(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物組織が導電性粘着フィルム上に貼付されている生物組織薄切試料であって、該導電性粘着フィルムの生物組織に貼付される面における７５ｍｍ以上離れた２点間の電気抵抗値が１．０×１０-2Ω以上２．０×１０7Ω未満であり、かつ、該導電性粘着フィルムの粘着剤の、ＤＳＣ測定におけるガラス転移を示す温度範囲の中点の値が、−１５０℃以上−４０℃以下である、生物組織薄切試料。
【請求項２】
前記生物組織が、水溶性包埋剤で包埋されている、請求項１に記載の生物組織薄切試料。
【請求項３】
前記導電性粘着フィルムの粘着剤が、アクリル系粘着剤又はシリコーン系粘着剤である、請求項１又は２に記載の生物組織薄切試料。
【請求項４】
前記導電性粘着フィルムの粘着剤が、シリコーン系粘着剤である、請求項３に記載の生物組織薄切試料。
【請求項５】
−３５℃〜−１０℃にある、請求項１〜４のいずれか１項に記載の生物組織薄切試料。
【請求項６】
１０℃〜３０℃にある、請求項１〜４のいずれか１項に記載の生物組織薄切試料。
【請求項７】
乾燥状態にある、請求項１〜６のいずれか１項に記載の生物組織薄切試料。
【請求項８】
以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む、請求項１に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【請求項９】
以下の工程：
生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程；
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む、請求項２に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【請求項１０】
以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を１０℃〜３０℃に調温する調温工程；
を含む、請求項６に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【請求項１１】
以下の工程：
生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程；
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を１０℃〜３０℃に調温する調温工程； 
を含む、請求項６に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【請求項１２】
以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を乾燥させる乾燥工程；
を含む、請求項７に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【請求項１３】
以下の工程：
生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程；
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を乾燥させる乾燥工程； 
を含む、請求項７に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物組織が導電性粘着フィルム上に貼付されている生物組織薄切試料に関する。より詳しくは、本発明は、質量分析計を用いたイメージングによる生命科学の研究（例えば、組織学的研究、組織化学的研究、酵素組織化学的研究、免疫組織化学的研究、遺伝子組織化学的研究、水溶性物質の体内分布研究、微小領域の生化学的分析、薬物動態研究）に利用できる、生物組織（例えば、未固定非脱灰の硬組織、実験動物の全身、植物試料等）の薄切試料、及び該試料の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
質量分析計を用いたイメージングによる生命科学の研究では、化学薬品により固定処理、脱灰処理されていない（以後、未固定非脱灰と呼ぶ）硬組織や大きな生物試料（組織）から作製される薄い凍結切片（例えば、厚さ５μｍ〜３０μｍ）が必要とされている。例えば、以下の非特許文献１、２には、凍結した生物試料から凍結切片を得、質量分析計を用いたイメージング用試料とする方法が開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】日本組織細胞化学会編組織細胞化学２００５ ｐｐ．９５−１０７（２００５）
【非特許文献２】Ｂｉｏｉｎｔｅｒｐｈａｓｅｓ  １３（３），Ｍａｙ／Ｊｕｎｅ  ２０１８，０３Ｂ４１４−１  −  ０３Ｂ４１４−７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、従来の生物組織凍結切片方法では、非導電性粘着プラスチックフィルムを用いたり、非導電性粘着プラスチックフィルムを用いて切片を作製した後に、物理的又は化学的処理を行い、これを、質量分析計を用いたイメージング用試料としていたため、感度の低下や体内物質等の保持、組織形状等の変化などの物理的破壊又は化学的な汚染の影響を排除することができなかった。【０００５】
従来の生物組織凍結薄切方法では、体内物質等の保持、組織形状等の保存状態に影響を与えないように、例えば、−２０℃の試料温度で凍結薄切を実施するが、その際、未固定非脱灰試料の薄い凍結切片を支持するため、上述のとおり、非導電性であるプラスチックフィルムを用いていたため、質量分析計を用いたイメージングでは、試料に電荷の蓄積が起こり著しく感度を低下させるという問題が生じていた。
そこで、質量分析計を用いたイメージングにおいて感度を低下させないために、非導電性であるプラスチックフィルム上の凍結切片に電荷が蓄積することを防止する目的で、導電性基材上に物理的又は化学的手法を用いて試料を転写することも検討されている。例えば、凍結薄切した生物組織を刷毛によってＩＴＯガラス基板等の導電性基板に移す方法である。しかしながら、この方法でも、刷毛を用いることで生物組織の表面に損傷を与えたり、特に大型の生物組織の場合、破れを生じる場合があり、体内物質等の保持、組織形状等の保存状態への影響を排除することができないという問題が残っていた。【０００６】
