(57)【要約】  本明細書に記載されているのは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療に有用な化合物を特定するための方法である。
2016502519.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を有する患者を治療するための方法であって、患者のＨＢＶ感染細胞におけるＨＢＶ  ｐｇＲＮＡの蓄積を阻害することが可能な化合物の治療有効量を患者に投与するステップを含む方法。
【請求項２】
治療有効量が、ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３細胞において、ＤＮＡ合成を抑制するのに必要な量よりも１０倍大きいインビトロ用量に相当する量以上であるか、またはｐｇＲＮＡ蓄積の細胞ベースアッセイにおいて１μＭに相当する量以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
化合物が、式
【化９】
2016502519.tif 000017
［式中、
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立して、アリールまたはヘテロアリールから選択され；
Ｒ１は、水素またはプロドラッグを形成する基であり；
Ａｋは、アルキレンであり；
Ａｋ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、１から４であり；
Ｚは、水素または
【化１０】
2016502519.tif 000018
であり、式中、Ｘは、ＣＨＮ３、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＲ５、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、またはＮＲＮであり、ここで、Ｒ５は、ヒドロキシもしくはその誘導体またはアミノもしくはその誘導体であり、ＲＮは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルコキシル−Ｃ（Ｏ）、アルキニル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）からなる群から選択され、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
Ｒ４は、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
Ｙは、ＯまたはＨＮであり；
ＲＡは、ハロ、およびアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノおよびその誘導体、ならびにヒドロキシルおよびその誘導体からなる群から場合ごとに独立して選択される０から３個の置換基を表し、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
ＲＢは、ハロ、およびアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノおよびその誘導体、ならびにヒドロキシルおよびその誘導体からなる群から場合ごとに独立して選択される０から３個の置換基を表し、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
Ｒ６は、水素およびＡｋ−Ｚ１からなる群から場合ごとに独立して選択され、ここで、Ａｋは、アルキレンであり、Ｚ１は、水素またはＮＲ２Ｒ３であり；ここで、Ｒ２およびＲ３は、水素、ならびにアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、およびヘテロシクロアルキルからなる群から場合ごとに独立して選択され、これらはそれぞれ置換されていてもよく、または
Ｒ２およびＲ３は、結合している窒素と一緒になって、
【化１１】
2016502519.tif 000019
を形成し、式中、Ｘは、ＣＨＮ３、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮａ）−、Ｃ＝ＮＲ５、またはＮＲＮａであり；ここで、Ｒ５は、ヒドロキシもしくはその誘導体またはアミノもしくはその誘導体であり；ＲＮａは、水素、ならびにアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルコキシル−Ｃ（Ｏ）、アルキニル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）からなる群から選択され、これらはそれぞれ置換されていてもよい］を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療に有用な化合物を特定するための方法であって、
ＨＢＶに感染した細胞を培養培地中で化合物と接触させるか、または可能性のある化合物を動物に投与することと；
１つまたは複数の時点において、細胞、培養培地、または動物の組織からサンプルを採取することと；
ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ濃度、メチル化されたｃｃｃＤＮＡの量、ｃｃｃＤＮＡのアセチル化状態、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ転写、細胞質におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、細胞核におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、未集合のカプシドタンパク質の濃度、ＨＢＶカプシドの安定化、ＨＢＶカプシドの核形成、およびＨＢＶ  Ｓ抗原濃度からなる群から選択される１つまたは複数の属性についてサンプルを分析することと；
属性の１つまたは複数の減少または増加に基づいて、化合物をＢ型肝炎の治療に有用であると特定することと
を含む方法。
【請求項５】
分析するステップが、ＨＢＶカプシドの安定化またはカプシドの核形成を分析することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＨＢＶ  ＲＮＡ濃度が、ｐｇＲＮＡ、亜属のサブゲノムＲＮＡ、またはスプライスＲＮＡから選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
分析するステップが、カプシドの安定性に対する化合物の作用、集合体の核形成に対する化合物の作用、カプシドに対する化合物の親和性、Ｃｐ二量体に対する化合物の親和性、またはアロステリック作用を誘導する化合物の能力を決定することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
属性の１つまたは複数が減少または増加するまで可能性のある化合物の濃度を変化させることをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
化合物が、ヘテロアリールジヒドロピリミジン化合物である、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
化合物が、請求項３に記載の化合物である、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
化合物の濃度が、約１μＭから約１０μＭ、または約０．１μＭから約１μＭである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
組織が、肝組織である、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
動物が、げっ歯類またはヒトである、請求項４に記載の方法。
【請求項１４】
細胞が、ヒト肝細胞由来の細胞株（たとえば、Ｈｕｈ７、ＡＤ３８、ＨｅｐＧ２、またはＨｅｐＧ２．２．１５）に由来する、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写を減少させる方法であって、該細胞をヘテロアリールジヒドロピリミジン化合物と接触させることを含む方法。
【請求項１６】
ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写を減少させる方法であって、該細胞を請求項３に記載の化合物と接触させることを含む方法。
【請求項１７】
ＲＡが、２−クロロ−４−フルオロを表す、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ａｒ１が、２−ピリジルである、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項１９】
ＲＢが、０個の置換基を表す、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２０】
Ｙが、Ｏである、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ４が、メチルである、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２２】
Ａｋが、メチレンである、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２３】
Ｚが、水素である、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２４】
Ｚ−Ａｋが、ＣＨ３である、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２５】
Ｘが、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、またはＮＲＮである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
Ｘが、Ｃ＝Ｏである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ６が、メチルである、請求項３、１０または１６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ６が、
【化１２】
2016502519.tif 000020
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮａ）−、またはＮＲＮａであり、ここで、ＲＮａは、水素またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）であり、これらはそれぞれ置換されていてもよい）である、請求項３、１０、または１６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｘが、Ｃ＝Ｏである、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年１１月９日に出願された米国仮出願第６１／７２４，８００号の利益を主張するものであり、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療に有用な化合物を特定するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ヘパドナウイルス科に属し、急性および慢性肝炎の原因因子である。ＨＢＶ感染は、世界の第９位の死亡原因である。ＨＢＶ感染は、多くの場合、急性肝炎および肝臓損傷につながり、腹痛、黄疸、および特定の酵素の血中レベルの上昇を引き起こす。ＨＢＶは、肝臓の大部分が破壊される急速進行型の疾患である劇症肝炎を引き起こす可能性がある。多くの患者は、急性ウイルス性肝炎から回復するが、特定の他の患者、とりわけ小児においては、ウイルス感染が長期間または無期限に持続し、慢性感染を引き起こす。慢性感染は、慢性遷延性肝炎につながる可能性がある。慢性遷延性肝炎は、倦怠感、肝臓損傷、肝硬変、および肝細胞癌腫、原発性肝癌を引き起こす可能性がある。
