(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
0006928096.tif 000072
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オンである、化合物。
【請求項２】
医療処置に使用するための、請求項1に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項３】
医療処置が、細胞保護的処置、心臓及び腎臓保護的処置から選択される、請求項2に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項４】
化合物が、Gタンパク質共役受容体キナーゼ2(GRK2、ADRBK1)による基質リン酸化を阻害する、請求項2または3に記載の医薬組成物。
【請求項５】
活性物質として、請求項1に記載の化合物を、任意選択で、賦形剤及び/又は担体と組み合わせて含む、心臓及び/又は腎臓保護的処置における使用のための、医薬組成物。
【請求項６】
心臓保護的処置が、
(i)本態性高血圧及び/又は慢性高血圧の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(ii)心臓血管疾患が誘発する老化の危険性の低減;
(iii)亜急性心筋梗塞後の左心室機能障害及び心不全の徴候の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(iv)慢性心不全及び左心室機能障害の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(v)拡張型心筋症の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(vi)左心室機能障害の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(vii)心筋細胞の壊死の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(viii)心線維症の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(ix)心筋細胞の壊死及び/又は拡張型心筋症の予防;
(x)急性心臓血管疾患、心筋梗塞、虚血性心疾患、狭心症、心房細動、非代償性及び慢性心不全、並びに脳血管発作からなる群から選択される以前の事象を有する患者における、心筋細胞の壊死及び/又は拡張型心筋症の予防;並びに
(xi)心筋梗塞、狭心症、虚血性心疾患、脳血管疾患及び代償性心不全からなる群から選択される心臓血管疾患の急性疾患の病態の処置;
からなる群から選択され;
化合物又は医薬組成物が、動物又はヒトの、処置における使用のためのものである、請求項2〜5のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項７】
腎臓保護的処置が、腎症の処置である、請求項2〜4のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞保護的、特に、心臓及び腎臓保護的な有機化合物、好ましくは、Gタンパク質共役受容体キナーゼ2(GRK2、ADRBK1)による基質リン酸化を阻害する有機化合物を対象とする。好ましくは、有機化合物は、心疾患、高血圧、心臓機能障害又は心不全及び心疾患関連病理、例えば、心筋細胞の壊死、虚血性心疾患及び/若しくは虚血性心臓障害、並びに老化を処置するために、GRK2が媒介するセリン/アルギニンリッチスプライシング因子1(SRSF1、ASF-1、SF2)及び/又はホスデューシンのリン酸化を阻害する。更にまた、本発明は、GRK2が媒介するSRSF1及び/又はホスデューシンのリン酸化の阻害剤の特定のための方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
心臓血管疾患及び心不全は、最も頻度の高い死因であり、したがって、新たな処置のアプローチのための緊急の必要性が存在する。心臓血管疾患のための確立された薬理学的治療としては、例えば、ベータ-ブロッカー、アンジオテンシンII AT1系の阻害剤、ACE阻害剤、ミネラルコルチコイド受容体ブロッカー、及びネプリライシン-AT1受容体ブロッカーであるサクビトリル-バルサルタンの併用が挙げられる。これらの利用可能な治療にもかかわらず、末期の心不全を有する患者の予後は、ほとんどのがん患者の予後よりも悪い。
【０００３】
Gタンパク質共役受容体キナーゼ2(GRK2、ADRBK1、ベータARK)の阻害は、心疾患及び心不全のための実験モデルにおける心臓保護と関係しており(Hullmannら、Pharmacol. Res. 110、52〜64頁(2016);Abd Allaら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016))、GRK2は、心臓血管疾患及び高血圧を有する患者において、アップレギュレートされる(Ungererら、Circulation 87、454〜463頁(1993);Grosら、J. Clin. Invest. 99、2087〜2093頁(1997))。
【０００４】
ベータARK-C末端を使用した1つのアプローチは、ヘテロ三量体のGタンパク質の活性化したベータガンマサブユニットを捕捉することによって、GRK2が媒介する受容体のリン酸化を阻害する(Kochら、Science 268、1350〜1353頁(1995);米国特許第7,060,871号)。
【０００５】
しかしながら、ベータARK-C末端は、これが、194アミノ酸の大きなタンパク質であって、投与が困難で、その細胞内標的であるGRK2に達するための遺伝子治療アプローチを必要とするので、臨床研究には達しなかった。また、ベータATRK-C末端は、インビボで複数の他の関連機能を有するG-ベータガンマサブユニットの活性も阻害する。この言及と一致して、ベータARK-C末端のインビボでの心臓保護的効果は、GRK2阻害-非依存性機構にも関与する(Volkers Mら、Circ. Res. 108、27〜39頁(2011))。
【０００６】
ヘテロ三量体Gタンパク質のGベータサブユニットとの相互作用に対するインシリコスクリーニングによって特定された化合物は、ベータARK-C末端と同様に、心臓の収縮性を増加させることも示されている(国際公開第2004/101495A1号)。しかし、このアプローチはまた、GRK2に対して特異的ではなく、ベータARK-C末端と同様に、他のGベータ-ガンマ媒介機能を妨げると予想される。これらの化合物は、更に特徴付けられておらず、臨床研究に達しなかった。
【０００７】
別の科学的研究は、ベータ2-アドレナリン受容体の第1の細胞内ループに由来する、GRK2(18アミノ酸)のペプチド阻害剤であるGRKInhに関する(Winstelら、Biochem. Pharmacol. 70、1001〜1008頁(2005))。GRKinhは、インビボで心臓保護性である(Abd Allaら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016);Fuら、J. Biol. Chem. 288、7739〜7755頁(2013))。しかしながら、これまでに、GRK2上のGRKInhの結合部位は決定されておらず、GRKInhは、投与が困難で、その細胞内標的であるGRK2に達するための遺伝子治療アプローチを必要とするペプチドである。また、GRKInhは、ベータ2-アドレナリン受容体に対する自己免疫反応を引き起こしうる免疫原性ペプチドである。
【０００８】
パロキセチンは、GRK2のATP部位特異的キナーゼ阻害剤である(Thalら、ACS Chem. Biol. 7、1830〜1839頁(2012);Schumacherら、Sci. Transl. Med. 7、277ra31 (2015))。パロキセチンが、(i)GRK2に対して非特異的であり、(ii)GRK2に対して低い阻害活性を有し、(iii)異なる主たる高親和性標的であるセロトニントランスポーターを有し、及び(iv)体重増加を引き起こすという事実は、パロキセチンを心臓保護的治療に適切ではないものにする(Uguzら、Gen Hosp Psychiatry 46〜48頁、37(2015))。
【０００９】
他のATP部位特異的GRK2阻害剤、例えば、GRK2に対する高親和性及び選択性を有するタケダの化合物(国際公開第2007/034846A1号)は、インビボで試験されておらず、心臓保護特性は知られていない。Waldschmidtら(J. Med. Chem. 59、3793〜3807頁(2016))もGRK2阻害剤を報告している。しかしながら、全てのこれらの高親和性のGRK2特異的なATP部位特異的キナーゼ阻害剤は、GRK2の全ての機能をブロックし、GRK2が代償することができないインビボでの必須の役割を示すので、即ち、GRK2のノックアウトは致死的であるので、深刻な副作用を有する場合がある(Jaberら、PNAS USA 93、12974〜12979頁(1996))。加えて、タケダ又はWaldschmidtの化合物のインビボでの効果は実証されておらず、標的外の効果及び化合物の生物学的利用率も知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第7,060,871号
【特許文献２】国際公開第2004/101495A1号
【特許文献３】国際公開第2007/034846A1号
【特許文献４】米国特許出願番号第09/902,822号
【特許文献５】PCT/US01/21860号
【特許文献６】米国仮特許出願番号第60/313,527号
【特許文献７】米国仮特許出願番号第60/339,249号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Hullmannら、Pharmacol. Res. 110、52〜64頁(2016)
【非特許文献２】Abd Allaら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016)
【非特許文献３】Ungererら、Circulation 87、454〜463頁(1993)
【非特許文献４】Grosら、J. Clin. Invest. 99、2087〜2093頁(1997)
【非特許文献５】Kochら、Science 268、1350〜1353頁(1995)
【非特許文献６】Volkers Mら、Circ. Res. 108、27〜39頁(2011)
【非特許文献７】Winstelら、Biochem. Pharmacol. 70、1001〜1008頁(2005)
【非特許文献８】Fuら、J. Biol. Chem. 288、7739〜7755頁(2013)
【非特許文献９】Thalら、ACS Chem. Biol. 7、1830〜1839頁(2012)
【非特許文献１０】Schumacherら、Sci. Transl. Med. 7、277ra31 (2015)
【非特許文献１１】Uguzら、Gen Hosp Psychiatry 46〜48頁、37(2015)
【非特許文献１２】Waldschmidtら、J. Med. Chem. 59、3793〜3807頁(2016)
【非特許文献１３】Jaberら、PNAS USA 93、12974〜12979頁(1996)
【非特許文献１４】H. C. Ansel及びN. G. Popovish、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、第5版、Lea and Febiger(1990)
【非特許文献１５】Zuo P及びManley JL、EMBO J 12、4727〜4737頁(1993)
【非特許文献１６】Xiao SH及びManley JL、Genes Dev 11、334〜344頁(1997)
【非特許文献１７】Neugebauer KMら、Genes Dev. 11、1148〜1159頁(1997)
【非特許文献１８】Xu Xら、Cell 120、59〜72頁(2005)
【非特許文献１９】Zhang Tら、Circ. Res. 92、912〜919頁(2003)
【非特許文献２０】Zhang Tら、J. Biol. Chem. 277、1261〜1267頁(2002)
【非特許文献２１】Zhang Tら、Nat. Med. 22、175〜182頁(2016)
【非特許文献２２】Kim Tら、Mol Cells 37、81〜87頁(2014)
【非特許文献２３】Lorenz Kら、Nature 426、574〜579頁(2003)
【非特許文献２４】Schmid Eら、Nat. Med. 21、1298〜1306頁(2015)
【非特許文献２５】Ruiz-Gomez Aら、J. Biol. Chem. 275、29724〜29730頁(2000)
【非特許文献２６】Kong KCら、Biochemistry 47、9279〜9288頁(2008)
【非特許文献２７】James Gulick、Gulick Jら、J. Biol. Chem. 266、9180〜9185頁(1991)
【非特許文献２８】AbdAlla Sら、Cardiovasc. Hematological Agents Med. Chem. 9、190〜206頁(2011)
【非特許文献２９】Sahn DJら、Circulation 58、1072〜1083頁(1978)
【非特許文献３０】Poncet Jら、J. Chem. Soc. Perkin Trans I.、611〜616頁(1990)
【非特許文献３１】Trautwein AWら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 8、2381〜2384頁(1998)
【非特許文献３２】Sakai Kら、Chem. Pharm. Bull. 29(6)、1554〜1560頁(1981)
【非特許文献３３】Coombs TCら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 23、3654〜3661頁(2013)
【非特許文献３４】Baber JCら、Bioorg. Med. Chem. 20、3565〜3574頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
要約すると、これまでに、心臓保護的処置についての新たなアプローチは、臨床研究に達していなかった。適切な標的の欠如、所与の標的に対する利用可能な阻害剤の特異性及び/又は副作用の発生が主な問題である。また、多くの治療アプローチの基礎をなす機構、例えば、GRK2阻害の心臓保護効果、及びその心臓保護的処置に対する実際の適合性は、本技術分野においていまだに論議を呼ぶほどに議論されている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の根底にある課題は、好ましくは、医療処置並びに/又は細胞保護的処置、好ましくは、心臓及び/若しくは腎臓保護的処置における使用のための、新たな及び/又は改善された、細胞保護性、好ましくは、心臓及び腎臓保護性の化合物の提供である。
【００１４】
第1の態様において、本発明の根底にある課題は、医療処置、好ましくは、細胞保護的処置、より好ましくは、心臓及び/又は腎臓保護的処置における使用のための、式(I)又は式(II)の化合物:
【００１５】
【化１】
0006928096.tif 000002
【００１６】
[式中、
式(I)中の位置(2)、(3)、(4)及び(5)の間、並びに式(II)中の位置(1)、(2)、(3)、(4)、(5)及び(6)の間の点線は、それぞれの位置の間の一重結合又は二重結合を表し;
Xは、N及びCからなる群から選択され;
Yは、S及びCからなる群から選択され、但し、YがCである場合、Xは、Nであり;
aは、0〜15の間、好ましくは、0〜10の間、より好ましくは、0〜5の間の整数であり、最も好ましくは、0又は1であり;
R1は、
(i)水素、ヒドロキシル、F、Cl、Br及びオキソ、好ましくは、XがNではない場合、又はXがNであってaが0ではない場合、R1は、ヒドロキシル、F、Cl、Br及びオキソからなる群から選択され;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;
(iii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(iv)(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3)炭素環及び(C5〜6)炭素環、好ましくは、芳香族の(C6)炭素環、より好ましくは、無置換フェニル、並びにCl、F、Br、置換又は無置換メチル、好ましくは、-(CF3)、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によって置換されたパラ置換フェニルからなる群から選択される、置換又は無置換の炭素環;並びに
(v)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、(C3〜6)ヘテロ環及び(C7〜C10)炭素又はヘテロ二環、好ましくは、N及びSから選択される2個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の(C7)ヘテロ二環、より好ましくは、置換又は無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、位置(5)又は(6)を介して、より好ましくは、インダゾリル若しくはベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル;
からなる群から選択され;
R2は、
(i)水素、ヒドロキシル、O-R14、-O-C(=O)-R14、F、Cl、Br及びオキソ、ここで、R14は、
(aa)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(bb)置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、より好ましくは、(C3)炭素環及び(C6)炭素環、好ましくは、(C6)炭素環、より好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又は(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換されたフェニル;
(cc)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、好ましくは、芳香族の、(C3〜6)ヘテロ環;
からなる群から選択され;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル、(C2〜10)アルキニル並びに(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル;
(iii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;並びに
(iv)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、(C3〜6)ヘテロ環及び(C7〜C10)炭素又はヘテロ二環、好ましくは、N及びSから選択される2個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の(C7)ヘテロ二環、より好ましくは、置換又は無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、インダゾリル、ベンゾジオキソリル又はベンズイミダゾリルの位置(5)又は(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル;
からなる群から選択され;
R3及びR4は、
(i)水素、-O-R14、-O-C(=O)-R14、F、Cl、Br及びオキソ、ここで、R14は、
(aa)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(bb)置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、より好ましくは、(C3)炭素環及び(C6)炭素環、好ましくは、(C6)炭素環、より好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又は(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;並びに
(cc)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、好ましくは、芳香族の、(C3〜6)ヘテロ環;
からなる群から選択され;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル、(C2〜10)アルキニル、並びに(C3〜10)炭素環、好ましくは、置換又は無置換の、(C3〜6)シクロアルキル、並びにN、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する(C3〜6)ヘテロ環;
(iii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;
(iv)
【００１７】
【化２】
0006928096.tif 000003
【００１８】
(式中、R12は、
(aa)水素、ヒドロキシル、置換又は無置換のN、F、Cl及びBr;
(bb)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(cc)置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、より好ましくは、(C3)炭素環及び(C6)炭素環、好ましくは、(C6)炭素環、より好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又は(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;並びに
(dd)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、好ましくは、芳香族の、(C3〜6)ヘテロ環;
からなる群から選択される);並びに
(v)
【００１９】
【化３】
0006928096.tif 000004
【００２０】
(式中、Xは、N又はCであり、aは、0〜15の間、好ましくは、0〜10の間、より好ましくは、0〜5の間の整数であり、最も好ましくは、0又は1であり、R13は、
(aa)水素、ヒドロキシル、F、Cl及びBr;
(bb)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(cc)置換又は無置換の、(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、(C7〜C10)炭素又はヘテロ二環、並びにN、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する(C3〜6)ヘテロ環、
より好ましくは、R3については、R13は、N及びSから選択される2個のヘテロ原子を有する(C7)ヘテロ二環、最も好ましくは、置換又は無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、位置(5)又は(6)を介して、より好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルであり、
最も好ましくは、R4については、R13は、置換又は無置換の、芳香族の(C6)炭素環、好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位がモノ又は二置換されたか、或いは(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換された、(C6)炭素環であり;並びに
(dd)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;
からなる群から選択される);
からなる群から独立して選択され;
式(I)の環の位置(2)、(3)及び/又は(4)が、sp3-混成である場合、R2及びR4並びに/又はR3及びR4は、好ましくは、互いに、シス又はトランス配置、より好ましくは、トランス配置であり、好ましくは、R2は、(R)-若しくは(S)-配置であり、R3は、(R)-若しくは(S)-配置であり、並びに/又はR4は、(R)-若しくは(S)-配置であり、より好ましくは、R2は、(R)-配置であり、R3は、(R)-配置であり、並びに/又はR4は、(R)-配置であるか、或いはR2は、(S)-配置であり、R3は(S)-配置であり、並びに/又はR4は、(S)-配置であり;
