(57)【要約】形態Ｉにある３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸（化合物１）、および実質的にアモルファスなＮ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド（化合物２）を含む固体分散体を含む医薬組成物を調製する方法、嚢胞性線維症などのＣＦＴＲ媒介性疾患を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法、投与方法、およびそのキットが開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む錠剤の連続調製方法であって、
ａ）  ブレンダー中で、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、充填剤および崩壊剤を混合して、ブレンドを形成するステップ、
ｂ）  水、結合剤および界面活性剤を含む造粒用溶液を調製するステップ、
ｃ）  ステップａ）から得られた前記ブレンドを、ステップｂ）から得られた前記造粒用溶液を添加しながら連続２軸造粒器にフィードして、顆粒を製造するステップ、
ｄ）  ステップｃ）から得られた前記顆粒を乾燥して、前記顆粒をミル粉砕するステップ、
ｅ）  ステップｄ）から得られた前記ミル粉砕顆粒を充填剤、崩壊剤および滑沢剤とブレンドしてブレンドを形成するステップ、ならびに
ｆ）  ステップｅ）から得られた前記ブレンドを圧縮して錠剤にするステップ
を含み、
上記ステップの少なくとも１つが、プロセス分析技法を含む、
方法。
【請求項２】
前記プロセス分析技法が、規定基準をモニタリングするためのＮＩＲまたはラマン分光技法を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記規定基準が、ブレンド均質性、顆粒均質性、水分、粒子サイズ分布、活性医薬品成分の固体形態の同一性、重量、厚さ、硬度またはコーティング厚さから選択される、請求項２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸（化合物１）の形態Ｉ、および実質的にアモルファスなＮ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド（化合物２）を含む固体分散体を含む医薬組成物を調製する方法、処置方法、投与方法、ならびにそのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、米国では、およそ３０，０００人の児童および成人、ならびに欧州ではおよそ３０，０００人の児童および成人が罹患している、劣性遺伝性疾患である。ＣＦの処置は進歩しているにもかかわらず、治癒しない。
ＣＦ患者では、呼吸器上皮において内因的に発現されるＣＦＴＲの変異により、イオンおよび流体輸送における不均衡を引き起こす低下した頂端陰イオン分泌がもたらされる。その結果として生じる陰イオン輸送の低下は、肺における粘液蓄積の増強、およびＣＦ患者において最終的に死を引き起こす付随する微生物感染に寄与する。呼吸器疾患に加えて、ＣＦ患者は、通常、胃腸の問題および処置されないまま放置されると死に至る膵臓の機能不全を受ける。さらに、嚢胞性線維症の男性の大部分は、生殖能力がなく、嚢胞性線維症の女性の間では、生殖能力が低下する。２つのコピーのＣＦ関連遺伝子の深刻な影響とは対照的に、１つのコピーのＣＦ関連遺伝子を有する個体は、コレラ、および下痢に起因する脱水に対して増大した耐性を示し、おそらく、集団内のＣＦ遺伝子が比較的高い頻度で存在していることが説明される。
【０００３】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列分析により、疾患を引き起こす様々な変異が明らかになった（Cutting,  G.  R.ら（１９９０年）Nature  ３４６巻：３６６〜３６９頁；Dean,  M.ら（１９９０年）Cell  ６１巻：８６３：８７０頁；およびKerem,  B-S.ら（１９８９年）  Science  ２４５巻：１０７３〜１０８０頁；Kerem,  B-Sら（１９９０年）  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８７巻：８４４７〜８４５１頁）。現在までに、ＣＦ遺伝子における疾患を引き起こす変異が、１０００を超えて同定されている（http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/app）。最も流行している変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位のフェニルアラニンの欠失であり、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲと一般に呼ばれている。この変異は、嚢胞性線維症の症例のおよそ７０％において発生し、重症な疾患と関連している。
【０００４】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、発生しようとしているタンパク質が正確にフォールディングするのを妨げる。これにより、変異タンパク質がＥＲを出て、形質膜へと輸送されることができなくなる。その結果、膜中に存在しているチャネル数は、野生型ＣＦＴＲを発現する細胞中で観察されるよりもかなり少ない。この変異は、輸送の障害に加えて、チャネルゲーティングの欠陥をもたらす。同時に、膜におけるチャネル数の減少およびゲーティングの欠陥により、上皮を横断する陰イオンの輸送が低下し、これによりイオンおよび流体の輸送の欠陥がもたらされる（Quinton,  P.  M.（１９９０年）、FASEB  J.  ４巻：２７０９〜２７２７頁）。しかし、研究により、膜における減少した数のΔＦ５０８−ＣＦＴＲが、野生型ＣＦＴＲより低いとはいえ、機能的であるということが示された（Dalemansら（１９９１年）、Nature  Lond.  ３５４巻：５２６〜５２８頁；Denningら、上記；PasykおよびFoskett（１９９５年）、J.Cell.  Biochem.  ２７０巻：１２３４７〜５０頁）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲに加えて、輸送、合成および／もしくはチャネルゲーティングの欠陥を生じるＣＦＴＲにおける他の疾患を引き起こす変異は、上方調節または下方調節されて、陰イオンの分泌を変化させて、疾患の進行および／または重症度を改変し得る。
【０００５】
塩形態にある化合物１は、ＣＦＴＲ活性の誘発剤として、したがって、嚢胞性線維症などのＣＦＴＲ媒介性疾患の有用な処置として、国際ＰＣＴ公開ＷＯ２００７０５６３４１および米国特許第７，７４１，３２１号に開示されている。実質的に結晶性であり、かつ塩不含形態である化合物１の形態Ｉは、国際ＰＣＴ公開ＷＯ２００９０７３７５７および米国特許第８，５０７，５３４号に開示されている。化合物２は、ＣＦＴＲ活性の誘発剤として、したがって、嚢胞性線維症などのＣＦＴＲ媒介性疾患の有用な処置として、国際ＰＣＴ公開ＷＯ２００６００２４２１および米国特許第７，４９５，１０３号に開示されている。実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体は、国際ＰＣＴ公開ＷＯ２０１００１９２３９および米国公開特許出願番号ＵＳ２０１０００７４９４９号に開示されている。上記の出願および特許はすべて、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。
化合物２などのＣＦＴＲポテンシエーターである化合物、および化合物１などのＣＦＴＲコレクターである化合物は、独立して、嚢胞性線維症などのＣＦＴＲ関連疾患の処置に有用であることが示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００７０５６３４１号
【特許文献２】米国特許第７，７４１，３２１号明細書
【特許文献３】国際公開第２００９０７３７５７号
【特許文献４】米国特許第８，５０７，５３４号明細書
【特許文献５】国際公開第２００６００２４２１号
【特許文献６】米国特許第７，４９５，１０３号明細書
【特許文献７】国際公開第２０１００１９２３９号
【特許文献８】米国公開特許出願番号ＵＳ２０１０００７４９４９号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Cutting,  G.  R.ら（１９９０年）Nature  ３４６巻：３６６〜３６９頁
【非特許文献２】Dean,  M.ら（１９９０年）Cell  ６１巻：８６３：８７０頁
【非特許文献３】Kerem,  B-S.ら（１９８９年）  Science  ２４５巻：１０７３〜１０８０頁
【非特許文献４】Kerem,  B-Sら（１９９０年）  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８７巻：８４４７〜８４５１頁
【非特許文献５】Quinton,  P.  M.（１９９０年）、FASEB  J.  ４巻：２７０９〜２７２７頁
【非特許文献６】Dalemansら（１９９１年）、Nature  Lond.  ３５４巻：５２６〜５２８頁
【非特許文献７】Denningら、上記；PasykおよびFoskett（１９９５年）、J.Cell.  Biochem.  ２７０巻：１２３４７〜５０頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、ＣＦＴＲコレクターおよびポテンシエーター化合物が関与する、ＣＦＴＲ媒介性疾患の新規処置が必要とされている。
【０００９】
特に、ＣＦＴＲポテンシエーターおよびコレクター化合物を含む、嚢胞性線維症などのＣＦＴＲ媒介性疾患を処置するための併用療法が必要とされている。
【００１０】
より特定すると、化合物１の形態Ｉなどの、ＣＦＴＲコレクター化合物と組み合わせて、実質的にアモルファスな化合物２などの、ＣＦＴＲポテンシエーター化合物を含む、嚢胞性線維症などの、ＣＦＴＲ媒介性疾患を処置するための併用療法が必要とされている。
【００１１】
化合物２との組合せ物の一部としての化合物１は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）から、嚢胞性線維症を処置するための飛躍的な治療法という指定を受けており、本出願の出願時点では、２つしかこのような承認を受けていないものの１つである（もう一方は、化合物２に対してである）。これは、症候性処置よりも、嚢胞性線維症の原因の効果的な処置について、満足されていない必要性が相当あることを実証している。さらに、ＦＤＡにより承認された薬物に関する共通の難題は、それを必要とする患者に、時として薬物入手が不可能なことである。したがって、ここで開示されている化合物１および化合物２の製剤、ならびに連続的かつ制御された様式でそれらを調製する方法に関して、満たされていない必要性がかなり存在している。
【００１２】
さらに、処置計画および投与量を患者が遵守することは、薬物投与の容易さに大きく依存している。コレクターおよびポテンシエーターの固体形態が安定である、前記ＣＦＴＲコレクターおよびＣＦＴＲポテンシエーターの固定投与量を含む医薬組成物は、嚢胞性線維症などのＣＦＴＲ媒介性疾患の処置にとって著しく飛躍的な進歩である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
要旨
本発明は、以下の構造を有する、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸である、化合物１の形態Ｉ
【化１】
2016535791.tif 000002
および
以下の構造を有する、実質的にアモルファスなＮ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミドである化合物２の固体分散体
【化２】
2016535791.tif 000003
を含む医薬組成物を調製する方法、処置方法、投与方法、ならびにそのキットを特徴とする。
【００１４】
一態様では、本発明は、ＰＣ−Ｉと呼ぶ、
ａ．  化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、
ｃ．  充填剤、
ｄ．  崩壊剤、
ｅ．  界面活性剤、および
ｆ．  結合剤
を含む、医薬組成物を調製する方法を特徴とする。
【００１５】
一実施形態では、本発明の医薬組成物を調製する方法は、３０〜５５重量パーセントの化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む１０〜４５重量パーセントの固体分散体を含む。
【００１６】
一実施形態では、充填剤は、セルロース、変性セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、酢酸セルロース、微結晶性セルロース、第二リン酸カルシウム、スクロース、ラクトース、コーンデンプン、バレイショデンプン、またはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、充填剤は微結晶性セルロースであり、１０〜２０重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００１７】
一実施形態では、崩壊剤は、寒天、アルギン、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、クレイ、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ガム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メチルセルロース、ポラクリリンカリウム、アルギン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、タピオカデンプンまたはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、崩壊剤は、クロスカルメロースナトリウムであり、１〜３重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００１８】
一実施形態では、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、フマル酸（fumerate）ステアリルナトリウム、モノ−オレイン酸ポリオキシエチレン２０ソルビタン、またはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムであり、０．５〜２重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００１９】
一実施形態では、結合剤は、ポリビニルピロリドン、第二リン酸カルシウム、スクロース、コーンデンプン、変性セルロース、またはそのそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、結合剤は、ポリビニルピロリドンであり、０〜５重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、ＰＣ−ＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する医薬組成物を調製する方法を特徴とする。
【化３】
2016535791.tif 000004
【００２１】
別の態様では、本発明は、ＰＣ−ＩＩＩと呼ぶ、
ａ．  化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、
ｃ．  充填剤、
ｄ．  崩壊剤、
ｅ．  界面活性剤、
ｆ．  結合剤、および
ｇ．  滑沢剤
を含む、医薬組成物を調製する方法を特徴とする。
【００２２】
一実施形態では、本発明の医薬組成物を調製する方法は、約１００〜２５０ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび約１００〜１５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび約１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび約１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。
【００２３】
一実施形態では、本発明の医薬組成物を調製する方法は、２５〜５０重量パーセントの化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む１５〜３５重量パーセントの固体分散体を含む。
【００２４】
一実施形態では、充填剤は、セルロース、変性セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース  ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、酢酸セルロース、微結晶性セルロース、第二リン酸カルシウム、スクロース、ラクトース、コーンデンプン、バレイショデンプン、またはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、充填剤は微結晶性セルロースであり、２０〜３０重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００２５】
一実施形態では、崩壊剤は、寒天、アルギン、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、クレイ、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ガム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メチルセルロース、ポラクリリンカリウム、アルギン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、タピオカデンプンまたはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、崩壊剤は、クロスカルメロースナトリウムであり、３〜１０重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００２６】
一実施形態では、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、モノ−オレイン酸ポリオキシエチレン２０ソルビタン、またはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムであり、０．５〜２重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００２７】
一実施形態では、結合剤は、ポリビニルピロリドン、第二リン酸カルシウム、スクロース、コーンデンプン、変性セルロース、またはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、結合剤は、ポリビニルピロリドンであり、０〜５重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００２８】
一実施形態では、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸アルミニウム、ロイシン、ベヘン酸グリセリル、水素化植物油またはそれらの任意の組合せから選択される。別の実施形態では、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、０．５〜２重量パーセントの範囲の量で存在している。
【００２９】
一実施形態では、本発明は、ＰＣ−ＩＶと呼ぶ、以下の配合を有する医薬組成物を調製する方法を特徴とする。
【化４】
2016535791.tif 000005
【００３０】
一実施形態では、本発明の医薬組成物を調製する方法は、着色剤および任意選択でワックスをさらに含む。別の実施形態では、着色剤は、２〜４重量パーセントの範囲の量で存在している。別の実施形態では、ワックスは、０〜０．０２０重量パーセントの範囲の量で存在しているカルナウバワックスである。
【００３１】
一実施形態では、本発明の医薬組成物を調製する方法は、固体の経口用医薬組成物である。別の実施形態では、固体の経口用医薬組成物は、粒状医薬組成物または錠剤である。
【００３２】
一実施形態では、本発明の粒状医薬組成物を調製する方法は、ＰＣ−Ｖと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化５】
2016535791.tif 000006
【００３３】
一実施形態では、本発明の粒状医薬組成物を調製する方法は、ＰＣ−ＶＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化６】
2016535791.tif 000007
【００３４】
一実施形態では、本発明の粒状医薬組成物を調製する方法は、ＰＣ−ＶＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化７】
2016535791.tif 000008
【００３５】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＶＩＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化８】
2016535791.tif 000009
【００３６】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＩＸと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化９】
2016535791.tif 000010
【００３７】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−Ｘと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１０】
2016535791.tif 000011
【００３８】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１１】
2016535791.tif 000012
【００３９】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１２】
2016535791.tif 000013
【００４０】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＩＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１３】
2016535791.tif 000014
【００４１】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＩＶと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１４】
2016535791.tif 000015
【００４２】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＶと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１５】
2016535791.tif 000016
【００４３】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＶＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１６】
2016535791.tif 000017
【００４４】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＶＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１７】
2016535791.tif 000018
【００４５】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＶＩＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１８】
2016535791.tif 000019
【００４６】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＩＸと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化１９】
2016535791.tif 000020
【００４７】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＸと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化２０】
2016535791.tif 000021
【００４８】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＸＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化２１】
2016535791.tif 000022
【００４９】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＸＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化２２】
2016535791.tif 000023
【００５０】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＸＩＩＩと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化２３】
2016535791.tif 000024
【００５１】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＸＩＶと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化２４】
2016535791.tif 000025
【００５２】
一実施形態では、本発明の錠剤を調製する方法は、ＰＣ−ＸＸＶと呼ぶ、以下の配合を有する。
【化２５】
2016535791.tif 000026
【００５３】
一態様では、本発明は、患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物、粒状医薬組成物または錠剤を患者に投与するステップを含む方法を特徴とする。
【００５４】
実施形態では、本発明は、患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の製剤ＰＣ−Ｉ〜ＰＣ−ＸＸＶのいずれか１つの医薬組成物、粒状医薬組成物または錠剤を患者に投与するステップを含む方法を特徴とする。
【００５５】
一実施形態では、患者はΔＦ５０８ＣＦＴＲ変異を有する。別の実施形態では、患者は、ΔＦ５０８の同型接合である。別の実施形態では、患者は、ΔＦ５０８のヘテロ接合である。別の実施形態では、１日あたり２つの錠剤が、患者に投与される。
【００５６】
一態様では、本発明は、以下の構成成分：
ａ．  化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、
ｃ．  充填剤、
ｄ．  崩壊剤、
ｅ．  界面活性剤、および
ｆ．  結合剤
を湿式造粒するステップを含む、粒状医薬組成物を調製する方法を特徴とする。
【００５７】
一態様では、本発明は、
ｉ）  以下の構成成分：
ａ．  化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、
ｃ．  充填剤、
ｄ．  崩壊剤、
ｅ．  界面活性剤、および
ｆ．  結合剤
を含む、複数の粒状医薬組成物、
ｉｉ）  崩壊剤、
ｉｉｉ）  充填剤、および
ｉｖ）  滑沢剤
を圧縮するステップを含む、錠剤を調製する方法を特徴とする。
【００５８】
一態様では、本発明は、本発明の医薬組成物、粒状医薬組成物、または錠剤、および別個の治療剤またはその医薬組成物を含むキットを特徴とする。
【００５９】
一実施形態では、本発明の医薬組成物、粒状医薬組成物、または錠剤、および別個の治療剤またはその医薬組成物は、別個の容器中にある。別の実施形態では、別個の容器はボトルである。別の実施形態では、別個の容器はバイアルである。別の実施形態では、別個の容器は、ブリスターパックである。
【００６０】
別の態様では、本発明は、２軸湿式造粒法による、本明細書に記載されている医薬組成物を作製するための、連続または半連続方法であって、化合物１、化合物２および添加剤をふるいにかけて秤量するステップ、化合物１、化合物２および添加剤をブレンダー中で混合し、好適な比で界面活性剤と結合剤とを含む造粒液を加えながら、ブレンドを連続造粒器に好適な時間量にわたってフィードし、この混合物を砕いて顆粒にするステップ、顆粒を乾燥させるステップ、顆粒を好適な量の時間、顆粒外添加剤とブレンドするステップ、ブレンドを錠剤に圧縮するステップ、錠剤をコーティングするステップ、ならびに任意選択で、錠剤の片面または両面にモノグラムを印刷するステップを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】図１は、化合物１の形態Ｉの単結晶構造から計算したＸ線回折パターンである。
【００６２】
【図２】図２は、化合物１の形態Ｉの実際のＸ線粉末回折パターンである。
【００６３】
【図３】図３は、高せん断造粒（ＨＳＧ）法および２軸湿式造粒（ＴＳＷＧ）法により作製した錠剤に関する、化合物１のｐＨグラジエント溶解プロファイルを図示しているグラフである（ＬＯＤは、粉末／顆粒中の水の量を規定するための尺度である、乾燥減量を表す）。
【００６４】
【図４】図４は、相対湿度６０％で予め平衡にした後の５０℃における、経時的にごく少量の結晶化度を示すことによる、錠剤製剤ＰＣ−ＸＶＩＩにおける、実質的にアモルファス形態の化合物２の安定性を図示するグラフである。
【００６５】
【図５】図５は、相対湿度６０％で予め平衡にした後の６０℃における、経時的にごく少量の結晶化度を示すことによる、錠剤製剤ＰＣ−ＸＶＩＩにおける、実質的にアモルファス形態の化合物２の安定性を図示するグラフである。
【００６６】
【図６】図６は、相対湿度６０％で予め平衡にした後の６０℃における、経時的にごく少量の結晶化度を示すことによる、錠剤製剤ＰＣ−ＸＸにおける、実質的にアモルファス形態の化合物２の安定性を図示するグラフである。
【００６７】
【図７】図７は、相対湿度６０％で予め平衡にした後の５０℃における、経時的にごく少量の結晶化度を示すことによる、錠剤製剤ＰＣ−ＸＸにおける、実質的にアモルファス形態の化合物２の安定性を図示するグラフである。
【００６８】
【図８】図８は、化合物１の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【００６９】
【図９】図９は、化合物１のＨＣｌ塩の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【００７０】
【図１０】図１０は、化合物１の形態Ｉの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のトレースである。
【００７１】
【図１１】図１１は、単結晶Ｘ線分析に基づく、化合物１の形態Ｉの立体構造の写真である。
【００７２】
【図１２】図１２は、プロセス分析技法（ＰＡＴ）により可能となる連続製造法の概略図である。ステップ１）フィーダー／ブレンダー１であり、ＰＡＴ１  ＮＩＲにより、原料のふるいがけの間に、材料特性を測定する。ステップ２）２軸造粒器であり、ＰＡＴ２  ＮＩＲにより組成およびＢＵを測定する。ステップ３）流動床乾燥器であり、ＰＡＴ３ａ  ＮＩＲにより顆粒均質性、ＬＯＤ、固体状態形態および顆粒の物理特性を測定し、ＰＡＴ３ｂのレーザー回折により、粒子サイズ分布を測定する。ステップ４）ミル粉砕であり、ＰＡＴ４  ＮＩＲにより組成およびＢＵを測定する。ステップ５）フィーダー／ブレンダー２であり、ＰＡＴ５ａラマンにより、アッセイおよびＣＵ、ＰＡＴ５ｂにより重量、硬度、厚さを測定する。ステップ６）圧縮であり、ＰＡＴ６ラマンによりコーティング厚さを測定する。ならびにステップ７）コーティングする。
【００７３】
【図１３】図１３は、ブレンダー１、造粒ミルおよび顆粒外ブレンダー後に置かれている、ＰＡＴインラインＳｅｎｔｒｏｎｉｃｓ  ＮＩＲを示している概略図である。各プローブは、逐次的に循環する７つのスポットを有し、マルチプレクサＮＩＲによるサンプリングおよびＮＩＲを最大限にし、プローブ光学部品全体の粉末流を制御することにより、確固たる徹底的なサンプリングを確実にする。
【００７４】
【図１４】図１４は、流動性粉末におけるＮＩＲを図示したものである。
【００７５】
【図１５】図１５は、錠剤の押圧後に測定した、化合物１の形態Ｉおよび化合物１の形態ＩＩのＫａｉｓｅｒラマンスペクトルである（化合物１の形態ＩＩは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＵＳ２０１１３１５８８に開示されている異なる多形である）。Ｋａｉｓｅｒラマン分光計は、Ｋｒａｅｍｅｒ  ＵＴＳ錠剤試験器にマウントされる。
【００７６】
【図１６】図１６は、化合物２の顆粒の、予測および参照オフラインＮＩＲのサンプリングの間に良好な相関があることを示しているグラフである。
【００７７】
【図１７】図１７は、化合物１の顆粒の試料中における、水分含量を測定した一連のＮＩＲスペクトルである。
【００７８】
【図１８】図１８は、左側が、様々な比の化合物１の形態Ｉと実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体とを含む、ある範囲の組成物を測定した一連のＮＩＲスペクトル、ならびに右側が、化合物１の形態Ｉを特定するための範囲Ａ、およびアモルファス化合物２を特定するための範囲Ｂを図示する予備処理したスペクトルである。
【００７９】
【図１９】図１９は、部分最小二乗（ＰＬＳ）法を使用する、化合物１の形態Ｉの予測される含有量の、化合物１の形態Ｉの参照（実際の）含有量に対する校正曲線を図示する。
【００８０】
【図２０】図２０は、図１９から計算した校正曲線を使用した予測含有量（Ｙ予測値）に対する、様々な含有量の化合物１の形態Ｉを含む未知試料の実際の結果（Ｙ参照）を図示する。
【００８１】
【図２１】図２１は、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む組成物に関する、線速度（流速）の変化に応答する、レーザー回折測定の透過率を示し、線速度が向上するにつれての予期される透過率の低下を示す。
【００８２】
【図２２】図２２は、様々な線速度における、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む粒子のレーザー回折測定を図示し、平均粒子サイズ（Ｄｖ（５０））が線速度により影響を受けないことを示している。
【００８３】
【図２３】図２３は、様々な加工パラメータでの、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む粒子のレーザー回折測定を図示し、粒子サイズ測定がこのような変化に敏感であることを示している。
【００８４】
【図２４】図２４は、錠剤中の化合物１の固体形態の同一性をモニタリングするための、非連続的および連続的の両方で、ラマン分光法を使用するプロセス分析技法モデルの予測能力を図示している。
【００８５】
【図２５】図２５は、錠剤中の化合物２の固体形態の同一性をモニタリングするための、非連続的および連続的の両方で、ラマン分光法を使用するプロセス分析技法モデルの予測能力を図示している。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
詳細な説明
定義
本明細書で使用する場合、「ＣＦＴＲ」は、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子を表す。
【００８７】
本明細書で使用する場合、「ΔＦ５０８変異」または「Ｆ５０８−ｄｅｌ変異」は、ＣＦＴＲタンパク質内の特異的な変異である。この変異は、５０８位におけるアミノ酸のフェニルアラニンのコドンを含む３つのヌクレオチドの欠失であり、このフェニルアラニン残基の欠如したＣＦＴＲタンパク質となる。
【００８８】
本明細書で使用する場合、特定の変異、例えばΔＦ５０８に対する「同型接合」である患者は、各アレルに同じ変異を有している。
【００８９】
本明細書で使用する場合、特定の変異、例えばΔＦ５０８に対する「ヘテロ接合」である患者は、１つのアレルにこの変異、および他のアレルに異なる変異を有している。
【００９０】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＦＴＲコレクター」とは、細胞表面に機能性ＣＦＴＲタンパク質の量を増加させてイオン輸送の増強をもたらす化合物を指す。
