(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンチセンス−オリゴヌクレオチド、または前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、もしくは光学異性体であって、
前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、前記１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、ここで、前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットおよび５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを有するギャップマー構造を有し、および前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、前記ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、または前記ＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列「ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ」（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）を含み、前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列「ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ」（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）に相補的な配列を含む、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、または前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、もしくは光学異性体。
【請求項２】
前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、または前記ＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域の配列「ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ」（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）とのみ選択的にハイブリダイズする、請求項１に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個のヌクレオチドの長さを有し、ここで、前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを有するギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）構造を有し、および／または、ここで、前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド間結合としてホスフェート、ホスホロチオエート、および／またはホスホロジチオエートを有する、請求項１または請求項２に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列：
【表１】
0006832285.tif 000147
によって表され、
ここで、
Ｎ７は、ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
および
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される、
請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記５’末端の最後から２〜４個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、前記３’末端の最後から２〜４個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、前記５’末端の前記ＬＮＡヌクレオチドと前記３’末端の前記ＬＮＡヌクレオチドとの間は、少なくとも６個の連続するヌクレオチドが存在しており、前記少なくとも６個の連続するヌクレオチドは、非ＬＮＡヌクレオチド、またはＤＮＡヌクレオチドである、請求項１〜請求項４のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
前記ＬＮＡヌクレオチドは、ホスホロチオエート基、またはホスホロジチオエート基を介して互いに連結される、または全てのヌクレオチドは、ホスフェート基、ホスホロチオエート基、またはホスホロジチオエート基を介して互いに連結される、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
前記ＬＮＡヌクレオチドは、次の基：
【化１】
0006832285.tif 000148
から選択され、
式中、
ＩＬ’は、−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−を表し、
Ｘ’は、＝Ｏ、または＝Ｓを表し、
Ｘ−は、−Ｏ−、−ＯＨ、−ＯＲＨ、−ＮＨＲＨ、−Ｎ（ＲＨ）２、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＲＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＲＨ、−ＢＨ３−、−ＲＨ、−ＳＨ、−ＳＲＨ、または−Ｓ−を表し、
Ｘ’’は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲＨ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−を表し、
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲＨ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり、
ＲｃおよびＲＨは、互いに独立して、水素およびＣ１〜４−アルキルから選択され、
Ｂは、次の基：
アデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシル、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−メチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、７−デアザキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチルアデニン、６−メチルグアニン、６−エチルアデニン、６−エチルグアニン、２−プロピルアデニン、２−プロピルグアニン、６−カルボキシウラシル、５，６−ジヒドロウラシル、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アザウラシル、６−アザシトシン、６−アザチミン、５−ウラシル、４−チオウラシル、８−フルオロアデニン、８−クロロアデニン、８−ブロモアデニン、８−ヨードアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−フルオログアニン、８−クロログアニン、８−ブロモグアニン、８−ヨードグアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、５−クロロシトシン、５−ヨードシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、７−デアザ−８−アザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、２−チオウラシル、２−チオチミン、および２−チオシトシン、
から選択される核酸塩基を表す、
請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
次のギャップマー構造：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、
の一つを有する、請求項１〜請求項７のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡに対して１００％相補性を有して結合しており、ヒトのトランスクリプトームの他の領域には結合していない、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
次の基：
【表２−１】
0006832285.tif 000149
【表２−２】
0006832285.tif 000150
【表２−３】
0006832285.tif 000151
【表２−４】
0006832285.tif 000152
【表２−５】
0006832285.tif 000153
【表２−６】
0006832285.tif 000154
【表２−７】
0006832285.tif 000155
から選択され、
ここで、略語ｂ、ｄ、Ｃ＊、Ａ＊、ｓ、ｓｓは、次の意味：
ｂ１  β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ、
ｂ２  β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ、
ｂ３  β−Ｄ−アミノ−ＬＮＡ、
ｂ４  α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ、
ｂ５  β−Ｄ−ＥＮＡ、
ｂ６  β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ、
ｂ７  β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ、
ｄ  ２−デオキシ、
Ｃ＊  ５−メチルシトシン、
Ａ＊  ２−アミノアデニン
ｓ  ヌクレオチド間架橋は、ホスホロチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−）であり、
ｓｓ  ヌクレオチド間架橋は、ホスホロジチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−）、／５ＳｐＣ３ｓ／アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’−末端基で（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、
／３ＳｐＣ３ｓ／アンチセンス−オリゴヌクレオチドの３’−末端基で（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−ＯＣ３Ｈ６ＯＨであり、
太字のヌクレオチドはＬＮＡヌクレオチドであり、
太字でないヌクレオチドは非ＬＮＡヌクレオチドである、
を有するアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
損傷した神経経路の再生および機能的再接続を促進するための、並びに／または神経幹細胞再生における年齢誘導性減少の治療および補償のための、請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
神経変性疾患、神経炎症性疾患、外傷性または外傷後疾患、神経血管性疾患、低酸素性疾患、感染後中枢神経系疾患、線維性疾患、過剰増殖性疾患、癌、腫瘍、老人性難聴、および老眼の予防および治療に使用するための請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
前記神経変性疾患、および前記神経炎症性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルトヤコブ病、クロイツフェルトヤコブ病の新しい変異体、ハレルフォルデン（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ）スパッツ病、ハンチントン病、多系統萎縮症、認知症、前頭側頭型認知症、運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳萎縮症、統合失調症、情動障害、大うつ病、髄膜脳炎、細菌性髄膜脳炎、ウイルス性髄膜脳炎、ＣＮＳ自己免疫疾患、多発性硬化症、急性虚血性／低酸素性病変、脳卒中、ＣＮＳおよび脊髄の外傷、頭部および脊髄外傷、脳外傷性損傷、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、細小血管性認知症、ビンスワンガー（Ｂｉｎｓｗａｎｇｅｒ）病、網膜変性症、蝸牛変性症、黄斑変性症、蝸牛性難聴、エイズ関連認知症、網膜色素変性症、脆弱Ｘ関連震え／失調症候群、進行性核上麻痺、線条体黒質変性症、オリーブ橋小脳変性症、シャイ（Ｓｈｙ）ドレーガー（Ｄｒａｇｅｒ）症候群、年齢依存性記憶障害、認知症と関連する神経発達障害、ダウン症候群、シヌクレイン症、スーパーオキシドディスムターゼ変異、トリヌクレオチド反復障害、外傷、低酸素症、血管疾患、血管炎症、およびＣＮＳ老化から成る群から選択され、前記線維性疾患、肺線維症、嚢胞性線維症、肝硬変、心内膜心筋線維症、陳旧性心筋梗塞、心房線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症、腎性全身性線維症、クローン病、ケロイド、全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー病、デュピュイトラン拘縮、および全身性エリテマトーデス後残留物（ｒｅｓｉｄｕｕｍ）から成る群から選択される、請求項１２に記載の使用のためのアンチセンス−オリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
少なくとも一つの薬学的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント、溶媒、または希釈剤と共に請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載のアンチセンス−オリゴヌクレオチドを少なくとも一つ含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、ＴＧＦ−Ｒシグナリング阻害剤としてのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用、当該アンチセンス−オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物、並びに神経学的疾患、神経変性疾患、腫瘍学的疾患を含む過剰増殖性疾患の予防および治療のためのそれらの使用に関する。
【０００２】
ＴＧＦ−βは、ヒトにおいて、３つの公知のサブタイプ、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３が存在する。これらは、ＡＬＳのような神経変性疾患、いくつかのヒト癌において上方制御され、神経変性疾患、急性外傷、および神経炎症の病態並びに加齢において、この増殖因子の発現の上昇が実証されている。トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β１）のイソ型は子癇前症の病因に関与することも考えられている。
【０００３】
活性化ＴＧＦ−βは、３つの異なる受容体クラス：アクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ；５３ｋＤａ）とも呼ばれるタイプＩ（ＴＧＦＲＩ）、タイプＩＩ（ＴＧＦＲＩＩ；７０〜１００ｋＤａ）、およびタイプＩＩＩ（ＴＧＦＲＩＩＩ；２００〜４００ｋＤａ）を介して標的細胞に影響を及ぼす。ＴＧＦ−β受容体は、単一パス  セリン／スレオニンキナーゼ受容体である。タイプＩＩ受容体キナーゼは恒常的活性型である一方、タイプＩ受容体は、活性型にする必要がある。この過程は、ＴＧＦＲＩＩへのリガンドの結合を介して開始され、これは、リガンドおよび受容体タイプＩおよびＩＩを含む複合体の一時的形成を誘発する。リガンドの二量体型構成を考慮して、受容体複合体は、二対の各受容体型によって形成される三量体構造からなるのが最も可能性が高い。
【０００４】
ＴＧＦ−βシグナル伝達は、当該受容体を介して起こり、Ｓｍａｄタンパク質を介して下流で起こる。Ｓｍａｄ依存性細胞シグナル伝達は、特異的ＴＧＦＲＩ／ＩＩ受容体対に対するＴＧＦ−βイソ型の結合によって開始し、細胞内Ｓｍａｄのリン酸化、およびその後に特定の標的遺伝子発現に影響を与えるために核へのＳｍａｄ複合体の移行につながる。他の経路へのシグナル分岐および近接のシグナル経路からの収束は、非常に複雑なネットワークを生成する。環境および細胞含有物に依存して、ＴＧＦ−βシグナリングは、腫瘍細胞における細胞増殖、分化、運動性、およびアポトーシスのような様々な異なる細胞応答を結果的に生じる。癌において、ＴＧＦ−βは、腫瘍の増殖に直接的に（ＴＧＦ−βシグナリングの本質的効果とも呼ばれる）、または腫瘍の増殖を促進し、上皮間葉転換（ＥＭＴ）を誘導し、抗腫瘍免疫応答を阻害し、腫瘍関連線維形成を増加させ、細胞外マトリックスおよび細胞遊走を調節し、最終的に血管新生を高めることによって、間接的に（外的効果とも呼ばれる）影響を及ぼすことができる。ＴＧＦ−βシグナリングが腫瘍プロモーターまたはサプレッサー機能を有するかどうかを決定する因子(例えば、濃度、タイミング、局所曝露など)は、激しい研究や議論の問題になる。現在、ＴＧＦ−βシグナリングの腫瘍サプレッサー機能は、他の腫瘍サプレッサーにおける劣性の機能喪失変異と同様に初期段階では失われると仮定されている。したがって、ガルニサーチブ（Ｇａｌｕｎｉｓｅｒｔｉｂ）およびＴＥＷ−７１９７（共にＴＧＦＲＩの小分子阻害剤であり、臨床的検討、およびＬＹ３０２２８５９で用いられており、ＴＧＦＲＩＩに対する抗体である）の調査のように、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害することによる種々の癌治療のためのいくつかの薬理学的アプローチがある）。
【０００５】
トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ−β）ファミリーのタンパク質によって提供されるシグナルは、神経幹細胞が生理学的な条件下で制御されるが、類似の他の細胞型は、癌幹細胞への変換後に、この制御下から放出されるシステムを示す。ＴＧＦ−βは、脳の
様々な生理学的および病態生理学的なプロセスに関与する多機能サイトカインである。ＴＧＦ−βは、大人の脳において傷害または低酸素症後に、および神経変性の間に誘導され、炎症反応を調節し弱める。傷害後、ＴＧＦ−βは一般に神経保護作用があるけれども、神経幹細胞の増殖を阻害し、瘢痕形成のために線維化／神経膠症を誘導することによって脳の自己修復を制限する。神経幹細胞に及ぼす当該影響と同様に、ＴＧＦ‐βは、ほとんどの細胞型において抗増殖制御を明らかにするが、逆説的に、多くの腫瘍はＴＧＦ−β制御から逃れる。さらに、これらの腫瘍は、主に、マトリックス、移行および浸潤、血管新生、並びに最も重要なのは免疫回避機構に対する多数のＴＧＦ−β媒介効果を調製することによって、ＴＧＦ−β抗増殖性効果を発癌の合図に変更するという機構を発達させる。したがって、ＴＧＦ−βは、腫瘍の進行に関与する（図３参照)。
【０００６】
結果的に、ＴＧＦ受容体ＩＩ（トランスフォーミング増殖因子、ベータ受容体ＩＩ；同義的に使用される記号：ＴＧＦ−βタイプＩＩ受容体、ＴＧＦＢＲ２；ＡＡＴ３；ＦＡＡ３；ＬＤＳ１Ｂ；ＬＤＳ２；ＬＤＳ２Ｂ；ＭＦＳ２；ＲＩＩＣ；ＴＡＡＤ２；ＴＧＦＲ−２；ＴＧＦベータ−ＲＩＩ、ＴＧＦ−ＲＩＩ、ＴＧＦ−ＲＩＩ）、および特に当該阻害は、ＡＬＳなどの神経変性疾患、並びに癌および線維性疾患などの過剰増殖性疾患の治療のための標的として確認された。
【０００７】
したがって、本出願の目的は、ＴＧＦ受容体ＩＩ（ＴＧＦ−ＲＩＩ）の発現を阻害によりＴＧＦ受容体ＩＩ（ＴＧＦ−ＲＩＩ）の量を減少させ、ＴＧＦ−β下流シグナリングを減少させることができる薬学的に活性な化合物を提供することである。
【０００８】
本発明の目的は、独立請求項の教示によって解決される。本発明のさらに有利な特徴、態様および詳細は、本発明の従属請求項、説明、図、および実施例から明らかである。
驚くべきことに、タンパク質ヌクレオチド複合体、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、アプタマー、ＣｐＧ−オリゴ、ＤＮＡ−ザイム、ラフト、またはカベオリン修飾剤、ゴルジ体の修飾剤、抗体およびそれらの誘導体、特にキメラ、Ｆａｂ−断片、およびＦｃ−断片、ＬＮＡ（ＬＮＡ（登録商標）ロックド核酸）を含むアンチセンス−オリゴヌクレオチドなどの数千もの候補物質の下で、本願において開示される使用のための最も有望な候補物質が発見された。
【０００９】
したがって、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００１０】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチ
センス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００１１】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）それぞれと相補的な配列を含む。
【００１２】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）、または配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）、または配列『Ａ
ＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）、または配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）、または配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）、または配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）それぞれと相補的な配列を含む。
【００１３】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００１４】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００１５】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）と相補的な配列を含む。
【００１６】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．４）と相補的な配列を含む。
【００１７】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの
少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００１８】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００１９】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）と相補的な配列を含む。
【００２０】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．５）と相補的な配列を含む。
【００２１】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００２２】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチ
センス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００２３】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）と相補的な配列を含む。
【００２４】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．６）と相補的な配列を含む。
【００２５】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００２６】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．
ＩＤ  Ｎｏ．７）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００２７】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）と相補的な配列を含む。
【００２８】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．７）と相補的な配列を含む。
【００２９】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００３０】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００３１】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−Ｒ
ＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）と相補的な配列を含む。
【００３２】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．８）と相補的な配列を含む。
【００３３】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００３４】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）とハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００３５】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）と相補的な配列を含む。
【００３６】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−
ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子のオープンリーディングフレーム領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．９）と相補的な配列を含む。
【００３７】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含み、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、さらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニット、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、好ましくは３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に位置される。好ましくは、少なくとも１個以上、好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【００３８】
したがって、好ましくは、３個〜１０個のＬＮＡユニットを含む本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。
【００３９】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びにそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。
【００４０】
したがって、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または
『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３０３）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００４１】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または『ＴＴＴＡＴＴ
ＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）それぞれと相補的な配列を含む。
【００４２】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、または『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、または『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００４３】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、または『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９６）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９７）、または『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９８）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００４４】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、または『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、または『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００４５】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴ
ＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、または『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２９９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３００）、または『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０１）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００４６】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、または『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、または『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００４７】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、または『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０２）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０３）、または『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０４）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００４８】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、または『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、または『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００４９】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『』ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、または『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０５）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０６）、または『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０７）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００５０】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、または『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、または『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００５１】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、または『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０８）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３０９）、または『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１０）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００５２】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、また
は『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００５３】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１１）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１２）、または『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１３）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００５４】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、３個〜１０個のＬＮＡユニットを含み、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニット、並びにさらに好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、好ましくは３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に位置される。好ましくは、少なくとも１個以上、好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【００５５】
したがって、好ましくは、３個〜１０個のＬＮＡユニットを含む本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。
【００５６】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びにそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。
【００５７】
したがって、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域と
ハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２２）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２７）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３７）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２２）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２７）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３７）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００５８】
代替的に、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２２）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２７）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３７）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２２）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２７）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『
ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３７）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００５９】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００６０】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１７）、または『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１４）、『ＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１５）、『ＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１６）、『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３１７）、または『ＡＣＴＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１８）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００６１】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、また
はＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２２）、または『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３２２）、または『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００６２】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２２）、または『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３１９）、『ＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２０）、『ＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２１）、『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３２２）、または『ＣＴＣＣＣＴＡＡＡＣＡＣＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２３）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００６３】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２７）、または『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３２７）、または『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００６４】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオ
チドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）『、ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２７）、または『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２４）、『ＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２５）、『ＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２６）、『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３２７）、または『ＡＣＡＣＴＡＣＣＡＡＡＴＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２８）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００６５】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、または『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３３２）、または『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００６６】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３２９）、『ＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３０）、『ＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３１）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３２）、『ＧＴＧＧＡＣＧＣＧＴＡＴＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３３）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００６７】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３７）、または『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３３７）、または『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００６８】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３７）、または『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３４）、『ＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３５）、『ＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３６）、『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３３７）、または『ＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＡＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３８）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００６９】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体にも関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、前記配列『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴ
ＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）、それぞれとハイブリダイズすることができる配列を含む。
【００７０】
少し言い換えると、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、１４個〜２０個のヌクレオチド、より好ましくは１４個〜１８個のヌクレオチドのうちの少なくとも４個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域は、配列『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）、を含み、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、配列『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３３９）、『ＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４０）、『ＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４１）、『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣ』（Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．３４２）、または『ＣＴＴＴＡＴＴＡＡＴＧＣＣＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４３）、それぞれと相補的な配列を含む。
【００７１】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、４個〜１１個のＬＮＡユニットを含み、より好ましくは４個〜１０個のＬＮＡユニット、さらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニット、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、好ましくは３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に位置される。好ましくは、少なくとも１個以上、好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【００７２】
したがって、好ましくは、３個〜１０個のＬＮＡユニットを含む本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個以上、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。
【００７３】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びにそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。
【００７４】
したがって、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少な
くとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、または５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）、または５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）、または５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）、または５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）、または５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、
ここで、
Ｎ１は、ＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧ、または、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧＧ、を表し、
Ｎ３は、ＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表し、
Ｎ５は、ＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、
−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表し、
Ｎ７は、ＴＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表し、
Ｎ９は、ＡＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表し、
Ｎ１１は、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ
ＧＧＡＡＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【００７５】
したがって、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びに前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、または５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）、または５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）、または５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）、または５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）、または５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、ここで、残基Ｎ１〜Ｎ１２は、特に、本願に開示されるような更なる限定される意味を有する。
【００７６】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、によって表され、ここで、
Ｎ１は、ＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧ、または、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧＧ、を表す。
【００７７】
式Ｓ１（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニット、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは
、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、好ましくは３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に位置される。好ましくは、少なくとも１個以上、好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【００７８】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個以上、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡ断片の間では、好ましくは少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡ−ユニットを含む。
【００７９】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに、５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【００８０】
したがって、好ましくは、式（Ｓ１）：
５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１は、ＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、および、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧ、または、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧＧ、から選択される。
【００８１】
好ましくは、一般式（Ｓ１）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【００８２】
より好ましくは、一般式（Ｓ１）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個はＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個はＬＮＡヌクレオチドを有する。
【００８３】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ１）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡヌクレオチドを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【００８４】
さらに好ましくは、式（Ｓ１）：
５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１は、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、および、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣ、から選択される。
【００８５】
さらに好ましくは、式（Ｓ１）：
５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１は、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、および、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣから選択される。
【００８６】
さらに好ましくは、式（Ｓ１）：
５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１は、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、および、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣから選択される。
【００８７】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２個〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列５’−Ｎ１Ａ−『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』−Ｎ２Ａ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６９）によって表され、ここで、
Ｎ１Ａは、ＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＣＴＧＣＴ−、ＣＴＧＣＴ−、ＴＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ２Ａは、−Ｃ、−ＣＧ、−ＣＧＡ、−ＣＧＡＧ、−ＣＧＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧ、または、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧＧを表す。
【００８８】
好ましくは、Ｎ１Ａは、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＣＴＧＣＴ−、ＣＴＧＣＴ−、ＴＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ２Ａは、−Ｃ、−ＣＧ、−ＣＧＡ、−ＣＧＡＧ、−ＣＧＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、または−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣを表す。
【００８９】
より好ましくは、Ｎ１Ａは、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴ−、ＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＣＴＧＣＴ−、ＣＴＧＣＴ−、ＴＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ２Ａは、−Ｃ、−ＣＧ、−ＣＧＡ、−ＣＧＡＧ、−ＣＧＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、または−ＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣを表す。
【００９０】
さらにより好ましくは、Ｎ１Ａは、ＣＧＣＴＧＣＴ−、ＧＣＴＧＣＴ−、ＣＴＧＣＴ−、ＴＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ２Ａは、−Ｃ、−ＣＧ、−ＣＧＡ、−ＣＧＡＧ、−ＣＧＡＧＣ、−ＣＧＡＧＣＣ、または−ＣＧＡＧＣＣＣを表す。
【００９１】
好ましくは、一般式（Ｓ１Ａ／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６９）のアンチセンス−オリゴヌ
クレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【００９２】
より好ましくは、一般式（Ｓ１Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個はＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個はＬＮＡヌクレオチドを有する。
【００９３】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ１Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【００９４】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）によって表され、ここで、
Ｎ３は、ＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表す。
【００９５】
式Ｓ２（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニット、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは
、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、好ましくは３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に位置される。好ましくは、少なくとも１個以上、好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【００９６】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡ断片の間では、好ましくは少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡ−ユニットを含む。
【００９７】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに、５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【００９８】
したがって、好ましくは、式（Ｓ２）：
、５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ３は、ＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表す。
【００９９】
好ましくは、一般式（Ｓ２）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１００】
より好ましくは、一般式（Ｓ２）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１０１】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ２）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１０２】
さらに好ましくは、式（Ｓ２）：
５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ３は、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表す。
【０１０３】
さらに好ましくは、式（Ｓ２）：
５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ３は、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表す。
【０１０４】
さらに好ましくは、式（Ｓ２）：
５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ３は、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表す。
【０１０５】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、
５’−Ｎ３Ａ−『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』−Ｎ４Ａ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７０）によって表され、ここで、
Ｎ３Ａは、ＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＣＧＡ−、ＧＣＧＡ−、ＣＧＡ−、ＧＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ４Ａは、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＣＡＧＧＡＣＧ、−ＣＡＧＧＡＣ、−ＣＡＧＧＡ、−ＣＡＧＧ、−ＣＡＧ、−ＣＡ、または−Ｃを表す。
【０１０６】
好ましくは、Ｎ３Ａは、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＣＧＡ−、ＧＣＧＡ−、ＣＧＡ−、ＧＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ４Ａは、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＣＡＧＧＡＣＧ、−ＣＡＧＧＡＣ、−ＣＡＧＧＡ、−ＣＡＧＧ、−ＣＡＧ、−ＣＡ、または−Ｃを表す。
【０１０７】
より好ましくは、Ｎ３Ａは、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡ−、ＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＣＧＡ−、ＧＣＧＡ−、ＣＧＡ−、ＧＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ４Ａは、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＣＡＧＧＡＣＧ、−ＣＡＧＧＡＣ、−ＣＡＧＧＡ、−ＣＡＧＧ、−ＣＡＧ、−ＣＡ、または−Ｃを表す。
【０１０８】
さらにより好ましくは、Ｎ３Ａは、ＣＴＧＧＣＧＡ−、ＴＧＧＣＧＡ−、ＧＧＣＧＡ−、ＧＣＧＡ−、ＣＧＡ−、ＧＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ４Ａは、−ＣＡＧＧＡＣＧ、−ＣＡＧＧＡＣ、−ＣＡＧＧＡ、−ＣＡＧＧ、−ＣＡＧ、−ＣＡ、または−Ｃを表す。
【０１０９】
好ましくは、一般式（Ｓ２Ａ／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７０）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個はＬ
ＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個はＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１１０】
より好ましくは、一般式（Ｓ２Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１１１】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ２Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１１２】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）によって表され、ここで、
Ｎ１１は、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【０１１３】
式Ｓ３（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニットを含み、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に好ましくは位置される。好ましくは、少なくとも１個、より好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【０１１４】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。
【０１１５】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【０１１６】
したがって、好ましくは、式（Ｓ３）：
５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ１１は、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、および、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡ
ＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【０１１７】
好ましくは、一般式（Ｓ３）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１１８】
より好ましくは、一般式（Ｓ３）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１１９】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ３）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１２０】
さらに好ましくは、式（Ｓ３）：
５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ１１は、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、および、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【０１２１】
さらに好ましくは、式（Ｓ３）：
５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ１１は、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−
、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、および、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【０１２２】
さらに好ましくは、式（Ｓ３）：
５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ１１は、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、および、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【０１２３】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、
５’−Ｎ１１Ａ−『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７１）によって表され、ここで、
Ｎ１１Ａは、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＧＧＴＡ−、ＴＧＧＴＡ−、ＧＧＴＡ−、ＧＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ１２Ａは、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴ、−ＡＧＣＣＧ、−ＡＧＣＣ、−ＡＧＣ、−ＡＧ、または−Ａを表す。
【０１２４】
好ましくは、Ｎ１１Ａは、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＧＧＴＡ−、ＴＧＧＴＡ−、ＧＧＴＡ−、ＧＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ１２Ａは、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ
ＡＡＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴ、−ＡＧＣＣＧ、−ＡＧＣＣ、−ＡＧＣ、−ＡＧ、または−Ａを表す。
【０１２５】
より好ましくは、Ｎ１１Ａは、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＧＧＴＡ−、ＴＧＧＴＡ−、ＧＧＴＡ−、ＧＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ１２Ａは、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＡＧＣＣＧＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴ、−ＡＧＣＣＧ、−ＡＧＣＣ、−ＡＧＣ、−ＡＧ、または−Ａを表す。
【０１２６】
さらにより好ましくは、Ｎ１１Ａは、ＴＴＴＧＧＴＡ−、ＴＴＧＧＴＡ−、ＴＧＧＴＡ−、ＧＧＴＡ−、ＧＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ１２Ａは、−ＡＧＣＣＧＴＣ、−ＡＧＣＣＧＴ、−ＡＧＣＣＧ、−ＡＧＣＣ、−ＡＧＣ、−ＡＧ、または−Ａを表す。
【０１２７】
好ましくは、一般式（Ｓ３Ａ／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７１）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１２８】
より好ましくは、一般式（Ｓ３Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１２９】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ３Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１３０】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）によって表され、ここで、
Ｎ５は、ＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、
ＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表す。
【０１３１】
式Ｓ４（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニットを含み、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に好ましくは位置される。好ましくは、少なくとも１個、より好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【０１３２】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びに両ＬＮＡ断片の間では少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。
【０１３３】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【０１３４】
したがって、好ましくは、式（Ｓ４）：
５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ５は、ＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、から選択される。
【０１３５】
好ましくは、一般式（Ｓ４）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１３６】
より好ましくは、一般式（Ｓ４）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１３７】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ４）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１３８】
さらに好ましくは、式（Ｓ４）：
５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ５は、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣ
ＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、から選択される。
【０１３９】
さらに好ましくは、式（Ｓ４）：
５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ５は、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、から選択される。
【０１４０】
さらに好ましくは、式（Ｓ４）：
５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、
式中、
Ｎ５は、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、から選択される。
【０１４１】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、
５’−Ｎ５Ａ−『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』−Ｎ６Ａ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７２）によって表され、ここで、
Ｎ５Ａは、ＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＧＣＴ−、ＡＧＣＴ−、ＧＣＴ−
、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ６Ａは、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧ、−ＧＴＴＴＡ、−ＧＴＴＴ、−ＧＴＴ、−ＧＴ、または−Ｇ、を表す。
【０１４２】
好ましくは、Ｎ５Ａは、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＧＣＴ−、ＡＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ６Ａは、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧ、−ＧＴＴＴＡ、−ＧＴＴＴ、−ＧＴＴ、−ＧＴ、または−Ｇ、を表す。
【０１４３】
より好ましくは、Ｎ５Ａは、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＧＣＴ−、ＡＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ６Ａは、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧ、−ＧＴＴＴＡ、−ＧＴＴＴ、−ＧＴＴ、−ＧＴ、または−Ｇ、を表す。
【０１４４】
さらにより好ましくは、Ｎ５Ａは、ＡＡＧＡＧＣＴ−、ＡＧＡＧＣＴ−、ＧＡＧＣＴ−、ＡＧＣＴ−、ＧＣＴ−、ＣＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ６Ａは、−ＧＴＴＴＡＧＧ、−ＧＴＴＴＡＧ、−ＧＴＴＴＡ、−ＧＴＴＴ、−ＧＴＴ、−ＧＴ、または−Ｇ、を表す。
【０１４５】
