(57)【要約】本発明は、とりわけ、筋ジストロフィーに罹患しているか、または罹患しやすい対象に、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを投与するステップを含む、筋ジストロフィーを処置する方法を提供する。本発明は、一部には、筋ジストロフィーの動物モデルにおいて、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを投与すると、筋ジストロフィーに罹患している患者における特徴的な症状である、線維形成が軽減される、歩行活動が回復する、交感神経と迷走神経のバランスが回復するという、予想外の発見に基づいている。したがって、本発明は、筋ジストロフィーに対する新規かつより有効な治療法を提供する。一部の実施形態において、アンジオテンシン（１−７）ペプチドには、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−ｌｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）の天然に存在するアンジオテンシン（１−７）アミノ酸配列が含まれる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
筋ジストロフィーに罹患しているか、または罹患しやすい対象に、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを投与するステップを含む、筋ジストロフィーを処置する方法。
【請求項２】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状もしくは特徴の強度、重症度、期間もしくは頻度が軽減されるよう、またはその発生が遅延するような投与間隔において、有効用量で定期的に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状または特徴が、筋消耗、筋力低下、筋脆弱化、関節拘縮、骨格変形、心筋症、嚥下障害、筋仮性肥大、腸および膀胱の機能障害、筋虚血、認知障害、行動機能障害、社会性障害、脊柱側弯症、ならびに呼吸機能障害からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドの前記投与により、筋再生、線維形成の軽減、筋力の向上、柔軟性の向上、可動域の増大、持久力の向上、易疲労感の軽減、血流の増加、認知力の改善、肺機能の改善、および／または炎症阻害がもたらされる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記筋ジストロフィーが、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、エメリー−ドレフュス型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、三好型ミオパチー、先天性筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼咽頭筋ジストロフィー、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、多発筋炎、ギラン−バレー症候群、および筋強直性ジストロフィーからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記先天性筋ジストロフィーが、ラミニン−α２−欠損型先天性筋ジストロフィー、ウルリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ウォーカー−ワールブルグ症候群、福山型先天性筋ジストロフィー、ならびに精神遅滞および脳回肥厚症を伴う先天性筋ジストロフィーからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが非経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記非経口投与が、静脈内、皮内、吸入、経皮（局所）、眼内、筋肉内、皮下、筋肉内、および／または経粘膜投与から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、毎月、毎週、毎日、または変動間隔で投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、約１〜１，０００ｕｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、約５０〜５００ｕｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、約４００〜５００ｕｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、１種または複数の抗筋ジストロフィー薬と組み合わせて投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記１種または複数の抗筋ジストロフィー薬が、エテプリルセン（ＡＶＩ−４６５８）、ＨＣＴ１０２６、ＮＣＸ３２０、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、アバナフィル、イオデナフィル、ミロデナフィル、ウデナフィル、ザプリナスト、コルチコステロイド、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）の天然に存在するアンジオテンシン（１−７）アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、配列番号１の機能的等価物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記機能的等価物が、線状ペプチドである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記線状ペプチドが、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）において見られる７個のアミノ酸に由来する少なくとも４個のアミノ酸を含む配列を含んでおり、前記少なくとも４個のアミノ酸が、前記天然に存在するアンジオテンシン（１−７）において見られる相対位置を維持している、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記線状ペプチドが、４〜２５個のアミノ酸を含有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記線状ペプチドが、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）のフラグメントである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記線状ペプチドが、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）において、アミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記線状ペプチドが、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｓｅｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｓ７（配列番号２）のアミノ酸配列を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記機能的等価物が、環状ペプチドである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記環状ペプチドが、アミノ酸の間に結合を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記結合が、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）中のＴｙｒ４位およびＰｒｏ７位に対応する残基に位置している、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記結合が、チオエーテル架橋である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記環状ペプチドが、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）の天然に存在するアンジオテンシン（１−７）アミノ酸配列と、他の点で同一のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記環状ペプチドが、以下の式
【化９】
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を有する４，７環化アンジオテンシン（１−７）である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記アンジオテンシン（１−７）ペプチドが、プロテアーゼ抵抗性、血清安定性、および／または生体利用率を向上させるために、１つまたは複数の化学修飾を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項３１】
前記１つまたは複数の化学修飾が、ペグ化を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
筋ジストロフィーに罹患しているか、または罹患しやすい対象に、アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを投与するステップを含む、筋ジストロフィーを処置する方法。
【請求項３３】
前記アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストが、非ペプチドアゴニストである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記非ペプチドアゴニストが、以下の構造
【化１０】
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を有する化合物または薬学的に許容されるその塩である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストが経口投与される、請求項３２から３４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
２０１３年４月１９日に出願された米国仮特許出願第６１／８１３，９２９号および２０１３年５月１日に出願された米国仮特許出願第６１／８１８，３０７号に基づく優先権の利益を請求し、その開示は、その全体が参照により本明細書によって組み込まれる。
【０００２】
連邦政府によって支援された研究に関する声明
本発明は、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）により授与されたＨＬ１４３８８の下で政府支援によりなされた。政府は、本発明における特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
筋ジストロフィー（ＭＤ）は、筋線維が異常に傷害を受けやすい疾患の一群を指す。デュシェンヌ型筋ジストロフィーの様な一部のサブタイプは、通常、かなり幼年期に現れる一方、眼筋麻痺性筋ジストロフィー（Ｏｐｔｈａｌｍｏｐｌｅｇｉｃ  Ｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）などの別のものは、かなり後年に現れる傾向がある。筋ジストロフィーに対する現在の処置には、コルチコステロイドの投与、歩行移動を補助するためおよび拘縮を予防するための整形外科用装具の使用、ならびに理学療法が含まれる。不運なことに、現在使用されている処置は、該疾患の進行を停止または反転することができないことが分かっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストに基づく、筋ジストロフィーの改善された処置方法を提供する。本発明は、一部には、筋ジストロフィーの動物モデルにおいて、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを投与すると、筋ジストロフィーに罹患している患者における特徴的な症状である、線維形成が軽減される、歩行活動（ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）が回復する、交感神経と迷走神経のバランスが回復するという、予想外の発見に基づいている。したがって、本発明は、筋ジストロフィーに対する新規かつより有効な治療法を提供する。
【０００５】
一態様では、本発明は、筋ジストロフィーに罹患しているか、または罹患しやすい対象に、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを投与するステップを含む、筋ジストロフィーを処置する方法を提供する。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状もしくは特徴の強度、重症度、期間もしくは頻度が軽減されるよう、またはその発生が遅延するような投与間隔において、有効用量で定期的に投与される。一部の実施形態では、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状または特徴は、筋消耗、筋力低下、筋脆弱化、筋仮性肥大、関節拘縮、骨格変形、心筋症、嚥下障害、腸および膀胱の機能障害、筋虚血、認知障害、行動機能障害、社会性障害、脊柱側弯症、ならびに呼吸機能障害からなる群から選択される。
【０００６】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの投与により、筋再生、線維形成の軽減、筋力の向上、柔軟性の向上、可動域の増大、持久力の向上、易疲労感の軽減、血流の増加、認知力の改善、肺機能の改善、および／または炎症阻害がもたらされる。
【０００７】
一部の実施形態では、筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、ベッカー型先天性筋緊張症、エメリー−ドレフュス型筋ジストロフィー、三好型ミオパチー、先天性筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼咽頭筋ジストロフィー、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、多発筋炎、ギラン−バレー症候群、アンダーセン−タウィル症候群（Anderson-Tawil  syndrome）、ベスレムミオパチー、球脊髄性筋萎縮症、カルニチン欠損、カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ欠損、セントラルコア病、中心核ミオパチー、シャルコー−マリー−トゥース病、先天性筋無力症候群、先天性筋強直性ジストロフィー（ウォーカー−ワールブルグ症候群）、コーリ病（脱分枝酵素欠損症）、デジュリーヌ−ソッタス病、皮膚筋炎、遠位筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー（筋強直性ジストロフィー）、内分泌性ミオパチー、エーレンバーグ病（先天性パラミオトニア）、フィンランド型遠位型ミオパチー、フォーブズ病、フリードライヒ運動失調症、福山型先天性筋ジストロフィー、糖原病２型、３型、５型、７型、９型、１０型、１１型、Ｇｏｗｅｒｓ−Ｌａｉｎｇ遠位型ミオパチー、遺伝性封入体筋炎、甲状腺機能亢進性ミオパチー、甲状腺機能低下性ミオパチー、封入体筋炎、遺伝性ミオパチー、インテグリン欠損型先天性筋ジストロフィー、ケネディ病（球脊髄性筋萎縮症）、乳酸デヒドロゲナーゼ欠損症、ランバート−イートン筋無力症候群、肢帯型筋ジストロフィー、マックアードル病、メロシン欠損型先天性筋ジストロフィー、ミトコンドリアミオパチー、運動ニューロン疾患、筋・眼・脳病、重症筋無力症、ミオアデニレートデアミナーゼ欠乏症、筋原線維性ミオパチー、筋型ホスホリラーゼ欠損症、先天性筋緊張症（トムセン病）、筋細管ミオパチー、筋強直性ジストロフィー、ネマリンミオパチー、野中型遠位型ミオパチー、先天性パラミオトニア、ピアソン症候群、周期性四肢麻痺、ホスホフルクトキナーゼ欠損症（垂井病）、ホスホグリセレートキナーゼ欠損症、ホスホグリセレートムターゼ欠損症、ホスホリラーゼ欠損症、ポンペ病（酸マルターゼ欠損症）、進行性外眼筋麻痺、ウェランダー型遠位型ミオパチー、およびＺＡＳＰ関連性ミオパチーからなる群から選択される。一部の実施形態では、先天性筋ジストロフィーは、ラミニン−α２−欠損型先天性筋ジストロフィー、ウルリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ウォーカー−ワールブルグ症候群、福山型先天性筋ジストロフィー、ならびに精神遅滞および脳回肥厚症を伴う先天性筋ジストロフィーからなる群から選択される。一部の実施形態では、筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである。
【０００８】
様々な投与経路の任意のものが、様々な実施形態に従って使用することができる。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、非経口投与される。一部の実施形態では、非経口投与は、静脈内、皮内、吸入、経皮（局所）、眼内、筋肉内、皮下、筋肉内および／または経粘膜投与から選択される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、経口投与される。
【０００９】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、毎週、毎日、または変動間隔で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、約１〜１，０００μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、約５０〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、約４００〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。
【００１０】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、抗筋ジストロフィー薬と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、抗筋ジストロフィー薬は、エテプリルセン（ＡＶＩ−４６５８）、ＨＣＴ１０２６、ＮＣＸ３２０、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、アバナフィル、イオデナフィル（ｉｏｄｅｎａｆｉｌ）、ミロデナフィル、ウデナフィル、ザプリナスト、コルチコステロイド、およびそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１１】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）の天然に存在するアンジオテンシン（１−７）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、配列番号１の機能的等価物である。
【００１２】
一部の実施形態では、機能的等価物は、線状ペプチドである。一部の実施形態では、線状ペプチドは、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）において見られる７個のアミノ酸に由来する少なくとも４個のアミノ酸を含む配列を含んでおり、これらの少なくとも４個のアミノ酸が、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）において見られる、それらの相対位置を維持している。一部の実施形態では、線状ペプチドは、４〜２５個のアミノ酸を含有する。一部の実施形態では、線状ペプチドは、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）のフラグメントである。一部の実施形態では、線状ペプチドは、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）において、アミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含有する。一部の実施形態では、線状ペプチドは、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｓｅｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｓ７（配列番号２）のアミノ酸配列を有する。
【００１３】
一部の実施形態では、機能的等価物は、環状ペプチドである。一部の実施形態では、環状ペプチドは、アミノ酸の間に結合を含む。一部の実施形態では、結合は、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）中のＴｙｒ４位およびＰｒｏ７位に対応する残基に位置している。一部の実施形態では、結合は、チオエーテル架橋である。一部の実施形態では、環状ペプチドは、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）の天然に存在するアンジオテンシン（１−７）アミノ酸配列と、他の点で同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、環状ペプチドは、以下の式
【化１】
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を有する４，７環化アンジオテンシン（１−７）である。
【００１４】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、プロテアーゼ抵抗性、血清安定性、および／または生体利用率を向上させるために、１つまたは複数の化学修飾を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の化学修飾は、ペグ化を含む。
【００１５】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、本発明による筋ジストロフィーを処置するために使用される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、非ペプチドアゴニストである。一部の実施形態では、非ペプチドアゴニストは、以下の構造
【化２】
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を有する化合物または薬学的に許容されるその塩である。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、経口投与される。
【００１６】
本出願において使用する場合、用語「約」および「およそ」は、等価なものとして使用される。約／およそを伴うまたは伴わずに本出願において使用される任意の数字は、当業者によって理解される、任意の正常な変動を包含することが意図される。
【００１７】
本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の詳細説明において明らかとなる。しかし、詳細説明は、本発明の実施形態を示すが、例示目的に過ぎず、限定ではないことを理解すべきである。詳細説明から、本発明の範囲内の様々な変更および修正が当業者に明らかになろう。
【００１８】
定義
本発明が一層容易に理解されるよう、ある種の用語を、以下でまず定義する。以下の用語および他の用語に関する追加の定義が、本明細書全体にわたって記載されている。
【００１９】
アゴニスト：本明細書で使用する場合、用語「アゴニスト」とは、目的のタンパク質の機能に正の影響を及ぼす任意の分子を指す。一部の実施形態では、アゴニストは、直接または間接的に、目的のタンパク質の活性を増強する、強化する、活性化するおよび／または向上させる。特定の実施形態では、アゴニストは、目的のタンパク質と直接相互作用する。こうしたアゴニストは、例えば、タンパク質、化学化合物、低分子、核酸、抗体、薬物、リガンド、または他の薬剤とすることができる。
【００２０】
動物：本明細書で使用する場合、用語「動物」とは、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」とは、任意の発達段階にあるヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」とは、任意の発達段階にある非ヒト動物を指す。ある種の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長動物、および／またはブタ）である。一部の実施形態では、動物は、以下に限定されないが、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生類、魚、昆虫、および／または蠕虫を含む。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作されている動物、および／またはクローンであってもよい。
