(57)【要約】発明は、一般式（Ｉ）のモノフェロセニル化合物を提供する。発明はまた、化合物で標識された基質、化合物の官能化誘導体および電気化学アッセイにおいて化合物、官能化誘導体および標識された基質を使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2016540724.tif 000039
［式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、アリール、シクロアルキルまたはヘテロアリールから選択され；
Ｙはスペーサであり；
Ｚはスペーサであり；
Ｌはリンカー基であり；
ａは０、１、２、３または４であり；
ｂは０、１、２、３、４または５であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る］
で示される化合物。
【請求項２】
Ｙがアルキレンであり、Ｚがアルキレンであり、アルキレンが、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｌがヒドロキシまたは保護ヒドロキシである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
式ＩＡ
【化２】
2016540724.tif 000040
［式中：
ＡはＯであり、ＢはＣＨ２であり、およびｃは１であり、または
ＡはＣＨ２であり、ＢはＯでありおよびｃは２である］
で示される、請求項１−３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
ａ＋ｂ＝１である、請求項１−４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
ｂが０である、請求項１−５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
式ＩＢ
【化３】
2016540724.tif 000041
で示される、請求項１−６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、独立して、ハロ、ビニル、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、アルキル、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、Ｓ（Ｏ）２Ｒ、ＳｉＲ３から選択され、例えば各ＸがＳＲ、Ｓ（Ｏ）ＲおよびＳ（Ｏ）２Ｒから独立して選択される、請求項１−７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
ａが４であり、ｂが５であり、各Ｘがメチルである、請求項１−４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
下記から選択される化合物：
３−（フェロセニルオキシ）プロパン−１オール
３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（（１’−クロロ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（（２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスピニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（２−トリブチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（２−トリメチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（２−トリブチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（２−トリメチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（２−ビニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
３−（２−ヨード−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール
２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルプロポキシ）エタノール
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール。
【請求項１１】
請求項１−１０のいずれか一項に記載の化合物の官能化誘導体である化合物であって、前記官能化誘導体が、スクシンイミジルエステル基、ホスホラミダイト基、マレイミド基、ビオチンおよびアジド基から選択される部分、例えばホスホラミダイト基である部分を含んでもよく、前記官能化誘導体が下記から選択されてもよい、化合物：
２−シアノエチル−（３−（フェロセニルオキシ）プロパン−１オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（（１’−クロロ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（（２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスピニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（２−トリブチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（２−トリメチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（２−トリブチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（２−トリメチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（２−ビニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（３−（２−ヨード−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルプロポキシ）エタノール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト
２−シアノエチル−（２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール）ジ−イソ−プロピルホスホラミダイト。
【請求項１２】
請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物で標識された基質。
【請求項１３】
請求項１２に記載の標識された基質を含む、アッセイ標的の存在を決定するためのアッセイキット。
【請求項１４】
電気化学アッセイにおける標識としての請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物の使用であって、前記アッセイが電気化学的に標識された基質を検出するためのものであってもよく、および／または前記アッセイが電気化学的に標識された基質の量を決定するためのものであってもよい、前記使用。
【請求項１５】
電気化学アッセイにおける内部標準としての、請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物または請求項１２に記載の標識された基質の使用。
【請求項１６】
請求項１−１０のいずれか一項に記載の化合物を官能化化合物と反応させることを含む、式Ｉの化合物の官能化誘導体の製造のための方法であって、前記官能化化合物がホスホラミダイト基を含んでもよい、方法。
【請求項１７】
請求項１−１１のいずれかに記載の化合物を基質と反応させ、標識された基質を形成させることを含む、標識された基質の製造のための方法。
【請求項１８】
核酸を、請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物で標識された相補的核酸プローブと、該プローブとアンプリコンの間のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触させること、続いてハイブリダイズされたまたはハイブリダイズされていないプローブのいずれかを選択的に分解する工程を含み、プローブを標識する化合物の電気化学活性を測定する工程を提供する、核酸を検出する方法。
【請求項１９】
プローブと核酸の間のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、核酸を相補的核酸プローブと接触させる工程であって、前記核酸プローブが請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物で標識された核酸である工程、続いて、ハイブリダイズされたまたはハイブリダイズされていないプローブのいずれかを選択的に分解する工程および前記化合物の電気化学活性を測定する工程を含み、前記分解が二本鎖特異的エクソヌクレアーゼ酵素により実行されてもよい、核酸を検出する方法。
【請求項２０】
前記電気化学活性が定量的にまたは定性的に、前記プローブの分解の程度に依存する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記核酸がこれを前記プローブと接触させる前に増幅される、請求項１９−２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも２つの標識を含むアッセイ装置が使用され、各標識が請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物または請求項１２に記載の標識された基質を含む、請求項１８−２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物の電気化学活性を測定する工程を含む、請求項１−１１のいずれかに記載の化合物で標識された基質を検出する方法。
【請求項２４】
前記基質が炭水化物、核酸、アミノ酸およびポリペプチドから選択され、前記基質が核酸であってもよい、請求項１２に記載の標識された基質、請求項１３に記載のアッセイキット、請求項１４−１５のいずれか一項に記載の使用、あるいは請求項１７または２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物で標識された核酸であって、前記核酸が病原体における核酸配列と相補的であってもよく、前記病原体がクラミジア・トラコマチス、腟トリコモナス、ナイセリア・ゴノレー、マイコプラズマ・ゲニタリウムおよびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌から選択されてもよい、核酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２０１３年１０月８日に出願された英国特許出願１３１７７８７．８号および２０１４年８月６日に出願された英国特許出願１４１３９３１．５号（これらの全内容は、これにより、全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる）の恩典を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明はフェロセニル標識用化合物ならびに電気化学アッセイおよび電気化学検出方法におけるそのような化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ある一定の生体分子の検出は人生の多くの側面において重要な役割を果たす。例えば、医療分野では、細菌またはウイルス病原体、あるいは生体分子を検出することが絶えず必要である。高感度アッセイが必須である他の分野としては、食品および飲料業界が挙げられる。１つの検出方法は電気化学的に活性な化合物の使用を含む。電気化学検出の適用は、他の方法、例えば蛍光検出よりも多くの利点を有する。電気化学検出は、非常に高いレベルの感度の可能性を有し、蛍光よりも広い直線ダイナミックレンジを示す。さらに、試料が光学的に透明であることが要求されない。バックグラウンド汚染物質（多くの生体試料は自己蛍光を発する）からの干渉も、より少なくなる。
【０００４】
特許文献１は、電気化学的に活性なマーカーおよび核酸のためのプロービング方法を開示している。その方法は、核酸溶液を、電気化学的に活性なマーカーに付着されたオリゴヌクレオチドプローブと接触させることを含む。プローブは、核酸溶液中に存在し得る任意の相補的標的配列と少なくとも部分的にハイブリダイズさせられる。核酸プローブの酵素分解後、マーカーに関連する情報が電気化学的に決定される。
【０００５】
非特許文献１は、標識されたオリゴヌクレオチドと、酵素消化された標識されたオリゴヌクレオチドの間の電気化学的識別のためのパルス電気化学法における標識としてのフェロセン尿素化合物の使用を記載している。
【０００６】
特許文献２は、さらに電気化学的に活性なマーカーおよびプロテアーゼ活性を検出する方法を開示している。その方法は、試料溶液を電気化学的に活性なマーカーに付着されたプロテアーゼ基質と接触させ、試料中に存在する任意のプロテアーゼがプロテアーゼ基質を分解することができる条件を提供することを含む。分解後、マーカーに関連する情報が電気化学的に決定される。
【０００７】
特許文献３および特許文献４は、電気化学標識として使用するためのある一定のジフェロセニル化合物を記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第０３／０７４７３１号
【特許文献２】国際公開第２００５／００５６５７号
【特許文献３】国際公開第２０１２／０８５５９１号
【特許文献４】国際公開第２０１３／１９０３２８号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｈｉｌｌｉｅｒら（Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６３  （２００４）  ３０７−３１０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
生体基質または指標、例えば、核酸またはアミノ酸の低濃度での存在の検出を可能にする標識を開発することが、継続して必要とされている。特に、異なる酸化電位および／または異なる化学的または物理的性質を有し、これにより、使用できる可能なアッセイの範囲が広がり、多重反応の開発のための範囲が増加される、新しい標識が、継続して必要とされている。さらに、アッセイにおいて内部標準として使用することができる電気化学的に活性な化合物が必要である。そのような化合物は堅固で、一貫した電気化学応答を提供する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は新しいフェロセニル標識用化合物、その化合物の官能化誘導体およびその化合物で標識された基質を提供する。この発明の化合物は、電気化学アッセイにおいて使用するのに有効な標識であることが見出されている。発明の化合物はまた、−１５０ｍＶ〜５８４ｍＶの酸化電位を有する、堅固で、一貫した電気化学応答を提供することが見出されており、そのため、それらは、アッセイにおける内部標準として有用であり得る。アッセイにおいてプローブとして使用される場合、発明の化合物は、一貫した、再現性のあるピーク高さを与える。さらに、発明の化合物は大きな電気化学範囲を示し、内部標準標識がボルタモグラムの「クリーンな」領域、すなわち他のピークから取り出された領域にあるようにする優れた調整が可能になる。よって、発明の化合物は多重アッセイにおいて非常に有用である。
【００１２】
発明の化合物および標識された基質は、任意の他の電気化学技術において使用することができ、この場合、それらの電気化学特性は、標識またはそれらの環境についての情報を引き出すために使用することができる。
【００１３】
発明の一実施形態は一般式Ｉを有する化合物を提供し
【化１】
2016540724.tif 000002
式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｙはスペーサであり；
Ｚはスペーサであり；
Ｌはリンカー基であり；
ａは０、１、２、３または４であり；
ｂは０、１、２、３、４または５であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る。
【００１４】
発明の標識用化合物およびそれから誘導された、標識された基質は、それらを、前に知られていた標識用化合物の有用な補完物にする特性を与え、より広い範囲の適用が可能になる。例えば、発明の化合物および標識された基質は、存在し得る不純物による妨害により測定電位が損なわれ得る条件の回避のための追加の機会を提供し得る。発明の化合物および標識された基質はまた、異なる電気化学電位値を与え、潜在的に、多重アッセイにおいてより大きなフレキシビリティを与える。
【００１５】
マーカーの電気化学活性は、主としてフェロセニル基上の置換基により調節される。よってＸ、ａおよびｂの選択により、化合物の電気化学電位は適切に選択することができる。さらに細かい調整は、ＹおよびＺの選択により達成することができる。
【００１６】
一実施形態では、発明は、一般式ＩＡの化合物に関し
【化２】
2016540724.tif 000003
式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
ＡはＯであり、ＢはＣＨ２であり、およびｃは１であり、または
ＡはＣＨ２であり、ＢはＯであり、およびｃは２であり；
ａは０、１、２、３または４であり；
ｂは０、１、２、３、４または５であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る。
【００１７】
別の実施形態では、発明は、一般式ＩＢの化合物を提供し
【化３】
2016540724.tif 000004
式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
ＡはＯであり、ＢはＣＨ２であり、およびｃは１であり、または
ＡはＣＨ２であり、ＢはＯであり、およびｃは２であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る。
【００１８】
好ましくは、式Ｉの化合物では、ＹおよびＺはどちらもアルキレンであり、そのいずれかまたは両方が、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基で置換される。より好ましくは、Ｙは直鎖アルキレンであり、これは、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基で置換され得、ＺはＣ１またはＣ３−Ｃ８アルキレンであり、これは、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基で置換され得る。
【００１９】
発明の化合物では、Ｌは、直接、または本明細書で記載される官能基を介して、基質へ結合するのに好適な任意のリンカー基である。Ｌは、有利には、酸素原子を含むリンカー基である。Ｌは好ましくは、ヒドロキシ基または保護ヒドロキシ基である。最も好ましくはＬはヒドロキシ基である。
【００２０】
発明の化合物では、フェロセニルは、ただ１つのＸ置換基を有することができ、よって、ａ＋ｂ＝１である。フェロセニルは、遠位のシクロペンタジエニル環上には置換基を有さず、よってｂは０である。フェロセニルは近位シクロペンタジエニル環上にただ１つの置換基を有し得、よって、ａは１である。
【００２１】
発明の化合物の一実施形態では、各Ｘは、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から独立して選択され得る。発明の化合物の別の実施形態では、各Ｘは、ハロ、ビニル、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、アルキル、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、Ｓ（Ｏ）２Ｒ、ＳｉＲ３から独立して選択され得る。特定の実施形態では、各Ｘは、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）ＲおよびＳ（Ｏ）２Ｒから独立して選択される。別の実施形態では、ａは４であり、ｂは５であり、各Ｘはメチルである。
【００２２】
発明の化合物は、標識された基質を形成させるのに好適な標識用化合物である。化合物の基質への付着は、直接（例えばＬを介して）または官能基を介して、好ましくはホスホラミダイト基を介してすることができる。よって、一実施形態では、発明は、発明の化合物の官能化誘導体である化合物を提供する。好ましくは、官能化誘導体は、スクシンイミジルエステル基、ホスホラミダイト基、マレイミド基、ビオチンおよびアジド基から選択される官能化部分を含む。特定の実施形態では、官能化部分はホスホラミダイト基である。
【００２３】
別の実施形態では、発明は、発明の化合物で標識された基質を提供する。標識され得る基質としては、核酸、アミノ酸、ポリペプチド、炭水化物およびそれらの分子のいずれかの誘導体または合成類似体が挙げられる。標識され得る他の基質としては、ラテックス／常磁性粒子が挙げられる。
