(57)【要約】本発明は、生物活性マーカーとして1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリ(Momordica Charantia)の標準化エキスおよびその製造に関する。また、本発明は、生物活性マーカーとして1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリの標準化エキスを含む組成物に関する。さらに、本発明は、糖尿病などの代謝異常の治療用のニガウリの標準化エキスまたは該標準化エキスを含む組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキス。
【請求項２】
該エキスが、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含む、請求項１に記載のエキス。
【請求項３】
該エキスが、生物活性マーカーとして総重量の約0.1 %〜約5 %のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含む、請求項１または２に記載のエキス。
【請求項４】
該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか1つに記載のエキス。
【請求項５】
単独もしくは少なくとも1つの医薬的に許容しうる賦形剤との併用で、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含む治療有効量のニガウリの標準化エキスを含む組成物。
【請求項６】
該標準化エキスが、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
該標準化エキスが、生物活性マーカーとして総重量の約0.1 %〜約5 %のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含む、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項８】
該標準化エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まない、請求項５〜７のいずれか1つに記載の組成物。
【請求項９】
該組成物が、経口投与によって提供される、請求項５〜８のいずれか1つに記載の組成物。
【請求項１０】
それを必要とする対象者に、治療有効量の請求項１〜４のいずれか1つに記載のエキスを投与することを含む、代謝異常の治療方法。
【請求項１１】
それを必要とする対象者に、治療有効量の請求項５〜８のいずれか1つに記載の組成物を投与することを含む、代謝異常の治療方法。
【請求項１２】
代謝異常が、糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症である、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
代謝異常が、糖尿病である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
糖尿病が、2型糖尿病である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
代謝異常が、糖尿病に伴う二次性合併症である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
ニガウリの標準化エキスの製造方法であって、以下のステップ：
a．ニガウリの新鮮な未熟の緑色の果実および種子から絞り汁(juice)を調製する；
b．ステップ(a)で得られた絞り汁をろ過して、懸濁した粒子を含むエキスを得る；
c．天然トニックの添加によって、ステップ(b)で得られた絞り汁エキスのpHを変化させて、酸性pH範囲にする；
d．ステップ(c)で得られた絞り汁エキスを静置する；
e．塩基またはアルカリを用いることによって、ステップ(d)で得られた絞り汁エキスのpHを中和する；
f．ステップ(e)で得られた絞り汁エキスに賦形剤を加えて均質な混合物を得る；
g．ステップ(f)で得られた絞り汁エキスを濃縮して、蒸留下で半固体の塊を得る；
h．ステップ(g)で得られた濃縮絞り汁エキスを乾燥して、ニガウリの乾燥エキスを得る；および
i．ニガウリのエキス中の生物活性マーカーの量を決定する；ここで、生物活性マーカーは、かウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンら選ばれる窒素含有複素環式化合物である；
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物活性マーカーとして1種以上の窒素含有複素環式化合物(本明細書に記載)を含むニガウリ(Momordica Charantia)のエキス(extract)；該エキスの製造方法；該エキスを含む組成物および代謝異常の治療のためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
代謝異常は、身体が炭水化物、脂質、タンパク質または核酸を適切に代謝することができない場合に起こる。大部分の代謝異常は、細胞が代謝プロセスを行うのに必要である酵素の欠失または機能不全をもたらす遺伝子突然変異によって引き起こされる。代謝異常の例として、肥満、過度の体脂肪、高脂血症、高リポタンパク血症、高血糖、高コレステロール血症、高インスリン血症、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、および真性糖尿病（糖尿病）、特に2型糖尿病が挙げられる。
【０００３】
代謝異常のうち、真性糖尿病は、最も一般的であり、世界の5つの主要死因の1つであるとみなされている。世界には糖尿病を患っている人々が1億5千万人おり、この数字は、2030年までに3億6千6百万人を超えると予測される。糖尿病は、通常、遺伝的および環境的原因の組合せによる代謝症候群であり、血糖値の異常な増加(高血糖)をもたらす。
【０００４】
糖尿病には、2つのタイプがある：インスリン依存型糖尿病(IDDMまたは1型糖尿病)およびインスリン非依存型糖尿病(NIDDMまたは2型糖尿病)。1型糖尿病は、子供および若者に起こることが多い自己免疫疾患である。最も一般的なタイプの糖尿病である2型糖尿病は、身体が十分な量でインスリンを生成できないこと、および生成したインスリンを適切に使用することができないことに起因する。インスリン分泌の不具合およびインスリン耐性が、2型糖尿病の主な原因とみなされる。2型糖尿病などの真性糖尿病は、心臓血管疾患、末梢血管疾患、脳卒中、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症および糖尿病性網膜症などの二次性合併症を伴うことが知られている。
【０００５】
