(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
チョウマメの水抽出物を含む、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現を増加させるための、皮膚適用用組成物であって、前記皮膚適用用組成物が、創傷治癒用である、組成物。
【請求項２】
線維芽細胞の増殖促進、或いは表皮細胞の遊走及び増殖による創傷治癒用である、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現を増加させるための皮膚適用用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、最表層から表皮、真皮及び皮下組織により構成される。表皮は、外的環境から身体を保護し、その健全な状態を確保する役割を担っている。表皮は、また、微生物や化学物質の侵入を抑制し、且つ水分の蒸発を防ぐことで皮膚の乾燥を防止する役割も果たす。
【０００３】
真皮は、線維芽細胞、組織球・マクロファージ、肥満細胞、及び形質細胞から構成される。線維芽細胞は、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などを産生する細胞であり、コラーゲンを繊維束として真皮構造を形成する役割を担っている。線維芽細胞は、また、皮膚組織に損傷が加わると損傷部に遊走し、コラーゲンなどの細胞外マトリックスの産生を開始する役割を担っている。これらの役割により、線維芽細胞は、創傷治癒の過程において重要な役割を担っている。
【０００４】
線維芽細胞は、さらに、紫外線、乾燥、ストレス、及び老化などの影響によって増殖能が低下する。このため、線維芽細胞の増殖能に影響があると、皮膚の弾力低下など肌の老化の原因となり、又は創傷治癒の速度が遅くなり得る。
【０００５】
線維芽細胞の増殖を活性化させるための研究が報告されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１３−１９４００８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本開示は、新規な皮膚適用用の新規組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示は、以下の発明を提供する：
［項１］
チョウマメの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物、及びニオイタコノキの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物のいずれか一方又は両方を含む、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現を増加させるための、皮膚適用用組成物。
［項２］
肌の老化防止用、創傷治癒用、又は発毛促進用である、項１に記載の組成物。
［項３］
表皮幹細胞から表皮角化細胞への分化促進、或いは表皮幹細胞及び／又は表皮角化細胞の増殖促進による肌の老化防止用；線維芽細胞の増殖促進による創傷治癒用；又は毛包幹細胞から毛乳頭細胞への分化促進、或いは毛包幹細胞及び／又は毛乳頭細胞の増殖促進による発毛促進用である、項２に記載の組成物。
［項４］
チョウマメの水抽出物を含む、項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
［項５］
ニオイタコノキの水抽出物を含む、項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
［項６］
前記チョウマメの１０％未満のアルコール抽出物が、チョウマメの１０％未満のエタノール抽出物であり、及びニオイタコノキの１０％未満のアルコール抽出物が、ニオイタコノキの１０％未満のエタノール抽出物である、項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】水抽出物によるＣＣＮ１の発現比を示す棒グラフ。
【図２】７０％エタノール抽出物によるＣＣＮ１の発現比を示す棒グラフ。
【図３】水抽出物によるＣＣＮ２の発現比を示す棒グラフ。
【図４】７０％エタノール抽出物によるＣＣＮ２の発現比を示す棒グラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
