(57)【要約】  本出願は、新規なベンジル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン、その調製法、疾患を治療および／または予防するためのその単独または組み合わせでのその使用、ならびに疾患を治療および／または予防するため、特に心血管障害を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）
【化１】
2016523944.tif 000102
（I）
（式中、
R1は水素またはフッ素を表し、
R2は水素またはフッ素を表し、
R3は水素、塩素またはフッ素を表し、
R4は水素、塩素、フッ素またはメチルを表し、
但し、R1、R2、R3またはR4基の少なくとも2つは水素とは異なり、
R5は水素またはフッ素を表し、
R6はメチルを表し、
R7はメチルを表す、
または
R6とR7はこれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成する）の化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物。
【請求項２】
組織名3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−A）
【化２】
2016523944.tif 000103
（I−A）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物。
【請求項３】
組織名3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−B）
【化３】
2016523944.tif 000104
（I−B）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物。
【請求項４】
組織名3−［5−フルオロ−1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−C）
【化４】
2016523944.tif 000105
（I−C）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物。
【請求項５】
組織名3−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−I）
【化５】
2016523944.tif 000106
（I−I）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物。
【請求項６】
組織名3−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−Q）
【化６】
2016523944.tif 000107
（I−Q）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物。
【請求項７】
疾患を治療および／または予防するための請求項1から6のいずれか一項に記載の式（I）、（I−A）、（I−B）、（I−C）、（I−I）または（I−Q）の化合物。
【請求項８】
心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害、動脈硬化、認知症障害および勃起不全を治療および／または予防するための医薬品を製造するための請求項1から6のいずれか一項に記載の式（I）、（I−A）、（I−B）、（I−C）、（I−I）または（I−Q）の化合物の使用。
【請求項９】
不活性で、非毒性の薬学的に適した補助剤と組み合わせて請求項1から6のいずれか一項に記載の式（I）、（I−A）、（I−B）、（I−C）、（I−I）または（I−Q）の化合物を含む医薬品。
【請求項１０】
有機硝酸塩、NOドナー、cGMP−PDE阻害剤、抗血栓活性を有する薬剤、血圧を降下させる薬剤、および脂肪代謝を変化させる薬剤からなる群から選択されるさらなる活性化合物と組み合わせて請求項1から6のいずれか一項に記載の式（I）、（I−A）、（I−B）、（I−C）、（I−I）または（I−Q）の化合物を含む医薬品。
【請求項１１】
心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害、動脈硬化、認知症障害および勃起不全を治療および／または予防するための請求項9または10に記載の医薬品。
【請求項１２】
有効量の少なくとも1種の請求項1から6のいずれか一項に記載の式（I）、（I−A）、（I−B）、（I−C）、（I−I）もしくは（I−Q）の化合物、または請求項9から11のいずれか一項に記載の医薬品を用いて、ヒトおよび動物の心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管疾患、腎機能不全、血栓塞栓性疾患、線維性障害、動脈硬化、認知症障害および勃起不全を治療および／または予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、新規なベンジル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン、その調製法、疾患を治療および／または予防するためのその単独または組み合わせでのその使用、ならびに疾患を治療および／または予防するため、特に心血管障害を治療および／または予防するための医薬品を製造するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物細胞で最も重要な細胞伝達系の1つが環状グアノシン一リン酸（cGMP）である。内皮から放出され、ホルモンおよび機械的シグナルを伝達する一酸化窒素（NO）と合わせて、これはNO／cGMP系を形成する。グアニル酸シクラーゼは、グアノシン三リン酸（GTP）からのcGMPの生合成を触媒する。現在までに知られているこのファミリーの代表的なものは、構造的特徴またはリガンドの型のいずれかによって、ナトリウム利尿ペプチドによって刺激され得る粒子状グアニル酸シクラーゼ、およびNOによって刺激され得る可溶性グアニル酸シクラーゼの2つのグループに分けることができる。可溶性グアニル酸シクラーゼは、2個のサブユニットからなり、調節中心の一部である、ヘテロ二量体1個当たり1個のヘムをおそらく含む。これは活性化機構にとって非常に重要である。NOはヘムの鉄原子に結合し、したがって酵素の活性を著しく増加させることができる。対照的に、無ヘム製剤はNOによって刺激され得ない。一酸化炭素（CO）もヘムの中心鉄原子に結合することができるが、COによる刺激はNOによる刺激よりもずっと小さい。
【０００３】
cGMPの形成ならびに結果として生じるホスホジエステラーゼ、イオンチャネルおよびプロテインキナーゼの調節によって、グアニル酸シクラーゼは種々の生理学的過程、特に平滑筋細胞の弛緩および増殖、血小板凝集および血小板粘着、ならびに神経シグナル伝達、ならびに上記過程の破壊に基づく障害においても重要な役割を果たす。病態生理学的状態では、NO／cGMP系が抑制され、これが例えば、高血圧、血小板活性化、細胞増殖増加、内皮機能不全、動脈硬化、狭心症、心不全、心筋梗塞、血栓症、脳卒中および性機能障害をもたらし得る。
【０００４】
予想される高い効率および低レベルの副作用のために、生物のcGMPシグナル経路の影響を標的化することによるこのような障害の考えられるNO非依存性治療は有望な手法である。
【０００５】
現在まで、可溶性グアニル酸シクラーゼの治療的刺激に、その効果がNOに基づく有機硝酸塩などの化合物がもっぱら使用されてきた。後者は生物変換によって形成され、ヘムの中心鉄原子での攻撃によって可溶性グアニル酸シクラーゼを活性化する。副作用に加えて、耐性の発達がこの治療様式の決定的な欠点の1つである。
【０００６】
数年前に、可溶性グアニル酸シクラーゼを直接、すなわち、例えば、3−（5’−ヒドロキシメチル−2’−フリル）−1−ベンジルインダゾールなどのNOの事前放出なしに、刺激するいくつかの物質が記載されている［YC−1；Wuら、Blood  84（1994）、4226；Mulschら、Brit．J．Pharmacol．120（1997）、681］。可溶性グアニル酸シクラーゼのより最近の刺激物質には、中でも、BAY41−2272、BAY41−8543およびリオシグアト（BAY63−2521）が含まれる（例えば、Stasch  J．−P．ら、Nat．Rev．Drug  Disc．2006；5：755〜768；Stasch  J．−P．ら、ChemMedChem  2009；4：853〜865．Stasch  J．−P．ら、Circulation  2011；123：2263〜2273参照）。興味深いことに、これらのsGC刺激物質のいくつか、例えば、YC−1またはBAY41−2272も、直接的グアニル酸シクラーゼ刺激に加えて、PDE5阻害作用を示す。cGMP経路を最大化するために、cGMPの合成を刺激すると同時に、PDE−5を介した分解を阻害することが薬理学的に望ましい。この二重原理が、薬理学的な点で特に有利である（例えば、Oudoutら、Eur．Urol．2011；60、1020〜1026；Albersenら、J  Sex  Med．2013；10、1268〜1277）。
【０００７】
発明の化合物が3μM以下の最小有効濃度（MEC）としてB−2での試験によって組換えグアニル酸シクラーゼ受容体細胞株に対する効果を示し、IC50＜100nMとしてB−3での試験によってヒトホスホジエステラーゼ−5（PDE5）の阻害を示す場合に、二重原理が本発明の文脈で満たされる。
【０００８】
ホスホジエステラーゼ−5（PDE5）は、cGMPのリン酸エステル結合を切断して、5’−グアノシン一リン酸（5’−GMP）を形成する酵素の1つの名称である。ヒトでは、ホスホジエステラーゼ−5が、陰茎海綿体の平滑筋系および肺動脈で主に生じる。（例えば、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタダラフィルを用いて）PDE5を阻害することによってcGMP分解を妨害すると、弛緩シグナル伝達経路のシグナル増加、具体的には陰茎海綿体の血液供給増加および肺血管の低圧がもたらされる。これらは勃起不全および肺動脈高血圧の治療に使用される。PDE5と同様に、さらなるcGMP切断ホスホジエステラーゼが存在する（StaschらCirculation  2011；123、2263〜2273）。
【０００９】
可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激物質として、国際公開第00／06568号パンフレットおよび国際公開第00／06569号パンフレットは、縮合ピラゾール誘導体を開示しており、国際公開第03／095451号パンフレットは、カルバメート置換3−ピリミジニルピラゾロピリジンを開示している。フェニルアミド置換基を有する3−ピリミジニルピラゾロピリジンが、E．M．Beckerら、BMC  Pharmacology  1（13）、2001に記載されている。国際公開第2004／009590号パンフレットは、CNS障害を治療するための置換4−アミノピリミジンを有するピラゾロピリジンを記載している。国際公開第2010／065275号パンフレットおよび国際公開第2011／149921号パンフレットは、sGC活性剤として置換ピロロ−およびジヒドロピリドピリミジンを開示している。sGC刺激物質として、国際公開第2012／004259号パンフレットは、縮合アミノピリミジンを記載しており、国際公開第2012／004258号パンフレット、国際公開第2012／143510号パンフレットおよび国際公開第2012／152629号パンフレットは、縮合ピリミジンおよびトリアジンを記載している。国際公開第2012／28647号パンフレットは、心血管障害を治療するための種々のアザ複素環を有するピラゾロピリジンを開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第00／06568号パンフレット
【特許文献２】国際公開第00／06569号パンフレット
【特許文献３】国際公開第03／095451号パンフレット
【特許文献４】国際公開第2004／009590号パンフレット
【特許文献５】国際公開第2010／065275号パンフレット
【特許文献６】国際公開第2011／149921号パンフレット
【特許文献７】国際公開第2012／004259号パンフレット
【特許文献８】国際公開第2012／004258号パンフレット
【特許文献９】国際公開第2012／143510号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第2012／152629号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第2012／28647号パンフレット
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Wuら、Blood  84（1994）、4226
【非特許文献２】Mulschら、Brit．J．Pharmacol．120（1997）、681
【非特許文献３】Stasch  J．−P．ら、Nat．Rev．Drug  Disc．2006；5：755〜768
【非特許文献４】Stasch  J．−P．ら、ChemMedChem  2009；4：853〜865．
【非特許文献５】Stasch  J．−P．ら、Circulation  2011；123：2263〜2273
【非特許文献６】Oudoutら、Eur．Urol．2011；60、1020〜1026
【非特許文献７】Albersenら、J  Sex  Med．2013；10、1268〜1277
【非特許文献８】Staschら、Circulation  2011；123、2263〜2273
【非特許文献９】E．M．Beckerら、BMC  Pharmacology  1（13）、2001
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激物質および可溶性グアニル酸シクラーゼとホスホジエステラーゼ−5阻害剤の刺激物質（二重原理）としても作用し、例えば、そのインビボ特性、例えば、その薬物動態および薬力学的特性ならびに／あるいはその代謝プロファイルならびに／あるいはその用量−活性の関係に関して、先行技術から知られている化合物と比べて同一のまたは改善した治療プロファイルを有する新規な物質を提供することが本発明の目的であった。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、一般式（I）
【化１】
2016523944.tif 000002
（I）
（式中、
R1は水素またはフッ素を表し、
R2は水素またはフッ素を表し、
R3は水素、塩素またはフッ素を表し、
R4は水素、塩素、フッ素またはメチルを表し、
但し、R1、R2、R3またはR4基の少なくとも2つは水素とは異なり、
R5は水素またはフッ素を表し、
R6はメチルを表し、
R7はメチルを表す、
または
R6とR7はこれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成する）の化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物を提供する。
【００１４】
本発明による化合物は、式（I）に含まれ、以下に言及される化合物が既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でない場合、式（I）の化合物およびその塩、溶媒和物と塩の溶媒和物、以下に言及される式の式（I）に含まれる化合物およびその塩、溶媒和物と塩の溶媒和物、ならびに式（I）に含まれ、実施例として以下に言及される化合物およびその塩、溶媒和物と塩の溶媒和物である。
【００１５】
本発明の文脈において好ましい塩は、本発明による化合物の生理学的に許容される塩である。それ自体が製薬用途に適していないが、例えば、本発明による化合物を単離または精製するために使用することができる塩も包含される。
【００１６】
本発明による化合物の生理学的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１７】
本発明による化合物の生理学的に許容される塩には、従来の塩基の塩、例としておよび好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）、およびアンモニアまたは1〜16個の炭素原子を有する有機アミンに由来するアンモニウム塩、例としておよび好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、N−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびN−メチルピペリジンも含まれる。
【００１８】
本発明の文脈において、溶媒和物は、溶媒分子による配位によって固体または液体状態で錯体を形成する本発明による化合物の形態を指す。水和物は、配位が水によるものである溶媒和物の特別な形態である。水和物が本発明の文脈において好ましい溶媒和物である。
【００１９】
本発明による化合物が互変異性型で生じ得る場合、本発明は全ての互変異性型を包含する。
【００２０】
本発明はまた、本発明による化合物の全ての適当な同位体変種も包含する。本発明による化合物の同位体変種は、ここでは、本発明による化合物中の少なくとも1個の原子が同じ原子番号であるが通常または主に自然に生じる原子質量とは異なる原子質量を有する別の原子と交換された化合物を意味すると理解される。本発明による化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体、例えば、2H（重水素）、3H（トリチウム）、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129Iおよび131Iがある。本発明による化合物の特定の同位体変種、特に1種または複数の放射性同位元素が組み込まれたものは、例えば、体内での作用機構または有効成分分布の調査に有益となり得、比較的容易な調製性および検出性のために、特に3Hまたは14Cで標識された化合物がこの目的に適している。さらに、同位体、例えば、重水素の組込みにより、化合物のより大きな代謝安定性の結果としての特定の治療上の利点、例えば、体内での半減期の延長または要求される活性剤用量の減少がもたらされ得るので、本発明による化合物のこのような修飾も、いくつかの場合、本発明の好ましい実施形態を構成し得る。本発明による化合物の同位体変種は、当業者に既知の方法、例えば、以下に記載される方法および実施例に記載の手順によって、それぞれの試薬および／または出発化合物の対応する同位体修飾を用いることにより調製することができる。
【００２１】
さらに、本発明は、本発明による化合物のプロドラッグも包含する。ここで、「プロドラッグ」という用語は、それ自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、体内での滞留時間中に本発明による化合物に（例えば、代謝的にまたは加水分解的に）変換される化合物を指す。
【００２２】
本発明の文脈において、「治療」または「治療すること」という用語は、疾患、状態、障害、傷害または健康問題の、このような状態および／またはこのような状態の症状の発達、経過または進行の阻害、遅延、検査、軽減、減弱、制限、減少、抑制、忌避または治癒を含む。ここでは、「療法」は「治療」という用語と同義であると理解される。
【００２３】
「防止」、「予防」または「妨害」という用語は本発明の文脈において同義的に使用され、疾患、状態、障害、傷害または健康問題の、このような状態および／またはこのような状態の症状の発達または進行に罹患する、を経験する、を患うまたはこれらを有するリスクの回避または減少を指す。
【００２４】
疾患、状態、障害、傷害または健康問題の治療または予防は、部分的であっても完全であってもよい。
【００２５】
本発明の文脈においては、一般式（I）
【化２】
2016523944.tif 000003
（I）
（式中、
R1は水素またはフッ素を表す）
の化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００２６】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−A）
【化３】
2016523944.tif 000004
（I−A）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００２７】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−B）
【化４】
2016523944.tif 000005
（I−B）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００２８】
本発明の文脈においては、組織名3−［5−フルオロ−1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−C）
【化５】
2016523944.tif 000006
（I−C）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００２９】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−D）
【化６】
2016523944.tif 000007
（I−D）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３０】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，4−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−E）
【化７】
2016523944.tif 000008
（I−E）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３１】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，4−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−F）
【化８】
2016523944.tif 000009
（I−F）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３２】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（4−クロロ−2−フルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−G）
【化９】
2016523944.tif 000010
（I−G）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３３】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（4−クロロ−2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−H）
【化１０】
2016523944.tif 000011
（I−H）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３４】
本発明の文脈においては、組織名3−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−I）
【化１１】
2016523944.tif 000012
（I−I）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３５】
本発明の文脈においては、組織名7，7−ジメチル−3−［6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−J）
【化１２】
2016523944.tif 000013
