(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌とを含有する組成物であって、
前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、
前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、組成物。
【請求項２】
ラクチュロースとラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ガラクトオリゴ糖とラクチュロースの含有量の質量比が１：９〜９：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ガラクトオリゴ糖とラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
組成物に含有される前記ビフィドバクテリウム属細菌の総生菌数が、組成物に含有される前記オリゴ糖１ｇ当たり１×１０８〜１×１０１１ｃｆｕである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
栄養組成物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
調製乳である、請求項６に記載の組成物
【請求項８】
オリゴ糖を含有するビフィドバクテリウム属細菌増殖促進用組成物であって、
前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、
前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、組成物。
【請求項９】
ガラクトオリゴ糖とラクチュロースの含有量の質量比が１：９〜９：１である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ガラクトオリゴ糖とラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
ラクチュロースとラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
栄養組成物である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
調製乳である、請求項１２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳幼児の腸内細菌叢はビフィドバクテリウム属細菌（以下、ビフィズス菌とも記す）が最優勢であることが知られており、このことは乳児の健康の維持と密接に関わっていると考えられている。そのため、ビフィズス菌の増殖を促進する食品を開発することは、乳幼児の健康を維持する上で重要である。
【０００３】
近年、ビフィズス菌を増殖させるプレバイオティクスの研究が盛んにおこなわれており、特に糖源がビフィズス菌の増殖に重要であるとされ、各種オリゴ糖が活発に利用されている。また、各種オリゴ糖を組み合わせてプレバイオティクスとして利用することも提案されている。
特許文献１には、ラクチュロ−ス、フラクトオリゴ糖及びガラクトオリゴ糖から選択されるオリゴ糖と、ラフィノ−スとを組み合わせてビフィズス菌を単独培養すると、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティスに対してそれぞれ増殖効果が認められたことが記載されている。
非特許文献１には、ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖の組み合わせが、ビフィドバクテリウム・ブレーベとビフィドバクテリウム属細菌の細胞数を有意に増加させたことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−１７５８６７号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】T. Ehara et al., British Journal of Nutrition (2016), 116, 270-278
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
プレバイオティクスの摂取を有効に活用するためには、当該プレバイオティクスが腸内細菌に資化され該腸内細菌が増殖することが必要である。しかしながら、ビフィドバクテリウム属細菌には多くの種が含まれ、腸内菌叢におけるその構成は個体により様々である。また、プレバイオティクスによって、増殖を促進しやすいビフィドバクテリウム属細菌の種はさまざまである。そのため、プレバイオティクスを摂取しても、個体によっては該プレバイオティクスを資化することができるビフィドバクテリウム属細菌を腸内に有していない、すなわち該プレバイオティクスの「レスポンダー」ではない（＝ノンレスポンダー）ことがあり、プレバイオティクスの効果が十分に得られない場合がある。
本発明は、腸内菌叢においてビフィドバクテリウム属細菌の主要な複数種の増殖をより促進する技術を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを組み合わせることにより、ビフィドバクテリウム属細菌の主要な４種ともをまんべんなく増殖させられることを見出し、かかる組成物がノンレ
スポンダーを生じにくいプレバイオティクスとなり得ることに想到して、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明の第一の態様は、オリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌とを含有する組成物であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、組成物である。
本態様において、ラクチュロースとラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１であることが好ましい。
本態様において、ガラクトオリゴ糖とラクチュロースの含有量の質量比が１：９〜９：１であることが好ましい。
本態様において、ガラクトオリゴ糖とラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１であることが好ましい。
本態様において組成物に含有される前記ビフィドバクテリウム属細菌の総生菌数が、組成物に含有される前記オリゴ糖１ｇ当たり１×１０８〜１×１０１１ｃｆｕであることが好ましい。
本態様の組成物は、栄養組成物であることが好ましく、調製乳であることがより好ましい。