「チョウマメ（Clitoria ternatea L.）」は、チョウマメ属（Clitoria）のチョウマメ属（C. ternatea）に属するマメ科の植物である。チョウマメは、例えば、公知の方法により栽培及び採取でき、又は商業的に入手可能である。１つの実施形態において、チョウマメは、花、葉、茎、及び根からなる群から選択される少なくとも１つの部位であってよく、好ましくは花、及び葉のいずれか一方又は両方であり、より好ましくは花である。チョウマメの重量は、乾燥形態の重量である。
【００１１】
チョウマメの水抽出物は、例えば、チョウマメの粉砕物と水とを混合し、得られた混合液から遠心分離又は濾過などの分離方法によって固形物を分離及び除去することによって得ることができる。１つの実施形態において、チョウマメ（好ましくは花の乾燥物）の水抽出物は、チョウマメの粉砕物と、前記粉砕物の１０倍重量の水とを混合し、得られた混合液を室温で２０分間放置した後、遠心分離又は濾過などの分離方法によって前記混合液から固形物を分離及び除去することによって得ることができる。チョウマメの水抽出物は、液体又は固体であってよい。チョウマメの水抽出物（固体）は、例えば、チョウマメの水抽出物（液体）の凍結乾燥によって調製することができる。
【００１２】
チョウマメの１０％未満のエタノール抽出物は、例えば、チョウマメの粉砕物と１０％ｗ／ｗ未満のエタノール水溶液とを混合し、得られた混合液から遠心分離又は濾過などの分離方法によって固形物を分離及び除去することによって得ることができる。１つの実施形態において、チョウマメの１０％未満のエタノール抽出物は、チョウマメ（好ましくは花の乾燥物）の粉砕物と、前記粉砕物の１０倍重量の１０％ｗ／ｗ未満のエタノール水溶液とを混合し、得られた混合液を室温で２０分間放置した後、遠心分離又は濾過などの分離方法によって前記混合液から固形物を分離及び除去することによって得ることができる。チョウマメの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物は、液体又は固体であってよい。チョウマメの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（固体）は、例えば、チョウマメの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（液体）の凍結乾燥によって調製することができる。チョウマメの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（液体）は、例えば、１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（液体）を凍結乾燥などにより固形化して、その固形物を水で溶解した液体であってもよい。
【００１３】
チョウマメのエタノール抽出物は、例えば、８％ｗ／ｗ未満のエタノール、５％ｗ／ｗ未満のエタノール、３％ｗ／ｗ未満のエタノール、又は１％ｗ／ｗ未満のエタノールと、チョウマメの粉砕物とを混合して、得られた混合液から固形物を分離及び除去することによって調製したものであってよい。
【００１４】
「ニオイタコノキ（Pandanus）」は、タコノキ科（Pandanaceae）のタコノキ属（Pandanus）に属する単子葉植物であり、パンダリーフとも称される。ニオイタコノキは、例えば、公知の方法により栽培及び採取でき、又は商業的に入手可能である。１つの実施形態において、ニオイタコノキは、葉、茎、及び根からなる群から選択される少なくとも１つの部位であってよく、好ましくは葉、及び茎のいずれか一方又は両方であり、より好ましくは葉である。ニオイタコノキの重量は、乾燥形態の重量である。
【００１５】
ニオイタコノキの水抽出物は、例えば、ニオイタコノキの粉砕物と水とを混合し、得られた混合液から遠心分離又は濾過などの分離方法によって固形物を分離及び除去することによって得ることができる。１つの実施形態において、ニオイタコノキ（好ましくは葉の乾燥物）の水抽出物は、ニオイタコノキの粉砕物と、前記粉砕物の１０倍重量の水とを混合し、得られた混合液を室温で２０分間放置した後、遠心分離又は濾過などの分離方法によって前記混合液から固形物を分離及び除去することによって得ることができる。ニオイタコノキの水抽出物は、液体又は固体であってよい。ニオイタコノキの水抽出物（固体）は、例えば、ニオイタコノキの水抽出物（液体）の凍結乾燥によって調製することができる。
