(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）［式中、Ｒ１は、低級アルキル、又はハロゲンで置換されている低級アルキルであり；Ｒ２、Ｒ３は、水素又はトリチウムである］で示される化合物に、又は薬学的に許容しうる酸付加塩に関する。本化合物は、タウ凝集体、及び他のもののほかにβアミロイド凝集体又はαシヌクレイン凝集体を含む関連βシート凝集体に結合し、そしてそれを画像化するために使用され得る。
2016533334.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化２６】
2016533334.tif 000029
［式中、
Ｒ１は、低級アルキル、又はハロゲンで置換されている低級アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３は、水素又はトリチウムである］で示される化合物又は薬学的に許容しうる酸付加塩。
【請求項２】
Ｒ１が、低級アルキルであり、そしてＲ２及びＲ３が、請求項１に記載されたとおりである、請求項１記載の式Ｉの化合物。
【請求項３】
化合物が、
２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
である、請求項１又は２記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、ハロゲンで置換されている低級アルキルであり、そしてＲ２及びＲ３が、請求項１に記載されたとおりである、請求項１記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
化合物が、
２−（４−（フルオロメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
２−［４−（３−フルオロプロポキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
である、請求項１又は４記載の式Ｉの化合物。
【請求項６】
Ｒ２及びＲ３が、トリチウムであり、そしてＲ１が、請求項１に記載されたとおりである、請求項１記載の式Ｉの化合物。
【請求項７】
化合物が、
［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
である、請求項１又は６記載の式Ｉの化合物。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか一項に定義されたとおりの式Ｉの化合物の製造のための方法であって、
ａ）式２（Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ）：
【化２７】
2016533334.tif 000030
で示される化合物をＮＨ４ＯＨでアミノ化して、式Ｉ：
【化２８】
2016533334.tif 000031
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換すること、又は
ｂ）式４：
【化２９】
2016533334.tif 000032
で示される化合物を式３（Ｘは脱離基である）：
【化３０】
2016533334.tif 000033
で示される対応するα活性ケトンとカップリングさせて、式Ｉ：
【化３１】
2016533334.tif 000034
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換すること、又は
ｃ）式５：
【化３２】
2016533334.tif 000035
で示される化合物を適切なアルキル化剤Ｒ１−Ｘ（Ｘはハロゲン又はスルホナートである）と反応させて、式Ｉ：
【化３３】
2016533334.tif 000036
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換すること、及び
ｄ）イリジウム、ルテニウム、ロジウム又はパラジウム含有錯体より選択される触媒の存在下、ジクロロメタン、クロロベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はそれらの混合物より選択される適切な溶媒中、周囲温度又は昇温で、式Ｉ：
【化３４】
2016533334.tif 000037
［式中、Ｒ２及びＲ３は水素である］で示される化合物をトリチウムガスと反応させて、式Ｉ：
【化３５】
2016533334.tif 000038
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３はトリチウムである］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換することを含む、方法。
【請求項９】
タウ凝集体、βアミロイド凝集体又はαシヌクレイン凝集体に結合し、そしてそれを画像化することに使用するための、請求項１〜７のいずれか一項記載の式Ｉの化合物。
【請求項１０】
アルツハイマー患者におけるタウ凝集体に結合し、そしてそれを画像化することに使用するための、請求項１〜７のいずれか一項記載の式Ｉの化合物。
【請求項１１】
タウ結合研究において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項記載の式Ｉの化合物。
【請求項１２】