【００２１】
およそまたは約：本明細書で使用する場合、興味対象の１つまたは複数の値に適用される用語「およそ」または「約」は、明記されている参照値と同様の値を指す。ある種の実施形態では、用語「およそ」または「約」は、他に明記されない、またはそうでない場合、文脈から明白でない限り、明記されている参照値のどちらかの方向（より大きいまたはより小さい）に、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ未満の範囲内におさまる、一連の値を指す（そのような数が、可能な値の１００％を超過する場合を除く）。
【００２２】
生物活性な：本明細書で使用する場合、「生物活性な」という言い回しは、生物系において、特に生物において活性を有する任意の作用剤の特徴を指す。例えば、生物に対して投与された場合に、その生物に対して生物的効果を有する作用剤は、生物活性であると考えられる。特定の実施形態では、ペプチドが生物活性である場合、ペプチドの少なくとも１種の生物活性を分担しているそのペプチドの一部分が、「生物活性な」部分と通常呼ばれる。ある種の実施形態では、ペプチドは、内在性の生物活性を有していないが、１つまたは複数の天然に存在するアンジオテンシン化合物の効果を阻害するペプチドが、生物活性であると考えられる。
【００２３】
担体または賦形剤：本明細書で使用する場合、用語「担体」および「賦形剤」とは、医薬製剤の調製に有用である、薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与に安全かつ無毒性の）担体または希釈用物質を指す。例示的な賦形剤には、滅菌水、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンガー溶液、またはデキストロース溶液が含まれる。
【００２４】
剤形：本明細書で使用する場合、用語「剤形」および「単位剤形」とは、処置される患者用の治療剤の物理的な個別単位を指す。それぞれの単位は、所望の治療効果を生じるように計算された、所定量の活性物質を含有する。しかし、組成物の総投与量は、妥当な医学的判断の範囲内で、主治医によって決定されることが理解されよう。
【００２５】
投与レジメン：「投与レジメン」（または「治療レジメン」）とは、その用語を本明細書で使用する場合、通常、ある期間により分けられる、対象に個々に投与される単位用量一式（通常、２回分以上）のことである。一部の実施形態では、所定の治療剤は、１回または複数の用量を含み得る、推奨される投与レジメンを有する。一部の実施形態では、投与レジメンは、それらの各々が同じ長さの期間によって互いに分けられている、複数の用量を含み、一部の実施形態では、投与レジメンが、複数の用量、および個々の用量を分ける少なくとも２つの異なる期間を含む。一部の実施形態では、治療剤は、所定の期間にわたって継続的に投与される。一部の実施形態では、治療剤は、１日１回（ＱＤ）または１日２回（ＢＩＤ）、投与される。
【００２６】
機能的等価物または誘導体：本明細書で使用する場合、用語「機能的等価物」または「機能的誘導体」とは、元の配列のそれと実質的に類似した生物活性（機能または構造のいずれか）を保持している分子を意味する。機能的誘導体または等価物は、天然の誘導体であってもよく、または合成により調製される。例示的な機能的誘導体には、１個または複数のアミノ酸の置換、欠失、または付加を有するアミノ酸配列が含まれるが、但し、タンパク質の生物活性は保存されている条件とする。置換するアミノ酸は、置換されるアミノ酸のそれと類似の物理化学特性を有するのが望ましい。望ましい類似の物理化学特性には、電荷、かさ高さ、疎水性、親水性などが含まれる。
【００２７】
改善する、向上する、または低減する：本明細書で使用する場合、用語「改善する」、「向上する」、もしくは「低減する」、または文法上の等価語は、本明細書に記載されている処置の開始前の同じ個体における測定値、または本明細書に記載されている処置の非存在下における１つの対照個体（または、複数の対照個体）における測定値などの、ベースライン測定値に対する値を指す。「対照個体」とは、処置されている個体とほぼ同じ年齢である（処置されている個体および対照個体における疾患の段階が、同等であることを確実とするため）、処置されている個体と同じ形態の疾患に罹患している個体である。
【００２８】
インビトロ：本明細書で使用する場合、用語「インビトロ」とは、多細胞生物内ではなく、人工環境において、例えば試験管中または反応容器中、細胞培養中などで行われる事象を指す。
【００２９】
インビボ：本明細書で使用する場合、用語「インビボ」とは、ヒトおよび非ヒト動物などの多細胞生物内で行われる事象を指す。細胞をベースとする系の文脈において、この用語は、生存細胞内で行われる事象を指すために使用されてもよい（例えば、インビトロ系の対語として）。
【００３０】
単離された：本明細書で使用する場合、用語「単離された」とは、（１）最初に産生された際に、関連していた少なくとも一部の構成要素から分離された（自然界における、および／または実験環境におけるかどうかにかかわらず）、ならびに／または（２）人間の手によって生成、調製および／もしくは製造された物質および／または実体を指す。単離された物質および／または実体は、それらが最初に関連していた他の構成要素の、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９８％、約９９％、実質的に１００％、または１００％から分離されてもよい。一部の実施形態では、単離された作用剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％超、実質的に１００％、または１００％純粋である。本明細書で使用する場合、物質は、他の構成要素を実質的に含まない場合、「純粋」である。本明細書で使用する場合、用語「単離された細胞」とは、多細胞生物中に含有されていない細胞を指す。
【００３１】
筋ジストロフィー：本明細書で使用する場合、用語「筋ジストロフィー」または「ＭＤ」とは、筋骨格系を弱化する疾患の一群を指す。一部の実施形態では、筋ジストロフィーは、ＭＤ様状態である。一部の実施形態では、こうした疾患には、筋骨格の進行性消耗症が含まれる。一部の実施形態では、心筋および平滑筋が冒される。
【００３２】
予防する：本明細書で使用する場合、用語「予防する」または「予防」とは、疾患、障害、および／または状態の発生に関連して使用する場合、疾患、障害、および／または状態を発症するリスクを低減することを指す。「リスク」の定義を参照されたい。
【００３３】
ポリペプチド：本明細書で使用する用語「ポリペプチド」とは、ペプチド結合を介して一緒に連結されているアミノ酸の連続鎖を指す。この用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を指すために使用されるが、当業者は、この用語は長鎖に限定されないこと、およびペプチド結合を介して一緒に連結されている２個のアミノ酸を含む最小の鎖を指すことができることを理解するであろう。当業者に公知の通り、ポリペプチドはプロセシングされてもよく、かつ／または修飾されてもよい。
【００３４】
タンパク質：本明細書で使用する用語「タンパク質」とは、個別の単位として機能する１種または複数のポリペプチドを指す。単一のポリペプチドが個別の機能単位となっており、個別の機能単位を形成するために、他のポリペプチドと永続的または一時的な物理的関連性を必要としない場合、用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、互換的に使用することができる。個別の機能単位が、相互に物理的に関連する２種以上のポリペプチドから構成される場合、用語「タンパク質」とは、物理的にカップリングされており、かつ個別の単位として一緒に機能する、複数のポリペプチドを指す。
【００３５】
リスク：文脈から理解される通り、疾患、障害、および／または状態の「リスク」は、特定の個体が疾患、障害、および／または状態（例えば、筋ジストロフィー）を発症する見込みを含む。一部の実施形態では、リスクは、百分率として表現される。一部の実施形態では、リスクは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、最大１００％である。一部の実施形態では、リスクは、参照標本または参照標本の群に関連するリスクに対するリスクとして表現される。一部の実施形態では、参照標本または参照標本の群は、疾患、障害、状態、および／または事象（例えば、筋ジストロフィー）の公知のリスクを有する。一部の実施形態では、参照標本または参照標本の群は、特定の個体と同等の個体に由来する。一部の実施形態では、相対リスクは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ超である。
【００３６】
安定性：本明細書で使用する場合、用語「安定な」とは、治療剤が、長期間にわたり、その治療効力を維持する能力（例えば、所期の生物活性および／または物理化学的完全性のすべて、または大部分）を指す。治療剤の安定性、およびそのような治療剤の安定性を維持する医薬組成物の能力は、長期間（例えば、少なくとも１、３、６、１２、１８、２４、３０、３６か月、またはそれ超）にわたり、評価することができる。ある種の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は、それと一緒に製剤化される１つまたは複数の治療剤を安定化することができるよう、あるいはその分解を遅延させるか防止することができるよう製剤化される。製剤の文脈において、安定な製剤は、その中の治療剤が、保管時および処理（凍結／解凍、機械的混合、および凍結乾燥など）中に、その物理的および／または化学的完全性、ならびに生物活性を本質的に保持するものである。
【００３７】
対象：本明細書で使用する場合、用語「対象」とは、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長動物）を指す。ヒトは、出生前および出生後の形態を含む。多くの実施形態では、対象はヒトである。対象は、患者とすることができ、患者とは、疾患の診断または処置のため、医療提供者を訪問するヒトを指す。用語「対象」は、本明細書では、「個体」または「患者」と互換的に使用される。対象は、疾患または障害に罹患し得るか、または罹患しやすいが、疾患または障害の症状を示してもよく、または示さなくてもよい。
【００３８】
実質的に：本明細書で使用する場合、用語「実質的に」とは、興味対象の特徴または特性の、全体またはほぼ全体の範囲または程度を示す、質的状態を指す。生物学の分野にいる当業者は、生物学的および化学的現象が、あるとしても、完了するおよび／もしくは完全に向かって進む、または絶対的な結果を実現するもしくは回避することはまれであることを理解するであろう。したがって、用語「実質的に」とは、多くの生物学的および化学的現象において、本来備わっている完全性が欠如している可能性をとらえるために、本明細書において使用される。
【００３９】
〜に罹患している：疾患、障害、および／または状態「に罹患している」個体は、疾患、障害、および／または状態と診断されているか、またはそれらの１つもしくは複数の症状を示す。
【００４０】
〜に罹患しやすい：疾患、障害、および／または状態「に罹患しやすい」個体は、疾患、障害、および／または状態と診断されていない。一部の実施形態では、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態の症状を示さないことがある。一部の実施形態では、疾患、障害、状態、または事象（例えば、筋ジストロフィー）に罹患しやすい個体は、１つまたは複数の以下のものが特徴となり得る。（１）疾患、障害、および／または状態の発症に関連する遺伝子の突然変異；（２）疾患、障害、および／または状態の発症に関連する遺伝子多型；（３）疾患、障害、および／または状態に関連するタンパク質の発現および／または活性の向上および／または減少；（４）疾患、障害、状態、および／または事象の発症に関連する習慣および／または生活スタイル、（５）移植を受けた、受ける予定である、または必要としている。一部の実施形態では、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態を発症するであろう。一部の実施形態では、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態を発症しないであろう。
【００４１】
治療有効量：本明細書で使用する場合、治療剤の「治療有効量」という用語は、疾患、障害、および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい対象に投与されると、疾患、障害、および／または状態の症状を処置する、診断する、予防する、および／またはこれらの発生を遅延させるのに十分な量を意味する。治療有効量は、少なくとも１単位用量を含む投与レジメンによって、通常、投与されることは、当業者により理解されよう。
【００４２】
処置すること：本明細書で使用する場合、用語「処置する」、「処置」、または「処置すること」とは、部分的にまたは完全に、特定の疾患、障害および／または状態の１つまたは複数の症状または特徴を軽減する、寛解させる、緩和する、阻害する、予防する、それらの発生を遅延させる、それらの重症度を低減する、および／または発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。処置は、疾患に関連する病変を発症するリスクを減少させるために、疾患の徴候を示さない、および／または疾患の初期徴候しか示さない対象に実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１Ａは、実施した解析の一部を一緒にした、実施例２において使用されている遠隔測定法のいくつかの概略図を示し、図１Ｂは、実施例２において示されている実験設計を示す。
【００４４】
【図２】図２Ａは、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の動脈血圧の平均を図示する棒グラフを示し、図２Ｂは、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の２４時間の心拍数の平均を示す。
【００４５】
【図３】図３は、無線遠隔測定法により測定した、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の２４時間の平均歩行活動を表す棒グラフを示す。
【００４６】
【図４】図４Ａは、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の圧反射感受性を図示する棒グラフを示し、図４Ｂは、アトロピンに対する応答により測定される、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の心臓の迷走神経緊張を示し、図４Ｃは、プロプラノロールに対する応答により測定される、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の心臓の交感神経緊張を示し、図４Ｄは、クロルイソンダミンに対する応答により測定される、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の血管運動の交感神経緊張を示す。
【００４７】
【図５】図５Ａは、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置とＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置との間の、筋組織の線維形成の比較を示すために、マッソントリクローム染色剤を使用した組織病理学データを示し、図５Ｂは、パネルＡにおける結果を定量化した棒グラフを示す。
【００４８】
【図６】図６は、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置およびＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置の組織におけるアンジオテンシン１型受容体（ＡＴ１Ｒ）の受容体発現のレベルを示す、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８染色の結果を示す。
【００４９】
【図７】図７Ａは、Ａｎｇ（１−７）による対照のＣ５７ＢＬ６マウス＋／−処置およびＡｎｇ（１−７）によるＳｇｃｄ−／−マウス＋／−処置における、筋骨格細胞のジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）染色を示し、図７Ｂは、パネルＡに示されているデータを表す棒グラフを示す。
【００５０】
【図８】図８は、生理食塩水、ＴＸＡ１２７（配列番号１）、Ｐａｎｃｙｔｅ（配列番号２２）またはＴＸＡ３０１（配列番号２）のうちの１つによる、６、７および８週間目の処置の間の、回し車について、Ｓｇｃｄ−／−マウスによりなされた、１分間あたりの平均回転数の例示的なグラフを示す。データ＝平均±ＳＥ、および＊＝ｐ＜０．０５対生理食塩水群である。
【００５１】
【図９】図９は、２０日間、生理食塩水、ＴＸＡ１２７（配列番号１）、Ｐａｎｃｙｔｅ（配列番号２２）またはＴＸＡ３０１（配列番号２）のうちの１つにより処置されたＳｇｃｄ−／−マウスによりなされた、回し車について、１分間あたりの平均回転数の例示的なグラフを示す。
【００５２】
【図１０】図１０Ａは、生理食塩水、ＴＸＡ１２７（配列番号１）、Ｐａｎｃｙｔｅ（配列番号２２）またはＴＸＡ３０１（配列番号２）のうちの１つにより処置された３６〜４３週齢の間のＳｇｃｄ−／−マウスから採取した大腿四頭筋の例示的な、ヘマトキシリン−エオシン染色（上の列）およびマッソントリクローム染色（下の列）を示す。図１０Ｂは、マッソントリクロームのデータから算出した線維形成量を示しており（青色の面積として算出される）、棒グラフとして表されている。データ＝平均±ＳＥ、および＊＝ｐ＜０．０５対生理食塩水群である。
【００５３】
【図１１】図１１Ａは、生理食塩水、ＴＸＡ１２７（配列番号１）、Ｐａｎｃｙｔｅ（配列番号２２）またはＴＸＡ３０１（配列番号２）のうちの１つにより処置されたＳｇｃｄ−／−マウスから採取した、ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）染色により示される酸化ストレスを有する大腿四頭筋の例示的な共焦点画像を示す。図１１Ｂは、ＮＩＨ  ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して蛍光強度を定量化して生理食塩水処置されたＳｇｃｄ−／−マウスにおいて測定された平均蛍光強度の百分率に正規化した後の、染色された大腿四頭筋の６つの切片の平均を図示する棒グラフを示す。データ＝平均±ＳＥ、および＊＝ｐ＜０．０５対生理食塩水群である。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
本発明は、とりわけ、アンジオテンシン（１−７）ペプチド、そのアナログもしくは誘導体、またはＡＶＥ０９９１の様なアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの使用に基づく、筋ジストロフィーを処置するための改善された組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状または特徴の強度、重症度、期間もしくは頻度が軽減される、またはその発生が遅延する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアンジオテンシン（１−７）ペプチド、そのアナログもしくは誘導体、またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの投与により、筋再生、線維形成の軽減、筋力の向上、柔軟性の向上、可動域の増大、持久力の向上、易疲労感の軽減、血流の増加、認知力の改善、肺機能の改善、および／または炎症阻害がもたらされる。
【００５５】
本発明の様々な態様は、以下の項目において詳細に記載されている。項目の使用は、本発明を限定することを意図するものではない。それぞれの項目は、本発明の任意の態様に適用することができる。本出願において、「または」の使用は、他に明記されない限り、「および／または」を意味する。
【００５６】
筋ジストロフィー
筋ジストロフィー（ＭＤ）は、筋の変性を引き起こし、運動の弱化および障害に至らしめる、遺伝性障害の一群である。すべての筋ジストロフィーの中心的な特徴は、それらの性質が進行性であるという点である。筋ジストロフィーには、以下に限定されないが、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、ベッカー型先天性筋緊張症、エメリー−ドレフュス型筋ジストロフィー、三好型ミオパチー、先天性筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼咽頭筋ジストロフィー、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、多発筋炎、ギラン−バレー症候群、アンダーセン−タウィル症候群、ベスレムミオパチー、球脊髄性筋萎縮症、カルニチン欠損、カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ欠損、セントラルコア病、中心核ミオパチー、シャルコー−マリー−トゥース病、先天性筋無力症候群、先天性筋強直性ジストロフィー（ウォーカー−ワールブルグ症候群）、コーリ病（脱分枝酵素欠損症）、デジュリーヌ−ソッタス病、皮膚筋炎、遠位筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー（筋強直性ジストロフィー）、内分泌性ミオパチー、エーレンバーグ病（先天性パラミオトニア）、フィンランド型遠位型ミオパチー、フォーブズ病、フリードライヒ運動失調症、福山型先天性筋ジストロフィー、糖原病２型、３型、５型、７型、９型、１０型、１１型、Ｇｏｗｅｒｓ−Ｌａｉｎｇ遠位型ミオパチー、遺伝性封入体筋炎、甲状腺機能亢進性ミオパチー、甲状腺機能低下性ミオパチー、封入体筋炎、遺伝性ミオパチー、インテグリン欠損型先天性筋ジストロフィー、ケネディ病（球脊髄性筋萎縮症）、乳酸デヒドロゲナーゼ欠損症、ランバート−イートン筋無力症候群、マックアードル病、メロシン欠損型先天性筋ジストロフィー、ミトコンドリアミオパチー、運動ニューロン疾患、筋・眼・脳病、重症筋無力症、ミオアデニレートデアミナーゼ欠乏症、筋原線維性ミオパチー、筋型ホスホリラーゼ欠損症、先天性筋緊張症（トムセン病）、筋細管ミオパチー、筋強直性ジストロフィー、ネマリンミオパチー、野中型遠位型ミオパチー、先天性パラミオトニア、ピアソン症候群、周期性四肢麻痺、ホスホフルクトキナーゼ欠損症（垂井病）、ホスホグリセレートキナーゼ欠損症、ホスホグリセレートムターゼ欠損症、ホスホリラーゼ欠損症、ポンペ病（酸マルターゼ欠損症）、進行性外眼筋麻痺、ウェランダー型遠位型ミオパチー、およびＺＡＳＰ関連性ミオパチーが含まれる。一部の実施形態では、先天性筋ジストロフィーは、ラミニン−α２−欠損型先天性筋ジストロフィー、ウルリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ウォーカー−ワールブルグ症候群、福山型先天性筋ジストロフィー、ならびに精神遅滞および脳回肥厚症を伴う先天性筋ジストロフィーからなる群から選択される。一部の実施形態では、筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである。
【００５７】
筋ジストロフィーの症状は、一部またはすべての筋が冒される、筋ジストロフィーのタイプにより、様々であり得る。筋ジストロフィーの例示的な症状には、筋運動技能の発達遅延、１つもしくは複数の筋群の使用困難、筋消耗、筋力低下、筋脆弱化、筋仮性肥大、関節拘縮、骨格変形、心筋症、筋虚血、脊柱側弯症、嚥下、発声もしくは摂食困難、腸および膀胱の機能障害、流涎、まぶたの垂れ下がり、頻繁な転倒、成人としての筋力もしくは筋群力の喪失、筋サイズの喪失、身体の弱化もしくは生体力学の変化による歩行上の問題、呼吸機能障害、ならびに／または認知障害もしくは行動機能障害／精神遅延が含まれる。
【００５８】
筋ジストロフィーに関する公知の治癒法は存在しないが、対症療法および疾患修飾療法の両方を含む、いくつかの支援的処置が使用される。コルチコステロイド、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、理学療法、装着装具、車椅子、またはＡＤＬおよび肺機能のための他の補助的医療用装具が、筋ジストロフィーにおいて一般に使用される。筋強直性ジストロフィーにおける、心不整脈による突然死を予防するため、心ペースメーカーが使用される。筋緊張症の症状（弛緩不能）を改善する抗筋緊張剤には、メキシリチンが含まれ、一部の場合、フェニトイン、プロカインアミドおよびキニンが含まれる。
