(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナマコ抽出物または分画物を有効成分として含むブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物であって前記ブルッフ膜機能の低下関連疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ソーズビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ＭＬ（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｉｎｔａｎｅｓｅ）、スターガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベスト卵黄状黄斑ジストロフィー（Ｂｅｓｔ’ｓ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）およびＤＨＲＤ（Ｄｏｙｎｅ’ｓ  ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれるものである、ブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項２】
前記有効成分は、ブルッフ膜の輸送機能を改善させることを特徴とする請求項１に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項３】
前記ブルッフ膜の水理伝導率（ｈｙｄｒａｕｌｉｃ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）を改善させることによって、輸送機能を改善させることを特徴とする請求項２に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項４】
前記ブルッフ膜の物質拡散（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）機能を改善させることによって、輸送機能を改善させることを特徴とする請求項２に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項５】
前記ブルッフ膜に結合されているか閉じ込められていたタンパク質または脂質を除去することによって、輸送機能を改善させることを特徴とする請求項２に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項６】
前記有効成分は、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項１に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項７】
前記有効成分は、ブルッフ膜に結合されるか沈着されたＨＭＷ１（ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  １）、ＨＭＷ２（ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ２）または脂質成分を除去することによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項６に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項８】
前記有効成分は、ブルッフ膜のマトリックスからｐｒｏ−ＭＭＰ２（ｐｒｏ−ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ２）、ｐｒｏ−ＭＭＰ９（ｐｒｏ−ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ９）、活性型ＭＭＰ２（ａｃｔｉｖｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ２）および活性型ＭＭＰ９（ａｃｔｉｖｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ９）を分泌させることによってブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項６に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項９】
前記有効成分は、網膜上皮細胞（ＲＰＥ，ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）から活性型ＭＭＰ分泌を活性化させることによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項６に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項１０】
前記有効成分は、フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）を含むことを特徴とする請求項１に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、フロンドシドＡをさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、アミノ酸、抗酸化物質、ミネラル、金属物質、ルテイン、アスタキサンチンおよびゼアキサンチンよりなる群から選ばれる一つ以上の組成物をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項１３】
ナマコ抽出物または分画物を有効成分として含むブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物であって前記ブルッフ膜機能の低下関連疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ソーズビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ＭＬ（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｉｎｔａｎｅｓｅ）、スターガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベスト卵黄状黄斑ジストロフィー（Ｂｅｓｔ’ｓ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）およびＤＨＲＤ（Ｄｏｙｎｅ’ｓ  ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれるものである、ブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項１４】
前記有効成分は、ブルッフ膜の輸送機能を改善させることを特徴とする請求項１３に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項１５】
前記ブルッフ膜の水理伝導率（ｈｙｄｒａｕｌｉｃ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）を改善させることによって、輸送機能を改善させることを特徴とする請求項１４に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項１６】
前記ブルッフ膜の物質拡散（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）機能を改善させることによって、輸送機能を改善させることを特徴とする請求項１４に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項１７】
前記ブルッフ膜に結合されているか閉じ込められていたタンパク質または脂質を除去することによって、輸送機能を改善させることを特徴とする請求項１４に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項１８】
前記有効成分は、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項１３に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項１９】
前記有効成分は、ブルッフ膜に結合されるか沈着されたＨＭＷ１、ＨＭＷ２または脂質成分を除去することによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項１８に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２０】
前記有効成分は、ブルッフ膜のマトリックスからｐｒｏ−ＭＭＰ２、ｐｒｏ−ＭＭＰ９、活性型ＭＭＰ２および活性型ＭＭＰ９を分泌させることによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項１８に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２１】
前記有効成分は、ＲＰＥから活性型ＭＭＰ分泌を活性化させることによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることを特徴とする請求項１８に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２２】
前記有効成分は、フロンドシドＡを含むことを特徴とする請求項１３に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２３】
前記組成物は、フロンドシドＡをさらに含むことを特徴とする請求項１３に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２４】
前記組成物は、アミノ酸、抗酸化物質、ミネラル、金属物質、ルテイン、アスタキサンチンおよびゼアキサンチンよりなる群から選ばれる一つ以上の組成物をさらに含むことを特徴とする請求項１３に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２５】
フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）、その異性体、その水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、またはその塩を有効成分として含むブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物であって前記ブルッフ膜機能の低下関連疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ソーズビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ＭＬ（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｉｎｔａｎｅｓｅ）、スターガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベスト卵黄状黄斑ジストロフィー（Ｂｅｓｔ’ｓ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）およびＤＨＲＤ（Ｄｏｙｎｅ’ｓ  ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれるものである、予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項２６】
