(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、（Ｉ）本発明の化合物を製造するための方法、およびその治療的使用を提供する。本発明はさらに、薬理学的に活性な薬剤の組合せ物、および医薬組成物を提供する。【選択図】  なし
2016520118.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【化１】
2016520118.tif 000099
（式中、
Ａは、
【化２】
2016520118.tif 000100
から選択され、
Ｂは、
【化３】
2016520118.tif 000101
であり、
Ｃは、
【化４】
2016520118.tif 000102
であり、
Ｒ１は、１個または２個のフルオロで任意に置換されているメチルであり、
Ｒ２は、クロロおよびフルオロから選択され、
Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびシクロプロピルから選択され、Ｒ４は、−ＯＨもしくは−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルによって任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；−ＯＨによって置換されているハロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；または
【化５】
2016520118.tif 000103
から選択されるか、
あるいは
Ｒ３は、
【化６】
2016520118.tif 000104
であり、Ｒ４は、Ｈ；−ＯＨもしくは−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルによって任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；およびシクロプロピルから選択され、
Ｒ５は、Ｈであり、
Ｒ６は、メチル、メトキシ、−ＮＨ２、および−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、
Ｒ７は、メトキシであり、
＊は、分子の残部への結合点を示す）。
【請求項２】
Ｒ１が、メチルおよびジフルオロメチルから選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ａが、
【化７】
2016520118.tif 000105
から選択される、請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ｒ３が、メチル、エチル、およびシクロプロピルから選択される、請求項１から３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｒ４が、メチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である、請求項１から４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｒ３が、
【化８】
2016520118.tif 000106
であり、
Ｒ４が、Ｈである、請求項１から３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項７】
実施例１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例４：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例５：−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
実施例７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例８：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例９：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１０：６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１１：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１２：６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１３：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１５：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１８：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１９：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２０：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２２：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２５：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２７：ｔｅｒｔ−ブチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート；
実施例２８：５−（８−アミノ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；および
実施例２９：エチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート
から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【請求項８】
治療有効量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項９】
治療有効量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と、１つ以上の治療的に活性な薬剤とを含む、組合せ物。
【請求項１０】
対象においてＢＥＴタンパク質活性をモジュレートする方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項１１】
がんを処置する方法であって、対象に、治療有効量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
医薬としての使用のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１３】
がんの処置における使用のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１４】
