(57)【要約】本発明は、Ｏ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）、Ｎ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物、その調製方法、およびそれを含む脱毛防止または育毛用化粧料組成物、並びに脱毛の予防、治療、または育毛用薬学組成物を提供する。【選択図】図１
2016520546.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（化１ａ）
2016520546.tif 000026
（化１ｂ）
2016520546.tif 000027
上記化学式１ａのＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）または化学式１ｂのＮ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物。
【請求項２】
（化１ａ）
2016520546.tif 000028
（化４）
2016520546.tif 000029
（前記化学式４で、Ｒ１は保護基である。）
上記化学式４の化合物をトリフルオロ酢酸または塩酸気体と反応させて脱保護する段階を含むことを特徴とする上記化学式１ａの化合物の調製方法。
【請求項３】
（化３）
2016520546.tif 000030
（前記化学式３で、Ｒ１は保護基である。）
前記化学式４の化合物は、上記化学式３の化合物をＰＯＣｌ３と反応させて調製されることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（化２）
2016520546.tif 000031
前記化学式３の化合物は、上記化学式２のＤ−フィトスフィンゴシンのアミノ基に保護基を導入して調製されることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
（化１ｂ）
2016520546.tif 000032
（化５）
2016520546.tif 000033
（前記化学式５で、Ｒ２は保護基である。）
上記化学式５の化合物をブロモトリメチルシランと反応させた後、水を加えて反応させる段階を含むことを特徴とする、上記化学式１ｂの化合物の調製方法。
【請求項６】
請求項１に記載の化学式１ａまたは１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含むことを特徴とする、脱毛防止または育毛用化粧料組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の化学式１ａまたは１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含むことを特徴とする、脱毛の予防、治療、または育毛用薬学組成物。
【請求項８】
前記組成物は、頭皮または毛髪で覆われた皮膚部位に局所適用するのに適した製剤であることを特徴とする、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、リポソーム、ナノエマルジョン、シャンプー、ヘアーコンディショナー、またはヘアーローションの剤形を持つことを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化学式１ａまたは１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含むことを特徴とする、シワの予防、改善または治療用化粧料組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、シワがあるか、シワになりやすい皮膚部位に局所適用するのに適した製剤であることを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物がリポソームまたはナノエマルジョンの剤形を持つことを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なフィトスフィンゴシン−１−リン酸誘導体、その調製方法、およびそれを含む脱毛の予防、治療、または育毛用組成物に関し、より具体的には脱毛の予防、治療、または育毛に有用な新物質であるフィトスフィンゴシン−１−リン酸誘導体、その調製方法、およびそれを含む脱毛防止または育毛用化粧料組成物、および脱毛の予防、治療、または育毛用薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
スフィンゴ脂質中スフィンゴシン１−リン酸(sphingosine-1-phosphate)はＧタンパク質結合内皮変異遺伝子(endothelialdifferentiation gene,ＥＤＧ）受容体との結合を介して強力な生体反応を起こす生理活性的オートクリン（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）分子であり（非特許文献１）、生体内でスフィンゴシンキナーゼによって生産され、スフィンゴシンリアーゼ（ｌｙａｓｅ）またはスフィンゴシンホスファターゼによって分解される（非特許文献２）。
【０００３】
スフィンゴ脂質の代謝物質、セラミド（ｃｅｒａｍｉｄｅ）とスフィンゴシン−１−リン酸含有量間の動力学的均衡と逆信号過程の調節は、細胞の生死を決める重要な要素である（非特許文献３）。細胞内で増加したセラミドは、癌細胞においてはその増殖を抑制するが、炎症細胞においては炎症反応をさらに悪化させる両面性を示す。近年、新しいスフィンゴ脂質の機能として、セラミドが細胞死滅、細胞増殖抑制のみならず、神経系では神経突起形成に関与することや細胞内輸送にスフィンゴミエリンの構造の重要性が示唆された。すなわち、スフィンゴ脂質の細胞内膜外膜における立体的非対称性および水平構造における不均一性が、分化、増殖および分泌などの多様な細胞機能に関与すると見なすことができ、また、新しいスフィンゴ脂質の機能として、抗癌剤に耐性がある細胞ではグルコシルセラミドが蓄積され、このような耐性細胞は、細胞死滅誘導因子であるセラミドを他の代謝産物であるグリコスフィンゴ脂質に変換して排除させるメカニズムの存在が示唆された（非特許文献４）。従って、スフィンゴ脂質の量の変化が、血液腫瘍や神経系疾患などの病態に関与している可能性が大きい（非特許文献５）。
【０００４】
