(57)【要約】本発明は、ポイント・オブ・ケア（PoC)の分野で使用されることが好ましい検査システムまたはアッセイシステム（検出システム）に関する。【選択図】図１ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル液から少なくとも１つの被分析物質を検出する検査方法であって、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分けられた２つのサンプルチャンバーにおいて前記キャリアの前側は第１サンプルチャンバーの方に向き後側は第２サンプルチャンバーの方に向き、
ａ）
少なくとも１つの受容体分子がキャリアの前側に固定され、
ｂ）少なくとも１つの自由体積が前記キャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られ、 
ｃ）少なくとも２つの開口部を有する第１サンプルチャンバーにおいて、サンプル液は１番目の開口部から流入し流速勾配に沿って前記キャリアの前側を通って前記キャリアから距離を置く２番目の開口部へと流れ、
ｄ）少なくとも2つの開口部を有する２番目のサンプルチャンバーにおいて、サンプル液は第１サンプルチャンバーから流速勾配に沿って前記キャリアの後側を通って、好ましくは前記キャリアの前側とは逆向きに２番目の開口部に流れ、
ｅ）前記第１サンプルチャンバーの２番目の開口部と前記第２サンプルチャンバーの１番目の開口部がチャネルにより相互接続され、
ｆ）前記第２サンプルチャンバーの２番目の開口部が前記の液を排出でき、
ｇ）上記ｂ）からの自由体積が少なくとも一部は液体カラムを形成し、
ｈ）前記キャリアの前側と後側に沿った該流速勾配が圧力をかけることによって提供され、上記ｇ）からの液体カラムを引き込む、
ことを特徴とする検査方法。
【請求項２】
サンプル液から少なくとも１つの被分析物質の前記検出のための検査方法であって、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分けられた２つのサンプルチャンバーにおいて、前記キャリアの前側は第１サンプルチャンバーの方に向き後側は第２サンプルチャンバーに向くサンプルチャンバーと、
ａ）少なくとも１つの受容体分子がキャリアの前側に固定され、
ｂ）少なくとも１つの自由体積が前記キャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られ、 
ｃ）２つの前記サンプルチャンバーのそれぞれへ導く２つの枝分かれしたチャネルにおいて前記サンプル液が分流され、それぞれがその１つに導かれる２つの前記サンプルチャンバーにおいて、流体のそれぞれが１番目の開口部を通って該キャリアの前側と後側の流速勾配に沿って該キャリアから離れた２番目の開口部へ流れ、
ｄ）該サンプルチャンバーのそれぞれの２番目の開口部は流れを少なくとも１つのチャネルへと移行させ、前記サンプルチャンバーからの放出を可能にし、
ｅ）上記ｂ）からの前記の自由体積は少なくとも一部は液体カラムを形成し、
ｆ）前記キャリアの前側と後側に沿った該流速勾配が圧力をかけることによって作成され上記e）からの液体カラムを引き込む
ことを特徴とする検査方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載のサンプル液から少なくとも１つの被分析物質を検出するための前記検査方法であって、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分けられた２つのサンプルチャンバーにおいて該キャリアはサンプル液に対して半透過性であることを特徴とする検査方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の前記検査方法において、前記チャネルの直径が前記サンプルチャンバーまたは前記自由体積の直径よりも小さい、検査方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の前記検査方法において、前記チャネルが、前記キャリアの固定要素、特に横の支柱、を取り囲み、丸い穴を有する、検査方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の検査方法において、第２サンプルチャンバーからの排出が後続のチャンバーへのチャネルによって接続され、該第３チャンバーは、
ａ）一部に吸収材を含み、
ｂ）好ましくはチャネルとして形成され、特に好ましくは少なくとも１つの屈曲または少なくとも１つの後続するチャンバーを有するチャネルとして形成された排出口を含む、
検査方法。、
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の検査方法であって、検査カセットが３つの構成部分から射出成形によって組み立てられ（ハーフシェル、中間部およびハーフシェル）、少なくとも１枚のフィルムが少なくとも１つのハーフシェルと前記中間部との間に位置し、少なくとも１つの切り欠きとキャリアを受けとめる少なくとも２つのタブとが提供され、追加のフィルムが前記中間部と２番目のハーフシェルとの間に位置することが特に好ましく、これらの構成部分がレーザー溶接、特にレーザー光線によるマスク溶接によって相接続された検査方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の検査方法において、前記キャリアの前側または後側からチャンバー壁への距離が１０μｍ以上、特に最大で１，５００μｍである、検査方法。
【請求項９】
請求項７に記載の検査方法において、前記距離が８０μｍから３５０μｍ、特に１２０μｍから２００μｍであって前記キャリアの前側と後側の距離が異なる、検査方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の検査方法において、前記キャリアが固形物、完全にまたは部分的にゲル様、多孔性、篩様、透過性または半透過性メンブレン、透析メンブレン、特にコーティングされたまたはコーティングされていないメンブレンから成る、検査方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の検査方法において、少なくとも１つの受容体分子がキャリアの２番目の表面に固定されている、検査方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の検査方法において、前記流速勾配が、ａ）前記キャリアの１番目と２番目の表面に並行に導かれるか、またはｂ）前記キャリアの１番目と２番目の表面を逆方向に導かれる、検査方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の検査方法において、前記サンプル液が生物学的または非生物学的液体、特に全血、血漿、血清、唾液、涙液、尿、分泌液、脳脊髄液、またはそれらの処理済み検体液、またはバクテリア含有溶液、あるいは活性成分、特にＥＤＴＡ安定化による検体液である、検査方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の検査方法であって、圧力の適用は、過剰圧または陰圧、特にシリンジ、アンプル、ポンプまたはふいごを用いることを特徴とする、検査方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の検査方法であって、３００μＬのサンプル希釈液を含めて、サンプル液の注入量が３４０〜５４０μＬ、特に血漿では３５０〜３７０μＬ、血液では４８０〜５２０μＬであり、前記サンプルチャンバーは、前記キャリアの長さが４０〜６０ｍｍ、幅が２．０〜１０ｍｍ、流入口の口径が０．１５〜０．４５ｍｍであることを特徴とする、検査方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれけあ１項に記載の検査方法であって、複数のサンプルチャンバーが少なくとも１つのサンプル液が入ったサンプルチャンバーと並行して供給されることを特徴とする、検査方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれけあ１項に記載の検査方法であって、前記被分析物質の検出のために抗体が用いられることを特徴とする、検査方法。
