(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞受容体結合能のあるペプチドであって、
前記ペプチドは配列番号１からなるペプチド。
【請求項２】
細胞は線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）を含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記細胞受容体は、
線維芽細胞成長因子受容体（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
請求項１に記載のペプチドが表面上に連結されているマイクロカプセル。
【請求項５】
前記ペプチドは、マイクロカプセルの総断面積を基準として、０．１〜１０ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２の密度で含まれる、請求項４に記載のマイクロカプセル。
【請求項６】
前記マイクロカプセルは、カプセル内に封入された有効成分をさらに含み、
前記有効成分は、アミノ酸類；植物由来のタンパク質またはその加水分解物；酵母発酵物、その溶解物またはその濾過物；及び植物抽出物のうちの少なくとも一つを含む、請求項４に記載のマイクロカプセル。
【請求項７】
前記植物由来のタンパク質はルピンタンパク質を含み、
前記酵母はピキア・パストリス（ Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）を含む、請求項６に記載のマイクロカプセル。
【請求項８】
前記アミノ酸類は、有効成分の総重量を基準として０．００００１〜０．１重量％で含まれ、
前記植物由来のタンパク質またはその加水物、酵母発酵物、その溶解物またはその濾過物、及び植物抽出物それぞれは、有効成分の総重量を基準としてそれぞれ０．０００１〜３０重量％で含まれる、請求項６に記載のマイクロカプセル。
【請求項９】
請求項４乃至８のいずれか一項に記載のマイクロカプセルを含む、化粧料組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、保湿用、皮膚バリア強化用、美白用、しわ改善用または皮膚弾力改善用である、請求項９に記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書には、細胞受容体結合能のあるペプチド、前記ペプチドが連結されているマイクロカプセル、及びこれを含む化粧料組成物が開示される。
【背景技術】
【０００２】
マイクロカプセルは、医薬品、塗料、電子産業及び化粧品などの様々な分野で使用される基盤技術であって、特に、有効成分の初期力価を維持するための最良のツールであって、医薬品及び化粧品分野で脚光を浴びている(Journal of controlled release, 58, 9, 1999)。
【０００３】
しかし、これまで知られているマイクロカプセルを含有した化粧料組成物は、人体に適用したとき、マイクロカプセルを使用していない化粧料組成物と比較して顕著に改善された効果を得ていない。
【０００４】
このため、最近、薬物送達システム原理を利用して、標的細胞にマイクロカプセルを伝達しようとする開発が続けられている。ところが、これまで知られているものは、マイクロカプセルの分子的不安定性や、標的細胞との結合力の問題などにより、まだ満足すべき効果を得ていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】韓国特許第１０−１０５１５５７号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
一態様において、本発明の目的は、標的細胞との結合力に優れたペプチドを提供することである。
一態様において、本発明の目的は、有効成分を標的細胞へ正確かつ安定に伝達することである。
一態様において、本発明の目的は、有効成分の皮膚への伝達力が改善された化粧料組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様において、本発明は、細胞受容体結合能のあるペプチドであって、前記ペプチドは、配列番号１〜３のいずれかを含むペプチドを提供する。
一態様において、本発明は、前記ペプチドが表面上に連結されているマイクロカプセルを提供する。
また、一態様において、本発明は、前記マイクロカプセルを含む化粧料組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の一態様であるペプチドは、ターゲットに対する選別的結合力に優れる。また、本発明の一態様であるマイクロカプセルは、物理化学的安定性に優れる。よって、前記ペプチドに結合されたマイクロカプセルを含む化粧料組成物は、カプセル内に含まれている有効成分の標的細胞に対する伝達効率に優れるため、皮膚状態改善効果に優れる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１ａ】本発明のカプセルのターゲット（標的細胞）との結合力を確認した結果である（図１ａ：カプセル１、図１ｂ：カプセル２、図１ｃ：カプセル３）