【０００９】
本発明の第二の態様は、オリゴ糖を含有するビフィドバクテリウム属細菌増殖促進用組成物であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、組成物である。
本態様において、ラクチュロースとラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１であることが好ましい。
本態様において、ガラクトオリゴ糖とラクチュロースの含有量の質量比が１：９〜９：１であることが好ましい。
本態様において、ガラクトオリゴ糖とラフィノースの含有量の質量比が１：９〜９：１であることが好ましい。
本態様の組成物は、栄養組成物であることが好ましく、調製乳であることがより好ましい。
本態様の組成物は、乳幼児用調製乳であることが好ましい。
【００１０】
本発明の第三の態様は、オリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌とを含有する組成物であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、ラフィノース、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、乳果オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ヒトミルクオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸、ポリデキストロース、イヌリンからなる群から選択される三種以上を含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、組成物である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、ビフィズス菌の主要な４種ともを腸内でまんべんなく増殖促進させることができる組成物が提供される。本発明の組成物は、その摂取によりビフィドバクテリウム属細菌の増殖効果が得られにくい「ノンレスポンダー」を生じにくい、優れたプレバイオティクスとなり得る。
かかる組成物は、飲食品や医薬品等の経口組成物の態様としたり、添加物等の態様で飲食品や医薬品に含有させたりすることができる。本発明の組成物を摂取することにより、
腸内細菌叢の改善効果が得られ、摂食者、特に乳幼児の健康維持に役立つことが期待される。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
次に、本発明を詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。
【００１３】
本発明の組成物は、オリゴ糖を含有し、前記オリゴ糖はガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを必須に含む。
本発明の組成物において、オリゴ糖の総含有量は、組成物全体（固形分当たり）に対して好ましくは０．１〜２０質量％、より好ましくは０．５〜１０質量％、さらに好ましくは１〜５質量％である。また、本発明の組成物が含有するオリゴ糖全体の、好ましくは２０質量％以上、より好ましくは５０質量％以上、さらに好ましくは８０質量％以上が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースである。
【００１４】
ラクチュロースは、フルクトースとガラクトースからなる二糖（４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｄ−フルクトース、Gal β1→4 Fru）である。ラクチュロースは、公知の方法、例えば、特開平３−１６９８８８号公報及び特開平６−２２８１７９号公報に記載の方法により、製造することができる。また、ラクチュロースは、市販品（例えば、森永乳業社製等）を使用することもできる。
本発明の組成物において、ラクチュロースの含有量は、組成物全体（固形分当たり）に対して好ましくは０．０２〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜５質量％、さらに好ましくは０．１〜２質量％である。
【００１５】
ラフィノースは、フルクトース、ガラクトース、及びグルコースが１つずつ結合した三糖（β−Ｄ−フルクトフラノシル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−６）−α−Ｄ−グルコピラノシド、Gal α1→6 Glc α1→2β Fru）である。ラフィノースは、公知の方
法、例えば、「食品新素材有効利用技術シリーズＮｏ．６、「ラフィノース」、第２ページ、社団法人菓子総合技術センター、１９９６年」に記載の方法により、製造することができる。また、ラフィノースは、市販品（例えば、日本甜菜製糖社製等）を使用することもできる。
本発明の組成物において、ラフィノースの含有量は、組成物全体（固形分当たり）に対して好ましくは０．０２〜１０質量％、より好ましくは０．１〜５質量％、さらに好ましくは０．２〜２質量％である。
【００１６】
ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）は、Gal-(Gal)n-Glc（ｎは１〜３，β１→４結合またはβ１→６結合）で表される構造を持つオリゴ糖又はその混合物である。ガラクトオリゴ糖は、工業的には乳糖を原料としてβ−ガラクトシダーゼによる転移反応により製造され、主成分は乳糖の非還元末端にガラクトースが１つ結合した３糖の４'−ガラクトシルラクト
ース（4'-GL）である。ガラクトオリゴ糖は、市販品（例えば、ヤクルト薬品工業社製等
）を使用することもできる。ガラクトオリゴ糖は、一種でもよく、二種以上の混合物であってもよい。
本発明の組成物において、ガラクトオリゴ糖の含有量は、組成物全体（固形分当たり）に対して好ましくは０．０２〜１０質量％、より好ましくは０．１〜５質量％、さらに好ましくは０．２〜２質量％である。
【００１７】
本発明の組成物は、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含む限りにおいて、他のオリゴ糖の一種又は二種以上を含有してもよい。他のオリゴ糖としては、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、乳果オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ヒトミルクオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸、ポリデキストロース、
