。更なる実施形態では、抗原結合分子は、その１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗原に特異的に結合する抗体フラグメントである。
【０１０４】
更なる実施形態では、抗原結合分子は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖポリペプチド分子は、ペプチドをコードするリンカーにより連結されたＶＨコーディング遺伝子及びＶＬコーディング遺伝子を含む遺伝子融合物から発現され得る共有結合により連結されたＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーである（Huston et al. (1988) Proc Nat Acad Sci USA 85(16):5879-5883を参照）。（例えば、約１０アミノ酸〜約２５アミノ酸の）リンカーペプチドは、通常、柔軟性のためにグリシンに富むだけでなく、可溶性のためにセリン又はトレオニンに富んでいる。リンカーは、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端とを連結し得るか、又はＶＨのＣ末端とＶＬのＮ末端とを連結し得るかのいずれかである。このタンパク質は、定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず当初の免疫グロブリンの特異性を維持する。ｓｃＦｖは、「シグナルペプチド」又は「リーダー配列」と呼ばれることもあるＮ末端ペプチド配列も含み得る。本来集合しているが、化学的に分離される抗体Ｖ領域からの軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造とかなり類似した３次元構造へとフォールディングするｓｃＦｖ分子へと変換するための化学構造を識別するための方法は数多く記載されている。例えば、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号及び同第４，９４６，７７８号を参照のこと。
【０１０５】
非常に大規模なナイーブヒトｓｃＦｖライブラリーが作製されており、かつ作製することができ、こうして大量の標的分子に対する再構成された抗体遺伝子の大規模な起源が提供される。感染性疾患を伴う個体からより小規模なライブラリーを構築することで、疾患特異的抗体を単離することができる（Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:9339-43 (1992)、Zebedee et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3175-79 (1992)を参照）。
【０１０６】
本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」の用語は、交換可能に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には抗体の一部、一般的には、軽鎖又は重鎖の一部、典型的には成熟重鎖中のアミノ末端の約１１０個〜１２０個のアミノ酸、及び成熟軽鎖中の約９０個〜１１５個のアミノ酸を指し、それらは、抗体間で配列が広範囲に異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域に濃縮されるのに対し、可変ドメイン中のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と称される。いかなる特定の機構又は理論にも縛られることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用及び特異性を主として担うものと考えられる。或る特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。或る特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及びヒトのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば非ヒト霊長類）の可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及び霊長類（例えば非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【０１０７】
「ＶＬ」、「ＶＬ領域」及び「ＶＬドメイン」の用語は、抗体又はその抗原結合フラグメント等の抗原結合ドメインの軽鎖可変領域を指すために区別なく使用され、１個、２個又は３個全てのＣＤＲを含む。
【０１０８】
「ＶＨ」、「ＶＨ領域」及び「ＶＨドメイン」の用語は、抗体又はその抗原結合フラグメント等の抗原結合ドメインの重鎖可変領域を指すために区別なく使用され、１個、２個又は３個全てのＣＤＲを含む。
【０１０９】
ＣＤＲの多くの定義、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリング、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング、ＡｂＭナンバリング、又は接触（contact）ナンバリングが一般に使用されている。ＡｂＭ定義は、Oxford Molecular社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される２つの折衷案である。接触定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。
【０１１０】
【表１】
0006975841.tif 000002
【０１１１】
「Ｋａｂａｔナンバリング」の用語及び類似の用語は、当該技術分野において認められ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域、又はその抗原結合分子中のアミノ酸残基をナンバリングするシステムを指す。或る特定の態様では、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って、抗体のＣＤＲを特定することができる（例えば、Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391、及びKabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）に続いて任意に１つ又は２つの追加のアミノ酸を含み得るアミノ酸３１位〜３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５位〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４位〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９位〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定された。
【０１１２】
或る特定の態様では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指す、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定され得る（例えば、Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917、Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948、Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817、Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82、及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖のアミノ酸２６〜３２、３３又は３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖のアミノ酸５２〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖のアミノ酸９５〜１０２に存在するのに対し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖のアミノ酸２４〜３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖のアミノ酸５０〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖のアミノ酸８９〜９７に存在する。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−ＨＩループの末端は、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用して番号を付与した場合には、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４の間で変動する（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くため、すなわち３５Ａも３５Ｂも存在しない場合には３２でループが終了し、３５Ａのみが存在する場合には３３でループが終了し、３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合には３４でループが終了するからである）。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定された。
【０１１３】
【表２】
0006975841.tif 000003
【０１１４】
【表３】
0006975841.tif 000004
【０１１５】
本明細書で使用される「定常領域」及び「定常ドメイン」の用語は区別なく用いられ、当該技術分野で共通の意味を有する。定常領域は抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関係しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を呈し得る、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
【０１１６】
本明細書で使用される「重鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むＩｇＧ、並びにＩｇＭのクラスの抗体をそれぞれ生じさせる、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指す場合がある。
【０１１７】
本明細書で使用される「軽鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、例えばカッパー（κ）又はラムダ（λ）を指す場合がある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野においてよく知られている。具体的な実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
【０１１８】
「結合親和性」は、一般的には、分子（例えば抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的な相互作用の合計の強さを指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的には、解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、限定されないが、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含む、当該技術分野で知られている多くの方法で測定され得る及び／又は表され得る。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるが、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば抗原に対する抗体の解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）又はＫｉｎＥｘＡ等の当業者に知られている技術によって決定され得る。
【０１１９】
ＣＤ１９（分化抗原群１９（Cluster of Differentiation 19）、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９としても知られる）は、ヒトにおいてＣＤ１９遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＣＤ１９はＢ細胞の表面上に見られる。ＣＤ１９はＢ細胞の証であるので、ＣＤ１９は、この種類のＢ細胞から生ずる癌細胞、すなわちＢ細胞リンパ腫を認識するために有用な抗原であり得る。
【０１２０】
本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。或る特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合分子のＣＤＲ（複数の場合がある）内又はフレームワーク領域（複数の場合がある）内の１以上のアミノ酸残基を、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置換することができる。
【０１２１】
本明細書で使用される「異種性（の）（heterologous）」の用語は、天然起源の配列以外の任意の起源によることを意味する。例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質、例えば対応するヒト共刺激タンパク質の一部として含まれる異種性配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質として天然に生じない、すなわちそれとアラインメントされないアミノ酸配列である。例えば、異種性ヌクレオチド配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質コーディング配列以外のヌクレオチド配列を指す。
【０１２２】
本明細書で使用される「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接するアミノ酸（直鎖の又は隣接するエピトープ）であってもよく、又はエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数の場合がある）の２以上の隣接しない領域に共に由来するもの（配座、非直鎖、不連続、又は隣接しないエピトープ）であってもよい。或る特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と結合された水素／重水素交換（例えば液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴペプチド走査アッセイ、及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば部位特異的変異誘発マッピング）によって特定され得る。Ｘ線結晶学研究のため、結晶化は、当該技術分野の既知の方法（例えば、Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350、McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23、Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274、McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）のいずれかを使用して遂行され得る。抗体：抗原の結晶は、よく知られるＸ線回折技術を使用して調査することができ、当該技術分野において既知のコンピュータソフトウェア、例えばＲｅｆｍａｃ及びＰｈｅｎｉｘを使用して精密化することができる。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して遂行され得る。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む、突然変異誘発技術の説明について、Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394、及びCunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085を参照されたい。
【０１２３】
本明細書で使用されるように、抗原と、第１の結合分子、抗体又はその抗原結合分子との相互作用が、参照結合分子、参照抗体又はその抗原結合分子の抗原と相互作用する能力を遮断する、制限する、阻害する、或いは減少させる場合、抗原結合分子、抗体又はその抗原結合分子は、参照抗体又はその抗原結合分子と「交差競合する」。交差競合は、完全なものであってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原に結合する能力を完全に遮断するか、又は交差競合は、部分的であってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原に結合する能力を減少させる。或る特定の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子と同じ、又はそれと重複するエピトープを結合する。他の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子とは異なるエピトープを結合する。多くの種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；固相直接又は間接酵素免疫定量法（ＥＩＡ）；サンドイッチ競合アッセイ（Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press）；Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82）を使用して、或る一つの抗原結合分子が他方と競合するかどうかを判断することができる。