これにより、スフィンゴシン代謝において重要な中間体であるスフィンゴシン−１−リン酸は多様な生理活性をしめしており、これにより、この物質に関する生成、代謝、作用、そして合成方法に至るまで多くの研究が集中して行われてきた（非特許文献６）。しかし、スフィンゴシン−１−リン酸に匹敵する役割をするフィトスフィンゴシン−１−リン酸に対しては、その研究量も極めて制限的だけでなく、その研究も主に生体内での役割に重点を置いた研究である。この二つの物質、すなわち、スフィンゴシン−１−リン酸とフィトスフィンゴシン−１−リン酸の調製方法は、キナーゼ（ｋｉｎａｓｅ）を利用した酵素的合成法と化学的合成法が知られている。酵素的合成法（非特許文献７、８、９）は、共に最終物質に対する構造の解明が制限的である。Ｄ−スフィンゴシン−１−リン酸の化学的合成法は、比較的多くの研究がなされてきたが、一方のＤ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸の化学的合成法に対する研究は非常に珍しく、三本の論文があるに過ぎない（非特許文献１０、１１、１４）。その中二つの合成方法も、Ｄ−スフィンゴシン−１−リン酸の合成法（非特許文献１２、１３）において既に使われた方法を、スフィンゴシン代わりにフィトスフィンゴシンを出発物質として置き換えて、同じ方法を適用している。
【０００５】
次の反応式１による方法が、Ｄ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸の最初の化学的合成法として発表された（非特許文献１０）。
（反応式１）
【０００６】
2016520546.tif 000003
【０００７】
前記合成法の全過程の最終収率は４３％と報告され、最終物質のＤ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸に対する高性能ＦＡＢ−ＭＳ、１Ｈ−ＮＭＲに対するデータが提供されている。
【０００８】
Ｄ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸の他の効率的な化学的合成法として、下記の反応式２による方法が報告された（非特許文献１４）。
（反応式２）
【０００９】
2016520546.tif 000004
【００１０】
前記方法は、計６つの段階で、全過程の収率は１４．２％と報告され、全ての中間体の分光学的データが記述されているが、最終目的物質であるＤ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸に対する具体的な分光学的データは報告されていない。
【００１１】
従って、Ｄ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸は、前記合成法によると、収率が４３％以下と非常に低くて、その合成において効率が非常に劣る物質といえる。
【００１２】
さらに、フィトスフィンゴシン−１−リン酸は、ミノキシジルと同等以上の育毛および発毛効能があることが認められ、フィトスフィンゴシン−１−リン酸誘導体の脱毛の予防、治療または育毛用途に対して特許登録を受けた（特許文献１）。頭皮から毛髪が抜けるような脱毛症の発生原因は多様であり、大きく分けて男性ホルモンの作用、精神的ストレス、頭皮における過酸化脂質の蓄積、薬物の副作用、白血病または結核などの慢性疾患、放射線療法による副作用、栄養欠乏などが挙げられる。また、最近では男性の悩みと知らされてきた脱毛が女性脱毛、若年層の脱毛に対する予防および治療に対する要求が大きくなっている。
【００１３】
現在、毛髪成長および養毛剤として用いられる薬物としては、大きく、頭皮に十分な血液を循環させるための血管拡張剤、男性ホルモンの作用を抑制するための女性ホルモン剤、テストステロンを５−ＤＨＴ（５−ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｅｏｎｅ）に変換させる５α−還元酵素を抑制する男性ホルモン活性抑制剤がある。前記血管拡張剤としては、塩化カルプロニウム、ミノキシジル、および各種植物抽出物などがあり、女性ホルモン剤としては、エストロゲン、エストラジオール、プロゲステロンなどがあり、男性ホルモン活性抑制剤としては、フィナステリド、ペンタデカン酸などがある。
【００１４】
しかし、前記脱毛治療剤は、充分でない効果や副作用などから、より効果的でかつ安全な脱毛治療または育毛のための薬物の開発が必要な実情である。局所用または経口用で投与されるミノキシジルの場合は、頭皮の紅斑、炎症、感染、刺激または疼痛など皮膚に刺激があり、血圧降下の効果があるので、血圧降下剤投与中の患者を含む高血圧患者には慎重な投与を要するなどの問題点がある。また、フィナステリドは、男性ホルモン活性抑制効果によって勃起不全、性欲の減少などの短所がある。
【００１５】
前記フィトスフィンゴシン−１−リン酸誘導体は、新生血管形成を促進する効果によって、脱毛の予防、治療または育毛用途があるのを認められた物質である。また、前記従来の脱毛治療剤が持つ血圧降下または性的機能減少などの副作用を恐れることなく用いることができる。
【００１６】
しかし、上述したとおりフィトスフィンゴシン−１−リン酸は、その合成において収率が劣る物質である。従って、高収率で合成できて前記従来脱毛治療剤が持つ副作用の恐れもない脱毛治療に効果的な物質の開発が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】韓国特許登録第１００３５３２号
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Lee,M.J. et al.,Science, 279,pp1552-1555,1996
【非特許文献２】Pyne,S.and Pyne,N.J.,Biochem.J.,349, pp385-402, 2000
【非特許文献３】Cuvillier,O.et al.,Nature, 381,pp800-803,1996
【非特許文献４】Lavie Y.et al.,J.Biol.Chem.,272, pp1682-1687,1997
【非特許文献５】Okazaki T.etal.,Int.J.Hematolo., 65, p40,1997
【非特許文献６】FASEB J,10:1388-1379
【非特許文献７】Hoppe-Seyler’s Z.Physiol.Chem.,351,635-642,
【非特許文献８】J.Biol.Chem.,273,19437-19442,
【非特許文献９】Biochem.J.,332,525-531
【非特許文献１０】J.of Lipid Research,40,1999,117-125
【非特許文献１１】Bull.Korean Chem.Soc.,2003,24,267-268
【非特許文献１２】J.of Lipid Research,35,1994,2305-2311
【非特許文献１３】Tetrahedron Letters,2000,41,7821-7824
【非特許文献１４】Bull.KoreanChem.Soc.,2003,24,267-268
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
