(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の自閉症スペクトラム障害に関連する神経障害の行動症状を治療するための医薬であって、
治療有効量の、前記対象の消化管に存在する少なくとも１つの腸内代謝産物の少なくとも一部に結合して隔離剤−代謝産物複合体を形成する隔離剤組成物を含み、前記隔離剤−代謝産物複合体は、前記消化管から除去され、
前記少なくとも１つの腸内代謝産物は、４−エチルフェノール（４−ＥＰ）であり、
前記行動症状が、反復行動、常同行動、社会的コミュニケーションの欠陥、及び臨床的過敏症からなる群から選択され、
前記隔離剤組成物は、活性炭を含み、並びに、
前記治療有効量により、前記行動症状が軽減される、医薬。
【請求項２】
前記神経障害が自閉症スペクトラム障害であり、前記行動症状が、反復行動、常同行動および社会的コミュニケーションの欠陥からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記対象が、慢性腎疾患を有しない、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項４】
前記対象が、臨床的不安または不安障害を有しない、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項５】
前記隔離剤組成物は、前記対象の消化管に存在する追加の腸内代謝産物の少なくとも一部に結合して隔離剤−代謝産物複合体を形成し、そうすることで前記隔離剤−代謝産物複合体が前記消化管から除去され、
前記追加の腸内代謝産物は、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）、３−ヒドロキシインドールおよび３−インドキシル硫酸塩からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項６】
前記隔離剤組成物は、少なくとも５００ｍ２／ｇのブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された最小平均比表面積および４０００ｍ２／ｇ未満のブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された最大平均比表面積を有する球状活性炭粒子を含むＡＢ−２００４製剤を含む、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項７】
前記隔離剤組成物は、少なくとも０．００５ｍｍの最小平均粒径および１．５ｍｍ未満の最大平均粒径を有する球状活性炭粒子を含むＡＢ−２００４製剤を含む、請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
前記医薬は、前記神経障害の行動症状の出現後に投与される、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項９】
前記隔離剤組成物の最初の投与前に特定されたレベルと比較して低下した腸内代謝産物のレベルを維持するために必要に応じて繰り返し投与される、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項１０】
前記治療有効量は、１日当たり５ｍｇ／ｋｇ体重〜５００ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、２０１７年３月３１日に申請された米国仮出願第６２／４８０，０３９号の利益を主張し、ここに本明細書の一部を構成するものとして明示的に援用する。
【０００２】
本開示は、自閉症などの神経障害の行動症状と、腸管透過性亢進または腸管壁浸漏を含む関連病状とを治療、阻害または改善する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
非吸収性、非消化性、生体適合性ポリマーは、腸管内のコレステロールと遊離リン酸塩の吸着を標的とすることにより、コレステロールと全身リン酸塩レベルを下げるのに使用されてきた。これらの製品は、生体適合性のイオン交換樹脂であり、あまり吸収されず、標的分子を結合した後に胃腸管（ＧＩ）から排出される。例えば、コレステロールを下げるために、コレステロール誘導体である胆汁酸を隔離するのにイオン交換樹脂であるコレスチラミンが使用されてきた。さらに、非吸収性、非消化性、生体適合性の活性炭製剤が、中毒および薬物過剰摂取における毒素（例えば、非特許文献１及び２）、ならびに慢性腎疾患の治療における尿毒症毒素（例えば、非特許文献３）の影響を打ち消すために研究されてきた。例えば、慢性腎疾患を患っている対象の透析を遅らせるために活性炭粒子製剤が開発され、利用されてきたが、このアプローチの臨床的有用性は積極的に受け入れられておらず、複数のメタ分析では明確な臨床的利益は示されておらず、米国での後期臨床試験は有効性を証明しそこねていた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９），Ａｎｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．１８（５）：５４７−５２；
【非特許文献２】Ｋｉｅｓｌｉｃｈｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８），Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．５０：１９２−１９７
【非特許文献３】Ｓｃｈｕｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６），ＢＭＣ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  １７：１４１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様において、本発明は、腸管透過性亢進（もしくは腸管壁浸漏）または腸内細菌叢異常に関連する神経障害の行動症状を有する対象の治療に使用するための隔離剤組成物を提供する。これらの組成物は、対象の消化管により非消化性および非吸収性である多数の生体適合性粒子および／またはポリマーを含む。隔離剤組成物は、対象の消化管に存在する少なくとも１つの腸内代謝産物の少なくとも一部に結合して、共有結合または非共有結合を含み得る隔離剤−代謝産物複合体を形成する。隔離剤−代謝産物複合体の形成の結果として、腸内代謝産物は、消化管の組織と相互作用したり吸収されたりするのではなく、隔離剤組成物と共に消化管から除去されるようになる。隔離剤組成物により結合される腸内代謝産物は、行動症状の発症または存在に関連し、したがって、腸内代謝産物の除去は、行動症状および神経障害の治療に役立つ。
【０００７】
別の態様において、本発明は、腸管透過性亢進または腸内細菌叢異常に関連する神経障害の行動症状を有する対象を治療する方法を提供する。この方法は、対象の消化管に存在する少なくとも１つの腸内代謝産物の少なくとも一部に結合する本発明の隔離剤組成物を対象に投与することを含む。上記のように、隔離剤と代謝産物は、隔離剤−代謝産物複合体を形成し、そうすることで、腸内代謝産物は、消化管の組織と相互作用したり吸収されたりするのではなく、隔離剤組成物と共に消化管から除去されるようになる。腸内代謝産物は、行動症状の発症または存在に関連しているため、隔離剤組成物の結合は、腸内代謝産物の除去を促進し、行動症状および神経障害の治療に役立つ。
【０００８】
別の態様において、本発明は、腸管透過性亢進または腸内細菌叢異常に関連する神経障害の行動症状を有する対象からの１つ以上の腸内代謝産物の量を減少させる方法を提供する。この方法は、対象の消化管に存在する少なくとも１つの腸内代謝産物の少なくとも一部に結合する隔離剤組成物を対象に投与することを含む。上記のように、隔離剤と代謝産物は、隔離剤−代謝産物複合体を形成し、そうすることで、腸内代謝産物は、消化管の組織と相互作用したり吸収されたりするのではなく、隔離剤組成物と共に消化管から除去されるようになる。したがって、行動症状の発症または存在に関連する腸内代謝産物への隔離剤組成物の結合は、腸内代謝産物の除去を促進し、行動症状および神経障害の治療に役立つ。
【０００９】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、隔離剤組成物は、対象の消化管と生体適合性、非消化性および／または非吸収性である多数の粒子を含む。
【００１０】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、隔離剤組成物は、活性炭粒子、粘土、アパタイトもしくはヒドロキシアパタイト、ベントナイト、カオリン、ペクチン、セルロースポリマー、酢酸セルロースポリマー、酢酸プロピオン酸セルロース、イオン交換樹脂、コレスチラミンポリマー、テトラエチレンペンタミンポリマー、フェノール樹脂、ボロン酸提示ポリマー、カテキン提示ポリマーまたはゼオライトを含む。
【００１１】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、隔離剤組成物はＡＢ−２００４製剤を含む。本発明のＡＢ−２００４組成物は、球状活性炭粒子を含む。いくつかの実施形態では、球状活性炭粒子は、少なくとも５００ｍ２／ｇのブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された最小平均比表面積および４０００ｍ２／ｇ未満のブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された最大平均比表面積を有する。いくつかの実施形態では、球状活性炭粒子は、少なくとも０．００５の最小平均粒径および１．５ｍｍ未満の最大平均粒径を有する。いくつかの実施形態では、球状活性炭粒子は、（ａ）少なくとも５００ｍ２／ｇのブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された最小平均比表面積と、４０００ｍ２／ｇ未満のブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された最大平均比表面積ならびに（ｂ）少なくとも０．００５の最小平均粒径および１．５ｍｍ未満の最大平均粒径との両方を有する。
【００１２】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、本発明の隔離剤組成物は、下部消化管での制御放出のために製剤化される。そのような組成物は、経口投与または坐剤として投与することができる。
【００１３】
前述の態様のそれぞれにおいて、前述の実施形態のそれぞれでは、神経障害は、自閉症スペクトラム障害、不安障害、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症、純粋自律神経障害を含む）、またはそれらの任意の組合せのいずれかから選択することができる。
【００１４】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、行動症状は、振戦、麻痺、運動障害、反復行動、コミュニケーション症、認知障害、常同行動、物理的対象への愛着、失語症、強迫行動、特異なまたは不適切なボディランゲージ、ジェスチャーおよび／または表情および／または感覚運動の問題、他者への関心の欠如、共感の欠如、非言語的な手がかりの把握の困難、タッチ嫌悪、社会化困難、言語発達の遅れ、異常な音声またはピッチ、音声の反復、保持、会話の困難、コミュニケーションのニーズまたは欲求の困難、単純な文または質問の無理解、言語サブテキストの処理の困難、特異な対象への執着、固執、ルーチンまたは環境の変化への不耐性、無器用、姿勢異常、奇妙な動き、特定の対象への魅了、感覚入力に対する感覚過敏・鈍麻および臨床的過敏性から選択される。
【００１５】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、神経障害は、自閉症スペクトラム障害であり、行動症状は、反復行動、コミュニケーション症、常同行動および臨床的過敏性から選択される。
【００１６】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、対象は、臨床的不安または不安障害を有していない。
【００１７】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、対象は、慢性腎臓病を有していない。
【００１８】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、腸内代謝産物は、４−エチルフェノール（４−ＥＰ）、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）、３−インドキシル硫酸塩、３−ヒドロキシインドール、クマル酸、３−（３−ヒドロキシフェニル）−３−ヒドロキシプロピオン酸（ＨＰＨＰＡ）、３−（３−ヒドロキシフェニル）プロパン酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン酸、３−ヒドロキシ馬尿（３ＨＨＡ）、３−カルボキシ−４−メチル−５−プロピル−２−フラン酸（ＣＭＰＦ）、３−ヒドロキシフェニル酢酸（３ＨＰＡ）、４−ヒドロキシフェニル酢酸および２−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸から選択される。
【００１９】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、腸内代謝産物は、４−エチルフェノール（４−ＥＰ）、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）、３−ヒドロキシインドールおよび３−インドキシル硫酸塩から選択される。
【００２０】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、治療方法は、治療過程中の対象の腸内代謝産物レベルを監視することを含む。
【００２１】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、治療方法は、対象の行動の変化を監視することを含む。
【００２２】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、治療方法は、神経障害の行動症状の出現後に隔離剤組成物を投与することを含む。
【００２３】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、治療方法は、神経障害の行動症状の出現前に隔離剤組成物を投与することを含む。
【００２４】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、治療方法は、組成物の最初の投与前に特定されたレベルと比較して低下した腸内代謝産物のレベルを維持するために必要に応じて繰り返される。いくつかの実施形態では、所定の投与について、組成物は、先に投与された組成物とは異なる。
【００２５】
前述の態様のそれぞれにおいて、いくつかの実施形態では、治療方法は、対象の行動の変化を監視することを含む。
【００２６】
したがって、本明細書に記載されるのは、腸内微生物叢の変化に関連する、１つ以上または複数の神経障害、神経障害と併発する腸管壁浸漏、または神経障害とは無関係の腸管壁浸漏の治療、阻害または改善のための方法である。いくつかの実施形態では、方法は、腸内微生物叢の変化に関連する腸内代謝産物を隔離し、この腸内代謝産物を隔離した後に代謝されることなく消化管から除去される組成物を対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、方法はさらに、腸内微生物叢の変化に関連する１つ以上の腸内代謝産物の上昇したレベルを有し、腸内微生物叢の変化に関連する障害の症状を有し、腸内微生物叢の変化に関連する障害と診断された、または腸内微生物叢の変化に関連する障害を発症するリスクが高い対象を特定および／または選択するステップを含む。本開示の方法に従って投与される組成物は、活性炭、アパタイトもしくはヒドロキシアパタイト、ベントナイト、カオリン、ペクチン、セルロースポリマー、酢酸セルロースポリマー、酢酸プロピオン酸セルロース、イオン交換樹脂、コレスチラミンポリマー、テトラエチレンペンタミンポリマー、フェノール樹脂、ボロン酸提示ポリマー、カテキン提示ポリマー、ゼオライト、および／もしくはナノ粒子のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含み得るか、本質的にそれらから成り得るか、またはそれらから成り得る吸着剤、ポリマー、粘土または樹脂を含み得る。本開示の方法に従って投与される組成物は、本明細書においてＡＢ−２００４と呼ばれる高表面積活性炭粒子の製剤を含み得るか、本質的にそれらから成り得るか、またはそれらから成り得る。本開示の方法に従って投与される組成物はさらに、下部胃腸管での制御放出のために製剤化され得る。
【００２７】
本開示の方法は、１つ以上または複数の神経障害、例えば、自閉症スペクトラム障害、精神分裂症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症、純粋自律神経障害を含む）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せに対処するために適用することができる。
【００２８】
本開示の方法はさらに、前記対象における腸管壁浸漏（腸管透過性亢進）だけでなく、そのような神経障害に関連する腸管壁浸漏症状および／または神経障害に関連しない腸管壁浸漏症状も呈示する神経障害に対処するために適用することができる。
【００２９】
本開示による方法は、微生物代謝産物と微生物代謝産物の宿主代謝産物との両方を含む、腸管透過性亢進（腸管壁浸漏）または腸内細菌叢異常（すなわち、腸内微生物叢の有害な変化）に関連する腸内代謝産物の隔離を促進する。そのような腸内代謝産物には、トリプトファンの代謝から生成されたもの（例えば、セロトニン、５−ヒドロキシインドール酢酸塩、キヌレニン、キヌレン酸塩、アントラニル酸塩、キサンツレン酸塩、キノリン酸塩、ニコチン酸塩、ニコチンアミド、インドール、３−ヒドロキシインドール、３−インドキシル硫酸塩、インドールピルビン酸塩、インドールプロピオン酸塩、インドール酢酸塩、トリプタミン）、チロシンの代謝から生成されたもの（例えば、４−エチルフェノール（４−ＥＰ）、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン）、および安息香酸塩の代謝から生成されたもの（例えば、安息香酸塩、馬尿酸塩、カテコール、カテコール硫酸塩）、ならびにＮ−アセチルセリン、ベータアラニン、グルタミン、トランスウロカニン酸塩、イミダゾールプロピオン酸塩、フェニルアセチルグリシン、フェノール、フェニル硫酸塩、クマル酸、３−（３−ヒドロキシフェニル）−３−ヒドロキシプロピオン酸（ＨＰＨＰＡ）、３−（３−ヒドロキシフェニル）プロパン酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン酸、３−ヒドロキシ馬尿酸（３ＨＨＡ）、３−カルボキシ−４−メチル−５−プロピル−２−フラン酸（ＣＭＰＦ）、３−ヒドロキシフェニル酢酸（３ＨＰＡ）、３−メチル−２−オキソ吉草酸塩、４−メチル−２−オキソペンタン酸塩、システイン、アルギニン、オルニチン、５−メチルチオアデノシン、グリシルバリン、フィブリノゲン切断ペプチド、３−ホスホグリセリン酸塩、ホスホエノールピルビン酸塩、リボース、キシロース、ドコサペンタエン酸塩（ｎ３  ＤＰＡ；２２：５ｎ３）、ドコサペンタエン酸塩（ｎ６  ＤＰＡ；２２：５ｎ６）、ドコサヘキサエン酸塩（ＤＨＡ；２２：６ｎ３）、ステアリン酸塩、エイコセン酸塩、ジホモリノール酸塩（２０：２ｎ６）、アドレン酸塩、１３−ＨＯＤＥ＋９−ＨＯＤＥ、オクタデカン二酸塩、１２−ＨＥＴＥ、ミオイノシトール、１−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン、Ｎ−α−アセチル−１−アルギニン、メチルグアニジン、フェニルアセチルグルタミン、インドール−３−酢酸、インドール乳酸塩、１−オレオイルグリセロホスホエタノールアミン、１−ペンタデカノイルグリセロホスホコリン、１−パルミトオレオイルグリセロホスホリコリン、１−ステアロイルグリセロホスホイノシトール、１−パルミトイルプラスメニルエタノールアミン、ビリルビン（Ｅ，Ｅ）、パントテン酸塩、グリコール酸塩（ヒドロキシ酢酸塩）、エルゴチオネイン、エクオールおよび／もしくはエクオール硫酸塩、またはそれらの任意の組合せも含まれるが、これらに限定されない。
【００３０】
理論に束縛されることなく、いくつかの実施形態では、微生物代謝産物は、チロシンが関与する代謝経路から生じる。いくつかの実施形態では、前記微生物代謝産物はｐ−クレゾールである。いくつかの実施形態では、前記微生物代謝産物は４−エチルフェノールである。いくつかの実施形態では、前記代謝産物はｐ−クレゾール硫酸塩である。いくつかの実施形態では、前記微生物代謝産物は４−エチルフェニル硫酸塩である。
【００３１】
理論に束縛されることなく、いくつかの実施形態では、微生物代謝産物は、芳香族もしくはヘテロ芳香族アルコール、または前記芳香族もしくはヘテロ芳香族アルコールの硫酸化もしくはスルホン化から生じるその硫酸塩である。いくつかの実施形態では、芳香族アルコールはｐ−クレゾールである。いくつかの実施形態では、芳香族アルコールは４−エチルフェノールである。いくつかの実施形態では、芳香族硫酸塩は４−エチルフェニル硫酸塩である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、前記芳香族もしくはヘテロ芳香族アルコールまたはその硫酸塩は単環式である。いくつかの実施形態では、前記芳香族もしくはヘテロ芳香族アルコールは、二環式、三環式または多環式である。いくつかの実施形態では、ヘテロ芳香族二環式アルコールは３−ヒドロキシインドールである。いくつかの実施形態では、ヘテロ芳香族二環式硫酸塩は３−インドキシル硫酸塩である。
【００３３】
「芳香族」、「ヘテロ芳香族」、「アルコール」、「硫酸塩」、「硫酸化」、「スルホン化」、「単環式」、「二環式」および「多環式」という用語は、有機化学、医薬品化学または製薬化学の分野で認められている用語であり、有機化学、医薬品化学、または製薬化学の当業者によりそのように容易に認識されよう。
【００３４】
本明細書で使用される「芳香族」基（または「アリール」基または「アリーレン」基）には、芳香族炭素環系（例えばフェニル）および縮合多環式芳香環系（例えば、ナフチル、ビフェニルおよび１，２，３，４−テトラヒドロナフチル）が含まれる。
