(57)【要約】対象において、脱水および／または利尿に起因する血液濃縮などの血液濃縮を治療するためのポロクサマーの使用およびポロクサマーを投与する方法を提供する。ポロクサマーの投与は、血液濃縮、脱水および／または利尿の有害作用を防止、治療、または軽減する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における血液濃縮の合併症を治療または防止するための方法であって：
ａ）血液濃縮、その合併症を示すか、またはその危険性がある対象を特定すること；および
ｂ）治療上有効な量のポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを投与して前記合併症を治療または防止すること、
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記コポリマーが次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、
ａ’およびａは、同一または異なり、各々、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分が前記化合物の（約）６０重量％〜９０重量％を構成するような整数であり、および
ｂは、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分が（約）１３００〜２３００ダルトン（Ｄａ）の分子量を有するような整数である）
を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が（約）１７５０Ｄａであり、前記コポリマーの全分子量が（約）８４００〜８８００Ｄａである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、
ａ’およびａは、同一または異なり得、各々、５〜１５０（両端を含む）の整数であり、および
ｂは１５〜７５（両端を含む）の整数である）
を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ａ’およびａが各々、７０〜１０５（両端を含む）の整数であり、および
ｂが１５〜７５（両端を含む）の整数である、請求項２または４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリオキシプロピレン疎水性部分が（約）１８００Ｄａの分子量を有し、および前記親水性ポリオキシエチレン含有量が前記全分子量の約８０％である、請求項２または４〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが減少した不純物を有し、それによって前記多分散性値が１．０７以下である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、ａ’およびａは、同一で、約７８、７９または８０であり、およびｂは約２７、２８、２９または３０である）
を有するポロクサマー１８８（Ｐ１８８）である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
ａ’およびａが８０であり、ｂが２７である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが低分子量物質を減らすた
めに精製されている、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が（約）１７５０Ｄａである、請求項２〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、約１４００〜２０００Ｄａまたは１４００〜２０００Ｄａの分子量を有する疎水性部分と、前記コポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する親水性部分とを有するポロクサマーである、請求項２〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される前記疎水性部分が１５００〜２１００Ｄａの分子量を有する、請求項２〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記分子量が１７００〜１９００Ｄａである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記コポリマーがポロクサマー１８８を含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記コポリマーが式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、
（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される前記疎水性部分が（約）１７００〜１８００Ｄａの分子量と、８４００〜８８００Ｄａの全分子量とを有するか、または
ｂが２７であり、前記親水性部分が前記ポロクサマーの前記全分子量の８０％〜８１％を構成し、前記分子量が１７５０Ｄａであるか、または
ａ’およびａは、同一または異なり得、各々、５〜１５０の整数であり、ｂは１５〜７５もしくは１５〜７２の整数であり、前記親水性部分は前記ポロクサマーの全分子量の８０％〜８１％を構成し、前記分子量は１８００Ｄａである）
を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記コポリマーが長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記コポリマーが、対象に投与した場合、前記コポリマー製剤の前記分布における前記主ピークの前記半減期よりも約１．５倍超もしくは１．５倍長い循環半減期（ｔ１／２）を有する物質もしくは成分である成分、またはそのような物質もしくは成分を対象の血漿中で生じさせる成分を含まない、あるいは全成分が前記主ピークの前記半減期の５倍以内である循環半減期を有するような、ＬＣＭＦ１８８である長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記ＬＣＭＦポロクサマーが、式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーであり、
ａ’またはａは、前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が約１３００〜２３００Ｄａとなるような整数であり、ａ’およびａは同一または異なり、および
ｂは、前記親水性部分（Ｃ２Ｈ４Ｏ）の前記パーセンテージが前記コポリマーの前記全分子量の約６０重量％〜９０重量％であるような整数であり、
前記コポリマーの前記分布中の前記全成分の１．５％以下が４５００Ｄａ未満の平均分子量を有する低分子量成分であり、
前記コポリマーの前記分布中の前記全成分の１．５％以下が、１３，０００Ｄａを上回る平均分子量を有する高分子量成分であり、
前記コポリマーの前記多分散性値が、１．０７未満またはおよそ１．０７未満であり、および
前記分布の任意の成分の前記半減期が、前記コポリマーを対象に投与した場合に、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも５．０倍以下長い、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記コポリマーの前記分布中の全成分が、対象に投与した場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下または１．５倍以下長い、前記対象の前記血漿中の半減期を示す、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記コポリマーの前記分布中の全成分が、対象に投与した場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも１．５倍以下長い、前記対象の前記血漿における半減期を示す、請求項１９または請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ポリマー分布の前記成分のすべてが前記循環からほぼ同じ速度で消失する、請求項１９〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記コポリマーの前記分布中のいずれか１つまたは複数の成分が、対象に投与した場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期以下である前記対象の前記血漿中の半減期を示す、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記コポリマーの前記分布中の前記成分のすべてが、ヒト対象に投与した場合に、３０時間以下、２５時間以下、２０時間以下、１５時間以下、１０時間以下、９時間以下、８時間以下または７時間以下である前記対象の前記血漿中の半減期を示す、請求項１９〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記コポリマーの前記分布中の前記成分のすべてが、ヒト対象に投与した場合、１０時間以下である前記対象の前記血漿中の半減期を示す、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、約１４００〜２０００Ｄａまたは１４００〜２０００Ｄａの分子量を有する疎水性部分と、前記コポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する親水性部分とを有するポロクサマーである、請求項１９〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が（約）１７５０Ｄａである、請求項１９〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記コポリマーが、式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、ｂは２７であり、前記親水性部分は前記ポロクサマーの前記全分子量の８０％〜８１％を構成し、および前記分子量は１７５０Ｄａである）
を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記平均分子量が８４００〜８８００Ｄａである、請求項１９〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
１３，０００Ｄａを上回る前記製剤中の高分子量成分の前記パーセンテージが前記ポロクサマー製剤の成分の前記全分布の１％未満を構成し、投与した場合に、前記主ピークの前記循環半減期を上回る循環半減期を示す成分をもたらさない、請求項１９〜２９のいず
れかに記載の方法。
【請求項３１】
１３，０００Ｄａを上回る前記製剤中の高分子量成分の前記パーセンテージが前記ポロクサマー製剤の成分の前記全分布の０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはそれ以下を構成し、投与した場合、前記主ピークの前記循環半減期を上回る循環半減期を有する成分をもたらさない、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記多分散性値が１．０６未満、１．０５未満、１．０４未満、１．０３未満またはそれ以下である、請求項１〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
全成分が前記主ピークの２倍以内、３倍以内または４倍以内の循環ｔ１／２を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＬＣＭＦポロクサマーが、前記製剤中の１３，０００Ｄａを上回る分子量を有する高分子量成分の前記パーセンテージが前記ポロクサマー製剤の成分の前記全分布の１％未満を構成し、投与した場合に、前記主ピークの前記循環半減期を上回る循環半減期を有する成分をもたらさないポロクサマー１８８である、請求項１９〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記全分子量が約８４００〜８８００Ｄａである、請求項１９〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを１０．０ｍｇ／ｍＬ〜２００．０ｍｇ／ｍＬの濃度の組成物で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記血液濃縮が利尿および／または脱水に起因する、請求項１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記血液濃縮が利尿に起因する、請求項１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記コポリマーを投与して、利尿もしくは脱水の合併症または利尿もしくは脱水の発症の危険性を防止または軽減する、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記対象が利尿薬で治療されている、請求項１〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記コポリマーを利尿薬の前、後、または同時に投与する、請求項１〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
利尿または脱水の合併症を治療するための、請求項１〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記対象が利尿薬で治療された、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記対象が利尿薬治療に関連した利尿を経験している、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
腎臓に関連する症状、高血圧、肝臓の症状、心臓に関連する症状および緑内障から選択される状態を改善するために利尿薬治療が施されている、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
利尿の結果、電解質平衡異常、過剰な利尿、脱水、不整脈、血漿量の変更、少なくとも１つの血漿タンパク質の血液濃縮の増加、赤血球の血液濃縮、およびそれらの組み合わせ
から選択される副作用が起こっている、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記少なくとも１つの血漿タンパク質が急性期反応タンパク質である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記急性期反応タンパク質がフィブリノゲンである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記利尿薬が、チアジド利尿薬、ループ利尿薬、カリウム保持性利尿薬、炭酸脱水酵素阻害薬、浸透圧性利尿薬およびそれらの組み合わせから選択される、請求項４１〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、アテローム動脈硬化症、糖尿病、心不全、血管炎、レイノー病、鎌状赤血球症および赤血球増加症から選択される疾患または状態にかかっている、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
前記対象が術後患者である、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５２】
前記対象が急性心不全にかかっている、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記対象が脱水を有している、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記脱水が激しい運動に起因する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを、別の薬剤の投与の前、同時、または後に前記対象に投与する、請求項１〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記別の薬剤で基礎症状を治療する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記別の薬剤が利尿薬である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記治療の結果、前記対象の前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度が０．０５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬとなる、請求項１〜５７のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
前記治療の結果、前記対象の前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度が０．２ｍｇ／ｍＬ〜４．０ｍｇ／ｍＬとなる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記治療の結果、前記対象の前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度が約０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬまたは０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬとなる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記濃度がピーク濃度である、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記濃度が定常状態の循環における濃度である、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記濃度が投与後最大７２時間目標とされる、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記コポリマーを静脈内注入によって投与する、請求項５８〜６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６５】
前記コポリマーをボーラス注入法によって投与する、請求項５８〜６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
治療を少なくとも１２時間から最大４日間、または少なくとも１２時間から最大３日間、または少なくとも１日から３日間で複数回実施する、請求項１〜６５のいずれかに記載の方法。
【請求項６７】
前記コポリマーでの複数の治療を含む、請求項１〜６６のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
前記コポリマーを２回目投与し、前記第２治療が、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜４．０ｍｇ／ｍＬの前記対象の前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度を得るのに充分である、請求項１〜６５のいずれかに記載の方法。
【請求項６９】
前記第２治療の結果、約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの前記対象の前記循環における前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度を得る、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを１回の連続ＩＶ注入、複数の連続ＩＶ注入、１回のＩＶボーラス投与、もしくは複数のＩＶボーラス投与、またはそれらの組み合わせとして投与する、請求項１〜６３のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
前記対象がヒトまたは獣医学的対象である、請求項１〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
前記対象が非ヒトほ乳類である、請求項１〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
血液の血液濃縮、脱水もしくは利尿の合併症を治療または防止するために使用するための治療上有効な量のポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを含む組成物。
【請求項７４】
血液の血液濃縮、脱水もしくは利尿の合併症を治療または防止するための薬剤の処方のためのポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの使用。
【請求項７５】
前記コポリマーが、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有し、式中：
ａ’およびａは、同一または異なり、各々、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分が前記化合物の（約）６０重量％〜９０重量％を構成するような整数であり；および
ｂは、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される前記疎水性部分が（およそ）１３００〜２３００Ｄａの分子量を有するような整数である、請求項７３に記載の組成物または請求項７４に記載の使用。
【請求項７６】
前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が（およそ）１７５０Ｄａであり、前記コポリマーの前記全分子量が（およそ）８４００〜８８００Ｄａである、請求項７５に記載の組成物または使用。
【請求項７７】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有し、式中、
ａ’およびａは、同一または異なり得、各々、５〜１５０（両端を含む）の整数である；および
ｂは１５〜７５（両端を含む）の整数である、請求項７３に記載の組成物または請求項７４に記載の使用。
【請求項７８】
ａ’およびａが各々、７０〜１０５（両端を含む）の整数であり、および
ｂが１５〜７５（両端を含む）の整数である、請求項７５または７７に記載の組成物または使用。
【請求項７９】
前記ポリオキシプロピレン疎水性部分が（約）１８００Ｄａの分子量を有し、および
前記親水性ポリオキシエチレン含有量が前記全分子量の約８０％である、請求項７５または７７〜７８のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８０】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーは不純物が減少し、それによって多分散性値が１．０７以下である、請求項７５〜７９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８１】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、ａ’およびａは同一で、約７８、７９または８０であり、およびｂは約２７、２８、２９または３０である）を有するポロクサマー１８８（Ｐ１８８）である、請求項７３〜８０に記載の組成物または使用。
【請求項８２】
ａ’およびａが８０であり；およびｂが２７である、請求項８１に記載の組成物または使用。
【請求項８３】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが低分子量物質を減らすために精製されている、請求項７３〜８２のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８４】
前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が（約）１７５０Ｄａである、請求項７５〜７８のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８５】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、約１４００〜２０００Ｄａまたは１４００〜２０００Ｄａの分子量を有する疎水性部分と、前記コポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する親水性部分とを有するポロクサマーである、請求項７３〜８４のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８６】
（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される前記疎水性部分が１５００〜２１００Ｄａの分子量を有する、請求項７３〜８５のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８７】
前記分子量が１７００〜１９００Ｄａであるか、または１８００Ｄａである、請求項８６に記載の組成物または使用。
【請求項８８】
前記コポリマーがポロクサマー１８８を含む、請求項７３〜８７のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項８９】
前記ポロクサマーが式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有し、
（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される前記疎水性部分が（およそ）１７００〜１８００Ｄａの分子量、および８４００〜８８００Ｄａの全分子量を有する、または
ｂが２７であり、前記親水性部分が前記ポロクサマーの前記全分子量の８０％〜８１％を構成し、および前記分子量が１７５０Ｄａである、または
ａ’およびａは、同一または異なり得、各々、５〜１５０の整数であり、ｂは１５〜７５または１５〜７２の整数であり、前記親水性部分は前記ポロクサマーの前記全分子量の８０％〜８１％を構成し、および前記分子量が１８００Ｄａである、請求項７３〜８８のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項９０】
前記コポリマーが長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである、請求項７３〜８９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項９１】
前記コポリマーが、対象に投与した場合、前記コポリマー製剤の前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも約１．５倍超または１．５倍長い循環半減期（ｔ１／２）を有する物質もしくは成分である成分、または前記対象の前記血漿中でそのような物質もしくは成分を生じさせる成分を含まない、あるいは、全成分が前記主ピークの前記半減期の５倍以内である循環半減期を有するようなＬＣＭＦ１８８である長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項９２】
前記ＬＣＭＦポロクサマーが、式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーであり、式中
ａ’またはａは、前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量がおよそ１３００〜２３００Ｄａであるような整数であり、ａ’およびａは同一または異なり、および
ｂは、前記親水性部分（Ｃ２Ｈ４Ｏ）の前記パーセンテージが前記コポリマーの前記全分子量の約６０重量％〜９０重量％であるような整数であり、
前記コポリマーの前記分布における前記全成分の１．５％以下が４５００Ｄａ未満の平均分子量を有する低分子量成分であり、
前記コポリマーの前記分布における前記全成分の１．５％以下が１３，０００Ｄａを上回る平均分子量を有する高分子量成分であり、
前記コポリマーの前記多分散性値がおよそ１．０７未満または１．０７未満であり、および
前記分布の任意の成分の半減期が、前記コポリマーを対象に投与した場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも５．０倍以下長い、請求項１７または１８に記載の組成物または使用。
【請求項９３】
前記コポリマーの前記分布中の全成分が、対象に投与した場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下または１．５倍以下長い前記対象の前記血漿中の半減期を示す、請求項９２に記載の組成物または使用。
【請求項９４】
前記コポリマーの前記分布における全成分が、対象に投与した場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期よりも１．５倍以下長い、前記対象の前記血漿中の半減期を示す、請求項９２または請求項９３に記載の組成物または使用。
【請求項９５】
前記ポリマー分布の前記成分のすべてが、ほぼ同じ速度で前記循環から消失する、請求項９２〜９４のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項９６】
前記コポリマーの前記分布におけるいずれか１つまたは複数の成分が、対象に投与した
場合、前記コポリマーの前記分布中の前記主ピークの前記半減期以下である、前記対象の前記血漿における半減期を示す、請求項９５に記載の組成物または使用。
【請求項９７】
前記コポリマーの前記分布における前記成分のすべてが、ヒト対象に投与した場合、３０時間以下、２５時間以下、２０時間以下、１５時間以下、１０時間以下、９時間以下、８時間以下または７時間以下である前記対象の前記血漿における半減期を示す、請求項９２〜９６のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項９８】
前記コポリマーの前記分布における前記成分のすべてが、ヒト対象に投与した場合、１０時間以下である前記対象の前記血漿における半減期を示す、請求項９６に記載の組成物または使用。
【請求項９９】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、約１４００〜２０００Ｄａまたは１４００〜２０００Ｄａの分子量を有する疎水性部分と、前記コポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する親水性部分とを有するポロクサマーである、請求項９２〜９８のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１００】
前記疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の前記分子量が（約）１７５０Ｄａである、請求項９２〜９９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０１】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記平均分子量が８４００〜８８００Ｄａである、請求項９２〜１００のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０２】
１３，０００Ｄａを上回る前記製剤中の高分子量成分の前記パーセンテージが、前記ポロクサマー製剤の成分の前記全分布の１％未満を構成し、投与した場合、前記主ピークの前記循環半減期を上回る循環半減期を示す成分をもたらさない、請求項９２〜１０１のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０３】
前記製剤中の１３，０００Ｄａを上回る高分子量成分の前記パーセンテージが、前記ポロクサマー製剤の成分の前記全分布の０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはそれ以下を構成し、投与した場合、前記主ピークの前記循環半減期を上回る循環半減期を有する成分をもたらさない、請求項１０２に記載の組成物または使用。
【請求項１０４】
前記多分散性値が１．０６未満、１．０５未満、１．０４未満、１．０３未満またはそれ以下である、請求項７３〜１０３のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０５】
全成分が前記主ピークの２倍以内、３倍以内または４倍以内である循環ｔ１／２を有する、請求項９２に記載の組成物または使用。
【請求項１０６】
前記ＬＣＭＦポロクサマーが、１３，０００Ｄａを上回る分子量を有する前記製剤中の高分子量成分の前記パーセンテージが前記ポロクサマー製剤の成分の前記全分布の１％未満を構成し、投与した場合に、前記主ピークの前記循環半減期を上回る循環半減期を有する成分をもたらさないポロクサマー１８８である、請求項９２〜１０３のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０７】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記全分子量が約８４００〜８８００Ｄａである、請求項７３〜１０６のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０８】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを１０．０ｍｇ／ｍＬ〜２
００．０ｍｇ／ｍＬの濃度の組成物で投与する、請求項７３〜１０７のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１０９】
前記血液濃縮が利尿および／または脱水に起因する、請求項７３〜１０８のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１１０】
前記血液濃縮が利尿に起因する、請求項７３〜１０９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１１１】
前記コポリマーを投与して利尿もしくは脱水の合併症または利尿もしくは脱水の発現の危険性を防止または軽減する、請求項７３〜１１０に記載の組成物または使用。
【請求項１１２】
治療が、前記コポリマーを利尿薬の前、利尿薬の後、または利尿薬とともに投与するレジメンを含む、請求項７３〜１１１のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１１３】
利尿または脱水の合併症を治療するためである、請求項７３〜１１２のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１１４】
利尿薬での治療に起因する利尿の合併症を治療するためである、請求項１１３に記載の組成物または使用。
【請求項１１５】
治療が利尿薬治療に関連する利尿のためである、請求項７３〜１１１のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１１６】
利尿薬治療が腎臓に関連する症状、高血圧、肝臓の症状、心臓に関連する症状および緑内障から選択される状態を改善するために施された、請求項１１５に記載の組成物または使用。
【請求項１１７】
治療が、電解質平衡異常、過剰な利尿、脱水、不整脈、血漿量の変更、少なくとも１つの血漿タンパク質の血液濃縮の増加、赤血球の血液濃縮、およびそれらの組み合わせから選択される副作用のためである、請求項１１５または１１６に記載の組成物または使用。
【請求項１１８】
少なくとも１つの血漿タンパク質が急性期反応タンパク質である、請求項１１７に記載の組成物または使用。
【請求項１１９】
急性期反応タンパク質がフィブリノゲンである、請求項１１８の組成物または使用。
【請求項１２０】