がんの処置のための医薬の製造における、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピラゾロ−ピロリジン−４−オン誘導体、およびがんなどの状態または疾患を処置するためのＢＥＴ阻害剤としてのその使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＢＥＴタンパク質は、遺伝子ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、またはＢＲＤＴのいずれかによってコードされるタンパク質である。これらのタンパク質のそれぞれは、２個のＮ末端ブロモドメインを有する。ブロモドメインは、例えばヒストンテールに存在するアセチル化リシンと特異的に相互作用する少なくとも４２種の多様なタンパク質に見出される、保存された約１１０個のアミノ酸のセグメントから構成される（Filippakopoulos and Knapp, FEBS Letters, 586 (2012), 2692-2704）。ヒストンは、クロマチンの構成部分であり、リシンアセチル化を含むその共有結合修飾は、遺伝子転写を調節する。したがって、ブロモドメインは、リシンアセチル化の特異的なパターンで印された遺伝子にタンパク質を動員することによって転写を調節すると考えられる。
【０００３】
いくつかの公開された報告書は、ＢＥＴタンパク質ファミリーを、がん、代謝性疾患、および炎症を含む疾患と関連付けている。染色体転座によって引き起こされるＢＲＤ４またはＢＲＤ３とＮｕｃｌｅａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｔｅｓｔｉｓ（ＮＵＴ）遺伝子との発がん性融合は、ＮＵＴ正中部癌という名称の侵襲性がんの根底にある（French et al., J Clin Oncol, 22 (2004), 4135-9、French et al., J Clin Pathol, 63 (2008), 492-6）。ＢＲＤ３／４ブロモドメインは、これらの融合タンパク質において保存されており、ノックダウンまたは選択的ＢＥＴブロモドメイン阻害剤ＪＱ１のいずれかによるその阻害は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび動物腫瘍モデルの両方において、これらのがん細胞の死および／または分化をもたらす（Filippakopoulos et al., Nature, 468 (2010), 1067-73）。ＪＱ１および他のいくつかの選択的ＢＥＴ阻害剤は、ＢＥＴブロモドメインに結合し、それによってアセチル−リシン結合を妨げ、これは、ＢＥＴタンパク質がクロマチンと相互作用し、それによって転写を調節するのを妨げることが示されている。ＢＲＤ４はまた、ＲＮＡｉスクリーニングから、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）における標的として同定された（Zuber et al., Nature, 478 (2011), 524-8）。この知見は、ＢＥＴ阻害剤ＪＱ１およびＪＱ１と化学的に無関係であるＩ−ＢＥＴ１５１という名称の別の選択的ＢＥＴ阻害剤を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで立証された（Dawson et al., Nature, 478 (2011), 529-33）。これらおよび他の研究は、ＢＥＴ阻害剤が、急性白血病、多発性骨髄腫、および他の血液悪性腫瘍において広範な抗がん活性を有することを示した。いくつかのがんモデルにおいて、ＢＥＴ阻害による発がん性転写因子Ｍｙｃの急速な下方調節が観察されている（Delmore et al., Cell, 146 (2011), 904-17、Mertz et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 108 (2011), 16669-74）。より最近の研究は、ＢＥＴ阻害剤の治療可能性が、他のがん適応症、例えば、肺および脳のがんに及ぶことを示唆している。
【０００４】
化学構造およびＢＥＴブロモドメインに結合する様式の点でＪＱ１と密接に関係しているＩ−ＢＥＴ７６２という名称の別のＢＥＴ阻害剤は、マウスモデルにおいて、主要な炎症性遺伝子の発現をモジュレートし、それによってエンドトキシンショックおよび細菌誘導性敗血症を防御することが報告された（Nicodeme et al., Nature, 468 (2010), 1119-23）。この一連のデータは、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、脂質異常症、糖尿病、および他の心血管疾患に罹患している患者における臨床試験でのＢＥＴ阻害剤ＲＶＸ−２０８の臨床評価を裏付けるのに使用されている（McNeill, Curr Opin Investig Drugs, 3 (2010), 357-64およびwww.clinicaltrials.gov ）。ＲＶＸ−２０８およびＩ−ＢＥＴ７６２はいずれも、アポリポタンパク質Ａ−Ｉを上方調節することが示されており、これは、コレステロールの組織レベルの低減に決定的に関与する。最後に、ＢＥＴタンパク質は、いくつかのウイルスの繁殖および転写調節と関連付けられており、したがって、ＢＥＴ阻害剤は、抗ウイルス活性を有する可能性があると考えられる（Weidner-Glunde, Frontiers in Bioscience 15 (2010), 537-549）。
【０００５】
要約すると、ＢＥＴブロモドメインの阻害剤は、いくつかのヒト疾患における治療可能性を有する。
【０００６】
【化１】
2016520118.tif 000003
【発明の概要】
【０００７】
がんを処置するための新たな処置および療法が依然として必要とされている。本発明は、ＢＥＴ阻害剤としての化合物、薬学的に許容されるその塩、その医薬組成物、およびその組合せ物を提供する。本発明はさらに、がんを処置、予防、または改善する方法であって、それを必要としている対象に、有効量のＢＥＴ阻害剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０００８】
本発明の様々な実施形態が、本明細書に記載されている。特に興味深い本発明の化合物は、本明細書に記載された生物学的アッセイにおいて良好な効力を有する。別の態様では、これらは、好ましい安全性プロファイルを有するべきである。別の態様では、これらは、好ましい薬物動態特性を保有するべきである。
【０００９】
本発明の第１の態様である実施形態１によれば、式（Ｉ）の化合物またはその塩が提供される：
【００１０】
【化２】
2016520118.tif 000004
（式中、
Ａは、
【００１１】
【化３】
2016520118.tif 000005
から選択され、
Ｂは、
【００１２】
【化４】
2016520118.tif 000006
であり、
Ｃは、
【００１３】
【化５】
2016520118.tif 000007
であり、
Ｒ１は、１個または２個のフルオロで任意に置換されているメチルであり、
Ｒ２は、クロロおよびフルオロから選択され、
Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびシクロプロピルから選択され、Ｒ４は、−ＯＨもしくは−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルによって任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；−ＯＨによって置換されているハロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；または
【００１４】
