(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｈｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物の、Ｐｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を機能性Ｔ細胞に分化転換するための製剤の調製における使用。
【請求項２】
形質転換したＢリンパ系細胞であって、前記Ｂリンパ系細胞において、Ｈｏｘｂ５を過剰発現させるようにＨｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物を導入し、且つ前記Ｂリンパ系細胞は、Ｔ細胞に分化転換する潜在能力を有する、ことを特徴とする形質転換したＢリンパ系細胞。
【請求項３】
前駆Ｂ細胞又はプレＢ細胞である、ことを特徴とする請求項２に記載の形質転換したＢリンパ系細胞。
【請求項４】
請求項２又は３に記載の形質転換したＢリンパ系細胞の、Ｔ細胞を再生するための医薬の調製における使用であって、前記Ｂリンパ系細胞はＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞である使用。
【請求項５】
活性成分としての請求項２又は３に記載の形質転換したＢリンパ系細胞、及び薬学的に許容可能であるベクター、賦形剤又は希釈剤を含む、医薬組成物であって、前記Ｂリンパ系細胞はＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞である医薬組成物。
【請求項６】
Ｂリンパ系細胞を機能性Ｔ細胞に分化転換するための方法であって、
（１）Ｈｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物を前記Ｂリンパ系細胞に導入し、Ｈｏｘｂ５が過剰発現したＢリンパ系細胞を得ることと、
（２）分化転換を誘導するために、ステップ（１）で得られたＢリンパ系細胞を被験マウスの体内に移植してＴ細胞前駆細胞を得てから、分化によって機能性Ｔ細胞を得ることとを含む、方法。
【請求項７】
前記Ｂリンパ系細胞は、前駆Ｂ細胞又はプレＢ細胞である、ことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（１）において、前記Ｈｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物は、トレーサー、好ましくは蛍光タンパク質トレーサー、より好ましくはＥＧＦＰ蛍光タンパク質トレーサーを担持する、ことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（１）において、トランスフェクション又はウイルス感染、好ましくはレトロウイルス感染により、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子又は前記核酸分子を含む構築物をＢリンパ系細胞に導入する、ことを特徴とする請求項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療用バイオエンジニアリング技術の分野に関し、具体的にＨｏｘｂ５を用いてＢ細胞のＴ細胞への分化転換を誘導する方法、その関連製品及び使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔ細胞は免疫系に不可欠である。現在、国内外の従来の基礎研究は、Ｐａｘ５欠失（Ｐａｘ５−／−）を用いてマウスの成熟Ｂ細胞をＴ細胞に分化転換でき、Ｅｂｆ１及びＰａｘ５複合型ヘテロ接合マウス（Ｅｂｆ１＋／−Ｐａｘ５＋／−）のＢ細胞もＴ細胞に分化転換でき、また、逆分化経路によってＢ前駆細胞を多能性前駆細胞段階に戻させ、再度分化してＴ細胞を得ることができることを示している。しかしながら、上記の経路により得られたＴ細胞は、いずれも機能が完全ではなく、リンパ腫までクローン化して生じる。結論として、上記の研究で使用されている重要な遺伝子の大部分は、造血系統マスターレギュレーター（ｌｉｎｅａｇｅ  ｍａｓｔｅｒ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ）であり、これらの因子の欠失又は過剰発現は、いずれも再生したＴ細胞の機能的欠陥又は癌化をもたらす。したがって、造血幹前駆細胞において、新しい系統潜在能力決定因子を求め、全てのＴ細胞潜在能力を得るためにＴ細胞への分化転換を達成するように細胞エピジェネティクスから標的化細胞を徹底的に変更する。完全に分化転換した再生Ｔ前駆細胞のみは、生理学的Ｔ細胞に似た発生軌跡をたどり、体内で分化して機能性Ｔ細胞に成熟し、腫瘍形成のリスクをできるだけ回避することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