前記利尿薬が、チアジド利尿薬、ループ利尿薬、カリウム保持性利尿薬、炭酸脱水酵素阻害薬、浸透圧性利尿薬およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１１４〜１１９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１２１】
前記使用または治療が、アテローム動脈硬化症、糖尿病、心不全、血管炎、レイノー病、鎌状赤血球症および赤血球増加症から選択される基礎疾患もしくは状態のため、または術後血液濃縮の治療のためである、請求項７３〜１２０のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１２２】
前記使用または治療が脱水のためである、請求項７３〜１１１のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１２３】
前記脱水が激しい運動に起因する、請求項１２２に記載の組成物または使用。
【請求項１２４】
治療が、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを別の薬剤の投与前、投与と同時に、または投与後に投与するレジメンを含む、請求項７３〜１２３のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１２５】
前記別の薬剤が基礎症状を治療する、請求項１２４の組成物または使用。
【請求項１２６】
前記別の薬剤が利尿薬である、請求項１２４または請求項１２５に記載の組成物または使用。
【請求項１２７】
ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの前記量が、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬまたは０．２ｍｇ／ｍＬ〜４．０ｍｇ／ｍＬまたは０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬのコポリマー循環量を得るために充分である、請求項７３〜１２６のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１２８】
前記コポリマーが静脈内注入による投与のために処方されている、請求項７３〜１２７のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１２９】
前記コポリマーがボーラス注入法による投与のために処方されている、請求項７３〜１２７のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１３０】
少なくとも１２時間から最大４日間、または少なくとも１２時間から最大３日間、または少なくとも１日から３日間、複数回繰り返すレジメンで治療が実施される、請求項７３〜１２９のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１３１】
治療が、前記コポリマーでの複数の治療のレジメンを含む、請求項７３〜１３０のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１３２】
前記ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、１回の連続ＩＶ注入、複数の連続ＩＶ注入、１回のＩＶボーラス投与、複数のＩＶボーラス投与、またはそれらの組み合わせとして投与するために処方されている、請求項７３〜１３１のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１３３】
非ヒト対象を治療するために使用するための請求項７３〜１３２のいずれかに記載の組成物または使用。
【請求項１３４】
前記対象が非ヒトほ乳類である、請求項１３３に記載の組成物または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願］
Marty Emanuele（R. Martin Emanuele）の表題「利尿薬によって誘発される血漿量の変化の治療」の２０１３年１０月１６日に出願された米国特許仮出願第６１／８９１，８５６号の優先権の利点を主張する。
【０００２】
本願は、R. Martin EmanueleおよびMannarsamy Balasubramanianの２０１４年７月７日に出願された表題「長期循環物質のないポロクサマー組成物、その産生方法およびその使用」の米国特許仮出願第６２／０２１，６９７号に関連する。
【０００３】
許される場合、上記出願の各々の主題は、その全体で参照することによって組み込まれる。
【０００４】
［技術分野］
ヒトおよび動物対象において利尿および／または脱水などの血液濃縮に起因する、ある副作用および合併症を治療するための方法およびポロクサマーの使用を提供する。特に、使用および治療は、血液濃縮および微小血管血液動態の変化が起こる利尿療法を含む。
【背景技術】
【０００５】
利尿薬は、細胞外液容量過負荷を管理するための臨床的に重要な治療法である。それらの使用は、ある臨床的障害における死亡率の増加、腎臓機能の悪化、および臓器不全の進行と関連づけられてきた。研究によって、高用量利尿薬と死亡率との間の関係が示される。
【０００６】
腎臓機能低下または他の障害の患者では、水が体内に蓄積する可能性がある。時間がたつと、この結果、循環中の液体体積が増加する。より多量の循環液体は血液中のタンパク質および赤血球（ＲＢＣ）を効果的に希釈して、希釈性貧血を引き起こす。身体は、多くの場合、ＲＢＣおよび血漿タンパク質のレベルを増加させることによって、これを補正して希釈性無月経（dilutional amenia）を治そうとする。液量の増加は継続する可能性があり、うっ血の発現に至る。利尿薬を投与して液量を減少させ、それによってうっ血を軽減する。利尿療法に起因する循環からの比較的急速な水分損失によって、血液中の血球、特にＲＢＣ、および血漿タンパク質の濃度が相対的に増加し、結果として循環障害、特に微小循環障害がおこり、脱水の可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
これらの過程および治療などは、血液中の細胞およびタンパク質の血液濃縮に至る。利尿および／または脱水ならびに他の原因によるこの血液濃縮および微小血管血行動態障害の治療が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
脱水および利尿に起因する血液濃縮および微小血管血行動態障害ならびに血液濃縮の原因となる疾患または状態の治療方法ならびに治療のための組成物およびその使用を本明細書中で提供する。
【０００９】
それを必要とする対象における血液濃縮の合併症を治療または防止するための方法を提供する。血液濃縮は、ポロクサマーを投与することによって治療する。その方法を使用し
て、血液濃縮を発現する危険性がある対象において、血液濃縮を治療するか、またはその危険性を軽減することができる。血液濃縮は、利尿および脱水をはじめとする様々な状態および／または治療から起こり得る。
【００１０】
特に、方法は、血液濃縮、血液濃縮の合併症を呈しているか、または血液濃縮の危険性がある対象を特定し、およびポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロクサマー）を投与して、合併症を治療または防止するために充分な循環濃度を達成することを含む。
【００１１】
コポリマーは、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、ａ’およびａは同一または異なって、各々は、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分が化合物の（約）６０重量％〜９０重量％を構成するような整数であり、ｂは、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分が（約）１３００〜２３００ダルトン（Ｄａ）、例えば１７５０Ｄａの分子量を有し、およびコポリマーの全分子量が約８４００〜８８００Ｄａまたは８４００〜８８００Ｄａであるような整数である）を有するものを含む。ある実施形態では、ポリオキシプロピレン疎水性部分は（約）１８００Ｄａの分子量を有し、親水性ポリオキシエチレン含有量は全分子量の約８０％である。いくつかの実施形態では、ａ’およびａは同一または異なって、各々は５〜１５０（両端を含む）の整数であり、ｂは１５〜７５（両端を含む）の整数であり、例えばａ’およびａは７０〜１０５（両端を含む）であり、ｂは１５〜７５（両端を含む）である。いくつかの実施形態では、コポリマーは、多分散性値が１．０７以下となるように不純物が減少している。
【００１２】
ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、ａ’およびａが同じであるかまたはほぼ同じであり、（約）７８、７９または８０であり、ｂが（約）２７、２８、２９または３０であるもの、例えばａ’およびａが８０であり、ｂが２７であるものである方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｐ１８８コポリマーは、（約）１４００〜２０００Ｄａの分子量、例えば１５００〜２１００Ｄａまたは１７００〜１９００Ｄａの分子量を有する疎水性部分を有するポロクサマー、例えば疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の分子量が（約）１７５０Ｄａであるポロクサマーである。いくつかの実施形態では、親水性部分はコポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、コポリマーを精製して低分子量物質を減少させる。他の実施形態では、コポリマーはポロクサマー１８８である。
【００１４】
ポロクサマーが以下の化学式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有する方法が含まれ、式中、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分は（約）１７００〜１８００Ｄａの分子量、および８４００〜８８００Ｄａの全分子量を有する。他の実施形態では、ｂは２７であり、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分はポロクサマーの全分子量の８０％〜８１％を構成し、および全分子量は１７５０Ｄａである。さらに他の態様では、同じまたは異なり得るａ’およびａは５〜１５０の整数であり、ｂは１５〜７５または１５〜７２の整数であり、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分はポロクサマーの全分子量の８０％〜８１％を構成し、および全分子量は１８００Ｄａである。
【００１５】
いくつかの実施形態では、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分は（約）１７００〜１８００Ｄａの分子量を有し、コポリマーは８４００〜８８００Ｄａの全分子量を有する。他の実施形態では、ｂは２７であり、親水性部分はポロクサマーの全分子量の８０
％〜８１％を構成し、および分子量は１７５０Ｄａである。
【００１６】
他の実施形態では、ａ’およびａは同一または異なり得５〜１５０の整数であり、ｂは１５〜７５または１５〜７２の整数であり、親水性部分はポロクサマーの全分子量の８０％〜８１％を構成し、分子量は１８００Ｄａである。いくつかの実施形態では、コポリマーは長期循環物質を含まない（long-circulating material-free）（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである。
【００１７】
いくつかの実施形態では、コポリマーは、対象に投与した場合、コポリマー製剤の分布における主ピークの半減期よりも約１．５倍超または１．５倍長い循環半減期（ｔ１／２）を有する物質もしくは成分である成分、またはそのような物質もしくは成分を対象の血漿中で生じさせる成分を含まないか、あるいは全成分が主ピークの半減期の５倍以内である循環半減期を有するような、ＬＣＭＦ１８８などの長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＬＣＭＦポロクサマーは、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、ａ’およびａは各々、同一または異なって、疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の分子量が約１３００〜２３００Ｄａとなるような整数であり；ｂは、親水性部分（Ｃ２Ｈ４Ｏ）のパーセンテージがコポリマーの分子量の約６０重量％〜９０重量％となるような整数であり；コポリマーの分布中の全成分の１．５％以下が４５００Ｄａ未満の平均分子量を有する低分子量成分であり；コポリマーの分布中の全成分の１．５％以下が１３，０００Ｄａを上回る平均分子量を有する高分子量成分であり；コポリマーの多分散性値は、１．０７未満または約１．０７未満であり；および分布のどの成分の半減期も、コポリマーを対象に投与した場合に、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも５．０倍以下長い）を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーである。
【００１９】
疎水性部分の分子量が（約）１７５０Ｄａである場合など、約１４００〜２０００Ｄａまたは１４００〜２０００Ｄａの分子量を有する疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）と、コポリマーの約７０重量〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する親水性部分（Ｃ２Ｈ４Ｏ）とを有するポロクサマーであるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを含む方法を提供する。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの平均分子量は８４００〜８８００Ｄａである。いくつかの実施形態では、１３，０００Ｄａを上回る製剤中の高分子量成分のパーセンテージは、ポロクサマー製剤の成分の全分布の１％未満を構成し、例えば１３，０００ダルトンを上回る製剤中の高分子量成分のパーセンテージが、ポロクサマー製剤の成分の全分布の０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはそれ以下を構成し、投与した場合に、主ピークの循環半減期より長い循環半減期を示す成分が得られない。いくつかの実施形態では、全成分は主ピークの循環ｔ１／２の２、３または４倍以内である循環ｔ１／２を有する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、投与するＰ１８８などのポロクサマーを、低分子量成分（ＬＭＷ）だけでなく高分子量成分も除去されるように製造またはさらに精製する。そのような製剤は、長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーと称する。ＬＣＭＦポロクサマー、特にＬＣＭＦ１８８ポロクサマーは、米国特許仮出願第６２／０２１，６９７号（ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１４／４５６２７号も参照のこと）および本明細書中で記載されている。
【００２１】
そのような製剤において、コポリマーの分布中の全成分は、対象に投与した場合、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下または１．５倍以下長い、対象の血漿中の半減期、例えばコポリマーの分布中の主ピークの
半減期よりも１．５倍以下長い、対象の血漿中の半減期を示す。他の実施形態では、ポリマー分布の成分のすべてはほぼ同じ速度で循環から消失する。対象に投与した場合、コポリマーの分布中のいずれの１つまたは複数の成分も、コポリマーの分布中の主ピークの半減期以下である対象の血漿中の半減期を示す。いくつかの実施形態では、コポリマーの分布中の成分のすべては、ヒト対象に投与した場合、３０時間以下、２５時間以下、２０時間以下、１５時間以下、１０時間以下、９時間以下、８時間以下または７時間以下である対象の血漿中の半減期、例えば、１０時間以下である対象の血漿中の半減期を示す。
【００２２】
いくつかの実施形態では、投与するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーは、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するＬＣＭＦポロクサマーであり、ここで、
ＬＣＭＦポロクサマーは、１３，０００Ｄａを上回る分子量を有する製剤中の高分子量成分のパーセンテージがポロクサマー製剤の成分の全分布の１％未満を構成するポロクサマー１８８であり、および、投与された場合、主ピークの循環半減期を上回る循環半減期を有する成分をもたらさない。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの全分子量は約８４００〜８８００Ｄａである。
【００２３】
投与されるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが、多分散性値が１．０７以下となるように減少した不純物を有する方法を提供する。いくつかの実施形態では、多分散性値は、１．０６未満、１．０５未満、１．０４未満、１．０３未満、またはそれ以下である。
【００２４】
治療される対象は、ヒトおよび非ヒト動物を含む任意の動物、特にペットおよび家畜であり得る。治療される対象は、血液濃縮、血液濃縮の合併症を示すか、または血液濃縮の危険性があるものであり得る。いくつかの実施形態では、血液濃縮は利尿および／または脱水の結果である。いくつかの実施形態では、コポリマーを投与して、利尿もしくは脱水の合併症、または利尿もしくは脱水を発現する危険性を防止または軽減する。対象は、血液濃縮を発現する危険性または血液濃縮を発現するに至った基礎症状を有するものであり得る。
【００２５】
いくつかの実施形態では、基礎症状を治療するための薬剤などの別の薬剤の投与前、投与と同時、または投与後に、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを対象に投与する。いくつかの実施形態では、他の薬剤は利尿薬である。
【００２６】
ポロクサマーを、基礎症状の治療用薬剤とともに、またはその薬剤と間欠的に、またはその薬剤の投与前もしくは投与後に、投与することができる。そのような薬剤の例は利尿薬である。コポリマーは、利尿薬の前、後、または利尿薬とともに投与することができる。利尿薬は、チアジド利尿薬、ループ利尿薬、カリウム保持性利尿薬、炭酸脱水酵素阻害薬、浸透圧性利尿薬、およびそれらの組み合わせであり得る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、方法は、対象がすでに利尿薬で治療されている場合、例えば、対象が利尿薬治療と関連した利尿を経験している場合をはじめとする利尿もしくは脱水の合併症または副作用を治療するためである。いくつかの実施形態では、利尿薬治療を施して、腎臓に関連する症状、高血圧、肝臓の症状、心臓に関連する症状および緑内障などの状態を改善する。いくつかの実施形態では、利尿の結果、電解質平衡異常、過剰な利尿、脱水、不整脈、血漿量の変更、少なくとも１つの血漿タンパク質の血液濃縮の増加、赤血球の血液濃縮、およびそれらの組み合わせなどの副作用が起こる。いくつかの実施形態では、血漿タンパク質は、フィブリノゲンなどの急性期反応タンパク質（acute phase reactant protein）である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、これらに限定されるものではないが、アテローム動脈硬化症、糖尿病、心不全、血管炎、レイノー病、鎌状赤血球症および赤血球増加症などの基礎疾患または状態にかかっている対象にコポリマーを投与する。
【００２９】
ある実施形態では、対象は術後患者である。他の実施形態では、対象は急性心不全にかかっている。他の実施形態では、対象は、激しい運動に起因する脱水などの脱水を呈する。
【００３０】
ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーでの治療の結果、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、例えば０．２ｍｇ／ｍＬ〜４．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬまたは０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬの対象の循環中のポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度が得られる方法および使用を提供する。いくつかの実施形態では、循環におけるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度はピーク濃度である。他の実施形態では、循環における濃度は定常状態での循環における濃度である。いくつかの実施形態では、循環におけるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度は、投与後最大７２時間までを目標とする。
【００３１】
ポロクサマーは任意の好適な投与経路によって投与することができる。概して、コポリマーを静脈内注入によるなど、静脈内投与する。他の実施形態では、コポリマーをボーラス注入法によって投与する。治療および投与量は、血液濃縮の合併症の治療を行うポロクサマーの充分な循環濃度を達成するように選択される。概して、ポロクサマーを複数回投与して、循環濃度を達成し、維持する。例えば、ポロクサマーを、複数回、少なくとも１２時間から最大４日間、または少なくとも１２時間から最大３日間、または少なくとも１日、もしくは３日間投与することができる。いくつかの実施形態では、コポリマーを２度目に投与する場合、その２回目の治療は、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜４．０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの濃度をもたらすために充分である。コポリマーを単回連続ＩＶ注入、複数の連続ＩＶ注入、単回ＩＶボーラス投与、もしくは複数のＩＶボーラス投与、またはそれらの組み合わせとして投与する。対象はヒトまたは家畜（動物）対象である。いくつかの実施形態では、対象は非ヒトほ乳類である。
【００３２】
血液の血液濃縮の合併症の治療または防止で使用するための組成物および血液の血液濃縮の合併症の治療または防止のための医薬の処方用に使用するための組成物も提供する。組成物は、方法のために上述したものであり、利尿および脱水を含む血液濃縮が関与する状態の治療または防止用に使用するためである。使用するための組成物は治療上有効な量のポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを含む。方法について上述したとおり、いくつかの実施形態では、コポリマーは次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有し、式中、ａ’およびａは同一または異なって、各々、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分が化合物の（約）６０重量％〜９０重量％を構成するような整数であり、およびｂは（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分が（約）１３００〜２３００Ｄａ、例えば（約）１７５０Ｄａの分子量を有するような整数であり、コポリマーの全分子量は（約）８４００〜８８００Ｄａであるか、または疎水性部分は（約）１８００Ｄａの分子量を有し、親水性ポリオキシエチレン含有量は全分子量の約８０％である。いくつかの実施形態では、ａ’およびａは、同一または異なり得、各々、５〜１５０（両端を含む）の整数であり、ｂは１５〜７５（両端を含む）の整数である。他の実施形態では、ａ’およびａは各々、７０〜１０５（両端を含む）の整数であり、ｂは１５〜７５（両端を含む）の整数である。いくつかの実施形態では、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン
コポリマーは、多分散性値が１．０７以下である場合など、不純物が減少している。
【００３３】
使用のいくつかの実施形態では、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーは、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
（式中、ａ’およびａは、同一であり、約７８、７９または８０であり、ｂは約２７、２８、２９または３０であり、例えばａおよびａ’は８０であり、ｂは２７である）を有するポロクサマー１８８（Ｐ１８８）である。いくつかの実施形態では、コポリマーを精製して低分子量物質を減らす。
【００３４】
使用のいくつかの実施形態では、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーは、約１４００〜２０００Ｄａもしくは１４００〜２０００Ｄａ、または１５００〜２１００Ｄａ、または１７００〜１９００Ｄａ、または１８００Ｄａの分子量を有する（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分と、コポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成する親水性部分とを有するポロクサマーである。いくつかの実施形態では、コポリマーはポロクサマー１８８である。
【００３５】
ある使用の実施形態では、組成物または使用は、長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマー、例えば方法について上述したようなＬＣＭＦ１８８であるコポリマーを含む。上述のとおり、ＬＣＭＦポロクサマーは、対象に投与した場合、コポリマー製剤の分布中の主ピークの半減期よりも約１．５倍超または１．５倍長い循環半減期（ｔ１／２）を有する物質もしくは成分である成分、またはそのような物質もしくは成分を対象の血漿中に生じさせる成分を含まないように、あるいは全成分が、主ピークの半減期の５倍以内である循環半減期を有するように、製造または精製する。いくつかの実施形態では、ＬＣＭＦポロクサマーは、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーであり、式中、ａ’またはａは、各々、疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）の分子量が約１３００〜２３００Ｄａとなるような整数であり、ａ’およびａは同一または異なり、ｂは、親水性部分（Ｃ２Ｈ４Ｏ）のパーセンテージがコポリマーの全分子量の約６０％〜９０重量％となり、コポリマーの分布中の全成分の１．５％以下が４５００Ｄａ未満の平均分子量を有する低分子量成分であり、コポリマーの分布中の全成分の１．５％以下が１３，０００Ｄａを上回る平均分子量を有する高分子量成分であり、コポリマーの多分散性値が１．０７未満または約１．０７未満であり、および分布中の任意の成分の半減期が、コポリマーを対象に投与した場合に、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも５．０倍以下長くなるような整数である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、コポリマーの分布中の全成分は、対象に投与した場合、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下または１．５倍以下長い対象の血漿中の半減期、例えば、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも１．５倍以下長い対象の血漿中の半減期を示す。他の実施形態では、ポリマー分布の成分のすべては循環からほぼ同じ速度で消失する。対象に投与した場合、コポリマーの分布中のいずれか１つまたは複数の成分も、コポリマーの分布中の主ピークの半減期以下である対象の血漿中の半減期を示す。いくつかの実施形態では、コポリマーの分布中の成分のすべては、ヒト対象に投与した場合、３０時間以下、２５時間以下、２０時間以下、１５時間以下、１０時間以下、９時間以下、８時間以下または７時間以下である対象の血漿中の半減期、例えば１０時間以下である対象の血漿中の半減期を示す。
【００３７】
ポロクサマーが、約１４００〜２０００Ｄａまたは１４００〜２０００Ｄａの分子量を有する疎水性部分（Ｃ３Ｈ６Ｏ）を有し、例えば疎水性部分の分子量が（約）１７５０Ｄ
ａであり、親水性部分（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）がコポリマーの約７０重量％〜９０重量％または７０重量％〜９０重量％を構成するポロクサマーであるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーである、組成物および使用を提供する。いくつかの実施形態では、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの平均分子量は８４００〜８８００Ｄａである。いくつかの実施形態では、１３，０００Ｄａを上回る製剤中の高分子量成分のパーセンテージは、ポロクサマー製剤の成分の全分布の１％未満を構成し、例えば１３，０００ダルトンを上回る製剤中の高分子量成分のパーセンテージはポロクサマー製剤の成分の全分布の０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはそれ以下を構成し、および、投与した場合、主ピークの循環半減期よりも長い循環半減期を示す成分を提供しない。いくつかの実施形態では、全成分は、主ピークの循環ｔ１／２の２、３または４倍以内である循環ｔ１／２を有する。
【００３８】
ＬＣＭＦポロクサマーが、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーであるいくつかの実施形態では、ＬＣＭＦポロクサマーはポロクサマー１８８であり、１３，０００Ｄａを上回る分子量を有する製剤中の高分子量成分のパーセンテージがポロクサマー製剤の成分の全分布の１％未満を構成し、および、投与した場合、主ピークの循環半減期を上回る循環半減期を有する成分を提供しない。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの全分子量は約８４００〜８８００Ｄａである。
【００３９】
多分散性値が１．０７以下となるように減少した不純物を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの使用のための組成物および使用を提供する。いくつかの実施形態では、多分散性値は、１．０６未満、１．０５未満、１．０４未満、１．０３未満またはそれ以下である。
【００４０】
組成物を治療のために使用するか、または治療のために処方する状態は、血液濃縮が関与する任意のものであるか、または血液濃縮由来の合併症の危険性がある場合である。いくつかの実施形態では、治療は、血液濃縮、血液濃縮の合併症のためであるか、またはその危険性があり、例えば、利尿および／または脱水に起因する血液濃縮などのためである。いくつかの実施形態では、血液濃縮は利尿の結果である。いくつかの実施形態では、コポリマーを、利尿もしくは脱水の合併症、または利尿もしくは脱水の発現の危険性を防止、治療、または軽減するための予防薬としての治療のために使用する。対象を、いくつかの実施形態では、利尿薬で治療する。コポリマーの使用は、コポリマーを、方法について前述するように複数回投与する、および／または基礎症状を治療するための別の薬剤とともに、別の薬剤の前、もしくは後に投与するレジメンを含み得る。例えば、レジメンは、コポリマーを、利尿薬の前、利尿薬の後、または利尿薬とともに投与するものであり得る。利尿薬は、チアジド利尿薬、ループ利尿薬、カリウム保持性利尿薬、炭酸脱水酵素阻害薬、浸透圧性利尿薬、およびそれらの組み合わせであり得る。
【００４１】
いくつかの実施形態では、組成物または使用は、対象が利尿薬での治療を受けたことがある場合、例えば対象が利尿薬治療に関連した利尿を経験している場合をはじめとする、利尿または脱水の合併症を治療するためである。いくつかの実施形態では、利尿薬治療を施して、腎臓に関連する症状、高血圧、肝臓の症状、心臓に関連する症状および緑内障などの状態を改善する。他の実施形態では、利尿の結果、電解質平衡異常、過剰な利尿、脱水、不整脈、血漿量の変更、少なくとも１つの血漿タンパク質の血液濃縮の増加、赤血球の血液濃縮、およびそれらの組み合わせなどの副作用が起こる。いくつかの実施形態では、血漿タンパク質はフィブリノゲンなどの急性期反応タンパク質である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、コポリマーは、これらに限定されるものではないが、アテロ
ーム動脈硬化症、糖尿病、心不全、血管炎、レイノー病、鎌状赤血球症および赤血球増加症などの基礎疾患または状態にかかっている対象における血液濃縮の治療用である。いくつかの実施形態では、対象は、術後血液濃縮を有する対象などの術後患者である。他の実施形態では、対象は、激しい運動に起因する脱水などの脱水を有する。
【００４３】
薬剤の使用のため、および薬剤の処方のための組成物を、０．０５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、例えば０．２ｍｇ／ｍＬ〜４．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬ、および特に０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬの循環量のポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを生成するために充分な量のコポリマーを投与するために調製する。ポロクサマーは、直接投与のために、約１０．０ｍｇ／ｍＬ〜約３００．０ｍｇ／ｍＬまたは１０．０〜２００．０ｍｇ／ｍＬ、例えば（少なくとも）１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０、１００．０、１０５．０、１１０．０、１１５．０、１２０．０，１２５．０、１３０．０、１３５．０、１４０．０、１４５．０、１５０．０、１５５．０、１６０．０、１６５．０、１７０．０、１７５．０、１８０．０、１８５．０、１９０．０、１９５．０または２００．０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で処方することができる。典型的には、濃度は２２．５％以下、すなわち２２５ｍｇ／ｍＬである。
【００４４】
組成物を、ＩＶ、例えば連続注入またはボーラス注入法によって投与して目標循環濃度を得ることができるような好適な濃度で処方する。使用するための組成物の例示的な濃度は、１０．０ｍｇ／ｍＬ〜２００．０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを含む。いかなる好適な濃度も用いることができる。特定の例では、ポロクサマーを、（約）２５〜４５０ｍｇ／ｋｇ、２５〜５０ｍｇ／ｋｇ、２００〜４５０ｍｇ／ｋｇ、例えば４００ｍｇ／ｋｇ対象体重の投与量で投与するために処方する。投与量は投与経路に左右され、目標は、少なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌ、特に０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍｌの目標濃度を、少なくとも数時間、概して少なくとも１２時間、かつ最大７２時間、例えば１日、２日、３日または４日間達成して治療を行うことである。典型的には、投与する体積は対象１ｋｇあたり３．０ｍＬ以下であり、使用するための組成物の濃度は容易に算出できる。選択される特定の体積は、投与後の対象の循環においてポロクサマーの所望の目標濃度をもたらすものである。この場合も、特定の体積および投与量は、血液濃縮の合併症の治療に関して本明細書中に記載する目標循環濃度の関数である。
