(57)【要約】本発明は、アクアポリンにより仲介される症状、例えば膠芽腫および卵巣過剰刺激症候群を予防、処置および抑制するための、アクアポリン−４またはアクアポリン−２などのアクアポリンの選択的阻害剤（例えば、特定のフェニルベンズアミド化合物）の使用に関する。本発明は特に、アクアポリンにより仲介される疾患症状、例えば水分不均衡の疾患または症状および他の疾患を処置または抑制する方法を提供する。
2016535787.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクアポリンにより仲介される疾患または症状を処置または抑制する方法であって、それを必要とする患者に、アクアポリンの阻害剤であるフェニルベンズアミド化合物を有効量で投与することを含んで成り、処置または抑制する症状が、膠芽腫、卵巣過剰刺激症候群、肺浮腫、線維筋痛症または多発性硬化症である方法。
【請求項２】
フェニルベンズアミドが、遊離または医薬上許容される塩の形態の式Ｉ:
【化１】
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［式中、Ｘは、連結基を表し、その主鎖の原子数は２〜５であり（前記連結基は、置換されていてもよい）、Ａは水素原子、または置換されていてもよいアシル基、または置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基を表すか、またはＡは連結基Ｘと結合して、置換されていてもよい環状構造を形成してもよく、Ｅは置換されていてもよいアリール基または置換されていてもよいヘテロアリール基を表し、環Ｚは、式−Ｏ−Ａ（式中、Ａは上記と同意義である）により表される基および式−Ｘ−Ｅ（式中、ＸおよびＥは上記と同意義である）により表される基の他に１以上の置換基を有してもよいアレーンを表すか、または式−Ｏ−Ａ（式中、Ａは上記と同意義である）により表される基および式−Ｘ−Ｅ（式中、ＸおよびＥは上記と同意義である）により表される基の他に１以上の置換基を有してもよいヘテロアレーンを表す］
で示される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式Ｉの化合物が、ＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１に記載される式（Ｉ）の化合物、ＵＳ７,７００,６５５に記載される式（Ｉ）の化合物、およびＵＳ７,６２６,０４２に記載される式（Ｉ）の化合物から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
式Ｉの化合物が、ＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１に記載される化合物番号１〜２２３、ＵＳ７,７００,６５５に記載される化合物番号３０１〜５５５、およびＵＳ７,６２６,０４２に記載される化合物番号１〜１５１から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
式Ｉの化合物が、遊離または医薬上許容される塩の形態の式１ａ：
【化２】
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［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、ハロ、ハロゲン化Ｃ１−４アルキルおよびシアノから選択され；Ｒ６は、Ｈおよび生理学的に加水分解可能で許容されるアシルから選択される］
で示される化合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１が、トリフルオロメチル、クロロ、フルオロおよびブロモから選択され；Ｒ３およびＲ５が、同一または異なって、トリフルオロメチル、クロロ、フルオロおよびブロモから選択され；Ｒ２およびＲ４がいずれもＨである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ１が、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３およびＲ５がいずれもトリフルオロメチルであり；Ｒ２、Ｒ４およびＲ６がいずれもＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｒ６がＨである、請求項５または６に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ６がアセチルである、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ１が、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３およびＲ５がいずれもトリフルオロメチルであり；Ｒ２およびＲ４がＨであり；Ｒ６がアセチルである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ１がクロロである、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ３およびＲ５がいずれもクロロであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６がいずれもＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ３およびＲ５がいずれもトリフルオロメチルであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６がいずれもＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ６がＣ１−４アシルである、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ６がアミノ酸の残基である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１６】
Ｒ６が、５〜６員非芳香族性複素環式環−カルボニル基、例えば複素環式環が環構成原子（環形成原子）として少なくとも１つの窒素原子を含み、該窒素原子においてカルボニル基に結合している５〜６員非芳香族性複素環式環−カルボニル基であり、ここで、例えば、前記５〜６員非芳香族性複素環式環は、１−ピロリジニル基、ピペラジノ基、モルホリノ基および１−ピペラジニル基から選択され、前記複素環式環は１以上の置換基（例えば、アルキル基、アルキル−オキシ−カルボニル基およびカルボキシ基から独立して選択される）により置換されていてもよく；例えば、Ｒ６が（モルホリン−４−イル）カルボニルである、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ６が、Ｎ,Ｎ−ジ置換カルバモイル基であり、ここで、前記カルバモイル基の２つの置換基は共同で、それらが結合する窒素原子と一体となって、置換されていてもよい窒素含有複素環基を形成してもよい、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ６が、（モルホリン−４−イル）カルボニル基である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ６が、置換されたホスホノ基、例えばジベンジルホスホノ基であるか、または置換されていないホスホノ基である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項２０】
フェニルベンズアミドが、ニクロサミドである、請求項１記載の方法。
【請求項２１】
フェニルベンズアミドが、
【化３】
2016535787.tif 000021
【化４】
2016535787.tif 000022
から選択される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２２】
フェニルベンズアミドが、
【化５】
2016535787.tif 000023
である、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２３】
フェニルベンズアミドが、
【化６】
2016535787.tif 000024
である、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２４】
処置または抑制される症状が、膠芽腫である、請求項１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
処置または制御される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、請求項１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
処置または制御される症状が、肺浮腫である、請求項１〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
処置または制御される症状が、多発性硬化症である、請求項１〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
アクアポリンにより仲介される疾患または症状の処置または抑制のため、例えば請求項１〜２８のいずれかに記載の方法において使用するための医薬の製造における、フェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物の使用。
【請求項３０】
フェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物を、医薬上許容される希釈剤または担体と共に含む、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法において使用するための医薬組成物。
【請求項３１】
膠芽腫を処置または抑制する方法であって、ＡＱＰ４阻害剤、例えばＡＱＰ４に結合する化合物、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に有効量で投与することを含む方法。
【請求項３２】
卵巣過剰刺激症候群を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に有効量で投与することを含む方法。
【請求項３３】
肺浮腫を処置または抑制する方法であって、ＡＱＰ４阻害剤、例えばＡＱＰ４に結合する化合物、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に有効量で投与することを含む方法。
【請求項３４】
線維筋痛症を処置または抑制する方法であって、ＡＱＰ４阻害剤、例えばＡＱＰ４に結合する化合物、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に有効量で投与することを含む方法。
【請求項３５】
多発性硬化症を処置または抑制する方法であって、ＡＱＰ４阻害剤、例えばＡＱＰ４に結合する化合物、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に有効量で投与することを含む方法。
【請求項３６】
膠芽腫を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項３７】
卵巣過剰刺激症候群を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項３８】
肺浮腫を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項３９】
線維筋痛症を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４０】
多発性硬化症を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、必要とする患者に、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４１】
膠芽腫の患者においてアクアポリンを阻害する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４２】
卵巣過剰刺激症候群の患者においてアクアポリンを阻害する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４３】
肺浮腫の患者においてアクアポリンを阻害する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４４】
線維筋痛症の患者においてアクアポリンを阻害する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４５】
多発性硬化症の患者においてアクアポリンを阻害する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばフェニルベンズアミド化合物、例えばニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば請求項１〜２３に記載の化合物を、アクアポリンの阻害に有効な量で投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、アクアポリンが仲介する症状、例えば膠芽腫および卵巣過剰刺激症候群、または例えば肺浮腫、線維筋痛症、および多発性硬化症を予防、処置および抑制するための、アクアポリン−４またはアクアポリン−２などのアクアポリンの選択的阻害剤（例えば、特定のフェニルベンズアミド化合物）の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
アクアポリンは、分子水チャンネルとして作用し、細胞の内部および外部へと水の流れを媒介する細胞膜タンパク質である。細胞膜を通過する水の受動拡散または浸透作用はある程度存在するが、細胞の内部および外部への迅速かつ選択的な水の移送には、アクアポリン類が関与している。これらの水チャンネルは、イオンおよび他の溶質の通過を遮断しつつ、細胞の内部および外部に水分子を選択的に導いて、細胞の膜電位を保持している。アクアポリンは、細菌から植物や動物まで、実質的に全ての生命体に存在している。ヒトにおいては、それらは体全体にわたり細胞内に存在している。
【０００３】
脳浮腫（ＣＥ）は、脳内圧（ＩＣＰ）の上昇、対応する脳灌流の減少、および永久的または致命的な脳損傷の可能性をもたらしうるため、卒中損傷に大きく関わる。浮腫は、例えば次のような場合のＣＮＳ損傷にも関与する：外傷性の脳および脊髄損傷、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、低酸素症、水中毒、肝不全、肝性脳症、糖尿病性ケトアシドーシス、膿瘍、子癇、クロイツフェルト−ヤコブ病およびループス脳炎。卒中または外傷性脳損傷から通常３日間の最高ＩＣＰ期間を生き延びた患者は、生存の可能性が高い。残念ながら、ＣＥ処置の選択肢はわずかであり、しかもその効力は限られている。
【０００４】
血清ナトリウムレベル＜１３５ｍＭを特徴とする低ナトリウム血症は、電解質不均衡の最も一般的な形態であり、全国の病院で、発生率が１５〜２０％であることが報告されている。関連する水分貯留は、心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害および抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）の症状を示す。様々な利尿薬が、ＨＦに関連する鬱血を処置するために使用される。ループ利尿薬は、ヘンレ係蹄の太い上行脚におけるＮａ／Ｋ／Ｃｌ共輸送体を阻害することにより、尿からのＮａ＋およびＣｌ−再吸収を低下させて、ナトリウム利尿を引き起こす。低ナトリウム血症のための代替療法はバソプレッシンレセプターアンタゴニストの使用であり、このアンタゴニストがＡＱＰ２のバソプレッシン誘導性移動を阻害することにより水分再吸収が阻害される。残念ながら、ループ利尿薬およびバソプレッシンレセプターアンタゴニストはいずれも、所望の生理学的結果に対して間接的に作用する。理想的な薬剤は、水の再吸収を直接遮断することにより、上流エフェクターにより引き起こされる潜在的副作用を最小とする薬剤であるが、そのような薬剤は現在知られていない。
【０００５】
癲癇は、反復発作を特徴とする脳障害である。発作は、脳活動の乱れにより起こり、一時的にいくらかの脳機能不全をもたらす。発作は、制御し難い振戦および意識低下を引き起こしうるが、より一般的には、発作を起こしている人は、動作が停止しているか、または何が起こっているかが判らなくなる。癲癇を処置するために抗痙攣剤を使用しうるが、抗痙攣剤が全ての癲癇患者にとって有効なわけではない。
【０００６】
ＡＱＰ４阻害剤はさらに、ＡＱＰ４支配により仲介される水の移動により神経刺激が増大されうる（神経のカリウムホメオスタシスが変化することによる）、ある種の障害にも有用であり得、例えば線維筋痛症、多発性硬化症、偏頭痛および発作（特に癲癇に関連する発作であるが、これに限定されない）のような障害において、神経刺激を低下することにより有益であることが示されうる。
【０００７】
虚血とは、組織への血液供給の遮断または不足を特徴とする状態である。網膜虚血は、網膜への血液の供給不足により起こる。血管閉塞、緑内障および糖尿病性網膜症は、網膜虚血に関連があり、視力障害および失明につながる網膜浮腫およびガングリオン細胞死をもたらし得る。ＡＱＰ４は、網膜のミュラー細胞で発現される。網膜虚血は、処置が比較的効果的ではないため、依然として視力障害および失明の一般的な原因である。
【０００８】
心筋虚血は、１以上の冠状動脈の遮断または狭窄によって起こる状態であり、例えばアテローム性動脈硬化プラーク閉塞または破裂により起こり得る。心筋虚血が臨界閾値を越え、正常な動作機能およびホメオスタシスを維持するための心筋細胞修復機構を圧倒すると、心筋梗塞、すなわち心臓発作がおこる。心筋梗塞は、依然として世界的に主要な病的状態の原因および死因である。心筋虚血、心筋虚血／再潅流障害、心筋梗塞およびうっ血性心不全の処置に有効な化合物は、有用な医薬であろう。
【０００９】
フェニルベンズアミド化合物は医薬として知られている。フェニルベンズアミド化合物には、例えばサナダ虫を処置するために使用される駆虫剤であるニクロサミド（５−クロロ−Ｎ−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−２−ヒドロキシベンズアミド）が挙げられるが、アクアポリン類に対して何らかの効果を持っていることは知られていない。ＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）には、特定のフェニルベンズアミドがＩＫＫ−βの選択的阻害によりＮＦ−κＢを阻害するのに有用であることが記載され、ＵＳ７,６２６,０４２（参照により本明細書に組み込まれる）には、かかる化合物のＯ−アシル誘導体が開示され、ＵＳ７,７００,６５５（参照により本明細書に組み込まれる）には、特定のフェニルベンズアミドがアレルギー性疾患を処置するために有用であることが記載されている。しかし、これらの特許出願は、脳浮腫または水分不均衡（水利尿）またはアクアポリン類について何ら開示していない。
【００１０】
２００４年の文献によると、あるグループが、ラット心筋虚血／再潅流障害モデルにおいて、Ｎ−（３,５−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−５−クロロ−２−ヒドロキシ−ベンズアミドのＩκＢリン酸化遮断効果を調査した。Onai, Y. et al, "Inhibition of IκB Phosphorylation in Cardiomyocytes Attenuates Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury," Cardiovascular Research, 2004, 63, 51-59。このグループは、ある程度の活性を報告した。しかし、その後活性作用が確認できなかったため、Ｎ−（３,５−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−５−クロロ−２−ヒドロキシ−ベンズアミドを、ヒトにおいてこの適応症に対して用いるための研究は続けられなかった。
【００１１】
本発明以前には、アクアポリン類、例えばＡＱＰ４またはＡＱＰ２の特異的かつ有効な阻害剤の存在は知られていなかった。特定の抗癲癇薬またはスルホンアミド薬剤（例えば、アセチルスルファニルアミド、アセタゾラミド、６−エトキシ−ベンゾチアゾール−２−スルホンアミド、トピラメート、ゾニサミド、フェニトイン、ラモトリジンおよびスマトリプタン）は、ＡＱＰ４の阻害剤としての可能性が一時報告されたが、これは後に誤りであることが判明した[Yangら(Bioorganic & Medicinal Chemistry (2008)16: 7489-7493)]。ＡＱＰ２の直接的な阻害剤は報告されていない。治療上有用なアクアポリン阻害剤の探索は、有効なハイスループットスクリーニングアッセイが存在しないこと、そしてそのようなアッセイを検証および評価するための、およびポジティブコントロールまたは結合競合剤として役立てられる高選択的阻害剤が存在しないことにより阻まれてきた。
【００１２】
水分不均衡疾患、例えば脳浮腫などの浮腫、水分貯留および低ナトリウム血症、また、癲癇、網膜虚血、心筋虚血、心筋虚血／再潅流障害、心筋梗塞、心筋低酸素症、うっ血性心不全、敗血症および視神経脊髄炎のような疾患、ならびに片頭痛を処置または抑制するための改良された方法が非常に必要とされている。
