(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、
を含み、
前記第２流路は、第２導入口を有し、且つ前記第１流路の前記フィルター部で前記第１流路と交差する、
血液成分分離デバイス。
【請求項２】
前記第１導入口から導入された溶液は、前記フィルター部の内部を前記第１流路の軸方向に流れ、
前記第２導入口から導入された溶液は、前記フィルター部の内部を前記第１流路の軸方向とは異なる方向に流れる、請求項１に記載の血液成分分離デバイス。
【請求項３】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、
を含み、
前記第１流路に接続する血漿分析部を備える、
血液成分分離デバイス。
【請求項４】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第３流路と、を含み、
前記第１流路において、前記第１導入口、前記第２流路との接続部、及び前記第３流路との接続部が、この順番で配置されており、
前記フィルター部において、
前記第２流路との接続部は前記フィルター部の一端に配置され、
前記第３流路との接続部は前記フィルター部の他端に配置される、
血液成分分離デバイス。
【請求項５】
前記第３流路は、前記第１流路の前記フィルター部で、前記第１流路と交差している、請求項４に記載の血液成分分離デバイス。
【請求項６】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、
を含み、
溶血された血球を分析する血球分析部を備える、
血液成分分離デバイス。
【請求項７】
前記血球分析部は、前記第２流路に接続している、
請求項６に記載の血液成分分離デバイス。
【請求項８】
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第３流路をさらに含み、
前記第１流路において、前記第１導入口、前記第２流路との接続部、及び前記第３流路との接続部が、この順番で配置されており、
前記血球分析部は、前記第２流路又は前記第３流路に接続している、
請求項６に記載の血液成分分離デバイス。
【請求項９】
前記血球分析部は、ヘモグロビンＡ１ｃを測定するヘモグロビンＡ１ｃ測定部である、請求項６又は７に記載の血液成分分離デバイス。
【請求項１０】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、
を含み、
血球回収部を備える、
血液成分分離デバイス。
【請求項１１】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、を含む、血液成分分離デバイスを用いて、
血液成分を分離する方法であって、
（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させ、前記溶液中の血漿を前記第１流路において移動させる工程と、
（ｂ）前記第１導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させ、溶血により放出された血球成分を前記第２流路において移動させる工程と、
（ｃ）前記工程（ａ）の後であり前記工程（ｂ）の前に、前記第１導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する血漿除去工程と、
を含む、方法。
【請求項１２】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続し、第２導入口を有し、且つ前記第１流路の前記フィルター部で前記第１流路と交差する、第２流路と、を含む、血液成分分離デバイスを用いて、
血液成分を分離する方法であって、
（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させ、前記溶液中の血漿を前記第１流路において移動させる工程と、
（ｂ）前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させ、溶血により放出された血球成分を前記第２流路において移動させる工程と、
（ｃ）前記工程（ａ）の後であり前記工程（ｂ）の前に、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する血漿除去工程と、
を含む、方法。
【請求項１３】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、を含む、血液成分分離デバイスを用いて、
血液成分を分析する方法であって、
（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させる工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、
（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、
（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、
を含む、方法。
【請求項１４】
血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
前記第１流路の前記フィルター部に接続し、第２導入口を有し、且つ前記第１流路の前記フィルター部で前記第１流路と交差する、第２流路と、を含む、血液成分分離デバイスを用いて、
血液成分を分析する方法であって、
（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させる工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、
（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、
（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、
を含む、方法。
【請求項１５】
（ｄ）前記工程（ａ）又は前記工程（ｂ）の後、前記フィルターを通過した血漿を分析する工程、をさらに含む、
請求項１４に記載の血液成分を分析する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液成分分離デバイス、血液成分分離方法、及び血液成分分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液検査を行う際には、通常、血球成分と血漿成分とに分離され、それぞれ分析が行われる。血球成分と血漿成分とを分離する方法としては、遠心分離法、血球分離フィルターを用いる方法等がある。
しかし、遠心分離法では、遠心分離の操作が煩雑であった。また、血球分離フィルターとしては、例えば、特許文献１には、血液濾過用のガラス繊維フィルター等が記載されている。しかし、従来の血球分離フィルターを用いた方法では、血球画分への血漿成分の混入を十分に防ぐことができなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−３８５１２号公報
【発明の概要】
【０００４】
本発明の一実施態様は、血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、を含む、血液成分分離デバイス、である。前記第２流路は、第２導入口を有し、且つ前記第１流路の前記フィルター部で前記第１流路と交差していてもよい。
【０００５】
また、本発明の一実施態様は、前記血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分離する方法であって、（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させ、前記溶液中の血漿を前記第１流路において移動させる工程と、（ｂ）前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させ、溶血により放出された血球成分を前記第２流路において移動させる工程と、を含む、方法である。
【０００６】
また、本発明の一実施態様は、前記血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分析する方法であって、（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、を含む、方法である。
【０００７】
また、本発明の一実施態様は、ヘモグロビンＡ１ｃを分析する方法であって、（ａ）血球と血漿とを分離するフィルターに血球と血漿とを含む溶液中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記フィルターに洗浄液を通過させ、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記フィルターに溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球中のヘモグロビンＡ１ｃを分析する工程と、を含む、方法である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明の１実施形態に係る血液成分分離デバイスの一例を示す模式図である。
【図２】本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例１を示す模式図である。
【図３】本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例２を示す模式図である。
【図４】本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例３を示す模式図である。
【図５】本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例４を示す模式図である。
【図６】本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例５を示す模式図である。
【図７】本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例６を示す模式図である。