このように、従来の質量分析計を用いたイメージング用試料の作製方法では、未固定非脱灰の硬組織や大きな生物試料（例えば、薄切面が４ｃｍ×５ｃｍの大きさ）から、感度を維持でき、体内物質等の保持、組織形状等の保存状態への影響を排除した薄い凍結切片（例えば、厚さが５μｍ〜３０μｍ）試料を作製することはできなかった。【０００７】
かかる従来技術の問題点に鑑み、本発明が解決しようとする課題は、物理的又は化学的な影響を排除し、低温下でも硬組織や大きな生物組織の薄い凍結切片を粘着支持できる質量分析計のためのイメージング用生物組織薄切試料、及び該試料の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明者は、前記した課題を解決すべく鋭意検討し実験を重ねた結果、凍結状態の生物組織（例えば、未固定非脱灰の硬組織、実験動物の全身、植物試料等）を凍結薄切装置に固定し、その固定した凍結生物組織の所定面に低温でも粘着性を有する導電性粘着剤が塗布されている薄いフィルム（以後、導電性粘着フィルムともいう。）を貼り付け、導電性粘着フィルムが貼り付いた状態の凍結生物組織を、刃物により所定の厚さに薄切することにより、前記課題を解決しうることを予想外に見出し、本発明を完成するに至ったものである。【０００９】
すなわち、本発明は、以下のとおりのものである。
［１］生物組織が導電性粘着フィルム上に貼付されている生物組織薄切試料であって、該導電性粘着フィルムの生物組織に貼付される面における７５ｍｍ以上離れた２点間の電気抵抗値が１．０×１０-2Ω以上２．０×１０7Ω未満であり、かつ、該導電性粘着フィルムの粘着剤の、ＤＳＣ測定におけるガラス転移を示す温度範囲の中点の値が、−１５０℃以上−４０℃以下である、生物組織薄切試料。
［２］前記生物組織が、水溶性包埋剤で包埋されている、前記［１］に記載の生物組織薄切試料。
［３］前記導電性粘着フィルムの粘着剤が、アクリル系粘着剤又はシリコーン系粘着剤である、前記［１］又は［２］に記載の生物組織薄切試料。
［４］前記導電性粘着フィルムの粘着剤が、シリコーン系粘着剤である、前記［３］に記載の生物組織薄切試料。
［５］−３５℃〜−１０℃にある、前記［１］〜［４］のいずれかに記載の生物組織薄切試料。
［６］１０℃〜３０℃にある、前記［１］〜［４］のいずれかに記載の生物組織薄切試料。
［７］乾燥状態にある、前記［１］〜［６］のいずれかに記載の生物組織薄切試料。
［８］以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む、前記［１］に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
［９］以下の工程：
生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程；
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む、前記［２］に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
［１０］以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を１０℃〜３０℃に調温する調温工程；
を含む、前記［６］に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
［１１］以下の工程：
生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程；
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を１０℃〜３０℃に調温する調温工程； 
を含む、前記［６］に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
［１２］以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を乾燥させる乾燥工程；
を含む、前記［７］に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
［１３］以下の工程：
生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程；
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む方法で得られた生物組織凍結薄切試料を乾燥させる乾燥工程； 
を含む、前記［７］に記載の生物組織薄切試料の製造方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、化学薬品により脱灰処理、固定処理等がされていない、硬組織、大きな生物組織（例えば、薄切面が４ｃｍ×５ｃｍの大きさの試料）等から感度の低下や体内物質等の保持、組織形状等の変化などの物理的破壊又は化学的な汚染の影響を排除した厚さ５μｍ〜３０μｍの凍結切片を、簡単かつ確実に作製することができ、さらには、これを用いて質量分析計のためのイメージング用試料として用いることができる。
また、本発明の生物組織薄切試料により作製されたイメージング用試料又は基板付イメージング用試料は、生物組織の切り出し面をそのまま測定に用いることが可能となり、体内物質等の保持、電荷蓄積の防止により画像の鮮明度が増す。また、本発明の生物組織薄切試料の製造方法では、生物組織と導電性粘着フィルムの間で低温下でも粘着性が保持されているため、組織形状の変化などの物理的破壊を排除し、容易に生物組織切片を連続して、例えば、マウス一匹につき、３０枚以上の切片を作製することが可能であり、試料作製効率が格段に向上する
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本実施形態の導電性粘着フィルムの断面図である。