【発明の概要】
【００１３】
（発明の概要）
本発明は、アクアポリン仲介性症状、例えば、水分不均衡疾患、例えば浮腫［特に、脳および脊髄の浮腫、例えば、外傷または虚血性脳梗塞後の浮腫、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症、糖尿病性ケトアシドーシス、膿瘍、子癇、クロイツフェルト−ヤコブ病およびループス脳炎と関連がある浮腫、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる浮腫、侵襲性の中枢神経系処置（例えば、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、動脈瘤修復または深部脳刺激）の結果生じる浮腫、網膜浮腫、心不全の結果生じる脳腫脹（例えば蘇生期前の低酸素による代謝性アシドーシス（例えば、乳酸アシドーシス）の発症に関連するもの）］、低ナトリウム血症および過剰水分貯留、卵巣過剰刺激症候群、また、癲癇、網膜虚血および他の眼圧または組織水和異常と関連する眼疾患、心筋虚血、心筋虚血／再潅流障害、心筋梗塞、心筋低酸素症、うっ血性心不全、敗血症、視神経脊髄炎および膠芽腫のような疾患、ならびに片頭痛を予防、処置および抑制するための、選択的アクアポリン阻害剤、例えばアクアポリン−４またはアクアポリン−２阻害剤の使用を提供するものである。
【００１４】
本発明はさらに、アクアポリン類、特にＡＱＰ４およびＡＱＰ２を阻害する特定のフェニルベンズアミドの使用を提供する。
【００１５】
本発明は特に、アクアポリンにより仲介される疾患または症状、例えば水分不均衡の疾患または症状および他の疾患、例えば、
脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫、例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、低酸素症（全身性低酸素症および心不全による低酸素症を含む）、水中毒、肝不全、肝性脳症、糖尿病性ケトアシドーシス、膿瘍、子癇、クロイツフェルト−ヤコブ病、ループス脳炎または侵襲性中枢神経系処置（例えば、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、動脈瘤修復または深部脳刺激）の結果生じる脳浮腫、または例えば脊髄外傷（例えば、脊髄圧迫）の結果生じる脊髄浮腫；または
微小重力および／または放射線暴露の結果生じる脳浮腫、および／または視神経浮腫、例えば微小重力および／または放射線暴露の結果生じる視神経浮腫；または
網膜浮腫；または
肺浮腫；または
低ナトリウム血症または過剰水分貯留、例えば心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害、抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）または不妊治療の結果生じるもの；または
卵巣過剰刺激症候群；または
癲癇、網膜虚血、または眼圧および／または組織水和異常と関連のある他の眼疾患、心筋虚血、心筋虚血／再潅流障害、心筋梗塞、心筋低酸素症、うっ血性心不全、敗血症、視神経脊髄炎、または膠芽腫；または
線維筋痛症；または
多発性硬化症；または
片頭痛
を処置または抑制する方法であって、アクアポリン阻害剤、例えばＡＱＰ２またはＡＱＰ４の阻害剤、例えばフェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたはＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１またはＵＳ７,７００,６５５に記載される式（Ｉ）の化合物、例えばそこに記載される一般式（Ｉ）、（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）および（Ｉ−４）の化合物、例えばＵＳ２０１０／０２７４０５１に記載の化合物番号１〜２２３またはＵＳ７,７００,６５５に記載の化合物番号３０１〜５５５から選択される化合物、またはＵＳ７,６２６,０４２に記載される式（Ｉ）の化合物、例えば、そこに記載される化合物番号１〜１５１から選択される化合物；例えば、式１ａ：
【化１】
2016535787.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、ハロ、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル（例えば、トリフルオロメチル）およびシアノから選択され；Ｒ６は、Ｈおよび生理学的に加水分解可能で許容し得るアシル基から選択される）の、遊離または医薬上許容される塩形態の化合物を、必要な患者に有効量で投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
本発明はさらに、試験化合物の存在または不存在下に、高張または低張溶液に対するアクアポリン発現細胞集団の応答を、コントロール細胞集団の応答と比較して測定することを含む、特異的なアクアポリンを同定するためのハイスループットアッセイを提供する。
【００１７】
本発明はさらに、下記式：
【化２】
2016535787.tif 000004
の化合物を提供する。
【００１８】
本発明のさらなる適用範囲は、後記する詳細な説明から明らかとなろう。詳細な説明および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すものであるが、単に説明を目的とするものであり、本発明の範囲を制限することを意図するものではないと理解されるべきである。
【００１９】
本発明は、詳細な説明および添付の図面により、よりよく理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、アクアポリン−４（図１Ａ）およびアクアポリン−２（図１Ｂ）仲介細胞体積変化アッセイの結果、ならびにこれらのアクアポリンに対する化合物３（式１ａの化合物；式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５が各々クロロであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６がＨである）の阻害効果を示す。
【図２】図２は、ＡＱＰ−１、ＡＱＰ−２、ＡＱＰ−４−Ｍ１、ＡＱＰ−４−Ｍ２３、およびＡＱＰ−５に対する化合物３の特異性を示す。
【図３】図３は、精製したＡＱＰ４ｂに結合する［３Ｈ］−標識化合物４（式１ａの化合物；式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５が各々トリフルオロメチルであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６がＨである）に対するHummel-Dryer式アッセイを示す。
【図４】図４は、０.７６ｍｇ／ｋｇの化合物１（式１ａの化合物；式中、Ｒ１がクロロであり、Ｒ３およびＲ５が各々トリフルオロメチルであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６がＨである）を用いた、水中毒マウスモデルの％生存曲線を示す。
【図５】図５は、ｎ＝１４匹のマウス／処置を用いるＭＲＩ脳体積分析による、マウス水中毒モデルにおける化合物１による脳浮腫形成の阻害を示す。浮腫形成の経時変化を、薬物なしと０.７６ｍｇ／ｋｇの化合物１を比較して示す。最初の５.６７分の時点は、注射後第１回目のスキャン中の脳中心部のスキャンスライスに対応する。他の時点も同様である。データを単一指数関数方程式に適合させる：Ｖ／Ｖ０＝Ｖｉ＋ｄＶｍａｘ（１−ｅ（−ｋｔ））；式中、Ｖ／Ｖ０＝相対脳体積、Ｖｉ＝初期相対脳体積、ｄＶｍａｘ＝相対脳体積における最大変化、ｋ＝一次速度定数（ｍｉｎ−１）、およびｔ＝時間（分）。
【図６】図６は、ハイスループットスクリーニングに使用したカルセイン蛍光エンドポイントアッセイを示す。
【図７】図７は、細胞破裂アクアポリンアッセイを用いるヒットバリデーションを示す；挿入図は化合物３の構造を示す。
【図８】図８は、化合物１を０.７６ｍｇ／ｋｇで用いたマウス水中毒モデルにおける頭蓋内圧（ＩＣＰ）の低下を示す。
【図９】図９は、2-((3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル)カルバモイル)-4-クロロフェニル二水素ホスフェート ビスエタノールアミン塩（下記式）から変換された化合物１の血漿および血清レベルを示す。
【化３】
2016535787.tif 000005
【図１０】図１０は、虚血性脳梗塞の、マウス中大脳動脈閉塞（ＭＣＡｏ）モデルを示す。
【図１１】図１１は、マウス中大脳動脈閉塞（ＭＣＡｏ）モデルにおける半球脳体積の相対変化を示す。
【図１２】図１２は、生理食塩水（薬物なし●）または化合物５（○）で処置されたマウスにおけるＭＣＡｏ後の神経学的アウトカムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
（発明の詳細な説明）
以下の好ましい実施形態の記載は、単に説明のためのものであり、本発明、その適用または使用を制限することを意図するものではない。
【００２２】
アクアポリン−４（ＡＱＰ４）の発現は、外傷、卒中および水中毒の動物モデルならびにヒト悪性脳腫瘍周辺部において上方調節される。アクアポリン−４（ＡＱＰ４）は、脳および脊髄浮腫の発生に重要な役割を担うことが示されている。ＡＱＰ４は、ＢＢＢおよびグリア境界を横切る水移動の主要な経路を提供する。ＡＱＰ４遺伝子を持たないＡＱＰ４ノックアウトマウスは、野性型マウスと比較して、虚血性脳梗塞、水中毒、細菌性髄膜炎および脊髄圧迫のモデルにおいて、高い生存性を示す。
【００２３】
脳浮腫（ＣＥ）は、一般に、血管原性および細胞毒性の２つの主要カテゴリーに分類される。血管原性の脳浮腫は、血液−脳関門（ＢＢＢ）の破壊により、水および溶質が脳内に拡散する場合に起こり得る。ＡＱＰ４欠損マウスは、クモ膜下出血モデルにおいて脳浮腫を増加させることが報告されており、ＡＱＰ４が細胞内腔に集まった水を排出するために必要でありうることが示唆される。これに対し、細胞毒性の脳浮腫は、ＢＢＢ破壊よりもむしろ、血漿浸透圧を低下させる虚血により起こりうる。虚血は、ＡＴＰレベルを低下させ、これがＮａ−Ｋ ＡＴＰアーゼポンプを遅らせ、その結果、漏出経路からＮａ＋およびＣｌ−が取込まれると考えられる。正味の影響は、細胞浸透圧不均衡であり得、Ｈ２Ｏが細胞内に引き込まれ（ニューロンよりも星状膠細胞の方がその傾向が強い）、ＩＣＰの上昇を導く。虚血性脳梗塞、水中毒、細菌性髄膜炎および脊髄圧迫のマウスモデルはこのカテゴリーに入る。これらのモデルにおいて、ＡＱＰ４欠損マウスはＣＥを低減し、細胞毒性ＣＥ形成においてＡＱＰ４が脳への水移動の中心的経路であることが示唆された。しかし、細胞毒性および血管原性の浮腫は、明確に分類されたカテゴリーではない；最初に細胞毒性浮腫を引き起こした損傷に引き続いて、例えばその後数時間から数日以内に、血管原性浮腫が起こり得る。このことは、脳浮腫について、異なる時点で異なる処置を行うことを示唆する。
【００２４】
膠芽腫は、一般的な侵攻性の悪性原発脳腫瘍である。Ｕ８７ヒト膠芽腫細胞系においてＡＱＰ４を阻害すると、アポトーシスが誘発される。
【００２５】
癲癇性発作への傾向は、細胞と細胞外空間（ＥＣＳ）との相対体積と関連があることが報告されている。異常興奮性および癲癇様活動の増加は、ＥＣＳ体積を低下させる低張暴露に起因し、一方で癲癇様活動の減弱化は、高浸透圧媒体に起因する。発作誘導性の細胞膨張を遮断するフロセミドは、インビトロおよびインビボで癲癇様活動を阻害することが報告されている。ＡＱＰ４ノックアウトマウスは、痙攣誘発剤であるペンチレンテトラゾールに対して低い発作感受性を示し、海馬における電気刺激により発作を誘導した場合に、電子画像で高い発作閾値を示すことが報告されている。ＡＱＰ４ノックアウトマウスは、野性型マウスと比較して、海馬刺激により誘起される発作を延期したことも報告された。
【００２６】
ＡＱＰ４は、網膜のミュラー細胞で発現される。虚血後の網膜損傷の発生機序にミュラー細胞が関与することが研究により示唆されている。マウスにおいてＡＱＰ４欠失により、網膜虚血後の網膜の機能および構造が有意に保存されることが報告されている。
【００２７】
ＡＱＰ４は、哺乳動物の心臓に見られることが報告されている。ヒトの心臓においてＡＱＰ４が発現されることは、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方で報告されている。虚血の結果として心筋中に水が蓄積するが、このとき虚血組織は高浸透圧性となり、毛細血管腔から水を引き寄せる。この水は、心筋の細胞、例えば心筋細胞へと輸送される。再潅流により、正常浸透圧の血液が高浸透圧性細胞にもたらされ、これがさらなる細胞膨張を導き、これにはリスク域外の細胞も巻き込まれ得る。この水の蓄積により、心臓機能が著しく低下し、酸素および栄養の供給不足を悪化させる。心筋の虚血／再潅流障害とは、心臓における虚血後の再潅流により生じる損傷をいう。ＡＱＰ４ノックアウトマウスは、エクソビボの虚血−再潅流後、およびインビボの再潅流なしの虚血後の両方で、梗塞サイズを縮小したことが報告されている。ＡＱＰ４ノックアウトの遺伝子型が、虚血性損傷に対する耐性増加を付与すると結論づけられた。
【００２８】
視神経脊髄炎（ＮＭＯ）は、視神経および脊髄に主に影響を及ぼす神経炎症性の脱髄性疾患である。ＮＭＯの特徴は、ＡＱＰ４上の細胞外エピトープに対する血清抗体の存在である。全てではないとしても大部分のＮＭＯ患者が、ＡＱＰ４自己抗体（ＮＭＯ−ＩｇＧ）に対して血清反応陽性であることが報告されている。星状膠細胞におけるＡＱＰ４へのＮＭＯ−ＩｇＧの結合により、炎症性カスケードが開始し、その結果としての神経炎症およびミエリン損失が神経障害を生じさせると考えられる。そのような抗体のＡＱＰ４への結合を遮断すれば、炎症性カスケードの開始を防ぎうる。
【００２９】
一実施形態において、本発明は、アクアポリン、例えばＡＱＰ４により仲介される浮腫を処置する方法を提供する。該浮腫は、低酸素症、例えば全身性低酸素症、例えば、血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫、例えば心不全、卒中またはその他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫であるか、または心臓虚血またはその他の心臓への血流遮断の結果生じる心臓浮腫である。低酸素症は、代謝性アシドーシス（例えば、乳酸アシドーシス）を引き起こし得、これが浮腫を導き、この浮腫自体が血液潅流を低下させて細胞死および予後不良を導き得る（特に、膨張が物理的に制約される組織、例えば頭蓋内または心膜内において）。この低酸素症が、例えば、心不全から蘇生した患者が脳腫脹および心臓組織の損傷を示し得る理由であると考えられる。ＡＱＰ４などのアクアポリンチャンネルを遮断すること、例えば、本明細書に記載されるようなアクアポリン阻害化合物の投与により遮断することにより、この浮腫が阻害または抑制され、それにより罹患組織のさらなる損傷が制限される。
【００３０】
アクアポリン−２（ＡＱＰ２）は、腎臓の集合管における水移動の主要経路である。この水チャンネルを遮断すると、電解質不均衡を起こさず、またはバソプレッシンレセプター仲介シグナル伝達を妨害せずに、水の再吸収が低下される。ＡＱＰ２ブロッカーが、電解質不均衡をもたらさない、低ナトリウム血症のための有効な処置であるという証拠は、機能的ＡＱＰ２を欠く尿崩症患者から得られる。このような患者は、慢性的な水利尿を示すが、（もし正常な水和作用が維持されれば）ＡＱＰ２機能の長期損失による他の影響を何ら示さない。
【００３１】
したがって本発明は、ＢＢＢからの水取り込みの阻害により、水分不均衡の疾患または症状、例えば浮腫、特に脳および脊髄の浮腫（例えば、外傷または虚血性脳梗塞後のもの）、また、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、低酸素症、水中毒、肝不全、肝性脳症、低酸素症および糖尿病性ケトアシドーシスに関連する浮腫を抑制するため、ならびに、腎臓での水取り込みの阻害により、低ナトリウム血症および過剰な水分貯留を処置および抑制するための、アクアポリン阻害剤の使用を提供するものである。本発明は、癲癇、網膜虚血、および他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患、心筋虚血、心筋虚血／再潅流傷害、心筋梗塞、心筋低酸素症、うっ血性心不全、敗血症、視神経脊髄炎および片頭痛疾患を包含する疾患または症状を抑制するためのアクアポリン阻害剤の使用も提供する。
【００３２】
一実施形態において、本発明は、有効量のフェニルベンズアミド化合物、例えば有効量のニクロサミド（５−クロロ−Ｎ−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−２−ヒドロキシベンズアミド）または式Ｉ：
【化４】
2016535787.tif 000006
［式中、Ｘは、連結基を表し、その主鎖の原子数は２〜５であり（前記連結基は、置換されていてもよい）、Ａは水素原子、または置換されていてもよいアシル基、または置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基を表すか、またはＡは連結基Ｘと結合して、置換されていてもよい環状構造を形成してもよく、Ｅは置換されていてもよいアリール基または置換されていてもよいヘテロアリール基を表し、環Ｚは、式−Ｏ−Ａ（式中、Ａは上記と同意義である）により表される基および式−Ｘ−Ｅ（式中、ＸおよびＥは上記と同意義である）により表される基の他に１以上の置換基を有してもよいアレーンを表すか、または式−Ｏ−Ａ（式中、Ａは上記と同意義である）により表される基および式−Ｘ−Ｅ（式中、ＸおよびＥは上記と同意義である）により表される基の他に１以上の置換基を有してもよいヘテロアレーンを表す］
で示される化合物を、遊離または医薬上許容される塩形態（溶媒和物または水和物形態を包含する）にて、必要な患者に投与することを含む、アクアポリンにより仲介される疾患または症状を処置または抑制する方法（方法１）を提供するものである。方法１は例えば、下記の方法である：
【００３３】
１.１.    式Ｉの化合物が、ＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１またはＵＳ７,７００,６５５に記載される式（Ｉ）の化合物、例えばそこに記載される一般式（Ｉ）、（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）および（Ｉ−４）の化合物、例えばＵＳ２０１０／０２７４０５１に記載される化合物番号１〜２２３またはＵＳ７,７００,６５５に記載される化合物番号３０１〜５５５から選択される、方法１。
【００３４】
１.２.    式Ｉの化合物が、遊離または医薬上許容される塩形態の下記化合物から選択される、方法１.１： 
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−フルオロ−２−ヒドロキシベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−シアノ−２−ヒドロキシベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（１,１,２,２,２−ペンタフルオロエチル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−（２,２−ジシアノエテン−１−イル）−２−ヒドロキシベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−エチニル−２−ヒドロキシベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（フェニルエチニル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−［（トリメチルシリル）エチニル］ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−４−ヒドロキシビフェニル−３−カルボキサミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（３−チエニル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（１−ピロリル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（２−メチルチアゾル−４−イル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（２−ピリジル）ベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−ジメチルスルファモイル−２−ヒドロキシベンズアミド、
Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシ−５−（ピロール−１−スルホニル）ベンズアミド、
Ｎ−［２,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド、
Ｎ−（２,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル−５−ブロモ−２−ヒドロキシベンズアミド、
２−アセトキシ−Ｎ−［２,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−クロロベンズアミド、