【図１ｂ】本発明のカプセルのターゲット（標的細胞）との結合力を確認した結果である（図１ａ：カプセル１、図１ｂ：カプセル２、図１ｃ：カプセル３）
【図１ｃ】本発明のカプセルのターゲット（標的細胞）との結合力を確認した結果である（図１ａ：カプセル１、図１ｂ：カプセル２、図１ｃ：カプセル３）
【図２ａ】本発明のカプセル１を処理したとき、コラーゲン１（図２ａ）、コラーゲン２（図２ｂ）及びエラスチン（図２ｃ）の発現変化を示す図である。
【図２ｂ】本発明のカプセル１を処理したとき、コラーゲン１（図２ａ）、コラーゲン２（図２ｂ）及びエラスチン（図２ｃ）の発現変化を示す図である。
【図２ｃ】本発明のカプセル１を処理したとき、コラーゲン１（図２ａ）、コラーゲン２（図２ｂ）及びエラスチン（図２ｃ）の発現変化を示す図である。
【図３】本発明のカプセルを含有したアンプルを使用した後の目元しわ改善効果を確認して示す図である。
【図４ａ】本発明のカプセル（カプセル２）を処理したときのα−ＭＳＨの結合妨害能（図４ａ）とメラニン合成阻害能（図４ｂ）を示す図である。
【図４ｂ】本発明のカプセル（カプセル２）を処理したときのα−ＭＳＨの結合妨害能（図４ａ）とメラニン合成阻害能（図４ｂ）を示す図である。
【図５】本発明のカプセルを含有したトナーを使用した後の美白効果を確認して示す図である。
【図６ａ】本発明のカプセル（カプセル３）を処理したときのケラチン１（図６ａ）、ケラチン５（図６ｂ）及びフィラグリン（図６Ｃ）の発現変化を確認して示す図である。
【図６ｂ】本発明のカプセル（カプセル３）を処理したときのケラチン１（図６ａ）、ケラチン５（図６ｂ）及びフィラグリン（図６Ｃ）の発現変化を確認して示す図である。
【図６ｃ】本発明のカプセル（カプセル３）を処理したときのケラチン１（図６ａ）、ケラチン５（図６ｂ）及びフィラグリン（図６Ｃ）の発現変化を確認して示す図である。
【図７】本発明のカプセルを含有した栄養クリームを使用した後の皮膚バリア（真皮緻密度、皮膚厚み）改善効果を確認して示す図である。
【図８】本発明の過量の親水性生理活性物質を脂質部からなる多層構造上に安定化したマイクロカプセルの模式図である。
【図９】ペプチドを含むマイクロカプセルの模式図である。
【図１０】本発明のスマートカプセル化製造技術によって作られた濃縮組成物試料の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、一態様において、細胞受容体結合能のあるペプチドであって、前記ペプチドは、配列番号１〜３のいずれかを含むペプチドである。
本明細書において、細胞受容体結合能とは、細胞上に形成されている受容体に結合することができる能力を意味する。
前記配列番号１乃至３のペプチドのアミノ酸配列は、下記表１のとおりである。
【００１１】
【表１】
0006946565.tif 000002
【００１２】
前記表１において、Ａｌａはアラニン、Ａｓｐはアスパラギン酸、Ｇｌｕはグルタミン酸、Ｇｌｙはグリシン、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｉｌｅはイソロイシン、Ｌｙｓはリシン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｐｒｏはプロリン、Ｓｅｒはセリン、Ｔｒｐはトリプトファン、Ｔｙｒはチロシン、Ｔｈｒはトレオニンをそれぞれ意味する。
【００１３】
一態様において、前記ペプチドのターゲットとなる細胞は、メラニン細胞（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ）、ケラチン細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）または線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）を含むことができる。
【００１４】
また、前記細胞受容体は、線維芽細胞成長因子受容体（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、インテグリン受容体またはメラノコルチン受容体（ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を含むことができる。具体的には、前記メラノコルチン受容体は、メラノコルチン１受容体（ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＭＣ１Ｒ）であり得る。
一実施形態において、前記配列番号１のペプチドは、線維芽細胞をターゲットとするものであって、線維芽細胞成長因子受容体と結合するものであり得る。
また、一実施形態において、配列番号２のペプチドは、メラニン細胞をターゲットとするものであって、メラノコルチン受容体と結合するものであり得る。
【００１５】
また、一実施形態において、配列番号３のペプチドは、ケラチン細胞をターゲットとするものであって、インテグリン受容体、特にインテグリン受容体のベータ１ファミリーと結合するものであり得る。
【００１６】
