(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株およびラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株からなる群の中から選択されることを特徴とする、終末糖化産物（ＡＧＥｓ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の低減活性を有する新菌株。
【請求項２】
前記終末糖化産物（ＡＧＥｓ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）は、非蛍光性の終末糖化産物であることを特徴とする、請求項１に記載の終末糖化産物の低減活性を有する新菌株。
【請求項３】
請求項１に記載の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする、終末糖化産物の低減活性を有する食品組成物。
【請求項４】
前記組成物は、終末糖化産物により引き起こされる糖尿病、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患、糖尿病性網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｃａｔａｒａｃｔ）または糖尿病性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）を予防または改善することを特徴とする、請求項３に記載の食品組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする、終末糖化産物関連疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
【請求項６】
前記疾患は、糖尿病、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患、糖尿病性網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｃａｔａｒａｃｔ）および糖尿病性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）からなる群の中から選択されることを特徴とする、請求項５に記載の終末糖化産物関連疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする、整腸用組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする、プロバイオティクス組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする、飼料用組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする、発酵製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、終末糖化産物の低減活性を有する新規な菌株およびその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質の非酵素的糖化反応（Ｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）とは、タンパク質のリジン残基などのアミノ酸グループと還元糖が酵素の作用なしに起こるメイラード反応（Ｍａｉｌｌａｒｄ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）であり、この反応の結果として終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＡＧＥｓ）が形成される。タンパク質の非酵素的糖化反応は、タンパク質の遊離アミノ基であるリジン（ｌｙｓｉｎｅ）や、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ）と還元糖のカルボニル基（ｃａｒｂｏｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ）が反応して初期糖化反応生成物であるシッフ塩基（Ｓｈｃｉｆｆ  ｂａｓｅ）を形成し、この時に形成された化合物が継続的に縮合、再転位、酸化、分裂、環化などの一連の複雑な反応を通じて褐色の化合物（ｍｅｌａｎｏｉｄｉｎｅ）を作って、総体的な概念の不可逆的な終末糖化産物を形成する反応である。
【０００３】
終末糖化産物は、不可逆的な反応産物であるため、一旦生成されると、血糖が正常に回復しても分解されず、タンパク質の生存期間の間組織に蓄積されて組織の構造と機能を非正常的に変化させる。比較的に半減期の長いコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）は、容易に糖化反応が起こり、既に形成された終末糖化産物とコラーゲンの交差結合（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ）を形成して体内の構造およびその他のタンパク質結合組織などの非正常的な物理化学的な変化を招く。また、様々な細胞タイプに対する特異的受容体により認識されて、糖尿病性網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｃａｔａｒａｃｔ）、糖尿病性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）などのような糖尿合併症と糖尿、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患および老化を引き起こす原因になる。
【０００４】
したがって、このような終末糖化産物の生成を抑制しようとする研究が行われており、代表的な合成医薬品としてアミノグアニジンがあり、これは求核性ヒドラジン（ｈｙｄｒａｚｉｎｅ）であって、縮合反応の産物と結合して終末糖化産物の生成を抑制することによって合併症に進展するのを防止する。また、アミノグアニジンは、糖尿合併症の予防および治療に最も有望な医薬品として第３相臨床試験まで進行したが、長期間投与時に毒性が誘発されるという問題があるため、より安全な薬剤の開発が必要な実情である。
【０００５】
そこで、人体副作用がなく、安定性を確保し、且つ、終末糖化産物を抑制および低減できる新しい材料の開発が必要な実情である。
【０００６】
このことから、本願発明は終末糖化産物を優れて低減できる新規な菌株を分離および同定しその活性を確認して、本発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、ラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株およびラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株からなる群の中から選択されることを特徴とする、終末糖化産物（ＡＧＥｓ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の低減活性を有する新菌株を提供することにある。