【０１２４】
本明細書で使用される「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」の用語は、抗体に関して類似の用語であって、抗原（例えばエピトープ又は免疫複合体）に結合する分子を指し、かかる結合は当業者によって理解される通りである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、一般的には、例えばイムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００測定器（アイダホ州ボイシのSapidyne Instruments）又は当該技術分野で知られている他のアッセイによって特定されるように、より低い親和性で他のペプチド又はポリペプチドに結合し得る。具体的な実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、分子が別の抗原に結合する場合のＫＡと比べて少なくとも２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ以上のＫＡで抗原に結合する。
【０１２５】
具体的な実施形態では、別の種の標的抗原、例えば非ヒトＣＤ１９に対するよりも高い親和性にて標的ヒト抗原、例えばヒトＣＤ１９に結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書において提供される。或る特定の実施形態では、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイ（kinetic exclusion assay）によって測定される、別の種の標的抗原に対するよりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％以上高い親和性にて標的ヒト抗原、例えばヒトＣＤ１９に結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書において提供される。具体的な実施形態では、標的ヒト抗原に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合分子は、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイによって測定される、ヒト抗原に対する抗体又はその抗原結合分子の結合の１０％、１５％、又は２０％未満で別の種の標的抗原に結合する。
【０１２６】
「抗原」は、免疫応答を誘発する、又は抗体若しくは抗原結合分子によって結合されることが可能な任意の分子を指す。免疫応答は、抗体産生若しくは特定の免疫適格細胞（immunologically-competent cells）の活性化のいずれか、又はそれらの両方を含み得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の高分子が抗原としての役割を果たし得ることを容易に理解する。抗原は内因性に発現され得て、すなわちゲノムＤＮＡによって発現され得るか、又は組み換えによって発現され得る。抗原は、癌細胞等の特定の組織に特異的となり得るか、又は広く発現され得る。さらに、より大きな分子のフラグメントが抗原として作用し得る。一実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。特定の一実施形態では、抗原はヒトＣＤ１９の全部又はフラグメントである。
【０１２７】
「中和する、中和すること」の用語は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的効果を妨げる又は減少させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントを指す。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、リガンド上の結合部位を直接遮断する、或いは間接的な手段（リガンドの構造の又はエネルギーの変更等）によってリガンドの結合能を変更する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、結合されるタンパク質が生体機能を実施するのを妨げる。
【０１２８】
本明細書で使用される「自己」の用語は、同じ個体に由来し、その個体に後に再導入される任意の材料を意味する。例えば、養子細胞移植としても知られる操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））は、患者自身のＴ細胞を収集し、続いてポリヌクレオチド、例えば１つ以上の特定の腫瘍細胞又は悪性腫瘍の細胞表面上に発現される１つ以上の抗原を認識して標的とするＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを発現するように遺伝子操作し、その後に同じ患者へと投与し戻すプロセスである。
【０１２９】
「同種異系」の用語は、一個体に由来する任意の材料を指し、該材料はその後、同種の別の個体に導入される（例えば同種異系Ｔ細胞移植）。
【０１３０】
「形質導入」及び「形質導入された」の用語は、外来ＤＮＡがウイルスベクターによって細胞へと導入されるプロセスを指す（Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)を参照されたい）。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタイン−バールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。
【０１３１】
本明細書で使用される「遺伝子操作」又は「操作」の用語は、区別なく使用され、コーディング領域若しくは非コーディング領域若しくはそれらの部分の欠失、又はコーディング領域若しくはその部分の挿入を含むが、それらに限定されない細胞のゲノムの改変方法を意味する。幾つかの実施形態では、改変される細胞は、患者又はドナーのどちらかから取得され得るリンパ球、例えばＴ細胞である。該細胞は、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）等の細胞のゲノム中に導入される外来コンストラクトを発現するように改変され得る。
【０１３２】
「癌」は、身体における異常な細胞の制御されていない成長を特徴とする、幅広い各種疾患のグループを指す。制御されていない細胞の分裂及び成長は、隣接する組織に侵入して、またリンパ系又は血流によって身体の離れた部分へと転移し得る、悪性腫瘍の形成をもたらす。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含む場合がある。本発明の方法によって治療され得る癌の例として、限定されないが、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び他の白血球の悪性腫瘍（leukocyte malignancies）を含む免疫系の癌が挙げられる。
【０１３３】
治療され得る癌としては、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＬＫ陽性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病において生ずる大Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）及びワルデンシュトレームのマクログロブリン血症又はそれらの組み合わせが挙げられる。１つの実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）及び非ホジキンリンパ腫である。１つの実施形態においては、Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【０１３４】
特定の癌は、化学療法又は放射線療法に反応性となり得るが、そうでなければその癌は難治性となり得る。難治性癌は、外科的処置に適用できない癌を指し、その癌は最初に化学療法若しくは放射線療法に無反応であるか、又はその癌は経時的に無反応となるいずれかである。
【０１３５】
本明細書に使用される「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移の数の減少、全体生存期間又は無増悪生存期間の増加、平均余命の増加、又は腫瘍と関係する様々な生理学的症状の改善として提示され得る、生物学的効果を指す。また、抗腫瘍効果は、腫瘍の発生の予防、例えばワクチンを指す場合がある。
【０１３６】
本明細書で使用される「サイトカイン」は、特異抗原との接触に反応して１つの細胞によって放出される非抗体タンパク質を指し、ここで、サイトカインは第２の細胞と相互作用して、第２の細胞における反応を媒介する。サイトカインは、細胞によって内因性に発現され得るか、又は被験体に投与され得る。サイトカインは、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び肥満細胞を含む免疫細胞によって放出されて、免疫応答を伝播し得る。サイトカインは、レシピエント細胞において様々な反応を誘導し得る。サイトカインは、ホメオスタシスサイトカイン（homeostatic cytokines）、ケモカイン、炎症誘発性サイトカイン、エフェクター及び急性期タンパク質を含み得る。例えば、インターロイキン（ＩＬ）７及びＩＬ−１５を含むホメオスタシスサイトカインは、免疫細胞の生存及び増殖を促進し、炎症誘発性サイトカインは炎症反応を促進し得る。ホメオスタシスサイトカインの例として、限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５及びインターフェロン（ＩＦＮ）ガンマが挙げられる。炎症誘発性サイトカインの例として、限定されないが、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７ａ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、可溶性細胞間接着分子１（ｓＩＣＡＭ−１）、可溶性血管接着分子１（ｓＶＣＡＭ−１）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ及び胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）が挙げられる。エフェクターの例として、限定されないが、グランザイムＡ、グランザイムＢ、可溶性Ｆａｓリガンド（ｓＦａｓＬ）及びパーフォリンが挙げられる。急性期タンパク質の例として、限定されないが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）が挙げられる。
【０１３７】
「ケモカイン」は細胞走化性又は指向性運動を媒介するサイトカインの一種である。ケモカインの例として、限定されないが、ＩＬ−８、ＩＬ−１６、エオタキシン、エオタキシン−３、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ又はＣＣＬ２２）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１又はＣＣＬ２）、ＭＣＰ−４、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１ａ）、ＭＩＰ−１β（ＭＩＰ−１ｂ）、ガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、並びに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ又はＣＣＬ１７）が挙げられる。
【０１３８】
「治療的有効量」、「有効用量」、「有効量」又は「治療的に有効な投薬量」の治療剤、例えば操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞は、単独で又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又は疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度及び持続期間の増加、若しくは疾患の罹患に起因する機能障害若しくは身体障害の予防によって明示される疾患の退縮を促進する、任意の量である。治療剤の疾患の退縮を促進する能力は、熟練した医師に知られている様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおける効能を予測する動物モデル系において、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによって評価され得る。
【０１３９】
本明細書で使用される「リンパ球」の用語は、ナチュラルキラー（ＮＫ：natural killer）細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞を含む。ＮＫ細胞は、生得免疫系の主な成分を占める細胞傷害性（細胞毒性）リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は腫瘍及びウイルスによって感染された細胞を拒絶する。ＮＫ細胞は、アポトーシス又はプログラム細胞死のプロセスによって作用する。ＮＫ細胞は、細胞を死滅させるために活性化を必要としないことから、「ナチュラルキラー」と名付けられた。Ｔ細胞は、細胞媒介免疫（抗体が関与しない）において主な役割を果たす。そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、他の種類のリンパ球からそれら自体を分化させる。免疫系の特殊化された器官である胸腺は、主としてＴ細胞の成熟を担う。６種類の既知のＴ細胞、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えばＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔ−キラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞としても知られる）、メモリーＴ細胞（（ｉ）ナイーブ細胞のようなステムメモリーＴＳＣＭ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及びＩＬ−７Ｒα＋であるが、それらは、大量のＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３及びＬＦＡ−１を発現し、メモリー細胞に特有の多数の機能的な属性を示す；（ｉｉ）セントラルメモリーＴＣＭ細胞は、Ｌ−セレクチン及びＣＣＲ７を発現し、ＩＦＮγ又はＩＬ−４ではなくＩＬ−２を分泌する；並びに（ｉｉｉ）エフェクターメモリーＴＥＭ細胞はＬセレクチンもＣＣＲ７も発現しないものの、ＩＦＮγ及びＩＬ−４のようなエフェクターサイトカインを産生する）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、サプレッサーＴ細胞又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びガンマデルタＴ細胞が存在する。一方、Ｂ細胞は、液性免疫（抗体が関与する）で最も重要な役割を果たす。Ｂ細胞は抗体を作り、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を発揮するように抗原をプロセシングし、抗原相互作用による活性化後にメモリーＢ細胞となる。哺乳動物において、未成熟Ｂ細胞は骨髄中で発生するため、それが名前の由来である。
【０１４０】
「遺伝子操作された」又は「操作された」の用語は、限定されないが、コーディング領域若しくは非コーディング領域、若しくはそれらの部分の欠失、又はコーディング領域若しくはその部分の挿入を含むが、それらに限定されない細胞のゲノムの改変方法を指す。幾つかの実施形態では、改変される細胞は、患者又はドナーのどちらかから取得され得るリンパ球、例えばＴ細胞である。Ｔ細胞は、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）等の細胞のゲノム中に導入される外来コンストラクトを発現するように改変され得る。
【０１４１】
「免疫応答」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性若しくは他の異常な細胞、又は自己免疫若しくは病理学的炎症の場合、正常なヒトの細胞若しくは組織の選択的な標的化、それらへの結合、それらに対する損傷、それらの破壊、及び／又は脊椎動物の身体からのそれらの排除をもたらす、免疫系の細胞（例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、及び好中球）及びこれらの細胞のいずれか又は肝臓によって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン、及び補体を含む）の作用を指す。
【０１４２】
「免疫療法」の用語は、免疫応答を誘導する、増強する、抑制する、或いは変更することを含む方法による、疾患に冒された、又は疾患にかかる若しくは疾患の再発を患うリスクがある被験体の治療を指す。免疫療法の例として、限定されないが、Ｔ細胞療法が挙げられる。Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞療法（adoptive T cell therapy）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞治療、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、及び同種異系Ｔ細胞移植を含み得る。しかしながら、当業者は、本明細書に開示されるコンディショニング法（conditioning methods）が任意の移植Ｔ細胞療法の有効性を増強し得ることを認識するであろう。Ｔ細胞療法の例は、米国特許出願公開第２０１４／０１５４２２８号及び同第２００２／０００６４０９号、米国特許第５，７２８，３８８号及び国際公開第２００８／０８１０３５号に記載される。
【０１４３】
