(57)【要約】本発明は、レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含む眼球乾燥症候群の予防又は治療のための経口用薬剤学的組成物に関するものであり、前記化合物は、経口投与を通して眼球乾燥症候群を治療することができることから、周知の点眼剤に比べて安全に且つ便利に使用可能である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含む眼球乾燥症候群の予防又は治療のための経口投与用薬剤学的組成物。
【請求項２】
前記レバミピドの前駆体が、下記の一般式２から７の化合物よりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤学的組成物：
【化２】
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【化３】
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【化４】
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【化５】
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【化６】
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【化７】
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【請求項３】
前記レバミピドの前駆体の塩が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭素化水素酸、ヨウ素化水素酸、酒石酸、ギ酸、クエン酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、安息香酸、乳酸、シュウ酸、フマル酸、マロン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びナフタレンスルホン酸から選ばれる酸により形成されることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤学的組成物。
【請求項４】
前記レバミピドの前駆体の塩が、硫酸、マロン酸又はシュウ酸により形成されることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤学的組成物。
【請求項５】
前記レバミピドの前駆体の塩が、下記の一般式２から７のうちのいずれか一つの化合物の硫酸、マロン酸又はシュウ酸塩であることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤学的組成物：
【化２】
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【化３】
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【化４】
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【化５】
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【化６】
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【化７】
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【請求項６】
前記レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩が、組成物の総量を基準として１〜５０重量％用いられることを特徴とする、請求項１から５のうちのいずれか一項に記載の薬剤学的組成物。
【請求項７】
薬剤学的に許容可能な担体又は添加剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の薬剤学的組成物。
【請求項８】
前記薬剤学的に許容可能な添加剤が、賦形剤、崩解剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、分散剤及び安定化剤よりなる群から選ばれるいずれか一種以上であることを特徴とする、請求項７に記載の薬剤学的組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物により製造される薬剤学的剤形。
【請求項１０】
前記薬剤学的剤形が、粉末、顆粒、錠剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアロゾール、若しくは、軟質又は硬質ゼラチンカプセルであることを特徴とする、請求項９に記載の薬剤学的剤形。
【請求項１１】
レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩をこれを必要とする対象に投与することを含む、対象における眼球乾燥症候群の予防又は治療方法。
【請求項１２】
眼球乾燥症候群の予防又は治療用薬剤の製造のためのレバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レバミピド又はこの前駆体を含む眼球乾燥症候群の予防又は治療のための経口用薬剤学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