【００４５】
組成物および使用のいくつかの実施形態では、コポリマーを静脈内注入による投与のために処方する。他の実施形態では、コポリマーをボーラス注入法による投与のために処方する。治療を複数回、少なくとも１２時間で最大４日、または少なくとも１２時間で最大３日、または少なくとも１日〜３日反復するレジメン、例えばコポリマーでの複数の治療のレジメンで治療を実施する組成物および使用を提供する。いくつかの実施形態では、コポリマーを単回連続ＩＶ注入、複数の連続ＩＶ注入、単回ＩＶボーラス投与、もしくは複数のＩＶボーラス投与、またはそれらの組み合わせとしての投与のために処方する。いくつかの実施形態では、組成物は、非ヒトほ乳類などの非ヒト対象の治療での使用のためである。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
本明細書中で記載する図面は、全ての可能な実施形態を示すものではなく選択された実施形態の例示のためであって、本開示の範囲を限定することを意図しない。
【図１】図１は、ポロクサマーの超臨界流体抽出法（ＳＦＥ）のための一般的過程１００である。
【図２】図２は、本明細書中で記載する方法を使用してポロクサマー１８８などのポロクサマーを調製するための過程１００’の具体例である。
【図３】図３は、本明細書中で記載する方法を使用して、ポロクサマー１８８などのポロクサマーを調製するための過程１００”の具体例である。
【図４】図４は、本明細書中で提供する方法において有用な抽出装置を示す。
【図５】図５は、溶媒分布床において異なるサイズのステンレス球の断面の一実施形態を示す。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、市販のポロクサマー１８８（図６Ａ）と本明細書中で提供する実施形態にしたがって精製した物質（図６Ｂ）中の低分子量物質含有量のＧＰＣ比較を示す。
【図７】図７は、本明細書中で提供する方法の実施形態にしたがって精製した長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマー１８８のＧＰＣを示す。
【図８】図８Ａ〜８Ｂは、長時間に及ぶ血漿中の成分の分子量分布を示す拡大したＨＰＬＣ−ＧＰＣクロマトグラムを示す。
【図９】図９Ａ〜９Ｂは、Grindel et al.（Biopharmaceutics & Drug Disposition (2002) 23:87-103）で記載されるような精製ポロクサマー１８８の４８時間の連続ＩＶ注入中およびその後の健常なヒトにおけるポロクサマー１８８（図９Ａ）および高分子量成分（図９Ｂ）の個々の血漿濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
[概要]
Ａ．定義
Ｂ．脱水および利尿の副作用および合併症
１．血液濃縮
２．利尿療法
３．利尿および副作用／合併症
Ｃ．ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの投与による利尿、脱水および／または血液濃縮の副作用の治療
１．血液濃縮からの合併症を防止および治療するためのポロクサマー
２．ポロクサマー１８８
３．長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマー
４．ポロクサマーを精製するための超臨界流体抽出法
ａ．抽出のための過程
ｂ．抽出容器およびシステム
ｃ．抽出および抽出剤の除去
ｄ．例示的方法
ｉ．低分子量（ＬＭＷ）成分の除去
ｉｉ．長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーの調製
Ｄ．医薬組成物および処方
１．処方
２．投与量
３．投与
Ｅ．利尿の副作用を評価する方法
１．血液濃縮のアッセイ
２．脱水のアッセイ
Ｆ．血液濃縮の合併症の治療方法
１．例示的副作用
ａ．血液濃縮
ｂ．脱水
２．治療の対象の特定
ａ．血液濃縮を有する対象の特定
ｂ．脱水を有する対象の特定
３．治療の対象のモニタリング
Ｇ．併用療法
Ｈ．実施例
【００４８】
Ａ．定義
別段の定義がない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中の開示全体にわたって言及するすべての特許、特許出願、公開出願および刊行物、Ｇｅｎｂａｎｋ配列、データベース、ウェブサイトおよび他の公開された資料は、別段の記載がない限り、それらの全体が参照により組み込まれる。本明細書中の用語について複数の定義がある場合、本章のものが優先する。ＵＲＬまたは他のそのような識別子またはアドレスを参照する場合、そのような識別子は変わる可能性があり、インターネット上の特定の情報は出現しては出ていく可能性があるが、インターネットを検索することによって同等の情報を見出すことができると理解される。それに対する参照は、そのような情報の有効性および公開を立証する。
【００４９】
本明細書中で用いる場合、「利尿」とは、尿の産生または排出を増加させる過程を指す。
【００５０】
本明細書中で用いる場合、「脱水」とは、細胞、組織、器官または身体のいずれに由来するかに関わらず、過度の水分または他の流体の損失によって特徴づけられる病態または状態を指す。水分または流体の損失は、発汗、排尿、熱、嘔吐、下痢に由来するものであり得、および利尿に起因するものであり得る。典型的には、脱水は、身体に入るよりも多くの水および流体が身体から出ていく場合に起こる。
【００５１】
本明細書中で用いる場合、血液濃縮とは、血液の細胞成分および非細胞成分の濃度の増加を指す。血液濃縮は、（ａ）一定体積の血液中の血液の細胞成分および非細胞成分の量の増加；または（ｂ）減少する体積の血液中の一定量の血液の細胞成分および非細胞成分のいずれかに起因する可能性がある。血液濃縮は赤血球および血漿タンパク質の濃度の増加である。
【００５２】
本明細書中で用いる場合、微小血管血行動態障害は、細動脈、毛細血管および小静脈を含む微小血管系中の血流の障害または減少を指す。
【００５３】
本明細書中で用いる場合、「ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマー」、「ＰＰＣ」または「ポロクサマー」は、以下の分子式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−［Ｃ３Ｈ６Ｏ］ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン（ＰＯＥ）のブロックが両側にあるポリオキシプロピレン（ＰＯＰ）の中央ブロックを含むブロックコポリマーを指す。ポロクサマーは、このＰＯＥ−ＰＯＰ−ＰＯＥ構造モチーフによって定義されるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーである。特定のポロクサマーはさらに、異なる化学的および物理的特性、ならびに薬力学的特性を有する特定のポロクサマーを提供する、繰り返しＰＯＥおよびＰＯＰ単位の数によって規定される。概して、本明細書中の目的について、ａ’およびａは同一または異なり得、各々整数であり、ｂは整数である。上記一般式を有する例示的ポロクサマーは、ａまたはａ’が５〜１５０の整数であり、ｂが１５〜７５の整数であるポロクサマー、例えばａが７０〜１０５の整数であり、ｂが１５〜７５の整数であるポロクサマーを含む。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの命名法はモノマー組成に関連する。ポロクサマー数の上２桁に１００を掛けると、疎水性ポリオキシプロピレンブロックのおよその分子量になる。最後の桁に１０を掛けると、親水性ポリオキシ
エチレン含有量のおよその重量パーセントが得られる。例えば、ポロクサマー１８８は、親水性ポリオキシエチレン含有量が全分子量の約８０％である、約１，８００Ｄａのポリオキシプロピレン疎水性部分を含むポリマーを表す。ポロクサマーは多くの場合、２ステップで、まずポリオキシプロピレンコアを構築し、次いでポリオキシエチレンをポリオキシプロピレンコアの末端に付加することによって合成する。両ステップの間の重合における変動のために、ポロクサマーは、典型的には主に分子量が異なる不均一ポリマー種を含む。様々な切断されたポリマー鎖および未反応モノマーも存在し得る。ポリマー種の分布は、これらに限定されるものではないが、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、束一性測定、光散乱技術および粘度測定法をはじめとする当業者に公知の標準的技術を使用して特性化することができる。
【００５４】
本明細書中で用いる場合、「多分散性」またはＤは、ポリマー組成物の特定のサンプルにおける物質のサイズ分布の不均一性を指す。単分散サンプルはすべての物質が同じサイズを有するものである。そのような場合、多分散性値は１である。典型的なポリマーは２〜５の範囲を有する。あるポリマーは２０を上回る多分散性を有する。したがって、大きな多分散性値は、特定のサンプル中の物質のサイズにおける幅広い変動を意味し、一方、低い多分散性値は変動が少ないことを意味する。多分散性を評価するための方法は当該技術分野で公知であり、米国特許第５，６９６，２９８号で記載されるような方法を含む。例えば、多分散性はＧＰＣクロマトグラムから決定できる。多分散性値は、採用した特定のクロマトグラム条件、分子量標準およびサイズ排除特性およびＧＰＣカラムの数および分析ソフトウェアに応じて変動する可能性があると理解される。当業者は、両システムに関して１つのサンプルを実験し、次いでクロマトグラムから得られる多分散性値を比較することによって、異なる条件、標準、カラムおよびソフトウェアを用いて得られるいかなる多分散性値も本明細書中に記載する値に変換することができる。
【００５５】
本明細書中で用いる場合、「ポロクサマー１８８」は、以下の分子式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−［Ｃ３Ｈ６Ｏ］ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーまたはポロクサマーを指し、式中、
ａおよびａ’の各々は、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分（すなわち、コポリマーのポリオキシエチレン部分）が全分子量の約６０％〜９０％、例えば約７０％〜９０％、または８０％または８１％を構成し得るような整数であり、およびｂは、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分が約１，３００〜２，３００Ｄａ、例えば１，４００〜２，０００、例えば約１，７５０Ｄａの分子量を有するような整数である。例えば、ａは約７９または８０であり、ｂは（約）２７または２８である。化合物の平均全分子量は特定のサンプルによって変わるが、７５００〜９５００または７６８０〜９５１０Ｄａの範囲内であり、および８，４００〜８，８００Ｄａ、例えば（約）８，４００Ｄａであり得る。ポロクサマー１８８は市販されており、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）、Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）を含む商標で販売されるポロクサマーである。これらのポロクサマー、および任意のそのような製剤の組成は変わり得る。ポロクサマー１８８の合成中に起こる副反応は、ポロクサマー１８８製剤の任意の特定のサンプル中に存在する他の物質を生成する。この他の物質としては、とりわけ、サイズ、組成およびポリ（オキシエチレン）対ポリ（オキシプロピレン）の比が異なる（例えば、異なる数のオキシプロピレンおよびオキシエチレンの繰り返し単位）ポリマー種、例えばジブロックポリマー、不飽和ポリマー、オリゴ（エチレングリコール）およびオリゴ（プロピレングリコール）をはじめとするオリゴマーグリコール；ならびにアルコール、アルデヒド、ケトン、およびヒドロペルオキシドをはじめとするポロクサマー分解産物が挙げられる。したがって、ポロクサマー１８８の任意の特定のサンプルは、ＧＰＣなどの分析法によって観察できる、ポロクサマータイプのポリマー種および他の物質の不均一分布を含む。そのような製剤では、主ピークとその主ピークの両側に「ショルダー」ピークが
あり、それぞれ低分子量および高分子量物質を表す。ある製剤では、低分子量ショルダー物質は除去されている。
【００５６】
本明細書中で用いる場合、「主ピーク」は、製剤中の最大ピークを指す。Ｐ１８８サンプルにおけるその正確な分子量範囲は、特定のサンプルおよび調製方法に左右される。当業者はそのようなピークを認識するであろう。典型的には、分子量範囲は、７６８０〜９５１０または７，７５０〜９，２５０Ｄａ、例えば（約）８，４００〜８，８００、例えば８，４００または８，５００Ｄａである。例えば、米国特許第５，６９６，２９８号で記載するＰ１８８製剤について、主ピーク種は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって１４〜１５分で溶出するものを含む。
【００５７】
本明細書中で用いる場合、「低分子量」または「ＬＭＷ」は、概ね７，０００Ｄａ未満、６，０００Ｄａ未満、５，５００Ｄａ未満、４５００Ｄａ未満またはそれ以下の分子量を有するポロクサマー１８８の特定のサンプル中の物質を指す。分子量範囲は主ピークよりも低い。例えば、ＬＭＷ物質は２，３００ダルトン〜５，０００ダルトンの分子量を有する。例えば、米国特許第５，６９６，２９８号で記載されている製剤中のＬＭＷ種は、１５分後にゲル浸透によって溶出するものである。
【００５８】
本明細書中で用いる場合、「高分子量」または「ＨＭＷ」は、１３，０００Ｄａ超、例えば１４，０００Ｄａ超、１５，０００Ｄａ超、１６，０００Ｄａ超またはそれ以上の分子量を有するポロクサマー１８８の特定のサンプル中の物質を指す。分子量範囲は主ピークよりも高い。例えば、米国特許第５，６９６，２９８号で記載されている製剤では、ＨＭＷ種は１３〜１４分でゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって溶出するものを含む。
【００５９】
本明細書中で用いる場合、「精製ポロクサマー１８８」は、１．０７未満もしくは約１．０７、例えば１．０５未満もしくは約１．０５または１．０３未満もしくは約１．０３の多分散性値を有するポロクサマー１８８を指す。例えば、ポロクサマー１８８を精製して、低分子量成分を除去または低減する。例示的な精製ポロクサマー１８８は米国特許第５，６９６，２９８号で記載されている。
【００６０】
本明細書中で用いる場合、「低分子量物質が除去された」もしくは「低分子量物質が減少した」ポロクサマー１８８またはその同様の変形についての言及は、ＬＭＷ物質がサンプル中の全物質の３．０％以下または３．０％未満であり、概ね２．０％以下もしくは２．０％未満、または１．５％以下もしくは１．５％未満のポロクサマー１８８のサンプルを指す。例えば、４，５００Ｄａ未満である物質がサンプル中の全物質の１．５％以下であるポロクサマーのサンプルである。典型的には、そのようなポロクサマー１８８は、より高いかまたは大きいパーセンテージの低分子量物質を含むポロクサマー１８８と比べて減少した毒性を示す。
【００６１】
本明細書中で用いる場合、「長期循環物質を含まないポロクサマー」または「ＬＣＭＦポロクサマー」とは、さらに、対象に投与した場合、循環中で主ピークよりも実質的またはかなり長い滞留時間（すなわち、より長い半減期）を有する成分であるか、またはそのような成分を生じる物質を含まない精製ポロクサマー１８８製剤を指す。手短に言うと、当該技術分野で公知の精製ポロクサマー１８８（Grindel et al. (2002) Journal of Pharmaceutical Sciences, 90:1936-1947またはGrindel et al. (2002) Biopharmaceutics &
Drug Disposition, 23:87-103を参照）は、対象に投与した場合、対象の血漿サンプルのＧＰＣ分析で２つのピークを示す物質を含み、各々のピークは、著しく異なった半減期（すなわち循環からのクリアランス率）によって例示される異なる薬物動態プロフィールを有する。主ピークは約７時間の半減期を示し、一方、第２ピーク（より高い平均分子量を
有する）は、約７０時間またはそれ以上の半減期を示し、半減期において約１０倍またはそれ以上の増加（主ピークと比較して）、および実質的により長い循環中の滞留時間を示す（例えば、図９Ａおよび図９Ｂを参照）。したがって、ＬＣＭＦポロクサマーは、対象に投与した場合、主ピークの半減期よりも５．０倍以下長い、概ね主ピークの半減期よりも４．０、３．０、２．０もしくは１．５以下長い半減期を有する物質であるか、またはそのような物質を生じる物質を含まない精製ポロクサマー１８８である。典型的には、ＬＣＭＦポロクサマーは、ポリマー分布の成分が循環からほぼ同じ速度で消失する精製ポロクサマーである。特定の例では、ＬＣＭＦポロクサマーは、１３，０００ダルトンを上回る物質が、生体がその正常な排出チャネルによって投与された物質の量の半分を除去するために必要とするサンプル中の全物質の１％以下であるかまたは１％未満、例えば０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはそれ以下である精製ポロクサマー１８８である。正常な排出チャネルは、概して、他の排泄経路（例えば呼吸）に加えて、腎臓および肝臓を含む。半減期は、物質の濃度が定常状態から、または排出曲線のある点からその濃度の半分になるのに要する時間と表すことができる。半減期は、典型的には血漿中で測定し、薬物の１回量を投与し、次いで様々な時点で血漿中の薬物濃度を測定することによって決定することができ、物質が除去される際の時間と濃度の減少との間の関係を決定する。例えば、ポロクサマー（またはその代謝産物もしくは成分）の濃度、およびそれら各々の半減期は、本明細書中で記載するようなＨＰＬＣ−ＧＰＣ法を使用して対象における様々な物質の血漿レベルを定量化することによって、本明細書中で記載するように決定することができる。手短に言うと、溶出するＨＰＬＣ−ＧＰＣピークの高さを既知濃度の参考基準と比較して、対象の血漿中の物質を定量する。物質の半減期を決定する研究は当業者によって容易に実施される。
【００６２】
本明細書中で用いる場合、Ｃｍａｘとは投与後の薬物のピーク血漿濃度を指す。
【００６３】
本明細書中で用いる場合、「不純物」とは、ポロクサマー製剤中の望ましくない物質を指す。ＧＰＣによって分析する場合、不純物は、典型的には、主ピークの一部でない物質、または主ピークの一部であるが、物質のサイズ、組成およびポリ（オキシエチレン）対ポリ（オキシプロピレン）の比が望ましくない物質を含み、およびポロクサマー１８８および精製ポロクサマー１８８に関して、４，５００ダルトン未満の分子量および／または１３，０００ダルトンを上回る分子量を有する物質を含み得る。
【００６４】
本明細書中で用いる場合、ポロクサマー製剤中の物質に関連して「除去する」または「減少（低減）させる」とは、物質の初期重量パーセンテージに対して減少した物質の重量パーセンテージを指す。概して、減少は、少なくとも１％、典型的には少なくとも２％、３％、４％、５％、またはそれ以上の減少を含む。例えば、ポロクサマー１８８のほとんどの商品は、製剤中の全物質の約４％（重量基準）であるＬＭＷ物質（４，５００ダルトン未満）を含む。ＬＭＷ物質は、精製後に３％以下（重量基準）、例えば３％、２％以下、または１％以下のＬＭＷ物質がある場合に精製品において減少したとみなす。
【００６５】
本明細書中で用いる場合、「溶媒」とは、溶質を溶解させて溶液を形成する任意の液体を指す。
【００６６】
本明細書中で用いる場合、「極性溶媒」とは、その分子において、正および負電荷が恒久的に分離しているか、または正および負電荷の中心が一致しない溶媒を指す。これらの溶媒は高い誘電率を有し、化学的に活性であり、および配位共有結合を形成する。例はアルコールおよびケトンである。
【００６７】
本明細書中で用いる場合、「フィード」とは、溶媒中に溶解させた溶質を指す。
【００６８】
本明細書中で用いる場合、「抽出溶媒」とは、ポロクサマー製剤中に含まれる望ましくない物質を可溶化させるために使用できる任意の液体または超臨界流体を指す。抽出溶媒は、溶媒抽出をおこなって、溶解度の差に基づいて１以上の他のものから分離することができる溶媒である。概して、抽出溶媒は、関心対象の物質がその中に溶解している溶媒と非混和性または部分的に混和性である。例えば、抽出溶媒は、関心対象の物質がその中に溶解している第１溶媒と混合しないかまたは部分的に混合しないので、静置した場合、２つの独立した層が生じるものである。例示的抽出溶媒は、超臨界液体または高圧液体である。
【００６９】
本明細書中で用いる場合、「超臨界液体」および「超臨界流体」という用語は、その臨界温度（Ｔｃ；すなわち、それより高いと化合物を液化することができない、化合物に特徴的な温度）および臨界圧（ｐｃ；すなわち、その臨界温度で化合物を液化するために充分な最小圧力）より高い状態の、ガスなどの任意の化合物を包含する。この状態で、異なった液相および気相は典型的には存在しない。超臨界液体は、典型的には溶媒密度の変化を示し、圧力、温度、または共改質溶媒（co-modifier solvent）の変化はわずかである。
【００７０】
本明細書中で用いる場合、「超臨界二酸化炭素」とは、その臨界温度（約３１℃）および臨界圧（約７４ｂａｒ）以上で保持される二酸化炭素の流体状態を指す。その臨界温度および臨界圧以下で、二酸化炭素は通常、空気中では気体として、または凍結した場合は固体のドライアイスとして挙動する。３１℃より高い温度および７４ｂａｒより高い圧力で、二酸化炭素は気体と液体の中間の特性を呈するので、気体のように膨張してその容器を満たすが、液体のような密度を有する。
【００７１】
本明細書中で用いる場合、「臨界温度」または「臨界点」とは、それより高いと明白な液相および気相が存在しない蒸気−液体臨界点を意味する温度を指す。したがって、それは、どれだけ圧力をかけても、それ以上で物質の蒸気が液化できない温度である。例えば、二酸化炭素の臨界温度は約３１℃である。
【００７２】
本明細書中で用いる場合、「臨界圧」とは、その臨界温度で気体を液化するために必要な圧力を指す。例えば、二酸化炭素の臨界圧は約７４ｂａｒである。
【００７３】
本明細書中で用いる場合、「高圧液体」という用語は、室温またはさらに高い温度で圧縮性気体を加圧して液体にすることによって生じる液体を含む。
【００７４】
本明細書中で用いる場合、「共改質溶媒」とは、抽出溶媒（例えば超臨界流体二酸化炭素）の溶媒強度を増加させる極性有機溶媒を指す。共改質は、溶質と強力に相互作用することができ、それによって抽出溶媒中の溶質の溶解性を実質的に増加させることができる。共改質溶媒の例としてはアルカノールが挙げられる。典型的には５重量％〜１５重量％の共改質溶媒を使用できる。
【００７５】
本明細書中で用いる場合、「アルカノール」という用語は単純な脂肪族有機アルコールを包含する。概して、本明細書中で提供する方法における使用を意図するアルコールは６個以下の炭素原子を含む（すなわち、Ｃ１〜Ｃ６アルカノール）。アルカノールのアルカン部分は分枝または非分枝であり得る。アルカノールの例としては、これらに限定されるものではないが、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール（２−プロパノール）、およびｔｅｒｔ−ブチルアルコールが挙げられる。
【００７６】
本明細書中で用いる場合、「亜臨界抽出」とは、常温常圧で通常気体状である流体物質であって、それより高い圧力および低い温度で液体に変わるものを使用する過程を指す。
圧力または温度を次いで標準化し、および抽出物質を蒸発させて、抽出物が残る。抽出剤はリサイクルできる。
【００７７】
本明細書中で用いる場合、「抽出容器」または「抽出器」とは、最高１０，０００ｐｓｉｇの圧力および最高２００℃の温度に耐えることができる高圧容器を指す。容器の容積は、２ｍＬ〜５，０００Ｌまたはそれ以上、概して１Ｌ〜１，０００Ｌ、例えば５Ｌ〜５００Ｌの範囲であり得、１Ｌ〜２００Ｌ、例えば５Ｌ〜１５０Ｌであり得る。抽出容器は概してステンレス鋼で作られている。そのような装置は当業者に周知であり、市販されている。
【００７８】
本明細書中で用いる場合、アイソクラティックとは、抽出溶媒を一定またはほぼ一定の濃度で使用する系を指す。
【００７９】
本明細書中で用いる場合、「勾配」または「勾配ステップ」とは、典型的には１以上の成分の濃度の変化によってその成分の組成が異なる２以上の抽出溶媒を使用する系を指す。例えば、アルカノール溶媒（例えばメタノール）の濃度を抽出の過程で連続して増加させる。したがって、抽出溶媒は一定のままではない。
【００８０】
本明細書中で用いる場合、「複数」は、反復回の過程またはステップを指す。複数は２以上である。繰り返しの数は、２、３、４、５、６またはそれ以上であり得る。
【００８１】
本明細書中で用いる場合、「抽出された物質」は、除去された物質を含む生成物を指す。
【００８２】
本明細書中で用いる場合、「ラフィネート」は、１つの成分または複数の成分が減少または除去されている生成物を指す。除去された物質を含む生成物は抽出物である。
【００８３】
本明細書中で用いる場合、「バッチ法」または「バッチ抽出」は、平衡が達成されるまで２層を振盪することによって１つの非混和性層から溶質を抽出し、その後、層を沈降させた後サンプリングする過程を指す。例えば、バッチ抽出は、溶質を抽出溶媒のバッチと混合することによって実施できる。溶質は２つの相間で分配する。一旦平衡が達成されると、混合を停止し、抽出物相およびラフィネート相を分離させる。この方法では、使用済み溶媒を蒸留によって除去し、リサイクルすることができるか、または新鮮な溶媒をリザーザーから連続して添加することができる。
【００８４】
本明細書中で用いる場合、「連続法」または「連続抽出」とは、溶液を通る非混和性溶媒の連続流または両相の連続した向流がある過程を指す。例えば、連続抽出溶媒を溶質と混合する。ミキサー中で生じるエマルジョンを沈殿槽ユニット中に供給し、ここで相分離が起こり、連続ラフィネートおよび抽出物流れが得られる。
【００８５】
本明細書中で用いる場合、単回注入とは、たった１回の注入または投与で有効な投与量の化合物または医薬組成物を提供する注入を指す。
【００８６】
本明細書中で用いる場合、ポロクサマーを含む医薬組成物とは、１以上の薬剤的に許容される賦形剤と配合した、ＬＣＭＦポロクサマーなどの本明細書中で記載するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーまたはポロクサマーを含む生成物を指す。ある場合では、医薬組成物は、緩衝剤で６〜７または６または約６などの所望のｐＨで緩衝されたポロクサマーの水性注射液を含む。そのような緩衝剤の例は、例えばクエン酸ナトリウムを含むクエン酸塩および／またはクエン酸などの、当業者に生体適合性であると知られている任意のものである。好適な濃度は、経験的に決定することができ、典型的には
生理食塩水などの等張液中０．００５〜０．０５Ｍの範囲、特に約０．０１Ｍであり得る。ある場合では、本明細書中の方法で有用な医薬組成物は、ポロクサマーの処方について当業者に公知である（例えばＰＣＴ出願公開第ＷＯ９４／０８５９６号および本明細書中の他のそのような参考文献および刊行物を参照のこと）。
【００８７】
本明細書中で用いる場合、疾患、障害、状態もしくは機能不全を有する対象の「治療（treatingまたはtreatment）」とは、対象に有効量の化合物または医薬組成物を提供することを指す。したがって、治療は予防、療法および／または療養を包含する。治療はさらに、本明細書中の化合物および医薬組成物のいかなる薬学的用途も包含する。治療の結果、疾患または状態と関連する症状が改善または軽減される。治療とは、状態、障害または疾患の症状が改善されるか、そうでなければ有益に変更される任意の方法を意味する。
【００８８】
本明細書中で用いる場合、例えば医薬組成物または他の治療薬の投与によるなどの治療による特定の疾患または障害の症状の改善とは、組成物または治療薬の投与に起因または関連し得る症状の、恒久的または一時的、持続的または一過性を問わず、いかなる軽減も指す。
【００８９】
本明細書中で用いる場合、防止または予防とは、疾患または状態を発症する危険性が減少した方法を指す。予防は、疾患もしくは状態の発症の危険性の低減および／または症状の悪化もしくは疾患の進行の防止または症状の悪化もしくは疾患の進行の危険性の低減を含む。
【００９０】
本明細書中で用いる場合、化合物または医薬組成物の「有効量」は、（ａ）対象がどのように感じ、機能し、または生存するかをある程度改善する（例えば症状を軽減する）ために充分である；（ｂ）所望の生理学的効果を達成するために充分である；および／または（ｃ）ある他の利益を提供するために充分である量であり、各々の場合、改善、効果、または利益が恒久的、持続性、一時的、周期的、一過性またはその他であるかどうかによらない。そのような量を一回量として投与することができるか、または投与スケジュールもしくはレジメン（例えば反復投与、持続投与）にしたがって投与することができ、それによって対象がどのように感じるか、機能するか、もしくは生存するかを改善する、および／または所望の生理的利益を達成する、および／または他の利益を提供する。例えば、本明細書中で記載するポロクサマーまたは医薬組成物の有効量は、ヒトまたは非ヒト対象に投与した場合に利尿を治療する量である。そのような量は、本明細書中で後述し、ポロクサマーを代用血液として投与するのではなく、脱水および利尿の有害作用を改善する能力のために投与するので、体液喪失体積よりも体積が少ない。
【００９１】
本明細書中で用いる場合、「対象」とは、綱、目、科、属もしくは種（または任意のサブカテゴリー）に関係なく任意の動物、例えば限定されるものではないが：ヒト科（例えばヒト）；非ヒト霊長類（例えばチンパンジー、ゴリラおよびサル）；げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスターおよびスナネズミ）；反芻動物（例えば、ヤギ、ウシ、シカ、ヒツジ）；イノシシ科（例えば、ブタ）；ウシ科（例えば、バイソン）；ウマ属（例えば、ウマ）；イヌ科（例えば、イヌ）；ネコ科（例えば、ネコ）を指し、全ての場合で、家畜化されているか否かを問わない。したがって、治療する「対象」は、ヒトまたは非ヒト動物を含む。
【００９２】
本明細書中で用いる場合、組み合わせとは、２以上の項目間の任意の関係を指す。関係は、キット中など空間的であり得るか、または共通の目的のための２以上の品目の使用を指す。
【００９３】
本明細書中で用いる場合、組成物は、２以上の生成物または化合物の任意の混合物を指
す。組成物は、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性もしくは非水性処方またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
【００９４】
本明細書中で用いる場合、「製品」は、作製し、販売する生成物である。本明細書全体にわたって使用する場合、その用語は、包装品中に含まれる修飾プロテアーゼポリペプチドおよび核酸を含むことが意図される。
【００９５】
本明細書中で用いる場合、流体は流動できる任意の組成物を指す。流体は、したがって、半固体、ペースト、溶液、水性混合物、ゲル、ローション、クリームの形態である組成物および他のそのような組成物を包含する。
【００９６】
本明細書中で用いる場合、「キット」とは、組み合わせの要素を使用して方法を実施するための試薬ならびに他の生成物および／または成分を任意に含んでもよい包装された組み合わせを指す。キットは、使用説明書を任意に含んでもよい。
【００９７】
本明細書中で用いる場合、「赤血球沈降速度」は、１時間の期間での赤血球(erythrocyte)（例えば、赤血球（red blood cell））の沈降速度の測定値である。典型的には、抗凝固処理血液をウェスターグレン管中に入れ、１時間で赤血球が沈降する速度をミリメートル／時間（ｍｍ／ｈ）として測定する。速度は、炎症または炎症性障害／疾患の存在の間接測定として使用できる。それは、血液濃縮（例えば、フィブリノゲンなどの凝集促進因子（pro-aggregation factor）のレベルの増加）の結果としての赤血球および／または「泥状」血液の凝集体の形成の間接測定としても使用できる。
【００９８】
本明細書中で用いる場合、「利尿薬」とは、利尿を支援する任意の化合物または物質を指す。利尿薬は尿の生成および排出を促進できる。利尿薬の例としては、これらに限定されるものではないが、ループ利尿薬、例えばフロセミド（商標Ｌａｓｉｘ（商標）、Ｆｒｕｍｅｘで販売されている）、エチアクリン酸（ethyacrynic acid）（商標Ｅｄｅｃｒｉｎ（登録商標）で販売されている）、ブメタニドおよびトラセミド（商標Ｄｅｍａｄｅｘ（登録商標）で販売されている）、チアジド、例えばクロロチアジド、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド（商標Ｍｉｃｒｏｚｉｄｅ（登録商標）で販売されている）、メトラゾン（商標Ｚａｒｏｘｏｌｙｎ（登録商標）で販売されている）、およびインダパミド、ならびにカリウム保持性利尿薬、例えばスピロノラクトン（商標Ａｌｄａｃｔｏｎｅ（登録商標）で販売されている）、エプレレノン（商標Ｉｎｓｐｒａ（登録商標）で販売されている）、アミロリド、およびトリアムテレン（商標Ｄｙｒｅｎｉｕｍ（登録商標）で販売されている）、または浸透活性剤（osmotically active agent）、例えばマンニトールが挙げられる。
【００９９】
本明細書中で用いる場合、「およそ（approximately）」および「約（about）」は数値を修飾して、明示した値に近接した範囲を意味する。「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」は０．９Ｘ〜１．１Ｘの値、および０．９５Ｘ〜１．０５Ｘの値を意味する。「約Ｘ」へのいかなる言及も、具体的には少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、および１．０５Ｘを意味する。したがって、「約Ｘ」は値「０．９８Ｘ」を含むことを意図する。
【０１００】
本明細書中で用いる場合、「ボーラス」とは、ある用量を比較的短時間に投与する薬物投与を指す。概して、ボーラスを６０分未満の時間にわたって投与する。
【０１０１】
本明細書中で用いる場合、「連続注入」とは、ある用量を比較的長時間にわたって投与する薬物投与を指す。概して、１２時間または２４時間など１時間を超える時間、連続注入を施す。
【０１０２】
本明細書中で用いる場合、「急性期反応物質」とは、生理的に活性であり、典型的には、炎症反応の一部として循環における濃度を急速に増加させる分子の群を指す。顕著な急性期反応物質としては、これらに限定されるものではないが、フィブリノゲン、血清アミロイドＡ、ｃ反応性タンパク質、補体因子、プロトロンビン、プラスミノーゲンおよびフォンウィルブランド因子が挙げられる。
【０１０３】
本明細書中で用いる場合、単数形「a」、「an」および「the」は、文脈上そうでないとする明確な記載がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの細胞外ドメイン（an extracellular domain）」を含む化合物の言及は、１つまたは複数の細胞外ドメインを有する化合物を含む。
【０１０４】
本明細書中で用いる場合、範囲および量は、「約」または「およそ」特定の値または範囲として表すことができる。約は正確な量も包含する。したがって、「約０．０５ｍｇ／ｍＬ」は「約０．０５ｍｇ／ｍＬ」および「０．０５ｍｇ／ｍＬ」も意味する。
【０１０５】