R5及びR9は、
(i)水素、ヒドロキシル、F、Cl、Br及びオキソ、但し、XがNであり、YがCである場合、R9はオキソではなく;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;
(iii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(iv)置換又は無置換の(C3〜10)炭素環、好ましくは、置換又は無置換の(C3)炭素環、置換又は無置換の芳香族の(C5〜6)炭素環、より好ましくは、シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル及び芳香族の(C6)炭素環、最も好ましくは、無置換フェニル、又はCl、F、Br、置換若しくは無置換のメチル、好ましくは、-(CF3)、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位が置換されたフェニル;並びに
(v)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する(C3〜6)ヘテロ環、好ましくは、置換又は無置換の、イミダゾリル及びピラゾリル、より好ましくは、イミダゾリル/ピラゾリルの位置(1)の窒素を介して式(I)の環と結合した、イミダゾリル及びピラゾリル;
からなる群から選択され;
式(I)の環の位置(5)が、sp3-混成である場合、R5は、好ましくは、(S)-又は(R)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;
式(II)の環の位置(3)が、sp3-混成である場合、R9は、好ましくは、(S)-又は(R)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;
R6及びR11は、
(i)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(iii)(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3)炭素環及び(C5〜6)炭素環、より好ましくは、芳香族の(C6)炭素環、最も好ましくは、無置換フェニル、或いはCl、F、Br、置換若しくは無置換のメチル、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってメタ及びパラ位がモノ又は二置換されたフェニルからなる群から選択される、置換又は無置換の炭素環;並びに
(iv)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、(C3〜6)ヘテロ環及び(C7〜C10)炭素又はヘテロ二環、好ましくは、N及びSから選択される2個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の(C7)ヘテロ二環、最も好ましくは、置換又は無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、位置(5)又は(6)を介して、より好ましくは、インダゾリル若しくはベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル;
からなる群から独立して選択され;
YがSである場合、R6は、存在せず;並びに/或いは
式(II)の環が、式(II)の環の位置(4)及び(5)の間又は位置(3)及び(4)の間の二重結合を有する場合、R11は、非存在であり、
但し、Xが、Nであり、Yが、Cであり、式(II)の環が芳香族である場合、R6は、1,2,4-トリアゾリルではなく;
R7は、
(i)水素、ヒドロキシル、F、Cl、Br及びオキソ;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル、(C2〜10)アルキニル、及び(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、並びにN、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する(C3〜6)ヘテロ環;
(iii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;並びに
(iv)
【００２１】
【化４】
0006928096.tif 000005
【００２２】
(式中、R12は、
(aa)水素、ヒドロキシル、置換又は無置換のN、F、Cl及びBr;
(bb)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル、(C2〜10)アルキニル、及び芳香族又は非芳香族の(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、より好ましくは、(C3)炭素環、最も好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又は(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、芳香族の(C6)炭素環;並びに
(cc)置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、好ましくは、芳香族の、N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する(C3〜6)ヘテロ環;
からなる群から選択される);
からなる群から選択され;
R8は、R7について上記で定義された群から選択され、この群は、更に、
(i)
【００２３】
【化５】
0006928096.tif 000006
【００２４】
(式中、Xは、N又はCであり、aは、0〜15の間、好ましくは、0〜10の間、より好ましくは、0〜5の間の整数であり、最も好ましくは、0又は1であり、R13は、
(aa)水素、ヒドロキシル、F、Cl及びBr;
(bb)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(cc)置換又は無置換の、(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、(C7〜C10)炭素又はヘテロ二環、並びにN、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する(C3〜6)ヘテロ環、
より好ましくは、N及びSから選択される2個のヘテロ原子を有する置換又は無置換の(C7)ヘテロ二環、最も好ましくは、置換又は無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、位置(5)又は(6)を介して、より好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して結合した、インダゾリル並びにベンゾジオキソリル、
最も好ましくは、置換又は無置換の、芳香族の(C6)炭素環、好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位がモノ又は二置換されたか、或いは(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換された、(C6)炭素環;並びに
(dd)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル及び(C4〜10)炭素環エーテル;
からなる群から選択される)
を含み;
但し、Xが、Nであり、Yが、Cであり、式(II)の環が芳香族である場合、R8は、1,2,4-トリアゾリルではなく、
式(II)の環の位置(5)が、sp3-混成である場合、R8は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;
R10は、非存在であるか、又は
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)シクロプロピル、若しくはH、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
からなる群から選択され;
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10及びR11の1つ又は複数は、式(I)若しくは式(II)の環に直接結合するか、或いはR2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10及び/又はR11と式(I)若しくは式(II)の環の間のリンカーに結合するかのいずれかであり、ここで、リンカーは、直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキルエーテル、(C2〜10)アルケニルエーテル、(C2〜10)アルキニルエーテル、(C4〜10)炭素環エーテル、直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、(C2〜10)アルケニル及び(C2〜10)アルキニルからなる群から選択される]
及びその薬学的に許容される塩又は溶媒和物によって解決される。
【００２５】
上記化合物は、細胞保護、特に、心臓及び/又は腎臓保護並びに心臓処置では以前に考えられていなかった標的である、GRK2が媒介する非受容体の基質であるSRSF1のリン酸化の活性化を標的とする。SRSF1は、非受容体GRK2の基質であり、これは、心不全の徴候を促進し、GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化は、不可逆的な心筋細胞の壊死及び心臓機能障害に寄与する。トランスジェニック動物モデルを用いた下記の実施例1〜3及び図1〜3は、更に、GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化が、心不全、及び不可逆的な心臓障害を主に引き起こす心筋細胞の壊死の徴候を促進することを実証する。本発明の化合物は、GRK2によって引き起こされる、これまで認識されていなかった深刻な心不全を促進する機構を妨げる(下記の実施例9〜12及び図9〜12を参照のこと)。GRK2は、心臓血管疾患及び高血圧を有する患者においてアップレギュレートされる(上記を参照のこと)。患者の心臓において見られるGRK2のアップレギュレーションを模倣するヒトGRK2の過剰発現を有するトランスジェニックマウスは、例えば、心筋細胞の壊死及び心不全を促進するCAMK2DアイソフォームB/Cのスプライシングの増強に起因して、増強されたSRSF1が媒介する心筋細胞の壊死及び心臓機能障害を発症した(下記の実施例3及び図3を参照のこと)。特に、不可逆的な壊死性の心筋細胞死は、心筋梗塞及び虚血性心疾患の主な特徴であり、これらは主要な心血管危険因子、例えば、本態性高血圧及び他の高血圧性障害、アテローム性動脈硬化症、慢性心不全、高脂血症、糖尿病、脳卒中、うつ病性障害、ストレス、老化によって引き起こされる。例えば、本発明の化合物によるGRK2が媒介する心不全を促進するSRSF1のリン酸化の阻害は、例えば、心筋細胞の壊死(下記の実施例9〜12及び図9〜12を参照のこと)、心臓機能障害(実施例11、12及び図11、12を参照のこと)及び心臓血管疾患が誘発する老化(実施例12及び図12を参照のこと)の発症を遅延させることによって、慢性的な圧力過負荷が誘発するインビボでの心不全の徴候に対して心臓保護を示す(実施例11、12、及び図11、12を参照のこと)。パロキセチンもインビトロ及びインビボでGRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害するが(実施例8及び図8を参照のこと)、上記に列挙した全ての欠点を伴う非特異的な方法で、パロキセチンを患者の心臓保護治療に適切ではないものにすることに留意されたい(Uguzら、Gen Hosp Psychiatry 46〜48頁、37(2015))。
【００２６】
第1の態様において、本発明は、それ自体、即ち、物質クレームの文脈で、上記に開示される化合物を対象とする。更なる態様において、本発明は、医療処置、好ましくは、細胞保護的処置、特に、心臓及び腎臓保護的処置における使用のためのこれらの化合物に関する。
【００２７】
本明細書で使用される場合、心臓保護的治療という用語は、心臓に影響を与える任意の疾患又は障害の予防又は処置、即ち、疾患から心臓を保護するか、又は既存の心疾患を処置する処置を意味する。心臓保護的治療としては、例えば、心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減、例えば、心筋梗塞、虚血性心臓血管疾患、狭心症、アテローム性動脈硬化症、高血圧性障害、慢性心不全、慢性腎不全、脳血管疾患、代償性心不全、ストレス、老化及び/又はうつによって引き起こされる不可逆的な壊死性の心筋細胞死の予防及び処置が挙げられる。不可逆的な壊死性の心筋細胞死は、最終的に心機能不全、拡張を伴う心肥大、心筋の薄化及び末期の心不全に至る心臓のリモデリングの深刻な原因でありうるか、又はその場合がある。
【００２８】
好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、式(I)において、二重結合が、位置(3)及び(4)の間若しくは位置(2)及び(3)の間、並びに位置(4)及び(5)の間に存在するか、又は二重結合が、環に存在せず;式(II)において、二重結合が、環に存在しないか、又は環が、芳香族であり;
並びに/或いは
aは、0又は1であり;並びに/或いは
R1が、
(i)水素;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル;
(iii)置換又は無置換の、シクロプロピル及びフェニル、好ましくは、置換フェニル、より好ましくは、H、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;並びに
(iv)置換又は無置換の、好ましくは、無置換の、位置(5)又は(6)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリル;
からなる群から選択される、化合物である。
【００２９】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、
R2が、
(i)水素又はオキソ;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル;並びに
(iii)置換又は無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、インダゾリル、ベンゾジオキソリル及びベンズイミダゾリルの位置(5)又は(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル;
からなる群から選択され;並びに/或いは
R3が、
(i)水素;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル;
(iii)
【００３０】
【化６】
0006928096.tif 000007
【００３１】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)置換又は無置換の、シクロプロピル及びフェニル、好ましくは、シクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される);並びに
(iv)
【００３２】
【化７】
0006928096.tif 000008
【００３３】
(式中、Xは、Nであり、aは、1であり、R13は、置換又は無置換の、好ましくは、無置換の、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択される);
からなる群から選択され;
並びに/或いは
R4が、
(i)水素及びヒドロキシル;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル;
(iii)
【００３４】
【化８】
0006928096.tif 000009
【００３５】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)置換又は無置換の、シクロプロピル及びフェニル、好ましくは、シクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位又はメタ位がモノ置換されたか、或いはそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される);並びに
(iv)
【００３６】
【化９】
0006928096.tif 000010
【００３７】
(式中、Xは、Nであり、aは、1であり、R13は、シクロプロピル若しくは-(CF3)によってそれぞれのメタ位がモノ又は二置換されたか、或いはシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換された、フェニルである);
からなる群から選択され;
式(I)の環の位置(2)、(3)及び/又は(4)が、sp3-混成である場合、R2及びR4並びに/又はR3及びR4は、好ましくは、互いに、シス又はトランス配置、より好ましくは、トランス配置であり、好ましくは、R2は、(R)-若しくは(S)-配置であり、R3は、(R)-若しくは(S)-配置であり、並びに/又はR4は、(R)-若しくは(S)-配置であり、より好ましくは、R2は、(R)-配置であり、R3は、(R)-配置であり、並びに/又はR4は、(R)-配置であるか、或いはR2は、(S)-配置であり、R3は(S)-配置であり、並びに/又はR4は、(S)-配置であり;並びに/或いは
R5が、
(i)水素;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル;
(iii)置換又は無置換の、シクロプロピル及びフェニル、好ましくは、置換フェニル、より好ましくは、H、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
(iv)シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル;並びに
(v)置換又は無置換の、好ましくは、無置換の、イミダゾリル/ピラゾリルの位置(1)の窒素を介して式(I)の環と結合した、イミダゾリル及びピラゾリル;
からなる群から選択され;
式(I)の環の位置(5)が、sp3-混成である場合、R5は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;並びに/或いは
R6及びR11が、置換又は無置換の、好ましくは、無置換の、位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から独立して選択され;
YがSである場合、R6は、存在せず;並びに/或いは
式(II)の環が、式(II)の環の位置(4)及び(5)の間又は位置(3)及び(4)の間の二重結合を有する場合、R11は、非存在であり;並びに/或いは
R7及びR8が、
(i)水素;
(ii)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル;並びに
(iii)
【００３８】
【化１０】
0006928096.tif 000011
【００３９】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)置換又は無置換の、シクロプロピル及びフェニル、好ましくは、シクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される);
からなる群から独立して選択され;
R8については、この群は、更に、
【００４０】
【化１１】
0006928096.tif 000012
【００４１】
(式中、Xは、Nであり、aは、1であり、R13は、置換又は無置換の、好ましくは、無置換の、位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択される)
を含み;
式(II)の環の位置(5)が、sp3-混成である場合、R8は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;並びに/或いは
R9が、
(i)水素、メチル及びシクロプロピル;並びに
(ii)置換又は無置換のフェニル、好ましくは、H、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位が置換されたフェニル;
からなる群から選択され;
式(II)の環の位置(3)が、sp3-混成である場合、R9は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(S)-配置であり;並びに/或いは
R10が、非存在であるか、又は
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)シクロプロピル、並びにH、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
からなる群から選択され;
Xが、Cである場合、並びに/或いは式(II)の環が、式(II)の環の位置(1)及び(2)の間又は位置(2)及び(3)の間の二重結合を有する場合、R10は、非存在である、化合物である。
【００４２】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、二重結合が、位置(3)及び(4)の間に位置する(式Ia)
【００４３】
【化１２】
0006928096.tif 000013
【００４４】
[式中、Xは、Nであり、aは、0であり、
R1は、位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択され;並びに/或いは
R2は、オキソであり;並びに/或いは
R3は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)
【００４５】
【化１３】
0006928096.tif 000014
【００４６】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)シクロプロピル、及びシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される)
からなる群から選択され;並びに/或いは
R4は、ヒドロキシルであり;並びに/或いは
R5は、
(i)水素;
(ii)メチル;
(iii)シクロプロピル、並びにH、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
(iv)シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル;並びに
(v)イミダゾリル/ピラゾリルの位置(1)の窒素を介して式(I)の環と結合した、イミダゾリル及びピラゾリル;
からなる群から選択され;
R5は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置である]
式(I)の化合物である。
【００４７】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、2つの二重結合が、位置(2)及び(3)の間並びに位置(4)及び(5)の間にそれぞれ位置する(式Ib)
【００４８】
【化１４】
0006928096.tif 000015
【００４９】
[式中、Xは、N又はC、好ましくは、Nであり、aは、0又は1、好ましくは、XがCである場合、aは、0であり、
R1は、位置(5)又は(6)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択され;並びに/或いは
R2は、
(i)水素;及び
(ii)メチル;
からなる群から選択され;並びに/或いは
R3は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)
【００５０】
【化１５】
0006928096.tif 000016
【００５１】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)シクロプロピル、及びシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される)
からなる群から選択され;並びに/或いは
R4は、水素であり;並びに/或いは
R5は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)シクロプロピル、並びにH、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
