(57)【要約】Ｆｃ受容体を含むエキソソームを含む組成物の有効量を投与することにより、それを必要とする対象におけるがんを処置するための、方法、薬学的組成物及びキットが、本明細書に記載されている。幾つかの態様において、本開示に記載された薬学的組成物におけるエキソソームは、Ｆｃγ１（ＣＤ６４）、Ｆｃγ２（ＣＤ３２）、Ｆｃγ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせを含むＦｃ受容体を含む。2016535009.tif 000012
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆｃ受容体を含むエキソソームと薬学的に許容可能な担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記Ｆｃ受容体が、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記エキソソームが、天然エキソソームである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記エキソソームが、活性化ナチュラルキラー細胞由来である、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記エキソソームが、操作されたエキソソームである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記操作されたエキソソームが、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせを含む、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記エキソソームをがん細胞に対して向ける１つ若しくはそれ以上の抗体を更に含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
１つ若しくはそれ以上の治療剤を更に含む、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記治療剤が、脂質、ペプチド、タンパク質、抗体、小分子、オリゴヌクレオチド、核酸、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
細胞由来のエキソソームを含む組成物を提供する段階であって、該エキソソームがＦｃ受容体を含む、段階；及び
対象のがんを処置するために、前記組成物の有効量を対象に投与する段階
を含む、それを必要とする対象のがんを処置する方法。
【請求項１１】
前記がんが、リンパ腫、肉腫、脳腫瘍、乳癌、結腸癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、甲状腺癌、腎臓癌、癌腫、黒色腫、頭頸部癌、脳腫瘍、及び前立腺癌のいずれか１つまたはそれ以上である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記がんが、神経芽腫または白血病である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記白血病がＡＬＬである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物が、Ｆｃ受容体を産生する細胞から得られる天然エキソソームを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、Ｆｃ受容体を産生するように操作された細胞から得られる操作されたエキソソームを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
Ｆｃ受容体が、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞が、活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、幹細胞、間葉系間質細胞、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、１つ若しくはそれ以上の抗体を更に含み、該抗体が、エキソソームをがん細胞に対して向ける、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が、神経芽腫細胞の表面上の、ＧＤ２、ＣＤ２４、ＣＤ２５またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上を標的とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、ＣＤ２、ＣＤ１０、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上を標的にする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が、１つ若しくはそれ以上の治療剤を更に含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２２】
前記治療剤が、脂質、ペプチド、タンパク質、抗体、小分子、オリゴヌクレオチド、核酸、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記治療剤が、抗ＧＤ２抗体、３Ｆ８抗体、組換えＧＭ−ＣＳＦまたはその変異体、イリノテカン／ＳＮ３８、エトポシド、ドキソルビシン、フェンレチニド、ＰＩ−１０３、シクロホスファミド、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｆｃ受容体を含むエキソソームと薬学的に許容可能な担体とを含む組成物；及び
がんの処置のための該組成物の使用のための指示書
を含む、キット。
【請求項２５】
前記組成物が、１つ若しくはそれ以上の抗体を更に含み、該抗体が、エキソソームをがん細胞に対して向ける、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記組成物が、１つ若しくはそれ以上の治療剤を更に含む、請求項２４に記載のキット。
【請求項２７】
前記治療剤が、脂質、ペプチド、タンパク質、抗体、小分子、オリゴヌクレオチド、核酸、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である、請求項２６に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府の権利
本発明は、国立癌研究所により授与された助成金番号ＣＡ０８１４０３−１４の元で、及び国立衛生研究所により授与された助成金番号０４７５９９−０９の元で、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明に対し一定の権利を有する。
【０００２】
発明の分野
抗体依存性エキソソーム治療（ＡＤＥＴ）のためエキソソームを含む組成物を用いて、がんを治療するための組成物及び方法が本明細書に記載されている。
【背景技術】
【０００３】
各々の個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に、本明細書に引用される全ての刊行物はその全体が参照により導入されるものとする。以下の記載は、本発明を理解するのに有用であり得る情報を含む。本明細書に提供されるいかなる情報も、本願発明の先行技術であること、若しくは関連性のあることを認めるものではなく、また、具体的若しくは暗黙的に参照されるいかなる出版物も、先行技術であることを認めるものではない。
【０００４】
エキソソームは、活性な分子（ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、タンパク質など）をレシピエント細胞に送達し、その機能に影響を与える、細胞外の生物学的ナノベシクルである。それらは、がんや変性疾患の病因に関与し得る。エキソソームは、ドナー細胞の細胞質と標的細胞の細胞外区画または潜在的に全ての内部区画のいずれかとの間で動作する情報伝達系を仲介すると考えられる。がんなどの悪性疾患、及び感染症などの非悪性疾患などを処置するための、効果的な標的化、及び治療的アプローチの必要性が当該分野で存在する。抗体依存性エキソソーム治療のためのエキソソームを含む組成物、並びに悪性及び非悪性疾患を処置するためにそれを使用する方法が本明細書に記載される。
【発明の概要】
【０００５】
以下の態様及びその局面は、典型的な、及び例示することを意図した、システム、組成物、及び方法に関連して示されているが、範囲を限定するものではない。
【０００６】
細胞から分離されたエキソソームと薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物及びキットが、本明細書に記載される。
【０００７】
幾つかの態様において、 本明細書に記載された薬学的組成物中のエキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせを含むＦｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせを含むＦｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。
【０００８】
幾つかの態様において、エキソソームは、明細書に記載の通り天然であり（例えば、活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞により分泌されるエキソソーム）、かつＦｃ受容体を含む。様々な態様において、エキソソームは、Ｆｃ受容体を有するエキソソームを天然に産生する任意の細胞に由来する。例示的な態様では、エキソソームはａＮＫ細胞に由来する。
【０００９】
幾つかの態様において、エキソソームは、本明細書に記載の通りに操作され（例えば、Ｆｃ受容体を発現するように改変された細胞により放出されるエキソソーム）、かつＦｃ受容体を含む。様々な態様において、エキソソームは、Ｆｃ受容体を有するエキソソームを産生するように操作された細胞に由来する。例示的な態様において、Ｆｃ受容体を含有するエキソソームは、操作されたＴ細胞、操作されたマクロファージ、操作された幹細胞、操作された間葉系間質細胞、またはその組み合わせに由来する。
【００１０】
様々な態様において、（天然または操作された）エキソソームは、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を含む。幾つかの態様において、抗体は、エキソソームを（がん細胞などの）標的細胞に対して向ける。幾つかの態様において、エキソソームは、エキソソームを標的細胞に対して向ける抗体を含み、そして、目的の遺伝子の発現を（増加または減少するように）変更するために、ｍｉＲＮＡを更に含む。様々な態様において、抗体は、治療剤と複合体化される。
【００１１】
一態様において、（天然または操作された）エキソソームは、Ｆｃ受容体、及びＦｃ受容体を介してエキソソームを標的細胞（例えば、がん細胞など）に対して向ける１つ若しくはそれ以上の抗体を含む。幾つかの態様において、エキソソームは、Ｆｃ受容体、１つ若しくはそれ以上の抗体及び１つ若しくはそれ以上の追加の治療剤を含む。治療剤は、化学治療剤、免疫調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤、またはその組み合わせを含んでもよい。様々な態様において、抗体は、治療剤と複合体化される。
【００１２】
例示的な態様において、本明細書に記載の組成物中のエキソソームは、ａＮＫ細胞に由来する。これらの細胞は、自己からのもの、または健康なドナーからのものであってもよい。エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）などのＦｃ受容体、またはその組み合わせを発現する。一態様において、ａＮＫ細胞由来のエキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。これらのエキソソームは、化学治療剤、免疫調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含んでもよい。
【００１３】
本明細書に記載のＦｃ受容体（ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせ）を含むエキソソームを含有する薬学的組成物を使用することにより治療可能である疾患状態を処置し、阻害し、及び／または、疾患状態の重症度を低減するための方法が、本明細書に記載される。方法は、本明細書に記載のＦｃ受容体を含むエキソソームを含有する組成物を提供する段階、及び疾患状態を治療するために、それを必要とする対象に組成物の有効量を投与する段階を含む。幾つかの態様において、疾患状態は、がんなどの転移性疾患である。幾つかの態様において、疾患状態は、感染症、心疾患、自己免疫疾患またはその組み合わせなどの非転移性疾患である。幾つかの態様において、疾患状態は、遺伝子欠損により引き起こされる疾患を含み、本明細書に記載のエキソソームが、欠落遺伝子産物を送達する。幾つかの態様において、疾患状態は、変性疾患を含み、変性プロセスをブロックし、または逆行させるように、本明細書に記載のエキソソームが、治療用分子を送達する。幾つかの態様において、組成物は、化学治療剤、免疫調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤またはその組み合わせを含むがそれに限定されない更なる治療剤を含む。様々な態様において、治療剤は、本明細書に記載のエキソソーム内に装填される治療用抗体である。幾つかの態様において、抗体は治療剤に複合体化される。
【００１４】
がんを処置し、がんを阻害し、がんの転移を予防し、がんの寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象におけるがんの再発の可能性を低減するための方法が、本明細書に更に記載されている。がんを処置し、がんを阻害し、がんの転移を予防し、がんの寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象におけるがんの再発の可能性を低減するために、方法は、本明細書に記載のＦｃ受容体を含むエキソソームを含有する組成物を提供する段階、及びそれを必要とする対象に有効量の該組成物を投与する段階を含む。がんを治療するための組成物中のエキソソームは、ａＮＫ細胞、またはＦｃ受容体を含むエキソソームを天然に産生する任意の細胞型に由来してもよく、または、Ｆｃ受容体を含有するエキソソームを産生するように操作される。これらの細胞は、自己から、または健康なドナーからのものであってもよい。エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）などのＦｃ受容体、またはその組み合わせを発現する。一態様において、ａＮＫ細胞由来のエキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。幾つかの態様において、組成物は、化学治療剤、免疫調節剤、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有する。例示的な態様において、がんは、神経芽腫または白血病である。
【００１５】