【図８】（ａ）及び（ｂ）は、図７の血液成分分離デバイス７００のポンプ部Ｐ１、Ｐ２の構造の一例を示す断面図である。
【図９】（ａ）〜（ｄ）は、図８のポンプ部の一例の動作を説明する断面図である。
【図１０】図７の血液成分分離デバイス７００のポンプ部Ｐ１、Ｐ２に適用可能な２色成型バルブの構造の一例を示す断面図である。
【図１１】図７の血液成分分離デバイス７００のポンプ部Ｐ１、Ｐ２に適用可能な２色成型バルブの構造の一例を示す断面図である。
【図１２】実験例１において、ＨｂＡ１ｃ測定値に及ぼす血漿含有量の影響を評価した結果を示すグラフである。
【図１３】実験例２〜６で用いた血液成分分離デバイスの構造を示す模式図である。
【図１４】実験例２において、血球画分中の血漿を測定した結果を示すグラフである。
【図１５】実験例３において、血球画分中の血漿を測定した結果を示すグラフである。
【図１６】実験例４において、２０μＬ、２５μＬ又は３０μＬの洗浄液でフィルターを洗浄後、血球を溶血して回収した後の各血液成分分離デバイスの写真である。
【図１７】実験例５において、ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性を評価した結果を示すグラフである。
【図１８】実験例６において、ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性を評価した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、場合により図面を参照しつつ、本発明の実施形態について詳細に説明する。なお、図面中、同一又は相当部分には同一又は対応する符号を付し、重複する説明は省略する。なお、各図における寸法比は、説明のため誇張している部分があり、必ずしも実際の寸法比とは一致しない。
【００１０】
［血液成分分離デバイス］
１実施形態において、本発明は、第１導入口と、血球と血漿とを分離するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、を含む、血液成分分離デバイスを提供する。
【００１１】
図１は、本実施形態の血液成分分離デバイスの一例を示す模式図である。血液成分分離デバイス１００は、第１流路１０、第２流路２０、第３流路３０、血漿分析部５０、及び血球分析部６０を備えている。第１流路１０は、第１導入口１２とフィルター部１１とを有している。第２流路２０及び第３流路３０は、第１流路１０のフィルター部１１に接続し、フィルター部１１で第１流路１０と交差している。
【００１２】
第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０は、例えば、ガラス管、樹脂管等の管で形成してもよく、貼り合された２枚のプレートの間に溝を形成することにより流路を形成してもよい。
第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０の幅及び高さは、特に限定されず、試料の種類に応じて、任意に選択すればよい。例えば、これらの流路の幅及び高さは、試料が通過できる程度の大きさとすることができ、１μｍ以上、１０μｍ以上、５０μｍ以上、１００μｍ以上等が例示される。第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０の幅は、それぞれ同じであってもよく、異なっていてもよい。例えば、全血試料を用いる場合、第１流路１０の直径としては、５０μｍ以上、８０μｍ以上、１００μｍ以上等が例示できる。これらの流路の幅及び高さの上限値は、特に限定されず、血液成分分離デバイスのサイズに応じて適宜選択すればよい。これらの流路の幅及び高さの上限値としては、例えば、１００ｍｍ以下、５０ｍｍ以下、１０ｍｍ以下、５ｍ以下、２ｍｍ以下等が挙げられる。一例として、幅０．５〜２．０ｍｍ程度、高さ０．２ｍｍ〜２．０ｍｍ程度が挙げられる。
第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０の形状は、特に限定されず、流路断面が円形であってもよく、矩形であってもよい。
【００１３】
（第１流路）
第１流路１０は、第１導入口１２、フィルター部１１、及びバルブＶ１を備えている。
【００１４】
第１導入口１２は、第１流路１０に血球と血漿とを含む溶液を導入する。また、その他の試料や試薬等を導入するために用いられてもよい。第１導入口１２は、試料を導入しやすいように漏斗状になっていてもよい。
【００１５】
フィルター部１１は、流路内に血球を捕捉するフィルターが設置された部位である。血球を捕捉するフィルターは、血液中の血球を選択的に捕捉して、血漿を含む、血液中の血球以外の成分から分離する。そのため、血液中の血球と血漿とを分離することが可能となる。フィルターは血球を捕捉し、且つ血漿が通過可能な材質及び構造を備えるものであれば特に限定されず、公知の血球分離フィルターを用いることができる。
フィルターとしては、例えば、多孔質膜や、ガラス繊維膜等が例示される。フィルターの材料としては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリビニルアルコール、ウレタン、アクリル、レーヨン、ガラス等が挙げられる。
フィルターとしては、例えば、上記素材を成形した繊維を不織布状に集積させたもの、上記素材を用いて連続孔が形成された連続気泡発泡体などの成形体、上記素材を成形した略球形の微粒子を細密充填構造となるように集積したもの、あるいはこの集積したものを焼結することにより一体成形したもの、上記素材を成形したフィルムに貫通孔を形成させたもの、あるいはフィルムの片面ないし両面にコロナ放電やプレス加工によりシボ加工したシートを多数枚積層したもの等が挙げられる。
フィルターの平均孔径は、血球を捕捉し且つ血漿の通過を阻害しない程度であればよく、例えば、２〜１０μｍ、又は３〜８μｍ等が挙げられる。平均孔径は、バブルポイント試験法（ＪＩＳ  Ｋ  ３８３２）や電子顕微鏡による拡大画像を用いた実測法などにより計測される。
フィルターの空隙率は、特に限定されないが、実用可能な濾過時間の確保及びフィルタの安定性を維持するために、例えば、２０〜９７％、３０〜９５％等が例示される。
【００１６】
バルブＶ１は、第１流路１０を開状態又は閉状態に制御するためのものである。バルブＶ１は、第１流路１０において、フィルター部１１に対して、第１導入口１２とは逆側に配置されている。第１流路１０において、第１導入口１２、フィルター部１１、及びバルブＶ１が、この順に並んでいる。この時、第１導入口１２が第１流路１０の上流側であり、バルブ部Ｖ１は下流側である。第１導入口１２から導入された溶液は、フィルター部１１を通過し、バルブ部Ｖ１に向かって流れる。バルブＶ１の構造は、特に限定されず、流体デバイス等に使用される任意のバルブを用いることができる。一例として、後述する、図７におけるポンプ部Ｐ１、Ｐ２を構成するバルブと同様のものを用いることができる。
バルブＶ１は、一例として、フィルター部１１の下流側の末端の近傍に配置されている。デッドボリュームを小さくするため、例えば、バルブＶ１とフィルター部１１とが接していることが好ましい。あるいは、バルブＶ１とフィルター部１１との間が離れて配置されている場合であっても、バルブＶ１の端部とフィルター部１１の端部との間の距離は広くとも数ミリ程度であることが好ましい。バルブＶ１の端部とフィルター部１１の端部との距離は、０〜１０ｍｍ程度であり、０〜５ｍｍ程度である。バルブＶ１をフィルター部１１の近傍に配置することにより、後述する溶血工程により溶血された血球画分を第２流路２０又は第３流路３０を介して、効率よく回収することができる。
なお、本実施形態の血液成分分離デバイスは、バルブＶ１を設けない構成としてもよい。また、第１導入口１２とフィルター部１１とが離れて配置されている場合には、第１導入口１２とフィルター部１１との間にもバルブを設けるようにしてもよい。
【００１７】
第１流路１０の、フィルター部１１に対する、第１導入口１２とは逆側は、血漿分析部５０に接続している。血漿分析部５０は、フィルター部１１を通過した血漿を分析するためのものである。血漿分析部５０は、目的に応じて任意の血漿成分を分析可能な構成とすることができる。例えば、血漿分析部５０は、グルコース分析部であってもよい。血漿分析部５０は、全コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＴＧ、ＵＡ、血中クレアチニン、アルブミン、総タンパク質、ＡＬＴ、ＡＳＴ、γＧＴＰ、ＢＵＮ、Ｋイオン、Ｎａイオン、Ｃａイオン、及びＣｌイオン等を分析するものであってもよい。また、血漿分析部５０は、ＢＶ、ＨＣＶ、ＣＲＰ、ｃＴｎＴ、ｃＴｎＩ、ＢＮＰ、Ｈ−ＦＡＢ、ＣＫ−ＭＢ、及びＩＬ−６等を分析するものであってもよく、腫瘍マーカー、ｍｉＲＮＡ等を分析するものであってもよい。血漿分析部５０は、単独項目を分析するものであってもよく、複数項目を分析するものであってもよい。  血液成分分離デバイスが、血漿分析部５０を備えることにより、フィルター部１１で分離した血漿成分をそのままデバイス内で分析することができる。フィルター部１１から血漿分析部５０までは血液成分分離デバイス上の流路を介して、血漿成分が送液されるため、コンタミネーション等のおそれや、装置の汚染等の心配がなく、簡便な血漿成分の分析が可能となる。また、血球成分の分離からダイレクトに血漿成分を測定できるので、非特異的な測定物のロスがなくなり精度が上がり、さらに検査時間が短時間になる。
【００１８】
本実施形態の血液成分分離デバイスは、血漿分析部５０及び／又は血漿回収部を設けてもよい。あるいは、本実施形態の血液成分分離デバイスは、血漿分析部５０の替わりに、血漿回収部を設け、フィルター部１１を通過した血漿を回収する構成としてもよい。回収した血漿は、手作業や血漿分析装置等を用いて分析を行ってもよく、後の分析等のために保存してもよい。また、血漿分析部５０とともに、血漿回収部を設ける構成としてもよい。この場合、血漿分析部５０で分析を終えた血漿を、血漿回収部で回収する構成とすることができる。
【００１９】
第１流路１０は、さらに、流路内の流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。第１流路１０が、流体制御部を備える場合、一例として、流体制御部は、フィルター部に対して、第１導入口とは逆側に配置される。この場合、第１導入口１２と流体制御部との間にフィルター部１１が配置されるため、第１導入口１２から第１流路内に導入された試料がフィルター部１１を通過する速度を、流体制御部により制御することができる。
