(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、
前記軽鎖がそれぞれ配列番号１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記重鎖が重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が
（ｉ）それぞれ配列番号２、配列番号４、及び配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、
（ｉｉ）それぞれ配列番号２、配列番号５、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号２、配列番号６、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、または
（ｉｖ）それぞれ配列番号２、配列番号７、及び配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、
抗体。
【請求項２】
１つまたは２つの軽鎖（ＬＣ）及び１つまたは２つの重鎖（ＨＣ）を含む、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、前記軽鎖の各々が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖の各々が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、抗体。
【請求項３】
（ｉ）前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する、
（ｉｉ）前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する、
（ｉｉｉ）前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する、または
（ｉｖ）前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、
請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、請求項２に記載の抗体。
【請求項５】
（ｉ）前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、
（ｉｉ）前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、
（ｉｉｉ）前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、または
（ｉｖ）前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、
請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
２つの軽鎖及び２つの重鎖を含み、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
（ｉ）各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、
（ｉｉ）各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、
（ｉｉｉ）各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、または
（ｉｖ）各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、
請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
前記重鎖のうちの１つが前記軽鎖のうちの１つと鎖間ジスルフィド結合を形成し、他の重鎖が他の軽鎖と鎖間ジスルフィド結合を形成し、前記重鎖のうちの１つが他の重鎖と２つの鎖間ジスルフィド結合を形成する、請求項６または７に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体がグリコシル化されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号２０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体を発現することができ、好ましくはＣＨＯ細胞である哺乳動物細胞。
【請求項１１】
配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体の産生プロセスであって、請求項１０に記載の哺乳動物細胞を前記抗体が発現されるような条件下で培養すること、及び前記発現された抗体を回収することを含む、プロセス。
【請求項１２】
請求項１１に記載のプロセスにより産生された、抗体。
【請求項１３】
請求項１〜９及び１２のいずれか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
がんの治療のための薬学的組成物の製造における請求項１〜９及び１２のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項１５】
前記がんが黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝がんである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
抗体が、１つ以上の抗腫瘍剤と、同時に、別々に、または連続して使用される組み合わせとなる、請求項１４または１５に記載の使用。
【請求項１７】
療法における使用のための、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
がんの治療における使用のための、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
がんの治療における、１つ以上の抗腫瘍剤との同時の、別々の、または連続した組み合わせでの使用のための、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記がんが、黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝細胞癌である、請求項１８または１９に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学分野に関する。より具体的には、本発明は、ヒトプログラム細胞死１（ＰＤ−１）に結合する抗体に関し、単独で、かつ化学療法及び他のがん治療法と組み合わせてがんの治療に有用であり得る。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍細胞は、複数のメカニズムを通して、免疫系による検出及び排除を逃れる。免疫チェックポイント経路は、自己寛容の維持及び活性化Ｔ細胞の制御において使用されているが、がん細胞は、その経路を使用し、破壊を防ぐことができる。ＰＤ−１／ヒトプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）経路は、１つのこのような免疫チェックポイントである。ヒトＰＤ−１は、Ｔ細胞上で見られ、ＰＤ−Ｌ１及びヒトプログラム細胞死１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）のＰＤ−１との結合は、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生を阻害する。ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の腫瘍細胞産生は、したがってＴ細胞監視からの回避を可能にすることができる。
【０００３】
ヒトＰＤ−１に対する完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体ニボルマブは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２との結合を阻害することが示され、様々な臨床治験において試験されている。（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ（２０１４）２（９）：８４６）。ＰＤ−１に対するヒト化ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体ペンブロリズマブ（旧名ランブロリズマブ）は、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２との結合を阻害することが示され、様々な臨床治験において試験されている。（ＷＯ２００８／１５６７１２及びＨａｍｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ（２０１３）３６９：２）。