【００９１】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＦＴＲポテンシエーター」とは、細胞表面に位置しているＣＦＴＲタンパク質のチャネル活性を増加させてイオン輸送の増強をもたらす化合物を指す。
【００９２】
本明細書で使用する場合、用語「活性医薬品成分」または「ＡＰＩ」とは、生物的に活性な化合物を指す。
【００９３】
本明細書で使用する場合、用語「ＰＡＴ」とは、プロセス分析技法（process  analytical  technology）を表す。
【００９４】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＵ」とは、含有物の均質性を表す。
【００９５】
用語「固体形態（単数）」、「固体形態（複数）」および関連用語は、本明細書で使用する場合、特定の固体形態、例えば、結晶、アモルファス状態などにある、化合物１または化合物２を指す。
【００９６】
本明細書で使用する場合、用語「実質的にアモルファス」とは、その分子の位置に長距離規則度がほとんどないまたはまったくない、固体材料を指す。例えば、実質的にアモルファスな材料は、約１５％未満の結晶化度（例えば、約１０％未満の結晶化度または約５％未満の結晶化度）を有する。用語「実質的にアモルファス」には、記述子「アモルファス」が含まれ、これは、結晶化度を有さない（０％）材料を指すことにも留意される。
【００９７】
本明細書で使用する場合、用語「実質的に結晶性」（実質的に結晶性の化合物１の形態Ｉという言い回しにおいてなど）とは、その分子の位置において、長距離規則度を主に有している固体材料を指す。例えば、実質的に結晶性の材料は、約８５％超の結晶化度（例えば、約９０％超の結晶化度または約９５％超の結晶化度）を有する。用語「実質的に結晶性」には、記述子「結晶性」が含まれ、これは、１００％の結晶化度を有する材料を指すことにも留意される。
【００９８】
本明細書において使用される用語「結晶性」および関連用語は、物質、構成成分、生成物または形態を記載するために使用する場合、該物質、構成成分または生成物が、Ｘ線回折により決定される場合に、実質的に結晶性であることを意味する（例えば、Remington：The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２１版、Lippincott  Williams  &  Wilkins、Baltimore、Md.（２００３年）；The  United  States  Pharmacopeia、第２３版、１８４３〜１８４４頁（１９９５年）を参照されたい）。
【００９９】
本明細書で使用する場合、「添加剤」には、医薬組成物中の機能性成分および非機能性成分が含まれる。
【０１００】
本明細書で使用する場合、「崩壊剤」は、医薬組成物を水和し、錠剤の分散を手助けする添加剤である。本明細書で使用する場合、「賦形剤」または「充填剤」とは、医薬組成物にかさ高さを付与する添加剤である。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、「界面活性剤」は、医薬組成物に溶解度および／または湿潤性の増強をもたらす添加剤である。
【０１０２】
本明細書で使用する場合、「結合剤」は、医薬組成物に密着性または引張強度（例えば、硬度）の増強をもたらす添加剤である。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、「流動促進剤」は、医薬組成物に流動特性の増強をもたらす添加剤である。
【０１０４】
本明細書で使用する場合、「着色剤」は、医薬組成物、例えば錠剤に所望の色を付与する添加剤である。着色剤の例には、ＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  ＃１  Ａｌｕｍｉｎｕｍ  Ｌａｋｅ、ＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  ＃２、他のＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅカラー、二酸化チタン、酸化鉄および／またはそれらの組合せなどの市販の顔料が含まれる。一実施形態では、本発明により提供される錠剤は、ピンク色である。
【０１０５】
本明細書で使用する場合、「滑沢剤」は、錠剤に押圧される医薬組成物に添加される添加剤である。滑沢剤は、錠剤への顆粒のコンパクト化、およびダイプレス器からの医薬組成物の錠剤の取り出しの一助となる。
【０１０６】
本明細書で使用する場合、「立方センチメートル」および「ｃｃ」は、体積の単位を表すために互換的に使用される。１ｃｃ＝１ｍＬであることに留意されたい。
【０１０７】
本明細書で使用する場合、「キロポンド」および「ｋＰ」は、互換的に使用され、１ｋＰ＝およそ９．８ニュートンである力の尺度を指す。
【０１０８】
本明細書で使用する場合、「脆弱さ」とは、外部圧力にもかかわらず、錠剤が無傷のままであり、その形態を維持する特性を指す。脆弱さは、式１：
【数１】
2016535791.tif 000027
（式中、Ｗ０は、錠剤の元の重量であり、Ｗｆは、破砕試験器に置かれた後の錠剤の最終重量である）に表されている数式を使用して定量化することができる。脆弱さは、１００または４００回転で実験錠剤をひっくり返す標準の米国薬局方試験装置を使用して測定される。本発明の一部の錠剤は、５．０％未満の脆弱さを有する。別の実施形態では、脆弱さは２．０％未満である。別の実施形態では、目標とする脆弱さは４００回転後に１．０％未満である。
【０１０９】
本明細書で使用する場合、「平均粒子径」は、レーザー光散乱、画像解析またはふるい分析などの技法を使用して測定される、平均粒子径である。一実施形態では、本発明により提供される医薬組成物を調製するために使用される顆粒は、１．０ｍｍ未満の平均粒子径を有する。
【０１１０】
本明細書で使用する場合、「かさ密度」は、材料の粒子質量を該粒子が占有する総体積で除算したものである。総体積には、粒子体積、粒子間空隙体積および内部細孔体積が含まれる。かさ密度は、材料の固有特性ではない。これは、材料がどのように加工されるかに依存して変わり得る。一実施形態では、本発明により提供される医薬組成物を調製するために使用される顆粒は、約０．５〜０．７ｇ／ｃｃのかさ密度を有する。
【０１１１】
本発明の化合物の「有効量」または「治療有効量」は、被験体の疾患状態、年齢および体重、ならびに被験体において所望の応答を引き起こす本発明の化合物の能力などの要因により、変わり得る。投与量レジメンは、最適な治療的応答をもたらすよう調整することができる。有効量はまた、治療的に有益な作用が本発明の化合物のいずれの毒性にも有害作用（例えば、副作用）にも勝るものでもある。
【０１１２】
本明細書で使用する場合、および別段の指定がない限り、化合物の「治療有効量」および「有効量」という用語は、疾患または障害の処置または管理において治療的利益をもたらすか、あるいは疾患または障害に関連する１つまたは複数の症状を遅延または最小化するのに十分な量を意味する。化合物の「治療有効量」および「有効量」は、単独または１種もしくは複数の他の薬剤と組み合わせて、疾患または障害の処置または管理において治療的利益をもたらす、治療剤の量を意味する。用語「治療有効量」および「有効量」は、治療全体を改善するか、疾患または障害の症状または原因を低減または回避するか、あるいは別の治療剤の治療的有効性を増強する、量を包含し得る。
【０１１３】
「実質的に純粋な化合物１の形態Ｉ」という言い回しで使用される「実質的に純粋な」とは、約９０％超の純度を意味する。別の実施形態では、実質的に純粋とは、約９５％超の純度を指す。別の実施形態では、実質的に純粋とは、約９８％超の純度を指す。別の実施形態では、実質的に純粋とは、約９９％超の純度を指す。
【０１１４】
化合物１の形態Ｉ、または実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体に関して、用語「約」および「およそ」は、組成物または剤形の成分の用量、量または重量パーセントに関連して使用される場合、指定した用量、量または重量パーセントから得られるものと等価な薬理学的効果をもたらすと、当業者により認識される、用量、量または重量パーセントを意味する。具体的には、用語「約」または「およそ」とは、当業者により決定される特定の値に関して許容される誤差を意味し、それはその値がどのように測定または決定されるかに一部依存する。ある特定の実施形態では、用語「約」または「およそ」は、１、２、３または４の標準偏差内であることを意味する。ある特定の実施形態では、用語「約」または「およそ」は、所与の値または範囲の、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％または０．０５％以内であることを意味する。
医薬組成物
【０１１５】
本発明は、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む医薬組成物を提供する。この態様の一部の実施形態では、医薬組成物中に存在している化合物１の形態Ｉの量は、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇである。この態様の一部の実施形態では、医薬組成物中に存在している化合物１の形態Ｉの重量パーセントは、１０〜７５パーセントである。これらおよび他の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、実質的に純粋な化合物１の形態Ｉとして存在している。この態様の一部の実施形態では、医薬組成物中に存在している実質的にアモルファスな化合物２の量は、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇまたは２５０ｍｇである。この態様の一部の実施形態では、医薬組成物中に存在している実質的にアモルファスな化合物２の重量パーセントは、１０〜７５パーセントである。これらおよび他の実施形態では、実質的にアモルファスな化合物２は、実質的に純粋かつアモルファスな化合物２として存在する。「実質的に純粋な」は、９０パーセント超の純度、好ましくは９５パーセント超の純度、より好ましくは９９．５パーセント超の純度を意味する。
【０１１６】
したがって、一態様では、本発明は、
ａ．  化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体、
ｃ．  充填剤、
ｄ．  崩壊剤、
ｅ．  界面活性剤、および
ｆ．  結合剤
を含む、医薬組成物を提供する。
【０１１７】
この態様の一実施形態では、本医薬組成物は、２５ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、５０ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、１００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、１２５ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、２００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、２５０ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、４００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む。
【０１１８】
この態様の一実施形態では、本医薬組成物は、２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、１００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、１５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、２００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。この態様の別の実施形態では、本医薬組成物は、２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、本医薬組成物は化合物１の形態Ｉを含み、化合物１の形態Ｉは、組成物の重量基準で、少なくとも１５重量％（例えば、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、または少なくとも６０重量％）の量で存在する。
【０１２０】
一部の実施形態では、本医薬組成物は実質的にアモルファスな化合物２を含み、実質的にアモルファスな化合物２は、組成物の重量基準で、少なくとも１５重量％（例えば、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、または少なくとも６０重量％）の量で存在する。
【０１２１】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、充填剤、崩壊剤、界面活性剤および結合剤を含む。この実施形態では、本組成物は、組成物の重量基準で、約２５重量％〜約５５重量％（例えば、約３０〜５０重量％）の化合物１の形態Ｉ、より一般には、組成物の重量基準で、４０重量％〜約４５重量％の化合物１の形態Ｉを含む。この実施形態では、本組成物は、組成物の重量基準で、約１５重量％〜約４０重量％（例えば、約２０〜３５重量％）の実質的にアモルファスな化合物２、より一般には、組成物の重量基準で、２５重量％〜約３０重量％の実質的にアモルファスな化合物２を含む。
【０１２２】
本組成物中の化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の濃度は、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の所望量、ならびに本医薬組成物の所望の溶解プロファイルをもたらすのに必要な、医薬組成物の量などの、いくつかの要因に依存する。
【０１２３】
別の実施形態では、本医薬組成物は、化合物１の形態Ｉを含み、その固体形態にある化合物１の形態Ｉは、光散乱法により（例えば、英国のＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓから入手可能なＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒを使用して）測定すると、０．１ミクロン〜１０ミクロンの平均粒子径を有する。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉの粒子サイズは、１ミクロン〜５ミクロンである。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２．０ミクロンの粒子サイズＤ５０を有する。
【０１２４】
示されている通り、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体に加えて、本発明の一部の実施形態では、経口用製剤である医薬組成物は、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、賦形剤、結合剤、流動促進剤、滑沢剤、着色剤または香料およびそれらの任意の組合せなどの１種または複数の添加剤も含む。
【０１２５】
本発明に好適な充填剤は、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の溶解度、硬度、化学安定性、物理安定性または生物活性を実質的に低下させない。例示的な充填剤には、セルロース、変性セルロース（例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース）、酢酸セルロース、微結晶性セルロース、リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、デンプン（例えばコーンデンプン、バレイショデンプン）、糖（例えば、ソルビトール）、ラクトース、スクロースなど）またはそれらの任意の組合せが含まれる。
【０１２６】
したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、少なくとも１種の充填剤を、少なくとも５重量％（例えば、少なくとも約２０重量％、少なくとも約３０重量％、または少なくとも約４０重量％）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１０重量％〜約６０重量％（例えば、約２０重量％〜約５５重量％、約２５重量％〜約５０重量％、または約２７重量％〜約４５重量％）の充填剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、少なくとも約２０重量％（例えば、少なくとも３０重量％または少なくとも４０重量％）の微結晶性セルロース、例えばＭＣＣ  Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ１０２を含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１０重量％〜約６０重量％（例えば、約２０重量％〜約５５重量％または約２５重量％〜約４５重量％）のマイクロセルロースを含む。
【０１２７】
本発明に好適な崩壊剤は、医薬組成物の分散を増強し、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の化学安定性、物理安定性、硬度または生物活性を実質的に低下させない。例示的な崩壊剤には、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、またはそれらの組合せが含まれる。
【０１２８】
したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、崩壊剤を、約１０重量％またはそれ未満（例えば、約７重量％もしくはそれ未満、約６重量％もしくはそれ未満、または約５重量％もしくはそれ未満）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１重量％〜約１０重量％（例えば、約１．５重量％〜約７．５重量％または約２．５重量％〜約６重量％）の崩壊剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１０重量％またはそれ未満（例えば、７重量％もしくはそれ未満、６重量％もしくはそれ未満、または５重量％もしくはそれ未満）のクロスカルメロースナトリウムを含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１重量％〜約１０重量％（例えば、約１．５重量％〜約７．５重量％または約２．５重量％〜約６重量％）のクロスカルメロースナトリウムを含む。一部の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約０．１％〜約１０重量％（例えば、約０．５重量％〜約７．５重量％または約１．５重量％〜約６重量％）の崩壊剤を含む。さらに他の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約０．５％〜約１０重量％（例えば、約１．５重量％〜約７．５重量％または約２．５重量％〜約６重量％）の崩壊剤を含む。
【０１２９】
本発明に好適な界面活性剤は、医薬組成物の湿潤性を増強し、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の化学安定性、物理安定性、硬度または生物活性を実質的に低下させない。例示的な界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ナトリウムステアリルフマレート（ＳＳＦ）、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエート（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標））、またはそれらの任意の組合せなどが含まれる。
【０１３０】
したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、界面活性剤を、約１０重量％またはそれ未満（例えば、約５重量％もしくはそれ未満、約２重量％もしくはそれ未満、約１重量％もしくはそれ未満、約０．８重量％もしくはそれ未満、または約０．６重量％もしくはそれ未満）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１０重量％〜約０．１重量％（例えば、約５重量％〜約０．２重量％または約２重量％〜約０．３重量％）の界面活性剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、１０重量％またはそれ未満（例えば、約５重量％もしくはそれ未満、約２重量％もしくはそれ未満、約１重量％もしくはそれ未満、約０．８重量％もしくはそれ未満、または約０．６重量％もしくはそれ未満）のラウリル硫酸ナトリウムを含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１０重量％〜約０．１重量％（例えば、約５重量％〜約０．２重量％または約２重量％〜約０．３重量％）のラウリル硫酸ナトリウムを含む。
【０１３１】
本発明に好適な結合剤は、医薬組成物の錠剤強度を増強し、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の化学安定性、物理安定性または生物活性を実質的に低下させない。例示的な結合剤には、ポリビニルピロリドン、第二リン酸カルシウム、スクロース、コーン（トウモロコシ）デンプン、変性セルロース（例えば、ヒドロキシメチルセルロース）、またはそれらの任意の組合せが含まれる。
【０１３２】
したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、結合剤を、少なくとも約０．１重量％（例えば、少なくとも約１重量％、少なくとも約３重量％、少なくとも約４重量％、または少なくとも約５重量％）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約０．１重量％〜約１０重量％（例えば、約１重量％〜約１０重量％または約２重量％〜約７重量％）の結合剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、少なくとも約０．１重量％（例えば、少なくとも約１重量％、少なくとも約２重量％、少なくとも約３重量％、または少なくとも約４重量％）のポリビニルピロリドンを含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、ポリビニルピロリドンの約０．１重量％〜約１０重量％（例えば、約１重量％〜約８重量％または約２重量％〜約５重量％）の範囲の量で流動促進剤を含む。
【０１３３】
本発明に好適な賦形剤は、所望のサイズの錠剤を調製するために、製剤に必要なかさ高さを付与することができ、医薬組成物の成分と一般に適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の溶解度、硬度、化学安定性、物理安定性または生物活性を実質的に低下させない。例示的な賦形剤には、糖、例えば、粉砂糖、圧縮糖、デキストレート、デキストリン、デキストロース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、および変性セルロース、例えば、粉末セルロース、タルク、リン酸カルシウム、デンプン、またはそれらの任意の組合せが含まれる。
【０１３４】
したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、賦形剤を、４０重量％またはそれ未満（例えば、３５重量％もしくはそれ未満、３０重量％もしくはそれ未満、または２５重量％もしくはそれ未満、または２０重量％もしくはそれ未満、または１５重量％もしくはそれ未満、または１０重量％もしくはそれ未満）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約４０重量％〜約１重量％（例えば、約３５重量％〜約５重量％、または約３０重量％〜約７重量％、約２５重量％〜約１０重量％、約２０重量％〜約１５重量％）の賦形剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、４０重量％またはそれ未満（例えば、３５重量％もしくはそれ未満、２５重量％もしくはそれ未満、または１５重量％もしくはそれ未満）のマンニトールを含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約３５重量％〜約１重量％（例えば、約３０重量％〜約５重量％または約２５重量％〜約１０重量％のマンニトールを含む。
【０１３５】
本発明に好適な流動促進剤は、医薬組成物の流動特性を増強し、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の溶解度、硬度、化学安定性、物理安定性または生物活性を実質的に低下させない。例示的な流動促進剤には、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、またはそれらの組合せが含まれる。
【０１３６】
したがって、一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、流動促進剤を、２重量％またはそれ未満（例えば、１．７５重量％、１．２５重量％もしくはそれ未満、または１．００重量％もしくはそれ未満）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約２重量％〜約０．０５重量％（例えば、約１．５重量％〜約０．０７重量％または約１．０重量％〜約０．０９重量％）の流動促進剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、２重量％またはそれ未満（例えば、１．７５重量％、１．２５重量％もしくはそれ未満、または１．００重量％もしくはそれ未満）のコロイド状二酸化ケイ素を含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約２重量％〜約０．０５重量％（例えば、約１．５重量％〜約０．０７重量％または約１．０重量％〜約０．０９重量％）のコロイド状二酸化ケイ素を含む。
【０１３７】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、表面（例えば、混合用ボウル、圧縮ダイおよび／または打錠器の表面）に顆粒のビーズ混合物が付着するのを防止することができる滑沢剤を含み得る、経口用固体医薬剤形を含むことができる。滑沢剤はまた、顆粒内部の粒子間摩擦を低下させることもでき、医薬組成物の圧縮、およびダイプレス器から圧縮済み医薬組成物の取り出しを改善する。滑沢剤はまた、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の溶解度、硬度または生物活性を実質的に低下させない。例示的な滑沢剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸アルミニウム、ロイシン、ベヘン酸グリセリル、水素化植物油またはそれらの任意の組合せが含まれる。一実施形態では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、滑沢剤を、５重量％またはそれ未満（例えば、４．７５重量％、４．０重量％もしくはそれ未満、または３．００重量％もしくはそれ未満、または２．０重量％もしくはそれ未満）の量で含む。例えば、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約５重量％〜約０．１０重量％（例えば、約４．５重量％〜約０．５重量％または約３重量％〜約１重量％）の滑沢剤を含む。別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、５重量％またはそれ未満（例えば、４．０重量％もしくはそれ未満、３．０重量％もしくはそれ未満、または２．０重量％もしくはそれ未満、または１．０重量％もしくはそれ未満）のステアリン酸マグネシウムを含む。さらに別の例では、本医薬組成物は、組成物の重量基準で、約５重量％〜約０．１０重量％（例えば、約４．５重量％〜約０．１５重量％または約３．０重量％〜約０．５０重量％）のステアリン酸マグネシウムを含む。
【０１３８】
本発明の医薬組成物は、任意選択で、該組成物の視覚的魅力、味および／または香りを増強するための、１種または複数の着色剤、フレーバー、および／または香料を含むことができる。好適な着色剤、フレーバーまたは香料は、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の溶解度、化学安定性、物理安定性、硬度または生物活性を実質的に低下させない。一実施形態では、本医薬組成物は、着色剤、フレーバーおよび／または香料を含む。一実施形態では、本発明により提供される医薬組成物は、紫色である。
【０１３９】
一部の実施形態では、本医薬組成物は錠剤を含むか、または錠剤を作製することができ、この錠剤は、着色剤によりコーティングすることができ、任意選択で、好適なインクを使用して、ロゴ、他の画像および／または文字により標識することができる。さらに他の実施形態では、本医薬組成物は錠剤を含むか、または錠剤を作製することができ、この錠剤は、着色剤によりコーティングすることができ、ワックスがけすることができ、任意選択で、好適なインクを使用して、ロゴ、他の画像および／または文字により標識することができる。好適な着色剤およびインクは、医薬組成物の成分と適合するものであり、すなわち、それらは医薬組成物の溶解度、化学安定性、物理安定性、硬度または生物活性を実質的に低下させない。好適な着色剤およびインクは、任意の色とすることができ、水をベースとするものまたは溶媒をベースとするものである。一実施形態では、本医薬組成物から作製される錠剤は、着色剤によりコーティングされ、次に、好適なインクを使用して、ロゴ、他の画像および／または文字により標識される。例えば、本明細書に記載されている医薬組成物を含む錠剤は、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の、着色剤を含むフィルムコーティング剤によりコーティングすることができる。着色錠剤は、好適なインクを使用して、錠剤中の活性成分の強度を示す、ロゴおよび文字により標識することができる。別の例では、本明細書に記載されている医薬組成物を含む錠剤は、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の、着色剤を含むフィルムコーティング剤によりコーティングすることができる。
【０１４０】
別の実施形態では、本医薬組成物から作製される錠剤は、着色剤によりコーティングされ、ワックスがけされ、次に、好適なインクを使用して、ロゴ、他の画像および／または文字により標識される。例えば、本明細書に記載されている医薬組成物を含む錠剤は、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の、着色剤を含むフィルムコーティング剤によりコーティングすることができる。着色錠剤は、最初の錠剤コアの重量の約０．０１％ｗ／ｗの量で秤量したカルナウバワックス粉末によりワックスがけすることができる。ワックスがけした錠剤は、好適なインクを使用して、錠剤中の活性成分の強度を示すロゴおよび文字により標識することができる。別の例では、本明細書に記載されている医薬組成物を含む錠剤は、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の、着色剤を含むフィルムコーティング剤によりコーティングすることができる。着色錠剤は、最初の錠剤コアの重量の約０．０１％ｗ／ｗの量で秤量したカルナウバワックス粉末によりワックスがけすることができる。ワックスがけした錠剤は、黒色インクなどの医薬品グレードのインク（例えば、Ｏｐａｃｏｄｅ（登録商標）Ｓ−１−１７８２３、溶媒をベースとするインク、Ｗｅｓｔ  Ｐｏｉｎｔ、ＰＡ．のＣｏｌｏｒｃｏｎ，Ｉｎｃ．から市販）を使用して、錠剤中の活性成分の強度を示すロゴおよび文字により標識することができる。
【０１４１】
１つの例示的な医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１５重量％〜約７０重量％（例えば、約１５重量％〜約６０重量％、約１５重量％〜約５０重量％、または約２０重量％〜約７０重量％または約３０重量％〜約７０重量％）の化合物１の形態Ｉ、および組成物の重量基準で、約１５重量％〜約４０重量％（例えば、約２０〜３５重量％）の実質的にアモルファスな化合物２、より一般には、組成物の重量基準で、２５重量％〜約３０重量％の実質的にアモルファスな化合物２を含む。上記の組成物はまた、１種または複数の薬学的に許容される添加剤、例えば約２０重量％〜約５０重量％の充填剤；約１重量％〜約５重量％の崩壊剤；約２重量％〜約０．３重量％の界面活性剤；および約０．１重量％〜約５重量％の結合剤を含み得る。
【０１４２】
別の例示的な医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１５重量％〜約７０重量％（例えば、約１５重量％〜約６０重量％、約１５重量％〜約５０重量％、または約１５重量％〜約４０重量％、または約２０重量％〜約７０重量％、または約３０重量％〜約７０重量％、または約４０重量％〜約７０重量％、または約５０重量％〜約７０重量％）の化合物１の形態Ｉ、組成物の重量基準で、約１５重量％〜約４０重量％（例えば、約２０〜３５重量％）の実質的にアモルファスな化合物２、およびより一般には、組成物の重量基準で、２５重量％〜約３０重量％の実質的にアモルファスな化合物２、および１種または複数の添加剤、例えば約２０重量％〜約５０重量％の充填剤；約１重量％〜約５重量％の崩壊剤；約２重量％〜約０．３重量％の界面活性剤；約０．１重量％〜約５重量％の結合剤；および約２重量％〜約０．１重量％の滑沢剤を含む。
【０１４３】
別の例示的な医薬組成物は、組成物の重量基準で、約１５重量％〜約７０重量％（例えば、約１５重量％〜約６０重量％、約１５重量％〜約５０重量％、または約１５重量％〜約４０重量％、または約２０重量％〜約７０重量％、または約３０重量％〜約７０重量％、または約４０重量％〜約７０重量％、または約５０重量％〜約７０重量％）の化合物１の形態Ｉ、組成物の重量基準で、約１５重量％〜約４０重量％（例えば、約２０〜３５重量％）の実質的にアモルファスな化合物２、およびより一般には、組成物の重量基準で、２５重量％〜約３０重量％の実質的にアモルファスな化合物２、および１種または複数の添加剤、例えば約２０重量％〜約５０重量％の充填剤；約１重量％〜約５重量％の崩壊剤；約２重量％〜約０．３重量％の界面活性剤；約０．１重量％〜約５重量％の結合剤；約２重量％〜約０．１重量％の滑沢剤；約２重量％〜約４重量％の着色剤；および約０．００５重量％〜約０．０１５重量％のワックスを含む。
【０１４４】
一実施形態では、本発明は、
ａ．  組成物の重量基準で、約４３重量％の化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  組成物の重量基準で、実質的にアモルファスな化合物２を含む約３４重量％の固体分散体、
ｃ．  組成物の重量基準で、約１７重量％の微結晶性セルロース、
ｄ．  組成物の重量基準で、約２重量％のクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  組成物の重量基準で、約１重量％のラウリル硫酸ナトリウム、および
ｆ．  組成物の重量基準で、約３重量％のポリビニルピロリドン
を含む、粒状医薬組成物である。
【０１４５】
一実施形態では、本発明は、
ａ．  組成物の重量基準で、約３５重量％の化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  組成物の重量基準で、実質的にアモルファスな化合物２を含む約２８重量％の固体分散体、
ｃ．  組成物の重量基準で、約２６重量％の微結晶性セルロース、
ｄ．  組成物の重量基準で、約６重量％のクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  組成物の重量基準で、約３重量％のポリビニルピロリドン、
ｆ．  組成物の重量基準で、約１重量％のラウリル硫酸ナトリウム、および
ｇ．  組成物の重量基準で、約１重量％のステアリン酸マグネシウム
を含む、錠剤である。
【０１４６】
一実施形態では、本発明は、
ａ．  組成物の重量基準で、約３４重量％の化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  組成物の重量基準で、実質的にアモルファスな化合物２を含む約２７重量％の固体分散体、
ｃ．  組成物の重量基準で、約２６重量％の微結晶性セルロース、