発明の目的
本発明の目的は、転写因子Ｈｏｘｂ５を用いてＢリンパ系細胞のＴリンパ系細胞への分化転換を誘導する方法、その関連製品及び使用を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の発明者らは、ＲＮＡ−Ｓｅｑ及びバイオインフォマティクス技術により、マウスの造血幹前駆細胞及び成熟血液細胞の転写発現プロフィールを詳細に解析し、候補転写因子であるＨｏｘｂ５をスクリーニングしてから、一連の生物学的実験を通して、当該転写因子がＢリンパ系細胞を機能性Ｔ細胞にうまく分化転換できるだけでなく、再生したＴ細胞の腫瘍形成のリスクも回避できることを発見した。
【０００５】
技術案
上記目的を達成するために、第１の態様において、本発明は、Ｈｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物の、（ｉ）Ｂリンパ系細胞を機能性Ｔ細胞に分化転換するための製剤、（ｉｉ）免疫応答を増強するため、好ましくはＴ細胞関連免疫応答を増強する医薬、及び／又は（ｉｉｉ）免疫不全症を予防又は治療するため、好ましくはＴ細胞免疫不全症を予防又は治療するための医薬の調製における使用を提供する。
【０００６】
上記使用において、好ましくは、前記Ｂリンパ系細胞は前駆Ｂ細胞又はプレＢ細胞である。
【０００７】
第２の態様において、本発明は、形質転換したＢリンパ系細胞であって、前記Ｂリンパ系細胞においてＨｏｘｂ５を過剰発現させるようにＨｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物を導入し、且つ前記Ｂリンパ系細胞はＴ細胞に分化転換する潜在能力を有する形質転換したＢリンパ系細胞を提供する。
【０００８】
好ましくは、前記Ｂリンパ系細胞は前駆Ｂ細胞（Ｐｒｏ−Ｂ）又はプレＢ細胞（Ｐｒｅ−Ｂ）である。
【０００９】
第３の態様において、本発明は、第２の態様に記載の形質転換したＢリンパ系細胞の、（ｉ）Ｔ細胞を再生するための医薬、（ｉｉ）免疫応答を増強するため、好ましくはＴ細胞関連免疫応答を増強する医薬、及び／又は（ｉｉｉ）免疫不全症を予防又は治療するため、好ましくはＴ細胞免疫不全症を予防又は治療するための医薬の調製における使用を提供する。
【００１０】
第４の態様において、本発明は、活性成分としての第２の態様に記載の形質転換したＢリンパ系細胞、及び薬学的に許容可能であるベクター、賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
第５の態様において、本発明は、
（１）Ｈｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物を前記Ｂリンパ系細胞に導入し、Ｈｏｘｂ５が過剰発現したＢリンパ系細胞を得ることと、
（２）分化転換を誘導するために、ステップ（１）で得られたＢリンパ系細胞を被験者の体内に移植してＴ細胞前駆細胞を得てから、分化によって機能性Ｔ細胞を得ることと、を含むＢリンパ系細胞を機能性Ｔ細胞に分化転換するための方法を提供する。
【００１２】
上記方法において、好ましくは、前記Ｂリンパ系細胞は前駆Ｂ細胞又はプレＢ細胞である。
【００１３】
好ましくは、ステップ（１）において、前記Ｈｏｘｂ５、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含む構築物はトレーサー、好ましくは蛍光タンパク質トレーサー、より好ましくはＥＧＦＰ蛍光タンパク質トレーサーを担持する。
【００１４】
好ましくは、ステップ（１）において、トランスフェクション又はウイルス感染、好ましくはレトロウイルス感染により、Ｈｏｘｂ５をコードする核酸分子又は前記核酸分子を含む構築物をＢリンパ系細胞に導入する。
【００１５】
具体的な実施形態では、本発明者らは、まずＨｏｘｂ５レトロウイルス発現ベクターを構築し、具体的に酵素切断部位を設計することで、Ｈｏｘｂ５遺伝子を逆転写発現ベクター（例えば、ｐＭＹｓ−ＩＲＥＳ−ＥＧＦＰ）に組み換え、レトロウイルスパッケージングシステムを用いてＨｏｘｂ５遺伝子を含む高力価レトロウイルスをコーティングし、次に、レトロウイルス組込み機能によってＨｏｘｂ５遺伝子をマウスのｐｒｏ−／ｐｒｅ−Ｂ細胞において過剰発現を実現させ、次に、眼球静脈移植によってＨｏｘｂ５を形質導入したＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を骨髄破壊されたレシピエントマウスに移植した。