(57)【要約】  本明細書には、ポリアニオン性ポリマー結合体からエンドトキシン含有量を低下させる方法が記載される。特に、様々な薬物送達用途に有用であり得る、ポリアニオン性ポリマー結合体からエンドトキシン含有量を減少させる方法が、本明細書中に記載される。
2016520687.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリアニオン性ポリマー結合体を精製する方法であって、
出発ポリアニオン性ポリマー結合体を第１溶媒系と混合して、溶液を形成すること；
溶液のｐＨを低下させることにより、出発ポリアニオン性ポリマー結合体の一部を沈殿させること；および
沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して、精製ポリアニオン性ポリマー結合体を提供すること
を含み、
第１溶媒系および第２溶媒系の一方または両方は、水混和性有機溶媒を含み、精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である、前記方法。
【請求項２】
精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量が、約０．２５ＥＵ／ｍｇ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量が、約０．０５ＥＵ／ｍｇ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量が、約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
エンドトキシンの量が、少なくとも約１０倍減少させられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
エンドトキシンの量が、約１００倍〜約１０倍の範囲で減少させられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
溶液のｐＨが、約２．５未満まで低下させられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
溶液のｐＨが、約３．０〜約１．５の範囲まで低下させられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
溶液のｐＨが、約２．５〜約１．５の範囲まで低下させられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
溶液のｐＨが、１種または２種以上の酸を用いて、低下させられる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
１種または２種以上の酸が、塩酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸およびマロン酸からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
第１溶媒系が、１種または２種以上の溶媒を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
第１溶媒系が、水を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第１溶媒系が、水混和性有機溶媒を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
第１溶媒系が、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
水および少なくとも１種の水混和性有機溶媒が、出発ポリアニオン性ポリマー結合体へ別々に添加される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
水混和性有機溶媒が、アセトアルデヒド、アセトン、アセトニトリル、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２−ブトキシエタノール、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン，ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、メタノール、エタノール、エチレングリコール、フルフリルアルコール、グリセロール、１−プロパノール、イソプロパノール、１，５−ペンタンジール、１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール、テトラヒドロフランおよびトリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体を第１溶媒系と混合することが、約３５℃〜約−５℃の範囲の温度で行われる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
第２溶媒系が、１種または２種以上の溶媒を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
第２溶媒系が、水を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
第２溶媒系が、水混和性有機溶媒を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
第２溶媒系が、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
水混和性溶媒が、アセトアルデヒド、アセトン、アセトニトリル、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２−ブトキシエタノール、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、メタノール、エタノール、エチレングリコール、フルフリルアルコール、グリセロール、１−プロパノール、イソプロパノール、１，５−ペンタンジール、１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール、テトラヒドロフランおよびトリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
第２溶媒系が、１種または２種以上の酸をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
１種または２種以上の酸が、塩酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸およびマロン酸からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
第２溶媒系で洗浄することが、１回または２回以上繰り返される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
第２溶媒系で洗浄することが、２回または３回以上繰り返される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
第２溶媒系で洗浄することが、少なくとも３回繰り返される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
洗浄することが、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第２溶媒系において混ぜることによって、実施される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体が、各洗浄の間に単離される、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
第２溶媒系で洗浄することが、少なくとも２回繰り返される場合、第２溶媒系が、洗浄することのうちの少なくとも２回について同じである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
第２溶媒系で洗浄することが、少なくとも２回繰り返される場合、第２溶媒系が、洗浄することのうちの少なくとも２回について異なる、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第３溶媒系で洗浄することをさらに含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
第３溶媒系が、水を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
第３溶媒系が、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
洗浄することが、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第３溶媒系において混ぜることによって、実施される、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
精製ポリアニオン性ポリマー結合体を乾燥することをさらに含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
乾燥することが、凍結乾燥によって実施される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
洗浄する前に、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を単離することをさらに含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
単離することが、濾過膜、分子篩、濾紙、クロマトグラフィ、遠心分離およびそれらの組み合わせから選択される１つまたは２つ以上を用いて、実施される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ｐＨを低下させる前に、溶液を濾過することをさらに含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
濾過することが、濾過膜、分子篩、濾紙、クロマトグラフィ、遠心分離およびそれらの組み合わせから選択される１つまたは２つ以上を用いて、実施される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体が、その塩形態である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体の沈殿させられた一部が、その酸性型である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
最後に洗浄した後に、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体のアルカリ金属塩を形成することをさらに含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリマー結合体が、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリマー結合体が、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−アスパルタート）−ポリマー結合体である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、ポリ（アスパルタート）−ポリマー結合体である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、ポリ（グルタマート）−ポリマー結合体である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、ポリアニオン性抗がん剤結合体である、請求項４６〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉａ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩａ）で表される繰返し単位：
【化１】
2016520687.tif 000017
を含み、式中：
各Ａ１、各Ａ２、各Ａ３および各Ａ４は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１および各Ｒ２は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ３および各Ｒ４は、独立して、水素、アルカリ金属、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、
ただし、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、ならびに、その外のＲ３およびＲ４が、水素またはアルカリ金属である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位：
【化２】
2016520687.tif 000018
を含み、式中：
各Ａ５、各Ａ６、各Ａ７および各Ａ８は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ５および各Ｒ６は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ７および各Ｒ８は、独立して、水素、アルカリ金属、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、
ただし、Ｒ７およびＲ８のうちの少なくとも１つが、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、ならびに、その外のＲ７およびＲ８が、水素またはアルカリ金属である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位：