そこで、本発明者等は、前記従来脱毛治療薬物が持つ問題点を解消できる、新しい脱毛治療活性物質の開発のために研究した結果、脱毛治療および育毛に効果がありながらも高収率で合成され得る新しいフィトスフィンゴシン誘導体物質を開発して本発明を完成するようになった。また、前記開発された物質は、脱毛および育毛だけでなくシワ改善にも効果的であることが確認された。
【００２０】
従って、本発明の目的は、脱毛の予防、治療、および育毛に効果的な新しい物質を提供することである。
【００２１】
本発明の他の目的は、前記本発明に係る物質の調製方法を提供することである。
【００２２】
本発明のさらに他の目的は、前記本発明に係る物質を含む脱毛防止または育毛用化粧料組成物を提供することである。
【００２３】
本発明のさらに他の目的は、前記本発明に係る物質を含む脱毛予防、治療、または育毛用薬学組成物を提供することである。
【００２４】
本発明のさらに他の目的は、前記本発明に係る物質を含むシワの予防、改善または治療用化粧料組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
前記目的を達成するために、本発明の一側面は、
下記化学式１ａのＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）または化学式１ｂのＮ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を提供する。
【００２６】
（化１ａ）
2016520546.tif 000005
【００２７】
（化１ｂ）
2016520546.tif 000006
【００２８】
本発明の他の側面は、下記化学式４の化合物をトリフルオロ酢酸または濃塩酸と反応させて脱保護する段階を含む、下記化学式１ａの化合物の調製方法を提供する。
【００２９】
（化１ａ）
2016520546.tif 000007
【００３０】
（化４）
2016520546.tif 000008
【００３１】
前記化学式４において、Ｒ１は保護基である。
【００３２】
本発明のさらに別の側面は、下記化学式５の化合物をブロモトリメチルシランと反応させた後、水を加えて反応させる段階を含む、下記化学式１ｂの化合物の調製方法を提供する。
【００３３】
（化１ｂ）
2016520546.tif 000009
【００３４】
（化５）
2016520546.tif 000010
【００３５】
前記化学式５において、Ｒ２は保護基である。
【００３６】
本発明のさらに別の側面は、前記化学式１ａまたは１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含む脱毛防止または育毛用化粧料組成物を提供する。
【００３７】
本発明のさらに別の側面は、前記化学式１ａまたは１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含む脱毛の予防、治療、または育毛用薬学組成物を提供する。
【００３８】
本発明のさらに別の側面は前記化学式１ａまたは１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含むシワの予防、改善または治療用化粧料組成物を提供する。
【００３９】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００４０】
本発明で用いられる全ての技術用語は、別に定義されない限り、本発明の関連分野で通常の当業者が一般的に理解するものと同様の意味で用いられる。また、本明細書には、好ましい方法や試料が記載されるが、これに類似するか同等なものなども本発明の範疇に含まれる。本明細書に参考文献として記載される全ての刊行物の内容は、本発明にその全体が参考として統合される。
【００４１】
本発明者等は、高収率で合成できて、前記従来の脱毛治療剤が持つ副作用の恐れもなく安全に用いられる脱毛治療に効果的な物質の開発のために研究した結果、従来安全な物質として知られたフィトスフィンゴシン−１−リン酸の新規な誘導体である前記化学式１ａおよび化学式１ｂの化合物を開発するようになった。
【００４２】
従って、本発明は一側面において、下記化学式１ａのＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）または化学式１ｂのＮ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を提供する。
【００４３】
（化１ａ）
2016520546.tif 000011
【００４４】
（化１ｂ）
2016520546.tif 000012
【００４５】
前記薬剤学的に許容可能な塩は、前記化学式１ａまたは１ｂの化合物が、遊離酸と共に塩を形成する酸付加塩として存在し得る。前記化学式１ａまたは１ｂの化合物は、当該技術分野に公知された通常の方法により薬剤学的に許容される酸付加塩を形成することができる。前記遊離酸としては、有機酸または無機酸を使用することができ、前記無機酸としては、塩酸、臭素酸、硫酸、またはリン酸などが使用でき、前記有機酸としては、クエン酸（citric acid）、酢酸、乳酸、酒石酸（tartaric acid）、マレイン酸、フマル酸（fumaric acid）、ギ酸、プロピオン酸（propionic acid）、シュウ酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸、クルコン酸、メタンスルホン酸、グリコール酸、コハク酸、４−トルエンスルホン酸、ガラクツロン酸（galacturonicacid）、エンボン酸、グルタミン酸またはアスパラギン酸などを使うことができる。特に前記化学式１ａの化合物は、塩酸塩の形態で存在し得る。
【００４６】
前記薬剤学的に許容可能な塩は、前記化学式１ａまたは１ｂの化合物の無機塩として存在し得る。前記化学式１ａまたは１ｂの化合物は、当該技術分野に公知された通常の方法によって薬剤学的に許容される無機塩を形成することができる。前記無機塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン、カリウム、ナトリウム、または亜鉛との塩があるが、これに限定されず、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、またはナトリウム塩が好ましい。
【００４７】
また、本発明に係る前記化学式１ａまたは１ｂの化合物は、薬剤学的に許容可能な塩だけでなく、通常の方法によって調製され得るすべての塩、水和物を含む溶媒和物を全て含むことができる。
【００４８】
本発明は、他の側面において、下記化学式４の化合物をトリフルオロ酢酸または塩酸気体と反応させて脱保護する段階を含む、下記化学式１ａの化合物の調製方法を提供する。
【００４９】
（化１ａ）
2016520546.tif 000013
【００５０】
（化４）
2016520546.tif 000014
【００５１】
前記化学式４において、Ｒ１は保護基である。
【００５２】