【請求項１８】
少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分けられ、流入口と流出口を備え結合アッセイを実施するために受容体分子が固定されたキャリアを含む２つのサンプルチャンバーにおいて、チャンバーシーリングからチャンバー底の間に自由空間が存在し、選択的に前記サンプルチャンバーに流体的に接続された追加の補助チャンバーを有し、圧力をかけるための手段および追加の補助部品ならびに添加剤を含む検査システムから成るキット。
【請求項１９】
少なくとも１つの被分析物質（複数の物質）を、アレルギー、自己免疫疾患または代謝疾患、感染症、性感染病、食物不耐性、寄生虫病、医学、獣医学、植物診断、食物診断、環境診断、法医学診断、薬理学、毒性学、薬物、治療薬まては代謝産物、細胞メディエーターの検出、組織タイピング、選別、食物タイピング、抗原タイピング、エピトープタイピング、およびＤＮＡまたはＲＮＡの検出におけるサンプル液から前記の検出を行う請求項１７または請求項１〜１６のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポイント・オブ・ケア（ＰｏＣ）の分野で使用されることが好ましい検査システムまたはアッセイシステム（検出システム）に関する。
【背景技術】
【０００２】
医学、獣医学、食物の研究およびインビトロ（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）の診断において、またはさらに広範な応用領域において、分子、被分析物質、およびまたは活性やそれらの組成の定性的およびまたは定量的測定のために分析検査が用いられる。検査結果は疾患決定のための診断パラメーター、食物の起源または薬物の有効性といった多様な情報を提供する。
【０００３】
今日では、既知のＤＮＡおよびタンパク質の分析方法が、入手可能な検査法のなかでは主要な方法である。特に、免疫アッセイ法は、例えばバイオマーカーのようなほとんど全ての選択された十分に大きい標的分子への特異的結合のために抗体が用いられる方法である。
【０００４】
迅速な検査は、検査開始から数分あるいは数時間内に測定値を提供するばかりか、サンプル採取の場に近接して、サンプルを発送することなく結果を提供する（ポイント・オブ・ケア（ＰｏＣ））。
【０００５】
既知の標準的検査方法には、ラテラルフロー検査（ＬＦＴ）、フロースルー検査（ＦＴＴ)、凝集検査（ＡＴ）、または固相化検査（ＳＰＴ）が含まれる。これらの方法はいずれも被検物質を直接的にそして可視的に検出する。このタイプの検査には、小型の読み取り用デバイスが追加され、それによって定量的結果も提供される。
【０００６】
既知のインビトロ診断用のアッセイ方法とは、免疫アッセイ（ＩＡ）、特に酵素結合免疫測定法（ＥＩＡ）、または「結合アッセイ」（「サンドイッチ法」）などである（例えば、ＥＰ０１７１１５０Ｂ１およびＥＰ００６３８１０Ｂ１を参照）。さらに、Ｒｏｇｅｒ  Ｐ．Ｅｋｉｎｓによる文献が参照として本明細書に掲載されている（例えば、ＷＯ８４０１０３１およびその他多数）。
【０００７】
メンブレン支持型の結合アッセイ、特に血液からのアレルゲンに対するＩｇＥ検出のための結合アッセイは、１９８０年代の終わりから知られているが、その例としてはＢ．Ｊ．Ｗａｌｓｈら、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，Ｏｈｉo，ＵＳ；ＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＡＢＳＴ  ｒａｃｔ  Ｓ，１０１（２５），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１７，  １９８４，ｐ．５７８，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．２２８１９０ｂ，Ａｌｌｅｒｇｅｎ  ｄｉｓｃｓ  ｐｒｅｐａｒｅｄ  ｆｒｏｍ  ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩｇＥ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｓｏｌｂｌｅ  ａｎｄ  ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ  ａｌｌｅｇｒｇｅｎｓ(ニトロセルロース調製のアレルゲンディスク：可溶性および非可溶性アレルゲンへのＩｇＥ結合の検出）、およびＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９８４，７３（１）、
１３９−４５がある。ラテラルフローの原理に基づく幾つかの検査システムが、迅速なアレルギー検査として市販されている。
【０００８】
ＰｏＣの分野においては、本出願人による市販の迅速検査用のＰｏＣが実施例として説明されていて（ＥＰ１７１８９７０を参照）、それは全血（ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）からアレルギーを検出するためのメンブレン支持型結合アッセイに基いて使用が可能である。
【０００９】
さらに、本出願人による迅速検査についてＷＯ２０１１／０００９５９に説明があり、それにおいては、検査試薬を特に効果的に、そして事前に分析する全血をチャージしたメンブレンの特異的部位と並行させて導入するために、検出ポイント間で選択的にメンブレンが湿らせてある。
【００１０】
前記出願人による２０１３年２月２８日のＷＯ２０１３０２６８０８Ａ１の次の迅速検査においては、液流は両側からメンブレンに流しこまれる。このために、前記メンブレンの上側および下側に自由体積が形成されるように、メンブレンはデバイスの長軸側に固定され、それを通して自由体積の液流がメンブレンを通過して流れる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、さらに改良された迅速検査が求められている。
【００１２】
特に、全ての検出部位の効率のよい洗い流し、また製造公差によるメンブレン性状の変動に耐え得る前記の液の再現性がある流線の改良のように、個々の検出部位のサンプル液（被分析物質）による均一なチャージの改良は可能である。しかしながら、これらの特性の全ては、再現性のある質の高い結果を得るための前提条件である。
【００１３】
本発明の目的は従って、ＰｏＣ検査システムにおいて、受容体分子を使った被分析物質の検出のために、キャリアにサンプル液を加えるための改良された再現性のある方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
この目的は意外にも、請求項1によって達成される。本発明によって、サンプル液から少なくとも1つの被分析物質を検出するための検査方法が提供され、サンプル液に半透過性であるキャリアによって分離されることが好ましい２つのサンプルチャンバーからなり、また、少なくとも2つの表面からなり、
キャリアの前面は第１サンプルチャンバーに面し、後面は第2サンプルチャンバーに面し、
ａ）少なくとも1つの受容体分子がキャリアの前面に固定され、
ｂ）少なくとも1つの自由体積が、前記キャリアの前記前面と前記後面のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られていて、 
ｃ）前記第１のチャンバーは少なくとも２つの開口部を有し、サンプル液は第１の開口部を通り、前記キャリアの前記前側の流れの勾配を通ってキャリアから離れた第２の開口部へと流れ、
ｄ）前記第２のサンプルチャンバーは少なくとも２つの開口部を有し、サンプル液は第１の開口部を通り、第１サンプルチャンバーから前記キャリアの前記後側の流れの勾配に沿って流れ、好ましくはキャリアの前側には逆向きに第２の開口部へと流れ、