【化３】
2016520687.tif 000019
を含み、式中：
各Ｒ９および各Ｒ１０は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ９は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１０は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位：
【化４】
2016520687.tif 000020
を含み、式中：
各Ａ１１および各Ａ１２は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１１は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１２は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位：
【化５】
2016520687.tif 000021
を含み、式中：
各Ａ１３および各Ａ１４は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１３は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１４は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位：
【化６】
2016520687.tif 000022
を含み、式中：
各Ａ１５および各Ａ１６は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１５は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１６は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）および（Ｉｆ）から選択される１つまたは２つ以上の繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）および（ＩＩｆ）から選択される１つまたは２つ以上の繰返し単位を含むコポリマー結合体であり、ただしコポリマーが、（Ｉａ）および（ＩＩａ）、（Ｉｂ）および（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）および（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）および（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）、または、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）で表される繰返し単位のみではない、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法：
【請求項５８】
アルカリ金属が、ナトリウムである、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、ポリアニオン性抗がん剤結合体であり；ならびに、抗がん剤が、パクリタキセルである、請求項５１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
分野
本出願は一般的に、ポリアニオン性ポリマー結合体からのエンドトキシン含有量を減少させる方法に関する。特に、本出願は、様々な薬物送達用途に有用であり得る、ポリアニオン性ポリマー結合体からエンドトキシン含有量を低下させることに関する。
【背景技術】
【０００２】
説明
アミノ酸ベースのポリマーは、新規な生体材料の潜在的な供給源として考えられてきた。良好な生態適合性を有するポリアミノ酸は、低分子量化合物の送達するために検討されてきた。比較的少数のポリグルタミン酸およびコポリマーが、薬物送達用の候補材料として特定されている。
【発明の概要】
【０００３】
概要
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、ポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関するものであって、該方法は、出発ポリアニオン性ポリマー結合体を第１溶媒系と混合して溶液を形成すること；出発ポリアニオン性ポリマー結合体の一部を、溶液のｐＨを低下させることにより沈殿させること；および、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ポリアニオン性ポリマー結合体を提供すること、を含み、ここで、第１溶媒系および第２溶媒系は、水混和性有機溶媒を含み、精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【０００４】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体、ポリ（グルタマート）−ポリマー結合体、ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−アスパルタート）−ポリマー結合体、ポリ（アスパルタート）−ポリマー結合体、ポリ（Ｌ−アスパルチル−グルタマート）−ポリマー結合体、ポリ（Ｌ−アスパルチル−アスパルタート）−ポリマー結合体およびそれらのコポリマーを精製する方法に関し、該方法は、前述の出発ポリマー結合体を第１溶媒系で混合して溶液を形成すること；出発ポリマー結合体の一部を、溶液のｐＨを低下させることにより沈殿させること；および、沈殿ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄することで前述の精製ポリマー結合体の１つを提供することを含み、ここで、第１溶媒系および第２溶媒系の一方または両方は、水混和性有機溶媒を含み、精製ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【０００５】
本明細書で記載されるいくつかの態様は、一般に、ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体を精製する方法に関し、該方法は、出発ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体を第１溶媒系で混合して溶液を形成すること；出発ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体の一部を、溶液のｐＨを低下させることによって沈殿させること；および、沈殿ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体を提供することを含み、ここで、第１溶媒系および第２溶媒系の一方または両方は、水混和性有機溶媒を含み、精製ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、ポリアニオン性ポリマー結合体のエンドトキシン含有量を減少させるための手順例を概略する。
【０００７】
【図２】図２は、ＰＧＧＡ−ＰＴＸのエンドトキシン含有量を減少させるための手順例を概略する。
【０００８】
【図３】図３は、ポリアニオン性ポリマー結合体をその酸性型から塩形態へ変換させるための手順例を概略する。
【０００９】
【図４】図４は、ＰＧＧＡ−ＰＴＸをその酸性型から塩形態へ変換させるための手順例を概略する。
【００１０】
詳細な説明
定義
特に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術的および科学的な用語は、当業者に共通して理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中で参照されたすべての特許、出願、公開された出願および他の刊行物は、特に明記しない限り、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書の１つの用語について複数の定義が存在する場合、特に明記しない限り、この節のものが優先する。
【００１１】
本明細書で用いるように、用語「水溶性」とは、水１００ｍｌあたり少なくとも３グラムの濃度で、ｐＨ＝７で、水に完全に溶解できる化合物を説明するものである。Shriner at al., The Systematic Identification of Organic 化合物s, § 5.1.1, (6th ed. 1980) を参照。
【００１２】
本明細書で用いる用語「ポリマー」は、別の記載がない限り、様々な分子構造を有するホモポリマーおよびコポリマーの両方を含む。
【００１３】
用語「ポリマー結合体」は、パクリタキセルなどの生物学的に活性な剤または薬物の１つまたは２つ以上に付着するポリマーを説明する。例えば、本明細書で用いるＰＧＧＡ−ＰＴＸは、ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）（ＰＧＧＡ）がパクリタキセル（ＰＴＸ）に付着しているポリマー結合体である。好適な生物学的に有用な剤の例には、これらに限定されないが、標的化剤、造影剤（例えば、光学造影または磁気共鳴造影剤）および安定剤（ポリエチレングリコールなど）が含まれる。生物学的に有用な剤および／または薬物は好適な分子（ＰＴＸなど）に直接付着してもよいか、または好適な分子はそのポリマーにリンカー基を介して直接付着してもよい。リンカー基は、エステル、アミドまたはアミン結合などの比較的小さな化学的部分であってもよく、またはより大きな化学的部分、例えば、アルキルエステル連結またはアルキレンオキシド連結であってもよい。
【００１４】
標的化剤の例には、アルギニン−グリシン−アスパルタート（ＲＧＤ）ペプチド、環状（ｆＫＲＧＤ）、フィブロネクチン、葉酸塩、ガラクトース、アポリポタンパク質、インスリン、トランスフェリン、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）および抗体が含まれる。標的化剤は、αｖβ３−インテグリン、葉酸塩、アシアロ糖タンパク質（ＬＤＬ）、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）受容体および抗体受容体から選択される受容体と相互作用することができる。
【００１５】
光学造影剤の例には、アクジリン色素、クマリン色素、ローダミン色素、キサンテン色素、シアニン色素およびピレン色素が含まれる。特定の光学造影剤には、Texas Red、Alexa Fluor（登録商標）色素、BODIPY（登録商標）色素、フルオレセイン、Oregon Green（登録商標）色素およびRhodamine Green（商標）色素が含まれる。
【００１６】
磁気共鳴造影剤の例には、
【化１】
2016520687.tif 000003
などの常磁性金属化合物（例えばＧｄ（ＩＩＩ））が含まれ得る。
【００１７】
本明細書で用いる用語「ポリアニオン性ポリマー結合体」は、中性のｐＨ（すなわちｐＨ＝７）で負に荷電されたポリマー結合体を説明する。ポリアニオン性ポリマー結合体の例には、これらに限定されるものではないが、ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）ポリマー結合体、ポリ（グルタマート）ポリマー結合体、ポリ（アスパルタート）ポリマー結合体、ポリ（γ−Ｌ−グルタミル−アスパルタート）ポリマー結合体、ポリ（アスパルチル−アスパルタート）ポリマー結合体、ポリ（アスパルチル−グルタマート）ポリマー結合体、ポリ（アスパルタート）ポリマー結合体およびそれらのコポリマーが含まれる。
【００１８】
本明細書で用いるように、ポリ（グルタミル−アスパルタート）（ＰＧＡＡ）は、式（Ａ）、式中：各ＲＡは、独立して、水素またはアルカリ金属であることができる、で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなるポリマーを意味する。式（Ａ）で表される繰返し単位は、塩、例えばナトリウム塩、または、酸の形態であることができる。よって、本明細書で用いるとおり、ポリ（グルタミル−アスパルタート）は、別の記載がない限り、式（Ａ）の酸性型、式（Ａ）の塩形態、または両方を含有することができるポリマーを意味する。
【化２】
2016520687.tif 000004
【００１９】
本明細書で用いるとおり、ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）（ＰＧＧＡ）は、本明細書で記載される式（Ｂ）、式中：各ＲＢは、独立して水素またはアルカリ金属であることができる、で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなるポリマーを意味する。式（Ｂ）で表される繰返し単位は、塩、例えばナトリウム塩、または、酸の形態であることができる。よって、本明細書で用いるとおり、ポリ（グルタミル−グルタマート）は、別の記載がない限り、式（Ｂ）の酸性型、式（Ｂ）の塩形態、または両方を含有することができるポリマーを意味する。
【化３】
2016520687.tif 000005
【００２０】
本明細書で用いるとおり、ポリ（アスパルタート）（ＰＡ）は、式（Ｃ）、式（Ｄ）または両方、式中、各ＲＣおよび各ＲＤは、独立して、水素またはアルカリ金属であることができる、で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなるポリマーを意味する。ポリ（アスパルタート）のいくつかは、塩、例えばナトリウム塩、または、酸の形態であり得る。よって、本明細書で用いるとおり、ポリ（アスパルタート）は、別の記載がない限り、式（Ｂ）および／または式（Ｄ）の酸性型、式（Ｃ）および／または式（Ｄ）の塩形態、または両方を含有することができるポリマーを意味する。
【化４】
2016520687.tif 000006
【００２１】