前記化学式４のＲ１は保護基であり、アミノ基の保護のために通常用いられる任意の保護基であってもよく、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基（ｔ−Ｂｏｃ）、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基またはアリルオキシカルボニル基などがあるが、これらに限定されない。
【００５３】
化学式４の化合物をトリフルオロ酢酸または塩酸気体と反応させて脱保護する反応を行うための溶媒は、前記反応を阻害しない任意の溶媒が使用できて、好ましくはトリフルオロ酢酸との反応時にはメチレンクロリド、ＨＣｌ気体との反応時には酢酸エチルが利用され得る。前記脱保護反応の具体的な反応条件は、保護基の種類および反応物により変わるが、一実施例によると、前記トリフルオロ酢酸との反応時には室温で行うことができ、前記塩酸気体との反応時には、約０℃で冷却させて反応させることができる。
【００５４】
前記化学式４の化合物は、下記化学式３の化合物をＰＯＣｌ３と反応させて調製することができる。
【００５５】
（化３）
2016520546.tif 000015
【００５６】
前記化学式３で、Ｒ１は保護基である。
【００５７】
化学式３の化合物をＰＯＣｌ３と反応させてリン酸化する反応を行うための溶媒は、前記反応を阻害しない任意の溶媒が用いられるが、好ましくはピリジン溶媒を使う。好ましくは、一実施例によると、前記反応のためにまず、ピリジン溶媒中に前記化学式３の化合物を溶解して約−２０℃に冷却した後、ピリジン溶媒中のＰＯＣｌ３溶液を加えることによって反応を行うことができる。反応が完了した後、塩酸のような強酸を利用してｐＨを約２に調節することによって、化学式４のような化合物が形成され得る。得られた化学式４の化合物は、特別な精製過程なく前記化学式１ａの化合物調製に用いられる。
【００５８】
前記化学式３の化合物は、下記化学式２のＤ−フィトスフィンゴシンのアミノ基に保護基を導入することによって調製され得る。
【００５９】
（化２）
2016520546.tif 000016
【００６０】
前記Ｄ−フィトスフィンゴシンのアミノ基に保護基を導入する反応は、当該技術分野に公知された任意の方法により行えるが、例えば非特許文献１４の方法により行える。
【００６１】
前記説明した化学式１ａの化合物の調製方法の一実施例は、下記の反応式３のように示すことができる。
（反応式３）
【００６２】
2016520546.tif 000017
【００６３】
本発明は、さらに別の側面において、下記化学式５の化合物をブロモトリメチルシランと反応させた後、水を加えて反応させる段階を含む、下記化学式１ｂの化合物の調製方法を提供する。
【００６４】
（化１ｂ）
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【００６５】
（化５）
2016520546.tif 000019
【００６６】
前記化学式５において、Ｒ２は保護基である。
【００６７】
前記化学式５のＲ２は保護基であり、アミノ基の保護のために通常用いられる任意の保護基であってもよく、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基（ｔ−Ｂｏｃ）、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基またはアリルオキシカルボニル基などがあるが、これらに限定されない。
【００６８】
化学式５の化合物のブロモトリメチルシランとの反応を行うための溶媒は、前記反応を阻害しない任意の溶媒が用いられ、好ましくはメチレンクロリドが利用され得る。前記脱保護反応の具体的な反応条件は、前記保護基の種類によって変わるが、一実施例によると、溶媒中に前記化学式５の化合物を溶解させて約−２０℃に冷却させた後、ブロモトリメチルシランを加えて反応させることができる。その後、水を加えて約０℃でさらに反応させることによって、化学式１ｂの化合物が形成され得る。
【００６９】
前記化学式５の化合物は、当該技術分野に公知された任意の方法により調製されることができ、例えば非特許文献１４の方法により調製され得る。
【００７０】
前記説明した化学式１ｂの化合物の調製方法の一実施例は、下記の反応式４のように示すことができる。
（反応式４）
【００７１】
2016520546.tif 000020
【００７２】
本発明は、さらに他の一側面において、前記化学式１ａまたは化学式１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含む脱毛防止または育毛用化粧料組成物を提供する。
【００７３】
本発明は、さらに他の一側面において、前記化学式１ａまたは化学式１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含む、脱毛の予防、治療、または育毛用薬学組成物を提供する。
【００７４】
本発明は、さらに他の一側面において、前記化学式１ａまたは化学式１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩、またはその溶媒和物を含む、シワの予防、改善、または治療用化粧料組成物を提供する。
【００７５】
以下、前記化粧料組成物および薬学組成物をまとめて「本発明に係る組成物」とも称する。
【００７６】
前記化学式１ａ（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）および化学式１ｂ（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）の化合物が、脱毛治療、予防、および育毛に効果があることは、下記の実施例で立証された。具体的には、本発明の化合物に対してＣ３Ｈマウスを利用した育毛試験を実施した。その結果、本発明の化合物が現在ＦＤＡから脱毛治療剤として許可を得て販売中であるマイノキシル３％（ミノキシジル３％液剤、現代薬品、韓国）に比べて顕著に優秀な育毛効果を示した。また、本発明の化合物を０．００５％〜０．０２％の濃度別にＣ３Ｈマウスを利用した育毛試験を実施した結果、陰性対照群に比べては顕著に優秀な効果を示し、濃度別には育毛効果に差が殆どなく、陽性対照群であるミノキシジル３％と類似の効果を示して、従来の脱毛治療剤に比べて３００倍以上低い濃度において効果的な育毛作用を有することと確認された。また、本発明の化合物をＨＣｌ塩およびジナトリウム塩の形態にしてＣ３Ｈマウスによる育毛試験を実施した結果、陰性対照群に比べては塩の種類に関係なく顕著に優秀な効果を示した。また、本発明の化合物に対して実際に脱毛症の患者を対象に臨床試験を実施した結果、脱毛予防および発毛効果が確認された。従って、本発明に係る化合物は、脱毛治療、予防、および育毛に効果的であることが確認された。
【００７７】