例示的な態様において、それを必要とする対象における神経芽細胞腫の処置、阻害、転移の予防、及び／または、寛解を促進するための方法が本明細書に記載される。方法は、本明細書に記載のＦｃ受容体を含むエキソソームを含有する組成物を提供する段階、並びに神経芽細胞腫を処置し、阻害し、転移を防止し、及び／または、対象におけるその寛解を促進するために、それを必要とする対象に有効量の組成物を投与する段階を含む。神経芽細胞腫を治療するための組成物中のエキソソームは、ａＮＫ細胞に由来するか、または、Ｆｃ受容体を含むエキソソームを天然に産生するか、またはＦｃ受容体を含むエキソソームを産生するよう操作された任意の細胞型に由来してもよい。これらの細胞は、自己から、または健康なドナーからのものであってもよい。エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）などのＦｃ受容体またはその組み合わせを発現する。一態様において、ａＮＫ細胞由来のエキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。これらのエキソソームは、化学治療剤、免疫調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有してもよい。幾つかの態様において、治療剤は、更なる治療剤と複合体化できる治療用抗体である。
【００１６】
例示的な態様において、白血病（急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）など）を、それを必要とする対象において、処置し、阻害し、転移を予防し、及び／または、寛解を促進するための方法が、本明細書に記載される。方法は、本明細書に記載のＦｃ受容体を含むエキソソームを含有する組成物を提供する段階、対象の白血病を処置し、阻害し、転移を予防し、及び／または、寛解を促進するために、それを必要とする対象に有効量の組成物を投与する段階を含む。白血病を処置するための組成物中のエキソソームは、ａＮＫ細胞、またはＦｃ受容体を含むエキソソームを天然に産生するか、またはＦｃ受容体を含有するエキソソームを産生するよう操作された任意の細胞型に由来し得る。これらの細胞は、自己から、または健康なドナーからのものであってもよい。エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）などのＦｃ受容体、またはその組み合わせを発現する。一態様において、ａＮＫ細胞由来のエキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。これらのエキソソームは、化学治療剤、免疫調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含んでもよい。幾つかの態様において、治療剤は、更なる治療剤に複合体化できる治療用抗体である。 幾つかの態様において、治療剤は、更なる治療剤に複合体化できる治療用抗体である。
【００１７】
また、標的細胞、及び／または、組織へのエキソソームの標的化効力を決定することを含む、抗体依存性エキソソーム治療の有効性を決定する方法を本明細書に提供する。幾つかの態様において、標的細胞、及び／または、組織へのエキソソームの標的化効力を決定することは、標的細胞、及び／または、組織において、エキソソームに固有の、核酸、及び／または、タンパク質を検出することを含む。標的細胞、及び／または、組織中のエキソソーム特異的核酸、及び／または、タンパク質の存在は、有効な抗体依存性エキソソーム治療の指標である。幾つかの態様において、エキソソームは、活性化ナチュラルキラー細胞に由来する。幾つかの態様において、エキソソームは、特異的タンパク質、及び／または、エキソソームに固有の核酸を含むように操作される。幾つかの態様において、核酸は、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはその組み合わせを含む。例示的な態様において、ｍｉＲＮＡは、表４に記載されたｍｉＲＮＡのいずれか１つまたはそれ以上であり得る。更なる例示的な態様では、ｍＲＮＡは、表５に記載されたｍＲＮＡのいずれか１つまたはそれ以上であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
例示的な態様が参照図面に示される。本明細書に開示される態様及び図面は、限定的ではなく、例示的と見なされるべきことが意図される。
【００１９】
【図１】本発明の様々な態様において、ＮＫ細胞によるエキソソームの放出、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、及びＮＫ細胞から放出されるエキソソームにより媒介される抗体依存性エキソソーム細胞毒性（ＡＤＥＣ）を図示する。Ａ）活性化ＮＫ細胞は、ＮＢ細胞に対し細胞毒性であり得るエキソソームを放出する。Ｂ）ＮＫ細胞により媒介されるＡＤＣＣ。Ｃ）ａＮＫエキソソームはＩｇＧに対するＦｃ受容体を発現する（ＣＤ６４：質量分析及びウェスタンブロッティングにより実証、ＣＤ１６：ＥｘｏＦｌｏｗ及びＮａｎｏＳｉｇｈｔ分析により実証）。ｃｈ１４．１８などのｍＡｂの結合は、「ＡＤＥＣ」を媒介するＮＢ細胞に対するａＮＫエキソソームの結合及び細胞毒性を強化する。
【図２】本発明の様々な態様におけるａＮＫ細胞の生体外増殖、及び大規模のａＮＫエキソソーム単離を図示する。（Ａ）独自開発のポリマー沈殿法を用いた、エキソソーム単離のためのフローチャート。単離されたエキソソームのアリコートは、ＰＢＳ（１：１００）で希釈し、ＮａｎｏＳｉｇｈｔ粒子分析に供した。（Ｂ）平均粒子サイズ１５５ｎｍの例示的なチャート、及び（Ｃ）光反射性粒子の画像を示す。（Ｄ）別の分離方法の平均粒径のまとめ。全体的には３つの方法は同等であるが、本発明者らの沈殿法が、ＧＭＰの調製用に、容易により大量に規模が拡大でき、効率的であり、かつ安価である。
【図３】発明の様々な態様に従い、活性化ＮＫ細胞由来のエキソソームがＣＤ６４を発現することを図示する。ウエスタンブロット分析：（１）単離されたエキソソーム、または（２）ＮＫ細胞ライセートからの１０μｇのタンパク質。タンパク質バンドは、抗ＣＤ６４抗体により検出された（１：５００；Ｒ＆Ｄシステムズ社、カタログ＃ＭＡＢ１２５７１）。
【図４】本発明の様々な態様に従い、ａＮＫエキソソームは、ａＮＫ細胞の細胞毒性の増加を示す。ＣＨＬＡ−２５５Ｆｌｕｃ細胞及びＣＨＬＡ−１３６−Ｆｌｕｃ細胞は、神経芽腫細胞株である。
【図５】本発明の様々な態様に従い、ａＮＫエキソソームは、ＮＢ細胞株に対して細胞毒性であり、及びａＮＫ由来のエキソソームは、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける神経芽腫細胞に対して細胞毒性であることを示す。１０６ＣＨＬＡ−２５５−Ｆｌｕｃ細胞（神経芽腫細胞）を、２５％低増殖因子マトリゲル中で、４匹のマウスの両肩に注入した。８日目と１０日目に、ＮＫエキソソーム（１７５μｇ）を左腫瘍領域に注入し、一方、対照溶液（ＰＢＳ中の１０％グリセロール溶液）を、反対側の腫瘍領域中に注入した。マウスについて、処理前（７日目；灰色のバー）、及び、処理後（１１日目；黒色バー）を画像化した。棒グラフは、各グループの４つの腫瘍の生物発光の平均値、ＳＤ、及びｔ検定のＰ値を示す。２１日目に、処置した腫瘍のいずれも触知可能でなかったのに対し、対照腫瘍の６／８が、直径≧３ｍｍであった。
【図６】本発明の様々な態様に従い、ａＮＫエキソソームの神経芽細胞腫に対する（ＣＨＬＡ２５５−Ｌｕｃ：灰色バー）細胞毒性、及びＡＬＬ（ＳｕｐＢ１５−Ｌｕｃ：黒色バー）の細胞毒性を示す。パーセンテージは、生存率である。
【図７】本発明の様々な態様に従い、ヒト神経芽腫細胞株（ＣＨＬＡ−１３６及びＣＨＬＡ−２５５）におけるｍｉＲ−１６及びｍｉＲ−１８６による、ＭＹＣＮ及びＳＭＡＤ２／３タンパク質発現の阻害を示す。１００ｎＭのｍｉＲ−１６及びｍｉＲ−１８６は、ＤＯＴＡＰトランスフェクションを用いて細胞に遺伝子移入した。
【図８】本発明の様々な態様に従い、ａＮＫエキソソームのＮＢ細胞に対する取り込み及び細胞毒性は、ｍＡｂ  ｃｈ１４．１８により上昇することを示す。Ａ）ａＮＫのエキソソーム（白矢印、ＦＭ６−４染色）のＣＨＬＡ−２５５−ＦｌｕｃＮＢ細胞（灰色、ＤＡＰＩ染色）による取り込みは、ｃｈ１４．１８により増加する。対照のクリプトコッカスエキソソームは取り込まれない。Ｂ）ＣＨＬＡ−２５５−Ｆｌｕｃ細胞に対するａＮＫエキソソーム（ｍｇ／ｍｌ）の細胞毒性は、抗ＧＤ２ｍＡＢ  ｃｈ１４．１８により増加する（２４時間アッセイ；アクリジン・オレンジ／ヨウ化プロピジウム染色；ＬｕｎａＦＬ機器）。Ｃ）細胞毒性は、７ＡＡＤ／Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖフローサイトメトリーアッセイで決定する（２４時間アッセイ；エキソソーム：０．５ｍｇ／ｍｌ；ｃｈ１４．１８、１μｇ／ｍｌ）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書に引用された全ての参考文献は、完全に記載されているのと同様に、その全体が参照により導入されたものとする。特に定義されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、一般的に、本発明が属する技術分野の当業者により理解されるのと同じ意味を有する。Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５，  ２０１２）；Ｈｏｒｎｙａｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｎａｎｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  （２００８）；Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｅｄ．，Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ  ２００６）；  Ｓｍｉｔｈ，  Ｍａｒｃｈ'ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ  ２０１３）；  Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２８，  ２０１２）；  及び  Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ  ２０１２）は、本出願において使用される多くの用語に対する一般的な指針を当業者に提供する。抗体の調製方法に関する参考文献としては、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ，  ２０１３）；Ｋoｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９７６  Ｊｕｌ，  ６（７）：５１１−９；Ｑｕｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｃｋ，  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，  Ｕ．  Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，５８５，０８９  （１９９６  Ｄｅｃ）；ａｎｄ  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｎａｔｕｒｅ  １９８８  Ｍａｒ  ２４，  ３３２（６１６２）：３２３−７を参照されたい。
【００２１】
小児科に関する参考文献としては、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  ５−Ｍｉｎｕｔｅ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｃｏｎｓｕｌｔ  ４ｔｈ  ｅｄ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，（Ｊｕｎｅ  １６，  ２００５）；  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｈａｒｒｉｅｔ  Ｌａｎｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｈｏｕｓｅ  Ｏｆｆｉｃｅｒｓ  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍｏｓｂｙ  （Ｊｕｎｅ  ２４，  ２００５）；  ａｎｄ  Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  （Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ＆  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）  １８ｔｈ  ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２５，  ２００６）を参照されたい。
【００２２】
本発明の実施において使用することができる本明細書に記載のものと類似または同等の多くの方法及び材料を当業者は認識するであろう。実際、本発明は、記載された方法及び材料に限定されるものではない。本発明の目的のために、以下の用語は下記の通りに定義する。
【００２３】
「有益な結果」は、疾患状態の重症度を軽減するか、または、緩和するか、疾患状態を悪化することを防ぎ、疾患状態を治し、疾患状態を発症から防ぎ、患者が疾患状態を発症する可能性を低下させ、及び患者の生命及び余命を延長することを含むが、それに限定されない。幾つかの態様において、疾患はがんである。幾つかの態様において、疾患状態は自己免疫疾患である。
【００２４】
「がん」及び「がん性」は、一般的に無秩序な細胞増殖により特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を意味し、または記載する。がんの例としては、リンパ腫（ホジキンリンパ腫、及び／または、非ホジキンリンパ腫）、肉腫、脳腫瘍、乳癌、結腸癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、白血病、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、甲状腺癌、腎臓癌、癌腫、黒色腫、頭頸部癌、脳腫瘍、並びに、アンドロゲン依存性前立腺癌及びアンドロゲン非依存性前立腺癌を含むがそれに限定されない前立腺癌が挙げられるが、それに限定されない。
【００２５】
本明細書で使用される「化学治療薬」及び「化学治療剤」は、 アルブミン結合パクリタキセル（ナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル）、アクチノマイシン、アリトレチノイン、全トランスのレチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、セツキシマブ、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エルロチニブ、エトポシド、フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、イピリムマブ、イリノテカン、ラパチニブ、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オクレリズマブ、オファツムマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パニツムマブ、ペメトレキセド、リツキシマブ、タフルポシド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、トレチノイン、バルルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、ロミデプシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、クラドリビン、クロファラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ペントスタチン、マイトマイシン、イクサベピロン、エストラムスチン、またはその組み合わせを含む、がんを治療するために使用される薬物を指すが、それらに限定されない。
