(57)【要約】  本開示は、[8-(4-メタンスルホニル-フェニル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イル]-[3-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン又は医薬的に許容されるその塩を用いた、多発性硬化症等の慢性自己免疫疾患を処置するための方法及び組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
多発性硬化症を有する個体又は多発性硬化症を発症しやすい個体を同定する工程、及び化合物A：
【化１】
2016540009.tif 000008
又は医薬的に許容されるその塩を前記個体に投与する工程を含む、多発性硬化症を処置するための方法。
【請求項２】
化合物Aが最大で1日4回まで投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
化合物Aが1日2回投与される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
化合物Aが1日1回投与される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
化合物Aが1日当たり約0.01 mg/kg〜1日当たり約1500 mg/kgの量で投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
化合物Aが1日当たり約3 mg/kg〜1日当たり約300 mg/kgの量で投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
化合物Aが1日当たり約10 mg/kg〜1日当たり約220 mg/kgの量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
化合物Aが1日当たり約60 mg/kg〜1日当たり約220 mg/kgの量で投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
化合物Aが1日当たり約60 mg/kg〜1日当たり約120 mg/kgの量で投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
化合物Aが1日当たり約115 mg/kgの量で投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
化合物Aが経口投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
第二の治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
化合物A及び前記第二の治療剤が別個に投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
化合物A及び前記第二の治療剤が単回投与として投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
化合物A：
【化２】
2016540009.tif 000009
又は医薬的に許容されるその塩、及び
少なくとも1種の医薬的に許容される賦形剤
を含む、多発性硬化症を有する個体又は多発性硬化症を発症しやすい個体の処置に使用するための組成物。
【請求項１６】
単位剤形である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
錠剤又はカプセルの形態である、請求項１５又は１６に記載の組成物。
【請求項１８】
化合物Aが約0.01 mg/kg〜約1500 mg/kgの量で存在する、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
化合物Aが約30 mg/kg〜約110 mg/kgの量で存在する、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、2013年12月11日に出願された、米国特許出願第61/914,634号の利益及び優先権を主張し、その内容は、本願明細書に完全に説明されているも同然に、参照により組み込まれる。
【０００２】
本開示は、化合物及びその医薬組成物の投与を介した疾患の治療的処置を対象とする。
【背景技術】
【０００３】
多発性硬化症(MS)は、脱髄及び神経変性につながる、中枢神経系におけるミエリン抗原に対する炎症反応によって引き起こされる、慢性的なヒトの自己免疫疾患である。相当な割合のMS患者が臨床的麻痺を発症し、利用可能な根治的治療法は無い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際出願第PCT/US10/37363号、
【特許文献２】米国特許第8,501,936号
【特許文献３】米国特許第8,633,173号
【特許文献４】米国公開特許出願第2013/0267535号
【特許文献５】米国公開特許出願第2014/0024655号
【特許文献６】国際出願第PCT/US10/37363号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, Pa., 1980)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、消耗性の疾患である多発性硬化症の安全かつ効果的な処置を開発するニーズがある。本開示は、これらのニーズ及び他の重要なニーズに向けたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、MSを有する個体又はMSを発症しやすい個体を同定する工程、及び前記個体に化合物A
【０００８】
【化１】
2016540009.tif 000002
【０００９】
又は医薬的に許容されるその塩を投与する工程を含む、多発性硬化症(MS)を処置するための方法を提供する。
【００１０】
また、本開示は、化合物A、又は医薬的に許容されるその塩、及び少なくとも一種の医薬的に許容される賦形剤を含む、多発性硬化症(MS)を処置するための組成物を提供する。
【００１１】
概要及びそれに続く詳細な説明は、例示的かつ説明的なものにすぎず、開示の制限的なものではなく、開示は添付の特許請求の範囲において規定する。本開示の他の態様は、本願明細書に提示される本開示の詳細な説明を考慮すれば、当業者には明らかである。
【００１２】
要旨及び以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読めばさらに理解される。開示を図解する目的のために、図面には開示の例示的実施態様が示される。しかし、本開示は、開示される特定の方法、組成物、及び装置に限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図1は、ラットミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質Novatideのアミノ酸35-55 (MOG35-55)によって誘導された、実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)のMSのマウスモデルにおける、インビボでの化合物Aの投与の効果を図示する。
【図２】図2は、化合物Aの投与により処置されたマウスにおけるMOG誘導EAEのインビボ試験由来の脊髄の腰仙部切片の炎症、脱髄、及び軸索損傷についての代表的な画像及び組織学的スコアリングを図示する。
