(57)【要約】本発明は、式Ｉの化合物：【化１】2016535032.tif 000034 またはその薬学的に許容される塩を提供する。【選択図】なし
2016535032.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
2016535032.tif 000032
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
【化２】
2016535032.tif 000033
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
患者における糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項４】
患者における１型糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項５】
患者における２型糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項６】
療法に使用するための、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項７】
糖尿病の治療に使用するための、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項８】
前記糖尿病が１型糖尿病である、請求項７に記載の化合物または塩。
【請求項９】
前記糖尿病が２型糖尿病である、請求項７に記載の化合物または塩。
【請求項１０】
請求項１または請求項２に記載の化合物または塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（新規尿素化合物）
本発明は、新規尿素化合物、その化合物を含む医薬組成物、その化合物を使用して生理的障害を治療する方法、ならびにその化合物の合成において有用な中間体およびプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、糖尿病および他の疾患ならびに高血糖と関連した障害の治療の分野におけるものである。糖尿病は高レベルの血中グルコースによって特徴づけられる疾患のグループである。２０１１年のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）によれば、糖尿病は米国中のおよそ２５００万人に影響を与え、米国における死亡の第７位の主要原因でもある。ナトリウム共役グルコースコトランスポーター（ＳＧＬＴ）は、炭水化物（グルコース等）の吸収に関与することが公知であるトランスポーターの１つである。より具体的には、ＳＧＬＴ１は小腸の刷子縁膜を横切るグルコースの輸送に関与する。ＳＧＬＴ１の阻害は、小腸においてグルコースの吸収の低減をもたらし、したがって糖尿病の治療への有用なアプローチを提供し得る。
【０００３】
特許文献１は、ＳＧＬＴ１および／またはＳＧＬＴ２の阻害活性を有する、１−（β−Ｄ−グリコピラノシル）−３で置換された窒素含有複素環式化合物を開示し、それは高血糖（糖尿病等）と関連した疾患の防止または治療のために有用なものとして更に開示される。加えて、特許文献２は、ＳＧＬＴ阻害剤であるインドール誘導体を開示し、それは糖尿病および関連する病態の治療または予防のために有用なものとして更に開示される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００８／０１３９４８４Ａ１号
【特許文献２】米国特許第７，８５１，６１７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
糖尿病のための代替の薬物および治療についての必要性がある。本発明は、糖尿病の治療のために好適であり得るＳＧＬＴ１の特定の新規阻害剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
したがって、本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
2016535032.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００７】
本発明は、患者における糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法も提供する。本発明は、患者における１型糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法を更に提供する。加えて、本発明は、患者における２型糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法を提供する。本発明は、患者における耐糖能異常（ＩＧＴ）、空腹時グルコース異常（ＩＦＧ）またはメタボリックシンドロームを治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法も提供する。
【０００８】
さらに、本発明は、療法に使用するため、特に糖尿病の治療のための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。加えて、本発明は、１型糖尿病の治療に使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。加えて、本発明は、２型糖尿病の治療に使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はさらに、耐糖能異常（ＩＧＴ）、空腹時グルコース異常（ＩＦＧ）またはメタボリックシンドロームの治療に使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明は、糖尿病の治療のための医薬品の製造のための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。さらに、本発明は、１型糖尿病の治療のための医薬品の製造のための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本発明は、２型糖尿病の治療のための医薬品の製造のための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ＩＧＴ、ＩＦＧまたはメタボリックシンドロームの治療のための医薬品の製造のための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【０００９】
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む、医薬組成物を更に提供する。本発明は、式Ｉの化合物の合成のための新規中間体およびプロセスも包含する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書において使用される場合、「治療する」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を、制止、減速、停止、または回復させることを含む。
【００１１】
本明細書において使用される場合、「患者」という用語は、哺乳動物（マウス、モルモット、ラット、イヌまたはヒト等）を指す。好ましい患者がヒトであることを理解されたい。
【００１２】
本明細書において使用される場合、「有効量」という用語は、患者への単一用量または複数用量投与に際して、診断または治療下で患者において所望される効果を提供する、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の量または用量を指す。
【００１３】
有効量は、公知の技法の使用によって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者としての担当診断医により容易に決定することができる。患者のための有効量の決定において、多数の要因が担当診断医によって考慮され、それらには、哺乳動物の種、そのサイズ、年齢および全体的な健康、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度または関与または重症度、個々の患者の応答、投与された特定の化合物、投与様式、投与された調製物の生物学的利用特性、選択された用量レジメン、併用医薬物の使用、ならびに他の関連する状況が含まれるが、これらに限定されない。
【００１４】
式Ｉの化合物は、幅広い投薬量範囲にわたって概して有効である。例えば、１日あたりの投薬量は、通常は約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。いくつかの実例において、前記範囲の下限よりも下の投薬量レベルが十分以上であってもよく、一方で他の事例において、あらゆる有害な副作用を引き起こさずにさらに多い用量を用いることができ、したがって上記の投薬量範囲は本発明の範囲を限定することを決して意図しない。
【００１５】
本発明の化合物は、好ましくは化合物を生体利用可能にする任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、かかる組成物は経口投与用である。かかる医薬組成物およびそれを調製するプロセスは当該技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ編、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６年）を参照）。
【００１６】
