(57)【要約】個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、およびＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つの発現メディエーター、またはこれらの発現メディエーターの組み合わせを含む検出組成物と、生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法を提供する。ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、およびＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはこれらの発現メディエーターの組み合わせに特異的である、核酸プローブ、抗体、または精製されたバイオマーカーを有する組成物を提供する。
2016507235.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳卒中症状の発症の時点を決定する方法であって、前記方法は：
個体から生物学的サンプルを取得する工程；
前記生物学的サンプルと、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、およびカルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、または前記発現メディエーターの組み合わせを含む検出組成物とを接触させる工程であって、ここで、前記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに
前記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項２】
脳卒中症状の発症の時点を決定する方法であって、前記方法は：
個体から生物学的サンプルを取得する工程；
前記生物学的サンプルと、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４のうちの少なくとも１つの発現メディエーター、または前記発現メディエーターの組み合わせに対応する検出可能なポリヌクレオチドまたは機能的ポリヌクレオチドフラグメントのパネルとを接触させる工程であって、ここで、前記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；
検出可能な応答を形成する工程；ならびに
前記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項３】
脳卒中症状の発症の時点を決定する方法であって、前記方法は：
個体から生物学的サンプルを取得する工程；
前記生物学的サンプルと、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、または前記発現メディエーターの組み合わせに対応する検出可能なオリゴヌクレオチドのパネルとを接触させる工程であって、ここで、前記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；
検出可能な応答を形成する工程；ならびに
前記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項４】
脳卒中症状の発症の時点を決定する方法であって、前記方法は：
個体から生物学的サンプルを取得する工程；
前記生物学的サンプルと、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、または前記発現メディエーターの組み合わせについての検出可能な抗体のパネルとを接触させる工程であって、ここで、前記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；
検出可能な応答を形成する工程；ならびに
前記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項５】
脳卒中症状の発症の時点を決定する方法であって、前記方法は：
ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、ｍＲＮＡを前記個体のｍＲＮＡから誘導し、前記ｍＲＮＡを標識し、そしてＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターのうちの少なくとも１つまたは前記発現メディエーターの組み合わせを含む検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程であって、ここで、前記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；
検出可能な応答を形成する工程；ならびに
前記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項６】
ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターのうちの少なくとも１つまたは前記発現メディエーターの組み合わせに特異的である核酸プローブを含む、バイオマーカーの検出のための組成物。
【請求項７】
ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターのうちの少なくとも１つまたは前記発現メディエーターの組み合わせに特異的である少なくとも１つの抗体を含む、バイオマーカーの検出のための組成物。
【請求項８】
ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターのうちの少なくとも１つまたは前記発現メディエーターの組み合わせに特異的である精製されたバイオマーカー、ならびに対応するそれらのコード核酸を含む、組成物。
【請求項９】
虚血性脳卒中症状または他の神経学的疾患の発症の時点を決定するための方法であって、前記方法は：
ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、核酸を前記個体のｍＲＮＡから誘導し、前記核酸を標識し、そして配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、および配列番号８のうちの少なくとも１つの一部であるプローブを含有する検出メカニズムに対して標識された前記核酸をハイブリダイズさせる工程；
前記サンプルと前記検出メカニズムの間の遺伝子発現プロフィールに基づいて化学反応を決定する工程；ならびに
前記化学反応を、１つ以上の脳卒中症状または１つ以上の神経学的疾患の症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項１０】
前記神経学的疾患が多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、てんかん、および外傷性脳損傷のうちの少なくとも１つから本質的になる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
虚血性脳卒中症状または他の神経学的疾患の発症の時点を決定するための方法であって、前記方法は：
ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、核酸を前記個体のｍＲＮＡから誘導し、前記核酸を標識し、そして配列番号２、配列番号３、配列番号５、配列番号６、および配列番号８のうちの少なくとも１つの一部であるプローブを含有する検出メカニズムに対して標識された前記核酸をハイブリダイズさせる工程；
前記サンプルと前記検出メカニズムの間の遺伝子発現プロフィールに基づいて化学反応を決定する工程；ならびに
前記化学反応を、１つ以上の脳卒中症状または１つ以上の神経学的疾患の症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項１２】
前記神経学的疾患が多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、てんかん、および外傷性脳損傷のうちの少なくとも１つから本質的になる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
脳卒中症状の発症の時点を決定する方法であって、前記方法は：
個体から生物学的サンプルを取得する工程；
リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、およびカルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）からなる群より選択される少なくとも１つを含むバイオマーカーまたは前記バイオマーカーの組み合わせと、前記生物学的サンプルとを接触させる工程であって、ここで、前記バイオマーカーのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに
前記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程
を包含する、方法。
【請求項１４】
虚血性脳卒中の診断用である少なくとも１つのバイオマーカーを検出するための検出メカニズムを含むキットであって、前記バイオマーカーは、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、およびカルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、または前記バイオマーカーの組み合わせからなる群より選択される、キット。
【請求項１５】
前記バイオマーカーが核酸およびポリペプチドからなる群より選択されるものである、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記検出メカニズムが核酸分子バイオマーカーまたはポリペプチドバイオマーカーのいずれかを検出することが可能な繊維ベースの診断システムである、請求項１４に記載のキット。
【請求項１７】
繊維ベースの診断システムであって、前記診断システムは：
リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、およびカルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）からなる群より選択される虚血性脳卒中のバイオマーカー、または前記バイオマーカーの組み合わせに対して、
（ｉ）それぞれ対応する検出可能なポリペプチドまたはその機能的ポリペプチドフラグメントのパネル、
（ｉｉ）それぞれ対応する検出可能なオリゴヌクレオチドのパネル、または
（ｉｉｉ）それぞれ特異的に結合することができる検出可能である検出可能な抗体のパネル
のいずれかを含む、診断システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この特許出願は、２０１３年２月１日に出願された係属中の米国仮特許出願第６１／７５９，６５７号への優先権の利益を主張する。米国仮特許出願第６１／７５９，６５７号の全容は、あたかもそれが本明細書に完全に再度記載されたかのように、この特許出願に参考として援用される。
【０００２】
連邦政府によって資金援助された研究または開発に関する言及
適用なし。
【０００３】
配列表
コンピュータ読み取り可能な形式（．ｔｘｔファイル）の配列表が本願に付随し、これは配列番号１〜配列番号８を有する。このコンピュータ読み取り可能な形式（．ｔｘｔファイル）の配列表は参照により本願に組み込まれる。
【０００４】
１．発明の分野
本発明は、患者における脳卒中症状の発症の診断のための診断アッセイのための組成物、および患者における脳卒中の発症の時点を決定するためにこれらのアッセイを使用する方法を提供する。さらに、本発明の方法および組成物はまた、脳卒中患者または他の神経学的疾患の患者の処置、ならびにさらなる診断的および／または予後的指標の開発を容易にするためにも使用できる。具体的には、本発明は、個体から生物学的サンプルを取得する工程、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、および／またはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）発現メディエーターである発現メディエーターのうちの少なくとも１つ以上、またはこれらの組み合わせを含む検出組成物と、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程、ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法に関する。
【背景技術】
【０００５】
２．背景技術の説明
脳血管障害（ＣＶＡ）とも呼ばれる脳卒中は、脳への血液供給の妨害に起因する脳機能の急速な損失である。脳卒中には、虚血性脳卒中と出血性脳卒中の２つの広いカテゴリーがある。急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）とも呼ばれる虚血性脳卒中は、通常、血液供給の中断によって引き起こされ、しばしば、血栓（血餅）によって引き起こされる。虚血性脳卒中はまた、脳に供給する血管（単数または複数）が狭くなることによっても引き起こされ得る。虚血性脳卒中は脳卒中の約８７％を占める。対照的に、出血性脳卒中は、血管の破裂または異常な血管構造からの結果としての脳への出血によって引き起こされる。脳内出血およびくも膜下出血は、それぞれ、脳卒中の１０％および３％を構成する。加えて、患者は、脳の特定の領域への血液供給の変化によって引き起こされる、一過性の虚血性発作を経験する可能性がある。一過性の虚血性発作は、将来の脳卒中の高いリスクを示し、２４時間以内に解消する脳卒中の症状として定義される。対照的に、２４時間より長く持続する症状は脳卒中として分類される。しかし、最近、医学界は、２４時間の任意の時間枠なしで脳卒中を区別するために、脳発作（ｂｒａｉｎ  ａｔｔａｃｈ）や急性虚血性脳血管症候群などの用語を取り入れてきた。
【０００６】
虚血性脳卒中は、血栓型、塞栓型、ラクナ型、低灌流型の脳卒中を少なくとも含むサブタイプを包含する。血栓型脳卒中において、脳に血液を供給する動脈のうち１つ以上に遮断を引き起こす血栓の形成に起因して、血流が損なわれる。対照的に、大部分の塞栓型脳卒中は、血栓が身体中で、通常は心臓において形成され、動脈の血流を通して脳まで移動し、そして血栓の通過を遮断するために十分に小さな血管まで移動したときに発生する。塞栓型脳卒中はまた、脂肪（アテローム）、空気、癌細胞、または細菌を含む血栓以外の物質によっても引き起こされることがあり得る。小血管疾患とも呼ばれるラクナは、血流が小動脈血管で遮断されるときに発生する。低灌流は身体のすべての部分での血流の減少であり、しばしば、心筋梗塞、肺塞栓、心内膜液浸出、または不整脈によって引き起こされる。
【０００７】
多くの場合、脳卒中の症状には、とりわけ、身体の片側での、しばしば、顔面、腕、または脚の突然のしびれまたは虚弱；突然の混乱、発話または理解の困難；片目または両目での突然の視覚の困難；突然の歩行困難、めまい、バランスまたは協調の喪失；および原因不明の突然の重篤な頭痛が挙げられる。
【０００８】