【０００８】
本発明の他の目的は、本発明の前記新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、終末糖化産物の低減活性を有する食品組成物を提供することにある。
本発明のまた他の目的は、本発明の前記新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、終末糖化産物関連疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供することにある。
【０００９】
本発明のまた他の目的は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、整腸用組成物を提供することにある。
【００１０】
本発明のまた他の目的は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、プロバイオティクス組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明のまた他の目的は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、飼料用組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明のまた他の目的は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、発酵製品を提供することにある。
【００１３】
さらに、本発明のまた他の目的は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を用いた終末糖化産物の抑制方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株およびラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株からなる群の中から選択されることを特徴とする、終末糖化産物（ＡＧＥｓ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の低減活性を有する新菌株を提供する。
【００１５】
本発明の一実施例において、前記終末糖化産物（ＡＧＥｓ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）は、非蛍光性の終末糖化産物であってもよい。
【００１６】
また、本発明は、前記本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、終末糖化産物の低減活性を有する食品組成物を提供する。
【００１７】
本発明の一実施例において、前記組成物は、終末糖化産物により引き起こされる糖尿病、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患、糖尿病性網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｃａｔａｒａｃｔ）または糖尿病性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）を予防または改善することができる。
【００１８】
また、本発明は、前記本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、終末糖化産物関連疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００１９】
本発明の一実施例において、前記疾患は、糖尿病、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患、糖尿病性網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｃａｔａｒａｃｔ）および糖尿病性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）からなる群の中から選択されるものであってもよい。
【００２０】
また、本発明は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、整腸用組成物を提供する。
【００２１】
なお、本発明は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、プロバイオティクス組成物を提供する。
【００２２】
また、本発明は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、飼料用組成物を提供する。
【００２３】
なお、本発明は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む、発酵製品を提供する。
【００２４】
さらに、本発明は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を用いた終末糖化産物の抑制方法を提供する。
【発明の効果】
【００２５】
本発明は、新規なラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株およびラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株を分離および同定し、これらの菌株の新規な用途を糾明したものであり、本発明において分離および同定した前記菌株、その破砕物またはその培養物は、終末糖化産物を効果的に低減できる活性があるため、終末糖化産物により引き起こされる疾患の予防または治療用の医薬品および機能性食品の製造に使用できるという効果があり、さらには、整腸用、プロバイオティクス、飼料用の組成物および発酵製品の製造にも使用できるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本発明の一実施例において対照群として用いた市販中のプロバイオティクス製品を示すものである。
【図２】本発明のラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０菌株と他の乳酸菌を対象にＣＭＬ低減活性を比較分析した結果である。
【図３】本発明のバチルス・サブティリスＫＦ１１菌株と他の乳酸菌を対象にＣＭＬ低減活性を比較分析した結果である。
【図４】本発明のラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６菌株と他の乳酸菌を対象にＣＭＬ低減活性を比較分析した結果である。
【図５】本発明のラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８菌株と他の乳酸菌を対象にＣＭＬ低減活性を比較分析した結果である。