移植後４週に、フローサイトメトリー、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ、ＲＮＡ−Ｓｅｑシークエンシング及びバイオインフォマティクス分析により、再生したＴ細胞の由来及び同一性を同定した結果は、再生したＴ細胞が確実にＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞の分化転換に由来することを示し、再生したＴ細胞の免疫表現型、リンパ組織での分布、ＴＣＲ受容体の再配列及び体外抗体刺激増殖実験を更に参照しながら分析し、再生したＴ細胞の機能は正常であることを証明した。また、移植されたレシピエントマウスの健康状態、特にＴリンパ系細胞の造血を連続的に追跡し、再生したＴ細胞の腫瘍形成のリスクを評価した結果は、本発明の方法により得られた再生したＴ細胞は腫瘍形成のリスクがないか、又は腫瘍形成のリスクが非常に低いことを示した。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】（Ａ）再生したＴ細胞の実験設計のフローチャート、（Ｂ）Ｈｏｘｂ５組み換えプラスミドのレトロウイルスパッケージングｐｌａｔ−Ｅ細胞へのトランスフェクション効率が８５％（トランスフェクション後４８時間）を超えることを示す蛍光ＥＧＦＰ検出、（Ｃ）Ｐｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞に感染するＨｏｘｂ５レトロウイルスの形質導入効率が５０％を超える（感染後４８時間）ことを示すフローサイトメトリー分析を示す。
【図２】（Ａ）移植２〜４週目のレシピエントマウスの胸腺における再生したＴ細胞の割合及び構成のフローサイトメトリー分析、移植４週目の時に、レシピエントマウスの末梢血（Ｂ）、脾臓（Ｃ）、リンパ節（Ｄ）におけるドナー由来細胞（ＧＦＰ＋）の構成、再生したＴ細胞の分類のフローサイトメトリー分析、そのうち、右側は３回の独立した反復実験の統計図であり、（Ｅ）単一の再生したＴ細胞におけるＢ細胞特徴のＶＤＪ再配列のＮｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ検出を示す。
【図３】（Ａ）レシピエントマウスの胸腺における種々の型の再生したＴ細胞及び野生型Ｔ細胞の細胞トランスクリプトームのクラスター分析、（Ｂ）Ｂ細胞Ｉｇ重鎖ＶＤＪ再配列、単一の再生したＴ細胞における異なる部位でのＴＣＲ−β鎖再配列のＰＣＲ検出、（Ｃ）体外で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体によって刺激された再生したＴ細胞の増殖の代表的な形態図、そのうち、ＷＴは野生型のコントロールであり、（Ｄ）体外で増殖が刺激された再生したＴ細胞が培地上清に分泌されている代表的な細胞因子のＥＬＩＳＡ検出を示す。
【図４】（Ａ）ＲＯＳＡ２６部位でのＨｏｘｂ５ノックインモデルマウス（ＬＳＬ−Ｈｏｘｂ５）の標的化の概略図、（Ｂ）４週齢、８週齢、１２週齢のＣＤ１９−Ｃｒｅ  ＬＳＬ−Ｈｏｘｂ５複合モデルマウスの胸腺における再生したＴ細胞（ＧＦＰ＋）の割合及び構成の動的分析、（Ｃ）Ｂ細胞Ｉｇ重鎖ＶＤＪ再配列、再生したＴ細胞がＢ細胞に由来することを確実に証明する単一及び１０個の再生したＴ細胞の異なる重鎖ＶＤＪ再配列部位（ＶＨＪ５５８、ＶＨＱ５２、ＶＨＧＡＭ３、ＤＨＱ５２）のＰＣＲ分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明を理解しやすくさせるために、本発明は以下の実施例を挙げる。当業者は、下記実施例が本発明を理解するためのものに過ぎず、本発明を具体的に制限するものと見なすべきではないということを理解すべきである。
【００１８】
実施例１
まず、Ｈｏｘｂ５を用いてＢ細胞を体内で分化転換して再生したＴ細胞を産生する全実験フローチャートを設計した（図１Ａ）。次に、ＬａｓｅｒｇｅｎｅソフトウェアによってＨｏｘｂ５遺伝子の切断部位の情報を分析し、上流、下流の組換え酵素切断部位としてＸｈｏＩ／ＳｎａＢＩを選択し、Ｈｏｘｂ５遺伝子をレトロウイルスベクター（ｐＭＹｓ−ＩＲＥＳ−ＥＧＦＰ）に組換え構築した。ＤＨ５αコンピテントが連結産物へ形質転換した後、アンピシリンプレートを用いて陽性組換えクローンをスクリーニングした。さらに菌液ＰＣＲ及びスクリーニングした組換えプラスミを参照しながらＤＮＡシークエンシングし、組み換えが成功したｐＭＹ−Ｈｏｘｂ５−ＩＲＥＳ−ＥＧＦＰレトロウイルスプラスミドを確定し、内毒素除去による大規模抽出を将来の使用のために行った。続いて、リン酸カルシウムトランスフェクションを用いてＨｏｘｂ５組換えベクターをレトロウイルスパッケージング細胞株（Ｐｌａｔ−Ｅ細胞）に移した。