【図３】図3は、マウス脊髄ホモジネート(MSCH)によって誘導された、実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)のMSのマウスモデルにおける、インビボでの化合物Aの投与の効果を図示する。
【図４】図4は、結核菌H37RAを補ったフロイントの完全アジュバント(CFA)中のラットプロテオリピドタンパク質のアミノ酸139-151 (PLP139-151)によって誘導された、実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)のMSのマウスモデルにおける、インビボでの化合物Aの投与の効果を図示する。
【図５】図5は、化合物Aのイヌへの投与についての薬物動態データを図示する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本開示は、本開示の一部を形成する、付随する図面及び実施例と関連して解釈される、以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解することができる。本開示は、本願明細書に記述される及び/又は示される特定の装置、方法、適用、条件、又はパラメーターに限定されないことが理解されるべきであり、本願明細書で用いられる専門用語は、特定の実施態様を例示の目的としてのみ記述することを目的とするものであり、特許請求の範囲の開示を限定することを意図しないことが理解されるべきである。
【００１５】
添付の特許請求の範囲を含む本願明細書で用いられる、単数形（「ある、一つの(a、an)」及び「その」には、複数形が含まれ、特定の数値への言及には、文脈に明確な別段の指示が無い限り、少なくともその特定の値が含まれる。
【００１６】
値の範囲が表現される場合は、別の実施態様には、一つの特定の値から、及び/又は別の特定の値までが含まれる。全ての範囲は包括的かつ結合可能である。さらに、範囲で述べた値への言及には、その範囲内のありとあらゆる値が含まれる。値が、先行詞「約」を用いて、近似値として表現される場合には、特定の値が別の実施態様を形成することが理解される。量、時間の持続等、測定可能な値に言及する場合に本願明細書で用いられる用語「約」は、例えば、特定した値の±10%等の、値の妥当な変動量を包含することを意味する。例えば、「約50%」という語句には、50の±10%、すなわち45%〜55%が含まれ得る。
【００１７】
本開示の特定の特性は、明確にするために別個の実施態様の文脈において記述されるが、単一の実施態様中で組み合わせで提示されてもよいことが認識されるべきである。反対に、簡潔にするために単一の実施態様の文脈において記述される開示の様々な特性は、別個に提示されてもよいし、あらゆるサブコンビネーションで提示されてもよい。
【００１８】
<用語>
本開示は、1,2,4-トリアゾロ[1,5a]ピリジン誘導体であり、本願明細書において「化合物A」と称され、以下の構造：
【００１９】
【化２】
2016540009.tif 000003
【００２０】
を有する、[8-(4-メタンスルホニル-フェニル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イル]-[3-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン、又はその医薬的塩、及び多発性硬化症の処置におけるその使用に関する。化合物Aは、強力で、経口で有効な、低分子のJAK2阻害剤である。例えば、国際出願第PCT/US10/37363号、米国特許第8,501,936号及び第8,633,173号、並びに米国公開特許出願第2013/0267535号及び第2014/0024655号を参照されたく、その各々は参照により本願明細書に組み込まれる。化合物Aは、例えば国際出願第PCT/US10/37363号の実施例35と類似の方法を用いて調製することができる。
【００２１】
本願明細書において用いられる場合、単独で用いられるか他の用語と共に用いられるかに関わらず、語句「を処置する方法」及び「処置方法」は、特定の疾患「の処置において用いるための」という語句と区別しないで用いることができることが理解されるべきである。
【００２２】
単独で用いられるか他の用語と共に用いられるかに関わらず、本願明細書において用いられる語句「医薬的に許容される」は、例えば、例として、医薬的に許容される賦形剤等の指定した実体等が、一般的に製剤又は組成物中の他の成分と化学的及び/又は物理的に適合すること、及び/又は一般的にその受容者と生理学的に適合することを示す。
【００２３】
単独で用いられるか他の用語と共に用いられるかに関わらず、本願明細書で用いられる「対象」、「個体」、及び「患者」は、ヒトを含む哺乳類を指す。ヒトという用語はヒトの小児、青年、又は成人を指し、また含む。
【００２４】
単独で用いられるか他の用語と共に用いられるかに関わらず、本願明細書において用いられる用語「処置する(treats、treating)」、「処置される」、及び「処置」は、改善的、緩和的、及び/若しくは治癒的な使用及び結果、又はこれらの任意の組み合わせを指し、また含む。他の実施態様において、本願明細書に記述される方法は、予防的に用いることができる。「予防」又は予防的使用若しくは結果は、絶対的な又は完全な予防(すなわち、100%の予防的若しくは保護的な使用又は結果)を示さず、また必要としないことが理解されるべきである。本願明細書で用いられる、予防又は予防的使用若しくは結果は、化合物又は組成物の投与により、本願明細書に記述する特定の状態、症状、障害、若しくは疾患の重症度が減少若しくは低減される；本願明細書に記述する特定の状態、症状、障害、若しくは疾患を経験する可能性が減少若しくは低減される；若しくは本願明細書に記述する特定の状態、症状、障害、若しくは疾患の発症若しくは再燃(再発)を遅らせるような使用及び結果、又は前述の使用及び結果の任意の組み合わせを指す。
【００２５】
単独で用いられるか他の用語と共に用いられるかに関わらず、本願明細書において用いられる用語「治療の」及び「治療的有効量」は、(a)本願明細書に記述する特定の状態、症状、障害、又は疾患を処置する；(b)本願明細書に記述する特定の状態、障害、又は疾患の1以上の症状を軽減する、改善する、又は取り除く；(c)本願明細書に記述する特定の状態、症状、障害、又は疾患の発症又は再燃(再発)を遅らせる、化合物又は組成物の量を指す。用語「治療の」及び「治療的に有効な」は、前述の効果(a)〜(c)の任意のものを、単独でも他の(a)〜(c)の任意のものとの組み合わせでもどちらでも、包含することが理解されるべきである。
【００２６】
単独で用いられるか他の用語と共に用いられるかに関わらず、本願明細書において用いられる用語「治療剤」は、疾患、状態、若しくは障害、又は併存疾患(すなわち、MSと同時に存在する疾患、状態、又は障害)の処置に有用であり、かつ化合物Aでない、組成物中に含まれる任意の物質を指す。
【００２７】
化合物A及び医薬的に許容されるその塩は、単独で投与してもよいし、医薬組成物中で、本願明細書に規定する1種以上の追加の治療剤と組み合わせて投与してもよい。追加の治療剤は、1つ以上の中核症状及び/又は自己免疫疾患一般と関連する若しくは特にMSと関連する併存疾患を治療するために用いてもよい。一態様において、化合物Aは固定用量として少なくとも1つの治療剤と共に製剤化(及び投与)される。別の態様において、化合物Aは、治療剤と別個に製剤化(及び投与)される。
【００２８】
