(57)【要約】  天然Ｔａｔポリペプチドに比して増加された免疫刺激特性を有する、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）誘導体ポリペプチドを投与することによる癌を治療する方法が開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）又はサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）タンパク質由来の転写因子（ＴＦ）領域配列、
（ｉｉ）ＨＩＶ、ＳＩＶ又はデフェンシン由来のシステインリッチ領域配列、及び、
（ｉｉｉ）ＨＩＶ又はＳＩＶ  Ｔａｔタンパク質由来のＣ−末端領域配列、
を示される順序で含むアミノ酸配列を有するＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＨＩＶは、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２である、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＨＩＶ−１  Ｔａｔは、長期末発症者（ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｎｏｎ−ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｒ）由来である、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項４】
前記ＳＩＶは、表２から選択されるホスト由来である、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項５】
前記デフェンシンは、α−デフェンシン又はβ−デフェンシンである、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項６】
ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２  Ｔａｔ由来のアルギニンリッチ領域をさらに含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項７】
前記ＴＦ領域におけるアミノ酸の少なくとも１つは、欠損又はアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、リジン、グルタミン、アルギニン、セリン若しくはトレオニンで置換されている、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項８】
置換されたアミノ酸の少なくとも１つは、プロリンである、
ことを特徴とする請求項７に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項９】
前記ＴＦ領域は、配列番号９６−１２３のうちのの１つのアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項１０】
前記システインリッチ領域は、配列番号１２４−１３２のうちの１つのアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記Ｃ−末端領域は、配列番号１３３−１５０のうちの１つのアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項１２】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項１３】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号２、３又は４のうちの１つではない、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項１５】
治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することと、
前記対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことと、
を含む癌の治療方法。
【請求項１６】
癌の治療を必要とする対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことにより、前記対象における癌を治療するための治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１７】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法又は請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの休薬期間が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法又は請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法又は請求項１６に記載の使用。
【請求項２０】
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする請求項１８に記載の方法又は使用。
【請求項２１】
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法又は請求項１６に記載の使用。
【請求項２２】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法又は請求項１６に記載の使用。
【請求項２３】
治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物を、それを必要とする癌を有する対象に投与することと、
前記対象において癌の退縮を起こすことと、
を含む前記対象における腫瘍負荷を低減させる方法。
【請求項２４】
癌の治療を必要とする癌を有する対象において癌の退縮を起こすことにより、前記対象における腫瘍負荷を低減させるための治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２５】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする請求項２３に記載の方法又は請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの休薬期間が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項２３に記載の方法又は請求項２４に記載の使用。
【請求項２７】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項２３に記載の方法又は請求項２４に記載の使用。
【請求項２８】
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする請求項２７に記載の方法又は使用。
【請求項２９】
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする請求項２３に記載の方法又は請求項２４に記載の使用。
【請求項３０】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする請求項２３に記載の方法又は請求項２４に記載の使用。
【請求項３１】
治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物を、癌を有する対象に投与することを含み、
前記投与が、前記対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
ことを特徴とする前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害する方法。
【請求項３２】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害するための治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３３】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有するアミノ酸を有する、
ことを特徴とする請求項３１に記載の方法又は請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を少なくとも５％含む、
ことを特徴とする請求項３１に記載の方法又は請求項３２に記載の使用。
【請求項３５】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から２０％含む、
ことを特徴とする請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１５％含む、
ことを特徴とする請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１０％含む、
ことを特徴とする請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする請求項３１に記載の方法又は請求項３２に記載の使用。
【請求項３９】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、休薬期間が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項３１に記載の方法又は請求項３２に記載の使用。
【請求項４０】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項３１に記載の方法又は請求項３２に記載の使用。
【請求項４１】
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする請求項３１に記載の方法又は請求項３２に記載の使用。
【請求項４３】
治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物を、癌を有する対象に投与することを含み、
前記投与が、前記対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
ことを特徴とする前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療する方法。
【請求項４４】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療するための治療上有効な量の請求項１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項１４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４５】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、
ことを特徴とする請求項４３に記載の方法又は請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を少なくとも５％含む、
ことを特徴とする請求項４３に記載の方法又は請求項４４に記載の使用。
【請求項４７】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から２０％含む、
ことを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１５％含む、
ことを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１０％含む、
ことを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする請求項４３に記載の方法又は請求項４４に記載の使用。
【請求項５１】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、休薬期間が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項４３に記載の方法又は請求項４４に記載の使用。
【請求項５２】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項４３に記載の方法又は請求項４４に記載の使用。
【請求項５３】
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする請求項４３に記載の方法又は請求項４４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌に対する免疫ベースの治療薬の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫チェックポイントは、腫瘍の回避をもたらすことができる癌に向けた、効果的な免疫応答の阻害をもたらす阻害分子を表す。細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）およびプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に伴うプログラム細胞死１（ＰＤ−１）といった免疫チェックポイント分子は、癌の進行に伴う免疫機能障害に寄与していると考えられており、それらの治療上の遮断剤は、臨床的有益性を示した。具体的には、浸潤する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）におけるＰＤ−１との腫瘍のＰＤ−Ｌ１の関与が、腫瘍の回避ならびにＴ細胞アネルギー、消耗及びプログラム細胞死を誘導することによる免疫耐性の基礎となる重要なメカニズムであると考えられている。免疫応答の間の免疫チェックポイント分子の操作を理解することは、ヒトの癌に対する効果的な免疫療法を設計するための重要な戦略である。
【０００３】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の転写トランス活性化因子（Ｔａｔ）は、可変ＲＮＡ結合ペプチドであり、それは、ウイルスＲＮＡの転写を増加させ、Ｔ４細胞およびマクロファージのアポトーシスを開始させ得、おそらくαインターフェロンの過剰産生を刺激する。しかし、ＨＩＶ感染の長期非進行者（ＬＴＮＰ）から単離されたＴａｔタンパク質は、それらの感染症の結果として、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に進行した患者に見られるＴａｔと異なっている。ＬＴＮＰに見出されるＴａｔタンパク質は、ウイルスＲＮＡのトランス活性化が可能である。しかしながら、この免疫刺激性のＴａｔは、Ｔ４細胞またはマクロファージのアポトーシスを誘導せず、免疫抑制性ではない。サル種に感染するレンチウイルスで見出された免疫刺激性のＴａｔ変異体はいまだ、免疫不全の進行をもたらさず、流行感染は、単球分化を細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を刺激する樹状細胞（ＤＣ）へと向かわせる。したがって、免疫刺激性のＴａｔは、ヒト癌に対する免疫応答を刺激するのに有用であり得る。
【０００４】
癌および慢性感染症は、免疫ベースの治療に応答する一般的なヒト疾患の最も顕著な例である。感染症は、免疫によって制御された最初の疾患であったが、ヒトでの臨床試験は、特に免疫系のＣＴＬアームの免疫応答が、いくつかのヒト黒色腫および腎臓癌を退行させ得ることを確立した。これらの観察は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の特定のクラスである樹状細胞が、癌および他の疾患に対するＣＴＬ活性を開始させるのに特に有効であるという発見により拡大された。ＤＣを標的とし活性化する技術において、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の感染によって引き起こされるヒト子宮頚前悪性腫瘍およびヒト肺癌に対して、いくつかの初期の成功が得られている。癌に対して現在使用される化学療法薬とは対照的に、癌に対して潜在的にＣＴＬ応答を誘発する薬剤は、免疫応答の高度な特異性のために、いくつかの副作用を伴う。
【０００５】
癌を治療する免疫療法薬を開発する努力は、ＣＴＬに必要なエントリ信号を伝達し維持するように、ＤＣを標的とし活性化することにおける技術的な問題により妨げられている。自然のプロセスが、ＣＴＬ活性化するための前提条件である、抗原が免疫系の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ抗原に結合するために、細胞の細胞質に入ることを要求する限りにおいて、ＣＴＬ応答の誘導のための抗原標的は、チャレンジである。ＣＴＬにおいてＴ細胞受容体を活性化するリガンドは、抗原およびＭＨＣクラスＩの複合体であるからである。ほとんどの場合において、タンパク質抗原は、ＤＣ共活性剤と結合した場合でも、ＣＴＬ刺激を除外する代替的なＭＨＣクラスＩＩ抗原提示経路に排他的に入る。これは部分的には、ペプチドベースの技術により、克服され得る。ペプチドは、ＤＣの表面上に既に存在するＭＨＣクラスＩに結合するからである。しかしながら、この技術は、非特異的であり、ほとんどのペプチドは、弱いＤＣ活性化剤であり、それはヒト癌の治療としての有効性を制限する。