【化６】
2016520118.tif 000008
から選択されるか、
あるいは
Ｒ３は、
【００１５】
【化７】
2016520118.tif 000009
であり、Ｒ４は、Ｈ；−ＯＨもしくは−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルによって任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；およびシクロプロピルから選択され、Ｒ５は、Ｈであり、
Ｒ６は、メチル、メトキシ、−ＮＨ２、および−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、
Ｒ７は、メトキシであり、＊は、分子の残部への結合点を示す）。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、治療有効量の式（Ｉ）の定義による化合物もしくはその塩またはその下位式と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、治療有効量の式（Ｉ）の定義による化合物もしくはその塩またはその下位式と、１つ以上の治療的に活性な薬剤とを含む、組合せ物、特に医薬組合せ物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の第１の態様のいくつかの実施形態（Ｅ）が下記に記載されており、ここで、便宜上、実施形態１は第１の態様と同一である。
【００１９】
別段の規定がない限り、「本発明の化合物」という用語は、式（Ｉ）およびその下位式の化合物、およびその塩、ならびにすべての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含む）、回転異性体、互変異性体、および同位体標識化合物（重水素置換を含む）、ならびに本質的に形成された部分を指す。
【００２０】
別段の規定がない限り、「本発明の化合物」という用語は、式（Ｉ）およびその下位式の化合物、およびその塩、ならびにすべての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含む）、回転異性体、互変異性体、および同位体標識化合物（重水素置換を含む）、ならびに本質的に形成された部分を指す。
【００２１】
本明細書で使用するとき、「Ｃ１〜４アルキル」という用語は、１から４個の炭素原子を有する完全飽和の分枝または非分枝の炭化水素部分を指す。Ｃ１〜４アルキルの代表的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
【００２２】
本発明の様々な実施形態が、本明細書に記載されている。各実施形態で規定された特徴を他の規定された特徴と組み合わせて、本発明のさらなる実施形態を提供できることは認識されよう。
【００２３】
したがって、本発明は、上記に実施形態１として記載された式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００２４】
実施形態１．１．式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【００２５】
【化８】
2016520118.tif 000010
（式中、
Ａは、
【００２６】
【化９】
2016520118.tif 000011
から選択され、
Ｂは、
【００２７】
【化１０】
2016520118.tif 000012
であり、
Ｃは、
【００２８】
【化１１】
2016520118.tif 000013
であり、
Ｒ１は、１個または２個のフルオロで任意に置換されているメチルであり、
Ｒ２は、クロロおよびフルオロから選択され、
Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびシクロプロピルから選択され、
Ｒ４は、−ＯＨまたは−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルによって任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、
Ｒ５は、Ｈであり、
Ｒ６は、メチルおよびメトキシから選択され、
＊は、分子の残部への結合点を示す）。
【００２９】
実施形態２．式（Ｉａ）で表される、実施形態１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【００３０】
【化１２】
2016520118.tif 000014
【００３１】
実施形態３．式（ＩＩ）または（ＩＩａ）で表される、実施形態１または２に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【００３２】
【化１３】
2016520118.tif 000015
【００３３】
実施形態４．Ｒ１が、メチルおよびジフルオロメチルから選択される、実施形態１から３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００３４】
実施形態５．Ａが、
【００３５】
【化１４】
2016520118.tif 000016
から選択される、実施形態１から４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００３６】
実施形態６．Ｒ２が、クロロである、実施形態１から５のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００３７】
実施形態７．Ｒ３が、メチル、エチル、およびシクロプロピルから選択される、実施形態１から６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００３８】
実施形態８．Ｒ３が、シクロプロピルである、実施形態１から７のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００３９】
実施形態９．Ｒ４が、メチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である、実施形態１から８のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００４０】
実施形態１０．Ｒ３が、
【００４１】
【化１５】
2016520118.tif 000017
であり、
Ｒ４が、Ｈである、実施形態１、２、３、４、または５に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００４２】
実施形態１１．本明細書に開示された２つの鏡像異性形態（Ｉａ）および（Ｉｂ）のラセミ体として存在する、実施形態１、１．１、または３から９のいずれか１つに記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００４３】
実施形態１２．
実施例１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例４：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
