(57)【要約】  本発明は、哺乳動物においてポジティブな情動および／または活発な覚醒を増強する方法における、グルコース代謝拮抗物質および／またはグルコース代謝拮抗物質の供給源を含む組成物の使用に関する。
2016522204.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物においてポジティブな情動および／または活発な覚醒を増強する方法における、グルコース代謝拮抗物質および／またはグルコース代謝拮抗物質の供給源を含む組成物の使用。
【請求項２】
前記哺乳動物におけるポジティブな情動および／または活発な覚醒の前記増強が、社会的相互関係が増すこと、新しいエリアおよび／または状況において快適さが増すこと、従順が増すこと、マナーが増すこと、アラートネスが増すこと、認識が増すこと、活性が増すこと、およびその混合からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記哺乳動物が、ヒトおよびコンパニオンアニマルからなる群から選択され、コンパニオンアニマルが、イヌ、ネコ、ウサギ、シロイタチ、ウマ、雌ウシからなる群から選択され、最も好ましくは、哺乳動物が、イヌまたはネコからなる群から選択されるコンパニオンアニマルであることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記グルコース代謝拮抗物質が、２−デオキシ−Ｄ−グルコース；５−チオ−Ｄ−グルコース；３−Ｏ−メチルグルコース；１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール；マンノヘプツロース；およびその混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記グルコース代謝拮抗物質が、最も好ましくは、マンノヘプツロースであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記マンノヘプツロースが、アボカド抽出物、アボカド粉、アルファルファ、イチジク、およびサクラソウならびにその混合物からなる群から選択される植物材料からのものであることを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記組成物が、前記グルコース代謝拮抗物質を、該組成物の０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．００１〜５重量％、より好ましくは０．００１〜１．５重量％、最も好ましくは０．０１〜０．５重量％含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
毎日の哺乳動物への前記グルコース代謝拮抗物質の投薬量が、０．５〜２００ｍｇ／ｋｇであり（ここで、ｍｇがグルコース代謝拮抗物質のレベルであり、およびｋｇが前記哺乳動物の体重のキログラムである）、好ましくは１〜１５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２〜１００ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは２〜５０ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記グルコース代謝拮抗物質が、マンノヘプツロースであり、毎日の哺乳動物への投薬量が、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇであり（ここで、ｍｇがグルコース代謝拮抗物質のレベルであり、およびｋｇが前記哺乳動物の体重のキログラムである）、好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２〜８ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物が、栄養的にバランスのとれた食物、栄養的にバランスのとれたペットフード、栄養的にバランスのとれたドッグフード、および栄養的にバランスのとれたキャットフードからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記組成物が、おやつ、噛んで食べる菓子、ビスケット、肉汁、ソース、飲料、補助水、ヨーグルト、粉末、およびその組合せからなる群から選択される食物栄養補助剤であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、動物タンパク質、植物タンパク質、穀粉性の物質、野菜、果実、卵ベースの材料、非変性タンパク質、食物グレードのポリマー接着剤、ゲル、ポリオール、デンプン、ゴム、風味材料、調味料、塩、着色剤、徐放性化合物、ミネラル、ビタミン、酸化防止剤、プレバイオティクス、プロバイオティクス、芳香調節剤、脂質、およびその組合せをさらに含むことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物におけるポジティブな応答を増強する目的のために、グルコースまたは他の炭水化物源の利用を改変するためのおよびカロリー制限の代謝効果を模倣するためのグルコース代謝拮抗物質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
最適なグルコースプロファイルおよびインスリンプロファイルを促進する最も勢いのある技術のうちの１つは、カロリー制限（ＣＲ）またはカロリー制限模倣化合物（ＣＲＭ）である。ＣＲＭは、ＣＲの代わりとして、ＣＲレジメンのネガティブな影響のうちのいくつかを回避するために研究されてきた。ＣＲＭ戦略の目的は、カロリー摂取量を減らすことなく、ＣＲがもたらすものと同じ寿命延長効果をもたらすことである。ＣＲの寿命延長戦略は、エネルギーセンシングおよび代謝の調節に関与する系に影響を及ぼすため、ＣＲＭのいくつかの標的は、貯蔵または異化を介してエネルギー産生に使用される主要な経路のうちの１つであるグルコース代謝を修飾する代謝物質に集中した。
【０００３】
２−デオキシ−Ｄ−グルコースなどのグルコース代謝拮抗物質は、グルコースに関係する化合物である。しかしながら、グルコースとの構造的な違いにより、そのような化合物は、炭水化物代謝のある側面をブロックしまたは阻害し、そのため、カロリー制限の効果を模倣し得る。これらのグルコース代謝拮抗物質は、体重の低下、血漿インスリンレベルの減少、体温の低下、腫瘍形成および成長の遅延、ならびに循環グルココルチコイドホルモン濃度の上昇を含む多くの生理学的効果を発揮する。これらの生理学的効果は、炭水化物代謝の阻害に起因する。本発明は、ポジティブな情動およびポジティブな覚醒を引き起こす、炭水化物代謝の阻害の効果に関する。
【０００４】
情動および覚醒という用語は、心理学において使用されてきた長い歴史を有し、多くの解釈が可能である。両方とも、行動の特定の側面を説明するために使用される仮想の構成概念である。
【０００５】
情動および気分は関係しており、一緒に理解される必要がある。仮想の構成概念として、気分は、ヒトにおいて口頭で表現することができる、感情によって操られる精神的、自覚的状態である。２つのタイプの気分が、一般に説明される：ポジティブな気分またはネガティブな気分。ネガティブな気分は、うつ、乏しい自尊心、攻撃、心配、ストレス、および過敏性の感情に関係するのに対して、ポジティブな気分は、活気ならびにモチベーションの増加、アラートネス、幸福感、親切、および信頼性の感情に関係する。しかしながら、気分は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物において観察可能な行動反応から推測することができる。
【０００６】
この違いを扱うために、もう一つの仮想の構成概念、行動反応に基づいた個人の外面的に示される気分の特徴を表す情動が適用される。したがって、コンパニオンアニマルなどの非ヒト哺乳動物において気分について説明される傾向があるが、技術的には、情動の応答に基づいてそれらの気分が推測されている。このように、情動という用語は、本発明による精神状態について、より適した説明となる。そのうえ、感情表出という用語も、情動を示す顔、声、身振り、または姿勢についての行動を表す従来の心理学的用語であるため、適用することができる。情動は、ポジティブな特徴およびネガティブな特徴の両方を含むと考えられる。ポジティブな情動の尺度は、楽しいことに関与しているレベルを反映し、人または動物が熱心になる、興奮する、活動的になる、固く決心する程度を反映するのに対して、ネガティブな情動尺度は、楽しくないことに関与している一般的な特徴ならびに恐れ、神経過敏、罪悪感、および羞恥心を含む広範囲の嫌悪の情動を包含する自覚的苦痛を反映する。本発明は、ポジティブな情動の行動的徴候に関する。