【００２６】
本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」若しくは「ＣＡＲｓ」は、細胞に抗原特異性をグラフトするように設計された受容体を指す（例えば、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリＴ細胞またはその組み合わせなどのＴ細胞）。ＣＡＲは、また、人工的なＴ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、またはキメラ免疫受容体として知られている。
【００２７】
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。幾つかの態様において、対象はがんである。幾つかの態様において、対象は、対象の生涯におけるある時点でがんを有していた。様々な態様において、対象のがんは、寛解期にあるか、再発期であるか、または非再発期である。
【００２８】
本明細書で使用される「哺乳動物」は、ヒト、家畜動物、農場動物、動物園の動物、競技用動物；例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、ウシなどのペット動物；類人猿、サル、オランウータン、チンパンジーなどの霊長類；イヌ及びオオカミなどのイヌ科動物；ネコ、ライオン、及びトラなどのネコ科動物；ウマ、ロバ、及びシマウマなどのウマ科の動物；ウシ、ブタ及びヒツジなどの食用動物；シカ及びキリンなどの有蹄動物；マウス、ラット、ハムスター及びモルモットなどのげっ歯類；などを含む哺乳綱の任意のメンバーを指すが、これに限定されない。特定の態様において、哺乳動物はヒト対象である。この用語は、特定の年齢や性別を意味しない。従って、雄性または雌性のいずれにせよ、成体及び新生対象並びに胎児は、この用語の範囲内に含まれることを意図する。
【００２９】
本明細書で使用する「処置」及び「処置する」は、治療的処置または予防的対策または予防対策またはその組み合わせを指し、ここで、目的は、標的病的状態を予防し、または遅延（低下）させ、病的状態を予防し、有益な結果を追求し、得るため、または、処置が最終的に成功しない場合でも、状態を発症する個々の可能性を低下させることである。処置を必要とするヒトは、既に状態を有するヒト、及び、状態を有しやすいヒト、または、状態が予防すべきであるヒトを含む。がん治療の例としては、積極的監視、観察、外科的介入、化学治療、免疫治療、放射線治療（外部ビーム照射、定位放射線照射（ガンマナイフ）、及び分別定位放射線照射（ＦＳＲ）など）、局所治療、全身治療、ワクチン治療、ウイルス治療、分子標的治療、またはその組み合わせを含むが、それに限定されない。
【００３０】
本明細書で用いられる「腫瘍」は、悪性または良性、並びに、前がん性及びがん性細胞及び組織のいずれにせよ、全ての腫瘍形成細胞成長及び増殖を指す。
【００３１】
本明細書で使用される「治療剤」は、例えば、処置し、阻害し、予防し、発症の影響を軽減し、発症の重症度を低下させ、発症の可能性を低下させ、疾患の進行を低下させ、及び／または、治療するために使用される薬剤を指す。治療剤により標的となる疾患は、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、胚細胞腫瘍、芽細胞腫、種々の免疫細胞上に発現される抗原、及び種々の血液疾患、自己免疫疾患、及び／または、炎症性疾患に関連する細胞上に発現される抗原を含むがそれに限定されない。
【００３２】
エキソソームは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、幹細胞、及び間葉系間質細胞及びがん細胞を含むがそれに限定されない多くの細胞型により分泌される、細胞外の生物学的ナノベシクルである。活性化されたナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞は、感染細胞、及び／または、がん細胞の強力なキラーである。それらは、標的細胞に対して、細胞死を引き起こすパーフォリン及びグランザイムＢなどの細胞毒性分子を送達するエキソソームを放出することによりこの機能を発揮することができる。本発明者らは、患者由来の高度に細胞毒性性を有するＮＫ細胞は、生体外で増殖させることができること、及び生体外で成長する際にそれらのａＮＫ細胞は、エキソソームを大量に放出することを報告した。ａＮＫから放出されたエキソソームの機能評価において、本発明者らは、エキソソームが、免疫グロブリン（ＩｇＧ）抗体（例えば、抗−ＧＤ２抗体ｃｈ１４．１８）を結合するＦｃ受容体（ＣＤ６４／ＦｃγＲ１及びＣＤ１６／ＦｃγＲ３受容体など）を有することを発見した。ＣＤ６４がＮＫ細胞またはそれらのエキソソームのいずれか上にあることは、これまで記載されていなかった。更に、神経芽細胞腫を処置するために臨床的に使用されるＩｇＧ抗体（ｃｈ１４．１８）は、エキソソームの結合、及び神経芽細胞腫細胞への進入を増加させることが発見された。従って、いかなる特定の仮説に限定されることも望まないが、この抗がん抗体または他の抗がん抗体の、エキソソーム上のＣＤ６４及び／またはＣＤ１６に対する結合が、細胞毒性または他の効果を媒介するためにがん細胞の標的化を著しく強化すると考えられている。本質的には、エキソソーム上のＦｃ受容体を介して、治療用ＩｇＧ抗体は、がん細胞を標的化し、がん細胞によるエキソソームの取り込みを媒介することができる。これは、「抗体依存性エキソソーム治療」（ＡＤＥＴ）と呼ばれる。ＡＤＥＴは、例えば、悪性細胞、非悪性細胞（例えば、ウイルス感染した細胞）に対する、及び特異的な抗体が利用可能な場合は微生物に対する、細胞毒性治療のために、一般的に適用される。
【００３３】
更に、Ｆｃ受容体（ＣＤ６４／ＦｃγＲ１またはＣＤ１６／ＦｃγＲ３などの）を発現しない細胞を、当該受容体を発現し、そして抗体に結合する能力を有するエキソソームを生みだすように遺伝子操作することができる。従って、細胞毒性を介して標的細胞を破壊するのでなく、標的細胞の機能を調節するために、間葉系間質細胞、樹状細胞、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、及び／または、幹細胞を含むがそれに限定されない種々の細胞からのエキソソームの標的化を可能にする。
【００３４】
従って、エキソソームを産生するための方法、エキソソームを含む組成物、及びがん、非悪性疾患またはその組み合わせを含むがそれに限定されない疾患状態を処置するためにエキソソームを治療的に使用する方法が本明細書に記載される。
【００３５】
組成物
Ｆｃ受容体を含むエキソソームと薬学的に許容可能な担体とを含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。組成物は、天然にＦｃ受容体を発現する細胞、またはＦｃ受容体を発現するように遺伝子操作された細胞由来のエキソソームを含む。Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせの１つ若しくはそれ以上であり得る。Ｆｃ受容体を天然に発現する細胞の例としては、活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞が挙げられるが、それに限定されない。Ｆｃ受容体を発現するように遺伝的に操作し得る細胞の例としては、Ｔ細胞、マクロファージ、幹細胞、間葉系幹細胞、またはその組み合わせが挙げられるがそれに限定されない。Ｆｃ受容体を含むエキソソームを含有する組成物は、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を含有する。一態様において、エキソソームは、Ｆｃ受容体、及びＦｃ受容体を介してエキソソームを標的細胞（がん細胞など）に対して向ける１つ若しくはそれ以上の抗体を含有する。幾つかの態様において、エキソソームは、Ｆｃ受容体、１つ若しくはそれ以上の抗体及び１つ若しくはそれ以上の追加の治療剤を含む。治療剤は、化学治療剤、免疫調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤またはその組み合わせを含むことができる。
【００３６】
本明細書に記載の通り、幾つかの態様において、エキソソームは、Ｆｃ受容体を含む「天然」エキソソームであってもよい。天然エキソソームは、Ｆｃ受容体を天然に発現する細胞を単離し、培養物中で細胞を増殖することにより得られる。天然エキソソームは、これらの細胞により分泌され、Ｆｃ受容体を含む。細胞は、自己から、または健康なドナーからのものであってもよい。Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせの、いずれか１つまたはそれ以上であってもよい。様々な態様において、天然エキソソームは、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有してもよい。幾つかの態様において、天然エキソソームは、エキソソーム上のＦｃ受容体を介してエキソソームを標的細胞に対して向けるように、標的細胞上に発現する抗原に特異的な抗体を更に含む。
【００３７】
例示的な態様において、天然エキソソームは、ナチュラルキラー細胞を単離し、単離されたＮＫ細胞を活性化し、培養物中で活性化細胞を増殖することにより得られる。ａＮＫ細胞は、Ｆｃ受容体を発現することができる。増殖されたａＮＫ細胞は、Ｆｃ受容体を含むエキソソームを分泌する。幾つかの態様において、ａＮＫ細胞はがん細胞の強力なキラーであるので、生体外で増殖されたａＮＫ細胞は、がん（例えば、神経芽細胞腫またはＡＬＬ）を処置するために本明細書に記載の方法で使用するのに有効な量で対象に投与される。更に、ＮＫ細胞はがん細胞の強力なターミネーターであるので、生体外で増殖されたａＮＫ細胞からのエキソソームは、また、がん細胞を破壊するのに有効であり得る。幾つかの態様において、天然エキソソームは、がん（例えば、神経芽細胞腫またはＡＬＬ）を処置するために、本明細書において記載された方法で使用するのに有効な量を投与される。ａＮＫ細胞は、自己から、または健康なドナーからのものであってもよい。ａＮＫ細胞及びａＮＫ細胞由来のエキソソーム上のＦｃ受容体は、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）またはその組み合わせの１つ若しくはそれ以上であってもよい。ａＮＫ細胞由来のエキソソームは、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有し得る。幾つかの態様において、ａＮＫ細胞に由来する天然エキソソームは、エキソソーム上のＦｃ受容体を介してエキソソームを標的細胞に対して向けるように、標的細胞上に発現される抗原に特異的な抗体を含んでもよい。
【００３８】
幾つかの態様において、エキソソームは、「操作された」エキソソームであってもよい。操作されたエキソソームは、例えば、Ｆｃ受容体を天然に発現しないエキソソーム産生細胞をＦｃ受容体を発現するよう改変（操作；リダイレクト）し、培養物中で細胞を増殖することにより、得られる。操作されたエキソソームは、これらの操作された細胞により分泌され、Ｆｃ受容体を含む。細胞は、自己から、または健康なドナーから得ることができる。Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上であってもよい。幾つかの態様において、エキソソームは、エキソソーム産生細胞を（がん細胞などの）標的細胞の表面上の抗原を標的とする分子を産生するよう改変することにより、得られる。様々な態様において、操作されたエキソソームは、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有してもよい。幾つかの態様において、操作されたエキソソームは、エキソソーム上のＦｃ受容体を介してエキソソームを標的細胞に対して向けるように、標的細胞上に発現する抗原に特異的な抗体を更に含む。
【００３９】
例示的な態様において、操作されたエキソソームは、操作されたａＮＫ細胞により分泌される。例えば、ａＮＫ細胞は、ａＮＫ細胞により、通常は、発現されない生物学的分子（例えば、核酸またはタンパク質）を発現するために、改変（操作；リダイレクト）され得る。幾つかの態様において、生体外で増殖操作したａＮＫ細胞は、がん（例えば、神経芽細胞腫またはＡＬＬ）を処置するため、本明細書に記載の方法で使用される有効量で対象に投与される。操作されたａＮＫ細胞により分泌されたエキソソームは、操作されたエキソソームである。幾つかの態様において、操作されたエキソソームは、がん（例えば、神経芽細胞腫またはＡＬＬ）を処置するために本明細書に記載された方法で使用する有効量を投与される。操作されたエキソソームは、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有してもよい。操作されたａＮＫ細胞は、自己から、または健康なドナーからのものであってもよい。操作されたａＮＫ細胞上に、及び操作されたａＮＫ細胞由来のエキソソーム上にあるＦｃ受容体は、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上であってもよい。操作されたａＮＫ細胞由来のエキソソームは、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を更に含有し得る。幾つかの態様において、操作されたａＮＫ細胞由来の操作されたエキソソームは、エキソソーム上のＦｃ受容体を介してエキソソームを標的細胞に対して向けるように、標的細胞上に発現される抗原に特異的な抗体を更に含んでもよい。
【００４０】
遺伝的に改変された細胞は、対象（自己）から、または健康なドナーから得られた細胞へ、目的の生体分子をコードするＤＮＡを安定的に形質移入された細胞により産生され得る。遺伝的に改変された細胞は、その後、増殖することができる。様々な方法は、目的の生体分子を発現する安定な形質移入体を産生する。一態様では、安定的に形質移入し、及び細胞をリダイレクトする方法は、裸のＤＮＡ（ｎａｋｅｄ  ＤＮＡ）を用いたエレクトロポレーションによるものである。裸のＤＮＡを使用することにより、操作された／リダイレクトされた細胞を産生するために必要な時間は、有意に低減することができる。目的の生体分子をコードする裸のＤＮＡを用いて細胞を遺伝子操作する更なる方法は、化学的な形質転換法（例えば、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、及び／または、カチオン性ポリマーの使用）、非化学的形質転換法（例えば、エレクトロポレーション、光変換、遺伝子の電子移動、及び／または、流体力学的送達）、及び／または、粒子に基づく方法（例えば、遺伝子銃、及び／または、マグネトフェクションを使用したインパレフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ））を含むが、それに限定されない。目的の分子の存在を示す形質移入された細胞は、生体外で増殖されてもよい。ウイルス形質導入の方法は、また、遺伝的に改変された細胞を生成するために使用されてもよい。様々な例示的な態様では、細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、幹細胞、間葉系間質細胞、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上であり得る。幾つかの態様において、細胞は自己由来のものである。 幾つかの態様において、細胞は、健康なドナーから得られる。