本明細書で用いるとおり、ポリ（グルタマート）（ＰＧＡ）は、式（Ｅ）、式（Ｆ）または両方、式中、各ＲＥおよび各ＲＦは、独立して、水素またはアルカリ金属であることができる、で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなるポリマーを意味する。式（Ｅ）および／または式（Ｆ）で表される繰返し単位は、塩、例えばナトリウム塩、または、酸の形態であり得る。よって、本明細書で用いるとおり、ポリ（グルタマート）は、別の記載がない限り、式（Ｅ）および／または式（Ｆ）の酸性型、式（Ｅ）および／または式（Ｆ）の塩形態、または両方を含有することができるポリマーを意味する。
【化５】
2016520687.tif 000007
【００２２】
本明細書で用いるとおり、「Ｃｍ〜Ｃｎ」において、「ｍ」および「ｎ」は、１つの基における炭素の数または環（単数または複数）における炭素の数を意味する整数である。つまり、該基または環は、「ｍ」〜「ｎ」（両端を含む）の炭素原子を含有することができる。よって、例えば、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基は、１〜４個の炭素を有するすべてのアルキル基、つまり、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−および（ＣＨ３）３Ｃ−を意味する。「ｍ」も「ｎ」も、指定されていない場合には、本明細書で示される定義における最も広い範囲であると見なされる。
【００２３】
１つまたは２つ以上のキラル中心を有する本明細書に記載のあらゆる化合物において、絶対立体化学が明確に示されていない場合は、各中心は独立して、立体配置またはＳ立体配置またはこれらの混合物であり得ることが理解される。よって、本明細書に記載の化合物は、鏡像異性体的に純粋であるか、または立体異性体の混合物であり得る。さらに、ＥまたはＺとして定義されることができる幾何異性体を生じる１つまたは２つ以上の二重結合（単数または複数）を有するあらゆる化合物において、各二重結合は独立して、ＥまたはＺまたはそれらの混合物であり得ることが理解される。同様に、すべての互変異生体の形態もまた含まれることが意図される。
【００２４】
本明細書で用いるとおり、保護基、アミノ酸および他の化合物の略語は、別の記載がない限り、それらの共通の用途、認識された略語または生化学命名法におけるIUPAC-IUP委員会（Biochem. 11:942-944 (1972)を参照）に従う。
【００２５】
エンドトキシン値を低下させる方法
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシン含有量を低下させる方法に関する。リポ多糖類（ＬＰＳ）とも称されるエンドトキシンは、市販のタンパク質または生物学的に活性な物質においてみられる主要な不純物である。エンドトキシンの存在は、しばしば、主成分の生物学的効果の研究を複雑化させる組換タンパク質処方物中の少量のエンドトキシンの存在は、宿主生物において、エンドトキシンショック、組織損傷およびさらには死などの副作用を引き起こし得る。したがって、薬物、注射可能物、ならびに、他の生物学的および薬学的生産物からエンドトキシンを除去することは重要である。
【００２６】
ポリアニオン性ポリマー結合体中の主要な供給源は、接線流濾過（ＴＦＦ）精製において用いられる大量の水にあると考えることができる。高品質のエンドトキシンフリーの注射用水（ＷＦＩ）をＴＦＦ精製において用いることができるが、大規模精製のための操作費用が極めて高くなり得るので、大規模精製は費用の面で抑制的である。
【００２７】
低エンドトキシン値を伴う生産物を生み出すための他の手順が知られている。しかしながら、該手順のいずれも広範に適用可能なものではない。例えばアニオン交換クロマトグラフィは、ウロキナーゼなどの正電荷のタンパク質の汚染除去に潜在的に有用である。しかしながら、負電荷のタンパク質の汚染除去は、吸着による生産物の実質的な損失を伴うことが示されてきた。ミオグロビン（Ｍｗ〜１８ｋＤａ）などの小さなタンパク質については、大きなエンドトキシン集合体を除去するために限外濾過が有用であり得る。しかしながら、イムノグロブリン（Ｍｗ〜１５０ｋＤａ）などの大きなタンパク質については、限外濾過が有効ではないことが示されてきた。よって、高分子量（Ｍｗ＞２０ｋＤａ）を伴うポリアニオン性ポリマー結合体については、限外濾過もアニオン交換クロマトグラフィも好適ではない。したがって、単純で、拡張可能で、費用対効果の高いエンドトキシン除去手順が、ＰＧＧＡ−ポリマー結合体およびＰＧＡ−ポリマー結合体などの大きなポリアニオン性ポリマー結合体中のエンドトキシン含有量を低下させるために必要である。
【００２８】
本明細書で記載するとおり、ポリマー結合体の酸沈殿、選択溶解およびエンドトキシンの溶媒混合物での洗浄を用いて、出発ポリアニオン性ポリマー結合体からエンドトキシン値を薬学的用途のために好適な値まで減少させることができる。
【００２９】
エンドトキシン値の低下によるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法は、出発ポリアニオン性ポリマー結合体を第１溶媒系で混合して溶液を形成すること；溶液のｐＨを低下させることにより出発ポリアニオン性ポリマー結合体の一部を沈殿させること；および沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ポリアニオン性ポリマー結合体を提供すること、を含みことができ、ここで、精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【００３０】
いくつかの態様において、本明細書に記載されるポリアニオン性ポリマー結合体は、ＰＧＧＡ−ポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、本明細書に記載のＰＧＧＡ−ポリマー結合体は、本明細書に記載のＰＧＧＡ−抗がん剤結合体などのＰＧＧＡ−抗がん剤結合体であることができる。いくつかの態様において、ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体を精製するための方法は、出発ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体を第１溶媒系と混合して溶液を形成すること；溶液のｐＨを低下させることにより、出発ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体の一部を沈殿させること；および、沈殿ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体を提供すること、を含むことができ、ここで、精製ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【００３１】
いくつかの態様において、本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体は、ＰＧＡ−ポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、本明細書に記載のＰＧＡ−ポリマー結合体は、ＰＧＡ−ＰＴＸなどのＰＧＡ−抗がん剤結合体であることができる。いくつかの態様において、ＰＧＡ−ポリマー結合体を精製するための方法は、出発ＰＧＡ−ポリマー結合体を第１溶媒系と混合して溶液を形成すること；溶液のｐＨを低下させることにより、出発ＰＧＡ−ポリマー結合体の一部を沈殿させること；および、沈殿ＰＧＡ−ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ＰＧＡ−ポリマー結合体を提供すること、を含むことができ、ここで、精製ＰＧＡ−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ＰＧＡ−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【００３２】
他の態様において、本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体は、ＰＧＡＡ−ポリマー結合体であることができる。他の態様において、本明細書に記載のＰＧＡＡ−ポリマー結合体は、ＰＧＡＡ−ＰＴＸなどのＰＧＡＡ−抗がん剤結合体であることができる。いくつかの態様において、ＰＧＡＡ−ポリマー結合体を精製するための方法は、出発ＰＧＡＡ−ポリマー結合体を第１溶媒系と混合して溶液を形成すること；溶液のｐＨを低下させることにより、出発ＰＧＡＡ−ポリマー結合体の一部を沈殿させること；および、沈殿ＰＧＡＡ−ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ＰＧＡＡ−ポリマー結合体を提供すること、を含むことができ、ここで、精製ＰＧＡＡ−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ＰＧＡＡ−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【００３３】
なお他の態様において、本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体は、ＰＡ−ポリマー結合体であることができる。なお他の態様において、本明細書に記載のＰＡ−ポリマー結合体は、ＰＡ−ＰＴＸなどのＰＡ−抗がん剤結合体であることができる。いくつかの態様において、ＰＧＡ−ポリマー結合体を精製するための方法は、出発ＰＧＡ−ポリマー結合体を第１溶媒系と混合して溶液を形成すること；溶液のｐＨを低下させることにより、出発ＰＧＡ−ポリマー結合体の一部を沈殿させること；および、沈殿ＰＧＡ−ポリマー結合体を第２溶媒系で洗浄して精製ＰＧＡ−ポリマー結合体を提供すること、を含むことができ、ここで、精製ＰＧＡ−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、出発ＰＧＡ−ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量未満である。
【００３４】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法は、出発ポリマー結合体中に存在するエンドトキシン値と比較してより低いエンドトキシン値を伴う精製ポリマー結合体を提供することができる。いくつかの態様において、精製ポリマー結合体中のエンドトキシン値は、精製ポリマー結合体が薬学的生産物における用途に許容可能である程度に低くあることができる。いくつかの態様において、精製ポリアニオン性ポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）中に存在するエンドトキシンの量は、約０．２５ＥＵ／ｍｇ未満であることができる。いくつかの態様において、精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、約０．１５ＥＵ／ｍｇ未満であることができる。他の態様において、精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、約０．１０ＥＵ／ｍｇ未満であることができる。他の態様において、精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、約０．０５ＥＵ／ｍｇ未満であることができる。また他の態様において、精製ポリアニオン性ポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）中に存在するエンドトキシンの量は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満であることができる。エンドトキシン含有量を測定するための方法は、当業者に知られている。一例は、カブトガニの血球溶解成分（ＬＡＬ）アッセイである。本段落のものを含むいくつかの態様において、出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体中に存在するエンドトキシンの量は、ＬＡＬアッセイを用いて測定することができる。
【００３５】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法は、エンドトキシン量を数倍減少させることができる。いくつかの態様において、エンドトキシンの量を少なくとも約１０倍減少させることができる。他の態様において、エンドトキシンの量を約１００倍〜約１０倍の範囲で減少させることができる。また他の態様において、エンドトキシンの量を約１００倍〜約２００倍の範囲で減少させることができる。なお他の態様において、エンドトキシンの量を約２００倍〜約５００倍の範囲でさらに減少させることができる。
【００３６】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体（例えば、本明細書に記載のＰＧＧＡ−ポリマー結合体またはＰＧＡ−ポリマー結合体）と混合することができる第１溶媒系には、１種または２種以上の溶媒が含まれ得る。いくつかの態様において、第１溶媒系は単一溶媒であることができる。他の態様において、第１溶媒系は、２種または３種以上の溶媒の混合物であることができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は水を含むことができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は水であることができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は水混和性有機溶媒を含むことができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は水混和性有機溶媒であることができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物を含むことができる。他の態様において、第１溶媒系は、水と２種または３種以上の水混和性有機溶媒との混合物を含むことができる。また他の態様において、第１溶媒系は水とエタノールとの混合物を含むことができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は、塩化物溶媒、例えばクロロホルムおよび／またはジクロロメタンを含むことができない。