【０００７】
心理学の文献では、覚醒は、感覚性のアラートネス、運動性、および応答する準備の増加に至るプロセスである、覚醒していて、刺激に反応する生理学的状態を表す仮想の構成概念である。事実、覚醒は、意識、注意、および情報処理の調節に関与する。提示される刺激および関与する動機づけの動因の関係に基づいて、覚醒した状態において結果として生じる行動は、動員性（ｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇ）または非動員性（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇ）のいずれかとすることができる。覚醒についての仮想の構成概念のもう一つの重要な側面は、動作に対する曲線関係の側面である。Ｙｅｒｋｅｓ−Ｄｏｄｓｏｎの法則として知られているように、この考え方は、低すぎるまたは高すぎる覚醒が作業成果に悪影響を及ぼし得るような、動作について最適なレベルの覚醒があることを強調する。神経レベルでは、覚醒の状態は、脳における網様賦活系ならびに体内における自律神経系および内分泌系によって操られる。生理学的なひとり言（ｓｏｌｉｌｏｑｕｙ）は、心拍数および血圧の上昇を含むことができる。そのうえ、血漿グルココルチコイドおよび遊離脂肪酸のレベルの上昇などのホルモン応答は、覚醒の尺度として示唆されてきた。覚醒はまた、脳波測定法（ＥＥＧ）によって測定される脳の活性によって生理学的に推測することができる。したがって、本発明は、動作に悪影響を及ぼさないが、処置された哺乳動物を最適化された動作に移す覚醒の増加に関すると理解することが重要である。さらに、情動および覚醒に対する本発明の効果を考慮する際に、ポジティブな情動を活発な覚醒の尺度として定義することができるのに対して、ネガティブな情動は、楽しくない覚醒の感情に関係する。
【０００８】
顕著な行動反応はまた、ポジティブな情動および覚醒の増加を示す、カロリー制限を受けている動物およびヒトにおいても報告された。特に、げっ歯動物がカロリー制限食を与えられる場合、それらは、全体としてならびにまた、新規な物体およびエリアの探索においても歩行活動の増加を示す。これは、食餌探索行動を増加させるためにデザインされた自然の応答として解釈することができる。バープレッシングタスク（ｂａｒ−ｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｔａｓｋ）において、短期間のカロリー制限食を与えられたげっ歯動物は、より多くの自発的なバープレスおよびまた、食餌報酬のためのバープレスへの意欲の増加をも示す。これらの観察は、より活動的な、集中している、固く決心した、注意深い、鼓舞された、および機敏な状態を含むポジティブな情動の説明を満たすと思われる。これらの行動はまた、活発な覚醒が増加した状態を示す。覚醒の生理学的指標に関して、短期間のカロリー制限を受けているげっ歯動物は、心拍数および血圧の増加を示すが、数週間の長期的なカロリー制限を受けているげっ歯動物は、心拍数および血圧の低下を示す。しかしながら、グルココルチコイドおよび遊離脂肪酸などの覚醒の生化学的指標は、短期間のカロリー制限を受けているげっ歯動物において上昇し、この上昇は、長い期間にわたって持続する。
【０００９】
「摂食中枢」と呼ばれる外側視床下部は、血漿グルコースレベルに応答性である。グルコース酸化および外側視床下部の電気的活性の増加ならびに血漿グルコースの短い一過性の低下はすべて、ヒトおよびラットにおいて摂食に先行し、空腹感に関連づけられる。マンノヘプツロース（ＭＨ）または他のグルコース代謝拮抗物質の消費による糖尿病誘発性の状態の誘発は、外側視床下部におけるグルコース応答性を低下させ、したがって、グルコース代謝に関連する満腹／空腹シグナルに影響を与え得る。そのため、イエネコにおける遊び行動の根底にある動機づけ系に影響を与える空腹もまた、グルコース代謝によって影響を受ける。ＭＨなどのグルコース代謝拮抗物質がグルコース代謝を阻害し、グルコース応答性を低下させるため、次いで、おそらく、ＭＨの代謝効果は、遊びの表明が増すことを通してネコの活性の増加が観察されることによって示されると思われる。
【００１０】
慣れたおよび不慣れの状況の両方における行動の挑戦は、哺乳動物の生理学的および精神的ストレスレベルを増加させ、また、生活の質を減少させることが知られている。未知の状況は、恐れおよび／またはストレスを誘発し、哺乳動物が新規な状況への曝露の変化を受ける場合、より明白になり得る。これは、哺乳動物をネガティブな、完全には熱中していない、それほど活動的ではない、また環境を完全には認識していない状態にさせ得る。哺乳動物がポジティブな情動を有する場合、それは、哺乳動物が、あたかも、哺乳動物が動作を止めしまうことがあり得る恐ろしい状況でのように応答するのではなく、学習し、調査する機会としてこれを知覚するのを促進することができる。さらに、動作に悪影響を及ぼさないが、処置された哺乳動物を最適化された動作に移す覚醒の増加は、これらの慣れたおよび不慣れの状況において支援となるであろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、ポジティブな情動および／または活発な覚醒を増強するために、慣れたおよび／または不慣れの状況における哺乳動物による使用に適した組成物を提供することが、本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明による組成物におけるグルコース代謝拮抗物質の使用によって上記の課題を達成できることが分かった。
【００１３】
哺乳動物がより幸福となり、動き回るように動機づけられるため、毎日の生活に関与する哺乳動物を得るためにそれらが使用されてもよいことは、本発明による組成物の利点である。
【００１４】
完全に熱中していて、活動的で、ポジティブで、また環境を完全に認識している哺乳動物を得るためにそれらが使用されてもよいことは、本発明による組成物のもう一つの利点である。
【００１５】
本発明は、哺乳動物においてポジティブな情動および／または活発な覚醒を増強する方法における、グルコース代謝拮抗物質を含む組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、取扱者および評価者が慣れている場合の、新しい状況における快適さに関する結果を示す図である。
【図２】図２は、取扱者が慣れており、評価者が不慣れな場合の、新しい状況における快適さに関する結果を示す図である。
【図３】図３は、取扱者および評価者が不慣れな場合の、新しい状況における快適さに関する結果を示す図である。
【図４】図４は、取扱者および評価者が慣れている場合の、社会的相互関係に関する結果を示す図である。
【図５】図５は、取扱者が慣れており、評価者が不慣れな場合の、社会的相互関係に関する結果を示す図である。
【図６】図６は、取扱者および評価者が不慣れな場合の、社会的相互関係に関する結果を示す図である。
【図７】図７は、血清Ｔｒｐ：ＬＮＡＡを示す、一緒にプールした高齢および若いコホートの時間と食餌の相互作用を示す図である。
【図８】図８は、血清Ｔｒｐ：ＬＮＡＡを示す、高齢および若いコホートの別々の時間と食餌の相互作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
パーセンテージおよび比はすべて、別段の指示がない限り、重量で計算される。パーセンテージおよび比はすべて、別段の指示がない限り、全組成に基づいて計算される。
【００１８】
本発明において利用される様々な成分を含む構成成分についての商標が本明細書において参照される。本発明者らは、ある商標の下の材料によって限定されることを意図しない。商標によって参照されるものと均等な材料（たとえば異なる名称または参照番号の下で異なる供給源から得られるもの）が、本明細書における説明において代用され、利用されてもよい。