眼球乾燥症候群（ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）は、涙腺の炎症及び角膜の脱神経化による涙の分泌の抑制、あるいは、マイボーム腺機能不全（Ｍｅｉｂｏｍｉａｎ  ｇｌａｎｄ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）又はまぶたの機能異常に伴う非正常的な涙の蒸発などにより発生する疾患であり、Ｔ細胞による炎症反応も一つの病因であることが報告されている（Ｅｙｅ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｌｅｎｓ，  ２９（１  Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ９６−１００，  ２００３；  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｅ，  １０３：９−１７，  ２００６）。
【０００３】
眼球乾燥症候群の症状としては、ほてり、異物感、掻痒症、充血などが挙げられ、酷い場合には視力の損傷を招くこともある。一般に、眼球乾燥症候群は、閉経期女性によく見られる老化の一つの症状であると認識されたが、最近のテレビ視聴及びコンピュータとコンタクトレンズの使用の増大には目を見張るものがあり、それに伴い、男女の両方においてよく発生しており、発病年齢も低くなっているのが現状である（Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，  ２０：２８９−９８，  ２００５；  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，  ５０：２５３−６２，  ２００５）。
【０００４】
眼球乾燥症候群に対する治療法としては、涙を人工的に補うための人工涙液型点眼、炎症反応を抑えるためのステロイド点眼、治療用コンタクトレンズの着用、涙が漏れることを抑えて涙を長時間留めるための涙点閉鎖施術などが挙げられる（Ｊ．  Ｋｏｒｅａｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｓｏｃ．，  ４６：１７７４−１７７９，  ２００５）。しかしながら、人工涙液はその効果が一時的であるため、一日につき数回に亘って使用することを余儀なくされ、角膜の損傷に対する保護効果がないという欠点があり、ステロイド製剤は、長期に亘って使用する場合に緑内障などの致命的な副作用を引き起こす虞がある。また、治療用コンタクトレンズは使い勝手が悪く、むしろ感染の原因を提供する虞があり、涙点閉鎖施術は、手術であるため拒否感が感じられ、しかも、副作用が発生する場合に原状回復され難いという欠点がある。何よりも、前記治療法の最大の欠点は、根本的な原因の解決ではなく、対症療法であるという点である。
【０００５】
一方、２００６年に米国のアラガン社は、免疫調節剤であるシクロスポリンを用いた眼球乾燥症候群治療剤であるレスタシス点眼液を開発した。レスタシス点眼液は、乾性角結膜炎と関連する免疫細胞の生成と活性化を抑え、しかも、涙の分泌量を増大させるものであることが報告されている（Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  １０７：９６７−７４，  ２０００；  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  １０７：６３１−９，  ２０００）。しかしながら、前記製剤は抗炎症作用を通して薬効を示すため、満足のいくレベルの効能を得るためには数ヶ月に亘って繰り返し使用することを余儀なくされ、代表的な副作用である灼熱感が約１７％と高く発現されるという問題がある（Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  １０７：６３１−９，  ２０００；  Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｐｈａｒｍａ）。
【０００６】
この理由から、副作用の発現頻度が低いので安全であり、且つ、単に症状のみを緩和させる対症療法剤ではなく、より根本的に眼球乾燥症候群を予防又は治療することのでき製剤の開発が切望されている。
【０００７】
レバミピド（ｒｅｂａｍｉｐｉｄｅ）は、一般式１の構造を有する２−（４−クロロベンゾイルアミノ）−３−［２（１Ｈ）−キノロン−４−イル］プロピオン酸であり、消化性潰瘍治療剤として用いられている。また、レバミピドは、目の杯状細胞の密度の増加作用、目の粘液の増加作用及び涙液の増加作用を有し、眼球乾燥症候群の治療効能があることが知られている（日本国出願公開第２００９−３０１８６６号）。
【０００８】
【化１】
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【０００９】
眼球乾燥症候群治療と関連して、米国出願公開第２００７−０２８７７２９号は、中性又は弱酸性のｐＨを有するレバミピドを含有する眼科用製剤であり、水溶性高分子及び界面活性剤から選ばれる少なくとも一種の化合物、酸性水溶液、レバミピドの水溶性塩を含有する水溶液の混和物を含む、レバミピド結晶の水性懸濁溶液を開示している。また、大韓民国出願公開第１０−２０１１−００２７７８６号は、レバミピド、アミノ糖及び緩衝剤を含有し、無機陽イオンを含有しない点眼用医薬組成物を開示している。
【００１０】
しかしながら、前記開示された組成物はいずれも眼球乾燥症候群治療用点眼剤の形態であり、眼粘膜に局所的な刺激を引き起こす可能性が高いだけではなく、定量投与が困難であり、流通期限が短く、患者が投薬の不便さを訴えるなど服薬順応度が悪くなって治療効率を格段に落とす虞がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、本発明の目的は、点眼経路ではなく、経口経路を介して眼球乾燥症候群を予防又は治療することのできる、レバミピドを含有する薬剤学的組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記目的を達成するために、本発明は、レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含む眼球乾燥症候群の予防又は治療のための経口用薬剤学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によるレバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、経口投与を通して眼球乾燥症候群を治療することができることから、周知の点眼剤に比べて安全に且つ便利に使用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に涙の分泌量の変化を測定した結果である。