【００３７】
第１溶媒系が２種または３種以上の溶媒を含む場合、該溶媒は種々の比率で存在することができる。例えば、第１溶媒系は、およそ１：１の比率で存在する水およびエタノールであることができる。他の態様において、第１溶媒系は、約２：約１の比率で存在する２種の溶媒を有することができる。いくつかの態様において、第１溶媒系は、約１：約１〜約４：約１の範囲の比率で存在する２種の溶媒を有することができる。
【００３８】
第１溶媒系が２種または３種以上の溶媒を含む場合、該溶媒をおよそ同時にまたは異なる時に出発ポリマー結合体へ添加することができる。例えば、水を出発ポリアニオン性ポリマー結合体へ完全に添加することができ、そして水混和性有機溶媒（単数または複数）（例えば、エタノール）を添加することができる。代替的に、水および水混和性有機溶媒（単数または複数）を出発ポリアニオン性ポリマー結合体へ同時発生的に添加することができる。
【００３９】
様々な水混和性溶媒を本明細書に記載の方法において用いることができる。いくつかの態様において、水混和性有機溶媒を、アセトアルデヒド、アセトン、アセトニトリル、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２−ブトキシエタノール、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、メタノール、エタノール、エチレングリコール、フルフリルアルコール、グリセロール、１−プロパノール、イソプロパノール、１，５−ペンタンジール、１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール、テトラヒドロフランおよびトリエチレングリコールから選択することができる。いくつかの態様において、水混和性有機溶媒はエタノールであることができる。
【００４０】
出発ポリマー結合体を第１溶媒系での混合を、種々の温度で実施することができる。いくつかの態様において、出発ポリマー結合体の第１溶媒系での混合は、約３５℃〜約−５℃の範囲の温度で実施することができる。いくつかの態様において、出発ポリマー結合体の第１溶媒系での混合は、約５０℃〜約−１０℃の範囲の温度で実施することができる。
【００４１】
出発ポリマー結合体（例えば、ＰＧＧＡ−ポリマー結合体）の一部の沈殿は、出発ポリマー結合体および第１溶媒系の溶液のｐＨを低下させることにより達成することができる。いくつかの態様において、溶液のｐＨは、出発ポリマー結合体の一部をその酸性型へ交換するために調節することができる。いくつかの態様において、該溶液のｐＨを約ｐＨ＝２．５よりも低いものに低下させることができる。他の態様において、溶液のｐＨを約ｐＨ＝３．０〜約ｐＨ＝１．５の範囲まで低下させることができる。いくつかの態様において、溶液のｐＨを約ｐＨ＝２．５〜約ｐＨ＝１．５の範囲まで低下させることができる。溶液のｐＨを低下させることによって、出発ポリアニオン性ポリマー結合体をその塩形態からその酸性型へ変換することができる。
【００４２】
その酸性型において、第１溶媒系における出発ポリマー結合体の溶解性は減少し得、出発ポリアニオン性ポリマー結合体の一部は第１溶媒系から沈殿し得る。いくつかの態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約４０％〜約１００％の範囲であることができる。他の態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約６０％〜約１００％の範囲であることができる。いくつかの態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約８０％〜約１００％の範囲であることができる。他の態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約９０％〜約１００％の範囲であることができる。いくつかの態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約６０％よりも高くあることができる。他の態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約８０％よりも高くあることができる。また他の態様において、沈殿した出発ポリマー結合体の一部は、第１溶媒系と混合された出発ポリマー結合体の量を基準とした約９０％よりも高くあることができる。
【００４３】
出発ポリマー結合体および第１溶媒系の溶液のｐＨを低下させるために、種々の酸を用いることができる。いくつかの態様において、溶液のｐＨは、１種または２種以上の酸を用いて低下させることができる。溶液のｐＨを調節するために用いられる酸（単数または複数）は、塩酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸、マロン酸および当業者に知られる他のあらゆる同等の酸から選択することができる。いくつかの態様において、酸は塩酸であることができる。
【００４４】
本明細書に記載のポリマー結合体を精製するための方法は、ｐＨの低下の前に出発ポリアニオン性ポリマー結合体を濾過することをさらに含むことができる。いくつかの態様において、出発ポリアニオン性ポリマー結合体を、第１溶媒系のすべての溶媒の添加後に濾過することができる。他の態様において、第１溶媒系が２種または３種以上の溶媒を含む場合、出発ポリアニオン性ポリマー結合体を、第１溶媒系のうちの少なくとも１種の溶媒の添加後に濾過することができる。例えば、水を出発ポリアニオン性ポリマー結合体と混合することができ、生じた溶液を本明細書に記載の方法を用いて濾過することができる。濾過後、水と出発ポリアニオン性ポリマー結合体との溶液を、水混和性溶媒（エタノールなど）と混合することができる。いくつかの態様において、濾過を、濾過膜、分子篩、濾紙、クロマトグラフィ、遠心分離およびこれらの組み合わせを用いて実施することができる。いくつかの態様において、濾過を、濾過膜（例えば、０．２μｍの濾過膜）を用いて実施することができる。他の態様において、濾過をクロマトグラフィによって実施することができる。また他の態様において、濾過を遠心分離によって実施することができる。
【００４５】
沈殿ポリマー結合体を洗浄するための第２溶媒系は、１種または２種以上の溶媒を含むことができる。洗浄を、様々な方法により実施することができる。例えば、洗浄は、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第２溶媒系において混ぜることによって実施することができる。別の例として、洗浄は、第２溶媒系を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体の上に注ぎ、その一方で第２溶媒系を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体から排水させることによって実施することができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は水を含むことができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は、エタノールなどの水混和性有機溶媒を含むことができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物を含むことができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物であることができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は、水と２種または３種以上の水混和性有機溶媒との混合物を含むことができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は、塩化物溶媒、例えばクロロホルムおよび／またはジクロロメタンを含むことができない。
【００４６】
第１溶媒系と同様、第２溶媒系が２種または３種以上の溶媒を含む場合、該溶媒は種々の比率で存在することができる。いくつかの態様において、第２溶媒は、約１：約１の比率で存在する２種の溶媒、例えば、約１：約１の比率の水：エタノール、を有することができる。他の態様において、第２溶媒系は、約２：約１の比率で存在する２種の溶媒を有することができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は、約１：約１〜約４：約１の範囲の比率で存在する２種の溶媒を有することができる。第２溶媒系が２種または３種以上の溶媒を含む場合、溶媒をおよそ同時にまたは異なる時に沈殿ポリマー結合体へ添加することができる。例えば、水を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体へ完全に添加することができ、そして水混和性有機溶媒（単数または複数）（例えば、エタノール）を添加することができる。代替的に、水および水混和性有機溶媒（単数または複数）を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体へ同時発生的に添加することができる。
【００４７】
第２溶媒系に含まれる水混和性溶媒（単数または複数）を、アセトアルデヒド、アセトン、アセトニトリル、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２−ブトキシエタノール、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、メタノール、エタノール、エチレングリコール、フルフリルアルコール、グリセロール、１−プロパノール、イソプロパノール、１，５−ペンタンジール、１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール、テトラヒドロフランおよびトリエチレングリコールから選択することができる。いくつかの態様において、水混和性溶媒はエタノールであることができる。
【００４８】
いくつかの態様において、第２溶媒系は１種または２種以上の酸を含むことができる。第２溶媒系に含まれる酸を、塩酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸およびマロン酸から選択することができる。いくつかの態様において、第２溶媒系は塩酸を含むことができる。
【００４９】
いくつかの態様において、第２溶媒系は、酸および水混和性有機溶媒を伴う水であることができる。好適な水混和性有機溶媒および酸は、本明細書で記載される。いくつかの態様において、第２溶媒系は、塩酸およびエタノールを伴う水であることができる。
【００５０】
沈殿ポリマー結合体を、繰り返し洗浄することができる。いくつかの態様において、沈殿ポリマー結合体を１回または２回以上洗浄することができる。他の態様において、沈殿ポリマー結合体を２回または３回以上洗浄することができる。また他の態様において、沈殿ポリマー結合体を少なくとも３回洗浄することができる。いくつかの態様において、沈殿ポリマー結合体を１〜３、１〜５または１〜１０の範囲の回数で洗浄することができる。
【００５１】
沈殿ポリマー結合体を複数回洗浄する場合、沈殿ポリマー結合体を、各洗浄の間に単離することができる。いくつかの態様において、沈殿ポリマー結合体を少なくとも１回の洗浄の後に単離することができる。洗浄の間の単離方法は、本明細書に記載され、濾過膜、分子篩、濾紙、クロマトグラフィ、遠心分離およびそれらの組み合わせを含む。
【００５２】
いくつかの態様において、洗浄が少なくとも２回繰り返される場合、第２溶媒系は、洗浄のうちの少なくとも２回について同じであることができる。他の態様において、洗浄が少なくとも２回繰り返される場合、第２溶媒系は、洗浄のうちの少なくとも２回について異なることができる。
【００５３】
本明細書に記載の方法には、沈殿ポリマー結合体を第３溶媒系で任意に洗浄することを含むことができる。第２溶媒系と同様に、第３溶媒系での洗浄を、様々な方法により実施することができる。いくつかの態様において、沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体を第３溶媒系で混ぜることによって実施することができる。他の態様において、洗浄は、第３溶媒系を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体の上に注ぎ、その一方で第３溶媒系を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体から排水させることによって実施することができる。沈殿ポリマー結合体を洗浄するための第３溶媒系は、１種または２種以上の溶媒を含むことができる。いくつかの態様において、第３溶媒系は水を含むことができる。いくつかの態様において、第３溶媒系は、本明細書に記載の水混和性有機溶媒などの水混和性有機溶媒を含むことができる。いくつかの態様において、第３溶媒系は、水と少なくとも１種の水混和性有機溶媒との混合物を含むことができる。いくつかの態様において、第３溶媒系は、水（例えば、ＭｉｌｌｉＱ水）であることができる。いくつかの態様において、第３溶媒系は、塩化物溶媒、例えばクロロホルムおよび／またはジクロロメタンを含むことができない。
【００５４】