【０００４】
ＨＢＶ感染は、同性および異性愛者、静注薬物使用者、臓器移植レシピエント、ならびに輸血患者の間で深刻な問題である。新たなＨＢＶ感染は、ワクチン接種によって予防することができる。しかしながら、現在のワクチン接種は、世界中のおよそ３億５千万人の慢性保菌者にとっては有効ではない。肝臓におけるＨＢＶの複製の抑制または根絶は、肝臓病変の改善ならびに肝硬変および肝細胞癌腫への進行の低減につながることが観察されている。
【０００５】
慢性Ｂ型肝炎感染を治療するために米国において承認されている現行の療法の１つは、αインターフェロンであるが、これは理想とは程遠いものである。米国肝臓財団（American Liver Foundation）および国際肝炎財団（International Hepatitis Foundation）によれば、進行性肝炎、ＨＩＶ重感染、薬物乱用、またはその他などの状態を有する患者は、この治療に適格でなく、その結果、この療法を受けられるのは慢性保菌者の５０％未満となる。この治療に応答するのは、これらの患者のうち約４０％のみである。また、これらの患者の多くは、治療を止めると再発し、長期的な利益を示すのは患者の約３０％のみである。ウイルスの消失は、治療された患者のうち約１０〜２０％でしか見られない。これらのデータは、αインターフェロンで治療された患者における応答率が極めて低いことを示唆している。低い応答率に加えて、インターフェロン療法は、重度の副作用、たとえば、不眠症、抑うつ、吐き気、嘔吐、発熱、および倦怠感を引き起こす。ＨＢＶ感染を治療するための別の承認されているクラスの薬物は、逆転写酵素阻害剤、例として、ラミブジン、エンテカビル、およびテノホビルである。逆転写酵素阻害剤は、良好な抗ウイルス活性を有するが、治療の間に急速に耐性が発現することがあり、耐性の交差反応性および腎臓損傷などの副作用が存在する。また、ＨＢＶおよびＨＩＶに対する逆転写酵素阻害剤間の交差反応性も存在する。さらに、逆転写酵素阻害剤は、ＨＢＶのクリアランスにつながることは知られておらず、さらに悪いことに、療法の中止は、生命に関わる可能性があるほとんどのケースで起こる反跳作用をもたらすことが知られている。
【０００６】
ＨＢＶ感染に対する新規の併用ベース療法の開発は、ウイルスポリメラーゼに関連するもの以外のウイルスの生活環機能を遮断する新たな抗ウイルス剤を必要とする。ウイルスカプシド、核酸、ならびに宿主およびウイルスの付随タンパク質を含むＨＢＶコアは、魅力的な標的となる。カプシドの適正な集合は、ＲＮＡパッケージング、逆転写、および細胞内輸送のために極めて重要である。正常な集合は、Ｃｐ二量体の三量体を核とし、観察可能な中間体の集団を蓄積することなく進行すると考えられる。さらに、コアタンパク質（Ｃｐ）は、ヒストンと相互作用し、核の共有結合閉環ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）に結合することで、ｃｃｃＤＮＡ機能の調節およびｃｃｃＤＮＡ安定性の維持に関与している可能性があることが示されている。ヘテロ−アリール−ジヒドロピリミジン（ＨＡＰ）は、インビトロおよびインビボでＨＢＶ複製を阻害する抗ウイルス剤の一クラスである（Deres, Science 2003; Zlotnick, PNAS 2007）。ＨＡＰは、幅広い濃度範囲にわたってコアタンパク質（Ｃｐ）集合の速度および程度を高め、集合活性状態を誘導するアロステリックエフェクターとして作用し、または高濃度において、正常なビリオン集合を妨げるＣｐの非カプシドポリマーを選択的に安定化し、その結果、抗ウイルス作用をもたらす。コアタンパク質（Ｃｐ）は、ヒストンと相互作用し、核のｃｃｃＤＮＡに結合することで、ｃｃｃＤＮＡ機能の調節およびｃｃｃＤＮＡ安定性の維持に関与している可能性があることが示されている（Bock, JMB 2001; Pollicino, Gastroenterology 2006; Guo, Epigenetics 2011）。本明細書では、ＨＡＰが、ＤＮＡ合成が遮断される濃度を超える高濃度において、ウイルスＲＮＡの産生を妨げるという発見を説明する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の例示的な一実施形態では、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を有する患者を治療するための方法であって、患者のＨＢＶ感染細胞におけるＨＢＶプレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）の蓄積を阻害することが可能な化合物の治療有効量を患者に投与するステップを含む方法が記載される。
【０００８】
別の実施形態では、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療に有用な化合物を特定するための方法であって、ＨＢＶに感染した細胞を培養培地中で試験化合物と接触させるか、または可能性のある化合物を動物に投与することと；１つまたは複数の時点において、細胞、培養培地、または動物の組織からサンプルを採取することと；ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ濃度、メチル化されたｃｃｃＤＮＡの量、ｃｃｃＤＮＡのアセチル化状態、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ転写、細胞質におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、細胞核におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、未集合のカプシドタンパク質の濃度、およびＨＢＶ  Ｓ抗原濃度からなる群から選択される１つまたは複数の属性についてサンプルを分析することと；属性の１つまたは複数の減少または増加に基づいて、化合物をＢ型肝炎の治療に有用であると特定することとを含む方法が記載される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＨＢＶ複製を阻害する新たなクラスの抗ウイルス剤であるＨＡＰを示す図である。ＨＡＰは、ＨＢＶカプシド集合を誤った方向に誘導して、ＨＢＶ複製を遮断する。
【図２】ＨＡＰ１２がｃｃｃＤＮＡ転写を標的とすることを示す図（１）である。ＨＡＰ１２処理は、７２および９６時間においてＨＢＶ複製の完全な抑制を誘導し、９６時間においてｐｇＲＮＡ転写を最高の＞５０％減少させ、ｃｃｃＤＮＡレベルをおよそ３０％低減する。ａ）モノマー線状完全長ＨＢＶをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞において、ｐｇＲＮＡおよびＨＢＶ複製は、ｃｃｃＤＮＡ形成、クロマチン化、および転写に依存する。ｂ）細胞質ＨＢＶコア粒子を、トランスフェクション後の指定された時点において、未処理およびＨＡＰ１２処理細胞から単離した。結果を、トランスフェクト細胞当たりのＨＢＶ  ＤＮＡコピーの数として表示する。ｃ）野生型ＨＢＶゲノムをトランスフェクトした未処理およびＨＡＰ１２処理ＨｅｐＧ２細胞におけるｃｃｃＤＮＡ蓄積。ｃｃｃＤＮＡを増幅するための選択的ｃｃｃＤＮＡプライマーおよびＤＮＡサンプルを正規化するためのβ−グロビンプライマーを使用して、ｑＰＣＲ分析を実施した。結果を、トランスフェクト細胞当たりのｃｃｃＤＮＡコピーの数として表示する。ｄ）野生型ＨＢＶゲノムをトランスフェクトした未処理およびＩＦＮα処理ＨｅｐＧ２細胞からｍＲＮＡを調製し、トランスフェクション後の指定された時間で回収した。特異的プライマーを利用して、ＨＢＶプレゲノムＲＮＡを定量し、ＧＡＰＤＨ増幅を使用して、各ＲＮＡサンプルの均等なローディングのために正規化した。すべてのヒストグラムは、２回の独立した実験からの平均値を示し；バーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図３】ＨＡＰ１２がｃｃｃＤＮＡ転写を標的とすることを示す図である（２）。ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３安定細胞株において、ｐｇＲＮＡ転写（ｄ）およびＨＢＶ複製（ｂ）に対するＨＡＰ１２の阻害作用を確認した。ａ）ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３  ＨＢＶ安定クローンは、馴化培地中、高コンフルエンスで培養したときにｃｃｃＤＮＡを蓄積する。ＨＢＶ複製が高くｃｃｃＤＮＡプールが拡大された「分化」の１０日目に、ＨＡＰ１２処理を開始する。ｐｇＲＮＡは、ｃｃｃＤＮＡおよび組み込みＨＢＶの両方から転写される。ｂ）細胞質ＨＢＶコア粒子、核のｃｃｃＤＮＡ（ｃ）、および全ｍＲＮＡ（ｄ）を、指定された時点において、未処理およびＨＡＰ１２処理細胞から単離した。ＨＢＶ−ＤＮＡ、ｃｃｃＤＮＡ、およびｐｇＲＮＡの結果を、図２の場合と同様に表示する。ヒストグラムは、２回の独立した実験からの平均値を示し；バーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図４】ＨＡＰ１２がｃｃｃＤＮＡの形成／蓄積を防止しないことを示す図である。ｃｃｃＤＮＡプールの確立の前にＨｅｐＧ２  Ｈ１．３細胞をＨＡＰ１２で処理することによって、ｃｃｃＤＮＡの形成および蓄積がＨＡＰ１２によって標的とされないことが示された。これらの条件下では、ＨＢＶ複製に対する作用が最大である。ａ）ＨＢＶ複製およびｃｃｃＤＮＡレベルが非常に低い「分化」の０日目に、ＨＡＰ１２処理を開始する。ｂ）細胞質ＨＢＶコア粒子、核のｃｃｃＤＮＡ（ｃ）、および全ｍＲＮＡ（ｄ）を、指定された時点において、未処理およびＨＡＰ１２処理細胞から単離した。ＨＢＶ−ＤＮＡ、ｃｃｃＤＮＡ、およびｐｇＲＮＡの結果を、図２の場合と同様に表示する。ヒストグラムは、２回の独立した実験からの平均値を示し；バーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図５】ＨＡＰ１２がＡＤ３８細胞におけるｃｃｃＤＮＡ転写を標的とすることを示す図である。ＨＢＶ複製（ｃ）およびｐｇＲＮＡ転写（ｄ）に対するＨＡＰ１２の阻害作用を、ＡＤ３８安定細胞株においてさらに確認した。ａ）テトラサイクリンを除去すると、ＡＤ３８細胞はｐｇＲＮＡを発現し、細胞質中にサブウイルス粒子を蓄積し、細胞上清中にＨＢＶビリオンを分泌する（ａ）。ｃｃｃＤＮＡプールは、「ｔｅｔ制御性」ＨＢＶ組み込みＤＮＡから最初に転写されたｐｇＲＮＡからＨＢＶ複製が開始された後、核に成熟コア粒子をリサイクルすることから構築される（ｂ）。０日目（左パネル）または６日目（右パネル）にＨＡＰ１２処理を開始する。ｃ）細胞質ＨＢＶコア粒子、および全ｍＲＮＡ（ｄ）を、指定された時点において、未処理およびＨＡＰ１２処理細胞から単離した。ＨＢＶ  ＤＮＡ、ｃｃｃＤＮＡ、およびｐｇＲＮＡの結果を、図２の場合と同様に表示する。すべてのヒストグラムは、２回の独立した実験からの平均値を示し；バーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図６】ＨＡＰ１２が、ｃｃｃＤＮＡへのＨＢｃの結合を妨げることを示す図である。ｃｃｃＤＮＡ  ＣｈＩＰアッセイを使用して（ａ）、ＨＢＶを複製するＨｅｐＧ２細胞（ｂ）およびＨｅｐＧ２  Ｈ１．３安定細胞株におけるｃｃｃＤＮＡ上にＨＢｃが動員されることが本明細書に記載されている。ＨＡＰ１２処理（１０日間）は、ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３細胞におけるｃｃｃＤＮＡ  ＨＢｃ占有を強力に阻害し、ｃｃｃＤＮＡ結合Ｈ３ヒストンのアセチル化を著しく低減した。この知見は、ＨＡＰ１２処理細胞におけるｃｃｃＤＮＡ転写およびｐｇＲＮＡ産生の観察された阻害と一致すると考えられる。ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３細胞の「分化」の１０日目に、ＨＡＰ１２処理を開始する（図３の説明文を参照されたい）。Ｔ０（処理前、「分化」の１０ｇｇ）およびＴ１０（１０日間のＨＡＰ１２への曝露、「分化」の開始から２０日）において、未処理およびＨＡＰ１２処理細胞から架橋クロマチンを調製し、妥当な対照ＩｇＧまたは抗ＡｃＨ４抗体または抗ＨＢｃ抗体（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、＃Ｈ１９０５−１５）で免疫沈降させた。ＣｈＩＰ後のクロマチンを、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ選択的プライマーを用いたｑＰＣＲによって分析した。結果を、インプットに対する％として表示する。ヒストグラムは、２回の独立した実験からの平均値を示し；バーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図７】いくつかの化合物を使用して、Ｈｕｈ−７細胞の一過性トランスフェクションを処理した（Ｈｕｈ−７は、高分化型の肝細胞由来細胞癌腫細胞株である）。細胞質ＲＮＡを回収し、ＲＴ−ｐｃｒによって定量した。処理／ダイナミックレンジ／ＥＤ５０：ＤＭＳＯ／１．６／なし；ＡＴ１３０／２５／０．５μＭ；ＨＡＰ１３／２０／５μＭ；ＨＡＰ１２／３６／０．５μＭ。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明のいくつかの例示的な実施形態を、下記に列挙する項によって説明する。