前記本発明に係る脱毛防止または育毛用化粧料組成物および脱毛の予防、治療または育毛用薬学組成物は、他の脱毛の予防、治療、または育毛用薬物や補助剤をさらに含んで複合製剤として用いられてもよい。他の薬物または補助剤としては、レチノイン酸（retinoic acid）、ミノキシジル（minoxidil）、フィナステリド、亜鉛ペプチド（zinc peptide）、亜鉛オキシド（zinc oxide）、ビオチン、ゲニステイン、玉ネギ抽出物、パンプキンシードオイル、エミュー（Ｅｍｕ）オイル、緑茶抽出物、ヤナギの樹皮抽出物、ツボクサ抽出物、イラクサ抽出物、菖蒲抽出物、ローズマリー抽出物、カモミール抽出物などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００７８】
前記本発明に係る脱毛防止または育毛用化粧料組成物および脱毛の予防、治療または育毛用薬学組成物は、経口投与製剤、注射剤、座剤、経皮投与製剤、および経鼻投与製剤を含むが、これらに限定されない任意の剤形に製剤化して投与されてもよいが、好ましくは頭皮または毛髪で覆われた皮膚部位に局所適用するのに適した製剤で製剤化することができる。このような局所投与用製剤としては、リポソーム、ナノエマルジョン、シャンプー、ヘアーコンディショナー、またはヘアーローションなどがあり、これらに限定されない。好ましくは経皮吸収の増加によって効果を促進させるために、リポソームまたはナノエマルジョンで製剤化することが好ましい。前記組成物の製剤化時、化粧品分野または薬剤学分野に公知されている各々の製剤の製造に適切な担体、希釈剤、または添加剤を利用して製造することができる。
【００７９】
前記本発明に係る脱毛防止または育毛用化粧料組成物および脱毛の予防、治療または育毛用薬学組成物は、前記化学式１ａまたは１ｂの化合物を組成物全体に対して約０．００１重量％〜１重量％、好ましくは０．００５重量％〜０．１重量％の範囲で含有してもよく、活性成分の種類によって増減してもよい。前記本発明に係る薬学組成物の場合、局所投与時化学式１ａの化合物または化学式１ｂの化合物を脱毛の予防、治療、または育毛のための部位に１日１回〜２回程度塗布することによって投与することができる。活性成分が１重量％である時を基準として一日の塗布量としては０．５ｍｇ〜３ｍｇ程度であり、塗布部位の面積に応じて増減することができる。このような投与量および回数は、患者の年齢、性別、脱毛の進行程度に応じて適切に増減して用いられてもよい。
【００８０】
さらに、前記化学式１ａ（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）および化学式１ｂ（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）の化合物がシワの予防、改善、または治療に効果があることは、下記の実施例で立証された。具体的には、本発明の化合物を濃度別に処理した後、ＭＴＴアッセイによりヒト繊維芽細胞の増殖効果を測定して、繊維芽細胞におけるコラーゲン量を測定した。その結果、本発明の化合物の濃度が増加するほど繊維芽細胞の生存率が増加して、コラーゲン量も増加することが分かり、効果的なシワの予防、改善および治療効果を有することが確認された。
【００８１】
前記本発明に係るシワの予防、改善および治療用化粧料組成物は、他のシワの予防、改善および治療用物質をさらに含んで複合製剤として用いられてもよい。
【００８２】
前記本発明に係るシワの予防、改善および治療用化粧料組成物は、シワがあるか、シワになりやすい皮膚部位に局所適用するのに適した製剤で製剤化することができる。このような局所投与用製剤としては、リポソームまたはナノエマルジョンなどがあって、これらに限定されない。前記組成物の製剤化時、化粧品分野に公知されている各々の製剤の調製に適切な担体、希釈剤、または添加剤を利用して調製することができる。
【００８３】
前記本発明に係るシワ予防、改善および治療用化粧料組成物は、前記化学式１ａまたは１ｂの化合物を組成物全体に対して約０．００１重量％〜１重量％、好ましくは０．００５重量％〜０．１重量％の範囲で含有してもよく、活性成分の種類によって増減してもよい。前記本発明に係る薬学組成物の場合、局所投与時化学式１ａの化合物または化学式１ｂの化合物をシワ予防、改善および治療のための部位に１日１回〜２回程度塗布することによって投与することができる。活性成分が１重量％である時を基準として一日の塗布量としては０．５ｍｇ〜３ｍｇ程度であり、塗布部位の面積に応じて増減することができる。このような投与量および回数は、使用する人の年齢、性別、シワの進行程度に応じて適切に増減して用いられることができる。
【発明の効果】
【００８４】
前術の通り、本発明に係る前記化学式１ａまたは前記化学式１ｂの化合物、薬剤学的に許容可能なその塩またはその溶媒和物は、脱毛の治療、予防、または育毛、およびシワ予防、改善、または治療に対する効果が優秀なだけでなく、合成によって簡単に調製できるので経済的であり、リポソーム、ナノエマルジョンのような脂質微粒球製剤に製剤化時、毛嚢に容易に伝達できる。また、従来用いられている他の脱毛治療剤であるミノキシジルおよびフィナステリドに比べて皮膚刺激がなく、副作用がないため非常に好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】本発明の一実施例により調製された化学式１ａの化合物（Ｏ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸）の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図２】本発明の一実施例により調製された化学式１ｂの化合物（Ｎ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸）の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【図３】Ｃ３Ｈマウスのわき腹を除毛した後、本発明に係る化合物であるＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ、Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ溶液を一日に一回ずつ塗布した後、１１日目、１４日目、および１８日目に陽性対照群（３％ミノキシジル液剤）および陰性対照群と比較して撮影した写真だ。
【図４】Ｃ３Ｈマウスのわき腹を除毛した後、本発明の一実施例により調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソームを一日に一回ずつ塗布した後、１４日目および１８日目に陽性対照群および陰性対照群と比較して撮影した写真である。
【図５】Ｃ３Ｈマウスのわき腹を除毛した後、本発明の一実施例により調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ溶液を濃度別に一日に一回ずつ塗布した後、１３日目および１７日目に陰性対照群と比較して撮影した写真である。