【００５９】
デュシェンヌ型筋ジストロフィー
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、筋変性および最終的に死をもたらす、筋ジストロフィーの劣性Ｘ連鎖形態である。ＤＭＤは、近位筋の弱化、異常歩行、腓腹（腓）筋の肥大、およびクレアチンキナーゼの増加により特徴付けられる。ＤＭＤ患者の多くは、５歳付近で診断を受け、この頃に、症状／徴候が、通常、一層明白になる。罹患個体は、およそ１０〜１３歳で歩行が止み、心肺機能障害により２０代中盤から後半、またはそれら以前に死亡する。
【００６０】
障害ＤＭＤは、ヒトＸ染色体上に位置している、ジストロフィン遺伝子における変異により引き起こされ、この遺伝子は、細胞膜のジストログリカン複合体（ＤＧＣ）に構造的安定性をもたらす、筋組織内部の重要な構造的構成要素である、タンパク質ジストロフィンをコードする。ジストロフィンは、内部細胞質性のアクチンフィラメントネットワークと細胞外マトリックスとを連結し、筋線維に物理的強度をもたらしている。したがって、ジストロフィンの改変または不在により、筋線維しょう膜の異常な裂けおよび筋線維の壊死がもたらされる。どちらの性別でもこの変異を保持し得るが、女性がこの疾患の重症な徴候を示すことはめったにない。
【００６１】
ＤＭＤの主な症状は、通常、最初に随意筋が冒されることに伴う筋消耗に伴う筋力低下であり、とりわけ、臀部、骨盤領域、大腿部、肩、および腓筋が冒される。筋力低下はまた、腕、頚および他の領域にも起こる。腓が肥大することが多い。徴候および症状は、通常、６歳前に現れ、早ければ幼児期に現れることがある。他の身体症状には、以下に限定されないが、独立歩行能力の遅延、歩行、足踏みまたは走ることの進行性困難、および歩行能力の最終的な喪失（通常、１２歳まで）、頻繁な転倒、疲労、運動技能の困難（走ること、跳びはね、跳躍）、股関節屈筋の短小化に至る腰椎前弯の増大、アキレス腱の拘縮および膝屈曲筋の機能性障害（筋線維の短小化および線維形成が結合組織に起こるため）、筋線維変形、脂肪および結合組織による筋組織の置き換えにより引き起こされる舌および腓筋の仮性肥大（増大）、神経行動学的障害（例えば、ＡＤＨＤ）のより高いリスク、学習障害（ディスレクシア）、ならびに特定の認知技能の非進行性弱化（特に、短期言語記憶）、骨格変形（一部の場合、脊柱側弯症を含む）が含まれる。
【００６２】
ベッカー型筋ジストロフィー
ベッカー型筋ジストロフィーは、脚および骨盤の筋の進行性弱化により特徴付けられる、Ｘ連鎖劣性遺伝疾患である。ＤＭＤと同様に、ベッカー型筋ジストロフィーは、ジストロフィン遺伝子における変異により引き起こされるが、ＤＭＤとは異なり、ベッカー型筋ジストロフィーに罹患している対象は、一般に、機能的ジストロフィンを実質的に産生することができない、ＤＭＤの罹患者よりも、高いレベルの機能的ジストロフィンを産生する。その結果、ベッカー型筋ジストロフィーは、通常、ＤＭＤほど重症なものとして考えられていない。
【００６３】
ベッカー型筋ジストロフィーの症状には、特に下肢における進行性筋力低下、つま先歩き、頻繁な転倒、呼吸困難、脊柱側弯症などの骨格変形、疲労、およびクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）の増加が含まれる。重症度および様々な症状は、ＤＭＤにおける場合よりもかなり大きな程度で、個体毎に変わる。
【００６４】
肢帯型筋ジストロフィー
肢帯型筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型筋ジストロフィーとベッカー型筋ジストロフィーの両方に一部の類似性を有するが、臀部および肩の筋（すなわち、「肢帯」筋）に最も大きな影響を及ぼす、異なった病変を示す。肢帯型筋ジストロフィーの根本にある正確なメカニズムは不明であるが、α、β、γおよびδサルコグリカンを含めた、いくつかのサルコグリカンが、この疾患の発症および進行に重要な役割を果たしていると考えられていると思われる。
【００６５】
肢帯型筋ジストロフィーの発症の経過を考慮に入れると、これは、致死性にはなり得ないことが多い（ＬＧＭＤ２Ｃとして公知の肢帯型筋ジストロフィーの最も重症な形態におけるものと同様に、心筋および呼吸筋の不全が起こる恐れはあるが）。しかし、対象は、この疾患の診断を受けて２０年以内には、車椅子までに留まっているのが通常である。肢帯型筋ジストロフィーの一部の症状は、他のタイプの筋ジストロフィーと重なるが、肢帯型ＭＤの罹患者に特に共通する症状には、歩行困難、前屈み困難、および歩行中または階段登り中の転倒が含まれる。
【００６６】
アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニスト
本発明は、とりわけ、筋ジストロフィーに罹患しているか、または罹患しやすい対象に、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを投与するステップを含む、筋ジストロフィーを処置する方法を提供する。
【００６７】
アンジオテンシン（１−７）ペプチド
本明細書で使用する場合、用語「アンジオテンシン（１−７）ペプチド」とは、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）と、天然に存在するアンジオテンシン（１−７）の任意の機能的等価物、アナログ、または誘導体の両方を指す。本明細書で使用する場合、「ペプチド」および「ポリペプチド」とは、互換的な用語であり、ペプチド結合によって一緒に結合している２個またはそれ超のアミノ酸を指す。本明細書で使用する場合、用語「ペプチド」および「ポリペプチド」には、線状ペプチドと環状ペプチドの両方が含まれる。用語「アンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ）−（１−７）」、「アンジオテンシン（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ）−（１−７）」、「Ａｎｇ−（１−７）」および「ＴＸＡ−１２７」は、互換的に使用される。
【００６８】
天然に存在するアンジオテンシン（１−７）
天然に存在するアンジオテンシン（１−７）（Ａｎｇ−（１−７）とも呼ばれる）は、以下に示される７個のアミノ酸ペプチドである。
【００６９】
Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）
【００７０】
それは、レニン−アンジオテンシン系の一部であり、アンジオテンシノーゲンとしても公知である前駆体から変換されるものであり、アンジオテンシノーゲンは、主に肝臓によって構成的に産生され、血液循環の中に放出されるα−２−グロブリンである。アンジオテンシノーゲンは、セルピンファミリーのメンバーであり、レニン基質としても公知である。ヒトアンジオテンシノーゲンは、４５２個のアミノ酸長であるが、他の種は、様々なサイズのアンジオテンシノーゲンを有する。通常、最初の１２個のアミノ酸は、アンジオテンシン活性にとって最も重要である。
【００７１】
Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７−Ｐｈｅ８−Ｈｉｓ９−Ｌｅｕ１０−Ｖａｌ１１−Ｉｌｅ１２（配列番号３）。
【００７２】
異なるタイプのアンジオテンシンは、様々な酵素の作用によって形成され得る。例えば、アンジオテンシン（１−７）は、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）の作用によって産生される。
【００７３】
Ａｎｇ−（１−７）は、Ｍａｓ受容体に対する内因性リガンドである。Ｍａｓ受容体は、７つの膜貫通領域を含有するＧ−タンパク質共役型受容体である。本明細書で使用する場合、用語「アンジオテンシン−（１−７）受容体」は、Ｇタンパク質共役型Ｍａｓ受容体を包含する。
【００７４】
本明細書で使用する場合、用語「天然に存在するアンジオテンシン（１−７）」には、天然源から精製された任意のアンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび天然に存在するアンジオテンシン（１−７）と同一のアミノ酸配列を有する、任意の組換え産生されたかまたは化学的に合成されたペプチドが含まれる。
【００７５】
Ａｎｇ−（１−７）の機能的等価物、アナログ、または誘導体
一部の実施形態では、本発明に適したアンジオテンシン（１−７）ペプチドは、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）の機能的等価物である。本明細書で使用する場合、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）の機能的等価物は、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）に対してアミノ酸配列の同一性を共有し、かつ天然に存在するＡｎｇ−（１−７）と同じまたは類似する活性を実質的に保持する任意のペプチドを指す。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載されている天然に存在するＡｎｇ−（１−７）の機能的等価物は、本明細書に記載されているか、もしくは当分野において公知の方法を使用して決定される血管新生促進活性、または一酸化窒素放出、血管拡張、内皮機能の改善、抗利尿、もしくは血管新生に正の影響を及ぼす、本明細書において議論されている他の特性の１つなどの活性を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載されている天然に存在するＡｎｇ−（１−７）の機能的等価物は、本明細書に記載されているかまたは当分野において公知の様々なアッセイを使用して決定される、アンジオテンシン−（１−７）受容体（例えば、Ｇタンパク質共役型Ｍａｓ受容体）に結合するか、またはそれを活性化することができる。一部の実施形態では、Ａｎｇ−（１−７）の機能的等価物は、アンジオテンシン（１−７）アナログ、または誘導体、または機能的誘導体とも呼ばれる。
【００７６】
通常、アンジオテンシン（１−７）の機能的等価物は、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）に対してアミノ酸配列の類似性を共有する。一部の実施形態では、本発明によるＡｎｇ−（１−７）の機能的等価物は、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）に見られる７個のアミノ酸に由来するアミノ酸を、少なくとも３個（例えば、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個）含む配列を含有しており、この場合、少なくとも３個（例えば、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、または少なくとも７個）のアミノ酸が、それらが天然に存在するＡｎｇ−（１−７）に見られる、それらの相対的な位置および／または間隔を維持している。
【００７７】
一部の実施形態では、Ａｎｇ−（１−７）の機能的等価物は、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）のアミノ酸配列と少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、または９０％）が同一な配列を含有する、任意のペプチドも包含する。アミノ酸配列同一性の百分率は、アミノ酸配列のアライメントによって決定することができる。アミノ酸配列のアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当分野の技術の範囲内にある様々な方法で実現することができる。当業者は、比較される完全長の配列に対して最大限のアライメントを実現するために必要とする任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。好ましくは、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２ソフトウェアは、アミノ酸配列の同一性を決定するために使用される（Altschulら、Methods  in  Enzymology、２６６巻、４６０〜４８０頁（１９９６年）；http://blast.wustl/edu/blast/README.html）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２では、いくつかの検索パラメータが使用され、これらのパラメータの大部分は、デフォルト値に設定されている。調整可能なパラメータは、以下の値により設定される：オーバーラップスパン（ｏｖｅｒｌａｐ  ｓｐａｎ）＝１、オーバーラップフラクション（ｏｖｅｒｌａｐ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）＝０．１２５、ワード閾値（ｗｏｒｄ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）（Ｔ）＝１１。ＨＳＰスコア（Ｓ）およびＨＳＰ  Ｓ２パラメータは、動的な値であり、特定の配列の組成に応じて、プログラム自体によって確立されるが、最小値は、上記に示されている通り、調整して設定することができる。
【００７８】
一部の実施形態では、Ａｎｇ−（１−７）の機能的等価物、アナログ、または誘導体は、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）のフラグメントである。一部の実施形態では、Ａｎｇ−（１−７）の機能的等価物、アナログ、または誘導体は、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）において、アミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含有する。Ａｎｇ−（１−７）機能的等価物、アナログ、または誘導体は、置換、付加、および／または欠失によりアミノ酸配列を改変することによって作製することができる。例えば、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）（配列番号１）の配列内の１個または複数のアミノ酸残基は、類似した極性の別のアミノ酸によって置換することができ、これは機能的等価物として作用し、サイレント改変をもたらす。配列内のアミノ酸に対する置換は、アミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択されてもよい。例えば、正に荷電している（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リシン、およびヒスチジンが含まれる。非極性（疎水性）アミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、バリン、プロリン、トリプトファン、およびメチオニンが含まれる。非荷電極性アミノ酸には、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンが含まれる。負に荷電している（酸性）アミノ酸には、グルタミン酸およびアスパラギン酸が含まれる。アミノ酸のグリシンは、非極性アミノ酸ファミリーまたは非荷電（中性）極性アミノ酸ファミリーのいずれかに含まれていてもよい。アミノ酸のファミリー内で行われる置換は、保存的置換であることが一般に理解される。例えば、ペプチド阻害剤のアミノ酸配列は、修飾または置換することができる。
【００７９】
Ａｎｇ−（１−７）機能的等価物、アナログ、および誘導体の例は、以下の「例示的なアンジオテンシン（１−７）ペプチド」と題する項目に記載されている。
【００８０】
アンジオテンシン−（１−７）ペプチドは、任意の長さとすることができる。一部の実施形態では、本発明によるアンジオテンシン−（１−７）ペプチドは、例えば、５〜２０個、５〜１５個または５〜１０個のアミノ酸残基などの、５〜２５個のアミノ酸残基を含有することができる。一部の実施形態では、本発明によるＡｎｇ−（１−７）ペプチドは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個の残基を含有する。
【００８１】
一部の実施形態では、アンジオテンシン−（１−７）ペプチドは、プロテアーゼ抵抗性、血清安定性、および／または生体利用率を向上させるために、１つまたは複数の修飾を含有する。一部の実施形態では、適切な修飾は、ペグ化、アセチル化、グリコシル化、ビオチン化、Ｄ−アミノ酸および／もしくは非天然アミノ酸による置換、ならびに／またはペプチドの環化から選択される。
【００８２】
本明細書で使用する場合、用語「アミノ酸」とは、その最も広範な意味において、ポリペプチド鎖の中に組み込むことができる任意の化合物および／または物質を指す。ある種の実施形態では、アミノ酸は、一般的な構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。ある種の実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。ある種の実施形態では、アミノ酸は、合成または非天然アミノ酸（例えばα，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸）であり、一部の実施形態では、アミノ酸はＤ−アミノ酸であり、ある種の実施形態では、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。「標準アミノ酸」とは、天然のペプチド中に両方が組み込まれているＬ−アミノ酸とＤ−アミノ酸の両方を含めて、天然に存在するペプチドにおいて一般に見出される２０個の標準アミノ酸のいずれかを指す。「非標準」または「非慣用アミノ酸」とは、それが合成して調製されるか、または天然源から得られるかどうかにかかわらず、標準アミノ酸以外の、任意のアミノ酸を指す。本明細書で使用する場合、「合成または非天然アミノ酸」は、以下に限定されないが、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）、および／または置換体を含む、化学的に修飾されているアミノ酸を包含する。ペプチド中にカルボキシおよび／またはアミノ末端アミノ酸を含むアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、および／またはその活性に悪影響を及ぼすことなく、ペプチドの循環半減期を変化させることができる他の化学基による置換によって修飾することができる。非慣用または非天然アミノ酸の例には、以下に限定されないが、シトルリン、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、４−（Ｅ）−ブテニル−４（Ｒ）−メチル−Ｎ−メチルトレオニン（ＭｅＢｍｔ）、Ｎ−メチル−ロイシン（ＭｅＬｅｕ）、アミノイソ酪酸、スタチン、およびＮ−メチル−アラニン（ＭｅＡｌａ）が含まれる。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与していてもよい。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と互換的に使用され、遊離アミノ酸および／またはペプチドのアミノ酸残基を指すことができる。それが遊離アミノ酸またはペプチドの残基を指すかどうかは、用語が使用されている文脈から明らかとなろう。
【００８３】
ある種の実施形態では、アンジオテンシン−（１−７）ペプチドは、１個または複数のＬ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、および／または非天然アミノ酸を含有する。
【００８４】
天然に存在するアミノ酸のみを含有するペプチドに加えて、ペプチド模倣薬またはペプチドアナログもまた、本発明によって包含される。ペプチドアナログは、鋳型ペプチドのそれと類似する特性を有する非ペプチド薬物として製薬産業において一般に使用されている。非ペプチド化合物は、「ペプチドミメティック」またはペプチド模倣薬と称される（Fauchereら、Infect.  Immun.５４巻：２８３〜２８７頁（１９８６年）；Evansら、J.  Med.  Chem.３０巻：１２２９〜１２３９頁（１９８７年））。治療上有用なペプチドと構造的に関連するペプチドミメティックは、等価なまたは増強された治療的または予防的効果をもたらすように使用することができる。一般に、ペプチド模倣薬は、天然に存在する受容体結合ポリペプチドなどのパラダイムポリペプチド（ｐａｒａｄｉｇｍ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）（すなわち、生物活性または薬理学的活性を有するポリペプチド）に構造的に類似しているが、当分野において周知の方法による−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＨ２ＳＯ−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、−ＣＯＣＨ２−などの結合によって、場合により置き換えられている１個または複数のペプチド結合を有する（Spatola、Peptide  Backbone  Modifications、Vega  Data、１巻（３号）：２６７頁（１９８３年）；Spatolaら、Life  Sci.３８巻：１２４３〜１２４９頁（１９８６年）；Hudsonら、Int.  J.  Pept.  Res.１４巻：１７７〜１８５頁（１９７９年）；およびWeinstein.  B.、１９８３年、Chemistry  and  Biochemistry,  of  Amino  Acids,  Peptides  and  Proteins、Weinstein編、Marcel  Dekker、New-York）。そのようなペプチドミメティックは、より経済的な産生、より高い化学安定性、増強されている薬理学的特性（例えば、半減期、吸収、効力、効率など）、低下した抗原性などを含む、天然に存在するポリペプチドにまさる、有意な利点を有することがある。
【００８５】
Ａｎｇ−（１−７）ペプチドはまた、ペプチドの正常な一部ではない、追加の化学部位を含有する、他のタイプのペプチド誘導体も含むが、但し、その誘導体は、ペプチドの所望の機能的な活性を保持していることを条件とする。そのような誘導体の例には、（１）アシル基が、アルカノイル基（例えば、アセチル、ヘキサノイル、オクタノイル）、アロイル基（例えば、ベンゾイル）、またはＦ−ｍｏｃ（フルオレニルメチル−Ｏ−ＣＯ−）などのブロック基とすることができる、アミノ末端または別の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体、（２）カルボキシ末端または別の遊離カルボキシ基もしくは遊離ヒドロキシル基のエステル、（３）アンモニアまたは適切なアミンとの反応によって生成するカルボキシ末端または別の遊離カルボキシル基のアミド、（４）リン酸化誘導体、（５）抗体または他の生物的リガンドにコンジュゲートされている誘導体および他のタイプの誘導体、ならびに（６）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖にコンジュゲートされている誘導体が含まれる。
【００８６】
Ａｎｇ−（１−７）ペプチドは、合成技法（例えば、完全固相合成法（ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ  ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、部分的固相合成法、フラグメント縮合、古典的な溶液合成、ネイティブケミカルライゲーション）および組換え技法を含む、当業者に公知のペプチド合成のいかなる方法によっても得ることができる。例えば、ペプチドまたはペプチド誘導体は、固相ペプチド合成によって得ることができ、これは、手短に言えば、Ｃ−末端アミノ酸のカルボキシル基を樹脂（例えば、ベンズヒドリルアミン樹脂、クロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル樹脂）にカップリングし、連続的にＮ−α保護アミノ酸を添加することからなる。保護基は、当分野において公知のいかなるそのような基とすることができる。新たなアミノ酸の各々が成長中の鎖に添加される前に、該鎖に添加された前のアミノ酸の保護基が除去される。そのような固相合成法は、例えば、Merrifield、J.  Am.  Chem.  Soc.８５巻：２１４９頁（１９６４年）；Valeら、Science２１３巻：１３９４〜１３９７頁（１９８１年）により、米国特許第４，３０５，８７２号および米国特許第４，３１６，８９１号、Bodonskyら、Chem.  Ind.（London）、３８巻：１５９７頁（１９６６年）；ならびにPiettaおよびMarshall、Chem.  Comm.６５０頁（１９７０年）において、Lubellらの「Peptides」Science  of  Synthesis  21.11、Chemistry  of  Amides.  Thieme、Stuttgart、７１３〜８０９頁（２００５年）において概説されている技法により開示されている。適切な樹脂へのアミノ酸のカップリングは、当分野において周知でもあり、米国特許第４，２４４，９４６号において開示されている（Houver-Weyl、Methods  of  Organic  Chemistry.、E22a巻、Synthesis  of  Peptides  and  Peptidomimetics、編集主任Murray  Goodman、Thieme、Stuttgart.  New  York  ２００２年において概説されている）。