ｅ）第１サンプルチャンバーの第２の開口部と第２サンプルチャンバーの第１の開口部がチャネルにより相互接続され、
ｆ）第２サンプルチャンバーの第２の開口部が液を排出でき、
ｇ）上記ｂ）からの自由体積は少なくとも部分的に流体カラムから形成され、
ｈ）前記キャリアの前側と後側に沿った前記流れの勾配が圧力をかけることによって提供され、ｇ）からの流体カラムを引き込む。
【００１５】
これを以下において、「本発明の方法」と言及する。
【００１６】
本発明による方法は特に有利に、被分析物質の検出のためにサンプル液による再現性があるキャリアのチャージおよび洗い流しを可能にする。ここで、前記キャリアおよび前記受容体分子を載せた関連する検出部位を流れる前記流速勾配に沿って時間をかけた液体カラムが形成されることで定性的な改善を可能にする。
【００１７】
本発明によると、前記キャリアが２つのサンプルチャンバーに分割し、実質的にサンプル液全体が、２つのサンプルチャンバーの間のキャリアを通って流れるか、またはサンプルチャンバー間の前記チャネルを通して流れるが、該キャリアの縁を越えないことが好ましく、該キャリアは２つの該サンプルチャンバーを分割することが好ましい。このようにして、寸法の異なるキャリアでも上側と下側が、前記サンプル液の流れに同等な程度に曝露されることが保証される。既存の、あるいは最初にまたはサンプル液で湿らせた後に始めて作成された横断方向のキャリアのいかなる円筒状の湾曲も、好ましくは前記サンプルチャンバー間の前記のキャリアを締め付けることによって、同様に軽減され、または埋め合わされることが好ましい。本発明によるこの観点はまた、前記キャリアへの望ましい均一で再現性がある液流を導く。
【００１８】
本発明によると、チャネルは第１サンプルチャンバーの第２の開口部から第２サンプルチャンバーの第１の開口部へ液流を導く。このチャネルによって、前記キャリアを使って前記サンプルチャンバーを第１の時間分かち、該キャリアの前側および後側が同程度に液流に曝露されるように、前記第１のサンプルチャンバから前記第２のサンプルチャンバーへ運ぶことを可能にする。スロットルと同様に液流に働くにもかかわらず、前記チャネルが洗い流し効果に影響しないのは意外である。
【００１９】
本発明によるこの実施態様のさらなる利点は、サンプルチャンバーに適用した圧力が軽減される場合にサンプル液がチャネルを通して逆流することが防がれることである。
【００２０】
好ましい態様においては、第１サンプルチャンバーの第２の開口部から第2サンプルチャンバーの第１の開口部へのこのチャネルの口径は、サンプル流入口のチャネルおよび排出（廃棄）チャネルの口径にほぼ相当する。さらに、このチャネルは、前記サンプルチャンバーまたは自由体積の直径よりも小さいことが好ましい。さらに、該チャネルは該キャリアの締め付け部、特に横軸の支柱を取り囲み、丸い穴を有することが好ましい。
【００２１】
これらの局面の結果として、前記キャリアの製造公差にもかかわらず、該キャリアの両表面、すなわち前側および後側の表面、に関して十分な流速勾配が再現性をもって作成され、かなりの割合の、少なくとも半分の、前記サンプル液の輸送が該キャリアの外側で有利に達成できることが保証される。これは前記サンプル液の流入時に最初に到達するまたは湿らせる、検出部位に受容体の少なくとも1分子が置かれた前記キャリアの部位について、特に真実である。洗い流し溶液のようなその他の溶液もまた、前記キャリアの外側を実質上は輸送されることが望ましい。
【００２２】
本発明によると、流体カラムは前記キャリアの前側または後側から各サンプルチャンバーの反対側のチャンバー壁へと形成される（チャンバーシーリングまたはチャンバーべース）。
【００２３】
さらに好ましい実施態様においては、キャリアの第１および第２表面のチャンバー壁からの距離が１０μｍ以上であり、そこで前記流速勾配が生じるやいなや前側およびまたは後側上の前記自由体積に流体カラムが提供される。
【００２４】
しかしながら、各前側および後側と前記チャンバー壁との間の間隔は、流速勾配が有利に失速できない１０から１５００μｍ（１．５ｍｍ）であることが好ましく、８０から３５０μｍの間隔がより好ましく、１２０から２００μｍの間隔が特に好ましい。
【００２５】
さらに、前記チャンバーの各前側または後側の両間隔は異なっていることが好ましく、特に例えば、チャンバーシーリング（チャンバー壁の頂点）までが１７０μｍであり、例えば、チャンバー底（チャンバー壁の底部）から１５０μｍであることが望ましい。前記変動は、前記サンプル液によるそれぞれに望ましい流速勾配に依存する。
【００２６】
さらに、前記キャリアは、縦方向のサイズに切り、前記サンプルチャンバーに全ての側面でしっかりと固定されることが望ましい。サンプルチャンバーを形成する前記ハーフシェルの２つの縁と前記メンブレンの上下の自由空間または自由体積との間の縦の側面を締め付けることが好ましい。また、テストカセットを塔載中に該キャリアがずれるのを防ぐとともに製造工程の簡便化のために、該キャリアの一端の側面または両端の側面は、例えばタブのように強制ガイド装置内に位置することが好ましい。前記キャリアも同様に縦の両側面または両端の側面で接着されてもよい。締め付けおよび接着の組み合わせもまた可能である。さらにキャリアの締め付けの可能な方法には、縁をポリマーマトリクスで成型、溶媒接着、超音波、レーザーおよび加熱による溶接、レーザーマスク溶接、クランプやリベット（プラスチック製）打ちのような機械的固定、または上記のキャリアが成型によって固定される３Ｄプリント技術などが含まれる。
【００２７】
さらに好ましい本発明の態様においては、２つのサンプルチャンバーに加えて、前記検査デバイスが第２サンプルチャンバーの２番目の開口部に流体的に結合され、加えられた流体（サンプル液、洗い流し液、溶液等）が２つのサンプルチャンバーを流れたらそこで回収される第３チャンバーを含む。この第３（補助的）チャンバーは、例えば脱脂綿、セルロース、ポリアクリル酸塩または機能化ポリアクリル酸塩のような吸収材を用いて既知の様式で装備されていてもよい。少なくとも１．０ｍＬの、特に５〜１０ ｍＬのチャンバー体積が好ましい。
【００２８】
さらに好ましい実施態様においては、第３チャンバーは、前記検査カセットに圧力をかけることによって圧力補償が行えるように、少なくとも1つの開口部または該検査カセットの外側への排出口に連結される。例えば過剰の流体容積での検査カセットの充填または過剰に迅速な充填の結果、第３チャンバーを出る流体が上記追加のチャンバーに集められ、例えば装置使用者への望ましくない接触を避けるべく、液を流出させないために、追加の第４チャンバーを第３チャンバーと前記検査カセットの外側との間に設けることが特に有益である。
【００２９】
従って、本発明は第２サンプルチャンバーからの排出が後続のチャンバーへのチャネルによって接続される実施態様にも関連し、この第３チャンバーは、ａ）一部に吸収材を含み、ｂ）好ましくはチャネルとして、特に好ましくは少なくとも１つの屈曲または少なくとも１つの後続するチャンバーを有するチャネルとして形成された排出口を有する。
【００３０】
前記検査液の漏れはまた、このような実施態様は製造工程上さらに複雑になるが、後続のチャンバー内の適切な半透過性メンブレンによって防いでもよい。
【００３１】
さらに好ましい実施態様においては、第３チャンバー（廃棄物容器）がチャネルによって第２サンプルチャンバーに接続される。廃棄物容器中の物質による毛細管現象の可能性はこのようにして効果的に避けられる。
【００３２】
好ましい前記検査カセットの製造方法は、十分な精度が再現性よく達成される射出成型された部品のレーザー光線を用いた溶接である。意外にも、３層の構造化された射出成型エレメント（上半部シェル、中間部、下半部シェル）が使用され、その各エレメント間に溶接前に部分的に切り抜きや穴を含むフィルムが設置された方法が最善であることが判明した。２つのフィルムを用いる結果として当初は製造工程の複雑性がより大きいと思われ、結果的に当初は好ましくないと思われた。しかしながら、射出成型部品の達成するべき複雑性および精度は意外にも、この方法によって軽減された。溶接前に前記キャリアの固定を促進するフィルムに切り抜きやタブを、あるいは垂直のチャネルを可能とするための穴を備えたフィルムを用いる実施態様が特に好ましい。