イヌリン等が挙げられる。
【００１８】
本発明の組成物において、ラクチュロースとラフィノースの含有量の質量比は、好ましくは１：９〜９：１、より好ましくは２：８〜８：２、さらに好ましくは３：７〜７：３である。
本発明の組成物において、ガラクトオリゴ糖とラクチュロースの含有量の質量比は、好ましくは１：９〜９：１、より好ましくは２：８〜８：２、さらに好ましくは３：７〜７：３である。
本発明の組成物において、ガラクトオリゴ糖とラフィノースの含有量の質量比は、好ましくは１：９〜９：１、より好ましくは２：８〜８：２、さらに好ましくは３：７〜７：３である。
【００１９】
本発明の組成物は、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の増殖を促進さ
せることができる。
本発明の組成物により増殖が促進されるビフィドバクテリウム属細菌は、少なくともビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファン
ティスに再分類されている）、及びビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）を含む。これらのビフィズス菌は乳幼児期の腸内菌叢の健康に特に重要な四
種（以降、「乳児型ビフィズス菌」とも記す）であり、本発明の組成物はこれらの増殖をまんべんなく促すことができる。
また、上記四種の増殖が促進される限りにおいて、他のビフィドバクテリウム属細菌の増殖も促進されてもよい。他のビフィドバクテリウム属細菌としては、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）ビフィドバクテリウム・カテヌラータム（Bifidobacterium catenulatum）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌ
ラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス
（Bifidobacterium animalis）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Bifidobacterium lactis）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム（Bifidobacterium pseudolongum）等が挙げられる。
【００２０】
本明細書において細菌の「増殖」は細菌の絶対数の増加を含み、「増殖の促進」は本発明の組成物を適用した場合に適用しない場合に比べて係る増加の程度が大きいことをいう。すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで本発明の組成物を適用した場合のビフィドバクテリウム属細菌の菌数が、適用しない場合に比べて増加する効果が得られる。かかる菌数の増加の程度は、特に限定されないが、本発明の組成物を適用しない場合の当該細菌の菌数に対して、好ましくは１．１倍以上、より好ましくは１．５倍以上、さらに好ましくは３倍以上の菌数となることをいう。
かかる菌数の増加は、菌数を直接的に計測する他、例えば、細菌を培養した培地や組成物を摂取したヒト等の動物の消化管内容物の濁度（吸光度）又は酢酸等の短鎖脂肪酸量を測定してその値が上昇すること、前記培地におけるｐＨを測定してその値が低下すること、等により確認することができる。
【００２１】
また、「増殖」は、腸内細菌叢における当該細菌の存在割合の増加を含み、「増殖の促進」は本発明の組成物を適用した場合に適用しない場合に比べて係る増加の程度が大きいことをいう。すなわち、本発明の組成物を摂取したヒト等の動物の消化管内に存在するビフィドバクテリウム属細菌の存在割合を増加させることを含む。ここで「存在割合」は、腸内細菌叢において検出された菌群全体に対する「占有率」とも言い換えることができる。「存在割合の増加」は、ビフィドバクテリウム属細菌の腸内細菌叢における存在割合が増加する限りにおいて、他の細菌の腸内細菌叢における存在割合が増加又は減少すること
が同時に生じてもよい。
かかる存在割合の増加の程度は、特に限定されないが、本発明の組成物を適用しない場合の当該細菌の存在割合に対して、好ましくは２％以上、より好ましくは５％以上、さらに好ましくは２０％以上大きいことをいう。
【００２２】
また、「増殖の促進」は、細菌の絶対数が増加する速度、又は腸内細菌叢における当該細菌の存在割合が増加する速度が増大することであってもよい。かかる速度の増大の程度は、特に限定されないが、本発明の組成物を適用しない場合の当該細菌の速度に対して、好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上、さらに好ましくは５０％以上大きいことをいう。
速度の増大は、例えば、任意の菌数又は存在割合に達するのに要する時間が、本発明の組成物を適用した場合に適用しない場合に比べて短くなること等により確認することができる。
【００２３】
本発明の組成物は、それ自体を飲食品や医薬品等の形態としてもよいし、添加物として飲食品や医薬品等に含有させる形態としてもよい。
本発明の組成物の摂取（投与）経路は、経口又は非経口のいずれでもよいが、通常は経口である。また、非経口摂取（投与）としては、直腸投与等が挙げられる。
【００２４】
前述の通り、本発明の組成物はビフィドバクテリウム属細菌の増殖を促進させることができるため、前記オリゴ糖と共にビフィドバクテリウム属細菌を組成物に含有させることが好ましい。すなわち、オリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌とを含有する、本発明の第一の態様の組成物である。
ここで、本発明の第一の態様の組成物に含有させるビフィドバクテリウム属細菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む。
【００２５】
ビフィドバクテリウム・ロンガムとしては、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＩＴＥ
ＢＰ−０２６２１（別名：ＢＢ５３６又はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｌｏｎｇｕｍ ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９）を用いることができる。ビフ
ィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６は、ＮＰＭＤに、２０１８年１月２６日にＮＩＴＥ ＢＰ−０２６２１の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたもので
ある。これと同一の細菌であるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｌｏｎｇｕｍ ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９（番号：ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９）は、Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ：米国、２
０１１０、ヴァージニア州、マナサス、ユニバーシティ ブルバード１０８０１（１０８
０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ， Ｍａｎａｓｓａｓ， ＶＡ ２０１１
０，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ））から、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９として入手可能である（例えば、特開２０１２−２２３１３４号公報等参照）。
また、ビフィドバクテリウム・ロンガムとしては、ＡＴＣＣから入手可能である、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＡＴＣＣ １５７０７を用い
ることができる。
【００２６】
ビフィドバクテリウム・ブレーベとしては、ビフィドバクテリウム・ブレーベ Ｍ−１
６Ｖが挙げられる。ビフィドバクテリウム・ブレーベ Ｍ−１６Ｖは、２０１８年１月２
６日付で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２６２２で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。市販品と
して入手可能な、例えば、森永乳業社製の「ビフィドバクテリウム・ブレーベ Ｍ−１６
Ｖ」を用いてもよい。
また、ビフィドバクテリウム・ブレーベとしては、ビフィドバクテリウム・ブレーベ 
ＭＣＣ１２７４も挙げられる。ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＭＣＣ１２７４は、２
００９年８月２５日付で、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（現・独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター（ＩＰＯＤ）（〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２０号室）に、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−
１１１７５で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。
【００２７】
ビフィドバクテリウム・インファンティスとしては、ビフィドバクテリウム・インファンティス Ｍ−６３も挙げられる。ビフィドバクテリウム・インファンティス Ｍ−６３は、２０１８年１月２６日付で、ＮＰＭＤに、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２６２３で、ブ
ダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・インファンティスとしては、ＡＴＣＣから入手可能である、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスＡＴＣＣ 
１５６９７を用いることができる。
【００２８】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１０９２が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１０９２は、２０１７年２月２１日付でＮＰＭＤに、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４２９で、ブダペスト条
約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１３１９が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１３１９は、２０１７年２月２１日付でＮＰＭＤに、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４３１で、ブダペ
スト条約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１８６８が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１８６８は、２０１７年２月２１日付でＮＰＭＤに、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４３２で、ブダペ
スト条約に基づく国際寄託がなされている。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１８７０が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＣＣ１８７０は、２０１７年２月２１日付でＮＰＭＤに、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４３３で、ブダペ
スト条約に基づく国際寄託がなされている。
【００２９】
また、本発明の第一の態様の組成物は、上記四種のビフィドバクテリウム属細菌を含有する限りにおいて、他のビフィドバクテリウム属細菌も含有してもよい。他のビフィドバクテリウム属細菌としては、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム等が挙げられる。
【００３０】