哺乳動物の脳内のタウ凝集体の画像診断において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項記載の式Ｉの化合物。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項記載の式Ｉの化合物及び薬学的に許容しうる担体を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
・哺乳動物に、検出可能量の請求項１３記載の組成物を導入すること；
・式Ｉの化合物がタウ凝集体沈着物と結合するのに十分な時間を与えること、及び
・１つ以上のタウ凝集体沈着物と結合する該化合物を検出すること
を含む、タウ凝集体沈着物を画像化する方法。
【請求項１５】
哺乳動物の脳内のタウ凝集体沈着物の画像診断のための、請求項１〜７のいずれか一項に定義されたとおりの化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式：
【化１】
2016533334.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、低級アルキル、又はハロゲンで置換されている低級アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３は、水素又はトリチウムである］で示される化合物に、又は薬学的に許容しうる酸付加塩に関する。
【０００２】
同様の化合物は、例えば、中枢神経系疾患の処置のためのホスホジエステラーゼ１０Ａ（ＰＤＥ１０Ａ）のモジュレーターとして国際公開公報第２０１１／１１７２６４号に、そして脂肪酸アミド加水分解酵素のモジュレーターとして国際公開公報第２０１０／０６８４５３号及び国際公開公報第２０１０／０６８４５２号に記載されている。
２−アリール−３−（ヘテロアリール）−イミダゾ（１，２−ａ）ピリミジンが、炎症性サイトカインの減少によって軽減される状態の処置のために、国際公開公報第０１３４６０５号に記載されている。
【０００３】
本化合物は、タウ凝集体、及び他のもののほかにβアミロイド凝集体又はαシヌクレイン凝集体を含む関連βシート凝集体に結合し、そしてそれを画像化するために、特に、アルツハイマー患者におけるタウ凝集体に結合し、そしてそれを画像化することにおいて使用するために、使用され得るということが示された。
【０００４】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知低下、回復不能な記憶喪失、失見当識及び言語機能障害によって特徴付けられる進行性神経変性障害である（Arch. Neurol. 1985, 42(11), 1097-1105）。ＡＤ脳切片の死後検査が、βアミロイド（Ａβ）ペプチドから構成される大量の老人斑（ＳＰ）、及び過剰リン酸化したタウタンパク質の線維によって形成される多数の神経原線維変化（ＮＦＴ）を明らかにする。
【０００５】
タウは、微小管結合タンパク質のファミリーに属し、そして主にニューロンにおいて発現され、そこでタウは、軸索輸送のための通路としてのニューロンの微小管ネットワークを構成するための、チューブリン単量体の微小管への集成において、重要な役割を担う（Brain Res. Rev. 2000, 33(1), 95-130）。タウは、１７番染色体上に位置する単一遺伝子から翻訳され、そして発現は、ヒト成人脳において異なる６個のアイソフォーム（それらの結合ドメインの数によって区別することができる）を産生する選択的スプライシング機構によって発生的に調節される。タウ過剰リン酸化、誤った折り畳み及び凝集をもたらす根底にある機構は、十分理解されていないが、タウ凝集体の堆積は、細胞内レベルならびに脳局所解剖学のレベルの両方で型通りの時間空間的経路をたどる。
【０００６】
１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）をもたらすタウ遺伝子突然変異の最近の発見が、神経変性障害の病理発生における、タウが原因である支配的な役割を裏付け、そして異なるニューロン集団において発現される別個のセットのタウアイソフォームは異なる病理をもたらし得るという事実を明確に示した（Biochim. Biophys. Acta 2005, 1739(2) 240-250）。病的タウ蓄積によって特徴付けられる神経変性疾患は、「タウオパシー」と称される（Ann. Rev. Neurosci. 2001, 24, 1121-1159）。ＡＤ及びＦＴＤに加えて、他のタウオパシーは、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、神経原線維変化優位型認知症（tangle-predominant dementia）、ピック病、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ダウン症候群等を含む。
【０００７】
新皮質領域の進行性関与と認知症の増大する重症度との間の直接的な相関関係が確立されており、ＮＦＴなどの病的タウ凝集体が神経変性プロセスの確かなマーカーであることを示唆している。ＡＤにおけるＮＦＴ関与の程度は、Ｂｒａａｋステージによって定義される（Acta Neuropathol. 1991, 82, 239-259）。ＢｒａａｋステージＩ及びＩＩは、ＮＦＴ関与が脳の経嗅内領域（transentorhinal region）に主に限定される場合に定義され、ステージＩＩＩ及びＩＶは、海馬などの辺縁領域が関与されている場合に診断され、そしてステージＶ及びＶＩは、広範囲の新皮質関与が見出された場合に診断される。
【０００８】