【０００６】
生物学的タンパク質の限られたグループは、ＣＴＬ応答を刺激することが知られている。ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ−１）の転写トランス活性化因子（Ｔａｔ）の変異体および誘導体は、このＣＴＬ応答を刺激することができる。直接的にＣＴＬ応答を誘発することが現在知られている追加の生物製剤は、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、または特定の細菌の外側のコートタンパク質に基づいている。熱ショックタンパク質は、ＨＰＶ感染に関連する特定の生殖器の腫瘍の治療において、限られた有効性を示した。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書において、癌の治療薬としての使用のためのヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）タンパク質の誘導体が開示される。人工的な免疫刺激性Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、癌を治療する可能性を有する。
【０００８】
一実施態様において、（ｉ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）又はサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）タンパク質由来の転写因子（ＴＦ）領域配列、（ｉｉ）ＨＩＶ、ＳＩＶ又はデフェンシン由来のシステインリッチ領域配列、及び（ｉｉｉ）ＨＩＶ又はＳＩＶ  Ｔａｔタンパク質由来のＣ−末端領域配列を示される順序で含むアミノ酸配列を有するＴａｔ誘導体ポリペプチドが提供される。
【０００９】
また、本明細書において、本明細書に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチドを含む医薬組成物が開示される。
【００１０】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの一実施態様において、ＨＩＶは、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２である。他の実施態様において、ＨＩＶ−１  Ｔａｔは、長期末発症者（ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｎｏｎ−ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｒ）由来である。他の実施態様において、ＳＩＶは、表２から選択されるホスト由来である。他の実施態様において、デフェンシンは、α−デフェンシン又はβ−デフェンシンである。さらなる他の実施態様において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２  Ｔａｔ由来のアルギニンリッチ領域をさらに含む。
【００１１】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの一実施態様において、ＴＦ領域におけるアミノ酸の少なくとも１つは、欠損又はアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、リジン、グルタミン、アルギニン、セリン若しくはトレオニンで置換されている。他の実施態様において、置換されたアミノ酸の少なくとも１つは、プロリンである。
【００１２】
ある実施態様において、ＴＦ領域は、配列番号９６−１２３のうちのの１つのアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、システインリッチ領域は、配列番号１２４−１３２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。他の実施態様において、Ｃ−末端領域は、配列番号１３３−１５０のうちの１つのアミノ酸配列を含む。
【００１３】
他の実施態様において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する。他の実施態様において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号２、３又は４のうちの１つではない。
【００１４】
また、本明細書において、治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することと、前記対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことと、を含む癌の治療方法が開示される。
【００１５】
また、本明細書において、癌の治療を必要とする対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことにより、前記対象における癌を治療するための治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物の使用が開示される。
【００１６】
また、本明細書において、治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することと、前記対象において癌の退縮を起こすことと、を含む前記対象における腫瘍負荷を低減させる方法が開示される。
【００１７】
また、本明細書において、癌の治療を必要とする対象において癌の退縮を起こすことによる、前記対象における腫瘍負荷を低減させるための治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物の使用が開示される。
【００１８】
また、本明細書において、治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物を、癌を有する対象に投与することを含み、前記投与が、前記対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、ことを特徴とする前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害する方法が開示される。
【００１９】
また、本明細書において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害するための治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物の使用が開示される。
【００２０】
また、本明細書において、治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物を、癌を有する対象に投与することを含み、前記投与が、前記対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、ことを特徴とする前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療する方法が開示される。
【００２１】
また、本明細書において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療するための治療上有効な量の本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチド又は医薬組成物の使用が開示される。
【００２２】
前記方法又は使用の一実施態様において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【００２３】
前記方法又は使用の一実施態様において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される。前記方法又は使用の他の実施態様において、前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの休薬期間が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される。前記方法又は使用の他の実施態様において、前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される。前記方法又は使用の他の実施態様において、前記治療薬は、シクロホスファミドである。
【００２４】
前記方法又は使用の他の実施態様において、前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である。
【００２５】
前記方法又は使用の他の実施態様において、前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を少なくとも５％、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から２０％、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１５％、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１０％含む。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、Ｔａｔ誘導体でのヒト単球の刺激を示す図である。
【図２】図２は、Ｔａｔ誘導体でのヒト単球の刺激の用量反応曲線を示す図である。
【図３Ａ】図３Ａ及び図３Ｂは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの４Ｔ１腫瘍増殖に対するＴａｔ誘導体による治療効果を示す図である。１×１０４  ４Ｔ１腫瘍細胞を注射したＢＡＬＢ／ｃマウスを、腫瘍細胞の注射後、０、７、１４および２１日目に、Ｎａｎｉ−Ｐ１もしくはＮａｎｉ−Ｐ２（４００ｎｇ、皮下［ＳＣ］）（図３Ａ）またはＮａｎｉ−Ｐ３（４００ｎｇまたは２μｇ、ＳＣ）（図３Ｂ）で治療した。対照群は、ＰＢＳで処理した。データは、平均腫瘍容積：バー±ＳＥを表す。各群は１０匹のマウスを含んでいた。１５日目から、対照群と、Ｎａｎｉ−Ｐ１またはＮａｎｉ−Ｐ２で処置した群と、の間の差が有意となった（ｐ＜０．０５＊＊）。対照と、Ｎａｎｉ−Ｐ１またはＮａｎｉ−Ｐ２と、の間の差は、２２日目から高度に有意となり始めた（ｐ＜０．０１＊＊）。Ｎａｎｉ−Ｐ３（いずれかの用量）と対照との間に差はなかった。
【図３Ｂ】図３Ａ及び図３Ｂは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの４Ｔ１腫瘍増殖に対するＴａｔ誘導体による治療効果を示す図である。１×１０４  ４Ｔ１腫瘍細胞を注射したＢＡＬＢ／ｃマウスを、腫瘍細胞の注射後、０、７、１４および２１日目に、Ｎａｎｉ−Ｐ１もしくはＮａｎｉ−Ｐ２（４００ｎｇ、皮下［ＳＣ］）（図３Ａ）またはＮａｎｉ−Ｐ３（４００ｎｇまたは２μｇ、ＳＣ）（図３Ｂ）で治療した。対照群は、ＰＢＳで処理した。データは、平均腫瘍容積：バー±ＳＥを表す。各群は１０匹のマウスを含んでいた。１５日目から、対照群と、Ｎａｎｉ−Ｐ１またはＮａｎｉ−Ｐ２で処置した群と、の間の差が有意となった（ｐ＜０．０５＊＊）。対照と、Ｎａｎｉ−Ｐ１またはＮａｎｉ−Ｐ２と、の間の差は、２２日目から高度に有意となり始めた（ｐ＜０．０１＊＊）。Ｎａｎｉ−Ｐ３（いずれかの用量）と対照との間に差はなかった。
【図４】図４は、インビボでの４Ｔ１乳房腫瘍増殖に対する精製されたＮａｎｉ−Ｐ２の効果についての用量応答曲線を示す図である。各々１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの４群に、１×１０４  ４Ｔ１細胞を移植した。３群では、２１日間にわたって、左脇腹に４回、各々、マウスあたり０．４ｎｇ、４ｎｇおよび４０ｎｇの用量で漸増投与した。４つめの対照群には、左脇腹にＰＢＳを注射した。データは平均腫瘍体積を表す。対照群と０．４ｎｇ用量との差が有意であり（ｐ＜０．５＊）、対照と４ｎｇのまたは４０ｎｇ治療群との間の差は高度に有意であった（ｐ＜０．１＊＊、ｐ＜０．０１＊＊）。
【図５Ａ】図５は、４Ｔ１乳房腫瘍を有するマウスのＮａｎｉ−Ｐ２治療のカプランマイヤー生存曲線を示す図である。マウスの乳房体に、０日目に、１×１０４  ４Ｔ１細胞をＳＣ注射した。治療をＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）４回のＳＣ投与で開始した。４２日目に、治療群は、対照に比して、統計的に有意なより良好な生存率を有していた（＊＊）（図５Ａ）。１つの群では、治療を１３日目まで延期し、その時点で一連の３回のＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）投与が、排液しているリンパ節に静脈内（ＩＶ）、ＳＣ投与、または腫瘍内（ＩＴ）投与のいずれかによって行われた（図５Ｂ）。ＩＶのＮａｎｉ−Ｐ２の延命効果は、４７日目で高度に統計的に有意であり（＊＊）、ＳＣのＮａｎｉ−Ｐ２の延命効果もまた、統計的に有意であった（＊）。
【図５Ｂ】図５は、４Ｔ１乳房腫瘍を有するマウスのＮａｎｉ−Ｐ２治療のカプランマイヤー生存曲線を示す図である。マウスの乳房体に、０日目に、１×１０４  ４Ｔ１細胞をＳＣ注射した。治療をＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）４回のＳＣ投与で開始した。４２日目に、治療群は、対照に比して、統計的に有意なより良好な生存率を有していた（＊＊）（図５Ａ）。１つの群では、治療を１３日目まで延期し、その時点で一連の３回のＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）投与が、排液しているリンパ節に静脈内（ＩＶ）、ＳＣ投与、または腫瘍内（ＩＴ）投与のいずれかによって行われた（図５Ｂ）。ＩＶのＮａｎｉ−Ｐ２の延命効果は、４７日目で高度に統計的に有意であり（＊＊）、ＳＣのＮａｎｉ−Ｐ２の延命効果もまた、統計的に有意であった（＊）。
【図６Ａ】図６Ａおよび６Ｂは、ＴＳ／ＡおよびＳＭ１乳癌モデルでのＮａｎｉ−Ｐ２の抗腫瘍活性を示す図である。マウスに、１×１０５  ＴＳ／乳癌細胞（図６Ａ）をＳＣで移植し、Ｎａｎｉ−Ｐ２のＳＣの用量（０．４、４および４０ｎｇ）を漸増させた。最も低い用量であっても、原発性の抗癌の差は高度に有意である（ｐ＜０．０１＊＊＊）一方で、４０ｎｇの用量でも高度に有意であった（ｐ＜０．０１＊＊）。図６Ｂは、２×１０５  ＳＭ１乳癌細胞をＳＣで移植し、０、７、１４および２１日目にＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）でＳＣ処置したマウスを示す図である。対照とＮａｎｉ−Ｐ２治療ＳＭ１動物との間の原発性腫瘍増殖の差は、高度に統計学的に有意であった（ｐ＜０．０１＊＊＊）。
【図６Ｂ】図６Ａおよび６Ｂは、ＴＳ／ＡおよびＳＭ１乳癌モデルでのＮａｎｉ−Ｐ２の抗腫瘍活性を示す図である。マウスに、１×１０５  ＴＳ／乳癌細胞（図６Ａ）をＳＣで移植し、Ｎａｎｉ−Ｐ２のＳＣの用量（０．４、４および４０ｎｇ）を漸増させた。最も低い用量であっても、原発性の抗癌の差は高度に有意である（ｐ＜０．０１＊＊＊）一方で、４０ｎｇの用量でも高度に有意であった（ｐ＜０．０１＊＊）。図６Ｂは、２×１０５  ＳＭ１乳癌細胞をＳＣで移植し、０、７、１４および２１日目にＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）でＳＣ処置したマウスを示す図である。対照とＮａｎｉ−Ｐ２治療ＳＭ１動物との間の原発性腫瘍増殖の差は、高度に統計学的に有意であった（ｐ＜０．０１＊＊＊）。
【図７】図７は、４Ｔ１乳房腫瘍を有するマウスの脾臓細胞由来のＩＮＦ−γ産生を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、１×１０４の４Ｔ１細胞をＳＣ注射した。対照動物には、毎週、ＰＢＳを注射し、Ｎａｎｉ−Ｐ２の治療は、０日目に開始され、４週間継続される週に１回のＳＣ注射（４０ｎｇ）を含んでいた。対照マウスが最後の段階であった３３日目に、マウスを屠殺し、脾臓を採取し、分析時まで単一細胞懸濁液として凍結させた。脾臓細胞（２×１０５）および１×１０４のマイトマイシンＣで処理した（３０分間、５０μｇ／ｍｌ）４Ｔ１刺激細胞（Ｓ）を、９６ウェルプレートに播種した。刺激の７２時間後、上清を回収し、ＩＦＮ−γの濃度を、市販のＩＦＮ−γＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。ＩＦＮ−γ産生は、インビトロ培養のすべての条件下でのＮａｎｉ−Ｐ２治療マウス由来の脾臓細胞の培養物において、有意に高かった（ｐ  ＜０．０５＊）。１：再刺激なし；２：ＩＬ−４（５０ｎｇ／ｍｌ）／ＧＭ−ＣＳＦ（１００ｍｇ／ｍｌ）；３：刺激細胞／ＩＬ−４／ＧＭ−ＣＳＦ；４：刺激細胞のみ。インビトロでのアゴニストＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦ（２及び３）の添加は、ＩＦＮ−γ産生の高度に有意な増加を誘導した（ｐ＜０．０１＊＊）。