免疫療法のＴ細胞は、当該技術分野において知られている任意の起源に由来し得る。例えば、Ｔ細胞は、造血幹細胞集団からｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞を、例えば末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍から得ることができる。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞系統に由来してもよい。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス（apheresis）等の当業者に知られている任意の多くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得ることもできる。Ｔ細胞療法用のＴ細胞を単離する更なる方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１４４】
「ｅＡＣＴ（商標）」と略記することができ、養子細胞移植としても知られる「操作された自己細胞療法」の用語は、患者自身のＴ細胞を収集し、続いて１以上の特定の腫瘍細胞又は悪性腫瘍の細胞表面上に発現される１つ以上の抗原を認識して標的とするように遺伝的に変更するプロセスである。Ｔ細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）又はそれらの両方を発現するように操作され得る。ＣＡＲ陽性（＋）Ｔ細胞は、少なくとも１つの共刺激ドメイン及び少なくとも１つの活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達部に連結された特定の腫瘍抗原に対する特異性を有する１つ以上の細胞外単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を発現するように操作される。共刺激ドメインは、天然に存在する共刺激ドメイン又はその変異体に基づき得て、活性化ドメインは、例えばＣＤ３ゼータ及びＣＤ３イプシロンに基づき得る。或る特定の実施形態では、ＣＡＲは、２個、３個、４個又はそれより多くの共刺激ドメインを有するように設計される。ＣＡＲ  ｓｃＦｖは、例えば、全ての正常なＢ細胞と、ＮＨＬ、ＣＬＬ及び非Ｔ細胞ＡＬＬを含むが、それらに限定されないＢ細胞悪性腫瘍とを含むＢ細胞系譜における細胞により発現される膜貫通型タンパク質であるヒトＣＤ１９を標的とするように設計することができる。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメインが別個のポリペプチド鎖として発現されるように操作される。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法及びコンストラクトの例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号及び同第２０１４／００５０７０８号、並びに米国仮特許出願第６２／４７０，７０３号及び同第６２／３１７，２５８号に記載されており、これらの文献は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす。
【０１４５】
本明細書で使用される「患者」は、癌（例えばリンパ腫又は白血病）に冒された任意のヒトを含む。「被験体」及び「患者」の用語は、本明細書では区別なく使用される。
【０１４６】
本明細書で使用される「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞」の用語は、ｅｘ  ｖｉｖｏで培養される任意の細胞を指す。特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞はＴ細胞を含み得る。
【０１４７】
「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」の用語は区別なく使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸残基を含む化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸を含み、タンパク質又はペプチドの配列を含み得るアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いにつながれた２個以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるように、上記用語はまた、当該技術分野において、例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーと一般的に称される短い鎖と、当該技術分野において一般的にはタンパク質と称され、多くの種類が存在する、より長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」として、例えば、特に、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同性のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、改変ポリペプチド、誘導体、類縁体、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。
【０１４８】
本明細書で使用される「刺激」は、その同族のリガンドと刺激分子を結合することによって誘導される一次応答を指し、ここで、その結合はシグナル伝達事象を媒介する。「刺激分子」は、Ｔ細胞上の分子、例えば、抗原提示細胞上に存在する同族の刺激リガンドと特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を指す。「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞等）上に存在する場合、Ｔ細胞上の刺激分子と特異的に結合することができ、それによって、限定されないがＴ細胞の活性化、免疫応答の開始、増殖等を含むＴ細胞による一次応答を媒介するリガンドである。刺激リガンドとして、限定されないが、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３等）、ペプチドで充填されたＭＨＣクラスＩ分子、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体が挙げられる。
【０１４９】
本明細書で使用される「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーション等の一次シグナルと組み合わせて、限定されないがＴ細胞の増殖及び／又は主要な分子の上方制御若しくは下方制御等のＴ細胞の応答をもたらすシグナルを指す。
【０１５０】
本明細書で使用される「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族の共同刺激分子を特異的に結合する抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の分子を含む。それに代えて／それに加えて、抗体（例えば抗ＣＤ２８抗体）は、プレート、ビーズ、ＡＰＣに結合されている場合又は溶解している場合に共刺激リガンドであり得る。共刺激リガンドの結合は、限定されないが、Ｔ細胞の増殖、活性化、分化等を含むＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する。共刺激リガンドは、一次シグナルに加えて、刺激分子によって、例えば、ペプチドがロードされた主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子とのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体の結合によって提供されるシグナルを誘導する。共刺激リガンドとして、限定されないが、３／ＴＲ６、４−１ＢＢリガンド、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニスト又は抗体、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ：herpes virus entry mediator）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ−Ｇ）、ＩＬＴ４、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ：immunoglobulin-like transcript）３、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合するリガンド、リンフォトキシンベータ受容体、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ（ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ｂ（ＭＩＣＢ）、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ−Ｌ２、又はプログラム細胞死（ＰＤ）Ｌ１が挙げられ得る。共刺激リガンドとして、限定されず、４−１ＢＢ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＩＣＯＳ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ（ＮＫＧ２Ｃ）、ＯＸ４０、ＰＤ−１、又は腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４又はＬＩＧＨＴ）等のＴ細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されないが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３（アルファ；ベータ；デルタ；イプシロン；ガンマ；ゼータ）、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８０、ＣＤ８３リガンド、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮物（truncations）、若しくは組み合わせが挙げられる。
【０１５２】
「減少する、減少させる（reducing）」及び「減じる（decreasing）」の用語は、本明細書において区別なく使用され、本来よりも少ない、あらゆる変化を示す。「減少する、減少させる」及び「減じる」は測定前と測定後の比較を必要とする、相対的な用語である。「減少する、減少させる」及び「減じる」は完全な欠乏を含む。
【０１５３】
被験体の「治療（Treatment）」又は被験体を「治療する、治療すること（treating）」は、症状、合併症若しくは病状の発症、進行、発現、重症度若しくは再発、又は疾患と関連する生化学的指標の転換、緩和、改善、阻害、遅延又は予防の目的で、被験体に対して行われる任意の種類の処置若しくはプロセス、又は被験体に対する有効成分の投与を指す。一実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は部分寛解を含む。別の実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は完全寛解を含む。
【０１５４】
パーセント同一性を計算するため、典型的には、配列間の最も大きな一致を与える方法で比較される配列をアラインメントさせる。パーセント同一性を特定するために使用され得るコンピュータープログラムの一例は、ＧＡＰ（Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387、ウィスコンシン州マディソンのウィスコンシン大学、Genetics Computer Group）を含むＧＣＧプログラムパッケージである。コンピューターアルゴリズムであるＧＡＰを使用して、パーセント配列同一性が特定される２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドをアラインメントさせる。配列を、それらの各アミノ酸又はヌクレオチドの最適なマッチング（アルゴリズムによって特定される、「一致スパン（matched span）」）についてアラインメントさせる。また或る特定の実施形態では、上記アルゴリズムによって、標準的な比較マトリクス（Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 for the PAM 250 comparison matrix、Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919 for the BLOSUM 62 comparison matrixを参照されたい）が使用される。
【０１５５】
本発明の様々な態様は、以下のサブセクションに更に詳細に記載される。
【０１５６】
Ｉ．キメラ抗原受容体及びＴ細胞受容体
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ又はＣＡＲ−Ｔ）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、遺伝子操作された受容体である。これらの操作された受容体は、当該技術分野で知られている技術によりＴ細胞を含む免疫細胞に容易に挿入され得て、その細胞によって発現され得る。ＣＡＲにより、単一の受容体は、特異抗原を認識するとともに、その抗原に結合した場合に免疫細胞を活性化させてその抗原を持っている細胞を攻撃して破壊するよう、プログラム化され得る。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在する場合、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、腫瘍細胞を標的とし、死滅させることができる。
【０１５７】
ＣＡＲを発現する細胞の製造において実施される工程は、図１Ａに示され、腫瘍細胞上の標的の認識を介したＣＡＲ媒介性の死滅の機構は、図１Ｂに示されている。
【０１５８】
本発明は、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するｓｃＦｖ等の抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、並びにヒトＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む操作されたＴ細胞に関する。幾つかの実施形態では、本発明の抗原結合ドメインは、抗体、例えばＦＭＣ６３抗体に基づくｓｃＦｖである。ヒトＣＤ１９に対するその他の抗体が使用され得る。
【０１５９】
本発明の抗ヒトＣＤ１９  ＣＡＲ又はＴＣＲは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗ヒトＣＤ１９  ＣＡＲ又はＴＣＲは、共刺激ドメイン、及び／又は細胞外ドメイン（すなわち「ヒンジ」又は「スペーサー」領域）、及び／又は膜貫通ドメイン、及び／又は細胞内（シグナル伝達）ドメイン、及び／又はＣＤ３ゼータ若しくはＣＤ３イプシロン活性化ドメインを更に含む。幾つかの実施形態では、抗ヒトＣＤ１９  ＣＡＲ又はＴＣＲは、ヒトＣＤ１９、共刺激ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及びＣＤ３ゼータ又はＣＤ３イプシロン活性化ドメインに特異的に結合するｓｃＦｖ抗原結合ドメインを含む。
【０１６０】
幾つかの実施形態では、本発明によるＣＡＲの配置は、共刺激ドメイン及び活性化ドメインとタンデムに抗原結合ドメイン（ｓｃＦｖ等）を含む。共刺激ドメインは、１以上の細胞外部分と、膜貫通部分と、細胞内部分とを含み得る。他の実施形態では、複数の共刺激ドメインをタンデムに利用することができる。
【０１６１】
Ｉ．Ａ．抗原結合ドメイン
ＣＡＲは、抗原（例えば、細胞表面抗原）に結合するように、特異的な標的となる抗原と相互作用する抗原結合分子を導入することによって操作され得る。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、その抗体フラグメント、例えば１種以上の単鎖抗体フラグメント（「ｓｃＦｖ」）である。ｓｃＦｖは、互いに連結された抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を有する単鎖抗体フラグメントである。米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにEshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136を参照のこと。ｓｃＦｖは、親抗体が標的抗原と特異的に相互作用する能力を維持している。ｓｃＦｖは、キメラ抗原受容体において有用である。それというのも、ｓｃＦｖは、その他のＣＡＲ成分と一緒に単一の鎖の一部として発現されるように操作され得るからである。同上。Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626)、Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797も参照のこと。抗原結合分子は、典型的には、対象となる抗原を認識して結合することができるようにＣＡＲの細胞外部分の範囲内に含まれることを理解されたい。対象となる２つ以上の標的に特異性を有する二重特異性及び多重特異性のＣＡＲが、本発明の範囲内で考慮される。
【０１６２】
本発明は、抗ヒトＣＤ１９抗体、そのフラグメント、例えばｓｃＦｖ、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びヒト化抗原結合ドメインを有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に関する。
【０１６３】