流体制御部は、流体デバイス等で流路内の流体の流れを制御するために用いられる任意の構成を採用することができる。流体制御部としては、例えば、吸気ポンプに接続する吸気ポート、ポンプ、バルブ等が挙げられる。
第１流路１０において、流体は、流路の軸方向を上流から下流に向かって移動する。この方向を第１方向、または、第１流路の軸方向と称してもよい。第１方向とは、第１導入口１２からフィルター部１１へと向かう方向であり、また、バルブＶ１を備える場合、フィルター部１１からバルブＶ１に向かう方向である。
【００２０】
また、第１流路１０は、さらに、後述する洗浄工程において、洗浄液を回収する廃液回収部等を備えていてもよい。
【００２１】
（第２流路）
第２流路２０は、第１流路１０の軸方向とは異なる方向において、第１流路１０のフィルター部１１に接続している。第２流路２０は、フィルター部１１で第１流路１０と交差している。第２流路２０、第２導入口２２と、第１流路１０との接続部を挟んだ両側に配置されるバルブＶ２ａ、Ｖ２ｂとを備えている。
【００２２】
第２流路２０が、第１流路１０と交差する角度は、特に限定されず、任意の角度とすることができる。一例として、第２流路２０は、第１流路１０と直交している。また、一例として、第２流路２０と第１流路１０とは、略同一平面上に配置される。これらの流路を略同一平面上に配置することにより、血液成分分離デバイスを小型化することができる。
【００２３】
第２導入口２２は、第２流路２０に、溶血剤等の試薬を導入するために用いられる。第２導入口２２は、試薬等を導入しやすいように漏斗状になっていてもよい。また、第２導入口２２は、図示しない薬液ポート等に接続する構成であってもよい。
【００２４】
バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂは、第２流路２０を開状態又は閉状態に制御するためのものである。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂの構造は、特に限定されず、流体デバイス等に使用される任意のバルブを用いることができる。一例として、上述のバルブＶ１と同様のバルブを採用してもよい。
バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂは、一例として、フィルター部１１の近傍に配置されている。デッドボリュームを小さくするため、例えば、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂとフィルター部１１とが接していることが好ましい。あるいは、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂとフィルター部１１との間が離れて配置されている場合であっても、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂの端部とフィルター部１１の端部との間の距離は広くとも数ミリ程度であることが好ましい。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂの端部とフィルター部１１の端部との距離は、０〜１０ｍｍ程度であり、０〜５ｍｍ程度である。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂをフィルター部１１の近傍に配置することにより、フィルター部１１における血液成分の分離を効率よく行うことができる。
なお、本実施形態の血液成分分離デバイスは、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂを設けない構成としてもよく、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂのいずれか一方のみを設ける構成としてもよい。バルブＶ２ａを備えることにより、第１流路１０において血球成分と血漿成分とを分離している間はバルブＶ２ａを閉じておき、血球成分と血漿成分との分離反応後にバルブＶ２ａを解放することが可能となる。このことは、事前に第２導入口２２に試薬を導入しておく場合などに有効である。また、バルブＶ２ｂを備えることにより、第２流路２０に試薬などを滞留することが可能となる。このことは、フィルター部１１中の成分と試薬との反応に時間を要する場合などに有効である。
【００２５】
第２流路２０の、フィルター部１１に対する第２導入口２２とは逆側は、閉鎖されていてもよく、開放されていてもよい。あるいは、廃液回収部等に接続していてもよい。
第２流路２０において、流体は第１方向とは異なる第２方向に移動する。第２方向は、第１流路の軸方向と異なる方向であり、第２流路の軸方向である。第２方向とは、第２導入口２２からフィルター部１１にむかう方向である。
【００２６】
（第３流路）
第３流路３０は、第１流路１０の軸方向とは異なる方向において、第１流路１０のフィルター部１１に接続している。第３流路３０は、第２流路２０とは異なる位置において、フィルター部１１で第１流路１０と交差している。第１流路１０においては、第１導入口１２、第２流路２０との接続部、第３流路３０との接続部が、この順番で配置されている。また、第１流路１０においては、第１導入口１２、第３流路３０との接続部、及び第２流路２０との接続部が、この順番で配置されていてもよい。第３流路３０は、第１流路１０との接続部を挟んだ両側に配置されるバルブＶ３ａ、Ｖ３ｂとを備えている。
【００２７】
第３流路３０が、第１流路１０と交差する角度は、特に限定されず、任意の角度とすることができる。第２流路２０と第３流路とは、実質同一の角度で第１流路１０と交差してもよい。一例として、第３流路３０は、第１流路１０と直交している。また、一例として、第３流路３０は、第１流路１０及び第２流路２０と、略同一平面上に配置される。これらの流路を略同一平面上に配置することにより、血液成分分離デバイスを小型化することができる。
【００２８】
バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂは、第３流路３０を開状態又は閉状態に制御するためのものである。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂは、第１流路１０との接続部を挟んだ両側に配置されている。第３流路３０において、バルブＶ３ａ、第１流路１０との接続部、及びバルブＶ３ｂが、この順に配置されている。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂの構造は、特に限定されず、流体デバイス等に使用される任意のバルブを用いることができる。一例として、上述のバルブＶ１、Ｖ２ａ、Ｖ２ｂと同様のバルブを採用してもよい。
バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂは、一例として、フィルター部１１の近傍に配置されている。デッドボリュームを小さくするため、例えば、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂとフィルター部１１とが接していることが好ましい。あるいは、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂとフィルター部１１との間が離れて配置されている場合であっても、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂの端部とフィルター部１１の端部との間の距離は広くとも数ミリ程度であることが好ましい。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂの端部とフィルター部１１の端部との距離は、０〜１０ｍｍ程度であり、０〜５ｍｍ程度である。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂをフィルター部１１の近傍に配置することにより、フィルター部１１における血液成分の分離を効率よく行うことができる。
なお、本実施形態の血液成分分離デバイスは、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂを設けない構成としてもよく、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂのいずれか一方のみを設ける構成としてもよい。バルブＶ３ａを備えることにより、第１流路１０において血球成分と血漿成分とを分離している間はバルブＶ３ａを閉じておき、血球成分と血漿成分との分離反応後にバルブＶ３ａを解放することが可能となる。また、バルブＶ３ｂを備えることにより、第３流路３０に試薬などを滞留することが可能となる。このことは、フィルター部１１中の成分と試薬との反応に時間を要する場合などに有効である。
【００２９】
第３流路３０は、血球分析部６０に接続している。血球分析部６０は、フィルター部１１により捕捉された血球を分析するためのものである。後述するように、フィルター部１１に捕捉された血球は、溶血剤等により溶血され、第３流路３０を介して血球分析部６０に運ばれる。血球分析部６０は、目的に応じて任意の血球成分を分析可能な構成とすることができる。例えば、血球分析部６０は、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を分析可能な構成（ＨｂＡ１ｃ測定部）であってもよい。一例として、血球分析部６０は、ラテックス凝集法により、ＨｂＡ１ｃを測定する構成を備える。血球分析部６０は、ヘモグロビン量を測定する構成を備えていてもよい。また、血球分析部６０は、グルコース６リン酸脱水素酵素やピルピン酸キナーゼ等に代表される、赤血球酵素の活性を測定する構成を備えていてもよい。血球分析部６０は、単独項目を分析するものであってもよく、複数項目を分析するものであってもよい。
血液成分分離デバイスが、血球分析部６０を備えることにより、フィルター部１１で分離した血球成分をそのままデバイス内で分析することができる。フィルター部１１から血球分析部６０までは血液成分分離デバイス上の流路を介して、血球成分が送液されるため、コンタミネーション等のおそれがなく、また簡便な血球成分の分析が可能となる。