ｄ．  組成物の重量基準で、約６重量％のクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  組成物の重量基準で、約２重量％のポリビニルピロリドン、
ｆ．  組成物の重量基準で、約１重量％のラウリル硫酸ナトリウム、
ｇ．  組成物の重量基準で、約１重量％のステアリン酸マグネシウム、
ｈ．  組成物の重量基準で、約３重量％の着色剤、および
ｉ．  組成物の重量基準で、約０．０１０重量％のワックス
を含む、錠剤である。
【０１４７】
本発明の別の錠剤は、
ａ．  約１５０〜２５０ｍｇの化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  約１００〜１５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２、
ｃ．  約１２５〜１７５ｍｇの微結晶性セルロース、
ｄ．  約２０〜４０ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  約１０〜２０ｍｇのポリビニルピロリドン、
ｆ．  約２〜６ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム、および
ｇ．  約３〜７ｍｇのステアリン酸マグネシウム
を含む。
【０１４８】
本発明の別の錠剤は、
ａ．  約２００ｍｇの化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  約１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２、
ｃ．  約１５０ｍｇの微結晶性セルロース、
ｄ．  約３４ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  約１５ｍｇのポリビニルピロリドン、
ｆ．  約４ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム、および
ｇ．  約６ｍｇのステアリン酸マグネシウム
を含む。
【０１４９】
本発明の別の錠剤は、
ａ．  約２００ｍｇの化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  約１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２、
ｃ．  約１５０ｍｇの微結晶性セルロース、
ｄ．  約３４ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  約１５ｍｇのポリビニルピロリドン、
ｆ．  約４ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム、
ｇ．  約６ｍｇのステアリン酸マグネシウム、
ｈ．  約１７ｍｇの着色剤、および
ｉ．  約０．０６ｍｇのワックス
を含む。
【０１５０】
一実施形態では、本発明は、
ａ．  組成物の重量基準で、約３８重量％の化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  組成物の重量基準で、実質的にアモルファスな化合物２を含む約４０重量％の固体分散体、
ｃ．  組成物の重量基準で、約１６重量％の微結晶性セルロース、
ｄ．  組成物の重量基準で、約２重量％のクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  組成物の重量基準で、約１重量％のラウリル硫酸ナトリウム、および
ｆ．  組成物の重量基準で、約３重量％のポリビニルピロリドン
を含む、粒状医薬組成物である。
【０１５１】
一実施形態では、本発明は、
ａ．  組成物の重量基準で、約３１重量％の化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  組成物の重量基準で、実質的にアモルファスな化合物２を含む約３２重量％の固体分散体、
ｃ．  組成物の重量基準で、約２６重量％の微結晶性セルロース、
ｄ．  組成物の重量基準で、約６重量％のクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  組成物の重量基準で、約３重量％のポリビニルピロリドン、
ｆ．  組成物の重量基準で、約１重量％のラウリル硫酸ナトリウム、
ｇ．  組成物の重量基準で、約１重量％のステアリン酸マグネシウム、および
ｈ．  組成物の重量基準で、約３重量％の着色剤
を含む、錠剤である。
【０１５２】
本発明の別の錠剤は、
ａ．  約１００〜２００ｍｇの化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  約１００〜１５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２、
ｃ．  約１００〜１５０ｍｇの微結晶性セルロース、
ｄ．  約２０〜４０ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  約１０〜２０ｍｇのポリビニルピロリドン、
ｆ．  約２〜６ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム、および
ｇ．  約３〜７ｍｇのステアリン酸マグネシウム
を含む。
【０１５３】
本発明の別の錠剤は、
ａ．  約１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉ、
ｂ．  約１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２、
ｃ．  約１２９ｍｇの微結晶性セルロース、
ｄ．  約２９ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、
ｅ．  約１３ｍｇのポリビニルピロリドン、
ｆ．  約４ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム、
ｇ．  約５ｍｇのステアリン酸マグネシウム、および
ｈ．  約１５ｍｇの着色剤
を含む。
【０１５４】
本発明の医薬組成物は、経口投与に好適な、錠剤形態、カプセル形態、ポーチ形態、ロゼンジ形態、または他の固体形態に加工することができる。したがって、一部の実施形態では、本医薬組成物は錠剤形態にある。
【０１５５】
本発明の別の態様は、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および添加剤（例えば、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、結合剤、着色剤、滑沢剤またはそれらの任意の組合せ）を含む錠剤からなる医薬製剤を提供し、添加剤のそれぞれは、上および以下の実施例に記載されており、錠剤は、約３０分間で、少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％）の溶解度を有する。
【０１５６】
一例では、本医薬組成物は、２５ｍｇ〜４００ｍｇの範囲の量、例えば、２５ｍｇ、または５０ｍｇ、または７５ｍｇ、または１００ｍｇ、または１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、または４００ｍｇの化合物１の形態Ｉ、２５ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲の量、例えば、２５ｍｇ、または５０ｍｇ、または７５ｍｇ、または１００ｍｇ、または１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２、および１種または複数の添加剤（例えば、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、結合剤、着色剤、滑沢剤、またはそれらの任意の組合せ）を含む錠剤からなり、添加剤のそれぞれは、上および以下の実施例において記載されており、錠剤は、約３０分で、約５０％〜約１００％（例えば、約５５％〜約９５％または約６０％〜約９０％）の溶解度を有する。
【０１５７】
溶解度は、約３７℃の温度、約５０〜７５ｒｐｍで撹拌した、５０ｍＭ第一リン酸カリウム（potassium  phosphate  monoasic）によりｐＨ６．８に緩衝化されているＤＩ水９００ｍＬ中に溶解した、０．１％ＣＴＡＢの溶解媒体を使用する、標準的な米国薬局方ＩＩ型装置を用いて測定することができる。装置の各試験容器中で１つの実験用錠剤を試験する。溶解度は、約３７℃の温度、約６５ｒｐｍで撹拌した、９００ｍＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解した０．７％ラウリル硫酸ナトリウムの溶解媒体を使用する、標準的な米国薬局方ＩＩ型装置を用いて測定することもできる。装置の各試験容器中で１つの実験用錠剤を試験する。溶解度は、約３７℃の温度、約６５ｒｐｍで撹拌した、９００ｍＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解した０．５％ラウリル硫酸ナトリウムの溶解媒体を使用する、標準的な米国薬局方ＩＩ型装置を用いて測定することもできる。装置の各試験容器中で１つの実験用錠剤を試験する。
化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を作製する方法
化合物１
【０１５８】
化合物１は、化合物１の形態Ｉの開始点として使用され、スキーム１〜４に従って、酸塩化物部分とアミン部分とをカップリングすることにより調製することができる。
スキーム１．酸塩化物部分の合成。
【化２６】
2016535791.tif 000028
【０１５９】
スキーム１は、化合物１のアミド結合を作製するために、スキーム３において使用される、１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボニルクロリドの調製を図示している。
【０１６０】
出発原料である２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸は、Ｓａｌｔｉｇｏ（Ｌａｎｘｅｓｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの関連会社）から市販されている。２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸中のカルボン酸部分の第一級アルコールへの還元、続く塩化チオニル（ＳＯＣｌ２）を使用する対応する塩化物への変換により、５−（クロロメチル）−２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソールが得られ、続いて、これをシアン化ナトリウムを使用して２−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）アセトニトリルに変換する。２−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）アセトニトリルの塩基および１−ブロモ−２−クロロエタンによる処理により、１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボニトリルが得られる。１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボニトリル中のニトリル部分を塩基を使用してカルボン酸に変換すると、１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボン酸が得られ、これを塩化チオニルを使用して所望の酸塩化物に変換する。
スキーム２．酸塩化物部分の代替合成。
【化２７】
2016535791.tif 000029
【０１６１】
スキーム２は、必要な酸塩化物の代替合成を図示している。５−ブロモメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールは、パラジウム触媒の存在下で、シアノ酢酸エチルとカップリングして対応するアルファシアノエチルエステルを形成する。エステル部分のカルボン酸へのケン化により、シアノエチル化合物が得られる。塩基の存在下で、１−ブロモ−２−クロロエタンによるシアノエチル化合物のアルキル化により、シアノシクロプロピル化合物が得られる。シアノシクロプロピル化合物の塩基による処理によって、カルボン酸塩が得られ、これは酸で処理することにより、カルボン酸に変換される。次に、カルボン酸の酸塩化物への変換は、塩化チオニルなどの塩素化剤を使用して行う。
スキーム３．アミン部分の合成。
【化２８】
2016535791.tif 000030
【０１６２】
スキーム３は、必要な３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルの調製を図示しており、これは、スキーム３中の１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボニルクロリドとカップリングすると化合物１が得られる。パラジウムを触媒とする２−ブロモ−３−メチルピリジンと３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニルボロン酸とのカップリングにより、３−（３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルが得られ、これを続いて、所望の化合物に変換する。
スキーム４．３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸の酸塩の形成。
【化２９】
2016535791.tif 000031
【０１６３】
スキーム４は、トリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンを使用する、１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボニルクロリドと３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルとをカップリングして、最初に化合物１のｔｅｒｔ−ブチルエステルを得ることを図示している。
化合物１の形態Ｉ
【０１６４】
化合物１の形態Ｉは、適切な溶媒中、有効量の時間、化合物１のＨＣｌ塩などの、塩形態を分散または溶解することにより調製される。ｔｅｒｔ−ブチルエステルのＨＣｌなどの酸による処理によって、化合物１のＨＣＬ塩が得られ、これは、通常、結晶性固体である。化合物１の形態Ｉはまた、ギ酸などの適切な酸による処理によって、ｔ−ブチルエステル前駆体から直接調製することもできる。
【０１６５】
３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸のＨＣｌ塩を使用して、適切な溶媒中、有効量の時間、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸のＨＣｌ塩を分散または溶解することにより、形態Ｉを作製することができる。例えば、他の無機または有機酸から誘導される塩などの、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸の他の塩を使用することができる。他の塩は、ｔ−ブチルエステル部分の酸媒介性加水分解から得られる。他の酸から誘導される塩は、例えば、硝酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、酢酸、安息香酸およびマロン酸を含むことができる。３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸のこれらの塩形態は、使用される溶媒に応じて可溶性である場合または可溶性でない場合があるが、溶解度の欠如は、化合物１の形態Ｉの形成を妨害しない。例えば、一実施形態では、適切な溶媒は、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸のＨＣｌ塩形態は、水中ではやや溶解しにくいだけであるとしても、水、または５０％メタノール／水混合物などのアルコール／水混合物とすることができる。一実施形態では、適切な溶媒は水である。
【０１６６】
３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸の塩からの化合物１の形態Ｉの形成のための有効量の時間は、２〜２４時間またはそれ超のいずれかの時間であり得る。必要な時間の量は、温度に逆比例すると認識される。すなわち、温度が高いほど、化合物１の形態Ｉを形成するための酸の解離を行うのに必要な時間がより少ない。溶媒が水である場合、分散液を室温でおよそ２４時間撹拌すると、化合物１の形態Ｉがおよそ９８％の収率で得られる。３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸の塩の溶液がプロセス目的に望まれる場合、高温が使用され得る。高温で有効量の時間、この溶液を撹拌した後、冷却して再結晶化すると、実質的に純粋な化合物１の形態Ｉが得られる。一実施形態では、実質的に純粋とは、約９０％超の純度を指す。別の実施形態では、実質的に純粋とは、約９５％超の純度を指す。別の実施形態では、実質的に純粋とは、約９８％超の純度を指す。別の実施形態では、実質的に純粋とは、約９９％超の純度を指す。選択される温度は、使用される溶媒に一部依存しており、当業者の決定能力の十分な範囲内にある。一実施形態では、温度は、室温と約８０℃の間である。別の実施形態では、温度は、室温と約４０℃の間である。別の実施形態では、温度は、約４０℃と約６０℃の間である。別の実施形態では、温度は、約６０℃と約８０℃の間である。
【０１６７】
化合物１の形態Ｉはまた、化合物１の塩の前駆体である、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエートから直接形成することもできる（スキーム３を参照）。したがって、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエートは、適切な反応条件下で、例えば、ギ酸などの適切な酸との反応を受け、化合物１の形態Ｉが得られる。
【０１６８】
化合物１の形態Ｉは、有機溶媒から再結晶化によりさらに精製することができる。有機溶媒の例には、以下に限定されないが、トルエン、クメン、アニソール、１−ブタノール、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチル、メチルｔ−ブチルエーテル、メチルイソブチルケトンおよび１−プロパノール−水混合物が含まれる。温度は、上で記載されている通りであり得る。例えば、化合物１の形態Ｉを、７５℃で１−ブタノール中に、完全に溶解するまで溶解させる。０．２℃／分の速度で溶液を１０℃まで冷却すると、化合物１の形態Ｉの結晶が生じ、これを濾過により単離することができる。
【０１６９】
一実施形態では、化合物１の形態Ｉは、Ｃｕ  Ｋアルファ照射を使用して得られるＸ線粉末回折において、１５．２〜１５．６度、１６．１〜１６．５度、および１４．３〜１４．７度の１つまたは複数のピークを特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１５．４、１６．３および１４．５度の１つまたは複数のピークを特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１４．６〜１５．０度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１４．８度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１７．６〜１８．０度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１７．８度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１６．４〜１６．８度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１６．４〜１６．８度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、１６．６度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、７．６〜８．０度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、７．８度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２５．８〜２６．２度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２６．０度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２１．４〜２１．８度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２１．６度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２３．１〜２３．５度のピークをさらに特徴とする。別の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、２３．３度のピークをさらに特徴とする。一部の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、図１の回折パターンと実質的に類似した回折パターンを特徴とする。一部の実施形態では、化合物１の形態Ｉは、図２の回折パターンと実質的に類似した回折パターンを特徴とする。
【０１７０】
一部の実施形態では、Ｄ９０の粒子サイズ分布は、化合物１の形態Ｉについて、約８２μｍまたはそれ未満である。一部の実施形態では、Ｄ５０の粒子サイズ分布は、化合物１の形態Ｉについて、約３０μｍまたはそれ未満である。
化合物２
【０１７１】
化合物２は、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体の出発点であり、スキーム５〜７に従い、４−オキソ−ジヒドロキノリンカルボン酸部分とアミン部分とをカップリングすることにより調製することができる。
スキーム５：４−オキソ−ジヒドロキノリンカルボン酸部分の合成。
【化３０】
2016535791.tif 000032
スキーム６：アミン部分の合成。
【化３１】
2016535791.tif 000033
スキーム７：４−オキソ−ジヒドロキノリンカルボン酸部分とアミン部分のカップリング。
【化３２】
2016535791.tif 000034
【０１７２】
実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体
化合物２から始めて、化合物２のアモルファス形態は、スプレー乾燥法により調製することができる。スプレー乾燥は、液体フィードを乾燥粒子形態に変換する方法である。任意選択で、流動床乾燥または真空乾燥などの第２の乾燥方法を使用して、残留溶媒を薬学的に許容されるレベルまで低下させてもよい。通常、スプレー乾燥には、高度に分散された液状懸濁液または溶液と十分な量の熱風とを接触させて、蒸発および液滴の乾燥を生じさせることが含まれる。スプレー乾燥される調製物は、選択されるスプレー乾燥装置を使用して噴霧化することができる、任意の溶液、粗懸濁液、スラリー、コロイド状分散液、またはペーストであり得る。標準的手順では、調製物は、溶媒を蒸発させて乾燥済み生成物を収集機（例えば、サイクロン）に運ぶ、温かい濾過空気流にスプレーされる。次に、消費された空気を溶媒と一緒に排気するか、または代替として消費された空気をコンデンサーに送り、溶媒を捕捉および可能性として再利用する。市販タイプの装置を使用して、スプレー乾燥を行うことができる。例えば、市販のスプレー乾燥器は、Ｂｕｃｈｉ  Ｌｔｄ．およびＮｉｒｏ（例えば、Ｎｉｒｏにより製造されているスプレー乾燥器のＰＳＤライン）（ＵＳ２００４／０１０５８２０；ＵＳ２００３／０１４４２５７を参照されたい）により製造されている。
【０１７３】
スプレー乾燥は、通常、約３重量％〜約３０重量％、例えば、約４重量％〜約２０重量％、好ましくは少なくとも約１０％の材料の固体投入（すなわち、薬物および添加剤）を使用する。一般に、固体投入の上限は、得られる溶液の粘度（例えば、ポンプ注入能力）、および溶液中の構成成分の溶解度により支配される。一般に、溶液の粘度は、得られる粉末生成物中の粒子サイズを決定することができる。
【０１７４】
スプレー乾燥のための技法および方法は、Perry’s  Chemical  Engineering  Handbook、第６版、R.  H.  Perry,  D.  W.  GreenおよびJ.  O.  Maloney編）、McGraw-Hill  book  co.（１９８４年）；およびMarshall  「Atomization  and  Spray-Drying」５０巻、Chem.  Eng.  Prog.  Monogr.  Series  ２（１９５４年）に見いだすことができる。一般に、スプレー乾燥は、約６０℃〜約２００℃、例えば約９５℃〜約１８５℃、約１１０℃〜約１８２℃、約９６℃〜約１８０℃、例えば、約１４５℃の入り口温度で行われる。スプレー乾燥は、一般に、約３０℃〜約９０℃、例えば約４０℃〜約８０℃、約４５℃〜約８０℃、例えば約７５℃の出口温度で行われる。噴霧化流速は、一般に、約４ｋｇ／時〜約１２ｋｇ／時、例えば、約４．３ｋｇ／時〜約１０．５ｋｇ／時、例えば、約６ｋｇ／時または約１０．５ｋｇ／時である。フィード流速は、一般に、約３ｋｇ／時〜約１０ｋｇ／時、例えば、約３．５ｋｇ／時〜約９．０ｋｇ／時、例えば、約８ｋｇ／時または約７．１ｋｇ／時である。噴霧化比は、一般に、約０．３〜１．７、例えば約０．５〜１．５、例えば約０．８または約１．５である。
【０１７５】
溶媒の除去は、トレイ乾燥、流動床乾燥（例えば、およそ室温〜約１００℃）、真空乾燥、マイクロ波乾燥、回転ドラム式乾燥または二重円錐真空乾燥（例えば、およそ室温〜約２００℃）などの、後乾燥ステップを必要とすることがある。
【０１７６】
一実施形態では、スプレー乾燥した分散体は流動床乾燥される。
【０１７７】
一方法では、溶媒は、揮発性溶媒、例えば、約１００℃未満の沸点を有する溶媒を含む。一部の実施形態では、溶媒は、溶媒の混合物、例えば揮発性溶媒の混合物、または揮発性溶媒と不揮発性溶媒との混合物を含む。溶媒の混合物が使用される場合、混合物は１種または複数の不揮発性溶媒を含むことができ、例えば、ここで、不揮発性溶媒が約１５％未満、例えば約１２％未満、約１０％未満、約８％未満、約５％未満、約３％未満、または約２％未満で混合物中に存在している。
【０１７８】
好ましい溶媒は、化合物２が少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも約１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌまたはそれ超）の溶解度を有する、溶媒である。より好ましい溶媒には、化合物２が少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの溶解度を有するものが含まれる。
【０１７９】
試験することができる例示的な溶媒には、アセトン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、酢酸エチル、エチルエーテル、氷酢酸（ＨＡｃ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ペンタン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル、およびトルエンが含まれる。例示的な共溶媒には、アセトン／ＤＭＳＯ、アセトン／ＤＭＦ、アセトン／水、ＭＥＫ／水、ＴＨＦ／水、ジオキサン／水が含まれる。２溶媒系では、溶媒は、約０．１％〜約９９．９％で存在し得る。一部の好ましい実施形態では、水は、アセトンとの共溶媒であり、この場合、水は約０．１％〜約１５％、例えば約９％〜約１１％、例えば約１０％存在している。一部の好ましい実施形態では、水はＭＥＫとの共溶媒であり、この場合、水は約０．１％〜約１５％、例えば約９％〜約１１％、例えば約１０％存在している。一部の実施形態では、溶媒の溶液は３種の溶媒を含む。例えば、アセトンおよび水は、ＤＭＡ、ＤＭＦ、ＤＭＩ、ＤＭＳＯまたはＨＡｃなどの第３の溶媒と混合することができる。実質的にアモルファスな化合物２が固体分散体の構成成分である場合、好ましい溶媒は、化合物２とポリマーの両方を溶解する。適切な溶媒には、上に記載されているもの、例えば、ＭＥＫ、アセトン、水、メタノールおよびそれらの混合物が含まれる。
【０１８０】
粒子サイズおよび乾燥温度の範囲は、最適なスプレー乾燥分散体を調製するよう修正してもよい。熟練技術者により認識される通り、粒子サイズが小さいと、溶媒除去が改善される。しかし、本出願人らは、より小さな粒子は、ある環境では、錠剤化などの下流での加工にとって最適なスプレー乾燥分散体とならない、ふんわりとした粒子になる恐れがあることを見いだした。より高い温度では、実質的にアモルファスな化合物２の結晶化または化学分解が起こることがある。より低い温度では、十分な量の溶媒が除去されないことがある。本明細書における方法は、最適な粒子サイズおよび最適な乾燥温度をもたらす。
【０１８１】
一般に、粒子サイズは、Ｄ１０（μｍ）が、約５未満、例えば、約４．５未満、約４．０未満、または約３．５未満となり、Ｄ５０（μｍ）が一般に、約１７未満、例えば約１６未満、約１５未満、約１４未満、約１３未満となり、Ｄ９０（μｍ）が、一般には、約１７５未満、例えば、約１７０未満、約１７０未満、約１５０未満、約１２５未満、約１００未満、約９０未満、約８０未満、約７０未満、約６０未満、または約５０未満となるものである。一般に、スプレー乾燥した粒子のかさ密度は、約０．０８ｇ／ｃｃ〜約０．２０ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１０〜約０．１５ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１１ｇ／ｃｃまたは約０．１４ｇ／ｃｃである。スプレー乾燥した粒子のタップ密度は、一般に、１０タップの場合、約０．０８ｇ／ｃｃ〜約０．２０ｇ／ｃｃ、例えば約０．１０〜約０．１５ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１１ｇ／ｃｃまたは約０．１４ｇ／ｃｃ；５００タップの場合、０．１０ｇ／ｃｃ〜約０．２５ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１１〜約０．２１ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１５ｇ／ｃｃ、約０．１９ｇ／ｃｃ、または約０．２１ｇ／ｃｃ；１２５０タップの場合、０．１５ｇ／ｃｃ〜約０．２７ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１８〜約０．２４ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１８ｇ／ｃｃ、約０．１９ｇ／ｃｃ、約０．２０ｇ／ｃｃ、または約０．２４ｇ／ｃｃ；および２５００タップの場合、０．１５ｇ／ｃｃ〜約０．２７ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１８〜約０．２４ｇ／ｃｃ、例えば、約０．１８ｇ／ｃｃ、約０．２１ｇ／ｃｃ、約０．２３ｇ／ｃｃ、または約０．２４ｇ／ｃｃの範囲である。
【０１８２】
ポリマー
【０１８３】
アモルファス化合物２およびポリマー（または固体状態の担体）を含む、スプレー乾燥した分散体も本明細書に含まれている。例えば、化合物２は、固体アモルファス分散体の構成成分としてのアモルファス化合物として存在している。固体アモルファス分散体は、一般に、実質的にアモルファスな化合物２およびポリマーを含む。例示的なポリマーには、ＨＰＭＣまたはＨＰＭＣＡＳなどのセルロースポリマー、およびＰＶＰ／ＶＡなどのピロリドンを含有するポリマーが含まれる。一部の実施形態では、固体のアモルファス分散体には、界面活性剤などの１種または複数の追加の添加剤が含まれる。
【０１８４】
一実施形態では、ポリマーは、水性媒体中に溶解することができる。ポリマーの溶解度は、ｐＨに非依存性であってもよく、またはｐＨ依存性であってもよい。ｐＨ依存性には、１種または複数の腸溶性ポリマーが含まれる。用語「腸溶性ポリマー」とは、より酸性な胃の環境と比べ、腸のそれほど酸性ではない環境で、優先的に溶解するポリマー、例えば、酸性水性媒体には不溶性であるが、ｐＨが５〜６を超える場合、溶解性であるポリマーを指す。適切なポリマーは、化学的および生物的に不活性であるべきである。スプレー乾燥分散体の物理安定性を改善するため、ポリマーのガラス転移温度（Ｔｇ）はできるだけ高くあるべきである。例えば、好ましいポリマーは、薬物（すなわち、化合物２）のガラス転移温度に少なくとも等しいか、またはそれより高いガラス転移温度を有する。他の好ましいポリマーは、薬物（すなわち、化合物２）の約１０〜約１５℃内であるガラス転移温度を有する。ポリマーの好適なガラス転移温度の例には、少なくとも約９０℃、少なくとも約９５℃、少なくとも約１００℃、少なくとも約１０５℃、少なくとも約１１０℃、少なくとも約１１５℃、少なくとも約１２０℃、少なくとも約１２５℃、少なくとも約１３０℃、少なくとも約１３５℃、少なくとも約１４０℃、少なくとも約１４５℃、少なくとも約１５０℃、少なくとも約１５５℃、少なくとも約１６０℃、少なくとも約１６５℃、少なくとも約１７０℃、または少なくとも約１７５℃（乾燥条件下で測定した場合）が含まれる。理論に拘束されることを望むものではないが、基本となるメカニズムは、より高いＴｇを有するポリマーは、室温ではより低い分子移動度を一般に有しており、このことが、アモルファスのスプレー乾燥分散体の物理安定性を安定化する重要な因子であり得ることであると考えられる。
【０１８５】
さらに、ポリマーの吸湿性は、低くあるべきであり、例えば、約１０％未満であるべきである。本出願において比較するために、ポリマーまたは組成物の吸湿性は、約６０％の相対湿度で特徴付けられる。一部の好ましい実施形態では、ポリマーは、約１０％未満の水分吸収度、例えば約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、または約２％未満の水分吸収度を有する。吸湿性はまた、スプレー乾燥分散体の物理安定性に影響を及ぼし得る。一般に、ポリマーに吸着される水分は、このポリマーおよび得られるスプレー乾燥分散体のＴｇを大きく低下させることができ、これは、上記のスプレー乾燥分散体の物理安定性をさらに低下させることになる。
【０１８６】
一実施形態では、ポリマーは、１種または複数の水溶性ポリマーまたは部分的に水溶性のポリマーである。水溶性または部分的に水溶性のポリマーには、以下に限定されないが、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））またはエチルセルロース；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）；ポリメタクリレート（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ）などのアクリレート；シクロデキストリン（例えば、β−シクロデキストリン）ならびにそれらのコポリマーおよび誘導体（例えば、ＰＶＰ−ＶＡ（ポリビニルピロリドン−酢酸ビニル）を含む）が含まれる。
【０１８７】
一部の実施形態では、ポリマーは、ＨＰＭＣＡＳ、ＨＰＭＣ  Ｅ５０、ＨＰＭＣＥ１５、またはＨＰＭＣ６０ＳＨ５０などのヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。
【０１８８】
本明細書で議論される通り、ポリマーは、ｐＨ依存性の腸溶性ポリマーであり得る。このようなｐＨ依存性腸溶性ポリマーには、以下に限定されないが、セルロース誘導体（例えば、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ））、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）またはその塩（例えば、（ＣＭＣ−Ｎａ）などのナトリウム塩）；セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルセルロースアセテートフタレート（ＨＰＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチル−セルロースアセテートフタレート（ＨＰＭＣＡＰ）、およびメチルセルロースアセテートフタレート（ＭＣＡＰ）またはポリメタクリレート（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ）が含まれる。一部の実施形態では、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）である。一部の実施形態では、ポリマーは、ＨＧグレードのヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート（ＨＰＭＣＡＳ−ＨＧ）である。