【００３５】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」、「ヘテロ芳香族」または「ヘテロアリーレン」という用語には、単環式環、二環式環および三環式環を含むがこれらに限定されない芳香環系が含まれ、少なくとも１つのヘテロ原子、例えば窒素、酸素または硫黄を含む５〜１２個の原子を有する。本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない例示目的のために：アザインドリル、ベンゾ（ｂ）チエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、フラニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、インドリル、インダゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジニル、キノリニル、キナゾリニル、トリアゾリル、チアゾリル、チオフェニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チエニル、６Ｈ−ピロロ［２，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジニル、６Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジニル、１，６−ジヒドロピラゾロ［３，４−ｄ］ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、３Ｈ−３，４，６，８ａ−テトラアザ−アシンダセニル、３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジニル、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、１，６−ジヒドロ−１，２，５，６−テトラザ−ａｓ−インダセニル、３Ｈ−３，４，８ａ−トリアザ−ａｓ−インダセニル、６Ｈ−３−オキサ−２，５，６−トリアザ−ａｓ−インダセニル、３，６−ジヒドロ−２，３，６−テトラアザ−ａｓ−インダセニル、１，６−ジヒドロ−ジピロロ［２，３−ｂ；２’３’−ｄ］ピリジニル、６Ｈ−３−チア−２，５，６−トリアザ−ａｓ−インダセニル、４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｂ］アゼピン−２（３Ｈ）−オン、３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−３（４Ｈ）−オン、または６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，４］オキサジニルまたは１，６−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｄ］ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが挙げられる。
【００３６】
本開示による方法は、本明細書に開示される隔離剤組成物の少なくとも１つが、１日当たり、毎日または毎日よりも少ない頻度で複数回投与される投薬スケジュールを含み得る。本明細書に記載の方法によれば、開示される組成物の投薬は、２日おき、３日おき、４日おき、５日おき、６日おき、または７日おきに行われ得る。
【００３７】
本明細書に記載の方法によれば、投薬は、対象における自閉症および／または腸管透過性亢進（腸管壁浸漏）を含む関連する病状などの神経障害のうちの１つ以上または複数の症状の出現前、出現と同時または出現後に開始することができる。本明細書に記載の方法はまた、治療過程の前、治療過程中または治療過程後に、対象における１つ以上の微生物代謝産物レベル、行動の変化および／または胃腸症状の変化の監視または測定を組み込むことができる。
【００３８】
本明細書に記載の方法は、神経障害の複数の症状のうちの１つ以上だけでなく、そのような神経障害に関連する腸管壁浸漏症状および／もしくは神経障害に関連しない腸管壁浸漏症状を治療または予防するために、ならびに／または組成物の最初の投与前に特定されたレベルと比較して低下した腸内代謝産物のレベルを維持するために必要に応じて繰り返すことができる。本明細書に記載の方法によるそれぞれの投与について、組成物は、先に投与された組成物と同じであっても、先に投与された組成物と異なってもよい。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本明細書で企図される神経障害は、振戦、麻痺、運動障害、反復行動、コミュニケーション症、認知障害、常同行動、物理的対象への愛着、失語症、強迫行動、特異なまたは不適切なボディランゲージ、ジェスチャーおよび／または表情および／または感覚運動の問題、他者への関心の欠如、共感の欠如、非言語的な手がかりの把握の困難、タッチ嫌悪、社会化困難、言語発達の遅れ、異常な音声またはピッチ、音声の反復、保持、会話の困難、コミュニケーションのニーズまたは欲求の困難、単純な文または質問の無理解、言語サブテキストの処理の困難、特異な対象への執着、固執、ルーチンまたは環境の変化への不耐性、無器用、姿勢異常、奇妙な動き、特定の対象への魅了、および感覚入力に対する感覚過敏・鈍麻、臨床的過敏性、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される１つ以上の症状を含む。いくつかの実施形態では、神経障害は、自閉症スペクトラム障害、精神分裂症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症、純粋自律神経障害を含む）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの実施形態では、神経障害は、臨床的不安以外の症状を含む自閉症スペクトラム障害を含み得る。いくつかの実施形態では、神経障害は不安障害を含まない。いくつかの実施形態では、神経障害は、臨床的過敏性症状を含む自閉症スペクトラム障害を含み得る。
【００４０】
いくつかの実施形態では、提供される方法はさらに、前記投与後に、振戦、麻痺、運動障害、反復行動、コミュニケーション症、認知障害、常同行動、物理的対象への愛着、失語症、強迫行動、特異なまたは不適切なボディランゲージ、ジェスチャーおよび／または表情および／または感覚運動の問題、他者への関心の欠如、共感の欠如、非言語的な手がかりの把握の困難、タッチ嫌悪、社会化困難、言語発達の遅れ、異常な音声またはピッチ、音声の反復、保持、会話の困難、コミュニケーションのニーズまたは欲求の困難、単純な文または質問の無理解、言語サブテキストの処理の困難、特異な対象への執着、固執、ルーチンまたは環境の変化への不耐性、無器用、姿勢異常、奇妙な動き、特定の対象への魅了、および感覚入力に対する感覚過敏・鈍麻、臨床的過敏性、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される症状の変化を監視することを含み得る。
【００４１】
いくつかの実施形態では、神経障害は自閉症スペクトラム障害を含み、本明細書に記載の方法はさらに、本明細書に記載される組成物の投与後に臨床的不安以外の自閉症スペクトラム障害の症状の改善を監視することを含む。いくつかの実施形態では、自閉症スペクトラム障害の症状は、以下のうちの１つ以上を含む：反復行動、コミュニケーション症、認知障害、社会化困難および過敏性。いくつかの実施形態では、投与される隔離剤組成物は、ＡＢ−２００４製剤を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】４ＥＰ＋および４ＥＰ−の二重定着マウスの尿中４−ＥＰＳレベルを示す図である。無菌野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに４週齢で、４−ＥＰを産生するＢ．ｏｖａｔｕｓ（バクテロイデス・オバツス）とＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ラクトバチルス・プランタルム）の菌株のペアまたは４−ＥＰを産生しないペアのいずれかの強制経口投与により二重定着させた。４−ＥＰ産生ペア（４ＥＰ＋）による定着を伴う生体内での高い４−ＥＰＳ産生および４−ＥＰ非産生ペア（４ＥＰ−）による定着を伴う低い４−ＥＰＳ産生を、ＡＳＴ−１２０を含むＡＢ−２００４製剤を提供する前に、５週齢での尿中の４ＥＰＳレベルの測定により実証した。
【図２】細菌叢の定着レベルがグループ間で類似していることを示す図である。Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（左）およびＢ．ｏｖａｔｕｓ（右）は、４−ＥＰを産生したかどうかや、マウスにＡＢ−２００４製剤を提供したかどうかに関係なく、マウスにおける類似の定着レベルを達成した。
【図３】図３は、ＡＢ−２００４製剤の投与により、反復的で不安様の行動が正常化されることを示す図である。（Ａ）反復行動のガラス玉覆い隠し試験。（Ｂ）探索行動の高架式十字迷路試験（＊はｐ＜０．０５を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示す。平均±標準偏差）。
【図４】オープンフィールド試験の結果を示す図である。（Ａ）壁区画と中央区画への進入を一つにまとめた合計の割合としての、マウスがオープンフィールドの壁区画に進入した頻度。（Ｂ）壁区画における合計期間（秒）。（Ｃ）試験中に移動した合計距離（ｃｍ）。
【図５】直接的な社会的相互作用の３チャンバー試験（ｔｈｒｅｅ  ｃｈａｍｂｅｒ  ｔｅｓｔ）の結果を示す図である。（Ａ）４−ＥＰを産生しない（左のバー）および４−ＥＰを産生する（右のバー）細菌叢を有する対照食餌での雄マウスが別のマウスとチャンバーで過ごした時間；ならびに（Ｂ）対照食餌（左のバー）およびＡＢ−２００４製剤を含む食餌（右のバー）での４−ＥＰ産生す細菌叢を有する雄マウスが別のマウスとチャンバーで過ごした時間。（＊＊ｐ＜０．０１；平均±平均の標準誤差が示される）。
【図６】隔離剤のゼオライト、ベントナイト、セルロース（７５Ｋ）、セルロース（１５Ｋ）およびＡＢ−２００４製剤による４−ＥＰの吸着の時間経過を示す図である。１時間の時点で、ＡＢ−２００４製剤とセルロースポリマーの両方が、９０％を超える４−ＥＰの隔離を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
詳細な説明
健常人と比較して、特定の微生物代謝産物の異常に高い腸内または全身レベルは、自閉症スペクトラム障害、精神分裂症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症および／または純粋自律神経障害を含む）などの様々な中枢神経系（ＣＮＳ）疾患および障害に見ることができる。これらの微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）のレベルの低下は、行動症状もしくは行動状態および／または他の神経学的症状もしくは状態ならびに神経学的な疾患の緩和および／または逆転につながるだろう。理論に束縛されることなく、本開示内で企図されるのは、微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の全身レベルを、そのような微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の全身レベルの上昇に関連する中枢神経系（ＣＮＳ）疾患または障害を有する対象（例えば、ヒト、哺乳動物または家畜）に、ポリマー、粘土、樹脂、炭素ベースまたは他の化学成分などの非吸収性組成物であって、腸管の微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）を選択的に結合することができるか、または選択的に結合するように構成されており、それにより微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の末梢組織への吸収および／または輸送を緩和、阻害または軽減する組成物を投与または提供することにより、健常人に見合ったレベル（例えば、同等以下）に下げるように構成または設計された方法および組成物である。次いで、代謝産物を含んだ組成物は、対象から糞便で排出され、それにより微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）が永続的に除去され、前記対象における前記ＣＮＳ症状、疾患および／または障害が改善される。特定の微生物代謝産物（例えば４−エチルフェノール（４−ＥＰ）およびｐ−クレゾール（ＰＣ））は、ＡＳＤなどの神経発達障害および行動障害と相関していると特定され、その原因であると考えられている。これらの代謝産物は、頻繁にそのような障害に関連する「腸管壁浸漏」併発疾患を通じて全身循環に偶発的に進入していく可能性がある。全身循環に入ると、これらの代謝産物は、関連性のある代謝およびシグナル伝達経路に直接作用して、疾患の進行、システムおよび／または病理に寄与する可能性がある。加えて、代謝産物はさらに、通常の宿主プロセスにより代謝産物を代謝して、同様に有害な神経学的影響を与える可能性のある新しい代謝産物（例えば４−ＥＰＳおよびＰＣＳ）を作り出す可能性がある。
【００４４】
したがって、以下の実験例に開示されているように、４−ＥＰ過剰産生マウスは、操作されたＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓおよびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍを含む無菌マウスの３〜５週間の二重定着により実験的に作製した。標準的なマウス行動試験では、これらの４ＥＰ過剰産生マウスは、ＡＳＤ関連の行動および症状を実証することが示された。さらに、これらのマウスにおける４−ＥＰおよび他の代謝産物を結合することができる隔離剤（例えばＡＢ−２００４）の投与により、そのようなＡＳＤ関連の行動および症状を改善できることが示された。これらの結果は驚くべきものであった。以前の研究では、４−ＥＰＳ（４−ＥＰの宿主硫酸化タイプ）が腹腔内に単回ボーラス注射として提供された場合、無治療の野生型マウスにおいて不安症状が生じたが、自閉症スペクトラム障害の中核症状は何ら生じなかった。
【００４５】
これらの代謝産物を、それらの産生源で、例えば、対象の腸管内で隔離することにより、微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の末梢組織への転流が最小化または除去されるだろう。正味の効果は、対象に及ぼすこれらの代謝産物およびそれらの更なる代謝産物の影響の最小化である。生体適合性ポリマーなどの非吸収性材料またはＡＢ−２００４製剤などの活性炭製剤を使用すると、通常の通過および腸からの排出を通じて標的代謝産物が永続的に除去される。
【００４６】
本明細書に記載の方法のいくつかの代替法は、ヒト、哺乳動物または家畜などの対象の腸内微生物叢の変化に関連する神経障害を治療、阻害または改善する方法を含み、前記方法は、前記微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）を隔離する組成物を前記対象に投与または提供することを含み、隔離された腸内代謝産物を有する前記組成物は、代謝されることなく消化管から除去される。いくつかの実施形態では、この方法はさらに、１つ以上の微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の上昇したレベルを有する対象を特定および／または選択するステップを含む。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、前記１つ以上の神経障害に関連する腸管壁浸漏または腸管壁浸漏症状を治療、阻害または改善する方法を含み得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、前記１つ以上の神経障害に関連しない腸管壁浸漏または腸管壁浸漏症状を治療、阻害または改善する方法を含み得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法は、腸管壁浸漏または腸管壁浸漏症状に及ぼす影響とは何ら無関係に、１つ以上の神経障害を治療、阻害または改善する方法を含み得る。
【００４７】
本開示の目的のために、以下の定義が提供される。
【００４８】
本明細書で使用される「腸内細菌叢異常」という用語を指す場合、腸管または腸内、特に小腸内のフローラまたは細菌叢の不均衡または不順化を意味する。そのような細菌叢異常は、存在する種／株および／または存在する種／株の相対存在量または割合に関して、腸内または腸管の微生物叢の組成の変化により特徴付けられ、その変化は宿主生物に有害な影響を及ぼす。宿主生物に及ぼす有害な影響は、電解質バランス、バイオフィルム形成、腸管上皮内層により形成された障壁の完全性、または直接的に（例えば毒性またはエフェクターとして）もしくは間接的に（例えば毒素またはエフェクターの前駆物質として）宿主の健康を害する代謝産物の微生物叢の放出における微生物叢媒介変化に起因し得る。
【００４９】
本明細書で使用される「腸管透過性亢進」という用語は、腸管腔と周辺組織との間の腸管上皮内層により形成された障壁の異常に増加した透過性を意味する。そのような透過性亢進は、腸内層の炎症および／または腸管上皮の細胞間の密着結合の障害に起因し、これにより、物質が内腔から周囲組織に通過することが可能になり、そこで一部が腹膜腔および／または全身循環に進入する可能性がある。腸管または腸管腔からのこの物質の漏出のため、腸透過性亢進は、「腸管壁浸漏」または「腸管壁浸漏症候群」と呼ばれることがある。
【００５０】
隔離剤組成物に関して本明細書で使用される「生体適合性」という用語は、隔離剤組成物が局所的または全身的に臨床的に有意な毒性または有害作用を有しないことを意味する。「生体適合性」という用語は、隔離剤組成物が腸内を通る部分的に消化された食物（例えば、糜汁、乳糜、糞便）の通過に影響を及ぼしたり、ある程度の下痢または便秘を誘発したりする可能性を排除しない。
【００５１】
隔離剤組成物に関して本明細書で使用される「難消化性」という用語は、少なくとも５０重量％、好ましくは６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％または９５重量％を超える隔離剤組成物がバルク（例えば、粒子状、顆粒状、繊維状）で存在し、直腸から除去されると溶解した形態ではないように、隔離剤組成物が胃腸管の環境における分解に対して実質的に耐性であることを意味する。
【００５２】
隔離剤組成物に関して本明細書で使用される「非吸収性」という用語は、２５重量％未満、好ましくは２０重量％、１５重量％、１０重量％、５重量％または１重量％未満の隔離剤組成物が胃腸管上皮により吸収されるように、隔離剤組成物が腸管上皮の内層により実質的に吸収され得ないことを意味する。
【００５３】
代謝産物および症状または障害に関して本明細書で使用される「関連する」という用語は、代謝産物の存在もしくはレベルが、症状もしくは障害の存在もしくは程度と統計的に有意に相関していること（少なくともｐ＜０．０５、好ましくはｐ＜０．０１またはｐ＜０．００１）、および／または代謝産物もしくは代謝産物の反応生成物が、症状または障害の発症、維持もしくは程度に因果的もしくは機械的に関連していることを意味する。
【００５４】
本明細書で使用される「自閉症スペクトラム障害」または「ＡＳＤ」という用語は、小児期の初期に始まり、社会的相互作用の障害：言語の理解の障害；口頭および書面によるコミュニケーションの障害および遅延；行動、興味および活動の制限された反復的で常同的なパターン；多動性；短い注意スパン；衝動性；攻撃性；自傷行為；ならびに特に幼児ではかんしゃく発作を含む広範な症状を有する神経学的および発達的な障害を意味する。今では、ＡＳＤには、以前は異なるものとして特定された障害：自閉症障害、アスペルガー障害および広汎性発達障害（詳細不明）が含まれると理解されている。例えば、Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９４（「ＤＳＭ−ＩＶ」）を参照されたい。ＡＳＤに関連する障害には、レット症候群および小児期崩壊性障害が含まれる。
【００５５】
本明細書で使用される「不安障害」という用語は、心配または恐怖の異常な状態により特徴付けられ、急性ストレス障害、全般性不安障害、パニック障害、社会不安障害、広場恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、場面緘黙症または分離不安などの亜型が含まれる。不安の症状は、経験した不安の種類に応じて異なる。「臨床的不安」という用語は、異常に激しくて破壊的な不安レベルを意味し、これは、ストレスに満ちた状況に関連する通常の不安レベルを明らかに上回っている。臨床的不安は、上掲の障害のいずれかに関連し得るか、または自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）または統合失調症などの別の神経障害に続発したり、その兆候となったりし得る。一般に、ＤＳＭ−ＩＶの第３９３頁〜第４４４頁を参照されたい。
【００５６】
本明細書で使用される「過敏性」という用語は、不快またはストレスの多い状況に関連する通常の過敏性レベルを明らかに上回っている、容易にイライラしたり、動揺したり、または怒りを誘発する傾向を含む、異常に激しくて破壊的な刺激性レベルを意味する。臨床的過敏性は、全般性不安障害、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）、心的外傷後ストレス障害、注意欠陥障害（ＡＤＤ）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、躁鬱病、アルツハイマー病、境界性人格障害、反社会的人格障害および統合失調感情障害を含むがこれらに限定されない障害に関連し得るか、または別の神経障害に続発したり、その兆候となったりし得る。過敏性は、Ｍａｒｃｕｓ  ｅｔ  ａｌ（２００９），Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｃｈｉｌｄ  Ａｄｏｌｅｓｃ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，４８（１１）：１１１０−１１１９，およびＡｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ，Ａｂｅｒｒａｎｔ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  Ｃｈｅｃｋｌｉｓｔ：Ｍａｎｕａｌ．Ｅａｓｔ  Ａｕｒｏｒａ，ＮＹ：Ｓｌｏｓｓｏｎ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ；１９８６に記載されている異常行動チェックリストを使用して、ヒトで臨床的に測定することができる。
