(57)【要約】  本発明は、保存効力の即効性をもつジフルプレドナートエマルション組成物を提供する。保存効力の即効性は、抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を配合することにより達成される。本発明はまた、ジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に保存効力の即効性を付与する方法であって、ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物を調製することを特徴とする方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物。
【請求項２】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）が抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体である請求項1記載のエマルション組成物。
【請求項３】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が銀及び銅からなる群から選択される少なくとも1種の抗菌性金属の塩又は錯体である請求項2記載のエマルション組成物。
【請求項４】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銀塩又は銀錯体である請求項3記載のエマルション組成物。
【請求項５】
銀塩又は銀錯体が、硝酸銀、プロテイン銀及び銀フィチン酸錯体からなる群より選択される少なくとも1種である請求項4記載のエマルション組成物。
【請求項６】
銀塩又は銀錯体の銀イオンとしての濃度が0.00005 (w/v)%以上、0.6 (w/v)%以下である請求項4又は5に記載のエマルション組成物。
【請求項７】
銀塩又は銀錯体の銀イオンとしての濃度が0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下である請求項4又は5に記載のエマルション組成物。
【請求項８】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銅塩又は銅錯体である請求項3記載のエマルション組成物。
【請求項９】
銅塩又は銅錯体が硫酸銅である請求項8記載のエマルション組成物。
【請求項１０】
銅塩又は銅錯体の銅イオンとしての濃度が0.0001 (w/v)%より高く、0.5 (w/v)%以下である請求項8又は9に記載のエマルション組成物。
【請求項１１】
銅塩又は銅錯体の銅イオンとしての濃度が0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下である請求項8又は9に記載のエマルション組成物。
【請求項１２】
眼科用組成物である請求項1〜11のいずれか１項に記載のエマルション組成物。
【請求項１３】
ジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に保存効力の即効性を付与する方法であって、ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物を調製することを特徴とする方法。
【請求項１４】
保存効力の即効性が、生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させることである、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
保存効力の即効性が、生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させ、かつ生菌数を菌接種後6時間以内に2 log以上減少させることである、請求項13記載の方法。
【請求項１６】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）が抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体である請求項13〜15のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１７】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が銀及び銅からなる群から選択される少なくとも1種の抗菌性金属の塩又は錯体である請求項16記載の方法。
【請求項１８】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銀塩又は銀錯体である請求項17記載の方法。
【請求項１９】
銀塩又は銀錯体が、硝酸銀、プロテイン銀及び銀フィチン酸錯体からなる群より選択される少なくとも1種である請求項18記載の方法。
【請求項２０】
銀塩又は銀錯体の銀イオンとしての濃度が0.00005 (w/v)%以上、0.6 (w/v)%以下である、請求項18又は19に記載の方法。
【請求項２１】
銀塩又は銀錯体の銀イオンとしての濃度が0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下である、請求項18又は19に記載の方法。
【請求項２２】
抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銅塩又は銅錯体である請求項17記載の方法。
【請求項２３】
銅塩又は銅錯体が硫酸銅である請求項22記載の方法。
【請求項２４】
銅塩又は銅錯体の銅イオンとしての濃度が0.0001 (w/v)%より高く、0.5 (w/v)%以下である、請求項22又は23に記載の方法。
【請求項２５】
銅塩又は銅錯体の銅イオンとしての濃度が0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下である、請求項22又は23に記載の方法。
【請求項２６】
エマルション組成物が眼科用組成物である請求項13〜25のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌性金属を含有するジフルプレドナートエマルション組成物に関する。より詳細には、抗菌性金属を配合することにより、保存効力の即効性をもつジフルプレドナート含有エマルション組成物に関する。
【０００２】
（発明の背景）
点眼剤、点鼻剤及び点耳剤は、1回使い切りタイプのものを除き、繰り返し使用される製剤であるため、開栓前に滅菌しておいても、開栓後は薬液が菌などの微生物で汚染される危険が極めて大きい。そのため、このような二次的な汚染を防止するために、通常、水性製剤の保存剤として、例えば塩化ベンザルコニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、パラオキシ安息香酸エステル等が添加される。しかし、エマルションは水性液剤に比べて保存効力を付与させることが難しく、エマルションに適した保存剤として、ソルビン酸、ホウ酸及びエデト酸ナトリウムを使用することが報告されている(米国特許第6379688号)。発明者らは、エマルションに二次的な微生物等による汚染が起こった場合でも、従来のエマルションに比べて、さらに短時間で侵入した菌を死滅させることができる保存剤の検討を行った。特に、ヨーロッパ薬局方における保存効力試験では、6時間及び24時間における生菌数の減少、つまり短時間で侵入した菌を死滅させることが重要視されている。