【０１８９】
さらに別の実施形態では、ポリマーは、ポリビニルピロリドンコポリマー、例えばビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（ＰＶＰ／ＶＡ）である。
【０１９０】
化合物２が、ポリマーを含む、例えば、ＨＰＭＣ、ＨＰＭＣＡＳまたはＰＶＰ／ＶＡポリマーを含むスプレー乾燥分散体を形成する実施形態では、スプレー乾燥分散体の総重量に対するポリマーの量は、約０．１重量％〜９９重量％の範囲である。別段の指定がない限り、分散体内での、記載されている薬物、ポリマーおよび他の添加剤の割合は、重量百分率で与えられる。ポリマーの量は、通常、少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約３０％、例えば、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または約５０％（例えば、４９．５％）である。その量は、通常、約９９％もしくはそれ未満、好ましくは約８０％もしくはそれ未満、例えば約７５％もしくはそれ未満、約７０％もしくはそれ未満、約６５％もしくはそれ未満、約６０％もしくはそれ未満、または約５５％もしくはそれ未満である。一実施形態では、ポリマーは、分散体の総重量の最大約５０％（さらにより具体的には、約４９％、約４９．５％または約５０％などの約４０％〜５０％の間）の量にある。ＨＰＭＣおよびＨＰＭＣＡＳは、信越化学工業株式会社から様々なグレードで入手可能であり、例えば、ＨＰＭＣＡＳは、ＡＳ−ＬＦ、ＡＳ−ＭＦ、ＡＳ−ＨＦ、ＡＳ−ＬＧ、ＡＳ−ＭＧ、ＡＳ−ＨＧを含めて、いくつかの変形体で入手可能である。これらのグレードの各々は、アセテートおよびスクシネートの置換度により変わる。
【０１９１】
一部の実施形態では、実質的にアモルファスな化合物２およびポリマーは、概ね等しい量で存在し、例えば、ポリマーおよび薬物のそれぞれが分散体の重量百分率の約半分を構成する。例えば、ポリマーは約４９．５％で存在し、薬物は約５０％で存在する。
【０１９２】
一部の実施形態では、合わせた実質的にアモルファスな化合物２およびポリマーは、スプレー乾燥前の非スプレー乾燥分散体の総固体含有量の１％〜２０％ｗ／ｗに相当する。一部の実施形態では、実質的にアモルファスな化合物２および合わせたポリマーは、スプレー乾燥前の非スプレー乾燥分散体の総固体含有量の５％〜１５％ｗ／ｗに相当する。一部の実施形態では、実質的にアモルファスな化合物２および合わせたポリマーは、スプレー乾燥前の非スプレー乾燥分散体の総固体含有量の約１１％ｗ／ｗに相当する。
【０１９３】
一部の実施形態では、分散体は、界面活性剤（例えば、ＳＬＳ）などの他の少量成分をさらに含む。一部の実施形態では、界面活性剤は、分散体の約１０％未満、例えば約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％、または約０．５％で存在している。
【０１９４】
ポリマーを含む実施形態では、このポリマーは、スプレー乾燥分散体を安定化するのに有効な量で存在すべきである。安定化には、実質的にアモルファスな化合物２の結晶化を阻害または防止することが含まれる。このような安定化は、化合物２がアモルファスから結晶形態に変換するのを阻害する。例えば、ポリマーは、化合物２の少なくとも一部（例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、またはそれ超）がアモルファスから結晶形態に変換するのを防止する。安定化は、例えば、スプレー乾燥分散体のガラス転移温度を測定することにより、アモルファス性材料の緩和速度を測定することにより、または化合物２の溶解度もしくは生体利用率を測定することにより、測定することができる。
【０１９５】
例えば、アモルファススプレー乾燥分散体などのスプレー乾燥分散体を形成するために、化合物２と組み合わせて使用するのに好適なポリマーは、以下の特性のうちの１つまたは複数を有すべきである：
【０１９６】
ポリマーのガラス転移温度は、実質的にアモルファスな化合物２のガラス転移温度よりも約１０〜１５℃を越えては低くない温度を有すべきである。好ましくは、ポリマーのガラス転移温度は、実質的にアモルファスな化合物２のガラス転移温度より高く、一般には、薬物製品の所望の保管温度よりも少なくとも５０℃高い。例えば、少なくとも約１００℃、少なくとも約１０５℃、少なくとも約１０５℃、少なくとも約１１０℃、少なくとも約１２０℃、少なくとも約１３０℃、少なくとも約１４０℃、少なくとも約１５０℃、少なくとも約１６０℃、少なくとも約１６０℃、またはそれ超である。
【０１９７】
ポリマーは、比較的、非吸湿性であるべきである。例えば、ポリマーは、標準条件下で保管する場合、約１０％未満の水分、例えば約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、または約５％未満、約４％未満、または約３％未満の水分を吸収すべきである。好ましくは、ポリマーは、標準条件下で保管した場合、吸収された水分を実質的に含まない。
【０１９８】
ポリマーは、スプレー乾燥法に好適な溶媒中で、化合物２の溶解度と比べて同様またはそれより高い溶解度を有すべきである。好ましい実施形態では、ポリマーは、化合物２と同じ溶媒または溶媒系のうちの１つまたは複数に溶解する。ポリマーは、塩化メチレン、アセトン、またはそれらの組合せなどの、少なくとも１種の非ヒドロキシ含有溶媒に溶解するのが好ましい。
【０１９９】
ポリマーは、例えば、スプレー乾燥分散体中または液状懸濁液中で、実質的にアモルファスな化合物２と組み合わせると、このポリマーの非存在下での化合物２の溶解度に比べて、または参照ポリマーと組み合わせた場合の化合物２の溶解度と比べて、水性媒体および生理的に関連する媒体中での化合物２の溶解度を向上させるべきである。例えば、このポリマーは、固体のアモルファス分散体または液状懸濁液のいずれかから結晶性化合物２に変換するアモルファス化合物２の量を低下させることにより、アモルファス化合物２の溶解度を向上させ得る。
【０２００】
ポリマーは、アモルファス性物質の緩和速度を低下させるべきである。
【０２０１】
ポリマーは実質的にアモルファスな化合物２の物理安定性および／または化学安定性を向上させるべきである。
【０２０２】
ポリマーは、実質的にアモルファスな化合物２の製造可能性を改善するべきである。
【０２０３】
ポリマーは、実質的にアモルファスな化合物２の取り扱い、投与または保管特性のうちの１つまたは複数を改善するべきである。
【０２０４】
ポリマーは、他の医薬品構成成分、例えば添加剤と不都合な相互作用をするべきではない。
【０２０５】
候補ポリマー（または他の構成成分）の適性は、アモルファス組成物を形成する、本明細書に記載されているスプレー乾燥法（または他の方法）を使用して試験することができる。候補組成物は、安定性、結晶形成抵抗性、または他の特性の点で比較することができ、参照調製物、例えば、純粋アモルファス化合物２または結晶性化合物２の調製物と比較することができる。例えば、候補組成物は、この組成物が、溶媒媒介性結晶化が発生するまでの時間、または制御されている条件下で所与の時間での変換率を、参照調製物同様少なくとも５０％、７５％、１００％または１１０％阻害するかどうかを決定するために試験することができ、または、候補組成物は、この組成物が結晶性化合物２と比べて、生体利用率または溶解度を改善したかどうかを決定するために試験することができる。
【０２０６】
界面活性剤
【０２０７】
スプレー乾燥分散体は、界面活性剤を含んでもよい。界面活性剤または界面活性剤の混合物は一般に、スプレー乾燥分散体と水性媒体との間の界面張力を低下させる。適切な界面活性剤または界面活性剤の混合物はまた、スプレー乾燥分散体からの化合物２の水溶解度および生体利用率を向上させることができる。本発明に関連して使用される界面活性剤には、以下に限定されないが、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｓｐａｎｓ（登録商標））、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎｓ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＳＤＢＳ）、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム（Ｄｏｃｕｓａｔｅ）、ジオキシコール酸ナトリウム塩（ＤＯＳＳ）、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ＨＴＡＢ）、ナトリウムＮ−ラウロイルサルコシン、オレイン酸ナトリウム、ミリスチン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ４４／１４、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ビタミンＥ  ｄ−アルファトコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）、レシチン、ＭＷ６７７−６９２、グルタミン酸（Glutanic）一ナトリウム一水和物、ラブラソール、ＰＥＧ８カプリル酸／カプリン酸グリセリド、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ−１５、ポリエチレングリコール／ヒドロキシステアレート、タウロコール酸、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１０８、およびＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７（または、任意の他のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標））または飽和ポリグリコール化グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｓ（登録商標）））が含まれる。本発明に関連して使用することができる、このような界面活性剤の具体例には、以下に限定されないが、Ｓｐａｎ６５、Ｓｐａｎ２５、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｃａｐｒｙｏｌ９０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１０８、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、ｐｌｕｒｏｎｉｃｓおよびコポリマーが含まれる。ＳＬＳが、一般に好ましい。
【０２０８】
スプレー乾燥分散体の総重量に対する界面活性剤（例えば、ＳＬＳ）の量は、０．１〜１５％の間であり得る。好ましくは、その量は、約０．５％〜約１０％、より好ましくは約０．５〜約５％、例えば、約０．５〜４％、約０．５〜３％、約０．５〜２％、約０．５〜１％、または約０．５％である。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、スプレー乾燥分散体の総重量に対する界面活性剤の量は、少なくとも約０．１％、好ましくは約０．５％である。これらの実施形態では、界面活性剤は、約１５％以下、好ましくは約１２％、約１１％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％または約１％以下の量で存在する。界面活性剤が約０．５重量％の量である実施形態が好ましい。
【０２１０】
候補界面活性剤（または他の構成成分）は、ポリマーの試験に関して記載されているものと類似の方法で、本発明において使用するのに適性を試験することができる。
医薬組成物を作製する方法
【０２１１】
本発明の医薬組成物は、湿式造粒、混合物もしくは組成物、例えば粉末もしくは顆粒を加圧下でコンパクト化または圧縮して、安定な三次元形状（例えば、錠剤）を形成させることにより製造することができる。本明細書で使用する場合、「錠剤」には、コーティングされているかまたはコーティングされていないかに関わらず、すべての形状およびサイズの、圧縮された医薬品の投与量単位形態が含まれる。
【０２１２】
用語「錠剤」は、本明細書で使用する場合、処置される患者にとって適切な薬剤の物理的に別々の単位を指す。一般に、コンパクト化した混合物は、コンパクト化前の混合物の密度より大きな密度を有する。本発明の投与用の錠剤は、凹型および／または凸型面、丸みまたは角度を付けた角型、および丸みを付けたものから直線形状のものを含む、任意の形状のほとんどを有することができる。一部の実施形態では、本発明の圧縮錠剤は、平坦面を有する丸型錠剤を含む。本発明の錠剤は、当業者により公知の、圧縮固体医薬品剤形を形成する、任意のコンパクト化および圧縮方法により調製することができる。特定の実施形態では、本明細書において提供される製剤は、例えば、関連する教科書においてに記載されている、医薬製剤の分野の当業者に公知の従来の方法を使用して調製することができる。例えば、これらの参照文献の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Remington：The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２１版、Lippincott  Williams  &  Wilkins、Baltimore、Md.（２００３年）；Anselら、Pharmaceutical  Dosage  Forms  And  Drug  Delivery  Systems、第７版、Lippincott  Williams  &  Wilkins、（１９９９年）；The  Handbook  of  Pharmaceutical  Excipients、第４版、Roweら編、American  Pharmaceuticals  Association（２００３年）；Gibson、Pharmaceutical  Preformulation  And  Formulation、CRC  Press（２００１年）を参照されたい。
造粒および圧縮
【０２１３】
一部の実施形態では、成分は本明細書で設定されている処方に従って秤量される。次に、粒内成分のすべてがふるいにかけられ、十分に混合される。成分は、好適な滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムにより滑沢が付与され得る。次のステップは、粉末混合物およびサイズを整えた成分のコンパクト化／強打を含むことができる。次に、このコンパクト化または強打されたブレンドを顆粒にミル粉砕し、所望のサイズが得られるようふるいにかける。次に、顆粒は、例えば、ステアリン酸マグネシウムによりさらに滑沢を付与され得る。次に、本発明の粒状組成物は、好適な打錠器で本発明による様々な医薬製剤に圧縮することができる。任意選択で、錠剤は、フィルム、着色剤または他のコーティング剤によりコーティングすることができる。
【０２１４】
本発明の別の態様は、医薬組成物を製造する方法であって、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および充填剤、賦形剤、結合剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤から選択される１種または複数の添加剤を含む組成物の混合物を用意するステップ、ならびに組成物を、約３０分で少なくとも約５０％の溶解度を有する錠剤に圧縮するステップを含む、方法を提供する。
【０２１５】
別の実施形態では、湿式造粒法を行い、粉末および液体成分の混合物から本発明の医薬製剤を得る。例えば、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および充填剤、結合剤、界面活性剤または崩壊剤から選択される１種または複数の添加剤を含む組成物の混合物を含む、医薬組成物を本明細書で定められている処方の通り秤量する。次に、粒内成分のすべてをふるいにかけ、水、または界面活性剤を含む水、または結合剤を含む水、または界面活性剤と結合剤を含む水を使用する高せん断または低せん断造粒器で混合し、粉末ブレンドを造粒する。水以外の流体も、界面活性剤および／もしくは結合剤と一緒に、またはこれらを一緒にしないで使用し、粉末ブレンドを造粒することができる。次に、湿潤顆粒は、適切なミルを使用して、任意選択でミル粉砕され得る。次に、任意の好適な方法で、これらの成分を乾燥することにより、混合物から水を任意選択で除去することができる。次に、乾燥顆粒は、任意選択でミル粉砕されて、必要なサイズにすることができる。次に、顆粒外添加剤をブレンドすることにより（例えば、充填剤、賦形剤および崩壊剤）加えることができる。次に、サイズを整えた顆粒に、ステアリン酸マグネシウム、および崩壊剤、例えば、クロスカルメロースナトリウムによりさらに滑沢を付与することができる。次に、本発明の粒状組成物は、十分な時間ふるいにかけて正しいサイズを得て、次に、好適な打錠器で本発明による様々な医薬製剤に圧縮することができる。任意選択で、錠剤は、フィルム、着色剤または他のコーティング剤によりコーティングすることができる。驚くべきことに、湿式造粒は、化合物１の形態Ｉまたは実質的にアモルファスな化合物２の固体状態形態を実質的に喪失することなく、行うことができる。
【０２１６】
特に都合のよい実施形態では、本発明の医薬組成物は、連続２軸湿式造粒（ＴＳＷＧ）法により調製される。連続製造は、オンラインモニタリングおよび管理を用いて、高い品質および高度に一定の製品をもたらす。連続製造はまた、「豊富なデータ」デザインスペースによるクオリティ・バイ・デザイン開発、ならびに下流のプロセスおよび最終製品の品質に対する上流の変数の影響をより容易に理解するのを容易にする。さらに、本発明の医薬組成物は、スケールアップのリスク、および開発後期の配合変更を回避する商業規模の機器で早期に仕上げることができる。最終的に、連続製造は、改善されたプロセス制御、軽減される製品の取り扱い、およびリアルタイムリリース効率などの商業的な製造上の利点を有する。総合的な結果は、プロセス確認をほとんど有さない、一層確固たる、制御可能で、規模変更が可能な方法であり、これにより製品品質が向上し、したがって患者の安全性がより高まる。これらの利点は、化学、製造および管理（ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ、ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ：ＣＭＣ）は、非常に有効な治療法の迅速な臨床開発に追いつくことができないであろうという、Ｊａｎｅｔ  Ｗｏｏｄｃｏｃｋ（医薬品評価研究センター（ＣＤＥＲ）の所長）の懸念に対処するものである（「What  we  are  seeing  is  that  often  the  rate  limiting  step  is  going  to  be  manufacturing」７月２４日、２０１３年、Friends  of  Cancer  hosted  congressional  briefing「Answering  a  Compelling  Need:  Expediting  Life-Saving  Treatments  to  Patients」to  discuss  the  Food  and  Drug  Administration's  Breakthrough  Therapy  Designation）。
【０２１７】
例えば、一般的な造粒技法である、高せん断造粒（ＨＳＧ）は、過造粒および不十分なプロセス制御のリスクで周知である。この方法のスケールアップは、非常な難題であり、かなりのリスクを含む。ＨＳＧ法から連続ＴＳＷＧ法に変更することにより、同一機器を使用してスケールアップし、より長い時間操作することにより、様々なバッチサイズのものを製造することができる。これにより、他の造粒方法の場合に一般に遭遇する、スケールアップリスクがなくなる。さらに、ＴＳＷＧ法は、一層確固たるものであり、過造粒に対してそれほど敏感でなないことが分かった。化合物１の錠剤について図３で分かる通り、ＨＳＧ法は、水分含量の増加につれて溶解がかなり減速することを示す一方、ＴＳＷＧ法は、水の添加が同様の範囲の場合、変化を示さなかった。驚くべきことに、２軸湿式造粒法を使用する、化合物１を４５〜５５重量パーセントの間で含む錠剤製剤、および化合物１を６０〜７０重量パーセントの間で含む錠剤製剤の場合、成績の変化は認められなかった。このことは、ＨＳＧ法では当てはまらなかった。さらに、この連続的かつ製品の品質が向上する方法は、それを必要とする患者が入手できる薬物が不足することに関して、ＦＤＡによる共通の苦情に対処する。
【０２１８】
一実施形態では、本連続法は、ロスインウェイトフィーディングにより、連続式インラインブレンダーに個々の添加剤、化合物１および化合物２をフィードして開始する。このブレンダーから、材料が連続的に運ばれ、２軸湿式造粒、乾燥、ミル粉砕、顆粒外添加剤の添加、ブレンド、圧縮、およびフィルムコーティングにより加工される。
【０２１９】
例えば、一実施形態では、化合物１および化合物２を含む錠剤は、以下の流れ図に従って連続的に調製することができる。
【化３３】
2016535791.tif 000035
【０２２０】
この例示的な混合物の成分の各々は、上および以下の実施例に記載されている。さらに、混合物は、上および以下の実施例に記載されている、１種もしくは複数の着色剤、１種もしくは複数のフレーバー、および／または１種もしくは複数の香料などの任意選択の添加物を含むことができる。一部の実施形態では、混合物中のこれらの成分（およびいずれかの任意選択の添加物）の各々の相対濃度（例えば、重量％）はまた、上および以下の実施例に提示されている。混合物を構成する成分は、逐次または添加の任意の組合せで供給され得、成分または成分の組合せは、いかなる順序でも供給され得る。一実施形態では、滑沢剤は、混合物に添加される最後の構成成分である。
【０２２１】
別の実施形態では、混合物は、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体、および任意の１種または複数の添加剤；結合剤、界面活性剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、および充填剤からなる組成物を含み、これらの成分のそれぞれは、粉末形態で供給される（例えば、光散乱法により測定される、平均（mean）すなわち平均（average）直径が、２５０μｍまたはそれ未満（例えば、１５０μｍもしくはそれ未満、１００μｍもしくはそれ未満、５０μｍもしくはそれ未満、４５μｍもしくはそれ未満、４０μｍもしくはそれ未満、または３５μｍもしくはそれ未満）の粒子として供給される）。
【０２２２】
別の実施形態では、混合物の錠剤への圧縮は、型（例えば、金型）に混合物を充填し、混合物に圧力を適用することにより行われる。これは、ダイプレス器または他の類似の装置を使用して行うことができる。一部の実施形態では、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および添加剤を含む混合物をまず粒状形態に加工することができる。次に、顆粒のサイズを整え、錠剤に圧縮するか、または医薬品分野で公知の方法に従ってカプセル封入するために製剤化することができる。この形態にある混合物への加圧を、各圧縮の間、同じ圧力を使用して、または圧縮の間、異なる圧力を使用して繰り返すことができることも留意される。別の例では、粉末成分または顆粒の混合物は、約３０分で約５０％またはそれ超の溶解度（例えば、約３０分で、約５５％もしくはそれ超、または約３０分で約６０％もしくはそれ超）を有する錠剤を形成するのに十分な圧力を適用するダイプレス器を使用して圧縮することができる。例えば、混合物は、ダイプレス器を使用して圧縮し、少なくとも約５ｋＰ（少なくとも約５．５ｋＰ、少なくとも約６ｋＰ、少なくとも約７ｋＰ、少なくとも約１０ｋＰ、または少なくとも１５ｋＰ）の硬度の錠剤を製造する。一部の例では、混合物を圧縮して、約５〜２０ｋＰの間の硬度の錠剤を製造する。
【０２２３】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物を含む錠剤は、錠剤の重量基準で、着色剤を含む約３．０重量％のフィルムコーティング剤によりコーティングすることができる。ある特定の場合、錠剤をコーティングするために使用される、着色剤懸濁液または溶液は、着色剤懸濁液または溶液の重量基準で約２０％ｗ／ｗの固体を含む。さらなる例では、コーティングされた錠剤は、ロゴ、他の画像または文字により標識することができる。
【０２２４】
別の実施形態では、医薬組成物を製造する方法は、固体形態の混合物、例えば、粉末および／または液体成分の混合物を用意するステップであって、混合物が、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、ならびに結合剤、賦形剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤から選択される１種または複数の添加剤を含む、ステップ；混合物が実質的に均一になるまで混合物を混合するステップ、および混合物を粒状形態に圧縮またはコンパクト化するステップを含む。次に、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む粒状組成物は、上または以下の実施例において記載されているように、錠剤に圧縮されるか、またはカプセル剤に製剤化することができる。あるいは、医薬組成物を製造する方法は、化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、ならびに１種または複数の添加剤、例えば、結合剤、賦形剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤からなる混合物を用意するステップ、混合物が実質的に均一になるまで混合物を混合するステップ、および以下の実施例に説明されている高せん断湿式造粒コンパクト化法を使用して、混合物を圧縮／コンパクト化して粒状形態にするステップを含む。医薬製剤、例えば、本明細書に記載されている錠剤は、本明細書に記載されている選択された添加剤に加えて、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を配合して調製される顆粒を使用して作製され得る。
【０２２５】
一部の実施形態では、混合物は、ハンドミキシング、ミキサー、ブレンダー、それらの任意の組合せなどを使用し、撹拌、ブレンド、振とうなどにより混合される。成分または成分の組合せが、逐次添加される場合、混合は、連続添加の間、成分の添加の間に連続して、すべての成分もしくは成分の組合せを添加した後、またはそれらの任意の組合せで、行うことができる。混合物は実質的に均一な組成を有するようになるまで、混合される。
【０２２６】
別の実施形態では、本発明は、０．１ミクロン〜５０ミクロンの間の粒子サイズの画分を優勢に有する粒子を製造するのに好適な空気圧を使用する好適な従来的なミル粉砕装置で、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む医薬組成物をジェットミル粉砕するステップを含む。別の実施形態では、粒子サイズは、０．１ミクロン〜２０ミクロンの間である。別の実施形態では、粒子サイズは、０．１ミクロン〜１０ミクロンの間である。別の実施形態では、粒子サイズは、１．０ミクロン〜５ミクロンの間である。さらに別の実施形態では、本医薬組成物は、２．０ミクロンの粒子サイズＤ５０を有する。
【０２２７】
本発明の製剤は、嚢胞性線維症の効果的な処置のための２種のＡＰＩ、すなわち、ＦＤＡから２つしか飛躍的な治療法と指定されなかったものの１つを受けた組合せ物の、固定投与量をもたらし、化合物２のアモルファス固体形態の少量の喪失により測定して、驚くほどの安定性で、そのような投与量を提供する。図４は、６０％の相対湿度において予め平衡にした後の、５０℃におけるＰＣ−ＸＶＩＩ中の、化合物２の経時的な少量の結晶度を図示している。これらの条件下で、１０００時間に近い後でさえも、化合物２は５重量％未満しか結晶化しなかった。図５は、ＰＣ−ＸＶＩＩの場合、６０％の相対湿度で予め平衡にした後の６０℃というより高い温度でさえも、これらの条件下では、１０００時間に近い時点で、化合物２の１０重量％未満しか結晶化しなかったことを示す。図６および７は、ＰＣ−ＸＩＸの場合の類似した結果を示している。したがって、本製剤により、驚くほどの安定な医薬組成物において、２つの飛躍的な進歩を遂げたＡＰＩの固定投与量の便利さがもたらされる。このような製剤により、疾患の効果的な処置に直接関連する患者のコンプライアンスが向上する。
【０２２８】
上の通り調製した剤形は、米国薬局方２９におけるＴｅｓｔ７１１「Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ」、米国薬局方協会、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．、２００５年（「ＵＳＰ」）に従ってｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶解評価を施し、活性物質が剤形から放出される速度を決定することができる。活性物質の含有量および不純物レベルは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの技法により都合よく測定される。
【０２２９】
一部の実施形態では、本発明は、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）およびまたはポリプロピレンおよび／またはガラス、グラシンホイル、アルミニウムポーチの容器および蓋、ならびにアルミニウムまたは高密度ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）（任意選択で、乾燥剤を含む）、ポリエチレン（ＰＥ）、二塩化ポリビニリデン（ＰＶＤＣ）、ＰＶＣ／ＰＥ／ＰＶＤＣなどからなるブリスターまたはストリップなどの包装用材料の使用を含む。これらの包装用材料を使用して、医薬品分野で一般に使用される、化学的または物理的殺菌技法を使用して、包装およびその内容物を適切に殺菌した後、様々な医薬組成物および製剤を無菌的に保管することができる。
医薬組成物を投与する方法
【０２３０】
一態様では、本発明の医薬組成物は、１日１回または約２４時間毎に患者に投与することができる。あるいは、本発明の医薬組成物は、１日２回、患者に投与することができる。あるいは、本発明の医薬組成物は、約１２時間毎に投与することができる。これらの医薬組成物は、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇの化合物１の形態Ｉ、および約２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇまたは２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する経口用製剤として投与される。この態様では、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の他に、本医薬組成物は、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、結合剤および滑沢剤（医薬組成物が顆粒か錠剤かによる）を含む。例えば、化合物１の形態Ｉの用量４００ｍｇは、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含有する、本発明の２つの錠剤を構成することができる。実質的にアモルファスな化合物２の２５０ｍｇの用量は、それぞれ１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、本発明の２つの錠剤を構成することができる。
【０２３１】
本発明の化合物および薬学的に許容される組成物および製剤は、併用療法において使用することができることも認識される。すなわち、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体、および薬学的に許容されるそれらの組成物は、１種または複数の他の所望の治療薬または医療的手順と同時、それらの前、またはそれらの後に投与することができる。
【０２３２】
一実施形態では、追加の治療剤は、粘液溶解剤、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２以外のＣＦＴＲ活性を誘発する化合物、または栄養剤から選択される。
【０２３３】
一実施形態では、追加の薬剤は、（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミドである。別の実施形態では、追加の薬剤は、４−（３−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）イソキノリン−１−イル）安息香酸である。別の実施形態では、追加の薬剤は、表１から選択される：
【表１−１】
2016535791.tif 000036
【表１−２】
2016535791.tif 000037
【０２３４】
別の実施形態では、追加の薬剤は、上の薬剤の任意の組合せである。例えば、組合せは、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体を含む、本発明の医薬組成物または錠剤を含むことができ、追加の治療剤は、（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミドである。別の例では、組合せは、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体を含む、本発明の医薬組成物または錠剤を含むことができ、追加の治療剤は４−（３−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）イソキノリン−１−イル）安息香酸である。別の例では、組合せは、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体を含む、本発明の医薬組成物または錠剤を含むことができ、追加の治療剤は表１からの化合物、すなわち表１の化合物１から１４のうちのいずれか１つ、またはそれらの任意の組合せである。
【０２３５】
別の実施形態では、追加の薬剤は、表１から選択される：
【表１】
2016535791.tif 000038
【０２３６】
別の実施形態では、追加の薬剤は、表２から選択される：
【表２−１】
2016535791.tif 000039
【０２３７】
一実施形態では、追加の治療剤は抗生物質である。本明細書において有用な例示的な抗生物質には、トブラマイシン（トブラマイシン吸入用粉末（ＴＩＰ）を含む）、アジスロマイシン、カイストン、アズトレオナム（アズトレオナムのエアゾール形態を含む）、アミカシン（そのリポソーム製剤を含む）、シプロフロキサシン（吸入による投与に適したその製剤を含む）、レボフロキサシン（levoflaxacin）（そのエアゾール製剤を含む）、および２種類の抗生物質の組合せ（例えば、ホスホマイシンとトブラマイシン）が含まれる。
【０２３８】
別の実施形態では、追加の薬剤は粘液溶解薬である。本明細書において有用な例示的な粘液溶解薬には、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）が含まれる。
【０２３９】
別の実施形態では、追加の薬剤は気管支拡張薬である。例示的な気管支拡張薬には、アルブテロール、硫酸メタプロテネロール、酢酸ピルブテロール、サルメテロール、または硫酸テトラブリンが含まれる。
【０２４０】
別の実施形態では、追加の薬剤は、肺気道表面の液体の回復に効果的である。このような薬剤は、細胞内外での塩の移動を改善し、肺気道中の粘膜がより湿るようになり、したがってより容易に除去されるようになる。例示的なこのような薬剤には、高張食塩水、デヌホゾールテトラナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］ハイドロジェンホスフェート）、またはブロンキトール（マンニトールの吸入用製剤）が含まれる。
【０２４１】
別の実施形態では、追加の薬剤は、抗炎症剤、すなわち、肺の炎症を軽減できる薬剤である。本明細書において有用な例示的なこのような薬剤には、イブプロフェン、ドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入用グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキン、またはシンバスタチン（simavastatin）が含まれる。
【０２４２】