【００１１】
１．Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を有する患者を治療するための方法であって、患者のＨＢＶ感染細胞におけるＨＢＶ  ｐｇＲＮＡの蓄積を阻害することが可能な化合物の治療有効量を患者に投与するステップを含む方法。
【００１２】
２．治療有効量が、ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３細胞において、ＤＮＡ合成を抑制するのに必要な量よりも１０倍大きいインビトロ用量に相当する量以上であるか、またはｐｇＲＮＡ蓄積の細胞ベースアッセイにおいて１μＭに相当する量以上である、第１項に記載の方法。
【００１３】
３．化合物が、式
【００１４】
【化１】
2016502519.tif 000003
［式中、
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立して、アリールまたはヘテロアリールから選択され；
Ｒ１は、水素またはプロドラッグを形成する基であり；
Ａｋは、アルキレンであり；
Ａｋ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、１から４であり；
Ｚは、水素または
【００１５】
【化２】
2016502519.tif 000004
であり、式中、Ｘは、ＣＨＮ３、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＲ５、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、またはＮＲＮであり、ここで、Ｒ５は、ヒドロキシもしくはその誘導体またはアミノもしくはその誘導体であり、ＲＮは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルコキシル−Ｃ（Ｏ）、アルキニル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）からなる群から選択され、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
Ｒ４は、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
Ｙは、ＯまたはＨＮであり；
ＲＡは、ハロ、およびアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノおよびその誘導体、ならびにヒドロキシルおよびその誘導体からなる群から場合ごとに独立して選択される０から３個の置換基を表し、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
ＲＢは、ハロ、およびアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノおよびその誘導体、ならびにヒドロキシルおよびその誘導体からなる群から場合ごとに独立して選択される０から３個の置換基を表し、これらはそれぞれ置換されていてもよく；
Ｒ６は、水素およびＡｋ−Ｚ１からなる群から場合ごとに独立して選択され、ここで、Ａｋは、アルキレンであり、Ｚ１は、水素またはＮＲ２Ｒ３であり；ここで、Ｒ２およびＲ３は、水素、ならびにアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、およびヘテロシクロアルキルからなる群から場合ごとに独立して選択され、これらはそれぞれ置換されていてもよく、または
Ｒ２およびＲ３は、結合している窒素と一緒になって、
【００１６】
【化３】
2016502519.tif 000005
を形成し、式中、Ｘは、ＣＨＮ３、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮａ）−、Ｃ＝ＮＲ５、またはＮＲＮａであり；ここで、Ｒ５は、ヒドロキシもしくはその誘導体またはアミノもしくはその誘導体であり；ＲＮａは、水素、ならびにアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルコキシル−Ｃ（Ｏ）、アルキニル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）からなる群から選択され、これらはそれぞれ置換されていてもよい］を有する、第１または２項に記載の方法。
【００１７】
４．Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療に有用な化合物を特定するための方法であって、
ＨＢＶに感染した細胞を培養培地中で試験化合物と接触させるか、または可能性のある化合物を動物に投与することと；
１つまたは複数の時点において、細胞、培養培地、または動物の組織からサンプルを採取することと；
ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ濃度、メチル化されたｃｃｃＤＮＡの量、ｃｃｃＤＮＡのアセチル化状態、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ転写、細胞質におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、細胞核におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、未集合のカプシドタンパク質の濃度、およびＨＢＶ  Ｓ抗原濃度からなる群から選択される１つまたは複数の属性についてサンプルを分析することと；
属性の１つまたは複数の減少または増加に基づいて、化合物をＢ型肝炎の治療に有用であると特定することと
を含む方法。
【００１８】
５．分析するステップが、ＨＢＶカプシドの安定化またはカプシドの核形成を分析することを含む、第４項に記載の方法。
【００１９】
６．ＨＢＶ  ＲＮＡ濃度が、ｐｇＲＮＡ、亜属のサブゲノムＲＮＡ、またはスプライスＲＮＡから選択される、第４または５項に記載の方法。
【００２０】
７．分析するステップが、カプシドの安定性に対する化合物の作用、集合体の核形成に対する化合物の作用、カプシドに対する化合物の親和性、二量体に対する化合物の親和性、またはアロステリック作用を誘導する化合物の能力を決定することを含む、第４から６項のいずれか１つに記載の方法。
【００２１】
８．属性の１つまたは複数が減少または増加するまで可能性のある化合物の濃度を変化させることをさらに含む、第４から７項のいずれか１つに記載の方法。
【００２２】
９．候補化合物が、ヘテロアリールジヒドロピリミジン化合物である、第４から８項のいずれか１つに記載の方法。
【００２３】
１０．候補化合物が、第３項に記載の化合物である、第４から８項のいずれか１つに記載の方法。
【００２４】
１１．可能性のある化合物の濃度が、約１μＭ以上である、第８項に記載の方法。
【００２５】
１２．組織が、肝組織である、第４から１１項のいずれか１つに記載の方法。
【００２６】
１３．動物が、げっ歯類またはヒトである、第４から１２項のいずれか１つに記載の方法。
【００２７】
１４．細胞が、ヒト肝細胞由来の細胞株（たとえば、Ｈｕｈ７、ＡＤ３８、ＨｅｐＧ２、またはＨｅｐＧ２．２．１５）に由来する、第４から１３項のいずれか１つに記載の方法。
【００２８】
１５．ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写を減少させる方法であって、該細胞をヘテロアリールジヒドロピリミジン化合物と接触させることを含む方法。
【００２９】
１６．ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写を減少させる方法であって、該細胞を第３項に記載の化合物と接触させることを含む方法。
【００３０】
１７．ＲＡが、２−クロロ−４−フルオロを表す、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３１】
１８．Ａｒ１が、２−ピリジルである、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３２】
１９．ＲＢが、０個の置換基を表す、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３３】
２０．Ｙが、Ｏである、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３４】
２１．Ｒ４が、メチルである、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３５】
２２．Ａｋが、メチレンである、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３６】
２３．Ｚが、水素である、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３７】
２４．Ｚ−Ａｋが、ＣＨ３である、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００３８】
２５．Ｘが、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、またはＮＲＮである、第２２項に記載の方法。
【００３９】
２６．Ｘが、Ｃ＝Ｏである、第２５項に記載の方法。
【００４０】
２７．Ｒ６が、メチルである、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００４１】
２８．Ｒ６が、
【００４２】
【化４】
2016502519.tif 000006
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮａ）−、またはＮＲＮａであり、ここで、ＲＮａは、水素またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）であり、これらはそれぞれ置換されていてもよい）である、第３、４、１５、または１６項に記載の方法。
【００４３】
２９．Ｘが、Ｃ＝Ｏである、第２８項に記載の方法。
【００４４】