【０００３】
ジフルプレドナートは強力なステロイド性抗炎症薬であり、エマルション点眼剤として米国で販売されている。このジフルプレドナート含有エマルション点眼剤には、保存剤として、0.1 (w/v)%のソルビン酸が配合されている。
【０００４】
一方、保存剤として抗菌性金属を含む組成物が報告されている。例えば国際公開第2004/091567号には、無機顔料及び酸化銀を含む懸濁液を撹拌することにより得られる顔料を含む局所用配合物が記載され、エマルションの形態でもよいことが記載されている。国際公開第2007/012977号には、ステロイド、治療活性油、界面活性剤及び高分子添加剤を含む起泡性組成物が記載され、更に追加的治療剤として銀を配合できることが記載されている。
【０００５】
欧州特許第0028110号には、トリアリルサッカロースと架橋したポリアクリル酸の医薬的に許容される塩の水溶液を含む熱安定な眼科用エマルション組成物が記載され、適用できる薬剤として、スルファジアジン銀が記載されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、保存効力の即効性をもつジフルプレドナートを含有するエマルション組成物を提供することを課題とする。
【０００７】
本発明者らは、抗菌性金属を配合することにより、保存効力の即効性をもつジフルプレドナート含有エマルション組成物が調製できることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は以下の通りのものである。
[1] ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物。
[2] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）が抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体である上記[1]記載のエマルション組成物。
[3] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が銀及び銅からなる群から選択される少なくとも1種の抗菌性金属の塩又は錯体である上記[2]記載のエマルション組成物。
[4] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銀塩又は銀錯体である上記[3]記載のエマルション組成物。
[5] 銀塩又は銀錯体が、硝酸銀、プロテイン銀及び銀フィチン酸錯体からなる群より選択される少なくとも１種である上記[4]記載のエマルション組成物。
[6] 銀塩又は銀錯体の銀イオンとしての濃度が0.00005 (w/v)%以上、0.6 (w/v)%以下である上記[4]又は[5]に記載のエマルション組成物。
[7] 銀塩又は銀錯体の銀イオンとしての濃度が0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下である上記[4]又は[5]に記載のエマルション組成物。
[8] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銅塩又は銅錯体である上記[3]記載のエマルション組成物。
[9] 銅塩又は銅錯体が硫酸銅である上記[8]記載のエマルション組成物。
[10] 銅塩又は銅錯体の銅イオンとしての濃度が0.0001 (w/v)%より高く、0.5 (w/v)%以下である上記[8]又は[9]に記載のエマルション組成物。
[11] 銅塩又は銅錯体の銅イオンとしての濃度が0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下である上記[8]又は[9]に記載のエマルション組成物。
[12] 眼科用組成物である上記[1]〜[11]のいずれか１つに記載のエマルション組成物。
[13] ジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に保存効力の即効性を付与する方法であって、ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物を調製することを特徴とする方法。
[14] 保存効力の即効性が、生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させることである、上記[13]記載の方法。
[15] 保存効力の即効性が、生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させ、かつ生菌数を菌接種後6時間以内に2 log以上減少させることである、上記[13]記載の方法。
[16] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）が抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体である上記[13]〜[15]のいずれか１つに記載の方法。
[17] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が銀及び銅からなる群から選択される少なくとも1種の抗菌性金属の塩又は錯体である上記[16]記載の方法。
[18] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銀塩又は銀錯体である上記[17]記載の方法。
[19] 銀塩又は銀錯体が、硝酸銀、プロテイン銀及び銀フィチン酸錯体からなる群より選択される少なくとも1種である上記[18]記載の方法。
[20] 銀塩又は銀錯体を、銀イオンとして0.00005 (w/v)%以上、0.6 (w/v)%以下の濃度で配合する、上記[18]又は[19]に記載の方法。
[21] 銀塩又は銀錯体を、銀イオンとして0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下の濃度で配合する、上記[18]又は[19]に記載の方法。
[22] 抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体が、銅塩又は銅錯体である上記[17]記載の方法。
[23] 銅塩又は銅錯体が硫酸銅である上記[22]記載の方法。
[24] 銅塩又は銅錯体を、銅イオンとして0.0001 (w/v)%より高く、0.5 (w/v)%以下の濃度で配合する、上記[22]又は[23]に記載の方法。
[25] 銅塩又は銅錯体を、銅イオンとして0.0005 (w/v)%以上、0.01 (w/v)%以下の濃度で配合する、上記[22]又は[23]に記載の方法。
[26] エマルション組成物が眼科用組成物である上記[13]〜[25]のいずれか１つに記載の方法。
[27] ジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を配合することによる、ジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に保存効力の即効性を付与する方法。