（I−J）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３６】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（3−クロロ−2−フルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−K）
【化１３】
2016523944.tif 000014
（I−K）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３７】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（3−クロロ−2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−L）
【化１４】
2016523944.tif 000015
（I−L）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３８】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，6−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−M）
【化１５】
2016523944.tif 000016
（I−M）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００３９】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，6−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−N）
【化１６】
2016523944.tif 000017
（I−N）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４０】
本発明の文脈においては、組織名3−［5−フルオロ−1−（3−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−O）
【化１７】
2016523944.tif 000018
（I−O）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４１】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（3−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−P）
【化１８】
2016523944.tif 000019
（I−P）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４２】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−Q）
【化１９】
2016523944.tif 000020
（I−Q）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４３】
本発明の文脈においては、組織名3−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オンおよび構造式（I−R）
【化２０】
2016523944.tif 000021
（I−R）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４４】
本発明の文脈においては、組織名3’−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ−［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンおよび構造式（I−S）
【化２１】
2016523944.tif 000022
（I−S）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４５】
本発明の文脈においては、組織名3’−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ−［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンおよび構造式（I−T）
【化２２】
2016523944.tif 000023
（I−T）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４６】
本発明の文脈においては、組織名3’−［5−フルオロ−1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ−［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンおよび構造式（I−U）
【化２３】
2016523944.tif 000024
（I−U）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４７】
本発明の文脈においては、組織名3’−［1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンおよび構造式（I−V）
【化２４】
2016523944.tif 000025
（I−V）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４８】
本発明の文脈においては、組織名3’−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンおよび構造式（I−W）
【化２５】
2016523944.tif 000026
（I−W）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００４９】
本発明の文脈においては、組織名3’−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンおよび構造式（I−X）
【化２６】
2016523944.tif 000027
（I−X）
を有する化合物、ならびにそのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩およびN−オキシドまたは塩の溶媒和物が好まれる。
【００５０】
本発明による化合物は、可溶性グアニル酸シクラーゼとホスホジエステラーゼ−5の阻害剤の強力な刺激物質として作用し、有用な薬理学的特性を有し、例えば、そのインビボ特性および／またはその薬物動態特性および／または代謝プロファイルに関して、改善した治療プロファイルを有する。そのため、これらの化合物は、ヒトおよび動物の疾患の治療および／または予防に適している。
【００５１】
本発明による化合物は血管弛緩および血小板凝集の阻害を引き起こし、血圧の低下および冠血流量の上昇をもたらす。これらの効果は、可溶性グアニル酸シクラーゼの直接刺激およびcGMPの細胞内増加によって媒介される。さらに、本発明による化合物は、cGMPレベルを上昇させる物質、例えば、EDRF（内皮由来弛緩因子）、NOドナー、プロトポルフィリンIX、アラキドン酸またはフェニルヒドラジン誘導体の作用を強化する。
【００５２】
本発明による化合物は、心血管、肺、血栓塞栓および線維障害の治療および／または予防に適している。
【００５３】
したがって、本発明による化合物を、心血管障害、例えば、高血圧、抵抗性高血圧、急性および慢性心不全、冠動脈心疾患、安定および不安定狭心症、末梢および心臓血管障害、不整脈、心房性および心室性不整脈ならびに伝導障害、例えば、I〜III度の房室ブロック（ABブロックI〜III）、上室性頻脈性不整脈、心房細動、心房粗動、心室細動、心室粗動、心室性頻脈性不整脈、多形性心室頻拍、心房性および心室性期外収縮、房室接合部期外収縮、洞不全症候群、失神、房室結節リエントリー性頻拍、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、急性冠動脈症候群（ACS）、自己免疫心疾患（心膜炎、心内膜炎、弁膜炎、大動脈炎、心筋症）、ショック、例えば、心原性ショック、敗血症性ショックおよびアナフィラキシーショック、動脈瘤、ボクサー心筋症（心室性期外収縮（PVC））を治療および／または予防するための、血栓塞栓障害および虚血、例えば、心筋虚血、心筋梗塞、卒中、心肥大、一過性および虚血性発作、子癇前症、炎症性心血管障害、冠動脈および末梢動脈の攣縮、浮腫形成、例えば、肺浮腫、脳浮腫、腎性浮腫または心不全によって引き起こされる浮腫、末梢循環障害、再灌流損傷、動脈および静脈血栓症、微量アルブミン尿、心筋不全、内皮機能不全を治療および／または予防するための、例えば、血栓溶解療法、経皮的血管形成術（PTA）、経管的冠動脈形成術（PTCA）、心臓移植およびバイパス手術後の再狭窄、ならびに微小および大血管損傷（血管炎）、フィブリノーゲンおよび低密度リポタンパク質（LDL）のレベル上昇ならびにプラスミノーゲン活性化因子阻害因子1（PAI−1）の濃度上昇を予防するための、ならびに勃起不全および女性性機能不全を治療および／または予防するための医薬品に使用することができる。
【００５４】
本発明の文脈において、「心不全」という用語は、心不全の急性型と慢性型の両方、およびより具体的なまたは関連する型の疾患、例えば、急性非代償性心不全、右心不全、左心不全、全心不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、肥大型心筋症、特発性心筋症、先天性心疾患、心臓弁奇形を伴う心不全、僧帽弁狭窄、僧帽弁閉鎖不全、大動脈弁狭窄、大動脈弁閉鎖不全、三尖弁狭窄、三尖弁閉鎖不全、肺動脈弁狭窄、肺動脈弁閉鎖不全、混合型心臓弁奇形、心筋炎症（心筋炎）、慢性心筋炎、急性心筋炎、ウイルス性心筋炎、糖尿病性心不全、アルコール性心筋症、心臓貯蔵障害、拡張期心不全および収縮期心不全、ならびに既存の慢性心不全の悪化の急性期（心不全憎悪）を包含する。
【００５５】
さらに、本発明による化合物を、動脈硬化、脂質代謝障害、低リポ蛋白血症、脂質異常症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、無βリポ蛋白血症、シトステロール血症、黄色腫症、タンジール病、脂肪症、肥満ならびに混合型高脂血症およびメタボリックシンドロームを治療および／または予防するために使用することもできる。
【００５６】
さらに、本発明による化合物を、一次および二次レイノー現象、微小循環障害、跛行、末梢および自律神経ニューロパチー、糖尿病性細小血管症、糖尿病性網膜症、四肢の糖尿病性潰瘍、壊疽、CREST症候群、エリテマトーデス、爪真菌症、リウマチ性障害を治療および／または予防するためならびに創傷治癒を促進するために使用することができる。本発明による化合物はまた、筋ジストロフィー、例えば、Becker−Kiener型筋ジストロフィー（BMD）およびDuchenne型筋ジストロフィー（DMD）の治療にも適している。
【００５７】
本発明による化合物は、泌尿器科障害、例えば、良性前立腺症候群（BPS）、良性前立腺肥大（BPH）、良性前立腺腫脹（BPE）、膀胱下尿道閉塞（BOO）、下部尿路症候群（LUTS、ネコ泌尿器科症候群（FUS）を含む）、神経性過活動膀胱（OAB）および（IC）、失禁（UI）、例えば、混合型尿失禁、切迫性尿失禁、ストレス性尿失禁または溢流性尿失禁（MUI、UUI、SUI、OUI）、骨盤痛を含む泌尿生殖器系の障害、男性および女性泌尿生殖器系の器官の良性および悪性障害を治療するのにさらに適している。
【００５８】
本発明による化合物は、腎障害、特に、急性および慢性腎機能不全、ならびに急性および慢性腎不全を治療および／または予防するのにさらに適している。本発明の文脈において、腎機能不全という用語は、その急性症状と慢性症状の両方、ならびに根底にあるまたは関連する腎疾患、例えば、腎低灌流、透析時低血圧、閉塞性尿路疾患、糸球体症、糸球体腎炎、急性糸球体腎炎、糸球体硬化、尿細管間質障害、腎症疾患、例えば、原発性および先天性腎疾患、腎炎、免疫学的腎疾患、例えば、移植腎拒絶反応および免疫複合体誘発性腎疾患、毒性物質によって誘発される腎症、造影剤によって誘発される腎症、糖尿病性および非糖尿病性腎症、腎盂腎炎、腎嚢胞、腎硬化症、高血圧性腎硬化症およびネフローゼ症候群（例えば、異常に低下したクレアチニンおよび／または水分排泄、異常に上昇した尿素、窒素、カリウムおよび／またはクレアチニンの血中濃度、例えば、グルタミルシンテターゼなどの腎臓酵素の変化した活性、変化した尿浸透圧または尿量、増加した微量アルブミン尿、マクロアルブミン尿、糸球体および細動脈の病変、尿細管拡張、高リン酸塩血症ならびに／あるいは透析の必要性によって診断上特徴付けされ得る）を含む。本発明はまた、腎機能不全、例えば、肺水腫、心不全、尿毒症、貧血、電解質異常（例えば、高カリウム血症、高ナトリウム血症）ならびに骨および炭水化物代謝の障害を治療および／または予防するための本発明による化合物の使用も包含する。
【００５９】
さらに、本発明による化合物は、喘息性障害、肺動脈高血圧（PAH）および他の型の肺高血圧（PH）（左心臓疾患、HIV、鎌状赤血球貧血、血栓塞栓症（CTEPH）、サルコイドーシス、COPDまたは肺線維症に関連する肺高血圧を含む）、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、急性呼吸窮迫症候群（ARDS）、急性肺傷害（ALI）、α1−抗トリプシン欠乏症（AATD）、肺線維症、肺気腫（例えば、タバコの煙によって誘発される肺気腫）および嚢胞性線維症（CF）の治療および／または予防にも適している。さらに、言及する化合物を気管支拡張薬として使用することができる。
【００６０】
本発明に記載される化合物はまた、NO／cGMP系の障害によって特徴付けられる中枢神経系障害を制御するための活性化合物でもある。これらは、特に、例えば、軽度認知障害、加齢性学習および記憶障害、加齢性記憶喪失、血管性認知症、頭蓋脳損傷、脳卒中、脳卒中後に起こる認知症（脳卒中後認知症）、外傷後頭蓋脳損傷、一般的な集中力障害、学習および記憶の問題を有する小児の集中力障害、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、ピック症候群を含む前頭葉変性を伴う認知症、パーキンソン病、進行性核性麻痺、大脳皮質基底核変性症を伴う認知症、筋萎縮性側索硬化症（ALS）、ハンチントン舞踏病、脱髄、多発性硬化症、視床変性、クロイツフェルト−ヤコブ認知症、HIV認知症、認知症を伴う統合失調症、またはコルサコフ精神病などの状態／疾患／症候群に関連して特に生じるものなどの認知障害後の知覚、集中力、学習または記憶を改善するのに適している。これらはまた、中枢神経系障害、例えば、不安、緊張およびうつ病、CNS関連性機能障害および睡眠障害の状態を治療および／または予防する、ならびに食物、嗜好品および習慣性物質の摂取の病理学的障害を制御するのにも適している。
【００６１】
さらに、本発明による化合物はまた、脳血流を調節するのにも適しているので、偏頭痛を制御するための有効な薬剤となる。これらはまた、大脳梗塞（脳溢血）、例えば、脳卒中、脳虚血および頭蓋脳損傷の続発症を予防および制御するのにも適している。本発明による化合物を疼痛の状態および耳鳴りを制御するために使用することもできる。
【００６２】
さらに、本発明による化合物は、抗炎症作用を有するので、敗血症（SIRS）、多臓器不全（MODS、MOF）、腎臓の炎症性障害、慢性腸炎症（IBD、クローン病、UC）、膵炎、腹膜炎、リウマチ様障害、炎症性皮膚疾患および炎症性眼疾患を治療および／または予防するための抗炎症剤として使用することができる。
【００６３】
さらに、本発明による化合物を自己免疫疾患を治療および／または予防するために使用することもできる。
【００６４】
本発明による化合物は、内臓、例えば、肺、心臓、腎臓、骨髄および特に、肝臓の線維性障害、ならびに皮膚科学的線維症および線維性眼障害を治療および／または予防するのにさらに適している。本発明の文脈において、線維性障害という用語は、特に、以下の用語を含む：肝線維症、肝硬変、肺線維症、心内膜心筋線維症、腎症、糸球体腎炎、間質性腎線維症、糖尿病から生じる線維性損傷、骨髄線維症および同様の線維性障害、強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕（外科手技後も）、母斑、糖尿病網膜症、増殖性硝子体網膜症および結合組織の障害（例えば、サルコイドーシス）。
【００６５】
本発明による化合物は、例えば、緑内障手術の結果としての術後瘢痕を制御するのにさらに適している。
【００６６】
本発明による化合物を老化および角質化皮膚のために美容的に使用することもできる。
【００６７】
さらに、本発明による化合物は、肝炎、新生物、骨粗鬆症、緑内障および胃不全麻痺を治療および／または予防するのに適している。
【００６８】
本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防するための本発明による化合物の使用を提供する。
【００６９】
本発明はさらに、心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害および動脈硬化を治療および／または予防するための本発明による化合物の使用を提供する。
【００７０】
本発明はさらに、心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害および動脈硬化を治療および／または予防する方法に使用するための本発明による化合物を提供する。
【００７１】
本発明はさらに、障害、特に上記障害を治療および／または予防するための医薬品を製造するための本発明による化合物の使用を提供する。
【００７２】
本発明はさらに、心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害および動脈硬化を治療および／または予防するための医薬品を製造するための本発明による化合物の使用を提供する。
【００７３】
本発明はさらに、有効量の本発明による化合物の少なくとも1種を使用して、障害、特に上記障害を治療および／または予防する方法を提供する。
【００７４】
本発明はさらに、有効量の本発明による化合物の少なくとも1種を使用して心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害および動脈硬化を治療および／または予防する方法を提供する。
【００７５】
本発明による化合物は、単独で、または必要に応じて他の活性化合物と組み合わせて使用することができる。本発明はさらに、特に上記障害を治療および／または予防するための、本発明による化合物の少なくとも1種と、1種または複数のさらなる活性化合物とを含む医薬品を提供する。適当な活性化合物組み合わせの好ましい例には以下が含まれる：
・有機硝酸塩およびNOドナー、例えば、ニトロプルシドナトリウム、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビド、モルシドミンまたはSIN−1、およびNO吸入；
・環状グアノシン一リン酸（cGMP）の分解を阻害する化合物、例えば、ホスホジエステラーゼ（PDE）1、2および／または5の阻害剤、特にシルデナフィル、バルデナフィルおよびタダラフィルなどのPDE5阻害剤；
・例としておよび好ましくは、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤または線維素溶解促進性物質の群の抗血栓剤；
・例としておよび好ましくは、カルシウム拮抗剤、アンジオテンシンAII拮抗剤、ACE阻害剤、エンドセリン拮抗剤、レニン阻害剤、α受容体遮断薬、β受容体遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗剤および利尿剤の群の降圧活性化合物；および／または
・例えばおよび好ましくは、甲状腺受容体作動薬、コレステロール合成阻害剤、例えば、例としておよび好ましくは、HMG−CoA還元酵素阻害剤またはスクアレン合成阻害剤、ACAT阻害剤、CETP阻害剤、MTP阻害剤、PPARα、PPARγおよび／またはPPARδ作動薬、コレステロール吸収阻害剤、リパーゼ阻害剤、重合胆汁酸吸着剤、胆汁酸再吸収阻害剤およびリポタンパク質拮抗剤の群の脂肪代謝を変化させる活性化合物。
【００７６】
抗血栓剤は、好ましくは、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤または線維素溶解促進性物質の群の化合物を意味すると理解される。
【００７７】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、血小板凝集阻害剤、例としておよび好ましくは、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジンまたはジピリダモールと組み合わせて投与する。
【００７８】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、トロンビン阻害剤、例としておよび好ましくは、キシメラガトラン、ダビガトラン、メラガトラン、ビバリルジンまたはクレキサンと組み合わせて投与する。
【００７９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、GPIIb／IIIa拮抗剤、例えば、例としておよび好ましくは、チロフィバンまたはアブシキシマブと組み合わせて投与する。
【００８０】
本発明の好ましい実施形態では、発明の化合物を、第Xa因子阻害剤（好ましい例は、リバロキサバン、DU−176b、アピキサバン、オタミキサバン、フィデキサバン、ラザキサバン、フォンダパリヌクス、イドラパリヌクス、PMD−3112、YM−150、KFA−1982、EMD−503982、MCM−17、MLN−1021、DX  9065a、DPC  906、JTV  803、SSR−126512またはSSR−128428である）と組み合わせて投与する。
【００８１】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、ヘパリンまたは低分子量（LMW）ヘパリン誘導体と組み合わせて投与する。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、ビタミンK拮抗剤、例としておよび好ましくは、クマリンと組み合わせて投与する。
【００８３】
降圧剤は、好ましくは、カルシウム拮抗剤、アンジオテンシンAII拮抗剤、ACE阻害剤、エンドセリン拮抗剤、レニン阻害剤、α受容体遮断薬、β受容体遮断薬、ミネラルコルチコイド受容体拮抗剤および利尿剤の群の化合物を意味すると理解される。
【００８４】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、カルシウム拮抗剤、例としておよび好ましくは、ニフェジピン、アムロジピン、ベラパミルまたはジルチアゼムと組み合わせて投与する。
【００８５】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、α1受容体遮断薬、例としておよび好ましくは、プラゾシンと組み合わせて投与する。
【００８６】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、β受容体遮断薬、例としておよび好ましくは、プロプラノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、アルプレノロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ブプラノロール、メチプラノロール、ナドロール、メピンドロール、カラゾロール、ソタロール、メトプロロール、ベタキソロール、セリプロロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、ラベタロール、カルベジロール、アダプロロール、ランジオロール、ネビボロール、エパノロールまたはブシンドロールと組み合わせて投与する。