【００８７】
他に定義されていない限り、本明細書で使用されている科学用語および技術用語および命名は、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。一般に、細胞培養、感染、分子生物学的方法などの手順が、当分野において使用される一般的な方法である。そのような標準的技法は、例えば、Ausubelら、Current  Protocols  in  Molecular  Biology、Wiley  Interscience、New  York、２００１年；およびSambrookら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual、第３版、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、N.Y.、２００１年などの参照手引書において見出すことができる。
【００８８】
Ａｎｇ−（１−７）ペプチドの調製の任意の過程の間に、関係するいずれかの分子上の感受性反応基を保護することが望ましいことがある。これは、T.W.  Greene  &  P.G.M.  WutsによるProtective  Groups  In  Organic  Synthesis、１９９１年、John  Wiley  and  Sons、New-York、ならびにSewaldおよびJakubkeによる、Peptides:  chemistry  and  Biology、２００２年、Wiley-VCH、Wheinheim、１４２頁において記載されているものなどの、従来の保護基によって実現することができる。例えば、αアミノ保護基には、アシル型保護基（例えば、トリフルオロアセチル、ホルミル、アセチル）、脂肪族ウレタン保護基（例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、シクロヘキシルオキシカルボニル）、芳香族ウレタン型保護基（例えば、フルオレニル−９−メトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、Ｃｂｚ誘導体）、およびアルキル型保護基（例えば、トリフェニルメチル、ベンジル）が含まれる。アミノ酸側鎖の保護基には、ベンジル（ＴｈｒおよびＳｅｒ用）、Ｃｂｚ（Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）、メチルエチル、シクロヘキシル（Ａｓｐ、Ｈｉｓ）、Ｂｏｃ（Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｃｙｓ）などが含まれる。保護基は、当分野において公知の方法を使用して、後続の好都合な段階で除去することができる。
【００８９】
さらに、Ａｎｇ−（１−７）ペプチドは、保護基を含む有機相において、ＦＭＯＣプロトコルに従って合成することができる。望ましくは、このペプチドは、Ｃ１８クロマトグラフィーカラム上で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により収率７０％で精製され、１０〜６０％のアセトニトリルグラジエントにより溶出される。ペプチドの分子量は、質量分析法によって確認することができる（Fields,  G.B.「Solid-Phase  Peptide  Synthesis」、Methods  in  Enzymology、２８９巻、Academic  Press、１９９７年において概説されている）。
【００９０】
あるいは、Ａｎｇ−（１−７）ペプチドは、例えば、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を使用して、組換え系において調製することができる。ポリペプチドは、同じポリペプチド内に、上記修飾を２箇所以上、含有してもよいことが理解される。
【００９１】
ペプチドは、インビトロにおいて生物活性を誘発するのに有効なことがあるが、インビボにおけるそれらの有効性は、プロテアーゼの存在によって低下し得る。血清プロテアーゼは、特異的な基質要件を有する。この基質は、Ｌ−アミノ酸と開裂に対するペプチド結合の両方を有していなければならない。さらに、エキソペプチダーゼは、血清におけるプロテアーゼ活性の最も顕著な構成要素に相当し、通常、ペプチドの第１のペプチド結合に作用し、遊離Ｎ−末端を必要とする（Powellら、Pharm.  Res.１０巻：１２６８〜１２７３頁（１９９３年））。この点を考慮すると、ペプチドの修飾版を使用するのが有利であることが多い。修飾ペプチドは、Ａｎｇ−（１−７）の所望の生物活性を与える、元のＬ−アミノ酸ペプチドの構造的な特徴を保持するが、有利には、プロテアーゼおよび／またはエキソペプチダーゼによる開裂に対して容易に影響を受けない。
【００９２】
同じタイプのＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リシンの代わりにＤ−リシン）を含むコンセンサス配列の１個または複数のアミノ酸の体系的な置換を使用して、より安定なペプチドを生成することができる。したがって、本発明のペプチド誘導体またはペプチド模倣薬は、順方向または逆方向の順序のどちらかで、すべてＬのペプチド、すべてＤのペプチド、またはＤ、Ｌのペプチドの混合とすることができる。ペプチダーゼがＤ−アミノ酸を基質として利用することができないので、Ｎ−末端またはＣ−末端のＤ−アミノ酸の存在により、ペプチドのインビボ安定性が向上する（Powellら、Pharm.  Res.１０巻：１２６８〜１２７３頁（１９９３年））。逆方向のＤペプチドは、Ｌ−アミノ酸を含有するペプチドに対して、逆方向の配列で配置されているＤ−アミノ酸を含有するペプチドである。したがって、Ｌ−アミノ酸ペプチドのＣ−末端残基は、Ｄ−アミノ酸ペプチドにとってＮ−末端などになる。逆方向のＤ−ペプチドは、Ｌ−アミノ酸ペプチドと同じ二次的な立体配座を、したがって、同様の活性を保持するが、インビトロおよびインビボにおける酵素的分解に対してより抵抗性があり、したがって、元のペプチドよりも大きな治療効力を有することができる（BradyおよびDodson、Nature、３６８巻：６９２〜６９３頁（１９９４年）；Jamesonら、Nature、３６８巻：７４４〜７４６頁（１９９４年））。同様に、逆方向のＬペプチドは、標準的な方法を使用して生成することができ、この場合、親ペプチドのＣ−末端は、逆方向のＬペプチドのＮ−末端の場所をとるようになる。重要な二次構造を有していない（例えば、短鎖ペプチド）、Ｌ−アミノ酸ペプチドの逆方向のＬ−ペプチドは、Ｌ−アミノ酸ペプチドの側鎖と同じ間隔および立体配座を保持しており、それ故に、多くの場合、元のＬ−アミノ酸ペプチドと同様の活性を有することが考えられる。さらに、逆方向のペプチドは、Ｌ−およびＤ−アミノ酸の組合せを含有してもよい。アミノ酸の間の間隔および側鎖の立体配座は保持され、これにより、元のＬ−アミノ酸ペプチドと同様の活性をもたらし得る。
【００９３】
ペプチドのＮ−末端またはＣ−末端残基に作用するペプチダーゼに対する抵抗性を与える別の有効な手法は、ペプチド末端に化学基を追加することであり、その結果、この修飾ペプチドは、もはやペプチダーゼに対する基質ではない。そのような化学修飾の１つは、一方または両方の末端におけるペプチドのグリコシル化である。ある種の化学修飾、特に、Ｎ−末端グリコシル化は、ヒト血清におけるペプチドの安定性を向上することが示されている（Powellら、Pharm.  Res.１０巻：１２６８〜１２７３頁（１９９３年））。血清安定性を強化する他の化学修飾には、以下に限定されないが、アセチル基などの１〜２０個の炭素の低級アルキルからなるＮ−末端アルキル基の追加、および／またはＣ−末端アミド基もしくは置換アミド基の追加が含まれる。特に、本発明は、Ｎ−末端アセチル基および／またはＣ−末端アミド基を有するペプチドからなる修飾ペプチドを含む。
【００９４】
ペプチドの部分配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）における天然アミノ酸を天然に存在しないアミノ酸に置換すると、やはりタンパク質分解に対する抵抗性が付与され得る。そのような置換は、例えば、生物活性に影響を及ぼすことなく、Ｎ−末端に作用するエキソペプチダーゼによるタンパク質分解に対する抵抗性を付与することができる。天然に存在しないアミノ酸の例には、α，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、Ｃ−α−メチルアミノ酸、β−アミノ酸、およびβ−メチルアミノ酸が含まれる。本発明において有用なアミノ酸アナログは、以下に限定されないが、β−アラニン、ノルバリン、ノルロイシン、４−アミノ酪酸、オルニチン（orithine）、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、シクロヘキシルアラニン、２−アミノイソ酪酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、および他の非慣用アミノ酸を含むことができる。さらに、天然に存在しないアミノ酸を有するペプチドの合成は、当分野において決まった手順である。
【００９５】
さらに、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列の変異を含む、拘束性ペプチドは、当分野で周知の方法によって生成することができる（RizoおよびGierasch、Ann.  Rev.  Biochem.６１巻：３８７〜４１８頁（１９９２年））。例えば、拘束性ペプチドは、ジスルフィド架橋を形成することができるシステイン残基を追加することによって生成され、それによって、環状ペプチドをもたらすことができる。環状ペプチドは、遊離Ｎ−末端またはＣ−末端を有しないように構築することができる。したがって、環状ペプチドは、エンドペプチターゼに対して影響を受け得るが、エキソペプチダーゼによるタンパク質分解に対して影響を受けず、ペプチド末端において開裂しない。Ｎ−末端またはＣ−末端Ｄ−アミノ酸を有するペプチド、および環状ペプチドのアミノ酸配列は、それぞれ、Ｎ−末端もしくはＣ−末端Ｄ−アミノ酸残基の存在またはそれらの環式構造を除いて、それらが対応するペプチドの配列と、通常、同一である。
【００９６】
環状ペプチド
一部の実施形態では、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）の機能的等価物、アナログ、または誘導体は、環状ペプチドである。本明細書で使用する場合、環状ペプチドは、隣接していない２つの残基の間に分子内共有結合を有する。分子内結合は、主鎖と主鎖、側鎖と主鎖、または側鎖と側鎖の結合であってよい（すなわち、線状ペプチドの末端官能基、および／または末端もしくは内部残基の側鎖官能基が、連結して環化を達成することができる）。通常の分子内結合には、ジスルフィド結合、アミド結合、およびチオエーテル結合が含まれる。こうしたペプチドに行うことができる多数の他の修飾と同様に、ポリペプチドを環化するための様々な手段が、当分野において周知である。一般的な議論に関すると、それらの内容が参照により本明細書に組み込まれている、国際特許出願番号ＷＯ０１／５３３３１およびＷＯ９８／０２４５２を参照されたい。こうした環式結合および他の修飾も、本発明の環状ペプチドおよび誘導体化合物に適用することができる。
【００９７】
本明細書に記載されている環状ペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはそれらの任意に組み合わせた残基を含むことができる。アミノ酸は、天然源または非天然源に由来することができるが、但し、少なくとも１つのアミノ基および少なくとも１つのカルボキシル基が、分子内に存在していることを条件とし、α−およびβ−アミノ酸が、一般に好ましい。環状ペプチドはまた、幅広い様々な側鎖修飾および／もしくは置換（例えば、メチル化、ベンジル化、ｔ−ブチル化、トシル化、アルコキシカルボニル化など）を伴うかまたは伴わない、１個または複数の希アミノ酸（４−ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシリシンなど）、有機酸もしくはアミド、および／または一般的なアミノ酸の誘導体（エステル化（例えば、ベンジル、メチル、またはエチルエステル）もしくはアミド化されているＣ−末端カルボキシレートを有する、および／またはＮ−末端アミノ基の修飾（例えば、アセチル化もしくはアルコキシカルボニル化）を有するアミノ酸など）を含有することができる。適切な誘導体には、Ｎ−アセチル基（環化前に線状ペプチドのＮ−末端に相当するアミノ基がアセチル化されているように）および／またはＣ−末端アミド基（すなわち、環化前の線状ペプチドのカルボキシ末端がアミド化されている）を有するアミノ酸が含まれる。環状ペプチドと共に存在することができる、一般的なアミノ酸以外の残基には、以下に限定されないが、ペニシラミン、β，β−テトラメチレンシステイン、β，β−ペンタメチレンシステイン、β−メルカプトプロピオン酸、β，β−ペンタメチレン−β−メルカプトプロピオン酸、２−メルカプトベンゼン、２−メルカプトアニリン、２−メルカプトプロリン、オルニチン、ジアミノ酪酸、α−アミノアジピン酸、ｍ−アミノメチル安息香酸、およびα，β−ジアミノプロピオン酸が含まれる。
【００９８】
Ｎ−アセチル化および／またはＣ−アミド化を伴うまたは伴わない線状ペプチドの合成後に、当分野において周知の様々な技法のいずれかによって環化を実現することができる。一実施形態の範囲内では、反応性アミノ酸の側鎖間で結合が生成されてもよい。例えば、ジスルフィド架橋は、２個のチオール含有残基を含む線状ペプチドから、様々な方法のいずれかを使用してペプチドを酸化することにより形成することができる。そのような一方法の範囲内では、塩基性または中性の水性媒体を使用し、数日間にわたるチオールの空気酸化により、ジスルフィド結合を生成することができる。このペプチドは高希釈で使用され、凝集および分子間の副反応を最小限にする。あるいは、Ｉ２およびＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６などの強酸化剤を使用して、ジスルフィド結合を形成させることができる。当業者は、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、またはＨｉｓの感受性側鎖を酸化しないように注意しなければならないということを認識するであろう。さらなる実施形態の範囲内では、環化は、アミド結合の形成によって実現することができる。例えば、ペプチド結合は、末端官能基（すなわち、環化前の線状ペプチドのアミノ末端とカルボキシ末端）間で形成することができる。別のそのような実施形態の範囲内では、線状ペプチドは、Ｄ−アミノ酸を含む。あるいは、環化は、Ｎ−末端アセチル基および／またはＣ−末端アミドを伴ってまたは伴うことなく、一方の末端と残基側鎖とを連結することによって、または２つの側鎖を使用することによって実施することができる。ラクタム結合を形成することができる残基には、リシン、オルニチン（Ｏｒｎ）、α−アミノアジピン酸、ｍ−アミノメチル安息香酸、α，β−ジアミノプロピオン酸、グルタミン酸、またはアスパラギン酸が含まれる。アミド結合を形成する方法は、当分野において一般に周知である。こうした一方法の範囲内では、カルボン酸とＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＡＣ、またはＤＣＣＩとの反応によって、カルボジイミドを媒介とするラクタム形成を実施することができ、これにより、環化を完了するための遊離アミノ基と直ちに反応させることができるＯ−アシル尿素が形成する。あるいは、環化は、アジド法を使用して実施することができ、この場合、反応性アジド中間体が、ヒドラジドを経てアルキルエステルから生成する。あるいは、環化は、活性化エステルを使用して実施することができる。エステルのアルコキシ炭素上の電子吸引性置換基が存在していることにより、アミノリシスに対するそれらの感受性が向上する。ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシ化合物、およびポリハロゲン化フェノールのエステルの高い反応性により、これらの「活性エステル」は、アミド結合の合成において有用となる。さらなる実施形態の範囲内では、チオール含有残基の側鎖と適切に誘導体化されているα−アミノ酸との間に、チオエーテル結合を形成することができる。例として、リシン側鎖は、カルボジイミドカップリング法（ＤＣＣ、ＥＤＡＣ）により、ブロモ酢酸とカップリングし、次いで、上記のチオール含有残基のいずれかの側鎖と反応させて、チオエーテル結合を形成させることができる。ジチオエーテルを形成させるために、任意の２個のチオール含有側鎖を、ＤＭ���中で、ジブロモエタンとジイソプロピルアミンと反応させることができる。
【００９９】
例示的なアンジオテンシン−（１−７）ペプチド
線状アンジオテンシン（１−７）ペプチド
ある種の態様では、本発明は、線状アンジオテンシン−（１−７）ペプチドを提供する。上で議論されている通り、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）の構造は、以下の通りである。
【０１００】
Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号１）
【０１０１】
本発明のペプチドおよびペプチドアナログは、以下の配列
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７（配列番号４）
によって、一般に表すことができ、または薬学的に許容されるその塩である。
【０１０２】
Ｘａａ１は、任意のアミノ酸またはジカルボン酸である。ある種の実施形態では、Ｘａａ１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタンカルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ２Ｇｌｙ（Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン）、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ（ベタイン、水酸化１−カルボキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルメタンアミニウム）、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｓａｒ（サルコシン）、またはＳｕｃ（コハク酸）である。ある種のこうした実施形態では、Ｘａａ１は、ＡｓｐまたはＧｌｕなどの負に荷電しているアミノ酸であり、通常Ａｓｐである。
【０１０３】
Ｘａａ２は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｃｉｔ（シトルリン）、Ｏｒｎ（オルニチン）、アセチル化Ｓｅｒ、Ｓａｒ、Ｄ−Ａｒｇ、およびＤ−Ｌｙｓである。ある種の実施形態では、Ｘａａ２は、ＡｒｇまたはＬｙｓなどの正に荷電しているアミノ酸であり、通常Ａｒｇである。
【０１０４】
Ｘａａ３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ＨｙｄｒｏｘｙＰｒｏ（ヒドロキシプロリン）、Ａｉｂ（２−アミノイソ酪酸）、Ａｃｐｃ、またはＴｙｒである。ある種の実施形態では、Ｘａａ３は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＮｌｅなどの脂肪族アミノ酸であり、通常、ＶａｌまたはＮｌｅである。
【０１０５】
Ｘａａ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ３）、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ｈｏｍｏＳｅｒ（ホモセリン）、ａｚａＴｙｒ（アザ−α１−ホモ−Ｌ−チロシン）またはＡｌａである。ある種の実施形態では、Ｘａａ４は、Ｔｙｒ、ＳｅｒまたはＴｈｒなどのヒドロキシル置換アミノ酸であり、通常Ｔｙｒである。
【０１０６】
Ｘａａ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ｎｏｒＬｅｕ、Ｖａｌ、またはＧｌｙである。ある種の実施形態では、Ｘａａ５は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＮｌｅなどの脂肪族アミノ酸であり、通常Ｉｌｅである。
【０１０７】
Ｘａａ６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、または６−ＮＨ２−Ｐｈｅ（６−アミノフェニルアラニン）である。ある種の実施形態では、Ｘａａ６は、ＡｒｇまたはＨｉｓなどの、完全にまたは部分的に正に荷電しているアミノ酸である。
【０１０８】
Ｘａａ７は、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、またはＡｌａである。
【０１０９】
ある種の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ７の１つまたは複数が、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。ある種のこうした実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ７の１つまたは２つ以外のすべてが、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。他の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ６のすべてが、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。
【０１１０】
ある種の実施形態では、Ｘａａ３は、Ｎｌｅである。Ｘａａ３が、Ｎｌｅである場合、Ｘａａ１〜Ｘａａ２およびＸａａ４〜７の１つまたは複数は、場合により、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。ある種のこうした実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ２およびＸａａ４〜７の１つまたは２つ以外のすべてが、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。他の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ２およびＸａａ４〜７のすべてが、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一であり、アミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ｔｙｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｐｒｏ７（配列番号５）となる。
【０１１１】
ある種の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｓｅｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｓ７（配列番号２）またはＡｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−ｓｅｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｓ７（配列番号６）を有する。
【０１１２】
例示的な環式アンジオテンシン（１−７）ペプチド
ある種の態様では、本発明は、ＡｎｇにおけるＴｙｒ４位およびＰｒｏ７位に相当するアミノ酸の側鎖間などの結合を含む環状アンジオテンシン−（１−７）（Ａｎｇ−（１−７））ペプチドアナログを提供する。これらのペプチドアナログは、通常、７個のアミノ酸残基を含むが、開裂可能な配列も含むことができる。より詳細に以下に議論される通り、本発明は、フラグメント、および１個または複数のアミノ酸が別のアミノ酸によって置換されているアナログ（フラグメントを含む）、例えば、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｓｅｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｓ７（配列番号２２）を含み、結合が、Ｓｅｒ４とＣｙｓ７との間に形成される。