【０００４】
ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２とのヒトＰＤ−１相互作用に結合し、これを中和する代替の抗体を提供する必要性が残る。特に、ヒトＰＤ−１に高い親和性で結合する抗体を提供する必要性が残る。また、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２とのヒトＰＤ−１相互作用を効果的にブロックする抗体を提供する必要性が残る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の第１の態様は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、
軽鎖が、それぞれアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１０）、ＳＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１）及びＱＱＡＮＨＬＰＦＴ（配列番号１２）からなる、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
重鎖が重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号２（ｘｄ−１６  Ａ、ｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及び／またはｘｄ−１６  ＥのＨＣＤＲ１の場合））に示されるアミノ酸配列からなり、
ＨＣＤＲ２が、
ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３（ｘｄ−１６  ＡのＨＣＤＲ２の場合））、
ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４（ｘｄ−１６  ＢのＨＣＤＲ２の場合））、
ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＳＹＡＱＫＦＲＧ（配列番号５（ｘｄ−１６  ＣのＨＣＤＲ２の場合））、
ＧＩＷＰＳＦＤＴＡＮＹＡＱＫＦＲＧ（配列番号６（ｘｄ−１６  ＤのＨＣＤＲ２の場合））、または
ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＮＹＡＲＫＦＱＧ（配列番号７（ｘｄ−１６  ＥのＨＣＤＲ２の場合））に示されるアミノ酸配列からなり、
ＨＣＤＲ３がＡＲＡＥＹＳＳＴＧＴＦＤＹ（配列番号８（ｘｄ−１６  Ａ、ｘｄ−１６  Ｃ及び／またはｘｄ−１６  ＤのＨＣＤＲ３の場合））またはＡＲＡＥＹＳＳＴＧＩＦＤＹ（配列番号９（ｘｄ−１６  Ｂ及び／またはｘｄ−１６  ＥのＨＣＤＲ３の場合））に示されるアミノ酸配列からなる、抗体を提供する。
【０００６】
本発明の特定の抗体は、一定の条件下、ヒトＰＤ−１にニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）及びペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）よりも高い、高親和性で結合する。さらに、本発明の特定の抗体は、インビボモデルにおいて、ニボルマブ及びペンブロリズマブと比較して優先的な向上した同種反応性を媒介する。
【０００７】
ある実施形態では、本発明は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１０）、ＳＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１）、及びＱＱＡＮＨＬＰＦＴ（配列番号１２）からなり、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号２）、ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３）、及びＡＲＡＥＹＳＳＴＧＴＦＤＹ（配列番号８）からなる、抗体を提供する。
【０００８】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１０）、ＳＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１）、及びＱＱＡＮＨＬＰＦＴ（配列番号１２）からなり、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号２）、ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４）、及びＡＲＡＥＹＳＳＴＧＩＦＤＹ（配列番号９）からなる、抗体を提供する。
【０００９】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１０）、ＳＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１）、及びＱＱＡＮＨＬＰＦＴ（配列番号１２）からなり、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号２）、ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＳＹＡＱＫＦＲＧ（配列番号５）、及びＡＲＡＥＹＳＳＴＧＴＦＤＹ（配列番号８）からなる、抗体を提供する。
【００１０】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１０）、ＳＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１）、及びＱＱＡＮＨＬＰＦＴ（配列番号１２）からなり、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号２）、ＧＩＷＰＳＦＤＴＡＮＹＡＱＫＦＲＧ（配列番号６）、及びＡＲＡＥＹＳＳＴＧＴＦＤＹ（配列番号８）からなる、抗体を提供する。
【００１１】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１０）、ＳＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１）、及びＱＱＡＮＨＬＰＦＴ（配列番号１２）からなり、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が、それぞれアミノ酸配列ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号２）、ＧＩＷＰＳＦＧＴＡＮＹＡＲＫＦＱＧ（配列番号７）、及びＡＲＡＥＹＳＳＴＧＩＦＤＹ（配列番号９）からなる、抗体を提供する。
【００１２】
ある実施形態では、本発明は、１つまたは２つの軽鎖（ＬＣ）及び１つまたは２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体であって、軽鎖の各々が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖の各々が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１３】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１４】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１５】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１６】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１７】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１８】
ある実施形態では、本発明は、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００１９】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２０】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２１】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２２】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２３】
さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２４】
ある実施形態では、本発明は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む抗体であって、各軽鎖が配列番号２４に示される前記アミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２５】
さらなる実施形態では、本発明は、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２６】
さらなる実施形態では、本発明は、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２７】
さらなる実施形態では、本発明は、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２８】
さらなる実施形態では、本発明は、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００２９】
さらなる実施形態では、本発明は、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００３０】
ある実施形態では、本発明は、重鎖のうちの１つが軽鎖のうちの１つと鎖間ジスルフィド結合を形成し、他の重鎖が他の軽鎖と鎖間ジスルフィド結合を形成し、重鎖のうちの１つが他の重鎖と２つの鎖間ジスルフィド結合を形成する、抗体を提供する。
【００３１】
ある実施形態では、本発明は、グリコシル化された抗体を提供する。
【００３２】
ある実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００３３】
さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００３４】
ある実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００３５】
さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＨＣが配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００３６】
ある実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含み、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。
【００３７】
さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、抗体を提供する。ある実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、重鎖のうちの１つが軽鎖のうちの１つと鎖間ジスルフィド結合を形成し、他の重鎖が他の軽鎖と鎖間ジスルフィド結合を形成し、重鎖のうちの１つが他の重鎖と２つの鎖間ジスルフィド結合を形成する、抗体を提供する。
【００３８】
ある実施形態では、本発明は、ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、グリコシル化された、抗体を提供する。
【００３９】
本発明の第２の態様では、本発明は、上記のいずれか１つの抗体、またはその断片もしくは誘導体をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００４０】
別の好ましい実施形態では、ｘｄ−１６  Ａ  Ｓ２２８Ｐ  ＩｇＧ４のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２５に示される。
【００４１】
別の好ましい実施形態では、ｘｄ−１６  Ｂ  Ｓ２２８Ｐ  ＩｇＧ４のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２６に示される。
【００４２】
別の好ましい実施形態では、ｘｄ−１６  Ｃ  Ｓ２２８Ｐ  ＩｇＧ４のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２７に示される。
【００４３】
別の好ましい実施形態では、ｘｄ−１６  Ｄ  Ｓ２２８Ｐ  ＩｇＧ４のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２８に示される。
【００４４】
別の好ましい実施形態では、ｘｄ−１６  Ｅ  Ｓ２２８Ｐ  ＩｇＧ４のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２９に示される。
【００４５】
別の好ましい実施形態では、ｘｄ−１６  Ａ、ｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  ＥのＬＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号３０に示される。
【００４６】
本発明の第３の態様は、第３の態様のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【００４７】
本発明の第４の態様は、第３の態様のベクターを含む宿主細胞を提供し、または前記細胞のゲノムには、第２の態様に係る外来性ポリヌクレオチドが導入されている。
【００４８】
好ましい実施形態では、前記宿主細胞は哺乳動物細胞、好ましくはＣＨＯ細胞である。
【００４９】
ある実施形態では、本発明は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体を発現することができる、哺乳動物細胞を提供する。
【００５０】
ある実施形態では、本発明は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号２０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体を発現することができる、哺乳動物細胞を提供する。
【００５１】
ある実施形態では、本発明は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号２１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体を発現することができる、哺乳動物細胞を提供する。
【００５２】
ある実施形態では、本発明は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体を発現することができる、哺乳動物細胞を提供する。
【００５３】
ある実施形態では、本発明は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体を発現することができる、哺乳動物細胞を提供する。
【００５４】
本発明の第５の態様は、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体の産生プロセスであって、第４の態様の宿主細胞を抗体が発現されるような条件下で培養すること、及び発現された抗体を回収することを含むプロセスを提供する。
【００５５】
ある実施形態では、本発明は、本発明のプロセスにより産生された抗体を提供する。
【００５６】
本発明の第６の態様は、本発明の抗体及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物を提供する。
【００５７】
本発明の第７の態様は、がんの治療方法であって、治療を必要とする患者に、有効量の本発明の抗体を投与するステップを含む、方法を提供する。
【００５８】
さらなる実施形態では、がんの治療方法は、治療を必要とする患者に、有効量の本発明の抗体を投与するステップを含み、そのがんは、黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝がんである。
【００５９】
さらなる実施形態では、これらの方法は、１つ以上の抗腫瘍剤、免疫療法剤またはそれらの組み合わせとの、同時の、別々の、または連続した組み合わせでの有効量の本発明の抗体の投与を含む。
【００６０】