【図８Ａ】図８Ａおよび８Ｂは、Ｎａｎｉ−Ｐ２治療による確立された４Ｔ１乳房腫瘍の退縮および肺転移の阻害を示す図である。図８Ａにおいて、１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの２つの群において、０日目に、乳腺体に１×１０４  ４Ｔ１細胞を注射した。１つ目の群では、１４日目から３週間、毎週、Ｎａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）を投与した。２つ目の群では、ＰＢＳ処置を行い、対照として用いた。腫瘍負荷は、２２日目まで高度に有意であり、試験の期間を通じてそのままであった（ｐ＜０．０１＊＊）。腫瘍直径が１５ｍｍに達したときにマウスを屠殺し、その時点で肺転移をカウントした（図８Ｂ）。データは、治療プロトコルを知らない二人の観察者によって定量化された総肺転移を表す（ｐ＜０．０１＊＊）。
【図８Ｂ】図８Ａおよび８Ｂは、Ｎａｎｉ−Ｐ２治療による確立された４Ｔ１乳房腫瘍の退縮および肺転移の阻害を示す図である。図８Ａにおいて、１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの２つの群において、０日目に、乳腺体に１×１０４  ４Ｔ１細胞を注射した。１つ目の群では、１４日目から３週間、毎週、Ｎａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）を投与した。２つ目の群では、ＰＢＳ処置を行い、対照として用いた。腫瘍負荷は、２２日目まで高度に有意であり、試験の期間を通じてそのままであった（ｐ＜０．０１＊＊）。腫瘍直径が１５ｍｍに達したときにマウスを屠殺し、その時点で肺転移をカウントした（図８Ｂ）。データは、治療プロトコルを知らない二人の観察者によって定量化された総肺転移を表す（ｐ＜０．０１＊＊）。
【図９】図９は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける４Ｔ１腫瘍増殖および肺転移を示す。１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの２つの群では、１×１０４  ４Ｔ１細胞を皮下（ＳＣ）移植し、マウスに、４０ｎｇのＮａｎｉ−Ｐ２またはＰＢＳをＩＶ注射した。処置の２８日目に、マウスを屠殺し、肺および腫瘍を除去し、腫瘍小結節を目視で計数した。１０匹のマウスに典型的な、腫瘍および肺の写真を示す。白っぽい腫瘍病変が、肺の表面上に観察され得た。３つの実験から、類似の結果が得られた。
【図１０】図１０は、確立された４Ｔ１乳房腫瘍のＮａｎｉ−Ｐ２治療誘発性退縮を示す図である。１０匹のマウスのうちの１匹は、完全寛解し、調査が終了した時点の５０日目で無病のままであった。１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの２つの群において、０日目に、乳腺体に、１×１０４  ４Ｔ１細胞を注射した。１つの群では、１４日目から３週間にわたって、マウスごとに、Ｎａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）を投与し、他の群では、ＰＢＳで処理し、対照とした。対照とＮａｎｉ−Ｐ２治療群との間の原発性腫瘍増殖の差は、高度に有意であった（Ｐ＜０．０１＊＊）。
【図１１】図１１は、Ｎａｎｉ−Ｐ２及びシクロホスファミドの反復投与による治療後の腫瘍増殖を示す図である。
【図１２】図１２は、毎週のシクロホスファミドに対する、Ｎａｎｉ−Ｐ２およびシクロホスファミドの反復投与の延命効果を示す図である。
【図１３Ａ】図１３Ａ−１３Ｂは、ＰＢＳ（対照、図１３Ａ）またはＮａｎｉ−Ｐ２（図１３Ｂ）で処理した４Ｔ１乳癌を有するマウス由来の脾臓組織中のＣＤ８＋細胞の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す図である。
【図１３Ｂ】図１３Ａ−１３Ｂは、ＰＢＳ（対照、図１３Ａ）またはＮａｎｉ−Ｐ２（図１３Ｂ）で処理した４Ｔ１乳癌を有するマウス由来の脾臓組織中のＣＤ８＋細胞の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す図である。
【図１４Ａ】図１４Ａ−１４Ｄは、ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８に対する原発性４Ｔ１乳房腫瘍のＩＨＣ染色を示す図である。図１４Ａは、ＰＢＳ対照動物におけるＰＤ−Ｌ１抗体によるＩＨＣ染色を示す。ＰＤ−Ｌ１染色は、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、ならびに腫瘍関連の樹状細胞および線維芽細胞に対して形態学的類似性を有する細胞において観察された。図１４Ｂは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスでのＩＨＣ染色を示す。図１４Ｃは、ＰＢＳ対照動物におけるＣＤ８＋細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）の浸潤のＩＨＣ染色を示す。図１４Ｄは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスにおけるＣＤ８＋  ＣＴＬのＩＨＣ染色を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａ−１４Ｄは、ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８に対する原発性４Ｔ１乳房腫瘍のＩＨＣ染色を示す図である。図１４Ａは、ＰＢＳ対照動物におけるＰＤ−Ｌ１抗体によるＩＨＣ染色を示す。ＰＤ−Ｌ１染色は、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、ならびに腫瘍関連の樹状細胞および線維芽細胞に対して形態学的類似性を有する細胞において観察された。図１４Ｂは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスでのＩＨＣ染色を示す。図１４Ｃは、ＰＢＳ対照動物におけるＣＤ８＋細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）の浸潤のＩＨＣ染色を示す。図１４Ｄは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスにおけるＣＤ８＋  ＣＴＬのＩＨＣ染色を示す。
【図１４Ｃ】図１４Ａ−１４Ｄは、ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８に対する原発性４Ｔ１乳房腫瘍のＩＨＣ染色を示す図である。図１４Ａは、ＰＢＳ対照動物におけるＰＤ−Ｌ１抗体によるＩＨＣ染色を示す。ＰＤ−Ｌ１染色は、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、ならびに腫瘍関連の樹状細胞および線維芽細胞に対して形態学的類似性を有する細胞において観察された。図１４Ｂは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスでのＩＨＣ染色を示す。図１４Ｃは、ＰＢＳ対照動物におけるＣＤ８＋細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）の浸潤のＩＨＣ染色を示す。図１４Ｄは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスにおけるＣＤ８＋  ＣＴＬのＩＨＣ染色を示す。
【図１４Ｄ】図１４Ａ−１４Ｄは、ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８に対する原発性４Ｔ１乳房腫瘍のＩＨＣ染色を示す図である。図１４Ａは、ＰＢＳ対照動物におけるＰＤ−Ｌ１抗体によるＩＨＣ染色を示す。ＰＤ−Ｌ１染色は、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、ならびに腫瘍関連の樹状細胞および線維芽細胞に対して形態学的類似性を有する細胞において観察された。図１４Ｂは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスでのＩＨＣ染色を示す。図１４Ｃは、ＰＢＳ対照動物におけるＣＤ８＋細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）の浸潤のＩＨＣ染色を示す。図１４Ｄは、Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療したマウスにおけるＣＤ８＋  ＣＴＬのＩＨＣ染色を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
一連の人工的なヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）タンパク質誘導体は、癌において活性を有するように設計されてきた。本明細書において、該分子は、「ＴＡＴ誘導体ポリペプチド」、「Ｔａｔ誘導体」または「精密免疫刺激剤（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｔｉｍｕｌａｎｔｓ）」（ＰＩＮＳ）と称され、Ｔａｔを免疫抑制性から免疫刺激性に変化させる修飾を有するＴａｔ分子を含む。
【００２８】
腫瘍関連抗原の相対量にもかかわらず、癌は、免疫療法に対して困難な標的であることが証明されてきた。癌の免疫療法に対する不応状態は、確立された癌を伴う免疫抑制から生じるというエビデンスが蓄積されてきた。疫学的研究は、ＨＩＶ感染、さらには後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の女性は、免疫不全が宣告される場合の後期段階の疾患でにおいてさえも、症逆説的に進行する乳癌から保護されていたことを示してきた。
【００２９】
ＨＩＶ−Ｔａｔタンパク質は、自然免疫系統の前駆細胞を、活性化した抗原提示細胞（ＡＰＣ）に繰り返し誘発することができる。これらの観察は、特に樹状細胞ＡＰＣに関して確認されており、それの活性化によってＡＩＤＳにおいてさえもＨＩＶ複製のラウンドが開始される。まとめると、これらのデータは、Ｔａｔが対抗抑制活性を有していたという結論を支持した。Ｔａｔにおけるこれらの観察結果が、ＨＩＶ感染個体におけるＴａｔが慢性的に自然免疫を刺激し、それによって乳癌の進行を制限したという理論を介して、乳癌の疫学データにつながり得ると仮定される。
【００３０】
（Ｔａｔ誘導体ポリペプチド）
【００３１】
ＨＩＶ  Ｔａｔタンパク質は、ＨＩＶゲノムの２つの別々のエクソン上でコードされている長さにおいて、８６−１１０のアミノ酸のタンパク質に結合している可変ＲＮＡである。Ｔａｔは、すべてのヒトレンチウイルスの間で高度に保存されており、ウイルスの複製に必須である。レンチウイルスのＴａｔがＴＡＲ（トランス活性化応答性）ＲＮＡ領域に結合すると、転写（ウイルスＲＮＡからＤＮＡへ、その後、メッセンジャーＲＮＡへの変換）レベルが大幅に増加する。ＴａｔがウイルスＲＮＡの転写を増加させることが実証されており、ＴａｔがＴ４細胞およびマクロファージ（ＨＩＶ感染に対する身体の免疫サーベイランスシステムの主要部分）においてアポトーシス（プログラムされた細胞死）を開始させ、αインターフェロン（αインターフェロンは、十分に確立された免疫抑制性サイトカインである）の過剰な産生を刺激し得ることが提言されてきた。
【００３２】
ＨＩＶ感染の早期の過程での細胞外Ｔａｔの存在は、患者の免疫応答を減少させ、宿主よりもウイルスに優位性を与え得る。さらに、Ｔ４細胞の直接的な破壊及びαインターフェロン産生誘導は、エイズ患者に見られる強固な細胞性免疫応答の欠如を説明するのに役立つとともに、初期の深刻な免疫抑制の主な原因となる可能性がある。
【００３３】
分子の分析に基づき、Ｔａｔタンパク質（配列番号１）は、４つの異なるドメイン：（１）伝達（ＳＨ３）ドメイン（アミノ酸３−１９）、（２）システインリッチリガンド結合ドメイン（アミノ酸２２−３７）、（３）膜輸送配列（アミノ酸４７−５７）および（４）第２のエクソンによってコードされた尾部（アミノ酸７３−１０１）を含む。
【００３４】
Ｔａｔのアミノ末端部分は、典型的には、プロリン残基を両側に有する核転写因子（ＴＦ）由来の短いペプチド領域を含む。この領域は、少なくとも部分的に、Ｔａｔポリペプチドが免疫系の細胞、具体的には、樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージ（抗原提示細胞またはＡＰＣ）といった自然免疫細胞に対してどの程度刺激性または抑制性を有するかを決定する。したがって、ＴＦ領域に対する修飾は、癌および他の慢性疾患の治療においてポリペプチドをより活性化状態にすることができることが予想される。
【００３５】
ＨＩＶ−１  ＴａｔのＳＨ３結合ドメインは、過去にマウスにおいて免疫抑制特性を有することが示されていた他のＴＦタンパク質、無毛（ｈｒ）に見られる配列と同一である。ｈｒ変異を有するマウスは、免疫調節不全を発症し、現在、最も一般的には「ＴＨ１からＴＨ２へのシフト」と呼ばれ、それは、エイズに進行しているＨＩＶ感染者の必須条件である。さらなる分析によって、ｈｒ遺伝子に由来するＳＨ３結合配列は、ＨＩＶ−１から単離されたＴａｔのほぼ不変的な特徴であり、およびＨＩＶ−２の高度に一貫性のある特徴であることが確立された。
【００３６】
これとは対照的に、ＨＩＶに密接に関連するレンチウイルスであるサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）の特定の株に感染した霊長類は、まれにＡＩＤＳに進行し、又は予測不可能にＡＩＤＳに進行する。この観察によって、免疫抑制性のＨＩＶ−１  Ｔａｔにおける推定上、免疫抑制性のｈｒ  ＴＦフラグメントの発見と相まって、いくつかの霊長類は、ＳＩＶ  Ｔａｔのアミノ末端で異なるＴＦフラグメントを有し得る（あるいはそれを有しない）ことが示唆された。免疫不全の弱毒されたコースを有する特定のＳＩＶに感染したハイイロマンガベイ由来のＴａｔは、アミノ末端において、ＴＦ  ｈｒの代わりにＴＦ  ＴＡＲＡ由来のフラグメントを有する。
【００３７】
一般に、癌の治療のための免疫刺激性Ｔａｔ誘導体のポリペプチドは、少なくとも３つの領域（ドメイン）を含む。第一のドメインは、Ｔａｔの誘導体化された核転写因子（ＴＦ）領域であり、第二のドメインは、システインリッチ領域であり、第三のドメインは、Ｃ末端Ｔａｔドメインである。これらのドメインの各々は、限定されることなくＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２感染進行者、長期非進行者、長期生存者、エリートコントローラーおよび／またはＳＩＶ感染したヒト以外の霊長類の種を含むソース由来のＴａｔタンパク質由来の配列を含む。また、システインリッチディフェンシン分子は、Ｔａｔ由来のシステインリッチドメインの代わりに置換され得る。特定の実施形態において、レトロウイルス由来のシステインリッチドメインは、非ヒト霊長類Ｔａｔ配列由来のＴＦドメインおよびＣ末端ドメインに結合されている。別の実施形態では、非ヒト霊長類システインリッチドメインは、レトロウイルス由来のＴＦドメインおよびＣ末端ドメインに結合されている。さらに別の実施形態において、配列は、完全長ドメインの免疫刺激活性を保持する領域のフラグメントを含む。代表的なレトロウイルスは、ＳＩＶ、ＨＩＶ、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、単純ヘルペスウイルス１、単純ヘルペスウイルス２またはウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）である。一実施形態において、レトロウイルスは、ＨＩＶまたはＳＩＶといったレンチウイルスである。別の実施形態において、ＨＩＶは、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２である。
【００３８】
このように、本明細書において、転写因子（ＴＦ）ドメイン、システインリッチドメインおよびＣ末端ドメインをその順番で含むアミノ酸配列を含むＴａｔ誘導体ポリペプチドが開示され、ＴＦドメインおよびＣ末端ドメインの各々は、レトロウイルスのＴａｔタンパク質由来であり、システインリッチドメインは、レトロウイルスまたはαデフェンシンもしくはβディフェンシンといったデフェンシン由来である。例示的な非限定のＴａｔ誘導体ポリペプチドは、表１に提示される。ＴＦ領域は、Ｃ末端プロリン残基を有し、システインリッチ領域は、Ｃ末端フェニルアラニンを有する。ネイティブなＴＦ配列がＣ末端にプロリン残基を有していない場合、プロリンは、Ｃ末端で挿入され得る。典型的なＳＩＶに感染したヒト以外の霊長類種を表２に列挙する。
