(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表示される結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩であって、
［化学式１］
【化１】
0006982097.tif 000019
Ｘ線粉末回折分析して得られた、相対強度が１５％以上である２θ回折角（２θ±０．２゜）が７．１５、１０．７２、１３．３６、１５．９９、１６．３９、１６．７１、１７．１４、１９．６１、２１．５０、２１．８２、２３．４６、２４．０８、２５．９１及び２７．３６を有することを特徴とする、前記結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩。
【請求項２】
結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩の製造方法であって、前記結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩が、Ｘ線粉末回折分析して得られた、相対強度が１５％以上である２θ回折角（２θ±０．２゜）が７．１５、１０．７２、１３．３６、１５．９９、１６．３９、１６．７１、１７．１４、１９．６１、２１．５０、２１．８２、２３．４６、２４．０８、２５．９１及び２７．３６を有し、
ａ）２−プロピル−３−オキソ−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルと２−ヒドラジノピリジンを反応させて粗生成物を得る段階；
ｂ）粗生成物をノルマルヘキサンに溶かした後、得られた溶液を−２０〜−１０℃まで徐々に冷却させて固体を生成する段階；
ｃ）生成された固体を濾過、洗浄及び乾燥して非結晶性遊離塩基化合物を得る段階；
ｄ）非結晶性遊離塩基化合物を、アセトニトリルと蒸留水が同量で含まれた混合溶媒に加え、得られた混合物を２０〜２５℃で激しく撹拌して結晶を生成する段階；
ｅ）生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して下記化学式２で表示される結晶形遊離塩基化合物を得る段階；
ｆ）結晶形遊離塩基化合物を塩酸−イソプロピルエーテル溶液と反応させて塩酸塩固体を生成する段階；
ｇ）塩酸塩固体をｔｅｒｔ−ブチルエーテルとトルエンが同量で含まれた混合溶媒に加え、得られた混合物を５〜１０℃で激しく撹拌して結晶を生成する段階；及び
ｈ）生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して下記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物を得る段階；
を含む、前記製造方法。
［化学式２］
【化２】
0006982097.tif 000020
［化学式１］
【化３】
0006982097.tif 000021
【請求項３】
請求項１に記載の結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩を活性成分として含む、活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患の予防又は治療用薬学組成物。
【請求項４】
前記活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患は、骨粗しょう症であることを特徴とする、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患は、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、糸球体腎炎、腎盂腎炎、間質性腎炎、ループス腎炎、多嚢胞性腎臓疾患及び腎不全症からなる群から選ばれる少なくとも一つの腎臓疾患を含むことを特徴とする、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患は、糖尿網膜病症（ＤＲ）、糖尿黄斑浮腫、加齢性黄斑変性症（Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ｐｏｌｙｐｏｉｄａｌ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）、虚血性増殖網膜症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、網膜色素変性症（Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  Ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、錐体ジストロフィー（ｃｏｎｅ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、増殖硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、翼状片（Ｐｔｅｒｙｇｉｕｍ）、網膜炎、角膜炎、結膜炎、ブドウ膜炎、レーベル視神経萎縮症、網膜剥離、網膜色素上皮剥離、新生血管緑内障、角膜新血管新生、網膜新血管新生、脈絡膜新血管新生（ＣＮＶ）及びウイルス感染からなる群から選ばれる少なくとも一つの眼疾患を含むことを特徴とする、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項７】
前記薬学組成物は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、エアゾール、軟膏、クリーム及び坐剤からなる群から選ばれる剤形に製剤化されたことを特徴とする、請求項３に記載の薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の結晶形固体化合物である３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩及びその製造方法、並びに該化合物を活性成分として含む薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記化学式１で表示される３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩（以下、‘塩酸塩化合物’と略す。）又は下記化学式２で表示される３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル（以下、‘遊離塩基化合物’と略す。）は大韓民国登録特許１０−１２８０１６０号（特許文献１）で初めて合成されて報告されている。