【００４１】
更なる態様では、操作されたエキソソームは、天然の生体外で増殖された細胞により分泌したエキソソームを始めに単離し、その後、目的の薬剤を単離されたエキソソームに負荷することにより得ることができる。目的の剤は、標的化剤、治療剤、またはその組み合わせであり得る。治療剤の例は、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子薬またはその組み合わせを含むが、それに限定されない。標的化剤は、生体外で増殖された細胞、またはエキソソームを、標的細胞（がん細胞、例えば、神経芽細胞腫細胞または白血病（ＡＬＬなど）に対して向ける。幾つかの態様において、標的化分子は、脂質、ペプチド、タンパク質、抗体、小分子、オリゴヌクレオチド、核酸、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。幾つかの態様において、治療剤は、脂質、ペプチド、タンパク質、抗体、小分子、オリゴヌクレオチド、核酸、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。
【００４２】
様々な態様において、がんを処置し、がんの転移を防止し、がんの重症度を低下させ、がんの寛解を促進し、及び／または、がんの再発の可能性を予防し、または減少させるために、薬学的に許容可能な賦形剤と、（ｉ）Ｆｃ受容体を天然に産生する生体外で増殖された細胞；（ｉｉ）Ｆｃ受容体を産生するように操作された生体外で増殖された細胞；（ｉｉｉ）生体外で増殖されたａＮＫ細胞；（ｉｖ）Ｆｃ受容体を天然に産生する生体外で増殖された細胞から得られる天然エキソソーム；（ｖ）Ｆｃ受容体を産生するように操作される生体外で増殖された細胞から得られる操作されたエキソソーム；（ｖｉ）生体外で増殖されたａＮＫ細胞から得られたエキソソーム；（ｖｉｉ）がんを処置し、がんの転移を防止し、がんの重症度を低下させ、がんの寛解を促進し、及び／または、がんの再発の可能性を予防し、または減少させるために、遺伝的に改変されたエキソソーム（生体外で増殖された自己遺伝子改変細胞、または生体外で増殖された遺伝子改変細胞からエキソソームを取得した後に改変されたエキソソームからのいずれかより得られた）、またはその組み合わせ；のうちいずれか１つまたはそれ以上の治療有効量とを含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。幾つかの態様において、がんは神経芽腫である。幾つかの態様において、がんは、ＡＬＬ、または他の白血病のサブタイプである。
【００４３】
幾つかの態様において、薬学的組成物は、いずれか１つまたはそれ以上の標的化分子、１つ若しくはそれ以上の治療剤またはその組み合わせを更に含む。様々な態様において、がん細胞上の特異マーカーを認識する、標的化分子、及び／または、治療用分子は、脂質、ペプチド、タンパク質、抗体、小分子、オリゴヌクレオチド、核酸、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。
【００４４】
「薬学的に許容される賦形剤」は、一般に、安全、無毒かつ望ましい薬学的組成物の調製に有用な賦形剤を意味し、獣医学的使用のために、及び、ヒトの薬学的使用のために許容される賦形剤を含む。そのような賦形剤は、固体、液体、半固体、または、場合においてはエアロゾル組成物、気体であってもよい。
【００４５】
様々な態様において、本発明による薬学的組成物は、任意の投与経路を介した送達のために、製剤化することができる。「投与経路」は、当技術分野で公知の任意の、エアロゾル、鼻腔、口腔、粘膜、経皮、非経口または経腸的投与経路を指すが、それに限定されない。「非経口」は、一般に、眼窩内、注入、動脈内、嚢内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、脊髄内、胸骨内、髄腔内、子宮内、静脈内、くも膜下、被膜下、皮下、粘膜、または経気管を含む注射と関連する投与経路を指す。非経口経路を介して、組成物は、注入または注射用の溶液または懸濁液の形態、または凍結乾燥粉末であってもよい。非経口経路を介して、組成物は、注入または注射用の溶液または懸濁液の形態であってもよい。経腸経路を介して、薬学的組成物は、制御された放出を可能にする、錠剤、ゲルカプセル、糖衣錠、シロップ、懸濁液、溶液、粉末、顆粒、エマルション、ミクロスフェアまたはナノスフェアまたは脂質ベシクルまたはポリマーベシクルの形態とすることができる。典型的には、抗体は、静脈内または腹腔内注射のいずれかにより投与される。これらの投与のための方法は当業者に公知である。
【００４６】
本発明による薬学的組成物は、また、任意の薬学的に許容される担体を含有することができる。本明細書で使用される「薬学的に許容可能な担体」は、１つの組織、器官、または身体の部分から、他の組織、器官、または身体の部分への、目的の化合物の搬送または輸送に関与する薬学的に許容可能な材料、組成物、またはビヒクルを指す。例えば、担体は、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル化材料、またはその組み合わせであり得る。担体の各構成成分は、製剤の他の成分と適合性がなければならないという点で、「薬学的に許容可能な」ものでなければならない。また、それが接触することができると共に、任意の組織または器官との接触に使用するのに適していなければならず、それは、毒性、刺激、アレルギー応答、免疫原性、または、治療上の利点を過度に上回る任意の他の合併症の危険性を保有してはならないことを意味する。
【００４７】
本発明による薬学的組成物は、カプセル化、錠剤化、または経口投与用のエマルションまたはシロップに調製することができる。薬学的に許容可能な固体または液体の担体は、組成物を強化し、または安定化するために、または組成物の製造を容易にするために、添加することができる。 液体担体としては、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリン、食塩水、アルコール、及び水が挙げられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アカシア、寒天またはゼラチンが挙げられる。担体は、また、グリセリルモノステアレート及びグリセリルジステアレートなどの徐放性材料単独で、またはワックスと一緒に含んでもよい。
【００４８】
医薬製剤は、錠剤形態のために、粉砕、混合、造粒、及び、必要に応じて、圧縮、または硬質ゼラチンカプセルの形態のために、粉砕、混合及び充填を含む薬学の従来技術に従い作製される。液体担体が使用される場合、製剤は、シロップ、エリキシル、エマルションまたは水性若しくは非水性懸濁液の形態であろう。このような液体製剤は、直接、経口投与することができ、または軟ゼラチンカプセルに充填できる。
【００４９】
本発明による薬学的組成物は、治療有効量で送達され得る。正確な治療有効量は、所定の対象における処置の有効性の観点で最も有効な結果をもたらす組成物の量である。この量は、治療用化合物の特性（活性、薬物動態学、薬物力学、及び生物学的利用能を含む）、対象の生理学的状態（年齢、性別、疾患のタイプ及びステージ、一般的身体条件、与えられた投与量に対する応答性、及び薬物治療のタイプを含む）、製剤中の薬学的に許容される担体の性質、及び投与経路を含むがそれに限定されない種々の要因に依存して変化するであろう。臨床的及び薬理学的分野の当業者は、化合物の投与に対する対象の応答をモニタリングし、それに応じて投与量を調整することにより、例えば、日常的な実験を通して、治療上有効な量を決定することができる。更なる指針としては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，  ＵＳＡ）（２０００）を参照されたい。
【００５０】
患者への投与前に、製剤化剤を組成物に添加してもよい。液体製剤が好ましい場合もあり得る。例えば、これらの製剤化剤は、油、ポリマー、ビタミン、糖質、アミノ酸、塩、緩衝液、アルブミン、界面活性剤、増量剤、またはその組み合わせを含んでもよい。
【００５１】
糖質製剤化剤としては、単糖類、二糖類、または多糖類、または水溶性グリカンなどの糖または糖アルコールが挙げられる。糖類またはグリカンとしては、フルクトース、デキストロース、ラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、α−及びβ−シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン及びカルボキシメチルセルロース、またはその混合物を含むことができる。「糖アルコール」は、−ＯＨ基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素と定義され、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロール、及びアラビトールを含む。上述したこれらの糖または糖アルコールは、個々に、または組み合わせて使用することができる。糖または糖アルコールが水性調製物中で可溶性である限り、使用される量に決まった制限はない。一態様において、糖または糖アルコールの濃度は、１．０ｗ／ｖ％の〜７．０ｗ／ｖ％、より好ましくは、２．０ｗ／ｖ％〜６．０ｗ／ｖ％である。
【００５２】
アミノ酸製剤化剤は、左旋性（Ｌ）カルニチン、アルギニン及びベタインの形態が挙げられる。しかしながら、他のアミノ酸を添加してもよい。幾つかの態様において、製剤化剤としてのポリマーは、２，０００〜３，０００の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または３，０００〜５，０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【００５３】
また、凍結乾燥前または再構成後の溶液のｐＨ変化を最小にするために、組成物中に緩衝剤を使用することが好ましい。クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、及びグルタミン酸塩の緩衝液、またはその混合物を含む、ほとんどあらゆる生理緩衝液が使用され得るが、それに限定されない。幾つかの態様において、濃度は０．０１〜０．３モルである。製剤に添加することができる界面活性剤は、欧州特許Ｎｏ．２７０，７９９、及び、２６８，１１０で示される。
【００５４】
更に、組成物は、化学的に、例えば、循環半減期を上昇させるために、ポリマーへの共有結合により改変することができる。好ましいポリマー、及びペプチドにそれらを取り付けるための方法は、米国特許Ｎｏ．４，７６６，１０６；４，１７９，３３７；４，４９５，２８５；及び４，６０９，５４６に示されており、それらは、その全体を参照により本明細書に導入にしたものとする。好ましいポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは、室温で水に可溶であり、そして幾つかの態様において、１０００〜４０，０００、２０００〜２０，０００、または３，０００〜１２，０００の平均分子量を有する。幾つかの態様において、ＰＥＧは、末端ヒドロキシル基のような少なくとも１つのヒドロキシル基を有する。ヒドロキシル基は、阻害剤上の遊離アミノ基と反応するように活性化することができる。しかし、反応基のタイプ及び量は、共有結合で複合体化した本発明のＰＥＧ／抗体を達成するために変えることができることを理解するであろう。
【００５５】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも、また、本発明において有用である。それらは、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などを含むが、ＰＯＧが好ましい。ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格が、モノ、ジ、トリグリセリドにおいて、例えば、動物及びヒトのために、天然に存在するものと同じ骨格であることが１つの理由である。従って、この分枝は、必ずしも体内で外来因子として認識されるわけではない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の分子量を有する。ＰＯＧの構造は、  Ｋｎａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｊ．  Ｂｉｏ．  Ｃｈｅｍ．  ２６３：１５０６４−１５０７０に示されている。ＰＯＧ／ＩＬＣ２複合体の考察は、米国特許Ｎｏ．４，７６６，１０６に見られる。これら両方は、その全体を参照により本明細書に導入したものとする。
【００５６】
循環半減期を上昇させるための別の薬物送達システムは、リポソームである。リポソーム送達システムを調製する方法は、Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９８２）  ４２：４７３４；  Ｃａｆｉｓｏ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  （１９８１）  ６４９：１２９；  ａｎｄ  Ｓｚｏｋａ，  Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｅｎｇ  （１９８０）  ９：４６７において考察されている。他の薬物送達システムは、当該分野で公知であり、そして、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  （Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  Ｎ．Ｙ．１９８０），ｐｐ．  ２５３−３１５；  Ｍ．  Ｌ．  Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ，  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｖｓ  （１９８４）  ３６：２７７に記載されている。
【００５７】
液体薬学的組成物を調製した後、劣化を防止し、無菌性を維持するために凍結乾燥することができる。液体組成物を凍結乾燥する方法は、当業者に公知である。使用直前に、組成物は、追加の成分を含んでもよい滅菌希釈剤（例えば、リンゲル液、蒸留水、または滅菌生理食塩水）で再構成することができる。再構成の際に、組成物は、当業者に公知の方法を使用して、対象に投与される。
【００５８】
制御された、及び遅延型の放出剤形。本明細書に記載の方法の幾つかの態様において、本明細書に記載のエキソソームを含む組成物は、制御された、または遅延型放出手段により対象に投与することができる。理想的には、医学的処置において最適に設計された制御放出製剤の使用は、最少の時間で状態を治癒する若しくは制御するために使用される最少量の薬物物質で特徴付けられる。制御放出製剤の利点は次の通りである：１）薬剤活性の延長；２）投与頻度の低減；３）患者のコンプライアンスの増大；４）より少ない総薬物量の使用；５）局所性または全身性の副作用の低下；６）薬物蓄積の最少化；７）血中での濃度変動の減少；８）処置の有効性の改善；９）相乗作用の低下または薬物活性の喪失；１０）疾患または状態の制御の高速化（Ｋｉｍ，Ｃｈｅｒｎｇ−ｊｕ，  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  Ｄｅｓｉｇｎ，  ２  （Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，  Ｐａ．：  ２０００））。放出制御製剤は、化合物の作用の開始時間、作用の持続時間、治療濃度域内の血漿レベル、及びピーク時の血中濃度を制御するために使用することができる。特に、制御された、または持続性の放出剤形及び製剤は、薬剤の過少投与（すなわち、最小治療レベルより下）及び薬物の毒性レベル超の両方から発生する可能性のある潜在的な副作用、及び安全性の懸念を最小限に抑えながら、式（Ｉ）の化合物の最大効果が達成されることを確実にするために使用することができる。