【図６】市販中のプロバイオティクス製品のＣＭＬ低減活性を分析した結果である。
【図７】ＣＭＬ標準形式と本発明において分離および同定した新菌株に対するＣＭＬ低減活性を比較分析した結果である。
【図８】ＣＭＬ高含有食品を摂取させたマウスを対象に本発明の新菌株の摂取に応じた血中ＣＭＬ低減効果を分析した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、新規なラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株およびラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株を分離および同定し、これらの終末糖化産物の生成抑制活性を最初に糾明したことに特徴がある。
【００２８】
終末糖化産物は、不可逆的な反応産物であって、一旦生成されると、血糖が正常に回復しても分解されず、タンパク質の生存期間の間組織に蓄積されて組織の構造と機能を非正常的に変化させて、糖尿病、糖尿合併症、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患または老化のような各種の疾患を誘発させる原因になる。したがって、終末糖化産物の生成を抑制または減少させることにより、終末糖化産物に由来する各種の疾患を予防、改善または治療することができる。
【００２９】
一方、終末糖化産物の種類としてはペントシジン（ｐｅｎｔｏｓｉｄｉｎｅ）やアルグピリミジン（ａｒｇｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）のような蛍光性物質と、Ｎ−カルボキシメチルリジン（Ｎ−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｌｙｓｉｎｅ、ＣＭＬ）、Ｎ−カルボキシエチルリジン（Ｎ−ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ  ｌｙｓｉｎｅ、ＣＥＬ）などのような非蛍光性物質があり、今までの研究はペントシジン（ｐｅｎｔｏｓｉｄｉｎｅ）やアルグピリミジン（ａｒｇｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）のような蛍光性物質の終末糖化産物に関するものが大半であった。
【００３０】
そこで、本発明者らは、非蛍光性の終末糖化産物を効果的に抑制できる新しい材料を発掘するために研究している間、非蛍光性の終末糖化産物の生成を効果的に抑制できる新規な菌株を分離および同定し、これらの菌株の非蛍光性の終末糖化産物の抑制活性を確認した。
【００３１】
本発明において分離および同定した終末糖化産物の生成抑制活性を有する新菌株として、本発明者らは、ラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０菌株を分離および同定し、それを国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に寄託して寄託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐが与えられ、バチルス・サブティリスＫＦ１１菌株を分離および同定し、国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１７年２月２４日付で寄託して寄託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐが与えられ、ラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６菌株を分離および同定し、それを国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１７年３月２４日付で寄託して寄託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐが与えられ、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８菌株を分離および同定し、それを国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１７年３月２４日付で寄託して寄託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐが与えられた。
【００３２】
さらに、本発明者らは、前記本発明において分離および同定した新菌株の終末糖化産物の低減活性を分析するために、終末糖化産物を含有した試料に本発明の新菌株と比較菌株を各々処理した後、培養液内の終末糖化産物の含量を測定した結果、本発明の新菌株が従来の同一属に属する菌株および市販中のプロバイオティクス製品に比べて遥かに優れた終末糖化産物の低減効果を示すことが明らかになった。
【００３３】
それのみならず、本発明者らは、動物実験を通じて前記菌株の終末糖化産物の低減効果を再検証し、非蛍光性の終末糖化産物のうちの一つであるＣＭＬを高含有した食品を製造し、６週齢の雄マウスに食餌するようにし、この時、本発明において同定した新菌株を摂取させた群と新菌株を摂取させていない群を対象に血中ＣＭＬ濃度を測定した。
【００３４】
その結果、本発明の新菌株であるラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株またはラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株を各々摂取した群は、これらの新菌株を摂取していない菌株に比べて、血中ＣＭＬの含量が遥かに低くなることを確認した。
【００３５】
そこで、本発明者らは、本発明において分離および同定した前記新菌株を終末糖化産物の低減を目的とする様々な製品の製造に有用に使用できることが分かった。
【００３６】
したがって、本発明は、新菌株であるラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株またはラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株を提供することができ、また、本発明は、前記本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を有効成分として含む終末糖化産物の低減活性を有する食品組成物を提供することができる。
【００３７】
本発明において、前記終末糖化産物は非蛍光性の終末糖化産物であり、前記非蛍光性の終末糖化産物はＮ−カルボキシメチルリジン（Ｎ−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｌｙｓｉｎｅ、ＣＭＬ）またはＮ−カルボキシエチルリジン（Ｎ−ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ  ｌｙｓｉｎｅ、ＣＥＬ）であってもよい。