別の実施形態では、追加の薬剤は、化合物１の形態Ｉ、または実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体以外のＣＦＴＲ活性を増強または誘発する化合物、すなわちＣＦＴＲ活性を誘発または増強する作用を有する薬剤である。例示的なこのような薬剤には、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、およびコビプロストン（７−｛（２Ｒ，４ａＲ，５Ｒ，７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）が含まれる。
【０２４３】
別の実施形態では、追加の薬剤は、栄養剤である。例示的な栄養剤には、パンクレリパーゼ（膵臓酵素代用物）（Ｐａｎｃｒｅａｓｅ（登録商標）、Ｐａｎｃｒｅａｃａｒｂ（登録商標）、Ｕｌｔｒａｓｅ（登録商標）、またはＣｒｅｏｎ（登録商標）を含む）、Ｌｉｐｒｏｔｏｍａｓｅ（登録商標）（以前はＴｒｉｚｙｔｅｋ（登録商標））、Ａｑｕａｄｅｋｓ（登録商標）、またはグルタチオン吸入薬が含まれる。一実施形態では、追加の栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０２４４】
別の実施形態では、追加の薬剤は、ゲンタマイシン、クルクミン、シクロホスファミド、４−フェニルブチレート、ミグルスタット、フェロジピン、ニモジピン、フィロキシンＢ、ゲニステイン（geniestein）、アピジェニン、ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ増強剤または誘発剤（ロリプラム、シルデナフィル、ミルリノン、タダラフィル、アムリノン、イソプロテレノール、アルブテロール、およびアルメテロールなど）、デオキシスペルグアリン、ＨＳＰ９０阻害剤、ＨＳＰ７０阻害剤、プロテオソーム阻害剤（エポキソミシン、ラクタシスチンなど）などから選択される化合物である。
【０２４５】
別の実施形態では、追加の薬剤は、３−アミノ−６−（４−フルオロ−フェニル）−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；５−アミノ−６’−メチル−３−トリフルオロメチル−［２，３］ビピリジニル−６−カルボン酸（３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−シクロプロピル−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド；３−アミノ−６−メトキシ−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−（トリフルオロメチル）プロピル）−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド；３−アミノ−６−（４−フルオロ−フェニル）−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−メトキシ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｓ−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−メトキシ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−（２，４−ジクロロ−フェニル）−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−（２，４−ジクロロ−フェニル）−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−（４−フルオロ−フェニル）−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−５，６−ビス−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−５，６−ビス−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；（Ｓ）−３−アミノ−６−エトキシ−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド；３−アミノ−６−メトキシ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−メトキシ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−６−（４−フルオロ−フェニル）−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−５，６−ビス−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミド；３−アミノ−５，６−ビス−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−アミドから選択される化合物、または薬学的に許容されるそれらの塩である。別の実施形態では、追加の薬剤は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第８，２４７，４３６号および国際ＰＣＴ公開ＷＯ２０１１１１３８９４に開示されている化合物である。
【０２４６】
別の実施形態では、追加の薬剤は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１２０３５１５８、ＷＯ２００９０７４５７５、ＷＯ２０１１０２８７４０、ＷＯ２００９１５０１３７、ＷＯ２０１１０７９０８７、またはＷＯ２００８１３５５５７に開示されている、上皮ナトリウムチャネル（ＥＮａｃ）モジュレーターであってもよい。
【０２４７】
他の実施形態では、追加の薬剤は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＷＯ２００４０２８４８０、ＷＯ２００４１１０３５２、ＷＯ２００５０９４３７４、ＷＯ２００５１２０４９７またはＷＯ２００６１０１７４０に開示されている化合物である。別の実施形態では、追加の薬剤は、ＣＦＴＲ誘発もしくは増強活性を示すベンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体、またはＣＦＴＲ誘発もしくは増強活性を示すベンゾピラン誘導体である。別の実施形態では、追加の薬剤は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第７，２０２，２６２号、米国特許第６，９９２，０９６号、ＵＳ２００６０１４８８６４、ＵＳ２００６０１４８８６３、ＵＳ２００６００３５９４３、ＵＳ２００５０１６４９７３、ＷＯ２００６１１０４８３、ＷＯ２００６０４４４５６、ＷＯ２００６０４４６８２、ＷＯ２００６０４４５０５、ＷＯ２００６０４４５０３、ＷＯ２００６０４４５０２またはＷＯ２００４０９１５０２に開示されている化合物である。別の実施形態では、追加の薬剤は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＷＯ２００４０８０９７２、ＷＯ２００４１１１０１４、ＷＯ２００５０３５５１４、ＷＯ２００５０４９０１８、ＷＯ２００６０９９２５６、ＷＯ２００６１２７５８８、またはＷＯ２００７０４４５６０に開示されている化合物である。
【０２４８】
一実施形態では、４００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２は、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、本発明の１つまたは複数の錠剤の投与により実現され得る。例えば、４００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の投与は、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、２つの錠剤を投与することにより実現され得る。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む２つの錠剤が、１日あたり患者に投与され得る。さらなる実施形態では、この２つの錠剤は、同時に投与されてもよく、または１日の間の異なる時間に投与されてもよい。さらなる実施形態では、１つの錠剤が１２時間毎に投与される。
【０２４９】
一実施形態では、４００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２は、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、２つの錠剤の投与により実現することができる。一実施形態では、錠剤は１２時間毎に１回、投与される。別の実施形態では、投与量はまた、それぞれ１００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する２つの錠剤を、１２時間毎に投与することにより実現することもできる。別の実施形態では、投与量はまた、化合物１の形態Ｉおよび実質的にアモルファスな化合物２を別個の錠剤で投与することにより実現することもできる。例えば、投与量は、２００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含有する２つの錠剤および１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する４つの錠剤、または１５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する２つの錠剤および１００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する２つの錠剤を投与することにより実現することができる。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、２００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む２つの錠剤および１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む４つの錠剤が、１日あたりに患者に投与され得る。一実施形態では、２００ｍｇの化合物１の形態Ｉを含む２つの錠剤が１日あたりに患者に投与され得、１５０ｍｇおよび１００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む２つの錠剤が、１日あたり２回、患者に投与され得る。さらなる実施形態では、この２つの錠剤は、同時に投与されてもよく、または１日の間の異なる時間に投与されてもよい。さらなる実施形態では、２００ｍｇの化合物１を含む１つの錠剤が１２時間毎に投与され、１５０ｍｇおよび１００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む２つの錠剤が１２時間毎に投与される。
【０２５０】
一実施形態では、３００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２が、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、本発明の１つまたは複数の錠剤の投与により実現され得る。例えば、３００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の投与は、それぞれ１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、２つの錠剤を投与することにより実現され得る。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、それぞれ１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む２つの錠剤が、１日あたり患者に投与され得る。さらなる実施形態では、この２つの錠剤は、同時に投与されてもよく、または１日の間の異なる時間に投与されてもよい。さらなる実施形態では、１つの錠剤が１２時間毎に投与される。
【０２５１】
一実施形態では、６００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２が、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、本発明の１つまたは複数の錠剤の投与により実現され得る。例えば、６００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の投与は、それぞれ１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、２つの錠剤を１２時間毎に投与することにより実現され得る。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、それぞれ１５０ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む４つの錠剤が、１日あたり患者に投与され得る。さらなる実施形態では、この４つの錠剤は、同時に投与されてもよく、または１日の間の異なる時間に投与されてもよい。さらなる実施形態では、２つの錠剤が１２時間毎に投与される。
【０２５２】
一実施形態では、８００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２が、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、本発明の１つまたは複数の錠剤の投与により実現され得る。例えば、８００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の投与は、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、４つの錠剤を投与することにより実現され得る。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む４つの錠剤が、１日あたり患者に投与され得る。さらなる実施形態では、この４つの錠剤は、同時に投与されてもよく、または１日の間の異なる時間に投与されてもよい。さらなる実施形態では、投与機会あたり２つの錠剤が投与され、１日あたり２回の投与機会がある。さらなる実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１および１２５ｍｇの化合物２を含む２つの錠剤を１日２回（ＢＩＤ）投与することにより、８００ｍｇの化合物１および５００ｍｇの化合物２が、患者に投与される。さらなる実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１および１２５ｍｇの化合物２を含む２つの錠剤を１２時間毎（ｑ１２ｈ）に投与することにより、８００ｍｇの化合物１および５００ｍｇの化合物２が患者に投与される。
【０２５３】
一実施形態では、６００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２が、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、本発明の１つまたは複数の錠剤の投与により実現され得る。例えば、６００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび２５０ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の投与は、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび８３．３ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、３つの錠剤を投与することにより実現され得る。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび８３．３ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む３つの錠剤が、１日あたり患者に投与され得る。さらなる実施形態では、この３つの錠剤は、同時に投与されてもよく、または１日の間の異なる時間に投与されてもよい。さらなる実施形態では、３つの錠剤が同時に投与される。
【０２５４】
一実施形態では、６００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２が、それを必要とする被験体に投与され得る。これらの実施形態では、投与量は、本発明の１つまたは複数の錠剤の投与により実現され得る。例えば、６００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび５００ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の投与は、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび８３．３ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含有する、３つの錠剤、次いでそれぞれ１２５ｍｇの化合物２を含む追加の２つの錠剤を投与することにより実現することができる。投与期間は、疾患の改善が実現されるまで、または被験体の医師が助言するまで継続することができ、例えば、投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間、４週間（２８日間）、または１か月もしくはそれより長期であり得る。一実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび８３．３ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む３つの錠剤を毎日（ｑｄ）、ならびにそれぞれ１２５ｍｇの化合物２を含む２つの錠剤を１２時間毎（ｑ１２ｈ）に投与することにより、６００ｍｇの化合物１が毎日（ｑｄ）投与され得、２５０ｍｇの化合物２が１日２回（ｂｉｄ）投与され得る。一実施形態では、それぞれ２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび８３．３ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２を含む３つの錠剤を毎日（ｑｄ）、ならびにそれぞれ１２５ｍｇの化合物２を含む２つの錠剤を１２時間毎（ｑ１２ｈ）に投与することにより、６００ｍｇの化合物１が毎日（ｑｄ）投与され得、２５０ｍｇの化合物２が１２時間毎（ｑ１２ｈ）に投与され得る。
【０２５５】
これらの組合せは、嚢胞性線維症を含む、本明細書に記載されている疾患を処置するのに有用である。これらの組合せはまた、本明細書に記載されているキットに有用である。別の態様では、本発明は、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および別個の追加の治療剤またはその医薬組成物を含む、本発明の医薬組成物または錠剤を含むキットを特徴とする。別の実施形態では、本発明の医薬組成物または錠剤、別個の追加の治療剤、またはそれらの医薬組成物は、別個の容器に入っている。別の実施形態では、別個の容器はボトルである。別の実施形態では、別個の容器はバイアルである。別の実施形態では、別個の容器は、ブリスターパックである。
【０２５６】
本発明の組成物に存在している追加の治療剤の量は、唯一の活性剤としてその治療剤を含む組成物で通常、投与される量以下になろう。好ましくは、現在開示されている組成物中の追加の治療剤の量は、唯一の治療活性剤としてその薬剤を含む組成物中に通常、存在している量の約５０％〜１００％の範囲となろう。
組成物の治療的使用
【０２５７】
一態様では、本発明はまた、患者における疾患を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含み、疾患が、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、副鼻腔炎、便秘、膵臓炎、膵臓機能不全、先天性両側精管欠損症（ＣＢＡＶＤ）により引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝臓疾患、遺伝性気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固線溶欠損（タンパク質Ｃ欠損など）、１型遺伝性血管性水腫、脂質プロセッシング欠損（家族性高コレステロール血症、１型カイロミクロン血症、無β−リポタンパク血症など）、リソソーム蓄積症（Ｉ細胞病／偽ハーラーなど）、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ−サックス、クリグラー−ナジャーＩＩ型、多発性内分泌腺症／高インスリン血症、糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性（neprogenic）ＤＩ、シャルコー−マリー−トゥース症候群、ペリツェウス−メルツバッハー病、神経変性疾患（アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上性麻痺、ピック病、ハンチントン病のようないくつかのポリグルタミン性神経障害、脊髄小脳性（spinocerebullar）運動失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（dentatorubal  pallidoluysian）、および筋強直性ジストロフィーなど）、および海綿状脳症（遺伝性クロイツフェルト−ヤコブ病（プリオンタンパク質のプロセッシング欠損に起因する）など）、ファブリー病、ストロイスラー−シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ病またはシェーグレン病、骨粗鬆症、オステオペニア、骨治癒および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収量の低減および骨沈着の増加）、ゴーハム症候群、塩素イオンチャネル病（先天性パラミオトニー（トムソンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病）、過剰驚愕症、てんかん、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、および原発性線毛運動不全症（ＰＣＤ）（線毛の構造および／または機能の遺伝性障害に関する用語（内臓逆位を有するＰＣＤを含む（カルタゲナー症候群としても知られている）、内臓逆位を有さないＰＣＤ））および線毛無形性から選択される、方法を提供する。
【０２５８】
一態様では、本発明はまた、患者における疾患を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含み、疾患が、全般てんかん熱性（ferbrile）けいれんプラス（ＧＥＦＳ＋）、全身性てんかん熱性（ferbile）および無熱性けいれん、筋緊張症、先天性パラミオトニー、カリウム惹起性ミオトニー、高カリウム血性周期性四肢麻痺、ＬＱＴＳ、ＬＱＴＳ／ブルガダ症候群、難聴を伴う常染色体優性ＬＱＴＳ、常染色体劣性ＬＱＴＳ、形態異常を伴うＬＱＴＳ、先天性および獲得性ＬＱＴＳ、ティモシー症候群、新生児持続性高インスリン性低血糖症、拡張型心筋症、常染色体優性ＬＱＴＳ、デント病、大理石骨病、バーター症候群ＩＩＩ型、セントラルコア病、悪性高熱症、およびカテコールアミン誘発性多形性頻拍から選択される、方法を提供する。
【０２５９】
一態様では、本発明は、ＣＦＴＲ遺伝子変異Ｎ１３０３Ｋ、ΔＩ５０７またはＲ５６０Ｔを有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む方法を対象としている。
【０２６０】
一態様では、本発明は、ＣＦＴＲ遺伝子変異Ｇ５５１Ｄを有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。別の実施形態では、患者は、Ｇ５５１Ｄの同型接合である。別の実施形態では、患者は、Ｇ５５１Ｄのヘテロ接合であり、他のＣＦＴＲ遺伝子変異は、ΔＦ５０８、Ｇ５４２Ｘ、Ｎ１３０３Ｋ、Ｗ１２８２Ｘ、Ｒ１１７Ｈ、Ｒ５５３Ｘ、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、Ｒ１１６２Ｘ、Ｇ８５Ｅ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、ΔＩ５０７、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、３６５９ｄｅｌＣ、Ｒ３４７Ｐ、Ｒ５６０Ｔ、Ｒ３３４Ｗ、Ａ４５５Ｅ、２１８４ｄｅｌＡ、または７１１＋１Ｇ−＞Ｔのうちのいずれか１つである。
【０２６１】
一態様では、本発明は、ＣＦＴＲ遺伝子変異ΔＦ５０８を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。別の実施形態では、患者は、ΔＦ５０８の同型接合である。別の実施形態では、患者は、ΔＦ５０８のヘテロ接合であり、他のＣＦＴＲ遺伝子変異は、Ｇ５５１Ｄ、Ｇ５４２Ｘ、Ｎ１３０３Ｋ、Ｗ１２８２Ｘ、Ｒ１１７Ｈ、Ｒ５５３Ｘ、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、Ｒ１１６２Ｘ、Ｇ８５Ｅ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、ΔＩ５０７、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、３６５９ｄｅｌＣ、Ｒ３４７Ｐ、Ｒ５６０Ｔ、Ｒ３３４Ｗ、Ａ４５５Ｅ、２１８４ｄｅｌＡ、または７１１＋１Ｇ−＞Ｔのうちのいずれか１つである。
【０２６２】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２Ｖ、Ｇ１０６９Ｒ、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０Ｎ、Ｄ１１５２Ｈ、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２６３】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一実施形態では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９ＲおよびＳ１２５１Ｎから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者に、化合物１を投与するステップを含む、ＣＦＴＲを処置する方法を提供する。一態様では、本発明は、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一部の実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送と比べて、１０倍超の塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２６４】
一態様では、本発明は、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０ＮおよびＤ１１５２Ｈから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送より１０％またはそれ超、塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２６５】
一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇおよび３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、２７８９＋５Ｇ−＞Ａおよび３２７２−２６Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２６６】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２Ｖ、Ｇ１０６９Ｒ、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０Ｎ、Ｄ１１５２Ｈ、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２６７】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９ＲおよびＳ１２５１Ｎから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７Ｈ、およびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一部の実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオンの輸送と比べて、塩化物イオン輸送の１０倍超の向上が生じる。
【０２６８】
一態様では、本発明は、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０ＮおよびＤ１１５２Ｈから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送より１０％またはそれ超、塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２６９】
一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇおよび３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、２７８９＋５Ｇ−＞Ａおよび３２７２−２６Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７Ｈから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２７０】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２Ｖ、Ｇ１０６９Ｒ、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０Ｎ、Ｄ１１５２Ｈ、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２７１】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９ＲおよびＳ１２５１Ｎから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一部の実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送と比べて、１０倍超の塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２７２】
一態様では、本発明は、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０ＮおよびＤ１１５２Ｈから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送より１０％またはそれ超、塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２７３】
一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇおよび３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、２７８９＋５Ｇ−＞Ａおよび３２７２−２６Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２７４】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２Ｖ、Ｇ１０６９Ｒ、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０Ｎ、Ｄ１１５２Ｈ、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択されるヒトＣＦＴＲ変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７Ｈ、およびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２７５】
一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、Ｇ１７８Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ９７０Ｒ、Ｇ１２４４Ｅ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９ＲおよびＳ１２５１Ｎから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、Ｅ１９３Ｋ、Ｆ１０５２ＶおよびＧ１０６９Ｒから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７Ｈ、およびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一部の実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送と比べて、１０倍超の塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２７６】
一態様では、本発明は、Ｒ１１７Ｃ、Ｄ１１０Ｈ、Ｒ３４７Ｈ、Ｒ３５２Ｑ、Ｅ５６Ｋ、Ｐ６７Ｌ、Ｌ２０６Ｗ、Ａ４５５Ｅ、Ｄ５７９Ｇ、Ｓ１２３５Ｒ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１０７０Ｗ、Ｆ１０７４Ｌ、Ｄ１１０Ｅ、Ｄ１２７０ＮおよびＤ１１５２Ｈから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。本態様の一実施形態では、本方法により、ベースラインの塩化物イオン輸送より１０％またはそれ超、塩化物イオン輸送の向上が生じる。
【０２７７】
一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、６２１＋１Ｇ−＞Ｔ、３１２０＋１Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ａ、７１１＋１Ｇ−＞Ｔ、２６２２＋１Ｇ−＞Ａ、４０５＋１Ｇ−＞Ａ、４０６−１Ｇ−＞Ａ、４００５＋１Ｇ−＞Ａ、１８１２−１Ｇ−＞Ａ、１５２５−１Ｇ−＞Ａ、７１２−１Ｇ−＞Ｔ、１２４８＋１Ｇ−＞Ａ、１３４１＋１Ｇ−＞Ａ、３１２１−１Ｇ−＞Ａ、４３７４＋１Ｇ−＞Ｔ、３８５０−１Ｇ−＞Ａ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇ、７１１＋５Ｇ−＞Ａ、３１２０Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、７１１＋３Ａ−＞Ｇ、１８９８＋３Ａ−＞Ｇ、１７１７−８Ｇ−＞Ａ、１３４２−２Ａ−＞Ｃ、４０５＋３Ａ−＞Ｃ、１７１６Ｇ／Ａ、１８１１＋１Ｇ−＞Ｃ、１８９８＋５Ｇ−＞Ｔ、３８５０−３Ｔ−＞Ｇ、ＩＶＳ１４ｂ＋５Ｇ−＞Ａ、１８９８＋１Ｇ−＞Ｔ、４００５＋２Ｔ−＞Ｃおよび６２１＋３Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、１７１７−１Ｇ−＞Ａ、１８１１＋１．６ｋｂＡ−＞Ｇ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａ、３２７２−２６Ａ−＞Ｇおよび３８４９＋１０ｋｂＣ−＞Ｔから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。一態様では、本発明は、２７８９＋５Ｇ−＞Ａおよび３２７２−２６Ａ−＞Ｇから選択されるＣＦＴＲ遺伝子変異、ならびにΔＦ５０８、Ｒ１１７Ｈ、およびＧ５５１Ｄから選択される１つまたは複数のヒトＣＦＴＲ変異を有する患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物または錠剤を患者、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む、方法を対象としている。
【０２７８】