前記有効成分は、ナマコに由来することを特徴とする請求項２５に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項２７】
前記有効成分は、ブルッフ膜に結合されているか閉じ込められていたＰｒｏ−ＭＭＰ９またはホスファチジルコリンを除去することによって、ブルッフ膜の輸送機能を改善させることを特徴とする請求項２５に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物。
【請求項２８】
フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）、その異性体、その水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、またはその塩を有効成分として含むブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物であって前記ブルッフ膜機能の低下関連疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ソーズビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ＭＬ（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｉｎｔａｎｅｓｅ）、スターガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベスト卵黄状黄斑ジストロフィー（Ｂｅｓｔ’ｓ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）およびＤＨＲＤ（Ｄｏｙｎｅ’ｓ  ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれるものである、ブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項２９】
前記フロンドシドＡは、ナマコに由来することを特徴とする請求項２８に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【請求項３０】
前記有効成分は、ブルッフ膜に結合されているか閉じ込められていたＰｒｏ−ＭＭＰ９またはホスファチジルコリンを除去することによって、ブルッフ膜の輸送機能を改善させることを特徴とする請求項２８に記載のブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナマコ抽出物を有効成分とするブルッフ膜機能の低下関連病気の予防および治療用組成物に関し、より具体的には、目のブルッフ膜を再生させ、輸送機能を改善させる効果を有するナマコ抽出物を含むブルッフ膜機能の低下と関連した病気の予防および治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ナマコは、棘皮動物ナマコ綱に属するナマコ類の総称であって、人参のようにサポニンなどの薬効成分が多量含有されているので、海の人参と呼ばれる最高の補陽食品である。ナマコは、中国をはじめとする東洋で古くから津液を補う薬であって、糖尿病、喘息などに卓越した効果を示し、夏に温度の上昇によって汗を多く流して気力喪失と虚脱状態に陥ったとき、気力を取り戻すことができる薬として知られている。また、ナマコは、身体の一部が切断されたとき、３ヶ月ぶりに切断部位が原状復帰され、内臓が除去されても、１ヶ月ぶりに新しい内臓が生じる驚くべき復元力があるので、漢方と民間療法では、ナマコが人体の単核細胞とマクロファージの貪食能力を高めて、免疫機能を旺盛にし、傷の治療に効果があるものと知られている。
【０００３】
ナマコは、子供の発育食品、老人の強壮食品、病後の回復食品、妊婦の貧血予防食品、排便促進食品などに活用されており、また、脂肪と糖分が少量含有されているので、ダイエット食品としても関心を集めているが、ナマコ抽出物の目機能改善に関する研究は、皆無であるのが現状である。
【０００４】
視細胞は、網膜に存在する光を感知する細胞であって、視角過程で情報を脳に伝送して物体を認識できるようにする。視細胞は、身体で最も新陳代謝が活発な部分であって、効果的な栄養素の伝達と老廃物の除去が必須である。必須脂肪酸と光、高濃度の酸素が豊富に存在する環境の特性上、相当部分遊離基（ｆｒｅｅ  ｒａｄｉｃａｌ）による損傷を受ける。このような場合、網膜上皮細胞（ＲＰＥ，ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）を利用して損傷した視細胞の外節（ｏｕｔｅｒ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ）を持続的に再生することができるようにする。
【０００５】
視細胞とＲＰＥは、脈絡膜（ｃｈｏｒｏｉｄ）の血液循環を通じて栄養素を供給される。血液から供給された栄養素が脈絡膜の毛細血管から分泌されると、ＲＰＥと視細胞に到達する前に、先に細胞外基質であるブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）を必ず通過しなければならない。サイズが小さいブドウ糖、酸素、アミノ酸などのような栄養素は、単純受動拡散によりブルッフ膜を通過し、ビタミン、微量金属（ｔｒａｃｅ  ｍｅｔａｌ）、脂質は、運搬タンパク質（ｃａｒｒｉｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）に結合した後、ブルッフ膜を通過してＲＰＥで分離される。反対に、視細胞とＲＰＥで生成された老廃物は、ブルッフ膜を通過して脈絡膜で除去される。老廃物は、大概毒性があるので、ブルッフ膜を損傷させる可能性があり、また、炎症反応を開始させることがある。したがって、ブルッフ膜の効率的な物質輸送能力は、正常な視力維持と視細胞の生存に必須条件であると見ることができる（図１）。
【０００６】
老化によってブルッフ膜の厚さが２〜３倍増加し、これによって、栄養素と老廃物が交換される拡散傾き（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｇｒａｄｉｅｎｔｓ）を減少させて、ブルッフ膜で物質の拡散が難しくなる。これに伴い、脂質と蛋白脂質複合体（ｐｒｏｔｅｏ−ｌｉｐｉｄ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）とＲＰＥで捨てられた老廃物が膜に沈着され、コラーゲンの交差結合（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ）が増加し、変性コラーゲンの量が増加する。それだけでなく、ブドウ糖化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）により生じるタンパク質と脂質の糖化物質（ＡＧＥ；ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＡＬＥ；ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ）が多くなり（Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）、損傷したり重合された蛋白複合物の沈着も増加して、結局のところ、膜の輸送能力に妨害を与えるようになり（Ｈｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９４）、栄養素の伝達と老廃物の除去機能に悪影響を起こす（図２）。
【０００７】
上記のような老化による変化は、老化が主な発病原因である加齢黄斑変性（ＡＭＤ，ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）の場合には、その程度が格別に深刻な状態で現れるようになり、ブルッフ膜の輸送能力の低下は、結果的にＲＰＥと視細胞を死に追い込むようにして失明するようになる（図３）。
【０００８】
臨床的に老人人口のブルッフ膜の老化は、ビタミンＡの再生が十分に行われないので、暗所閾値（ｓｃｏｔｏｐｉｃ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ）が低下すると報告されたことがあり（Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９３；Ｏｗｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２００１）、現在、一部の国家では、ビタミンＡに金属（ｍｅｔａｌ）と抗酸化物質を添加して処方されているが、この方法には、二つの問題点がある。第一に、特定の栄養素だけが添加されるので、その他の必須栄養素は、依然として不足した状態で存在するという問題であり、第二に、輸送機能が低下したブルッフ膜内に金属を添加するようになると、ブルッフ膜内に金属の濃度が高くなり、継続して膜に沈着され、これによる損傷は、さらに大きくなるしかないということである。また、１０年以上進行されている米国の黄斑変性臨床試験であるＡＲＥＤＳ（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｅｙｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｔｕｄｙ）によれば、まだビタミンとミネラル添加物から構成された組成物の効果が立証されていない（Ｋａｓｓｏｆ  ｅｔ  ａｌ．２００１）。
【０００９】
理想的な解決策は、ブルッフ膜の輸送能力を円滑にして、血しょうに存在するすべての必要な栄養分を供給され得るようにすることである。
【００１０】
本出願の発明者らは、加齢黄斑変性を含んで老化による目機能低下の根本原因を解決できる治療方法を開発するために鋭意努力した結果、ナマコ抽出物のブルッフ膜輸送能力の改善およびブルッフ膜の再生効果を発掘し、これを利用してブルッフ膜機能の低下による病気の予防および治療用組成物として使用することができることを確認することによって、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
参考先行文献
【非特許文献１】［１］Ｂｉｒｋｅｄａｌ−Ｈａｎｓｅｎ  Ｈ，Ｍｏｏｒｅ  ＷＧ，Ｂｏｄｄｅｎ  ＭＫ，Ｗｉｎｄｓｏｒ  ＬＪ，Ｂｉｒｋｅｎｄａｌ−Ｈａｎｓｅｎ  Ｂ，ＤｅＣａｒｌｏ  Ａ，Ｅｎｇｌｅｒ  ＪＡ．（１９９３）Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｒａｌ  Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．４：１９７−２５０．