からなる群から選択される]
式(I)の化合物である。
【００５２】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、式(I)の5員環中の結合が、完全に飽和である(式Ic)
【００５３】
【化１６】
0006928096.tif 000017
【００５４】
[式中、Xは、Nであり、aは、0であり、
R1は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)シクロプロピル、並びにH、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
からなる群から選択され;
並びに/或いは
R2は、
(i)水素;並びに
(ii)インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリル、好ましくは、位置(5)又は(6)を介して、より好ましくは、R3がメチルではない場合、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して、最も好ましくは、R3がメチルである場合、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリル;
からなる群から選択され;並びに/或いは
R3は、
(i)水素又はメチル;並びに
(ii)
【００５５】
【化１７】
0006928096.tif 000018
【００５６】
(式中、Xは、Nであり、aは、1であり、R13は、インダゾリル、ベンズイミダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択される);
からなる群から選択され;並びに/或いは
R4は、
(i)水素;
(ii)メチル;
(iii)
【００５７】
【化１８】
0006928096.tif 000019
【００５８】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)シクロプロピル、及びシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される);並びに
(iv)
【００５９】
【化１９】
0006928096.tif 000020
【００６０】
(式中、Xは、Nであり、aは、1であり、R13は、シクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位がモノ置換されたか、又はシクロプロピル若しくは-(CF3)によってそれぞれのメタ位が二置換されたか、又はシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換された、フェニルである);
からなる群から選択され;
R2及びR4並びに/又はR3及びR4は、好ましくは、互いに、トランス配置であり、好ましくは、R2は、(S)-配置であり、R3は、(S)-配置であり、R4は、(R)-配置であり;並びに/或いは
R5は、水素である]
式(I)の化合物である。
【００６１】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、式(II)の環内の結合が、完全に飽和である(式IIa)
【００６２】
【化２０】
0006928096.tif 000021
【００６３】
[式中、Xは、Cであり、Yは、Sであり、
R6は、存在せず;並びに/或いは
R7は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)
【００６４】
【化２１】
0006928096.tif 000022
【００６５】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)シクロプロピル、或いはシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される)
からなる群から選択され;並びに/或いは
R8は、
(i)水素及びメチル;並びに
(ii)
【００６６】
【化２２】
0006928096.tif 000023
【００６７】
(式中、Xは、Nであり、aは、1であり、R13は、位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(5)又はベンズイミダゾリルの位置(6)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択される);
からなる群から選択され;
R8は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;並びに/或いは
R9は、
(i)水素、メチル及びシクロプロピル;並びに
(ii)H、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
からなる群から選択され;
R9は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(S)-配置であり;並びに/或いは
R10は、水素であり;並びに/或いは
R11は、水素であるか、或いは位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択される]
式(II)の化合物である。
【００６８】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、式(II)の環が、芳香族である(式IIb)
【００６９】
【化２３】
0006928096.tif 000024
【００７０】
[式中、Xは、Nであり、Yは、Cであり、
R6は、位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択され;並びに/或いは
R7及びR8は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)
【００７１】
【化２４】
0006928096.tif 000025
【００７２】
(式中、R12は、
(aa)N;並びに
(bb)シクロプロピル、及びシクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又はそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;
からなる群から選択される)
からなる群から独立して選択され;
並びに/或いは
R9は、水素であり;並びに/或いは
R10及び/又はR11は、非存在である]
式(II)の化合物である。
【００７３】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、2つの二重結合が、位置(1)及び(6)の間並びに位置(4)及び(5)の間にそれぞれ位置する(式IIc)
【００７４】
【化２５】
0006928096.tif 000026
【００７５】
[式中、Xは、Nであり、Yは、Cであり、
R6は、位置(6)又は(5)を介して、好ましくは、インダゾリル及びベンゾジオキソリルの位置(6)又はベンズイミダゾリルの位置(5)を介して結合した、インダゾリル、ベンズイミダゾリル並びにベンゾジオキソリルからなる群から選択され;並びに/或いは
R7及びR8は、水素及びメチルからなる群から独立して選択され;
並びに/或いは
R9は、水素であり;並びに/或いは
R10は、
(i)水素;
(ii)メチル;並びに
(iii)シクロプロピル、並びにH、Cl、F、Br、メチル、-(CF3)及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基によってパラ位がモノ置換されたフェニル;
からなる群から選択され;
並びに/或いは
R11は、非存在である]
式(II)の化合物である。
【００７６】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、
R1が、水素、メチル、
【００７７】
【化２６】
0006928096.tif 000027
【００７８】
からなる群から選択され;
並びに/或いは
R2が、水素、オキソ、メチル、
【００７９】
【化２７】
0006928096.tif 000028
【００８０】
からなる群から選択され;
並びに/或いは
R3が、水素、メチル、
【００８１】
【化２８】
0006928096.tif 000029
【００８２】
からなる群から選択され;
並びに/或いは
R4が、水素、ヒドロキシル、メチル、
【００８３】
【化２９】
0006928096.tif 000030
【００８４】
からなる群から選択され;
R4並びに/又はR3及びR4が、好ましくは、互いにシス若しくはトランス配置、より好ましくは、トランス配置であり、好ましくは、R2が、(R)-若しくは(S)-配置であり、R3が、(R)-若しくは(S)-配置であり、並びに/又はR4が、(R)-若しくは(S)-配置であり、より好ましくは、R2が、(R)-配置であり、R3が、(R)-配置であり、並びに/又はR4が、(R)-配置であるか、或いはR2が、(S)-配置であり、R3が、(S)-配置であり、並びに/又はR4が、(S)-配置であり;並びに/或いは
R5及びR9が、水素、メチル、シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル、
【００８５】
【化３０】
0006928096.tif 000031
【００８６】
からなる群から選択され、
R9が、好ましくは、シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イルではなく、
式(I)の環の位置(5)が、sp3-混成である場合、R5は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり、
R9は、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;並びに/或いは
Yが、Sである場合、R6は、存在せず、Yが、Cである場合、R6は、
【００８７】
【化３１】
0006928096.tif 000032
【００８８】
からなる群から選択され;並びに/或いは
R7及びR8が、水素、メチル、
【００８９】
【化３２】
0006928096.tif 000033
【００９０】
からなる群から選択され、
R8が、
【００９１】
【化３３】
0006928096.tif 000034
【００９２】
からなる群から追加で選択され、
R8が、好ましくは、(R)-又は(S)-配置、より好ましくは、(R)-配置であり;並びに/或いは
R10が、非存在であるか、又は水素、メチル、
【００９３】
【化３４】
0006928096.tif 000035
【００９４】
からなる群から選択され、
Xが、Cである場合、並びに/或いは式(II)の環が、式(II)の環の位置(1)及び(2)の間又は位置(2)及び(3)の間の二重結合を有する場合、R10は、非存在であり、並びに/或いは
R11が、非存在であるか、又は水素、
【００９５】
【化３５】
0006928096.tif 000036
【００９６】
からなる群から選択され、
式(II)の環が、式(II)の環の位置(4)及び(5)の間又は位置(3)及び(4)の間の二重結合を有する場合、R11は、非存在である、
化合物である。
【００９７】
更に好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、
(i)1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-メチル-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-シクロプロピル-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-(シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル)-5-オキソ-3-ヒドロキシ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-(ピラゾール-1-イル)-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-(イミダゾール-1-イル)-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-フェニル-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-(p-トリル)-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-(4-クロロフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-(4-フルオロフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-(4-ブロモフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-(4-シクロプロピルフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2-フェニル-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2-(p-トリル)-2H-ピロール-4-イル、
2-(4-クロロフェニル)-3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
2-(4-フルオロフェニル)-3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
2-(4-ブロモフェニル)-3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
2-(4-シクロプロピルフェニル)-3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
2-シクロプロピル-3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2-メチル-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2-(ピラゾール-1-イル)-2H-ピロール-4-イル、
2-(シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル)-3-ヒドロキシ-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
3-ヒドロキシ-2-(イミダゾール-1-イル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-ジメチル-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-シクロプロピル-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-(ピラゾール-1-イル)-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-(イミダゾール-1-イル)-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-(シクロペンタ-2,4-ジエン-1-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-(4-フルオロフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-フェニル-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2-(p-トリル)-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-(4-クロロフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-(4-ブロモフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-(4-シクロプロピルフェニル)-3-ヒドロキシ-5-オキソ-2H-ピロール-4-イル、
ここで、2H-ピロール環の番号は以下の通りであり:
【００９８】
【化３６】
0006928096.tif 000037
【００９９】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-ブロモフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-ブロモフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2,5-ジメチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-シクロプロピル-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-シクロプロピル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
5-(4-クロロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
5-(4-フルオロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
5-(4-ブロモフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
5-(4-シクロプロピルフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
5-(4-フルオロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
5-(4-クロロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)ピロール-3-イル、
5-(4-ブロモフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)ピロール-3-イル、
5-(4-シクロプロピルフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)ピロール-3-イル、
5-シクロプロピル-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-2,5-ジメチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)ピロール-3-イル、
5-シクロプロピル-1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イルメチル)-5-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-ブロモフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-2-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-ブロモフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-2,5-ジメチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-シクロプロピル-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチル)-5-シクロプロピル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2,5-ジメチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-シクロプロピル-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピロール-3-イル、
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-シクロプロピル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
5-(4-クロロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)ピロール-3-イル、
5-(4-ブロモフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)ピロール-3-イル、
5-(4-フルオロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-フェニル-ピロール-3-イル、
5-(4-シクロプロピルフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
5-(4-クロロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
5-(4-ブロモフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
5-(4-フルオロフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-イル、
5-(4-シクロプロピルフェニル)-1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-2,5-ジメチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
5-シクロプロピル-1-(1H-インダゾール-6-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)-5-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-インダゾール-6-イル)ピロール-3-イル、
5-シクロプロピル-1-(1H-インダゾール-6-イル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2,5-ジメチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-シクロプロピル-2-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-メチル-ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)ピロール-3-イル、
1-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-シクロプロピル-ピロール-3-イル、
ここで、ピロール環の番号は以下の通りであり:
【０１００】
【化３７】
0006928096.tif 000038
【０１０１】
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-ブロモフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-クロロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオ-モルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-5-(4-フルオロフェニル)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-5-(4-ブロモフェニル)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-5-(4-クロロフェニル)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオ-モルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-ブロモフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-クロロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