２−アセトキシ−Ｎ−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−５−クロロベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−［２−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−［２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−ブロモ−Ｎ−［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
２−アセトキシ−５−クロロ−Ｎ−［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−［３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−ブロモ−Ｎ−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−［３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−ブロモ−Ｎ−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−ニトロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−ブロモ−Ｎ−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−メチル−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
２−ヒドロキシ−５−メチル−Ｎ−［２−メチル−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［４−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
２−ヒドロキシ−５−メチル−Ｎ−［４−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−ブロモ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−メトキシ−５−トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−ブロモ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［３−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［４−メトキシ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−メチルスルファニル−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２−（１−ピロリジノ）−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−クロロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［２”−モルホリノ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、
５−ブロモ−Ｎ−［５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）チアゾル−２−イル］−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−クロロ−Ｎ−｛５−シアノ−４−［（１,１−ジメチル）エチル］チアゾル−２−イル｝−２−ヒドロキシベンズアミド、
５−ブロモ−Ｎ−｛５−シアノ−４−［（１,１−ジメチル）エチル］チアゾル−２−イル｝−２−ヒドロキシベンズアミド、
２−（５−ブロモ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−４−（トリフルオロメチル）チアゾル−５−カルボン酸エチルエステル。
【００３５】
１.３.    ＡがＣ１−４アシル（例えば、アセチル）である、方法１。
【００３６】
１.４.    化合物が、ＵＳ７,６２６,０４２に記載される式Ｉの化合物、例えば、式Ｉ−１の化合物、例えばＵＳ７,６２６,０４２に記載される化合物番号１〜１５１のいずれかである、方法１。
【００３７】
１.５.    ＡがＣ１−４アシル（例えば、アセチル）である、方法１.４。
【００３８】
１.６.    Ａがアミノ酸の残基である、方法１。
【００３９】
１.７.    Ａが、５〜６員非芳香族性複素環式環−カルボニル基、例えば複素環式環が環構成原子（環形成原子）として少なくとも１つの窒素原子を含み、該窒素原子においてカルボニル基に結合している５〜６員非芳香族性複素環式環−カルボニル基であり、ここで、例えば、前記５〜６員非芳香族性複素環式環は、１−ピロリジニル基、ピペラジノ基、モルホリノ基および１−ピペラジニル基から選択され、前記複素環式環は１以上の置換基（例えば、アルキル基、アルキル−オキシ−カルボニル基およびカルボキシ基から独立して選択される）により置換されていてもよく；例えば、Ａが（モルホリン−４−イル）カルボニルである、方法１。
【００４０】
１.８.    Ａが、Ｎ,Ｎ−ジ置換カルバモイル基であり、ここで、前記カルバモイル基の２つの置換基は共同で、それらが結合する窒素原子と一体となって、置換されていてもよい窒素含有複素環基を形成してもよい、方法１。
【００４１】
１.９.    Ａが（モルホリン−４−イル）カルボニルである、方法１。
【００４２】
１.１０.    Ａが、置換されたホスホノ基、例えばジベンジルホスホノであるか、または置換されていないホスホノ基である、方法１。
【００４３】
１.１１.    式Ｉの化合物が、遊離または医薬上許容される塩の形態の式１ａ：
【化５】
2016535787.tif 000007
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、ハロ、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル（例えば、トリフルオロメチル）およびシアノから選択され；Ｒ６は、Ｈおよび生理学的に加水分解可能で許容されるアシルから選択され、例えば、Ｒ６は方法１〜１.９のいずれかにおいて規定される前記Ａである］
の化合物である、方法１。
【００４４】
１.１２.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物（ここで、Ｒ１は、トリフルオロメチル、クロロ、フルオロおよびブロモから選択され；Ｒ３およびＲ５は、同一または異なって、トリフルオロメチル、クロロ、フルオロおよびブロモから選択され；Ｒ２およびＲ４は、いずれもＨである）である、方法１.１１。
【００４５】
１.１３.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物（ここで、Ｒ１は、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３およびＲ５は、いずれもトリフルオロメチルであり；Ｒ２、Ｒ４およびＲ６は、いずれもＨである）であり、例えば式１ａの化合物は、
【化６】
2016535787.tif 000008
から選択される、方法１.１２。
【００４６】
１.１４.    Ｒ６がＨである、方法１.１１または１.１２。
【００４７】
１.１５.    Ｒ６がアセチルである、方法１.１１または１.１２。
【００４８】
１.１６.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物（ここで、Ｒ１は、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３およびＲ５は、いずれもトリフルオロメチルであり；Ｒ２およびＲ４はＨであり、Ｒ６はアセチルである）であり、例えば式１ａの化合物が、
【化７】
2016535787.tif 000009
から選択される、方法１.１１または１.１２。
【００４９】
１.１７.    式１ａの化合物が化合物１：
【化８】
2016535787.tif 000010
である、方法１.１３。
【００５０】
１.１８.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物（ここで、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５は各々クロロであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６は各々Ｈである）（化合物３）である、方法１.１２。
【００５１】
１.１９.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物（ここで、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５は各々トリフルオロメチルであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６は各々Ｈである）（化合物４）である、方法１.１２。
【００５２】
１.２０.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物であり、Ｒ６がＣ１−４アシル（例えば、アセチル）である、方法１.１１または１.１２。
【００５３】
１.２１.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物であり、Ｒ６がアミノ酸の残基である、方法１.１１または１.１２。
【００５４】
１.２２.    式Ｉの化合物が式１ａの化合物であり、Ｒ６が５〜６員非芳香族性複素環式環−カルボニル基、例えば複素環式環が環構成原子（環形成原子）として少なくとも１つの窒素原子を含み、該窒素原子においてカルボニル基に結合している５〜６員非芳香族性複素環式環−カルボニル基であり、ここで、例えば、前記５〜６員非芳香族性複素環式環は、１−ピロリジニル基、ピペラジノ基、モルホリノ基および１−ピペラジニル基から選択され、前記複素環式環は１以上の置換基（例えば、アルキル基、アルキル−オキシ−カルボニル基およびカルボキシ基から独立して選択される）により置換されていてもよく；例えば、Ｒ６が（モルホリン−４−イル）カルボニルである、方法１.１１または１.１２。
【００５５】
１.２３.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物であり、Ｒ６がＮ,Ｎ−ジ置換カルバモイル基であり、ここで、前記カルバモイル基の２つの置換基は共同で、それらが結合する窒素原子と一体となって、置換されていてもよい窒素含有複素環基を形成してもよい、方法１.１１または１.１２。
【００５６】
１.２４.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物であり、Ｒ６が（モルホリン−４−イル）カルボニル基である、方法１.１１または１.１２。
【００５７】
１.２５.    式Ｉの化合物が、式１ａの化合物であり、Ｒ６が置換されたホスホノ基（例えば、ジベンジルホスホノ）であるか、または置換されていないホスホノ基である、方法１.１１または１.１２。
【００５８】
１.２６.    式１ａの化合物が、
【化９】
2016535787.tif 000011
から選択される、方法１.２５。
【００５９】
１.２７.    式１ａの化合物が、化合物５：
【化１０】
2016535787.tif 000012
である、方法１.２６。
【００６０】
１.２８.    フェニルベンズアミド化合物がニクロサミドまたは式：
【化１１】
2016535787.tif 000013
の化合物である、方法１。
【００６１】
１.２９.    アクアポリンがＡＱＰ４である、方法１以下のいずれかの方法。
【００６２】
１.３０.    処置または抑制される症状が、浮腫、例えば脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫（例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫）または例えば脊髄浮腫（例えば、脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫）から選択される、方法１以下のいずれかの方法。
【００６３】
１.３１.    静脈流出を促進する最適な頭頸部の位置調整（例えば、頭部挙上３０°）；脱水の回避；全身性血圧降下；正常体温または低体温の維持；積極的手段（aggressive measures）；浸透圧療法、例えば、マンニトールまたは高張食塩水を使用すること；過換気；脳灌流を増強する治療的昇圧療法；脳代謝（ＣＭＯ２）を減少させるバルビツレートの投与；半頭蓋切除；アスピリンの投与；アマンタジンの投与；静脈内血栓溶解（例えば、ｒｔＰＡの使用）；機械的血栓除去；血管形成術；および／またはステント、から選択される１以上の処置をさらに含む、方法１.３０。
【００６４】
１.３２.    患者が、脳浮腫、例えば頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスによる脳浮腫のリスクが高い状態にある、方法１以下のいずれかの方法。
【００６５】
１.３３.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患っている、方法１.３０。
【００６６】
１.３４.    患者が卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患ってから、１２時間以内、例えば６時間以内、好ましくは３時間以内に処置が開始される、方法１.３３。
【００６７】
１.３５.    患者が、例えば戦闘あるいは運動競技において、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患うリスクが高い状態にある、方法１.３０。
【００６８】
１.３６.    患者が、既に脳浮腫を有している、方法１以下のいずれかの方法。
【００６９】
１.３７.    処置または抑制される症状が、卒中または外傷性脳損傷の結果生じる脳浮腫である、方法１以下のいずれかの方法。
【００７０】
１.３８.    処置または抑制される症状が、中大脳動脈梗塞の結果生じる脳浮腫である、方法１以下のいずれかの方法。
【００７１】
１.３９.    処置または抑制される症状が、閉鎖性頭部外傷の結果生じる脳浮腫である、方法１以下のいずれかの方法。
【００７２】
１.４０.    処置または抑制される症状が、癲癇性発作の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３２のいずれかの方法。
【００７３】
１.４１.    処置または抑制される症状が、感染の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３２のいずれかの方法。
【００７４】
１.４２.    処置または抑制される症状が、代謝障害の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３２のいずれかの方法。
【００７５】
１.４３.    処置または抑制される症状が、神経膠腫の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３２のいずれかの方法。
【００７６】
１.４４.    処置または抑制される症状が、髄膜炎、急性高山病または水中毒の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３２のいずれかの方法。
【００７７】
１.４５.    処置または抑制される症状が、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫である、１〜１.３２のいずれかの方法。
【００７８】
１.４６.    処置または抑制される症状が、膿瘍の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００７９】
１.４７.    処置または抑制される症状が、子癇の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００８０】
１.４８.    処置または抑制される症状が、クロイツフェルト−ヤコブ病の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００８１】
１.４９.    処置または抑制される症状が、ループス脳炎の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００８２】
１.５０.    処置または抑制される症状が、低酸素症の結果生じる浮腫、例えば全身性低酸素症、例えば血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫であって、例えば、心不全、卒中または他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫であるか、または心臓虚血または他の心臓への血流の遮断の結果生じる心臓浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００８３】
１.５１.    処置または抑制される症状が、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる脳浮腫、および／または視神経浮腫、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる視神経浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００８４】
１.５２.    処置または抑制される症状が、侵襲性中枢神経系処置、例えば神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、動脈瘤修復または深部脳刺激の結果生じる脳浮腫である、１〜１.３１のいずれかの方法。
【００８５】
１.５３.    患者が、浮腫、例えば微小重力および／または放射線暴露、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、動脈瘤修復または深部脳刺激による浮腫のリスクが高い状態にある、方法１.５１または１.５２。
【００８６】
１.５４.    患者が、既に浮腫を有している、方法１.５１または１.５２。
【００８７】
１.５５.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法１以下のいずれかの方法。
【００８８】
１.５６.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法１〜１.４５または１.５０のいずれかの方法。
【００８９】
１.５７.    処置または抑制される症状が、脊髄浮腫、例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫である、方法１〜１.３０いずれかの方法。
【００９０】
１.５８.    処置または抑制される症状が、脊髄圧迫の結果生じる脊髄浮腫である、方法１.５７。
【００９１】
１.５９.    処置または抑制される症状が、網膜浮腫である、方法１〜１.３０のいずれかの方法。
【００９２】
１.６０.    処置または抑制される症状が、肺浮腫である、方法１〜１.３０のいずれかの方法。
【００９３】
１.６１.    処置または抑制される症状が、癲癇である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【００９４】
１.６２.    処置または抑制される症状が、網膜虚血、または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【００９５】
１.６３.    処置または抑制される症状が、心筋虚血である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【００９６】
１.６４.    処置または抑制される症状が、心筋虚血／再潅流傷害である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【００９７】
１.６５.    処置または抑制される症状が、心筋梗塞である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【００９８】
１.６６.    処置または抑制される症状が、心筋低酸素症である、方法１〜１.２９いずれかの方法。
【００９９】
１.６７.    処置または抑制される症状が、うっ血性心不全である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１００】
１.６８.    処置または抑制される症状が、敗血症である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１０１】
１.６９.    処置または抑制される症状が、片頭痛である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１０２】