[28] 保存効力の即効性が、生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させることである、上記[27]記載の方法。
[29] 保存効力の即効性が、生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させ、かつ生菌数を菌接種後6時間以内に2 log以上減少させることである、上記[27]記載の方法。
【０００９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物を提供する。より詳細には、本発明は、保存効力の即効性を有する、ジフルプレドナート、油、水、乳化剤及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有する水中油型エマルション組成物(以下、本発明の組成物という)を提供する。
【００１０】
本明細書において、特記しない限り、保存効力の即効性を有するとは、例えば、保存効力試験において、短時間に細菌の生菌数を減少させることをいい、例えば、細菌(黄色ブドウ球菌、大腸菌及び緑膿菌)の生菌数を菌接種後24時間以内に3 log以上減少させることができることをいう。さらには菌接種後24時間以内に生菌数を3 log以上減少させ、かつ菌接種後6時間以内に生菌数を2 log以上減少させることができることをいう。前記基準は、ヨーロッパ薬局方7.0記載の保存効力試験(EUROPEAN PHARMACOPOEIA 7.0, Efficacy of antimicrobial preservation)を実施したときの判定基準の1つである。
【００１１】
ヨーロッパ薬局方7.0記載の保存効力試験の操作方法は、試験菌として、細菌である、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)及び緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)を用い、真菌であるカンジタ菌(Candida albicans)及び黒かび(Aspergillus brasiliensis (niger))を用い、以下の(i)〜(iv)の操作を行う方法である。なお、必要に応じて試験菌に大腸菌(Escherichia coli)などの菌を加えることができる。
【００１２】
(i) 試験に用いる上記5種の菌株をそれぞれカンテン斜面培地の表面に接種して前培養する。前培養用のカンテン培地としては、細菌の場合はソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地を、真菌の場合はサブロー・ブドウ糖カンテン培地を用いる。細菌の場合は30〜35℃で18〜24時間、Candida albicansは20〜25℃で40〜48時間、Aspergillus brasiliensis (niger)は20〜25℃で1週間又は十分な胞子が形成されるまで前培養する。
【００１３】
(ii)試験に供する水性液剤組成物を検体とし、該検体を10 mLずつ5本の滅菌済みの共栓付試験管に分注し、(i)の試験菌を105〜106 cells/mLとなるよう接種した混合試料を調製後、20〜25℃で遮光保存する。なお、試験菌は混合せず、それぞれ単独に検体に接種する。
【００１４】
(iii)保存開始から24時間保存後に各混合試料から1 mLをサンプリングし、その液を生理食塩水9 mLで希釈する。さらに同様の希釈を2〜3回行い、各希釈液1 mLを滅菌シャーレに分注する。
【００１５】
(iv)次に、細菌にはレシチン0.1 (w/v)% ポリソルベート80 0.7 (w/v)%添加ソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地、真菌にはレシチン0.1 (w/v)% ポリソルベート80 0.7 (w/v)%添加サブロー・ブドウ糖カンテン培地を加えて混釈し、下記の条件で培養後、生成したコロニー数を測定し、混合試料1 mL当たりの理論菌数を算出する。
細菌の培養条件:30〜35℃で約3日
真菌の培養条件:20〜25℃で約5日
【００１６】
上記(i)〜(iv)の操作後、混合溶液中の上記全ての細菌(黄色ブドウ球菌、大腸菌及び緑膿菌)の生菌数が菌接種後24時間以内に3 log以上減少したとき、保存効力の即効性を有すると判定する。さらには菌接種後24時間以内に生菌数が3 log以上減少し、かつ菌接種後6時間以内に生菌数が2 log以上減少したとき、保存効力の即効性を有すると判定する。
【００１７】
本発明の組成物に用いることのできるジフルプレドナート(6α,9α-ジフルオロプレドニゾロン 17-ブチレート 21-アセテート)は、ステロイド性抗炎症薬であり、経皮投与や点眼投与により、優れた抗炎症作用及び抗アレルギー作用を示すことが知られている。ジフルプレドナートは、例えば米国特許第3780177号及び米国特許第3784692号に記載された方法に基づいて調製することができる。
【００１８】
本発明の組成物に用いることのできる油は、低毒性、低刺激性の眼に適用可能なものであればよく、好ましくはグリセリンの脂肪酸エステルを含有するもの、例えばヒマシ油、落花生油、綿実油、大豆油、オリーブ油、中鎖脂肪酸トリグリセリド[例えば、ミグリオール(商品名、ミツバ貿易)]等が挙げられる。さらに好ましくはジフルプレドナートをよく溶解させることができるヒマシ油及び中鎖脂肪酸トリグリセリド(例えば、ミグリオール)等が挙げられ、特に好ましくはヒマシ油である。
【００１９】
本発明の組成物に用いることのできる水としては、医薬組成物に通常添加されるものであれば特に限定されないが、精製水及び注射用蒸留水等が挙げられる。
【００２０】
本発明の組成物に用いることのできる乳化剤の種類としては、非イオン界面活性剤等が挙げられる。その例として、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類、アルキルアリールポリエーテルアルコール型ポリマー、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール又はショ糖脂肪酸エステル、好ましくはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油10、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油50、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、チロキサポール、ステアリン酸ポリオキシル類等が挙げられ、特に好ましくはポリソルベート80、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、チロキサポール及びステアリン酸ポリオキシル40である。また、これらを組み合せて使用してもよい。
【００２１】
本発明の組成物における抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）は、エマルション組成物中で、抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）がイオンとなり得る化合物であることが好ましい。抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の塩又は錯体の形態であってもよい。本発明の組成物における抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の種類としては、抗菌性を有する金属（ただし、亜鉛を除く）であればよく、例えば銀若しくは銅、又はそれらを組み合せて使用できる。銀又は銅は、エマルション組成物中で銀イオン又は銅イオンとなり得る化合物であることが好ましい。