６実施例５：−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例８：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例９：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１０：６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１１：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１２：６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１３：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１５：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１８：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１９：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２０：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２２：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２５：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２７：ｔｅｒｔ−ブチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート；
実施例２８：５−（８−アミノ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；および
実施例２９：エチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート
から選択される、実施形態１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【００４４】
実施形態１３．
実施例２：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例４：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例１１：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；
実施例２４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン；および
実施例２８：５−（８−アミノ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
から選択される、実施形態１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩。
本開示は、式（Ｉｂ）に示す立体化学の化合物：
【００４５】
【化１６】
2016520118.tif 000018
を含む。
【００４６】
出発材料および手順の選択に応じて、化合物は、不斉炭素原子の数に応じて、可能な異性体のうちの１つの形態で、またはそれらの混合物として、例えば、純粋な光学異性体として、またはラセミ体およびジアステレオ異性体混合物などの異性体混合物として存在し得る。本発明は、ラセミ混合物、ジアステレオマー混合物、および光学的に純粋な形態を含む、すべてのそのような可能な異性体を含むことを意図している。光学活性な（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体は、キラルシントンまたはキラル試薬を使用して調製するか、または慣用の技術を使用して分割することができる。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、ＥまたはＺ配置であり得る。化合物が二置換シクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基は、ｃｉｓ−またはｔｒａｎｓ−配置を有し得る。すべての互変異性形態もまた、含まれることを意図している。
【００４７】
本明細書で使用するとき、「塩」という用語は、本発明の化合物の酸付加塩または塩基付加塩を指す。「塩」は、特に、「薬学的に許容される塩」を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、典型的には生物学的にまたは他の点で望ましくないものでない塩を指す。多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／もしくはカルボキシル基またはそれらと同様の基の存在によって、酸性および／または塩基性塩を形成することが可能である。
【００４８】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸により形成され得る。
【００４９】
塩が由来し得る無機酸には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。
【００５０】
塩が由来し得る有機酸には、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが含まれる。
【００５１】
別の態様では、本発明は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、硫酸水素塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロルテオフィロネート（chlortheophyllonate）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフェニル酢酸塩（trifenatate）、トリフルオロ酢酸塩、またはキシナホ酸塩形態の式Ｉの化合物を提供する。
【００５２】
また、本明細書に示す式はいずれも、非標識形態ならびに同位体標識形態の化合物を表すことを意図している。同位体標識化合物は、１個以上の原子が、選択された原子質量または質量数を有する原子で置き換えられていることを除いて、本明細書に示す式によって描かれた構造を有する。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉが含まれる。本発明は、本明細書で定義された様々な同位体標識化合物、例えば、３Ｈおよび１４Ｃなどの放射性同位体、または２Ｈおよび１３Ｃなどの非放射性同位体が存在するものを含む。そのような同位体標識化合物は、代謝研究（１４Ｃを用いる）、反応速度論研究（例えば、２Ｈまたは３Ｈを用いる）、薬物もしくは基質組織分布アッセイを含む、検出もしくは画像化技術、例えば、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）もしくは単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）において、または患者の放射線処置において有用である。特に、１８Ｆまたは標識化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ研究に特に望ましいものであり得る。同位体標識された式（Ｉ）の化合物は、一般的に、当業者に公知の慣用の技術によって、または付随する実施例および調製に記載されたものに類似のプロセスによって、以前に用いられた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して調製することができる。