【図２】図２は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に涙の分泌量の変化を測定した結果である。
【図３】図３は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に涙の分泌量の変化を測定した結果である。
【図４】図４は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に涙の分泌量の変化を測定した結果である。
【図５】図５は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に涙の分泌量の変化を測定した結果である。一方、各図において、「正常眼」は、眼球乾燥症候群が誘発されていないマウスを、「対照群」は、ビークルのみを投与した眼球乾燥症候群マウスモデルを意味する。なお、図中の記号「＃」は、正常眼に対してｐ＜０．０５であることを意味し、「＊」は、対照群に対してｐ＜０．０５であることを意味する（ｔ検定）。
【図６】図６は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の表面状態の変化を測定した結果である。
【図７】図７は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の表面状態の変化を測定した結果である。
【図８】図８は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の表面状態の変化を測定した結果である。
【図９】図９は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の表面状態の変化を測定した結果である。
【図１０】図１０は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の表面状態の変化を測定した結果である。一方、各図において、「正常眼」は、眼球乾燥症候群が誘発されていないマウスを、「対照群」は、ビークルのみを投与した眼球乾燥症候群マウスモデルを意味する。なお、図中の記号「＃」は、正常眼に対してｐ＜０．０５であることを意味し、「＊」は、対照群に対してｐ＜０．０５であることを意味する（ｔ検定）。
【図１１】図１１は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の透過率を評価した結果である。
【図１２】図１２は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の透過率を評価した結果である。
【図１３】図１３は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の透過率を評価した結果である。
【図１４】図１４は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の透過率を評価した結果である。
【図１５】図１５は、眼球乾燥症候群マウスモデルに本発明による経口用組成物（実施例１から２８）を投与した後、１０日目に角膜の透過率を評価した結果である。一方、各図において、「正常眼」は、眼球乾燥症候群が誘発されていないマウスを、「対照群」は、ビークルのみを投与した眼球乾燥症候群マウスモデルを意味する。なお、図中の記号「＃」は、正常眼に対してｐ＜０．０５であることを意味し、「＊」は、対照群に対してｐ＜０．０５であることを意味する（ｔ検定）。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を詳述する。
本発明は、レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含む眼球乾燥症候群の予防又は治療のための経口用薬剤学的組成物を提供する。
【００１６】
本発明の組成物に用いられる有効成分であるレバミピドは、下記の一般式１の構造を有する化合物であり、消化性潰瘍治療剤又は眼球乾燥症候群治療剤として知られている。
【００１７】
【化１】
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【００１８】
特に、眼球乾燥症候群治療と関連して、レバミピドは、従来、点眼剤の形としてしか用いられていなかった。これは、点眼剤が目に直接的に薬物を提供すると共に、さらに水分を提供するため、眼球乾燥症候群を治療する上で最も有効であると認められたためである。
【００１９】
しかしながら、本発明は、点眼剤の形としてしか用いられていなかったレバミピドが経口投与時にも結膜における粘液の分泌を促し、眼球表面の損傷を抑えることにより、優れた眼球乾燥症候群の治療効果を示すという驚くべき結果を提示する。通常、点眼剤及び経口投与剤はその作用機序が異なるため、たとえ同じ薬物を使用するとしても同じ効果が得られない。特に、直接的に目に適用する点眼剤とは異なり、経口投与剤は、体内のいくつかの器官を経ながら分解されたり損失されたりする可能性が高く、標的部位まで達するのに長時間がかかるため点眼剤と同じ効果が得られるとは限らない。それにも拘わらず、レバミピドは経口投与時にも眼球乾燥症候群に対する治療効果を示すので、刺激の誘発可能性、定量投与の困難さ、低い服薬順応度及び短い流通期限などの問題点を有する点眼剤の代わりに、本発明による経口投与剤を使用することができる。