【００８７】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、アンジオテンシンAII拮抗剤、例としておよび好ましくは、ロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエンブサルタンと組み合わせて投与する。
【００８８】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、ACE阻害剤、例としておよび好ましくは、エナラプリル、カプトプリル、リシノプリル、ラミプリル、デラプリル、フォシノプリル、キノプリル、ペリンドプリルまたはトランドプリルと組み合わせて投与する。
【００８９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、エンドセリン拮抗剤、例としておよび好ましくは、ボセンタン、ダルセンタン、アンブリセンタンまたはシタクスセンタンと組み合わせて投与する。
【００９０】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、レニン阻害剤、例としておよび好ましくは、SPP−600またはSPP−800と組み合わせて投与する。
【００９１】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、ミネラルコルチコイド受容体拮抗剤、例としておよび好ましくは、スピロノラクトンまたはエプレレノンと組み合わせて投与する。
【００９２】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、ループ利尿剤、例えば、フロセミド、トラセミド、ブメタニドおよびピレタニド、カリウム保持性利尿剤、例えば、アミロライドおよびトリアムテレン、アルドステロン拮抗剤、例えば、スピロノラクトン、カンレノ酸カリウムおよびエプレレノン、ならびにチアジド系利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド、クロルタリドン、キシパミドおよびインダパミドと組み合わせて投与する。
【００９３】
脂肪代謝調節剤は、好ましくは、CETP阻害剤、甲状腺受容体作動薬、コレステロール合成阻害剤、例えば、HMG−CoA還元酵素阻害剤またはスクアレン合成阻害剤、ACAT阻害剤、MTP阻害剤、PPARα、PPARγおよび／またはPPARδ作動薬、コレステロール吸収阻害剤、重合胆汁酸吸着剤、胆汁酸再吸収阻害剤、リパーゼ阻害剤およびリポタンパク質拮抗剤の群の化合物を意味すると理解される。
【００９４】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、CETP阻害剤、例としておよび好ましくは、ダルセトラピブ、BAY60−5521、アナセトラピブまたはCETPワクチン（CETi−1）と組み合わせて投与する。
【００９５】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、甲状腺受容体作動薬、例としておよび好ましくは、D−チロキシン、3，5，3’−トリヨードチロニン（T3）、CGS23425またはアキシチロム（CGS26214）と組み合わせて投与する。
【００９６】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、スタチンのクラスのHMG−CoA還元酵素阻害剤、例としておよび好ましくは、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フラバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチンまたはピタバスタチンと組み合わせて投与する。
【００９７】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、スクアレン合成阻害剤、例としておよび好ましくは、BMS−188494またはTAK−475と組み合わせて投与する。
【００９８】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、ACAT阻害剤、例としておよび好ましくは、アバシミブ、メリナミド、パクチミブ、エフルチミブまたはSMP−797と組み合わせて投与する。
【００９９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、MTP阻害剤、例としておよび好ましくは、インプリタピド、BMS−201038、R−103757またはJTT−130と組み合わせて投与する。
【０１００】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、PPARγ作動薬、例としておよび好ましくは、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾンと組み合わせて投与する。
【０１０１】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、PPARδ作動薬、例としておよび好ましくは、GW501516またはBAY68−5042と組み合わせて投与する。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、コレステロール吸収阻害剤、例としておよび好ましくは、エゼチミブ、チクエシドまたはパマクエシドと組み合わせて投与する。
【０１０３】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、リパーゼ阻害剤（好ましい例はオルリスタットである）と組み合わせて投与する。
【０１０４】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、重合胆汁酸吸着剤、例としておよび好ましくは、コレスチラミン、コレスチポール、コレソルバム、コレスタゲルまたはコレスチミドと組み合わせて投与する。
【０１０５】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、胆汁酸再吸収阻害剤、例としておよび好ましくは、ASBT（＝IBAT）阻害剤、例えば、AZD−7806、S−8921、AK−105、BARI−1741、SC−435またはSC−635と組み合わせて投与する。
【０１０６】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物を、リポタンパク質拮抗剤、例としておよび好ましくは、ゲムカベンカルシウム（CI−1027）またはニコチン酸と組み合わせて投与する。
【０１０７】
本発明はさらに、典型的には1種または複数の不活性で、非毒性の、薬学的に適当な賦形剤と共に少なくとも1種の本発明による化合物を含む医薬品、および上記目的のためのその使用を提供する。
【０１０８】
本発明による化合物は全身的におよび／または局所的に作用することができる。この目的のために、これらを適当な様式で、例えば、経口、非経口、肺、経鼻、舌下、舌、頬側、直腸、真皮、経皮、結膜もしくは耳経路により、またはインプラントもしくはステントとして投与することができる。
【０１０９】
本発明による化合物をこれらの投与経路に適した投与形態で投与することができる。
【０１１０】
先行技術により機能し、本発明による化合物を速効性のおよび／または修正された様式で放出し、本発明による化合物を結晶および／または非晶質および／または溶解形態で含む投与形態が、経口投与に適しており、例えば、錠剤（非コーティングあるいは例えば、腸溶性コーティングまたは遅延様式で溶解するもしくは不溶性であり、本発明による化合物の放出を制御するコーティングによるコーティング錠）、口腔で急速に崩壊する錠剤またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥物またはカプセル剤（例えば、硬質または軟質ゼラチンカプセル）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤がある。
【０１１１】
非経口投与は、吸収ステップを迂回しても（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）または吸収を含んでも（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）よい。非経口投与に適した投与形態には、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥物または滅菌散剤の形態の注射および注入製剤が含まれる。
【０１１２】
他の投与経路については、適当な例に、吸入医薬形態（粉末吸入器、ネブライザーを含む）、点鼻薬、液またはスプレー、舌、舌下または頬側投与のための錠剤、フィルム／ウエハーまたはカプセル剤、坐剤、耳または眼製剤、膣カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、粉剤、インプラントまたはステントがある。
【０１１３】
経口または非経口投与、特に、経口投与が好ましい。
【０１１４】
本発明による化合物を言及する投与形態に変換することができる。これは、不活性で、非毒性の、薬学的に適当な賦形剤と混合することによって、それ自体は既知の様式で行うことができる。これらの賦形剤には、担体（例えば、微結晶セルロース、乳糖、マンニトール）、溶媒（例えば、液体ポリプロピレングリコール）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えば、アルブミン）、安定剤（例えば、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸）、染料（例えば、無機顔料、例えば、酸化鉄）ならびに香味および／または臭気修正剤が含まれる。
【０１１５】
一般に、非経口投与の場合、有効な結果を達成するために、約0．001〜1mg／kg、好ましくは約0．01〜0．5mg／kg体重の量を投与することが有利であることが分かった。経口投与の場合、用量は約0．001〜2mg／kg、好ましくは約0．001〜1mg／kg体重である。
【０１１６】
それにもかかわらず、該当する場合には、具体的には体重、投与経路、活性化合物に対する個体の反応、製剤の性質および投与が行われる時間または間隔の関数として言及する量から逸脱することが必要となり得る。例えば、いくつかの場合、上記最小量未満で十分となり得る一方、他の場合では、言及する上限を超過しなければならない。より多量を投与する場合、これらを1日数回の個々の用量に分割することが賢明となり得る。
【発明を実施するための形態】
【０１１７】
以下の実施例は本発明を説明する。本発明はこれらの実施例に限定されない。
【０１１８】
以下の試験および実施例中の百分率は、特に指示しない限り、重量百分率であり、部は重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度数値はそれぞれ体積に基づく。
【０１１９】
A．実施例
【０１２０】
【表１】
2016523944.tif 000028
【０１２１】
別の方法に具体的に言及しない限り、純度はLCMSによる純度である。
【０１２２】
LC／MSおよびMS法：
方法1（LC−MS）：
機器：Waters  ACQUITY  SQD  UPLCシステム；カラム：Waters  Acquity  UPLC  HSS  T3  1．8μ  50×1mm；移動相A：水1l＋99％濃度ギ酸0．25ml、移動相B：アセトニトリル1l＋99％濃度ギ酸0．25ml；勾配：0．0分90％A→0001．2分5％A→0002．0分5％A；オーブン：50℃；流量：0．40ml／分；UV検出：208〜400nm。
【０１２３】
方法2（LC−MS）：
MS機器：Waters（Micromass）Quattro  Micro；HPLC機器：Agilent  1100シリーズ；カラム：YMC−Triart  C18  3μ  50×3mm；移動相A：水1l＋0．01molの炭酸アンモニウム、移動相B：アセトニトリル1l；勾配：0．0分100％A→0002．75分5％A→0004．5分5％A；オーブン：40℃；流量：1．25ml／分；UV検出：210nm。
方法3（LC−MS）：
MS機器：Waters（Micromass）QM；HPLC機器：Agilent  1100シリーズ；カラム：Agilent  ZORBAX  Extend−C18  3．0×50mm  3．5ミクロン；移動相A：水1l＋0．01molの炭酸アンモニウム、移動相B：アセトニトリル1l；勾配：0．0分98％A→0000．2分98％A→0003．0分5％A→004．5分5％A；オーブン：40℃；流量：1．75ml／分；UV検出：210nm。
【０１２４】
方法4（LC−MS）：
機器：Waters  ACQUITY  SQD  UPLCシステム；カラム：Waters  Acquity  UPLC  HSS  T3  1．8μ  50×1mm；移動相A：水1l＋99％濃度ギ酸0．25ml、移動相B：アセトニトリル1l＋99％濃度ギ酸0．25ml；勾配：0．0分95％A→006．0分5％A→007．5分5％A；オーブン：50℃；流量：0．35ml／分；UV検出：210〜400nm。
【０１２５】
方法5（LC−MS）：
機器：Micromass  Quattro  Premier  with  Waters  UPLC  Acquity；カラム：Thermo  Hypersil  GOLD  1．9μ  50×1mm；移動相A：水1l＋50％濃度ギ酸0．5ml、移動相B：アセトニトリル1l＋50％濃度ギ酸0．5ml；勾配：0．0分97％A→000．5分97％A→003．2分5％A→004．0分5％A；オーブン：50℃；流量：0．3ml／分；UV検出：210nm。
【０１２６】
方法6（LC−MS）：
MS機器：Waters（Micromass）Quattro  Micro；HPLC機器：Agilent  1100シリーズ；カラム：YMC−Triart  C18  3μ  50×3mm；移動相A：水1l＋0．01molの炭酸アンモニウム、移動相B：アセトニトリル1l；勾配：0．0分100％A→002．75分5％A→004．5分5％A；オーブン：40℃；流量：1．25ml／分；UV検出：210nm。
【０１２７】
方法7（LC−MS）：
MS機器：Waters（Micromass）QM；HPLC機器：Agilent  1100シリーズ；カラム：Agilent  ZORBAX  Extend−C18  3．0×50mm  3．5ミクロン；移動相A：水1l＋0．01molの炭酸アンモニウム、移動相B：アセトニトリル1l；勾配：0．0分98％A→000．2分98％A→003．0分5％A→004．5分5％A；オーブン：40℃；流量：1．75ml／分；UV検出：210nm。
【０１２８】
方法8（GC−MS）：
機器：Thermo  DFS、Trace  GC  Ultra；カラム：Restek  RTX−35、15m×200μm×0．33μm；一定ヘリウム流量：1．20ml／分；オーブン：60℃；入口：220℃；勾配：60℃、30℃／分→00300℃（3．33分間維持）。
出発材料および中間体：
【０１２９】
実施例1A
5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−アミン
【化２７】
2016523944.tif 000029
2−クロロ−5−フルオロ−6−メチルニコチノニトリル58g（340．027mmol）（国際公開第WO2007／41052号パンフレット、実施例U−2、80頁に記載されている調製）を最初に1，2−エタンジオール（580ml）に装入し、次いで、ヒドラジン水和物（24．813ml）およびジイソプロピルエチルアミン56．091ml（340．027mmol）を添加した。攪拌しながら、混合物を80℃で16時間、次いで、120℃で6時間加熱した。冷却後、水（2．5l）および酢酸エチル（2．5l）を添加し、混合物を吸引しながら濾別した。得られた固体を乾燥させた。これにより、標的化合物28．4g（理論値の47％）が得られた。
LC−MS（Method  2）：Rt＝1．77min
MS（ESIpos）：m／z＝167（M＋H）＋
【０１３０】
実施例2A
5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化２８】
2016523944.tif 000030
実施例1Aからの5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−アミン28g（168．5mmol）を最初にTHF1．32lに装入し、混合物を0℃に冷却した。次いで、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体41．45ml（337．03mmol）をゆっくり添加した。反応混合物を−10℃に冷却した。次いで、亜硝酸イソペンチル25．66g（219．07mmol）のTHF166ml中溶液をゆっくり添加し、混合物をさらに30分間攪拌した。THFの75％が除去されるように反応溶液を濃縮した。アセトン988mlを添加し、溶液を0℃に冷却した。ヨウ化ナトリウム32．84g（219．07mmol）のアセトン412ml中溶液をこの溶液に滴加し、混合物を室温で2時間攪拌した。反応混合物を氷水5lに注ぎ入れ、それぞれ酢酸エチル750mlで3回抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液750mlで洗浄し、乾燥させ、次いで、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル勾配：9：1〜1：1）によって精製した。これにより、標記化合物14．90g（理論値の32％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．84min
MS（ESIpos）：m／z＝278（M＋H）＋
【０１３１】
実施例3A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化２９】
2016523944.tif 000031
実施例2Aからの5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン2．60g（9．37mmol）を最初にDMF35mlに装入した。次いで、DMF10mlに溶解した炭酸セシウム3．67g（11．26mmol）および1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロベンゼン1．94g（9．37mmol）を添加し、混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を水200mlに添加し、酢酸エチルで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル／酢酸エチル＝10／1）にかけ、生成物分画を濃縮した。生成物をクロマトグラフィー：カラム：Sunfire  C18、5μm、250×20mm；移動相：12％水＋85％メタノール＋3％1％濃度TFA水溶液；流量：25ml／分；温度：40℃；波長：210nmによってさらに精製した。これにより、標記化合物2．67g（理論値の71％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．29min
MS（ESIpos）：m／z＝404（M＋H）＋
【０１３２】
実施例4A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル
【化３０】
2016523944.tif 000032
変形A：
実施例3Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン2．47g（6．13mmol）とシアン化銅（I）0．576g（6．43mmol）の混合物を最初に加熱によって乾燥させたフラスコ中の無水DMSO12．1mlに装入し、混合物を150℃で3時間攪拌した。酢酸エチルを冷却した反応溶液に添加し、混合物を半飽和塩化アンモニウム溶液と濃アンモニア溶液の混合物（3／1）で3回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル勾配：15／1〜10／1；次いで、ジクロロメタン／メタノール：10／1）によって精製した。これにより、標的化合物780mg（理論値の42％）が得られた。
変形B：
実施例5Aで得られる化合物の1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキサミド650mg（1．56mmol；純度77％）を最初にTHF2．7mlに装入し、ピリジン0．49ml（6．0mmol）を添加した。次いで、攪拌しながら、トリフルオロ酢酸無水物0．85ml（6．0mmol）をゆっくり滴加し、次いで、混合物を室温で3時間攪拌した。水を添加し、反応溶液を酢酸エチルで3回抽出した。有機相を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で1回、1N塩酸水溶液で1回および飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、高真空下で一晩乾燥させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル勾配：15／1〜10／1；次いで、ジクロロメタン／メタノール＝10／1）によって精製した。これにより、標的化合物180mg（理論値の37％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．19min
MS（ESIpos）：m／z＝303（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．65（d，3H），5．87（s，2H），7．10−7．25（m，2H），7．39−7．48（m，1H），8．41（d，1H）．
【０１３３】
実施例5A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキサミド
【化３１】
2016523944.tif 000033
標的化合物は、出発材料4Aの調製中に微量成分として形成した。フラッシュクロマトグラフィーにより、標的化合物650mg（理論値の26％；純度77％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．98min
MS（ESIpos）：m／z＝321（M＋H）＋
【０１３４】
実施例6A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミド
【化３２】
2016523944.tif 000034
実施例4Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル960mg（3．18mmol）を最初にメタノール9．47mlに装入した。メタノール中ナトリウムメトキシド0．69ml（3．18mmol）を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。次いで、メタノールさらに10mlを添加し、反応混合物を60℃で1時間攪拌した。塩化アンモニウム204mg（3．81mmol）および酢酸0．71ml（12．39mmol）を添加し、反応混合物を還流下で7時間攪拌した。溶媒を濃縮し、残渣を1N水酸化ナトリウム水溶液38mlを用いて室温で1時間攪拌した。次いで、沈殿を濾別し、水で洗浄した。これにより、標的化合物1．0g（理論値の90％；純度90％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．68min
MS（ESIpos）：m／z＝320（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．60（d，3H），5．77（s，2H），6．62（br．s，3H），6．91−6．98（m，1H），7．11−7．20（m，1H），7．34−7．44（m，1H），8．29（d，1H）．