【図２】凍結生物組織としての凍結包埋ブロックの所定面に導電性粘着フィルムを貼り付けた状態を示す断面図である。
【図３】薄切中の凍結切片と導電性粘着フィルムとの関係を示す断面図である。
【図４】導電性粘着フィルムに貼り付いた切片を基板に貼り付けた状態を示す断面図である。
【図５】実施例１で得たイメージング用試料の写真である。
【図６】実施例１で得た基板に貼り付けたイメージング用試料の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施形態の例について詳細に説明するが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。本開示で、図面に付された同一の符号は、同様の構造及び／又は機能を有する要素を意図する。また、本実施形態において「〜」の記号を用いて数値範囲を表す場合があるが、「〜」の前後に記載される数値は当該数値範囲に含まれる。
【００１３】
本発明の１の実施形態は、生物組織が導電性粘着フィルム上に貼付されている生物組織薄切試料であって、該導電性粘着フィルムの生物組織に貼付される面における７５ｍｍ以上離れた２点間の電気抵抗値（以下、単に電気抵抗値ともいう。）が１．０×１０-2Ω以上２．０×１０7Ω未満であり、かつ、該導電性粘着フィルムの粘着剤の、ＤＳＣ測定におけるガラス転移を示す温度範囲の中点の値（以下、単にガラス転移点ともいう。）が、−１５０℃以上−４０℃以下である、生物組織薄切試料である。
前記生物組織は、好ましくは、水溶性包埋剤で包埋されている。
前記導電性粘着フィルムの粘着剤は、好ましくは、アクリル系粘着剤又はシリコーン系粘着剤であり、より好ましくはシリコーン系粘着剤である。
前記生物組織薄切試料は、−３５℃〜−１０℃の凍結状態にあっても、１０℃〜３０℃の常温状態にあっても構わない。また、生物組織薄切試料は、乾燥状態にあることができる。
【００１４】
本発明の他の実施形態は、以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む、前記生物組織薄切試料の製造方法である。
前記生物組織薄切試料の製造方法は、好ましくは前記凍結工程前に、生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程を含むことができる。また、前記生物組織薄切試料の製造方法は、得られた生物組織凍結薄切試料を１０℃〜３０℃に調温する調温工程；及び／又は乾燥させる乾燥工程；を含むことができる。
【００１５】
導電性粘着フィルムは、試料の帯電防止の観点から、少なくとも凍結生物組織と接する側の面において７５ｍｍ以上離れた２点の間の電気抵抗値が１．０×１０-2Ω以上２．０×１０7Ω未満の導電性を有している。さらに、好ましい態様においては、導電性粘着フィルムは全体として（すなわち、例えば、導電性粘着フィルムが粘着剤と基材とを含む場合には粘着剤と基材が共に）導電性を有する。この場合、導電性粘着フィルムを基板に貼り付けて用いる場合に基板側へも導電性を有するものとなる。
【００１６】
凍結生物組織の薄切は、通常、凍結下、具体的には−３５℃〜−１０℃という低温で行われる。すなわち、本実施形態の方法では、好ましくは、導電性粘着フィルムは包埋生物組織とともに上記低温下に置かれることになるため、導電性粘着フィルムには低温での粘着性（接着性）が要求される。凍結生物組織と導電性粘着フィルムとの間の接着性は、導電性粘着フィルムのガラス転移点に影響されることが多く、ガラス転移点より低温側では、粘着性を発揮するゴム状態からガラス状態へと変化し、粘着性が著しく低下する場合がある。よって、生物組織との粘着性の観点から、少なくとも、凍結生物組織と接する導電性粘着フィルムのガラス転移点は−１５０℃〜−４０℃である必要がある。
【００１７】
以下、本実施形態の生物組織薄切試料の製造方法について説明する。
前記したように、本発明の他の実施形態は、以下の工程：
生物組織を凍結して凍結生物組織を得る凍結工程；
該凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける貼付工程；及び
該導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに、該凍結生物組織を薄切する薄切工程；
を含む、前記生物組織薄切試料の製造方法である。
【００１８】
（凍結工程）
凍結工程は、生物組織（試料）を凍結して凍結生物組織を得る工程である。
本明細書中、用語「生物組織（試料）」は、特に制限されず、硬組織、実験動物の全身、肝臓、腎臓、皮膚、植物、果実等を包含する。実験動物としては、例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ等が挙げられる。
より具体的には、凍結生物組織は、生物組織を冷却することにより作製することができる。凍結工程の温度は生物組織が凍結する条件であれば特に制限はなく、凍結処理の時間も特に限定されない。例えば、生物組織を、ドライアイスで冷却した容器内のアセトン中、−７０℃以下の温度、３０分間程度で凍結処理することができる。生物組織が凍結しているかどうかを目視確認して、凍結していることが確認できた時点で凍結処理を終了してもよい。
【００１９】
容器の材質は、生物組織薄切試料やそれを用いて質量分析等の分析等を行う際に影響を及ぼさないものであって、凍結工程を通じて破損したり漏れたりしないものであれば特に制限はなく、公知のものが使用できる。容器としては、例えば、ステンレス製容器、ガラス製容器、高分子材料を用いた容器、高分子材料を用いた袋等を適宜選択し使用できる。
生物組織を冷却する方法も、生物組織が凍結する条件を達成できる限り、特に制限はなく、例えば、生物組織を入れた容器を冷凍機で冷却する方法、循環型冷凍機や、ドライアイス、液体窒素、液体プロパン等の低温体で冷却された溶媒に浸漬する方法等を採用することができる。
【００２０】
（包埋工程）
前記凍結工程前に、生物組織を水溶性包埋剤で包埋する包埋工程を含んでもよい。