なお、上記例示した細菌名で特定される細菌には、当該細菌名で所定の機関に寄託や登録がなされている株そのもの（以下、説明の便宜上、「寄託株」ともいう）に限られず、それと実質的に同等な株（「派生株」または「誘導株」ともいう）も包含される。すなわち、上記受託番号で上記寄託機関に寄託されている株そのものに限られず、それと実質的に同等な株も包含される。各細菌について、「上記寄託株と実質的に同等の株」とは、上記寄託株と同一の種に属し、腸内細菌叢改善効果が得られ、さらにその１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して、好ましくは９９．８６％以上、より好ましくは９９．９３％以上、さらに好ましくは１００％の同一性を有し、かつ、好ましくは上記寄託株と同一の菌学的性質を有する株をいう。各細菌について、上記寄託株と実質的に同等の株は、例えば、当該寄託株を親株とする派生株であってよい。派生株としては、寄託株から育種された株や寄託株から自然に生じた株が挙げ
られる。育種方法としては、遺伝子工学的手法による改変や、突然変異処理による改変が挙げられる。突然変異処理としては、Ｘ線の照射、紫外線の照射、ならびにＮ−メチル−Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルフォネート、およびメチルメ
タンスルフォネート等の変異剤による処理が挙げられる。寄託株から自然に生じた株としては、寄託株の使用の際に自然に生じた株が挙げられる。そのような株としては、寄託株の培養（例えば継代培養）により自然に生じた変異株が挙げられる。派生株は、一種の改変により構築されてもよく、二種またはそれ以上の改変により構築されてもよい。
【００３１】
本発明の第一の態様の組成物に含有させるビフィドバクテリウム属細菌の菌体としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。
また、本態様の組成物に含有させるビフィドバクテリウム属細菌の菌体は、前述のビフィドバクテリウム属細菌を培養することにより容易に取得することができる。培養方法は、ビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り、特に制限されない。培養方法としては、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を、そのまま、あるいは適宜修正して、用いることができる。培養温度は、例えば、２５〜５０℃であってよく、３５〜４２℃であることが好ましい。培養は、好ましくは嫌気条件下で実施することができ、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら実施することができる。また、培養は、液体静置培養等の微好気条件下で実施することもできる。培養は、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌が所望の程度に増殖するまで実施することができる。
【００３２】
培養に用いる培地は、ビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り、特に制限されない。培地としては、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる培地を、そのまま、あるいは適宜修正して、用いることができる。すなわち、炭素源としては、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて用いることができる。窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩類や硝酸塩類を用いることができる。また、無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、ペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。また、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる培地として、具体的には、強化クロストリジア培地（Reinforced Clostridial medium）、ＭＲＳ培地（de Man, Rogosa, and Sharpe medium）、ｍＭＲＳ培地（modified MRS medium）、ＴＯＳＰ培地（TOS propionate medium）、ＴＯＳＰ Ｍｕｐ
培地（TOS propionate mupirocin medium）が挙げられる。
【００３３】
本態様の組成物に含有し得るビフィドバクテリウム属細菌としては、その菌体又はそれを含有する画分を、特に制限されず用いることができる。すなわち、ビフィドバクテリウム属細菌としては、例えば、培養により得られた培養物をそのまま用いてもよく、培養物を希釈又は濃縮して用いてもよく、培養物から回収した菌体を用いてもよい。また、腸内細菌叢改善効果を損なわない限り、加熱や凍結乾燥等の種々の追加操作を培養後に行うことができる。追加操作は、菌体の生残性が高いものであるのが好ましい。すなわち、本態様の組成物に含有し得るビフィドバクテリウム属細菌として、具体的には、ビフィドバクテリウム属細菌の培養物、又は前記培養物から回収した菌体、それらの処理物が挙げられ、前記処理物としては希釈物、濃縮物、又は乾燥物等が挙げられる。なお、菌体は、通常は生菌体を含有する形態で使用されるのが好ましい。菌体は、例えば、生菌体からなるものであってもよく、生菌体と死菌体の混合物であってもよい。
【００３４】
本態様において、組成物に含有されるビフィドバクテリウム属細菌としては少なくとも生菌を含んでおり、組成物中に、総量で、好ましくは１×１０４〜１×１０１３ｃｆｕ／
ｇまたは１×１０４〜１×１０１３ｃｆｕ／ｍＬ、より好ましくは１×１０５〜１×１０１２ｃｆｕ／ｇまたは１×１０５〜１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬ、さらに好ましくは１×１０６〜１×１０１１ｃｆｕ／ｇまたは１×１０６〜１×１０１１ｃｆｕ／ｍＬのビフィドバクテリウム属細菌の生菌を含有する。
また、本態様において、組成物に含有されるビフィドバクテリウム属細菌の総生菌数は、組成物に含有されるオリゴ糖１ｇ当たり、好ましくは１×１０８〜１×１０１１ｃｆｕ、より好ましくは１×１０８〜１×１０１０ｃｆｕ、さらに好ましくは１×１０８〜３×１０９ｃｆｕである。
なお、生菌を含有する限りにおいて、死菌も含まれていても構わない。
ここで、ｃｆｕはコロニー形成単位（Ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ）を指す。本明細書においては、例えば、還元脱脂粉乳１０質量％を含む固体培地にて３８℃で培養したときの値とすることができる。
これらの範囲は、通常、組成物として流通するときの含有量であっても、経口摂取するときの含有量であってもよい。
【００３５】