【０００３】
［化学式１］
【化１】
0006982097.tif 000002
【０００４】
［化学式２］
【化２】
0006982097.tif 000003
【０００５】
また、大韓民国登録特許１０−１２８０１６０号（特許文献１）、大韓民国登録特許１０−１６３３９５７号（特許文献２）及び大韓民国特許出願１０−２０１７−００２４０８３号（特許文献３）では、前記化学式１又は化学式２で表示される化合物が活性酸素種（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ；ＲＯＳ）の生成を抑制する活性に優れていることを示している。また、このような薬理機転に基づいて、前記化学式１又は化学式２で表示される化合物が骨粗しょう症、腎臓疾患、眼疾患の治療用薬学組成物の活性成分として有効であることが報告されている。
【０００６】
また、大韓民国登録特許１０−１６３３９５７号（特許文献２）には、前記化学式１又は化学式２で表示される化合物の製造方法が開示されている。前記特許文献２に開示された製造方法では具体的に、２−プロピル−３−オキソ−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルと２−ヒドラジノピリジンをエタノール溶媒で加熱還流して生成された固体をヘキサンとエチルアセテートで洗浄して真空乾燥させ、前記化学式２で表示される遊離塩基化合物を製造する。そして、製造された遊離塩基化合物をジエチルエーテルに溶解させた後、０℃でＨＣｌ／ジエチルエーテル溶液を滴加して生成された固体をヘキサンとエチルアセテートで洗浄して真空乾燥させ、前記化学式１で表示される塩酸塩化合物を製造している。
【化３】
0006982097.tif 000004
【０００７】
前記特許文献１及び２では、前記化学式１又は化学式２で表示される化合物が結晶形化合物ではなく非結晶性固体化合物として得られた。
【０００８】
一方、無晶形（ａｍｏｒｐｈｏｕｓ  ｆｏｒｍ）又は非結晶性（ｎｏｎｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｆｏｒｍ）化合物は結晶質（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｆｏｒｍ）化合物に比べて粒子の表面積が大きい。したがって、無晶形又は非結晶質化合物は、速度論的に溶媒に対する溶解度には優れている長所があるが、結晶化による格子エネルギーを有しておらず、結晶質化合物に比べて安定性が低いという短所がある。
【０００９】
また、結晶形化合物は特有の結晶パターンを有している。そのパターンは、単一結晶形であるか、或いは２種類又はそれ以上の結晶多形（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｆｏｒｍ）が存在し得る。また、結晶多形化合物は、含湿性などが互いに異なり、溶解度、融点などの物理的特性も互いに異なり得る。また、医薬原料が結晶多形化合物である場合、結晶形が変わることにより製剤の溶出及び崩壊にも影響を与えることがあり、これは経口絶対吸収率にも影響が及び得る。
【００１０】
すなわち、結晶多形化合物は化学構造式が同一であっても個別の結晶形態を有するので、化合物の安定性と生理的な活性が互いに異なり得る。特に、医薬用途に適用される結晶多形化合物は、結晶形態によって、医薬原料製造の容易性、溶解度、保管安定性、完製品製造の容易性及び生体内薬理活性に多くの影響を与え得る。したがって、投与経路、用法容量などによって医薬原料として要求される結晶形を選定することは非常に重要である。一般的な結晶形薬物の選定基準は結晶形の物理化学的特性に起因するが、例えば、熱力学的に最も安定した結晶形を選択するか、医薬原料及び完製品の製造に最適化された結晶形を選択するか、或いは薬物の溶解度及び溶解速度を改善したり薬動学的特性の変化を与え得る結晶形を選択することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】大韓民国登録特許第１０−１２８０１６０号公報
【特許文献２】大韓民国登録特許第１０−１６３３９５７号公報
【特許文献３】大韓民国特許出願第１０−２０１７−００２４０８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、医薬原料として用いられて優れた物性及び安定性を示し、且つ保管条件下で経時変化によって結晶転移が発生しないように熱力学的に安定化し得る、前記化学式１で表示される塩酸塩化合物の新しい結晶形化合物を製造し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
したがって、本発明は、下記化学式１で表示される新規の結晶形塩酸塩化合物を提供することに目的がある。
【００１４】
［化学式１］
【化４】
0006982097.tif 000005
また、本発明は、前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物の製造方法を提供することに他の目的がある。
【００１５】
また、本発明は、前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物が活性成分として含まれた薬学組成物を提供することにさらに他の目的がある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記の課題を解決するための一態様として、本発明は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）で測定した最大吸熱温度が１３４．２５±３℃である、下記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物を提供する。