【００３３】
前記検査カセットの作製のさらに好ましい方法は、３Ｄプリント技術であり、少数の製造には特に適している。
【００３４】
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記サンプル液が前記キャリアに直接に注がれるのではなく、検査デバイス内の（サンプル）チャネルを介して圧力をかけるか、または陰圧によって吸引されて前記サンプルチャンバー内に導入される。好ましい態様においては、前記（サンプル）チャネルはキャリアに並行に設置されているかまたは形成されるべき流速勾配の方向に向いている。従って、本発明はまた、サンプル液が前記検査デバイス内の（サンプル）チャネルを介して圧力をかけることにより、または陰圧によって吸引され、該サンプルチャネルが第１サンプルチャンバーの１番目の開口部（例えば、図３を参照）に導き、サンプル液はこの１番目の開口部を通ってキャリアの前面を越えて流速勾配に沿って、キャリアから離れた２番目の開口部に流れることを特徴とする方法に関する。
【００３５】
好ましい実施態様においては、拡散器が１番目の自由体積の入り口に設置され、その結果、前記液体は末端の前記キャリアを越えてより良く流れる。
【００３６】
さらに好ましい態様においては、前記キャリアは既存の湾曲または流体で湿らせてできた湾曲が上側に向けられるようにチャンバーに留めつけられる  （図５を参照）。
【００３７】
前記キャリアが許容可能な流体容積よりも多い、または湿らせたキャリアの全容積よりも多い、サンプル液または溶液容積の使用（前記実施例を参照）もまた好ましい。
【００３８】
前記流速勾配は圧力をかけて作り出すことが可能であり、その際、サンプル液はサンプルチャンバー内の圧力を受ける。適切な圧力の適用は、手動で、特にシリンジやアンプルによって可能であり、また特にポンプやふいごを使って機械で行うことができる。
【００３９】
典型的で適切な流速勾配は以下のようにして達成できる。
【００４０】
十分な圧力の適用は、例えば典型的なサンプル液容積が９５μＬで、自由体積の高さが３２０μｍ、幅が３．５ｍｍ、長さが５０．５ｍｍで必要な充填時間が５秒であれば、前記チャンバーに対して１５０ｈＰａである。充填時間が１０分の１、すなわち０．５秒であれば、それ以外の条件が同一である場合、必要な圧力はほぼ１０倍であり、すなわち１，５００ｈＰａである。排出口に陰圧が適用される場合は、その他の条件が同一であれば充填時間は少なくとも０．７５秒である。
【００４１】
チャンバー内のサンプル液のさらに好ましい平均的流速は０．１ｍ／ｓであり、これは１，０００μＬの４チャネル付きで充填期間が５秒に相当するディスポーザブルなシリンジを使って手動で問題なく達成できる。
【００４２】
さらに、例えば容積が９５μＬのサンプル液の場合は、前記キャリア上の自由体積が好ましくは長さが５０ｍｍで幅が３．５ｍｍのキャリアで、全体的な高さが３２０μｍ（チャンバーの底からシーリングまで）、１番目の表面からチャンバーシーリングまでの距離が１７０μｍで２番目の表面からチャンバー底までの距離が１５０μｍである。
【００４３】
最大過剰圧または陰圧とサンプルチャンバーの流動抵抗も同様に寸法により決められ、本発明の方法によればサンプル液が排出口に５秒足らずで、好ましくは２秒足らずで到達するようなサンプルチャンバーとキャリアの寸法となる。
【００４４】
設定されたサンプル液容積と導入口の口径が９５μＬと０．３ｍｍで、排出口の口径が１．２ｍｍで、与えられた流速でのキャリア上の距離が５０，５ｍｍであることはまた有益である。さらに好ましい実施態様によって、その他の寸法も推定することができる。
【００４５】
従って、本発明は好ましい実施態様のサンプル液の注入量が８０〜１２０μＬ、キャリアの長さが４０〜６０ｍｍ、キャリアの幅が２．０〜５ｍｍ、導入口の口径が０．１５ｍｍから０．４５ｍｍ、排出口の口径が１ｍｍから１．５ｍｍ、サンプルチャンバーの全体的な高さが２６０μｍから４５０μｍである最適なサンプルチャンバーに関連する。
【００４６】
さらなる実施態様においては、前記流速勾配は選択的に、ａ）前記キャリアの１番目と２番目の表面上に並行に導かれる、またはｂ）キャリアの１番目と２番目の表面上で非並行的に導かれる（図１ａおよび図１ｂを参照）。
【００４７】
前記液流が先ずキャリアの前側にそって、後続のチャネルを通してキャリアの前面から後面へ導かれ、次に２番目の自由体積の開口部へ反対方向に導かれる（図１ｂ）実施態様が特に有利である。この態様においては、液流は分断されず前記キャリアの両側に沿って導かれる。前記分岐点における液流の不均一性が起こる少ないリスクがある。さらに、この態様の場合、同一方向の液流による態様とチャンバーの体積が同じであれば前記溶液の流速が２倍速くなる。速い流速が理由で、使用液の容積が一定であれば、洗い流し効果の改善がさらに達成される。
【００４８】
本発明によると、サンプル液から少なくとも１つの被分析物質を検出するための検査方法が提供され、前記キャリアの前側は１番目のサンプルチャンバーに面し、該キャリアの後側は２番目のサンプルチャンバーに面する少なくとも２つの表面からなる、好ましくはサンプル液に半透過性であるキャリアにより分離された２つのチャンパーからなり、
ａ）少なくとも1つの受容体分子が前側のキャリアに固定され、
ｂ）少なくとも1つの自由体積がキャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られていて、 
ｃ）それそれが相応する、前記サンプル液がそれぞれの場合に１番目の開口部を通して前記キャリアの前側と後側を通してキャリアから離れた２番目の開口部へ流れる、２つのサンプルチャンバーの１つに導かれる２つの枝分かれしたチャネルを介して前記サンプルチャンバーに分流され、
ｄ）各サンプルチャンバーの２番目の開口部から少なくとも1つのチャネルに移行し、サンプルチャンバーからの放出を可能にし、
ｅ）上記ｂ）からの自由体積は少なくとも一部が液体カラムを形成し、
ｆ）そこで、前記キャリアの前側と後側に沿った前記流速勾配が圧力の適用により作成され、前記e）からの液体カラムを引き込む。
【００４９】
さらに好ましい実施態様においては、複数の（例えば１から１０の）サンプルチャンバーを並行に接続させ１つのサンプルチャネルからの送液が可能である（図２を参照）。
【００５０】
したがって、本発明は複数のサンプルチャンバーに、少なくとも１つのサンプル液が入った１つのサンプルチャネルから並行に供給されることを特徴とする方法に関連する。
【００５１】
本発明の範囲内で、「受容体分子」はペプチド、タンパク質、核酸、酵素、リガンド、受容体、抗体または抗原、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ、のような分子、および合成分子のような非生化学的起源の分子も意味する。検査試薬はこれらの分子タイプまたはそれらの断片、抱合体、あるいはたとえばそれらのグリコール化またはリン酸化型のような修飾型を含むことができる。本発明によると、脂質や糖質もまた含まれる。さらに、アレルギー検査または食物不耐性検査の場合にしばしばそうであるように、天燃物および天然物の抽出物も検査試薬に含まれてもよい。少なくとも1つの受容体分子がサンプル液からの少なくとも1つの被分析物質に結合する。従って、本発明はまた、本発明による方法によって特に再現性がある結果が得られる結合アッセイにも関する。
【００５２】