化合物Aと組み合わせて用いてもよい治療剤のいくつかの例には、例えば、アレムツズマブ(レムトラダ(Lemtrada)(登録商標))、アルプロスタジル(ミューズ(MUSE)(登録商標)、プロスチン(Prostin) VR(登録商標))、アマンタジン(Lysovir(登録商標)、シンメトレル(Symmetrel)(登録商標))、アミトリプチリン(エラビル(Elavil)(登録商標)、トリプタフェン(Triptafen)(登録商標))、アザチオプリン(イムラン(Imuran)(登録商標))、バクロフェン(リオレサール(Lioresal)(登録商標)、ガブロフェン(Gablofen)(登録商標))、ベータインターフェロン1a(アボネックス(Avonex)(登録商標)、レビフ(Rebif)(登録商標))、ベータインターフェロン1b(ベタフェロン(Betaferon)(登録商標)、Extavia(登録商標)、ベタセロン(Betaseron)(登録商標))、ベタメタゾン、ビサコジル(bisacodyl)(ダルコラックス(Dulcolax)(登録商標))、ボツリヌストキシン(ボトックス(Botox)(登録商標))、ブプロピオン(ウェルブトリン(Wellbutrin)(登録商標))、カルバマゼピン(テグレトール(Tegretol)(登録商標))、シプロフロキサシン(シプロ(Cipro)(登録商標))、クロナゼパム(クロノピン(Klonopin)(登録商標)、リボトリール(Rivotril)(登録商標)、Syn-Clonazepam(登録商標))、クロナゼパム(リボトリール(登録商標))、シクロホスファミド(エンドキサナ(Endoxana)(登録商標))、ダルファムプリジン(アムピラ(Ampyra)(登録商標))、ダントロレン(ダントリウム(Dantrium)(登録商標))、ダリフェナシン(エナブレックス(Enablex)(登録商標))、デスモプレッシン(デスモスプレー(Desmospray)(登録商標)、Desmotabs(登録商標)、DDAVP鼻腔用スプレー)、デキサメタゾン、デキストロメトルファン＋キニジン(ニューデクスタ(Nuedexta)(登録商標))、ジアゼパム(バリウム(Valium)(登録商標))、フマル酸ジメチル(テクフィデラ(Tecfidera)(登録商標))、ドキュセート、デュロキセチン塩酸塩(サインバルタ(Cymbalta)(登録商標))、ファムプリジン(Fampyra(登録商標))、フィンゴリモド(ジレニア(Gilenya)(登録商標))、フルオキセチン(プロザック(Prozac)(登録商標))、ガバペンチン(ニューロンチン(Neurontin)(登録商標))、グラチラマー酢酸塩(コパキソン(Copaxone)(登録商標))、グリセリン、ヒドロキシジン(アタラックス(Atarax)(登録商標))、イブプロフェン、イミプラミン(トフラニール(Tofranil)(登録商標))、免疫グロブリン静注(IVIg)、イソニアジド(ラニアジド(Laniazid)(登録商標)、ニドラジド(Nydrazid)(登録商標))、ラモトリギン(ラミクタール(Lamictal)(登録商標))、水酸化マグネシウム(フィリップスミルクマグネジア(Phillips Milk of Magnesia)(登録商標))、メクリジン(Antivert(登録商標))、メテナミン(ハイプレックス(Hiprex)(登録商標))、メトトレキサート(Maxtrex(登録商標))、メチルプレドニゾロン(ソル・メドロール(Solu-Medrol)(登録商標))、ミネラルオイル、ミトキサントロン(ノバントロン(Novantrone)(登録商標))、モダフィニル(プロビジル(Provigil)(登録商標))、ナタリズマブ(タイサブリ(Tysabri)(登録商標))、ニトロフラントイン(マクロダンチン(Macrodantim)(登録商標))、ノルトリプチリン(パメロール(Pamelor)(登録商標)、アベンチル(Aventyl)(登録商標))、オクスカルバゼピン(oxcarbazepine)(トリレプタル(Trileptal)(登録商標))、オキシブチニン(ジトロパン(Ditropan)(登録商標)、ジトロパンXL(登録商標)、ライリネル(Lyrinel)(登録商標)、オキシトロール(Oxytrol)(登録商標))、パパベリン、パロキセチン(パキシル(Paxil)(登録商標))、ペグインターフェロンベータ-1a (プレグリディ(Plegridy)(登録商標))、フェナゾピリジン(ピリジウム(Pyridium)(登録商標))、フェニトイン(ディランティン(Dilantin)(登録商標)、エパヌチン(Epanutim)(登録商標))、プラゾシン(ミニプレス(Minipress)(登録商標))、プレドニゾロン、プレドニゾン(デルタゾン(Deltasone)(登録商標))、プレガバリン(リリカ(Lyrica)(登録商標))、プロパンテリン(プロ・バンサイン(Pro-Banthine)(登録商標))、オオバコ(サイリウム)親水性粘漿薬(musilloid)(メタムシル(Metamucil)(登録商標))、セルトラリン(ゾロフト(Zoloft)(登録商標))、シルデナフィル(バイアグラ(Viagra)(登録商標))、リン酸ナトリウム、重リン酸ナトリウム(sodium biphosphate)、ソリフェナシンコハク酸塩(ベシケア(Vesicare)(登録商標))、スルファメトキサゾール(バクトリム(Bactrim)(登録商標)、セプトラ(Septra)(登録商標))、タダラフィル(シアリス(Cialis)(登録商標))、タムスロシン(フロマックス(Flomax)(登録商標))、テラゾシン(ハイトリン(Hytrin)(登録商標))、テリフルノミド(オーバジオ(Aubagio)(登録商標))、チザニジン(ザナフレックス(Zanaflex)(登録商標))、トルテロジン(デトロール(Detrol)(登録商標)、デトルシトール(Detrusitol)(登録商標))、塩化トロスピウム(サンクチュラ(Sanctura)(登録商標))、バルデナフィル(レビトラ(Levitra)(登録商標))、及びベンラファキシン(エフェクサー(Effexor)(登録商標))が含まれるが、これに限定されない。
【００２９】
本願明細書に記述される化合物の医薬的に許容される塩には、医薬的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、及びアミノ酸付加塩が含まれる。酸付加塩の例には、例えば、塩化物(HCl)、硫酸塩、及びリン酸塩等の無機酸付加塩、並びに酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、及び乳酸塩等の有機酸付加塩が含まれる。金属塩の例には、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、及びカリウム塩等のアルカリ金属塩、並びにマグネシウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩、及び亜鉛塩等のアルカリ土類金属塩が含まれる。アンモニウム塩の例には、例えば、アンモニウム塩及びテトラメチルアンモニウム塩等が含まれる。有機アミン付加塩の例には、例えば、モルホリン塩及びピペリジン塩等の塩が含まれる。アミノ酸付加塩の例には、例えば、グリシン塩、フェニルアラニン塩、グルタミン酸塩、及びリジン塩等の塩が含まれる。
【００３０】
化合物Aは、1種以上の医薬的に許容される賦形剤との混合により製剤化して医薬組成物(又は単に「組成物」若しくは「製剤」)にすることができる。本願明細書で用いられる用語「賦形剤」及び「賦形剤類」は、化合物A及び組成物中に存在していてもよい本願明細書に規定する任意の他の治療剤以外の任意の成分を指し、また含む。したがって、医薬的に許容される賦形剤は、例えば、界面活性剤、湿潤剤、香味剤/味マスキング剤、ビヒクル、担体、希釈剤、保存剤、増量剤、可溶化剤等の成分を指し、また含む。賦形剤の選択は、主として、例えば特定の投与方法、並びに所望の溶解性及び安定性プロファイル、並びに剤形の性質等の要因に依存するものである。