(3R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)チオ-モルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-シクロプロピル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3,5-ジメチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-シクロプロピル-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
5-(4-フルオロフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)チオモルホリン-2-イル、
5-(4-ブロモフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)チオモルホリン-2-イル、
5-(4-クロロフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-5-メチル-チオモルホリン-2-イル、
5-シクロプロピル-4-(1H-インダゾール-6-イル)チオモルホリン-2-イル、
5-(4-シクロプロピルフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)チオモルホリン-2-イル、
5-(4-フルオロフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
5-(4-ブロモフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
5-(4-クロロフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-3,5-ジメチル-チオモルホリン-2-イル、
5-(4-シクロプロピルフェニル)-4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
5-シクロプロピル-4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-シクロプロピル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-フルオロフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-ブロモフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-クロロフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3,5-ジメチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-シクロプロピル-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-(4-シクロプロピルフェニル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-メチル-5-(p-トリル)チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-メチル-5-フェニル-チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-メチル-5-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]チオモルホリン-2-イル、
4-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-メチル-チオモルホリン-2-イル、
ここで、チオモルホリン環の番号は以下の通りであり:
【０１０２】
【化３８】
0006928096.tif 000039
【０１０３】
【化３９】
0006928096.tif 000040
【０１０４】
6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン-4-イル、
【０１０５】
【化４０】
0006928096.tif 000041
【０１０６】
6-(1H-ベンズイミダゾール-5-イル)ピリミジン-4-イル、
【０１０７】
【化４１】
0006928096.tif 000042
【０１０８】
6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-メチル-ピリミジン-4-イル、
【０１０９】
【化４２】
0006928096.tif 000043
【０１１０】
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン-5-イル、
【０１１１】
【化４３】
0006928096.tif 000044
【０１１２】
6-(1H-ベンズイミダゾール-5-イル)-5-メチル-ピリミジン-4-イル、
【０１１３】
【化４４】
0006928096.tif 000045
4-(1H-ベンズイミダゾール-5-イル)ピリミジン-5-イル、
【０１１４】
【化４５】
0006928096.tif 000046
6-(1H-インダゾール-6-イル)ピリミジン-4-イル、
【０１１５】
【化４６】
0006928096.tif 000047
6-(1H-インダゾール-6-イル)-4-メチル-ピリミジン-5-イル及び
【０１１６】
【化４７】
0006928096.tif 000048
6-(1H-インダゾール-6-イル)ピリミジン-5-イル
からなる群から選択される第1の残基であって、
【０１１７】
水素、メチル
【０１１８】
【化４８】
0006928096.tif 000049
【０１１９】
からなる群から選択される第2の残基と共有結合した第1の残基;並びに
(ii)
6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-メチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-メチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4,5-ジメチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-5-メチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4,5-ジメチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-インダゾール-6-イル)-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-インダゾール-6-イル)-4-メチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-5-メチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-インダゾール-6-イル)-4,5-ジメチル-2H-ピリミジン-1-イル、
6-(1H-インダゾール-6-イル)-5-メチル-2H-ピリミジン-1-イル、
【０１２０】
ここで、2H-ピリミジン環は以下の通り番号付けられ:
【０１２１】
【化４９】
0006928096.tif 000050
【０１２２】
(4R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]-メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3-(シクロプロピルフェニル)フェニル]-メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピルフェニル)フェニル]-メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[4-(シクロプロピルフェニル)フェニル]-メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(1H-インダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]-メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-3-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イルメチルカルバモイル)-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチルカルバモイル]-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-メチル-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-3-メチル-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-5-イル)-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチルカルバモイル]-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-メチル-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(3H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル]、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-3-メチル-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-ピロリジン-1-イル
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-インダゾール-6-イル)-3-メチル-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[4-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-3-メチル-ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[3,5-ビス(シクロプロピル)フェニル]メチル-カルバモイル]ピロリジン-1-イル、及び
(4R)-2-(1H-ベンゾイミダゾール-5-イル)-4-[[4-(シクロプロピル)フェニル]メチルカルバモイル]ピロリジン-1-イル、
【０１２３】
ここで、ピロリジン環は以下の通り番号付けられ:
【０１２４】
【化５０】
0006928096.tif 000051
【０１２５】
からなる群から選択される第1の残基であって、
水素、メチル、
【０１２６】
【化５１】
0006928096.tif 000052
【０１２７】
からなる群から選択される第2の残基と共有結合した第1の残基;
からなる群から選択される化合物であって、
第1の残基は、第1の残基のイルの位置で第2の残基と共有結合し;
好ましくは、
【０１２８】
【化５２】
0006928096.tif 000053
【０１２９】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン;
【０１３０】
【化５３】
0006928096.tif 000054
【０１３１】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド;
【０１３２】
【化５４】
0006928096.tif 000055
【０１３３】
(3R)-N-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-3-カルボキサミド;
【０１３４】
【化５５】
0006928096.tif 000056
【０１３５】
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン;
【０１３６】
【化５６】
0006928096.tif 000057
【０１３７】
(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド;
【０１３８】
【化５７】
0006928096.tif 000058
【０１３９】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-カルボキサミド;
【０１４０】
【化５８】
0006928096.tif 000059
【０１４１】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-カルボキサミド;及び
【０１４２】
【化５９】
0006928096.tif 000060
【０１４３】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド
からなる群から選択される化合物である。
【０１４４】
更なる態様において、本発明は、
【０１４５】
【化６０】
0006928096.tif 000061
【０１４６】
[式中、R4は、ヒドロキシル、-O-R14及び-O-C(=O)-R14からなる群から選択され、ここで、R14は、
(aa)直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、(C1〜10)アルキル、好ましくは、(C1〜5)アルキル、より好ましくは、メチル、エチル及びプロピル、最も好ましくは、メチル、(C2〜10)アルケニル並びに(C2〜10)アルキニル;
(bb)置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、(C3〜10)炭素環、好ましくは、(C3〜6)シクロアルキル、より好ましくは、(C3)炭素環及び(C6)炭素環、好ましくは、(C6)炭素環、より好ましくは、(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又は(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニル;並びに
(cc)N、O及びSからそれぞれ独立して選択される1〜3個のヘテロ原子を有する、置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、好ましくは、芳香族の、(C3〜6)ヘテロ環;
からなる群から選択される]
からなる群から選択される化合物、
好ましくは、
【０１４７】
【化６１】
0006928096.tif 000062
【０１４８】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン;
【０１４９】
【化６２】
0006928096.tif 000063
【０１５０】
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド;
【０１５１】
【化６３】
0006928096.tif 000064
【０１５２】
4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン;及び
【０１５３】
【化６４】
0006928096.tif 000065
【０１５４】
(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミドからなる群から選択される化合物を対象とする。
【０１５５】
本明細書に記載の化合物は、一般に、Advanced Chemistry Development, Inc.社(カナダ)によって提供されるACD/Chemsketch 2015及びBIOVIA社(米国)によって提供されるBIOVIA Draw 2016というソフトウェアにより、描画される構造に基づいてコンピューターが計算した命名を使用することによって、命名される。本明細書に記載のそれぞれの分子について、本明細書は、命名の目的のために、式I及びIIの環の残基を明確に番号付けした構造式を提供する。構造式が結合しており、コンピューターが計算していない化学名であることに更に留意されたい;言い換えれば、名称及び構造式が互いに矛盾する場合は、構造式が優先される。
【０１５６】
不斉中心を有する化合物の場合、他に規定のない限り、全ての光学異性体及びその混合物を包含すると理解される。それぞれの不斉中心の炭素は、別に指示がない場合、(R)-若しくは(S)-配置、又はその配置の組み合わせでありうる。また、2以上の不斉元素を有する化合物は、ジアステレオマーの混合物として存在することができる。更にまた、本発明の化合物は、好ましくは、少なくとも50%、好ましくは、少なくとも60%、70%、80%、85%、より好ましくは、少なくとも90%、95%、96%、97%、最も好ましくは、少なくとも98%、99%又は100%のジアステレオマー純度を有する。加えて、炭素-炭素二重結合を有する化合物は、Z-及びE体で存在していてよく、他に規定のない限り、存在する化合物の全ての異性体の形態が本発明に含まれる。化合物がさまざまな互変異性体で存在する場合、列挙される化合物は、いずれか1つの特定の互変異性体に限定されず、むしろ全ての互変異性の形態を包含することを意図する。
【０１５７】
例えば、以下のように表される化合物
【０１５８】
【化６５】
0006928096.tif 000066
【０１５９】
は、
【０１６０】
【化６６】
0006928096.tif 000067
【０１６１】
の互変異性の形態を包含する。
【０１６２】
列挙される化合物は、更に、1つ又は複数の原子が同位元素、即ち、同じ原子番号を有するが異なる質量数を有する原子で置き換えられた化合物を包含することを意図する。一般的な例として、限定されるものではないが、水素の同位元素としては、三重水素及び重水素が挙げられ、炭素の同位元素としては、11C、13C及び14Cが挙げられる。
【０１６３】
1つ又は複数の立体中心を有する本明細書に提供される式による化合物は、少なくとも50%の鏡像体過剰率を有する。例えば、このような化合物は、少なくとも60%、70%、80%、85%、好ましくは、少なくとも90%、95%又は98%の鏡像体過剰率を有しうる。本化合物のいくつかの実施形態は、少なくとも99%の鏡像体過剰率を有する。単一のエナンチオマー(光学活性体)は、不斉合成、光学的に純粋な前駆体からの合成、生合成、例えば、改変されたCYP102(CYP BM-3)の使用、或いはラセミ体の分割、例えば、酵素的分割、又は分割剤の存在下での結晶化、若しくは例えば、キラルHPLCカラムを使用するクロマトグラフィー等の従来の方法による分割によって、得ることができる。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、「置換基」又は「残基」又は「R」は、対象の分子内の原子と共有結合する分子の部分を指す。例えば、「置換基」、「R」又は「残基」は、ハロゲン、アルキル基、ハロアルキル基、又は対象の分子の一部を形成する原子、好ましくは、炭素原子又は窒素原子と共有結合する本明細書に記載のその他の置換基等の部分でありうる。本明細書で使用される「置換された」という用語は、指定された原子の通常の原子価を超えず、かつ置換が安定な化合物、即ち、従来の手段を使用して単離及び特徴付けることができる化合物をもたらすという条件で、指定された原子上のいずれか1つ又は複数の水素が、指示された置換基からの選択によって置き換えられることを意味する。例えば、置換は、炭素以外のその他の化学原子と結合した酸素の形態、例えば、ヒドロキシル基又は酸素アニオンでありうる。置換がオキソ、即ち、=Oである場合、その結果として、原子上の2個の水素が置き換わる。芳香族の炭素原子の置換基であるオキソ基は、-CH-から-C(=O)-への変換及び芳香族性の喪失をもたらす。例えば、オキソによって置換されたピリジル基はピリドンである。
【０１６５】
本明細書で使用される「ヘテロ原子」という用語は、好ましくは、O、N、S及びP等の炭素及び水素以外の原子を意味すると理解されるべきである。
【０１６６】
1番目の化合物、置換基又は残基が、例えば、「-3-イル」という名称で終わる場合、この最後は、1番目の化合物、置換基又は残基が、1番目の化合物の原子の番号が3の位置で、2番目の化合物、置換基又は残基に共有結合することを示す。当然ながら、この定義は、化合物、置換基又は残基の名称の「-イル」という末端の前の任意の所与の整数に対しても当てはまる。例えば、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)ピロール-3-イルが、2番目の残基
【０１６７】
【化６７】
0006928096.tif 000068
【０１６８】
と共有結合する1番目の残基として選択される場合、以下の化合物:
【０１６９】
【化６８】
0006928096.tif 000069
【０１７０】
が形成される。
【０１７１】
本発明の文脈において、「直鎖状又は分枝状の」、「置換又は無置換の」等の先行する用語は、後続の用語のそれぞれが、前記先行する用語によって修正されていると解釈されるべきであることを示すことが理解される。例えば、「直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環」という用語の範囲は、直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換のアルキル;直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換のアルケニル;直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換のアルキニル;直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換のアルキリデン;及び直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の炭素環を包含する。例えば、「(C2〜10)アルケニル、アルキニル又はアルキリデン」という用語は、2〜10個の炭素、及びアルケニル、アルキニル又はアルキリデン官能性を有する化合物の群を指す。
【０１７２】
「アルキル」という表現は、指示された炭素数の項目を含有する、飽和の、直鎖状又は分枝状の炭化水素基を指し、例えば、「(C1〜10)アルキル」は、1〜10個の炭素原子を含有する炭化水素残基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、n-ヘキシル、2,2-ジメチルブチル等を表す。
【０１７３】
「アルケニル」という表現は、指示された炭素原子の数を含有する、少なくとも部分的に不飽和の、置換又は無置換の、直鎖状又は分枝状の炭化水素基を指し、例えば、「(C2〜10)アルケニル」は、2〜10個の炭素原子を含有する炭化水素残基、例えば、エテニル(ビニル)、プロペニル(アリル)、イソプロペニル、ブテニル、イソプレニル又はヘキサ-2-エニル基、又は、例えば、1個の二重結合によって中断されたメチレン鎖を含む炭化水素基、例えば、モノ不飽和脂肪酸又はメチレン中断ポリエンを含む炭化水素基、例えば、ポリ不飽和脂肪酸中で見られるような、例えば、2以上の以下の構造単位-[CH=CH-CH2]-を含む炭化水素基を表す。アルケニル基は、1個又は複数、好ましくは、1、2、3、4、5又は6個の二重結合を有する。
【０１７４】
「アルキニル」という表現は、指示された炭素数の項目を含有する、少なくとも部分的に不飽和の、置換又は無置換の、直鎖状又は分枝状の炭化水素基を指し、例えば、「(C2〜10)アルキニル」は、2〜10個の炭素原子を含有する炭化水素残基、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、アセチレニル又はプロパルギル基を表す。好ましくは、アルキニル基は、1個又は2個(特に好ましくは、1個)の三重結合を有する。
【０１７５】
更にまた、「アルキル」、「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、1個又は複数の水素原子が、例えば、ハロゲン原子、好ましくは、F又はClによって置き換わった基、例えば、2,2,2-トリクロロエチル又はトリフルオロメチル基等を指す。
【０１７６】
「炭素環」という用語は、指示された炭素数の項目、例えば、「(C3〜10)炭素環」又は3〜20個、好ましくは、3〜12個の炭素原子、より好ましくは、5又は6個の炭素原子を含有する、置換又は無置換の、脂肪族炭化水素の環を意味すると理解されるべきである。これらの炭素環は、芳香族又は非芳香族系のいずれかでありうる。非芳香族の環系は、モノ又はポリ不飽和でありうる。
【０１７７】