【０１１３】
以下の項目は、４位および７位における残基を連結するチオエーテル結合に関する本発明の態様を説明するが、他の結合（上記の通り）が、チオエーテル架橋に置き換えられて、他の残基が環化し得ることを理解すべきである。チオエーテル架橋はまた、一硫化架橋とも、またはＡｌａ−Ｓ−Ａｌａの場合、ランチオニン架橋とも呼ばれる。チオエーテル架橋含有ペプチドは、以下の式
【化３】
2016522178.tif 000005
【化４】
2016522178.tif 000006
の１つを有する２個のアミノ酸によって形成することができる。
【０１１４】
これらの式において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、独立して、−Ｈ、アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、またはアラルキル基であり、これらのアルキル基およびアラルキル基は、１つまたは複数のハロゲン、−ＯＨ、または−ＮＲＲ’基（ＲおよびＲ’は、独立して、−ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである）によって場合により置換されている。ある種の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立して、−Ｈまたは−ＣＨ３であり、こうした場合、すべて−Ｈである。
【０１１５】
ある種の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）によるチオエーテル架橋を含むＡｎｇアナログまたは誘導体を提供する。通常、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、−Ｈおよび−ＣＨ３から独立して選択される。式（Ｉ）によるチオエーテル架橋を含むペプチドは、例えば、ランチビオティック酵素によってまたはジスルフィドの硫黄押出しによって、生成することができる。一例では、硫黄が押し出されるジスルフィドは、４位におけるＤ−システインおよび７位におけるＬ−システインによって、または４位におけるＤ−システインおよび７位におけるＬ−ペニシラミンによって、形成することができる（例えば、Galande、TrentおよびSpatola（２００３年）、Biopolymers、７１巻、５３４〜５５１頁を参照されたい）。
【０１１６】
他の実施形態では、２個のアミノ酸の結合は、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）において示されている架橋とすることができる。式（ＩＩ）によるチオエーテル架橋を含むペプチドは、例えば、４位におけるＤ−ホモシステインおよび７位におけるＬ−システインによって形成されるジスルフィドの硫黄押出しによって、作製することができる。同様に、式（ＩＩＩ）にある通りのチオエーテル架橋を含むペプチドは、例えば、４位におけるＤ−システインおよび７位におけるＬ−ホモシステインによって形成されるジスルフィドの硫黄押出しによって、作製することができる。
【０１１７】
上で議論されている通り、本発明のＡｎｇアナログおよび誘導体は、長さおよびアミノ酸組成が変動する。本発明のＡｎｇアナログおよび誘導体は、好ましくは、生物活性を有するか、またはタンパク質分解により活性化され得る不活性前駆体分子である（１０個のアミノ酸を有するアンジオテンシン（Ｉ）が、２個のアミノ酸の開裂によってどのように活性フラグメントに変換されるかなど）。Ａｎｇアナログまたは誘導体のサイズは、変動し得るが、３〜７個のＮｌｅ−チオエーテル環構造を含む「コア」の五量体セグメントが包含されている限り、通常、約５〜１０個の間のアミノ酸である。本発明のアナログまたは誘導体のアミノ酸配列は、変動し得るが、通常、それが、生物活性であるか、またはタンパク質分解により活性化されている状態になることができることを条件とする。アナログまたは誘導体の生物活性は、放射性リガンド結合の検討、インビトロ細胞活性化アッセイ、およびインビボ実験を含む、当分野において公知の方法を使用して決定することができる。例えば、GodenyおよびSayeski（２００６年）Am.  J.  Physiol.  Cell.  Physiol.２９１巻：Ｃ１２９７〜１３０７頁；Sarrら、Cardiovasc.  Res.（２００６年）７１巻：７９４〜８０２頁；ならびにKoziarzら（１９３３年）Gen.  Pharmacol.２４巻：７０５〜７１３頁を参照されたい。
【０１１８】
ペプチドの長さしか変動しない、Ａｎｇアナログおよび誘導体は、以下を含む：
【０１１９】
天然Ａｎｇ−（１−７）（Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７、配列番号７）から誘導される、［Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（１−７）と命名される４，７−環化アナログ
天然アンジオテンシンＩ（Ａｎｇ−（１−１０））（Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７−Ｐｈｅ８−Ｈｉｓ９−Ｌｅｕ１０、配列番号８）から誘導される、［Ｎｌｅ３，Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（１−１０）と命名される４，７−環化アナログ；
天然アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ−（１−８））（Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７−Ｐｈｅ８、配列番号９）から誘導される、［Ｎｌｅ３，Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（１−８）と命名される４，７−環化アナログ；
天然アンジオテンシンＩＩＩ（Ａｎｇ−（２−８））（Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７−Ｐｈｅ８、配列番号１０）から誘導される、［Ｎｌｅ３，Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（２−８）と命名される４，７−環化アナログ；
天然アンジオテンシンＩＶ（Ａｎｇ−（３−８））（Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７−Ｐｈｅ８、配列番号１１）から誘導される、［Ｎｌｅ３，Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（３−８）と命名される４，７−環化アナログ；
天然Ａｎｇ−（１−７）（Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７、配列番号１２）から誘導される、［Ｎｌｅ３，Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（１−７）と命名される４，７−環化アナログ；および
天然Ａｎｇ−（１−９）（Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｃ７−Ｐｈｅ８−Ｈｉｓ９、配列番号１３）から誘導される、［Ｎｌｅ３，Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（１−９）と命名される４，７−環化アナログ。
これらのアナログは、Ｃｙｃ４−７部位として、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）において示されているチオエーテル架橋の１つを有することができ、例えば、Ｒ１〜Ｒ４がそれぞれ、−Ｈまたは−ＣＨ３であり、通常−Ｈである場合などの、Ｃｙｃ４およびＣｙｃ７が、式（Ｉ）によって表される。
【０１２０】
天然アンジオテンシンペプチドのアミノ酸配列と比較して、Ｃｙｃ４−７アナログの４位および７位のアミノ酸は修飾されて、上に示されているチオエーテル環構造の導入が可能になる。Ａｎｇアナログの長さに加えて、３、４、および７以外の位置にあるアミノ酸は、天然に存在するペプチドと同じであるかまたは異なるものとすることができるが、但し、通常、アナログが、生物的機能を保持していることを条件とする。一例は、Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ｓｅｒ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ｃｙｓ７（配列番号２２）である。［Ｃｙｃ４−７］Ａｎｇ−（１−１０）のような不活性前駆体のアナログに関すると、生物的機能とは、それを開裂して、生物活性なフラグメント（例えば、Ａｎｇ−（１−８）またはＡｎｇ−（１−７））にすることができるアンジオテンシン変換酵素に対するアナログの感受性またはフラグメント自体の生物活性の一方または両方を指す。ある種の実施形態では、本発明のＡｎｇアナログまたは誘導体は、内在性の機能を有していないが、１つまたは複数の天然に存在するアンジオテンシン化合物の効果を阻害する。
【０１２１】
ある種の実施形態では、本発明のＡｎｇアナログは、式（ＩＶ）
【０１２２】
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｃｙｃ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｃｙｃ７（ＩＶ、配列番号１４）によって表される。
【０１２３】
Ｘａａ１は、任意のアミノ酸であるが、通常、ＧｌｕまたはＡｓｐなどの負に荷電しているアミノ酸であり、より典型的にはＡｓｐである。
【０１２４】
Ｘａａ２は、ＡｒｇまたはＬｙｓなどの正に荷電しているアミノ酸であり、通常Ａｒｇである。
【０１２５】
Ｘａａ３は、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＶａｌなどの脂肪族アミノ酸であり、通常、Ｖａｌである。
【０１２６】
Ｃｙｃ４は、Ｃｙｃ７と一緒になって、チオエーテル架橋を形成する。Ｃｙｃ４は、Ｄ−立体異性体および／またはＬ−立体異性体、通常、Ｄ−立体異性体とすることができる。Ｃｙｃ４（Ｃｙｃ７と一緒になって）の例は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＩＩＩ）において示されている。通常、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＩＩＩ）におけるＲ基は、−Ｈまたは−ＣＨ３、とりわけ−Ｈである。
【０１２７】
Ｘａａ５は、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＶａｌなどの脂肪族アミノ酸であり、通常、Ｉｌｅである。
【０１２８】
Ｘａａ６は、Ｈｉｓである。
【０１２９】
Ｃｙｃ７は、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）におけるものなどの、Ｃｙｃ４と一緒になってチオエーテル架橋を形成する。Ｃｙｃ７は、Ｄ−立体異性体および／またはＬ−立体異性体、通常、Ｌ−立体異性体とすることができる。Ｃｙｃ７（Ｃｙｃ４と一緒になって）の例は、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）において示されている。通常、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）におけるＲ基は、−Ｈまたは−ＣＨ３、とりわけ−Ｈである。
【０１３０】
ある種の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ６の１つまたは複数（Ｃｙｃ４およびＣｙｃ７を除く）が、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。ある種のこうした実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ６の１つまたは２つ以外のすべてが、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。他の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ６のすべてが、天然に存在するＡｎｇ−（１−７）における対応するアミノ酸と同一である。
【０１３１】
ある種の実施形態では、Ｃｙｃ４およびＣｙｃ７は、Ａｂｕ（２−アミノ酪酸）およびＡｌａ（アラニン）から独立して選択され、この場合、Ａｌａは、少なくとも１つの位置に存在している。したがって、環状アナログは、−Ａｌａ４−Ｓ−Ａｌａ７−（式（Ｉ）、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ−Ｈである）、−Ａｌａ４−Ｓ−Ａｂｕ７−（式（Ｉ）、Ｒ１〜Ｒ３は−Ｈであり、Ｒ４は−ＣＨ３である）、または−Ａｂｕ４−Ｓ−Ａｌａ７−（式（Ｉ）、Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４は−Ｈであり、Ｒ２は−ＣＨ３である）によって形成されるチオエーテル結合を有することができる。環状アナログの具体例は、−Ａｂｕ４−Ｓ−Ａｌａ７−または−Ａｌａ４−Ｓ−Ａｌａ７−結合を含む。
【０１３２】
ある種の実施形態では、本発明は、以下の構造図
【化５】
2016522178.tif 000007
によって表される、アミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ａｂｕ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ａｌａ７（配列番号１５）またはアミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｖａｌ３−Ａｌａ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ａｌａ７（配列番号１６）を有する、４位と７位との間にチオエーテル架橋を有するＡｎｇ−（１−７）アナログを提供する。
【０１３３】
ある種の実施形態では、本発明のＡｎｇアナログまたは誘導体は、式（Ｖ）
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｎｌｅ３−Ｃｙｃ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｃｙｃ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０（Ｖ、配列番号１７）
によって表される。上で議論されている通り、Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ８、Ｘａａ９、およびＸａａ１０の１つまたは複数が、ある種の実施形態において存在していない。例えば、（１）Ｘａａ１０が存在しない、（２）Ｘａａ９およびＸａａ１０が存在しない、（３）Ｘａａ８、Ｘａａ９、およびＸａａ１０が存在しない、（４）Ｘａａ１が存在しない、（５）Ｘａａ１およびＸａａ１０が存在しない、（６）Ｘａａ１、Ｘａａ９、およびＸａａ１０が存在しない、（７）Ｘａａ１、Ｘａａ８、Ｘａａ９、およびＸａａ１０が存在しない、（８）Ｘａａ１およびＸａａ２が存在しない、（９）Ｘａａ１、Ｘａａ２、およびＸａａ１０が存在しない、（１０）Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ９、およびＸａａ１０が存在しない、または（１１）Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ８、Ｘａａ９、およびＸａａ１０が存在しない。これらの実施形態のそれぞれの場合、残りのアミノ酸は、以下に記載される意味（ｖａｌｕｅ）を有する。
【０１３４】
Ｘａａ１は、存在している場合、任意のアミノ酸であるが、通常、ＧｌｕまたはＡｓｐなどの負に荷電しているアミノ酸であり、より典型的にはＡｓｐである。
【０１３５】
Ｘａａ２は、存在する場合、ＡｒｇまたはＬｙｓなどの正に荷電しているアミノ酸であり、通常Ａｒｇである。
【０１３６】
Ｎｌｅ３は、ノルロイシンである。
【０１３７】
Ｃｙｃ４は、Ｃｙｃ７と一緒になって、チオエーテル架橋を形成する。Ｃｙｃ４は、Ｄ−立体異性体および／またはＬ−立体異性体、通常、Ｄ−立体異性体とすることができる。Ｃｙｃ４（Ｃｙｃ７と一緒になって）の例は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＩＩＩ）において示されている。通常、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）におけるＲ基は、−Ｈまたは−ＣＨ３、とりわけ−Ｈである。
【０１３８】
Ｘａａ５は、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、またはＶａｌなどの脂肪族アミノ酸であり、通常、Ｉｌｅである。
【０１３９】
Ｘａａ６は、Ｈｉｓである。
【０１４０】
Ｃｙｃ７は、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）におけるものなどの、Ｃｙｃ４と一緒になってチオエーテル架橋を形成する。Ｃｙｃ７は、Ｄ−立体異性体および／またはＬ−立体異性体、通常、Ｌ−立体異性体とすることができる。Ｃｙｃ７（Ｃｙｃ４と一緒になって）の例は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＩＩＩ）において示されている。通常、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）におけるＲ基は、−Ｈまたは−ＣＨ３、とりわけ−Ｈである。
【０１４１】
Ｘａａ８は、存在する場合、Ｐｒｏ以外のアミノ酸であり、通常、ＰｈｅまたはＩｌｅである。ある種の実施形態では、Ｉｌｅは、Ａｎｇ（１−８）の阻害剤となる。ある種の実施形態では、Ｐｈｅは、Ａｎｇ（１−８）またはＡｎｇ（１−１０）の生物活性を維持している。
【０１４２】
Ｘａａ９は、存在する場合、Ｈｉｓである。
【０１４３】
Ｘａａ１０は、存在する場合、脂肪族残基、例えば、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、またはＬｅｕ、通常、Ｌｅｕである。
【０１４４】
ある種の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ１０（Ｎｌｅ３、Ｃｙｃ４、およびＣｙｃ７を除く）の１つまたは複数が、天然に存在するＡｎｇ（Ａｎｇ−（１−７）、Ａｎｇ（１−８）、Ａｎｇ（１−９）、Ａｎｇ（１−１０）、Ａｎｇ（２−７）、Ａｎｇ（２−８）、Ａｎｇ（２−９）、Ａｎｇ（２−１０）、Ａｎｇ（３−８）、Ａｎｇ（３−９）、およびＡｎｇ（３−１０）を含む）における対応するアミノ酸と同一である。ある種のこうした実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ１０の１つまたは２つ以外のすべて（存在するものについて）が、天然に存在するＡｎｇにおける対応するアミノ酸と同一である。他の実施形態では、Ｘａａ１〜Ｘａａ１０はすべて（存在するものについて）が、天然に存在するＡｎｇにおける対応するアミノ酸と同一である。
【０１４５】
ある種の実施形態では、Ｃｙｃ４およびＣｙｃ７は、Ａｂｕ（２−アミノ酪酸）およびＡｌａ（アラニン）から独立して選択され、この場合、Ａｌａは、少なくとも１つの位置に存在している。したがって、−Ａｌａ４−Ｓ−Ａｌａ７−（式（Ｉ）、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ−Ｈである）、−Ａｌａ４−Ｓ−Ａｂｕ７−（式（Ｉ）、Ｒ１〜Ｒ３は−Ｈであり、Ｒ４は−ＣＨ３である）、または−Ａｂｕ４−Ｓ−Ａｌａ７−（式（Ｉ）、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は−Ｈであり、Ｒ２は−ＣＨ３である）によって形成されるチオエーテル結合を含む環状アナログが包含される。特定の環状アナログは、−Ａｂｕ４−Ｓ−Ａｌａ７−または−Ａｌａ４−Ｓ−Ａｌａ７−結合を含む。
【０１４６】
特に、本発明は、アミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ａｂｕ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ａｌａ７（配列番号１８）またはアミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ａｌａ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ａｌａ７（配列番号１９）を有する、４位と７位との間にチオエーテル架橋を有する、Ａｎｇ−（１−７）アナログまたは誘導体を提供する。
【０１４７】
別の態様では、本発明は、Ａｎｇ−（１−８）アンタゴニスト活性を有する、４位と７位との間にチオエーテル架橋を有するＡｎｇ−（１−８）アナログまたは誘導体、特に、アミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ａｂｕ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ａｌａ７−Ｉｌｅ８（配列番号２０）またはアミノ酸配列Ａｓｐ１−Ａｒｇ２−Ｎｌｅ３−Ａｌａ４−Ｉｌｅ５−Ｈｉｓ６−Ａｌａ７−Ｉｌｅ８（配列番号２１）を有するＡｎｇ（１−８）アナログまたは誘導体を提供する。
【０１４８】
Ａｎｇ（１−７）受容体アゴニスト
一部の実施形態では、本発明は、筋ジストロフィーを処置する方法であって、筋ジストロフィーに罹患しているか、または罹患しやすい対象に、アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを投与するステップを含む、方法を提供する。本明細書で使用する場合、用語「アンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニスト」は、アンジオテンシン−（１−７）受容体、特にＧ−タンパク質共役型Ｍａｓ受容体の機能に正の影響を及ぼす、いかなる分子も包含している。一部の実施形態では、アンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストは、直接または間接的に、アンジオテンシン−（１−７）受容体（すなわち、Ｍａｓ受容体）活性を増強する、強化する、活性化する、および／または向上させる。一部の実施形態では、アンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストは、直接、アンジオテンシン−（１−７）受容体（すなわち、Ｍａｓ受容体）と相互作用する。こうしたアゴニストは、例えば、タンパク質、化学化合物、低分子、核酸、抗体、薬物、リガンド、または他の作用剤を含む、ペプチドまたは非ペプチドとすることができる。一部の実施形態では、本アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、非ペプチドアゴニストである。
【０１４９】
例示的なクラスのアンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストは、１−（ｐ−チエニルベンジル）イミダゾールである。これらの非ペプチドアンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストの例は、式（ＶＩ）
【化６】
2016522178.tif 000008
によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩である［式中、
【０１５０】
Ｒ１は、ハロゲン、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシ（１〜６個の炭素原子が、ヘテロ原子Ｏ、ＳまたはＮＨによって（好ましくは、Ｏによって）置き換えられている）、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルコキシ（テトラヒドロピランまたはテトラヒドロフランなどの飽和環状エーテルによって置換されている）、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルケニル、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルアリール、またはアリールオキシ（無置換であるか、またはハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）−アルコキシ、およびトリフルオロメチルから選択される置換基によって置換されている）であり、
【０１５１】