本発明の意味するところによると、前記キャリアは第１面と第２面を有し全体的にまたは部分的にゲル様、多孔質、ふるい様、透過性または半透過性メンブレン、特にコーティングされたあるいはされていないメンブレンからなる。典型的な材質にはニトロセルロース、ＰＶＤＦ、ゼオライト、焼結材料、特にポリエチレンオキシド、およびレーザードリル、イオン衝撃またはエッチングによって透過性を付加されたシリコン、ガラスまたはプラスチックのような後からマイクロチャネルを持たされた物質が含まれる。前記キャリアは例えばタンパク質、特に抗体、デキストランのような糖質または金属、ガラス、またはプラステックまたはカーボンナノチューブのような炭素誘導体でコーティングされてもよい。
【００５３】
本発明において、「該キャリアはサンプル液に対して部分的に透過性がある」とは前記サンプル液が少なくとも前記キャリアを湿らせ、該サンプル液は部分的に少なくともキャリア内に吸収されることを意味する。少量のサンプル液が通過する可能性も否定されない。本発明によると、したがってメンブレンが好ましく、また市販されていて入手可能である。
【００５４】
前記キャリアは本発明によると特に前側と後側を形成する並行平面またはほぼ並行平面な表面を有していてもよい。特に該キャリアはメンブレンまたは平坦なビームの外形をしていてもよい。該キャリアは検出部位を形成し受容体分子（検査試薬）を付けて提供されてもよい。
【００５５】
キャリアの１番目の表面に１つ以上の受容体分子が固定される。さらに、少なくとも１つの受容体分子がキャリアの２番目の表面に固定されてもよい。本発明によると、受容体分子はまた１番目または２番目の表面の下層に固定されてもよい。例えば、受容体分子は単独でまたは安定化マトリクス中において表面上であるいは表面の近くで乾燥されるかもしれないし、凍結乾燥物として適用し加湿中に表面からはがれるかもしれない。固定は、例えば抗体とタンパク質A間の、ビオチンとストレプトアビディン間の、ヘキサヒスチジンと二ッケルNTA間またはDNAの塩基ペアに存在するような非共有結合を使って提供してもよい。さらに、受容体分子の要素が1番目の表面に共有結合で固定されてもよい。好ましい実施態様においては、受容体分子が加湿が起こる際に、1番目の表面に実質上、特に５０％以上が固定状態を留める。
【００５６】
本発明の意味におけるサンプル液は、起源に関わらず、しかし好ましくは生物学的液体である溶媒を伴う全ての物質または物質の混合物であってもよい。前記サンプル液は、特に植物または動物、特に哺乳類、特に人間に由来してもよい。サンプル液は例えば結論的ではないが： 全血、血清、唾液、涙液、尿、分泌液、脳脊髄液またはそのような体液の処理検体、またはこれら前述の体液を含む液体である。該サンプル液はまた希釈されてもよい。該サンプル液は少なくとも1つの受容体分子に反応するとされる、または検出可能な相互作用を起こす少なくとも1つの被分析物質を含む。
【００５７】
前記サンプル液はまた、リガンド、拮抗物質、抗体、特に二次抗体として100個までの抗ジゴキシゲニン抗体が結合できるためにシグナルが増幅されるジゴキシゲニン抱合抗体、または標識抗体、酵素または酵素基質、特に変色をおこすかまたは発光を生じるものといった試薬をも含み、例えば別の抗体を含んでさらに変色を起こす二次的な有機的サンプル液を含んでもいてもよい。
【００５８】
さらに、該サンプル液は安定剤またはＥＤＴＡ、へパリンまたはクエン酸のような抗凝固剤を含んでもいてもよい。
【００５９】
さらに該溶液はまた、洗い流しまたは反応停止に適するように、界面活性剤、受容体分子にまだ結合していない遊離の物質に結合するキャッチャー分子、または酵素阻害剤を含んでいても良い。
【００６０】
溶液はまた、その他の物質を含むまたは含まない再蒸留水、蒸留水または水道水を含んでも良く、この水はさらにイオン交換剤を通してもよい。さらに、該溶液はｐＨ値の安定化またはサンプル液中の成分の安定化のために、従来型の緩衝液成分を含んでいても良い。
【００６１】
前記のサンプルチャンバーはキャリアが位置する空洞であり、両方の開口部（流入、流出）を有する。該サンプルチャンバーは、例えば手に掴むことができる平坦な立方体の形のような手動に適した形であってよい。立方体は好ましくは厚みが１ｃｍ未満である。前記液体はサンプルチャンバーに他方の手を使って操作されるシリンジを用いて連続して注入されてもよい。該サンプルチャンバーの上側は、少なくともキャリアの一部が覗け、本発明の方法によって検査の迅速な評価を可能にする透明なカバーを含んでもいてもよい。      
【００６２】
さらに、該サンプルチャンバーはサンプルチャンバーの充填のため、または検査結果を読み取るためのデバイスを含んだ検査読取機の中に位置するようにデザインされてもよい。このタイプのデバイス、特に小型のデバイスはさらにハウジングまたはその類似物に組み込まれてもよい。
【００６３】
該サンプル液が開口部を通してサンプルチャンバーに流入するための圧力は、好ましくはサンプルチャンバー体積の１０分の１以上で１０倍以下であるシリンジを使って手動で、作り出してもよい。さらに、該シリンジはルアー接続を有することが好ましい。該サンプル液はシリンジを使って先ず吸引され、次に前記サンプルチャンバーに注入される。
【００６４】
圧力をかける該シリンジは、またシリンジ用ポンプによって操作されてもよい。ここで、圧力が均一に再現性良く高められることは有利である。この実施態様において、前記シリンジポンプと前記サンプルチャンバーとの間のチューブコネクターと、該コネクターのカセット側の末端がルアー接続されることは有利である。さらに、検査試薬／サンプル液が１つ以上の保存容器から吸引され前記のサンプルチャンバーに送達されるように少なくとの２つの経路を有するバルブを提供することが好ましいかもしれない。
【００６５】
圧力はまた、例えば開口部を設けた圧縮可能な保存容器に前記検査試薬／サンプル液を保存するような、別の方法で手動でまたは機械で作り出してもよい。開口部は効果的にルアーアダプターを付けて提供されてもよい。保存デバイスに手動で圧力をかけることにより、前記検査溶液は保存容器から前記のサンプルチャンバーに送られる。保存容器への圧力はまたモーターを使った空気圧または油圧で作動するピストンのような機械で、例えばピストン、レバーまたは圧縮デバイスが保存管を圧縮することで作り出されてもよい。
【００６６】
全ての方法およびデバイスにおいて、流入口を介した過剰圧または流出口を介した陰圧として圧力がかけられる。
【００６７】
前記保存容器は特に充填済みや密閉型でベローズやブリスターとして一回限りの使い捨てとしてデザインされてもよい。プラスチックまたはフィルムで作られた、特に一回限りの使い捨てアンプルのようなベローズやブリスターは有利である。同じ製造工程で合わせて製造され、保存容器が次のステップで充填されるといったように、ブリスターまたは使い捨てアンプルを前記検査カセットに組み込むことが好ましいかもしれない。
【００６８】
本発明のさらに好ましい態様においては、ポンプが前記の溶液／サンプル液を前記サンプルチャンバーに送り出すために使用される。該ポンプは前記保存容器とサンプルチャンバーとの間に位置し直接に前記溶液／サンプル液を送り出してもよいし、２つの開口部を有する保存容器に空気または流体を送ってもよく、そこで該流体は移動させられ該サンプルチャンバーに送られる。さらに、ポンプは前後方向への送り出しに使われてもよく、検査試薬が１つ以上の保存容器から送液され該サンプルチャンバーに送られることが可能なように、少なくとも２つの経路が含まれるようにバルブが使用されてもよい。前記サンプルチャンバーの前に位置する圧縮可能な保存容器からの流体が陰圧によって該サンプルチャンバーに吸引され、選択的にさらに廃棄容器に吸引されるように、該ポンプはまた前記サンプルチャンバーの後に位置されていてもよく、該サンプルチャンバー内の陰圧を作り出してもよい。この実施態様においては、該ポンプがどの溶液／サンプル液にも汚染されないので洗浄しないで使用を続けられることで特に有利である。ＰＡＲＩｒｅｃ社（Grafelfing、ドイツ）のＯ−ｒｕｎ  １００またはＯ−ｒｕｎ２００のようなマイクロポンプが特に適切である。さらに、ダイアフラグムポンプやマイクロダイアフラグムポンプ、蠕動ポンプやギアーポンプが特に望ましい。
【００６９】