【００２０】
本発明の組成物は、レバミピドの代わりに、レバミピド前駆体又は前記前駆体の薬剤学的に許容可能な塩が使用可能である。
【００２１】
前記レバミピド前駆体とは、生体内でレバミピドに分解可能な化合物、具体的に、生体内に吸収された後に脱離し易い基を有する化合物のことをいう。前記前駆体は、生体内への吸収を増進したり溶解度を増大させたりするために用いられる。
【００２２】
前記前駆体の好適な例としては、下記の一般式２から７の構造を有する化合物が挙げられる：
【００２３】
【化２】
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【００２４】
上記の一般式２の化合物は、（２−モルフォリノエチル２−（４−クロロベンズアミド）−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）プロパノエートであり、本願の明細書では「レバミピド前駆体Ｉ」と相互交換的に用いられる。前記レバミピド前駆体Ｉは、レバミピドを４−（２−ヒドロキシエチル）モルフォリンと反応させて得ることができる。
【００２５】
【化３】
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【００２６】
上記の一般式３の化合物は、２−（２−モルフォリノエトキシ）−２−オキソエチル２−（４−クロロベンズアミド）−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）プロパノエートであり、本願の明細書では「レバミピド前駆体ＩＩ」と相互交換的に用いられる。前記レバミピド前駆体ＩＩは、レバミピドを４−（２−（２−ブロモアセトキシ）エチル）モルフォリン−４−イウムブロミドと反応させて得ることができる。
【００２７】
【化４】
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【００２８】
上記の一般式４の化合物は、（（２−モルフォリノエトキシ）カルボニルオキシ）メチル２−（４−クロロベンズアミド）−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）プロパノエート）であり、本願の明細書では「レバミピド前駆体ＩＩＩ」と相互交換的に用いられる。前記レバミピド前駆体ＩＩＩは、レバミピドを４−（２−（３−クロロプロパノイルオキシ）エチル）モルフォリン−４−イウムブロミドと反応させて得ることができる。
【００２９】
【化５】
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【００３０】
上記の一般式５の化合物は、２−モルフォリノエチル２−（２−（４−クロロベンズアミド）−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）プロパノイルオキシ）−ブタノエートであり、本願の明細書では「レバミピド前駆体ＩＶ」と相互交換的に用いられる。前記レバミピド前駆体ＩＶは、レバミピドを４−（２−（２−ブロモブタノイルオキシ）エチル）モルフォリン−４−イウムと反応させて得ることができる。
【００３１】
【化６】
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【００３２】
上記の一般式６の化合物は、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル２−（４−クロロベンズアミド）−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）プロパノエートであり、本願の明細書では「レバミピド前駆体Ｖ」と相互交換的に用いられる。前記レバミピド前駆体Ｖは、レバミピドを１−（２−ブロモアセチル）−４−メチルピペラジン−１−イウムブロミドと反応させて得ることができる。
【００３３】
【化７】
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【００３４】
上記の一般式７の化合物は、１−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１−オキソブタン−２−イル２−（４−クロロベンズアミド）−３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−４−イル）プロパノエートであり、本願の明細書では「レバミピド前駆体ＶＩ」と相互交換的に用いられる。前記レバミピド前駆体ＶＩは、レバミピドを１−（２−ブロモブタノイル）−４−メチルピペラジン−１−イウムブロミドと反応させて得ることができる。
【００３５】
本発明の実験例によれば、前記レバミピド前駆体は、レバミピドに比べて眼球乾燥症候群の治療効果に遥かに優れている（図１から図１５を参照すること）。
本発明の組成物に有効成分として使用可能なレバミピド前駆体の薬剤学的に許容可能な塩とは、酸を用いて形成する酸付加塩のことをいい、前記酸の例としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭素化水素酸、ヨウ素化水素酸、酒石酸、ギ酸、クエン酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、安息香酸、乳酸、シュウ酸、フマル酸、マロン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸又はナフタレンスルホン酸が挙げられる。中でも、好適な例としては、硫酸、マロン酸又はシュウ酸により形成される酸付加塩が挙げられる。
【００３６】
本発明の実験例によれば、前記レバミピド前駆体の塩は、レバミピドに比べて眼球乾燥症候群の治療効果に遥かに優れている（図１から図１５を参照すること）。