水溶性包埋剤としては、従来公知の包埋剤を使用でき、例えば、３質量％〜５質量％カルボキシメチルセルロース水溶液、ＯＣＴコンパウンド、ゼラチン等を例示できる。包埋生物組織は、典型的には包埋ブロックであり、従来公知の方法（例えば、マウスの場合、被毛を刈り取り４質量％カルボキシメチルセルロース溶液で包埋し、ドライアイス・アセトン中、−７０℃以下の温度、３０分間程度で、凍結処理する方法）で作製できる。
より具体的には、凍結包埋生物組織は、容器内に生物組織と水溶性包埋剤とを入れ、冷却することにより作製することができる。包埋工程は大気下で実施しても不活性ガス雰囲気下で実施してもよい。包埋工程の温度は生物組織、水溶性包埋剤が凍結する条件であれば特に制限されず、凍結処理の時間も特に制限はない。生物組織、水溶性包埋剤が凍結しているかどうかを目視確認して、凍結していることが確認できた時点で凍結処理を終了してもよい。
【００２１】
水溶性包埋剤の使用量は、生物組織凍結薄切試料を作製する生物組織の部位が、容器に入れた水溶性包埋剤に浸漬する量であれば特に制限はなく、好ましくは、生物組織凍結薄切試料を作製する生物組織の部位の周囲に５ｍｍ〜１０ｍｍ程度の厚みの水溶性包埋剤が凍結した層を有するように水溶性包埋剤の使用量を決めることができる。使用する容器の容量や形状もそれに合わせて適宜選択できる。
容器の材質は、水溶性包埋剤が溶出したり、生物組織凍結薄切試料やそれを用いて質量分析等の分析等を行う際に影響を及ぼさないものであって、包埋工程を通じて破損したり漏れたりしないものであれば特に限定されず、凍結工程で示したものと同様の、公知の材質の容器を使用できる。
生物組織と水溶性包埋剤とを冷却する方法は、生物組織と水溶性包埋剤が凍結する条件を達成できるものであれば特に制限はなく、凍結工程で示したものと同様の方法を採用することができる。
【００２２】
（貼付工程）
貼付工程は、凍結生物組織に導電性粘着フィルムを貼り付ける工程である。凍結工程の前に、包埋工程を実施する場合、凍結生物組織は、凍結包埋生物組織となる。以下の説明では、凍結生物組織として凍結包埋生物組織を用いる態様を説明する。この場合、凍結生物組織を凍結包埋生物組織に読み替えればよい。
【００２３】
図１は、導電性粘着フィルムの例を示す図である。図１を参照し、好ましい態様において、導電性粘着フィルム１０は、第１の粘着剤１を含み、又は第１の粘着剤１のみからなってもよく；基材２と、基材２の第１の表面上に配置された導電性の第１の粘着剤１とを含み、又はこれらからなってもよく；導電性の第１の粘着剤１と、導電性又は非導電性の第２の粘着剤３とを含み、又はこれらからなってもよく；あるいは、基材２と、基材２の第１の表面上に配置された導電性の第１の粘着剤１と、基材２の第２の表面上に配置された導電性又は非導電性の第２の粘着剤３とを含み、又はこれらからなってもよい。第１の粘着剤１と第２の粘着剤３は同種であっても異種であってもよい。
【００２４】
基材は、導電性材料、非導電材料のいずれであってもよい。好ましい態様において、基材は、金属箔、プラスチック（導電性プラスチック、及び非導電性プラスチック）、及び繊維（導電性繊維、及び非導電性繊維）からなる群から選択される。金属箔としては、アルミニウム箔、銅箔等が例示される。プラスチックとしては、ポリオレフィン（例えば、ポリプロピレン）、ビニル樹脂（例えば、ポリ塩化ビニル）、ポリエステル（例えば、ＰＥＴ）等が例示される。繊維としては、不織布等が例示される。基材の厚みは、薄切試料の支持体としての良好な機械強度及び可撓性を得る観点から、好ましくは０．１μｍ〜２００μｍ、より好ましくは５μｍ〜１５０μｍ、更に好ましくは２５μｍ〜７５μｍである。
【００２５】
第１の粘着剤は、試料の帯電防止の観点から、導電性である。導電性としては、７５ｍｍ以上離れた２点の間の電気抵抗値が１．０×１０-2Ω以上２．０×１０7Ω未満であることが好ましい。また、第１の粘着剤の７５ｍｍ以上離れた２点の間の電気抵抗値は、より好ましくは１．０×１０-2Ω以上１．０×１０3Ω以下である。また、電気抵抗値を測定する２点間は７５ｍｍ以上１００ｍｍ以下の距離であることが好ましく、７５ｍｍ離れた２点の間であることがさらに好ましい。７５ｍｍの間隔で電気抵抗値を測定できない場合は、測定可能な２点間の電気抵抗値（Ωを単位とする）を、２点間の距離（ｍｍを単位とする）で除し７５を乗じて算出される値としてもよい。
【００２６】
粘着フィルムの電気抵抗値の測定装置は特に限定されず、例えば、抵抗計、テスター等の公知の方法で測定することができる。例えば、電気抵抗計に接続されたプラスとマイナスのテストリードの先端を７５ｍｍ以上離し、導電性粘着フィルムの包埋生物試料と接する側の面に接触させることで測定することができる。電気抵抗値を測定する際には、好ましくは粘着フィルムをガラス板（例えば、スライドグラスを使用してもよい）の上に乗せ、さらに、粘着フィルムに重しを載せて測定を行う。その際の重しは、重さは１００ｇ程度、重しの底面は９００ｍｍ2程度であって、粘着フィルムと接触する面が導電性の低い素材のもの（プラスチック、ガラス等）を使用する。
【００２７】
好ましい態様において、第１の粘着剤は、導電性物質と粘着性ポリマーとを含む。この態様の粘着性ポリマーは導電性でも非導電性でもよい。導電性物質としては、金属（例えば、ニッケル、銅等）の粉末等が例示される。導電性物質の配合量は、粘着剤が好ましい電気抵抗率を有するように（本実施形態では７５ｍｍ以上離れた２点の間の電気抵抗値が好ましい範囲となるように）配合されていればよい。
導電性の粘着性ポリマーとしては、良好な粘着力及び可撓性を低温下でも得る観点から、一態様において、各種導電性ゴムが挙げられ、また、別の態様において、導電性アクリル、導電性シリコーン及び導電性ウレタンからなる群から選択される導電性ポリマー（これら導電性ポリマーは室温にてゴム弾性を有するものと有さないものとを包含する。）が挙げられる。中でも好ましくは導電性アクリル、導電性シリコーンである。より好ましくは導電性シリコーンである。
【００２８】