【００１７】
［化学式１］
【化５】
0006982097.tif 000006
本発明の好ましい具現例によれば、前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物は、Ｘ線粉末回折分析して得られた、相対強度が１５％以上である２θ回折角（２θ±０．２゜）が７．１５、１０．７２、１３．３６、１５．９９、１６．３９、１６．７１、１７．１４、１９．６１、２１．５０、２１．８２、２３．４６、２４．０８、２５．９１及び２７．３６であり得る。
【００１８】
本発明は他の態様として、下記の製造段階を含む前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物の製造方法を提供する：
ａ）２−プロピル−３−オキソ−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルと２−ヒドラジノピリジンを反応させて粗生成物を得る段階；
ｂ）粗生成物をノルマルヘキサンに溶かした後に、−２０〜−１０℃まで徐々に冷却させて固体を生成する段階；
ｃ）生成された固体を濾過、洗浄及び乾燥して非結晶性遊離塩基化合物を得る段階；
ｄ）非結晶性遊離塩基化合物をアセトニトリルと蒸留水が同量で含まれた混合溶媒に加え、２０〜２５℃で激しく撹拌して結晶を生成する段階；
ｅ）生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して下記化学式２で表示される結晶形遊離塩基化合物を得る段階；
ｆ）結晶形遊離塩基化合物を塩酸−イソプロピルエーテル溶液と反応させて塩酸塩固体を生成する段階；
ｇ）塩酸塩固体をｔｅｒｔ−ブチルエーテルとトルエンが同量で含まれた混合溶媒に加え、５〜１０℃で激しく撹拌して結晶を生成する段階；及び
ｈ）生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して下記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物を得る段階。
【００１９】
［化学式２］
【化６】
0006982097.tif 000007
［化学式１］
【化７】
0006982097.tif 000008
本発明は他の態様として、前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物が活性成分として含まれている、活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患の予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００２０】
本発明の他の態様として、対象患者の活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患を治療、予防又は軽減するための方法であって、該方法は、前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物の有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２１】
本発明の他の態様として、活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患の治療、予防又は軽減のための薬剤の製造において前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物の用途を提供する。
【００２２】
本発明の他の態様として、活性酸素種（ＲＯＳ）によって媒介される疾患の治療、予防又は軽減のために使用する前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物を提供する。
【００２３】
本発明の好ましい具現例によれば、前記活性酸素種によって媒介される疾患は骨粗しょう症であり得る。
【００２４】
本発明の好ましい具現例によれば、前記活性酸素種によって媒介される疾患は、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、糸球体腎炎、腎盂腎炎、間質性腎炎、ループス腎炎、多嚢胞性腎臓疾患及び腎不全症からなる群から選ばれる一つ以上の腎臓疾患であり得る。
【００２５】
本発明の好ましい具現例によれば、前記活性酸素種によって媒介される疾患は、糖尿網膜病症（ＤＲ）、糖尿黄斑浮腫、加齢性黄斑変性症（Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ｐｏｌｙｐｏｉｄａｌ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）、虚血性増殖網膜症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、網膜色素変性症（Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  Ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、錐体ジストロフィー（ｃｏｎｅ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、増殖硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、翼状片（Ｐｔｅｒｙｇｉｕｍ）、網膜炎、角膜炎、結膜炎、ブドウ膜炎、レーベル視神経萎縮症、網膜剥離、網膜色素上皮剥離、新生血管緑内障、角膜新血管新生、網膜新血管新生、脈絡膜新血管新生（ＣＮＶ）及びウイルス感染からなる群から選ばれる一つ以上の眼疾患であり得る。
【００２６】
本発明の好ましい具現例によれば、前記薬学組成物は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアゾール、軟膏、クリーム、坐剤、点眼剤（Ｅｙｅ  ｄｒｏｐ）及び注射剤からなる群から選ばれる剤形に製剤化することができる。