【非特許文献２】［２］Ｈａｎｄａ  ＪＴ，Ｖｅｒｚｉｊｌ  Ｎ，Ｍａｔｓｕｎａｇａ  Ｈ，Ａｏｔａｋｉ−Ｋｅｅｎ  Ａ，Ｌｕｔｔｙ  ＧＡ，ｔｅ  Ｋｏｐｐｅｌｅ  ＪＭ，Ｍｉｙａｔａ  Ｔ  ａｎｄ  Ｈｊｅｌｍｅｌａｎｄ  ＬＭ．Ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｐｅｎｔｏｓｉｄｉｎｅ  ｉｎ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｗｉｔｈ  ａｇｅ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９９９；４０：７７５−７７９．
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【非特許文献５】［５］Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｓｔａｒｉｔａ  Ｃ，Ｈｏｄｇｅｔｔｓ  Ａ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（２０１０）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ａｇｅｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（ＡＭＤ）．Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．９０：７０３−７１０．
【非特許文献６】［６］Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｌｅｅ  Ｙ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（２０１０）Ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ：ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｈａｎｇｅｓ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５１：２３６３−７１．
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【非特許文献８】［８］Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｒｏｗｅ  Ｌ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（２００２）Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎａｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ−ｃｈｏｒｏｉｄ  ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ａ，Ｏｐｔｉｃｓ，Ｉｍａｇｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，＆  Ｖｉｓｉｏｎ．１９（１）：１６６−７２．
【非特許文献９】［９］Ｋａｒｗａｔｏｗｓｋｉ  ＷＳＳ，Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ  ＴＥ，Ｄｕａｎｃｅ  ＶＣ，Ａｌｂｏｎ  Ｊ，Ｂａｉｌｅｙ  ＡＪ  ＆  Ｅａｓｔｙ  ＤＬ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｇｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｃｏｌｌａｇｅｎｓ．（１９９５）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．７９：９４４−９５２．
【非特許文献１０】［１０］Ｋａｓｓｏｆ  Ａ，Ｋａｓｓｏｆｆ  Ｊ，Ｂｕｅｈｌｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｄｏｓｅ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｖｉｔａｍｉｎｓ  Ｃ  ａｎｄ  Ｅ，ｂｅｔａ  ｃａｒｏｔｅｎｅ，ａｎｄ  ｚｉｎｃ  ｆｏｒ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｖｉｓｉｏｎ  ｌｏｓｓ：ＡＲＥＤＳ  ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．８．Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００１；１１９：１４１７−３６．
【非特許文献１１】［１１］Ｋｕｍａｒ  Ａ，Ｅｌ−Ｏｓｔａ  Ａ，Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（２０１０）Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ｉｎ  ａｇｅｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＥＣＭ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５１：２６６４−７０．
【非特許文献１２】［１２］Ｍｏｏｒｅ  ＤＪ  ａｎｄ  Ｃｌｏｖｅｒ  ＧＭ．Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｇｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００１；４２：２９７０−２９７５．
【非特許文献１３】［１３］Ｍｏｏｒｅ  ＤＪ，Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（１９９５）．Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｙｄｒａｕｌｉｃ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６（７）：１２９０−７．
【非特許文献１４】［１４］Ｏｗｓｌｅｙ  Ｃ，Ｊａｃｋｓｏｎ  ＧＲ，Ｗｈｉｔｅ  Ｍ，Ｆｅｉｓｔ  Ｒ  ａｎｄ  Ｅｄｗａｒｄｓ  Ｄ．Ｄｅｌａｙｓ  ｉｎ  ｒｏｄ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄａｒｋ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００１；１０８：１１９６−１２０２．
【非特許文献１５】［１５］Ｏｗｓｌｅｙ  Ｃ，ＭｃＧｗｉｎ  Ｇ，Ｊａｃｋｓｏｎ  ＧＲ，Ｈｅｉｎｂｕｒｇｅｒ  ＤＣ，Ｐｉｙａｔｈｉｌａｋｅ  ＣＪ，Ｋｌｅｉｎ  Ｒ，Ｗｈｉｔｅ  ＭＦ，Ｋａｌｌｉｅｓ  Ｋ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｔｅｒｍ，ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｒｅｔｉｎｏｌ  ｏｎ  ｄａｒｋ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｇｅ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００６．４７（４）：１３１０−８．
【非特許文献１６】［１６］Ｒａｍｒａｔｔｅｎ  ＲＳ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｓｃｈａｆｔ  ＴＬ，Ｍｏｏｙ  ＣＭ，ｄｅ  Ｂｒｕｉｊｎ  ＷＣ，Ｍｕｌｄｅｒ  ＰＧＨ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｊｏｎｇ  ＰＴＶＭ．Ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ，ｔｈｅ  ｃｈｏｒｉｏｃａｐｉｌｌａｒｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｈｏｒｏｉｄ  ｉｎ  ａｇｅｉｎｇ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９９４；３５：２８５７−２８６４．
【非特許文献１７】［１７］Ｓｔａｒｉｔａ  Ｃ，Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｐａｇｌｉａｒｉｎｉ  Ｓ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（１９９６）Ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ａｇｅｉｎｇ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．６２（５）：５６５−７２．
【非特許文献１８】［１８］Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ  ＲＬ，Ｈａｉｍｏｖｉｃｉ  Ｒ，Ｊｕｂｂ  Ｃ，Ｆｉｔｚｋｅ  ＦＷ，Ｂｉｒｄ  Ａ．Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｄａｒｋ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｈａｎｇｅ．Ｂｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９３；７７：５４９−５５４．
【非特許文献１９】［１９］Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｌｅｅ  Ｙ（２０１６）ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｄａｔａ
【非特許文献２０】［２０］Ｌｅｅ  Ｙ，Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｓｅｏｋ  Ｊ，Ｋｉｍ  Ｓ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（２０１５）．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｗｉｔｈ  Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｔｏ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（ＡＭＤ）．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５６（１３）：８４０３−１８．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、ナマコ抽出物または分画物を有効成分として含むブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学組成物を提供することにある。