サンプル液または溶液であってもよい液体は、前記のキャリアの１番目と２番目の表面に並行する流動コンポーネントを有する前記サンプルチャンバーに流入する。少なくとも１つの受容体分子に結合できる被分析物質が該液体中に存在すれば、該液体が送られ受容体分子に接触すれば直ちに、この反応が可能になる。ここで、該液体の導入に続いて、前記キャリア上の該液体が流入し続けない、またはほとんど流入し続けず、留まり新たな液を追加することなしに受容体分子と被分析物質が結合できるように、該圧力をほぼ空気圧まで下げることが好ましいかもしれない。また、該液体が逆方向に移動するようにしばらく圧力比を逆転させる、または該液体がキャリア上を往復して移動できるようにしばらく圧力条件を交互に変えることが好ましいかもしれない。移動しない液体に比べると、このようにして追加の液体を必要としないで液体とキャリア間のより良い物質交換が可能である。
【００７０】
前記キャリアを洗い流すためにさらなる液体／溶液を使用してもよい。洗い流す際にまた、しばらく該液を動かさないまたはキャリア上をごく僅かに動かすようにすれば使用する液量が少なくなるので有利かもしれない。同様に洗い流しの際に、該圧力を交互に適用することもできる。
【００７１】
実施例１に説明される試験的プロトコールが、先行技術によって知られるラテラルフローアッセイのような目視で読み取れるほどの結果をもたらすのは意外である。しかしながら、ラテラルフローアッセイの場合は、流体は、毛細管現象により前記キャリアを通してその表面と並行して送られ、結果として受容体分子上または検査／検出フィールドまでも通して流れる。
【００７２】
本発明による方法の優位性はまた、ラテラルフローアッセイの場合に異なる検査フィールドに位置する２つの受容体分子が同じ被分析物質に結合する際に起こる可能性があるクロストークによる問題点がないことである。
【００７３】
本発明による方法の場合、流体は前記キャリア上を十分に迅速に流れ、そのために最初の検査試薬に接触すると、偽りの測定値をもたらす被分析物質の該液からの除去が起こらず、２番目の受容体分子との相互作用が起こるような影響がない。
【００７４】
本発明による方法のさらに有利な点は、時間間隔にかかわらずほとんど混合することなしに、複数の液が続けて容易に加えられるという事実にある。これとは対照的に、ラテラルフローアッセイでは、  該液がテストストリップまたはウィックパッドの毛細管現象効果でほとんど流動しないので、この可能性は制限される。液は注入されると前記キャリアまたはまだ湿っていないウィックパッドの方向に継続的に流動する。また、キャリアに同時にまたは続けて流入された液が出合い混ざることが毛細管現象効果の特徴である。この結果として、例えば西洋わさび由来のペルオキシダーゼまたはアルカリフォスファターゼを介して望ましいシグナル増幅が起こる、非常に高感度の酵素的検査方法は、乾燥させるなどの制限下でのみ実施できるにすぎない。実際のところ、市販されるラテラルフロー検査は酵素的ステップが起こらずサンプルに１つだけの液体試薬が加えられた場合の検査プロトコールのみに基づいている。
【００７５】
また、前記検査溶液がメンブレン上の上清に存在する、開放的実施の検査に比べると優位性がある。これらの検査においては、前記出願人によるＥＰ１７１８９７０の場合のように、自由なメンブレンまたは枠に固定されたメンブレンが反応槽中で手動で振盪される、または反応槽が機械的シェイカーやロッカーシェーカーを使って継続的に動かされる。振盪の手段により、メンブレンに関連する上清が動き、その結果として結合反応のための、そしてまた洗い流しのためのより良い物質交換が起こり、本発明による方法で得られるものと同等の良い結果を導く。しかしながら、密閉構造の優位性はサンプルの汚染回避、使用者のサンプル液のしぶきや接触からの防護、そしてシェーカーの振盪頻度のような操作パラメーターからの解放にある。したがって、再現性は本発明による方法によって改善される。
【００７６】
また、前記キャリアの両表面が液と接触する場合に結果が非常に良いことは意外である。このことは、いずれの場合も２番目の表面が割合的に同等な流量、物質量および被検液、試薬および洗い流し液に接触するので意外である。しかしながら、実験的な比較において、前記キャリアの２番目の側または後側が空洞の底部で固定されると、洗い流し効果が非常に悪くなる。
【００７７】
検査結果は前記検査カセットに、検査試薬が観察され色の明度またはグレイスケールの変化が可視的に読み取れる透明なカバーが含まれる結果として、読み取りが可能である。この配備はまた、検査方法の測光による読取り、特に検査結果をイメージセンサーに送る光学システムの使用を可能とする。このイメージセンサーはCCDまたはCMSOセンサーが好ましい。カメラ、ウェブカムおよび携帯電話に使われている市販の光学システムは特に経済的でありしかも効率的である。色の変化または蛍光の変化を用いる検査においては、色感受性の光学センサーとともに色フィルターまたは色センサーを使用することが望ましいかもしれない。蛍光の使用については、該蛍光はランプ、レーザーまたはＬＥＤを使って励起される。
【００７８】
さらなる態様においては、電気化学的検出方法は、例えばＤｉｏｎｅｘ  ＥＤ  ４０  電気検出器使用者用取り扱い説明書（http://www.dionex.com/en-us/webdocs/4529-34855-03.pdf）やＧａｕ,Ｖ．らの「Ｏｒａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｎａｎｏｓｅｎｓｏｒ  Ｔｅｓｔ  （ＯＦＮＡＳＥＴ）ｗｉｔｈ  Ａｄｖanced  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ（先端的電気化学による分子分析プラットフォームによる口腔液ナノセンサー検査（ＯＦＮＡＳＥＴ）」や、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１０９８：４０１−４１０（２００７）ｄｏｉ：  １０．１１９６／ａｎｎａｌｓ．１３８４．００５．Ｗｏｏｄ，Ｍ．ら「ｅＳｅｎｓｏｒ（登録商標）：Ａｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｂａｓｅｄ  ＤＮＡ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（多重化分子診断のためのＤＮＡマイクロアレイ技術に基づく電気化学検出）」第２１９回電気化学（ＥＣＳ）学会総会、２０１１年５月１日〜６日、モントリオール、ＱＣ、にカナダ、にみられるように、近年すでに開発されてきた。
【００７９】
従って、本発明は同様に少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分かたれた２つのサンプルチャンバーを含み、流入口と流出口があり結合アッセイを行うための固定された受容体分子を有するキャリアを含むサンプルチャンバーから成り、そこにはチャンバーシーリングからチャンバー底の間に自由空間があり、流動体でサンプルチャンバーに接続された補助チャンバーを選択的に有し、さらに圧力適用の手段および停止溶液、洗浄溶液等の補助装置や追加剤等を合わせた検査システムから成るキットに関する。さらなる実施態様が上記の検査システム・方法にしたがって提供可能である。
【００８０】
特に、本発明はしたがって、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分かれた２つのサンプルチャンバーを有し、そこでキャリアの前側は第１サンプルチャンバーの方に向きキャリアの後側は第２サンプルチャンバーに向けられた、サンプル液から少なくとも１つの被分析物質を検出する一般的キットに関し、
ａ）少なくとも1つの受容体分子がキャリアの前側に固定され、
ｂ）少なくとも1つの自由体積が前記キャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られていて、 