【発明の効果】
【００２７】
本発明が提供する前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物は、文献に報告されたことのない新規物質であり、非結晶性塩酸塩化合物に比べて熱及び水分に対する安定性に著しく優れている。
【００２８】
また、本発明が提供する結晶形塩酸塩化合物は、塩酸以外の酸を付加して製造された様々な結晶形酸付加塩化合物に比べても安定性に優れている。
【００２９】
また、本発明が提供する結晶形塩酸塩化合物は、薬物の製造に有利な物性を有するだけでなく、熱及び水分に対する安定性に優れているため、製造された薬物は流通期間を超えて長期間保管されても、活性成分が分解されないか、結晶形が転移されることなく安定して保存される。
【００３０】
したがって、本発明が提供する結晶形塩酸塩化合物は、骨粗しょう症、腎臓疾患、眼疾患の予防又は治療を目的とする薬剤の製造時に活性成分として有用である。具体的に、結晶形塩酸塩化合物は、経口用製剤、注射用製剤又は点眼剤に剤形化される薬物の医薬原料として容易に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オルの分子模型写真である。
【図２】結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル（結晶形遊離塩基化合物）のＸ線粉末回折パターンである。
【図３】結晶形遊離塩基化合物のＤＳＣ熱分析図である。
【図４】結晶形遊離塩基化合物の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図５】結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル塩酸塩（結晶形塩酸塩化合物）のＸ線粉末回折パターンである。
【図６】結晶形塩酸塩化合物のＤＳＣ熱分析図である。
【図７】結晶形塩酸塩化合物の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図８】様々な結晶形酸付加塩化合物のＸ線粉末回折パターンである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、新規の結晶形塩酸塩化合物及びその製造方法、並びに該化合物が活性成分として含まれた薬学組成物に関する。
【００３３】
本発明が特徴とする結晶形塩酸塩化合物は、文献に報告されたことのない新規物質であり、薬物の製造に有利な物性を有しており、熱及び水分に対して安定しており、流通保管中に活性成分が分解されたり結晶形の転移が発生しない、安定性が十分に確保された化合物である。
【００３４】
本発明が提供する結晶形塩酸塩化合物は、下記化学式１で表示されるように、３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル母核に塩酸が付加された酸付加塩化合物である。
【００３５】
［化学式１］
【化８】
0006982097.tif 000009
しかし、酸付加塩を形成するようになる母核のピリジン基が相対的に弱い塩基である上に、ピラゾールＣ５位置のヒドロキシ基（−ＯＨ）がピリジンの窒素原子（Ｎ）と水素結合を形成することもあるので、一般の場合に比べてピリジンの塩基度がより弱くなり得る。これは、図１の分子模型から確認できる。図１は、３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル遊離塩基が分子力学的にエネルギーを最小化できる最も安定した形態を有している分子模型写真であり、ピラゾールＣ５位置のヒドロキシ基がピリジンの窒素原子と水素結合をなしていることが確認できる。
【００３６】
本発明者らは、実験の結果、従来の製造方法で製造された非結晶性塩酸塩化合物は、保管中に塩化水素（ＨＣｌ）が脱離し続き、その結果、分解産物として下記化学式３で表示される化合物が生成されることが確認できた。
【００３７】
［化学式３］
【化９】
0006982097.tif 000010
３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル遊離塩基の場合、薬剤学的許容可能な塩化合物に比べて融点がより低いため、前記化学式３で表示される分解産物の発生可能性がより高い。その上、水分や熱に露出される時間が長くなるほど前記化学式３で表示される分解産物をはじめとして様々な類縁物質が生成され得る。
【００３８】
結晶形塩酸塩化合物が薬物に適用されるための要件としては、第一に、薬学的に許容可能な塩の合成過程や医薬原料として製剤化する過程に適用され得るように物理的に安定していること、第二に、保管流通中に経時変化によって他の結晶形態に転移しやすくないこと、第三に、保管流通中に化学式３で表示されるピリジンのＮ−Ｏ−化合物をはじめとする類縁物質の生成を最小化できること、が挙げられる。
【００３９】
そこで、本発明者らは、３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル遊離塩基をより力学的に安定化させ得る酸付加塩化合物を選定するために研究した。すなわち、結晶形塩酸塩化合物と、塩酸（ＨＣｌ）に比べて酸度がより高いとともに不揮発性である薬剤学的に許容される酸が付加された様々な結晶形塩化合物を製造し、製造された酸付加塩化合物に対して安定性を比較実験した。通常、塩酸の付加された結晶形塩酸塩化合物に比べて、ピリジンと塩酸のｐＫａ値よりも大きいｐＫａ値を有するとともに不揮発性の酸が付加された酸付加塩化合物が、母核から酸の脱離を効果的に抑制できるものと予測され得る。しかし、本発明者らの比較実験から、３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オルを母核とする様々な結晶形酸付加塩化合物の中でも結晶形塩酸塩化合物が薬物保管条件下で最も安定的であるという予期せぬ結果を得た［下記の実験例２を参考］。
【００４０】