【００５７】
本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒトもしくは非ヒト哺乳動物（イヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ラバ、ウシ、家畜スイギュウ、ラクダ、ラマ、アルパカ、バイソン、ヤク、ヤギ、ヒツジ、ブタ、エルク、シカ、家畜アンテロープを含むがこれらに限定されない）、または１つ以上の微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の除去のために選択もしくは特定された、または自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）、統合失調症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、脆弱Ｘ症候群、レット症候群、結節性硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症を含む）および／またはアルツハイマー病を含むがこれらに限定されない、腸内微生物叢の変化に関連する神経疾患もしくは神経障害、またはそれらの任意の症状の治療、阻害、改善のために選択または特定された非ヒト霊長類を指す。
【００５８】
「〜有することが疑わしい対象」とは、疾患または状態のうちの１つ以上の臨床指標を示す対象を指す。特定の実施形態では、疾患または状態は、自閉症スペクトラム障害、不安障害、脆弱Ｘ症候群、レット症候群、結節性硬化症、強迫性障害、注意欠陥障害および／または統合失調症のうちの１つ以上を含み得る。
【００５９】
「それを必要とする対象」は、１つ以上の微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）を除去または隔離する組成物を必要とするもの、または自閉症スペクトラム障害、不安障害、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症、純粋自律神経障害を含む）、またはそれらの任意の組合せなどの、腸内微生物叢の変化に関連する神経疾患もしくは神経障害の治療、阻害、改善を必要とするものとして選択または特定された対象を指す。
【００６０】
「治療効果」は、疾患または障害の症状のうちの１つ以上を少なくともある程度軽減または緩和し、疾患または障害の治癒を含む。「治癒」とは、活動性疾患の症状が除去されることを意味する。しかしながら、治癒が得られた後でも、疾患の特定の長期的または永続的な影響（例えば組織の損傷）が存在する場合がある。
【００６１】
「改善」とは、状態または疾患のうちの少なくとも１つの指標の重症度の軽減を指す。特定の実施形態では、改善には、状態または疾患のうちの１つ以上の指標の進行の遅延または減速が含まれる。指標の重症度は、当業者に知られている主観的または客観的尺度により決定され得る。
【００６２】
「調節」とは、機能または活性の摂動を指す。特定の実施形態では、調節とは、遺伝子発現の増加を指す。特定の実施形態では、調節とは、遺伝子発現の減少を指す。特定の実施形態では、調節とは、特定のタンパク質の総血清レベルの増加または減少を指す。特定の実施形態では、調節とは、特定のタンパク質の遊離血清レベルの増加または減少を指す。特定の実施形態では、調節とは、特定の非タンパク質因子、例えば代謝産物の総血清レベルの増加または減少を指す。特定の実施形態では、調節とは、特定の非タンパク質因子の遊離血清レベルの増加または減少を指す。特定の実施形態では、調節とは、特定のタンパク質の総生物学的利用能の増加または減少を指す。特定の実施形態では、調節は、特定の非タンパク質因子の総生物学的利用能の増加または減少を指す。
【００６３】
「脂質番号」は、脂肪酸および脂質の構造的特徴を定義するのに使用される、当該技術分野で認められている用語である。例えば、「ドコサペンタエン酸（ｎ３  ＤＰＡ；２２：５ｎ３）」における「２２」は、炭素の総数を指す。「５」は、不飽和（二重）結合の総数を指し、「ｎ３」は、最初の不飽和が生じる炭素原子の位置を指し、カルボキシレート基の反対側の端部から数えられる。
【００６４】
隔離剤製剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って投与される組成物は、吸着剤、ポリマー、粘土または樹脂のうちの１つ以上を含み得るか、本質的にそれらから成り得るか、またはそれらから成り得るものであって、前記吸着剤、ポリマー、粘土または樹脂はさらに、活性炭、アパタイトまたはヒドロキシアパタイト、カオリン、ベントナイト、ペクチン、セルロースポリマー、イオン交換樹脂、コレスチラミンポリマー、テトラエチレンペンタミンポリマー、フェノール樹脂、ボロン酸提示ポリマー、カテキン提示ポリマー、ゼオライト、および／もしくはナノ粒子、またはそれらの任意の組合せを含み得る。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本開示の方法によれば、投与される隔離剤組成物は、炭素材料または活性炭材料を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。前記炭素材料または活性炭材料は、５〜４０ｎｍ、２５〜１００ｎｍ、５０〜３００ｎｍ、１５０〜５００ｎｍ、３００ｎｍ〜１μｍ、０．５μｍ〜２μｍ、１μｍ〜５μｍ、２．５〜１０μｍ、６〜２０μｍ、１５〜５０μｍ、３０〜１００μｍ、７５〜１５０μｍ、１００〜３００μｍ、２５０〜５００μｍ、３００〜７５０μｍ、６００μｍ〜１ｍｍ、もしくは１ｍｍよりも大きい平均粒度、または前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有する。いくつかの実施形態では、前記炭素材料または活性炭材料は、３００μｍ〜１ｍｍ、１〜３ｍｍ、２〜５ｍｍ、もしくは５ｍｍを超える粒度、または前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有する。前記炭素材料または活性炭材料は、複数の細孔および２０ｍ２／ｇ〜５０００ｍ２／ｇ、例えば２０、５０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００ｍ２／ｇなどの範囲の比表面積、または前述の表面積のいずれか２つにより定義される範囲内の比表面積を有する。比表面積は、例えば、ブルナウアー・エメット・テラーの方法（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９３８），６０：３０９−３１１）および／または水銀ポロシメトリーなどの既知の方法を使用して測定することができる。例えば、ＡＳＴＭ試験方法Ｄ３６６３、Ｄ６５５６およびＤ４５６７を参照されたい。これらの各試験を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【００６６】
前記炭素材料または活性炭材料はさらに、０．１ｃｍ３／ｇ〜１．５ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜１ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．９ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇである特定の細孔容積（直径１．７ｎｍ〜１００ｎｍを有する細孔に基づいて測定される）、または細孔径および比細孔容積を測定するための方法、例えばＢａｒｒｅｔｔ，Ｊｏｙｎｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｌｅｎｄａ（１９５１），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７３：３７３−３８０およびＡＳＴＭ  Ｄ４２２２−０３（２００８）（本明細書では「ＢＪＨ法」と呼ばれる方法）に記載されている方法（これらは両方とも、本明細書の一部を構成するものとして明示的に援用する）によるか、または水銀ポロシメトリーの方法（例えば、メーカーの指示に従って、例えば、Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ  Ａｕｔｏｐｏｒｅ  Ｖ  ９６０５  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｏｒｏｓｉｍｅｔｅｒ（Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）などの水銀ポロシメーターを使用する）により測定して、前述の値のいずれか２つにより定義される範囲を有し得る。例えば、ＡＳＴＭ  ３６６３、ＡＳＴＭ  Ｄ−４２８４−１２およびＤ６７６１−０７（２０１２）を参照されたい。これらのすべてを、本明細書の一部を構成するものとして援用する。前記炭素材料または活性炭材料はさらに、ＢＪＨ法および／または水銀ポロシメトリーにより測定して、２ｎｍ〜１００ｎｍの範囲の平均細孔径を有し得る。より典型的には、炭素材料または活性炭材料は、２〜５ｎｍ、３〜９ｎｍ、６〜１５ｎｍ、１０ｎｍ〜９０ｎｍの範囲の平均細孔径、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有し得る。いくつかの実施形態では、平均細孔径は、１０ｎｍ〜８０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜７０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜６０ｎｍ、頻繁に１０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。いくつかの実施形態では、平均細孔径は、２０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。これらの特定の実施形態では、平均細孔径は、２０ｎｍ〜９０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜８０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜７０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜６０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＡＢ−２００４製剤を含む吸着剤の投与を企図する。本明細書で使用される「ＡＢ−２００４」または「ＡＢ−２００４製剤」という用語は、（ａ）ブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された、少なくとも５００ｍ２／ｇ、少なくとも６００ｍ２／ｇ、少なくとも７００ｍ２／ｇもしくは少なくとも８００ｍ２／ｇの最小平均比表面積およびブルナウアー・エメット・テラー（ＢＥＴ）法により測定された、２０００ｍ２／ｇ未満、３０００ｍ２／ｇ未満もしくは４０００ｍ２／ｇ未満の最大平均比表面積、ならびに／またはラングミュアの吸着等温式により測定された、少なくとも５００ｍ２／ｇ、少なくとも１０００ｍ２／ｇもしくは少なくとも２０００ｍ２／ｇの最小平均比表面積を有する球状活性炭粒子；ならびに（ｂ）少なくとも０．００５ｍｍ、少なくとも０．０１ｍｍ、少なくとも０．０５ｍｍの最小平均粒径および１．５ｍｍ未満、１ｍｍ未満もしくは０．２ｍｍ未満の最大平均粒径を有する球状活性炭粒子の製剤を指す。いくつかの実施形態では、ＡＢ−２００４製剤は、０．５重量％以上の窒素原子を含む活性炭粒子を含む。前記球状活性炭は、炭素源として、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂、または窒素原子を含有するイオン交換樹脂を使用して調製することができる。この場合、前記熱可塑性樹脂またはイオン交換樹脂は、アクリロニトリル、エチルアクリロニトリル、メチルアクリロニトリル、ジフェニルアクリロニトリルおよびクロロアクリロニトリルからなる群から選択されるモノマーを含んでよく、前記熱硬化性樹脂は、メラミンおよび尿素からなる群から選択されるモノマーを含んでよい。前記球状活性炭はさらに表面修飾されていなくてもよく、０．４０〜１．００ｍｅｑ／ｇ、０．４０ｍｅｑ／ｇ未満（ただしゼロではない）、０．３０ｍｅｑ／ｇ未満（ただしゼロではない）の酸性基総含有量および／または０．４０〜１．１０ｍｅｑ／ｇの塩基性基の総量を有していてよい。あるいは前記球状活性炭は、例えば酸化により表面修飾することができ、これは、０．１体積％〜５０体積％、１体積％〜３０体積％または３体積％〜２０体積％の酸素を含有する雰囲気中で、３００℃〜８００℃または３２０℃〜６００℃の温度にて実施することができる。前記球状活性炭はさらに修飾されていてもよいか、あるいは他の手順、例えば還元により表面修飾することができ、これは、８００℃〜１２００℃または８００℃〜１０００℃の温度にて実施することができる。
【００６８】
「活性炭」としても知られており、ＡＢ−２００４製剤を含む非吸収性球状粒子製剤の製造に有用な例示的な炭素／活性炭材料は、株式会社クレハ（日本）、アディティア・ビルラ・グループ（インド）、オリオン・エンジニアド・カーボンズ株式会社（ルクセンブルグ）、アズベリー・グラファイト・ミルズ社（ニュージャージー州アズベリー）、キャボットコーポレーション（マサチューセッツ州ボストン）、コンチネンタル・カーボン・カンパニー（テキサス州ヒューストン）、シド・リチャードソン・カーボン・アンド・エナジー社（テキサス州フォートワース）およびイメリス・グラファイト＆カーボン社（スイス）を含む多数のメーカーから入手可能である。これらおよび他のメーカーの様々な活性炭／活性炭製品は、ＡＢ−２００４製剤で使用したり、ＡＢ−２００４製剤で使用するために適合または変更したりすることができる。
【００６９】
本発明の特定の球状活性炭ＡＢ−２００４製剤を含む球状活性炭の製造方法は、米国特許第９，８７７，９８７号明細書、米国特許第８，３０９，１３０号明細書、米国特許第７，６５１，９７４号明細書、米国特許第４，７６１，２８４号明細書および米国特許第４，６８１，７６４号明細書に見出すことができ、これらの各明細書を、特に球状活性炭組成物の作製方法およびそれにより作製された球状活性炭組成物の開示に関して、ここに本明細書の一部を構成するものとして明示的に援用する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本開示の方法によれば、隔離剤組成物は、アパタイトまたはヒドロキシアパタイトのうちの１つ以上を含み得る。前記アパタイトまたはヒドロキシアパタイトは、５〜４０ｎｍ、２５〜１００ｎｍ、５０〜３００ｎｍ、１５０〜５００ｎｍ、３００ｎｍ〜１μｍ、０．５μｍ〜２μｍ、１μｍ〜５μｍ、２．５〜１０μｍ、６〜２０μｍ、１５〜５０μｍ、３０〜１００μｍ、７５〜１５０μｍ、１００〜３００μｍ、２５０〜５００μｍ、３００〜７５０μｍ、６００μｍ〜１ｍｍ、もしくは１ｍｍよりも大きい平均粒度、または前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有し得る。いくつかの実施形態では、前記アパタイトまたはヒドロキシアパタイトは、３００μｍ〜１ｍｍ、１〜３ｍｍ、２〜５ｍｍ、もしくは５ｍｍよりも大きい粒度、または前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有し得る。前記アパタイトまたはヒドロキシアパタイトはまた、複数の細孔および２０ｍ２／ｇ〜５００ｍ２／ｇ、例えば２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５もしくは５００ｍ２／ｇなどの範囲の比表面積、または前述の表面積のいずれか２つにより定義される範囲内の比表面積を有し得る。比表面積は、上記のように、例えば、ブルナウアー・エメット・テラーの方法および／または水銀ポロシメトリーなどの既知の方法を使用して測定することができる。
【００７１】
アパタイトまたはヒドロキシアパタイト隔離剤はさらに、０．１ｃｍ３／ｇ〜１．５ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜１ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．９ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇである特定の細孔容積（直径１．７ｎｍ〜１００ｎｍを有する細孔に基づいて測定される）、または細孔径および比細孔容積を測定するための方法、上記のように、例えばＢＪＨ法によるか、または水銀ポロシメトリーにより測定して、前述の値のいずれか２つにより定義される範囲を有し得る。前記アパタイトまたはヒドロキシアパタイト隔離剤はさらに、ＢＪＨ法および／または水銀ポロシメトリーにより測定して、１０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲の平均細孔径を有し得る。より典型的には、アパタイトまたはヒドロキシアパタイト隔離剤は、ＢＪＨ法および／または水銀ポロシメトリーにより測定して、２ｎｍ〜９０ｎｍの範囲の平均細孔径を有し得る。いくつかの実施形態では、平均細孔径は、２〜５ｎｍ、３〜９ｎｍ、６〜１５ｎｍ、１０ｎｍ〜８０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜７０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜６０ｎｍ、頻繁に１０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。いくつかの実施形態では、平均細孔径は、ＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、２０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲にある。これらの特定の実施形態では、平均細孔径は、２０ｎｍ〜９０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜８０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜７０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜６０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。アパタイトまたはヒドロキシアパタイト隔離剤の例示的な形態には、粉砕粒子、噴霧乾燥粒子、球状ナノ粒子および球形マイクロ粒子が含まれる。
【００７２】
本開示の方法によるいくつかの実施形態では、隔離剤組成物は、Ｍｉｃｒｏ−Ｃｅｌ  Ｅ（商標）製品（イメリス・グラファイト＆カーボン社、ビロニコ、スイス）などの摂取可能な多孔質シリカ化合物（例えばカルシウムシリカ水和物）のうちの１つ以上を含み得るか、本質的にそれらから成り得るか、またはそれらから成り得る。いくつかの実施形態では、本開示の方法によれば、隔離剤組成物は、摂取可能な多孔質シリカ化合物を含む。前記摂取可能な多孔質シリカ化合物は、５〜４０ｎｍ、２５〜１００ｎｍ、５０〜３００ｎｍ、１５０〜５００ｎｍ、３００ｎｍ〜１μｍ、０．５μｍ〜２μｍ、１μｍ〜５μｍ、２．５〜１０μｍ、６〜２０μｍ、１５〜５０μｍ、３０〜１００μｍ、７５〜１５０μｍ、１００〜３００μｍ、２５０〜５００μｍ、３００〜７５０μｍ、６００μｍ〜１ｍｍ、もしくは１ｍｍよりも大きい平均粒度、または前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有し得る。いくつかの実施形態では、前記摂取可能な多孔質シリカ化合物は、３００μｍ〜１ｍｍ、１〜３ｍｍ、２〜５ｍｍ、もしくは５ｍｍよりも大きい粒度、または前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズを有し得る。前記摂取可能な多孔質シリカ化合物はまた、複数の細孔および２０ｍ２／ｇ〜５００ｍ２／ｇ、例えば２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５もしくは５００ｍ２／ｇなどの範囲の比表面積、または前述の表面積のいずれか２つにより定義される範囲内の比表面積を有し得る。比表面積は、上記のように、例えば、ブルナウアー・エメット・テラーの方法および／または水銀ポロシメトリーなどの既知の方法を使用して測定することができる。
【００７３】