【００３０】
本実施形態の血液成分分離デバイスは、血球分析部６０及び／又は血球回収部を設けてもよい。本実施形態の血液成分分離デバイスは、血球分析部６０の替わりに、血球回収部を設け、フィルター部１１に捕捉され溶血された血球成分を回収する構成としてもよい。回収した血球成分は、手作業や血球成分析装置（ＨｂＡ１ｃ測定装置など）等を用いて分析を行ってもよく、後の分析等のために保存してもよい。また、血球分析部６０とともに、血球回収部を設ける構成としてもよい。この場合、血球分析部６０で分析を終えた血球成分を、血球回収部で回収する構成とすることができる。
【００３１】
第３流路３０は、さらに、流路内の流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。第３流路３０が、流体制御部を備えることにより、フィルター部１１から第３流路３０への流体の流れを制御することができる。
流体制御部は、流体デバイス等で流路内の流体の流れを制御するために用いられる任意の構成を採用することができる。流体制御部としては、例えば、吸気ポンプに接続する吸気ポート、ポンプ、バルブ等が挙げられる。
【００３２】
第３流路３０の血球分析部６０に接続しない他端は、閉鎖されていてもよく、開放されていてもよい。あるいは、廃液回収部等に接続していてもよい。
第３流路３０において、流体は第１方向とは異なる第３方向に移動する。第３方向は、第３流路３０の軸方向である。第３方向とは、フィルター部１１から血球分析部６０または血球回収部に向かう方向である。第２流路２０と第３流路３０とは略平行であってもよく、この場合第２方向と第３方向とは略同一である。
【００３３】
（使用方法）
上記のような構成を備えた血液成分分離デバイス１００の使用方法について、例を挙げて説明する。
【００３４】
まず、バルブＶ１を開状態にし、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂ、Ｖ３ａ、Ｖ３ｂを閉状態にする。この状態で、第１導入口１２から、第１流路１０に、血液試料を導入する。血液試料は、血球成分と血漿成分とを含むものであれば、特に限定されないが、一例として全血試料が挙げられる。また、血液試料は、全血試料から、白血球等を除去したものであってもよい。
【００３５】
第１導入口１２から第１流路１０に導入された血液試料は、フィルター部１１を通過する。この際、血球はフィルターに選択的に捕捉される。血漿の大部分はフィルターを通過する。一部の血漿はフィルターに残存することもある。第１流路１０が、流体制御部を有する場合には、流体制御部により、フィルター部１１を通過する血液試料の流れを制御してもよい。血液試料の流れを制御することにより、フィルター部１１における血液試料の通過速度を短縮することができる。
【００３６】
フィルター部１１を通過した血漿は、第１流路１０に接続する血漿分析部５０において分析される。なお、血球成分分離デバイスが、血漿分析部５０に替えて血漿回収部を備える場合には、血漿回収部において血漿を回収してもよい。
【００３７】
次に、第１導入口１２から、第１流路１０に、洗浄液を導入する。洗浄液は、血球を破壊しないものであれば、特に限定されず、公知の細胞洗浄液等を用いることができる。洗浄液としては、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（Phosphate buffered saline：ＰＢＳ）、生理食塩水等が挙げられる。これにより、フィルター部１１に残っている血漿を除去することができる。血液成分分離デバイス１００が、流体制御部を有する場合には、流体制御部により、フィルター部１１を通過する洗浄液の流れを制御してもよい。洗浄液の流れを制御することにより、フィルター部１１の洗浄を短縮することができる。
フィルター部を洗浄した洗浄液は、血漿分析部５０において回収してもよく、第１流路１０が血漿回収部や廃液回収部を備えている場合には、これらにより回収してもよい。
【００３８】
上記の洗浄工程は、バルブＶ２ａを開状態にし、第２導入口２２から洗浄液を導入することにより行ってもよい。第２導入口２２から導入された洗浄液は、第２流路２０を介して、フィルター部１１に導入される。フィルター部１１に導入された洗浄液により、上記と同様に、フィルター部１１に残っている血漿を除去することができる。
【００３９】
あるいは、第３流路３０のバルブＶ３ａを有する一端が、廃液回収部に接続している場合には、バルブＶ１を閉状態にし、バルブＶ３ａを開状態にして、第１導入口１２から洗浄液を導入してもよい。この場合、第３流路３０を介して、第３流路３０に接続する廃液回収部に、フィルター部１１に残っている血漿を洗浄液とともに回収することができる。
また、バルブＶ２ａ、Ｖ３ａを開状態とし、第２導入口２２から、第２流路を介して、洗浄液をフィルター部１１に導入してもよい。この場合も、第３流路３０を介して、第３流路３０に接続する廃液回収部に、フィルター部１１に残っている血漿を洗浄液とともに回収することができる。
【００４０】
次に、バルブＶ１、Ｖ２ｂ、Ｖ３ａを閉状態にし、バルブＶ２ａ、Ｖ３ｂを開状態にする。この状態で、第２導入口２２から、第２流路２０に溶血剤を導入する。溶血剤は、血球（例えば、赤血球）を破壊できるものであればよく、公知の溶血剤と特に限定なく用いることができる。溶血剤としては、例えば、低張液、水等が挙げられる。第２導入口２２から導入れた溶血剤は、第２流路２０を介してフィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球（例えば、赤血球）が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第３流路３０との接続部に到達すると、第３流路３０へと移動する。
【００４１】
第２流路２０又は第３流路３０が、流体制御部を有する場合には、流体制御部により、第２流路からフィルター部１１への溶血剤の流れ、及びフィルター部１１から第３流路３０への血球成分の流れを制御してもよい。これらの流れを制御することにより、血球成分が血球分析部６０に到達する時間を短縮することができる。
【００４２】
フィルター部１１から第３流路３０に移動した血球成分は、第３流路３０に接続する血球分析部６０において分析される。なお、血球成分分離デバイスが、血球分析部６０に替えて血球回収部を備える場合には、血球回収部において血球成分を回収してもよい。
【００４３】
上記の溶血工程は、バルブＶ１、Ｖ２ａ、Ｖ２ｂ、Ｖ３ａを閉状態にし、バルブＶ３ｂを開状態にして、第１導入口１２から溶血剤を導入することにより行ってもよい。第１導入口１２から導入された溶血剤は、フィルター部１１に捕捉されている血球を溶血し、放出された血球成分は、上記と同様に、第３流路を介して血球分析部６０へと移動する。
【００４４】
上記のように、本実施形態の血液成分分離デバイスを用いることにより、血漿と血球とを分離した後、それぞれ回収又は分析を行うことができる。特に、血液成分分離デバイスが、血漿分析部５０と血球分析部６０との両方を備える場合には、血漿分析と血球分析とを１つのデバイスで同時に行うことができるため、迅速且つ簡易に血液分析を行うことができる。血球分離部（フィルター部）と血漿分析部、また、血球分離部（フィルター部）と血球分析部とが、流路で接続されているため、コンタミネーションのおそれがないというメリットがある。
【００４５】
また、従来の血球分離方法では、血球画分への血漿の混入を防ぐことができず、当該血漿の混入により血球成分の分析結果が不安定となる場合があった。例えば、後述する実施例で示すように、血漿が存在する血球試料でＨｂＡ１ｃを測定した場合、測定値が不安定となり、信頼できる測定値を得ることができない。
本実施形態の血液成分分離デバイスでは、フィルターで血球を捕捉した後、洗浄液でフィルターに残っている血漿を除去することができるため、血球画分への血漿の混入量を低減することができる。これにより、血球成分分析における血漿の影響を低減し、安定した血球成分測定値を得ることが可能となる。
【００４６】
本実施形態の血液成分分離デバイスは、上記で説明した態様に限定されず、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、各構成要素を適宜変更することができる。例えば、以下のような変形例１〜６も、本実施形態の血液成分分離デバイスの範囲内である。
【００４７】
＜変形例１＞
図２は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例１を示す模式図である。血液成分分離デバイス２００は、第３流路３０を有さない以外は、血液成分分離デバイス１００と同様の構成となっている。第２流路２０の、第１流路との接続部に対する、第２導入口２２とは逆側は、血球分析部６０に接続している。
【００４８】
血液成分分離デバイス２００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂを開状態として、第２導入口２２から、第２流路２０に、溶血剤を導入する。第２流路２０に導入された溶血剤は、第２流路２０を介してフィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）とは異なる方向（第２方向）にフィルター部１１を移動する。溶血剤が移動する第２方向上に捕捉されている血球は、溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、フィルター部１１から第２流路２０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
【００４９】
第２流路２０は、血球分析部６０に替えて、又は血球分析部６０に加えて、血球回収部を備えていてもよい。また、第２流路２０は、第２流路２０における流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。後述する変形例４、変形例５でも同様である。
【００５０】
＜変形例２＞
図３は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例２を示す模式図である。血液成分分離デバイス３００は、第２流路２０及び第３流路３０が第１流路１０と交差していない以外は、血液成分分離デバイス１００と同様の構成となっている。血液成分分離デバイス３００において、第２流路２０及び第３流路３０は、それぞれフィルター部１１から突き出るような構成となっている。