肥満は、すべての年齢層に影響を及ぼすもう1つの一般的な健康問題である。成人では、3億人が肥満に苦しんでおり、この数字は、急速に増加する傾向にあり、2型糖尿病、心臓病、脳卒中および高血圧などの肥満関連疾患の急速な増加をもたらしている。太り過ぎおよび肥満をもたらす主な理由は、高脂肪および高カロリーの食事、運動不足および加速する都市化に起因する。抗肥満薬を開発するために、相当な努力が必要であるが、最小の副作用で持続的な体重減少を生み出す理想的な抗肥満薬はまだ存在しない。さらに、試験研究中の薬のうち、非常にわずかな肥満治療薬しか承認されていない。さらに、承認された抗肥満薬、すなわち、消化管リパーゼの特異的阻害剤であるオルリスタットおよびモノアミン再取り込み阻害剤であるシブトラミンのうち、後者、すなわち、シブトラミンは、その心血管副作用により、インドおよびアメリカ合衆国などの2、3の国においては中止されている。
【０００６】
スルホニルウレア、グリニド、グルカゴン様ペプチド1(GLP-1)受容体アゴニスト、メトホルミン、チアゾリジンジオンおよびα-グルコシダーゼインヒビターなどのよく知られている糖尿病薬は、一般に、インスリン分泌またはインスリンに対する組織感受性を増加させることによる、インスリン耐性またはβ細胞機能不全を標的とする。さらに、相当な数の市販薬は、治療の有効性を制限する大きな欠点を伴う。特に、以下の問題が、現在の療法を苦しめ続けている：1)高血糖(特に療法を開始する時；重篤な高血糖は、心筋梗塞および認知症の発症をもたらすことが知られている)；2)体重増加の上昇(糖尿病の蔓延を駆動させる主要因子)；3)インスリン耐性の上昇；および4)β細胞破壊。これは、これらの欠点を解消するための新たな療法または現在の療法におけるさらなる改善に対する要求を明らかに創設する。
【０００７】
したがって、糖尿病のために現在利用可能な治療選択肢が欠点を伴うという事実を考慮すると、2型糖尿病；その関連障害およびそれに伴う合併症に対する有効な療法に対する継続的必要性が存在する。
【０００８】
植物が別の治療選択肢を提供することを考慮して、植物ベースの薬剤が糖尿病などのいくつかの疾患の治療のために用いられている。ウリ科の花をつける蔓であるニガウリは、ビターメロン、ビターゴード、カレーラー、バルサムペアとしても知られており、糖尿病の治療に用いられる非常に一般的な植物である(Int J Diabetes ＆ Metabolism 2003、11：pages 46-55)。さらに、ニガウリは、解熱、解毒、視力の鋭敏さの改善、胃の爽快化、のどの渇きの緩和のための医薬品として、および殺蠕虫薬として広く用いられている。
【０００９】
ヒトおよび動物モデルの両方において、ニガウリの高血糖活性が報告されている。実際、ニガウリ由来のエキスは、糖尿病の治療のために市販されている。これらのエキスは、単独もしくは他の治療薬との併用で、糖尿病の治療に用いられる。糖尿病の治療に用いるためにニガウリエキスが利用可能であるにもかかわらず、糖尿病およびそれに伴う合併症などの関連疾患を効果的に治療する、ニガウリの標準化エキスを含む改善された組成物を提供する必要がある。
【００１０】
ニガウリのさまざまな部分からの有効成分の抽出プロセスは、従来技術文献に報告されている。ニガウリからの有効成分の抽出プロセスおよび製剤方法は、特許文献に開示されている：IN81887、JP2006314273、GB1435664、WO2013123912、JP2005126370、IN156263、US5098710、CN1180545、CN101637491、US6852695、US6831162、IN191582、CN1253734、CN1303698、IN188858、IN826/DEL/2000、IN768/MUM/2001、CN1418890、CN1562340、CN1858223、CN1709900、CN1872134、JP2008120701、TW200927139、CN101366806、CN101461514、CN101485429およびCN101597389。
【００１１】
市販のニガウリ由来のエキスの使用を含む糖尿病の治療が知られているが、エキスに関連する、特に、エキスの限定された有効性、長期摂取または長期療法の必要性、エキスに存在する神経毒要素の存在の観点から、特定の欠点が同定されている。ビシンは、神経毒の1つのタイプであり(International Journal of Toxicology 2002、21：pages 201-209)、市販のニガウリ由来のエキスに存在する。市販のニガウリのエキスに関連するもう1つの欠点は、エキス中に、抗酸化剤および炭水化物耐容性改善剤として働く糖尿病患者にとって必須の栄養である天然ビタミンCおよび天然繊維含量が相対的に低いことである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、糖尿病およびそれに伴う二次性合併症を効果的に抽出する、改善された有効性および安全性を有するエキス、特にニガウリの標準化エキスを含む改善された組成物を提供することが必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明の概略
1つの態様において、本発明は、生物活性マーカーとして1種以上の窒素含有複素環式化合物(本明細書に記載)を含むニガウリのエキスに関する。
【００１４】
もう1つの態様において、本発明は、ウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリの標準化エキスに関する；該エキスは、生物活性マーカーとしての1種以上の該窒素含有複素環式化合物に関して標準化される。
【００１５】
もう1つの態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスに関する；ここで、該エキスは、天然ビタミンCおよび繊維に富んでおり、該エキスは、実質的にビシンフリーである。
【００１６】
もう1つの態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスの製造方法に関する。
【００１７】
もう1つのさらなる態様において、本発明は、単独もしくは少なくとも1つの医薬的に許容しうる賦形剤との併用で、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含む治療有効量のニガウリのエキスを含む組成物に関する。
【００１８】
さらにもう1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量のニガウリのエキス(本明細書に記載)を投与することを含む、代謝異常の治療方法に関する。
【００１９】
さらにもう1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量のニガウリのエキス(本明細書に記載)を含む組成物を投与することを含む、代謝異常の治療方法に関する。
【００２０】
もう1つの態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含む治療有効量のニガウリのエキスを投与することを含む、糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症の治療方法に関する。
【００２１】
もう1つの態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含む治療有効量のニガウリのエキスを含む組成物を投与することを含む、糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症の治療方法に関する。