本発明の一態様である前記ペプチドは、それぞれがターゲットとする細胞またはそのレセプター以外の他の細胞とは結合せず、その結合力にも優れるため、ペプチドに他の成分を連結させたときにターゲットへの高い伝達力を期待することができる。
【００１７】
本発明は、一態様において、前記ペプチドが表面上に連結されているマイクロカプセルである。前記ペプチドは、マイクロカプセル上の親水性基、例えば、カルボキシル基とペプチド上のＮ−末端とを結合させてマイクロカプセル上に連結できるが、連結方法は、限定されず、当業者によく知られている様々な方法によることができる。
【００１８】
マイクロカプセルは、広範囲かつ多様なポリマーを含むことができ、これらは、ポリマー、熱感受性ポリマー、感光性ポリマー、磁性ポリマー、ｐＨ感受性ポリマー、塩感受性ポリマー、化学的感受性ポリマー、高分子電解質、多糖類、ペプチド、タンパク質および／またはプラスチックを含むが、これらに限定されない。ポリマーは、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）（ＰＮＩＰＡＡｍ）、ポリ（スチレンスルホネート）（ＰＳＳ）、ポリ（アリルアミン）（ＰＡＡｍ）、ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）、ポリ（ジアリルメチル−塩化アンモニウム）（ＰＤＡＤＭＡＣ）、ポリ（ピロール）（ＰＰｙ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰＯＮ）、ポリ（ビニルピリジン）（ＰＶＰ）、ポリ（メタクリル酸）（ＰＭＡＡ）、ポリ（メチルメタクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリ（テトラヒドロフラン）（ＰＴＨＦ）、ポリ（フタルアルデヒド）（ＰＴＨＦ）、ポリ（ヘキシルビオロゲン）（ＰＨＶ）、ポリ（Ｌ−リシン）（ＰＬＬ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリ（Ｌ−アルギニン）（ＰＡＲＧ）、ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）などの物質を含むが、これらに限定されない。
【００１９】
一実施形態において、カプセルは２重層であってもよい。このとき、外殻に位置した層はポリビニルアルコールを含むことができ、内面に位置した層はポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）を含むことができる。
【００２０】
また、マイクロカプセルは、カプセルの外殻層に有効中性電荷、負電荷または正電荷を生成することができる１つ以上の物質を含むことができる。場合によっては、カプセルの電荷は、粒子の凝集またはクラスタリング（ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）を防止または促進するのを助けることができる。
【００２１】
一態様において、前記ペプチドは、マイクロカプセルの総断面積を基準として、０．１〜１０ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２の密度で含まれ得る。前記ペプチドの密度は、好ましくは０．３〜８ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２、最も好ましくには０．４〜７ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２である。ペプチドの密度とは、マイクロカプセルの単位表面積を基準に存在するペプチドの本数を意味することができる。
【００２２】
例えば、前記マイクロカプセル上のペプチドの密度が０．１ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２未満である場合、または前記マイクロカプセル上のペプチドの密度が１０ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２を超える場合には、ペプチドが連結されていないマイクロカプセルと類似する程度の皮膚状態改善効果を示すため、上記の密度範囲で優れた標的細胞への結合力及び有効成分伝達力がある。
【００２３】
一態様において、前記マイクロカプセルは、カプセル内に封入された有効成分をさらに含み、前記有効成分は、アミノ酸類；植物由来タンパク質またはその加水分解物；及び酵母発酵物、その溶解物またはその濾過物の少なくとも一つを含むことができる。また、カプセルに封入される有効成分としては、様々な植物抽出物とその果実抽出物を含むことができる。具体的には、前記植物抽出物は、フサザキスイセン根抽出物、スノーフレーク鱗茎抽出物などを含むことができ、果実抽出物は、ドラゴンフルーツ抽出物を含むことができる。
【００２４】
また、前記アミノ酸類は、限定されず、アルギニン、アラニン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、リシン、ヒスチジン、プロリン、チロシン、セリン、バリン、フェニルアラニン、トリプトファン、トレオニン、アスパラギン酸などを含むことができる。