【００３９】
別の実施形態において、修飾されたＴａｔポリペプチドはさらに、レンチウイルスのＴａｔタンパク質由来のアルギニンリッチドメインを含む。アルギニンリッチドメインは、Ｃ末端領域内に見出される。
【００４０】
ＴＦドメイン、システインリッチドメインおよびＣ末端ドメイン配列は、その順序でのＴａｔ誘導体ポリペプチドに配置されている。
【００４１】
追加の実施形態において、ＴＦのドメインにおける、限定されることなくプロリンを含む１つまたは２以上のアミノ酸は、欠損し、またはアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、リジン、グルタミン、アルギニン、セリン、またはトレオニンといった保存的アミノ酸置換で置換される。
【００４２】
一実施形態において、ＴＦドメインは、配列番号９６−１２３のうちの１つのアミノ酸配列を含み、本質的にそれからなり、またはそれからなる。別の実施形態において、システインリッチドメインは、配列番号１２４−１３２のうちの１つのアミノ酸配列を含み、本質的にそれからなり、またはそれからなる。別の実施形態において、システインリッチドメインは、配列番号１３３−１５０のうちの１つのアミノ酸配列を含み、本質的にそれからなり、またはそれからなる。
【００４３】
【表１−１】
2016533352.tif 000002
【００４４】
【表１−２】
2016533352.tif 000003
【００４５】
【表１−３】
2016533352.tif 000004
【００４６】
【表１−４】
2016533352.tif 000005
【００４７】
【表１−５】
2016533352.tif 000006
【００４８】
【表１−６】
2016533352.tif 000007
【００４９】
【表１−７】
2016533352.tif 000008
【００５０】
【表１−８】
2016533352.tif 000009
【００５１】
【表１−９】
2016533352.tif 000010
【００５２】
【表２】
2016533352.tif 000011
【００５３】
追加の実施形態において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的に修飾された変異体の使用が本明細書において開示される。本明細書中に記載された変異体は、親またはソースのＴａｔ誘導体ポリペプチドの免疫刺激活性を維持する。
【００５４】
本開示で使用される語句「保存的に修飾された変異体」とは、もとのペプチドと同じ又はよく似た生物学的活性を有する変異ペプチドを示す。例えば、タンパク質又はペプチドの主要な配列は修飾されてもその機能は修飾されないように、保存的なアミノ酸を変化させてもよい。保存的な変異は、少なくとも１個のアミノ酸が他のアミノ酸又は典型的な参照ペプチド由来のもとのアミノ酸に似た少なくとも１つの特性を持つアミノ酸類似体によって置換されている。特性の例としては、類似した大きさ、トポグラフィ−、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能、水素結合能、物理化学特性等又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。保存的置換は、例えば、置換されたアミノ酸の物理的特性（表３）、又はもとのアミノ酸がどれだけ置換への耐性を備えるか（表４）といった様々な因子によって評価され得る。本開示に係るペプチドにおいて、いずれのアミノ酸を選択すれば他のアミノ酸に置換し得るかということは、本技術分野の当業者には公知である。保存的変異は、典型的な参照ペプチドと実質的に同様に機能し得、本明細書のいずれの態様においても典型的な参照ペプチドと置き換えられ得る。
【００５５】
【表３】
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【００５６】
【表４】
2016533352.tif 000013
【００５７】
一実施形態において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、表１に開示されたペプチドである。特定の実施形態において、Ｔａｔ誘導体は、配列番号２、３または４のいずれかではない。Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、Ｔａｔの誘導体ポリペプチドの保存的変異体をも含み得る。一実施形態において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異体は、本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異体である。この実施態様の側面では、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異体は、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドに対して、例えば、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列の同一性を有するアミノ酸配列であり得る。この実施態様の他の側面において、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異体は、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドに対して、例えば、多くて５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、多くて８０％、多くて８５％、多くて９０％、多くて９５％、多くて９７％、多くて９８％、多くて９９％のアミノ酸配列の同一性を有するアミノ酸配列であり得る。
【００５８】
従って、本明細書において、配列番号５−９５に開示されたＴａｔ誘導体に対して８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列が開示される。
【００５９】
本実施態様の別の側面では、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異は、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドのアミノ酸配列において、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、２０個、２５個、３０個又はそれ以上の保存的置換を有するＴａｔ誘導体ポリペプチドであり得る。本実施の別の一態様では、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異は、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドのアミノ酸配列において、例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも２０個又は少なくとも２５個の保存的置換を有するアミノ酸配列であり得る。さらに別の本実施の態様では、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの保存的変異は、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドのアミノ酸配列において、例えば、最大１個、最大２個、最大３個、最大４個、最大５個、最大６個、最大７個、最大８個、最大９個、最大１０個、最大１１個、最大１２個、最大１３個、最大１４個、最大１５個、最大２０個、又は最大２５個、又は最大３０個の保存的置換を有するアミノ酸配列であり得る。
【００６０】
修飾（通常、主要な配列は修飾しない）は、例えば、アセチル化、又はカルボキシル化といったｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ポリペプチドの化学的誘導体化を含む。同様に、例えば、合成及びプロセッシングの間又はさらなるプロセッシングのステップにおけるポリペプチドのグリコシル化パターンの修飾によるもの、例えばポリペプチドをグリコシル化に影響する酵素、例えば哺乳類のグリコシル化又は脱グリコシル化酵素に曝露することによるものといった、グリコシル化の修飾も含む。また、例えば、ホスホチロシン、ホスホセリン、又はホスホトレオニンといったリン酸化アミノ酸残基を有する配列も含まれる。
【００６１】
また同様に、タンパク質分解に対する耐性の改善、又は溶解特性の最適化を目的として通常の分子生物学上の技術を使用して修飾されたＴａｔ誘導体ポリペプチドも含まれる。このようなポリペプチドの類似体には、例えばＤ−アミノ酸といった自然発生のＬ−アミノ酸又は非自然発生である合成アミノ酸以外の残基を含有するものが含まれる。本開示に係るペプチドは、ここにリスト化された特定の典型的な任意のプロセスによる製品に限定されない。
【００６２】
本開示で使用されるように、実質的に同じであるアミノ酸配列は、典型的には、９５％超のアミノ酸同一性を共有する。しかし、スプライス変異体として生じた上述のレベル未満の同一性を含むタンパク質（及びこのようなタンパク質をコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡ）、又は保存的アミノ酸置換（又は縮重コドンの置換）によって修飾されたものは、本開示の範囲に含まれると予期されることが認識される。本技術分野における当業者により容易に理解されるように、例えば、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ    ａｎｄ    Ｈｅｎｉｋｏｆｆ    ｉｎ    Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ    Ｓｃｉ．ＵＳＡ    ８９：１０９１５（１９９２））に記載されるＢｌｏｓｕｍ６２スコアリングマトリックスといった、対象物の配列を調節するための様々な方法が考案されてきた。この目的のため、便利に採用されるアルゴリズムは、広く入手可能である（例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ    ａｎｄ    Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．４８：４４３（１９７０）を参照）。
【００６３】
実質的に完全長のポリペプチドに加えて、本開示はまた、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントを提供する。用語「生物学的に活性なフラグメント」は、免疫刺激活性を有するＴａｔ誘導体ポリペプチドのフラグメントを指す。
【００６４】
さらに、本開示に係るペプチドは、一量体での形態の存在に加えて、これらに限定されないが、二量体、三量体及び四量体を含む多量体に自己会合し得る。ペプチドの多量体化は、自然発生的に発生し得るか、又は多量体化につながる条件にペプチドをさらすことで促進され得る。これらの条件は、ペプチド化学における当業者に公知である。本開示に係る組成物は、一量体又は多量体のペプチド、又は一量体と多量体の混合物を含み得る。
【００６５】
以下の発現系が、開示に係るＴａｔ誘導体の発現における使用に適しており、哺乳類細胞発現系（例えば、これらに限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞（アフリカミドリザル腎組織由来の線維芽細胞様細胞）、ウシ細胞、マウス細胞、ヒト胚性腎細胞またはベビーハムスター腎臓細胞）、昆虫細胞発現系（例えば、これらに限定されないが、Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ発現系、バキュロウイルス発現系およびＤＥＳ発現系）、酵母発現系、及び大腸菌発現系（例えば、これらに限定されないが、ｐＥＴ、ｐＳＵＭＯおよびＧＳＴ発現系を含む）が挙げられる。別の態様では、Ｔａｔ誘導体は、ポリペプチドの単離に有用なヒスタジン（ポリヒスチジン）タグとともに発現される。ヒスチジンタグの精製システムは、本技術分野の当業者に公知である。
【００６６】
「治療上有効な量」は、治療効果を達成するのに必要な量を特定することを意図している。本明細書で使用されるように、用語「治療上有効な量」は、「治療上有効な用量」と同義であり、癌治療に関連して使用される場合、所望の治療効果を達成するために必要な本明細書中に開示された組成物の最も有益な用量を意味し、腫瘍サイズを減少させ、腫瘍の増殖を阻害し、または腫瘍の退行を引き起こすのに十分な用量を含む。
【００６７】
（免疫チェックポイントの無効化）
【００６８】
腫瘍特異的Ｔ細胞に発現した細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）およびプログラム死１（ＰＤ−１）といった免疫チェックポイントは、易感染性の活性化および
増殖、サイトカイン分泌および腫瘍細胞の溶解といった抑制されたエフェクター機能を引き起こす。免疫チェックポイント阻害剤でこれらの受容体を調節することは、癌免疫療法における新しいアプローチである。
【００６９】
Ｔ細胞活性化を調節する重要な負の共刺激シグナルは、ＰＤ−１（ＣＤ２７９としても知られる）ならびにそのリガンド結合パートナーＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１およびＣＤ２７４としても知られる）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣおよびＣＤ２７３としても知られる）によって提供される。ＰＤ−１は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４に関連するが、ホモ二量体化を可能にする膜近位システインを欠く。ＰＤ−１の細胞質ドメインは、免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ、Ｖ／ＩｘＹｘｘＬ／Ｖ）を含む。これまで、ＰＤ−１に対して唯一の同定されたリガンドは、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２である。
【００７０】
腫瘍微小環境の免疫抑制性の性質は、癌の進行を伴う免疫機能障害を説明するのに役立つ。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路は、腫瘍部位における免疫回避のための１つの出現モデルであり、効果的な免疫応答に対する重要なチェックポイントおよびバリアを表す。
【００７１】
腫瘍部位でのＰＤ−Ｌ１の存在は、腫瘍微小環境内に存在する再プログラミング宿主細胞に対する活性化した腫瘍媒介プロセスの結果として免疫回避を促進すると考えられている。Ｔ細胞に浸潤する表面でのＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１受容体への関与は、それらのプログラム細胞死、アネルギーおよび枯渇を引き起こし得る。腫瘍微小環境におけるＰＤ−Ｌ１の誘導は、細胞媒介免疫応答から腫瘍を保護する「分子シールド」として機能し得る。
【００７２】
免疫療法に対する癌の難治性状態は、確立された癌において疾患の進行に伴う免疫抑制の結果であり得る。本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチドは、単球由来の樹状細胞を誘発することにより、抗腫瘍免疫応答を惹起して、ＣＤ８＋  ＣＴＬを刺激し、ＰＤ−Ｌ１の免疫抑制を無効化する。したがって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の免疫抑制性のシグナル伝達経路は、乳房腫瘍がホストの腫瘍免疫を回避するところの潜在的なメカニズムを提供し得、それゆえ、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１の免疫抑制に直面して、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋  ＣＴＬを誘導することにより堅実な腫瘍の進行に影響を与え得る。
【００７３】
ＰＤ−Ｌ１を介してシグナル伝達を調節することによってＰＤ−Ｌ１のＴ細胞への負の共刺激シグナルの伝達を防止することは、感染（例えば、急性および慢性）および腫瘍免疫に応答して免疫を増強する可能性がある。また、本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチドは、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体およびアンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体といった、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１シグナリングの他の構成要素のアンタゴニストと組み合わされ得る。
【００７４】