ｃ）１番目のサンプルチャンバーは少なくとも２つの開口部があり、そこでサンプル液は１番目の開口部から流入しキャリアの前側を越えて該キャリアから離れた２番目の開口部へと流れ、
ｄ）第２サンプルチャンバーは少なくとも2つの開口部を持ち、そこで前記サンプル液は第１サンプルチャンバーから前記キャリアの後側を通って、好ましくは該キャリアの前側とは逆向きに２番目の開口部に流れ、
ｅ）第１サンプルチャンバーの２番目の開口部と第２のサンプルチャンバーの１番目の開口部がチャネルにより相互接続され、
ｆ）第２サンプルチャンバーの２番目の開口部が液を排出でき、
ｇ）上記ｂ）からの自由体積が少なくとも部分的に液体カラムを形成し、
ｈ）そこで、前記キャリアの前側と後側に沿った流速勾配が圧力をかけることによって提供され、上記ｇ）からの液体カラムを引き込む。
【００８１】
特に、本発明は従って、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分かたれた２つのサンプルチャンバーを有し、そこで前記キャリアの前側は第１サンプルチャンバーの方に向き該キャリアの後側は第２サンプルチャンバーに向けられた、サンプル液から少なくとも1つの被分析物質を検出する一般的キットに関し、
ａ）少なくとも1つの受容体分子が前側のキャリアに固定され、
ｂ）少なくとも1つの自由体積がキャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られていて、 
ｃ）前記サンプル液が2つのサンプルチャンバーのそれぞれへ導く2つの枝分かれしたチャネルを介して前記サンプルチャンバーに分流され、それぞれが1番目の開口部を通してキャリアの前側と後側を通して前記キャリアから離れた2番目の開口部へ流れ、
ｄ）それぞれの前記サンプルチャンバーの2番目の開口部から、サンプルチャンバーからの放出を可能にする少なくとも1つのチャネルに移行し、
ｅ）上記b）からの自由体積が少なくとも部分的に液体カラムを形成し、
ｆ）そこで、前記キャリアの前側と後側に沿った流速勾配が圧力をかけることによって作成され、上記e）からの液体カラムを引き込む。
【００８２】
本発明はまた、医学的、獣医学的、あるいは植物診断、食物診断、環境診断、法医学診断、薬理学、毒性学、アレルギー、自己免疫、または代謝疾患、感染性疾患、性感染症、食物不耐性、寄生虫病、薬物、治療薬または代謝産物のような小分子の測定、細胞タイピング、エピトープタイピングおよびＤＮＡまたはＲＮＡ検出のためにサンプル液からの少なくとも１つの被分析物質（物質類）を検出するための本発明による方法の使用またはキットあるいは検査システム（デバイス）に関する。
【００８３】
本発明による方法または検査システム（デバイス）のポイントオブケア分野での使用が特に好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１ａ】液がキャリア（1）の両表面（前面および後面）を並行する液流（3）で流れる両方のサンプルチャンバーを有する検査カセットの縦断面である。カセットは流入口（5）を通して圧力を受け液体がそこから流出口へさらにチャネルを通し廃棄（4）へ流れる（補助チャンバー（上記））。
【図１ｂ】液体がキャリア（1）の末端でチャネルを通してキャリアの後側へ運ばれ2番目の表面（後面）で1番目の表面とは逆行して流れるサンプルチャンバーの縦断面である。
【図２】サンプルチャンバーの平面図である。カセットには複数のキャリアが並行して配置されてもよい。この目的で、液流が分流されたりまたはキャリアが１つの空洞に一緒に配置されてもよい。
【図３】ある実施態様の詳細な縦断面である。尺度によらない図示。溶液は流入口（5）から導入され液流（3）は検査試薬（2）が置かれた固定されたキャリア（1）の上を流れる。そこから、液はキャリアの他端にあるさらに離れたチャネルを介してキャリアの後側を通って流出口へ流れる。追加のチャネルは好ましくは吸収材を含む液を廃棄物（4）チャンバーへ運ぶ。廃棄物のためのチャンバーは排出口を介して外界と接続される。排出口には、廃棄物の漏れをふせぐためにシケインやさらなるチャンバーを設置してもよい。
【図４】固相として3つの同一のメンブレンを使い実施例1のプロトコールに従って同時に行った免疫アッセイである。トラック1と2において、液はメンブレンの両面上を流れ、トラック3では液流は上面のみを流れ、全てのトラックに同じ試薬を同じ容量で用いた。
【図５】検査カセットの層構造を図示するために分解図示された縦断面である。フィルムは各ケース内で、ある部分が透明である射出成形されたハーフシェルと、同様に射出成形された中間部の間に位置する。ハーフシェルを通して、レーザーがフィルムをハーフシェルと中間部分に溶接し、またハーフシェルと中間部分を互いに溶接する。
【図６】キャリアの詳細な平面図である。尺度によらない図示。キャリアはフィルムの末端のタブの下で固定され、フィルムの切り抜き部をカバーする。
【図７】検査カセットの断面図、尺度によらない図示。キャリアはサンプルチャンバーの端に固定される。キャリアの逆向きの屈曲は非常に誇張されて示されている。屈曲がある、または湿った後に形成される場合は、好ましくは屈曲が前面の方向に形成されるようにキャリアが挿入される。
【発明を実施するための形態】
【００８５】
これらの実施例は本発明を説明するためだけのもので、本発明はこれらの実施例の記載事項に限定されない。
【実施例１】
【００８６】
アレルギー検査のための検査プロトコール
準備
検査ボックスと試験管および検査カセット（サンプルチャンバーを含むキット）ならびに患者サンプルを室温にもどす（１８〜２５°Ｃ）。
【００８７】
タイマー、使い捨て手袋、固体廃棄物用の容器およびペンを用意する。
【００８８】
検査カセットとシリンジを外す。
【００８９】
全てのインキュベーションは室温で行う。
【００９０】
以下の検査手順の前または後に、検査ボックス（キット）中に挿入された試薬試験管を垂直に、ボックスの上端のそれぞれ対応する色の支持デバイスに再挿入する。
１．１．サンプル導入：
前もって入れられたサンプルを含むサンプルチューブ（赤いカバー）を開け、内容物を完全に、気泡を入れないように、シリンジを使って検査カセットに移す。このために、該シリンジをサンプル流入口に入れ内容物を素早く注入する。
【００９１】
前記検査カセットを平坦な支持台に置き、４分間インキュベートする。
１．２．検査溶液の添加：
前述したように（セクション10.1）抱合体溶液（黄色のカバー）の内容物をシリンジを使って前記検査カセットの流入口に素早く注入し、そのままこれを８分間インキュベートする。
１．３．洗浄：
洗浄溶液を含む最初の試験管（青色のカバー）を開け、前述したように前記検査カセットの流入口に素早く注入する。そして直ちに洗浄溶液を含む２番目の試験管（青色のカバー）の内容物を素早く注入する。インキュベーションの必要はない。
１．４．現像：
色がついた基質を含む最初の試験管（白色のカバー）を開けて内容物を検査カセットの流入口に素早く注入する。続いて、直ちに色がついた基質を含む２番目の試験管（白色のカバー）を開け、内容物を気泡を入れないように前記検査カセットの流入口へ注入し、そのまま８分間インキュバーとする。
【００９２】
現像の間に、２つの並行する異なる強度の参照用ラインおよび場合によっては追加の中央のテストラインが各検査フィールドに可視化される。
１．５．停止：  
停止溶液を含む試験管（緑色のカバー）を開け、内容物を前記検査カセットの流入口に注入する。注： 検査結果は少なくとも12時間安定なのでこの間に読取りを行う。
【実施例２】
【００９３】
検査チャンバー（サンプルチャンバー）
メンブレンおよびデバイスの他の部品からの距離の寸法を以下に明細する。ここで、全ての寸法・値は乾燥状態のメンブレンについての規格であり、あり得るメンブレンの湾曲または表面の不均一性あるいは注入口の成型部分の潜在的ワーピングは考慮されていない。湿った状態では、該メンブレンは膨れたりまたはゆがむかもしれないし、したがって厚みや他の部分からの距離が変更されるかもしれない。
【００９４】