現在、タウ凝集体の検出は、生検又は剖検材料の組織学的解析によってのみ可能である。タウ病理のインビボ画像化は、ヒト脳内でのタウ凝集体の堆積への新規な洞察を提供し、そしてタウ病理の程度を非侵襲的に検査し、タウ堆積における経時的な変化を定量化し、その認知との相関関係を評価し、かつ抗タウ療法の有効性を分析することができるであろう。生体脳においてタウ凝集体を検出するための潜在的なリガンドは、血液脳関門を通過し、かつタウ凝集体に対する高い親和性及び特異性を有しなければならない。この目的を達成するために、成功するニューロイメージング放射性トレーサーは、適切な親油性（logD １〜３）及び低分子量（＜４５０）を有しなければならず、血液からの迅速な排除及び低い非特異的結合を示す。
【０００９】
本出願の目的は、アルツハイマー病を発症する可能性があろう、脳内に過剰のタウ凝集体を有する潜在的な患者を特定することによって診断を改善するであろう画像化ツールを見出すことである。疾患の進行を監視することも有用であろう。抗タウ凝集体薬物が利用可能になると、脳内のタウのもつれを画像化することは、処置を監視するための本質的なツールを提供し得る。
【００１０】
本発明のさらなる目的は、
−検出可能量の組成物を哺乳動物に導入すること
−式Ｉの化合物がタウ凝集体沈着物と結合するのに十分な時間を与えること、及び
−１つ以上のタウ凝集体沈着物と結合された化合物を検出すること
を含む、タウ凝集体沈着物を画像化する方法である。
【００１１】
本発明のさらなる目的は、式Ｉの化合物及び薬学的に許容しうる担体を含有する医薬組成物であり、それは、潜在的な患者を特定するために使用され得る。
【００１２】
本記載に使用される一般用語の以下の定義は、問題の用語が単独で出現するか組合せで出現するかに関わりなく適用される。
【００１３】
本明細書で使用されるように、用語「低級アルキル」は、１〜７個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の炭素鎖を含む、飽和、すなわち、脂肪族炭化水素基を示す。「アルキル」の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル及びイソプロピルである。
【００１４】
用語「ハロゲン」は、塩素、臭素、フッ素又はヨウ素を示す。
【００１５】
用語「ハロゲンで置換されている低級アルキル」は、少なくとも１個の水素原子がハロゲン原子によって置き換えられている、先に定義されたとおりのアルキル基を示す。
【００１６】
３Ｈは、トリチウム原子を示す。
【００１７】
用語「脱離基」は、ハロゲン又はスルホナートを示す。スルホナートの例は、トシラート、メシラート、トリフラート、ノシラート又はブロシラートである。
【００１８】
用語「薬学的に許容しうる塩」又は「薬学的に許容しうる酸付加塩」は、無機及び有機酸、例えば、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との塩を包含する。
【００１９】
式Ｉの化合物は、タウ凝集体、及び他のもののほかにβアミロイド凝集体又はαシヌクレイン凝集体を含む関連βシート凝集体に結合し、そしてそれを画像化するために使用され得ることが見出された。
【００２０】
本発明の一実施態様は、Ｒ１が低級アルキルである、式Ｉの化合物、例えば、以下の化合物：
２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
である。
【００２１】
本発明の一実施態様は、さらに、Ｒ１がハロゲンで置換されている低級アルキルである、式Ｉの化合物、例えば、以下の化合物：
２−（４−（フルオロメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
２−［４−（３−フルオロプロポキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
である。
【００２２】
本発明の一実施態様は、さらに、Ｒ２及びＲ３がトリチウムである、式Ｉの化合物、例えば、以下の化合物：
［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
である。
【００２３】
式Ｉの化合物は、タウ凝集体、βアミロイド凝集体、αシヌクレイン凝集体又はハンチンチン凝集体に結合し、そしてそれを画像化することにおいて使用されてもよい。
【００２４】
式Ｉの化合物の好ましい使用は、アルツハイマー患者におけるタウ凝集体に結合し、そしてそれを画像化することにおける使用である。
【００２５】
さらに、式Ｉの化合物は、タウ結合研究において使用されてもよい。
【００２６】
式Ｉの化合物は、哺乳動物の脳内のタウ凝集体の画像診断に適している。
【００２７】
本発明はまた、哺乳動物の脳内のタウ凝集体沈着物の画像診断のために使用される。
【００２８】
式Ｉ：
【化２】
2016533334.tif 000004
で示される本化合物、及びそれらの薬学的に許容しうる塩は、以下に記載される方法によって調製されることができ、その方法は、
ａ）式２（Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ）：
【化３】
2016533334.tif 000005
で示される化合物をＮＨ４ＯＨでアミノ化して、式Ｉ：
【化４】
2016533334.tif 000006
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換すること、又は
ｂ）式４：
【化５】
2016533334.tif 000007
で示される化合物を式３（Ｘは脱離基、例えば、Ｂｒである）：