好ましくは、一般式（Ｓ４Ａ／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７２）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１４６】
より好ましくは、一般式（Ｓ４Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１４７】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ４Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８
個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１４８】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）によって表され、ここで、
Ｎ７は、ＴＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表す。
【０１４９】
式Ｓ６（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニットを含み、並びにさらに好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に好ましくは位置される。好ましくは、少なくとも１個、より好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【０１５０】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、お
よび３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びに両ＬＮＡ断片の間では少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。
【０１５１】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【０１５２】
したがって、好ましくは、式（Ｓ６）：
５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ７は、ＴＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１５３】
好ましくは、一般式（Ｓ６）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１５４】
より好ましくは、一般式（Ｓ６）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１５５】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ６）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬ
ＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１５６】
さらに好ましくは、式（Ｓ６）：
５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ７は、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１５７】
さらに好ましくは、式（Ｓ６）：
５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ７は、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１５８】
さらに好ましくは、式（Ｓ６）：
５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ７は、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１５９】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、
５’−Ｎ７Ａ−『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』−Ｎ８Ａ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７３）によって表され、ここで、
Ｎ７Ａは、ＴＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、Ａ
ＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＣＴＣＡＴ−、ＣＴＣＡＴ−、ＴＣＡＴ−、ＣＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ８Ａは、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴ、−ＧＴＡＴＴＣ、−ＧＴＡＴＴ、−ＧＴＡＴ、−ＧＴＡ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１６０】
好ましくは、Ｎ７Ａは、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＣＴＣＡＴ−、ＣＴＣＡＴ−、ＴＣＡＴ−、ＣＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ８Ａは、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴ、−ＧＴＡＴＴＣ、−ＧＴＡＴＴ、−ＧＴＡＴ、−ＧＴＡ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１６１】
より好ましくは、Ｎ７Ａは、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴ−、ＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＣＴＣＡＴ−、ＣＴＣＡＴ−、ＴＣＡＴ−、ＣＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ８Ａは、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＧＴＡＴＴＣＴ、−ＧＴＡＴＴＣ、−ＧＴＡＴＴ、−ＧＴＡＴ、−ＧＴＡ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１６２】
さらにより好ましくは、Ｎ７Ａは、ＡＴＣＴＣＡＴ−、ＴＣＴＣＡＴ−、ＣＴＣＡＴ−、ＴＣＡＴ−、ＣＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ８Ａは、−ＧＴＡＴＴＣＴ、−ＧＴＡＴＴＣ、−ＧＴＡＴＴ、−ＧＴＡＴ、−ＧＴＡ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１６３】
好ましくは、一般式（Ｓ６Ａ／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７３）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１６４】
より好ましくは、一般式（Ｓ６Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１６５】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ６Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ま
しくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１６６】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、ここで、
Ｎ９は、ＡＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表す。
【０１６７】
式Ｓ７（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニットを含み、並びにさらにより好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に好ましくは位置される。好ましくは、少なくとも１個、より好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【０１６８】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びに両ＬＮＡ断片の間では少なく
とも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。
【０１６９】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【０１７０】
したがって、好ましくは、式（Ｓ７）：
５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ９は、ＡＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１７１】
好ましくは、一般式（Ｓ７）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１７２】
より好ましくは、一般式（Ｓ７）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１７３】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ７）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１７４】
さらに好ましくは、式（Ｓ７）：
５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ９は、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１７５】
さらに好ましくは、式（Ｓ７）：
５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ９は、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１７６】
さらに好ましくは、式（Ｓ７）：
５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ９は、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａから選択される。
【０１７７】
好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドからなり、１２〜２４個のヌクレオチドのうちの少なくとも３個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ９Ａ−『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』−Ｎ１０Ａ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７４）によって表され、ここで、
Ｎ９Ａは、ＡＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＣＡＧＧ−
、ＴＡＣＡＧＧ−、ＡＣＡＧＧ−、ＣＡＧＧ−、ＡＧＧ−、ＧＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１０Ａは、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴＡ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡ、−ＧＴＧＣＡＡ、−ＧＴＧＣＡ、−ＧＴＧＣ、−ＧＴＧ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１７８】
好ましくは、Ｎ９Ａは、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＣＡＧＧ−、ＡＣＡＧＧ−、ＣＡＧＧ−、ＡＧＧ−、ＧＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１０Ａは、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡ、−ＧＴＧＣＡＡ、−ＧＴＧＣＡ、−ＧＴＧＣ、−ＧＴＧ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１７９】
より好ましくは、Ｎ９Ａは、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧ−、ＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＣＡＧＧ−、ＡＣＡＧＧ−、ＣＡＧＧ−、ＡＧＧ−、ＧＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１０Ａは、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＧＴＧＣＡＡＡ、−ＧＴＧＣＡＡ、−ＧＴＧＣＡ、−ＧＴＧＣ、−ＧＴＧ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１８０】
さらにより好ましくは、Ｎ９Ａは、ＡＴＡＣＡＧＧ−、ＴＡＣＡＧＧ−、ＡＣＡＧＧ−、ＣＡＧＧ−、ＡＧＧ−、ＧＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１０Ａは、−ＧＴＧＣＡＡＡ、−ＧＴＧＣＡＡ、−ＧＴＧＣＡ、−ＧＴＧＣ、−ＧＴＧ、−ＧＴ、または−Ｇを表す。
【０１８１】
好ましくは、一般式（Ｓ７Ａ／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７４）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１８２】
より好ましくは、一般式（Ｓ７Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１８３】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ７Ａ）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ま
しくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１８４】
さらに、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、８個〜１８個、好ましくは１０個〜２８個のヌクレオチドからなり、８個〜２８個、好ましくは１０個〜２８個のヌクレオチドのうちの少なくとも２個はＬＮＡであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９９）によって表され、ここで、
Ｎ１３は、ＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＡＴＴＴＧ−、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣ、−
ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、
ｍは、０または１を表し、
ｎは、０または１を表し、
および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１８５】
式Ｓ５（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９９）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニット、より好ましくは３個〜９個のＬＮＡユニット、およびさらにより好ましくは４個〜８個のＬＮＡユニットを含み、並びにさらに好ましくは少なくとも６個の非ＬＮＡユニット、より好ましくは、少なくとも７個の非ＬＮＡユニット、および最も好ましくは少なくとも８個の非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニットは、好ましくはＤＮＡユニットである。ＬＮＡユニットは、３’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ
ｅｎｄ）（３’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）、および５’末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｄ）（５’末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）とも呼ばれる）に好ましくは位置される。好ましくは、少なくとも１個、より好ましくは少なくとも２個のＬＮＡユニットは、３’末端および／または５’末端に存在する。
【０１８６】
したがって、好ましくは、２個〜１０個のＬＮＡユニットを含むギャップマーとして設計される本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１個〜５個のＬＮＡユニット、および３’末端で１個〜５個のＬＮＡユニットを含み、並びにＬＮＡユニットの間では少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットを含む。より好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、５’末端で２個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で２個〜４個のＬＮＡユニットを含み、さらにより好ましくは、５’末端で３個〜４個のＬＮＡユニット、および３’末端で３個〜４個のＬＮＡユニットを含み、並びに両ＬＮＡ断片の間では少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。
【０１８７】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルのような一般的な核酸塩基、並びに５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンのようなそれらの一般的な誘導体を含んでもよい。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ホスフェート結合の代わりにホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートのような修飾ヌクレオチド間結合も含んでもよい。当該修飾は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片にのみ、または非ＬＮＡ断片にのみ存在してもよい。ＬＮＡユニットとして本願に開示される残基ｂ１〜ｂ９が特に好ましい。
【０１８８】
したがって、好ましくは、式（Ｓ５）：
５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１３は、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＡＴＴＴＧ−、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、ｍは、０または１を表し、ｎは、０または１を表し、および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１８９】
好ましくは、一般式（Ｓ５）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１９０】
より好ましくは、一般式（Ｓ５）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１９１】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ５）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０１９２】
さらに好ましくは、式（Ｓ５）：
５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１３は、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＡＴＴＴＧ−、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、ｍは、０または１を表し、ｎは、０または１を表し、および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１９３】
さらに好ましくは、式（Ｓ５）：
５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１３は、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＡＴＴＴＧ−、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、ｍは、０または１を表し、ｎは、０または１を表し、および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１９４】
さらに好ましくは、式（Ｓ５）：
５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１３は、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＡＴＴＴＧ−、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−Ｔ
ＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、ｍは、０または１を表し、ｎは、０または１を表し、および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１９５】
さらに好ましくは、式（Ｓ５）：
５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１３は、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧ−、ＴＡＴＴＴＧ−、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、ｍは、０または１を表し、ｎは、０または１を表し、および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１９６】
さらに好ましくは、式（Ｓ５）：
５’−（Ｎ１３）ｍ−『ＧＴＡＧＴＧＴＴ』−（Ｎ１４）ｎ−３’
のアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、ここで、
Ｎ１３は、ＡＴＴＴＧ−、ＴＴＴＧ−、ＴＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１４は、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＡＧＧＧＡ、−ＴＡＧＧＧ、−ＴＡＧＧ、−ＴＡＧ、−ＴＡ、または−Ｔから選択され、ｍは、０または１を表し、ｎは、０または１を表し、および、ｎ＋ｍ＝１または２である。
【０１９７】
好ましくは、一般式（Ｓ５／Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９９）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２４個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを有する。ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。
【０１９８】
より好ましくは、一般式（Ｓ５）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２２個のヌクレオチドを有し、３’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有し、５’末端では少なくとも２個のＬＮＡヌクレオチドを有する。
【０１９９】
さらにより好ましくは、一般式（Ｓ５）のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１２個〜２０個、より好ましくは、１３個〜１９個、さらにより好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドを有し、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有する。好ましくは、アンチセ
ンス−オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーである。好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。
【０２００】
本発明の他の態様は、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１０個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１１個〜２２個のヌクレオチドまたは１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個のヌクレオチド、および最も好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドの長さを有するアンチセンス−オリゴヌクレオチドに関し、ここで、少なくとも２個のヌクレオチド、好ましくは、少なくとも３個のヌクレオチド、より好ましくは、少なくとも４個のヌクレオチドはＬＮＡであり、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１０個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１１個〜２２個のヌクレオチドまたは１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個のヌクレオチド、および最も好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの配列は、次の群：
ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７５：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の３８３〜４２３）
ＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７７：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２２４５〜２２８５）
ＴＧＡＧＧＡＡＧＴＧＣＴＡＡＣＡＣＡＧＣＴＴＡＴＣＣＴＡＴＧＡＣＡＡＴＧＴＣＡＡＡＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７８：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２３１５〜２３５６）
ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７９：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２５２８〜２５７６）
ＣＧＣＡＧＧＴＣＣＴＣＣＣＡＧＣＴＧＡＴＧＡＣＡＴＧＣＣＧＣＧＴＣＡＧＧＴＡＣＴＣＣＴＧＴＡＧＧＴ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８１：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の３２０５〜３２５３）
ＡＴＧＴＣＧＴＴＡＴＴＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＧＴＧＣＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８３：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４１４１〜４２１８）
ＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８４：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４２１６〜４２８９）
ＡＴＧＴＣＧＴＴＡＴＴＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＧＴＧＣＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８６：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４１４１〜４２８９）
ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡＧＴＡＴＴＣＴＡ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８７：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の３８８〜４１８）
ＣＡＡＧＴＧＧＡＡＴＴＴＣＴＡＧＧＣＧＣＣＴＣＴＡＴＧＣＴＡＣＴＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８８：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４８３〜５１５）
ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡＧＴＧＣＡＡＡＴ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８９：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２２５０〜２２８０）
ＡＡＧＴＧＣＴＡＡＣＡＣＡＧＣＴＴＡＴＣＣＴＡＴＧＡＣＡＡＴＧＴ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９０：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２３２０〜２３５１）
ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９１：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２５３３〜２５７１）
ＣＴＧＧＴＣＧＣＣＣＴＣＧＡＴＣＴＣＴＣＡＡＣＡＣＧＴＴＧＴＣＣＴＴＣＡＴＧＣＴＴＴＣＧＡＣＡＣＡＧＧＧＧＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＣＣＴＴＧＧＡＡＣＣＡＡＡＴＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９２：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の２７５３〜２８３０）
ＧＴＣＣＴＣＣＣＡＧＣＴＧＡＴＧＡＣＡＴＧＣＣＧＣＧＴＣＡＧＧＴＡＣＴＣＣＴＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９３：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の３２１０〜３２４８）
ＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＧＣＴＧＣＣＧＧＴＴＡＡＣＧＣＧＧＴＡＧＣＡＧＴＡＧＡＡＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９４：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の３６５５〜３６９４）
ＧＴＴＡＴＴＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＴＧＡＡＣＧＴＧＣＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９５：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４１４６〜４２１３）
ＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９６：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４２２１〜４２８４）
ＣＡＣＧＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＧＴＣＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＣＧＣＧＡＧＴＧＡＣＴＣＡＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡ
（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９７：Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１の４４９５〜４５４６）から選択される配列中に含まれる。
【０２０１】
ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体は、全ヒトトランスクリプトームに関してＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とのみ、選択的にハイブリダイズすることができる。
【０２０２】
配列Ｎｏ．７５、７７、７８、７９、８１、８３、８４、８６〜９７に含まれる配列を有する前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、５’末端では２個〜５個、好ましくは、３個〜５個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニットを有し、ＬＮＡ断片Ａ−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片Ｂの型のギャップマーの構造を好ましくは有し、ＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）として、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において、好ましくは章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものが特に適しており、ヌクレオチド間結合として、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」において開示されるものが特に適している。好ましくは、前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つのＬＮＡ断片の間において、少なくとも６個、より好ましくは、少なくとも７個、最も好ましくは少なくとも８個のＤＮＡユニットのような非ＬＮＡユニットを含む。非ＬＮＡユニット、およびＬＮＡユニットのための適切な核酸塩基は、章「核酸塩基」で開示される。前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドの適切な例は、式（Ｓ１）〜（Ｓ７）、（Ｓ１Ａ）〜（Ｓ４Ａ）、（Ｓ６Ａ）および（Ｓ７Ａ）によって表される。
【０２０３】
Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１は、ヒトトランスフォーミング増殖因子、ベータ受容体ＩＩ（ＴＧＦ−ＲＩＩ）、転写バリアント（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔ）２のｃＤＮＡ（ｃＤＮＡ）（５’−３’アンチセンス−配列）のアンチセンス鎖を表す。
【０２０４】
Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２は、ヒトトランスフォーミング増殖因子、ベータ受容体ＩＩ（７０／８０ｋＤａ）（ＴＧＦ−ＲＩＩ）、転写バリアント（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔ）２のｃＤＮＡ（５’−３’センス−配列）のセンス鎖を表す。代替的に、ヒトトランスフォーミング増殖因子、ベータ受容体ＩＩ（ＴＧＦ−ＲＩＩ）、転写バリアント（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔ）２のｍＲＮＡの配列（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３）を表すためのＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２の配列と見なすこともできるが、ＤＮＡコー
ドで書かれており、すなわち、Ｇ、Ｃ、Ａ、Ｔコードで表されており、ＲＮＡコードではない。
【０２０５】
Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３は、ヒトトランスフォーミング増殖因子、ベータ受容体ＩＩ（ＴＧＦ−ＲＩＩ）、転写バリアント（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔ）２のｍＲＮＡ配列（５’−３’センス−配列）を表す。Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３で示されるｍＲＮＡは、ＲＮＡコードで書かれており、すなわちＧ、Ｃ、Ａ、Ｕコードで表されていることは明らかである。
【０２０６】
本願で使用される「コーディングＤＮＡ鎖」は、ｍＲＮＡと同じであり（ＤＮＡコードで記載されているものは除く）、タンパク質翻訳のために使用されるコドンを包含するＤＮＡ鎖に関することは理解されるだろう。したがって、用語「コーディングＤＮＡ鎖」、「センスＤＮＡ鎖」、および「非鋳型ＤＮＡ鎖」を、交換可能に使用することができる。さらに、本願に使用される「非コーディングＤＮＡ鎖」は、「コーディングＤＮＡ鎖」と相補的であり、ｍＲＮＡへの転写のための鋳型として機能するＤＮＡ鎖に関する。したがって、用語「非コーディングＤＮＡ鎖」、「アンチセンスＤＮＡ鎖」、および「鋳型ＤＮＡ鎖」を交換可能に使用することができる。
【０２０７】
用語「アンチセンス−オリゴヌクレオチド」は、リボ核酸（ＲＮＡ）もしくはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、またはホスホロチオエート結合のような修飾ヌクレオチド間結合を有するアンチセンス−オリゴヌクレオチド、および／または５−メチルシトシンのような一つ以上の修飾核酸塩基、および／またはβ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡのようなＬＮＡなどの一つ以上の修飾ヌクレオチドなどのようなそれらのミメティクス（ｍｉｍｅｔｉｃｓ）もしくはバリアント（ｖａｒｉａｎｔｓ）のオリゴマーまたはポリマーに関する。用語「アンチセンス−オリゴヌクレオチド」は、天然由来の核酸塩基、糖および共有結合性ヌクレオチド間（骨格）結合、並びに同様に機能する非天然由来部分を有するオリゴヌクレオチドから構成されるオリゴヌクレオチドを含む。当該修飾または置換オリゴヌクレオチドは、所望の特性、例えば細胞内取込みの向上、核酸標的への親和性の向上、ヌクレアーゼの存在における安定性の増加などのために、天然型よりもより好ましい。アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、標的核酸にハイブリダイズし、当該発現を阻害する短い触媒的ＲＮＡまたは触媒的オリゴヌクレオチドである。
【０２０８】
用語「ヌクレオシド」は、当業者によく知られており、リボース、デオキシリボースのような、またはＬＮＡのような修飾、もしくはロックドリボース、または修飾、もしくはロックドデオキシリボースのような、ペントース糖部分に関し、詳細に以下に開示される。核酸塩基は、グリコシド炭素原子（ペントースの１’位）に連結され、ヌクレオチド間結合は、ヌクレオシドの３’酸素原子または硫黄原子、好ましくは３’酸素原子と隣接のヌクレオシドの５’酸素原子または硫黄原子、好ましくは５’酸素原子との間で形成されるが、ヌクレオシド間結合は、ヌクレオシドに属さない（図２参照）。
【０２０９】
用語「ヌクレオチド」は、当業者によく知られており、リボース、デオキシリボースのような、またはＬＮＡのような修飾、もしくはロックドリボース、または修飾、もしくはロックドデオキシリボースのような、ペントース糖部分に関し、詳細を以下に開示される。核酸塩基は、グリコシド炭素原子（ペントースの１’位）に結合され、ヌクレオチド間結合は、ヌクレオチドの３’酸素原子または硫黄原子、好ましくは３’酸素原子と隣接のヌクレオチドの５’酸素原子または硫黄原子、好ましくは５’酸素原子との間で形成される、一方、ヌクレオチド間結合は、ヌクレオチドの一部である（図２参照）。
核酸塩基
用語「核酸塩基」は、本願において「Ｂ」と略され、５個の標準的なヌクレオチド塩基アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ
）、並びにそれらの修飾体、もしくは類似体、または相補鎖における塩基とワトソン−クリック塩基対を形成するための能力を有する類似体に関する。修飾核酸塩基は、５−メチルシトシン（Ｃ＊）、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−メチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、７−デアザキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチルアデニン、６−メチルグアニン、６−エチルアデニン、６−エチルグアニン、２−プロピルアデニン、２−プロピルグアニン、６−カルボキシウラシル、５−ハロウラシル、５，６−ジヒドロウラシル、５−ハロシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アザウラシル、６−アザシトシン、６−アザチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）４−チオウラシル、８−フルオロアデニン、８−クロロアデニン、８−ブロモアデニン、８−ヨードアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−フルオログアニン、８−クロログアニン、８−ブロモグアニン、８−ヨードグアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、５−クロロシトシン、５−ヨードシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、７−デアザ−８−アザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、２−チオウラシル、２−チオチミン、および２−チオシトシン、などのような、他の合成および天然核酸塩基を含み、好ましいのは、５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニン置換基であり、これらの修飾は、核酸二重鎖の安定性の増加を明らかに示している。
【０２１０】
本発明の好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、核酸塩基類似体を含むことができる。アンチセンス−オリゴヌクレオチドの１個のヌクレオチドユニットの核酸塩基だけを、核酸塩基の類似体によって置き換えることが可能であり、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドの２個、３個、４個、５個の核酸塩基、もしくは全ての核酸塩基でさえも、５−メチルシトシン、またはＮ６−メチル−アデニン、もしくは２−アミノアデニンのような核酸塩基の類似体によって、置き換えられることが可能である。好ましくは、ＬＮＡユニットは、５−メチルシトシンなどの核酸塩基類似体に連結されてもよい。
【０２１１】
ヌクレオチドまたはモノマーの配列に関する場合、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、またはＵのような塩基の配列に関することを認識されるだろう。しかしながら、表３〜表８に開示される特定の例を除いて、文字コードＡ、Ｔ、Ｇ、ＣおよびＵによるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの表示は、前記アンチセンス−オリゴヌクレオチドが、本願に開示されるような任意の核酸塩基、本願に開示されるような任意の３’末端基、本願に開示されるような任意の５’末端基、および本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合（ヌクレオチド間架橋とも呼ばれる）を含んでもよいことは理解されなければならない。ヌクレオチドＡ、Ｔ、Ｇ、ＣおよびＵは、ＬＮＡヌクレオチド、または好ましくはＤＮＡヌクレオチドのような非ＬＮＡヌクレオチドであることも理解されなければならない。
【０２１２】
表４〜表９に開示されるような特定の実施形態に関してのみ、核酸塩基、ＬＮＡユニット、非ＬＮＡユニット、ヌクレオチド間結合、および末端基は、表２の前の章「説明（Ｌｅｇｅｎｄ）」において概要としてさらに明記される。
【０２１３】
本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチド、およびアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩は、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡである標的に相補的であると証明されており、すなわち、所望の阻害効果を与えるために、かなり十分に、並びに十分な特異性、および特に選択性でハイブリダイズする。
【０２１４】
用語「塩」は、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの生理学的および／または薬学的に許容される塩に関する。アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アデニン、グアニン、チミン、シトシンまたはそれらの誘導体のような核酸塩基を含み、核酸塩基は、塩基性であり、塩化物またはメシル酸塩のような塩を形成する。ヌクレオチド間結合は、ナトリウム塩、リチウム塩、またはカリウム塩のような塩を形成する帯電した酸素原子または硫黄原子を好ましくは含む。したがって、薬学的に許容できる塩基付加塩は、無機塩基または有機塩基と共に形成される。適切な有機塩基および無機塩基の例は、例えばアルミニウム等の金属イオン由来、ナトリウムまたはカリウムのようなアルカリ金属イオン由来、カルシウムまたは、マグネシウムなどのアルカリ土類金属イオン由来、またはアミン塩イオン由来、またはアルカリ、もしくはアルカリ土類の水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩由来、の塩基である。例には、水性ＬｉＯＨ、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、炭酸カリウム、アンモニア、および炭酸水素ナトリウム、アンモニウム塩、第一級、第二級、および第三級アミン（例えば、テトラアルキルアンモニウム水酸化物；メチルアミンのような低級アルキルアミン；ｔ−ブチルアミン；プロカイン；エタノールアミン；ジベンジルアミンおよびＮ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンのようなアリールアルキルアミン；Ｎ−エチルピペリジンのような低級アルキルピペリジン；シクロヘキシルアミン、またはジシクロヘキシルアミンのようなシクロアルキルアミン；モルホリン；グルカミン；Ｎ−メチル−およびＮ，Ｎ−ジメチルグルカミン；１−アダマンチルアミン；ベンザチン；または、アルギニン、リシン、オルニチンのようなアミノ酸由来の塩；またはもともと中性のアミド；または酸性アミノ酸；クロロプロカイン；クロリン；プロカインなど）、または同様のものを含む。
【０２１５】
アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、塩基性であるけれども、有機酸および無機酸と薬学的に許容される塩を形成する。このような酸添加塩の形成に適した酸の例は、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ぎ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ酸、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、Ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、  トルイル酸、（ｏ、ｍ、ｐ）−トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、および他の鉱物、または当業者によく知られているカルボン酸である。塩は、従来の方法で塩を生産するために、遊離塩基を十分な量の所望の酸と接触させることによって調製される。
【０２１６】
本発明において、「ハイブリダイゼーション」は、核酸ハイブリダイゼーションを意味し、ここで、一本鎖核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）は、非常に類似または相補的な配列を有する他の一本鎖と相互作用する。したがって、相互作用は、特定の核酸塩基間（塩基対）の水素結合によって起こる。
【０２１７】
本願で使用される、用語「相補性」（ＤＮＡおよびＲＮＡ塩基対相補性)は、２個の核酸間の正確な対のための能力に関する。塩基対におけるヌクレオチドは、それらの形が水素結合によって共に結合することができる場合に、相補性である。したがって、アデニンおよびチミジン(またはウラシル)は２つの水素結合の対を形成し、シトシン−グアニンの対は、３つの水素結合を形成する。本願に使用される「相補的な配列」は、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列を意味し、それらが互いに逆平衡に並べられる場合に、配列中の各位置でヌクレオチド塩基は、多くは鏡で見ているように、物質の逆を見ているように、相補的になるようなものである。
【０２１８】
本願に使用される用語「明確にハイブリダイズ可能」は、安定および特異的な結合が、アンチセンス−オリゴヌクレオチドとＤＮＡまたはＲＮＡ標的との間で起こるような、標的配列に対するアンチセンス−オリゴヌクレオチドの十分な程度の相補性、または正確な塩基対を示す。本発明に係るアンチセンス−オリゴヌクレオチドの配列は、明確にハイブリダイズ可能であるために当該標的核酸の配列に１００％相補的である必要はないが、１００％の相補性が好ましい。したがって、「１００％相補性」は、アンチセンス−オリゴヌクレオチドがミスマッチすることなく、標的の完璧な、または完全な長さにわたってハイブリダイズすることを意味する。言い換えると、本発明内で、アンチセンス化合物は、標的ＤＮＡまたはＲＮＡ分子に対するアンチセンス化合物の結合が、生理学的または病理学的条件の下で起こるが、非標的配列に対するアンチセンス−オリゴヌクレオチドの非特異的結合が、高く起こりそうもない、または不可能でさえある場合に、明確にハイブリダイズ可能であると定義される。
【０２１９】
したがって、本発明は、好ましくはアンチセンスオリゴヌクレオチドに関し、ここでアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ  ＲＩＩをコードするｍＲＮＡに１００％の相補性で結合し、完全なヒトのトランスクリプトームにおける任意の他の領域に結合しない。さらに好ましくは、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに関し、ここでアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ  ＲＩＩをコードするｍＲＮＡの完全な長さにわたって１００％相補性を有し、オフターゲット効果を有しない。代替的に、本発明は、好ましくは、ＴＧＦ  ＲＩＩをコードするｍＲＮＡに対して１００％相補性を有するが、ヒトのトランスクリプトームの他のｍＲＮＡに対して相補性はないアンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。したがって、用語「ヒトのトランスクリプトーム」は、人間体における転写物の全セットに関し、全ての細胞型および環境条件（任意に与えられた時間で）の転写物を意味する。
【０２２０】
特に、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子に、またはｍＲＮＡに結合する領域に関して、特異的であるという共通点を有する。本発明にしたがって、ヒトのトランスクリプトーム内で、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの完全な長さにわたってＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡとのみ１００％相補性を有する。さらに、本発明の目的は、サル以外の哺乳類のトランスクリプトーム内で交差反応性なしのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを見つけることであり、特に、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、大型類人猿のトランスクリプトームとのみ交差反応性を有する。このことはオフ効果を避けるだろう。したがって、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子、またはｍＲＮＡとのハイブリダイゼーションに関して、非常に特異的である。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子に対して、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡに対して、１００％の相補性でそれらの完全な長さにわたって結合し、完全なヒトのトランスクリプトームにおける任意の他の領域に結合しない。このことは、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ミスマッチをすることなく標的（ＴＧＦ−ＲＩＩ  ｍＲＮＡ）とハイブリダイズすることを意味する。
【０２２１】
本願に使用される用語「ｍＲＮＡ」は、イントロンを含むｍＲＮＡ（Ｐｒｅ−ｍＲＮＡとも呼ばれる）並びに任意のイントロンを含まないｍＲＮＡの両方を含んでもよい。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｐｒｅ−ｍＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡと、結合またはハイブリダイズすることができる。このことは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、Ｐｒｅ−ｍＲＮＡのイントロン領域で、またはイントロン領域内で、結合またはハイブリダイズすることができ、またはＰｒｅ−ｍＲＮＡの、オーバーラッピングするイントロン−エキソン領域で、結合またはハイブリダイズすることができ、または
Ｐｒｅ−ｍＲＮＡのエキソン領域で、またはエキソン領域内で、およびｍＲＮＡのエキソン領域で結合、またはハイブリダイズすることができる、ことを意味する（図１参照）。好ましくは、Ｐｒｅ−ｍＲＮＡおよびｍＲＮＡと結合、またはハイブリダイズすることができるアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。Ｐｒｅ−ｍＲＮＡに対するアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の結合、またはハイブリダイゼーションは、５’キャップ形成を阻害し、ｍＲＮＡを得るためのＰｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングを阻害し、Ｐｒｅ−ｍＲＮＡを切断するＲＮａｓｅ  Ｈを活性化する。ｍＲＮＡに対するアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の結合、またはハイブリダイゼーションは、ｍＲＮＡを切断するＲＮａｓｅＨを活性化し、リボソームサブユニットの結合を阻害する。
【０２２２】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個〜２８個以下、好ましくは、２４個以下、より好ましくは２０個以下のヌクレオチドからなり、結果的に、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２０個、または１１個〜１９個、または１２個〜１９個、または１３個〜１９個、または１３個〜１８個のヌクレオチド、より好ましくは、１４個〜１８個のヌクレオチドからなり、ここで、これらのヌクレオチドの少なくとも２個、好ましくは、３個は、ロックド核酸（ＬＮＡ）である。より短いアンチセンス−オリゴヌクレオチド、すなわち、１０個未満のヌクレオチドを有するアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、可能でもあるが、より短いアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションが、もはや十分に強くなく、選択性が低下する、または失われるだろうという危険性がより高い。非選択的アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ヒトのトランスクリプトームにおいて望まない領域に対して、およびＴＧＦ−ＲＩＩよりも他のタンパク質をコードする望まないｍＲＮＡに対して結合することによって、望まない副作用を引き起こすという危険性を有する。２０個より多いヌクレオチドを有するより長いアンチセンス−オリゴヌクレオチドも可能であるが、長さの更なる増加は、当該アンチセンス−オリゴヌクレオチドの合成を、選択性の増加、またはハイブリダイゼーションの強さの増加、または分解に関してより良い安定性の増加という任意の更なる利益はなく、さらにより複雑で高価にする。
【０２２３】
したがって、本発明は、１０個〜２０個のヌクレオチドからなるアンチセンス−オリゴヌクレオチドに関し、ここで少なくとも２個のヌクレオチド、好ましくは、３’および５’末端のヌクレオチドはＬＮＡである。したがって、少なくとも３’末端のヌクレオチドはＬＮＡであり、５’末端のヌクレオチドもＬＮＡであると好ましい。２個より多いＬＮＡが存在する場合、更なるＬＮＡは、本願に開示されるようなギャップマーの場合と同様に、３’または５’末端に結合されると好ましい。
【０２２４】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドに存在する一つのヌクレオチド骨格を、次の一般式（Ｂ１）および（Ｂ２）によって表すことができる。
【０２２５】
【化１】
0006832285.tif 000002
【０２２６】
式中、
Ｂは核酸塩基を表し、
ＩＬ’は、−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−を表し、
Ｒは、−Ｈ、−Ｆ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３を表し、およびＲ＃は−Ｈを表し、または、ＲおよびＲ＃は、共に、結合−Ｒ＃−Ｒ−を形成し、−Ｒ＃−Ｒ−は、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）−から選択され、
Ｘ’は、＝Ｏ、または＝Ｓを表し、
Ｘ−は、−Ｏ−、−ＯＨ、−ＯＲＨ、−ＮＨＲＨ、−Ｎ（ＲＨ）２、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＲＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＲＨ、−ＢＨ３−、−ＲＨ、−ＳＨ、−ＳＲＨ、または−Ｓ−を表し、
Ｘ’’は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲＨ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−を表し、
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲＨ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり、
ＲＨは、水素、およびＣ１〜４−アルキルから選択され、好ましくは、−ＣＨ３、または−Ｃ２Ｈ５であり、最も好ましくは、−ＣＨ３である。
【０２２７】
好ましくは、Ｘ−は、−Ｏ−、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＢＨ３−、−ＣＨ３、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、または−Ｓ−を表し、より好ましくは、−Ｏ−、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＢＨ３−、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、または−Ｓ−を表す。
【０２２８】
ＩＬ’は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−、−Ｓ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＲＨ）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＨ）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＲＨ）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＲＨ）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｎ（ＲＨ）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、を表し、ここでＲＨは、水素およびＣ１〜４−アルキルから選択される。
【０２２９】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、
または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｃ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２３０】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２３１】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２３２】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２］−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−である。
【０２３３】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２３４】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＲＨ）−Ｏ−は，好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２３５】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＲＨ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＨ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＨ−である。
【０２３６】
基−Ｎ（ＲＨ）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−は、好ましくは、−ＮＨ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、または−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−ＮＨ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−である。
【０２３７】
さらにより好ましくは、ＩＬ’は、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−を表し、さらにより好ましくは、ＩＬ’は、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−、または−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−を表し、最も好ましくは、ＩＬ’は、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−、または−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−を表す。
【０２３８】
好ましくは、Ｙは、−Ｏ−を表し、
好ましくは、Ｂは、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、Ｕから選択される標準的な核酸塩基を表し、
好ましくは、ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（Ｓ−）−、または−Ｏ−Ｐ（＝Ｓ）（Ｓ−）−を表す。
【０２３９】
Ｂ、Ｙ、およびＩＬ’の上記定義は、ｂ１〜ｂ９にも適用する。
したがって、次の一般式（Ｂ３）〜（Ｂ６）が好ましい：
【０２４０】
【化２】
0006832285.tif 000003
【０２４１】
式中、
Ｂは、核酸塩基を表し、好ましくは、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、Ｕを表す。
Ｒは、−Ｈ、−Ｆ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２を表し、好ましくは、−Ｈを表す。
【０２４２】
Ｒ＊は、下記に定義されるような部分−Ｒ＃−Ｒ−を表し、例えば、好ましくは、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−ＮＲｃ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｓ−、および−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−から選択され、ここで、置換基Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、本願に定義される通りの意味を有する。より好ましくは、Ｒ＊は、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−から選択され、より好ましくは、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−から選択され、さらにより好ましくは、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−から選択され、さらにより好ましくは、−ＣＨ２−Ｏ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり、最も好ましくは、−ＣＨ２−Ｏ−である。
【０２４３】
非ＬＮＡユニットである好ましいヌクレオチドの例は、次の通りである：
【０２４４】
【化３−１】
0006832285.tif 000004
【０２４５】
【化３−２】
0006832285.tif 000005
【０２４６】
ヌクレオチド間結合（ＩＬ）
本願に記述されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドのモノマーは、ヌクレオチド間結合を介して共に結合される。適切に、各モノマーは、３’隣接モノマーに、ヌクレオチド間結合を介して連結される。本発明との関連で、オリゴマーの末端における５’モノマーは、５’末端基を含んでも、または含まなくてもよいが、５’ヌクレオチド間結合を含まないことを当業者は理解するだろう。用語「ヌクレオチド間結合」は、２個のヌクレオチド、２個のＬＮＡのような２個のヌクレオチド類似体、並び１個のヌクレオチドおよび１個のＬＮＡのような１個のヌクレオチド類似体を共に共有結合することができる基を意味するように意図される。特定の好ましい例は、リン酸基およびホスホロチオエート基を含む。
【０２４７】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオチド、またはその連続したヌクレオチド配列は、ヌクレオチド間結合を介して共に結合される。適切に各ヌクレオチドは、ヌクレオチド間結合を介して５’位から３’位に連結される。
【０２４８】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、さまざまな異なる方法によって修飾することができる。骨格内の修飾は可能であり、当該アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間骨格において、ホスフェート基（リン酸ジエステル基とも呼ばれる）が部分的に、または完全に他の基によって置き換えられたアンチセンス−オリゴヌクレオチドに関する。好ましい修飾アンチセンス−オリゴヌクレオチドに骨格は、例えば、通常の３’−５’結合を有する、ホスホロチオエート；キラルホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；ホスホトリエステル；アミノアルキルホスホトリエステル；３’−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含む、メチル、エチル、Ｃ３〜Ｃ１０−アルキルホスホネート；；ホスフィネート；３’−アミノホスホロアミデート、およびアミノアルキルホスホロアミデートを含むホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、；チオノアルキルホスホネート；チオノアルキルホスホトリエステル；並びにボラノホスフェート；これらの２’−５’結合類似体、および隣接のヌクレオチドユニットの対が３’−５’から５’−３’、または２’−５’から５’−２’に連
結されて極性反転を有するもの、を含む。それらの様々な塩、混合塩、および遊離酸も含まれ、更なる詳細において本願に開示される。
【０２４９】
適切なヌクレオチド間結合は、ＷＯ２００７／０３１０９１に列挙されるものを含み、例えば、ＷＯ２００７／０３１０９１の３４ページの最初の段落に列挙されるヌクレオチド間結合を含む（参照により本願に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、当該通常のホスホジエステルから、ヌクレアーゼ攻撃により抵抗性を有するホスホロチオエート、またはボラノホスフェートのようなものに、ヌクレオチド間結合を修飾すると好ましく、ホスホロチオエート、またはボラノホスフェートの２つは、ＲＮａｓｅＨ媒介切断に受け入れられ、標的遺伝子の発現を減少させるアンチセンス阻害のルートも可能にする。
【０２５０】
ヌクレオチド間結合は、以下の式（ＩＬ’Ｙ）に示されるように、リボース部分の３’炭素原子に結合される基である基ＩＬ’、および隣接のリボース部分の５’炭素原子に結合される基である基Ｙからなり、
【０２５１】
【化４】
0006832285.tif 000006
【０２５２】
ヌクレオチド間結合ＩＬは、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。ＩＬ’は−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−を表すので、ＩＬは、−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−によって表され、ここで置換基Ｘ−、Ｘ’、Ｘ’’、およびＹは、本願に開示される意味を有する。
【０２５３】
ヌクレオチド間結合ＩＬ＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−は、好ましくは、次からなる群から選択される：
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＲＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＲＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＲＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＲＨ−、−Ｎ（ＲＨ）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、を表し、ここでＲＨは、水素およびＣ１〜４−アルキルから選択される。
【０２５４】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｃ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２５５】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２５６】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２５７】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２］−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−である。
【０２５８】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＲＨ）−Ｏ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２５９】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＲＨ）−は、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ２Ｈ５）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−である。
【０２６０】
基−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＲＨ−は、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＨ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−であり、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−ＮＨ−である。
【０２６１】
基−ＮＲＨ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−は、好ましくは、−ＮＨ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、または−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−であり、最も好ましくは、−ＮＨ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−である。
【０２６２】
さらにより好ましくは、ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−を表し、さらにより好ましくは、ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−を表し、最も好ましくは、ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−を表す。
【０２６３】
したがって、ＩＬは、好ましくは、ホスフェート基（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−）、ホスホロチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−）、またはホスホロジチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−）である。
【０２６４】
ヌクレオチドユニット、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、互いにヌクレオチド間結合によって連結されるので、一つのアンチセンス−オリゴヌクレオチド内に、異なるヌクレオチド間結合が存在することができる。ＬＮＡユニットは、ホスフェート基ではないヌクレオチド間結合によって好ましくは連結される。ＬＮＡユニットは、基ＩＬによって互いに連結され、基ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−から好ましくは選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択される。
【０２６５】
非ＬＮＡユニットは、基ＩＬによって互いに連結され、基ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ
−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−から好ましくは選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択される。
【０２６６】
非ＬＮＡユニットは、基ＩＬによってＬＮＡユニットに連結され、基ＩＬは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨＲＨ）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＲＨ）２］−Ｏ−から好ましくは選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択される。