【００２２】
もう1つの態様によれば、本発明は、代謝異常、特に糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症の治療のための、さらなる治療的活性剤との併用で用いるための、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物(本明細書に記載)を含むニガウリのエキス、または該エキスを含む組成物に関する。
【００２３】
本発明のこれらの態様およびその他の態様および利点は、以下の記載から当業者には明らかである。
【００２４】
発明の詳細な記載
詳細な記載および特定の実施例は、本発明の実施態様を示しているが、説明のためのみに提供されるものであり、本発明の真の趣旨および範囲内でのさまざまな変更および修正が、当業者にとっては明らかであることを理解すべきである。当業者は、本明細書の記載に基づいて、本発明を最大限に利用することができる。以下の特定の実施態様は、単なる説明としてみなされるべきであり、いかなる意味においても本明細書の開示の残りの部分を制限するものではない。
【００２５】
他に特記しない限り、技術用語および科学用語などの本明細書に用いるすべての用語は、本発明に関して当業者によって一般的に理解される意味を有する。
【００２６】
定義
他に特記しない限り、本明細書および特許請求の範囲で用いる単数形「a」、「an」および「the」は、複数形の対象物を包含することに留意すべきである。
【００２７】
他に特記しない限り、用語「および」は、「および／または」を包含する意味で一般に用いられることにも留意すべきである。
【００２８】
本明細書で用いる用語「窒素含有複素環式化合物」は、アデニンなどの核酸塩基および／またはウリジンおよび2-ヒドロキシアデノシンなどのヌクレオシドを包含する化合物のグループを意味する。したがって、生物活性マーカーとしてエキスに含まれる「窒素含有複素環式化合物」として、アデニン、ウリジンおよび2-ヒドロキシアデノシンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２９】
窒素含有複素環式化合物(本明細書に記載)に関して用いる用語「1種以上」は、1〜2種の窒素含有複素環式化合物、好ましくは1〜3種の窒素含有複素環式化合物を意味する。
【００３０】
本明細書で用いる用語「対象者」は、任意の動物、特にヒトまたは非ヒト動物が挙げられるが、これらに限定されるものではない動物を意味する。非ヒト動物として、たとえば、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラットおよびマウスなどの家畜、ならびに非家畜が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明との関連で、用語「対象者(subject)」は、用語「患者(patient)」と互換的に用いることができる。本発明との関連で、語句「それを必要とする対象者」は、ニガウリのエキス(本明細書に記載)または該エキス(本明細書に記載)を含む組成物を好適に用いることができる疾患または障害の治療を必要とする対象者を意味する。
【００３１】
本明細書で用いる用語「治療」、「治療する」または「治療している」は、進行を軽減、阻止、遅延化すること、健康状態(たとえば、糖尿病に伴う二次性合併症)、疾患、障害(たとえば、糖尿病などの代謝異常)またはこのような用語が関連する症候群を逆行および／または緩和することを意味する。治療には、治療される疾患、障害または健康状態の症状の1つ以上の発症を予防することまたはある程度軽減することも包含される。
【００３２】
本明細書で用いる用語「治療有効量」または「有効量」は、健康状態、疾患、障害、状態または症候群を治療するための有利な結果または所望の結果を達成するのに十分な治療的に有効な化合物(たとえば、本明細書に記載のニガウリのエキス)の量を意味する。本発明との関連で、健康状態、疾患または障害は、糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症などの代謝異常を意味する。有効量は、1回以上の投与で投与されうる。有効量は、典型的には、疾患状態の進行を緩和、改善、安定化、逆行、低速化または遅延化するのに充分な量である。
【００３３】
一般に、用語「代謝異常」は、身体が、炭水化物、脂質、タンパク質または核酸を適切に代謝することができない場合に起こる障害または不具合を意味する。本発明との関連で、代謝異常は、インスリン抵抗性、高血糖、糖尿病(1型または2型糖尿病)、糖尿病に伴う二次性合併症、肥満、耐糖能異常、高コレステロール血症、脂質異常症、高インスリン血症、アテローム性動脈硬化症、多嚢胞性卵巣症候群、冠動脈疾患、メタボリックシンドローム、高血圧、または異常な血漿リポタンパク質、トリグリセリドに伴う関連障害、または膵臓ベータ細胞再生などのグルコースレベルに関連する障害から選ばれるが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
本明細書で用いる用語「医薬的に許容しうる」は、組成物中に用いられる担体、希釈剤および／または賦形剤が、製剤の他の成分と適合しなければならず、そのレシピエントに対して有害であってはならないことを意味する。
【００３５】
本明細書で用いる用語「医薬的に許容しうる賦形剤」は、非毒性で不活性な固体、半固体、希釈剤、封入材料または任意のタイプの製剤補助剤を意味する。医薬的に許容しうる賦形剤として働きうる材料のいくつかの例は、糖類、たとえば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、たとえば、コーンスターチおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、たとえば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；麦芽；ゼラチンであり；ならびに製剤者の判断にしたがって、その他の非毒性適合性滑沢剤、たとえば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味剤および芳香剤；保存剤および抗酸化剤を組成物に用いることもできる。
【００３６】
用語「単独で」は、任意の医薬的に許容しうる賦形剤を加えることなく、組成物がニガウリのエキス、特に、本明細書に記載のニガウリの標準化エキスのみを含むことを意味する。用語「組成物」は、広義に解釈されるべきであり、たとえば、意図する適応症に関するラベルを有する医薬品として販売されるか、または植物性製剤(phytopharmaceutical)として販売される、治療効果を達成する目的を意図する任意の組成物を包含することに留意すべきである。
【００３７】
本明細書で用いる用語「標準化エキス」は、適切な濃度で、1種以上の生物活性マーカー(生物活性物質)を含む、ニガウリなどの植物または植物の一部のエキスを意味する。たとえば、エキスは、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる総窒素含有複素環式化合物の約0.10重量%〜約5.00重量%を含むように標準化されてもよい。ニガウリのエキス中に窒素含有複素環式化合物が含まれる総量は、該窒素含有複素環式化合物の5重量%以上でありうる。本発明との関連で、用語「ニガウリのエキス」または「エキス」の使用は、「ニガウリの標準化エキス」を意味する。