【化６】
2016533334.tif 000008
で示される対応するα活性ケトンとカップリングさせて、式Ｉ：
【化７】
2016533334.tif 000009
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換すること、又は
ｃ）式５：
【化８】
2016533334.tif 000010
で示される化合物を適切なアルキル化剤Ｒ１−Ｘ（Ｘはハロゲン又はスルホナートである）と反応させて、式Ｉ：
【化９】
2016533334.tif 000011
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換すること、及び
ｄ）触媒、例えば、イリジウム、ルテニウム、ロジウム又はパラジウム含有錯体の存在下、適切な溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はそれらの混合物）中、周囲温度又は昇温で、式Ｉ：
【化１０】
2016533334.tif 000012
［式中、Ｒ２及びＲ３は水素である］で示される化合物をトリチウムガスと反応させて、式Ｉ：
【化１１】
2016533334.tif 000013
［式中、Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３はトリチウムである］で示される化合物を与え、そして所望により、得られた化合物を薬学的に許容しうる酸付加塩に変換することを、含む。
【００２９】
以下のスキーム１〜３は、式Ｉの化合物の調製のための方法をより詳細に説明する。
【００３０】
本発明の式Ｉの化合物の調製は、逐次又は収束合成経路で実施されてもよい。本反応及び得られた生成物の精製を実施するために必要とされる技能は、当業者に公知である。以下の方法の記載において使用される置換基及び指数は、特に断りない限り、本明細書において上記で与えられた意味を有する。
【００３１】
より詳細には、式Ｉの化合物は、以下で与えられる方法によるか、実施例に与えられる方法によるか、又は類似の方法によって、製造され得る。個々の反応工程のための適切な反応条件は、当業者に公知である。反応シーケンスは、スキーム１〜３に表示されたものに限定されず、出発物質及びそれらそれぞれの反応性に依存して、反応工程のシーケンスは、自由に変更され得る。出発物質は、市販されているか、あるいは以下で与えられる方法と類似の方法によるか、本記載もしくは実施例で引用される参考文献に記載されている方法によるか又は当技術分野において公知の方法によって調製され得るかのいずれかである。
【００３２】
【化１２】
2016533334.tif 000014
スキーム１に従って、イミダゾピリジンＩの誘導体［式中、置換基Ｒ１は先に定義されたとおりであり、そしてＲ２及びＲ３は水素である］を、適切な触媒（例えば、酸化銅（Ｉ））の存在下、適切な溶媒（例えば、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン）中、昇温又は周囲温度での、式２の化合物の適切なアンモニア試薬（例えば、水酸化アンモニウム）でのアミノ化反応を介して調製する。
【００３３】
【化１３】
2016533334.tif 000015
スキーム２に従って、活性ケトン３［式中、置換基Ｒ１は先に定義されたとおりであり、Ｒ２及びＲ３は水素であり、そしてＸはハロゲンである］を、油浴内又はマイクロ波反応器内、適切な溶媒（例えば、アセトン又はエタノール）中、昇温で、アミノ−ピリジン４と反応させて、化合物Ｉの誘導体を与える。
【００３４】
【化１４】
2016533334.tif 000016
スキーム３に従って、イミダゾピリジンＩのさらなる誘導体［式中、置換基Ｒ１は先に定義されたとおりである］を、適切な塩基（例えば、炭酸セシウム又は水素化ナトリウム）の存在下、適切な溶媒（例えば、ＤＭＦ）中、周囲温度又は昇温で、適切なアルキル化試薬Ｒ１−Ｘ（例えば、臭化１−フルオロエチルのようなハロゲン化アルキル、又はトシル酸フルオロメチルのようなトシル酸アルキル）を使用するフェノール５のアルキル化によって合成する。
【００３５】
化合物の単離及び精製
本明細書に記載される化合物及び中間体の単離及び精製は、所望により、任意の適切な分離又は精製方法、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、厚層クロマトグラフィー、分取低圧又は高圧液体クロマトグラフィー、又はこれらの手順の組み合わせなどにより、達成され得る。適切な分離及び単離手順の具体的な例示は、本明細書において以下の調製例及び実施例を参照することによって見出され得る。しかしながら、他の同等の分離又は単離手順も当然、使用され得る。
【００３６】
式Ｉの化合物の塩
式Ｉの化合物は塩基性であり、そして対応する酸付加塩に変換されてもよい。この変換は、少なくとも化学量論量の適切な無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等、又は有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等での処理によって達成される。典型的には、遊離塩基を、不活性有機溶媒、例えばジエチルエーテル、酢酸エチル、クロロホルム、エタノール又はメタノール等に溶解し、そして酸を同様の溶媒に加える。温度を、０℃〜５０℃の間に維持する。得られた塩は自然に沈殿するか、又はより極性の小さい溶媒の添加によって沈殿されてもよい。
【００３７】