好ましい実施形態では、前記抗腫瘍剤としては、限定されないが、ラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、ネシツムマブ（ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、オララツマブ（ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、ガルニセルチブ（ｇａｌｕｎｉｓｅｒｔｉｂ）、アベマシクリブ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミド及びドキソルビシン、ナベルビン（ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）、エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イザベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びイリノテカン）、セツキシマブまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６１】
さらなる実施形態では、前記免疫療法剤としては、限定されないが、ニボルマブ、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）、リリルマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、デュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６２】
本発明の第８の態様は、療法における使用のための、本発明の抗体を提供する。
【００６３】
本発明の第９の態様は、がん治療における使用のための、本発明の抗体を提供する。
【００６４】
さらなる実施形態では、本発明は、がん治療における使用のための、本発明の抗体であって、そのがんが、黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝がんである、抗体を提供する。
【００６５】
本発明の第１０の態様は、がんを治療における組み合わせた使用のための、１つ以上の抗腫瘍剤、免疫的抗腫瘍剤またはそれらの組み合わせとの、同時の、別々の、または連続した組み合わせでの、本発明の態様のいずれか１つに係る抗体を提供する。
【００６６】
好ましい実施形態では、前記抗腫瘍剤としては、限定されないが、ラムシルマブ、ネシツムマブ、オララツマブ、ガルニセルチブ、アベマシクリブ、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミド及びドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イザベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びイリノテカン）、セツキシマブまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６７】
さらなる実施形態では、前記免疫療法剤としては、限定されないが、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６８】
本発明の第１１の態様は、がんの治療のための薬学的組成物の調製のための、本発明の抗体の使用を提供する。
【００６９】
さらなる実施形態では、そのがんが、黒色腫、肺がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝細胞癌である、方法を提供する。
【００７０】
さらなる実施形態では、前記薬学的組成物は、１つ以上の抗腫瘍剤及び／または免疫療法剤をさらに含む。
【００７１】
さらなる実施形態では、前記薬学的組成物は、１つ以上の抗腫瘍剤及び／またはイムノ−腫瘍学剤との同時の、別々の、または連続した組み合わせで、必要とする対象に投与される。
【００７２】
好ましい実施形態では、前記抗腫瘍剤としては、限定されないが、ラムシルマブ、ネシツムマブ、オララツマブ、ガルニセルチブ、アベマシクリブ、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミド及びドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、イザベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びイリノテカン）、セツキシマブまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００７３】
さらなる実施形態では、前記免疫療法剤としては、限定されないが、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００７４】
本発明において、上記及び下記（例えば実施例）において、具体的に記載される技術的特徴が、相互いに組み合わされ、それにより、個別の記載を要さない新たな、または好ましい技術的な解決手段を構成し得ることを理解すべきである。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
本発明の抗体は、改変された、非自然発生ポリペプチド複合体である。本発明のＤＮＡ分子は、本発明の抗体におけるポリペプチドのうちの１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、非自然発生ＤＮＡ分子である。
【００７６】
本発明の抗体は、改変ＣＤＲ及び抗体のいくつかの部分（フレームワーク、ヒンジ領域、及び定常領域のすべてまたは一部）が、ヒトゲノム配列から誘導されたフレームワーク及び定常領域と同一または実質的に同一であるヒト由来となるように設計されている。完全ヒトフレームワーク、ヒンジ領域、及び定常領域は、それらのヒト生殖細胞系列配列ならびに自然発生体細胞突然変異を有する配列及び改変突然変異を有する配列である。本発明の抗体は、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含有する完全ヒトフレームワーク、ヒンジ、または定常領域から誘導されたフレームワーク、ヒンジ、または定常領域を含み得る。さらに、本発明の抗体は、好ましくはヒトにおいて実質的に非免疫原性である。
【００７７】
本発明の抗体は、ＩｇＧ型抗体であり、鎖内及び鎖間ジスルフィド結合を介して架橋された４つのアミノ酸鎖（２つの「重」鎖及び２つの「軽」鎖）を有する。各重鎖は、Ｎ末端ＨＣＶＲ及び重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）からなる。各軽鎖は、ＬＣＶＲ及び軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。特定の生体系で発現される場合、天然のヒトＦｃ配列を有する抗体は、Ｆｃ領域においてグリコシル化される。典型的には、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位で抗体のＦｃ領域にグリコシル化が起こる。Ｎ−グリカンは、典型的にはアスパラギンに結合する。抗体は、他の位置でもグリコシル化され得る。
【００７８】
任意で、本発明の抗体は、Ｆｃ受容体媒介性炎症メカニズムに関与または補体を活性化する能力の低下によりヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域から誘導されたＦｃ部分を含有し、エフェクタ機能の低下をもたらす。
【００７９】
Ｓ２２８Ｐ突然変異は、半抗体形成（ＩｇＧ４抗体における半分子の動的交換の現象）を防止するヒンジ突然変異である。Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異は、既に低いヒトＩｇＧ４アイソタイプのエフェクタ機能をさらに低減する。
【００８０】
ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ領域は、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と称される、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と称される、超可変性を有する領域にさらに細分することができる。各ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、次の順番、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称され、軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含む。配列描写には、現在、抗体のＣＤＲ割り当ての３つのシステムが使用されている。ＫａｂａｔのＣＤＲ定義（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））は、抗体配列可変性に基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１−９１７（１９８７）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７−９４８（１９９７））は、抗体の三次元構造及びＣＤＲループの形態に基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義は、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２を除いては、ＫａｂａｔのＣＤＲ定義と同一である。ＮｏｒｔｈのＣＤＲ定義（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８−２５６（２０１１））は、多数の結晶構造との親和性伝播クラスタリングに基づく。本発明の目的には、ＮｏｒｔｈのＣＤＲ定義が使用される。