【０１３５】
実施例7A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド
【化３３】
2016523944.tif 000035
実施例6Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミド1．0g（2．84mmol；純度90％）を最初にエタノール13．9mlに装入し、トリエチルアミン1．58ml（11．38mmol）およびヒドラジン水和物（80％）0．19ml（3．13mmol）を0℃で添加した。混合物を室温で4時間攪拌し、次いで、10％濃度塩化ナトリウム水溶液28mlに添加し、酢酸エチルで2回抽出した。合わせた有機相を10％濃度塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、室温でロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣をジエチルエーテルを用いて攪拌し、濾別し、沈殿を高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物864mg（理論値の89％）が得られた。濾液を濃縮し、高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物さらに144mg（理論値の10％、純度69％）が得られた。
LC−MS（Method  3）：Rt＝2．36min
MS（EIpos）：m／z＝335［M＋H］＋．
【０１３６】
実施例8A
メチル2−｛3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート
【化３４】
2016523944.tif 000036
ジメチル2，2−ジメチル−3−オキソブタンジオエート1．61g（8．53mmol）（C．J．A．DaleyらJ．Am．Chem．Soc．2002、124（14）、3680〜3691に記載）を最初にエタノール21mlに装入し、加熱還流した。実施例7Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド0．95g（2．84mmol）のエタノール21ml中懸濁液を滴加した。混合物を一晩還流下で加熱した。冷却後、固体を吸引しながら濾別し、少量のエタノールで洗浄し、濾液を濃縮した。アセトニトリルを残渣に添加した。これにより、固体の沈殿が得られた。後者を濾別し、乾燥させた。これにより、標記化合物570mg（理論値の42％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．14min
MS（EIpos）：m／z＝473［M＋H］＋．
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．64（d，3H），3．55（s，3H），5．90（s，2H），7．04−7．10（m，1H），7．14−7．20（m，1H），7．38−7．46（m，1H），8．30（d，1H），14．50（br．s，1H）．
【０１３７】
実施例9A
メチル2−｛5−クロロ−3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート
【化３５】
2016523944.tif 000037
塩化ホスホリル19．4mlを、メチル2−｛3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート、実施例8Aからの化合物717mg（1．52mmol）に添加し、混合物を室温で5．5時間攪拌した。反応混合物を後の反応に直接使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．37min
MS（EIpos）：m／z＝491［M＋H］＋．
【０１３８】
実施例10A
3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化３６】
2016523944.tif 000038
6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−アミン10g（67．49mmol）を最初にTHF250mlに装入し、混合物を0℃に冷却した。次いで、三フッ化ホウ素／ジエチルエーテル錯体17．11ml（134．98mmol）をゆっくり添加し、反応混合物を−10℃に冷却した。次いで、亜硝酸イソペンチル11．81ml（87．74mmol）のTHF50ml中溶液をゆっくり添加し、混合物をさらに30分間攪拌した。次いで、冷ジエチルエーテル（500ml）を滴加した。反応混合物を10℃に加温させ、得られた固体を吸引しながら濾別し、冷ジエチルエーテルで洗浄した。固体を、少しずつ、発泡しながら、ヨウ化ナトリウム13．15g（87．74mmol）のアセトン300ml中0℃溶液に添加し、反応混合物を室温で30分間攪拌した。反応混合物を水に注ぎ入れ、酢酸エチルで3回抽出した。有機相を合わせ、固体を吸引しながら濾別した。濾液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。ジエチルエーテルおよびメタノール数滴を残渣に添加した。固体を吸引しながら濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し、高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物11．67g（理論値の67％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．78min
MS（ESIpos）：m／z＝260（M＋H）＋
【０１３９】
実施例11A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化３７】
2016523944.tif 000039
実施例10Aからの3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン1．76g（6．78mmol）を最初にDMF13．3mlに装入し、炭酸セシウム3．31g（10．17mmol）および1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロベンゼン1．68g（8．14mmol）を添加した。混合物を室温で7時間攪拌し、次いで、0℃で一晩保管した。次いで、水を反応混合物に添加した。酢酸エチルを添加し、混合物を短時間に攪拌し、相を分離した。有機相を水で1回洗浄し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、残渣を高真空下で一晩乾燥させた。これにより、標記化合物3．00g（定量的収率；純度約87％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．24min
MS（ESIpos）：m／z＝386（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．65（s，3H），5．73（s，2H），7．02−6．95（m，1H），7．13−7．20（m，1H），7．22（d，1H），7．35−7．44（m，1H），7．84（d，1H）．
【０１４０】
実施例12A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル
【化３８】
2016523944.tif 000040
実施例11Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン（粗）3．00g（6．78mmol；純度約87％）およびシアン化銅（I）0．768g（8．58mmol）を最初に加熱によって乾燥させたフラスコ中の無水DMSO40mlに装入し、混合物を150℃で1．5時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液、濃アンモニア水溶液の混合物（3／1）および酢酸エチルを冷却した反応溶液に添加し、混合物を室温で30分間攪拌し、Celite（登録商標）を通して吸引しながら濾別した。濾過残渣を酢酸エチルで洗浄し、有機相を分離し、飽和塩化アンモニウム水溶液と濃アンモニア水溶液の混合物（3／1）で4回洗浄した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、高真空下で一晩乾燥させた。標記化合物2．55g（定量的、純度84％）をさらに精製することなく次のステップに使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．16min
MS（ESIpos）：m／z＝285（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．69（s，3H），5．87（s，2H），7．14−7．09（m，1H），7．16−7．23（m，1H），7．39−7．47（m，1H），7．43（d，1H），8．37（d，1H）．
【０１４１】
実施例13A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミドアセテート
【化３９】
2016523944.tif 000041
実施例12Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル2．22g（6．55mmol；純度84％）およびナトリウムメトキシド0．354g（6．55mmol）を最初にメタノール20mlに装入し、混合物を室温で4．5時間攪拌した。塩化アンモニウム0．421g（7．86mmol）および酢酸1．46ml（25．55mmol）を添加し、反応混合物を還流下で6時間攪拌した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧下で濃縮し、1N水酸化ナトリウム水溶液を残渣に添加し（最大でpH9）、酢酸エチルを添加した。混合物を0℃で30分間攪拌した。次いで、沈殿を濾別し、酢酸エチルで洗浄し、高真空下で一晩乾燥させた。これにより、標的化合物1．14g（理論値の48％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．62min
MS（ESIpos）：m／z＝302（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．82−1．86（m，3H），2．63（s，3H），5．78（s，2H），6．90−6．96（m，1H），7．11−7．18（m，1H），7．25（d，1H），7．34−7．43（m，1H），8．50−7．54（m，2H）．
【０１４２】
実施例14A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド
【化４０】
2016523944.tif 000042
実施例13Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミドアセテート1．14g（3．16mmol）を最初にエタノール15mlに装入し、トリエチルアミン1．76ml（12．62mmol）およびヒドラジン水和物（80％）0．192ml（3．16mmol）を0℃で添加した。混合物を最初に0℃で10分間、次いで室温で一晩攪拌した。反応混合物を10％濃度塩化ナトリウム水溶液70mlに添加し、酢酸エチルで2回抽出した。合わせた有機相を10％濃度塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、室温でロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物0．96g（理論値の94％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．62min
MS（EIpos）：m／z＝317［M＋H］＋．
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．60（s，3H），5．36（br．s．，2H），5．49（br．s．，2H），5．72（s，2H），6．84−6．90（m，1H），7．10−7．18（m，1H），7．16（d，1H），7．32−7．41（m，1H），8．38（d，1H）．
【０１４３】
実施例15A
メチル2−｛3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート
【化４１】
2016523944.tif 000043
ジメチル2，2−ジメチル−3−オキソブタンジオエート0．860g（4．57mmol）（C．J．A．DaleyらJ．Am．Chem．Soc．2002、124（14）、3680〜3691に記載）を最初にエタノール10mlに装入し、加熱還流した。実施例14Aからの1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド0．95g（2．84mmol）のエタノール25ml中懸濁液を滴加した。混合物を還流下で12時間攪拌した。冷却後、沈殿を吸引しながら濾別し、少量のエタノールで洗浄し、濾液を濃縮し、高真空下で乾燥させた。これにより標記化合物（粗）1．36g（理論値の68％；純度69％）が得られ、これをさらに精製することなく後のステップに使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．09min
MS（EIpos）：m／z＝455［M＋H］＋．
【０１４４】
実施例16A
メチル2−｛5−クロロ−3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート
【化４２】
2016523944.tif 000044
塩化ホスホリル9．0mlを、実施例15Aからのメチル2−｛3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート物1．36g（2．99mmol；純度69％）に添加し、混合物を室温で60時間攪拌した。反応混合物をさらに精製することなく後の反応に使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．32min
MS（EIpos）：m／z＝473［M＋H］＋．
【０１４５】
実施例17A
5−フルオロ−3−ヨード−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化４３】
2016523944.tif 000045
アルゴン下、実施例2Aからの5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン14．90g（53．78mmol）を最初に無水DMF150mlに装入し、次いで、DMF50mlに溶解した炭酸セシウム21．03g（64．54mmol）および1−（クロロメチル）−4−メトキシベンゼン8．42g（53．78mmol）を添加した。混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、反応混合物を水1000mlに添加し、酢酸エチルで3回抽出した。回収した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。残渣をSFCクロマトグラフィー［カラム：THAR  SFC−Super  Chrom  Prep  200、5μm、150×30mm；移動相：95％二酸化炭素＋5％メタノール；圧力：150bar；流量：150ml／分；温度：38℃；波長：210nm］によって精製した。これにより、標記化合物12．95g（理論値の61％）が得られた。
LC−MS（Method  5）：Rt＝2．77min
MS（ESIpos）：m／z＝398（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．61（d，3H），3．71（s，3H），5．55（s，2H），6．88（d，2H），7．21（d，2H），7．78（d，1H）．
【０１４６】
実施例18A
5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル
【化４４】
2016523944.tif 000046
実施例17Aからの5−フルオロ−3−ヨード−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン11．80g（29．71mmol）とシアン化銅（I）2．93g（32．72mmol）の混合物を最初に加熱によって乾燥させたフラスコ中の無水DMSO94mlに装入し、混合物を150℃で2時間攪拌した。冷却した反応溶液をCeliteを通して濾過し、濾過残渣をTHF／酢酸エチル（1／1）1．2lで洗浄した。濾液を25％濃度アンモニア水溶液940ml、半濃縮塩化アンモニア水溶液830mlおよび飽和塩化ナトリウム水溶液410mlで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル／酢酸エチル：3／1；次いで、ジクロロメタン／メタノール勾配）によって精製した。これにより、標的化合物7．50g（理論値の85％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．18min
MS（ESIpos）：m／z＝297（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．65（d，3H），3．71（s，3H），5．69（s，2H），6．89（d，2H），7．29（d，2H），8．37（d，1H）．
【０１４７】
実施例19A
5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミド
【化４５】
2016523944.tif 000047
実施例18Aからの5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル7．80g（26．32mmol）を最初にメタノール／THF／ジクロロメタン（1／1／1）120mlに装入した。メタノール10ml中ナトリウムメトキシド1．42g（26．32mmol）を添加し、混合物を室温で2時間攪拌した。塩化アンモニウム1．55g（28．98mmol）および酢酸5．88ml（102．74mmol）を添加し、反応混合物を還流下で2時間攪拌した。メタノールさらに50mlを反応混合物に添加した。ジクロロメタンを留去し、混合物を還流下で1時間攪拌した。溶媒混合物を濃縮し、残渣を1N水酸化ナトリウム水溶液約160mlを用いて室温で1時間攪拌した。次いで、残渣を濾別し、水で洗浄した。これにより、標的化合物8．15g（理論値の99％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．68min
MS（ESIpos）：m／z＝314（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．60（d，3H），3．70（s，3H），5．59（s，2H），6．21（br．s，2H），6．87（d，2H），7．21（d，2H），8．26（d，1H）．
【０１４８】
実施例20A
5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド
【化４６】
2016523944.tif 000048
実施例19Aからの5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミド7．0g（21．22mmol）を最初にエタノール94mlに装入し、トリエチルアミン11．83ml（84．88mmol）およびヒドラジン水和物（80％）1．29ml（21．22mmol）を0℃で添加した。混合物を室温で一晩攪拌し、次いで、10％濃度塩化ナトリウム水溶液260mlに添加し、酢酸エチルで2回抽出した。合わせた有機相を10％濃度塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、室温でロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物7．33g（理論値の96％；純度約91％）が得られた。
LC−MS（Method  3）：Rt＝2．25min
MS（EIpos）：m／z＝329［M＋H］＋．
【０１４９】
実施例21A
メチル2−｛3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート
【化４７】
2016523944.tif 000049
ジメチル2，2−ジメチル−3−オキソブタンジオエート11．47g（60．93mmol）（C．J．A．DaleyらJ．Am．Chem．Soc．2002、124（14）、3680〜3691に記載）を最初にエタノール146mlに装入し、加熱還流した。実施例20Aからの5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド7．33g（20．31mmol；純度約91％）のエタノール146ml中懸濁液を滴加した。混合物を一晩還流下で加熱した。冷却後、固体を濾別し、エタノールで洗浄し、濾液を濃縮した。アセトニトリル約30mlを残渣に添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。固体を濾別し、乾燥させた。これにより、標記化合物5．58g（理論値の50％；純度約85％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．11min
MS（EIpos）：m／z＝467［M＋H］＋．
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．65（d，3H），3．55（s，3H），3．71（s，3H），5．73（s，2H），6．89（d，2H），7．30（d，2H），8．28（d，1H），14．52（br．s，1H）．
【０１５０】
実施例22A
メチル2−｛5−クロロ−3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート
【化４８】
2016523944.tif 000050
塩化ホスホリル53．6mlを、メチル2−｛3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエート、実施例21Aからの化合物5．98g（10．90mmol；純度約85％）に添加し、混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、塩化ホスホリルさらに20mlを添加し、混合物を室温で0．5時間攪拌した。反応混合物を後の反応に直接使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．35min
MS（EIpos）：m／z＝485［M＋H］＋．
【０１５１】
実施例23A
3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化４９】
2016523944.tif 000051
実施例22Aからのメチル2−｛5−クロロ−3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエートの反応溶液を乾燥アセトニトリル500mlで希釈し、次いで、33％濃度アンモニア水溶液780mlにゆっくり滴加した（極めて発熱性）。反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物の有機相を除去し、水相をジクロロメタンで2回抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。これにより、標的化合物5．27g（理論値の89％；純度80％）が得られた。