【図６】Ｃ３Ｈマウスのわき腹を除毛した後、本発明の一実施例により調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ遊離塩基（ｆｒｅｅ  ｂａｓｅ）、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐの塩酸塩、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐのジナトリウム塩の溶液を一日に一回ずつ塗布した後、１４日目および１８日目に陰性対照群と比較して撮影した写真である。
【図７】図７のａは、本発明の一実施例により調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソームを、脱毛が進行中のボランティアに一日に１〜２回塗布するようにした後、頭の経時変化を撮影した写真であり、図７のｂは、本発明の一実施例により調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソームを、脱毛が進行中のボランティアに一日に１〜２回塗布するようにした後、頭の経時変化を撮影した写真である。
【図８】本発明の一実施例により調製された０．００２重量％（グループＡ）、０．０１重量％（グループＢ）、０．０５重量％（グループＣ）のＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソームを、脱毛が進行中の被験者に二重盲倹法により臨床実験を行った後、各濃度グループ別に塗布前と１６週後の頭を撮影した写真である。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は本発明を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
【００８７】
＜実施例１：Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシンの調製＞
Ｄ−フィトスフィンゴシンをBull.Korean Chem.Soc.,2003,24,267-268の方法により、ｔ−ブタノール中（Ｂｏｃ）２Ｏと反応させてアミノ基に保護基（Ｂｏｃ）を導入して、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシンを調製した。
【００８８】
＜実施例２：Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン−３−Ｏ，Ｐ−シクロリン酸の調製＞
１．０５当量のＰＯＣｌ３を約−３０℃に冷却されたピリジン溶媒（総体積の１/３）にゆっくり滴下してＰＯＣｌ３/ピリジン溶液を調製した。前記実施例１で調製したＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン（１当量）をピリジン溶媒（総体積の２/３）に溶解させて−２０℃に冷却した後、この温度を維持しながら調製済のＰＯＣｌ３/ピリジン溶液を加えた。反応温度が常温まで上がれば、減圧下で溶媒ピリジンを除去して６Ｎ  ＨＣｌによりｐＨ２に調節後、酢酸エチルで抽出した。その次に、酢酸エチル抽出物をＭｇＳＯ４で水分を除去した後、減圧下で溶媒を濃縮して所望の物質Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン−３−Ｏ，Ｐ−シクロリン酸を定量的に得た。更なる精製過程はなく、下記実施例３および４の出発物質として用いた。
【００８９】
＜実施例３：Ｏ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（化学式１ａ）の調製（１）＞
前記実施例２で調製されたＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン−３−Ｏ，Ｐ−シクロリン酸をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた後常温でトリフルオロ酢酸を用いたＣＨ２Ｃｌ２溶媒体積の１/３を加えて１時間常温で撹拌した。その後、溶媒を減圧下で除去してＣｏｎｃ−ＨＣｌ溶媒を加えて強く撹拌して生成された白色固体をろ過して得て水で洗浄した後、アセトンで洗浄し乾燥して最終目的物であるＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）を塩酸塩の形態として得た（総収率：９０％）。
【００９０】
＜実施例４：Ｏ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（化学式１ａ）の調製（２）＞
前記実施例２で調製されたＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン−３−Ｏ，Ｐ−シクロリン酸を酢酸エチル溶媒に溶解させた後、０℃で冷却してＨＣｌ気体を１時間注入した。生成された白色固体をろ過した後、酢酸エチルで洗浄後乾燥して、最終目的物であるＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）を塩酸塩の形態として得た（総収率：９３％）。
【００９１】
最終的に得られた物質の１ＨＮＭＲ（３００ＭＨz、ＣＤ３ＯＤ：ＣＤ３ＣＯＯＤ=１：１）データを図１に示した。
【００９２】
得られた塩酸塩を、同じ当量のＫＯＨエタノール溶液で処理して塩酸塩が除去されたＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸を得た。
【００９３】
また、前記得られたＯ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸を３当量のＮａＯＨ水溶液で処理して、Ｏ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸ジナトリウム塩を調製した。
【００９４】
＜実施例５：Ｎ−サイクリックフィトスフィンゴシン−１−リン酸（化学式１ｂ）の調製＞
Bull.KoreanChem.Soc.,2003,24,267-268に記載された方法によりＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸ジメチルエステルを調製した。調製されたＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フィトスフィンゴシン−１−リン酸ジメチルエステルＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた後、−２０℃で冷却後５当量のブロモジメチルシランを加えて約１時間撹拌した。その後、水を加えて加熱濃縮して得られる残留物にアセトンを加えて生成された白色の固体をろ過して、標識化合物（Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ）を収得した（総収率：１３％）。