さらに、開示されたＴａｔ誘導体のポリペプチドと組み合わせて、癌の免疫療法治療レジメンのために使用され得る免疫チェックポイントを調節する薬剤は、限定されることなく、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３及びＧＩＴＲならびにそれらの各々のリガンドを含む。
【００７５】
（Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの使用）
【００７６】
開示されたＴａｔ誘導体は、多くのタイプの癌に有用である免疫刺激ポリペプチドである。一実施形態では、Ｔａｔの誘導体は、限定されることなく、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍を含む、ある種類の癌の治療に有用である。
【００７７】
別の実施形態では、癌は、乳癌である。さらに別の実施形態では、癌は、卵巣癌である。さらに別の実施形態では、癌は、前立腺癌である。さらに別の実施形態では、癌は、肺癌である。さらに別の実施形態では、癌は、悪性黒色腫である。
【００７８】
開示されたＴａｔ誘導体が、癌において「独立した」効果を有する対抗抑制的な（ｃｏｕｎｔｅｒｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ）薬剤であるが、これらの観察はさらに、Ｔａｔ誘導体が、高度な腫瘍負荷および付随する重度の免疫抑制に直面して限局的な効果を有し得る、現在臨床開発中の他の対抗抑制的な（ｃｏｕｎｔｅｒｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ）抗癌薬剤との相乗作用を示すという可能性を支持する。
【００７９】
腫瘍および浸潤する免疫細胞によるＰＤ−Ｌ１の存在および発現は、治療への応答および／または疾患の予後を予測するために使用さえ得る。したがって、本明細書で開示される一実施形態において、対象は、その腫瘍組織におけるＰＤ−Ｌ１の発現に基づく、Ｔａｔの誘導体ポリペプチドによる治療に対して選択される。特定の実施形態において、腫瘍組織は、対象が任意の癌療法で治療される前に、ＰＤ−Ｌ１発現に対して評価される。別の実施形態では、腫瘍組織は、対象が本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチドで治療される前に、ＰＤ−Ｌ１発現に対して評価される。
【００８０】
ＰＤ−Ｌ１の発現は、限定されることなく、免疫組織化学、免疫測定法（ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、ラジオイムノアッセイ）、タンパク質マイクロアレイ、フローサイトメトリー、定量的免疫蛍光および表面プラズモン共鳴といった腫瘍組織の免疫学的分析によって決定され得る。定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）、およびメッセンジャーＲＮＡの決定といった非免疫学的アッセイもまた、使用され得る。
【００８１】
このように、いくつかの実施形態では、患者は、治療前の腫瘍が５％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、６％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、７％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、８％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、９％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１０％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１１％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１２％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１３％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１４％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１６％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞、１８％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞または２０％を超えるＰＤ−Ｌ１発現細胞を含む場合、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドでの治療に対して選択される。
【００８２】
（医薬組成物）
【００８３】
本開示は、同様に、上述したＴａｔ誘導体ポリペプチドを含有する医薬組成物も対象とする。開示に係る医薬組成物の投与量及び望ましい薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて異なり得る。適切な投与量又は投薬経路の決定は、通常の医師の技術の範囲内に十分に入る。動物実験は、ヒトの治療のための有効な投与量の決定に対して信頼性のある指針を提供する。有効な投与量の種間のスケーリングは、Ｍａｒｄｅｎｔｉ，Ｊ    ａｎｄ    Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．著「Ｔｈｅ    ｕｓｅ    ｏｆ    ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ    Ｎｅｗ    Ｄｒｕｇ    Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，    Ｙａｃｏｂｉ    ｅｔ    ａｌ，Ｅｄｓ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ    Ｐｒｅｓｓ，    Ｎｅｗ    Ｙｏｒｋ    １９８９，    ｐｐ．２２−９６」により規定の原理に従ってなされる。一態様では、疾患は現存している。他の態様では、細胞又は個体の寿命は、本開示に係る方法に起因して延長される。
【００８４】
上記のＴａｔ誘導体ポリペプチドは、特定の用途に適するように、ヒトを含む哺乳動物への投与のために、過度の実験なしに製剤化され得る。さらに、組成物の適切な投与量は、標準用量−応答プロトコルを使用して、過度の実験なしに決定され得る。
【００８５】
従って、経口、経鼻、舌、舌下、口腔、頬内、静脈内、皮下、筋肉内、及び経肺投与のためにデザインされた組成物は、例えば、不活性希釈剤、又は薬学上許容されるキャリアを用いた本技術分野においてよく知られた方法による過度な実験を行うことなく調整される。治療上の投与を目的とし、医薬組成物は、賦形剤に組み込まれてもよく、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、溶液、シロップ等の形態で使用されてもよい。「薬学上許容されるキャリア」は、任意の標準的な薬学的キャリアを意味する。適切なキャリアの例は、本技術分野において公知であり、これらに限定されないが、リン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０を含むリン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルジョンといったエマルジョン、及び様々な種類の湿潤剤のような任意の標準的な薬学的キャリアを含み得る。また、他のキャリアは、滅菌溶液、錠剤、コート錠、及びカプセルを含み得る。典型的にはこのようなキャリアは、澱粉、乳、砂糖、特定の種類の粘土、ゼラチン、ステアリン酸又はその塩、ステアリン酸マグネシウム又はステアリン酸カルシウム、タルク、植物油脂又は油、ガム、グリコール、又は他の公知の賦形剤のような賦形剤を含み得る。このようなキャリアを含む組成物は、従来の公知の方法で製剤され得る。
【００８６】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチド組成物は、例えば静脈内、筋肉内、髄腔内、又は皮下注射によって、容易に、非経口的に投与され得る。非経口投与は、溶液又は懸濁液に化合物を組み込むことで達成され得る。このような溶液又は懸濁液は、同様に、例えば注射用水といった滅菌希釈剤、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒を含んでもよい。非経口製剤は、同様に、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベンといった抗菌剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムといった抗酸化剤、ＥＤＴＡといったキレート剤も含み得る。例えば、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩といった緩衝液、塩化ナトリウム又はデキストロースといった等張化調節のための薬剤も同様に加えられ得る。非経口製剤は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジ、又は複数回投与用バイアルに封入され得る。
【００８７】
経皮投与は、皮膚を通じて組成物を経皮吸収することを含む。経皮製剤は、パッチ、イオントフォレーゼ装置、軟膏、クリーム、ジェル、膏薬等を含む。
【００８８】
組成物は、固体又は液体の投与量単位の物理形態を変更する様々な材料を含み得る。例えば、組成物は、活性成分の周囲に被覆殻を形成する材料を含み得る。被覆殻を形成する材料は、例えば、砂糖、セラック、及び他の腸溶性コーティング剤から選択され得、典型的には不活性である。代替的に、活性成分は、ゼラチンカプセル又はカシェーに包まれ得る。
【００８９】
本開示に係るＴａｔ誘導体ポリペプチド組成物は、適切な投与レジメンに従い、治療上有効な量で投与され得る。当業者により理解されるように、必要とされる正確な量は、対象により異なり、対象の種、年齢、及び全身状態、感染の重症度、特定の薬剤、及び投与の様式に左右される。いくつかの態様では、望ましい治療効果を得るため、対象の体重に基づき約０．００１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの組成物が１日に１回以上投与される。別の態様では、望ましい治療効果を得るため、対象の体重に基づき、約１ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇの組成物が１日に１回以上投与される。
【００９０】
組成物の１日の全投与量は、専門医により、正当な医学的判断の範囲内で決定され得る。任意の特定の患者又は対象に対する特定の治療上有効な投与量は、治療されている障害及びその障害の重症度、採用される特定の化合物の活性、採用される特定の組成物の活性、患者又は対象の年齢、体重、総合的な健康状態、性別及び食習慣、投与時間、投与経路、採用される特定の化合物の排泄速度、治療の持続時間、採用される特定の化合物と組み合わせて使用又は同時服用する薬剤、及び医学の分野においてよく公知である他の因子を含む様々な因子に左右されるであろう。
【００９１】
開示に係る組成物はまた、併用療法に採用され得る。すなわち、本開示に係る組成物は、１種以上の他の望ましい組成物、治療学、治療、又は医学的処理と同時、前又は後に、投与され得る。行われる治療の特定の組み合わせは、専門医により決定されるであろう、また、治療の適合性及び達成される望ましい治療効果が考慮に入れるであろう。組み合わせにて利用される治療上の活性剤は、単一の組成物、治療又は処置において組み合わせて投与され得ること、又は代替的に別個に投与され得るということが理解されるであろう。
【００９２】
別の実施形態では、開示されたＴａｔ誘導体の反復的なまたは頻回な投与は、タキフィラキシーよりも有利となるばかりでなく、癌の進行中に確立された免疫抑制の時期を逆行し得ると考えられる。頻回な投与は、薬剤への免疫寛容を支持し得るアレルギー治療における例に対して用いられる１つの手段である。Ｔａｔ誘導体が腫瘍への免疫活性を回復させるために使用され得る場合、進行した疾患に起因して利益を失っている他の免疫療法は、潜在的に有効性を取り戻し得る。第二のプロトコルでは、Ｔａｔ誘導体の免疫療法の代わりに腫瘍抗原のシャワーを放出し得る化学療法レジメンが使用される。進行した段階のヒトの癌は、多くの場合、薬剤耐性を有するため、放射線療法は、ヒトでの治験において実用的な代替手段である可能性がある。
【００９３】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの反復投与の回数は、医療専門家が投薬に対する患者の反応に基づいて確立し得る。一態様では、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、１０日の期間において、３日おきに１回、計３回投与される。この投与スキームは、その後、複数のサイクル繰り返される。本開示では、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドが選択された時間フレーム内で複数回投与されるような様々な異なる投与スキームを想定しており、その後、この投与スキームは複数サイクル繰り返される。別の態様では、Ｔａｔ誘導体の投与は、１種以上の他の抗癌剤、免疫調節剤又は免疫抑制剤の投与と交互に行われ得る。一態様では、免疫抑制剤は、シクロホスファミドである。
【００９４】
さらに、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを用いた治療は、手術、放射線療法または化学療法といった他の癌療法と組み合わせることができる。化学療法剤は、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、テトラジン、アジリジン、シスプラチンおよび誘導体といったアルキル化剤；抗葉酸剤、フルオロピリミジン、デオキシヌクレオシド類縁体およびチオプリンといった代謝拮抗剤；ビンカアルカロイドおよびタキサンといった微小管阻害剤；カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、ノボビオシン、メルバロン（ｍｅｒｂａｒｏｎｅ）およびアクラルビシンといったトポイソメラーゼ阻害剤；アントラサイクリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、プリカマイシンおよびマイトマイシンといった細胞傷害性抗生物質を含む。
【００９５】
（乳癌におけるＴａｔ誘導体ポリペプチドの効果）
【００９６】
乳癌の３つの異なる広く受け入れられているマウスモデルである４Ｔ１、ＳＭ１およびＴＳ／Ａにおける組換え産生されたＴａｔタンパク質誘導体を用いた動物試験は、Ｔａｔ誘導体が、マウスにおいて原発性乳癌の増殖を抑制する活性を有することを支持する。また、１つの誘導体であるＮａｎｉ−Ｐ２は、有意に原発性４Ｔ１の肺転移の発生を抑制し、対照マウスと比較して生存率を増加させた。重要なことに、ＩＦＮ−γ産生のレベルの増加は、Ｔａｔ誘導体でのマウス乳癌の治療に伴って起こった。４Ｔ１の乳癌が治療開始前に１４日間播種された研究では、Ｔａｔ誘導体は、ＰＢＳ処置対照と比較して、原発性腫瘍の増殖、生存率及び転移性肺癌負荷時の低減により評価された場合、腫瘍移植の時に与えられたときと同様に効果的であった。
【００９７】
合成のＴａｔ誘導体は、ＡＰＣに対して免疫刺激性であり、３つの広く使用されているマウス乳癌モデルにおいて、確立された癌と同様に原発性癌に対して実質的な活性を有する。特に、誘導体の１つであるＮａｎｉ−Ｐ２は、積極的なＨｅｒ２（−）４Ｔ１乳癌モデルにおける原発性腫瘍の増殖、肺転移の形成および生存率に用量及び経路依存的な影響を与えた。肺転移が進行乳癌における死亡の主要な原因であるため、肺転移の減少が生存率の改善と相関する。重要なことに、Ｎａｎｉ−Ｐ２タンパク質を静脈内投与した、確立された４Ｔ１乳房腫瘍を有するマウスは、高度に有意な、腫瘍増殖阻害および最後の投与を越えて少なくとも３６日間延長した生存率の利益を有していた。限られたケースでは、全寛解は、積極性が低く（ＳＭ１）および／またはいくらかより免疫原性（ＴＳ／Ａ）の乳房腫瘍でより頻繁であることが明確に観察された。腫瘍移植後にＮａｎｉ−Ｐ２の投与を遅らせることは、４Ｔ１腫瘍増殖抑制に負の影響をほとんど及ぼさず、腫瘍細胞注射後０日目に開始された治療（ＳＣ）は、平均５３％腫瘍負荷を縮小したが、腫瘍がすでに直径約５ミリメートルに成長していた時点の、１３日目でのＳＣ治療の開始は、その最大効果で平均５２％腫瘍負荷を減少させた。まとめると、これらの観察は、Ｔａｔ誘導体がヒトにおいて進行乳癌およびＨＥＲ２（−）ヒト乳癌に良好な影響を与えることを示した。
【００９８】