１０４．Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療に有用な化合物を特定するための方法であって、
ＨＢＶに感染した細胞を培養培地中で化合物と接触させるか、または可能性のある化合物を動物に投与することと；
１つまたは複数の時点において、細胞、培養培地、または動物の組織からサンプルを採取することと；
ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ濃度、メチル化されたｃｃｃＤＮＡの量、ｃｃｃＤＮＡのアセチル化状態、ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ転写、細胞質におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、細胞核におけるＨＢＶ  ＲＮＡ濃度、未集合のカプシドタンパク質の濃度、ＨＢＶカプシドの安定化、ＨＢＶカプシドの核形成、およびＨＢＶ  Ｓ抗原濃度からなる群から選択される１つまたは複数の属性についてサンプルを分析することと；
属性の１つまたは複数の減少または増加に基づいて、化合物をＢ型肝炎の治療に有用であると特定することと
を含む方法。
【００４５】
１０５．分析するステップが、ＨＢＶカプシドの安定化またはカプシドの核形成を分析することを含む、第１０４項に記載の方法。
【００４６】
１０６．ＨＢＶ  ＲＮＡ濃度が、ｐｇＲＮＡ、亜属のサブゲノムＲＮＡ、またはスプライスＲＮＡから選択される、第１０４または１０５項に記載の方法。
【００４７】
１０７．分析するステップが、カプシドの安定性に対する化合物の作用、集合体の核形成に対する化合物の作用、カプシドに対する化合物の親和性、Ｃｐ二量体に対する化合物の親和性、またはアロステリック作用を誘導する化合物の能力を決定することを含む、第１０４または１０５項に記載の方法。
【００４８】
１０８．属性の１つまたは複数が減少または増加するまで可能性のある化合物の濃度を変化させることをさらに含む、第１０４から１０７項のいずれか１つに記載の方法。
【００４９】
１０９．化合物が、ヘテロアリールジヒドロピリミジン化合物である、第１０４から１０８項のいずれか１つに記載の方法。
【００５０】
１１０．化合物が、第３項に記載の化合物である、第１０４から１０８項のいずれか１つに記載の方法。
【００５１】
１１１．化合物の濃度が、約０．１μＭから約１μＭ、または約１μＭから約１０μＭ、または約１０μＭから約５０μＭである、第１０８項に記載の方法。
【００５２】
１１２．組織が、肝組織である、第１０４から１１１項のいずれか１つに記載の方法。
【００５３】
１１３．動物が、げっ歯類またはヒトである、第１０４から１１２項のいずれか１つに記載の方法。
【００５４】
１１４．細胞が、ヒト肝細胞由来の細胞株（たとえば、Ｈｕｈ７、ＡＤ３８、ＨｅｐＧ２、またはＨｅｐＧ２．２．１５）に由来する、第１０４から１１３項のいずれか１つに記載の方法。
【００５５】
１１５．ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写を減少させる方法であって、該細胞をヘテロアリールジヒドロピリミジン化合物と接触させることを含む方法。
【００５６】
１１６．ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写を減少させる方法であって、該細胞を第３項に記載の化合物と接触させることを含む方法。
【００５７】
１１７．ＲＡが、２−クロロ−４−フルオロを表す、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００５８】
１１８．Ａｒ１が、２−ピリジルである、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００５９】
１１９．ＲＢが、０個の置換基を表す、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６０】
１２０．Ｙが、Ｏである、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６１】
１２１．Ｒ４が、メチルである、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６２】
１２２．Ａｋが、メチレンである、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６３】
１２３．Ｚが、水素である、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６４】
１２４．Ｚ−Ａｋが、ＣＨ３である、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６５】
１２５．Ｘが、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、またはＮＲＮである、第１２２項に記載の方法。
【００６６】
１２６．Ｘが、Ｃ＝Ｏである、第１２５項に記載の方法。
【００６７】
１２７．Ｒ６が、メチルである、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００６８】
１２８．Ｒ６が、
【００６９】
【化５】
2016502519.tif 000007
（式中、Ｘは、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮａ）−、またはＮＲＮａであり、ここで、ＲＮａは、水素またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキル−Ｃ（Ｏ）、ヘテロアルキル−Ｃ（Ｏ）、アルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）、およびヘテロアルキルアシルアミノ−Ｃ（Ｏ）であり、これらはそれぞれ置換されていてもよい）である、第３、１１０、または１１６項に記載の方法。
【００７０】
１２９．Ｘが、Ｃ＝Ｏである、第１２８項に記載の方法。
【００７１】
１３０．ｐｇＲＮＡ転写が、約１．５分の１から約２．５分の１に減少する、先行する項のいずれか１つに記載の方法。
【００７２】
１３１．カプシド会合ＨＢＶ  ＤＮＡが、約２分の１から約５０分の１に減少する、先行する項のいずれか１つに記載の方法。
【００７３】
１３２．ｃｃｃＤＮＡが、約２５％から約５０％減少する、先行する項のいずれか１つに記載の方法。
【００７４】
１３３．化合物が、ＨＡＰ１、ＨＡＰ１２、またはＨＡＰ１３ではない、先行する項のいずれか１つに記載の方法。
【００７５】
加えて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ、Ａｋ、Ａｋ１、ＲＡ、ＲＢおよびＺのそれぞれの様々な属および亜属が、本明細書に記載されている。本明細書に記載されたＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ、Ａｋ、Ａｋ１、ＲＡ、ＲＢおよびＺのそれぞれの様々な属および亜属のあらゆる考えられる組合せは、本明細書に記載された発明の化合物のさらなる例示的な実施形態となることが理解されるものとする。化合物のそれらのさらなる例示的な実施形態はそれぞれ、本明細書に記載された組成物、方法、および／または使用のいずれかにおいて使用され得ることがさらに理解されるものとする。
【００７６】
別の実施形態では、本明細書に記載された１つまたは複数の化合物を含有する医薬組成物もまた記載されている。一態様では、組成物は、Ｂ型肝炎を有する患者を治療するための１つまたは複数の化合物の治療有効量を含む。組成物は、他の治療的に活性な化合物、および／または１つもしくは複数の担体、希釈剤、賦形剤などを包含するがこれらに限定されない、他の構成要素および／または成分を含み得ることが理解されるものとする。別の実施形態では、Ｂ型肝炎を有する患者を治療するために化合物および医薬組成物を使用するための方法もまた本明細書に記載されている。一態様では、方法は、本明細書に記載された１つまたは複数の化合物および／または組成物を、Ｂ型肝炎を有する患者に投与するステップを含む。別の態様では、方法は、Ｂ型肝炎を有する患者を治療するための本明細書に記載された１つまたは複数の化合物および／または組成物の治療有効量を投与することを含む。別の実施形態では、Ｂ型肝炎を有する患者を治療するための医薬の製造における化合物および組成物の使用もまた本明細書に記載されている。一態様では、医薬は、Ｂ型肝炎を有する患者を治療するための１つまたは複数の化合物および／または組成物の治療有効量を含む。
【００７７】
本明細書に記載された化合物は、単独で、または同一のもしくは異なる作用機序によって治療上有効であり得る化合物を包含する、本明細書に記載された方法におけるＢ型肝炎の治療に有用な他の化合物と組み合わせて使用され得ることが本明細書では認識される。加えて、本明細書に記載された化合物は、Ｂ型肝炎の他の症状を治療するために投与される他の化合物と組み合わせて使用され得ることが本明細書では認識される。
【００７８】
上記および下記の実施形態のそれぞれでは、式は、化合物のあらゆる薬学的に許容される塩を包含し表すだけでなく、化合物式のあらゆる水和物および／または溶媒和物をも包含することが理解されるものとする。特定の官能基、たとえば、ヒドロキシ、アミノ、および同様の基は、化合物の様々な物理的形態で、水および／または様々な溶媒と複合体および／または配位化合物を形成することが認識される。したがって、上記の式は、それらの様々な水和物および／または溶媒和物を包含し表すと理解すべきである。また、上記および下記の実施形態のそれぞれでは、式は、それぞれの考えられる異性体、たとえば、立体異性体および幾何異性体を、個々におよび考えられるあらゆる混合物としての両方で包含し表すことが理解されるものとする。また、上記および下記の実施形態のそれぞれでは、式は、化合物のあらゆる結晶性形態、部分結晶性形態、ならびに非結晶性および／またはアモルファス形態を包含し表すことが理解されるものとする。
【００７９】
別の実施形態では、本明細書に記載された方法のいずれかにおける下記の例示的な化合物の使用が記載される。
【００８０】
【化６】
2016502519.tif 000008
2016502519.tif 000009
2016502519.tif 000010
2016502519.tif 000011
2016502519.tif 000012
2016502519.tif 000013
2016502519.tif 000014
【００８１】
例示的な誘導体は、本明細書に記載された化合物から合成的に調製され得る化合物、ならびに本明細書に記載されたものと同様の様式で調製され得るが、出発物質の選択が異なる化合物の両方を包含するがこれらに限定されない。加えて、それらの化合物の誘導体はまた、芳香環上の異なる位置にそれらの同一のまたは異なる官能基を有する化合物を包含することが理解されるものとする。同様に、誘導体は、たとえばＲＡ、ＲＢなどの本明細書に記載された化合物における他の官能基の類似の変形物も包含する。
【００８２】
そのような誘導体は、本明細書に記載された他の化合物の調製において使用される化合物を包含する、本明細書に記載された化合物のプロドラッグ、１つまたは複数の保護または保護基を含む本明細書に記載された化合物を包含し得ることが理解されるものとする。
【００８３】
上記の実施形態はそれぞれ、化学的に妥当な様式で組み合わせて、本明細書に記載された実施形態の部分集合を作成してもよいことが理解されるものとする。したがって、あらゆるそのような部分集合もまた、本明細書に記載された発明の例示的な実施形態であることがさらに理解されるものとする。
【００８４】
