(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ソリザヤノキ（Ｏｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）からのオロキシリンＡを含有する組成物の抽出方法であって、前記方法が：
ａ）ソリザヤノキの樹皮を切り、乾燥し及び粉砕して細粉にする工程、
ｂ）工程ａ）の１００ｋｇの細粉を８０％メタノール（ｖ／ｖ）で抽出して、水メタノール抽出物を得る工程、
ｃ）工程ｂ）の前記水メタノール抽出物を水に溶解して、懸濁溶液を産出する工程、
ｄ）工程ｃ）の前記懸濁溶液を、酢酸エチルを用いて抽出する工程、
ｅ）工程ｄ）の溶媒分画を濃縮し及び乾燥して、黄褐色の粉末を得る工程、及び
ｆ）工程ｄ）の前記粉末に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ及び質量分析を用いて、ＳＴＲ＃１によって表されるオロキシリンＡ、ＳＴＲ＃２によって表されるバイカレイン、及びＳＴＲ＃３によって表されるクリシンとして特徴づける工程
【化１】
0006851476.tif 000018
【化２】
0006851476.tif 000019
【化３】
0006851476.tif 000020
を含む、抽出方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法を使用してソリザヤノキの樹皮から単離された、１０％〜１５％のオロキシリンＡ、１０％〜２５％のバイカレイン及び２％〜１０％のクリシンを含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許出願の相互参照
これは、２０１６年１１月１１日に出願された米国仮特許出願第６２４２０６７６号にからの優先権を主張するＰＣＴ出願である。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概してソリザヤノキ（Ｏｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）に関連する。より具体的には、本発明は、生理活性物質であるオロキシリンＡ、バイカレイン及びクリシン並びにそれらのグルクロニドの、ソリザヤノキからの単離に関連する。
【背景技術】
【０００３】
先行技術の説明
東南アジアの至る所に広く分布するＯｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ（ファミリー：Ｂｉｇｎｏｎｉａｃｅａｅ）又はソリザヤノキ（Ｂｒｏｋｅｎ  ｂｏｎｅｓ  ｔｒｅｅ）は、アーユルベーダの医学システムにおいて重要な薬草である。この植物の根及び幹の皮は、広範囲の薬効を有することが報告されている（Ｄｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ−ａ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｐｌａｎｔ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ｅａｓｔ  Ｉｎｄｉａ：Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ，ｒｅｍｅｄｉａｌ，ａｎｄ  ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，Ｖｏｌ．３（Ｓｕｐｐｌ  １），Ｓ１０４−Ｓ１１２）。当該植物から単離される多くの重要なフラバノイド、即ちオロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン、バイカリン、スクテラリン、ヒスピズリン及びそれらの誘導体は、その薬理学的性質に起因すると考えられるが、それらの多くは未だ評価されていない。したがって、ソリザヤノキに存在する重要な活性物質を単離及び同定してそれらの治療上の可能性を確証するという、未だ対処されていない産業上の必要性が存在する。
【０００４】
先行研究によって、植物に存在する重要な生理活性物質をうまく単離することができた。Ｒａｏら、米国特許第７，８５５，２００号は、ヘキサン及びアセトンを介した生理活性物質であるオロキシリンＡ、バイカレイン、クリシンの単離方法を開示した。しかし、当該方法は高価であるか、時間がかかるか、又は産業的に実現不可能であるかであった。よって、経済的かつ産業的に実現可能な新規な方法の、技術的必要性が存在する。本発明は前記問題を、ソリザヤノキからの生理活性物質の単離のための、新規な方法を開示することによって解決する。
ソリザヤノキからの生理活性物質であるオロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン、及びそれらのグルクロニドの、非自明かつ産業的に適用可能な単離方法を開示することは、本発明の主目的である。
オロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン及びそれらのグルクロニドを含む新規な組成物を開示することは、本発明のもう一つの目的である。
本発明は、前記の目的を達成し、かつさらなる関連する利点を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、生理活性成分であるオロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン、並びにそれらのグルクロニドであるオロキシリンＡ−７−グルクロニド、バイカレイン７−グルクロニド及びクリシン７−グルクロニドの、ソリザヤノキの樹皮からの単離方法を開示する。本発明は、前記生理活性成分であるオロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン、並びにそれらのグルクロニド成分であるオロキシリンＡ−７−グルクロニド、バイカレイン−７−グルクロニド及びクリシン−７−グルクロニドを含む組成物もまた、開示する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡ、バイカレイン、及びクリシンの同定のためのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】図２は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡの同定のためのプロトンＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡの同定のための炭素ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】図４は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡの質量分析データを示す。