ここで報告された研究では、ＩＶまたはＳＣのいずれかで与えられたＴａｔ誘導体のおおよそ毎週３または４回の用量のプロトコルを使用し、ＩＶ投与が、生存率を増加させるため、および転移を減少させるための最大の有効性を示した。これらの組成物を与えられた２５０以上のマウスにおいて、毒性は認められなかった。Ｔａｔ誘導体に対する乳癌の感度は、ハーセプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）（登録商標）（ジェネンテック社）の用量応答曲線と比較した場合、良好に対照をなし、それにおいては４−８ｍｇ／ｋｇが標準的な治療である。Ｔａｔ誘導体は、マウスよりもヒトで最大で１００倍以上、生物活性を有し、これは、毒性のさらに少ないリスクと関連したより少ない用量が功を奏する可能性があることを意味すると評価される。
【００９９】
本明細書において、Ｔａｔ誘導体が、抗癌Ｔ細胞免疫応答のＩＮＦ−γの作用を活性化することが確立された（図５）。Ｎａｎｉ−Ｐ２で治療されたマウス由来の脾細胞によって分泌されたＩＦＮ−γのベースラインレベルは、ＰＢＳで処置した対照マウス由来のものより８倍高い。生体内でのＴａｔ誘導体治療に応答したＩＦＮ−γ分泌はさらに、自然免疫アゴニストＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで（５３倍まで）増強され得た一方で、対照マウス由来の脾細胞は、高用量のＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＩＬ４で共刺激しようとする試みの後であっても、抑制されたままである。
【０１００】
免疫優性エピトープ（ＴＳ／Ａ）を有する多くの免疫原性乳癌モデル（ＳＭ１）および／またはで乳房腫瘍は、Ｔａｔ誘導体治療の後、比較的高い退縮率を有するが、「非免疫原性」４Ｔ１モデルは、より難治性である。これは、免疫抑制が乳癌の進行における主要な因子であるというモデルと一致しており、実際に乳癌の侵襲性に寄与し得る。このモデルは、免疫応答がＴａｔ誘導体によって誘導される対抗抑制（ｃｏｕｎｔｅｒｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）無しで明らかに完全に抑制される高いレベルで、ラクタドヘリンおよびアンドロゲン結合タンパク質を含むいくつかの一般的な乳癌抗原を４Ｔ１が発現するという観察によって支持される。
【実施例】
【０１０１】
（実施例１）
（Ｔａｔ誘導体のインビトロ活性）
ヒト単球を、Ｔａｔ誘導体（Ｎａｎｉ−Ｐ２）、トール様受容体（ＴＬＲ）の免疫刺激性配列（ＩＳＳ）（図１）またはリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（図２）とともに２４−４８時間培養し、細胞をその後洗浄し、蛍光標識されたＣＤ８６で染色した。Ｔａｔ誘導体は、ＩＳＳ（ＴＬＲ）またはＬＰＳのいずれかよりもＣＤ８６の発現をより高度に刺激した。
【０１０２】
（実施例２）
（乳癌のマウスモデルにおけるＴａｔ誘導体の評価）
（材料及び方法）
【０１０３】
（動物）
６−８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを、ジャクソン研究所（バーハーバー、ＮＥ）から購入した。マウスを、使用前に少なくとも１週間順化させた。マウスを、コロンビア大学の医療センターの動物保守施設にて無菌状態で保持し、すべての実験は、コロンビア大学の医療センターの施設内動物管理使用委員会によって承認された。
【０１０４】
（細胞株）
４Ｔ１細胞、ＢＡＬＢ／ｃの原発性マウス乳癌由来の６−チオグアニン耐性細胞株は、ＡＴＣＣから入手され；ＴＳ／Ａ、マウス腺癌細胞株は、サンドラ・デマリア博士によって提供され（Ｄｅｍａｒｉａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １１：７２８−３４，２００５）；ＳＭ１、ＢＡＬＢ／Ｃ由来の乳癌は、カリフォルニア大学バークレー校のジェームス・アリソン博士によって親切にも提供された。全ての腫瘍細胞株を、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０単位／  ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン、１０％熱不活性化ＦＣＳ（インビトロジェン社）、５０μＭの２−メルカプトエタノール（シグマ社）および５０ｍｇ／Ｌのゲンタマイシン（ランツァ社）で補完されたＤＭＥＭ中で培養した。
【０１０５】
（腫瘍チャレンジおよび治療）
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０日目に、左乳房体において、１×１０４の４Ｔ１、１×１０５のＴＳ／Ａまたは２×１０５のＳＭ１細胞を各々注射（ＳＣ）した。免疫療法を、腫瘍の確立後０、７、１２および１７日目に、右脇腹にＴａｔ誘導体を直接的に注射することにより行った。対照群には、ＰＢＳを注射した。いくつかの実験では、マウスの全てが確立された測定可能な腫瘍（腫瘍注射後１４日目で直径３−５ｍｍ）を有した時に、動物を示されるように種々の治療群に無作為に割り当てた。腫瘍負荷（腫瘍容積）を測定し、週に３回記録した。腫瘍の容積が直径１５ｍｍに達したときに動物を屠殺し、腫瘍を回収し、重量を測定した。
【０１０６】
（肺転移の検出）
肺の４Ｔ１転移について、過去の記載（Ｐｕｌａｓｋｉ  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６０：２７１０−２７１５，  ２０００）の通り調べた。ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて２−３週間で確立された原発性の４Ｔ１腫瘍は、大多数の動物において肺に転移する。要するに、マウスを、試験開始時に確立されたＩＡＣＵＣガイドラインに従って屠殺し、肺を摘出し、肺の表面上の腫瘍結節を、治療プロトコルを知らされていない２名の独立した調査員が肉眼で数えた。
【０１０７】
（免疫脾臓細胞によるＩＦＮ−γ産生のＥＬＩＳＡ分析）
ＩＦＮ−γの脾臓細胞分泌を、ＯｐｔＥＩＡ（商標）ＥＬＩＳＡキット（ＢＤバイオサイエンス社）により評価した。簡潔には、４Ｔ１腫瘍を有するマウス由来の脾臓細胞（１×１０５／ウェル）を、９６ウェルプレートにおいて、ＩＬ−２（５０ｎｇ／  ｍｌ）およびＧＭ−ＣＳＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）を有する２０：１のＥ：Ｔ（エフェクター：腫瘍）比率でのＤＭＥＭ中で、５×１０３／ウェルのマイトマイシンＣ（５０μｇ／ｍｌ）で処理した４Ｔ１細胞（腫瘍抗原を提供するために使用される）存在下または非存在下で培養した。上清を７２時間後に採取し、活性を失うことなく、分析まで−８０℃で凍結保存した。ＩＦＮ−γを、製造者の説明書に従って、ＥＬＩＳＡによって二連のウェルの細胞を含まない上清中で測定した。腫瘍特異的ＩＦＮ−γ産生を、培地のみで培養された脾細胞の上清において測定したバックグラウンド値を差し引いて計算し、光学濃度（ＯＤ）値を、組換えＩＦＮ−γの標準曲線を用いて、ＩＦＮ−γのｐｇ／ｍｌでの量に変換した。刺激指数（ＳＩ）を、“刺激培養”対“対照培養”においてＦＮ−γの比として計算した。
【０１０８】
（統計分析）
データを、スチューデントｔ検定（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  バージョン５；  ＧｒａｐｈＰａ）を用いて、統計的に分析した。動物の生存実験からのデータは、ログランク検定（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  バージョン５）を用いて、統計的に分析した。
【０１０９】
（結果）
【０１１０】
乳癌のマウスモデルにおける合成のＴａｔ由来の組成物の全身投与の治療効果を調べた。原発性乳房腫瘍増殖に対する異なる誘導体の小さなパネル（ｓｍａｌｌ  ｐａｎｅｌ）によって与えられる相対的な保護を比較するために、雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの乳房体に１×１０４の４Ｔ１乳房腫瘍細胞をＳＣ注射し、その後、排液している腋窩リンパ節を、０、７、１４および２１日目に、４００ｎｇの部分的に精製されたＴａｔ誘導体で処理した（ＰＢＳにおけるＳＣ注射）。
【０１１１】
２つの誘導体、Ｎａｎｉ−Ｐ１およびＮａｎｉ−Ｐ２は、ＰＢＳのみの注射を受けた対照マウスと比較して、有意に腫瘍負荷を減少させ、この差は腫瘍移植後１５日目に初めて明らかになってきた（図３Ａ、１５日目、ｐ＜０．０５）。これに対して、他と同様のプロトコルで製造され、部分的に精製された第３の誘導体、Ｎａｎｉ−Ｐ３は、５倍高い用量でさえも４Ｔ１原発性腫瘍の増殖の抑制において効果が低く（２μｇ、図３Ｂ）、また生存延長の効果が低かった（図示せず）。これらの結果は、調製における混入物質が抗腫瘍効果に寄与したこと、特に次の試験を行う限りにおいて、はるかに低い用量で、高度に精製された（＞９５％純度）材料で実施されたことを効果的に除外した。Ｎａｎｉ−Ｐ２の有効性は、Ｎａｎｉ−Ｐ１よりも有意により持続的であり、２１日目（最終投与）において、Ｎａｎｉ−Ｐ２処理腫瘍とＮａｎｉ−Ｐ１処理腫瘍との間の原発性腫瘍負荷の差は１８ｍｍ３となり、統計学的に高度に有意であった（Ｐ＜０．０１）。この効果は、さらなる治療を伴わないにもかかわらず、この試験の残りの部分で持続した。
【０１１２】
高度に精製されたＮａｎｉ−Ｐ２の、４Ｔ１腫瘍に対する乳房腫瘍増殖抑制効果は、用量依存的であり、わずか０．４ｎｇの化合物のＳＣ投与の後に明らかであった（図４）。投与あたり０．４ｎｇから４０ｎｇの対数増加的に、排液している腋窩脇腹にＳＣ投与する、Ｎａｎｉ−Ｐ２の用量の増加は、漸増的に４Ｔ１乳房腫瘍増殖を阻害した。０．４ｎｇから４０ｎｇの間のＮａｎｉ−Ｐ２のより高用量でのより強固な４Ｔ１増殖阻害は、統計学的に有意であり（ｐ＜０．０１）、一方で、４００ｎｇ、さらには２μｇへの用量増加は、さらなる抗腫瘍効果をもたらさなかった（データは示されない）。重要なことに、複数の投与スケジュールを使用した、複数の試験で、Ｎａｎｉ−Ｐ２の４０ｎｇのＳＣまたはＩＶ投与後に、毒性は観察されなかった。４０ｎｇの用量のＮａｎｉ−Ｐ２が、さらなる研究のために選択された。
【０１１３】
Ｎａｎｉ−Ｐ２治療がマウスで原発腫瘍を縮小させることに加えて、生存期間を延長し得るのかどうかを決定するために、４０ｎｇのＮａｎｉ−Ｐ２投与の種々の投与スケジュールおよび経路（ＳＣ、ＩＶまたはＩＴ）を用いた治療プロトコルを実施した。群当たり１０匹のマウスのコホートを、生存の長さに対して追跡し、カプラン・マイヤー積極限法を用いて評価した。コロンビア大学医療センター動物施設の規則に従って、平均腫瘍直径が約１５ｍｍの時点で、またはマウスが瀕死状態になった場合にはそれよりも早い時期に、各マウスを安楽死させて、これらの２つの結果のうちの１つを、致死に対して定義する基準とした。
【０１１４】
Ｎａｎｉ−Ｐ２を評価する最初の試験において、ＳＣ治療を、腫瘍移植と同時に開始した。対照（ＰＢＳ処理）マウスの生存期間の中央値は、３０日間であり、１００％の致死は３６日目で起こった。Ｎａｎｉ−Ｐ２投与（２１日間で４回投与）では、処置したマウスの３５％は、４８日目でまだ生存しており（ｐ＜０．００１、図５Ａ）、この時点で、全てのマウスは、原発性腫瘍負荷に起因して屠殺された。
【０１１５】
第二の生存試験において、転移性疾患における有効性を良好に評価するために、腫瘍を１４日間で確立するようにし、その後、３サイクルのＮａｎｉ−Ｐ２療法を、いくつかの経路（ＳＣ、ＩＶまたはＩＴ）のいずれかで毎週投与して、投与の各経路に対する相対的な有効性を比較した（図５Ｂ）。以前の試験と同様に、対照マウス（ＰＢＳで処置されたＳＣ）の生存期間の中央値は３２日であり、３６日までには致死率が１００％となった。生存率は、４７日目で２０％の生存率のＳＣ処置マウス（Ｐ＜０．０５）と比較して、Ｎａｎｉ−Ｐ２のＩＶ投与で延長され（ｐ＜０．００５、図５Ｂ）、４７日目で６０％の生存率であった。化合物の腫瘍内投与は、ＳＣ投与にやや劣っていた。
【０１１６】
４Ｔ１マウス乳腺腫瘍モデルは、悪性かつ迅速な浸潤性腫瘍であるため、研究のために選択された。それは、移植後１４日目で通常転移し、その時点までは治療が困難である。Ｎａｎｉ−Ｐ２の有効性が、他のマウス乳房腫瘍モデルに拡張することができるかどうかを調べるために、２つの追加の乳腺腫瘍、ＴＳ／ＡおよびＳＭ１を調べた（図６）。ＴＳ／Ａの原発性乳腺腫瘍は、４Ｔ１とほぼ同程度に悪性であり、３０日で１５ｍｍの腫瘍容積に達していた（図６Ａ）。しかし、ＴＳ／Ａ腫瘍は、Ｎａｎｉ−Ｐ２の治療にかなり反応性がよく、０．４ｎｇのＮａｎｉ−Ｐ２で処理した後の増殖を約５０％抑制し、３０日目で４０％の総寛解率であった。
【０１１７】
ＳＭ１乳癌モデル（図６Ｂ）は、原発腫瘍のように最初はそれほど悪性ではなく、転移性疾患以外のメカニズムを介して死亡が生じるようである。治療の３０日目までは、ＳＭ１腫瘍は、ＴＳ／Ａまたは４Ｔ１いずれよりも約３３％小さい平均体積に達した。これは、４Ｔ１と比較して、Ｎａｎｉ−Ｐ２の免疫療法に対するＳＭ１腫瘍の高度化された感受性を示し、腫瘍増殖は、１６日間、１００％の動物で抑制され、４０％の動物は、移植の後２８日目およびレジメンの終了後の完全な１週間後でさえも寛解したままであった。
【０１１８】
細胞傷害性Ｔリンパ球がＮａｎｉ−Ｐ２療法により誘発される腫瘍拒絶において役割を果たすかどうかを決定するために、ＩＦＮ−γＥＬＩＳＡアッセイを行って、Ｎａｎｉ−Ｐ２無し（対照）または有り（図７）のいずれかで治療された４Ｔ１腫瘍を有するマウスの脾臓細胞を比較した。脾臓を無菌条件下で除去し、この記載のように調製した（ｄｕＰｒｅ’  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｐａｔｈ．８５：１７４−１８８，２００８）。簡潔には、脾臓をホモジナイズし、脾細胞を、全身細胞傷害性Ｔ細胞およびＡＰＣの豊富なソースとして、マイトマイシンＣで処理した４Ｔ１刺激細胞と共培養して、リコール免疫応答を誘導した。対照ウェルは、培地のみで培養した。
【０１１９】
ＣＴＬ活性化に対する標準的なサロゲートであるＩＦＮ−γ濃度を、市販のＥＬＩＳＡ（ＢＤバイオサイエンス社）により定量した。ＩＦＮ−γ産生は、アッセイの全ての条件下で、Ｎａｎｉ−Ｐ２で処理されたＢＡＬＢ／ｃマウスから採取した脾臓細胞の培養において有意に高かった（ｐ＜０．０１＊＊）。Ｎａｎｉ−Ｐ２で処理された（対象では処理されていない）動物におけるＩＦＮ−γ活性は、ＤＣの分化を促進することが示された条件下でＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦを添加することによって増強され得（ｐ＜０．０５）、腫瘍刺激が、他のＣＴＬアゴニストとの相乗効果でのＮａｎｉ−Ｐ２の効力を実証する培養の開始に戻って追加された場合（“刺激指数＝５３”対“対照”、３Ｓ＋ＩＬ４＋  ＧＭ−ＣＳＦ）であれば、さらに増強され得ただろう。
【０１２０】
確立された転移性乳癌に対するＮａｎｉ−Ｐ２の有効性をさらに調査するために、４Ｔ１細胞をマウスの腹部乳腺にＳＣ注射し、治療を、腫瘍が肺に転移し、平均３．５ｍｍのサイズに達する時点まで延期し（図８Ａ、１３日目）、これはヒト乳房腫瘍の２．４ｃｍまたはステージＴ２に対応する。マウスの腫瘍増殖（図８Ａ）および肺転移（図８Ｂ）を追跡した。剖検で、Ｎａｎｉ−Ｐ２の治療を受けた動物は、対照（図９）と比較した場合、肺転移の可視数の劇的な減少を示した。Ｎａｎｉ−Ｐ２でＩＶ治療を受けたマウスの肺における肉眼で見える腫瘍小結節の平均数は、７個であり、ＰＢＳ対照群では、平均３５．３個であった（Ｐ＜０．０１＊＊）。このことは、サイズにおいて平均的にはるかに小さかった肺転移（図８Ｂ）と同様に、原発腫瘍のより悪性ではない外見に対応した。
【０１２１】
事前に確立された、悪性の４Ｔ１乳癌の設定におけるＮａｎｉ−Ｐ２の効力は、明らかであり、対照（ＰＢＳ処理）動物（１８日目、ｐ＜０．０１＊＊、図１０）に対して、静脈内投与動物（４０ｎｇのＮａｎｉＰ２、ＩＶ）における原発性腫瘍負荷を比較することによって顕著に証明された。原発腫瘍抑制（図１０）におけるこの統計的に有意な効果は、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを１４日および２８日の間、週３回だけ投与した場合であっても、試験の残り５０日間の期間を通して持続した（ｐ＜０．０１＊＊）。さらに、７／１０のマウスは、１４日目の腫瘍の最初の治療の時点で、腫瘍の退縮を示した。このことは、生存率に対する非常に高度な統計的に有意な利益に変換される（ｐ＜０．００５＊＊、図５Ｂを参照）。驚くべきことに、一匹の動物は完全寛解し、試験が終了した５０日の時点で明らかに疾患のないままであり、このことは、この動物に明らかに腫瘍が無い状態がもたらされていたという推論を支持するものである。
【０１２２】
（実施例３）
（Ｔａｔ誘導体およびシクロホスファミドの反復投与療法）