本明細書中で用いる場合、「任意の（optional）」または「任意に（optionally）」とは、その後に記載される要素、事象、または状況が起こるかまたは起こらず、およびその説明が前記事象または状況が起こる場合および起こらない場合を含むことを意味する。例えば、任意に置換されていてもよい基とは、その基が置換されていないか、または置換されていることを意味する。
【０１０６】
本明細書中で用いる場合、任意の保護基、アミノ酸および他の化合物の略語は、特に明記しない限り、それらの一般的な用法、認定された略語、または生化学命名法に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会（(1972) Biochem. 11:1726を参照）に従う。
【０１０７】
Ｂ．脱水および利尿または他の原因に由来する血液濃縮の副作用および合併症
血液の血液濃縮に起因する副作用および合併症を治療または改善または防止する方法を提供する。血液濃縮は、脱水および／または利尿薬誘導性利尿をはじめとする利尿に起因する可能性がある。治療は、本明細書中に記載するように、脱水および／もしくは利尿の症状を示すか、または脱水および／もしくは利尿を有する対象に、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロクサマー）を投与することによって実施する。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの投与で合併症を治療でき、利尿薬の副作用をはじめとする合併症を防止（合併症の危険性を低減）するか、または合併症の重篤度を防止することもできる。
【０１０８】
１．血液濃縮
血液濃縮は、細胞およびタンパク質を含む血液成分の濃度の増加に起因する。濃度は、体液喪失ならびに／または細胞および／もしくはタンパク質の数の増加から増加し得る。血液成分のこの濃度は合併症を有し得る。血液濃縮の例は、利尿薬での治療の結果としての、または特定の疾患の結果もしくは症状としての利尿に起因する血液濃縮である。血液濃縮は、脱水、例えば利尿および流体の喪失、例えば激しい運動から起こり得る。
【０１０９】
利尿または他の原因に由来するか否かに関わらず、脱水を経験している対象では、血液濃縮がある。その結果、血液成分の濃度が増加する。これは、フィブリノゲンおよび（他の疎水性タンパク質）および赤血球（ＲＢＣ）および他の細胞の濃度の増加を含む。血液濃縮の結果、フィブリノゲンとＲＢＣとの間の「架橋」相互作用をはじめとする相互作用によってＲＢＣ凝集体が形成する。これらの凝集体が血液中で形成する場合、流れが、特に微小循環では「泥状」になる。
【０１１０】
本明細書中の方法および使用において、本明細書中で記載し、当業者には知られているＰ１８８などのポロクサマー、（ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマー）の投与を実施する。ポロクサマーは、他の効果の中でも、合併症を軽減できる。ポロクサマーは、例えばフィブリノゲンとＲＢＣとの間の架橋相互作用を拮抗することができる。ポロクサマーは、血液を単に希釈するために投与するのではなく、むしろ血液濃縮の合併症／副作用を軽減するために血液に対して影響を及ぼす。
【０１１１】
以下のセクションで記載するように、有効量のポロクサマー組成物を投与する。好適な投与量は、症状を改善する血中濃度を達成する。多くの可能な投薬レジメンがあり、目標は、対象の治療を達成するために充分な時間有効な血漿濃度にすることである。特定の投与レジメンは、対象、利尿または脱水の副作用の重篤度および性質に左右される。熟練した医師は、適切なレジメンを選択できる。
【０１１２】
特に、方法は、（約）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜（約）１５ｍｇ／ｍｌ、例えば、（約）０．２ｍｇ／ｍＬ〜（約）４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば（少なくとも約）０．５ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポロクサマーの濃度を得るために投与が充分となるようなポロクサマー、つまりポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの投与を含む。対象の循環におけるポロクサマーの濃度は、１つの時点を表すものであり得るか、あるいは例えば投与後または複数回の投与により最大７２時間もしくはそれ以上の期間維持される平均定常状態濃度を表すものであり得る。
【０１１３】
典型的には、利尿／脱水または血液濃縮の副作用の治療のための最適定常状態血漿濃度範囲は、治療を実施するために充分な時間、約０．５〜１．５ｍｇ／ｍＬまたは０．５〜１．５ｍｇ／ｍｌの循環における血漿濃度である。治療は典型的には１２時間〜数日、例えば１、２、３または４日間持続する。ポロクサマーを、任意の好適な投与経路および方法によって投与できる。典型的には、静脈内（Ｉ．Ｖ．）注入またはボーラスによって投与できる。例えば、５０ｍｇ／ｋｇ／ｈｒのＩＶ注入を与えることによって０．５ｍｇ／ｍｌの濃度を維持でき、１００ｍｇ／ｋｇ／ｈｒを投与することによって１．０ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を維持できる。概して、治療のために、注入は必要に応じて１２〜４８時間継続できる。別法として、反復ボーラス投与を施すことができる。例えば、５０ｍｇ／ｋｇをＩＶボーラスとして６時間ごとに１〜３日または４日間にわたって投与して、約０．５ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を達成でき、約１ｍｇ／ｍｌのさらに高い血漿濃度を達成できる。１００ｍｇ／ｋｇを６時間ごとに１〜３または４日間で、所望の範囲の中間の濃度が得られる。
【０１１４】
本明細書中で提供する方法を、利尿薬または血液濃縮をもたらす他の治療もしくは状態に起因する利尿もしくは脱水に関連するいかなる副作用または結果の治療でも使用できる。これらの副作用としては、限定されるものではないが、電解質平衡異常、脱水、不整脈、血漿量の変更、血漿タンパク質および／または血球の血液濃縮、微小血管血行動態障害、ならびに増加した利尿に関連する任意の他の副作用または望ましくない結果が挙げられる。
【０１１５】
特に、本明細書中で提供する方法を、循環障害、特に微小循環障害にかかっている対象などの、血液中の血球、特に赤血球、および血漿タンパク質のレベルが増加している対象の治療で使用できる。対象は、利尿もしくは脱水または他の原因に由来する血液濃縮にかかっている任意のものである。対象は、利尿薬で治療したもの、持久力の必要な運動選手、長時間にわたって熱にさらされた対象、アテローム動脈硬化症、糖尿病、心不全、動脈炎、レイノー病、鎌状赤血球症、赤血球増加症などの心血管障害にかかっている対象、移植患者をはじめとする術後患者を含む。対象はさらに、非常に激しい運動および高温への暴露に由来するなどの脱水、あるいは熱が蒸発または発汗によって失われる可能性がある
障害もしくは状態にかかっているものも含む。
【０１１６】
本明細書中で提供する方法のいくつかでは、ポロクサマーの投与は、基礎症状のための療法もしくは利尿療法と組み合わせるか、またはその後に行う。脱水または利尿または血液濃縮に至る状態または治療の例は利尿療法である。本明細書中の方法を、１つもしくは複数の体液の喪失または血液成分の増加をもたらす任意の状態もしくは治療またはそれらの組み合わせなどの、血液濃縮または脱水に起因する任意の副作用の治療で使用できると理解される。
【０１１７】
２．利尿療法
血液濃縮は、利尿薬での療法に起因する可能性がある。利尿薬は、限定されるものではないが、腎臓および肝臓に関連する状態、血圧上昇（すなわち、高血圧）、緑内障、眼圧上昇、およびうっ血性心不全などの心臓に関連する疾患をはじめとする様々な病状を治療または改善するために投与する薬物の１種である。利尿療法を採用して、典型的にはうっ血性症状（起坐呼吸、浮腫、および息切れ）、または充填圧力上昇の徴候（頚静脈膨張、末梢浮腫、拍動性肝腫、およびそれほど一般的ではないがラ音）によって示される過剰な液体の臨床所見のある患者において、正常な液量を復元し、および維持する。
【０１１８】
利尿療法の結果、水および溶質、主にナトリウムの腎排泄の増加により体液量および静脈圧が減少する。さらに、利尿薬は、身体の水分と電解質バランスを調節する役目を果たす。ほとんどの利尿薬に関して、これらの効果は、腎臓のネフロンによるナトリウム（Ｎａ＋）および水再吸収の阻害または減少によるものである。この作用は、身体からのＮａ＋および水の腎排泄を増加させ、かくして細胞外液（ＥＣＦ）体積を減少させる。典型的には、ナトリウムは食事を介してＥＣＦに入り、およびほとんど同じ量で尿中に排出される。正常な成人では、糸球体ろ過により腎臓のネフロンに入るナトリウムの９９％超が、尿細管液（tubular fluid）（すなわち、腎臓の尿細管中の流体）から輸送されてＥＣＦへ戻る。塩類貯留は、ナトリウム排泄のレベルがナトリウム摂取のレベル以下に低下する場合に起こる。１以上の利尿薬の投与で、腎臓によるＮａ＋および水の再吸収を減少させることによってこのアンバランスを治療し、かくして尿中のそれらの排出を増加させる。ある利尿薬は、上皮膜を通過する電解質の輸送の原因となる特定のタンパク質の機能を阻害することによってナトリウムおよび水の再吸収を抑制し、一方、他のものは小管内浸透圧を増加させることによって水およびナトリウムの再吸収を阻害する。異なる種類の利尿薬は、管状系の異なる部分で異なるトランスポーターを阻害することができる。
【０１１９】
利尿薬は、利尿薬によってナトリウム再吸収が損なわれる腎臓の位置によって識別されるクラスに分類される。主なクラスの利尿薬としては、ループ利尿薬、チアジド型利尿薬、カリウム保持性利尿薬、浸透圧性利尿薬および炭酸脱水酵素阻害薬が挙げられる。
【０１２０】
ループ利尿薬、または強力（high-ceiling）利尿薬は、腎臓内のヘンレ係蹄の太い上行脚中のナトリウム−カリウム−塩化物のコトランスポーターに作用し、電解質再吸収を阻害し、およびナトリウム、ならびにカリウム、カルシウムおよびマグネシウムの排出をもたらす。このトランスポーターは、通常、ナトリウム負荷の約２５％を再吸収し、したがって、このポンプの阻害は、ナトリウムの遠位尿細管濃度の有意な増加、周囲の間質の高浸透圧性の低下、および集合尿細管中の水再吸収の低下に至る可能性がある。ナトリウムおよび水の操作のこのような変更は、利尿（水分喪失の増加）およびナトリウム利尿（ナトリウム喪失の増加）の両方に至る。ナトリウム再吸収のかなりの割合に対処する太い上行脚に作用することによって、ループ利尿薬は非常に強力な利尿薬である。例示的ループ利尿薬としては、エタクリン酸、フロセミド、ブメタニド、およびトラセミド（またはトルセミド）が挙げられる。
【０１２１】
最も一般的に用いられる種類の利尿薬であるチアジド利尿薬は、遠位尿細管中の塩化ナトリウムトランスポーターを阻害することによって腎臓の遠位尿細管および連結セグメントで作用する。このトランスポーターは、典型的にはろ過されたナトリウムの約５％しか再吸収せず、したがってチアジド利尿薬は、利尿およびナトリウム利尿をもたらすのにループ利尿薬よりも効果が少ない。チアジド利尿薬としては、クロロチアジド、クロルタリドン、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、インダパミド、メチクロチアジド、メトラゾン、およびポリチアジドが挙げられる。チアジド利尿薬は、高血糖症を誘発する可能性があり、および既存の真性糖尿病を悪化させる可能性があり、また血清コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）およびトリグリセリド濃度の増加を引き起こす可能性がある。
【０１２２】
別の種類の利尿薬はカリウム保持性利尿薬であり、これはいくつかの機序のうちの１つにより作用することができる。「カリウムを浪費する」利尿薬とみなされるループおよびチアジド利尿薬とは異なり、これらの利尿薬の一部はナトリウム輸送に対して直接作用しない。あるカリウム保持性利尿薬は、遠位尿細管の遠位部分でアルドステロンの作用を拮抗し（すなわち、アルドステロン受容体拮抗物質）、より多くのナトリウムおよび水に集合尿細管を通過させ、および尿中に排出させる。他のものは、アルドステロン感受性ナトリウムポンプに関連したナトリウムチャネルを直接阻害し、したがって、アルドステロン拮抗物質としてカリウムおよび水素イオンに対して同様の効果を及ぼす。カリウム保持性利尿薬としては、スピロノラクトンおよびエプレレノンなどのステロイド化合物、ならびにトリアムテレンおよびアミロリドなどの非ステロイド化合物が挙げられる。スピロノラクトンがカルシウム排出を増加させるのに対して、トリアムテレンおよびアミロリドはナトリウムおよび塩化物排出の増加を引き起こし、カリウム排出に対してはほとんど影響を及ぼさない。カリウム保持性利尿薬の使用に関連する一般的な副作用としては、悪心、胃痙攣、嘔吐、下痢、脚痙攣、眩暈、頭痛、内分泌アンバランス、女性化乳房症（男性における一方または両方の乳房の異常な腫脹）、性欲の変化、不能、多毛症（過剰な体毛）、および高カリウム血症（増加した血清カリウム濃度）が挙げられる。
【０１２３】
浸透圧性利尿薬は別のクラスの利尿薬である。これらの化合物は腎尿細管によって充分に再吸収されず、ナトリウム塩の低い正味再吸収をもたらす。浸透圧性利尿薬は、マンニトール、グリセロール、尿素、およびイソソルビドを含む。
【０１２４】
別のクラスの利尿薬は、炭酸脱水酵素阻害薬、例えばアセタゾラミド、ジクロルフェナミド、およびメタゾラミドである。これらの利尿薬は、近位曲尿細管から間質への重炭酸塩の輸送を阻害し、この部位でのナトリウム再吸収が少なくなり、したがってより多くのナトリウム、重炭酸塩および水が尿中に失われる。炭酸脱水酵素阻害薬は利尿薬のうちで最弱であり、緑内障の治療で主に用いられる。
【０１２５】
利尿薬は、単独で投与できるか、または２以上の利尿薬の組み合わせとして投与して、いずれかの化合物単独の有効性を増加させることができる。この理由は、１つのネフロンセグメントが別のネフロンセグメントでの変更されたナトリウム再吸収を補うことができ、したがって、複数のネフロン部位をブロックして、効力を有意に増強することができることである。
【０１２６】
限定されるものではないが、ループ利尿薬、例えばフロセミド（商標Ｌａｓｉｘ（商標）、Ｆｒｕｍｅｘで販売されている）、エタクリン酸（商標Ｅｄｅｃｒｉｎ（登録商標）で販売されている）、ブメタニドおよびトラセミド（商標Ｄｅｍａｄｅｘ（登録商標）で販売されている）；チアジド利尿薬、例えばクロロチアジド、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド（商標Ｍｉｃｒｏｚｉｄｅ（登録商標）で販売されている）、メトラゾン（商標Ｚａｒｏｘｏｌｙｎ（登録商標）で販売されている）、およびインダパミド
；ならびにカリウム保持性利尿薬、例えばスピロノラクトン（商標Ａｌｄａｃｔｏｎｅ（登録商標）で販売されている）、エプレレノン（商標Ｉｎｓｐｒａ（登録商標）で販売されている）、アミロリド、およびトリアムテレン（商標Ｄｙｒｅｎｉｕｍ（登録商標）で販売されている）をはじめとする利尿薬は公知であり、市販されている。
本明細書中の目的のために、利尿薬をポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの投与の前、後、または同時に投与できる。
【０１２７】
３．利尿およびその副作用
利尿薬は、尿細管系の異なる部分でのナトリウムの再吸収を阻害し、このように腎臓がナトリウムを処理する方法を変更する。腎臓が排出されるナトリウムの量を増加させる場合、排出される水の量も増加する。したがって、利尿療法は腎臓による尿量を増加させ、すなわち利尿を促進する。利尿は、腎臓もしくは肝臓に関連する状態、血圧上昇（すなわち、高血圧）、緑内障、眼圧上昇、または心臓に関連する疾患、例えばうっ血性心不全などの状態を改善または治療するために施される利尿薬治療の望ましい効果である。利尿は望ましい効果であるが、電解質平衡異常、脱水、不整脈、血漿量の変更、ならびに血漿タンパク質および血球の血液濃縮、およびそれらの組み合わせをはじめとする利尿の望ましくない結果が起こり得る。例えば、副作用には、フィブリノゲンなどの血漿タンパク質および／または赤血球などの血球の濃度の相対的増加を含まれる可能性がある。数例において、この血液濃縮は赤血球沈降速度の増加として反映される。
【０１２８】
血液濃縮は、血液中の赤血球の体積パーセンテージを表すヘマトクリット、すなわち赤血球体積分率の増加によって立証でき、利尿に起因し得る。利尿はそのような血管内体積減少を引き起こす可能性があり、これは末端器官低潅流または神経液性活性化（neurohumoral activation）の危険性に至る。血液濃縮を示すのは、赤血球（erythrocyte）などの赤血球(red blood cell)、および血漿タンパク質、例えば限定されるものではないが陽性急性期反応タンパク質、例えばＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、血清アミロイドＰ、血清アミロイドＡ、補体因子、フィブリノゲン、プロトロンビン、抗血友病因子（ＡＨＦ）、フォンウィルブランド因子、マンナン結合レクチン、プラスミノーゲン、アルファ２−マクログロブリン、フェリチン、ヘプシジン、セルロプラスミン、ハプトグロビン、アルファ−１−酸糖タンパク質（ＡＧＰ）、アルファ１−抗トリプシン、アルファ１−抗キモトリプシン、およびプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤Ｉの濃度の上昇である。
【０１２９】
血液濃縮を検出または診断するための標準的臨床検査がある。臨床試験の例としては、これらに限定されるものではないが、沈降価、ＳｔＯ２（組織酸素化）の減少または低値、フィブリノゲン上昇を示す測定値、ＲＢＣ数上昇、ヘマトクリット上昇（正常よりも高い任意の値）、ＲＢＣ凝集の測定値（凝集の増加を示す）またはＲＢＣ沈降速度（正常範囲を上回る上昇値）が挙げられる。
【０１３０】
血液濃縮はまた、循環障害、例えば微小循環障害の対象で起こり得る。微小循環は、典型的には直径１５０μｍ未満である血管、例えば、細動脈、毛細血管、および小静脈を含む。例えば、微小循環は、管腔直径の筋原性減少による圧力の増加に反応する動脈血管、ならびに毛細血管および小静脈を包含する。微小循環の機能としては、需要の変動に反応して組織内への栄養分および酸素の供給を最適化すること、および毛管交換での障害を引き起こす毛細血管のレベルで静水圧の大きな変動を回避することが挙げられる。さらに、静水圧のかなりの降下が起こるのは微小循環のレベルである。したがって、微小循環は、全体的な末梢耐性、すなわち体循環における血流に対する動脈の耐性を決定するのに非常に重要である。それはまた、心血管疾患の最も初期の徴候、特に、炎症過程が起こる部位でもある。
【０１３１】
Ｃ．ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの投与による利尿、脱水お
よび／または血液濃縮の副作用の治療
ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーの投与で、脱水および利尿の望ましくない副作用ならびに結果、例えば利尿薬で誘発された利尿を治療する。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを対象に投与することで血液濃縮が改善され、脱水または利尿による血液濃縮および微小血管血液動態の変化は、高いヘマトクリット、フィブリノゲンなどの急性期反応物質の濃度の増加、赤血球沈降速度の上昇およびそれらの組み合わせによって示すことができる。
【０１３２】
対象における脱水もしくは利尿の副作用または結果を治療するための方法を本明細書中で提供する。方法は、対象にポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロクサマー）を含む治療上有効な量の組成物を投与することを含む。ポロクサマーには、本明細書全体にわたって記載するような化学式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するいかなるものも含まれる。特に、ポロクサマーに含まれるのは、利尿の副作用を治療するためのものであって、式中、ａ’およびａは、同一または異なって、各々、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分が化合物の約６０重量％〜９０重量％を構成するような整数であり、ｂは、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分がおよそ１３００〜２３００ダルトン（Ｄａ）、例えば（およそ）１５００〜２１００Ｄａ、または約１７００〜１９００Ｄａの分子量を有するような整数であるものが含まれる。
【０１３３】
使用できるポロクサマーには、ａおよびａが５〜１５０、例えば７０〜１０５であり、ｂが１５〜７２または１５〜７５であるものが含まれる。ポロクサマーは６０〜９０％の親水性部分Ｃ２Ｈ４Ｏを含み得、化合物の８０％または８１％を構成し、疎水性部分は分子量が（約）１８００〜１８４０Ｄａ、例えば１８００となるように存在する。ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーＰ１８８は、ａおよびａ’が各々８０であり、ｂが２７であり、親水性部分が化合物の約８０重量％（または８０〜８１重量％）を構成し、化合物の分子量が（約）１７５０Ｄａである化合物も含む。他のものは、上述し、また以下のセクションで記載する。
【０１３４】
いくつかの方法では、ポロクサマーは、多分散性値がおよそ１．０７以下となるように不純物が減少している。いくつかの方法では、ポロクサマーを精製して、低分子量（ＬＭＷ）物質を減らす。他の方法では、ポロクサマーは、化学式：
ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ’−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＨ
を有し、式中、疎水性部分［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］の分子量はおよそ１７００〜１７９０Ｄａ、例えば約１７５０Ｄａであり、ポロクサマー化合物の全分子量は約８４００〜８８００Ｄａである。
【０１３５】
提供する方法は、本明細書中で記載および／または当業者に公知のように、化学式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロクサマー）を含む治療上有効な量の組成物を対象に投与して利尿の副作用を治療し、および治療上有効な量の利尿薬を投与することを含む。治療用ポロクサマーを利尿薬もしくは他の治療、またはそれらの任意の組み合わせを施す前、同時、または後に投与できる。ポロクサマー投与の量および期間は、治療を実施する目標血中濃度を維持するために充分である。目標血中濃度は、特定のポロクサマー、投与する対象、治療する状態、基礎症状および血液濃縮の重篤度に左右される可能性がある。投与量は本明細書中で記載し、また当業者が経験的に決定できる。概して、目標投与量は少なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌ、典型的には少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、および概して０．５ｍｇ／ｍｌ〜１．５ｍｇ／ｍｌの範囲の循環濃度を達成するものである。本明細書中で提供する方法では、ポロクサマーの治療上有効な量
は、（約）０．２ｍｇ／ｍＬ〜（約）４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬまたは少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌの対象の循環におけるポロクサマーの濃度を、ポロクサマーの投与後の所望の時点で、典型的には定常状態でもたらす量である。他の範囲、例えば０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ、０．５〜１０ｍｇ／ｍｌ、および本明細書中で記載する他の範囲も同様に想定される。
【０１３６】
同時に投与するかまたは前に施される他の治療および治療薬の投与量は、治療薬および治療する状態およびレジメンに左右される。例えば、利尿薬の投与量は、典型的には、例えばPhysician’s Desk Reference and Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)をはじめとする標準的マニュアルに記載されている投与量などの、そのような利尿薬について推奨される用量である。記載されるように、提供する方法は、利尿療法が血液濃縮および／または微小血管血液動態の変化をもたらす場合のポロクサマーの投与を含む。いくつかの方法では、ポロクサマーは、少なくとも１つの血漿タンパク質、血球、またはそれらの組み合わせの血液濃縮をはじめとする利尿薬投与の副作用を緩和する。ある例では、血漿タンパク質はフィブリノゲンである。ある例では、血球は赤血球（erythrocyte）、すなわち赤血球（red blood cell）である。
【０１３７】
本明細書中で提供するいくつかの方法では、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーポロクサマーを投与して、血液濃縮の合併症の危険性を治療、防止または軽減することができる。ポロクサマーを基礎症状のための利尿療法などの療法と組み合わせて投与できる。方法の他の実施形態では、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを、脱水／利尿もしくは血液濃縮が検出されるかまたは症状が起こった後に投与する。
【０１３８】
提供する方法では、ポロクサマーの投与を例えば、２回、３回、４回、またはそれ以上繰り返すことができる。例えば、ポロクサマーの投与が約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約４．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約２．０ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポロクサマーの濃度をもたらすために充分になるまで、方法を繰り返すことができる。利尿薬治療と組み合わせてポロクサマーを投与する方法では、利尿薬の投与を例えば、２回、３回、４回、またはそれ以上繰り返すことができる。
【０１３９】
以下のセクションで、利尿薬誘導性利尿に関連した副作用または結果の治療をはじめとする利尿の副作用または結果の治療で使用するための、ポロクサマー１８８などのポロクサマー、およびその組成物を説明する。例示的投薬計画および方法を記載する。
【０１４０】
１．血液濃縮からの合併症を防止および治療するためのポロクサマー
血液濃縮の合併症／副作用、特に特に利尿および脱水に起因するものを治療するためのポロクサマーの方法および使用を本明細書中で提供する。ポロクサマーとしては、これらに限定されるものではないが、利尿の副作用を治療または改善するためのポロクサマー１８８（Ｐ１８８）、例えば精製Ｐ１８８（例えば、ＬＣＭＦ）が挙げられる。利尿の副作用を治療するための本明細書中で提供する方法は、治療上有効な量のポロクサマーを含む治療をヒトまたは動物対象に施すことを含む。
【０１４１】
Ｐ１８８を含むあるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーは、ヒトまたは動物に投与した場合に、いくつかの障害に対して有益な生物学的効果を及ぼす。これらの活性は、米国特許第４，８０１，４５２号；同第４，８３７，０１４号；同第４，８７３，０８３号；同第４，８７９，１０９号；同第４，８９７，２６３号；同第４，９３７，０７０号；同第４，９９７，６４４号；同第５，０１７，３７０号；同第５，０２８，５９９号；同第５，０３０，４４８号；同第５，０３２，３９４号；同第５，０３９，
５２０号；同第５，０４１，２８８号；同第５，０４７，２３６号；同第５，０６４，６４３号；同第５，０７１，６４９号；同第５，０７８，９９５号；同第５，０８０，８９４号；同第５，０８９，２６０号；第ＲＥ３６，６６５号（第５，５２３，４９２号の再発行）；同第５，６０５，６８７号；同第５，６９６，２９８号；同第６，３５９，０１４号；同第６，７４７，０６４号；同第８，３７２，３８７号；同第８，５８０，２４５号；米国特許公開第２０１１／００４４９３５号、同第２０１１／０２１２０４７号、および同第２０１３／０１７７５２４号；国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３４７９０号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３７１５７号および同第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００６８６２号；ならびに米国特許仮出願第６０／９９５，０４６号で記載されている。Ｐ１８８などのポロクサマーの活性には、細胞膜中へ組み入れられ、それによって損傷を受けた細胞膜を修復する能力が含まれる。
【０１４２】
本明細書中で提供する方法で使用するためのポロクサマーとしては、次式：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ’−（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａＨ
を有するＰＯＰ／ＰＯＥブロックコポリマーが挙げられ、式中、「ａ’」および「ａ」は同一または異なり得、各々、（Ｃ２Ｈ４Ｏ）によって表される親水性部分が重量基準で化合物の約６０％〜９０％、例えば７０％〜９０％を構成するような整数であり、「ｂ」は、（Ｃ３Ｈ６Ｏ）によって表される疎水性部分がおよそ９５０〜４０００Ｄａ、例えば１２００〜３５００Ｄａ、例えば、１３００〜２３００Ｄａの分子量を有するような整数である。例えば、疎水性部分は、１２００〜２３００Ｄａ、例えば概して１５００〜２１００Ｄａ、例えば、１７００〜１９００Ｄａの分子量を有する。コポリマーの平均分子量は３０００〜２３，０００Ｄａ、例えば、５０００〜１５，０００Ｄａ、５０００〜９０００Ｄａである。ある例では、ｂは、約２０〜約４０の整数、またはその間の任意の数である。ある例では、ｂは（約）１５〜約５０、例えば約２０〜約４０、または約２５〜約３５、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０である。いくつかの例では、ａおよびａ’は各々、約２０〜約２３０の整数またはその間の任意の数、例えば、約４０〜約２００、約５０〜約１５０、約６０〜約１００、または約７０〜約９０である。当業者はこれらの値が平均値であることを認めるであろう。ポリマー分子が分子の分布または集団である場合、ａ、ａ’およびｂの値は平均である。集団内のａ、ａ’およびｂの実際の値はある範囲の値を構成する。
【０１４３】
Ｐ１８８をはじめとする本明細書中の方法で使用するためのポロクサマーは、商業的供給源から入手可能である。別法として、ポロクサマーは前記の米国特許文献で記載されているいずれかを含む標準的ポリマー合成技術を用いて合成できる。それらはまた、本明細書中、実施例で記載するようにして合成することもできる。
【０１４４】
概して、ポロクサマーは、当業者に公知の標準的技術を使用するエチレンオキシド−プロピレンオキシド縮合によって形成する（例えば、米国特許第ＲＥ３６，６６５号；同第ＲＥ３７，２８５号；同第ＲＥ３８，５５８号；同第６，７４７，０６４号；同第６，７６１，８２４号；および同第６，９７７，０４５号を参照；Reeve, L.E., “The Poloxamers: Their Chemistry and Medical Applications,” in Handbook of Biodegradable Polymers, Domb, A.J. et al. (eds.), Hardwood Academic Publishers, 1997も参照のこと）。水酸化ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ性触媒の存在下でＰＯＰおよびＰＯＥモノマーを逐次添加することによって、ポロクサマーを合成できる（例えば、Schmolka
(1977) J. Am. Oil Chem. Soc. 54:110-116を参照）。ＰＯＰブロックの重合と、それに続いてＰＯＰブロックの両末端でＰＯＥ鎖を成長させることによって反応を開始する。ポリマーを合成する方法は、米国特許第５，６９６，２９８号にも記載されている。
【０１４５】
上述のとおり、ポロクサマー命名法は、様々なポリマーメンバーの組成に関連する。ポ
ロクサマー数の上２桁に１００を掛けて疎水性部分のおよその分子量、すなわちポリオキシプロピレン含有量を得る。下１桁に１０をかけて、コポリマーの親水性部分、すなわちポリオキシエチレン含有量のおよその重量パーセントを得る。例えば、ポロクサマー４０７は、約４０００Ｄａのポリオキシプロピレン疎水例物質を含み、ポリオキシエチレン親水性部分が全分子量の約７０％を構成するポリマーである。ポロクサマー１８８（Ｐ１８８）は、約１８００Ｄａの分子量を有する疎水性部分を有し、コポリマーの全分子量の約８０％である親水性部分を有する。
【０１４６】
本明細書中の方法で使用するための例示的ポロクサマーとしては、これらに限定されるものではないが、ポロクサマー１３６、ポロクサマー１３７、ポロクサマー１３８、ポロクサマー１３９、ポロクサマー１４６、ポロクサマー１４７、ポロクサマー１４８、ポロクサマー１４９、ポロクサマー１５６、ポロクサマー１５７、ポロクサマー１５８、ポロクサマー１５９、ポロクサマー１６６、ポロクサマー１６７、ポロクサマー１６８、ポロクサマー１６９、ポロクサマー１７６、ポロクサマー１７７、ポロクサマー１７８、ポロクサマー１７９、ポロクサマー１８６、ポロクサマー１８７、ポロクサマー１８８、ポロクサマー１８９、ポロクサマー１９６、ポロクサマー１９７、ポロクサマー１９８、ポロクサマー１９９、ポロクサマー２０６、ポロクサマー２０７、ポロクサマー２０８、ポロクサマー２０９、ポロクサマー２１６、ポロクサマー２１７、ポロクサマー２１８、ポロクサマー２１９、ポロクサマー２２６、ポロクサマー２２７、ポロクサマー２２８、ポロクサマー２２９、ポロクサマー２３６、ポロクサマー２３７、ポロクサマー２３８、ポロクサマー２３９およびそれらの変異形が挙げられる。
【０１４７】
ポロクサマーは、販売され、しばしば商品名でよばれ、限定されるものではないが、ＡＤＥＫＡ  ＮＯＬ，  Ｓｙｎｐｅｒｏｎｉｃ（商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）およびＬｕｔｒｏｌ（登録商標）をはじめとする商標で販売されている。そのようなポロクサマーの例は、限定されるものではないが、ポロクサマー１８８（Ｐ１８８；商標Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ１８８、ＲｈｅｏｔｈＲＸ  ＲｘおよびＦｌｏｃｏｒ（商標）で販売されている；８０％ＰＯＥ）、ポロクサマー４０７（Ｐ４０７；商標Ｌｕｔｒｏｌ  Ｆ１２７、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−１２７で販売されている；７０％ＰＯＥ）、ポロクサマー２３７（Ｐ２３７；商標Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ８７およびＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ２３７で販売されている；７０％ＰＯＥ）である。
【０１４８】