Ｒ２は、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、または（３）ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルであり、
【０１５２】
Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルまたはアリールであり、
【０１５３】
Ｒ４は、水素、ハロゲン（クロロ、ブロモ、フルオロ）、または（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルであり、
【０１５４】
Ｘは、酸素または硫黄であり、
【０１５５】
Ｙは、酸素または−ＮＨ−であり、
【０１５６】
Ｒ５は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、または（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルアリールであり、Ｙが−ＮＨ−である場合、Ｒ５は水素であり、
【０１５７】
Ｒ６は、（Ｃ１〜Ｃ５）−アルキルである］。
【０１５８】
ある種の実施形態では、Ｒ２が、ＣＯＯＨまたはＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルである場合、Ｒ１はハロゲンではない。
【０１５９】
一部の実施形態では、アンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストは、以下の構造
【化７】
2016522178.tif 000009
によって表される、ＡＶＥ０９９１、５−ホルミル−４−メトキシ−２−フェニル−１［［４−［２−（エチルアミノカルボニルスルホンアミド）−５−イソブチル−３−チエニル］−フェニル］−メチル］−イミダゾールである。
【０１６０】
別の例示的なクラスのアンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストは、ｐ−チエニルベンジルアミドである。これらの非ペプチドアンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストの例は、構造式（ＶＩＩ）
【化８】
2016522178.tif 000010
によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩である［式中、
【０１６１】
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ５）−アルキル（無置換であるか、またはＮＨ２、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、ＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキルおよびＣＯ２Ｈから選択されるラジカルによって置換されている）、（Ｃ３〜Ｃ８）−シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）−シクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール（無置換であるか、またはハロゲンおよびＯ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキルから選択されるラジカルによって置換されている）、（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル−（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール（アリールラジカルは無置換であるか、またはハロゲンおよびＯ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキルから選択されるラジカルによって置換されている）、（Ｃ１〜Ｃ５）−ヘテロアリール、または（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル−（Ｃ１〜Ｃ５）−ヘテロアリールであり、
【０１６２】
Ｒ２は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル（無置換であるか、またはハロゲンおよびＯ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキルから選択されるラジカルによって置換されている）、（Ｃ３〜Ｃ８）−シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）−シクロアルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール（無置換であるか、またはハロゲン、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル、およびＣＯ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキルのなかから選択されるラジカルによって置換されている）、または（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル−（Ｃ６〜Ｃ１０）−アリール（無置換であるか、またはハロゲンおよびＯ−（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキルから選択されるラジカルによって置換されている）であり、
【０１６３】
Ｒ３は、水素、ＣＯＯＨ、またはＣＯＯ−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルであり、
【０１６４】
Ｒ４は、水素、ハロゲン、または（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルであり、
【０１６５】
Ｒ５は、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、
【０１６６】
Ｒ６は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）−アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）−シクロアルキル、または（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルであり、
【０１６７】
Ｘは、酸素またはＮＨである］。
【０１６８】
アンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストのさらなる例は、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第６，２３５，７６６号において記載されている。
【０１６９】
上記の様々なアンジオテンシン−（１−７）受容体アゴニストは、薬学的に許容される塩として存在することができる。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」とは、ペプチドまたは等価な化合物の所望の活性を保持しているが、好ましくは、ペプチドの活性またはペプチドを使用する系の他の構成要素の活性に悪影響を及ぼさない塩を指す。そのような塩の例は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などにより形成される酸付加塩である。塩はまた、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸などの有機酸により形成されてもよい。陽イオン性物質から形成される塩は、これらの無機酸および有機酸の共役塩基を利用してもよい。塩はまた、亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケルなどの多価金属陽イオンにより、あるいはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンもしくはエチレンジアミン、またはそれらの組合せから形成される有機カチオンにより形成されてもよい（例えば、タンニン酸亜鉛塩）。無毒性の、生理学的に許容される塩が好ましい。
【０１７０】
塩は、この塩が不溶性である溶媒もしくは媒体中または水などの溶媒中（これらの溶媒または媒体は、次に真空で、または凍結乾燥により除去される）、遊離酸または遊離塩基形態の生成物を、１当量またはそれ超の適切な酸または塩基と反応させることによる、あるいは存在している塩の陽イオンを適切なイオン交換樹脂上の別の陽イオンで交換することによるなどの従来的な手段によって形成することができる。
【０１７１】
アルキル基は、完全に飽和している直鎖または分岐非芳香族炭化水素である。通常、直鎖または分岐アルキル基は、１〜約２０個、好ましくは１〜約１０個の炭素原子を有する。直鎖および分岐アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ペンチル、およびオクチルが含まれる。Ｃ１〜Ｃ４直鎖または分岐アルキル基はまた、「低級アルキル」基とも呼ばれる。
【０１７２】
アルケニル基は、１つまたは複数の二重結合を含む直鎖または分岐非芳香族炭化水素である。通常、直鎖または分岐アルケニル基は、２〜約２０個、好ましくは２〜約１０個の炭素原子を有する。直鎖および分岐アルケニル基の例には、エテニル、ｎ−プロペニル、およびｎ−ブテニルが含まれる。
【０１７３】
芳香族（アリール）基には、フェニル、ナフチル、およびアントラシルなどの炭素環式芳香族基、ならびにイミダゾリル、チエニル、フリル、ピリジル、ピリミジル、ピラニル、ピラゾリル、ピロリル、ピラジニル、チアゾリル、オキサゾリル、およびテトラゾリルなどのヘテロアリール基が含まれる。芳香族基には、炭素環式芳香環またはヘテロアリール環が１つまたは複数の他のヘテロアリール環と縮合している、縮合多環式芳香族環系も含まれる。例には、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、インドリル、キノリニル、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾイミダゾール、キノリニル、イソキノリニル、およびイソインドリルが含まれる。
【０１７４】
アラルキル基は、アリール基によって置換されているアルキル基である。芳香族（アリール）基には、フェニル、ナフチルおよびアントラシルなどの炭素環式芳香族基、ならびにイミダゾリル、チエニル、フリル、ピリジル、ピリミジル、ピラニル、ピラゾリル、ピロリル、ピラジニル、チアゾリル、オキサゾリルおよびテトラゾリルなどのヘテロアリール基が含まれる。芳香族基には、炭素環式芳香環またはヘテロアリール環が１つまたは複数の他のヘテロアリール環と縮合している、縮合多環式芳香族環系も含まれる。例には、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、インドリル、キノリニル、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾイミダゾール、キノリニル、イソキノリニルおよびイソインドリルが含まれる。
【０１７５】
医薬組成物
本発明の方法によれば、本明細書に記載されている、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、単独で（例えば、精製済みペプチドまたは化合物として）、または本明細書に記載されている組成物もしくは医薬の構成要素（例えば、疾患の処置のための医薬製造において）として、対象に投与することができる。本組成物は、生理学的に許容される担体または添加剤と一緒に製剤化して、医薬組成物を調製することができる。担体および組成物は、無菌とすることができる。製剤は、投与の形式に好適となるべきである。組成物の製剤化方法は、当分野で公知である（例えば、Remington's  Pharmaceuticals  Sciences、第１７版、Mack  Publishing  Co.（Alfonso  R.  Gennaro編集）（１９８９年）を参照されたい）。
【０１７６】
適切な薬学的に許容される担体には、以下に限定されないが、水、塩の溶液（例えば、ＮａＣｌ）、生理食塩水、緩衝生理食塩水、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアガム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、炭水化物（ラクトース、アミロースまたはデンプンなど）、糖（マンニトール、スクロース、またはその他）、デキストロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン（pyrolidone）など、およびそれらの組合せが含まれる。医薬調製物は、所望の場合、活性化合物と反応して有害とならないか、またはそれらの活性を妨害しない補助剤（例えば、滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝液、着色物質、風味物質、および／または芳香物質など）と混合することができる。好ましい実施形態では、静脈内投与に適した水溶性担体が使用される。
【０１７７】
本組成物または医薬は、所望の場合、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝化剤も含有することができ、これらの一部は、以下でさらに議論される。本組成物は、液状溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放製剤、または粉末とすることができる。本組成物はまた、従来の結合剤およびトリグリセリドなどの担体と共に坐剤として製剤化することもできる。経口用製剤は、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。
【０１７８】
本組成物または医薬は、ヒトに投与するようになされた医薬組成物として、決まった手順に従って製剤化することができる。例えば、好ましい実施形態では、静脈内投与向け組成物は、通常、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、本組成物は、溶解補助剤、および注射部位における痛みを緩和するための局所麻酔薬を含んでもよい。一般に、成分は、別々または単位剤形中に一緒に混合されて供給される（例えば、乾燥した凍結乾燥散剤、またはアンプルなどの気密密封されている容器中の水不含濃縮製剤、または活性剤の量を示しているサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）として）。本組成物が注入によって投与されることになる場合、無菌医薬グレードの水、生理食塩水、またはデキストロース／水を含有している注入用ボトルに分注することができる。組成物が注射によって投与される場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルを用意し、投与前に、成分を混合することができる。
【０１７９】
一部の実施形態では、医薬製剤として提供されるものを含めた、提供される組成物は、以下に限定されないが、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、血清含有溶液、ハンクス溶液、他の水性の生理的平衡溶液、油、エステル、およびグリコールなどの液状担体を含む。
【０１８０】
本明細書に記載されている、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、中性または塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどの、遊離アミノ基と形成されるもの、および水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの、遊離カルボキシル基と形成されるものが含まれる。
【０１８１】
経口用製剤
一部の実施形態では、好適な医薬組成物は、経口用製剤である。任意の医薬として許容される経口用製剤が、本発明の範囲内で使用することができるものと企図される。
【０１８２】
一部の実施形態では、提供される組成物は、少なくとも１種のｐＨ低下剤を含む。本発明の一部の実施形態において使用するために好適なｐＨ低下剤には、任意の薬学的に許容されるｐＨ低下剤、あるいはａ）消化管に毒性を示さないｐＨ低下剤、ｂ）水素イオンを送達することができるかもしくは局部環境からより多くの水素イオン含有物を誘発することができるかのいずれかのｐＨ低下剤、および／またはｃ）腸管において見出されるプロテアーゼに対して最適なｐＨ未満に局部腸管のｐＨを低下させるのに十分な量で経口投与することができるｐＨ低下剤の組合せが含まれることが企図される。様々な試験を使用して、ｐＨ低下剤が本発明に好適であるかどうか、およびどのような量が適切であるかどうかを決定することができる。例えば、１種のｐＨ低下剤、または複数のｐＨ低下剤の組合せは、０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム１０ミリリットルの溶液にある特定の量が加えられた場合、この量がこの溶液のｐＨを、５．５、４．７、または３．５以下まで低下させる場合、本発明に好適である。一部の実施形態では、１種または複数のｐＨ低下剤の量は、０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム１０ミリリットルの溶液において、ｐＨを３．４、３．２、３．０または２．８以下まで低下させるよう添加され得る。
【０１８３】
一部の実施形態では、好適な１種または複数のｐＨ低下剤には、ｐＫａが４．２以下（例えば、４．０、３．８、３．６、３．４、３．２、３．０または２．８以下）を有する少なくとも１種のｐＨ低下剤が含まれる。本発明に好適な、例示的なｐＨ低下剤には、以下に限定されないが、アセチルサリチル酸、酢酸、アスコルビン酸、クエン酸、フマル酸、グルクロン酸、グルタル酸、グリセリン酸、グリココール酸、グリオキシル酸、イソクエン酸、イソ吉草酸、乳酸、マレイン酸、オキサロ酢酸、オキサロコハク酸、プロピオン酸、ピルビン酸、コハク酸、酒石酸および吉草酸などのカルボン酸；塩化アルミニウム；塩化亜鉛；アセチルグルタミン酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、ベタイン、カルニチン、カルノシン、シトルリン、クレアチン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシリシン、ヒドロキシプロリン、ヒポタウリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチルヒスチジン、ノルロイシン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、サルコシン、セリン、タウリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンの酸塩を含めたアミノ酸（またはその誘導体）の酸塩が含まれる。フルクトース１，６ジホスフェートおよびグルコース１，６ジホスフェートを含めたある種のリン酸エステルも、ある特定の実施形態では、適切なｐＨ低下剤とすることができる。特定の実施形態では、クエン酸または酒石酸が、ｐＨ低下剤として使用される。
【０１８４】
任意の特定のｐＨ低下剤または複数のｐＨ低下剤の組合せの必要な量は、様々であり得る。通常、好適な量は、当分野で公知の、および本明細書に記載されている様々な試験を使用して決定することができる（例えば、上記の０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム１０ミリリットルの溶液中でｐＨ低下試験を使用する）。非限定例として、本発明による製剤中に使用されるｐＨ低下剤の好適な量は、約１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇもしくは１，０００ｍｇの量、またはそれ超とすることができる。他の実施形態では、使用されるクエン酸の量は、１，０００ｍｇを超えてもよい。
【０１８５】
一部の実施形態では、使用されるｐＨ低下剤（例えば、クエン酸または酒石酸）の好適な量は、特定の剤形の総重量の％として測定することができる。非限定例として、使用されるｐＨ低下剤の好適な量は、固形剤形の総重量の約１０％（例えば１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％、またはそれ超）の量またはそれ超とすることができる。
【０１８６】
様々な実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の吸収促進剤を含む。本明細書で使用する場合、吸収促進剤とは、それらが放出される水性もしくは疎水性環境のどちらかにおいて他の構成要素の溶解度を向上させる作用剤、および／または活性ペプチド（例えば、アンジオテンシン（１−７）ペプチド）の腸管壁への取込みを増強する作用剤を指す。一部の実施形態では、吸収促進剤は、溶解度増強剤および／または取込み増強剤と呼ばれる。
【０１８７】
一部の実施形態では、吸収促進剤の混合物を持たせることができ、この場合、一部は、溶解度の増強をもたらし、一部は取込みの増強をもたらし、一部は、これらの両方をもたらす。所与の実施形態では、非限定的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０種の吸収促進剤を含めた、様々な数の吸収促進剤を持たせることが可能である。
【０１８８】
表面活性剤は、溶解度増強剤と取込み増強剤の両方の特性を有する、有用な吸収促進剤の一例である。一部の実施形態では、表面活性剤が吸収促進剤として使用される場合、これらは、製造過程中の、混合およびカプセルへの充填を容易にするための、易流動性粉末とすることができる。他の実施形態では、表面活性剤がアンジオテンシン（１−７）ペプチドの生体利用率を向上させるために使用される場合、この表面活性剤は、（ａ）コレステロール誘導体などの陰イオン性表面活性剤（例えば胆汁酸）、（ｂ）陽イオン性表面剤（例えばアシルカルニチン、リン脂質など）、（ｃ）非イオン性表面活性剤、および（ｄ）陰イオン性表面活性剤と負電荷中和剤との混合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択され得る。負電荷中和剤には、以下に限定されないが、アシルカルニチン、塩化セチルピリジニウムなどが含まれる。
【０１８９】
一部の実施形態では、酸可溶性胆汁酸および陽イオン性表面活性剤が、吸収促進剤として一緒に使用されよう。アシルカルニチン（ラウロイルカルニチンなど）、リン脂質および胆汁酸が、一部の実施形態において特に有効な吸収促進剤となり得る。
【０１９０】
様々な吸収促進剤が、様々な実施形態において使用するのに好適であるが、以下の例示的なリストは、本発明の一部の実施形態を例示するよう意図されている。非限定的に、一部の好適な吸収促進剤には、（ａ）サリチル酸ナトリウム、３−メトキシサリチル酸ナトリウム、５−メトキシサリチル酸ナトリウムなどのサリチル酸塩、およびホモバニリン酸塩、（ｂ）タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、デオキシコール酸、コール酸、グリコール酸、リトコール酸、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、ウルソコール酸、デヒドロコール酸、フシジン酸などの胆汁酸、（ｃ）ポリオキシエチレンエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ３６Ｔ、Ｂｒｉｊ５２、Ｂｒｉｊ５６、Ｂｒｉｊ７６、Ｂｒｉｊ９６、テキサホールＡ６、テキサホールＡ１４、テキサホールＡ６０など）、ｐ−ｔ−オクチルフェノールポリオキシエチレン（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−４５、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−３０５など）、ノニルフェノキシポリオキシエチレン（nonylphenoxypoloxyethylenes）（例えば、Ｉｇｅｐａｌ  ＣＯシリーズ）、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０など）などの非イオン性界面活性剤、（ｄ）スルホコハク酸ジオクチルナトリウムなどの陰イオン性界面活性剤、（ｅ）リソレシチンおよびリソホスファチジルエタノールアミンなどのリソリン脂質、（ｆ）ラウロイルカルニチン、ミリストイルカルニチン、パルミトイルカルニチン、ラウリルコリン、ミリストイルコリン、パルミトイルコリン、ヘキサデシルリシン、Ｎ−アシルフェニルアラニン、Ｎ−アシルグリシンなどのアシルカルニチン、アシルコリンおよびアシルアミノ酸、ｇ）ジヘプタノイルホスファチジルコリン、ジオクチルホスファチジルコリンなどの水溶性リン脂質、（ｈ）中鎖長脂肪酸（カプリル酸、カプロン酸およびラウリン酸）を含有するモノ、ジ、およびトリグリセリドの混合物である、中鎖グリセリド、（ｉ）エチレン−ジアミン四酢酸、（ｊ）塩化セチルピリジニウムなどの陽イオン性界面活性剤、（ｋ）ラブラゾール、ラブラファックなどのポリエチレングリコールの脂肪酸誘導体、ならびに（ｌ）ラウロイルマルトシド、ラウロイルスクロース、ミリストイルスクロース、パルミトイルスクロースなどのアルキルサッカライドが含まれる。