【００５３】
さらに、重い同位体、特に重水素（すなわち、２ＨまたはＤ）による置換は、代謝安定性の増大により生じるある特定の治療上の利点、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長または必要投与量の低減または治療指数の向上をもたらし得る。この文脈における重水素は、式（Ｉ）の化合物の置換基と見なされることは理解される。そのような重い同位体、具体的には重水素の濃度は、同位体濃縮係数によって定義され得る。本明細書で使用する「同位体濃縮係数」という用語は、特定の同位体の同位体存在度と天然存在度との比を意味する。本発明の化合物中の置換基が重水素と表示されている場合、そのような化合物は、各指定された重水素原子について、少なくとも３５００（各指定された重水素原子において５２．５％の重水素組み込み）、少なくとも４０００（６０％の重水素組み込み）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素組み込み）、少なくとも５０００（７５％の重水素組み込み）、少なくとも５５００（８２．５％の重水素組み込み）、少なくとも６０００（９０％の重水素組み込み）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素組み込み）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素組み込み）、少なくとも６６００（９９％の重水素組み込み）、または少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素組み込み）の同位体濃縮係数を有する。
【００５４】
本発明による薬学的に許容される溶媒和物には、結晶化の溶媒が同位体置換され得るもの、例えば、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯが含まれる。
【００５５】
水素結合のドナーおよび／またはアクセプターとして作用することが可能な基を含有する、本発明の化合物、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、好適な共結晶形成剤と共結晶を形成することが可能であり得る。これらの共結晶は、公知の共結晶形成手順によって式（Ｉ）の化合物から調製され得る。そのような手順は、結晶化条件下で、式（Ｉ）の化合物と共結晶形成剤とを粉砕、加熱、共昇華、共溶融、または溶液中で接触させることと、それによって形成された共結晶を単離することとを含む。好適な共結晶形成剤には、ＷＯ２００４／０７８１６３に記載されたものが含まれる。そこで、本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物を含む共結晶を提供する。
【００５６】
本明細書で使用するとき、「薬学的に許容される担体」という用語には、当業者には公知であるように、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、着香剤、色素などおよびそれらの組合せが含まれる（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329参照）。いずれかの慣用の担体が活性成分と不適合である場合を除いて、治療用または医薬組成物におけるその使用が企図される。
【００５７】
本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的または医学的応答、例えば、酵素またはタンパク質活性の低減または阻害を誘発する、あるいは症状を改善する、状態を緩和する、疾患進行を遅らせるもしくは遅延させる、または疾患を予防するなどする、本発明の化合物の量を指す。非限定的な一実施形態では、「治療有効量」という用語は、対象に投与した場合に、（１）（ｉ）ＢＥＴタンパク質によって媒介される、または（ｉｉ）ＢＥＴタンパク質活性に関連する、または（ｉｉｉ）ＢＥＴタンパク質の活性（正常なもしくは異常な）を特徴とする、状態または障害もしくは疾患を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防、および／または改善するのに、あるいは（２）ＢＥＴタンパク質の活性を低減または阻害するのに、あるいは（３）ＢＥＴの発現を低減または阻害するのに有効である、本発明の化合物の量を指す。別の非限定的な実施形態では、「治療有効量」という用語は、細胞または組織または非細胞性生体材料または培地に投与した場合に、ＢＥＴタンパク質の活性を少なくとも部分的に低減または阻害するのに、あるいはＢＥＴタンパク質の発現を少なくとも部分的に低減または阻害するのに有効である、本発明の化合物の量を指す。
【００５８】
「ＢＥＴタンパク質」は、遺伝子ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、またはＢＲＤＴのいずれかによってコードされるタンパク質である。別段の指示がない限り、「ＢＥＴタンパク質」は、単数形および複数形で互換的に本明細書で使用され、いずれかの使用は限定的なものではない。別段の指示がない限り、「ＢＥＴタンパク質」には、そのようなコードされるタンパク質のすべてのまたは任意の組合せが含まれる。
【００５９】
本明細書で使用するとき、「対象」という用語は、動物を指す。典型的には、動物は、哺乳動物である。対象はまた、例えば、霊長類（例えば、ヒト、男性または女性）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類などを指す。ある特定の実施形態では、対象は、霊長類である。さらに他の実施形態では、対象は、ヒトである。
【００６０】
本明細書で使用するとき、「阻害する」、「阻害」、または「阻害すること」という用語は、所与の状態、症状もしくは障害もしくは疾患の低減もしくは抑制、または生物学的活性もしくは過程のベースライン活性の有意な低下を指す。
【００６１】
本明細書で使用するとき、任意の疾患または障害を「処置する」、「処置すること」、または「処置」という用語は、一実施形態では、疾患または障害を改善する（すなわち、疾患またはその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅らせるまたは阻止するまたは低減する）ことを指す。別の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、または「処置」は、患者が認識できない可能性があるものを含む少なくとも１つの物理的パラメーターを緩和または改善することを指す。さらに別の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、または「処置」は、疾患または障害を、身体的に（例えば、認識可能な症状の安定化）、生理的に（例えば、物理的パラメーターの安定化）、または両方のいずれかでモジュレートすることを指す。さらに別の実施形態では、「処置する」、「処置すること」、または「処置」は、疾患または障害の発症または発生または進行を予防するまたは遅延させることを指す。
【００６２】
本明細書で使用するとき、対象が処置によって生物学的に、医学的に、または生活の質において利益を得る場合、そのような対象はそのような処置「を必要としている」。
【００６３】