以下のヌクレオチド配列は、「リーダー配列−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−Ｈｉｓタグ−終止コドン」の形式で示されており、すなわち「リーダー配列」は太字体であり、「リンカー」はイタリック体であり、「Ｈｉｓタグ」は太字イタリック体であり、かつＶＬ、ＶＨ及び「終止コドン」は標準字体である。
【０１６４】
ＷＴ−ＦＭＣ６３−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000005
【０１６５】
ＳＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000006
【０１６６】
ＪＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000007
【０１６７】
ＡＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000008
【０１６８】
ＮＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000009
【０１６９】
幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、上述のポリヌクレオチド配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であり得る。
【０１７０】
野生型ｓｃＦｖ及び７種の選択されたヒト化ｓｃＦｖのうちの４種についてのアミノ酸配列
以下のポリペプチド配列は、「リーダー配列−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−Ｈｉｓタグ」の形式で示されており、すなわち「リーダー配列」は太字体であり、「リンカー」はイタリック体であり、かつ「Ｈｉｓタグ」は太字イタリック体である。
【０１７１】
以下のｓｃＦｖの各々で使用されるリーダー配列は、ＭＥＷＴＷＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を有する。以下のｓｃＦｖの各々で使用されるリンカー配列は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号７）のアミノ酸配列を有する。以下のｓｃＦｖの各々で使用されるＨｉｓタグ配列は、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号８）のアミノ酸配列を有する。
【０１７２】
ＷＴ−ＦＭＣ６３−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000010
【０１７３】
ＷＴ−ＦＭＣ６３−ｓｃＦｖについてのＶＬ配列は、
0006975841.tif 000011
のアミノ酸配列を有する。
【０１７４】
ＷＴ−ＦＭＣ６３−ｓｃＦＶについてのＶＨ配列は、
0006975841.tif 000012
のアミノ酸配列を有する。
【０１７５】
ＳＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000013
【０１７６】
ＳＳ−ｓｃＦｖについてのＶＬ配列は、
0006975841.tif 000014
のアミノ酸配列を有する。
【０１７７】
ＳＳ−ｓｃＦＶについてのＶＨ配列は、
0006975841.tif 000015
のアミノ酸配列を有する。
【０１７８】
ＪＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000016
【０１７９】
ＪＳ−ｓｃＦＶについてのＶＬ配列は、
0006975841.tif 000017
のアミノ酸配列を有する。
【０１８０】
ＪＳ−ｓｃＦＶについてのＶＨ配列は、
0006975841.tif 000018
のアミノ酸配列を有する。
【０１８１】
ＡＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000019
【０１８２】
ＡＳ−ｓｃＦＶについてのＶＬ配列は、
0006975841.tif 000020
のアミノ酸配列を有する。
【０１８３】
ＡＳ−ｓｃＦＶについてのＶＨ配列は、
0006975841.tif 000021
のアミノ酸配列を有する。
【０１８４】
ＮＳ−ｓｃＦｖ
0006975841.tif 000022
【０１８５】
ＮＳ−ｓｃＦＶについてのＶＬ配列は、
0006975841.tif 000023
のアミノ酸配列を有する。
【０１８６】
ＮＳ−ｓｃＦＶについてのＶＨ配列は、
0006975841.tif 000024
のアミノ酸配列を有する。
【０１８７】
上記のＷＴ−ＦＭＣ６３−ｓｃＦｖ、ＳＳ−ｓｃＦｖ、ＪＳ−ｓｃＦｖ、ＡＳ−ｓｃＦｖ及びＮＳ−ｓｃＦｖのアミノ酸配列は、（配列番号８の）Ｈｉｓタグを有しなくてよい。したがって、ｓｃＦｖは、以下のアミノ酸配列を有することとなる。
【０１８８】
ＷＴ−ＦＭＣ６３−ｓｃＦｖ（Ｈｉｓタグを有しない）
0006975841.tif 000025
【０１８９】
ＳＳ−ｓｃＦｖ（Ｈｉｓタグを有しない）
0006975841.tif 000026
【０１９０】
ＪＳ−ｓｃＦｖ（Ｈｉｓタグを有しない）
0006975841.tif 000027
【０１９１】
ＡＳ−ｓｃＦｖ（Ｈｉｓタグを有しない）
0006975841.tif 000028
【０１９２】
ＮＳ  ｓｃＦｖ（Ｈｉｓタグを有しない）
0006975841.tif 000029
【０１９３】
幾つかの実施形態では、ポリペプチド配列は、上述のポリペプチド配列のいずれか１つと少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であり得る。
【０１９４】
ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３６と、少なくとも１個のアミノ酸、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個又はそれより多くのアミノ酸だけ異なるＶＬ領域を有する。例えば、ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３６と、位置７のＳｅｒ、位置８のＰｒｏ、位置１５のＶａｌ、位置２２のＴｈｒ、位置４１のＧｌｎ、位置４２のＬｙｓ、位置４２のＧｌｎ、位置４３のＡｌａ、位置４４のＰｒｏ、位置４９のＬｙｓ、位置７２のＴｈｒ、位置７７のＳｅｒ、位置７９のＧｌｎ、位置８０のＰｒｏ、位置８３のＰｈｅ、位置８７のＴｙｒ、位置１００のＧｌｎ、及び／又は位置１０７のＬｙｓを有する点で異なるＶＬ領域を有し得る。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３６と、位置７のＳｅｒ、位置８のＰｒｏ、位置１５のＶａｌ、位置２２のＴｈｒ、位置４２のＧｌｎ、位置４３のＡｌａ、位置４４のＰｒｏ、位置４９のＬｙｓ、位置７２のＴｈｒ、位置７７のＳｅｒ、位置７９のＧｌｎ、位置８０のＰｒｏ、位置８３のＰｈｅ、位置８７のＴｙｒ、位置１００のＧｌｎ、及び／又は位置１０７のＬｙｓを有する点で異なるＶＬ領域を有し得る。他の実施形態では、ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３６と、位置７のＳｅｒ、位置８のＰｒｏ、位置１５のＶａｌ、位置２２のＴｈｒ、位置４１のＧｌｎ、位置４２のＬｙｓ、位置４３のＡｌａ、位置７２のＴｈｒ、位置７７のＳｅｒ、位置７９のＧｌｎ、位置８０のＰｒｏ、及び位置１０７のＬｙｓ領域を有する点で異なるＶＬを有し得る。
【０１９５】
ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３７と、少なくとも１個のアミノ酸、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個又はそれより多くのアミノ酸だけ異なるＶＨ領域を有する。例えば、ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３７と、位置１のＧｌｎ、位置３のＧｌｎ、位置５のＶａｌ、位置９のＧｌｙ、位置１３のＬｙｓ、位置１３のＧｌｎ、位置１５のＧｌｙ、位置１６のＡｒｇ、位置１６のＴｈｒ、位置１７のＴｈｒ、位置１９のＡｒｇ、位置２０のＬｅｕ、位置２１のＳｅｒ、位置２４のＡｌａ、位置４２のＧｌｙ、位置４８のＩｌｅ、位置６７のＰｈｅ、位置７０のＳｅｒ、位置７１のＡｒｇ、位置７３のＴｈｒ、位置７６のＡｓｎ、位置７７のＴｈｒ、位置７８のＬｅｕ、位置７９のＴｙｒ、位置８１のＧｌｎ、位置８３のＳｅｒ、位置８６のＴｈｒ、位置８６のＡｒｇ、位置８７のＡｌａ、位置８８のＧｌｕ、位置８８のＡｌａ、位置９２のＶａｌ、及び／又は位置１１５のＬｅｕを有する点で異なるＶＨ領域を有し得る。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３７と、位置３のＧｌｎ、位置５のＶａｌ、位置９のＧｌｙ、位置１３のＧｌｎ、位置１５のＧｌｙ、位置１６のＡｒｇ、位置１９のＡｒｇ、位置２０のＬｅｕ、位置２１のＳｅｒ、位置２４のＡｌａ、位置４２のＧｌｙ、位置４８のＩｌｅ、位置６７のＰｈｅ、位置７０のＳｅｒ、位置７１のＡｒｇ、位置７６のＡｓｎ、位置７７のＴｈｒ、位置７８のＬｅｕ、位置７９のＴｙｒ、位置８１のＧｌｎ、位置８６のＡｒｇ、位置８７のＡｌａ、位置８８のＧｌｕ、位置９２のＶａｌ、及び／又は位置１１５のＬｅｕを有する点で異なるＶＨ領域を有し得る。他の実施形態では、ヒト化抗体、例えばｓｃＦｖは、配列番号３７と、位置１のＧｌｎ、位置３のＧｌｎ、位置１３のＬｙｓ、位置１６のＴｈｒ、位置１７のＴｈｒ、位置４２のＧｌｙ、位置７０のＳｅｒ、位置７３のＴｈｒ、位置７６のＡｓｎ、位置８３のＳｅｒ、位置８６のＴｈｒ、位置８７のＡｌａ、位置８８のＡｌａ、及び／又は位置１１５のＬｅｕを有する点で異なるＶＨ領域を有し得る。
【０１９６】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、標的抗原（例えばヒトＣＤ１９）に、１×１０−６Ｍ未満、１×１０−７Ｍ未満、１×１０−８Ｍ未満、又は１×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、標的抗原（例えばヒトＣＤ１９）に、約１×１０−８Ｍ、約２×１０−８Ｍ、約３×１０−８Ｍ、約４×１０−８Ｍ、約５×１０−８Ｍ、約６×１０−８Ｍ、約７×１０−８Ｍ、約８×１０−８Ｍ、約９×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約２×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ、約８×１０−９Ｍ、又は約９×１０−９ＭのＫＤで結合する。或る特定の実施形態では、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、Ｆａｂフラグメント等の一価抗体を使用して決定され、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術により測定される。他の実施形態では、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、Ｆａｂフラグメント等の二価抗体を使用して決定され、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術により測定される。
【０１９７】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、標的抗原（例えばヒトＣＤ１９）に、１×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、２×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、３×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、４×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、５×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、６×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、７×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、８×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、９×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、１×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、２×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、３×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、４×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、５×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、６×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、７×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、８×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、９×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、１×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、２×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、３×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、４×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、５×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、６×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、７×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、８×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、９×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、又は１×１０−７Ｍ−１ｓ−１未満の会合速度（ｋｏｎ）で結合する。或る特定の実施形態では、ｋｏｎはＦａｂフラグメント等の一価抗体を使用して決定され、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術により測定される。他の実施形態では、ｋｏｎは、二価抗体を使用して決定され、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術により測定される。
【０１９８】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、標的抗原（例えばヒトＣＤ１９）に、１×１０−２ｓ−１未満、２×１０−２ｓ−１未満、３×１０−２ｓ−１未満、４×１０−２ｓ−１未満、５×１０−２ｓ−１未満、６×１０−２ｓ−１未満、７×１０−２ｓ−１未満、８×１０−２ｓ−１未満、９×１０−２ｓ−１未満、１×１０−３ｓ−１未満、２×１０−３ｓ−１未満、３×１０−３ｓ−１未満、４×１０−３ｓ−１未満、５×１０−３ｓ−１未満、６×１０−３ｓ−１未満、７×１０−３ｓ−１未満、８×１０−３ｓ−１未満、９×１０−３ｓ−１未満、１×１０−４ｓ−１未満、２×１０−４ｓ−１未満、３×１０−４ｓ−１未満、４×１０−４ｓ−１未満、５×１０−４ｓ−１未満、６×１０−４ｓ−１未満、７×１０−４ｓ−１未満、８×１０−４ｓ−１未満、９×１０−４ｓ−１未満、１×１０−４ｓ−１未満、又は５×１０−４ｓ−１未満の解離速度（ｋｏｆｆ）で結合する。或る特定の実施形態では、ｋｏｆｆは、Ｆａｂフラグメント等の一価抗体を使用して決定され、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術により測定される。他の実施形態では、ｋｏｆｆは、二価抗体を使用して決定され、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術により測定される。
【０１９９】
幾つかの実施形態では、上記ポリヌクレオチドはＴＣＲをコードし、ここでＴＣＲは、第４の相補性決定領域（ＣＤＲ４）を更に含む。或る特定の実施形態では、上記ポリヌクレオチドはＴＣＲをコードし、ここでＴＣＲは、定常領域を更に含む。幾つかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭの定常領域から選択される。
【０２００】
Ｉ．Ｂ．共刺激ドメイン
キメラ抗原受容体が共刺激（シグナル伝達）ドメインを含むことで、それらの効力は高められる。米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにKrause et al.及びFinney et al.（上記参照）、Song et al., Blood 119:696-706 (2012)、Kalos et al., Sci. Transl. Med. 3:95 (2011)、Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)、及びGross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)を参照のこと。例示的な共刺激タンパク質は、Ｔ細胞上に天然に見られる共刺激タンパク質のアミノ酸配列を有する。この共刺激タンパク質の完全な天然アミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６１３０．１に記載されている。