【０２６７】
本願に使用される用語「ＬＮＡユニット」は、ロックされたヌクレオチド、すなわち、二環性の構造、特に二環性のリボース構造、より特に一般式（ＩＩ）に示されるような二環性のリボース構造に関する。結合は、３’−エンド（ノース）配置においてリボースを「ロックする」。ＬＮＡヌクレオチドのリボース部分は、２’酸素および４’炭素を連結する別の架橋で修飾される。代替的に、ＬＮＡのために使用される用語は、二環性ヌクレオチドまたは架橋ヌクレオチドであり、したがって、ＬＮＡユニットの用語は、二環性ヌクレオチドユニット、または架橋ヌクレオチドユニットである。
【０２６８】
本願に使用される用語「非ＬＮＡユニット」は、ロックされていないヌクレオチド、すなわち、二環性の糖部は有さない、特に二環性のリボース構造ではないもの、より特に一般式（ＩＩ）に示されるような二環性のリボース構造ではないものに関する。非ＬＮＡユニットは、最も好ましくはＤＮＡユニットである。
【０２６９】
本願に使用される用語「ＤＮＡユニット」は、糖として２−デオキシリボースを含むヌクレオチドに関する。したがって、ヌクレオチドは、核酸塩基および２−デオキシリボースから構成される。
【０２７０】
本願に使用される用語「ユニット」は、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの、部分（ｐａｒｔ）、断片、部分（ｍｏｉｅｔｙ）に関する。したがって、「ユニット」は、完全な分子ではなく、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの他の部分（ｐａｒｔ）、断片、部分（ｍｏｉｅｔｙ）に共有結合するための位置を少なくとも一つ有するアンチセンス−オリゴヌクレオチドの、部分（ｐａｒｔ）、断片、部分（ｍｏｉｅｔｙ）である。例えば、一般構造（Ｂ１）〜（Ｂ６）は、基ＹおよびＩＬ’、または、−Ｏ−および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−それぞれを通して、共有結合されることができるので、ユニットである。好ましくは、ユニットは、ペントース構造、ペントース構造に連結される核酸塩基、５’ラジカル基、およびＩＬ’ラジカル基からなる。
【０２７１】
本願に使用される用語「構成要素（ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｌｏｃｋ）」、または「モノマー」は、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの合成に使用される分子、特にヌクレオシドに関する。例は、一般式（Ｉ）のＬＮＡ分子であり、式中、Ｙは５’末端基、およびＩＬ’は３’末端基を表す。
【０２７２】
さらに、純粋なジアステレオマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドが好ましい、好ましいのは、次に示されるように、Ｓｐ−、およびＲｐ−ジアステレオマーである。
【０２７３】
【化５】
0006832285.tif 000007
【０２７４】
本願に提供されるように適切な硫黄（Ｓ）を含むヌクレオチド間結合は好ましい。
好ましくは、少なくとも５０％のヌクレオチド間結合がホスホロチオエート基である骨格におけるホスホロチオエート部分である。さらに好ましくは、ＬＮＡユニットが存在する場合、ＬＮＡユニットは、ヌクレオチド間結合としてホスホロチオエートを介して結合される。最も好ましくは、完全なホスホロチオエート骨格であり、すなわち、最も好ましくは、全てのヌクレオチドユニットおよび（存在する場合）ＬＮＡユニットが、次に定義されるホスホロチオエート基：−Ｏ−Ｐ（Ｏ，Ｓ）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｐ（Ｏ−）（Ｓ）−Ｏ−と同義である−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、を介して互いに連結される。
【０２７５】
アンチセンス−オリゴヌクレオチドがギャップマーである場合、ＬＮＡ領域は、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択されるヌクレオチド間結合を有し、非ＬＮＡ領域は、真ん中部分で、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択されるヌクレオチド間結合を有し、ＬＮＡ領域は、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択されるヌクレオチド間結合を介して非ＬＮＡ領域に連結されることが好ましい。
【０２７６】
全てのヌクレオチド間結合が１０マーでは９個あり、２０マーでは１９個ある場合、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択されるとさらにより好ましい。さらにより好ましくは、全てのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−）またはホスホロジチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−）である。
ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標））
アンチセンス−オリゴヌクレオチドにおいて、一般式（Ｂ１）または（Ｂ２）のいくつかのヌクレオチドは、いわゆるＬＮＡ（ロックド核酸）によって置き換えられると特に好ましい。略語ＬＮＡは登録商標であるが、本願において用語「ＬＮＡ」は、もっぱら用語説明で使用される。
【０２７７】
好ましくは、末端のヌクレオチドはＬＮＡによって置き換えられ、より好ましくは、３’末端では最後の１〜４個のヌクレオチド、および／または５’末端では最後の１〜４個のヌクレオチドはＬＮＡによって置き換えられる。３’末端および５’末端でそれぞれＬＮＡによって置き換えられた末端ヌクレオチドを少なくとも有するとさらに好ましい。
【０２７８】
本願に使用される用語「ＬＮＡ」は、二環性ヌクレオチド類似体に関し、「ロックド核酸」として知られる。ＬＮＡモノマーに関してもよく、または、「ＬＮＡアンチセンス−オリゴヌクレオチド」、もしくは「ＬＮＡを含むアンチセンス−オリゴヌクレオチド」という文脈において使用される場合は、ＬＮＡは、当該二環性ヌクレオチド類似体を一つ以上含むオリゴヌクレオチドに関する。ＬＮＡヌクレオチドは、リボース糖環のＣ２’およびＣ４’の間の（橋のような）リンカー基の存在によって特徴づけられ、例えば、下記に記述されるようなビラジカルＲ＃−Ｒとして示される。本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにおいて使用されるＬＮＡは、好ましくは、一般式（Ｉ）の構造を有し、
【０２７９】
【化６】
0006832285.tif 000008
【０２８０】
式中、全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置、またはＳ配置のどちらかで発見されてもよく、
式中、Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｒ６Ｒ７）−、から選択され、好ましくは、Ｘは、−Ｏ−、であり、
Ｂは、水素、任意に置換されたＣ１−４−アルコキシ、任意に置換されたＣ１−４−アルキル、任意に置換されたＣ１−４−アシルオキシ、核酸塩基、および核酸塩基類似体から選択され、好ましくは、Ｂは、核酸塩基、または核酸塩基類似体であり、最も好ましくは、標準核酸塩基である。
【０２８１】
Ｙは、一般式（Ｉ）の当該部分が本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡユニットである場合には隣接ヌクレオチドに対する、または一般式（Ｉ）の当該部分が本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドを合成するためのモノマーまたは構成要素である場合には５’末端基に対するヌクレオチド間結合の部分を表す。５’炭素原子は、任意に、置換基Ｒ４およびＲ５を含む。
【０２８２】
ＩＬ’は、一般式（Ｉ）の当該部分が本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡユニットである場合には隣接ヌクレオチドに対する、または一般式（Ｉ）の当該部分が本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドを合成するためのモノマーまたは構成要素である場合には３’末端基に対するヌクレオチド間結合の部分を表す。
【０２８３】
Ｒ＃およびＲは共に、−Ｃ（ＲａＲｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−Ｎ（Ｒｃ）−、および＞Ｃ＝Ｚから選択される１個〜４個の基または原子からなる二価のリンカーを表し、ここで、Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、および−Ｎ（Ｒａ）−から選択され、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、互いに独立して、水素、任意に置換されたＣ１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ２−６−アルケニル、任意に置換されたＣ２−６−アルキニル、ヒドロキシ、任意に置換されたＣ１−１２−アルコキシ、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ１−１２−アルコキシカルボニル、Ｃ１−１２−
アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ１−６−アルキレニル−アミノカルボニル、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）アミノ−Ｃ１−６−アルキレニル−アミノカルボニル、Ｃ１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ１−６−アルカノイルオキシ、スルホノ、Ｃ１−６−アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ１−６−アルキルチオ、ハロゲンから選択され、ここで、アリールおよびヘテロアリールは、任意に置換されてもよく、ここで２つのジェミナルな置換基ＲａおよびＲｂは共に、任意に置換されたメチレン（＝ＣＨ２）を表してもよく、この場合において、全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよく、および
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、独立して、水素、任意に置換されたＣ１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ２−６−アルケニル、任意に置換されたＣ２−６−アルキニル、ヒドロキシ、Ｃ１−１２−アルコキシ、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ１−１２−アルコキシカルボニル、Ｃ１−１２−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ１−６−アルキル−アミノカルボニル、モノ−およびジ−（Ｃ１−６−アルキル）アミノ−Ｃ１−６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ１−６−アルカノイルオキシ、スルホノ、Ｃ１−６−アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ１−６−アルキルチオ、ハロゲンから選択され、ここで、アリールおよびヘテロアリールは、任意に置換されてもよく、ここで２つのジェミナルな置換基は共に、オキソ、チオキソ、イミノ、または任意に置換されたメチレンを示してもよい。
【０２８４】
ここで、ＲＮは、水素およびＣ１−４−アルキルから選択され、ここで２個の隣接（非ジェミナル）置換基は、結果的に二重結合になる更なる結合を示してもよく、ＲＮは、ビラジカルに存在し、ビラジカルに関与しない場合、水素およびＣ１−４−アルキル、並びにそれらの塩基性塩および酸付加塩から選択される。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。
【０２８５】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは共に、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲａＲｂ）−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−ＮＲｃ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｓ−、および−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−からなる群から選択される基からなるビラジカルを表し、ここで、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、任意に独立して選択されてもよい。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、ＲａおよびＲｂは、水素、およびＣ１−６−アルキル（例えば、メチル）からなる群から任意に独立して選択されてもよく、好ましくは、水素である。
【０２８７】
好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニルまたは置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキル、から選択される。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどち
らかで発見されてもよい。
【０２８８】
好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニルまたは置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキル、から選択される。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素である。
【０２８９】
好ましい実施形態において、Ｒ４およびＲ５は、互いに独立して、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、および−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択される。適切ないくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５のどちらかは水素であり、一方、他の基（Ｒ４またはＲ５それぞれ）は、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ１−６−アルキル、置換されたＣ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、または置換されたアシル（−Ｃ（＝Ｏ）−）から成る群から選択され、ここで、各置換基は、独立してハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、−ＯＪ１、−ＳＪ１、−ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ３、−ＣＯＯＪ１、−ＣＮ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ１Ｊ２、または−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｘ）Ｎ（Ｈ）Ｊ２、から選択される置換基を用いてモノ、またはポリ置換され、ここで、Ｘは、ＯまたはＳであり、Ｊ１およびＪ２それぞれは、独立して、−Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アミノアルキル、置換されたＣ１−６−アミノアルキル、または保護基である。いくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５それぞれは、置換されたＣ１−６−アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５それぞれは、置換されたメチレンであり、ここで好ましい置換基は、独立して−Ｆ、−ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ３、−ＣＮ、−ＯＪ１、−ＳＪ１、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ１Ｊ２、または−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｊ２から選択される一つ以上の基を含む。いくつかの実施形態において、Ｊ１およびＪ２それぞれは、独立して、−Ｈ、またはＣ１−６−アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５のどちらかは、メチル、エチル、またはメトキシメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５のどちらかは、メチルである。更なる実施形態において、Ｒ４またはＲ５のどちらかは、エチレニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５のどちらかは、置換されたアシルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４またはＲ５のどちらかは、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２である。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。当該５’修飾二環性ヌクレオチドは、ＷＯ２００７／１３４１８１  Ａに開示されており、当該全体の参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、Ｂは、例えばプリン、もしくはピリジン、または置換されたプリン、もしくは置換されたピリミジンなどの、例えば本願において言及される核酸塩基のなどの、例えば、アデニン、シトシン、チミン、アデニン、ウラシル、および／または例えば５−チアゾロ−ウラシル、２−チオ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２’チオ−チミン、５−メチルシトシン、５−チオゾロ−シトシン、５−プロピニル−シトシン、および２，６−ジアミノプリンなどの、修飾された、または置換された核酸塩基からなる群から選択される核酸塩基などの、核酸塩基類似体、および天然に存在する核酸塩基を含む、核酸塩基である。
【０２９１】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは共に、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲｃＲｄ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲｃＲｄ）−Ｃ（ＲｅＲｆ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｃ（ＲｄＲｅ）−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｃ（ＲｄＲｅ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲｄＲｅ）−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲｃＲｄ）−Ｃ（ＲｅＲｆ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−Ｃ（ＲｄＲｅ）−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒｃ）−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲｄＲｅ）−Ｎ（Ｒｃ）−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｓ−、および−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲｄＲｅ）−Ｓ−、からなる群から選択されるビラジカルを表し、ここで、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、およびＲｆそれぞれは、独立して、水素、任意に置換されたＣ１−１２−アルキル、任意に置換されたＣ２−６−アルケニル、任意に置換され      たＣ２−６−アルキニル、ヒドロキシ、Ｃ１−１２−アルコキシ、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ１−１２−アルコキシカルボニル、Ｃ１−１２−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ−カルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ−カルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、アミノ、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）−アミノ−カルボニル、アミノ−Ｃ１−６−アルキル−アミノカルボニル、モノ−およびジ（Ｃ１−６−アルキル）アミノ−Ｃ１−６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ１−６−アルキル−カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ１−６−アルカノイルオキシ、スルホノ、Ｃ１−６−アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ１−６−アルキルチオ、ハロゲンから選択され、ここで、アリールおよびヘテロアリールは、任意に置換されてもよく、ここで２つのジェミナルな置換基ＲａおよびＲｂは共に、任意に置換されたメチレン（＝ＣＨ２）を表してもよい。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。
【０２９２】
更なる実施形態において、Ｒ＃およびＲは共に、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−、−ＣＨ（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３）−Ｏ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、および−ＣＨ＝ＣＨ−から選択されるビラジカル（二価基）を表し。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、Ｒ＃およびＲは共に、ビラジカル−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−を表し、ここでＲａ、およびＲｂは、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、または置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキル、からなる群から選択され、例えば水素などであり、ここで、Ｒｃは、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、または置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキルからなる群から選択され、好ましくは、水素である。
【０２９４】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは共に、ビラジカル−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−
Ｃ（ＲｄＲｅ）−Ｏ−を表し、ここでＲａ、Ｒｂ、Ｒｄ、およびＲｅは、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、または置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキル、からなる群から選択され、好ましくは水素である。
【０２９５】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは、ビラジカル−ＣＨ（Ｚ）−Ｏ−を形成し、ここでＺは、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ１−６−アルキル、置換されたＣ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、アシル、置換されたアシル、置換されたアミド、チオール、または置換されたチオールからな群から選択され、ここで、置換された基のそれぞれは、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシ、−ＯＪ１、−ＮＪ１Ｊ２、−ＳＪ１、−Ｎ３、−ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、−ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１Ｊ２、−ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２および−ＣＮから選択される任意に保護された置換基を用いてモノ、またはポリ置換されており、ここで、各Ｊ１、Ｊ２、およびＪ３は、独立して、−Ｈ、またはＣ１−６−アルキルであり、ＸはＯ、Ｓ、またはＮＪ１である。好ましい実施形態において、Ｚは、Ｃ１−６−アルキル、または置換されたＣ１−６−アルキルである。さらに好ましい実施形態において、Ｚはメチルである。好ましい実施形態において、Ｚは、置換されたＣ１−６−アルキルである。好ましい実施形態において、前記置換基は、Ｃ１−６−アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｚは、ＣＨ３ＯＣＨ２−である。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。当該二環性ヌクレオチドは、ＵＳ７，３９９，８４５に開示されており、当該全体の参照によって本明細書に組み込まれる。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素であり、Ｒ４、Ｒ５の一つ、または両方は、上記およびＷＯ２００７／１３４１８１に参照されるような水素以外であってもよい。
【０２９６】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは、共に、ビラジカルを表し、ビラジカル−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−のような結合における置換されたアミノ基を含む。ここでＲｃはＣ1-12−アルきるオキシである。好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは、共に、ビラジカル−Ｃｑ３ｑ４−ＮＯＲ−を表し、ここで、ｑ３およびｑ４は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、または置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシル、置換されたＣ１−６−アルコキシル、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキル、からなる群から選択され、ここで、各置換基は、独立して、ハロゲン、−ＯＪ１、−ＳＪ１、−ＮＪ１Ｊ２、−ＣＯＯＪ１、−ＣＮ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ１Ｊ２、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｘ）ＮＨＪ２から選択される置換基を用いてモノ、またはポリ置換されており、ここで、ＸはＯ、またはＳであり、各Ｊ１、およびＪ２は、独立して、−Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または保護基である。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。当該二環性ヌクレオチドは、ＷＯ２００８／１５０７２９に開示されており、当該全体の参照によって本明細書に組み込まれる。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、または置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキルからなる群から選択される。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素であり、Ｒ４、Ｒ５の一つ、または両方は、上記およびＷＯ２００７／１３４１８１に参照されるような水素以外であってもよい。
【０２９７】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは共に、ビラジカル（二価の基）−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−を表し、ここでＲａ、およびＲｂは、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ１−１２−アルキル、置換されたＣ１−１２−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−１２−アルコキシ、置換されたＣ１−１２−アルコキシ、−ＯＪ１、−ＳＪ１、−Ｓ（Ｏ）Ｊ１、−ＳＯ２−Ｊ１−、−ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｊ１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ１Ｊ２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ１Ｊ２、であり、またはＲａおよびＲｂは、共に、＝Ｃ（ｑ３）（ｑ４）であり、ｑ３およびｑ４は、それぞれ、独立して、−Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−１２−アルキル、または置換されたＣ１−１２−アルキル、であり、各置換基は、独立して、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、−ＯＪ１、−ＳＪ１、−ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｊ１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ１Ｊ２、から選択される置換基を用いてモノ、またはポリ置換されており、各Ｊ１、およびＪ２は、独立して、−Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アミノアルキル、置換されたＣ１−６−アミノアルキル、または保護基である。当該化合物は、ＷＯ２００９００６４７８Ａに開示されており、当該全体の参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２９８】
好ましい実施形態において、Ｒ＃およびＲは、ビラジカル−Ｑ−を形成し、ここで、Ｑは、−Ｃ（ｑ１）（ｑ２）Ｃ（ｑ３）（ｑ４）−、−Ｃ（ｑ１）＝Ｃ（ｑ３）
−、−Ｃ［＝Ｃ（ｑ１）（ｑ２）］−Ｃ（ｑ３）（ｑ４）−、または−Ｃ（ｑ１）（ｑ２）−Ｃ［＝（ｑ３）（ｑ４）］−であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４は、互いに独立して、それぞれ、−Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−１２−アルキル、置換されたＣ１−１２−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換された１−１２−アルコキシ、−ＯＪ１、−ＳＪ１、−Ｓ（Ｏ）Ｊ１、−ＳＯ２−Ｊ１−、−ＮＪ１Ｊ２、−Ｎ３、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｊ１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ１Ｊ２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ１Ｊ２、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ１Ｊ２、であり、各Ｊ１およびＪ２は、互いに独立して、−Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または保護基であり、任意に、Ｑが−Ｃ（ｑ１）（ｑ２）Ｃ（ｑ３）（ｑ４）−であり、ｑ３またはｑ４の一つが−ＣＨ３である場合、他のｑ３またはｑ４の少なくとも一つ、または、ｑ１およびｑ２の一つは、−Ｈ以外である。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、水素である。全てのキラル中心のために、非対称基は、Ｒ配置またはＳ配置のどちらかで発見されてもよい。当該二環性ヌクレオチドは、ＷＯ２００８／１５４４０１に開示されており、当該全体の参照によって本明細書に組み込まれる。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、互いに独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−６−アルキル、置換されたＣ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、置換されたＣ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、または置換されたＣ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ、置換されたＣ１−６−アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−６−アミノアルキル、または置換されたＣ１−６−アミノアルキルからなる群から選択される。好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である。好ましい実施形態におい
て、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は水素であり、Ｒ４、Ｒ５の一つ、または両方は、上記およびＷＯ２００７／１３４１８１、またはＷＯ２００９／０６７６４７（アルファ−Ｌ−二環性核酸類似体）に参照されるような水素以外であってもよい。
【０２９９】
本願に使用される用語「Ｃ１−Ｃ６−アルキル」は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ５Ｈ１１、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ６Ｈ１３、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、および−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（ＣＨ３）３に関する。用語「Ｃ１−Ｃ６−アルキル」は、シクロ−Ｃ３Ｈ５、シクロ−Ｃ４Ｈ７、シクロ−Ｃ５Ｈ９、および、シクロ−Ｃ６Ｈ１１のような「Ｃ１−Ｃ６−シクロアルキル」も含むであろう。
【０３００】
好ましくは、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、および−Ｃ５Ｈ１１である。特に好ましくは、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、および−ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【０３０１】
用語「Ｃ１−Ｃ６−アルキル」は、シクロ−Ｃ３Ｈ５、シクロ−Ｃ４Ｈ７、シクロ−Ｃ５Ｈ９、および、シクロ−Ｃ６Ｈ１１のような「Ｃ１−Ｃ６−シクロアルキル」も含むであろう。
【０３０２】
本願に使用される用語「Ｃ１−Ｃ１２−アルキル」は、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−Ｃ７Ｈ１５、−Ｃ８Ｈ１７、−Ｃ９Ｈ１９、−Ｃ１０Ｈ２１、−Ｃ１１Ｈ２３、−Ｃ１２Ｈ２５に関する。
【０３０３】
本願に使用される用語「Ｃ１−Ｃ６−アルキレニル」は、−ＣＨ２−、−Ｃ２Ｈ４−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ３Ｈ６−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ４Ｈ８−、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ４−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ５Ｈ１０−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ６−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ４−、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ４−、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ３Ｈ６−、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ４−、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−、−Ｃ３Ｈ６−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ４Ｈ８−、−Ｃ６Ｈ１２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ６−、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ４−、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−Ｃ４Ｈ８−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、および−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−
Ｃ２Ｈ４−に関する。
【０３０４】
本願に使用される用語「Ｃ２−Ｃ６−アルケニル」は、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ４Ｈ８−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ４Ｈ９、−Ｃ３Ｈ６−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）（Ｃ２Ｈ５）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（Ｃ２Ｈ５）＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（Ｃ３Ｈ７）＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（Ｃ２Ｈ５）＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ（Ｃ４Ｈ９）＝ＣＨ２、−Ｃ（Ｃ３Ｈ７）＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ（Ｃ２Ｈ５）＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（Ｃ２Ｈ５）＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ［Ｃ（ＣＨ３）３］＝ＣＨ２、−Ｃ［ＣＨ（ＣＨ３）（Ｃ２Ｈ５）］＝ＣＨ２、−Ｃ［ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２］＝ＣＨ２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）
−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、および−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２に関する。
【０３０５】
好ましくは、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３である。特に好ましくは、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、および−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３である。
【０３０６】
本願に使用される用語「Ｃ２−Ｃ６−アルキニル」は、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ６−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ４Ｈ８−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ３Ｈ６−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ４Ｈ９、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（Ｃ３Ｈ７）−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ（ＣＨ３）（Ｃ２Ｈ５）−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ（Ｃ≡ＣＨ）２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（Ｃ≡ＣＨ）−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ（Ｃ≡ＣＨ）２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｃ≡ＣＨ）２、−ＣＨ（Ｃ≡ＣＨ）−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３に関する。好ましくは−Ｃ≡ＣＨ、および−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３である。
【０３０７】
用語「Ｃ１−６−アルコキシル」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−Ｏ−」に関する。
用語「Ｃ１−１２−アルコキシル」は、「Ｃ１−Ｃ１２−アルキル−Ｏ−」に関する。
用語「Ｃ１−６−アミノアルキル」は、「Ｈ２Ｎ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル−」に関する。
【０３０８】
用語「Ｃ２−Ｃ６−アルケニルオキシ」は、「Ｃ２−Ｃ６−アルケニル−Ｏ−」に関する。
用語「Ｃ１−６−アルキルカルボニル」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−ＣＯ−」に関する。「アシル」とも呼ばれる。
【０３０９】
用語「Ｃ１−１２−アルキルカルボニル」は、「Ｃ１−Ｃ１２−アルキル−ＣＯ−」に関する。「アシル」とも呼ばれる。
用語「Ｃ１−６−アルコキシカルボニル」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−Ｏ−ＣＯ−」に関する。
【０３１０】
用語「Ｃ１−１２−アルコキシカルボニル」は、「Ｃ１−Ｃ１２−アルキル−Ｏ−ＣＯ−」に関する。
用語「Ｃ１−Ｃ６−アルカノイルオキシ」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−ＣＯ−Ｏ−」に関する。
【０３１１】
用語「Ｃ１−６−アルキルチオ」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−Ｓ−」に関する。
用語「Ｃ１−６−アルキルスルホニルオキシ」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−ＳＯ２−Ｏ−」に関する。
【０３１２】
用語「Ｃ１−６−アルキルカルボニルアミノ」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−ＣＯ−ＮＨ−」に関する。
用語「Ｃ１−６−アルキルアミノ」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−ＮＨ−」に関する。
【０３１３】
用語「（Ｃ１−６−）２アルキルアミノ」は、「［Ｃ１−Ｃ６−アルキル］［Ｃ１−Ｃ６−アルキル］Ｎ−」のようなジアルキルアミノ基に関する。
用語「Ｃ１−６−アルキルアミノカルボニル」は、「Ｃ１−Ｃ６−アルキル−ＮＨ−ＣＯ−」に関する。
【０３１４】
用語「（Ｃ１−６−）２アルキルアミノカルボニル」は、「［Ｃ１−Ｃ６−アルキル］［Ｃ１−Ｃ６−アルキル］Ｎ−ＣＯ−」のようなジアルキルアミノカルボニル基に関する。
【０３１５】
用語「アミノ−Ｃ１−６−アルキルアミノカルボニル」は、「Ｈ２Ｎ−［Ｃ１−Ｃ６−アルキレニル］−ＮＨ−ＣＯ−」に関する。
用語「Ｃ１−６−アルキル−アミノ−Ｃ１−６−アルキルアミノカルボニル」は、「Ｃ１−６−アルキル−ＨＮ−［Ｃ１−Ｃ６−アルキレニル］−ＮＨ−ＣＯ−」に関する。
【０３１６】
用語「（Ｃ１−６−）２アルキル−アミノ−Ｃ１−６−アルキルアミノカルボニル」は、「［Ｃ１−Ｃ６−アルキル］［Ｃ１−Ｃ６−アルキル］Ｎ−［Ｃ１−Ｃ６−アルキレニル］−ＮＨ−ＣＯ−」に関する。
【０３１７】
用語「アリール」は、フェニル、トルイル、置換されたフェニル、および置換されたトルイルに関する。
用語「アリールオキシ」は、「アリール−Ｏ−」に関する。
【０３１８】
用語「アリールカルボニル」は、「アリール−ＣＯ−」に関する。
用語「アリールオキシカルボニル」は、「アリール−Ｏ−ＣＯ−」に関する。
用語「ヘテロアリール」は、置換されたヘテロ芳香族基、または置換されていない４個〜９個の原子を有するヘテロ芳香族基に関し、４個〜９個の原子うちの１個〜４個は、Ｏ、Ｎ、および／またはＳから選択される。好ましい「ヘテロアリール」基は、５−、または６−員芳香族環に１個、または２個のヘテロ原子を有する。単環システムおよび二環性環システムを含む。典型的に「ヘテロアリール」基は、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾイル、チアゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、ピリダジニル、ピリミジル、ピラジニル、１，３，５−トリアジニル、１，２，３−トリアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、インドリジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾ［ｂ］フリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリニル、キノリジニル、キノリル、イソキノリル、キナゾリニル、キノキサリニル、１，８−ナフチリジニル、テトラヒドロキノリル、ベンゾオキサゾリル、クロム−２−オニル、インダゾリル、および同類のものである。
【０３１９】
用語「ヘテロアリールオキシ」は、「ヘテロアリール−Ｏ−」に関する。
用語「ヘテロアリールカルボニル」は、「ヘテロアリール−ＣＯ−」に関する。
用語「ヘテロアリールオキシカルボニル」は、「ヘテロアリール−Ｏ−ＣＯ−」に関する。
【０３２０】
用語「置換された」は、基において一つ以上の水素原子が、一つ以上の次の置換基：−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ２Ｐｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、−ＣＯ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ３Ｈ７、−ＮＨ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２、−Ｎ（シクロ−Ｃ３Ｈ５）２、−Ｎ［ＣＨ（ＣＨ３）２］２、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＣＦ３、−ＯＣ２Ｆ５、シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ≡ＣＨおよび／または−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、によって置き換えられる基に関する。
【０３２１】
一般構造（Ｉ）が、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドを合成するためのモノマーまたは構成要素を表す場合、末端基ＹおよびＩＬ’は、互いに独立して、水素、アジド、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、ＰＧ−Ｏ−、ＡＧ−Ｏ−、メルカプト、ＰＧ−Ｓ−、ＡＧ−Ｓ−、Ｃ１−６−アルキルチオ、アミノ、ＰＧ−Ｎ（ＲＨ）−、ＡＧ−Ｎ（ＲＨ）−、モノ−またはジ（Ｃ１−６−アルキル）アミノ、任意に置換されたＣ１−６−アルコキシ、任意に置換されたＣ１−６−アルキル、任意に置換されたＣ２−６−アルケニル、任意に置換されたＣ２−６−アルケニルオキシ、任意に置換されたＣ２−６−アルキニル、任意に置換されたＣ２−６−アルキニルオキシ、モノホスフェート、モノチオホスフェート、ジホスフェート、ジチオホスフェート、トリホスフェート、トリチオホスフェート、カルボキシ、スルホノ、ヒドロキシメチル、ＰＧ−Ｏ−ＣＨ２−、ＡＧ−Ｏ−ＣＨ２−、アミノメチル、ＰＧ−Ｎ（ＲＨ）−ＣＨ２−、ＡＧ−Ｎ（ＲＨ）−ＣＨ２−、カルボキシメチル、スルホノメチル、から選択され、ここで、ＰＧは、−ＯＨ、−ＳＨ、および−ＮＨ（ＲＨ）、それぞれのための保護基であり、ＡＧは、−ＯＨ、−ＳＨ、および−ＮＨ（ＲＨ）、それぞれのための活性化基であり、ＲＨは水素およびＣ１−６−アルキルから選択される。
【０３２２】
ヒドロキシ置換基の保護基ＰＧは、例えば、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）；４−モノメトキシトリチルなどの置換されたトリチル；任意に置換された９−（９−フェニル）キサンテニル（ピクシル）；任意に置換されたメトキシテトラヒドロピラニル（ｍｔｈｐ）；例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリエチルシリル、および、フェニルジメチルシリルなどのシリル；ｔｅｒｔ−ブチルエステル、アセタール（２つのヒドロキシ基を含む）；アセチル、または例えばクロロアセチル、もしくはフルオロアセチルなどのハロゲン置換されたアセチル；イソブチリル、ピバロイル、ベンゾイル、および置換されたベンゾイルなどのアシル：メトキシメチル（ＭＯＭ）；ベンジルエステル；または２，６−ジクロロベンジル（２，６−Ｃｌ２Ｂｚｌ）のような置換されたベンジルエステル、を含む。代替的に、ＹまたはＩＬ’がヒドロキシルである場合、ＹまたはＩＬ’は、任意にリンカーを介して固体支持体に結合することによって保護されてもよい。
【０３２３】
ＹまたはＩＬ’がアミノ基である場合、アミノ保護基の例は、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル（ａｌｌｏｃまたはＡＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＺまたはＣｂｚ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−ＣｌＺ）のような置換されたベンジルオキシカルボニル、モノメトキシトリチル（ＭＭＴ）、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、フタロイル、および９−（９−フェニル）キサンテニル（ｐｉｘｌ）である。
【０３２４】
Ａｃｔは、−ＯＨ、−ＳＨ、および−ＮＨ（ＲＨ）、それぞれのための活性化基を表す。当該活性化基は、例えば、任意に置換されたＯ−ホスホロアミダイト、任意に置換されたＯ−ホスホロトリエステル、任意に置換されたＯ−ホスホロジエステル、任意に置換されたＨ−ホスホネート、および任意に置換されたＯ−ホスホネートから選択される。
【０３２５】
本願の文脈において、用語「ホスホロアミダイト」は、式−Ｐ（ＯＲｘ）−Ｎ（Ｒｙ）２を意味し、式中、Ｒｘは、例えば、メチル、２−シアノエチル、またはベンジルなどの任意に置換されたアルキル基、Ｒｙのそれぞれは、例えば、エチル、またはイソプロピルなどの任意に置換されたアルキル基を示し、または−Ｎ（Ｒｙ）２は、モルホリノ基（−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）を形成する。Ｒｘは、好ましくは、２−シアノエチルを示し、２つのＲｙは、好ましくは同一であり、イソプロピルを示す。したがって、特に適当なホルホロアミダイトは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−Ｏ−（２−シアノエチル）−ホスホロアミダイトである。
ＬＮＡモノマー、またはＬＮＡ構成要素
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの合成において出発物質として使用されるＬＮＡモノマー、またはＬＮＡ構成要素は、好ましくは、次の一般式のＬＮＡヌクレオチドである。
【０３２６】
【化７】
0006832285.tif 000009
【０３２７】
ＬＮＡ構成要素は、４つの異なる核酸塩基：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、５−メチル−シトシン（Ｃ＊）、およびチミン（Ｔ）と共にＬＮＡホスホロアミダイトとして通
常提供される。ＬＮＡユニットを含む本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、標準的なホスホロアミダイト化学によって合成される。ＬＮＡ構成要素において、核酸塩基は保護される。プリン塩基のアミノ基のための好ましい保護基は、ベンゾイル基（Ｂｚ）であり、ＡＢｚとして示される。５−メチルピリミジノン塩基のアミノ基のための好ましい保護基は、ベンゾイル基（Ｂｚ）であり、ＣＢｚとして示される。プリノン塩基のアミノ基のための好ましい保護基は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）基、ジエチルホルムアミド（ＤＥＦ）基、ジプロピルホルムアミド（ＤＰＦ）基、ジブチルホルムアミド（ＤＢＦ）基、またはイソ−ブチリル（−ＣＯ−ＣＨ（ＣＨ３）２）基、であり、ＧＤＭＦ、ＧＤＥＦ、ＧＤＰＦ、ＧＤＢＦ、またはＧｉＢｕ、として示される。したがって、−ＮＤＭＦ基は、−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）２に関する。ＤＭＴは４，４’−ジメトキシトリチルに関する。
【０３２８】
したがって、ＬＮＡ−Ｔは、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）−ホルホロアミダイト−チミジンＬＮＡに関する。ＬＮＡ−Ｃ＊Ｂｚは、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）−ホルホロアミダイト−４−Ｎ−ベンゾイル−５−メチル−２’−シチジンＬＮＡに関する。ＬＮＡ−ＡＢｚは、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホルホロアミダイト−６−Ｎ−ベンゾイル−２’−アデノシンＬＮＡに関する。ＬＮＡ−ＧＤＭＦは、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）−ホルホロアミダイト−２−Ｎ−ジメチルホルムアミジン−２’−グアノシンＬＮＡに関する。ＬＮＡ−ＧｉＢｕは、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシ−トリチル）−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホルホロアミダイト−２−Ｎ−ブチリル−２’−グアノシンＬＮＡに関する。
末端基
Ｙは、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’−末端基を表す場合、残基Ｙは、Ｙ５’とも呼ばれ、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−Ｃ６−９−フェニル、−Ｏ−Ｃ７−１０−ベンジル、−ＮＨ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｎ（Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｃ２−６−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−６−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２−６−アルケニル、−Ｎ（Ｃ２−６−アルケニル）２、−Ｏ−Ｃ２−６−アルキニル、−Ｓ−Ｃ２−６−アルキニル、−ＮＨ−Ｃ２−６−アルキニル、−Ｎ（Ｃ２−６−アルキニル）２、−Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−［Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ］ｍ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２−６−アルケニル、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２−６−アルキニル、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＮＨ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）（ＮＨ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）［Ｎ（Ｃ１−６−アルキル）２］、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）［Ｎ（Ｃ１−６−アルキル）２］、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＢＨ３−）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）（ＢＨ３−）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ
（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、を表し、
ここで、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、−Ｏ−Ｃ６−９−フェニル、または−Ｏ−Ｃ７−１０−ベンジルは、−Ｆ、−ＯＨ、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ２−４−アルケニル、および／またはＣ２−４−アルキニルによってさらに置換されてもよく、ここでｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０から選択される。
【０３２９】
より好ましくは、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＯＣ４Ｈ９、−ＯＰｈ、−ＯＣＨ２−Ｐｈ、−Ｏ−ＣＯＣＨ３、−Ｏ−ＣＯＣ２Ｈ５、−Ｏ−ＣＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−ＣＯ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）Ｃ２Ｈ５、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）Ｃ３Ｈ７、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２ＣＨ３、−Ｏ−ＳＯ２Ｃ２Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２Ｃ３Ｈ７、−Ｏ−ＳＯ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＣＨ３、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＣ２Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−ＳＯ２−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ［（ＣＨ２）ｎ−Ｈ］、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、である。
【０３３０】
さらにより好ましくは、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（ＭＯＥとも知られている）、−ＯＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２（ＤＭＡＯＥとも知られている）、−Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、であり、
ここで、ｎは、１、２、３、４、５、または６から選択され、
ここで、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０から選択される。
【０３３１】
ＩＬ’は、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの３’−末端基を表す場合、残基ＩＬ’は、ＩＬ’３’とも呼ばれ、
−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｓ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−Ｃ６−９−フェニル、−Ｏ−Ｃ７−１０−ベンジル、−ＮＨ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｎ（Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｃ２−６−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−６−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２−６−アルケニル、−Ｎ（Ｃ２−６−アルケニル）２、−Ｏ−Ｃ２−６−アルキニル、−Ｓ−Ｃ２−６−アルキニル、−ＮＨ−Ｃ２−６−アルキニル、−Ｎ（Ｃ２−６−アルキニル）２、−Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−［Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ］ｍ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２−６−アルケニル、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２−６−アルキニル、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−ＳＯ２−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＮＨ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）（ＮＨ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）［Ｎ（Ｃ１−６−アルキル）２］、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）［Ｎ（Ｃ１−６−アルキル）２］、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＢＨ３−）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）（ＢＨ３−）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ１−６−アルキレニル−Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（ＯＣＨ
２ＣＨ２Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓ−Ｃ１−６−アルキル）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−を表し、
ここで、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニル、−Ｏ−Ｃ６−９−フェニル、または−Ｏ−Ｃ７−１０−ベンジルは、−Ｆ、−ＯＨ、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ２−４−アルケニル、および／またはＣ２−４−アルキニルによってさらに置換されてもよく、
ここでｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０から選択される。
【０３３２】
より好ましくは、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＯＣ４Ｈ９、−ＯＰｈ、−ＯＣＨ２−Ｐｈ、−Ｏ−ＣＯＣＨ３、−Ｏ−ＣＯＣ２Ｈ５、−Ｏ−ＣＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−ＣＯ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）Ｃ２Ｈ５、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）Ｃ３Ｈ７、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２ＣＨ３、−Ｏ−ＳＯ２Ｃ２Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２Ｃ３Ｈ７、−Ｏ−ＳＯ２−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＣＨ３、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＣ２Ｈ５、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＣ３Ｈ７、−Ｏ−ＳＯ２−Ｏ−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ［（ＣＨ２）ｎ−Ｈ］、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、である。
【０３３３】
さらにより好ましくは、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（ＭＯＥとも知られている）、−ＯＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２（ＤＭＡＯＥとも知られている）、−Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ、であり、
ここで、ｎは、１、２、３、４、５、または６から選択され、
ここで、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０から選択される。
好ましいＬＮＡ
好ましい実施形態において、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドに使用されるＬＮＡユニットは、一般式（ＩＩ）
【０３３４】
【化８】
0006832285.tif 000010
【０３３５】
の構造を有し、
部分−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｘ−は、好ましくは、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−ＮＲｃ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｓ−、および−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−を表し、ここで、置換基Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、本願に定義される意味を有し、
好ましくはＣ１−６−アルキルであり、より好ましくはＣ１−４−アルキルである。より好ましい−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｘ−は、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−から選択され、より好ましくは−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−から選択され、さらにより好ましくは、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、から選択され、さらにより好ましくは、−ＣＨ２−Ｏ−、または−ＣＨ２−Ｓ−、から選択され、最も好ましくは−ＣＨ２−Ｏ−である。
【０３３６】
全てのキラル中心および非対称基は（もしあれば）、Ｒ配置、またはＳ配置のどちらかであることができる。例えば、２つの代表的な立体化学的異性体は、以下に示されるようなベータ−Ｄ−異性体、およびアルファ−Ｌ−異性体である。
【０３３７】
【化９】
0006832285.tif 000011
【０３３８】
好ましいＬＮＡユニットは、一般式（ｂ１）〜（ｂ９）：
【０３３９】
【化１０】
0006832285.tif 000012
【０３４０】
から選択される。
用語「チオ−ＬＮＡ」は、ロックドヌクレオチドを含み、ロックドヌクレオチドにおいて、一般式（ＩＩ）のＸは、−Ｓ−、または−ＣＨ２−Ｓ−から選択される。チオ−ＬＮＡは、ベータ−Ｄ−配置、およびアルファ−Ｌ−配置の両方であることができる。
【０３４１】
用語「アミノ−ＬＮＡ」は、ロックドヌクレオチドを含み、ロックドヌクレオチドにおいて、一般式（ＩＩ）のＸは、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｒ）−、−ＣＨ２−ＮＨ−、および−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−から選択され、ここでＲは、水素およびＣ１−４−アルキルから選択される。アミノ−ＬＮＡは、ベータ−Ｄ−配置、およびアルファ−Ｌ−配置の両方であることができる。
【０３４２】
用語「オキシ−ＬＮＡ」は、ロックドヌクレオチドを含み、ロックドヌクレオチドにおいて、一般式（ＩＩ）のＸは、−Ｏ−である。オキシ−ＬＮＡは、ベータ−Ｄ−配置、およびアルファ−Ｌ−配置の両方であることができる。
【０３４３】
用語「ＥＮＡ」は、ロックドヌクレオチドを含み、ロックドヌクレオチドにおいて、一般式（ＩＩ）のＸは、−ＣＨ２−Ｏ−である（ここで、−ＣＨ２−Ｏ−の酸素原子は、塩基Ｂに関して２’位に連結される）。Ｒａ、およびＲｂは、互いに独立して、水素、またはメチルである。
【０３４４】
好ましい代表的な実施形態において、ＬＮＡは、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ、アルファ−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ、ベータ−Ｄ−アミノ−ＬＮＡ、およびベータ−Ｄ−チオ−ＬＮＡから選択され、特にベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡである。
【０３４５】
さらにより好ましくは、次のアンチセンス−オリゴヌクレオチド（表１）である。
【０３４６】
【表１−１】
0006832285.tif 000013
【０３４７】
【表１−２】
0006832285.tif 000014
【０３４８】
【表１−３】
0006832285.tif 000015
【０３４９】
【表１−４】
0006832285.tif 000016
【０３５０】
表１〜表３のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、特に表４〜表９のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのような本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド、好ましくはＤＮＡヌクレオチドからなり、非ＬＮＡユニット（本願において非ＬＮＡヌクレオチドとも呼ばれる）およびＬＮＡユニット（本願においてＬＮＡヌクレオチドとも呼ばれる）である。
【０３５１】
明白に示されていないけれども、表１の配列Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．ｓ  １０２ａ〜２１８ａのアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜４個のＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）、５’末端で２個〜４個のＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含む。明白に示されていないけれども、ＬＮＡユニットに関する表２の「Ｃ」は、核酸塩基として５−メチルシトシン（Ｃ＊）を好ましくは含む。
【０３５２】
明白に示されていない限り、次のコードＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、およびＵによって示される本発明の、または本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示される任意のヌクレオチド間結合、任意の末端基、および任意の核酸塩基を含んでもよいことを意味する。さらに、本発明の、または本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で少なくとも１個のＬＮＡユニット、および５’末端で少なくとも１個のＬＮＡユニットを有する本願に開示される任意のギャップマー構造のギャップマーである。さらに、本願に開示される任意のＬＮＡユニットを、本発明の、または本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチド内で使用することができる。したがって、例えば、アンチセンス−オリゴヌクレオチドＧＣＴＣ『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』ＣＣＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ.１３）、またはＣＧＡＴ『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』ＡＣＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ.１４）、またはＧＴＡＧ『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』ＧＡＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ.１５）、またはＧＣＴＡ『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』ＴＧＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ.１６）、またはＣＡＴＧ『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』ＡＧＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ.１７）、またはＡＧＧＣ『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』ＡＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ.１８）は、本願に開示される５’末端で少なくとも１個のＬＮＡユニット、および３’末端で少なくとも１個のＬＮＡユニット、任意の核酸塩基、任意の３’末端基、任意の５’末端基、任意のギャップマー構造、および任意のヌクレオチド間結合を含み、そのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体も含む。
【０３５３】
ＬＮＡユニットの使用は、特に、３’末端および５’末端で使用されると好ましい。したがって、特に、本願に開示される配列の、特に、表１のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．ｓ  １０２ａ〜２１８ａにおける、３’末端の最後の１個〜５個のヌクレオチド、さらに５’末端の最後の１個〜５個のヌクレオチドが、ＬＮＡユニット（ＬＮＡヌクレオチドとも呼ばれる）である場合、３’末端および５’末端での１個〜５個のＬＮＡユニットの間において２〜１４個、好ましくは３〜１２個、より好ましくは４個〜１０個、より好ましくは５個〜９個、さらにより好ましくは６個〜８個、の非ＬＮＡユニット（非ＬＮＡヌクレオチドとも呼ばれる）が存在すると好ましい。当該ある種のアンチセンス−オリゴヌクレオチド
は、ギャップマーと呼ばれ、下記により詳細に開示される。３’末端および５’末端でのＬＮＡユニットの間において、好ましくは４個〜１０個、より好ましくは５個〜９個、さらにより好ましくは６個〜８個の非ＬＮＡユニットを有するアンチセンス−オリゴヌクレオチドにおいて、より好ましくは、３’末端で２個〜５個のＬＮＡヌクレオチドおよび５’末端で２個〜５個のＬＮＡヌクレオチドであり、または３’末端で１個〜４個のＬＮＡヌクレオチドおよび５’末端で１個〜４個のＬＮＡヌクレオチドであり、さらにより好ましくは、３’末端で２個〜４個のＬＮＡヌクレオチドおよび５’末端で２個〜４個のＬＮＡヌクレオチドである。