「炭素二環」という用語は、2個以上の環、好ましくは、2個の環を含む、上記に定義される炭素環を指す。好ましい炭素環及び炭素二環としては、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプタニル、シクロヘプテニル、フェニル、インダニル、インデニル、ベンゾシクロブタニル、ジヒドロナフチル、テトラヒドロナフチル、ナフチル、デカヒドロナフチル、ベンゾシクロヘプタニル、ベンゾシクロヘプテニル、スピロ[4,5]デカニル、ノルボルニル、デカリニル、ビシクロ[4.3.0]ノニル、テトラリン又はシクロペンチルシクロヘキシルが挙げられる。炭素及び/又は炭素二環残基は、環の任意の原子によって完全分子の残りの構造と結合していてよく、これは、安定な構造をもたらす。
【０１７８】
「炭素環」という用語は、「シクロアルキル」も含むものとし、これは、好ましくは、3〜12個の炭素原子を有する、脂肪族の炭化水素含有環を意味すると理解されるべきである。これらの非芳香族の環系は、モノ又はポリ不飽和であってよく、即ち、この用語は、シクロアルケニル及びシクロアルキニルを包含する。
【０１７９】
「ヘテロ環」という用語は、安定な、置換又は無置換の、芳香族又は非芳香族の、好ましくは、3〜30員、より好ましくは、3〜12員、最も好ましくは、5〜6員の、単環式のヘテロ原子含有環を指す。それぞれのヘテロ環は、炭素原子、並びに、1個又は複数、好ましくは、1〜4個、より好ましくは、1〜3個の、好ましくは、窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子で構成される。ヘテロ環は、非炭素原子に加えて指示された数の炭素原子を含有していてよく、「(C3〜6)ヘテロ環」は、所与の数のヘテロ原子に加えて、3〜6個の炭素原子を有することを意味する。
【０１８０】
「ヘテロ二環」という用語は、2個以上の環、好ましくは、2個の環を含む、上記に定義されるヘテロ環を指す。
【０１８１】
ヘテロ及び/又はヘテロ二環残基は、環の任意の原子によって完全分子の残りの構造と結合していてよく、これは、安定な構造をもたらす。ヘテロ環及びヘテロ二環の例としては、限定されるものではないが、ピロリジニル、ピロリニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、ジオキサラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、1-オキソ-λ4-チオモルホリニル、13-オキサ-11-アザ-トリシクロ[7.3.1.0-2,7]トリデシル-2,4,6-トリエン、テトラヒドロピラニル、2-オキソ-2H-ピラニル、テトラヒドロフラニル、1,3-ジオキソラノン、1,3-ジオキサノン、1,4-ジオキサニル、8-オキサ-3-アザ-ビシクロ[3.2.1]オクタニル、2-オキサ-5-アザ-ビシクロ[2.2.1]ヘプタニル、2-チア-5-アザ-ビシクロ[2.2.1]ヘプタニル、ピペリジノニル、テトラヒドロ-ピリミドニル、ペンタメチレンスルフィド、ペンタメチレンスルホキシド、ペンタメチレンスルホン、テトラメチレンスルフィド、テトラメチレンスルホキシド及びテトラメチレンスルホン、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾジオキソリル、イミダゾリル、1,3-ベンゾジオキソリル並びにピラゾリルが挙げられる。
【０１８２】
「アルキル/アルケニル/アルキニルエーテル」という表現は、指示された炭素数の項目を含有する、置換又は無置換の、直鎖状又は分枝状の炭化水素基を指す。例えば、「(C1〜10)アルキルエーテル」は、1〜10個の炭素原子、及びエーテル構造をもたらす任意の適切な数の酸素原子を含有する炭化水素残基を表す。本明細書で使用されるアルキル/アルケニル/アルキニルエーテル基は、いずれかのエーテルモチーフ、即ち、2個の炭素によって結合された酸素として、酸素原子を含む、任意の、直鎖状又は分枝状の、置換又は無置換の、アルキル/アルケニル/アルキニル鎖を意味すると理解されるべきである。エーテル残基は、本発明において提供される式と、炭素原子を介して、又はエーテル残基の酸素原子を介してのいずれかで、結合することができる。
【０１８３】
本明細書で使用される「置換基」又は「残基」又は「R」、好ましくは、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10及び/又はR11は、本発明において提供される式と、直接又はリンカーによって結合することができる。前記リンカーはまた、ポリエチレングリコールの形態でありうる。本明細書で使用されるポリエチレングリコールという用語は、置換又は無置換のエチレンオキシドモノマーの鎖を指す。
【０１８４】
本明細書で使用される場合、「窒素」又は「N」及び「硫黄」又は「S」という用語は、生じる化合物が化学的に安定である限り、窒素及び硫黄の任意に酸化された形態、並びに任意の塩基性窒素の四級化された形態を含む。例えば、-S-C1〜6アルキル基に関して、-S(O)-C1〜6アルキル及び-S(O)2-C1〜6アルキルを含むものと理解されるものとする。
【０１８５】
対象の2番目の化合物と所与の位置を介して結合する残基は、指定された原子の位置で2番目の化合物と共有結合する残基として理解されるべきである。例えば、インダゾリルの位置(5)を介して結合するインダゾリルは、以下の残基:
【０１８６】
【化６９】
0006928096.tif 000070
【０１８７】
を表す。この場合において、本技術分野における慣例により、番号は、1H-窒素から開始する。しかしながら、いくつかの命名は、番号に関して異なる開始点を提供しうることに留意されたい。例えば、1H-ベンズイミダゾール-6-イル残基は、当業者によって理解されるように、3H-ベンズイミダゾール-5-イル残基と同一である。
【０１８８】
本明細書で使用される場合、例えば、「1〜5」又は「(C1〜5)」等の長さの範囲の限定を定義する文言は、1〜5の任意の整数、即ち、1、2、3、4及び5を意味する。言い換えれば、明確に言及された2つの整数によって定義される任意の範囲は、前記限定を定義する任意の整数及び前記範囲に含まれる任意の整数を包含及び開示する意味である。
【０１８９】
例として、「メタ位でモノ若しくは二置換されたか、又はパラ位でモノ置換された」という用語は、本明細書で使用される場合、化合物が、化合物が別の化合物又は残基と結合する位置に対してパラ位で少なくとも1個の所与の置換基によって置換されるか、又は少なくとも1個の置換基によって2つのそのメタ位で置換されるかのいずれかであることを意味する。例えば、「(C3)炭素環又は-(CF3)によってメタ位で二置換された」という用語は、化合物が、1個の(C3)炭素環若しくは-(CF3)によってそれぞれのメタ位が、又は1つのメタ位が(C3)炭素環によって、及び他のメタ位が-(CF3)によって置換されることを表す。好ましくは、この用語は、化合物が、それぞれのメタ位が1個の(C3)炭素環によって、又はそれぞれのメタ位が1個の-(CF3)によって置換される、即ち、同じ置換基によって両方のメタ位が置換されることを表す。パラ位に関して上記に表したように、メタ位は、化合物が別の化合物又は残基と結合する位置に対するメタ位を表す。
【０１９０】
例として、「フェニル、好ましくは、シクロプロピル若しくは-(CF3)によってパラ位又はメタ位がモノ置換されたか、或いはそれぞれのメタ位においてシクロプロピル若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された」という用語は、好ましくは、以下の構造:
【０１９１】
【化７０】
0006928096.tif 000071
【０１９２】
を表す。
【０１９３】
本発明における使用のためのR1、R5及び/又はR9残基は、好ましくは、Cl、F、Br、置換又は無置換のメチル、好ましくは、-(CF3)、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる基によってパラ位がモノ置換されたフェニルである。本発明における使用のためのR12及びR13残基は、好ましくは、(C6)炭素環、より好ましくは、(C3)炭素環、好ましくは、シクロプロピル、若しくは-(CF3)によってパラ位がモノ置換されたか、又は(C3)炭素環、好ましくは、シクロプロピル、若しくは-(CF3)によってメタ位が二置換された、フェニルである。R1、R5、R9、R12及び/又はR13は、Cl、F、Br、置換又は無置換のメチル、好ましくは、-(CF3)、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる基によって、オルト位、メタ位及び/又はパラ位が、モノ、二又は三置換されたフェニルであることが更に好ましい。R1、R5、R9、R12及び/又はR13が表す二又は三置換フェニルは、オルト位、メタ位及びパラ位のそれぞれが同じ置換基で、又はオルト位、メタ位及び/又はパラ位のそれぞれが異なる置換基によって置換された、二又は三置換フェニルであり得、ここで、置換基は、Cl、F、Br、置換又は無置換のメチル、好ましくは、-(CF3)、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる群から選択される。R1、R5、R9、R12及び/又はR13が表すフェニルのオルト位、メタ位及び/又はパラ位におけるCl、F、Br、置換又は無置換のメチル、好ましくは、-(CF3)、エチル、プロピル及びシクロプロピルからなる群から選択される置換基のそれぞれの組み合わせ及び数は、本明細書に明確に開示される。
【０１９４】
本発明の範囲は、例えば、代謝安定性、1個又は複数の炭素に結合した水素、好ましくは、1個又は複数の芳香族炭素に結合した水素の、F、Cl又はBr、好ましくは、F等のハロゲン原子との交換の特性の理由のために、上記及び特許請求の範囲に記載の化合物のそれらの類似物を含む。例えば、化合物-1は、フェニル環中の芳香族炭素に結合した水素の代わり、又は1,3-ベンゾジオキソール-5-イル部分中の芳香族若しくは非芳香族炭素に結合した水素の代わりの、1個又は複数のハロゲン原子、好ましくは、Fが特徴でありうる。また、例えば、化合物-4は、ピリミジン環中の芳香族炭素に結合した水素の代わり、又はベンゾジオキソール部分中の芳香族若しくは非芳香族炭素に結合した水素の代わりの、1個又は複数のハロゲン原子、好ましくは、Fが特徴でありうる。
【０１９５】
好ましい実施形態において、本発明は、例えば、上記に記載の使用のための化合物又は化合物を対象とし、ここで、この化合物は、好ましくは、Gタンパク質共役受容体キナーゼ2(GRK2、ADRBK1)によって、セリン/アルギニンリッチスプライシング因子1(SRSF1、ASF-1、SF2)又はホスデューシンのリン酸化を阻害する。
【０１９６】
別の態様において、本発明は、活性物質として、例えば、上記に記載の使用のための化合物若しくは化合物、又はこれらの薬学的に許容される誘導体を、任意選択で、賦形剤及び/又は担体と組み合わせて含む医薬組成物を対象とする。
【０１９７】
本発明は、本発明の式(I)及び式(II)の化合物の薬学的に許容される塩又は溶媒和物を含む。「薬学的に許容される塩又は溶媒和物」は、患者への投与の際に、本発明の化合物、又はその薬理学的に活性な代謝体若しくは薬理学的に活性な残基を(直接的又は間接的に)提供することが可能な、任意の薬学的に許容される、塩、溶媒和物若しくはエステル又は任意の他の化合物を指す。薬理学的に活性な代謝体は、酵素的又は化学的に代謝されることが可能な任意の本発明の化合物を意味すると理解されるべきである。これは、例えば、本発明の化合物のヒドロキシル化又は酸化誘導体を含む。
【０１９８】
薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機酸及び有機酸並びに塩基から誘導される塩を含む。適切な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン-p-硫酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-硫酸及びベンゼンスルホン酸が挙げられる。シュウ酸等の他の酸は、それ自身が薬学的に許容されないが、化合物及びそれらの薬学的に許容される酸付加塩を得る際に、中間体として有用な塩の調製において用いてよい。適切な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属(例えば、ナトリウム)、アルカリ土類金属(例えば、マグネシウム)、アンモニウム及びN-(C1〜C4アルキル)4+の塩が挙げられる。
【０１９９】
加えて、本発明の範囲は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。プロドラッグは、単純な化学変換の際に、本発明の化合物を生成するように修飾された化合物を含む。単純な化学変換としては、加水分解、酸化及び還元が挙げられる。具体的には、プロドラッグが患者に投与されると、プロドラッグは、本明細書の上記に開示の化合物に変換され、それによって、所望の薬理学的効果を付与することができる。
【０２００】
好ましい実施形態において、本発明による使用のための化合物は、
(i)本態性高血圧及び/又は慢性高血圧の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(ii)心臓血管疾患が誘発する老化の危険性の低減;
(iii)亜急性心筋梗塞後の左心室機能障害及び心不全の徴候の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(iv)慢性心不全及び左心室機能障害の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(v)拡張型心筋症の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(vi)左心室機能障害の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(vii)心筋細胞の壊死の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(viii)心線維症の状態下での心血管系死亡率及び/又は疾病率の危険性の低減;
(ix)好ましくは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、慢性及び急性ストレス、うつ、真性糖尿病、慢性心不全、狭心症、心房細動、慢性腎不全並びに老化からなる群から選択される心血管危険因子の結果として、好ましくは、虚血性心疾患及び虚血性心臓障害に対する危険性が高い状態下での、心筋細胞の壊死及び/又は拡張型心筋症の予防、好ましくは、一次予防;
(x)急性心臓血管疾患、心筋梗塞、虚血性心疾患、狭心症、心房細動、非代償性及び慢性心不全、並びに脳血管発作からなる群から選択される以前の事象を有する患者における、心筋細胞の壊死及び/又は拡張型心筋症の予防、好ましくは、二次予防;並びに
(xi)好ましくは、心筋梗塞、狭心症、虚血性心疾患、脳血管疾患及び代償性心不全からなる群から選択される心臓血管疾患の急性疾患の病態の処置;
からなる群から選択される心臓保護的処置における使用のためであり、ここで、上記に記載の化合物又は医薬組成物は、動物又はヒト、好ましくは、哺乳類、より好ましくは、ヒトの処置における使用のためである。
【０２０１】
また、本発明の化合物は、例えば、ヒト腎臓細胞における生存促進性活性を引き起こす、ヒト腎臓細胞における細胞を損傷するSRSF1のリン酸化を阻害する。したがって、好ましい実施形態において、本発明の化合物は、さまざまな形態の腎臓疾患及び腎症、例えば、高血圧、腎動脈狭窄、心不全、虚血、糖尿病及び/又は毒物によって引き起こされる腎症を有する患者の処置における使用のためである。
【０２０２】
治療的使用のために、本発明の化合物は、任意の従来の方法で、任意の従来の剤形で投与することができる。投与経路としては、経口、静脈内、筋肉内及び皮下注射が挙げられる。好ましい投与様式は、経口、静脈内又は皮下である。
【０２０３】
本化合物は、単独で、又は本化合物の安定性を高め、ある特定の実施形態においてそれらを含有する医薬組成物の投与を容易にし、向上した溶解又は分散を提供し、活性を向上させ、補助療法(例えば、ベータアドレナリン受容体アンタゴニスト、ACE阻害剤、アンジオテンシン受容体アンタゴニスト、ミネラルコルチコイド受容体アンタゴニスト、イバブラジン、カルシウムチャネルアンタゴニスト及び/又は利尿剤)を提供する等、他の活性成分を含む、補助剤と組み合わせて、投与することができる。有利には、このような併用療法はより低用量の従来の治療薬を利用し、したがって、それらの薬剤が単独療法として使用される場合に起こる可能性がある毒性及び有害な副作用を回避する。上記に記載の化合物は、従来の治療薬又は他の補助剤と物理的に組み合わせて単一の医薬組成物とすることができる。これに関する言及は、Cappolaら、米国特許出願番号第09/902,822号、PCT/US01/21860号及び米国仮特許出願番号第60/313,527号で行われ、これらの全体が、本明細書に参照によってそれぞれ組み込まれる。有利には、本化合物は、したがって、単一の剤形で一緒に投与することができる。いくつかの実施形態において、このような化合物の組み合わせを含む医薬組成物は、少なくとも約5%、より好ましくは、少なくとも約20%の本発明の化合物を含有する(w/w)。本発明の化合物の最適な百分率(w/w)は、変化してよく、当業者の範囲内である。或いは、本化合物は、別々に(連続的又は並行のいずれか)投与されてよい。別々の投与は、投与レジメンにおけるより大きな柔軟性を可能にする。
【０２０４】
上述のように、本明細書の記載の化合物の剤形は、当業者に公知の、薬学的に許容される担体及び補助剤を含む。このような剤形を調製するための方法は公知である(例えば、H. C. Ansel及びN. G. Popovish、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、第5版、Lea and Febiger(1990)を参照のこと)。用量のレベル及び要件は、本技術分野において十分に認識されており、利用可能な方法及び特定の患者のために適切な技術から、当業者によって選択することができる。いくつかの実施形態において、用量レベルは、70kgの患者に対して1〜300mg/回の範囲である。1日あたり1回投与で十分でありうるが、1日あたり5回投与まで投与してよい。経口用量については、2000mg/日まで必要であってよい。これに関する言及は米国仮特許出願番号第60/339,249号にも行われうる。当業者が十分に理解するように、より低いかより高い用量は、患者の要因に応じて必要であってよい。例えば、特定の用量及び処置レジメンは、患者の全体的な健康プロファイル、患者の障害又はそれらに対する素因の重症度及び経過、並びに処置する医師の判断等の要因に依存するだろう。
【０２０５】
別の態様において、本発明は、患者、好ましくは、哺乳類の患者、より好ましくは、ヒト患者における、細胞保護的処置、好ましくは、心臓又は腎臓保護的処置のための方法であって、本発明による化合物の治療有効量、又は本発明による医薬組成物の有効量を、そのような処置を必要とする患者に投与する工程を含む、方法を対象とする。
【０２０６】
別の態様において、本発明は、好ましくは、GRK2が媒介するセリン/アルギニンリッチスプライシング因子1(SRSF1)及び/又はホスデューシンのリン酸化の決定によって、Gタンパク質共役受容体キナーゼ2(GRK2)の阻害剤の特定のための方法であって、
(i)SRSF1又はホスデューシンのリン酸化に適切な生理学的条件下、対象とする化合物の存在及び非存在下、GRK2及びSRSF1若しくはホスデューシンを提供及びインキュベートする工程;
(ii)対象とする化合物の存在及び非存在下でのSRSF1若しくはホスデューシンのリン酸化を決定する工程;
(iii)対象とする化合物の非存在下でのSRSF1若しくはホスデューシンのリン酸化に対して、対象とする化合物の存在下でのSRSF1若しくはホスデューシンのリン酸化に基づいて、阻害剤又は非阻害剤として、対象とする化合物を特定する工程;
を含む、方法を対象とする。
【０２０７】
好ましい実施形態において、上記に記載の特定のための方法は、
(a)工程(i)において、インキュベーションが、放射活性物質で標識されたATP、好ましくは、[ガンマ-32P]ATPの存在下、好ましくは、約25〜40℃で約30〜90分間行われ;並びに/又は
(b)工程(i)のインキュベーションが、30℃未満の温度、好ましくは、約0〜10℃の温度での希釈によって停止され;並びに/又は
(c)工程(ii)におけるSRSF1又はホスデューシンのリン酸化の決定が、(A)フィルター、好ましくは、ガラス繊維フィルターを通す(i)の生成物の濾過;(B)フィルターの洗浄;及び
(c)フィルターに結合した放射活性の、好ましくは、β-カウンターでの決定によって行われる;
方法である。
【０２０８】
(GRK2)が媒介する(SRSF1)及び(ホスデューシン)のリン酸化の阻害剤の特定のための方法についての非限定的及び代表的な実施例を、下記の実施例13及び実施例5に提供する。例えば、(GRK2)が媒介する(SRSF1)及び(ホスデューシン)のリン酸化の低分子阻害剤の特定のために、リン酸化アッセイを反応緩衝液(例えば、ATP、好ましくは、約5マイクロMの[ガンマ-32P]-ATP(例えば、1×106DPM、約3000Ci/mmolの比放射能)が補われた、20mMのTris、2mMのEDTA、5mMのMgCl2、0.05%のBSA、pH7.5又は20mMのHepes、2mMのMgCl2、0.025%のDDM(=n-ドデシルベータ-D-マルトシド)、pH 7.4)及び約300〜500nMのSRSF1(又はホスデューシン)中で行うことができる。反応混合物を、GRK2又はGRK2-S670A(例えば、反応緩衝液中約60nM、低分子化合物の濃度の増加なし又はあり)に添加して、例えば、約50マイクロLの最終反応容積を得る。例えば、約30℃での約30〜60分間のインキュベーション後、リン酸化を、好ましくは約5倍容積量の氷冷した反応緩衝液の添加によって停止することができる。反応混合物を直ぐにフィルター、好ましくは、ガラス繊維フィルターに適用する。例えば、約5mlの反応緩衝液による3回の洗浄工程後、フィルターに結合した放射活性をβ-カウンターで決定することができる。
【０２０９】
また、本発明の化合物は、変化するGRK2活性のマーカーとして使用することができる。
【０２１０】
以下の図及び実施例は、本発明を説明するためのものであり、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０２１１】
図及び実施例において、以下の名称は、本発明の化合物及び対照化合物のそれぞれに帰属される。
化合物-1:1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン;
化合物-2:1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド;
化合物-3:(3R)-N-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-3-カルボキサミド;
化合物-4:4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン;
化合物-5:(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド;
化合物-22:1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-フェニル-ピロール-3-カルボキサミド;
化合物-23:1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-2-メチル-5-(p-トリル)ピロール-3-カルボキサミド;
化合物-24:1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド;
化合物-6:イブプロフェン((±)-2-(4-イソブチルフェニル)プロパン酸)(参照化合物、Sigma-Aldrich社、St. Louis、米国)。
【図面の簡単な説明】
【０２１２】