【００３８】
本明細書で用いる用語「約」は、およそを意味し、数値との関連で、用語「約」は、列挙された値または範囲の±10%、好ましくは±5%である値を推定すると解釈されうる。
【００３９】
「生物活性マーカー」は、本明細書において、医薬的活性または治療的活性の許容しうる度合いと相関する活性化合物(単数/複数)の特徴(または植物化学物質プロフィール)を定義するために用いられる。活性化合物である「生物活性マーカー」は、プレパラティブHPLCまたは当技術分野で知られている任意の他の方法によって、ニガウリから得られたエキスから単離されてもよい。用語「生物活性成分」は、用語「生物活性マーカー」と互換的に用いることができ、「生物活性マーカー」と同じ意味を有する。
【００４０】
実施態様
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスに関する。
【００４１】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1〜3種の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスに関する。
【００４２】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスに関する。
【００４３】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジンおよびアデニンを含むニガウリのエキスに関する。
【００４４】
さらにもう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスに関する。
【００４５】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてアデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスに関する。
【００４６】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスに関する。
【００４７】
本発明のさらにもう1つの実施態様によれば、上記の1つ以上の実施態様において列挙されたニガウリのエキスは、天然ビタミンCおよび繊維で富化されている。
【００４８】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されているエキスに関する。
【００４９】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1〜3種の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されているエキスに関する。
【００５０】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されているエキスに関する。
【００５１】
本発明の1つの実施態様によれば、1つ以上の上記の実施態様において列挙されたニガウリのエキスは、神経毒性物質を実質的に含まない。
【００５２】
もう1つの実施態様において、神経毒性物質は、ビシンである。
【００５３】
したがって、1つの実施態様によれば、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスに関する。
【００５４】
したがって、1つの実施態様によれば、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1〜3種の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスに関する。
【００５５】
したがって、1つの実施態様によれば、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスに関する。
【００５６】
本明細書で用いる用語「神経毒性物質を実質的に含まない」または「ビシンを実質的に含まない」は、1つ以上の上記の実施態様において列挙されたニガウリのエキスは、0重量%〜約0.004重量%；好ましくは約0.002重量%未満、より好ましくは0重量%の神経毒性物質または特にビシンを含むニガウリのエキスを意味する。これらのパーセンテージのすべては、他に特記しない限り、重量%を意味する。
【００５７】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとして総重量の約0.1 %〜約5 %のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスに関する。
【００５８】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとして総重量の約0.1 %〜約3 %のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスに関する。
【００５９】
本発明は、生物活性マーカーとして総重量の約0.1 %〜約1 %のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスに関する。
【００６０】
もう1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとして0.1 %〜3%のウリジン、0.1 %〜3%のアデニンおよび0.1 %〜3%の2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されているエキスに関する。
【００６１】
本発明との関連で、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを、本明細書において、標準化エキスと称する。
【００６２】
1つの実施態様において、標準化エキスは、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスである。
【００６３】
1つの実施態様において、標準化エキスは、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、該エキスが、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスである。
【００６４】
1つの態様において、本発明は、ニガウリの標準化エキスの製造方法であって、以下のステップ：
a．ニガウリの新鮮な未熟の緑色の果実および種子から絞り汁(juice)を調製する；
b．ステップ(a)で得られた絞り汁をろ過して、懸濁した粒子を含むエキスを得る；
c．天然トニックの添加によって、ステップ(b)で得られた絞り汁エキスのpHを変化させて、酸性pH範囲にする；
d．ステップ(c)で得られた絞り汁エキスを静置する；
e．塩基またはアルカリを用いることによって、ステップ(d)で得られた絞り汁エキスのpHを中和する；
f．ステップ(e)で得られた絞り汁エキスに賦形剤を加えて均質な混合物を得る；