非導電性の粘着性ポリマーとしては、良好な粘着力及び可撓性を低温下でも得る観点から、一態様において、ゴム、合成ポリマー等が挙げられ、また別の態様において、アクリル、シリコーン及びウレタンからなる群から選択されるポリマー（これらポリマーは室温にてゴム弾性を有するものと有さないものとを包含する。）が挙げられる。中でも、好ましくはアクリル、シリコーンであり、より好ましくはシリコーンである。別の好ましい態様において、第１の粘着剤は、上記の粘着性ポリマーと導電性物質で構成されていてよい。
【００２９】
尚、粘着剤のポリマーがアクリル（導電性アクリルを含む）である粘着剤をアクリル系粘着剤、粘着剤のポリマーがシリコーン（導電性シリコーンを含む）である粘着剤をシリコーン系粘着剤と呼称する場合がある。シリコーン系粘着剤を使用した場合、その機構は明らかではないが、本実施形態の生物組織薄切試料を使用して質量分析を行った際にシグナル／ノイズ比（Ｓ／Ｎ比）が大きくなる効果を奏する。
アクリル系粘着剤は、粘着性ポリマーの主たる構成成分がアクリルモノマーの重合物である粘着剤である。その構造やポリマー組成は特に限定されず、本実施形態の粘着剤として好ましいガラス転移点を有する組成であれば使用できる。一般的に、アクリルはメタクリル酸エステル及び／又はアクリル酸エステルの重合体であり、そのポリマーのガラス転移点は、エステル基の炭素数や構造の違い、あるいは、メタクリル酸エステルとアクリル酸エステルの組成比等によって調整することができる。アクリルの重合度（例えば、数平均分子量と指標とすることができる）も適宜選択することができる。また、他のモノマー成分が共重合していているものでも差し支えない。
【００３０】
シリコーン系粘着剤は、粘着性ポリマーの主たる構成成分がポリシロキサンである粘着剤である。その構造や組成は特に限定されず、粘着剤として好ましいガラス転移点を有する組成であれば使用できる。一般的に、ポリシロキサンはＭ（Ｒ1Ｒ2Ｒ3ＳｉＯ1/2）、Ｄ（Ｒ4Ｒ5ＳｉＯ）、Ｔ（Ｒ6ＳｉＯ3/2）、Ｑ（ＳｉＯ2）（前記Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6は任意の有機基を表す）からなる群から選ばれる少なくとも１つの構造を繰り返し単位として有し、ケイ素原子上の置換基やこれらの構造の組成比、重合度等によってポリシロキサンの物性を変えることができる。
【００３１】
第１の粘着剤のガラス転移点は、低温下での良好な可撓性及び粘着性を得る観点から、好ましくは−１５０℃以上−４０℃以下、より好ましくは−１５０℃以上−４５℃以下、さらに好ましくは−１５０℃以上−５０℃以下である。
このようなガラス転移点を有する粘着剤を使用することにより、生物組織凍結薄切試料を作製する一連の工程（貼付工程、薄切工程）において導電性粘着フィルムと生物試料が貼付された状態を維持することができ、作業効率が向上する効果や、作製された生物組織凍結薄切試料の形態を良好な状態で維持する効果を奏する。好ましい範囲に下限値を−１５０℃としているのは、当業者がガラス転移点の測定に一般的に使用するＤＳＣ測定装置における測定下限値が−１５０℃であることが多いため便宜的に−１５０℃としているのであって、ガラス転移点がが−１５０℃よりも低いものを積極的に排除しているわけではない。すなわち、ガラス転移点が−１５０℃より低い粘着剤を有する粘着フィルムでも好適に使用することができる。
【００３２】
粘着剤のガラス転移点は公知の方法で測定することができる。例えば、ＤＳＣ測定装置（示差走査熱量測定装置）を用いて、同装置の測定範囲の下限界まで試料を冷却し、続いて、例えば、３℃／分の速度で昇温し、昇温の際に得られる熱量変化を記録し、熱量変化曲線の変曲点からガラス転移温度を読み取ることができる。一般的にガラス転移に伴う熱量変化曲線の変曲点は、１のガラス転移に対して低温側と高温側の２つの変曲点が観測される場合が多い。本実施形態においては、高温側の変曲点と低温側の変曲点の中間の温度（中点）が上記した温度範囲に該当するか否かで判断すればよい。熱量変化曲線の変曲点が不明瞭な場合は、熱量変化曲線の二次微分曲線のピークをガラス転移にともなう熱量変化曲線の変曲点の温度とすることができる。尚、同装置の測定範囲の下限界まで試料を冷却することが容易でない場合は容易に冷却できる範囲で測定を行ってもよい。
【００３３】
粘着剤が、室温（例えば、１０℃）において粘着性を示し、上記した昇温過程を室温（例えば、１０℃）以上まで行ってもガラス転移点が観測されない場合は、粘着剤のガラス転移点は測定に使用したＤＳＣ装置の測定範囲以下であると推定することができる。また、本実施形態においては粘着剤のガラス転移点の好ましい範囲を示しているが、ＤＳＣ装置を用いてガラス転移点を測定する際は、導電性粘着フィルムそのものを試料として測定を行ってもよい。上記測定範囲で導電性粘着フィルムの基材がガラス転移点を有する場合は、粘着剤を剥ぎ取る方法や溶剤を用いて拭き取る方法等の公知の方法によって粘着剤を除去した基材を準備し、基材のＤＳＣ測定結果と粘着フィルムのＤＳＣ測定結果の比較から粘着層のガラス転移点を求めることができる。
【００３４】
図２は、凍結包埋生物試料としての凍結包埋ブロックの所定面に導電性粘着フィルムを貼り付けた状態を示す断面図である。導電性粘着フィルム１０は、第１の粘着剤１によって凍結包埋生物試料４に貼り付けられる。
貼付工程では水溶性包埋剤で包埋された生物試料の所望の面に導電性粘着フィルムを貼り付ける。
貼付工程を行う温度は、生物試料の凍結包埋状態を維持し、かつ、本実施形態で好ましく使用される導電性粘着フィルムの粘着剤が粘着性を有し、生物試料と導電性粘着フィルムが貼りつけられる温度であれば特に限定されない。好ましくは、次の薄切工程と同じ温度条件下でおこなわれる。具体的には、好ましくは−３５℃以上、より好ましくは−３０℃以上、更に好ましくは−２５℃以上、他方、好ましくは−１０℃以下、より好ましくは−１５℃以下、更に好ましくは−２０℃以下である。尚、水溶性包埋剤で包埋された生物試料、導電性粘着テープは、貼付工程をおこなう温度に予め調整されていることが好ましい。
【００３５】