したがって、本発明が提供する結晶形塩酸塩化合物は、塩酸の付加された塩化合物であり、様々な結晶形酸付加塩化合物の中でも最も安定的であるので、薬物の活性成分として用いられる場合、流通期間内に長期間保管されても活性成分が分解されることなく安定して保存され得る。
【００４１】
また、本発明は、結晶形塩酸塩化合物の製造方法を提供する。本発明に係る結晶形塩酸塩化合物の製造方法は、具体的に、
ａ）２−プロピル−３−オキソ−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルと２−ヒドラジノピリジンを反応させて粗生成物を得る段階；
ｂ）粗生成物をノルマルヘキサンに溶かした後に、−２０〜−１０℃まで徐々に冷却させて固体を生成する段階；
ｃ）生成された固体を濾過、洗浄及び乾燥して非結晶性遊離塩基化合物を得る段階；
ｄ）非結晶性遊離塩基化合物を、アセトニトリルと蒸留水が同量で含まれた混合溶媒に加え、２０〜２５℃で激しく撹拌して結晶を生成する段階；
ｅ）生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して下記化学式２で表示される結晶形遊離塩基化合物を得る段階；
ｆ）結晶形遊離塩基化合物を塩酸−イソプロピルエーテル溶液と反応させて塩酸塩固体を生成する段階；
ｇ）塩酸塩固体をｔｅｒｔ−ブチルエーテルとトルエンが同量で含まれた混合溶媒に加え、５〜１０℃で激しく撹拌して結晶を生成する段階；及び
ｈ）生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して下記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物を得る段階；を含む
［化学式２］
【化１０】
0006982097.tif 000011
［化学式１］
【化１１】
0006982097.tif 000012
本発明に係る結晶形塩酸塩化合物の製造方法を各段階別にさらに具体的に説明すると下記の通りである。
【００４２】
前記ａ）段階は、大韓民国登録特許１０−１６３３９５７号（特許文献２）に開示された製造方法に基づいて粗生成物（ｃｒｕｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ）を製造する。
【００４３】
前記ｂ）段階は、粗生成物を固体化する過程であり、ノルマルヘキサンに粗生成物を溶解させた後に冷却して固体を生成する。前記粗生成物を溶解させる過程では、完全な溶解のために若干の加熱を必要とし得るが、加熱は、５０〜６０℃温度範囲で適切に行うことができる。前記冷却は、−２０〜−１０℃の範囲が適当であり、冷却温度が高すぎると固体の生成速度が遅く、収率が低いことがあり、冷却温度が低すぎると、後に行われる結晶化過程で結晶が生成されないことがある。
【００４４】
前記ｃ）段階は、生成された固体を濾過、洗浄及び乾燥して非結晶性遊離塩基化合物を得る。前記洗浄は、０〜１０℃に冷却されたノルマルヘキサンを溶媒として行うことができる。前記乾燥は、常温で行うか、或いは３０〜４０℃で真空乾燥することができる。
【００４５】
前記ｄ）段階は、非結晶性遊離塩基化合物を結晶化する過程である。具体的に、非結晶性遊離塩基化合物を、アセトニトリルと蒸留水が１：１重量比で含まれた混合溶媒に加え、２０〜２５℃で激しく撹拌して結晶を生成する。前記アセトニトリルと蒸留水の重量比は１：０．５〜２の重量比であり得る。
【００４６】
前記ｅ）段階は、生成された結晶を濾過して溶媒で洗浄した後に乾燥して結晶形遊離塩基化合物を得る過程である。前記洗浄溶媒は、アセトニトリルと蒸留水が１：１の重量比で含まれた混合溶媒を使用し、該溶媒は、０〜１０℃に冷却して使用することが好ましい。前記乾燥は、通常の乾燥方法、例えば凍結乾燥、回転蒸発乾燥、噴霧乾燥、真空乾燥又は流動層乾燥によって行うことができ、具体的に、真空乾燥によって行うことができる。好ましくは、３０〜４０℃で真空乾燥することができる。
【００４７】
前記ｆ）段階は、結晶形遊離塩基化合物を塩酸と反応させて塩酸付加塩の固体を生成する過程である。前記塩酸塩生成反応はイソプロピルエーテル溶媒で行う。前記塩酸はイソプロピルエーテルに稀釈して０．５〜２Ｍ濃度の溶液にして使用することができる。反応温度は−１０〜１０℃が好ましく、より好ましくは０〜５℃を維持できる。
【００４８】
前記ｇ）段階は、塩酸塩固体を結晶化する過程である。具体的に、非結晶性塩酸塩化合物をｔｅｒｔ−ブチルエーテルとトルエンが１：１の重量比で含まれた混合溶媒に加え、５〜１０℃で激しく撹拌して結晶を生成する。
【００４９】
前記ｈ）段階は、生成された結晶を濾過、洗浄及び乾燥して結晶形塩酸塩化合物を得る過程である。前記洗浄溶媒は、ｔｅｒｔ−ブチルエーテルとトルエンが１：１重量比で含まれた混合溶媒を使用し、前記溶媒は、０〜１０℃に冷却して使用することが好ましい。前記乾燥は、通常の乾燥方法、例えば凍結乾燥、回転蒸発乾燥、噴霧乾燥、真空乾燥又は流動層乾燥によって行うことができ、具体的に真空乾燥によって行うことができる。好ましくは、３０〜４０℃で真空乾燥することができる。
【００５０】
また、本発明は、結晶形塩酸塩化合物が活性成分として含まれた薬学組成物を提供する。
【００５１】
特許文献１〜３によれば、非結晶性塩酸塩化合物は、活性酸素種（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）によって媒介される疾患、具体的には骨粗しょう症、腎臓疾患、眼疾患の治療用薬学組成物の活性成分として有効である。したがって、本発明が提供する結晶形塩酸塩化合物も活性酸素種（ＲＯＳ）の生成を抑制する活性を有するので、このような薬理機転に基づくと、結晶形塩酸塩化合物が活性成分として含まれた薬学組成物は、骨粗しょう症、腎臓疾患、眼疾患の治療又は予防に用いることができる。
【００５２】
前記腎臓疾患は、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、糸球体腎炎、腎盂腎炎、間質性腎炎、ループス腎炎、多嚢胞性腎臓疾患及び腎不全症からなる群から選ばれ得る。
【００５３】