前記摂取可能な多孔質シリカ化合物はさらに、０．１ｃｍ３／ｇ〜１．５ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．１ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．２ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜１ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．９ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．８ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．７ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．６ｃｍ３／ｇ、０．３ｃｍ３／ｇ〜０．５ｃｍ３／ｇである特定の細孔容積（直径１．７ｎｍ〜１００ｎｍを有する細孔に基づいて測定される）、または細孔径および比細孔容積を測定するための方法、上記のように、例えばＢＪＨ法によるか、または水銀ポロシメトリーにより測定して、前述の値のいずれか２つにより定義される範囲を有し得る。前記摂取可能な多孔質シリカ化合物はさらに、ＢＪＨ法および／または水銀ポロシメトリーにより測定して、２ｎｍ〜１００ｎｍの範囲の平均細孔径を有し得る。より典型的には、前記摂取可能な多孔質シリカ化合物は、ＢＪＨ法および／または水銀ポロシメトリーにより測定して、２ｎｍ〜９０ｎｍの範囲の平均細孔径を有し得る。いくつかの実施形態では、平均細孔径は、２〜５ｎｍ、３〜９ｎｍ、６〜１５ｎｍ、１０ｎｍ〜８０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜７０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜６０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。いくつかの実施形態では、平均細孔径は、ＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、２０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲にある。これらの特定の実施形態では、平均細孔径は、２０ｎｍ〜９０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜８０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜７０ｎｍ、もしくは２０ｎｍ〜６０ｎｍ、もしくは１０ｎｍ〜５０ｎｍの範囲にあるか、またはＢＪＨ法および／もしくは水銀ポロシメトリーにより測定して、前述のサイズのいずれか２つにより定義される範囲内のサイズである。例示的な摂取可能な多孔質シリカ化合物は、例えば米国特許第６，６６６，２１４号明細書に記載されている。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本開示の方法によれば、隔離剤組成物は、１つ以上の摂取可能な炭化水素またはタンパク質ポリマーを含み得る。例示的な摂取可能なポリマーには、グアー、ガム、コンドロイチンベースのポリマー、ポリエチレンオキシドポリマーおよびポリエステル、ポリ乳酸、ポリ乳酸−コ−グリコール酸、セルロース、ニトロセルロース、キチン、キトサン、ポリエチレンオキシド、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラテート）、ポリ（ε−カプロラクトン）、ポリグリコリド、ポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリブチルシアノアクリレート、アルジネート、ポリ（無水アジピン酸）、１，５−ジオキセパン−２−オン、Ｄ，Ｌ−ジラクチド、ポリ酢酸ビニルフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸エステルコポリマー、トリメリテート、ポリ（メタクリル酸）、ポリウレタン、ポリシロキサン、ポリメチルメタクリレート、ポリビニルアルコール、ポリエチレン、ポリビニルピロリドン、エポキシ樹脂、ポリ２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド；ポリエチレン−コ−酢酸ビニル、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリラクチド−コ−グリコリド、ポリ無水物、および／もしくはポリオルトエステル、および／もしくはポリフルオロアクリル酸、または当業者に知られている他のもの、またはそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。これらおよび他の多くの薬学的に許容されるポリマーは、ダウ・デュポン（ミシガン州ミッドランド）から入手可能である。
【００７５】
本開示の方法によるいくつかの実施形態では、隔離剤組成物は、１つ以上のセルロースポリマーを含み得る。例示的なセルロースポリマーには、セルロースエーテル、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、セルロースエステル、酢酸セルロース、酢酸トリメリット酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸フタル酸セルロースおよび／もしくは酢酸プロピオン酸セルロース、または当業者に知られている他のもの、ならびにそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。例示的なセルロースポリマーは、ゲル浸透クロマトグラフィーにより測定して、１０Ｋ、２５Ｋ、５０Ｋ、１００Ｋ、１５０Ｋ、２００Ｋ、２５０Ｋ、５００Ｋ、７５０Ｋ、１０００Ｋ以上、または本明細書に開示される値のいずれか２つにより定義される範囲内の平均分子量を有する酢酸プロピオン酸セルロースを含み得る。
【００７６】
本開示の方法によるいくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の弱塩基アミン含有樹脂および／または海泡石を含み得る。例示的なアミン含有樹脂には、ポリアクリルアミド、キトサン、アミン誘導体化ポリ（メチルアクリレート）、エポキシアミン樹脂、および／もしくは本明細書に開示される任意のポリマーもしくは樹脂のアミン誘導体、またはそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。
【００７７】
本開示の方法によるいくつかの実施形態では、隔離剤組成物は、１つ以上のイオン交換樹脂を含み得るか、本質的にそれから成り得るか、またはそれから成り得る。例示的なイオン交換樹脂には、セルロース、ポリスチレン、アクリル酸エステル、スルホン酸ポリマー、スルホン酸エステル、ポリエチレンイミン、ポリアミド、ポリスチレン−ジビニルベンゼン、またはポリフェノール−ホルムアルデヒド、または他の化合物を含み得る。市販のイオン交換樹脂には、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ（登録商標）またはＤｏｗｅｘ（登録商標）が含まれるが、これらに限定されない
【００７８】
いくつかの実施形態では、隔離剤組成物は粘土化合物を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、ベントナイト、アルミナ、または当該技術分野で知られている他の粘土化合物を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物はゼオライトを含み得る。いくつかの更なる実施形態では、前記組成物はクリノプチロライトを含み得る。いくつかの実施形態では、前記クリノプチロライトは、（Ｎａ，Ｋ，Ｃａ）２−３Ａｌ３（Ａｌ，Ｓｉ）２Ｓｉ１３Ｏ３６・１２Ｈ２Ｏの一般的な化学量論比を有し得る。
【００７９】
本明細書に開示されるか、または当該技術分野で知られている樹脂、粘土、ポリマー、セルロース誘導体などは、本開示の方法による投与に適するように、従来の手段、例えば架橋またはアミノ化により修飾させることができると当業者により理解される。
【００８０】
いくつかの実施形態では、隔離剤組成物は、複数回投与することができる。いくつかの更なる実施形態では、同じ隔離剤組成物は、毎回投与される。いくつかの更なる実施形態では、後続の投与で投与される隔離剤組成物は、初回投与または以前の任意の投与で投与された隔離剤組成物とは異なり得る。いくつかの実施形態では、隔離剤組成物の最初の投与前に特定されたレベルと比較して低下した腸内代謝産物のレベルを維持するのに必要な期間だけ、本明細書に記載される間隔で更なる投与を用いることができる。
【００８１】
本開示の方法によるいくつかの実施形態では、隔離剤組成物および方法はさらに、例えば、１つ以上の隔離剤を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる組成物の投与前、投与中または投与後に、プロバイオティック組成物またはプロバイオティック組成物の投与を含み得る。いくつかの実施形態では、隔離剤組成物および／または方法は、プレボテーラ種（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビフィドバクテリア種（Ｂｉｆｉｄｏ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、パラバクテロイデス種（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｐ．メルダエ、Ｐ．ディスタソニス）、フィーカリバクテリウム種（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｆ．プラウスニッツィ）、ユーバクテリウム種（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コプロコッカス種（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｉｓ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、バクテロイデス・オバツス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）および／もしくはバクテロイデス・シータイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含むことができ、これは、１つ以上の隔離剤を含む組成物の投与前、投与中または投与後に投与することができる。いくつかの実施形態では、本開示の方法はさらに、隔離剤組成物の成分としてのプロバイオティック組成物の投与を含む。いくつかの実施形態では、本開示の方法はさらに、隔離組成物に加えてプロバイオティック組成物の投与を含む。
【００８２】
製剤および投与方法
「投与する」とは、医薬品、栄養補助食品または組成物を対象に提供することを指し、医療専門家による投与および自己投与が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩の投与は、経口、腹腔内または直腸内を含むがこれらに限定されない類似の有用性を提供する薬剤の許容される投与様式のいずれかによるものであり得る。経口投与は、好ましい実施形態の主題である組成物を投与する際に慣習的である。しかしながら、いくつかの実施形態では、組成物は、注腸または坐剤などにより直腸内投与される。いくつかの実施形態では、化合物の投与は、例えば、アフェレーシスまたは透析により体外で行われ得る。
【００８３】
「薬剤」という用語には、任意の物質、分子、元素、化合物、実体、またはそれらの組合せが含まれる。それには、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたは模倣体、有機小分子、多糖、ポリヌクレオチド、ポリマー、樹脂、有機または無機マイクロ粒子、有機または無機ナノ粒子などが含まれるが、これらに限定されない。天然物、合成化合物、化学化合物、または２つ以上の物質の組合せであり得る。
【００８４】
上記の有用な化合物は、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）、統合失調症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、脆弱Ｘ症候群、レット症候群、結節性硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症を含む）および／またはアルツハイマー病などの腸内微生物叢の変化に関連する神経疾患または神経障害の治療、阻害または改善に使用するための医薬組成物および／または栄養補助食品に製剤化することができる。本明細書の一部を構成するものとして援用されるレミントン著「薬学の科学と実践」、第２１版、リピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンス（２００５年）に開示されているような標準的な医薬品および／または栄養補助食品製剤技術が使用される。したがって、いくつかの実施形態には、（ａ）安全で治療有効量の本明細書に記載される１つ以上の化合物またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはそれらの組合せとを含む、本質的にそれらからなるか、またはそれらから本質的になる医薬組成物および／または栄養補助食品組成物が含まれる。
【００８５】
「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」という用語には、あらゆる任意の溶媒、希釈剤、乳化剤、結合剤、緩衝剤、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤など、または医薬製剤の調製に有用であることが当業者に知られている他の任意の化合物が含まれる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と適合しない場合を除いて、治療組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性成分も組成物中に組み込むことができる。さらに、当該技術分野で通常使用されているような様々なアジュバントを含めることができる。これらおよび他のそのような化合物は、例えば、メルク・アンド・カンパニー（ニュージャージー州ラーウェイ）のＭｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘのなどの文献に記載されている。医薬組成物に様々な成分を含めることに関する考慮すべき事項は、例えば、Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）（１９９０）；グッドマン・ギルマン著「薬物治療の基礎と臨床」、第８版、ペルガモン出版社に記載されている。
【００８６】
薬学的に許容される担体またはその成分として機能し得る物質のいくつかの例は、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；コーンスターチおよびポテトスターチなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ステアリン酸およびステアリン酸マグネシウムなどの固体滑沢剤；硫酸カルシウム；ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびテオブロマ油などの植物油；プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；アルギン酸；ＴＷＥＥＮＳなどの乳化剤；ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤；着色剤；着香剤；錠剤化剤、安定剤；抗酸化剤；保存剤；パイロジェンフリー水；等張食塩水；および／またはリン酸緩衝液、またはそれらの任意の組合せである。
【００８７】
本明細書に記載される組成物は、好ましくは単位剤形で提供される。本明細書で使用される「単位剤形」は、良好な医療慣行に従って、単回投与での対象への投与に適した量の化合物を含有する組成物である。しかしながら、単回または単位剤形の調製は、剤形が１日１回または治療過程ごとに１回投与されることを含意しない。単位剤形は、単回１日用量または分割副用量を含み得るか、本質的にそれから成り得るか、またはそれから成り得るものであって、いくつかの単位剤形は、１日用量を完了するために１日にわたって投与されることになる。本開示によれば、単位剤形は、１日１回よりも多かれ少なかれ頻繁に投与することができ、治療過程中に２回以上投与することができる。そのような剤形は、経口、直腸内、経鼻および／または非経口を含む、それらの製剤と一致する任意の方法で投与することができる。単回投与が特に企図されるが、本明細書に記載の方法に従って投与される組成物は、連続注入として、または埋め込み可能な注入ポンプを介して投与することもできる。
【００８８】
本明細書に記載の方法は、例えば、経口、経鼻または直腸内投与経路などの、多岐にわたる投与経路のための多岐にわたる適切な形態のいずれかを利用することができる。所望される特定の投与経路に応じて、当該技術分野で周知の多岐にわたる薬学的に許容される担体を使用することができる。薬学的に許容される担体には、例えば、固体または液体の充填剤、希釈剤、ヒドロトロープ、界面活性剤およびカプセル封入物質が含まれる。製剤中の１つ以上の化合物の活性を実質的に妨げない任意の薬学的に活性な材料を含めることができる。化合物と併用される担体の量は、化合物の単位用量当たりの投与のための材料の実用的な量を提供するのに十分である。本明細書に記載の方法に有用な剤形を作製するための技術および組成物は、以下の参考文献に記載されており、これらのすべてを、本明細書の一部を構成するものとして援用する：最新薬理学、第４版、第９章および第１０章（Ｂａｎｋｅｒ  ＆  Ｒｈｏｄｅｓ編、２００２年）；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，医薬剤形：錠剤（１９８９年）；アンセル著「医薬剤形入門」、第８版（２００４年）。
【００８９】
錠剤、カプセル剤、顆粒および／またはバルク粉末などの固体形態を含む、様々な経口剤形を使用することができる。錠剤は、圧縮、錠剤粉砕、腸溶コーティング、糖コーティング、フィルムコーティングまたは多重圧縮することができ、適切な結合剤、滑沢剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、着香剤、流動誘発剤および融解剤を含有する。液体経口剤形には、適切な溶媒、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、希釈剤、甘味剤、融解剤、着色剤および／または着香剤、またはそれらの任意の組合せを含有する、非発泡性顆粒から再構成された水溶液、乳濁液、懸濁液、溶液および／または懸濁液、ならびに発泡性顆粒から再構成された発泡性調製物が含まれる。
【００９０】
経口投与のための単位剤形の調製に適した薬学的に許容される担体は、当該技術分野で周知である。錠剤は、典型的には、不活性希釈剤として、薬学的に適合性のある従来のアジュバント、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトースおよび／またはセルロース；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンおよびスクロース；崩壊剤、例えばデンプン、アルギン酸および／またはクロスカルメロース；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースおよび／またはタルクを含む。錠剤は、ポロキサマー、クレモフォール／Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）／Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）、もしくはメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの可溶化剤または乳化剤、または当該技術分野で知られている他のもの、またはそれらの任意の組合せを含み得る。二酸化ケイ素などの流動化剤は、粉末混合物の流動特性を改善するのに使用することができる。ＦＤ＆Ｃ色素などの着色剤は、外観のために添加することができる。甘味剤および着香剤、例えばアスパルテーム、サッカリン、メントール、ペパーミントおよびフルーツフレーバー、またはそれらの任意の組合せは、チュアブル錠剤のための有用なアジュバントである。カプセル剤は、典型的には、上記で開示される１つ以上の固体希釈剤を含む。担体成分の選択は、風味、費用および貯蔵性などの二次的考察に応じて決まり、当業者により容易に行われ得る。
【００９１】
経口（ＰＯ）組成物にはまた、液体溶液、乳濁液または懸濁液が含まれる。そのような組成物の調製に適した薬学的に許容される担体は、当該技術分野で周知である。シロップ、エリキシル、乳濁液および懸濁液のための担体の典型的な成分には、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、液体スクロース、ソルビトールおよび／または水が含まれる。懸濁液については、典型的な懸濁化剤には、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ＡＶＩＣＥＬ  ＲＣ?５９１、トラガカントおよび／またはアルギン酸ナトリウムが含まれ、典型的な湿潤剤には、レシチンおよびポリソルベート８０が含まれ、典型的な保存剤には、メチルパラベンおよび／もしくは安息香酸ナトリウム、またはそれらの任意の組合せが含まれる。経口液体組成物はまた、上記で開示される甘味剤、着香剤および／または着色剤などの１つ以上の成分を含有し得る。経口組成物はまた、キャンディー、アップルソース、ヨーグルト、ソフトプディング、ゼラチン食品材料、ジュース、牛乳、大豆もしくはナッツ飲料、増粘飲料もしくはチーズ、またはそれらの任意の組合せなどの食品材料の形態であり得る。
【００９２】
そのような組成物はまた、対象の１つ以上の化合物が、所望の施用の付近の胃腸管において、または所望の作用を長引かせるために様々な時間で放出されるように、従来の方法により、典型的にはｐＨまたは時間依存性コーティングでコーティングされ得る。胃腸管での放出のための例示的な剤形は、酢酸フタル酸セルロース、ポリ酢酸ビニルフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、エチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔコーティング、ワックスおよび／もしくはシェラック、または当該技術分野で知られている他の賦形剤のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを組み込むことができる。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法に従って投与される組成物は、胃腸管での放出のために製剤化される。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の方法に従って投与される組成物は、下部胃腸管での放出のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、腸溶コーティングされたカプセル、錠剤、ソフトゲルとして提供されるか、または本質的に腸溶カプセルとして提供される。
【００９３】