【図５】図５は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレインの同定のためのプロトンＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】図６は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレインの同定のための炭素ＮＭＲスペクトルを示す。
【図７】図７は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレインの質量分析データを示す。
【図８】図８は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたクリシンの同定のためのプロトンＮＭＲスペクトルを示す。
【図９】図９は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたクリシンの同定のための炭素ＮＭＲスペクトルを示す。
【図１０】図１０は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたクリシンの質量分析データを示す。
【図１１】図１１は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡ−７−グルクロニド、バイカレイン−７−グルクロニド、及びクリシン−７−グルクロニドの同定のためのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図１２】図１２は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡ−７−グルクロニドの同定のためのプロトンＮＭＲスペクトルを示す。
【図１３】図１３は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたオロキシリンＡ−７−グルクロニドの同定のための炭素ＮＭＲスペクトルを示す。
【図１４】図１４は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレイン−７−グルクロニドの質量分析データを示す。
【図１５】図１５は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレイン−７−グルクロニドの同定のためのプロトンＮＭＲスペクトルを示す。
【図１６】図１６は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレイン−７−グルクロニドの同定のための炭素ＮＭＲスペクトルを示す。
【図１７】図１７は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたバイカレイン−７−グルクロニドの質量分析データを示す。
【図１８】図１８は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたクリシン−７−グルクロニドの同定のためのプロトンＮＭＲスペクトルを示す。
【図１９】図１９は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたクリシン−７−グルクロニドの同定のための炭素ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２０】図２０は、ソリザヤノキの樹皮から単離されたクリシン−７−グルクロニドの質量分析データを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明は、ソリザヤノキからのオロキシリンＡ及びそのグルクロニドを含有する組成物の抽出方法を開示し、前記方法は：
ａ）ソリザヤノキの樹皮を切り、乾燥し及び粉砕して細粉にする工程
ｂ）工程ａ）の１００ｋｇの前記細粉を８０％メタノール（ｖ／ｖ）で抽出して、水メタノール抽出物を得る工程
ｃ）工程ｂ）の前記水メタノール抽出物を水に溶解して、懸濁溶液を産出する工程
ｄ）工程ｃ）の前記懸濁溶液を、有機溶媒を用いて抽出する工程
ｅ）工程ｄ）の溶媒分画を濃縮し及び乾燥して、黄褐色の粉末を得る工程
ｆ）工程ｄ）の前記粉末に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ及び質量分析を用いて、ＳＴＲ＃１によって表されるオロキシリンＡ、ＳＴＲ＃２によって表されるバイカレイン、及びＳＴＲ＃３によって表されるクリシンとして特徴づける工程
【化１】
0006851476.tif 000002
【化２】
0006851476.tif 000003
【化３】
0006851476.tif 000004
ｇ）工程ｄ）の水性分画を濃縮し及び乾燥して、茶色の粉末を得る工程
ｈ）工程ｇ）の前記粉末に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ及び質量分析を用いて、ＳＴＲ＃４で表されるオロキシリンＡ−７−グルクロニド、ＳＴＲ＃５で表されるバイカレイン−７−グルクロニド、及びＳＴＲ＃６によって表されるクリシン−７−グルクロニドとして特徴づける工程
【化４】
0006851476.tif 000005
【化５】
0006851476.tif 000006
【化６】
0006851476.tif 000007
を含む。
【０００８】
関連する実施形態においては、工程ｄ）の有機溶媒は、ヘキサン、酢酸エチル、メタノール、エタノール、クロロホルム、ブタノール及びアセトンからなる群から選択される。別の関連する実施形態においては、工程ｄ）の有機溶媒は、好ましくは酢酸エチルである。
【０００９】
別の実施形態においては、本発明は、ソリザヤノキの樹皮から単離された、１０％以上のオロキシリンＡ、１０％以上のバイカレイン及び２％以上のクリシンを含む組成物を開示する。さらに具体的な実施形態においては、本発明は、ソリザヤノキの樹皮から単離された、約１０％〜１５％のオロキシリンＡ、約１０％〜２５％のバイカレイン及び約２％〜１０％のクリシンを含む組成物を開示する。
【００１０】
別の関連する実施形態においては、本発明は、ソリザヤノキの樹皮から単離された、０．５％以上のオロキシリンＡ−７−グルクロニド、２％以上のバイカレイン−７−グルクロニド及び０．５％以上のクリシン−７−グルクロニドを含む組成物を開示する。さらに具体的な実施形態においては、ソリザヤノキの樹皮から単離された、約０．５％〜８％のオロキシリンＡ−７−グルクロニド、約２％〜１０％のバイカレイン−７−グルクロニド及び約０．５％〜５％のクリシン−７−グルクロニドを含む組成物を開示する。
【００１１】
前記の最も好ましい実施形態は、本発明の技術的特徴及び技術的効果を取り込み、以下の実例によって説明される。
【００１２】
実施例１：ソリザヤノキからの生理活性物質の単離及び同定