Ｐ１８８をはじめとする、本明細書中の方法で使用するポロクサマーはさらにポロクサマーの製剤も含み、これをさらに精製して、特定の成分、概してＬＭＷおよびＨＭＷ成分を除去する。上述のとおり、１つの所定の化学構造を有する独立した分子とは異なり、ポロクサマーは分子的に多様であり得る。特定のポロクサマーは、ＰＯＥ−ＰＯＰ−ＰＯＥ構造モチーフを有するが、反復するＰＯＥおよびＰＯＰ単位の数が異なる複数の化学物質から構成される。分子多様性はポロクサマーが合成される過程の産物である。結果は、不均一な物質（すなわち、多分散性である物質）である。意図するポロクサマー化合物の合成の間に起こる副反応の結果として生じ得る様々な他の物質もこの多分散性を増す。これらの他の物質が全体的なポロクサマー分布内に存在し、見出すことができる。ある例では、ポロクサマーは不純物を減少させた。例えば、特定の例では、例えば多分散性値がおよそ１．０７未満となるように、ある低分子量不純物および他の成分を除去するかまたはその量を減少させるために、コポリマーを精製する。ポロクサマーを精製する方法は公知である（例えば、米国特許第５，５６７，８５９号を参照）。超臨界流体抽出法などの方法を本明細書中で記載する。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、１以上のポロクサマーの化学的に修飾した形態を本明細書中で提供する組成物、方法および使用で用いる。ポロクサマーの化学的修飾としては、これ
らに限定されるものではないが、放射標識、アセチル化、ビオチニル化、フルオロフォアの添加、および当業者に公知の他の化学的修飾が挙げられる。
【０１５０】
２．ポロクサマー１８８
本明細書中で提供する組成物、方法および使用におけるポロクサマーの例は、ポロクサマー１８８（Ｐ１８８）およびその精製品である。Ｐ１８８コポリマーは、以下の化学式：
ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ’−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＨ
を有し、式中、［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］によって表される疎水性部分は、およそ１７００〜１８００Ｄａ、例えば１７５０Ｄａの分子量、ならびに７６８０〜９５１０Ｄａ、例えば概ねおよそ８４００〜８８００Ｄａの平均分子量を有する。Ｐ１８８のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレン重量比はおよそ４：２：４である。Ｐ１８８は、８１．８±１．９％のオキシエチレンの重量パーセント、および０．０２６±０．００８ｍＥｑ／ｇの不飽和レベルを有する。
【０１５１】
Ｐ１８８は、表面活性剤、または界面活性剤であるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン直鎖状コポリマーである。表面活性剤として、Ｐ１８８は、損なわれた細胞および変性タンパク質上に発生する疎水性部分と結合し、それによって水和格子（hydration lattice）を復元する。非精製Ｐ１８８は商業的に入手可能であり、上述のような様々な商標で販売されている。これらには、例えば、商標Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８（ＢＡＳＦ、Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ，  Ｎ．Ｊ．）およびＲｈｅｏｔｈＲＸ  Ｒｘ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ，  Ｉｎｃ．によって開発）で販売されているＰ１８８が含まれる。合成手順のために、ＰＯＰコアおよびＰＯＥ末端を構築するステップ中で重合速度のばらつきがあり得る。したがって、Ｐ１８８の形態は、主に全体の鎖長が異なるベル形のポリマー種の分布を含む。加えて、不完全な重合（例えば、グリコールおよび切断ポリマー（truncated polymer））によって生じた様々な低分子量（ＬＭＷ）成分、および高分子量（ＨＭＷ）成分（例えば、二量体化ポリマー）が存在し得る。ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によるＰ１８８の特性化によって、意図せぬＬＭＷおよびＨＭＷ成分を表す「ショルダー」ピークを有するＰ１８８の主ピークを特定する（Emanuele and Balasubramanian (2014) Drugs R D 14:73-83を参照のこと）。Ｐ１８８の治療可能性の研究から、ひとつには臨床試験評価中に観察される急性腎機能不全のために、ＲｈｅｏｔｈＲＸ  Ｒｘ（登録商標）Ｐ１８８の治療応用の中止に至った。これらの効果は、合成の間に生じる様々な低分子量（ＬＭＷ）物質の存在に起因する（Emanuele and Balasubramanian (2014) Drugs R D 14:73-83）。したがって、精製Ｐ１８８では、これらのＬＭＷ成分は除去されている。
【０１５２】
本明細書中で提供する方法および使用では、任意の好適なポロクサマー製剤を使用できる一方で、Ｐ１８８を典型的には精製してＬＭＷ成分を除去する。精製Ｐ１８８は、およそ１．０７以下、例えばおよそ１．０５以下、概しておよそ１．０３以下であるポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロックコポリマーの多分散性値を有する。精製Ｐ１８８は、典型的にはＬＭＷ成分が減少している。加えて、それを精製してＨＭＷ成分を除去することができる。精製Ｐ１８８、ＬＣＭＦ  Ｐ１８８はＨＭＷ成分が減少している。
【０１５３】
精製Ｐ１８８の例は、精製してＬＭＷ成分を減少または除去したＰ１８８（例えば、米国特許第５，６９６，２９８号で記載されているとおり、または商標Ｆｌｏｃｏｒ（商標）で公知である）、および本明細書中に記載する長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）Ｐ１８８（米国特許仮出願第６２／０２１，６９７号も参照のこと）である。Ｐ１８８は、当該技術分野で公知の様々な抽出過程、例えば、ＬＭＷおよび／またはＨＭＷ成分などの成分をポロクサマーから除去できる任意の抽出過程を用いて精製することができる。その
ような方法としては、本明細書中で提供する任意の方法、および限定されるものではないが、高圧抽出または超臨界流体抽出法（ＳＦＥ）が挙げられる。
【０１５４】
３．長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマー
本明細書中、および米国特許仮出願第６２／０２１，６９７号（国際ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１４／４５６２７号も参照）で記載するように、Ｐ１８８中の成分は、主要または優勢ポロクサマーピーク種よりも長い循環半減期および長い保持時間を有する血漿または血液中の循環物質であるかまたは循環物質を生じさせるものと特定されている。例えば、非臨床および臨床研究で、高性能液体クロマトグラフィー−ゲル浸透クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＧＰＣ）による、精製Ｐ１８８の静脈内投与後に得られる血漿の分析は、循環において２つの別個のピークを示す（例えば、Grindel et al. (2002) Journal of Pharmaceutical Sciences, 90:1936-1947またはGrindel et al. (2002) Biopharmaceutics
& Drug Disposition, 23:87-103を参照）。約８６００Ｄａの平均分子量および約７時間の半減期を有する主ピークと、約１６，０００Ｄａの平均分子量および約７０時間の半減期を有するさらに小さなピークとがある。このように、２つのピークは明確に異なる薬物動態プロフィールを示し、高分子量ピークほど循環からのクリアランスが低く、明確に長い血漿滞留時間を示す（図６Ａおよび図６Ｂを参照）。同様の観察結果がラットおよびイヌでも報告された。
【０１５５】
Ｐ１８８のレオロジー効果、細胞保護効果、抗接着効果および抗血栓効果が、約８４００〜９４００Ｄａであり約７時間の半減期を有する、分布の優勢または主要コポリマーで観察されるので、長期循環半減期を示す他の成分の存在の結果、望ましくない副作用が起こる可能性がある。例えば、Ｐ１８８の望ましい活性には、血液粘性を低下させ、および赤血球（ＲＢＣ）凝集を阻害するそのレオロジー効果があり、これは、損傷組織における血流を改善する能力の原因となる。対照的に、Ｐ３３８などの他のポロクサマー（商標Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−１０８）およびＰ２７８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ９８で販売されている）は、血液粘性を増大させ、ＲＢＣ凝集を増加させる可能性がある（Armstrong et al. (2001) Biorheology 38:239-247）。この結果は、ＰＯＥ含有量のパーセンテージとは対照的に、ＰＯＰ成分の分子量の増加と相関関係がある。８０％ＰＯＥを有する高分子量ポロクサマーメンバーであるＰ２３８またはＰ３３８の静脈内注射したエマルジョンは、比較的長期間血液中に残留することが記載されている（Moghimi, S.M. (1998) “Recent Developments and Limitations of Poloxamine-Coated Long-Circulating Particles in Experimental Drug Delivery,” in Gregoriadis and McCormack (eds) Targeting of Drugs 6: Strategies For Stealth Therapeutic Systems, pp. 263-274, New York: Plenum Press）。例えば、Ｐ３３８の平均分子量は１２，７００〜１７，６００Ｄａである。したがって、Ｐ１８８で観察されるＨＭＷ成分は、約１６，０００Ｄａなどの１３，０００Ｄａを上回る推定分子量を有するブロックポリマーであるので、長期循環物質としてのその存在は、分布中の主要または優勢コポリマーと比較してその反対の作用によってマイナスの治療効果を有するはずである。したがって、ＬＣＭＦ  Ｐ１８８は改善された特性を示す。
【０１５６】
したがって、精製ポロクサマーの例は、ＬＣＭＦ  Ｐ１８８をはじめとする長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーである。このＬＣＭＦは、１．０７未満の多分散性値；１．５％以下の４５００ダルトン未満の低分子量（ＬＭＷ）成分；１．５％以下の１３，０００ダルトンを上回る高分子量成分；対象に投与した場合、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも５．０倍以下長い血液または血漿中の半減期である、コポリマーの分布中の全成分の半減期を有する精製Ｐ１８８であるポロクサマーである。ＬＣＭＦ
Ｐ１８８ポリマーは、以下の化学式：
ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ’−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＨ
を含むＰ１８８について本明細書中で記載する式を有し、式中、「ａ’」および「ａ」は、同一または異なり得、各々、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）によって表される親水性部分（すなわち、コポリマーのポリオキシエチレン部分）がコポリマーの約６０％〜９０％、例えば約８０％または８１％を構成するような整数であり、「ｂ」は、［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］によって表される疎水性部分（すなわち、コポリマーのポリオキシプロピレン部分）がおよそ１３００〜２３００Ｄａ、例えばおよそ１７５０Ｄａの分子量を有するような整数であり、および化合物の平均全分子量は約７６８０〜９５１０Ｄａ（主ピーク）、例えば概して８４００〜８８００Ｄａ、例えば、（約）８０００Ｄａまたは８４００Ｄａである。コポリマーを精製して、多分散性値が１．０７未満となるように、低分子量不純物および他の不純物を含む不純物を除去した。ＨＭＷ不純物も存在しないように生成物を調製する。
【０１５７】
研究によって、精製Ｐ１８８製剤の主ピークは、ヒト対象に投与した場合、約７時間の血漿中半減期（ｔ１／２）を有することが証明されている（Grindel et al. (2002) Journal of Pharmaceutical Sciences, 90:1936-1947およびGrindel et al. (2002) Biopharmaceutics & Drug Disposition, 23:87-103を参照）。対照的に、約１６，０００Ｄａの平均分子量を有するものなど高分子量成分は、約７０時間のｔ１／２で半減期において約１０倍以上の増加を示す。
【０１５８】
Grindel et al.の研究（（Grindel et al. (2002) Journal of Pharmaceutical Sciences, 90:1936-1947またはGrindel et al. (2002) Biopharmaceutics & Drug Disposition,
23:87-103を参照））で特徴づけられた精製Ｐ１８８と対照的に、ＬＣＭＦ１８８と称する精製されたポロクサマーは、ポリマー分布の全成分が、対象に投与した場合、ほぼ同じ速度で循環から消失するものである。ＬＣＭＦポロクサマーの製剤は、１．０７未満、概して１．０５未満または１．０３未満の実質的に多分散性の組成物を含み、コポリマーの分布中の任意の成分の血液または血漿中の半減期は、対象に投与した場合、コポリマーの分布中の主ピークの半減期よりも５．０倍以下長く、概して４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下、または１．５倍以下長い。典型的には、ＬＣＭＦは、対象に投与した場合、コポリマーの分布における主ピークよりも実質的に長いかまたはコポリマーの分布における主ピークよりも長い血液または血漿における半減期を示す成分を含まない。
【０１５９】
ある例では、ＬＣＭＦポロクサマー中の全成分の血液または血漿中の半減期は、ヒト対象に投与した場合、３０時間を上回り、概して、２５時間以下、２０時間以下、１５時間以下、１０時間以下、９時間以下、８時間以下、または７時間以下である半減期を有する成分がないようなものである。
【０１６０】
理論によって拘束されることを望むものではないが、１３，０００Ｄａを上回る高分子量成分は、長循環半減期物質（longer circulating half-life material）の原因となり得た。例えば、上述のように、１３，０００Ｄａを上回る平均分子量を有するものをはじめとする高分子量ポリマー（例えば、Ｐ２３８またはＰ３３８）は他のポリマーよりも長い血漿中保持時間を有することが、研究によって示された（Moghimi, S.M. (1998) “Recent Developments and Limitations of Poloxamine-Coated Long-Circulating Particles
in Experimental Drug Delivery,” in Gregoriadis and McCormack (eds) Targeting of Drugs 6: Strategies For Stealth Therapeutic Systems, pp. 263-274, New York: Plenum Press）。ある例では、本明細書中で提供するＬＣＭＦ製剤は、長期循環種をもたらさない異なる特性を示す、分布中のＨＭＷ成分を含む。例えば、概して全成分の１．５重量％以下である、ＬＣＭＦ製剤中の１３，０００Ｄａを上回るＨＭＷ不純物は、ＬＣＭＦ製剤を対象に投与した場合、分布における主ピークよりも実質的に長いか、または分布における主ピークよりも長い循環半減期をもたらさない（例えば、図７および図８Ａおよび８Ｂを参照）。例えば、概して全成分の１．５重量％以下である、ＬＣＭＦ製剤中の１３
，０００Ｄａを上回るＨＭＷ不純物は、ＬＣＭＦ製剤を対象に投与した場合、分布における主ピークの半減期よりも５．０倍超長く、概して４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下、または１．５倍以下長い循環半減期をもたらさない。
【０１６１】
ある例では、ＨＭＷ成分を他の既存の精製Ｐ１８８製剤と比べてＬＣＭＦ製剤中で除去または減少させる。この成分を有しない生成物を生成する例示的調製法を含む、そのような精製のためのいかなる方法も想定される。例えば、本明細書中で提供するＬＣＭＦポロクサマーには、例えば１．２％以下、１．１％以下、１．０％以下またはそれ以下など１．３％以下の１３，０００Ｄａを上回る高分子量成分があるＰ１８８ポロクサマーが含まれる。本明細書中で提供する特定の実施例では、本明細書中で提供するＬＣＭＦポロクサマーには、１．０重量％未満、概して０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはそれ以下の１３，０００Ｄａを上回る高分子量成分があるＰ１８８ポロクサマーが含まれる。
【０１６２】
３．ポロクサマーを精製するための超臨界流体抽出法
ポロクサマーを精製するために当業者に公知の任意の方法を使用できる。特に、超臨界方法を使用できる。超臨界抽出は、温度、圧力および共溶媒改質因子の存在の操作によって溶解力の制御を可能にする。二酸化炭素はＰ１８８などのポロクサマーの特に効果的な抽出溶媒ではないが、改質因子としてのアルカノールなどの極性共溶媒の存在が抽出溶媒の可溶化効率を増加させ得ることが判明した。特に、記載した抽出方法を、抽出過程が進行するにつれその濃度が勾配方式（例えば、段階的勾配または連続的に上昇する勾配）で増加するアルカノールなどの極性共溶媒の存在下で実施する。濃度がこの方法で増加するアルカノール共溶媒を採用することによって、不純物の除去を、二酸化炭素を単独で使用する場合よりも遙かに多く除去できることが判明した。例えば、二酸化炭素を単独で使用する抽出方法は、本明細書中で記載するＬＭＷ成分またはＨＭＷ成分などの望ましくない成分を、提供する方法によって達成するのと同じ程度まで除去することはできない。
【０１６３】
超臨界流体抽出法を使用してポロクサマーを精製する方法において、ポロクサマー分布のＬＭＷ成分または不純物を、分布中の他のＨＭＷ成分よりも低いアルカノール（例えば、メタノール）濃度および高い圧力で選択的に除去できる。さらに後述するように、抽出溶媒の可溶化能を増加させることによって、例えば、アルカノール（例えば、メタノール）などの極性溶媒の圧力および濃度を慎重に制御することによって、他の不純物を除去することも可能である。特に、方法は、高濃度のアルカノール（例えば、メタノール）の勾配を、単独または減圧と組み合わせて用いて、その結果、対象に投与した場合、血漿中の長期循環物質であるかまたは血漿中で長期循環物質を生じさせる、ポロクサマー分布における成分（例えば、ＨＭＷ成分）を除去する。
【０１６４】
しかしながら、ポロクサマーの収率に関してはトレードオフがある。概して、アルカノール（例えば、メタノール）共溶媒の濃度が増加するにつれ、抽出溶媒の溶媒和能（solvating power）が増加して、より多くの化合物が可溶化し、抽出の程度が増加する。抽出溶媒の濃度を勾配方式で増加させることによって、ポロクサマー収率の減少は最小に抑えられ、一方で最終生成物の純度は最大になる。典型的には、方法は、その方法によって得られる抽出または精製ポリマーの量が、方法の実施前のポロクサマーの出発量の少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上となるような収率を達成する。しかしながら、結果として得られるポロクサマーは、実質的にさらに高い純度を示し、分布中の主ピークのパーセンテージが出発物質よりも高く、投与した場合に毒性副作用を示すかまたは血漿中で長期循環物質の原因となり得る不純物がない。
【０１６５】
例えばポリマーの分布において望ましくない成分を減少または縮小させることによって、純度を増加させることが望ましい任意のポロクサマーに関して方法を実施できる。当業
者は、方法で使用する特定のポロクサマーを選択することができる。望ましくない成分は、毒性であるか、または所望の活性に対して反対もしくは逆の生物活性を有する物質であるか、あるいはそのような物質を生じさせる任意のものである。例えば、ポロクサマーは、ポロクサマー中のＬＭＷ成分、例えば、投与した場合にクレアチンの上昇などの急性腎臓副作用をもたらす任意のＬＭＷ成分を減少または除去することが望ましいものであり得る。ポロクサマーはまた、投与した場合に、ポリマーの分布における主ピークの半減期とは異なる（例えばより長い）血液中の半減期を有する物質であるか、またはそのような物質を生じさせるＨＭＷ成分などの任意の成分を含むものでもあり得る。そのような成分は、血液粘性および赤血球凝集を増加させる可能性があり、したがって望ましくない。
【０１６６】
例えば、本明細書中で提供する抽出方法を用いてＰ１８８製剤を精製することができ、Ｐ１８８製剤は、以下の化学式：
ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ’−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＨ
（式中、［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］によって表される疎水性部分は、およそ１７００〜１８００Ｄａ、例えば１７５０Ｄａの分子量、および７６８０〜９５１０Ｄａ、例えば概して約８４００〜８８００Ｄａの平均分子量を有する）を有する。Ｐ１８８のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレン重量比はおよそ４：２：４である。Ｐ１８８は８１．８±１．９％のオキシエチレンの重量パーセント、および０．０２６±０．００８ｍＥｑ／ｇの不飽和レベルを有する。本明細書中の方法で使用するためのＰ１８８製剤には市販の製剤が含まれる。これらとしては、限定されるものではないが、商標Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８（ＢＡＳＦ，  Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ，  Ｎ．Ｊ．）およびＲｈｅｏｔｈＲｘ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｉｎｃ．により開発されたもの）で販売されているポロクサマーが挙げられる。
【０１６７】
本明細書中で提供するＬＣＭＦポロクサマーは、本明細書中で後述する方法によって調製できる。例えば、本明細書中で提供するＬＣＭＦポロクサマーを：
ａ）ポロクサマー溶液を抽出容器中に導入し、この場合、ポロクサマーを第１アルカノール中に溶解させて溶液を得る；
ｂ）ポロクサマー溶液と、第２アルカノールおよび超臨界二酸化炭素を含む抽出溶媒とを、第１の所定の期間、ある温度および圧力下で接触させて超臨界二酸化炭素を維持し、この場合、
温度は二酸化炭素の臨界温度よりも高いが４０℃以下であり、
圧力は２２０ｂａｒ〜２８０ｂａｒであり、および
アルカノールは、全抽出溶媒の７重量％〜８重量％であるアルカノール濃度で提供する；
ｃ）抽出溶媒中のステップｂ）の第２アルカノールの濃度を抽出方法の時間にわたって勾配ステップで複数回増加させ、この場合、
複数回の各々はさらなる所定の時間に行い、および
連続するステップの各々で、アルカノール濃度を第２アルカノールの前の濃度と比べて１％〜２％増加させる；
ｄ）抽出溶媒を抽出容器から除去し、それによって抽出された物質をラフィネートポロクサマー製剤から除去すること
を含む方法によって作製する。
【０１６８】
ａ．抽出のための過程
超臨界流体抽出法過程は、本質的に、超臨界流体を溶媒として使用する溶媒抽出過程である。超臨界流体抽出法で、多成分混合物は、成分の揮発性の差および成分の混合物と超臨界流体溶媒との間の特定の相互作用の両方を利用することによって分離できる（溶媒抽出）。相図の超臨界領域において、二酸化炭素などの圧縮可能な流体は、液体様密度およ
び圧力に依存した大きく増加した溶解力（solvent capacity）を示す。
【０１６９】
超臨界流体は、多くの非常に有利な特性を示し、その特性のために超臨界流体は優れた溶媒となる。例えば、超臨界流体の調節可能な溶解力は、ある範囲内の臨界状態付近で急速に変化する。超臨界流体の溶解力と、そのため抽出中に選択的に除去できる成分の性質は、超臨界流体溶媒の温度および圧力を変えることによって微調整できる。
【０１７０】
様々な超臨界流体の別の有益な特性は、それらの臨界温度および圧力の差である。各々の超臨界流体は様々な溶解力を有する。調節可能な溶解力範囲は、適切な超臨界流体を選択することによって選択できる。
【０１７１】
独自の溶解特性に加えて、超臨界流体はそれらを有用にするある物理化学的特性を示す。例えば、超臨界流体は、液体様密度を示し、かつガス様輸送特性、例えば拡散性および粘性を有する。これらの特性も、臨界領域付近で急速に変化する。超臨界流体はゼロ表面張力も有する。ほとんどの有用な超臨界流体は環境温度付近または環境温度以下の沸点を有するので、精製後の溶媒除去ステップは簡単でエネルギー効率がよく、および残留溶媒を残さない。
【０１７２】
加えて、抽出中に固体マトリックスを使用することは、分画パラメータにさらなる特徴を提供する。好適な固体マトリックスの使用は、溶質−溶媒相互作用に加えて溶媒−マトリックスおよび溶質−マトリックス相互作用を提供して、分画分解能を増強する。
【０１７３】
超臨界流体の望ましい輸送特性のために、過程は製造のために容易に拡張可能になる。熱伝達および物質伝達特性は超臨界流体抽出過程で過程をスケールアップしても有意に変化しない。圧力、温度、および流速などの抽出処理条件を精密に制御できるので、精製過程は高度に調節可能であることに加えて再現可能である。
【０１７４】
そのような方法において、抽出溶媒は超臨界液体（例えば、超臨界二酸化炭素）、ならびに抽出中に時間とともに増加する別の共溶媒改質因子、概してアルカノールを含み得る。上述のように、共溶媒改質因子の存在は、高分子量またはさらに非極性溶質などの溶質の溶解性を改善することができ、それによって方法でのそれらの抽出を増加させる。
【０１７５】
例えば、本明細書中で提供する方法は：ａ）ポロクサマーを第１アルカノール中に溶解させて溶液を形成することによって調製したポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）溶液を抽出容器中に提供または導入し、ｂ）第２アルカノールと超臨界液体とを含む抽出溶媒を、超臨界液体状態を作るのに充分な高圧および高温下でポロクサマー溶液と混合して抽出混合物を形成し、この場合、抽出溶媒中の第２アルカノールの濃度を抽出方法の時間にわたって増加させ、およびｃ）抽出容器から抽出溶媒を除去して、それにより不純物（例えば、ＬＭＷ成分または他の成分）をポロクサマー製剤から除去することを含み得る。第１および第２アルカノールは同一または異なり得る。その方法では、第１アルカノール中にポロクサマーを溶解させるステップは、溶液を抽出容器中に装填する前、または溶液を抽出容器中に装填する時点で行うことができる。例えば、ポロクサマーを別の容器中で溶解させ、次いで溶液を抽出容器に添加する。
【０１７６】
図１は、ポロクサマー製剤から不純物（例えば、ＬＭＷ成分または他の成分）を除去するために有用な過程１００を示す。抽出システムを、典型的にはステップ１１０で示すようにフィード混合タンク中に第１アルカノールを分注する前に、ステップ１０５で示すように加圧する。システムを抽出過程に好適な温度まで加熱する。温度は、典型的には超臨界液体（例えば、二酸化炭素）の臨界温度より高い温度である。概して、温度は４０℃以下である。
【０１７７】
いかなる好適なアルカノールまたはアルカノールの組み合わせも、ポロクサマーを精製する方法で使用できる。好適なアルカノールの例としては、これらに限定されるものではないが、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、およびその他が挙げられる。例えば、本明細書中で提供する方法には、第１および第２アルカノールが各々、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、およびそれらの組み合わせから独立して選択される上述の抽出方法が含まれる。いくつかの実施形態では、第１アルカノールはメタノールである。方法のある例では、メタノールは精製溶媒として選択され、第２アルカノールである。当業者は、メタノールが比較的低い毒性を有することを理解するであろう。メタノールは、ポロクサマー１８８について良好な溶解性を有する。
【０１７８】
第１アルカノール（例えば、メタノール）を使用して、過程１００におけるステップ１１５にしたがってポロクサマー溶液を形成する。Ｐ１８８製剤などのポロクサマーを供給タンク中に分注し、および第１アルカノールと混合されるまで撹拌する。供給タンクに添加するポロクサマーの量は、抽出方法のスケーラビリティ、抽出容器のサイズ、達成する純度の程度、および当業者のレベル範囲内の他の因子の関数である。例えば、抽出容器１ｍＬあたりのポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の非限定量は０．１ｋｇ〜０．５ｋｇまたは０．２ｋｇ〜０．４ｋｇであり得る。いくつかの例では、３Ｌの抽出容器を使用する抽出方法において、ポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の非限定量は０．６ｋｇ〜１．２ｋｇ、例えば０．８ｋｇ〜１．０ｋｇであり得る。別の例では、１２Ｌの抽出容器を使用する抽出方法において、ポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の非限定量は１．５ｋｇ〜５ｋｇ、例えば２ｋｇ〜４ｋｇであり得る。さらなる例では、５０Ｌの抽出容器を使用する抽出方法において、ポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の非限定量は８ｋｇ〜２０ｋｇ、例えば１０ｋｇ〜１６ｋｇまたは１２ｋｇ〜１５ｋｇであり得る。量の変動が、特定の用途、抽出容器、出発物質の純度、および当業者のレベル範囲内の他の検討項事項に応じて想定される。
【０１７９】
ポロクサマーとアルカノールとの任意の好適な比が、ポロクサマーを精製する方法で使用するために想定される。ポロクサマーのアルカノールに対する比は、重量基準で、例えば約４：１〜約１：４、例えば約３：１〜約１：３、２：１〜約１：２、１：１〜４：１または１：２〜１：４であり得る。例えば、ポロクサマーのアルカノールに対する比は、重量比で、約４：１、または約３：１、または約２：１、または約１：１、または約１：２、または約１：３、または約１：４であり得る。例えば、ある量のポロクサマー、例えばＰ１８８を、重量基準で等しい量のアルカノール（例えば、メタノール）と混合することができる。ある量のポロクサマー、例えばＰ１８８を、重量基準でより少ない量のアルカノール、例えば重量基準で半量のアルカノール（例えば、メタノール）と混合することができる。適切なポロクサマーのアルカノールに対する比が所与のアルカノール中の溶解度などのポロクサマーの特性に依存することは、当業者には理解されるであろう。
【０１８０】
ポロクサマー／アルカノール混合物を形成した後、混合物の全部または一部をステップ１２０で示すように抽出器中にポンプで供給する。そのような例では、ポロクサマー溶液を調製する過程を抽出器から独立した容器中で実施する。当業者は、ポロクサマーはまた、第１アルカノールと混合する前に抽出器へ固体として導入できることを理解するであろう。したがって、ポロクサマー溶液を調製する過程は抽出容器中で直接実施することができる。
【０１８１】
過程１００のステップ１２５で示すように、抽出器を次いで加圧し、抽出溶媒を抽出器に導入する。抽出溶媒は超臨界液体を含む。超臨界流体の例としては、これらに限定されるものではないが、二酸化炭素、メタン、エタン、プロパン、アンモニア、フレオン、水、エチレン、プロピレン、メタノール、エタノール、アセトン、およびそれらの組み合わ
せが挙げられる。いくつかの実施形態では、圧力下の超臨界液体は、二酸化炭素、メタン、エタン、プロパン、アンモニア、およびフレオンから選択される構成要素である。いくつかの実施形態では、圧力下の超臨界液体は二酸化炭素（ＣＯ２）である。
【０１８２】
抽出は、超臨界液体状態を維持するために高圧および高温下で行う。典型的には、圧力および温度を一定に保つ。この圧力および温度で、超臨界液体（例えば、超臨界二酸化炭素）を実質的に一定の流速で提供する。流速は、０．５ｋｇ／ｈ〜６００ｋｇ／ｈ、例えば１ｋｇ／ｈ〜４００ｋｇ／ｈ、１ｋｇ／ｈ〜２５０ｋｇ／ｈ、１ｋｇ／ｈ〜１００ｋｇ／ｈ、１ｋｇ／ｈ〜５０ｋｇ／ｈまたは１ｋｇ／ｈ〜２０ｋｇ／ｈ、または１ｋｇ／ｈ〜１０ｋｇ／ｈ、１０ｋｇ／ｈ〜４００ｋｇ／ｈ、１０ｋｇ／ｈ〜２５０ｋｇ／ｈ、１０ｋｇ／ｈ〜１００ｋｇ／ｈ、１０ｋｇ／ｈ〜５０ｋｇ／ｈ、１０ｋｇ／ｈ〜２０ｋｇ／ｈ、２０ｋｇ／ｈ〜４００ｋｇ／ｈ、２０ｋｇ／ｈ〜２５０ｋｇ／ｈ、２０ｋｇ／ｈ〜１００ｋｇ／ｈ、２０ｋｇ／ｈ〜５０ｋｇ／ｈ、５０ｋｇ／ｈ〜４００ｋｇ／ｈ、５０ｋｇ／ｈ〜２５０ｋｇ／ｈ、５０ｋｇ／ｈ〜１００ｋｇ／ｈ、１００ｋｇ／ｈ〜４００ｋｇ／ｈ、１００ｋｇ／ｈ〜２００ｋｇ／ｈまたは２００ｋｇ／ｈ〜４００ｋｇ／ｈ（各々両端を含む）で変動し得る。例えば、流速は、２０ｋｇ／ｈ〜１００ｋｇ／ｈ（両端を含む）、例えば概して（約）１００ｋｇ／ｈである。
【０１８３】
超臨界流体を超臨界状態で維持するいかなる好適な温度も、抽出過程を実施するために使用できる。例えば、二酸化炭素の臨界温度は約３１℃である。したがって、抽出容器を、３１℃を上回る温度で保持する。いくつかの実施形態では、抽出容器は、３２℃〜８０℃、概して３２℃〜６０℃または３２℃〜５０℃（各々、両端を含む）の温度を有する。例えば、温度は、３５℃以下、３６℃以下、３７℃以下、３８℃以下、３９℃以下、４０℃以下、４１℃以下、４２℃以下、４３℃以下、４４℃以下、４５℃以下、５０℃以下、または６０℃以下の温度であり得る。概して、温度は３１℃を上回るが、４０℃以下である。当業者は、温度がひとつには抽出溶媒の組成ならびに過程で採用した溶媒中の所与のポロクサマーの溶解度に応じて変化し得ることを理解するであろう。
【０１８４】
いかなる好適な圧力も本発明の方法で使用できる。超臨界流体抽出法を採用する場合、システムを、超臨界液体が臨界圧より高い圧力を維持することを確実にするレベルで加圧する。例えば、二酸化炭素の臨界圧は約７４ｂａｒである。したがって、抽出容器を７４ｂａｒ超まで加圧する。特定の圧力の程度は、超臨界液体の溶解特性を変更する可能性があり、したがって、選択した特定の圧力は、収率および不純物の抽出の程度に影響を及ぼす可能性がある。典型的には、抽出容器を１２５〜５００ｂａｒの範囲内で加圧する。いくつかの実施形態では、抽出容器を２００ｂａｒ〜４００ｂａｒ、２００ｂａｒ〜３４０ｂａｒ、２００ｂａｒ〜３００ｂａｒ、２００ｂａｒ〜２８０ｂａｒ、２００ｂａｒ〜２６０ｂａｒ、２００ｂａｒ〜２４０ｂａｒ、２００ｂａｒ〜２２０ｂａｒ、２２０ｂａｒ〜４００ｂａｒ、２２０ｂａｒ〜３４０ｂａｒ、２２０ｂａｒ〜３００ｂａｒ、２２０ｂａｒ〜２８０ｂａｒ、２２０ｂａｒ〜２６０ｂａｒ、２２０ｂａｒ〜２４０ｂａｒ、２４０ｂａｒ〜４００ｂａｒ、２４０ｂａｒ〜３４０ｂａｒ、２４０ｂａｒ〜３００ｂａｒ、２４０ｂａｒ〜２８０ｂａｒ、２４０ｂａｒ〜２６０ｂａｒ、２６０ｂａｒ〜４００ｂａｒ、２６０ｂａｒ〜３４０ｂａｒ、２６０ｂａｒ〜３００ｂａｒ、２６０ｂａｒ〜２８０ｂａｒ、２８０ｂａｒ〜４００ｂａｒ、２８０ｂａｒ〜３４０ｂａｒ、２８０ｂａｒ〜３００ｂａｒ、または３００ｂａｒ〜３４０ｂａｒの範囲内で加圧する。例えば、抽出容器を、およそまたは少なくとも２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、または４００ｂａｒ、概して５００ｂａｒ以下で加圧することができる。抽出容器を例えば３１０±１５ｂａｒで加圧することができる。