【００２２】
銀イオンと成り得る化合物としては、例えば金属銀、銀塩、銀錯体等が挙げられ、銀塩又は銀錯体であることが好ましい。
【００２３】
金属銀は、ナノ粒子化された銀、コロイド状の銀でもよい。
【００２４】
銀塩としては、硝酸銀、硫酸銀、塩化銀、臭化銀、酸化銀、酢酸銀、炭酸銀、クエン酸銀、乳酸銀、リン酸銀、シュウ酸銀、チオ硫酸銀、プロテイン銀等が挙げられ、好ましくは硝酸銀、プロテイン銀である。
【００２５】
銀錯体としては、シアン化銀錯体、ジアミン銀錯体、チオ硫酸銀錯体、テトラキス（ピリジン）銀（II）ペルオキソジスルファート、銀クロロ錯塩、銀アミノ酸錯体、銀フィチン酸錯体等が知られている。好ましくは銀フィチン酸錯体である。例えば、銀フィチン酸錯体として、LunarSilver（登録商標）(銀を0.5 (w/v)%、フィチン酸を1.5 (w/v)%含有する)を用いることができる。ここで、LunarSilver（登録商標）とは、抗菌化研（株）から製造販売されている水溶液中の銀をフィチン酸により安定化させたものである。
【００２６】
銅イオンと成り得る化合物としては、例えば金属銅、銅塩、銅錯体等が挙げられ、好ましくは銅塩、銅錯体である。
【００２７】
金属銅は、ナノ粒子化された銅、コロイド状の銅でもよい。
【００２８】
銅塩としては、硫酸銅、塩化銅、酸化銅、炭酸銅等が挙げられる。好ましくは硫酸銅である。
【００２９】
銅錯体としては、銅-エタノールアミン、銅-ジメチルジチオカルバメート、銅-スルフェート、銅-2-エチルヘキサノエート、銅-第四級アルキルアンモニウム、水酸化銅（II）、塩基性炭酸銅、銅-ニトレート、銅-8-キノリノレート、銅アミノ酸錯体等が挙げられる。
【００３０】
本発明の組成物におけるジフルプレドナートの配合割合は、組成物中に、例えば、0.001 (w/v)%以上、好ましくは0.005 (w/v)%以上、さらに好ましくは0.01 (w/v)%以上であり、0.4 (w/v)%以下、好ましくは0.3 (w/v)%以下、さらに好ましくは0.2 (w/v)%以下である。
【００３１】
本発明の組成物における油の配合割合は特に限定されず、通常、水中油型エマルションを調製しうる配合割合であればよく、その配合割合は、組成物中に0.1 (w/v)%以上、好ましくは0.5 (w/v)%以上、さらに好ましくは1 (w/v)%以上であり、40 (w/v)%以下、好ましくは30 (w/v)%以下、さらに好ましくは20 (w/v)%以下である。
【００３２】
本発明の組成物における水の配合割合は特に限定されないが、組成物中に20 (w/v)%以上、好ましくは50 (w/v)%以上、さらに好ましくは60 (w/v)%以上であり、99.8 (w/v)%以下、好ましくは99 (w/v)%以下、さらに好ましくは98 (w/v)%以下である。
【００３３】
本発明の組成物における乳化剤の配合割合は特に限定されず、通常、水中油型エマルションを調製しうる配合割合であればよく、その配合割合は、組成物中に0.1 (w/v)%以上、好ましくは0.5 (w/v)%以上、さらに好ましくは1 (w/v)%以上であり、40 (w/v)%以下、好ましくは30 (w/v)%以下、さらに好ましくは20 (w/v)%以下である。
【００３４】
本発明の組成物における抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の配合割合は、銀塩又は銀錯体の場合、通常、銀イオンとしての濃度が約0.00005 (w/v)%以上、約0.6 (w/v)%以下であり、好ましくは、約0.0001 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下であり、さらに好ましくは約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下であり、最も好ましくは約0.005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下である。本組成物の外観変化の観点から銀イオンとしての添加上限は約0.01 (w/v)%とすることが望ましい。銅塩又は銅錯体の場合、通常、銅イオンとしての濃度が約0.0001 (w/v)%より高く、約0.5 (w/v)%以下であり、好ましくは約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下である。眼に対する安全性の観点から銅イオンとしての添加上限は約0.01 (w/v)%とすることが望ましい。
【００３５】
本発明の組成物における上記各成分の配合割合の組み合わせは特に限定されないが、例えば組成物中に、ジフルプレドナート0.001〜0.4 (w/v)%、油0.1〜40 (w/v)%、水20〜99.8 (w/v)%、乳化剤0.1〜40 (w/v)% 、及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）が、銀塩又は銀錯体の場合は銀イオンとしての濃度が約0.00005 (w/v)%以上、約0.6 (w/v)%以下、銅塩又は銅錯体の場合は銅イオンとしての濃度が約0.0001 (w/v)%より高く、約0.5 (w/v)%以下の割合で配合される。好ましくは組成物中に、ジフルプレドナート0.005〜0.3 (w/v)%、油0.5〜30 (w/v)%、水50〜99 (w/v)%、乳化剤0.5〜30 (w/v)% 、及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）が、銀塩又は銀錯体の場合は銀イオンとしての濃度が約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下、銅塩又は銅錯体の場合は銅イオンとしての濃度が約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下の割合で配合される。特に好ましくは組成物中に、ジフルプレドナート0.01〜0.2 (w/v)%、油1〜20 (w/v)%、水60〜98 (w/v)%、乳化剤1〜20 (w/v)% 、及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）として、銀塩又は銀錯体の場合は銀イオンとしての濃度が約0.005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下、銅塩又は銅錯体の場合は銅イオンとしての濃度が約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下の割合で配合される。最も好ましい本発明の組成物は、ジフルプレドナート0.05 (w/v)%、ヒマシ油5.0 (w/v)%、ポリソルベート80 4.0 (w/v)%の割合で各成分を含有し、及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）として、銀塩又は銀錯体の場合は銀イオンとしての濃度が約0.00005〜約0.0005 (w/v)%、銅塩又は銅錯体の場合は銅イオンとしての濃度が約0.0005 (w/v)%の割合で各成分を含有し、pH約5.5である。