第３溶媒系が２種または３種以上の溶媒を含む場合、溶媒は種々の比率で存在することができる。沈殿ポリマー結合体の第３溶媒系での洗浄は、２回または３回以上あるいは３回または４回以上などの複数回起こることができる。いくつかの態様において、第３溶媒系での洗浄は、第２溶媒系での洗浄（単数または複数）が完了した後に起こることができる。追加的に、第３溶媒系が１種より多い溶媒を含む場合、溶媒をおよそ同時にまたは異なる時に沈殿ポリマー結合体へ添加することができる。例えば、水を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体へ完全に添加することができ、そして水混和性有機溶媒（単数または複数）（例えば、エタノール）を添加することができる。代替的に、水および水混和性有機溶媒（単数または複数）を沈殿ポリアニオン性ポリマー結合体へ同時発生的に添加することができる。
【００５５】
本明細書に記載のポリマー結合体を精製するための方法は、精製ポリアニオン性ポリマー結合体を乾燥することをさらに含むことができる。種々の乾燥方法が用いられることができ、それは、限定するものではないが、オーブン乾燥、凍結乾燥、空気乾燥およびそれらの組合せを含む。いくつかの態様において、精製ポリマー結合体を凍結乾燥によって乾燥することができる。
【００５６】
本明細書に記載のポリマー結合体を精製するための方法は、ｐＨを低下させた後および洗浄する前に、沈殿ポリマー結合体を単離することを含むことができる。ｐＨを低下させた後にポリマー結合体を単離するための公的な方法は本明細書に記載される。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、遠心分離により単離することができる。
【００５７】
精製ポリアニオン性ポリマー結合体は、その酸性型またはその塩形態であることができる。精製ポリアニオン性ポリマー結合体のアルカリ金属塩（例えば、ＰＧＧＡ−ポリマー結合体のナトリウム塩）を、当業者に知られる方法を用いて形成することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体のアルカリ金属塩は、ナトリウム塩であることができる。いくつかの態様において、精製ポリアニオン性ポリマー結合体のアルカリ金属塩が、最後の洗浄の後に形成することができる。
【００５８】
種々のアルカリ金属塩基を、ポリマー結合体のアルカリ金属塩を形成するために用いることができる。好適なアルカリ金属塩基の例には、金属重炭酸塩、アルカリ金属炭酸塩およびアルカリ金属水酸化物が含まれる。いくつかの態様において、アルカリ金属塩基は重炭酸ナトリウムであることができる。他の態様において、アルカリ金属塩基は水酸化ナトリウムであることができる。いくつかの態様において、アルカリ金属塩基は炭酸ナトリウムであることができる。
【００５９】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法は、最後の洗浄後に得られたポリマー結合体のアルカリ金属塩を精製することをさらに含むことができる。様々な方法を用いることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体のアルカリ金属塩を、最後の接線流濾過（ＴＦＦ）系を用いて精製することができる。いくつかの態様において、透析管を用いてポリマー結合体のアルカリ金属塩を精製することができる。
【００６０】
所望および／または需要に応じて、ポリマー結合体のアルカリ金属塩を、精製後に濾過することができる。いくつかの態様において、濾過を、濾過膜、分子篩、濾紙、クロマトグラフィ、遠心分離およびそれらの組み合わせを用いることによって実施することができる。いくつかの態様において、濾過膜を用いることによって濾過を実施することができる。いくつかの態様において、クロマトグラフィを用いることによって濾過を実施することができる。
【００６１】
ポリマー結合体
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、１つまたは２つ以上の式（Ｉａ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩａ）で表される繰返し単位：
【化６】
2016520687.tif 000008
式中：各Ａ１、各Ａ２、各Ａ３および各Ａ４は、独立して、Ｏ（酸素）またはＮＨであることができ；各Ｒ１および各Ｒ２は、独立して、水素またはアルカリ金属であることができ；および、各Ｒ３および各Ｒ４は、独立して、水素、アルカリ金属、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であることができ、ただし、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、ならびに、その外のＲ３およびＲ４が、水素またはアルカリ金属である、を含むことができるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関する。
【００６２】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、１つまたは２つ以上の式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位：
【化７】
2016520687.tif 000009
式中：各Ａ５、各Ａ６、各Ａ７および各Ａ８は、独立して、Ｏ（酸素）またはＮＨであることができ；各Ｒ５および各Ｒ６は、独立して、水素またはアルカリ金属であることができ；および、各Ｒ７および各Ｒ８は、独立して、水素、アルカリ金属、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であることができ、ただし、Ｒ７およびＲ８のうちの少なくとも１つが、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、ならびに、その外のＲ７およびＲ８が、水素またはアルカリ金属である、を含むことができるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関する。
【００６３】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、１つまたは２つ以上の式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位：
【化８】
2016520687.tif 000010
式中：各Ａ９および各Ａ１０は、独立して、Ｏ（酸素）またはＮＨであることができ；各Ｒ９は、水素またはアルカリ金属であることができ；および、各Ｒ１０は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であることができる、を含むことができるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関する。
【００６４】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、１つまたは２つ以上の式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位：
【化９】
2016520687.tif 000011
式中：各Ａ１１および各Ａ１２は、独立して、Ｏ（酸素）またはＮＨであることができ；各Ｒ１１は、水素またはアルカリ金属であることができ；および、各Ｒ１２は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であることができる、を含むことができるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関する。
【００６５】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、１つまたは２つ以上の式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位：
【化１０】
2016520687.tif 000012
式中：各Ａ１３および各Ａ１４は、独立してＯ（酸素）またはＮＨであることができ；各Ｒ１３は、水素またはアルカリ金属であることができ；および、各Ｒ１４は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であることができる、を含むことができるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関する。
【００６６】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、１つまたは２つ以上の式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位：
【化１１】
2016520687.tif 000013
式中：各Ａ１５および各Ａ１６は、独立してＯ（酸素）またはＮＨであることができ；各Ｒ１５は、水素またはアルカリ金属であることができ；および、各Ｒ１６は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であることができる、を含むことができるポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法に関する。当業者は、アルカリ金属が存在し、かつＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１、Ａ１２、Ａ１３、Ａ１４、Ａ１５またはＡ１６が酸素である場合、該酸素が負電荷を有し、かつ該酸素および該アルカリ金属との間の結合が静電結合であるだろうことを理解する。
【００６７】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、ポリアニオン性ポリマー結合体を精製するための方法であって、ここで該ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体であることができる前記方法に関する。コポリマー結合体は、広範で様々な少なくとも２つの異なる種類の繰返し単位を含むことができる。例えば、コポリマー結合体は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）および（Ｉｆ）から選択される１つまたは２つ以上の繰返し単位；式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）および（ＩＩｆ）から選択される１つまたは２つの繰返し単位を含むことができ、ただし、該ポリマーは、（Ｉａ）および（ＩＩａ）；（Ｉｂ）および（ＩＩｂ）；（Ｉｃ）および（ＩＩｃ）；（Ｉｄ）および（ＩＩｄ）；（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）；（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）；（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）；（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）の繰返し単位のみではない。
【００６８】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩａ）および式（ＩＩｂ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において，ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩａ）および式（ＩＩｃ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。なお他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩａ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。なおさらに他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩａ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩａ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００６９】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において，ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｃ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマーであることができる。なお他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマーであることができる。また他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマーであることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマーであることができる。