g．ステップ(f)で得られた絞り汁エキスを濃縮して、蒸留下で半固体の塊を得る；
h．ステップ(g)で得られた濃縮絞り汁エキスを乾燥して、ニガウリの乾燥エキスを得る；および
i．ニガウリのエキス中の生物活性マーカーの量を決定する；ここで、生物活性マーカーは、ウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物である；
を含む方法に関する。
【００６５】
上述の方法のステップ(i)において、生物活性マーカーの量は、HPLC法などのクロマトグラフィー法を用いることによって決定される。
【００６６】
1つの実施態様において、水は、ステップ(a)に記載のニガウリの果実の絞り汁を調製中に、任意に加えられる。
【００６７】
1つの実施態様において、ステップ(c)で用いた天然トニックは、アムラ(Amla)の果肉である。
【００６８】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(c)では、絞り汁エキスの酸性pH範囲は、2〜6である。
【００６９】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(c)では、絞り汁エキスの酸性pH範囲は、4〜4.5である。
【００７０】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(c)では、絞り汁エキスの酸性pHは、4.5である。
【００７１】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(d)では、絞り汁エキスを1分〜2時間静置する。
【００７２】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(d)では、絞り汁エキスを1分〜1時間静置する。
【００７３】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(d)では、絞り汁エキスを5〜30分間静置する。
【００７４】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(e)では、塩基またはアルカリは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムおよび炭酸水素カルシウムから選ばれる。
【００７５】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(e)では、アルカリは、水酸化ナトリウムである。
【００７６】
さらにもう1つの実施態様において、方法のステップ(e)では、水酸化ナトリウムを0.05%〜0.25%の量でアルカリとして用いる。
【００７７】
水酸化ナトリウムを0.15%の量でアルカリとして用いる。
【００７８】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(e)では、アルカリは、任意に攪拌しながら、滴下される。
【００７９】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(f)では、賦形剤は、継続的攪拌下に添加される。
【００８０】
もう1つの実施態様において、方法のステップ(f)では、賦形剤は、微結晶セルロースおよびアエロジルである。
【００８１】
1つの実施態様において、本発明は、ニガウリの標準化エキスの製造方法であって、以下のステップ：
(i)水を断続的にくわえながら、ニガウリの新鮮な未熟の緑色の果実および種子を粉砕することによって粗絞り汁を調製する；
(ii)ステップ(i)で得られた粗絞り汁をろ過して、懸濁した粒子を含む透明な絞り汁エキスを得る；
(iii)天然トニックの添加によって、ステップ(ii)で得られた絞り汁エキスのpHを4〜4.5に変化させる；
(iv)ステップ(iii)で得られた絞り汁エキスを5〜30分間静置する；
(v)継続的に攪拌しながらアルカリを滴下することによって、ステップ(iv)で得られた絞り汁エキスのpHを中和する；
(vi)継続的に攪拌しながらステップ(v)で得られた絞り汁エキスに賦形剤を加えて均質な混合物を得る；
(vii)ステップ(vi)で得られた絞り汁エキスを濃縮して、蒸留および減圧下で半固体の塊を得る；
(viii)ステップ(vii)で得られた濃縮絞り汁エキスを乾燥して、ニガウリの乾燥エキスを得る；
(ix)クロマトグラフィー法を用いて、ニガウリのエキス中の生物活性マーカーの量を決定する；
を含む方法に関する。
【００８２】
上述の方法において、ステップ(ix)では、生物活性マーカーの量は、HPLC法およびクロマトグラフィー法を用いることによって決定される。
【００８３】
もう1つの実施態様において、本発明は、本明細書に記載の方法によって得られたニガウリのエキスに関する。
【００８４】
1つの態様において、本発明は、上記の1つ以上の実施態様において列挙されたニガウリのエキスを含む組成物に関する。
【００８５】
1つの態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００８６】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスが天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、組成物がエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００８７】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスが天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まず、組成物がエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００８８】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００８９】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスが天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、組成物がエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００９０】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスが天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まず、組成物がエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００９１】
1つの実施態様において、本発明は、生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスを含む組成物であって、エキスが天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まず、組成物がエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物に関する。