【００３８】
本発明の食品組成物は、機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｆｏｏｄ）、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、健康食品（ｈｅａｌｔｈ  ｆｏｏｄ）および食品添加剤（ｆｏｏｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）などの全ての形態を含む。前記類型の食品組成物は、当業界で公知の通常的な方法により様々な形態に製造することができる。例えば、健康食品としては、本発明の新菌株そのもの、その破砕物および前記菌株培養物グループのうちの一つ以上をお茶、ジュースおよびドリンクの形態に製造して飲用するようにするか、または顆粒化、カプセル化および粉末化して摂取するようにしてもよい。また、本発明の新菌株、その破砕物および培養物グループのうち一つ以上を終末糖化産物の低減効果があると知られた公知の物質または活性成分と共に混合して組成物の形態に製造することができる。また、機能性食品としては、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実およびその加工食品（例えば、果物の缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレードなど）、魚類、肉類およびその加工食品（例えば、ハム、ソーセージ、コーンビーフなど）、パン類および麺類（例えば、ウドン、ソバ、ラーメン、スパゲティ、マカロニなど）、果汁、各種のドリンク、クッキー、飴、乳製品（例えば、バター、チーズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種の調味料（例えば、味噌、醤油、ソースなど）などに本発明の新菌株、その破砕物および培養物グループのうち一つ以上を添加して製造することができる。
【００３９】
本発明の食品組成物中における前記本発明の新菌株、その破砕物および培養物などの好ましい含有量は、これに限定されるものではないが、好ましくは、最終的に製造された食品中に０．０１〜５０重量％である。また、本発明の新菌株、その破砕物および培養物からなる群より選択された一つ以上を有効成分として食品添加剤の形態で用いるためには、粉末または濃縮液の形態に製造して用いることができる。
【００４０】
また、本発明は、本発明の新菌株であるラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０（受託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ）菌株、バチルス・サブティリスＫＦ１１（受託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ）菌株、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８（受託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ）菌株またはラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６（受託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ）菌株；その破砕物；またはその培養物；を有効成分として含む、終末糖化産物により引き起こされる疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供することができ、前記疾患は、これらに限定されるものではないが、糖尿病、慢性腎臓疾患、心臓疾患、血管疾患、糖尿病性網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｃａｔａｒａｃｔ）および糖尿病性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）であってもよい。
【００４１】
前記糖尿病性網膜症に対し、報告された研究結果によれば、糖尿病性網膜症患者と正常な人とのＣＭＬレベルを比較した結果、糖尿病性網膜症の場合、ＣＭＬの発現レベルが正常に比べて増加していることが確認され、ＣＭＬが糖尿病性網膜症の治療剤ターゲットになることができ、ＣＭＬを抑制すれば糖尿病性網膜症を治療できることが報告されている。
【００４２】
また、糖尿病性白内障患者の場合、非糖尿病性白内障患者よりＣＭＬレベルが増加していることが知られており、ＣＭＬが糖尿病性白内障の主な原因であることが明らかになっており、糖尿病性腎症の誘発時にもＣＭＬレベルが増加しており、ＣＭＬが糖尿病性腎症の誘発要因であることが知られている。
【００４３】
また、慢性腎臓疾患が誘発されると、正常に比べてＣＭＬレベルが増加していることが明らかになっており、増加したＣＭＬレベルは慢性腎臓疾患の発病有無を判別できる因子として活用することができ、その抑制因子は慢性腎臓疾患の治療剤になり得ることが知られている。
【００４４】
それのみならず、ＣＭＬは糖尿病性神経障害の危険因子であることが知られており、糖尿病性神経障害患者の場合、正常患者に比べてＣＭＬレベルが遥かに増加しているという研究結果が報告されている。
【００４５】
血管疾患の場合も、血管疾患の発病時、ＣＭＬレベルが増加していて血管疾患の危険因子であることが知られており、ＣＭＬの抑制は血管疾患を予防または治療できることが知られており、ＣＭＬが心臓疾患と糖尿の主な病因として作用し、これらの疾患が誘発された場合にＣＭＬレベルが増加していることも知られている。
【００４６】
したがって、ＣＭＬのような非蛍光性の終末糖化産物を抑制できるのであれば、このような疾患を治療することができる。
【００４７】
前記薬学的組成物には、薬学的に許容可能な塩を単独で含有するか、または一つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤をさらに含有することができる。薬学的に許容される担体としては、例えば、経口投与用担体または非経口投与用担体をさらに含むことができる。経口投与用担体としては、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸などを含むことができる。また、非経口投与用担体としては、水、好適なオイル、食塩水、水性グルコースおよびグリコールなどを含むことができ、安定化剤および保存剤をさらに含むことができる。好適な安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような抗酸化剤が挙げられる。好適な保存剤としては、ベンザルコニウムクロリド、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノールが挙げられる。その他の薬学的に許容される担体としては、次の文献に記載されているものを参考することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９ｔｈ  ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９５）。