【００１３】
本発明の他の目的は、ナマコ抽出物または分画物を有効成分として含むブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用健康機能食品組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明のさらに他の目的は、フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）、その異性体、その水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、またはその塩を有効成分として含むブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学的組成物を提供することにある。
【００１５】
本発明のさらに他の目的は、フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）、その異性体、その水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、またはその塩を有効成分として含むブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、上述した問題点を解決するためのものであって、ナマコ抽出物または分画物を有効成分として含むブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用薬学組成物を提供する。
【００１７】
本発明で使用される用語「ナマコ」は、棘皮動物門（Ｐｈｙｌｕｍ  Ｅｃｈｉｎｏｄｅｒｍａｔａ）ナマコ綱（Ｃｌａｓｓ  Ｈｏｌｏｔｈｕｒｏｉｄｅａ）に属する海洋無脊椎動物を意味し、樹手目（Ｏｒｄｅｒ  Ｄｅｎｄｒｏｃｈｉｒｏｔａｃｅａ）に属するジイガセキンコ、リポトラペザ、Ｓｃｌｅｒｏｄａｃｔｙｌａ  ｍｕｌｔｉｐｅｓ、キンコ、イシワタナマコなど、楯手目（Ｏｒｄｅｒ  Ａｓｐｉｄｏｃｈｉｒｏｔｉｄａ）に属するアカナマコ、フジナマコ、ジャノメナマコ、リュウキュウフジナマコなど、無足目（Ｏｒｄｅｒ  Ａｐｏｄｉｄａ）に属するイカリナマコ、ムラサキクルマナマコなど、隠足目（Ｏｒｄｅｒ  Ｍｏｌｐａｄｉｄａ）に属するシロナマコ、イモナマコなどを含むことができるが、これらに限定されない。前記ナマコは、健康増進と強壮剤、妊娠中の女性と身体が虚弱な女性のための用途、高血圧、動脈硬化、糖尿患者と肥満患者の健康食品として推奨されているが、目の老化と関連した病気に対する効果は、知られていない。
【００１８】
本発明で使用される用語「抽出物」は、ナマコの抽出処理により得られる抽出液、ナマコを乾燥して得られる乾燥物、前記抽出液の希釈液や濃縮液、前記抽出液を乾燥して得られる乾燥物、前記抽出液の粗精製物や精製物、またはこれらの混合物など、抽出液自体および抽出液を利用して形成可能なすべての剤形の抽出物を含む。本発明の前記抽出物または分画物は、好ましくは、抽出後に液体形態で使用することができる。
【００１９】
本発明の前記ナマコ抽出物において、前記ナマコを抽出する方法は、特に制限されず、当該技術分野における通常的に使用する方法により抽出することができる。前記抽出方法の非制限的な例としては、熱水抽出法、超音波抽出法、濾過法、還流抽出法などが挙げられ、これらは、単独で行われたり、２種以上の方法を併用して行われ得る。
【００２０】
本発明で前記ナマコを抽出するのに使用される抽出溶媒の種類は、特に制限されず、当該技術分野において公知となった任意の溶媒を使用することができる。前記抽出溶媒の非制限的な例としては、水、アルコールまたはこれらの混合溶媒などが挙げられ、アルコールを溶媒として使用する場合には、好ましくはＣ１〜Ｃ４のアルコール、より好ましくはＣ１〜Ｃ２の低級アルコール、さらに好ましくは８０％エタノール水溶液を使用することができるが、これらに限定されない。本発明のナマコ抽出物は、好ましくは水またはエタノール抽出物であってもよい。
【００２１】
本発明で前記ナマコを熱水抽出方法で抽出する場合には、１回〜５回反復抽出することが好ましく、３回反復抽出することがより好ましいが、これに限定しない。前記抽出溶媒は、乾燥したナマコの重量対比０．１倍〜１００倍添加することができ、０．３倍〜５倍添加することが好ましい。抽出温度は、２０℃〜１３０℃であることが好ましいが、これに限定しない。また、抽出時間は、３０分〜４８時間であることが好ましいが、これに限定しない。
【００２２】
本発明の前記ナマコ抽出物を製造する方法において、前記減圧濃縮は、真空減圧濃縮機または真空回転蒸発機を利用することが好ましいが、これに限定しない。また、乾燥は、減圧乾燥、真空乾燥、沸騰乾燥、噴霧乾燥または凍結乾燥することが好ましいが、これらに限定しない。
【００２３】
本発明の前記ナマコ乾燥物を製造する方法は、自然乾燥、熱風乾燥、凍結乾燥方法などを使用することができるが、ナマコの水分を除去するために、当該技術分野において公知となった任意の方法であれば、これらに限定されない。
【００２４】
本発明の前記ナマコ抽出または乾燥方法において、ナマコの外皮と内臓をまるごと抽出または乾燥させることができ、ナマコの外皮と内臓を分離してそれぞれ抽出または乾燥させることができ、外皮と内臓抽出物または乾燥物をそれぞれ使用することもでき、混合して使用することもできる。
【００２５】
本発明の具体的な一実施例によれば、乾燥したナマコを粉砕してナマコ粉末を製造し、これに抽出溶媒として７０％エタノールを添加した後、約３〜６時間の間抽出し、真空状態でエタノールを除去して、抽出物を収得した。
【００２６】
本発明で使用される用語「分画物」とは、多様な構成成分を含む混合物から特定の成分または特定の成分グループを分離するために分画を行って得られた結果物を意味する。
【００２７】
本発明で前記分画物を得る分画方法は、特に限定されず、当該技術分野において通常的に使用する方法により行われ得る。前記分画方法の非限定的な例としては、ナマコを抽出して得られた抽出物に所定の溶媒を処理して前記抽出物から分画物を得る方法が挙げられる。
【００２８】
本発明で前記分画物を得るのに使用される分画溶媒の種類は、特に限定されず、当該技術分野において公知となった任意の溶媒を使用することができる。前記分画溶媒の非限定的な例としては、水、アルコールなどの極性溶媒；ヘキサン、エチルアセテート、クロロホルム、ジクロロメタンなどの非極性溶媒などが挙げられる。これらは、単独で使用されたり、２種以上混合して使用することができる。前記分画溶媒のうちアルコールを使用する場合には、好ましくはＣ１〜Ｃ４のアルコールを使用することができる。
【００２９】
本発明の有効成分は、ブルッフ膜の輸送機能を改善させることによって、ブルッフ膜機能の低下と関連した病気の発病を予防したり、病気の進行を遅延させたり、治療する効果がある。
【００３０】
本発明の有効成分は、ブルッフ膜の水理伝導率（ｈｙｄｒａｕｌｉｃ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）を改善させたり、ブルッフ膜の物質拡散（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）機能を改善させたり、前記ブルッフ膜に結合されているか閉じ込められていたタンパク質または脂質を除去することによって、輸送機能を改善させることができる。
【００３１】
本発明の有効成分は、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることによって、ブルッフ膜機能の低下と関連した病気の発病を予防したり、病気の進行を遅延させたり、治療することができる。
【００３２】
本発明の有効成分は、ブルッフ膜に結合されるか沈着されたＨＭＷ（ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ）または脂質成分を除去することによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることができる。
【００３３】
また、本発明の有効成分は、ブルッフ膜のマトリックスからｐｒｏ−ＭＭＰ２、ｐｒｏ−ＭＭＰ９、活性型ＭＭＰ２および活性型ＭＭＰ９を分泌させることによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることができる。
【００３４】
また、本発明の有効成分は、網膜上皮細胞（ＲＰＥ）から活性型ＭＭＰ分泌を活性化させることによって、ブルッフ膜を再生させ、ブルッフ膜の機能を向上させることができる。
【００３５】
このように本発明のナマコ抽出物組成物は、ブルッフ膜に重合されてブルッフ膜を老化させ、その機能を喪失させる物質を分解し、ブルッフ膜のマトリックスに閉じ込められているか結合されたタンパク質や脂質のような栄養物質と老廃物を分泌して、目に栄養を供給し、老廃物を排出するのに助けになる。また、ブルッフ膜のＭＭＰを分泌して酵素の機能を回復することができるようにすることによって、ブルッフ膜の機能を再生させるのに関与し、目の水理伝導率と物質の拡散度を増加させることによって、結局のところ、網膜の老化を予防すると共に、網膜の機能を再生させて、老化による網膜機能の喪失を予防、遅延および治療する効果があるものである。
【００３６】
本発明で使用される用語「予防」または「遅延」とは、本発明の前記組成物を個体に投与してブルッフ膜の機能低下によって発生する病気の発病を抑制させたり遅延させるすべての行為を意味する。
【００３７】
本発明で使用される用語「治療」とは、本発明の前記組成物を個体に投与してブルッフ膜の機能低下によって発生する病気の症状を好転させたり有利にするすべての行為を意味する。
【００３８】
本発明で使用される用語「改善」は、治療される状態と関連したパラメーター、例えば症状の程度を少なくとも減少させるすべての行為を意味する。
【００３９】
本発明の前記薬学的組成物において、前記ナマコ抽出物またはその分画物は、前記薬学的組成物の全体重量を基準として好ましくは０．１重量％〜９９．９９重量％で含有され得、より好ましくは１０重量％〜９９．９９重量％で含有され得、さらに好ましくは５０重量％〜９９．９９重量％で含有され得る。前記範囲内で、前記ナマコ抽出物またはその分画物によるブルッフ膜の輸送機能の改善、ブルッフ膜の再生およびブルッフ膜機能の改善効果が十分に発揮されて、本発明の目的を達成するのにさらに適合となる利点がある。
【００４０】
本発明の前記薬学的組成物は、前記ナマコ抽出物またはその分画物を有効成分として含有することに加えて、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。
【００４１】
本発明で、前記「薬学的に許容可能」であるというのは、これを投与時に生物体を刺激することなく、投与される化合物の生物学的活性および特性を阻害しない、薬学分野において通常的に使用されることを意味する。
【００４２】
本発明の前記薬学的組成物は、前記担体と共に製剤化されて、食品、医薬品、飼料添加剤、飲用水添加剤などに活用され得る。本発明で、前記担体の種類は、特に限定されず、当該技術分野において通常的に使用される担体であれば、いずれのものでも使用することができる。前記担体の非限定的な例としては、食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、マルトデキストリン、グリセロール、エタノールなどが挙げられる。これらは、単独で使用したり、２種以上を混合して使用することができる。