本発明の更なる態様において、本化合物は、１種または複数の治療剤（抗糖尿病薬等）と組み合わせて投与される。組み合わせの投与には同時投与または連続投与が含まれる。加えて、組み合わせの同時投与は、単一の組み合わせ用量または各々の治療剤の別個の用量としてであってもよい。抗糖尿病剤の例には、メトホルミン、ＤＰＰＩＶ阻害剤（シタグリプチンまたはリナグリプチン等）、スルホニル尿素（グリメピリド等）、チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン等）、基礎インスリン（グラルギン等）、速効型インスリン（ＨＵＭＡＬＯＧまたはＮＯＶＯＬＯＧ等）、ＧＬＰ−１アゴニスト（エクセナチドまたはリラグルチド等）、ＳＧＬＴ２阻害剤（ダパグリフロジンまたはエンパグリフロジン等）、グルカゴン受容体アンタゴニスト（ＬＹ２４０９０２１等）などが含まれる。
【００１７】
以下の調製例、実施例およびスキームに例示されるように、式Ｉの化合物が調製される。試薬および出発材料は当業者に容易に利用可能である。すべての置換基は、特別の定めのない限り、今までに定義された通りである。これらのスキーム、調製例および実施例は、本発明の範囲に限定されるとは決して意図されないことが理解される。
【００１８】
分割の例には、選択的な結晶技法またはキラルクロマトグラフィーが含まれる（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓら、「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９８１年、およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４年を参照）。式Ｉの個々のジアステレオマーもしくは幾何異性体または式Ｉをもたらす中間体の個々のジアステレオマーもしくは幾何異性体のクロマトグラフィー、キラルクロマトグラフィーまたは選択的な結晶化による、分離および単離は、合成における任意の好都合な点で起こり得ることは、当業者に更に明らかであろう。
【００１９】
本明細書において使用される場合、「δ」は、テトラメチルシランからのｐｐｍでの低磁場を指し、「ｍｉｎｓ」は分を指し、「ｈｒｓ」は時間を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールまたはメチルアルコールを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールまたはエチルアルコールを指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「ＤＰＰＡ」はジフェニルホスホリルアジドを指し、「ＨＡＴＵ」はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートを指し、「ＣＤＩ」は１，１’−カルボニルジイミダゾールを指し、「ＤＤＱ」は２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを指し、「Ｘｐｈｏｓ」は２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニルを指し、「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「Ａｃ」は、以下の構造：
【化２】
2016535032.tif 000004
のアセチル置換基を指し、「ＢＯＣ」という用語はｔ−ブチルオキシカルボニル保護基を指す。
【００２０】
薬学的に許容される塩およびそれらの調製のための一般的な方法論は当該技術分野において周知である。例えばＧｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．、「Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３３：２０１−２１７（１９８６）；Ｂａｓｔｉｎら、「Ｓａｌｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、４：４２７−４３５（２０００）；およびＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ．６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照されたい。合成分野の当業者は、アミンとしての式Ｉの化合物が有機塩基であり、それらは当業者に周知の技法および条件を使用して容易に転換され、薬学的に許容される塩として単離されることを認識するだろう。
【化３】
2016535032.tif 000005
【００２１】
調製例１
４−メチルインドリン
【化４】
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方法Ａ
４−メチル−１Ｈ−インドール（５００ｇ、１．０当量、３．８１１モル）および酢酸（２０００ｍＬ）を室温にて２０Ｌのフラスコに入れる。溶液を０℃（内部温度）に冷やし、次いで反応混合物が１０℃以上に加温しないようにしながら、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３５９．２ｇ、１．５当量、５．７１モル）を５つの等しい部分で加える。添加が完了すると、反応混合物を室温にて２時間撹拌する。反応混合物を０℃に冷やし、氷（５Ｋｇ）を加える。水酸化ナトリウム（４Ｍ）の予冷した（５℃）溶液を非常にゆっくり加えてｐＨ１４の反応混合物を得た。反応混合物を酢酸エチル（２×１０Ｌ）で抽出する。有機層を合わせ、水（１×１０Ｌ）およびブライン（１×１０Ｌ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（４６０ｇ、９０％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１３４（Ｍ＋１）。
【００２２】
方法Ｂ
トリフルオロ酢酸（７．６２モル、５７６．４２ｍＬ）を、温度計、磁気撹拌器、窒素ラインおよび滴下漏斗を備えた２０００ｍＬの３つ口フラスコに入れる。フラスコを氷／水浴に入れ、混合物を１３℃（内部温度）に冷やす。反応混合物の温度を２５℃超にしないように４−メチル−１Ｈ−インドール（７６２．３３ミリモル、９４．２５ｍＬ、１００．００ｇ）を３分にわたって加える。添加が完了した後、混合物を約１分間撹拌し、反応混合物の温度を２０℃に到達させ、次いで氷浴からフラスコを取り除き、２０℃にて１０分間撹拌する。トリエチルシラン（８７６．６８ミリモル、１４０．４７ｍＬ、１０１．９４ｇ）を４１分にわたって反応物に滴下して加え、２５℃に温度を上昇させ、次いで必要な場合、冷却水浴の使用によって２５℃から３０℃の温度を維持する。添加が完了すると、反応混合物を８０分間撹拌する。反応混合物を１０℃に冷やし、次いで撹拌しながら、氷（１０００ｇ）、５Ｍ塩酸（８００ｍｌ）およびＭＴＢＥ（２０００ｍｌ）の混合物に注ぐ。不純物の形成を防ぐために二相系内でクエンチすることが重要であることに留意されたい。水相を分離し、有機相を塩酸（４００ｍｌ、２Ｍ）、次いで塩酸（２×２００ｍｌ、２Ｍ）で抽出する。水性抽出物を合わせ、氷水中で冷やす。５０％ｗ／ｗのＮａＯＨを加えて、温度を３０℃以下に維持してｐＨ＞１０を達成する。水性混合物をＭＴＢＥ（１０００ｍｌ、次いで２００ｍｌ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（７３ｇ、６８％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１３４（Ｍ＋１）。
【００２３】
方法Ｃ
テトラヒドロフラン（７５．００ｍＬ）中の４−メチル−１Ｈ−インドール（１１４．３５ミリモル、１５．００ｇ）の溶液を、室温にて撹拌しながら水（７５．００ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１３７．２２ミリモル、２３．６３ｇ）の溶液に加える。一面を覆った二酸化炭素下で５％白金炭素（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙ  Ｔｙｐｅ  １０３、１．５０ｇ）を加える。混合物を水素雰囲気（４．２ｂａｒ）下に置き、室温にて一晩撹拌する。反応混合物を水酸化ナトリウム（２Ｍ水溶液、１４８．６５ミリモル、７４．３３ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（１５０．００ｍＬ）で撹拌する。混合物を珪藻土で濾過し、パッドをＭＴＢＥ（５０ｍＬ）で洗浄する。濾液を分離し、水相をＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（１４．８０ｇ、９７．１７％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１３４（Ｍ＋１）。
【００２４】
調製例２
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドリン−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化５】
2016535032.tif 000007
方法Ａ
スキームＩ、工程Ａ：Ｄ−グルコース（１８０．２ミリモル）を水（２５ｍＬ）で濡らし、次いでエタノール（２００ｍＬ）中の４−メチルインドリン（１８０．２ミリモル）を加える。混合物を窒素でパージし、窒素雰囲気下で一晩加熱還流する。次いで室温に冷やし、減圧下で濃縮する。得られた残渣に、ジクロロメタン（２００ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（９．０ミリモル）およびピリジン（２．５モル）を加える。混合物を氷浴中で冷やし、次いで無水酢酸（１．１モル）を３０分にわたって滴下して加える。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、混合物を水（５００ｍＬ）中のクエン酸（飽和水溶液、５０ｍＬ）で洗浄する。ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。エタノール（５００ｍＬ）を加え、５０℃にて１０分間混合する。混合物を室温に冷やし、次いで氷水中で冷やす。得られた混合物を濾過し、減圧下で乾燥させて標題化合物（３２ｇ、３８．３２％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４６４．２（Ｍ＋１）。