本明細書に記載された化合物は、１つまたは複数のキラル中心を含有してもよく、またはその他の形で複数の立体異性体として存在することが可能な場合もある。一実施形態では、本明細書に記載された発明は、いかなる特定の立体化学的必要条件にも限定されず、化合物、ならびにそれらを含む組成物、方法、使用および医薬は、光学的に純粋であってもよく、またはラセミおよび他のエナンチオマー混合物、他のジアステレオマー混合物などを包含する、多様な立体異性体混合物のいずれかであってもよいことが理解されるものとする。また、立体異性体のそのような混合物は、１つまたは複数のキラル中心で単一の立体化学的配置を含んでいてもよいし、一方で１つまたは複数の他のキラル中心で混成の立体化学的配置を含んでいてもよいことが理解されるものとする。
【００８５】
同様に、本明細書に記載された化合物は、ｃｉｓ、ｔｒａｎｓ、Ｅ、およびＺ二重結合などの幾何中心を含み得る。別の実施形態では、本明細書に記載された発明は、いかなる特定の幾何異性体の必要条件にも限定されず、化合物、ならびにそれらを含む組成物、方法、使用および医薬は、純粋であってもよく、または多様な幾何異性体混合物のいずれかであってもよいことが理解されるものとする。また、幾何異性体のそのような混合物は、１つまたは複数の二重結合で単一の配置を含んでいてもよいし、一方で１つまたは複数の他の二重結合で混成の幾何配置を含んでいてもよいことが理解されるものとする。
【００８６】
本明細書で使用する場合、用語「アルキル」は、分岐鎖状であってもよい炭素原子の鎖を包含する。本明細書で使用する場合、用語「アルケニル」および「アルキニル」は、分岐鎖状であってもよく、それぞれ少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む炭素原子の鎖を包含する。アルキニルは、１つまたは複数の二重結合を含んでいてもよいことが理解されるものとする。特定の実施形態では、上記はそれぞれ、一価（すなわち、１つの結合点を介して式の残部に結合している）であってもよく、または多価（すなわち、２つ以上の結合点を介して式の残部に結合している）であってもよいことが理解されるものとする。特定の実施形態では、アルキルは、有利には、Ｃ１〜Ｃ２４、Ｃ１〜Ｃ１２、Ｃ１〜Ｃ８、Ｃ１〜Ｃ６、およびＣ１〜Ｃ４を包含する限定された長さであることがさらに理解されるものとする。特定の実施形態では、アルケニルおよび／またはアルキニルはそれぞれ、有利には、Ｃ２〜Ｃ２４、Ｃ２〜Ｃ１２、Ｃ２〜Ｃ８、Ｃ２〜Ｃ６、およびＣ２〜Ｃ４を包含する限定された長さであってもよいことがさらに理解されるものとする。より短いアルキル、アルケニル、および／またはアルキニル基は、より少ない親油性を化合物に付加することができ、したがって、異なる薬物動態挙動を有することが本明細書では認識される。例示的なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどであるがこれらに限定されない。
【００８７】
本明細書で使用する場合、用語「アルキレン」は、分岐鎖状であってもよい炭素原子の二価鎖を包含する。本明細書で使用する場合、用語「アルケニレン」および「アルキニレン」は、分岐鎖状であってもよく、それぞれ少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む炭素原子の二価鎖を包含する。アルキニレンは、１つまたは複数の二重結合を含んでいてもよいことが理解されるものとする。特定の実施形態では、アルキレンは、有利には、Ｃ１〜Ｃ２４、Ｃ１〜Ｃ１２、Ｃ１〜Ｃ８、Ｃ１〜Ｃ６、およびＣ１〜Ｃ４を包含する限定された長さであることがさらに理解されるものとする。例示的には、Ｃ１〜Ｃ８、Ｃ１〜Ｃ６、およびＣ１〜Ｃ４を包含するそのような特に限定された長さのアルキレン基は、低級アルキレンと称されることがある。特定の実施形態では、アルケニレンおよび／またはアルキニレンはそれぞれ、有利には、Ｃ２〜Ｃ２４、Ｃ２〜Ｃ１２、Ｃ２〜Ｃ８、Ｃ２〜Ｃ６、およびＣ２〜Ｃ４を包含する限定された長さであってもよいことがさらに理解されるものとする。例示的には、Ｃ２〜Ｃ８、Ｃ２〜Ｃ６、およびＣ２〜Ｃ４を包含するそのような特に限定された長さのアルケニレンおよび／またはアルキニレン基は、低級アルケニレンおよび／またはアルキニレンと称されることがある。より短いアルキレン、アルケニレン、および／またはアルキニレン基は、より少ない親油性を化合物に付加することができ、したがって、異なる薬物動態挙動を有することが本明細書では認識される。本明細書に記載された発明の実施形態では、場合ごとに、アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレンとの記述は、本明細書に定義されたアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン、ならびに場合により、低級アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレンを指すことが理解されるものとする。例示的なアルキル基は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレン、イソブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ペンチレン、１，２−ペンチレン、１，３−ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレンなどであるがこれらに限定されない。
【００８８】
本明細書で使用する場合、用語「シクロアルキル」は、分岐鎖状であってもよい炭素原子の鎖であって、鎖の少なくとも一部分が環状である鎖を包含する。シクロアルキルアルキルは、シクロアルキルの部分集合であることが理解されるものとする。シクロアルキルは、多環式であってもよいことが理解されるものとする。例示的なシクロアルキルは、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、２−メチルシクロプロピル、シクロペンチルエタ−２−イル、アダマンチルなどを包含するがこれらに限定されない。本明細書で使用する場合、用語「シクロアルケニル」は、分岐鎖状であってもよく、少なくとも１つの二重結合を含む炭素原子の鎖であって、鎖の少なくとも一部分が環状である鎖を包含する。１つまたは複数の二重結合は、シクロアルケニルの環状部分および／またはシクロアルケニルの非環状部分にあってもよいことが理解されるものとする。シクロアルケニルアルキルおよびシクロアルキルアルケニルは、それぞれシクロアルケニルの部分集合であることが理解されるものとする。シクロアルキルは、多環式であってもよいことが理解されるものとする。特定の実施形態では、上記はそれぞれ、一価（すなわち、１つの結合点を介して式の残部に結合している）であってもよく、または多価（すなわち、２つ以上の結合点を介して式の残部に結合している）であってもよいことが理解されるものとする。例示的なシクロアルケニルは、シクロペンテニル、シクロヘキシルエテン−２−イル、シクロヘプテニルプロペニルなどを包含するがこれらに限定されない。シクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルを形成する鎖は、有利には、Ｃ３〜Ｃ２４、Ｃ３〜Ｃ１２、Ｃ３〜Ｃ８、Ｃ３〜Ｃ６、およびＣ５〜Ｃ６を包含する限定された長さであることがさらに理解されるものとする。それぞれシクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルを形成するより短いアルキルおよび／またはアルケニル鎖は、より少ない親油性を化合物に付加することができ、したがって、異なる薬物動態挙動を有することが本明細書では認識される。
【００８９】
本明細書で使用する場合、用語「ヘテロアルキル」は、炭素および少なくとも１個のヘテロ原子の両方を含み、分岐鎖状であってもよい原子の鎖を包含する。例示的なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄を包含する。特定の変形例では、例示的なヘテロ原子はまた、リンおよびセレンを包含する。本明細書で使用する場合、ヘテロシクリルおよび複素環を包含する用語「シクロヘテロアルキル」は、ヘテロアルキルなど、炭素および少なくとも１個のヘテロ原子の両方を含み、分岐鎖状であってもよい原子の鎖であって、鎖の少なくとも一部分が環状である鎖を包含する。例示的なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄を包含する。特定の実施形態では、上記はそれぞれ、一価（すなわち、１つの結合点を介して式の残部に結合している）であってもよく、または多価（すなわち、２つ以上の結合点を介して式の残部に結合している）であってもよいことが理解されるものとする。特定の変形例では、例示的なヘテロ原子はまた、リンおよびセレンを包含する。例示的なシクロヘテロアルキルは、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、キヌクリジニルなどを包含するがこれらに限定されない。
【００９０】
本明細書で使用する場合、用語「アリール」は、単環式および多環式の芳香族炭素環式基を包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。本明細書に記載された例示的な芳香族炭素環式基は、フェニル、ナフチルなどを包含するがこれらに限定されない。本明細書で使用する場合、用語「ヘテロアリール」は、芳香族複素環式基を包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。例示的な芳香族複素環式基は、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、テトラジニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイソチアゾリルなどを包含するがこれらに限定されない。
【００９１】
本明細書で使用する場合、用語「アミノ」は、基ＮＨ２、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノを包含し、ここで、ジアルキルアミノの２つのアルキル基は、同一であっても異なっていてもよく、すなわち、アルキルアルキルアミノであってもよい。例示的には、アミノは、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノなどを包含する。加えて、アミノアルキルまたはアシルアミノなど、アミノが別の用語を修飾しているまたは別の用語によって修飾されているとき、用語アミノの上記の変形物が、その中に包含されることが理解されるものとする。例示的には、アミノアルキルは、Ｈ２Ｎ−アルキル、メチルアミノアルキル、エチルアミノアルキル、ジメチルアミノアルキル、メチルエチルアミノアルキルなどを包含する。例示的には、アシルアミノは、アシルメチルアミノ、アシルエチルアミノなどを包含する。
【００９２】
本明細書で使用する場合、用語「アミノおよびその誘導体」は、本明細書に記載されたアミノ、およびアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、ヘテロアルケニルアミノ、ヘテロアルキニルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルケニルアミノ、シクロヘテロアルキルアミノ、シクロヘテロアルケニルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールアルケニルアミノ、アリールアルキニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルケニルアミノ、ヘテロアリールアルキニルアミノ、アシルアミノなどを包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。用語「アミノ誘導体」はまた、尿素、カルバメートなども包含する。
【００９３】