【００１９】
本発明の説明において、様々な実施形態または個々の特徴が開示される。当業者に明らかなように、そのような実施形態および特徴のすべての組合せが可能であり、本発明の好ましい実施をもたらすことができる。
【００２０】
本明細書における組成物は、本明細書において記載される特徴または実施形態のいずれかを含んでいてもよい、それから本質的になってもよい、またはそれからなってもよい。
【００２１】
本発明の経口用量はすべて、別段の指示がない限り、哺乳動物の体重１キログラム当たりで計算される。
【００２２】
ヒトおよびコンパニオンアニマルは、本明細書において有利に処置される。本明細書において使用されるように、「コンパニオンアニマル」は、家畜を意味する。好ましくは、「コンパニオンアニマル」は、イヌ、ネコ、ウサギ、シロイタチ、ウマ、雌ウシ、またはその他同種のものを意味する。より好ましくは、「コンパニオンアニマル」は、イヌまたはネコを意味する。
【００２３】
本発明は、哺乳動物においてポジティブな情動および／または活発な覚醒を増強するための使用のためのグルコース代謝拮抗物質を含む組成物の使用に関する。前記哺乳動物におけるポジティブな情動および／または活発な覚醒は、社会的相互関係が増すこと、新しいエリアおよび／または状況において快適さが増すこと、従順が増すこと、マナーが増すこと、アラートネスが増すこと、認識が増すこと、活性が増すこと、およびその混合からなる群から選択される。
【００２４】
ポジティブな情動および／またはポジティブな覚醒は、哺乳動物を、完全に熱中した、集中した、活動的な、機敏な、および環境を完全に認識している状態にする。理論によって限定されることを意図するものではないが、神経細胞がグルコースを利用できることは、神経機能を増強し／維持し、そのうえ、グルコースは、脳のためのエネルギーレベルを保持し、これにより、哺乳動物はより長い間、十分に機能的になることができると考えられる。脳は、細胞エネルギーＡＴＰを合成するために、その主なエネルギー源としてグルコースを主として利用する。グルコースレベルは変動するという証拠がある。マンノヘプツロースなどのグルコース代謝拮抗物質は、より持続的なレベルのグルコースをもたらし、グルコースの変動を予防し、そのため、脳にとってのエネルギーレベルの保持をもたらし得る。
【００２５】
理論によって限定されることを意図するものではないが、ポジティブな情動の増強は、活発な覚醒の増加に至ると考えられる。覚醒の増加により、覚醒が、動作に悪影響を及ぼさないが、処置された哺乳動物を最適化された動作に移すことを意味する。
【００２６】
本発明は、グルコースまたは他の炭水化物源の利用を改変するためのおよびカロリー制限の代謝効果を模倣するためのグルコース代謝拮抗物質構成成分の使用に関する。
【００２７】
本明細書において有用なグルコース代謝拮抗物質は、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、および２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールを含むアンヒドロ糖、ならびにマンノヘプツロース（ＭＨ）を含む。マンノヘプツロースは、本明細書における使用のための最も好ましいグルコース代謝拮抗物質である。理論によって限定されることを意図するものではないが、これらの化合物は、グルコース代謝拮抗物質であることが認められている。さらに、理論によって限定されることを意図するものではないが、マンノヘプツロースはグルコース代謝拮抗物質であると考えられる。たとえば米国特許出願公開第２００２／００３５７０１号明細書を参照されたい。有利には、マンノヘプツロースは、アボカド抽出物、アボカド粉、またはマンノヘプツロースの他の豊富な供給源など、植物の構成成分として列挙される組成物中に存在してもよい。マンノヘプツロースの豊富な供給源の非限定的な例は、アルファルファ、イチジク、またはサクラソウである。植物は、果実、種（もしくは壁孔）、枝、葉、または適切な植物の任意の他の部分またはその組合せを含んでいてもよい。
【００２８】
アボカド（ワニナシ、アグアカテ、またはパルタと一般に呼ばれる）は、非常に豊富なレベルのマンノヘプツロースならびに関係する糖および他の炭水化物を含有する。アボカドは、カリフォルニア、フロリダ、ハワイ、グアテマラ、メキシコ、西インド諸島、南アフリカ、およびアジアの地域で最も成長に成功している亜熱帯常緑樹の果実である。
【００２９】
アボカドの種は、たとえばペルセア・アメリカーナ（Ｐｅｒｓｅａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａ）およびペルセア・ヌビゲナ（Ｐｅｒｓｅａ  Ｎｕｂｉｇｅｎａ）を含み、これらの例証となる種内の栽培品種をすべて含む。適した栽培品種の例は、アナハイム（Ａｎａｈｅｉｍ）；ベーコン（Ｂａｃｏｎ）；クリームハート（Ｃｒｅａｍｈａｒｔ）；デューク（Ｄｕｋｅ）；フエルテ（Ｆｕｅｒｔｅ）；ガンター（Ｇａｎｔｅｒ）；グエン（Ｇｗｅｎ）；ハス（Ｈａｓｓ）；ジム（Ｊｉｍ）；ルラ（Ｌｕｌａ）；リヨン（Ｌｙｏｎ）；メヒコーラ・グランデ（Ｍｅｘｉｃｏｌａ  Ｇｒａｎｄｅ）；マリエッタ・グリーン（Ｍｕｒｒｉｅｔａ  Ｇｒｅｅｎ）；ネイバル（Ｎａｂａｌ）；ピンカートン（Ｐｉｎｋｅｒｔｏｎ）；クィーン（Ｑｕｅｅｎ）；プエブラ（Ｐｕｅｂｌａ）；リード（Ｒｅｅｄ）；リンコン（Ｒｉｎｃｏｎ）；ライアン（Ｒｙａｎ）；スピンクス（Ｓｐｉｎｋｓ）；トパ・トパ（Ｔｏｐａ  Ｔｏｐａ）；ウィトセル（Ｗｈｉｔｓｅｌｌ）；ビュルツ（Ｗｕｒｔｚ）；およびズッターノ（Ｚｕｔａｎｏ）を含んでいてもよい。アボカドの果実は、本明細書における使用に特に好ましく、果実は壁孔を含有してもよく、または壁孔は除去されてもよく、もしくは少なくとも部分的に除去されてもよい。ペルセア・アメリカーナ（Ｐｅｒｓｅａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａ）の果実ならびにアナハイム（Ａｎａｈｅｉｍ）、クリームハート（Ｃｒｅａｍｈａｒｔ）、フエルテ（Ｆｕｅｒｔｅ）、ハス（Ｈａｓｓ）、ルラ（Ｌｕｌａ）、リヨン（Ｌｙｏｎ）、マリエッタ・グリーン（Ｍｕｒｒｉｅｔａ  Ｇｒｅｅｎ）、ネイバル（Ｎａｂａｌ）、クィーン（Ｑｕｅｅｎ）、プエブラ（Ｐｕｅｂｌａ）、リード（Ｒｅｅｄ）、ライアン（Ｒｙａｎ）、およびスピンクス（Ｓｐｉｎｋｓ）などのより大きな果物（たとえば、果実が成熟している場合、約１２オンス（３４０．１９４ｇ）以上）を産生する栽培品種の果実は、本明細書における使用に特に好ましい。
【００３０】
特に好ましいアボカドは、クリオロアボカドである。クリオロは、クリオロ西インド諸島アボカド、クリオロ西インド諸島／グアテマラハイブリッドアボカド、およびその混合物からなる群から選択されるもの、とりわけドミニカ共和国で成長したアボカドであってもよい。最適には、前記クリオロアボカドは、早期収穫のクリオロアボカドである。
【００３１】
アルファルファ、イチジク、またはサクラソウ由来の植物もまた、比較的高いレベルのマンノヘプツロースを提供することが報告されている。アルファルファはまた、メディカゴ・サティバ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ  ｓａｔｉｖａ）とも呼ばれる。イチジクまたはフィカス・カリカ（Ｆｉｃｕｓ  ｃａｒｉｃａ）（たとえばフサナリイチジクもしくはエジプトイチジクを含む）およびサクラソウまたはセイヨウサクラソウ（Ｐｒｉｍｕｌａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）もまた、使用されてもよい。
【００３２】