【００３６】
本発明の組成物には、エマルション粒子の安定性を高めるために、水溶性高分子を配合することができる。水溶性高分子の例としては、ポビドン(ポリビニルピロリドン)、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー及びそれらの塩等が挙げられる。水溶性高分子は組成物中に約0.001〜約3 (w/v)%程度添加できる。
【００３７】
本発明の組成物には等張化剤を配合することができる。等張化剤の例としては、ホウ酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、濃グリセリン、プロピレングリコール、D-マンニトールなどが挙げられる。ジフルプレドナートの保存安定性を顕著に低下させない限り、またエマルションの物理的安定性が損なわれない限り、上記の等張化剤を添加することができる。特に、ジフルプレドナートの保存安定性に影響し難い、ホウ酸、塩化ナトリウム及び濃グリセリンのいずれかであることが好ましい。また、これらを組み合せて使用してもよい。
【００３８】
本発明の組成物は、前記のような等張化剤の添加により、浸透圧が約150〜約1100 mOsmで調製され、好ましくは浸透圧が約150〜約650 mOsmで調製され、更に好ましくは浸透圧が約220〜約480 mOsmで調製される。
【００３９】
本発明の組成物には緩衝剤を配合することができる。緩衝剤の例としては、酢酸ナトリウム等の酢酸塩、リン酸二水素一ナトリウム、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸二水素一カリウム、リン酸一水素二カリウム等のリン酸塩、イプシロンアミノカプロン酸、グルタミン酸ナトリウム等のアミノ酸塩、クエン酸及びその塩、トロメタモール、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸等が挙げられる。
【００４０】
緩衝剤は、ジフルプレドナートの保存安定性を低下させない限り、またエマルションの物理的安定性が損なわれない限り、添加することができる。緩衝剤は組成物中に約0.01〜約2 (w/v)%添加できる。
【００４１】
本発明の組成物に、消炎剤、非ステロイド消炎剤、消炎鎮痛剤、消炎酵素剤のような抗炎症剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗アレルギー剤、抗生物質、サルファ剤、合成ペニシリン、緑内障治療剤、白内障治療剤、縮瞳剤、散瞳剤、局所収斂剤、血管収縮剤、眼圧上昇防止剤、高眼圧症治療剤、表面麻酔剤、α1-遮断剤、β-遮断剤、β1-遮断剤、炭酸脱水素酵素阻害剤、局所用選択H1-ブロッカー、副腎皮質ホルモン、ビタミンB12、補酵素型ビタミンB2、抗コリンエステラーゼ剤又は有機ヨウ素製剤などを添加することもできる。
【００４２】
本発明の組成物には他に、安定化剤、抗酸化剤、キレート化剤、pH調整剤、増粘剤等の各種添加剤を配合することができる。また、抗菌性金属以外の保存剤をさらに添加してもよい。抗酸化剤の例としては、アスコルビン酸及びその塩、トコフェロール、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ピルビン酸及びその塩等が挙げられる。キレート化剤の例としては、エデト酸ナトリウム、クエン酸及びその塩等が挙げられる。pH調整剤の例としては、塩酸、リン酸、酢酸、硫酸、ホウ酸、ホウ砂、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、アンモニア水等が挙げられる。特に酸性のpH調整剤の例としては、塩酸、リン酸、酢酸、硫酸、ホウ酸が挙げられる。安定化剤の例としては、ジブチルヒドロキシトルエン、トロメタモール、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート、トコフェロール、ピロ亜硫酸ナトリウム、モノエタノールアミン、モノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン等が挙げられる。増粘剤の例としてはカルボキシビニルポリマー、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、アルギン酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、ヒアルロン酸ナトリウム等が挙げられる。抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）以外にさらに添加してもよい保存剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等が挙げられる。
【００４３】
本発明の組成物は、水中油型(O/W型)のエマルション、マイクロエマルション等の水性製剤として提供できる。
【００４４】
本発明の組成物の油滴の平均粒子径(メディアン径)としては10〜2000 nmが好ましく、さらに20〜1000 nmがより好ましく、20〜500 nmが特に好ましい。平均粒子径の測定は粒度分布測定装置を用いて行うことができる。
【００４５】
本発明の組成物のpHは3〜8が好ましい。より好ましいpHは4〜7であり、さらに好ましいpHは5〜6であり、最も好ましいpHは約5.5である。このpHの範囲では、ジフルプレドナートの安定性が最もよい。
【００４６】
本発明の組成物は、乳化剤を含有する水相と、ジフルプレドナートを含有する油相を調製し、これらを混合して乳化することにより調製する。均一に乳化させるために、ホモミキサー、ホモジナイザー、高圧ホモジナイザー、超高圧ホモジナイザー(マイクロフルイダイザー)等の公知の手段を使用することができる。抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）をはじめ、等張化剤、緩衝剤などその他の添加剤は乳化剤を含む水相に溶解させても良いし、乳化後のエマルションに添加しても良い。
【００４７】
特に、水に抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）、乳化剤、等張化剤及び緩衝剤を加えて水相を調製する工程、ジフルプレドナートを油に溶解させ、ジフルプレドナート油相を調製する工程、該水相及び該ジフルプレドナート油相を混合し、ホモジナイザー等を用いて粗乳化して粗乳化液を調製する工程、該粗乳化液をさらにホモジナイザーにより微粒子化して水中油型エマルションを調製する工程から製造されることが望ましい。製造工程におけるジフルプレドナートの安定性の低下を抑制するために、該水相は、該ジフルプレドナート油相と混合するよりも前に、pH調整剤を加えてpH 5〜6になるよう調整することが望ましい。
【００４８】
なお、本明細書中で、「乳化」とは、油相を微細な多数の液滴にし、水相中に分散保持させることを指す。「粗乳化」とは、乳化の一つの状態で、油相をある程度細かい液滴にし、水相中に分散保持させた状態を指す。このとき、液滴サイズは不均一である。「微粒子化」とは、乳化の一つの状態で、粗乳化物をさらにマイクロフルイダイザーなどの機器を用いて、油相の液滴をさらに細かくし、液滴サイズをある程度均一にした状態を指す。