【００４８】
本発明の薬学的組成物は、ヒトをはじめとする哺乳動物にいかなる方法でも投与することができる。例えば、経口または非経口的に投与することができる。 非経口的な投与方法は、これらに限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下または直腸内の投与であってもよい。好ましくは、本発明の薬学的組成物は、経口または経皮投与できる。
【００４９】
本発明の薬学的組成物は、上述したような投与経路に応じて、経口投与用または非経口投与用の製剤に剤形化することができる。
【００５０】
経口投与用製剤の場合、本発明の組成物は、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液などに当業界で公知の方法を利用して剤形化できる。例えば、経口用製剤は、活性成分を固体賦形剤と配合した後にそれを粉砕し、好適な補助剤を添加した後に顆粒混合物に加工することによって錠剤または糖衣錠剤を得ることができる。好適な賦形剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトールおよびマルチトールなどを含む糖類と、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプンおよびジャガイモデンプンなどを含むデンプン類、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチル−セルロースなどを含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなどのような充填剤が含まれることができる。また、場合によっては、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはナトリウムアルギネートなどを崩壊剤として添加することができる。さらに、本発明の薬学的組成物は、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤および防腐剤などをさらに含むことができる。
【００５１】
非経口投与用製剤の場合、注射剤、クリーム剤、ローション剤、外用軟膏剤、オイル剤、保湿剤、ゲル剤、エアロゾルおよび鼻腔吸入剤の形態に当業界で公知の方法により剤形化することができる。これらの剤形は、全ての製薬化学に一般に公知となった処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９７５．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １８０４２、Ｃｈａｐｔｅｒ  ８７：Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒ）に記載されている。
【００５２】
本発明の新菌株そのもの、その破砕物および前記菌株培養物などの総有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ）で患者に投与されてもよく、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によって投与されてもよい。本発明の薬学的組成物は、疾患の程度に応じて、有効成分の含量を異にすることができる。好ましくは、本発明の菌株、その破砕物および培養物の好ましい全体容量は、１日当たりに患者体重１ｋｇ当たり約０．０１ｕｇ〜１，０００ｍｇ、最も好ましくは、０．１ｕｇ〜１００ｍｇであってもよい。しかし、前記本発明の菌株そのもの、その破砕物および前記菌株培養物などの容量は、薬学的組成物の投与経路および治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌および排泄率などのような様々な要因を考慮して患者に対する有効投与量が決定されるため、このような点を考慮する時、当分野における通常の知識を有した者であれば、前記本発明の菌株、その破砕物および培養物を免疫機能増進剤としての特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができるであろう。本発明に係る薬学的組成物は、本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路および投与方法に特に限定されるものではない。
【００５３】
また、本発明は、新菌株、その破砕物および培養物からなる群より選択された一つ以上を有効成分として含む、整腸用、プロバイオティクス、飼料用の組成物を提供する。本発明の新菌株は、終末糖化産物の低減活性がある菌株であって、ヒトおよび動物の健康増進のための用途、すなわち、整腸用、プロバイオティクスまたは飼料用の組成物として用いられることができる。前記組成物は、前記菌株そのもの、その破砕物および前記菌株培養物などを有効成分として含むことができ、賦形剤または担体をさらに含むことができる。前記組成物は、液体培地において培養した培養液そのもの、前記培養液を濾過または遠心分離して菌株を除去した濾液（遠心分離した上清）などを含む。組成物内の前記本発明の菌株の含量は、組成物の用途および剤形に応じて異なる。
【００５４】
本発明に係る整腸用またはプロバイオティクスの組成物は、様々な剤形と方法により製造および投与できる。例えば、本発明の新菌株、その破砕物およびその培養物を薬剤学的分野で通常用いられる担体および香料と混合して、錠剤（ｔａｂｌｅｔ）、トローチ（ｔｒｏｃｈｅ）、カプセル（ｃａｐｓｕｌｅ）、エリキシル（ｅｌｉｘｉｒ）、シロップ（ｓｙｒｕｐ）、散剤（ｐｏｗｄｅｒ）、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）または顆粒剤（ｇｒａｎｕｌｅ）などの形態に製造および投与できる。
【００５５】
担体としては、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤などを用いることができる。投与方式は、経口、非経口または塗布法を用いることができるが、経口投与することが好ましい。また、投与容量は、体内での活性成分の吸収度、不活性率および排泄速度、被投与者の年齢、性別、状態などに応じて適切に選択することができる。また、本発明に係る飼料用組成物は、発酵飼料、配合飼料、ペレット形態およびサイレージ（ｓｉｌａｇｅ）などの形態に製造できる。
【００５６】