血液成分分離デバイス３００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａ、Ｖ３ａを開状態として、第２導入口２２から、第２流路２０に、溶血剤を導入する。第２流路２０に導入された溶血された溶血剤は、第２流路２０を介してフィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第３流路３０との接続部に到達すると、第３流路３０へと移動する。そして、第３流路３０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
【００５１】
＜変形例３＞
図４は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例３を示す模式図である。血液成分分離デバイス４００は、第２流路２０及び第３流路３０が第１流路１０に対して同方向に配置されている以外は、血液成分分離デバイス３００と同様の構成となっている。
溶血工程は、血液成分分離デバイス３００と同様に行うことができる。
【００５２】
＜変形例４＞
図５は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例４を示す模式図である。血液成分分離デバイス５００は、第３流路３０を有さず、第２流路２０が第１流路１０と交差しない構成となっている。第２流路２０は、血球分析部６０に接続している。
【００５３】
血液成分分離デバイス５００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａを開状態として、第１導入口１２から、第１流路１０に、溶血剤を導入する。第１流路１０に導入された溶血剤は、フィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第２流路２０との接続部に到達すると、第２流路２０へと移動する。そして、第２流路２０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
【００５４】
第２流路２０は、血球分析部６０に替えて、又は血球分析部６０に加えて、血球回収部を備えていてもよい。また、第２流路２０は、第２流路２０における流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。
【００５５】
＜変形例５＞
図６は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例５を示す模式図である。血液成分分離デバイス６００は、第３流路３０を有さず、第２流路２０が第１流路１０と交差しない構成となっている。第２流路２０は、血球分析部６０に接続している。また、第１流路１０の第１導入口１２とフィルター部１１との間に、第４流路４０が接続している。第４流路４０は、第４導入口４２と、バルブＶ４ａとを備えている。
【００５６】
血液成分分離デバイス６００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａ、Ｖ４ａを開状態として、第４導入口４２から、第４流路４０に、溶血剤を導入する。第４流路４０に導入された溶血された溶血剤は、第４流路４０を介して第１流路１０に到達し、第１流路１０を移動して、フィルター部１１に到達する。フィルター部１１において、溶血剤は、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第２流路２０との接続部に到達すると、第２流路２０へと移動する。そして、第２流路２０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
【００５７】
＜変形例６＞
図７は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例６を示す模式図である。血液成分分離デバイス７００は、プレート７０内に、第１流路及び第２流路が形成されている。第１流路は第１流路１０ａ、１０ｂから構成されており、第２流路は第２流路２０ａ、２０ｂ、２０ｃから構成されている。
【００５８】
第１流路１０ａ、１０ｂは、バルブＶ１ａを介して互いに接続されている。
第１流路１０ａは、第１導入口１２、及びフィルター部１１を有している。
第１流路１０ｂは、流路制御部としてのポンプ部Ｐ１、及び血漿分析部５０を備えている。第１流路１０ｂは、バルブＶ１ｆを介して、インレットＩ１に接続している。インレットＩ１は、プレート７０の下方に配置される図示しない試薬貯留部に接続している。そのため、バルブＶ１ｆを開状態とすることにより、インレットＩ１から、第１流路１０ｂに試薬を導入することができる。第１流路１０ｂは、バルブＶ１ｃ又はＶ１ｄを介して、廃液回収部Ｗ１に接続している。そのため、バルブＶ１ｃ又はＶ１ｄを開状態とすることにより、第１流路１０ｂから廃液回収部Ｗ１に廃液を排出することができる。
第１流路１０ｂは、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｂ、Ｖ１ｅを開状態とすることにより、循環流路（第１循環経路）を形成する。
また、第１流路１０ｂ及び廃液回収部Ｗ１は、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態とすることにより、流体を第１流路１０ｂから廃液回収部Ｗ１へと排出する流路（第１排出経路）を形成する。
【００５９】
第２流路２０ａ、２０ｂは、バルブＶ２ｅを介して互いに接続されている。第２流路２０ｂ、２０ｃは、バルブＶ２ｋ、Ｖ２ｍを介して互いに接続されている。
第２流路２０ａは、第２導入口２２を有している。第２導入口２２は、プレート７０の下方に配置される図示しない溶血剤貯留部に接続しており、第２導入口２２から、第２流路２０ａに溶血剤を導入することができる。第２流路２０ａは、第１流路１０ａのフィルター部１１に接続し、第１流路１０ａと交差している。第２流路２０ａにおける、第１流路１０ａとの接続部の両側には、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂが設置されている。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂを開状態とし、第２導入口２２から第２流路２０ａに溶血剤を導入すると、溶血剤は、第２流路２０ａの軸方向に移動して、フィルター部１１を通過する。第２流路２０ａは、バルブＶ２ｄを介して、インレットＩ２に接続している。インレットＩ２は、プレート７０の下方に配置される図示しない試薬貯留部に接続している。そのため、バルブＶ２ｄを開状態とすることにより、インレットＩ２から、第２流路２０ａに試薬を導入することができる。さらに、バルブＶ２ｅを開状態とすることにより、第２流路２０ｂに試薬を導入することができる。また、第２流路２０ａは、バルブＶ２ｃを介して、エア導入口Ａに接続している。そのため、バルブＶ２ｅを開状態とすることにより、エア導入口Ａから、第２流路２０ａにエアを導入することができる。さらに、バルブＶ２ｅを開状態とすることにより、第２流路２０ｂにエアを導入することができる。
第２流路２０ｂは、流体制御部としてのポンプ部Ｐ２、及び血球分析部６０を備えている。第２流路２０ｂは、バルブＶ２ｈ又はＶ２ｉを介して、廃液回収部Ｗ２に接続している。そのため、バルブＶ２ｈ又はＶ２ｉを開状態とすることにより、第２流路２０ｂから廃液回収部Ｗ２に廃液を排出することができる。
第２流路２０ｃは、バルブＶ２ｎを介して、インレットＩ３に接続している。インレットＩ３は、プレート７０の下方に配置される図示しない試薬貯留部に接続している。そのため、バルブＶ２ｎを開状態とすることにより、インレットＩ３から、第２流路２０ｃに試薬を導入することができる。さらに、バルブＶ２ｋ又はバルブＶ２ｍを開状態とすることにより、第２流路２０ｂに試薬を導入することができる。また、第２流路２０ｃは、バルブＶ２ｊを介して、廃液回収部Ｗ２に接続している。そのため、バルブＶ２ｊを開状態とすることにより、第２流路２０ｃから廃液回収部Ｗ２に廃液を排出することができる。
第２流路２０ｂは、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｍを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｌを開状態とすることにより、循環流路（第２循環経路）を形成する。また、第２流路２０ｂ及び２０ｃは、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｊ、Ｖ２ｌ、Ｖ２ｎを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｍを開状態とすることにより、循環流路（第３循環経路）を形成する。
また、第２流路２０ｂ及び廃液回収部Ｗ２は、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｍを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｌを開状態とすることにより、流体を第２流路２０ｂから廃液回収部Ｗ２へと排出する流路（第２排出経路）を形成する。また、第２流路２０ｂ、２０ｃ、及び廃液回収部Ｗ２は、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｌ、Ｖ２ｎを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｊ、Ｖ２ｍを開状態とすることにより、流体を第２流路２０ｂ、２０ｃから廃液回収部Ｗ２へと排出する流路（第３排出経路）を形成する。
【００６０】
ポンプ部Ｐ１、Ｐ２は、３連のバルブから構成されている。前記バルブとしては、ダイアフラム部材を備えるダイアフラムバルブが例示され、ダイアフラム部材としてはエラストマー材料が例示される。
【００６１】
図８（ａ）及び（ｂ）は、ダイアフラムバルブの構造の一例を説明する断面図である。