【００２５】
一実施形態において、前記植物由来のタンパク質は、ルピンタンパク質を含むことができ、前記酵母は、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）を含むことができる。一実施形態において、前記酵母発酵物は、ピキア発酵溶解濾過物であり得る。
【００２６】
上述した態様において、植物由来のタンパク質またはその加水物、酵母発酵物、その溶解物またはその濾過物は、有効成分の総重量を基準として、それぞれ０．０００１〜３０重量％で含まれ得る。０．０００１重量％未満の場合には、効能が微々たるものであり、３０重量％を超える場合には、変色や変臭などの安定性の問題があり得る。前記植物由来のタンパク質またはその加水分解物；酵母発酵物；及びその溶解物またはその濾過物は、有効成分の総重量を基準として、それぞれ好ましくは０．０１〜３０重量％、さらに好ましくは０．０１〜２５重量％ずつ含まれ得る。
【００２７】
前記アミノ酸類は、０．００００１〜０．１重量％、好ましくは０．０００１〜０．１重量％、さらに好ましくは０．０００１〜０．０５重量％で含まれ得る。前記植物抽出物または果実抽出物は、０．０００１〜３０重量％で含まれ得る。前記植物抽出物と果実抽出物は、それぞれ好ましくは０．００１〜２０重量％、最も好ましくは０．００１〜１５重量％で含まれ得る。
【００２８】
アミノ酸類の含有量が０．００００１重量％未満である場合には、効能が微々たるものであり、アミノ酸類の含有量が０．１重量％を超える場合には、剤形の粘度安定性において問題があり得る。
【００２９】
植物抽出物及び果実抽出物が０．０００１重量％未満である場合には、効果が微々たるものであり、植物抽出物及び果実抽出物が３０重量％を超える場合には、変色、変臭及び剤形の粘度安定性において問題があり得る。
前記羅列された成分が前記含有量の範囲内に含まれる場合、最も優れた保湿、皮膚バリア強化、美白、しわ改善、及び皮膚弾力改善効果を得ることができる。
【００３０】
一態様において、本発明は、前記マイクロカプセルを含む化粧料組成物である。前記組成物は、保湿用、皮膚バリア強化用、美白用、しわ改善用または皮膚弾力改善用であり得る。
【００３１】
本明細書において、皮膚バリア強化とは、皮膚角質細胞の分化を促進して皮膚の最外殻層を強化することにより皮膚状態を改善することを意味することができる。
【００３２】
一態様において、前記組成物は、ケラチン１、ケラチン５、ケラチン１０、ケラチン１４、フィラグリン、ロリクリン（ｌｏｒｉｃｒｉｎ）、エラスチン、コラーゲンなどの合成を促進することができる。
【００３３】
一態様において、前記化粧料組成物内のマイクロカプセルの含有量は、０．０００１〜３０重量％ており、好ましくは０．００１〜２０重量％、最も好ましくは０．０１〜１０重量％であり得る。
【００３４】
化粧料組成物内のマイクロカプセルの含有量が０．０００１重量％未満である場合には、効果が微々たるものであり、化粧料組成物内のマイクロカプセルの含有量が３０重量％を超える場合には、組成物内のカプセルの分散度が低下し、化粧料組成物としての粘度を失うおそれがある。
【００３５】
本明細書において、前記有効成分を最適の含有量で配合し、この有効成分が封入されたマイクロカプセルを「ＣｅｌｌＡｃｔｉｖｅ  Ｃｏｄｅ」という。また、これを含む組成物を用いて様々な剤形、例えば、トナー、アンプル、セラム、アイクリーム、栄養クリーム及びローションなどに製造することができる。前記有効成分をマイクロカプセル内に封入させることをスマートカプセル化という。また、前記有効成分が封入されたマイクロカプセル（スマートカプセル）を含む組成物を標的細胞へ正確に伝達する技術を「ＣｅｌｌＡｃｔｉｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」という。
以下、製造例と実施例によって本発明を説明する。下記製造例と実施例は、本発明を説明するためのもので、本発明の権利範囲を限定するものではない。
［製造例］
［製造例１］ペプチドの製造
【００３６】
前記表１の配列番号１〜３のペプチドは、自動化合成器（ＰｅｐｔｒＥｘ−Ｒ４８、ＰＥＰＴＲＯＮ社製、大田、韓国）を用いて、ＦＭＯＣ固相方法（ＦＭＯＣ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｍｅｔｈｏｄ）で合成した。合成されたペプチドは、ＲＰカラム（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ  ｃａｐｃｅｌｌ  ｐａｋ）を用いた逆相高速液体クロマトグラフィー（ｒｅｖｅｒｓｅ−ｐｈａｓｅ  ＨＰＬＣ）（Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＬＣ−２０ＡＢ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製、日本）で精製および分析し、質量分析計（ＨＰ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＬＣ／ＭＳＤ、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ社製、Ｒｏｓｅｖｉｌｌｅ、アメリカ）を用いて同定した。