【図１】図１Ａ〜図１Ｂ。新規な非受容体GRK2基質としてのSRSF1の特定。A、左パネル:心不全患者の心臓生検標本からの免疫アフィニティークロマトグラフィーによるGRK2の濃縮、並びに免疫ブロットにおける濃縮GRK2及び共濃縮SRSF1の検出。右パネル:ナノ-LC-ESI-MS/MS分析は、SRSF1(セリン/アルギニンリッチスプライシング因子1、ASF/SF2、配列番号:7)を心不全患者の心臓生検標本における以前に認識されていなかったGRK2相互作用タンパク質として特定した。B、GRK2は、インビトロキナーゼアッセイにおいて、SRSF1をリン酸化する。ナノ-LC-ESI-MS/MS分析、GRK2リン酸化部位としてセリン199/201を有するリン含有ペプチドの特定(配列番号:8及び配列番号:9)。  図１Ｃ〜図１Ｅ。新規な非受容体GRK2基質としてのSRSF1の特定。C、パロキセチンは、2.38μM(n=4)の半最大阻害濃度(IC50値)でGRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害する。D、別の心臓保護的GRK2阻害剤であるGRKInhによるGRK2が媒介するSRSF1のリン酸化の阻害。E、リン特異的SR抗体1H4(p-SRSF1)を用いるGRK2によるSRSF1のリン酸化の活性化の免疫ブロット検出。
【図２】GRK2はインビボでのSrsf1のリン酸化の活性化を誘発する。A、B、アルファ-MHCプロモーターの制御下でのGRK2の心筋特異的発現を有するTg-GRK2マウスの作製(A)、及び非トランスジェニックB6対照に対して、Tg-GRK2マウスからの心臓溶解物中の増加したGRK2タンパク質の免疫ブロット検出(B;n=4心臓/群)。C、Tg-GRK2マウスは、エコー検査によって決定される左心室駆出分画率の減少を有する(±標準偏差、n=6)。D、E、非トランスジェニック対照に対して、Tg-GRK2マウスからの心臓溶解物中の増加したp-Srsf1(右)並びにCamk2dアイソフォームB及びCの含有量の免疫ブロット検出(n=4/群)。F、Tg-GRK2の心臓における心筋の壊死をフォン・コッサ染色によって決定した(n=6;±標準偏差)。バー:100ミクロン。G、H、対照レンチウイルス又はレンチウイルス標的化Srsf1をmiRNA(+miSrsf1)によって形質導入したTg-GRK2心臓におけるpSrsf1(G)及びCamk2dアイソフォームB/C(H)の免疫ブロット検出。I、miSrsf1によるSrsf1のダウンレギュレーションは、Tg-GRK2マウスにおける心機能不全の発症を遅延させる(n=4、±標準偏差)。J、心筋の壊死をフォン・コッサ染色で検出した(n=6、±標準偏差)。
【図３】トランスジェニックのSRSF1の過剰発現は、増強されたCamk2dスプライシング及び心不全の徴候を誘発する。A、心筋特異的アルファ-MHCプロモーターの制御下での心筋特異的SRSF1発現を有するトランスジェニックマウスの作製。B、Tg-SRSF1マウスの心臓のSRSF1/Srsf1タンパク質の増加を免疫ブロットで決定した(n=4心臓/群)。C、Tg-SRSF1マウスにおけるCamk2dタンパク質のアイソフォームB及びCの心臓スプライシングの増強(n=4心臓/群)。D、Tg-SRSF1の心臓における心筋の壊死をフォン・コッサ染色で決定した(n=5、±標準偏差)。E、Tg-SRSF1の心臓の組織学的評価は、非トランスジェニックB6対照に対して、拡張を伴う心肥大を示す。心臓の切片をヘマトキシリン-エオシン(HE)で染色し、これは4マウス/群の代表である。F、非トランスジェニックB6対照に対するTg-SRSF1のマウスの心機能不全をエコー検査によって決定した(n=5、±標準偏差)。
【図４】インビボでのGRK2の阻害は、Srsf1のリン酸化の活性化、及び心機能不全の慢性的な圧力過負荷モデルにおける心不全の徴候を遅延させる。A、ドミナントネガティブGRK2-K220Rの心筋特異的発現を有するトランスジェニックマウスの作製、及びTg-GRK2-K220Rの心臓におけるGRK2-K220Rの免疫ブロット検出(n=3(B6対照)及びn=5(Tg-GRK2-K220Rの心臓)。B、腹部大動脈狭窄(AAC)によって課された8週間の慢性的な圧力過負荷を有する、4月齢のB6対照(B6)マウス、Tg-GRK2-K220Rマウス及びTg-GRKInhマウスからの心臓における心臓のpSrsf1及びCamk2dアイソフォームB/Cの免疫ブロット決定;n=4マウス/群。C、心筋の壊死をフォン・コッサ染色によって決定した(n=6/群;±標準偏差)。D、8週間のAACによるB6マウスにおける心機能不全は、GRK2-K220R又はGRKInhによるGRK2阻害によって遅延された(n=6/群;±標準偏差)。
【図５】GRK2阻害剤であるRKIPは、Srsf1のリン酸化の活性化を阻害せず、インビボでの心不全の徴候を誘発する。A、ヒトRKIPはインビボでのGRK2によるSRSF1のリン酸化を阻害しない。対照的に、ヒトRKIPはGRK2によるホスデューシンのリン酸化を阻害した(IC50=950nM、n=6〜7)。B、C、ヒトRKIPの心筋特異的な発現を有するTg-RKIP2系統及びTg-RKIP3系統における心臓RKIPの免疫ブロット検出(B;n=3マウス/群)、並びにTg-RKIP2系統及びTg-RKIP3系統における左心室駆出分画率の低下(n=5/群;±標準偏差)。D、B6及びTg-GRK2-K220Rの心臓に対する8月齢のTg-RKIP2の心臓の組織学的評価(左)、並びに体重に対する心臓の質量の決定(n=6、±標準偏差)。組織学的切片は、4心臓/群の代表である。E、F、Tg-RKIP2の心臓、B6及びTg-GRK2-K220R心臓において、心線維症をピクロシリウスレッド染色で決定し(E)、壊死をフォン・コッサ染色によって決定した(F)(n=6、±標準偏差)。G、異なる群のマウスからの心臓溶解物中の心臓Srsf1(合計Srsf1)及び活性化されたリン酸化p-Srsf1の免疫ブロット検出(n=3/群)。
【図６】FVBバックグラウンドにおけるTg-RKIPマウス系統は心不全の徴候も生じる。A、FVBバックグラウンドにおいて作製されたTg-RKIPマウス系統におけるヒト/マウスRKIPの免疫ブロット検出(n=8/群、±標準偏差)。B、非トランスジェニックFVB対照に対するTg-RKIP1の心臓におけるRKIPタンパク質の免疫組織学的検出。免疫組織学は、4心臓/群の代表である。C、D、非トランスジェニックFVB対照に対するTg-RKIP1及びTg-RKIP2マウスの、左心室駆出分画率(C、n=5)及び体重に対する心臓の質量の比(n=6、±標準偏差)。E、非トランスジェニックFVB対照に対するTg-RKIPの心臓の組織学的分析。組織学的切片は、4マウス/群の代表である。F、G、非トランスジェニックFVB対照に対するTg-RKIP1及びTg-RKIP2マウスの左心室駆出分画率、並びにmiRKIPのレンチウイルス形質導入によるヒトRKIPのRNAi媒介ダウンレギュレーション(F;n=5;±標準偏差)。ヒトRKIPのダウンレギュレーションはリアルタイムqRT-PCRによって確認した(G;n=5;±標準偏差)。
【図７】トランスジェニックRKIP発現は、GRK2阻害が関連する遺伝子発現特性を誘発する。A、Tg-RKIP及びB6対照の心臓におけるRKIP(pS153)のセリン-153リン酸化の免疫ブロット検出(n=5マウス/群)。B、固定化RKIP特異的抗体を用いるアフィニティー精製(AP)によるRKIPの除去は、Tg-RKIP心臓溶解物からGRK2タンパク質を激減させる。無関係の抗体を用いる対照のアフィニティー精製は、RKIPもGRK2も激減させなかった。上側パネルは代表的な実験を示し、下側パネルは定量的なデータの評価を示す(±標準偏差、n=4;*、p=0.0286;マンホイットニー検定)。C、Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rマウスからの新生仔の心筋細胞におけるイソプロテレノール刺激cAMP応答(n=6;±標準偏差)。D、B6対照に対するTg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rの心臓におけるcAMP誘導遺伝子であるTtc14の発現の有意な増加(n=3;±標準偏差)。E、F、全ゲノム遺伝子の発現プロファイリングは、Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rの心臓の間で45%の有意に変化したプローブセットの一致したレギュレーションを明らかにした。パネルFは、Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rの心臓において、一致してレギュレートされたプローブセットを示す(2つの遺伝子チップ/群;**、p<0.01及び***、p<0.001、B6対照に対するt-検定)。
【図８】心臓保護的GRK2阻害剤であるパロキセチンは、Tg-RKIPマウスの心不全表現型を遅延させる。A〜C、パロキセチン(1日あたり飲料水中5mg/kg体重)での8週間の処置は、免疫ブロット(B、n=5心臓/群)及びリアルタイムqRT-PCR(C、n=6;±標準偏差)によって決定されるように、5月齢のTg-RKIPの心臓において、Srsf1の心臓含有量及びSrsf1のリン酸化の活性化(A)、並びにCamk2dアイソフォームB/Cのスプライシング(B)を減少させた。C、カルシウムの過負荷による心筋の壊死を、心臓切片において、フォン・コッサ染色によって決定した(n=6心臓/群、±標準偏差)。D、左心室駆出分画率をエコー検査によって決定した(n=6マウス/群;±標準偏差)。
【図９】GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害する低分子化合物の開発。GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を、増加させた濃度のパロキセチン又は異なる低分子化合物の存在下、精製タンパク質を用いて決定した。SRSF1のリン酸化を、阻害剤の非存在下でのSRSF1のリン酸化である対照の%として表す。0.45μMの1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)のIC50値は、パロキセチンのIC50値よりも5倍超低い(±標準偏差、n=4)。
【図１０】低分子化合物は、無傷のTg-SRSF1心筋細胞及びヒトHEK細胞において、GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害する。A、GRK2が媒介するSRSF1/Srsf1のリン酸化を、媒体処置対照(「C」)の心筋細胞に対して、10マイクロMのパロキセチン、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)又は4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン(「化合物-4」)と共に60時間インキュベーション後、Tg-SRSF1マウスから単離した新生仔心筋細胞からの溶解物中での免疫ブロットにより、決定した。B、GRK2が媒介するSRSF1(pSRSF1)リン酸化の免疫ブロット検出を、媒体処置対照(「C」)に対して、10マイクロMの4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン(「化合物-4」)、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド(「化合物-24」)又は(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド(「化合物-5」)と共に60時間インキュベーションしたHEK(ヒト胚腎臓)細胞からの溶解物を用いて行った。
【図１１】インビボでの低分子化合物の心臓保護的効果。A、GRK2が媒介するSrsf1のリン酸化を、媒体処置B6対照(「con」)に対して、10mg/kgの1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)、4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン(「化合物-4」)、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド(「化合物-2」)又は(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド(「化合物-5」)で5時間処置(i.p.)後、非トランスジェニックB6マウスの心臓から調製した心臓溶解物中での免疫ブロットにより決定した。右パネルは、定量的免疫ブロット評価を示す。B、左パネル:AACが誘発した心臓のp-Srsf1含有量を、AACを伴う媒体処置B6対照(「AAC-con」)に対して、5mg/kgの1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)又は(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド(「化合物-5」)で7日間処置後、AACを伴うB6マウスからの心臓溶解物中で決定した。中央パネルは、定量的免疫ブロット評価を示す。右下パネル:心臓機能パラメーターを、AACを伴う媒体処置B6対照に対して、「化合物-1」又は「化合物-5」で7日間処置後、AACを伴うB6マウスにおいて、エコー検査によって決定した((±標準偏差;n=5(A)及びn=3(B);con(A)又はAAC-con(B)に対するダネットの多重比較検定)。
【図１２】化合物-1及び化合物-4による経口処置は心不全及び心臓血管疾患によって誘発される老化を妨げる。A、左心室駆出分画率を、未処置のAAC対照に対して、3カ月のAACによって課した慢性的な圧力過負荷並びに化合物-1(AAC+compd-1)及び化合物-4(AAC+compd-4)での経口処置の6月齢の雄B6マウスにおいて決定した。処置をAAC導入1カ月後に開始し、2カ月継続した。心不全を有するマウスのみ(AAC1カ月後の駆出分画率が<34%)を研究に含めた(±標準偏差、n=5/群、***p=0.0006、**p=0.0051対未処置AAC;ダネットの多重比較検定)。B、化合物-1での2カ月の処置なし(対照、上側パネル)又はあり(下側パネル)で3カ月のAACを有する心臓の組織学的評価は、化合物-1が慢性的な圧力過負荷によって誘発される心肥大を遅延させることを明らかにする(n=4心臓/群)。C、D、化合物-1による処置はまた、心臓血管疾患が誘発する老化、例えば、慢性的な圧力過負荷によって誘発される老化を遅延させ、即ち、化合物-1による処置の2カ月後、毛の灰色の着色は実質的に遅延した(左(D)及び右(D)パネル、n=5の異なるマウス)。
【図１３Ａ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。A化合物-1をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｂ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。B、化合物-2をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｃ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。C、化合物-22をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｄ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。D、化合物-23をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｅ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。E、化合物-24をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｆ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。F、化合物-3をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｇ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。G、化合物-4をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｈ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。H、化合物-5をエレクトロスプレー質量分析及びHPLC分析によって分析した。
【図１３Ｉ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。化合物-1の例としての化学合成経路。
【図１３Ｊ】本発明分子による試験化合物の特定及び例としての化学合成経路。化合物-4の例としての化学合成経路。
【発明を実施するための形態】
【実施例１】
【０２１３】
新規な非受容体GRK2基質としてのSRSF1の特定
GRK2及びその未だ未知の標的の病態生理学的重要性を考慮して、新規のGRK2相互作用タンパク質を探索した。GRK2特異的抗体をアフィニティーマトリックスに共有的に結合させた。心不全の患者の生検標本からのタンパク質溶解物を適用し、結合したタンパク質を溶出させ、濃縮GRK2及び共濃縮タンパク質をSDS-PAGEによって分離した。染色されたタンパク質のバンドを切断し、ナノ-LC-ESI-MS/MS分析により、SRSF1(セリン/アルギニンリッチスプライシング因子1、ASF/SF2)を以前に認識されていなかったGRK2相互作用タンパク質として特定した(図1A、右パネル)。対照として、免疫ブロット検出により、GRK2のタンパク質濃縮及びSRSF1の共濃縮を確認した(図1A、左パネル)。SRSF1がGRK2のキナーゼ基質であることが分かった。インビトロキナーゼアッセイにおいて、GRK2は、組換えSRSF1をリン酸化した(図1B)。ナノ-LC-ESI-MS/MS分析により、GRK2リン酸化部位としてセリン199/201を有するリン含有ペプチドを特定した(図1B)。GRK2によるセリン199/201でのSRSF1のリン酸化は、これらの残基及びこれらの残基のリン酸化がSRSF1のスプライシング機能に実質的に関与するので、関連性がある(Zuo P及びManley JL、EMBO J 12、4727〜4737頁(1993);Xiao SH及びManley JL、Genes Dev 11、334〜344頁(1997))。インビトロのリン酸化アッセイのGRK2特異性についての対照として、心臓保護的なATP部位特異的GRK2阻害剤であるパロキセチン(Thal DMら、ACS Chem Biol 7、1830〜1839頁(2012);Schumacher SMら、Sci. Transl. Med. 7、277ra31(2015))を適用した。パロキセチンは、2.38μMの半最大阻害濃度(IC50値)でGRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害した(図1C)。この値は、他のGRK2基質のパロキセチンが媒介する阻害と同等である(Thal DMら、ACS Chem Biol 7、1830〜1839頁(2012);Schumacher SMら、Sci. Transl. Med. 7、277ra31(2015))。加えて、別の心臓保護的GRK2阻害剤(6,7)であるGRKInhもインビトロでGRK2によるSRSF1のリン酸化を阻害した(図1D)。GRK2によるSRSF1のリン酸化の活性化も、SRSF1のカルボキシル末端ドメインにおけるリン酸化されたRS反復を検出するリン特異的SR抗体1H4を用いる免疫ブロットにおいて確認した(図1E)(Neugebauer KMら、Genes Dev. 11、1148〜1159頁(1997))。
【実施例２】
【０２１４】
GRK2はインビボでのSrsf1のリン酸化の活性化を誘発する
GRK2がインビボでSrsf1をリン酸化するか否かを調べ、心筋特異的アルファ-MHCプロモーターの制御下で心筋特異的ヒトGRK2(ADRBK1)の発現を有するTg-GRK2マウスを作製した(図2A)。Tg-GRK2マウスの心臓は、増加したGRK2タンパク質レベルを有していた(非トランスジェニックB6対照に対して2倍、図2B)。心臓のGRK2タンパク質レベルの増加の病態生理学的役割と一致して(Hullmann Jら、Pharmacol. Res. 110、52〜64頁(2016))、Tg-GRK2マウスは、8月齢のTg-GRK2マウスにおける心室駆出率の有意な減少によって実証される、老化による心機能不全を発症した(図2C)。活性化されたホスホ-Srsf1の心臓含有量を、トランスジェニックTg-GRK2マウスにおける増加したGRK2タンパク質レベルがSrsf1リン酸化及び活性化の増加をもたらすか否かを分析するために決定した。免疫ブロット検出は、Tg-GRK2の心臓が活性化したSrsf1リン酸化の増加したレベルを有していたことを明らかにした(図2D)。活性化されたSrsf1のスプライシング因子の活性は、Camk2d(カルシウムカルモジュリン依存性キナーゼIIアイソフォームδ)アイソフォームB及びCのスプライシングのために必要である(Xu Xら、Cell 120、59〜72頁(2005))。Srsf1の増強された活性化と一致して、Tg-GRK2の心臓は、免疫ブロットで検出されたように、心臓特異的Camk2dアイソフォームB及びCが増加していた(図2E)。Camk2dアイソフォームB及びCにおける増加は、心機能不全及び心不全を促進するのに十分である(Zhang Tら、Circ. Res. 92、912〜919頁(2003);Zhang Tら、J. Biol. Chem. 277、1261〜1267頁(2002))。
【０２１５】
また、Camk2dは心臓の壊死を促進する(Zhang Tら、Nat. Med. 22、175〜182頁(2016))。Tg-GRK2の心臓は、フォン・コッサ染色で決定されたように、カルシウム過負荷による壊死領域の増加を示した(図2F)。Tg-GRK2の心臓のGRK2が媒介するSrsf1の活性化及び心臓表現型の間の因果関係はまた、RNAiによるSrsf1を標的とするmiRNAのレンチウイルス形質導入によるSrsf1のダウンレギュレーションによって実証された(図2G)。Srsf1のダウンレギュレーションは、Camk2dアイソフォームB及びCの誘発、心不全の徴候の発生、並びにTg-GRK2の心臓におけるカルシウム過負荷による心臓の壊死を遅延させた(図2H〜図2J)。
【実施例３】
【０２１６】
トランスジェニックのSRSF1の過剰発現は、Camk2dスプライシングの増強及び心不全の徴候を誘発する
心筋特異的SRSF1の発現に起因する心臓SRSF1タンパク質の増加を有するTg-SRSF1マウスを心筋特異的アルファ-MHCプロモーターの制御下で作製した(図3A)。Tg-SRSF1マウスは、増加した心臓SRSF1タンパク質を有し(図3B)、Camk2dアイソフォームB及びCのスプライシングの増強を示した(図3C)。付随して、Tg-SRSF1マウスは、カルシウム過負荷による心筋の壊死、拡張を伴う心肥大(心筋細胞の減少を示す)及び心機能不全を生じた(図3D〜図3F)。
【実施例４】
【０２１７】
インビボでのGRK2の阻害は、Srsf1のリン酸化の活性化、及び心機能不全の慢性的な圧力過負荷モデルにおける心不全の徴候を遅延させる
Srsf1及びGRK2は、圧力過負荷が誘発する心機能不全の実験モデルにおいてアップレギュレーションされる(Hullmann Jら、Pharmacol. Res. 110、52〜64頁(2016);Kim Tら、Mol Cells 37、81〜87頁(2014))。圧力過負荷が引き起こすSrsf1のリン酸化の活性化の誘発は、ドミナントネガティブGRK2-K220R変異のトランスジェニック発現によるGRK2の阻害によって遅延した(図4B)。GRK2-K220Rの心筋特異的発現を有するトランスジェニックTg-GRK2-K220Rマウスを作製した(図4A)。インビトロでSRSF1のリン酸化を阻害する(図1を参照)、心臓保護的GRK2阻害剤であるGRKInh(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016);Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))も、圧力過負荷が誘発するGRK2によるSrsf1のリン酸化の活性化を遅延させた。付随して、GRK2阻害の2つの異なる様式で、Camk2dアイソフォームB及びCのスプライシング、カルシウム過負荷による心筋の壊死及び心不全の徴候を遅延させた(図4C、図4D)。したがって、心臓保護的GRK2阻害は、圧力過負荷が誘発するSrsf1活性化、心筋細胞死及び心不全の徴候を鈍らせる。
【実施例５】
【０２１８】
GRK2阻害剤であるRKIPは、Srsf1のリン酸化の活性化を阻害せず、インビボでの心不全の徴候を誘発する