２−デオキシ−Ｄ−グルコース；５−チオ−Ｄ−グルコース；３−Ｏ−メチルグルコース；１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール；マンノヘプツロース；およびその混合物から選択される特定のレベルのグルコース代謝拮抗物質が、本明細書において有用であることが発見された。特に、比較的低レベルのおよび比較的高用量のグルコース代謝拮抗物質は、有用であるが、所望の目的に対して最適ではない効能をもたらし得ることが分かった。投薬量は、使用されるグルコース代謝拮抗物質に依存し、グルコース代謝拮抗物質が投与されることになっている哺乳動物のサイズおよび状態に依存して変動するであろう。たとえば０．０００５〜１ｇ／ｋｇの範囲または０．００１〜１ｇ／ｋｇのマンノヘプツロースの投薬量が、有益であり、ｇ／ｋｇは、哺乳動物の１キログラムの体重当たりのグラムを意味する。大きな動物において２−デオキシ−Ｄ−グルコースを使用する場合、より低い範囲の投薬量が、適切であろう。より高用量の、特に５−チオ−Ｄ−グルコースまたはマンニトールなどの化合物は、容易に許容されるであろう。一実施形態では、毎日哺乳動物に提供されるグルコース代謝拮抗物質の投薬量が、０．５〜２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２〜１００ｍｇ／ｋｇであってもよい（ここで、「ｍｇ」が構成要素のレベルを指し、および「ｋｇ」が哺乳動物の体重キログラムを指す）。一実施形態では、毎日哺乳動物に提供されるマンノヘプツロースの投薬量が、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１．０〜１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２〜８ｍｇ／ｋｇであってもよい。ある実施形態では、これが、１０重量％未満のグルコース代謝拮抗物質の組成物または５重量％未満もしくは２重量％未満もしくは０．０００１重量％〜０．５重量％の抗グルコース代謝物質の組成物を含む組成物と解釈されてもよい。グルコース代謝拮抗物質のレベルは、様々な因子、たとえば、組成物の形態（たとえば乾燥組成物、やや湿った組成物、湿性組成物、もしくは栄養補助剤または任意の他の形態もしくはその混合物）に基づいて当業者によって決定されてもよい。当業者は、好ましい投薬量を利用し、所与の組成物内のグルコース代謝拮抗物質の最適なレベルを決定することができるであろう。
【００３３】
同様に、植物の抽出物または粉が、本明細書における組成物において利用される場合、抽出物または粉の最適なレベルは、そのような抽出物または粉内の有効な構成成分のレベルに依存性であってもよい。０．５重量％〜９９重量％のグルコース代謝拮抗物質の抽出物または粉、その代わりに０．５％〜７５％のグルコース代謝拮抗物質構成成分、その代わりに０．５％〜５０％のグルコース代謝拮抗物質構成成分、その代わりに０．５％〜２５％のグルコース代謝拮抗物質構成成分を含む最適な抽出物および／または粉が、本明細書において発見された。グルコース代謝拮抗物質が、０．５〜９９重量％、好ましくは１〜７５％、より好ましくは５〜５０％、最も好ましくは１０〜２５％の抽出物および／または粉であってもよい最適な抽出物および／または粉が、本明細書において発見された。
【００３４】
組成物は、アボカド果肉ならびにアボカド壁孔、アボカド皮、または壁孔および皮の両方から選択されるものを含んでいてもよい。組成物は、マンノヘプツロースまたはもう一つのグルコース代謝拮抗物質を含む、アボカドの水性抽出物を含んでいてもよい。
【００３５】
本発明は、哺乳動物による摂取のためのものである組成物に関する。組成物は、必須の食事必要物およびおやつ（ｔｒｅａｔ）（たとえばビスケット）または他の食品栄養補助剤を供給するためのものである食物を含む。任意選択で、本明細書における組成物は、乾燥組成物（たとえば粗びきの穀物）、やや湿った組成物、湿性組成物、またはその任意の混合物であってもよい。その代わりにまたはそのうえ、組成物は、肉汁、ソース、飲料水、ヨーグルト、粉末、飲料、懸濁液、噛んで食べる菓子、おやつ（たとえばビスケット）、補助水、およびその組合せなどの栄養補助剤である。
【００３６】
一実施形態では、組成物が、栄養的にバランスのとれた食物またはペットフードである。本明細書において使用されるように、組成物に関しての用語「栄養的にバランスのとれた」は、組成物が、栄養の分野において認められている権威の推奨に基づく適切な量および割合で、生命を維持するための既知の必要とされる栄養素を有することを意味する。最も好ましくは、組成物が、ドッグフードまたはキャットフードである。
【００３７】
本明細書において使用される組成物は、任意選択で、１つ以上のさらなる構成成分を含んでいてもよい。他の構成成分は、本明細書において使用される組成物への包含に有益であるが、本発明の目的にとっては任意選択である。一実施形態では、前記組成物が、乾燥物質基準で、粗タンパク質を、該組成物の１０重量％〜９０重量％、好ましくは２０重量％〜５０重量％、より好ましくは２０重量％〜４０重量％、最も好ましくは粗タンパク質を該組成物の２０重量％〜３５重量％含んでいてもよい。粗タンパク質材料は、ダイズ、シリアル（トウモロコシ、コムギなど）、綿実、およびピーナッツなどの野菜ベースのタンパク質またはカゼイン、アルブミン、および食肉タンパク質などの動物ベースのタンパク質を含んでいてもよい。本明細書において有用な食肉タンパク質の非限定的な例は、牛肉、豚肉、子羊、家禽、魚、およびその混合物からなる群から選択されるタンパク質供給源を含む。
【００３８】
さらに、前記組成物は、乾燥物質基準で、脂肪を、該組成物の５重量％〜４０重量％、より好ましくは１０重量％〜３５重量％含んでいてもよい。
【００３９】
本発明の組成物は、炭水化物の供給源をさらに含んでいてもよい。一実施形態では、前記組成物が、炭水化物供給源を、該組成物の３５重量％〜５０重量％まで含んでいてもよい。他の実施形態では、前記組成物が、炭水化物供給源を、該組成物の３５重量％〜４５重量％、好ましくは４０重量％〜５０重量％含むことができる。米、トウモロコシ、ミロ、ソルガム、オオムギ、コムギ、およびその他同種のものなどの穀粒またはシリアルは、炭水化物の例証となる供給源である。
【００４０】
組成物はまた、限定されないが、乾燥ホエイおよび他の乳製品副産物、ビートパルプ、セルロース、繊維、魚油、アマ、ビタミン、ミネラル、香料、ならびに酸化防止剤などの他の材料を含有してもよい。
【００４１】
組成物はまた、他の任意選択の成分を含有してもよい。任意選択の成分は、生菌構成成分（ビフィズス菌および／または乳酸桿菌）ならびに前生物的（フラクトオリゴ糖）構成成分を含むことができる。含むことができる生菌構成成分および前生物的構成成分の例および量は、たとえば米国特許出願公開第２００５／０１５８２９４号明細書において開示される。含むことができる他の任意選択の成分は、オメガ−６およびオメガ−３脂肪酸、ヘキサメタホスフェート、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、ベータカロテンを含むカロテノイド、ビタミンＥ、およびルテインならびに下記表３において示されるような成分である。
【００４２】
以下の非限定的な例証は、本発明の様々なグルコース代謝拮抗物質を例証する：
２−デオキシ−Ｄ−グルコースによるエネルギー源としてのグルコースの利用の減少：
カロリー制限の効果を模倣するために、グルコース代謝拮抗物質は、長期間にわたって提供される。以前の研究は、著しい、好ましくない副作用および毒性が観察されたため、２−デオキシ−Ｄ−グルコースを高用量で投与するべきではないことを示す。しかしながら、げっ歯動物における研究（Ｌａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉ−Ａｇｉｎｇ  Ｍｅｄ．１（４）：３２７−３３７（１９９８））は、より低用量の２−デオキシ−Ｄ−グルコースを使用するグルコース代謝の長期的な破壊は、体温の低下、体重減少、およびより低い空腹時インスリンレベルを含むカロリー制限および寿命延長の主な代謝の特徴のうちのいくつかを模倣することができることを示した。
【００４３】
２−デオキシ−Ｄ−グルコースによる代謝の阻害の負の側面と比較検討したカロリー制限の上記の潜在的な生理学的有益性を考慮して、潜在的に有害な副作用を伴うことなくグルコースの代謝拮抗物質として作用する代替物は、本発明を実施する目的にとって好ましい。
【００４４】
５−チオ−Ｄ−グルコースによる細胞に対するグルコースの利用可能性の減少：