本明細書で使用するとき、本発明に関連して（とりわけ、特許請求の範囲に関連して）使用される「１つの（a）」、「１つの（an）」、「その（the）」という用語および同様の用語は、本明細書で別段の指示がない限り、または明らかに文脈と矛盾していない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるべきである。
【００６４】
本明細書に記載されたすべての方法は、本明細書で別段の指示がない限り、または他の点で明らかに文脈と矛盾していない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提示するあらゆる例または例示的な文言（例えば、「など」）の使用は、本発明をより明解にすることを意図したものにすぎず、別途特許請求された本発明の範囲に限定を課すものではない。
【００６５】
本発明の化合物の任意の不斉原子（例えば、炭素など）は、ラセミまたは鏡像異性的に濃縮された、例えば、（Ｒ）−、（Ｓ）−、または（Ｒ，Ｓ）−配置で存在し得る。ある特定の実施形態では、各不斉原子は、（Ｒ）−または（Ｓ）−配置のいずれかで、少なくとも５０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも６０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも７０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも８０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９５％の鏡像異性体過剰率、または少なくとも９９％の鏡像異性体過剰率を有する。不飽和二重結合を有する原子における置換基は、可能な場合、ｃｉｓ−（Ｚ）−またはｔｒａｎｓ−（Ｅ）−形態で存在してもよい。
【００６６】
したがって、本明細書で使用するとき、本発明の化合物は、可能な異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体、またはそれらの混合物のうちの１つの形態で、例えば、実質的に純粋な幾何（ｃｉｓまたはｔｒａｎｓ）異性体、ジアステレオマー、光学異性体（対掌体）、ラセミ体、またはそれらの混合物として存在し得る。
【００６７】
得られる異性体の混合物はいずれも、構成要素の物理化学的差異に基づいて、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶化によって、純粋なまたは実質的に純粋な幾何または光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体へと分離することができる。
【００６８】
得られる最終生成物または中間体のラセミ体はいずれも、公知の方法によって、例えば、光学活性な酸または塩基により得られたそのジアステレオマー塩を分離し、光学活性な酸性または塩基性化合物を遊離させることによって、光学対掌体へと分割することができる。したがって、特に、塩基性部分を用いて、例えば、光学活性な酸、例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、またはカンファー−１０−スルホン酸により形成された塩の分別結晶化によって、本発明の化合物をその光学対掌体へと分割してもよい。ラセミ生成物はまた、キラルクロマトグラフィー、例えば、キラル吸着剤を使用する高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分割することができる。
【００６９】
さらに、その塩を含む本発明の化合物は、その水和物の形態で得ることも、またはその結晶化に使用される他の溶媒を含むこともできる。本発明の化合物は、本質的にまたは設計により、薬学的に許容される溶媒（水を含む）と溶媒和物を形成することができ、したがって、本発明は溶媒和および非溶媒和形態の両方を包含することが意図される。「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物（薬学的に許容されるその塩を含む）と１つ以上の溶媒分子との分子複合体を指す。そのような溶媒分子は、受容者に無害であることが知られている、製薬技術分野で一般に使用されるもの、例えば、水、エタノールなどである。「水和物」という用語は、溶媒分子が水である複合体を指す。
【００７０】
その塩、水和物、および溶媒和物を含む本発明の化合物は、本質的にまたは設計により、多形を形成することができる。
【００７１】
組成物：
別の態様では、本発明は、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。さらなる実施形態では、組成物は、少なくとも２つの薬学的に許容される担体、例えば、本明細書に記載されたものを含む。本発明の目的において、別段の指定がない限り、溶媒和物および水和物は、一般的に、組成物と見なされる。好ましくは、薬学的に許容される担体は、滅菌されている。医薬組成物は、例えば、経口投与、非経口投与、および直腸投与などの特定の投与経路のために製剤化することができる。加えて、本発明の医薬組成物は、固体形態（カプセル剤、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、または坐剤が含まれるがこれらに限定されない）または液体形態（溶液、懸濁液、または乳濁液が含まれるがこれらに限定されない）で調合することができる。医薬組成物は、慣用の製薬工程、例えば、滅菌に供することができ、および／または慣用の不活性希釈剤、滑沢剤、または緩衝剤、ならびにアジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、および緩衝液などを含有することができる。
【００７２】
典型的には、医薬組成物は、活性成分を以下の１つ以上とともに含む、錠剤またはゼラチンカプセル剤である：
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、および／またはグリシン、
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩、および／またはポリエチレングリコール、錠剤についてはまた、
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン、所望の場合、
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物、ならびに
ｅ）吸収剤、着色剤、着香剤、および甘味剤。
【００７３】
錠剤は、当技術分野で公知の方法に従って、フィルムコーティングまたは腸溶コーティングされてもよい。
【００７４】