【０１８５】
典型的には、本明細書中で提供する方法において、抽出容器中に導入する抽出溶媒はアルカノールも含む。したがって、抽出溶媒は第２アルカノールおよび超臨界液体を高圧および高温下で含む。第２アルカノールは超臨界液体の共溶媒改質因子として、超臨界液体の溶媒特性を変える働きをし、方法における溶質の抽出性を改善する働きをする。任意の好適なアルカノールまたはアルカノールの組み合わせを、上述のように、本明細書中で提供する方法で第２アルカノールとして使用できる。上述のように、特定の例では、第２アルカノールはメタノールである。
【０１８６】
上述のいかなるものなど、第２アルカノールと超臨界液体とのいかなる好適な組み合わせも、本発明の方法において抽出溶媒中で使用することができる。いくつかの実施形態では、抽出溶媒はメタノールおよび二酸化炭素を含む。第２アルカノールを、典型的には、３％〜２０％、概して３％〜１５％、例えば５％〜１２％、５％〜１０％、５％〜９％、５％〜８％、５％〜７％、７％〜１５％、７％〜１２％、７％〜１０％、７％〜９％、７％〜８％、８％〜１５％、８％〜１２％、８％〜１０％、８％〜９％、９％〜１５％、９％〜１２％、９％〜１０％、１０％〜１５％、または１０％〜１２％（各々両端を含む）である全抽出溶媒のパーセンテージ（ｗ／ｗ）として提供する。アルカノールの流速（ｋｇ／ｈ）は、抽出器に導入するアルカノールの量の関数である。
【０１８７】
例えば、アルカノール（例えば、メタノール）の超臨界液体（例えば、二酸化炭素）に対する好適な比は、ポロクサマー出発物質のアイデンティティーおよび純度に基づいて、または温度もしくは圧力などの他の抽出パラメータに基づいて、選択できる。例えば、アルカノール（例えば、メタノール）の超臨界液体（例えば、二酸化炭素）に対する比は、約１：１００〜約２０：１００であり得る。いくつかの実施形態では、アルカノール（例えば、メタノール）の超臨界液体（例えば、二酸化炭素）に対する比は約１：１００〜約１５：１００である。いくつかの実施形態では、アルカノール（例えば、メタノール）の超臨界液体（例えば、二酸化炭素）に対する比は約２：１００〜約１４：１００である。アルカノール（例えば、メタノール）の超臨界液体（例えば、二酸化炭素）に対する比は、約３：１００、または約４：１００、または約５：１００、または約６：１００、または約７：１００、または約８：１００、または約９：１００、または約１０：１００、または約１１：１００、または約１２：１００、または約１３：１００、または約１４：１００であり得る。
【０１８８】
ある態様では、抽出溶媒の組成が抽出手順全体にわたって一定のままである、アイソクラティック方式で抽出を実施できる。例えば、超臨界液体（例えば、二酸化炭素）およびアルカノール（例えば、メタノール）の量は、例えば、各々の一定流速を維持することによって、時間または抽出に対して一定である。別法として、抽出溶媒の組成は、典型的には、抽出溶媒を構成する超臨界液体および／またはアルカノール成分の量を変える（例えば、増加または減少させる）ことによって、時間とともに変えることができる。概して、超臨界液体（例えば、二酸化炭素）の濃度を一定に保ち、一方で、抽出溶媒中のアルカノール（例えば、メタノール）の濃度を抽出の時間にわたって変える（例えば、増加または減少させる）。成分の濃度は、流速を調節することによって変えることができる。
【０１８９】
抽出溶媒の組成が時間とともに変化する実施形態において、抽出過程が進行するにつれて第２アルカノールを（段階式勾配として、または連続上昇式勾配のいずれかで）増加させる方法は、その方法にとって有益である。ある場合では、商業等級ポロクサマーは、主生成物または成分とともに高分子量成分および低分子量成分の両方を有する。高圧二酸化炭素抽出流体中の低アルカノール（例えば、メタノール）濃度は、低分子量成分を選択的に除去できる。しかしながら、不純物を多く含む抽出可能物の溶解性は低く、および低分子量成分を有意に減少させるには時間がかかり、そのために効果的でなくなる。抽出溶媒
のアルカノール濃度を勾配方式（段階式勾配または連続上昇式勾配としてのいずれか）で増加させることによって、抽出物される低分子量不純物の量が増加する。
【０１９０】
さらに、アルカノール（例えば、メタノール）濃度が高いほど、より高分子量成分の溶解度、したがって抽出が増加する。したがって、抽出溶媒のアルカノール（例えば、メタノール）濃度が連続して高くなる勾配で漸進的に低分子量成分を、および最終的には低濃度の抽出溶媒中には溶解しにくい高分子量成分を抽出できる。これを説明するための非限定例として、約６．６％ｗ／ｗの低いアルカノール（例えば、メタノール）濃度は低分子量成分を除去できると考えられる。アルカノールの濃度を１％〜３％増加させることで、低分子量成分の抽出の実施を続けるが、高分子量成分も除去も除去する。アルカノールの濃度を１％〜３％さらに増加することで、これらの成分、ならびに高分子量を有する、および／または先の抽出溶媒中に溶けにくい他の成分もさらに除去する。
【０１９１】
さらに高いアルカノール（例えば、メタノール）濃度を有する抽出溶媒は選択的ではなく；低分子量成分についてより高い溶解度を提供するが、主ピークを含む他の成分の溶解度も増加させる。したがって、精製産物の収率は高いメタノール濃度で減少する。本明細書中の方法で提供するような、勾配方式で抽出溶媒の濃度を増加させることによって、ポロクサマー収率の減少が最小限に抑えられ、最終生成物の純度が最大になる。
【０１９２】
メタノール濃度を段階式に増加させることで、抽出器のローディング容量を増加させ、それによって所与の抽出システムにおけるスループットを増加させる。２相システムは抽出器の内部を構成する。主にポロクサマーと二酸化炭素が若干溶解したメタノールとの混合物の下相。抽出溶媒（低いメタノール共溶媒画分を有する二酸化炭素）は下相に浸透する。上相は抽出溶媒とポロクサマーから抽出された成分とを含む。２相の相対量は溶媒流中のメタノール濃度に左右される。典型的な抽出システムでは、上相の適切な相分離のために適切なヘッドスペースがある。メタノール共溶媒濃度を抽出過程中に段階的に増加させると、抽出器中へのさらに高いフィード装填に至る。
【０１９３】
例えば、過程１００に戻って、抽出溶媒の組成は、ステップ１３０〜１４０で示すようにさまざまであり得る。いくつかの実施形態では、抽出溶媒のアルカノール（例えば、メタノール）の重量パーセンテージを方法の過程にわたって増加させる。メタノール／二酸化炭素混合物中のメタノール含有量は、抽出過程が進行するにつれて段階方式または連続方式で増加させることができる。いくつかの実施形態では、例えば、ポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の抽出過程は、超臨界液体（例えば、二酸化炭素）を含む抽出溶媒中、約３重量％〜約１０重量％（ｗ／ｗ）、例えば約５重量％〜約１０重量％、例えば６重量％〜８重量％（例えば、約６．６重量％または７．４重量％）などのアルカノール（例えば、メタノール）を用いて開始する。所定の期間の後、抽出溶媒のアルカノール（例えば、メタノール）含有量を約１〜３％、例えば１〜２％（例えば、それぞれ７．６％または９．１％まで）上昇させる。アルカノール（例えば、メタノール）含有量を続いて最終期間中に約１〜３％、例えば１〜２％（例えば、それぞれ８．６％または１０．７％まで）再度上昇させる。本発明の方法ではいかなる好適な溶媒勾配も使用できる。例えば、抽出溶媒中のアルカノール（例えば、メタノール）濃度を抽出手順の過程で約５％から約２０％まで増加させることができる。抽出溶媒中のアルカノール（例えばメタノール）濃度を約５％から約２０％まで、または約５％から約１５％まで、または約５％から約１０％まで増加させることができる。抽出溶媒中のアルカノール（例えばメタノール）濃度は、約６％から約１８％まで、または約６％から約１２％まで、または約６％から約１０％まで増加させることができる。抽出溶媒中のアルカノール（例えばメタノール）濃度を約７％から約１８％まで、または約７％から約１２％まで、または約７％から約１０％まで増加させることができる。アルカノール（例えばメタノール）濃度は任意の好適な段階数で増加させることができる。例えば、アルカノール（例えばメタノール）濃度を抽出手順の過程
で２段階、または３段階、または４段階、または５段階にわたって増加させることができる。当業者は、他の溶媒比および溶媒勾配を抽出過程で使用できることを理解するであろう。
【０１９４】
本明細書中で提供する過程の抽出時間は、ポロクサマー収率の減少を最小限に抑え、かつ純度を最大にしつつ、製剤中の物質の好適な抽出をもたらす任意の所定の期間であり得る。時間は、圧力、温度、第２アルカノール濃度、および抽出溶媒を提供する過程（例えば、アイソクラティックまたは、本明細書中で記載するような増加するアルカノール濃度の勾配として）の選択の関数である。概して、抽出は、５時間〜５０時間、概して１０時間〜３０時間、または１５時間〜２５時間（各々、両端を含む）、例えば約１５時間または２４時間進行する。その方法で用いるアルカノール（例えば、メタノール）濃度が高いほど、典型的には抽出時間が短くなる。アルカノールの勾配を方法で用いる例では、抽出の総時間を手順における勾配段階数の関数として分割することも理解される。各勾配段階での抽出は、同じ量の時間または異なる時間であり得る。当業者は用いる抽出時間を実験的に決定することができる。
【０１９５】
物質の除去をモニターするため、または温度もしくは抽出溶媒の組成などの抽出パラメータの調節が必要かどうかを判定するために、サンプルを抽出過程の間に集めることができる。
【０１９６】
特に、方法を使用してＰ１８８を精製することができる。過程を他のポリマーにも同様に適用できる。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書中で提供する方法は、精製ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン組成物を調製する方法を提供する。
【０１９７】
方法は：
ａ）抽出容器中に、第１溶媒中に溶解させたポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロックコポリマーを提供または導入してコポリマー溶液を形成することであって、第１溶媒はメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノールまたはそれらの組み合わせであり、組成物は：
ｉ）コポリマーの平均分子量が約４０００〜約１０，０００Ｄａであるポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロックコポリマーと
ｉｉ）４５００Ｄａ未満の分子量を有する複数の低分子量物質であって、組成物の総重量の４％超を構成する前記複数の低分子量物質と
を含む；
ｂ）第２溶媒を添加して抽出混合物を形成することであって、第２溶媒は、高圧および高温下の超臨界液体と、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノールまたはそれらの組み合わせであるアルカノールとを含み、抽出溶媒中の第２溶媒の濃度は抽出方法の時間にわたって増加する；および
ｃ）抽出混合物を分離させて、ラフィネート相および抽出物相を含む複数の相を形成することであって、ラフィネート相および抽出物相を別々に除去または単離すること
を含む。
【０１９８】
上記方法のある場合では、コポリマーの中間または平均分子量は約７６８０〜９５１０Ｄａ、例えば概して８４００〜８８００Ｄａ、例えば（約）８４００Ｄａである。その方法では、コポリマーの添加および第１溶媒を添加してコポリマーの溶液または懸濁液を形成することによって、コポリマー溶液を抽出容器中で形成でき、第１溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、およびそれらの組み合わせから選択されるアルカノールである。別法として、第１溶媒をコポリマーに添加してコポリマー溶液を形成するのは別の容器中であり得、および第１溶媒中に溶解させたコポリマー溶液を抽出容器中に提供または導入（すなわち装填）する。場合によっては、ステップｃ
）の前に、方法は、抽出混合物を高圧および高温下で撹拌して、不純物（例えば、低分子量の抽出可能な成分および他の成分）をコポリマー組成物から抽出することを含む。
【０１９９】
ｂ．抽出容器およびシステム
本明細書中で提供する方法のいずれかについて、次に図４を見てみると、システム２００は、提供した方法の実施のための１つの実施形態を表す。システム２００は、不純物（例えば、ＬＭＷ物質または他の成分）をポロクサマーから超臨界流体または亜臨界法を使用して抽出するために使用できる１つのシステムである。
【０２００】
ポリマー供給ポンプ２０１に精製するポロクサマー、例えば、Ｐ１８８を入れる。ポロクサマーを、バルブ２０５を通ってポリマー供給タンク２０７に輸送する。抽出容器２１５を使用して、サンプルからの抽出不純物を、例えばポロクサマーからのＬＭＷ物質または他の成分を除去する。二酸化炭素（または他の超臨界液体もしくは亜臨界液体）ポンプ２０８に、バルブ２４３および予冷器２０３を通って外部二酸化炭素供給２５０から二酸化炭素を装填する。二酸化炭素をポンプ２０８から熱交換器２１０へ、次いで抽出器２１５へ供給する。メタノール（または他の好適な溶媒）を、ポンプ２０９を通して抽出器２１５中へ供給する。そのような実施形態において、メタノールおよび二酸化炭素は不純物、例えばＬＭＷ物質または他の成分を抽出器２１５中のポロクサマーから抽出する。抽出後、精製ポロクサマー混合物を排出させ、急速減圧処理によって集める。抽出した成分を、コレクタ２２５、減圧容器２２７、およびサイクロンセパレータ２３１を使用して溶媒流から単離する。コレクタ２２５中に収集する間に放出される二酸化炭素蒸気を、凝縮器２３２を使用して凝縮することができ、およびリサイクルすることができる。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、抽出装置は、抽出容器の底部で「流動」床を形成するある形状の粒子を含む溶媒分布システムを含み得る。床は、スクリーンまたはストレーナーまたは焼結金属ディスクによって支持できる。床に使用する粒子は、完全な球体またはペブルなどの不揃いな形状の粒子のいずれかであり得る。有孔率が低いかまたは表面粗度が低い平滑面を使用することで洗浄が容易になる。これらの利点は、薬品製造過程で立証できる。
【０２０２】
床を形成する粒子の密度は、溶媒密度よりも高くなるように選択し、したがって抽出過程の間に流入する溶媒によって床は影響を受けないままである。粒子サイズは、床の充填密度および有孔性を制御するために均一であり得るかまたは異なるサイズ分布を有し得る。充填分布配置（packing distribution arrangement）を、バランスの取れた最適抽出および抽出容器から出ていく前の溶媒粒子のその後の合体を提供するように設計する。これによって、ポロクサマーを装填した抽出器の最大装填を促進する。これはまた、抽出効率を最大にすることができ、抽出時間を最小限に抑えることができ、および抽出容器からの精製産物の望ましくないキャリーオーバーを最小限に抑えることができる。
【０２０３】
床中の球のサイズは、抽出容器の寸法、抽出容器中の溶媒液滴の滞留時間、および溶媒液滴が合体する能力を含む１以上のシステム特性に基づいて選択される。球の直径は約５ｍｍ〜約２５ｍｍの範囲であり得る。直径は、床が異なるサイズの球を含む場合、平均直径であり得る。別法として、床中の球はすべて同じ直径を有し得る。溶媒分布床中の異なるサイズのステンレス鋼球の断面の１例を図５に示す。
【０２０４】
したがって、本発明の方法のある実施形態は効果的な溶媒抽出装置を提供する。装置は：
ａ）抽出器の底部の分布システムであって、複数の球を含む前記分布システム；および
ｂ）抽出器の最上部の粒子合体システム
を備える。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、複数の球は金属球、セラミック球、またはそれらの混合物を含む。いくつかの実施形態では、複数の球は同じサイズである。いくつかの実施形態では、複数の球は異なるサイズの球を含む。いくつかの実施形態では、粒子合体システムは、デミスターパッド、据置型噴霧器、および温度ゾーンから選択される１以上の構成要素を含む。
【０２０６】
ｃ．抽出および抽出剤の除去
本明細書中で提供する方法のいずれもバッチ法または連続法として実施できる。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、方法はバッチ法である。バッチ法は、前述のような様々な寸法およびサイズの抽出容器で実施できる。例えば、装置トレイン（equipment train）は１２０Ｌの高圧抽出器を含み得る。ポロクサマーを適切な溶媒（例えば、メタノールなどのアルカノール溶媒）中に溶解させたポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）溶液を抽出容器中に提供または導入する。上記方法で記載する任意のものなどの抽出溶媒（例えば、超臨界または高圧二酸化炭素およびメタノール）を、制御した温度、流れ、および圧力で維持した抽出容器中に独立して連続的にポンプで供給する。本明細書中で記載するように抽出溶媒組成を変えることによって物質を除去する。別法として、温度および圧力などの抽出処理条件も、独立してまたは組み合わせて変えることができる。後述するように、物質を除去した後、精製産物を二酸化炭素ガスから分離するように好適に設計したサイクロンセパレータ中に精製産物を排出させる。生成物を乾燥して残留アルカノール溶媒を除去する。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、抽出方法は連続法である。典型的な連続抽出では、ポロクサマーを適切な溶媒（例えば、メタノールなどのアルカノール溶媒）中に溶解させたものであるポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）溶液を、好適な充填材料を充填した高圧抽出カラムの中間点でロードする。抽出溶媒を、向流方式で底部から抽出カラムを通ってポンプで供給する。ＬＭＷ物質または他の成分などの抽出物質をカラムの最上部から除去し、一方、精製産物をカラムの底部から除去する。精製産物を抽出器カラムの底部で連続して集め、および定期的に除去し、特別に設計したサイクロンセパレータ中に排出させる。残留メタノールを含む精製ポリマー粒子を続いて真空下で乾燥する。
【０２０９】
精製ポロクサマー生成物で望まれる純度のレベルに応じて、抽出ステップを所与のバッチについて繰り返すことができる。充分なレベルのポロクサマー純度が得られるまで、追加の抽出溶媒を抽出容器に導入することができ、除去することができる。したがって、本明細書中で提供する方法のある実施形態は、ステップｃ）の後に、ステップｂ）およびｃ）を繰り返すことをさらに含む上述のような抽出方法を提供する。ポロクサマーが十分に純粋になるまで、ステップｂ）およびｃ）を繰り返すことができる。例えば、ステップｂ）およびｃ）を１回、２回、３回、４回、もしくは５回、または反復方式で繰り返すことができる。
【０２１０】
ポロクサマー物質が充分に純粋である場合、生成物をさらなる処理のために準備する。いくつかの実施形態では、生成物を図１で概要を示すような過程１００にしたがって処理する。ステップ１４５で示すように、生成物を抽出容器から排出させることができ、適切な受器中に集めることができる。ステップ１５０に示すように、湿潤生成物を純度、化学安定性、または他の特性に関して試験するためにサンプリングすることができる。残留溶媒を真空下で除去することによって生成物を乾燥できる。真空レベルを調節して乾燥速度を制御できる。乾燥は、必要ならば、環境温度、または高温で実施できる。概して、乾燥温度をポロクサマーの融点以下で保持する。湿潤生成物を単一ロットで、またはサブロットとして少量ずつ乾燥できる。ステップ１６０〜１７０で示すように、例えば、サブロッ
トで、真空下、環境温度にて生成物の乾燥を開始できる。乾燥を次いで過程が進行するにつれてさらに高い温度およびさらに低い圧力で続けることができる。例えばサブロットで収集する場合、過程１００のステップ１７５で示すように、湿潤生成物の残りの部分を同様の方法で処理することができる。まとめた様々なサブロットなどの結果として得られる生成物を、ステップ１８０で示すように好適な容器中で混合し、および結果として得られる生成物を特性化、保存、輸送、または配合することができる。
【０２１１】
有利には、本明細書中で開示する方法は二酸化炭素を効率的にリサイクルする。特に、抽出物相を温度および圧力の変化に供することによって、超臨界二酸化炭素または高圧二酸化炭素を回収できる。ある実施形態では、本明細書中で採用する方法は、８０％超、９０％超、または９５％超のリサイクル効率を有する。
【０２１２】
そのような方法のいずれにおいても、本明細書中で提供する方法は、ｄ）複数の分離容器を含むシステムに抽出物相を通過させること、ｇ）不純物（例えば低分子量不純物）を単離すること、ｈ）精製された物質またはラフィネートを処理すること、およびｉ）圧縮された二酸化炭素を再使用のために回収することをさらに含み得る。
【０２１３】
本明細書中で提供する方法のいずれにおいても、様々なパラメータを、方法および結果として得られる生成物の評価において査定することができる。例えば、メタノール濃度、勾配プロフィール、温度、および圧力などのパラメータを処理最適化のために査定できる。真空レベル、混合用式、時間、および温度などの湿潤ラフィネートを乾燥するための過程および好適な条件も査定できる。
【０２１４】
ｄ．例示的方法
本明細書中で提供する上記方法の結果、特定の精製されたポロクサマー製剤、特にＰ１８８製剤を得る。特に、本明細書中で提供する方法は、式：
ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ’−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＨ、
７６８０〜９５１０Ｄａ、例えば概して８４００〜８８００Ｄａ、例えば（約）８４００Ｄａのコポリマーの平均または中間分子量を有し、および４０００Ｄａ未満の分子量を有する複数の低分子量物質を含み、複数の低分子量物質が組成物の総重量の４％超を構成する、本明細書中で記載するＰ１８８コポリマーを精製するために使用できる。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、約５％未満の低分子量成分、例えば約４％未満、約３％未満、約２％未満または約１％未満の低分子量成分を有する精製ポロクサマーを生成する。典型的には、低分子量成分には、グリコールおよび揮発性物質分解不純物、例えば、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、アセトン、メタノール、およびペルオキシドなどが含まれる。ある例では、本明細書中の過程は、低分子量成分を実質的に含まないポロクサマー、すなわち５％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満の前記成分を産生する。方法はさらに、精製されたポロクサマーを対象に投与する場合、ポロクサマー分布における主ピークの半減期の５．０倍を上回る、例えば概して４．０倍以下、３．０倍以下、２．０倍以下、もしくは１．５倍以下の、血液または血漿中の長い半減期を有する物質であるかまたはそのような物質を生じさせるポロクサマー中の成分がないように、長期循環物質を実質的に含まないポロクサマーを産生することもできる。これらの精製産物を製造するそのような方法の例は後述する。
【０２１６】
ｉ．低分子量（ＬＭＷ）成分の除去
図２は、本明細書中の方法のある実施形態が、ポロクサマー中の低分子量（ＬＭＷ）物質を除去するために有用な過程１００’を提供することを示す。抽出システムを、ステップ１１０’で示すように第１アルカノール（例えば、メタノール）をフィード混合タンク
中に注入する前に、ステップ１０５’で示すように加圧する。システムを、二酸化炭素（過程で使用）の臨界温度、すなわち約３１℃より高い温度である、抽出過程に好適な温度まで加熱する。典型的には、温度は４０℃以下である。温度を過程全体にわたって一定に保つ。
【０２１７】
第１アルカノール（例えば、メタノール）を使用して、過程１００’中のステップ１１５’にしたがってポロクサマー溶液を形成する。この過程において、Ｐ１８８ポロクサマーをアルカノール（例えば、メタノール）とともに供給タンク中に分注し、その結果、アルカノール（例えば、メタノール）中に溶解したＰ１８８ポロクサマー溶液を得る。方法で使用するためのポロクサマーの量は、本明細書中で前述の量などのいかなる量でもあり得る。ポロクサマー／アルカノール混合物を形成した後、混合物の全部または一部をステップ１２０’で示すように抽出器中にポンプで供給する。場合によっては、アルカノールと混合する前にポロクサマーを固体として抽出器中に導入することによって、ポロクサマー溶液を抽出容器中で形成することができる。
【０２１８】
過程１００’のステップ１２５’で示すように、抽出器を次いで加圧し、抽出溶媒を抽出器中に導入する。抽出溶媒は、典型的には二酸化炭素を含み、抽出を、上述のように３１℃の臨界温度を上回る温度で、高圧下、すなわち７４ｂａｒの臨界圧を超えて実施する。例えば、例示的方法で、抽出容器を約３１０±１５ｂａｒまで加圧し、および二酸化炭素を２０ｋｇ／ｈ〜５０ｋｇ／ｈ、例えば概して約またはおよそ２４ｋｇ／ｈ（すなわち、３９０ｇ／ｍｉｎ）である流速で提供する。
【０２１９】
抽出を次いで、二酸化炭素の共溶媒改質因子として作用する第２アルカノールの存在下で実施する。抽出溶媒中の第２アルカノールの濃度が抽出方法の時間とともに増加するように、メタノールなどの第２アルカノールを勾配段階方式で添加する。例えば、ステップ１３０’〜１４０’で示すように、抽出溶媒の組成を変えることができる。例えば、ステップ１３０’で示すように、ポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の抽出過程はまず、超臨界液体（例えば、二酸化炭素）を有する抽出溶媒中、約５重量％〜７重量％（ｗ／ｗ）、例えば約６．６％のアルカノール（例えば、メタノール）を使用する。所定の期間の後、抽出溶媒のアルカノール（例えば、メタノール）含有量を約１〜３％、例えば１％（例えば、７．６％まで）上昇させる。アルカノール（例えば、メタノール）含有量を再度その後、最終期間中に約１〜３％、例えば１％（例えば、８．６％まで）上昇させる。抽出方法の総時間は１５時間〜２５時間であり得る。各勾配を全時間の一部で実施する。
【０２２０】
商業的に実行可能であり、かつ効果的な精製過程については、メタノール濃度を連続して増加させることが望ましく、ＬＭＷ成分のほとんどが選択的に除去されるようにプロフィールを好適に改質する。残留ＬＭＷ成分を続いて高メタノール濃度で短時間に除去することができる。したがって、約５％〜１０％（例えば、６．６％）のメタノール濃度を１２時間使用し、さらに高いメタノール濃度を１０時間使用し、最終的にはさらに高いメタノール濃度を４時間使用する段階式のメタノール濃度プロフィールによって、全収率を有意に低下させることなく、および高分子量成分を濃縮することなく、精製産物を高収率で製造する。
【０２２１】
ポロクサマー物質が充分に純粋である場合、生成物を過程１００’で示すようなさらなる処理のために準備する。ステップ１４５’で示すように、生成物を抽出容器から排出させることができ、および適切な受器中に集めることができる。ステップ１５０’で示すように、湿潤生成物を純度、化学安定性、または他の特性に関して試験するためにサンプリングできる。本明細書中で記載するように、残留溶媒を真空下で除去することによって生成物を乾燥できる。例示的方法では、ステップ１６０’〜１７０’で示すように、乾燥をサブロットで真空下、環境温度にて開始することができ、および過程が進行するにつれ、
乾燥をさらに高い温度、さらに低い圧力で続けることができる。過程１００’のステップ１７５’で示すように、残りのサブロットを同様に処理できる。ステップ１８０’で示すように、サブロットを好適な容器中にまとめ、混合することができ、結果として得られる生成物を特性化、保存、輸送、または処方できる。
【０２２２】
ｉｉ．長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマーの調製
次に図３を見ると、本明細書中の方法のある実施形態は、本明細書中で記載するような血漿または血液中の長期循環物質をもたらす成分を含まないポロクサマーを生成するために有用な過程１００”を提供する。ステップ１０５”で示すように、ポロクサマーおよび第１アルカノール（例えば、メタノール）を抽出容器中に分注し、およびポロクサマー溶液を形成する。この過程では、アルカノール（例えば、メタノール）を含む抽出容器中にＰ１８８ポロクサマーを分注すると、Ｐ１８８ポロクサマーをアルカノール（例えば、メタノール）中に溶解させた溶液が得られる。方法で使用するためのポロクサマーの量は、本明細書中で記載するような任意の量であり得る。場合によっては、ポロクサマー溶液は別の容器中で形成することができ、およびポロクサマー溶液を抽出容器に移すことができる。
【０２２３】
ステップ１１０”で示すように、第１アルカノール（例えば、メタノール）およびポロクサマーを分注した後、抽出システムを加圧する。ステップ１１５”で示すように、システムを、抽出過程に好適な温度まで加熱し、この温度は（過程で使用する）二酸化炭素の臨界温度、すなわち約３１℃よりも高い温度である。典型的には、温度は４０℃以下である。温度を概して過程全体にわたって一定に保つ。加圧二酸化炭素下、例えば約４９ｂａｒ、４０℃以下または約４０℃の温度にて所定の期間、概して数時間未満でポロクサマー溶液が形成する。
【０２２４】
過程１００’”のステップ１２０”で示すように、抽出器を次いで加圧し、および抽出溶媒を抽出器中に導入する。抽出溶媒は、典型的には二酸化炭素および第２アルカノールを含み、および上述のように３１℃の臨界温度より高い温度で、高圧下、すなわち７４ｂａｒの臨界圧より高い圧力下で、抽出を実施する。例えば、例示的方法では、抽出容器を約２４７±１５ｂａｒまで加圧し、および二酸化炭素を、５０ｋｇ／ｈ〜１００ｋｇ／ｈ（両端を含む）、例えば概して約またはおよそ１００ｋｇ／ｈの流速で提供する。
【０２２５】
抽出を、二酸化炭素の共溶媒改質因子として作用する第２アルカノールの存在下で実施する。ステップ１２５”〜１３５”で示すように、抽出溶媒中の第２アルカノールの濃度が抽出方法の時間とともに増加するように、メタノールなどの第２アルカノールを勾配段階方式で添加する。例えば、抽出溶媒の組成をステップ１２５”〜１３５”で示すように変えることができる。例えば、ステップ１２５”で示すように、ポロクサマー（例えば、Ｐ１８８）の抽出過程は、まず、超臨界液体（例えば、二酸化炭素）を含む抽出溶媒中、約７重量％〜８重量％（ｗ／ｗ）、例えば、約７．４％のアルカノール（例えば、メタノール）を使用する。所定の期間の後、抽出溶媒のアルカノール（例えば、メタノール）含有量を約１〜３％、例えば２％（例えば、９．１％まで）上昇させる。アルカノール（例えば、メタノール）含有量を再度続いて最終期間で約１〜３％、例えば２％（例えば、１０．７％まで）上昇させる。抽出方法の総時間は１５時間〜２５時間（両端を含む）であり得る。各勾配を全時間の一部で実施する。
【０２２６】
投与した場合に長期循環形態であるかまたは長期循環形態を生じさせる成分を含むとするＬＭＷ成分以外の成分を除去する抽出過程について、収率の損失を最小限に抑えつつ、これらの成分の純度および除去を最大にする過程があることが望ましい。他の方法よりも高濃度のアルカノール（例えばメタノール）から出発して、概して７％〜８重量％から出発して、アルカノール（例えば、メタノール）濃度を連続して増加させることで、収率の
減少を最小限に抑えつつ、これらの成分および低分子量成分を選択的に除去するようにプロフィールを好適に改質することが判明した。例えば、そのような例示的方法は、５５％を上回る収率、概して６０％または６５％を上回る収率をもたらすことができる。残存する低分子量成分を続いて高いメタノール濃度で短時間に除去できる。したがって、約７〜８％（例えば、７．４％）のメタノール濃度を約３時間使用し、さらに高いメタノール濃度（例えば、９．１％）を約４時間使用し、および最終的に、さらに高いメタノール濃度（例えば、１０．７％）を約８時間使用する段階式メタノール濃度プロフィールによって、全収率を著しく低下させることなく精製産物を高収率で得る。
【０２２７】
ポロクサマー物質が充分に純粋である場合、生成物を過程１００”で示すようにさらなる処理のために準備する。ステップ１４０”で示すように、生成物を抽出容器から排出させることができ、および適切な受器に集めることができる。生成物をステップ１４５”で示すようなガス飽和溶液からの微粒子形成（particles from gas saturated solutions）（ＰＧＳＳ）技術により減圧下で沈殿させることができる。本明細書中で記載するように真空下で残留溶媒を除去することによって生成物を乾燥できる。ステップ１５０”〜１６５”で示すような例示的方法では、乾燥を４０℃以下の高温で開始することができる。乾燥生成物をステップ１６０”で示すように集めることができる。結果として得られる生成物をステップ１６５”で示すように特性化、保存、輸送、または処方することができる。
【０２２８】
Ｄ．医薬組成物および処方
本明細書中で記載する方法および／または当業者に公知の方法によって調製されるいかなるものも含む、本明細書中で記載するポロクサマーを含む組成物を提供する。ＬＣＭＦポロクサマーを含む組成物を提供する。ポロクサマーの濃度は、治療を行うために充分な時間、目標血漿濃度を達成するようなものである。特定の時間および濃度は、目標血漿濃度、投与様式、投与期間、およびレジメンに左右される。当業者はそのような組成物を調製できる。記載されているように、ポロクサマーを単独または他の薬剤、例えば利尿薬と組み合わせて投与できる。組成物は同時処方または投与することができる。例示的組成物およびそれらの使用をセクションＦで記載する。
【０２２９】
１．処方
ＬＣＭＦ  Ｐ１８８をはじめとするＰ１８８などのポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーを含む医薬組成物は、選択された量のポロクサマーを１以上の生理学的に許容される担体または賦形剤と混合することによって任意の通常の方法で処方することができる。担体または賦形剤の選択は当該技術範囲内であり、多くのパラメータに左右される可能性がある。これらには、例えば、投与様式（すなわち、全身性、経口、鼻、肺、局所（local、topical）、または任意の他の様式）および治療する症状、副作用、障害、または疾患が含まれる。
【０２３０】
ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の濃度を全身性、局所（topical）または局所（local）投与のために好適な医薬担体またはビヒクルと混合する。特に、本明細書中の方法について、ポロクサマーを連続注入または一連のボーラス注入法によるなどで、ＩＶ投与する。
【０２３１】
コポリマーの投与に好適な医薬担体およびビヒクルには、特定の投与様式に好適であることが当業者に知られている任意の担体が含まれる。医薬組成物は、投与直前に滅菌水などで復元する凍結乾燥粉末として提供できる。
【０２３２】
組成物は、投与前に希釈するように、または直接投与のために調製できる。概して、本明細書中の方法について、組成物を、連続注入または一連のボーラス注入法のいずれかでＩＶによって投与する。目標循環濃度は少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌであり、１５ｍｇ／
ｍｌもの高濃度でも投与できるが、概して１．５ｍｇ／ｍＬまたは２ｍｇ／ｍｌ以下である。このレベルを、治療を行うために十分な時間、典型的には少なくとも１２時間から１〜３日または４日維持して、血液濃縮、脱水および／または利尿の望ましくない効果および合併症を軽減または除去、あるいはそのような効果／合併症が発生する危険性を防止する。
【０２３３】