【００３１】
化合物Aを含む組成物は、例えば、非経口で、特に液体の溶液又は懸濁液の形態で；経口的、特に錠剤、カプセル、又はシロップ剤/液剤の形態で；鼻腔内に、特に散剤、点鼻薬、又はエアロゾルの形態で；又は皮膚から、特にゲル、クリーム、ローション、又は経皮パッチ等、任意の数の種々の投与方法用に調製することができる。化合物Aを含む組成物は、単位剤形で好都合に投与することができ、また、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, Pa., 1980)に記述されるような、医薬の分野で周知の任意の方法により調製してもよい。
【００３２】
錠剤は、ラクトース、グルコース、スクロース、マンニトール、及びメチルセルロース等の賦形剤、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、及び結晶セルロース等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム及びタルク等の潤滑剤、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、及びメチルセルロース等の結合剤、ショ糖脂肪酸エステル及びソルビトール脂肪酸エステル等の界面活性剤等を用いて、従来の方法で調製することができる。各錠剤が約0.01 mg〜約1500 mgの化合物Aを含有することが好ましい。
【００３３】
顆粒剤は、ラクトース及びスクロース等の賦形剤、デンプン等の崩壊剤、ゼラチンなどの結合剤等を用いて、従来の方法で調製することができる。散剤は、ラクトース及びマンニトール等の賦形剤等を用いて、従来の方法で調製することができる。カプセルは、ゼラチン、水、スクロース、アラビアゴム、ソルビトール、グリセリン、結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク等を用いて、従来の方法で調製することができる。カプセルは、ビーズ等の固形の粒子、又は、その代わりに、充填された液体又はゲルを含有してもよい。各カプセルが約0.01 mg〜約1500 mgの化合物Aを含有することが好ましい。
【００３４】
化合物Aを含むシロップ製剤は、スクロース等の糖類、水、エタノール等を用いて、従来の方法で調製することができる。
【００３５】
化合物Aを含む軟膏は、ワセリン、流動パラフィン、ラノリン、及びマクロゴール等の軟膏ベース、ラウリル乳酸ナトリウム(sodium lauryl lactate)、塩化ベンザルコニウム、ソルビタンモノ脂肪酸エステル、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びアラビアゴム等の乳化剤等を用いて、従来の方法で調製することができる。
【００３６】
化合物Aを含む注入可能な製剤は、水、生理食塩水、植物油(例えば、オリーブ油及び落花生油)、オレイン酸エチル、及びプロピレングリコール等の溶媒、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、及びウレタン等の可溶化剤、塩化ナトリウム及びグルコース等の等張化剤、フェノール、クレゾール、p-ヒドロキシ安息香酸エステル、及びクロロブタノール等の保存剤、アスコルビン酸及びピロ亜硫酸ナトリウム等の抗酸化剤等を用いて、従来の方法で調製することができる。
【００３７】
また、非経口投与用製剤は、ポリエチレングリコール、水素化ナフタレン等のポリアルケニルグリコールも含有してもよい。特に、生体適合性で生分解性のラクチドポリマー、ラクチド/グリコリドコポリマー、又はポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマーが、活性化合物Aの放出の制御に有用な賦形剤であり得る。有用である可能性がある他の化合物Aの非経口送達系には、エチレン-酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入システム、及びリポソームが含まれる。また、他の非経口投与用製剤は、口腔内投与のためのグリココレート、直腸投与のためのサリチレート、又は膣内投与のためのクエン酸も含んでいてもよい。吸入投与のための製剤は、例えばラクトース等の賦形剤を含んでいてもよく、点鼻薬の形態での投与のための、ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテル、グリココレート、及びデオキシコレートを含む水性溶液、又は油性溶液であってもよく、又は鼻腔内に適用されるゲルとしてのものでもよい。経皮パッチのための製剤は、好ましくは親油性のエマルジョンである。
【００３８】
化合物A及び医薬的に許容されるその塩は、経口で投与されても、例えば軟膏又は注射として、経口でなく投与されてもよい。特定の医薬組成物中の化合物Aの濃度は、本願明細書に記述するように、又は当業者により決定されるように、変動し得る。特に、特定の剤形中の化合物Aの濃度は、投与される総用量、化合物Aの化学的特徴(例えば疎水性)、投与経路、患者の年齢、体重、及び症状等の要因に依存する。化合物Aの好ましい用量範囲は、処置する疾患の種類及び進行の程度、特定の患者の全体的な健康状態、特定の製剤(剤形)及びそこに含まれる賦形剤、並びに投与経路等の変数に依存しやすい傾向がある。
【００３９】
化合物A及び医薬的に許容される塩の量は、単回用量で、1日1回投与することができる。代わりに、化合物Aの量は、1日2回投与することができる。他の実施態様において、化合物Aの量は、1日3回投与することができる。さらに他の実施態様において、化合物Aの量は、1日4回投与することができる。
【００４０】
当業者であれば、本願明細書に提示する説明及び実施例に基づいて、化合物Aの用量範囲及び投与レジメンを、治療分野で周知の方法に従って調整してもよいことを理解する。すなわち、当業者は、検出可能な治療的利益を提供するために必要とされる化合物Aの特定の用量及び投与の時間的要件を容易に決定することができる。したがって、本願は、特定の用量及び投与レジメンを記述及び/又は例示するかもしれないが、これらの実施例は、本願明細書に記述される方法の実施において用いられる可能性がある用量も投与レジメンも全く限定しないということが理解されるべきである。
【００４１】
一態様において、本開示は、多発性硬化症を有する個体又は多発性硬化症を発症しやすい個体を同定する工程、及び化合物A
【００４２】
【化３】
2016540009.tif 000004
【００４３】
又は医薬的に許容されるその塩を前記個体に投与する工程を含む、多発性硬化症を処置するための方法を記述し、提供する。
【００４４】
別の態様において、本開示は、化合物Aが1日に最大4回投与される、上述の方法を記述し、提供する。別の態様において、本開示は、化合物Aが1日2回投与される、本段落の第一の方法に記載の方法を記述し、提供する。別の態様において、本開示は、化合物Aが1日1回投与される、本段落の第一の方法に記載の方法を記述し、提供する。
【００４５】