【００２４】
好ましい実施形態では、基質は核酸である。好ましくは、核酸は、クラミジア・トラコマチス、腟トリコモナス、ナイセリア・ゴノレー、マイコプラズマ・ゲニタリウムおよびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌からなる群より選択される微生物における配列に相補的である配列を有する。一実施形態では、基質はアデノシンではない。
【００２５】
別の好ましい実施形態では、基質はアミノ酸、ポリペプチドまたは炭水化物；または少なくとも２つのヌクレオチドを含む核酸である。
【００２６】
アッセイ標的の存在を決定するためのアッセイキット（アッセイキットは発明の標識された基質を含む）もまた提供される。
【００２７】
別の実施形態は発明の実施形態のいずれかの化合物の、電気化学アッセイにおける標識としての使用を提供する。特定の実施形態では、アッセイは、電気化学的に標識された基質を検出するためのものである。より特定的には、アッセイは電気化学的に標識された基質の量を決定するためのものである。例えば、発明の化合物は、ＷＯ０３／０７４７３１号において記載される方法またはＷＯ２００５／００５６５７号において記載される方法において用途が見出し得る。
【００２８】
別の実施形態は、式Ｉの化合物を官能化化合物と反応させることを含む、式Ｉの化合物の官能化誘導体の製造のための方法を提供する。特定の実施形態では、官能化化合物はホスホラミダイト基を含む。
【００２９】
発明の実施形態のいずれかの化合物を基質と反応させ、標識された基質を得ることを含む、標識された基質の製造のための方法もまた、提供される。
【００３０】
別の実施形態は、プローブと核酸の間のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、核酸を相補的核酸プローブと接触させることを含む、試料中の核酸を検出する方法を提供し、ここで、プローブは、発明の実施形態のいずれかの化合物で標識されている。その方法はプローブを標識する化合物の電気化学活性を測定するさらなる工程を含むことができる。任意で、その方法は、測定工程前に、ハイブリダイズされたまたはハイブリダイズされていないプローブのいずれかを選択的に分解する工程を含む。ハイブリダイズされたプローブの選択的分解は、二本鎖特異的エクソヌクレアーゼ酵素により実施され得る。発明の化合物の電気化学活性は、定量的にまたは定性的に、プローブの分解の程度に依存し得る。任意で核酸は、これをプローブと接触させる前に、増幅される（例えば、ＰＣＲまたは別の核酸増幅技術により）。
【００３１】
別の実施形態は、化合物の電気化学活性を測定する工程を含む、発明の実施形態のいずれかの化合物で標識された基質を検出する方法を提供する。一実施形態では、少なくとも２つの標識（各標識は本発明による化合物または標識された基質を含む）を含むアッセイ装置が使用される。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】以下の実施例２２で記載される多重ＰＣＲアッセイから得られたボルタモグラムである。
【図２】実施例２３において記載される、３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（実施例化合物２）の、一連の検出アッセイにおけるプローブとしての使用を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、より好ましくは１〜４個の炭素原子を有する直鎖アルキル基および３〜８個の炭素原子、好ましくは３〜６個の炭素原子を有する分枝鎖アルキル基を示す。例示的なアルキル基としてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチルおよびｔ−ブチルが挙げられる。
【００３４】
「シクロアルキル」という用語は、３〜８個の環員、好ましくは３〜６個の環員を有する飽和または部分飽和環状炭素を示す。１つ以上の環員は酸素、硫黄および窒素などのヘテロ原子から選択され得る。例示的なシクロアルキル基としては、シクロヘキシル、シクロペンチル、ピペリジニルおよびモルホリニルが挙げられる。
【００３５】
「アルキレン」という用語は、１〜８個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、より好ましくは１〜４個の炭素原子を有する二価直鎖アルキルラジカルまたは２〜６個の炭素原子、好ましくは３〜４個の炭素原子を有する二価分枝鎖アルキルラジカルを示す。
【００３６】
「アルケニル」という用語は、２〜６個の炭素原子、より好ましくは２〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖アルケニル基を示す。例示的なアルケニル基としてはエテニル、プロペニルおよびブテニルが挙げられる。
【００３７】
「アリール」という用語は、５〜１０個の炭素員を有する不飽和で芳香族の単環または二環を示す。例示的なアリール基としてはフェニルおよびナフタレニルが挙げられる。
【００３８】
「ヘテロアリール」という用語は、５〜１０個の環員を有し、炭素原子ならびに酸素、硫黄および窒素などのヘテロ原子から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を含む芳香族単環または二環芳香族環系を示す。例示的なヘテロアリール基としては、フラニル、イミダゾリルおよびチアゾリルが挙げられる。
【００３９】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を示す。
【００４０】
「近位シクロペンタジエニル環」という用語は、スペーサ基Ｙが付着されたシクロペンタジエニル環を示す。「遠位シクロペンタジエニル環」という用語は、スペーサ基Ｙが付着されていないシクロペンタジエニル環を示す。
【００４１】
置換基に関しては、「独立して」という用語は、１を超える置換基が可能である場合、置換基は互いに同じか、または異なっていてもよい状況を示す。
【００４２】
文脈に反することが明らかである場合を除き、「基質」という用語への言及は、天然基質および合成基質の両方を含むことが理解されるべきである。炭水化物、核酸、アミノ酸およびポリペプチドへの言及は、天然または合成炭水化物、核酸、アミノ酸およびポリペプチドを示すものとして理解されるべきである。
【００４３】
「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸残基を含む、ペプチド結合により結合されたアミノ酸の任意の鎖、例えばジペプチドまたは複合タンパク質を示す。
【００４４】
「核酸」という用語は、１つ以上の核酸残基を含む分子を示し、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドを含み、ならびにＤＮＡおよびＲＮＡを含む。核酸は１〜５０個のヌクレオチド、より好ましくは２〜４０個のヌクレオチドとりわけ１５〜３５個のヌクレオチドを含むことができ、１８〜３０個のヌクレオチドがとりわけ好ましい。いくつかの適用では、より短い長さの基質が有用である場合があり、例えば、１〜１４個のヌクレオチド、より好ましくは２〜１０個のヌクレオチドを有する核酸である。ヌクレオチドは、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジンまたはウリジンヌクレオチドから選択され得る。核酸が本明細書で提供される標識に付着される場合、これは好ましくは、例えば２’、３’または５’位で、ヌクレオチドのリボースまたはデオキシリボース基に付着された基を介して、例えば、酸素または窒素原子を介して付着される。最も好ましくは、核酸は、ヌクレオチドの３’または５’位、例えば５’位で付着される。基質の核酸部分の配列は、好ましくは、基質が相補的標的配列とハイブリダイズすることができ、よって、分子生物学的技術、例えば、本明細書で開示される核酸検出技術の１つにおいてプローブとして使用することができるようなものとされる。
【００４５】
「炭水化物」という用語は、１つ以上のサッカライド残基を含む分子を示し、単糖、オリゴ糖、および多糖を含む。
【００４６】
基質は単一ヌクレオチドおよび単一アミノ酸とすることができる。例えば酵素による基質の切断に依存するアッセイの場合、単一アミノ酸またはヌクレオチドは、基質と見なすことができ、というのも、酵素により切断させることができる内部結合が欠如しているが、そのような結合は、マーカーの付着により形成させることができるからである。一実施形態では、基質はアデノシンではない。
【００４７】
天然基質の誘導体が本明細書で言及される場合、それらの誘導体は基質の天然誘導体または合成誘導体であってもよい。
【００４８】
核酸との関連における「ハイブリダイズする」という用語への言及は、第１の核酸の相補的配列の第２の核酸への特異的結合を意味することが理解されるであろう。ハイブリダイゼーションが起こるためには、核酸配列の相補性は、完全であることは要求されないこともまた、理解されるであろう。ハイブリダイゼーションは、塩基ミスマッチを、そのようなミスマッチが記載される方法の効率を実質的に低減させない程度まで含む相補的結合を含む。
【００４９】
以上で記載される発明の化合物は、基質に直接、または化合物の官能化後および／または基質の誘導体化後に付着させることができる。
【００５０】
本発明による官能化誘導体は式ＩＩによる化合物とすることができ：
【化４】
2016540724.tif 000005
式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｙはスペーサであり；
Ｚはスペーサであり；
Ｆは官能基であり；
ａは０、１、２、３または４であり；
ｂは０、１、２、３、４または５であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る。
【００５１】
Ｆは、式Ｉの化合物におけるＬから誘導され得る。好ましくは、Ｆはスクシンイミジルエステル基、ホスホラミダイト基、マレイミド基、ビオチンまたはアジド基を含む。
【００５２】
好ましくは、Ｆはホスホラミダイト基であり、またはこれを含む。よって、官能化誘導体は式ＩＩＡによる化合物とすることができ：
【化５】
2016540724.tif 000006
式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
ＡはＯであり、ＢはＣＨ２であり、およびｃは１であり、または
ＡはＣＨ２であり、ＢはＯであり、およびｃは２であり；
Ｒ’はアルキルであり；
Ｒ’’はアルキルであり；
ａは０、１、２、３または４であり；
ｂは０、１、２、３、４または５であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る。
【００５３】
好ましくは、Ｒ’はｉ−プロピルであり、Ｒ’’は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＮである。式ＩＩＡの化合物は、式ＩＡの化合物の、ホスホラミダイト基を含む官能化化合物による官能化により形成され得る。ホスホラミダイトによる官能化は、発明の化合物を核酸に付着させるために特に有利である。ホスホラミダイト基の核酸への結合はよく知られており、当業者にとって型通りに進められる事柄である。
【００５４】
本発明による標識された基質は、発明の化合物または官能化誘導体の基質との反応により調製され得る。よって、標識された基質は式ＩＩＩを有することができ
【化６】
2016540724.tif 000007
式中：
各Ｘ置換基は、独立して、ハロ、ビニル、アルキル、シクロアルキル、ＳｉＲ３、ＳｎＲ３、ＰＲ２、Ｐ（Ｏ）Ｒ２、ＳＲ、Ｓ（Ｏ）Ｒ、ＳＯ２Ｒ、アリール、ヘテロアリール、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮおよびＣＦ３から選択され；
各Ｒは独立して、アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｙはスペーサであり；
Ｚはスペーサであり；
Ｌ’は、発明の化合物または官能化誘導体を基質と反応させた後の、以上で記載されるＬまたはＦの残基であり；
ａは０、１、２、３または４であり；
ｂは０、１、２、３、４または５であり；
［Ｓ］は基質の残基であり；ならびに
ビニル、アルキル、シクロアルキル、アルキレン、アリールおよびヘテロアリールは、任意で、未置換アルキル、ＯＨ、ＣＮ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から独立して選択される１、２または３つの置換基により置換され得る。
【００５５】
Ｌ’は、発明の化合物または官能化誘導体を基質と反応させた後の、以上で記載されるＬまたはＦの残基であってもよい。好ましくはＬ’は、ヒドロキシ基またはホスホラミダイト基の残基である。一実施形態では［Ｓ］は、単一ヌクレオチドの残基ではない。一実施形態では、［Ｓ］はポリペプチド、アミノ酸または炭水化物の残基である。
【００５６】
発明の例示的な化合物は、下記表１で示される。
【００５７】
【表１−１】
2016540724.tif 000008
【表１−２】
2016540724.tif 000009
【００５８】
表１中の化合物のいずれも、任意の好適な方法により、例えばホスホラミド化により官能化され得る。ホスホラミダイト基により官能化された、発明の例示的な官能化化合物は下記表２で示される。本発明は表１および２の化合物から誘導された、標識された基質を包含する。
【表２】
2016540724.tif 000010
【００５９】
発明の化合物、特にフェロセニル部分上に硫黄含有またはリン含有置換基を有するもの、ならびにそれらの対応する官能化誘導体および標識された基質は、測定電位が比較的高く、例えば、４００ｍＶ超、例えば４５０ｍＶ超またはさらに５００ｍＶ超であるアッセイにおいて有用であると考えられる。少なくとも４５０ｍＶ、例えば５００ｍＶ以上の電気化学電位を有する化合物は、有効電位値の範囲を拡張するのに特に有用であり、よって、例えば、潜在的に、より有効な多重アッセイを提供するのに有用である。フェロセニル部分上に高電子求引性置換基、例えば、トリフルオロメチルまたはシアノを有する発明の化合物は、高い電気化学電位値を提供する、よって、有用な標識および標識された基質の範囲を拡張する観点から同様の利点を有すると考えられる。電子豊富な発明の化合物、例えば化合物２は、電気化学電位の範囲を低電圧、例えば電圧＜０ｍＶまで拡張するために有用である。これは、多重アッセイの範囲を拡張するために特に有利である。
【００６０】
加えて、発明のいくつかの化合物、特にハロゲン原子を有するそれらの化合物、および対応する標識された基質は、より狭い電圧ピークを有するという利点を提供し、これは、多重アッセイにおいてより多くの数の標識を使用する選択肢を提供する点で有利であり、というのも、より狭い測定ピークでは、ピーク間のギャップがより広くなり、これは、所望であれば、ギャップ内にある電位を有する追加の標識を組み込むことにより、利用可能である。
【００６１】
電気化学検出は、電気化学的に活性なマーカーは、基質に付着されているか否かおよび基質の性質によって、異なる電気化学特性を示すという観察に基づく。例えば、アミノ酸に付着された電気化学標識の場合、示される特性は、アミノ酸のアイデンティティだけでなく、そのアミノ酸残基がポリペプチドに組み込まれているか否か、および任意のそのようなポリペプチドの長さに依存するであろう。適切な状況下では、アミノ酸残基に付着されたマーカーの電気化学活性は、単一または非常に少ないアミノ酸残基の付着の損失後、検出可能な程度だけ変化し得る。
【００６２】
電気化学的に活性なマーカーが付着される基質のサイズおよび特性は電気化学マーカーの観察可能な特性に影響する。理論に縛られることは望まないが、電気化学の観察可能な特性におけるそのような変化は、例えば、拡散によるマーカーの移動速度またはその電場に応じた移動速度に影響することにより起こり得る。
【００６３】
マーカーの電気化学活性はまた、これが結合された分子の存在から得られる立体効果により影響され得る。例えば、立体障害は、マーカーが電極に接近し、電子を受容または供与しないように防止する可能性がある。
【００６４】
マーカーがポリペプチドに付着された場合、そうすると、ポリペプチドの二次構造（一次配列によりほとんど決定される）は、マーカーの物理的性質に影響し得る。例えば、マーカーがポリペプチド中のアミノ酸残基に付着された場合、よって、ポリペプチドの構造は電気化学的に活性なマーカーを立体的に妨害し、そうして、ボルタメトリーにより観察可能なシグナルが低減される可能性がある。ポリペプチドの消化は、二次構造要素を破壊または放出する可能性があり、よって、ペプチド構造のマーカーへの影響が低減または消失され得る。したがって、ポリペプチドの消化により、マーカー部分により生成される電気化学シグナルの変化、通常、増加が得られる。微分パルスボルタンメトリー実験では、特定の印加電圧でのファラデー電流応答は、ペプチドの消化で増加し得る。
【００６５】
電気化学的に活性なマーカーに関連する情報はボルタメトリーまたは電流測定法により得ることができる。微分パルスボルタンメトリーは特に好適である。所望であれば、電気化学検出工程は、１つ以上の特性、例えば、サイズ、電荷または疎水性に基づき分子を選択的に排除することができる膜で被覆された１つ以上の電極を使用して実施され得る。それは、例えば、溶液中の荷電種から生じるバックグラウンドノイズ電流を排除するのを支援することができる。
【００６６】
類似して、マーカーがヌクレオチドに付着された場合、電気化学特性は、ヌクレオチドがポリヌクレオチドなどのより複雑な核酸に組み込まれたか否か、その核酸の長さ、とりわけ付着点付近の核酸の配列により影響されるであろう。
【００６７】
発明はまた、核酸を増幅させる任意的な工程（例えば、ＰＣＲまたは別の核酸増幅技術による）、続いて、アンプリコン（または核酸）を相補的核酸プローブと、プローブとアンプリコン（または核酸）の間のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触させる工程、続いてハイブリダイズされたまたはハイブリダイズされていないプローブのいずれかを選択的に分解する工程（例えば、一本または二本鎖特異的ヌクレアーゼの使用による）を含む、試料中の核酸（例えばＲＮＡまたはＤＮＡ）を検出する方法を提供し、前記プローブは、発明の電気化学的に活性な化合物で標識され、その方法は、プローブを標識する化合物の電気化学活性を測定する工程を提供し、前記電気化学活性は、定量的または定性的にプローブの分解の程度に依存する。核酸ハイブリダイゼーションアッセイにおける電気化学標識のそのような使用は、Ｐｅａｒｃｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  ＩＥＥＥ  Ｔｒａｎｓ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｅｎｇ  ５８：７５５−５８（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）により記載される。
【００６８】
発明はまた、化合物の電気化学活性を測定する工程を含む、発明の電気化学的に活性な化合物を用いて抗体または誘導体（これらは例えば、アッセイにおいて標的抗原に結合され得る）を検出する方法を提供する。この方法は、定量的または定性的に実施することができる。
【００６９】
発明はまた、被験体の組織または体液中の疾患と関連するプロテアーゼまたはプロテアーゼインヒビターの検出において発明の方法を使用することを含む、被験体において疾患を診断またはモニタする方法を提供する。プロテアーゼのための基質は本発明により標識することができる。被験体の組織中のプロテアーゼまたはプロテアーゼインヒビターの存在と関連する疾患の例としては、血清中のアンチトロンビンＩＩＩの欠乏に起因する血栓塞栓症に罹りやすい遺伝的素因が挙げられる。上昇した血清または細胞外マトリクスカテプシンレベルはアルツハイマー病、癌または関節炎を示し得る。好ましくは、被験体の組織または体液は、血清、血漿、唾液、尿であるか、または試料を簡便にかつ安全に得ることができる任意の他の組織もしくは体液である。
【００７０】
発明はまた、被験体の組織または体液中の前記疾患と関連するポリペプチドを検出するために発明の方法を使用することを含む、被験体において疾患を診断する方法を提供する。
【００７１】
発明はまた、被験体の組織または体液中の前記疾患と関連するヌクレアーゼまたはヌクレアーゼインヒビターの検出において発明の方法を使用することを含む、被験体において疾患を診断またはモニタする方法を提供する。
【００７２】
さらに、発明は、被験体において疾患を検出するための発明の方法の使用を提供する。発明はまた、発明の方法を使用することを含む、微生物（特に、病原体または他の望ましくない生物、例えば、腐敗生物）を検出する方法を提供する。微生物由来の基質（または、病原体由来、例えば病原体において標的核酸配列を使用して産生される核酸アンプリコン）は、本発明により標識することができる。標識された基質の検出は、微生物の検出を示すために使用することができる。好ましくは、微生物はクラミジア・トラコマチス、腟トリコモナス、ナイセリア・ゴノレー、マイコプラズマ・ゲニタリウムおよびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌からなる群より選択される。
【００７３】
発明はまた、発明の標識された基質を、任意で、他のアッセイ構成要素、例えば、試料容器、電気化学検出のための電極を含む入れ物、アッセイにおいて使用するための酵素または標準および対照と組み合わせて使用する工程を含むアッセイを提供する。前記アッセイは発明の１を超える異なる標識された基質を使用し得る。もしそうだとしたら、異なる標識された基質の存在は、それらを、異なる電気化学特性（例えば異なる酸化電位）を有する発明の電気化学標識で標識することにより、別個に検出することができ、これにより、アッセイは多重（例えば、デュプレックス）アッセイとすることができ、この場合、異なる基質が同じ試料容器中に存在する時に区別され得る。シンプレックスアッセイもまた、発明により包含される。
【００７４】
実施例で示されるように、フェロセニル基上での１つ以上の置換基の組み込みは、アッセイにおいて使用される改変された電気化学特性を有する化合物を得るために使用することができる。その上、発明は、２つ以上が多重反応およびアッセイにおいて使用するために選択され得る化合物の範囲を提供する。
【００７５】
発明の化合物または官能化誘導体の基質への付着は、任意の好適な結合、典型的には基質側鎖への結合によるものとすることができる。従来のヒドロキシ保護基、例えばＴ．  Ｗ．  ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓにより、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  第４版，  ２００６において記載されるものが使用され得る。本明細書で使用するのに好適な一般的なヒドロキシ保護基はメチルエーテルであり；脱保護条件は、４８％ＨＢｒ水溶液中で１−２４時間還流させること、または三臭化ボラン（ｂｏｒａｎｅ  ｔｒｉｂｒｏｍｉｄｅ）と共にジクロロメタン中で１−２４時間撹拌することを含むことができる。あるいは、ヒドロキシ基はベンジルエーテルとして保護することができ；脱保護条件は、パラジウム触媒による、水素雰囲気下での水素化を含むことができる。
【００７６】
様々な合成方法が、基質の誘導体化のために当技術分野で知られている。例えば、リジンまたはリジン残基は、スクシンイミジルエステルとの反応により、誘導体化され得る。他のアミノ酸およびアミノ酸残基の誘導体化のためには、他の公知の合成方法が使用され得る。例えば、マレイミド試薬がシステインまたはシステイン残基を誘導体化するために使用され得る。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルがポリペプチドまたはアミノ酸のアミノ末端または側鎖アミノ基を誘導体化するために使用され得る。例えば、ホスホラミダイト部分を使用する、核酸のための好適な誘導体化方法もまたよく知られている。
【００７７】
発明の化合物は、標識用化合物の基質への付着を促進する任意の官能基の使用により、基質に付着され得る。好適な官能基としてはスクシンイミジルエステル基、ホスホラミダイト基、マレイミド基、ビオチンおよびアジド基が挙げられる。
【００７８】
発明の化合物のポリペプチドへの、例えば、システインまたはリジンを介する付着は、場合によっては、ポリペプチドおよび発明の化合物を一緒に室温で適切な緩衝液中でインキュベートすることにより達成することができる。標識が有利に、システインまたはリジンに結合されるべきであるが、基質配列がシステインまたはリジンを好適な位置に含まない場合、配列は、所望であれば、１つ以上のシステインまたはリジン残基を、追加の残基としてまたは別の残基の代わりとして付加するように、変異させることができる。ポリペプチドへの付着のための別の方法としては、標識のビオチン化および市販のストレプトアビジン化タンパク質の使用が挙げられる（またはその逆）。例として、基質は、任意の標準技術により、例えば市販されたビオチン化キットの使用によりビオチン化され得る。ビオチン化基質は、ストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート化合物、例えば抗体（商業的に広く入手可能である）に結合するであろう。
【００７９】
一実施形態では、式Ｉの化合物は下記ではない。
【化７】
2016540724.tif 000011
【００８０】
一実施形態では、式Ｉの化合物は下記ではない。
【化８】
2016540724.tif 000012
【００８１】
一実施形態では発明は、下記を含まない。
【化９】
2016540724.tif 000013
【００８２】
一実施形態では式Ｉの化合物は下記のいずれでもない。
【化１０】
2016540724.tif 000014
【００８３】
発明の化合物の一実施形態では、Ｚは、−ＣＨ２ＣＨ２−ではない。発明の化合物の一実施形態では、Ｙは−ＣＨ（Ｍｅ）−ではない。一実施形態では、Ｘは、ＰＰｈ２ではない。
【００８４】
実施例
発明の化合物は、下記スキームおよび実施例の手順に従い、適切な材料を使用して調製することができる。その上、本明細書で記載される手順を使用することにより、当業者は、本発明の範囲内に含まれる追加の化合物を容易に調製することができる。読者は、下記調製手順の条件およびプロセスの公知のバリエーションは、これらの化合物を調製するために使用することができることを容易に理解するであろう。よって、発明は、実施例で示される化合物に制限されるとして解釈されるべきではない。
【００８５】
下記略語が実施例において使用されている：
【表３】
2016540724.tif 000015
一般式ＩおよびＩＩによる化合物は、従来の合成方法、例えば、限定はされないが、下記スキームで概要が示される経路を使用して調製され得る。より詳細な合成手順は、下記実施例において見出され得る。
【００８６】
スキーム１
【化１１】
2016540724.tif 000016
Ｅ＋はフェロセニル基を置換するのに有用な任意の好適な求電子剤である。
【００８７】
スキーム２
【化１２】
2016540724.tif 000017
【００８８】
スキーム３は、ホスホラミダイト官能基をリンカーヒドロキシル基に付着させるための一般合成手順を示す。
スキーム３
【化１３】
2016540724.tif 000018
上記反応スキームにおいて開始材料として示されるフェロセニル誘導体は例示であり、モル当量の発明の化合物のいずれかと置き換えることができる。
【００８９】
電気化学電位の決定
以下で言及される電気化学電位値は、バックグラウンド電解質として、塩化ナトリウムの１００ｍＭ水溶液を含み、印刷カーボン作用電極、印刷カーボン対電極および銀／塩化銀参照電極（全て、銀コネクタを有する）を使用する電気化学セルを使用して測定した。電極はインクベースであり、ポリマ基板（例えばＭｙｌａｒ（登録商標））上にスクリーン印刷され、続いて熱硬化された。例として、試料は下記の通りに調製され得る：フェロセニル化合物の０．０１Ｍ原液をＤＭＳＯ（１ｃｍ３）中で調製する。これをその後、さらに１４μＭまで緩衝液中で希釈する。この１４μＭ溶液の２０μＬアリコートをその後、スクリーン印刷された電極に適用し、電気化学走査を実施する。好適なセルの例示的な形態は、ＷＯ２０１２／０８５５９１号において、概略的に記載され、図示されている。
【００９０】
実施例１：３−（フェロセニルオキシ）プロパン−１オール（１）の調製
【化１４】
2016540724.tif 000019
マグネチックスターラーバーが取り付けられた丸底フラスコにフェロセンカルボキシアルデヒド（５３５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を添加した。フラスコに、その後、エタノール（４ｃｍ３）およびＴＨＦ（１ｃｍ３）を添加した。赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（１２３ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）で処理した。フラスコをその後密閉し、窒素雰囲気下に置いた。３０分後、溶液の色が、オレンジに変化し、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。フラスコをその後、真空で元の体積の約９０％まで濃縮した。ダークオレンジ残渣をその後、ＥｔＯＡｃ（１５ｃｍ３）およびＮａＨＣＯ３（１５ｃｍ３）に溶解させた。二相性混合物を分液漏斗に移し、水層を分離し、その後、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出し、合わせた有機洗液をその後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、黄色固体を得た。フェロセンメタノールをその後、１，３−プロパンジオール（５ｃｍ３）に溶解させ、黄色溶液をその後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（７７ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコをその後密閉し、１００℃まで加熱した。１０分間加熱した後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。フラスコを室温まで冷却し、Ｈ２Ｏ（２０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（２０ｃｍ３）で希釈した。有機層をその後分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機層を合わせ、その後、Ｈ２Ｏ（２０ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（２０ｃｍ３）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、オレンジ固体を得た。精製をその後、シリカゲルクロマトグラフィーにより、ｎ−Ｈｅｘ１：１ＥｔＯＡｃで溶離して実施し、所望の生成物３−（フェロセニルオキシ）プロパン−１オール（１）をオレンジ粉末として得た（５１４ｍｇ、７４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＨ：４．２４（ｓ、４Ｈ）、４．１１（ｓ、６Ｈ）、３．６５（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．４Ｈｚ）、３．５４（ｔ、２Ｈ  Ｊ＝５．４Ｈｚ）、３．６５（ｔ、２Ｈ  Ｊ＝５．４Ｈｚ）、２．５２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１．７（ｑｕｉｎ  ２Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＣ：８３．６、７７．３、７１．５、６９．４、６９．３、６９．２、６８．７、３２．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１４Ｈ１８ＦｅＯ２Ｎａに対する計算値ｍ／ｚ  ２９７．０５５３  観測値２９７．０５６０（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：１８１ｍＶ。
【００９１】
実施例２：３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（２）の調製
【化１５】
2016540724.tif 000020
ノナメチルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｂ）
デカメチルフェロセン（Ａ）（４．８０ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）をマグネチックスターラーバーが取り付けられた丸底フラスコに入れた。新鮮な細かく粉砕されたマンガン酸バリウム（１８．７７ｇ、７３．６ｍｍｏｌ、５ｅｑ）をその後、フラスコに添加した。固体をその後、乾燥ベンゼン（２０ｃｍ３）および乾燥ジエチルエーテル（２０ｃｍ３）の混合物に懸濁させた。フラスコをその後密閉し、窒素雰囲気下に置いた。濃青色スラリーをその後、４５分間超音波処理した。この時間後、フラスコを超音波処理器から取り出し、４５℃で、１６時間加熱した。この時間後、暗色スラリーをセライトパッドに通して濾過し、固体を、洗液が透明になるまで、ＥｔＯＡｃ（２５０ｃｍ３）で洗浄した。赤色溶液をその後、真空で濃縮し、赤色固体を得た。シリカクロマトグラフィーにより、５％ＥｔＯＡｃ：ｎＨｅｘ＋２％ＴＥＡで溶離して精製し、生成物ノナメチルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｂ）を暗赤色結晶固体として得た（１．１９ｇ、２３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δＨ：９．９１（ｓ、１Ｈ）、１．９２（ｓ、６Ｈ）、１．７１（ｓ、６Ｈ）、１．５９（ｓ、１５Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δＣ：１９５．６、８６．０、８２．７、８０．６、７８．３、７２．５、９．３、９．３、８．９。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２０Ｈ２９ＦｅＯに対する計算値ｍ／ｚ  ３４１．１４８４  観測値３４１．１４８５（ｍ／ｚ＋Ｈ）。
【００９２】
３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（２）
ノナメチルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｂ）（３．４３ｇ、１０．０８ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をマグネチックスターラーバーが取り付けられた丸底フラスコに入れた。フラスコにその後、エタノール（４４ｃｍ３）および１，４−ジオキサン（１１ｃｍ３）を入れ、赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（８２０ｍｇ、２２．１８ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）で処理した。フラスコをその後密閉し、アルゴン雰囲気下に置き、室温で１６時間撹拌した。この時間後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。オレンジ溶液を真空で、元の体積のおよそ９０％まで濃縮した。オレンジ固体をその後、Ｈ２Ｏ（５０ｃｍ３）とＣＨ２Ｃｌ２（５０ｃｍ３）の間で分配させた。有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５ｃｍ３）で逆抽出した。合わせた有機物をその後合わせ、ブライン（ｓａｔ）（５０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ固体を得た。粗アルコールをその後、１，３−プロパンジオール（５０ｃｍ３）、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｃｍ３）に懸濁させ、赤色溶液を得た。溶液をその後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（３３４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコをその後密閉し、窒素雰囲気下に置いた。３０分間、室温で撹拌した後、ＴＬＣ分析は、開始材料の完全消化を示した。反応物をその後、Ｈ２Ｏ（１５０ｃｍ３）およびＣＨ２Ｃｌ２（１００ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×１５ｃｍ３）で抽出した。有機物を合わせ、その後、Ｈ２Ｏ（３×５０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、１０％ＥｔＯＡｃ：ｎＨｅｘ＋２％ＴＥＡで溶離して精製し、所望の生成物３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（２）を黄色粉末３．１６ｇ、７８％として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ：４．３１（ｓ、２Ｈ）、３．７１（ｓ、２Ｈ）、３．５２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、２．１８（ｓ、２Ｈ）、１．８５（ｓ、６Ｈ）、１．７０（ｓ、２２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＣ：８３．６、７７．３、７１．５、６９．４、６９．３、６９．２、６８．７、３２．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２３Ｈ３６ＦｅＯ２Ｎａに対する計算値ｍ／ｚ  ４２３．１９６２  観測値４２３．１９５５（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：−１５１ｍＶ。
【００９３】
実施例３：３−（（１’−クロロ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（３）の調製
【化１６】
2016540724.tif 000021
クロロフェロセン（Ｃ）を、フェロセンから、Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．  Ｃｈｅｍ．，  １９９６，  ５１２，  ２１９−２２４からの改変手順を使用し、ヘキサクロロエタンを塩素化試薬として使用して調製した。
【００９４】
１’−クロロフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｄ）を、クロロフェロセンから、Ｃｏｌｌ．  Ｃｈｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ．  Ｃｈｅｍｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．，  １９８７，  ５２，  １７４−１８１からの手順を使用して、所望の位置異性体の４：１混合物として調製した。
【００９５】
１’−クロロフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｄ）（４２６ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、マグネチックスターラーバーが取り付けられた丸底フラスコに入れ、エタノール（４ｃｍ３）およびＴＨＦ（１ｃｍ３）に溶解した。赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（８３ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）で処理し、フラスコを密閉し、窒素雰囲気下に置いた。３０分後、溶液は色がオレンジに変わり、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。フラスコをその後、元の体積の約９０％まで真空で濃縮した。ダークオレンジ残渣をその後、ＥｔＯＡｃ（１５ｃｍ３）およびＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（１５ｃｍ３）に溶解させた。二相性混合物を分液漏斗に移し、水層を分離し、その後、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。合わせた有機洗液をその後、合わせ、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、オレンジ／黄色油を得た。フェロセンメタノールをその後、１，３−プロパンジオール（３ｃｍ３）に溶解させ、黄色溶液をその後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（５６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコをその後密閉し、１００℃まで加熱した、１０分間加熱した後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。フラスコを室温まで冷却し、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層をその後分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機層を合わせ、その後、Ｈ２Ｏ（２０ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（２０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、褐色油を得た。精製をその後、シリカゲルクロマトグラフィーにより、２５％ＥｔＯＡｃ：ｎＨｅｘで溶離して実施し、所望の生成物３−（（１’−クロロ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（３）をオレンジ色の油状物（２９７ｍｇ、５７％）として、位置異性体の４：１混合物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ（主）  ４．２６（ｔ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．１９−４．１３（ｍ、４Ｈ）、４．０３（ｔ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．７８（ｔ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．６９（ｓ、２Ｈ）、３．４６（ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．７３−１．６５（ｍ、２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ（主）  ９３．３、８６．２、７１．５、７１．０、６９．６、６９．３、６９．０、６７．２、６２．０、３３．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１４Ｈ１７ＣｌＦｅＯ２Ｎａに対する計算値ｍ／ｚ  ３３１．０１６４  観測値３３１．０１４４（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：３５２ｍＶ。