図８（ａ）はダイアフラムバルブ８００の開状態を示し、図８（ｂ）はダイアフラムバルブ８００の閉状態を示す。図８（ａ）及び（ｂ）に示すように、ダイアフラムバルブ８００は、第１の基板３１０と、エラストマー材料からなるダイアフラム部材３３０と、第２の基板３２０とを備えている。第２の基板３２０とダイアフラム部材３３０とは密着した状態で接着されている。また、第１の基板３１０とダイアフラム部材３３０との間の空間は流体が流れる流路３１５を形成している。また、第２の基板３２０の一部には貫通孔３４０が設けられている。また、貫通孔３４０においては、ダイアフラム部材３３０が露出している。
【００６２】
ダイアフラムバルブ８００は、流路３１５（血液成分分離デバイス７００では第１流路１０ｂ又は第２流路２０ｂ）に配置されており、流路３１５の内部の流体の流れを調節するものである。
【００６３】
図８（ａ）に示すダイアフラムバルブ８００の開状態では、流路３１５の内部を流体が流れることができる。一方、図８（ｂ）に示すように、ダイアフラムバルブ８００の貫通孔３４０からバルブ制御用の流体を供給し、貫通孔３４０の内部を加圧すると、ダイアフラム部材３３０が変形し、変形したダイアフラム部材３３０の一部が第１の基板３１０と密着する。この状態は、ダイアフラムバルブ８００の閉状態である。その結果、流路３１５の内部の流体の流れが遮断される。
【００６４】
ここで、図８（ａ）及び（ｂ）に示すように、ダイアフラムバルブ８００の閉状態をより強固なものとするために、貫通孔３４０と対向する第１の基板３１０の領域には凸部３１１が形成されていてもよい。
【００６５】
バルブ制御用の流体としては、Ｎ２ガス、空気等の気体、水、油等の液体等が挙げられる。バルブ制御用の流体は、例えば、貫通孔３４０に接続されたチューブ等により供給することができる。
【００６６】
また、ダイアフラム部材３３０を形成するエラストマー材料としては、貫通孔３４０の内部の圧力変化に応じて貫通孔３４０の軸線方向に変形可能な材料であれば特に限定されず、例えば、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリメチルフェニルシロキサン、ポリジフェニルシロキサン等のシリコーン系エラストマー等が挙げられる。
【００６７】
図８（ｂ）に示す閉状態のダイアフラムバルブ８００において、貫通孔３４０の内部に印加していた圧力を低下させると、変形していたダイアフラム部材３３０が元の形状に戻り、再び図８（ａ）に示す開状態となる。その結果、再び流路３１５の内部を流体が流れることができるようになる。
【００６８】
３連以上のバルブにより、すなわちバルブを３個以上並べることにより、ポンプを形成することができる。図９（ａ）〜（ｄ）は、３個のダイアフラムバルブ８００ａ、８００ｂ及び８００ｃを備えるポンプの一例の動作を説明する断面図である。
【００６９】
図９（ａ）に示す状態では、３個のバルブ８００ａ、８００ｂ及び８００ｃは、いずれも開状態である。この状態では、流路３１５の内部の流体の流れは制御されていないため、流体は図９（ａ）に向かって右側に流れる場合もあるし、左側に流れる場合もあるし、流体の流れが停止している場合もある。
【００７０】
続いて、図９（ｂ）に示すように、バルブ８００ａを閉状態に制御し、バルブ８００ｂ及び８００ｃは開状態のままにする。この結果、流路３１５の内部の流体の流れはバルブ８００ａによって堰き止められる。
【００７１】
続いて、図９（ｃ）に示すように、バルブ８００ａ及びバルブ８００ｂを閉状態に制御し、バルブ８００ｃは開状態のままにする。ここで、バルブ８００ｂが開状態から閉状態に変化する過程で、ダイアフラム部材３３０が変形することにより、バルブ８００ｂの周囲に存在していた流体が押しのけられる。ところが、バルブ８００ａが閉状態にあることから、押しのけられた流体は図９（ｃ）の矢印で示す方向、すなわち、図９（ｃ）に向かって右側に移動する。この結果、流体に矢印で示す方向の流れが生じる。
【００７２】
続いて、図９（ｄ）に示すように、バルブ８００ｂ及び８００ｃを閉状態に制御する。
すると、バルブ８００ｃが開状態から閉状態に変化する過程で、ダイアフラム部材３３０が変形することにより、バルブ８００ｃの周囲に存在していた流体が押しのけられる。ところが、バルブ８００ａが閉状態にあることから、押しのけられた流体は図９（ｄ）の矢印で示す方向、すなわち、図９（ｄ）に向かって右側に移動する。この結果、流体に矢印で示す方向の流れが更に加速される。この時、バルブ８００ａは図９（ｄ）に示すように開状態に制御してもよいし、閉状態のまま維持してもよい。
【００７３】
続いて、再び図９（ａ）に示すように、バルブ８００ａ、８００ｂ及び８００ｃを、いずれも開状態に制御する。ここでは、慣性により、流路３１５の内部の流体は、図９（ａ）に向かって右側に移動し続けている場合がある。
【００７４】
更に、以上の工程を繰り返すことにより、流路３１５の内部の流体の流れを制御することができる。
【００７５】
以上の工程は、３個のバルブを備えるポンプの制御方法の一例であり、３個のバルブを備えるポンプの制御方法はこれに限られない。例えば、上述したバルブの制御において、バルブ８００ａとバルブ８００ｃの開閉のタイミングを逆にすることにより、流路３１５の内部の流体の流れを上述したものと逆方向に制御することもできる。また、図９（ａ）〜図９（ｄ）の動作を繰り返す周期を調節して、パルス的な微小溶液のフローを形成し、流速を制御したりすることもできる。また、バルブ８００ａ〜８００ｃを駆動する気体の圧力やバルブの径を調節することによっても、流速を制御することができる。
【００７６】
また、バルブを４個以上備えるポンプにより、流路３１５の内部の流体の流れを制御することも可能である。
【００７７】
また、ダイアフラムバルブの構造も、上述したものに限られない。例えば、ダイアフラムバルブとして、国際公開第２０１６／００６６１５号に記載された、外筒部と内筒部とを有する筒状構造体と、前記内筒部の一端を覆うように配置された薄膜部と、前記薄膜部の周縁を一周し、前記外筒部の内壁及び前記内筒部の外壁に沿って密着したアンカー部と、を有するダイアフラム部材と、を備えたバルブを用いることもできる。
【００７８】
本実施形態の血液成分分離デバイスにおいて、他に使用可能なバルブとしては、例えば、２つの金型を使って、樹脂部分とエラストマー部分を連続的に成形して得られた、２色成型バルブが例示される。２色成型バルブは、製造に要する時間が短く、樹脂とエラストマーとの密着性が高い利点がある。
【００７９】
２色成型バルブの具体例を図１０及び図１１に例示する。図１０に例示するバルブ９００では、基板９０９は、下面（一面）９０９ａに形成された窪み（例、流路）９４０Ａと、窪み９４０Ａの底部（例、図１０の窪み９０Ａの上側）および基板９０９の上面（他面）９０９ｂに開口（貫通）する開口部９５２とを有している。開口部９５２には、被バルブ駆動部９７０が設けられている。被バルブ駆動部９７０は、上述のバルブ部９５０と同様の軟質材で形成されており、バルブ部（変形部）９７１、および筒部（接続部）９７３を備えている。バルブ部９７１は、開口部９５２における基板９０９の下面９０９ａ側を閉塞する。例えば、筒部９７３は、バルブ部９７１と単一部材で構成され、開口部９５２の内周面に沿って設けられ、下端においてバルブ部９７１に一体的に接続されている。筒部９７３の内部空間は下端がバルブ部９７１によって閉塞され、上端が開口する開口部９７０ａを形成している。例えば、図１０における窪み９０Ａが流路の場合、図面の左側から右側へ流体（例、試料物質を含む溶液、洗浄液等）が流れるように構成される。
【００８０】
基板９０９の下面９０９ａは、下板９０８の上面９０８ｂと接合されている。上面９０８ｂには、窪み９４０Ａと対向する位置に曲面状（例、半球状）の凹面９８０が形成されている。
【００８１】
上記構成の被バルブ駆動部９７０は、例えば、開口部９７０ａを介してバルブ部９７１に下側への力（例、空圧、液圧、機械的な力など）が加わったときに、バルブ部９７１の変形によって流路（例、窪み９４０Ａ）の開閉状態を制御する。一例として、図１１に示すように、バルブ部９７１が窪み９４０Ａ側に変形して撓んで凹面９８０に接触することにより流路（例、窪み９４０Ａ）を閉塞する（バルブが閉じた状態）。また、被バルブ駆動部９７０は、バルブ部９７１に下側への力が加わることが解除されることによりバルブ部９７１の変形（例、撓み）が解消されて凹面９８０から離れることで流路（例、窪み９４０Ａ）が開放される（バルブが開いた状態）。
【００８２】
上述の２色成型バルブは、例えば、国際公開第２０１８／０１２４２９号に記載された方法により製造することができる。その他、２色成型バルブとしては、国際公開第２０１８／０１２４２９号に記載されたもの等の公知のものを特に制限なく用いることができる。
【００８３】
上記のような構成を備えた血液成分分離デバイス７００の使用方法について、例を挙げて説明する。
【００８４】
まず、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ１ｅを開状態とし、他のバルブを閉状態として、第１導入口１２から第１流路１０ａに血液試料（例、全血試料等）を導入する。第１流路１０ａに導入された血液試料は、フィルター部１１に到達し、フィルター部１１をバルブＶ１ａ方向（第１方向）に移動する。この際に、血液試料中の血球は、フィルターに捕捉される。一方、血漿の大部分は、フィルター部１１を通過し、第１流路１０ｂに到達する。ここで、バルブＶ１ａを閉状態とし、ポンプ部Ｐ１を適宜作動させると、第１流路１０ｂに到達した血漿を、第１流路１０ｂからなる第１循環経路に循環させることができる。必要に応じて、血漿分析のための試薬をインレットＩ１から導入し、第１循環経路を循環させて血漿と混合する。血漿を第１循環経路に循環させながら、血漿分析部５０で血漿分析を行うことができる。第１循環経路を循環する流体は、必要に応じて、バルブＶ１ｂ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態として、第１排出経路により廃液回収部Ｗ１に排出することができる。
【００８５】