経口投与のための好適な組成物には、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、分散性散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤の形態の有効量の本発明の化合物が含まれる。経口使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造のための当技術分野で公知の任意の方法に従って調製され、そのような組成物は、薬学的に洗練された口当たりの良い調製物を提供するために、甘味剤、着香剤、着色剤、および保存剤からなる群から選択される１つ以上の薬剤を含有することができる。錠剤は、錠剤の製造に好適な非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混和された活性成分を含有し得る。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；造粒および崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、またはアカシア；ならびに滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクである。錠剤は、素錠であるか、または消化管における崩壊および吸収を遅延させ、それによってより長い期間にわたる持続的作用を実現するために公知の技術によってコーティングされる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を用いることができる。経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、もしくはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセル剤として、または活性成分が水もしくは油媒体、例えば、ラッカセイ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセル剤として提供することができる。
【００７５】
ある特定の注射用組成物は、水性等張性溶液または懸濁液であり、坐剤は、有利には、脂肪性乳濁液または懸濁液から調製される。前記組成物は、滅菌されていてもよく、および／またはアジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩、および／または緩衝液を含有してもよい。加えて、これらはまた、他の治療上価値のある物質を含有し得る。前記組成物は、それぞれ慣用の混合、造粒、またはコーティング方法に従って調製され、活性成分を約０．１〜７５％含有するまたは約１〜５０％含有する。
【００７６】
経皮適用のための好適な組成物には、好適な担体を伴う有効量の本発明の化合物が含まれる。経皮送達に好適な担体には、宿主の皮膚の通過を助けるための吸収性の薬理学的に許容される溶媒が含まれる。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材と、化合物を任意に担体とともに含有するリザーバーと、任意に、制御された所定の速度で長期間にわたり化合物を宿主の皮膚に送達するための速度制御バリアと、デバイスを皮膚に固定するための手段とを含む包帯の形態である。
【００７７】
例えば皮膚および眼への局所適用のための好適な組成物には、水溶液、懸濁液、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、または例えばエアロゾルなどによって送達するための噴霧用製剤が含まれる。そのような局所送達系は、特に、皮膚適用に、例えば、皮膚がんの処置に、例えば、日焼け止めクリーム、ローション、スプレーなどにおける予防的使用に適切である。したがって、これらは、当技術分野で周知の、化粧用を含む局所製剤における使用に特に適している。それらは、可溶化剤、安定剤、張性増強剤、緩衝液、および保存剤を含有し得る。
【００７８】
本明細書で使用するとき、局所適用はまた、吸入または鼻腔内適用に関連し得る。それらは、乾燥粉末吸入器からの乾燥粉末の形態（単独で、混合物、例えばラクトースとの乾燥ブレンドとして、または例えばリン脂質との混合構成成分粒子としてのいずれか）で、または好適な噴射剤を使用してもしくは使用せずに、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー、もしくはネブライザーからのエアロゾルスプレー提供物の形態で、好都合に送達され得る。
【００７９】
遊離形態または薬学的に許容される塩形態の式Ｉの化合物は、例えば、次節に提示する試験において示されるように、価値のある薬理学的特性、例えば、ＢＥＴタンパク質モジュレート特性を示し、したがって、療法にまたは研究用化学物質、例えばツール化合物としての使用に適応される。
【００８０】
ＢＥＴ阻害剤としてのその活性を考慮すると、遊離または薬学的に許容される塩形態の式（Ｉ）の化合物は、ＢＥＴタンパク質の活性によって媒介される状態、例えば、がん、および／またはＢＥＴタンパク質の阻害に応答する（つまり、とりわけ治療上有益な形で）状態、中でもとりわけ後述の疾患もしくは障害の処置において有用である。
【００８１】
本発明の化合物は、がんなどの疾患または障害の処置において有用であると考えられる。特に、そのようながんには、良性または悪性腫瘍、軟部組織肉腫または肉腫、例えば、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、または骨がん、例えば、骨肉腫、癌腫、例えば、脳、腎臓、肝臓、副腎、膀胱、乳房、胃、卵巣、結腸、直腸、前立腺、膵臓、肺（小細胞肺がんを含む）、膣、または甲状腺のもの、神経膠芽細胞腫、髄膜腫、神経膠腫、中皮腫、神経内分泌腫瘍、例えば、神経芽細胞腫、多発性骨髄腫、消化管がん、とりわけ、結腸癌または結腸直腸腺腫、頭頸部腫瘍、黒色腫、前立腺過形成、新生物、上皮性新生物（neoplasia of epithelial character）、血液または骨髄を起源とする新生物、白血病、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）またはＢ細胞慢性リンパ性白血病、リンパ腫、例えば、Ｂ細胞またはＴ細胞起源のもの、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、ＮＵＴ正中部癌またはＢＥＴ遺伝子の染色体再配置を伴う他の任意の新生物、および他の器官における転移が含まれる。特に、本発明の化合物は、血液または骨髄を起源とする新生物；白血病、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）またはＢ細胞慢性リンパ性白血病；リンパ腫、例えば、Ｂ細胞またはＴ細胞起源のもの、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；ＮＵＴ正中部癌またはＢＥＴ遺伝子の染色体再配置を伴う他の任意の新生物、神経内分泌腫瘍、例えば、神経芽細胞腫；多発性骨髄腫；肺がん（小細胞肺がんを含む）；および結腸がんから選択されるがんにおいて有用であると考えられる。
【００８２】
本発明の化合物はまた、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、脂質異常症、糖尿病、および他の心血管疾患の処置において、ならびに／または抗ウイルス剤として役立ち得る。
【００８３】
したがって、さらなる実施形態として、本発明は、療法における式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用を提供する。さらなる実施形態では、療法は、ＢＥＴタンパク質の阻害によって処置され得る疾患から選択される。別の実施形態では、疾患は、上述の一覧から選択されるがん疾患である。
【００８４】
したがって、さらなる実施形態として、本発明は、療法における使用のための式（Ｉ）の化合物またはその塩を提供する。さらなる実施形態では、療法は、ＢＥＴタンパク質の阻害によって処置され得る疾患から選択される。別の実施形態では、疾患は、上述の一覧から選択されるがん疾患である。