本明細書で使用する場合、用語「ヒドロキシおよびその誘導体」は、ＯＨ、およびアルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、ヘテロアルケニルオキシ、ヘテロアルキニルオキシ、シクロアルキルオキシ、シクロアルケニルオキシ、シクロヘテロアルキルオキシ、シクロヘテロアルケニルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アリールアルケニルオキシ、アリールアルキニルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルケニルオキシ、ヘテロアリールアルキニルオキシ、アシルオキシなどを包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。用語「ヒドロキシ誘導体」はまた、カルバメートなども包含する。
【００９４】
本明細書で使用する場合、用語「チオおよびその誘導体」は、ＳＨ、およびアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、ヘテロアルキルチオ、ヘテロアルケニルチオ、ヘテロアルキニルチオ、シクロアルキルチオ、シクロアルケニルチオ、シクロヘテロアルキルチオ、シクロヘテロアルケニルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ、アリールアルケニルチオ、アリールアルキニルチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールアルキルチオ、ヘテロアリールアルケニルチオ、ヘテロアリールアルキニルチオ、アシルチオなどを包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。用語「チオ誘導体」はまた、チオカルバメートなども包含する。
【００９５】
本明細書で使用する場合、用語「アシル」は、ホルミル、およびアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、ヘテロアルキルカルボニル、ヘテロアルケニルカルボニル、ヘテロアルキニルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルケニルカルボニル、シクロヘテロアルキルカルボニル、シクロヘテロアルケニルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールアルケニルカルボニル、アリールアルキニルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールアルキルカルボニル、ヘテロアリールアルケニルカルボニル、ヘテロアリールアルキニルカルボニル、アシルカルボニルなどを包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。
【００９６】
本明細書で使用する場合、用語「カルボニルおよびその誘導体」は、基Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（ＮＨ）およびその置換アミノ誘導体を包含する。
【００９７】
本明細書で使用する場合、用語「カルボキシレートおよびその誘導体」は、基ＣＯ２Ｈおよびその塩、ならびにそのエステルおよびアミド、ならびにＣＮを包含する。
【００９８】
本明細書で使用する場合、用語「スルフィニルまたはその誘導体」は、ＳＯ２Ｈおよびその塩、ならびにそのエステルおよびアミドを包含する。
【００９９】
本明細書で使用する場合、用語「スルホニルまたはその誘導体」は、ＳＯ３Ｈおよびその塩、ならびにそのエステルおよびアミドを包含する。
【０１００】
本明細書で使用する場合、用語「ホスフィニルまたはその誘導体」は、Ｐ（Ｒ）Ｏ２Ｈおよびその塩、ならびにそのエステルおよびアミドを包含し、ここで、Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、シクロヘテロアルキル、シクロヘテロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルであり、これらはそれぞれ置換されていてもよい。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、用語「ホスホニルまたはその誘導体」は、ＰＯ３Ｈ２およびその塩、ならびにそのエステルおよびアミドを包含する。
【０１０２】
本明細書で使用する場合、用語「ヒドロキシルアミノおよびその誘導体」は、ＮＨＯＨ、およびアルキルオキシルＮＨ、アルケニルオキシルＮＨ、アルキニルオキシルＮＨ、ヘテロアルキルオキシルＮＨ、ヘテロアルケニルオキシルＮＨ、ヘテロアルキニルオキシルＮＨ、シクロアルキルオキシルＮＨ、シクロアルケニルオキシルＮＨ、シクロヘテロアルキルオキシルＮＨ、シクロヘテロアルケニルオキシルＮＨ、アリールオキシルＮＨ、アリールアルキルオキシルＮＨ、アリールアルケニルオキシルＮＨ、アリールアルキニルオキシルＮＨ、ヘテロアリールオキシルＮＨ、ヘテロアリールアルキルオキシルＮＨ、ヘテロアリールアルケニルオキシルＮＨ、ヘテロアリールアルキニルオキシルＮＨ、アシルオキシなどを包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、用語「ヒドラジノおよびその誘導体」は、アルキルＮＨＮＨ、アルケニルＮＨＮＨ、アルキニルＮＨＮＨ、ヘテロアルキルＮＨＮＨ、ヘテロアルケニルＮＨＮＨ、ヘテロアルキニルＮＨＮＨ、シクロアルキルＮＨＮＨ、シクロアルケニルＮＨＮＨ、シクロヘテロアルキルＮＨＮＨ、シクロヘテロアルケニルＮＨＮＨ、アリールＮＨＮＨ、アリールアルキルＮＨＮＨ、アリールアルケニルＮＨＮＨ、アリールアルキニルＮＨＮＨ、ヘテロアリールＮＨＮＨ、ヘテロアリールアルキルＮＨＮＨ、ヘテロアリールアルケニルＮＨＮＨ、ヘテロアリールアルキニルＮＨＮＨ、アシルＮＨＮＨなどを包含し、これらはそれぞれ置換されていてもよい。
【０１０４】
本明細書で使用する用語「置換されていてもよい」は、置換されていてもよい基における、他の官能基による水素原子の置き換えを包含する。そのような他の官能基は、例示的には、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、チオール、アジド、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体などを包含するがこれらに限定されない。例示的には、アミノ、ヒドロキシル、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、および／またはスルホン酸はいずれも、置換されていてもよい。
【０１０５】
本明細書で使用する場合、用語「置換されていてもよいアリール」および「置換されていてもよいヘテロアリール」は、置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリールにおける、他の官能基による水素原子の置き換えを包含する。そのような他の官能基は、例示的には、アミノ、アジド、ヒドロキシ、ハロ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体などを包含するがこれらに限定されない。例示的には、アミノ、ヒドロキシ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、および／またはスルホン酸はいずれも、置換されていてもよい。
【０１０６】
例示的な置換基は、基−（ＣＨ２）ｑＺｘ（式中、ｑは、０〜６の整数であり、Ｚｘは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルカノイルオキシ、たとえば、Ｃ１〜Ｃ６アルカノイルオキシ、置換されていてもよいアロイルオキシ、アルキル、たとえば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アルコキシ、たとえば、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、シクロアルキル、たとえば、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、シクロアルコキシ、たとえば、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルコキシ、アルケニル、たとえば、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、アルキニル、たとえば、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、ハロアルキル、たとえば、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、ハロアルコキシ、たとえば、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ハロシクロアルキル、たとえば、Ｃ３〜Ｃ８ハロシクロアルキル、ハロシクロアルコキシ、たとえば、Ｃ３〜Ｃ８ハロシクロアルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ、アルキルカルボニルアミノ、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アルキルカルボニルアミノ、アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アルキルカルボニルアミノアルキル、シアノ、アジド、およびニトロから選択される；またはＺｘは、−ＣＯ２Ｒ４および−ＣＯＮＲ５Ｒ６から選択され、ここで、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、およびヘテロアリール−Ｃ１〜Ｃ６アルキルから各出現においてそれぞれ独立して選択される）を包含するがこれに限定されない。
【０１０７】
本明細書で使用する用語「プロドラッグ」は、一般的に、生体系に投与されたとき、１つもしくは複数の自発的化学反応、酵素触媒化学反応、および／もしくは代謝化学反応、またはそれらの組合せの結果として生物学的に活性な化合物を生じる任意の化合物を指す。インビボにおいて、プロドラッグは、典型的には、酵素（たとえば、エステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼなど）、単純な生物化学反応、または他のインビボプロセスによる作用を受けて、より薬理学的に活性な薬物を遊離または再生する。この活性化は、内在性宿主酵素の作用によって発生する場合もあるし、またはプロドラッグ投与の前、後もしくは間に宿主に投与された非内在性酵素の作用によって発生する場合もある。プロドラッグの使用のさらなる詳細は、米国特許第５，６２７，１６５号；およびPathalk et al., Enzymic protecting group techniques in organic synthesis, Stereosel. Biocatal. 775-797 (2000)に記載されている。プロドラッグは、有利には、標的化送達、安全性、安定性などの目標が達成されるとすぐに元の薬物に変換され、それに続き放出されたプロドラッグ形成基の残部が急速に取り除かれることが認識されている。
【０１０８】