本明細書に記載される組成物の実際の単位用量は、製剤中の１つ以上の化合物に応じて決まる。いくつかの実施形態では、製剤中の各化合物の量は、１日当たり体重１ｋｇにつき５ｍｇ〜５００ｍｇ以上、１日当たり体重１ｋｇにつき１０ｍｇ以下〜７０ｍｇ、５０ｍｇ〜８０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇにつき７０ｍｇ〜１２０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇにつき１００ｍｇ〜３００ｍｇ、または１日当たり体重１ｋｇにつき２５０ｍｇ〜５００ｍｇであり得る。いくつかの実施形態では、用量は、１日当たり体重１ｋｇにつき１００ｍｇ、５００ｍｇ、３００ｍｇ、２００ｍｇ、１５０ｍｇ、１００ｍｇ、５０ｍｇ、４０ｍｇ、３０ｍｇ、２５ｍｇ、２０ｍｇ、１０ｍｇ、７．５ｍｇ、６ｍｇ、５ｍｇ、４ｍｇ、３ｍｇ、２．５ｍｇ、もしくは１ｍｇ未満、または前述の量のいずれか２つにより定義される範囲内の量であり得る。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は、１日当たり体重１ｋｇにつき５、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、もしくは２００ｍｇであるか、または前述の量のいずれか２つにより定義される範囲内の量である。したがって、例えば、７０ｋｇの人への投与の場合、用量範囲は、３５０ｍｇ〜７５０ｍｇ、５００ｍｇ〜１ｇ、７５０ｍｇ〜２ｇ、１ｇ〜５ｇ、２．５ｇ〜６ｇ、４ｇ〜１０ｇ、８ｇ〜２０ｇ、１５ｇ〜３５ｇ、もしくは１ｇ以下〜３５ｇ以上、または前述の量のいずれか２つにより定義される範囲内の量である。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は６ｇである。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は１０ｇである。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は３５ｇである。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は１ｇ以下であるがゼロではない。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は１０ｇ以下であるがゼロではない。いくつかの実施形態では、実際の単位用量は３５ｍｇ以下であるがゼロではない。
【００９４】
本明細書で使用される「負荷用量」とは、後続の用量よりも高い化合物の初期用量を指す。
【００９５】
本明細書で使用される「維持用量」とは、負荷用量に続く後続用量を指し、負荷用量よりも時間的に遅く発生する。当業者は、維持用量の投与形態または投与様式が、負荷用量に使用されるものとは異なり得ることを認識するであろう。本明細書に開示される実施形態のいずれにおいても、維持用量は、月単位または月に複数回、隔週単位または２週間毎に複数回、週単位または週に複数回、週単位または日に複数回を含む、本明細書で企図される任意の投与スケジュールでの単位剤形の投与を含み得るが、これらに限定されない。本開示内では、投薬休日を維持用量の投薬期間中に組み込むことができると企図される。そのような投薬休日は、負荷用量の投与直後、または維持用量の投与期間中の任意の時点で見出され得る。本明細書で使用される維持用量の投与期間は、治療期間の「維持段階」と呼ばれ得る。
【００９６】
本明細書で使用される「投与様式」とは、１つ以上の化合物が対象に投与される手段を指す。本明細書で使用される「投与様式」は、剤形（例えば、錠剤、粉末、溶解液、懸濁液、乳濁液など）および剤形が対象に適用されるメカニズム（例えば、ピル、溶解液、経口懸濁液などによる経口手段）を含む。本明細書で使用される「投与様式」はまた、化合物が対象に投与される用量、投与量および投与スケジュールを含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って投与される組成物は、食品材料、飲料、もしくは他の摂取可能な品目と共に提供されるか、またはそれらに混合される。いくつかの実施形態では、前記飲料、食品材料もしくは他の摂取可能な品目は、キャンディー、アップルソース、ヨーグルト、ソフトプディング、ゼラチン食品材料、ジュース、牛乳、大豆もしくはナッツ飲料、増粘飲料もしくはチーズのうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含み得るか、本質的にそれらから成り得るか、またはそれらから成り得る。本開示の方法に従って投与される組成物の組合せを任意の適切な食品または飲料と組み合わせて、組成物の摂取を促進できることが当業者に容易に認識されよう。
【００９８】
一部の代謝産物のレベルは外部刺激に応じて変動することが予想されるため、本開示による方法は、治療の有効性を高めるために、例えば、対象の身体と微生物の両方に関わる健康を維持するように、有害な代謝産物の除去を最適化するか、または有用な代謝産物の除去を制限することにより、本明細書に記載される組成物の投与タイミングを変更または制御することを企図する。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って投与される組成物は、食事または食品材料の他の摂取と同時になど、食品と共に投与することができる。いくつかの更なる実施形態では、本開示の方法に従って投与される組成物は、食事または食品材料の他の摂取の直前または直後に投与することができる。いくつかの更なる実施形態では、本開示の方法に従って投与される組成物は、１〜５分以内、３〜１０分以内、６〜１５分以内、１０〜２０分以内、１５〜３０分以内、２０〜４５分以内に、または食事もしくは食品材料の他の摂取の前後１時間以内に投与することができる。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って投与される組成物は、食品なしで、食事または食品材料の他の摂取の前後、例えば、１から３時間の間で、２から５時間の間で、４から８時間の間で、６から１２時間の間で、９から１８時間の間で、１２から２４時間の間で、または２４時間を超えて投与することができる。
【００９９】
本明細書で使用される「治療期間」とは、最初の用量の投与から始まり、最終用量の投与で終わる時間を指し、そのような時間の長さは、治療される対象の症状および健康に関して、神経障害または腸管透過性亢進（腸管壁浸漏）を伴う障害を治療する当業者により決定される。そのような期間は、本明細書に開示されるように、または神経障害および腸管透過性亢進（腸管壁浸漏）を伴う障害を治療する当業者により知られているように、代謝産物のレベルの定期的、散発的、または継続的な監視を参照して決定することができる。
【０１００】
本明細書で使用される「投薬休日」とは、２４時間以上の期間を指し、その期間中、対象に用量が投与されないか、減少させた用量が対象に投与される。本明細書で使用される「減少させた用量」とは、対象に投与される１日の総用量よりも少ない用量を指す。
【０１０１】
本明細書に開示される方法によれば、血清代謝産物の減少は、対象が一定の時間の投薬において周期的な部分的または完全な減少を経験し、その後に投薬を再開するように投薬スケジュールを調整することにより達成される。いくつかの実施形態では、投薬量は１日から３０日間毎日投与され、その後に１日から３０日間投薬休日が続く。いくつかの実施形態では、投薬休暇中、用量は投与されない。いくつかの更なる実施形態では、本開示の組成物は、次の用量の投与前に対象の身体から完全に除かれることが許容される。いくつかの他の実施形態では、投薬休暇中、通常の１日用量よりも少ない用量が投与される。いくつかの更なる実施形態では、治療有効量未満の投与された組成物の量は、投薬休暇中に対象内にとどまることが許容される。いくつかの更なる実施形態では、罹患組織における治療レベルを維持するのに十分な投与組成物の量は、対象内にとどまることが許容される。
【０１０２】
本開示によれば、投薬スケジュールは、所望の治療効果を達成するように変更することができる。本明細書に開示される実施形態のそれぞれでは、投与スケジュールの変更は、投与される治療プロトコルの期間全体にわたって繰り返され得る。本明細書に開示される実施形態のそれぞれでは、最初の投与量は、最初の投与量に続く投与量と同じであるか、または高くても低くてもよい。本明細書に開示される実施形態のそれぞれでは、負荷用量は、開示された投薬レジメンに先行してよく、投薬休日は、負荷用量の投与に続いても続かなくてもよい。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、本明細書で提供される１つ以上の組成物の毎日または毎日よりも少ない頻度、例えば２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、もしくは７日毎、または前述の時間のいずれか２つにより定義される範囲内の期間での投与を含む。
【０１０４】
本開示の方法は、自閉症スペクトラム障害、統合失調症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症、純粋自律神経障害を含む）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む１つ以上の神経障害の治療、予防および／または改善に使用することができる。前記障害には、振戦、麻痺、運動障害などの神経障害の診断および治療の分野で知られている身体的症状、ならびに／または腸管透過性亢進（腸管壁浸漏）などの胃腸症状に加えて、コミュニケーション症、認知障害、常同行動、感覚運動の問題、臨床的過敏性および／もしくは不安様行動などの神経障害の臨床診断および治療の分野で知られている行動症状が含まれ得る。したがって、そのような臨床的および／または診断的な評価ならびに決定を使用して、本開示で提供される１つ以上の方法に従って、本明細書に記載される１つ以上の化合物を受け入れる１つ以上の対象を特定および／または選択することができる。本開示の方法には、いくつかの実施形態では、神経障害の診断および治療の分野で知られているように、行動症状、身体症状および／または胃腸症状の監視が含まれ得る。いくつかの実施形態では、本開示による方法は、自閉症スペクトラム障害、統合失調症、不安障害、鬱病、パーキンソン病、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、エンジェルマン症候群、ウィリアムズ症候群、筋萎縮性側索硬化症、白質ジストロフィー（アレキサンダー症候群を含む）、α−シヌクレイノパチー（レビー小体型認知症、偶発的なレビー小体病、レビー小体変異型アルツハイマー病、多系統萎縮症、純粋自律神経障害を含む）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せに関連することが知られている行動症状について対象を監視することを組み込む。いくつかの実施形態では、監視された行動症状は、臨床的不安を含まない。いくつかの更なる実施形態では、本発明による方法は、反復行動、コミュニケーション症、認知障害、常同行動、物理的対象への愛着、失語症、強迫行動、特異なまたは不適切なボディランゲージ、ジェスチャーおよび／または表情および／または感覚運動の問題、他者への関心の欠如、共感の欠如、非言語的な手がかりの把握の困難、タッチ嫌悪、社会化困難、言語発達の遅れ、異常な音声またはピッチ、音声の反復、保持、会話の困難、コミュニケーションのニーズまたは欲求の困難、単純な文または質問の無理解、言語サブテキストの処理の困難、特異な対象への執着、固執、ルーチンまたは環境の変化への不耐性、無器用、姿勢異常、奇妙な動き、特定の対象への魅了、感覚入力に対する感覚過敏・鈍麻、臨床的過敏性、またはそれらの任意の組合せについて対象を監視することを組み込む。また、そのような臨床的および／または診断的な評価ならびに決定を使用して、本開示で提供される１つ以上の方法に従って、本明細書に記載される１つ以上の��合物を受け入れる１つ以上の対象を特定および／または選択することができる。追加の実施形態では、方法は、振戦、麻痺および／もしくは運動障害、または神経障害の診断および治療の分野で当業者に知られている他の症状、またはそれらの任意の組合せについて対象を監視することを組み込むことができる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示されるように、または当業者に知られているように、微生物および／または腸内の代謝産物の監視を含み得る。本開示の方法によれば、前記代謝産物は、対象の腸、糞便、尿、血液、唾液、脳脊髄液および／または滑液中で監視することができる。本開示の方法は、治療過程中に対象から取得可能な任意の組織または体液中の前記代謝産物の監視を企図する。また、そのような臨床的および／または診断的な評価ならびに決定を使用して、本開示で提供される１つ以上の方法に従って、本明細書に記載される１つ以上の化合物を受け入れる１つ以上の対象を特定および／または選択することができる。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、組成物は、腸内透過性亢進（腸管壁浸漏）および／または腸内細菌叢異常に関連する神経障害の上述の症状のうちの１つ以上の発症後の任意の時間に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法による組成物は、前記障害または複数の障害の症状発現前に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法による組成物は、前記障害または複数の障害の症状の発症と同時にまたは発症後に投与される。
【０１０６】
本明細書に記載の方法を、以下の実施例によりさらに説明する。
【実施例】
【０１０７】
実施例１：４ＥＰ産生細菌叢の確立およびＡＢ−２００４の投与
胃腸内細菌叢による４ＥＰ産生の効果を、宿主により４ＥＰＳに変換される４ＥＰを産生する能力のみが異なるように操作された菌株を二重定着させたノトバイオティックマウスを使用して調査した。４−ＥＰ、その誘導体４−ＥＰＳおよび他の有毒な微生物代謝産物を隔離するＡＢ−２００４製剤の効果を、ＡＢ−２００４をマウスフードに配合し、ＡＢ−２００４を含まない対照食餌と並行して投与することにより調査したが、その他の点では同一であった。細菌叢およびＡＢ−２００４投与による４ＥＰ産生の影響を、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）のコア症状および非コア症状を表す反復的、社会的および不安様行動の評価により決定した。
【０１０８】
遺伝子操作された菌株を産生するために、ｐ−クマル酸産生のためのＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ遺伝子を、フェノール酸デカルボキシラーゼのためのＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ遺伝子と同時にＢ．ｏｖａｔｕｓ染色体にクローン化して４−ビニルフェノールを産生した。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍが、操作されたＢ．ｏｖａｔｕｓ菌株により産生された４−ビニルフェノールを４−ＥＰに変換する。４ＥＰ産生は不可能であるが、他の点では同一の菌株のペアを産生するために、機能喪失型変異をＢ．ｏｖａｔｕｓ菌株に導入し、その結果、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍによる４−ビニルフェノール産生と、ひいては４−ＥＰ産生を除去した。
【０１０９】
５週齢で、マウスに８％（ｗ／ｗ）のＡＢ−２００４製剤（ＡＳＴ−１２０、クレハ株式会社、日本）を含む食餌、またはＡＢ−２００４を含まない同一の食餌を与えた。糞便ホモジネートの希釈液を固形培地にプレーティングすることにより、マウスの定着性を定量化し、糞便ホモジネート１ｍＬ当たりのコロニー形成単位の類似のレベルがアッセイで産生されたことから（図２）、２つのペアの菌株はマウスを同様のレベルに定着させることを確認した。第１表は、このセクションの図中ラベルでマウスのグループに使用される識別子を説明している。
【０１１０】
第１表．図中のマウスグループラベルの説明
【表１】
0006978122.tif 000002
【０１１１】
ガラス玉覆い隠し試験
ガラス玉覆い隠し試験を使用して、ＡＳＤのコア症状である反復行動を評価した。Ｍａｌｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｅｈａｖ  Ｉｍｍｕｎ．２６（４）：６０７−１６（２０１２））により記載されたアッセイで、ガラス玉をケージ内の床敷の上に配置し、試験マウスをケージに入れ、試験期間中にマウスが埋めたガラス玉の数を測定した。図３（ａ）に示すように、アッセイでは、４−ＥＰ産生微生物で二重定着させた対照食餌のマウスは、４−ＥＰを産生しない微生物で二重定着させた対照食餌のマウスよりもかなり多くのガラス玉を埋め、それにより腸内細菌叢による４ＥＰ産生に基づく反復行動が実証された。ＡＢ−２００４の投与により、アッセイでのこの反復行動が正常化された：ＡＢ−２００４食餌で４−ＥＰ産生細菌叢を有するマウスは、対照食餌で４−ＥＰ産生細菌叢を有するマウスよりかなり少ないガラス玉を埋める。データは、４−ＥＰ、４−ＥＰＳおよび／または他の有毒な微生物代謝産物を隔離する物質の投与が、ＡＳＤのコア症状の１つである反復行動を減らすのに有益であり得ることを示している。
【０１１２】
高架式十字迷路試験
探索行動の高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験を使用して、一般行動と不安様行動を評価した。マウスに、共通の中央プラットフォームから伸びる２本のオープンアームと２本のクローズドアームで構成される高架式十字迷路を５分間探索させた。オープンアームの端部の周りの小さく盛り上がったヘリが、マウスが滑り落ちるのを防ぐのに役立った。オーバーヘッドビデオカメラを使用してセッションを記録し、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州サクラメント）を使用してマウスの動きを分析した。迷路の閉じた比較的保護された部分で費やされた時間と、迷路の開いた比較的露出した部分を探索するのに費やされた時間とを不安の測定値として解釈する。図３（ｂ）に示すように、アッセイでは、対照食餌で４−ＥＰ産生細菌叢を有するマウスは、４−ＥＰを産生しない細菌叢を含む対照食餌でのマウスよりもＥＰＭのクローズド部分に対してＥＰＭのオープン部分で費やす時間が少なく、それにより腸内細菌叢による４ＥＰの産生に基づく不安様行動が実証された。ＡＢ−２００４食餌での４−ＥＰ産生細菌叢を有するマウスは、ＡＢ−２００４を欠いた対照食餌での４−ＥＰ産生細菌叢を有するマウスよりもＥＰＭのクローズド部分に対してオープン部分で費やす時間がかなり多かったことから、ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイでのこれらの不安様行動が正常化された。不安はＡＳＤの一般的な非コア症状であり、これらは、４−ＥＰ、４−ＥＰＳおよび／または他の有毒な微生物代謝産物の隔離剤の投与が、一部ＡＳＤ患者の不安症状を減らすのに有益であり得ることを示している。
【０１１３】
オープンフィールド試験
探索行動のオープンフィールド試験を使用して、一般行動と不安様行動を評価した。オープンフィールド試験では、マウスを５０×５０ｃｍの白色プレキシガラスボックスで１０分間探索させた。オーバーヘッドビデオカメラを使用してセッションを記録し、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州サクラメント）を使用して、ボックスの壁区画に対して中央アリーナ（中央四方形、１７×１７ｃｍ）への移動距離、進入回数およびそこで費やされる時間を分析した。４−ＥＰ産生細菌叢を定着させた対照食餌のマウスは、アッセイで不安様の表現型を示し、４−ＥＰを産生しない細菌叢を定着させた対照食餌でのマウスと比較して、壁区画に進入する頻度が高く、壁区画でより多くの時間を費やす。アッセイでは、ＡＢ−２００４食餌で４−ＥＰ産生細菌叢を定着させたマウスが壁区画で費やされた時間（図４（Ｂ））および壁区画に進入した頻度（図４（Ａ））は、４−ＥＰを産生しない細菌叢を定着させたマウスに類似しており、ＡＢ−２００４によるこの行動の正常化を示唆している。オープンフィールド試験での総移動距離（図４（Ｃ））はすべてのグループで類似しており、フィールドのオープン部分とクローズ部分の探索の違いは、試験中にマウスが移動した距離の違いによるものではないことを示唆している。ＥＰＭデータと一致して、これらのデータは、４−ＥＰ、その誘導体４−ＥＰＳおよび／または他の有毒な微生物代謝産物を隔離する物質の投与が、不安症状に悩んでいるＡＳＤ患者の不安症状を緩和するのに有益であり得るという追加の証拠を提供する。
【０１１４】
直接的な社会的相互作用
３チャンバーの社会的アプローチ試験を使用して、直接的な社会的相互作用を測定した。試験マウスを隣接する３つのチャンバーの中央チャンバーに配置し、隣接する末端チャンバーには新規のオブジェクトを配置し、他方の隣接する末端チャンバーには馴染みのないマウスを配置した。採点の開始前に、試験マウスを装置内で１０分間馴化させた。試験マウスは、中央のチャンバーから隣接するそれぞれのチャンバーに開口部を通して通過することができた。試験はビデオで記録し、馴染みのないマウスがいるチャンバー内で試験マウスが費やした時間を手入力で記録した。馴染みのないマウスと過ごす時間が長いほど社交性が高いことを示すのに対し、馴染みのないマウスと過ごす時間が短いほど社交性が低いことを示し、自閉症スペクトラム障害のコア症状である社会的障害と一致している。
【０１１５】
図５に示すように、社会的相互作用の３チャンバー試験では、４ＥＰ産生細菌叢を二重定着させた雄マウスが、４ＥＰを産生しない微生物を二重定着させた雄マウスよりもチャンバー内で別のマウスと費やした時間がかなり短くなった。アッセイでは、ＡＢ−２００４製剤（ｐ＝０．１０７１）での処置によるこの社会的障害の改善傾向があった。これらのデータは、４ＥＰ、その誘導体、４ＥＰＳおよび他の有毒な微生物由来の代謝産物を隔離するＡＢ−２００４などの材料のＡＳＤ患者への投与が、社会的障害などのＡＳＤのコア症状の改善に有益であり得ることを示している。
【０１１６】
実施例２：隔離剤物質による微生物代謝産物の除去
単一の微生物代謝産物の５０ｍｇ／ｍＬストック溶液をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で調製し、ＤＭＳＯで連続希釈（２：１）して、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６および０．７８ｍｇ／ｍＬの標準溶液を作製した。各ＤＭＳＯ標準溶液（１０μＬ）を脱イオン水（９９０μＬ）に希釈して、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６、０．０３、０．０１５、０．０７８ｍｇ／ｍＬの水溶液（１％ＤＭＳＯ）の標準校正試料を作製した。１０μＬのＤＭＳＯを９９０μＬの蒸留水に添加して盲検試料を調製し、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計を使用して各水性標準溶液のＵＶ吸光度を単一波長で測定し、吸光度の線形範囲を特定して検量線を作成した。