別のGRK2、即ち、rafキナーゼ阻害剤タンパク質であるRKIP(Lorenz Kら、Nature 426、574〜579頁(2003))の役割が解析されており、これは、二重特異性のGRK2及びRafキナーゼ阻害剤である。RKIPは、心不全を有する患者の心臓の生検標本においてアップレギュレーションを示す(Schmid Eら、Nat. Med. 21、1298〜1306頁(2015))。ヒトRKIPはインビトロでのGRK2によるSRSF1のリン酸化を阻害しなかった(図5A)。対照として、ヒトRKIPは、有効なGRK2阻害剤であり、別のGRK2の非受容体の基質であるホスデューシン(Ruiz-Gomez Aら、J. Biol. Chem. 275、29724〜29730頁(2000))のリン酸化を阻害した(図5A)。GRK2が誘発するホスデューシンのリン酸化のヒトRKIPが媒介する阻害についてのIC50値は、950nMであり(図5A)、これは、GPCRのリン酸化のRKIPが媒介する阻害について報告されたIC50値の460nM(Lorenz Kら、Nature 426、574〜579頁(2003))と同等である。ヒトRKIPの心筋特異的発現を有するTg-RKIPマウスは、用量依存性の様式で心不全の徴候を生じた(図5B、図5C)。付随して、拡張を伴う心肥大、心線維症及び壊死が明らかであった(図5D〜図5F)。ヒトRKIPがGRK2によるSRSF1のリン酸化の活性化を阻害することができないことを実証する(図5Aを参照)、インビトロでの実験と一致して、活性化されたSrsf1のリン酸化の心臓含有量は、非トランスジェニックB6対照のものよりもTg-RKIPの心臓において高かった(図5G)。
【実施例６】
【０２１９】
FVBバックグラウンドにおけるTg-RKIPマウス系統は心不全の徴候も生じる
トランスジェニックヒトRKIP発現によって誘発された心不全の表現型を、FVBバックグラウンドで作製されたヒトRKIPを発現するトランスジェニックマウス系統において、用量依存性の様式で同様に検出した(図6A〜図6D)。組織学的分析は、FVBバックグラウンドにおけるTg-RKIPマウスが、拡張を伴う強い心肥大及び心筋細胞の喪失を生じたことを明らかにした(図6E)。Tg-RKIPマウスの心機能不全は、RNAiによるRKIP(PEBP1)を標的とするmiRNAのレンチウイルス形質導入によるトランスジェニックRKIP(PEBP1)のダウンレギュレーションによって部分的に明らかになった(図6F、図6G)。したがって、Tg-RKIPマウスにおける心不全の表現型は、トランスジェニックRKIP発現によるものであった。
【実施例７】
【０２２０】
トランスジェニックRKIPはGRK2と相互作用し、GRK2阻害が関連する遺伝子発現特性を誘発する
トランスジェニックRKIP(ヒトRKIP〜PEBPI)のGRK2阻害活性をインビボで制御した。セリン-153上でのRKIPのリン酸化は、RKIPをRaf1阻害からGRK2阻害に切り替える(Lorenz Kら、Nature 426、574〜579頁(2003))。実質的なRKIPのセリン-153のリン酸化をTg-RKIPの心臓における免疫ブロット検出によって実証した(図7A)。セリン-153がリン酸化されたRKIPは、結合するのに十分であり、Tg-RKIPの心臓中のGRK2タンパク質の90.4%(±3.6%、n=4)を中和した(図7B)。我々は、それぞれ、RKIP及びGRK2-K220RによるGRK2阻害についての読取値として、新生仔の心筋細胞におけるイソプロテレノール刺激cAMP応答のGRK2阻害が媒介する再感作を決定した(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016);Kong KCら、Biochemistry 47、9279〜9288頁(2008))。Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rマウスからの新生仔の心筋細胞は、有意に増強されたβ-アドレナリン受容体が媒介するcAMP応答によって実証されたように、同等のGRK2阻害の徴候を示した(図7C)。再感作されたcAMPシグナル伝達は、インビボで、Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rの心臓におけるcAMP誘導遺伝子であるTtc14の有意に増加した発現によって確認された(図7D)。全ゲノムマイクロアレイ遺伝子発現プロファイリングは、Tg-RKIPの心臓におけるGRK2阻害が関連する遺伝子発現特性を更に明らかにした(図7E、図7F)。とりわけ、Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rの心臓の間で45%の有意に変化したプローブセットの一致したレギュレーションが存在した(図7E、図7F)。
【実施例８】
【０２２１】
心臓保護的GRK2阻害剤であるパロキセチンは、Tg-RKIPマウスの心不全表現型を遅延させる
GRK2によるSrsf1のリン酸化の活性化を阻害するRKIPの不能がTg-RKIPマウスにおける心不全表現型に寄与するか否かを分析した。Tg-RKIPマウスを、心筋梗塞の実験モデルにおいて心臓保護的なGRK2阻害剤であるパロキセチンで処置した(Schumacher SMら、Sci. Transl. Med. 7、277ra31(2015))。パロキセチンはまた、インビトロでSRSF1のリン酸化を阻害する(図1Cを参照)。8週間のパロキセチンによる処置は、Tg-RKIPの心臓において、Srsf1のリン酸化の活性化の心臓含有量及びCamk2dアイソフォームB及びCのスプライシングを減少させた(図8A〜図8C)。付随して、心筋の壊死及び心不全の徴候の発生を遅延させた(図8D〜図8F)。総合すると、トランスジェニックマウス及び異なるGRK2阻害剤を用いたデータは、心臓保護的GRK2阻害がGRK2によるSrsf1のリン酸化の活性化の阻害に依拠することを示す。
【実施例９】
【０２２２】
GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害する低分子化合物の開発
GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害する低分子化合物を開発した(図9)。1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)は、0.45マイクロMのIC50値で、GRK2が媒介するSRSF1のリン酸化を阻害する。1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)のIC50値は、インビボでの実験的な条件下で実証された心臓保護的活性を有する唯一の利用可能な低分子GRK2阻害剤であるパロキセチン(Schumacher SMら、Sci. Transl. Med. 7、277ra31(2015))のIC50値よりも5倍超低い(図9)。1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド、(3R)-N-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-3-カルボキサミド、4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン及び(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド(「化合物2〜5」)の4化合物は、1.87マイクロM(4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン、「化合物-4」)及び12.87マイクロM((3R)-N-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)チオモルホリン-3-カルボキサミド、「化合物-3」)の間の範囲のIC50値で、SRSF1のリン酸化を阻害した(図9)。無関係の対照化合物であるイブプロフェン((±)-2-(4-イソブチルフェニル)プロパン酸(「化合物-6」、Sigma-Aldrich社、St. Louis米国)は、1mMまで阻害効果を有さなかった(図9)。
【実施例１０】
【０２２３】
低分子化合物は、無傷の心筋細胞及びヒト腎臓細胞において、GRK2が媒介するSRSF1/Srsf1のリン酸化を阻害する
1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)及び4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン(「化合物-4」)は、単離されたTg-SRSF1の心筋細胞において、心不全を促進するSRSF1/Srsf1のリン酸化も減少させた(図10A)。GRK2阻害はヒト腎臓細胞の生存を促進する(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))。4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン(「化合物-4」)、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-クロロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド(「化合物-24」)及び(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド(「化合物-5」)は、ヒト腎臓細胞において、細胞を損傷するSRSF1のリン酸化を阻害した(図10B)。
【実施例１１】
【０２２４】
インビボでの低分子化合物の心臓保護的効果
低分子化合物(1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパン-カルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(「化合物-1」)、4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン(「化合物-4」)、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-5-(4-フルオロフェニル)-2-メチル-ピロール-3-カルボキサミド(「化合物-2」)及び(4R)-N3-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルメチル)-N4-[[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル]ピロリジン-3,4-ジカルボキサミド(「化合物-5」))による5時間の短時間の処置は、非トランスジェニックB6マウスの心臓において、インビボでの基本条件下、心不全を促進するGRK2が媒介するSrsf1のリン酸化を減少させた(図11A)。「化合物-1」又は「化合物-5」による処置は、慢性的な圧力過負荷が誘発する心臓のp-Srsf1含有量も遅延させ、AACによって課された慢性的な圧力過負荷後に、B6マウスの心機能を改善した(図11B)。
【実施例１２】
【０２２５】
化合物-1及び化合物-4による経口処置は心不全及び心臓血管疾患によって誘発される老化を妨げる
我々は、新たな低分子GRK2阻害剤である、化合物-1(1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン)及び化合物-4(4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン)が、腹部大動脈狭窄(AAC)によって課された心不全の慢性的な圧力過負荷モデルにおいて、心不全の症状を遅延させうるか否かを調べた。化合物-1(3mg/kg/日)及び化合物-4(5mg/kg/日)を、AACが誘発する心不全のモデルに経口投与した。化合物-1及び化合物-4による経口処置を、4週間のAACによって誘発された心不全の症状(左心室駆出分画率が<34%)を有するB6マウスで開始した。化合物-1及び化合物-4による2カ月の処置は、それぞれ、未処置のAAC対照の28.6%±3.5%の駆出分画率と比較して、化合物-1及び化合物-4による処置後に、それぞれ、41.4±4.8%及び38.2±3.7%の有意に改善された左心室駆出分画率によって実証されるように、AACが誘発する心機能不全を弱めた(図12A)。改善された心臓機能に加えて、組織学的分析は、化合物-1による経口処置後に、AACが誘発する心肥大の低下を示した(図12B)。付随して、改善された心臓機能の結果として、心臓血管疾患が誘発するマウスの老化を明らかに遅延させ、即ち、黒い毛の灰色の着色を、未処置のB6対照動物と比較して、化合物-1による処置の8週間後に、実質的に遅延させた(図12C、図12D)。
【実施例１３】
【０２２６】
材料及び方法
トランスジェニックマウスの作製
本研究は、我々のグループによって作製された以下のトランスジェニックマウス系統:B6(C57BL/6J)及びFVBバックグラウンドにおけるTg-RKIP(PEBP1)マウス、B6バックグラウンドにおけるTg-GRK2(ADRBK1)マウス、B6バックグラウンドにおけるTg-SRSF1マウス、B6バックグラウンドにおけるTg-GRK2-K220R及びTg-GRKInhマウスを使用した。全ての導入遺伝子は、心筋特異的アルファ-MHCプロモーターの制御下で発現させた(MyHCプラスミドは、James Gulick、Gulick Jら、J. Biol. Chem. 266、9180〜9185頁(1991)によって快く提供された)。トランスジェニックマウスを標準的な手順に従って作製した。簡潔には、指示されたタンパク質/ペプチドをコードするDNAを、アルファ-MHC(MyHC)プラスミドに挿入し、プラスミド配列をNot I消化によって取り除き、過剰排卵させたB6(C57BL/6J)及びFVB(FVB/N)マウスの受精卵母細胞に、精製したDNA(2ng/マイクロL)を注入した。注入された胚の偽妊娠したCD-1マウスへの卵管移植を標準的な手順に従って行った。F0世代のゲノムDNAを3〜4週齢で採取した耳パンチ生検から単離し、導入遺伝子の組込みについて、PCRによって解析した(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))。
【０２２７】
慢性的な圧力過負荷が誘発する実験的心不全モデル及び経胸壁心エコー検査
大動脈狭窄(AAC)によって課された慢性的な圧力過負荷を実験モデルとして使用して、心肥大及び心不全の徴候を誘発した。腹部大動脈の大動脈狭窄を、記載のようにして(AbdAlla Sら、Cardiovasc. Hematological Agents Med. Chem. 9、190〜206頁(2011))、トリブロモエタノールで麻酔された8〜12週齢のトランスジェニックマウス又は非トランスジェニックB6対照において行った。腹部大動脈を、26ゲージのブラントニードルに対して7-0絹糸縫合結紮糸を結ぶことによって、副腎動脈の上で狭窄させた。年齢をマッチさせた対照は、大動脈の結紮を除いて同一の外科的処置を受けた(偽手術マウス)。
【０２２８】
心臓機能パラメーターを経胸壁心エコー検査によって決定し、これは、Vivid 7心エコー装置(GE Healthcare社、Glattbrugg、スイス)及び12MHzの線形アレイ変換器を用いて、麻酔されたマウスに対して行った。左心室駆出分画率を、Teichholzの式を使用して、傍胸骨長軸像のM-モードで計算した。Mモードイメージングを、マウスに適合させたアメリカ心臓病学会の推奨に従って(Sahn DJら、Circulation 58、1072〜1083頁(1978))行った。記録をEchoPac Pc 3.0ソフトウェア(GE Healthcare社、Glattbrugg、スイス)を使用してオフラインで解釈した。
【０２２９】
動物実験は、NIHガイドラインに従って行い、動物ケア及び使用に対する地方委員会(University of Zurich)によって審査及び承認された。
【０２３０】
ナノ-LC-ESI-MS/MS
ヒト心臓GRK2タンパク質と相互作用するタンパク質を濃縮するために、タンパク質溶解物を僧帽弁置換術を受けた心不全の徴候を有する患者からの小さな心筋の生検標本から調製した。インフォームドコンセントを全ての参加者から得た。研究は、ヘルシンキ宣言の原則にのっとり、Ain Shams Universityの倫理委員会によって承認されたプロトコールで実施した。研究参加者の患者特性は以前に公開された(AbdAlla Sら、Cardiovasc. Hematological Agents Med. Chem. 9、190〜206頁(2011))。GRK2の濃縮及びGRK2相互作用タンパク質の共濃縮を、記載(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))と同様にして行った。簡潔には、心筋タンパク質を可溶化緩衝液(プロテアーゼ阻害剤で補充された、1%のデオキシコール酸ナトリウム、0.05%のSDS、0.05%のPBS中Tween 20、pH7.4)を用いて4℃で30分間可溶化し、不溶性物質を遠心分離によって除去し、上清をプロテアーゼ阻害剤で補充されたPBS中、1:5で希釈し、抗GRK2抗体((1mlのAffigel 10と結合させた6mgのアフィニティー精製されたIgG(Bio-Rad Gmbh社、Munchen、ドイツ);ポリクローナル抗GRK2抗体を、Sf9昆虫細胞で発現させた全長組換えGRK2タンパク質に対してウサギで産生させた)を用いるアフィニティークロマトグラフィーに付した。4℃での終夜のインキュベーション後、未結合のタンパク質をPBS(20カラム容積)で洗浄することによって除去し、結合したタンパク質を0.25MのNH4OH、10%のジオキサン、pH11で溶出させた。溶出液のpHを直ぐにpH7.4に調整し、溶出したタンパク質をアセトン沈殿によって濃縮し、8Mの尿素に溶解し、還元条件下で8%の尿素含有SDS-PAGEに付した。クマシーブリリアントブルー染色後、濃縮タンパク質のバンドを切断し、ナノ-LC-ESI-MS/MSに付した。SRSF1タンパク質を30〜40kDaのタンパク質範囲を含むゲル切片中で特定した。タンパク質の特定はナノLC-ES-MS/MS(Proteome Factory AG社、Berlin)によって行った。MSシステムは、Agilent 1100 ナノ-LCシステム(Agilent社、Boeblingen、ドイツ)、PicoTipエミッター(New Objective社、Woburn、MA)及びEsquire 3000 plusイオントラップMS(Bruker社、Bremen、ドイツ)で構成されていた。切断したタンパク質バンドをトリプシン(Promega社、Mannheim、ドイツ)によってゲル内消化し、non-LC-MS/MSに適用した。1%のアセトニトリル、0.5%のギ酸溶液を使用する5分間の濃縮カラム(Zorbax SB C18、0.3×5mm、Agilent社、Boeblingen社、ドイツ)上でのペプチドの捕捉及び脱塩後、ペプチドを、40分以内で、アセトニトリル、5%〜40%のアセトニトリルの0.1%のギ酸のグラジエントを使用して、Zorbax 300 SB C18、75ミクロン×150mmカラム(Agilent社、Boeblingen、ドイツ)で分離した。MSスペクトルを、Esquire 3000 plusにより、nan-LC-MS/MS分析のための製造者の機器の設定に従って自動的に取得した。タンパク質をMascotサーチエンジン(Matrix Science社、London、イングランド)のMS/MSイオンサーチ及びnrタンパク質データベース(National Center for Biotechnology Information、Bethesda、MD)を使用して特定した。ESI-MS/MSデータ収集からのイオンについてのサーチパラメーターにおけるイオンの電荷を、機器及び方法に対する一般的な荷電状態の分布に従って「1+、2+又は3+」に設定した(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))。
【０２３１】
GRK2によってリン酸化されたSRSF1中の残基の特定のために、ナノ-LC-ES-MS/MS分析を、インビトロのリン酸化アッセイ後に精製組換えSRSF1を用いて行った。手順は、上記の通り行ったが、MSシステムは、Agilent 1100ナノLCシステム(Agilent社、Waldbronn、ドイツ)、Nanomate 100エレクトロスプレーシステム(Advion社、Ithaca、米国)及びFinnigan LTQ-FT質量分析計(ThermoFisher社、Bremen、ドイツ)で構成されていた。Mascotサーチエンジンの設定を調整して、可変の改変、即ち、脱アミド化(NQ)、酸化(M)、ホスホ(ST)及びホスホ(Y)を特定した。
【０２３２】
組換えタンパク質の発現及び精製
組換えヒトGRK2タンパク質及びGRK2-S670Aタンパク質を、バキュロウイルスの発現系によるスポドプテラ・フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)(Sf9)細胞で発現させ、精製した。ヘキサヒスチジンタグ化ヒトGRK2(ADRBK1)GRK2-S670AをコードするcDNAを、Sal I/Hind III制限部位を使用して、pFastBac1発現プラスミド(Invitrogen(商標)、Thermo Fisher Scientific社、Waltham、MA、米国)にサブクローニングし、組換えバキュロウイルスを、Bac-To-Bacバキュロウイルス発現系(Thermo Fisher Scientific社、Waltham、MA、米国)によって作製した。Sf9細胞を、2〜3のMOIで組換えバキュロウイルスに感染させ、感染の48時間後、細胞を遠心分離によって採取し、溶解緩衝液(1%のNP40、1mMのPMSF及びプロテアーゼ阻害剤のカクテルで補充された、300mMのNaCl、50mMのHEPES、pH7.5)で溶解し、Ni-NTAクロマトグラフィーに適用した。4℃での終夜のインキュベーション後、未結合のタンパク質を溶解緩衝液(20×カラム容積)、続いて、1×カラム容積の30mMのイミダゾール含有溶解緩衝液での洗浄によって除去した。結合したGRK2を、300mMの溶解緩衝液中のイミダゾールによって溶出させ、PD10カラムクロマトグラフィーによって脱塩し、20%のグリセロールで補充し、更なる使用のために-80℃で保管した。
【０２３３】
ヒトHis6-SRSF1及びホスデューシン-His6をコードするcDNA、並びにGRK2のカルボキシル末端ドメイン(配列番号10、His-6タグ化)を、それぞれ、BL21(DE3)pLysSバクテリアにおいてIPTGを有するT7 RNAポリメラーゼ導入によってタンパク質発現を可能にするT7プロモーターの制御下で、PET-3d発現プラスミド(Novagen(登録商標)、EMD Millipore社、Merck KGaA社、Darmstadt、ドイツ)にサブクローニングした。タンパク質発現バクテリアを遠心分離によって収集し、液体窒素中で凍結させ、溶解緩衝液(8Mの尿素、300mMのNaCl、50mMのHEPES、10mMのイミダゾール、pH7.5)中で氷上で解凍し、これを、使用前に新たに2-メルカプトエタノール(0.7ml/L)で補充した(200mlの培地からバクテリアペレットについて10mlの溶解緩衝液)。バクテリア溶解物を室温で1時間インキュベートし、超音波処理し、4℃で、4000×gで15分間遠心分離した。上清を20mlの溶解緩衝液であらかじめ洗浄したNi-NTAカラムマトリックスに適用した。4℃での終夜のインキュベーション後、フロースルーを廃棄し、Ni-NTAアフィニティーマトリックスを、洗浄緩衝液-1(0.7ml/lの2-メルカプトエタノールで新しく補充された、4Mの尿素、300mMのNaCl、50mMのHEPES、20mMのイミダゾール、pH7.5)、洗浄緩衝液-2(0.7ml/Lの2-メルカプトエタノールで新しく補充された、2Mの尿素、300mMのNaCl、50mMのHepes、20mMのイミダゾール、pH7.5)及び洗浄緩衝液-3(0.7ml/lの2-メルカプトエタノールで新しく補充された、300mMのNaCl、50mMのHEPES、20mMのイミダゾール、pH7.5)による、3つの異なる洗浄工程(1mlの5%のNi-NTAマトリックスに対してそれぞれ20mlの洗浄緩衝液を用いる4℃での30分のインキュベーション)に付した。最後に、タンパク質を溶出緩衝液(0.7ml/Lの2-メルカプトエタノールで新しく補充された、300mMのNaCl、50mMのHEPES、500mMのイミダゾール、pH7.5)で溶出させた。溶出させたタンパク質の緩衝液を、PD10カラムクロマトグラフィーによって、150mMのNaCl、50mMのHEPES(pH7.5)に交換した。
【０２３４】
インビトロのリン酸化アッセイ