【００８１】
ＨＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に結合することにより、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト、及び他の哺乳動物の、重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において知られている。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、例えば、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。
【００８２】
ＬＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に結合することにより、全長軽鎖遺伝子に変換してもよい。ヒト、及び他の哺乳動物の、軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において知られている。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、例えば、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。
【００８３】
本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に動作可能に結合した後で宿主細胞において発現されることになる。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分のいずれかとして宿主生物中で複製可能である。一般的に、発現ベクターは、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、及びジヒドロ葉酸還元酵素を含有し、所望のＤＮＡ配列で変換された細胞の検出を可能にするだろう。
【００８４】
本発明の抗体は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞のような哺乳動物細胞において、容易に産生することができる。宿主細胞は、当該技術分野において周知の技術を使用して培養される。
【００８５】
対象のポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて変わる周知の方法により、宿主細胞に移入することができる。
【００８６】
タンパク質精製の様々な方法を用いてもよく、このような方法は、当該技術分野において知られ、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８２：８３−８９（１９９０）及びＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）において記載されている。
【００８７】
本発明の別の実施形態では、抗体、またはそれをコードする核酸は、単離形態で提供される。本明細書で使用される「単離」という用語は、細胞環境において見られるその他の高分子種を含まない、または実質的に含まないタンパク質、ペプチド、または核酸を指す。本明細書で使用される「実質的に含まない」という用語は、対象のタンパク質、ペプチド、または核酸が、存在する高分子種の８０％超（モル基準）、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超を含むことを意味する。
【００８８】
本発明の抗体、またはそれを含む薬学的組成物は、非経口経路により（例えば、皮下及び静脈内）投与してもよい。本発明の抗体は、患者に、単独で、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、単回または複数回で投与してもよい。本発明の薬学的組成物は、当該技術分野において周知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄ．（１９９５），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）により調製することができ、本明細書において開示されている抗体、及び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
【００８９】
「治療すること」（または「治療する」もしくは「治療」）という用語は、既存の症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅らせること、妨げること、抑えること、止めること、低減すること、または回復に向かわせることを指す。
【００９０】
本明細書においてヒトＰＤ−１についての抗体の親和性に関して使用される「結合」とは、特に指示のない限り、本質的に本明細書において記載されているような３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野において知られている一般的な方法により決定される、約１×１０−９Ｍ未満、好ましくは、約２×１０−１０Ｍ未満のＫＤを意味することを意図している。
【００９１】
本開示の目的には、「高親和性」という用語は、ヒトＰＤ−１について約１５０ｐＭ未満のＫＤを指す。ＫＤ値は、アッセイの節にある「結合反応速度及び親和性」において記載されているように、結合反応速度により構築される。
【００９２】
本発明はさらに、安全かつ有効量の本発明のポリペプチドまたはそのアゴニストと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬学的組成物を提供する。これらの担体としては（限定されないが）、生理食塩水、緩衝液、グルコース、水、グリセリン、エタノールまたはそれらの組み合わせが挙げられる。薬学的製剤は、投与方法に適合するものでなければならない。本発明の薬学的組成物は、注入用の剤形に調製することができ、例えば生理食塩水またはグルコース水溶液または他の助剤と共に従来法により調製できる。錠剤及びカプセル剤などの薬学的組成物は、従来法によって、調製できる。注入用、溶液状、タブレット状及びカプセル状の薬学的組成物は、好ましくは無菌条件において、製造され得る。有効成分の投与量は治療的有効量であり、例えば、１日あたり約１μｇ／ｋｇ（体重）〜５ｍｇ／ｋｇ（体重）である。さらに、本発明のポリペプチドはさらに、他の治療薬と共に使用できる。
【００９３】
「有効量」とは、研究者、医師、または他の臨床家により求められている、組織、システム、動物、哺乳動物、またはヒトの、生物学的もしくは医学的応答、またはそれに対する所望の治療効果を引き出す、本発明の抗体または本発明の抗体を含む薬学的組成物の量を意味する。抗体の有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を引き出す抗体の能力のような因子に従って変化し得る。有効量はまた、抗体の毒性または有害な効果を治療上有益な効果が上回る量である。
【００９４】
本発明を、下記の実施例によりさらに例示する。これらの実施例は、本発明の例示を目的とするものであり、本発明の範囲を限定するものではない。以下の実施例における実験方法においては、その具体的な条件を具体的に示さないが、それらは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２などに記載のルーチン的な条件、または製造業者による取扱説明の記載に従い実施される。特に明記しない限り、パーセンテージ及び部は、重量百分率及び重量部を指す。
【００９５】
本発明の大きな利点：
ｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅは、一価の、及び特異的（ａｖｉｄ）な結合様式において、ペンブロリズマブ及びニボルマブより高い親和性でヒトＰＤ−１に結合する。各濃度の抗体ｘｄ−１６  Ｂは、免疫細胞活性化アッセイにおいて、ニボルマブ及びペンブロリズマブと同等に、またはそれらより良好に、ＩＦＮ−γのＩＬ−２を増加させた。