【００７０】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において，ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉｆ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉｆ）で表される繰返し単位ならびに式（ＩＩｅ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７１】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｃ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。なお他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。なおさらに他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７２】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。なお他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７３】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７４】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｄ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。なお他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７５】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７６】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｅ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７７】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位、ならびに、式（ＩＩａ）、式（ＩＩｂ）、式（ＩＩｃ）、式（ＩＩｄ）、式（ＩＩｅ）および式（ＩＩｆ）の少なくとも１つで表される繰返し単位を含むことができるコポリマー結合体であることができる。
【００７８】
繰返し単位の総数を基準とするポリアニオン性ポリマー結合体中の繰返し単位の割合は、広範囲にわたって変動し得る。いくつかの態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約５０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なお他の態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なおさらに他の態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９９モル％よりも大きくあることができる。いくつかの態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約２０モル％〜約４０モル％の範囲であることができる。他の態様において、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約３０モル％〜約６０モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体である場合、いくつかの態様において、式（Ｉａ）または（ＩＩａ）でない繰返し単位は、式（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択することができるので、ポリマー結合体が、式（Ｉａ）および（ＩＩａ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。
【００７９】
いくつかの態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約５０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なお他の態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なおさらに他の態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９９モル％よりも大きくあることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約２０モル％〜約４０モル％の範囲であることができる。他の態様において、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約３０モル％〜約６０モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体である場合、いくつかの態様において、式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ）でない繰返し単位は、式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択することができるので、ポリマー結合体が、式（Ｉｂ）および（ＩＩｂ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。
【００８０】
いくつかの態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約５０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なお他の態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なおさらに他の態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９９モル％よりも大きくあることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位からなることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約２０モル％〜約４０モル％の範囲であることができる。他の態様において、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約３０モル％〜約６０モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体である場合、いくつかの態様において、式（Ｉｃ）または（ＩＩｃ）でない繰返し単位は、式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択することができるので、ポリマー結合体が、式（Ｉｃ）および（ＩＩｃ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。
【００８１】
いくつかの態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約５０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なお他の態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なおさらに他の態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９９モル％よりも大きくあることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位からなることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約２０モル％〜約４０モル％の範囲であることができる。他の態様において、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約３０モル％〜約６０モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体である場合、いくつかの態様において、式（Ｉｄ）または（ＩＩｄ）でない繰返し単位は、式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択することができるので、ポリマー結合体が、式（Ｉｄ）および（ＩＩｄ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｅ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。
【００８２】
いくつかの態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約５０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なお他の態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なおさらに他の態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９９モル％よりも大きくあることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位からなることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約２０モル％〜約４０モル％の範囲であることができる。他の態様において、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約３０モル％〜約６０モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体である場合、いくつかの態様において、式（Ｉｅ）または（ＩＩｅ）でない繰返し単位は、式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択することができるので、ポリマー結合体が、式（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）から選択される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。
【００８３】
いくつかの態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約５０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なお他の態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であることができる。なおさらに他の態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約９９モル％よりも大きくあることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位からなることができる。いくつかの態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約２０モル％〜約４０モル％の範囲であることができる。他の態様において、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位の割合は、ポリマー結合体中の繰返し単位の総モルを基準として、約３０モル％〜約６０モル％の範囲であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、式（Ｉｆ）で表される繰返し単位および式（ＩＩｆ）で表される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。ポリアニオン性ポリマー結合体がコポリマー結合体である場合、いくつかの態様において、式（Ｉｆ）または（ＩＩｆ）でない繰返し単位は、式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）から選択することができるので、ポリマー結合体が、式（Ｉｆ）および（ＩＩｆ）で表される繰返し単位ならびに式（Ｉａ）、（ＩＩａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩｄ）、（Ｉｅ）および（ＩＩｅ）から選択される繰返し単位からなるか、または本質的にからなることができる。
【００８４】
いくつかの態様において、本明細書に記載のポリマー結合体は、アルカリ金属を含むことができる。アルカリ金属の例には、リチウム（Ｌｉ）、ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、ルビジウム（Ｒｂ）およびセシウム（Ｃｓ）が含まれる。いくつかの態様において、アルカリ金属はナトリウムである。
【００８５】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体（例えば、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位を含むポリマー結合体）は、その酸性型またはそのアルカリ金属塩の形態にあることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は酸性型であることができる。他の態様において、ポリマー結合体は、アルカリ金属塩の形態にあることができる。例として、式（Ｉａ）で表される繰返し単位および式（ＩＩａ）で表される繰返し単位を含むポリマーの酸性型およびアルカリ金属塩の形態を以下に示す。
【化１２】
2016520687.tif 000014
【００８６】