次に、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態とし、他のバルブを閉状態として、第１導入口１２から第１流路１０ａに洗浄液を導入する。第１流路１０ａに導入された洗浄液は、フィルター部１１に到達し、フィルター部１１をバルブＶ１ａ方向（第１方向）に移動する。この際に、フィルターに残っていた血漿が洗浄液とともに第１方向に移動し、バルブＶ１ａを介して第１流路１０ｂに導入される。第１流路１０ｂに導入された血漿を含む洗浄液は、バルブ１ｂ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態として、第１排出経路により廃液回収部Ｗ１に排出することができる。
【００８６】
次に、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂ、Ｖ２ｅ、Ｖ２ｆ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｌを開状態とし、他のバルブを閉状態として、第２導入口２２から第２流路２０ａに溶血剤を導入する。第２流路２０ａに導入された溶血剤は、フィルター部１１に到達し、フィルター部１１をバルブＶ２ｂ方向（第２方向）に移動する。この際に、フィルターに捕捉されていた血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともに第２流路２０ａを軸方向に移動して、バルブＶ２ｂからバルブＶ２ｅを介して、第２流路２０ｂに導入される。ここで、バルブＶ２ｂを閉状態とし、バルブＶ２ｃを開状態として、エア導入口Ａから第２流路２０ａにエアを吹き込むことにより、第２流路２０ａに滞留していた血球成分を、第２流路２０ｂへと導くことができる。第２流路２０ｂに導入された血球成分は、バルブＶ２ｅを閉状態とし、ポンプ部Ｐ２を適宜作動させることにより、第２流路２０ｂからなる第２循環経路に循環させることができる。必要に応じて、血球分析のための試薬をインレットＩ２から導入し、第２循環経路を循環させて血球成分と混合する。あるいは、必要に応じて、血球分析のための試薬をインレットＩ３から導入し、第２流路２０ｂ、２０ｃからなる第３循環経路を循環させて血球成分と混合する。血球成分を、第２循環経路又は第３循環経路に循環させながら、血球分析部６０で血球分析を行なうことができる。第２循環経路又は第３循環経路を循環する流体は、必要に応じて、第２排出経路又は第３排出経路により、廃液回収部Ｗ２に排出することができる。
【００８７】
［血液成分分離方法］
１実施形態において、本発明は、上記実施形態の血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分離する方法を提供する。本実施形態の方法は、（ａ）前記第１導入口から、血液試料を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記血液試料中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる溶血工程と、を含む。
【００８８】
本実施形態の血液成分分離方法は、上記「［血液成分分離デバイス］」で説明した「（使用方法）」で例示した方法と同様に行うことができる。
一例として、本実施形態の方法は、前記工程（ａ）の後であり前記工程（ｂ）の前に、（ｃ）前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する血漿除去工程、を更に含むことができる。
【００８９】
［血液成分分析方法］
１実施形態において、本発明は、上記実施形態の血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分析する方法を提供する。本実施形態の方法は、（ａ）前記第１導入口から、血液試料を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記血液試料中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、を含む。
【００９０】
本実施形態の血液成分分析方法は、上記「［血液成分分離デバイス］」で説明した「（使用方法）」で例示した方法と同様に行うことができる。本実施形態の方法に血球分析部６０を備える血液成分分離デバイスを用いる場合には、工程（ｄ）における血球成分の分析は、血球分析部６０で行うことができる。血球分析部６０を備えない血液成分分離デバイスを用いる場合には、血液成分分離デバイスから溶血させた血球成分を回収し、回収した血球成分を分析すればよい。
【００９１】
本実施形態の方法は、上記（ａ）〜（ｄ）の工程に加えて、（ｄ）前記工程（ａ）又は前記工程（ｂ）の後、フィルターを通過した血漿を分析する工程、をさらに含んでいてもよい。血漿分析部５０を備える血液成分分離デバイスを用いる場合には、血漿の分析は、血漿分析部５０で行うことができる。血漿分析部５０を備えない血液成分分離デバイスを用いる場合には、血液成分分離デバイスから溶血させた血漿を回収し、回収した血漿を分析すればよい。
【００９２】
［ヘモグロビンＡ１ｃ分析方法］
１実施形態において、本発明は、ヘモグロビンＡ１ｃを分析する方法を提供する。本実施形態の方法は、（ａ）血球と血漿とを分離するフィルターに血液試料中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記フィルターに洗浄液を通過させ、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記フィルターに溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球中のヘモグロビンＡ１ｃを分析する工程と、を含む。
【００９３】
本実施形態の方法は、上記「［血液成分分離デバイス］」で説明した「（使用方法）」で例示した方法と同様に行うことができる。また、本実施形態の方法は、上記実施形態の血液成分分離デバイスを用いることなく、血球分離フィルターを備えたカラム等を用いて行ってもよい。
【００９４】
ＨｂＡ１ｃの分析は、公知のＨｂＡ１ｃ測定方法を用いて行うことができる。ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法としては、例えば、ラテックス凝集法が挙げられる。
ラテックス凝集法では、ラテックス粒子にＨｂＡ１ｃを吸着させて（吸着反応）、抗ＨｂＡ１ｃ抗体（マウスＩｇＧ等）を反応させ、さらに二次抗体（抗マウスＩｇＧ抗体等）を反応させる。これにより、ＨｂＡ１ｃが抗ＨｂＡ１ｃ抗体及び二次抗体で架橋され、ラテックス粒子が凝集する（凝集反応）。ＨｂＡ１ｃ濃度が高いほど、ラテックス粒子の凝集量が多くなる。凝集していないラテックス粒子は、光を反射しないが、凝集すると光を反射するため、光の透過量はラテックス粒子の凝集量により変化する。そのため、凝集反応後の吸光度を測定することにより、ＨｂＡ１ｃ濃度を測定することができる。一例として、６６０ｎｍの吸光度から８００ｎｍの吸光度を差し引いた値から、ＨｂＡ１ｃ濃度を算出することができる。
【００９５】
後述する実施例で示すように、ＨｂＡ１ｃの測定値は、血漿が存在すると不安定になり、信頼性の高い測定値を得ることができない。本実施形態の方法は、フィルターに血球を捕捉させた後、洗浄液でフィルターを洗浄してフィルター中の血漿を除去する。これにより、溶血剤により溶血させた血球成分中に混入する血漿の量を大幅に低減することができる。そのため、信頼性の高いＨｂＡ１ｃ測定値を得ることができる。
【００９６】
以上、本発明の実施形態について図面を参照して詳述したが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、この発明の要旨を逸脱しない範囲の設計等も含まれる。
【実施例】
【００９７】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００９８】
［実験例１］ＨｂＡ１ｃ測定値に及ぼす血漿含有量の影響
ＨｂＡ１ｃ標準検査試薬（ＨｂＡ１ｃ濃度６．１％、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％；ヘモグロビンＡ１ｃカットオフテスト認証標準物質、検査医学標準物質機構）に０〜６０％（ｖ／ｖ）となるようにヒト血漿を添加した。前記ヒト血漿を添加したＨｂＡ１ｃ標準検査試薬のＨｂＡ１ｃ濃度を、ラピディア（登録商標）  オートＨｂＡ１ｃ−Ｌ（富士レビオ）を用いたラテックス凝集法により測定した。各サンプルについて、６６０ｎｍの吸光度及び８００ｎｍの吸光度を測定し、６６０ｎｍの吸光度−８００ｎｍの吸光度の値を求めた。
その結果を表１及び図１２に示す。【００９９】
【表１】
0006939988.tif 000002
【０１００】
血漿含有量が１５％（ｖ／ｖ）以下であれば、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％の標準検査試薬で変動係数（Coefficient of Variation；ＣＶ）は２．０％以下であり、ラテックス凝集反応が安定した。そのため、ＨｂＡ１ｃを安定的に測定するためには、試料中の血漿含有量を１５％（ｖ／ｖ）以下とすることが望ましいことが確認された。【０１０１】
［実験例２］血球画分中の血漿成分測定
ウサギの全血１０００μＬに、血漿成分をトレースするためにＣｙ５を１μＬを添加して混合して、Ｃｙ５添加ウサギ全血を調製した。
前記Ｃｙ５添加ウサギ全血試料を遠心分離（遠心力（１０００×ｇ）、５分）し、血球画分と血漿画分とを分離した。血球画分と血漿画分の希釈系列をそれぞれ調製し、各希釈系列を用いてヘモグロビン量及びＣｙ５量に対する検量線を作成した。
次に、図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、前記のＣｙ５添加ウサギ全血試料の血球分離を行った。導入口からＣｙ５添加ウサギ全血試料１５μＬを第１流路に導入し（大気圧：１分間）、導入口の逆側から５ｋＰａで２分間陰圧印加して、Ｃｙ５含有ウサギ全血試料をフィルターに通した。その後、第３流路のポートｂ及びｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから１００μＬの低張液（超純水）を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、ポートａから溶血した血球画分を回収した。同様に、第２流路のポートａ及びｃを塞ぎ、第３流路のポートｄから１００μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、ポートｂから溶血した血球画分を回収した。回収した血球画分について、ヘモグロビン吸光度及びＣｙ５蛍光を測定し、上記で作成した検量線から、血球画分中の血漿含有量を算出した。【０１０２】