前記眼疾患は、糖尿網膜病症（ＤＲ）、糖尿黄斑浮腫、加齢性黄斑変性症（Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ｐｏｌｙｐｏｉｄａｌ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）、虚血性増殖網膜症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、網膜色素変性症（Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  Ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、錐体ジストロフィー（ｃｏｎｅ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、増殖硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、翼状片（Ｐｔｅｒｙｇｉｕｍ）、網膜炎、角膜炎、結膜炎、ブドウ膜炎、レーベル視神経萎縮症、網膜剥離、網膜色素上皮剥離、新生血管緑内障、角膜新血管新生、網膜新血管新生、脈絡膜新血管新生（ＣＮＶ）及びウイルス感染からなる群から選ばれ得る。
【００５４】
本発明の薬学組成物は活性成分として結晶形塩酸塩化合物を含む。前記活性成分の含有量は、患者の年齢、体重などを考慮して算定できるが、一般的に薬学組成物総重量を基準に０．０１〜１０重量％の範囲で含有することができる。
【００５５】
また、本発明の薬学組成物は、有効成分の効果を損ねない範囲内で担体、希釈剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、ｐＨ調節剤、酸化防止剤、溶解補助剤などの薬学的に許容可能な添加剤を含むことができる。本発明の薬学組成物を剤形化するために使用できる薬学的に許容可能な添加剤の例には、非晶質セルロース、キシリトール、エリスリトール、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、澱粉、アカシア、アルギネート、ゼラチン、ラクトース、デキストロース、スクロース、ヒドロキシ安息香酸プロピル、セルロース、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ステアリン酸マグネシウムタルク、ソルビトール、マンニトール、マルチトール、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、又は鉱物油などを挙げることができる。
【００５６】
また、本発明の薬学組成物は、通常の製剤化方法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアゾール、軟膏、クリーム、坐剤、点眼剤（Ｅｙｅ  ｄｒｏｐ）及び注射剤からなる群から選ばれる剤形に剤形化できる。本発明は、前記剤形に特に制限はない。
【００５７】
また、本発明に係る点眼剤又は注射剤組成物は、注射用水を用いて製造することができる。薬学的に許容可能な塩を含有する点眼剤や注射剤は、当業界で通常用いられている等張化剤、緩衝液、浸透化剤などを制限なく選択的に含むことができる。
【実施例】
【００５８】
以下、実施例を用いて本発明の構成及び効果をより詳細に説明する。ただし、下記の実施例は、本発明を例示するもので、本発明の内容を制限するためのものではない。
【００５９】
［実施例］
実施例１．結晶形遊離塩基化合物の製造
丸いフラスコに２−プロピル−３−オキソ−３−フェニルプロピオン酸エチルエステル（５．６ｇ、５１．４ｍｍｏｌ）、２−ヒドラジノピリジン（１１．５ｇ、４９ｍｍｏｌ）を入れ、反応溶媒無しで窒素大気下で２４時間１５０℃で撹拌した。反応液を室温に冷却させた後、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０ｇ；ｎ−Ｈｅｘａｎｅ／ＥｔＯＡｃ＝５／１）を通過させて精製し、減圧濃縮した。生成された固体化合物にノルマルヘキサン（７０ｍＬ）を加えて徐々に昇温させて溶解させた後、−２０℃まで１時間にわたって徐々に冷却させた。生成された固体を減圧濾過し、０〜１０℃に冷却されたノルマルヘキサンで固体を洗浄した。洗浄された固体をアセトニトリル：蒸留水＝１：１の混合溶媒（１００ｍＬ）に加えた後、２５℃で激しく１時間撹拌して結晶を生成した。生成された結晶を濾過し、１０℃以下に冷却させたアセトニトリル：蒸留水＝１：１の混合溶媒で洗浄し、４０℃で１２時間真空乾燥して結晶形遊離塩基化合物を得た。
【００６０】
前記実施例１で製造された結晶形遊離塩基化合物に対するＸ線粉末回折（ＰＸＲＤ）分析図、ＤＳＣ熱分析図及び1Ｈ  ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図２〜図４に添付した。
【００６１】
実施例２．結晶形塩酸塩化合物の製造
丸いフラスコに結晶形遊離塩基化合物（１２．９ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）を入れて窒素大気下でイソプロピルエーテル（３００ｍＬ）に溶かした後、１Ｍ濃度の塩酸−イソプロピルエーテル溶液を０〜５℃で１０分間加えた。反応物を０〜５℃で１時間撹拌して固体化合物を生成した。生成された固体化合物を窒素大気下で減圧濾過し、１０℃以下に冷却させたイソプロピルエーテル（３０ｍＬ）で洗浄した。洗浄された固体化合物をｔｅｒｔ−ブチルエーテル：トルエン＝１：１（５０ｍＬ）に加えた後、窒素大気下で５〜１０℃で激しく１時間撹拌して結晶を生成した。生成された結晶を濾過し、１０℃以下に冷却させたｔｅｒｔ−ブチルエーテル：トルエン＝１：１の混合溶媒で洗浄し、４０℃で１２時間乾燥し、白色の結晶形塩酸塩化合物を得た。
【００６２】
前記実施例２で製造された結晶形塩酸塩化合物に対するＸ線粉末回折分析図、ＤＳＣ熱分析図及び1Ｈ  ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図５〜図７に添付した。
【００６３】
比較例１．非結晶性遊離塩基化合物の製造