【００９５】
最終的に得られた物質の１ＨＮＭＲ（３００ＭＨz、ＣＤ３ＯＤ：ＣＤ３ＣＯＯＤ=１：１）データを図２に示した。
【００９６】
＜実施例６：Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソームの調製＞
まず、７５％大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ社）１ｇと、前記実施例４で得られたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ  ０．０１ｇと、ビタミンＥアセテート０．３ｇとを、エタノール２０ｇとエトキシジグリコール２ｇとの混合液に溶解させてＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐエタノール溶液を調製した。溶解のために５分間超音波処理をした。その後、蒸溜水７１．５９ｇにメントール０．５ｇ、ナイアシンアミド０．５ｇ、天然有機硫黄３ｇ、およびヘスペリジン０．１ｇを溶解した水溶液を前記Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐエタノール溶液に徐々に添加した。添加時、強く撹拌した。蒸溜水を全部添加した後３０分間撹拌し続けた。その後、バスタイプ超音波発生装置により３０分間超音波処理して、粒子の大きさを１００ｎｍ前後に作り、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソームを調製した。
【００９７】
別途、前記調製方法において、リポソーム調製時、皮膚透過促進剤としてポロキサマー＋ポリソルベート８０（Ｔwｅｅｎ８０）を添加して皮膚透過促進リポソームを調製した。
【００９８】
＜実施例７：Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソームの調製（２）＞
前記実施例６において水溶液の調製時、ヤナギの樹皮抽出物１ｇ、緑茶抽出物１ｇ、ツボクサ抽出物３ｇ、イラクサ抽出物０．５ｇ、菖蒲抽出物０．５ｇ、ローズマリー抽出物０．５ｇ、カモミール抽出物０．５ｇ、および大豆発効物１ｇをさらに加えて水溶液を調製することを除いては、前記実施例６と同じ方式でＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソームを調製した。但し、各種抽出物が加わった量の分、蒸溜水を少なく用いてリポソームを調製した。
【００９９】
＜実施例８：Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソームの調製（１）＞
前記実施例６においてＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐの代わりに前記実施例５で調製されたＮ−Ｃ−Ｐ１Ｐを用いたことを除いては、前記実施例６と同じ方式でＮ−Ｃ−Ｐ１Ｐ  ０．０１％含有リポソームを調製した。
【０１００】
＜実施例９：Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソーム調製（２）＞
前記実施例７においてＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐの代わりに前記実施例５で調製されたＮ−Ｃ−Ｐ１Ｐを用いたことを除いては、前記実施例７と同じ方式でＮ−Ｃ−Ｐ１Ｐ  ０．０１％含有リポソームを調製した。
【０１０１】
前記実施例６〜９で調製されたリポソームの組成を下記の表１にまとめた。
【０１０２】
【表１】
2016520546.tif 000021
【０１０３】
＜実験例１：Ｃ３Ｈマウスを利用した育毛試験（１）＞
６週齢のＣ３Ｈマウスを購入して背中部分の毛を一部除去した後、除毛クリームを塗布して既存の毛を完全に除去した。完全に除毛できなかったマウスは実験から除外し、除毛した後無操作でマウスケージ当たり５匹ずつ飼育して、計５ケージを用いた。
【０１０４】
除毛後一日程度放置した後に、試験化合物として前記実施例４で合成したＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐと、実施例５で合成したＮ−Ｃ−Ｐ１Ｐとを、エタノールとエトキシジグリコールとの混合液（９：１，ｖ/ｖ）に０．０１重量％の濃度で溶解させて除毛した部位に一日に一回ずつ塗布した。前記試験化合物なしで、エタノールとエトキシジグリコールとの混合液のみを塗布した群を陰性対照群として用いて、３％ミノキシジル製剤（マイノキシル、現代薬品、韓国）を陽性対照群として用いた。試料を塗布した後１４日目と１８日目に除毛した部位を撮影した写真を図３に示した。
【０１０５】
図３の結果によると、非処理群（陰性対照群）では毛がほとんど育たなく、皮膚が外部に露出しているのに対し、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐ処理群、Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ処理群では、非常に早く毛髪の成長が行われていることが分かった。Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐにおいて陽性対照群よりもさらに早く育毛効果が現れる反面、Ｎ−Ｃ−Ｐ１Ｐ群では陽性対照群よりは多少劣るが陰性対照群に比べては顕著な育毛効果を観察することができた。従って、このような結果から本発明に係る化合物が育毛を促進させるということが明らかである。
【０１０６】
＜実験例２：Ｃ３Ｈマウスを利用した育毛試験（２）＞
前記実施例６および７で調製したＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ含有リポソームを前記実験例１と同じ方式で育毛試験を行った。但し、一日に１回ずつ塗布することを３週間持続した後、除毛した部位の写真を撮影した。その結果を図４に示した。
【０１０７】
図４によると、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソーム処理群が、陰性対照群に比べて顕著な育毛効果を示していて、陽性対照群と類似の育毛効果を有することが分かった。
【０１０８】
＜実験例３：Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐの濃度による育毛試験（３）＞
前記の実施例４で調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐを、０．００５重量％、０．０１重量％、０．０２重量％の三つの濃度でエタノールとエトキシジグリコールとの混合液（９：１，ｖ/ｖ）に溶解して試料を調製した。その試料に対して前記実験例１と同じ方式で育毛試験を行った。