【００３７】
本発明による組成物において、前記レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、組成物の総量を基準として１〜５０重量％使用可能である。
【００３８】
また、本発明による薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容可能な担体又は添加剤をさらに含んでいてもよい。前記「薬学的に許容可能な」とは、生理学的に許容され、且つ、ヒトに投与されるときに、通常、胃腸障害、目眩などのアレルギー反応又はこれと同じ反応を引き起こさないことをいう。前記添加剤の例としては、賦形剤、崩解剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、分散剤、安定化剤などが挙げられる。前記賦形剤の例としては、乳糖、マンニトール、イソマルト、微結晶セルロース、ケイ素化微結晶セルロース、粉末セルロースなどが挙げられる。崩解剤の例としては、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスポビドン、澱粉グリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、澱粉などが挙げられる。結合剤の例としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、ポビドン、コポビドン、アルファでん粉などが挙げられる。滑沢剤の例としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリルフマル酸ナトリウムなどが挙げられる。湿潤剤としては、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル誘導体、ポロキサマー、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体などが挙げられる。分散剤としては、ヒプロメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポビドン、コポビドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースなどが挙げられる。安定化剤としては、クエン酸、フマル酸、コハク酸などが挙げられる。なお、本発明の薬剤学的組成物は、抗凝集剤、香料、乳化剤及び防腐剤などをさらに含んでいてもよい。
【００３９】
さらに、本発明の薬剤学的組成物は、哺乳動物に投与された後に活性成分の迅速、持続又は遅延された放出を提供するように当業界における公知の方法を用いて剤形化させることができる。前記薬剤学的剤形は、粉末、顆粒、錠剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアロゾール、又は軟質又は硬質ゼラチンカプセルであってもよい。
【００４０】
本発明による組成物に用いられるレバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩の投与量は、処理される対象、疾病又は状態の深刻度、投与の速度及び処方医師の判断による。前記化合物は、ヒトをはじめとする哺乳動物に一日につき０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で経口的経路を介して投与可能である。一部の場合において、上述した範囲よりも少ない投与量の数値が好適である場合もあれば、有害な副作用を引き起こさないつつもより多い投与量が用いられる場合もある。なお、より多い投与量の場合には、一日につき数回に亘って少ない投与量で分配される。
【００４１】
一方、本発明は、レバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩をこれを必要とする対象に投与することを含む、対象における眼球乾燥症候群の予防又は治療方法を提供する。前記対象とは、眼球乾燥症候群に苦しんでいる対象、眼球乾燥症候群にかかる危険性がある対象、例えば、哺乳動物、好ましくは、ヒトのことをいう。
【００４２】
また、本発明は、眼球乾燥症候群予防又は治療用薬剤の製造のためのレバミピド又はこの前駆体、又はこれらの薬剤学的に許容可能な塩の用途を提供する。
【００４３】
以下、下記の実施例により本発明を詳細に説明するが、下記の実施例は本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらにのみ限定されることはない。
【００４４】
実施例１〜４：レバミピドを含有する経口用製剤の製造
精製水１００ｍＬに分散剤としてのポリソルベート８０（フルカ社製）３．０ｇを溶解させて薬物を懸濁化させるためのビークルを調製した。ここにレバミピド（一般式１）（ハンソケム社製）１、２、４及び６ｇをそれぞれ添加し、１０分間攪拌して懸濁液（実施例１〜４）を製造した。眼球乾燥症候群が誘発された８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに前記懸濁液（５ｍＬ／ｋｇ）を表１の容量にて一日につき二回投薬した。
【００４５】
実施例５〜１０：レバミピド前駆体を含有する経口用製剤の製造
精製水１００ｍＬに安定化剤としてのクエン酸（シグマアルドリッチ社製）０．１ｇ及び懸濁化剤としてのヒプロメロース２９１０（Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ ６１５、信越社製）２ｇを溶解させて薬物を懸濁化させるためのビークルを調製した。ここにレバミピド前駆体Ｉ〜ＶＩ（一般式２〜７、サンジン製薬社製）１ｇをそれぞれ添加し、１０分間攪拌して懸濁液を製造した（実施例５〜１０）。前記懸濁液（５ｍＬ／ｋｇ）を眼球乾燥症候群が誘発された８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに表１の容量にて一日につき二回投薬した。