前記発酵飼料は、本発明の新菌株と種々の微生物菌または酵素を添加することによって有機物を発酵させて製造することができ、前記配合飼料は、種々の一般飼料と本発明の菌株を混合して製造することができる。ペレット形態の飼料は、前記発酵飼料または配合飼料をペレット機で剤形化して製造することができ、サイレージは、青刈飼料を本発明に係る菌株を発酵させることにより製造することができる。
【００５７】
また、本発明の新菌株、その破砕物および培養物からなる群より選択された一つ以上を有効成分として含む発酵製品を提供する。発酵製品の製造方法は、通常、原料の準備、乳酸菌の添加、発酵、完成された製品の回収などの過程からなる。原料の準備ステップは、発酵対象になる材料を準備し、発酵がよく行われるように発酵条件を準備するステップである。乳酸菌の添加は発酵対象の量に応じて適量の菌を添加することであり、本発明においては本発明の新菌株を用いることを特徴とする。発酵は、通常の発酵菌の発酵条件に応じて行われ、好ましくは、３７℃〜４３℃で４〜１６８時間行われる。完成された製品の回収は、発酵物から不要な副産物や未発酵した材料を除去することから貯蔵、輸送を容易にするための全ての後処理過程および包装などを含む。前記方法により製造される発酵製品は好ましくは飲料であり、この飲料は、例えば、本発明の菌株を培養して乳酸発酵させたものに殺菌水を加えて薄め、糖分、香料などを加えた後に容器に充電した製品をいう。この飲料には一般に乳酸菌が生きている状態で含まれているため、飲用後に腸の中での整腸作用が期待できる。
【００５８】
さらに、本発明は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を用いた終末糖化産物の抑制方法を提供することができる。本発明に係る前記方法は本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を終末糖化産物が含まれた試料に処理するステップを含むことができ、この過程を通じて前記試料の終末糖化産物の含量を減少させることができる。
【００５９】
また、前記方法は、本発明の新菌株、その破砕物またはその培養物を、それを必要とする個体に投与するステップを含むことができ、前記個体は、ヒトを含む哺乳動物であってもよい。
【００６０】
本発明の一実施例においては、本発明の新菌株をマウスの食餌に含ませて摂取させることによって、前記マウス血清内の終末糖化産物の含量を減少させることができた。
【実施例】
【００６１】
以下、実施例を通じて本発明についてより詳しく説明する。これらの実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
【００６２】
＜実施例１＞
終末糖化産物の低減活性を有する新菌株の分離および同定
＜１−１＞新菌株ラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０の分離および同定
本発明者らは、終末糖化産物の低減活性を有する新しい菌株をキムチから分離するために次のような実験を行った。キムチを０．８５％生理食塩水に懸濁し、懸濁液の一部をＭＲＳ固体培地に塗抹した後に３７℃で培養した。培養後、形成されたコロニーを取ってＭＲＳ培地に画線培養して、汚染されていない純粋な単一コロニーを確保した。確保された菌株から１６Ｓ  ｒＤＮＡを分離してシークエンシング分析を行った。
【００６３】
シークエンシング分析の結果、前記菌株の１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列は既存のラクトコッカス・ラクチスＮＣＤＯ６０４（Ｔ）菌株と９９％の相同性を示しており、本願発明において同定した菌株がラクトコッカス・ラクチスに属する菌株であることが分かり、１６ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は配列番号１に示した。その後、分離した菌株はＭＲＳ培地を用いて培養し、この時、培養条件はｐＨ６．５±０．２、温度３７℃および４８時間静置培養させ、酸素要求性は通性嫌気性であり、凍結乾燥保存または細胞懸濁液の凍結によって菌株を保存させた。その後、本発明者らは、分離した菌株をラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＫＦ１４０に命名し、国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に寄託し、寄託番号ＫＣＣＭ１１６７３Ｐが与えられた。
【００６４】
＜１−２＞新菌株バチルス・サブティリスＫＦ１１菌株の分離および同定
終末糖化産物の低減活性を有する新しい菌株を味噌から分離するために次のような実験を行った。味噌を０．８５％生理食塩水に懸濁し、懸濁液の一部をＴＳＢ固体培地に塗抹した後に３７℃で培養した。培養後、形成されたコロニーを取ってＴＳＢ培地に画線培養して、汚染されていない純粋な単一コロニーを確保した。確保された菌株から１６Ｓ  ｒＤＮＡを分離してシークエンシング分析を行った。
【００６５】
シークエンシング分析の結果、前記菌株の１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列は既存のバチルス・サブティリスＫＣＴＣ１３４２９（Ｔ）菌株と９９％の相同性を示しており、本願発明において同定した菌株がバチルス・サブティリスに属する菌株であることが分かり、１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列は配列番号２に示した。その後、分離した菌株はＴＳＢ培地を用いて培養条件ｐＨ７．０±０．２、温度３７℃および２４時間攪拌して培養し、酸素要求性は通性嫌気性であり、凍結乾燥保存または細胞懸濁液の凍結によって菌株を保存させた。
【００６６】
その後、本発明者らは、分離した前記菌株をバチルス・サブティリスＫＦ１１に命名し、国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１７年２月２４日付で寄託し、寄託番号ＫＣＣＭ１１９８１Ｐが与えられた。
【００６７】
＜１−３＞ラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６菌株の分離および同定
キムチからラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６菌株を分離および同定し、伝統式で製造されたキムチを０．８５％生理食塩水に懸濁し、懸濁液の一部をＭＲＳ固体培地に塗抹した後に３７℃で培養した。培養後、形成されたコロニーを取ってＭＲＳ培地に画線培養して、汚染されていない純粋な単一コロニーを確保した。確保された菌株から１６Ｓ  ｒＤＮＡを分離してシークエンシング分析を行った。
【００６８】