前述の通り、本発明の組成物は乳児型ビフィズス菌を含むビフィドバクテリウム属細菌の増殖を促進させることができるため、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進の用途に好ましく適用できる。すなわち、本発明の第二の態様である、オリゴ糖を含有するビフィドバクテリウム属細菌増殖用組成物である。
【００３６】
ここで、増殖対象のビフィドバクテリウム属細菌は、本発明の第一の態様の如く組成物に含有されるビフィドバクテリウム属細菌に限らず、経口摂取したヒト等の動物の消化管内に存在するビフィドバクテリウム属細菌も含まれる。また、本発明の第二の態様の組成物は、乳児型ビフィズス菌四種ともを増殖させるために用いられる。
そのため、本発明の第二の態様の組成物は、腸内細菌叢を改善させるために用いることができる。ここで、「菌叢改善」とは、ビフィドバクテリウム属細菌、特に乳児型ビフィズス菌の腸内細菌叢に存在する細菌数やその存在割合を増加させることを含む。また、「菌叢改善」は、ビフィドバクテリウム属細菌の腸内細菌叢における存在割合が増加する限りにおいて、他の善玉菌の腸内細菌叢における存在割合を増加させることや、悪玉菌の腸内細菌叢における存在割合を減少させることを含んでもよい。他の善玉菌としては乳酸菌等が挙げられる。悪玉菌としては、ウェルシュ菌、サルモネラ属細菌、黄色ブドウ球菌、病原性大腸菌等が挙げられる。
前記「存在割合」は、腸内細菌叢において検出された菌群全体に対する「占有率」とも言い換えることができる。
【００３７】
本発明の組成物は、腸内菌叢が改善することにより予防又は改善しうる疾患や病態の対象者、あるいは腸内菌叢が悪化することに起因する疾患や病態の対象者に対して、有用となり得る。例えば、整腸用、免疫調節用、抗アレルギー用、細菌・ウイルス感染防御用、酸化ストレス低減用、下痢の予防・改善用、便秘の予防・改善用、炎症性腸疾患用、大腸がんの予防用等とすることができる。
【００３８】
本発明の第二の態様は、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進用組成物の製造における、オリゴ糖の使用であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、使用と言い換えることができる。
本発明の第二の態様は、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖促進における、オリゴ糖の使用であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバ
クテリウム・ビフィダムを含む、使用とも言い換えることができる。
本発明の第二の態様は、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖を促進させるために用いられるオリゴ糖であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、オリゴ糖、とも言い換えることができる。
【００３９】
本発明の第二の態様は、オリゴ糖を対象に投与することを含む、ビフィドバクテリウム属細菌の増殖を促進させる方法であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含み、前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む、方法、とも言い換えることができる。
ここで、対象は、動物であれば特に限定されないが、通常はヒトである。なお、「オリゴ糖を対象に投与すること」は、「オリゴ糖を対象に摂取させること」と同義であってよい。摂取は、自発的なもの（自由摂取）であってもよく、強制的なもの（強制摂取）であってもよい。すなわち、投与工程は、具体的には、例えば、オリゴ糖を飲食品や飼料に配合して対象に供給し、以て対象にオリゴ糖を自由摂取させる工程であってもよい。
【００４０】
本発明の組成物の摂取（投与）時期は、特に限定されず、投与対象の状態に応じて適宜選択することが可能である。
【００４１】
本発明の組成物の摂取（投与）量は、摂取（投与）対象の年齢、性別、状態、その他の条件等により適宜選択される。
なお、摂取（投与）の量や期間にかかわらず、薬剤は１日１回又は複数回に分けて投与することができる。
【００４２】
本発明は、第三の態様として、オリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌とを含有する組成物であって、前記オリゴ糖が、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、ラフィノース、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、乳果オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ヒトミルクオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸、ポリデキストロース、イヌリンからなる群から選択される三種以上を含むものをも提供する。三種以上のオリゴ糖は任意の組み合わせでよいが、好ましくはガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースから選択される一種又は二種以上を含む。
なお、ここでビフィドバクテリウム属細菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含み、本発明の第一の態様における説明に準ずる。
【００４３】
本発明の組成物は、飲食品の態様とすることが好ましい。
飲食品としては、本発明の効果を損なわないものであれば形態や性状は特に制限されず、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。
なお、飲食品や医薬品に添加する添加物の態様も本発明の組成物に含まれる。かかる態様としては、例えば、搾乳された母乳や調製乳に添加する添加物が挙げられ、添加後の乳を新生児や乳児に摂取させることが想定される。
飲食品は、通常は経口摂取されるものであるが、これに限られず、例えば経鼻摂取されるもの、胃瘻や腸瘻により摂取されるものでもよい。例えば、新生児や乳児に対し、後述の本発明の組成物である調製乳や、本発明の組成物を添加した母乳を、経鼻胃栄養チューブ等によって摂取させることが想定される。
【００４４】
飲食品としては、液状、ペースト状、ゲル状固体、粉末等の形態を問わず、例えば、錠