現在、脳卒中は、米国で死因の第４位にランクされており、これより多いのは心疾患、癌、および慢性下気道疾患のみである。毎年米国でおよそ７９５，０００件の脳卒中が発生し、毎年１３３，０００件の死亡を引き起こしている。さらに、米国において２０歳を超えた年齢で脳卒中の生存者が７００万人いると推定されており、急性虚血性脳卒中が長期の障害の主因である。米国における脳卒中のコストの推定は１年あたり７３０億米国ドルを超えている。上記に言及した通り、虚血性脳卒中は脳卒中の症例の８７％を占めており、結果的に、このカテゴリーの脳卒中が最大の財政的負担の原因となっている。Ｒｏｇｅｒ  ＶＬ，Ｇｏ  ＡＳ，Ｌｌｏｙｄ−Ｊｏｎｅｓ  ＤＭら、Ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｓｔｒｏｋｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ−２０１１  ｕｐｄａｔｅ：ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１１；１２３（４）：ｅ１８−ｅ２０９。
【０００９】
虚血性脳卒中のリスクは、制御可能な様々な要因と関連している。これらの要因には、高血圧（高い血圧）、心房細動、高コレステロール、糖尿病、アテローム性動脈硬化、循環の問題、タバコの使用、アルコールの使用、運動不足、および肥満が挙げられる。患者における虚血性脳卒中のリスクと関連する制御できない要因には、年齢、人種、性別、家族歴、線維筋性形成異常、および卵円孔開存が挙げられる。
【００１０】
現在、脳卒中のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）が認可した処置が１つのみ存在する。組織プラスミノゲン活性化因子（ｔＰＡ）または組換え組織プラスミノゲン活性化因子（ｒｔＰＡ）は、１９９５年以来、ＦＤＡが認可した虚血性脳卒中の唯一の処置であった。しかし、ｔＰＡの強力な効果はまた、顕著な臨床的合併症を伴う。多くの禁忌要因のために、すべての虚血性脳卒中患者のうちの２〜３％のみがｔＰＡを受容し、患者の症状が開始したときと比較して、患者が処置施設に到着したときに、初めて主要なものとなる。ｔＰＡは脳卒中の症状の発症から４．５時間までがＦＤＡに認可されているに過ぎない。しかし、処置のために患者がＥＤ（救急科）に到着するメジアン時間はおよそ８時間である。ｔＰＡ処置のための時間ウィンドウを増加させることは臨床的に必要である。加えて、３０％までの患者は、彼らの脳卒中症状が始まった時間について気付いていない。いくつかの場合において、患者は、普通に就寝し、その後、朝に脳卒中の症状を伴って目覚める。これらの患者は最後に正常であると知られていた時間の周辺が不確かなため、これらの患者にはｔＰＡを与えることはできない。
【００１１】
本発明以前には、本明細書中上記に議論した通り、脳卒中症状の発症の時点の決定はしばしば困難かつ不正確であり、とりわけ、患者が重篤に構成され、または事象が目撃されていない場合にはそうである。これらの問題は、患者の脳卒中が開始したときについて患者を評価するために現在使用されている技術の限界（臨床医と患者／代理人の相互関係）、ならびに患者に関与する臨床医師によって保有される経験のレベルおよび／または適切な訓練の限界に部分的に起因している。これらの状況は、脳卒中および脳損傷の被害者には有害である。なぜなら、脳卒中の発症の時点の正確で偏りのない予測が、ポイントオブケア（ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  ｃａｒｅ）において患者の健康および転帰に対して極度に重要であるからである。本発明は、脳卒中症状の発症を決定するための方法に関する。
【００１２】
本明細書中上記に言及した通り、組織プラスミノゲン活性化因子（ｔＰＡ）は、１９９５年以来、ＦＤＡが認可した虚血性脳卒中の唯一の処置であった。本発明は、脳卒中に対する強力な先天性炎症反応を開示し、脳卒中後の末梢血中でこれらの免疫遺伝子の発現をモニターする。本発明は、これらの免疫遺伝子の発現が経時的に有意に減少し、従って、脳卒中が開始したときの代理物として使用できることを開示する。脳卒中症状が開始したときの偏りのない尺度は、臨床医がｔＰＡを用いて処置することについての彼らの決定を補助する。このことは、ｔＰＡの利用の３０％増加をもたらすことができ、機能的回復の増加が予想される。これらの炎症性免疫マーカーはまた、４．５時間の時間ウィンドウを超えて、ｔＰＡ処置を導くために使用されてもよい。これらのゲノムバイオマーカーを使用する本発明の方法は、脳卒中治療法を導く。
【００１３】
ｔＰＡ治療の進歩は別として、臨床実務において、代替的な急性虚血性脳卒中治療の必要性がなお存在している。不運にも、最近の臨床試験の結果は、虚血性脳卒中に対する変動するヒト応答の理解においてなおギャップがあることを実証してきた。多数の有望な前臨床治療は、ヒト患者において臨床的有用性が有意でないことを示し、このことは、机で学習したことを臨床での患者に翻訳することの困難さを論じている。
【００１４】
これらのネガティブな知見は、虚血性脳卒中に対するヒトの生理学的応答の複雑さ、虚血性脳卒中に応答して相互作用する複数の経路に関する知識が限られていること、および虚血性脳卒中からの個体の回復に関するゲノムの変動の密接な関係に部分的に起因しているのかもしれない。この困難さはまた、虚血性脳卒中のサブタイプの不十分な分類に起因するのかもしれない。虚血性脳卒中のサブタイプを同定するために遺伝子発現プロファイリングは役立たせることができ、これは、処置のための治療ストラテジーを設計する際に多大な有用性を有することが可能性としてある。ヒトにおける脳卒中の病態生理学およびより適切な脳卒中サブタイプ決定のより良好な理解は、虚血性脳卒中および他の脳卒中型と闘うための適切な治療法を設計するために必要である土台を提供し得る。発症の決定的な時点を知ることは組織プラスミノゲン活性化因子（ｔＰＡ）を用いて脳卒中患者を処置するために重大である。なぜなら、ｔＰＡを用いる処置は４．５時間の時間ウィンドウ以内のｔＰＡの投与のために、最後の知られていた正常を知っていることに依存しているからである。しかし、目撃されていない脳卒中の事象、患者が連絡することができないこと、または軽度でかつすぐに気付かれない脳卒中の症状のために、最後の知られていた正常は、決定することがしばしば困難である。さらに、虚血性脳卒中の診断における別の制限は、急速な発症および急性虚血性脳卒中の進行に起因する状況であり、その状況は虚血性脳卒中患者が、しばしば、正確で救命診断を提供できるための適切な知識および訓練がない臨床医によって観察されるほどのものである。例えば、脳イメージング技術は、虚血性脳卒中を診断する際の重要な要素であり得る。これらの技術には、例えば、脳コンピュータ断層撮影スキャン（脳ＣＴスキャン）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影動脈造影図（ＣＴＡ）および磁気共鳴動脈造影図（ＭＲＡ）、頸動脈造影、ならびに頸動脈超音波が挙げられる。しかし、このような技術は、しばしば、利用可能ではなく、脳卒中診断に関連する脳イメージング結果の適切な解釈は、高度かつ具体的に訓練を受けた臨床医のために最良である。従って、早期かつ正確な診断を達成することは、現在の臨床的状況に起因して、しばしば、可能ではない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｒｏｇｅｒ  ＶＬ，Ｇｏ  ＡＳ，Ｌｌｏｙｄ−Ｊｏｎｅｓ  ＤＭら、Ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｓｔｒｏｋｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ−２０１１  ｕｐｄａｔｅ：ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１１；１２３（４）：ｅ１８〜ｅ２０９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
従って、偏りがなくかつ正確な虚血性脳卒中の臨床的診断を作製することが可能な迅速な診断テストのための必要性が存在する。本発明は、脳卒中患者の医学的評価におけるこれらの合致していない必要性に合致する。本発明は、ｔＰＡの投与の有用性を改善し、適切な二次予防を合理化するために、救急介護臨床設定における使用のための脳卒中症状の発症からの時間を決定するための方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、脳卒中の発症の時点のための診断マーカーの同定および使用に関する。本発明は、脳卒中の迅速かつ早期の検出のための方法、および患者に対する医学的処置を容易にすることを補助するために脳卒中が開始したときについての代理物を含む。
【００１８】
本発明の１つの実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターの発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはその組み合わせを含む検出組成物と、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法を提供し、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターの発現メディエーターのうちの少なくとも１つ以上、またはその組み合わせに対応する検出可能なポリヌクレオチドまたは機能的ポリヌクレオチドフラグメントのパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００２０】
本発明のなお別の実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定するための方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターの発現メディエーターのうちの少なくとも１つ以上、またはその組み合わせに対応する検出可能なオリゴヌクレオチドのパネルと、上記生物学的サンプルを接触させ、ここで、上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法を提供し、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターである発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはその組み合わせについての検出可能な抗体のパネルと、上記生物学的サンプルを接触させ、ここで、上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００２２】
別の実施形態において、脳卒中症状の発生の時点を決定するための方法が提供され、上記方法は、ＤＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、ｍＲＮＡを個体のＲＮＡから誘導し、上記ｍＲＮＡを標識し、そしてＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つである発現メディエーターのうちの少なくとも１つを含む検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程であって、ここで、上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００２３】
加えて、本発明は、バイオマーカーを検出する組成物に係る。本発明は、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられるバイオマーカーと相補的であるか、またはそれに特異的である核酸プローブおよび抗体を含む組成物を提供する。
【００２４】
本発明の別の実施形態は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つに特異的である核酸プローブを含む、バイオマーカーの検出のための組成物を提供する。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つに特異的である少なくとも１つの抗体を含む、バイオマーカーの検出のための組成物を提供する。
【００２６】
本発明の別の実施形態は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つに特異的である精製されたバイオマーカー、ならびに対応するそれらのコード核酸を含む組成物を提供する。
【００２７】
本発明のなお別の実施形態において、虚血性脳卒中症状または他の神経学的疾患の発症の時点を決定するための方法が開示され、上記方法は、ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、核酸を個体のｍＲＮＡから誘導し、上記核酸を標識し、そして配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、および配列番号８のうちの少なくとも１つ以上を含有する検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程；上記サンプルと上記検出メカニズムの間の遺伝子発現プロフィールに基づいて化学反応を決定する工程；ならびに上記化学反応を、１つ以上の脳卒中症状または１つ以上の神経学的疾患の症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００２８】
本発明の別の実施形態において、虚血性脳卒中症状または他の神経学的疾患の発症の時点を決定するための方法が開示され、上記方法は、ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、核酸を個体のｍＲＮＡから誘導し、上記核酸を標識し、そして配列番号２、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、および配列番号８のうちの少なくとも１つ以上の一部であるプローブを含有する検出メカニズムに対して上記標識核酸をハイブリダイズさせる工程；上記サンプルと前記検出メカニズムの間の遺伝子発現プロフィールに基づいて化学反応を決定する工程；ならびに上記化学反応を、１つ以上の脳卒中症状または１つ以上の神経学的疾患の症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００２９】
上記神経学的疾患は、多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、てんかん、および外傷性脳損傷のうちの少なくとも１つから本質的になる群より選択される。
【００３０】
配列番号１はマーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号（Ｇｅｎｅ  ＩＤ）：２３６４３についての配列番号（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ＩＤ）であり、配列番号２はマーカーリンパ球抗原９６、転写バリアント１についての配列番号である。配列番号３は、ＭＤ２、転写バリアント２としてもまた知られるマーカーリンパ球抗原９６についての配列番号である。配列番号４はマーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。配列番号５はマーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント１、ｍＲＮＡについての配列番号である。配列番号６はマーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント２、ｍＲＮＡについての配列番号である。配列番号７はマーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。配列番号８はマーカーカルボニックアンヒドラーゼＩＶ（ＣＡ４）、ｍＲＮＡについての配列番号である。これらの配列番号は当業者には利用可能であり、本明細書において開示される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１ａ】図１（ａ）は、患者の人口統計情報を示す表である。