１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの４つの群に、乳房脂肪体に１×１０４の４Ｔ１細胞をＳＣで移植した。１０日目の腫瘍の直径が４−５ｍｍに達したとき、治療を開始した。対照マウスに３日間隔でＰＢＳをＩＶ注射し、代替的な治療マウスは、循環する１０日サイクルにおいて３日毎に３回の薬物投与を受けた。腫瘍負荷（腫瘍サイズｍｍ３）を、標準式を用いて計算した。ＣＹ（シクロホスファミド単独）マウスに、１０日目からマウス当たり８０ｍｇ／ｋｇを毎週、ＩＰ注射した。Ｃｙ／Ｎａｎｉ−Ｐ２（最初にシクロホスファミド、続いてＮａｎｉ−Ｐ２）マウスに、１０日目から開始して３回、３日間ごとにシクロホスファミド（８０ｍｇ／ｋｇ）を最初にＩＰ注射し、その後、順番で３回、３日間ごとにＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）をＩＶ注射した。３回のＣＹの投与の後に３回のＮａｎｉ−Ｐ２投与が続くサイクルを、５０日目まで繰り返した。Ｎａｎｉ−Ｐ２  ／ＣＹ（最初にＮａｎｉ−Ｐ２、続いてシクロホスファミド）マウスに、１０日目から開始して３回、３日間ごとにＮａｎｉ−Ｐ２（４０ｎｇ）を最初にＩＶ注射し、その後、順番で３回、３日間ごとにシクロホスファミドをＩＰ注射した。３回のＮａｎｉ−Ｐ２投与の後に３回のＣＹ投与が続くサイクルを、５０日目まで繰り返した。
【０１２３】
ＣＹ群と比較して、Ｎａｎｉ−Ｐ２／ＣＹにおける腫瘍量の減少は、非常に高度に統計的に有意であった（図１１、ｐ＝０．００３０７７）。
【０１２４】
毎週のシクロホスファミドに対して、シクロホスファミドに代わるＮａｎｉ−Ｐ２のボーラス治療の延命効果は、高度に統計的に有意である（図１２、ｐ＝０．０００１）。Ｎａｎｉ−Ｐ２のコホートにおいて、５０日目（図示せず）で、３／１０のマウスで完全寛解および９／１０のマウスで部分寛解となり、一方で、シクロホスファミド処理したマウスの１０／１０は、４２日目までに死亡した。
【０１２５】
（実施例４）
（Ｎａｎｉ−Ｐ２を受けたマウスにおける脾臓のＣＤ８＋  ＣＴＬの存在）
脾臓は、主要なリンパ器官であり、抗原提示細胞が抗原に関連した捕捉された腫瘍を提示して、傷害性Ｔ細胞応答を刺激する場所である。腫瘍特異的ＣＴＬは、感染部位に移動し、標的細胞を溶解する。
【０１２６】
雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの乳房脂肪体に、同系および高転移性４Ｔ１乳癌細胞を接種し、それは、ヒト乳癌のＩＶ期をモデル化するものである。Ｎａｎｉ−Ｐ２の免疫療法を、腫瘍細胞接種後７日目に開始した。腫瘍は、試験を通してカリパス測定により評価され、２９／３０日目に切除された。ＣＤ８に対して免疫組織化学的染色（ＩＨＣ）を、切除脾臓組織のホルマリン固定、パラフィン包埋標本において行った。
【０１２７】
図１３に示すように、ＩＨＣ染色は、無治療（ＰＢＳ、図１３Ａ）に対して、Ｔａｔ誘導体（図１３Ｂ）での治療後における、脾臓のマウスＣＤ８＋細胞の増加した割合を明らかにする。
【０１２８】
（実施例５）
（ＰＤ−Ｌ１の存在下でのＮａｎｉ−Ｐ２による４Ｔ１乳房腫瘍浸潤ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球の誘導）
免疫療法への癌の難治性状態は、確立された癌において疾患の進行に伴う、免疫抑制の結果であり得る。腫瘍微小環境では、プログラム細胞死受容体リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）の発現は、疾患の進行、予後不良、およびホスト腫瘍免疫の障害のマーカーとして示唆され、それはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の腫瘍浸潤の機能を抑制することによる。そのため、様々な腫瘍タイプにおけるＰＤ−Ｌ１の存在は、効果的な免疫療法を開発するための主要な障壁を表す。
【０１２９】
本明細書に記載されたＴａｔ誘導体ポリペプチドは、単球由来樹状細胞を誘発し、ＣＤ８＋  ＣＴＬを刺激し、ＰＤ−Ｌ１の免疫抑制を無効化することにより、抗腫瘍免疫応答を誘発する。したがって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１免疫抑制的シグナル伝達経路は、４Ｔ１腫瘍がホスト腫瘍免疫を逃れるところの潜在的なメカニズムを提供し得、したがって、Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１の免疫抑制に直面して、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋  ＣＴＬを誘導することにより堅実な腫瘍の進行に影響を与え得る。
【０１３０】
雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの乳房脂肪体に、同系および高転移性４Ｔ１乳癌細胞を接種し、それは、ヒト乳癌のＩＶ期をモデル化するものである。Ｎａｎｉ−Ｐ２の免疫療法を、腫瘍細胞接種後７日目に開始した。腫瘍は、試験を通してカリパス測定により評価され、２９／３０日目に切除された。ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８に対して免疫組織化学的染色（ＩＨＣ）を、原発性４Ｔ１腫瘍のホルマリン固定、パラフィン包埋標本において行った。
【０１３１】
図１４に示すように、ＰＤ−Ｌ１の発現は、対照（図１４Ａ）に比してＮａｎｉ−Ｐ２治療（図１４Ｂ）を受けた動物において低減される。ＰＤ−Ｌ１染色は、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連の樹状細胞および線維芽細胞に形態学的に類似する細胞において観察された。ＰＤ−Ｌ１の減少は、より低いＰＤ−Ｌ１の染色強度と組み合わせて、対照と比較したＮａｎｉ−Ｐ２治療におけるインビボ腫瘍測定データに基づく。ＰＤ−Ｌ１染色の大部分を含有する腫瘍縁を、対照と比較して、Ｎａｎｉ−Ｐ２治療において大きく欠いている。ＰＢＳ対照においてＣＤ８＋  ＣＴＬに対して陽性に染色された細胞はほとんどなく（図１４Ｃ）、一方で、浸潤性ＣＤ８＋  ＣＴＬがＰＩＮ−２治療マウスにおける腫瘍縁の周りに進行している（図１４Ｄ）。
【０１３２】
ＰＢＳ対照と比較して、ＰＩＮ−２を投与されたマウスにおいて確立された原発性４Ｔ１乳房腫瘍の免疫染色は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋  ＣＴＬの割合の大幅な増加をもたらした。腫瘍縁におけるＰＤ−Ｌ１の存在は、腫瘍の悪性度に寄与し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路に関与することでＣＴＬ活性を阻害するように、分子シールドとして作用することによって、免疫サーベイランスから逃れ得る。腫瘍浸潤ＣＤ８＋  ＣＴＬは、Ｎａｎｉ−Ｐ２治療マウスにおいては腫瘍縁近傍に局在する一方で、これらのＣＴＬはＰＢＳ対照の腫瘍縁では多くは存在していないと考えられる。ＰＤ−Ｌ１は、疾患の進行、悪性腫瘍および予後不良に関連したマーカーであるので、腫瘍ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８＋  ＣＴＬの逆相関は、ＰＩＮ−２治療で観察された抗腫瘍ＣＴＬ応答に基づいて説明され得る。
【０１３３】
結論として、（ｉ）腫瘍縁近傍での低減されたＰＤ−Ｌ１の存在がＰＩＮ−２治療で観察された、（ｉｉ）ＣＤ８＋  ＣＴＬは、ＰＩＮ−２治療マウスで観察された抗腫瘍免疫応答に寄与する、（ｉｉｉ）ＰＤ−Ｌ１＋原発性乳房腫瘍のＣＤ８＋  ＣＴＬの浸潤は、良好な抗腫瘍免疫応答を妨げるバリア（免疫チェックポイント）として癌により使用される免疫抑制メカニズムをＰＩＮＳが無効化することを示唆する、（ｉｖ）確立された４Ｔ１原発性乳房腫瘍におけるＩＨＣによるＰＤ−Ｌ１の陽性検出は、腫瘍回避のための重要なメカニズムとしての免疫抑制的なＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の軸により発揮される役割を示唆する、（ｖ）本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１を発現している乳房腫瘍におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を無効化する能力を有する、（ｖｉ）本明細書に開示されたＴａｔ誘導体ポリペプチドの投与は、腫瘍進行の間に確立された免疫抑制の勢力を逆転させ、免疫反応性を再確立する。
【０１３４】
特段の指示がない場合、本明細書及び請求項にて使用される特性、項目、量、パラメータ、特性、期間等を表現する全てのメンバーは、全ての場合において、語句「約」によって修飾されていると理解される。本開示の語句「約」は、その特性、項目、量、パラメータ、特性、又は期間が、記述された特性、項目、量、パラメータ、特性、又は期間の上下±１０パーセントの値を含むことを意味する。従って、反対の示唆がない限り、本明細書及び添付した請求項にて述べられた数値パラメータは、変化する可能性のある近似値である。最低限でも、請求項の範囲に等価物の原理の適用を限定する意図はなく、各数値は、少なくとも報告された有効数字の数を考慮し、また通常の丸め技術を適用することにより解釈されるべきである。本発明の広い範囲を記述している数値範囲及び値は、可能な限り正確に報告されている。しかし、任意の範囲又は値は、本質的にそれぞれの測定試験にて見られる標準偏差に起因する特定の誤差を必ず含む。本開示に係る値の数値範囲の列挙は、範囲に入る別個の数値個々に参照する簡易的な方法として提供する意図があるにすぎない。本開示にて別段の示唆がない場合は、数値範囲の個別の値は、本開示にそれぞれが引用されているかのように本明細書に組み込まれる。
【０１３５】
本発明の記事の文身約にて使用される語句「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」及び類似する参照は（特に以下の請求項の文脈において）、本開示にて別段の示唆がない、又は明らかに文脈に矛盾していない場合は、単数形及び複数形の両方を含むと解釈されるべきである。本開示に係る全ての方法は、本開示にて別段の示唆がなく、又は明らかに文脈に矛盾していない場合は、任意の適切な順序で実施され得る。本開示にて提供されるいずれか及び全ての例、又は代表的な言語（例えば、「例えば」）は、本発明の理解をよりよくする意図に過ぎず、又別段にて請求された本発明の範囲の制限を提起するものではない。本明細書のいずれの言葉も、本発明の実施に必要な非請求要素を示唆するものとして解釈されるべきでない。
【０１３６】
本発明の代替的な形態、要素、又はステップのグループ分けは、限定として解釈されない。各グループのメンバーは、個別に又は本開示に係る他のグループのメンバーとの任意の組み合わせで参照及びクレームされ得る。１つの又は複数のグループのメンバーは便宜及び／又は特許性の理由で、グループに包含又は削除されることが予測される。このようないずれかの包含又は削除が発生する場合、明細書は、修正され、そして添付した請求項にて使用される全マーカッシュ群の文書による説明に記載されるグループを含むとみなされる。
【０１３７】
本発明の特定の態様は、開示され、本発明を実行する発明者が既知であるベストモードを含む。もちろん、これら開示された形態の変更は、前述の記載を読む当業者には明白なものとなるであろう。発明者は、当業者がこのような変更を適切に採用することを期待し、発明者は具体的な開示とは異なる方法で実施されることを意図している。従って、本発明は、適用される法律により許可されたものとして添付された請求項に列挙された対象の全ての修正、及び等価物を含む。さらに、本開示にて特段の示唆がなく又は文脈により明確な矛盾がない場合、全ての可能な変更における上述した形態の任意の組み合わせは、本発明に含まれる。
【０１３８】
本開示に係る特定の態様は、言語からなる又は本質的に言語からなる請求項にてさらに限定され得る。請求項にて使用される場合、補正ごとに提出又は追加されるとしても、推移する語句「からなる」は、請求項にて特定されていない要素、ステップ、又は成文を排除する。推移する語句「本質的に〜からなる」は、特定のマテリアル又はステップ及び基本的並びに新規な特性に実質的に影響を与えないものに、請求の範囲を限定する。請求項に係る本発明の態様は、本開示に本質的に又は明確に記述されており、また実行可能なものにされている。
【０１３９】
さらに、この明細書の至るところに特許及び刊行物が多数参照されてきた。上述の参照及び刊行物の各々は、それらの全体において本明細書に個々に包含される。
【０１４０】
最後に、本明細書の態様を具体的な実施の形態を示して強調しているが、当業者であれば、これらの開示の形態は、開示した対象の原理の説明であるにすぎないことは、容易に理解するであろう。このため、開示対象は、開示した特定の方法、プロトコル、及び／又は試薬等に限定されないことは理解されるべきである。従って、本明細書の精神と乖離することなく、開示の教示に従って開示対象の構成に対する様々な修正又は変更又は代替を行うことができる。最後に、本開示の用語は、特定の形態の説明のみを目的とするものであり、請求項だけにより定義される本発明の範囲を制限することは意図しない。従って、本発明は、開示又は記載されたままに正確に限定されない。
【０１４１】
本出願は、３５  ＵＳＣ  §１１９（ｅ）のもと、２０１３年１０月４日に出願された米国仮特許出願第６１／８８７，１６６号の利益を主張するものであり、両出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１４２】
（付記）
（付記１）
（ｉ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）又はサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）タンパク質由来の転写因子（ＴＦ）領域配列、
（ｉｉ）ＨＩＶ、ＳＩＶ又はデフェンシン由来のシステインリッチ領域配列、及び、
（ｉｉｉ）ＨＩＶ又はＳＩＶ  Ｔａｔタンパク質由来のＣ−末端領域配列、
を示される順序で含むアミノ酸配列を有するＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４３】
（付記２）
前記ＨＩＶは、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２である、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４４】
（付記３）
前記ＨＩＶ−１  Ｔａｔは、長期末発症者（ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｎｏｎ−ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｒ）由来である、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４５】
（付記４）
前記ＳＩＶは、表２から選択されるホスト由来である、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４６】
（付記５）
前記デフェンシンは、α−デフェンシン又はβ−デフェンシンである、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４７】
（付記６）
ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２  Ｔａｔ由来のアルギニンリッチ領域をさらに含む、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４８】
（付記７）
前記ＴＦ領域におけるアミノ酸の少なくとも１つは、欠損又はアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、リジン、グルタミン、アルギニン、セリン若しくはトレオニンで置換されている、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１４９】
（付記８）
置換されたアミノ酸の少なくとも１つは、プロリンである、
ことを特徴とする付記７に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１５０】
（付記９）
前記ＴＦ領域は、配列番号９６−１２３のうちのの１つのアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１５１】
（付記１０）
前記システインリッチ領域は、配列番号１２４−１３２のうちの１つのアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１５２】
（付記１１）
前記Ｃ−末端領域は、配列番号１３３−１５０のうちの１つのアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１５３】
（付記１２）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１５４】
（付記１３）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号２、３又は４のうちの１つではない、
ことを特徴とする付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【０１５５】