１.７０.    処置または抑制される症状が、膠芽腫である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１０３】
１.７１.    処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１０４】
１.７２.    処置または抑制される症状が、多発性硬化症である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１０５】
１.７３.    アクアポリンがＡＱＰ２である、方法１〜１.２８のいずれかの方法。
【０１０６】
１.７４.    処置される症状が、低ナトリウム血症または過剰な水分貯留（例えば、うっ血性心不全などの心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害、抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、または不妊治療、例えば不妊治療の結果生じるもの）である、方法１〜１.２８または１.７３のいずれかの方法。
【０１０７】
１.７５.    処置または抑制される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、方法１〜１.２８または１.７３のいずれかの方法。
【０１０８】
１.７６.    食事性ナトリウム、水分および／またはアルコールの１以上の制限；および／または１以上の利尿薬、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アルドステロン阻害剤、アンギオテンシンレセプターブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリンアンタゴニス（β−ブロッカー）および／またはジゴキシンの投与をさらに含む、方法１〜１.２８、１.７３、１.７４または１.７５のいずれかの方法。
【０１０９】
１.７７.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でアクアポリン活性（例えば、ＡＱＰ２および／またはＡＱＰ４活性）を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２および／またはＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法１以下のいずれかの方法。
【０１１０】
１.７８.    処置または抑制される症状が、視神経脊髄炎である、方法１〜１.２９のいずれかの方法。
【０１１１】
１.７９.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が経口投与される、方法１以下のいずれかの方法。
【０１１２】
１.８０.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が非経口投与される、方法１以下のいずれかの方法。
【０１１３】
１.８１.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が静脈内投与される、方法１.８０。
【０１１４】
１.８２.    患者がヒトである、方法１以下のいずれかの方法。
【０１１５】
１.８３.    方法１〜１.２８において規定される化合物いずれかの作用開始が、かなり急速である、方法１以下のいずれかの方法。
【０１１６】
本発明は、アクアポリンにより仲介される疾患または症状の処置または抑制、例えば方法１、１.１以下のいずれかの方法において使用するための、フェニルベンズアミド、例えば、ニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物をさらに提供する。
【０１１７】
本発明は、アクアポリンにより仲介される疾患または症状の処置または抑制のため、例えば方法１、１.１以下のいずれかにおける使用のための医薬の製造における、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物をさらに提供する。
【０１１８】
本発明は、アクアポリンにより仲介される疾患または症状の処置または抑制のため、例えば方法１、１.１以下のいずれかにおける使用のための、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物を、医薬上許容し得る希釈剤または担体と共に含む医薬組成物をさらに提供する。
【０１１９】
フェニルベンズアミド、例えば前記式Ｉまたは式１ａのフェニルベンズアミドは、遊離または塩の形態で、例えば酸付加塩として存在してよい。本明細書において、別段の記載が無ければ、例えば「式Ｉまたは式１ａの化合物」なる用語は、該化合物のあらゆる形態、例えば遊離塩基または酸付加塩の形態を包含するものと理解されるべきである。医薬上許容される塩は当分野において知られており、投与される量および形態で生理学的に許容し得る塩（例えば、塩酸塩）を包含する。
【０１２０】
アシル基の例としては、例えば、ホルミル基、グリオキシロイル基、チオホルミル基、カルバモイル基、チオカルバモイル基、スルファモイル基、スルフィナモイル基、カルボキシ基、スルホ基、ホスホノ基、および以下の式により示される基が挙げられる：
【化１２】
2016535787.tif 000014
【化１３】
2016535787.tif 000015
【化１４】
2016535787.tif 000016
［式中、Ｒａ１およびＲｂ１は、同一または異なって、炭化水素基または複素環基を表すか、またはＲａ１およびＲｂ１は共同で、それらが結合する窒素原子と一体となって環状アミノ基を形成する］。アシルは、生理学的に加水分解可能で許容しうるアシル基を包含する。本明細書において例えば「Ａ」に関して用いられる「置換されていてもよいアシル基」のアシル基の例は、上記定義のアシル基と同様の基を包含する。「Ａ」は、以下の置換基ωから選択される基である：
［置換基ω］置換されていてもよい炭化水素−カルボニル基、置換されていてもよい複素環式環−カルボニル基、置換されていてもよい炭化水素−オキシ−カルボニル基、置換されていてもよい炭化水素−スルホニル基、置換されていてもよいスルファモイル基、置換されていてもよいスルホ基、置換されていてもよいホスホノ基、および置換されていてもよいカルバモイル基。本明細書において、例えば式Ｉまたは式１ａの化合物における「Ａ」または「Ｒ６」に関して使用される用語「生理学的に加水分解可能で許容し得るアシル」は、酸、例えばカルボン酸、カルバミン酸またはリン酸の残基［例えば、場合により置換されたカルボニル、例えばアセチルまたはアミノ酸残基、場合により置換されたカルバモイル、例えば（モルホリン−４−イル）カルボニル、または場合により置換されたホスホノ、例えばジベンジルホスホノ］を意味し、酸素に、例えば前記式Ｉまたは式１ａに示されるように結合して、例えば式Ｉまたは式１ａの化合物のエステルまたはリン酸エステルを形成し、これは生理学的条件下に前記酸素から加水分解されて、投与される用量で生理学的に忍容される酸と、ＡまたはＲ６がＨである対応する式Ｉまたは式１ａのヒドロキシ化合物とを生成することができる。理解されるであろうが、この用語はこのように従来の医薬プロドラッグ形態を包含するが、化合物が活性となるために加水分解されることは必ずしも必要ではない。アシル化合物は、従来の方法により、例えば好適な酸または酸ハライドによる式１または式１ａの化合物（ここで、ＡまたはＲ６はＨである）のアシル化により製造され得る。アシル化化合物の例およびその製造方法は、例えばＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１、ＵＳ７,７００,６５５およびＵＳ７,６２６,０４２に記載されており、これらを引用により本明細書の一部とする。
【０１２１】
用語「患者」は、ヒトまたはヒト以外（即ち、動物）の患者を包含する。特定の実施形態において、本発明は、ヒトおよびヒト以外の両方を包含する。別の実施形態において、本発明は、ヒト以外を包含する。別の実施形態において、この用語はヒトを包含する。
【０１２２】
作用の開始に関して、用語「かなり急速」とは、化合物が投与されてから応答が観察されるまでに要する時間が、３０分またはそれ以下、例えば２０分またはそれ以下、例えば１５分またはそれ以下、例えば１０分またはそれ以下、例えば５分またはそれ以下、例えば１分またはそれ以下であることを意味する。
【０１２３】
本発明の方法において使用するためのフェニルベンズアミド、例えば前記式１または式１ａのフェニルベンズアミドは、単独の処置剤として使用しうるが、他の有効成分と組み合せるかまたは併用して投与してもよく、例えば、脳浮腫、卒中、外傷性脳損傷、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、感染、代謝障害、低酸素症、水中毒、肝不全、肝性脳症、糖尿病性ケトアシドーシス、膿瘍、子癇、クロイツフェルト−ヤコブ病、ループス脳炎、視神経浮腫、低ナトリウム血症、水分貯留、卵巣過剰刺激症候群、癲癇、網膜虚血または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患、心筋虚血、心筋虚血／再潅流傷害、心筋梗塞、心筋低酸素症、うっ血性心不全、敗血症、視神経脊髄炎、膠芽腫、または片頭痛のための従来の処置法と組み合わせて使用しうる。
【０１２４】
さらなる実施形態において、本発明は、浮腫、例えば脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫（例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、低酸素症、水中毒、肝不全、肝性脳症、糖尿病性ケトアシドーシス、膿瘍、子癇、クロイツフェルト−ヤコブ病またはループス脳炎の結果生じる脳浮腫）、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる浮腫、侵襲性の中枢神経系処置（例えば、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、動脈瘤修復または深部脳刺激）の結果生じる浮腫、または例えば網膜浮腫、または例えば脊髄浮腫（例えば、脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫）、または例えば肺浮腫を処置または抑制する方法であって、有効量のＡＱＰ４阻害剤、例えばＡＱＰ４に結合する化合物を、それが必要な患者に投与することを含み、該ＡＱＰ４阻害剤は例えば、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかから選択される、方法を提供するものである（方法２）。以下はその例であ：
【０１２５】
２．
２.１.    静脈流出を促進する最適な頭頸部の位置調整（例えば、頭部挙上３０°）；脱水の回避；全身性血圧降下；正常体温または低体温の維持；積極的手段；浸透圧療法、例えば、マンニトールまたは高張生理食塩水を使用すること；過換気；脳灌流を増強する治療的昇圧療法；脳代謝（ＣＭＯ２）を減少させるバルビツレートの投与；半頭蓋切除；アスピリンの投与；アマンタジンの投与；静脈内血栓溶解（例えば、ｒｔＰＡを使用する）；機械的血栓除去；血管形成術；および／またはステント、から選択される１以上の処置をさらに含む方法２。
【０１２６】
２.２.    患者が、脳浮腫、例えば頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスによる脳浮腫のリスクが高い状態にある、方法２または２.１。
【０１２７】
２.３.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患っている、方法２、２.１または２.２。
【０１２８】
２.４.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患ってから、１２時間以内、例えば６時間以内、好ましくは３時間以内に処置が開始される、方法２以下のいずれかの方法。
【０１２９】
２.５.    患者が、例えば戦闘あるいは運動競技において、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患うリスクが高い状態にある、方法２以下のいずれかの方法。
【０１３０】
２.６.    患者が、既に脳浮腫を有している、方法２以下のいずれかの方法。
【０１３１】
２.７.    処置または抑制される症状が、卒中または外傷性脳損傷の結果生じる脳浮腫である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１３２】
２.８.    処置または抑制される症状が、中大脳動脈梗塞の結果生じる脳浮腫である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１３３】
２.９.    処置または抑制される症状が、閉鎖頭部外傷の結果生じる脳浮腫である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１３４】
２.１０.    処置または抑制される症状が、癲癇性発作の結果生じる脳浮腫である、方法２〜２.２いずれかの方法。
【０１３５】
２.１１.    処置または抑制される症状が、感染の結果生じる脳浮腫である、方法２〜２.２のいずれかの方法。
【０１３６】
２.１２.    処置または抑制される症状が、代謝障害の結果生じる脳浮腫である、方法２〜２.２のいずれかの方法。
【０１３７】
２.１３.    処置または抑制される症状が、神経膠腫の結果生じる脳浮腫である、方法２〜２.２のいずれかの方法。
【０１３８】
２.１４.    処置または抑制される症状が、髄膜炎、急性高山病または水中毒の結果生じる脳浮腫である、方法２〜２.２のいずれかの方法。
【０１３９】
２.１５.    処置または抑制される症状が、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫である、方法２〜２.２のいずれかの方法。
【０１４０】
２.１６.    処置または抑制される症状が、膿瘍の結果生じる脳浮腫である、方法２または２.１。
【０１４１】
２.１７.    処置または抑制される症状が、子癇の結果生じる脳浮腫である、方法２または２.１。
【０１４２】
２.１８.    処置または抑制される症状が、クロイツフェルト−ヤコブ病の結果生じる脳浮腫である、方法２または２.１。
【０１４３】
２.１９.    処置または抑制される症状が、ループス脳炎の結果生じる脳浮腫である、方法２または２.１。
【０１４４】
２.２０.    処置または抑制される症状が、例えば宇宙飛行による微小重力暴露または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業の結果生じる脳浮腫、および／または視神経浮腫、例えば宇宙飛行による微小重力暴露または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業の結果生じる視神経浮腫である、方法２または２.１。
【０１４５】
２.２１.    処置または抑制される症状が、侵襲性中枢神経系処置、例えば神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激の結果生じる脳浮腫である、方法２または２.１。
【０１４６】
２.２２.    患者が、浮腫、例えば、微小重力および／または放射線暴露、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、動脈瘤修復または深部脳刺激による浮腫のリスクが高い状態にある、方法２.２０または２.２１。
【０１４７】
２.２３.    患者が、既に浮腫を有している、方法２.２０または２.２１。
【０１４８】
２.２４.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１４９】
２.２５.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法２−２.１５以下のいずれかの方法。
【０１５０】
２.２６.    処置または抑制される症状が、脊髄浮腫、例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫である、方法２。
【０１５１】
２.２７.    処置または抑制される症状が、脊髄圧迫の結果生じる脊髄浮腫である、方法２.２６。
【０１５２】
２.２８.    処置または抑制される症状が、網膜浮腫である、方法２。
【０１５３】
２.２９.    処置または抑制される症状が、肺浮腫である、方法２。
【０１５４】
２.３０.    ＡＱＰ４阻害剤が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法２以下のいずれかの方法。
【０１５５】
２.３１.    ＡＱＰ４阻害剤による処置の期間が、２１日未満、例えば２週間未満、例えば１週間またはそれ以下である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１５６】
２.３２.    ＡＱＰ４阻害剤が経口投与される、方法２以下のいずれかの方法。
【０１５７】
２.３３.    ＡＱＰ４阻害剤が非経口投与される、方法２以下のいずれかの方法。
【０１５８】
２.３４.    ＡＱＰ４阻害剤が静脈内投与される、方法２.３３。
【０１５９】
２.３５.    患者がヒトである、方法２以下のいずれかの方法。
【０１６０】
２.３６.    方法１〜１.２８において規定される化合物いずれかの作用開始が、かなり急速である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１６１】
２.３７.    浮腫が、低酸素症、例えば全身性低酸素症、例えば血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫、例えば心不全または他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫である、方法２以下のいずれかの方法。
【０１６２】
さらなる実施形態において、本発明は、低ナトリウム血症または過剰な水分貯留（例えば、うっ血性心不全などの心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害、抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、または不妊治療、例えば不妊治療の結果生じるもの）から選択される症状を処置または抑制する方法であって、有効量のＡＱＰ２阻害剤、例えばＡＱＰ２に結合する化合物を、その必要のある患者に投与することを含み、例えばここで、該ＡＱＰ２阻害剤が、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかから選択される、方法を提供するものである（方法３）。以下はその例である：
【０１６３】
３．
３.１.    処置または抑制される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、方法３。
【０１６４】
３.２.    食事性ナトリウム、水分および／またはアルコールの１以上の制限；および／または１以上の利尿薬、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アルドステロン阻害剤、アンギオテンシンレセプターブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリンアンタゴニス（β−ブロッカー）および／またはジゴキシンの投与をさらに含む、方法３または３.１。
【０１６５】
３.３.    ＡＱＰ２阻害剤が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＱＰ２活性を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法３以下のいずれかの方法。
【０１６６】
３.４.    ＡＱＰ２阻害剤が経口投与される、方法３以下のいずれかの方法。
【０１６７】
３.５.    ＡＱＰ２阻害剤が非経口投与される、方法３以下のいずれかの方法。
【０１６８】
３.６.    ＡＱＰ２阻害剤が静脈内投与される、方法３.５。
【０１６９】
３.７.    患者がヒトである、方法３以下のいずれかの方法。
【０１７０】
３.８.    方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかの作用開始がかなり急速である、方法３以下のいずれかの方法。
【０１７１】
さらなる実施形態において、本発明は、癲癇、網膜虚血または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患、心筋虚血、心筋虚血／再潅流傷害、心筋梗塞、心筋低酸素症、うっ血性心不全、敗血症、視神経脊髄炎、膠芽腫、線維筋痛症、多発性硬化症、あるいは片頭痛から選択される症状を処置または抑制する方法であって、有効量のＡＱＰ４阻害剤、例えばＡＱＰ４に結合する化合物を、その必要のある患者に投与することを含み、例えばここで、該ＡＱＰ４阻害剤が、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式Ｉａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかから選択される、方法を提供するものである（方法４）。以下はその例である：
【０１７２】
４.