この50mgを分取HPLC（RP18カラム、移動相：0．1％TFAを添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。得られた生成物分画をジクロロメタンに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で2回洗浄した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。標的化合物35mgが得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．09min
MS（ESIpos）：m／z＝434（M＋H）＋
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H）；2．65（d，3H），3．70（s，3H），5．70（s，2H），6．89（d，2H），7．28（d，2H），8．42（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１５２】
実施例24A
3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化５０】
2016523944.tif 000052
実施例23Aからの3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン1．0g（1．85mmol、純度80％）を最初にアセトニトリル／水（2／1）40．5mlに装入し、硝酸アンモニウムセリウム（IV）4．05g（7．38mmol）を添加し、混合物を室温で3時間攪拌した。水50mlを反応混合物に添加し、混合物を室温で2時間攪拌し、次いで、濾別し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させた。これにより、標的化合物540mg（理論値の91％）が得られた。
LC−MS（Method  3）：Rt＝1．56min
MS（ESIpos）：m／z＝314（M＋H）＋
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．46（s，6H）；2．61（d，3H），8．40（d，1H），12．15（br．s，1H），14．24（br．s，1H）．
【０１５３】
実施例25A
3−ヨード−6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化５１】
2016523944.tif 000053
実施例10Aからの3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン19．8g（76．35mmol）を最初にジクロロメタン190mlに装入し、テトラブチルアンモニウムブロミド246mg（0．76mmol）および50％濃度水酸化カリウム水溶液96mlを0℃で添加し、混合物を激しく攪拌した。次いで、［2−（クロロメトキシ）エチル］（トリメチル）シラン16．2ml（91．62mmol）を滴加し、反応混合物を0℃で1時間、次いで、室温で1時間攪拌した。次いで、［2−（クロロメトキシ）エチル］（トリメチル）シラン2．7ml（15．27mmol）を室温で滴加し、混合物を室温で1時間攪拌した。反応混合物を−20℃で一晩保管した。次いで、［2−（クロロメトキシ）エチル］（トリメチル）シランさらに4．04ml（22．90mmol）を0℃で滴加し、反応混合物を0℃で1時間および室温で1時間攪拌した。有機相を分離し、水相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で2回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／ジクロロメタン勾配、次いで、ジクロロメタン／酢酸エチル勾配）によって精製した。これにより、標記化合物18．14g（理論値の61％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．37min
MS（ESIpos）：m／z＝390（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝−0．11（s，9H），0．79−0．85（m，2H），2．63（s，3H），3．55−3．62（m，2H），5．71（s，2H），7．23（d，1H），7．84（d，1H）．
【０１５４】
実施例26A
6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル
【化５２】
2016523944.tif 000054
実施例25Aからの3−ヨード−6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン1．00g（2．57mmol）とシアン化銅（I）0．253g（2．83mmol）の混合物を最初に無水ジメチルスルホキシド10mlに装入し、混合物を150℃で3時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液、濃アンモニア水溶液の混合物（3／1）および酢酸エチルを冷却した反応溶液に添加し、混合物を室温で30分間攪拌し、Celite（登録商標）を通して濾別した。濾過残渣を酢酸エチルで洗浄した。有機相を分離し、水相が無色になるまで飽和塩化アンモニウム水溶液と濃アンモニア水溶液の混合物（3／1）で3回洗浄した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、高真空下で一晩乾燥させた。標記化合物0．74g（理論値の76％；純度76％）をさらに精製することなく次のステップに使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．29min
MS（ESIpos）：m／z＝289（M＋H）＋
【０１５５】
実施例27A
6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミドアセテート
【化５３】
2016523944.tif 000055
実施例26Aからの6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル12．33g（42．75mmol；純度76％）およびナトリウムメトキシド2．31g（42．75mmol）を最初にメタノール200mlに装入し、混合物を室温で3時間攪拌した。塩化アンモニウム2．74g（51．30mmol）および酢酸9．5ml（166．72mmol）を添加し、混合物を還流下で8時間攪拌した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧下で濃縮し、1N水酸化ナトリウム水溶液を残渣に添加し（最大でpH9）、酢酸エチルを添加した。混合物を室温で30分間攪拌した。次いで、沈殿を濾別し、酢酸エチルで洗浄し、高真空下で一晩乾燥させた。これにより、標的化合物9．01g（理論値の48％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．74min
MS（ESIpos）：m／z＝306（M＋H）＋
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝−0．10（s，9H），0．81−0．88（m，2H），1．84（s，3H），2．64（s，3H），3．58−3．67（m，2H），5．79（s，2H），7．29（d，1H），8．49（d，1H），8．87（br．s．，3H）．
【０１５６】
実施例28A
6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド
【化５４】
2016523944.tif 000056
実施例27Aからの6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドアミドアセテート9．33g（25．52mmol）を最初にエタノール120mlに装入し、トリエチルアミン14．3ml（102．08mmol）およびヒドラジン水和物（80％）1．55ml（25．52mmol）を0℃で添加した。反応混合物を0℃で10分間、次いで、室温で一晩攪拌した。反応混合物を10％濃度塩化ナトリウム水溶液550mlに添加し、酢酸エチルで2回抽出した。合わせた有機相を10％濃度塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、室温でロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物8．41g（理論値の97％；純度：94％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．75min
MS（ESIpos）：m／z＝321（M＋H）＋
【０１５７】
実施例29A
メチル2−［5−ヒドロキシ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］−2−メチルプロパノエート
【化５５】
2016523944.tif 000057
ジメチル2，2−ジメチル−3−オキソブタンジオエート6．54g（34．73mmol）（C．J．A．DaleyらJ．Am．Chem．Soc．2002、124（14）、3680〜3691に記載）を最初にエタノール230mlに装入し、加熱還流した。次いで、実施例28Aからの6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド7．42g（23．15mmol）を少しずつ添加した。反応混合物を還流下で一晩攪拌した。冷却後、沈殿を濾別し、少量のエタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、高真空下で乾燥させた。これにより標記化合物（粗）が得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．24min
MS（ESIpos）：m／z＝459（M＋H）＋
【０１５８】
実施例30A
メチル2−［5−クロロ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］−2−メチルプロパノエート
【化５６】
2016523944.tif 000058
テトラヒドロチオフェン1，1−ジオキシド（スルホラン）22mlおよびオキシ三塩化リン11mlを、実施例29Aからのメチル2−［5−ヒドロキシ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］−2−メチルプロパノエート10．62g（23．15mmol）に添加した。反応混合物を室温で60時間保ち、次いで、後の反応に直接使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．43min
MS（EIpos）：m／z＝477［M＋H］＋．
【０１５９】
実施例31A
7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化５７】
2016523944.tif 000059
実施例30Aからのメチル2−［5−クロロ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］−2−メチルプロパノエートの反応溶液を乾燥アセトニトリル78mlで希釈し、次いで、内部温度を0〜12℃の間に保ちながら、0℃に冷却した33％濃度アンモニア水溶液（245ml）にゆっくり滴加した。次いで、混合物を室温で一晩攪拌した。2相反応混合物からロータリーエバポレーターで溶媒を取り除いた。次いで、混合物を酢酸エチルで3回抽出した。合わせた有機相を濃縮し、ジエチルエーテル800mlを残渣に添加し、混合物を水で3回（200ml、400ml、200ml）および塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、濃縮し、高真空下で乾燥させた。ジクロロメタンを残渣に添加し、混合物を濾過した。濾液をシリカゲルカラムに適用し、シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／酢酸エチル勾配）によって精製した。これにより、標的化合物4．05g（理論値の36％；純度88％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．15min
MS（EIpos）：m／z＝426［M＋H］＋．
【０１６０】
実施例32A
7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化５８】
2016523944.tif 000060
実施例31Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン3．2g（6．62mmol；純度88％）を最初にジクロロメタン14mlおよびトリフルオロ酢酸14mlに装入し、混合物を室温で30分間攪拌した。反応混合物を減圧下30℃で濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。次いで、THF33mlおよび2N水酸化リチウム水溶液36．4mlを添加し、混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を減圧下50℃で濃縮し、水50mlを添加し、混合物を再濃縮した。残渣を水70mlに溶解し、ジクロロメタンで3回抽出した。水相を、濃塩酸水溶液を用いてpH6に酸性化し、塩化ナトリウムを用いて飽和した。混合物を2−メチルテトラヒドロフランで5回抽出し、合わせた有機相をロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を2つの（100mlおよび50ml）メチルtert−ブチルエーテルで抽出し、濾別した。濾過残渣を高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物1．20g（理論値の55％；純度約90％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．67min
MS（ESIpos）：m／z＝296（M＋H）＋
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．46（s，6H）；2．63（s，3H），7．27（d，1H），8．68（d，1H），12．17（br．s，1H），14．05（br．s，1H）．
【０１６１】
実施例33A
エチル1−ホルミルシクロプロパンカルボキシレート
【化５９】
2016523944.tif 000061
温度計、滴下漏斗および排気を備えた三つ首フラスコ中で、塩化オキサリル7．39g（58．19mmol）を−78℃で最初に無水ジクロロメタン116mlに装入した。次いで、内部温度を−70℃〜−78℃の間に保ちながら、無水ジクロロメタン8mlに溶解したジメチルスルホキシド9．08g（116．38mmol）をゆっくり滴加した（注意：激しいガス放出）。反応混合物を−78℃でさらに5分間攪拌した。次いで、内部温度を−70℃〜−78℃の間に保ちながら、無水ジクロロメタン196mlに溶解したエチル1−（ヒドロキシメチル）シクロプロパンカルボキシレート7．63g（52．90mmol）（M．H．Parkerら米国特許出願公開第20120053146号明細書に記載）をゆっくり滴加した。反応混合物を−78℃でさらに10分間攪拌した。次いで、内部温度を−70℃〜−78℃の間に保ちながら、トリエチルアミン26．72g（264．51mmol）をゆっくり滴加した。反応混合物を−78℃でさらに10分間攪拌し、次いで、2時間にわたって室温に加温した。混合物をメチルtert−ブチルエーテル700mlで希釈し、沈殿を濾別し、濾液を30℃および100mbarで濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン）によって精製した。これにより、標記化合物7．30g（理論値の97％、NMRによる純度約95％）が得られた。
1H  NMR（500MHz，CDCl3）：δ［ppm］＝1．32（t，3H），1．58−1．63（m，2H），1．65−1．70（m，2H），4．28（q，2H），10．41（s，1H）．
【０１６２】
実施例34A
エチル1−［シアノ（ヒドロキシ）メチル］シクロプロパンカルボキシレート
【化６０】
2016523944.tif 000062
実施例33Aからのエチル1−ホルミルシクロプロパンカルボキシレート7．30g（51．35mmol）および塩化アンモニウム3．16g（59．06mmol）を最初に0℃で水9mlおよびジエチルエーテル9mlに装入した。反応混合物の温度を常に＋10℃未満に保ちながら、シアン化ナトリウム2．52g（51．35mmol）の水6．4ml中溶液を0℃で滴加した。混合物を0℃でさらに20分間攪拌し、次いで、相を分離した。水相を酢酸エチルで3回抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で2回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下室温および100mbarで濃縮した。これにより標記化合物8．99g（理論値の104％；NMRによる純度約95％）が得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
1H  NMR（500MHz，CDCl3）：δ［ppm］＝1．04−1．11（m，1H），1．15−1．22（m，1H），1．29（t，3H），1．39−1．46（m，1H），1．47−1．53（m，1H），4．16（br．s，1H），4．24（q，2H）．
【０１６３】
実施例35A
エチル1−（2−エトキシ−1−ヒドロキシ−2−オキソエチル）シクロプロパンカルボキシレート
【化６１】
2016523944.tif 000063
反応を文献から既知の方法（A．de  Meijereら、Eur．J．Org．Chem．2004、3669〜3678に記載）と同様に行った。装置：温度計、排気カニューレを有する隔膜、ガス入口管を備えた三つ首フラスコ。穏やかな塩化水素流を装置に通過させた。反応フラスコを−20℃（浴温度）に冷却した。実施例34Aからのエチル1−［シアノ（ヒドロキシ）メチル］シクロプロパンカルボキシレート8．69g（51．35mmol）を乾燥エタノール26mlに溶解し、塩化水素流下でゆっくり滴加した。フラスコ中の反応混合物の温度を常に−10℃未満に保った。添加を終了した後、反応混合物を−20℃で（約10分）塩化水素で飽和し、冷却浴を除去し、次いで、混合物を室温で1時間攪拌した。反応混合物を室温で（最高7〜8mbar）濃縮し、氷水28mlを0℃で残渣（固体12．4g）に添加し、混合物を最初に0℃で30分間、次いで、室温で一晩攪拌した。酢酸エチル70mlを添加し、反応混合物を室温で5分間攪拌し、その後、相を分離した。水相を酢酸エチルで3回抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で2回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下室温および30mbarで濃縮した。これにより標記化合物10．46g（理論値の94％；NMRによる純度約90％）が得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
1H  NMR（500MHz，CDCl3）：δ［ppm］＝1．00−1．07（m，1H），1．10−1．18（m，1H），1．18−1．33（m，6H），1．33−1．44（m，2H），3．42（br．d，1H），3．57（br．d，1H），4．07−4．20（m，2H），4．20−4．34（m，2H）．
【０１６４】
実施例36A
エチル1−［エトキシ（オキソ）アセチル］シクロプロパンカルボキシレート
【化６２】
2016523944.tif 000064
実施例35Aからのエチル1−（2−エトキシ−1−ヒドロキシ−2−オキソエチル）シクロプロパンカルボキシレート10．46g（48．37mmol）を最初に無水ジエチルエーテル300mlに装入し、活性化二酸化マンガン（Fluka）24．19g（278．21mmol）を添加した。反応混合物を室温で2時間攪拌した。次いで、反応混合物をCelite（登録商標）を通して吸引しながら濾過し、濾過残渣をジエチルエーテルで洗浄した。濾液をロータリーエバポレーターで室温および70mbarで濃縮した。これにより、標記化合物7．42g（理論値の72％；NMRによる純度95％）が得られた。
GC−MS（方法8）：Rt＝3．87分
MS（EIpos）：m／z＝141（M−73）＋
1H  NMR（500MHz，CDCl3）：δ［ppm］＝1．25（t，3H），1．39（t，3H），1．62−1．67（m，2H），1．68−1．73（m，2H），4．20（q，2H），4．36（q，2H）．
【０１６５】
実施例37A
エチル1−｛3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝シクロプロパンカルボキシレート
【化６３】
2016523944.tif 000065
反応を実施例41Aと同様に行った。
実施例36Aからのエチル1−［エトキシ（オキソ）アセチル］シクロプロパンカルボキシレート（2．1当量）を最初にエタノールに装入し（濃度約0．2モル濃度）、加熱還流する。次いで、酢酸／エタノールの混合物（1／4．6体積比；酢酸20当量；5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジドの濃度約0．2モル濃度）に懸濁した、実施例20Aからの5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド（1当量）を少しずつ添加する。反応混合物を還流下で1時間攪拌する。冷却後、反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮する。残渣を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸または0．1％TFAを添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製する。
【０１６６】
実施例38A
エチル1−｛5−クロロ−3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝シクロプロパンカルボキシレート
【化６４】
2016523944.tif 000066
反応を実施例42Aと同様に行った。
0℃で、テトラヒドロチオフェン1，1−ジオキシド（スルホラン）（濃度約0．1〜0．2モル濃度）および塩化ホスホリル（50当量）を実施例37Aからのエチル1−｛3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−ヒドロキシ−1，2，4−トリアジン−6−イル｝シクロプロパンカルボキシレート（1当量）に添加する。全ての出発材料が溶解するまで、反応混合物を超音波で処理し、次いで、0℃で5分間攪拌する。次いで、反応混合物を＋10℃で2時間攪拌し、後の反応に直接使用する。
【０１６７】
実施例39A
3’−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン
【化６５】
2016523944.tif 000067
反応を実施例43Aと同様に行う。