【図１ｂ】図１（ｂ）は、脳卒中の発症からの時間の増加がＬＹ９６の発現の減少と関連付けられることを示す、脳卒中後最初の４８時間における末梢血（患者−ヒト）におけるＬＹ９６の発現のグラフである。
【図１ｃ】図１（ｃ）はＬＹ９６の逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）の検証を示す、時間をわたってのＬＹ９６  Ｃｔ遺伝子発現のグラフであり、ここで、ＬＹ９６未加工（ｒａｗ）Ｃｔ値は小さなサンプルサイズでは、時間をわたって減少傾向を示す。
【図１ｄ】図１（ｄ）は、ＬＹ９６のＲＴ−ＰＣＲの検証を示す、、時間をわたってのＬＹ９６  ｄＣｔ遺伝子発現のグラフであり、ＬＹ９６をＢ−アクチンに対して正規化したときに、減少傾向はもはや見られない。
【図２−１】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−３】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−４】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−５】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−６】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−７】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−８】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−９】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１０】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１１】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１２】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１３】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１４】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１５】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１６】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１７】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１８】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−１９】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２０】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２１】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２２】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２３】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２４】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２５】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２６】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２７】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２８】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−２９】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図２−３０】図２は、マーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号である。
【図３】図３は、マーカーリンパ球抗原９６、転写バリアント１についての配列番号である。
【図４】図４は、ＭＤ２、転写バリアント２としても知られるマーカーリンパ球抗原９６についての配列番号である。
【図５−１】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−２】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−３】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−４】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−５】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−６】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−７】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−８】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−９】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図５−１０】図５は、マーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。
【図６−１】図６は、マーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント１、ｍＲＮＡについての配列番号である。
【図６−２】図６は、マーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント１、ｍＲＮＡについての配列番号である。
【図７−１】図７は、マーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント２、ｍＲＮＡについての配列番号である。
【図７−２】図７は、マーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント２、ｍＲＮＡについての配列番号である。
【図８−１】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−２】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−３】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−４】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−５】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−６】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−７】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−８】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図８−９】図８は、マーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。
【図９】図９は、マーカーカルボニックアンヒドラーゼＩＶ（ＣＡ４）、ｍＲＮＡについての配列番号である。
【図１０−１】図１０（ａ）〜（ｌ）は、時間に対して（時間単位で、０（ｚｅｏ）時間〜４８時間）（各グラフのｘ軸を参照のこと）本明細書の特異的発現メディエーターの発現としてプロットされた（各グラフのｙ軸を参照のこと）、様々な年齢群（すなわち、それぞれ、６０歳未満、６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ）８０歳未満、および８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ））の患者集団（ヒト）についてのデータを示すグラフである。図１０（ａ）は６０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｂ）は６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｃ）は６０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｄ）は６０歳を超える患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｅ）は６０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｆ）は６０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｇ）は８０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｈ）は８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｉ）は８０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｊ）は８０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｋ）は８０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｌ）は８０歳を超える患者についてのＬＹ９６の発現を示す。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、ベースラインと追跡調査の間で１．５倍を超えて有意に減少した。これらの発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連性があり、そしてより高齢の患者（８０歳を超える患者）において有意に低かった。
【図１０−２】図１０（ａ）〜（ｌ）は、時間に対して（時間単位で、０（ｚｅｏ）時間〜４８時間）（各グラフのｘ軸を参照のこと）本明細書の特異的発現メディエーターの発現としてプロットされた（各グラフのｙ軸を参照のこと）、様々な年齢群（すなわち、それぞれ、６０歳未満、６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ）８０歳未満、および８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ））の患者集団（ヒト）についてのデータを示すグラフである。図１０（ａ）は６０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｂ）は６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｃ）は６０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｄ）は６０歳を超える患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｅ）は６０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｆ）は６０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｇ）は８０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｈ）は８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｉ）は８０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｊ）は８０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｋ）は８０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｌ）は８０歳を超える患者についてのＬＹ９６の発現を示す。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、ベースラインと追跡調査の間で１．５倍を超えて有意に減少した。これらの発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連性があり、そしてより高齢の患者（８０歳を超える患者）において有意に低かった。
【図１０−３】図１０（ａ）〜（ｌ）は、時間に対して（時間単位で、０（ｚｅｏ）時間〜４８時間）（各グラフのｘ軸を参照のこと）本明細書の特異的発現メディエーターの発現としてプロットされた（各グラフのｙ軸を参照のこと）、様々な年齢群（すなわち、それぞれ、６０歳未満、６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ）８０歳未満、および８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ））の患者集団（ヒト）についてのデータを示すグラフである。図１０（ａ）は６０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｂ）は６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｃ）は６０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｄ）は６０歳を超える患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｅ）は６０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｆ）は６０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｇ）は８０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｈ）は８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｉ）は８０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｊ）は８０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｋ）は８０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｌ）は８０歳を超える患者についてのＬＹ９６の発現を示す。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、ベースラインと追跡調査の間で１．５倍を超えて有意に減少した。これらの発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連性があり、そしてより高齢の患者（８０歳を超える患者）において有意に低かった。