厚さが１４０μｍの（強化）ニトロセルロースメンブレンが５０．５ｍｍ×６．３ｍｍのサイズに切り取られる。結果として得られるメンブレンのストリップを切り抜きのあるフィルム上に、ストリップが切り欠きを完全にカバーするように置き、前記フィルムの切り欠きの末端に位置するタブの下で固定する。該フィルムは、２つの射出成形されたハーフシェルの間にメンブレンストリップとともに固定され、図１ｂ及び図２により、フィルムおよびメンブレンストリップと幅が３．５ｍｍの両方のサンプルチャンバーを形成する。該メンブレンの総体積は４４．５μＬでありフリーのメンブレンの体積は２４．７μＬである。メンブレンの上端から上部チャンバー壁のかなり平坦な内側までは１７０μｍであり、メンブレンの下側から前記ハーフシェルのかなり平坦な下部チャンバー壁までは１５０μｍである。上位チャンバーの体積は３０．０４μＬであり下位チャンバーの体積は２６．５１μＬである。メンブレンの固定されていない部分の断面積は０．４９ｍｍ２でありチャンバーのそれは１．６２ｍｍ２である。
【００９５】
該チャンバーは第１サンプルチャンバーのメンブレンの末端の近くに断面積が０．３ｍｍ２の流入口および第２サンプルチャンバーの流出口のメンブレンの近くに断面積が１．２ｍｍ２の流出口を有する。
【００９６】
前記検査デバイスにおいては、メンブレンの全容積が９８．９８μＬであり、液の流入および流出なしの状態で第１チャンバーの体積は１２０．１９μＬであり第２チャンバーのそれは１０６，０５μＬとなるように４×２のチャンバーが形成される。それらはそれぞれが最初のチャンバーに接続された４つのチャネルに広がる、単一の導入口（サンプルチャネル）を通して同時に充填される。次に各流出口は、その中に廃棄物量吸収材を備え前記検査カセットに組み込まれた廃棄物用空間に接続された単一のチャネルに合流される。前記吸収材は流体的にどのメンブレンにも接続されないので、前記廃棄物を通過する自由流体への吸引効果は限られている。前記検査デバイスには、試薬を負荷された検査ストリップの領域を観察できる窓がある。
【００９７】
切り欠きがある不透明なフィルムが該検査カセットに接着される。切り欠き部分は、それぞれのアレルゲンが見られ光学的読取機を使って測定値が読みとれるように測定の場を覗くための窓としての役割を果たす。キャリアに沿って並べられた窓の間のウェブは、例えば２ｍｍ以下といったようにできるだけ狭くしてある。個々の測定フィールドについて印刷された情報にとって十分なスペースがあるように、キャリアからキャリアへの垂直なウェブはより幅広である。該情報には例えば数字、頭字語、またはアレルゲンのデザインのような全用語が含まれてよい。
【００９８】
検査にはプロトコール１に従って以下の物質とその量が前記検査デバイスに加えられる：
１）サンプル希釈液とサンプル    ３８０μＬ
２）操作手順に従った洗浄用緩衝液    １．０００μＬ
３）操作手順に従った基質溶液（洗い流し２回）  ２×８００μＬ
４）抗体／抱合体溶液１          ８００μＬ
５）抗体／抱合体溶液２          ８００μＬ
６）停止用緩衝液                １．０００μＬ
各検査成分の容積はメンブレンの体積（１００μＬ）よりも大きい。
【図１ａ】
2016507069.tif 000003
【図１ｂ】
2016507069.tif 000004
【図２】
2016507069.tif 000005
【図３】
2016507069.tif 000006
【図４】
2016507069.tif 000007
【図５】
2016507069.tif 000008
【図６】
2016507069.tif 000009
【図７】
2016507069.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成27年11月19日(2015.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
サンプル液から少なくとも１つの被分析物質を検出する検査方法であって、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分けられた２つのサンプルチャンバーにおいて前記キャリアの前側は第１サンプルチャンバーの方に向き後側は第２サンプルチャンバーの方に向き、
ａ）
少なくとも１つの受容体分子がキャリアの前側に固定され、
ｂ）少なくとも１つの自由体積が前記キャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られ、 
ｃ）少なくとも２つの開口部を有する第１サンプルチャンバーにおいて、サンプル液は１番目の開口部から流入し流速勾配に沿って前記キャリアの前側を通って前記キャリアから距離を置く２番目の開口部へと流れ、
ｄ）少なくとも2つの開口部を有する２番目のサンプルチャンバーにおいて、サンプル液は第１サンプルチャンバーから流速勾配に沿って前記キャリアの後側を通って、前記キャリアの前側とは逆向きに２番目の開口部に流れ、
ｅ）前記第１サンプルチャンバーの２番目の開口部と前記第２サンプルチャンバーの１番目の開口部がチャネルにより相互接続され、
ｆ）前記第２サンプルチャンバーの２番目の開口部が前記の液を排出でき、
ｇ）上記ｂ）からの自由体積が少なくとも一部は液体カラムを形成し、
ｈ）前記キャリアの前側と後側に沿った該流速勾配が圧力をかけることによって提供され、上記ｇ）からの液体カラムを引き込む、
ことを特徴とする検査方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１８】
サンプル液から少なくとも１つの被分析物質を検出するためのキットであって、少なくとも２つの表面を有するキャリアによって分けられた２つのサンプルチャンバーにおいて、前記キャリアの前側は第１サンプルチャンバーに向き後側は第２サンプルチャンバーに向くサンプルチャンバーと、
ａ）少なくとも１つの受容体分子が前記キャリアの前側に固定され、
ｂ）少なくとも１つの自由体積が前記キャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られ、 
ｃ）少なくとも２つの開口部を有する前記第１サンプルチャンバーにおいて、サンプル液は第１の開口部から流入し流速勾配に沿って前記キャリアの前側を通って前記キャリアから距離を置く第２の開口部へと流れ、
ｄ）少なくとも２つの開口部を有する前記第２サンプルチャンバーにおいて、前記サンプル液は第１サンプルチャンバーから流速勾配に沿って前記キャリアの後側を通って、前記キャリアの前側とは逆向きに第２の開口部に流れ、
ｅ）前記第１サンプルチャンバーの第２の開口部と前記第２サンプルチャンバーの第１の開口部がチャネルにより相互接続され、
ｆ）前記第２サンプルチャンバーの第２の開口部が前記の液を排出でき、
ｇ）上記ｂ）からの自由体積が少なくとも一部は液体カラムを形成し、
ｈ）キャリアの前側と後側に沿った前記流速勾配が圧力の適用によって提供され、上記ｇ）からの液体カラムを引き込む、
または、
ａ）少なくとも１つの受容体分子が前記キャリアの前側に固定され、
ｂ）少なくとも１つの自由体積が前記キャリアの前側と後側のそれぞれに形成され、それぞれがチャンバー壁により区切られ、 
ｃ）前記のサンプル液が２つのサンプルチャンバーのそれぞれへ導く２つの枝分かれしたチャネルを介してサンプルチャンバーに分流され、流速勾配に沿ってそれぞれ第１の開口部を通して前記キャリアの前側と後側を通して前記キャリアから離れた第２の開口部へ流れ、
ｄ）各サンプルチャンバーの前記第２の開口部は少なくとも１つのチャネルに移り、前記サンプルチャンバーからの放出を可能にし、
ｅ）上記ｂ）からの前記の自由体積は少なくとも一部は液体カラムを形成し、
ｆ）キャリアの前側と後側に沿った前記流速勾配が圧力の適用により作成され上記e）からの液体カラムを引き込む
ことを特徴とする、キット。
【国際調査報告】
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