【実施例】
【００９６】
実施例１：抗体発現及び精製
重鎖及び軽鎖の可変領域のポリペプチド、抗体Ａ〜抗体Ｉの完全重鎖及び軽鎖アミノ酸配列、ならびにそれをコードするヌクレオチド配列を、下で「アミノ酸及びヌクレオチド配列」と題されている節において列挙する。また、抗体Ａ〜抗体Ｉの軽鎖、重鎖、軽鎖可変領域、及び重鎖可変領域の配列番号を、表１に示す。
【００９７】
限定されないが、抗体Ａ〜抗体Ｉを含む、本発明の抗体は、本質的に下記のように作製及び精製することができる。ＨＥＫ２９３またはＣＨＯのような適切な宿主細胞は、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比（例えば、１：３または１：２）またはＨＣ及びＬＣの両方をコードする単一ベクター系を用いて、抗体を分泌するための発現系で一時的または安定的にトランスフェクトすることができる。抗体が分泌された清澄化培地は、多くの一般的に使用されている技術のいずれかを使用して精製してもよい。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）のような相溶性バッファで平衡化した、ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、またはＦａｂ断片用のＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に便利に適用してもよい。カラムは、洗浄し、非特異的な結合成分を除去してもよい。結合抗体は、例えば、ｐＨ勾配（例えば、２０ｍＭトリスバッファｐＨ７から１０ｍＭクエン酸ナトリウムバッファｐＨ３．０まで、またはリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４から１００ｍＭグリシンバッファｐＨ３．０まで）により溶出され得る。抗体画分は、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検出され、その後プールされ得る。意図する使用に応じて、さらなる精製は任意選択的である。抗体は、一般的な技術を用いて濃縮及び／または無菌濾過され得る。可溶性の凝集体及び多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術により、効率的に除去され得る。これらのクロマトグラフィーステップ後の抗体の純度は、９５％を上回る。産生物は、直ちに−７０℃で凍結してもよく、凍結乾燥してもよい。
【００９８】
【表１】
0006967515.tif 000002
【００９９】
アッセイ
結合反応速度及び親和性
ヒトＰＤ−１の反応速度及び平衡解離定数（ＫＤ）を、本発明の抗体について、ＭＳＤ、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）、バイオライト（ｂｉｏ−ｌｉｇｈｔ）干渉（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）アッセイ法を使用して決定する。
【０１００】
本明細書で使用されるニボルマブとは、Ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ＩＮＮ：Ｌｉｓｔ１０７からの重鎖及び軽鎖配列を利用する２９３ＨＥＫ細胞（ＣＡＳ♯９４６４１４−９４−４）において一時的に発現されたヒトＩｇＧ４  ＰＤ−１抗体である。本明細書で使用されるペンブロリズマブとは、Ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ＩＮＮ：Ｌｉｓｔ７２からの重鎖及び軽鎖配列を利用する２９３ＨＥＫ細胞において一時的に発現されたヒトＩｇＧ４  ＰＤ−１抗体である。
【０１０１】
ＭＳＤアッセイ
平衡親和性測定を、以前記載されているように実施する（Ｅｓｔｅｐ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ，２０１３．５（２）：ｐ．２７０−８）。溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を、抗原（ｂ−ＰＤ−１単量体）が１０〜１００ｐＭで一定に保持され、５〜１００ｎＭから開始するＦａｂまたはｍＡｂｓの３〜５倍連続希釈物と共にインキュベートされる、ＰＢＳ＋０．１％ＩｇＧフリーＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中で実施する（実験条件は試料依存的である）。ＰＢＳ中で２０ｎＭに希釈した抗体を、標準的な結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレート上に４℃で一晩、または室温で３０分間コーティングする。プレートを、７００ｒｐｍで振盪しながら、ＢＳＡで３０分間ブロックする。プレートを次に洗浄バッファ（ＰＢＳＦ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。ＳＥＴ試料を適用し、プレート上で１５０秒間７００ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした後、１回の洗浄を行う。プレート上に捕捉した抗原を、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍＬのスルホタグ標識ストレプトアビジンで、プレート上での３分間のインキュベーションにより検出する。プレートを洗浄バッファで３回洗浄した後、界面活性剤を含む１倍読み取りバッファＴを使用してＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００装置上で読み取る。遊離型抗原パーセントをＰｒｉｓｍにおいて滴定抗体の関数としてプロットし、二次方程式に当てはめてＫＤを抽出する。スループットを向上させるため、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ−ＳＥＴ実験全体を通して、液体ハンドリングロボットを使用する。
【０１０２】
本質的にこのアッセイにおいて記載されているように実施された実験では、ＩｇＧ１形式の、酵母で発現されたｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅは、それぞれ４５ｐＭ、５０ｐＭ、９３ｐＭ及び１５０ｐＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する。ペンブロリズマブ及びニボルマブは、それぞれ１３０ｐＭ及び６４０ｐＭのＫＤでＰＤ−１に結合する。ｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅの場合の結合活性の測定の結果、それぞれ約０．９ｐＭ、２．５ｐＭ、１．３ｐＭ及び０．９ｐＭのＫＤである。ペンブロリズマブ及びニボルマブは、それぞれ約３ｐＭ及び５ｐＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する。
【０１０３】
【表２】
0006967515.tif 000003
【０１０４】
バイオライト（Ｂｉｏ−ｌｉｇｈｔ）干渉法
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、一般的には以前記載されているように実施した（Ｅｓｔｅｐ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｂｉｎｎｉｎｇ．  ＭＡｂｓ，  ２０１３．  ５（２）：  ｐ．  ２７０−８．）。簡潔に、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、ＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサー上に負荷することにより実施した。センサーをオフラインでアッセイバッファにおいて３０分間平衡化した後、ベースライン構築のためにオンラインで６０秒間モニタリングした。免疫グロブリンＧを負荷したセンサーを１００ｎＭの抗原に５分間曝露し、その後オフレート測定のためにそれらをアッセイバッファに５分間移した。１：１結合モデルを使用して反応速度を分析した。
【０１０５】