【図１０−４】図１０（ａ）〜（ｌ）は、時間に対して（時間単位で、０（ｚｅｏ）時間〜４８時間）（各グラフのｘ軸を参照のこと）本明細書の特異的発現メディエーターの発現としてプロットされた（各グラフのｙ軸を参照のこと）、様々な年齢群（すなわち、それぞれ、６０歳未満、６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ）８０歳未満、および８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ））の患者集団（ヒト）についてのデータを示すグラフである。図１０（ａ）は６０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｂ）は６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｃ）は６０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｄ）は６０歳を超える患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｅ）は６０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｆ）は６０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｇ）は８０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｈ）は８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｉ）は８０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｊ）は８０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｋ）は８０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｌ）は８０歳を超える患者についてのＬＹ９６の発現を示す。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、ベースラインと追跡調査の間で１．５倍を超えて有意に減少した。これらの発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連性があり、そしてより高齢の患者（８０歳を超える患者）において有意に低かった。
【図１０−５】図１０（ａ）〜（ｌ）は、時間に対して（時間単位で、０（ｚｅｏ）時間〜４８時間）（各グラフのｘ軸を参照のこと）本明細書の特異的発現メディエーターの発現としてプロットされた（各グラフのｙ軸を参照のこと）、様々な年齢群（すなわち、それぞれ、６０歳未満、６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ）８０歳未満、および８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ））の患者集団（ヒト）についてのデータを示すグラフである。図１０（ａ）は６０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｂ）は６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｃ）は６０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｄ）は６０歳を超える患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｅ）は６０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｆ）は６０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｇ）は８０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｈ）は８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｉ）は８０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｊ）は８０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｋ）は８０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｌ）は８０歳を超える患者についてのＬＹ９６の発現を示す。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、ベースラインと追跡調査の間で１．５倍を超えて有意に減少した。これらの発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連性があり、そしてより高齢の患者（８０歳を超える患者）において有意に低かった。
【図１０−６】図１０（ａ）〜（ｌ）は、時間に対して（時間単位で、０（ｚｅｏ）時間〜４８時間）（各グラフのｘ軸を参照のこと）本明細書の特異的発現メディエーターの発現としてプロットされた（各グラフのｙ軸を参照のこと）、様々な年齢群（すなわち、それぞれ、６０歳未満、６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ）８０歳未満、および８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｌｄ））の患者集団（ヒト）についてのデータを示すグラフである。図１０（ａ）は６０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｂ）は６０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｃ）は６０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｄ）は６０歳を超える患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｅ）は６０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｆ）は６０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｇ）は８０歳未満の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｈ）は８０歳を超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ８０  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ａｇｅ）の患者についてのＡＲＧ１の発現を示す。図１０（ｉ）は８０歳未満の患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｊ）は８０歳を超える患者についてのＣＡ４の発現を示す。図１０（ｋ）は８０歳未満の患者についてのＬＹ９６の発現を示す。図１０（ｌ）は８０歳を超える患者についてのＬＹ９６の発現を示す。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、ベースラインと追跡調査の間で１．５倍を超えて有意に減少した。これらの発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連性があり、そしてより高齢の患者（８０歳を超える患者）において有意に低かった。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の詳細な説明
定義
本発明は、以下の本発明の好ましい実施形態の詳細な説明、およびそこに含まれる方法に対する参照によってより容易に理解され得る。本発明の方法および技術が開示および記載される前に、本発明は特定の分析方法または合成方法に限定されないことが理解される。このようなものは当然変動し得るからである。本明細書で使用される専門用語は特定の実施形態を記載する目的のみのためであって、限定を意図するものではないこともまた理解される。他に定義されない場合、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解される意味を有する。
【００３３】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、文脈が明確に反対のことを指示していない限り、単数形（「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」）は複数の言及を含む。従って、例えば、「バイオマーカー」との言及は、１つ以上のバイオマーカーの言及であり、当業者に公知であるその等価物を含む。
【００３４】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分をいう。このようなものとして、抗体という用語は、例えば、免疫グロブリン分子の、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹを含む任意のタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を含む任意のクラス、またはサブクラスをいうことができる。さらに、「抗体」という用語と「免疫グロブリン」という用語は、本明細書を通して交換可能に使用することができる。抗体または免疫グロブリンは、抗体分子全体のみならず、抗体マルチマー、抗体フラグメント、ならびに抗体、抗体マルチマー、および抗体フラグメントのバリアントもまた包含するように使用することができる。免疫グロブリン分子は、自然界から単離することができ、または組換え手段によって調製もしくは化学合成できる。本発明の抗体および免疫グロブリンは、様々な目的のために使用できる。好ましい実施形態において、抗体および免疫グロブリンは、任意の適切な検出メカニズム、例えば、ＥＬＩＳＡの使用を通してバイオマーカーの検出のために使用できる。
【００３５】
「虚血性脳卒中（ＩＳ）」、「急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）」、および「急性虚血性脳血管症候群（ＡＩＣＳ）」という用語は交換可能に使用され、脳への血液供給の障害に起因して脳機能の急速な損失を経験する患者の状態をいう。Ｋｉｄｗｅｌｌら「Ａｃｕｔｅ  Ｉｓｃｈｅｍｉｃ  Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ」Ｓｔｒｏｋｅ，２００３，３４、ｐｐ．２９９５−２９９８（参照により本明細書に組み込まれる）によって定義されたＡＩＣＳの診断基準は下記の通りである。
【００３６】
確定ＡＩＣＳ：局所脳虚血と一致する任意の重篤度の神経学的機能不全の急性発症、および急性血管虚血病理のイメージング／研究室での確認。
【００３７】
高可能性（Ｐｒｏｂａｂｌｅ）ＡＩＣＳ：局所脳虚血症候群を示唆する任意の重篤度の神経学的機能不全の急性発症、しかし急性血管虚血病理のイメージング／研究室での確認がない（診断研究は陰性であったが、所定の期間、重篤度、および位置の虚血性病理について感度が不十分であった）。イメージング、研究室、および臨床データの研究は、非虚血性病因を示唆していない：可能性のある代わりの病因が除外されている。
【００３８】
可能性ＡＩＣＳ：おそらく局所脳虚血と一致する任意の期間または重篤度の急性神経学的機能不全であって、急性虚血性病理のイメージング／研究室での確認がない（診断研究は行われなかったか、または陰性でありかつ所定の期間、重篤度、および位置の虚血性病理について感度があった）。可能性のある代わりの病因が除外されていない。症状は局所的ではなく、または位置決めが困難であり得る。
【００３９】
ＡＩＣＳではない：神経学的症候群の原因としての非虚血性病理のイメージング／研究室での確認（所定の期間、重篤度、および位置の虚血性病理について高感度である通常のイメージング／研究室での研究を含む）を伴う神経学的機能不全の急性発症。
【００４０】
「脳卒中症状」という用語は、急性虚血性脳卒中を含む任意のタイプの脳卒中の発症において存在する可能性がある症状をいうことができる。脳卒中症状には、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ｗｗｗ．ｓｔｒｏｋｅ．ｏｒｇ）によって認定されたものが含まれ、これらは以下の通りである：（ａ）とりわけ、身体の片側での顔面、腕、または脚の突然のしびれまたは虚弱、（ｂ）突然の錯乱、発話または理解の困難、（ｃ）片目または両目での突然の視覚の困難、（ｄ）突然の歩行困難、めまい、バランス（ｂａｌａｎｃｅ）または協調の喪失、および（ｅ）原因不明の突然の重篤な頭痛。
【００４１】
「診断」という用語は、患者が所定の疾患または状態に苦しんでいるか、またはそれを発症するある程度のレベルのリスクがあるか否かを当業者が推定し、および／または決定できる方法をいう。当業者、例えば、脳卒中の臨床医またはポイントオブケア医師は、しばしば、１つ以上の診断指標、すなわち、バイオマーカーに基づいて診断を行い、そのリスク、存在、非存在または量は、状態、例えば、急性虚血性脳卒中または他の神経学的状態の存在、重篤度、もしくは非存在を示す。
【００４２】
「急性期応答」という語句は、本明細書で使用される場合、感染、外傷、例えば、虚血性脳卒中、炎症性プロセス、および何らかの悪性状態の発症の直後に起こる一群の生理学的プロセスをいう。急性期応答には、血清中の急性期タンパク質の増加、熱、血管透過性の増加、ならびに代謝的および病理学的変化が挙げられる。急性期応答と関連するバイオマーカーには、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、およびＴＬＲが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４３】