ある特定の実施形態では、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２の固体分散体を含む、薬学的に許容される本発明の組成物または錠剤は、呼吸器上皮および非呼吸器上皮の頂端膜における残留ＣＦＴＲ活性を示す患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置するのに有用である。上皮表面における残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当技術分野において公知の方法、例えば、標準的な電気生理学的、生化学的または組織化学的技法を使用して容易に検出することができる。このような方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｅｘ  ｖｉｖｏでの電気生理学的技法、汗もしくは唾液のＣｌ−濃度の測定、またはｅｘ  ｖｉｖｏでの生化学的もしくは組織化学的技法を使用してＣＦＴＲ活性を特定し、細胞表面密度をモニタリングする。このような方法を使用して、残留ＣＦＴＲ活性は、最も一般的な変異であるΔＦ５０８、およびＧ５５１Ｄ変異またはＲ１１７Ｈ変異などの他の変異に関して同型接合またはヘテロ接合の患者を含む、様々な異なる変異に関してヘテロ接合または同型接合の患者において容易に検出することができる。ある特定の実施形態では、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む、薬学的に許容される組成物または錠剤は、残留ＣＦＴＲ活性をほとんどまたはまったく示さない患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置するのに有用である。ある特定の実施形態では、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む、薬学的に許容される組成物または錠剤は、呼吸器上皮の頂端膜における残留ＣＦＴＲ活性をほとんどまたはまったく示さない患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置するのに有用である。
【０２７９】
別の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、薬理学的方法を使用して、誘発されたまたは増強された残留ＣＦＴＲ活性を有する患者における嚢胞性線維症を処置するか、またはその重症度を軽減するのに有用である。別の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、遺伝子治療法を使用して、誘発されたまたは増強された残留ＣＦＴＲ活性を有する患者における嚢胞性線維症を処置するか、またはその重症度を軽減するのに有用である。このような方法により、細胞表面に存在しているＣＦＴＲの量が向上し、これにより、患者においてこれまで不在であったＣＦＴＲ活性が誘発されるか、または患者における残留ＣＦＴＲ活性の存在レベルが増強される。
【０２８０】
一実施形態では、本明細書に記載されている、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む本発明の医薬組成物および錠剤は、残留ＣＦＴＲ活性、例えば、クラスＩ変異（合成型ではない）、クラスＩＩ変異（ミスフォールディング型）、クラスＩＩＩ変異（調節障害もしくはゲーティング型）、クラスＩＶ変異（改変コンダクタンス型）またはクラスＶ変異（合成低減型）を示すある種の遺伝子型内の患者における嚢胞性線維症を処置するか、またはその重症度を軽減するのに有用である。
【０２８１】
一実施形態では、本明細書に記載されている、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む本発明の医薬組成物および錠剤は、ある種の臨床的な表現型、例えば、上皮の頂端膜における残留ＣＦＴＲ活性の量と通常、相関がある、中度から軽度の臨床的な表現型の範囲内の患者における嚢胞性線維症を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置するのに有用である。このような表現型には、膵外分泌機能十分を示す患者が含まれる。
【０２８２】
一実施形態では、本明細書に記載されている、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む本発明の医薬組成物および錠剤は、膵外分泌機能十分、特発性膵臓炎および先天性両側精管欠損症、または軽度肺疾患と診断された患者であって、残留ＣＦＴＲ活性を示す患者を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置するのに有用である。
【０２８３】
一実施形態では、本明細書に記載されている、化合物１の形態Ｉ、および実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体を含む本発明の医薬組成物および錠剤は、膵外分泌機能十分、特発性膵臓炎および先天性両側精管欠損症、または軽度肺疾患と診断された患者であって、野生型ＣＦＴＲを有する患者を処置する、その重症度を軽減する、またはそれを症候的に処置するのに有用である。
【０２８４】
嚢胞性線維症に加え、ＣＦＴＲ活性のモジュレーションは、分泌疾患、およびＣＦＴＲにより媒介される他のタンパク質のフォールディングの疾患などの、ＣＦＴＲにおける変異により直接引き起こされることがない他の疾患に利益をもたらし得る。これらには、以下に限定されないが、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ドライアイ疾患、およびシェーグレン症候群が含まれる。ＣＯＰＤは、進行性であり、完全に可逆ではない、気流制限を特徴とする。この気流制限は、粘液分泌過多、気腫、および細気管支炎によるものである。変異体または野生型ＣＦＴＲのアクチベーターにより、粘液分泌過多、およびＣＯＰＤに共通な粘膜線毛クリアランスの障害の潜在的な処置がもたらされる。具体的には、ＣＦＴＲ全体にわたる陰イオン分泌の増加は、気道表面の液体への流体輸送を促進し、粘膜を湿らせて、線毛間流体の粘度を最適化することができる。これにより、粘膜線毛クリアランスが増強し、ＣＯＰＤに関連する症状を低減する。ドライアイ疾患は、涙液の産生の低下、ならびに涙液膜脂質、タンパク質およびムチンプロファイルの異常を特徴とする。ドライアイの原因は多くあり、これらの一部は、年齢、レーシック眼科手術、関節炎、投薬、化学的／熱傷、アレルギー、ならびに嚢胞性線維症およびシェーグレン症候群などの疾患が含まれる。ＣＦＴＲによる陰イオン分泌の増加は、角膜内皮細胞および眼周辺の分泌腺からの流体輸送を増強し、角膜の潤いを向上させる。これは、ドライアイ疾患に関連する症状を緩和する一助になる。シェーグレン症候群は、免疫系が、眼、口、皮膚、呼吸器組織、肝臓、膣および消化管を含む身体中の水分産生腺を攻撃する、自己免疫疾患である。症状には、眼、口および膣の乾燥、ならびに肺疾患が含まれる。この疾患はまた、関節リウマチ、全身紅斑、全身性硬化症および多発性筋炎（polymypositis）／皮膚筋炎にも関連している。欠陥タンパク質輸送が、処置選択肢が制限される疾患を引き起こすと考えられる。ＣＦＴＲ活性の増強剤または誘発剤は、疾患により冒された様々な臓器に潤いをもたらすことができ、これらの関連症状を高める一助となり得る。
【０２８５】
一実施形態では、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの陰イオンチャネル活性を増強または誘発する方法であって、チャネルを医薬組成物ＰＣ−Ｉ〜ＰＣ−ＸＸＶのいずれか１つと接触させるステップを含む方法に関する。別の実施形態では、陰イオンチャネルは塩化物イオンチャネルまたは炭酸水素イオンチャネルである。別の実施形態では、陰イオンチャネルは塩化物イオンチャネルである。
【０２８６】
正確な必要量は、被験体の種、年齢および一般的な状態、感染の重症度、特定の薬剤、その投与形式などに応じて、被験体間で変わる。本発明の化合物は、好ましくは、投与の容易さおよび投与量の均質性のために、投与単位形態で製剤化される。表現「投与単位形態」は、本明細書で使用する場合、処置される患者にとって適切な薬剤の物理的に別々の単位を指す。しかし、本発明の化合物および組成物の１日の使用量の合計は、主治医による、妥当な医療的判断の範囲内で決定されることが理解されよう。任意の特定の患者または生物に関する具体的な有効用量レベルは、処置される障害および障害の重症度、使用される具体的な化合物の活性、使用される具体的な組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康、性別および食事、使用される具体的な化合物の投与時間、投与経路、および排出速度、処置期間、使用される具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、ならびに医療分野で周知のような要因を含む、様々な要因に依存するであろう。用語「患者」は、本明細書で使用する場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０２８７】
本出願のどこでも、化合物の名前が、該化合物の構造を正しく記載していない場合、その構造が名前に優先して支配する。
【実施例】
【０２８８】
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
【０２８９】
ＨＩ−ＳＴＡＲ２次元検出器および平面グラファイトモノクロメーターを備えた、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８  ＤＩＳＣＯＶＥＲ粉末回折計で化合物１の形態ＩのＸ線回折（ＸＲＤ）データを採集した。Ｋα照射によるＣｕ封管は、４０ｋＶ、３５ｍＡで使用した。試料は２５℃でゼロバックグラウンドのシリコンウェハ上に置いた。各試料について、２つの異なるθ２角度８°および２６°で、１２０秒ずつで２つのデータフレームを採集した。これらのデータは、ＧＡＤＤＳソフトウェアにより積分し、ＤＩＦＦＲＡＣＴｐｌｕｓＥＶＡソフトウェアにより融合した。報告されたピーク位置の不確定性は、±０．２度である。
【０２９０】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
【０２９１】
化合物１の形態Ｉの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）データは、ＤＳＣ  Ｑ１００  Ｖ９．６  Ｂｕｉｌｄ２９０（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）を使用して採集した。温度は、インジウムを用いて校正し、熱容量はサファイアを用いて校正した。３〜６ｍｇの試料を、ピンホールを１つ有する蓋を使用してクランプしたアルミニウム製パンに秤量した。試料を１．０℃／分の加熱速度および５０ｍｌ／分の窒素ガスをパージして、２５℃から３５０℃までスキャンした。データはＴｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ（商標）バージョン２．２．０．２４８ソフトウェアにより採集し、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアバージョン４．１Ｄ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）により解析した。報告された数は、１回の解析を表す。
【０２９２】
化合物１の形態Ｉの単結晶構造の決定
【０２９３】
回折データは、封管したＣｕ  Ｋ−アルファ源およびＡｐｅｘ  ＩＩ  ＣＣＤ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ａｐｅｘ  ＩＩ回折計で取得した。ＳＨＥＬＸプログラム（Sheldrick,  G.M.、Acta  Cryst.、（２００８年）Ａ６４巻、１１２〜１２２頁）を使用して構造を解き、精密化した。消滅則および強度統計に基づいて、構造を解き、Ｐ２１／ｎ空間群に精密化した。
【０２９４】
Ｖｉｔｒｉｄｅ（登録商標）（水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム［またはＮａＡｌＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）２］、トルエン中６５重量％溶液）は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。
【０２９５】
２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−カルボン酸は、Ｓａｌｔｉｇｏ（Ｌａｎｘｅｓｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの関連会社）から購入した。
【０２９６】
化合物１の調製
【０２９７】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−メタノールの調製。
【化３４】
2016535791.tif 000040
【０２９８】
市販の２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−カルボン酸（１．０当量）をトルエン（１０体積）中でスラリーにした。Ｖｉｔｒｉｄｅ（登録商標）（２当量）を１５〜２５℃の温度を維持する速度で、滴下漏斗により加えた。添加の終了時に、温度を４０℃まで２時間（ｈ）上昇させ、次に、４０〜５０℃の温度を維持しながら、滴下漏斗により１０％（ｗ／ｗ）水性（ａｑ）ＮａＯＨ（４．０当量）を注意深く加えた。さらに３０分間（ｍｉｎ）撹拌した後、層を４０℃で分離した。有機相を２０℃まで冷却し、次に、水（２×１．５体積）により洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）して濾過し、濃縮すると、粗製（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−メタノールが得られ、これを次のステップに直接使用した。
【０２９９】
５−クロロメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールの調製
【化３５】
2016535791.tif 000041
【０３００】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−メタノール（１．０当量）をＭＴＢＥ（５体積）に溶解した。触媒量の４−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）アミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１ｍｏｌ％）を加え、ＳＯＣｌ２（１．２当量）を滴下漏斗により加えた。反応器内の温度を１５〜２５℃に維持する速度で、ＳＯＣｌ２を加えた。温度を３０℃まで１時間、上昇させて、次に、２０℃まで冷却した。温度を３０℃未満に維持しながら、水（４体積）を滴下漏斗により加えた。さらに３０分間撹拌した後、層を分離した。有機層を撹拌し、１０％（ｗ／ｖ）の水性ＮａＯＨ（４．４体積）を加えた。１５〜２０分間撹拌した後、層を分離した。次に、有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）して濾過し、濃縮すると、粗製５−クロロメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールが得られ、これを次のステップで直接使用した。
【０３０１】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルの調製。
【化３６】
2016535791.tif 000042
【０３０２】
ＤＭＳＯ（３体積）中のＮａＣＮ（１．４当量）のスラリーに、３０〜４０℃の間の温度を維持しながら、５−クロロメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール（１当量）のＤＭＳＯ（１．２５体積）溶液を加えた。この混合物を１ｈ、撹拌し、次に、水（６体積）、次いでメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（４体積）を加えた。３０分間撹拌した後、層を分離した。水層をＭＴＢＥ（１．８体積）により抽出した。合わせた有機層を水（１．８体積）により洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）して濾過し、濃縮すると粗製（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリル（９５％）が得られ、これを次のステップに直接使用した。
【０３０３】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１−エチルアセテート−アセトニトリルの合成
【化３７】
2016535791.tif 000043
【０３０４】
反応器を窒素によりパージし、９００ｍＬのトルエンを投入した。溶媒を１６時間以上、窒素散布することにより脱気した。次に、この反応器に、Ｎａ３ＰＯ４（１５５．７ｇ、９４９．５ｍｍｏｌ）、続いてビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（７．２８ｇ、１２．６６ｍｍｏｌ）を投入した。１０％ｗ／ｗのｔｅｒｔ−ブチルホスフィンのヘキサン溶液（５１．２３ｇ、２５．３２ｍｍｏｌ）を窒素パージした滴下漏斗から１０分間かけて２３℃で投入した。この混合物を５０分間撹拌し、この時点で、５−ブロモ−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール（７５ｇ、３１６．５ｍｍｏｌ）を１分間かけて加えた。さらに５０分間撹拌した後、この混合物にシアノ酢酸エチル（７１．６ｇ、６３３．０ｍｍｏｌ）を５分間かけて、次いで水（４．５ｍＬ）を１回で投入した。この混合物を４０分間かけて、７０℃まで加熱し、１〜２時間毎にＨＰＬＣにより、反応物の生成物への変換率を分析した。完全な変換を観察（通常、５〜８時間後に１００％変換）した後、この混合物を２０〜２５℃まで冷却し、セライトパッドにより濾過した。このセライトパッドをトルエン（２Ｘ４５０ｍＬ）によりすすぎ、合わせた有機物を６０〜６５℃で真空下、３００ｍＬまで濃縮した。濃縮物にＤＭＳＯ２２５ｍＬを投入し、溶媒の活発な蒸留が終わるまで、７０〜８０℃で真空下で濃縮した。この溶液を２０〜２５℃まで冷却し、ステップ２の準備のために、ＤＭＳＯにより９００ｍＬまで希釈した。1H  NMR  (500  MHz,  CDCl3)  δ  7.16  -  7.10  (m,  2H),  7.03  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  4.63  (s,  1H),  4.19  (m,  2H),  1.23  (t,  J  =  7.1  Hz,  3H)。
【０３０５】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルの合成。
【化３８】
2016535791.tif 000044
【０３０６】
上記から得られた（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１−エチルアセテート−アセトニトリルのＤＭＳＯ溶液に３Ｎ  ＨＣｌ（６１７．３ｍＬ、１．８５ｍｏｌ）を、内部温度を＜４０℃に維持しながら、２０分間かけて投入した。次に、この混合物を１時間かけて、７５℃まで加熱し、１〜２時間毎にＨＰＬＣにより変換％を分析した。＞９９％の変換が観察（通常、５〜６時間後）された場合、この反応物を２０〜２５℃まで冷却し、抽出中、完全な相分離となるのに十分な時間で、ＭＴＢＥ（２Ｘ５２５ｍＬ）により抽出した。合わせた有機抽出物を５％ＮａＣｌ（２Ｘ３７５ｍＬ）により洗浄した。次に、この溶液を、冷却した受器のフラスコを備えた、１．５〜２．５Ｔｏｒｒの真空蒸留に適した機器に移した。溶液を真空下、＜６０℃で濃縮し、溶媒を除去した。次に、得られた油状物から、１２５〜１３０℃（オーブン温度）および１．５〜２．０Ｔｏｒｒで（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルを蒸留した。（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルを透明な油状物として、５−ブロモ−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール（２ステップ）から６６％の収率で単離し、ＨＰＬＣ純度は９１．５％ＡＵＣ（９５％のｗ／ｗアッセイに相当）であった。1H  NMR  (500  MHz,  DMSO)  δ  7.44  (br  s,  1H),  7.43  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.22  (dd,  J  =  8.2,  1.8  Hz,  1H),  4.07  (s,  2H)。
【０３０７】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルの調製。
【化３９】
2016535791.tif 000045
【０３０８】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリル（１．０当量）、５０重量％水性ＫＯＨ（５．０当量）、１−ブロモ−２−クロロエタン（１．５当量）、およびＯｃｔ４ＮＢｒ（０．０２当量）からなる混合物を７０℃で１時間、加熱した。この反応混合物を冷却し、次にＭＴＢＥおよび水により後処理した。有機相を水およびブラインにより洗浄した。溶媒を除去すると、（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルが得られた。
【０３０９】
１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸の調製。
【化４０】
2016535791.tif 000046
【０３１０】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルは、エタノール（５体積）中、６Ｍ  ＮａＯＨ（８当量）を使用して、８０℃で一晩、加水分解した。この混合物を室温まで冷却し、エタノールを真空下で蒸発させた。残留物を水およびＭＴＢＥにとり、１Ｍ  ＨＣｌを加えて層を分離した。次に、ＭＴＢＥ層をジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）（０．９７当量）により処理した。このスラリーを０℃まで冷却し、濾過してヘプタンにより洗浄すると対応するＤＣＨＡ塩が得られた。この塩をＭＴＢＥおよび１０％クエン酸に入れ、固体がすべて溶解するまで撹拌した。この層を分離し、ＭＴＢＥ層を水およびブラインにより洗浄した。溶媒をヘプタンに交換して、次いで濾過すると、５０℃で一晩、真空オーブンで乾燥した後に、１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸が得られた。
【０３１１】
１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニルクロリドの調製。
【化４１】
2016535791.tif 000047
【０３１２】
トルエン（２．５体積）中で１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸（１．２当量）をスラリーにし、この混合物を６０℃まで加熱した。ＳＯＣｌ２（１．４当量）を滴下漏斗により加えた。３０分後に、反応混合物からトルエンおよびＳＯＣｌ２を蒸留した。追加のトルエン（２．５体積）を加え、得られた混合物を再蒸留し、生成物の酸塩化物が、油状物として残り、これをさらに精製することなく使用した。
【０３１３】
ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエートの調製。
【化４２】
2016535791.tif 000048
【０３１４】
２−ブロモ−３−メチルピリジン（１．０当量）をトルエン（１２体積）に溶解した。Ｋ２ＣＯ３（４．８当量）、次いで水（３．５体積）を加えた。Ｎ２流下、１時間、得られた混合物を６５℃に加熱した。次に、３−（ｔ−ブトキシカルボニル）フェニルボロン酸（１．０５当量）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（０．０１５当量）を加え、この混合物を８０℃まで加熱した。２時間後、この加熱を止め、水（３．５体積）を加え、この層を分離した。次に、この有機相を水（３．５体積）により洗浄し、１０％水性メタンスルホン酸（２当量のＭｓＯＨ、７．７体積）により抽出した。水相を５０％水性ＮａＯＨ（２当量）により塩基性にし、ＥｔＯＡｃ（８体積）により抽出した。有機層を濃縮すると、粗製ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエート（８２％）が得られ、これを次のステップに直接使用した。
【０３１５】
２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−３−メチルピリジン−１−オキシドの調製。
【化４３】
2016535791.tif 000049
【０３１６】
ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸（１．０当量）をＥｔＯＡｃ（６体積）に溶解した。水（０．３体積）、次いで、尿素−過酸化水素（３当量）を加えた。次に、この混合物に、反応器内の温度を４５℃未満に維持する速度で、無水フタル酸（３当量）を固体として小分けにして加えた。無水フタル酸の添加の完了後、この混合物を４５℃まで加熱した。さらに４時間撹拌した後、加熱を止めた。１０％ｗ／ｗ水性Ｎａ２ＳＯ３（１．５当量）を滴下漏斗により加えた。Ｎａ２ＳＯ３の添加完了後、この混合物をさらに３０分間撹拌し、層を分離した。有機層を撹拌し、１０％重量／重量水性Ｎａ２ＣＯ３（２当量）を加えた。３０分間撹拌した後、層を分離した。有機相を１３％ｗ／ｖ水性ＮａＣｌにより洗浄した。次に、有機相を濾過して、濃縮すると粗製２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−３−メチルピリジン−１−オキシド（９５％）が得られ、これを次のステップで直接使用した。
【０３１７】
ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエートの調製。
【化４４】
2016535791.tif 000050
【０３１８】
２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−３−メチルピリジン−１−オキシド（１当量）およびピリジン（４当量）のアセトニトリル（８体積）溶液を７０℃に加熱した。７５℃未満の温度に維持しながら、メタンスルホン酸無水物（１．５当量）のＭｅＣＮ（２体積）溶液を滴下漏斗により５０分間かけて加えた。添加完了後、この混合物をさらに０．５時間撹拌した。次に、この混合物を周囲温度まで冷却した。エタノールアミン（１０当量）を滴下漏斗により加えた。２時間撹拌した後、水（６体積）を加え、この混合物を１０℃まで冷却した。３時間撹拌した後、固体を濾過により採集し、水（３体積）、２：１アセトニトリル／水（３体積）およびアセトニトリル（２×１．５体積）により洗浄した。わずかにＮ２を流しながら、５０℃の真空オーブン中、一定重量（＜１％差異）になるまで固体を乾燥すると、ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエートが赤黄色固体（５３％の収率）として得られた。
【０３１９】
３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエートの調製。
【化４５】
2016535791.tif 000051
【０３２０】
上記の粗製酸塩化物をトルエン（酸塩化物に対して２．５体積）に溶解し、トルエン（ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエートに対して４体積）中のｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエート（１当量）、ＤＭＡＰ（０．０２当量）、およびトリエチルアミン（３．０当量）からなる混合物に、滴下漏斗により加えた。２時間後、この反応混合物に、水（ｔｅｒｔ−ブチル−３−（６−アミノ−３−メチルピリジン−２−イル）ベンゾエートに対して４体積）を加えた。３０分間撹拌した後、層を分離した。次に、有機相を濾過して濃縮すると、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエート（定量的、粗製物収率）の濃厚な油状物が得られた。アセトニトリル（粗生成物に対して３体積）を加え、結晶化が起こるまで蒸留した。水（粗生成物に対して２体積）を加え、この混合物を２時間撹拌した。この固体を濾過により採集し、アセトニトリル／水（粗生成物に対して２Ｘ１体積）１：１（体積基準）により洗浄し、真空下、フィルター上で部分的に乾燥した。わずかにＮ２を流しながら、６０℃の真空オーブン中、一定重量（＜１％の差異）になるまでこの固体を乾燥すると、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエートが褐色固体として得られた。
【０３２１】
３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸・ＨＣＬ塩の調製。
【化４６】
2016535791.tif 000052
【０３２２】
ＭｅＣＮ（３．０体積）中の３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエート（１．０当量）のスラリーに、水（０．８３体積）、次いで濃水性ＨＣｌ（０．８３体積）を加えた。この混合物を４５±５℃に加熱した。２４〜４８時間撹拌した後、この反応が完了し、この混合物を周囲温度まで冷却した。水（１．３３体積）を加え、この混合物を撹拌した。この固体を濾過により採集し、水（２Ｘ０．３体積）により洗浄し、真空下、フィルター上で部分的に乾燥した。わずかにＮ２を流しながら、６０℃の真空オーブン中、一定重量（＜１％の差異）になるまでこの固体を乾燥すると、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸・ＨＣｌがオフホワイトの固体として得られた。
【０３２３】
化合物１の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルが図８に示されており、図９は、ＨＣｌ塩としての化合物１の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを図示している。
【０３２４】
以下の表２は、化合物Ｉの１Ｈ  ＮＭＲデータを列挙している。
【表２−２】
2016535791.tif 000053
【０３２５】
化合物１の形態Ｉの調製
【０３２６】
化合物１の形態Ｉの調製、方法Ａ。
【化４７】
2016535791.tif 000054
【０３２７】
水（１０体積）中の３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸・ＨＣｌ（１当量）のスラリーを周囲温度で撹拌した。２４時間撹拌した後、試料を採取した。この試料を濾過して、固体を水により洗浄した（２回）。この固体試料をＤＳＣ分析に供した。ＤＳＣ分析により形態Ｉに完全に変換されたことが示されると、この固体を濾過により採集し、水（２×１．０体積）により洗浄し、真空下、フィルター上で部分的に乾燥した。次に、わずかにＮ２を流しながら、６０℃の真空オーブン中、一定重量（＜１％の差異）になるまでこの固体を乾燥すると、化合物１の形態Ｉがオフホワイトの固体（９８％の収率）として得られた。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  9.14  (s,  1H),  7.99-7.93  (m,  3H),  7.80-7.78  (m,  1H),  7.74-7.72  (m,  1H),  7.60-7.55  (m,  2H),  7.41-7.33  (m,  2H),  2.24  (s,  3H),  1.53-1.51  (m,  2H),  1.19-1.17  (m,  2H)。
【０３２８】
化合物１の形態Ｉの調製、方法Ｂ。
【化４８】
2016535791.tif 000055
【０３２９】
３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエート（１．０当量）のギ酸（３．０体積）溶液を撹拌しながら７０±１０℃に８時間、加熱した。クロマトグラフ法により、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエートが１．０％ＡＵＣ以下しか残存していない場合、反応は完了したと見なした。この混合物を周囲温度まで冷却した。この溶液を水（６体積）に加え、５０℃に加熱して、この混合物を撹拌した。次に、この混合物を、３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）−ｔ−ブチルベンゾエートのレベルが、０．８％以下（ＡＵＣ）になるまで、７０±１０℃に加熱した。この固体を濾過により採集し、水（２ｘ３体積）により洗浄し、真空下、フィルター上で部分的に乾燥した。わずかにＮ２を流しながら、６０℃の真空オーブン中、一定重量（＜１％の差異）になるまでこの固体を乾燥すると、化合物１の形態Ｉがオフホワイトの固体として得られた。
【０３３０】
化合物１の形態ＩのＤＳＣトレースを図１０に示している。化合物１の形態Ｉの融解は、約２０４℃で起こる。
【０３３１】
Ｘ線回折パターンは、化合物１の形態Ｉの単結晶構造から計算し、図１に示されている。表３は、図１について計算したピークを一覧表示している。
【表３】
2016535791.tif 000056
【０３３２】
化合物１の形態Ｉの実際のＸ線粉末回折パターンを図２に示している。表４は、図２の実際のピークを一覧表示している。
【表４】
2016535791.tif 000057
【０３３３】
濃１−ブタノール溶液を０．２℃／分の速度で７５℃から１０℃まで冷却することにより、化合物１の形態Ｉの無色結晶が得られた。０．５０×０．０８×０．０３ｍｍの寸法を有する結晶を選択し、鉱物油によりきれいにし、ＭｉｃｒｏＭｏｕｎｔにマウントしてＢｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸ  ＩＩシステムの中央に置いた。逆格子空間中で分離した４０フレームの３つのバッチを得て、配向マトリックスおよび初期セルパラメータを得た。最終的なセルパラメータを得て、全データセットに基づいて精密化した。
【０３３４】
逆格子空間の回折データセットを得て、それぞれのフレームについて３０秒間の曝露を使用して、０．５°のステップを使用し、０．８２Åの解像度にした。１００（２）Ｋでデータを収集した。強度の積分およびセルパラメータの精密化をＡＰＥＸＩＩソフトウェアを使用して行った。データ収集後の結晶の観察により、分解の徴候は示されなかった。
【０３３５】
単結晶Ｘ線解析に基づく、化合物１の形態Ｉの立体構造の写真が図１１に示されている。化合物１の形態Ｉは、単斜晶系のＰ２１／ｎであり、以下の単位セル寸法：ａ＝４．９６２６（７）Å、ｂ＝１２．２９９（２）Å、ｃ＝３３．０７５（４）Å、β＝９３．９３８（９）°、Ｖ＝２０１４．０Å３、Ｚ＝４を有する。構造データから算出される化合物１の形態Ｉの密度は、１００Ｋで１．４９２ｇ／ｃｍ３である。
【０３３６】
化合物２の調製
【０３３７】
４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２６）の合成
【化４９】
2016535791.tif 000058
【０３３８】
４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸エチル（２５）の調製手順
【化５０】
2016535791.tif 000059
【０３３９】
エタノールを追い出すために表面下にＮ２を流しながら、化合物２２（１０ｇ、４６．３ｍｍｏｌ）に化合物２３（４．７７ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）を３０℃未満、０．５時間で滴下して加えた。次に、この溶液を１００〜１１０℃に加熱し、２．５時間撹拌した。この混合物を６０℃未満に冷却した後、ジフェニルエーテルを加えた。得られた溶液をジフェニルエーテルに滴下して加え、エタノールを追い出すために表面下にＮ２を流しながら、２２８〜２３２℃に１．５時間加熱した。この混合物を２２８〜２３２℃でさらに２時間撹拌し、１００℃未満に冷却して、次に、ヘプタンを加えると生成物が沈殿した。得られたスラリーを３０℃で０．５時間撹拌した。次に、この固体を濾過し、ケーキをヘプタンにより洗浄し、真空で乾燥すると、化合物２５が褐色固体として得られた。1H  NMR  (DMSO-d6;  400  MHz)  δ  12.25  (s),  δ  8.49  (d),  δ  8.10  (m),  δ  7.64  (m),  δ  7.55  (m),  δ  7.34  (m),  δ  4.16  (q),  δ  1.23  (t)。
【０３４０】
４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２６）の調製手順
【化５１】
2016535791.tif 000060
方法１
【０３４１】