ソリザヤノキは、東南アジアに広く分布している。当該植物に存在する生理活性物質を単離及び同定するため、樹皮を切り、乾燥しかつ粉砕して細粉にした。１００ｋｇの細粉を、８０％メタノール（ｖ／ｖ）で抽出して水メタノール抽出物を得た。これをさらに水に溶解して懸濁溶液を得た。懸濁溶液をさらに酢酸エチルを用いて抽出した。酢酸エチル分画を分離し、濃縮し、及び乾燥して黄褐色の粉末を得た。黄褐色粉末中に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣを用いて分離及び同定し（図１）、かつさらにＮＭＲ及び質量分析器を用いて、それぞれＳＴＲ＃１、ＳＴＲ＃２及びＳＴＲ＃３によって表されるオロキシリンＡ（図２〜４）、バイカレイン（図５〜７）及びクリシン（図８〜１０）として特徴づけた。
【化７】
0006851476.tif 000008
【化８】
0006851476.tif 000009
【化９】
0006851476.tif 000010
【００１３】
水性分画をさらに濃縮し及び乾燥して茶色の粉末を得た。茶色の粉末（水性分画）中に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣを用いて分離及び同定し（図１１）、かつさらにＮＭＲ及び質量分析器を用いて、それぞれＳＴＲ＃４、ＳＴＲ＃５及びＳＴＲ＃６によって表されるオロキシリンＡ−７−グルクロニド（図１２〜１４）、バイカレイン−７−グルクロニド（図１５〜１７）及びクリシン−７−グルクロニド（図１８〜２０）として特徴づけた。
【００１４】
ソリザヤノキの樹皮から単離された生理活性物質の内容を、表１に表にした。
【表１】
0006851476.tif 000011
【００１５】
本発明に対する他の変更及びバリエーションは、前述の開示及び教示から当技術分野における当業者にとって明らかであろう。したがって、本発明の一定の実施形態のみを具体的にここに説明したが、多数の変更が本発明の主旨及び範囲を逸脱することなく加えられ得ることは、明らかであろう。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕ソリザヤノキ（Ｏｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）からのオロキシリンＡ及びそのグルクロニドを含有する組成物の抽出方法であって、前記方法が：
ａ）ソリザヤノキの樹皮を切り、乾燥し及び粉砕して細粉にする工程
ｂ）工程ａ）の１００ｋｇの細粉を８０％メタノール（ｖ／ｖ）で抽出して、水メタノール抽出物を得る工程
ｃ）工程ｂ）の前記水メタノール抽出物を水に溶解して、懸濁溶液を産出する工程
ｄ）工程ｃ）の前記懸濁溶液を、有機溶媒を用いて抽出する工程
ｅ）工程ｄ）の溶媒分画を濃縮し及び乾燥して、黄褐色の粉末を得る工程
ｆ）工程ｄ）の前記粉末に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ及び質量分析を用いて、ＳＴＲ＃１によって表されるオロキシリンＡ、ＳＴＲ＃２によって表されるバイカレイン、及びＳＴＲ＃３によって表されるクリシンとして特徴づける工程
【化１】
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【化２】
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【化３】
0006851476.tif 000014
ｇ）工程ｄ）の水性分画を濃縮し及び乾燥して、茶色の粉末を得る工程
ｈ）工程ｇ）の前記粉末に存在する生理活性物質を、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ及び質量分析を用いて、ＳＴＲ＃４によって表されるオロキシリンＡ−７−グルクロニド、ＳＴＲ＃５によって表されるバイカレイン−７−グルクロニド、及びＳＴＲ＃６によって表されるクリシン−７−グルクロニドとして特徴づける工程
【化４】
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【化５】
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【化６】
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を含む、抽出方法。
〔２〕工程ｄ）の前記有機溶媒が、ヘキサン、酢酸エチル、メタノール、エタノール、クロロホルム、ブタノール及びアセトンからなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕工程ｄ）の前記有機溶媒が、好ましくは酢酸エチルである、前記〔１〕に記載の方法。
〔４〕ソリザヤノキの樹皮から単離された、１０％以上のオロキシリンＡ、１０％以上のバイカレイン及び２％以上のクリシンを含む組成物。
〔５〕前記組成物が、ソリザヤノキの樹皮から単離された、１０％〜１５％のオロキシリンＡ、１０％〜２５％のバイカレイン及び２％〜１０％のクリシンを含む、前記〔４〕に記載の組成物。
〔６〕ソリザヤノキの樹皮から単離された、０．５％以上のオロキシリンＡ−７−グルクロニド、２％以上のバイカレイン−７−グルクロニド及び０．５％以上のクリシン−７−グルクロニドを含む組成物。
〔７〕前記組成物が、ソリザヤノキの樹皮から単離された、０．５％〜８％のオロキシリンＡ−７−グルクロニド、２％〜１０％のバイカレイン−７−グルクロニド及び０．５％〜５％のクリシン−７−グルクロニドを含む、前記〔６〕に記載の組成物。
【図１】
0006851476.tif 000021
【図２】
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【図３】
0006851476.tif 000023
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0006851476.tif 000027
【図８】
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【図９】
0006851476.tif 000029
【図１０】
0006851476.tif 000030
【図１１】
0006851476.tif 000031
【図１２】
0006851476.tif 000032
【図１３】
0006851476.tif 000033
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
0006851476.tif 000036
【図１７】
0006851476.tif 000037
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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