【０１１７】
１００μＬの５０ｍｇ／ｍＬ  ＤＭＳＯストック溶液を９．９ｍＬの脱イオン水に添加することにより、０．５ｍｇ／ｍＬの単一微生物代謝産物の溶液を脱イオン水中で調製した。次に、５０ｍｇ／ｍＬの試験対象の一連の隔離剤物質のうちの１つを添加し、溶液を室温で撹拌した。得られた混合物を０〜≦４時間の時間経過でサンプリングした。各時点で、約１ｍＬの隔離剤混合物をシリンジで取り、ナイロン製シリンジフィルター（０．２μｍ）に通過させた。各試料を脱イオン水で適切に希釈し、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）ＮａｎｏＤｒｏｐ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用した分析のためにキュベットに移すか、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ｉ３ｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）を使用した分析のために９６ウェル透明ボトムプレートに移すかのいずれかを行った。
【０１１８】
様々な代表的な隔離剤物質による４−ＥＰの吸光度は、一般的なプロトコルに従って実施した。各試料のＵＶ吸光度は、分光測光法により２７０ｎｍで測定した。５０ｍｇ／ｍＬの代表的な吸着材料剤で２時間処理した後の４−ＥＰの残存％を表２に報告する。
【０１１９】
次の意味が適用される：「＋＋＋＋」は、＜１０％の残存率を指す；「＋＋＋」は、１０〜３０％の残存率を指す；「＋＋」は、３１〜７０％の残存率を指す；「＋」は、７１〜９０％の残存率を指す；ＮＡは、＞９０％の残存率または吸収が観察されないことを示す。使用したゼオライトはクリノプチロライトで、一般的な化学量論比が（Ｎａ，Ｋ，Ｃａ）２−３Ａｌ３（Ａｌ，Ｓｉ）２Ｓｉ１３Ｏ３６・１２Ｈ２Ｏである；ベントナイト製剤をＢｅｎｔｏｎａｉｔｅ  Ｂ．Ｐ．（Ｈａｌｅｗｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、英国）から製造した；活性炭製剤を２６０ｍｇの活性炭栄養補助食品製剤サプリメントカプセル（Ｎａｔｕｒｅ’ｓ  Ｗａｙ、ウィスコンシン州グリーンベイ）から製造し、ＡＢ−２００４製剤をＡＳＴ−１２０（クレハ株式会社、日本）から製造した。
【０１２０】
第２表：４−ＥＰの吸収
【表２】
0006978122.tif 000003
【０１２１】
実施例３
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からの４−ＥＰＳの除去は、分光測光法を使用して２６５ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間提供した後の４−ＥＰＳの残存率を第３表に報告する。
【０１２２】
第３表：４−エチルフェニル硫酸塩の吸収
【表３】
0006978122.tif 000004
【０１２３】
実施例４
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からのｐ−クレゾールの除去は、分光測光法を使用して２６０ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間提供した後のｐ−クレゾールの残存率を第４表に報告する。
【０１２４】
第４表：ｐ−クレゾールの吸収
【表４】
0006978122.tif 000005
【０１２５】
実施例５
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からのｐ−クレシル硫酸塩の除去は、分光測光法を使用して２６０ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間処理した後のｐ−クレシル硫酸塩の残存率を第５表に報告する。
【０１２６】
第５表：ｐ−クレシル硫酸塩の吸収
【表５】
0006978122.tif 000006
【０１２７】
実施例６
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からのインドールの除去は、分光測光法を使用して２７８ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間提供した後のインドールの残存率を第６表に報告する。
【０１２８】
第６表：インドールの吸収
【表６】
0006978122.tif 000007
【０１２９】
実施例７
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からの３−インドキシル硫酸塩の除去は、分光測光法を使用して２６０ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間処理した後の３−インドキシル硫酸塩の残存率を第７表に報告する。
【０１３０】
第７表：３−インドキシル硫酸塩の吸収
【表７】
0006978122.tif 000008
【０１３１】
実施例８
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からの４−ヒドロキシフェニル酢酸の除去は、分光測光法を使用して２７８ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間処理した後のチロシンの残存率を第８表に報告する。
【０１３２】
第８表：４−ヒドロキシフェニル酢酸の吸収
【表８】
0006978122.tif 000009
【０１３３】
実施例９
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からの２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸の除去は、分光測光法を使用して２７８ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間処理した後の２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸の残存率を第９表に報告する。
【０１３４】
第９表：２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸の吸収
【表９】
0006978122.tif 000010
【０１３５】
実施例１０
様々な代表的な隔離剤物質による試験溶液からのＬ−ホモシトルリンの除去は、分光測光法を使用して２７４ｎｍで測定された各試料のＵＶ吸光度で、実施例２に示される一般的なプロトコルに従って行った。代表的な吸着剤物質を５０ｍｇ／ｍＬで２時間処理した後のＬ−ホモシトルリンの残存率を第１０表に報告する。
【０１３６】
第１０表：Ｌ−ホモシトルリンの吸収
【表１０】
0006978122.tif 000011
【０１３７】
実施例１１
インドキシル硫酸塩、ｐ−クレシル硫酸塩および４−エチルフェニル硫酸塩をそれぞれｐＨ６．８のリン酸緩衝液に別々に溶解し、様々な時間で撹拌しながらＡＢ−２００４に曝露した。様々な時点で、試料を採取し、それぞれの化合物の存在についてアッセイし（以下「毒素」に分類した）、溶液から除去された各化合物の量を計算した。結果を以下の第１１表に示し、表中、「活性炭」とは、ＡＢ−２００４製剤を指す。
【０１３８】
第１１表
【表１１】
0006978122.tif 000012
【０１３９】
これらの結果は、ＡＢ−２００４製剤に曝露した場合、各化合物について４時間未満の曝露で最大吸収が起こることを示している。
【０１４０】
実施例１２
インドキシル硫酸塩、ｐ−クレシル硫酸塩および４−ＥＰを、ｐＨ６．８のリン酸緩衝液に同時に溶解し、シミュレートされた代謝産物混合物を作製し、様々な時間で撹拌しながらＡＢ−２００４に曝露した。様々な時点で、試料を採取し、それぞれの化合物の存在についてアッセイし（以下「毒素」に分類した）、溶液から除去された各化合物の量を計算した。結果を以下の第１２表に示し、表中、「活性炭」とは、ＡＢ−２００４製剤を指す。
【０１４１】
第１２表
【表１２】
0006978122.tif 000013
【０１４２】
これらの結果は、ＡＢ−２００４製剤に曝露した場合、混合溶液中の化合物についても、４時間未満の曝露で最大吸収が起こることを示している。
【０１４３】
実施例１３
４−エチルフェニル硫酸塩をｐＨ６．８のリン酸緩衝液に溶解し、様々な時間で撹拌しながらＡＢ−２００４、酢酸プロピオン酸セルロース（ＭＷ  １５Ｋおよび７５Ｋ）、ベントナイトおよびクリノプチロライトゼオライトに曝露した。様々な時点で、試料を採取し、それぞれの化合物の存在についてアッセイし、溶液から除去された各化合物の割合を計算した。結果を図６に示す。
【０１４４】
これらの結果は、セルロースベースの高分子材料が代謝産物４−ＥＰの効果的な隔離剤であるという証拠を提供する。
【０１４５】
実施例１４：隔離剤による糞便スラリー上清中の微生物代謝産物の除去
ＡＢ−２００４、ベントナイト、ゼオライト、酢酸プロピオン酸セルロース（Ｍｎ約１５，０００）および活性炭が、ヒト結腸の内腔に見られるものと類似した代謝産物の複雑な混合物から毒素４−エチルフェノール、ｐ−クレゾール、３−インドキシル硫酸塩を吸着する能力を決定するために、ヒト糞便を使用して生体外アッセイを実施した。採集したばかりの糞便を４℃以下に維持した。二酸化炭素５％、水素５％および残分窒素の雰囲気を有する嫌気性チャンバー（ＡＳ−５８０、Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州モーガンヒル）内で、糞便をピペッティングにより氷冷リン酸緩衝生理食塩水に懸濁し、２０％（ｗ／ｖ）の糞便スラリーを達成し、固形分を沈降させ、好気性雰囲気および−８０℃に移す前に、上清を氷上の円錐形のチューブに移した。後続のすべてのステップは好気的に実施した。凍結したアリコートを氷上で解凍し、２１，０００ｘｇで３分間遠心分離し、上清を新しいチューブに移し、等量の氷冷リン酸緩衝生理食塩水で希釈した。４−エチルフェノール、ｐ−クレゾールおよび３−インドキシル硫酸塩をジメチルスルホキシド中で２５ｍｇ／ｍＬにて調製し、糞便スラリー上清の別個のアリコートに２ｍｇ／ｍＬの最終濃度まで添加した。スパイクされた糞便スラリー上清を、ＡＢ−２００４製剤、ベントナイト、ゼオライト、酢酸プロピオン酸セルロース（Ｍｎ約１５，０００）および活性炭からなる隔離剤物質に添加して、３５〜５９ｍｇ／ｍＬの最終的な隔離剤物質を得るが、ただし、活性炭はｐ−クレゾールに対して９８ｍｇ／ｍＬで試験した。混合物を、円錐形のチューブ内で激しく混合しながら１０℃で４時間７５０ｒｐｍにてインキュベートし、２１，０００ｘｇで３分間遠心分離した。上清を９６ウェルプレートに移し、リン酸緩衝生理食塩水で１０倍希釈した後、分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ｉ３ｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）により２７８ｎｍで吸収を測定することにより代謝産物の濃度を測定した。
【０１４６】
各毒素について、それらを４、２、１、０．５および０．２５ｍｇ／ｍＬ（最終）で糞便スラリー上清に添加し、それらをリン酸緩衝生理食塩水で１０倍希釈し、２７８ｎｍでの吸収を測定することにより標準曲線を作成した。試料中のスパイクされた４−エチルフェノール、ｐ−クレゾールおよび３−インドキシル硫酸塩の濃度を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州ラホヤ）を使用した標準曲線からの補間により測定した。隔離剤により除去されたスパイク毒素の割合は、内挿値を隔離剤処理されていないスパイク対照試料の内挿値で除算し、１００を乗算することにより計算した。各隔離剤により除去されたスパイク毒素の割合を第１３表に示す。
【０１４７】
第１３表．示された濃度の吸着剤物質で４時間インキュベートした後の糞便スラリー上清中に残存するスパイク毒素の割合。
【表１３】
0006978122.tif 000014
【０１４８】
【数１】
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【０１４９】
第１３表に示されているように、吸着された毒素の数と各毒素の吸着の程度は、アッセイで試験された材料全体を通して異なった。ＡＢ−２００４および活性炭は、アッセイでスパイクされた４−エチルフェノール、３−インドキシル硫酸塩およびｐ−クレゾールのそれぞれ９０％超を吸着し、酢酸プロピオン酸セルロースは、スパイクされた４−エチルフェノール６５〜９０％およびｐ−クレゾール３５〜６５％を吸着したが、スパイクされた３−インドキシル硫酸塩に対する吸着率は１０％未満であった。ベントナイトは、アッセイでスパイクされた４−エチルフェノール３５〜６５％およびスパイクされたｐ−クレゾール１０〜３５％を吸着し、スパイクされた３−インドキシル硫酸塩に対する吸着率は１０％未満であった。ゼオライトは、アッセイでスパイクされた４−エチルフェノール１０〜３５％を吸着し、スパイクされたｐ−クレゾールと３−インドキシル硫酸塩に対する吸着率は１０％未満であった。したがって、生体外アッセイ内では、異なる材料が様々な毒素に対して異なる親和性を有し、これはヒトの腸内で見られる代謝産物の多様性と組成の一部を再現する。
【０１５０】
ＡＢ−２００４、ベントナイト、ゼオライト、酢酸プロピオン酸セルロース（Ｍｎ約１５，０００）、ヒト結腸の内腔に見られるものと類似した代謝産物の複雑な混合物から毒素４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩を吸着する能力を決定するために、ヒト糞便を使用して生体外アッセイを実施した。採集したばかりの糞便を、二酸化炭素５％、水素５％および残分窒素の雰囲気を有する嫌気性チャンバー（ＡＳ−５８０、Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州モーガンヒル）内で４℃以下に維持し、糞便をピペッティングにより氷冷リン酸緩衝生理食塩水に懸濁し、２０％（ｗ／ｖ）の糞便スラリーを達成し、固形分を沈降させ、好気性雰囲気および−８０℃に移す前に、上清を氷上の円錐形のチューブに移した。後続のすべてのステップは好気的に実施した。凍結したアリコートを氷上で解凍し、２１，０００ｘｇで３分間遠心分離し、上清を新しいチューブに移した。４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩をジメチルスルホキシド中で２５ｍｇ／ｍＬにて調製し、糞便スラリー上清の別個のアリコートに０．７５ｍｇ／ｍＬの最終濃度まで３連で添加した。スパイクされた糞便スラリー上清を、ＡＢ−２００４製剤、ベントナイト、ゼオライトおよび酢酸プロピオン酸セルロース（Ｍｎ約７５，０００）からなる隔離剤物質に添加して、１２ｍｇ／ｍＬの最終的な隔離剤物質を達成する。混合物を、円錐形のチューブ内で激しく混合しながら室温で１時間１７００ｒｐｍにてインキュベートし、１２，０００ｘｇで１分間遠心分離した。上清を新たな円錐形のチューブに移し、サロゲートマトリックス曲線（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、マサチューセッツ州ウスター）に対するＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析による４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩の定量化前に−８０℃で凍結した。結果を第１４表に示す。
【０１５１】
第１４表．様々な材料との１時間のインキュベーション後に残存する４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩の割合
【表１４】
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【０１５２】
第１４表に見られるように、ＡＢ−２００４は、試験された材料のいずれかの４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩に対する最大親和性を示した。酢酸プロピオン酸セルロースは、アッセイでｐ−クレシル硫酸塩７〜３５％を吸着したが、４−エチルフェニル硫酸塩の吸着７％未満であった。ベントナイトおよびゼオライトは、アッセイで７％未満の４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩を吸着した。したがって、試験された材料は、生体外アッセイ内では、４−エチルフェニル硫酸塩およびｐ−クレシル硫酸塩に対する広範な親和性を示し、これはヒトの腸内で見られる代謝産物の多様性と組成の一部を再現する。
【０１５３】
実施例１５
ウイルス性二本鎖ＲＮＡ模倣ポリ（Ｉ：Ｃ）を妊娠中の母畜に注射することによりマウスのＭＩＡをモデリングすると、ＡＳＤに関連するコアコミュニケーション的、社会的および常同的な障害を示す子孫が生まれる。妊娠中のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスに、本明細書の一部を構成するものとして援用されるＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００７），Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２７：１０６９５−１０７０２に記載の方法に従って、Ｅ１２．５日目に生理食塩水または２０ｍｇ／ｋｇポリ（Ｉ：Ｃ）を腹腔内注射する。ＭＩＡ子孫および対照子孫を、有効量のＡＢ−２００４製剤で毎日１０日間にわたり処置するか、１０日間処置しないままにする。子孫は、血液、尿および糞便中の４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルについて監視する。４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルは、未処置のＭＩＡ子孫と比べてＡＢ−２００４処置されたＭＩＡ子孫において減少したことが観察される。処置された子孫は、未処置の子孫および／または健常者と比較して類似、同等または減少したレベルの４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、３−４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩を有することが観察される。
【０１５４】
ＭＩＡ子孫および対照子孫は、次のようにＡＳＤの行動症状についても観察される。オープンフィールド探索では、オープンアリーナでの動物の動きをマッピングして、移動と不安を測定する。未処置のＭＩＡ子孫は、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間の減少を示し、これは不安様行動を示唆するものである。処置されたＭＩＡ子孫と未処置の対照子孫は、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間と一致したまたは同等の量を示す。
【０１５５】
プレパルス抑制（ＰＰＩ）は、低強度の刺激が先行する場合に音響トーンに反応して驚愕反応を抑制する動物の能力を測定する。ＰＰＩの欠陥は、感覚運動ゲーティングの障害の尺度であり、自閉症を含むいくつかの神経発達障害で観察される。未処置のＭＩＡ子孫はＰＰＩの低下を示す。処置されたＭＩＡ子孫と未処置の対照子孫は、正常なＰＰＩを示す。
【０１５６】
ガラス玉覆い隠し試験は、マウスが不安に惑わされない自然な埋め隠し行動に繰り返し関与する傾向を測定する。未処置のＭＩＡ子孫は、対照と比較して常同化されたガラス玉覆い隠しの増加を示す。処置されたＭＩＡ子孫と未処置の対照子孫は、通常の埋め隠し行動を示す。
【０１５７】
超音波発声は、様々なタイプやモチーフの呼出しが様々な社会的パラダイムで生成される、マウスによるコミュニケーションの測定に使用される。未処置のＭＩＡ子孫は、社会的遭遇に応じて生成される超音波発声の数と期間の減少により示されるように、コミュニケーションの欠陥を示す。処置されたＭＩＡ子孫と未処置の対照子孫は、社会的遭遇に応じて生成される超音波発声の正常な数と期間を示す。
【０１５８】
３チャンバー社会試験は、社会的相互作用におけるＡＳＤ関連の障害を測定するのに使用される。未処置のＭＩＡ子孫は、社交性、または新規のオブジェクトよりも新規のマウスとの相互作用を好むことと、社会的選好、または馴染みのないマウスよりも馴染みのあるマウスとの相互作用を好むことの両方の欠陥を示す。処置されたＭＩＡ子孫と未処置の対照子孫は、通常の社会的相互作用を示す。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、プレボテーラ種（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビフィドバクテリア種（Ｂｉｆｉｄｏ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、パラバクテロイデス種（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｐ．メルダエ、Ｐ．ディスタソニス）、フィーカリバクテリウム種（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｆ．プラウスニッツィ）、ユーバクテリウム種（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コプロコッカス種（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｉｓ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、バクテロイデス・オバツス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）および／もしくはバクテロイデス・シータイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む細菌の接種剤が、隔離剤組成物の投与前、投与中または投与後に投与され、添加された細菌の効果が決定される。
【０１６０】
実施例１６