化合物２５（１．０当量）をＨＣｌ（１０．０当量）およびＨ２Ｏ（１１．６体積）の溶液中に懸濁させた。このスラリーを８５〜９０℃に加熱したが、代替温度もこの加水分解ステップに好適である。例えば、加水分解は、代替として、約７５〜約１００℃の温度で行うことができる。一部の例では、この加水分解は、約８０〜約９５℃の温度で行う。他の場合、この加水分解ステップは、約８２〜約９３℃（例えば、約８２．５〜約９２．５℃または約８６〜約８９℃）の温度で行われる。８５〜９０℃でおよそ６．５時間撹拌した後、反応の完了を見るためにこの反応物をサンプリングした。加水分解に適した温度のいずれかで、撹拌を行うことができる。次に、この溶液を２０〜２５℃に冷却して濾過した。反応器／ケーキをＨ２Ｏ（２体積×２）によりすすいだ。次に、ｐＨ≧３．０になるまで、このケーキを２体積のＨ２Ｏにより洗浄した。次に、このケーキを真空下、６０℃で乾燥すると化合物２６が得られた。
方法２
【０３４２】
化合物２５（１１．３ｇ、５２ｍｍｏｌ）を１０％ＮａＯＨ（ａｑ）（１０ｍＬ）およびエタノール（１００ｍＬ）からなる混合物に加えた。この溶液を１６時間、加熱還流し、２０〜２５℃まで冷却して、次に８％ＨＣｌによりｐＨを２〜３に調整した。次に、この混合物を０．５時間撹拌して濾過した。ケーキを水（５０ｍＬ）により洗浄し、次に、真空で乾燥すると、化合物２６が褐色固体として得られた。1H  NMR  (DMSO-d6;  400  MHz)  δ  15.33  (s),  δ  13.39  (s),  δ  8.87  (s),  δ  8.26  (m),  δ  7.87  (m),  δ  7.80  (m),  δ  7.56  (m)。
【０３４３】
Ｎ−（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２）の全合成
【化５２】
2016535791.tif 000061
【０３４４】
２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルカーボネート（３０）の調製手順
【化５３】
2016535791.tif 000062
方法１
【０３４５】
２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール２９（１０ｇ、４８．５ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（１００ｍＬ）およびトリエチルアミン（１０．１ｍＬ、７２．８ｍｍｏｌ）溶液に、クロロギ酸メチル（７．４６ｍＬ、９７ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加えた。次に、この混合物を室温まで温め、さらに２時間撹拌した。次に、さらに５ｍＬのトリエチルアミンおよび３．７ｍＬのクロロギ酸メチルを加え、この反応物を一晩、撹拌した。次に、この反応物を濾過し、濾液を０℃まで冷却し、次に、追加の５ｍＬのトリエチルアミンおよび３．７ｍＬのクロロギ酸メチルを加え、この反応物を室温まで温め、次に、さらに１時間撹拌した。この段階で、この反応はほとんど完了し、濾過、次に水（２×）、次いでブラインにより洗浄することにより後処理した。次に、この溶液を濃縮すると、黄色油状物が生成し、カラムクロマトグラフィーを使用して精製すると化合物３０が得られた。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  7.35  (d,  J  =  2.4  Hz,  1H),  7.29  (dd,  J  =  8.4,  2.4  Hz,  1H),  7.06  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  3.85  (s,  3H),  1.30  (s,  9H),  1.29  (s,  9H)。
方法２
【０３４６】
４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、３．１６ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）および２，４−ジｔｅｒｔ−ブチルフェノール（化合物２９、１０３．５ｇ、５０１．６ｍｍｏｌ）を投入した反応容器に、塩化メチレン（４１５ｇ、３１３ｍＬ）を加え、固体がすべて溶解するまで、この溶液を撹拌した。次に、トリエチルアミン（７６ｇ、７５１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を０〜５℃に冷却した。次に、溶液温度を０〜５℃の間に維持しながら、クロロギ酸メチル（５２ｇ、５５０．３ｍｍｏｌ）を２．５〜４時間かけて、滴下して加えた。次に、この反応混合物をゆっくりと２３〜２８℃に加熱し、２０時間撹拌した。次に、この反応物を１０〜１５℃に冷却し、１５０ｍＬの水を投入した。この混合物を１５〜２０℃で３５〜４５分間撹拌し、次に、水層を分離して１５０ｍＬの塩化メチレンにより抽出した。有機層を合わせて、２．５％ＨＣｌ（ａｑ）により、５〜２０℃の温度で中和し、最終ｐＨを５〜６にした。次に、有機層を水により洗浄して、２０℃未満の温度で真空で１５０ｍＬまで濃縮すると、塩化メチレン中に化合物３０が得られた。
【０３４７】
５−ニトロ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルカーボネート（３１）の調製手順
【化５４】
2016535791.tif 000063
方法１
【０３４８】
化合物３０（６．７７ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、硫酸と硝酸の１：１混合物６ｍＬを０℃で滴下して加えた。この混合物を室温まで温め、１時間撹拌した。この生成物を液体クロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２０ｇ、０〜７％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３８分）を用いて精製すると、化合物３１の位置異性体の約８：１〜１０：１の混合物が白色固体として生成した。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  7.63  (s,  1H),  7.56  (s,  1H),  3.87  (s,  3H),  1.36  (s,  9H),  1.32  (s,  9H).ＨＰＬＣ保持時間３．９２分  １０−９９％  ＣＨ３ＣＮ、５分操作；ＥＳＩ−ＭＳ３１０  ｍ／ｚ（ＭＨ）＋。
方法２
【０３４９】
化合物３０（１００ｇ、３７８ｍｍｏｌ）にＤＣＭ（５４０ｇ、４０８ｍＬ）を加えた。すべての固体が溶解するまで、この混合物を撹拌し、次に−５〜０℃に冷却した。次に、反応の初期温度を維持しながら、濃硫酸（１６３ｇ）を滴下して加え、この混合物を４．５時間撹拌した。次に、この反応の初期温度を維持しながら、硝酸（６２ｇ）を２〜４時間かけて滴下して加え、次に、さらに４．５時間、この温度で撹拌した。次に、温度を５℃未満に維持しながら、反応混合物を冷水にゆっくりと加えた。次に、クエンチした反応物を２５℃まで加熱し、水層を除去して塩化メチレンにより抽出した。合わせた有機層を水により洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を使用して乾燥し、１２４〜１５５ｍＬまで濃縮した。ヘキサン（４８ｇ）を加え、得られた混合物を１２４〜１５５ｍＬまで再度濃縮した。続いて、この混合物にさらなるヘキサン（１６０ｇ）を加えた。次に、この混合物を２３〜２７℃で１５．５時間撹拌し、次に、濾過した。この濾過ケーキにヘキサン（１１５ｇ）を加え、得られた混合物を加熱還流し、２〜２．５時間撹拌した。次に、この混合物を３〜７℃まで冷却し、さらに１〜１．５時間撹拌して濾過すると、化合物３１が淡黄色固体として得られた。
【０３５０】
５−アミノ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルカーボネート（３２）の調製手順
【化５５】
2016535791.tif 000064
【０３５１】
好適な水素化用反応器に、２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ニトロフェニルメチルカーボネート（１．００当量）、次いで、５％Ｐｄ／Ｃ（２．５０重量％、乾燥基準、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｍａｔｔｈｅｙ  Ｔｙｐｅ３７）を投入した。この反応器にＭｅＯＨ（１５．０体積）を投入し、この系を閉じた。この系をＮ２（ｇ）によりパージし、次に、Ｈ２（ｇ）で２．０Ｂａｒに加圧した。この反応を２５℃＋／−５℃の反応温度で行った。完了すると、反応物を濾過して、反応器／ケーキをＭｅＯＨ（４．００体積）により洗浄した。得られた濾液を５０℃以下で８．００体積になるまで真空下で蒸留した。水（２．００体積）を４５℃＋／−５℃で加えた。得られたスラリーを０℃＋／−５に冷却した。このスラリーを０℃＋／−５℃で、１時間以上保持し、濾過した。ケーキを０℃＋／−５℃のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８：２）（２．００体積）により１回洗浄した。ケーキを真空下（−０．９０ｂａｒおよび−０．８６ｂａｒ）、３５℃〜４０℃で乾燥すると、化合物３２が得られた。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  7.05  (s,  1H),  6.39  (s,  1H),  4.80  (s,  2H),  3.82  (s,  3H),  1.33  (s,  9H),  1.23  (s,  9H)。
【０３５２】
反応が一旦完了すると、得られた混合物を約５〜１０体積のＭｅＯＨ（例えば、約６〜約９体積のＭｅＯＨ、約７〜約８．５体積のＭｅＯＨ、約７．５〜約８体積のＭｅＯＨ、または約７．７体積のＭｅＯＨ）により希釈し、約３５±５℃の温度まで加熱し、上で記載した通り、濾過し、洗浄し、乾燥した。
【０３５３】
Ｎ−（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２）の調製。
【化５６】
2016535791.tif 000065
【０３５４】
４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸２６（１．０当量）および５−アミノ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルカーボネート３２（１．１当量）を反応器に投入した。２−ＭｅＴＨＦ（酸に対して４．０体積）、次いで２−ＭｅＴＨＦ中のＴ３Ｐ（登録商標）５０％溶液（１．７当量）を加えた。Ｔ３Ｐを投入した容器を２−ＭｅＴＨＦ（０．６体積）により洗浄した。次に、ピリジン（２．０当量）を加え、得られた懸濁液を４７．５＋／−５．０℃に加熱し、この温度で８時間保持した。試料を採取し、ＨＰＬＣにより完了を確認した。完了すると、得られた混合物を２５．０℃＋／−２．５℃まで冷却した。２−ＭｅＴＨＦ（１２．５体積）を加え、混合物を希釈した。この反応混合物を水（１０．０体積）により、２回洗浄した。２−ＭｅＴＨＦを加えて、反応物の総体積を４０．０体積（約１６．５体積を投入）にした。この溶液に、ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ（１．７当量）を加え、メタノール分解を行った。この反応物を１．０時間以上撹拌し、ＨＰＬＣにより完了を確認した。完了すると、反応を１Ｎ  ＨＣｌ（１０．０体積）によりクエンチし、０．１Ｎ  ＨＣｌ（１０．０体積）により洗浄した。有機溶液をポリッシュ濾過（polish  filtered）し、いかなる粒子も除去し、第２の反応器に入れた。減圧下、３５℃以下（ジャケット温度）および８．０℃（内部反応温度）以上で濾過溶液を濃縮し、２０体積にした。ＣＨ３ＣＮを４０体積になるまで加え、この溶液を３５℃以下（ジャケット温度）および８．０℃（内部反応温度）以上で２０体積まで濃縮した。ＣＨ３ＣＮの添加および濃縮のサイクルをさらに２回繰り返し、合計で３回のＣＨ３ＣＮの添加、および２０体積への４回の濃縮を行った。２０体積への最終濃縮の後、ＣＨ３ＣＮを１６．０体積、次いでＨ２Ｏを４．０体積加えて、開始した酸に対して、最終濃度を４０体積の１０％Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮにした。このスラリーを７８．０℃＋／−５．０℃（還流）に加熱した。次に、このスラリーを５時間以上撹拌した。このスラリーを０．０℃＋／−５℃に５時間かけて冷却し、濾過した。このケーキを０．０℃＋／−５．０℃のＣＨ３ＣＮ（５体積）で４回洗浄した。得られた固体（化合物２）を５０．０℃＋／−５．０℃の真空オーブン中で乾燥した。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.8  (s,  1H),  11.8  (s,  1H),  9.2  (s,  1H),  8.9  (s,  1H),  8.3  (s,  1H),  7.2  (s,  1H),  7.9  (t,  1H),  7.8  (d,  1H),  7.5  (t,  1H),  7.1  (s,  1H),  1.4  (s,  9H),  1.4  (s,  9H)。
【０３５５】
Ｎ−（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２）の代替調製。
【化５７】
2016535791.tif 000066
【０３５６】
４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸２６（１．０当量）および５−アミノ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルカーボネート３２（１．１当量）を反応器に投入した。２−ＭｅＴＨＦ（酸に対して４．０体積）、次いで２−ＭｅＴＨＦ中のＴ３Ｐ（登録商標）５０％溶液（１．７当量）を加えた。Ｔ３Ｐを投入した容器を２−ＭｅＴＨＦ（０．６体積）により洗浄した。次に、ピリジン（２．０当量）を加え、得られた懸濁液を４７．５＋／−５．０℃に加熱し、この温度で８時間保持した。試料を採取し、ＨＰＬＣにより完了を確認した。完了すると、得られた混合物を２０℃＋／−５℃に冷却した。２−ＭｅＴＨＦ（１２．５体積）を加え、混合物を希釈した。反応混合物を水（１０．０体積）により２回洗浄し、反応器に２−ＭｅＴＨＦ（１６．５体積）を投入した。この溶液に３０％ｗ／ｗＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ（１．７当量）を投入し、メタノール分解を行った。この反応物を２５．０℃＋／−５．０℃で１．０時間以上撹拌し、ＨＰＬＣにより完了を確認した。完了すると、反応を１．２Ｎ  ＨＣｌ／Ｈ２Ｏ（１０．０体積）によりクエンチし、０．１Ｎ  ＨＣｌ／Ｈ２Ｏ（１０．０体積）により洗浄した。有機溶液をポリッシュ濾過し、いかなる粒子も除去し、第２の反応器に入れた。
【０３５７】
減圧下、３５℃以下（ジャケット温度）および８．０℃（内部反応温度）以上で濾過溶液を濃縮し、２０体積にした。ＣＨ３ＣＮを４０体積になるまで加え、この溶液を３５℃以下（ジャケット温度）および８．０℃（内部反応温度）以上で２０体積になるまで濃縮した。ＣＨ３ＣＮの添加および濃縮のサイクルをさらに２回繰り返し、合計で３回のＣＨ３ＣＮの添加、および２０体積への４回の濃縮を行った。２０体積への最終濃度の後、ＣＨ３ＣＮを１６．０体積、次いでＨ２Ｏを４．０体積投入して、開始した酸に対して、最終濃度を４０体積の１０％Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮにした。このスラリーを７８．０℃＋／−５．０℃（還流）に加熱した。次に、このスラリーを５時間以上撹拌した。このスラリーを２０〜２５℃まで、５時間かけて冷却し、濾過した。ケーキを２０〜２５℃に加熱したＣＨ３ＣＮ（５体積）により４回洗浄した。得られた固体（化合物２）を５０．０℃＋／−５．０℃の真空オーブン中で乾燥した。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO-d6)  δ  12.8  (s,  1H),  11.8  (s,  1H),  9.2  (s,  1H),  8.9  (s,  1H),  8.3  (s,  1H),  7.2  (s,  1H),  7.9  (t,  1H),  7.8  (d,  1H),  7.5  (t,  1H),  7.1  (s,  1H),  1.4  (s,  9H),  1.4  (s,  9H)。
【０３５８】
Ｎ−（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２）の再結晶化の手順
【化５８】
2016535791.tif 000067
【０３５９】
反応器に化合物２（１．０当量）を投入した。２−ＭｅＴＨＦ（２０．０当量）、次いで０．１Ｎ  ＨＣｌ（５．０体積）を加えた。二相溶液を撹拌して分離し、上部の有機相を０．１Ｎ  ＨＣｌ（５．０体積）によりさらに２回洗浄した。有機溶液をポリッシュ濾過し、いかなる粒子も除去し、第２の反応器に入れた。濾過溶液を減圧下、３５℃以下（ジャケット温度）および８．０℃（内部反応温度）以下で１０体積になるまで濃縮した。酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ）（１０体積）を加え、この溶液を３５℃以下（ジャケット温度）および８．０℃（内部反応温度）以下で１０体積になるまで濃縮した。ＩＰＡｃの添加および濃縮をさらに２回繰り返し、合計で３回のＩＰＡｃの添加、および１０体積への４回の濃縮を行った。最終濃縮の後、ＩＰＡｃ１０体積を投入し、スラリーを加熱還流し、この温度で５時間維持した。このスラリーを０．０℃＋／−５℃まで、５時間かけて冷却し、濾過した。このケーキをＩＰＡｃ（５体積）により１回洗浄した。得られた固体を５０．０℃＋／−５．０℃の真空オーブン中で乾燥した。
【０３６０】
実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体の調製
【０３６１】
９０重量％ＭＥＫ／１０重量％ＤＩ水の比に従い配合した、ＭＥＫおよびＤＩ水の溶媒系を、磁気撹拌器および熱回路を備えた反応器中、２０〜３０℃の温度に加熱した。この溶媒系に、ヒプロメロースアセテートスクシネートポリマー（ＨＰＭＣＡＳ）（ＨＧグレード）、ＳＬＳ、および化合物２を、１９．５重量％ヒプロメロースアセテートスクシネート／０．５重量％ＳＬＳ／８０重量％化合物２の比に従って加えた。得られた混合物は、１０．５重量％の固体を含有した。この混合物を生成するために使用した成分および溶媒の実際の量は、以下の表５に列挙されている。
【表５】
2016535791.tif 000068
【０３６２】
この混合物の温度を２０〜４５℃の範囲に調整し、実質的に均一になり、かつすべての構成成分が実質的に溶解するまで混合した。
【０３６３】
加圧ノズル（オリフィス／コアサイズ５４／２１を有するＳｐｒａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍａｘｉｍｕｍ  ＰａｓｓａｇｅシリーズＳＫ−ＭＦＰ）を装着し、アンチベアディングキャップ（anti-bearding  cap）を装備したスプレー乾燥器であるＮｉｒｏ  ＰＳＤ４という市販スプレー乾燥器を、以下の表６に列挙されている乾燥スプレープロセスのパラメータに従って、通常のスプレー乾燥モード下で使用した。
【表６】
2016535791.tif 000069
【０３６４】
高効率サイクロンにより、湿潤生成物とスプレーガスおよび溶媒蒸気とを分離した。湿潤生成物は、８．５〜９．７％ＭＥＫおよび０．５６〜０．８３％水を含有し、平均粒子サイズ１７〜１９ｕｍおよびかさ密度０．２７〜０．３３ｇ／ｃｃを有した。湿潤生成物は、乾燥のために４０００Ｌのステンレス鋼二重円錐真空乾燥器に送り、残留溶媒を約５０００ｐｐｍ未満のレベルまで低下させて、＜０．０３％ＭＥＫおよび０．３％水を含有するアモルファス化合物２の乾燥させたスプレードライ分散体を生成した。
【０３６５】
完全連続湿式造粒方法からの錠剤形成
【０３６６】
機器／プロセス
【０３６７】
機器
【０３６８】
完全連続ディベロプメントアンドローンチリグ（Development  and  Launch  Rig）（ＤＬＲ）または類似のタイプの機器
【０３６９】
ふるいがけ
【０３７０】
化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および添加剤は、別個の中間ビン容器（intermediate  bin  container：ＩＢＣ）中に分注することができる。これらの材料は、「ビン−トゥ−ビン」ふるいがけ操作を使用してふるいがけすることができる。適切なスクリーンサイズは、メッシュ２０、メッシュ４０、またはメッシュ６０である。
【０３７１】
ブレンド
【０３７２】
ふるいがけした化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および添加剤を含有するＩＢＣを、例えば、体積測定または重量測定用ロスインウェイトフィーダーを使用し、材料を制御して連続式ブレンダーにフィードすることができる、フィーダーシステムにドックすることができる。個々の構成成分のフィード速度は、製剤組成および全体のライン速度により定義される。ライン速度は、８ｋｇ／時〜３０ｋｇ／時であり得る。連続式ブレンダーは、適切なブレンドを可能にする様々なブレード構成を有することができ、これらのブレードの回転速度は、８０ＲＰＭ〜３００ＲＰＭの間であり得る。
【０３７３】
湿式造粒
【０３７４】
造粒用溶液は、ステンレス鋼容器中で、７００ＲＰＭの撹拌速度のオーバーヘッド型撹拌器を使用して、水１，６２６ｇに、ラウリル硫酸ナトリウム４８ｇおよびポリビニルピロリドン１５９ｇを溶解することにより調製することができる。この造粒用溶液を容器に入れ、マスフローメータおよびコントロールを備えた蠕動ポンプを使用し、本プロセスに適した流速を使用して、容器から溶液を２軸造粒器にポンプ注入することができる。このブレンドは、ＤＬＲの一部である造粒器などの２軸造粒器を使用して、造粒することができる。ブレンドは、フィード速度８ｋｇ／時〜２４ｋｇ／時でＤＬＲ上のＫ−Ｔｒｏｎフィーダーなどのロスインウェイトフィーダーを使用して、２軸造粒器に加えることができる。２軸造粒器は、バレル温度摂氏２５度および軸速度２００〜９５０ＲＰＭにより操作することができる。造粒プロセスは、小さなバッチサイズの場合、３分間、または大きなバッチサイズの場合、数時間行うことができる。
【０３７５】
乾燥
【０３７６】
湿潤顆粒は、ＤＬＲ上のセグメント化された流動床乾燥器などの流動床乾燥器に直接フィードすることができる。乾燥のエンドポイントは、取り出しの間の、摂氏４０〜５５度の範囲の生成物温度で選択することができ、この時点で、顆粒の水分含有量は２．１％ｗ／ｗ（「乾燥減量、ＬＯＤ」）またはそれ未満であり得る。乾燥時間は、１２分間またはそれより短くまたは長くして、所望の乾燥エンドポイントに到達することができる。
【０３７７】
ミル粉砕
【０３７８】
乾燥顆粒は、ミル粉砕して顆粒のサイズを小さくすることができる。このために統合Ｑｕａｄｒｏ  Ｕ１０  ＣｏＭｉｌなどの円錐ミルを使用することができる。
【０３７９】
ブレンド
【０３８０】
顆粒は、ロスインウェイトフィーダーおよび連続式ブレンダーを使用して、充填剤および滑沢剤などの顆粒外添加剤とブレンドすることができる。ブレンド速度は、８０〜３００ＲＰＭであり得る。
【０３８１】
圧縮
【０３８２】
圧縮ブレンドは、適切にサイズを整えた工具を使用して、ＤＬＲシステムの一部である、Ｃｏｕｒｔｏｙ  Ｍｏｄｕｌ  Ｐプレス器などのシングルステーションまたは回転錠剤プレス器を使用して、錠剤に圧縮することができる。２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の用量の錠剤の重量は、約５００または６００ｍｇであり得る。
【０３８３】
フィルムコーティング剤
【０３８４】
錠剤は、ＤＬＲシステムの一部である、革新的なＯｍｅｇａフィルムコーティング機を使用して、フィルムコーティングすることができる。このコーティング機により、１〜４ｋｇの部分バッチの迅速なフィルムコーティングが可能になり、連続製造することができる。
【０３８５】
印刷
【０３８６】
フィルムコーティング錠剤は、例えば、Ａｃｋｌｅｙランプ印刷機を使用して、錠剤の片面または両面にモノグラムを印刷してもよい。
【０３８７】
一実施形態における上記の連続プロセスは、表７に記載されているＰＡＴ技法により増強される。ＰＡＴ位置が６つ存在しており、これらのそれぞれは、手作業によるサンプリング用ポートを含む。プロセスにおいて、必要に応じて、検討理由のため、ならびにＰＡＴモデルのメンテナンス、移送およびバリデーションのためにも試料を採取することができる。本ＰＡＴシステムは、リアルタイムリリース試験（ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｔｅｓｔｉｎｇ：ＲＴＲＴ）に使用することができ、プロセス内管理（ｉｎ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ：ＩＰＣ）およびフィードバック／フィードフォワード管理にも使用することができる。
【表７】
2016535791.tif 000070
【０３８８】
規格の合致は、表８に記載されているＲＴＲＴにより行うことができる。
【表８】
2016535791.tif 000071
【０３８９】
不適合材料を検出する確率が高い。例えば、モデルの分類基準が、最低９５％の信頼性に設定されて、８００個の錠剤をバッチ製造中に試験した場合、３分間あたり１個の錠剤のサンプリング速度で４０時間操作すると、８００個の錠剤に等しくなる。次に、不適合バッチが合格する確率は、極めて低い：＜（０．０５）ｎ−（ｎ＝試料数）であり、したがって確率は、＜１．５×１０−１０４１である。短期間（≧３分間）イベントに起因する、不適合錠剤を検出しない確率は、以下の通りである：１個の錠剤（３分間イベント）→＜０．０５（検出確率＞０．９５）；２個の錠剤（６分間イベント）→＜０．００２５（検出確率＞０．９９７５）。
【０３９０】
ＰＡＴ測定は、属性（すなわち、アッセイ、ＣＵ、溶解などとして）を慣用的に表す測定を組み合わせることにより、直接、慣用的なエンド試験の代わりとして働き得る。バリデーションは、指針としてＩＣＨ  Ｑ２を使用して行うことができる。逐次オフライン法からオンライン法への開発により、材料を浪費せずにＣＱＡの評価を行うことが可能になる。究極的に、ＲＴＲＴは、従来の試験法より高い信頼性レベルで、製品品質を確実にすることになろう。
【０３９１】
２軸湿式造粒法からの錠剤形成
【０３９２】
機器／プロセス
【０３９３】
機器
【０３９４】
２軸湿式造粒器：ＣｏｎｓｉＧｍａ−１、ＣｏｎｓｉＧｍａ−２５またはＬｅｉｓｔｒｉｔｚ  ｎａｎｏ。
【０３９５】
ふるいがけ／秤量
【０３９６】
化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および添加剤は、秤量前またはその後にふるいがけすることができる。適切なスクリーンサイズは、メッシュ２０、メッシュ４０またはメッシュ６０である。化合物１の形態Ｉおよび／または実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体は、１種または複数の添加剤と予めブレンドして、ふるいがけを簡単にすることができる。
【０３９７】
ブレンド
【０３９８】
化合物１の形態Ｉ、実質的にアモルファスな化合物２を含む固体分散体、および添加剤は、様々な順序でブレンダーに添加することができる。ブレンドは、タービュラブレンダー、ｖ−シェルブレンダーまたはビンブレンダーで行うことができる。これらの構成成分を１０分間ブレンドすることができる。
【０３９９】
湿式造粒
【０４００】
造粒用溶液は、ステンレス鋼容器中で、７００ＲＰＭの撹拌速度のオーバーヘッド型撹拌器を使用して、水１，６２６ｇに、ラウリル硫酸ナトリウム４８ｇおよびポリビニルピロリドン１５９ｇを溶解することにより調製することができる。ブレンドは、ＣｏｎｓｉＧｍａ−１などの２軸造粒器を使用して、造粒することができる。造粒用溶液は、フィード速度６７ｇ／分のＣｏｎｓｉＧｍａ−１のポンプなどの蠕動ポンプを使用して、２軸造粒器に加えることができる。ブレンドは、フィード速度１０ｋｇ／時のＣｏｎｓｉＧｍａ−１のブラベンダーフィーダーなどのロスインウェイトフィーダーを使用して、２軸造粒器に加えることができる。２軸造粒器は、バレル温度摂氏２５度および軸速度４００ＲＰＭで操作することができる。この造粒プロセスは４分間行うことができる。この造粒プロセスは、より短期間またはより長期間行い、より少量またはより大量の湿潤顆粒を製造することができる。
【０４０１】
乾燥
【０４０２】
湿潤顆粒は、ＣｏｎｓｉＧｍａ−１における乾燥チャンバーなどの流動床乾燥器またはＣＴＬ−２５におけるセグメント化されている流動床乾燥器に直接フィードすることができる。乾燥エンドポイントは、摂氏４３度の生成物温度で選択することができ、この時点で、顆粒の水分含有量は１．６％ｗ／ｗ（「乾燥時の減少、ＬＯＤ」）であり得る。乾燥時間は、１２分間、またはそれより短くまたは長くして、所望の乾燥エンドポイントに到達することができる。乾燥は、空気流５９ｍ３／分および入り口温度摂氏６０度で行うことができる。あるいは、２軸造粒器から来る湿潤顆粒を採集して、ある期間ビンまたは容器に入れることができ、この後、この湿潤顆粒はＶｅｃｔｏｒ  Ｍｕｌｔｉ１５などの、別個の独立した流動床乾燥器に移送される。
【０４０３】
ミル粉砕
【０４０４】
乾燥顆粒は、ミル粉砕して顆粒のサイズを小さくすることができる。このためにＱｕａｄｒｏ１９４  ＣｏＭｉｌなどの円錐ミルを使用することができる。
【０４０５】
ブレンド
【０４０６】
顆粒は、Ｖ−シェルブレンダーまたはビンブレンダーを使用して、充填剤および滑沢剤などの顆粒外添加剤とブレンドすることができる。このブレンド時間は、５分間、３分間または１分間であり得る。
【０４０７】
圧縮
【０４０８】
圧縮ブレンドは、０．５５’×０．３３’の楕円形状の工具を使用する、Ｃｏｕｒｔｏｙ  Ｍｏｄｕｌ  Ｐプレス器などのシングルステーションまたは回転錠剤プレス器を使用して、錠剤に圧縮することができる。２００ｍｇの化合物１の形態Ｉおよび１２５ｍｇの実質的にアモルファスな化合物２の用量の錠剤の重量は、約５００または６００ｍｇであり得る。
【０４０９】
フィルムコーティング
【０４１０】
錠剤は、例えばＴｈｏｍａｓ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｃｏｍｐｕ−Ｌａｂコーティング機などの、パンコーティング機を使用してフィルムコーティングすることができる。微量のカルナウバワックスを加えて、錠剤の外観および加工能力を改善することができる。
【０４１１】
印刷
【０４１２】
フィルムコーティング錠剤は、例えば、Ｈａｒｔｎｅｔｔ  Ｄｅｌｔａ印刷機を使用して、錠剤の片面または両面にモノグラムを印刷してもよい。
【０４１３】
連続２軸湿式造粒法からの錠剤形成
【０４１４】
機器／プロセス
【０４１５】
機器
造粒器：ＣｏｎｓｉＧｍａまたはＬｅｉｓｔｒｉｔｚまたはＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ２軸造粒器。
【０４１６】
ふるいがけ／秤量
【０４１７】
化合物１および添加剤は、秤量前またはその後にふるいがけすることができる。可能なスクリーンサイズは、メッシュ２０、メッシュ４０またはメッシュ６０である。化合物１は、１種または複数の添加剤と予めブレンドして、ふるいがけを簡単にすることができる。
【０４１８】
ブレンド
【０４１９】
化合物１および添加剤は、様々な順序でブレンダーに添加することができる。ブレンドは、タービュラブレンダー、ｖ−シェルブレンダー、ビンブレンダーまたは連続式ブレンダーで行うことができる。構成成分は、バッチブレンダーの場合、１０分間、または連続式ブレンダーの場合、連続してブレンドすることができる。
【０４２０】
造粒操作
造粒用液−ＳＬＳおよび結合剤を精製水に加え、溶解するまで混合する。好適な比は、水中で、２．５％ｗ／ｗＳＬＳと１０．０％ｗ／ｗ  ＰＶＰ  Ｋ３０である。
造粒−化合物１および添加剤を含有するブレンドは、１０ｋｇ／時の速度のロスインウェイトフィーダーを使用して、２軸造粒器に投入することができる。造粒用液は、３．５ｋｇ／時の速度の蠕動ポンプを使用して加えることができる。造粒器は、４００ＲＰＭの速度で操作することができる。本２軸湿式造粒法の注目に値する利点は、湿潤性の向上により、より優れた造粒のための界面活性剤および結合剤の両方を含む造粒用液を使用する点である。一実施形態では、界面活性剤は、ＳＬＳである。別の注目に値する利点は、本方法が連続的であり、かつ時間内のいつでも、限られた量の材料だけが加工されるので、本方法が良好に制御され、生成物が高品質になることである。
【０４２１】
ミル粉砕
【０４２２】
顆粒は、乾燥前もしくは乾燥後のいずれか、または両方で、スクリーンミルまたは円錐ミルを使用してサイズを低下させることができる。
【０４２３】
乾燥
【０４２４】
顆粒は、真空オーブン、トレイ乾燥器、二重円錐乾燥器または流動床乾燥器を使用して乾燥することができる。
【０４２５】
ブレンド
【０４２６】
顆粒を顆粒外添加剤とブレンドすることができる。顆粒は、６０回転の３００リットルビンブレンダーを使用してブレンドした。
【０４２７】
圧縮
【０４２８】
圧縮用ブレンドは、Ｃｏｕｒｔｏｙ  Ｍｏｄｕｌ  Ｐ回転式プレス器を使用して、錠剤に圧縮した。
【０４２９】
フィルムコーティング
【０４３０】
錠剤は、例えばＯ’Ｈａｒａ  Ｌａｂｃｏａｔなどの、パンコーティング機を使用してフィルムコーティングすることができる。
【０４３１】
印刷
【０４３２】
フィルムコーティング錠剤は、例えば、Ｈａｒｔｎｅｔｔ  Ｄｅｌｔａ印刷機を使用して、錠剤の片面または両面にモノグラムを印刷してもよい。
アッセイ
【０４３３】
プロトコール１
【０４３４】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲポテンシエーション特性を検出および測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーション特性をアッセイするための膜電位光学法
【０４３５】
このアッセイは、蛍光性電位感受性色素を利用して、ＮＩＨ３Ｔ３細胞における機能性ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの向上の読み出しとして蛍光プレートリーダー（例えば、ＦＬＩＰＲ  ＩＩＩ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、膜電位の変化を測定する。この応答に対する推進力は、細胞が予め化合物により処理され、続いて、電位感受性色素をロードされた後に、単一液体の添加ステップにより、チャネル活性化に連動して塩化物イオンの勾配が生じることである。
ポテンシエーター化合物の同定
【０４３６】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲのポテンシエーターを特定するため、二重付加ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。このＨＴＳアッセイは、ＦＬＩＰＲ  ＩＩＩ上での膜電位の変化を測定するために、温度補正済みΔＦ５０８ＣＦＴＲ  ＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるΔＦ５０８ＣＦＴＲのゲーティング（コンダクタンス）の増大の測定として、蛍光性電位感受性色素を利用する。この応答のための推進力は、細胞が予めポテンシエーター化合物（またはＤＭＳＯビヒクル対照）により処理され、続いて、再分布色素をロードされた後に、ＦＬＩＰＲ  ＩＩＩなどの蛍光プレートリーダーを使用して、単一液体の添加ステップにおいて、フォルスコリンによるチャネル活性化と連動する、Ｃｌ−イオン勾配である。
溶液
【０４３７】
浴溶液＃１：（ｍＭ）ＮａＣｌ  １６０、ＫＣｌ  ４．５、ＣａＣｌ２  ２、ＭｇＣｌ２  １、ＨＥＰＥＳ  １０、ＮａＯＨによりｐＨ７．４。
【０４３８】
塩化物イオン不含の浴溶液：浴溶液＃１（上記）中の塩化物イオン塩をグルコン酸塩で置きかえる。
細胞培養物
【０４３９】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学測定のために使用する。細胞を、１７５ｃｍ２の培養フラスコ中、５％ＣＯ２および９０％湿度、３７℃で、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎児血清、１Ｘ  ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で維持する。すべての光学的アッセイについて、細胞を、３８４ウェルのマトリゲルコーティングしたプレート中、約２０，０００個／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養した後に、ポテンシエーターアッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのため、細胞を、化合物ありまたはなしで２７℃または３７℃で１６〜２４時間、培養する。