【００４９】
また、本発明の組成物の調製工程において、抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）、等張化剤、緩衝剤などの添加剤を水相に溶解させても良いし、乳化後のエマルションに添加しても良い。
【００５０】
本発明の組成物は、眼、鼻、耳又は皮膚に対する局所投与用の製剤として用いることが好ましく、さらに点眼液等の眼科用組成物、点鼻液、点耳液又はローションとして用いることが好ましい。
【００５１】
本発明の組成物は、優れた抗炎症作用、抗アレルギー作用及び抗菌作用を有する。このため、アレルギー性結膜炎、春季カタル、眼瞼縁炎、カタル性結膜炎、ぶどう膜炎、眼手術に伴う炎症または痛み、黄斑浮腫等の種々の炎症性疾患及びアレルギー性疾患の予防・治療に有用であり、また、眼、鼻、耳、皮膚等の局所に投与する際にも有利に使用することができる。
【００５２】
本発明の組成物は、哺乳動物(ヒト、イヌ、ウサギ、ウシ、ウマ、サル、ネコ、ヒツジ等)に安全に投与することができる。
【００５３】
本発明の組成物の投与量は、疾病の種類、症状、患者の年齢、体重などにより異なるが、例えば成人に点眼液として用いる場合、患者１人に対し、1眼につき、ジフルプレドナートを0.01〜0.2 (w/v)%含有する点眼液として、症状に応じて1回量1〜2滴を1日2〜4回程度点眼投与することが望ましい。
【００５４】
また、本発明はジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に保存効力の即効性を付与する方法であって、ジフルプレドナート及び抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有するエマルション組成物を調製することを特徴とする方法を提供する。より詳細には、(a)ジフルプレドナート、(b)水、(c)油、(d)乳化剤及び(e)抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を混合して水中油型エマルション組成物とすることを含む、ジフルプレドナートを含有するエマルション組成物に保存効力の即効性を付与する方法(以下、本発明の方法という)を提供する。
【００５５】
本発明の方法において、保存効力の即効性を付与するとは、例えば菌接種後24時間以内に生菌数を3 log以上減少させることであり、さらには菌接種後24時間以内に生菌数を3 log以上減少させ、かつ菌接種後6時間以内に生菌数を2 log以上減少させることである。
【００５６】
本発明の方法で用いることのできるジフルプレドナートは前述した通りである。
【００５７】
本発明の方法に用いることのできる油の種類としては、前記のようにヒマシ油、落花生油、綿実油、大豆油、オリーブ油、中鎖脂肪酸トリグリセリド[例えば、ミグリオール(商品名、ミツバ貿易)]等が挙げられる。さらに好ましくはジフルプレドナートの溶解性が高いヒマシ油及び中鎖脂肪酸トリグリセリド(例えば、ミグリオール)等が挙げられ、特に好ましくはヒマシ油である。
【００５８】
本発明の方法に用いることのできる乳化剤の種類としては、前記のような非イオン界面活性剤等が挙げられる。その例として、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類、アルキルアリールポリエーテルアルコール型ポリマー、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール又はショ糖脂肪酸エステル、好ましくはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油10、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油50、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、チロキサポール、ステアリン酸ポリオキシル類等が挙げられ、特に好ましくはポリソルベート80、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、チロキサポール及びステアリン酸ポリオキシル40である。また、これらを組み合せて使用してもよい。
【００５９】
本発明の方法における抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）は、エマルション組成物中で、抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）がイオンとなり得る化合物であることが好ましい。抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）は、塩又は錯体の形態であってもよい。本発明の組成物における抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の種類としては、抗菌性を有する金属であればよく、例えば銀若しくは銅、又はそれらを組み合せて使用できる。銀又は銅は、エマルション組成物中で銀イオン又は銅イオンとなり得る化合物であることが好ましい。
【００６０】
銀イオンと成り得る化合物としては、例えば金属銀、銀塩、銀錯体等が挙げられ、銀塩又は銀錯体であることが好ましい。
【００６１】
金属銀は、ナノ粒子化された銀、コロイド状の銀でもよい。
【００６２】
銀塩としては、硝酸銀、硫酸銀、塩化銀、臭化銀、酸化銀、酢酸銀、炭酸銀、クエン酸銀、乳酸銀、リン酸銀、シュウ酸銀、チオ硫酸銀、プロテイン銀等が挙げられ、好ましくは硝酸銀、プロテイン銀である。
【００６３】
銀錯体としては、シアン化銀錯体、ジアミン銀錯体、チオ硫酸銀錯体、テトラキス（ピリジン）銀（II）ペルオキソジスルファート、銀クロロ錯塩、銀アミノ酸錯体、銀フィチン酸錯体等が知られている。好ましくは銀フィチン酸錯体である。例えば銀フィチン酸錯体としてLunarSilver（登録商標）を使用することができる。LunarSilver（登録商標）とは、前述の通りである。
【００６４】
銅イオンと成り得る化合物としては、例えば金属銅、銅塩、銅錯体等が挙げられ、好ましくは銅塩、銅錯体である。
【００６５】
金属銅は、ナノ粒子化された銅、コロイド状の銅でもよい。
【００６６】
銅塩としては、硫酸銅、塩化銅、酸化銅、炭酸銅等が挙げられる。好ましくは硫酸銅である。
【００６７】
銅錯体としては、銅-エタノールアミン、銅-ジメチルジチオカルバメート、銅-スルフェート、銅-2-エチルヘキサノエート、銅-第四級アルキルアンモニウム、水酸化銅（II）、塩基性炭酸銅、銅-ニトレート、銅-8-キノリノレート、銅アミノ酸錯体等が挙げられる。
【００６８】