【０３５４】
さらに、ＬＮＡユニット間でのヌクレオチド間結合、並びにＬＮＡユニットおよび非ＬＮＡユニットの間でのヌクレオチド間結合として、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートの使用、好ましくはホスホロチオエートの使用が好ましい。
【０３５５】
したがって、更に好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドにおいて、５０％を超える、好ましくは６０％を超える、より好ましくは７０％を超える、さらにより好ましくは８０％を超える、最も好ましくは９０％を超えるヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエートまたはホスフェートであり、より好ましくはホスホロチオエート結合であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドにおいて、３’末端の最後の１個〜４個、または２個〜５個のヌクレオチドはＬＮＡユニットであり、５’末端の最後の１個〜４個、または２個〜５個のヌクレオチドはＬＮＡユニットであり、末端におけるＬＮＡユニットの間では、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、好ましくは８個〜１１個、より好ましくは８個〜１０個のヌクレオチド配列が存在し、それらは非ＬＮＡユニットであり、好ましくはＤＮＡユニットである。
【０３５６】
さらに、ギャップマーの型におけるこれらのアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、全体で１２個〜２０個、好ましくは１２個〜１８個のヌクレオチドに存在すると好ましい。ギャップマー
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、両ＤＮＡヌクレオチドを含むヌクレオチド配列からなってもよく、両ＤＮＡヌクレオチドは、非ＬＮＡヌクレオチドおよびＬＮＡヌクレオチドであり、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ギャップマーの型で配列されてもよい。
【０３５７】
したがって、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくはギャップマーである。ギャップマーは、中間部分がＤＮＡヌクレオチドユニットからなり、ロックされていないので、非ＬＮＡユニットである。この中間部分のＤＮＡヌクレオチドは、互いに、本願に開示されるようなヌクレオチド間結合（ＩＬ）に連結されることが可能であり、ヌクレオチド間結合は、好ましくは、ホスフェート基、ホスホロチオエート基、またはホスホロジチオエート基であってもよく、この中間部分のＤＮＡヌクレオチドは、５−プロピニルシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−アミノアデニン、２−チオチミン、２−チオシトシン、または５−メチルシトシン、のような核酸塩基類似体を含んでもよい。ＤＮＡユニット、またはＤＮＡヌクレオチドは、二環性ペントース構造ではない。ＬＮＡユニットからなる配列が中間部分の非ＬＮＡユニットの３’末端、および５’末端に隣接する。したがって、ギャップマーは一般式：
ＬＮＡ配列１−非ＬＮＡ配列−ＬＮＡ配列２、または領域Ａ−領域Ｂ−領域Ｃ
を有する。
【０３５８】
非ＬＮＡユニットであるＤＮＡヌクレオチドからなるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの中間部分は、相補的な標的ＲＮＡと二本鎖が形成される場合、ＲＮａｓｅをリクルートすることができる。３’末端および５’末端ヌクレオチドユニットは、好ましくはアルファ−Ｌ配置であるＬＮＡユニットであり、特に好ましくは、ベータ−Ｄ−オキシ−ＬＮ
Ａ、およびアルファ−Ｌ−オキシ−ＬＮＡである。
【０３５９】
したがって、ギャップマーは、ＲＮａｓｅＨのようなＲＮａｓｅをリクルートすることができる非ＬＮＡユニットである少なくとも６個または７個のＤＮＡヌクレオチド領域のようなＤＮＡヌクレオチドの連続ストレッチを含むアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、本願において、真ん中部分、または領域Ｂと称され、ここで領域Ｂは、ＬＮＡユニットである親和性が高いヌクレオチド類似体の領域によって５’および３’の両方で隣接されており、真ん中部分、または領域Ｂは、例えばＲＮａｓｅをリクルートすることができるＤＮＡヌクレオチドの連続ストレッチに対する１個〜６個のＬＮＡユニットの５’末端〜３’末端であり、これらの隣接領域は、それぞれ領域Ａおよび領域Ｃと称される。
【０３６０】
好ましくは、ギャップマーは、式（５’−３’）Ａ−Ｂ−Ｃ、または任意にＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ、またはＤ−Ａ−Ｂ−Ｃの（ポリ）ヌクレオチド配列を含み、ここで領域Ａ（５’領域）は、少なくとも１個のＬＮＡユニットのような、少なくとも１個〜６個のＬＮＡユニットのような、少なくとも１個のヌクレオチド類似体からなり、領域Ｂは少なくとも５個の連続したＤＮＡヌクレオチドからなり、ＤＮＡヌクレオチドは非ＬＮＡユニットであり、ＲＮａｓｅをリクルートすることができ（標的ｍＲＮＡのような、相補的なＲＮＡ分子と二本鎖を形成する）、領域Ｃ（３’領域）は、少なくとも１個のＬＮＡユニットのような、１個〜６個のＬＮＡユニットのような、少なくとも１個のヌクレオチド類似体からなり、領域Ｄは、存在する場合、非ＬＮＡユニットである１個、２個、または３個のＤＮＡヌクレオチドからなる。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、領域Ａは、２個〜５個のＬＮＡユニットのような、３個、または４個のＬＮＡユニットのような、１個、２個、３個、４個、５個、または６個のＬＮＡユニットからなり、および／または領域Ｃは、２個〜５個のＬＮＡユニットのような、３個、または４個のＬＮＡユニットのような、１個、２個、３個、４個、５個、または６個のＬＮＡユニットからなる。
【０３６２】
いくつかの実施形態においてＢは、ＲＮａｓｅをリクルートすることができる５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、または１２個の連続したＤＮＡヌクレオチドからなり、またはＲＮａｓｅをリクルートすることができる８個の連続したヌクレオチドのような６個〜１０個、もしくは７個〜９個の連続したヌクレオチドからなる。いくつかの実施形態において領域Ｂは、１個〜１２個のＤＮＡヌクレオチドユニット、好ましくは４個〜１２個のＤＮＡヌクレオチドユニット、より好ましくは６個〜１０個のＤＮＡヌクレオチドユニット、さらにより好ましくは７個〜１０個のＤＮＡヌクレオチドユニット、最も好ましくは８個、９個、または１０個のＤＮＡヌクレオチドユニットのような、少なくとも１個のＤＮＡヌクレオチドユニットからなり、ＤＮＡヌクレオチドユニットは非ＬＮＡユニットである。
【０３６３】
いくつかの実施形態において領域Ａは、３個または４個のＬＮＡからなり、領域Ｂは、７個、８個、９個、または１０個のＤＮＡヌクレオチドユニットからなり、領域Ｃは、３個または４個のＬＮＡユニットからなる。当該設計は、（Ａ−Ｂ−Ｃ）：１−７−２、２−７−１、２−７−２、３−７−１、３−７−２、１−７−３、２−７−３、３−７−３、２−７−４、３−７−４、４−７−２、４−７−３、４−７−４、１−８−１、１−８−２、２−８−１、２−８−２、１−８−３、３−８−１、３−８−３、２−８−３、３−８−２、４−８−１、４−８−２、１−８−４、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、１−９−１、１−９−２、２−９−１、２−９−２、２−９−３、３−９−２、３−９−３、１−９−３、３−９−１、４−９−１、１−９−４、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、１−１０−１、１−１０−２、２−１０−１、２−１０−２、１−１０−３、３−１０−１、２−１０−２、２−１０−３、３
−１０−２、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、１−１１−１、１−１１−２、２−１１−１、２−１１−２、１−１１−３、３−１１−１、２−１１−２、２−１１−３、３−１１−２、３−１１−３、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、４−１１−４、を含み、さらに領域Ｄを含んでもよく、領域Ｄは、１個または２個のＤＮＡヌクレオチドユニットを有し、ＤＮＡヌクレオチドユニットは非ＬＮＡユニットである。
【０３６４】
更なるギャップマー設計は、ＷＯ２００４／０４６１６０Ａに開示されており、参照によって本明細書に組み込まれる。ＵＳ仮出願、６０／９７７４０９は
参照によって本明細書に組み込まれ、「ショートマー」ギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドに関し、本発明にも適切である。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、全体で１０個、１１個、１２個、１３個、または１４個のヌクレオチドユニット（ＬＮＡユニットおよび非ＬＮＡユニットの両方である）の連続したヌクレオチド配列からなり、ここで、連続したヌクレオチド配列は、式（５’−３’）Ａ−Ｂ−Ｃ、または任意にＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ、またはＤ−Ａ−Ｂ−Ｃの配列であり、ここで、Ａは、１個、２個、または３個のＬＮＡユニットからなり、Ｂは、７個、８個、または９個の連続したＤＮＡヌクレオチドユニットからなり、連続したＤＮＡヌクレオチドユニットは、非ＬＮＡユニットであり、（標的ｍＲＮＡのような）相補的なＲＮＡ分子と二本鎖を形成する場合ＲＮａｓｅをリクルートすることができ、Ｃは、１個、２個、または３個のＬＮＡユニットからなる。存在する場合、Ｄは非ＬＮＡユニットである単一のＤＮＡヌクレオチドユニットからなる。
【０３６６】
いくつかの実施形態において、Ａは１個のＬＮＡユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ａは２個のＬＮＡユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ａは３個のＬＮＡユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｃは１個のＬＮＡユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｃは２個のＬＮＡユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｃは３個のＬＮＡユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｂは非ＬＮＡユニットである７個のＤＮＡヌクレオチドユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｂは８個のＤＮＡヌクレオチドユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｂは９個のＤＮＡヌクレオチドユニットからなる。いくつかの実施形態において、Ｂは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のＤＮＡヌクレオチドユニットのような１個〜９個のＤＮＡヌクレオチドユニットからなる。ＤＮＡヌクレオチドユニットは常に非ＬＮＡユニットである。いくつかの実施形態において、Ｂは、１個、２個、または３個のＬＮＡユニットを含み、ＬＮＡユニットは、好ましくはアルファ−Ｌ配置であり、より好ましくはアルファ−Ｌ−オキシＬＮＡユニットである。いくつかの実施形態において、Ａ−Ｂ−Ｃに存在するヌクレオチド数は、（ＬＮＡユニット−領域Ｂ−ＬＮＡユニット、より好ましくは、アルファ−Ｌ−オキシＬＮＡユニット（領域Ａ）−領域Ｂ−（領域Ｃ）アルファ−Ｌ−オキシＬＮＡユニット）：１−８−１、１−８−２、２−８−１、２−８−２、１−８−３、３−８−１、３−８−３、２−８−３、３−８−２、４−８−１、４−８−２、１−８−４、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、１−９−１、１−９−２、２−９−１、２−９−２、２−９−３、３−９−２、３−９−３、１−９−３、３−９−１、４−９−１、１−９−４、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、１−１０−１、１−１０−２、２−１０−１、２−１０−２、１−１０−３、３−１０−１、２−１０−２、２−１０−３、３−１０−２、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、１−１１−１、１−１１−２、２−１１−１、２−１１−２、１−１１−３、３−１１−１、２−１１−２、２−１１−３、３−１１−２、３−１１−３、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、４−１１−４、
からなる群から選択される。さらに好ましい実施形態において、Ａ−Ｂ−Ｃにおけるヌク
レオチド数は、３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４，４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４，４−１１−２、３−１１−４、および４−１１−３からなる群から選択され、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−４、および４−１１−３、である。
【０３６７】
ホスホロチオエート、ホスフェート、またはホスホロジチオエート、特にホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、特にギャップマー領域Ｂのためにも好ましい。ホスホロチオエート、ホスフェート、またはホスホロジチオエート結合、特にホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、隣接領域のために使用されてもよい（ＡおよびＣ、並びに連結するＡまたはＣからＤのために、存在する場合領域Ｄ内で）。
【０３６８】
領域Ａ、Ｂ、およびＣは、しかしながら、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート以外のホスホジエステル連結のようなヌクレオチド間結合を含んでもよく、特に、例えば、領域ＡおよびＣがＬＮＡユニットからなる場合のような、ヌクレオチド類似体の使用は、エンド−ヌクレアーゼ分解から領域ＡおよびＣ内でのヌクレオチド間結合を保護する。
【０３６９】
アンチセンス−オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオチド間結合は、標的ＲＮＡのＲＮａｓｅＨ切断をさせるように、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートまたはボラノホスフェートであってもよい。ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートは、ヌクレアーゼ耐性を向上させるために、および、調製の容易さのような他の理由のために好ましい。本発明のオリゴマーの一つの態様において、ＬＮＡユニットおよび／または非ＬＮＡユニットは、ホスホロチオエート基の手段によって共に連結される。
【０３７０】
他のホスホロチオエートアンチセンス−オリゴヌクレオチドにおいて、特にＬＮＡユニット間、またはＬＮＡユニットに隣接して、例えば一つ、または二つの連結にホスホロジエステル結合が含まれると、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの生物学的利用能および／または生体分布を変更することができることが認識される（ＷＯ２００８／０５３３１４Ａ参照、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０３７１】
いくつかの実施形態において、本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの配列において、適切であり、明確に示されていない場合、全ての残存するヌクレオチド間結合基は、ホスホジエステル基、もしくはホスホロチオエート基のどちらか、またはそれらの混合物である。
【０３７２】
いくつかの実施形態において、全てのヌクレオチド間結合基は、ホスホロチオエート基である。本願に提供されるような、特異的なギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチド配列に関する場合、様々な実施形態において、結合がホスホロチオエート結合、本願に開示されるような代替的な結合が使用されてもよい場合、例えば、ホスフェート（ホスホジエステルとも呼ばれる）結合が使用されてもよく、特に、ＬＮＡユニットのようなヌクレオチド類似体間での結合のために使用されてもよい、ことを理解するであろう。同様に、本願に提供されるような、特異的なギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチド配列に関する場合、様々な実施形態において、Ｃ残基が５’−メチル修飾シトシンとして注釈をつけられる場合、様々な実施形態において、オリゴマーに存在する一つ以上のＣは、未修飾Ｃ残基であってもよい。
説明
本願に使用される略語ｂ、ｄ、ｓ、ｓｓは、次の意味を有する：
ｂ  ＬＮＡユニット、またはＬＮＡヌクレオチド（ｂ１〜ｂ７から選択されるいずれか）ｂ１  β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ
ｂ２  β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ
ｂ３  β−Ｄ−アミノ−ＬＮＡ
ｂ４  α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ
ｂ５  β−Ｄ−ＥＮＡ
ｂ６  β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ
ｂ７  β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ
ｄ  ２−デオキシ、２−デオキシリボースユニットを意味する（例えば、Ｒ＝−Ｈを有する式Ｂ３またはＢ５）
Ｃ＊  メチル−Ｃ（５−メチルシトシン）；［したがって、ｄＣ＊は、５−メチル−２’−デオキシシチジンである。］
Ａ＊  ２−アミノアデニン；［したがって、ｄＡ＊は、２−アミノ−２’−デオキシアデノシンである。］
ｓ  ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−）
ｓｓ  ヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート基（−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−）
／５ＳｐＣ３／  アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端基で−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ
／３ＳｐＣ３／  アンチセンス−オリゴヌクレオチドの３’末端基で−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ
／５ＳｐＣ３ｓ／  アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端基で−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ
／３ＳｐＣ３ｓ／  アンチセンス−オリゴヌクレオチドの３’末端基で−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨ
太字のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドである。なお、表を除く明細書本文及び、特許請求の範囲本文においては、太字列を、『と、』とで挟んで太字列であることを表している。
【０３７３】
太字でないヌクレオチドは、非ＬＮＡヌクレオチドである。
ギャップマー配列
表２〜表９、より好ましくは表４〜表９に列挙されるギャップマーの形の次のアンチセンス−オリゴヌクレオチドが特に好ましい。
【０３７４】
【表２−１】
0006832285.tif 000017
【０３７５】
【表２−２】
0006832285.tif 000018
【０３７６】
【表２−３】
0006832285.tif 000019
【０３７７】
【表２−４】
0006832285.tif 000020
【０３７８】
【表２−５】
0006832285.tif 000021
【０３７９】
【表３−１】
0006832285.tif 000022
【０３８０】
【表３−２】
0006832285.tif 000023
【０３８１】
好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチド
次に本発明の好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドを開示する。
したがって、本発明は、好ましくは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜２９個、または１４個〜１８個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端で１〜５個のヌクレオチド、および３’末端で１〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間では、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチドが存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、または５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）、または５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）、または５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）、または５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）、または５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、
ここで、
Ｎ１は、ＣＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡ
ＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧ、または、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＧＧ、を表し、
Ｎ３は、ＧＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表し、
Ｎ５は、ＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表し、
Ｎ７は、ＴＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表し、
Ｎ９は、ＡＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＣ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表し、
Ｎ１１は、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表し、または、ここで、Ｎ１〜Ｎ１２は、本願に開示されるような残基の制限されたリストのいずれかを表す。
【０３８２】
さらに、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、によって表され、ここで、
Ｎ１は、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ
−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、を表す。
【０３８３】
Ｎ１および／またはＮ２は、本願に開示されるような３’残基および５’残基の更なる制限されたリストのいずれかを表もしてもよい。
特に好ましい、一般式
Ｓ１：５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）
Ｓ１
に該当するギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の：
ＣＣＧＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.１９）
ＣＧＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２０）
ＧＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２１）
ＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２２）
ＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２３）
ＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２４）
ＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２５）
Ｔ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣＣＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２６）
『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣＣＣＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２７）
ＣＧＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２８）
ＧＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.２９）
ＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３０）
ＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３１）
ＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３２）
ＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３３）
Ｔ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３４）
『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣＣＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３５）
ＧＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３６）
ＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３７）
ＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３８）
ＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.３９）
ＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４０）
Ｔ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４１）
『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４２）
ＣＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４３）
ＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４４）
ＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４５）
ＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４６）
Ｔ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４７）
『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧＣ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４８）
ＴＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.４９）
ＧＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣＣ』（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.５０）
ＣＴ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.５１）
Ｔ『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.５２）
『ＣＧＴＣＡＴＡＧＡＣ』ＣＧＡＧ（Ｓｅｑ.ＩＤ  Ｎｏ.５３）
である。
【０３８４】
ギャップマーの形の（ＬＮＡ断片１−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片２）の式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる５’末端でのＬＮＡ断片を含み、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる３’末端でのＬＮＡ断片を含み、２つのＬＮＡ断片の間では、一つのＤＮＡ断片は、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、より好ましくは８個〜１１個のＤＮＡユニットからなる。
【０３８５】
式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示されるようなＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含み、特に、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において開示されるもの、好ましくは、章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものを含む。ＬＮＡユニットおよびＤＮＡユニットは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）のような一般的な核酸塩基を含んでもよいが、章「核酸塩基」に開示されるような修飾核酸塩基も含んでもよい。式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片およびＤＮＡ断片は、本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合、特に、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」に開示されるようなもの、を含んでもよい。式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端における、および／または５’末端における末端基、特に、章「末端基」に開示されるようなもの、を含んでもよい。
【０３８６】
実験は、修飾核酸塩基が、試験された神経学的および腫瘍学的徴候に関して、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性を重大に増加または変更しないことを明らかにしている。修飾核酸塩基５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンは、特に、５−メチルシトシンがＬＮＡヌクレオチドのみにおいて、またはＬＮＡヌクレオチドおよびＤＮＡヌクレオチドにおいて使用される場合、および／または２−アミノアデニンがＤＮＡヌクレオチドにおいて使用されＬＮＡヌクレオチドにおいて使用されない場合に、式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性をさらに増加させることを証明している。
【０３８７】
式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの好ましいギャップマー構造は、次の：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、
の通りであり、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−４、および４−１１−３である。
【０３８８】
式Ｓ１のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのためのＬＮＡユニットとして、特に、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、が好ましい。実験は、これらのＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、ｂ８、およびｂ９の全ては、必要な努力で合成され、同等な安定性および活性のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにつながることができることを示している。しかしながら、実験に基づいて、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、およびｂ７はさらに好ましい。さらに更なる好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ６、およびｂ７であり、さらにより好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ４であり、化学合成の複雑さに関しても、最も好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１
）である。
【０３８９】
これまで、腫瘍学的または神経学的徴候のための安定性、または活性が非常に変化し、増加している特別な３’末端または５’末端は、見つかっておらず、その結果。それで、３’末端および５’末端は、可能な基はあるが、明確に好ましい基はない。
【０３９０】
様々なヌクレオチド間結合またはヌクレオチド間結合が可能である。本願に開示される式において、ヌクレオチド間結合は、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。したがって、ＩＬ＝−ＩＬ’−Ｙ−＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−であり、ここで、ＩＬは、好ましくは、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、
からなる群から選択される。
【０３９１】
好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、さらにより好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択され、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、から選択される。
【０３９２】
したがって、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、によって表され、ここで、
Ｎ１は、ＧＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、Ｃ
ＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧ、を表し、および
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、から選択され、好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０３９３】
より好ましくは、Ｎ１は、ＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＧＣ、を表す。
【０３９４】
さらに、更なる好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での２個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での２個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチ
センス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１−『ＧＴＣＡＴＡＧＡ』−Ｎ２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１２）、によって表され、ここで、
Ｎ１は、ＡＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、好ましくは、Ｎ１は、ＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＧＣＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＧＣＴＣ−、ＣＴＧＣＴＣ−、ＴＧＣＴＣ−、ＧＣＴＣ−、ＣＴＣ−、ＴＣ−、またはＣ−、を表し、および、
Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧ、を表し、好ましくは、Ｎ２は、−Ｃ、−ＣＣ、−ＣＣＧ、−ＣＣＧＡ、−ＣＣＧＡＧ、−ＣＣＧＡＧＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣ、−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣ、または−ＣＣＧＡＧＣＣＣＣＣ、を表し、
および、ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、および好ましくは、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０３９５】
特に好ましくは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５３のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１９〜Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．５３のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、５’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、およびＬＮＡユニットの２個の断片の間には少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡユニット断片を含み、ここで、ＬＮＡユニットは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、ヌクレオチド間結合は、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基としてＬＮＡユニット、好ましくは全てのＬＮＡユニットにおいて、５−メチルシトシンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて２−アミノアデニンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて５−メチルシトシンを含む。
【０３９６】
さらに特に好ましくは、表４（Ｓｅｑ．Ｎｏ．２３２ａ〜２４４ｂ）のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。
さらに、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレ
オチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）によって表され、ここで、
Ｎ３は、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表す。
【０３９７】
Ｎ３および／またはＮ４は、本願に開示されるような、３’および５’残基の更なる制限されたリストのいずれかを表してもよい。
特に好ましくは、一般式Ｓ２：
５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）  Ｓ２
に該当するギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、
次の：
ＧＣＴＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５４）
ＣＴＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』Ｃ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５５）
ＴＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５６）
ＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５７）
ＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５８）
ＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５９）
ＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６０）
Ａ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６１）
『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡＣＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６２）
ＣＴＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６３）
ＴＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』Ｃ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６４）
ＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６５）
ＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６６）
ＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６７）
ＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６８）
Ａ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４９）
『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５０）
ＴＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５１）
ＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』Ｃ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５２）
ＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５３）
ＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５４）
ＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５５）
Ａ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５６）
『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５７）
ＧＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５８）
ＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』Ｃ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３５９）
ＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６０）
ＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６１）
Ａ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６２）
『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６３）
ＧＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６４）
ＣＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』Ｃ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６５）
ＧＡ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６６）
Ａ『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６７）
『ＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡ』ＣＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６８）
である。
【０３９８】
ギャップマーの形の（ＬＮＡ断片１−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片２）の式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる５’末端でのＬＮＡ断片を含み、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる３’末端でのＬＮＡ断片を含み、２つのＬＮＡ断片の間では、一つのＤＮＡ断片は、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、より好ましくは８個〜１１個のＤＮＡユニットからなる。
【０３９９】
式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示されるようなＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含み、特に、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において開示されるもの、好ましくは、章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものを含む。ＬＮＡユニットおよびＤＮＡユニットは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）のような標準的な核酸塩基を含んでもよいが、章「核酸塩基」に開示されるような修飾核酸塩基も含んでもよい。式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片およびＤＮＡ断片は、本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合、特に、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」に開示されるようなもの、を含んでもよい。式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端における、および／または５’末端における末端基、特に、章「末端基」に開示されるようなもの、を含んでもよい。
【０４００】
実験は、修飾核酸塩基が、試験された神経学的および腫瘍学的徴候に関して、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性を重大に増加または変更しないことを明らかにしている。修飾核酸塩基５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンは、特に、５−メチルシトシンがＬＮＡヌクレオチドのみにおいて、またはＬＮＡヌクレオチドおよびＤＮＡヌクレオチドにおいて使用される場合、および／または２−アミノアデニンがＤＮＡヌクレオチドにおいて使用されＬＮＡヌクレオチドにおいて使用されない場合に、式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性をさらに増加させることを証明している。
【０４０１】
式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの好ましいギャップマー構造は、次の：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、の通りであり、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−４、および４−１１−３である。
【０４０２】
式Ｓ２のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのためのＬＮＡユニットとして、特に、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、が好ましい。実験は、これらのＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、ｂ８、およびｂ９の全ては、必要な努力で合成され、同等な安定性および活性のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにつながることができることを示している。しかしながら、実験に基づいて、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、およびｂ７はさらに好ましい。さらに更なる好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ６、およびｂ７であり、さらにより好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ４であり、化学合成の複雑さに関しても、最も好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）である。
【０４０３】
これまで、腫瘍学的または神経学的徴候のための安定性、または活性が非常に変化し、増加している特別な３’末端または５’末端は、見つかっておらず、その結果、３’末端および５’末端は、可能な基はあるが、明確に好ましい基はない。
【０４０４】
様々なヌクレオチド間架橋またはヌクレオチド間結合が可能である。本願に開示される式において、ヌクレオチド間結合ＩＬは、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。したがって、ＩＬ＝−ＩＬ’−Ｙ−＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−であり、ここで、ＩＬは、好ましくは、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、
からなる群から選択される。
【０４０５】
好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、さらにより好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択され、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、から選択される、ヌクレオチド間結合ＩＬである。
【０４０６】
したがって、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、ア
ンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）によって表され、ここで、
Ｎ３は、ＧＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表し、および
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、から選択され、好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、から選択され、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４０７】
より好ましくは、Ｎ３は、ＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧＣ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、
−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表し、
さらに、更なる好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での２個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での２個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ３−『ＡＣＧＣＧＴＣＣ』−Ｎ４−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．９８）によって表され、ここで、
Ｎ３は、ＣＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、好ましくは、Ｎ３は、ＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＣＴＧＧＣＧＡＴ−、ＴＧＧＣＧＡＴ−、ＧＧＣＧＡＴ−、ＧＣＧＡＴ−、ＣＧＡＴ−、ＧＡＴ−、ＡＴ−、またはＴ−、を表し、および、
Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表し、好ましくは、Ｎ４は、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡＴ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧＡ、−ＡＣＡＧＧＡＣＧ、−ＡＣＡＧＧＡＣ、−ＡＣＡＧＧＡ、−ＡＣＡＧＧ、−ＡＣＡＧ、−ＡＣＡ、−ＡＣ、または、−Ａ、を表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、および好ましくは、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４０８】
特に好ましくは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５４〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６８、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６８のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５４〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．６８、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６８のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、５’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、およびＬＮＡユニットの２個の断片の間には少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡユニット断片を含み、ここで、ＬＮＡユニットは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）
−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、ヌクレオチド間結合は、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基としてＬＮＡユニット、好ましくは全てのＬＮＡユニットにおいて、５−メチルシトシンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて２−アミノアデニンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて５−メチルシトシンを含む。
【０４０９】
さらに特に好ましくは、表５（Ｓｅｑ．Ｎｏ．２４５ａ〜２５７ｂ）のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。
さらに、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）によって表され、ここで、
Ｎ１１は、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表す。
【０４１０】
Ｎ１１および／またはＮ１２は、本願に開示されるような、３’および５’残基の更なる制限されたリストのいずれかを表してもよい。
特に好ましくは、一般式Ｓ３：
５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）  Ｓ３
に該当するギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、
次の：
ＡＴＴＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６９）
ＴＴＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』Ａ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７０）
ＴＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７１）
ＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７２）
ＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７３）
ＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７４）
ＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７５）
Ａ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧＴＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７６）
『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧＴＣＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７７）
ＴＴＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７８）
ＴＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』Ａ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３７９）
ＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８０）
ＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８１）
ＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８２）
ＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８３）
Ａ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８４）
『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧＴＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８５）
ＴＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８６）
ＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』Ａ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８７）
ＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８８）
ＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３８９）
ＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９０）
Ａ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９１）
『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９２）
ＴＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９３）
ＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』Ａ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９４）
ＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９５）
ＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９６）
Ａ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９７）
『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９８）
ＧＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３９９）
ＧＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』Ａ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４００）
ＴＡ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０１）
Ａ『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０２）
『ＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧ』ＡＧＣＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０３）
である。
【０４１１】
ギャップマーの形（ＬＮＡ断片１−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片２）の式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる５’末端でのＬＮＡ断片を含み、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる３’末端でのＬＮＡ断片を含み、２つのＬＮＡ断片の間では、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、より好ましくは８個〜１１個のＤＮＡユニットからなる一つのＤＮＡ断片を含む。
【０４１２】
式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示されるようなＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含み、特に、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において開示されるもの、好ましくは、章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものを含む。ＬＮＡユニットおよびＤＮＡユニットは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）のような標準的な核酸塩基を含んでもよいが、章「核酸塩基」に開示されるような修飾核酸塩基も含んでもよい。式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片およびＤＮＡ断片は、本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合、特に、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」に開示されるようなもの、を含んでもよい。式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端における、および／または５’末端における末端基、特に、章「末端基」に開示されるようなもの、を任意に含んでもよい。
【０４１３】
実験は、修飾核酸塩基が、試験された神経学的および腫瘍学的徴候に関して、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性を重大に増加または変更しないことを明らかに
している。修飾核酸塩基５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンは、特に、５−メチルシトシンがＬＮＡヌクレオチドのみにおいて、またはＬＮＡヌクレオチドおよびＤＮＡヌクレオチドにおいて使用される場合、および／または２−アミノアデニンがＤＮＡヌクレオチドにおいて使用されＬＮＡヌクレオチドにおいて使用されない場合に、式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性をさらに増加させることを証明している。
【０４１４】
式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの好ましいギャップマー構造は、次の：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、の通りであり、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−４、および４−１１−３である。
【０４１５】
式Ｓ３のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのためのＬＮＡユニットとして、特に、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、が好ましい。実験は、これらのＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、ｂ８、およびｂ９の全てが、必要な努力で合成され、同等な安定性および活性のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにつながることができることを示している。しかしながら、実験に基づいて、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、およびｂ７はさらに好ましい。さらに更なる好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ６、およびｂ７であり、さらにより好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ４であり、化学合成の複雑さに関しても、最も好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）である。
【０４１６】
これまで、腫瘍学的または神経学的徴候のための安定性、または活性が非常に変化し、または増加している特別な３’末端または５’末端は、見つかっておらず、その結果、３’末端および５’末端は、可能な基はあるが、明確に好ましい基はない。
【０４１７】
様々なヌクレオチド間架橋またはヌクレオチド間結合が可能である。本願に開示される式において、ヌクレオチド間結合ＩＬは、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。したがって、ＩＬ＝−ＩＬ’−Ｙ−＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−であり、ここで、ＩＬは、好ましくは、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、
からなる群から選択される。
【０４１８】
好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））
−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、さらにより好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択され、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、から選択される、ヌクレオチド間結合ＩＬである。
【０４１９】
したがって、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）によって表され、ここで、
Ｎ１１は、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表し、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、から選択され、好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、から選択され、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−
、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４２０】
より好ましくは、Ｎ１１は、ＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡＧ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表し、
さらに、更なる好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での２個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での２個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ１１−『ＴＧＴＴＴＡＧＧ』−Ｎ１２−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０）によって表され、ここで、
Ｎ１１は、ＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、好ましくは、Ｎ１１は、ＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＡＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＴＧＧＴＡＧ−、ＴＧＧＴＡＧ−、ＧＧＴＡＧ−、ＧＴＡＧ−、ＴＡＧ−、ＡＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＡ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表し、好ましくは、Ｎ１２は、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＧＡＧＣＣＧＴ、−ＧＡＧＣＣＧ、−ＧＡＧＣＣ、−ＧＡＧＣ、−ＧＡＧ、−ＧＡ、または、−Ｇを表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、および好ましくは、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５
’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４２１】
特に好ましくは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０３のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３６９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０３のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、５’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、およびＬＮＡユニットの２個の断片の間には少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡユニット断片を含み、ここで、ＬＮＡユニットは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、ヌクレオチド間結合は、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基としてＬＮＡユニット、好ましくは全てのＬＮＡユニットにおいて、５−メチルシトシンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて２−アミノアデニンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて５−メチルシトシンを含んでもよい。
【０４２２】
さらに特に好ましくは、表６（Ｓｅｑ．Ｎｏ．２５８ａ〜２７０ｂ）のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。
さらに、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、次の配列５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）によって表され、ここで、
Ｎ５は、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表す。
【０４２３】
Ｎ５および／またはＮ６は、本願に開示されるような、３’および５’残基の更なる制限されたリストのいずれかを表してもよい。
特に好ましい一般式Ｓ４：
５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）  Ｓ４
に該当するギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、
次の：
ＧＡＡＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０４）
ＡＡＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０５）
ＡＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０６）
ＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０７）
ＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０８）
ＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０９）
ＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１０）
Ｔ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１１）
『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡＧＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１２）
ＡＡＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１３）
ＡＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１４）
ＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１５）
ＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１６）
ＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１７）
ＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１８）
Ｔ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４１９）
『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２０）
ＡＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２１）
ＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２２）
ＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２３）
ＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２４）
ＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２５）
Ｔ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２６）
『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２７）
ＧＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２８）
ＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４２９）
ＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３０）
ＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３１）
Ｔ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３２）
『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３３）
ＡＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３４）
ＧＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３５）
ＣＴ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３６）
Ｔ『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３７）
『ＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ』ＧＴＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３８）
である。
【０４２４】
ギャップマーの形（ＬＮＡ断片１−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片２）の式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる５’末端でのＬＮＡ断片を含み、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる３’末端でのＬＮＡ断片を含み、２つのＬＮＡ断片の間では、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、より好ましくは８個〜１１個のＤＮＡユニットからなる一つのＤＮＡ断片を含む。
【０４２５】
式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示されるようなＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含み、特に、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において開示されるもの、好ましくは、章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものを含む
。ＬＮＡユニットおよびＤＮＡユニットは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）のような標準的な核酸塩基を含んでもよいが、章「核酸塩基」に開示されるような修飾核酸塩基も含んでもよい。式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片およびＤＮＡ断片は、本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合、特に、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」に開示されるもの、を含んでもよい。式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端における、および／または５’末端における末端基、特に、章「末端基」に開示されるもの、を任意に含んでもよい。
【０４２６】
実験は、修飾核酸塩基が、試験された神経学的および腫瘍学的徴候に関して、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性を重大に増加または変更しないことを明らかにしている。修飾核酸塩基５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンは、特に、５−メチルシトシンがＬＮＡヌクレオチドのみにおいて、またはＬＮＡヌクレオチドおよびＤＮＡヌクレオチドにおいて使用される場合、および／または２−アミノアデニンがＤＮＡヌクレオチドにおいて使用されＬＮＡヌクレオチドにおいて使用されない場合に、式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性をさらに増加させることを証明している。
【０４２７】
式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの好ましいギャップマー構造は、次の：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、の通りであり、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−４、および４−１１−３である。
【０４２８】
式Ｓ４のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのためのＬＮＡユニットとして、特に、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、が好ましい。実験は、これらのＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、ｂ８、およびｂ９の全てが、必要な努力で合成され、同等な安定性および活性のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにつながることができることを示している。しかしながら、実験に基づいて、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、およびｂ７はさらに好ましい。さらに更なる好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ６、およびｂ７であり、さらにより好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ４であり、化学合成の複雑さに関しても、最も好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）である。
【０４２９】
これまで、腫瘍学的または神経学的徴候のための安定性、または活性が非常に変化し、または増加している特別な３’末端または５’末端は、見つかっておらず、その結果、３’末端および５’末端は、可能な基はあるが、明確に好ましい基なない。
【０４３０】
様々なヌクレオチド間架橋またはヌクレオチド間結合が可能である。本願に開示される式において、ヌクレオチド間結合ＩＬは、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。したがって、ＩＬ＝−ＩＬ’−Ｙ−＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−であり、ここで、ＩＬは、好ましくは、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−
、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、
からなる群から選択される。
【０４３１】
好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、さらにより好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択され、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、から選択される、ヌクレオチド間結合ＩＬである。
【０４３２】
したがって、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）によって表され、ここで、
Ｎ５は、ＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＴＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表し、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、から選択され、好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、から選択され、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４３３】
より好ましくは、Ｎ５は、ＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧＴ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表す。
【０４３４】
さらに、更なる好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での２個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での２個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ５−『ＴＴＴＧＧＴＡＧ』−Ｎ６−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１１）によって表され、ここで、
Ｎ５は、ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、好ましくは、Ｎ５は、ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＡＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＡＧＣＴＡ−、ＧＡＧＣＴＡ−、ＡＧＣＴＡ−、ＧＣＴＡ−、ＣＴＡ−、ＴＡ−、またはＡ−、を表し、および、
Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表し、好ましくは、Ｎ６は、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧＧ、−ＴＧＴＴＴＡＧＧ、−Ｔ
ＧＴＴＴＡＧ、−ＴＧＴＴＴＡ、−ＴＧＴＴＴ、−ＴＧＴＴ、−ＴＧＴ、−ＴＧ、または、−Ｔ、を表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、および好ましくは、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の修飾３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４３５】
特に好ましくは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０４〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３８のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４０４〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３８のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、５’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、およびＬＮＡユニットの２個の断片の間には少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡユニット断片を含み、ここで、ＬＮＡユニットは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、ヌクレオチド間結合は、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基としてＬＮＡユニット、好ましくは全てのＬＮＡユニットにおいて、５−メチルシトシンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて２−アミノアデニンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて５−メチルシトシンを含んでもよい。
【０４３６】
さらに特に好ましくは、表７（Ｓｅｑ．Ｎｏ．２７１ａ〜２８３ｂ）のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。
さらに、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）によって表され、ここで、
Ｎ７は、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴ
ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表す。
【０４３７】
Ｎ７および／またはＮ８は、本願に開示されるような、３’および５’残基の更なる制限されたリストのいずれかを表してもよい。
特に好ましい一般式Ｓ６：
５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）  Ｓ６に該当するギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、
次の：
ＴＡＴＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３９）
ＡＴＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４０）
ＴＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４１）
ＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４２）
ＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４３）
ＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４４）
ＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４５）
Ｔ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴＣＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４６）
『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴＣＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４７）
ＡＴＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４８）
ＴＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４４９）
ＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５０）
ＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５１）
ＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５２）
ＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５３）
Ｔ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５４）
『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴＣＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５５）
ＴＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５６）
ＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５７）
ＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５８）
ＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４５９）
ＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６０）
Ｔ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６１）
『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６２）
ＣＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６３）
ＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６４）
ＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６５）
ＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６６）
Ｔ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６７）
『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６８）
ＴＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４６９）
ＣＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７０）
ＡＴ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７１）
Ｔ『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７２）
『ＧＡＡＴＧＧＡＣＣＡ』ＧＴＡＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７３）
である。
【０４３８】
ギャップマーの形（ＬＮＡ断片１−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片２）の式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる５’末端でのＬＮＡ断片を含み、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる３’末端でのＬＮＡ断片を含み、２つのＬＮＡ断片の間では、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、より好ましくは８個〜１１個のＤＮＡユニットからなる一つのＤＮＡ断片を含む。
【０４３９】
式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示されるようなＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含み、特に、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において開示されるもの、好ましくは、章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものを含む。ＬＮＡユニットおよびＤＮＡユニットは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）のような標準的な核酸塩基を含んでもよいが、章「核酸塩基」に開示されるような修飾核酸塩基も含んでもよい。式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片およびＤＮＡ断片は、本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合、特に、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」に開示されるもの、を含んでもよい。式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端における、および／または５’末端における末端基、特に、章「末端基」に開示されるもの、を任意に含んでもよい。
【０４４０】
実験は、修飾核酸塩基が、試験された神経学的および腫瘍学的徴候に関して、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性を重大に増加または変更しないことを明らかにしている。修飾核酸塩基５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンは、特に、５−メチルシトシンがＬＮＡヌクレオチドのみにおいて、またはＬＮＡヌクレオチドおよびＤＮＡヌクレオチドにおいて使用される場合、および／または２−アミノアデニンがＤＮＡヌクレオチドにおいて使用されＬＮＡヌクレオチドにおいて使用されない場合に、式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性をさらに増加させることを証明している。
【０４４１】
式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの好ましいギャップマー構造は、次の：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、の通りであり、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−４、および４−１１−３である。
【０４４２】
式Ｓ６のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのためのＬＮＡユニットとして、特に、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、が好ましい。実験は、これらのＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、ｂ８、およびｂ９の全てが、必要な努力で合成され、同等な安定性および活性のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにつながることができることを示している。しかしながら、実験に基づいて、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、およびｂ７はさらに好ましい。さらに更なる好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ６、およびｂ７であり、さらにより好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ４であり、化学合成の複雑さに関しても、最も好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）である。
【０４４３】
これまで、腫瘍学的または神経学的徴候のための安定性、または活性が非常に変化し、または増加している特別な３’末端基または５’末端基は、見つかっておらず、その結果、３’末端基および５’末端基は、可能な基はあるが、明確に好ましい基なない。
【０４４４】
様々なヌクレオチド間架橋またはヌクレオチド間結合が可能である。本願に開示される式において、ヌクレオチド間結合ＩＬは、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。したがって、ＩＬ＝−ＩＬ’−Ｙ−＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−であり、ここで、ＩＬは、好ましくは、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、
からなる群から選択される。
【０４４５】
好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、さらにより好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択され、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、から選択される、ヌクレオチド間結合ＩＬである。
【０４４６】
したがって、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、、５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）によって表され、ここで、
Ｎ７は、ＡＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、から選択され、好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、から選択され、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４４７】
より好ましくは、Ｎ７は、ＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡＣ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表す。
【０４４８】
さらに、更なる好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での２個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での２個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス
−オリゴヌクレオチドは、次の配列、、５’−Ｎ７−『ＡＡＴＧＧＡＣＣ』−Ｎ８−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１００）によって表され、ここで、
Ｎ７は、ＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、好ましくは、Ｎ７は、ＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＡＴＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＴＣＡＴＧ−、ＣＴＣＡＴＧ−、ＴＣＡＴＧ−、ＣＡＴＧ−、ＡＴＧ−、ＴＧ−、またはＧ−、を表し、および、
Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表し、好ましくは、Ｎ８は、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡＧ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴＡ、−ＡＧＴＡＴＴＣＴ、−ＡＧＴＡＴＴＣ、−ＡＧＴＡＴＴ、−ＡＧＴＡＴ、−ＡＧＴＡ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａを表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、および好ましくは、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４４９】
特に好ましくは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７３のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４３９〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７３のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、５’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、およびＬＮＡユニットの２個の断片の間には少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡユニット断片を含み、ここで、ＬＮＡユニットは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、ヌクレオチド間結合は、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基としてＬＮＡユニット、好ましくは全てのＬＮＡユニットにおいて、５−メチルシトシンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて２−アミノアデニンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて５−メチルシトシンを含んでもよい。
【０４５０】
さらに特に好ましくは、表８（Ｓｅｑ．Ｎｏ．２１９ａ〜２３１ｂ）のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。
さらに、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド
、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、ここで、
Ｎ９は、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表す。
【０４５１】
Ｎ９および／またはＮ１０は、本願に開示されるような、３’および５’残基の更なる制限されたリストのいずれかを表してもよい。
特に好ましい一般式Ｓ７：
５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）  Ｓ７
に該当するギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、
次の：
ＴＡＴＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７４）
ＡＴＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７５）
ＴＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７６）
ＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７７）
ＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７８）
ＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７９）
ＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８０）
Ｇ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８１）
『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡＡＡＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８２）
ＡＴＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８３）
ＴＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８４）
ＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８５）
ＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８６）
ＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８７）
ＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８８）
Ｇ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４８９）
『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９０）
ＴＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９１）
ＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９２）
ＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９３）
ＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９４）
ＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９５）
Ｇ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９６）
『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９７）
ＡＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９８）
ＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４９９）
ＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５００）
ＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０１）
Ｇ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０２）
『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０３）
ＣＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０４）
ＡＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』Ｇ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０５）
ＧＧ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０６）
Ｇ『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０７）
『ＣＡＴＴＡＡＴＡＡＡ』ＧＴＧＣ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０８）
である。
【０４５２】
ギャップマーの形（ＬＮＡ断片１−ＤＮＡ断片−ＬＮＡ断片２）の式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる５’末端でのＬＮＡ断片を含み、２個〜５個、好ましくは２個〜４個のＬＮＡユニットからなる３’末端でのＬＮＡ断片を含み、２つのＬＮＡ断片の間では、６個〜１４個、好ましくは７個〜１２個、より好ましくは８個〜１１個のＤＮＡユニットからなる一つのＤＮＡ断片を含む。
【０４５３】
式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、本願に開示されるようなＬＮＡヌクレオチド（ＬＮＡユニット）を含み、特に、章「ロックド核酸（ＬＮＡ（登録商標）」において開示されるもの、好ましくは、章「好ましいＬＮＡ」において開示されるものを含む。ＬＮＡユニットおよびＤＮＡユニットは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）のような標準的な核酸塩基を含んでもよいが、章「核酸塩基」に開示されるような修飾核酸塩基も含んでもよい。式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチド、またはアンチセンス−オリゴヌクレオチドのＬＮＡ断片およびＤＮＡ断片は、本願に開示されるような任意のヌクレオチド間結合、特に、章「ヌクレオチド間結合（ＩＬ）」に開示されるもの、を含んでもよい。式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端における、および／または５’末端における末端基、特に、章「末端基」に開示されるもの、を任意に含んでもよい。
【０４５４】
実験は、修飾核酸塩基が、試験された神経学的および腫瘍学的徴候に関して、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性を重大に増加または変更しないことを明らかにしている。修飾核酸塩基５−メチルシトシン、または２−アミノアデニンは、特に、５−メチルシトシンがＬＮＡヌクレオチドのみにおいて、またはＬＮＡヌクレオチドおよびＤＮＡヌクレオチドにおいて使用される場合、および／または２−アミノアデニンがＤＮＡヌクレオチドにおいて使用されＬＮＡヌクレオチドにおいて使用されない場合に、式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの活性をさらに増加させることを証明している。
【０４５５】
式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの好ましいギャップマー構造は、次の：３−８−３、４−８−２、２−８−４、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−２、２−９−４、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、２−１０−４、４−１０−２、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、２−１１−４、４−１１−２、３−１１−４、４−１１−３、の通りであり、さらにより好ましくは、３−８−３、３−８−４、４−８−３、４−８−４、３−９−３、４−９−３、３−９−４、４−９−４、３−１０−３、３−１０−４、４−１０−３、４−１０−４、３−１１−
４、および４−１１−３である。
【０４５６】
式Ｓ７のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのためのＬＮＡユニットとして、特に、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、が好ましい。実験は、これらのＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、ｂ７、ｂ８、およびｂ９の全てが、必要な努力で合成され、同等な安定性および活性のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにつながることができることを示している。しかしながら、実験に基づいて、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ５、ｂ６、およびｂ７はさらに好ましい。さらに更なる好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ２、ｂ４、ｂ６、およびｂ７であり、さらにより好ましくは、ＬＮＡユニットｂ１、ｂ４であり、化学合成の複雑さに関しても、最も好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）である。
【０４５７】
これまで、腫瘍学的または神経学的徴候のための安定性、または活性が非常に変化し、または増加している特別な３’末端基または５’末端基は、見つかっておらず、その結果、３’末端基および５’末端基は、可能な基はあるが、明確に好ましい基はない。
【０４５８】
様々なヌクレオチド間架橋またはヌクレオチド間結合が可能である。本願に開示される式において、ヌクレオチド間結合ＩＬは、−ＩＬ’−Ｙ−によって表される。したがって、ＩＬ＝−ＩＬ’−Ｙ−＝−Ｘ’’−Ｐ（＝Ｘ’）（Ｘ−）−Ｙ−であり、ここで、ＩＬは、好ましくは、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、
からなる群から選択される。
【０４５９】
好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−から選択され、より好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、さらにより好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−から選択され、最も好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、および−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、から選択される、ヌクレオチド間結合ＩＬである。
【０４６０】
したがって、本発明は、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１０個〜２８個のヌクレオチド、好ましくは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個
〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での１個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での１個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、ここで、
Ｎ９は、ＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−ＥＮＡ（ｂ５）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、β−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、β−Ｄ−（ＯＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ８）、およびβ−Ｄ−（ＯＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ９）、から選択され、好ましくは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＨ（ＣＨ３））−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）［Ｎ（ＣＨ３）２］−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＢＨ３−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ３）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、から選択され、好ましくは、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４６１】
より好ましくは、Ｎ９は、ＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、および、
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ
、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表す。
【０４６２】
さらに、更なる好ましくは、本発明は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド、並びにアンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩、および光学異性体に関し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、１１個〜２４個のヌクレオチド、より好ましくは、１２個〜２０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは、１３個〜１９個、または１４個〜１８個のヌクレオチド、からなるギャップマーの形であり、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの５’末端での２個〜５個のヌクレオチド、および３’末端での２個〜５個のヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチドであり、５’末端、および３’末端でのＬＮＡヌクレオチドの間は、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個のＤＮＡヌクレオチド配列が存在し、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードする遺伝子領域、またはＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡ領域とハイブリダイズすることができ、ここで、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、次の配列、５’−Ｎ９−『ＡＴＴＡＡＴＡＡ』−Ｎ１０−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１０１）によって表され、ここで、
Ｎ９は、ＴＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、好ましくは、Ｎ９は、ＡＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＴＡＣＡＧＧＣ−、ＴＡＣＡＧＧＣ−、ＡＣＡＧＧＣ−、ＣＡＧＧＣ−、ＡＧＧＣ−、ＧＧＣ−、ＧＣ−、またはＣ−、を表し、および
Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表し、好ましくは、Ｎ１０は、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴＧ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡＴ、−ＡＧＴＧＣＡＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡＡ、−ＡＧＴＧＣＡ、−ＡＧＴＧＣ、−ＡＧＴＧ、−ＡＧＴ、−ＡＧ、または、−Ａ、を表し、および、
ＬＮＡヌクレオチドは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（ＮＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、および、
ヌクレオチド間結合は、
−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｏ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）−Ｓ−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）−Ｓ−、から選択され、および好ましくは、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基として５−メチルシトシンおよび／または２−アミノアデニンを含んでもよい。
【０４６３】
特に好ましくは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７４〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０８のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．４７４〜Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．５０８のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、３’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、５’末端で２個〜５個、好ましくは、２個〜４個、より好ましくは、３個〜４個のＬＮＡユニット断片を含み、およびＬＮＡユニットの２個の断片の間には少なくとも６個、好ましくは７個、より好ましくは８個のＤＮＡユニット断片を含み、ここで、ＬＮＡユニットは、β−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ１）、β−Ｄ−チオ−ＬＮＡ（ｂ２）、α−Ｌ−オキシ−ＬＮＡ（ｂ４）、β−Ｄ−（ＮＨ）−ＬＮＡ（ｂ６）、およびβ−Ｄ−（Ｎ
ＣＨ３）−ＬＮＡ（ｂ７）、から選択され、ヌクレオチド間結合は、ホスフェート、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエートから選択される。当該好ましいアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、任意の修飾３’末端および５’末端を含まなくてもよく、または任意の３’末端基および５’末端基を含まなくてもよく、修飾核酸塩基としてＬＮＡユニット、好ましくは全てのＬＮＡユニットにおいて、５−メチルシトシンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて２−アミノアデニンを、および／または、いくつかの、もしくは全てのＤＮＡユニットにおいて５−メチルシトシンを含んでもよい。
【０４６４】
さらに特に好ましくは、表９（Ｓｅｑ．Ｎｏ．２８４ａ〜２３６ｂ）のギャップマーアンチセンス−オリゴヌクレオチドである。
【０４６５】
【表４−１】
0006832285.tif 000024
【０４６６】
【表４−２】
0006832285.tif 000025
【０４６７】
【表４−３】
0006832285.tif 000026
【０４６８】
【表４−４】
0006832285.tif 000027
【０４６９】
【表５−１】
0006832285.tif 000028
【０４７０】
【表５−２】
0006832285.tif 000029
【０４７１】
【表５−３】
0006832285.tif 000030
【０４７２】
【表５−４】
0006832285.tif 000031
【０４７３】
【表６−１】
0006832285.tif 000032
【０４７４】
【表６−２】
0006832285.tif 000033
【０４７５】
【表６−３】
0006832285.tif 000034
【０４７６】
【表６−４】
0006832285.tif 000035
【０４７７】
【表７−１】
0006832285.tif 000036
【０４７８】
【表７−２】
0006832285.tif 000037
【０４７９】
【表７−３】
0006832285.tif 000038
【０４８０】
【表７−４】
0006832285.tif 000039
【０４８１】
【表８−１】
0006832285.tif 000040
【０４８２】
【表８−２】
0006832285.tif 000041
【０４８３】
【表８−３】
0006832285.tif 000042
【０４８４】
【表８−４】
0006832285.tif 000043
【０４８５】
【表８−５】
0006832285.tif 000044
【０４８６】
【表９−１】
0006832285.tif 000045
【０４８７】
【表９−２】
0006832285.tif 000046
【０４８８】
【表９−３】
0006832285.tif 000047
【０４８９】
【表９−４】
0006832285.tif 000048
【０４９０】
【表９−５】
0006832285.tif 000049
【０４９１】
医薬組成物
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、好ましくは、実質的に無毒な薬学的に許容される担体、賦形剤、アジュバント、溶媒、または希釈剤を任意に使用してそれらの薬学的に活性な塩の形態で投与される。本発明の医薬品は、従来の固体もしくは液体担体、または希釈剤で、および公知の方法で適切な用量レベルで従来の薬学的に作られるアジュバントで調製される。好ましい調製物および製剤は、輸液または注射(髄腔内、脳室内、頭蓋内、静脈内、実質内、腫瘍内、眼内または眼外、腹腔内、筋肉内、皮下)、脳への局所投与、吸入、固体腫瘍への局所投与、または経口投与に適切な投与可能形態である。しかしながら、上皮ライニング、または粘膜皮膚ライニング（口腔粘膜、直腸ライニングおよび腟上皮ライニング、鼻咽頭粘膜、腸粘膜）を介する吸収、直腸的に、経皮的に、局所的に、皮内に（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌｌｙ）、胃内に、皮内に（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、膣内に、管内に（ｉｎｔｒａｖａｓａｌｌｙ）、鼻腔内に、口腔内に（ｉｎｔｒａｂｕｃｃａｌｌｙ）、経皮的に（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、舌下に適用、または医薬分野内で利用できる任意の他の手段、のような、他の適用形態が可能である。
【０４９２】
投与可能製剤は、例えば、注射用液体製剤、遅延性製剤、特に吸入用の散剤、ピル、錠剤、フィルム錠、被覆錠剤、分散性顆粒、糖衣錠、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤、エマルジョン、カプセル及び沈殿物を含む。他の投与可能ガレン製剤は、埋め込み式ポンプまたはカテーテルを介して脳内への連続的な注入のようなのも可能である。
【０４９３】
本願において使用される用語「薬学的に許容できる」は、製剤中の有効成分としてアンチセンス−オリゴヌクレオチドの生物活性の有効性と干渉せず、投与される宿主に対して毒性を持たない任意の担体に関する。好適な医薬担体の例は、当該技術分野ではよく知られており、リン酸緩衝生理食塩液、水、油／水エマルジョンのようなエマルジョン、各種湿潤剤、滅菌液等を含む。当該担体を、慣習的な方法で製剤化することができ、活性化合物を有効な用量で患者に投与することができる。
【０４９４】
「有効用量」は、疾患の進路および重症度に影響を与え、当該病理の減少または寛解につながるのに十分である有効成分としてのアンチセンスオリゴヌクレオチドの量に関する。これらの疾患や障害を治療および／または予防するのに有用な「有効用量」は、当業者に公知の方法を用いて決定されてもよい。さらに、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、リポソーム、錯体形成剤、受容体標的分子、溶媒、防腐剤および／または希釈剤と共に混合、および投与されてもよい。
【０４９５】
好ましくは、有効成分の連続放出のための、特に、本発明の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドの髄こう内投与、脳室内投与、または頭蓋内投与のための連続輸液のための、輸液又は固体マトリックスの形態での医薬製剤である。また、好ましくは、脳内への局所投与に適した溶液または固体マトリックスの形態の医薬製剤である。肺の線維性疾患には、吸入製剤が特に好ましい。
【０４９６】
滅菌液を使用するための準備は、例えば、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、５〜１０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、ショ糖、乳糖、マンニトール又はソルビトールなどの糖類の中から選択される等張剤を含む。溶液ｐＨを６〜８（好ましくは７〜８）に制御するための好適な緩衝剤を含んでもよい。製剤における他の任意成分は、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０やトゥイーン８０などの非イオン性界面活性剤であることができる。
【０４９７】
使用のために再構成される滅菌凍結乾燥粉末は、少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、および任意に増量剤(例えば、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、グリシン)および／または凍結保護物質(例えば、トレハロース、マンニトール)を含む。再構成のための溶媒は、ｐＨ６〜８に制御する緩衝塩の有無にかかわらず注入可能な化合物のために水であることもできる。
【０４９８】
吸入に適したエアロゾル製剤は、溶液や粉末状の固体を含んでいてもよく、例えば窒素などの不活性圧縮ガスなどの薬学的に許容される担体と併用してもよい。
特に好ましい医薬組成物は、吸入または静脈内投与による投与に適した凍結乾燥(フリーズドライ)製剤(凍結乾燥物)である。好ましい凍結乾燥製剤を調製するために、本発明の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドを４〜５％（ｗ／ｖ）マンニトール溶液に可溶化し、その後、溶液を凍結乾燥させる。マンニトール溶液は、上述の適切な緩衝液で調製することもできる。
【０４９９】
さらに適切な冷凍／凍結保護剤(そうでなければ、増量剤または安定剤と称する)は、チオール遊離アルブミン、免疫グロブリン、ポリアルキレンオキシド(例えば、ＰＥＧ、ポリプロピレングリコール)、トレハロース、グルコース、スクロース、ソルビトール、デキストラン、マルトース、ラフィノース、スタキオースおよび他の糖類(例えば、ＷＯ９７／２９７８２参照)を含み、マンニトールが好ましくは使用される。これらは従来の凍結技術で従来の量で使用することができる。凍結の方法は、医薬製剤を調製する当該分野においてよく知られている。
【０５００】
吸入投与のために凍結乾燥製剤の粒子径は、好ましくは２〜５μｍ、より好ましくは、３〜４μｍである。凍結乾燥製剤は、例えば、ＯＰＴＩＮＥＢ（登録商標）、またはＶＥＮＴＡ−ＮＥＢ（登録商標）吸入器（ＮＥＢＵ−ＴＥＣ、エルゼンフェルト（Ｅｌｓｅｎｆｅｌｄ）、ドイツ)を用いた投与に特に適切である。凍結乾燥製品は、吸入投与のために滅菌蒸留水または任意の他の適切な液体に再水和されることができる。代替的に、静脈内投与のために凍結乾燥製品を、滅菌蒸留水または任意の他の適切な液体に再水和するとができる。
【０５０１】
滅菌蒸留水または他の適切な液体における投与のための再水和後、凍結乾燥製剤は、再水和ペプチド製剤のための標的組織、すなわち、静脈内投与のための血液、または吸入投与のための肺組織のおおよその生理学的モル浸透圧濃度を有するべきである。従って、再水和製剤は実質的に等張であると好ましい。
【０５０２】
静脈内、経口、または吸入投与のいずれに対しても好ましい投与濃度は、１０〜２０００μｍｏｌ／ｍｌ、より好ましくは２００〜８００μｍｏｌ／ｍｌである。
錠剤やカプセルの形での経口投与のために、少なくとも１つのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを、ラクトース、デンプン、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、タルク、マンニトール、エチルアルコール（液体の形態）などのような任意の経口無毒な薬学的に許容できる不活性担体と組み合わせてもよい。さらに、所望される、または、必要とされる場合、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤を混合物に包含されてもよい。
【０５０３】
粉末および錠剤は、約５％〜約９５％の発明組成物から構成されていてもよい。
適切な結合剤は、デンプン、ゼラチン、天然糖、トウモロコシ甘味料、アカシアのような天然および合成ガム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチル−セルロース、ポリエチレングリコールおよびワックスを含む。潤滑剤の中で、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が、これらの剤形で使用するために挙げられてもよい。崩壊剤は、デンプン、メチルセルロース、グアーガム等を含む。
【０５０４】
さらに、本発明の組成物は、治療効果を最適化するための少なくとも１つのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの速度制御放出を提供するために徐放性形態で製剤化されてもよい。持続性放出のための適切な投与形態は、少なくとも１つのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを含む持続性放出のための埋込型生分解性マトリックスを含み、少なくとも１つのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを含浸させた種々の崩壊率のまたは制御放出のポリマーマトリックス層を含む層状錠剤を含む。
【０５０５】
液体形態製剤は、溶液、懸濁液およびエマルジョンを含む。例として、非経口注射用の水、もしくは水−ポリエチレングリコール、または経口溶液、懸濁液およびエマルジョンのための、甘味料および乳白剤の添加が挙げらえてもよい。
【０５０６】
適切な希釈剤は、通常、組成物または投与形態の主要部分を構成する物質である。適切な希釈剤は、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトール等の糖類、小麦、トウモロコシ、米、およびジャガイモ由来のデンプン、並びに、微結晶セルロースなどのセルロースを含む。組成物中の希釈剤の量は、組成物全体の約５重量％〜約９５重量％、好ましくは、約２５重量％〜約７５重量%の範囲であることができる。
【０５０７】
用語崩壊剤は、組成物が分解（崩壊）し、薬物を解放するのを助けるために組成物に添加される材料に関する。適切な崩壊剤は、デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム等の「冷水可溶」変性澱粉、イナゴ豆、カラヤ、グアーガム、トラガカントおよび寒天などの天然および合成ガム、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウムなどのクロスリンクされた微結晶性セルロース、アルギン酸およびアルギン酸ナトリウムなどのアルギネート、ベントナイトなどの粘土、並びに発泡性混合物を含む。組成物中の崩壊剤の量は、組成物の約１〜約４０重量％、好ましくは、組成物の２〜３０重量％、より好ましくは、組成物の約３〜２０重量％、最も好ましくは、組成物の約５〜１０重量％の範囲であることができる。
【０５０８】
結合剤は、粉末を共に結合し、または「接着」し、顆粒を形成することにより、粉末を凝集させるので、製剤において「接着剤」として機能する物質と特徴付ける。結合剤は、希釈剤または増量剤においてすでに利用可能な凝集力を追加する。適切な結合剤は、スクロースなどの糖、小麦、トウモロコシ、米、およびジャガイモ由来の澱粉；アカシア、ゼラチン、およびトラガカントなどの天然ガム；アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、およびアルギン酸アンモニウムカルシウムなどの海藻類の誘導体；メチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースナトリウム、およびヒドロキシプロピル−メチルセルロースなどのセルロース系材料；ポリビニルピロリドン；ケイ酸マグネシウムアルミニウムなど
の無機物、を含む。組成物中の結合剤の量は、組成物の約１〜３０重量％、好ましくは、組成物の約２〜約２０重量％、より好ましくは、約３〜約１０重量％、さらにより好ましくは、約３〜約６重量％の範囲であることができる。
【０５０９】
潤滑剤は、圧縮された後の錠剤、顆粒などを、摩擦や磨耗を低減することによりモールド（ｍｏｌｄ）またはダイ（ｄｉｅ）から離すことを可能にするために剤形に添加される物質に関する。適切な潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、またはステアリンカリウムなどの金属ステアレート、ステアリン酸；高融点ワックス；例えば、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコールおよびＤ，Ｌ−ロイシンなどの水溶性潤滑剤を含む。潤滑剤は顆粒の表面に、および顆粒と錠剤圧縮部分との間に存在する必要があるので、通常、圧縮する前に、非常に最後のステップで加えられる。組成物中の潤滑剤の量は、組成物の約０．０５〜約１５重量％、好ましくは、組成物の０．２〜約５重量％、より好ましくは、組成物の約０．３〜約３重量％、最も好ましくは、組成物の約０．３〜約１．５重量％の範囲であることができる。
【０５１０】
滑剤は、固化を防止し、流れが滑らかで均一になるように顆粒の流動特性を向上させる材料である。適切な滑剤は、二酸化ケイ素およびタルクを含む。組成物中の滑剤の量は、組成物の約０．０１〜１０重量％、好ましくは、全組成物の０．２〜約７重量％、より好ましくは、約０．２〜５重量％、最も好ましくは、約０．５〜約２重量％の範囲であることができる。
【０５１１】
本願に開示される医薬組成物において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの塩の形で、任意にアンチセンス−オリゴヌクレオチドの安定性を増加させる、ＲＮａｓｅＨのリクルートを増加させる、標的の発見特性を増加させる、細胞内取込みを向上させる他の成分、および同様のものと共に含まれる。これらの目標を達成するために、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、これらの目的を達成するために有用な更なる成分の使用の代わりに、または加えて、化学修飾されてもよい。従って本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取込み等を向上させる部分または成分に化学的に連結されていてもよい。当該部分は、例えばコレステロール部分、コール酸、チオエーテル、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール、チオコレステロールなどの脂質部分、例えば、ドデカンジオール、またはウンデシル残基などの脂肪族鎖、例えば、ジヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウム−１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３Ｈ−ホスホネートなどのリン脂質、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、またはアダマンチン酢酸、パルミチル部分、またはオクタデシルアミン、またはへキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分を含む。本発明は、キメラ化合物であるアンチセンスオリゴヌクレオチドも含む。本発明の文脈における「キメラ」アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、２つ以上の化学的に異なる領域を含むアンチセンス−オリゴヌクレオチドであり、１つは、細胞取り込みを増加させ、ヌクレアーゼ分解に対する耐性を増加させ、標的核酸に対する結合親和性を増加させ、ＲＮａｓｅＨのリクルートを増加させるなどのための部分または成分に接続される本願に開示されるオリゴヌクレオチド配列である。例えば、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの付加領域または部分または成分は、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッド、またはＲＮＡ：ＲＮＡ分子を切断することができる酵素の基質として機能してもよい。例として、ＲＮａｓｅＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドリボヌクレアーゼである。ＲＮａｓｅＨの活性化は、ＴＧＦ−ＲＩＩをコードするｍＲＮＡである標的ＲＮＡの切断を起こすので、遺伝子発現のアンチセンス−オリゴヌクレオチド阻害の効率を大きく高めることになる。その結果、キメラオリゴヌクレオチドを用いた場合には、より短いオリゴヌクレオチドを用いて同等の成果を得られることが多い。
指示（Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ）
本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）の感染後および炎症性疾患を含む、神経変性疾患、神経外傷、神経血管性および神経炎症性疾患の予防および治療のために本願に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０５１２】
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、損傷した神経経路の再生や機能的再結合を促進するのに、および／または、神経幹細胞複製における年齢誘導減少の治療および補償に、特に有用である。
【０５１３】
したがって、本発明の別の態様は、神経新生を活性化することにより再生神経組織を促進し、神経細胞の分化および移動を可能にし、新たな神経細胞の解剖学的および機能的神経回路への統合を誘導するための、本願に開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０５１４】
本発明の更なる態様は、神経系に損傷を有する、または線維化もしくは幹細胞ターンオーバーの損失によって誘導される他の臓器系に損傷を有する患者における再生および臨床的(構造的)修復を促進するための、本願において開示されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０５１５】
さらに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、年齢、炎症または遺伝子欠損によって誘発される神経幹細胞複製の減少における補償および処置のために有用である。
本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、ＴＧＦ−ＲＩＩ発現を阻害し、その結果、上方調節された、または向上したＴＧＦ−ＲＩＩおよび／またはＴＧＦ−ＲＩＩレベルに関連する疾患の治療に用いられる。
【０５１６】
したがって、本発明の別の態様は、神経変性疾患、神経炎症性疾患、外傷性、または外傷後疾患、血管性、またはより正確には神経血管性疾患、低酸素障害、感染後中枢神経系疾患、線維性疾患、過剰増殖性疾患、癌、腫瘍、老人性難聴、および老人性遠視の予防および治療におけるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０５１７】
用語「神経変性疾患」または「神経疾患」または「神経炎症性障害」は、中枢または末梢神経系に影響を与える任意の疾患、障害、または状態に関し、ＡＤＨＤ、エイズ−神経合併症、透明中隔の欠損、後天性てんかん性失語症、急性散在性脳脊髄炎、副腎白質ジストロフィー、脳梁の欠損、認知不能症、アイカルディ症候群、アレクサンダー病、アルパーズ病、交代性片麻痺、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、失語症、失行症、くも膜嚢胞、くも膜炎、アーノルド−キアリ奇形、動静脈奇形、アスパルテーム、アスペルガー症候群、毛細血管拡張性運動失調症、運動失調症、注意欠陥多動性障害、自閉症、自律神経機能障害、背痛、バース症候群、バッテン病、ベーチェット病、ベル麻痺、良性本能性眼瞼けいれん、良性限局性筋委縮、良性頭蓋内圧亢進症、ベルナール−ロス症候群、ビンスワンガー病、眼瞼痙攣、ブロッホ−ザルツバーガー症候群、腕神経叢出生時外傷、腕神経叢外傷、ブラッドベリー−エグルストン症候群、脳動脈瘤、脳損傷、脳および脊髄腫瘍、ブラウン−セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、カナヴァン病、手根管症候群、灼熱痛、海綿腫、海綿血管腫、海綿状奇形、中央頸髄症候群、中心性脊髄症候群、中枢性疼痛症候群、頭部障害、小脳変性症、小脳形成不全、脳動脈瘤、脳動脈硬化、脳萎縮、脳性脚気、脳性巨人症、脳低酸素症、脳性麻痺、脳−眼−顔−骨格症候群、シャルコー−マリー−トゥース病、キアリ奇形、舞踏病、有棘赤血球舞踏病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性起立失調、慢性疼痛、コケイン症候群タイプＩＩ、コフィン−ローリー症候群、遷延性植物状態を含む昏睡、複合局所疼痛症候群、先天性顔面神経対まひ、先天性重症筋無力症、先天性ミオパシー、先天性血管海綿状奇形、基底核変性症、頭蓋動脈炎、頭蓋骨癒合
、クロイツフェルト−ヤコブ病、累積外傷性障害、クッシング症候群、巨大細胞封入体病（ＣＩＢＤ）、サイトメガロウイルス感染、ダンシングアイ−ダンシング脚症候群、ダンディ−ウォーカー症候群、ドーソン病、ドモルシア症候群、デジェリン−クルンプケ麻痺、多発梗塞性認知症、皮質性痴呆、レビー小体型認知症、皮膚筋炎、発達性統合運動障害、デビック症候群、糖尿病性神経障害、びまん性硬化症、ドラベ症候群、自律神経障害、書字障害、失読症、嚥下困難、統合運動障害、ジストニア、早期乳児てんかん脳症、エンプティセラ症候群、脳炎嗜眠性脳炎、脳炎および髄膜炎、脳瘤、脳症、脳３叉神経領域血管腫症、てんかん、エルブ麻痺、エルブ−デュシェンヌおよびデジェリン−クルンプケ麻痺、ファブリ病、ファール症候群、失神、家族性自律神経障害、家族性血管腫、家族性特発性基底核石灰化、家族性痙攣麻痺、熱性発作（例えば、ＧＥＦＳおよびＧＥＦＳプラス)、フィッシャー症候群、フロッピー乳児症候群、フリードライヒ運動失調症、ゴーシェ病、ゲルストマン症候群、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー病、巨細胞性動脈炎、巨細胞性封入体病、球様細胞白質萎縮症、舌咽神経痛、ギラン−バレー症候群、ＨＴＬＶ−１関連脊髄症、ハレルフォルデン−スパッツ病、頭部外傷、頭痛、持続性片側頭痛、片側顔面痙攣、交代性片麻痺、遺伝性神経障害、遺伝性痙性対麻痺、遺伝性多発神経炎性失調、耳帯状疱疹、帯状疱疹、平山症候群、全前脳欠損症、ハンチントン病、水頭無脳症、正常圧水頭症正常圧、水頭症(特に、ＴＧＦ−β誘発水頭症)、水脊髄症、副腎皮質機能亢進、過眠症、高血圧症、低血圧症、低酸素症、免疫介在脳脊髄炎、封入体筋炎、色素失調症、乳児低血圧症、乳児フィタン酸蓄積症、乳児レフサム病、乳児けいれん、炎症性筋疾患、腸性リポジストロフィー、頭蓋内嚢胞、頭蓋内高血圧、アイザック症候群、ジュベール症候群、カーンズセイヤー症候群、ケネディー病、キンスボーン（Ｋｉｎｓｂｏｕｒｎｅ）症候群、クライン−レビン症候群、クリッペル−フェイル症候群、クリッペル−トレノニー症候群（ＫＴＳ）、クリューヴァー−ビューシー症候群、コルサコフ健忘症候群、クラッベ病、クーゲルバーグ−ヴェランダー病、クールー病、ランバート−イートン筋無力症候群、ランドー−クレフナー症候群、外側大腿皮神経絞扼、外側髄症候群、学習障害、リー病、レノックス−ガストー症候群、レッシュ−ナイハン症候群、白質ジストロフィー、レヴァイン−クリッチュリー症候群、レビー小体型認知症、間脳腫瘍、ロックイン症候群、ルーゲーリッグ病、神経学的後遺症、ライム病の神経学的合併症、マチャド−ジョセフ病、巨大脳髄症、巨脳症、メルカーソン−ローゼンタール症候群、髄膜炎、メンケス病、知覚異常性大腿神経痛、異染性白質ジストロフィー、小頭症、片頭痛、ミラーフィッシャー症候群、軽度の脳卒中、ミトコンドリア筋症、メビウス症候群、単肢筋萎縮症、運動ニューロン疾患、もやもや病、ムコリピド症、ムコ多糖症、多発梗塞性認知症、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症（ＭＳ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ−ＣおよびＭＳＡ−Ｐ）、起立性低血圧を伴う多系統萎縮症、筋ジストロフィー、先天性筋無力症、重症筋無力症���ミエリン破壊性びまん性硬化症（ｍｙｅｌｉｎｏｃｌａｓｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、乳児のミオクロニー脳症、ミオクローヌス、先天性ミオパシー、甲状腺中毒性ミオパシー、ミオパシー、先天性筋緊張症、筋緊張症、ナルコレプシー、神経有棘赤血球症、脳鉄蓄積を有する神経変性症、神経線維腫症、神経遮断薬悪性症候群、エイズの神経学的合併症、ポンペ病の神経症状、視神経オプティカ、神経性筋緊張病、神経セロイドリポフスチン症、神経遊走障害、遺伝性ニューロパシー、神経サルコイドーシス、神経毒性、海綿静脈母斑、ニーマン−ピック病、オサリバン−マクラウド症候群、後頭神経痛、オカルト脊椎管癒合異常配列、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、オプソクローヌスミオクローヌス、起立性低血圧、濫用症候群、慢性疼痛、腫瘍随伴症候群、感覚異常、パーキンソン病、先天性パラミオトニア、発作性舞踏病、発作性片側頭痛、ペイリー−ロンベルグ病、ペリツェウス−メルツバッハー病、ペナ  ショッカー症候群ＩＩ型、神経周囲嚢胞、周期性麻痺、末梢神経障害、脳室周囲白質軟化症、遷延性植物状態、広汎性発達障害、フィタン酸貯留病、ピック病、梨状筋症候群、下垂体腫瘍、多発性筋炎、ポンペ病、孔脳症、ポストポリオ症候群、帯状疱疹後神経痛、後感染性脳脊髄炎、体位性低血圧、体位性起立性頻拍症候群、体位頻拍症候群、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性顔面半側萎縮症、進行性脊髄ろう、進行性多病巣性白質脳症、進行性硬化