【０４４０】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーション特性をアッセイするための電気生理学的アッセイ
ウッシングチャンバーアッセイ
【０４４１】
光学的アッセイにおいて特定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強剤または誘発剤をさらに特性評価するために、ウッシングチャンバー実験を、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現する分極気道上皮細胞で実施した。非ＣＦおよびＣＦ気道上皮を、気管支組織から単離し、以前に記載されている通り培養し（Galietta,  L.J.V.、Lantero,  S.、Gazzolo,  A.、Sacco,  O.、Romano,  L.、Rossi,  G.A.およびZegarra-Moran,  ０（１９９８年）In  Vitro  Cell.  Dev.  Biol.３４巻、４７８〜４８１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３馴化培地で予めコーティングしたＣｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）フィルター上にプレーティングした。４日後に、頂端培地を除去し、使用前に、細胞を気液界面で＞１４日間成長させた。これによって、十分に分化した円柱状細胞の単層が得られたが、これは気道上皮に特徴的なフィーチャーである線毛細胞である。非ＣＦ  ＨＢＥを、既知の肺疾患をなんら有していない非喫煙者から単離した。ＣＦ−ＨＢＥを、ΔＦ５０８についてホモ接合性患者から単離した。
【０４４２】
Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）細胞培養インサート上で成長させたＨＢＥをウッシング（Using）チャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）にマウントし、経上皮抵抗および短絡回路電流を、側底から頂端のＣｌ−勾配（ＩＳＣ）の存在下で、電位クランプシステム（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｏｗａ、ＩＡ）を使用して測定した。手短に述べると、電位クランプ記録条件（Ｖｈｏｌｄ＝０ｍＶ）下、３７℃でＨＢＥを試験した。側底側溶液は、（ｍＭ）１４５  ＮａＣｌ、０．８３  Ｋ２ＨＰＯ４、３．３  ＫＨ２ＰＯ４、１．２  ＭｇＣｌ２、１．２  ＣａＣｌ２、１０  グルコース、１０  ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨによりｐＨを７．３５に調整）を含み、頂端溶液は、（ｍＭ）１４５グルコン酸Ｎａ、１．２  ＭｇＣｌ２、１．２  ＣａＣｌ２、１０  グルコース、１０  ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨによりｐＨ７．３５に調整）を含んだ。
ポテンシエーター化合物の同定
【０４４３】
典型的なプロトコールは、側底側から頂端膜へのＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を設定するために、側底膜で通常のリンゲル液を使用した一方、頂端ＮａＣｌを等モル濃度のグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨによりｐＨ７．４に滴定）により置きかえて、上皮間に大きなＣｌ−濃度勾配を得た。フォルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を細胞培養インサートの頂端側に加えた。推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲポテンシエーターの有効性を既知のポテンシエーターであるゲニステインのそれと比較した。
パッチクランプ記録
【０４４４】
ΔＦ５０８−ＮＩＨ３Ｔ３細胞における全Ｃｌ−電流を、以前に記載されている、穿孔パッチ記録構成（Rae,  J.、Cooper,  K.、Gates,  P.およびWatsky,  M.（１９９１年）J.  Neurosci.  Methods  ３７巻、１５〜２６頁）を使用してモニタリングした。電位クランプ記録をＡｘｏｐａｔｃｈ  ２００Ｂパッチ−クランプ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用して２２℃で実施した。ピペット溶液は、（ｍＭ）１５０  Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ、２  ＭｇＣｌ２、２  ＣａＣｌ２、１０  ＥＧＴＡ、１０  ＨＥＰＥＳおよび２４０μｇ／ｍＬアムホテリシン−Ｂ（ＨＣｌによりｐＨを７．３５に調整）を含んだ。細胞外培地は、（ｍＭ）１５０  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２  ＭｇＣｌ２、２  ＣａＣｌ２、１０  ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌによりｐＨを７．３５に調整）を含んだ。パルス発生、データ取得および分析は、Ｃｌａｍｐｅｘ８（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を接続したＤｉｇｉｄａｔａ１３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを使用して実施した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化させるために、１０μＭフォルスコリンおよび２０μＭゲニステインを浴に加え、電流−電位の関係を３０秒毎にモニタリングした。
ポテンシエーター化合物の同定
【０４４５】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的なΔＦ５０８−ＣＦＴＲ  Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増加させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲポテンシエーターの能力も、穿孔パッチ記録技法を使用して検討した。光学的アッセイから同定されたポテンシエーターは、光学的アッセイにおいて観察されものと同様の効力および有効性で、ＩΔＦ５０８の用量依存的増加を引き起こした。試験したすべての細胞において、ポテンシエーターを施用する前およびその間の逆転電位は、およそ−３０ｍＶであった。これは計算されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である。
細胞培養物
【０４４６】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞をホールセル記録に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２の培養フラスコ中、５％ＣＯ２および９０％湿度、３７℃で、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎児血清、１Ｘ  ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で維持する。ホールセル記録のため、ポテンシエーターの活性を試験するために使用する前に、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたガラス製カバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養し、コレクターの活性を測定するために、補正化合物ありまたはなしで３７℃でインキュベートした。
単一チャネル記録
【０４４７】
ＮＩＨ３Ｔ３細胞において発現されたｗｔ−ＣＦＴＲおよび温度補正済みΔＦ５０８−ＣＦＴＲのゲーティング活性を、Ａｘｏｐａｔｃｈ２００Ｂパッチ−クランプ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用して、これまで記載されている切除インサイドアウト膜パッチ記録法（Dalemans,  W.、Barbry,  P.、Champigny,  G.、Jallat,  S.、Dott,  K.、Dreyer,  D.、Crystal,  R.G.、Pavirani,  A.、Lecocq,  J-P.、Lazdunski,  M.（１９９１年）  Nature  ３５４巻、５２６〜５２８頁）を使用して観察した。ピペットは、（ｍＭ）：１５０  ＮＭＤＧ、１５０  アスパラギン酸、５  ＣａＣｌ２、２  ＭｇＣｌ２および１０  ＨＥＰＥＳ（Ｔｒｉｓ塩基でｐＨを７．３５に調整）を含んだ。その浴は、（ｍＭ）：１５０  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２  ＭｇＣｌ２、５  ＥＧＴＡ、１０  ＴＥＳおよび１４  Ｔｒｉｓ塩基（ＨＣｌによりｐＨを７．３５に調整）を含んだ。切除の後、タンパク質ホスファターゼを阻害するために１ｍＭ  Ｍｇ−ＡＴＰ、７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼの触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）および１０ｍＭ  ＮａＦを添加することによってｗｔ−ＣＦＴＲとΔＦ５０８−ＣＦＴＲの両方が活性化され、これにより電流の低下が防止された。ピペット電位を８０ｍＶに維持した。チャネル活性を、≦２の活性チャネルを含む膜パッチから分析した。同時開口の最大数により、実験経過中の活性チャネルの数が決定された。単一チャネル電流振幅を決定するために、１２０秒間のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルターにかけ、次いで、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ  Ｃｏｍｐ．フランス）を使用して、多重ガウス関数を当てはめた全点振幅ヒストグラムを構築するために使用した。全微視的電流および開口確率（Ｐｏ）を１２０秒間のチャネル活性から決定した。Ｐｏを、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈソフトウェアを使用して、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）（Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャネル電流振幅、およびＮ＝パッチにおける活性チャネルの数）から決定した。
細胞培養物
【０４４８】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切除膜パッチ−クランプ記録に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２の培養フラスコ中、５％ＣＯ２および９０％湿度、３７℃で、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎児血清、１Ｘ  ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ  ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で維持する。単一チャネル記録のため、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたガラス製カバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養した後に使用した。
【０４４９】
プロトコール２
【０４５０】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ補正特性を検出および測定するためのアッセイ
【０４５１】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーション特性をアッセイするための膜電位光学法。
【０４５２】
光学膜電位アッセイは、電位／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）などの蛍光変化を測定するための機器と組み合わせて、GonzalezおよびTsienにより記載されている（Gonzalez,  J.  E.およびR.  Y.  Tsien（１９９５年）「Voltage  sensing  by  fluorescence  resonance  energy  transfer  in  single  cells」、Biophys  J  ６９巻（４号）：１２７２〜８０頁、ならびにGonzalez,  J.  E.およびR.  Y.  Tsien（１９９７年）「Improved  indicators  of  cell  membrane  potential  that  use  fluorescence  resonance  energy  transfer」Chem  Biol  ４巻（４号）：２６９〜７７頁を参照されたい）電位感受性ＦＲＥＴセンサーを利用した（Gonzalez,  J.  E.、K.  Oadesら（１９９９年）「Cell-based  assays  and  instrumentation  for  screening  ion-channel  targets」Drug  Discov  Today  ４巻（９号）：４３１〜４３９頁を参照されたい）。
【０４５３】
これらの電位感受性アッセイは、膜可溶性の電位感受性色素であるＤｉＳＢＡＣ２（３）と、形質膜の外葉に結合して、ＦＲＥＴドナーとして作用する蛍光リン脂質であるＣＣ２−ＤＭＰＥとの間の蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）の変化に基づくものである。膜電位（Ｖｍ）が変化することにより、負に帯電しているＤｉＳＢＡＣ２（３）が、形質膜全体に再配分され、したがって、ＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギー移動の量が変化する。蛍光の発光の変化を、９６または３８４ウェルのマイクロタイタープレートで細胞に基づくスクリーニングを行うために設計されている統合液体処理装置（integrated  liquid  handler）および蛍光検出器である、ＶＩＰＲ（商標）ＩＩを使用してモニタリングした。
補正化合物の同定
【０４５４】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲに関連する輸送欠陥を補正する低分子を特定するために、単一付加ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。細胞は、試験化合物の存在下または非存在下（ネガティブ対照）、３７℃で１６時間、血清不含培地中でインキュベートした。ポジティブ対照として、３８４−ウェルプレートでプレーティングした細胞を、２７℃で１６時間インキュベートして、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを「温度補正した」。続いて、細胞をＫｒｅｂｓリンゲル溶液によりすすぎ（３×）、電位感受性色素をロードした。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化するため、各ウェルに、１０μＭフォルスコリンおよびＣＦＴＲポテンシエーターであるゲニステイン（２０μＭ）をＣｌ−不含培地と共に加えた。Ｃｌ−不含培地を添加すると、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性化に応答するＣｌ−流出が促進され、その結果の膜の脱分極を、ＦＲＥＴをベースとする電位感知色素を使用して光学的にモニタリングした。
ポテンシエーター化合物の同定
【０４５５】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲのポテンシエーターを特定するため、二重付加ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。第１の添加中に、試験化合物を含むまたは含まないＣｌ−不含培地を各ウェルに加えた。２２秒後、２〜１０μＭのフォルスコリンを含有する第２の添加のＣｌ−不含培地を添加して、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化した。両方を添加した後の細胞外Ｃｌ−濃度は、２８ｍＭであり、これによりΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性化に応答するＣｌ−流出が促進され、その結果の膜の脱分極を、ＦＲＥＴをベースとする電位感知色素を使用して光学的にモニタリングした。
溶液
【０４５６】
浴溶液＃１：（ｍＭ）ＮａＣｌ  １６０、ＫＣｌ  ４．５、ＣａＣｌ２  ２、ＭｇＣｌ２  １、ＨＥＰＥＳ  １０、ＮａＯＨによりｐＨ７．４。
【０４５７】
塩化物イオン不含の浴溶液：浴溶液＃１（上記）の塩化物イオン塩をグルコン酸塩により置きかえる。
【０４５８】
ＣＣ２−ＤＭＰＥ：ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの保存溶液として調製し、−２０℃で保管した。
【０４５９】
ＤｉＳＢＡＣ２（３）：ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの保存溶液として調製し、−２０℃で保管した。
細胞培養物
【０４６０】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学測定のために使用する。細胞を、１７５ｃｍ２の培養フラスコ中、５％ＣＯ２および９０％湿度、３７℃で、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎児血清、１Ｘ  ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で維持する。すべての光学的アッセイについて、細胞を、３８４ウェルのマトリゲルコーティングしたプレート中、３０，０００個／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養した後に、ポテンシエーターアッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのため、細胞を、化合物ありまたはなしで２７℃または３７℃で１６〜２４時間培養する。
【０４６１】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーション特性をアッセイするための電気生理学的アッセイ
ウッシングチャンバーアッセイ
【０４６２】
光学的アッセイにおいて特定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強剤または誘発剤をさらに特性評価するために、ウッシングチャンバー実験を、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現する分極上皮細胞で実施した。Ｃｏｓｔａｒ  Ｓｎａｐｗｅｌｌ細胞培養インサートに成長させたＦＲＴΔＦ５０８−ＣＦＴＲ上皮細胞をウッシングチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）にマウントし、電位−クランプシステムを使用して、単層を継続的に短絡回路にした（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｏｗａ、ＩＡ、およびＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。経上皮抵抗を、２ｍＶのパルスを印加することにより測定した。これらの条件下では、ＦＲＴ上皮は、４ＫΩ／ｃｍ２またはそれ超の抵抗を示した。この溶液を２７℃に維持し、空気により通気した。電極のオフセット電位および流体抵抗は、細胞不含インサートを使用して補正した。これらの条件下では、電流は、頂端膜において発現するΔＦ５０８−ＣＦＴＲを通るＣｌ−の流れを反映する。ＩＳＣは、ＭＰ１００Ａ−ＣＥインターフェースおよびＡｃｑＫｎｏｗｌｅｄｇｅソフトウェア（γ３．２．６；ＢＩＯＰＡＣ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｔａ  Ｂａｒｂａｒａ、ＣＡ）を使用してデジタルで取得した。
補正化合物の同定
【０４６３】
典型的なプロトコールは、側底側から頂端膜へのＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を設定するために、側底膜で通常のリンゲル液を使用し、頂端膜のＮａＣｌを等モル濃度のグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨによりｐＨ７．４に滴定）により置きかえて、上皮間に大きなＣｌ−濃度勾配を得た。実験はすべて、無傷単層で行った。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを完全に活性化するため、フォルスコリン（１０μＭ）およびＰＤＥ阻害剤、ＩＢＭＸ（１００μＭ）を施用し、次いで、ＣＦＴＲポテンシエーターであるゲニステイン（５０μＭ）を添加した。
【０４６４】
他の細胞タイプにおいて観察される通り、低温におけるΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＦＲＴ細胞のインキュベーションにより、形質膜中のＣＦＴＲの機能密度が向上する。補正化合物の活性を決定するために、細胞を試験化合物１０μＭと共に、３７℃で２４時間、インキュベートし、続いて、記録前に３Ｘ洗浄した。化合物により処理された細胞におけるｃＡＭＰおよびゲニステイン媒介性ＩＳＣを、２７℃および３７℃の対照に正規化し、活性率として表した。細胞と補正化合物との予備インキュベーションにより、３７℃での対照と比べて、ｃＡＭＰおよびゲニステイン媒介性ＩＳＣがかなり向上した。
ポテンシエーター化合物の同定
【０４６５】
典型的なプロトコールは、側底側から頂端膜へのＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を設定するために、側底膜で通常のリンゲル液を使用し、ナイスタチン（３６０μｇ／ｍｌ）により浸透化した一方、頂端膜のＮａＣｌを等モル濃度のグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨによりｐＨ７．４に滴定）により置きかえて、上皮間に大きなＣｌ−濃度勾配を得た。実験はすべて、ナイスタチンの浸透化の３０分後に行った。フォルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を細胞培養インサートの両側に加えた。推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲポテンシエーターの有効性を既知のポテンシエーターであるゲニステインのそれと比較した。
溶液
【０４６６】
側底側溶液（ｍＭ）：ＮａＣｌ（１３５）、ＣａＣｌ２（１．２）、ＭｇＣｌ２（１．２）、Ｋ２ＨＰＯ４（２．４）、ＫＨＰＯ４（０．６）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（１０）、およびデキストロース（１０）。この溶液をＮａＯＨによりｐＨ７．４に滴定した。
【０４６７】
頂端溶液（ｍＭ）：ＮａＣｌをグルコン酸Ｎａ（１３５）により置きかえた、側底側溶液と同じ。
細胞培養物
【０４６８】
本発明者らの光学的アッセイから同定された推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強剤および誘発剤に関するウッシングチャンバー実験に、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現するフィッシャーラット上皮（ＦＲＴ）細胞（ＦＲＴΔＦ５０８−ＣＦＴＲ）を使用した。Ｃｏｓｔａｒ  Ｓｎａｐｗｅｌｌ細胞培養インサートで細胞を培養し、５％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＣｏｏｎ’ｓ改変Ｈａｍ’ｓＦ−１２培地中、３７℃および５％ＣＯ２で、５日間培養した。化合物のポテンシエーター活性を特性評価するために使用する前に、細胞を２７℃で１６〜４８時間インキュベートし、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲについて補正した。補正化合物の活性を決定するため、細胞を、化合物ありまたはなしで２７℃または３７℃で２４時間、インキュベートした。
ホールセル記録
【０４６９】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現する温度補正および試験化合物補正済みＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的なΔＦ５０８−ＣＦＴＲ電流（ＩΔＦ５０８）を、穿孔パッチホールセル記録を使用してモニタリングした。手短に言うと、ＩΔＦ５０８の電位クランプ記録は、Ａｘｏｐａｔｃｈ  ２００Ｂパッチ−クランプ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用して室温で実施した。記録はすべて、１０ｋＨｚのサンプリング周波数で取得し、１ｋＨｚで短経路フィルターにかけた。ピペットは、細胞内溶液を充填した場合、５〜６ＭΩの抵抗を有した。これらの記録条件下では、室温におけるＣｌ−について算出された逆転電位（ＥＣｌ）は、−２８ｍＶであった。すべての記録は、シール抵抗＞２０ＧΩおよび直流抵抗＜１５ＭΩを有した。パルス発生、データ取得および分析は、Ｃｌａｍｐｅｘ８（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）に接続したＤｉｇｉｄａｔａ１３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを使用して実施した。浴は＜２５０μｌの生理食塩水を含有しており、重力推進性かん流システムを使用して、２ｍｌ／分の速度で連続的にかん流した。
補正化合物の同定
【０４７０】
形質膜における機能性ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの密度を向上させる補正化合物の活性を決定するために、本発明者らは、上記の穿孔パッチ記録技法を使用して、補正化合物による２４時間の処理後の電流密度を測定した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを完全に活性化するために、１０μＭのフォルスコリンおよび２０μＭのゲニステインを細胞に加えた。本発明者らの記録条件下、２７℃において２４時間インキュベートした後の電流密度は、３７℃で２４時間インキュベートした後に観察されるものよりも高かった。これらの結果は、形質膜におけるΔＦ５０８−ＣＦＴＲの密度に及ぼす、低温インキュベーションの公知の効果と一致している。ＣＦＴＲ電流密度に及ぼす補正化合物の効果を決定するため、試験化合物１０μＭと共に３７℃で２４時間、細胞をインキュベートし、電流密度を２７℃および３７℃の対照（％活性）と比較した。記録前に、細胞を細胞外記録用培地により３Ｘ洗浄して、いかなる残留試験化合物も除去した。１０μＭの補正化合物と一緒に予めインキュベートすると、３７℃での対照と比べて、ｃＡＭＰおよびゲニステイン依存性電流がかなり増加した。
ポテンシエーター化合物の同定
【０４７１】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的なΔＦ５０８−ＣＦＴＲ  Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増加させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲポテンシエーターの能力も、穿孔パッチ記録技法を使用して検討した。光学的アッセイから同定されたポテンシエーターは、光学的アッセイにおいて観察されたものと同様の効力および有効性で、ＩΔＦ５０８の用量依存的な増加を引き起こした。試験したすべての細胞において、ポテンシエーターを施用する前およびその間の逆転電位は、およそ−３０ｍＶであった。これは計算されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である。
溶液
【０４７２】
細胞内溶液（ｍＭ）：アスパラギン酸Ｃｓ（９０）、ＣｓＣｌ（５０）、ＭｇＣｌ２（１）、ＨＥＰＥＳ（１０）および２４０μｇ／ｍｌアムホテリシン−Ｂ（ＣｓＯＨによりｐＨを７．３５に調整した）。
【０４７３】
細胞外溶液（ｍＭ）：Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ（１５０）、ＭｇＣｌ２（２）、ＣａＣｌ２（２）、ＨＥＰＥＳ（１０）（ＨＣｌによりｐＨを７．３５に調整した）。
細胞培養物
【０４７４】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞をホールセル記録に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２の培養フラスコ中、５％ＣＯ２および９０％湿度、３７℃で、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎児血清、１Ｘ  ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で維持する。ホールセル記録のため、ポテンシエーターの活性を試験するために使用する前に、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたガラス製カバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養し、そしてコレクターの活性を測定するために、補正化合物ありまたはなしで３７℃でインキュベートした。
単一チャネル記録
【０４７５】
ＮＩＨ３Ｔ３細胞において安定的に発現する温度補正済みΔＦ５０８−ＣＦＴＲの単一チャネル活性、およびポテンシエーター化合物の活性は、切除インサイドアウト膜パッチを使用して観察した。手短に言うと、単一チャネル活性の電位クランプ記録を、Ａｘｏｐａｔｃｈ  ２００Ｂパッチ−クランプ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を用いて、室温で実施した。記録はすべて、１０ｋＨｚのサンプリング周波数で取得し、４００Ｈｚで短経路フィルターにかけた。パッチピペットは、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｋｏｖａｒ  Ｓｅａｌｉｎｇ＃７０５２ガラス（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｒａｓｏｔａ、ＦＬ）から作製し、細胞外溶液を充填した場合、５〜８ＭΩの抵抗を有した。１ｍＭ  Ｍｇ−ＡＴＰおよび７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を添加することにより、切除後にΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化した。チャネル活性の安定化後、重力推進性マイクロかん流システムを使用してパッチをかん流した。流入部をパッチの隣に置き、これにより、１〜２秒以内に溶液が完全に交換された。迅速なかん流中のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性を維持するため、非特異的ホスファターゼ阻害剤Ｆ−（１０ｍＭ  ＮａＦ）をこの浴溶液に加えた。これらの記録条件下では、チャネル活性は、パッチ記録の間中、一定のままであった（最大６０分間）。細胞内溶液から細胞外溶液への陽電荷の移動により発生する電流（陰イオンは、反対方向に動く）は、正電流として示される。ピペットの電位（Ｖｐ）は、８０ｍＶに維持された。
【０４７６】
チャネル活性を、≦２の活性チャネルを含む膜パッチから分析した。同時開口の最大数により、実験経過中の活性チャネルの数が決定された。単一チャネル電流振幅を決定するために、１２０秒間のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルターにかけ、次いで、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ  Ｃｏｍｐ．フランス）を用いて、多重ガウス関数を当てはめた全点振幅ヒストグラムを構築するために使用した。全微視的電流および開口確率（Ｐｏ）を１２０秒間のチャネル活性から決定した。Ｐｏを、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈソフトウェアを使用して、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）（Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャネル電流振幅、およびＮ＝パッチにおける活性チャネルの数）から決定した。
溶液
【０４７７】
細胞外溶液（ｍＭ）：ＮＭＤＧ（１５０）、アスパラギン酸（１５０）、ＣａＣｌ２（５）、ＭｇＣｌ２（２）およびＨＥＰＥＳ（１０）（Ｔｒｉｓ塩基によりｐＨを７．３５に調整した）。
【０４７８】
細胞内溶液（ｍＭ）：ＮＭＤＧ−Ｃｌ（１５０）、ＭｇＣｌ２（２）、ＥＧＴＡ（５）、ＴＥＳ（１０）およびＴｒｉｓ塩基（１４）（ＨＣｌによりｐＨを７．３５に調整した）。
細胞培養物
【０４７９】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切除膜パッチ−クランプ記録に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２の培養フラスコ中、５％ＣＯ２および９０％湿度、３７℃で、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎児血清、１Ｘ  ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で維持する。単一チャネル記録のため、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リジンでコーティングしたガラス製カバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養した後に使用した。
【０４８０】
本発明の化合物１および化合物２は、ＣＦＴＲ活性の増強剤または誘発剤として有用である。以下の表９は、化合物１および化合物２のＥＣ５０および相対有効性を例示している。以下の表９において、以下の意味が適用される。ＥＣ５０：「＋＋＋」は＜１０ｕＭを意味する。「＋＋」は、１０ｕＭ〜２５ｕＭの間を意味する。「＋」は、２５ｕＭ〜６０ｕＭの間を意味する。％有効性：「＋」は＜２５％を意味する。「＋＋」は、２５％〜１００％の間を意味する。「＋＋＋」は＞１００％を意味する。
【表９】
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他の実施形態
【０４８１】
本開示において言及されている刊行物および特許はすべて、個々の刊行物または特許出願の各々が、参照により組み込まれていることが具体的かつ個々に示されているのと同じ程度に、参照により本明細書中に組み込まれている。参照により組み込まれている特許または刊行物のいずれかにおける用語の意味が、本開示に使用されている用語の意味と矛盾する場合、本開示における用語の意味が、支配的となるものとする。さらに、前述の議論は、本発明の例示的な実施形態を単に開示および記載しているに過ぎない。当業者であれば、こうした議論から、ならびに添付の図面および特許請求の範囲から、以下の特許請求の範囲において規定されている本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更、修正および変形をそれらのなかで行うことができることが容易に認識されよう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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