丸いフラスコに２−プロピル−３−オキソ−３−フェニルプロピオン酸エチルエステル（５．６ｇ、５１．４ｍｍｏｌ）、２−ヒドラジノピリジン（１１．５ｇ、４９ｍｍｏｌ）を入れ、反応溶媒無しで窒素大気下で３日間１５０℃で撹拌した。反応液を室温に冷却させた後に減圧濃縮し、ヘキサンとエチルアセテートで洗浄して真空乾燥させ、非結晶性遊離塩基化合物を得た。
【００６４】
比較例２．非結晶性塩酸塩化合物の製造
丸いフラスコに前記比較例１で製造した非結晶性遊離塩基化合物（１２．９ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）を入れてジエチルエーテル（３００ｍＬ）に溶かした後、２Ｍ濃度の塩酸−ジエチルエーテル溶液を０〜５℃で１０分間加えた。生成された固体化合物を減圧濾過し、ヘキサンとエチルアセテートで洗浄して真空乾燥させ、非結晶性塩酸塩化合物を得た。
【００６５】
比較例３．様々な結晶形酸付加塩化合物の製造
結晶形３−フェニル−４−プロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オル（結晶形遊離塩基）に様々な酸を付加して酸付加塩を製造した。結晶化方法としては、文献に公知された様々な方法、例えば反応性結晶化法（Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、冷却結晶化法（Ｃｏｏｌｉｎｇ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、ドラウニングアウト結晶化法（Ｄｒｏｗｎｉｎｇ−ｏｕｔ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、蒸発結晶化法（Ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）を利用した。２０余種の酸を用いて結晶性酸付加塩化合物を製造し、それらのうち、蒸発結晶化法（Ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）を用いて製造された結晶形酸付加塩化合物を、下記表１に示した。
【００６６】
具体的に、丸いフラスコに結晶形遊離塩基化合物（１２．９ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）を入れ、下記表１に示した酸を添加した。それぞれの反応物に無水メタノール２０ｍＬを加え、５０〜６０℃程度に加熱して完全に溶かした。フラスコ栓を開き、空気が通り得るようにＫｉｍｗｉｐｅｓTMティッシュペーパーを入口に覆ったのち輪ゴムで巻いた後、ヒュームフード（Ｆｕｍｅ  ｈｏｏｄ）内で３６時間保管した。この時、ヒュームフードの内部温度は２３〜２６℃の範囲を維持した。生成された固体を濾過し、１０℃以下に冷却されたノルマルヘキサン（５ｍＬ）で洗って真空乾燥し、それぞれの結晶形酸付加塩を得た。
【００６７】
【表１】
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【００６８】
前記実施例２で製造した結晶形塩酸塩化合物と前記比較例３で製造した様々な結晶形酸付加塩化合物に対してＸ線粉末回折分析した結果を図８に示した。
【００６９】
［実験例］
実験例１．吸湿性試験
結晶形遊離塩基化合物（実施例１）、結晶形塩酸塩化合物（実施例２）、非結晶性遊離塩基化合物（比較例１）、非結晶性塩酸塩化合物（比較例２）及び様々な結晶形酸付加塩化合物（比較例３）のそれぞれに対して吸湿性比較実験を行った。
【００７０】
試験化合物は、温度４０℃及び相対湿度７５％の加速保管条件下でペトリ皿（Ｐｅｔｒｉ  ｄｉｓｈ）に入れて密封しないまま７日間露出させた。各試験化合物の含水率は、カールフィッシャー（Ｋａｒｌ−Ｆｉｓｃｈｅｒ）水分測定機で測定した。下記表２には、保管期間中に測定した各試験化合物の含水率（％）をまとめて示した。
【００７１】
【表２】
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【００７２】
前記表２の結果から、遊離塩基化合物と塩酸塩化合物の場合、結晶形を有する化合物が非結晶性化合物に比べて初期含水率が少ないだけでなく、加速保管条件で７日後には含水率において顕著な差異を示していることが確認できる。したがって、結晶形遊離塩基化合物又は結晶形塩酸塩化合物は、吸湿性が非常に少ないだけでなく、時間経過によって含水率が増えずに飽和（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）される特性を有するので、医薬原料として薬剤学的に有用に使用することができる。また、塩酸以外の酸が付加された結晶形酸付加塩化合物（比較例３）と対比すると、結晶形塩酸塩化合物は、結晶形１，５−ナフタレンジスルホン酸塩、結晶形リンゴ酸塩を除く残りの結晶形酸付加塩に比べて吸湿性に優れていることが分かる。
【００７３】
実験例２．安定性比較試験
結晶形遊離塩基化合物（実施例１）、結晶形塩酸塩化合物（実施例２）、非結晶性遊離塩基化合物（比較例１）、非結晶性塩酸塩化合物（比較例２）及び様々な結晶形酸付加塩化合物（比較例３）のそれぞれに対して安定性比較実験を行った。
【００７４】
試験化合物は、温度２５℃及び相対湿度６０％の長期保存条件下で安定性チャンバーに入れて６ケ月間保管した。保管は、各試験化合物を二重ポリエチレン袋（ｂａｇ）に入れておき、前記ポリエチレン袋の間にシリカゲルパウチを充填した後、小型の紙箱（Ｆｉｂｅｒ  ｄｒｕｍ）に入れた。
【００７５】
下記表３に、６ケ月間長期保存条件で保管した後に測定した前記化学式３の分解産物の濃度と全体類縁物質の濃度をＨＰＬＣ分析で測定した結果をまとめて示した。
【００７６】
［液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の分析条件］
カラム：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５ｕｍ、１００Å  ｐｏｒｅ  ｓｉｚｅ
カラム温度：３５℃
検出機：ＵＶ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（２４６ｎｍ）
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