本質的にこのアッセイにおいて記載されているように実施された実験では、Ｆａｂ形式での、酵母で発現されたＩｇＧ１から産生されたｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅは、ＰＤ−１＿Ｆｃがセンサーチップ上にあった場合、ヒトＰＤ−１＿Ｆｃに、ニボルマブ及びペンブロリズマブより約２倍から３倍低いＫＤで結合する。抗体がセンサーチップ上にあった場合、ＩｇＧ１形式の、酵母で発現されたｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅは、ヒトＰＤ−１＿Ｈｉｓに、ニボルマブ及びペンブロリズマブより約３倍から４倍低いＫＤで結合する。Ｆａｂ形式での、酵母で発現されたＩｇＧ１から産生されたｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅは、ｃｙｎｏＰＤ−１＿Ｆｃに、ニボルマブ及びペンブロリズマブと同様のＫＤで結合する。
【０１０６】
【表３】
0006967515.tif 000004
【０１０７】
ＣＨＯ細胞上でのヒトＰＤ−１への結合
ヒトＰＤ−１に対する本発明の抗体の結合は、フローサイトメトリーアッセイにおいて測定され得る。
【０１０８】
ＣＨＯ細胞（０．２×１０6個）を、２００ｎＭから１９回、２倍で０．３８１５ｐＭの最低濃度までの滴定される実験用抗体と共に３０分間、ＰＢＳ１％ＢＳＡ中、氷上でインキュベートする。細胞を次に３回洗浄し、二次抗体（ＰＥ標識、５μｇ／ｍｌの最終濃度）と共に、ＰＢＳ１％ＢＳＡ中、３０分間、氷（光から保護）上でインキュベートする。細胞を３回洗浄し、フローサイトメトリーによって分析する。Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６システム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でフローサイトメトリーを実施し、Ｃ６ソフトウェア上でＭＦＩを計算する。Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェア上でＥＣ５０を計算する。
【０１０９】
本質的にこのアッセイにおいて記載されているように実施された実験では、ｘｄ−１６  Ｂ（ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ）は、ＰＤ−１に用量依存的に１．４６１ｎＭのＥＣ５０値（ｎ＝１）で結合し、ｘｄ−１６  Ｄ（ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ）は、ＰＤ−１に用量依存的に１．４７１ｎＭのＥＣ５０値（ｎ＝１）で結合し、ニボルマブ（ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ）は、ＰＤ−１に用量依存的に１．３１１ｎＭのＥＣ５０値（ｎ＝１）で結合する。本質的にこのアッセイにおいて記載されているように実施された実験では、ｘｄ−１６  Ｂ及びｘｄ−１６  Ｄは、これらの条件下、ニボルマブと同様のＥＣ５０でヒトＰＤ−１に結合する。
【０１１０】
【表４】
0006967515.tif 000005
【０１１１】
ＣＨＯ細胞におけるＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２に対するヒトＰＤ−１のブロッキング。
ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２に対するヒトＰＤ−１の結合をブロックする本発明の抗体の能力は、フローサイトメトリーにより測定され得る。
【０１１２】
ＣＨＯ細胞０．２×１０６個を、実験抗体（１００ｎＭ）と共に、３０分間、ＰＢＳ１％ＢＳＡ中、氷上でインキュベートする。細胞を次に３回洗浄し、ＮＨＳ−ＦＩｕｏｒｅｓｃｅｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）と関連したＰＤ−Ｌ２と共に、ＰＢＳ１％ＢＳＡ中、３０分間、氷（光から保護）上でインキュベートする。細胞を３回洗浄し、フローサイトメトリーによって分析する。Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６システム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でフローサイトメトリーを実施し、Ｃ６ソフトウェア上でＭＦＩを計算する。Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェア上でＥＣ５０を計算する。
【０１１３】
本質的にこのアッセイにおいて記載されているように実施された実験では、ｘｄ−１６  Ｂ、ｘｄ−１６  Ｃ、ｘｄ−１６  Ｄ及びｘｄ−１６  Ｅ（ＩｇＧ１形式、酵母で発現された）は、ヒトＰＤ−Ｌ２−ＦＩＴＣの結合をブロックし、１８２，９５９．１のＭＦＩをもたらした対照ＩｇＧと比較して、それぞれ２６，４４５．９、２６，５２４．８、３９，９８３．１及び４０，８６７．９のＭＦＩをもたらした。ペンブロリズマブ及びニボルマブは、それぞれ４６，２４５．９及び５４，５０９．８のＭＦＩをもたらした。
【０１１４】
【表５】
0006967515.tif 000006
【０１１５】
混合リンパ球反応
本発明の抗体によるＰＤ−１シグナルのブロッキングは、Ｔ細胞活性化中の阻害シグナルの放出を測定することにより評価され得る。
【０１１６】
２×１０６個のＰＢＭＣを、完全Ｔ細胞培地において、６ウェル組織培養プレート中の各ウェルまたはＴ２５組織培養フラスコに分注する。細胞を２〜３時間インキュベートし、単球を付着させる。付着が不十分である場合、無血清培地を使用する。新鮮な３倍培地と共にフラスコを穏やかに旋回させることにより、非付着細胞を除去する。
【０１１７】
１％ＡＢ血清、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０μＭのβ−Ｍｅ、ＩＬ−４（１０００Ｕ／ｍｌ）、及びＧＭ−ＣＳＦ（１０００Ｕ／ｍｌ）、または２５〜５０ｎｇ／ｍｌの各々を含有するＸ−ＶＩＶＯ１５培地においてＰＢＭＣから単球（１×１０６個／ｍｌ）を培養することにより、未成熟骨髄ＤＣを産生する。２日後、ＩＬ−４及びＧＭ−ＣＳＦを補足した新鮮な培地を添加する。５日目、細胞を凍結するか、または、ｒＴＮＦａ（１０００Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ−１ｂ（５ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６（１０ｎｇ／ｍｌ）、及び１μＭのＰＧＥ２を含有する刺激カクテルを２日間３×１０５個／ｍｌの細胞密度で添加することにより、成熟を誘導する。
【０１１８】
Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ  ＣＤ４＋Ｔ細胞単離キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において、製造業者の指示に従ってＴ細胞単離を実施する。１．５ｍｌチューブラックを備え付けた磁石を使用し、望ましくない磁性ビーズ（ＱＩＡＧＥＮ）を除去する。
【０１１９】
９６丸底組織培養プレートにおいて、１００，０００〜２００，０００個の単離Ｔ細胞を１０，０００〜２０，０００個の同種異系ｍｏＤＣと、２００μｌの総体積で４〜５日間３７℃で混合する。陽性対照として３：１（細胞：ビーズ）の比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ＤｙｎａＢｅａｄｓを使用してＴ細胞を刺激し、ビーズは製造業者の指示に従って用意する。試験抗体をＭＬＲの初期に添加し、培養期間全体を通してインキュベートする。
【０１２０】
製造業者の指示（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に従ってＩＬ−２及びＩＦＮ−γの検出を実施する。ＯＤ測定値をＭｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ）上で決定する。
【０１２１】
本質的にこのアッセイにおいて記載されているように実施された実験では、抗体ｘｄ−１６  Ｂは、各濃度で、ニボルマブ及びペンブロリズマブに相当してＩＦＮ−γのＩＬ−２を増加させた。
【０１２２】
【表６】
0006967515.tif 000007
【０１２３】
【表７】
0006967515.tif 000008
【０１２４】
本発明に記載のすべての参照文献は、それらの各々が本願明細書で個々に引用されるのと同様に、参照により本願明細書に組み込まれる。さらに、当業者であれば、上記の内容を読んだ後、本発明に様々な修飾または変更を施すことができることを理解すべきである。すべてのこれらの均等物も、本願に添付される特許請求の範囲により定義される範囲内に含まれる。
また、本発明は以下を提供する。
［１］
ヒトＰＤ−１（配列番号１）に結合する抗体であって、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、