グルコースのアナログである５−チオグルコースは、２−デオキシ−Ｄ−グルコースよりも顕著な効果を有する（インビボにおいて）。化合物は、主として細胞によるグルコース取込みを阻害することによって作用すると考えられる。ラットに注射された大部分の５−チオグルコース（９７％）は、尿中にそのまま排泄されることが発見された（Ｈｏｆｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７，ｐｐ．４４７９−４４８３（１９６８））。５−チオグルコースは、注目すべきことには、無毒性である；ＬＤ５０は、ラットにおいて注射によって１４ｇ／ｋｇであることが測定された（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１６９，ｐｐ．３９２−３９６（１９７５））。
【００４５】
５−チオ−Ｄ−グルコースは、マンノヘプツロースおよび他のグルコース代謝拮抗物質のように、尿中にそのまま排泄されるように思われるため、この化合物および他のものは、２−デオキシ−Ｄ−グルコースにまさって、長期投与にとってある利点を示す。５−チオ−Ｄ−グルコースおよび他のグルコース代謝拮抗物質がグルコース取込みを阻害するため、適切な投薬は、健康の増強、ウェルネス、および寿命延長を含む、カロリー制限に関連する有益性をもたらすことができる。
【００４６】
３−Ｏ−メチルグルコースの効果：
グルコースのこのアナログは、２−デオキシ−Ｄ−グルコースとは対照的に代謝されず（Ｊａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５５，ｐｐ．９８９−１０００（１９９０））、したがって、長期投与における使用にとってある利点をもたらし得る。本発明との関連において、３−Ｏ−メチルグルコースは、ラットにおけるその投与に対する応答によって実証されるようにエネルギー源としてのグルコースの利用を予防することができる。応答は、２−デオキシグルコースに対するものよりも約７倍弱かった。
【００４７】
アンヒドロ糖：１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール（Ｐｏｌｙｇａｌｉｔｒｏｌ）の効果：
この化合物は、グルコースの非還元アナログであり、変換が２−デオキシ−グルコースほど効率的ではないが、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール−６−ホスフェートに酵素的に変換される（Ｓｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２１０，ｐｐ．５８１−５９５（１９５４）。１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール−６−ホスフェートは、解糖の第１の調節ステップを触媒するヘキソキナーゼのアロステリック（非競合的）阻害剤である（Ｃｒａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２１０，ｐｐ．５９７−６９６（１９５４））。さらに、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール−６−ホスフェートは、非還元アナログであり、グルコース−６−リン酸イソメラーゼによって触媒される解糖の次のステップの基質となることはできない。結果的に、このアナログは、細胞中に蓄積し、グルコース利用に対する非常に有効な代謝ブロックとして作用することができ得る。その非還元の特徴に関するもう一つの利点は、この化合物を、糖脂質、糖タンパク質、およびグリコーゲンの中に組み込むことができないことである。したがって、その効果は、解糖に対して特異的であり、他の代謝ステップに影響を与えたり、以前に議論されたいくつかのグルコース代謝拮抗物質の毒性を及ぼすことは予想されないと思われる。
【００４８】
興味深いことには、この化合物（またはそのホスフェート）は、人体において発見された。それは、通常の臨床の場で実行される試験において検出されるのに十分高い濃度で副次的な高血中グルコース（糖尿病および腎臓の疾患由来の）を有した患者の脳脊髄液中に存在することが発見された。
【００４９】
２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールおよび２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトールの使用：
これらの化合物は、フルクトースの非還元アナログである。フルクトースは、食物の重要な構成成分であり、フルクトースホスフェートおよびジホスフェートは、解糖の中間産物である。しかしながら、アンヒドロ糖アナログによるフルクトースおよびそのホスフェートに関係する代謝イベントの阻害は、困難である。自然に相互変換する、フルクトースのアルファおよびベータアノマーは、異なるアンヒドロ糖、それぞれ、２、５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトールおよび２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールに相当する。したがって、わずかな酵素的変換しか、単一の化合物によって阻害することができない。２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールは、いくらか詳しく調査されてきた。その化合物は、細胞によって取込まれ、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール−１−ホスフェートに変換される。そのホスフェートは、フルクトース−１−ホスフェートのアナログであるが、アルドラーゼによって切断することができず、したがって、細胞によるグルコースおよびフルクトースの両方の利用は、ブロックされる。２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールは、単離されたラット肝細胞においてグルコース形成および利用に干渉することが発見された（Ｒｉｑｕｅｌｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０，ｐｐ．４３１−４３５（１９８３））。
【００５０】
ケトースによるエネルギー源としてのグルコース利用の減少：
マンノヘプツロース（ＭＨ）は、いくつかの食物において適度な量で存在し（たとえば、アボカドは、湿重量で、５％までのマンノヘプツロースを含有し得る）、ヒトが消費するのに「安全なものとして一般に認識される」物質として分類することができる。代謝の研究では、１０グラムの用量のマンノヘプツロースは、経口的にヒトに安全に投与された。摂取されたマンノヘプツロースの約５％が、経口投与後に尿中に出ることが報告された。注射されたマンノヘプツロースの結果がラットにおいて以前に調査された：６６％がそのまま排泄され、２９％が代謝され、注射の１日後、５％が体内に残った（Ｓｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，６９，ｐｐ．５９２−６０１（１９５７））。マンノヘプツロースは、天然源におけるその高い存在量およびその安全性プロファイルのために好ましいグルコース代謝拮抗物質である。
【００５１】
細胞に対するグルコースの利用可能性はまた、グルコースプロセシングの阻害をもたらすことができるグルコースの代謝に対する同様の効果を有する、本明細書において特に同定されたもの以外の栄養補助食品を使用して減少させることもできる。
【００５２】
本発明の方法は、経口的にまたは非経口的に、本明細書において記載される構成成分を投与することによって実施されてもよいが、経口投与が好ましいであろう。組織代謝の低下が所望される場合、外傷の処置に対する補助剤として、構成成分が静脈内に投与されてもよい。
【実施例】
【００５３】
以下の実施例は、本発明を例証するために提供され、いかなる方法でもその範囲を限定するようには意図されない。
【００５４】
実施例１
情動行動に対するカロリー制限模倣化合物（ＭＨ）効果
毎年の飼育場での評価（５年の期間）を、コントロール食餌またはコントロール食餌＋ＭＨを与えたイヌに対して行った。この評価は、ラブラドルレトリーバーの２つのコホートを含んだ。コホート１は、試験供給期間の開始時点で年齢が５．１〜８．２歳の範囲にわたる（研究開始時点の平均年齢６．７歳）３９匹の去勢したラブラドルレトリーバー、１２匹のオスおよび２７匹のメスを含んだ。コホート２は、試験供給期間の開始時点で年齢が２．０〜６．１歳の範囲にわたる（研究開始時点の平均年齢４．０歳）４１匹の去勢したラブラドルレトリーバー、１２匹のオスおよび２９匹のメスを含んだ。それぞれのコホートに、コントロール食餌または試験食餌を与え、唯一の差異は、２ｍｇ／ｋｇ体重のＭＨを供給することを目標にしたｍＨｅｐが豊富なアボカド抽出物の包含とした。研究者、実験室助手、および査定者はみな、供給群に対して盲検とした。