結果を図１４に示す。低張液を第２流路に導入して血球画分を回収した場合には、血漿画分含有量は２６％（ｖ／ｖ）であった。一方、低張液を第３流路に導入して血球画分を回収した場合には、血漿画分含有量は４２％（ｖ／ｖ）であった。【０１０３】
［実験例３］血球画分中の血漿成分測定（洗浄の影響）
上記実験例１と同様に、Ｃｙ５添加ウサギ全血試料を調製し、図１１に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、前記のＣｙ５添加ウサギ全血試料の血球分離を行った（大気圧：１分間、５ｋＰａ陰圧：２分間）。次いで、導入口からＰＢＳ  １５μＬを第１流路に導入し（５ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第３流路のポートｂ及びポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから１００μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、ポートａから溶血した血球画分を回収した。実験例１と同様に、回収した血球画分中の血漿含有量を算出した。【０１０４】
結果を図１５に示す。図１５中、「洗浄なし」は、ＰＢＳ洗浄を行わなかった場合であり、実験例１の第２流路にて血球画分を回収した場合と同様である。「洗浄あり」は、ＰＢＳ洗浄を行った場合であり、「洗浄なし」と比較して、血漿成分含有量が大きく低減した。
【０１０５】
［実験例４］フィルター洗浄液量の評価
ウサギの全血９μＬに、血漿をトレースするためにＣｙ５を１μＬを添加して混合して、Ｃｙ５添加ウサギ全血試料を調製した。
次に、図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、前記のＣｙ５添加ウサギ全血試料の血球分離を行った。導入口からＣｙ５添加ウサギ全血試料１０μＬを第１流路に導入し、導入口の逆側から１０ｋＰａで２分間陰圧印加して、Ｃｙ５含有ウサギ全血試料をフィルターに通した。次いで、導入口からＰＢＳ  ２０μＬ、２５μＬ、又は３０μＬを第１流路に導入し（１０ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第２流路のポートａ及び第３流路のポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから５０μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、第３流路のポートｂから溶血した血球画分を回収した。血液画分の大部分が押し出されたところで、低張液の導入を停止した。【０１０６】
図１６は、各ＰＢＳ量でフィルターを洗浄後、血球画分を回収した後の各血液成分分離デバイスの写真である。フィルター通過直後（点線の楕円部分）の液体の色を比較すると、洗浄液量が多いほど、Ｃｙ５の青色成分が薄くなっていくことが定性的に示された。Ｃｙ５の青色部分が血漿とすると、洗浄液量２５μＬでフィルター内の血漿の大部分が除去されたと考えられた。【０１０７】
［実験例５］ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性評価
（実施例１）
図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、ヒト冷蔵血液（正常ヒト全血液・Ｏ型、コージンバイオ）の血球分離を行った。導入口からヒト冷蔵血液１０μＬを第１流路に導入し、導入口の逆側から１０ｋＰａで２分間陰圧印加して、ヒト冷蔵血液をフィルターに通した。次いで、導入口からＰＢＳ  ２５μＬ、２５μＬ、又は３０μＬを第１流路に導入し（１０ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第２流路のポートａ及び第３流路のポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから１００μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、第３流路のポートｂから溶血した血球画分を回収した。溶血液が約１５μＬ押し出された時点で、溶血液の回収を終了した。
前記のように回収した溶血液５μＬを用いて、ラピディア（登録商標）  オートＨｂＡ１ｃ−Ｌを用いたラテックス凝集法を行い、６６０ｎｍ及び８００ｎｍの吸光度を測定した。測定された吸光度から、ＨｂＡｃ１濃度、及び変動係数（ＣＶ）を算出した。
【０１０８】
（比較例１）
Ｃｏｂａｓ（登録商標）  ｃ１０１（Ｒｏｃｈｅ）のカートリッジ内で、ヒト冷蔵血液２．０μＬを用いたラテックス凝集阻害法を行い、ＨｂＡｃ１濃度、及び変動係数（ＣＶ）を算出した。【０１０９】
（比較例２）
Ａｆｆｉｎｉｏｎ（登録商標）  ＨｂＡｉｃ（Ａｌｅｒｅ）のカートリッジ内で、ヒト冷蔵血液１．５μＬの溶血処理を行った。その後、ボロン酸アフィニティ―法により、ＨｂＡ１ｃに起因する発色を測定した。発色の測定値から、ＨｂＡｃ１濃度、及び変動係数（ＣＶ）を算出した。【０１１０】
（結果）
実施例１、並びに比較例１及び２の結果を図１７に示す。実施例１では、比較例１及び２と比較して、変動係数（ＣＶ）を小さく、再現性の高い測定が可能であることが確認された。
【０１１１】
［実験例６］ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性評価
図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、ヒト全血（正常ヒト全血液・Ｏ型、コージンバイオ）の血球分離を行った。導入口からヒト全血１５μＬを第１流路に導入し、導入口の逆側から１０ｋＰａで２分間陰圧印加して、標準検査試薬をフィルターに通した。次いで、導入口からＰＢＳ２５μＬを第１流路に導入し（１０ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第２流路のポートａ及び第３流路のポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから５０μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、第３流路のポートｂから溶血した血球画分を回収した。溶血液が約５０μＬ押し出された時点で、溶血液の回収を終了した。
前記のように回収した溶血液を用いて、ラピディア（登録商標）  オートＨｂＡ１ｃ−Ｌを用いたラテックス凝集法を行い、６６０ｎｍ及び８００ｎｍの吸光度を測定した。測定された吸光度から、変動係数（ＣＶ）を算出した。
また、遠心分離法（遠心力（１０００×ｇ）、５分）により、ヒト全血の血球画分を分離し、同様に６６０ｎｍ及び８００ｎｍの吸光度を測定した。
なお、Ａｆｆｉｎｉｏｎ（登録商標）  ＨｂＡｉｃ（Ａｌｅｒｅ）を用いて、ヒト全血のＨｂＡｃ１濃度を測定ところ、ＨｂＡｃ１濃度は５．０６％であった。【０１１２】
結果を図１８に示す。図１８には、標準検体（ＨｂＡ１ｃ濃度６．１％、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％；ヘモグロビンＡ１ｃカットオフテスト認証標準物質、検査医学標準物質機構）を、ラピディア（登録商標）  オートＨｂＡ１ｃ−Ｌを用いて測定した結果も併せて示す。血液成分分離デバイスを用いて全血から分離された血球画分では、遠心分離法で得られた血球画分と同等のＨｂＡ１ｃ測定値が得られた。また、変動係数（ＣＶ）は、遠心分離法と比較して、小さかった。さらに、血液成分分離デバイスを用いて分離された血球画分では、標準検体よりもラテックス凝集法による測定値が低かった。一般的に、正常ヒト全血のＨｂＡ１ｃ濃度は、６％以下である。そのため、標準検体（ＨｂＡ１ｃ濃度６．１％、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％）の測定値との比較により、本方法による測定値の信頼性が示された。
【符号の説明】
【０１１３】
１０，１０ａ，１０ｂ    第１流路、
１１    フィルター部
１２    第１導入口
２０，２０ａ，２０ｂ，２０ｃ    第２流路
２２    第２導入口
３０    第３流路
４０    第４流路
４２    第４導入口
５０    血漿分析部
６０    血球分析部
７０    プレート
１００，２００，３００，４００，５００，６００，７００  血液成分分離デバイス
３１０    第１の基板
３１１，３１１ａ，３１１ｂ，３１１ｃ    凸部
３１５    流路
３２０    第２の基板
３３０    ダイアフラム部材
３３１    アンカー部
３４０，３４０ａ，３４０ｂ，３４０ｃ    貫通孔
８００，８００ａ，８００ｂ，８００ｃ    ダイアフラムバルブ
Ｖ１、Ｖ１ａ〜Ｖ１ｆ，Ｖ２ａ〜Ｖ２ｎ    バルブ
Ｐ１，Ｐ２    ポンプ部
Ｉ１〜Ｉ３    インレット
Ｗ１，Ｗ２    廃液回収部
Ａ    エア導入口
【図１】
0006939988.tif 000003
【図２】
0006939988.tif 000004
【図３】
0006939988.tif 000005
【図４】
0006939988.tif 000006
【図５】
0006939988.tif 000007
【図６】
0006939988.tif 000008
【図７】
0006939988.tif 000009
【図８】
0006939988.tif 000010
【図９】
0006939988.tif 000011
【図１０】
0006939988.tif 000012
【図１１】
0006939988.tif 000013
【図１２】
0006939988.tif 000014
【図１３】
0006939988.tif 000015
【図１４】
0006939988.tif 000016
【図１５】
0006939988.tif 000017
【図１６】
0006939988.tif 000018
【図１７】
0006939988.tif 000019
【図１８】
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