【００２５】
方法Ｂ
スキームＩ、工程Ａ：エタノール：水（８０００ｍｌ：１０００ｍｌ）中の４−メチルインドリン（１０００ｇ、７．５１モル）およびＤ−グルコース（１４８０ｇ、８．２５モル）の溶液を２０Ｌの３つ口フラスコに入れる。混合物を８０℃にて６時間加熱する。混合物を減圧下で濃縮し、残渣をピリジン：ジクロロメタン（８０００ｍｌ：８０００ｍｌ）に溶解する。ジメチルアミノピリジン（９１．７９ｇ、０．７５モル）を加え、反応混合物を１０℃（内部温度）に冷やす。無水酢酸（９０００ｍｌ）を滴下して加える。添加を完了すると、反応混合物を４５℃にて１時間撹拌し、次いで室温にて一晩撹拌する。混合物を減圧下で濃縮する。酢酸エチル（２０Ｌ）および水（１０Ｌ）を残渣に加える。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（２×１０Ｌ）で抽出する。有機層を合わせ、飽和クエン酸（５Ｋｇ）水溶液で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をエタノールから結晶化して標題化合物（３２０５．５ｇ、９２．１１％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４６４．２（Ｍ＋１）。
【００２６】
方法Ｃ
スキームＩ、工程Ａ：Ｄ−グルコース（５１７．３０ミリモル、９３．２０ｇ）を水（６６ｍＬ）で濡らし、次いでエタノール（３９４ｍＬ）中の４−メチルインドリン（６５．６２ｇ、４９２．６７ミリモル）を加える。混合物を窒素でパージし、窒素雰囲気下で一晩加熱還流する。次いで室温に冷やし、減圧下で濃縮する。得られた残渣に、ジクロロメタン（３９４ｍＬ）、トリエチルアミン（２．８２モル、３９３．７２ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン（２４．６３ミリモル、３．０１ｇ）を加える。混合物を氷浴中で冷やし、次いで無水酢酸（３．９４モル、３７２．５７ｍＬ）を３０分にわたって滴下して加える。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（９８４ｍＬ）で希釈し、混合物を水（２００ｍＬ）中のクエン酸（飽和水溶液、５０ｍＬ）で洗浄する。層を分離し、水相を酢酸エチル（６００ｍＬ、次いで３００ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、ブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮する。エタノール（６５６ｍＬ）を加え、５０℃にて１０分間混合する。混合物を室温に冷やし、次いで氷／水中で冷やす。得られた混合物を濾過し、減圧下で乾燥させて標題化合物（１１２．２ｇ、４９．１４％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４６４．２（Ｍ＋１）。
【００２７】
調製例３
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドール−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化６】
2016535032.tif 000008
方法Ａ
スキームＩ、工程Ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドリン−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（６０．４ミリモル）を５００ｍＬのフラスコに入れる。１，４ジオキサン（２５０ｍＬ）を加え、溶液を１０℃に冷やす。ＤＤＱ（６３．４ミリモル）を一度に加える。混合物を室温に加温し、２時間撹拌する。反応混合物を濾過し、固体を１，４−ジオキサン（３×５０ｍＬ）で洗浄する。濾液を減圧下で濃縮し、１０％のＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（３００ｍＬ）ですすいでいるシリカゲル（２００ｇ）のプラグで濾過する。飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×２００ｍＬ）、次いで水（２００ｍＬ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（２７．５ｇ、９８．６％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４６２．５（Ｍ＋１）。
【００２８】
方法Ｂ
スキームＩ、工程Ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドリン−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（４２００ｇ、９．０８モル）を２０Ｌのフラスコに入れる。１，４ジオキサン（４２０００ｍＬ）を加え、溶液を１０℃に冷やす。温度を１０℃に維持して、ＤＤＱ（２０５７ｇ、９．０８モル）を５つの等しい部分で加える。添加が完了した後、混合物を室温に加温し、２時間撹拌する。反応混合物を濾過し、固体を１，４−ジオキサン（３回）で洗浄する。濾液を減圧下で濃縮し、ヘキサン中の０％〜２０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。純粋な画分を、２５００ｇの［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドリン−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテートから開始して同様に調製した別個のロットの物質と合わせ、減圧下で濃縮する。残渣を酢酸エチル（５０Ｌ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×２０Ｌ）、次いで水（１×１０Ｌ）で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、エタノール（１０Ｌ）から結晶化させて標題化合物（４．６３２Ｋｇ、６９％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４６２．５（Ｍ＋１）。
【００２９】
方法Ｃ
スキームＩ、工程Ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドリン−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１１２．２ｇ、２４２．０８ミリモル）を、室温にて１，４−ジオキサン（１．６８Ｌ）に溶解する。混合物を氷／水浴に冷やし、次いで反応混合物の温度を１５℃以下に維持して、４，５−ジクロロ−３，６−ジオキソ−シクロヘキサ−１，４−ジエン−１，２−ジカルボニトリル（２４４．５０ミリモル、５５．５０ｇ）を少しずつ加える。添加が完了すると、混合物を５分間撹拌し、次いで氷浴から取り除き、さらに５分間撹拌する。混合物を濾過し、固体を１，４−ジオキサン（５６１．００ｍＬ）で洗浄する。濾液を減圧下で濃縮し、次いでエタノール（５６１．００ｍＬ）を残渣に加え、４０℃にて２０分間撹拌する。混合物を氷水中で１５分間冷やし、濾過し、冷エタノール（１００ｍＬ）で得た固体を洗浄する。固体を減圧下で乾燥させて標題化合物（８２．５ｇ、７３．９％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４６２．０（Ｍ＋１）。
【００３０】
調製例４
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−（４−ヒドロキシベンゾイル）−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化７】
2016535032.tif 000009
スキームＩ、工程Ｃ：窒素でパージした０．５Ｌの撹拌丸底に、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドール−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（２９．５ミリモル）、ジクロロメタン（１００ｍＬ）および４−ブロモベンゾイルクロリド（３０．９ミリモル）をこの順で入れる。混合物を氷浴中で冷やし、アルミニウムトリクロリド（８８．４ミリモル）を加える。冷却しながら、１．５時間撹拌した後、反応混合物を氷上に注ぎ、水（１００ｍＬ）およびクロロホルム（１００ｍＬ）で希釈する。有機相を分離し、水相をクロロホルム（１００ｍＬ）で洗浄する。有機相を合わせ、濃炭酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。５〜２５％のＥｔＯＡｃ／クロロホルムで溶出するシリカゲル（３３０ｇ）上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（７．９ｇ、４６．０９％収率）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５８２．４（Ｍ＋１）、５８０．４（Ｍ−Ｈ）。
【００３１】
調製例５