本開示によれば、化合物A及び医薬的に許容されるその塩は、少なくとも1日当たり約0.01 mg/kgの量で投与することができる。いくつかの実施態様において、化合物Aは、1日当たり約0.01 mg/kg〜約1500 mg/kgの量で投与される。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約3 mg/kg〜約300 mg/kgの量で投与される。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約10 mg/kg〜約220 mg/kgの量で投与される。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約60 mg/kg〜約220 mg/kgの量で投与される。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約60 mg/kg〜約120 mg/kgの量で投与される。別の態様において、化合物Aは、1日当たり約115 mg/kgの量で投与される。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000、1100、1200、1300、1400、又は1500 mg/kgの量で投与される。
【００４６】
別の態様において、本開示は、化合物Aが経口的に投与される、上述の任意の方法を記述し、提供する。
【００４７】
別の態様において、本開示は、第二の治療剤を投与する工程をさらに含む、上述の任意の方法を記述し、提供する。別の態様において、本開示は、化合物A及び第二の治療剤が別個に投与される、本段落の第一の方法に記載の方法を記述し、提供する。別の態様において、本開示は、化合物A及び第二の治療剤が単回投与として投与される、本段落の第一の方法に記載の方法を記述し、提供する。
【００４８】
別の態様において、本開示は、化合物A：
【００４９】
【化４】
2016540009.tif 000005
【００５０】
又は医薬的に許容されるその塩及び少なくとも1種の医薬的に許容される賦形剤を含む、多発性硬化症を有する個体又は多発性硬化症を発症しやすい個体の処置において使用するための組成物を記述し、提供する。別の態様において、本開示は、単位剤形の上述の組成物を記述し、提供する。別の態様において、本開示は、錠剤又はカプセルの形態である、本段落の第一の組成物を記述し、提供する。
【００５１】
本開示によれば、化合物A及び医薬的に許容されるその塩は、少なくとも1日当たり約0.01 mg/kgの量で本開示の組成物中に存在することができる。いくつかの実施態様において、化合物Aは、1日当たり約0.01 mg/kg〜約1500 mg/kgの量で存在する。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約3 mg/kg〜約300 mg/kgの量で存在する。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約10 mg/kg〜約220 mg/kgの量で存在する。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約60 mg/kg〜約220 mg/kgの量で存在する。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約60 mg/kg〜約120 mg/kgの量で存在する。別の態様において、本開示は、化合物Aが1日当たり約115 mg/kgの量で存在する組成物を記述し、提供する。他の実施態様において、化合物Aは、1日当たり約5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000、1100、1200、1300、1400、又は1500 mg/kgの量で存在する。
【００５２】
当業者は、本開示の好ましい実施態様に多数の変更及び改変を行うことができること、及びそのような変更及び改変は、本開示の精神から逸脱することなく行うことができることを理解する。したがって、以下の実施例及び添付の請求項は、本開示の真の精神及び範囲に含まれるような全ての等価的変形を包含することが意図される。
【実施例】
【００５３】
［材料と方法］
国際出願番号第PCT/US10/37363号の実施例35に記述される方法と類似の方法で化合物Aを調製した。
【００５４】
「動物モデル」
実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)は、Th1細胞媒介性の多発性硬化症の自己免疫疾患モデルである。EAEは、MSの臨床的及び組織病理学的特徴の多くを共有しており、認められているMSの動物モデルである。
【００５５】
以下の実施例中、生きている動物を用いた部分に関しては、健康で、未経産の、非妊娠C57Bl/6 (MOG誘導EAE試験用)、(Balb/c x SJL) F1 (CSFL) (SCH誘導EAE試験用)、又はSJL/J (PLP誘導EAE試験用)の雌のマウスを、イスラエルのエルサレムにあるハーランラボラトリーズ(Harlan Laboratories)動物飼育センターより入手した。動物は、到着時点で17グラム〜20グラムであり、およそ11週齢であった。動物の体重を、送達の日に記録した。健康な動物を、任意に試験群に割り当て、その後処置を開始した。マウスは、身体の印によって個体を識別した。動物の収容場所及び世話の条件を、イスラエルの国立研究評議会(National Research Council) (NRC)及びテバ・ファーマスーティカル・インダストリーズ社(Teva Pharmaceutical Industries Ltd.)の倫理委員会(Ethical Committee)に従い、NRCに認可されたイスラエルのネタニアにある動物施設において維持した。
【００５６】
以下の実施例でのEAEの誘導のために、マウスの側腹部に、300 μgのラットミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質Novatideのアミノ酸35-55 (MOG35-55)、2 mgのマウス脊髄ホモジネート(MSCH)、又は500 μgの結核菌(Mycobacterium tuberculosis) H37RA (MT)を補ったフロイントの完全アジュバント(CFA) (Difco社、デトロイト、ミシガン州)中の200 μgのラットプロテオリピドタンパク質のアミノ酸139-151 (PLP139-151)のいずれかを含む脳炎誘発性エマルジョン200 μlを皮下(sc)注射した。MOG35-55を注射したマウス及びMSCHを注射したマウスについては、誘導の日及び48時間後に、100 ng/0.2 ml/マウスの用量で、百日咳毒素(PTX)を腹腔内(ip)注射した。PLPを注射したマウスについては、(1 mg/ml MTを含む)CFAを結核菌で強化し、2 mg/ml MTを生成した。MOG35-55を注射したマウスについては、30 mgのMOGを20 mlの生理食塩水に溶解して1.5 mg/mlのMOGを生成した。エマルジョンは、ルアーロックを用いて互いに接続された2本のシリンジ中の、等量のオイル(2 mg/ml MTを含む20 ml CFS)と液状部分(20 mlの1.5 mg/ml MOG)とから作製し、0.75 mg/mlのMOGを生成した。全ての群におけるMOGの用量は、0.15 mg/0.2 ml/マウス、全ての群におけるMTの用量は0.2 mg/0.2 ml/マウスであった。MOG誘導EAEは、炎症及び脱髄を特徴とする、慢性的な形態の疾患である。SCH誘導EAEは、主に炎症により引き起こされる、急性かつ自己解決的な形態のモデルである。PLP誘導EAEは、再発寛解疾患の形態であり、炎症、脱髄、及び軸索損傷の兆候を伴う、ヒトの再発寛解型MS(RR-MS)のモデルを作るために用いられる。陽性対照の参照剤を各試験において準備し、異なるモデル及び試験日にわたって一貫したEAE応答を確保した(本願明細書にデータ示さず)。
【００５７】