【００５９】
公知の制御または持続性の放出剤形、製剤、及び様々なデバイスは、本明細書に記載のエキソソームを含む組成物の使用に適合させることができる。例としては、米国特許Ｎｏ．３，８４５，７７０；３，９１６，８９９；３，５３６，８０９；３，５９８，１２３；４，００８，７１９；５６７４，５３３；５，０５９，５９５；５，５９１，７６７；５，１２０，５４８；５，０７３，５４３；５，６３９，４７６；５，３５４，５５６；５，７３３，５６６；及び６，３６５，１８５Ｂ１が挙げられるが、それに限定されない。各々を全体として参照することにより本明細書に取り入れたものとする。これらの剤形は、例えば、様々な割合で望ましい放出プロファイルを提供するための、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧システム（ＯＲＯＳ（登録商標）（Ａｌｚａ社，  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，  Ｃａｌｉｆ．  ＵＳＡ）など）、多層コーティング、微粒子、リポソーム、微小球またはその組み合わせを用いた、１つ若しくはそれ以上の活性成分の低速放出、または制御放出を提供するために使用できる。更に、イオン交換材料は、開示された化合物の固定化、吸着塩形態を調製し、従って、薬物の制御放出を達成するために使用することができる。具体的なアニオン交換体の例としては、Ｄｕｏｌｉｔｅ（登録商標）Ａ５６８及びＤｕｏｌｉｔｅ（登録商標）ＡＰ１４３（Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓ社，  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈｏｕｓｅ，  Ｐａ．  ＵＳＡ）が挙げられるが、それに限定されない。
【００６０】
幾つかの態様において、本明細書に記載する方法で使用するための、本明細書に記載のエキソソームを含む組成物は、持続放出により、またはパルス状で対象に投与される。パルス治療は、経時的な同量の組成物の不連続な投与形態ではないが、低い頻度で同量の組成物の投与すること、または低用量の投与を含む。疾患が対象において連続的に発生した場合、例えば、対象がウイルス感染の連続的な、または慢性的な症状を有している場合、持続放出またはパルス投与は、特に好ましい。各々のパルス用量は低下することができ、及び本明細書に記載のエキソソームを含む組成物の合計量は、患者への処置の過程にわたって投与することができ、最小化される。
【００６１】
パルス間の間隔は、必要に応じて、当業者により決定することができる。多くの場合、パルス間の間隔は、次のパルスの送達を受ける前に、組成物または組成物の活性成分が対象にもはや検出されないときに、組成物の他の用量を投与することにより、計算することができる。間隔は、また、組成物の生体内半減期からも計算することができる。間隔は、生体内半減期より大きく計算でき、または組成物の半減期より２、３、４、５倍、及び１０倍も大きく計算できる。注入または患者への送達の他の形態による組成物をパルスするための様々な方法及び装置は、米国特許Ｎｏ．４，７４７，８２５；４，７２３，９５８；４，９４８，５９２；４，９６５，２５１、及び５，４０３，５９０に開示されている。
【００６２】
本発明による薬学的組成物は、治療的に有効な量で送達され得る。正確な治療有効量は、所与の対象における処置の有効性の点で最も有効な結果をもたらす組成物の量である。この量は、治療化合物の特性（活性、薬物動態学、薬物力学、及び生物学的利用能を含む）；対象の生理学的状態（年齢、性別、疾患のタイプ及びステージ、一般的身体条件、所定の投与量に対する応答性、薬の種類を含めて）；製剤中の薬学的に許容可能な担体の性質及び投与経路を含むがそれに限定されない種々の要因に依存して変化する。臨床的及び薬理学的分野の当業者は、例えば、化合物の投与に対する対象の応答をモニタリングし、それに応じて投与量を調整することにより、日常的な実験を通して、治療上有効な量を決定することができる。更なる指針として、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，  ＵＳＡ）  （２０００）を参照されたい。
【００６３】
様々な態様において、この組成物は、対象に１日当たり１〜３回、または１週当たり、１〜７回投与される。様々な態様において、組成物は１〜５日、１〜５週間、１〜５ヶ月間、または１〜５年間、対象に投与される。
【００６４】
本明細書で使用される有効量は、また、疾患の症状の発症を遅延させ、疾患の症状の経過を変化させ、（例えば、これに限定されないが、疾患の症状の進行を遅らせるなど）、または疾患の症状を逆転させるのに十分な量を含むであろう。従って、正確な「有効量」を特定することはできない。しかしながら、任意の所与の場合について、適切な「有効量」は、日常的な実験を用いるだけで当業者により決定することができる。
【００６５】
有効量、毒性及び治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に対して治療上有効な用量）を決定するために、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順により決定することができる。用量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に依存して変化し得る。毒性と治療効果の間の用量比は、治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示す組成物及び方法が好ましい。治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。また、用量は、ＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する薬剤の濃度（本明細書に記載のエキソソーム））を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、細胞培養物で、または適切な動物モデルで決定できる様に、動物モデルで処方することができる。血漿中の濃度は、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。任意の特定の投薬量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニタリングすることができる。投薬量は、医師によって決定され、観察される処置の効果に合わせて必要に応じて調整することができる。
【００６６】
投与量と投与方式は個人により異なる。一般的に、抗体は１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜７ｍｇ／ｋｇの用量で与えられるように、組成物が投与される。幾つかの態様において、ボーラス投与後４〜６時間の循環濃度を１０〜２０倍上昇させるために、ボーラス用量として与えられる。連続注入は、また、ボーラス投与後に用いてもよい。その場合、抗体は、５μｇ／ｋｇ／分〜２０μｇ／ｋｇ／分、または７μｇ／ｋｇ／分〜１５μｇ／ｋｇ／分で注入され得る。
【００６７】
方法
また、本明細書において、がんを処置し、がんを阻害し、がんの転移を予防し、がんの重症度を低下させ、がんの寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象におけるがんの再発の可能性を予防し、または低減するための方法が提供される。方法は、細胞から単離されたＦｃ受容体を含有するエキソソームを含む組成物を提供する段階、並びにがんを処置し、がんを阻害し、がんの転移を予防し、がんの重症度を低下させ、がんの寛解を促進し、及び／または、対象におけるがんの再発の可能性を予防し、低減するために、対象に有効量の組成物を投与する段階を含む。様々な態様において、エキソソームは、天然のまま、または本明細書に記載するように操作することができる。幾つかの態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上を含むＦｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはそれらの組み合わせを含む、Ｆｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。様々な態様において、エキソソーム（天然または操作された）は、抗体、脂質、ペプチド、タンパク質、核酸、小分子、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を含有する。幾つかの態様において、本明細書に記載の組成物は、追加の治療剤と共に投与される。幾つかの態様において、エキソソームは、エキソソームをがん細胞に対して向けるように、抗体が負荷される。幾つかの態様において、抗体は、同時に、または順次に、エキソソームと共に投与される。更なる態様において、エキソソームは、追加の治療剤（例えば、化学治療剤など）と共に投与される。エキソソームと一緒に投与される治療剤は、エキソソームを含む組成物の投与の前、投与中、投与後に投与することができる。
【００６８】
様々な態様において、がんは、リンパ腫、脳腫瘍、乳癌、結腸癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、甲状腺癌、腎臓癌、癌腫、黒色腫、頭頸部癌、脳腫瘍、白血病、神経芽細胞腫及び前立腺癌のいずれか１つまたはそれ以上であってもよい。幾つかの態様において、組成物は、１つ若しくはそれ以上の標的化分子を更に含む。幾つかの態様において、組成物は、１つ若しくはそれ以上の治療剤を更に含む。更なる態様において、組成物は、１つ若しくはそれ以上の標的化分子及び１つ若しくはそれ以上の治療剤を更に含む。一態様において、組成物は、生体外で増殖される自己ＮＫ細胞の有効量を更に含む。
【００６９】
また、神経芽細胞腫を処置し、神経芽細胞腫を阻害し、神経芽細胞腫の転移を予防し、神経芽腫の重症度を低下させ、神経芽細胞腫の寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象における神経芽腫の再発の可能性を低減するための方法が提供される。方法は、細胞から単離されたＦｃ受容体を含有するエキソソームを含む組成物を提供する段階、並びに神経芽細胞腫を処置し、神経芽細胞腫を阻害し、神経芽細胞腫の転移を防ぎ、神経芽腫の重症度を軽減し、神経芽腫の寛解を促進し、及び／または、対象における神経芽腫の再発の可能性を予防し若しくは減少させるために、対象に有効量の組成物を投与する段階を含む。様々な態様において、エキソソームは、天然のまま、または本明細書に記載されるように操作されてもよい。幾つかの態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上を含むＦｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、そのＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせを含む、Ｆｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。様々な態様において、エキソソーム（天然または操作された）は、抗体、脂質、ペプチド、タンパク質、核酸、小分子、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を含有する。幾つかの態様において、本明細書に記載の組成物は、追加の治療剤と共に投与される。幾つかの態様において、エキソソームは、エキソソームをがん細胞に対して向けるように、抗体が負荷される。幾つかの態様において、抗体は、同時にまたは順次に、エキソソームと共に投与される。更なる態様では、エキソソームは、追加の薬剤（例えば、化学治療剤など）と共に投与される。エキソソームと一緒に投与される治療剤は、エキソソームを含む組成物の投与の前、投与中、投与後に投与することができる。一態様において、エキソソームは、ａＮＫ細胞由来のエキソソームを含み、ここで、エキソソームは、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせ）、及び抗ＧＤ２抗体を含む。一態様において、細胞は自己由来のものである。別の態様において、細胞は、健康なドナーからのものである。
【００７０】
また、白血病を処置し、白血病を阻害し、白血病転移を予防し、白血病の重症度を低下させ、白血病の寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象における白血病の再発の可能性を予防し、低減するための方法が提供される。方法は、細胞から単離されたＦｃ受容体を含有するエキソソームを含む組成物を提供する段階、並びに白血病を処置し、白血病を阻害し、白血病の転移を防ぎ、白血病の重症度を軽減し、白血病の寛解を促進し、及び／または、対象における白血病の再発の可能性を予防し、低減するように、対象に有効量の組成物を投与する段階を含む。様々な態様において、エキソソームは、天然のまま、または本明細書に記載のように操作することができる。幾つかの態様において、白血病は、ＡＬＬ、ＡＭＬ、ＣＬＬ、ＪＭＭＬまたはＣＭＬである。一態様において、白血病はＡＬＬである。幾つかの態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上を含むＦｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはそれらの組み合わせを含む、Ｆｃ受容体を含有する。一態様において、エキソソームは、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）を含む。様々な態様において、（天然、または操作された）エキソソームは、抗体、脂質、ペプチド、タンパク質、核酸、小分子、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない治療剤を含有する。幾つかの態様において、本明細書に記載の組成物は、追加の治療剤と共に投与される。幾つかの態様において、エキソソームは、エキソソームをがん細胞に対して向けるように、抗体が負荷される。幾つかの態様において、抗体は、同時に、または順次に、エキソソームと共に投与される。更なる態様では、エキソソームは、追加の治療剤（例えば、化学治療剤など）と共に投与される。エキソソームと一緒に投与される治療剤は、エキソソームを含む組成物の投与前、投与中、または投与後に投与することができる。一態様において、組成物は、ａＮＫ細胞由来のエキソソームを含み、ここで、エキソソームは、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせ）、及び抗ＣＤ１９抗体を含む。一態様において、組成物は、ａＮＫ細胞由来のエキソソームを含み、ここで、エキソソームは、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせ）、及び抗ＣＤ２２抗体を含有する。一態様において、組成物は、ａＮＫ細胞由来のエキソソームを含み、ここで、エキソソームは、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲ３（ＣＤ１６）、またはその組み合わせ）、及び抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２２抗体を含有する。一態様において、細胞は自己からのものである。別の態様において、細胞は、健康なドナーからのものである。