性ポリオジストロフィー、進行性核上性麻痺、偽性脳腫瘍、ピリドキシン依存性およびピリドキシン応答性発作性疾患、ラムジーハント症候群Ｉ型、ラムジーハント症候群タイプＩＩ型、ラスムッセン脳炎および他の自己免疫てんかん、反射性交感神経性ジストロフィー症候群、乳児レフスム病、レフスム病、反復運動障害、反復的ストレス傷害、むずむず脚症候群、レトロウイルス関連脊髄症、レット症候群、ライ症候群、ライリー−デイ症候群、ＳＵＮＣＴ頭痛、仙骨神経根嚢胞、聖ヴァイタス舞踏病、唾液腺疾患、サンドホフ病、シルダー病、裂脳症、発作性疾患、中隔視神経異形成症、乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）、揺さぶられっ子症候群、帯状疱疹、シャイ−ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、睡眠時無呼吸、睡眠病、ソトス症候群、痙縮、脊椎披裂、脊髄梗塞、脊髄損傷、脊髄腫瘍、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳萎縮、スティール−リチャードソン−オルシェウスキー症候群、スティッフパーソン症候群、線条体黒質変性症、脳卒中、スタージ−ウェーバー症候群、亜急性硬化性汎脳炎、皮質下動脈硬化性脳症、嚥下障害、シデナム舞踏病、失神、梅毒脊髄硬化症、水脊髄空洞症、脊髄空洞症、全身性エリテマトーデス、脊髄癆、遅発性ジスキネジア、ターロブ嚢胞、テイ−サックス病、側頭動脈炎、繋留脊髄症候群、トムセン病、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパシー、三叉神経痛、トッド麻痺、トゥレット症候群、一過性虚血発作、伝染性海綿脳症、横断性脊髄炎、外傷性脳損傷、震え、三叉神経痛、熱帯性痙性不全対麻痺症、結節性硬化症、血管勃起性腫瘍、側頭動脈炎を含む血管炎、フォンエコーノモ病、フォンヒッペル−リンダウ病（ＶＨＬ）、フォンレックリングハウゼン病、ワレンベルク症状群、ウェルドニッヒ−ホフマン病、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウェスト症候群、ウィップル病、ウィリアムス症候群、ウイルソン病、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症、ゼルウィガー症候群を含む。
【０５１８】
神経変性疾患および神経炎症性疾患の好ましい例は、
アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、クロイツフェルトヤコブ病の新しい変異体（ｎｖＣＪＤ）、ハレルフォルデン  スパッツ病、ハンチントン病、多系統萎縮症、認知症、前頭側頭型認知症、複数の自発的または遺伝的背景の運動ニューロン障害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄筋萎縮症、小脳萎縮症（ＳＣＡｓ）、統合失調症、情動障害、大うつ病、髄膜脳炎、細菌性髄膜脳炎、ウイルス性髄膜脳炎、ＣＮＳ自己免疫疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、急性虚血性／低酸素性病変脳卒中、ＣＮＳおよび脊髄外傷、頭および脊椎の外傷、脳外傷性傷害、動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、微小血管症性認知症痴呆、ビンスワンガー病（白質希薄化）、網膜変性症、蝸牛変性症、黄斑変性症、蝸牛難聴、エイズ関連認知症、網膜色素変性症、脆弱Ｘ関連震え／失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、線条体黒質変性症（ＳＮＤ）、オリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＤ）、シャイドレーガー症候群（ＳＤＳ）、年齢依存性記憶欠損、認知症関連神経発達障害、ダウン症候群、シヌクレイノパチー、スーパーオキシドジスムターゼ変異、ハンチントン病気のようなトリヌクレオチド反復障害、外傷、低酸素症、血管疾患、血管炎症、ＣＮＳ老化、
を含む、またはからなる群から選択される。また幹細胞更新の年齢依存的減少であってもよい。
【０５１９】
神経変性疾患および神経炎症性疾患の特に好ましい例は、
アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、水頭症(特に、ＴＧＦβ−誘導水頭症)、脊髄損傷などの、ＣＮＳの、および脊髄の、外傷、頭部の、および脊椎の外傷、脳外傷性傷害、網膜変性症、黄斑変性症、蝸牛難聴、エイズ関連認知症、ハンチントン病のようなトリヌクレオチド反復障害、およびＣＮＳ老化、
を含む、または、からなる群から選択される。
【０５２０】
アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、線維性疾患の予防および治療にも有用である。線維化または線維性疾患は、修復性または反応性プロセスにおける器官または組織の過剰
な繊維状結合組織の形成である。これは、反応性、良性、または病理学的状態であることができる。損傷に応答して、これは瘢痕と呼ばれ、線維化が単一細胞系列から発生する場合、線維腫と呼ばれる。生理学的に、これは、細胞外マトリックスを堆積させるために作用し、基になる器官または組織の構造および機能を消し去ることができる。線維化は、繊維組織の過剰堆積の病理学的状態、および治療における結合組織堆積の過程を説明するために使用することができる。線維化は、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンを含む結合組織を形作るために刺激された細胞を含む過程である。続いて間質の間のマクロファージおよび損傷を受けた組織は、ＴＧＦ−βを放出する。ＴＧＦ−βは、結合組織を堆積させる線維芽細胞の増殖および活性化を刺激する。ＴＧＦ−βレベルを減らすことは、結合組織の形成を減少させるので、線維化を防ぎ、治療する。
【０５２１】
線維性疾患の例は、
肺：・肺線維症
・特発性肺線維症(特発性は原因が不明であることを意味する)
・嚢胞性線維症
肝臓:・多発性起源肝硬変
心臓：・心筋線維症
・古い心筋梗塞
・心房線維症
その他：・縦隔線維症(縦隔の軟組織)
・緑内障（眼、眼の）
・骨髄線維症（骨髄）
・後腹膜線維症（後腹膜腔の軟組織)
・進行性塊状線維症（肺）；石炭労働者じん肺症の合併症
・腎性全身性線維症(皮膚)
・クローン病(腸管)
・ケロイド(皮膚)
・強皮症／全身性硬化症(皮膚、肺)
・関節線維化（膝、肩、他の関節）
・ペイロニー病（陰茎）
・デュプイトラン拘縮（手、指）
・癒着性関節包炎のいくつかの形態（肩）
・ループスエリテマトーデス後のレジデュー（ｒｅｓｉｄｕｕｍｓ）
である。
【０５２２】
したがって、本発明の他の態様は、肺線維症、嚢胞性線維症、肝硬変、心内膜心筋線維症、陳旧性心筋梗塞、心房線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症、腎性全身性線維症、原発開放隅角緑内症のような緑内障、クローン病、ケロイド、全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー病、デュプイトラン拘縮、およびループスエリテマトーデス後のレジデューの、予防および／もしくは治療のためのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用、または、予防および／もしくは治療のための医薬組成物の調製のためのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０５２３】
本発明の更に別の態様は、過剰増殖性疾患、癌、腫瘍およびそれらの転移の予防および／または治療のためのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用に関し、または、過剰増殖性疾患、癌、腫瘍およびそれらの転移の予防および／または治療のための医薬組成物の調製のためのアンチセンス−オリゴヌクレオチドの使用に関する。
【０５２４】
過剰増殖性疾患、癌、腫瘍の例は、腺癌、黒色腫、急性白血病、聴神経腫瘍、乳頭部癌腫、肛門癌、星状細胞腫、基底細胞癌、膵癌、デスモイド腫瘍、膀胱癌、気管支癌、非小
細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、バーキットリンパ腫、コーパス癌、ＣＵＰ−症候群（原発不明の癌腫)、大腸癌、小腸癌、小腸腫瘍、卵巣癌、子宮内膜癌、上衣腫、上皮癌型、ユーイング腫瘍、消化管腫瘍、胃癌、胆嚢癌、胆嚢癌腫、子宮癌、子宮頸癌、子宮頸部、神経膠芽細胞腫、婦人科腫瘍、耳、鼻および喉の腫瘍、血液学的新生組織形成、有毛細胞白血病、尿道癌、皮膚癌、皮膚精巣癌、脳腫瘍(星状細胞腫、乏突起膠細胞、髄芽細胞腫、ＰＮＥＴ、混合膠腫、などのグリオーマ)、脳転移、睾丸癌、脳下垂腫瘍、カルチノイド、カポジ肉腫、喉頭癌、生殖細胞腫、骨癌、結腸直腸癌、頭頸部腫瘍（耳、鼻、喉領域の腫瘍）、大腸癌、頭蓋咽頭腫、口腔癌（口領域および唇上の癌）、中枢神経系の癌、肝臓癌、肝転移、白血病、眼瞼腫瘍、肺癌、リンパ節癌（ホジキン／非ホジキン）、リンパ腫、胃癌、悪性黒色腫、悪性新生物、悪性消化管腫瘍、乳癌、直腸癌、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、ホジキン病、菌状息肉腫、鼻癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、腎癌、腎細胞癌、非ホジキン病リンパ腫、乏突起膠腫、食道癌、溶骨性癌、および骨形成性癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、形質細胞腫、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ），前立腺癌、咽頭癌、直腸癌、網膜芽細胞腫、腟癌、甲状腺癌、シュネーベルガー病、食道癌、スピナリオムズ（ｓｐｉｎａｌｉｏｍｓ）、Ｔ−細胞リンパ腫(菌状息肉症)、胸腺腫、管癌、眼（ｅｙｅ）／眼（ｏｃｕｌａｒ）腫瘍、尿道癌、泌尿器腫瘍、尿路上皮癌、外陰部癌、疣贅出現（ｗａｒｔ  ａｐｐｅａｒａｎｃｅ）、軟部組織腫瘍、軟組織肉腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、および舌癌、を含む、または、からなる群から選択される。
【０５２５】
用語「癌」は、好ましくは、
肺癌腫のような肺癌；肝細胞癌などの肝臓癌；黒色腫、または悪性黒色腫；膵上皮癌または膵腺癌などの膵癌；結腸直腸腺癌などの大腸癌；胃癌または胃癌腫；乳癌；悪性星細胞腫；前立腺癌；胃癌腫のような；急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、単球性白血病、前骨髄球性白血病、リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、リンパ性白血病および急性リンパ性白血病などの白血病；組織球性リンパ腫などのリンパ腫、
からなる、または含む群から選択される癌に関する。
【０５２６】
過剰増殖性疾患、癌、腫瘍およびそれらの転移の治療のために、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、例えば、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、または１３日のような３日〜２週間の間、例えば、６日、７日、または８日のような約１週間、の定期的な間隔（投与間隔、ＤＩ）で投与してもよい。適切に少なくとも２回投与は、３、４、５、６、７、８、９、または１０用量などが、２回投与の間にＤＩ期間で、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの各投与間のそれぞれの投与間隔（ＤＩ）で提供される。各投与量間のＤｌ期間は、例えば、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、または１３日のような３日〜２週間の間、例えば、６日、７日、または８日のような約１週間と同じでよい。
【０５２７】
好ましくは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの各用量は、例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇなどの、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇであってもよい。いくつかの実施形態において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの各用量は、約２ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇ、または約４ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、または約４ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇであってもよい。いくつかの実施形態において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの各用量は、例えば、２、３、４、５、６、７、または８ｍｇ／ｋｇ、例えば、６ｍｇ／ｋｇなどのような、少なくとも２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドのための投与計画は、初期投与計画の後に、例えばアンチセンス−オリゴヌクレオチドが投与されていない休止期間後に繰り返されてもよい。このような休止期間などは、約３週間もしくは約４週間、または約５週間もしくは約６週間のような期間で２週間を超えてもよい。いくつかの実施形態において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドの
ための投与計画は、一週間投与であり、３回、４回、または５回と繰り返される。この投与計画は、その後、例えば、約４週間のような約３〜５週間などの休止期間後に、繰り返される。いくつかの実施形態において、アンチセンス−オリゴヌクレオチドは、初期投与計画の間に、２〜１０投与が４日〜１３日の定期的な投与間隔（ＤＩ）で投与される。
【０５２８】
アンチセンス−オリゴヌクレオチドの投与は、通常、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内投与などの非経口投与によって行われる。
【図面の簡単な説明】
【０５２９】
【図１】図１は、アンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の阻害効果を示す。ＤＮＡは細胞の核にあるＰｒｅ−ｍＲＮＡに転写され、アンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、（右側から第一のＡＳＯ、および左側から第一のＡＳＯによって表されるような）エキソン内で、または（右側から第二のＡＳＯによって表されるような）イントロン内で、または、（左側から第二のＡＳＯによって表されるような）エキソン領域および隣接イントロン領域からなるアロケーションで、相補的な配列に結合、またはハイブリダイズすることができる。転写後修飾によって、すなわちスプライシングによって、ｍＲＮＡは、蛋白質配列へとｍＲＮＡの翻訳するのを阻害するために細胞の細胞質において、結合、またはハイブリダイズすることができるように形成される。したがって、ＡＳＯは、標的遺伝子およびタンパク質発現を選択的にノックダウンする。
【図２】図２は、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドがギャップマーである場合に特に領域Ｂにおいて、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれていてもよい、非ＬＮＡユニットである、ヌクレオシドユニット(ヌクレオチド間結合なし)、またはヌクレオチドユニット(ヌクレオチド間結合あり)を示す。
【図３】図３は、ＴＧＦ−βおよび神経幹細胞、癌幹細胞、および腫瘍へのＴＧＦ−βの影響を示す。ＴＧＦ−βは、神経幹細胞の増殖を阻害する。これは、癌幹細胞への移行に影響を与え得り、このことはＴＧＦ−β成長制御から逃れるかもしれない。後に、腫瘍の進行において、ＴＧＦ−βは癌遺伝子として作用し；さらに血管新生を促進し、免疫系を抑制することで腫瘍の増殖を促進する。さらに、細胞遊走を促進することにより細胞を転移に駆動させる。
【図４】図４は、５’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ｃ＊ｂ１』および『Ａｂ１』および『Ｔｂ１』）、および３’末端で４個のＬＮＡユニット（『Ａｂ１』および『Ｇｂ１』および『Ｔｂ１』および『Ａｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に９個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＧ、ｄＡ、ｄＡ、ｄＴ、ｄＧ、ｄＧ、ｄＡ、ｄＣ、およびｄＣ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から最初のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）である、１６個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３０】
SP   L  Seq ID 
No      配列,5’−3'
4217 16 218b『C*b1sAb1sTb1』sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCs『Ab1sGb1sTb1sAb1』
【図５】図５:ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）処理は、細胞内ｐＳｍａｄ２タンパク質減少につながる。Ａ５４９（図５Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図５Ｂ）細胞において、それぞれ７２時間または９６時間、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いて裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、ｐＳｍａｄ２（左カラム、赤）に対する抗体で標識化する。核ＤＮＡはＤＡＰＩ（中央カラム、青）を用いて染色された。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ。
【図６】図６:ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）処理は、細胞内ｐＳｍａｄ２タンパク質減少につながる。Ａ５４９（図６Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図６Ｂ）細胞において、それぞれ７２時間または９６時間、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃを用いて裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、ｐＳｍａｄ２（左カラム、赤）に対する抗体で標識化する。核ＤＮＡはＤＡＰＩ（中央カラム、青）を用いて染色された。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ。
【図７】図７:ＴＧＦ−β１の存在下で、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）処理は、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの下方調節につながる。ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図７Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図７Ｂ）細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの強力な下方調節。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。ｍＲＮＡの発現レベルを、定量的リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを用いてハウスキーピング遺伝子と比較して定量化し、未処理コントロールに正規化した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、±＝ＳＥＭ、＊ｐ＜０．０５、Ａに関して＊＊ｐ＜０．０１、Ｅ＋Ｂに関して＋＋ｐ＜０．０１。統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いて「テューキー（Ｔｕｋｅｙ’ｓ）」ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）によって算出された。
【図８】図８:ＴＧＦ−β１の存在下で、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）処理は、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの下方調節につながる。ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図８Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図８Ｂ）細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの強力な下方調節。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。ｍＲＮＡの発現レベルを、定量的リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを用いてハウスキーピング遺伝子と比較して定量化し、未処理コントロールに正規化した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｄ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、±＝ＳＥＭ、＊ｐ＜０．０５、Ａに関して＊＊ｐ＜０．０１、Ｅ＋Ｂに関して＋＋ｐ＜０．０１。統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いて「テューキー（Ｔｕｋｅｙ’ｓ）」ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）によって算出された。
【図９】図９は、５’末端で２個のＬＮＡユニット（『Ｇｂ１』および『Ｔｂ１』）、および３’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ａｂ１』および『Ｇｂ１』および『Ｃ＊ｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に１１個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＡ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＴ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＧ、ｄＧ、およびｄＧ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から最後のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）である、１６個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｙのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３１】
SP   L  Seq ID 
No    配列,5'−3'
2064 16  209y 『Gb1sTb1s』dAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGs『Ab1sGb1sC*b1』
【図１０】図１０は、５’末端で４個のＬＮＡユニット（『Ｇｂ１』および『Ｃ＊ｂ１』および『Ｔｂ１』および『Ａｂ１』）、および３’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ｇｂ１』および『Ｔｂ１』および『Ｔｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に９個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＴ、ｄＴ、ｄＴ、ｄＧ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＧ、およびｄＴｓ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から二番目のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）である、１６個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３２】
SP    L  Seq ID
No     配列,5'−3'
2072   16 210q 『Gb1sC*b1sTb1sAb1s』dTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTs
『Gb1sTb1sTb1』
【図１１】図１１:ＴＧＦ−β１の存在下で、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）処理は、ＣＴＧＦｍＲＮＡの下方調節につながる。ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図１１Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１１Ｂ）細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、ＣＴＧＦｍＲＮＡの強力な下方調節。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。ｍＲＮＡの発現レベルを、定量的リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを用いてハウスキーピング遺伝子ＧＮＢ２Ｌ１と比較して定量化し、未処理コントロールに正規化した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、±＝ＳＥＭ、＊ｐ＜０．０５、Ａに関して＊＊ｐ＜０．０１、Ｅ＋Ｂに関して＋＋ｐ＜０．０１。統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いて「テューキー（Ｔｕｋｅｙ’ｓ）」ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）によって算出された。
【図１２】図１２:ＴＧＦ−β１存在下において、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）処理は、ＣＴＧＦ細胞内タンパク質の減少につながる。ＣＴＧＦタンパク質発現は、ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図１２Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１２Ｂ）細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後に減少した。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。細胞をＣＴＧＦに対する抗体を用いて標識化した（左カラム、赤）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図１３】図１３:ＴＧＦ−β１存在下において、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）処理は、細胞内ｐＳｍａｄ２タンパク質の減少につながる。ｐＳｍａｄ２タンパク質発現は、ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図１３Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１３Ｂ）細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後に減少した。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。細胞をｐＳｍａｄ２に対する抗体を用いて標識化した（左カラム、赤）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図１４】図１４:ＴＧＦ−β１存在下において、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）処理は、ＣＴＧＦｍＲＭＡの下方調節につながる。ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図１４Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１４Ｂ）細胞における、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後のＣＴＧＦｍＲＮＡの強力な下方調節。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。ｍＲＮＡ発現レベルを、定量的リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを用いてハウスキーピング遺伝子ＧＮＢ２Ｌ１と比較して定量化し、未処理コントロールに正規化した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｄ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、±＝ＳＥＭ、＊ｐ＜０．０５、Ａに関して＊＊ｐ＜０．０１。統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いて「ダネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）」ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）を用いて算出された。異なるスケールに注意する。
【図１５】図１５:ＴＧＦ−β１存在下において、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）処理は、ＣＴＧＦ細胞内タンパク質の減少につながる。ＣＴＧＦタンパク質発現は、ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後に減少した。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間インキュベートされた。細胞をＣＴＧＦに対する抗体を用いて標識化した（左カラム、赤）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図１６】図１６:ＴＧＦ−β１存在下において、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）処理は、細胞内ｐＳｍａｄ２タンパク質の減少につながる。ｐＳｍａｄ２タンパク質発現は、ＴＧＦ−β１プレインキュベートされた（４８時間）Ａ５４９（図１６Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１６Ｂ）細胞において、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後に減少した。ＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。細胞をｐＳｍａｄ２に対する抗体を用いて標識化した（左カラム、赤）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｄ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図１７】図１７:ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）プレ処理、および続くＴＧＦ−β１共曝露は、ＴＧＦ−ＲＩＩ膜タンパク質の減少につながる。ＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質は、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、続くＴＧＦ−β１（４８時間）Ａ５４９（図１７Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１７Ｂ）細胞の共曝露によって減少した。ＡＳＯは、４８時間ＴＧＦ−β１の共曝露の前に、７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。細胞をＴＧＦ−ＲＩＩに対する抗体を用いて標識化した（左カラム、赤）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図１８】図１８:ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）プレ処理、および続くＴＧＦ−β１共曝露は、細胞内ｐＳｍａｄ３タンパク質の減少につながる。ｐＳｍａｄ３タンパク質発現は、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後、続くＴＧＦ−β１（４８時間）Ａ５４９（図１８Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）（図１８Ｂ）細胞の共曝露によって減少した。ＡＳＯは、４８時間ＴＧＦ−β１の共曝露の前に、７２時間、または９６時間、それぞれインキュベートされた。細胞をｐＳｍａｄ３に対する抗体を用いて標識化した（左カラム、赤）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図１９】図１９：ヒト神経前駆体ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における神経発生をＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）は、向上させ、ＴＧＦ−β１は減少させる。神経発生マーカーＤＣＸｍＲＮＡは、本発明のＡＳＯの繰り返される裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後（２×９６時間）にＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞において上方調節される。ＤＣＸｍＲＮＡ発現の強い減少は、８日のＴＧＦ−β１曝露後に確認された。ｍＲＮＡレベルを、定量的リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを用いてハウスキーピング遺伝子ＧＮＢ２Ｌ１と比較して定量化し、未処理コントロールに正規化した。統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いて「テューキー（Ｔｕｋｅｙ’ｓ）」多重ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）を用いて算出された。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、±＝ＳＥＭ、Ｃ  ２．５μＭに関して＋ｐ＜０．０５、Ｃ  １０μＭに関して＃ｐ＜０．０５。
【図２０】図２０：ヒト神経前駆体ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における神経発生をＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）は向上させ、ＴＧＦ−β１は減少させる。増殖マーカーＫｉ６７タンパク質発現は、本発明のＡＳＯの繰り返される裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後（２×９６時間）にＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞において増加する。減少したＫｉ６７タンパク質発現を、８日のＴＧＦ−β１曝露後に確認した。細胞をＫｉ６７に対する抗体を用いて標識化した（左カラム、緑）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図２１】図２１：増殖条件にもかかわらず、ＡＳＯ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）は、ヒト神経前駆体ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における分化を向上させる。ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）における神経マーカーＮｅｕＮ（図２３Ａ、左カラム、赤）、およびβＩＩＩ−チューブリン（図２３Ａ、左カラム、赤）を観察した。ＡＳＯ処理を、増殖条件下、最初の４日間適用し、続いて、さらに４日間、増殖条件下（＋ＥＧＦ／ＦＧＦ）、または分化条件下（−ＥＧＦ／ＦＧＦ）にした。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、＋ＥＧＦ／ＦＧＦ＝増殖、−ＥＧＦ／ＦＧＦ＝分化。
【図２２】図２２：ＴＧＦ−β誘導神経幹細胞増殖停止からのＡＳＯ−介在（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）レスキュー。ヒト神経前駆体ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞増殖は、７日間のＴＧＦ−β１曝露、続いて８日間のＡＳＯ処理の有り、または無しで観察された。ＴＧＦ−β１プレ−インキュベーション後７日でＧＦＡＰ（図２４Ａ）、Ｋｉ６７（図２４Ｂ）およびＤＣＸ（図２４Ｃ）の上方調節は、幹細胞増殖の回復を示す。ｍＲＮＡの発現レベルを、定量的リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを用いてハウスキーピング遺伝子ＧＮＢ２Ｌ１と比較して定量化し、未処理コントロールに正規化した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１、±＝ＳＥＭ、Ａに関して＊ｐ＜０．０５、統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いて「テューキー（Ｔｕｋｅｙ’ｓ）」ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）を用いて算出された。
【図２３】図２３：ＡＳＯは、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）の増殖を減少させる。増殖マーカーＫｉ６７タンパク質発現は、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移後（７２時間）にＡ５４９細胞において減少する。減少したＫｉ６７タンパク質発現を確認した（左カラム、緑）。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図２４】図２４：ＡＳＯは、様々なヒト腫瘍細胞系列の増殖を減少させる。ＨＰＡＦＩＩ、Ｋ５６２、ＭＣＦ−７、Ｐａｎｃ−１、およびＨＴＺ−１９細胞を、４×７２時間、本発明のＡＳＯに曝し、増殖を光学顕微鏡検査によって分析した（ニコン（Ｎｉｋｏｎ）、ＴＳ−１００（登録商標）Ｆ  ＬＥＤ）。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ。
【図２５】図２５：ＡＳＯ処理は、神経抗線維性効果を媒介し、細胞ストレスを改善する。ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞は、ＴＧＦ−β１プレインキュベーション（４８時間）、続いて、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移、および９６時間のＴＧＦ−β１処理を伴う共曝露後に観察された。細胞を、ＣＴＧＦ（図２９Ａ、左カラム、赤）、ＦＮ（図２９Ｂ、左カラム、緑）およびファロイジン（アクチン−細胞骨格、図２９Ｃ、左カラム、赤）に対する抗体を用いて標識化した。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図２６】図２６：ＡＳＯ処理は、腫瘍抗線維性効果を媒介し、細胞ストレスを改善する。Ａ５４９細胞は、ＴＧＦ−β１、または本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移を用いる処理後（７２時間）に観察された。細胞を、ＦＮ（図３０Ａ、左カラム、緑）、ファロイジン（アクチン−細胞骨格、図３０Ｂ、左カラム、赤）に対する抗体を用いて標識化した。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図２７】図２７：ＡＳＯ処理は、腫瘍抗線維性効果を媒介する。Ａ５４９ヒト肺癌細胞は、ＴＧＦ−β１プレインキュベーション（４８時間）、続いて、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移、および７２時間のＴＧＦ−β１処理を伴う共曝露後に観察された。細胞を、ＣＴＧＦ（図３１Ａ、左カラム、赤）、ＦＮ（図３１Ｂ、左カラム、緑）に対する抗体を用いて標識化した。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｃ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図２８】図２８：ＡＳＯ処理は、腫瘍抗線維性効果を媒介する。Ａ５４９ヒト肺癌細胞は、ＴＧＦ−β１プレインキュベーション（４８時間）、続いて、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）転移、および７２時間のＴＧＦ−β１処理を伴う共曝露後に観察された。細胞を、ＣＴＧＦ（図３２Ａ、左カラム、赤）、およびＦＮ（図３２Ｂ、左カラム、緑）に対する抗体を用いて標識化した。核ＤＮＡはＤＡＰＩを用いて染色された（中央カラム、青）。細胞の試験は、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）  アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行われた。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。Ａ＝未処理のコントロール、Ｂ＝Ｒｅｆ．１、Ｄ＝Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｅ＝ＴＧＦ−β１。
【図２９】図２９は、５’末端で２個のＬＮＡユニット（『Ｇｂ１』および『Ｔｂ１』）、および３’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ａｂ１』および『Ｇｂ１』および『Ｃ＊ｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に１１個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＡ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＴ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＧ、ｄＧ、およびｄＧ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から最後のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）を有し、５’末端および３’末端での末端基として−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｓ−）ＯＣ３Ｈ６ＯＨを有する、１６個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９Ｘのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３３】
SP   L   Seq ID
No     配列,5'−3'
2064 16   209x    /5SpC3s/『Gb1sTb1s』dAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGs
『Ab1sGb1sC*b1』/3SpC3s/
【図３０】図３０は、５’末端で４個のＬＮＡユニット（『Ｃ＊ｂ１』および『Ｇｂ１』および『Ａｂ１』および『Ｔｂ１』）、および３’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ａｂ１』および『Ｃ＊ｂ１』および『Ａｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に８個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、ｄＣ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＣ、およびｄＣ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から最初および最後から二番目のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）を有する、１５個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１５２ｈのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３４】
SP  L   Seq ID 
No   配列,   5'−3'
429  15  152h 『C*b1sGb1sAb1sTb1s』dAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCs『Ab1sC*b1sAb1』 
【図３１】図３１は、５’末端で２個のＬＮＡユニット（『Ｃ＊ｂ１』および『Ｔｂ１ｓ』）、および３’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ｃ＊ｂ１』および『Ｃ＊ｂ１』および『Ｇｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に９個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＣ、ｄＧ、ｄＴ、ｄＣ、ｄＡ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＧおよびｄＡ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から最初、最後から三番目、および二番目のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）を有する、１４個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３５】
SP  L  Seq ID 
No    配列,5'−3'
355  14 143h 『C*b1sTb1s』dCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAs『C*b1sC*b1sGb1』
【図３２】図３２は、５’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ｃ＊ｂ１』および『Ａｂ１』および『Ｇｂ１』）、および３’末端で３個のＬＮＡユニット（『Ｇｂ１』および『Ｔｂ１』および『Ｇｂ１』）、およびＬＮＡ断片の間に１１個のＤＮＡヌクレオチド（ｄＧ、ｄＣ、ｄＡ、ｄＴ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＡ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＡおよびｄＡ）を有し、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し、５’末端から最初のＬＮＡユニットは核酸塩基５−メチルシトシン（Ｃ＊）を有する、１７個のヌクレオチドからなるギャップマーの形のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１３ｋのアンチセンス−オリゴヌクレオチドを示す。
【０５３６】
SP  L  Seq ID 
No     配列,5'−3'
2355 17 213k  『C*b1sAb1sGb1s』dGsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAs                              『Gb1sTb1sGb1』
【発明を実施するための形態】
【０５３７】
実施例
材料および方法
本願に使用されるほとんどのアンチセンス−オリゴヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドのコントロールまたは参照は、発明者／出願人の必要性に従って、カスタムオリゴヌクレオチドとしてＥＸＩＱＯＮによって合成された。次の配列を有するオリゴヌクレオチドは、参照として使用された：
Ｒｅｆ．０＝ｄＣｓｄＡｓｄＧｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＧｓｄＡｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＡｓｄＴｓｄＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４７ｃ）；
Ｒｅｆ．１＝Ａｂ１ｓＡｂ１ｓＣ＊ｂ１ｓｄＡｓｄＣｓｄＧｓｄＴｓｄＣｓｄＴｓｄＡｓｄＴｓｄＡｓＣ＊ｂ１ｓＧｂ１ｓＣ＊ｂ１（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．７６）；
Ｒｅｆ．２＝Ｃ＊ｂ１ｓＡｂ１ｓＧｂ１ｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓｄＧｓｄＡｓｄＣｓｄＣｓｄＣｓＡｂ１ｓＴｂ１ｓＧｂ１（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４７ｍ）；
Ｒｅｆ．３＝ＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧＡＡＴＧＧＡ；２’−ＭＯＥ−ウィングス（５ユニット５’および３’）およびホスホロチオエート連結を有する（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８０）；
Ｒｅｆ．４＝；ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＧＧＴＡＧＴ、２’−ＭＯＥ−ウィングス（５ユニット５’および３’）およびホスホロチオエート連結を有する（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８２）；
Ｒｅｆ．５＝ＴＧＧＴＡＧＴＧＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＣＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．８５），
Ｒｅｆ．６＝ＧＴＧＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＴＧＡＡＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４４），
Ｒｅｆ．７＝ＧＡＧＣＴＣＴＴＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＴＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４５），
Ｒｅｆ．８＝ＡＧＣＣＴＣＴＴＴＣＣＴＣＡＴＧＣＡＡＡ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４６），
Ｒｅｆ．９＝ＣＣＴＴＣＴＣＴＧＣＴＴＧＧＴＴＣＴＧＧ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４７），および
Ｒｅｆ．１０＝ＧＣＣＡＴＧＧＡＧＴＡＧＡＣＡＴＣＧＧＴ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．３４８）。
標準手順プロトコール
細胞培養：
【０５３８】
【表１０−１】
0006832285.tif 000050
【０５３９】
【表１０−２】
0006832285.tif 000051
【０５４０】
材料：
ＦＣＳ（ＡＴＣＣ＃３０−２０２０）
ピルビン酸ナトリウム（シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃８６３６）
重炭酸ナトリウム(シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｓ８７６１−１００ＭＬ)
トランスフェリン(シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｔ８１５８−１００ＭＧ)
亜セレン酸ナトリウム(シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｓ５２６１−１０Ｇ)
ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）(シグマ−アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）＃Ｐ４４５８)
非必須アミノ酸（ＡＳ）１００×（シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｍ７１４５)
抗生物質／抗真菌薬（シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ａ５９５５）
ＭＥＭビタミン溶液（シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｍ６８９５）
ＰＢＳ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｄ８５３７）
ＦＧＦ塩基性  ヒト（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＧＦ００３）
ＥＧＦ  ヒト（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＧＦ１４４)
Ｎ−２サプリメント(ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）＃１７５０２０４８)
ＲｅＮｃｅｌｌ神経幹細胞維持培地（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＳＣＭ００５）培養および播種細胞:
培地を除去後、細胞をＰＢＳで洗浄し、アクターゼ（ａｃｃｕｔａｓｅ）(シグマ−アルドリッチ＃Ｐ４４５８)と共にインキュベートした(５分、ＲＴ)。培養後、細胞をピーニングし、全培地（３ｍｌ、会社：各細胞株については表１０参照）を加えた。その後、
細胞を、５ｍｌのエッペンドルフカップに移し、遠心分離した（５分、１０００ｒｐｍ、ＲＴ)。１  Ｔ７５−ボトル（ザルスタッド（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３３．９１０．３０２）からのペレットを、２．５ｍｌの新鮮な培地に再懸濁した。細胞懸濁液の細胞数を、アクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムアッセイ生存率キット（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０４５）を用いて染色することにより、ルナ（Ｌｕｎａ）−ＦＬ（商標）自動細胞カウンター（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０４０）を用いて決定した。２μｇ／ｃｍ２の濃度での実験用の細胞を播種する前に、ディッシュのラミニンコーティング（ミリポア＃ＣＣ０９５）がＲｅＮｃｅｌｌＣＸ（登録商標）細胞の接着には必要であった。ラミニン−ＰＢＳ溶液のそれぞれの量を、ウェルおよびフラスコに直接与え、１．５時間３７℃でインキュベートした。実験のために細胞を、それぞれの実験章の方法の部分で述べられるように播種し、収穫した。３７℃、５％ＣＯ２で細胞を一晩インキュベーションした後、細胞を、それぞれの実験的記述に説明されているように処理した。５００μｌの残りの細胞懸濁液を、細胞を培養するために、１０ｍｌの新鮮な完全な培地で満たされた新しいＴ７５−ボトルに与えた。
ＲＮＡ−解析
ｃＤＮＡ合成のための全ＲＮＡを、製造業者の指示に従って、ｉｎｎｕＰＲＥＰ（登録商標）ＲＮＡミニキット（Ａｎａｌｙｔｉｋ  Ｊｅｎａ（アナリティク  イエナ）  ＃８４５−ＫＳ−２０４０２５０）を用いて、単離した。ｃＤＮＡを合成するために、全ＲＮＡ含量を、フォトメーター（エッペンドルフ、バイオフォトメーター（ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）  Ｄ３０＃６１３３０００９０７）を用いて決定し、ヌクレアーゼフリーの水を用いて希釈した。その後、最初ｃＤＮＡ鎖を、製造業者の推薦に従って、ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）ｃＤＮＡ合成キット合成キット（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１７０−８８９１)を用いて調製した。ｍＲＮＡ解析のために、リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを、ＣＦＸ９６  Ｔｏｕｃｈ（商標）リアルタイムＰＣＲ検出システム（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ＃１８５−５１９６）を用いて行った。
【０５４１】
全てのプライマーペアは、製造業者の指示（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）プライム（Ｐｒｉｍｅ）  ＰＣＲ  クイック（Ｑｕｉｃｋ）  ガイド（Ｇｕｉｄｅ））に従って、すぐに使用可能に標準化され、それぞれ使用準備済みのマスターミックス液（ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓｉａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１７２−５２７１）と混合された。インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）実験のためのプライマーペアは個々の種に従って適合させた。
【０５４２】
【表１１】
0006832285.tif 000052
【０５４３】
テンプレートとして、１μｌの各ｃＤＮＡを使用した。逆転写されなかったＲＮＡは、リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲのネガティブコントロールとして役立った。相対定量のために、ハウスキーピング遺伝子グアニンヌクレオチド−結合タンパク質サブユニット  ベータ−２様１（ＧＮＢ２Ｌ１）を用いた。リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを、次のプロトコルで行った。
【０５４４】
【表１２】
0006832285.tif 000053
【０５４５】
その後、バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）  ＣＦＸ  マネージャー（Ｍａｎａｇｅｒ）  ３．１を、ＧＮＢ２Ｌ１ｍＲＮＡと相対的な各ｍＲＮＡ−レベルの定量化に使用し、その後、未処理コントロールに正規化した。
ウェスタンブロット：
タンパク質分析のために、細胞／組織を、製造業者の指示に従って、それぞれ、Ｍ−ＰＥＲ（登録商標）哺乳類タンパク質抽出試薬／Ｔ−ＰＥＲ（登録商標）組織タンパク質抽出試薬（サーモ  サイエンティフィック、＃７８５０１／＃７８５１０）を使用して溶解した。ＳＤＳ−アクリルアミド−ゲル（１０％）を、製造業者の指示に従って、ＴＧＸ  
染色（Ｓｔａｉｎ）  フリー（Ｆｒｅｅ）（商標）  ファースト（Ｆａｓｔ）  キャスト（Ｃａｓｔ）（商標）アクリルアミドキット（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１６１−０１８３）を使用して生産した。タンパク質サンプル（２０μｌ）を、ラムリ（Ｌａｍｍｌｉ）−緩衝液（６．５μｌ、ロティ（登録商標）−ロード（Ｌｏａｄ）１、ロス（Ｒｏｔｈ）＃Ｋ９２９．１)を用いて１：５に希釈し、６０℃で３０分間インキュベートし、タンパク質溶液の全容量をゲル上にロードした。タンパク質の分離を、パワーパック（ＰｏｗｅｒＰａｃ）（商標）ベーシック（Ｂａｓｅｉｃ）  パワー（Ｐｏｗｅｒ）  サプライ（Ｓｕｐｐｌｙ）（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１６４−５０５０−ＳＰ）およびミニ−プロテアン（Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ）（登録商標）テトラセル（Ｔｅｔｒａ  ｃｅｌｌ）電気泳動チャンバー（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１６５−８００１−ＳＰ)（２００Ｖ、４５分）を使用して電気泳動によって行った。電気泳動後、タンパク質を、トランス−ブロット（Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ）（登録商標）ターボ（Ｔｕｒｂｏ）転送（Ｔｒａｎｓｆｅｒ）システム（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１７０−４１５５ＳＰ）を使用してブロットした。ウェスタンブロッティングのための全ての材料を、トランス−ブロット（Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ）（登録商標）ターボ（Ｔｕｒｂｏ）ＲＴＡ  ＰＶＤＦ−ミディ（Ｍｉｄｉ）キット（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ＃１７０−４２７３）に含めた。
【０５４６】
ブロッティング手順のためのＰＶＤＦ−膜を、メタノール（メルク＃１．０６００９．２５１１）で活性化し、１×転写バッファーで平衡化した。ブロッティング（２５Ｖ、１Ａ、３０分）に続いて、膜を、０．５ｍｌのトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ−２０（ロス（Ｒｏｔｈ）  ＃９１２７．１）を含む１×ＴＢＳ（ロス（Ｒｏｔｈ）＃１０．６０．１）を用いて洗浄（３×、１０分、ＲＴ）した。その後、膜を、ＴＢＳ−Ｔを用いて希釈された５％ＢＳＡ（アルブミン−ＩｇＧ−フリー、ロス（Ｒｏｔｈ）＃３７３７．３）を用いて１時間ＲＴでブロックし、一次抗体（ＴＢＳ−Ｔ中に０．５％ＢＳＡに希釈、表１３）を加え、４℃で２日インキュベートした。インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）実験のための抗体を、種特異性に従って選択した。
【０５４７】
【表１３】
0006832285.tif 000054
【０５４８】
次の工程において、膜をＴＢＳ−Ｔ（３×１０分、ＲＴ）を用いて洗浄し、２次抗体（１時間、ＲＴ、表１３）を用いてインキュベートした。インキュベーション後、ブロットを、ＴＢＳ−Ｔを用いて洗浄し、Ｌｕｍｉｎａｔａ（商標）Ｆｏｒｔｅ  ウェスタンＨＲＰ基質（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＷＢＬＵＦ０５００）を用いて出現させ、バンドを蛍光画像アナライザ（イメージクアント（ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ）（商標）ＬＡＳ
４０００、ＧＥ  ヘルスケア)を用いて検出した。その後、ブロットをＴＢＳ−Ｔで洗浄し（３×１０分、ＲＴ）、ＴＢＳ−Ｔで希釈された５％ＢＳＡを有する溶液ブロックした（１時間、ＲＴ）。
【０５４９】
ハウスキーパー比較のために、膜をＨＲＰ−共役抗アルファ−チューブリンを用いてインキュベートした（０．５％ＢＳＡ溶液で１：２０００、４℃、一晩）。次の日、ブロットを、Ｌｕｍｉｎａｔａ（商標）Ｆｏｒｔｅ  ウェスタンＨＲＰ基質（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＷＢＬＵＦ０５００）を用いて出現させ、バンドを蛍光画像アナライザを用いて検出した。最後に、ブロットを、ＴＢＳ−Ｔを用いて洗浄し（３×、５分）、１×ロティ（Ｒｏｔｉ）（登録商標）−ブルー溶液（ロス（Ｒｏｔｈ）＃Ａ１５２．２）を
使用して染色し、ＲＴで乾燥した。
免疫細胞化学
細胞を前記したように処理し、採取した。８ウェルのロティ（登録商標）−ヒストフィックス４％（Ｈｉｓｔｏｆｉ）（ロス（Ｒｏｔｈ）＃Ｐ０８７．４)を用いて細胞の固定化後、、細胞培養スライドディッシュ（６分、ＲＴ）をＰＢＳを用いて３回洗浄した。ブロッキング液（Ｚｙｔｏｍｅｄ  ＃ＺＵＣ００７−１００)を用いて１時間ＲＴで細胞をブロッキング後、細胞を表１４に記載の各一次抗体と共にインキュベートし、４℃で一晩インキュベートした。
【０５５０】
その後、細胞培養用スライドを、二次抗体を用いてインキュベートした後（１時間、ＲＴ）、ＰＢＳを用いて３回洗浄した。全ての抗体希釈液を、抗体希釈液（Ｚｙｔｏｍｅｄ＃ＺＵＣ０２５−１００）を用いて調製した。
【０５５１】
【表１４】
0006832285.tif 000055
【０５５２】
二次抗体を用いてのインキュベーションに続いて、細胞を、ＰＢＳを用いて３回洗浄し、カバーガラスを、細胞培養ディッシュから分離し、ＤＡＰＩを有するＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）  ＨａｒｄＳｅｔ（商標）(バイオゾル（Ｂｉｏｚｏｌ）＃ＶＥＣ−Ｈ−１５００)に定着させた。スライドを、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）、アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）の前に４℃で一晩乾燥した。画像を
、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて解析した。
インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）実験
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）アッセイ
ＰＢＭＣを、５００ｍｌの完全な輸血ユニットに対応するバフィーコートから単離した。各ユニットを、健康的なボランティアから得て、クエン酸グルコースを、抗凝着剤として使用した。バフィーコート血液は、輸血医学研究所の血液銀行ズール（Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ  Ｓｕｈｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎe）、ドイツ、によって調製され送達された。各献血は、ＨＩＶ抗体、ＨＣＶ抗体、ＨＢｓ抗原、ＴＰＨＡ、ＨＩＶ  ＲＮＡ、およびＳＰＧＴ（ＡＬＡＴ）のために監視された。感染症因子に対して陰性であり、通常のＳＰＧＴ値を有する唯一の試験された血液サンプルを、低速遠心分離によって白血球および赤血球の分離のために使用された。ＰＢＭＣの分離を、献血に続いて、フィコール−ヒストパック（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｉｓｔｏｐａｇｕｅ）（登録商標）１０７７（ヘレウス（Ｈｅｒａｅｕｓ）（商標）マルチフュージ（Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅ）（商標）３ＳＲ）を用いてグラジエント遠心分離により約４０時間行った。ＩＦＮαアッセイのために、ＰＢＭＣを１００μｌ完全培地プラス添加剤（ＲＰＭＩ１６４０、＋Ｌ−Ｇｌｕ、＋１０％ＦＣＳ、＋ＰＨＡ−Ｐ（５μｇ／ｍｌ）、＋ＩＬ−３（１０μｇ／ｍｌ）に１００，０００細胞／９６ウェルで播種し、試験テスト化合物（５μｌ）を直接インキュベーションのために加えた（２４時間、３７℃、５％ＣＯ２）。ＴＦＮαアッセイのために、ＰＢＭＣを１００μｌ完全培地ｗ／ｏ添加剤（ＲＰＭＩ１６４０、＋Ｌ−Ｇｌｕ、＋１０％ＦＣＳ）に１００，０００細胞／９６ウェルで播種し、試験テスト化合物（５μｌ）を直接インキュベーションのために加えた（２４時間、３７℃、５％ＣＯ２）。ｈｕＩＦＮα（イーバイオサイエンス（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、♯ＢＭＳ２１６ＩＮＳＴＣＥ）のためにＥＬＩＳＡ（プールされた上清を除く二重反復測定、２０μｌ)を製造業者のプロトコルに従って行った。ｈｕＴＮＦα（イーバイオサイエンス（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、♯ＢＭＳ２２３ＩＮＳＴＣＥ）のためにＥＬＩＳＡ（プールされた上清を除く二重反復測定、２０μｌ)を製造業者のプロトコルに従って行った。
ｂＤＮＡアッセイ
ＴＧＦ−ＲＩＩ  ｍＲＮＡレベルを、製造業者の指示に従って、ｂＤＮＡアッセイによって肝臓、腎臓、および肺の溶解物で決定した（クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）キット、パノミクス（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）／アフィメトリクス（Ａｆｆｉｍｅｔｒｉｘ））。
免疫蛍光
パラフィン埋め込み脊髄および頭脳の組織を、５μｍ断片(物質プレートごとに３〜４スライド)に切った。パラフィン断片は、電子レンジでクエン酸バッファー中で加熱することにより（１０ｍＭ、４０分）、脱パラフィンおよび脱マスクした。その後、脱パラフィン化断片を、０．３％Ｈ２Ｏ２を用いてインキュベートし（３０分、ＲＴ）、ＰＢＳを用いて洗浄し（１０分、ＲＴ）、ブロッキング溶液（Ｚｙｔｏｍｅｄ  ＃ＺＵＣ００７−１００)を用いて３０分間ブロッキングした。ブロッキング溶液（Ｚｙｔｏｍｅｄ）を用いて１時間ＲＴでブロッキング後、断片を、１５０μｌの各一次抗体を用いてインキュベートし、４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳを用いて洗浄後（３回、５分ＲＴ）、断片を、２次抗体を用いて１時間ＲＴでインキュベートした。全ての抗体希釈液を、抗体希釈液（Ｚｙｔｏｍｅｄ＃ＺＵＣ０２５−１００）を用いて調製した。その後、断片を、ＰＢＳを用いて再び洗浄し（３回、５分、ＲＴ）、ＤＡＰＩを有するＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）マウンティング（Ｍｏｕｎｔｉｎｇ）培地（ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ））を用いて定着させた。免疫蛍光のための抗体は、細胞培養実験に相当し、各種に適合した。
電気化学発光
免疫学的および血液学的変化のために、電気化学発光の技術（メソスケール  ディスカ
バリー（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（登録商標）、メリーランド州、米国）を使用した。各アッセイのために、２５μｌのタンパク質、血液、およびアルコール試料を使用し、手順を製造業者の指示に従って行った。
ＢｒｄＵアッセイ
分裂細胞の標識化を、チミジン類似体ＢｒｄＵ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、シュタインハイム、ドイツ）の５０ｍｇ／体重ｋｇでの腹腔内注射によって、０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ溶液中に１０ｍｇ／ｍｌのＢｒｄＵを溶解した滅菌溶液を用いて行った。ＢｒｄＵ注射は、最後の実験週内に毎日行われた。
外科処置
慢性の中心静脈注入のために、動物は、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）浸透圧ミニポンプ（マウス、ラット、注入率：０．２５μｌ／ｈ、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）、モデル２００４年、クパチーノ（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ）、米国)、またはガス圧ポンプ（カニクイザル、注入率０．２５ｍｌ／２４時間、Ｔｒｉｃｕｍｅｄ（登録商標）、モデルＩＰ２０００Ｖ、ドイツ)に取り付けられたｉｃｖカニューレのために外科処置を受けた。カニューレおよびポンプを、ケタミン／キシラチン（ｘｙｌａｃｉｎ）麻酔（バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）、ＧｍｂＨ、ドイツ)および半滅菌条件の下で定位的に埋め込んだ。各浸透圧ミニポンプ／ガス圧ポンプを、動物の首に皮膚切開を介して腹部領域に皮下移植され、シリコーンチューブによって、ｉｃｖカニューレと接続された。動物を、定位フレームに配置し、ｉｃｖカニューレを、右側脳室へと降ろした。カニューレを、歯科用セメント（Ｋａｌｌｏｃｒｙｌ、Ｓｐｅｉｋｏ（登録商標）−Ｄｒ．Ｓｐｅｉｅｒ  ＧｍｂＨ、ミュンスター、ドイツ)を用いて２つのスチール製のネジで固定した。首の皮を縫合で閉じた。外科処置中、体温を加温パッドによって維持した。外科処置後の感染を避けるために、動物を局所的にｂｅｔａｉｓｏｄｏｎａ（登録商標）（ムンディファーマ（Ｍｕｎｄｉｐｈａｒｍａ）  ＧｍｂＨ、リンブルグ（Ｌｉｍｂｕｒｇ）、ドイツ)を用いて処置し、抗生物質（ｓｃ，バイトリル（Ｂａｙｔｒｉｌ）（登録商標）２．５％
バイエルバイタル（Ｂａｙｅｒ  Ｖｉｔａｌ）ＧｍｂＨ、レバークーゼン（Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ）、ドイツ)を受けた。チューブを、各溶液で満たした。血液、アルコール、および組織を分析のために収集した。ｉｃｖ移植部位の組織学的検証を、４０μｍ冠状面のクレシルバイオレット染色脳断片で行った。
結果パラメーターおよび機能解析
症候性疾患の発症、初期麻痺の発症および生存を、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）エンドポイントとして使用した。症候性疾患の発症を、尾懸垂に反応する脚のストレッチの欠如として定義した。歩行障害が最初に検出された時点(例えば、よろよろ歩き（ｈｏｂｂｌｉｎｇ）またはよたよた歩く（ｗａｄｄｌｉｎｇ）を、初期麻痺の発症として分類された。これらのパラメーターを、年齢４０日に開始して毎日決定した。
【０５５３】
病気の進行を監視するために、ランニングホイールテスト（ｒｕｎｎｉｎｇ  ｗｈｅｅｌ  ｔｅｓｔｉｎｇ）（ＬＭＴＢ、ベルリン、ドイツ)を行った。動物を年齢３３日に始まるランニングホイールへのアクセスと別にケージに入れた。運動活性は、ランニングホイールにおいて各動物によって生成される１分あたりの回転と直接相関した。ホイールの各フルターンは、２つの電磁信号を誘因するホイールの各フルターンは、最大１２０ホイールに接続されたコンピュータに直接供給された。ランニングホイールデータを、「マウス  バイタル（Ｍａｕｓ  Ｖｉｔａｌ）」ソフトウェア（Ｌａｓｅｒ−  ｕｎｄ  Ｍｅｄｉｚｉｎ−Ｔｅｃｈｎｏｌｉｇｉｅ、ベルリン、ドイツ)で分析した。評価時間は午後６時〜午前６時の１２時間持続した。
空間学習試験（モリス−水−迷路)
行動試験を、８：００と１３：００との間で行った。
【０５５４】
ラットは、可視の白色標的（直径１０ｃｍ、水表面より上に約１ｃｍ上げられる）を見つけるために黒い円形のプール（直径１．４ｍ、高さ５０ｃｍ、３０ｃｍの高さに２０℃
温水で満たされた)で訓練され、同じ想像上の象限（近位の手がかり）の中心に全研究が置かれる。各動物は、１２のトライアル／セッション、１日あたり１つのセッションおよび１０〜２０秒の試行間間隔（ｉｎｔｅｒ−ｔｒｉａｌ−ｉｎｔｅｒｖａｌ）を有する３つの連続したセッションにおいてプラットフォームに移動するように訓練された。
微生物学的分析
アンチセンス−オリゴヌクレオチド試料は、Ｐｈに応じて微生物学的に分析された。Ｅｕｒ．２．６．１２、ＵＳＰ３０＜６１＞  全好気性微生物数（ＴＡＭＣ）、および酵母とカビの全合計数（ＴＹＭＣ）に関する。
アニオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＡＥＸ−ＨＰＬＣ）
アンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）試料の完全性および安定性を、ＡＫＴＡｅｘｐｌｏｒｅ（商標）システム（ＧＥ  ヘルスケア（ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、フライブルク（Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）、ドイツ)を用いてＡＥＸ−ＨＰＬＣによって決定した。精製されたＡＳＯ試料をエタノール沈殿により脱塩した。ＡＳＯの同一性を、エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）によって確認され、純度を、Ｄｉｏｎｅｘ  ＤＮＡＰａｃ（商標）２００（４×２５０ｍｍ）カラムを用いてＡＥＸ−ＨＰＬＣによって決定した。