時間：５５分
移動相の勾配条件：
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【００７７】
【表３】
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【００７８】
前記表３の結果によれば、遊離塩基化合物の場合、結晶形遊離塩基化合物（実施例１）に比べて非結晶性遊離塩基化合物（比較例１）が、化学式３で表示される分解産物の濃度が顕著に高いということが確認できる。初期に比べて６ケ月後に測定された全体類縁物質の濃度は、結晶形遊離塩基化合物（実施例１）に比べて非結晶性遊離塩基化合物（比較例１）において格段に増加することが確認できる。また、塩酸塩化合物において、非結晶性塩酸塩化合物（比較例２）には塩酸（ＨＣｌ）の脱離現象が発生したことが分かる。この結果から、非結晶性塩酸塩化合物（比較例２）は結晶形塩酸塩化合物（実施例２）に比べて、化学式３で表示される分解産物の濃度が顕著に高いということが分かる。また、類縁物質の濃度においても、非結晶性塩酸塩化合物（比較例２）の方が熱力学的安定性が低いため、結晶形塩酸塩化合物（実施例２）に比べて類縁物質の濃度が相対的に高いということが分かる。
【００７９】
また、塩酸以外の酸が付加された結晶形酸付加塩化合物と対比したとき、結晶形塩酸塩化合物（実施例２）は結晶形酸付加塩化合物（比較例３）に比べて、化学式３で表示される分解産物の濃度及び類縁物質の濃度が顕著に低いことが確認できる。したがって、結晶形塩酸塩化合物は様々な結晶形酸付加塩化合物の中でも最も安定性に優れている。
【００８０】
実験例３．結晶転移（Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）有無の評価
結晶形遊離塩基化合物（実施例１）と結晶形塩酸塩化合物（実施例２）に対して保管条件で結晶転移現象が発生するかを確認するために、初期状態のＰＸＲＤ分析結果と経時変化による結晶転移可能性を調べてみた。
【００８１】
具体的に、試験化合物をポリエチレン袋（ｂａｇ）に入れ、温度４０℃及び相対湿度７５％の条件下で安定性チャンバーに４週間保管した。そして、初期状態と４週後にそれぞれ測定したＰＸＲＤ及びＤＳＣ分析結果を比較した。その結果を下記表４にまとめて示した。
【００８２】
【表４】
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【００８３】
結晶形遊離塩基化合物（実施例１）と結晶形塩酸塩化合物（実施例２）は、保管して４週経過時点にＰＸＲＤとＤＳＣを確認した結果、経時変化による結晶転移が発生しないことが分かった。したがって、結晶形遊離塩基化合物（実施例１）と結晶形塩酸塩化合物（実施例２）は安定した化合物であることが分かる。
【００８４】
実験例４．物性分析
（１）粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）分析
前記実施例１及び２で製造された結晶形遊離塩基化合物及び結晶形塩酸塩化合物に対するＸ線粉末回折分析は、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）社のＤ８  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線粉末回折計上でＣｕ  Ｋα線を使用した。回折計には管動力が装置されており、電流量は４５ｋＶ及び４０ｍＡに設定した。発散及び散乱スリットは１゜に設定し、受光スリットは０．２ｍｍに設定した。２θは５から３５゜まで６゜／分で測定した。ＰＸＲＤ分析結果は、図２及び図５に示した。
【００８５】
また、下記表５はＸ線粉末回折分析結果であり、結晶形遊離塩基化合物の場合は、相対強度が５％以上である２θ回折角（２θ±０．２゜）をまとめて示し、結晶形塩酸塩化合物の場合は、相対強度が１５％以上である２θ回折角（２θ±０．２゜）をまとめて示した。
【００８６】
【表５】
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【００８７】
（２）温度示差走査熱量法（ＤＳＣ）分析
前記実施例１及び２で製造された結晶形遊離塩基化合物及び結晶形塩酸塩化合物の融点は、温度示差走査熱量法（ＤＳＣ）分析で測定した。
【００８８】
ＳＣＩＮＣＯ社から入手したＤＳＣ  Ｎ−６５０を使用し、窒素気流下に２０℃から１５０℃まで１０℃／ｍｉｎのスキャン速度で、密閉パンでＤＳＣ測定を行った。その結果を図３及び図６にそれぞれ示した。
【００８９】
図３及び図６によれば、結晶形遊離塩基化合物は、７３．５４±３℃で特徴的な吸熱ピークを示し、結晶形塩酸塩化合物は１３４．２５±３℃で特徴的な吸熱ピークを示した。
【００９０】
また、比較例１で製造された非結晶性遊離塩基化合物は、融点が一定でなく、６０℃以上で完全に溶融することを確認した。比較例２で製造された非結晶性塩酸塩化合物も、融点が一定でなく、広い温度領域で徐々に溶融する特性を有し、１６０℃以上で完全に溶融した。この点から、本願発明が提供する結晶形化合物は、非結晶性化合物と物理化学的特性が全く異なる別個化合物であることが分かる。
【００９１】
以上の実験結果によれば、前記化学式２で表示される結晶形遊離塩基化合物と前記化学式１で表示される結晶形塩酸塩化合物は吸湿性がなく、安定性に優れ、経時変化による結晶転移可能性が低いので、他の結晶形酸付加塩及び従来の物質に比べて医薬原料として最適のものであることが確認できた。
【００９２】
以上では本発明の特定の部分を詳細に記述したが、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な技術は好ましい具現例に過ぎず、それらに本発明の範囲が制限されないことは明らかである。
【００９３】
したがって、本発明の実質的な範囲は、添付する請求項とその同等物によって定義されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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