【００７１】
本明細書に記載の組成物及び方法の様々な態様において、エキソソームは、がんに特異的な抗原を標的とすることができる抗体を含む。１つ若しくはそれ以上の標的化分子により標的とすることができるがんに特異的な抗原としては、ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）、４−１ＢＢ、５Ｔ４、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、ＢＡＦＦ、Ｂリンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＮＴＯ８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメインＢ、葉酸受容体１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌ１−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、レグマイン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒα、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＧＦβ２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、葉酸受容体、トランスフェリン受容体、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上を含むが、それに限定されない。がんに特異的な他の抗原は、当業者には明らかであり、そして本発明の代替的な態様に関連して使用することができる。
【００７２】
本明細書に記載のように、Ｆｃ受容体を含有するエキソソームは、治療用抗体を更に含むことができる。本明細書に記載の組成物及び方法の幾つかの例示的な態様において、抗体は、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アベイキシマブ、アセトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アズカヌマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ・ペゴール、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ・ペンテテート、アマツキシマブ、アナツノマブ・マフェナトクス、アニフロルマブ、アンルキンズナブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビバツズマブ・メルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブ・メルタンシン、カンツズマブ・ラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブ・ペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ＣＣ４９、ｃＢＲ９６−ドキソルビシン免疫複合体、セデリズマブ、セルトリズマブ・ペゴール、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、チタツズマブ・ボガトクス、チクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ・テトラキセタン、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デメシズマブ、デノシズマブ、デツモマブ、ドルリモマブ・アリトックス、ドロジツマブ、ヅリンゴツマブ、ズピルマブ、ズシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブ・ペゴール、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブ・シツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エクスビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フォレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガンビリモマブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ・ベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブ・ラブタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ・オゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イクセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ラムブロリズマブ、ラムパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロルボツズマブ・メルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビスマブ、モクセツモマブ・パスドトックス、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブ・タフェナトックス、ナミルマブ、ナプツモマブ・エスタフェナトックス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ・メルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オズリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オポルツヅマブ・モナトックス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペクセルズマブ、ピジリズマブ、ピナツズマブ・ベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブ・ベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ  １４０、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレズマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブ・ペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、サビルマブ、シブロツズマブ、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブ・テトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネスマブ、タプリツモマブ・パプトックス、テフィバズマブ、テリモマブ・アリトックス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、ベクスキサール、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブ・セルモロイキン、チビルマブ、ユブリツキシマブ、ユレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンチクツマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブ・マフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ゾリモマブ・アリトックス、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上であり得る。
【００７３】
幾つかの態様において、抗体は、生体外で増殖されたａＮＫ細胞（天然または操作した）、またはエキソソーム（天然または操作した）を神経芽腫細胞に対して向ける。神経芽腫細胞の標的としては、ＧＤ２、ＣＤ２４、ＣＤ２５またはその組み合わせを含むがそれに限定されない。
【００７４】
幾つかの態様において、抗体は、生体外で増殖されたａＮＫ細胞（天然または操作した）、またはエキソソーム（天然または操作した）をＡＬＬ細胞に対して向ける。ＡＬＬ細胞の標的としては、ＣＤ２、ＣＤ１０、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２またはその組み合わせを含むがそれに限定されない。            
【００７５】
幾つかの態様において、Ｆｃ受容体を含むエキソソームは、二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を更に含有する。これらのＣＡＲは、がん細胞上の少なくとも２つの抗原に特異的であり、Ｆｃ受容体を介して、Ｆｃ受容体を含有するエキソソームをがん細胞に向ける。様々な態様において、ＣＡＲは、少なくとも２つ若しくはそれ以上の抗原を標的とする。ＣＡＲにより標的とする典型的な抗原は、４−１ＢＢ、５Ｔ４、腺癌抗原、α−フェトプロフェン、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水素−９（ＣＡ−ＩＸ）、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４  ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＮＴＯ８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質−７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌ１−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒα、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テナシンＣ、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、及びその組み合わせを含むが、それに限定されない。
【００７６】
幾つかの態様において、治療剤は、本明細書に記載の化学治療剤を含むがそれに限定されない、がんを処置するためなどの本明細書に記載する方法で使用することができる化学治療剤である。幾つかの態様において、がん（例えば、神経芽腫またはＡＬＬ）を処置するために、本明細書に記載する方法で使用することができる治療剤は、抗ＧＤ２抗体、３Ｆ８抗体、組換えＧＭ−ＣＳＦまたはその変異体、イリノテカン／ＳＮ３８、エトポシド、フェンレチニド、ＰＩ−１０３、シクロホスファミド、ドキソルビシン、治療用マイクロＲＮＡ（例えば、がん遺伝子を標的とするもの）、またはその組み合わせを含むがそれに限定されない。
【００７７】
幾つかの態様において、操作されたエキソソーム及び１つ若しくはそれ以上の標的化分子を含む組成物は、操作されたエキソソーム及び１つ若しくはそれ以上の治療剤を含む組成物から分離されている。２つの組成物が分離されている場合は、２つの組成物は、同時に、または別々に、投与してもよい。他の態様では、操作されたエキソソームを含む組成物は、また、１つ若しくはそれ以上の標的化分子及び１つ若しくはそれ以上の治療剤を含む。
【００７８】
幾つかの態様において、エキソソーム（天然、または遺伝子操作されたエキソソーム）は、（示されたマイクロＲＮＡの−３ｐ及び−５ｐ成熟配列を指す）表１に記載のマイクロＲＮＡを含むがそれに限定されない、がん特異的な治療用マイクロＲＮＡを含有する。
【００７９】
（表１）がん特異的ｍｉＲＮＡ
2016535009.tif 000003
2016535009.tif 000004
2016535009.tif 000005
2016535009.tif 000006
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【００８０】
幾つかの態様において、エキソソーム（天然または遺伝子操作されたエキソソーム）は、表２に記載のマイクロＲＮＡを含むがそれに限定されない、神経芽細胞腫に特異的な治療用のマイクロＲＮＡを含有する。
【００８１】
（表２）例示的な、神経芽細胞腫に特異的なマイクロＲＮＡ（示されたマイクロＲＮＡの−３ｐ及び−５ｐ成熟配列を指す）
2016535009.tif 000008
【００８２】
幾つかの態様において、エキソソーム（天然または遺伝子操作されたエキソソーム）は、表３に記載のマイクロＲＮＡを含むがそれに限定されない、白血病に特異的な治療用のマイクロＲＮＡを含有する。
【００８３】
（表３）例示的な、白血病に特異的なマイクロＲＮＡ（示されたマイクロＲＮＡの−３ｐ及び−５ｐ成熟配列を指す）
2016535009.tif 000009
【００８４】
幾つかの態様において、エキソソーム（天然または遺伝子操作されたエキソソーム）は、表４に列挙されたｍｉＲＮＡを含むがそれに限定されない、神経芽腫細胞における重要な遺伝子の発現を調節するｍｉＲＮＡを含有する。
【００８５】
（表４）神経芽腫細胞の重要な遺伝子の発現を調節することができる、ａＮＫエキソソーム中の例示的なｍｉＲＮＡ
2016535009.tif 000010
【００８６】
幾つかの例示的態様では、ａＮＫ細胞由来のエキソソームは表５に示されるｍＲＮＡを含む。
【００８７】
（表５）ＴＬＤＡアッセイにより決定される、ａＮＫ関連のエキソソーム中の例示的なＮＫ関連ｍＲＮＡ。Ｃｔ＝サイクル閾値（低い値は、ｍＲＮＡの量がより大きい）
2016535009.tif 000011
【００８８】
様々な態様において、追加の治療は、（ｉ）天然にＦｃ受容体を産生する生体外で増殖された細胞；（ｉｉ）Ｆｃ受容体を産生するように操作された生体外で増殖された細胞；（ｉｉｉ）生体外で増殖されたａＮＫ細胞；（ｉｖ）天然にＦｃ受容体を産生する生体外で増殖された細胞から得られる天然エキソソーム；（ｖ）Ｆｃ受容体を産生するように操作された生体外で増殖された細胞から得られる操作されたエキソソーム；（ｖｉ）生体外で増殖されたａＮＫ細胞から得られるエキソソーム；（ｖｉｉ）遺伝的に改変されたエキソソーム（生体外で増殖された自己遺伝子改変細胞、または生体外で増殖された遺伝的に改変された細胞からエキソソームを取得した後に改変されたエキソソームのいずれかから得られた）、またはその組み合わせの、いずれか１つまたはそれ以上を含む本明細書に記載の組成物で処方され得る。様々な態様において、治療は、外科手術、放射線治療、化学治療、免疫治療、ワクチンまたはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。
【００８９】