式Ｉの塩基性化合物の酸付加塩は、少なくとも化学量論当量の適切な塩基、例えば水酸化ナトリウム又はカリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニア等での処理によって、対応する遊離塩基に変換されてもよい。
【００３８】
本化合物を本明細書において以下で与えられる試験に従って調査した。
【００３９】
タウ放射性リガンド・インビトロ置換アッセイ
このインビトロ結合アッセイは、天然のタウ凝集体に対する化合物の親和性を評価するものである。本化合物を、十分に確立されたタウ特異的放射性リガンド［３Ｈ］Ｔ８０８と一緒に共インキュベートし、そして［３Ｈ］Ｔ８０８結合の化合物の置換潜在力を、ヒトのアルツハイマー病（ＡＤ）脳切片を使用して、インビトロオートラジオグラフィーによって決定する（図３を参照のこと）。
【００４０】
材料
ＡＤヒト脳を、Banner Sun Health Research Institute（米国アリゾナ州サンシティ）から購入する。ＡＤの病理診断を、神経病理学的データに基づき、標準のNIAレーガン研究所基準（NIA-Reagan Institute criteria）に従って行う。放射性リガンド［３Ｈ］Ｔ８０８を社内で合成した（［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロ−エチル）−ピペリジン−１−イル］−ベンゾ［４，５］イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン、放射化学的純度９９．０％）。参照用に、非放射性Ｔ８０８を使用する（２−［４−（２−フルオロ−エチル）−ピペリジン−１−イル］−ベンゾ［４，５］イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン）。オートラジオグラフィーのために、富士フイルムイメージングプレート（BAS-IP TR 2025）を切片に対して露出し、そして富士フイルムＩＰリーダーで読み取る（BAS-5000）。
【００４１】
方法
１０μm厚のヒトＡＤ脳切片を、−１７℃チャンバー温度、及び−１５℃物体温度で、クリオスタット（Leica CM3050）を用いて作成する。切片を、Histobond＋顕微鏡スライド（Marienfeld Laboratory Glasware）に移す。室温で３時間乾燥した後、切片を−２０℃で保存する。切片を、５０mM トリス緩衝液、ｐＨ７．４中の放射性リガンド（１０nM）及びそれぞれの非放射性化合物（種々の濃度で）と共に、室温で３０分間インキュベートする。４℃で１０分間、５０mM トリス緩衝液、ｐＨ７．４で３回洗浄し、そして４℃の蒸留Ｈ２Ｏ中に３回素早く浸漬した後、切片を、４℃で３時間乾燥させる。切片を、富士フイルムカセット（BAS 2025）内に置き、５日間イメージングプレートに露出して、そしてその後、１ピクセル当たり２５μMの解像度でスキャンする。
【００４２】
データ分析
オートラジオグラムの対象領域（ＲＯＩ）におけるシグナル強度（Dens−PSL／mm2）を、ソフトウェアＭＣＩＤ分析（７．０バージョン、ImagingResearch Inc.）で定量化する。化合物の非存在下又は存在下での［３Ｈ］Ｔ８０８結合の特異結合（ＳＢ）を、白質における非特異結合シグナルを引くことによって計算し、こうしてＳＢ［３Ｈ］Ｔ８０８のみ及びＳＢ化合物を得る。種々の化合物による置換％を以下のようにして計算する：
置換％＝１００−（ＳＢ化合物／ＳＢ［３Ｈ］Ｔ８０８のみ）×１００。
【００４３】
検証データ
各実験において、非放射性Ｔ８０８を陽性内部対照として使用する。等モル量の放射性及び非放射性Ｔ８０８の共インキュベーションは、特異結合を約５０％減少させることが予想される。
【００４４】
参考文献
A.K. Szardenings et al. ‘Imaging agents for detecting neurological disorders’. US Patent Application US20110182812
W. Zhang et al., ‘A highly selective and specific PET tracer for imaging of tau pathologies’. Journal of Alzheimer’s Disease 31 (2012) 601-612。
【００４５】
【表１】
2016533334.tif 000017
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】Ｂｒａａｋ Ｖにステージ分類されたＡＤ患者から得られたヒト脳皮質切片と共にインキュベートされた［［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン（実施例５）のオートラジオグラムを表した図である。
【図２】Ｂｒａａｋ Ｖにステージ分類されたＡＤ患者から得られたヒト脳皮質切片と共にインキュベートされた［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン（実施例６）のオートラジオグラムを表した図である。
【図３】本化合物を、十分に確立されたタウ特異的放射性リガンド［３Ｈ］Ｔ８０８と一緒に共インキュベートし、そして［３Ｈ］Ｔ８０８結合の化合物の置換潜在力を、ヒトのアルツハイマー病（ＡＤ）脳切片を使用して、インビトロオートラジオグラフィーによって決定した図である。
【００４７】