【００４３】
また、本発明の前記薬学的組成物は、必要な場合、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、緩衝液または静菌剤などその他薬学的に許容可能な添加剤を添加して使用することができ、充填剤、増量剤、湿潤剤、崩解剤、分散剤、界面活性剤、結合剤または潤滑剤などを付加的に添加して使用することができる。
【００４４】
本発明の前記薬学的組成物は、経口投与または非経口投与のための適合した多様な剤形で製剤化されて使用することができる。前記経口投与用製剤の非制限的な例としては、トローチ剤（ｔｒｏｃｈｅｓ）、ロジェンジ（ｌｏｚｅｎｇｅ）、錠剤、水溶性懸濁液、油性懸濁液、調製粉末、顆粒、エマルジョン、ハードカプセル、ソフトカプセル、シロップまたはエリキシル剤などが挙げられる。
【００４５】
本発明の前記薬学的組成物を経口投与用に製剤化するために、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン（Ａｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎ）、セルロース（Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）またはゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎ）等のような結合剤；リン酸二カルシウム（Ｄｉｃａｌｃｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）等のような賦形剤；とうもろこしデンプンまたはさつまいもデンプン等のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｔｅａｒａｔｅ）、スステアリン酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｔｅａｒａｔｅ）、ステアリルフマル酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  ｓｔｅａｒｙｌ  ｆｕｍａｒａｔｅ）またはポリエチレングリコールワックス（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｗａｘ）等のような潤滑油などを使用することができ、甘味剤、芳香剤、シロップ剤等も使用することができる。
【００４６】
ひいては、カプセル剤の場合には、前記言及した物質の他にも脂肪油のような液体担体などをさらに使用することができる。
【００４７】
前記非経口用製剤の非制限的な例としては、注射液、坐剤、呼吸器吸入用粉末、スプレー用エアロゾル剤、軟膏、塗布用パウダー、オイル、クリームなどが挙げられる。
【００４８】
本発明の前記薬学的組成物を非経口投与用に製剤化するために、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、外用剤などを使用することができ、前記非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどを使用することができる。
【００４９】
また、より具体的に本発明の前記薬学的組成物を注射液で製剤化する場合、本発明の前記組成物を安定剤または緩衝剤と共に水で混合して溶液または懸濁液で製造し、これをアンプル（ａｍｐｏｕｌｅ）またはバイアル（ｖｉａｌ）の単位投与用で製剤化することができる。また、本発明の前記薬学的組成物をエアロゾル剤で製剤化する場合、水分散された濃縮物または湿潤粉末が分散されるように推進剤などが添加剤と共に配合することができる。
【００５０】
また、本発明の前記薬学的組成物を軟膏、クリームなどで製剤化する場合には、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、酸化亜鉛などを担体として使用して製剤化することができる。
【００５１】
本発明の前記薬学的組成物の薬学的有効量、有効投与量は、前記薬学的組成物の製剤化方法、投与方式、投与時間および／または投与経路などによって多様になり得、前記薬学的組成物の投与により達成しようとする反応の種類と程度、投与対象となる個体の種類、年齢、体重、一般的な健康状態、病気の症状や程度、性別、食事、排泄、該当個体に同時または異時に共に使用される薬物やその他組成物の成分などを含む様々な因子および医薬分野においてよく知られた類似因子によって多様になり得、当該技術分野において通常の知識を有する者は、目的とする治療に効果的な投与量を容易に決定し、処方することができる。
【００５２】
本発明の前記薬学的組成物のより好ましい効果のための投与量は、好ましくは１日０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１，０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇであってもよい。本発明の前記薬学的組成物の投与は、１日に１回投与され得、数回に分けて投与され得る。したがって、前記投与量は、いかなる点においても本発明の範囲を限定するものではない。
【００５３】
本発明の前記薬学的組成物の投与経路および投与方式は、それぞれ独立的であってもよく、その方式において特に限定されず、目的とする該当部位に前記薬学的組成物が到達できる限り、任意の投与経路および投与方式に従うことができる。前記薬学的組成物は、経口投与または非経口投与方式で投与することができる。
【００５４】
前記非経口投与する方法としては、例えば静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、経皮投与または皮下投与などを利用することができ、前記組成物を疾患部位に塗布したり、噴霧、吸入する方法も利用することができるが、これらに限定されない。
【００５５】
本発明の前記薬学的組成物は、好ましくは経口投与または注射投与され得る。
【００５６】
本発明の組成物は、ブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療効果を高めるために、フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）をさらに含むことができる。
【００５７】
本発明で「フロンドシドＡ」または「Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ」は、下記［化学式］で表されるサポニン化合物であって、本発明のナマコに含まれたものと知られている。ＣＡＳ番号は、１２７３６７−７６−４（ａｎｈｙｄｒｏｕｓ）であり、化学式は、Ｃ６０Ｈ９６Ｏ２９ＳＮａである。本発明では、フロンドシドＡが、ブルッフ膜の水理伝導率の改善、ＭＭＰ分泌および脂質分泌を通じてブルッフ膜の輸送機能の改善、ブルッフ膜の再生および機能向上に関与することを確認し、これを通じて、フロンドシドＡがブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延、治療および改善の新規用途を確認した。
【００５８】
［化学式］
【化１】
0006869367.tif 000002
【００５９】
本発明の組成物は、ブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療効果を高めるために、アミノ酸、抗酸化物質、ミネラル、金属物質、ルテイン、アスタキサンチンおよびゼアキサンチンよりなる群から選ばれる一つ以上の組成物をさらに含むことができる。
【００６０】
本発明で前記ブルッフ膜機能の低下関連疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ソーズビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ＭＬ（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｉｎｔａｎｅｓｅ）、スターガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベスト卵黄状黄斑ジストロフィー（Ｂｅｓｔ’ｓ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）または、ＤＨＲＤ（Ｄｏｙｎｅ’ｓ  ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）であってもよいが、これらに限定されない。
【００６１】
また、本発明は、前記ナマコ抽出物を有効成分として含むブルッフ膜（Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療用健康機能食品組成物を提供する。
【００６２】
本発明の前記健康機能食品組成物において、前記ナマコ抽出物またはその分画物、およびその効能などは、本発明の前記薬学的組成物と関連して前記で説明したものと同一である。
【００６３】
本発明の前記健康機能食品組成物を食品添加物として使用する場合、前記組成物をそのまま添加したり、他の食品または食品成分と共に使用することができ、通常の方法によって適切に使用することができる。
【００６４】
前記食品の種類は、特に限定されず、通常の意味における食品を全て含む。前記物質を添加できる食品の非制限的な例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディ類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料およびビタミン複合剤などが挙げられる。
【００６５】
本発明の前記健康機能食品組成物が飲料組成物である場合、通常の飲料のように様々な香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。前記天然炭水化物の非制限的な例として、ブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド；マルトース、スクロースのようなジサッカライド；デキストリン、シクロデキストリンのような天然甘味剤；サッカリン、アスパルタムのような合成甘味剤などが挙げられる。前記添加される追加成分の比率は、当業者の選択によって適切に決定され得る。
【００６６】
前記の他に本発明の健康機能食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有することができる。その他に本発明の健康機能食品組成物は、天然果物ジュース、果物飲料または野菜飲料などの製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、独立して使用するか、２以上を組み合わせて使用することができる。このような添加物の比率も、当業者によって適切に選択され得る。
【００６７】