【０２０１】
その他の共刺激ドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は、当該技術分野において知られている。幾つかの実施形態では、共刺激ドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られているヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、共刺激ドメインのポリペプチド配列は、当該技術分野において知られているポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
【０２０２】
Ｉ．Ｂ．１  細胞外ドメイン又は「ヒンジ」ドメイン
１つの実施形態では、本開示のＣＡＲ又はＴＣＲは、「細胞外」又は「ヒンジ」又は「スペーサー」ドメイン又は領域を含み、それらの用語は本明細書では区別なく使用される。別の実施形態では、前記細胞外ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連α鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連β鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、及びそれらの断片又は組み合わせに由来する、又はそれらに基づく（例えばそれらの全て又は断片を含む）。「細胞外」又は「ヒンジ」又は「スペーサー」ドメイン又は領域は、天然起源又は合成起源のいずれかに由来し得る。これらのヒンジドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は、当���技術分野において知られている。
【０２０３】
幾つかの実施形態では、ヒンジドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られているヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインのポリペプチド配列は、当該技術分野において知られているポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
【０２０４】
幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）と膜貫通ドメインとの間に位置している。この向きで、ヒンジドメインは、抗原結合ドメインと、ＣＡＲが貫通して発現される細胞膜の表面との間に距離を与える。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、免疫グロブリンに由来するか、又は免疫グロブリンに基づく。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭのヒンジ領域又はそれらの断片から選択される。他の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αのヒンジ領域を含むか、ＣＤ８αのヒンジ領域に由来するか、又はＣＤ８αのヒンジ領域に基づく。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８のヒンジ領域を含むか、ＣＤ２８のヒンジ領域に由来するか、又はＣＤ２８のヒンジ領域に基づく。幾つかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αのヒンジ領域の断片又はＣＤ２８のヒンジ領域の断片を含み、ここで断片は、全ヒンジ領域より小さい任意のものである。幾つかの実施形態においては、ＣＤ８αのヒンジ領域の断片又はＣＤ２８のヒンジ領域の断片は、ＣＤ８αのヒンジ領域又はＣＤ２８のヒンジ領域のＮ末端若しくはＣ末端又は両方で少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個のアミノ酸を除くアミノ酸配列を含む。
【０２０５】
Ｉ．Ｂ．２  膜貫通ドメイン
本発明のＣＡＲ又はＴＣＲのための共刺激ドメインは、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインを更に含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合されるように設計され得る。膜貫通ドメインは、同様にＣＡＲの細胞内ドメインに融合され得る。１つの実施形態では、ＣＡＲ中のドメインの１つと本来会合される膜貫通ドメインが使用される。幾つかの場合においては、膜貫通ドメインは、そのようなドメインが同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合することを避け、受容体複合体のその他のメンバーとの相互作用を最小限にするように選択される、又はアミノ酸置換により改変され得る。膜貫通ドメインは、天然起源又は合成起源のいずれかに基づき得る。その起源が天然である場合に、上記ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に基づき得る。本発明における具体的な用途の膜貫通領域は、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらの断片、短縮物若しくは組み合わせに基づき（すなわち含み）得る。これらの膜貫通ドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は、当該技術分野において知られている。
【０２０６】
幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られているヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインのポリペプチド配列は、当該技術分野において知られているポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
【０２０７】
任意に、短いリンカーは、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインのいずれか又は幾つかの間で連結を形成し得る。
【０２０８】
Ｉ．Ｂ．３．細胞内（シグナル伝達）ドメイン
本発明の操作されたＴ細胞の細胞内（シグナル伝達）ドメインは、活性化ドメインへのシグナル伝達をもたらし得て、次いでそれは免疫細胞の通常のエフェクター機能の少なくとも１つを活性化する。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であり得る。
【０２０９】
或る特定の実施形態において、好ましい細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、Ｌｙ１０８）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらの断片、短縮物若しくは組み合わせを包含する（すなわち含む）が、これらに限定されない。これらの細胞内シグナル伝達ドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は、当該技術分野において知られている。
【０２１０】
幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られているヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインのポリペプチド配列は、当該技術分野において知られているポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
【０２１１】
Ｉ．Ｃ．活性化ドメイン
ＣＤ３は、天然Ｔ細胞上のＴ細胞受容体の１つの要素であり、ＣＡＲ中の重要な細胞内活性化要素であることが示されている。幾つかの実施形態では、ＣＤ３は、ＣＤ３ゼータ又はＣＤ３イプシロンであり、その各々のポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は、当該技術分野において知られている。
【０２１２】
幾つかの実施形態では、活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られているヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、活性化ドメインのポリペプチド配列は、当該技術分野において知られているポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
【０２１３】
Ｉ．Ｄ．スイッチドメイン
有害事象は、自殺遺伝子で免疫細胞（１以上のＣＡＲ又はＴＣＲを含む）を形質導入することにより最小化され得ることが理解される。また、免疫細胞への誘導性の「オン」又は「アクセラレーター（accelerator）」スイッチを組み込むことが望ましい場合がある。好適な技術として、細胞が本発明のＣＡＲコンストラクトで形質導入される前、その後、又はそれと同時の誘導性カスパーゼ−９（米国特許出願公開第２０１１／０２８６９８０号）又はチミジンキナーゼの使用が挙げられる。自殺遺伝子及び／又は「オン」スイッチを導入する追加の方法として、ＴＡＬＥＮＳ、ジンクフィンガー、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス技術、及び当該技術分野で知られている他の技術が挙げられる。
【０２１４】
本発明によれば、追加のオン−オフ又は他の種類の制御スイッチ技術が本発明に組み込まれ得る。これらの技術は、二量体化ドメイン及びかかるドメイン二量体化の任意の活性化因子の使用を利用し得る。これらの技術として、例えば、或る特定の細胞においてＦＫＢＰ／Ｒａｐａｌｏｇ二量体化システムを利用するWu et al., Science 2014 350 (6258)によって記載される技術が挙げられ、その内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。追加の二量体化技術は、例えばFegan et al. Chem. Rev. 2010, 110, 3315-3336と並んで、米国特許第５，８３０，４６２号、同第５，８３４，２６６号、同第５，８６９，３３７号、及び同第６，１６５，７８７号に記載され、それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。追加の二量体化対として、シクロスポリン−Ａ／シクロフィリン受容体、エストロゲン／エストロゲン受容体（任意にタモキシフェンを使用する）、糖質コルチコイド／糖質コルチコイド受容体、テトラサイクリン／テトラサイクリン受容体、ビタミンＤ／ビタミンＤ受容体が挙げられ得る。二量体化技術の更なる例は、例えば、国際公開第２０１４／１２７２６１号、国際公開第２０１５／０９０２２９号、米国特許出願公開第２０１４／０２８６９８７号、米国特許出願公開第２０１５／０２６６９７３号、米国特許出願公開第２０１６／００４６７００号、米国特許第８，４８６，６９３号、米国特許出願公開第２０１４／０１７１６４９号、及び米国特許出願公開第２０１２／０１３００７６号に見ることができ、それらの内容は、それらの全体が引用することにより更に本明細書の一部をなす。
【０２１５】
Ｉ．Ｅ．リーダーペプチド又はリーダー配列
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、リーダーペプチド（本明細書では「シグナルペプチド」又は「リーダー配列」とも呼ばれる）を更に含み得るＣＡＲ又はＴＣＲをコードする。或る特定の実施形態では、リーダーペプチドは、アミノ酸配列ＭＥＷＴＷＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳ（配列番号６）又はＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号３５）と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、リーダーペプチドは、配列番号６又は配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
その他のリーダーペプチドのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は、当該技術分野において知られている。
【０２１７】
幾つかの実施形態では、リーダーペプチドをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られているヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、リーダーペプチドのポリペプチド配列は、当該技術分野において知られているポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
【０２１８】
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードし、ここでＣＡＲ又はＴＣＲは、リーダーペプチド（Ｐ）と、抗原結合分子（Ｂ）と、共刺激タンパク質の細胞外ドメイン（Ｅ）と、膜貫通ドメイン（Ｔ）と、共刺激領域（Ｃ）と、活性化ドメイン（Ａ）とを含み、ここで、ＣＡＲはＰ−Ｂ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａにより構成される。幾つかの実施形態では、抗原結合分子はＶＨ及びＶＬを含み、ここで、ＣＡＲはＰ−ＶＨ−ＶＬ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａ又はＰ−ＶＬ−ＶＨ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａにより構成される。幾つかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬはリンカー（Ｌ）によって接続され、ここで、ＣＡＲはＮ末端からＣ末端へ、Ｐ−ＶＨ−Ｌ−ＶＬ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａ又はＰ−ＶＨ−Ｌ−ＶＬ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａにより構成される。
【０２１９】
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードし、ここでＣＡＲ又はＴＣＲは、当該技術分野において知られるＣＡＲ又はＴＣＲについてのアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。例えば、米国特許出願第６２／４７０，７０３号及び同第６２／３１７，２５８号を参照のこと。
【０２２０】
ＩＩ．ベクター、細胞及び医薬組成物
或る特定の態様においては、本明細書において本発明のポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクター又は一式のベクターに関する。
【０２２１】
当該技術分野において知られるあらゆるベクターが、本発明のために適切であり得る。幾つかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタイン−バールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。
【０２２２】
その他の態様においては、本明細書において本発明のポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞が提供される。幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞に関する。他の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲによってコードされるポリペプチドを含む細胞、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞に関する。
【０２２３】
あらゆる細胞が本発明のポリヌクレオチド、ベクター又はポリペプチドのための宿主細胞として使用され得る。幾つかの実施形態では、細胞は、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、又は哺乳動物細胞等のより高等な真核細胞であってもよい。適切な原核細胞としては、限定されるものではないが、グラム陰性又はグラム陽性の生物等の真正細菌、例えば腸内細菌科、例えばエシェリキア（Escherichia）、例えばＥ．コリ（E. coli）、エンテロバクター（Enterobacter）、エルウィニア（Erwinia）、クレブシエラ（Klebsiella）、プロテウス（Proteus）、サルモネラ（Salmonella）、例えばサルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）、セラチア（Serratia）、例えばセラチア・マルセッセンス及びシゲラ（Shigella）、Ｂ．サブティリス（B. subtilis）及びＢ．リケニフォルミス（B. licheniformis）等の桿菌、Ｐ．アエルギノーザ（P. aeruginosa）等のシュードモナス、並びにストレプトマイセス（Streptomyces）が挙げられる。幾つかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は免疫細胞である。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ発現細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、顆粒球、自然リンパ球、巨核球、単球、マクロファージ、血小板、胸腺細胞、及び骨髄性細胞からなる群から選択される。１つの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。別の実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞である。或る特定の実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ（商標））、同種異系Ｔ細胞、異種性Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせである。