「バイオマーカー」、「マーカー」、および「発現メディエーター」という用語は本明細書で交換可能に使用され、正常または異常な状態と相関する、身体（例えば、血液、他の体液、または組織）において見い出される分子（例えば、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはＤＮＡ転写物）をいう。本発明の好ましい実施形態において、バイオマーカー、マーカー、および発現メディエーターという用語は、急性虚血性脳卒中または他の神経学的疾患もしくは状態に起因する急性期応答と関連する、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、およびＤＮＡ転写物をいう。さらに、バイオマーカー、マーカー、および発現メディエーターは、ＲＮＡ発現、代謝産物、タンパク質発現、または他の上流もしくは下流のメディエーターをいうことができる。本発明の別の実施形態において、バイオマーカー、マーカー、および発現メディエーターという用語は、バイオマーカーのｍＲＮＡまたはＤＮＡの相補配列をいう。本発明によって同定された急性虚血性脳卒中に起因する急性期応答の特異的バイオマーカーには、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、およびｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ならびにＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、およびＴＬＲの上流または下流のメディエーターが挙げられる。これらの特異的バイオマーカーは本明細書中以下に詳細に記載される。このようなものとして、発現メディエーターは、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲと関連する、ＲＮＡ発現、代謝産物、タンパク質発現、または他の上流もしくは下流のメディエーターを含むことができる。例えば、本発明のバイオマーカーは、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲをコードするｍＲＮＡを含むことができる。別の例において、本発明の発現メディエーターは、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡの一部に対して相補的または相同なヌクレオチドを含むことができる。なお他の例において、本発明の発現メディエーターは、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのゲノムＤＮＡの一部に対して相補的または相同なヌクレオチドを含むことができる。相補的または相同なヌクレオチドの長さは任意の長さであり得る。本発明の１つの実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約１０〜約１５ヌクレオチドである。別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約１５〜約２０ヌクレオチドである。なお別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約２０〜約２５ヌクレオチドである。別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約２０〜約３０ヌクレオチドである。なお別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約３０〜約４０ヌクレオチドである。別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約４０〜約５０ヌクレオチドである。なお別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約５０〜約７５ヌクレオチドである。別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約７５〜約１００ヌクレオチドである。なお別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約１００〜約１５０ヌクレオチドである。別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約１５０〜約２００ヌクレオチドである。なお別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約２００〜約２５０ヌクレオチドである。別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約２５０〜約３００ヌクレオチドである。なお別の実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対して相補的または相同なヌクレオチドの長さは約３００ヌクレオチドより長い。さらなるバイオマーカーもまた、本発明において含まれてもよい。バイオマーカーは、ポリペプチド、タンパク質、またはｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および転写されたＤＮＡを含む核酸分子を検出、同定、または検出するために、任意の適切な方法、メカニズム、または機器を使用して、検出され、同定され、または、測定され得る。バイオマーカーを検出、同定、または測定できる特定の検出メカニズムは本明細書中下記に詳細に記載される。
【００４４】
本明細書でバイオマーカーとして使用される用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、その任意のフラグメント、いくつかの特定の実施形態においては、免疫学的に検出可能なフラグメントを含むことが意図される。当業者は、細胞によって放出されるタンパク質が急性期応答（例えば、急性虚血性脳卒中の結果として）の間に損傷される可能性があり、このようなフラグメントに分解または切断される可能性があることを認識している。さらに、いくつかのマーカーは、不活性型で合成され、これは、引き続いて、例えば、タンパク質分解によって、活性化され得る。
【００４５】
「検出メカニズム」および「検出アッセイ」という語句は交換可能に使用され、上記のバイオマーカーを含む任意の標準比較メカニズムまたはツールが使用されることが本明細書で意図される。また、「検出メカニズム」という用語は、バイオマーカーを測定、同定、または検出するための任意の標準比較メカニズムまたはツールをいうために本明細書で使用される。このようなものとして、検出メカニズムという用語は、マイクロアレイまたは逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）のアッセイをいうことができる。さらに、検出メカニズムという用語は、特異的バイオマーカーを認識する抗体のパネルをいうことができる。本発明の１つの実施形態において、検出メカニズムとは、本明細書に記載されるバイオマーカーのうちの少なくとも１つを含むマイクロアレイをいう。本発明の好ましい実施形態において、検出メカニズムとは、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲのバイオマーカーのうちの少なくとも１つを含むマイクロアレイ、ＲＴ−ＰＣＲアッセイ、またはプローブセットをいう。さらに、検出メカニズムとは、核酸分子であるバイオマーカーを分析することをいうことができる。例えば、本発明のバイオマーカーをコードする末梢血中のｍＲＮＡを検出または測定することは検出メカニズムの１つの型である。加えて、「遺伝子パネル」は、バイオマーカーを測定、同定、または検出するための検出メカニズムをいうために本明細書で同様に使用される。
【００４６】
加えて、本明細書で使用される「繊維ベース（ｆｉｌａｍｅｎｔ−ｂａｓｅｄ）の診断システム」という用語は、当該分野で公知である特異的検出メカニズムをいう。繊維ベースの診断システムには、生物学的サンプルから収集されたバイオマーカーを捕捉するか、それに結合するために使用される材料（例えば、ポリエステル繊維または金線）が含まれるがこれらに限定されない。一般的に、繊維ベースの診断システムは、ポリエステル繊維上に抗体を捕捉するか、または金線上にＤＮＡ（または他の核酸）プローブを捕捉するかのいずれでもよく、これらの各々は、例えば、患者（「患者」は任意の動物または温血もしくは冷血の生き物を意味し、例えば、ヒトなどを含むがこれに限定されない）の末梢血であるがこれに限定（ｌｉｍｉｔｙｅｄ）されない生物学的サンプルのおける目的のポリペプチドまたは核酸分子（例えば、本発明のバイオマーカーポリペプチド、または対応するそれらのｍＲＮＡ分子）を釣る（ｔｒｏｌｌ）ための分子フックとして機能する。標的ポリペプチド（例えば、本発明のバイオマーカーポリペプチド）の抗体検出のために、試験生物学的サンプルに曝露された標的ポリペプチドに特異的な抗体で固定化された繊維材料が、洗浄を実行するチャンバーのアレイを通して通り抜け、次いでそこからの結果の報告が行われた。核酸検出（例えば、本発明のバイオマーカーをコードしているｍＲＮＡ）のために、生物学的サンプル中の標的核酸分子（例えば、生物学的サンプル中の各バイオマーカーのｍＲＮＡ）に特異的であるかまたはハイブリダイズするＤＮＡを含有している繊維または該繊維（例えば、金線）に結合したヌクレオチドプローブが、洗浄を実行する様々なチャンバーを通過し、次いで、繊維表面で起こったあらゆるプローブ／標的相互作用の報告を行う。当業者は、「繊維ベースの診断システム」によって意味されるものを理解し、繊維が例えば、ポリスチレン、ガラス、およびナイロンなどであるがこれらに限定されない様々な材料から作られてもよいことを認識している。米国特許出願第１３／５８０，５７１号（２０１３年７月２５日に公開された米国特許出願公開第２０１３／０１８９２４３  Ａ１号）は繊維ベースの診断システムの一般的記載を示し、このような記載は参照により本明細書に組み込まれる。
【００４７】
「検出する」、「検出」、「検出可能な」、「検出可能な応答」および「検出すること（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ）」という用語により、所定のバイオマーカーの存在、非存在、または量の同定をいうことが意図される。このようなものとして、「検出可能な組成物」、「検出可能なポリヌクレオチド」、「検出可能なオリゴヌクレオチド」、および「検出可能な抗体」という用語は、それぞれ、組成物、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および抗体によって表されるバイオマーカーの存在、非存在、または量の同定をいうことが意図される。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「相関させる」という用語は、少なくとも２つの因子を、相補的、平行、または相互関係にすることを意味する。例えば、検出可能な応答を、急性虚血性脳卒中症状の発症の時点と相関させる。特定の実施形態において、急性期応答のバイオマーカー、例えば、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲの発現レベルを、脳卒中症状または他の神経学的疾患症状の発症の時点と相関させる。本発明は、バイオマーカーと、脳卒中または神経学的疾患の症状の発症の時点の間の相関を確立する（方法を参照のこと）。さらに、本発明は、アルゴリズムによって、データのセット（すなわち、バイオマーカー発現および脳卒中または神経学的疾患の症状の発症の時点）を相関させる。これらのアルゴリズムは当該分野において周知であり、本明細書でさらに議論する（方法を参照のこと）。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「生物学的サンプル」、「患者サンプル」、または「サンプル」とは、目的の被験体の診断、予後診断、または評価の目的のために生物からまたは被験体もしくは患者の構成要素（例えば、細胞）から得られるサンプルをいう。本明細書で使用される場合、「患者」または「個体」という用語は、例えば、ヒトを含むがこれに限定されない、任意の動物または温血もしくは冷血の生き物を意味する。ある特定の実施形態において、このようなサンプルは、進行している状態の転帰または状態に対する処置レジメンの効果を決定する目的のために得られてもよい。サンプルは任意の生物学的組織または体液のサンプルであってもよい。サンプルは、患者から由来のサンプルである臨床サンプルであってもよい。このようなサンプルには、他の体液サンプルの中でも、脳の細胞または組織、脳脊髄液、神経組織、痰、血液、血清、血漿、血液細胞（例えば、白血球）、組織サンプル、生検サンプル、尿、腹水（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｆｌｕｉｄ）および胸水、唾液、精液、胸部浸出液（ｂｒｅａｓｔ  ｅｘｕｄａｔｅ）、涙液、粘液、リンパ、サイトゾル、腹水（ａｓｃｉｔｅｓ）、羊水、膀胱洗浄液、および気管支肺胞上皮（ｂｒｏｎｃｈｉｏａｌｖｅｏｌａｒ）洗浄液またはそこからの細胞が挙げられるがこれらに限定されない。好ましくは、サンプルは末梢血である。好ましくは、サンプルは、本発明のバイオマーカーのうちの１つ以上を含有する。患者サンプルは新鮮であるかまたは凍結されていてもよく、そして例えば、ヘパリン、クエン酸塩、またはＥＤＴＡで処理されてもよい。サンプルはまた、組織学的目的のために採取された凍結切片などの組織の切片も含んでもよい。
【００５０】
バイオマーカー
本発明は、遺伝子プロフィールを同定し、虚血性脳卒中または他の神経学的事象の急性期の時点の発症を決定することを用いて各々を相関させる。これらの遺伝子のうちの少なくとも１つが生理学的に急性期応答に対応する。具体的には、本発明は、虚血性事象が始まったときからの時間、従って、脳卒中症状または神経学的疾患の他の症状が始まったときについての代理物と関連付けられるマーカーのうちの少なくとも１つ（すなわち、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）別名ＭＤ２；カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、もしくはｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、またはリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）別名ＭＤ２；カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、もしくはｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の群から選択される発現メディエーターのうちの少なくとも２つの組み合わせ）の発現を決定する。本発明は、脳卒中症状の発症の時点と、例えば、ＬＹ９６、ＡＲＧＩ、およびＣＡ４のうちの少なくとも１つ（すなわち、マーカー）を含む１つ以上の遺伝子パネルとの機能的な関係性を開示する。
【００５１】
本発明の１つの実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つである発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはこれらの発現メディエーターの組み合わせを含む検出組成物と、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「組み合わせ」という用語は、例示的な組み合わせをいくつか挙げれば、例えば、ＬＹ９６とＡＲＧＩの組み合わせ、またはＬＹ９６とＣＡ４の組み合わせ、またはＬＹ９６、ＡＲＧＩ、およびＣＡ４の組み合わせ、またはＣＡ４とＡＲＧＩの組み合わせ、またはＴＬＲ発現メディエーターとＣＡ４の組み合わせ、またはＡＲＧＩとＴＬＲ発現メディエーターの組み合わせなどであるがこれらに限定されない、２つ以上の特異的発現メディエーターを意味する。
【００５３】