実施例１：ｍＲＮＡレベルにおける本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの阻害活性の決定
１．１アンチセンス−オリゴヌクレオチドのトランスフェクション
ＴＧＦ−ＲＩＩに向けられるいくつかのアンチセンスオリゴヌクレオチドの阻害活性を、ヒト上皮肺癌細胞（Ａ５４９）で試験した。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的オリゴヌクレオチドとともにインキュベートした細胞から分離された全ｍＲＮＡにおける分岐ＤＮＡアッセイにより定量した。
方法の説明：
細胞を上述のように得て、培養した。アンチセンス−オリゴヌクレオチドのトランスフェクションを、９６ウェルプレート上で１０，０００Ａ５４９細胞／ウェルを播種した後に直接行い、製造業者によって記述されるように、リポフェクトアミン（登録商標）２０００（インビトロジェン  ＧｍｂＨ、カールスルーエ（Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ）、ドイツ、ｃａｔ．Ｎｏ．１１６６８−０１９)を用いて行った。４反復で行われた２つの独立した単回投与実験において、オリゴヌクレオチドは、２０ｎＭの濃度でトランスフェクトされた。トランスフェクション後、細胞を加湿器(ヘレウス（Ｈｅｒａｅｕｓ）ＧｍｂＨ、ハーナウ（Ｈａｎａｕ）、ドイツ)で２４時間、３７℃で、５％ＣＯ２でインキュベートした。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの測定のために、細胞を、分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）の単離のために、ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（登録商標）Ｅｘｐｌｏｒｅキット（パノミクス（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）、フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎｔ）、カリフォルニア州、米国、ｃａｔ．Ｎｏ．ＱＧ０００４）の製造業者によって推奨される手順にしたがって、収穫し、５３℃で溶解した。ハウスキーピング遺伝子グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの定量のために、クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）Ｅｘｐｌｏｒｅキットを使用し、一方、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの定量を、クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）２．０(Ａｘｏｌａｂｓ  ＧｍｂＨ、クルムバッハ（Ｋｕｌｍｂａｃｈ）、ドイツのカスタム製造)を用いて行った。インキュベートおよび溶解後、１０μｌ溶解物を、ヒトＴＧＦ−ＲＩＩおよびヒトＧＡＰＤＨに特異的なプローブセットと共にインキュベートした。両方の反応型を、それぞれのクアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）キットのための製造業者のプロトコルに従って処理した。化学発光を、ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ）２（商標）マルチラベル（ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ）カウンター（ｃｏｕｎｔｅｒ）（パーキン  エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）、ヴィースバーデン（Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ）、ドイツ)で、ＲＬＵ（相対光単位）として測定し、ＴＧＦ−ＲＩＩプローブセットを用いて得られた値を、ウェル毎にそれぞれのＧＡＰＤＨに正規化し、その後、モック処理細胞から対応するｍＲＮＡの読み出し（ｒｅａｄｏｕｔ）に正規化した。
結果
結果は、Ａ５４９細胞のトランスフェクション後に様々なＡＳＯによりＴＧＦ−ＲＩＩの効率的な下方調節を示す。参照オリゴヌクレオチドＲｅｆ．６〜Ｒｅｆ．１０のトランスフェクション後の下方調節は、効率的ではないとして６０％を超える下方調節に結果的にならなかった。
【０５５５】
【表１５】
0006832285.tif 000056
【０５５６】
結果
ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡは、本発明のＡＳＯによって効果的に標的にされた。言及されたＡＳＯは、Ａ５４９細胞のトランスフェクション後の効率的な標的ｍＲＮＡ下方調節を
達成した。
１．２  アンチセンス−オリゴヌクレオチドの裸の（Ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み
１．２．１ａ  Ａ５４９およびＰａｎｃ−１−細胞における裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達による本発明のＡＳＯおよび先行技術配列の両方の標的ノックダウンの比較
ＴＧＦ−ＲＩＩに向けられる様々なアンチセンス−オリゴヌクレオチドの下方調節活性を、ヒト上皮肺腫瘍細胞においてトランスフェクション試薬なしの直接的な取り込み（「裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み」）によって試験した。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的オリゴヌクレオチドと共にインキュベートした細胞から単離された全ｍＲＮＡにおいて、分岐ＤＮＡアッセイにより定量化した。
方法の説明
細胞を一般的な方法に記載されるように得て、培養した。アンチセンス−オリゴヌクレオチドの裸の（Ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達を、各アンチセンス−オリゴヌクレオチドと共に９６ウェルプレートを調製し、続いて１０，０００細胞（Ｐａｎｃ−１）または８，０００細胞（Ａ５４９）／ウェルを播種することによって、行った。実験を４反復で行い、オリゴヌクレオチドを、最終濃度５μＭ（Ｐａｎｃ−１）および７．５μＭ（Ａ５４９）で使用した。細胞を加湿インキュベーター(ヘレウス（Ｈｅｒａｅｕｓ）ＧｍｂＨ、ハーナウ（Ｈａｎａｕ）、ドイツ)で７２時間、３７℃で、および５％ＣＯ２でインキュベートした。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの測定のために、細胞を、分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）のために、クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）Ｅｘｐｌｏｒｅキット（パノミクス（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）、フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎｔ）、カリフォルニア州、米国、ｃａｔ．Ｎｏ．ＱＧ０００４）の製造業者によって推奨される手順に従って、収穫し、５３℃で溶解した。ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨｍＲＮＡの定量のために、クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）Ｅｘｐｌｏｒｅキットを使用し、一方、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの定量を、クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）２．０(Ａｘｏｌａｂｓ  ＧｍｂＨ、クルムバッハ（Ｋｕｌｍｂａｃｈ）、ドイツのカスタム製造)を用いて行った。インキュベートおよび溶解後、１０μｌ溶解物を、ヒトＴＧＦ−ＲＩＩおよびヒトＧＡＰＤＨに特異的なプローブセットと共にインキュベートした。両方の反応型を、それぞれのクアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）キットのための製造業者のプロトコルに従って処理した。化学発光を、ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ）２（商標）マルチラベル（ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ）カウンター（ｃｏｕｎｔｅｒ）（パーキン  エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）、ヴィースバーデン（Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ）、ドイツ)で、ＲＬＵ（相対光単位）として測定し、ＴＧＦ−ＲＩＩプローブセットを用いて得られた値を、ウェル毎にそれぞれのＧＡＰＤＨに正規化し、その後、ＰＢＳ処理細胞から対応するｍＲＮＡの読み出し（ｒｅａｄｏｕｔ）に正規化した。
【０５５７】
選択された結果を、表１６ａに示す。Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ａｙ、Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．２０９ａｘ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｙの更なる修飾体、すなわち、明細書の表６において列挙されるＡＳＯは、これら３個のアンチセンス−オリゴヌクレオチドと同程度の値を示した。さらに、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１５２ｈの修飾体、すなわち、明細書の表５において列挙されるＡＳＯは、このアンチセンス−オリゴヌクレオチドと同程度の値を示した。Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの修飾体、すなわち、明細書の表８において列挙されるＡＳＯは、このアンチセンス−オリゴヌクレオチドＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂと同程度の値を示した。Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１３ｋの修飾体、すなわち、明細書の表９において列挙されるＡＳＯは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１３ｋと同程度の値を示した。さらに、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑの修飾体、すなわち、明細書の表７において列挙されるＡＳＯは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑと同程度の値を示した。最後に、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈの修飾体、すなわち、明細書の表４において列挙されるＡＳＯは、アンチセンス−オリゴヌクレオチドＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈと同程度の値を示した。表４〜表９に列挙されるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの送達は、試験された参照配
列の送達と比較した標的ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡのより強力な下方調節になるという結果になった（Ａ５４９：下方調節＜０．５；Ｐａｎｃ１細胞：下方調節＜０．４）。
【０５５８】
【表１６】
0006832285.tif 000057
【０５５９】
結論
本発明のＡＳＯの裸の（Ｇｙｍｏｔｉｃ）送達は、試験された参照配列の送達よりも標的ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの連続的な強い下方調節をもたらす。クレームされたアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、選択されたヒト細胞株とは独立して、先行技術から公知の全ての試験された配列より優れていた。それにもかかわらず、一般的に１２個〜２０個のヌクレオチドの長さを有するアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、より短い、またはより長いアンチセンス−オリゴヌクレオチドよりも標的ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡのより効果的な下方調節をもたらす。この効果は、一般的に最も強力な効果を示す１４個〜１８個のヌクレオチドの長さを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドではさらにより顕著であった。
１．２．１ｂ  分岐ＤＮＡアッセイによるＡ５４９細胞における裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達の分析
トランスフェクションスクリーンからＴＧＦ−ＲＩＩに対する最も効果的なアンチセン
ス−オリゴヌクレオチドを、Ａ５４９細胞における裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みによってさらに特徴付けた。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的オリゴヌクレオチドと共にインキュベートした細胞から単離された全ｍＲＮＡにおいて、分岐ＤＮＡにより定量化した。
方法の説明
Ａ５４９細胞を、標準的な条件下、前に記述されるように培養した。単回投与、および投与−応答実験のために、８０，０００細胞  Ａ５４９細胞／ウェルを、６ウェル培養ディッシュに播種し、７．５μＭの濃度でオリゴヌクレオチドと直接的にインキュベートした。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの測定のために、細胞を、上記（１．１参照）に記述されるようにクアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）Ｅｘｐｌｏｒｅキット（パノミクス（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）、フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎｔ）、カリフォルニア州、米国、ｃａｔ．Ｎｏ．ＱＧ０００４）の製造業者によって推奨される手順に従って、収穫し、５３℃で溶解し、分岐ＤＮＡアッセイによって分析した。
結果
表１６ｂにおいて列挙されたＡＳＯは、Ａ５４９細胞におけるハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較してＴＧＦ−ＲＩＩの標的ｍＲＮＡレベルの低下を示した。１０個の最も効率的なＡＳＯは、阻害濃度５０（ＩＣ５０）も試験された。Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｔ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃおよびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｙは全体的に、低濃度レベルでのＴＧＦ−ＲＩＩの最も適切なノックダウンにつながった。
【０５６０】
【表１７−１】
0006832285.tif 000058
【０５６１】
【表１７−２】
0006832285.tif 000059
【０５６２】
結論
最も効率的な本発明のＡＳＯの標的下方調節は、トランスフェクション試薬なしで再び優れていた。したがって、裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達が可能であり、さらなる薬剤開発に好適な方法である。
１．２．２  Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みの分析
アンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）による標的ｍＲＮＡに対する阻害活性を、皮質脳領域からのヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞、ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＳＣＭ００７）において決定した。治療対象として成人の神経新生に関する問題を、最も効果的なＡＳＯを用いる裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達試験によって評価した。Ａ５４９細胞を、参照細胞線株として用いた。
方法の説明
Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞を上述のように培養した。治療試験のために、細胞を２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（５０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞治療のために、培地を除去し、新しい全培地（２４ウェルに０．５ｍｌ）に交換した。その後、Ｒｅｆ．１、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを有するＡＳＯ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃを有するＡＳＯを、異なる時点（Ａ５４９細胞：１８時間、７２時間、６日、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞：１８時間、９６時間、８日）での標的下方調節の分析のために、３７℃および５％ＣＯ２で、２．５μＭおよび１０μＭの濃度で培地に添加した。収穫のために、細胞を、ＰＢＳを用いて二回洗浄し、−２０℃で凍結した。リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲによるｍＲＮＡの分析のために、細胞を上述のように処理した。リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲのために使用準備済の、および標準的なプライマーペア（表１１参照）を使用し、製造業者の指示（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）プライム（Ｐｒｉｍｅ）  ＰＣＲ  クイック（Ｑｕｉｃｋ）  ガイド（Ｇｕｉｄｅ））に従って、それぞれ使用準備済みのマスターミックス液（ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓｉａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１７２−５２７１）と混合した。プローブを３反復として分析し、データを、バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）  ＣＦＸ  マネージャー（Ｍａｎａｇｅｒ）（商標）  ３．１を用いてＧＮＢ２Ｌ１ｍＲＮＡと比較して定量化し、その後、未処理コントロールに正規化した。統計は、Ｏｒｄｉｎａｒｙ−ｏｎｅ−ｗａｙ−ＡＮＯＶＡ、続いてダネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）」ポストホック比較（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）を用いて算出された。
結果：
結果は、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂおよび２１８ｃを用いての裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）において、用量および時間依存的方法で適切な下方調節をもたらすことを示した（表１７）。Ａ５４９細胞
における標的ｍＲＮＡは、１８時間後に重大に減少し、７２時間および６日後にさらにより効率的に減少した。１８時間後、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）において、１０μＭの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み後のＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの低下のみが観察され得るが、標的下方調節は、両方の試験濃度で７２時間後に有意であり、８日目まで安定していた。
【０５６３】
【表１８】
0006832285.tif 000060
【０５６４】
結論
ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みによる標的ｍＲＮＡの効率的および安定した下方調節は、長期間の適用においても達成される。したがって、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞は、患者の治療オプションとして例えば成人の神経新生の回復に対処する実験のために使用することも可能である。同じことが、Ａ５４９実験によって示される
ような他の指示に適用する。
【０５６５】
まとめると、ＴＧＦ−ＲＩＩの効率的な下方調節は、送達方法および細胞型から独立して適している。ＡＳＯの裸の（Ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みは、臨床応用において好ましい送達方法であり、追加のトランスフェクション剤の不在は、患者に対する安全性が高いことを示唆する。
実施例２：タンパク質レベルにおけるＴＧＦ−ＲＩＩに対するアンチセンス-オリゴヌクレオチドの阻害活性の決定
ウェスタンブロット分析および免疫細胞化学は、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡレベルを減少させるかどうかを決定するために行われ、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）およびヒト神経前駆体細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））における本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）による媒介は、標的タンパク質の減少をもたらす。
方法の説明
細胞を上述のように培養した。治療のために、細胞を６−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．３９２０．３００,８０，０００細胞／ウェル）および、８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２、１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達のために、培地を除去し、新しい全培地（６ウェルに１ｍｌ、８ウェルに０．５ｍｌ）に交換した。その後、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール）、各本発明のＡＳＯを、Ａ５４９細胞においては７２時間後、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においては９６時間後の標的下方調節の分析のために、２．５μＭおよび１０μＭのタンパク質濃度で培地に添加した。細胞を溶解し、一般的な方法部分に記述されるようにウェスタンブロットによって試験した。一次抗体抗ＴＧＦ−ＲＩＩをＴＢＳ−Ｔ中に０．５％ＢＳＡを有する溶液で希釈し、４℃で２日間インキュベートした。その後、膜を、ＴＢＳ−Ｔ中に０．５％ＢＳＡを有する溶液で希釈された２次抗体抗−ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ−連結を用いてインキュベートした（１時間、ＲＴ）。インキュベーション後、  ブロットを、ＴＢＳ−Ｔを用いて洗浄し、Ｌｕｍｉｎａｔａ（商標）Ｆｏｒｔｅ
ウェスタンＨＲＰ基質（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）＃ＷＢＬＵＦ０５００）を用いて出現させ、バンドを蛍光画像アナライザ（イメージクアント（ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ）（商標）ＬＡＳ  ４０００、ＧＥ  ヘルスケア)を用いて検出した。ハウスキーパー比較のために、膜をＨＲＰ−共役抗−ＧＡＰＤＨを用いてインキュベートした（０．５％Ｂｌｏｔｔｏで１：１０００、４℃、一晩）。デンシトメトリー（Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ）定量を、ＧＡＰＤＨと比較して算出し、その後イメージ（ｉｍａｇｅ）スタジオ（Ｓｔｕｄｉｏ）（商標）ライフ（Ｌｉｆｅ）ソフトウェア（Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて未処理コントロールに正規化した。免疫細胞化学のための手順を、標準的なプロトコルに記述されるように行った。標的−下方調節の検証のために、抗−ＴＧＦ−ＲＩＩを希釈し、４℃で一晩インキュベートした。Ｃｙ３ヤギ−抗−ウサギを二次抗体として使用した。全ての抗体希釈液を、抗体希釈液（Ｚｙｔｏｍｅｄ（登録商標）＃ＺＵＣ０２５−１００）を用いて調製した。細胞の試験を、蛍光顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ）、アクシオ（Ａｘｉｏ）（登録商標）オブザーバー．Ｚ１）によって行った。画像を、イメージ（ｉｍａｇｅ）  Ｊ  ソフトウェアおよびコーレルドロー（ＣｏｒｅｌＤＲＡＷ）（登録商標）Ｘ７ソフトフェアを用いて分析した。
結果および裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達
ウェスタンブロット分析および免疫細胞化学は、ＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質レベルの減少を確認するのに使用された。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の７２時間で、ＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質は、Ａ５４９細胞における未処理コントロールと比較して、本発明に係る高濃度の異なるＡＳＯを用いて重大に減少した（表１８）。減少したＴＧＦ−ＲＩＩレベルは、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においても観察された（表１８）。両方の細胞株について、ＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質レベルの減少は、ウェスタンブロット分析
によって示された。免疫細胞化学は、未処理細胞およびスクランブルコントロール処理細胞に比べて両方の細胞株におけるＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質の強力な用量依存的減少を明らかにした。
【０５６６】
【表１９】
0006832285.tif 000061
【０５６７】
結論
標的ｍＲＮＡ下方調節に加えて、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１３ｋ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１５２ｈ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ａｚ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｙの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、Ａ５４９細胞および  ＲｅＮｃｅｌｌ（登録商標）細胞におけるタンパク質レベルの優れた減少をもたらした。ＴＧＦ−ＲＩＩの染色は、両細胞株において、これらのＡＳＯを用いての治療後に用量依存的低減を明らかにした。
更なるＡＳＯを用いての裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の結果
タンパク質分析は、試験されたＡＳＯのＡ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達におけるＴＧＦ−ＲＩＩの量の減少を示した（１０μＭ、表１９）。このことは、免疫細胞化学によっても確認された。両細胞株ののために、試験されたＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達によるＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質レベルの減少は、未処理細胞およびスクランブルコントロール処理細胞と比較して検出され得る。
【０５６８】
【表２０−１】
0006832285.tif 000062
【０５６９】
【表２０−２】
0006832285.tif 000063
【０５７０】
【表２０−３】
0006832285.tif 000064
【０５７１】
【表２０−４】
0006832285.tif 000065
【０５７２】
【表２０−５】
0006832285.tif 000066
【０５７３】
結論
まとめると、Ａ５４９細胞および  ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達によるＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの用量−依存的下方調節は、タンパク質レベルの用量−依存的減少をもたらした。本発明のＡＳＯは、Ａ５４９細胞および  ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞において示されるようにタンパク質標的下方調節に影響を及ぼす。
実施例３：ＴＧＦ−ＲＩＩの下流のシグナル伝達経路に対するアンチセンス−オリゴヌクレオチドの効果の分析
機能分析をヒト肺癌細胞（Ａ５４９）およびヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））において行った。ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの効果的な下方調節および本発
明のＡＳＯにおける裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達によるタンパク質レベルの減少に続いて、ＴＧＦ−β下流シグナル伝達経路を分析した。したがって、ＴＧＦ−βの下流−メディエーターとしても知られる結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）のｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを評価した。さらに、Ｓｍａｄ２（マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ２（ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｈｌｅｇｉｃ  ｈｏｍｏｌｏｇ２））のリン酸化を試験した。Ｓｍａｄ２のリン酸化は、ＴＧＦ−β経路の活性化、続く、下流標的遺伝子ＣＴＧＦの上方調節のためのマーカーである。
方法の説明
細胞を上述のように培養した。処理のために、細胞を６−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．３９２０．３００）（８０，０００細胞／ウェル）および、８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達のために、Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞の培地を除去し、新しい全培地（６ウェルに１ｍｌ、および８ウェルに０．５ｍｌ）に交換した。その後、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール）、配列識別番号２１８ｂ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ）、Ｎｏ．２１８ｃ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）を有するＡＳＯを、２．５μＭおよび１０μＭの濃度で培地に添加し、各分析を、Ａ５４９細胞においては７２時間後、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においては９６時間後に行った。ＣＴＧＦｍＲＮＡレベルにおける効果を評価するために、リアル−タイムＰＣＲを、以前に記述されるように行った。ＣＴＧＦ分析のためのプライマーペアは、使用準備済みであり、標準化された。ＣＴＧＦおよびｐＳｍａｄ２タンパク質レベルをチェックするために、ウェスタンブロットおよび免疫細胞化学を、以前に記述されるように行った。各方法のための型および使用される希釈液を表１３および表１４に列挙した。
３．１．Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
３．１．１ＣＴＧＦｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおける効果
ＣＴＧＦｍＲＮＡは、Ａ５４９細胞（７２時間）、およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞（９６時間）においてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に、大幅に、および用量−依存的に減少した。ＴＧＦ−βの下流−メディエーターは、１０μＭのＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においては５２％±０．０２に、Ａ５４９細胞においては３９％±０．０３に減少した（表２０）。これらの下方調節されたＣＴＧＦｍＲＮＡレベルにしたがって、ＣＴＧＦタンパク質発現の強い減少を、Ａ５４９細胞において観察した（表２１）。
【０５７４】
【表２１】
0006832285.tif 000067
【０５７５】
【表２２】
0006832285.tif 000068
【０５７６】
結論
ＴＧＦ−βシグナリングの機能的阻害は、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞において標的ＣＴＧＦｍＲＮＡの下方調節およびＣＴＧＦタンパク質レベルの減少によって示されるように、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達を用いて達成された。
３．１．２  ｐＳｍａｄ２タンパク質レベルにおける効果
ＡＳＯ媒介ＴＧＦ−βシグナリング阻害の特異的結果としてのＣＴＧＦ下方調節を証明するために、ｐＳｍａｄ２タンパク質レベルを分析した。
【０５７７】
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のＡ５４９細胞においては７２時間後、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においては９６時間後のｐＳｍａｄ２に対する染色は、Ｓｍａｄ２リン酸化の用量−依存的阻害を示した（図５）。ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによるｐＳｍａｄ２発現レベルの減少は、Ａ５４９細胞におけるウェスタンブロット分析によって確認された（表２２）。
【０５７８】
【表２３】
0006832285.tif 000069
【０５７９】
結論
Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、ＴＧＦ−βシグナリングの下流メディエーターの用量−依存的阻害をもたらした。ＣＴＧＦおよびＳｍａｄ２のリン酸化は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって減少し、共に、阻害されたＴＧＦ−β経路を示した。
３．２．Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃの結果
３．２．１ＣＴＧＦｍＲＮＡおよびｐＳｍａｄ２タンパク質レベルにおける効果
Ａ５４９細胞、およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、ＣＴＧＦｍＲＮＡを下流調節する（表２３）。ｐＳｍａｄ２に対する免疫細胞化学は、ＴＧＦ−βシグナリングの阻害を確認した（図６）。したがって、ＣＴＧＦｍＲＮＡの下流調節は、ＴＧＦ−βシグナリングの直接的な減少効果である。
【０５８０】
【表２４】
0006832285.tif 000070
【０５８１】
結論
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃは、標的ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの下流調節後のＴＧＦ−βシグナリング阻害に効果的であった。このことは、ＣＴＧＦｍＲＮＡの決定によって試験され、ＴＧＦ−βシグナリングのためのマーカーとしてｐＳｍａｄ２タンパク質レベルを減少させた。
【０５８２】
まとめると、本発明のＡＳＯは、ＴＧＦ−ＲＩＩの下流調節によるＴＧＦ−βシグナリングの機能的阻害を媒介するのに効果的である。したがって、本発明のＡＳＯは、例えば、神経疾患、線維症および腫瘍進行などの上昇したＴＧＦ−βレベルが関与する医学的適応に有利であるだろう。
実施例４：ＴＧＦ−β１処理細胞において、標的ｍＲＮＡレベルにおける本発明のＡＳＯの阻害活性
４．１  ＴＧＦ−β１前処理後のＡ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み
病理学的条件下、皮質脳領域からのヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）におけるアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の阻害活性を分析するために、細胞をトランスフォーミング成長因子−β１（ＴＧＦ−β１）を用いて前処理した。以前の研究から、ＴＧＦ−β１は、例えばＡＬＳなどの全ての神経疾患の脳脊髄液（ＣＳＦ）において高濃度で見られると知られている。したがって、ＴＧＦβ−シグナリングにおけるＡＳＯの阻害活性を、前処理後、ＴＧＦ−β１の存在で試験した。Ａ５４９細胞は参照細胞株として使用された。
方法の説明
Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）を上述のように培養した。処理研究のために、細胞を２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（５０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞処理のために、培地を除去し、新しい全培地（２４ウェルに０．５ｍｌ）に交換した。４８時間ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ、プロモセル（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）＃Ｃ−６３４９９）に続いて、培地を交換した。ＴＧＦ−β１再処理を、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、１０μＭ）、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ（１０μＭ）、またはＡ
ＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ（１０μＭ）を有する培地と組み合わせて行った。Ａ５４９細胞をさらに７２時間インキュベートし、一方、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞を９６時間後に収穫した。収穫のために、細胞を、ＰＢＳを用いて二回洗浄し、続いて、以前に記述されるようなＲＮＡ単離（２４ウェルディッシュ）を使用した。リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲのために使用されたプライマーペアを表１１に列挙する。
４．１．１  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによるＴＧＦ−ＲＩＩのｍＲＮＡ下方調節における効果は、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においてＴＧＦ−β１プレインキュベーションによって影響されなかった（表２４、図７）。Ａ５４９細胞における標的ｍＲＮＡは、ＡＳＯを用いての単回処理後（残存ｍＲＮＡ：１５％±０．０５）に重大に下方調節したが、前処理に続くＴＧＦ−β１の存在下での処理後（残存ｍＲＮＡ：７％±０．０１）も重大に下方調節した。ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞において、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、ＴＧＦ−β１の非存在下で（２５％±０．０１）、またはＴＧＦ−β１前処理に続く、ＴＧＦ−β１の存在下で（１７％±０．０２）ＴＧＦ−ＲＩＩ  ｍＲＮＡ阻害の同様の効力を示した。
【０５８３】
【表２５】
0006832285.tif 000071
【０５８４】
結論
標的ｍＲＮＡは、両試験された細胞株におけるプレ−インキュベーションに続いて、ＴＧＦ−β１の存在下で、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みによって約２０％に効果的に下方調節した。
４．１．２  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃの結果
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃによるＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの下方調節は、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においてＴＧＦ−β１存在下で効果的であった（表２５、図８）。両試験された細胞における標的ｍＲＮＡは、ＡＳＯ
Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃを用いての単回処理にもかかわらず、またはＴＧＦ−β１の存在下で、重大に下方調節した。
【０５８５】
【表２６】
0006832285.tif 000072
【０５８６】
結論
まとめると。本発明のＡＳＯは、ＴＧＦ−β１の存在下で、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを下方調節するのに効果的であり、ＡＳＯが病理学的条件下で機能的であることを示す。
実施例５：ＴＧＦ−β１処理細胞において、標的タンパク質レベルにおける本発明のＡＳＯの阻害活性
病理学的条件下、皮質脳領域からのヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）におけるアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の阻害活性を分析するために、細胞をトランスフォーミング成長因子−β１（ＴＧＦ−β１）を用いて前処理した。以前の研究から、ＴＧＦ−β１は、例えばＡＬＳなどの全ての神経疾患の脳脊髄液（ＣＳＦ）において高濃度で見られると知られている。したがって、ＴＧＦβ−シグナリングにおけるＡＳＯの阻害活性を、前処理後、ＴＧＦ−β１の存在で試験した。Ａ５４９細胞は参照細胞株として使用された。
方法の説明
細胞を標準的なプロトコルで以前に記述されたように培養した。処理のために、細胞を６−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．３９２０．３００）（８０，０００細胞／ウェル）および、８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達効果の調査のために（Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ）、ＴＧＦ−β１（プロモセル（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）＃Ｃ−６３４９９）を用いたプレインキュベーション後、培地を除去し、新しい全培地（６ウェルディッシュ、および８ウェル細胞培養スラ
イドディッシュに１ｍｌ）に交換した。ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ、４８時間）の曝露後、培地を交換し、ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、１０μＭ）、および本発明のＡＳＯ（１０μＭ）を細胞に組み合わせ、単回処理で加えた。Ａ５４９細胞を、さらに７２時間インキュベートし、一方、ＲｅＮｃｅｌｌ
ＣＸ（登録商標）細胞を９６時間後収穫した。続いて、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、その後、ウェスタンブロット分析に続くタンパク質単離（６−ウェルディッシュ）のために、または細胞の免疫細胞化学試験（８−ウェル細胞培養スライドディッシュ中で）のために使用した。使用された技術のための手順は、以前に記述されるように行った。各方法のために使用された抗体および希釈液を、表１３および１４に列挙する
裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の結果
Ａ５４９細胞のウェスタンブロットおよび免疫細胞化学分析は、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１３ｋ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１５２ｈ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ａｚ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｙが、ＴＧＦ−β１の存在下で強力な標的下方調節を生じることを示した（表２６）。固定化ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞でのＴＧＦＲＩＩの染色は、Ａ５４９細胞において観察された結果を確認した。試験されたＡＳＯは、単回処理後、ＴＧＦ−β１の存在下でも、強力な標的下方調節を明らかにした。
【０５８７】
【表２７】
0006832285.tif 000073
【０５８８】
結論
ＴＧＦ−β１プレインキュベーションに続いてＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１３ｋ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１５２ｈ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ａｚ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２０９ｙの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後は、標的ｍＲＮＡ下方調節に加えて、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録
商標）細胞におけるタンパク質レベルの減少をもたらした。
更なるＡＳＯを用いての裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の結果
ウェスタンブロット分析は、未処理細胞およびスクランブルコントロールを用いて処理された細胞と比較して、７２時間の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のＡ５４９細胞におけるＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質量の減少を示した（表２７）。ＴＧＦ−β１のプレインキュベーションに続く、試験されたＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、ＴＧＦ−β１を用いて前処理に続く、スクランブルコントロールを用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達が行われた細胞と比較して、減少を誘発した。ＴＧＦ−ＲＩＩに対する染色後のＡ５４９および  ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）の免疫細胞化学試験は、試験されたＡＳＯが、ＴＧＦ−β１の前処理で、またはＴＧＦ−β１の前処理をしないで裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に、標的タンパク質の強力な減少を媒介したことを示した。
【０５８９】
【表２８−１】
0006832285.tif 000074
【０５９０】
【表２８−２】
0006832285.tif 000075
【０５９１】
【表２８−３】
0006832285.tif 000076
【０５９２】
【表２８−４】
0006832285.tif 000077
【０５９３】
【表２８−５】
0006832285.tif 000078
【０５９４】
結論
ＴＧＦ−β１プレインキュベーション後でさへも、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質の減少をもたらす。
実施例６：ＴＧＦ−β１プレインキュベーション後のＴＧＦ−ＲＩＩの下流のシグナル伝達経路に対する本発明のＡＳＯの効果の分析
機能分析をヒト肺癌細胞（Ａ５４９）およびヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））において行った。ＴＧＦ−β１の存在下でのＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの効果的な下方調節および本発明のＡＳＯにおける裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達によるタンパク質レベルの減少に続いて、ＴＧＦ−β下流シグナル伝達経路を分析した。したがって、ＴＧＦ−β１の下流−メディエーターとして知られる結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）の
ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを評価した。さらに、Ｓｍａｄ２（マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ２（ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｈｌｅｇｉｃ  ｈｏｍｏｌｏｇ２））のリン酸化を試験した。Ｓｍａｄ２のリン酸化は、ＴＧＦ−β経路の活性化、続く、下流標的遺伝子ＣＴＧＦの上方調節のためのマーカーである。
方法の説明
細胞を標準的なプロトコルで上述のように培養した。処理のために、細胞を、２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（５０，０００細胞／ウェル）、６−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．３９２０．３００）（８０，０００細胞／ウェル）および、８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達効果の調査のために、ＴＧＦ−β１を用いてプレインキュベーション後、培地を除去し、新しい全培地（６ウェルディッシュ、および８ウェル細胞培養スライドディッシュに１ｍｌ）に交換した。ＴＧＦ−β１の曝露（１０ｎｇ／ｍｌ）に続いて、培地を交換し、ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、１０μＭ）、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを有するＡＳＯ（１０μＭ）、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃを有するＡＳＯ（１０μＭ）を、組み合わせて、および単回処理で細胞に加えた。Ａ５４９細胞をさらに７２時間インキュベートし、一方、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞を、９６時間後に収穫した。その後、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いてＲＮＡ（２４−ウェルディッシュ）、およびタンパク質単離（６−ウェルディッシュ）、または細胞の免疫細胞化学試験（８−ウェル細胞培養スライドディッシュ中で）のために使用した。ＣＴＧＦｍＲＮＡレベルにおける効果を評価するために、リアル−タイムＰＣＲを、以前に記述されるように行った。ＣＴＧＦ分析のためのプライマーペアは、使用準備済みであり、標準化された。ＣＴＧＦおよびｐＳｍａｄ２タンパク質レベルをチェックするために、ウェスタンブロットおよび免疫細胞化学を、以前に記述されるように行った。各方法のための型および使用される希釈液を表１３および表１４に列挙する。
６．１．Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
６．１．１  ＣＴＧＦｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおける効果
Ａ５４９細胞（７２時間、０．５２±０．０５）、およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞（９６時間、０．７０±０．２５）においてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に、ＣＴＧＦｍＲＮＡは、下方調節され、一方、５日間（Ａ５４９：４８時間＋７２時間、６．９２±２．３２）、または６日間（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ：４８時間＋９６時間、１．６０±０１５）のＴＧＦ−β１インキュベーションは、それぞれ、ＣＴＧＦｍＲＮＡの重大な上方調節を引き起こした。ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、ＴＧＦ−β１の存在下でＴＧＦ−β１の効果を阻害することによるＣＴＧＦｍＲＮＡ下方調節を誘発するのに十分効力があった（表２８、図１１）。ｍＲＮＡレベルの観察によると、ＣＴＧＦに対して染色する免疫細胞化学も、タンパク質レベルにおけるこのような観察を確認した（図１２）。
【０５９５】
【表２９】
0006832285.tif 000079
【０５９６】
結論
ＴＧＦ−β１の存在で、続くＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの処理は、最初にＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの下方調節をもたらし、二番目にＣＴＧＦｍＲＮＡ並びにＡ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるタンパク質レベルの減少をもたらした。このことは、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、高ＴＧＦ−β１病理学的条件下で十分強力に活性であり、ＴＧＦ−β１媒介効果から救うことができることを示す。
６．１．２  ｐＳｍａｄ２タンパク質レベルにおける効果
ＣＴＧＦ下方調節が、ＴＧＦ−β１存在下でＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂにより媒介される特異的なＴＧＦ−βシグナリング阻害の結果であるかどうかを証明するために、ｐＳｍａｄ２タンパク質レベルを分析した。
【０５９７】
ＴＧＦ−β１プレインキュベーション続くＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の平行的なＴＧＦ−β１発現を伴うｐＳｍａｄ２染色は、両試験された細胞株においてＳｍａｄ２リン酸化の阻害につながる（図１３）。さらに、減少したｐＳｍａｄ２タンパク質レベルを、Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるウェスタンブロット分析によって証明した（表２９）。
【０５９８】
【表３０】
0006832285.tif 000080
【０５９９】
結論
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、ＴＧＦ−β１の存在でＡ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるＴＧＦ−βシグナリングの機能的阻害をもたらし、ｐＳｍａｄ２のリン酸化の減少が確認された。
６．２．Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃの結果
６．２．１  ＣＴＧＦｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおける効果
データは、スクランブルコントロールおよびＴＧＦ−β１の組み合わせ処理（Ａ５４９：５．８９、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）：１．２５）と比較して、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃおよびＴＧＦ−β１の組み合わせ処理（Ａ５４９：０．８６、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）：０．２３）後のＣＴＧＦｍＲＮＡ下流調節を示す（表３０および図１４）。これらの観察に加えて、ＣＴＧＦにおける免疫細胞化学的染色は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃによるタンパク質レベルにおけるＴＧＦ−β１媒介効果の防止を確認した（図１５）。
【０６００】
【表３１】
0006832285.tif 000081
【０６０１】
結論
データは、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃによるＣＴＧＦｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおけるＴＧＦ−β１誘導効果の効果的な防止を確認した。
６．２．２  ｐＳｍａｄ２タンパク質レベルにおける効果
ＣＴＧＦ下方調節が、ＴＧＦ−β１プレインキュベーションの存在でさへも、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃによって媒介されるＴＧＦ−β１シグナリング阻害の結果であるかどうかを証明するために、ｐＳｍａｄ２タンパク質レベルを分析した。
【０６０２】
ｐＳｍａｄ２のリン酸化は、ＴＧＦ−β１インキュベーションによって誘導され（１．５２±０．１９）、一方、ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、Ａ５４９細胞におけるｐＳｍａｄ２の減少を媒介した（０．８９±０．０５）。
ＴＧＦ−β１プレインキュベーションに続く組み合わせ処理は、Ｓｍａｄ２のリン酸化におけるＴＧＦ−β１効果の抑制をもたらす（ウェスタンブロット分析、表３１）。免疫細胞化学は、ウェスタンブロット分析によって観察されるデータを支持した（図１６）。
【０６０３】
【表３２】
0006832285.tif 000082
【０６０４】
結論
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃは、ＴＧＦ−β１プレインキュベーションに続くＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のＴＧＦ−βシグナリングを効果的に阻害している。このことは、下流のｐＳｍａｄ２タンパク質レベルの試験によって示された。
【０６０５】
まとめると、本発明のＡＳＯは、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを効果的に下流調節することによって、病理学的に、高いＴＧＦ−β１レベルの存在で、ＴＧＦ−βシグナリングの機能的阻害を媒介することが並外れてできる。したがって、本発明のＡＳＯは、例えば、神経疾患、線維症および腫瘍進行などの上昇したＴＧＦ−βレベルが関与する医学的適応に有利であるだろう。
実施例７：ｍＲＮＡレベルにおけるアンチセンス−オリゴヌクレオチドの予防活性の決定（ＴＧＦ−β１処理後）
皮質脳領域からのヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）におけるアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の予防活性を分析するために、ＡＳＯを、トランスフォーミング成長因子−β１（ＴＧＦ−β１）処理に続く裸の取り込みによって細胞に移した。
方法の説明
Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞を以前に記述されたように培養した。予防処理研究のために、細胞を２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（５０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。その後、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、１０μＭ）、またはＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを有するＡＳＯ（１０μＭ）を、７２時間（Ａ５４９）、または９６時間（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））
培地に加えた。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のインキュベーション時間に続いて、ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ  プロモセル（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）  ＃Ｃ−６３４９９））を、培地置換なしで、細胞にさらに４８時間で加えた。収穫するために、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いて、リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲによるｍＲＮＡ分析後のＲＮＡ単離（２４−ウェルディッシュ）のために使用した。リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲのための使用準備済みのおよび標準化されたプライマーペアを使用し、製造業者の指示（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）プライム（Ｐｒｉｍｅ）  ＰＣＲ  クイック（Ｑｕｉｃｋ）
ガイド（Ｇｕｉｄｅ））に従って、それぞれ使用準備済みのマスターミックス液（ＳｓｏＡｄｖａｎｃｅｄ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓｉａｌ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（バイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）＃１７２−５２７１）と混合した。方法は、以前に記述されたように行った。
７．１．Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによるＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡにおける効果は、Ａ５４９およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるＴＧＦ−β１のポストインキュベーションによって影響されなかった（表３２）。ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における標的ｍＲＮＡの重大な減少は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いて単回処理後に示された（０．３３＊±０．１１）。ＴＧＦ−β１の後処理を伴うＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、標的ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを強く減少させた。Ａ５４９細胞において、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、単回処理（０．２５±０．０７）またはＴＧＦ−β１のポストインキュベーションを伴う組み合わせ処理（０．２４±０．０６）においてＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡを阻害するのに同様の有効性を示した。
【０６０６】
【表３３】
0006832285.tif 000083
【０６０７】
結論
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みに続くＴ
ＧＦ−β１のポストインキュベーションは、標的ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡ下方調節において有効であり、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、医学的適応における予防処理に適している。
実施例８：ＴＧＦ−β１処理に続くタンパク質レベルにおける本発明のＡＳＯの阻害活性の決定
皮質脳領域からのヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））における本発明のＡＳＯの予防活性を分析するために、ＡＳＯを、ＴＧＦ−β１処理に続く裸の取り込みによって細胞に移した。
方法の説明
細胞を標準的なプロトコルで以前に記述されるように培養した。処理のために、細胞を８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。その後、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、１０μＭ）、またはＡＳＯ配列特定ナンバー２１８ｂ（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、１０μＭ）を、７２時間（Ａ５４９細胞）、または９６時間（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））培地に加えた。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達に続いて、ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ、プロモセル（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）＃Ｃ−６３４９９））を、培地置換なしで、さらに４８時間で細胞に加えた。収穫するために、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いて、免疫細胞化学分析に使用した。手順を、以前に記述されたように行った。各方法に使用される抗体および希釈液を表１３および表１４に列挙する。
８．１  ＴＧＦ−β１処理に続くＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、を用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質減少の結果
Ａ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞に対する免疫細胞化学分析は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂが、続くＴＧＦ−β１処理後に強力なＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡ標的下方調節を生成することを示した（図１７）。
結論
ＴＧＦ−β１処理に続くＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、標的ｍＲＮＡ下方調節、並びにＡ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における強いＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質レベルの減少をもたらす。
【０６０８】
まとめると、ＴＧＦ−β１のポスト処理と組み合わせてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって媒介されるＴＧＦ−ＲＩＩタンパク質を下方調節する効果が、さらに与えられ、本発明のＡＳＯは、医学的応用に効果があるという結論をだす。
実施例９：ＴＧＦ−β１処理に続くＴＧＦ−ＲＩＩの下流のシグナル伝達経路におけるＡＳＯ処理効果
ＴＧＦ−βシグナリングの阻害を媒介することにおける本発明のＡＳＯの効果は、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）およびヒト神経前駆細胞（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））におけるＴＧＦ−β１処理に続く裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達を評価した。したがって、ＴＧＦ−βシグナリングの下流分子、Ｓｍａｄ２（マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ３（ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｈｌｅｇｉｃ
ｈｏｍｏｌｏｇ  ３）および結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）を分析した。
方法の説明
細胞を標準的なプロトコルで以前に記述されるように行った。処理のために、細胞を、２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（５０，０００細胞／ウェル）および、８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。その後、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、１０μＭ）、またはＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ（１０μＭ）を、培地に７２時間（Ａ５４９）、または９６時間（ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標））で加えた。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達に続いて、ＴＧＦ−β１（
１０ｎｇ／ｍｌ、プロモセル（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）＃Ｃ−６３４９９）を、培地の交換なしに、さらに４８時間で加えた。収穫するために、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いてＲＮＡ単離（２４−ウェルディッシュ）、または細胞の免疫細胞化学試験（８−ウェル細胞培養スライドディッシュ中で）のために使用した。ＣＴＧＦｍＲＮＡレベルにおける効果を評価するために、リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲを、以前に記述されるように行った。ＣＴＧＦ分析のためのプライマーペアは、使用準備済みであり、標準化された。ｐＳｍａｄ３タンパク質レベルを決定するために、免疫細胞化学を、以前に記述されるように使用した。各方法のための型および使用される希釈液を表１３および表１４に列挙する。
９．１．Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
９．１．１  ＣＴＧＦｍＲＮＡおよびｐＳｍａｄ３タンパク質レベルにおける効果
ＣＴＧＦｍＲＮＡは、Ａ５４９細胞（５日：０．６７±０．０２）、およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞（６日：０．７０±０．０２）においてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に減少した。それぞれ、７２時間、または９６時間後にＴＧＦ−β１を添加し、細胞は、ＣＴＧＦｍＲＮＡの増加に反応するが、ＴＧＦ−β１処理に続くスクランブルコントロールの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達と比較して、ＣＴＧＦｍＲＮＡの誘導は強く減少した（表３３）。ＣＴＧＦｍＲＮＡ下流調節は、ＴＧＦ−βシグナリング阻害の結果であり、続くＴＧＦ−β１処理後でも、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって媒介されるかどうかを検証するために、ｐＳｍａｄ３タンパク質レベルを試験した。図１８は、ＴＧＦ−βシグナリングが、Ａ５４９細胞（図１８Ａ）およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞（図１８Ｂ）において、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達によって、事実上阻害されたことを示す。この効果は、ＴＧＦ−β１処理に続く試験されたＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後も存在した。
【０６０９】
【表３４】
0006832285.tif 000084
【０６１０】
結論
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、ＴＧＦ−β１処理に独立して、ＴＧＦ−ＲＩＩｍＲＮＡの下方調節、並びにＡ５４９細胞およびＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞におけるＣＴＧＦｍＲＮＡおよびｐＳｍａｄ３タンパク質レベルの減少をもたらした。
【０６１１】
このことは、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、進行中のＴＧＦ−β１媒介効果を再開する、または減少させるための医学的条件下でも十分強力に活性であることを示す。
実施例１０：アンチセンス−オリゴヌクレオチドの潜在的な炎症性および毒性効果の分析
１０．１  末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）アッセイ
免疫賦活特性のためアンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の免疫賦活特性を分析するために、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、コントロールＡＳＯおよび試験化合物とインキュベートし、続いてＩＦＮαおよびＴＧＦαのためにＥＬＩＳＡを行った。
方法の説明
ＰＢＭＣを５００ｍｌの全輸血ユニットに対応するバフィーコートから単離した。各ユニットを、健康なボランティアから得て、クエン酸グルコースを、抗接着剤として使用した。バフィーコートは、輸血医学研究所の血液銀行ズール（Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ  Ｓｕｈｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎe）、ドイツ、によって調製され送達された。各献血は、ＨＩＶ抗体、ＨＣＶ抗体、ＨＢｓ抗原、ＴＰＨＡ、ＨＩＶＲＮＡ、およびＳＰＧＴ（ＡＬＡＴ）のために監視された。感染症因子に対して陰性であり、通常のＳＰＧＴ値を有する唯一の試験された血液サンプルを、低速遠心分離によって白血球および赤血球の分離のために使用した。ＰＢＭＣの分離を、献血に続いて、フィコール−ヒストパック（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｉｓｔｏｐａｇｕｅ）（登録商標）１０７７（ヘレウス（Ｈｅｒａｅｕｓ）（商標）マルチフュージ（Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅ）（商標）３ＳＲ）を用いてグラジエント遠心分離により約４０時間行った。ＩＦＮαアッセイのために、ＰＢＭＣを１００μｌ完全培地プラス添加剤（ＲＰＭＩ１６４０、＋Ｌ−Ｇｌｕ、＋１０％ＦＣＳ、＋ＰＨＡ−Ｐ（５μｇ／ｍｌ）、＋ＩＬ−３（１０μｇ／ｍｌ）に１００，０００細胞／９６ウェルで播種し、試験テスト化合物（５μｌ）を直接インキュベーションのために加えた（２４時間、３７℃、５％ＣＯ２）。ＴＦＮαアッセイのために、ＰＢＭＣを１００μｌ完全培地ｗ／ｏ添加剤（ＲＰＭＩ１６４０、＋Ｌ−Ｇｌｕ、＋１０％ＦＣＳ）に１００，０００細胞／９６ウェルで播種し、試験化合物（５μｌ）を直接インキュベーションのために加えた（２４時間、３７℃、５％ＣＯ２）。ｈｕＩＦＮα（イーバイオサイエンス（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、♯ＢＭＳ２１６ＩＮＳＴＣＥ）のためにＥＬＩＳＡ（プールされた上清を除く二重反復測定、２０μｌ)を製造業者のプロトコルに従って行った。ｈｕＴＮＦα（イーバイオサイエンス（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、♯ＢＭＳ２２３ＩＮＳＴＣＥ）のためにＥＬＩＳＡ（プールされた上清を除く二重反復測定、２０μｌ)を製造業者のプロトコルに従って行った。