【００５５】
イヌは、毎年８月および９月に評価した。それぞれの記録係に、独立して作業するように指示した。熟練した査定者を、イヌに対して慣れているまたは不慣れであるとして分類した。慣れた査定者は、定期的にイヌと仕事をした人々とした。不慣れの査定者は、定期的にイヌと交わることはなかった。それぞれの評価グループは、取扱者および２人の記録係から構成された。イヌはすべて、それぞれのグループに少なくとも１人の慣れた記録係がいる部屋で３人で評価した。これにより、合計３つの推定される条件ができた：慣れた取扱者、２人の慣れた記録係（Ｆａｍ／Ｆａｍ）；慣れた取扱者、１人の不慣れな記録係、１人の慣れた記録係（Ｆａｍ／Ｕｎｆａｍ）；不慣れな取扱者、１人の不慣れな記録係、１人の慣れた記録係（Ｕｎｆａｍ／Ｕｎｆａｍ）。行動を表１において概説する。
【００５６】
スコアの計算：査定者に、ハーフスコアを含む１〜５の尺度でイヌをスコア化するように依頼した。行動の項目については、１のスコアは、「行動せず」を示し、５は、「優れている」を示した。態度の項目については、１のスコアは、「強い」を示し、５のスコアは、「全くない」を示した。必須の項目はすべて、より高いスコアがより好都合なスコアを示し、より低いスコアがそれほど好都合でないスコアを示すように、逆にスコア化した。
【００５７】
対応する行動および態度の項目の合計は、２つの行動構成成分のそれぞれについてのスコアを計算するために使用した。これらのスコアは、数年にわたって、群間で変化を比較するために使用した。
【００５８】
【表１】
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【００５９】
不慣れな人の存在により差異が生じるであろうということならびに「新しいエリアにおける快適さ」は、後年にならびに不慣れな試験者および査定者により差異を示すであろうということが仮定された。結果を図１〜６に示す。新しいエリアにおける快適さについての大部分の差異は、予想された条件（不慣れな人の存在下）およびより高齢で生じる。詳細には、慣れた／慣れた条件におけるイヌは、後年に有意な差異を示し始めただけであった。そのうえ、応答における差異は、不慣れ／不慣れ条件においてはるかに早く２つの群の間で有意になり、＋ＭＨのイヌは、新しい環境の導入に挑戦した場合に、有意により好適な反応を示した。
【００６０】
「社会的相互関係」について評価する場合、本発明者らは、イヌが慣れている人々とより積極的に交わるであろうということ仮定した。個人を認識し、その情報を保持する能力は、複雑な認知作業である。このエリアの評価における差異は、後年にｆａｍ／ｕｎｆａｍ設定で生じ、イヌが、部屋におけるさらなる不慣れな人に異なって応答していたことを示す。そのうえ、ｆａｍ／ｆａｍまたはｕｎｆａｍ／ｕｎｆａｍ群の２つの群は、異ならなかった。これは、２つの食餌の間で、栄養補助剤を与えられた群が、部屋に存在する慣れた人に集中することができたことを示し得る。慣れにおける差異なしに、１人の不慣れな人の存在は、＋ＭＨ群に対して、コントロールのイヌの気をそらすのに十分であった。＋ＭＨのイヌは、慣れた存在に対する集中を維持し、応答し続けることができた。
【００６１】
結論：マンノヘプツロースを含む食物を与えたイヌは、新しいエリアおよび社会的相互関係を処理する能力についてより高いスコアを有した。これらの両方の結果は、マンノヘプツロースが覚醒に対して直接的または間接的な効果を有することを示唆する。
【００６２】
実施例２
最近、本出願人は、ＭＨの供給が遊びに対するネコの動機づけを増加させるかどうかについて調査した。これはそのうえ動物とヒトのきずなを改善することができた。研究の目的は、ネコにおけるＭＨ補充の影響を測定することならび若年成体の、やせたおよびやや太ったネコの生理および心理に対する食事マンノヘプツロース（ＭＨ）処置の効果を測定することとした。
【００６３】
研究デザイン
１０匹のメス（５匹はやせており、５匹はやや太っている）および１０匹のオス（５匹はやせており、５匹はやや太っている）に分けた同年齢（約２．５歳）の２０匹のネコ（Ｎ＝２０）。エネルギー代謝に対するＭＨの効果を有効に試験するために、体重を維持することを目的とする食事エネルギー必要量を、体重ベースで動物間で等しく提供した；そのため、それぞれのネコは、４５ｋｃａｌ  ＭＥ／ｋｇ体重／日（メス）および５０ｋｃａｌ  ＭＥ／ｋｇ体重／日（オス）を受けた。
【００６４】
研究開始までの２週間にわたり、ネコにＩａｍｓ（登録商標）Ｏｒｉｇｉｎａｌ  Ｃｈｉｃｋｅｎを与えた。食餌は粗びきの穀物の形態で与え、ネコに毎日午前７：００に個々に与え、食物提供の間、６０分間食べさせた。この供給プロトコールは、ネコに午前９：００までにサンプリング期間後に供給した絶食血液／熱量測定サンプルを得る日以外、全研究を通じて維持した。第１のウォッシュアウト期間の終わりに、ネコを、コントロール群またはコントロール＋ＭＨ群のいずれかに無作為に割り当てた。研究の初日（０日目）に、半分のネコは、ＭＨ処置なし（０ｍｇ／ｋｇ体重）のコントロール食餌を受け続け、半分のネコに、ＭＨ処置と共にコントロール食餌を与えた。それぞれのネコに、合計３７日間、それぞれの食餌を与えた。６日間、第１の３７日間の食事処置後に、すべてのネコを、第２のウォッシュアウト期間の間、研究の第１の部で最初のウォッシュアウト食餌として使用したＭＨ処置なしのコントロール食餌に戻した。ウォッシュアウト期間後、ネコに、さらに３７日の期間、代わりの食餌を与えた。そのため、これは、すべてのネコが両方の食餌を受け、それぞれのネコがそれ自体のコントロールとしての役割を果たすことを可能にしたクロスオーバー研究となった。
【００６５】
遊びの動機づけを測定するための行動評価：
一方をスタートボックス、他方をゴールボックスとして分類し、それぞれ、中心に１ｃｍの直径の穴を含有するプレクシグラスの屋根を有する、壁で囲まれた２つの仕切った小部屋（それぞれ１００ｃｍ  Ｗ×１００ｃｍ  Ｌ×７５ｃｍ  Ｈである；Ｑｕｅｎｎ  Ｃｉｔｙ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｄａｙｔｏｎ、Ｏｈｉｏ）を、互いの隣りに置き、スイングドア（２３ｃｍ  Ｗ×１８ｃｍ  Ｈ）を介して接続した。スイングドアは、１／１６’’（１．５８７５ｍｍ）プレクシグラスで作製されており、ドアフレームの上部に付けられている。ドアは、ネコをそれらの群のリビングルームにおいて使用するために順応させるタイプに類似している。遊びの動機づけを評価するために、ドアの下の方の溝の中に置くおもりの追加によって、スイングドアを、次第に、開けるのをより難しくした。ネコが十分な力で重みのついたドアを押すと、ドアは、フレームから離れて揺れ、ネコがドアの真下を通過して、おもちゃと交わることが許されるゴールボックスに入るのを可能にする。ネコは、摂食のおよそ５時間後に、１４日目およびさらに３７日目に、食事の処置当たり２回評価した。ネコは、研究の開始に先立って４日間、ぬいぐるみと交わることが許されなかった。手順および測定はすべて、Ｗｉｄｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｄｕｎｃａｎ，２０００の改良である。
【００６６】