いくつかの態様において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも９０％は水素であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ３およびＲ４の少なくとも９０％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも９５％は水素であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ３およびＲ４の少なくとも９５％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１およびＲ２の９８％より多くは水素であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ３およびＲ４の９８％より多くは水素であることができる。他の態様において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ３およびＲ４の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができる。他の態様において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ３およびＲ４の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができる。他の態様において、Ｒ１およびＲ２の９８％より多くはアルカリ金属であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ３およびＲ４の９８％より多くはアルカリ金属であることができる。
【００８７】
いくつかの態様において、Ｒ５およびＲ６の少なくとも９０％は水素であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ７およびＲ８の少なくとも９０％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ５およびＲ６の少なくとも９５％は水素であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ７およびＲ８の少なくとも９５％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ５およびＲ６の９８％より多くは水素であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ７およびＲ８の９８％より多くは水素であることができる。他の態様において、Ｒ５およびＲ６の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ７およびＲ８の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができる。他の態様において、Ｒ５およびＲ６の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ７およびＲ８の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができる。他の態様において、Ｒ５およびＲ６の９８％より多くはアルカリ金属であることができ、かつ抗がん剤ではないＲ７およびＲ８の９８％より多くはアルカリ金属であることができる。
【００８８】
いくつかの態様において、Ｒ９の少なくとも９０％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ９の少なくとも９５％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ９の９８％より多くは水素であることができる。他の態様において、Ｒ９の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ９の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ９の９８％より多くはアルカリ金属であることができる。
【００８９】
いくつかの態様において、Ｒ１１の少なくとも９０％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１１の少なくとも９５％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１１の９８％より多くは水素であることができる。他の態様において、Ｒ１１の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１１の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１１の９８％より多くはアルカリ金属であることができる。
【００９０】
いくつかの態様において、Ｒ１３の少なくとも９０％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１３の少なくとも９５％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１３の９８％より多くは水素であることができる。他の態様において、Ｒ１３の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１３の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１３の９８％より多くはアルカリ金属であることができる。
【００９１】
いくつかの態様において、Ｒ１５の少なくとも９０％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１５の少なくとも９５％は水素であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１５の９８％より多くは水素であることができる。他の態様において、Ｒ１５の少なくとも９０％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１５の少なくとも９５％はアルカリ金属であることができる。いくつかの態様において、Ｒ１５の９８％より多くはアルカリ金属であることができる。
【００９２】
様々な抗がん剤は、ポリアニオン性抗がん剤結合体を形成するためにポリマーへ付着することができる。いくつかの態様において、抗がん剤をタキサン、カンプトテカおよびアントラサイクリンから選択することができる。いくつかの態様において、カンプトテカはカンプトテシンであることができる。いくつかの態様において、アントラサイクリンはドキソルビシンであることができる。タキサンの例には、これらに限定されるものではないが、パクリタキセルおよびドセタキセルが含まれる。いくつかの態様において、タキサンはパクリタキセルであることができる。抗がん剤がパクリタキセルである場合、パクリタキセルは、繰返し単位のＣ２’−炭素に付着する酸素原子またはＣ７−炭素に付着する酸素原子へ付着することができる。
【００９３】
ポリアニオン性ポリマー結合体（ＰＧＧＡポリマー結合体またはＰＧＡポリマー結合体など）中に存在する標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤の量は、広範囲にわたって変動することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤のポリマー結合体に対する質量比を基準として、約５％〜約５０％（重量／重量）の範囲の総量の標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤を含むことができる。他の態様において、ポリマー結合体は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤のポリマー結合体に対する質量比を基準として、約１０％〜約４０％（重量／重量）の範囲の総量の標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤を含むことができる。なお他の態様において、ポリマー結合体は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤のポリマー結合体に対する質量比を基準として、約２０％〜約４０％（重量／重量）の範囲の総量の標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤を含むことができる。なおさらに他の態様において、ポリマー結合体は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤のポリマー結合体に対する質量比を基準として、約３０％〜約４０％（重量／重量）の範囲の総量の標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤を含むことができる。いくつかの態様において、本段落のものを含め、出発ポリマー結合体中に存在する標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤の総量および精製ポリマー結合体中に存在する標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤の総量は、およそ同じであることができる（約２０％〜約４０％の範囲の総量の標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤など）。
【００９４】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体中に存在する繰返し単位の総数は、変動することができる。例えば、本明細書に記載のポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体中に存在する式（Ｉａ）および（ＩＩａ）で表される繰返し単位の総数は広い範囲にわたって変動することができる。いくつかの態様において、繰返し単位の総数は、約４０から約１，０００までの範囲にあることができる。いくつかの態様において、繰返し単位の総数は、約５０から約５００までの範囲にあることができる。いくつかの態様において、本段落のものも含め、出発ポリマー結合体中に存在する繰返し単位の総数および精製ポリマー結合体中に存在する繰返し単位の総数は、およそ同じであることができる（例えば、約４０から約１，０００までの範囲の総数の繰返し単位）。
【００９５】
標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤は、多数の異なる方法でポリマーへ結合してもよい。いくつかの態様において、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤の酸素、硫黄、窒素および／または炭素原子を通してポリマーへ直接付着することができる。他の態様において、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤はリンカー基をさらに含むことができる。リンカー基は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤をポリマーへ付着させる基である。例えば、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤は、式（Ｉａ）で表される繰返し単位へリンカー基を介して付着し、式（ＩＩａ）で表される繰返し単位を形成することができる。リンカー基は比較的に小さくあってもよい。例えば、リンカー基は、アミン、アミド、エーテル、エステル、ヒドロキシル基、カルボニル基またはチオール基を含んでもよい。代替的に、リンカー基は比較的大きくあってもよい。例えば、リンカー基は、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリール（Ｃ１〜６アルキル）基、ヘテロアリール基またはヘテロアリール（Ｃ１〜６アルキル）基を含んでよい。一態様において、リンカーは−ＮＨ（ＣＨ２）１〜４−ＮＨ−であることができる。いくつかの態様において、リンカーは−（ＣＨ２）１〜４−アリール−ＮＨ−であることができる。リンカー基、抗がん剤に好適な位置で付着することができる。例えば、リンカー基は、水素の代わりに、抗がん剤の炭素において付着することができる。リンカー基を、当業者に知られる方法を用いて抗がん剤に添加することができる。いくつかの態様において、抗がん剤がパクリタキセルである場合、パクリタキセルを、Ｃ２’−炭素に付着した酸素原子を介して結合させることができる。いくつかの態様において、抗がん剤がパクリタキセルである場合、パクリタキセルを、Ｃ７−炭素に付着した酸素原子を介して結合させることができる。
【００９６】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）結合体）は、種々の分子量を有することができる。いくつかの態様において、ポリアニオン性ポリマー結合体は、約１０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有することができる。他の態様において、ポリアニオン性ポリマー結合体は、約３０ｋＤａ〜約１２０ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有することができる。なお他の態様において、ポリアニオン性ポリマー結合体は、約６０ｋＤａ〜約１００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有することができる。なおさらに他の態様において、ポリアニオン性ポリマー結合体は、約１００ｋＤａ以下の重量平均分子量を有することができる。いくつかの態様において、ポリアニオン性ポリマー結合体は、約６０ｋＤａ以上の重量平均分子量を有することができる。いくつかの態様において、本段落のものを含め、出発ポリアニオン性ポリマー結合体の重量平均分子量および精製ポリアニオン性ポリマー結合体の重量平均分子量はおよそ同じであることができる（例えば、約７０ｋＤａ〜約８５ｋＤａの範囲の重量平均分子量）。