【０１０９】
試料を塗布した後、１３日目と１７日目に除毛した部位を撮影した写真を図５に示した。
【０１１０】
図５の結果によると、０．００５重量％〜０．０２重量％の濃度において陰性対照群に比べて顕著に優れた育毛効果を示したが、０．００５重量％、０．０１重量％、０．０２重量％の三つの濃度群の間では育毛効果の差が大きくなかった。３重量％３％ミノキシジル製剤投与群と類似の効果を見せたため、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐはミノキシジルの３００倍以上の低い濃度でも同じ育毛効果を示すことが分かる。
【０１１１】
＜実験例４：Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐの塩の種類による育毛試験＞
前記実施例４で合成したＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ塩酸塩、実施例４で調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ、実施例４で調製されたＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐジナトリウム塩に対して、前記実験例１と同じ方式で育毛試験を行った。
【０１１２】
試料を塗布した後１４日目と１８日目に除毛した部位を撮影した写真を図６に示した。
【０１１３】
図６の結果によると、塩の種類に関係なく陰性対照群に比べて顕著な育毛効果が現れることが分かった。
【０１１４】
＜実験例５：発毛効能臨床試験（１）＞
前記実施例７で調製したＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソームを、脱毛が進行中である被験者に直接投与して発毛効能を比較した。被験者２人に一日１回〜２回塗布して、一度に５回〜７回スプレーした後、リポソーム溶液が流れないように塗布した後、手でこするようにした。
【０１１５】
試料を塗布する前と、経時による頭部撮影の写真を図７ａおよび図７ｂに示した。
【０１１６】
図７ａおよび７ｂの結果によると、塗布前に比べて時間経過により脱毛予防および発毛効能が非常に優れることが分かった。従って、人体に直接適用時に優れた脱毛予防および発毛効果が確認された。
【０１１７】
＜実験例６：発毛効能臨床試験（２）＞
前記実施例７に記載の通り、０．００２重量％（グループＡ）、０．０１重量％（グループＢ）、０．０５重量％（グループＣ）のＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐリポソームを調製して、脱毛が進行中である被験者に直接投与して発毛効能を比較した。被験者と実験者は濃度が分からないように二重盲倹法で実験を進めた。
【０１１８】
塗布した後４週、８週、１２週、１６週の間、髪の毛の密度と太さの変化を観察して、Ｏ−Ｃ−Ｐ１Ｐの濃度による臨床効能を評価した。各濃度別髪の毛の密度変化と太さの変化を観察した結果を下記の表２と表３にまとめた。評価基準は次の通りにした（単位：頭皮密度と太さの評価単位、０：変化がない、１：認知できるレベルの好転、２：弱く好転、３：好転、４：相当好転、５：非常に好転）。塗布前と１６週後の頭を撮影した写真を各濃度グループ別に比較した結果を図８に示した。
【０１１９】
【表２】
2016520546.tif 000022
【０１２０】
【表３】
2016520546.tif 000023
【０１２１】
前記表２および３によると、グループＢとＣにおいて１２週と１６週に統計的に有意な髪の毛の密度および太さ変化が観察できた。また、図８によると、塗布前に比べて塗布後に髪の毛の密度が増加したことが確認できる。
【０１２２】
＜実験例７：細胞増殖およびコラーゲン合成促進＞
Ｎ−Ｃ−Ｐ１ＰおよびＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐのシワ改善効果を測定するためにヒト繊維芽細胞（human fibroblast）の増殖効果をＭＴＴ（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazoliumbromide）アッセイにより測定して、コラーゲン合成を調べるためにはヒト繊維芽細胞（真皮細胞）で生成されるプロコラーゲンタイプＩ（procollagen type Ｉ）を測定した。
【０１２３】
細胞増殖を測定するために、ヒト繊維芽細胞を１０％ＦＢＳと１００ｕｎｉｔ/ｍＬのペニシリン/ストレプトマイシンが添加されたＤＭＥＭ（Dulbecco's modified eagle medium）培地で２４時間培養し、培養環境は３７℃に維持される５％ＣＯ２培養器で培養した。その後、培地を除去してＮ−Ｃ−Ｐ１ＰとＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐを濃度別に添加して培養した後、ＭＴＴアッセイにより細胞増殖効果を測定した結果を表４にまとめた。
【０１２４】
【表４】
2016520546.tif 000024
【０１２５】
コラーゲン合成を測定するためには、ヒト繊維芽細胞（真皮細胞）を前記の条件で２４時間培養した後培地を除去して、新しい無血清培地で段階別に希釈したＮ−Ｃ−Ｐ１ＰとＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐ（１ｕＭおよび１０ｕＭ）を加えた後、再び２４時間培養した後、培養液を以てプロコラーゲンタイプIＣ−ペプチドＥＩＡキットによりコラーゲン量を測定した結果を下記の表５に示した。
【０１２６】
【表５】
2016520546.tif 000025
【０１２７】
前記表４および表５の結果によると、Ｎ−Ｃ−Ｐ１ＰおよびＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐは細胞増殖を促進するだけでなく、コラーゲン合成を促進することが明らかになった。従って、Ｎ−Ｃ−Ｐ１ＰおよびＯ−Ｃ−Ｐ１Ｐは、ヒト繊維芽細胞の増殖と、コラーゲン合成を促進する、シワ改善および老化製品に適用可能であることが確認された。
【図１】
2016520546.tif 000034
【図２】
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【図３】
2016520546.tif 000036
【図４】
2016520546.tif 000037
【図５】
2016520546.tif 000038
【図６】
2016520546.tif 000039
【図７】
2016520546.tif 000040
【図８】
2016520546.tif 000041
【国際調査報告】
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