【００９６】
実施例４：３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（４）の調製
【化１７】
2016540724.tif 000022
１−［（ジメチルアミノ）メチル］−２−（ｔ−ブチルチオ）−フェロセン（Ｅ）を、Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．，  １９８８，  ７，  １２９７−１３０２からの手順を使用して調製した。
【００９７】
１−［（アセトキシ）メチル］−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセン（Ｆ）
１−［（ジメチルアミノ）メチル］−２−（ｔ−ブチルチオ）−フェロセン（Ｅ）（１．２１ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）を、無水酢酸（１０ｃｍ３）に溶解した。褐色溶液をその後、１時間間還流させた；この時点でのＴＬＣにより、開始材料の完全消費が示された。溶液を室温まで冷却し、溶液をその後真空で、元の体積のおよそ９０％まで濃縮した。得られた褐色油をその後、ＥｔＯＡｃ（２５ｃｍ３）に溶解させ、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（２０ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（２０ｃｍ３）で洗浄した。褐色溶液をその後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、１−［（アセトキシ）メチル］−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセン（Ｆ）をオレンジ／褐色油として得（１．１２ｇ、９３％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ５．３７（ｄ、Ｊ＝１．４３Ｈｚ、２Ｈ）、４．５１（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４４（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．０７（ｔ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．０７（ｓ、５Ｈ）  １．８２（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、９Ｈ）。
【００９８】
２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンメタノール（Ｇ）
水素化アルミニウムリチウム（３６９ｍｇ、９．７１ｍｍｏｌ）を含むＥｔ２Ｏ（１５ｃｍ３）の懸濁液に、０℃で、１−［（アセトキシ）メチル］−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセン（Ｆ）（１．１２ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）を１滴ずつシリンジを介して添加した。添加が完了するとすぐに、スラリーを室温まで温め、３０分間撹拌した。この時間後、フラスコを０℃まで冷却し、その後、Ｈ２Ｏ（３６９μｌ）、続いて１５％ＮａＯＨ（ａｑ）（３６９μｌ）およびＨ２Ｏ（１．１ｃｍ３）の連続添加により反応停止させた。懸濁液をその後、室温まで温め、１０分間撹拌し、濾過し、真空で濃縮し、２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンメタノール（Ｇ）をオレンジ固体として得（７９０ｍｇ、８０％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．６４（ｓ、２Ｈ）、４．４１（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．３２（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｓ、５Ｈ）、４．０８（ｔ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．２８（ｓ、９Ｈ）。
【００９９】
３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（４）
２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンメタノール（Ｇ）（７７８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）をマグネチックスターラーバーが取り付けられた丸底フラスコに入れ、その後、１，３−プロパンジオール（１０ｃｍ３）に懸濁させた。黄色懸濁液をその後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（７９ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理し、フラスコを密閉し、窒素雰囲気下に置き、その後、１００℃まで加熱した。１０分後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。褐色溶液を室温まで冷却し、その後、Ｈ２Ｏ（２０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（２０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、ブライン（ｓａｔ）（２×１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（４）をオレンジ色の油状物として得た（８９９ｍｇ、９９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．５５（ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．４２（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４０（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．６、１Ｈ）、４．３２（ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｓ、５Ｈ）、４．０９（ｔ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．７３（ｑ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５７（ｑｔ、Ｊ＝９．０、５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．１０（ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．７４（ｐ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８８．６、７７．７、７７．５、７１．０、７０．７、７０．２、６９．５、６８．４、６２．０、４５．７、３３．２、３１．４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１８Ｈ２６ＦｅＯ２ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３８５．０９１８  観測値３８５．０９００（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：３５２ｍＶ。
【０１００】
実施例５：３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（５）の調製
【化１８】
2016540724.tif 000023
３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（４）（４５９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｃｍ３）に溶解し、フラスコをその後、窒素雰囲気下に置き、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、３−クロロ−過安息香酸（２５８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を一度に添加した。溶液をその後、０℃で１５分間撹拌した。この時間後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。反応をその後、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（１５ｃｍ３）の添加により停止させ、５分間激しく撹拌した。この時間後、有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｃｍ３）で抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、暗褐色油を得た。シリカクロマトグラフィーにより、ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、所望の生成物３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（５）を、オレンジ色のアモルファス固体として得た（３４９ｍｇ、７７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．８２（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ｓ、５Ｈ）、４．３４−４．２２（ｍ、２Ｈ）、４．１８（ｄ、Ｊ＝１１．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．１１（ｔ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．７７（ｑ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．５５（ｄｄｄ、Ｊ＝９．０、５．５、５．５、Ｈｚ、１Ｈ）、３．４６（ｄｄｄ、Ｊ＝９．０、５．５、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５９（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．７９（ｐ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．１９（ｓ、８Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８８．７、８７．１、７２．０、７１．４、６９．７、６９．４、６８．０、６６．９、６１．１、５５．８、３３．４、２３．４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１８Ｈ２６ＦｅＯ３ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４０１．０８４９７  観測値４０１．０８３８（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：４７４ｍＶ。
【０１０１】
実施例６：３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（６）の調製
【化１９】
2016540724.tif 000024
３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（５）（３４９ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｃｍ３）に溶解し、フラスコをその後、窒素雰囲気下に置き、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、３−クロロ−過安息香酸（１９０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を一度に添加した。溶液をその後、０℃で３０分間撹拌した。この時間後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。反応をその後、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（１５ｃｍ３）の添加により停止させ、５分間激しく撹拌した。この時間後、有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｃｍ３）で抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、暗褐色油を得た。シリカクロマトグラフィーにより、４０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（６）を黄色固体として得た（２５６ｍｇ、７０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．７７（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．４６（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．４０（ｓ、５Ｈ）、４．３６（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．０３（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．７１（ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１−３．５０（ｍ、２Ｈ）、２．０５（ｓ、１Ｈ）、１．７７−１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８６．７、８２．９、７３．７、７３．２、７２．１、７０．４、７０．１、６７．５、６１．７、５９．２、３３．２、２３．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）Ｃ１８Ｈ２７ＦｅＯ４ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４１８．０８３３  観測値４１８．０８２４（ｍ／ｚ＋Ｈ）；電気化学電位：５８４ｍＶ。
【０１０２】
実施例７：３−（（２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスピニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（７）の調製
【化２０】
2016540724.tif 000025
１−［（ジメチルアミノ）メチル］−２−（ｔ−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニル）−フェロセン（Ｈ）を、Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．，  １９８８，  ７，  １２９７−１３０２からの手順を適合させ、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−クロロホスフィンを求電子剤として用いて調製した。
【０１０３】
１−［（アセトキシ）メチル］−２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィニル）−フェロセン（Ｉ）
１−［（ジメチルアミノ）メチル］−２−（ｔ−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニル）−フェロセン（Ｈ）（４．８２ｇ、１２．５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、マグネチックスターラーバーを備えた丸底フラスコに入れ、アセトン（３０ｃｍ３）に溶解した。オレンジ溶液をその後、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、溶液を、Ｈ２Ｏ２（５０％ｗｔ）（８１２μｌ、１４．３ｍｍｏｌ、１．１５ｅｑ）で１滴ずつ、２分間にわたって処理した。添加が完了したらすぐにフラスコを室温まで温め、１５分間の撹拌後、反応が完了した。フラスコを０℃まで再冷却し、その後、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（ｓａｔ）（３０ｃｍ３）の添加により反応を停止させた。溶液をさらにＥｔＯＡｃ（５０ｃｍ３）で希釈し、有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（３０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、濃い赤色油を得た。この赤色油を、無水酢酸（３０ｃｍ３）に溶解させ、その後、１００℃で、２時間加熱した。この時間後、溶液を室温まで冷却し、褐色溶液をその後、元の体積のおよそ９０％まで濃縮した。得られた褐色油をその後、ＥｔＯＡｃ（５０ｃｍ３）に溶解させた。溶液をその後、２Ｍ  ＮａＯＨ（２０ｃｍ３）、Ｈ２Ｏ（２×２０ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（５０ｃｍ３）で洗浄した。有機層をその後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、褐色油を得た。塩基性アルミナクロマトグラフィーにより、ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、所望の生成物１−［（アセトキシ）メチル］−２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィニル）−フェロセン（Ｉ）を赤色油として得た（２．３０ｇ、４４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ５．８７（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．６２（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８−４．４７（ｍ、１Ｈ）、４．１９−４．０６（ｍ、６Ｈ）、３．８０（ｂｒｓ、１Ｈ）、１．８５（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｄ、ＪＰ−Ｈ  ＝  １６．７Ｈｚ、９Ｈ）、１．２１（ｄ、ＪＰ−Ｈ  ＝  １６．７Ｈｚ、９Ｈ）；３１Ｐ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１２２ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＰ  ５８．５９；  １３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  １７０．５、７２．５、７１．３、６２．４、６０．４、４２．２、４１．４、３８．０、３７．３、３７．２、３６．５、２７．７、２７．０、２６．９、２１．１、１４．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２１Ｈ３１ＦｅＯ３ＰＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４４１．１２５７  観測値４４１．１２６５（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）。
【０１０４】