マウスを無作為に以下の処置群：陰性対照(PBS)、ビヒクル(0.5% メチルセルロース)、及び薬剤処置群(化合物A)に割り当てた。各群から15匹のマウスをEAE臨床的観察に用いた。瀕死の個体がいないか、全てのケージを1日1回調べた。マウスは、EAE誘導後10日目から、30日目(MOG誘導EAE及びSCH誘導EAE)又は60日目(PLP誘導EAE)まで、臨床的兆候を毎日モニタリングした。EAEの臨床的兆候は、これらのモデルを35年より長く扱ってきた単一の人物より、盲検で決定される、数値スコアとして定義された。本願明細書で用いられるスコアリング方法は以下のとおりであった：ゼロのスコア(0) = 「正常な行動、神経症状無し」；1のスコア(1) = 「尾の衰弱」；2のスコア(2) = 「後肢の衰弱」；3のスコア(3) = 「後肢の麻痺」；4のスコア(4) = 「完全な麻痺」；5のスコア(5) = 「死」。PLP誘導EAEモデルについては、追加のパラメーターがスコア1と2との間に挿入され、「尾を引きずる、又は立ち直り反射の喪失」と、「尾を引きずる、及び立ち直り反射の喪失」とを区別し、これによりPLP誘導モデルでは瀕死/死が6のスコア(6)になった。1以上のスコアを有する全てのマウスを、病気であるとみなした。人道的理由により、3日間より長く5のスコアを有する動物には6のスコアを与え屠殺した。計算の目的で、屠殺されたか又は死亡した動物についての6のスコアを、グラフでは前に進めた。
【００５８】
「EAEの臨床的兆候の評価、計算、及びスコアリング」
［疾患の発生率(疾患比率)の計算］：疾患の発生率は、処置群中の病気のマウスの数を、対照群中の病気のマウスの数で除したものに等しい。発生率による阻害パーセントは、1から、処置群中の病気のマウスの数を対照群中の病気のマウスの数で除したものを引いて、100%を乗じたものとして計算した。
【００５９】
［死亡/罹患率(死亡比率)の計算］：1から、処置群中の死亡したマウスの数を対照群中の死亡したマウスの数で除したものを引いて、100%を乗じたもの。
【００６０】
［疾患の持続期間の計算］：各マウスの疾患の持続期間の合計を群中のマウスの数で除したもの。計算の目的で、観察期間中にEAEを発症しなかったマウスの疾患の持続期間を0日間とみなした。
【００６１】
［疾患の発症の平均遅延の計算］：日数で表現された、疾患の発症における平均遅延は、対象群における平均の疾患発症を、試験群から差し引くことにより計算した。計算の目的で、観察期間中にEAEを発症しなかったマウスの発症期間を31日間とみなした。
【００６２】
［平均最大スコア及び阻害パーセントの計算］：各群の平均最大スコア(MMS)は、各マウスの最大スコアの合計を群中のマウスの数で除したものとして計算した。阻害パーセントは、1から、処置群のMMSを対照群のMMSで除したものを引いて、100%を乗じたものとして計算した。
【００６３】
［平均群スコア及び阻害パーセントの計算］：試験群中の各マウスの各日のスコアを合計し、個々の平均の1日のスコア(IMS)を、マウスの各日のスコアの合計を日単位の観察期間で除したものとして計算した。平均群スコア(GMS)は、各マウスの合計IMSを群中のマウスの数で除したものとして計算した。阻害パーセントは、1から、処置群のGMSを対照群のGMSで除したものを引いて、100%を乗じたものとして計算した。
【００６４】
観察期間の終わり(30日目)に、処置群のマウスを剖検した。マウスをイソフルラン及び空気を用いて深く麻酔し、最初、潅流液から血液が無くなるまでは、フラッシング溶液(ヘパリン含有生理食塩水)で経心腔的潅流し、その後は4%緩衝化ホルマリンを流した。各マウスの脊柱(頸部から腰部まで)を解剖した。脊柱を、可能な限り多くの筋肉を切り離して単離し、最後の肋骨で遠位切片化した。脳及び脊柱を4%緩衝化ホルマリン中で保存した。
【００６５】
各頸椎及び腰椎の膨張(頸胸部及び腰仙部の脊椎分節)由来の2つの横断切片を評価した。組織学的評価は、ヘマトキシリン・エオシン(H&E)、ルクソールファストブルー過ヨウ素酸シッフ(LFB/PAS)、及びビルショウスキー(Bielschowsky's)鍍銀染色で染色した、厚さ4 μmの切片で行い、炎症、脱髄、及び軸索病変を評価した。組織切片を、盲検でスコアリングした。炎症を灰白質及び白質の両方について評価し、脱髄を白質内でのみ評価し、軸索損傷を白質内で評価した。頸胸部切片と腰仙部切片の両方のスコアそれぞれを、平均化して、平均炎症スコア及び脱髄スコアを得た。各切片について脱髄の最も重度な領域を用いて、軸索病変を評価した。20X及び100Xの倍率で評価された、ヘマトキシリン・エオシン染色した切片を用い、半定量的グレード分類図を適用して、炎症を評価した(炎症重症度スコア：1 = 炎症無し；2 = 血管周囲/髄膜の炎症；3 = 実質を含む軽度の炎症；4 = 実質内の中程度の炎症；5 = 実質内の重度の炎症) (炎症分布スコア 1 = 無し；2 = 限局的(focal)；3 = 多巣性(multifocal)/斑点状(pach)；4 = 局所的(regional)；5 = 多発局所性(multi-regional)/融合性(confluent))、及び、20Xの倍率で評価された、ルクソールファストブルー/PAS染色-切片を用いて、脱髄を評価した(脱髄重症度スコア：1 = 無し；2 = 最小限か又は稀なスフェロイド/消化室(digestion chambers)；3 = 軽度(少数の散在性のスフェロイド/消化室；4 = 中程度；5 = 重度) (脱髄分布スコア：1 = 無し；2 = 限局的；3 = 多巣性/斑点状；4 = 局所的；5 = 多発局所性/融合性)。軸索病変に関しては、各動物由来の1つの頸胸部切片及び1つの腰仙部切片中、最も重度に罹患した領域を選択し、ビルショウスキー鍍銀染色した切片に400Xの倍率で重ね合わせた、ランダム化された25ポイントのChalkey配列接眼レンズ網線(array eyepiece reticule)を用いて、点サンプリングにより評価した。軸索消失パーセントは、立体格子の点の総数を差し引いた、軸索を横切る点の数を差し引いたものを、立体格子の点の総数で除することにより決定した。
【００６６】
経時的に測定したパラメーターの有意性は、一元配置分散分析(one-way ANOVA)検定によって主として決定した。個々の比較用に、各群について、経時的に測定したパラメーターを用いて曲線下面積(AUC)の値を決定した。図及び表の説明に注記してある場合は、試験及び検定した仮説に応じて、マン・ホイットニー・ノンパラメトリック及び一元配置分散分析又は二元配置分散分析(two-way ANOVA)を統計的検定として用いた。p値 <0.05を有意であるとみなした。使用した統計ソフトウェアは、GraphPad Prism(登録商標) (vs. 5.01, 2007)であり、計算はMicrosoft(登録商標) Excel(登録商標)の2003 Office Professionalバージョンを用いて実行した。
【００６７】
「実施例1：MOG誘導EAEの処置」