［製造例２］マイクロカプセルの製造
［製造例２−１］ペプチド未付着マイクロカプセルの製造
【００３７】
別途の溶解槽に脂質濃縮部（セラミド、コレステロール、水素化レシチン）を投入し、７０℃に加温して溶解させ、別途の溶解槽に親水性生理活性物質部（パンテノール、ラフィノース、ナイアシンアミド、チャ葉水）を投入し、４５℃に加温して溶解させて準備した。そして、脂質安定化部を有する溶解槽に、前記準備した脂質濃縮部を投入し、５０℃に維持しながら、攪拌機（Ａｇｉｔａｔｏｒ）を用いて１，５００ｒｐｍの速度で５分間攪拌し、ここに親水性生理活性物質部を投入し、攪拌機（Ａｇｉｔａｔｏｒ）を用いて１，５００ｒｐｍの速度で５分間撹拌して均一化させることにより、過量の親水性活性成分をバルキー（Ｂｕｌｋｙ）に均一化させた第１濃縮相を準備した。前記第１濃縮相を５０℃の温度に維持しつつ、攪拌機（Ａｇｉｔａｔｏｒ）を用いて低速の５００ｒｐｍで１時間攪拌して前記第１濃縮相を十分に水和（Ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）させた。前記水和された第１濃縮相を５０℃で高圧型乳化機に投入して９，０００ｂａｒの圧力で２回処理し、過量の親水性生理活性物質が最内相の水相及び脂質二重層（Ｂｉｌａｙｅｒ）の間に形成された水相に位置しながら、ナノサイズに濃縮カプセル化して第２濃縮相を形成した。これを２８℃まで攪拌機（Ａｇｉｔａｔｏｒ）で５００ｒｐｍの速度にて徐々に攪拌しながら冷却させて安定化することにより、ペプチド未結合状態のマイクロカプセルを製造した。製造されたマイクロカプセルの直径は約０．２μｍであった。
［製造例２−２］ペプチド付着マイクロカプセルの製造
製造例１のペプチドを、製造例２−１で製造したマイクロカプセルに付着させた。
【００３８】
ペプチドのＮ末端とペプチド未結合状態のマイクロカプセル表面のカルボキシル基とを連結してマイクロカプセルの表面に製造例１のペプチドをそれぞれ付着させた。具体的には、ペプチド未結合状態のマイクロカプセルを、ＭＥＳ（２−（Ｎ−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）バッファサリン（ＭＥＳ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ、ｐＨ５．５）上で再懸濁させ、ＥＤＡＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）及びＮＨＳ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）と一緒に約１時間反応させた。その後、マイクロカプセルを約１５０００ｒｐｍで１時間ほど遠心分離してＥＤＡＣとＮＨＳを除去することにより、ペプチド未結合マイクロカプセルの表面を活性化させた。その後、約１００ｍｌのＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）にマイクロカプセルを浮遊させた後、室温で約０．１ｇの配列番号１のペプチドとマイクロカプセルとを反応させた。その後、ＰＢＳバッファで洗浄することにより、未反応ペプチドは除去した。配列番号２および３のペプチドも、上記と同様の方法で、試薬の投与量を調節して、ペプチドが連結されているマイクロカプセルを製造した。マイクロカプセル上にペプチドが付着したか否かは、Ｋａｉｓｅｒ  ｔｅｓｔで確認した。また、走査型電子顕微鏡（ＪＳＭ−７１００Ｆ）を用いて、マイクロカプセル表面上のペプチドの密度を測定し、およそ２ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２の密度を示した。
【００３９】
配列番号１のペプチドが連結されているマイクロカプセルはカプセル１とし、配列番号２のペプチドが連結されているマイクロカプセルはカプセル２とし、配列番号３のペプチドが連結されているマイクロカプセルはカプセル３とする。
［製造例３］マイクロカプセル上のペプチド密度の調整
【００４０】
製造例２と同様にマイクロカプセルを製造するが、ペプチドの投与量を調節することにより、マイクロカプセル上のペプチド密度を調節した。密度によって、実験群を次のように分けた。
【００４１】
【表２】
0006946565.tif 000003
［実施例］
［実施例１］細胞毒性テスト
【００４２】
Ｂ１６メラノーマ細胞（Ｂ１６  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌ）にカプセル１〜３それぞれを１０μＭずつ処理し、細胞生存率を確認した。対照群としては、コウジ酸とアルブチンを処理した。その結果、本発明のカプセルを処理した場合に細胞生存率がほとんど変化しないため、細胞毒性がないことを確認することができた。
［実施例２］標的細胞との結合選択度（ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）テスト
【００４３】