また、本発明は、フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）、その異性体、その水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、またはその塩を有効成分として含むブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および治療／改善用薬学的組成物を提供する。
【００６８】
また、本発明は、フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）、その異性体、その水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）、またはその塩を有効成分として含むブルッフ膜機能の低下関連疾患の予防、遅延および改善用健康機能食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【００６９】
本発明による組成物は、ブルッフ膜の輸送機能を改善させ、ブルッフ膜の再生を促進させることによって、目の老化過程を遅らせたり取り戻す効果があるので、老化によるブルッフ膜の機能低下によって発生する加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ソーズビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ＭＬ（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｉｎｔａｎｅｓｅ）、スターガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ベスト卵黄状黄斑ジストロフィー（Ｂｅｓｔ’ｓ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）またはＤＨＲＤ（Ｄｏｙｎｅ’ｓ  ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）のような病気の予防および治療に優れている。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、ヒトの網膜の断面イメージと可視光変調（ｐｈｏｔｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）の構成要素を図式化した図である。
【図２】図２は、老化によるブルッフ膜の構造的変化を示すグラフであって、老化によって（Ａ）ブルッフ膜の厚さが２〜３倍増加し、（Ｂ）損傷したり変性したコラーゲンの蓄積量が増加し、（Ｃ）コレステロールエステルのような主な脂質物質が幾何級数的に増加し、（Ｄ）遊離状態のチオール（ｔｈｉｏｌ）基が減少して、タンパク質の凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）を起こす。
【図３】図３は、老化によるブルッフ膜の変化と黄斑変性患者での急激な変化を示す図である。
【図４】図４は、ブルッフ膜の老化と再生役割をするＭＭＰ作用機序および黄斑変性患者での異常なＭＭＰ作用機序を示すものである。
【図５】図５は、一般人と黄斑変性患者の老化によるヒトのブルッフ膜の水理伝導率変化を示す結果である。
【図６】図６は、一般人と黄斑変性患者の老化によるヒトのブルッフ膜の拡散度の変化を示す結果である。
【図７】図７は、本願発明のナマコ抽出物のブルッフ膜の輸送機能の改善効果を示す結果である。
【図８】図８は、本願発明のナマコ抽出物のブルッフ膜から脂質分泌効果を示す用量反応曲線である。
【図９】図９は、ヒトのブルッフ膜から自由なＭＭＰ酵素を除去した結果である。
【図１０】図１０は、本願発明のナマコ抽出物を利用してヒトのブルッフ膜に結合されたＭＭＰ酵素の除去効果を示す結果である。
【図１１】図１１は、本願発明のナマコ抽出物を利用してヒトのブルッフ膜に結合されたＨＭＷ２の除去効果を示す結果である。
【図１２】図１２は、ナマコ濃縮液をシリカゲルカラムを用いて分離して採取した分画物のサポニンをＴＬＣで確認した結果である。
【図１３】図１３は、前記図１２の分画物のうち類似した構成成分からなる分画物どうしを５個のグループに分類してＴＬＣで示す結果である（Ｓｔｄ、ナマコ粉末全体；Ｆ１〜Ｆ５、ナマコ粉末の分画物）。
【図１４】図１４は、前記図１３の５個の分画物の水理伝導率の改善効果を示す結果である。
【図１５】図１５は、各分画物に含まれたサポニンの種類を比較した結果である。（Ａ）は、ナマコ分画物それぞれに存在するサポニンの種類を確認した結果であり、（Ｂ）は、Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａと全体ナマコ抽出物に存在するサポニンを比較した結果である（ＳＣ、ナマコ全体；ＦＡ、Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ；Ｆ１〜Ｆ５、ナマコ分画物）。
【図１６】図１６は、ヒトのブルッフ膜をナマコ分画物（Ｆ１〜Ｆ５）と培養させた後、ブルッフ膜からＭＭＰ酵素分泌を確認した結果である（ＦＣＳ、ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ；Ｃ、対照群；Ｆ１〜Ｆ５、それぞれの分画物と共に培養したブルッフ膜；それぞれｎ＝３）
【図１７】図１７は、ナマコ分画物の培養後に分泌される脂質の変化を分析した結果である（ＣｈＥ、コレステロールエステル；ＴＧ、トリグリセリド；Ｃｈ、コレステロール；ＰＣ、ホスファチジルコリン）。
【図１８】図１８は、フロンドシドＡの水理伝導率の改善効果を確認した結果である。
【図１９】図１９は、フロンドシドＡのブルッフ膜内ＭＭＰ除去効果を確認した結果である。
【図２０】図２０は、フロンドシドＡのブルッフ膜内脂質除去効果を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
以下では、本発明をより詳細に説明する。
【００７２】
老化によって現れるブルッフ膜輸送機能の退行性変化は、老人に視力障害を起こし、ひどい場合、失明につながる加齢黄斑変性（ＡＭＤ；Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）の原因となる。
【００７３】
多数の研究結果を通じて、老化は、ブルッフ膜の物質輸送能力と老廃物除去過程に深刻な悪影響を与えると明らかにされ（Ｈｕｓｓａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；２００４；２０１０；Ｓｔａｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６；Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９５；Ｍｏｏｒｅ  ａｎｄ  Ｃｌｏｖｅｒ，２００１）、老化によって厚さが増加するブルッフ膜に蓄積された老廃物は、脂質および変性したタンパク質からなると知られている。また、ブルッフ膜に存在する老廃物蓄積の根本原因は、ＭＭＰ（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ、基質金属タンパク質分解酵素、以下、ＭＭＰという）と呼ばれるタンパク質分解酵素が、ブルッフ膜の再生に関する役割を十分に行わないためであることが明らかにされた。
【００７４】
ＭＭＰ（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）は、タンパク質分解酵素であって、ＲＰＥからブルッフ膜に不活性化状態である前駆体（ｐｒｏ−ｆｏｒｍ）の形態で分泌される。この前駆体で小さいペプチドが除去されることによって、活性化した形態である活性ＭＭＰ２と活性ＭＭＰ９となる。活性化したＭＭＰ２およびＭＭＰ９酵素は、活性化過程を通じて細胞外基質を構成する大概の物質を分解することができ、損傷した構成物質を除去し、新しい物質に交替する。このような膜の再生作用機序を通じてブルッフ膜の構造と機能が健康な状態に維持され得るように役割をする。しかしながら、ブルッフ膜の老化によって活性化した形態のＭＭＰ２およびＭＭＰ９の量が減少することが明らかにされ、黄斑変性患者のブルッフ膜では、活性化したＭＭＰ２およびＭＭＰ９の量が、類似した年齢帯の平均に比べて約６０％減少した（Ｈｕｓｓａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【００７５】
具体的に、老化によるＭＭＰの作用機序は、図４に示した。前駆体形態であるｐｒｏ−ＭＭＰ２およびｐｒｏ−ＭＭＰ９は、ブルッフ膜でＨＭＷ１、ＨＭＷ２と呼ばれる高分子化合物（ＨＭＷ；ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）を形成する。また、この物質は、他のｐｒｏ−ＭＭＰ２およびｐｒｏ−ＭＭＰ９分子と結合されて、さらに大きい形態の高分子物質になるが、これを大型高分子基質金属タンパク質分解酵素化合物（ＬＭＭＣ，ｌａｒｇｅ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）という（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｓｓａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１０）。老化によって前記のような高分子物質の合成が増加すると、高分子化合物がマトリックス内に閉じ込められているか結合された状態で存在するようになり、ｐｒｏ−ＭＭＰと活性型ＭＭＰも、膜に閉じ込められて使用できなくなる。したがって、ブルッフ膜の再生に必要な自由な状態のＭＭＰ量が減少するので、膜の分解および再生が正常に行われず、結果的に、相当量の老廃物が積もって、膜の輸送能力の低下につながる。
【００７６】
老化によるブルッフ膜の輸送機能の変化を確認するために、１歳から９６歳の範囲の５６名の正常なヒトの目と１１名の黄斑変性患者の目を対象として中心視力を担当する黄斑（ｍａｃｕｌａｒ）部位と周辺（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ）部位を区分してその影響を評価した。
【００７７】
まず、老廃物の輸送能力を確認するために、寄贈を受けた目から分離したブルッフ膜の水理伝導率（ｈｙｄｒａｕｌｉｃ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）を測定した。分離したブルッフ膜は、開放型ウッシングチャンバー（Ｕｓｓｉｎｇ  ｃｈａｍｂｅｒ）に載置して、静水圧（ｈｙｄｒｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）下の流体の定量変化を測定して、水理伝導率の変化を計算した（図５Ｂ、Ｃ）。その結果、黄斑部位の流体輸送能力は、老化が進行されるに伴い、幾何級数的に減少し、毎１６年ごとに輸送能力が半分に減少したことが分かった（図５Ｄ）。図５Ｄのデータは、Ｙ軸をセミログプロット（ｓｅｍｉ−ｌｏｇ  ｐｌｏｔ）を使用して指数関数型崩壊（ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｄｅｃａｙ）を線形に転換して示した。視細胞の機能を維持するために、ブルッフ膜は、最小限の水理伝導率の機能が要求されるが、これを機能停止（Ｆａｉｌｕｒｅ）線で表示した。輸送機能がこの以下に低下する場合には、ＲＰＥの下部に流体（ｆｌｕｉｄ）が蓄積されて、ＲＰＥ剥離現象が起こるようになり、上部にある視細胞の死につながる。黄斑変性患者の約１２〜２０％にこのような症状が現れる。普通、正常なヒトの場合には、一生の間この線が機能停止閾値点（ｆａｉｌｕｒｅ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）以下に低下しないが、一般的な老人人口のうちでも、この機能停止閾値点と交差する場合があり、この場合、異常な夜間視力のような深刻な問題が現れる。黄斑変性患者は、黄斑部位が病気の特性上、非常に毀損された状態であるので、黄斑部位だけを独立して測定することが不可能である。周辺部位の水理伝導率も、黄斑部位と類似した様相で幾何級数的に減少し、機能の半減期が約２２年であることが示された（図５Ｅ）。１１名の黄斑変性患者の周辺部位を測定した水理伝導率は、いずれも、平均回帰線以下に示されることを確認（図５Ｅの黒色円、赤色円を参照）することができ、これは、黄斑部位でなく、周辺部においても物質輸送機能の減少が深刻な状態に進行されることを示している。