【００９７】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマー結合体は、狭い多分散指数を有することができる。例えば、いくつかの態様において、ポリマー結合体（例えば，ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）の多分散指数は２．０未満であることができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体の多分散指数は１．７未満であることができる。他の態様において、ポリマー結合体の多分散指数は約１．２〜約２．０の範囲にあることができる。いくつかの態様において、本段落のものを含め、出発ポリマー結合体の多分散指数および精製ポリマー結合体の多分散指数はおよそ同じであることができる（約１．２〜約２．０の範囲の多分散指数など）。
【００９８】
本明細書に記載のポリアニオン性ポリマーは、商業的に入手することまたは当業者に知られた方法を用いて調製することができる。例えば、ポリ（アスパルタート）およびポリ（グルタマート）は商業的に入手することができる。ＰＧＧＡおよびＰＧＡＡは、米国公開第2007/0128118号に記載される方法を用いて調製することができ、これは、ＰＧＧＡ、ＰＧＡＡ、ならびに、式（Ａ）で表される繰返し単位および式（Ｂ）で表される繰返し単位を含むコポリマーを調製する目的に限定して参照により本明細書に組み込まれる。
【００９９】
例
例１
第Ｉ相臨床試験によると、エンドトキシン含有量は、最大用量投与計算値（用量あたり１５００ｍｇ）に到達するためには、０．２３ＥＵ／ｍｇ未満の値に調整すべきである。ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体を活性炭で処置するという従来の手法は、エンドトキシンの量を減少させるのに有効ではなかった。酸沈殿に続いて追加的なエタノール／水での洗浄を通じた、水溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態（０．５ｇ）の、水不溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型への変換は、エンドトキシン値がこのプロセスを通じて有意に減少した（〜８３％）ことを実証した。
【０１００】
水溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態（３０ｇ）を、エタノール／ＨＣｌ培地でＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型へ変換した。ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型の沈殿を、エタノール／水によって２回洗浄した。乾燥後、単離ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型のエンドトキシン値を分析して、完全な品質管理（ＱＣ）の対象とした。結果は、単離材料の生化学的物性へ何らの重大な影響も与えることなく、エンドトキシンの約９５％が除去されたことを示した。
【０１０１】
ＮａＨＣＯ３による塩基性化およびＴＦＦでの精製を通じて、精製ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型を、水溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態へ戻した。プロセスの間中ずっと、高品質水（ＭｉｌｌｉＱ水）を用いた。プロセス済みの水溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態におけるエンドトキシン含有量は０．１２ＥＵ／ｍｇであり、これは判断基準（０．２３ＥＵ／ｍｇ）を遥かに下回った。プロセス済みの水溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態における全生化学的物性は原材料のものと比較可能だった。よって、水溶性ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態におけるエンドトキシン値を、このプロセスを用いて効果的に減少させることができる。
【０１０２】
例２
ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態の、酸性型への交換
【化１３】
2016520687.tif 000015
ＰＧＧＡ−ＰＴＸ塩の形態（３０ｇ）を、ＭｉｌｌｉＱ水（７５０ｍＬ）中に溶解させ、室温で４０ｍｇ／ｍＬの溶液を形成した。すべての固体が溶解するまで、混合物を約１時間攪拌した。溶液のｐＨは７．４１として計測された。溶液を、０．２μｍ膜を用いて濾過し、次いで氷浴を用いて０〜５℃まで冷却した。エタノール（３７５ｍＬ）をＰＧＧＡ−ＰＴＸ溶液へ添加し、生じた溶液を混ぜた。１ＮＨＣｌ（７８ｍＬ）（ＭｉｌｌｉＱ水を用いて調製された）と共に溶液を、溶液のｐＨがおよそ２．５になるまで０〜５℃で勢いよく攪拌することによって、酸性化した。溶液を３０分間攪拌し、４℃で１０分間６０００ｒｐｍでの遠心分離により沈殿を単離した。沈降物を１Ｍ  ＨＣｌ／エタノール（２：１）（１２００ｍＬ）において再懸濁して、次いで１０分間振盪機上で扇動した。４℃で１０分間６０００ｒｐｍでの遠心分離により、固体を単離した。単離固体を１Ｍ  ＨＣｌ／エタノール（２：１）（１２００ｍＬ）において２度目に再懸濁して、次いで１０分間振盪機上で扇動した。４℃で１０分間６０００ｒｐｍでの遠心分離により、固体を単離した。単離固体をＭｉｌｌｉＱ水において再懸濁して、次いで１０分間振盪機上で扇動した。４℃で１０分間６０００ｒｐｍでの遠心分離により、固体を単離した。単離固体を一定の重量まで凍結乾燥させた。ＰＧＧＡ−ＰＴＸ酸性型（２６．７ｇ、９８．２％）を得た。乾燥ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型を完全な品質管理テストに付し、エンドトキシン含有量をEndosafe（登録商標）キットを用いて分析した。
【０１０３】
例３
ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型の、塩形態への変換
方法Ａ
６Ｌのエルレンマイヤーフラスコにおいて２２℃で、ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型（１０ｇ）を０．３Ｎ  ＮａＨＣＯ３溶液（１０００ｍＬ）中に溶解させた。固体が溶解した後、生じた溶液を１時間勢いよく攪拌し、ｐＨを記録した。ＭｉｌｌｉＱ水を用いて溶液を４Ｌに希釈した。MicroKros  ＴＦＦ系において１０ｋＤａ  ｍＰＥＳ中空ファイバカラムを用いて、浸透伝導率が０．０５ｍＳ／ｃｍ未満になるまで溶液を精製した。次いで溶液を、０．２μＭの濾過膜で濾過した。エンドトキシン含有量を、ＧＰＣ分析を用いて定量した。次いで溶液を凍結させ、一定の重量まで凍結乾燥させた。乾燥塩形態を完全な品質管理テストおよびエンドトキシン含有量分析に付した。
【０１０４】
方法Ｂ
６Ｌのエルレンマイヤーフラスコにおいて２２℃で、ＰＧＧＡ−ＰＴＸの酸性型（１０ｇ）を０．３ＮＮａＨＣＯ３溶液（１０００ｍＬ）中に溶解させた。溶液の一部を抽出し（５０ｍＬ）、室温で６時間攪拌させた。溶液を、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯを伴う透析管へ移動させた。次いで、ＭｉｌｌｉＱ水を用いて透析を２４時間実施した（透析の最初の４時間は、ＭｉｌｌｉＱ水を１時間毎に取り替えた）。次いで、透析溶液を０．２μＭの濾過膜で濾過した。ＧＰＣ分析を用いてエンドトキシン含有量を定量した。次いで溶液を凍結させ、一定の重量まで凍結乾燥させた。乾燥塩形態を完全な品質管理およびエンドトキシン含有量分析に付した。
【０１０５】
表１は、出発および精製ＰＧＧＡ−ＰＴＸポリマー結合体に関するデータを提供する。表１に示されるとおり、その塩形態における出発ＰＧＧＡ−抗がん剤結合体のエンドトキシン値は１．８ＥＵ／ｍｇであった。その酸性型への交換後、エンドトキシン値は０．１１ＥＵ／ｍｇまで減少した。酸性型が塩形態へ戻った後、エンドトキシン量は、０．１２ＥＵ／ｍｇであると定量された。このデータは、エンドトキシン量が１６倍より多く減少したことを示す。表１はまた、ＰＧＧＡ−ＰＴＸの物理化学的物性が、分子量、多分散指数および薬物負荷などの何らのネガティブな影響も受けなかったことも示す。
【表１】
2016520687.tif 000016
【０１０６】
明瞭さと理解を目的として、前述は例示および例によってある程度詳細に説明しているが、当業者には、多くの種々の修正が、本開示の精神から逸脱することなくなされ得ることが理解される。したがって、本明細書に開示された形態は単なる例示であり、本開示の範囲を限定することを意図せず、本発明の真の範囲および精神からの全ての修正および代替形態を包含することが明らかに理解される。
【図１】
2016520687.tif 000023
【図２】
2016520687.tif 000024
【図３】
2016520687.tif 000025
【図４】
2016520687.tif 000026
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月20日(2016.4.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５１】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉａ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩａ）で表される繰返し単位：
【化１】
2016520687.tif 000027
を含み、式中：
各Ａ１、各Ａ２、各Ａ３および各Ａ４は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１および各Ｒ２は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ３および各Ｒ４は、独立して、水素、アルカリ金属、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、
ただし、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１つが、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、ならびに、その外のＲ３およびＲ４が、水素またはアルカリ金属である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５２】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｂ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｂ）で表される繰返し単位：
【化２】
2016520687.tif 000028
を含み、式中：
各Ａ５、各Ａ６、各Ａ７および各Ａ８は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ５および各Ｒ６は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ７および各Ｒ８は、独立して、水素、アルカリ金属、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、
ただし、Ｒ７およびＲ８のうちの少なくとも１つが、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤であり、ならびに、その外のＲ７およびＲ８が、水素またはアルカリ金属である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５３】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｃ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｃ）で表される繰返し単位：
【化３】
2016520687.tif 000029
を含み、式中：
各Ｒ９および各Ｒ１０は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ９は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１０は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５４】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｄ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｄ）で表される繰返し単位：
【化４】
2016520687.tif 000030
を含み、式中：
各Ａ１１および各Ａ１２は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１１は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１２は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５５】
出発ポリアニオン性ポリマー結合体および精製ポリアニオン性ポリマー結合体が、１つまたは２つ以上の式（Ｉｅ）で表される繰返し単位および１つまたは２つ以上の式（ＩＩｅ）で表される繰返し単位：
【化５】
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を含み、式中：
各Ａ１３および各Ａ１４は、独立して、ＯまたはＮＨであり；
各Ｒ１３は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ１４は、標的化剤、造影剤、安定剤または抗がん剤である、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】
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