ポロクサマーを微粉化形態もしくは他の好適な形態で懸濁させることができ、または誘導体化してさらに溶解性の高い活性生成物を製造できる。結果として得られる混合物の形態は、意図する投与様式および特定のポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の選択された担体またはビヒクル中の溶解性をはじめとする多くの因子に左右される。結果として得られる混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョンおよび他のそのような混合物であり、および非水性もしくは水性混合物、クリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、フォーム、エアゾル、洗浄液（irrigation）、スプレー、坐剤、包帯、または全身性、局所（topical）もしくは局所（local）投与に好適な任意の他の処方として処方できる。本明細書中の目的のために、組成物は、典型的にはＩＶ投与用水溶液、懸濁液、またはエマルジョンである。
【０２３４】
概して、薬剤的に許容される組成物は、規制当局からの認可を考慮して調製するか、または動物およびヒトでの使用のために一般的に認められた薬局方基準にしたがって調製する。例えば、本明細書中で提供する方法はヒトおよび動物用途の両方に応用される。
【０２３５】
医薬組成物は、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルなどの担体を含み得、これとともにイソ型（アイソフォーム）を投与する。そのような医薬担体は、無菌液体、例えば水ならびに石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、およびゴマ油をはじめとする油であり得る。水および生理食塩水溶液は、医薬組成物を静脈内投与する場合の典型的な担体である。生理食塩水溶液ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液は、液体担体として、特に注射液のためにも使用できる。組織標的化リポソームをはじめとするリポソーム懸濁液はさらに、薬剤的に許容される担体として好適であり得る。これらは、当業者に公知の方法にしたがって調製できる。例えば、リポソーム処方は、米国特許第４，５２２，８１１号で記載するようにして調製できる。リポソーム送達はさらに、コラーゲンゲルおよびフィブロネクチンで修飾したリポソームなどの医薬マトリックスを含む徐放性処方も含み得る（例えば、Weiner et al. (1985) J. Pharm. Sci. 74(9):922-925を参照）。
【０２３６】
組成物は、ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８とともに：希釈剤、例えばラクトース、スクロース、リン酸二カルシウム、およびカルボキシメチルセルロース；潤滑剤、例えばステアリン酸塩、例えばステアリン酸カルシウム、およびタルク；ならびにバインダー、例えばデンプン、天然ゴム、例えばアカシアゴムゼラチン、グルコース、糖蜜、ポリビニルピロリドン、セルロースおよびその誘導体、ポビドン、クロスポビドン、および当業者に公知の他のそのようなバインダーを含み得る。好適な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、およびエタノールが挙げられる。組成物は、所望により、少量の湿潤もしくは乳化剤、および／またはｐＨ緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、トリエタノールアミンオレエート、および他のそのような薬剤も含み得る。本明細書中の目的のために、これらの組成物は、ＩＶ投与用溶液、懸濁液、エマルジョンの形態をとり得る。組成物は、坐剤として、伝統的なバインダーおよび担体、例えばトリグリセリドと処方できる。好適な医薬担体の例は、“Remington’s Pharmaceutical Sciences,” E. W. Martin (ed
.), Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition (1995)で記載されている。そのような組成物は、治療上有効な量のＰ１８８を、ＬＣＭＦ形態をはじめとする本明細書中で記載する形態で、対象または患者に対して適切な投与のための形態を提供するような好適な量の担体とともに含む。
【０２３７】
本明細書中で提供する組成物は、送達を促進する１以上のアジュバント、例えば限定されるものではないが、不活性担体またはコロイド状分散系をさらに含み得る。そのような不活性担体の代表的かつ非限定的な例は、水、イソプロピルアルコール、気体状フルオロカーボン、エチルアルコール、ポリビニルピロリドン、プロピレングリコール、ゲル産生物質、ステアリルアルコール、ステアリン酸、鯨蝋、ソルビタンモノオレエート、およびメチルセルロース、ならびにそれらの２以上の好適な組み合わせである。
【０２３８】
処方は、投与様式に適合するように選択する。例えば、ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８を含む組成物は、注入（例えば、ボーラス注入法または連続注入）による非経口投与用に処方できる。注入可能な組成物は、油性もしくは水性ビヒクル中懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとり得る。無菌注射用製剤はさらに、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射液または懸濁液、例えば、クエン酸塩緩衝食塩水などの生理食塩水中溶液としてであり得る。無菌固定油を溶媒または懸濁媒として採用できる。この目的のために、限定されるものではないが、合成モノグリセリドまたはジグリセリド、脂肪酸（オレイン酸を含む）、ゴマ油、ココナッツ油、ピーナッツ油、綿実油、および他の油のような天然に存在する植物油、またはエチルオレエートのような合成脂肪質ビヒクルをはじめとする任意の無味無臭の固定油を採用できる。緩衝液、防腐剤、抗酸化剤、および好適な成分を必要に応じて組み入れることができるか、または処方を構成することができる。
【０２３９】
非経口投与に適した処方としては、処方を意図する投与経路に適合性にする抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および溶質を含み得る水性および非水性無菌注射液が挙げられる。処方を、例えば、活性成分、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのＰ１８８を１つもしくは複数の医薬担体または１つもしくは複数の賦形剤と結合させることを含む通常の製剤技術によって単位投与形態または複数回投与形態で調製できる。処方を単位投与または複数回投与容器、例えば、密封アンプルおよびバイアル、予備充填シリンジまたは他の送達装置中で提供でき、および水溶液で、あるいは無菌液体担体、例えば、注射用の水もしくは生理食塩水を使用直前に添加するだけでよい、乾燥またはフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵できる。
【０２４０】
ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８は、組成物中の単独の医薬活性成分として処方できるか、または他の活性成分と組み合わせることができる。ＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのＰ１８８を薬剤的に許容される担体中に、治療する対象に対する望ましくない副作用がなく、治療上有用な効果を及ぼすために充分な量で含める。治療上効果的な濃度は、本明細書中で提供するアッセイなどの、公知インビトロおよびインビボシステムで化合物を試験することによって経験的に決定できる。
【０２４１】
２．投与量
本明細書中で提供するＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのＰ１８８を含む医薬組成物は、単回服用量（直接）投与、複数服用量投与のために、または希釈もしくは他の改質のために、処方できる。典型的には、本明細書中で提供するＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのポロクサマーＰ１８８を含む組成物は、投与後の所望の時点で対象の循環においてポロクサマー、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の目標循環濃度を達成するように処方する。本明細書中の使用および方法のこの目標は、少なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌ、典型的には、０．５〜１．５ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上、例えば１０または１５ｍｇ／ｍｌまでである。そのような濃度に
ついて望ましい時間は数時間であり、１２時間から最高数日、１，２、３または４日を含む。タイミングおよび特定の濃度は、対象、治療する状態、基礎症状および他のそのようなパラメータに左右される。
【０２４２】
当業者は本明細書中の方法にしたがった投与のために組成物を処方できる。例えば、組成物を処方するために、化合物または混合物の重量分率を、選択されたビヒクル中に、利尿に関連する副作用が改善されるような効果的な濃度で溶解、懸濁、分散、または他の方法で混合する。目標濃度を達成するために投与するポロクサマーの正確な量または用量は、当業者が容易に決定でき、および投与経路、ならびに治療する副作用の重篤度、対象の体重および全身状態、ならびに対象などの他の検討項目に左右される。生理学的変数（限定されるものではないが、腎臓および肝臓機能、年齢、ならびに体重およびまたは体表面積を含む）のために調節する日常的な手順を使用して、適切な投薬レジメンを決定できる。治療薬の局所投与は、全身性投与用式よりも少ない投与量しか必要としないが、治療薬の局所投与濃度は場合によって、局所投与後に、全身性投与で安全に達成できるよりも高い可能性がある。
【０２４３】
必要ならば、特定の投与量および期間および治療プロトコルは、経験的に決定または推定できる。例えば、本明細書中で提供するポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の例示的用量を、必要ならば、特定の対象および状態に適切な投与量を決定するための出発点として使用できる。治療期間および注入の間隔は、副作用または状態の重篤度および治療に対する対象の反応で変化し、それに応じて調節できる。ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の活性レベルおよび半減期などの因子を、投与量を決定する場合に考慮できる。特定の投与量およびレジメンは当業者が経験的に決定できる。
【０２４４】
特に、ポロクサマーは、直接投与については、約１０．０ｍｇ／ｍＬ〜約３００．０ｍｇ／ｍＬまたは１０．０〜２００．０ｍｇ／ｍｌ、例えば（少なくとも）１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０、１００．０、１０５．０、１１０．０、１１５．０、１２０．０、１２５．０、１３０．０、１３５．０、１４０．０、１４５．０、１５０．０、１５５．０、１６０．０、１６５．０、１７０．０、１７５．０、１８０．０、１８５．０、１９０．０、１９５．０または２００．０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で処方できる。典型的には、濃度は２２．５％以下、すなわち２２５ｍｇ／ｍＬである。投与するために選択される量は、特定の目標血漿濃度および期間について期間について決定できる。
【０２４５】
例えば、別々に、または本明細書中で記載する医薬組成物の成分として投与する場合、ポロクサマーを約０．５％〜２０％の濃度で投与するが、さらに薄い濃度またはさらに高濃度を使用できる。例えば、ポロクサマーは、約０．５％〜約２０重量％／体積、例えば０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、１０．０％、１０．５％、１１％、１１．５％、１２％、１２．５％、１３％、１３．５％、１４％、１４．５％、１５％、１５．５％、１６％、１６．５％、１７％、１７．５％、１８％、１８．５％、１９％、１９．５％または２０重量％／体積の量で投与できる。他の実施形態では、ポロクサマーを約０．５％〜約１０重量％／体積、例えば０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０．０重量％／体積の量で投与する。さらに別の実施形態では、ポロクサマーを約５％〜約１５重量％／体積、例えば５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、１０．０％、１０．５％、１１％、１１．５％、１２％、１２．５％、１
３％、１３．５％、１４％、１４．５％、または１５重量％／体積の量で投与する。例えば、濃度は１０％〜２２．５％、例えば１０％〜２０％または１５％〜２０％である。
【０２４６】
典型的には、ポロクサマーを、ポロクサマーを対象に投与した結果、有効量のＬＣＭＦ
Ｐ１８８などのＰ１８８などのポロクサマーが対象の循環中で得られるように処方する。有効量のＰ１８８、またはＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのポロクサマーを単独で、または他の薬剤、例えば、利尿薬と組み合わせて投与できる。有効量は、ポロクサマーを１回または複数回、例えば２回、３回、４回、５回、またはそれ以上、様々な投与経路によって投与した結果であり得る。例えば、ポロクサマー、例えばＰ１８８またはＬＣＭＦ  Ｐ１８８は、ポロクサマーを対象に投与すると、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約４．０ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポロクサマー濃度が得られるように処方する。対象の循環におけるポロクサマー濃度は、１つの時点を表すものであり得るか、またはある期間、例えば、最大約７２時間、例えば少なくとも約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、１０時間、１５時間、２０時間、３０時間、４０時間、５０時間、６０時間、７０時間、またはそれ以上の期間、維持される平均定常状態濃度を表すものであり得る。いくつかの例では、循環中のポロクサマーの目標濃度は概して約４時間〜約７２時間、またはそれ以上維持される。
【０２４７】
いくつかの例では、ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８を、１回量のポロクサマーを対象に投与すると、対象の循環において有効量のポロクサマーが得られるように処方する。例えば、１回量のポロクサマーを投与すると、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１５．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約４．０ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポロクサマー濃度が得られる。例えば、対象の循環におけるポロクサマー濃度は、約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．５、３．０、３．５または４．０ｍｇ／ｍＬである。１例では、１回量のポロクサマー、例えばＰ１８８、またはＬＣＭＦ  Ｐ１８８を投与すると、約０．５ｍｇ／ｍＬ対象の循環におけるポロクサマー濃度が得られる。
【０２４８】
他の例では、ポロクサマーの対象に対する反復投与、例えば、２回、３回、または複数回投与すると、対象の循環において有効量のポロクサマーが得られるようにポロクサマーを処方する。例えば、反復治療は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１５．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０．０ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約４．０ｍｇ／ｍＬの患者の循環におけるポロクサマーの濃度をもたらすために充分である。例えば、対象の循環におけるＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのポロクサマーの濃度は、約０．２ｍｇ／ｍＬ〜約４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．５、３．０、３．５または４．０ｍｇ／ｍＬである。１例では、ポロクサマー、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の反復投与の結果、約０．５ｍｇ／ｍＬの対象の循環中のポロクサマーの濃度が得られる。
【０２４９】
１例では、ポロクサマーは、希釈の有無を問わず投与を意図した無菌非発熱性溶液として処方できる。最終投与形態を１００ｍＬのバイアル中で調製することができ、この場合、１００ｍＬは、１５ｇの精製ポロクサマー１８８（１５０ｍｇ／ｍＬ）またはＬＣＭＦ
Ｐ１８８などのＰ１８８、３０８ｍｇの塩化ナトリウムＵＳＰ、２３８ｍｇのクエン酸ナトリウムＵＳＰ、３６．６ｍｇのクエン酸ＵＳＰおよび注射用水ＵＳＰを１００ｍＬに
するための適量（充分な量）を含む。溶液のｐＨは約６．０であり、約３１２ｍＯｓｍ／Ｌのオスモル濃度を有する。溶液を対象に投与する前に滅菌する。他の用途にいついては、少なくとも５００ｍＬを１０％〜２０％、例えば（約）１５重量％のポロクサマー製剤／組成物の体積の濃度で調製する。
【０２５０】
本明細書中で提供するこの投与量範囲は、限定を意図せず、個々の対象の要求および応答、特定の対象、ならびに投与のために選択した特定のポロクサマーの特性に基づいて変化する。
【０２５１】
３．投与
本明細書中の方法では、本明細書中で記載する精製ポロクサマー１８８またはＬＣＭＦなどのポロクサマーを、血液濃縮の副作用または合併症を治療するために対象に投与する。これらの副作用は、利尿、および特にセクションＦで記載するような利尿薬誘導性利尿と関連した副作用または結果と関連づけることができる。特に、本明細書中で記載する精製ポロクサマー１８８およびＬＣＭＦなどのポロクサマー１８８は、腎臓に関連する状態、高血圧、肝臓疾患、心臓に関連する疾患、および緑内障などの応対を改善するための、公知利尿薬療法などの利尿薬の投与の結果利尿が起こり、続いて望ましくない副作用または結果を引き起こす方法で使用することが意図される。本明細書中で提供するポロクサマー１８８を使用して、電解質平衡異常、脱水、不整脈、血漿量の変更、血漿タンパク質および／または血球の血液濃縮、および利尿に関連する任意の他の副作用または望ましくない結果などの利尿に関連する状態もしくは副作用を治療するなど、血液濃縮の合併症を治療する。
【０２５２】
セクションＦで本明細書中に記載する精製ポロクサマー１８８およびＬＣＭＦなどのポロクサマー１８８に関して記載するいずれかなど、利尿に関連する副作用および状態の治療は、限定されるものではないが、注入、肺、経口および経皮投与をはじめとする、本明細書中で記載するような好適な処方を使用して任意の好適な投与経路によって実施できる。治療は典型的には静脈内投与によって実施する。
【０２５３】
活性薬、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのポロクサマー１８８は、望ましくない副作用の非存在下で治療される患者に対して治療上有用な効果を及ぼすために充分な量で含まれる。概して、治療上有効な量のポロクサマーは、対象において約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１５．０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、または１５．０ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポロクサマーの濃度、すなわち目標血漿濃度および本明細書中の他の箇所に記載する濃度で得られる。
【０２５４】
例えば、利尿の副作用などの血液濃縮の合併症の治療のために投与するポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８の量。それらは、例えば、他の原因に起因する急性脱水または血液濃縮を有する対象を治療するために投与できる。そのような治療の必要性は、容易に明らかでない場合は、標準的臨床技術によって決定できる。加えて、必要ならば、インビトロアッセイおよび動物モデルを、最適投与量範囲の特定を助けるために使用できる。経験的に決定できる正確な投与量は、特定の組成、投与経路、治療する副作用の種類および副作用の重篤性に左右される可能性がある。
【０２５５】
本明細書中の他の箇所で記載するように、ポロクサマー１８８を、ＬＭＷ成分を除去する精製によって改質した。これらの成分の除去は、ＬＭＷ汚染物質を含むＰ１８８の製剤
で観察されるクレアチンレベルおよび腎毒性の上昇を防止することが知られている。クレアチンレベルをポロクサマー１８８（Ｐ１８８−Ｐ）の精製形態で治療したヒト患者で評価した臨床研究、例えば、ポロクサマー１８８の低分子量種が欠如したＣ９７−１２４８研究において、研究者らは、Ｐ１８８−Ｐの静脈内投与がプラセボのレベルより高い血清クレアチンの有意な増加を誘発しないことを見出した。高性能液体クロマトグラフィーによる評価に基づく低および高分子量種の喪失は、非精製（Ｐ１８８−ＮＦ）治療に関連する腎臓の危険性を軽減または除去する。したがって、精製ポロクサマー１８８、例えば本明細書中で記載するポロクサマー１８８は、以前に評価した非精製形態で存在する実際的な制限を示さない。本明細書中で記載する精製ポロクサマー１８８またはＬＣＭＦ１８８などのポロクサマーの投薬レジメンを改質して、以前のポロクサマー１８８の臨床使用の制限に対処した。
【０２５６】
いくつかの例では、ポロクサマー１８８での治療方法は、持続的治療効果を達成するために、より長い作用持続期間を必要とする。本明細書中の他の箇所で検討するように、ポロクサマー１８８の半減期は１８時間である。比較的短い半減期にも関わらず、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーの効果は長時間持続し得る。したがって、本明細書中で記載するポロクサマー１８８を使用して、利尿および脱水の副作用をはじめとする血液濃縮の合併症の治療のためのさらに長い持続的療法を送達できる。概して、ポロクサマーをＩＶ投与して、治療を実施するために充分長い間、少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬの目標濃度または他の目標濃度を達成し、維持する。これは、少なくとも１２時間、１日、２日、３日、かつ最高４日を含む。
【０２５７】
必要ならば、特定の投与量および期間ならびに治療プロトコルは、経験的に決定または推定できる。事前にヒト対象に投与し、臨床試験で使用したポロクサマー１８８をはじめとするポロクサマーの投与量は、本明細書中で記載する精製ポロクサマー１８８およびＬＣＭＦ１８８などのポロクサマー１８８の投与量を決定するための指針として使用できる。ポロクサマー１８８の投与量も、必要ならば関連する動物研究から決定または推定できる。ポロクサマー１８８の活性レベルおよび半減期などの因子を、そのような決定で使用できる。特定の投与量およびレジメンは、様々な因子に基づいて経験的に決定できる。そのような因子としては、個体の体重、全般的健康、年齢、採用した特定の化合物の活性、性、食事、投与時間、排出速度、薬物の組み合わせ、副作用の重篤度および経過、ならびに患者の副作用に対する体質および治療する医師の判断が挙げられる。活性成分ポロクサマー１８８を典型的には医薬的に効果的な担体と組み合わせる。担体物質と組み合わせて単一投与形態または複数投与形態を産生することができることができる活性成分の量または複数投与形態は、治療する宿主および特定の投与様式に応じて変わる可能性がある。
【０２５８】
特定の例では、ＬＣＭＦ８８）などのＰ１８８などのポロクサマーを、２５ｍｇ〜６７５ｍｇ／ｋｇ、例えば２５〜５０ｍｇ／ｋｇ；１００〜６７５ｍｇ／ｋｇ、例えば１００〜５００ｍｇ／ｋｇ対象体重、例えば、１００ｍｇ／ｋｇ〜４５０ｍｇ／ｋｇ、１００〜４００ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ〜４５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ〜４５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ〜４５０ｍｇ／ｋｇまたは４５０ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ対象体重、例えば約１００、１２５、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、または６００ｍｇ／ｋｇ対象体重の投与量で対象に投与するために処方する。特定の例では、ポロクサマーを、（約）２５〜４５０ｍｇ／ｋｇ、２５〜５０ｍｇ／ｋｇ、２００〜４５０ｍｇ／ｋｇ、例えば４００ｍｇ／ｋｇ対象体重の投与量で投与するために処方する。投与量は投与経路に左右され、目標は、少なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌ、特に、０．５ｍｇ／ｍＬ
〜１．５ｍｇ／ｍｌの目標濃度を、少なくとも数時間、概して少なくとも１２時間、および７２時間まで、例えば１日、２日、３日または４日間治療を行うことである。
【０２５９】
概して、目標は、できる限り少量の用量を投与することである。典型的には、投与する体積は、対象１ｋｇあたり３．０ｍＬを越えない。例えば、用量を対象に投与する体積は、０．４ｍＬ／ｋｇ〜３．０ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ〜２．５ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ〜２．０ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ〜１．８ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ〜１．４ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ〜１．０ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ〜０．６ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ〜３．０ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ〜２．５ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ〜２．０ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ〜１．８ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ〜１．４ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ〜１．０ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ〜３ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ〜２．５ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ〜２．０ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ〜１．８ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ〜１．４ｍＬ／ｋｇ、１．４ｍＬ／ｋｇ〜３．０ｍＬ／ｋｇ、１．４ｍＬ／ｋｇ〜２．５ｍＬ／ｋｇ、１．４ｍＬ／ｋｇ〜２．０ｍＬ／ｋｇ、１．４ｍＬ／ｋｇ〜１．８ｍＬ／ｋｇ、１．８ｍＬ／ｋｇ〜３．０ｍＬ／ｋｇ、１．８ｍＬ／ｋｇ〜２．５ｍＬ／ｋｇ、１．８ｍＬ／ｋｇ〜２．０ｍＬ／ｋｇ、２．０ｍＬ／ｋｇ〜３．０ｍＬ／ｋｇ、２．０ｍＬ／ｋｇ〜２．５ｍＬ／ｋｇ、または２．５ｍＬ／ｋｇ〜３．０ｍＬ／ｋｇであり得る。例えば、１００ｍｇ／ｍＬで投与される２２．５％（すなわち、２２５ｍｇ／ｍＬ）の濃度の組成物を約０．４ｍｇ／ｍＬの体積で投与して、その用量を達成する。選択される特定の体積は、投与後に対象の循環中でポロクサマーの所望の目標濃度をもたらすものである。ここでも、特定の体積および投与量は、血液濃縮の合併症を治療するために本明細書中で記載する目標循環濃度の関数である。
【０２６０】
本明細書中で提供する方法で使用する処方は、いかなる適切な経路によっても、例えば、経口、鼻、肺、肺内、非経口、静脈内、皮内、皮下、関節内、大槽内、眼内、脳室内、くも膜下腔内、筋肉内、腹腔内、気管内または局所（topically）、ならびにそれらのいずれか２以上の任意の組み合わせによって、液体、半液体または固体形態で投与でき、各投与経路に好適な方法で処方する。本明細書中で記載する反復投与などの複数回投与は、任意の経路または経路の組み合わせにより実施できる。最も好適な投与経路は、治療する副作用および個体の要求に応じて変わる。
【０２６１】
典型的には、投与用量を注入として投与する。概して、注入は静脈内（ＩＶ）注入である。ポロクサマーは、単回連続ＩＶ注入、複数の連続ＩＶ注入、単回ＩＶボーラス投与、または複数のＩＶボーラス投与として投与できる。いくつかの例では、ポロクサマーを他の投与経路、例えば、皮下または腹腔内注射によって投与して、投与後に対象の循環においてポロクサマーの所望の濃度を達成する。
【０２６２】
いくつかの例では、ポロクサマーをＩＶ注入として投与する。適切な投与量を提供するための注入を、対象に対して、１時間〜２４時間、１時間〜１２時間、１時間〜６時間、１時間〜３時間、１時間〜２時間、２時間〜２４時間、２時間〜１２時間、２時間〜６時間、２時間〜３時間、３時間〜２４時間、３時間〜１２時間、３時間〜６時間、６時間〜２４時間、６時間〜１２時間、または１２時間〜２４時間である時間にわたって、例えば概して（最大）約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２０時間、２２時間、またはそれ以上である時間にわたって、提供できる。治療にあたる医師は、対象が耐えることができる注入の適切な時間および速度を決定することができる。
【０２６３】
Ｐ１８８（例えば、ＬＣＭＦ  Ｐ１８８）などのポロクサマーの注入は、少なくとも１週間繰り返さない単回注入として提供できる。例えば、単回服用量は、治療上有効な量のポロクサマー、例えば投与後の所望の時点で対象の循環におけるポロクサマーの目標濃度
を提供するために充分であり得る。本明細書中で提供する実施例では、投与を１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回または４週間ごとに１回繰り返すことができる。例えば、投与を前の投与完了後７日、８日、９日、１０日、１１日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日２６日、２７日、２８日、２９日または３０日以内に繰り返すように、投与を前の投与後１週間から４週間繰り返すことができる。反復投与で投与する用量は、先の用量と同一または異なり得る。例えば、先の用量から増加または減少させることができる。治療する医師は反復投与における投与頻度および投与のレベルまたは量を決定できる。
【０２６４】
投与サイクルの時間の長さは経験的に決定でき、治療する副作用、副作用の重篤度、特定の患者、および治療する医師の技術レベル範囲内の他の検討事項に左右される。ＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのＰ１８８での治療の時間の長さは、１週間、２週間、１ヶ月、数か月、１年、数年またはそれ以上であり得る。例えば、ＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのＰ１８８を、１年またはそれ以上の期間にわたって、１週間に１回以下、例えば７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日以上ごとに投与できる。治療を中断しない状態で副作用が存続する場合、治療をさらなる期間続けることができる。治療過程全体にわたって、副作用および／または治療に関連する毒性もしくは副作用の証拠をモニタリングできる。
【０２６５】
加えて、投与サイクルを調整して、治療への暴露からの休止期間を提供するために治療中断期間を加えることができる。治療の中断の時間の長さは、あらかじめ決められた時間であり得るか、または患者がどのように反応するかに応じて、もしくは観察される副作用に応じて経験的に決定できる。例えば、治療は１週間、２週間、１ヶ月または数か月間中断できる。
【０２６６】
典型的には、治療は、患者が入院した時に開始するが、対象の要求を満たすために入院中のいかなる時点でも開始できる。さらに一般的に、投薬は入院の最初の７２時間に開始する。
【０２６７】
Ｐ１８８、特に本明細書中で提供するＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのポロクサマーの有効量を、単独または疾患もしくは状態を治療するための他の薬剤と組み合わせて送達できる。ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８を採用する治療レジメンと組み合わせて投与するさらなる追加治療を当業者は選択できる。決定は治療する特定の副作用／合併症、特定の対象、対象の年齢、副作用の重篤度および他の因子に左右される。加えて、投与量は種で異なる。
【０２６８】
本明細書中のいくつかの実施形態では、ポロクサマーを、基礎症状の治療のための、利尿薬などの別の活性薬と組み合わせて対象に投与する。ポロクサマーを他の薬剤、例えば利尿薬の投与前、投与と同時、または投与後に対象に投与できる。例えば、ポロクサマー、例えばＰ１８８、例えばＬＣＭＦ  Ｐ１８８を治療上有効な量の利尿薬などの１以上の利尿薬と組み合わせて投与できる。例えば、ＬＣＭＦ  Ｐ１８８などのポロクサマーＰ１８８を利尿薬と組み合わせて投与する方法は、利尿療法の結果、望ましくない副作用などの副作用、例えば血液濃縮および微小血管血液動態の変化が起こる場合である。ポロクサマーを、副作用／合併症を防止するための他の薬剤の前または他の薬剤とともに投与できる。本明細書中で提供する方法で使用するための例示的利尿薬には、当業者に公知のいずれのもの、および上述のものが含まれる。それらの例は、限定されるものではないが、チアジド利尿薬（例えば、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、およびインダパミド）、ループ利尿薬（例えば、フロセミド、ブメタニド、およびトラセミド）、カリウム保持性利尿薬（例えば、スピロノラクトン／エプレレノン、アミロリド、およびトリアムテレン）、炭酸脱水酵素阻害薬（例えば、アセタゾラミド、メタゾラミ
ド、ドルゾラミド、トピラマート、およびエラジタンニン（エラジタンニン（elagitannin）））、浸透圧性利尿薬（例えば、グルコースおよびマンニトール）、およびそれらの組み合わせである。
【０２６９】
Ｅ．治療のために血液濃縮を評価する方法
１．血液濃縮のアッセイ
熟練した医師は血液濃縮を評価することができる。臨床的評価を使用する血液濃縮のためのアッセイには、脈圧および脈容量、皮膚のはり、乾燥粘膜、頭痛、肝腫大、中心静脈圧、起立性低血圧症、掻痒、脾腫、頻脈、渇き、耳鳴り、めまい、および虚弱のアッセイが含まれる。当業者に公知の多くのそのようなアッセイを定量分析（例えば、脈圧および脈容量、静脈圧）に供する。
【０２７０】