２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスフィニル）−フェロセンメタノール（Ｊ）
水素化アルミニウムリチウム（６２８ｍｇ、１６．５ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を含む乾燥ジエチルエーテル（１０ｃｍ３）の懸濁液に窒素下０℃で、２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィニル−アセトキシメチルフェロセン（Ｉ）（２．３０ｇ、５．５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含む乾燥ジエチルエーテル（１０ｃｍ３）を１滴ずつシリンジを介して２分間にわたって添加した。添加が完了するとすぐに、フラスコをその後一晩還流させた。この時間後、フラスコをその後、０℃まで冷却し、反応をその後、Ｈ２Ｏ（６２８μｌ）、１５％ＮａＯＨ（ａｑ）（６２８μｌ）およびＨ２Ｏ（１．８８ｃｍ３）の連続添加により停止させた。オレンジスラリーをその後、室温で１０分間撹拌させた。固体をその後、濾過により除去し、その後、Ｅｔ２Ｏで洗液が透明になるまで洗浄した。オレンジ溶液をその後、真空で濃縮し、所望の生成物２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスフィニル）−フェロセンメタノール（Ｊ）をオレンジ粉末として得（２．０３ｇ、９９％）、さらに精製する必要はなかった。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ６．８４（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝１３．０、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９（ｄｄ、Ｊ＝１３．０、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｓ、５Ｈ）、４．１９−４．１３（ｍ、１Ｈ）、４．０４（ｄｄ、Ｊ＝４．３、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．７７（ｂｒｓ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝１３．８Ｈｚ、１０Ｈ）、０．９９（ｄ、Ｊ＝１３．８Ｈｚ、９Ｈ）；３１Ｐ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１２２ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＰ  ６２．２７；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ９８．３、７２．７、７２．６、７２．５、７２．３、７１．３、７０．２、７０．１、６０．７、３８．２、３７．３、３６．９、３６．１、２７．２、２６．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１９３０９ＦｅＯ２Ｐに対する計算値ｍ／ｚ  ３７７．２３４９  観測値３７７．２３０１（ｍ／ｚ＋Ｈ）。
【０１０５】
３−（（２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスピニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（７）
２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスフィニル−フェロセンメタノール（Ｊ）（３７６ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、１，３−プロパン−ジオール（５ｃｍ３）に懸濁させた。懸濁液を、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（３１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコを密閉し、その後、１００℃で、１５分間加熱した。フラスコを室温まで冷却し、溶液をＨ２Ｏ（１５ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（３０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、Ｈ２Ｏ（３×５ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄した。有機物を合わせ、その後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、褐色油を得た。塩基性アルミナクロマトグラフィーにより、ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、所望の生成物３−（（２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスピニル）−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（７）をオレンジ色の油状物として得た（１５７ｍｇ、３６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ５．４７（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．７７（ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．６−４．５２（ｍ、２Ｈ）、４．２１−４．１３（ｍ、７Ｈ）、４．０３−３．８４（ｍ、３Ｈ）、３．８１（ｂｒｓ、１Ｈ）、２．０９−１．９５（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、９Ｈ）、１．０５（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、９Ｈ）；３１Ｐ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１２２ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ６０．５３。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ９２．２、７２．９、７２．８、７２．４、７２．２、７２．２、７１．４、７１．３、７１．０、７１．０、７０．９、６９．１、６８．８、５９．４、３８．１、３７．３、３７．１、３６．３、３３．８、２７．５、２７．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２２Ｈ３５ＦｅＯ３ＰＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４５７．１６３９  観測値４５７．１６２６（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：４１９ｍＶ。
【０１０６】
実施例８：３−（２−トリブチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（８）の調製
【化２１】
2016540724.tif 000026
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−フェロセニル−１，３−ジオキサン（Ｋ）、（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−（トリブチルスタニル）−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｌ）および２−トリブチルスタニルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｍ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順に従い調製した。
【０１０７】
２−トリブチルスタニルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｍ）（４４７ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＥｔＯＨ：ＴＨＦ混合物（４：１）（５ｃｍ３）に溶解した。赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（４２ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）で処理し、赤色溶液をその後、室温で１時間撹拌した。この時間後、オレンジ色となった溶液を、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）で処理し、ＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、所望のアルコールをオレンジ色の油状物として得た。その油状物を、１，３−プロパンジオール（３ｃｍ３）に懸濁させ、その後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（２７ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコを密閉し、その後、１００℃まで１０分間加熱した。フラスコをその後、室温まで冷却し、溶液をＨ２Ｏ（１０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（２５ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（２−トリブチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（８）をオレンジ色の油状物として得た（２８０ｍｇ、５７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４３−４．３３（ｍ、２Ｈ）、４．２８（ｔ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．１８−４．０９（ｍ、７Ｈ）、３．７０（ｑ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．５８（ｄｄｄ、Ｊ＝９．１、５．６、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４９（ｄｄｄ、Ｊ＝９．１、５．６、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．８１−１．７３（ｍ、６Ｈ）、１．６３−１．４６（ｍ、６Ｈ）、１．３１−１．２５（ｍ  ８Ｈ）、１．０７（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ８９．９、７６．１、７２．７、７１．４、７１．２、６９．４、６９．２、６１．９、３３．１、３０．１、２８．３、１４．３、１１．２；１１５Ｓｎ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１１２ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＳｎ  −２０．７１。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２６Ｈ４４ＦｅＯ２ＳｎＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ５８７．１６１０  観測値５８７．１６０７（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：３０３ｍＶ。
【０１０８】
実施例９：３−（２−トリメチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（９）の調製
【化２２】
2016540724.tif 000027
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−フェロセニル−１，３−ジオキサン（Ｋ）、（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−（トリメチルシリル）−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｎ）および２−トリメチルシリルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｏ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順に従い調製した。
【０１０９】
２−トリメチルシリルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｏ）（２６６ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＥｔＯＨ：ＴＨＦ混合物（４：１）（５ｃｍ３）に溶解した。赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（４４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）で処理し、その後、室温で１時間撹拌した。この時間後、オレンジ色となった溶液を、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）で処理し、ＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、所望のアルコールをオレンジ色の油状物として得た。その油状物を、１，３−プロパンジオール（３ｃｍ３）に懸濁させ、その後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（２８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコを密閉し、その後、１００℃まで２分間加熱した。フラスコをその後、室温まで冷却し、溶液をＨ２Ｏ（１０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（２５ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物をオレンジ色の油状物として得た（１２４ｍｇ、３８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．２９（ｄ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．１５（ｄｄ、Ｊ＝２．３、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．９４−３．８８（ｍ、７Ｈ）、３．５４（ｑ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１−３．２６（ｍ、２Ｈ）  １．６７（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、１Ｈ）、１．６２−１．５１（ｍ、２Ｈ）、０．２８（ｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８８．２、７４．７、７３．０、７１．６、６９．８、６９．３、６８．４、６８．３、６１．０、３２．３、０．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１７Ｈ２６ＦｅＯ２ＳｉＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３６９．０９４９  観測値３６９．０９５４（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：２４８ｍＶ。
【０１１０】
実施例１０：３−（２−トリブチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１０）の調製
【化２３】
2016540724.tif 000028
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−フェロセニル−１，３−ジオキサン（Ｋ）、をＪ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順に従い調製した。
【０１１１】
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−（トリブチルシリル）−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｐ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順により、トリブチルシリルクロリドを求電子剤として使用して調製した。
【０１１２】
２−トリブチルシリルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｑ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順を適合させることにより調製した。
【０１１３】
２−トリブチルシリルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｑ）（４６１ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＥｔＯＨ：ＴＨＦ混合物（４：１）（５ｃｍ３）に溶解した。赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（５５ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）で処理し、赤色溶液をその後、室温で１時間撹拌した。この時間後、オレンジ色となった溶液を、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）で処理し、ＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、所望のアルコールをオレンジ色の油状物として得た。その油状物を、１，３−プロパンジオール（３ｃｍ３）に懸濁させ、その後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（３５ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコを密閉し、その後、１００℃まで２０分加熱した。フラスコをその後、室温まで冷却し、溶液をＨ２Ｏ（１０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（２５ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（２−トリブチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１０）をオレンジ色の油状物として得た（７１ｍｇ、１３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４６（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．３４（ｄｄ、Ｊ＝２．３、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｔ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１−４．０５（ｍ、７Ｈ）、３．７２（ｑ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．６３−３．４４（ｍ、２Ｈ）、１．８４（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．８０−１．７０（ｍ、２Ｈ）、１．６１−１．５４（ｍ、１２Ｈ）、１．１０−１．０１（ｍ、１５Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８８．８、７５．９、７３．７、７１．０、７０．９、７０．５、６９．５、６９．４、６１．９、３３．２、２７．７、２７．３、１４．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２６Ｈ４４ＦｅＯ２ＮａＳｉに対する計算値ｍ／ｚ  ４９５．２３５７  観測値４９５．２３８１（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：３６１ｍＶ。
【０１１４】
実施例１１：３−（２−トリメチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１１）の調製
【化２４】
2016540724.tif 000029
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−フェロセニル−１，３−ジオキサン（Ｋ）、をＪ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順に従い調製した。