本明細書の好ましい実施形態において、本明細書に記載されるような、脳卒中症状の発症の時点を決定するこの方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧＩ、ＣＡ４、およびＴＬＲ発現メディエーターからなる群より選択される発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはＬＹ９６、ＡＲＧＩ、ＣＡ４、およびＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも２つの組み合わせを含む検出組成物と、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。本発明のより好ましい実施形態において、本明細書に記載されるような、脳卒中症状の発症の時点を決定するこの方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧＩ、およびＣＡ４発現メディエーターからなる群より選択される発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはＬＹ９６、ＡＲＧＩ、およびＣＡ４のうちの少なくとも２つの組み合わせを含む検出組成物と、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。本発明の最も好ましい実施形態において、本明細書に記載されるような、脳卒中症状の発症の時点を決定するこの方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧＩ、およびＣＡ４発現メディエーターからなる群より選択される発現メディエーターのうちの少なくとも１つ、またはＬＹ９６、ＡＲＧＩ、およびＣＡ４発現メディエーターの各々の組み合わせを含む検出組成物と、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００５４】
本発明の別の実施形態は、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法を提供し、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧＩ、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つ（またはそれより多く）に対応する検出可能なポリヌクレオチドまたは機能的ポリヌクレオチドフラグメントのパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００５５】
本発明のなお別の実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定するための方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧＩ、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つ以上に対応する検出可能なオリゴヌクレオチドのパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００５６】
本発明の別の実施形態は、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法を提供し、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの１つ以上についての検出可能な抗体のパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００５７】
別の実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定するための方法が提供され、上記方法は、ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、個体のＲＮＡからｍＲＮＡを誘導し、上記ｍＲＮＡを標識し、そしてＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つを含む検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程であって、ここで、上記発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、検出可能な応答を形成するために、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００５８】
本発明の別の実施形態は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つに特異的である核酸プローブを含む、バイオマーカーの検出のための組成物を提供する。
【００５９】
本発明の別の実施形態は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つに特異的である少なくとも１つの抗体を含む、バイオマーカーの検出のための組成物を提供する。
【００６０】
本発明の別の実施形態は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、および／またはＴＬＲ発現メディエーターのうちの少なくとも１つに特異的である精製されたバイオマーカー、ならびに対応するそれらのコード核酸を含む組成物を提供する。
【００６１】
本発明の好ましい実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４からなる群より選択される少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせに対応する検出可能なポリヌクレオチドまたは機能的ポリヌクレオチドフラグメントのパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；検出可能な応答を形成する工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００６２】
本発明の好ましい実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４からなる群より選択される少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせに対応する検出可能なオリゴヌクレオチドのパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；検出可能な応答を形成する工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００６３】
本発明の好ましい実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法が提供され、上記方法は、個体から生物学的サンプルを取得する工程；ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４からなる群より選択される少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせについて検出可能な抗体のパネルと、上記生物学的サンプルを接触させる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；検出可能な応答を形成する工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００６４】
本発明の好ましい実施形態において、脳卒中症状の発症の時点を決定する方法が提供され、上記方法は、ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを処理し、ｍＲＮＡを個体のｍＲＮＡから誘導し、上記ｍＲＮＡを標識し、そしてＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４からなる群より選択される（ｓｅｌｅｃｔｗｅｄ）少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせを含む検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程であって、ここで、これらの発現メディエーターのうちの少なくとも１つが、虚血性脳卒中の急性期応答と関連付けられる、工程；検出可能な応答を形成する工程；ならびに上記検出可能な応答を１つ以上の脳卒中症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００６５】
本発明の好ましい実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４からなる群より選択される少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせについて特異的な核酸プローブを含む、バイオマーカーの検出のための組成物が提供される。
【００６６】
本発明の別の好ましい実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４からなる群より選択される少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせについて特異的である少なくとも１つの抗体を含む、バイオマーカーの検出のための組成物が提供される。
【００６７】
本発明のさらに別の好ましい実施形態において、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４発現メディエーターからなる群より選択される少なくとも１つの発現メディエーターまたはこれらの発現メディエーターの組み合わせについて特異的である精製されたバイオマーカー、ならびに対応するそれらのコード核酸を含む組成物が提供される。
【００６８】
本発明のなお別の実施形態において、虚血性脳卒中症状または他の神経学的疾患の発症の時点を決定するための方法が開示され、上記方法は、ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、核酸を個体のｍＲＮＡから誘導し、上記核酸を標識し、そして配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、および配列番号８のうちの少なくとも１つ以上を含む検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程；上記サンプルと上記検出メカニズムの間の遺伝子発現プロフィールに基づいて化学反応を決定する工程；ならびに上記化学反応を、１つ以上の脳卒中症状または１つ以上の神経学的疾患の症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００６９】
本発明の別の実施形態において、虚血性脳卒中症状または他の神経学的疾患の発症の時点を決定するための方法が開示され、上記方法は、ＲＮＡが保存されるように、虚血性脳卒中に罹患した個体から標的ポリヌクレオチド分子を抽出することによってサンプルを作製し、核酸を個体のｍＲＮＡから誘導し、上記核酸を標識し、そして配列番号２、配列番号３、配列番号５、配列番号６、および配列番号８のうちの少なくとも１つ以上を含む検出メカニズムに対してハイブリダイズさせる工程；上記サンプルと上記検出メカニズムの間の遺伝子発現プロフィールに基づいて化学反応を決定する工程；ならびに上記化学反応を、１つ以上の脳卒中症状または１つ以上の神経学的疾患の症状の発症の時点と相関させる工程を包含する。
【００７０】
上記神経学的疾患は、多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、てんかん、および外傷性脳損傷のうちの少なくとも１つから本質的になる群より選択される。
【００７１】
配列番号１はマーカーリンパ球抗原９６（ＬＹ９６）［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］遺伝子番号：２３６４３についての配列番号であり、配列番号２はマーカーリンパ球抗原９６、転写バリアント１についての配列番号である。配列番号３は、ＭＤ２、転写バリアント２としてもまた知られるマーカーリンパ球抗原９６についての配列番号である。配列番号４はマーカーＡＲＧ１アルギナーゼ１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：３８３についての配列番号である。配列番号５はマーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント１、ｍＲＮＡについての配列番号である。配列番号６はマーカーアルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、転写バリアント２、ｍＲＮＡについての配列番号である。配列番号７はマーカーＣＡ４カルボニックアンヒドラーゼＩＶ［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ｈｕｍａｎ）］遺伝子番号：７６２についての配列番号である。配列番号８はマーカーカルボニックアンヒドラーゼＩＶ（ＣＡ４）、ｍＲＮＡについての配列番号である。
【００７２】
本発明の組成物および方法は以下のように使用することができる。
１．ヒト虚血性脳卒中の発症の時点のマーカーまたは予測因子として。
２．他の神経学的疾患（多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、てんかん、外傷性脳損傷など）の症状発症の時点のマーカーまたは予測因子として。
３．脳卒中処置のための新規な治療標的として。
４．他の神経学的疾患（多発性硬化症、アルツハイマー病、片頭痛、てんかん、外傷性脳損傷など）の処置のための新規な治療標的として。
５．脳組織損傷のマーカーまたは時間の予測因子として。
６．神経学的損傷後の健康の転帰の予後指標として。
７．ｔＰＡまたは他の溶解性薬物処置のための時間ウィンドウを増加させるための方法として。
【００７３】
本発明は、脳卒中症状の発症の時点の困難な臨床的評価を決定することにおける既存の課題を解決する。この評価は、患者が支離滅裂であるか、または事象が目撃されていないといういずれかの理由のために決定に問題があった。症状の発症の時点の偏りのない代理物が臨床評価を改善し、ｔＰＡまたは他の溶解性薬剤／手順の利用の増加を容易にさえし得る。
【００７４】
症状の発症の時点を決定する目的のために、臨床的検証後、本発明は、ポイントオブケアテスト（ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  ｃａｒｅ  ｔｅｓｔ）としての方法を提供する。従って、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、および／またはＣＡ４発現と関連するＲＮＡ発現、代謝産物、タンパク質発現、または他の上流もしくは下流のメディエーターのいずれかを通してのＬＹ９６、ＡＲＧ１、および／またはＣＡ４の発現が、臨床的決定を行うためにリアルタイムで分析される。これはまた、例えば、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）または損傷もしくは病原体関連分子パターン（ＤＡＭＰおよびＰＡＭＰ）などの急性期応答の他のマーカーと組み合わせて使用されてもよい。当業者は、ＬＹ９６がＴＬＲ発現（ｅｘｐｅｓｓｉｏｎ）メディエーターの一例であることを理解している。ＴＬＲ発現メディエーターの他の例は当業者に知られており、これには、ＴＬＲ１およびＴＬＲ２に関連するものが挙げられる。
【００７５】
ＬＹ９６、ＡＲＧ１、およびＣＡ４は急性期応答およびストレスに対する一般的応答のマーカーであるので、その発現のレベルを使用して複数の例（急性または慢性の神経学的疾患、心疾患、または外傷／外傷性事象）において疾患の重篤度または症状の発症の時点を決定できる可能性がある。
【００７６】