実施例38Aからのエチル1−｛5−クロロ−3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝シクロプロパンカルボキシレートの反応溶液を乾燥アセトニトリルで希釈し（濃度約0．01〜0．05モル濃度）、次いで、内部温度を0〜12℃の間に保ちながら（極めて発熱性）、0℃に冷却した33％濃度アンモニア水溶液にゆっくり滴加する（このアンモニア溶液72ml／エチル1−｛5−クロロ−3−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝シクロプロパンカルボキシレート1mmol）。次いで、混合物を室温で約48時間攪拌する。反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮する。水を残渣に添加し、混合物をジクロロメタンで3回抽出する。合わせた有機相を水で2回および飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。粗生成物を分取HPLC（RP18カラム、移動相：0．05％ギ酸または0．1％TFAを添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製する。得られた生成物分画をジクロロメタンに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で2回洗浄する。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮する。
【０１６８】
実施例40A
3’−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン
【化６６】
2016523944.tif 000068
実施例39Aからの3’−［5−フルオロ−1−（4−メトキシベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン（1当量）を最初にアセトニトリル／水（2／1）に装入し（濃度約0．05モル濃度）、硝酸アンモニウムセリウム（IV）（4当量）を添加し、混合物を室温で4時間攪拌する。水を反応混合物に添加し、混合物を室温で2時間攪拌し、次いで、濾別し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させる。
【０１６９】
実施例41A
エチル1−［5−ヒドロキシ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］シクロプロパンカルボキシレート
【化６７】
2016523944.tif 000069
エタノール16ml中実施例36Aからのエチル1−［エトキシ（オキソ）アセチル］シクロプロパンカルボキシレート681mg（3．18mmol）を加熱還流した。次いで、酢酸1．73ml（30．27mmol）とエタノール8mlの混合物に懸濁した、実施例28Aからの6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボキシイミドヒドラジド485mg（1．51mmol）を少しずつ添加した。反応混合物を還流下で1時間攪拌した。冷却後、反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標記化合物127mg（理論値の15％；純度86％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．18min
MS（ESIpos）：m／z＝471（M＋H）＋
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝−0．13−  −0．08（m，9H），0．83−0．88（m，2H），1．11（t，3H），1．32（br．s，2H），1．41−1．45（m，2H），2．68（s，3H），3．67（t，2H），4．06（q，2H），5．88（s，2H），7．40（d，1H），8．61（d，1H），14．40（br．s，1H）．
【０１７０】
実施例42A
エチル1−［5−クロロ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］シクロプロパンカルボキシレート
【化６８】
2016523944.tif 000070
0℃で、テトラヒドロチオフェン1，1−ジオキシド（スルホラン）2．5mlおよび塩化ホスホリル1．27mlを、実施例41Aからのエチル1−［5−ヒドロキシ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］シクロプロパンカルボキシレート127mg（0．23mmol、純度86％）に添加した。全ての出発材料が溶解するまで、反応混合物を超音波で処理し、次いで、0℃で5分間攪拌した。次いで、反応混合物を＋10℃で90分間攪拌し、後の反応に直接使用した。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．43min
MS（ESIpos）：m／z＝489（M＋H）＋
【０１７１】
実施例43A
3’−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン
【化６９】
2016523944.tif 000071
実施例42Aからのエチル1−［5−クロロ−3−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−1，2，4−トリアジン−6−イル］シクロプロパンカルボキシレートの反応溶液を乾燥アセトニトリル30mlで希釈し、次いで、内部温度を0〜12℃の間に保ちながら、0℃に冷却した33％濃度アンモニア水溶液（41ml）にゆっくり滴加した。次いで、混合物を室温で約48時間攪拌した。反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮した。水を残渣に添加し、混合物をメチルtert−ブチルエーテルで3回抽出した。合わせた有機相を水で2回および飽和塩化ナトリウム水溶液で1回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製生成物をさらに精製することなく次のステップに使用した。
LC−MS（Method  4）：Rt＝3．42min
MS（EIpos）：m／z＝424［M＋H］＋．
【０１７２】
実施例44A
3’−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン
【化７０】
2016523944.tif 000072
実施例43Aからの粗生成物3’−（6−メチル−1−｛［2−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オンを最初にジクロロメタン13mlおよびトリフルオロ酢酸13mlに装入し、混合物を室温で30分間攪拌した。反応混合物を減圧下30℃でで濃縮した。残渣を減圧下30℃でジオキサンから2回およびトルエンから1回濃縮し、次いで、高真空下で乾燥させた。THF5mlおよび5％濃度アンモニア水溶液5mlを添加し、混合物を室温で5分間保った。反応混合物を減圧下30℃で濃縮し、残渣を減圧下30℃でTHF5mlと5％濃度アンモニア水溶液5mlの混合物から2回濃縮した。残渣を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標記化合物40mg（理論値の46％；NMRによる純度約90％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝0．65min
MS（ESIpos）：m／z＝294（M＋H）＋
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．82−1．86（m，2H），1．96−2．00（m，2H），2．63（s，3H），7．26（d，1H），8．66（d，1H），12．31（br．s，1H），14．02（br．s，1H）．
【０１７３】
実施例：
【０１７４】
実施例1
3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７１】
2016523944.tif 000073
実施例9Aからのメチル2−｛5−クロロ−3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエートの反応溶液を乾燥アセトニトリル72mlで希釈し、次いで、0℃で33％濃度アンモニア水溶液109mlにゆっくり滴加した（極めて発熱性）。反応混合物を室温で一晩攪拌し、次いで、50℃でロータリーエバポレーターで濃縮した。水100mlおよびジクロロメタン150mlを残渣に添加し、混合物を室温で30分間激しく攪拌した。2つの相を分離し、水相をジクロロメタンで1回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。
無水ジオキサン9．6mlおよび酢酸2．4mlを粗生成物に添加し、混合物をマイクロ波中100℃で8時間攪拌した。混合物を濃縮し、残渣を30分間水を用いて攪拌した。得られた固体を濾別し、高真空下で乾燥させた。エタノール5．5mlを固体に添加した。懸濁液を50℃に加熱し、透明な溶液が得られるようにジクロロメタン3．3mlを添加した。0℃に冷却した後、標的化合物の第1の生成物分画を固体（241mg）として濾別した。濾液を濃縮し、エタノール3mlを添加した。懸濁液を50℃に加熱し、透明な溶液が得られるようにジクロロメタン1．5mlを添加した。室温に冷却した後、標的化合物の第2の生成物分画を固体（127mg）として濾別した。2つの生成物分画を合わせ、凍結乾燥した。これにより、標記化合物368mg（理論値の52％；純度94％）が得られた。
LC−MS（Method  2）：Rt＝3．35min
MS（EIpos）：m／z＝440［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．65（d，3H），5．89（s，2H），7．03−7．09（m，1H），7．14−7．21（m，1H），7．36−7．44（m，1H），8．45（d，1H），12．15（br．s，1H）．
【０１７５】
実施例2
ナトリウム3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−6−オキソ−6，7−ジヒドロピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−5−イド
【化７２】
2016523944.tif 000074
実施例1からの3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン20mg（0．046mmol）をTHF0．1mlに溶解し（穏やかに加温し、次いで、短時間超音波処理）、1N水酸化ナトリウム溶液0．046mlを添加した。反応混合物を室温で2分間、次いで、50℃で5分間攪拌した。次いで、混合物を濃縮し、生成物を高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物20mg（理論値の91％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．09min
MS（EIpos）：m／z＝440［M−Na＋2H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．16（s，6H），2．63（d，3H），5．84（s，2H），6．97−7．03（m，1H），7．13−7．21（m，1H），7．35−7．44（m，1H），8．46（d，1H）．
【０１７６】
実施例3
3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７３】
2016523944.tif 000075
実施例16Aからのメチル2−｛5−クロロ−3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−1，2，4−トリアジン−6−イル｝−2−メチルプロパノエートの反応溶液を乾燥アセトニトリル85mlで希釈し、次いで、0℃に冷却した33％濃度アンモニア水溶液（78ml）にゆっくり滴加した（極めて発熱性；内部温度：0〜12℃）。反応混合物を室温で一晩攪拌した。有機相を分離し、ロータリーエバポレーターで約30mlに濃縮し、次いで、水を添加した。混合物を超音波浴で1．5時間処理した。固体を吸引しながら濾別し、水および少量のアセトニトリルで洗浄し、高真空下で乾燥させた。残渣をDMF（数滴）およびジクロロメタンに溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル勾配）によって精製した。生成物分画を濃縮し、酢酸エチルおよびジイソプロピルエーテルを残渣に添加した。固体を吸引しながら濾別し、高真空下で乾燥させた。
生成物が少量のDMFをまだ含んでいたので、これを以下の通りさらに精製した：エタノール／水を粗生成物に添加し、混合物を90℃で30分間攪拌し、氷浴で冷却し、生成物をエタノール／水で洗浄し、高真空下で乾燥させた。固体を還流下でエタノール60mlに溶解し、冷却し、減圧下で約10mlに濃縮した。第1の抽出実験からのエタノール／水濾液および水100mlを添加した。次いで、混合物を短時間氷浴で冷却し、固体を吸引しながら濾別し、水および少量の水／エタノールで洗浄し、高真空下で一晩乾燥させた。これにより、標的化合物290mg（理論値の23％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．05min
MS（EIpos）：m／z＝422［M＋H］＋
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．68（s，3H），5．88（s，2H），7．00−7．05（m，1H），7．14−7．20（m，1H），7．35−7．42（m，1H），7．36（d，1H），8．72（d，1H），12．12（br．s，1H）．
【０１７７】
実施例4
ナトリウム3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−6−オキソ−6，7−ジヒドロピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−5−イド
【化７４】
2016523944.tif 000076
実施例3からの3−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン14．7mg（0．035mmol）をTHF0．2mlに溶解し、1N水酸化ナトリウム水溶液0．035mlを添加した。反応混合物を室温で2分間、次いで、50℃で5分間攪拌した。次いで、混合物を濃縮し、高真空下で乾燥させた。これにより、標記化合物15．4mg（理論値の99．6％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．05min
MS（EIpos）：m／z＝422［M−Na＋2H］＋．
1H  NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．15（s，6H），2．65（s，3H），5．82（s，2H），6．91−6．98（m，1H），7．11−7．19（m，1H），7．26（d，1H），7．33−7．43（m，1H），8．71（d，1H）．
【０１７８】
実施例5
3−［5−フルオロ−1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７５】
2016523944.tif 000077
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン80mg（0．255mmol）を最初にDMF2．7mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム333mg（1．02mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．27mlに溶解した1−（ブロモメチル）−2−フルオロ−4−メチルベンゼン40mg（0．19mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。次いで、混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物をジクロロメタン／メタノール／アンモニアのメタノール中1N溶液（2／2／1）に溶解し、厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物7mg（理論値の6％；純度98％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．17min
MS（EIpos）：m／z＝436［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．28（s，3H），2．65（d，3H），5．77（s，2H），6．97（d，1H），7．05（d，1H），7．13（t，1H），8．44（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１７９】
実施例6
3−［1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７６】
2016523944.tif 000078
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．31mmol、純度90％）を最初にDMF3．2mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム397mg（1．22mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．32mlに溶解した1−（ブロモメチル）−2−フルオロ−4−メチルベンゼン54mg（0．26mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。次いで、混合物を冷却し、水およびギ酸0．5mlを添加した。得られた沈殿を濾別し、アセトニトリルで洗浄し、濾液を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物20mg（理論値の16％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．06min
MS（EIpos）：m／z＝418［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．28（s，3H），2．67（s，3H），5．77（s，2H），6．96（d，1H），7．05（d，1H），7．07−7．13（m，1H），7．34（d，1H），8．70（d，1H），12．13（br．s，1H）．
【０１８０】
実施例7
3−［1−（2，4−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７７】
2016523944.tif 000079
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン80mg（0．255mmol）を最初にDMF2．7mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム333mg（1．02mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．27mlに溶解した1−（ブロモメチル）−2，4−ジフルオロベンゼン40．5mg（0．19mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物をジクロロメタン／メタノール／アンモニアのメタノール中1N溶液（2／2／1）に溶解し、厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物17mg（理論値の15％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．13min
MS（EIpos）：m／z＝440［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．43（s，6H），2．65（d，3H），5．80（s，2H），7．04−7．10（m，1H），7．25−7．31（m，1H），7．32−7．39（m，1H），8．44（d，1H），12．15（br．s，1H）．
【０１８１】
実施例8
3−［1−（2，4−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７８】
2016523944.tif 000080
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．31mmol、純度90％）を最初にDMF3．2mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム397mg（1．22mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．32mlに溶解した1−（ブロモメチル）−2，4−ジフルオロベンゼン55mg（0．26mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．5mlを添加した。得られた沈殿を濾別し、アセトニトリルで洗浄し、濾液を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物29mg（理論値の22％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．02min
MS（EIpos）：m／z＝422［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．68（s，3H），5．80（s，2H），7．03−7．10（m，1H），7．25−7．35（m，2H），7．36（d，1H），8．71（d，1H），12．16（br．s，1H）．
【０１８２】
実施例9
3−［1−（4−クロロ−2−フルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化７９】
2016523944.tif 000081
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン80mg（0．255mmol）を最初にDMF2．7mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム333mg（1．02mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．27mlに溶解した1−（ブロモメチル）−4−クロロ−2−フルオロベンゼン44mg（0．19mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物をジクロロメタン／メタノール／アンモニアのメタノール中1N溶液（2／2／1）に溶解し、厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物24mg（理論値の21％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．19min
MS（EIpos）：m／z＝456［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．65（d，3H），5．82（s，2H），7．26−7．31（m，2H），7．46−7．50（m，1H），8．44（d，1H），12．16（br．s，1H）．
【０１８３】
実施例10
3−［1−（4−クロロ−2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８０】
2016523944.tif 000082