カプセル１〜３それぞれが標的細胞以外に他の細胞とも結合するか否かを確認するために、さまざまな種類の細胞との結合有無を確認してみた。その結果、カプセル１〜３それぞれは、それぞれの標的細胞以外の細胞とはほとんど結合しないことを確認することができた。
［実施例２−１］カプセル１
【００４４】
カプセル１の細胞との結合力を蛍光免疫法によってフローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、ＦＡＣＳ）を用いて確認した。使用された細胞は、線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）、ケラチン細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）、リンパ球（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）、単球（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ）、メラニン細胞（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ）、樹枝状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ）及び皮膚ニューロン（ｓｋｉｎ  ｎｅｕｒｏｎ）であった。測定の結果、カプセル１と標的細胞である線維芽細胞との結合率は約７５％を示したのに対し、標的細胞以外の細胞との結合力は著しく低いことを確認した（図１ａ）。
［実施例２−２］カプセル２
【００４５】
カプセル２に対しても、実施例２−１と同様にして実験を行った。その結果、カプセル２は、標的細胞であるメラニン細胞とは約７０％の結合力を示すが、これに対し、他の細胞との結合率は著しく低いことを確認することができた（図１ｂ）。
［実施例２−３］カプセル３
【００４６】
カプセル３に対しても、実施例２−３と同様にして実験を行った。その結果、カプセル３は、標的細胞であるケラチン細胞との結合率は約８５％であるが、これに対し、他の細胞との結合率は著しく低いことを確認することができた（図１ｃ）。
［実施例３］ペプチド連結されているマイクロカプセルの抗老化効果（カプセル１−３）
［実施例３−１］線維芽細胞とカプセルとの結合力（ペプチドの有無による結合力の比較）
【００４７】
カプセルの表面にペプチドが連結されているマイクロカプセルと、カプセルの表面にペプチドが連結されていないマイクロカプセルの線維芽細胞との結合力及び有効成分の吸収力を比較した。
【００４８】
カプセル１を４℃で標的細胞と一緒に１時間培養して結合プロセスを遅延させた後、カプセルの表面にペプチドが連結されているマイクロカプセルと、カプセルの表面にペプチドが連結されていないマイクロカプセルの線維芽細胞との結合力を測定した。カプセル１の線維芽細胞との結合力は、ペプチドが連結されていないマイクロカプセルの結合力に比べて約４倍程度優れている。
［実施例３−２］コラーゲン及びエラスチン生成力の比較
カプセルの表面にペプチドが連結されているマイクロカプセルを線維芽細胞と反応させ、エラスチンとコラーゲンの生成量を観察した。
【００４９】
ペプチドが連結されていないカプセルを使用した場合には、コラーゲン生成量が微々たるものであるが、これに対し、ペプチドが連結されているカプセル１を使用した場合には、ペプチドが連結されていないカプセルに比べてコラーゲンタイプ１と３の生成量が約１．７倍以上増加した（図２ａ、図２ｂ）。
【００５０】
エラスチン生成量は、カプセル反応後の７日経過時に、ペプチドが連結されているカプセル１を使用した場合が、ペプチド連結されていないカプセルを使用した場合に比べて、最大９倍以上のエラスチン生成量を示した（図２ｃ）。
［実施例３−３］皮膚しわ改善パネルテスト
【００５１】
カプセル１が総重量に対して３０ｗｔ％で含まれているアンプルを製造し、皮膚疾患のない３５〜６５歳の女性２１人それぞれに対して、前記アンプルを１日２回ずつ顔の全面にまんべんなく２８日間塗り、目元しわ改善程度を確認した。その結果、おおむね約１０％の目元しわ改善効果を確認することができた（図３）。
［実施例４］ペプチドが連結されているマイクロカプセルの美白効果（カプセル２−３）
［実施例４−１］メラニン細胞とα−ＭＳＨとの結合妨害能
【００５２】
カプセルの表面にペプチドが連結されているマイクロカプセル（カプセル２）と、カプセルの表面に連結されていないマイクロカプセルを１０μＭずつ処理し、メラニン細胞とα−メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）との結合力を測定した。その結果、カプセル２を使用した場合に、メラニン細胞とα−ＭＳＨとの結合力が９５％以上減少することが分かった（図４ａ）。
［実施例４−２］メラニン合成阻害能
【００５３】
カプセルの表面にペプチドが連結されているマイクロカプセルと、カプセルの表面にペプチドが連結されていないマイクロカプセルを１０μＭずつ処理し、メラニンの合成量を比較した。その結果、カプセル２を投与した場合に、メラニン細胞からのメラニンの生成量が大幅に減少することが分かった（図４ｂ）。