好ましい態様においては、凍結包埋生物試料を生物組織薄切装置の試料台に固定した状態で、凍結包埋生物試料に導電性粘着フィルムを貼り付ける。生物試料への導電性粘着フィルムの貼付け度合いを高めるために、小手等の治具を用いて生物試料に導電性粘着フィルムを押し付けてもよい。その際に試料台や小手等の治具も薄切工程を行う温度に予め調整しておくことが好ましい。
また、好ましくは、予め、生物試料の導電性粘着フィルムを貼り付ける面を平らにしておく。より好ましくは、予め、生物試料の導電性粘着フィルムを貼り付ける面をミクロトーム等の刃物を用いて削り、平らにしておく。その際に使用するミクロトーム等の刃物も当該工程を行う温度に予め調整しておくことが好ましい。後述するように貼付工程と薄切工程を複数回おこなって複数の生物組織凍結薄切試料を作製する場合は、薄切工程後の生物試料の表面が平らになっているので、そのまま導電性粘着フィルムを貼り付けてもよい。
【００３６】
（薄切工程）
薄切工程は、前記導電性粘着フィルムを貼り付けた状態で、−３５℃〜−１０℃で所定の厚さに前記凍結包埋生物試料を薄切する工程である。
図３は、薄切中の薄い凍結切片と導電性粘着フィルムとの関係を示す断面図である。図２及び３を参照し、導電性粘着フィルム１０とともに、凍結状態の包埋生物試料４を所定の厚さ（例えば、質量分析計を用いたイメージングによる生命科学研究に適した厚さである５μｍ〜５０μｍ）に刃物５（例えば、タングステンカーバイド製刃等）で切削して、導電性粘着フィルム１０と、該導電性粘着フィルム１０に貼り付いた薄切試料６とを含むイメージング用試料２０を作製する。
【００３７】
凍結包埋生物試料を薄切する際に、導電性粘着フィルムは、得られた薄切試料の支持体としても機能する。
【００３８】
導電性粘着フィルム１０が基材２の第２の表面上の第２の粘着剤３を有する場合、第２粘着剤は、質量分析計の基板に試料を固定する機能を有する。このとき試料は、通常、皺にならないよう引き伸ばされながら固定される。したがって、基材２、第２の粘着剤１と第２の粘着剤３は、常温下で強い粘着力、並びに良好な可撓性及び柔軟性を有するように選択されることが好ましい。尚、基板と試料とを固定するための粘着剤等を別途使用する場合には、導電性粘着フィルムが第２の粘着剤を備えることは要しない。
【００３９】
第２の粘着剤としては、常温下の優れた粘着力及び可撓性を得る観点から、一態様において、導電性又は非導電性の、天然ゴム、合成ゴム等が挙げられ、また、別の態様において、導電性又は非導電性の、アクリル、シリコーン、及びウレタンからなる群から選択される１種以上のポリマー（これらポリマーは室温にてゴム弾性を有する）が挙げられる。各種ゴム、アクリル、シリコーン、及びウレタンの好適例は、第１の粘着剤において粘着性ポリマーの好適例として挙げたものと同様である。第２の粘着剤が導電性である場合の第２の粘着剤としては、第１の粘着剤として例示したのと同様のものが挙げられる。第１の粘着剤と第２の粘着剤とが同種であってもよい。
【００４０】
薄切工程を行う温度は、生物試料の凍結包埋状態を維持し、かつ、本実施形態で好ましく使用される導電性粘着フィルムの粘着剤が粘着性を有し、生物試料と導電性粘着フィルムが貼付されている状態を維持できる温度であれば特に限定されない。好ましくは、上記した貼付工程と同じ温度条件下でおこなわれる。具体的には、−３５℃〜−１０℃が好ましく、−３０℃〜−１５℃がより好ましく、−２５℃〜−２０℃が更に好ましい。当該薄切工程で使用する刃物（例えば、図３の刃物５）、生物組織凍結薄切装置の試料台等の道具類は、予め、薄切工程を行う温度に調整されていることが好ましい。
上記したように、当該薄切工程で薄切される生物試料の厚みは、薄すぎても厚すぎても薄切のしやすさやハンドリングのしやすさが損なわれるため、好ましくは５μｍ以上、より好ましくは１０μｍ以上、さらに好ましくは１５μｍ以上、他方、好ましくは５０μｍ以下、より好ましくは３０μｍ以下、さらに好ましくは２０μｍ以下である。
【００４１】
上記した包埋工程、貼付工程、薄切工程を順に１回行うことにより、１つの生物組織凍結薄切試料を得ることができる。複数の生物組織凍結薄切試料が必要な場合は、上記の貼付工程と薄切工程を複数回おこなってもよい。
【００４２】
＜イメージング用試料を作製する方法＞
本実施形態の生物組織薄切試料は、例えば、下記工程を更に含む工程によって質量分析計のためのイメージング用試料の作製することに用いることができる。
（乾燥工程）
乾燥工程は生物組織凍結薄切試料を乾燥させる工程である。乾燥工程は薄切工程で得た試料を冷凍下で行うことができる。使用する冷凍機は試料が溶解しない温度であれば特に制限されず、試料を溶解させないようにクリオスタット、冷凍庫、凍結乾燥機等を適宜使用できる。乾燥は大気下で行っても不活性ガス雰囲気下で行ってもよいし、大気圧下で行っても減圧下で行ってもよい。
試料の乾燥速度を速める場合は、生物試料に変化を与えない程度で、公知の乾燥剤や乾燥機、送風機を使用してもよい。試料の乾燥速度を遅くする場合は公知の加湿器を使用してもよい。
乾燥工程は薄切工程で得られた生物組織凍結薄切試料の形態のまま行ってもよい。
乾燥工程は、調温工程の前もしくは調温工程の後に設けてもよい。
【００４３】
（調温工程）
調温工程は、前記薄切工程で作製した生物組織凍結薄切試料の温度を常温（１０℃〜３０℃）とし生物組織薄切試料とする工程である。尚、調温工程における常温は、調温工程を行う環境の温度であれば特に制限はないが、一般に、１０℃〜３０℃である。
調温工程では乾燥した生物組織凍結薄切試料が温度変化により結露しないように乾燥環境下で行うことができる。乾燥環境は真空下、シリカゲルによる乾燥下でおこなうことができる。調温は不活性ガス雰囲気下で行ってもよい。また、生物組織凍結薄切試料を容器に入れて加熱してもよい。容器を使用する場合、当該容器は当該操作をおこなうための十分な大きさと形状を有するものであれば特に制限されず、乾燥環境を保てるステンレス製の容器、ガラス製の容器、高分子材料を用いた容器、高分子材料を用いた袋等を適宜選択し使用できる。加熱は、公知の加熱器（必要に応じて冷却器を付加してもよい）による加熱であっても、雰囲気ガス（大気であっても不活性ガスであってもよい）に接触させることによる加熱であってもよい。