菓；パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品；即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等の即席食品類；農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等の農産加工品；水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等の水産加工品；畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品；加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、クリーム、その他の乳製品等の乳・乳製品；バター、マーガリン類、植物油等の油脂類；しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等の基礎調味料；調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等の複合調味料・食品類；素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等の冷凍食品；キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、ゼリー、その他の菓子などの菓子類；炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等の嗜好飲料類、ベビーフード、ふりかけ、お茶漬けのり等のその他の市販食品等；調製乳（粉乳、液状乳等を含む）、流動食、サプリメント等の栄養組成物；機能性食品（特定保健用食品、栄養機能食品）等が挙げられる。
【００４５】
これらのうち、栄養組成物が好ましく挙げられる。
本発明において、「栄養組成物」は、飲食品の一態様として特に限定されないが、好ましくは調製乳、流動食等であり、より好ましくは調製乳である。摂取対象は、乳児、幼児、小児、成人を問わないが、好ましくは乳児及び幼児である。
調製乳には、調製粉乳、調製液状乳が含まれる。
調製粉乳は、乳および乳製品の成分規格等に関する省令（乳等省令）において、「生乳、牛乳、特別牛乳、またはこれらを原料として製造した食品を加工し、または主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え粉末状にしたもの」として定義される。
調製液状乳は、前記省令において、「生乳、牛乳、特別牛乳、またはこれらを原料として製造した食品を加工し、または主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え液状にしたもの」として定義される。
また、調製乳は、各種の蛋白質、油脂、炭水化物、ミネラル類、ビタミン類等の栄養成分が配合されたものであって、粉末状又は液状に加工されたものも含まれる。
また、調製乳にはさらに、健康増進法で規定される特別用途食品における「乳児用調製粉乳」、「乳児用調製液状乳」「妊産婦、授乳婦用粉乳」が含まれ、幼児向け調製粉乳、成人用栄養粉末、高齢者用栄養粉末等の態様も含まれる。
【００４６】
本発明の組成物をサプリメントの形態とする場合は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤；等に製剤化することができる。かかる製剤化に際しては、後述する医薬品の製剤化に係る成分、担体、及び方法の説明に準ずることができる。
【００４７】
また、飲食品の一態様として飼料とすることもできる。飼料としては、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
飼料の形態としては特に制限されず、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類；大豆油粕、ナタネ油粕、ヤシ油粕、アマニ油粕等の植物性油粕類；フスマ、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；魚粉、脱脂粉乳、ホエイ、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類；トルラ酵母、ビール酵母等の酵母類；第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油
脂類；単体アミノ酸；糖類等を含有するものであってよい。
【００４８】
本発明の組成物が飲食品（飼料を含む）の態様である場合、腸内でビフィズス菌を増殖させるという用途が表示された飲食品として提供・販売されることが可能である。
【００４９】
かかる「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００５０】
一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００５１】
また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、若しくは機能性表示食品に係る制度、又はこれらに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。具体的には、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示、科学的根拠に基づいた機能性の表示等を挙げることができ、より具体的には、健康増進法に規定する特別用途表示の許可等に関する内閣府令（平成二十一年八月三十一日内閣府令第五十七号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
かかる表示としては、例えば、「ビフィズス菌を増やしたい方」、「赤ちゃんの健康に役立つビフィズス菌を増やすために」「腸内フローラを改善する」、「乳幼児のおなかの健康のために」等と表示することが挙げられる。
【００５２】
本発明の組成物が、医薬品の形態である場合、その投与経路は、経口又は非経口のいずれでもよいが経口が好ましい。また、非経口摂取（投与）としては、直腸投与等が挙げられる。
医薬品の形態としては、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合、座剤、軟膏剤、注射剤等に製剤化することができる。
製剤化に際しては、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。また、他の薬効成分や、公知の又は将来的に見出されるビフィドバクテリウム属細菌に対するプレバイオティクスや、他の細菌に対するプレバイオティクスなどを併用することも可能である。
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
【００５３】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシ
メチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００５４】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００５５】
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００５６】
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００５７】
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
【００５８】
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤等が挙げられる。
【００５９】
本発明の医薬品を摂取するタイミングは、例えば食前、食後、食間、就寝前など特に限定されない。
【実施例】
【００６０】
以下に実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００６１】
＜試験例１＞便培養による、各種オリゴ糖の乳児型ビフィズス菌増殖促進作用の評価
（１）検体の前処理
１〜１２ヶ月齢の健康な乳児７名（それぞれａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ，ｆ，ｇとした）から、便サンプルを入手した。排便後直ちに採取し、直ちに１０℃以下、嫌気条件下に移行させた。排便後８時間以内に、採取した便を１０倍量の生理食塩水で希釈し、使用するまで−８０℃にて保管した。
【００６２】
（２）培養試験
大腸内の環境を模すために、以下の手順で培養実験を行った。Ｂｉｏ Ｊｒ．８ １００ｍＬ×８連培養装置（株式会社バイオット社製ＢＪＲ−２５ＮＡ１Ｓ−８Ｍ）を用い、操作は機器の説明書に従った。培地は、表１に示す組成のＹＣＦＡ培地１００ｍＬを用いた。なお、該培地中のオリゴ糖の総濃度は１質量％とした。オリゴ糖以外の培地成分は精製水に溶解してオートクレーブで滅菌し、オリゴ糖は精製水に溶解した後ろ過滅菌したものを、前記オートクレーブ後のものに添加した。培養温度は３７℃とし、各培養容器にろ過滅菌したＣＯ２を吹き込み、培養期間中の嫌気状態を維持した。ｐＨを７．０に調整した
後、生理食塩水で希釈した便サンプルを１００μＬ（便として１０ｍｇ）添加し、嫌気培養を開始した。乳児の大腸内ｐＨを模すために、培養期間中にｐＨが５．５を下回った際は１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３で中和し、ｐＨのコントロールを行った。培養開始から２４時間後
に培地を回収し、８０００ｒｍｐ、３ｍｉｎ、４℃で遠心し、上清と沈殿物をそれぞれ回収した。
【００６３】
【表１】
0006978621.tif 000002
【００６４】
（３）ＤＮＡ抽出
GENE PREP STAR PI-480自動抽出機（Kurabo Industries Ltd  Ｊａｐａｎ）を用いて、（２）で回収した沈殿物からＤＮＡを抽出した。抽出したＤＮＡを鋳型として、Applied Bio systems 7500 Fast & 7500リアルタイムPCRシステム（サーモフィッシャー製）を用
いて、ビフィドバクテリウム属細菌及びビフィドバクテリウム属各種（ビフィドバクテリ
ウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダム）の菌数を定量ＰＣＲにより測定した。プライマー及びＰＣＲ条件を表２に示す。
【００６５】
【表２】
0006978621.tif 000003
【００６６】
（４）結果
表３〜７に、定量ＰＣＲにより測定した、２４時間培養後のビフィドバクテリウム属及びビフィドバクテリウム属各種の増殖度合を示す。増殖度合は、培養前の菌数を１とした場合の増加倍率を対数で表した値である。被験乳児の保有していたビフィドバクテリウム属細菌の種及び数は、これまでの報告と一致して１〜４種まであり、また組み合わせも各個人で多様であった。ビフィドバクテリウム属及び各ビフィドバクテリウム種に対して増殖促進効果を分散分析・共分散分析（統計解析ソフトJMPの「モデルにあてはめ」メニュ
ー）により解析し、各群（実施例／比較例）について増殖効果が高い順に順位付けし、上位の群を表の上段に配した。また、各検体について増殖効果が高い順に順位付けし、上位の検体を表の左列に配した。つまり、統計処理により各群及び各検体について総合的な評価で順位付けを行い、左上から右下の順にと増殖効果が弱くなるように並べた。
【００６７】
ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースの組み合わせを含む実施例１では、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムの四種の乳児型ビフィズス菌全てに対して、各種オリゴ糖の種々の組み合わせの中で増殖促進効果が１位又は２位の成績であった。このことからガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを組み合わせることにより、全被験乳児の乳児型ビフィズス菌全ての増殖をまんべんなく促進させる効果が得られることが明らかとなった。すなわち、ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースの組み合わせは、ノンレスポンダーを生じにくい優れたプレバイオティクスとなり得る。
【００６８】
【表３】
0006978621.tif 000004
【００６９】
【表４】
0006978621.tif 000005
【００７０】
【表５】
0006978621.tif 000006
【００７１】
【表６】
0006978621.tif 000007
【００７２】
【表７】
0006978621.tif 000008
【要約】
【課題】腸内菌叢においてビフィドバクテリウム属細菌の主要な複数種の増殖をより促進する技術を提供することを課題とする。
【解決手段】ガラクトオリゴ糖、ラクチュロース、及びラフィノースを含むオリゴ糖を、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、及びビフィドバクテリウム・ビフィダムを含むビフィドバクテリウム属細菌のためのプレバイオティクスとする。前記オリゴ糖と前記ビフィドバクテリウム属細菌とを含む組成物が提供される。また、前記オリゴ糖を含有するビフィドバクテリウム属細菌増殖促進用組成物が提供される。
【選択図】なし【配列表】
0006978621000001.app