組換えタンパク質をGRK2及びGRK2-S670Aを用いるインビトロのリン酸化アッセイのために使用した。GRK2及びGRK2-S670Aを、バキュロウイルスの発現系によるスポドプテラ・フルギペルダ(Sf9)細胞で発現させ、精製した。基質リン酸化を、増加させた濃度での指示されたGRK2阻害剤の存在下、300〜500nMの基質(SRSF1、ホスデューシン)を有するそれぞれ50マイクロM又は5マイクロMのATP及び[ガンマ-32P]-ATP(1×106のDPM、比放射能3000Ci/mmol))で補充された反応緩衝液(50マイクロLの20mMのTris、2mMのEDTA、5mMのMgCl2、pH7.5;又は20mMのHepes、2mMのMgCl2、0.025%のDDM(n-ドデシル  ベータ-D-マルトシド)、pH7.4)中で行った。反応をGRK2-S670A又はGRK2(50nM又は130nM)の添加によって開始した。30℃での30分間のインキュベーション後、反応を5×SDS-Laemmli緩衝液の添加によって停止した。タンパク質をSDS-PAGEによって分離し、オートラジオグラフィーに付した。低分子阻害剤の分析のために、リン酸化アッセイを、5マイクロMのATP及び[ガンマ-32P]-ATP(1×106のDPM、比放射能3000Ci/mmol))及び300〜500nMの基質(SRSF1、ホスデューシン)で補充された反応緩衝液(20mMのTris、2mMのEDTA、5mMのMgCl2、0.05%のBSA、pH7.5;又は20mMのHepes、2mMのMgCl2、0.025%のDDM(n-ドデシルベータ-D-マルトシド)、pH7.4)(=反応混合物)中で行った。反応混合物を、GRK2-S670A又はGRK2(反応緩衝液中50nM又は60nM、低分子化合物の濃度の増加なし又はあり)に添加して、50マイクロLの最終反応容積を得た。30℃での30〜60分間のインキュベーション後、リン酸化を、5倍容積量の氷冷した反応緩衝液の添加によって停止した。反応混合物を直ぐにガラス繊維フィルター(GF/C、Whatman、GE Healthcare Life Sciences社、Glattbrugg、スイス)に適用した。5mlの反応緩衝液による3回の洗浄工程後、フィルターに結合した放射活性をβ-カウンターで決定した。
【０２３５】
タンパク質の免疫ブロット検出
タンパク質の免疫ブロット検出のために、以前の記載(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))に軽微な変更をして、心臓組織を液体窒素中で微粉砕し、プロテアーゼ/ホスファターゼ阻害剤のカクテルで補充されたRIPA緩衝液で抽出した。特定の物質を、4℃で、20,000×gでの15分間の遠心分離によって除去した。可溶化されたタンパク質を沈殿させ、4℃で90分間、アセトン/メタノール(12:2;最終濃度83%)によって脱脂した。沈殿物を遠心分離(5000×g、10分、4℃)によって収集し、続いて、これを0.2mlの冷アセトンによる洗浄工程を行った。ペレットを、2%のSDS、0.1MのDTT及び6Mの尿素を含有するSDS-試料緩衝液に、室温で90分間溶解した。ヨードアセトアミド(10mM)の添加後、試料を更なる使用のために-70℃で保管した。タンパク質の検出を、SDS-PAGE(<100kDaのタンパク質のために10%のゲル;>100kDaのタンパク質のために7.5%のゲル)によるタンパク質の分離、その後のセミドライブロッティング(Trans-Blot(登録商標)SD Semi-Dry Transfer Cell、Bio-Rad GmbH社、Munchen、ドイツ)によるPVDF膜への電気泳動タンパク質転写の後、アフィニティー精製抗体又は代表的な抗体のF(ab)2フラグメントを用いて行った。Fasnタンパク質の電気泳動転写のために、タンク輸送細胞(Mini Trans-Blot(登録商標)cell、Bio-Rad GmbH社、Munchen、ドイツ)を使用した。結合した抗体を、酵素結合二次抗体のF(ab)2フラグメント(Dianova GmbH社、Hamburg、ドイツ)を用いて、又は適用可能な場合は酵素結合プロテインA(Calbiochem、EMD Millipore、Merck KGaA社、Darmstadt、ドイツ)によって可視化し、続いて、増強化学発光検出(ECL Prime、Amersham、GE Healthcare Life Sciences社、Glattbrugg、スイス)を行った。
【０２３６】
抗体
以下の抗体をタンパク質の免疫ブロット検出のために使用し:抗Gnb抗体は、精製Gnbに対してウサギで産生させた(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016));抗GRK2抗体は、Sf9細胞で発現させた組換えGRK2に対してウサギで産生させた(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016));抗pRKIP抗体は、リン酸化セリン-153を含有するヒトRKIPからの短いアミノ酸配列に対してウサギで産生させた(sc-32623、Santa Cruz Biotechnology Inc.社、Dallas、TX、米国);抗SRSF1抗体は、SF2/ASFタンパク質のN末端に近接するマウスモノクローナル抗体エピトープのマッピングである(sc-33652、Santa Cruz Biotechnology Inc.社、米国);SR(1H4)抗体は、アフリカツメガエル起源の全長SRに対して産生されたマウスモノクローナル抗体である(sc-13509、Santa Cruz Biotechnology Inc.社製、米国);抗CAMK2Dポリクローナル抗体は、全長ヒトタンパク質に対してウサギで産生させた(精製ポリクローナル抗体、no.H00000817-D01P;Abnova社、Taipei、台湾);CAMK2D(アミノ酸301〜410)のGST-タグを有する部分組換えタンパク質(WH0000817M2;Sigma-Aldrich社、St. Louis、MO、米国)に対してマウスで産生させたモノクローナルの抗CAMK2D抗体を、CAMK2D/Camk2dアイソフォームB/Cの検出のために使用した。
【０２３７】
化合物の合成
化学物質は、EMC microcollections GmbH社、Tubingen、ドイツ及びChiroBlock GmbH社、Wolfen、ドイツによって合成された。化合物の合成は、固相化学合成法によって小スケールで行われ、これは、確立されたプロトコールから適応させた(「化合物-1」について:Poncet Jら、J. Chem. Soc. Perkin Trans I.、611〜616頁(1990);「化合物-2」、「化合物-22」、「化合物-23」及び「化合物-24」について:Trautwein AWら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 8、2381〜2384頁(1998);「化合物-3」について:Sakai Kら、Chem. Pharm. Bull. 29(6)、1554〜1560頁(1981);「化合物-4」について:Coombs TCら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 23、3654〜3661頁(2013);並びに「化合物-5」について:Baber JCら、Bioorg. Med. Chem. 20、3565〜3574頁(2012))。加えて、化合物-1及び化合物-4を下記に詳述するように大スケールで合成した。
【０２３８】
化合物-1の合成
化合物-1(1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン)の合成を6工程の化学反応プロセスによって行った(ChiroBlock GmbH社、Wolfen、ドイツ)。工程-1は、メチル2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルアミノ)-2-フェニル-アセテートの合成を包含した。シクロヘキサン(800ml)中のメチル2-オキソ-2-フェニル-アセテート(96g、584mmol、4.0当量)、1,3-ベンゾジオキソール-5-アミン(20g、146mmol、1.0当量)及びNa2SO4  の混合物を、N2下、2時間還流させた。5%のPd/C(7.8g)を添加し、得られた懸濁液を、20barで、20℃で48時間水素化した。生じた不均一混合物をEtOAc(およそ800ml)で希釈し、セライトを通して濾過した。濾液を真空中で濃縮して(40℃、100mbar)、褐色油状物(135g)を得て、これを、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、酢酸エチル:石油エーテル=12:88〜30:70)によって精製して、オフホワイト固体(18.46g;純度95%、収率44%)の目的物3を得た。
【０２３９】
工程2はS-tert-ブチルエタンチオエートの合成であった。ピリジン(87.0g、1.1mol、1.1当量)のクロロホルム(800ml)溶液を氷浴中で冷却し、塩化アセチル(86.4g、1.1mol、1.1当量)で、11℃を超えない反応温度で処理した。生じたオレンジ色の懸濁液に、2-メチルプロパン-2-チオール(90.2g、1.0mol、1.0当量)を40分かけて滴下添加し、混合物を48時間撹拌し、その後水(500ml)でクエンチした。相を分離し、水性相をクロロホルム(400ml)で抽出した。ひとまとめにした有機抽出物を、それぞれ400mlの水、10%のH2SO4、飽和NaHCO3及び水で洗浄し、その後、Na2SO4で乾燥した。得られたクロロホルム溶液を分留に付し、目的のS-tert-ブチルエタンチオエートを透明液体(55.8g、純度95%、収率45%)として得た。
【０２４０】
工程-3において、S-(2-ピリジル)シクロプロパンカルボチオエートの合成を行った。シクロプロパンカルボニルクロリド(23.5g、225mmol、1.0当量)を、ピリジン-2-チオール(25.0g、225mmol、1.0当量)のTHF(250ml)溶液に20℃で滴下添加した。混合物を10分間撹拌し、濾過し、濾過ケーキを1:4のEt2O/石油エーテル(250ml)で洗浄した。このようにして得られた固体を水(250ml)に溶解し、NaHCO3(19g、225mmol、1.0当量)で処理し、水溶液を2×250mlのEtOAcで抽出した。ひとまとめにした有機画分をNa2SO4  で乾燥し、真空中で濃縮して、S-(2-ピリジル)シクロプロパンカルボチオエートを黄色油状物(37g、純度95%;収率92%)として得た。
【０２４１】
工程-4は、S-tert-ブチル3-シクロプロピル-3-オキソ-プロパンチオエートの合成であった。2Lの三ツ口丸底フラスコにHMDS(83.3g、516mmol、2.5当量)及び新たに蒸留したTHF(800ml)を入れた。得られた混合物をアセトン/ドライアイス浴中で冷却し、1.6Mのヘキサン中のnBuLi(323ml、516mmol、2.5当量)を、温度を-50℃未満を維持しながら滴下添加した。その後、得られた混合物を、S-(2-ピリジル)シクロプロパンカルボチオエート(37.0g、206mmol、1.0当量)及びS-tert-ブチルエタンチオエート(23.4g、214mmol、1.04当量)の溶液で連続して処理した。得られた溶液を-30℃で1時間撹拌し、反応を1NのH2SO4(800ml)によって(TLCでのプロセスの制御の下)クエンチした。生じた懸濁液をEtOAc(3×900ml)で抽出し、有機画分をひとまとめにし、ブライン(2L)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、酢酸エチル:石油エーテル=25:75)によって精製して、S-tert-ブチル目的の3-シクロプロピル-3-オキソ-プロパンチオエートを褐色油状物(29.5g、純度83%、収率59%)として得た。
【０２４２】
工程-5において、メチル2-[1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-(3-シクロプロピル-3-オキソ-プロパノイル)アミノ]-2-フェニル-アセテートの合成を行った。1Lの丸底フラスコに、メチル2-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルアミノ)-2-フェニル-アセテート(18.5g、61mmol、1.0当量)、S-tert-ブチル3-シクロプロピル-3-オキソ-プロパンチオエート(15.9g、66mmol、1.073当量)、CF3COOAg(814.6g、66mmol、1.073当量)及び蒸留THF(400ml)を加え、得られた混合物を20℃で36時間撹拌した(プロセスをTLCによって制御した)。暗褐色の反応混合物を真空中で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、酢酸エチル:石油エーテル=25:75〜50:50)によって精製して、目的のメチル2-[1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-(3-シクロプロピル-3-オキソ-プロパノイル)アミノ]-2-フェニル-アセテートを褐色油状物(21.0g、純度90%、収率78%)として得た。
【０２４３】
最終の工程-6は、最終目的物である1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン(化合物-1)を与えた。500mlの丸底フラスコに、メチル2-[1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-(3-シクロプロピル-3-オキソ-プロパノイル)アミノ]-2-フェニル-アセテート(20.0g、45.5mmol、1.0当量)、CsF(6.9g、45.5mmol、1.0当量)及びDMF(140ml)を加え、得られた混合物を60℃で20時間撹拌した(プロセスをTLCによって制御した)。暗褐色の反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を1NのH2SO4(400ml)で処理した。得られた混合物をEtOAc(500ml)で抽出し、有機相をブライン(2×300ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、真空中で濃縮して、粗1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オンを褐色固体(19g)として得た。上記の固体を無色になるまでフィルター上でEtOAcで洗浄し、目的の化合物-1(1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)-4-(シクロプロパンカルボニル)-3-ヒドロキシ-2-フェニル-2H-ピロール-5-オン)をオフホワイト固体(5.0g、純度98%、収率30%)として得た。
【０２４４】
化合物-4の合成
化合物-4(4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン)を以下の手順によって合成した(ChiroBlock GmbH社、Wolfen、ドイツ)。250mlの丸底フラスコに、1-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)エタノン(10.0g、60.9mmol、1.0当量)、(EtO)3CH(27g、183mmol、3.0当量)、ZnCl2(0.83g、6.1mmol、0.1当量)、NH4CH3COO(0.4g、122mmol、2.0当量)及びトルエン(120ml)を投入し、得られた混合物を48時間還流撹拌し、その後20℃で48時間撹拌した(プロセスをTLCによって制御した)。反応混合物を飽和NaHCO3(400ml)でクエンチし、クロロホルム(400ml)で抽出した。有機相をNa2SO4で乾燥し、真空中で濃縮し、生じた粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、MeOH-CHCl3(0:100〜5:95))によって精製して、目的の化合物-4(4-(1,3-ベンゾジオキソール-5-イル)ピリミジン)をオフホワイト固体(3.0g、純度97%、収率25%)として得た。
【０２４５】
新生仔心筋細胞の単離及び細胞実験
新生仔マウス及びラット心筋細胞を記載のようにして単離した(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013);Lorenz Kら、Nature 426、574〜579頁(2003))。簡潔には、心臓を2〜3日齢のマウスから切り取り、心房及び大動脈を取り除き、心臓を無菌緩衝液A(137mMのNaCl、5.36mMのKCl、0.81mMのMgSO4、5.55mMのデキストロース、0.44mMのKH2PO4、0.34mMのNa2HPO4、20mMのHEPES、100U/mlのペニシリン、100マイクロg/mlのストレプトマイシン、pH7.4)に移した。心臓を小片に切断し、150mg/Lのトリプシン(Becton&Dickinson社、Franklin Lakes、NJ、米国)で補充された緩衝液Aと共に15分間インキュベート(マグネチックスターラー上)した。上清を廃棄し、この手順を1回繰り返した。その後、心臓組織を、心臓組織が完全に消化されるまで、順次、室温でトリプシン補充緩衝液Aを用いる5分間のインキュベーションによって消化した。上清中の細胞を遠心分離(10分、700×g、室温)によって収集し、5%のFCSを有するMEMに懸濁させ、ナイロンメッシュ(40ミクロン)を通して濾過した。線維芽細胞を37℃で1時間のプレプレーティングによって除去した。非接着性心筋細胞を収集し、MEM(5%のFCS及び25mg/lのBrdUで補充)中で培養した。分離した心筋細胞の細胞内cAMPレベルを、記載と同様にして(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016))、100nMのイソプロテレノールでのベータアドレナリン受容体の刺激後、cAMP酵素イムノアッセイキット(CA200、Sigma Aldrich社、St. Louis、MO、米国)を用いて決定した。ヒト胚腎臓細胞を記載のようにして培養した(Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))。
【０２４６】
組織学的技処理
組織学的分析のために、マウス心臓検体のパラフィン切片を使用した。RKIPの免疫組織学的検出を、組換えRKIPに対してウサギで産生させたアフィニティー精製されたポリクローナル抗体を用いて行った。抗原回復後、切片をブロッキング緩衝液(PBS、pH7.4、5%(w/v)のウシ血清アルブミン、0.05%のTween-20で補充)中、37℃で1時間、一次抗体(希釈1:200)と共にインキュベートした。未結合の抗体を0.05%のTween-20で補充されたPBSでの3回の洗浄工程によって除去した。ペルオキシダーゼ結合二次抗体(Dianova、Dianova GmbH社、Hamburg、ドイツ;希釈1:500)とのインキュベーション、続いて、洗浄工程の後、酵素基質反応を行った(DAB Enhanced Liquid Substrate System、Sigma-Aldrich社、St. Louis、MO、米国)。免疫組織学的切片を、DFC420カメラを備えたLeica DMI6000顕微鏡で撮像した。心筋の壊死をフォン・コッサ染色(カルシウム染色キット、フォン・コッサNo.KT028で改変、Diagnostic Biosystems Pleasanton社、CA、米国)で決定した。
【０２４７】
レンチウイルスが媒介するインビボでのRNAiによるSrsf1のダウンレギュレーション
インビボでのSrsf1発現のダウンレギュレーションのために、Tg-GRK2マウスを、RNAiによるSrsf1 RNAを標的とするプレmiRNAのポリメラーゼII(Pol II)依存性発現によってSrsf1をダウンレギュレーションする、複製能力のないレンチウイルス(1x108コピー/マウス、PBS中)のi.p.投与によって形質導入した。レンチウイルス発現プラスミドを、RNAi干渉によってマウスSrsf1遺伝子を標的とする遺伝子操作されたプレmiRNA配列をコードする指示された二本鎖オリゴヌクレオチドをpLenti6/V5-Dest Gateway(登録商標)ベクター(Invitrogen Invitrogen(商標)、Thermo Fisher Scientific社、Waltham、MA、米国)に挿入することによって作製した:miSrsf上部鎖5'-TGC TGT TTA AGT CCT GCC AGC TTC CAG TTT TGG CCA CTG ACT GAC TGG AAG CTC AGG ACT TAA A-3'(配列番号:1);及びmiSrsf下部鎖5'-CCT GTT TAA GTC CTG AGC TTC CAG TCA GTC AGT GGC CAA AAC TGG AAG CTG GCA GGA CTT AAA C -3'(配列番号:2)。シュードタイプ化レンチウイルスを、レンチウイルスプラスミド並びにpLP1、pLP2及びpLP/VSVGのパッケージングプラスミドの混合物(Invitrogen(商標)、Thermo Fisher Scientific社、Waltham、MA、米国)での293FT細胞の同時導入によって作成した。Srsf1タンパク質発現のダウンレギュレーションを、miSrsf1-レンチウイルスでのマウスの形質導入後、免疫ブロット検出によって確認した。
【０２４８】
全ゲノムマイクロアレイ遺伝子発現解析
Tg-RKIP及びTg-GRK2-K220Rマウスからの心臓組織の全ゲノムマイクロアレイ遺伝子発現解析を、実質的に記載のようにして(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016))、Affymetrix GeneChipマウスゲノムMG430 2.0アレイを使用して行った。マイクロアレイデータのGO解析を、GeneSpring GXソフトウェア(Agilent社、Santa Clara、CA、米国)を使用して、GCOS及び/又はRMA処理データを用いて行った。データを、非対比両側のスチューデントのT検定を使用して、2群の間で比較した。有意にアップレギュレーションされた(それぞれの対照群に対して倍数変化≧2及びP≦0.01)プローブセットをGO分類のために使用した。Camk2dアイソフォームスプライシングのリアルタイムqRT-PCRを、記載のようにして(Abd Alla, Jら、J. Biol. Chem. 291、2583〜2600頁(2016);Fu Xら、J. Biol. Chem. 288、7738〜7755頁(2013))、LightCycler 480(Roche Molecular Diagnostics社、Pleasanton、CA、米国)を用いて行った。以下のプライマーを使用した:Camk2d-フォワード  5'-ACG AGA AAT TTT TCA GCA GCC-3'(配列番号:3);Camk2d-リバース-A 5'-AC AGT AGT TTG GGG CTC CAG C-3'(配列番号:4);Camk2d-リバース-B 5'-T CAT CTG AAC ACT CGA ACT GG-3'(配列番号:5);Camk2d-リバース-C 5'-CTC AGT TGA CTC CTT TAC CCC-3'(配列番号:6)。
【０２４９】
統計解析
結果は、他に規定のない限り、平均±標準偏差として表す。P値はスチューデントのt-検定で計算した。3つ以上の群の間の比較のための分散分析、それに続く事後検定を行い、特に明記しない限り、統計学的有意性をP値<0.05で設定した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
0006928096.tif 000083
【図１２】
0006928096.tif 000084
【図１３Ａ】
0006928096.tif 000085
【図１３Ｂ】
0006928096.tif 000086
【図１３Ｃ】
0006928096.tif 000087
【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
0006928096.tif 000092
【図１３Ｉ】
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【図１３Ｊ】
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【配列表】
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