幾つかの態様において、化学治療剤は、細胞毒性性抗生物質、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、ヒ素化合物は、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、タキサン、ヌクレオシド類似体、植物アルカロイド及び毒素、及びその合成誘導体のいずれか１つまたはそれ以上から選択できる。例示的な化合物は、アルキル化剤；トレオスルファン、及びトロホスファミド；植物アルカロイド；ビンブラスチン、パクリタキセル、ドセタキソール、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤；ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、テニポシド、クリスナトール、及びマイトマイシン；抗葉酸塩；メトトレキサート、ミコフェノール酸、及びヒドロキシ尿素；ピリミジン類似体；５−フルオロウラシル、ドキシフルリジン、及びシトシンアラビノシド；プリン類似体；メルカプトプリン及びチオグアニン；ＤＮＡ代謝拮抗物質；２’−デオキシ−５−フルオロウリジン、アフィジコリングリシネート、及びピラゾロイミダゾール;及び抗有糸分裂薬：ハリコンドリン、コルヒチン、及びリゾキシンを含むが、それに限定されない。１つ若しくはそれ以上の化学治療剤を含む組成物（例えば、ＦＬＡＧ、ＣＨＯＰ）をまた、用いてもよい。ＦＬＡＧは、フルダラビン、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）及びＧ−ＣＳＦを含む。ＣＨＯＰは、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、及びプレドニゾンを含む。別の態様において、ＰＡＲＰ（例えば、ＰＡＲＰ−１、及び／または、ＰＡＲＰ−２）阻害剤が使用され、そしてそのような阻害剤は、当業者に公知である (例えば、Ｏｌａｐａｒｉｂ、ＡＢＴ−８８８、ＢＳＩ−２０１、ＢＧＰ−１５（Ｎ−Ｇｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）；ＩＮＯ−１００１（Ｉｎｏｔｅｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）；  ＰＪ３４（Ｓｏｒｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｐａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２ｂ）；３−アミノベンズアミド（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ社）；４−アミノ−１，８−ナフタルイミド（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ社）；６（５Ｈ）−フェナントリジノン（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ社）；ベンズアミド（米国特許Ｒｅ．３６，３９７）；及び、ＮＵ１０２５（Ｂｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）。
【００９０】
様々な態様において、治療は、例えば、放射線治療が挙げられる。放射線治療に使用される放射線は、電離放射線とすることができる。放射線治療は、また、γ線、Ｘ線、または陽子ビームとすることもできる。放射線治療の例としては、外部ビーム放射線治療、放射性同位体（Ｉ−１２５、パラジウム、イリジウム）の間質注入、ストロンチウム８９などの放射性同位体、胸部放射線治療、腹腔内Ｐ−３２放射線治療、及び／または、全腹部及び骨盤放射線治療を含むが、それに限定されない。放射線治療の一般的な総説としては、Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ：  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２００１，  ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  Ｊ．  Ｂ．  Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照されたい。放射線治療は、放射線が遠隔源から向けられる外部ビーム照射、または遠隔治療として投与され得る。放射線治療は、また、内部治療または近接照射治療として投与することができ、放射源は、がん細胞または腫瘍塊に近接した身体内部に置かれる。また、ヘマトポルフィリン及びその誘導体、ベルトポルフィン（ＢＰＤ−ＭＡ）、フタロシアニン、光増感剤Ｐｃ４、デメトキシ−ヒポクレリンＡ；及び２ＢＡ−２−ＤＭＨＡなどの光増感剤の投与を含む光力学治療の使用が包含される。
【００９１】
様々な態様において、治療は、例えば、免疫治療を含む。免疫治療は、例えば、がんワクチン、及び／または、感作抗原提示細胞の使用を含むことができる。幾つかの態様において、治療は、腫瘍微小環境内の細胞を標的にすること、または免疫細胞を標的にすることを含む。例えば、Ｔ細胞は、ＰＤ−１（プログラム死１）ＣＡＲを含む本明細書に記載のエキソソームを含有する組成物を投与することにより活性化でき、またはマクロファージは、マクロファージにおける調節遺伝子を標的とする、例えば、マイクロＲＮＡを含む本明細書に記載のエキソソームを含有する組成物を投与することにより下方制御することができる。免疫治療は、がん抗原または疾患抗原に対する予め形成された抗体の投与により達成される宿主の短期保護のための受動免疫を含むことができる。（例えば、化学治療剤または毒素を腫瘍抗原に任意で連結されたモノクローナル抗体の投与）。免疫治療は、また、がん細胞株の細胞毒性のあるリンパ球を認識したエピトープを使用することに集中することができる。
【００９２】
様々な態様において、治療は、例えば、ホルモン治療を含む。ホルモンの治療的処置は、例えば、ホルモンアゴニスト、ホルモンアンタゴニスト（例えば、フルタミド、ビカルタミド、タモキシフェン、ラロキシフェン、酢酸ロイプロリド（ルプロン）、ＬＨ−ＲＨアンタゴニスト）、ホルモン生合成及び処理、並びにステロイドの阻害剤（例えば、デキサメタゾン、レチノイド、デルトイド、ベタメタゾン、コルチゾル、コルチゾン、プレドニゾン、デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、ミネラロコルチコイド、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン）；ビタミンＡ誘導体 （例えば、全トランンスのレチノイン酸（ＡＴＲＡ））；ビタミンＤ３類似体；抗ゲスタゲン（例えば、ミフェプリストン、オナプリストン）、または抗アンドロゲン（例えば、シプロテロン酢酸塩）を含むことができる。
【００９３】
抗がん治療による持続時間、及び／または、処置剤の用量は、個々の抗がん剤またはその組み合わせに応じて変化し得る。個々のがん治療剤のための適切な処置時間は、当業者により理解されるであろう。本発明は、それぞれのがん治療剤についての最適な処置スケジュールの継続的な評価を企図し、ここで、本発明の方法により決定される対象のがん遺伝子シグネチャーは、最適な処置用量及びスケジュールを決定する要因である。
【００９４】
様々な態様において、抗がん治療の予測される有効性を決定する対象は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、霊長類；イヌ、ネコ、ウシ、ウマなどの非ヒト哺乳動物）であり、好ましくはヒトである。本発明の方法の別の態様において、対象は、化学治療または放射線治療を受けていない。代替の態様では、対象は、化学治療または放射線治療を受けている。関連する態様において、対象は、種の対象が一般的に遭遇するレベルまたは平均値より高い放射線や化学毒性物質のレベルに曝露されていない。特定の態様において、対象は、がんまたは前がん組織を除去するための手術を受けた。他の態様において、がん組織が除去されていない。例えば、がん組織は、生命に必須である組織などの身体の手術不能領域に、または外科的手術が患者にかなりのリスクを引き起こす領域に位置する場合がある。または、例えば、対象は、前がん組織を除去するために抗がん治療が与えられる。
【００９５】
様々な態様において、１つ若しくはそれ以上の組成物の有効量は、約０．０１〜０．０５μｇ／ｋｇ／日、０．０５〜０．１μｇ／ｋｇ／日、０．１〜０．５μｇ／ｋｇ／日、０．５〜５μｇ／ｋｇ／日、５〜１０μｇ／ｋｇ／日、１０〜２０μｇ／ｋｇ／日、２０〜５０μｇ／ｋｇ／日、５０〜１００μｇ／ｋｇ／日、１００〜１５０μｇ／ｋｇ／日、１５０〜２００μｇ／ｋｇ／日、２００〜２５０μｇ／ｋｇ／日、２５０〜３００μｇ／ｋｇ／日、３００〜３５０μｇ／ｋｇ／日、３５０〜４００μｇ／ｋｇ／日、４００〜５００μｇ／ｋｇ／日、５００〜６００μｇ／ｋｇ／日、６００〜７００μｇ／ｋｇ／日、７００〜８００μｇ／ｋｇ／日、８００〜９００μｇ／ｋｇ／日、９００〜１０００μｇ／ｋｇ／日、０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、０．０５〜０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．１〜０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ／日、１〜５ｍｇ／ｋｇ／日、５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ／日、１５〜２０ｍｇ／ｋｇ／日、２０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、１００〜２００ｍｇ／ｋｇ／日、２００〜３００ｍｇ／ｋｇ／日、３００〜４００ｍｇ／ｋｇ／日、４００〜５００ｍｇ／ｋｇ／日、５００〜６００ｍｇ／ｋｇ／日、６００〜７００ｍｇ／ｋｇ／日、７００〜８００ｍｇ／ｋｇ／日、８００〜９００ｍｇ／ｋｇ／日、９００〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日、またはその組み合わせのいずれか１つまたはそれ以上である。１つ若しくはそれ以上の組成物の有効量の一般的な用量は、公知の治療化合物が使用され、製造業者により推奨され、また、生体外の応答または動物モデルでの応答により当業者に示されるような範囲内であり得る。そのような用量は、一般的には、関連する生物学的活性を失うことなく、濃度または量のほぼ１桁程度を低減することができる。実際の投与量は、例えば、患者の状態、及び関連培養細胞の生体外の応答性、或いは、生検悪性腫瘍などの組織培養試料、または適切な動物モデルで観察された応答に基づく治療方法の有効性の医師の判断に依存し得る。様々な態様において、レチノイドアゴニストを含む本発明の組成物は、対象にレチノイドアゴニストの有効量を投与するために、１日に１回（ＳＩＤ／ＱＤ）、１日に２回（ＢＩＤ）、１日に３回（ＴＩＤ）、１日に４回（ＱＩＤ）、若しくはそれ以上投与してもよく、ここで、効果的な有効量は、本明細書に記載の用量のいずれか１つまたはそれ以上である。
【００９６】
幾つかの態様において、本明細書に記載のエキソソームは、エキソソーム、及びＦ−１８、Ｆ−１９、Ｔｃ−９９ｍまたはＩ−１２３を含むがそれに限定されない１つ若しくはそれ以上の造影剤を含む組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象に造影剤を送達するために使用できる。幾つかの態様において、臨床前画像化のために、近赤外蛍光色素（例えば、Ｘｅｎｏｌｉｇｈｔ  ＤｉＲ）を、ＮＫ細胞またはエキソソームに添加してもよい。
【００９７】
本発明のキット
本発明は、また、がんを処置し、がんの転移を予防し、がんの重症度を低下させ、がんの寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象におけるがんの再発の可能性を予防し、減少させるためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の薬学的組成物と、がんを処置し、がんを予防し、がんの重症度を低下させ、がんの寛解を促進し、及び／または、それを必要とする対象におけるがんの再発の可能性を予防し、または減少させるための組成物の使用のための指示書とを含む。幾つかの態様において、がんは神経芽腫である。幾つかの態様において、がんは、ＡＬＬまたは他の白血病のサブタイプである。キットは、本明細書に記載の組成物のうちの少なくとも１つを含む、材料または構成要素の組み合わせである。
【００９８】
本発明のキットで構成されている構成要素の正確な性質は、その目的に応じて異なる。一態様において、キットは、特に、ヒト対象のために設定されている。更なる態様では、キットは、農場動物、家畜、実験動物などを含むがそれに限定されない対象を処置する獣医学的用途のために構成されている。
【００９９】
使用指示書は、キットに含まれていてもよい。「使用指示書」は一般的に、症状を処置し、阻害し、軽減し、及び／または、対象における自己免疫疾患、及び／または、がんの予防を促進するような、望ましい結果をもたらすためのキットの構成要素の使用において採用される技術を説明する、明確な表現を含む。任意で、キットは、また、当業者により容易に認識される通り、測定ツール、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体など他の有用な構成要素、シリンジまたは他の有用な道具などを含む。
【０１００】
キットに集められた材料または構成要素は、それらの信頼性及び有用性を維持する任意の便利で適切な方法で格納されて施術者に提供されることができる。例えば、構成要素は、溶解した、脱水した、または凍結乾燥の形態であり得る。それら、室温、冷蔵または冷凍温度で提供することができる。構成要素は、一般的には、適切な包装材料中に含まれている。本明細書で使用する語句「包装材料」は、本発明の組成物などのキットの内容物を収容するために使用される１つ若しくはそれ以上の物理的構造体を指す。包装材料は、好ましくは、無菌で、汚染のない環境を提供するために、公知の方法で構成される。本明細書で使用する用語「包装」は、ガラス、プラスチック、紙、ホイルなど、個々のキット成分を保持することができる適切な固体マトリックスまたは材料を意味する。従って、例えば、包装は、本明細書に記載の組成物の適切な量を含有するために使用されるボトルであってもよい。包装材料は、一般に、キット、及び／または、その構成要素の内容、及び／または、目的を表す外部ラベルを有している。
【０１０１】
治療効果
また、本明細書中において、標的細胞、及び／または、組織へのエキソソームの標的化効力を決定することを含む抗体依存エキソソーム治療の有効性を決定する方法を提供する。幾つかの態様において、標的細胞、及び／または、組織へのエキソソームの標的有効性を決定することは、標的細胞、及び／または、組織中で、エキソソームに特異的な核酸、及び／または、タンパク質を検出することを含む。標的細胞、及び／または、組織中のエキソソーム特異的核酸、及び／または、タンパク質の存在は、有効な抗体依存性エキソソーム治療の指標である。幾つかの態様において、エキソソームは、活性化ナチュラルキラー細胞に由来する。幾つかの態様において、エキソソームは、エキソソーム特異的タンパク質、及び／または、エキソソームに固有の核酸を含むように操作される。幾つかの態様において、核酸は、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはその組み合わせを含む。例示的な態様において、ｍｉＲＮＡは、表４に記載されたｍｉＲＮＡのいずれか１つ若しくはそれ以上であってもよい。更なる例示的な態様では、ｍＲＮＡは、表５に記載されたｍＲＮＡのいずれか１つ若しくはそれ以上であってもよい。
【０１０２】