プロドラッグは、たとえば−ＯＨ−、−ＳＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＲ２などの化合物上に存在する１つまたは複数の官能基に、インビボで最終的に切断される基を結合させることによって、本明細書に記載された化合物から調製してもよい。例示的なプロドラッグは、上記基がアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルであるカルボン酸エステル、ならびに結合した基がアシル基、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ホスフェート、またはスルフェートであるヒドロキシル、チオールおよびアミンのエステルを包含するがこれらに限定されない。活性エステルとも称される例示的なエステルは、１−インダニル、Ｎ−オキシスクシンイミド；アシルオキシアルキル基、たとえば、アセトキシメチル、ピバロイルオキシメチル、β−アセトキシエチル、β−ピバロイルオキシエチル、１−（シクロヘキシルカルボニルオキシ）プロパ−１−イル、（１−アミノエチル）カルボニルオキシメチルなど；アルコキシカルボニルオキシアルキル基、たとえば、エトキシカルボニルオキシメチル、α−エトキシカルボニルオキシエチル、β−エトキシカルボニルオキシエチルなど；ジ低級アルキルアミノアルキル基を包含するジアルキルアミノアルキル基、たとえば、ジメチルアミノメチル、ジメチルアミノエチル、ジエチルアミノメチル、ジエチルアミノエチルなど；２−（アルコキシカルボニル）−２−アルケニル基、たとえば、２−（イソブトキシカルボニル）ペンタ−２−エニル、２−（エトキシカルボニル）ブタ−２−エニルなど；およびラクトン基、たとえば、フタリジル、ジメトキシフタリジルなどを包含するがこれらに限定されない。
【０１０９】
さらなる例示的なプロドラッグは、本明細書に記載された化合物の溶解性および／または安定性を増加させるように機能する、アミドまたはリン基などの化学部分を含有する。アミノ基に対するさらなる例示的なプロドラッグは、（Ｃ３〜Ｃ２０）アルカノイル；ハロ−（Ｃ３〜Ｃ２０）アルカノイル；（Ｃ３〜Ｃ２０）アルケノイル；（Ｃ４〜Ｃ７）シクロアルカノイル；（Ｃ３〜Ｃ６）−シクロアルキル（Ｃ２〜Ｃ１６）アルカノイル；置換されていてもよいアロイル、たとえば、非置換アロイル、またはハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルおよび（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ（これらはそれぞれ、１種または複数の１から３個のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい）からなる群から選択される１から３個の置換基によって置換されているアロイル；置換されていてもよいアリール（Ｃ２〜Ｃ１６）アルカノイルおよび置換されていてもよいヘテロアリール（Ｃ２〜Ｃ１６）アルカノイル、たとえば、非置換の、またはハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルおよび（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ（これらはそれぞれ、１から３個のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい）からなる群から選択される１から３個の置換基によって置換されている、アリールもしくはヘテロアリール基；ならびにヘテロアリール部分にＯ、ＳおよびＮから選択される１から３個のヘテロ原子、およびアルカノイル部分に２から１０個の炭素原子を有する、置換されていてもよいヘテロアリールアルカノイル、たとえば、非置換の、またはハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、および（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ（これらはそれぞれ、１から３個のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい）からなる群から選択される１から３個の置換基によって置換されている、ヘテロアリール基を包含するがこれらに限定されない。例示された基は、網羅的ではなく典型的なものであり、従来のプロセスによって調製され得る。
【０１１０】
プロドラッグ自体は、有意な生物学的活性を保有しなくてもよいが、代わりに、インビボ投与後に、１つもしくは複数の自発的化学反応、酵素触媒化学反応、および／もしくは代謝化学反応、またはそれらの組合せを受けて、生物学的に活性であるか、または生物学的に活性な化合物の前駆体である本明細書に記載された化合物を生じることが理解される。しかしながら、一部の場合、プロドラッグは生物学的に活性であることが認識される。また、プロドラッグは、多くの場合、改善された経口バイオアベイラビリティ、薬力学的半減期などによって、薬物の有効性または安全性を改善するために役立ち得ることが認識される。プロドラッグはまた、望ましくない薬物特性を単に遮蔽するかまたは薬物送達を改善する基を含む、本明細書に記載された化合物の誘導体も指す。たとえば、本明細書に記載された１つまたは複数の化合物は、遮断または最小化することが有利であり、臨床薬物適用において薬理学的、薬学的、または薬物動態学的障壁となり得る望ましくない特性、たとえば、低い経口薬物吸収、部位特異性の欠如、化学的不安定性、毒性、および不十分な患者許容性（味の悪さ、臭気、注射部位の疼痛など）等を示し得る。プロドラッグ、または可逆的誘導体を使用する他の方策は、薬物の臨床適用の最適化において有用であり得ることが本明細書では認識される。
【０１１１】
本明細書に記載された実施形態は、あらゆる考えられる化学的に妥当な様式で組み合わせてもよいことが理解されるものとする。
【０１１２】
本明細書で使用する用語「治療有効量」は、治療される疾患または障害の症状の緩和を包含する、研究者、獣医師、医師、または他の臨床家が求めている組織系、動物またはヒトにおける生物学的または薬理的応答を誘発する活性化合物または医薬品の量を指す。一態様では、治療有効量は、任意の医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスク比で、疾患または疾患の症状を治療または緩和し得る量である。しかしながら、本明細書に記載された化合物および組成物の合計１日使用量は、担当医が正当な医学的判断の範囲内で決めることができることが理解されるものとする。任意の特定の患者に対する具体的な治療有効用量レベルは、治療される障害および障害の重症度；用いられる具体的な化合物の活性；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別、および食事：用いられる具体的な化合物の投与時間、投与経路、および排泄速度；治療の継続期間；用いられる具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；ならびに通常の研究者、獣医師、医師、または他の臨床家に周知の同様の要素を包含する多様な要素に依存する。
【０１１３】
また、治療有効量は、単独療法または組み合わせ療法のいずれに関する場合でも、本明細書に記載された１つまたは複数の化合物の投与中に発生し得る、毒性または他の望ましくない副作用を参照して選択されることが有利であることが認識される。さらに、本明細書に記載された併用療法は、そのような毒性または他の望ましくない副作用を示す化合物をより低い用量で投与することを可能にすることができ、この場合、それらのより低い用量は、毒性の閾値未満であるか、または治療濃度域内で、併用療法を行わない場合に投与される量よりも少ないことが認識される。
【０１１４】
本明細書で使用する場合、用語「組成物」は、一般的に、規定量の規定成分を含む任意の生成物、ならびに規定量の規定成分の組合せから直接的または間接的に生じる任意の生成物を指す。本明細書に記載された組成物は、本明細書に記載された単離化合物から、または本明細書に記載された化合物の塩、溶液、水和物、溶媒和物および他の形態から調製され得ることが理解されるものとする。また、組成物は、本明細書に記載された化合物の様々なアモルファス、非アモルファス、部分結晶性、結晶性、および／または他の形態学的形態から調製され得ることが理解されるものとする。また、組成物は、本明細書に記載された化合物の様々な水和物および／または溶媒和物から調製され得ることが理解されるものとする。したがって、本明細書に記載された化合物を記述（recite）しているそのような医薬組成物は、本明細書に記載された化合物の様々な形態学的形態および／または溶媒和物もしくは水和物形態のそれぞれまたは任意の組合せを含むと理解すべきである。例示的には、組成物は、１つまたは複数の担体、希釈剤、および／または賦形剤を含み得る。本明細書に記載された化合物、またはそれらを含有する組成物は、本明細書に記載された方法に適した任意の従来の剤形として治療有効量で製剤化され得る。本明細書に記載された化合物、またはそのような製剤を包含するそれらを含有する組成物は、本明細書に記載された方法のための多種多様な従来の経路によって、および多種多様な投薬形式で、公知の手順を利用して投与され得る（一般的に、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (21sted., 2005)を参照されたい）。
【０１１５】
本明細書で使用する場合、用語「治療」または「治療する」は、記載された化合物または組成物の任意の投与を意味し、（１）ＨＢＶ感染の病理または症候を経験しているまたは示している患者における疾患を阻害すること（すなわち、病理および／または症候のさらなる発生を阻止すること）、（２）ＨＢＶ感染の病理または症候を経験しているまたは示している患者における疾患を和らげること（すなわち、病理および／または症候を逆転させるまたは減らすこと）、ＨＢＶによる慢性感染を阻害すること、または（４）予防することを包含する。用語「制御する」は、ＨＢＶ感染を予防する、治療する、根絶する、和らげる、またはその他の形でその重症度を軽減することを包含する。
【０１１６】
本明細書で使用する用語「投与」は、経口（ｐｏ）、静脈内（ｉｖ）、筋肉内（ｉｍ）、皮下（ｓｃ）、経皮、吸入などを包含するがこれらに限定されない、本明細書に記載された化合物および組成物を患者に導入するあらゆる手段を包含する。本明細書に記載された化合物および組成物は、従来の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含有する単位剤形および／または製剤として投与され得る。
【０１１７】
例示的な経口投与経路は、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などを包含する。
【０１１８】
例示的な非経口投与経路は、静脈内、動脈内、腹腔内、硬膜外、尿道内、胸骨内、筋肉内および皮下、ならびに当技術分野で認められた他の任意の非経口投与経路を包含する。
【０１１９】
例示的な非経口投与手段は、有針（マイクロニードルなど）の注射器、無針注射器および注入技法、ならびに当技術分野で認められた他の任意の非経口投与手段を包含する。非経口製剤は、典型的には、賦形剤、たとえば、塩、炭水化物および緩衝剤（好ましくは、約３から約９の範囲のｐＨ）を含有し得る水溶液であるが、一部の用途の場合には、無菌の非水性溶液として、または好適なビヒクル、たとえば、無菌のパイロジェンフリー水と併せて使用する乾燥形態としてそれらはより好適に製剤化され得る。たとえば凍結乾燥による、無菌条件下での非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準的な製薬技法を使用して容易に達成され得る。化合物の非経口投与は、例示的には、生理食塩水の形態で、またはリポソームに組み込まれた化合物を用いて実施される。化合物自体では溶解するのに十分に可溶性ではない場合には、エタノールなどの可溶化剤を適用することができる。
【０１２０】
特許請求された組合せの各化合物の投薬量は、投与方法、治療すべき状態、状態の重症度、状態を治療すべきかまたは予防すべきか、ならびに治療すべき人の年齢、体重および健康状態を包含するいくつかの要素に依存する。加えて、特定の患者についての薬理ゲノミクス（治療薬の薬物動態、薬力学、または有効性のプロファイルに対する遺伝子型の作用）の情報も、使用される投薬量に影響を及ぼし得る。