４.１.    処置または抑制される症状が、網膜虚血、または眼圧および／または組織水和異常に関連のある他の眼疾患である、方法４。
【０１７３】
４.２.    処置または抑制される症状が、心筋虚血である、方法４。
【０１７４】
４.３.    処置または抑制される症状が、心筋虚血／再潅流傷害である、方法４。
【０１７５】
４.４.    処置または抑制される症状が、心筋梗塞である、方法４。
【０１７６】
４.５.    処置または抑制される症状が、心筋低酸素症である、方法４。
【０１７７】
４.６.    処置または抑制される症状が、うっ血性心不全である、方法４。
【０１７８】
４.７.    処置または抑制される症状が、敗血症である、方法４。
【０１７９】
４.８.    処置または抑制される症状が、視神経脊髄炎である、方法４。
【０１８０】
４.９.    処置または抑制される症状が、片頭痛である、方法４。
【０１８１】
４.１０.    処置または抑制される症状が、膠芽腫である、方法４。
【０１８２】
４.１１.    処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、方法４。
【０１８３】
４.１２.    処置または抑制される症状が、多発性硬化症である、方法４。
【０１８４】
４.１３.    ＡＱＰ４阻害剤が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法４以下のいずれかの方法。
【０１８５】
４.１４.    ＡＱＰ４阻害剤が経口投与される、方法４以下のいずれかの方法。
【０１８６】
４.１５.    ＡＱＰ４阻害剤が非経口投与される、方法４以下のいずれかの方法。
【０１８７】
４.１６.    ＡＱＰ４阻害剤が静脈内投与される、方法４.１５。
【０１８８】
４.１７.    患者がヒトである、方法４以下のいずれかの方法。
【０１８９】
４.１８.    方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかの作用の開始が、かなり急速である、方法４以下のいずれかの方法。
【０１９０】
さらなる実施形態において、本発明は、アクアポリンにより仲介される疾患または症状を処置または抑制する方法であって、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかを、アクアポリンを阻害するのに有効な量で、必要な患者に投与することを含む方法を提供する（方法５）。以下はその例である：
【０１９１】
５.
５.１.    アクアポリンがＡＱＰ４である、方法５。
【０１９２】
５.２.    処置または抑制される症状が、浮腫、例えば脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫（例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫）または例えば脊髄浮腫（例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫）から選択される、方法５または５.１。
【０１９３】
５.３.    静脈流出を促進する最適な頭頸部の位置調整（例えば、頭部挙上３０°）；脱水の回避；全身性血圧降下；正常体温または低体温の維持；積極的手段；浸透圧療法、例えば、マンニトールまたは高張生理食塩水を使用すること；過換気；脳灌流を増強する治療的昇圧療法；脳代謝（ＣＭＯ２）を減少させるバルビツレートの投与；半頭蓋切除；アスピリンの投与；アマンタジンの投与；静脈内血栓溶解（例えば、ｒｔＰＡを使用する）；機械的血栓除去；血管形成術；および／またはステント、から選択される１以上の処置をさらに含む、方法５.２。
【０１９４】
５.４.    患者が、脳浮腫、例えば頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスによる脳浮腫のリスクが高い状態にある、方法５以下のいずれかの方法。
【０１９５】
５.５.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患っている、方法５以下のいずれかの方法。
【０１９６】
５.６.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患ってから、１２時間以内、例えば６時間以内、好ましくは３時間以内に処置が開始される、方法５以下のいずれかの方法。
【０１９７】
５.７.    患者が、例えば戦闘あるいは運動競技において、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患うリスクが高い状態にある、方法５以下のいずれかの方法。
【０１９８】
５.８.    患者が、既に脳浮腫を有している、方法５以下のいずれかの方法。
【０１９９】
５.９.    処置または抑制される症状が、卒中または外傷性脳損傷の結果生じる脳浮腫である、方法５以下のいずれかの方法。
【０２００】
５.１０.    処置または抑制される症状が、中大脳動脈梗塞の結果生じる脳浮腫である、方法５以下のいずれかの方法。
【０２０１】
５.１１.    処置または抑制される症状が、閉鎖頭部外傷の結果生じる脳浮腫である、方法５以下のいずれかの方法。
【０２０２】
５.１２.    処置または抑制される症状が、癲癇性発作の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.４いずれかの方法。
【０２０３】
５.１３.    処置または抑制される症状が、感染の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.４いずれかの方法。
【０２０４】
５.１４.    処置または抑制される症状が、代謝障害の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.４いずれかの方法。
【０２０５】
５.１５.    処置または抑制される症状が、神経膠腫の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.４いずれかの方法。
【０２０６】
５.１６.    処置または抑制される症状が、髄膜炎、急性高山病または水中毒の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.４いずれかの方法。
【０２０７】
５.１７.    処置または抑制される症状が、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.４いずれかの方法。
【０２０８】
５.１８.    処置または抑制される症状が、膿瘍の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２０９】
５.１９.    処置または抑制される症状が、子癇の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２１０】
５.２０.    処置または抑制される症状が、クロイツフェルト−ヤコブ病の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２１１】
５.２１.    処置または抑制される症状が、ループス脳炎の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２１２】
５.２２.    処置または抑制される症状が、低酸素症の結果生じる浮腫、例えば全身性低酸素症、例えば血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫であって、例えば該浮腫が、心不全、卒中または他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫であるか、または該浮腫が、心臓虚血または他の心臓への血流の遮断の結果生じる心臓浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２１３】
５.２３.    処置または抑制される症状が、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる脳浮腫、および／または、例えば宇宙飛行による微小重力暴露または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業の結果生じる視神経浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２１４】
５.２４.    処置または抑制される症状が、侵襲性中枢神経系処置、例えば神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激の結果生じる脳浮腫である、方法５〜５.３のいずれかの方法。
【０２１５】
５.２５.    患者が、浮腫、例えば、微小重力および／または放射線暴露、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激による浮腫のリスクが高い状態にある、方法５.２３または５.２４。
【０２１６】
５.２６.    患者が、既に浮腫を有している、方法５.２３または５.２４。
【０２１７】
５.２７.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法５以下のいずれかの方法。
【０２１８】
５.２８.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法５〜５.１７または５.２２いずれかの方法。
【０２１９】
５.２９.    処置または抑制される症状が、脊髄浮腫、例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫である、方法５または５.１。
【０２２０】
５.３０.    処置または抑制される症状が、脊髄圧迫の結果生じる脊髄浮腫である、方法５.２９。
【０２２１】
５.３１.    処置または抑制される症状が、網膜浮腫である、方法５〜５.２いずれかの方法。
【０２２２】
５.３２.    処置または抑制される症状が、肺浮腫である、方法５〜５.２いずれかの方法。
【０２２３】
５.３３.    処置または抑制される症状が、癲癇である、方法５または５.１。
【０２２４】
５.３４.    処置または抑制される症状が、網膜虚血または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患である、方法５または５.１。
【０２２５】
５.３５.    処置または抑制される症状が、心筋虚血である、方法５または５.１。
【０２２６】
５.３６.    処置または抑制される症状が、心筋性虚血／再潅流傷害である、方法５または５.１。
【０２２７】
５.３７.    処置または抑制される症状が、心筋梗塞である、方法５または５.１。
【０２２８】
５.３８.    処置または抑制される症状が、心筋低酸素症である、方法５または５.１。
【０２２９】
５.３９.    処置または抑制される症状が、うっ血性心不全である、方法５または５.１。
【０２３０】
５.４０.    処置または抑制される症状が、敗血症である、方法５または５.１。
【０２３１】
５.４１.    処置または抑制される症状が、片頭痛である、方法５または５.１。
【０２３２】
５.４２.    処置または抑制される症状が、膠芽腫である、方法５または５.１。
【０２３３】
５.４３.    処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、方法５または５.１。
【０２３４】
５.４４.    処置または抑制される症状が、多発性硬化症である、方法５または５.１。
【０２３５】
５.４５.    アクアポリンが、ＡＱＰ２である、方法５。
【０２３６】
５.４６.    処置される症状が、低ナトリウム血症または過剰な水分貯留（例えば、うっ血性心不全などの心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害または抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、または不妊治療、例えば不妊治療の結果生じるもの）である、方法５または５.４５。
【０２３７】
５.４７.    処置または抑制される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、方法５または５.４５。
【０２３８】
５.４８.    食事性ナトリウム、水分および／またはアルコールの１以上の制限；および／または１以上の利尿薬、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アルドステロン阻害剤、アンギオテンシンレセプターブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリンアンタゴニスト（β−ブロッカー）および／またはジゴキシンの投与をさらに含む、方法５または５.４５〜５.４７。
【０２３９】
５.４９.    式Ｉまたは式１ａの化合物が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でアクアポリン活性（例えば、ＡＱＰ２および／またはＡＱＰ４活性）を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２および／またはＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法５以下のいずれかの方法。
【０２４０】
５.５０.    フェニルベンズアミドによる処置の期間が、２１日未満、例えば２週間未満、例えば１週間またはそれ以下である、方法５以下のいずれかの方法。
【０２４１】
５.５１.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、経口投与される、方法５以下のいずれかの方法。
【０２４２】
５.５２.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、非経口投与される、方法５以下のいずれかの方法。
【０２４３】
５.５３.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、静脈内投与される、方法５.５２。
【０２４４】
５.５４.    患者がヒトである、方法５以下のいずれかの方法。
【０２４５】
５.５５.    方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかの作用の開始が、かなり急速である、方法５以下のいずれかの方法。
【０２４６】
さらなる実施形態において、本発明は、アクアポリンを、有効量のフェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１−１.２８において規定される化合物のいずれかと接触させることを含む、アクアポリンを阻害する方法を提供するものである（方法６）。以下はその例である：
【０２４７】
６.
６.１.    アクアポリンがインビボで阻害される、方法６。
【０２４８】
６.２.    アクアポリンがインビトロで阻害される、方法６。
【０２４９】
６.３.    アクアポリンがＡＱＰ４である、方法６以下のいずれかの方法。
【０２５０】
６.４.    アクアポリンがＡＱＰ２である、方法６以下のいずれかの方法。
【０２５１】
６.５.    式Ｉまたは式１ａの化合物が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でアクアポリン活性（例えば、ＡＱＰ２および／またはＡＱＰ４活性）を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２および／またはＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法６以下のいずれかの方法。
【０２５２】
６.６.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、経口投与される、方法６.１。
【０２５３】
６.７.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、非経口投与される、方法６.１。
【０２５４】
６.８.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、静脈内投与される、方法６.７。
【０２５５】
さらなる実施形態において、本発明は、アクアポリンを阻害するために有効量のフェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかを投与することを含む、アクアポリンにより仲介される疾患または症状を有する患者においてアクアポリンを阻害する方法を提供するものである（方法７）。以下はその例である：
【０２５６】
７.
７.１.    アクアポリンが、ＡＱＰ４である、方法７。
【０２５７】
７.２.    処置または抑制される症状が、浮腫、例えば脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫（例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫）または例えば脊髄浮腫（例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫）から選択される、方法７または７.１。
【０２５８】
７.３.    静脈流出を促進する最適な頭頸部の位置調整（例えば、頭部挙上３０°）；脱水の回避；全身性血圧降下；正常体温または低体温の維持；積極的手段；浸透圧療法、例えば、マンニトールまたは高張生理食塩水を使用すること；過換気；脳灌流を増強する治療的昇圧療法；脳代謝（ＣＭＯ２）を減少させるバルビツレートの投与；半頭蓋切除；アスピリンの投与；アマンタジンの投与；静脈内血栓溶解（例えば、ｒｔＰＡを使用する）；機械的血栓除去；血管形成術；および／またはステント、から選択される１以上の処置をさらに含む方法７.２。
【０２５９】
７.４.    患者が、脳浮腫、例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスによる脳浮腫のリスクが高い状態にある、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６０】
７.５.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患っている、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６１】
７.６.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患ってから、１２時間以内、例えば６時間以内、好ましくは３時間以内に処置が開始される、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６２】
７.７.    患者が、例えば戦闘あるいは運動競技において、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患うリスクが高い状態にある、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６３】
７.８.    患者が、既に脳浮腫を有している、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６４】
７.９.    処置または抑制される症状が、卒中または外傷性脳損傷の結果生じる脳浮腫である、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６５】
７.１０.    処置または抑制される症状が、中大脳動脈梗塞の結果生じる脳浮腫である方法７以下のいずれかの方法。
【０２６６】
７.１１.    処置または抑制される症状が、閉鎖頭部外傷の結果生じる脳浮腫である、方法７以下のいずれかの方法。
【０２６７】
７.１２.    処置または抑制される症状が、癲癇性発作の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.４のいずれかの方法。
【０２６８】
７.１３.    処置または抑制される症状が、感染の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.４のいずれかの方法。
【０２６９】
７.１４.    処置または制御される症状が、代謝障害の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.４のいずれかの方法
【０２７０】
７.１５.    処置または抑制される症状が、神経膠腫の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.４のいずれかの方法。
【０２７１】
７.１６.    処置または抑制される症状が、髄膜炎、急性高山病または水中毒の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.４のいずれかの方法。
【０２７２】
７.１７.    処置または抑制される症状が、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.４のいずれかの方法。
【０２７３】
７.１８.    処置または抑制される症状が、膿瘍の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２７４】
７.１９.    処置または抑制される症状が、子癇の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２７５】
７.２０.    処置または抑制される症状が、クロイツフェルト−ヤコブ病の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２７６】
７.２１.    処置または抑制される症状が、ループス脳炎の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２７７】
７.２２.    処置または抑制される症状が、低酸素症の結果生じる浮腫、例えば全身性低酸素症、例えば血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫、例えば心不全、卒中もしくは他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫、または心臓虚血もしくは他の心臓への血流の遮断の結果生じる心臓浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２７８】
７.２３.    処置または制御される症状が、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる脳浮腫、および／または視神経浮腫、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる視神経浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２７９】
７.２４.    処置または抑制される症状が、侵襲性中枢神経系処置、例えば神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激の結果生じる脳浮腫である、方法７〜７.３のいずれかの方法。
【０２８０】
７.２５.    患者が、浮腫、例えば微小重力および／または放射線暴露、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激による浮腫のリスクが高い状態にある、方法７.２３または７.２４。
【０２８１】
７.２６.    患者が、既に浮腫を有している、方法７.２３または７.２４。
【０２８２】
７.２７.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法７以下のいずれかの方法。
【０２８３】
７.２８.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、方法７〜７.１７または７.２２のいずれかの方法。
【０２８４】
７.２９.    処置または抑制される症状が、脊髄浮腫、例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫である、方法７〜７.２いずれかの方法。
【０２８５】
７.３０.    処置または抑制される症状が、脊髄圧迫の結果生じる脊髄浮腫である、方法７.２９。
【０２８６】
７.３１.    処置または抑制される症状が、網膜浮腫である、方法７〜７.２いずれかの方法。
【０２８７】
７.３２.    処置または抑制される症状が、肺浮腫である、方法７〜７.２いずれかの方法。
【０２８８】
７.３３.    処置または抑制される症状が、癲癇である、方法７または７.１。
【０２８９】
７.３４.    処置または抑制される症状が、網膜虚血または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患である、方法７または７.１。
【０２９０】
７.３５.    処置または抑制される症状が、心筋虚血である、方法７または７.１。
【０２９１】
７.３６.    処置または抑制される症状が、心筋虚血／再潅流傷害である、方法７または７.１。
【０２９２】
７.３７.    処置または抑制される症状が、心筋梗塞である、方法７または７.１。
【０２９３】
７.３８.    処置または抑制される症状が、心筋低酸素症である、方法７または７.１。
【０２９４】
７.３９.    処置または抑制される症状が、うっ血性心不全である、方法７または７.１。
【０２９５】
７.４０.    処置または制御される症状が、敗血症である、方法７または７.１。
【０２９６】
７.４１.    処置または抑制される症状が、片頭痛である、方法７または７.１。
【０２９７】
７.４２.    処置または抑制される症状が、膠芽腫である、方法７または７.１。
【０２９８】
７.４３.    処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、方法７または７.１。
【０２９９】
７.４４.    処置または抑制される症状が、多発性硬化症である、方法７または７.１。
【０３００】
７.４５.    アクアポリンがＡＱＰ２である、方法７。
【０３０１】
７.４６.    処置される症状が、低ナトリウム血症または過剰な水分貯留（例えば、うっ血性心不全などの心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害または抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、または不妊治療、例えば不妊治療の結果生じるもの）である、方法７または７.４５。
【０３０２】
７.４７.    処置または抑制される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、方法７または７.４５。
【０３０３】
７.４８.    食事性ナトリウム、水分および／またはアルコールの１以上の制限；および／または１以上の利尿薬、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アルドステロン阻害剤、アンギオテンシンレセプターブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリンアンタゴニスト（β−ブロッカー）および／またはジゴキシンの投与をさらに含む、方法７または７.４５〜７.４７。
【０３０４】
７.４９.    式Ｉまたは式１ａの化合物が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でアクアポリン活性（例えば、ＡＱＰ２および／またはＡＱＰ４活性）を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２および／またはＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、方法７以下のいずれかの方法。
【０３０５】
７.５０.    フェニルベンズアミドによる処置の期間が、２１日未満、例えば２週間未満、例えば１週間またはそれ以下である、方法７以下のいずれかの方法。
【０３０６】
７.５１.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、経口投与される、方法７以下のいずれかの方法。
【０３０７】
７.５２.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、非経口投与される、方法７以下のいずれかの方法。
【０３０８】
７.５３.    ニクロサミドまたは式Ｉもしくは式１ａの化合物が、静脈内投与される、方法７.５２。
【０３０９】
７.５４.    患者がヒトである、方法７以下のいずれかの方法。
【０３１０】
７.５５.    方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかの作用の開始が、かなり急速である、方法７以下のいずれかの方法。
【０３１１】
さらなる実施形態において、本発明は、アクアポリンにより仲介される疾患または症状に罹患している患者においてアクアポリンを阻害するために使用する、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかを含有する医薬組成物を提供するものである（使用８）。例えば、前記方法のいずれかにおける使用。
【０３１２】
８.