【０１９１】
一部の実施形態では、吸収促進剤は、医薬組成物の全重量（通常、腸溶コーティング剤を除く）に対する重量％として測定される量で存在することになろう。さらなる非限定例として、実施形態において存在する吸収促進剤の量は、０．１〜２０重量％、０．５〜２０重量％、１．０〜２０重量％、２．０〜２０重量％、３．０〜２０重量％、４．０〜２０重量％、５．０〜２０重量％、５．０〜１５重量％、５．０〜１４重量％、５．０〜１３重量％、５．０〜１２重量％、５．０〜１２重量％、５．０〜１１重量％、５．０〜１０重量％、６．０〜１０重量％、７．０〜１０重量％、８．０〜１０重量％、９．０〜１０重量％、５．０〜９．０重量％、５．０〜８．０重量％、５．０〜７．０重量％、および５．０〜６．０重量％の範囲とすることができる。
【０１９２】
一部の実施形態では、ｐＨ低下剤と吸収促進剤との重量比は、約３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、または上記の例示的な比の任意の２つの間とすることができる。所与の医薬組成物におけるすべてのｐＨ低下剤の総重量およびすべての吸収促進剤の総重量は、上記の例示的な比に含まれる。例えば、医薬組成物が、２種のｐＨ低下剤および３種の吸収促進剤を含む場合、上記の比は、両方のｐＨ低下剤の合わせた総重量と３種の吸収促進剤すべてを合わせた総重量に基づいて計算されよう。
【０１９３】
一部の実施形態では、吸収促進剤はｐＨ５．５未満、特にｐＨ３．０〜ｐＨ５．０の間などの酸性ｐＨにおいて可溶であろう。
【０１９４】
一部の実施形態では、提供される組成物は、１種または複数の保護ビヒクルを含む。本明細書で使用する場合、保護ビヒクルとは、担体、層、コーティング剤または他のビヒクルなどの、胃のプロテアーゼから活性ペプチド（例えば、アンジオテンシン（１−７）ペプチド）を保護する、任意の保護性構成要素および／または構築物を指す。通常、保護ビヒクルは最終的に溶解し、その結果、特定の剤形中の活性成分および他の成分が放出され得る。保護ビヒクルの一般的な形態は、腸溶コーティング剤である。一部の実施形態では、好適な腸溶コーティング剤（costing）は、０．１Ｎ  ＨＣｌ中で少なくとも２時間、本発明の医薬組成物の崩壊を防止することができ、次に、この医薬組成物が１分間あたり１００回転数で回転された溶出浴中で、ｐＨが６．３まで上昇した後、３０分以内に前記組成物のすべての内容物を完全に放出することができる。
【０１９５】
多くの腸溶コーティング剤が当分野で公知であり、１つまたは複数の実施形態において有用である。腸溶コーティング剤の非限定例には、酢酸フタル酸セルロース、コハク酸ヒドロキシプロピルメチルエチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシルメチルエチルセルロースおよびメタクリル酸−メタクリル酸メチルコポリマーが含まれる。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチド、溶解度増強剤および／または取込み増強剤などの吸収促進剤、ならびにｐＨ低下剤が、本実施形態の構成要素の胃への保護通過を可能にする、十分に粘ちょうな保護シロップ中に含まれる。
【０１９６】
好適な腸溶コーティング剤は、例えば、本発明の活性な構成要素および他の構成要素がカプセル内に充填された後、カプセル剤に施用することができる。他の実施形態では、腸溶コーティング剤は、錠剤の外側上にコーティングされるか、または活性な構成要素の粒子の外側表面上にコーティングされ、次に、錠剤形態に圧縮されるか、またはカプセルに充填される。
【０１９７】
一部の実施形態では、本発明のすべての構成要素は、担体またはビヒクルから放出されて、できる限り同時に、腸環境で溶解することが望ましいものとなり得る。一部の実施形態では、ビヒクルまたは担体は、小腸において活性な構成要素を放出し、ここで、細胞間輸送または傍細胞輸送を高める取込み増強剤が、同じ取込み増強剤が結腸において後から放出される場合よりも、望ましくない副作用を引き起こす可能性が低いことがやはり好ましいものとなり得る。しかし、本発明は、結腸においておよび小腸において有効であると考えられることが理解されよう。上で議論したものの他に、多数のビヒクルまたは担体が、当分野で公知である。
【０１９８】
一部の実施形態では、（とりわけ、本発明の構成要素が、どのように同時に放出されるかを最適化する際には）腸溶コーティング剤の量を低く保つことが望ましいことがある。一部の実施形態では、腸溶コーティング剤は、固形剤形などの医薬組成物の残りの重量に対して３０％以下で加える（「残り」とは、腸溶コーティング剤自体を除いた医薬組成物である）。他の実施形態では、腸溶コーティング剤は、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、または１０％未満を加える。一部の実施形態では、腸溶コーティング剤などの保護ビヒクルは、医薬組成物（例えば、固形剤形）の総重量のおよそ２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％の量、またはそれ未満を構成する。
【０１９９】
投与経路
本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニスト（または、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドもしくはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含有する組成物もしくは医薬）は、任意の適切な経路によって投与することができる。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、非経口投与される。一部の実施形態では、非経口投与は、静脈内、皮内、吸入、経皮（局所）、眼内、筋肉内、皮下、筋肉内、および／または経粘膜投与から選択される。一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、皮下投与される。本明細書で使用する場合、用語「皮下組織」とは、皮膚の直下にある、緩く、不規則な結合組織の層として定義される。例えば、皮下投与は、以下に限定されないが、大腿部、腹部、殿部、または肩甲部を含む領域に組成物を注射することにより実施することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、静脈内投与される。他の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、心臓または筋（例えば、筋肉内）、腫瘍（腫瘍内）、神経系（例えば、脳、脳室内、くも膜下内への直接注射）などの標的組織への直接投与により投与される。あるいは、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニスト（または、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含有している組成物もしくは医薬）は、吸入、非経口、皮内、経皮、または経粘膜（例えば、経口または鼻内）により投与することができる。所望の場合、２つ以上の経路を、同時に使用することができる。
【０２００】
一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、経口投与される。一部の実施形態では、本発明は、経口投与向けの、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの固形剤形であって、（ａ）アンジオテンシン（１−７）ペプチド、（ｂ）少なくとも１種の薬学的に許容されるｐＨ低下剤、（ｃ）アンジオテンシン（１−７）ペプチドの生体利用を促進するのに有効な少なくとも１種の吸収促進剤、および（ｄ）保護ビヒクルを含む、固形剤形を提供する。一部の実施形態では、固形剤形は、カプセル剤または錠剤である。経口用製剤を作製するための様々な方法および成分が当分野で公知であり、当業者であれば、これらの方法および成分のいずれが、本明細書において記載されている発明および／またはその全体の開示が本明細書に組み込まれている、２０１２年９月１７日出願の米国仮特許出願第６１／７０１，９７２号における発明に適合可能であるかを決定することができることが予期される。こうした方法および成分も、本発明の範囲内のものとして企図される。
【０２０１】
投与
一部の実施形態では、組成物は、治療有効量で、および／または特定の所望の転帰（例えば、筋ジストロフィーの処置、またはそのリスクの低減）に相関する投与レジメンに従って投与される。
【０２０２】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状もしくは特徴の強度、重症度、期間もしくは頻度が軽減されるよう、またはその発生が遅延するような投与間隔において、有効用量で定期的に投与される。一部の実施形態では、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状または特徴は、筋消耗、筋力低下、筋脆弱化、筋仮性肥大、関節拘縮、骨格変形、心筋症、嚥下障害、腸および膀胱の機能障害、筋虚血、認知障害、行動機能障害、社会性障害、脊柱側弯症、ならびに呼吸機能障害からなる群から選択される。
【０２０３】
一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含む製剤は、単回用量として投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含む製剤は、定期的な間隔で投与される。本明細書で使用する場合、「時間間隔」での投与は、治療有効量が定期的（１回用量とは区別される）に投与されることを示す。この時間間隔は、標準的な臨床技法により決定することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含む製剤は、２か月毎、毎月、毎月２回、３週間毎、２週間毎、毎週、毎週２回、毎週３回、毎日、毎日２回、または６時間毎に投与される。単一の個体のための投与間隔は一定間隔である必要はないが、個体の必要性に応じて、経時的に変えることができる。
【０２０４】
本明細書で使用する場合、用語「２か月毎」とは、２か月あたり１回（すなわち、２か月毎に１回）の投与を意味する。用語「毎月」とは、１か月あたり１回の投与を意味する。用語「３週間毎」とは、３週間あたり１回（すなわち、３週間毎に１回）の投与を意味する。用語「２週間毎」とは、２週間あたり１回（すなわち、２週間毎に１回）の投与を意味する。用語「毎週」とは、１週間あたり１回の投与を意味する。用語「毎日」とは、１日あたり１回の投与を意味する。一部の実施形態では、繰返し用量は、１日の同じ時間（例えば、１０ａｍ）に与えられる。一部の実施形態では、繰返し用量は、１日の異なる時間に与えられる。
【０２０５】
一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含む製剤は、定期的な間隔で無期限投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含む製剤は、定期的な間隔で定められた期間、投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されているアンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストを含む製剤は、定期的な間隔で、５年間、４年間、３年間、２年間、１年間、１１か月間、１０か月間、９か月間、８か月間、７か月間、６か月間、５か月間、４か月間、３か月間、２か月間、１か月間、３週間、２週間、１週間、６日間、５日間、４日間、３日間、２日間または１日間投与される。
【０２０６】
本発明に従って投与すべき具体的な用量または量は、例えば、所望の転帰の特質および／もしくは程度、投与経路および／もしくはタイミングの詳細、ならびに／または１種もしくは複数の特徴（例えば、体重、年齢、個人の経歴、遺伝的特徴、生活スタイルパラメータ、心臓欠損の重症度および／もしくは心臓欠損のリスクレベルなど、またはそれらの組合せ）に応じて、変わり得る。そのような用量または量は、当業者によって決定することができる。一部の実施形態では、適切な用量または量は、標準的な臨床技法に従って決定される。例えば、一部の実施形態では、適切な用量または量は、筋肉量を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００％、またはそれ超増加させるのに十分な用量または量である。例えば、一部の実施形態では、適切な用量または量は、筋虚血の出現率または重症度を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００％低下させるのに十分な用量または量である。あるいは、または追加的に、一部の実施形態では、適切な用量または量は、投与すべき所望投与量または至適投与量の範囲または量を特定する手助けとなる、１種または複数のインビトロまたはインビボアッセイの使用により決定される。
【０２０７】
様々な実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、治療有効量で投与される。本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」とは、本発明の医薬組成物に含有されている、治療剤の総量に基づいて、主に決定される。一般に、治療有効量は、対象に有意な利益（例えば、根本的な疾患または状態を処置する、変調する、治癒する、予防する、および／または寛解させる）を実現するのに十分である。一部の特定の実施形態では、投与されるべき適切な用量または量は、インビトロまたは動物モデルの試験システムに由来する用量応答曲線から推定することができる。
【０２０８】
様々な実施形態では、誘導体、アナログ、および／または塩を含めた、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの治療有効投与量は、様々な量で存在し得る。一部の実施形態では、治療有効投与量は、例えば、約１〜１０，０００μｇ／ｋｇ、約５〜１，５００μｇ／ｋｇ、約１００〜１，０００μｇ／ｋｇ、または４００〜５００μｇ／ｋｇとすることができる。一部の実施形態では、治療有効投与量は、例えば、約１μｇ／ｋｇ、２．５μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、４０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、６０μｇ／ｋｇ、７０μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、４００μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、６００μｇ／ｋｇ、７００μｇ／ｋｇ、８００μｇ／ｋｇ、９００μｇ／ｋｇ、１０００μｇ／ｋｇ、または１５００μｇ／ｋｇとすることができる。特定の個体のための有効用量は、個体の必要性に応じて、経時的に変えることができる（例えば、増量または減量）。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１回用量で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１日に提供される。
【０２０９】
他の実施形態では、治療有効投与量は、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜４００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜３００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜２００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜９０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜８０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜７０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜６０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜４０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１回用量で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１日に提供される。
【０２１０】
さらに他の実施形態では、治療有効投与量は、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１回用量で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１日に提供される。
【０２１１】
さらに他の実施形態では、治療有効投与量は、例えば、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．１ｍｇ／ｋｇ体重、例えば約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１４ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１３ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００９ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００４ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００３ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重〜０．００２ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。一部の実施形態では、治療有効用量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００３ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００６ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００７ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００８ｍｇ／ｋｇ体重、０．０００９ｍｇ／ｋｇ体重、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重、０．００２ｍｇ／ｋｇ体重、０．００３ｍｇ／ｋｇ体重、０．００４ｍｇ／ｋｇ体重、０．００５ｍｇ／ｋｇ体重、０．００６ｍｇ／ｋｇ体重、０．００７ｍｇ／ｋｇ体重、０．００８ｍｇ／ｋｇ体重、０．００９ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、０．０２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０３ｍｇ／ｋｇ体重、０．０４ｍｇ／ｋｇ体重、０．０５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０６ｍｇ／ｋｇ体重、０．０７ｍｇ／ｋｇ体重、０．０８ｍｇ／ｋｇ体重、０．０９ｍｇ／ｋｇ体重、または０．１ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。特定の個体のための有効用量は、個体の必要性に応じて、経時的に変えることができる（例えば、増量または減量）。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１回用量で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている治療有効量は、１日に提供される。
【０２１２】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、約１〜１，０００μｇ／ｋｇ／日（例えば、約１〜９００μｇ／ｋｇ／日、１〜８００μｇ／ｋｇ／日、１〜７００μｇ／ｋｇ／日、１〜６００μｇ／ｋｇ／日、１〜５００μｇ／ｋｇ／日、１〜４００μｇ／ｋｇ／日、１〜３００μｇ／ｋｇ／日、１〜２００μｇ／ｋｇ／日、１〜１００μｇ／ｋｇ／日、１〜９０μｇ／ｋｇ／日、１〜８０μｇ／ｋｇ／日、１〜７０μｇ／ｋｇ／日、１〜６０μｇ／ｋｇ／日、１〜５０μｇ／ｋｇ／日、１〜４０μｇ／ｋｇ／日、１〜３０μｇ／ｋｇ／日、１〜２０μｇ／ｋｇ／日、１〜１０μｇ／ｋｇ／日の範囲）の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、約１〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、約４００〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、約１〜１００μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、約１〜６０μｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、約１、２、４、６、８、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１，０００ｕｇ／ｋｇ／日から選択される有効用量で投与される。
【０２１３】
一部の実施形態では、提供される組成物は、医薬製剤として提供される。一部の実施形態では、医薬製剤は、筋ジストロフィーの少なくとも１つの症状もしくは特徴の強度、重症度、期間、頻度の軽減、またはその発生の遅延の達成に相関する投与レジメンに従う、投与のための単位用量の量であるか、またはそれを含む。
【０２１４】
併用療法
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、筋ジストロフィーの予防および／または処置に現在使用されている１種または複数の公知の治療剤（例えば抗筋ジストロフィー薬）と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、公知の治療剤は、その標準的または承認を受けた投与レジメンおよび／またはスケジュールに従い投与される。一部の実施形態では、公知の治療剤は、その標準的または承認を受けた投与レジメンおよび／またはスケジュールに比べると、変更されたレジメンに従い投与される。一部の実施形態では、こうした変更されたレジメンは、その標準的または承認を受けた投与レジメンとは、１つもしくは複数の単位用量の量が変更（例えば、減量または増量）されている、および／または投与の頻度が変更されているという点（例えば、単位用量間の１つまたは複数の時間間隔が広がり、より少ない頻度となる、または上記の時間間隔が狭まり、より多い頻度となるという点）で異なる。
【０２１５】
一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドは、１種または複数の抗筋ジストロフィー薬と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、１種または複数の抗筋ジストロフィー薬は、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾンまたはＶＢＰ１５）、ホスホジエステラーゼ５型（ｐｄｅ５）阻害剤、または一酸化窒素ブースティング薬（ｂｏｏｓｔｉｎｇ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）（例えば、ＨＣＴ１０２６またはＮＣＸ３２０）などの他の治療法、ドリサペルセン（ｄｒｉｓａｐｅｒｓｅｎ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＶＩ−４６５８）、および他のものである。一部の実施形態では、１種または複数の抗筋ジストロフィー薬は、エテプリルセン（ＡＶＩ−４６５８）、ＨＣＴ１０２６、ＮＣＸ３２０、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、アバナフィル、イオデナフィル、ミロデナフィル、ウデナフィル、ザプリナスト、コルチコステロイド、およびそれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストは、１種または複数の抗筋ジストロフィー薬と同時に投与される。一部の実施形態では、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニスト、ならびに１種または複数の抗筋ジストロフィー薬は、逐次投与される。