【００１６】
ニオイタコノキの１０％未満のエタノール抽出物は、例えば、ニオイタコノキの粉砕物と１０％ｗ／ｗ未満のエタノール水溶液とを混合し、得られた混合液から遠心分離又は濾過などの分離方法によって固形物を分離及び除去することによって得ることができる。１つの実施形態において、ニオイタコノキの１０％未満のエタノール抽出物は、ニオイタコノキ（好ましくは葉の乾燥物）の粉砕物と、前記粉砕物の１０倍重量の１０％ｗ／ｗ未満のエタノール水溶液とを混合し、得られた混合液を室温で２０分間放置した後、遠心分離又は濾過などの分離方法によって前記混合液から固形物を分離及び除去することによって得ることができる。ニオイタコノキの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物は、液体又は固体であってよい。ニオイタコノキの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（固体）は、例えば、ニオイタコノキの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（液体）を凍結乾燥によって調製することができる。ニオイタコノキの１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（液体）は、例えば、１０％ｗ／ｗ未満のエタノール抽出物（液体）を凍結乾燥などにより固形化して、その固形物を水で溶解した液体であってよい。
【００１７】
ニオイタコノキのエタノール抽出物は、例えば、８％ｗ／ｗ未満のエタノール、５％ｗ／ｗ未満のエタノール、３％ｗ／ｗ未満のエタノール、又は１％ｗ／ｗ未満のエタノールと、ニオイタコノキの粉砕物とを混合して、得られた混合液から固形物を分離することによって調製したものであってよい。
【００１８】
「皮膚適用用組成物」は、皮膚に適用し得る形態であればよく、溶液系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、ミスト、エアゾール、水−油二層系、又は水−油−粉三層系であってよい。皮膚適用用組成物は、例えば、チョウマメの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物、及びニオイタコノキの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物のいずれか一方又は両方を、前記組成物の重量当たり９５％ｗ／ｗ以下、９０％ｗ／ｗ以下、８０％ｗ／ｗ以下、７０％ｗ／ｗ以下、６０％ｗ／ｗ以下、５０％ｗ／ｗ以下、４０％ｗ／ｗ以下、３０％ｗ／ｗ以下、２０％ｗ／ｗ以下、１０％ｗ／ｗ以下、又は５％ｗ／ｗ以下含む。皮膚適用用組成物は、さらに、皮膚に適用可能な担体又は賦形剤、要すれば、適当な添加剤を適宜含んでよい。皮膚適用用組成物は、公知の方法により調製することができる。一例において、皮膚適用用組成物は、チョウマメの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物、及びニオイタコノキの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物のいずれか一方又は両方と、皮膚に適用可能な担体又は賦形剤とを混合することにより調製することができる。
【００１９】
「ＣＣＮ１」は、Ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｒｉｃｈ  ６１（Ｃｙｒ６１）としても知られる、ＣＣＮファミリーに属するタンパク質である。ＣＣＮ１は、細胞表面のインテグリン受容体及びヘパラン硫酸プロテオグリカンとの相互作用を通じて、細胞増殖、細胞運動、細胞分化、及び細胞の老化に関与する。ＣＣＮ１のアミノ酸配列及び核酸配列は公知である。
【００２０】
「ＣＣＮ２」は、結合組織増殖因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＣＴＧＦ））としても知られる、ＣＣＮファミリーに属するタンパク質である。ＣＣＮ２は、線維芽細胞の増殖促進、細胞外気質産生促進、結合組織増殖促進、軟骨細胞の増殖、細胞分化の促進、創傷治癒、及び線維性疾患に関与する。ＣＣＮ２のアミノ酸配列及び核酸配列は公知である。
【００２１】
ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の「発現の増加」は、本開示に係る組成物を培養したヒトの皮膚線維芽細胞に添加した場合のＣＣＮ１の発現量及びＣＣＮ２の発現量が、本開示に係る組成物を添加しなかった場合のＣＣＮ１の発現量及びＣＣＮ２の発現量と比較して、少なくとも２０％、３０％、４０％、又は５０％増加することであってよい。ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現量は、ＣＣＮ１又はＣＣＮ２に対応する培養したヒト線維芽細胞中のＲＮＡの量を意味する。ＲＮＡの量は、本願明細書の実施例に記載のように、ＲＴ−ＰＣＲにより測定することができる。
【００２２】
「肌の老化防止」は、皮膚の弾力が維持される又は向上することを意味する。肌の老化防止は、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現が増加し、表皮幹細胞から表皮角化細胞への分化が促進され、表皮幹細胞及び／又は表皮角化細胞の増殖が促進され、真皮幹細胞の増殖及び／又は繊維芽細胞への分化が促進され、或いは線維芽細胞の分化によるコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸の産生が促進されることによって達成され得る。肌の老化防止は、例えば、本開示に係る組成物をヒトの肌に１日１回〜３回を３週間適用した場合に、本開示に係る組成物を適用しなかった場合と比べて、皮膚の弾力が維持される又は５％以上、１０％以上若しくは１５％以上向上することであってよい。
【００２３】
「創傷治癒」は、創傷治癒が促進させることを意味する。創傷治癒は、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現が増加し、線維芽細胞の増殖が促進され、或いは表皮細胞が遊走及び増殖することによって達成され得る。創傷治癒は、例えば、本開示に係る組成物を皮膚の創傷に適用した場合、本開示に係る組成物を同程度の皮膚の創傷に適用しなかった場合と比べて、創傷治癒が促進されることであってよい。
【００２４】
「発毛促進」は、発毛が促進させることを意味する。毛髪促進は、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現が増加し、毛包幹細胞から毛乳頭細胞への分化が促進され、或いは毛包幹細胞及び／又は毛乳頭細胞の増殖が促進されることによって達成され得る。発毛促進は、例えば、本開示に係る組成物を頭皮に適用した場合、本開示に係る組成物を適用する前と比べて、当該頭皮における毛髪が増加することであってよい。
【００２５】
１つの実施形態において、本開示に係る皮膚適用用組成物は、肌の老化防止、創傷治癒用、又は発毛促進用であり、好ましくは肌の老化防止又は創傷治癒用であり、より好ましくは肌の老化防止用である。
【００２６】
以下、具体的な実施例を記載するが、それらは本発明の好ましい実施形態を示すものであり、添付する特許請求の範囲に記載の発明をいかようにも限定するものではない。
【００２７】
［調製例］
以下の表に記載のＮｏ．１〜Ｎｏ．８に対応する植物試料の乾燥物２ｇを、すり鉢とすりこぎ棒とを用いて又は袋に詰めて叩くことによって、それぞれ粉砕した。粉砕した各植物試料と水２０ｍｌと混合した。得られた混合液を２０分間室温下で放置した。前記混合液を遠心分離（３０００回転、１０分）にかけ、上清を各植物試料の水抽出物（比較例１〜６、実施例１及び２）とした。
【表１】
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【００２８】
以下の表に記載のＮｏ．１〜Ｎｏ．８に対応する植物試料の乾燥物２ｇを、すり鉢とすりこぎ棒とを用いて又は袋に詰めて叩くことによって、それぞれ粉砕した。粉砕した各植物試料と７０％エタノール２０ｍｌと混合した。上記と同様にして、得られた混合液から各植物試料のエタノール抽出物（比較例７〜１４）を得た。
【表２】
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【００２９】
［細胞培養］
ヒトの皮膚線維芽細胞を、培養液３ｍｌを含むシャーレにて培養した。前記培養液に、比較例１の水抽出物を０．２５ｍｌ添加した。比較例２〜６、実施例１及び実施例２の各水抽出物０．２５ｍｌを前記培養液に添加した。対照として、水０.２５ｍｌを用いた（Ｃ１）。同様にして、前記培養液に、比較例７〜１４の各エタノール抽出物０．２５ｍｌを前記培養液に添加した。対照として、７０％エタノール０．２５ｍｌを用いた（Ｃ２）。前記皮膚線維芽細胞を、各抽出物が添加された培養液中、３７℃、５％ＣＯ２下にてさらに２４時間培養した。