１つの態様において、本発明は、脳卒中を診断するためのおよび／または脳卒中症状の発症の時点を決定するための方法における使用のためのバイオマーカーを提供する。加えて、本発明は、脳卒中もしくは脳卒中症状の発症の時点、または継続的／二次的脳損傷の診断／予後診断において使用できる、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、および／もしくはＣＡ４、またはＴＬＲの発現、あるいは、急性期応答に関連する他の上流または下流のメディエーターを含む組成物（例えば、アレイ、プローブ、バイオマーカーパネル）に係る。さらに、本発明のバイオマーカー（単数または複数）は脳卒中の処置のための介入の標的を表すので、本発明のバイオマーカー（単数または複数）は、脳卒中またはその症状を処置でき、かつ本発明のバイオマーカーの評価によって検出可能である化合物または薬剤をスクリーニングするための方法において使用できる。加えて、本発明は、本発明のバイオマーカーに特異的である核酸プローブおよび抗体を含む、バイオマーカーの検出において有用である組成物、ならびに、精製されたバイオマーカーおよびそれらの対応するコード核酸分子を含む組成物に係る。
【００７７】
１つの態様において、本発明は、脳卒中に特徴的である症状を呈しているか、または脳卒中もしくは他の神経学的疾患を有するリスクがある被験体において、脳卒中の症状の発症の時点または脳卒中を決定するための方法を提供し、上記方法は、
（ａ）患者から生物学的サンプルを取得する工程；
（ｂ）ＬＹ９６またはＴＬＲの存在を検出することが可能である検出手段と、上記生物学的サンプルを接触させる工程
を包含する。この検出手段は、本明細書に記載されるような検出メカニズムである。
【００７８】
他の態様において、本発明は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、ＣＡ４、もしくはＴＬＲのうちの少なくとも１つ、またはその組み合わせを検出するための手段を含むキットを提供する。従って、当業者は、本発明が虚血性脳卒中の診断用である少なくとも１つのバイオマーカーを検出するための検出メカニズムを含むキットを提供し、前記バイオマーカーは、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、およびカルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、または前記バイオマーカーの組み合わせからなる群より選択されることを理解する。検出メカニズムは本明細書に記載されている。
【００７９】
ある特定の他の態様において、本発明は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、および／もしくはＣＡ４、またはＴＬＲにそれぞれ対応する、検出可能なポリペプチドまたは機能的ポリペプチドフラグメントのパネルを含む診断システムを提供する。
【００８０】
なお他の態様において、本発明は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、および／もしくはＣＡ４、またはＴＬＲについての検出可能なオリゴヌクレオチドのパネルを含む繊維ベースの診断システムを提供する。
【００８１】
なおさらなる態様において、本発明は、ＬＹ９６、ＡＲＧ１、および／もしくはＣＡ４、またはＴＬＲについての検出可能な抗体のパネルを含む繊維ベースの診断システムを提供する。
【００８２】
当業者は、本発明が、リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、およびカルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）からなる群より選択される虚血性脳卒中のバイオマーカー、または前記バイオマーカーの組み合わせに対して、（ｉ）それぞれ対応する検出可能なポリペプチドまたはその機能的ポリペプチドフラグメントのパネル、（ｉｉ）それぞれ対応する検出可能なオリゴヌクレオチドのパネル、または（ｉｉｉ）それぞれに特異的に結合することができる検出可能な抗体のパネルのいずれかを含む、繊維ベースの診断システムを提供することを理解する。
【００８３】
具体的には、４つのバイオマーカーが本発明において同定されている。（１）リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）、（２）アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、（３）カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）、および（４）ＴＬＲである。これらのバイオマーカーの各々をさらに説明する。
【００８４】
（１）リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）。リンパ球抗原９６（ＬＹ９６）はＭＤ２タンパク質としても知られ、細胞表面上でｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）と会合している。ＬＹ９６は、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）に対する先天性反応として、ＴＬＲ４活性化のために重要である。従って、ＬＹ９６は、この受容体とＬＰＳシグナル伝達の間の連結を提供する。さらに、ＴＬＲ４活性化は、ＮＦ−κＢ発現およびその後の炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ６およびＩＬ８）の放出を生じる伝達経路を誘導する。興味深いことに、虚血性組織損傷は、死細胞により放出されるタンパク質（アラーミンと呼ばれている）の受容体媒介検出を介して、細胞レベルで認識されているという証拠が当該分野において存在している。従って、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）として知られている先天性免疫系の類似の応答を誘発する、ＬＰＳおよびアラーミンなどの外因系および内因系がそれぞれ存在している。本発明の方法（方法を参照のこと）によって示されるようにＬＹ９６のアップレギュレーションは、急性虚血性脳卒中に対する応答が先天性免疫系およびＴＬＲシグナル伝達によって媒介されていることを示唆する。本発明の方法（方法を参照のこと）はさらに、ＬＹ９６の発現のこのアップレギュレーションが、急性虚血性脳卒中の症状の発症から時間をわたって有意に減少することを示す。ヒトＬＹ９６ゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００８で公的に利用可能であり、完全配列は配列番号１として本明細書に提示される。ヒトＬＹ９６遺伝子は遺伝子番号：２３６４３として開示されている。さらに、ＬＹ９６は、異なるアイソフォームをコードする複数の転写バリアントを生じる選択的スプライシングを有する。転写物１のヒトＬＹ９６  ｍＲＮＡ配列は、配列番号２として本明細書に提示されており、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１５３６４として公的に開示されている。転写物２のヒトＬＹ９６  ｍＲＮＡの配列はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１１９５７９７として公的に利用可能であり、配列番号３として本明細書に開示されている。
【００８５】
（２）アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）。アルギナーゼ−１（ＡＲＧ１）は、Ｌ−アルギニンからオルニチンおよび尿素への加水分解を触媒する酵素であり、一酸化窒素（ＮＯ）合成の重要な調節因子である。ＡＲＧ１はＴ−ヘルパー２サイトカインによって誘導される。炎症性刺激は、Ｌ−アルギニン代謝を通して、誘導性ＮＯシンターゼ（ｉＮＯＳ）の発現の増加を生じる。ＡＲＧ１およびｉＮＯＳの相対量に依存して、損傷に対する炎症性応答のタイプを決定することが可能である。なぜなら、両方ともＬ−アルギニンについて競合するからである。外傷はＡＲＧ１の活性の増加とアルギニンのレベルの減少を伴う。加えて、当該分野における研究は、ＪＡＫおよびＳＴＡＴ経路の活性化が平滑筋においてＡＲＧ１を誘導することを示唆する。体液性抗炎症性サイトカインはＡＲＧ１を誘導するので、ＡＲＧ１のアップレギュレーション（方法を参照のこと）は、急性虚血性脳卒中に対する応答が体液性先天性免疫応答に有利に働くことを示唆する。本発明の方法（方法を参照のこと）は、ＡＲＧ１の発現のこのアップレギュレーションが、急性虚血性脳卒中の症状の発症から時間をわたって有意に減少することを示す。ヒトＡＲＧ１遺伝子は、遺伝子番号３８３として開示され、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＧ＿００７０８６として公的に利用可能である。ＡＲＧ１の全長ゲノム配列は配列番号４として本明細書に提示されている。異なるアイソフォームをコードする２つの転写バリアントがＡＲＧ１遺伝子について見い出された。転写バリアント１のヒトＡＲＧ１  ｍＲＮＡはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１２４４４３８として公的に利用可能であり、配列番号５として本明細書に開示されている。転写バリアント２のヒトＡＲＧ１  ｍＲＮＡはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００００４５として公的に利用可能であり、配列番号６として本明細書に提示されている。
【００８６】
（３）カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）。カルボニックアンヒドラーゼ４（ＣＡ４）は、二酸化炭素の可逆的水和を触媒する亜鉛金属結合酵素の大きなファミリーの一部である。従って、ＣＡ４は、細胞呼吸および細胞輸送に関与する全ての生理学的プロセスについて重要である。ＣＡ４は、肺毛細管および近位腎管などの管腔表面上に発現する、グリコシルホスファチジル−イノシトール固着化膜タンパク質である。従って、ＣＡ４は、身体の全体を通して、および脳の中で、毛細管内皮細胞の管腔表面の中で見い出される。このことは、脳におけるＣＯ２および重炭酸の恒常性の調節因子としての血液脳関門中のＣＡ４のための役割を示唆する。虚血性脳卒中後のＣＡ４のアップレギュレーションは、ＣＯ２をＨＣＯ３に変換してｐＨを維持するためにＣＡ４の増加を必要とする細胞呼吸の増加が存在することを示唆する。本発明の方法（方法を参照のこと）は、このＣＡ４の発現のアップレギュレーションが、急性虚血性脳卒中の症状の発症から時間をわたって有意に減少することを示す。ヒトＣＡ４は遺伝子番号７６２として同定され、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＧ＿０１２０５０として公的に利用可能である。ＣＡ４のこのゲノム配列は本明細書において配列番号７として提示される。ヒトＣＡ４  ｍＲＮＡ配列はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００７１７として公的に開示される。この完全配列は配列番号８として本明細書に提示される。
【００８７】
（４）Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、病原体認識および先天性免疫の活性化において基礎的な役割を果たすタンパク質のファミリーである。ＴＬＲは効果的な免疫発達のために必要なサイトカインの生成を媒介する。ＴＬＲは、単一の膜貫通型非触媒性受容体である。ＴＬＲ経路の活性化因子には、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）認識と呼ばれるメカニズムを通しての、タンパク質分解の生成物、損傷したＤＮＡ、フィブリノーゲン、および熱ショックタンパク質が挙げられる。Ｂｉａｎｃｈｉ  ＭＥ．Ｄａｍｐｓ、ｐａｍｓ  ａｎｄ  ａｌａｒｍｉｎｓ：Ａｌｌ  ｗｅ  ｎｅｅｄ  ｔｏ  ｋｎｏｗ  ａｂｏｕｔ  ｄａｎｇｅｒ．Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．２００７；８１：１−５。当業者は、ＬＹ９６がＴＬＲ発現メディエーターの一例であることを理解している。ＴＬＲ発現メディエーターの他の例は当業者によって知られており、これには、ＴＬＲ１およびＴＬＲ２に関連するものが挙げられる。
【００８８】
本明細書中上記したように、組織プラスミノゲン活性化因子（ｔＰＡ）は、１９９５年以来、ＦＤＡが認可した虚血性脳卒中の唯一の処置法であった。多くの禁忌要因のために、すべての虚血性脳卒中患者のうちの２〜３％のみがｔＰＡを受容し、患者の症状が開始したときと比較して、患者が処置施設に到着したときに、初めて主要なものとなる。ｔＰＡは脳卒中の症状の発症から最大で４．５時間以内に与えられなければならない。しかし、処置のために患者がＥＤに到着するメジアン時間はおよそ８時間である。ｔＰＡ処置のための時間ウィンドウを増加させることは臨床的に必要である。加えて、３０％までの患者は、彼らの脳卒中症状が始まった時間について気付いていない。いくつかの場合において、患者は、普通に就寝し、その後、朝に脳卒中の症状を伴って目覚める。これらの患者は最後に正常であると知られていた時間の周辺が不確かなため、これらの患者にはｔＰＡを与えることはできない。本発明は、脳卒中に対する強力な先天性炎症反応を認識し、脳卒中後の患者の末梢血中のこれらの免疫遺伝子の発現をモニターする。本発明は、これらの免疫遺伝子の発現が、時間をわたって任意に減少し、従って、脳卒中が開始したときについての代理物として使用できることを見い出した。いつ脳卒中症状が始まったかの偏りのない尺度により、臨床医のｔＰＡを用いて処置することの決断の手助けとなる。このことは、機能的回復の予測される増加を伴って、ｔＰＡの利用の３０％増加をもたらし得る。これらの炎症性免疫マーカーはまた、４．５時間の時間ウィンドウを超えてｔＰＡ処置を導くために使用されてもよい。これらのゲノムバイオマーカーを利用することを含む本発明の方法は、脳卒中治療を導くことができる。
【００８９】
方法
末梢全血サンプルを、１８歳より上のＭＲＩ診断したＩＳ（虚血性脳卒中）患者（ここではヒト）から、最後に正常であることが知られたときから２４時間以内（すなわち脳卒中前の状態）および２４〜４８時間後に収集した。総ＲＮＡを、全血から抽出されたＰａｘｇｅｎｅ  ＲＮＡチューブ中で安定化とし、増幅し、そしてＩｌｌｕｍｉｎａ  ＨｕｍＲｅｆ−８ｖ２ビーズチップにハイブリダイズした。遺伝子発現を、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇにおいて、ｔ検定を使用して両方の時点で脳卒中患者間で単変量様式で比較した。タイプ１エラーのインフレーションをＢｏｎｆｅｒｒｏｎｅによって補正した。線形回帰を使用して、年齢について調整する時間の関数として遺伝子発現の変化をモデル化した。マイクロアレイの知見の検証は、別々の脳卒中患者コホートにおいてＲＴ−ＰＣＲを用いて確認した。図１は、患者の人口統計情報を示す表を示す。図１（ｂ）は、脳卒中の発症からの時間の増加がＬＹ９６の発現の減少と関連付けられることを示す、時間をわたってのＬＹ９６の発現のグラフである。図１（ｃ）はＬＹ９６のＲＴ−ＰＣＲ検証を示す、時間をわたってのＬＹ９６  Ｃｔ遺伝子発現のグラフであり、ここで、ＬＹ９６未加工Ｃｔ値は小さなサンプルサイズでは時間をわたって減少傾向を示す。図１（ｄ）は、ＬＹ９６のＲＴ−ＰＣＲの検証を示す、時間をわたってのＬＹ９６  ｄＣｔ遺伝子発現のグラフであり、ＬＹ９６をＢ−アクチンに対して正規化したときに、減少傾向はもはや見られない。
【００９０】