糞便試料を、ＡＢ−２００４製剤またはコレスチラミンによる処置を受けているヒト患者から得る。各試料について、ＡＢ−２００４製剤またはコレスチラミンを回収し、ＡＢ−２００４またはコレスチラミンから溶出した化合物をＧＣ−ＭＳまたはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法により、本明細書に記載の微生物代謝産物（およびこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）のいずれかの存在について分析する。次いで、本明細書に記載される微生物代謝産物（および／またはこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）の１つ以上をＡＢ−２００４またはコレスチラミンから回収し、これにより前記微生物代謝産物（および／またはこれらの代謝産物の宿主生成修飾体）が生体内でヒトにＡＢ−２００４またはコレスチラミンにより結合または隔離されていることが実証される。これらの結果は、本明細書に記載の方法の治療有効性も実証するだろう。
【０１６１】
実施例１７
ＭＩＡ子孫は、上記の実施例１５で説明したように生じさせる。ＭＩＡ子孫および対照子孫を、有効量のＡＢ−２００４製剤で毎日１０日間にわたり処置するか、１０日間処置しないままにする。子孫は、血液、尿および糞便中の４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルについて監視する。４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルは、未処置のＭＩＡ子孫と比べてＡＢ−２００４処置されたＭＩＡ子孫において減少したことが観察される。処置された子孫は、未処置の子孫および／または健常者と比較して類似、同等または減少したレベルの４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、３−４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩を有することが観察される。
【０１６２】
ＭＩＡ子孫および対照子孫は、ラクツロースもしくは高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）などの大きなサイズのオリゴ糖、および／またはマンニトール、Ｌ−ラムノースもしくは低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）などの小さな糖、および／または５１Ｃｒ−ＥＤＴＡなどの他の難消化性プローブを経口投与することにより、腸管壁浸漏症状についても試験する。前記化合物の投与は、ＡＢ−２００４または他の隔離剤の投与とは別個に行われる。尿を採集し、そのような分子の存在について監視し、この場合、尿中の試験分子の存在は、腸管壁浸漏の徴候となる。未処置のＭＩＡ子孫は、経口投与後の尿中に、かなりの量のラクツロース、高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）、小さな糖、マンニトール、Ｌ−ラムノース、低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡおよび／または他の難消化性プローブを示す。処置されたＭＩＡ子孫と未処置の対照子孫は、経口投与後の尿中に、ラクツロース、高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）、小さな糖、マンニトール、Ｌ−ラムノース、低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡおよび／または他の難消化性プローブをほとんどまたは全く示さない。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、プレボテーラ種（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビフィドバクテリア種（Ｂｉｆｉｄｏ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、パラバクテロイデス種（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｐ．メルダエ、Ｐ．ディスタソニス）、フィーカリバクテリウム種（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｆ．プラウスニッツィ）、ユーバクテリウム種（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コプロコッカス種（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｉｓ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、バクテロイデス・オバツス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）および／もしくはバクテロイデス・シータイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む細菌の接種剤が、隔離剤組成物の投与前、投与中または投与後に投与され、添加された細菌の効果が決定される。
【０１６４】
実施例１８
ＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスは、自閉症様行動の遺伝モデルを提供する。例えば、Ｗｅｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１２：６１５およびＳｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０），Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１：４９０−５０２を参照されたい。これらの各明細書を、ここに本明細書の一部を構成するものとして明示的に援用する。ＣＮＴＮＡＰ２−／−、Ｓｈａｎｋ３−／−または遺伝子操作されていない（対照）マウスを、ＡＢ−２００４製剤または他の隔離剤で毎日１０日間にわたり処置するか、１０日間処置しないままにする。マウスは、血液および糞便中の４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルについて監視する。４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルは、未処置のＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスと比べてＡＢ−２００４処置されたＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスにおいて減少したことが観察される。処置されたマウスは、未処置のマウスおよび／または健常者と比較して類似、同等または減少したレベルの４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、３−４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩を有することが観察される。ＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスおよび対照マウスは、実施例１５のようにＡＳＤの行動症状についても観察される。
【０１６５】
オープンフィールド探索アッセイでは、未処置のＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスは、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間の減少を示し、これは不安様行動を示唆するものである。処置されたＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスおよび未処置の対照マウスは、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間と一致したまたは同等の量を示す。
【０１６６】
プレパルス抑制（ＰＰＩ）アッセイでは、未処置のＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスは、減少したＰＰＩを示す。処置されたＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスおよび未処置の対照マウスは、通常のＰＰＩを示す。
【０１６７】
ガラス玉覆い隠しアッセイでは、未処置のＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスは、対照と比較して常同化されたガラス玉覆い隠しの増加を示す。処置されたＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスおよび未処置の対照子孫は、通常の埋め隠し行動を示す。
【０１６８】
超音波発声アッセイでは、処置されたＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスおよび未処置の対照マウスは、社会的遭遇に応じて生成される超音波発声の通常の数と期間を示す。
【０１６９】
３チャンバー社会試験では、未処置のＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスは、社交性と社会的選好の両方の欠陥を示す。処置されたＣＮＴＮＡＰ２−／−またはＳｈａｎｋ３−／−マウスおよび未処置の対照マウスは、通常の社会的相互作用を示す。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、プレボテーラ種（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビフィドバクテリア種（Ｂｉｆｉｄｏ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、パラバクテロイデス種（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｐ．メルダエ、Ｐ．ディスタソニス）、フィーカリバクテリウム種（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｆ．プラウスニッツィ）、ユーバクテリウム種（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コプロコッカス種（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｉｓ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、バクテロイデス・オバツス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）および／もしくはバクテロイデス・シータイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む細菌の接種剤が、隔離剤組成物の投与前、投与中または投与後に投与され、添加された細菌の効果が決定される。
【０１７１】
実施例１９
Ｍｅｃｐ２−／−または同等のレット症候群のマウスモデルを、ＡＢ−２００４製剤または他の隔離剤での処置後の行動および／または胃腸症状の改善について評価する。例えば、Ｓｈａｈｂａｚｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎｅｕｒｏｎ  ３５：２４３−２５４を参照されたい。この文献を、ここに本明細書の一部を構成するものとして援用する。Ｍｅｃｐ２−／−または同等のマウスおよび遺伝子操作されていない（対照）マウスを、ＡＢ−２００４製剤または他の隔離剤で毎日１０日間にわたり処置するか、１０日間処置しないままにする。マウスは、血液、尿および糞便中の４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルについて監視する。４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩のレベルは、未処置のＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスと比べてＡＢ−２００４処置されたＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスにおいて減少したことが観察される。処置されたマウスは、未処置のマウスおよび／または健常者と比較して類似、同等または減少したレベルの４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、３−４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、ヒドロキシインドールおよび／または３−インドキシル硫酸塩を有することが観察される。Ｍｅｃｐ２−／−または同等のマウスおよび対照マウスは、実施例１５のようにＡＳＤの行動症状についても観察される。
【０１７２】
オープンフィールド探索アッセイでは、未処置のＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスは、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間の減少を示すが、糞便のボーラス数、グルーミング時間、およびフィールドの異なるエリアで費やした時間が影響を受けることはない。処置されたＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスおよび未処置の対照マウスは、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間と一致したまたは同等の量を示す。未処置のＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスは、処置されたＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスおよび対照マウスには存在しない活動力欠如、呼吸異常および後肢反射異常表現型も示す。
【０１７３】
Ｍｅｃｐ２−／−または同等のマウスおよび対照マウスは、ラクツロースもしくは高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）などの大きなサイズのオリゴ糖、および／またはマンニトール、Ｌ−ラムノースもしくは低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）などの小さな糖、および／または５１Ｃｒ−ＥＤＴＡなどの他の難消化性プローブを経口投与することにより、腸管壁浸漏症状についても試験する。前記化合物の投与は、ＡＢ−２００４または他の隔離剤の投与とは別個に行われる。尿を採集し、そのような分子の存在について監視し、この場合、尿中の試験分子の存在は、腸管壁浸漏の徴候となる。未処置のＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスは、経口投与後の尿中に、かなりの量のラクツロース、高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）、小さな糖、マンニトール、Ｌ−ラムノース、低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡおよび／または他の難消化性プローブを示す。処置されたＭｅｃｐ２−／−または同等のマウスおよび未処置の対照マウスは、経口投与後の尿中に、ラクツロース、高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）、小さな糖、マンニトール、Ｌ−ラムノース、低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡおよび／または他の難消化性プローブをほとんどまたは全く示さない。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、プレボテーラ種（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビフィドバクテリア種（Ｂｉｆｉｄｏ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、パラバクテロイデス種（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｐ．メルダエ、Ｐ．ディスタソニス）、フィーカリバクテリウム種（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｆ．プラウスニッツィ）、ユーバクテリウム種（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コプロコッカス種（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｉｓ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、バクテロイデス・オバツス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）および／もしくはバクテロイデス・シータイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む細菌の接種剤が、隔離剤組成物の投与前、投与中または投与後に投与され、添加された細菌の効果が決定される。
【０１７５】
実施例２０
４−エチルフェノール（４−ＥＰ）（４−ＥＰＳの前駆体）を産生する細菌株を予め生成し、これらの菌株をマウスに定着させ、特定の微生物代謝産物の腸内産生で、マウスの不安および関連行動を促進するのに十分であることを示した。不安は４−ＥＰＳの注射でも誘発され得る。
【０１７６】
動物および投薬
本研究では、３週齢の微生物学的に滅菌（無菌）で通常は定着させた特定の病原体がいない（ＳＰＦ）Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを得る（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，メイン州ハーハーバー）。マウスは最初に４つのグループに分ける：１）特定の病原体がいないマウス；２）無菌マウス；３）４−ＥＰを産生する操作された細菌株を定着させた無菌マウス、あるいは４−ＥＰＳを静脈内注射した無菌マウス；４）４−ＥＰを産生しない操作された細菌株を定着させた無菌マウス。各グループをさらに、ＡＢ−２００４製剤、生理食塩水（ネガティブコントロール）、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ポジティブコントロール）を投与するグループと、処置を行わないグループとに分ける。各試験品に、１日１回または各摂食時に経口投与する。試験品に５週間投与し、その後に行動試験を行う。一部のグループでは、行動試験前に投与を中断し、一部のグループでは、試験期間全体にわたって投与を継続する。
【０１７７】
ＡＢ−２００４製剤（ＡＳＴ−１２０、クレハ株式会社、日本）を食物または強制飼養で与え、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓを１．５％重炭酸ナトリウム溶液中１０１０ｃｆｕでリンゴソースプラグまたは強制飼養で投与し、生理食塩水を食物または強制飼養で投与する。ＡＢ−２００４製剤は、８〜１００ｍｇ／マウス／用量のレベルで初期投与し、必要に応じて用量を調整する。
【０１７８】
行動試験
高架式「プラス」迷路試験では、プラス記号の形をした２つの交差要素を有し、１つの要素はエンクローズドされ、１つの要素は露出させられた装置に動物を配置する。不安の症状を有する動物は、不安のない動物に比べて、迷路の囲まれた領域でより多くの時間を費やす。本研究では、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＡＢ−２００４で処置されたマウス、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓで処置されたマウス、および４−ＥＰ産生細菌を定着させていないマウス（特定の病原体がいないマウス、無菌マウスおよび４−ＥＰを産生しない操作された菌株を定着させた無菌マウス）は、未処置のマウスまたは生理食塩水でモック処置された４−ＥＰ産生細菌を定着させたマウスと比べて、迷路の囲まれた領域で費やす時間が短く、これはＡＢ−２００４またはＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓ処置による不安症状の低下を示している。
【０１７９】
明暗箱試験では、動物を箱に入れ、そのほとんどは照明され、動物がアクセスすることのできる小さな独立した暗いコンパートメントがある。不安の症状を示すマウスは、不安のない動物に比べて、箱の明るい領域で費やす時間が短い。本研究では、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＡＢ−２００４で処置されたマウス、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓで処置されたマウス、および４−ＥＰ産生細菌を定着させていないマウス（特定の病原体がいないマウス、無菌マウスおよび４−ＥＰを産生しない操作された菌株を定着させた無菌マウス）は、未処置のマウスまたは生理食塩水でモック処置された４−ＥＰ産生細菌を定着させたマウスと比べて、囲まれた領域で費やす時間が短く、これはＡＢ−２００４またはＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓ処置による不安症状の低下を示している。
【０１８０】
オープンフィールド探索アッセイは、実施例１５に記載している。本研究では、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＡＢ−２００４で処置されたマウス、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓで処置されたマウス、および４−ＥＰ産生細菌を定着させていないマウス（特定の病原体がいないマウス、無菌マウスおよび４−ＥＰを産生しない操作された菌株を定着させた無菌マウス）は、未処置のマウスまたは生理食塩水でモック処置された４−ＥＰ産生細菌を定着させたマウスと比べて、アリーナの中心への進入とそこで費やされる時間がより長く、これはＡＢ−２００４またはＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓ処置による不安症状の低下を示している。
【０１８１】
非行動試験
ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなどを含む炎症誘発性マーカーのレベルは、屠殺後の組織で評価する。炎症誘発性マーカーのレベルの上昇は、未処置のマウスまたは生理食塩水でモック処置された４−ＥＰ産生細菌を定着させたマウスと比べて、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＡＢ−２００４製剤で処置されたマウス、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓで処置されたマウス、および４−ＥＰ産生細菌を定着させていないマウス（特定の病原体がいないマウス、無菌マウスおよび４−ＥＰを産生しない操作された菌株を定着させた無菌マウス）に見られ、これはＡＢ−２００４またはＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓ処置による炎症反応の低下を示している。
【０１８２】
４−ＥＰ、４−ＥＰＳ、ＰＣ、ＰＣＳ、４−ヒドロキシフェニル酢酸塩、２−ヒドロキシ−２（４−ヒドロキシフェニル）酢酸塩、ホモシトルリン、インドールピルビン酸塩、セロトニン、３−ヒドロキシインドールおよびインドキシル硫酸塩を含む主要な微生物代謝産物の血清および尿レベルを、投与中および行動試験前に、隔離の初期指標として監視する。代謝産物レベルをさらに低下させるために、投与量を調整することができる。不安関連代謝産物のレベルの低下は、未処置のマウスまたは生理食塩水でモック処置された４−ＥＰ産生細菌を定着させたマウスと比べて、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＡＢ−２００４製剤で処置されたマウス、４−ＥＰ産生細菌を定着させてＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓで処置されたマウス、および４−ＥＰ産生細菌を定着させていないマウス（特定の病原体がいないマウス、無菌マウスおよび４−ＥＰを産生しない操作された菌株を定着させた無菌マウス）に見られ、これはＡＢ−２００４またはＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓ処置による代謝産物レベルの低下を示している。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、プレボテーラ種（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ビフィドバクテリア種（Ｂｉｆｉｄｏ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、パラバクテロイデス種（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｐ．メルダエ、Ｐ．ディスタソニス）、フィーカリバクテリウム種（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）（例えば、Ｆ．プラウスニッツィ）、ユーバクテリウム種（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、コプロコッカス種（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｉｓ）、バクテロイデス・カカエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）、バクテロイデス・オバツス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）および／もしくはバクテロイデス・シータイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組合せを含む細菌の接種剤が、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓに代えて投与される。
【０１８４】
実施例２１
４−エチルフェノール（４−ＥＰ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、３−ヒドロキシインドール、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）および３−インドキシル硫酸塩を含む、本明細書に記載の微生物産生代謝産物（またはその宿主修飾体）に関連する１つ以上の腸内代謝産物を産生することが予め特徴付けけられた１つ以上の特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたノトバイオティックマウスで研究した。４−エチルフェノール（４−ＥＰ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、３−ヒドロキシインドール、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）および３−インドキシル硫酸塩を含む、本明細書に記載の微生物産生代謝産物（またはその宿主修飾体）に関連する１つ以上の腸内代謝産物を隔離する材料、ＡＢ−２００４の効果を、ＡＢ−２００４をマウスフードに配合し、ＡＢ−２００４を含まない対照食と並行して投与することにより調査したが、その他の点では同一であった。細菌叢およびＡＢ−２００４投与による有毒な微生物代謝産物の影響を、宿主から得られた血清、糞便および／または尿中の有毒な細菌代謝産物のレベルの評価、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）のコア症状および非コア症状を表す反復的、社会的および不安様行動に及ぼす影響、ならびに腸管壁浸漏の尺度として胃腸バリアの完全性に及ぼす影響により決定した。
【０１８５】
４週齢で、離乳後、ノトバイオティックマウスに特定の細菌株またはヒト糞便のいずれかを定着させた。５週齢で、マウスに８％（ｗ／ｗ）のＡＢ−２００４を含む食餌、またはＡＢ−２００４を含まない同一の食餌を与えた。糞便ホモジネートの希釈液を固形培地にプレーティングし、細菌株特異的マーカーを評価することにより、マウスの定着性を確認した。
【０１８６】
ガラス玉覆い隠し試験
ガラス玉覆い隠し試験を使用して、ＡＳＤのコア症状である反復行動を評価した。Ｍａｌｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｅｈａｖ  Ｉｍｍｕｎ．２６（４）：６０７−１６（２０１２））により記載されたアッセイで、ガラス玉をケージ内の床敷の上に配置し、試験マウスをケージに入れ、試験期間中にマウスが埋めたガラス玉の数を測定した。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させた対照食餌でのマウスは、無菌ノトバイオティックマウスよりもかなり多くのガラス玉を埋め、それにより腸内細菌叢による有毒な細菌代謝産物産生に基づく反復行動が実証された。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスへのＡＢ−２００４の投与により、アッセイでのこの反復行動が正常化された。データは、４−ＥＰ、ＰＣ、３−ヒドロキシインドール、４−ＥＰＳ、ＰＣＳおよび３−インドキシル硫酸塩を隔離する物質の投与が、一部のＡＳＤ患者におけるＡＳＤのコア症状のうちの１つである反復行動を減らすのに有益であり得ることを示している。
【０１８７】
高架式十字迷路試験
探索行動の高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験を使用して、一般行動と不安様行動を評価した。マウスに、共通の中央プラットフォームから伸びる２本のオープンアームと２本のクローズドアームで構成される高架式十字迷路を５分間探索させた。オープンアームの端部の周りの小さく盛り上がったヘリが、マウスが滑り落ちるのを防ぐのに役立った。オーバーヘッドビデオカメラを使用してセッションを記録し、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州サクラメント）を使用してマウスの動きを分析した。迷路の閉じた比較的保護された部分で費やされた時間と、迷路の開いた比較的露出した部分を探索するのに費やされた時間とを不安の測定値として解釈する。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させた対照食餌でのマウスは、無菌ノトバイオティックマウスよりもＥＰＭのクローズド部分に対してＥＰＭのオープン部分で費やす時間がかなり少ない。それにより腸内細菌叢による有毒な細菌代謝産物産生に基づく不安様行動が実証された。ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイでのこれらの不安様行動が正常化された。不安はＡＳＤの一般的な非コア症状であり、これらのデータは、４−ＥＰ、ＰＣ、３−ヒドロキシインドール、４−ＥＰＳ、ＰＣＳおよび３−インドキシル硫酸塩を隔離する物質の投与が、一部のＡＳＤ患者における不安を減らすのに有益であり得ることを示している。
【０１８８】
オープンフィールド試験
探索行動のオープンフィールド試験を使用して、一般行動と不安様行動を評価した。オープンフィールド試験では、マウスを５０×５０ｃｍの白色プレキシガラスボックスで１０分間探索させた。オーバーヘッドビデオカメラを使用してセッションを記録し、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州サクラメント）を使用して、ボックスの壁区画に対して中央アリーナ（中央四方形、１７×１７ｃｍ）への移動距離、進入回数およびそこで費やされる時間を分析した。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させた対照食餌でのマウスは、アッセイで不安様の表現型を示し、無菌ノトバイオティックマウスと比較して、試験アリーナ内で費やす時間が短く、試験アリーナの中央を行き交い、壁区画に進入する頻度が高く、壁区画でより多くの時間を費やす。ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイでのこれらの不安様行動が正常化された。重要なことに、オープンフィールド試験での総移動距離はすべてのグループで類似しており、フィールドのオープン部分とクローズ部分の探索の違いは、試験中にマウスが移動した距離の違いによるものではないことを示唆している。ＥＰＭデータと一致して、これらのデータは、４−ＥＰ、ＰＣ、３−ヒドロキシインドール、４−ＥＰＳ、ＰＣＳおよび３−インドキシル硫酸塩を隔離する物質の投与が、不安症状に悩んでいるＡＳＤ患者の不安症状を緩和するのに有益であり得るという追加の証拠を提供する。
【０１８９】
直接的な社会的相互作用
３チャンバーの社会的アプローチ試験を使用して、直接的な社会的相互作用を測定した。試験マウスを隣接する３つのチャンバーの中央チャンバーに配置し、隣接する末端チャンバーには新規のオブジェクトを配置し、他方の隣接する末端チャンバーには馴染みのないマウスを配置した。採点の開始前に、試験マウスを装置内で１０分間馴化させた。試験マウスは、中央のチャンバーから隣接するそれぞれのチャンバーに開口部を通して通過することができた。試験はビデオで記録し、馴染みのないマウスがいるチャンバー内で試験マウスが費やした時間を手入力で記録した。馴染みのないマウスと過ごす時間が長いほど社交性が高いことを示すのに対し、馴染みのないマウスと過ごす時間が短いほど社交性が低いことを示し、自閉症スペクトラム障害のコア症状である社会的障害と一致している。
【０１９０】
社会的相互作用の本試験では、有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させた雄マウスが、雄の無菌ノトバイオティックマウスよりもチャンバー内で別のマウスと費やした時間がかなり短くなった。ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイで観察された社会的行動の欠陥が正常化された。これらのデータは、４−ＥＰ、ＰＣ、３−ヒドロキシインドール、４−ＥＰＳ、ＰＣＳおよび３−インドキシル硫酸塩を隔離するＡＢ−２００４などの物質の投与が、社会的障害などのＡＳＤのコア症状の改善に有益であり得ることを示している。
【０１９１】
感覚ゲーティング
プレパルス抑制（ＰＰＩ）は、低強度の刺激が先行する場合に音響トーンに反応して驚愕反応を抑制する動物の能力を測定する。ＰＰＩの欠陥は、感覚運動ゲーティングの障害の尺度であり、自閉症を含むいくつかの神経発達障害で観察される。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスは、無菌ノトバイオティックマウスにおいて観察されたものと比較してＰＰＩ応答の低下を示す。ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイで観察された感覚ゲーティングの欠陥が正常化された。
【０１９２】
社会的コミュニケーション行動
超音波発声は、様々なタイプやモチーフの呼出しが様々な社会的パラダイムで生成される、マウスによるコミュニケーションの測定に使用される。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスは、社会的遭遇に応じて生成される超音波発声の数と期間の減少により示されるように、コミュニケーションの欠陥を示す。ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイで観察された社会的コミュニケーション行動の欠陥が正常化された。
【０１９３】
社会的相互作用行動
３チャンバー社会試験は、社会的相互作用におけるＡＳＤ関連の障害を測定するのに使用される。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスは、社交性、または新規のオブジェクトよりも新規のマウスとの相互作用を好むことと、社会的選好、または馴染みのないマウスよりも馴染みのあるマウスとの相互作用を好むことの両方の欠陥を示す。ＡＢ−２００４製剤の投与により、アッセイで観察された社会的相互作用行動の欠陥が正常化された。
【０１９４】
胃腸バリア完全性
有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスは、ラクツロースもしくは高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）などの大きなサイズのオリゴ糖、および／またはマンニトール、Ｌ−ラムノースもしくは低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）などの小さな糖、および／または５１Ｃｒ−ＥＤＴＡなどの他の難消化性プローブを経口投与することにより、腸管壁浸漏症状についても試験する。尿、血液および／または糞便試料を採集し、そのような分子の存在について監視し、この場合、尿中の試験分子の存在は、腸管壁浸漏の徴候となる。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスは、経口投与後の尿中に、かなりの量のラクツロース、高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）、小さな糖、マンニトール、Ｌ−ラムノース、低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡおよび／または他の難消化性プローブを示す。ＡＢ−２００４製剤の投与により、上昇した尿中レベルのラクツロース、高ＭＷ−ＰＥＧ（１５００もしくは４０００ｋＤ）、小さな糖、マンニトール、Ｌ−ラムノース、低ＭＷ−ＰＥＧ（４００ｋＤ）、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡおよび／または他の難消化性プローブのうちの１つ以上が正常化され、これは腸管壁浸漏の補正を示している。
【０１９５】
血清、尿および糞便
４−エチルフェノール（４−ＥＰ）、ｐ−クレゾール（ＰＣ）、３−ヒドロキシインドール、４−エチルフェニル硫酸塩（４−ＥＰＳ）、ｐ−クレシル硫酸塩（ＰＣＳ）、３−インドキシル硫酸塩、インドールピルビン酸塩および／またはセロトニンを含む主要な微生物代謝産物のレベルを、隔離の指標として監視した。代謝産物レベルをさらに低下させるために、投与量を調整することができる。有毒な代謝産物を産生する特定の細菌株、またはヒト糞便を定着させたマウスでは、ＡＢ−２００４による処置が、これらの標的代謝産物の１つ以上のレベルを低下させた。
【０１９６】
本明細書における実質的に任意の複数および／または単数の用語の使用に関して、当業者は、文脈および／または用途に適切なように、複数から単数および／または単数から複数へと言い替えることができる。本明細書では、明確にするために、様々な単数／複数の順列を明示的に説明することができる。
【０１９７】
一般に、本明細書および特に添付の特許請求の範囲（例えば、添付の特許請求の範囲の本文）で使用される用語は、一般に「オープン」用語（例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、「〜を含むがこれ（ら）に限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」と解釈されるべきであり、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、「〜を少なくとも有する（ｈａｖｉｎｇ  ａｔ  ｌｅａｓｔ）」と解釈されるべきであり、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語は、「〜を含むがこれ（ら）に限定されない（ｉｎｃｌｕｄｅｓ  ｂｕｔ  ｉｓ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」などと解釈されるべきである）を意図すると当業者に理解されよう。さらに、特定の数の導入されたクレーム記載が意図される場合、そのような意図はクレームに明示的に記載され、そのような記載がない場合、そのような意図は存在しないことを当業者に理解されよう。例えば、理解を助けるために、以下の添付の特許請求の範囲には、クレーム記載を導入するための「少なくとも１つ」および「１つ以上」の導入句の使用を含めることができる。しかしながら、そのような句の使用は、同じクレームに「１つ以上」または「少なくとも１つ」の導入句および「ａ」または「ａｎ」などの不定冠詞（例えば、「ａ」および／または「ａｎ」は、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味する解釈されるべきである）が含まれる場合でも、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」によるクレーム記載の導入が、そのような導入されたクレーム記載を含む任意の特定のクレームを、そのような記載を１つだけ含む実施形態に限定することを意味すると解釈されるべきではない；クレーム記載を導入するのに使用される定冠詞の使用についても同じことが当てはまる。さらに、特定の数の導入されたクレーム記載が明示的に記載されている場合でも、そのような記載は少なくとも記載された数を意味すると解釈されるべきであることが当業者に認識されよう（例えば、他の修飾語なしでの「２つの記載の」の単なる記載は、少なくとも２つの記載、または２つ以上の記載を意味する）。さらに、「Ａ、ＢおよびＣなどの少なくとも１つ」に類似の慣例表現が使用されている事例では、通常、そのような構文は、当業者がその慣例表現を理解するであろう意味で意図されている（例えば、「Ａ、ＢおよびＣの少なくとも１つを有するシステム」には、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡおよびＢを共に、ＡおよびＣを共に、ＢおよびＣを共に、ならびに／またはＡ、ＢおよびＣを共に、などを有するシステムが含まれるが、これらに限定されない）。「Ａ、Ｂ、またはＣ、などの少なくとも１つ」に類似の慣例表現が使用されている事例では、通常、そのような構文は、当業者がその慣例表現を理解するであろう意味で意図されている（例えば、Ａ、ＢまたはＣの少なくとも１つを有するシステムには、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡおよびＢを共に、ＡおよびＣを共に、ＢおよびＣを共に、ならびに／またはＡ、ＢおよびＣを共に、などを有するシステムを含むが、これらに限定されない）。さらに、２つ以上の代替用語を提示する事実上いかなる離接する語および／または句も、明細書、特許請求の範囲または図面のどこにあ��ても、当該用語の一方、当該用語のいずれか、または両方の用語を含む可能性を企図すると理解されるべきであることが、当業者に理解されよう。例えば、句「ＡまたはＢ」は、「Ａ」もしくは「Ｂ」または「ＡおよびＢ」の可能性を含むことが理解されよう。
【０１９８】
加えて、本開示の特徴または態様がマーカッシュグループにより説明される場合、当業者には、それにより本開示がまたマーカッシュグループの任意の個別のメンバーまたはメンバーのサブグループにより説明されることが理解されよう。
【０１９９】
当業者により理解されるように、文書での説明を用いるなど、あらゆる目的のために、本明細書で開示されたすべての範囲は、そのあらゆる可能な部分範囲および部分範囲の組合せも包含するものである。列挙されたいずれの範囲も、同じ範囲が少なくとも等しい半分、１／３、１／４、１／５、１／１０などに分割されることを十分に説明し可能にしていると容易に理解され得る。非限定的な例として、本明細書で述べられる各範囲は、下位の１／３、中間の１／３、上位の１／３などに容易に分割されることができる。また、当業者により理解されるように、「までの」、「少なくとも」などのすべての用語は記載された数を含み、上述のように続いて部分範囲に分割されることができる範囲を指す。最後に、当業者により理解されるように、１つの範囲は各個別の要素を含む。したがって、例えば、１〜３個の項目を有する群は、１、２または３個の項目を有する群を指す。同様に１〜５個の項目を有する群は、１、２、３、４または５個の項目を有する群を指すなどとなる。
【０２００】
本明細書では様々な態様および実施形態が開示されているが、他の態様および実施形態が当業者には明らかであろう。本明細書で開示される様々な態様および実施形態は、例示を目的としており、限定することを意図するものではなく、実際の範囲および趣旨は添付の特許請求の範囲により示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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