【０１１５】
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−（トリメチルスタニル）−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｒ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順により、塩化トリメチルスズを求電子剤として使用して調製した。
【０１１６】
２−トリメチルスタニルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｔ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順を適合させることにより調製した。
【０１１７】
２−トリメチルスタニルフェロセンカルボキシアルデヒド（Ｔ）（３５６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＥｔＯＨ：ＴＨＦ混合物（４：１）（５ｃｍ３）に溶解した。その赤色溶液をその後、水素化ホウ素ナトリウム（４５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）で処理し、その赤色溶液をその後、室温で１時間撹拌した。この時間後、オレンジ色となった溶液を、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）で処理し、ＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、所望のアルコールをオレンジ色の油状物として得た。その油状物を、１，３−プロパンジオール（３ｃｍ３）に懸濁させ、その後、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（２９ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコを密閉しその後、１００℃まで２０分加熱した。フラスコをその後、室温まで冷却し、溶液をＨ２Ｏ（１０ｃｍ３）およびＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（２５ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（２−トリメチルスタニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１１）をオレンジ色の油状物として得た（１９０ｍｇ、４８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．１６−４．１０（ｍ、２Ｈ）、４．０５（ｔ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２−３．８６（ｍ、６Ｈ）、３．８５（ｄｄ、Ｊ＝２．２、１．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．４５（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．２７（ｄｄｔ  Ｊ＝２０．７、９．１、５．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．５４−１．４５（２Ｈ、ｍ）、０．２１（ｓｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ９０．１、７５．８、７２．７、７１．１、７０．９、７０．７、６９．１、６１．７、３３．１、−７．８；１１５Ｓｎ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１１２ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＳｎ  −９．０３。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１７Ｈ２６ＦｅＯ２ＮａＳｎに対する計算値ｍ／ｚ  ４６１．０２０１  観測値４６１．０２２１（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：２０７ｍＶ。
【０１１８】
実施例１２：３−（２−ビニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１２）の調製
【化２５】
2016540724.tif 000030
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−フェロセニル−１，３−ジオキサン（Ｋ）および（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−ホルミル−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｕ）を、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  １９９７，  ６２，  ６７３３−６７４５における手順に従い調製した。
【０１１９】
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−ビニル−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｖ）
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−ホルミル−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｕ）（４８１ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、乾燥ＴＨＦ（１５ｃｍ３）に溶解し、その後、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（９９９ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ、２ｅｑ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３１３ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ、２ｅｑ）で処理した。混合物をその後、室温で３時間撹拌した。この時間後、反応を、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）の添加により停止させた。有機層をその後分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−ビニル−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｖ）をオレンジ色の油状物として得た（１３７ｍｇ、２９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ６．８０（ｄｄ、Ｊ＝１７．６、１０．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．４２（ｄｄ、Ｊ＝１７．６、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．３５（ｓ、１Ｈ）、５．０８（ｄｄ、Ｊ＝１０．９、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５７（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．２５（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６（ｓ、５Ｈ）、３．９４（ｔ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．８８（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．５、５．５、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．４２（ｄｄｄ、Ｊ＝１０．１、１１．５、２．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５（ｄｄ、Ｊ＝１０．１、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０９−３．０３（ｍ、４Ｈ）、１．６５−１．４６（ｍ、１Ｈ）、１．０３−０．９２（ｍ、１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  １３４．７、１１２．４、１００．５、８５．４、８２．８、７６．７、７６．２、７０．８、６９．１、６８．１、６７．１、６６．９０、５９．４、２８．８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１８Ｈ１２２ＦｅＯ３Ｎａに対する計算値ｍ／ｚ  ３６５．０８１６  観測値３６５．０８１８（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）。
【０１２０】
３−（２−ビニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１２）
（ｒａｃ）−４−（メトキシメチル）−２−（α−ビニル−フェロセニル）−１，３−ジオキサン（Ｖ）（１３７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、パラ−トルエンスルホン酸一水和物（２００ｍｇ、１ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）と共にシュレンクチューブに入れた。フラスコを密閉し、その後、排気し、アルゴンを再充填するのを４回行った。フラスコに、その後、ＣＨ２Ｃｌ２（７ｃｍ３）およびＨ２Ｏ（３ｃｍ３）を入れた。二相性混合物をその後、１８時間激しく撹拌した。この時間後、有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、アルデヒドを赤色油として得た。これをその後、ＥｔＯＨ：ＴＨＦ（４：１）（５ｃｍ３）に溶解させ、水素化ホウ素ナトリウム（２７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）で処理した。赤色溶液をその後、室温で３０分撹拌した。この時点で、オレンジ溶液を、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で処理し、その後、ＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、Ｈ２Ｏ（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、標的アルコールをオレンジ色の油状物として得た。これをその後、１，３−プロパンジオール（３ｃｍ３）に溶解し、溶液を、イッテルビウム（ＩＩＩ）トリフラート（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）で処理した。フラスコを密閉し、その後、１００℃で、１５分間加熱した。フラスコをその後、室温まで冷却し、褐色溶液をその後、ＥｔＯＡｃ（１０ｃｍ３）およびＨ２Ｏ（１０ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、Ｈ２Ｏ（２５ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、４０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（２−ビニル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１２）をオレンジ色の油状物として得た（３ｍｇ、２．５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ６．４７（ｄｄ、Ｊ＝１７．５、１０．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９（ｄｄ、Ｊ＝１７．５、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．０５（ｄｄ、Ｊ＝１０．９、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．４２−４．２９（ｍ、２Ｈ）、４．０８−３．９１（ｍ、６Ｈ）、３．８７（ｓ、５Ｈ）、３．５４（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、５．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１−３．２８（ｍ、２Ｈ）、１．７０（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．５３（ｄｔ、Ｊ＝７．６、５．８Ｈｚ、２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  １３３．７、１１２．７、８２．９、８２．３、７１．５、７０．３、６９．１、６８．４、６８．２、６７．１、６４．７、６１．９、３３．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１６Ｈ２０ＦｅＯ２Ｎａに対する計算値ｍ／ｚ  ３２３．０６３０  観測値３２３．０６４６（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：２２０ｍＶ。
【０１２１】
実施例１３：３−（２−ヨード−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１３）の調製
【化２６】
2016540724.tif 000031
３−（２−トリブチルシリル−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１２）（２６５ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２．５ｃｍ３）に溶解し、その後、ヨウ素（１３０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）で処理した。暗褐色溶液をその後、室温で１６時間撹拌した。この時間後、反応を、チオ硫酸ナトリウム（ｓａｔ）（５ｃｍ３）の添加により停止させた。有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、３０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物３−（２−ヨード−フェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（１３）をオレンジ色の油状物として得た（１５ｍｇ、８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．３６−４．２８（ｍ、２Ｈ）、４．１９（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｓ、５Ｈ）、３．９１（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．７１（ｄｄ、Ｊ＝１０．６、５．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１−３．４７（ｍ、２Ｈ）、１．７６１．６５（ｍ、２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８５．８、７５．６、７２．１、６９．７、６９．７、６９．６、６８．９、６１．９、４５．３、３３．１、３２．３、２３．４、１４．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１４Ｈ１７ＦｅＯ２ＩＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４２２．９５２０  観測値４２２．９５３８（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：３５５ｍＶ。
【０１２２】
実施例１４：２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１４）の調製
【化２７】
2016540724.tif 000032
エチル−３−フェロセニルアクリレート（Ｗ）をＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，  ２００９，  ６５，  ６７２−６７６における手順に従い調製した。
【０１２３】
エチル−３−フェロセニルプロパノエート（Ｘ）
エチル−３−フェロセニルアクリレート（Ｗ）（７．４３ｇ、２３．３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＭｅＯＨ（１２５ｃｍ３）に溶解し、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、炭素上のパラジウム（１０％ｗｔ）（１．５ｇ）およびギ酸アンモニウム（５．８７ｇ、９３．２ｍｍｏｌ、４ｅｑ）を順次添加した。黒色懸濁液を室温まで温め、その後１時間撹拌した。懸濁液をセライトに通して濾過し、固体を、ＭｅＯＨ（１００ｃｍ３）で洗浄した。オレンジ溶液をその後、真空で濃縮し、オレンジ色の固体を得、これをその後、ＥｔＯＡｃ（１００ｃｍ３）およびＮａＨＣＯ３（５０ｃｍ３）に溶解させた。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、所望の生成物エチル−３−フェロセニルプロパノエート（Ｘ）をオレンジ色の油状物として得（４．８６ｇ、７３％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＨ：４．２（ｄ、Ｊ＝７．０、２Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ）、４．０２（ｓ、７Ｈ）、２．９３−２．８７（ｍ、２Ｈ）、２．５４−２．４９（ｍ、２Ｈ）、２．５２（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．３７（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＣ：１７０．５、７７．５、７７．０、７６．６、６９．８、６１．３、３４．８、２３．２、１５．３。
【０１２４】
フェロセンプロパノール（Ｙ）
水素化アルミニウムリチウム（１．９４ｇ、５１ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（１２０ｃｍ３）の懸濁液に、０℃で、エチル−３−フェロセニルプロパノエート（Ｘ）（４．８６ｇ、１７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（３０ｃｍ３）を１滴ずつ２５分間にわたって添加した。添加が完了するとすぐに、懸濁液を室温まで温め、１時間撹拌した。この時間後、フラスコを０℃まで冷却し、反応を、Ｈ２Ｏ（１．９ｃｍ３）、１５％ＮａＯＨ（ａｑ）（１．９ｃｍ３）およびＨ２Ｏ（５．７ｃｍ３）を順次に滴加することにより停止させた。黄色懸濁液をその後、室温まで温め、１０分間撹拌した。懸濁液を濾過し、固体を、Ｅｔ２Ｏ（７５ｃｍ３）で洗液が透明となるまで洗浄した。オレンジ溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、フェロセンプロパノール（Ｙ）をオレンジ色の油状物として得（４．１９ｇ、９９％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＨ：４．１９（ｓ、９Ｈ）、３．６５（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．５５（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．７０（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）；δＣ：７７．８、７７．６、７７．４、７６．９、６３．４、３８．５、２９．４。
【０１２５】
エチル２−フェロセンエトキシアセテート（Ｚ）