標的細胞、及び／または、組織中のエキソソーム特異的核酸の量を評価するために使用できる技術は、インサイチューハイブリダイゼーションを含むが、それに限定されない（例えば：Ａｎｇｅｒｅｒ  （１９８７）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １５２：  ６４９）。好ましいハイブリダイゼーションをベースとするアッセイは、サザンブロット法、または、インサイチューハイブリダイゼーション法（例えば、ＦＩＳＨ  ａｎｄ  ＦＩＳＨ  ｐｌｕｓ  ＳＫＹ）などの従来の「直接プローブ」法、及び比較ゲノムハイブリダイゼーション法（ＣＧＨ）、例えば、ｃＤＮＡベース、またはオリゴヌクレオチドベースのＣＧＨなどの、「比較プローブ」法を含むが、それに限定されない。方法は、基板（例えば、膜、またはガラス）に結合した方法、またはアレイベースのアプローチを含む様々な形式で使用されるが、それに限定されない。核酸分析のために使用することができるプローブは、一般的には、例えば、放射性同位体または蛍光リポーターで標識される。好ましいプローブは、厳密な条件下で標的核酸と特異的にハイブリダイズするのに十分な程長い。好ましいサイズ範囲は、約２００塩基〜約１０００塩基である。本発明の方法での使用に適したハイブリダイゼーションの手順は、例えば、Ａｌｂｅｒｔｓｏｎ  （１９８４）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ３：  １２２７−１２３４；  Ｐｉｎｋｅｌ  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：  ９１３８−９１４２；  ＥＰＯ  Ｐｕｂ．  Ｎｏ．  ４３０，４０２；  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ３３：  Ｉｎ  ｓｉｔｕ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｃｈｏｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  Ｎ．Ｊ．  （１９９４），  Ｐｉｎｋｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２０：  ２０７−２１１，  ａｎｄ／ｏｒ  Ｋａｌｌｉｏｎｉｅｍｉ  （１９９２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：５３２１−５３２５  （１９９２）に記載されている。
【０１０３】
「定量的」増幅方法は、当業者に公知である。例えば、定量的ＰＣＲは、同じプライマーを用いた、既知量の対照配列の同時共増幅を含む。これは、ＰＣＲ反応を較正するために使用できる内部標準を提供する。定量ＰＣＲの詳細な手順は、Ｉｎｎｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎ．Ｙ．）に提供されている。定量ＰＣＲ分析を用いたマイクロサテライト座におけるＤＮＡコピー数の測定は、Ｇｉｎｚｏｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：５４０５−５４０９に記載されている。遺伝子についての公知の核酸配列は、当業者が日常的に遺伝子の任意の部分を増幅するプライマーを選択するのに十分なものである。蛍光定量ＰＣＲもまた、本発明の方法で用いることができる。蛍光定量ＰＣＲでは、定量は、蛍光シグナルの量、例えば、ＴａｑＭａｎ及びｓｙｂｒグリーンをベースにしている。
【０１０４】
他の適切な増幅方法としては、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）（参照：Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗａｌｌａｃｅ  （１９８９）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ４：  ５６０，  Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：１０７７，  ａｎｄ  Ｂａｒｒｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｇｅｎｅ  ８９：  １１７）：転写増幅（Ｋｗｏｈ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：  １１７３），  ｓｅｌｆ−ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  （Ｇｕａｔｅｌｌｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：  １８７４）；ｄｏｔＰＣＲ、及びリンカ−アダプタＰＣＲなどが含まれるが、それに限定されない。
【０１０５】
標的細胞、及び／または、組織中のエキソソーム特異的タンパク質及び核酸の存在を決定するための更なる方法としては、核酸、免疫蛍光のためのＴａｑＭａｎＰＣＲ、またはタンパク質のためのフローサイトメトリーを含むが、それに限定されない。
【実施例】
【０１０６】
以下の実施例は、より良く本願発明を例示するために提供されるものであって、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。特定の材料が言及される点については、それは例示の目的のためだけであり、本発明を限定するものではない。当業者は、発明の能力を行使することなく、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段または反応物を開発することができる。
【０１０７】
本発明者らは、ＧＤ２と呼ばれる神経芽腫特異的細胞表面マーカーに特異的に向けることができるＮＫエキソソームを、生体外で大量に産生する方法を有している。これは、抗ＧＤ２ＣＡＲをＮＫ細胞に形質移入することにより達成することができる。或いは、ＮＫ由来のエキソソームは、抗ＧＤ２抗体でコーティングでき、それにより、表面にＧＤ２を発現する神経芽細胞腫細胞に、（排他的ではないにせよ）主としてエキソソームを送達する。 エキソソームによるがん細胞の死滅を増加させることができる治療剤は、多くのパーフォリンまたはグランザイム、及びがん細胞における遺伝子発現を調節するマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含む。がん細胞を死滅させるように、またはがん細胞が他の処置に対してより感受性があるようにするために、ＮＫ細胞中、及び従ってそれらのエキソソーム中に、関心対象の特定のｍｉＲＮＡ（例えば、「ｍｉＲＮＡに富む」抗神経芽細胞腫のエキソソーム）を過剰発現することが可能である。
【０１０８】
図１は、ＮＫ細胞によるエキソソームの放出、抗体依存細胞毒性（ＡＤＣＣ）、及びＮＫ細胞から放出されるエキソソームにより媒介される抗体依存エキソソーム細胞毒性（ＡＤＥＣ）の概略図である。
【０１０９】
図２は、例示的な態様における、活性化したナチュラルキラー細胞の生体外増殖、及び大規模のａＮＫエキソソーム単離を記載している。
【０１１０】
図３は、活性化ＮＫ細胞由来のエキソソームがＣＤ６４を発現することを示すウエスタンブロットである。質量分析データは、活性化ＮＫ細胞由来のエキソソームがＣＤ６４を発現することを示した。
【０１１１】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の注入は、がん免疫治療のための新たなツールである。十分に機能する多数のａＮＫ細胞を産生する方法は、このアプローチの重要なステップである（Ｌｉｕ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｆｒｏｍ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１３；１９（８）：２１３２−４３；  Ｓｅｅｇｅｒ  ＲＣ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ．  ２０１１；２１（４）：２２９−３７；  Ｄｅｎｍａｎ  ＣＪ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｍｂｒａｎｅ−Ｂｏｕｎｄ  ＩＬ−２１  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  Ｅｘ  Ｖｉｖｏ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｋｉｌｌｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．  ＰｌｏＳ  ｏｎｅ．  ２０１２；７（１）：ｅ３０２６４．  ＰＭＣＩＤ：  ３２６１１９２）。そして本発明者らの最近の研究は、患者ＰＢＭＣをＫ５６２ｍｂＩＬ−２１ａＡＰＣで共培養することで、ａＮＫ細胞の大規模な増殖（＞２，０００倍）を誘導することができ、それは自家臨床治療のための十分なａＮＫ細胞を提供することを示した。本発明者らは、ａＮＫ細胞からエキソソームを生成するために、このアプローチを拡張する。本発明者らは、また、提案された研究のために必要な、生体外、及び生体内での前臨床神経芽細胞腫モデルを有する。本発明者らの実験は、１）１０ｍｇを超える量のａＮＫエキソソームを産生し、精製することができること；及び２）２人の異なるドナーから精製したａＮＫエキソソームが、神経芽腫及びＡＬＬ細胞株に対して細胞毒性であること（図６）を実証した。
【０１１２】
エキソソームを、超遠心分離し、独自開発のポリマー沈殿方法によりａＮＫ細胞を４８〜７２時間馴化培地から単離した。神経芽細胞腫ＣＨＬＡ２５５−Ｌｕｃ細胞、またはＳｕｐＢ１５−ＬｕｃのＡＬＬ細胞（１０４細胞）を、ａＮＫ細胞と共に９６ウェルプレート中で（１０４細胞、エフェクター細胞と標的細胞比は１：１）、または示した通りの精製エキソソームの異なる量で、６時間、培養した。ルシフェラーゼ基質Ｂｅｅｔｌｅルシフェリン（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｅ１６０５）を添加し、その後、生物発光を定量した。未処理試料（図６：レーン２または６）は、ＣＨＬＡ２５５−ＬｕｃまたはＳｕｐＢ１５−Ｌｕｃについてそれぞれ１００％とした。Ｌｕｃは、ホタルルシフェラーゼ標識細胞である。
【０１１３】
図４に示すように、ａＮＫエキソソームは、ａＮＫ細胞の細胞毒性を増加させた。更に、ａＮＫ由来のエキソソームは、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＮＢ細胞に対して細胞毒性である（図５）。本明細書で記載する通り、本明細書に記載のエキソソームは、治療用ｍｉＲＮＡ、及び／または、抗体を含むように操作され得る。ＭＹＣＮ及びＳＭＡＤ２／３のタンパク質発現は、ヒト神経芽細胞腫細胞株におけるｍｉＲ−１６及びｍｉＲ−１８６により抑制される（図７）。抗ＧＤ２モノクローナル抗体は、ａＮＫエキソソーム（白矢印）と神経芽細胞腫細胞（灰色）間の相互作用を増加させる（図８）。
【０１１４】
上記の様々な方法及び技術は、本出願を実行する多くの方法を提供する。もちろん、説明した全ての目的または利点が、本明細書に記載の任意の態様によって必ずしも達成できるわけではないことを理解すべきである。従って、例えば、当業者は、本明細書で教示または示唆した他の目的または利点を必ずしも達成することなく、本明細書で教示した１つの利点または利点のグループを達成または最適化するやり方で、方法を実施することができることを認識するであろう。様々な代替物が、本明細書に記載されている。幾つかの好ましい態様は、１つの、別の、または、幾つかの特定の特徴を含む一方、別の態様は、１つの、別の、または幾つかの特定の特徴を除外し、尚、別の態様は、１つの、別の、または、幾つかの有利な特徴を含むことにより特定の特徴を軽減することを理解すべきであろう。
【０１１５】
更にその上、当業者は、異なる態様から種々の特徴の適用可能性を認識するであろう。同様に、上記で記載した様々な要素、特徴及び段階、並びに、そのような要素、特徴及び段階のための他の既知の同等物は、本明細書に記載の原理に従った方法を実行するために、当業者により様々な組み合わせで使用することができる。様々な要素、特徴及び段階のうち、幾つかのあるものは具体的に含まれ、そして他のものは、多様な態様において具体的に除外した。
【０１１６】
本出願は、特定の態様及び実施例の文脈で開示したが、本出願の態様が、その他の代替態様に対する具体的に開示された態様、及び／または、その使用及び改変及び等価物を越えて拡張されることは、当業者により理解されるであろう。
【０１１７】
本出願の特定の態様を記載する文脈において使用される、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び類似の参照（特に、以下の特許請求範囲の特定の文脈における）は、単数及び複数の両方を包含すると解釈できる。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内に入るそれぞれ別個の値を個々に言及する簡略表記法として役立つことを企図している。本明細書において特に指示されない限り、各々の個別値は、それが個々に本明細書に記載されているかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に提示されない限り、またはそうでなければ文脈により明らかに矛盾しない限り、本明細書に記載の全ての方法は、任意の適切な順序で実施できる。本明細書において特定の態様に関して提供される、任意の及び全ての例または例示的な言語（例えば、「など（ｓｕｃｈ  ａｓ）」）の使用は、単に、出願をより良く示すためであり、特許請求の範囲を限定するものではない。本明細書中の言語は、出願の実施に必須の任意の請求範囲にない要素を示すものとして解釈するべきではない。
【０１１８】
出願を実行するために発明者に知られている最良の形態を含む本出願の好ましい態様は、本明細書中に記載されている。好ましい態様のバリエーションは、前述の説明を読めば当業者には明白であろう。当業者がこのようなバリエーションを適切に採用することができ、出願が具体的に本明細書に記載された以外の方法で実施することができることが、意図される。従って、本出願の多くの態様は、適用法令により許可された通り、添付の特許請求の範囲に記載の主題の全ての改変及び均等物を含む。さらに、本明細書に示されない限り、またはそうでなければ文脈に明らかに矛盾しない限り、全ての可能なバリエーションにおける上記要素の任意の組み合わせが、本出願により包含される。
【０１１９】
全ての特許、特許出願、特許出願の刊行物、及び、本明細書に参照された記事、書籍、仕様書、出版物、文書、物事、及び／または、類似物などの他の素材は、それに関する任意の審査経過履歴、本文書との相反する若しくは矛盾するもの、または、現在またはそれ以降、本文書に関する最も広範囲の請求項に関して制限効果を有するかもしれないものを除いて、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれたものとする。一例として、組み込まれた任意の素材と関連する記述、定義、及び／または、用語の使用と、本文書、記述、定義、及び／または、用語の使用との間に矛盾や不一致がある場合は、本文書がまさる。
【０１２０】
本明細書に開示された出願の態様は、出願の態様の原理の例示であることを理解すべきである。用いることができる他の改変は、出願の範囲内であるはずである。従って、限定的ではなく、一例として、本出願の態様の代替の構成は、本明細書の教示に従って利用することができる。従って、本出願の態様は、図示及び説明したものに厳密に限定されるものではない。
【図１】
2016535009.tif 000013
【図２】
2016535009.tif 000014
【図３】
2016535009.tif 000015
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2016535009.tif 000020
【国際調査報告】
2016535009.tif 000021