試験手順：それぞれのネコを、群のリビングルームから個々に取り出し、スタートの仕切った小部屋の中に置いた。ぬいぐるみのマウスに似ているおもちゃを、ひもに付け、ゴールの仕切った小部屋にだけ、プレクシグラスの屋根の中心にある切り抜いた穴から吊るした。スタートの仕切った小部屋の中に放した後、おもちゃに接近させるようにネコにドアを１０分間開けさせた。それぞれの試験シリーズは、ドアに追加するおもりをゼロとして始めた。ネコがドアを開け、ゴールボックスに入るのに成功した場合、ネコは、３０秒間、おもちゃと接触することが許された。３０秒後、ネコをスタートボックスに戻し、さらなるおもりをドアに追加した。手順を、１つの試験日に３回まで繰り返した。その日の第３のテストで、２分間、ゴールボックスにネコを残し、それらの群のリビングルームへ戻す前におもちゃと遊ぶ十分な時間を提供した。ネコがドアを開けることを試みなかった場合（スタートの仕切った小部屋において１０分後）、その日の試験を終了した。第２の試験日に（３７日目）、ネコが最後にドアを開けるのに成功した前回のおもりをテスト１に使用し、その後、おもりを、それぞれのテストで次第に増やした。ネコが合計５回ドアを押し開けるのを試みたが、失敗した場合、おもりを取り出し、おもちゃを得るための仕事の閾値を定めるために、おもりを減らしてもう一度試験するためにネコをスタートボックスに戻した。それぞれのネコがゴールボックスに入るために押すであろう最大のドアのおもりを得ることに加えて、動機づけを評価するために他の行動パターンを測定した。ドアを開けるまでの待ち時間、ドアを開けるのに失敗した試みの数、およびドアを開いておもちゃと最初に意図的に接触するまでの待ち時間を測定した。
【００６７】
結果：ＭＨを含有する試験食餌を与えたネコは、コントロール食餌を与えたネコよりも、スタートボックスで過ごした時間が少なく、テストに成功し、失敗したテストが少なく、かつおもちゃを得るためにより多くおもりを押した（表２）。
【００６８】
【表２】
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【００６９】
結論：これらのデータは、ＭＨを与えたネコが、同じであるがＭＨなしの食餌を与えたネコよりも、有意に、遊びに対する大きな動機づけを有することを強く示唆する。
【００７０】
実施例４
脳セロトニンは気分に影響を及ぼすことが知られている。セロトニンは、トリプトファンから脳において合成され、脳の中へのトリプトファンの取込みは、他の大きな中性アミノ酸の総量に対するトリプトファンの血漿比（Ｔｒｐ／ＬＮＡＡ）に依存性である。他の大きなアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、およびチロシンを含む。炭水化物が豊富な食餌はこの比を増加させ、タンパク質が豊富な食餌はこの比を減少させることがかなり認められており、言いかえれば、インスリン感受性が減少し、血糖上昇反応（ｇｌｙｃｅｍｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）がより大きな場合、より高いＴｒｐ／ＬＮＡＡ比が予想される。
【００７１】
アミノ酸分析のための血液サンプルを、コントロール食餌またはコントロール食餌＋ＭＨを与えた合計５１匹のイヌから収集した。血液サンプルは、ラブラドルレトリーバーの２つのコホートから収集した。コホート１は、サンプリング時に年齢が１２．６〜１５．７歳の範囲にわたる１９匹の去勢したラブラドルレトリーバー、５匹のオスおよび１４匹のメスを含んだ。コホート２は、サンプリング時に年齢が８．３〜１２．５歳の範囲にわたる３２匹の去勢したラブラドルレトリーバー、９匹のオスおよび２３匹のメスを含んだ。それぞれのコホートは、同様のコントロール食餌または試験食餌を与え、唯一の差異は、食餌中２００ｐｐｍ  ＭＨを供給することを目標にしたｍＨｅｐが豊富なアボカド濃縮ジュースの包含とした。アボカド濃縮ジュースは、果実全体（果肉、皮、および壁孔）のアボカドに由来した。コホート１のイヌは、サンプリング時に９０か月の間、コントロール食餌または試験食餌を続けて消費していた。コホート２のイヌは、サンプリング時に７７か月の間、コントロール食餌または試験食餌を続けて消費していた。研究者、実験室助手、および査定者はみな、供給群に対して盲検とした。
【００７２】
ＨＰＬＣ分析のための血漿／血清サンプル準備
血漿／血清サンプルの除タンパク
１．標識１０Ｋスピンフィルター遠心管の中で１００μＬの解凍した血漿または血清を１００μＬの０．４ｍＭノルロイシン溶液と混合する。
【００７３】
２．４℃で３０分間１５，０００×ｇで遠心分離する。
【００７４】
３．遠心分離機から取り出し、インサートを廃棄し、フロースルー（除タンパクされたサンプル）を含有する遠心管を再度閉じる。この時点で、除タンパクされたサンプルは、さらなるプロセシングまで−２０℃で保管されてもよく、または以下のステップに進んでもよい。
【００７５】
４．除タンパクされたサンプルの５０μＬの一定分量を取り、標識Ｋｉｍｂｌｅガラス管にそれを移し、それらが乾燥するまで、凍結乾燥フラスコ中および凍結乾燥器に置く。
【００７６】
５．乾燥させたＫｉｍｂｌｅ管をパラフィルムでカバーし、プロセシングの時間まで−２０℃で保管する。
【００７７】
再乾燥ステップ
１．冷凍庫からサンプルを取り出し、パラフィルムを取り除く。同時に、２本のあらかじめ乾燥させた「コンプリートＡＡ標準物質」Ｋｉｍｂｌｅ管を取り出す（説明については「アミノ酸標準物質の作製」を参照されたい）。
【００７８】
２．「コンプリートＡＡ標準物質」に、２５μＬの０．２ｍＭグルタミンを追加する。
【００７９】
３．それぞれのサンプル／標準物質バイアルに、１０μＬの再乾燥溶液を追加し、管をボルテックスする。換気フード中で再乾燥溶液を作製する（ＴＥＡは悪臭がする！）。
2016522204.tif 000005
【００８０】
４．少なくとも３０分間、冷凍乾燥器でサンプルを乾燥させる。
誘導体化ステップ
１．凍結乾燥器からサンプルを取り出す。
【００８１】
２．それぞれのバイアルに、２０μＬの誘導体化溶液を追加し、管をボルテックスする。換気フード中で誘導体化溶液を作製する。
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【００８２】
３．凍結乾燥用フラスコの中にサンプルを入れ、２０分間室温でインキュベートする。
【００８３】
４．乾燥するまで凍結乾燥器にフラスコを置く（少なくとも４５分間）。
【００８４】
ＨＰＬＣのためのサンプルの再希釈
１．１００μＬのＰｈｙｓｉｏｌ  Ａバッファーをそれぞれの標準物質およびサンプルに追加し、十分にボルテックスする。
【００８５】
２．ガラス製パスツールピペットを使用して、キンブル（Ｋｉｍｂｌｅ）管中のすべての内容物を、大きい方のオートサンプラーバイアルの内側に適合する小さなガラス製インサートチューブの中に移す  −  いずれの番号のバイアルにそれぞれのサンプルを入れているのかに細心の注意を払い、バイアル番号が、コンピューター上のサンプルラインアップにおいて指定されているものに対応することを確かめる。赤色のセプタムを標準物質バイアル上に置き、白色のセプタムをサンプルバイアル上に置く。
【００８６】
３．ＨＰＬＣシステムの中にオートサンプラーバイアルカルーセルを置く。
【００８７】
ＨＰＬＣによりサンプルを測定する。
【００８８】
バッファー作製
Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ａ
＊＊一般に、２または４ＬのＰｈｙｓｉｏｌ  Ａを一度に作製する。
【００８９】
１．２（または４）Ｌのｎａｎｏｐｕｒｅ水を測定し、大きなプラスチックビーカーの中に入れる。
【００９０】
２．ビーカーから７００μＬ／２Ｌ（１４００μＬ／４Ｌ）の水を取り出し、廃棄する。
【００９１】
３．７００μＬ／２Ｌ（１４００μＬ／４Ｌ）の１０ｍｇ／ｍＬ  ＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物をビーカーに追加する。
【００９２】
４．１９．０５ｇ／２Ｌ（３８．１０ｇ／２Ｌ）の酢酸ナトリウムを秤量し、ビーカーに追加する。
【００９３】
５．酢酸ナトリウムがすべて溶解するまで、撹拌プレート上で溶液を混合する。
【００９４】
６．溶液のｐＨを測り、氷酢酸を滴下して、ｐＨを６．４５（±０．０１）まで下げる。
【００９５】
７．溶液をフィルターにかけて、空気を除去する。
【００９６】
８．１９５０ｍＬ／２Ｌ（３９００ｍＬ／４Ｌ）のフィルターにかけた溶液を測定し、次いで、５０ｍＬ／２Ｌ（１００ｍＬ／４Ｌ）のアセトニトリルを追加する（注意：これらを別々に測定する。メスシリンダーの上部にアセトニトリルをただ追加してもうまくいかないため、これは行わないようにする）。
【００９７】
９．この新しい溶液をＨＰＬＣに付けられた適切なガラスビン（Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ａの標識）の中に注意深く注ぎ、気泡が立つのを避ける。