調温工程は、乾燥工程が、薄切工程で得られた生物組織凍結薄切試料の形態のまま行われた場合、そのままの形態でおこなってもよい。
【００４４】
＜基板付イメージング用試料を作製する方法＞
本発明の他の実施形態は、以下の工程:
本実施形態のイメージング用試料を作製する方法を含む工程；及び
得られたイメージング用試料を導電性又は非導電性の基板に貼付して基板付イメージング用試料を作製する工程；
を含む、質量分析計のための基板付イメージング用試料の製造方法である。
【００４５】
図４は、導電性粘着フィルムに貼り付いた切片を基板に貼り付けた状態を示す断面図である。図４を参照し、導電性粘着フィルム１０とその上に保持された状態の薄切試料６とを有するイメージング用試料２０を、第２の粘着剤３を介して基板７に貼り付ける。
【００４６】
基板としては、導電性基板（例えば、導電性ガラス、ＩＴＯ、金属等）及び非導電性基板（例えば、通常のガラス、プラスチック、フィルム等）のいずれも使用できる。しかし、前記したように、導電性粘着フィルムが有する導電性によって所望の帯電防止効果が得られるため、一般に高価である導電性基板の使用は必須ではない。非導電性基板はコスト低減の点で有利である。
【００４７】
上記の手順により、凍結包埋生物試料（例えば、未固定非脱灰の硬組織、実験動物の全身等）から、感度の維持、体内物質等の保持、組織形状の変化などの物理的破壊又は化学的な汚染の影響を排除した凍結切片を、簡単に、しかも確実に作製することができ、その薄い凍結切片を、質量分析計を用いたイメージングによる生命科学の研究に用いることができる。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明を実施例、比較例を挙げて具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
まず、実施例、比較例で用いた導電性粘着フィルム、試料の物性の測定、評価方法等を説明する。【００４９】
（１）ガラス転移点の測定
各導電性粘着フィルムを直径約４〜５ｍｍの大きさに切り取りサンプルパンに入れ、−８０℃〜１０℃の範囲で１分間に３℃昇温させる条件で、示差走査熱量計 (DSC) DSC Q2000（ティー・エイ・インスツルメント・ジャパン株式会社製）を用いてガラス転移点を測定した。ガラス転移点は低温側の変曲点と高温側の変曲点の中間点で評価した。【００５０】
（２）薄切性の評価
ラット腎臓を４％カルボキシメチルセルロース溶液（ライカマイクロシステムズ株式会社製）に入れ液体窒素中で凍結し凍結包埋生物試料を作製した。凍結包埋生物試料をクリオスタット CM 1860UV（ライカマイクロシステムズ株式会社製）にセットし、試料温度を−１５℃、−２０℃、−２５℃にした。各導電性粘着フィルムを直径約１０ｍｍに切り、包埋試料面に貼付し、薄切の厚さを２０μｍで刃の速度を１０ｍｍ〜２０ｍｍ毎秒で薄切を３回行った。薄切の際に包埋試料と導電性粘着フィルムが剥離したり、導電性粘着フィルム上にラット腎臓の形態が維持されなかった場合が１回以上生じた場合は×、３回とも導電性粘着フィルム上にラット腎臓が完全に剥離せずに切片化された場合を〇と評価した。【００５１】
（３）電気抵抗値の測定
各導電性粘着フィルムをスライドグラス（２５ｍｍ×７５ｍｍ）と同じ大きさに切り取り、スライドグラス上に粘着剤１が上面になるように貼り付け、粘着剤１の表面を下面に向けディジタルマルチテスタCD721（三和電気計器株式会社製）のテスターの側面を十分に導電性粘着フィルムの両短辺に接触させた。スライドグラス上に１００ｇの重りを乗せ、常温で電気抵抗値を測定した。尚、重りは底面が９００ｍｍ2程度のガラス瓶に水を入れて１００ｇとしたものを使用した。【００５２】
（４）イオン強度、シグナルノイズ比の測定
各導電性粘着フィルムをスライドガラスに乗せ、直径約３ｍｍの薬包紙 パラピン（株式会社博愛社製）にセレコキシブ５００μｇ／ｍｌアセトニトリル溶液に浸潤し乾燥させ、次いで前記薬包紙を粘着剤１の表面に貼付し、薬包紙を貼付した粘着剤１の表面に２，５−ジヒドロキシ安息香酸（東京化成工業株式会社製）３０ｍｇ／ｍＬ、０．１％トリフルオロ酢酸（和光純薬工業）の５０％メタノール（関東化学株式会社）水溶液を噴霧し、真空デシケーターで３０分間乾燥した。前記試料を飛行時間形質量分析計Ultraflextrerme（ブルカージャパン株式会社）にて薬包紙上をリフレクターモード、ｍ／ｚ範囲 １００〜１０００、１０００ｓｈｏｔｓ／ポイントで測定し、６測定ポイントのセレコキシブのプロトン付加イオンであるｍ／ｚ３８２のスペクトル強度を平均化してイオン強度、シグナルノイズ比を測定した。【００５３】
［実施例１］
マウス全身試料を凍結用の型に入れ、４質量％カルボキシメチルセルロース水溶液にて包埋し、ドライアイス・アセトンで凍結して、凍結包埋ブロックを作製した。凍結包埋ブロックを、−２０℃に設定したクライオミクロトーム（ライカマイクロシステムズ株式会社製）に固定した。ミクロトームにタングステンカーバイド製替刃を取り付けた。凍結包埋ブロックの表面を削り出した。導電性粘着フィルムとして、導電性シリコーン系両面粘着フィルム（金属箔基材の両面に、導電性フィラーとシリコーン系粘着性ポリマーとからなる第１及び第２の粘着剤が積層されてなる両面粘着フィルム、ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログ）を−２０℃に冷却し、片面（第１の粘着剤側）の剥離紙を剥がした。皺にならないように導電性粘着フィルムの第１の粘着剤を、削り出した凍結包埋ブロック表面に貼り付けた。この時、良好な粘着のために、冷却した小手等の密着用具で導電性粘着フィルムを凍結包埋ブロックに押し付けた。クライオミクロトームを薄切厚み２０μｍに設定し、導電性粘着フィルムを貼り付けたまま、凍結包埋ブロックからマウス全身切片を削り取った。導電性粘着フィルム上にマウス全身切片試料を保持したまま、冷凍庫内で乾燥をおこなった。マウス全身切片の露出面を上方に向け、適当な板に導電性粘着フィルムの第２の粘着剤側を、剥離紙付のまま固定し、デシケーターに入れ調温させ、イメージング用試料を得た。得られたイメージング用試料の画像を図５に示す。