化合物Aを用いて、MOG誘導EAEを有する動物を処置することが可能であるか、並びに脊髄の炎症及び脱髄への何らかの影響が観察され得るかを調査した。C57Bl/6実験室マウス株において、ビヒクル中で投与した化合物Aの薬物動態を、30-100 mg/kgの投与量について、評価し、以前に試験したモデルと同等の曝露を確保した(データ示さず)。図1は、化合物Aを用いた、活性MOG誘導EAEマウスの処置の結果を示す。MOG35-55ペプチド及びCFAからなる脳炎誘発性エマルジョンを、0.2 ml/マウスの液量で、右脇腹に皮下注射することにより、活性EAEを1日目に誘導した。PTXを、誘導の日及び48時間後に、100 ng/0.2 ml/マウスで、腹腔内注射した。0.5%メチルセルロース又は30 mg/kg、55 mg/kg、若しくは110 mg/kgの化合物Aを含有するビヒクルを、経口(per os)で、1日2回(全て)又は1日1回(110 mg/kgのみ)のいずれかで投与した。化合物Aを、0.5%メチルセルロース(Sigma社、セントルイス、ミシガン州)中、経口投与のための所望の濃度まで、懸濁液の形態で経口的に与えた。全ての動物を、EAE誘導後10日目から、30日目まで、臨床的兆候について、各日モニタリングした。EAEの臨床的兆候のスコアリングを、本願明細書に記述するグレード分類系に従って、観察カードに記録した。図1は、平均±SEM(平均の標準誤差)を、ビヒクル対照群と比較して、一元配置分散分析として実行した統計的計算と共に示す(群当たりN=15匹のマウス、*p<0.05、***p<0.001)。
【００６８】
図2は、炎症、脱髄、及び軸索損傷に関する組織切片スコアリングについての値を示す。頸椎膨張及び腰椎膨張(頸胸部及び腰仙部の脊椎分節)の各々からの2つの横断切片を評価した。組織学的評価を、ヘマトキシリン・エオシン染色、ルクソールファストブルー過ヨウ素酸シッフ(LFB/PAS)染色、及びビルショウスキー鍍銀染色した切片について実行し、それぞれ炎症、脱髄、及び軸索病変を評価した。選択された脊髄の腰仙部切片からの代表的な画像を、図2の下の部分に示す。組織切片は、独立した有資格の病理学者が、盲検でスコアリングした。炎症を灰白質及び白質の両方について評価し、脱髄を白質内でのみ評価し、軸索損傷を白質内で評価した。頸胸部切片と腰仙部切片の両方のスコアそれぞれを、平均化して、平均炎症スコア及び脱髄スコアを得た。各切片について脱髄の最も重度な領域を用いて、軸索病変を評価した。各切片について脱髄の最も重度な領域を用いて、軸索病変を評価した。半定量的グレード分類図を適用して、20X及び100Xの倍率で評価された、ヘマトキシリン・エオシン染色した切片を用い、炎症を評価し、20Xの倍率で評価された、ルクソールファストブルー/PAS染色した切片を用い、脱髄を評価した。軸索病変に関しては、各動物由来の1つの頸胸部切片及び1つの腰仙部切片中、最も重度に罹患した領域を選択し、ビルショウスキー鍍銀染色した切片に400Xの倍率で重ね合わせた、ランダム化された25ポイントのChalkey配列接眼レンズ網線を用いて、点サンプリングにより評価した。軸索消失パーセントは、立体格子の点の総数を差し引いた、軸索を横切る点の数を差し引いたものを、立体格子の点の総数で除することにより決定した。
【００６９】
MOG誘導EAEの化合物A処置により、試験全体にわたって、試験した各用量について、臨床的スコアの有意な減少がもたらされた。図1に示すとおり、化合物Aの1日2回、経口の投与により、ビヒクル対照群と比較して、臨床的スコアが有意に減少し(30 mg/kgについて90.5%(*p<0.05)55 mg/kgについて99.5%(***p<0.001))、1日1回の110 mg/kgの投与により、ビヒクルの投与に対して98.5%の臨床的スコアの低減(*p<0.001)が得られた。死亡率は、MOG誘導EAE処置群のいずれについても観察されなかった。1日1回の投与は、10 mg/kg、30 mg/kg、及び60 mg/kgの用量の化合物Aについても試験されたが、ビヒクルに対して有意な影響は観察されなかった(データ示さず)。
【００７０】
【表１】
2016540009.tif 000006
【００７１】
表1は、MOG誘導EAE試験の結果を示し、死亡率、疾患の発生率、第1、第2、及び第3の再発の阻害パーセント、並びに個々の平均の日々のスコア合計を群中のマウスの数で除したものとして計算された群平均スコア(GMS)を示している。実行した統計的計算は、ビヒクル対照群と比較した、一元配置分散分析であった(群当たりN=15匹のマウス、*p<0.05、***p<0.001)。
【００７２】
表1に示すように、化合物Aを用いて処置した全ての群において、臨床的兆候の発症の遅延が観察された。この疾患発症の遅延は、生存中の(in-life)結果、用量、及び頻度と相関していた。ビヒクル群の11.5 ± 1.1日と比較して、55 mg/kg及び110 mg/kgの化合物Aを用いて1日2回処置した動物は、30.5 ± 2.1日の平均疾患発症を有していた。比較のために、30 mg/kg、1日2回処置群の疾患の発症は、23.7 ± 8.2日であった。ビヒクル対照群の17.4 ± 1.7日と比較して、30 mg/kg、55 mg/kg、及び110 mg/kgの化合物Aで1日2回処置した動物における疾患の持続期間は、それぞれ、3.7 ± 6.1日、0.2 ± 0.8日、及び0.5 ± 2.1日であった。したがって、化合物Aを用いた処置は、EAEのMOG誘導モデルにおいて、疾患の発症を遅延させ、疾患の持続期間を減少させた。
【００７３】
表1に見られるように、平均最大スコア(MMS)及び群平均スコア(GMS)はどちらもEAEの臨床的兆候の重症度、疾患の発症、及び疾患の持続期間を決定するのに役立つ。対照のビヒクル群における3.4 ± 0.8日及び2.1 ± 0.7日と比較して、30 mg/kgで1日2回処置した動物のMMS及びGMSは、それぞれ0.7 ± 1.0日(79.4%減少、p<0.001)及び0.2 ± 0.4日(90.5%減少、p<0.001)であり、55 mg/kg、1日2回については、それぞれ0.1 ± 0.3日(97.1%減少、p<0.001)及び0.01 ± 0.04日(99.5%減少p<0.001)であり、110 mg/kg、1日1回については、それぞれ0.1 ± 0.3日(97.1%減少、p<0.001)及び0.03 ± 0.1日(98.5%減少、p<0.001)であった(表1)。組織病理は、外部の盲検の病理学者によりスコアリングされた；スコアを図2に示す。本願明細書に記述する方法に従って、組織サンプルを切り取り及び染色した。30 mg/kg及び55 mg/kg、1日2回、並びに110 mg/kg、1日1回の化合物Aで処置した群は、ヘマトキシリン及びエオシン、並びにルクソールファストブルー過ヨウ素酸シッフの特殊染色を用いて決定した脊髄の炎症(ビヒクルに対し41.6%〜57.5%減少、****p<0.00001)及び脱髄(ビヒクルに対し17.3%〜23.9%減少、**p<0.01)が有意に減少するという結果になった。
【００７４】
「実施例2：SCH誘導EAEの処置」
急性のマウス脊髄ホモジネート誘導性EAEモデルにおいて試験を遂行した。図3は、化合物Aを用いた、活性SCH誘導EAEマウスの処置の結果を示す。2 mg/マウスのマウス脊髄ホモジネート(SCH)及びCFAからなる脳炎誘発性エマルジョンを、0.2 ml/マウスの液量で、右脇腹に皮下注射することにより、活性EAEを1日目に誘導した。PTXを、誘導の日及び48時間後に、125 ng/0.2 ml/マウスで、腹腔内注射した。化合物Aを、SCH誘導EAEモデルにおいて、3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kgの用量、経口、1日2回投与で、及び10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg、1日1回で(データ示さず)、試験し、経口で1日2回投与した0.5%メチルセルロース含有ビヒクルと比較した。化合物Aを、0.5%メチルセルロース(Sigma社、セントルイス、ミシガン州)中、経口投与のための所望の濃度まで、懸濁液の形態で経口的に与えた。全ての動物を、EAE誘導後10日目から、30日目まで、臨床的兆候について、各日モニタリングした。EAEの臨床的兆候のスコアリングを、本願明細書に記述するグレード分類系に従って、観察カードに記録した。図3は、平均±SEM値のプロットを図示する；統計的計算を、ビヒクル対照群と比較して、一元配置分散分析として実行した(群当たりN=10匹のマウス、「*」はp<0.05を意味し、「ns」は、結果が有意でなかったことを意味する)。