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．34mmol；純度90％）を最初にDMF3．2mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム441mg（1．36mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．32mlに溶解した1−（ブロモメチル）−4−クロロ−2−フルオロベンゼン64mg（0．29mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．5mlを添加した。得られた沈殿を濾別し、アセトニトリルで洗浄し、濾液を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物30mg（理論値の21％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．08min
MS（EIpos）：m／z＝438［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．68（s，3H），5．81（s，2H），7．22−7．29（m，2H），7．36（d，1H），7．46−7．50（m，1H），8．71（d，1H），12．13（br．s，1H）．
【０１８４】
実施例11
3−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８１】
2016523944.tif 000083
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン80mg（0．255mmol）を最初にDMF2．7mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム333mg（1．02mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．27mlに溶解した2−（ブロモメチル）−1，3，4−トリフルオロベンゼン44．4mg（0．19mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物を厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物33mg（理論値の28％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．09min
MS（EIpos）：m／z＝458［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．66（d，3H），5．86（s，2H），7．16−7．24（m，1H），7．50−7．60（m，1H），8．43（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１８５】
実施例12
7，7−ジメチル−3−［6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８２】
2016523944.tif 000084
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．27mmol；純度90％）を最初にDMF2．8mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム353mg（1．08mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．28mlに溶解した2−（ブロモメチル）−1，3，4−トリフルオロベンゼン56mg（0．24mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．5mlを添加し、生成物を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物38mg（理論値の32％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．02min
MS（EIpos）：m／z＝440［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．69（s，3H），5．85（s，2H），7．16−7．22（m，2H），7．36（d，1H），7．50−7．58（m，1H），8．69（d，1H），12．13（br．s，1H）．
【０１８６】
実施例13
3−［1−（3−クロロ−2−フルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８３】
2016523944.tif 000085
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン80mg（0．255mmol）を最初にDMF2．7mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム333mg（1．02mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．27mlに溶解した1−（ブロモメチル）−3−クロロ−2−フルオロベンゼン44．6mg（0．19mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物を厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物26mg（理論値の21％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．15min
MS（EIpos）：m／z＝456［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．65（d，3H），5．88（s，2H），7．18−7．26（m，2H），7．53−7．58（m，1H），8．45（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１８７】
実施例14
3−［1−（3−クロロ−2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８４】
2016523944.tif 000086
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．31mmol、純度90％）を最初にDMF3．2mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム397mg（1．22mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．32mlに溶解した1−（ブロモメチル）−3−クロロ−2−フルオロベンゼン60mg（0．26mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．5mlを添加した。得られた沈殿を濾別し、アセトニトリルで洗浄し、濾液を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物33mg（理論値の25％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．10min
MS（EIpos）：m／z＝438［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．68（s，3H），5．87（s，2H），7．16−7．23（m，2H），7．37（d，1H），7．52−7．59（m，1H），8．72（d，1H），12．16（br．s，1H）．
【０１８８】
実施例15
3−［1−（2，6−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８５】
2016523944.tif 000087
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン50mg（0．16mmol）を最初にDMF0．5mlに装入し、炭酸セシウム156mg（0．48mmol）および2，6−ジフルオロベンジルブロミド25．5mg（0．12mmol）を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。2，6−ジフルオロベンジルブロミドさらに6．6mg（0．032mmol）を添加し、混合物を室温で0．5時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物を厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物10．4mg（理論値の15％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．10min
MS（EIpos）：m／z＝440［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．44（s，6H），2．67（d，3H），5．82（s，2H），7．12−7．19（m，2H），7．44−7．52（m，1H），8．41（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１８９】
実施例16
3−［1−（2，6−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８６】
2016523944.tif 000088
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．34mmol；純度90％）を最初にDMF3．2mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム441mg（1．36mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．32mlに溶解した2−（ブロモメチル）−1，3−ジフルオロベンゼン60mg（0．29mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．5mlを添加した。得られた沈殿を濾別し、アセトニトリルで洗浄し、濾液を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物43mg（理論値の29％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．00min
MS（EIpos）：m／z＝422［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．43（s，6H），2．69（s，3H），5．81（s，2H），7．10−7．18（m，2H），7．34（d，1H），7．43−7．51（m，1H），8．69（d，1H），12．12（br．s，1H）．
【０１９０】
実施例17
3−［5−フルオロ−1−（3−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８７】
2016523944.tif 000089
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン80mg（0．255mmol）を最初にDMF2．7mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム333mg（1．02mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．27mlに溶解した4−（ブロモメチル）−2−フルオロ−1−メチルベンゼン38．9mg（0．19mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物を厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物27mg（理論値の22％、純度92％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．17min
MS（EIpos）：m／z＝436［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．16−2．20（m，3H），2．65（d，3H），5．76（s，2H），6．99−7．03（m，1H），7．04−7．09（m，1H），7．23（t，1H），8．44（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１９１】
実施例18
3−［1−（3−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８８】
2016523944.tif 000090
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン40mg（0．135mmol）を最初にDMF1．3mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム221mg（0．677mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．13mlに溶解した4−（ブロモメチル）−2−フルオロ−1−メチルベンゼン20．6mg（0．102mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．3mlを添加し、生成物を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物18．5mg（理論値の33％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．09min
MS（EIpos）：m／z＝418［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．16−2．19（m，3H），2．67（s，3H），5．75（s，2H），6．98−7．02（m，1H），7．03−7．08（m，1H），7．21−7．25（m，1H），7．35（d，1H），8．71（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１９２】
実施例19
3−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化８９】
2016523944.tif 000091
実施例24Aからの3−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン100mg（0．319mmol）を最初にDMF3．4mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム416mg（1．28mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．34mlに溶解した1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロ−4−メチルベンゼン53mg（0．24mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮した。粗生成物を厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝40／1）によって精製した。これにより、標的化合物22mg（理論値の14％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．20min
MS（EIpos）：m／z＝454［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．23−2．26（m，3H），2．65（d，3H），5．83（s，2H），6．95−7．01（m，1H），7．03−7．09（m，1H），8．44（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１９３】
実施例20
3−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−7，7−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン
【化９０】
2016523944.tif 000092
実施例32Aからの7，7−ジメチル−3−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6−オン40mg（0．135mmol）を最初にDMF1．3mlに装入し、80℃に加熱した。炭酸セシウム177mg（0．542mmol）を混合物に添加した。次いで、DMF0．13mlに溶解した1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロ−4−メチルベンゼン25．5mg（0．115mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。反応混合物を冷却し、水およびギ酸0．2mlを添加した。得られた沈殿を吸引しながら濾別し、アセトニトリルで洗浄した。固体をTFA／DMFに溶解し、次いで、分取HPLC（RP−C18、移動相：0．05％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物16．7mg（理論値の28％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．08min
MS（EIpos）：m／z＝436［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．45（s，6H），2．23−2．26（m，3H），2．68（s，3H），5．82（s，2H），6．91−6．97（m，1H），7．02−7．08（m，1H），7．35（d，1H），8．71（d，1H），12．14（br．s，1H）．
【０１９４】
実施例21
3’−［5−フルオロ−1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6’（5’H）−オン
【化９１】
2016523944.tif 000093
実施例40Aからの3’−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン（1当量）を最初にDMFに装入し（濃度約0．1モル濃度）、80℃に加熱する。炭酸セシウム（4当量）を添加し、混合物を10分間攪拌する。次いで、DMFに溶解した1−（ブロモメチル）−2−フルオロ−4−メチルベンゼン（0．75当量）（濃度約0．7モル濃度）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加する。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌する。次いで、混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮する。粗生成物をジクロロメタン／メタノール／アンモニアのメタノール中1N溶液（2／2／1）に溶解し、厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール）または分取HPLC（RP−C18、移動相：0．1％TFAを添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製する。
【０１９５】
実施例22
3’−［1−（2−フルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6’（5’H）−オン
【化９２】
2016523944.tif 000094
実施例44Aからの3’−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン14．2mg（0．044mmol、純度90％）を最初にDMF500μlに装入し、炭酸セシウム142mg（0．436mmol）を添加した。混合物を80℃℃に加熱し、10分間攪拌した。次いで、DMF50μlに溶解した1−（ブロモメチル）−2−フルオロ−4−メチルベンゼン7．1mg（0．034mmol）を、個々の添加の間80℃℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。次いで、混合物を冷却し、水0．1mlおよびギ酸0．9mlを添加した。混合物を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．1％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物1．6mg（理論値の9％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．05min
MS（EIpos）：m／z＝416［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．80−1．86（m，2H），1．93−2．00（m，2H），2．28（s，3H），2．67（s，3H），5．76（s，2H），6．96（d，1H），7．06（d，1H），7．12（t，1H），7．33（d，1H），8．68（d，1H），12．32（br．s，1H）．
【０１９６】
実施例23
3’−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6’（5’H）−オン
【化９３】
2016523944.tif 000095
実施例40Aからの3’−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン（1当量）を最初にDMFに装入し（濃度約0．1モル濃度）、80℃に加熱する。炭酸セシウム（4当量）を添加し、次いで、混合物を10分間攪拌する。次いで、DMFに溶解した1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロベンゼン（0．75当量）（濃度約0．7モル濃度）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加する。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌する。次いで、混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮する。粗生成物をジクロロメタン／メタノール／アンモニアのメタノール中1N溶液（2／2／1）に溶解し、厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール）または分取HPLC（RP−C18、移動相：0．1％TFAを添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製する。
【０１９７】
実施例24
3’−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6’（5’H）−オン
【化９４】
2016523944.tif 000096
実施例44Aからの3’−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン10．0mg（0．031mmol、純度90％）を最初にDMF352μlに装入し、炭酸セシウム100mg（0．307mmol）を添加した。混合物を80℃℃に加熱し、10分間攪拌した。次いで、DMF35μlに溶解した1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロベンゼン5．1mg（0．024mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。次いで、混合物を冷却し、水0．1mlおよびギ酸0．9mlを添加した。混合物を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．1％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物2．6mg（理論値の20％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．00min