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［４−（３−ベンジルオキシプロポキシ）ベンゾイル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化８】
2016535032.tif 000010
スキームＩ、工程Ｄ：窒素でパージした０．５Ｌの撹拌丸底に、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−（４−ヒドロキシベンゾイル）−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１３．５８ミリモル）、アセトニトリル（２５０ｍＬ）および炭酸カリウム（６７．９２ミリモル）をこの順で入れる。この撹拌溶液に、室温にて３−ブロモプロポキシメチルベンゼン（２７．２ミリモル）を加え、窒素下で６０℃にて１６時間加熱する。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、濾過する。濾液を濃縮し、２〜４０％のＥｔＯＡｃ／クロロホルムで溶出するフラッシュクロマトグラフィー（３３０ｇシリカゲル）により精製する。生成物を含有する画分を濃縮して標題化合物（９．０ｇ、９０．７９％）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：７３０．４（Ｍ＋Ｈ）。
【００３２】
調製例６
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［３−［［４−（３−ベンジルオキシプロポキシ）フェニル］−ヒドロキシ−メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラン−３，４，５−トリオール
【化９】
2016535032.tif 000011
スキームＩ、工程Ｅ：窒素でパージした０．５Ｌの撹拌丸底フラスコに、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［４−（３−ベンジルオキシプロポキシ）ベンゾイル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１２．３３ミリモル）、ＴＨＦ（５０ｍＬ）およびエタノール（１００ｍＬ）を入れる。水素化ホウ素ナトリウム（３７．０ミリモル）を加え、室温にて６時間撹拌する。５ＮのＨＣｌを滴下して加えることによって酸性にし、次いで水（２００ｍＬ）およびジクロロメタン（２００ｍＬ）で希釈する。有機相を分離し、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、次の工程においてさらに精製せずに使用するのに十分な純度でジアステレオマーの混合物として標題化合物（７．２ｇ粗製物）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５４６．４（Ｍ＋１−１８）。
【００３３】
調製例７
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−ベンジルオキシプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化１０】
2016535032.tif 000012
スキームＩ、工程Ｆ：窒素下で０．５Ｌの丸底フラスコに、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［３−［［４−（３−ベンジルオキシプロポキシ）フェニル］−ヒドロキシ−メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラン−３，４，５−トリオール（７．２ｇ、粗製物）、次いでアセトニトリル（５０ｍＬ）、次いでジクロロメタン（１００ｍＬ）を入れる。混合物を０℃に冷やす。トリエチルシラン（６３．８７ミリモル）を加え、続いて三フッ化ホウ素エーテラート（５１．１０ミリモル）を滴下して加える。添加が完了すると、反応混合物を５分間、氷浴中で撹拌し、次いで炭酸水素ナトリウム溶液（２０ｍＬ）を滴下して加えることによってクエンチする。水（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈する。層を分離し、有機相をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮する。ピリジン（５０ｍＬ）、ジクロロメタン（５０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．４１ミリモル）を加える。氷浴中で冷やし、無水酢酸（１２７．７４ミリモル）を加える。室温に加温し、１６時間撹拌する。減圧下で濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を加える。クエン酸溶液（２００ｍＬ）、続いて水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。５〜５〜２０％のＥｔＯＡｃ／ジクロロメタンで溶出するフラッシュクロマトグラフィー（３３０ｇのシリカゲル）により精製して、標題化合物（７．５ｇ、８２．０３％）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：７１６．３（Ｍ＋１）。
【化１１】
2016535032.tif 000013
【００３４】
調製例８
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−ヒドロキシプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化１２】
2016535032.tif 000014
スキームＩＩ、工程Ａ：０．５Ｌの丸底フラスコに、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−ベンジルオキシプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１０．３４ミリモル）および酢酸エチル（８０ｍＬ）を加える。この溶液に、酢酸エチル（２０ｍＬ）で予め湿潤した５％Ｐｄ／Ｃを加える。撹拌しながら、混合物を水素（３×）で真空パージし、次いで水素下で１６時間撹拌する。珪藻土で濾過し、酢酸エチル（１００ｍＬ）ですすぐ。濾液を減圧下で濃縮して、次の工程に使用するのに十分な純度で標題化合物（６．５ｇ）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２６．４（Ｍ＋１）。
【００３５】
調製例９
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［４−メチル−３−［［４−（３−メチルスルホニルオキシプロポキシ）フェニル］メチル］インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化１３】
2016535032.tif 000015
スキームＩＩ、工程Ｂ：０．５Ｌの丸底フラスコに、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−ヒドロキシプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（６．５ｇ、粗製物）、ジクロロメタン（１００ｍＬ）およびトリエチルアミン（２５．９７ミリモル）を加える。氷浴中に冷やし、メタンスルホニルクロリド（１２．４７ミリモル）を１０分にわたって滴下して加える。室温に加温し、１時間撹拌する。ジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、次の工程に使用するのに十分な純度で標題化合物（７．２ｇ）を得る：質量スペクトル（ｍ／ｚ）：７０４．４（Ｍ＋１）。
【００３６】
調製例１０ａ
１−［２−（４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素
【化１４】
2016535032.tif 000016
丸底フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−カルボキシレート塩酸塩（１．３８ミリモル）、２−（イソブチルカルバモイルアミノ）酢酸（１．１５ミリモル）、ジメチルホルムアミド（３．８ｍＬ）、トリエチルアミン（１．７２ミリモル）およびＨＡＴＵ（１．２６ミリモル）を加える。室温にて１６時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）および酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈する。有機相を濃塩化アンモニウム（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。酢酸エチル中の０〜１０％のメタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのシリカゲルカートリッジ）により中間体を精製して、ｔｅｒｔ−ブチル９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレート（０．３８ｇ、０．９３ミリモル）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００３７】