図１及び２はそれぞれ、Ｂｒａａｋ Ｖにステージ分類されたＡＤ患者から得られたヒト脳皮質切片と共にインキュベートされた［［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン（実施例５）及び［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン（実施例６）のオートラジオグラムを表す。放射性リガンド濃度はそれぞれ、２．６及び２．５nMであった。両方の放射性リガンドは、層状の分布パターンでタウ凝集体の点状の染色、及び白質における種々の程度の非特異結合を示す。
【００４８】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容しうる塩は、医薬製剤の形態で使用され得る。医薬製剤は、注射液剤の形態で投与され得る。
【００４９】
式Ｉの化合物及びそれらの薬学的に許容しうる塩は、医薬製剤の製造ため、薬学的に不活性な無機又は有機の担体と共に加工され得る。液剤及びシロップ剤の製造のために適切な担体は、例えば、水、ポリオール類、ショ糖、転化糖、グルコース等である。アルコール類、ポリオール類、グリセリン、植物油等などの佐剤は、式Ｉの化合物の水溶性塩の水性注射液剤のために使用され得るが、原則として必要ではない。坐剤のために適切な担体は、例えば、天然又は硬化油、ロウ、脂肪、半液体又は液体のポリオール類等である。
【００５０】
加えて、医薬製剤は、保存料、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、香味料、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、マスキング剤又は酸化防止剤を含有することができる。これらはまた、さらに他の治療上有益な物質も含有することができる。
【００５１】
投与量は、広い範囲内で変えることができ、そして当然ながら各特定の症例における個々の要求に適合されるであろう。
【００５２】
実施例
使用される略号：
h    −    時間
min    −    分
【００５３】
実施例１
２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化１５】
2016533334.tif 000018
マイクロ波バイアルに、ピリジン−２，４−ジアミン（４００mg、３．６７mmol）、２−ブロモ−１−（４−メトキシフェニル）エタノン（８８２mg、３．８５mmol）、重炭酸ナトリウム（３２９mg、３．９２mmol）及びメタノール（３．５mL）を入れた。反応混合物を、還流下で４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷やし、水及び酢酸エチルで希釈し、超音波処理し、そして室温で約１５分間撹拌した。懸濁液を濾過し、水及び酢酸エチルですすいだ。得られた淡黄色の固体を高真空下に置いて、２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン臭化水素酸塩を与えた。それを飽和ＮａＨＣＯ３水溶液 約５mLに懸濁し、超音波処理し、濾過し、そして水ですすいだ。残留物を、２M ＮａＯＨ水溶液 約５mLに懸濁し、超音波処理し、濾過し、そして水ですすいだ。得られた残留物を高真空下に置いて、標記化合物を明褐色の固体として与えた（３１０mg、１．３mmol、３５％収率）。MS m/z: 240.1 [M+H]+.
【００５４】
実施例２
２−（４−（フルオロメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化１６】
2016533334.tif 000019
【００５５】
ａ）７−ブロモ−２−（４−（ヒドロキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン
【化１７】
2016533334.tif 000020
実施例１と同様にして、ピリジン−２，４−ジアミンの代わりに４−ブロモピリジン−２−アミンを、そしてブロモ−１−（４−メトキシフェニル）エタノンの代わりに２−ブロモ−１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノンを、標記化合物（２．３４ｇ、８０％）に変換し、それを灰色の固体として得た。MS m/z: 289.3 [M]+.
【００５６】
ｂ）７−ブロモ−２−（４−（フルオロメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン
【化１８】
2016533334.tif 000021
ＤＭＦ（１０．００mL）中の４−（７−ブロモイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル）フェノール（２．３７ｇ、６．５６mmol）及び４−メチルベンゼンスルホン酸フルオロメチル（１．３４ｇ、６．５６mmol）の溶液に、炭酸セシウム（２．７８ｇ、８．５２mmol）を加え、そして７０℃に１８時間加熱し、そして次にマイクロ波中、１００℃で３０分間照射した。それを水に注ぎ、そしてジクロロメタンで２回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。得られた油状物にトルエン（約２００mL）を加え、そして溶媒を蒸発させて、残ったＤＭＦを除去した。いくらかの１N ＮａＯＨ水溶液を加え、そして撹拌を１５分間続けた。それを濾過し、そして高真空下で乾燥させて、標記化合物（１．６９ｇ、純度 約６０％）を明褐色の油状物として与え、それをさらに精製することなく使用した。MS m/z: 321.3 [M+H]+.