MS（EIpos）：m／z＝420［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．82−1．87（m，2H），1．96−2．01（m，2H），2．69（s，3H），5．88（s，2H），7．04−7．09（m，1H），7．16−7．22（m，1H），7．36（d，1H），7．37−7．44（m，1H），8．71（d，1H）．
【０１９８】
実施例25
3’−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6’（5’H）−オン
【化９５】
2016523944.tif 000097
実施例40Aからの3’−（5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン（1当量）を最初にDMFに装入し（濃度約0．1モル濃度）、80℃に加熱する。炭酸セシウム（4当量）を添加し、混合物を10分間攪拌する。次いで、DMFに溶解した1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロ−4−メチルベンゼン（0．75当量）（濃度約0．7モル濃度）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加する。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌する。次いで、混合物を酢酸エチルで希釈し、水で2回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過および濃縮する。粗生成物をジクロロメタン／メタノール／アンモニアのメタノール中1N溶液（2／2／1）に溶解し、厚層クロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール）または分取HPLC（RP−C18、移動相：0．1％TFAを添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製する。
【０１９９】
実施例26
3’−［1−（2，3−ジフルオロ−4−メチルベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン−6’（5’H）−オン
【化９６】
2016523944.tif 000098
実施例44Aからの3’−（6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル）スピロ［シクロプロパン−1，7’−ピロロ［2，3−e］［1，2，4］トリアジン］−6’（5’H）−オン10．0mg（0．031mmol、純度90％）を最初にDMF352μlに装入し、炭酸セシウム100mg（0．307mmol）を添加した。混合物を80℃℃に加熱し、10分間攪拌した。次いで、DMF35μlに溶解した1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロ−4−メチルベンゼン5．4mg（0．024mmol）を、個々の添加の間80℃で約1分間攪拌して、80℃で10分間にわたって10回に分けて反応混合物に添加した。次いで、混合物を80℃で10分間攪拌した。次いで、混合物を冷却し、水0．1mlおよびギ酸0．9mlを添加した。混合物を分取HPLC（RP−C18、移動相：0．1％ギ酸を添加したアセトニトリル／水勾配）によって精製した。これにより、標的化合物1．4mg（理論値の11％）が得られた。
LC−MS（Method  1）：Rt＝1．07min
MS（EIpos）：m／z＝434［M＋H］＋．
1H  NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．81−1．85（m，2H），1．95−1．98（m，2H），2．25（d，3H），2．67（s，3H），5．81（s，2H），6．94−6．99（m，1H），7．03−7．08（m，1H），7．34（d，1H），8．69（d，1H），12．32（br．s，1H）．
【０２００】
B．薬理学的有効性の評価
本発明による化合物の薬理効果を以下のアッセイで示すことができる：
【０２０１】
B−1．インビトロでの血管弛緩効果
単離した血管に対する本発明による化合物の弛緩活性の測定を、JP  Staschら、Br  J  Pharmacol．2002；135、333〜343に記載されているように行った。ウサギを首への強打によって気絶させ、失血させる。大動脈を取り出し、接着組織を取り除き、幅1．5mmの輪に分割した。これらの輪を、37℃であり、カルボゲンをした、注入以下の組成（各場合についてmM）：塩化ナトリウム：119；塩化カリウム：4．8；塩化カルシウム二水和物：1；硫酸マグネシウム七水和物：1．4；リン酸二水素カリウム：1．2；重炭酸ナトリウム：25；グルコース：10を有するクレブス−ヘンゼライト液を含む5ml臓器浴に初張力下で個々に入れる。収縮力をStatham  UC2セルで測定し、増幅し、A／D変換器（DAS−1802  HC、Keithley  Instruments  Munich）を用いてデジタル化し、線形レコーダーで並行して記録する。
【０２０２】
収縮を生み出すために、フェニレフリンを増加する濃度で累積的に浴に添加する。数回の対照サイクル後、試験する物質を各場合でに増加する投与量で各さらなる実行に添加し、得られた収縮の高さをその直前の実行時に得られた収縮の高さと比較する。これを、対照値の大きさを50％減少させるために要する濃度（IC50値）を計算するために使用する。標準投与体積は5μlであり、浴溶液中のDMSO含量は0．1％に相当する。
【０２０３】
B−2．組換えグアニル酸シクラーゼレポーター細胞系に対する効果
本発明による化合物の細胞活性を、F．Wunderら、Anal．Biochem．339、104〜112（2005）に記載されているように、組換えグアニル酸シクラーゼレポーター細胞系を用いて測定する。
【０２０４】
本発明による化合物についての代表的な値（MEC＝最小有効濃度）を以下の表（表1；いくつかの場合、個々の測定についての平均値として）に示す：
【０２０５】
【表２】
2016523944.tif 000099
【０２０６】
B−3．ヒトホスホジエステラーゼ5（PDE5）の阻害
PDE5調製物を、破壊（Microfluidizer（登録商標）、800bar、3回）、引き続いて遠心分離（75000g、60分、4℃）およびMono  Q10／10カラムでの上清のイオン交換クロマトグラフィー（線形塩化ナトリウム勾配、塩化ナトリウムの緩衝液（20mM  Hepes  pH7．2、2mM塩化マグネシウム）中0．2〜0．3M溶液で溶出）によってヒト血小板から得る。PDE5活性を有する分画を合わせ（PDE5調製物）、−80℃で保管する。
【０２０７】
ヒトPDE5に対するそのインビトロ作用を測定するために、試験物質を100％DMSOに溶解し、段階希釈する。典型的には、200μMから0．091μMの希釈系列（1：3）を調製する（試験で得られる最終濃度：4μM〜0．0018μM）。各場合で、希釈した物質溶液2μlをマイクロタイタープレート（Isoplate−96／200W；Perkin  Elmer）のウェルに入れる。その後、上記PDE5調製物の希釈液50μlを添加する。後のインキュベーション中に、基質の70％未満が変換されるように、PDE5調製物の希釈液を選択する（典型的な希釈：1：100；希釈緩衝液：50mMトリス／塩酸pH7．5、8．3mM塩化マグネシウム、1．7mM  EDTA、0．2％BSA）。基質、［8−3H］環状グアノシン−3’，5’−一リン酸（1μCi／μl；Perkin  Elmer）をアッセイ緩衝液（50mMトリス／塩酸pH7．5、8．3mM塩化マグネシウム、1．7mM  EDTA）で0．0005μCi／μlの濃度まで1：2000希釈する。希釈基質50μl（0．025μCi）を添加することによって、酵素反応を最終的に開始する。試験物質を室温で60分間インキュベートし、18mg／mlイットリウムシンチレーション近接ビーズの水中懸濁液25μl（SPAアッセイ用のホスホジエステラーゼビーズ、RPNQ  0150、Perkin  Elmer）を添加して反応を停止する。マイクロタイタープレートをフィルムで密閉し、室温で60分間静置する。その後、プレートを、Microbetaシンチレーションカウンター（Perkin  Elmer）で1ウェル当たり30秒間分析する。PDE5阻害割合に対する物質濃度の図表プロットを用いて、IC50値を決定する。
【０２０８】
本発明による化合物についての代表的なIC50値を以下の表（表2；いくつかの場合、個々の測定についての平均値として）に示す：
【０２０９】
【表３Ａ】
2016523944.tif 000100
【表３Ｂ】
2016523944.tif 000101
【０２１０】
B−4．意識のある自然発症高血圧ラットにおける血圧のラジオテレメトリー測定
DATA  SCIENCES  INTERNATIONAL  DSI、米国から商業的に入手可能なテレメトリシステムを、下記の意識のあるラットでの血圧測定に使用する。
【０２１１】
システムは3つの主要部品からなる：
−埋込み型送信機（Physiotel（登録商標）テレメトリ送信機）
−データ取得コンピュータ
と多重化装置（DSI  Data  Exchange  Matrix）を介して接続されている
−受信機（Physiotel（登録商標）受信機）。
【０２１２】
テレメトリシステムによって、その通常の生育環境にいる意識のある動物の血圧、心拍数および体動を連続的に記録することが可能になる。
【０２１３】
動物材料
調査は、体重200g超の成体雌、自然発症高血圧ラット（SHR岡本）で行う。岡本  京都大学医学部、1963のSHR／NCrlは、血圧が極めて上昇した雄ウィスター京都ラットと血圧がわずかに上昇した雌の交雑種で、米国国立衛生研究所にF13で渡した。
【０２１４】
送信機埋込み後、実験動物を別々にMakrolonケージ3型に収容する。これらの動物は標準的な飼料および水を自由に入手できる。
【０２１５】
実験室の昼／夜リズムは、午前6：00時と午後7：00時に室内照明によって変化させる。
【０２１６】
送信機埋込み
使用するテレメトリ送信機TA11PA−C40を、最初の実験使用の少なくとも14日前に無菌状態で実験動物に外科的に埋め込む。創傷が治癒し、埋込みが定着した後、このような計装動物を繰り返し使用することができる。
【０２１７】
埋込みのために、絶食動物にペントバルビタール（Nembutal、Sanofi：50mg／kg腹腔内）で麻酔をかけ、腹部の広域にわたって剪毛および消毒する。白線に沿って腹腔を開いた後、システムの液体充填測定カテーテルを、下行大動脈に頭蓋方向に分岐より上に挿入し、組織接着剤（VetBonD（商標）、3M）で固定する。送信機ハウジングを腹壁筋に腹腔内固定し、創傷の層状閉包を行う。
【０２１８】
感染症を予防するために抗生物質（Tardomyocel  COMP  Bayer  1ml／kg皮下）を術後に投与する。
【０２１９】
物質および溶液
特に明言しない限り、試験する物質を、それぞれ動物の群（n＝6）に経管栄養によって経口投与する。5ml／kg体重の投与量によると、試験物質を適当な溶媒混合物に溶解する、または0．5％チロースに懸濁する。
【０２２０】
溶媒で処理した動物群を対照として使用する。
【０２２１】
試験手順
本テレメトリ測定装置を24匹の動物に設定する。各実験を実験番号で記録する（V年月日）。
【０２２２】
システムで生きている計装ラットの各々に受信アンテナ（1010  Receiver、DSI）を割り当てる。
【０２２３】
埋込み送信機を組み込まれたマグネチックスイッチを用いて外部から起動することができる。実験の準備期間にこれらを送信に切り替える。発信シグナルは、データ取得システム（WINDOWS（登録商標）用のDataquest（商標）A．R．T．、DSI）によってオンラインで検出し、適宜処理することができる。データをこの目的のために作成され、実験番号を有するファイルにそれぞれ保存する。
【０２２４】
標準的な手順では、それぞれ10秒間、以下を測定する：
−収縮期血圧（SBP）
−拡張期血圧（DBP）
−平均動脈圧（MAP）
−心拍数（HR）
−活動（ACT）。
【０２２５】
測定値の取得を5分間隔でコンピュータ制御下で繰り返す。絶対値として得たソースデータを、現在測定されている大気圧（Ambient  Pressure  Reference  Monitor；APR−1）を用いた図表で補正し、個々のデータとして保存する。さらなる技術的詳細は、製造企業（DSI）の広範なドキュメントに示される。
【０２２６】
特に指示しない限り、試験物質を実験日の午前9．00に投与する。投与後、上記パラメータを24時間にわたって測定する。
【０２２７】
評価
実験終了後、取得した個々のデータを分析ソフトウェア（DATAQUEST（商標）A．R．T．（商標）ANALYSIS）を用いてソーティングする。ブランク値は投与2時間前の時間と仮定されるので、選択されたデータセットは実験日の午前7．00〜翌日の午前9．00の期間を包含する。
【０２２８】
データを、平均値（15分平均）を決定することによって予設定可能な時間にわたって平滑化し、テキストファイルとして記憶媒体に移す。このように予めソーティングし、圧縮した測定値をエクセルテンプレートに移し、表にする。各実験日について、得られたデータを実験番号を有する専用ファイルに保存する。結果および試験プロトコルを数でソーティングした紙の形状でファイルする。
【０２２９】
文献
Klaus  Witte、Kai  Hu、Johanna  Swiatek、Claudia  Mussig、Georg  ErtlおよびBjorn  Lemmer：Experimental  heart  failure  in  rats：effects  on  cardiovascular  circadian  rhythms  and  on  myocardial  β−adrenergic  signaling．  Cardiovasc  Res  47（2）：203〜405、2000；Kozo  Okamoto：Spontaneous  hypertension  in  rats．Int  Rev  Exp  Pathol  7：227〜270、1969；Maarten  van  den  Buuse：Circadian  Rhythms  of  Blood  Pressure，Heart  Rate，and  Locomotor  Activity  in  Spontaneously  Hypertensive  Rats  as  Measured  With  Radio−Telemetry．Physiology＆Behavior  55（4）：783〜787、1994
【０２３０】
B−5．ラットに対する長期実験での臓器保護効果の測定
本発明による化合物の臓器保護効果は、ラットにおいて治療上関連する「低一酸化窒素（NO）／高レニン」高血圧モデルで示されている。試験を最近公開された論文（Sharkovska  YらJ  Hypertension  2010；28：1666〜1675）と同様に行った。これは、数週間にわたって本発明による化合物またはビヒクルと同時に飲料水を介してNO合成酵素阻害剤L−NAMEを投与したレニントランスジェニックラット（TGR（mRen2）27）の処理を伴う。血行動態および腎臓パラメータを処理期間中に測定する。長期試験の最後に、臓器保護（腎臓、肺、心臓、大動脈）を病理組織学的試験、バイオマーカー、発現解析および心血管血漿パラメータによって示す。
【０２３１】
B−6．低酸素条件下での意識のあるイヌの肺動脈圧（PAP）の測定
例えば、DATA  SCIENCES  INTERNATIONAL  DSI、米国からテレメトリシステムを、下記の意識のあるイヌでの血圧測定に使用する。システムは、埋込み型血圧送信機、受信機およびデータ取得コンピュータからなる。テレメトリシステムによって、意識のある動物の血圧および心拍数を連続的に監視することが可能になる。使用するテレメトリ送信機を、最初の実験使用前に無菌状態で実験動物に外科的に埋め込む。創傷が治癒し、埋込みが定着した後、このような計装動物を繰り返し使用することができる。成体雌ビーグルを用いて試験を行う。技術的詳細は、製造企業（DSI）のドキュメントに見出すことができる。
【０２３２】
物質および溶液
試験する物質をそれぞれ、イヌの群（n＝3〜6）にゼラチンカプセルを介して経口で、または適当な溶媒混合物で静脈内に投与する。ビヒクルで処理した動物群を対照として使用する。
【０２３３】
試験手順
低酸素条件下での測定のために、動物を低酸素雰囲気（酸素含量約10％）のチャンバーに移す。商業的に入手可能な低酸素発生器（Hoehenbalance、Cologne、ドイツ製）を用いてこれを確立する。標準実験では、例えば、物質投与の1時間および5時間後に、イヌを30分間低酸素チャンバーに保つ。低酸素チャンバーに入る約10分前および入った約10分後、ならびに低酸素チャンバーにいる間、テレメトリによって血圧および心拍数を測定する。
【０２３４】
評価
健康なイヌでは、低酸素下で、PAPの急速な上昇がある。物質投与によって、この上昇を減少させることができる。PAP上昇ならびに心拍数および体血圧の差異を定量化するために、平均値の測定によって平滑化した低酸素期間前および中のデータを比較する。測定パラメータの経過を、Prismソフトウェア（GraphPad、米国）を用いて図表で示す。
【０２３５】
B−7．静脈内投与および経口投与後の薬物動態パラメータの測定
本発明による化合物の薬物動態パラメータを、雄CD−1マウス、雄ウィスターラット、雌ビーグルおよび雌カニクイザルで測定する。マウスおよびラットの場合の静脈内投与は、種特異的血漿／DMSO製剤によって行い、イヌおよびサルの場合には、水／PEG400／エタノール製剤によって行う。全ての種において、溶解した物質の経口投与は、水／PEG400／エタノール製剤に基づいて、経管栄養を介して行う。ラットからの血液採取は、物質投与前に、シリコーンカテーテルを右外頚静脈に挿入することによって単純化する。手術は、イソフルラン麻酔および鎮痛剤（アトロピン／リマダイル（3／1）0．1ml皮下）の投与により、実験の少なくとも1日前に行う。血液は、物質投与の少なくとも24〜最大で72時間後の終端時点を含む時間窓内で採取する（一般的には10時点超）。血液をヘパリン処理チューブに取り出す。次いで、血漿を遠心分離によって得て、必要に応じて、さらなる処理まで−20℃で保管することができる。
【０２３６】
内部標準（化学的に関連のない物質でもあり得る）を本発明による化合物の試料、較正試料および修飾物質（qualifier）に添加し、それに続いて過剰のアセトニトリルを用いてタンパク質を沈殿させる。LC濃度に適合した緩衝液を添加し、その後ボルテックスし、引き続いて1000gで遠心分離する。C18逆相カラムおよび可変的移動相混合物を用いるLC−MS（／MS）によって上清を分析する。特定の選択したイオンモニタリング実験または高分解能LC−MS実験の抽出イオンクロマトグラムからのピーク高さまたは面積を介して物質を定量化する。
【０２３７】
測定した血漿濃度／時間プロットを使用して、検証された薬物動態計算プログラムを用いて、AUC、Cmax、F（生物学的利用能）、t1／2（終端半減期）、MRT（平均滞留時間）およびCL（クリアランス）などの薬物動態パラメータを計算する。
【０２３８】
物質定量化を血漿で行うので、薬物動態パラメータを対応して調整することができるようにするために、物質の血液／血漿分布を決定することが必要である。この目的のために、定義された量の物質を揺動ローラーミキサーにおいて20分間当の種のヘパリン処理全血でインキュベートする。血漿を1000gでの遠心分離によって得る。（LC−MS（／MS）による；上記参照）血漿および血液中の濃度の測定後、C血液／C血漿値を商形成によって決定する。
【０２３９】
B−8．代謝試験
本発明による化合物の代謝プロファイルを決定するため、極めて実質的に完全な肝I相およびII相代謝、ならびに代謝に関与する酵素についての情報を得て、これらを比較するために、本発明による化合物を組換えヒトチトクロムP450（CYP）酵素、種々の動物種（例えば、ラット、イヌ）およびヒト起源からの肝ミクロソームまたは新鮮な初代培養肝細胞と共にインキュベートする。
【０２４０】
本発明による化合物を約0．1〜10μMの濃度でインキュベートした。このために、アセトニトリル中0．01〜1mMの濃度を有する本発明による化合物のストック溶液を調製し、次いで、インキュベーション混合物に1：100希釈でピペットを用いて移す。肝ミクロソームおよび組換え酵素を、1mM  NADP＋、10mMグルコース−6−リン酸および1ユニットのグルコース−6−リン酸脱水素酵素からなるNADPH産生系を含むおよび含まない50mMリン酸カリウム緩衝液pH7．4中37℃でインキュベートした。初代培養肝細胞を37℃で同様にウィリアムE培地中懸濁でインキュベートした。0〜4時間のインキュベーション時間後、インキュベーション混合物をアセトニトリル（最終濃度約30％）を用いて停止し、タンパク質を約15000×gで遠心分離した。こうして停止した試料を直接分析した、または分析まで−20℃で保存した。
【０２４１】
紫外線および質量分析検出を含む高速液体クロマトグラフィー（HPLC−UV−MS／MS）によって分析を行う。このために、インキュベーション試料の上清を、適当なC18逆相カラムおよびアセトニトリルと10mMギ酸アンモニウム水溶液または0．05％ギ酸の可変性移動相混合物を用いてクロマトグラフにかける。質量分析データと合わせたUVクロマトグラムは、代謝産物の同定、構造決定および定量的評価、ならびにインキュベーション混合物中の本発明による化合物の定量的代謝評価に役立つ。
【０２４２】
C．医薬組成物の実施例
本発明による化合物を以下の通り医薬製剤に変換することができる：
錠剤：
組成：
本発明による化合物100mg、乳糖（一水和物）50mg、コーンスターチ（野生）50mg、ポリビニルピロリドン（PVP25）（BASF、Ludwigshafen、ドイツ）10mgおよびステアリン酸マグネシウム2mg。
【０２４３】
総重量212mg、直径8mm、曲率半径12mm。
【０２４４】
製造：
本発明による化合物、乳糖およびデンプンの混合物をPVPの水中5％溶液（w／w）を用いて顆粒化する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと5分間混合する。この混合物を従来の打錠機を用いて圧縮する（錠剤寸法については上記参照）。圧縮に使用するガイド値は押圧力15kNとする。
【０２４５】
経口投与することができる懸濁剤：
組成：
本発明による化合物1000mg、エタノール（96％）1000mg、Rhodigel（登録商標）（FMC、ペンシルバニア州、米国製のキサンタンガム）400mgおよび水99g。
【０２４６】
1回量の本発明による化合物100mgは経口懸濁剤10mlに相当する。
【０２４７】
製造：
Rhodigelをエタノールに懸濁し、本発明による化合物を懸濁液に添加する。攪拌しながら水を添加する。Rhodigelの膨潤が完了するまで、混合物を約6時間攪拌する。
【０２４８】
経口投与することができる液剤：
組成：
本発明による化合物500mg、ポリソルベート2．5gおよびポリエチレングリコール400  97g。1回量の本発明による化合物100mgは経口液剤20gに相当する。
【０２４９】
製造：
本発明による化合物を、攪拌しながらポリエチレングリコールとポリソルベートの混合物に懸濁する。本発明による化合物の溶解が完了するまで、攪拌操作を継続する。
【０２５０】
静脈内溶液：
本発明による化合物を、生理学的に許容される溶媒（例えば、等張食塩水、グルコース溶液5％および／またはPEG400溶液30％）に飽和溶解度未満の濃度で溶解する。溶液を滅菌濾過に供し、滅菌パイロジェンフリー注射容器に分配する。
【国際調査報告】
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