【００９８】
Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂ：
＊＊通常、一度に１ＬのＰｈｙｓｉｏｌ  Ｂを作製する
１．ビーカー中で以下のものを一緒に混合する：
ａ．４５０ｍＬアセトニトリル
ｂ．４００ｍＬ  ｎａｎｏｐｕｒｅ水
ｃ．１５０ｍＬメタノール
２．溶液をフィルターにかけて、空気を除去する。
【００９９】
３．この溶液をＨＰＬＣに付けられた適切なガラスビン（Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂの標識）の中に注意深く注ぎ、気泡が立つのを避ける。
【０１００】
アミノ酸標準物質の作製
追加のアミノ酸についての原液：
１．
−  Ｌ−アスパラギン（ＭＷ＝１３２．１２ｍｇ／ｍｍｏｌ）  −  約２６ｍｇを秤量する
−  Ｌ−シトルリン（ＭＷ＝１７５．１９ｍｇ／ｍｍｏｌ）  −  約３６ｍｇを秤量する
−  Ｌ−システインヒドロクロリド（ＭＷ＝１７５．１６ｍｇ／ｍｍｏｌ）  −  約３６ｍｇを秤量する
−  Ｌ−グルタミン（ＭＷ＝１４６．１５ｍｇ／ｍｍｏｌ）  −  約３０ｍｇを秤量する
−  Ｌ−ノルロイシン（ＭＷ＝１３１．１７ｍｇ／ｍｍｏｌ）  −  約２６ｍｇを秤量する
−  Ｌ−オルニチンヒドロクロリド（ＭＷ＝１６５．６２ｍｇ／ｍｍｏｌ）  −  約３４ｍｇを秤量する
のそれぞれについて原液（約１００μｍｏｌ／ｍＬ＝０．１００ｍｍｏｌ／ｍＬ＝１００ｍｍｏｌ／Ｌ）を作製する。
【０１０１】
２．それぞれのアミノ酸について、２ｍＬ遠心管の中にアミノ酸を直接秤量し、厳密な重量（０．１ｍｇまで）を記録する。次いで、２ｍＬのｎａｎｏｐｕｒｅ水を遠心管に正確に追加し、管を閉じ、ボルテックスしてすべての粉末を溶解する。
【０１０２】
３．それぞれのアミノ酸の正確な濃度を計算し、遠心管にそれを記録する：
濃度（ｍｍｏｌ／ｍＬで）＝［（ｍｇでの重量）／（ｍｇ／ｍｍｏｌでのＭＷ）］／２ｍＬ
４．使用まで−２０℃で保管する。
【０１０３】
０．４ｍＭノルロイシン溶液（内部標準）：
１．５０ｍＬメスフラスコ中で５０ｍＬ（＝５００００μＬ）の溶液を一度に作製する。
【０１０４】
２．ノルロイシン原液濃度から、
量（μＬで）＝［（５００００μＬ）＊（０．４ｍｍｏｌ／Ｌ）］／（原液濃度）を使用して、必要とされる量を計算する。
【０１０５】
３．原液をボルテックスし、所望の量の原液をメスフラスコの中にピペットで移す。
【０１０６】
４．０．１Ｎ  ＨＣｌを使用して、メスフラスコ中の容積を５０ｍＬ（正確に）にする。
【０１０７】
＊０．１Ｎ  ＨＣｌは、４．１ｍＬの約１２．２Ｎ  ＨＣｌストック［ストックは、約３７．５％  ＨＣｌ（ｖ／ｖ）であり、ＭＷが３６．４６ｇ／ｍｏｌおよび密度が１．１９ｇ／ｍＬである］をメスフラスコ中の約２５０ｍＬ  ｎａｎｏｐｕｒｅ水に追加し、次いで、ｎａｎｏｐｕｒｅ水により容積を５００ｍＬにすることによって作製する。
【０１０８】
５．適切な保管容器に移す。
【０１０９】
６．使用まで４℃で保管する。
【０１１０】
０．２ｍＭグルタミン溶液（再乾燥ステップの間のコンプリートＡＡ標準物質への追加）：
１．５０ｍＬメスフラスコ中で５０ｍＬの溶液を一度に作製する。
【０１１１】
２．グルタミン原液濃度から、
量（μＬで）＝［（５００００μＬ）＊（０．２ｍｍｏｌ／Ｌ）］／（原液濃度）を使用して、必要とされる量を計算する。
【０１１２】
３．原液をボルテックスし、所望の量の原液をメスフラスコの中にピペットで移す。
【０１１３】
４．ｎａｎｏｐｕｒｅ水を使用して、メスフラスコ中の容積を５０ｍＬ（正確に）にする。
【０１１４】
５．適切な保管容器に移す。
【０１１５】
６．使用まで４℃で保管する。
【０１１６】
０．５ｍＭの追加のＡＡ標準溶液：
１．５０ｍＬメスフラスコ中で５０ｍＬの溶液を一度に作製する。
【０１１７】
２．アスパラギン、システインヒドロクロリド、オルニチンヒドロクロリド、およびシトルリンのそれぞれについて、
量（μＬで）＝［（５００００μＬ）＊（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）］／（原液濃度）
を使用して、必要とされるそれぞれの原液の量を計算する。
【０１１８】
３．それぞれの原液の管をボルテックスし、所望の量の原液をメスフラスコの中にピペットで移す。
【０１１９】
４．アミノ酸原液をすべて追加したら、ｎａｎｏｐｕｒｅ水を使用して、メスフラスコ中の容積を５０ｍＬ（正確に）にする。
【０１２０】
５．適切な保管容器に移す。
【０１２１】
６．使用まで４℃で保管する。
コンプリートＡＡ標準物質の作製（０．２ｍＭ＝２００ｎｍｏｌ／ｍＬのそれぞれのＡＡ）：
１．遠心管中で５００μＬのあらかじめ作製した標準物質（Ｓｉｇｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ  Ａ２９０８；０．５  ｍＭ）および５００μＬの追加のＡＡ標準物質（０．５ｍＭ）および２５０μＬのｎａｎｏｐｕｒｅ水を混合する。
【０１２２】
２．ボルテックスして混合する。
【０１２３】
３．個々の標識Ｋｉｍｂｌｅガラス管の中に２５μＬ一定分量（５ｎｍｏｌ）を入れる。それらが乾燥するまで、凍結乾燥フラスコ中および凍結乾燥器に置く。
【０１２４】
図７は、一緒にプールした高齢および若いコホートを示す図であり、時間と食餌の相互作用は、統計的傾向（Ｐ＝０．１５）を示した。マンノヘプツロースを与えたイヌは、空腹および供給４時間後のＴｒｐ：ＬＮＡＡ濃度に差異はなかったのに対して、コントロール食餌を与えたイヌにおいてＴｒｐ：ＬＮＡＡ濃度の有意な（Ｐ＜０．０５）減少があった。
【０１２５】
図８は、コホートを別々に検査した場合について示す図であり、時間と食餌の相互作用（Ｐ＝０．０００６）および時間（Ｐ＝０．０００８）は、コホート２と比較してイヌが高齢であるコホート１について非常に有意であった。ＭＨを含有する食餌を与えたイヌは、空腹および供給４時間後のＴｒｐ：ＬＮＡＡ濃度に差異はなかった（Ｐ＞０．０５）のに対して、コントロール食餌を与えた高齢のイヌにおいてＴｒｐ：ＬＮＡＡ濃度の有意な（Ｐ＜０．０５）減少があった。比の差異は、食事の処置または空腹対供給の間で統計的な差異がなかったことによって証明されるように、トリプトファンのみまたはＬＮＡＡのみの差異によっては生じなかった。
【０１２６】
試験もしくはコントロール食餌を与えた若いイヌにおいて（コホート２）または空腹および供給の間でＴｒｐ：ＬＮＡＡ比に差異はなかった（Ｐ＞０．０５）が、供給に対して、空腹由来のＬＮＡＡ（ロイシン、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、およびチロシン）の濃度において有意な増加（Ｐ＜０．０５）があった。
【０１２７】
表３は、およその示す量で以下の構成成分を有する２つの粗びきの穀物の組成物を押し出し成形を含む当技術分野において標準的な方法を使用して調製し、毎日の飼料としてイヌおよび／またはネコに与えることを示す。
【０１２８】
【表３】
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【０１２９】
実施例５
表４は、従来の方法で以下の構成成分を組み合わせることによって、牛肉風味の肉汁組成物を調製することを示す。
【０１３０】
【表４】
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【０１３１】
１液量オンス（２９．５７３５３ｍＬ）の肉汁組成物を、哺乳動物への供給前に、毎日、２分の１カップの食物組成物と混合する。肉汁組成物の量は、哺乳動物の保護者によって所望されるように決定される。
【０１３２】
本明細書において開示される寸法および値は、列挙されるまさにその数値に厳密に限定されるようには解釈されない。その代わりに、他に指定のない限り、それぞれのそのような寸法は、列挙される値およびその値を取り囲む機能的に均等な範囲の両方を意味することが意図される。たとえば、「４０ｍｍ」として開示される寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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