【００９２】
本明細書に記載の本発明組成物は、該組成物は、上記の1つ以上の実施態様において列挙されたニガウリのエキスを含むことを考慮した薬草組成物を構成する。
【００９３】
もう1つの実施態様において、本発明の組成物に含まれるエキスは、ニガウリの乾燥エキスである。
【００９４】
もう1つの実施態様において、本発明の組成物は、0.1重量%〜10重量%の上記の1つ以上の実施態様において列挙されたニガウリのエキスを含む。
【００９５】
もう1つの実施態様において、本発明の組成物は、0.1重量%〜5重量%の上記の1つ以上の実施態様において列挙されたニガウリのエキスを含む。
【００９６】
もう1つの実施態様において、本発明の組成物は、0.1重量%〜3重量%の上記の1つ以上の実施態様において列挙されたニガウリのエキスを含む。
【００９７】
1つの実施態様において、本発明の組成物は、経口投与用に提供される。
【００９８】
もう1つの実施態様において、本発明組成物は、限定的ではないが、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、サシェ剤、懸濁液剤、液剤、トローチ、チューインガム、ロゼンジまたは丸剤から選ばれる投与剤形で経口投与されうる。
【００９９】
本発明の薬草組成物は、有効成分、すなわち、標準化エキスであってもよい植物ニガウリのエキスを、散剤、丸剤、錠剤、被覆錠剤、ペレット、顆粒、カプセル剤、液剤、乳剤、懸濁液剤、エリキシル剤、シロップおよびその他の使用に適した形態のための通常の非毒性の医薬的に許容しうる賦形剤と混ぜ合わせる(compounded)ことによって経口投与用に製剤されてもよい。本発明の製剤は、タルク、水、グルコース、ラクトース、スクロース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、デンプンペースト、三ケイ酸マグネシウム、コーンスターチ、ケラチン、コロイド状シリカ、ジャガイモデンプン、尿素、およびセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのその誘導体；麦芽；ゼラチン；ならびにその他の非毒性適合性滑沢剤、たとえば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、放出剤、コーティング剤および固体、半固体または液体形態の製剤の製造に用いるのに適したその他の賦形剤を含有する製剤を包含し、さらに、補助剤、安定化剤、増粘剤および着色剤を用いることもできる。錠剤またはカプセル剤などの固体組成物を製造するために、エキスを、固体組成物を形成するための医薬用賦形剤(たとえば、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガムなどの従来の錠剤化成分)およびその他の医薬用希釈剤(たとえば、水)と混合する。次いで、この固体組成物を、有効量の本発明組成物を含む単位用量剤形にさらに分割うる。エキスを含む錠剤または丸剤をコーティングするか、または他に混ぜ合わせて、長期作用の利点をもたらす投与剤形を提供することができる。
【０１００】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとして1種以上のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０１】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとして1種以上のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されているエキスを投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０２】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとして1種以上のウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０３】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスを投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０４】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されているエキスを投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０５】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０６】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の上記の1つ以上の実施態様において列挙された組成物を投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０７】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスを含む組成物であって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物を投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０８】
1つの態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスを含む組成物であって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを単独で、または少なくとも1種の医薬的に許容しうる賦形剤とともに含む組成物を投与することを含む代謝異常の治療方法に関する。
【０１０９】
1つの実施態様によれば、代謝異常は、インスリン抵抗性、高血糖、糖尿病(1型または2型糖尿病)、糖尿病に伴う二次性合併症、肥満、耐糖能異常、高コレステロール血症、脂質異常症、高インスリン血症、アテローム性動脈硬化症、多嚢胞性卵巣症候群、冠動脈疾患、メタボリックシンドローム、高血圧、または異常な血漿リポタンパク質、トリグリセリドに伴う関連障害、または膵臓ベータ細胞再生などのグルコースレベルに関連する障害から選ばれる。
【０１１０】
1つの実施態様によれば、代謝異常は、インスリン抵抗性、高血糖、糖尿病、糖尿病に伴う二次性合併症、肥満、耐糖能異常、メタボリックシンドロームまたは膵臓ベータ細胞再生などのグルコースレベルに関連する障害から選ばれる。
【０１１１】
1つの実施態様によれば、代謝異常は、糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症である。
【０１１２】
1つの実施態様によれば、代謝異常は、2型糖尿病である糖尿病である。
【０１１３】
1つの実施態様によれば、代謝異常は、糖尿病に伴う二次性合併症である。
【０１１４】
したがって、1つの実施態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症の治療方法に関する。
【０１１５】