［実施例４−３］皮膚美白効果パネルテスト
【００５４】
皮膚疾患のない３５〜５５歳の女性２１人に対して、カプセル２が１５％含まれているトナーを顔の全面にまんべんなく１日２回１４日間皮膚に塗布し、美白効果を確認した。その結果、カプセル２を含むトナーを塗った場合、著しく改善された美白効果を確認することができた（図５）。
［実施例５］ペプチドが連結されているマイクロカプセルの皮膚バリア改善効果（カプセル３−３）
［実施例５−１］ケラチン１およびケラチン５の発現増進効果
【００５５】
ペプチドが連結されているカプセル３の皮膚バリア改善効果を調べるために、ケラチンの発現増進効果を調べた。カプセルの表面にペプチドが連結されているマイクロカプセルと、カプセルの表面にペプチドが連結されていないマイクロカプセルを１０μＭずつ処理し、これらの因子の発現程度を確認した。その結果、カプセル３を使用した場合は、ペプチドが連結されていないカプセルを使用した場合に比べてケラチン１およびケラチン５の発現量が２倍程度高かった（順次図６ａ、図６ｂ）。
［実施例５−２］フィラグリン合成増進効果
【００５６】
実施例５−１と同様にしてカプセルを処理し、フィラグリン合成効果を確認した。その結果、カプセル３を使用した場合は、ペプチドが連結されていないカプセルを使用した場合と比較して、約５倍のフィラグリン発現量を確認することができた（図６ｃ）。
［実施例６］皮膚バリア強化効果パネルテスト
【００５７】
皮膚疾患のない３５〜５５歳の女性２０人に対して、カプセル３が２０％含まれている栄養クリームを顔の全面にまんべんなく１日２回ずつ１４日間皮膚に塗布し、皮膚真皮緻密度と皮膚厚みを確認した。その結果、カプセル３を含む栄養クリームを塗った場合には、真皮緻密度及び皮膚厚みが著しく改善され、皮膚バリア改善効果を確認することができた（図７）。
［実施例７］ペプチドの密度による効果差
【００５８】
表２に記載されている実験群に対して、実施例３〜６の実験を同様に行った。カプセル１−３、２−３、３−３を含む場合（密度が２ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２である場合）の効果を１０とし、各実験群の結果はカプセル１−３、２−３、３−３に対する相対的な値で表示した。
表３は実施例３の実験に対応した実験結果値を記録したものであり、表４は実施例４、表５は実施例６に対応した実験結果の値を記録したものである。
【００５９】
【表３】
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【００６０】
【表４】
0006946565.tif 000005
【００６１】
【表５】
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その結果、ペプチドの密度が０．１〜１０ｐｅｐｔｉｄｅｓ／μｍ２の範囲を外れた場合、皮膚状態促進効果が微々たるものであることが分かった。
［剤形例］
［剤形例１］トナー（ブライトニング用）
【００６２】
【表６】
0006946565.tif 000007
［剤形例２］アンプル（老化改善用）
【００６３】
【表７】
0006946565.tif 000008
［剤形例３］セラム（老化改善用）
【００６４】
【表８】
0006946565.tif 000009
［剤形例４］アイクリーム（老化改善用）
【００６５】
【表９】
0006946565.tif 000010
［剤形例５］ローション（弾力用）
【００６６】
【表１０】
0006946565.tif 000011
［剤形例６］栄養クリーム（弾力用）
【００６７】
【表１１】
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【配列表フリーテキスト】
【００６８】
配列番号１（Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ）は、線維芽細胞をターゲットとするペプチドの配列であって、配列番号１のペプチドは、線維芽細胞成長因子受容体と結合するものであり得る。
【００６９】
配列番号２（Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ）は、メラニン細胞をターゲットとするペプチドの配列であって、配列番号２のペプチドは、メラノコルチン受容体と結合するものであり得る。
【００７０】
配列番号３（Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ）は、ケラチン細胞をターゲットとするペプチドの配列であって、配列番号３のペプチドは、インテグリン受容体、特にインテグリン受容体のベータ１ファミリーと結合するものであり得る。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図６ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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