【０２２４】
本発明の細胞は、当該技術分野において知られる任意の起源を通じて得ることができる。例えば、Ｔ細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏで造血幹細胞集団から分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞は、例えば末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍から得ることができる。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１種以上のＴ細胞系列に由来し得る。Ｔ細胞はまた、被験体から収集された血液単位からＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス等の当業者に知られる幾つもの技術を使用して得ることもできる。或る特定の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後の処理に適切なバッファー又は培地に入れる。幾つかの実施形態では、細胞はＰＢＳで洗浄される。理解されるように、洗浄工程は、例えばＣｏｂｅ（商標）２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）等の半自動フロースルー遠心分離機を使用すること等によって使用され得る。幾つかの実施形態では、洗浄された細胞は１種以上の生体適合性のバッファー、又はバッファーを含む若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁される。或る特定の実施形態では、アフェレーシス試料の不所望な成分は除去される。Ｔ細胞療法のためにＴ細胞を単離する追加の方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体は引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２２５】
或る特定の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球の溶解及び例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離を使用することによる単球の除去によってＰＢＭＳから単離される。幾つかの実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋のＴ細胞等のＴ細胞の特定の亜集団は、当該技術分野において知られる正又は負の選択技術によって更に単離される。例えば、負の選択によるＴ細胞集団の富化は、負に選択される細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせによって達成され得る。幾つかの実施形態では、負に選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する負の磁気免疫付着（negative magnetic immunoadherence）又はフローサイトメトリーによる細胞の選別及び／又は選択を使用することができる。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ２０及びＨＬＡ−ＤＲに対する抗体を含む。或る特定の実施形態においては、フローサイトメトリー及び細胞選別は、本発明における使用のための対象となる細胞集団を単離するために使用される。
【０２２６】
幾つかの実施形態では、ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を使用して、免疫細胞について遺伝子改変（例えばＣＡＲ又はＴＣＲ）に直接使用される。或る特定の実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後に、Ｔリンパ球を更に単離し、遺伝子改変及び／又は増幅の前又は後のいずれかに、細胞傷害性Ｔリンパ球及びヘルパーＴリンパ球の両方を、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、及びエフェクターＴ細胞の亜集団へと選別する。
【０２２７】
幾つかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、これら各種のＣＤ８＋細胞と関連する細胞表面抗原を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞へと更に選別される。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＣＲ７、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ１２７を含み、グランザイムＢに対して陰性である。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋及びＣＤ６２Ｌ＋のＴ細胞である。幾つかの実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ１２７に対して陰性であり、グランザイムＢ及びパーフォリンに対して陽性である。或る特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は亜集団へと更に選別される。例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞及びエフェクター細胞へと選別され得る。
【０２２８】
幾つかの実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、単離に続いて、既知の方法を使用して遺伝子改変されるか、又は免疫細胞は、遺伝子改変に先だってｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化され、増殖させる（又は前駆細胞の場合には、分化される）。別の実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体を伴って遺伝子改変され（例えば、ＣＡＲをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むウイルスベクターによって形質導入され）、次いでｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化及び／又は増殖させる。Ｔ細胞を活性化及び増殖させる方法は当該技術分野において知られており、例えば米国特許第６，９０５，８７４号、同第６，８６７，０４１号、及び同第６，７９７，５１４号、並びにＰＣＴ公報国際公開第２０１２／０７９０００号に記載され、それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。一般的には、そのような方法は、ＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞と、一般的にはビーズ又は他の表面に付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等の刺激性物質及び共刺激性物質とを、ＩＬ−２等の適切なサイトカインを含む培養培地中で接触させることを含む。同じビーズに付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。１つの例は、ヒトＴ細胞の生理学的な活性化に対するＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子／刺激因子システムである、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）システムである。他の実施形態では、米国特許第６，０４０，１７７号及び同第５，８２７，６４２号、並びにＰＣＴ公報国際公開第２０１２／１２９５１４号（それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されるような方法を使用して、フィーダー細胞、並びに適切な抗体及びサイトカインによって、Ｔ細胞は活性化され、刺激されて増殖する。
【０２２９】
或る特定の実施形態では、Ｔ細胞はドナー被験体から得られる。幾つかの実施形態では、ドナー被験体は、癌又は腫瘍に冒されたヒト患者である。他の実施形態では、ドナー被験体は癌又は腫瘍に冒されていないヒト患者である。
【０２３０】
本発明のその他の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド、本明細書に記載されるベクター、本明細書に記載されるポリペプチド、又は本明細書に記載されるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞を含む組成物に関する。幾つかの実施形態では、上記組成物は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、防腐剤、及び／又はアジュバントを含む。幾つかの実施形態では、上記組成物は賦形剤を含む。１つの実施形態では、上記組成物は、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む。別の実施形態では、上記組成物は、本発明のポリヌクレオチドによってコードされる本明細書に記載される抗原結合ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲを含む。別の実施形態では、上記組成物は、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲを含むＴ細胞を含む。
【０２３１】
ＩＩＩ．本発明の方法
本発明の別の態様は、適切な条件下で、本明細書に開示されるポリヌクレオチドで細胞に形質導入することを含む、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞を作製する方法に関する。幾つかの実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるように、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドで細胞に形質導入することを含む。幾つかの実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターで細胞に形質導入することを含む。
【０２３２】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド、本明細書に記載されるベクター、又は本明細書に記載されるＣＡＲ若しくはＴＣＲを含む有効量の細胞を被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法に関する。１つの実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む有効量の細胞を被験体に投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む有効量の細胞を被験体に投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲを含む有効量の細胞を被験体に投与することを含む。
【０２３３】
本発明の別の態様は、有効量の本出願の操作された免疫細胞を投与することを含む、被験体において免疫応答を誘導する方法に関する。幾つかの実施形態では、免疫応答はＴ細胞媒介免疫応答である。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞媒介免疫応答は、１つ以上の標的細胞に対するものである。幾つかの実施形態では、操作された免疫細胞はＣＡＲ又はＴＣＲを含み、ここでＣＡＲ又はＴＣＲは、本明細書に記載される抗原結合ドメインを含む。幾つかの実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。
【０２３４】
本発明の別の態様は、悪性腫瘍を治療又は予防する方法であって、有効量の少なくとも１つの免疫細胞を、それを必要とする被験体に投与することを含み、該免疫細胞は少なくとも１つのＣＡＲ又はＴＣＲを含み、該ＣＡＲ又はＴＣＲは本明細書に記載される抗原結合ドメインを含む、方法に関する。
【０２３５】
本発明の別の態様は、癌の治療を必要とする被験体において癌を治療する方法であって、上記被験体に、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、ＣＡＲ若しくはＴＣＲ、細胞、又は組成物を投与することを含む、方法に関する。１つの実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、又は該ポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。
【０２３６】
幾つかの実施形態では、癌の治療を必要とする被験体において癌を治療する方法は、Ｔ細胞療法を含む。１つの実施形態では、本発明のＴ細胞療法は、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））である。この実施形態によれば、上記方法は、患者から血液細胞を収集することを含み得る。単離された血液細胞（例えばＴ細胞）は、次いで、本発明のＣＡＲ又はＴＣＲを発現するように操作され得る。具体的な実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞が患者に投与される。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は、患者において腫瘍又は癌を治療する。１つの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は、腫瘍又は癌のサイズを縮小させる。
【０２３７】
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞療法において使用するためのドナーＴ細胞は、（例えば自己Ｔ細胞療法のためには）患者から得られる。他の実施形態では、Ｔ細胞療法において使用するためのドナーＴ細胞は、患者ではない被験体から得られる。
【０２３８】
Ｔ細胞は、治療的有効量で投与され得る。例えば、Ｔ細胞の治療的有効量は、少なくとも約１０４個の細胞、少なくとも約１０５個の細胞、少なくとも約１０６個の細胞、少なくとも約１０７個の細胞、少なくとも約１０８個の細胞、少なくとも約１０９個の細胞、又は少なくとも約１０１０個の細胞であり得る。別の実施形態では、Ｔ細胞の治療的有効量は、約１０４個の細胞、約１０５個の細胞、約１０６個の細胞、約１０７個の細胞、又は約１０８個の細胞である。１つの具体的な実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞の治療的有効量は、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約２×１０７細胞／ｋｇ、約３×１０７細胞／ｋｇ、約４×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０７細胞／ｋｇ、又は約９×１０７細胞／ｋｇである。
【０２３９】
ＩＶ．癌治療
本発明の方法は、被験体において癌を治療し、腫瘍のサイズを縮小させ、腫瘍細胞を死滅させ、腫瘍細胞増殖を予防し、腫瘍の成長を予防し、患者から腫瘍を排除し、腫瘍の再発を予防し、腫瘍転移を予防し、患者において寛解を誘導するために、又はそれらの任意の組み合わせに使用され得る。或る特定の実施形態では、上記方法は完全奏功を誘導する。他の実施形態では、上記方法は部分奏功を誘導する。
【０２４０】
治療され得る癌としては、Ｂ細胞リンパ腫、或る特定の実施形態においては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＬＫ陽性大Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心キャッスルマン病において生ずる大Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、結節性リンパ球優勢ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）及びワルデンシュトレームのマクログロブリン血症又はそれらの組み合わせが挙げられる。１つの実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）及び非ホジキンリンパ腫である。１つの実施形態においては、Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【０２４１】
幾つかの実施形態では、上記方法は、化学療法剤を投与することを更に含む。
【０２４２】
他の実施形態では、抗原結合分子、形質導入された（或いは操作された）細胞（例えばＣＡＲ又はＴＣＲ）及び化学療法剤は、それぞれ被験体における疾患又は状態を治療するために有効な量で投与される。
【０２４３】