２４時間後、トランスフェクション率を蛍光顕微鏡でチェックし、トランスフェクション率≧８５％を確保した（図１Ｂ）。４８時間後、Ｈｏｘｂ５を含有するレトロウイルス上清を将来の使用のために集めると同時に、４〜６週齢のマウスを殺し、マウスの骨髄を取り出して単一細胞懸濁液に調製した。次に、骨髄単一細胞懸濁液中のＢ２２０＋細胞を磁気ビーズ富化法により富化した。Ｐｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ抗体組合せ（ＣＤ１９／Ｂ２２０／ＣＤ９３／ＩｇＭ）で染色した後、超高速フローソーター（Ｍｏｆｌｏ  Ａｓｔｒｉｏｓ）を用いてＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞（ＣＤ１９＋Ｂ２２０＋ＣＤ９３＋ＩｇＭ−）を選別した。５００ｇで低温遠心分離した後に選別されたＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を集めた。続いて、富化されたＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞をＢリンパ系細胞完全培地に入れ、１２〜１４時間予備刺激し、レトロウイルスを１：１の体積でｏｐｔｉ−ＭＥＭ基礎培地に添加すると同時に、８μｇ／ｍｌ  ｐｏｌｙｂｒｅｎｅを添加し、将来の使用のために均一に混合した。３５０ｇで５分間遠心分離によって予備刺激したＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を集めた。続いて、Ｐｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を、再構成したレトロウイルス溶液を用いて再懸濁して、低接着性６穴培養プレートに入れて、３５℃の恒温水平遠心分離機において８０５ｇで９０分間遠心分離して感染させた。遠心分離終了後、６穴培養プレートを細胞インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）に戻させ、２時間静置培養した。続いて、Ｐｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を３５０ｇでの遠心分離によって集めた。予熱した完全培地を用いてＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞を再懸濁して、１ｍｌ当たり２〜４百万個の細胞の密度を保持した。２４時間後、遠心感染を１回繰り返した。２回目の感染の２４時間後、少量の細胞を採取し、Ｐｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞感染率をトリパンブルーで計数し、フローサイトメトリーによって分析した結果において、対照群とＨｏｘｂ５群のいずれか一方の感染率が５０％を超えることを示した（図１Ｃ）。続いて、懸濁細胞を３５０ｇでの遠心分離によって集め、レシピエントマウス１匹当たり６〜８百万個の生存細胞の用量で移植し、レシピエントマウスは４時間前に致死量未���（６．５Ｇｙ）の照射処理を行う。同時に、照射後のマウスの腸感染を予防するためにネオマイシン硫酸塩１．１４ｇ／Ｌをマウスの給水に添加した。
【００１９】
移植から２〜４週後に、移植されたレシピエントマウスを殺し、胸腺、脾臓、リンパ節、末梢血におけるＴ細胞形成を分析し、Ｔリンパ細胞の表面抗原ＣＤ３及び内因性ＥＧＦＰ蛍光タンパク質を用いて再生したＴリンパ細胞を追跡した。結果は、移植から２週後にレシピエントマウスの胸腺に最大１０％のＥＧＦＰ及びＣＤ３二重陽性Ｔ細胞を発見可能であることがわかった。さらなる分析により、この群のＴ細胞はＣＤ４単一陽性、ＣＤ８単一陽性、ＣＤ４ＣＤ８二重陽性（Ｄｏｕｂｌｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ、ＤＰ）及びＣＤ４ＣＤ８二重陰性（Ｄｏｕｂｌｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ、ＤＮ）Ｔ細胞を含むことを確実に証明した（図２Ａ）。
【００２０】
また、ＤＮ細胞のさらなる分析により、生理学的状態と同様の割合でＤＮ１細胞（ＣＤ４４＋ＣＤ２５−）、ＤＮ２細胞（ＣＤ４４＋ＣＤ２５＋）、ＤＮ３細胞（ＣＤ４４−ＣＤ２５＋）、ＤＮ４細胞（ＣＤ４４−ＣＤ２５−）という４つの細胞群に分類することができる（図２Ａ）。
【００２１】
次に、レシピエントマウスの胸腺細胞の連続分析は、レシピエントマウスの胸腺中のＣＤ３＋ＥＧＦＰ＋の再生したＴ細胞の割合が時間とともに徐々に増加することを示した。移植後４週に、８０％を超える胸腺細胞が再生したＴ細胞であった（図２Ａ）。