【００７５】
図3に、p<0.05を意味する「*」を伴って見られるように、30 mg/kg、1日2回、及び60 mg/kg、1日2回の化合物Aは、ビヒクルと比較して、平均臨床的スコアを減少させた。60 mg/kg及び30 mg/kgについての臨床的スコアの減少は、それぞれ58.3%及び37.3%であった。死亡は、実施例1で用いたMOG誘導EAEよりも、SCH誘導EAEモデルにおいて、より一般的に観察された。ビヒクル処置群において、40%の死亡率が観察され、化合物Aを用いて処置した群において、20%〜80%の間の死亡率が観察された。臨床的兆候の発症の遅延は、30 mg/kg及び60 mg/kg、1日2回の群について最大であり、60 mg/kg、1日2回の群は、ビヒクル対照に対してp<0.05の有意な効果を与えた。ビヒクル群の13.1±2.0日と比較して、30 mg/kg及び60 mg/kg、1日2回における疾患の発症は、それぞれ16.2±2.0日及び16.4±3.0日であった。また、化合物Aで処置した群における疾患の持続期間も、30 mg/kg及び60 mg/kg、1日2回の群について、それぞれ8.2±3.3日、及び8.4±4.2日と、ビヒクル処置群の10.9±2.0日と比較して減少した。ビヒクル対照群の4.0±.9日及び2.76±1.1日と比較して、30 mg/kg、1日2回処置群のMMS及びGMSは、それぞれ3.3±1.3日(17.5%減少、p=0.25)及び1.73±1.4日(37.3%減少、p<0.05)であった。60 mg/kg、1日2回の処置群に関しては、MMS及びGMSは、ビヒクル対照群の4.0±.9日及び2.76±1.1日と比較して、それぞれ2.8±1.5日(30%減少、p=0.05)及び1.15±1.1日(58.3%減少、p<0.01)であった。
【００７６】
「実施例3：PLP誘導EAEの処置」
PLPペプチド誘導モデルにより実証される再発及び寛解性EAEは、上行性の弛緩性後肢麻痺の発症により臨床的に特徴づけられる。疾患の最初の臨床的兆候は、急性期に起こるが、そこでマウスは上行性麻痺を示し、その後活動性疾患の誘導を示す。寛解期中は、臨床的改善が臨床症状の後に続く。再発中は、寛解の後に臨床疾患の増加が見られ、これは通常初期段階からの1グレードの上昇であり、2〜3日間維持される。化合物Aを、PLP誘導EAEモデルにおいて試験し、JAK2阻害により再発の頻度及び大きさを経時的に減少させることができるかを判定した。
【００７７】
図4は、化合物Aを用いた、マウスにおける活性PLP誘導EAEの処置の結果を示す。1.5 mg/ml PLP139-151ペプチド及び0.2 ml/マウスの液量のCFAからなる脳炎誘発性エマルジョンを、、右脇腹に、200 μl/マウスで皮下注射することにより、活性EAEを1日目に誘導した。PTXを、誘導の日及び48時間後に、100 ng/0.2 ml/マウスで、腹腔内注射した。0.5%メチルセルロース又は30、60、若しくは100 mg/kgの化合物Aを含むビヒクルを、経口で1日2回与えた。化合物Aを、0.5%メチルセルロース(Sigma社、セントルイス、ミシガン州)中、経口投与のための所望の濃度まで、懸濁液の形態で経口的に与えた。全ての動物を、EAE誘導後10日目から、60日目まで、臨床的兆候について、各日モニタリングした。EAEの臨床的兆候のスコアリングを、本願明細書に記述するグレード分類系に従って、観察カードに記録した。図4は、平均±SEMを、ビヒクル対照群と比較して、一元配置分散分析として実行した統計的計算と共に示す(群当たりN=16匹のマウス、「***」はp<0.001を意味する)。
【００７８】
【表２】
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【００７９】
表2は、PLP-EAE試験の結果を示し、死亡率、疾患の発生率、第1、第2、及び第3の再発の阻害パーセント、並びに個々の平均の日々のスコア合計を群中のマウスの数で除したものとして計算された平均スコア(GMS)を示す。行った統計的計算は、ビヒクル対照群と比較した一元配置分散分析であった(群当たりN=16匹のマウス、「***」はp<0.001を意味する)。
【００８０】
図4及び表2に示すように、全ての用量により、PLP-EAEモデルにおいて有意な反応が得られ、1日2回の投与レジメンにより最良総合効果が得られた。60及び100 mg/kgの化合物Aの1日1回投与により、一元配置分散分析解析により判定されるように(p<0.0001)、経時的な臨床的スコアの非常に有意な減少が得られ、ビヒクル(データ示さず)に対して20.1%及び54.9%の臨床的スコアの減少であった。図4に見られるように、30、60、及び100 mg/kgの化合物Aの1日2回の投与により、ビヒクル処置群と比べて、25.9%、49.9%、及び86.1%の総合全平均臨床的スコアの減少が得られた(「***」はp<0.001を意味する)。図4に見られるように、1日1回及び1日2回の両方の投与について、化合物Aの強い用量反応があった。
【００８１】
化合物A処置群の中で、100 mg/kg、1日2回の用量レベルは、第1の再発において97.6%の活性(p<0.001)、第2の再発において85.9%の活性(p<0.001)を示し、これらにより累積スコアが得られ、一緒に計算した第1及び第2の再発のGMS(表2)によれば、87%の活性(p<0.001)を示した。表2に示すように、100 mg/kg、1日2回、100 mg/kg、1日1回、60 mg/kg、1日2回、60 mg/kg、1日1回、及び30 mg/kg、1日2回の化合物A投与について、合計された第1及び第2の再発スコアに関して、PLP誘導EAEは、ビヒクル対照に比べてそれぞれ87%、60.9%、65.2%、39.1%、43.5%の減少が得られた(「***」はp<0.01を示す)。エクスビボ盲検病理スコアリングにおいて、100 mg/kgの用量により、炎症の減少における有意性が得られた(H&E染色、p<0.05、データ示さず)。
【００８２】
「実施例4：イヌにおける化合物Aの薬物動態」
図5は、イヌへの化合物Aの投与についての薬物動態データを示す。10、30、及び100 mg/kgの用量の化合物Aを、雄のビーグル犬に経口的に投与した。化合物Aを、0.5%メチルセルロース(Sigma社、セントルイス、ミシガン州)中、経口投与のための所望の濃度まで、懸濁液の形態で経口的に与えた。化合物Aの血漿濃度(ng/mL)を、経口投与後15分、30分、1時間、2時間、4時間、8時間、及び24時間で測定し、平均値(n=3)を図5に示す。10及び30 mg/kgのデータは、Cmax及びAUCの両方の線形の用量依存的な増加と一致していた。100 mg/kg投与後10分で3頭中2頭のイヌに嘔吐が観察され、その用量のCmaxレベルは嘔吐により負の影響を受けた可能性がある。100 mg/kgの用量についてのCmaxは1763 ng/mlであり、これはマウスにおいて有効性を伴う2000〜4000 ng/mlの曝露を下回っている。
【００８３】
本願明細書において引用又は記述された各特許、特許出願、及び刊行物は、参照により全体として本願明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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