或る特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤に先行して、それと併せて、及び／又はその後に投与され得る。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホン酸エステル、ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）及びウレドーパ（uredopa）等のアジリジン類、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロールメラミンのレジームを含む、エチレンイミン類及びメチルメラミン類、クロラムブシル、クロルナファジン、クロルプロマジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノボエンビキン、フェネストリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード類、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン等のニトロソウレア類、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質、メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類縁体、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類縁体、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ等のピリミジン類縁体、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン類、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤、フォリン酸等の葉酸補液、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビスアントレン、エダトラキサート、デフォファミン（defofamine）、デメコルチン、ジアジコン、エルフォルミチン（elformithine）、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンティナン、ロニダミン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（商標）、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２、２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン（gacytosine）、アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Bristol-Myers Squibb社）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）、Rhone-Poulenc Rorer社）、クロラムブチル、ゲムシタビン、６−チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類縁体、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ−１６）、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ナベルビン、ノバントロン、テニポシド、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロン酸塩、ＣＰＴ−１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）等のレチノイン酸誘導体、ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキン・ディフティトックス）、エスペラミシン、カペシタビン、並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられる。幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール類、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（keoxifene）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（フェアストン）を含む抗エストロゲン薬、並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリン等の抗アンドロゲン薬、並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体と併せて投与され得る。適宜、限定されるものではないが、ＣＨＯＰ、すなわち、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、ドキソルビシン（ヒドロキシドキソルビシン）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））及びプレドニゾンを含む化学療法剤の組み合わせも投与される。
【０２４４】
或る特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、ＣＨＯＰに先行して、それと併せて、及び／又はその後に投与され得る。ＣＨＯＰは、ＤＮＡに結合して架橋の形成を引き起こすことによりＤＮＡを損傷させるアルキル化剤であるシクロホスファミド（（Ｃ）ｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）と、ＤＮＡをそれ自身のＤＮＡ塩基間への挿入により損傷させるインターカレーション剤であるヒドロキシダウノルビシン（（Ｈ）ｙｄｒｏｘｙｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）（ドキソルビシン又はアドリアマイシンとも呼ばれる）と、タンパク質のチューブリンへの結合により細胞の複製を妨げるオンコビン（（Ｏ）ｎｃｏｖｉｎ）（ビンクリスチン）と、コルチコステロイド類であるプレドニゾン（（Ｐ）ｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）又はプレドニゾロン（（Ｐ）ｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）とからなる。
【０２４５】
幾つかの実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与と同時に又はその投与後１週間以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与後の１週間〜４週間若しくは１週間〜１ヶ月、１週間〜２ヶ月、１週間〜３ヶ月、１週間〜６ヶ月、１週間〜９ヶ月、又は１週間〜１２ヶ月で投与される。幾つかの実施形態では、化学療法剤は、細胞又は核酸を投与する少なくとも１ヶ月前に投与される。幾つかの実施形態では、上記方法は、２種以上の化学療法剤を投与することを更に含む。
【０２４６】
本発明と組み合わせて使用するために適した追加の治療剤としては、限定されるものではないが、イブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標））、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標））、カツマキソマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アキシチニブ、マシチニブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、トセラニブ、レスタウルチニブ、アキシチニブ、セジラニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、セマクサニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チボザニブ、トセラニブ、バンデタニブ、エントレクチニブ、カボザンチニブ、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ラドチニブ、ボスチニブ、レスタウルチニブ、ルキソリチニブ、パクリチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、トラメチニブ、ビニメチニブ、アレクチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、アフリベルセプト、アジポチド、デニロイキン・ディフティトックス、エベロリムス及びテムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ソニデギブ及びビスモデギブ等のヘッジホッグ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤（パルボシクリブ）等のＣＤＫ阻害剤が挙げられる。
【０２４７】
本発明において使用するために適した追加の治療剤としては、放射性原子が挙げられる。そのような放射性原子の例としては、１３１Ｉ、９０Ｙ、２１２Ｂｉ、１８６Ｒｅ、２２１Ａｔ、９９ｍＴｃ及びそれらの混合物が挙げられる。しかしながら、当該技術分野において知られているようにその他の放射性原子を利用することもできる。
【０２４８】
追加の実施形態では、ＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現するＴ細胞、ｓｃＦｖを含むコンジュゲート又はｓｃＦｖ自身を含む組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤又は抗炎症薬としては、限定されるものではないが、ステロイド類及びグルココルチコイド類（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド及びミコフェノール酸塩を含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられ得る。例示的なＮＳＡＩＤとしては、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤及びシアリレートが挙げられる。例示的な鎮痛剤としては、アセトアミノフェン、オキシコドン、トラマドール又は塩酸プロポキシフェンが挙げられる。例示的なグルココルチコイド類としては、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物学的応答調節物質としては、細胞表面マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ５等）に対する分子、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標））等のサイトカイン阻害剤、ケモカイン阻害剤、及び接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的応答調節物質は、モノクローナル抗体及び分子の組み換え形も含む。例示的なＤＭＡＲＤとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）及びミノサイクリンが挙げられる。
【０２４９】
或る特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、サイトカインと併せて投与される。本明細書で使用される「サイトカイン」は、１つの細胞集団によって放出され、細胞間メディエーターとして別の細胞に対して作用するタンパク質を指すことを意味する。サイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中でも、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、プロインスリン、リラキシン、プロリラキシン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン、肝臓増殖因子（ＨＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、ミューラー管阻害物質、マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮細胞増殖因子、インテグリン、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＮＧＦ−ベータ等の神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板増殖因子、ＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータ等のトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨誘導因子、インターフェロン−アルファ、ベータ及びガンマ等のインターフェロン、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５等のインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ−アルファ又はＴＮＦ−ベータ等の腫瘍壊死因子、並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書で使用されるサイトカインという用語は、天然起源由来又は組み換え細胞培養物由来のタンパク質、及び天然の配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０２５０】
Ｖ．コンジュゲート
本発明の抗原結合ドメイン（例えば、抗ヒトＣＤ１９  ｓｃＦｖ）は、本明細書に記載されるように治療剤（例えば、化学療法剤及び放射性原子）にコンジュゲート（例えば連結）され得る。
【０２５１】
そのような治療剤を抗体、例えばｓｃＦｖにコンジュゲートさせるための技術はよく知られている。例えば、Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), 1985, pp. 243-56, Alan R. Liss, Inc.、Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), 1987, pp. 623-53, Marcel Dekker, Inc.、Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), 1985, pp. 475-506、"Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), 1985, pp. 303-16, Academic Press、及びThorpe et al., Immunol. Rev., 62:119-58, 1982を参照のこと。上記参考文献の各々は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす。
【０２５２】
ＶＩ．抗体のヒト化
抗体のヒト化は、非ヒト抗体、例えばｓｃＦｖのフレームワークをヒトのものと置き換えるプロセスである。好結果の抗体のヒト化は、残部の置き換え後に親和性が維持されることに依存する。幾つかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖及び重鎖の両方の配列の少なくとも一部がヒト遺伝子に起因する抗体分子である。そのような抗体は、本明細書では「ヒト化抗体」、「ヒト抗体」又は「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kozbor, et al., 1983 Immunol Today 4: 72を参照）及びヒトモノクローナル抗体の生産のためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96を参照）を使用することによって製造され得る。ヒトモノクローナル抗体は、ヒトハイブリドーマ（Cote, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030を参照）又はヒトＢ細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏにてエプスタインバールウイルスで形質転換させる（Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96を参照）ことによって生産され得る。
【０２５３】
さらに、ヒト抗体、例えばｓｃＦｖは、ファージディスプレイライブラリー（Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)、Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)を参照）を含む更なる技術を使用して生産され得る。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活性化されたトランスジェニック動物、例えばマウスへと導入することにより作製され得る。抗原投与に際して、遺伝子再構成、アセンブリ及び抗体レパートリーを含むあらゆる点でヒトに見られるものと非常によく似たヒト抗体の産生が観察される。このアプローチは、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、並びにMarks et al., Bio/Technology 10, 779-783 (1992)、Lonberg et al., Nature 368 856-859 (1994)、Morrison, Nature 368, 812-13 (1994)、Fishwild et al, Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996)、Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996)、及びLonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)に記載されている。
【０２５４】
ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（商標）は、抗体をヒト化する方法を提供する。この方法は、ＣＤＲグラフティングと、構造ベースの復帰突然変異法と、発現レベル、生物物理学的特性及び親和性に関する高速スクリーニング（FAst Screening for Expression level,Biophysical properties,and Affinity）（ＦＡＳＥＢＡ）技術との組み合わせに従い、それにより親和性及び最適化された特性を有するヒト化抗体、例えばｓｃＦｖが作製される。ＦＡＳＥＢＡ技術は、最適な製造及びｉｎ  ｖｉｖｏでの挙動のために重要である発現レベル及び熱安定性等のヒト化抗体の特性を最適化するために使用される。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（商標）の方法の更なる詳細は、ワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）でgenscript.com/Antibody-Humanization.htmlにおいて見られる。その内容は、本出願の開示で利用可能であれば、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす。