（付記１４）
付記１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチドを含む医薬組成物。
【０１５６】
（付記１５）
治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することと、
前記対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことと、
を含む癌の治療方法。
【０１５７】
（付記１６）
癌の治療を必要とする対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことにより、前記対象における癌を治療するための治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物の使用。
【０１５８】
（付記１７）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法又は付記１６に記載の使用。
【０１５９】
（付記１８）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの休薬期間が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法又は付記１６に記載の使用。
【０１６０】
（付記１９）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法又は付記１６に記載の使用。
【０１６１】
（付記２０）
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法又は付記１６に記載の使用。
【０１６２】
（付記２１）
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法又は付記１６に記載の使用。
【０１６３】
（付記２２）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法又は付記１６に記載の使用。
【０１６４】
（付記２３）
治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物を、それを必要とする癌を有する対象に投与することと、
前記対象において癌の退縮を起こすことと、
を含む前記対象における腫瘍負荷を低減させる方法。
【０１６５】
（付記２４）
癌の治療を必要とする癌を有する対象において癌の退縮を起こすことにより、前記対象における腫瘍負荷を低減させるための治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物の使用。
【０１６６】
（付記２５）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする付記２３に記載の方法又は付記２４に記載の使用。
【０１６７】
（付記２６）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの休薬期間が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記２３に記載の方法又は付記２４に記載の使用。
【０１６８】
（付記２７）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、１つの定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く１つの定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記２３に記載の方法又は付記２４に記載の使用。
【０１６９】
（付記２８）
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする付記２３に記載の方法又は付記２４に記載の使用。
【０１７０】
（付記２９）
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする付記２３に記載の方法又は付記２４に記載の使用。
【０１７１】
（付記３０）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする付記２３に記載の方法又は付記２４に記載の使用。
【０１７２】
（付記３１）
治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物を、癌を有する対象に投与することを含み、
前記投与が、前記対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
ことを特徴とする前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害する方法。
【０１７３】
（付記３２）
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害するための治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物の使用。
【０１７４】
（付記３３）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有するアミノ酸を有する、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１７５】
（付記３４）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を少なくとも５％含む、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１７６】
（付記３５）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から２０％含む、
ことを特徴とする付記３４に記載の方法。
【０１７７】
（付記３６）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１５％含む、
ことを特徴とする付記３４に記載の方法。
【０１７８】
（付記３７）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１０％含む、
ことを特徴とする付記３４に記載の方法。
【０１７９】
（付記３８）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１８０】
（付記３９）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、休薬期間が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１８１】
（付記４０）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１８２】
（付記４１）
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１８３】
（付記４２）
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法又は付記３２に記載の使用。
【０１８４】
（付記４３）
治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物を、癌を有する対象に投与することを含み、
前記投与が、前記対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
ことを特徴とする前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療する方法。
【０１８５】
（付記４４）
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療するための治療上有効な量の付記１乃至１３のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は付記１４に記載の医薬組成物の使用。
【０１８６】
（付記４５）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【０１８７】
（付記４６）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を少なくとも５％含む、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【０１８８】
（付記４７）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から２０％含む、
ことを特徴とする付記４６に記載の方法。
【０１８９】
（付記４８）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１５％含む、
ことを特徴とする付記４６に記載の方法。
【０１９０】
（付記４９）
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１０％含む、
ことを特徴とする付記４６に記載の方法。
【０１９１】
（付記５０）
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【０１９２】
（付記５１）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、休薬期間が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【０１９３】
（付記５２）
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【０１９４】
（付記５３）
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【０１９５】
（付記５４）
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする付記４３に記載の方法又は付記４４に記載の使用。
【図１】
2016533352.tif 000014
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成28年8月1日(2016.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）配列番号９６−１１３のうちの１つのアミノ酸配列に対して、８５％超の配列同一性を有する、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）又はサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）転写トランスアクチベーター（Ｔａｔ）タンパク質由来の転写因子（ＴＦ）領域配列、
（ｉｉ）配列番号１２４−１３２のうちの１つのアミノ酸配列に対して、８５％超の配列同一性を有する、ＨＩＶ、ＳＩＶ又はデフェンシン由来のシステインリッチ領域配列、及び、
（ｉｉｉ）配列番号１３３−１５０のうちの１つのアミノ酸配列に対して、８５％超の配列同一性を有する、ＨＩＶ又はＳＩＶ  Ｔａｔタンパク質由来のＣ−末端領域配列、
を示される順序で含むアミノ酸配列を有するＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項２】
ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２  Ｔａｔ由来のアルギニンリッチ領域をさらに含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＴＦ領域におけるアミノ酸の少なくとも１つは、欠損又はアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、リジン、グルタミン、アルギニン、セリン若しくはトレオニンで置換されている、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項４】
置換されたアミノ酸の少なくとも１つは、プロリンである、
ことを特徴とする請求項３に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項５】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号５−９５のうちの１つに対して、８５％超の配列同一性を有する、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項６】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、配列番号２、３又は４のうちの１つではない、
ことを特徴とする請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド。
【請求項７】
請求項１に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項８】
癌の治療を必要とする対象において癌の増殖の停止又は癌の退縮を起こすことにより、前記対象における癌を治療するための治療上有効な量の請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
癌の治療を必要とする癌を有する対象において癌の退縮を起こすことにより、前記対象における腫瘍負荷を低減させるための治療上有効な量の請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１０】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
前記対象における抗腫瘍免疫反応の抑制を阻害するための治療上有効な量の請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１１】
Ｔａｔ誘導体ポリペプチドの投与が、癌を有する対象における癌の増殖の低減若しくは阻害又は癌の退縮をもたらす、
前記対象におけるＰＤ−Ｌ１発現腫瘍を治療するための治療上有効な量の請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＴａｔ誘導体ポリペプチド又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１２】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を少なくとも５％含む、
ことを特徴とする請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から２０％含む、
ことを特徴とする請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１５％含む、
ことを特徴とする請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記対象由来の少なくとも１つの前処理腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１発現細胞を５％から１０％含む、
ことを特徴とする請求項１２に記載の使用。
【請求項１６】
前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドは、複数回投与される、
ことを特徴とする請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、休薬期間が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
前記投与ステップは、反復投与サイクルを含み、各サイクルは、定められた期間中の治療薬の単回投与又は複数回投与が後に続く定められた期間中に、前記Ｔａｔ誘導体ポリペプチドを複数回投与することを含み、前記サイクルは複数回繰り返される、
ことを特徴とする請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記治療薬は、シクロホスファミドである、
ことを特徴とする請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記癌は、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、口腔癌、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮癌、膵臓癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症又はウィルムス腫瘍である、
ことを特徴とする請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の使用。
【国際調査報告】
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