【００５７】
ｃ）２−（４−（フルオロメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化１９】
2016533334.tif 000022
Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（２mL）中の７−ブロモ−２−（４−（フルオロメトキシ）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（１１２mg、３４９μmol）の溶液に、酸化銅（Ｉ）（９．９８mg、６９．８μmol）及び水酸化アンモニウム（７３３mg、５．２３mmol）を加えた。次に、そのバイアルを密封し、そして反応混合物を、１１０℃で３時間撹拌した。それをジクロロメタン（１５mL）で希釈し、そして水（１５mL）で２回洗浄した。水層をジクロロメタン（１５mL）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。ジクロロメタン：ジクロロメタン：メタノール：アンモニア（９０：９：１ vol.％）  勾配８５：１５〜５０：５０を使用したフラッシュクロマトグラフィーが、標記化合物（１７mg、１９％収率）を明褐色の固体として与えた。MS m/z: 258.6 [M+H]+.
【００５８】
実施例３
２−［４−（３−フルオロプロポキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化２０】
2016533334.tif 000023
【００５９】
ａ）４−（７−アミノイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル）フェノール臭化水素酸塩
【化２１】
2016533334.tif 000024
５mL容量のマイクロ波バイアル内で、ピリジン−２，４−ジアミン（５００mg、４．５８mmol）及び２−ブロモ−１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノン（１．０３ｇ、４．８１mmol）を、アセトン（８．０mL）と共に合わせて、オフホワイトの懸濁液を与えた。バイアルをアルゴンでフラッシュし、そして密封した。反応混合物を、６５℃（油浴温度）で一晩攪拌した。オフホワイトの懸濁液を濾過し、そしてアセトンで洗浄した。得られたオフホワイトの固体は、高真空下で一晩乾燥させて、標記化合物（３６３mg、１８％収率）をオフホワイトの固体として与えた。MS m/z: 226.1 [M+H]+.
【００６０】
ｂ）２−［４−（３−フルオロプロポキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化２２】
2016533334.tif 000025
５mL容量のマイクロ波バイアル内で、４−（７−アミノイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル）フェノール臭化水素酸塩（１５０mg、３４３μmol）を、ＤＭＦ（２．５mL）と共に合わせて、無色の溶液を与えた。炭酸セシウム（３３５mg、１．０３mmol）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した（ガス発生が観察された；反応混合物は暗褐色の懸濁液に変化した）。ＤＭＦ（０．５mL）に溶解した１−ブロモ−３−フルオロプロパン（４８．４mg、３４３μmol）を加えた。バイアルをアルゴンでフラッシュし、そして密封した。反応混合物を、９０℃（油浴温度）で一晩攪拌した。反応混合物を周囲温度に冷やし、そしてジクロロメタン及び水で抽出した。水層（ｐＨ約９）をジクロロメタンで抽出した。有機層を、水で３回、そしてブラインで１回洗浄した。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物（褐色の油状物）を高真空下で４時間乾燥させた。褐色の固体を、酢酸エチルでトリチュレートして、標記化合物（５３mg、４８％収率）を褐色の固体として与えた。MS m/z: 286.1 [M+H]+.
【００６１】
実施例４
２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化２３】
2016533334.tif 000026
ＤＭＦ（２mL）中の４−（７−アミノイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−イル）フェノール臭化水素酸塩（１５６mg、５１０μmol）の溶液に、窒素の雰囲気下０℃で、水素化ナトリウム６０％（８１．５mg、２．０４mmol）を加えた。周囲温度で３０分間撹拌した後、１−ブロモ−２−フルオロエタン（７１．２mg、５６０μmol）を１分間かけて加えた。次に、反応混合物を、周囲温度で２時間撹拌した。それを水（１５mL）に注ぎ、そして酢酸エチル（１５mL）で２回抽出した。有機層を、水（１５mL）及びブライン（１０mL）で洗浄した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。ジクロロメタン：ジクロロメタン：メタノール：アンモニア（９０：９：１  ｖｏｌ．％）勾配  ８０：２０〜４０：６０を使用したフラッシュクロマトグラフィーが、標記化合物（８０mg、５８％収率）をオフホワイトの固体として与えた。MS m/z: 272.5 [M+H]+.