【００３０】
さらなる培養後に、各シャーレからヒト皮膚線維芽細胞を回収した。回収したヒト皮膚線維芽細胞におけるＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現量を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７０００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いたＲＴ−ＰＣＴにより定量した。ＲＴ−ＰＣＲは、Ｏｎｅ  Ｓｔｅｐ  ＴＢ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔを用い、前記キットに添付の説明書に従って行った。ＣＣＮ１のＲＴ−ＰＣＲには、配列番号１及び２に記載の各核酸配列を有するプライマーを用いた。ＣＣＮ２のＲＴ−ＰＣＲには、配列番号３及び４に記載の各核酸配列を有するプライマーを用いた。
【００３１】
【表３】
0006978015.tif 000004
【００３２】
［結果］
各植物試料（Ｎｏ．１〜Ｎｏ．８）の水抽出物を用いた場合のＣＣＮ１発現量から、対照Ｃ１を用いた場合のＣＣＮ１発現量に対する相対値を算出した。算出した結果を図１に示す。図１は、植物試料Ｎｏ．１〜Ｎｏ．３、及びＮｏ．５が、対照Ｃ１と比較して、ＣＣＮ１の発現量を増加させたことを示す。
【００３３】
各植物試料（Ｎｏ．１〜Ｎｏ．８）の７０％エタノール抽出物を用いた場合のＣＣＮ１発現量から、対照Ｃ２を用いた場合のＣＣＮ１発現量に対する相対値を算出した。算出した結果を図２に示す。図２は、植物試料Ｎｏ．１、及びＮｏ．３〜Ｎｏ．８が、対照Ｃ２と比較して、ＣＣＮ１の発現量を増加させたことを示す。
【００３４】
図１及び図２は、植物試料Ｎｏ．１、Ｎｏ．３及びＮｏ．５が、水抽出物及び７０％エタノール抽出物の両方が、対照Ｃ１及びＣ２と比べて、ＣＣＮ１の発現量をそれぞれ増加させたことを示した。図１及び図２は、また、植物試料Ｎｏ．２が、水抽出物の場合にはＣＣＮ１の発現を増加させるが、７０％エタノール抽出物の場合はＣＣＮ１の発現を低下させることを示す。
【００３５】
各植物試料（Ｎｏ．１〜Ｎｏ．８）の水抽出物を用いた場合のＣＣＮ２発現量から、対照Ｃ１を用いた場合のＣＣＮ２発現量に対する相対値を算出した。算出した結果を図３に示す。図３は、植物試料Ｎｏ．２、Ｎｏ．３、及びＮｏ．８が、対照Ｃ１と比較して、ＣＣＮ２の発現量を増加させたことを示す。
【００３６】
各植物試料（Ｎｏ．１〜Ｎｏ．８）の７０％エタノール抽出物を用いた場合のＣＣＮ２発現量から、対照Ｃ２を用いた場合のＣＣＮ２発現量に対する相対値を算出した。算出した結果を図４に示す。図４は、植物試料Ｎｏ．１が、対照Ｃ２と比較して、ＣＣＮ２の発現量を増加させたことを示す。
【００３７】
図３及び図４は、植物試料Ｎｏ．２、Ｎｏ．３及びＮｏ．８が、水抽出物の場合にはＣＣＮ２の発現を増加させるが、７０％エタノール抽出物の場合はＣＣＮ２の発現を低下させることを示す。
【００３８】
図１〜図４は、Ｎｏ．２及びＮｏ．３の水抽出物が、対照Ｃ１及びＣ２と比較して、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２それぞれに発現量を増加させたことを示す。
【要約】
【課題】  ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現を増加させるための皮膚適用用の新規組成物を提供すること。
【解決手段】  チョウマメの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物、及びニオイタコノキの水抽出物若しくは１０％未満のアルコール抽出物のいずれか一方又は両方を含む、ＣＣＮ１及びＣＣＮ２の発現を増加させるための、皮膚適用用組成物。
【選択図】  なし【図１】
0006978015.tif 000005
【図２】
0006978015.tif 000006
【図３】
0006978015.tif 000007
【図４】
0006978015.tif 000008
【配列表】
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