脳卒中の発症後のｔＰＡの早期の投与は、患者の機能回復の改善を伴い、ｔＰＡを受容した患者のパーセンテージを増加させることは、急性医療の現在の品質を有意に改善し、ポジティブな転帰の可能性を増加させることが当業者によって理解される。本発明のデータは、末梢血中でのＬＹ９６の発現が脳卒中の発症の時点を決定するための代理物として働くことの証拠を提供する。このバイオマーカープロフィールおよび他の臨床的共変量に基づく本発明の方法は、脳卒中の発症の時点が不明の場合、ｔＰＡを投与するためのさらなる確信を臨床医に与えるのに有用である。本発明の方法は、ｔＰＡの利用を増加または病院ベースの診察室および野外での処置の時間ウィンドウを増加すべきである虚血性脳卒中の診断のためのポイントオブケア血液検査と共に使用することができる。
【００９１】
２つの異なる研究ソースから収集されたデータを将来的に利用する、遡及的に症例を管理した（ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ）研究を行った。以下の包含基準を有する脳卒中患者を採用した：年齢１８歳以上；ＭＲＩで診断された明確な急性虚血性脳血管症候群（ＡＩＣＳ）；および症状の発症から２４時間以内に血液を採取。高可能性／可能性ＡＩＣＳおよび出血を伴う患者をこの研究から除外した。発症の時点を、患者に急性脳卒中症状がないことが最後に知られていた時点として決定した。ｒｔＰＡを発症から３時間以内に身体障害の症状を有する患者に与えた。前病的欠損（ｐｒｅ−ｍｏｒｂｉｄ  ｄｅｆｉｃｉｔ）を、脳卒中の前の状態について修正ランキンスケール（ＭＲＳ）によって決定し、そして損傷の重篤度を、脳卒中後の採血の時点でＮＩＨ脳卒中スケール（ＮＩＨＳＳ）によって決定した。対照被験体を、参加の時点で神経学者の評価により神経学的に正常であったならば、別個のＮＩＡ／ＮＩＨプロトコールの下で連続した便宜サンプルとして採用した。末梢全血を、同意後にＰａｘｇｅｎｅ血液ＲＮＡチューブ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ，Ｑｉａｇｅｎ）に収集した。人口統計データを、熟練の神経学者によって、患者または顕著な他人（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｏｔｈｅｒ）から収集した。
【００９２】
標準プロトコールの認可、登録、および同意
本研究は、ＮＩＨおよびＳｕｂｕｒｂａｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭａｒｙｌａｎｄにおけるＮＩＮＤＳおよびＮＩＡのＩＲＢからヒト被験体の研究についての認可を受けた。書面でのインフォームドコンセントを、あらゆる研究手順を実施する前に、すべての被験体または権限を与えられた代理人からから得た。
【００９３】
ＲＮＡ抽出および増幅
Ｐａｘｇｅｎｅ  ＲＮＡチューブを８〜１０回転倒させ、ＲＮＡ抽出まで−８０℃フリーザーに置いた。チューブを回転ベッド上でＲＮＡ単離前２４時間の間室温で解凍した。ＲＮＡをＰａｘｇｅｎｅ血液ＲＮＡ抽出キット（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ，Ｑｉａｇｅｎ）で抽出した。グロビン還元を本研究ではどのサンプルでも行わなかった。なぜなら、Ｉｌｌｕｍｉｎａプラットフォーム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｔｅｍｓ）を使用するときにプローブ検出に対してほとんど影響がないことが示されていたからである。
【００９４】
ビオチン化した増幅ＲＮＡをＩｌｌｕｍｉｎａ  ＴｏｔａｌＰｒｅｐ  ＲＮＡ増幅キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）から生成した。ＲＮＡ量をＮａｎｏｄｒｏｐで決定し、ＲＮＡ品質をＡ２６０／Ａ２８０比率、およびゲル電気泳動上の２つの区別できるリボソームバンドの存在によって決定した。
【００９５】
アレイハイブリダイゼーション
サンプルを、２２，０００超の遺伝子および選択的スプライシングバリアントの分析が可能なＩｌｌｕｍｉｎａ  ＨｕｍＲｅｆ−８  ｖ２発現ビーズチップにランダムにハイブリダイズした。ビーズアレイをＩｌｌｕｍｉｎａ  ＢｅａｄＳｔａｔｉｏｎ  ５００Ｘによってスキャンし、未加工の強度値をＩｌｌｕｍｉｎａのＢｅａｄ  Ｓｔｕｄｉｏ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｍａｎａｇｅｒにセーブした。サンプル標識、ハイブリダイゼーション、およびスキャニングを標準的なＩｌｌｕｍｉｎａプロトコールを使用して行った。
【００９６】
統計学的分析
ベースライン人口統計を、ＳＰＳＳ（バージョン１５、ＳＰＳＳ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）において実施した。カイ二乗分析を使用して、性別、人種、共存症（高血圧、糖尿病、および高脂質血症）および薬物適用歴についての比較を行った。スチューデントｔ検定を行って群間の年齢の有意さを分析した。有意さのレベルは、両側仮説検定について０．０５で確立した。
【００９７】
プローブレベル分析
プローブ発現をＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸ  ｖ１０（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でフィルタリングし、２４，４２４の最終プローブセットを得た。ロブストマルチアレイ分析（ＲＭＡ）正規化により、プローブデータを以下の順番で照合した：１）バックグラウンド補正−完全マッチプローブ情報；２）分位数正規化−プローブレベル正規化；および３）要約（ｓｕｍｍａｒｉｚａｔｉｏｎ）−線形モデルに適合するようにメジアンを用いるｌｏｇ２の発現尺度要約（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｍｅａｓｕｒｅ  ｓｕｍｍａｒｙ）。監視されていないクラスタリングを実施して、系統発生学的距離を測定し、域外値を検出した。
【００９８】
遺伝子発現レベル分析
遺伝子発現分析を、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ遺伝子発現（ＧＸ）モジュール（バージョン１、Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）で実施し、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸ  ｖ１０（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で検証した。少なくとも発現が２倍違う遺伝子を、ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏにおけるＩｌｌｕｍｉｎａカスタムモデル（修正ｔ検定）およびＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇにおけるｔ検定比較を使用して、脳卒中患者と対照被験体の間で単変量様式で比較した。複数検定の影響は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  Ｆａｍｉｌｙ  ｗｉｓｅ  ｅｒｒｏｒ（ＦＷＥＲ）を使用して評価した。
【００９９】
オフターゲット効果の同定のためのロジスティック回帰
群による年齢の有意差を考慮して、事後（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ）ロジスティック回帰を実施した。各遺伝子についての正規化された強度を年齢別に入力し、次いで、高血圧および異脂肪血症を、目的の共変量として入力した。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正された０．００５以下のｐ（０．０５／９）は有意であった。線形回帰を使用して、年齢について調整されたときの時間の線形関数として遺伝子発現の変化をモデル化した。
【０１００】
ポリメラーゼ連鎖反応の検証
ｃＤＮＡを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ第１鎖合成キットにしたがって生成した。ＱＲＴ−ＰＣＲ反応を、ＡＲＧ１、ＣＣＲ７、ＬＹ９６、およびＭＭＰ９についてＴａｑｍａｎ遺伝子発現プローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、７９００ＨＴ  ＱＲＴ−ＰＣＲシステムによって実施した。ベータアクチンによって選ばれた遺伝子の相対発現を正規化した。倍数変化の違いは、デルタデルタＣＴ法によって計算した。検証は、ｔ検定が有意さを示し（ｐ≧０．０５）、ＱＲＴ−ＰＣＲ結果がマイクロアレイシグナル強度と相関した場合（Ｐｅａｒｓｏｎ  ｒ≧０．５かつｐ≧０．０５）に確認された。
【０１０１】
サンプルサイズの推定
サンプルサイズの推定はＰＡＳＳ：（ｐｏｗｅｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｓａｍｐｌｅ  ｓｉｚｅ  ｓｙｓｔｅｍ）およびＪＭＰを使用して実施した。２２人の患者および２２人の対照被験体は、発現の違いを検出するために各遺伝子について９０．６８％検出力（ｐｏｗｅｒ）を達成し、少なくとも１．５倍の倍数変化および１．５の標準偏差であり、両側１サンプルｔ検定を使用して０．０５の偽発見率（ｆａｌｓｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｒａｔｅ）であった。
【０１０２】
結果
サンプルの平均年齢は７１．９±（１４．６ｓｄ）歳であった。症状の発症から急性の血液採取までの平均時間は９：２９±（６：２ｓｄ）時間（範囲２：３５〜２３：０２）であり；追跡血液採取までは２９：２４±（７．１ｓｄ）時間（範囲１８：４５〜４３：３０）であり；そして急性の血液採取から追跡血液採取までの間の時間は１９：５５±（３．３ｓｄ）時間（範囲１３：３０〜２７：３２）であった。ＣＡ４およびＡＲＧ１の発現は、１．５倍を超えて有意に減少し（図１０）、ＬＹ９６発現はベースラインから追跡までの間で２倍を超えて減少した（図１ｂ）。この発現の減少は、脳卒中の発症の時点からの増加と関連し、年齢について調整した際にＬＹ９６発現のみについて有意なままであった。ＡＲＧ１およびＣＡ４発現は、年配の患者において有意に低かった。
【０１０３】
本発明の特定の実施形態は例示目的のために上記したが、本発明の詳細の多数の変形が、図面および添付の特許請求の範囲に規定されるような本発明から逸脱することなく行われてもよいことは当業者には明白であろう。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図２−９】
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【図２−１０】
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【図２−１１】
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【図２−１２】
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【図２−１３】
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【図２−１４】
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【図２−１５】
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【図２−１６】
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【図２−１７】
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【図２−１８】
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【図２−１９】
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【図２−２０】
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【図２−２１】
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【図２−２２】
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【図２−２３】
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【図２−２４】
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【図２−２５】
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【図２−２６】
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【図２−２７】
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【図２−２８】
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【図２−２９】
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【図２−３０】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図５−５】
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【図５−６】
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【図５−７】
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【図５−８】
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【図５−９】
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【図５−１０】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図８−５】
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【図８−６】
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【図８−７】
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【図８−８】
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【図８−９】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１０−５】
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【図１０−６】
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【配列表】
2016507235000001.app
【国際調査報告】
2016507235.tif 000069
2016507235.tif 000070