分析の結果、前記菌株の１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列は既存のラクトバチルス・パラカゼイＡＴＣＣ２５３０２（Ｔ）と９９％の相同性を示しており、本願発明において同定した菌株がラクトバチルス・パラカゼイに属する菌株であることが分かり、分析された１６ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は配列番号３に示した。その後、分離した菌株はＭＲＳ培地を用いて培養し、この時、培養条件はｐＨ６．５±０．２、温度３７℃および４８時間静置培養させ、酸素要求性は通性嫌気性であり、凍結乾燥保存または細胞懸濁液の凍結によって菌株を保存させた。
【００６９】
その後、本発明者らは、分離した菌株をラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６に命名し、国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１７年０３月２４日付で寄託し、寄託番号ＫＣＣＭ１１９９８Ｐが与えられた。
【００７０】
＜１−４＞ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８菌株の分離および同定
終末糖化産物の低減活性を有するラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８菌株は伝統式の醤油から分離し、伝統式の醤油を０．８５％生理食塩水に懸濁し、懸濁液の一部をＭＲＳ固体培地に塗抹した後に３７℃で培養した。培養後、形成されたコロニーを取ってＭＲＳ培地に画線培養して、汚染されていない純粋な単一コロニーを確保した。確保された菌株から１６Ｓ  ｒＤＮＡを分離してシークエンシング分析を行った。
【００７１】
シークエンシング分析の結果、前記菌株の１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列は既存のラクトバチルス・ペントーサスＤＳＭ２０３１４（Ｔ）と９７％の相同性を示しており、本願発明において同定した菌株がラクトバチルス・ペントーサスに属する菌株であることが分かり、分析された１６ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は配列番号４に示した。その後、分離した菌株はＭＲＳ培地を用いて培養し、この時、培養条件はｐＨ６．５±０．２、温度３７℃および４８時間静置培養させ、酸素要求性は通性嫌気性であり、凍結乾燥保存または細胞懸濁液の凍結によって菌株を保存させた。
【００７２】
その後、本発明者らは、分離した菌株をラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８に命名し、国際微生物寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１７年０３月２４日付で寄託し、寄託番号ＫＣＣＭ１１９９７Ｐが与えられた。
【００７３】
＜実施例２＞
本発明の新菌株の終末糖化産物の低減効能の分析
本発明者らは、前記実施例１において分離および同定した４個の新菌株が各々終末糖化産物の低減効能があるか否かを分析するために、牛乳に含まれた終末糖化産物に対する低減活性の程度を次のような方法によって確認した。
【００７４】
＜２−１＞終末糖化産物含有食品の製造
本発明の新菌株が非蛍光性の終末糖化産物の一種類であるＣＭＬ（Ｎε−（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ）を低減させる活性があるか否かを分析するためにＣＭＬ含有食品を製造した。すなわち、牛乳の熱処理工程中に生成されるＣＭＬを低減するために乳タンパク質であるカゼインと乳糖であるラクトースを用い、ｓｏｄｉｕｍ  ｃａｓｅｉｎａｔｅとＤ−ｌａｃｔｏｓｅは（株）ＥＳ食品原料とＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから各々購入して用いた。牛乳内のカゼインとラクトースの比率を考慮して牛乳タンパク質（カゼイン）と糖（ラクトース）を１：７の比率で混ぜて１４０℃の温度で８０分間反応し、それを本発明の新菌株に対するＣＭＬ低減効能の評価に用いた。この時、カゼインとラクトースのメイラード反応によるＣＭＬ含量は８．２４ｕｇ／ｍＬとして確認された。
【００７５】
＜２−２＞ＣＭＬ低減活成を分析するために用いた菌株
本発明に係る新菌株のＣＭＬ低減効能を下記表１に記載された他の菌株および商用化されたプロバイオティクス製品を対照群にして分析を行った。下記表１の対照群として用いられた他の菌株としては韓国食品研究院の伝統食品微生物菌株銀行から購入したものを用い、プロバイオティクス製品としては市販中のものを購入して用い、プロバイオティクス製品は図１に示す。また、下記実験に用いられた菌株を培養するための培地はＤｉｆｃｏ社から購入し、乳酸菌株の培養のためにＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ  ＭＲＳ  ａｇａｒとＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ  ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈを用い、バチルス属菌株の培養培地としてＴＳＡ（ｔｒｙｐｔｉｃ  ｓｏｙ  ａｇａｒ）とＴＳＢ（ｔｒｙｐｔｉｃ  ｓｏｙ  ｂｒｏｔｈ）を用いた。乳酸菌およびバチルス菌のＣＭＬ低減のための本培養にはＭ９  ｍｉｎｉｍａｌ  ｍｅｄｉｕｍ（ＭＢ  ｃｅｌｌ）を用い、Ｍ９培地を製造する時、ｇｌｕｃｏｓｅ  ２ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ2  ０．０１５ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ4  ０．５ｇ／Ｌを添加して用いた。
【００７６】
【表１】
0006880307.tif 000002
【００７７】
＜２−３＞ＣＭＬ含量の分析
表１の乳酸菌およびプロバイオティクス製品をＣＭＬが含まれた培養液において２４時間本培養させた後、Ｎε−（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｌｙｓｉｎｅ（ＣＭＬ）の変化量をＣＭＬ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（ＣｉｒｃｕＬｅｘ、Ｉｎａ、Ｎａｇａｎｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。ＣＭＬ−ＢＳＡで事前コーティングされた９６ｗｅｌｌに上清または標準試料とａｎｔｉ−ＣＭＬ−ａｄｄｕｃｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙを添加して室温で１時間反応させた。洗浄バッファで４回洗浄した後、ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  １００μｌを添加して１時間反応させた後、洗浄バッファで４回洗浄し、基質含有溶液１００μｌを添加して２０分間光を遮断した条件下で反応させた後、停止液１００μｌを添加し、マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで吸光度を測定し、その結果を下記表に示す。この時、下記表２において、陰性対照群（ＣＯＮ；ｃｏｎｔｒｏｌ）は乳酸菌を全く添加していない前記＜２−１＞のメイラード反応で測定されたＣＭＬが８．２４ｕｇ／ｍＬ含量で含まれた群を用いたものであり、陰性対照群をＣＭＬ含量１００％に基準にして測定された結果である。