本発明の方法における抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）の配合割合は、銀塩又は銀錯体の場合、通常、銀イオンとしての濃度が約0.00005 (w/v)%以上、約0.6 (w/v)%以下であり、好ましくは、約0.0001 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下であり、さらに好ましくは約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下であり、最も好ましくは約0.005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下である。本組成物の外観変化の観点から銀塩又は銀錯体の場合、銀イオンとしての添加上限は約0.01 (w/v)%とすることが望ましい。銅塩又は銅錯体の場合、通常、銅イオンとしての濃度が約0.0001 (w/v)%以上、約0.5 (w/v)%以下であり、好ましくは約0.0005 (w/v)%以上、約0.01 (w/v)%以下である。眼に対する安全性の観点から銅イオンとしての添加上限は約0.01 (w/v)%とすることが望ましい。
【００６９】
本発明の方法では、前記の等張化剤、緩衝剤、抗菌性金属以外の保存剤、安定化剤、抗酸化剤、キレート化剤、pH調整剤、増粘剤等の各種添加剤を更に使用しても良い。これら各種添加剤の詳細については前述の通りである。
【００７０】
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明がこれらに限定されないことは言うまでもない。
【実施例】
【００７１】
ジフルプレドナートエマルション組成物の保存効力について調べた。
1.1 試験方法
試験菌としてStaphylococcus aureus (ATCC 6538)、Escherichia coli (ATCC 8739)及びPseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)を用いた。それぞれの試験菌をカンテン斜面培地の表面に接種して前培養した。前培養は、ソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地を用い、30〜35℃で18〜24時間行った。
【００７２】
試験に供するエマルション組成物を検体とし、その検体を10 mLずつ5本の滅菌済みの共栓付試験管に分注した。検体に前培養した試験菌を菌数が105〜106 cells/mLとなるように加えて混合し、混合試料とした。なお、試験菌はそれぞれ単独に検体に加えた。混合試料を20〜25℃で遮光保存した。
【００７３】
保存開始から6時間及び24時間後に各混合試料から1 mLずつサンプリングし、その液を生理食塩水9 mLで希釈した。さらに同様の希釈を2〜3回行い、各希釈液1 mLを滅菌シャーレに分注した。次に0.1 (w/v)%レシチン・0.7 (w/v)%ポリソルベート80添加ソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地を加えて混釈し、30〜35℃で約3日間培養した。生成したコロニー数を測定し、混合試料1 mL当たりの生菌数を算出した。
【００７４】
1.2 判定基準
試験開始24時間後における全菌種の生菌数が開始時から3 log以上減少した場合、保存効力の即効性を有すると判断し、判定を適合とした。また、更なる保存効力の即効性が要求される場合には、試験開始24時間後における全菌種の生菌数が開始時から3 log以上減少し、かつ試験開始6時間後における全菌種の生菌数が開始時から2 log以上減少した場合、更に保存効力の即効性を有すると判断し、判定を適合にした。
【００７５】
なお、試験に使用した試薬の入手先は下表の通りである。
【００７６】
【表１】
2016507469.tif 000002
【００７７】
2. 試験例1(銀化合物)
2.1 調製方法
表2に示した処方1〜5の処方の製剤を調製した。以下に調製方法を記載した。
【００７８】
調製方法:
ヒマシ油100 gを200 mLビーカーに量り、加温した(水浴温度:85〜95℃)。このビーカーにジフルプレドナート1.0 gを加えて攪拌し、ジフルプレドナートを溶解させて油相とした。別に2 Lビーカーにポリソルベート80 80 g及び濃グリセリン44 gを量り、水700 mLを加えた。この液を約70℃に加温し、攪拌しながら、酢酸ナトリウム水和物1.0 gを加えて、混合物を攪拌して、水相とした。なお、処方5には、水相にソルビン酸 2.0 g、ホウ酸 2.0 g及びエデト酸ナトリウム 0.4 gを加えて溶かした。約70℃に加温した水相をホモミキサー(T.K.ロボミックス, プライミクス)により攪拌(2000 rpm)し、約90℃に加温した油相を少しずつ滴下しながら水相に加えた。ホモミキサーの回転数を8000 rpmにし、約70℃で1時間攪拌した。この液を室温に戻し、1 mol/L水酸化ナトリウム水溶液を適量加えてpHを約5.5に調整した。精製水を加え、全量1000 mLにし、粗乳化物とした。次にマイクロフルイダイザー(M-110EH, Microfluidics Corp.)を用いて、圧力約1500 kgf/cm2及び温度35〜45℃にて粗乳化物を20パス処理し、エマルション原液を得た。
【００７９】
エマルション原液50 mLを100 mLのビーカーに加え、処方1では0.16 (w/v)%硝酸銀水溶液5 mL(銀イオンとして0.005 g)、処方2では0.016 (w/v)%硝酸銀水溶液5 mL(銀イオンとして0.0005 g)、又は処方3では0.016 (w/v)%硝酸銀水溶液1 mL(銀イオンとして0.0001 g)をそれぞれ加えた。また、処方4ではプロテイン銀1.3 mg(銀イオンとして0.0001 g)を加えて溶かし、処方5ではLunarSilver（登録商標） 0.1 μL(銀イオンとして0.00005 g)を加えた。それぞれの液に精製水を加えて全量100 mLにした。それぞれの液のpHが約5.5であることを確認し、目的のエマルション組成物を得た。
【００８０】
【表２】
2016507469.tif 000003
【００８１】
2.2 試験結果
処方1〜5における試験開始24時間後の生菌数を表3に示した。処方1(硝酸銀, 銀イオンとして0.005 (w/v)%)及び処方2(硝酸銀, 銀イオンとして0.0005 (w/v)%)は判定基準に適合した。しかし、処方3(硝酸銀, 銀イオンとして0.0001 (w/v)%)は判定基準に不適合であった。また、処方4(プロテイン銀, 銀イオンとして0.0001 (w/v)%)、処方5(LunarSilver（登録商標）, 銀イオンとして0.00005 (w/v)%)は判定基準に適合した。
【００８２】
処方1〜5における試験開始6時間後の生菌数を表4に示した。処方1(硝酸銀,銀イオンとして0.005 (w/v)%)及び処方5(LunarSilver（登録商標）, 銀イオンとして0.00005 (w/v)%)は判定基準に適合した。しかし、処方2(硝酸銀, 銀イオンとして0.0005 (w/v)%)、処方3(硝酸銀, 銀イオンとして0.0001 (w/v)%)，及び処方4(プロテイン銀, 銀イオンとして0.0001 (w/v)%)は判定基準に不適合であった。
【００８３】
【表３】
2016507469.tif 000004
【００８４】
【表４】
2016507469.tif 000005
【００８５】
3. 試験例2(銅化合物)
3.1 調製方法
表5に示した処方7及び8の処方のエマルションを調製した。以下に調製方法を記載した。
【００８６】
調製方法:
ヒマシ油100 gを200 mLビーカーに量り、加温した(水浴温度:85〜95℃)。このビーカーにジフルプレドナート1.0 gを加えて攪拌し、ジフルプレドナートを溶解させて油相とした。別に2 Lビーカーにポリソルベート80 80 g及び濃グリセリン 44 gを量り、水700 mLを加えた。この液を約70℃に加温して攪拌しながら、酢酸ナトリウム水和物 1.0 gを加えて、混合物を攪拌して、水相とした。約70℃に加温した水相をホモミキサー(T.K.ロボミックス, プライミクス)により攪拌(2000 rpm)し、約90℃に加温した油相を少しずつ滴下しながら水相に加えた。ホモミキサーの回転数を8000 rpmにし、約70℃で1時間攪拌した。この液を室温に戻し、1 mol/L水酸化ナトリウム水溶液を適量加えてpHを約5.5に調整した。精製水を加え、全量1000 mLにし、粗乳化物とした。次にマイクロフルイダイザー(M-110EH, Microfluidics Corp.)を用いて、圧力約1500 kgf/cm2及び温度35〜45℃にて粗乳化物を20パス処理し、エマルション原液を得た。
【００８７】
エマルション原液50 mLを100 mLのビーカーに加え、処方7では0.039 (w/v)%硫酸銅五水和物水溶液5 mL(銅イオンとして0.0005 g)、又は処方8では0.039 (w/v)%硫酸銅五水和物水溶液1 mL(銅イオンとして0.0001 g)をそれぞれ加えた。それぞれの液に精製水を加えて全量100 mLにした。それぞれの液のpHが約5.5であることを確認し、目的のエマルション組成物を得た。
【００８８】
【表５】
2016507469.tif 000006
【００８９】
3.2 試験結果
処方7及び8における試験開始24時間後の生菌数を表6に示した。処方7(銅イオンとして0.0005 (w/v)%)は判定基準に適合した。しかし、処方8(銅イオンとして0.0001 (w/v)%)は判定基準に不適合であった。
【００９０】
更なる保存効力の即効性を評価するために、処方7及び8における試験開始6時間後の生菌数を評価した(表7)。処方7(銅イオンとして0.0005 (w/v)%)は判定基準に適合した。しかし、処方8(銅イオンとして0.0001 (w/v)%)は判定基準に不適合であった。
【００９１】
【表６】
2016507469.tif 000007
【００９２】
【表７】
2016507469.tif 000008
【００９３】
4. 試験例3
4.1 調製方法
表8に示したように抗菌性金属以外の保存剤を含有する処方9〜11の処方のエマルション組成物を調製した。以下に調製方法を記載した。
【００９４】
処方9の調製方法:
ヒマシ油50 gを100 mLビーカーに量り、加温した(水浴温度:85〜95℃)。このビーカーにジフルプレドナート0.5 gを加えて攪拌し、ジフルプレドナートを溶解させて油相とした。別に1 Lビーカーにポリソルベート80 40 g及び濃グリセリン22 gを量り、水800 mLを加えた。この液を約70℃に加温し、攪拌しながら、酢酸ナトリウム水和物0.5 g、ホウ酸1 g、エデト酸ナトリウム水和物0.2 g及びソルビン酸1 gを加えて、混合物を攪拌して、水相とした。
【００９５】
約70℃に加温した水相をホモミキサー(T.K.ロボミックス, プライミクス)により攪拌(2000 rpm)し、約90℃に加温した油相を少しずつ滴下しながら水相に加えた。ホモミキサーの回転数を8000 rpmにし、約70℃で1時間攪拌した。この液を室温に戻し、1 mol/L水酸化ナトリウム水溶液を用いてpHを約5.5に調整した。この液に精製水を加えて全量1000 mLにし、粗乳化物とした。次にマイクロフルイダイザー(M-110EH, Microfluidics Corp.)を用いて、圧力約1500 kgf/cm2及び温度35〜45℃にて粗乳化物を20パス処理し、目的のエマルション組成物を得た。
【００９６】
処方10の調製方法:
処方9と同様にして処方10を調製した。ただし、処方9のホウ酸、エデト酸ナトリウム及びソルビン酸の代わりにベンザルコニウム塩化物を0.1 g加えて調製した。
【００９７】
処方11の調製方法:
処方9と同様にして処方11を調製した。ただし、処方9のソルビン酸を2 gに増量し、更にベンザルコニウム塩化物を0.2 g及び硫酸オキシキノリン0.1 gを加えて調製した。
【００９８】
【表８】
2016507469.tif 000009
【００９９】
4.2 試験結果
処方9〜11における試験開始24時間後の生菌数を表9に示した。処方9〜11は全て、全菌種における生菌数が102 cfu/mL以下にならなかった。また、処方9〜11における試験開始6時間後の生菌数を表10に示した。全ての処方9〜11において、全菌種における生菌数が103 cfu/mL以下にならなかった。従って、全ての処方9〜11は判定基準に適合せず、保存効力に即効性は認められなかった。
【０１００】
【表９】
2016507469.tif 000010
【０１０１】
【表１０】
2016507469.tif 000011
【０１０２】
まとめ
保存剤としてソルビン酸、ベンザルコニウム塩化物及び硫酸オキシキノリンを添加した場合は、判定基準を満足せず、保存効力の即効性が認められなかった。
【０１０３】
一方、銀化合物を使用したことにより、保存効力の即効性が認められた。硝酸銀を用いた場合、保存効力の即効性が認められた濃度は銀イオンとして0.0005 (w/v)%以上であり、更に即効性が認められた濃度は銀イオンとして0.005 (w/v)%以上であった。また、LunarSilver（登録商標）を用いた場合は、試験開始6時間後においても判定基準に適合したことから、銀イオンとして0.00005 (w/v)%以上の添加量であれば、優れた即効性が認められると考えられた。
【０１０４】
また、銅化合物を使用した場合でも、銀化合物を使用したとき同様に、保存効力の即効性が認められた。硫酸銅をエマルション組成物に銅イオンとして0.0005 (w/v)%以上添加することにより、優れた保存効力の即効性を示すと考えられた。
【０１０５】
よって、ジフルプレドナートエマルション組成物の場合、銀又は銅などの抗菌性金属（ただし、亜鉛を除く）を含有させることにより、保存効力の即効性が認められることが明らかとなった。
【０１０６】
本発明を好ましい態様を強調して説明してきたが、好ましい態様が変更され得ることは当業者にとって自明であろう。本発明は、本発明が本明細書に詳細に記載された以外の方法で実施され得ることを意図する。従って、本発明は添付の「特許請求の範囲」の精神及び範囲に包含される全ての変更を含むものである。
【０１０７】
ここで述べられた特許及び特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、ここに引用されたことによって、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
【０１０８】
本出願は、米国仮特許出願No. 61/765,349（出願日：2013年2月15日）を基礎としており、その内容は、ここに引用されたことによって、その全てが本明細書に組み込まれるものである。
【国際調査報告】
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