１，４−ジオキサン（１．７５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレート（０．３８ｇ、０．９３ミリモル）の溶液に、１，４−ジオキサン（８．７７ミリモル）中の４ＭのＨＣｌを加える。反応物を室温にて５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。残渣をメタノールに溶解し、ＳＣＸ（イオン交換）カラムに負荷することによって精製する。負荷したカラムをメタノール（３×２５ｍＬ）ですすぎ、次いでカラムをメタノール中の２Ｎのアンモニアでフラッシュする。アンモニア洗浄液を合わせ、濃縮して標題化合物（０．２５ｇ、０．８１ミリモル）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００３８】
調製例１０ｂ
１−［２−（４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素の代替の調製
ベンジル２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセテートの調製
【化１５】
2016535032.tif 000017
３−メチルブタン酸（１０６．３６ｇ）、トルエン（８００ｍｌ）およびトリエチルアミン（１２６．４６ｇ）を３つ口フラスコ（Ｒ１）に入れる。Ｒ１を９０℃に加熱する。トルエン（４００ｍｌ）中のＤＰＰＡ（２８９．３ｇ）の溶液をゆっくり加える（注意：Ｎ２が放出する）。Ｒ１を９０℃にて３０〜６０分間撹拌し、次いで２０〜３０℃に冷やす。別個のフラスコ（Ｒ２）に、ベンジル２−アミノアセテート塩酸塩（２００ｇ）、トリエチルアミン（１５０．５４ｇ）およびトルエン（１０００ｍｌ）を入れ、２０〜３０℃にて１〜２時間撹拌する。Ｒ１混合物を、２０〜３０℃にて添加漏斗を介してＲ２にゆっくり滴下して加え、１〜２時間撹拌する。反応混合物を激しく撹拌しながら水（２０００ｍｌ）にゆっくり加える。有機相を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１０００ｍｌ）で抽出する。有機層を合わせ、１Ｎの塩酸（１０００ｍｌ）、次いで７％のＮａＨＣＯ３水溶液（１０００ｍｌ）、次いで水（１０００ｍｌ）、次いで１５％のブライン（１０００ｍｌ）で洗浄する。減圧下で濃縮する。残渣をヘプタン（１０００ｍｌ）でスラリーにし、次いで固体を濾過する。４０℃以下で濾過ケーキを減圧下で乾燥させて、ベンジル２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセテート（２１８ｇ、９８．１％アッセイ、８１．５％収率）を得る。
【００３９】
２−（イソブチルカルバモイルアミノ）酢酸の調製
【化１６】
2016535032.tif 000018
ベンジル２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセテート（２００ｇ、９８．１％アッセイ）、乾燥Ｐｄ／Ｃ（２０ｇ、１０％ｗ／ｗ）およびイソプロピルアルコール（２０００ｍｌ）をオートクレーブに入れる。真空下で脱気し、水素で３回パージする。５０〜６０ｐｓｉのＨ２下で６０℃にて４時間撹拌する。混合物を２０〜３０℃に冷やし、珪藻土で濾過し、濾液を４５〜５０℃にて減圧下で１〜２体積に濃縮する。アセトニトリル（１０００ｍｌ）を加え、４５〜５０℃にて減圧下で２〜３体積に濃縮する。混合物を５〜１０℃に冷やし、濾過する。ケーキを４５〜５０℃にて減圧下で乾燥させて２−（イソブチルカルバモイルアミノ）酢酸（１１２ｇ、９２．５％アッセイ、８２．５％収率）を得る。
【００４０】
最終標題化合物の調製
丸底フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−カルボキシレート塩酸塩（１．３８ミリモル）、２−（イソブチルカルバモイルアミノ）酢酸（１．１５ミリモル）、ジメチルホルムアミド（３．８ｍＬ）、トリエチルアミン（１．７２ミリモル）およびＨＡＴＵ（１．２６ミリモル）を加える。室温にて１６時間撹拌し、次いで水（５０ｍＬ）および酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈する。有機相を濃塩化アンモニウム（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。酢酸エチル中の０〜１０％のメタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのシリカゲルカートリッジ）により中間体を精製して、ｔｅｒｔ−ブチル９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレート（０．３８ｇ、０．９３ミリモル）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００４１】
１，４−ジオキサン（１．７５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレート（０．３８ｇ、０．９３ミリモル）の溶液に、１，４−ジオキサン（８．７７ミリモル）中の４ＭのＨＣｌを加える。反応物を室温にて５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。残渣をメタノールに溶解し、ＳＣＸ（イオン交換）カラムに負荷することによって精製する。負荷したカラムをメタノール（３×２５ｍＬ）ですすぎ、次いでカラムをメタノール中の２Ｎのアンモニアでフラッシュする。アンモニア洗浄液を合わせ、濃縮して、最終標題化合物、１−［２−（４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素（０．２５ｇ、０．８１ミリモル）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００４２】
調製例１０ｃ
１−［２−（４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素の代替の調製
Ｏ４−ベンジルＯ９−ｔｅｒｔ−ブチル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４，９−ジカルボキシレートの調製
【化１７】
2016535032.tif 000019
２０Ｌの温度制御反応器に、ｔｅｒｔ−ブチル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−カルボキシレート塩酸塩（２．０６モル、６００．００ｇ）、続いてジクロロメタン（６．００Ｌ）を入れ、次いでトリエチルアミン（４．３３モル、６０４ｍＬ）を加える。反応器のジャケットを０℃に設定する。反応混合物の温度が５℃に到達したとき、内部温度を２０℃以下に維持して、約２０分にわたってクロロギ酸ベンジル（２．１０モル、３１１ｍＬ）を加える。添加が完了したとき、ジャケットを室温に加温し、混合物を一晩撹拌する。反応混合物を水（４Ｌ）に注ぎ、混合物を分離する。有機相を減圧下で濃縮して標題化合物（８３８ｇ、次の反応での計算の目的のために９５．６５％純度および１００％収率と推定した）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４１１．２（Ｍ＋２３）。
【００４３】
ベンジル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレート塩酸塩の調製
【化１８】
2016535032.tif 000020
０℃に設定したジャケットを備えた２０Ｌの温度制御反応器に、１，４−ジオキサン（１９．６３ミリモル、１．６８Ｌ）中のＯ４−ベンジルＯ９−ｔｅｒｔ−ブチル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４，９−ジカルボキシレート（２．０６モル、８３８．００ｇ、９５．６５％純度）の溶液を加える。溶液の温度が５℃になると、温度が２０℃以上に上昇しないような速度で塩化水素（１，４−ジオキサン中に４Ｍ、１０．３２モル、２．５８Ｌ）を加える。添加が完了すると、溶液を室温に加温し、一晩撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して厚いスラリーを得る。ＭＴＢＥ（３．３５Ｌ）を加え、４０℃にて３０分間混合物を撹拌する。混合物を室温に冷やし、沈殿物を濾過する。沈殿物をＭＴＢＥ（８３８ｍＬ）で洗浄する。沈殿物をフィルター上で乾燥させ、次いでさらに乾燥させるために真空オーブンに移して標題化合物（６３８ｇ、９５％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２８９［Ｍ（遊離塩基）＋１］。
【００４４】
ベンジル９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレートの調製
【化１９】
2016535032.tif 000021
ジクロロメタン（１．１６Ｌ）中の２−（イソブチルカルバモイルアミノ）酢酸（６６７．０５ミリモル、１１６．２０ｇ）に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（７００．４０ミリモル、１１３．５７ｇ）を少しずつ加える。混合物を室温にて１時間撹拌する。この混合物Ａを標識する。別個の容器に、ベンジル４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−カルボキシレート塩酸塩（７００．４０ミリモル、４１３．６８ｇ）、ジクロロメタン（５８１ｍＬ）およびトリエチルアミン（１．３３モル、１８６ｍＬ）を加える。混合物を撹拌する。この混合物Ｂを標識する。混合物Ａを混合物Ｂに２分にわたって注ぐ。得られた混合物を室温にて撹拌する。３時間後、水（１０００ｍＬ）を加える。有機相を分離し、減圧下で濃縮する。酢酸エチル（５８１．００ｍＬ）を加え、混合物を４０℃にて２０分間撹拌し、次いで室温に冷やし、次いで氷中で２０分間冷やす。沈殿物を濾過し、真空オーブン中でさらに乾燥させて、標題化合物（１３７．１ｇ、４６．２３％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）４４５．２（Ｍ＋１）。濾液を静置させた後、沈殿物が形成する。この沈殿物を濾過し、真空オーブン中でさらに乾燥させて標題化合物（９．３０ｇ、３．１４％収率）を得る。