【００２２】
また、レシピエントマウスの末梢血、脾臓、リンパ節における再生したＴ細胞を分析した結果は、末梢血における再生したＴ細胞群においてＣＤ４単一陽性ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞、ＣＤ８単一陽性細胞毒性Ｔ細胞及び発現Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）β鎖を検出可能であることを示した（図２Ｂ）。レシピエントマウスの脾臓内にＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋の調節性Ｔ細胞を検出可能である（図２Ｃ）。リンパ節においてＴＣＲ−γδ陽性Ｔ細胞を検出可能である（図２Ｄ）。
【００２３】
再生したＴ細胞（ＣＤ３＋ＥＧＦＰ＋）がＰｒｏ−／Ｐｒｅ−Ｂ細胞に由来するかどうかをさらに確定するために、Ｂ細胞Ｉｇ重鎖ＶＤＪ及び軽鎖（κ、λ）再配列を分析することで同定した。単一のＣＤ３＋ＥＧＦＰ＋細胞をフローサイトメトリーによって選別し、ＰＣＲ検出を行った。続いて、ＰＣＲ断片を回収し、Ｔベクターに連結してシークエンシング分析した。結果は、異なる単一のＣＤ３＋ＥＧＦＰ＋細胞のＴ細胞がＢ細胞Ｉｇ重鎖ＶＤＪ及び軽鎖（κ、λ）再配列を有し、前記Ｔ細胞がＢ細胞から分化転換したことを示す（図２Ｅ）。
【００２４】
また、本発明者らは、移植から４週間後のレシピエントの胸腺における再生したＴ細胞（ＥＧＦＰ＋）のＤＮ１、ＤＮ２、ＤＮ３、ＤＮ４、ＤＰ、ＣＤ４＋単一陽性、ＣＤ８＋単一陽性細胞という７つの細胞群を選別し、ＲＮＡ−Ｓｅｑシークエンシング分析した。次に、バイオインフォマティクスによって７つの細胞群の細胞の転写発現プロフィールを解析し、クラスター分析を行った。結果は、再生した７つの細胞群のＴ細胞が、野生型の近接する転写発現プロファイルを有する対応するＴ細胞群と共にクラスター化されたことを示した（図３Ａ）。さらに、フローサイトメトリーにより、レシピエントマウスの脾臓における単一成熟Ｔ細胞（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋）をＴＣＲ−β再配列して分析した。ＰＣＲ技術及びＴベクターと組み合わせってシークエンシングした実験結果は、異なる再生したＴ細胞が異なるＴＣＲ−β再配列を有することを示した（図３Ｂ）。且つ、発明者は、脾臓における再生した成熟Ｔ細胞を選別し、体外刺激増殖実験を行い、ＣＤ３及びＣＤ２８抗体と組み合わせて６日間刺激して培養し、再生したＴ細胞は、刺激に応答して大量に増殖することができる（図３Ｃ）。ＥＬＩＳＡ技術を用いて培養上清を分析した結果、増殖が刺激された再生したＴ細胞は、大量のインターロイキン２（ＩＬ-２）、インターロイキン１０（ＩＬ-１０）、γインターフェロン（ＩＦＮ-γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）を分泌することができる（図３Ｄ）。最後に、移植されたレシピエントマウスの健康状態、特にＴリンパ系細胞の造血を連続的に追跡した結果、マウス体内の再生したＴ細胞は、腫瘍形成のリスクがないか、又は腫瘍形成のリスクが非常に低いことを示した。
【００２５】
実施例２
レトロウイルス組込み部位の不確実性及び発現レベルの不均一性などの潜在的な問題を排除するために、本発明者らは、Ｈｏｘｂ５ノックイン動物モデル（ＬＳＬ−Ｈｏｘｂ５）を更に構築した（図４Ａ）。Ｈｏｘｂ５ノックインマウスとＢリンパ系細胞特異的発現ＣｒｅモデルマウスＣＤ１９−Ｃｒｅをヘテロ接合することにより、ＬＳＬ−Ｈｏｘｂ５  ＣＤ１９−Ｃｒｅ（以下、Ｈｏｘｂ５マウスと略記する）を得る。Ｈｏｘｂ５マウスの胸腺を分析することで、その中に少量のＣＤ３＋ＥＧＦＰ＋の再生したＴ細胞を有することを発見した（図４Ｂ）。同様に、再生したＴ細胞を選別してＢ細胞Ｉｇ重鎖ＶＤＪ及び軽鎖（κ、λ）再配列を行って同定した（図４Ｃ）。Ｔベクターと組み合わせてシークエンシングした結果は、再生したＴ細胞がＢ細胞特徴の再配列を有し、それらがＢ細胞の分化転換に由来することを示した。
【００２６】
本発明は、上記実施例によって本発明の製品、方法及び使用を説明したが、本発明はこれに限定されるものではないことを本出願人より声明する。当業者にとって、本発明に対するすべての改良、本発明の製品に対する均等置換や補助成分の添加、具体的な形態の選択等は、本発明の保護範囲と開示範囲に属することを理解できるはずである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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