したがって、1つの実施態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む糖尿病または糖尿病に伴う二次性合併症の治療方法に関する。
【０１１６】
1つの実施態様において、糖尿病は、2型糖尿病である。
【０１１７】
したがって、1つの実施態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む2型糖尿病の治療方法に関する。
【０１１８】
したがって、1つの実施態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む2型糖尿病の治療方法に関する。
【０１１９】
したがって、1つの実施態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンから選ばれる1種以上の窒素含有複素環式化合物を含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む糖尿病に伴う二次性合併症の治療方法に関する。
【０１２０】
したがって、1つの実施態様において、本発明は、それを必要とする対象者に、治療有効量の生物活性マーカーとしてウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシンを含むニガウリのエキスであって、天然ビタミンCおよび繊維で富化されており、ビシンを実質的に含まないエキスを投与することを含む糖尿病に伴う二次性合併症の治療方法に関する。
【０１２１】
もう1つの実施態様において、糖尿病に伴う二次性合併症は、糖尿病性神経障害、糖尿病性白内障および網膜症、糖尿病性角膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性皮膚障害、糖尿病性足部潰瘍および他の糖尿病性微小血管障害から選ばれる。
【０１２２】
選ばれた用量レベルは、使用された本発明の特定のエキスの活性、投与経路、投与時間、使用されている特定の組成物の排出速度、治療期間、他のエキスとの併用、治療される患者の年齢、性別、体重、健康状態、全体的な健康および以前の病歴、および医療業界で周知の因子などのさまざまな因子に応じて変わる。しかしながら、一般に、成人のヒトの治療に用いる場合、典型的には、0.02-5000 mg/日または1-1500/日の範囲である。所望の用量が、1日当りの単回用量で、または2、3、4回またはそれ以上のサブ用量などの適当な間隔での分割用量で提供されるのが便利である。
【０１２３】
本発明の組成物、薬剤およびエキスを、単独で用いることができるか、あるいは他の植物エキス、組成物または治療的に有効な化合物(ただし、このような化合物は、本発明のエキスまたは植物組成物の抗糖尿病特性を阻害しない)との併用で用いることができることが理解されるであろう。したがって、本発明は、また、代謝異常、特に糖尿病または糖尿病に伴う合併症の治療のためのさらなる治療的活性剤との併用で用いるための本明細書に列挙されるエキスもしくはエキスを含む組成物に関する。
【０１２４】
治療的活性剤は、オルリスタット、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、グリベンクラミド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、ナテグリニドまたはメトホルミンなどの既知の薬剤または生物活性物質から選ばれうるが、これらに限定されるものではない。
【０１２５】
本発明の態様および実施態様ならびに添付の特許請求の範囲では、ニガウリへの言及が行われる場合、ニガウリの果実を意味することを意図する。
【発明を実施するための形態】
【０１２６】
以下の実施例は、本発明を説明する。しかしながら、それらは、決して本発明を限定するものではない。この点に関し、実施例のセクションで使用される特定のアッセイは、抗糖尿病活性の指標を提供するためのみに設計されていることを理解することが重要である。このような活性を決定するために利用できる多くの方法があり、したがって、いずれか1つの特定の方法における否定的な結果は決定的なものではない。
一度でも記載された用語は、本明細書を通して同じ意味を有する。
【実施例１】
【０１２７】
ニガウリのエキスの調製
ステップ−I：
アムラの果肉の調製
インドのマハラシュトラ州ムンバイの地元の市場から、市販されている新鮮なアムラの果実を入手し、物理的な損傷に関して選別し、洗浄して果実から余分な粒子を除去した。洗浄した果実を小片に切り分けた。アムラ果実の小片を等量の水(1:1)とともにミキサーに入れ、果実の均一な絞り汁を得るために、混合物を十分すり潰した。もしあれば、果実の塊または他の部分を絞り汁から除去する。ニガウリの絞り汁エキスのpHを調節するために、この得られた絞り汁を直接用いた。
【０１２８】
ステップ−II：
ニガウリのエキスの調製：
ステップ−IIA：
インドのマハラシュトラ州ムンバイの地元の市場から、市販されている新鮮な未熟の緑色の果実および種子を入手し、洗浄して果実から余分な粒子を除去した。洗浄した果実を小片に切り分け、ひき臼に入れた。蒸留脱塩水を断続的に加えながら、脱ひき臼に入れた果実の小片をすり潰した。粗絞り汁を得、秤量した。
【０１２９】
ステップ−IIB：
ステップIIAで得た粗絞り汁を遠心分離、ろ紙圧縮、篩またはナイロンクロス(100メッシュナイロンクロス)を用いてろ過して、懸濁粒子を含む透明な絞り汁エキスを得た。ろ過後に残った残渣を除去した。ろ液(透明な絞り汁エキス)をさらなる処理のために用いた。継続攪拌しながらステップIに記載の手順で調製したアムラ果肉(絞り汁エキス1リットル当り270 ml)を添加することによって、懸濁粒子を含む絞り汁エキスのpHを4〜4.5に調節した。アムラ果肉の添加後、絞り汁の攪拌を10−15分間継続し、前述のpH範囲の絞り汁エキスを得た。攪拌後、絞り汁エキスのpHをチェックし、もし絞り汁エキスのpHが特定の範囲にないならば、アムラ果肉を追加する必要がある。絞り汁エキスを5〜25分間静置した。
【０１３０】
ステップ−IIC：
15%水酸化ナトリウム(NaOH)溶液(絞り汁エキス1リットル当り10 mL)を添加することによって、上記ステップIIBで得た安定化した絞り汁エキスをpH7〜7.2の範囲に中和した。NaOH溶液の添加後、中和した絞り汁エキスを10−15分間継続的に攪拌した。絞り汁エキスのpHをチェックして、特定の範囲にあるか確かめ、ない場合は、NaOH溶液をさらに加える。この後、0.15%(絞り汁エキス1リットル当り15 g)の微結晶セルロースおよび0.15%(絞り汁エキス1リットル当り15 g)のアエロジルを中和した絞り汁エキスに加え、混合物を10分間よく攪拌して、絞り汁エキスの均質な混合物を得た。
【０１３１】
ステップ−IID：
ステップIICで得られた均質な絞り汁エキスをチャンバーに移し、減圧下[700 mm Hg]、60℃±5℃の温度での蒸留によって濃縮して半固体の塊にした。水を完全に除去して絞り汁エキス粉末を得るために、凍結乾燥機または55 ℃±5℃における噴霧乾燥機などの適当な乾燥機で濃縮した絞り汁を乾燥した。
ニガウリの新鮮な果実に関して、計算されたエキスの収量は、4.0−4.5 Kgであった。新鮮な果実ニガウリ対エキスの比率は、25：1であることがわかった。