【００７８】
【表２】
0006880307.tif 000003
分析の結果、前記実施例＜２−１＞においてＣＭＬ低減効能を分析するために準備したＣＭＬが８．２４ｕｇ／ｍＬ濃度で含まれたカゼインとラクトースのメイラード反応生成物を基準に培養液に表１および図１の各々の乳酸菌を接種した後、ＣＭＬ含量を測定した結果、他の対照群に比べて本願発明の新菌株を接種した群において顕著にＣＭＬ含量が減少しており、このような結果は図２〜図６の結果からも確認できる。
【００７９】
＜実施例３＞
ＣＭＬ標準形式を用いた本発明に係る新菌株の終末糖化産物の低減効能の検証
前記実施例の結果から、本発明者らは、本発明の新菌株が従来のＣＭＬ低減活性を有する菌株および市販品に比べて遥かに優れたＣＭＬ低減効能があることを確認した。そこで、ＣＭＬ低減効能の再検証のために、終末糖化産物のうち最も代表的な非蛍光性の終末糖化産物であるＮε−（１−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ（ＣＡＳ：５７４６−０４−３）をＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入し、その低減活性を再度分析した。純度９９％のＣＭＬ標準形式を用い、ＣＭＬの低減分析は前記実施例２と同様の方法により分析を行った。
【００８０】
分析結果、図７に示すように、本発明の新菌株の処理時、１００％のＣＭＬの含量が顕著に抑制されていることが明らかになり、具体的には、ラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０菌株は約７３％のＣＭＬ低減活性を有し、バチルス・サブティリスＫＦ１１菌株は約７２％の高いＣＭＬ低減活性を有し、ラクトバチルス・パラカゼイＫＦ００８１６菌株は約７５．４％、ラクトバチルス・ペントーサスＫＦ８菌株は約８０％の高いＣＭＬ低減活性を有することが明らかになった。したがって、このような結果から、本発明者らは、本発明において分離および同定した前記新菌株が優れたＣＭＬ低減活性を有することを再確認した。
【００８１】
＜実施例４＞
動物実験を通じた本発明の新菌株の血中ＣＭＬ低減効能の分析
さらに、本発明者らは、動物実験を通じて、本発明の新菌株を用いる場合、直接的に血中内ＣＭＬの含量を低減できるか否かを確認する実験を行った。このために、牛乳に含まれたタンパク質成分であるカゼインと糖成分であるラクトースのメイラード反応によるＣＭＬ高含有食品を前記実施例で記述された方法により製造した後、それをＳＤマウス（６週齢、雄）に摂取させた後、血中ＣＭＬ含量の変化を確認し、この時、１週間は本発明の新菌株を各々５０ｍｇ／ｋｇ摂取させ、１２時間の空腹状態を維持したラットにＣＭＬ高含有食品を摂取させた後、８時間の経過後に血中ＣＭＬ濃度を測定した。また、陰性対照群としては、本発明の新菌株を摂取させず、ＣＭＬ高含有食品だけを摂取させた群を用いた。
【００８２】
【表３】
0006880307.tif 000004
分析の結果、表３および図８に示すように、ＣＭＬ高含有食品だけを摂取したマウス群は、ＣＭＬ高含有食品を摂取していない実験群に比べて、血中ＣＭＬ濃度が平均２．３倍増加している反面、本発明の新菌株であるＫＦ１４０、ＫＦ００８１６、ＫＦ８およびＫＦ１１を摂取した群は、ＣＭＬ高含有食品の摂取により増加した血中のＣＭＬ含量が効果的に減少していることを確認することができた。
【００８３】
以上の結果から、本発明者らは、本発明において分離および同定した新菌株であるラクトコッカス・ラクチスＫＦ１４０菌株が終末糖化産物を効果的に低減できる活性があることを確認することによって、終末糖化産物により引き起こされる各種の疾患に対する医薬品の製造および機能性食品の製造に有用に使用できることが分かった。
【００８４】
以上では、本発明についてその好ましい実施例を中心に説明した。本発明が属する技術分野における通常の知識を有した者であれば、本発明が本発明の本質的な特性から逸脱しない範囲内で変形された形態に実現できることを理解することができるでろう。したがって、開示された実施例は、限定的な観点ではなく説明的な観点で考慮しなければならない。本発明の範囲は、前述した説明ではなく特許請求の範囲に示されており、それと同等な範囲内にある全ての差は本発明に含まれていると解釈しなければならない。
【００８５】
本特許は、国家研究課題事業の一環として行われた結果物であって、課題固有番号Ｅ０１６４４０１−０３、部署名：科学技術情報通信部、研究管理専門機関：韓国食品研究院、主管機関：韓国食品研究院、研究事業名：韓国食品研究院の主要事業、研究課題名：糖尿合併症の主な発病因子の分析および低減化技術の開発、研究期間：２０１６．０１．０１〜２０１８．１２．３１に該当する課題；および課題固有番号Ｅ０１７０６０１−０２、部署名：科学技術情報通信部、研究管理専門機関：韓国食品研究院、主管機関：韓国食品研究院、研究事業名：韓国食品研究院の主要事業、研究課題名：腸内微生物媒介の代謝疾患を改善するための食品・医薬の研究、研究期間：２０１７．０１．０１〜２０２５．１２．３１に該当する課題である。
【００８６】
［受託番号］
寄託機関名：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ１１９９７Ｐ
受託日時：２０１７０３２４
寄託機関名：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ１１９９８Ｐ
受託日時：２０１７０３２４
寄託機関名：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ１１６７３Ｐ
受託日時：２０１５０３０６
寄託機関名：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ１１９８１Ｐ
受託日時：２０１７０２２４
【図１−１】
0006880307.tif 000005
【図１−２】
0006880307.tif 000006
【図２】
0006880307.tif 000007
【図３】
0006880307.tif 000008
【図４】
0006880307.tif 000009
【図５】
0006880307.tif 000010
【図６】
0006880307.tif 000011
【図７】
0006880307.tif 000012
【図８】
0006880307.tif 000013
【配列表】
0006880307000001.app