【０１２１】
本明細書に記載された化合物のいずれか１つまたは混合物の有効量は、公知の技法の使用によって、および／または類似の状況下で得られた結果を観察することによって、担当診断医または担当医によって容易に決定され得ることが理解されるものとする。有効量または用量を決定する際には、ヒトを包含する哺乳動物の種、その大きさ、年齢、および全身の健康状態、関与する具体的な疾患または障害、疾患または障害の関与の度合いまたは重症度、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与方式、投与される調製物のバイオアベイラビリティ特性、選択される用量レジメン、併用薬の使用、ならびに他の関係する状況を包含するがこれらに限定されない多数の要素が、担当診断医または担当医によって考慮される。
【実施例】
【０１２２】
代表的なＨＡＰ化合物の合成
【０１２３】
【化７】
2016502519.tif 000015
【０１２４】
化合物Ａ。４−クロロアセト酢酸メチル（２．４３ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（３．３ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）のベンゼン（３０ｍＬ）溶液を、ディーン−スタークトラップを備えた丸底フラスコに入れた。酢酸（１１５μＬ、２．０ｍｍｏｌ）およびピペリジン（２００μＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、還流状態で共沸水を除去しながら１２時間加熱し、得られた混合物をエーテルで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、回転蒸発によって溶媒を除去した。生成物をカラムクロマトグラフィー（１：１０のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、Ａ（３．８ｇ、６６％）を黄色の油状物として得た。ＮＭＲデータは、この物質が異性体の２：１混合物から構成されることを示した。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋、ｍ／ｚ）２９１。
【０１２５】
化合物Ｂ。Ａ（３．８ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）のｉ−ＰｒＯＨ（３０ｍＬ）溶液に、２−アミジノピリジニウム塩化物（２ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（１２３ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を還流状態で１２時間加熱し、次いで冷却し、蒸発させ、０．５Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）／ＥｔＯＡｃの１：１混合物（６０ｍＬ）に溶解した。有機層を１Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた水層をエーテルで洗浄し、アンモニア溶液（３６重量％）で塩基性にし、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィー（１：５のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、Ｂ（２．６ｇ、５０％）を黄色の固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋、ｍ／ｚ）３９４。
【０１２６】
化合物Ｂ−１２０。Ｂ（３０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（６０μＬ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて１，４−ジアゼパン−５−オン（４５ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィー（１：３のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１２（収率８８％）を黄色の固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋、ｍ／ｚ）４７２。
【０１２７】
【化８】
2016502519.tif 000016
【０１２８】
代表的なプロペンアミド化合物の合成。図１に示した以前に報告された手順に従って、化合物ＡＴ−１３０およびＢ−２１を合成した。１００℃の無水酢酸中酢酸ナトリウムの存在下での適切なベンズアルデヒドと４−ニトロ馬尿酸（１）との縮合により、オキサゾロン中間体（２）が得られ、これをピペリジンで開環させ、その後臭素化した。代表的な手順および特徴付けデータは下記の通りである。（Ｚ）−４−（２−メトキシベンジリデン）−２−（４−ニトロフェニル）オキサゾール−５（４Ｈ）−オン（２ａ）。４−ニトロ馬尿酸（１、０．５ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、ｏ−アニスアルデヒド（０．２７６ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（０．１８３ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、および無水酢酸（０．６ｍＬ）を合わせ、混合物がちょうど沸騰し始めるまでホットプレート上で加熱した。次いでこれを油浴に移し、沸点直下で１時間加熱した。温エタノール（２ｍＬ）を添加し、混合物を均質になるまで撹拌し、次いで室温に冷却した。得られた固体を吸引濾過によって収集し、最少量の冷エタノールで、次いで沸騰水（およそ１ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥させて、２ａ（０．３４０ｇ、６８％）を得た。（Ｅ）−Ｎ−（１−ブロモ−１−（２−メトキシフェニル）−３−オキソ−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）−４−ニトロベンズアミド（ＡＴ−１３０）。０℃のオキサゾロン２ａ（０．５ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）のクロロホルム溶液に、ピペリジン（０．１２９ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１ｍＬ）溶液を滴下添加した。黄色の溶液を０℃で１時間撹拌した。固体の炭酸カルシウム（０．１５４ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロホルム（２ｍＬ）中の臭素（０．２４６ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。懸濁液を濾過してカルシウム塩を除去し、得られた溶液を蒸発乾固した。得られた橙色の油状物をエタノール／水（４：１）から再結晶させて、化合物ＡＴ−１３０（０．３１２ｇ、６７％）を無色の粉末として得た。1H NMR(CDCl3): δ 0.53-1.44 (m, 4H), 3.30-3.35 (m, 4H), 7.75 (br, 1H, NH), 6.91-7.37 (m, 4H), 7.86-8.44 (m, 4H).
（Ｅ）−Ｎ−（１−ブロモ−１−（２−フルオロフェニル）−３−オキソ−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）−４−ニトロベンズアミド（Ｂ−２１）。２フルオロベンズアルデヒドから出発して類似の手順によって調製した。最終化合物は、無色の粉末として７０％の収率で単離された。1H NMR (CDCl3): δ 0.53-1.44 (m, 4H), 3.30-3.35 (m, 4H), 7.75 (br, 1H, NH), 7.11-7.39 (m, 4H), 7.97-8.45 (m, 4H).
【０１２９】
方法
抗ウイルス活性
抗ウイルス活性は、誘導性ＨＢＶ発現系、ＡＤ３８細胞を使用して測定した（Ladner, S.K. et al., Antimicrob Agents Chemother 41, 1715-20 (1997)）。最初の実験は、１０μＭ  ＨＡＰの活性について試験した（２４時間におけるウイルス集合のパーセンテージ）。活性分子について、ＨＢＶ産生を５０％および９０％抑制する有効濃度を決定した；この値は、μＭ単位で報告される。化合物の毒性を、親細胞株、ＨｅｐＧ２において試験した。これは、細胞増殖を５０％抑制するのに必要とされる濃度であるＣＣ５０（単位：μＭ）として、および治療指数としても知られているＣＣ５０／ＥＣ５０の比として報告される。対照としておよび比較のため、ヌクレオシド類似体３ＴＣ（ラミブジン）についての結果もまた記載されている。
【０１３０】
カプシド会合ＨＢＶ−ＤＮＡ（ＴａｑＭａｎリアルタイムＰＣＲ）、ｃｃｃＤＮＡ（ＴａｑＭａｎリアルタイムＰＣＲ）（Werle-Lapostolle, Gastroenterology 2004）、およびｐｇＲＮＡのレベル（定量的リアルタイムＰＣＲ）（Belloni, PNAS 2009）に対するヘテロ−アリール−ジヒドロピリミジンＨＡＰ１２化合物の活性を、３つのインビトロＨＢＶ複製モデルにおいて評価した：
ａ）線状完全長遺伝子型Ａ  ＨＢＶ  ＤＮＡをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞（Gunther, J Virol 1995; Pollicino, Gastroenterology 2006）；
ｂ）「馴化」培地中、高コンフルエンスで培養したときにｃｃｃＤＮＡを蓄積する、ＨｅｐＧ２  Ｈ１．３遺伝子型Ｄ  ＨＢＶ安定クローン（Protzer, Gastroenterology 2007; Lucifora, J Hepatol 2011）；
ｃ）ＡＤ３８細胞は、安定なＨｅｐＧ２由来ＨＢＶ遺伝子型Ｄクローンであり、これは、テトラサイクリンを除去すると、ｐｇＲＮＡを発現し、
細胞質中にサブウイルス粒子を集合させ、核中にｃｃｃＤＮＡを蓄積し、細胞上清中にＨＢＶビリオンを分泌する（Ladner, J Virol 1997）。
【０１３１】
ＨＢｃの動員およびｃｃｃＤＮＡ結合ヒストンの修飾を、ｃｃｃＤＮＡ  ＣｈＩＰアッセイを使用して評価した（Pollicino, 2006）。
【０１３２】
ＣｐＡＭを使用して、ｈｕｈ７細胞の一過性トランスフェクションを処理した。細胞質ＲＮＡを回収し、ＲＴ−ｐｃｒによって定量した。トランスフェクション系は、ＬｅｎｔｚおよびＬｏｅｂによって記載されている（Lentz and Loeb (2010) J Virol Methods 169, 52-60）。薬物を含む新鮮な培地を、０．００１から１０マイクロモルの濃度で、４日間毎日培養細胞に添加した。０．００００１における２つの点はともに、薬物なしおよびＤＭＳＯなしの対照である。対照およびＤＭＳＯ処理細胞は、同様のＲＮＡ量を有していた。処理後のサンプルは、分泌されるＤＮＡ合成を抑制する同一の薬物の能力に対して５０％ＲＮＡを抑制するために、高濃度のＨＡＰ１２が必要であることを示した。比較のため、ＨＡＰ１２、ＨＡＰ１３、およびＡＴ１３０について、ＤＮＡ抑制のためのＥＣ５０はそれぞれ、１２ｎＭ、６．１μＭ、および２．４μＭであり、ＲＮＡ抑制のためのＥＣ５０は、０．５、５．０、および０．５μＭであった（図７を参照されたい）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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