【００７８】
次に、ブルッフ膜の栄養素輸送能力を確認するために、タンパク質拡散度（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）実験を行った。具体的に、一般的なウッシングチャンバー（Ｕｓｓｉｎｇ  ｃｈａｍｂｅｒ）を使用してＦＩＴＣ−ｄｅｘｔｒａｎ（ＭＷ  ２３ｋＤａ）がブルッフ膜を通過する拡散度を実験した（図６Ｂ、Ｃ）。デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）は、ビタミンＡ、微量金属（ｔｒａｃｅ  ｍｅｔａｌｓ）、脂質などの物質輸送に役割をする大概の運搬タンパク質（ｃａｒｒｉｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）と類似したサイズの物質として選択された。ブルッフ膜の老化によって黄斑部位を通過するタンパク質サイズの物質の拡散度が急激に落ちること（図６Ｄ）を確認することができた。これによって、血しょうには、正常水準のビタミンや抗酸化物質が存在するにも関わらず、黄斑部位には、これら物質の欠乏現象が観察される。周辺部位の場合、黄斑部位に比べて拡散度の減少程度が遅く示されるが（図６Ｅ）、黄斑変性患者の場合には、非常に急激に減少することを確認することができた（図６Ｅの黒色円、赤色円を参照）。このように周辺部位の減少程度と比較して、黄斑変性患者の黄斑部位の機能を測定することができる場合、その程度は、周辺部位に比べて格別に速くて且つ急激に進行され得る可能性が大きいことを確認することができる。このような拡散輸送の減少は、栄養分の供給および有害老廃物の除去を妨害して、結局のところ、ＲＰＥおよび視細胞の損傷および死滅の危険を増加させて失明の原因となる。
【００７９】
以下、実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は、ただ本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例により限定されるものと解すべきものではないことは、当業界において通常の知識を有する者にとって自明だろう。
【００８０】
実施例１．ナマコ抽出物の製造
乾燥したナマコを粉砕機を使用してナマコ粉末を製造し、これに７０％エタノールを添加した後、約３〜６時間の間抽出した。真空状態でエタノールを除去して、本発明の実施例に使用するナマコ抽出物を製造した。
【００８１】
実施例２．ナマコ抽出物を利用したブルッフ膜の水理伝導率の改善効果
前記実施例１で製造したナマコ抽出物のブルッフ膜の水理伝導率に対する効果を確認するために、１４名の眼球寄贈者（５２〜８４歳）の目を使用して実験した。具体的に、寄贈を受けたヒトの目から分離したブルッフ膜を２４時間の間２．５％のナマコ抽出物と共に培養し、対照群としてＴｒｉｓ−ＨＣｌを使用した。
【００８２】
その結果を図７に示し、ナマコ抽出物がブルッフ膜の水理伝導率を２．３倍増加させたことが分かった（図７Ａ、ｐ＜０．００１）。ナマコ抽出物の水理伝導率の改善効果は、ブルッフ膜を約２０〜２５年ほど若くする効果と同じである。水理伝導率のこのような改善効果によって機能停止閾値点（ｆａｉｌｕｒｅ）に達しないようにするので、黄斑変性の発病可能性が低くなる。
【００８３】
また、ナマコ抽出物の用量によるブルッフ膜の輸送機能の改善効果を調べてみるために、６９歳〜８４歳の範囲の４名の目から分離したブルッフ膜を測定して、水理伝導率の改善に対する用量反応曲線で示した。具体的に、開放型ウッシングチャンバー（ｏｐｅｎ−ｔｙｐｅ  Ｕｓｓｉｎｇ  ｃｈａｍｂｅｒ）にブルッフ膜を載置した後、チューブを通じて静水圧（ｈｙｄｒｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）下でＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファーを通過させ、一定時間後に通過した溶液を採取して、流体輸送（ｆｌｕｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）を測定した。対照群には、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌだけを使用し、実験群は、０〜１０％の濃度別ナマコ抽出物を処理し、２４時間の間培養した後に、再び流体輸送を測定した（［１３］Ｍｏｏｒｅ  ＤＪ，Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（１９９５）．Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｙｄｒａｕｌｉｃ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６（７）：１２９０−７．［１７］Ｓｔａｒｉｔａ  Ｃ、Ｈｕｓｓａｉｎ  ＡＡ，Ｐａｇｌｉａｒｉｎｉ  Ｓ，Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｊ．（１９９６）Ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ａｇｅｉｎｇ  Ｂｒｕｃｈｍｅｍｂｒａｎｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．６２（５）：５６５−７２．参考）
【００８４】
その結果、図７に示されたナマコ抽出物の用量反応曲線によれば、ナマコ抽出物の用量が増加するに伴って膜に対する水理伝導率が改善され、飽和状態で水理伝導率がナマコ抽出物を添加しなかったときに比べて、３．２倍増加したことが分かり（図７Ｂ）、これは、老化による減少曲線の水理伝導率の機能を約３３歳改善させる効果と同じである（図７Ｃ）。
【００８５】
したがって、ナマコ抽出物は、老化が進行される多様な年齢帯のブルッフ膜の輸送機能の改善に重大な影響を与えることができることを確認した。
【００８６】
実施例３．ナマコ抽出物を利用したブルッフ膜の脂質老廃物の除去効果
ブルッフ膜の脂質老廃物の主な構成成分は、コレステロールエステル（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｅｓｔｅｒｓ）、コレステロール、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ）、リン脂質（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ）である。ナマコ抽出物がブルッフ膜に積まれている脂質抽出物の除去効果があるかを確認するために、用量反応（ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ）実験を行った。具体的に４名のヒトの目から分離したブルッフ膜（５０歳〜８２歳）をＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファーに混ぜて均質化した。ホモジネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ）は、遠心分離を行って上澄み液と脂質老廃物が含まれているペレット（ｐｅｌｌｅｔ）に分離した。ペレットは、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファーを再び混ぜて、２４時間の間３７℃インキュベーターで０〜２．５％濃度のナマコ抽出物と共に培養した。培養が終わった後に、試料を遠心分離して、ペレットから上澄み液として分泌された脂質の量を薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ  Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＴＬＣ）方法で定量した。
【００８７】
その結果、多様な種類の脂質の分泌データと反応力学（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）が現れた。図８に示されたように、コレステロールエステル、コレステロールおよびトリグリセリドの分泌は、双曲線動力学（ｈｙｐｅｒｂｏｌｉｃ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）を示し、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｃｈｏｌｉｎｅ）の分泌は、シグモイド動力学（ｓｉｇｍｏｉｄ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）形態を示し、ナマコ抽出物と共に培養したとき、ブルッフ膜に沈着されていた脂質老廃物を分散させ、膜から分泌されることを確認した。
【００８８】
実施例４．ナマコ抽出物を利用したブルッフ膜のＭＭＰ酵素分泌効果
ブルッフ膜のＭＭＰ酵素は、自由な形態や膜に結合された形態で存在する。ナマコ抽出物がブルッフ膜からＭＭＰ酵素を除去できるかを確認するために、まず、分離したブルッフ膜で膜に結合されたＭＭＰを確認した。
【００８９】
分離したブルッフ膜をウッシングチャンバーに載置してＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファーを貫流すると、自由なＭＭＰがブルッフ膜の水理伝導率によって約６〜１２時間の間ゆっくり膜から分泌される（図９Ａ）。膜から自由な形態のＭＭＰが分泌されたら、ブルッフ膜をチャンバーから分離した後、膜に残っているＭＭＰをＳＤＳバッファーを使用して抽出した。溶解性があるか、自由に存在するＭＭＰ物質の場合には、貫流５〜１２時間の間に大概ゆっくり分泌された（図９Ｂ）。しかしながら、ブルッフ膜に存在する大概のＭＭＰは、膜に結合されているか閉じ込められた状態で存在し、５〜１２時間の貫流後にも除去されずに、膜に残っていることを確認することができる。
【００９０】
このように膜に結合されているか閉じ込められた状態であるＭＭＰがナマコ抽出物により除去され得るかを調べるために、７３歳、７９歳の寄贈者の目から分離したブルッフ膜を１２時間の間Ｔｒｉｓ−ＨＣｌとの貫流を通じて自由な状態のＭＭＰ酵素を先に分泌させて除去した。その後、２．５％濃度のナマコ抽出物と共に貫流した結果、図１０に示されたように、膜に結合されていたＭＭＰが分泌されることを確認することができた。