【００４５】
最終標題化合物の調製
ベンジル９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−２−カルボキシレート（２３９．７８ミリモル、１０６．６０ｇ）を、エタノール（８５２．８０ｍＬ）およびシクロヘキセン（１．２０モル、１２１．９０ｍＬ）に懸濁し、５％パラジウム炭（２４ｇ、５５．４％水分含量）を加える。混合物を加熱還流し、４５分間撹拌する。混合物を室温に冷やし、珪藻土のパッドで濾過し、固体をエタノールで洗浄し、減圧下で濃縮して、最終標題化合物、１−［２−（４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素（７９．２ｇ、９４％純度、１００％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３１１．２（Ｍ＋１）。
【００４６】
実施例１ａ
１−イソブチル−３−［２−［４−［３−［４−［［４−メチル−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］インドール−３−イル］メチル］フェノキシ］プロピル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル］−２−オキソ−エチル］尿素
【化２０】
2016535032.tif 000022
スキームＩＩ、工程Ｃ：０．２５Ｌの丸底フラスコに、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［４−メチル−３−［［４−（３−メチルスルホニルオキシプロポキシ）フェニル］メチル］インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（７．２ｇ、粗製物）、１−［２−（４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素（１２．２８ミリモル）、アセトニトリル（１００ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（４０．９２ミリモル）を加える。８０℃にて１６時間加熱し、次いで減圧下で濃縮する。メタノール（５０ｍＬ）およびナトリウムメトキシド（２０．４６ミリモル、ＭｅＯＨ中の３０％溶液）を加え、室温にて１時間撹拌する。小片のドライアイスを加えることによってクエンチする。減圧下で濃縮する。アセトニトリル（０．１％ギ酸）中の５〜８０％の水（０．１％ギ酸）で３回に分けて溶出する逆相フラッシュクロマトグラフィー（４００ｇのＣ１８カートリッジ）により精製する。減圧下で濃縮して、少しの不純物を含有するギ酸塩として標題化合物を得る。塩をメタノール（２０ｍＬ）中の７Ｎのアンモニアに溶解し、次いで濃縮して遊離塩基を形成する。メタノール／ジクロロメタン中の５％の７Ｎのアンモニアで溶出するフラッシュクロマトグラフィー（３３０ｇのシリカゲルカートリッジ）によって遊離塩基を精製する。生成物画分を減圧下で濃縮して標題化合物（１．７５ｇ、２２．８１％）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：７４６．６（Ｍ＋Ｈ）。Ｈ１  ＮＭＲ（４００．３１ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．２８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｓ，２Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８７−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５７−３．３８（ｍ，５Ｈ），３．３１（ｂｍ，２Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４６−２．１３（ｍ，８Ｈ），１．８８（ｐｅｎｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．６８（ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６１−１．２８（ｍ，８Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．８，６Ｈ）。
【化２１】
2016535032.tif 000023
【００４７】
調製例１１
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−（４−ベンジルオキシベンゾイル）−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化２２】
2016535032.tif 000024
スキームＩＩＩ、工程Ａ：２０Ｌの温度制御反応器に、ジクロロメタン（７．００Ｌ）、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（４−メチルインドール−１−イル）テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１．５２モル、７００．００ｇ）および４−ベンジルオキシベンゾイルクロリド（１．６７モル、４１１．６３ｇ）を入れる。反応器ジャケットを−３０℃に設定し、反応器の内容物を冷やし、内部温度を−５から−１０℃に維持して、四塩化スズ（１．９７モル、５１３．７４ｇ）を３０分にわたって加える。添加が完了すると、混合物を約−９℃にて２０分間撹拌する。冷反応混合物を２０Ｌの粉砕した氷に注ぐ。有機層を分離し、水相をジクロロメタンで抽出する。有機抽出物を合わせ、減圧下で約２Ｌに濃縮する。７ＬのＭＴＢＥを加え、塩酸（１Ｍ、２×８Ｌ）、次いで水（８Ｌ）、次いで炭酸水素ナトリウム（飽和水溶液）、次いでブラインで洗浄する。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、約１７％ｗ／ｗのＭＴＢＥ（１３７７ｇ、次の反応での計算の目的のために７４％純度および１００％収率と推定した）を含有する標題化合物を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６７２．２（Ｍ＋１）。
【００４８】
調製例１２
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［（４−ベンジルオキシフェニル）−ヒドロキシ−メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化２３】
2016535032.tif 000025
スキームＩＩＩ、工程Ｂ：温度制御撹拌反応器に、エタノール（４．９６Ｌ）中の塩化セリウム（ＩＩＩ）七水和物（４．５５モル、１．１２ｋｇ）を入れ、撹拌して、溶液を得る。［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−（４−ベンジルオキシベンゾイル）−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１．５２モル、１．３８ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（７．５７Ｌ）を加える。混合物を＋２℃に冷やし、添加の間、内部温度を０から＋５℃に維持して、水素化ホウ素ナトリウム（４．５５モル、１７２．１８ｇ）を３時間にわたって少しずつ加える。添加が完了すると、混合物を５℃にて１時間撹拌する。さらなる水素化ホウ素ナトリウム（６８７．２４ミリモル、２６．００ｇ）を加え、混合物を３０分間撹拌する。さらなる水素化ホウ素ナトリウム（０．４５当量、６８７．２４ミリモル、２６．００ｇ）を加え、混合物を一晩撹拌する。混合物をＭＴＢＥ（５Ｌ）および水（１０Ｌ）に注ぐ。混合物がｐＨ紙によりわずかに酸性になるまで撹拌しながら塩酸（２Ｎ）をゆっくり加える。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、次の工程に使用するための許容可能な純度で標題化合物（１５４７ｇ、次の反応での計算の目的のために６６％純度および１００％収率と推定した）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６５６．４（Ｍ＋１−１８）。
【００４９】
調製例１３
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［（４−ベンジルオキシフェニル）メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化２４】
2016535032.tif 000026