フェロセンプロパノール（Ｙ）（１．９３ｇ、７．９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、丸底フラスコに入れ、ジアゾ酢酸エチル（５５２μｌ、５．２６ｍｍｏｌ、０．６６ｅｑ）および塩化インジウム（ＩＩＩ）（４６４ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、４０ｍｏｌ％）で処理した。スラリーを室温で窒素下にて１６時間撹拌した。この時間後、スラリーをＥｔＯＡｃ（２５ｃｍ３）およびＨ２Ｏ（２５ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、ブライン（ｓａｔ）（５０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、１５％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物エチル２−フェロセンエトキシアセテート（Ｚ）をオレンジ色の油状物として得た（９９３ｍｇ、５７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．１１−４．０６（ｍ、８Ｈ）、４．０４−３．９８（ｍ、５Ｈ）、３．９４（ｓ、２Ｈ）、２．５０（ｄｄ、Ｊ＝８．７、６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９４−１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．００（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  １７０．５、８９．２、７１．６、６９．２、６８．９、６８．３、６７．９、６０．６、３２．０、２６．６、１４．５。
【０１２６】
２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１４）
水素化アルミニウムリチウム（３４３ｍｇ、９ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（１０ｃｍ３）の懸濁液に、０℃で、エチル２−フェロセンエトキシアセテート（Ｚ）（９９３ｍｇ、３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（５ｃｍ３）を１滴ずつ５分間にわたって添加した。懸濁液を室温まで温め、３０分間撹拌した。この時間後、フラスコを、０℃まで冷却し、反応を、Ｈ２Ｏ（３４３μｌ）、１５％ＮａＯＨ（ａｑ）（３４３μｌ）およびＨ２Ｏ（１．２ｃｍ３）を順次に滴加することにより停止させた。黄色懸濁液をその後、室温まで温め、１０分間撹拌した。懸濁液を濾過し、固体をＥｔ２Ｏ（２５ｃｍ３）で、洗液が透明になるまで、洗浄した。オレンジ溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ油を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノールをオレンジ色の油状物として得た（７３９ｍｇ、８５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ３．９０（ｓ、５Ｈ）、３．８５（ｓ、４Ｈ）、３．４７−３．３５（ｍ、２Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、５．４Ｈｚ、４Ｈ）、２．２９−２．１４（ｍ、２Ｈ）、１．６７−１．４７（ｍ、３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ８９．１、７２．６、７１．１、６９．２、６８．８、６７．９、６２．３、３１．９、２６．８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１５Ｈ２１ＦｅＯ２に対する計算値ｍ／ｚ  ２８９．１５５３  観測値２８９．０９８７（ｍ／ｚ＋Ｈ）；電気化学電位：１１４ｍＶ。
【０１２７】
実施例１５：２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１５）の調製
【化２８】
2016540724.tif 000033
２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ−フェロセンカルボキシアルデヒド（ＡＡ）
２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンメタノール（Ｇ）（７４１ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、マンガン酸バリウム（２．４９ｇ、９．７ｍｍｏｌ、４ｅｑ）と共にシュレンクチューブに入れた。フラスコを密閉し、その後、排気し、アルゴン下で再充填するのを４回行った。フラスコに、その後、ベンゼン（１５ｃｍ３）を入れた。得られた濃青色スラリーをその後、室温で１６時間撹拌した。この時間後、スラリーをセライトに通して濾過し、固体を、Ｅｔ２Ｏ（２５ｃｍ３）で、洗液が透明になるまで洗浄した。得られた赤色溶液を真空で濃縮し、所望のアルデヒド２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ−フェロセンカルボキシアルデヒド（ＡＡ）を赤色油として得（６６８ｍｇ、９２％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  １０．６６（ｓ、１Ｈ）、５．０９−５．０１（ｍ、１Ｈ）、４．４５（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．１９（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４（ｓ、５Ｈ）、１．１４（ｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  １９３．４、８２．３、８１．７、８１．１、７３．２、７１．５、６９．６、４５．９、３０．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１５Ｈ１８ＦｅＯＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３２５．０３２５  観測値３２５．０３２５（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）
【０１２８】
エチル−３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ−フェロセニル）アクリレート（ＡＢ）
水素化ナトリウム（６０％油中分散物）（１０９ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）を含む乾燥ＴＨＦ（１０ｃｍ３）の懸濁液に、０℃でホスホノ酢酸トリエチル（５７１ｍｌ、２．８５ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）を１滴ずつ５分間にわたって添加した。添加が完了するとすぐに溶液を室温まで温め、３０分間撹拌した。この時間後、溶液を、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、２−ｔｅｒｔ−ブチル−フェロセンカルボキシアルデヒド（ＡＡ）（６６８ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含む乾燥ＴＨＦ（５ｃｍ３）を１滴ずつ５分間にわたり添加した。添加が完了したらすぐにフラスコを室温まで温め、さらに３０分間撹拌した。この時間後、反応を、Ｈ２Ｏ（２０ｃｍ３）の添加により停止させた。有機層をその後分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、赤色油を得た。シリカクロマトグラフィーにより、５％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物エチル−３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ−フェロセニル）アクリレート（ＡＢ）を赤色油として得た（８２３ｍｇ、９９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ８．５０（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．４８（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４４（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｑｄ、Ｊ＝７．１、２．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．１６（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｓ、４Ｈ）、１．２１（ｓ、９Ｈ）、１．１４（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  １８５．５、１６７．２、１４４．８、１１６．４、８３．４、７９．９、７２．６、７１．７、７１．４、６７．３、６０．５、５１．１、４６．２、４０．４、３１．１、２０．３、１４．８、１０．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１９Ｈ２４ＦｅＯ２ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３９５．０７４４  観測値３９５．０７４８（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）。
【０１２９】
エチル−３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセニル）プロパノエート（ＡＣ）
エチル−３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ−フェロセニル）アクリレート（ＡＢ）（８２３ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、メタノール（１５ｃｍ３）に溶解し、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、炭素上のパラジウム（１０％ｗｔ）（１ｇ）およびギ酸アンモニウム（８３１ｍｇ、１３．２ｍｍｏｌ、６ｅｑ）を添加した。懸濁液を室温まで温め、４時間撹拌した。この時間後、懸濁液をセライトに通して濾過し、固体を、メタノール（２５ｃｍ３）で洗液が透明になるまで洗浄した。オレンジ溶液をその後、真空で濃縮し、オレンジ固体を得た。これを、ＥｔＯＡｃ（２５ｃｍ３）とＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（２５ｃｍ３）の間で分配させた。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、所望の材料エチル−３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセニル）プロパノエート（ＡＣ）をオレンジ色の油状物として得（６１７ｍｇ、７５％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４２（ｄｄ、Ｊ＝２．３、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４−４．１０（ｍ、３Ｈ）、４．０８（ｓ、５Ｈ）、４．０４（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．１７（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．４、８．９、６．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．００（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．４、８．９、６．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．７９−２．６０（ｍ、２Ｈ）、１．２６（ｓ、９Ｈ）、１．０９（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  １７３．１、９２．３、７７．３、７６．９、７０．７、６９．０、６８．４、６０．６、４５．９、３５．６、３１．４、２３．８、１４．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１９Ｈ２６ＦｅＯ２ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３９７．０９００  観測値３９７．０９１７（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）。
【０１３０】
２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンプロパノール（ＡＤ）
水素化アルミニウムリチウム（１８８ｍｇ、４．９ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（３．５ｃｍ３）の懸濁液に、０℃でエチル−３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセニル）プロパノエート（ＡＣ）（６１７ｍｇ、１６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（４ｃｍ３）を１滴ずつ２分間にわたって添加した。添加が完了したらすぐに、懸濁液を室温まで温め、３０分間撹拌した。この時間後、フラスコを、０℃まで冷却し、反応を、Ｈ２Ｏ（１８８μｌ）、１５％ＮａＯＨ（ａｑ）（１８８μｌ）およびＨ２Ｏ（５４６μｌ）を順次に滴加することにより停止させた。黄色懸濁液をその後、室温まで温め、１０分間撹拌した。懸濁液を濾過し、固体を、Ｅｔ２Ｏ（１５ｃｍ３）で、洗液が透明になるまで洗浄した。オレンジ溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンプロパノール（ＡＤ）をオレンジ色の油状物として得（３８１ｍｇ、６６％）、さらに精製する必要はなかった。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４５（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７−４．１５（ｍ、１Ｈ）、４．１４（ｓ、５Ｈ）、４．０９（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．５６（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．７９（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．９、１１．２、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．５８（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．９、１１．２、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．９７−１．７１（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ９３．５、７７．２、７６．７、７０．７、６９．１、６８．３、６３．２、４５．８、３４．０、３１．８、２４．８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１７Ｈ２４ＦｅＯＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３５５．０７９４  観測値３５５．０７８０（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）。
【０１３１】
エチル２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセン）エトキシアセテート（ＡＥ）
２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセンプロパノール（ＡＤ）（４８３ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、丸底フラスコに入れ、ジアゾ酢酸エチル（５５２μｌ、５．２６ｍｍｏｌ、４ｅｑ）および塩化インジウム（ＩＩＩ）（１１４ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、４０ｍｏｌ％）で処理した。スラリーを室温で窒素下にて１６時間撹拌した。この時間後、スラリーをＥｔＯＡｃ（２５ｃｍ３）およびＨ２Ｏ（１５ｃｍ３）で希釈した。有機層を分離し、水層を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｃｍ３）で逆抽出した。有機物を合わせ、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、１０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物をオレンジ色の油状物として得た（１６４ｍｇ、３０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４５（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１９（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｓ、５Ｈ）、４．０９−３．９７（ｍ、９Ｈ）、３．５９（ｔｄ、Ｊ＝８．６、２．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．０、１１．１、５．６Ｈｚ  １Ｈ）、２．６９（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．０、１１．１、５．６Ｈｚ  １Ｈ）、２．１８−１．９１（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｓ、９Ｈ）、１．０２（ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  １７０．６、９３．５、７７．２、７６．７、７２．２、７０．７、６９．２、６８．９、６８．３、６１．０、６０．７、４５．８、３１．５、３１．２、２５．０、１４．７、１４．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２１Ｈ３０ＦｅＯ３ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４４１．１１６２  観測値４４１．１１７９（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）。
【０１３２】
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１５）
水素化アルミニウムリチウム（４４ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（２ｃｍ３）の懸濁液に、０℃で、エチル２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェロセン）エトキシアセテート（ＡＥ）（１６４ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含む乾燥Ｅｔ２Ｏ（１ｃｍ３）を１滴ずつ２分間にわたって添加した。懸濁液を室温まで温め、３０分間撹拌した。この時間後、フラスコを０℃まで冷却し、反応を、Ｈ２Ｏ（４４μｌ）、１５％ＮａＯＨ（ａｑ）（４４μｌ）およびＨ２Ｏ（１３２ｃｍ３）を順次に滴加することにより停止させた。黄色懸濁液をその後、室温まで温め、１０分間撹拌した。懸濁液を濾過し、固体を、Ｅｔ２Ｏ（１０ｃｍ３）で、洗液が透明になるまで洗浄した。オレンジ溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。シリカクロマトグラフィーにより、２０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘで溶離して精製し、所望の生成物２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１５）をオレンジ色の油状物として得た（４１ｍｇ、２８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４６（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１９（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１５（ｓ、５Ｈ）、４．１０（ｔ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．６７（ｄｄ、Ｊ＝９．７、５．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．４３（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ  ２Ｈ）、２．８１（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．９、１１．１、５．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．６３（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．９、１１．１、５．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．１３（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．０９−１．８５（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ９３．４、７７．２、７６．８、７２．８、７１．８、７０．７、６９．１、６８．３、６２．３、４５．８、３１．５、３１．２、２５．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１９Ｈ２８ＦｅＯ２ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ３９９．１０５７  観測値３９９．１０６３（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：２９７ｍＶ。