こうして得たイメージング用試料から、導電性粘着フィルムの第２の粘着剤側の剥離紙を剥がし、導電性粘着フィルムの両端を伸張しながらプラスチック板（基板として）に貼り付けた。この時、プラスチック板上にマウス全身切片が保持されるように注意した。プラスチック板よりはみ出た導電性粘着フィルムを切断し、基板付イメージング用試料を得た。得られた基板としてのプラスチック板に貼り付けたイメージング用試料の画像を図６に示す。【００５４】
［比較例１］
ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログに代えて、マクセル株式会社 Cat.No.5815；2019年カタログを導電性粘着フィルムとして用いた以外、実施例１と同様に、イメージング用試料を作製した。【００５５】
［比較例２］
ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログに代えて、株式会社寺岡製作所 Cat.No.8315；2016年カタログを導電性粘着フィルムとして用いた以外、実施例１と同様に、イメージング用試料を作製した。【００５６】
［実施例２］
ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログに代えて、スリーエムジャパン株式会社 Cat No.1170；2017年カタログを導電性粘着フィルムとして用いた以外、実施例１と同様に、イメージング用試料を作製した。【００５７】
［実施例３］
ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログに代えて、スリーエムジャパン株式会社 Cat No.1181；2017年カタログを導電性粘着フィルムとして用いた以外、実施例１と同様に、イメージング用試料を作製した。【００５８】
［比較例３］
ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログに代えて、日新EM株式会社 Cat.No.7322；2016年カタログを導電性粘着フィルムとして用いた以外、実施例１と同様に、イメージング用試料を作製した。【００５９】
［比較例４］
ESD EMIエンジニアリング株式会社Cat.No.T-9426；2018年カタログに代えて、スリーエムジャパン株式会社 Cat No.810；2019年 https://www.scotch.jp/3M/ja_JP/scotch-brand-jp/ ホームページカタログを導電性粘着フィルムとして用いた以外、実施例１と同様に、イメージング用試料を作製した。【００６０】
上記実施例、比較例における、導電性粘着フィルムのガラス転移温度、イメージング用試料作製の際の薄切性を、以下の表１に示す。【００６１】
【表１】
0006876881.tif 000002
【００６２】
表１から、代表的な低温環境下である−２０℃において、−４０℃より高いガラス転移点をもつ導電性粘着フィルムでは、薄切性が「×」であり、薄切時に導電性粘着フィルムから切片が剥離したり、組織形態が維持されないことが分かった。よって、低温環境下の薄切には、導電性粘着フィルムのガラス転移点が重要であることが示され、−２０℃環境下では少なくともガラス転移点が−４０℃以下であることが必要である。【００６３】
上記実施例、比較例における、導電性粘着フィルムの電気抵抗値、イオン強度、シグナルノイズ比を、以下の表２に示す。【００６４】
【表２】
0006876881.tif 000003
【００６５】
表２から、質量分析には一般的にシグナルノイズ比が３以上必要であり、これを達成するためにはある程度のイオン強度（シグナル）が必要である。導電性粘着フィルムの電気抵抗値が２．０×１０7Ω未満であればイオン強度、シグナルノイズ比は良好であることが分かった。よって、良好なシグナルノイズ比を得るには電気抵抗値が重要であることが示され、少なくとも電気抵抗値が２．０×１０7Ω未満であることが必要である。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
本発明によれば、化学薬品により脱灰処理、固定処理等がされてない、硬組織、大きな生物試料（例えば、薄切面が４ｃｍ×５ｃｍの大きさの試料）等から、感度の維持、体内物質等の保持、組織形状の変化などの点で物理的破壊又は化学的な汚染の影響を排除した厚さ５μｍ〜３０μｍの凍結切片を、簡単かつ確実に作製し、これを質量分析計のためのイメージング用試料として用いることができる。また、本発明に係る生物試料薄切方法で作製した薄い凍結切片は、多くの生命科学の研究（例えば、組織学的研究、組織化学的研究、酵素組織化学的研究、免疫組織化学的研究、遺伝子組織化学的研究、水溶性物質の体内分布研究、微小領域の生化学的分析、薬物動態研究等）に利用することができる。
【符号の説明】
【００６７】
１０    導電性粘着フィルム
２０    イメージング用試料
１    第１の粘着剤
２    基材
３    第２の粘着剤
４    包埋生物試料
５    刃物
６    薄切試料
７    基板
【要約】
物理的又は化学的な影響を排除し、低温下でも硬組織や大きな生物組織の薄い凍結切片を粘着支持できる質量分析計のためのイメージング用生物組織薄切試料、及び該試料の製造方法を提供する。本発明は、生物組織が導電性粘着フィルム上に貼付されている生物組織薄切試料であって、該導電性粘着フィルムの生物組織に貼付される面における７５ｍｍ以上離れた２点間の電気抵抗値が１．０×１０-2Ω以上２．０×１０7Ω未満であり、かつ、該導電性粘着フィルムの粘着剤の、ＤＳＣ測定におけるガラス転移を示す温度範囲の中点の値が、−１５０℃以上−４０℃以下である、生物組織薄切試料、並びに該試料の製造方法に関する。【図１】
0006876881.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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