スキームＩＩＩ、工程Ｃ：内部温度が−５℃になるまで、ブライン／氷浴中のアセトニトリル（６．１９Ｌ）およびジクロロメタン（６．１９Ｌ）中の［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［（４−ベンジルオキシフェニル）−ヒドロキシ−メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１．５２モル、１．５５ｋｇ）の混合物を冷やし、次いでトリエチルシラン（３．７９モル、６０７ｍＬ）を２分にわたって加える。内部温度を＋５℃以下に維持して、三フッ化ホウ素エーテラート（３．７９モル、４７９ｍＬ）を滴下して加える。混合物を氷浴中で３０分間撹拌する。ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、５Ｌ）および水（４Ｌ）の混合物を注意深く加える。有機相を分離し、水、次いでブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物および１つ以上のアセチル基が損失している化合物の混合物を得る。残渣をジクロロメタン（１．８６Ｌ）に溶解し、無水酢酸（７．５８モル、７１６ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン（７５．７８ミリモル、９．２６ｇ）を加える。混合物を４０℃に加温し、溶解を促すように穏やかにかき混ぜ、次いで混合物を室温にて１時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＭＴＢＥ（６Ｌ）中で一晩スラリーにする。濾過により固体を回収し、オーブン中で減圧下で６０℃にて乾燥させて標題化合物（６９２．８ｇ、７０％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６５８．３（Ｍ＋１）および６８０．２（Ｍ＋２３）。
【００５０】
調製例１４
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化２５】
2016535032.tif 000027
スキームＩＩＩ、工程Ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［（４−ベンジルオキシフェニル）メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１．００当量、１．０５モル、６９２．８０ｇ）、メタノール（８５．５９モル、３．４６Ｌ、２．７４ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（４２．５７モル、３．４６Ｌ、３．０７ｋｇ）の混合物に、ギ酸アンモニウム（５．２７モル、３３２．１０ｇ）を加える。反応容器を窒素でパージし、イソプロピルアルコール中のスラリーとして５％パラジウム炭（６９．３０ｇ、Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙタイプ８７Ｌ、５７．８％水分含有量）を加える。混合物を３８〜４２℃にて１５分間加熱する（穏やかは泡立ちが観察される）。加熱浴を除去し、冷却しながら反応混合物を１５分間撹拌する。混合物を珪藻土で濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣を酢酸エチル（７．５Ｌ）と水（１Ｌ）との間で分配する。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させる。濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（５９４ｇ、９９％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５６８．２（Ｍ＋１）および５９０．２（Ｍ＋２３）。
【００５１】
調製例１５
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−クロロプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化２６】
2016535032.tif 000028
スキームＩＩＩ、工程Ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１５０．６４ミリモル、８５．５０ｇ）およびアセトニトリル（８５５．００ｍＬ）の混合物に、１−ブロモ−３−クロロ−プロパン（１８０．７６ミリモル、１７．８８ｍＬ）および炭酸カリウム（３０１．２７ミリモル、４１．６４ｇ）を加える。混合物を窒素下に置き、混合物を２日間穏やかに加熱還流する。さらに１−ブロモ−３−クロロ−プロパン（４５．１９ミリモル、４．４７ｍＬ）を加え、混合物を一晩加熱し続ける。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルと水の間で分配する。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、次の工程のために十分な純度で標題化合物を得る（１２４．４ｇ、次の反応での計算の目的のために７８％純度および１００％収率と推定した）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６４４．２／６４６．２（Ｍ＋１）。
【００５２】
調製例１６
［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−［３−［９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−イル］プロポキシ］フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート
【化２７】
2016535032.tif 000029
工程ＩＩＩ、工程Ｆ：アセトニトリル（８２９ｍＬ）中の［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−クロロプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（１４３．３８ミリモル、１１８．４０ｇ）の撹拌溶液に、１−［２−（３，８−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−イル）−２−オキソ−エチル］−３−イソブチル−尿素（１４３．３８ミリモル、４７．３５ｇ）、炭酸カリウム（２８６．７５ミリモル、３９．６３ｇ）およびヨウ化カリウム（１４３．３８ミリモル、２３．８０ｇ）を加える。混合物を一晩窒素下で加熱還流する。反応混合物を室温に冷やし、無水酢酸（１．４３モル、１３５．５３ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン（１４．３４ミリモル、１．７５ｇ）を加える。混合物を１時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を水とＥｔＯＡｃの間で分配する。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯＳ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−（３−クロロプロポキシ）フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（６．２ミリモル）から開始して同様に調製した別のロットと合わせる。９９：１のＥｔＯＡｃ：トリエチルアミン（１ｃｖ）、ＥｔＯＡｃ（３ｃｖ’ｓ）および１９０：１０：１のＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ：トリエチルアミン（５ｃｖ’ｓ）で溶出するシリカゲル（１．５ｋｇ）上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（６８．２ｇ、４９％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：９１８．６（Ｍ＋１）。
【００５３】
実施例１ｂ
１−イソブチル−３−［２−［４−［３−［４−［［４−メチル−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］インドール−３−イル］メチル］フェノキシ］プロピル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル］−２−オキソ−エチル］尿素の代替の調製
【化２８】
2016535032.tif 000030
スキームＩＩＩ、工程Ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−［３−［［４−［３−［９−［２−（イソブチルカルバモイルアミノ）アセチル］−４，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−４−イル］プロポキシ］フェニル］メチル］−４−メチル−インドール−１−イル］テトラヒドロピラン−２−イル］メチルアセテート（７４．２８ミリモル、６８．２０ｇ）およびメタノール（３４１．００ｍＬ）の混合物を氷浴中で冷やす。ナトリウムメトキシド（１１１．４３ミリモル、６．０２ｇ）を加える。混合物を１０分間撹拌する。混合物を水（３．５Ｌ）に注ぎ、次いで混合物を濾過する。固体を水で洗浄し、シンター上で乾燥させ、真空オーブン中で６０℃にてさらに乾燥させて標題化合物（４９．８ｇ、８９％収率）を得る、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：７５０．６（Ｍ＋１）。
【００５４】
ナトリウム依存性グルコーストランスポーター１（ＳＧＬＴ１）およびＳＧＬＴ２アッセイ
ヒトＳＧＬＴ１（ｓｌｃ５ａ１、ＮＭ＿０００３４３）およびマウスＳＧＬＴ１（ｓｌｃ５ａ１、ＮＭ＿０１９８１０．４）をコードするｃＤＮＡをそれぞれ、ＯｐｅｎｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓおよびＯｐｅｎｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから購入する。ｃＤＮＡを哺乳動物発現のためにｐｃＤＮＡ３．１＋内にクローニングし、標準的な哺乳動物トランスフェクション手順を使用して、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）−Ｋ１細胞内に安定的にトランスフェクトする。各々の過剰発現細胞株のＳＧＬＴ発現サブクローンは、ネオマイシン（ジェネティシン、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）への耐性、および１４Ｃ−α−メチル−Ｄ−グルコピラノシド（１４Ｃ−ＡＭＧ）取り込みアッセイにおける活性に基づいて選択される（以下参照）。安定的なＳＧＬＴ発現細胞は標準的な細胞培養技法を使用して維持する。