【０１３３】
実施例１６：２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１６）の調製
【化２９】
2016540724.tif 000034
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１５）（４０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｃｍ３）に溶解し、フラスコをその後、窒素雰囲気下に置き、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、３−クロロ−過安息香酸（２２ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を一度に添加した。溶液をその後、０℃で１５分間撹拌した。この時間後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。反応をその後、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（５ｃｍ３）の添加により停止させ、５分間激しく撹拌した。この時間後、有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｃｍ３）で抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、暗褐色油を得た。シリカクロマトグラフィーにより、ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、所望の生成物２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１６）を黄色固体として得た（１２ｍｇ、２９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．８１（ｓ、１Ｈ）、４．４１（ｓ、５Ｈ）、４．１０（ｔ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．０７（ｓ、１Ｈ）、３．７５（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．４６（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．４０（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．６８（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．２、１１．５、４．７Ｈｚ  １Ｈ）、２．３４（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．２、１１．５、４．７Ｈｚ  １Ｈ）、２．０−１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．９０−１．７８（ｍ、１Ｈ）、１．１３（ｓ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ９２．１、８８．０、７３．０、７１．４、６９．６、６８．６、６５．９、６２．３、５６．１、３０．６、２５．５、２３．４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１９Ｈ２８ＦｅＯ３ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４１５．１００６  観測値４１５．１０１０（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：３９７ｍＶ。
【０１３４】
実施例１７：２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１７）の調製
【化３０】
2016540724.tif 000035
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１６）（１２ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｃｍ３）に溶解し、窒素雰囲気下に置き、０℃まで冷却した。冷却したらすぐに、３−クロロ−過安息香酸（６．３ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を一度に添加した。溶液をその後、０℃で１５分間撹拌した。この時間後、ＴＬＣ分析により、開始材料の完全消費が示された。反応をその後、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（５ｃｍ３）の添加により停止させ、５分間激しく撹拌した。この時間後、有機層を分離し、水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｃｍ３）で抽出した。有機物を合わせ、その後、ブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、暗褐色油を得た。シリカクロマトグラフィーにより、ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、所望の生成物２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１７）を黄色油として得た（４ｍｇ、３３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．５８（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１（ｓ、４Ｈ）、４．０９（ｄｄ、Ｊ＝２．４、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｔ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．６５（ｔ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．４−３．３４（ｍ、４Ｈ）、３．１５（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．３、１１．９、５．２  １Ｈ）、２．６５（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．３、１１．９、５．２、Ｈｚ  １Ｈ）、２．０−１．７３（ｍ、４Ｈ）、１．２３（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  １０１．９、９１．８、８８．７、８２．９、７５．７、７２．８、７２．７、７２．０、７１．５、７１．０、６９．３、６２．、５９．４、３６．２、３０．９、２４．７、２４．１、２４．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ１９Ｈ２８ＦｅＯ４ＳＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ４３１．０９５５  観測値４３１．０９５４（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；電気化学電位：４８９ｍＶ。
【０１３５】
実施例１８：２−シアノエチル−（２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール）ジイソプロピル−ホスホラミダイトの調製
【化３１】
2016540724.tif 000036
オーブン乾燥させた、マグネチックスターラーが取り付けられた１００ｃｍ３丸底フラスコに２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール（１４）（７５３ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を添加した。フラスコをその後密閉し、Ｎ２でパージした。黄色粉末をその後、乾燥ＴＨＦ（２５ｃｍ３）に溶解し、オレンジ溶液を得、これをその後、直ちに、ＤＩＰＥＡ（１．９５ｍｌ、１１．２ｍｍｏｌ、４．３ｅｑ）で処理した。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホラミダイト（１ｇ、４．２ｍｍｏｌ、１．６ｅｑ）をその後、１４の溶液に２分間にわたって添加した。完了したらすぐに、オレンジ溶液を、１０分間撹拌させた。Ｈ２Ｏ（２００μｌ）をその後、添加し、オレンジ溶液を、さらに３０分間窒素下で撹拌させた。反応をその後、ＥｔＯＡｃ：ＴＥＡ（１：１、２５ｃｍ３）の添加により停止させた。混合物をその後、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄した。オレンジ有機層をその後、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、黄色油を得た。シリカクロマトグラフィー（φ５×１０ｃｍ３、ＣＨ２Ｃｌ２ウェットロード）により、１０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘ＋１％トリエチルアミンで溶離して、窒素出口ストリーム下で精製し、所望の生成物２−シアノエチル−（２−（３−フェロセニルプロポキシ）エタノール）ジイソプロピルホスホラミダイトをオレンジ色の油状物として得た（９４６ｍｇ、７８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δＨ  ４．０９（ｓ、５Ｈ）、４．０６−４．０４（ｍ、４Ｈ）、３．８８−３．７９（ｍ、２Ｈ）、３．６０（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．６５（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．４４−２．３２（ｍ、２Ｈ）、１．７９（ｄｔ、Ｊ＝１４．１、６．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δＣ  １１７．７、８８．７、７０．９、７０．８、７０．７、６８．４、６８．０、６７．１、６２．８、６２．５、５８．６、５８．３、４３．１、４２．９、３１．０、２６．０、２４．７、２４．６、２４．６、２４．５、２０．４、２０．３；  ３１Ｐ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１２２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δＰ  １４９．１８。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ２４Ｈ３７ＦｅＮ２Ｏ３ＰＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ５１１．１８８６  観測値５１１．１８９３（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）；
【０１３６】
実施例１９：２−シアノエチル−（３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール）ジ−イソ−プロピル−ホスホラミダイト
【化３２】
2016540724.tif 000037
オーブン乾燥させた、マグネチックスターラーが取り付けられた１００ｃｍ３丸底フラスコに、３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（２）（１．１２ｇ、２．８ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を添加した。フラスコをその後密閉し、Ｎ２でパージした。黄色粉末をその後、乾燥ＴＨＦ（２５ｃｍ３）に溶解し、オレンジ溶液を得、これをその後、直ちに、ＤＩＰＥＡ（１．９５ｍｌ、１１．２ｍｍｏｌ、４ｅｑ）で処理した。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホラミダイト（１ｇ、４．２ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）をその後、２溶液に２分間にわたって添加した。完了するとすぐに、オレンジ溶液を、１０分間撹拌させた。Ｈ２Ｏ（２００μｌ）をその後添加し、オレンジ溶液を、さらに３０分間窒素下で撹拌させた。反応をその後、ＥｔＯＡｃ：ＴＥＡ（１：１、２５ｃｍ３）の添加により停止させた。混合物をその後、ＮａＨＣＯ３（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）およびブライン（ｓａｔ）（１０ｃｍ３）で洗浄した。オレンジ有機層をその後、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、その後、真空で濃縮し、黄色油を得た。シリカクロマトグラフィー（φ５×１０ｃｍ３、ＣＨ２Ｃｌ２ウェットロード）により、１０％ＥｔＯＡｃ：ｎ−Ｈｅｘ＋１％トリエチルアミンで溶離して、窒素出口ストリーム下で精製し、所望の生成物をオレンジ色の油状物として得た（９９５ｍｇ、５９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＨ  ４．４３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．３），４．３８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．３）  ３．９９−３．７５（ｍ、２Ｈ）、３．７２−３．５６（ｍ、４Ｈ）、３．５２−３．３３（ｍ、２Ｈ）、２．０−１．７７（ｍ、１０Ｈ）、１．７３（ｓ、２１Ｈ）、１．２３（ｔ、Ｊ＝６．４、６Ｈ）；３１Ｐ｛１Ｈ｝  ＮＭＲ（１２２ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＰ  １４８．７５（ｓ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６）  δＣ  ９０．４、８０．４、８０．２、７９．２、７８．０、７１．９、６６．７、６６．５、６３．９、６１．３、５９．１、４７．２、４３．７、４３．６、３７．３、３２．７、３０．８、２５．１、２５．０、２５．０、２０．４、１６．６、１０．２、１０．１、９．９３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ  μＴＯＦ）  Ｃ３２Ｈ５３ＦｅＮＯ３ＰＮａに対する計算値ｍ／ｚ  ６２３．３０４１  観測値６２３．３０３１（ｍ／ｚ＋Ｎａ＋）
【０１３７】
電気化学データにより、発明の化合物は有用な電気化学的に活性な標識を提供することが示される。標識は、所望の範囲の値内の電気化学シグナルを提供するために使用され得る。それらは、例えば、それらの他の標識用化合物が、問題になっているアッセイにおける不利な特性、例えば、アッセイ中に存在する不純物または他の成分との不適合性または測定条件との不適合性（それらのいずれも測定感度に影響する可能性がある）場合、類似の電位値を有する他の標識用化合物の代替標識として有用であり得る。その上、あるいは代わりに、それらは、単一試料において２つ以上の決定を提供するために１を超える標識が存在する多重アッセイにおいて１つ以上の他の標識と共に使用され得、そのような状況における異なる電気化学特性を有する２つ以上の標識の使用は、決定される個々の種に関連する測定間の有効な区別を可能にする（例えば、実施例２２を参照されたい）。発明の化合物はまた、一貫した電気化学応答を与え、これにより、アッセイにおける内部標準として有用なものとなる。
【０１３８】
実施例２０−標識のタンパク質への結合
発明の標識は、例えば、ペプチド中のリジン残基の遊離アミンを介してペプチドに付着される。付着は、従来の技術、例えば、活性ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）エステルを形成するための標識用化合物の官能化、およびその官能化されたエステルとペプチドの遊離アミン基との反応により達成され得る。
【０１３９】
実施例２１−標識の粒子への結合
ビオチン分子を標識、例えば上記実施例のいずれかにおいて製造された標識に結合させる。ビオチン化は、自動化オリゴヌクレオチドシンセサイザーにおいて、または標準研究室条件を使用して、フェロセニルホスホラミダイト標識の、ビオチンのＮＨＳエステルとの反応により実施することができる。
【０１４０】
常磁性ストレプトアビジン粒子を×３（リン酸緩衝液）で洗浄し、ビオチン化標識と混合し、続いて１時間、室温で混合しながら、インキュベートする。粒子を×２（リン酸緩衝液）洗浄し、×１（ＰＣＲ緩衝液）洗浄する。それらを、最終緩衝液（ＰＣＲ緩衝液）中に再懸濁させる。各洗浄工程後、上清を電気化学シグナルに対し試験し、必要に応じて、上清が遊離電気化学標識の徴候を示さなくなるまで洗浄を繰り返す。
【０１４１】
これらの粒子を、観察された電気化学シグナルが、磁性粒子に結合された標識に起因することを実証するために、ある濃度範囲において、粒子の磁気捕捉およびある範囲の緩衝液体積における再懸濁を使用してアッセイする。
【０１４２】
実施例２２−多重ＰＣＲアッセイ
フェロセン化合物２、１４および６をそれらの対応するホスホラミダイトに、本明細書で記載される手順を使用して変換させた。２つのジフェロセン標識もまた、ホスホラミダイト、すなわち６−（ビス−メチルフェロセニル）アミノ）ヘキサン−１−オール（「ｄｉ−１」）および６−（ビス（（１’−クロロフェロセニル）１−メチルフェロセニル）アミノ）ヘキサン−１−オール（「ｄｉ−２」）に変換した。標準固相カップリング法を使用して、これらの５つのホスホラミダイトをその後、５’端で、それぞれ、特定の遺伝子を検出するように設計された５つのオリゴヌクレオチドプローブに結合させた。標識およびプローブ標的は下記の通りであった：
【表４】
2016540724.tif 000038
ＰＣＲを様々な試料上で、この表中で列挙される５つの標的遺伝子に対し設計されたプライマーを使用して実施した。別々の増幅物を合わせて５重混合物を得、５つの標識されたプローブをその後、この混合物に、Ｔ７エクソヌクレアーゼと共に添加した。この混合物をインキュベートし、検出を、本質的に、Ｐｅａｒｃｅ  ｅｔ  ａｌ．において提示されるように、スクリーン印刷された電極を使用して実施した。
【０１４３】
図１は６つの重ねたボルタモグラムを示す：３つは、様々な標的遺伝子（陽性対照）を含む試料に対して実施し、３つはブランク試料（陰性対照）に対して実施した：
【０１４４】
３つの陰性対照試料は、−０．５〜＋０．７ボルトで視認可能なピークを示さない。対照的に、３つの陽性対照試料はそれぞれ、５つの別々のピークを示す。左から右へ、これらのピークは標識２、１４、ｄｉ−１、ｄｉ−２、および６に対応する。よって、発明のモノフェロセン標識は、多重アッセイを含む核酸ハイブリダイゼーションアッセイにおける標識として有用であり、それらはまた、ジフェロセン標識と組み合わせて使用することができる。
【０１４５】
実施例２３−再現性実験
３−（ノナメチルフェロセニルメトキシ）プロパン−１−オール（化合物例２）をオリゴヌクレオチドに、標準条件を用いてコンジュゲートさせた。得られたプローブをＤＮＡの１０００コピーを増幅する５２の別々のＰＣＲにおいて５μＭの濃度で使用した。プローブの電気化学検出により図２の電流データが得られた。
【０１４６】
このデータにより、発明の化合物が、一貫した、再現性のある電気化学シグナルを与えることが示される。これにより、発明の化合物は、アッセイにおいて、例えば内部標準として特に有用なものとなる。
【０１４７】
発明を、以上、ほんの一例として記載してきたが、改変が可能であり、それらは発明の範囲および精神の範囲内にあることが理解されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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2016540724.tif 000045
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