【０２５５】
本明細書で言及される全ての出版物、特許、及び特許出願は、個々の出版物、特許又は特許出願が各々、具体的かつ個別に引用することにより本明細書の一部をなすことが指示されるのと同じ程度に、引用することにより本明細書の一部をなす。しかしながら、本明細書における参照文献の引用は、かかる参照文献が本発明に対する先行技術の認識として解釈されるべきではない。引用することにより本明細書の一部をなす参照文献に提供される定義又は用語のいずれかが本明細書に提供される用語及び考察とは異なる場合は、本発明の用語及び定義を優先する。
【０２５６】
本発明を、以下の実施例によって更に説明するが、実施例は、更なる限定として解釈されるべきではない。本出願全体を通して引用される全ての参考文献の内容は、引用することにより明確に本明細書の一部をなす。
【実施例】
【０２５７】
実施例１：ＦＭＣ６３抗体のｓｃＦｖのヒト化
この実施例の目的は、ＣＤＲグラフティング及び復帰突然変異を使用して親（野生型）抗体の結合親和性を犠牲にすることなく抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）クローンＦＭＣ６３をヒト化することであった。
【０２５８】
抗原細胞と参照抗体との結合確認
Ｒａｊｉ（ヒトバーキットリンパ腫）細胞を培養し、遠心分離により採取した。１ウェル当たり約３×１０５個の細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、参照抗体（ＦＭＣ６３：マウス抗ヒトＢ細胞（ＣＤ１９）ＩｇＧ抗体）の２００μｌの連続希釈物中にて４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後に、二次抗体（５μｇ／ｍｌのヤギ抗マウスＩｇＧ［ＦＩＴＣ］）を上記細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後に、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）（BD Bioscience社、カリフォルニア州、サンノゼ）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェア（オレゴン州、アシュランド）を使用することにより細胞をＥＣ５０結合について分析した。
【０２５９】
参照抗体（ＦＭＣ６３）は、Ｒａｊｉ細胞に結合したが、Ｅｏｌ−１細胞（ヒト急性骨髄性（好酸球性）白血病）には結合しなかった（データは示していない）。
【０２６０】
ヒト化ＦＭＣ６３ライブラリーの作製
ＦＭＣ６３についての重鎖及び軽鎖に関するコンビナトリアルヒト化復帰突然変異（ＢＭ）スクリーニングライブラリーをデザインした。ライブラリーの構築は、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔの標準的な操作手順に従って実施した。
【０２６１】
ファージディスプレイライブラリーからのヒト化ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖの単離
上述のヒト化ライブラリーから得られたヒト化ｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーを、Ｒａｊｉ（ヒトバーキットリンパ腫）細胞に対してパンニングした。インプットファージ粒子を、Ｅｏｌ−１（ヒト急性骨髄性（好酸球性）白血病）細胞と一緒に及びＥｏｌ−１細胞無しにプレインキュベートし、結合されたファージを、多様な高親和性結合体を得るために、野生型抗体による事前の競合溶出と共にＴＥＡによって溶出させた。
【０２６２】
個々のアウトプットファージクローンを９６深ウェルプレート中で増幅させ、増幅したファージをセルベースＥＬＩＳＡ及びフローサイトメトリー確認によりアッセイした。結合されたファージを、ＨＲＰ／抗Ｍ１３モノクローナル抗体によりプロービングした。
【０２６３】
Ｒａｊｉ細胞と結合するが、Ｅｏｌ−１細胞とは結合しない十分なパーセンテージのファージクローンが見られたときに、パンニングを終えた。パンニング及びファージＥＬＩＳＡは、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔの標準的な操作手順に従って実施した。
【０２６４】
発現レベル、生物物理学的特性及び親和性に関する高速スクリーニング（ＦＡＳＥＢＡ）
選択されたアウトプットファージを使用して、対数増殖期ＴＧ１（ファージディスプレイ用コンピテント）細胞に感染させた。トランスフェクションした細胞を増殖させ、そこからｄｓＤＮＡを抽出した。ヒト化ｓｃＦｖ断片を、２本鎖ファージミドから消化し、最良のヒト化抗体クローンのスクリーニングのためにｐＦＡＳＥＢＡベクターに挿入した。
【０２６５】
個々のクローンを９６深ウェルプレート中で発現させ、Ｅ．コリによって培地に分泌された粗製タンパク質を、それぞれ発現及び結合活性の評価のためにＢＳＡに対するＥＬＩＳＡ及びＲａｊｉ細胞に対するＦＡＣＳ確認によってアッセイした。
【０２６６】
ヒト化ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖの構築及び産生
ＦＭＣ６３（マウス抗ヒトＢ細胞（ＣＤ１９）ＩｇＧ抗体）についてのヒト化重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列を合成し、ｐＴＴ５発現ベクター中に挿入することで、ｓｃＦｖ（単鎖可変フラグメント）発現プラスミドを構築した。ヒト化抗体の発現を１００ｍｌのＨＥＫ２９３細胞培養物において行い、Ｎｉキレート化親和性カラムを用いて上清を精製した。精製された抗体を、ＰＤ−１０脱塩カラムを使用してＰＢＳへとバッファー交換した。精製されたタンパク質の濃度及び純度を、それぞれＯＤ２８０及びＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定した。
【０２６７】
ヒト化ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖのフローサイトメトリー抗体価測定
ヒト化ＦＭＣ６３抗体のＲａｊｉ細胞への親和性のランク付けのために、精製した抗体を、フローサイトメトリー抗体価測定にかけた。簡潔には、Ｒａｊｉ細胞を培養し、遠心分離により採取した。１ウェル当たり約３×１０５個の細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、ｓｃＦｖの２００μｌの連続希釈物中にて４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後に、二次抗体（５μｇ／ｍｌのＨｉｓタグ抗体［ＦＩＴＣ］）を細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後に、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用することにより細胞をＥＣ５０結合について分析した。
【０２６８】
ファージディスプレイライブラリーからのヒト化ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖクローンの単離
Ｅｏｌ−１細胞と一緒に及びＥｏｌ−１細胞無しにプレインキュベートされたヒト化ｓｃＦｖファージライブラリーのパンニングを実施した（表４）。
【０２６９】
【表４】
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【０２７０】
第２ラウンドの陽性率（無作為に選ばれたクローンの総数に対する抗原特異的なヒト化クローンの数）は、約４０％であった。Ｒａｊｉ細胞及びＥｏｌ−１細胞に対するセルベースＥＬＩＳＡの結果が一貫して観察され、その後にフローサイトメトリーにより確認した。
【０２７１】
ＦＡＳＥＢＡスクリーニング
第２のアウトプットファージのｓｃＦｖフラグメントをコードするＤＮＡを増幅させ、ｐＦＡＳＥＢＡベクター中に挿入して、リード抗体をスクリーニングした。個々のＦＡＳＥＢＡライブラリーのクローンを、９６深ウェルプレートにおいて接種し、発現のために誘導した。ＦＡＣＳスクリーニングを実施して、Ｒａｊｉ細胞を特異的に認識するｓｃＦｖを単離した。
【０２７２】
結果に従って、発現、精製及び親和性測定のために７種のクローン（ＲＳ、ＣＳ、ＢＳ、ＳＳ、ＪＳ、ＡＳ、及びＮＳと呼ばれる）を選択した。
【０２７３】
ヒト化ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖの発現及び精製
上述の７種のヒト化ｓｃＦｖ及び野生型ｓｃＦｖを、１００ｍｌのＨＥＫ２９３細胞中で発現させ、ＮＴＡ−Ｎｉ樹脂により精製した。各ｓｃＦｖの純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる評価で９０％を上回っていた。
【０２７４】
ヒト化ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖのフローサイトメトリー抗体価測定
ヒト化ｓｃＦｖとＲａｊｉ細胞との結合をまず、使用に際して３μＭの精製抗体から開始するＦＡＣＳにより調査した。陽性の結合シグナルが、７種の上述のヒト化ｓｃＦｖクローンについてフローサイトメトリーの２ラウンドの間に一貫して観察された。
【０２７５】
最後に、これらの７種のヒト化ｓｃＦｖを、フローサイトメトリーによる分析のために選択した。７種の選択されたヒト化抗体の幾何平均及びＥＣ５０を、図３Ａ及び図３Ｂ及び表５に示した。注目すべきことに、ｓｃＦｖクローンのＳＳ、ＪＳ、ＡＳ／ＡＳ−Ｒ、及びＮＳのＥＣ５０は、それぞれ７２．７６ｎＭ、６５．９８ｎＭ、５３．０６／６１．９７ｎＭ、及び３４．０２ｎＭであり、野生型抗体の２７．１１ｎＭと同等であった。
【０２７６】
【表５】
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【０２７７】
７種の選択されたｓｃＦｖのうちの４種のキャラクタリゼーション
野生型ｓｃＦｖ及び７種の選択されたヒト化ｓｃＦｖのうちの４種をコードするヌクレオチドは、詳細な説明で先に記載されている。同様に、野生型ｓｃＦｖ及び７種の選択されたヒト化ｓｃＦｖのうちの４種についてのアミノ酸配列は、詳細な説明で先に記載されている。
【０２７８】
野生型ｓｃＦｖと同等のＥＣ５０結合を有する４種のヒト化ｓｃＦｖ（ＳＳ、ＪＳ、ＡＳ、及びＮＳと呼ばれるクローン）を、更なるキャラクタリゼーションのために選択した。
【０２７９】
４種のクローンのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を実施して、部分的にｓｃＦｖが可溶性凝集を形成する性向を特定した。図４Ａ及び図４Ｂに示されるように、ＮＳクローン及びＪＳクローンは、ＳＥＣで単独のピークを示すため、ＮＳ及びＪＳのｓｃＦｖは、そのアッセイ条件において凝集物を形成しない。他方で、図４Ｃ及び図４Ｄに示されるように、ＳＳクローン及びＡＳクローンは、ＳＥＣで二重ピークを示す（各図における挿入図を参照）。したがって、ＳＳ及びＡＳのｓｃＦｖは、試験された条件においてかなりの量の可溶性凝集物を形成する。
【０２８０】
結論
この実施例において、抗ＣＤ１９マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）クローンＦＭＣ６３のヒト化に成功した。７種のヒト化ｓｃＦｖが、ＦＡＳＥＢＡハイスループットスクリーニング及びファージディスプレイ技術から得られた。４種のヒト化ｓｃＦｖ（ＳＳ、ＪＳ、ＡＳ、及びＮＳと呼ばれるクローン）は、野生型ＦＭＣ６３  ｓｃＦｖと同等の結合（ＥＣ５０値）を示した。
【０２８１】
実施例２：各々の選択されたｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）のキャラクタリゼーション
４種の選択されたｓｃＦｖ（ＳＳ、ＪＳ、ＡＳ、及びＮＳ）のうちの１種をその抗原結合分子として発現するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を設計した。
【０２８２】
サーマルランピング（Thermo-ramping）アッセイを実施して、ＣＡＲ結合ドメインを含む４種のｓｃＦｖの熱安定性を調べた
増強された安定性は、所望のタンパク質特性である。これはしばしば、様々な条件下でのタンパク質の融解温度の測定により評価される。より高い融解温度を有するタンパク質は、一般的により長い時間にわたって安定である。ＣＡＲがより熱安定性である場合に、そのＣＡＲは、細胞表面上でより長期にわたり機能的に活性であり得る。
【０２８３】
本発明のＣＡＲの結合ドメインを含むｓｃＦｖの熱安定性を、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｃ１０００サーマルサイクラー、ＣＦｘ９６リアルタイムシステムを使用して測定した。タンパク質のアンフォールディングに際して露出される疎水性アミノ酸に結合する蛍光色素ＳＹＰＲＯ（商標）Ｏｒａｎｇｅ（Invitrogen社）を使用して、タンパク質のアンフォールディングをモニターした。１分毎に１℃の段階的な増分で２５℃から９５℃までの温度勾配を設定した。各試料は、１０μＭのＣＡＲ  ｓｃＦｖ及び５×のＳＹＰＲＯ（商標）Ｏｒａｎｇｅタンパク質ゲル染色試薬（Molecular Probes（商標）社、ＤＭＳＯ中の５０００倍濃縮物）を含有していた。図５Ａに示される試料中には５０ｍＭのＮａＣｌが含まれていた。
【０２８４】
このアッセイでは、ＣＡＲについて許容可能な融解温度は、理想的には６０℃より高かった。
【０２８５】
図５Ａに示されるように、ヒト化ｓｃＦｖを含むＣＡＲは、５０ｍＭのＮａＣｌが存在する場合に様々な熱安定性を示し、ＮａＣｌを省いた場合に殆ど差はなかった（図５Ｂに示される）。さらに、本発明のＣＡＲのｓｃＦｖは、他のＣＡＲで使用される他の研究のｓｃＦｖに対してかなり安定であった。ＡＳ（「□」）のｓｃＦｖは、約５８℃の最低の融解温度を有し、融解温度の増加は、ＳＳクローン（「△」、６５℃）、ＪＳクローン（「◇」、６７℃）及びＮＳクローン（「×」、７３℃）のｓｃＦｖについて見られた。
【０２８６】
２種の細胞系統におけるＣＡＲ発現
ＳＳのｓｃＦｖ、ＪＳのｓｃＦｖ、ＡＳのｓｃＦｖ及びＮＳのｓｃＦｖを含むＣＡＲを、２種のＴ細胞ドナー細胞：５２４４（図６Ａ）及び５２７３（図６Ｂ）中で発現させた。モックのＣＡＲを発現するドナー細胞試料及びＦＭＣ６３（親）ｓｃＦｖを含むＣＡＲを発現するドナー細胞も準備した。
【０２８７】
ＰＥにコンジュゲートされた抗ＣＡＲ抗体と一緒にドナー細胞をインキュベートすることにより、該細胞の表面上でＣＡＲを検出した。ＣＡＲ陽性のパーセンテージ及び蛍光強度をフローサイトメトリーにより測定した。
【０２８８】
図６Ａ及び図６Ｂは、モックが形質導入されたＴ細胞においてＣＡＲが発現されなかったことを示している。どちらのドナーの細胞においても、その他の３種の選択されたヒト化ｓｃＦｖクローンよりも多くのＳＳのＣＡＲが発現され、ＡＳのＣＡＲが、最少量の発現を示した。
【０２８９】
実施例３：選択されたどのｓｃＦｖを含むＣＡＲも、腫瘍細胞を選択的に死滅させる
ＣＡＲ又はモックが形質導入されたドナー由来のＴ細胞５２４４（図７Ａ〜図７Ｄ）又は５２７３（図８Ａ〜図８Ｄ）を、１：１又は４：１のエフェクター対標的比で標的細胞系統に添加した。４種の標的細胞型を使用した：Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋ヒトバーキットリンパ腫細胞；図７Ａ及び図８Ａ）、Ｎａｍａｌａｗａ（ＣＤ１９＋ヒトバーキットリンパ腫細胞；図７Ｂ及び図８Ｂ）、Ｅｏｌ−１（ＣＤ１９−ヒト急性骨髄性（好酸球性）白血病細胞；図７Ｃ及び図８Ｃ）及びＭｖ４１１（ＣＤ１９−ヒト二重表現型Ｂ骨髄単球性白血病細胞；図７Ｄ及び図８Ｄ）。スタウロスポリン（「Ｓｔａｕｒｏ」）を、腫瘍細胞死滅のためのポジティブコントロールとして使用した。
【０２９０】
３７℃で１８時間にわたり共培養した後に、Ｒ１０培地中の５０μＬのｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェリン試薬を各ウェルへと加え、プレートを３７℃で１０分間インキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、細胞生存性の尺度として使用した。ルミネッセンスを、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ  Ｆｌａｓｈプレートリーダーで読み取った。
【０２９１】
図７Ａ〜図７Ｄ及び図８Ａ〜図８Ｄは、ＣＡＲが形質導入されたドナー細胞を標的細胞と一緒にインキュベートして測定されたルミネッセンスを示している。本発明のどのＣＡＲも、ＣＤ１９＋標的細胞を死滅させることが可能である。
【０２９２】
ＣＡＲ又はモックが形質導入された追加のドナー由来のＴ細胞の成長動態を、ＯＫＴ３による初期刺激後１０日間にわたって測定した。各ＣＡＲの観察された成長プロファイルは、図９Ａに示されている。次いで、ＣＡＲ又はモックが形質導入されたＴ細胞を再度刺激し、図９Ｂに示されるような成長動態の差が観察された。１０日目に、抗ＣＡＲ抗体及びＣＤ３を用いてＴ細胞集団のキャラクタリゼーションに着手した（図１０Ａ）。またＣＤ４／ＣＤ８染色を実施することで、図１０Ｂに示すようにＣＡＲ  Ｔ細胞産生の間のＣＤ８細胞の富化をモニターした。細胞毒性アッセイを、ＣＤ１９＋のＮＡＭＡＬＷＡ（図１１Ａ）又はＣＤ１９−のＥＯＬ−１（図１１Ｂ）で１：１のエフェクター対標的比で実施した。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【配列表】
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