【００６２】
実施例５
［３Ｈ］−２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化２４】
2016533334.tif 000027
２mL容量のトリチウム化フラスコ内で、２−（４−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン（２．０mg、８．４μmol）及びクラブトリー触媒（１０．１mg、１５．５μmol）を、ジクロロメタン（１．０mL）に溶解した。フラスコを、トリチウムマニフォールド（RC-TRITEC）に取り付け、そして凍結・ポンプ・融解（freeze-pump-thaw）によって脱気した。トリチウムガスを導入し、そしてこの明橙色の溶液を、トリチウムの雰囲気下、１０５０mbarで４時間、激しく撹拌した。溶液を液体窒素によって冷却し、そして反応容器内の過剰なトリチウムガスを、廃棄物トリチウム用のウラントラップに再吸収させた。溶媒を凍結乾燥除去し、そして不安定トリチウムを、エタノール及び水の９：１ 混合物（３×１mL）及びトルエン（２×１mL）を用いた凍結乾燥によって除去した。残った褐色を帯びた油状物を、ジクロロメタン（２５mL）に溶解し、そしてＳＣＸ−３陽イオン交換体に移した。残った触媒を、ジクロロメタン（１５mL）で溶離し、そして廃棄し、生成物を、ＭｅＯＨ中のＮＨ３（１N、２５mL）で溶離し、別個に回収し、そして減圧下で濃縮した。粗生成物を、アセトニトリル、水及びｐＨ９緩衝液を溶離剤として使用した分取ＨＰＬＣ（XBridge C-18 Prep、５μm、１０×２５０mm）によって精製した。ＭＳスペクトロメトリによって測定すると、８３３MBq（２２．５mCi）が標記化合物から得られ、９９％の放射化学的純度及び１．０２TBq／mmol（２７．６Ci／mmol）の比放射能を有した。化合物をエタノール溶液として保存した。 MS m/z: 240.2 [M+H]+ (48 %), 242.2 [M(T)+H]+ (10 %), 244.2 [M(T2)+H]+ (40 %), 246.2 [M(T3)+H]+ (2 %).
【００６３】
実施例６
［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン
【化２５】
2016533334.tif 000028
２mL容量のトリチウム化フラスコ内で、２−［４−（２−フルオロエトキシ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−アミン（２．０mg、７．４μmol）及びクラブトリー触媒（５．９mg、７．４μmol）をＤＭＦ（１．０mL）に溶解した。フラスコを、トリチウムマニフォールド（RC-TRITEC）に取り付け、そして凍結・ポンプ・融解によって脱気した。トリチウムガスを導入し、そしてこの明橙色の溶液を、トリチウムの雰囲気下、５５０mbarで４時間、激しく撹拌した。溶液を液体窒素によって冷却し、そして反応容器内の過剰なトリチウムガスを、廃棄物トリチウム用のウラントラップに再吸収させた。溶媒を凍結乾燥除去し、そして不安定トリチウムを、エタノール及び水の９：１ 混合物（３×１mL）及びトルエン（２×１mL）を用いた凍結乾燥によって除去した。残った褐色を帯びた油状物を、ジクロロメタン（１０mL）に溶解し、そしてＳＣＸ−３陽イオン交換体に移した。残った触媒を、ＭｅＯＨ（５mL）で溶離し、そして廃棄し、生成物を、ＭｅＯＨ中のＮＨ３（３．５N、５mL）及びＭｅＯＨ（３５mL）で溶離し、別個に回収し、そして減圧下で濃縮した。粗生成物を、アセトニトリル、水及びｐＨ７緩衝液を溶離剤として使用した分取ＨＰＬＣ（XBridge C-18 Prep、５μm、１０×２５０mm）によって精製した。ＭＳスペクトロメトリによって測定すると、８３３MBq（２２．５mCi）が標記化合物から得られ、９８％の放射化学的純度及び１．５８TBq／mmol（４２．６Ci／mmol）の比放射能を有した。化合物をメタノール溶液として保存した。MS m/z: 272.2 [M+H]+ (7 %), 274.2 [M(T)+H]+ (39 %), 276.2 [M(T2)+H]+ (54 %).
【図１ａｎｄ２】
2016533334.tif 000039
【図３】
2016533334.tif 000040
【国際調査報告】
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2016533334.tif 000042