前記軽鎖がそれぞれ配列番号１０、１１及び１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記重鎖が重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が配列番号２に示されるアミノ酸配列からなり、
ＨＣＤＲ２が配列番号３、４、５、６または７に示されるアミノ酸配列からなり、
ＨＣＤＲ３が配列番号８または９に示されるアミノ酸配列からなる、抗体。
［２］
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３がそれぞれ配列番号２、配列番号３、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、［１］に記載の抗体。
［３］
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３がそれぞれ配列番号２、配列番号４、及び配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、［１］に記載の抗体。
［４］
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３がそれぞれ配列番号２、配列番号５、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、［１］に記載の抗体。
［５］
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３がそれぞれ配列番号２、配列番号６、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる、［１］に記載の抗体。
［６］
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３がそれぞれ配列番号２、配列番号７、及び配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、［１］に記載の抗体。
［７］
１つまたは２つの軽鎖（ＬＣ）及び１つまたは２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体であって、前記軽鎖の各々が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖の各々が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、または配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、抗体。
［８］
前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する、［７］に記載の抗体。
［９］
前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する、［７］に記載の抗体。
［１０］
前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する、［７］に記載の抗体。
［１１］
前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する、［７］に記載の抗体。
［１２］
前記ＬＣＶＲが配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有する、［７］に記載の抗体。
［１３］
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、［７］に記載の抗体。
［１４］
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、［１３］に記載の抗体。
［１５］
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、［１３］に記載の抗体。
［１６］
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、［１３］に記載の抗体。
［１７］
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、［１３］に記載の抗体。
［１８］
前記ＬＣが配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣが配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、［１３］に記載の抗体。
［１９］
２つの軽鎖及び２つの重鎖を含み、各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、または配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、［１３］に記載の抗体。
［２０］
各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する、［１９］に記載の抗体。
［２１］
各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有する、［１９］に記載の抗体。
［２２］
各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有する、［１９］に記載の抗体。
［２３］
各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、［１９］に記載の抗体。
［２４］
各軽鎖が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有する、［１９］に記載の抗体。
［２５］
前記重鎖のうちの１つが前記軽鎖のうちの１つと鎖間ジスルフィド結合を形成し、他の重鎖が他の軽鎖と鎖間ジスルフィド結合を形成し、前記重鎖のうちの１つが他の重鎖と２つの鎖間ジスルフィド結合を形成する、［１９］〜［２４］のいずれか一項に記載の抗体。
［２６］
前記抗体がグリコシル化されている、［１］〜［２４］のいずれか一項に記載の抗体。
［２７］
配列番号２４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列及び配列番号２０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体を発現することができ、好ましくはＣＨＯ細胞である哺乳動物細胞。
［２８］
配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体の産生プロセスであって、［２７］に記載の哺乳動物細胞を前記抗体が発現されるような条件下で培養すること、及び前記発現された抗体を回収することを含む、プロセス。
［２９］
［２８］に記載のプロセスにより産生された、抗体。
［３０］
［１］〜［２６］のいずれか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
［３１］
がんの治療方法であって、治療を必要とする対象に、有効量の［１］〜［２６］のいずれか一項に記載の抗体を投与するステップを含む、方法。
［３２］
前記がんが黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝がんである、［３１］に記載の方法。
［３３］
１つ以上の抗腫瘍剤を同時に、別々に、または連続して投与することをさらに含む、［３１］または［３２］に記載の方法。
［３４］
療法における使用のための、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載の抗体。
［３５］
がんの治療における使用のための、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載の抗体。
［３６］
前記がんが、黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝細胞癌である、［３５］に記載の使用のための抗体。
［３７］
がんの治療における組み合わせた使用のための、１つ以上の抗腫瘍剤との同時の、別々の、または連続した組み合わせでの、［１］〜［２６］のいずれか一項］に記載の抗体。
［３８］
前記がんが、黒色腫、肺がん、頭頚部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、または肝細胞癌である、［３７］の組み合わせた使用のための抗体。
【配列表】
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