【００９１】
ブルッフ膜を塞いでいたＨＭＷ１とＨＭＷ２を膜から除去できるので、ブルッフ膜の輸送能力を助けることができ、また、活性化した状態のＭＭＰの分泌は、異常なタンパク質を分解する効果があるので、ブルッフ膜の老化を取り戻すのに肯定的な影響を与えることができるものと期待される。
【００９２】
実施例５．ナマコ抽出物を利用したヒトの目のブルッフ膜のペレットに存在するＭＭＰ酵素の分泌効果
ナマコ抽出物のブルッフ膜からＭＭＰ酵素の分泌効果を確認するために、７５歳の寄贈者の二つの眼球から分離したヒトの目のブルッフ膜を利用した。試料に使用されたブルッフ膜のペレットには、ＭＭＰ酵素が膜に閉じ込められているか結合された形態で存在した。一定体積のペレットを対照群としてＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファーと培養し、実験群として２．５％ナマコ抽出物と培養した。３７℃で２４時間の間培養した後に、上澄み液として分泌されたＭＭＰの量とペレットに結合された状態で存在するＭＭＰを測定するために遠心分離を行った。
【００９３】
その結果、対照群では、ＨＭＷ２の化合物がほとんど分泌されず、大概ペレット内に残っていたが、ナマコ抽出物と培養したブルッフ膜は、膜に結合されていた大概のＨＭＷ２が上澄み液として分泌されたことを確認することができた（図１１）。これは、膜を塞いでいたＨＭＷ２を除去することによって、膜の流れを良くして、ブルッフ膜の輸送能力を改善させることができることを意味する。また、ナマコ抽出物の培養は、活性化した状態のＨＭＷ１と前駆体状態のｐｒｏ−ＭＭＰ２およびｐｒｏ−ＭＭＰ９を膜から分泌させて、ブルッフ膜にある老廃物を除去することによって、輸送機能の改善に肯定的影響を与えることができることを確認した。
【００９４】
実施例６．ナマコ粉末の分画物を利用したヒトのブルッフ膜の水理伝導率の改善効果
乾燥したナマコを粉砕機を使用してナマコ粉末を製造し、１．５ｇのナマコ粉末を１５ｍｌのメタノールに溶かした後に溶媒を蒸発させた後、３ｍｌのＣＭＷ（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ：ｍｅｔｈａｎｏｌ：Ｈ２Ｏ＝５０：３０：６）溶媒を入れて、ナマコ濃縮液を製造した。製造されたナマコ濃縮液中０．８ｍｌをシリカゲル（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ）カラムを通じて分離した。カラムは、前記と同じＣＭＷ溶媒を使用し、分画物は、２０分に一回ずつ（約２ｍｌ）総３４個を採取した。それぞれの分画物は、溶媒を蒸発させた後、２００μｌのメタノールに溶かし、それぞれ５μｌずつの溶液を取ってＴＬＣ（ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）でサポニンの量を定量した（図１２）。その結果、図１２および下記表１で示されたように、類似した構成成分からなる分画物を５個のグループ（Ｆ１〜Ｆ５）に分け、それぞれの分画物のグループに対してＴＬＣを行った（図１３）。５個の分画物内に入っているサポニンの量を同一にするために、ＣＭＷ溶媒で希釈して、分画物別のサポニンを２５０μｇ／ｍｌの濃度で標準化した。
【００９５】
【表１】
0006869367.tif 000003
【００９６】
ナマコ粉末の分画物別にブルッフ膜の水理伝導率の改善効果を確認するために、寄贈を受けたヒト（７８歳、８２歳）の目から分離したブルッフ膜を前記実施例２で記述した水理伝導率の実験方法と同一に測定した。
【００９７】
その結果、下記表２および図１４に示されたように、Ｆ３の分画物が統計学的に有意に改善効果があり（ｐ＜０．００１）、Ｆ２、Ｆ４、Ｆ５も、対照群に対して水理伝導率が増加する傾向を示した。
【００９８】
【表２】
0006869367.tif 000004
【００９９】
実施例７．ナマコ粉末の分画物に存在する活性物質の確認
前記実施例６においてブルッフ膜の水理伝導率の改善に最も良い効果を示したＦ３分画に特異的な物質を確認するために、それぞれの分画物に存在するサポニンの種類を比較分析した。
【０１００】
図１５で、Ｆ３に存在し、Ｆ１およびＦ２にはないサポニンを矢印（→）で表示し、この物質は、Ｆ４およびＦ５にも微量存在することが示された。全体ナマコ試料の分離結果（ＳＣ）の同一位置でも、この物質を確認することができ、これは、従来ナマコのサポニンとして知られたフロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ，ＦＡ）であることが分かった。
【０１０１】
実施例８．ナマコ分画物のＭＭＰ分泌効果
前記ナマコ分画物がブルッフ膜からＭＭＰを分泌させる効果を確認するために、６５〜７６歳の間の患者から寄贈を受けた目からブルッフ膜を分離した。具体的に、直径８ｍｍの円形状のブルッフ膜を３６個準備し、総１８個の試験管に円形状の組織（Ｔｒｅｐｈｉｎｅ）を２個ずつ入れ、試験管３個ずつ一つのグループとして総６個のグループに分けて実験した（対照群、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５）。ナマコ分画物は、サポニンの量を上記のように２５０μｇ／ｍｌと同一に調整し、２４時間培養後、５０μｌの培養液でザイモグラフィー（ｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ）を実施して、ＭＭＰ分泌を確認した。対照群は、ナマコ分画物の代わりにＴｒｉｓバッファーと共に培養した。残りの培養液は、ＣＭ溶液（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ：ｍｅｔｈａｎｏｌ＝２：１，ｖ／ｖ）を入れて、下記実施例９で分泌された脂質の量を分析するのに使用した。
【０１０２】
その結果、図１６に示されたように、Ｔｒｉｓバッファーと培養した対照群と分画物Ｆ１の場合、ＨＭＷ２とＰｒｏ−ＭＭＰ９、微量のＨＭＷ１が分泌されたが、ｐｒｏ−ＭＭＰ２は、観察されなかった。分画物Ｆ３は、対照群と比較したとき、Ｐｒｏ−ＭＭＰ２が追加に分泌され、分画物Ｆ４とＦ５は、ＨＭＷ２、ＨＭＷ１、Ｐｒｏ−ＭＭＰ２を膜で分泌すると共に、Ｐｒｏ−ＭＭＰ９の分泌量も顕著に増加することを確認することができた。これから分画物Ｆ３は、Ｐｒｏ−ＭＭＰ２分泌量を増加させ、分画物Ｆ４およびＦ５は、ブルッフ膜に結合されていた大概のＭＭＰ酵素の種類を分泌させることが分かった。
【０１０３】
実施例９．ナマコ分画物の脂質変化効果
前記実施例８のように、ブルッフ膜をそれぞれのナマコ分画物と２４時間の間培養させた後に、０．９５ｍｌの培養液をＣＭ溶液（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ：ｍｅｔｈａｎｏｌ＝  ２：１、ｖ／ｖ）を利用して脂質成分を抽出した。溶媒を蒸発させた後、５０μｌのＣＭ溶液を入れ、それぞれの試料で３０μｌずつＴＬＣプレートに点滴して、存在する脂質の種類を分析した。
【０１０４】
その結果、図１７に示されたように、対照群と分画物Ｆ１の場合、ホスファチジルコリン（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  Ｃｈｏｌｉｎｅ，ＰＣ）は分泌されず、コレステロールエステル（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｅｓｔｅｒ，ＣｈＥ）とトリグリセリド（Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ，ＴＧ）が分泌され、微量のコレステロール（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，Ｃｈ）が分泌された。一方、分画物Ｆ３は、コレステロールエステルとトリグリセリド、コレステロールの分泌に効果を示し、他の種類の脂質ＵＬ−１とＵＬ−３の除去にも効果があった。分画物Ｆ４とＦ５は、対照群と比較したとき、脂質の除去に微々たる効果を示した。
【０１０５】
実施例１０．フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）のヒトのブルッフ膜に対する水理伝導率の改善効果
前記実施例７で確認した単一サポニンフロンドシドＡを利用してヒトのブルッフ膜で物質輸送能力の改善効果があるかを確認した。具体的に、寄贈を受けた６８歳、７９歳患者のブルッフ膜を利用して前記実施例と同じ方法でフロンドシドＡ溶液１６７μｇ／ｍｌの水理伝導率の変化を測定した。対照群としては、Ｔｒｉｓバッファーを利用した。その結果、下記表３および図１８に示されたように、フロンドシドＡの水理伝導率の改善効果が、対照群に比べて１．６倍以上優れていることが分かった。
【０１０６】
【表３】
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【０１０７】
実施例１１．フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）のＭＭＰ分泌効果
前記実施例１０において水理伝導率の測定時に、３０時間の間培養した溶液を利用してザイモグラフィー（ｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ）を実施した。具体的に、対照群であるＴｒｉｓバッファー溶液とフロンドシドＡ溶液（１６７μｇ／ｍｌ）を３０時間の間ブルッフ膜と培養し、その溶液中５０μｌとＳＤＳサンプルバッファー５０μｌを混合した後、このうち３０μｌをゼリにローディングして、ヒトのブルッフ膜から分泌されるＭＭＰ酵素を測定した。
【０１０８】
その結果、図１９に示されたように、対照群であるＴｒｉｓバッファーと培養したときは、ＭＭＰがほとんど分泌されないのに対し、フロンドシドＡと培養した場合は、膜に結合されていた膨大な量のＰｒｏ−ＭＭＰ９が分泌されることを確認することができた。これから、フロンドシドＡが様々な種類のＭＭＰの中から選択的にＰｒｏ−ＭＭＰ９と結合して、これをブルッフ膜から除去することができることが分かった。
【０１０９】
実施例１２．フロンドシドＡ（Ｆｒｏｎｄｏｓｉｄｅ  Ａ）の脂質除去効果
フロンドシドＡの脂質除去効果を確認するために、前記実施例１０で水理伝導率を測定した後に、直径６ｍｍのサイズのブルッフ膜を切り出して、ＣＭ溶液（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ：ｍｅｔｈａｎｏｌ＝２：１）で脂質を抽出し、溶媒を蒸発させた。さらに５０μｌのＣＭ溶液を入れ、このうち４０μｌをシリカゲルＴＬＣプレートに点滴して、脂質の種類と量を分析した。
【０１１０】
その結果、図２０に示されたように、フロンドシドＡと共に培養した場合、コレステロールエステル、トリグリセリド、コレステロールの除去には影響を与えなかったが、ブルッフ膜のホスファチジルコリンの除去効果があることを確認することができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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