ステップIIDでそのように得られたエキスを、本明細書では「実施例１のエキス」と呼ぶ。
【実施例２】
【０１３２】
カプセル剤の調製
実施例１のエキスおよび賦形剤(微結晶セルロース、エアロゾル、リン酸二カルシウム)をそれぞれ30メッシュおよび40メッシュの篩を通してマスミキサーに入れ、移した材料を適切に混合した。次いで、湿潤顆粒を得るために、ポビドン(PVPK-30)を用いてブレンドを造粒する。湿潤顆粒をトレー乾燥機で50℃±5℃にて乾燥した。乾燥した顆粒をマスミキサーに移した。滑沢材(タルクおよびステアリン酸マグネシウム)を篩にかけ、マスミキサー内で乾燥顆粒と適切に混合した。得られた化合物流を硬ゼラチンカプセル殻に充填した。実施例１のエキスを含む各カプセルの組成を以下に示す。
2016535746.tif 000002
【実施例３】
【０１３３】
カプセル剤の安定性試験
3A：苦味含量の決定方法：
3 gのサンプルおよび0.5 gの炭酸カルシウムを250 mLのビーカーに入れた。軽石片を加え、次いで、混合物を沸騰蒸留水で抽出して、粉末を得た。得られた粉末を沈ませ、上清をもう1つのフラスコにて綿でろ過した。抽出を繰り返して、淡い黄色のエキスを得た。抽出された液体を250 mLのビーカーに集め、沸騰させ、濃縮して、10 mLの濃縮エキスを得た。次いで、最高濃度アルコール20 mLを加え、水浴上に維持した。それが沸騰を開始した時点でそれを除去し、残渣を沈ませ、上清をろ紙でろ過した。抽出を続けて淡い黄色のエキスを得た。得られた淡い黄色のエキスを蒸発皿で蒸発させ、水浴上に維持して、アルコールを完全に蒸発させた。得られた残渣を約15 mLの蒸留水で希釈し、分離器に移し、酢酸エチルで抽出(4−5回)して、抽出を完了した。得られた酢酸エチルエキスを蒸留水で洗浄し、水層を捨て、酢酸エチル層を水浴上で蒸発させて、残渣を得た。得られた残渣をオーブン中で105℃にて維持し、デシケーター内で室温まで冷却し、秤量して、恒量を得た。
【０１３４】
以下の式にしたがって、苦味含量を決定した：
苦味(% w/w)＝残渣の重量 X 100 / サンプルの重量
苦味(mg/カプセル)＝苦味(% w/w) X (平均充填重量(g) X 1000 / 100)
【０１３５】
3B：タンパク質含量の決定方法(自動タンパク質分析器による)：
消化：1gのサンプルをケルダールチューブに入れた。硫酸ナトリウム(9.95g)、硫酸銅(0.05 g)および濃硫酸をチューブに加えた。クリア後、サンプルを30分間消化した。
蒸留：ケルダールチューブを蒸留ユニットに適合させた。サンプルに、水10 mLおよび32% 水酸化ナトリウム(90 mL)を加えた。蒸留を行い、60 mLのpH 4.65の4%ホウ酸溶液中に蒸留物を集めた。
滴定：ホウ酸溶液を0.25 M(0.5N)の硫酸で滴定して、pH 4.65にした。ブランクおよびサンプルを滴定した。
【０１３６】
以下の式にしたがって、タンパク質含量を決定した：
タンパク質%(w/w)＝(サンプル測定値−ブランク測定値) X 1.4007 X 6.25 X NF
サンプル重量
ここで、NFは、0.5 N硫酸の規定度係数(Normality Factor)を表す；
1.4007は、窒素の分子量、V*Nのミリ当量結果の変換、および変換%を考慮に入れる単一因子を表す；
6.25は、タンパク質ファクターを表す。
タンパク質(mg/カプセル)＝タンパク質(% w/w) X (平均充填重量(g) X 1000 / 100)
【０１３７】
3C：微生物学的試験：
アメリカ薬局方-37、I巻、2014、2021、2022および2023章明細ならびに英国薬局方、V巻、2014、付記XVI FおよびG(A474-A476)により、微生物学的試験を行った。
【０１３８】
表1：カプセル剤の安定性試験
2016535746.tif 000003
結論：HDPEコンテナにパッキングされたカプセル剤が、6ヶ月間にわたって40℃にて安定であることが観察された。
【実施例４】
【０１３９】
実施例１のエキス中の生物活性マーカー含量の決定
実施例１のニガウリのエキスに存在する生物活性マーカー(ウリジン、アデニンおよび2-ヒドロキシアデノシン)の含量を、HPLC法などのクロマトグラフィー法によって決定した。実施例１のエキスが、ウリジン(0.3 %)、アデニン(0.2 %)および2-ヒドロキシアデノシン(0.3 %)を含むことが見い出された。
【０１４０】
方法
A．ウリジン標準溶液：5.0 mgのウリジンを50 mL容のフラスコに移し、25 mLの希釈液(水：メタノール 90:10)を加え、音波処理した。5 mLの溶液をピペットで取り出し、25 ml容のフラスコに移した。
B．サンプル調製：0.5 gの実施例１のエキスを25 mLの水：メタノール(90:10)に溶解した。No.1ろ紙にて混合物をろ過し、HPLCによってろ液を分析した。
【０１４１】
分析的HPLC条件：
カラム：Hypersil BDS C-18、250 mm x 4.6mm、5μ
移動相A：リン酸緩衝液3.0
移動相B：アセトニトリル
勾配：時間(分)/% A：0/90、25/60、30/20、35/20、36/90、40/90
流速：1.0 mL/分
検出器：UV 
検出波長：261 nm
注入体積：20 μL
実行時間：40分
温度：周囲
希釈液：水：メタノール(90:10)
【０１４２】
ウリジンの含量を以下の式にしたがって決定した：
計算：
ウリジンの含量(% w/w)＝(サンプル面積/標準面積) X(標準の希釈係数/サンプルの希釈係数) X 標準の純度%
ウリジン(mg/カプセル)＝ウリジン(% w/w) X (平均充填重量(g) X 1000 / 100)
【実施例５】
【０１４３】
実施例１のエキス中のビシン含量の決定
市販のニガウリの絞り汁エキスは、長期投与中に発達中および成熟神経組織の両方において機能に悪影響を及ぼしうる神経毒の存在による欠点を有している。ビシンは、広くしられている神経毒の1つであり、毒性があり、重篤な副作用を引き起こす能力がある。
【０１４４】
本発明のニガウリのエキスを分析して、クロマトグラフィー法を用い、もしあれば、ビシン含量を決定したが、該分析に基づいて、実施例１のエキスはビシンを含まないことがわかった。実施例１のニガウリのエキスおよび市販のニガウリのエキス中のビシン含量に関する比較データを、表2に提供する。市販のエキスを、本明細書において参照エキス 1、参照エキス2、参照エキス3、参照エキス4、参照エキス5、参照エキス6、参照エキス7、参照エキス8および参照エキス9と称する。
【０１４５】
表2：市販のニガウリの絞り汁エキスとのエキス中のビシン含量の比較
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【実施例６】
【０１４６】
生物学的活性
非インスリン依存性糖尿病(2型糖尿病)を有する患者に、１日当り実施例１のエキスを3カプセル投与する。各カプセル剤は、実施例２に記載したように、400 mgの実施例１のエキスを含む。
実施例１のエキスは、治療を受けている患者の血糖値を低下させる活性を有することが見い出されている。
【国際調査報告】
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