【００５５】
ＳＧＬＴ活性は、上記の細胞株におけるナトリウム依存性１４Ｃ−ＡＭＧ取り込みとして、以下に記述されるように測定する。３０，０００細胞を含有する１００ｍＬの培養培地を、９６ウェルのＢｉｏＣｏａｔポリ−Ｄ−リジンプレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ）の各々のウェルへ播種し、３７℃で一晩培養する。培養培地を吸引し、細胞を、２００μＬの反応緩衝液（１４０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２および１４ｍＭのＮ−２−ヒドロエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ヘペス）、ｐＨ７．５）により２回洗浄する。過剰の緩衝液をペーパータオルの上へ打ち出す。３５ｍＬの反応緩衝液を各々のウェルへ添加する。変動濃度の試験化合物を含有するか、または対照として化合物なしの、５μＬの反応緩衝液中の１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、各々のウェルの中に分注する。反応は、反応緩衝液中へ１０μＬの１４Ｃ−ＡＭＧを添加して４μＭの最終的な濃度にすることによって開始される。プレートを３７℃で１２５分間インキュベートする。反応は、反応緩衝液を吸引し、次いで２００μＬの氷冷反応緩衝液により３回洗浄することによって終結させる。手動式吸引を適用して反応緩衝液の完全な除去を確実にする。１０μＬの０．１ＮのＮａＯＨを各々のウェルへ添加し、次いで１００μＬのＳｕｐｅｒｍｉｘシンチレーションカクテル（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を添加する。混合後に、プレート中のシンチレーションシグナルをＭｉｃｒｏＢｅｔａ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）中でカウントする。１０用量反応曲線を、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を使用して、実験に基づいた４パラメーターのモデルにフィッティングさせて、最大半量阻害（ＩＣ５０）での阻害剤濃度を決定する。
【００５６】
本明細書における実施例１の化合物は本質的に上述のように試験され、ヒトＳＧＬＴ１についてのＩＣ５０は３５．２±１４．１ｎＭ（ｎ＝５）およびマウスＳＧＬＴ１についてのＩＣ５０は１４．９±１０．４ｎＭ（ｎ＝５）であることが示される。これらのデータは、実施例１の化合物がインビトロでヒトおよびマウスのＳＧＬＴ１を阻害することを実証する。
【００５７】
経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）におけるグルコース低下効果
試験化合物は、１％ヒドロキシエチルセルロース、０．２５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）８０および０．０５％消泡剤のビヒクルを前計量した試験化合物へ添加して、１ｍｇ／ｍｌの溶液を作製することによって製剤化される。混合物をおよそ１分間プローブ超音波処理する。撹拌子を添加し、もたらされた懸濁物は投薬を通して連続的に撹拌する。
【００５８】
単独飼育されたＣ５７Ｂｌ／６マウスの２つの別個の群を使用して、ＯＧＴＴの間のグルコース低下を決定する。マウスの第１のセットには化合物投与の１８時間後にＯＧＴＴを与え、第２には化合物投与の８時間後に与える。動物の第１のセットを計量し、体重を使用して、２６〜３０ｇの作業範囲内で研究群（ｎ＝５）を決定する。群分け後に、１０ｍｌ／ｋｇの試験化合物調製物またはビヒクルを、マウスに、３０秒間隔で強制経口投与する。次いで両セットのマウス、マウスの１８および８時間のＯＧＴＴを次いで、餌へ接近させず、試験日前の夕方近くから一晩絶食させる。翌朝に、８時間のＯＧＴＴマウスを計量し、グルコースのために（尾部の小さな切れ目を介して）採血する。８０〜１００ｍｇ／ｄｌの作業範囲内の絶食グルコース値を使用して研究群（ｎ＝５）を決定する。群分け後に、３０秒間隔で化合物をマウスに強制経口投与する。次いでこれらのマウスに、化合物投与の８時間後、ＯＧＴＴを与える。
【００５９】
それぞれの化合物処理が各々開始された８時間および１８時間後に、ベースラインの血液サンプルをグルコースの測定のために採取する（第１の動物から）。次いで動物に、３ｇ／ｋｇの経口用量で５０％デキストロース（Ｈｏｓｐｉｒａ（登録商標））を直ちに与える。グルコースについての血液サンプルを、正確に３０秒間隔で尾静脈を経由して採取し、その結果、血液はデキストロース投薬後に２０、４０および６０分で各々の動物において収集される。
【表１】
2016535032.tif 000031
【００６０】
表１に示されるように、投与の８時間または１８時間後に５０％デキストロース（Ｈｏｓｐｉｒａ（登録商標））の経口ボーラスを正常血糖のＣ５７Ｂｌ／６マウスへ与えた場合、実施例１の化合物はグルコース変動幅の減少を達成する。実施例１は、両方のＯＧＴＴの間のベースライン調整グルコース曲線下面積（ＡＵＣ）の減少も実証する。加えて、実施例１は、ＯＧＴＴの間の血漿グルコースの平均最高濃度（Ｃｍａｘ）を減少させる一方で、グルコースが最高濃度に到達するのにかかる平均時間（Ｔｍａｘ）を増加させる。
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月27日(2016.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
2016535032.tif 000035
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
【化２】
2016535032.tif 000036
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
療法に使用するための、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項４】
糖尿病の治療に使用するための、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項５】
前記糖尿病が１型糖尿病である、請求項４に記載の化合物または塩。
【請求項６】
前記糖尿病が２型糖尿病である、請求項４に記載の化合物または塩。
【請求項７】
請求項１または請求項２に記載の化合物または塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む、医薬組成物。 
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
表１に示されるように、投与の８時間または１８時間後に５０％デキストロース（Ｈｏｓｐｉｒａ（登録商標））の経口ボーラスを正常血糖のＣ５７Ｂｌ／６マウスへ与えた場合、実施例１の化合物はグルコース変動幅の減少を達成する。実施例１は、両方のＯＧＴＴの間のベースライン調整グルコース曲線下面積（ＡＵＣ）の減少も実証する。加えて、実施例１は、ＯＧＴＴの間の血漿グルコースの平均最高濃度（Ｃｍａｘ）を減少させる一方で、グルコースが最高濃度に到達するのにかかる平均時間（Ｔｍａｘ）を増加させる。
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
以下の式の化合物：
【化２９】
2016535032.tif 000037
またはその薬学的に許容される塩。
［２］
【化３０】
2016535032.tif 000038
である、［１］に記載の化合物。
［３］
患者における糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、［１］または［２］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法。
［４］
患者における１型糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、［１］または［２］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法。
［５］
患者における２型糖尿病を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、［１］または［２］に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、方法。
［６］
療法に使用するための、［１］または［２］に記載の化合物または塩。
［７］
糖尿病の治療に使用するための、［１］または［２］に記載の化合物または塩。
［８］
前記糖尿病が１型糖尿病である、［７］に記載の化合物または塩。
［９］
前記糖尿病が２型糖尿病である、［７］に記載の化合物または塩。
［１０］
［１］または［２］に記載の化合物または塩を、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【国際調査報告】
2016535032.tif 000039
2016535032.tif 000040