８.１.    アクアポリンがＡＱＰ４である、使用８。
【０３１３】
８.２.    処置または抑制される症状が、浮腫、例えば脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫（例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫）または例えば脊髄浮腫（例えば、脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫）から選択される、使用８または８.１。
【０３１４】
８.３.    静脈流出を促進する最適な頭頸部の位置調整（例えば、頭部挙上３０°）；脱水の回避；全身性血圧降下；正常体温または低体温の維持；積極的手段；浸透圧療法、例えば、マンニトールまたは高張生理食塩水を使用すること；過換気；脳灌流を増強する治療的昇圧療法；脳代謝（ＣＭＯ２）を減少させるバルビツレートの投与；半頭蓋切除；アスピリンの投与；アマンタジンの投与；静脈内血栓溶解（例えば、ｒｔＰＡを使用する）；機械的血栓除去；血管形成術；および／またはステント、から選択される１以上の処置をさらに含む、使用８.２。
【０３１５】
８.４.    患者が、脳浮腫、例えば頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスによる脳浮腫のリスクが高い状態にある、使用８以下のいずれかの使用。
【０３１６】
８.５.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患っている、使用８以下のいずれかの使用。
【０３１７】
８.６.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患ってから、１２時間以内、例えば６時間以内、好ましくは３時間以内に処置が開始される、使用８以下のいずれかの使用。
【０３１８】
８.７.    患者が、例えば戦闘あるいは運動競技において、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患うリスクが高い状態にある、使用８以下のいずれかの使用。
【０３１９】
８.８.    患者が、既に脳浮腫を有している、使用８以下のいずれかの使用。
【０３２０】
８.９.    処置または抑制される症状が、卒中または外傷性脳損傷の結果生じる脳浮腫である、使用８以下のいずれかの使用。
【０３２１】
８.１０.    処置または抑制される症状が、中大脳動脈梗塞の結果生じる脳浮腫である、使用８以下のいずれかの使用。
【０３２２】
８.１１.    処置または抑制される症状が、閉鎖頭部外傷の結果生じる脳浮腫である、使用８以下のいずれかの使用。
【０３２３】
８.１２.    処置または抑制される症状が、癲癇性発作の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.４のいずれかの使用。
【０３２４】
８.１３.    処置または抑制される症状が、感染の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.４のいずれかの使用。
【０３２５】
８.１４.    処置または抑制される症状が、代謝障害の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.４いずれかの使用。
【０３２６】
８.１５.    処置または抑制される症状が、神経膠腫の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.４のいずれかの使用。
【０３２７】
８.１６.    処置または抑制される症状が、髄膜炎、急性高山病または水中毒の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.４のいずれかの使用。
【０３２８】
８.１７.    処置または抑制される症状が、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.４のいずれかの使用。
【０３２９】
８.１８.    処置または抑制される症状が、膿瘍の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３０】
８.１９.    処置または抑制される症状が、子癇の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３１】
８.２０.    処置または抑制される症状が、クロイツフェルト−ヤコブ病の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３２】
８.２１.    処置または抑制される症状が、ループス脳炎の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３３】
８.２２.    処置または抑制される症状が、低酸素症、例えば全身性低酸素症、例えば血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫、例えば心不全、卒中もしくは他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫、または心臓虚血もしくは他の心臓への血流の遮断の結果生じる心臓浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３４】
８.２３.    処置または抑制される症状が、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる脳浮腫、および／または視神経浮腫、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる視神経浮腫、例えば視神経浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３５】
８.２４.    処置または抑制される症状が、侵襲性中枢神経系処置、例えば神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激の結果生じる脳浮腫である、使用８〜８.３のいずれかの使用。
【０３３６】
８.２５.    患者が、浮腫、例えば微小重力暴露および／または放射線、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激による浮腫のリスクが高い状態にある、使用８.２３または８.２４。
【０３３７】
８.２６.    患者が、既に浮腫を有している、使用８.２３または使用８.２４。
【０３３８】
８.２７.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、使用８以下のいずれかの使用。
【０３３９】
８.２８.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、使用８〜８.１７または８.２２のいずれかの使用。
【０３４０】
８.２９.    処置または抑制される症状が、脊髄浮腫、例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫である、使用８〜８.２のいずれかの使用。
【０３４１】
８.３０.    処置または抑制される症状が、脊髄圧迫の結果生じる脊髄浮腫である、使用８.２９。
【０３４２】
８.３１.    処置または抑制される症状が、網膜浮腫である、使用８〜８.２いずれかの使用。
【０３４３】
８.３２.    処置または抑制される症状が、肺浮腫である、使用８〜８.２いずれかの使用。
【０３４４】
８.３３.    処置または抑制される症状が、癲癇である、使用８または８.１。
【０３４５】
８.３４.    処置または抑制される症状が、網膜虚血または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患である、使用８または８.１。
【０３４６】
８.３５.    処置または抑制される症状が、心筋虚血である、使用８または８.１。
【０３４７】
８.３６.    処置または抑制される症状が、心筋虚血／再潅流傷害である、使用８または８.１。
【０３４８】
８.３７.    処置または抑制される症状が、心筋梗塞である、使用８または８.１。
【０３４９】
８.３８.    処置または抑制される症状が、心筋低酸素症である、使用８または８.１。
【０３５０】
８.３９.    処置または抑制される症状が、うっ血性心不全である、使用８または８.１。
【０３５１】
８.４０.    処置または抑制される症状が、敗血症である、使用８または８.１。
【０３５２】
８.４１.    処置または抑制される症状が、片頭痛である、使用８または８.１。
【０３５３】
８.４２.    処置または抑制される症状が、膠芽腫である、使用８または８.１。
【０３５４】
８.４３.    処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、使用８または８.１。
【０３５５】
８.４４.    処置または抑制される症状が、多発性硬化症である、使用８または８.１。
【０３５６】
８.４５.    アクアポリンがＡＱＰ２である、使用８。
【０３５７】
８.４６.    処置される症状が、低ナトリウム血症または過剰な水分貯留（例えば、うっ血性心不全などの心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害または抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、または不妊治療、例えば不妊治療の結果生じるもの）である、使用８または使用８.４５。
【０３５８】
８.４７.    処置または制御される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、使用８または８.４５。
【０３５９】
８.４８.    食事性ナトリウム、水分および／またはアルコールの１以上の制限；および／または１以上の利尿薬、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アルドステロン阻害剤、アンギオテンシンレセプターブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリンアンタゴニスト（β−ブロッカー）、および／またはジゴキシンの投与をさらに含む、使用８または８.４５〜８.４７。
【０３６０】
８.４９.    式Ｉまたは式１ａの化合物が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でアクアポリン活性（例えば、ＡＱＰ２および／またはＡＱＰ４活性）を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２および／またはＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、使用８以下のいずれかの使用。
【０３６１】
８.５０.    フェニルベンズアミドによる処置の期間が、２１日未満、例えば２週間未満、例えば１週間またはそれ以下である、使用８以下のいずれかの使用。
【０３６２】
８.５１.    医薬組成物が、経口投与される、使用８以下のいずれかの使用。
【０３６３】
８.５２.    医薬組成物が、非経口投与される、使用８以下のいずれかの使用。
【０３６４】
８.５３.    医薬組成物が、静脈内投与される、使用８.５２。
【０３６５】
８.５４.    患者がヒトである、使用８以下のいずれかの使用。
【０３６６】
８.５５.    医薬組成物の作用の開始が、かなり急速である、使用８以下のいずれかの使用。
【０３６７】
さらなる実施形態において、本発明は、アクアポリンにより仲介される疾患または症状を処置または抑制するための医薬の製造における、フェニルベンズアミド、例えばニクロサミドまたは前記式Ｉもしくは式１ａの化合物、例えば上記方法１〜１.２８において規定される化合物のいずれかの使用であって、該医薬は、アクアポリンを阻害するために有効な量でフェニルベンズアミドを含む、使用を提供するものである（使用９）。例えば、前記方法のいずれかにおける使用。
【０３６８】
９.
９.１.    アクアポリンがＡＱＰ４である、使用９。
【０３６９】
９.２.    処置または抑制される症状が、浮腫、例えば脳または脊髄の浮腫、例えば脳浮腫（例えば、頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫）または例えば脊髄浮腫（例えば、脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫）から選択される、使用９または９.１のいずれかの使用。
【０３７０】
９.３.    静脈流出を促進する最適な頭頸部の位置調整（例えば、頭部挙上３０°）；脱水の回避；全身性血圧降下；正常体温または低体温の維持；積極的手段；浸透圧療法、例えば、マンニトールまたは高張生理食塩水を使用すること；過換気；脳灌流を増強する治療的昇圧療法；脳代謝（ＣＭＯ２）を減少させるバルビツレートの投与；半頭蓋切除；アスピリンの投与；アマンタジンの投与；静脈内血栓溶解（例えば、ｒｔＰＡを使用する）；機械的血栓除去；血管形成術；および／またはステント、から選択される１以上の処置をさらに含む、使用９.２。
【０３７１】
９.４.    患者が、脳浮腫、例えば頭部外傷、虚血性脳梗塞、神経膠腫、髄膜炎、急性高山病、癲癇性発作、感染、代謝障害、水中毒、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスによる脳浮腫のリスクが高い状態にある、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７２】
９.５.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患っている、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７３】
９.６.    患者が、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患ってから、１２時間以内、例えば６時間以内、好ましくは３時間以内に処置が開始される、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７４】
９.７.    患者が、例えば戦闘あるいは運動競技において、卒中、頭部損傷または脊髄損傷を患うリスクが高い状態にある、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７５】
９.８.    患者が、既に脳浮腫を有している、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７６】
９.９.    処置または抑制される症状が、卒中または外傷性脳損傷の結果生じる脳浮腫である、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７７】
９.１０.    処置または抑制される症状が、中大脳動脈梗塞の結果生じる脳浮腫である、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７８】
９.１１.    処置または抑制される症状が、閉鎖頭部外傷の結果生じる脳浮腫である、使用９以下のいずれかの使用。
【０３７９】
９.１２.    処置または抑制される症状が、癲癇性発作の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.４のいずれかの使用。
【０３８０】
９.１３.    処置または抑制される症状が、感染の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.４のいずれかの使用。
【０３８１】
９.１４.    処置または抑制される症状が、代謝障害の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.４のいずれかの使用。
【０３８２】
９.１５.    処置または抑制される症状が、神経膠腫の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.４のいずれかの使用。
【０３８３】
９.１６.    処置または抑制される症状が、髄膜炎、急性高山病または水中毒の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.４のいずれかの使用。
【０３８４】
９.１７.    処置または抑制される症状が、肝不全、肝性脳症または糖尿病性ケトアシドーシスの結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.４のいずれかの使用。
【０３８５】
９.１８.    処置または抑制される症状が、膿瘍の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３８６】
９.１９.    処置または抑制される症状が、子癇の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３８７】
９.２０.    処置または抑制される症状が、クロイツフェルト−ヤコブ病の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３８８】
９.２１.    処置または抑制される症状が、ループス脳炎の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３８９】
９.２２.    処置または抑制される症状が、低酸素症の結果生じる浮腫、例えば全身性低酸素症、例えば血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる浮腫、例えば心不全、卒中もしくは他の脳への血液潅流の遮断を原因とする低酸素症の結果生じる脳浮腫、または心臓虚血もしくは他の心臓への血流の遮断の結果生じる心臓浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３９０】
９.２３.    処置または抑制される症状が、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる脳浮腫、および／または視神経浮腫、例えば宇宙飛行または放射性物質を扱う作業もしくは放射能領域内での作業による、微小重力および／または放射線暴露の結果生じる視神経浮腫、例えば視神経浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３９１】
９.２４.    処置または抑制される症状が、侵襲性中枢神経系処置、例えば神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激の結果生じる脳浮腫である、使用９〜９.３のいずれかの使用。
【０３９２】
９.２５.    患者が、浮腫、例えば微小重力および／または放射線暴露、神経外科手術、血管内血栓除去、脊椎穿刺、血管瘤修復または深部脳刺激による浮腫のリスクが高い状態にある、使用９.２４または９.２５。
【０３９３】
９.２６.    患者が、既に浮腫を有している、使用９.２４または９.２５。
【０３９４】
９.２７.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性の脳浮腫である、使用９以下のいずれかの使用。
【０３９５】
９.２８.    浮腫が、細胞毒性脳浮腫であるか、または主として細胞毒性脳浮腫である、使用９〜９.１７または９.２２のいずれかの使用。
【０３９６】
９.２９.    処置または抑制される症状が、脊髄浮腫、例えば脊髄圧迫などの脊髄外傷の結果生じる脊髄浮腫である、使用９〜９.２のいずれかの使用。
【０３９７】
９.３０.    処置または抑制される症状が、脊髄圧迫の結果生じる脊髄浮腫である、使用９.２９。
【０３９８】
９.３１.    処置または抑制される症状が、網膜浮腫である、使用９〜９.２のいずれかの使用。
【０３９９】
９.３２.    処置または制御される症状が、肺浮腫である、使用９〜９.２のいずれかの使用。
【０４００】
９.３３.    処置または制御される症状が、癲癇である、使用９または９.１。
【０４０１】
９.３４.    処置または抑制される症状が、網膜虚血または他の眼圧および／または組織水和異常に関連のある眼疾患である、使用９または９.１。
【０４０２】
９.３５.    処置または抑制される症状が、心筋虚血である、使用９または９.１。
【０４０３】
９.３６.    処置または抑制される症状が、心筋虚血／再潅流傷害である、使用９または９.１。
【０４０４】
９.３７.    処置または抑制される症状が、心筋梗塞である、使用９または９.１。
【０４０５】
９.３８.    処置または抑制される症状が、心筋低酸素症である、使用９または９.１。
【０４０６】
９.３９.    処置または抑制される症状が、うっ血性心不全である、使用９または９.１。
【０４０７】
９.４０.    処置または抑制される症状が、敗血症である、使用９または９.１。
【０４０８】
９.４１.    処置または抑制される症状が、片頭痛である、使用９または９.１。
【０４０９】
９.４２.    処置または抑制される症状が、膠芽腫である、使用９または９.１。
【０４１０】
９.４３.    処置または抑制される症状が、線維筋痛症である、使用９または９.１。
【０４１１】
９.４４.    処置または抑制される症状が、多発性硬化症である、使用９または９.１。
【０４１２】
９.４５.    アクアポリンがＡＱＰ２である、使用９。
【０４１３】
９.４６.    処置される症状が、低ナトリウム血症または過剰な水分貯留（例えば、うっ血性心不全などの心不全（ＨＦ）、肝硬変、ネフローゼ障害または抗利尿ホルモン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、不妊治療、例えば不妊治療の結果生じるもの）である、使用９または９.４５。
【０４１４】
９.４７.    処置または抑制される症状が、卵巣過剰刺激症候群である、使用９または９.４５。
【０４１５】
９.４８.    食事性ナトリウム、水分および／またはアルコールの１以上の制限；および／または１以上の利尿薬、バソプレッシンレセプターアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アルドステロン阻害剤、アンギオテンシンレセプターブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリンアンタゴニスト（β−ブロッカー）および／またはジゴキシンの投与をさらに含む、使用９または９.４５〜９.４７。
【０４１６】
９.４９.    式Ｉまたは式１ａの化合物が、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でアクアポリン活性（例えば、ＡＱＰ２および／またはＡＱＰ４活性）を少なくとも５０％阻害する、例えば、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにおいて、１０マイクロモルまたはそれ以下の濃度でＡＰＱ２および／またはＡＱＰ４活性を少なくとも５０％阻害する（例えば、後述の方法１０以下のアッセイのいずれかにおいて活性である）、使用９以下のいずれかの使用。
【０４１７】
９.５０.    フェニルベンズアミドによる処置の期間が、２１日未満、例えば２週間未満、例えば１週間またはそれ以下である、使用９以下のいずれかの使用。
【０４１８】
９.５１.    医薬が、経口投与用に処方される、使用９以下のいずれかの使用。
【０４１９】
９.５２.    医薬が、非経口投与用に処方される、使用９以下のいずれかの使用。
【０４２０】
９.５３.    医薬が、静脈内投与用に処方される、使用９.５２。
【０４２１】
本発明の投薬の用量または投与方法には、特に制約はない。本発明を実施する際の投薬量は、例えば処置する疾患または症状、使用する化合物、投与方法、および所望の治療によって当然変わりうる。化合物は、経口、非経口、経皮または吸入を包含する任意の好適な経路で投与しうる。卒中または他の重度に消耗性の疾患または症状において、例えば患者が意識不明または嚥下不能である場合には、ＩＶ注入またはＩＶボーラスが好適でありうる。一般に、約０.０１〜１５.０ｍｇ／ｋｇのオーダーの用量の経口投与により、十分な結果、例えば前記疾患の処置のための十分な結果が得られることが示される。したがって、比較的大型の哺乳動物、例えばヒトにおいては、指示される１日の経口投与用量は、約０.７５〜１０００ｍｇ／日の範囲となり得、簡便に１日１回、または1日２〜３回の分割用量または徐放形態にて投与される。したがって、経口投与のための単位投与形態は、例えば約０.２〜７５または１５０ｍｇ、例えば約０.２または２.０〜５０、７５、１００、１２５、１５０または２００ｍｇの本発明の化合物を、医薬上許容しうる希釈剤または担体と共に含有しうる。医薬が注射（皮下、筋肉内または静脈内）により用いられる場合には、用量は、ボーラスとして、またはＩＶの場合はボーラスもしくは点滴として、０.２５〜５００ｍｇ／日であってよい。
【０４２２】
式Ｉまたは式１ａの化合物を含む医薬組成物は、従来の希釈剤または賦形剤および当分野において知られた技術を用いて製造しうる。したがって、経口投与形態は、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液などを包含し得る。
【０４２３】
式Ｉまたは式１ａの化合物を製造および製剤化する方法は、ＵＳ２０１０／０２７４０５１Ａ１、ＵＳ７,７００,６５５およびＵＳ７,６２６,０４２に記載されており、これらを引用により本明細書の一部とする。
【０４２４】
さらなる実施形態において、本発明は、試験化合物の存在または不存在下に高張または低張溶液に対するアクアポリン発現細胞集団とコントロール細胞集団との応答を比較測定することを含む、特異的なアクアポリン阻害剤を同定する方法を提供するものである（例えば、方法１０）。例えば、本発明は下記の方法を提供する：
【０４２５】
１０.