血液濃縮を評価するためのアッセイは、ヘマトクリット、赤血球体積分率、赤血球沈降速度を評価するものを含む。例えば、血液検査を使用して、全血液体積中の赤血球レベルを測定することができる。
【０２７１】
別の方法では、血液検査を用いて血漿タンパク質のレベルを測定する。そのアッセイでは、急性期反応タンパク質などの血漿タンパク質、例えばフィブリノゲンのレベルを測定し、および評価して血液濃縮を判定する。フィブリノゲンなどの急性期反応タンパク質のレベルの増加は、血液濃縮を示すものである。
【０２７２】
血液濃縮についての他のアッセイは、血行動態性能、左心室拡張末期容積、左心室収縮末期容積、および駆出率を評価するものを含む。例えば、心エコー検査法を使用して駆出率を測定できる。
【０２７３】
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーが血液濃縮を治療または改善する治療活性を示す能力は、１以上の上記アッセイを使用して評価できる。１例では、精製ポロクサマー１８８を、血液濃縮を有する対象、または適切な動物モデルに投与することができ、血液濃縮に対する効果は、経胸壁心エコー検査を使用して評価することができ、精製ポロクサマー１８８を投与しない対象または動物モデルと比較することができる。
【０２７４】
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８が上述の血液濃縮に関連するいずれか１以上の特性に影響を及ぼす可能性は、上記アッセイのいずれか１つ以上を使用して評価できる。方法を使用して、利尿薬治療によって誘発される利尿をはじめとする利尿を有する任意の対象における血液濃縮を評価することができる。
【０２７５】
２．脱水のアッセイ
熟練した医師は脱水を評価できる。臨床的評価を使用する脱水についてのアッセイは、精神状態、心拍数、呼吸数、血圧、および温度をはじめとするバイタルサイン、渇き、口渇および肥大した舌、虚弱、眩暈、心臓動悸、錯乱、停滞、失神、発汗能、下痢、熱、嘔吐、体重減少、尿産生、および発作についてのアッセイを含む。多くの当業者に公知のそのようなアッセイを定量分析（例えば、心拍数、血圧、尿産生）に供する。
【０２７６】
脱水を評価するためのアッセイは、ヘモグロビンおよび赤血球数を評価するためのものを含む。例えば、血液検査を使用して、全血液体積中の赤血球のレベルを測定できる。他のアッセイには、電解質レベル、例えばナトリウム、カリウムおよび塩化物レベルならびに糖レベルを評価するものが含まれる。脱水を評価するためのアッセイには、血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチンレベルを評価するものが含まれる。例えば、腎臓機能検査を使用してそのようなレベルを評価できる。他のアッセイには、色、透明性、比重および尿中のケトンの存在を評価する検尿アッセイが含まれる。脱水を評価するアッセイは当業
者には公知である。
【０２７７】
脱水の他のアッセイには、血行動態性能、左心室拡張末期容積、左心室収縮末期容積、および駆出率を評価するものが含まれる。例えば、心エコー検査法を使用して駆出率を測定できる。
【０２７８】
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８が脱水を治療または改善するための治療活性を示す可能性は、上記アッセイのいずれか１つ以上を使用して評価できる。１例では、精製ポロクサマー１８８を、脱水を有する対象、または適切な動物モデルに投与することができ、脱水に対する効果を、経胸壁心エコー検査を使用して評価することができ、および精製ポロクサマー１８８を投与していない対象または動物モデルと比較することができる。
【０２７９】
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８が上述の脱水に関連する特性のいずれか１つ以上に影響を及ぼす可能性は、上記アッセイのいずれか１つ以上を使用して評価することができる。方法は、利尿薬治療によって誘発される利尿などの利尿を有する対象をはじめとする任意の対象における脱水を評価することができる。
【０２８０】
Ｆ．利尿の副作用を治療する方法
本明細書中で提供するのは、利尿の副作用を治療または改善するための治療方法および治療的使用である。前述のとおり、利尿はある薬物、例えば利尿薬の投与の結果として起こり得る。利尿薬は、腎臓のネフロンによるナトリウム（Ｎａ＋）および水再吸収を阻害または軽減し、典型的には、過剰の流体の臨床的証拠を有する対象、例えば、腎臓および肝臓に関連する状態、血圧上昇（すなわち、高血圧）、緑内障、眼圧上昇、および心臓に関連する疾患、例えば、うっ血性心不全などの病状に苦しんでいる対象に投与する。有益であるが、利尿は望ましくない副作用または結果ももたらす可能性がある。
【０２８１】
概して、治療前に、利尿に関連する１以上の望ましくない副作用を示す患者を選択する。熟練した医師はそのような望ましくない副作用を診断できる。例えば、電解質平衡異常、脱水、不整脈、上昇した赤血球沈降速度、血漿量の変更、血漿タンパク質および／または血球の血液濃縮、微小循環障害、またはそれらの組み合わせを有する対象は、利尿に関連する望ましくない副作用である。
【０２８２】
本明細書中で提供する方法および使用は、限定されるものではないが、電解質平衡異常、脱水、不整脈、血漿量の変更、血漿タンパク質および／または血球の血液濃縮、微小血管血行動態障害、および利尿に関連する任意の他の副作用または望ましくない結果をはじめとする、利尿、例えば利尿薬誘導性利尿に関連する望ましくない副作用を示す対象を治療するためである。特に、本明細書中で提供する方法は、循環、特に微小循環障害の対象など、血液中の血球、特に赤血球、および血漿タンパク質のレベルが増加した対象の治療で使用できる。本明細書中で提供する方法は、赤血球沈降速度が上昇している対象の治療で使用できる。
【０２８３】
利尿は典型的には利尿薬治療に起因するが、任意の他の状態または状況に由来する利尿は、本明細書中で提供する方法での使用のために想定される。本明細書中で提供する方法および使用では、ポロクサマー１８８、例えば精製ポロクサマー１８８を使用して、１以上血漿タンパク質、赤血球、またはそれらの組み合わせの血液濃縮の治療、循環、特に微小循環障害の改善、脱水の治療、およびそれらの任意の組み合わせができる。したがって、本明細書中で提供する方法では、ポロクサマー１８８、例えば精製ポロクサマー１８８を使用して、利尿薬誘導性利尿をはじめとする利尿に関連する望ましくない副作用および結果を治療する。
【０２８４】
特に、方法は、投与の結果、（約）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜（約）１５ｍｇ／ｍｌ、例えば、（約）０．２ｍｇ／ｍＬ〜（約）４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば（約）０．５ｍｇ／ｍＬの対象の循環におけるポロクサマーの濃度が得られるに充分であるような、ポロクサマーの投与を含む。例えば、対象の循環におけるポロクサマーの濃度は、１つの時点の代表的なものでありえるか、または一定期間、例えば、投与後最高７２時間またはそれ以上まで持続する平均定常状態濃度の代表的なものであり得る。
【０２８５】
本明細書中で提供する方法のいくつかにおいて、ポロクサマーの投与を、利尿療法または他の療法と組み合わせる。特に、方法は、治療上有効な量のポロクサマー１８８などのポロクサマー（Ｐ１８８）、例えば、本明細書中で記載する任意のＰ１８８、ならびに治療上有効な量の利尿薬、例えば、チアジド利尿薬、ループ利尿薬、カリウム保持性利尿薬、炭酸脱水酵素阻害薬、浸透圧性利尿薬、およびそれらの組み合わせの投与を含む。方法は、投与が、（約）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜（約）１５ｍｇ／ｍｌ、例えば、（約）０．２ｍｇ／ｍＬ〜（約）４．０ｍｇ／ｍｌ、例えば（約）０．５ｍｇ／ｍＬの、対象の循環におけるポロクサマーの濃度をもたらすために充分であるような、ポロクサマー、例えばＰ１８８の投与を含む。
【０２８６】
例えば、５０ｍｇ／ｋｇ／ｈｒのＩＶ注入を投与することによって、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度を維持できる。１００ｍｇ／ｋｇ／ｈｒを投与することによって、１．０ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を維持できる。他の投与量は容易に推定できる。概して、注入は必要に応じて１２〜４８時間継続できる。別法として、反復ボーラス投与を採用できる。例えば、ＩＶボーラスとして５０ｍｇ／ｋｇを６時間ごとに１〜３日間投与できるか、または１００ｍｇ／ｋｇを６時間ごとに１〜３日間で、所望の範囲の中間の濃度が得られる。具体的な投与量およびレジメンは容易に決定できる。治療は、本明細書中に記載するものをはじめとする、当業者に公知の任意の方法によってモニタリングできる。例えば、陽性治療応答は、ＳｔＯ２における改善をしめすか（正常またはベースライン範囲を達成するかもしくは正常またはベースライン範囲に向かう）またはＲＢＣ沈降速度を正常化することを含み得る。治療は、パラメータが正常レベルもしくは範囲に近づくか、または正常レベルもしくは範囲になるまで続けることができる。
【０２８７】
１．治療できる例示的副作用および合併症
ａ．血液濃縮
本明細書中で提供するのは、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーを対象に投与することによる利尿に起因するものなどの血液濃縮を軽減、縮小、改善または治療する方法である。血液濃縮は、血液中の細胞要素、特に赤血球（erythrocytes）（すなわち、赤血球（red blood cells））および血漿タンパク質、例えば陽性急性期反応タンパク質の濃度の相対的な増加である。概して、血液濃縮は血漿の喪失に起因する。例えば、利尿薬を対象に投与することで、尿生成の増加（すなわち、利尿）および急速な水分喪失に至る可能性があり、かくして赤血球および血漿タンパク質の濃度の増加に至り、血液濃縮が起こる。特に、本明細書中で提供するのは、血液濃縮を治療、改善または軽減するために、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を使用する方法である。血液濃縮の対象または患者に精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を投与できる。
【０２８８】
本明細書中で提供する方法および使用は、血液濃縮に関連する１つまたは複数の症状を典型的に示す対象を治療するためである。特に、本明細書中の方法を使用して、血漿タンパク質、例えば限定されるものではないが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、血清アミロイドＰ、血清アミロイドＡ、補体因子、フィブリノゲン、プロトロンビン、抗血友病因子（ＡＨＦ）、フォンウィルブランド因子、マンナン結合レクチン、プラスミノーゲン、アルファ２−マクログロブリン、フェリチン、ヘプシジン、セルロプラスミン、ハプトグロ
ビン、アルファ−ｌ−酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、アルファ１−抗トリプシン、アルファ１−抗キモトリプシン、およびプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤Ｉをはじめとする陽性急性期反応タンパク質、ならびに／または血球、例えば、赤血球の血液濃縮を有する患者を治療することができる。概して、治療前に、血液濃縮に関連する１以上の徴候または症状を示す患者を選択する。熟練した医師は血液濃縮を診断できる。血漿タンパク質および赤血球の血液濃縮をはじめとする血液濃縮を有する対象は、概して、１以上の急性期反応タンパク質、例えばフィブリノゲン、もしくは血球、例えば赤血球（すなわち、赤血球）、またはそれらの任意の組み合わせのレベルの上昇を示す。例えば、血液濃縮は、ヘマトクリットまたは赤血球沈降速度の上昇として反映される可能性があり、この場合、速度は血液中の沈降促進因子、例えばフィブリノゲンの存在の間接測定として使用できる。本明細書中で提供する方法において精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８での治療のための血液濃縮を有する対象の選択は、臨床症状、ヘマトクリット測定値、または例えば血液中の急性期反応タンパク質のレベルに基づく可能性がある。
【０２８９】
特に、本明細書中で提供するのは、利尿により誘発される血液濃縮を治療、改善または軽減するために、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を使用する方法である。血液濃縮を有する対象または患者に精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を投与できる。
【０２９０】
ｂ．脱水
本明細書中で提供するのは、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を対象に投与することによって脱水を軽減、縮小、改善または治療する方法である。脱水は、代謝過程の途絶と相まった身体水分の過度の損失である。脱水とは、液量が減少したいかなる状態も指す可能性がある。最も一般的には、脱水とは、水分損失と付随した過度の塩分濃度がある高ナトリウム血症を指すが、血液体積、特に血漿が失われる血液量減少も指す可能性がある。いくつかの例では、脱水は利尿、例えば利尿薬誘導性利尿に起因する。例えば、利尿薬を対象に投与して、腎臓により多くのナトリウムを尿中に排出させ、これはその後、尿産生の増加（すなわち、利尿）および急速な水分損失に至り、かくして脱水に至る。特に、本明細書中で提供するのは、脱水を治療、改善、または軽減するための、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を使用する方法である。脱水を有する対象または患者に精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を投与できる。
【０２９１】
本明細書中で提供する方法および使用は、典型的には脱水に関連する１つまたは複数の症状を示す対象を治療するためである。特に、本明細書中の方法は、利尿療法の結果として起こる脱水の患者を治療するために使用できるが、いかなる他の状態または状況に起因する脱水が本明細書中で提供する方法での使用についても想定される。概して、治療前に、脱水に関連する１以上の徴候または症状を示す患者を選択する。熟練した医師は脱水を選択できる。脱水した対象は、概して、中等度から重度の、限定されるものではないが、激しい口渇、口渇および肥大した舌、虚弱、眩暈、心臓動悸、錯乱、停滞、失神、発汗不能、重篤な下痢、熱、増加または持続する嘔吐、体重減少、尿産生の減少、発作、またはそれらの任意の組み合わせをはじめとする症状を示す。例えば、脱水は中等度から重篤な下痢、例えば少なくとも２日間続く下痢、および熱に反映され得る。本明細書中で提供する方法において精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８での治療のための脱水を有する対象の選択は、精神状態などの臨床症状、心拍数、呼吸数、血圧、および温度をはじめとするバイタルサイン、ヘモグロビンおよび赤血球数を判定するための血液検査、検尿ならびに腎臓機能検査に基づく可能性がある。
【０２９２】
特に、本明細書中で提供するのは、利尿によって誘発される脱水などの脱水を治療、改善、または軽減するための、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を使用する方法である。脱水を有する対象または患者に精製ポロクサマー１８８などのポロクサマ
ー１８８を投与できる。
【０２９３】
２．治療の対象の特定
ａ．血液濃縮を有する対象の特定
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーでの治療のための血液濃縮を有する対象の特定は、脈圧および脈容量の減少、皮膚のはりの喪失、乾燥粘膜、頭痛、肝腫大、低い中心静脈圧、起立性低血圧症、掻痒（特に高温浴後）、脾腫、頻脈、渇き、耳鳴り、めまい、および虚弱などの症状に基づくものであり得る。
【０２９４】
本明細書中で提供する方法における、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー出の治療のための血液濃縮を有する対象の選択は、血液検査によって判定できるヘマトクリット（全血液中の赤血球のパーセンテージ）または赤血球体積分率の増加に基づくものであり得る。そのような技術は当業者には周知である。正常なヘマトクリットレベルは、成人男性については典型的には４０．７％〜５０．３％、成人女性については３６．１％〜４４．３％、新生児については４５％〜６１％、および乳児については３２％〜４２％である。血液濃縮を示すものとしては赤血球（すなわち、赤血球）沈降速度の増加が挙げられ、この場合、速度は血液中の沈降促進因子（沈降促進因子）、例えばフィブリノゲンの存在の間接的尺度として使用できる。
【０２９５】
特定は、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）などの急性期反応タンパク質、血清アミロイドＰ、血清アミロイドＡ、補体因子、フィブリノゲン、プロトロンビン、抗血友病因子（ＡＨＦ）、フォンウィルブランド因子、マンナン結合レクチン、プラスミノーゲン、アルファ２−マクログロブリン、フェリチン、ヘプシジン、セルロプラスミン、ハプトグロビン、アルファ−ｌ−酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、アルファ１−抗トリプシン、アルファ１−抗キモトリプシン、およびプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤Ｉをはじめとする血漿タンパク質のレベルの増加に基づく可能性がある。フィブリノゲンなどの急性期反応タンパク質のレベルの増加は、血液濃縮を示すものである。血漿タンパク質レベルは、血液検査および当業者に公知の他のいかなる方法によっても決定できる。
【０２９６】
治療のために赤血球および／または血漿タンパク質の血液濃縮を有する対象を特定するための例示的方法において、血液検査および他のアッセイおよび方法を概して、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーでの対象の治療の前、治療中、または治療後に実施する。血液濃縮の療法をモニタリングする例示的方法において、血液サンプルまたは他のアッセイを、対象がポロクサマーでの１以上の治療を受ける前、治療を受けている間、または治療を受けた後に実施できる。
【０２９７】
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーでの治療のための血液濃縮を有する対象の特定は、本明細書中で提供する方法では、血圧、心拍数、潅流キャピラリー密度、および当業者に公知の微小循環または微小血管血行動態障害または機能不全のいかなる他の指標も含む微小循環または微小血管血行動態障害または機能不全の指標に基づく可能性がある。
【０２９８】
ｂ．脱水を有する対象の特定
精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーでの治療のための脱水を有する対象の特定は、本明細書中で提供する方法では、精神状態、心拍数、呼吸数、血圧、および体温をはじめとするバイタルサイン、激しい口渇、口渇および肥大した舌、虚弱、眩暈、心臓動悸、錯乱、停滞、失神、発汗不能、重篤な下痢、熱、増加または持続する嘔吐、体重減少、尿産生の減少、発作、またはそれらの任意の組み合わせなどの臨床症状に基づく可能性がある。
【０２９９】
特定はまた、血液検査から得られる結果例えばヘモグロビンおよび赤血球数の増加、電解質レベル（例えば、ナトリウム、カリウム、および塩化物）、糖レベル、および完全血球算定；尿試験、例えば色、透明度、比重、ケトンの存在；および腎臓機能試験、例えばＢＵＮおよびクレアチンレベルに基づく可能性がある。脱水は当業者に公知のいかなる方法によっても判定できる。
【０３００】
治療のために脱水を有する対象を選択する例示的方法において、血液検査ならびに他のアッセイおよび方法は概して、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマーでの対象の治療前、治療中、または治療後に実施する。脱水の療法をモニタリングする例示的方法では、血液サンプルまたは他アッセイを、精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８での１以上の治療を対象が受ける前、受けている間、または受けた後に実施できる。
【０３０１】
したがって、本明細書中で記載するようなポロクサマーでの治療およびポロクサマーの使用について、臨床的指標としては、限定されるものではないが、臨床試験、例えば沈降速度、ＳｔＯ２の減少または低い値（組織酸素化）、高いフィブリノゲン、高いＲＢＣ数、高いヘマトクリット（正常よりも高い任意の値）を示す実験室測定値、ＲＢＣ凝集（凝集の増加を示す）またはＲＢＣ沈降速度（sed rate）の実験室測定値（正常範囲より高く上昇）が挙げられる。
【０３０２】
３．治療についての対象のモニタリング
しかしながら、本明細書中で提供する精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８は、限定されるものではないが、脱水、血漿タンパク質および／または血球の血液濃縮、ならびに微小血管血行動態機能障害をはじめとする、利尿に関連する望ましくない副作用を軽減、縮小、または改善する。対象を長時間にわたってモニタリングして、望ましくない副作用の減少が精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８での療法の過程にわたって達成されたかどうかを評価できる。
【０３０３】
Ｇ．併用療法
本明細書中で記載する任意のポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８は、ポロクサマー１８８化合物単独の効果を改善するために、腎臓および肝臓に関連する状態、血圧上昇（すなわち、高血圧）、緑内障、眼圧上昇、ならびに心臓に関連する疾患、例えばうっ血性心不全を治療するために利用される治療薬と組み合わせて投与できる。典型的には、そのような治療としては、これらに限定されるものではないが、本明細書中で記載し、ここに列挙する生理学的状態および病状の治療方法が挙げられる。本明細書中で提供する組成物は、他の治療もしくは薬剤または血液濃縮の減少が望ましい治療などの治療とともに、その前に、その合間に、またはその後に、さらに同時処方または同時投与できる。例えば、本明細書中で記載する任意のポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８を、利尿の副作用、例えば血液濃縮、脱水，および／または微小血管血行動態障害の治療で使用できる。
【０３０４】
第２の薬剤または治療薬の製剤は、１回で投与できるか、または間隔をあけて投与する複数のより少ない用量に分割できる。選択された薬剤／治療製剤を、１以上の用量で治療期間にわたって投与できる。例えば、数時間、数日、数週間、または数か月にわたって、場合によっては、連続投与が有用である。正確な投与量および投与単位は、症状および患者の認容性に左右されると理解される。概して、本明細書中の第２の薬剤／治療薬の投薬レジメンは当業者に知られている。
【０３０５】
本明細書中で記載する精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８は、限定されるものではないが、本明細書中で記載する利尿薬などの利尿薬、血管拡張薬、ＡＣＥ阻害剤、ＡＲＢ（アンギオテンシン受容体遮断薬）、アンギオテンシンＩＩ拮抗物質、アルド
ステロン拮抗物質、陽性変力薬、ホスホジエステラーゼ阻害剤、ベータ−アドレナリン受容体拮抗物質、カルシウムチャネル遮断薬、硝酸エステル、アルファ遮断薬、中心アルファ拮抗物質、スタチン、ジゴキシン、硝酸エステル、クロルタリドン、アムロジピン、リシノプリル、ドキサゾシン、またはこれらの薬剤の組み合わせをはじめとする現在入手可能な治療薬と組み合わせて使用することもできる。さらに、本明細書中で記載する精製ポロクサマー１８８などのポロクサマー１８８は、埋め込み型ペースメーカー、除細動器、および左心室補助装置（ＬＶＡＤ）を含む機械的装置とあわせて使用することもできる。
【実施例】
【０３０６】
Ｈ．実施例
以下の実施例は、例示目的のためだけに含まれ、本発明の範囲を限定することを意図しない。
［実施例１］
より高いメタノール濃度およびより低い圧力での５０Ｌスケール多段階抽出バッチ処理精製を用いる長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマー１８８の精製
Ａ．超臨界流体抽出（ＳＦＥ）過程
【０３０７】
２４７±１５気圧（およそ２５０ｂａｒ）の圧力ならびに７．４、９．１および１０．７重量％メタノールの、メタノールの制御された段階的な増加を伴って抽出を実施して、ポロクサマー１８８の多段階抽出バッチ処理を実施した。精製前に、ポロクサマー１８８原料（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）をゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって特性化した。分子量分析は、原料が約８，５００±７５０Ｄａの主ピークの平均分子量、６．０％以下の４，５００Ｄａ未満の低分子量（ＬＭＷ）種および１％以下の１３，０００Ｄａを上回る高分子量種（ＨＭＷ）を有することを証明した。加えて、多分散性は１．２以下であった。
【０３０８】
５０Ｌの高圧ステンレス鋼製抽出容器に１４ｋｇの商業等級のポロクサマー１８８（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）およびＣＯ２で加圧した７ｋｇのメタノール（４９±１０気圧、すなわち７２０±１４７ｐｓｉ）（Ｍｅｓｓｅｒ  Ｆｒａｎｃｅ，  Ｓ．Ａ．Ｓ．，  Ｌａｖｅｒａ，  Ｆｒａｎｃｅ）を装填し、均質溶液が得られるまで４０℃まで４０〜８０分間加熱した。ＣＯ２（メイン供給タンクから、または抽出システムを通したリサイクルを経て供給する）を熱交換器中で冷却し、温度制御した高圧ステンレス鋼溶媒性溶媒リザーバー中に供給した。高圧ポンプは液体ＣＯ２の圧力を所望の抽出圧力まで増加させた。高圧ＣＯ２流を第２熱交換器によって処理温度まで加熱した。メタノール（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ，  Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）をメイン供給タンクからＣＯ２溶媒流に供給して、抽出メタノール／ＣＯ２共溶媒を生成させ、これを吸入装置から抽出容器中へ細かい霧として２４７±１５気圧（３６００±ｐｓｉ）の気圧および４０℃の温度にて供給した。
【０３０９】
７．４％のメタノール／ＣＯ２抽出共溶媒を、８ｋｇ／ｈｒのメタノール流速（１０８ｋｇ／ｈｒの総流速）で３時間ポロクサマー溶液を通して濾過した。抽出を９．１％のメタノール／ＣＯ２共溶媒でさらに４回、１０ｋｇ／時（１１０ｋｇ／ｈｒの総流速）のメタノール流速で続けた。抽出は、１０．７％メタノール／ＣＯ２共溶媒でさらに８回、１時間あたり１２ｋｇのメタノール流速（１１２ｋｇ／ｈｒの総流速）でさらに続けた。抽出過程全体にわたって、可溶性種の抽出物を抽出器の最上部から連続して抽出した。抽出溶媒を抽出器の最上部から除去し、および直列に配置した２つの高圧ステンレス鋼製サイクロンセパレータに通して、システム圧力を２４７気圧（３６００ｐｓｉ）から５９気圧（８７０ｐｓｉ）まで減圧し、次いで５９気圧から４９気圧（７２０ｐｓｉ）まで減圧し、およびメタノール蒸気からＣＯ２を分離した。分離したＣＯ２を凝縮させ、熱交換器に通し、および溶媒リザーバー中で保存した。別のサイクロンセパレータに通すことによっ
てメタノール排気流の圧力をさらに減圧した。精製ポロクサマー１８８は抽出器中に残留した。
【０３１０】
抽出後、精製ポロクサマー１８８溶液を抽出器の底部からスターラーを備えたミキサー／ドライヤーユニット中へ排出した。ポロクサマー１８８生成物をガス飽和溶液からの微粒子形成（ＰＧＳＳ）技術により減圧下で沈殿させた。沈殿はおよそ２５％〜３５％のメタノールを含んでいた。精製ポロクサマー１８８を真空下で４０℃以下にて乾燥して、残留メタノールを除去した。生成物のフィード収率は約６５％であった。
【０３１１】
ＧＰＣによって決定される精製した生成物の分子量分析は、その精製産物が受容規格（acceptance specifications）を満たすことを実証した。約８，５００±７５０Ｄａの主ピークの平均分子量および平均８，５００±７５０Ｄａの平均分子量、１．５％以下の４，５００Ｄａ未満の低分子量（ＬＭＷ）種および１．５％の１３，０００Ｄａを上回る高分子量種（ＨＭＷ）があった。加えて、多分散性は１．０５以下であった。したがって、結果から、手順の結果、ＬＭＷ種において測定可能な減少が起こり、および精製産物の多分散性が改善されたことがわかる。結果として得られるポロクサマー１８８は、１５ｇの精製されたポロクサマー薬物物質（１５０ｍｇ／ｍＬ）を含む１００ｍＬのガラスバイアル中無色透明無菌非発熱性（non-pyrogenic）水溶液であった。組成物は、総ナトリウム含有量が０．４５％の注射用塩化ナトリウム溶液中の総ナトリウム含有量と等しくなるように調節するために０．０１Ｍのクエン酸塩緩衝液および塩化ナトリウムを含んでいた。結果として得られる溶液のオスモル濃度はおよそ３１２ｍＯｓｍ／Ｌであった。ＬＣＭＦポロクサマー１８８組成物は静菌剤または防腐剤を含んでいなかった。
【０３１２】
Ｂ．精製したポロクサマー１８８の静脈内投与後の血漿循環半減期の特性化
精製したポロクサマー１８８は、異なる薬物動態プロフィールを示す循環において２つの異なるピークをもたらし、主ピークは８，６００ダルトンの平均分子量を有し、より小さな高分子量（ＨＭＷ）ピークは約１６，０００ダルトンの平均分子量を有することが報告されている（Grindel et al. (2002) Biopharmaceutics and Drug Disposition, 23:87-103）。より高分子量のピークはより長い血漿滞留時間を示し、循環からのクリアランスがより遅く、主ピーク血漿クリアランス速度のおよそ５％で消失する。精製ポロクサマー１８８の循環半減期を静脈内投与後に評価した。
【０３１３】
上述のようにして生じた精製ポロクサマー１８８を、健常なヒトボランティアに静脈内投与した。精製ポロクサマー１８８を１００ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの投与量として１時間投与し、続いて３０ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの維持量を５時間投与した。血漿を様々な時点で集め、およびポロクサマー１８８の血漿濃度はＨＰＬＣ−ＧＰＣを使用して測定した。結果を図７に記載する。主ピークの半減期に関して報告された研究と一致して、結果は、０．９ｍｇ／ｍＬの投与した精製ポロクサマー１８８の平均最大濃度（Ｃｍａｘ）が１時間のローディング注入の最後に達成されたことを示す。また、約０．４ｍｇ／ｍＬの定常状態（Ｃｓｓ）平均濃度が維持注入の間に達成され、維持注入の中断後に濃度は急速に減少した。以前の報告とは異なり、上述のように精製した生成物では、血漿中の長期循環高分子量ピークは観察されなかった。
【０３１４】
血漿中に長期循環分子量ピークがないことを確認するために、上述のようにして調製した精製ポロクサマー１８８を３００ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの投与量として１時間投与し、続いて２００ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの維持量で５時間投与した。血漿を、様々な時点および血漿濃度でＨＰＬＣ−ＧＰＣを使用して集めた。結果を図８Ａおよび８Ｂに示し、この図は前述のようにして調製した精製ポロクサマー１８８の投与後の様々な時点で得られた血漿のＨＰＬＣ−ＧＰＣクロマトグラムを示す。図８Ａは、すべての血漿サンプリング時点についてＨＰＬＣ−ＧＰＣによって測定した全分子量分布の血漿濃度の時間的経過を示す。図８
Ｂは、時間とともにクロマトグラフのプロフィールにおける変化を示す選択された時点を示す。クロマトグラムを拡大してポリマー分布の高分子量部分（１９．８Ｋダルトン〜１２．４Ｋダルトン）を示す。主ピーク部分（およそ１２．８Ｋダルトン〜およそ４．７Ｋダルトンの分子量範囲）および低分子量部分（およそ４．７Ｋダルトン未満の分子量を有する成分）も示す。ＨＰＬＣ−ＧＰＣ法は、既知濃度の標準に対する溶出ピークの高さに基づいて血漿レベルを定量する（すなわち、溶出ピークが高いほど血漿レベルが高い）。ＧＰＣ法はまた、サンプル溶出時間を既知分子量の標準の溶出時間と比較することによって分子量範囲を特定する。
【０３１５】
クロマトグラムは、時間とともに、ポロクサマー１８８ポリマー分布の高分子量部分が主ピークおよび低分子量成分に比例して減少することを示す。したがって、ポリマー分布は実質的に均一な薬物動態プロフィールを示す。したがって、結果は、より高分子量種がより長い循環半減期（他のポリマー成分に対して）を示さず、静脈内投与後の循環において蓄積しないことを示す。したがって、ポロクサマー１８８は、長期循環物質を含まない（ＬＣＭＦ）ポロクサマー１８８と称する。
【０３１６】
［実施例２］
利尿薬で誘発された血液濃縮
心筋梗塞の既往のある体重１８０ポンドの６５歳の男性が疲労、末梢浮腫および呼吸困難で入院していた。胸部Ｘ線によって間質浮腫および肺静脈うっ血が明らかになり、経胸壁心エコー検査は駆出率３０％で低い左室収縮性を示した。１５０ｍｇのフロセミドのＩＶボーラス用量を１２時間おきに投与することによって実施する利尿療法を開始した。フロセミド治療の４８時間後の患者の体重測定値は１７２ポンドであった。この時点で、反復経胸壁心エコー検査は評価前から本質的に変化を示さなかった（患者の駆出率は２９％であった）。
【０３１７】
患者はフロセミドを摂取し続け、クエン酸塩緩衝食塩水中精製ポロクサマー１８８の１５％溶液を２５０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶ注入として１時間の期間にわたって投与した。２４時間後、彼の体重は１６８ポンドであった。この時点での経胸壁心エコー検査は、拡張型筋疾患の著しい軽減と、４０％の改善された駆出率で心室収縮において有意な改善を示した。彼の臨床症状は著しく改善し、彼は病院から退院した。１週間後、患者は追跡経胸壁心エコー検査を受け、３７％の駆出率を示した。
【０３１８】
［実施例３］
患者における脱水
７２歳の女性が脱力や疲労を訴えて緊急治療室を訪れた。彼女は歩行時に息切れするのが観察された。患者にはうっ血性心不全の病歴はなく、ＡＣＥ阻害剤を服用していた。その前の２〜３日間、彼女は中等度からやや重度の下痢をし、微熱があった。彼女には下肢にわずかな浮腫があった。ベッドサイド心エコー図は２８％の駆出率を示した。臨床検査は高いヘマトクリットおよび赤血球沈降速度の上昇を示した。
【０３１９】
患者をクエン酸塩緩衝食塩水中１０％溶液として投与した精製ポロクサマー１８８で治療した。５０ｍｇ／ｋｇの用量を、注入ポンプを使用して１時間にわたってＩＶ注入として送達した。注入後２時間、反復心エコー図は、患者の駆出率が３８％まで改善したことを示した。注入の２時間後の時点で採取した血液に関する臨床検査によって、正常な赤血球沈降速度を除いてヘマトクリットに変化がないことが明らかになった。
【０３２０】
改変は当業者には明らかであるので、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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