結果
ＡＳＯインキュベーションに対して検出できるＩＦＮα（表３４）およびＴＮＦα（表３５）分泌がないことによって、ＰＢＭＣにおけるＡＳＯ処理の免疫賦活効果はないことが示された。分析機能は、免疫賦活化、コレステロール共役ｓｉＲＮＡ（ＸＤ−０１０２４；ＩＦＮα）、および（二本鎖ＲＮＡの合成類似体であり、ＴＬＲ３に結合し、免疫システムを刺激する）ポリイノシン：ポリシチジン酸（ｐｏｌｙＩ：Ｃ；インビボジェン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）＃ｔｌｒｌ−ｐｉｃ）における免疫賦活効果によって証明される。
【０６１２】
【表３５】
0006832285.tif 000085
【０６１３】
【表３６】
0006832285.tif 000086
【０６１４】
１０．２  本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドのインビボ毒性学
アンチセンス−オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の毒性特性を分析するために、Ｃ５７／Ｂｌ６Ｎマウスは、ＡＳＯ静脈注射を３回受け、続いて殺処分され、血清、肝臓、および腎臓内のトランスアミナーゼレベルを調べた。
方法の説明
年齢６週の雌のＣ５７／Ｂｌ６Ｎマウスを、試験化合物（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）を用いて７日間処理した。ＡＳＯ（２００μl、１５ｍｇ／ｋｇ／ＢＷ)を、治療期間の１日目、２日目、および３日目に静脈内に注射した。体重の進展（Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｃ）を連続して毎日監視し、１日につき４回の血清を、静脈ファシキュラリス（Ｖｅｎａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）から採集めた。８日目に動物を殺処分し（ＣＯ２）、大静脈、肝臓（〜５０ｍｇの破片）、腎臓、および肺からの血清を、ｍＲＮＡおよびトランスアミナーゼの定量のために採集した。ＴＧＦ−ＲＩＩ  ｍＲＮＡレベルを、ｂＤＮＡアッセイによって肝臓、腎臓、および肺の溶解物で決定した（クアンチジーン（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ）（登録商標）キット、パノミクス（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）／アフィメトリクス（Ａｆｆｉｍｅｔｒｉｘ））。アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＰ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）を、コバス（Ｃｏｂａｓ）  インテグラ（Ｉｎｔｅｇｒａ）（登録商標）４００で１：１０希釈血清から測定した。
【０６１５】
【表３７】
0006832285.tif 000087
【０６１６】
【表３８】
0006832285.tif 000088
【０６１７】
【表３９】
0006832285.tif 000089
【０６１８】
【表４０】
0006832285.tif 000090
【０６１９】
【表４１】
0006832285.tif 000091
【０６２０】
結論：ＰＢＭＣまたはＣ５７／Ｂｌ６Ｎマウスにおける適切な本発明のＡＳＯの炎症性または毒性効果はなかった。したがって、ＴＧＦ−ＲＩＩを標的とするＡＳＯ処理は、様々なＴＧＦ−β関連疾患を治療するために安全な方法と考える。
実施例１１：インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）においてＴＧＦ−β誘導神経幹阻害および神経前駆細胞増殖における本発明のＡＳＯの脳室内注入の決定
本研究の目標は、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）において神経幹および神経前駆細胞増殖におけるＴＧＦ−β１誘導効果をｉ）防ぐために、およびｉｉ）処理するためにＴＧＦ−ＲＩＩに対する本発明のＡＳＯの可能性を評価することであった。
方法の説明
１１．１  神経発生のＴＧＦ−β１関連下流調節の防止
２ヶ月歳の雌のフィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）−３４４ラット（ｎ＝３２）は、ステンレススチール製カニューレに接続された浸透圧ミニポンプ(２００２年モデル、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）)を介して脳室内注入を受けた。ミニポンプの外科的移植を、筋肉内注射を使用して深麻酔下行った。動物は、本発明に係る本発明のＡＳＯ(ポンプ内に１．６４ｍＭ濃度存在)、スクランブルＡＳＯ(ポンプ内に１．６４ｍＭ濃度存在)、またはＣＳＦ（人工髄液）を７日間注入された。８日目にポンプが変更され、動物は、ｉ）ＣＳＦ、ｉｉ）ＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）、ｉｉｉ）ＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）＋スクランブルＡＳＯ（ポンプ内に１．６４ｍＭ濃度存在）、またはｉｖ）ＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）＋本発明のＡＳＯ（ポンプ内に１．６４ｍＭ濃度存在）を１４日間注入された。注入期間の終わりに、全ての動物を、４％パラホルムアルデヒドを用いて経心腔的灌流した。脳を、カニューレ管局在のために分析し、不適切なカニューレ配置を有する動物を、分析から除外した。ポンプ期間の最後の２４時間の間に、動物は、２００ｍｇ／ｋｇブロモ−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の腹腔内注入を受けた。
【０６２１】
組織を、４０μｍ矢状断面においてＢｒｄＵ陽性細胞の色素生成免疫検出のために処理した。ＢｒｄＵ陽性細胞を、脳室下帯の最下端部、中間部、上部に位置される断片ごとに３つの５０μｍ×５０μｍのカウンティングフレーム内で数えた。最上部の焦点面(除外平面)またはカウンティングフレームの側面除外境界を交差した陽性プロファイルは数えられなかった。海馬の分析のため、海馬の用量を決定し、境界内のおよび境界に隣接するすべての陽性細胞が数えられた。各構造体のＢｒｄＵ陽性細胞数の予測値を得るために、陽性プロファイルの総数を、試料容量に対する参照容量の比率によって乗算した。すべての推定を、１つの大脳半球のために算出し、総脳値を表すために倍増するべきである。データを平均値±標準偏差（ＳＤ）として表す。統計分析を、ＴＧＦ−β１処理群およびコントロール群間で、不対の、両側ｔ検定比較−スチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ）ｔ検定を用いて行った（グラフパッド（ＧｒａｐｈＰａｄ）プリズム（Ｐｒｉｓｍ）４ソフトウェア、米国)。有意レベルをＰ＜０．０５に仮定した。
１１．２  神経発生のＴＧＦ−β１関連下流調節の治療
動物は、ＣＳＦまたは組換え体ヒトＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）のどちらかを、毎時０．５μｌの流速で１４日間受けた。１４日後、ポンプを変更し、動物は、ｉ）ＣＳＦ、ｉｉ）組換え体ヒトＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）、またはｉｉｉ）本発明のＡＳＯ（ポンプ内に１．６４ｍＭ濃度存在）＋組換え体ヒトＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）を有する共注入体、またはｉｖ）スクランブルＡＳＯ（ポンプ内に１．６４ｍＭ濃度存在）＋組換え体ヒトＴＧＦ−β１（ポンプ内に５００ｎｇ／ｍｌ存在）を有する共注入体のどれかを用いて注入された。注入期間の終わりに、全ての動物を、４％パラホルムアルデヒドを用いて経心腔的灌流した。脳を、カニューレ管局在のために分析し、不適切なカニューレ配置を有する動物を、分析から除外した。ポンプ期間の最後の２４時間の間に、動物は、２００ｍｇ／ｋｇブロモ−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の腹腔内注入を受けた。組織学的分析は、上述のように行った（１１．１）。
結果：
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ａｊ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑを用いた処理は、明確に、および部分的に、海馬における、および室壁における細胞増殖のＴＧＦ−β１効果を減少させた。本発明のＡＳＯを用いる処置は、神経新生におけるＴＧＦ−β１の阻害効果から明確におよび部分的に救助する。結論：齧歯動物との交差反応性を示す本発明のＡＳＯは、このインビボ実験における神経新生を誘導する。交差反応性を示さない本発明のＡＳＯは、インビボ実験において、大抵は、より多くの潜在的な効果を及ぼす。結果として、これらの本発明のＡＳＯは、インビボセットアップにおいて、非ヒト霊長類およびヒトにとってより有効でもあり、したがって、ＴＧＦ−β１誘導の神経幹阻害および前駆細胞増殖を予防する、または治療するための非常に強力な薬として機能する。
実施例１２：増殖に対する本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの効果、およびヒト神経前駆細胞の特異的マーカーの分析
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、今までのところ効果的な治療のない神経変性致死疾患である。現在の分子遺伝的キャンペーンは、この致命的な病気の分子病態をますます解明しており、以前の研究から、ＴＧＦ−βはＡＬＳ患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）において高濃度に発見されることが知られている。ＴＧＦ−βの高レベルの循環は、幹細胞の静止を促進するので、脳の脳室下帯（ＳＶＺ）内の成体の神経新生の阻害を引き起こすことが知られている。したがって、変性神経の再生は、高められたＴＧＦ−βシグナリングによって予防されるようである。  本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドによって媒介されるＴＧＦ−βシグナリングの選択的阻害が、成体の神経新生の再活性化を許可する可能性があるかどうかを見つけ出すだめに、ＴＧＦ−β媒介細胞周期の停止の証拠を、証明しなければならない。
方法の説明
細胞周期停止研究  細胞を標準的なプロトコルで以前に記述されるように培養した。実験
のために、細胞を２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。増殖条件下（＋ＥＧＦ／ＦＧＦ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（ミリポア）：ＥＧＦ＃ＧＦ１４４、ｂＦＧＦ♯ＧＦ００３)、または分化条件下（−ＥＧＦ／ＦＧＦ）で細胞周期におけるＴＧＦ−β１媒介効果の決定のために、細胞を、各培地の除去および交換後に、ＴＧＦ−β１（プロモセル（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）＃Ｃ−６３４９９、１０ｎｇ／ｍｌ、または５０ｎｇ／ｍｌ）を用いて４日間処理した。４日目に培地をリフレッシュし、ＴＧＦ−β１処理を７日目まで繰り返した。７日目に、残存細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄することによって収穫し、続いて上述されるようにＲＮＡ（２４−ウェルディッシュ）単離のために使用した。リアル−タイムＲＴ−ＰＣＲによって細胞周期におけるＴＧＦ−β１媒介効果を評価するために、増殖マーカーＫｉ６７の、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３の、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１（ｐ２１）の、および神経新生マーカーダブルコルチン（Ｄｏｕｂｌｅｃｏｒｔｉｎ）（ＤＣＸ）のｍＲＮＡを分析した。各プライマーペアを、表１１に列挙する。
ヒト神経前駆細胞におけるＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの効果のためのｍＲＮＡ分析  細胞を標準的なプロトコルで以前に記述されるように培養した。実験のために、細胞を２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。本実験のために細胞培地を変更し、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、２．５μＭおよび１０μＭ）、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂのＡＳＯ（２．５μＭおよび１０μＭ）、またはＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ、プロモセル（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）＃Ｃ−６３４９９）を、９６時間細胞に加えた。インキュベーション時間後、培地をもう一度交換し、更なる処理を、更に９６時間行った。処理の８日後に細胞を収穫した。細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いてＲＮＡ（２４−ウェルディッシュ）単離のために使用した。前駆細胞に及ぼす効果を評価するために、ネスチン（Ｎｅｓｔｉｎ）(初期神経細胞マーカー)、ソックス２（Ｓｏｘ２）(初期神経細胞マーカー)、ＤＣＸ（神経新生のインジケーター）、およびＫｉ６７（増殖マーカー）ｍＲＮＡレベルを、以前に記述されるようにリアル−タイムＲＴ−ＰＣＲによって決定した。各プライマーペアを、表１１に列挙する。
ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達によるＴＧＦＲＩＩ特異的ＡＳＯの増殖性効果および分化効果：次の目的は、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯが、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞の増殖に影響を与えるかどうかを調査することであった。したがって、細胞を、２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）または、８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（１０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。増殖曲線を得るために、細胞を、培地交換後、７２時間、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール、２．５μＭおよび１０μＭ）、およびＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ（２．５μＭおよび１０μＭ）を用いて処理した。インキュベーション時間後、培地を交換し、処理を２回繰り返した。上澄みを採集後、残存細胞を、細胞数の決定のために２４ウェルディッシュから収穫した。この目的のために、残存細胞を、ＰＢＳを用いて洗浄し（２×）、アクターゼ（５００μｌ／ウェル）を用いて処理し、５分間３７℃でインキュベートした。その後、５００μｌ培地を加え、細胞数を、製造業者の指示に従って、ルナ（Ｌｕｎａ）−ＦＬ（商標）自動細胞カウンター蛍光および明視野（Ｂｒｉｇｈｔ  Ｆｉｅｌｄ）（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）８７２０４０）を用いて決定した。簡単に、１８μｌの細胞懸濁液を、２μｌのアクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムアッセイ生存率キット（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０４５）に加えた。セッティングの１分後、１０μｌを、細胞カウントスライド（Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｓｌｉｄｅ）（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０１１）に加え、細胞をカウントし、全細胞／ｍｌおよび死細胞と比較して生存細胞の割合を算出した。Ｒｅｆ．１
（１０μＭ）、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ（１０μＭ）の送達、および８日間のＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）の対応する処理の後に、８−ウェル細胞培養スライドディッシュの細胞を固定し、Ｋｉ６７キットに対する抗体を用いて染色した。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞の分化能力を調査するために、他の８−ウェル細胞培養スライドディッシュを、Ｒｅｆ．１（１０μＭ）、Ｓｅｑ．ＩＤ
Ｎｏ．２１８ｂ（１０μＭ）を用いて処理し、増殖条件下（＋ＥＧＦ／ＦＧＦ）、９６時間、ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）の対応する処理をした。その後、細胞の一部をさらに９６時間増殖条件下で処理し、一方、細胞の他の部分を、処理し、分化条件下（−ＥＧＦ／ＦＧＦ）に保持した。細胞の染色に続いて、ニューロフィラメント  Ｎ  （ＮｅｕＮ）およびβＩＩＩ−チューブリン発現レベルを蛍光顕微鏡によって決定した。細胞を収穫し、固定し、染色するプロトコルは、以前に記述され、各抗体希釈液を表１４に列挙する。
ＴＧＦ−β１プレ−インキュベーションに続く裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の増殖および神経新生のためのマーカーのｍＲＮＡ分析：細胞を標準的なプロトコルで以前に記述されるように培養した。実験のために、細胞を２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）に播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。細胞周期停止を誘導するために、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞を、ＴＧＦ−β１を用いて４日間処理した。その後、培地を変更し、ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）を新たに加えた。１日に８個の培地をもう一度交換し、裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達を、Ｒｅｆ．１（１０μＭ）、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂ（１０μＭ）をＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）と組み合わせて加えることによって９６時間行った。細胞を、インキュベーション後にＰＢＳを用いて２回洗浄することによって収穫した。続くＲＮＡ単離およびリアル−タイムＲＴ−ＰＣＲによるｍＲＮＡ分析を、記述されるように行った。
１２．１．１  ヒト神経前駆細胞におけるＴＧＦ−β１による細胞周期停止の媒介
幹細胞静止マーカーの検出は、ＴＧＦ−β１が細胞の曝露後７日で細胞周期停止を媒介することを示した。増殖マーカーＫｉ６７ｍＲＮＡ発現は用量依存的に減少した。さらに、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３のｍＲＮＡ発現は、ＴＧＦ−β１濃度と相関して下方調節された。対照的に、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１（ｐ２１）は、ＴＧＦ−β１によって重大に上方調節された。要約すると、これらの結果は、ＴＧＦ−β１によって誘導される幹細胞静止を示す。興味深いことに、神経新生のためのマーカー、ＤＣＸは、ＴＧＦ−β１によって強く減少した（表４１）。
【０６２２】
【表４２】
0006832285.tif 000092
【０６２３】
結論
ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞の増殖はＴＧＦ−β１によって阻害された。
１２．１．２  ヒト神経幹細胞のマーカーに及ぼすアンチセンス−オリゴヌクレオチド効果の結果
幹細胞マーカーに及ぼすＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの効果を見つけ出すために、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞において繰り返しの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後８日で初期神経前駆細胞の異なるマーカーを試験した（表４２）。ネスチンおよびＳｏｘ２遺伝子発現レベルは、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって影響されなかった。ＧＦＡＰｍＲＮＡは、１０μＭのＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いた裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後にわずかに上方調節し、対照的に、ＤＣＸは、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み後に明らかに誘導された。全ての試験されたマーカーの発現は、ＴＧＦ−β１処理後（８日）に強く減少した（表４２、図１９）。
【０６２４】
【表４３】
0006832285.tif 000093
【０６２５】
結論：
ｍＲＮＡ分析の結果、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、さらに多くの幹細胞様状態の方向にＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞を導く（ＧＦＡＰ上方調節）、さらに、ＤＣＸの誘導は、神経新生の上昇を示す。ＴＧＦ−β１処理は、反対の方向になるという結果をもたらす。
１２．１．３  ヒト神経幹細胞の増殖に及ぼすアンチセンス−オリゴヌクレオチド効果の結果
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、繰り返しの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達（３×７２時間）後９日の細胞をカウントすることによる増殖速度、および裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み（２×９６時間）後８日のＫｉ６７タンパク質レベルの決定、に真に効果を有するかどうか調査するために行った。
結果
細胞数は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み後、細胞の免疫化学染色において観察された増殖マーカーＫｉ６７のタンパク質発現の上昇にしたがって、上昇した（表４３、図２０）。免疫細胞化学染色の蛍光分析も、ＴＧＦ−β１によって媒介される増殖ステップを明らかにした。
【０６２６】
【表４４】
0006832285.tif 000094
【０６２７】
結論
ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞においてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、Ｋｉ６７タンパク質発現の向上と並行して、細胞数の増加をもたらし、全体的に神経前駆体の増殖の増加を示す。
１２．１．３  ヒト神経幹細胞における分化能力に及ぼすアンチセンス−オリゴヌクレオチドの効果の結果
分化するための細胞能力に及ぼすＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの影響を除外するために、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを、増殖条件下（＋ＥＧＦ／ＦＧＦ）、９６時間、裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みによって細胞に移した。インキュベーション時間後、培地を交換し、細胞増殖培地の一部に加え、一方、細胞分化培地の他の部分（−ＥＧＦ／ＦＧＦ）に加えた。その後、  ＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）の対応する処理をした。その後、９６時間の他の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達を行った。細胞を、神経細胞マーカーのニューロフィラメント  Ｎ  （ＮｅｕＮ）およびβＩＩＩ−チューブリンの発現レベルもよって分析した。
結果
ＮｅｕＮ（図２３Ａ）およびβＩＩＩ−チューブリン（図２３Ｂ）に対する免疫化学染色は、増殖条件下の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）ＡＳＯ送達に続く、分化条件下の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に分化する能力に影響を及ぼさないことを示す。ヒト神経特異的タンパク質であるβＩＩＩ−チューブリンのシグナルは、分化条件下でＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって影響されず、未処理コントロールに匹敵した。ＮｅｕＮ発現も、分化条件下の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に影響されなかった。したがって、細胞は、未だに神経細胞に分化することができる。驚くべきことに、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞は、増殖条件下（２×９６時間）、両期間で、ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の神経マーカーＮｅｕＮおよびβＩＩＩ−チューブリンを発現し、ＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、増殖条件下でさへ神経の分化へ特異的シフトを促進し得ることを示す。さらに、神経前駆細胞の増殖率の上昇を観察した（表４３、図２０）。さらに、ＮｅｕＮに対する染色は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いて処理された細胞が、全ての他の処理と比較して、より生存できるように見えることを明らかにした（図２１Ａ）。明らかに、ＴＧＦ−β１を用いて処理された細胞は、増殖性が重大に低かった。
結論
分化能力は、本発明のＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって影響されなかった。興味深いことに、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞は、増殖および分化条件下
で裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に神経に分化することを示した。このことは、本文中で増加した増殖速度の観察において示しており、本発明のＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、神経分化の上昇傾向を伴う神経新生を促進することを示す。
１２．１．４  ＴＧＦ−β１プレインキュベーション後のヒト神経幹細胞の増殖における本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの結果
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達が、ＲｅＮｃｅｌｌ  ＣＸ（登録商標）細胞における逆のＴＧＦ−β１媒介効果に効果的であるかどうか分析するために、更なる研究を、７日間のＴＧＦ−β１プレインキュベーション、続く８日間の裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達（２×９６時間）と共に行った。
結果
初期神経マーカーとしてＧＦＡＰ（表４４、図２２Ａ）、増殖マーカーとしてＫｉ６７（表４４、図２２Ｂ）、および神経新生マーカーとしてＤＣＸ（表４４、図２２Ｃ）の遺伝子発現は、単回のＡＳＯ処理後に上昇し、一方、ＴＧＦ−β１は反対の結果をもたらした。さらに、ＴＧＦ−β１プレインキュベーション後７日に、本発明のＡＳＯ処理は、ＴＧＦ−β１誘導効果を逆転させた。したがって、分析は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂが幹細胞および増殖マーカーに対してＴＧＦ−β１媒介効果を回復させること影響を及ぼすことを示す。
【０６２８】
【表４５】
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【０６２９】
結論
結果は、成体の神経新生が、本発明のＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯ−媒介ＴＧＦ−βシグナリング阻害によって再活性化され得ることを示す。
【０６３０】
まとめると、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、ＴＧＦ−β媒介幹細胞静止から救助し、分化に影響を及ぼさない成体神経新生を促進する。このことは、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを脳修復のための理想的な治療薬にする。
実施例１３：ＳＯＤ１マウスにおいて本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドにおけるＡＬＳの疾患進行の治療活性の決定
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）のための薬としてＡＳＯの治療可能性を分析するために、雄および雌のトランスジェニックのＳＯＤ１  Ｇ９３Ａマウスを、浸透圧アルゼット（ＡＬＺＥＴ）（登録商標）ミニポンプを介して側脳室にｉｃｖカニューレによって本発明のＡＳＯの異なる投与量を用いて処理した。さらに、リルゾール（ｒｉｌｕｚｏｌｅ）を参照として使用した。リルゾールは筋萎縮性側索硬化症を治療するために使用される薬であり、サノフィ（Ｓａｎｏｆｉ）  ファーマシューティカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）社によって販売される。選択された患者において、人工呼吸器依存性または気管切開の発現を遅延し、約２〜３ヶ月生存率を高め得る。
方法の説明：
長期の中心静脈注入のために、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）浸透圧ミニポンプ（注入率：０．２５μｌ／ｈ、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）、モデル２００４年、クパチーノ（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ）、米国)に取り付けられたｉｃｖカニューレを、イソフルラン麻酔（バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）、ＧｍｂＨ、ドイツ)および半滅菌条件の下で定位的に埋め込んだ。各浸透圧ミニポンプを、マウスの首に１ｃｍの長さの皮膚切開を介して腹部領域に皮下移植し、シリコーンチューブによって、ｉｃｖカニューレと接続した。動物を、定位フレームに配置し、ｉｃｖカニューレ（２３Ｇ、３ｍｍ長さ）を、右側脳室へと降ろした（ブレグマ（ｂｒｅｇｍａ）に対して相対的に後部０．３ｍｍ、側部１ｍｍ、深さ３ｍｍ）。カニューレを、歯科用セメント（Ｋａｌｌｏｃｒｙｌ、Ｓｐｅｉｋｏ（登録商標）Ｄｒ．Ｓｐｅｉｅｒ  ＧｍｂＨ、ミュンスター、ドイツ)を用いて２つのステンレススチール製のネジで固定した。首の皮を縫合で閉じた。外科処置中、体温を加温パッドによって維持した。外科処置後の感染を避けるために、マウスを局所的にｂｅｔａｉｓｏｄｏｎａ（登録商標）（ムンディファーマ（Ｍｕｎｄｉｐｈａｒｍａ）  ＧｍｂＨ、リンブルグ（Ｌｉｍｂｕｒｇ）、ドイツ)を用いて処置し、０．１ｍｌの抗生物質（ｓｃ，バイトリル（Ｂａｙｔｒｉｌ）（登録商標）２．５％  バイエルバイタル（Ｂａｙｅｒ  Ｖｉｔａｌ）ＧｍｂＨ、レバークーゼン（Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ）、ドイツ)を受けた。チューブを、各溶液で満たした。ＡＳＯ効果をＡＬＳの発展および進行、症状の発症、不全麻痺、並びに生存率をインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）エンドポイントとして使用した。９週の年齢のマウスを殺処分し、脳を神経病理学分析のために除去した。ｉｃｖ移植部位の組織学的検証を、４０μｍ冠状面、クレシルバイオレット染色脳断片で行った。
【０６３１】
本発明のＡＳＯはインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において潜在的な効果を及ぼす。相当一致して、齧歯類交差反応性のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ａｊ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑのＡＳＯは、ＡＬＳモデル動物の治療効果を証明する上記実験においても効果的であった。交差反応性を示さない本発明のＡＳＯは、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において、より多くの潜在的な効果を及ぼす。結果として、これらの本発明のＡＳＯは、非ヒト哺乳類およびヒトのためのインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）セットアップにおいても効果的であり、したがって、神経幹および神経前駆体の増殖の阻害を誘導するＴＧＦ−β１を予防または治療し、そのことによって、ＡＬＳおよび他の神経変性疾患を治療するための非常に強力な薬として作用すると推測される。
実施例１４：Ｒ６／２マウスにおいてハンチントン病の疾患発展および進行におけるＴＧＦ−ＲＩＩに関するアンチセンス−本発明のＡＳＯの治療活性の決定
ハンチントン症（ＨＤ）のための薬としてＡＳＯの治療可能性を分析するために、雄および雌のトランスジェニックＲ６／２マウスを、浸透圧ミニポンプを介して側脳室にｉｃｖ用法によって本発明のＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯの異なる投与量を用いて処理した。方法の説明：
慢性の中心静脈注入のために、マウスは、５週の年齢で、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）浸透圧ミニポンプ（注入率：０．２５μｌ／ｈ、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）、モデル２００４年、クパチーノ（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ）、米国)に取り付けられたｉｃｖカニューレのために外科処置を受けた。カニューレおよびポンプを、ケタミン／キシラシン（ｘｙｌａｃｉｎ）麻酔（バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）、ＧｍｂＨ、ドイツ)および半滅菌条件の下で定位的に埋め込んだ。各浸透圧ミニポンプを、マウスの首に１ｃｍの長さの皮膚切開を介して腹部領域に皮下移植し、シリコーンチューブによって、ｉｃｖカニューレと接続した。動物を、定位フレームに配置し、ｉｃｖカニューレ（２３Ｇ、３ｍｍ長さ）を、右側脳室へと降ろした（ブレグマ（ｂｒｅｇｍａ）に対して相対的に後部０．３ｍｍ、側部１ｍｍ、深さ３ｍｍ）。カニューレを、歯科用セメント（Ｋａｌｌｏｃｒｙｌ、Ｓｐｅｉｋｏ（登録商標）Ｄｒ．Ｓｐｅｉｅｒ  ＧｍｂＨ、ミュンスター、ドイツ)を用いて２つのステンレススチール製のネジで固定した。首の皮を縫合で閉じた。外科処置中、体温を加温パッドによって維持した。外科処置後の感染を避けるために、マウスを局所的にｂｅｔａｉｓｏｄｏｎａ（登録商標）（ムンディファーマ（Ｍｕｎｄｉｐｈａｒｍａ）  ＧｍｂＨ、リンブルグ（Ｌｉｍｂｕｒｇ）、ドイツ)を用いて処置し、０．１ｍｌの抗生物質（ｓｃ，バイトリル（Ｂａｙｔｒｉｌ）（登録商標）２．５％  バイエルバイタル（Ｂａｙｅｒ  Ｖｉｔａｌ）ＧｍｂＨ、レバークーゼン（Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ）、ドイツ)を受けた。チューブを、各溶液で満たした。ＨＤの発展および進行、症状の発症、握力、一般的な運動性、並びに生存率をインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）エンドポイントとして使用した。９週の年齢のマウスを殺処分し、脳を組織学的分析のために除去した。ｉｃｖ移植部位の組織学的検証を、４０μｍ冠状面、クレシルバイオレット染色脳断片で行った。
【０６３２】
本発明のＡＳＯはインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において潜在的な効果を及ぼす。相当一致して、齧歯類交差反応性のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ａｊ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑの本発明のＡＳＯは、ハンチントンモデル動物の治療の効果を証明する上記実験においても効果的であった。交差反応性を示さない本発明のＡＳＯは、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において、より多くの潜在的な効果を及ぼす。結果として、これらの本発明のＡＳＯは、非ヒト哺乳類およびヒトのためのインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）セットアップにおいてもより効果的であるので、神経幹および神経前駆体の増殖の阻害を誘導するＴＧＦ−β１を予防または治療するための非常に強力な薬として作用し、そのことによって、ＨＤおよび他の神経変性疾患を治療すると推測される。
実施例１５：フィッシャー−３４４ラットにおけるＴＧＦ−β１誘導の水頭症およびこれに伴う認知障害の疾患進行における本発明のＡＳＯの治療活性の決定
本研究の目標は、本発明のＡＳＯの脳室内注入によって、容量依存的手法でｉ）神経幹細胞増殖および神経新生、ｉｉ）水頭症の形成、およびｉｉｉ）空間学習障害、におけるＴＧＦ−β１誘導効果に苦しむ動物を治療することである。
方法の説明：脳室内注入のための浸透圧ミニポンプを、１８０ｇ〜２００ｇ体重の雌のフィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）−３４４ラット（ｎ全体＝７０、ｎグループ＝１０）に移植した。注入は、コントロールとしてａ）人工脳脊髄液（ａＣＳＦ：１４８．０ｍＭ  ＮａＣｌ、３．０ｍＭ  ＫＣｌ、１．４ｍＭ  ＣａＣｌ２  ０．８ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、０．２ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、１００μｇ／ｍｌラット血清アルブミン、５０μｇ／ｍｌ  ゲンタマイシン、ｐＨ７．４）、またはｂ）ａＣＳＦ中に１μｇ／ｍｌのＴＧＦ−β１を有する溶液をアルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）浸透圧ポンプ２００４を用いて０．２５μｌ／ｈの流速で１４日間行った。１４日後にポンプは
変更され、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）浸透圧ポンプ２００４（流速０．２５μｌ／ｈ）は、次の注入：ａＣＳＦ、または様々な濃度のＴＧＦ−ＲＩＩＡＳＯ（１．１ｍｍｏｌ／Ｌ、３．２８ｍｍｏｌ／Ｌ、９．８４ｍｍｏｌ／Ｌ、）と組み合わせたＴＧＦ−β１（１μｇ／ｍｌ）、のために使用され、またはスクランブルＡＳＯ（３．２８ｍｍｏｌ／ｌ）を注入した（２×４週）。注入期間の最後の４日の間に、動物は、増殖細胞を標識するために、毎日、ＢｒｄＵ（５０ｍｇ／ｋｇ体重）の腹腔内注入を受けた。ポンプを除去し、二週間後の動物を、１４日間空間学習試験（モリス−水−迷路)で機能分析した。１日後、動物を、０．９％ＮａＣｌを用いてかん流し、脳を除去し、ＰＣＮＡ、ＢｒｄＵ、ＤＣＸ、ＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ、およびＢｒｄＵ／ＧＦＡＰの定量的組織学的分析のために、および水頭症の測定として側脳室の容量の立体解析のために、４％パラホルムアルデヒド中に後で添加した。対側半球をさらに解剖し、異なる領域(心室壁、海馬、皮質)を、ＴＧＦ−ＲＩＩ発現レベルを分析する定量的ＲＴ−ＰＣＲのために処理する。ＭＲ画像を、ポンプ移植４日前、ポンプ移植後１週、最初のポンプ変更日、および、その後から、注入期間の終わりまで２週間毎に、グループ１、グループ３、およびグループ６のうちの４匹の動物から撮った。ｉｃｖ移植部位の組織学的検証を、４０μｍ冠状面、クレシルバイオレット染色脳断片で行った。
【０６３３】
【表４６】
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【０６３４】
本発明のＡＳＯはインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において潜在的な効果を及ぼす。相当一致して、齧歯類交差反応性のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ａｊ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑの本発明のＡＳＯは、水頭症モデル動物の治療の効果を証明する上記実験においても効果的であった。交差反応性を示さない本発明のＡＳＯは、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において、より多くの潜在的な効果を及ぼす。結果として、これらの本発明のＡＳＯは、非ヒト哺乳類およびヒトのためのインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）セットアップにおいてもより効果的であり、したがって、神経幹および神経前駆体の増殖の阻害を誘導するＴＧＦ−β１を予防または治療し、そのことによって、水頭症および他の神経変性疾患を治療するための非常に強力な薬として作用すると推測される。
実施例１６：フィッシャー３４４ラットにおいて脊髄損傷のリハビリテーションにおけるＴＧＦ−ＲＩＩに関するアンチセンス−オリゴヌクレオチドの治療活性の決定
脊髄損傷（ＳＣＩ）のための薬としてＡＳＯの治療可能性を分析するために、雄および雌のフィッシャー−３４４ラットを、浸透圧ミニポンプを介して側脳室にｉｃｖ投与によ
って本発明のＡＳＯの異なる投与量を用いて処理した。
方法の説明：
ＳＣＩを、Ｃ３レベルで頸部タングステンワイヤーナイフの脊柱離脱によって刺激した。次のステップにおいて、慢性の中心静脈注入のために、ラット（１８０ｇ〜２００ｇ体重）は、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）浸透圧ミニポンプ（注入率：０．２５μｌ／ｈ、アルゼット（Ａｌｚｅｔ）（登録商標）、モデル２００４年、クパチーノ（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ）、米国)に取り付けられたｉｃｖカニューレのために外科処置を受けた。カニューレおよびポンプを、ケタミン／キシラシン（ｘｙｌａｃｉｎ）麻酔（バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）、ＧｍｂＨ、ドイツ)および半滅菌条件の下で定位的に埋め込んだ。各浸透圧ミニポンプを、ラットの首に１ｃｍの長さの皮膚切開を介して腹部領域に皮下移植し、シリコーンチューブによって、ｉｃｖカニューレと接続した。動物を、定位フレームに配置し、ｉｃｖカニューレ（２３Ｇ、３ｍｍ長さ）を、右側脳室へと降ろした（ブレグマ（ｂｒｅｇｍａ）に対して相対的に後部１．０ｍｍ、側部１．０ｍｍ、深さ１．８ｍｍ）。カニューレを、歯科用セメント（Ｋａｌｌｏｃｒｙｌ、Ｓｐｅｉｋｏ（登録商標）−Ｄｒ．Ｓｐｅｉｅｒ  ＧｍｂＨ、ミュンスター、ドイツ)を用いて２つのステンレススチール製のネジで固定した。首の皮を縫合で閉じた。外科処置中、体温を加温パッドによって維持した。外科処置後の感染を避けるために、ラットを局所的にｂｅｔａｉｓｏｄｏｎａ（登録商標）（ムンディファーマ（Ｍｕｎｄｉｐｈａｒｍａ）  ＧｍｂＨ、リンブルグ（Ｌｉｍｂｕｒｇ）、ドイツ)を用いて局所的に処理し、０．５ｍｌ抗生物質（ｓｃ，バイトリル（Ｂａｙｔｒｉｌ）（登録商標）２．５％  バイエルバイタル（Ｂａｙｅｒ  Ｖｉｔａｌ）ＧｍｂＨ、レバークーゼン（Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ）、ドイツ)を受けた。チューブを、各溶液で満たした。ＳＣＩに続くリハビリテーションにおけるＡＳＯの効果を決定するために、外科処理後４週で、インビボＭＲＩ構造分析を行った（３Ｔ  ＭＲＩ、アレグラ（Ａｌｌｅｇｒａ）  シーメンス（Ｓｉｅｍｅｎｓ）、フェーズトアレイ（ｐｈａｓｅｄ  ａｒｒａｙ）−小動物コイル）。手術後６週で、動物を殺処分し、脊髄を組織学的、および免疫組織学的分析のために除去した。ｉｃｖ移植部位の組織学的検証を、４０μｍ冠状面、クレシルバイオレット染色脳断片で行った。
【０６３５】
本発明のＡＳＯはインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において潜在的な効果を及ぼす。相当一致して、齧歯類交差反応性のＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ａｊ、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．１４３ｈ、およびＳｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１０ｑの本発明のＡＳＯは、フィッシャー３４４−ラット脊髄対麻痺モデルの治療の効果を証明する上記実験においても効果的であった。ＭＲＩ画像および神経病理学的分析において、本発明のＡＳＯは高い処理効果を示した。交差反応性を示さない本発明のＡＳＯは、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において、より多くの潜在的な効果を及ぼす。結果として、これらの本発明のＡＳＯは、非ヒト哺乳類およびヒトのためのインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）セットアップにおいてもより効果的であるので、神経幹および神経前駆体の増殖の阻害を誘導するＴＧＦ−β１を予防または治療するための非常に強力な薬として作用し、そのことによって、脊髄損傷および他の神経変性疾患を治療すると推測される。
実施例１７：ヒト肺癌細胞株Ａ５４９の増殖におけるＡＳＯ−媒介効果
Ｋｉ６７、ｐ５３、カスパーゼ８（Ｃａｓｐａｓｅ  ８）およびＤＮＡ−結合タンパク質阻害剤２（ＩＤ２）のｍＲＮＡを、いくつかの腫瘍細胞の増殖における代表するマーカーとして分析した。以前の研究から、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３およびＩＤ２の発現は、腫瘍組織においてしばしば劇的に上昇した。Ｋｉ６７は増殖マーカーであり、Ｃａｓｐ８は、アポトーシスの指標となる。さらに、細胞数を裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に決定した。
方法の説明
Ａ５４９細胞を上述のように培養した。処理細胞のために、培地は除去され、２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）、６−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅ
ｄｔ）＃８３．３９２０．３００）（５０，０００細胞／ウェル）、または８−ウェル細胞培養スライドディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃９４．６１４０．８０２）（２０，０００細胞／ウェル）（２４−ウェルおよび８−ウェル細胞培養スライドディッシュには０．５ｍｌ、６−ウェルディッシュには１ｍｌ）に新しい全培地によって置換され、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。ｍＲＮＡ発現および増殖における影響を分析するために、細胞を、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール）、およびＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いて、２．５μＭおよび１０μＭの濃度で処理し、７２時間、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。培地交換を含む処理は、７２時間毎に３回（全体で１２日）繰り返された。増殖（Ｋｉ６７）の免疫細胞化学的分析のために、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達は、７２時間に制限された。その後、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いてタンパク質単離（６−ウェルディッシュ）、免疫細胞化学（８−ウェル細胞培養スライドディッシュ中に）、増殖曲線およびＲＮＡ単離（２４−ウェルディッシュ）、のために使用した。ＲＮＡ、タンパク質、および免疫細胞化学のためのプロトコルは、上述のように行った。増殖曲線のために、残存細胞を細胞数の決定のために２４−ウェルディッシュから収穫した。この目的のために、残存細胞を、ＰＢＳを用いて洗浄し（２×）、アクターゼ（５００μｌ／ウェル）を用いて処理し、７分間３７℃でインキュベートした。その後、５００μｌ培地を加え、細胞数を、製造業者の指示に従って、ルナ（Ｌｕｎａ）−ＦＬ（商標）自動細胞カウンター蛍光および明視野（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）、＃８７２０４０）を用いて決定した。簡単に、１８μｌの細胞懸濁液を、２μｌのアクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムアッセイ生存キット（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０４５）に加えた。セッティングの１分後、１０μｌを、細胞カウンティングスライド（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０１１）に加えた。細胞をカウントし、生存細胞および死細胞を区別して算出した。
１７．１  ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
ｍＲＮＡ分析は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後１２日のＫｉ６７、ｐ５３およびＩＤ２発現レベルの減少を示した。対照的に、Ｃａｓｐ８は、低レベルのＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂで上昇した（表４６）。これらの結果は、減少した腫瘍成長が、アポトーシス細胞のわずかな増加と関連しているということを示す。さらに、ウェスタンブロット分析は、本発明のＡＳＯの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後１２日のＫｉ６７、およびｐＡｋｔ１２のタンパク質レベルの減少を示した（表４７）。ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後のＡ５４９細胞の免疫化学試験は、適用された両濃度では、スクランブルコントロールと比較してＫｉ６７シグナルの減少したレベルを示した（図２３）。最後に、Ａ５４９細胞数は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後の１２日に約５０％近く減少した（表４８）。
【０６３６】
【表４７】
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【０６３７】
【表４８】
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【０６３８】
【表４９】
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【０６３９】
結論
これらの結果は、減少した腫瘍成長がアポトーシス細胞の増加と関連していることを示す。特に、腫瘍において可能な治療標的遺伝子ＩＤ２はＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後に減少した。
【０６４０】
まとめると、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、増殖速度を最小にすることに効果的であり、腫瘍進行遺伝子発現を減少させる。
実施例１８：いくつかの腫瘍細胞株の増殖におけるＡＳＯ裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達の効果
ＴＧＦ−βシグナリングは、癌発展において重要な経路である。一方、ＴＧＦ−βは、腫瘍抑制に機能する因子を促進するが、他方、この成長因子は、細胞遊走、細胞浸潤、細胞増殖、免疫調節の刺激につながり、腫瘍細胞の進行および遊走に利点である環境再編成を促進する。したがって、ＴＧＦ−βは、癌治療において鍵となる標的である。増殖マーカー（Ｋｉ６７）のｍＲＮＡおよびタンパク質レベル、並びに細胞数を、腫瘍細胞の増殖速度のマーカーとして本発明のＡＳＯにおける裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込み後に決定した。さらに、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３の、およびＤＮＡ結合タンパク質阻害剤２（ＩＤ２）の腫瘍抑制遺伝子を試験した。
方法の説明
いくつかの腫瘍細胞株を上述されるように培養した（表１０）。細胞を治療するために、培地を、２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）、６−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．３９２０．３００）（５０，０００細胞／ウェル）（２４−ウェルには０．５ｍｌ、６−ウェルディッシュには１ｍｌ）の新しい全培地によって置換し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。ｍＲＮＡ発現および増殖における影響を分析するために、細胞を、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール）、およびＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを用いて、２．５μＭおよび１０μＭの濃度で処理し、７２時間、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。培地交換を含む処理は、７２時間毎に３回（全体で１２日）繰り返された。収穫のために、細胞を、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、続いてＲＮＡ単離（２４−ウェルディッシュ）、タンパク質単離（６−ウェルディッシュ）、または増殖曲線のために使用した。ＲＮＡおよびタンパク質単離のためのプロトコルは、上述されるように行われた。増殖曲線のために細胞をカウント
する前に、細胞を、光学顕微鏡（ニコン（Ｎｉｋｏｎ、ＴＳ−１００  Ｆ  ＬＥＤ  ＃ＭＦＡ３３５００）を用いることによって分析した。残存細胞を、その後、細胞数の決定のために２４−ウェルディッシュから収穫した。この目的のために、残存細胞を、ＰＢＳを用いて洗浄し（２×）、アクターゼ（５００μｌ／ウェル）を用いて処理し、５〜７分間３７℃でインキュベートした。その後、５００μｌ培地を加え、細胞数を、製造業者の指示に従って、ルナ（Ｌｕｎａ）ＦＬ（商標）自動細胞カウンター蛍光および明視野（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）、＃８７２０４０）を用いて決定した。簡単に、１８μｌの細胞懸濁液を、２μｌのアクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウムアッセイ生存キット（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０４５）に加えた。セッティングの１分後、１０μｌを、細胞カウンティングスライド（バイオジム（Ｂｉｏｚｙｍ）＃８７２０１１）に加えた。細胞をカウントし、生存細胞および死細胞を区別して算出した。
１８．１  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの結果
Ｋｉ６７ｍＲＮＡレベルは、使用されたＡＳＯ濃度に独立して（Ａ５４９、Ｌ３．６ｐＩ、Ｐａｎｃ−１）、または依存して（ＨＴ−２９、Ｐａｎｃ−１、ＣａＣｏ２）、裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後１２日に効果的に減少した（表４０）。ｐ５３の遺伝子発現レベルは、試験されたＡＳＯによって、Ａ５４９、ＨＴ−２９、Ｋ５６２、ＫＧ−１、ＣａＣｏ２およびＴＭＫ−１においても影響を及ぼした（表５０）。減少したＫｉ６７タンパク質発現の検証は、Ａ５４９、Ｌ３．６ｐＩ、ＴＭＫ−１、ＨＴ−２９、およびＫ５６２で示された（表５１）。特に、ＩＤ２  ｍＲＮＡ発現は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって媒介されるＡ５４９、ＨＴ−２９、Ｋ５６２およびＴＭＫ−１細胞において首尾一貫して効率的および用量依存的な下方調節を示した（表５１）。さらに、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、いくつかの腫瘍細胞株の増殖速度の減少をもたらした（表５３）。細胞数の用量依存的減少は、ＨＰＡＦＩＩ、ＭＣＦ−７、ＫＧ１、Ｋ５６２、Ｕ９３７、およびＨＴＺ−１９細胞で認められた。肺癌細胞（Ａ５４９）は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによって誘発された約５０％の細胞数の減少を示した。減少した細胞数は、ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後１２日にＨＰＡＦＩＩ、Ｋ５６２、ＭＣＦ−７、Ｐａｎｃ−１およびＨＴＺ−１で光学顕微鏡によってさらに確認した（図２４）。
【０６４１】
同等の結果を、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．ｓ  １４１ｄ、１４１ｇ、１４１ｉ、１４３ｒ、１４３ｗ、１４３ａｆ、１４３ａｇ、１４３ａｈ、１４３ｊ、１４３ｐ、１４３ｑ、２３３ｄ、２３４ｄ、２３５ｂ、２３５ｄ、２３７ｂ、２３７ｃ、２３７ｉ、２３７ｍ、２３８ｃ、２３８ｆ、２３９ｅ、２４０ｃ、２４１ｂ、２４２ａ、２４６ｅ、２４７ｄ、２４８ｂ、２４８ｅ、２４８ｇ、１５２ｋ、１５２ｓ、１５２ｔ、１５２ｕ、１５２ａｂ、１５２ａｇ、１５２ａｈ、１５２ａｉ、２４９ｃ、２４９ｅ、２５０ｂ、２５０ｇ、２５１ｃ、２５１ｆ、２５２ｅ、２５３ｃ、２５４ｂ、２５５ａ、２５９ｅ、２６０ｄ、２６１ｂ、２６１ｅ、２６１ｇ、２６２ｄ、２６２ｅ、２０９ｓ、２０９ｖ、２０９ｗ、２０９ｘ、２０９ａｉ、２０９ａｎ、２０９ａｔ、２０９ａｕ、２０９ａｖ、２１０ｏ、２１０ｖ、２１０ｗ、２１０ｘ、２１０ａｂ、２１０ａｃ、２１０ａｄ、２１０ａｆ、２１０ａｍ、２６３ｂ、２６３ｃ、２６３ｉ、２６３ｍ、２６４ｅ、２６４ｈ、２６５ｅ、２６６ｃ、２６７ｂ、２６８ａ、２７２ｅ、２７３ｄ、２７４ａ、２７４ｄ、２７４ｆ、２７５ｇ、２７５ｉ、２７６ｂ、２７６ｃ、２７６ｊ、２７６ｋ、２７７ｄ、２７７ｅ、２７８ｆ、２７９ｃ、２８０ｂ、２８１ａ、２１８ａｄ、２１８ｎ、２１８ｔ、２１８ｕ、２１８ｖ、２１８ａｈ、２１８ａｎ、２１８ａｏ、２１８ａｐ、２２０ｄ、２２１ｄ、２２２ｂ、２２２ｃ，２２２ｆ、２２３ｃ、２２３ｆ、２２４ｉ、２２４ｍ、２２５ｃ、２２５ｆ、２２６ｅ、２２７ｃ、２１３ｏ、２１３ｐ、２１３ｑ、２１３ｓ、２１３ｙ、２１３ｚ、２１３ａａ、２１３ａｆ、２２８ｂ、２２９ａ、２８５ｄ、２８６ｄ、２８７ｄ、２８７ｅ、２８７ｆ、２８８ｅ、２８８ｉ、２８９ｄ、２８９ｈ、２８９ｏ、２８９ｐ、２８９ｑ、２９０ｃ、２９０ｆ、２９０ｉ、２９１ｃ、２９２ｃ、２９３ｂ、および２９４ａのアンチセンス−オリゴヌクレオチドで得ることができる。前述のアンチセンス−オリ
ゴヌクレオチドの多くは、Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂおよび２１８ｃを負かすことは可能ではないだろうが、当該技術分野のアンチセンス−オリゴヌクレオチドの場合よりまだかなりより有利である。したがって、本発明のアンチセンス−オリゴヌクレオチドは、癌および腫瘍のような高増殖性疾患の治療に非常に有用である。
【０６４２】
【表５０】
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【０６４３】
【表５１】
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【０６４４】
【表５２】
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【０６４５】
【表５３】
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【０６４６】
【表５４−１】
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【０６４７】
【表５４−２】
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【０６４８】
結論
ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂによるＫｉ６７、ｐ５３、およびＩＤ２のｍＲＮＡの調節は、いくつかの組織において、および異なる組織と共に腫瘍拡大を弱めるのに有利な効果を示す。Ｋｉ６７、ＩＤ２およびｐ５３は、異なる癌タイプにおいて上方調節され細胞増殖を促進するることが知られている。増殖マーカーＫｉ６７、ｐ５３、およびＩＤ２は、効果的に下方調節された。裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後１２日のいくつかの腫瘍細胞における細胞カウントおよび光学顕微鏡は、細胞増殖を減少させるために強力な物質としてＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを明らかにした。
【０６４９】
まとめると、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂは、Ｋｉ６７、ｐ５３、およびＩＤ２の認識されたｍＲＮＡ調節に並行して、増殖速度を効果的に減少させていた。これらのデータは、本発明のＡＳＯは、腫瘍細胞進行および腫瘍細胞の転移を弱めるための薬物候補物を促進していることを示す。
実施例１９：いくつかの腫瘍細胞株における血管新生に対するアンチセンス−オリゴヌクレオチドの効果の分析
血管新生の調節は、組織成長および修復に必須である。血管成長の不均衡は、例えば腫瘍成長、虚血、炎症、および免疫疾患などのような、種々の病気に貢献している。ＴＧＦ−βは、血管新生促進の因子であると知られている。ＴＧＦ−βは、過大応答（ｏｖｅｒｓｈｏｏｔｉｎｇ）血管新生が疾患進行に責任がある場合に、炎症性および腫瘍性のプロセスにおいて最も関連があり得る。これらの効果は、ＴＧＦ−β１誘導線維化を伴ってもよい。したがって、ＴＧＦ−ＲＩＩ特異的ＡＳＯによるＴＧＦ−βシグナリングの阻害は、適切な治療アプローチを表してもよい。この仮定を試験するために、これらのＡＳＯは、裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）取り込みによっていくつかの腫瘍細胞株に移された。繰り返しの裸の（ｇｙｍｎｏｔｉｃ）送達後１２日に、細胞上清を、多重分析によって、血管新生促進因子におけるタンパク質レベルのために分析した。この技術は、電気化学発光による複数の血管新生促進タンパク質（ＶＥＧＦ、Ｔｉｅ−２、ＦＬｔ−１、ＰＩＧＦ、およびｂＦＧＦ）の調査を可能にした。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生を促進し、それと共に例えば腫瘍増殖などに貢献する強力な腫瘍分泌サイトカインである。Ｔｉｅ−２は、活発に成長する血管から発現されるタンパク質である。Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１(Ｆｌｔ−１)は、血管内皮細胞増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）としても知られており、血管内皮細胞において高く発現される膜貫通型チロシン受容体キナーゼであり、胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）は、ＶＥＧＦとともに作用し、例えば腫瘍形成などの病理学的条件下で上方調節される。さらに、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）は、血管新生も誘導する成長因子である。ＰＡＩ−１は、ＴＧＦ−βの標的遺伝子であり、ＴＧＦ−βの瘢痕形成および血管新生効果を仲介する。したがって、ＰＡＩ−１は、腫瘍浸潤および転移にも重要な因子を示す。ＰＡＩ−１が高濃度を示す患者は、例えば乳癌、肺癌、大腸癌、および胃癌などにおいて不良予後因子と見なされます。ＰＡＩ−１の高濃度は、血栓症の役割を果たしている疾患(例えば、心筋梗塞、脳卒中など)の危険因子でもある。したがって、ＴＧＦ−β特異的アンチセンス−オリゴヌクレオチドによるＰＡＩ−１ｍＲＮＡ調節も試験された。
方法の説明
腫瘍細胞株を上述されるように培養した（表１０）。細胞を処理するために、培地を除去し、２４−ウェル培養ディッシュ（ザルスタット（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）＃８３．１８３６．３００）（３０，０００細胞／ウェル）の新しい全培地によって置換し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。次の日、Ｒｅｆ．１（スクランブルコントロール）、およびＡＳＯ  Ｓｅｑ．ＩＤ  Ｎｏ．２１８ｂを、２．５μＭおよび１０μＭの濃度でリフレッシュした培地に加え、７２時間、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。培地交換を含む処理は、７２時間毎に３回（全体で１２日）繰り返された。その後、細胞上清を集め、メソスケール（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ）  ディスカバリー（Ｄｉｓｃｏ
ｖｅｒｙ）（登録商標）アッセイ（ＭＳＤ  ディスカバリー（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ））によって分析した。この技術は、電気化学発光によって複数の血管新生促進タンパク質（ＶＥＧＦ、Ｔｉｅ−２、ＦＬｔ−１、ＰＩＧＦ、およびｂＦＧＦ）の調査を可能にした。個々の成長因子に関する実験パフォーマンスおよび情報を、製造業者の指示（ＭＳＤ  メソスケール（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ）  ディスカバリー（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（登録商標）、♯Ｋ１５１９８Ｇ）によって抽出した。結果を、グラフパッド（ＧｒａｐｈＰ뷯蒽볯鞃菣몂菣袼볯銽뷯鎽뷯覼볯뮙賩蚕꣦覼苣閃菣Ꚃ苣ꊂ臣袂臣ꚁꧨꆾ臣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†臣꺁뻥膀듧麃苣膀볯ꊼ볯銂铧蒁臣銼鯥鞴뗦鞁胣骶臣ꚁ볯꺼볯颍鯩袼볯钼裢Ꚃ苣ꮃ菣ꎂ菣랂菣覼臣龁苣ꮁ뷤ꢔ臣膀菣ꊂ菣銈苣ꒂ菣늼볯銈볯ꎼ볯ꮁ苣ꎁ臣ꆼ볯꾼臣뢣臣袼뷯馽뷯躽뷯钽뷯莽볯膀臩貁胣鞃菣릂菣躃菣늂菣뮴胦隌鯥邭飩뎮觥銈볯꺁뷯늼볯ꆼ菣馃菣銂ꫨ肯臣鞾苣讁臣蚁臣蚈黦鞁臣芀菣궃菣뎂菣誁苣뎁菣ꦃ苣麃菣꾁胣ꖻ觥ꮁ꣨낿臣貂苣袂臣ꮁ뷤ꢔ臣貂裥馌臣貂臣芀戼㹲醼볯躼볯ₑ뎼뷯醽볯ꦼ볯₤꺼뷯躼볯醼볯芽臣邵黦㲜牢ਾ†ꇨ閼볯꾁胣낼볯ꦼ裢醼뷯늼볯ꆼ臣膀볯뎼볯₯뎼뷯醽볯ꦼ볯₤꺼뷯躼볯醼볯芽臣낹苣钿臣꺁ꏨ꺁볯螽뷯趽뷯辽뷯覽뷯覼胩钁뻥ꮁ胣蒁臣ꒁ臣꺁ꧨ鎨臣貂臣貙듧麃볯ꆼ볯钼볯骼苨貙胣ꢼ볯ꆼ볯ꦼ볯骼蛨명駧膀볯뒼裢銼볯骼ꓥ뢅藨貙胣ꢼ볯몼裢醼볯骼菣ꦃ菣벃菣膀볯궼볯銈볯骼菨貙胣뒼볯낼裢醼볯颍郧Ꞁ駧股韧⦅臣誁臣ꚁ铧辇뻤颭髧ꮁ룤릖ꫨ肯臣貂臣鎁臣銂ꓧ馁胣閁苣ꮁ胣몈뿦閁苣龁듧麃룤薸臣誁臣讂볯ꖼ볯ꚼ苣膀볯閼볯馼胣ꢼ볯몼裢醼볯膀볯낼볯ꚼ볯ꦼ胣誁苣뎁볯ꎼ볯궼볯趉ꯧ명駧覼臣誁臣ꚁ铧辇뻤颭髧鮸냥銂ꓧ鞁臣芀볯낼볯ꚼ볯ꦼ臣袂臣낼볯鎼볯내菨꺁룤릖ꫨ肯臣趇ꛨꞁ臣ꎁ臣袼ꇨ閼볯覼胣芽볯Ꞽ볯ꮁ꿥馁苣ꆼ볯꾼†볯薽뷯躼볯꒼†볯辽볯銼볯颼뷯꺁뷥뾟臣膀볯ꖼ볯ꚼ臣꺁ꛨ龯臣몢ꫨ閁苣膀볯뎼볯₯뎼뷯醽볯ꦼ볯₤꺼뷯躼볯醼볯芽臣股껧낖铧銂諦뚈臣讂菨鮊臣芁苣鎁臣銂蓦뎑臣讂볯ꢡ볯隼볯芀볯閼볯馼臣袂臣낼볯鎼볯ꮁ臣醁苣邵黦꾁胣芽볯Ꞽ볯꺁蟩Ꞥ臣鮸냥节ꓧ鞁臣芀듧麃룤薸臣誁臣讂볯ꦼ볯ꚼ臣뾂菣醃苣ꪳ蟩꾁胣辂臣讁臣貁胣ꆼ볯钼볯誁苣뎁볯뒼볯銈볯馼듧麃臣誁臣ꚁ铧辇뻤颭髧ꮁ룦醰臣龁胣낼볯鎼볯내菨ꮁ臣蒁臣몟鳦蒚臣薆鯥Ꞁ볯ꦼ볯ꚼ菣馃菣꾁胣ꢅ臣꺁믤꺁ꧨ鎨臣貂臣내菨袂苣颫臣膀볯뎼볯릊黦节苣誂볥讁臣龁볯ꢡ볯鞼볯芀鳦貾臣膀볯뒼裢銼볯내菨ꮁ臣醁苣ꚼ뷯钽裢醼苣뎃菣꾂돨꺁룤릖ꫨ肯볯ꢡ볯颼볯膀룤뎁臣ꢼ볯몼裢醼볯袼볯뎼볯₯뎼뷯醽볯ꦼ볯₤꺼뷯躼볯醼볯芽†볯躼볯캕궼볯誁苣뎁볯ꎼ볯銈볯袼매貙胣醼볯캐궼볯ꮁ臣醁苣뒼뷯薽裢銼룦醰苣鲤蟥馁苣鎁臣貁迥붃臣芁苣袼ꇨ閼볯覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†郥覭臣邵黦銂胣뎼뷯醽볯ꦼ볯₤꺼뷯躼뷯ₓ醼볯醼뷯膀볯钼볯螽胣醼볯醼뷯膀볯钼볯銽胣醼볯鎼뷯膀볯钼볯膽뷯膀볯钼볯膽뷯膀볯钼볯膽뷯膀볯钼볯誽胣醼볯鎼뷯膀볯钼볯醽胣醼볯銼뷯膀볯閼볯鎽胣醼볯銼뷯膀볯閼볯閽胣醼볯銼뷯芽胣醼볯銼뷯螽胣醼볯銼뷯袽胣醼볯銼뷯覽胣銼볯馼뷯膀볯邼볯隽胣銼볯馼뷯膀볯邼볯颽胣銼볯馼뷯覽胣銼볯馼뷯躽胣銼볯馼뷯钽胣銼볯馼뷯閽胣銼볯馼뷯隽胣銼볯邼뷯膀볯醼볯隽胣銼볯邼뷯膀볯醼볯颽胣銼볯邼뷯芽胣銼볯邼뷯莽胣銼볯邼뷯蒽胣銼볯邼뷯蚽胣銼볯邼뷯趽胣銼볯鎼뷯膀볯醼볯邽胣銼볯鎼뷯膀볯醼볯鎽胣銼볯鎼뷯膀볯醼볯骽胣銼볯鎼뷯膽胣銼볯鎼뷯蚽胣銼볯颼뷯蒽胣銼볯颼뷯膀볯醼볯钽胣銼볯颼뷯膀볯醼볯隽胣銼볯颼뷯袽胣銼볯颼뷯躽胣銼볯颼뷯辽胣銼볯颼뷯邽胣銼볯邼뷯膀볯銼볯蒽胣銼볯銼뷯膀볯銼볯莽볯銼볯銼뷯膀볯銼볯莽胣銼볯鎼뷯膀볯銼볯覽胣銼볯钼뷯膀볯銼볯莽胣銼볯閼뷯膀볯銼볯薽胣銼볯鞼뷯膀볯銼볯芽胣銼볯馼뷯膀볯鎼볯蒽胣銼볯钼뷯膀볯鎼볯芽胣銼볯閼뷯膀볯鎼볯芽胣銼볯鞼뷯膀볯鎼볯覽胣銼볯鞼뷯膀볯鎼볯莽胣銼볯颼뷯膀볯鎼볯薽胣銼볯邼뷯膀볯钼볯芽胣銼볯銼뷯膀볯钼볯薽胣銼볯鞼뷯膀볯钼볯芽胣銼볯颼뷯膀볯钼볯螽胣銼볯馼뷯膀볯钼볯薽胣銼볯邼뷯膀볯閼볯螽胣銼볯醼뷯膀볯閼볯蚽胣銼볯銼뷯膀볯閼볯莽胣銼볯钼뷯膀볯閼볯膽胣銼볯馼뷯膀볯隼볯蒽胣銼볯醼뷯膀볯隼볯薽胣銼볯醼뷯膀볯隼볯蒽胣銼볯銼뷯膀볯隼볯芽胣銼볯鎼뷯膀볯隼볯覽胣銼볯鎼뷯膀볯隼볯薽胣銼볯钼뷯膀볯隼볯薽胣銼볯隼뷯膀볯隼볯芽胣銼볯颼뷯膀볯鞼볯薽胣銼볯鎼뷯膀볯鞼볯膽胣銼볯钼뷯膀볯鞼볯蚽胣銼볯閼뷯膀볯鞼볯覽胣銼볯隼뷯膀볯鞼볯莽胣銼볯隼뷯膀볯鞼볯讽胣銼볯鞼뷯膀볯鞼볯薽胣銼볯颼뷯膀볯鞼볯莽胣銼볯邼뷯膀볯颼볯膽胣銼볯閼뷯膀볯颼볯蒽胣銼볯鞼뷯膀볯颼볯薽胣銼볯鞼뷯膀볯颼볯薽胣銼볯颼뷯膀볯颼볯蒽胣銼볯馼뷯膀볯颼볯辽胣銼볯馼뷯膀볯㲒牢ਾ볯馼뷯膀볯馼볯莽胣銼볯邼뷯膀볯馼볯覽胣銼볯醼뷯膀볯馼볯莽胣銼볯鎼뷯膀臣袂臣銼볯钼뷯꺁苣뎃菣뮂菣릂裢ꪂ菣뒂菣꾂菣ꪂ菣覃臣鞾苣鎁臣貁臣趁苣芀觥낿臣ꊂ菣膃苣뎃苣銈苣ꪃ苣貃苣것苣膃菣꺁ꓥ辁臣膀볯薽뷯躼볯꒼†볯辽볯銼볯颼뷯誁苣뎁볯醼볯莽苣ꂲ臣馁臣ꢁ臣꾏菨ꞁ臣ꪁ臣ꂁ苣蚁臣膀뷥늩諦鎡裥躇臣ꊂ菣膃苣뎃苣銈苣ꪃ苣貃苣것苣膃菣꺁ꃥ袐苣誂臣ꂁ臣ꪁ苣袂苣覜裥ꞁ臣讂胣鞁臣貁臣ꚁ胣겜駧躘臣ꊂ菣膃苣뎃苣銈苣ꪃ苣貃苣것苣膃菣꾁胣貙臣袂臣ꮅ飧꺁苣蚁臣颫ꋥ隮胦뺖苦꺁닦芙臣麝룥ꮁ鳦ꢔ臣芁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣ꢡ볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〰㘰㌸㈲㔸琮晩㸢〰㘰㌸㈲㔸琮晩ꃂ〰㄰㘰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀ꇨ閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦〢〰㠶㈳㠲⸵楴≦〾〰㠶㈳㠲⸵楴쉦゠〰〱㰷愯㰾䐯噉ਾ㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣ꢡ볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〰㘰㌸㈲㔸琮晩㸢〰㘰㌸㈲㔸琮晩ꃂ〰㄰㠰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀ꇨ閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦〢〰㠶㈳㠲⸵楴≦〾〰㠶㈳㠲⸵楴쉦゠〰〱㰹愯㰾䐯噉ਾ㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣ꢡ볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〰㘰㌸㈲㔸琮晩㸢〰㘰㌸㈲㔸琮晩ꃂ〰㄰〱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀ꇨ隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦〢〰㠶㈳㠲⸵楴≦〾〰㠶㈳㠲⸵楴쉦゠〰ㄱ㰱愯㰾䐯噉ਾ㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢뗧隫⼼㹵戼㹲 ꢅ臣꺁裥邞臣貂臣股껧낖铧莿胩ꂛ귥袼볯ꖼ볯ꚼ胣芽볯Ꞽ볯膀볯ꦼ볯ꚼ胣ꚼ뷯钽裢醼胣誁苣뎁볯覽뷯銈볯覼臣膀藨趘胩財臣袂臣醐룤鞁臣股껧낖铧ꮁ뻤颭臣讂믤꺁韧蚐귥蒚菣ꮂ菣몂菣꺁諦뚈臣覜裥ꪁ뷥뾟苣覜臣讂雦閳臣誁臣ꚁ胣ꆼ볯꾼†볯薽뷯躼볯꒼†볯辽볯銼볯颼뷯ꮁ苣ꎁ臣뾪꿧閁苣讂迥붃胦貁臣讂胣閁苣ꮁ胣낼볯ꦼ裢醼뷯늼볯ꆼ臣膀볯뎼볯₯뎼뷯醽볯ꦼ볯㲤牢ਾ†볯辽볯銼볯颼뷯ꮁ苣ꎁ臣膀铧辇뻤颭髧ꮁ룦醰臣龁胣鎁臣ꂛ귥膀볯Ꞽ볯銈닎꣦蒚臩鶼귥膀臣袂臣设臣낁매貙臣誁臣讂触趪臣貂臣袺뻥麃菣ꮂ菣ꪁ臣꾁胣ꢔ蟩鶾귥蒚臣许雦뾪꿧节臣貂臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖 뺁臣膂苣ꢁ胣ꢅ臣꺁ꧨ鎨臣貂臣겜駧躘臣ꆼ볯꾼臣膀藨趘臣늀ꇨ膀믨뮧胣躂韧膀ꇨ鎠韧ꮁ鳦ꦈ臣ꪁ苣股껧낖铧鞃菣뮂苣銂룦覂臣鎁臣ꮁ諥螎髧ꞁ臣ꎁ臣芀臣龁臣ꎁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯㲲畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯ꦼ⼼畳㹢臣뺯臣ꚁ郥醁苣貂苣겜駧躘臣ꆼ볯꾼臣膀駧誁苣뎁ꇨ鎠韧ꊖ胩뺖苦꺁臣뺁臣뺁臣꺨ꇩꮁ臣醁苣랼諥ꪁ닦芙胥鲣觧ꞁ臣讂胣㲂牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰龮雦设볯邼볯㲚甯骷뛧螗臣뺯臣讂鳦몙飦꺁볯뎼볯꺁諥鲞臣蚈黦芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯隼볯醀⼼䥄㹖 뒼볯ꚼ裢캒꾁胣내菨鞢껦膀믨뮧胣떉若뮲駧膀ꇨꆮ雦龔臣袂臣내菨鎖鯧銺뷤ꢔ臣ꦁ臣袂臣ꪁꓥ辁臣鞃菣뮂苣ꮁ雩躸臣ꚁ臣讂胣蒁臣ꒁ臣꺁ꃧ뚩臣覂胣鎁臣ꂛ귥꾁胣龎駧讖铦薚꟨醷蛥螗胣ꊂ菣蒃菣ꒂ菣벃韧膀苨骷뛧螗臣袂臣隳냥薗胦躅韧銂郥肂臣辁臣讁臣뺖苦꺁駧薗臣鎖臣뮠맧ꮁ룤螘臣讂臣ꢁ臣ꖟ苣貂臣蒁苣芀臣貂苣꺁雧ꎂ臣膀듧麃ꓥ麃菣ꪃ菣꾂苣袼볯ꎼ볯覼臣袂臣ꊂ苣膃菣銈듧麃ꫩ베臣誁臣讂韧蚐귥蒚ꫨ肯臣ꊖ胩鞁臣蒁苣芀ꓥ辁臣뒠郥膀臣貂苣꺁ꛨ龯臣貂臣뾪꿧꾁胣趇ꓥ뺖苦늀ꇨ誁苣뎁닦芙臣꺁諦鞊胦袼藨趘臣誸髧鎖釨ꊻ迦銈볯궼볯銈볯ꢁ뫤蒁臣ꊖ뿤貁臣讂胣邵郥蒵맧邈闩ꂛ귥袼볯뒼볯ꚼ볯꾁胣뒼볯ꚼ裢캒꺁룤膵菣螃苣ꢂ菣뾂菣ꞁ臣誂胣뒼볯ꚼ裢캒ꮁ臣醁苣骷뛧隌諥鲞苣銪믤馁苣芀臣龁臣ꎁ臣膀볯뒼볯ꚼ臣膀볯ꎼ볯꺁ꃥ趩苣銪믤鞁胣ꊂ苣膃菣銈듧麃ꫩ베臣趆럧銂ꫨ肯臣讂臣ꢁ臣몤臣貂苣芀鳦몙飦꺁볯뎼볯貁볯Ꞽ볯銈닎苣낂菣ꪃ菣낂苣뮘껥馁苣鎁臣ꮁ苣讂럧궶賥ꖷ꣧꺁꟨몱臣ꊲ賧馁苣讁臣蚁臣銂ꫨ뮟臣讂臣膂臣膀볯뒼볯ꚼ菣馃菣銂胣閩뻤鞁胣閁苣ꮁ胣蒁臣ꒁ臣꺁闧ꪁ苣貙듧麃臣誁臣讂戼㹲ꖼ볯궼臣銼臣꺁룤ꪁꛨꂴ臣芁苣閃苣隃菣趃苣膃菣袼볯꺼볯膀臣袂臣뎂菣벃苣뎃볯뚼볯ꎼ뷯貽볯뚼볯銂ꧨꆾ臣龁胣閁苣ꮁ胣ꎼ볯Ꞽ볯膀볯꺼胣誁苣뎁苣꾂菣뎃裢내菨ꢪꃦꮁ臣醁苣ꆼ볯꾼臣릊黦銂胣麥뗧趉꟩鎽듧麃볯늼뷯꺼뷯薽뷯貽†볯뢼볯誁苣뎁菣袃苨貙듧麃볯ꆼ볯钼볯覼臣誁臣ꚁꧨ鎨臣龁胣㲂牢ਾ볯邼볯醼†ꗧ貵ꓥꞀ臣誁臣讂럧궶韧㲇牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰릖돦꺁ꫨ躘⼼㹵戼㹲 내菨銂꣦隺髧ꪁ菣궃菣뎂菣ꮁ臣蒁臣誸뿨閁苣讂苣蚁臣릟ꓩ鞁臣芀蟥蚐臣讂臣膂臣膀듧麃苣膀볯钼裢Ꚃ苣ꮃ鿥誤菣ꎂ菣랂菣袼苣ꮃ苣뾂菣袃볯뎼뷯銽뷯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