１０.１.    アクアポリン発現細胞集団が、ＡＱＰ２またはＡＱＰ４を発現する、方法１０。
【０４２６】
１０.２.    細胞が、哺乳動物細胞、例えばトランスジェニックＣＨＯ細胞である、方法１０または１０.１のいずれかの方法。
【０４２７】
１０.３.    コントロール細胞が、アクアポリン以外のトランスジェニック膜貫通タンパク質、例えばＣＤ８１を発現する、方法１０以下のいずれかの方法。
【０４２８】
１０.４.    アクアポリン発現細胞集団の大部分が試験化合物の不存在下に破裂するが、コントロール細胞集団は破裂しない時間と濃度で、細胞を低張環境に暴露する（例えば水中、３〜８分間）、方法１０以下のいずれかの方法。
【０４２９】
１０.５.    生存細胞により発せられるが破裂細胞により発せられない蛍光シグナル、例えばアセトキシメチルカルセイン（カルセイン−ＡＭ）の蛍光色素カルセインへの変換を測定することにより、細胞破裂を測定する、方法１０.４。
【０４３０】
１０.６.    細胞を、低張環境、例えば脱イオン水に３〜８分間暴露し、次いで正常浸透常環境（例えば、約３００ｍＯＳＭ）に戻し、生存細胞の割合を測定する、方法１０.４または１０.５。
【０４３１】
１０.７.    生存の尺度は、アセトキシメチルカルセイン（カルセイン−ＡＭ）を蛍光色素カルセインに変換する細胞の能力である、方法１０以下のいずれかの方法。
【０４３２】
１０.８.    前記式Ｉの化合物、例えば式１ａの化合物を、アクアポリン発現細胞集団の低張環境における破裂を阻止するポジティブコントロールとして使用する、方法１０.４以下のいずれかの方法。
【０４３３】
１０.９.    アクアポリン発現細胞集団を、それが試験化合物の不存在下には生存不能となる低張環境に、試験化合物の存在下に暴露した後、例えばアセトキシメチルカルセイン（カルセイン−ＡＭ）を蛍光色素カルセインに変換する能力により、生存能力有りと認めた場合に、試験化合物を、アクアポリン阻害活性を有すると判定する、前記方法１０.４〜１０.８のいずれかの方法。
【０４３４】
１０.１０.    試験化合物の不存在下にアクアポリン発現細胞集団が収縮を起こすのに十分な時間と濃度で、細胞を高張環境に暴露する（例えば約５３０ｍＯｓｍに３〜８分間）、方法１０または１０.１〜１０.３のいずれかの方法。
【０４３５】
１０.１１.    細胞の収縮を光散乱により測定する、方法１０.９。
【０４３６】
１０.１２.    高張環境が約５３０ｍＯｓｍであり、正常浸透圧環境が約３００ｍＯｓｍである、方法１０.１０以下のいずれかの方法。
【０４３７】
１０.１３.    前記式Ｉの化合物、例えば式１ａの化合物を、アクアポリン発現細胞集団の高張環境における収縮を阻害するポジティブコントロールとして使用する、前記方法１０.１０以下のいずれかの方法。
【０４３８】
１０.１４.    試験化合物がアクアポリン発現細胞集団の高張環境における収縮を阻止する場合に、試験化合物を、アクアポリン活性を阻害すると判定する、前記方法１０.１０以下のいずれかの方法。
【０４３９】
１０.１５.    試験化合物が、アクアポリン活性を阻害すると判定される、前記方法のいずれかの方法。
【０４４０】
１０.１６.    アクアポリン発現細胞集団が、ＡＱＰ２を発現する、方法１０以下のいずれかの方法。
【０４４１】
１０.１７.    アクアポリン発現細胞集団が、ＡＱＰ４を発現する、方法１０以下のいずれかの方法。
【０４４２】
１０.１８.    試験化合物が、フェニルベンズアミド、例えば前記式Ｉ、例えば式１ａのフェニルベンズアミドである、方法１０以下のいずれかの方法。
【０４４３】
本明細書を通じて、範囲は、その範囲内の全ての個々の値を記載するための表現として用いられる。範囲内にある任意の値を、該範囲の限界値として選択できる。さらに、本明細書中に引用される全ての文献は、それらの全体が、引用により本明細書の一部とされる。本発明の開示における定義が引用文献のものと一致しない場合は、本発明の開示を支配的とする。
【０４４４】
別途記載がなければ、本明細書に記載されるパーセンテージおよび量はいずれも、重量のパーセンテージを示す。記載される量は、材料の有効重量に基づく。
【実施例】
【０４４５】
実施例１
フェニルベンズアミド−ＡＱＰの構造活性相関
改善された効力について試験すべき新規分子を調製するための化学を導くために、選択されたヒット化合物アナログをアッセイすることにより、構造活性相関（ＳＡＲ）を決定する。この反復過程のために、９６ウェル・マルチプレート・リーダーにおいて、定量的動態アッセイであるアクアポリン仲介細胞体積変化アッセイを用いる。これは、必要なＡＱＰを発現する単層のＣＨＯ細胞が、高張溶液に暴露されたとき（３００ｍＯｓｍ→５３０ｍＯｓｍ）に収縮する際の、光散乱の変化を検出するものである。図１に、ＡＱＰ４発現細胞（図１Ａ）およびＡＱＰ２発現細胞（図１Ｂ）を用いたアクアポリン仲介細胞体積変化アッセイを示す。アクアポリン発現細胞は、水の移動が増強されることから、コントロール細胞よりもより急速に収縮するが、この収縮はアクアポリンを阻害する化合物により阻止することができる。
【０４４６】
図１に、ＤＭＳＯ存在下のアクアポリン発現細胞（▲）、試験化合物（ここでは、化合物３）１０μＭ存在下のアクアポリン発現細胞（■）、ＤＭＳＯ存在下のＣＨＯ−ＣＤ８１発現コントロール細胞（◆）を示す。各曲線は、９６ウェルプレート中の１６ウェルの平均を表す。
【０４４７】
図１Ａにおいて、ＤＭＳＯで処理したＡＱＰ４ｂ細胞を高張ショックに暴露すると、細胞は急速な収縮を示して光散乱の増加をもたらし（吸光度の相対変化 Ａｂｓ／Ａｂｓ０の増加）、その後、細胞がプレートから剥離するにつれて光散乱は減少する。ＣＨＯ-ＡＱＰ４ｂ細胞系は、ＣＨＯ−ＣＤ８１コントロール細胞と比較して、細胞収縮速度において４.５倍の増加を示す（二重指数関数モデルに適合）。化合物３アナログ１０μＭで処理したＣＨＯ−ＡＱＰ４ｂ細胞（■）は、特徴的な「屈曲しない（unbending）」光散乱曲線により示されるとおり、より低い収縮速度（５５％の抑制）を示す。同様に、図１Ｂに、ＤＭＳＯまたは１０μＭの化合物３で処理したＣＨＯ−ＡＱＰ２を比較する実験を示す。ここで観察されるように、アクアポリン−２は、ＡＱＰ４よりも本質的に水透過性が低い。ＤＭＳＯで処理したＣＨＯ−ＡＱＰ２細胞系（図１Ｂ、▲）は、ＤＭＳＯで処理したＣＨＯ−ＣＤ８１コントロール細胞（◆）と比較して、１.７倍の収縮速度増加を示す（二重指数関数モデルに適合）（図１Ｂ）。１０μＭの化合物３で処理したＣＨＯ−ＡＱＰ２細胞（■）は、Ａｂｓの相対変化（Ａｂｓ／Ａｂｓ０）（図１Ｂ）を比較した場合に、より低い収縮速度（８１％の抑制）を示す。
【０４４８】
これらのデータは、このアッセイにおいて、化合物３は１０μＭの濃度で、ＡＱＰ２およびＡＱＰ４活性を有意に阻害（例えば５０％以上）できることを示している。
【０４４９】
実施例２
フェニルベンズアミド化合物のアクアポリン特異性
１３の既知のアクアポリンのうち最も密接に関連するものであるＡＱＰ１、ＡＱＰ２、ＡＱＰ５および２つのＡＱＰ４スプライスバリアント（ＡおよびＢ）に対する化合物の特異性を試験する。上記アクアポリン各々について、安定なＣＨＯ細胞系を作成し、１０μＭの化合物３による水透過性阻害を、アクアポリン仲介細胞体積変化アッセイにより試験する。化合物３はＡＱＰ２およびＡＱＰ４を阻害するが、ＡＱＰ１およびＡＱＰ５を殆ど阻害しない（図２）。
【０４５０】
実施例３
フェニルベンズアミドとＡＱＰ４との直接的な薬物−標的相互作用
フェニルベンズアミドがＡＱＰ４を直接遮断する作用機序を支持するために、精製ＡＱＰ４ｂおよび３Ｈで放射性標識した化合物４を用いて、インビトロ結合試験を行う。Hummel-Dryer式アッセイを用いて、ゲル濾過カラムを、ＡＱＰ４ｂおよび１μＭ［３Ｈ］−化合物４の溶解性を維持するために、界面活性剤を含有する緩衝液で平衡化する。ＡＱＰ４ｂを、このカラム緩衝液で２５０μＭに希釈し、ＲＴで３０分間インキュベートする。次いで、サンプルをカラムに適用し、画分を収集し、［３Ｈ］−化合物４の存在を液体シンチレーション計数により検出する。図３に、ゲル濾過カラムからの［３Ｈ］−化合物４の溶出プロファイルを示し、ＡＱＰ４ｂテトラマーおよびモノマーの溶出時点も示す。１μＭのベースライン値からの［３Ｈ］−化合物４の増加は、これらのタンパク質の各々と結合していることを表す。我々の高度に精製されたＡＱＰ４ｂにおいてはモノマーＡＱＰ４ｂは常法では容易に検出できないが、このアッセイは、少ないものの、少量のモノマーの存在を示す。化合物４に対する相対的な親和性は、テトラマーおよびモノマーにおいてそれぞれ、〜１００μＭおよび１μＭ未満である。このアッセイは、可溶化ＡＱＰ４ｂに化合物４が比較的弱く結合することを示すが、それでもなお、このフェニルベンズアミドがＡＱＰ４ｂと直接相互作用することを証明する。
【０４５１】
実施例４
薬理学的概念実証
マウス水中毒モデル−生存曲線：マウスに体重の２０％の水を注射するマウス水中毒モデルを用いて、化合物のインビボ有効性を試験する[Manley, G. T. et al. Aquaporin-4 deletion in mice reduces brain edema after acute water introxication and ischemic stroke. Nat Med 6, 159-163 (2000)；Gullans, S. R. & Verbalis, J. G. control of brain volume during hyperosmolar and hypoosmolar conditions). Annual Review of Medicine 44, 289-301(1993)]。結果としておこる正常血液量の低ナトリウム血症は、急速にＣＥを導くので、これが、ＣＮＳアクアポリンであるＡＱＰ４ｂの阻害剤を試験するための実用的なモデルとなる。
【０４５２】
Ｈ２Ｏ中毒を生き延びるマウスの能力を、それぞれ１０〜１２匹のマウス（１６〜１９週齢の雄／雌）を用いる３つの実験で決定する。脱イオン水を、０.３９ｍｇ／ｋｇのフェニルベンズアミド（プラセボ）または０.７６ｍｇ／ｋｇの試験化合物のいずれかと共に、注射用に調製する。図４に、これらの実験の結果をまとめて示す（ｎ＝３３（プラセボ）、ｎ＝３４（化合物１））。化合物１コホートの生存％は３.２倍改善し、化合物１処置動物の５０％生存時間は約５２分改善する。
【０４５３】
マウス水中毒モデル−核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による脳体積：水中毒モデルを用いて、水ショックに応答する脳体積の変化をＭＲＩにより測定する。上記の生存および脳水含量試験について記載したように、水ボーラスのみ、または水ボーラスおよび試験化合物０.７６ｍｇ／ｋｇをマウスにＩＰ注射し、ＭＲＩにより検出される脳体積の変化をモニターする。Case Western Reserve UniversityのCase Center for Imaging Researchにて、9.4T Bruker Biospec MRI スキャナーを用いて収集したＭＲＩスキャンにより、マウス脳体積を評価する。この画像法は、脳浮腫のマウス水中毒モデルにおいて、全脳体積の変化を高感度で検出するために十分なコントラストおよび解像力を提供することがわかる。水の注射前、水注射の５.６７分後、およびその後５.２分毎に動物が水負荷のために死亡するまで、マウス頭部の高解像度T2強調矢状面スキャンを得る（解像度＝０.１ｍｍ×０.１ｍｍ×０.７ｍｍ）。各スキャンは、２５の０.７ｍｍ連続画像スライスを含み、そのうち１４〜１５のスライスが脳の部分を含む。各画像スライスにおける脳の断面積を、ImageJを用いて手作業の関心領域選択により計測する。次いで、個々の脳断面積を合計し、スライス厚（０.７ｍｍ）を掛けて、各スキャンにおける脳体積を算出する。
【０４５４】
０.７６ｍｇ／ｋｇの化合物１による処置は、ＣＥ進行速度を０.０８１ｍｉｎ−１から０.０３２ｍｉｎ−１に（または２.５倍）低下させる（単一指数関数モデルに適合）（図５）。また、観察期間中のＣＥの程度も軽減する（図５）。さらに同アッセイにおいて、血漿レベルは、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより０.０３〜０.０６μｇの範囲と測定され(Lerner Center, Cleveland Clinic, Cleveland, OHにて実施)、このＣＥモデルにおける有効性を示すのに十分である。
【０４５５】
核磁気共鳴画像法による脳体積試験を、フェニルベンズアミド（０.３９ｍｇ／ｋｇ）および化合物４（０.８３ｍｇ／ｋｇ）に対しても行う。化合物４は、ＣＥ進行速度を０.０８１ｍｉｎ−１から０.０２２ｍｉｎ−１に低下させる（表１）。フェニルベンズアミドは、マウスにおいてＣＥ速度の低下を示さない（表１）。
【０４５６】
【表１】
2016535787.tif 000017
薬物なし、および化合物１については、それぞれ、ｎ＝１４匹のマウス。フェニルベンズアミドおよび化合物４については、それぞれ、ｎ＝１２匹のマウス。