【００４６】
実施例１１〜１６：レバミピド前駆体のマロン酸塩を含有する経口用製剤の製造
実施例５〜１０において、レバミピド前駆体Ｉ〜ＶＩの代わりにこのマロン酸塩（サンジン製薬社製）を各前駆体ベースを基準として１ｇ相当量使用した以外は、実施例５〜１０の過程を繰り返し行って懸濁液（実施例１１〜１６）を製造した。前記懸濁液（５ｍＬ／ｋｇ）を眼球乾燥症候群が誘発された８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに表１の容量にて一日につき二回投薬した。
【００４７】
実施例１７〜２２：レバミピド前駆体のシュウ酸塩を含有する経口用製剤の製造
実施例５〜１０において、レバミピド前駆体Ｉ〜ＶＩの代わりにこのシュウ酸塩（サンジン製薬社製）を各前駆体ベースを基準として１ｇ相当量使用した以外は、実施例５〜１０の過程を繰り返し行って懸濁液（実施例１１〜１６）を製造した。前記懸濁液（５ｍＬ／ｋｇ）を眼球乾燥症候群が誘発された８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに表１の容量にて一日につき二回投薬した。
【００４８】
実施例２３〜２８：レバミピド前駆体の硫酸塩を含有する経口用製剤の製造
実施例５〜１０において、レバミピド前駆体Ｉ〜ＶＩの代わりにこの硫酸塩（サンジン製薬社製）を各前駆体ベースを基準として１ｇ相当量使用した以外は、実施例５〜１０のの過程を繰り返し行って懸濁液（実施例１１〜１６）を製造した。前記懸濁液（５ｍＬ／ｋｇ）を眼球乾燥症候群が誘発された８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに表１の容量にて一日につき二回投薬した。
【００４９】
【表１】
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【００５０】
実験例１：眼球乾燥症候群動物モデルを用いた薬物の効能の分析
＜１−１＞  眼球乾燥症候群動物モデルの製造
８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（チャールスリバー研究所、米国）を一週間検疫・順化させた後、各マウスの平均体重及び標準偏差を計算して各グループ当たりに８匹ずつ均等に分配した。
【００５１】
実験群（実施例１〜２８の投与群）の場合、一日につき１８時間相対湿度２５〜３０％の空気を含む送風機の風に露出させながら１０日間スコポラミン（２．５ｍｇ／ｍｌ、シグマアルドリッチ社製）を皮下注射して眼球乾燥症候群を誘発した。次いで、実施例１〜２８において製造した懸濁液をそれぞれ１０日間一日につき２回ずつ経口投与した。
【００５２】
これに対し、正常眼の場合、眼球乾燥症候群が誘発されていない正常マウスに薬物又はビークルを投与せず、対照群の場合、眼球乾燥症候群が誘発されたマウスに薬物の代わりにビークルを投与した。
【００５３】
＜１−２＞  涙量の分析
前記薬物を投与してから１０日目に正常眼、対照群及び実験群の涙量を測定した。涙量は、フェノールレッド綿糸の先端をマウスの両眼の外眼角下眼瞼に当て、所定の時間だけ放置して涙が濡らされて下降する面積（ｍｍ２）をイメージインサイドプログラム （Ｉｍａｇｅ Ｉｎｓｉｄｅ、Ｖｅｒ ２．３２）を用いて分析して評価した。前記測定結果を図１から図５に示す。
【００５４】
図１から図５に示すように、レバミピドは、２００ｍｇ／ｋｇ以上の投与用量（実施例３及び４）において対照群に比べて有意な涙量の増加を示した。なお、レバミピド前駆体及びその塩（実施例５〜２８）もまた、対照群に比べて有意な涙量の増加を示した。
【００５５】
＜１−３＞  角膜の表面状態の分析
角膜の表面状態を分析するために、１０日目に各グループのマウスを安楽死させた。次いで、角膜の表面をデジタルズーム実体顕微鏡（ニコン社製）を用いて観察した後、角膜不規則性スコア（４点法、０．５点：正常、１点：最小、１．５点：軽症、３点：中間及び４点：重症）に基づいて数値化させた。前記数値は、熟練された専門家２名の結果を平均して算出した。前記実験結果を図６から図１０に示す。
【００５６】
図６から図１０に示すように、レバミピドは、２００ｍｇ／ｋｇ以上の投与用量（実施例３及び４）において対照群に比べて有意な角膜表面の改善効果を示し、レバミピド前駆体及びその塩（実施例５〜２８）もまた、対照群に比べて有意な角膜表面の改善効果を示した。
【００５７】
＜１−４＞  角膜表面の上皮細胞の損傷度の評価
角膜表面の上皮細胞の損傷度を評価するために、蛍光染料であるフルオレセインナトリウム塩（シグマアルドリッチ社製）１％を平衡塩類溶液に溶解させて製造した溶液５μＬをマウスの結膜嚢に点眼し、絆創膏を用いて１時間以上目をつぶらせておいた。次いで、未透過の余分の蛍光染料を精製水で洗い落とした後、眼球を摘出して角膜に浸透された緑色の蛍光発光度を観察して写真撮影を行った。撮影した写真をＩｍａｇｅＪ １．３８ｘ（ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ，ＮＩＨ、ボルチモア、米国）プログラムを用いて分析して角膜の緑色強さを数値化させた。角膜上皮の損傷度を３点：正常、６点：最小、９点：軽症、１２点：中間及び１５点：重症に点数化させた。
【００５８】
図１１から図１５に示すように、レバミピドは、２００ｍｇ／ｋｇ以上の投与用量（実施例３及び４）において対照群に比べて有意な蛍光染料の角膜透過性の低減効果を示し、レバミピド前駆体及びその塩（実施例５〜２８）もまた対照群に比べて有意な蛍光染料の角膜透過性の低減効果を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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