【０２１６】
キット
本発明は、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニスト、またはそれを含有する製剤を含有するキットまたは他の製造品をさらに提供し、その再構成（凍結乾燥である場合）および／または使用のための指示書を提供する。キットまたは他の製造品は、投与（例えば、皮下、経口、吸入による）において有用な容器、注射器、バイアル、および任意の他の物品、デバイス、または機器を含むことができる。好適な容器は、例えば、ボトル、バイアル、注射器（例えば、予め充填されている注射器）、アンプル、カートリッジ、リザーバ、またはｌｙｏ−ｊｅｃｔを含む。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成することができる。一部の実施形態では、容器は、予め充填されている注射器である。好適な予め充填されている注射器は、以下に限定されないが、焼成シリコーンコーティングを有するホウケイ酸ガラス注射器、吹付けシリコーンを有するホウケイ酸ガラス注射器、またはシリコーンを有していないプラスチック樹脂製注射器を含む。
【０２１７】
通常、容器は、製剤、ならびに再構成および／または使用のための指示を表示することができる該容器上のラベル、またはその容器に付随したラベルを保持することができる。例えば、ラベルは、製剤が上記の濃度に再構成されることを表示することができる。ラベルはさらに、製剤が、例えば皮下投与に有用であること、または皮下投与向けであることを表示することができる。一部の実施形態では、容器は、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを含有する、単回用量の安定な製剤を含有することができる。様々な実施形態では、単回用量の安定な製剤は、約１５ｍｌ、１０ｍｌ、５．０ｍｌ、４．０ｍｌ、３．５ｍｌ、３．０ｍｌ、２．５ｍｌ、２．０ｍｌ、１．５ｍｌ、１．０ｍｌ、または０．５ｍｌ未満の容量で存在する。あるいは、製剤を保持する容器は、製剤の繰り返し投与（例えば、２〜６回の投与）を可能にする、多目的のバイアルであってもよい。キットまたは他の製造品はさらに、好適な賦形剤（例えば、ＢＷＦＩ、生理食塩水、緩衝生理食塩水）を含む第２の容器を含んでもよい。賦形剤および製剤の混合に際して、再構成された製剤中の最終タンパク質濃度は、一般に、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ）になろう。キットまたは他の製造品はさらに、使用のための指示書と共に、他の緩衝液、賦形剤、フィルター、針、注射器、および添付文書を含む、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料を含むことができる。一部の実施形態では、キットまたは他の製造品は、自己投与のための指示書を含んでいてもよい。
【実施例】
【０２１８】
（実施例１）
デュシェンヌ型筋ジストロフィーのｍｄｘマウスモデルにおける、アンジオテンシン（１−７）、ＰａｎＣｙｔｅまたは線状ＰａｎＣｙｔｅの投与
この実施例では、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の公知の容認されているモデルである、ｍｄｘマウスを使用して、ＤＭＤ患者において通常、観察される筋変性に及ぼす、いくつかのアンジオテンシン（１−７）ペプチド、およびアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストであるＡＶＥ０９９１の効果を評価する。DangainおよびVrbova、Muscle  development  in  mdx  mutant  mice、１９８４年、Muscle  Nerve７巻：７００〜７０４頁を参照されたい。Tanabeら、Skeletal  muscle  pathology  in  X-chromosome-linked  muscular  dystrophy(mdx)  mouse、１９８６年、Acta  Neuropathol、６９巻：９１〜９５頁；Kobayashiら、Endpoint  measures  in  the  mdx  mouse  relevant  for  muscular  dystrophy  pre-clinical  studies、２０１２年、Acta  Materialia、２２巻：３４〜４２頁も参照されたい。具体的には、ｍｄｘマウスは、そのジストロフィン遺伝子内部に点変異を有しており、これにより、ジストロフィン産生の撹乱がもたらされ、機能的ジストロフィンがこのマウスにおいてほとんど存在しなくなる。機能的ジストロフィンの欠乏により、横隔膜を含む多くの筋全体にかなりの線維形成および深刻な弱化が最終的にもたらされ、通常、死に至る。
【０２１９】
この実施例では、３種のアンジオテンシン（１−７）ペプチド、すなわちアンジオテンシン（１−７）（配列番号１）、ＰａｎＣｙｔｅ（配列番号２２）、および線状ＰａｎＣｙｔｅ（「ＴＸＡ３０１」とも称される。配列番号２）、ならびに低分子アンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストであるＡＶＥ０９９１を使用して、経時的な筋消耗の進行に及ぼすこれらの効果を試験する。具体的には、１１０匹のｍｄｘマウス（群あたり１０匹）を以下の表１に概説している群の１つに入れる。
【０２２０】
【表１】
2016522178.tif 000011
【０２２１】
この実施例では、線状ＰａｎＣｙｔｅ、ＰａｎＣｙｔｅおよびＡＶＥ０９９１は、生理食塩水中で調製し、２８日間、毎日、１００μｌ／マウスの用量の体積で肩甲下注射により皮下投与する。投与用溶液は、３日毎に新しく調製する。
【０２２２】
最後の注射をして１週間後、各動物を犠牲にして、いくつかの筋肉を切り取って秤量し、アンジオテンシン（１−７）ペプチドまたはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの投与が、対照動物と比べて、処置ｍｄｘマウスの筋肉量を増加させるのに十分であるかどうかを決定する。この検討では、試験した筋とは、横隔膜、腓腹筋、大腿四頭筋および三頭筋である。
【０２２３】
筋線維のサイズも、標準的な組織学的方法および免疫組織化学的方法を使用して、処置マウスと対照マウスの両方で決定する。公知の方法（例えば、ヘマトキシリンおよびエオシン染色）による組織病理学も使用して、筋肉量が健全な線維からなるかどうかを決定する。健全な筋組織の指標には、丸みを帯びた線維および中心核の存在が含まれる。筋組織を分析する例示的な方法には、これらの開示が、参照により本明細書に組み込まれている、Meola  G、「Advanced  microscopic  and  histochemical  techniques:  Diagnostic  tools  in  the  molecular  era  of  myology」、２００５年、Eur  J  Histochem４９巻（１号）：９３〜９６頁、およびKarpatiら、「Tracer  and  marker  techniques  in  the  microscopic  study  of  skeletal  muscles」、１９８１年、Methods  Achiev  Exp  Pathol、１０巻：１０１〜１３７頁において記載されているものが含まれる。
【０２２４】
アンジオテンシン（１−７）ペプチドの投与により、ｍｄｘマウスにおける筋肉量が増加することが予期される。肥大は、様々な組織において観察されることになろう。アンジオテンシン（１−７）ペプチドの投与はまた、ｍｄｘマウスにおいて、健全な筋組織も増加させることになろう。
【０２２５】
（実施例２）
筋ジストロフィーのＳｇｃｄ−／−マウスモデルにおける、Ａｎｇ（１−７）の投与
この実施例では、肢帯型筋ジストロフィーの公知モデルである、Ｓｇｃｄ−／−マウスを使用して、筋骨格線維、血圧、心拍数、心臓活動、圧反射感受性、酸化ストレス、ＡＴ１Ｒ受容体発現、ならびに安静時の心臓の交感神経緊張および迷走交感神経緊張に及ぼす、アンジオテンシン（１−７）ペプチドの効果を評価した。Ｓｇｃｄ−／−マウスは、サルコグリカン複合体の重要な構成要素がなく、具体的には、これらのマウスは、Ｆ−アクチン細胞骨格と細胞外マトリックスとの間にリンクがない。この欠陥により、筋線維の完全性の低下および筋細胞における細胞シグナル伝達の異常調節のために、筋消耗および弱化が引き起こされる。この欠陥により、若年において、歩行活動の低下および自律神経機能不全がもたらされることが既に示されている。この自律神経機能不全は、後年における心臓の機能異常をもたらすと考えられる。
【０２２６】
Ｓｇｃｄ−／−マウスにおける正常な運動活動の撹乱に及ぼす、アンジオテンシン（１−７）ペプチドの効果を試験するため、意識のある若い（１０〜１５週）Ｓｇｃｄ−／−マウス、および対照のＣ５７ＢＬ６マウスを無線遠隔測定法により解析した。マウスが１０週齢になると、ケタミン−キシラジン麻酔下で、無線遠隔測定器を左の頸動脈から大動脈に埋め込んだ。回復後、血圧、心拍数および歩行活動を２４時間／日、測定した。血圧測定は、収縮期動脈圧およびパルス間隔（ＰＩ）の心拍毎の測定を可能にするよう、１時間の期間、２０００Ｈｚでサンプリングした。心拍数の圧反射の対照は、公知のシークエンス技法を使用する、収縮期血圧およびパルス間隔における自発的変動から見積もった。
【０２２７】
圧反射感受性は、このシークエンス技法を使用する、収縮期血圧およびパルス間隔における自発的変動から算出した。具体的には、圧反射感受性は、４つまたはそれ超の連続血圧パルスのシークエンスの平均傾きとして算出し、この場合、血圧およびパルス間隔の変化が、正に相関（ｒ２＞０．８５）する。
【０２２８】
心臓の交感神経緊張および副交感神経緊張は、それぞれ、β−アドレナリン作動性受容体遮断薬であるプロプラノロール、およびムスカリン様コリン作動性受容体遮断薬であるメチルアトロピンに応答する心拍数から算出した。具体的には、安静時の心臓の交感神経緊張および副交感神経（迷走神経）緊張は、それぞれ、プロプラノロール（１μｇ／ｇ、ＩＰ）およびメチルアトロピン（１μｇ／ｇ、ＩＰ）に応答する心拍数から見積もった。血管運動の交感神経緊張は、神経節遮断薬であるクロルイソンダミン（１２μｇ／ｇ、ＩＰ）の注射に応答する平均動脈血圧の低下から算出した。
【０２２９】
３週齢のマウスの仔において、ケタミン−キシラジン麻酔下で、Ａｎｇ（１−７）（「ＴＸＡ１２７」とも称される）またはビヒクルと共に、浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ）を埋め込んだ。
【０２３０】
データを２〜３日間かけて収集し、２４時間の平均を算出した。対照およびＳｇｃｄ−／−マウスの個別の群に、３週齢で開始して８週間、Ａｎｇ−（１−７）（３００ｎｇ／ｋｇ／分）を注入した。これらのマウスにおいて、上記と同じプロトコルを使用して測定値を得た。図１Ａは、この実施例において適用したデータ収集技法の一部を図示したものを示し、図１Ｂは、この検討のための実験を示す。
【０２３１】
筋骨格の表現型を評価するため、筋骨格（大腿四頭筋）のパラフィン切片をマッソントリクロームにより染色し、組織病理および線維形成を評価した。筋骨格の凍結切片をポリクローナル抗δおよび抗βサルコグリカン一次抗体、核染色剤ならびにＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８と共にインキュベートした。ウサギ抗ＡＴ１Ｒおよび抗Ｍａｓ核染色剤、ならびに二次抗体のヤギ抗ウサギＩｇＧにより、ＡＴ１Ｒ（Ａｎｇ１型受容体）およびＭａｓ（Ａｎｇ（１−７）受容体）を検出した。ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）蛍光により、酸化ストレス（Ｏ２・−）を測定した。
【０２３２】
この実施例におけるデータは、±ＳＥとして表される。適宜、ＡＮＯＶＡならびに対応ｔ検定および独立ｔ検定により結果を解析し、有意性をｐ＜０．０５で求めた。
【０２３３】
図２Ａおよび２Ｂは、未処置、およびＡｎｇ（１−７）処置対照、およびＳｇｃｄ−／−マウスにおける、平均動脈血圧および心拍数のレベルを示す。パネルＡは、Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて通常観察されたより低い血圧が、Ａｎｇ（１−７）処置によって有意に影響を受けなかったことを示す。パネルＢは、Ｓｇｃｄ−／−マウスのＡｎｇ（１−７）処置により、未処置のＳｇｃｄ−／−対照に比べて、動物の心拍数が穏やかに低下しているように思われる。
【０２３４】
図３において示されている通り、歩行活動は、予期される通り、Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいてかなり低下した。しかし、この歩行活動の低下は、Ａｎｇ（１−７）による処置によってかなり軽減された。実際のところ、処置Ｓｇｃｄ−／−マウスにおける歩行移動のレベルは、対照のＣ５７ＢＬ６マウスとは、それほど変わりがなかった。
【０２３５】
図４は、対照とＳｇｃｄ−／−マウスとの間、および未処置動物とＡｎｇ（１−７）処置動物との間の、４Ａ）圧反射感受性、４Ｂ）心臓の迷走神経緊張、４Ｃ）心臓の交感神経緊張、および４Ｄ）血管運動の交感神経緊張の比較を示す。パネルＡおよびＢにおいて示されている通り、正常マウスと比較して、Ｓｇｃｄ−／−マウスにおける圧反射感受性および心臓の迷走神経緊張の軽減は、Ａｎｇ（１−７）による処置によって本質的に抑止された。パネルＣおよびＤは、Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて通常観察される、心臓の交感神経緊張および血管運動の交感神経緊張の向上も、Ａｎｇ（１−７）による処置によって本質的に抑止されたことを示す。
【０２３６】
図５は、筋骨格の線維形成、ここでは大腿四頭筋に関する、組織病理（パネル５Ａ）と定量的（パネル５Ｂ）データの両方を示す。両方のパネルから分かる通り、Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて観察されたかなりの線維形成が、Ａｎｇ（１−７）による処置により顕著に低下した。実際、パネル５Ｂは、Ａｎｇ（１−７）により処置されたＳｇｃｄ−／−マウスにおいて観察された線維形成のレベルは、対照のＣ５７ＢＬ６マウスと同等であったことを示す。
【０２３７】
Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて、アンジオテンシン１型受容体（ＡＴ１Ｒ）の増加が観察され、この増加は歩行活動の低減および自律神経機能不全と相関がある（Sabharwalら、Receptor  activity-modifying  protein  1  increases  baroreflex  sensitivity  and  attenuates  Angiotensin-induced  hypertension、２０１０年、Hypertension、５５巻（３号）：６２７〜６３５頁を参照されたい）。図６は、Ａｎｇ（１−７）による処置により、未処置Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて観察されたＡＴ１Ｒの増加が本質的に抑止されることを示す。
【０２３８】
スーパーオキシドのレベル向上によるなどの、酸化ストレスのレベルの向上は、筋ジストロフィーの広範囲な症状と相関があった（Terrillら、Oxidative  stress  and  pathology  in  muscular  dystrophies:  focus  on  protein  thiol  oxidation  and  dysferlinopathies、２０１３年、FEBS  Journal  doi:  10.1111/febs.１２１４２頁を参照されたい。MurphyおよびKehrer、Oxidative  stress  and  muscular  dystrophy、１９８９年、Chem  Biol  Interact、６９巻（２〜３号）：１０１〜１７３頁も参照されたい）。類似の現象がＳｇｃｄ−／−マウスにおいて通常観察され、これは、このモデルにおいて観察された歩行活動および自律神経機能の困難さに相関があると考えられる。図７Ａおよび７Ｂは、未処置Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて観察されたスーパーオキシドの顕著なレベル向上が、Ａｎｇ（１−７）による処置によって強力に弱められたことを示す。パネルＡは、試料のジヒドロエチジウム蛍光を示す一方、パネルＢは、各群におけるスーパーオキシドのレベルの定量的評価を示す。
【０２３９】
Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて、血圧の低下なしに筋骨格線維形成を軽減し、かつ歩行活動および交感神経と迷走神経とのバランスを回復させる、Ａｎｇ（１−７）ペプチドの能力は、筋ジストロフィーの処置として、Ａｎｇ（１−７）ペプチドがかなりの治療可能性を有することを示す。この実施例において示されている通り、Ａｎｇ（１−７）ペプチドは、未処置Ｓｇｃｄ−／−マウスと比較して、Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて毎回観察された機能異常の尺度を改善した。上の実施例により例示されている通り、この発見に基づくと、アンジオテンシン（１−７）ペプチドおよび／またはアンジオテンシン（１−７）受容体アゴニストの投与は、筋ジストロフィーの処置に対する、強力かつ新規な手法を提供することができる。
【０２４０】
（実施例３）
ｍｄｘマウスへのＰａｎＣｙｔｅおよび線状ＰａｎＣｙｔｅ組成物の経口投与
この実施例では、特定のアンジオテンシン（１−７）ペプチド、すなわちＰａｎＣｙｔｅ（配列番号２２）および線状ＰａｎＣｙｔｅ（「ＴＸＡ３０１」とも称される。配列番号２）を例示的な経口用製剤に使用し、ｍｄｘマウスの状態に及ぼす経口投与の効果を評価する。この実施例では、強制経口投与を使用して、公知の方法による薬剤を投与し、２０１２年９月１７日出願の米国仮特許出願第６１／７０１，９７２号に記載されている方法に従って、ＰａｎＣｙｔｅおよび線状ＰａｎＣｙｔｅの個別の水性製剤をそれぞれ、クエン酸、ラウロイルカルニチン、およびフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースと共に作製する。
【０２４１】
ＰＢＳ対照、およびそのままのアンジオテンシン（１−７）ペプチド対照を含めて、８群に分けた合計８０匹のｍｄｘマウスを、表２に示されている設計に従い、この実施例に使用する。
【表２】
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【０２４２】
実施例１における場合と同様に、最後の投与をして１週間後、各動物を犠牲にして、いくつかの筋肉を切り取って秤量し、アンジオテンシン（１−７）ペプチド、および／またはＰａｎＣｙｔｅもしくは線状ＰａｎＣｙｔｅのどちらかを含む組成物の経口投与が、対照動物と比べて、処置ｍｄｘマウスの筋肉量を増加させるのに十分であるかどうかを決定する。この検討では、筋とは、横隔膜、腓腹筋、大腿四頭筋および三頭筋である。
【０２４３】
筋線維のサイズも、標準的な組織学的方法および免疫組織化学的方法を使用して、処置マウスと対照マウスの両方で決定する。実施例１の上記の通り、公知の方法（例えば、ヘマトキシリンおよびエオシン染色）による組織病理学も使用して、筋肉量が健全な線維からなるかどうかを決定する。健全な筋組織の指標には、丸みを帯びた線維および中心核の存在が含まれる。
【０２４４】
ＰａｎＣｙｔｅまたは線状ＰａｎＣｙｔｅのどちらかを含む組成物の経口投与は、ｍｄｘマウスにおいて筋肉量を増加させるのに十分となることが予期される。肥大は、様々な組織において観察されることになろう。ＰａｎＣｙｔｅまたは線状ＰａｎＣｙｔｅのどちらかを含む組成物の経口投与はまた、ｍｄｘマウスにおいて健全な筋組織を増加させるであろう。
【０２４５】
（実施例４）
筋ジストロフィーのＳｇｃｄ−／−マウスモデルにおける、アンジオテンシン（１−７）ペプチドによる処置後の、機能的性能および線維形成の程度
この実施例では、定着している肢帯型筋ジストロフィー−２Ｆ（ＬＧＭＤ−２Ｆ）のマウスモデルである、サルコグリカンデルタ欠損マウス（Ｓｇｃｄ−／−）を使用して、この疾患の罹患者における機能障害および線維形成の進行に及ぼす、アンジオテンシン（１−７）ペプチドの効果を試験した。Ｓｇｃｄ−／−マウスは、若年において、歩行活動の低下、および筋骨格におけるジストロフィー性表現型を示すことが一般に公知であり、この実施例は、アンジオテンシン（１−７）ペプチドによる処置により、歩行活動の改善および線維形成速度の低下を示す。
【０２４６】
合計３２匹のＳｇｃｄ−／−マウスを無作為に４つの処置群、すなわち生理食塩水群（ビヒクル）、ＴＸＡ１２７群、Ｐａｎｃｙｔｅ群、およびＴＸＡ３０１群の１つに割り当てた（それぞれ、ｎ＝８）。投与したアンジオテンシン（１−７）ペプチドの用量は、ＴＸＡ１２７の場合、５００μｇ／ｋｇ／日、Ｐａｎｃｙｔｅの場合、５０μｇ／ｋｇ／日、およびＴＸＡ３０１の場合、５０μｇ／ｋｇ／日であった。処置物を含有する浸透圧ミニポンプを、２８〜３５週齢のマウスに埋め込み、アンジオテンシン（１−７）ペプチドを８週間、注入した。処置の最後の３週間、マウスを各動物により行われる自発運動量を計算するために取り付けた回し車を有するケージ内に入れた。車の回転総数（走った距離）を毎日収集した。８週間の処置の終わりに、組織病理学的および酸化ストレス解析のために、大腿四頭筋をマウスから採取した。
【０２４７】
図８は、６、７および８週目の間に、回し車において、各処置群のマウスによりなされた平均回転数を示す。生理食塩水の対照群におけるマウスと比べると、ＴＸＡ１２７とＴＸＡ３０１の両方による処置により、行われた自発運動量が有意に改善し、ＴＸＡ１２７が最も大きな改善程度を示した。図９は、３週間の試験期間（６、７および８週目）にわたり、処置群あたりの累積合計として図示されているに過ぎない、図８と同じデータを示す。やはり、ＴＸＡ１２７とＴＸＡ３０１の両方による処置により、生理食塩水の対照動物と比べると、これらの群により行われた運動量が有意に増加することを示した。注目すべきことに、ＴＸＡ１２７による処置によって、生理食塩水の対照動物と比べて、６倍超で改善した。
【０２４８】
Ｈ＆Ｅ染色を使用し、マウスの大腿四頭筋のジストロフィンの形態を試験した。図１０Ａは、処置マウスに由来する、例示的なＨ＆Ｅ（上の列）ならびにマッソン（下の列）染色を示す。図１０Ａおよび１０Ｂにおいて示されている通り、生理食塩水処置Ｓｇｃｄ−／−マウスは、中心核、脂肪酸の浸潤、およびコラーゲン沈着の増加が示される一方、ＴＸＡ１２７による処置は、Ｓｇｃｄ−／−マウスの筋骨格において、有意に線維形成を軽減した。さらに、ＴＸＡ３０１により処置されたマウスも一部の改善を示した一方、線維形成の軽減は、ＰａｎＣｙｔｅ処置マウスでは観察されなかった。
【０２４９】
ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）を使用して、処置Ｓｇｃｄ−／−マウスにおける酸化ストレスの程度を試験した。手短に言うと、ＤＨＥ溶液を筋骨格の切片に施用し、画像を共焦点顕微鏡でとらえた（赤色が、酸化ストレスを示す）。例示的な共焦点画像が図１１Ａにおいて示されている。線維形成の程度を定量化するため、６枚の大腿四頭筋骨格の切片の平均を各マウスから得た。各マウスの蛍光強度を、ＮＩＨ  ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量化し、生理食塩水処置Ｓｇｃｄ−／−マウスにおいて測定された平均蛍光強度の百分率に正規化した。図１１Ａおよび１１Ｂに示されている通り、生理食塩水処置Ｓｇｃｄ−／−マウスは、酸化ストレスの増加を示しており、これは、ＴＸＡ１２７によって有意に弱められた。
【０２５０】
この実施例は、ＴＸＡ１２７および／またはＴＸＡ３０１などのアンジオテンシン（１−７）ペプチドによる処置は、この実施例において、線維形成の程度、酸化ストレスの程度、および筋機能の障害の程度などの症状を含めた、筋ジストロフィーの処置に有意な効果を有することを明確に示す。
【０２５１】
均等物および範囲
当業者は、決まった手順の実験だけを使用して、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または確認することができるであろう。本発明の範囲は、上の詳細説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲において説明される。
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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