【０４５７】
実施例５
ハイスループットスクリーニングアッセイ
低張ショック下に、トランスフェクションされていない細胞、および無関係の膜貫通タンパク質を発現する細胞（ＣＤ８１をＡＱＰ４ｂと同じレベルで発現）は、いずれも、ゆっくりと膨張するもののインタクトにとどまる。このような知見を用いて、ハイスループットスクリーニングアッセイ（ＨＴＳ）を開発する。
【０４５８】
３８４ウェルプレートフォーマットにおいて、低張ショックの後に、各ウェルに、カルセインの非蛍光アセトキシメチル誘導体（カルセイン−ＡＭ）を２μＭまで加えた２倍濃縮リン酸緩衝生理食塩水を加えることにより、浸透圧を正常（３００ｍＯＳＭ）に戻す。インタクト細胞はカルセイン−ＡＭを取り込んで、それを蛍光色素カルセインに変換する。これが、残存するインタクト細胞の定量手段となる。破裂細胞は、この前駆体を色素に変換しない。ＡＱＰ４発現細胞による水の取り込みは比較的急速であり、試験細胞の多くが低張ショック後４分以内に破裂するが、ＣＤ８１発現細胞の多くは、８分後に生存を維持する。カルセイン−ＡＭの細胞内変換は、我々のアッセイにおいて、５３５ｎＭにおいて強力かつ検出容易なシグナルを提供する（図６）。
【０４５９】
カルセイン蛍光エンドポイントアッセイ：１００％コンフルエンスに達するように、アッセイの２４時間前に細胞を播種する。培地を、５：３０分間、Ｈ２Ｏに交換する（浸透圧ショック）。その後、２×ＰＢＳ＋２μＭカルセイン−ＡＭを加えて、浸透圧を正常化する。次いで、細胞を３７℃でさらに３０分間インキュベートし、蛍光をプレートリーダーで測定する。列１〜２２にＣＨＯ−ＡＱＰ４細胞を播種し、列２３〜２４にはＣＨＯ−ＣＤ８１細胞を播種する（３８４ウェルプレート）。全てのプレートの端部を除外することに留意されたい。各ウェルの蛍光強度（ＦＩ）を、ＤＭＳＯで処理したＡＱＰ４細胞（コントロール）の平均ＦＩで除した相対蛍光強度を算出する。有効なアッセイの基準：変動係数（ＣＶ）＜１５％、およびＺ値＞０.５。統計分析は、５.５分の浸透圧ショックが最適なシグナル／ノイズ比を提供することを示している。
【０４６０】
【表２】
2016535787.tif 000018
示されるように、ＣＤ８１細胞のシグナルは、ＡＰＱ４細胞のシグナルの約５倍の大きさである。これは、５.５分後までに、ＡＱＰ４細胞の多くは破裂しているが、ＣＤ８１細胞の多くは依然インタクトであることが理由である。従って、ＡＱＰ４の阻害は、ＣＤ８１細胞により近い、より大きいシグナルをもたらすと期待される。
【０４６１】
このアッセイを、MicroSoure GenPlus 960およびMaybridge Diversity(登録商標)20kライブラリーのパイロットスクリーンに適用する（約２１,０００の化合物をそれぞれ１０〜２０μＭで試験）。
【０４６２】
このアッセイから、特定の化学的系統、すなわち上位２３４ヒットのうちの３つであるフェニルベンズアミド類が特定される。
【０４６３】
ＨＴＳからのヒット化合物を、異なるプレートアレンジを用いる同じアッセイにより検証する。図７に、化合物３の試験に用いられるこの検証アッセイを示す。細胞を、プレートの端部（レーン１および２４）を除外して９６ウェルマルチプレートフォーマットに播種し、全行（ｎ＝１６）を使用して、Ｈ２ＯショックによるＡＱＰ４仲介細胞破裂を阻止する化合物の能力を試験する。コントロールとしてＣＤ８１発現ＣＨＯ細胞をレーン２〜３に播種し、ＡＱＰ４発現ＣＨＯ細胞をレーン４〜２３に播種する。細胞を、１０％ＦＢＳ、ＤＭＥＭ中の０.１％ＤＭＳＯ（偶数番号の行）、または０.１％ＤＭＳＯ、１０％ＦＢＳ、ＤＭＥＭ中の１０μＭ 化合物１（奇数番号の行）で３０分間処理する。上記のように、細胞にＨ２Ｏによるショックを５：３０分間与えた後、浸透圧を１μＭ カルセイン−ＡＭの存在下に３００ｍＯＳＭに戻す。細胞を、３７℃で３０分間インキュベートし、相対蛍光を蛍光マルチプレートリーダーで測定する（ｅｘ ４９５／ｅｍ ５３５ｎＭ）。図７のデータは、平均相対蛍光単位を表す（ＲＦＵ±ＳＥＭ、ｎ＝１６）。
【０４６４】
実施例６
ＣＥの水中毒モデル：頭蓋内圧（ＩＣＰ）
Samba 202 コントロールユニットを備えたSamba 420 Sensor圧力変換器(Harvard Appratus, Holliston, MA)を用いて、ＩＣＰをモニターする。このＩＣＰモニタリングシステムは、光ファイバーに取付けられた０.４２ｍｍシリコンセンサーエレメントを含む。２０ゲージ注射針を、大槽を通して深さ〜１ｃｍまで埋め込む。この針はSamba Sensor挿入のガイドとしての役割を果たし、針埋め込み部位および針の開口端を、１００％シリコンの封止材により封止する。ベースラインＩＣＰの測定後、化合物１を含むかまたは含まない水のボーラスＩＰ注射（動物の２０重量％）を行う。動物が水負荷のために死亡するまで、ＩＣＰをモニターする。
【０４６５】
水のボーラス注射をせずにモニターした動物に観察される僅かなＩＣＰ上昇（図８、水中毒なし）を補正して、０.７６ｍｇ／ｋｇの化合物１は、ＩＣＰ上昇の相対速度を、３.６×１０−３ｍｉｎ−１から２.３×１０−３ｍｉｎ−１に３６％低下させる（ｎ＝６匹のマウス／処置、平均±ＳＥＭ）。
【０４６６】
実施例７
２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩から化合物１への変換
Cleveland Clinic FoundationのLerner Research InstituteのMass Spectrometry II Core facilityにて、化合物１の血漿または血清レベルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定する。測定は、２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩を１０ｍｇ／ｋｇでｉ.ｐ.初期投与してから１５分後および２４時間後の時点で、１ｍｇ／ｍｌの８μｌ／ｈ維持投与[Alzet i.p. 浸透圧ポンプ（Durect Corp., Cupertino, CA）により送達] において行う（ｎ＝５匹のマウス／時点、平均±ＳＥＭ）（図９）。タンパク質を除去するために最初の処理（７５％アセトニトリル抽出）を行なった後に、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）による定量の向上のために化合物３を導入する。Ｃ１８逆相クロマトグラフィーおよびトリプル四重極質量分析計による質量分析を用いるタンデムＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより、サンプルを分析する。ＬＣ法は化合物１を化合物３から分離するために十分であり、その後のＭＲＭにより、０.００４〜０.４ｎｇの化合物１の最も豊富な娘イオンについて直線応答で信頼性のある定量を得た。図９における点線は、マウス水中毒モデルで観察された化合物１の相対有効血漿濃度である。２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩を含むAlzet 浸透圧ポンプ(Durect Corp., Cupertino, CA)の腹膜内の埋め込みは、初期投与と併せて、化合物１を２０ｎｇ／ｍｌの期待有効血漿濃度を上回る濃度に２４時間維持するために十分である（図９）。
【０４６７】
化合物１の水中の溶解度は３.８μｇ／ｍｌである。化合物５の水中の溶解度は１ｍｇ／ｍｌである。
初期実験により、２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩は、インビトロでマウス血漿に加えられると、急速に化合物１に生物変換されることが示される。２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩が検出不能となるのに、２０℃で５分間もかからない。また、２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩をＩＰ注射したマウスから採取した血漿サンプル中に、２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩は検出されない。その代わりに、化合物１が、２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩の良好なバイオアベイラビリティーおよびほぼ完全な変換と一致する濃度で検出される。２−（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）カルバモイル）−４−クロロフェニル二水素ホスフェート・ビスエタノールアミン塩は、４００ｎｇ／ｍｌを超える化合物１の血清濃度（図９）をもたらす、１０ｍｇ／ｋｇおよび生理食塩水中のＩＰ注射体積（３０ｇのマウスには０.５ｍｌ）の投与を用いることができる。マウスにおける重要なＰＫパラメーターは：吸収速度０.１２ｍｉｎ−１；消失速度０.０１７ｍｉｎ−１である。
【０４６８】
実施例８
動物卒中モデル
虚血性脳梗塞の多く（〜８０％）は、中大脳動脈（ＭＣＡ）の領域で起こる。この傷害をマウスで模倣するために、中大脳動脈閉塞（ＭＣＡｏ）の管腔内モノフィラメントモデルを用いる。外科用フィラメントを、外頸動脈（ＥＣＡ）に挿入し、その先端がＭＣＡの起始部を閉塞するまで内頚動脈（ＩＣＡ）に通すことにより、閉塞をもたらす。それによる血流遮断によって、ＭＣＡ領域における脳梗塞を起こす[Longa、E.Z. et al., Reversible Middle Cerebral Artery Occlusion Without Craniectomy in Rats, Stroke, 20, 84-91(1989)]。この技術を用いて、ＭＣＡを１時間遮断する一時的な閉塞を試験する。その後、フィラメントを取り除いて、２４時間再潅流させた後に、Case Center for Imaging Researchにおいて9.4T Bruker MRI スキャナーのT2強調スキャンを用いて動物の脳を画像化した（図１０）。図１０は、「正常」マウス（左側のパネル）およびＭＣＡｏを１時間受けた後に２４時間再潅流したマウス（右側のパネル）について、大脳皮質、海馬、視床、扁桃および視床下部を示す脳の中心部のT2強調ＭＲ画像の一つのスライスを示す。点線は脳の正中線を示すが、ＭＣＡｏの脳においては脳浮腫の故に大幅なずれを示す。ＭＣＡｏの脳における梗塞部分を実線で示す。
【０４６９】
生存
マウスに、２ｍｇ／ｋｇの化合物５のｉ.ｐ.初期投与および１ｍｇ／ｍｌの化合物５の８μｌ／ｈ維持投与（ｉ.ｐ.浸透圧ポンプにより送達）を行うか、または同じ方法で生理食塩水を投与する（コントロール；ｎ＝１７）。このモデルにおいて、動物に化合物５を投与した場合、２４時間後の全生存において２９.４％の改善が見られた（Ｘ２（１）＝４.２６；Ｐ＜０.０５）。
【０４７０】
脳浮腫
マウスに、生理食塩水を投与するか、または３時間毎に５ｍｇ／ｋｇの化合物５をｉ.ｐ.反復投与する（ｎ＝８／処置）。この投与計画は、試験期間中、化合物１の血漿濃度を＞２０ｎｇ／ｍｌに維持するために十分である。icus後（post-icus）２４時間のマウスのT2強調ＭＲ画像により、同側および対側の半球体積を測定する。半球体積の相対変化を、対側脳体積に対する、同側脳体積（Ｖｉ）と対側脳体積（Ｖｃ）の差の％として算出する［半球脳体積の変化％＝（（Ｖｉ−Ｖｃ）／Ｖｃ）×１００％］。
【０４７１】
コントロール動物は、同側脳体積の相対変化１３.４％±１.９％で同側半球の膨張を示すが、化合物５を投与した動物は４.２±１.７％の変化を示す（Ｐ＝０.００３±ＳＥＭ、図１１参照）。これは、ＭＣＡｏ後の脳腫脹が３.２倍低下することを示す。
【０４７２】
神経学的アウトカム
上記と同じ実験において、動物を神経学的アウトカムについて、Manley, G.T. et al., Aquaporin-4 Deletion in Mice Reduces Brain Edema After Acute Water Intoxication and Ischemic Stroke, Nature Medicine, 6, 159-163(2000)に記載される簡単な５点スケールで評価する。化合物５を投与した動物において、神経学的アウトカムにおける改善が見られる。コントロール動物の平均神経学的スコアは２.７７±０.６６であり、化合物５を投与した動物の平均スコアは０.８８±０.３１である（図１３、挿入図、Ｐ＝０.０２５、ｎ＝９／処置）。化合物５を投与した動物は、重度の麻痺状態または死亡に至らなかった。
【０４７３】
水中毒（脳浮腫）モデルと併せてＭＣＡｏ卒中モデルからのデータは、化合物５／化合物１の薬理作用と、卒中における改善されたアウトカムとを関連付ける。
【図１】
2016535787.tif 000025
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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