【００８５】
別の実施形態では、本発明は、ＢＥＴタンパク質の阻害によって処置される疾患を処置する方法であって、治療上許容される量の式（Ｉ）の化合物またはその塩を投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、疾患は、上述の一覧から選択されるがん疾患である。
【００８６】
したがって、さらなる実施形態として、本発明は、医薬を製造するための式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用を提供する。さらなる実施形態では、医薬は、ＢＥＴタンパク質の阻害によって処置され得る疾患の処置のためのものである。別の実施形態では、疾患は、上述の一覧から選択されるがん疾患である。
【００８７】
本発明の医薬組成物または組合せ物は、約５０〜７０ｋｇの対象に対して約１〜１０００ｍｇの活性成分、または約１〜５００ｍｇもしくは約１〜２５０ｍｇもしくは約１〜１５０ｍｇもしくは約０．５〜１００ｍｇもしくは約１〜５０ｍｇの活性成分の単位投与量であり得る。化合物、医薬組成物、またはそれらの組合せ物の治療有効投与量は、対象の種、体重、年齢、および個々の状態、処置される障害もしくは疾患またはその重症度に応じて決まる。通常の医師、臨床医、または獣医は、障害または疾患の進行を予防、処置、または阻害するのに必要な活性成分のそれぞれの有効量を容易に決定することができる。
【００８８】
前述の投与量特性は、有利には哺乳動物、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、または単離した器官、組織、およびその調製物を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの試験で実証可能である。本発明の化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、溶液、例えば、水溶液の形態で、およびｉｎ  ｖｉｖｏで、経腸的に、非経口的にのいずれかで、有利には静脈内に、例えば、懸濁液または水溶液として適用することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの投与量は、約１０−３モルから１０−９モル濃度の範囲であり得る。ｉｎ  ｖｉｖｏでの治療有効量は、投与経路に応じて、約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇまたは約１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【００８９】
本発明の化合物は、１つ以上の他の治療剤と同時に、またはその前もしくは後に投与され得る。本発明の化合物は、同じまたは異なる投与経路によって別個に投与されてもよく、または他の薬剤と同じ医薬組成物として一緒に投与されてもよい。治療剤は、例えば、化合物、ペプチド、抗体、抗体断片、または核酸であり、これは、本発明の化合物と組み合わせて患者に投与した場合に、治療的に活性であるかまたは治療活性を高めるものである。
【００９０】
組合せ物
一実施形態では、本発明は、療法において同時に、別個に、または逐次的に使用するための組合せ調製物としての、式（Ｉ）の化合物と少なくとも１つの他の治療剤とを含む製品を提供する。一実施形態では、療法は、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態の処置である。組合せ調製物として提供される製品には、式（Ｉ）の化合物と他の治療剤とを同じ医薬組成物中に一緒に含む組成物、または別個の形態、例えば、キットの形態の式（Ｉ）の化合物および他の治療剤が含まれる。
【００９１】
一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物と、別の治療剤とを含む、医薬組成物を提供する。任意に、医薬組成物は、上記の薬学的に許容される担体を含んでもよい。
【００９２】
一実施形態では、本発明は、２つ以上の別個の医薬組成物を含むキットを提供し、その少なくとも１つは、式（Ｉ）の化合物を含有する。一実施形態では、キットは、前記組成物を別個に保持するための手段、例えば、容器、分割されたボトル、または分割されたホイルパックを含む。そのようなキットの例は、錠剤、カプセル剤などの包装に典型的に使用される、ブリスターパックである。
【００９３】
本発明のキットは、異なる剤形、例えば、経口および非経口剤形を投与するため、別個の組成物を異なる投与間隔で投与するため、または別個の組成物を互いに対して滴定するために使用され得る。コンプライアンスを支援するため、本発明のキットは、典型的には、投与指示書を含む。
【００９４】
本発明の併用療法において、本発明の化合物と他の治療剤とは、同じまたは異なる製造業者によって製造および／または製剤化され得る。さらに、本発明の化合物および他の治療薬は、（ｉ）医師への併用製品のリリースの前に（例えば、本発明の化合物と他の治療剤とを含むキットの場合）、（ｉｉ）医師自身によって（または医師の指導の下で）投与の直前に、（ｉｉｉ）患者自身で、例えば、本発明の化合物および他の治療剤の逐次投与の間に、一緒にして併用療法とすることができる。
【００９５】
したがって、本発明は、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供し、ここで、医薬は、別の治療剤とともに投与するために調製される。本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置するための別の治療剤の使用を提供し、ここで、医薬は、式（Ｉ）の化合物とともに投与される。
【００９６】
本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置する方法における使用のための式（Ｉ）の化合物を提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は、別の治療剤とともに投与するために調製される。本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置する方法における使用のための別の治療剤を提供し、ここで、他の治療剤は、式（Ｉ）の化合物とともに投与するために調製される。本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置する方法における使用のための式（Ｉ）の化合物を提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は、別の治療剤とともに投与される。本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置する方法における使用のための別の治療剤を提供し、ここで、他の治療剤は、式（Ｉ）の化合物とともに投与される。
【００９７】
本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供し、ここで、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）別の治療剤で処置されている。本発明はまた、ＢＥＴタンパク質によって媒介される疾患または状態を処置するための別の治療剤の使用を提供し、ここで、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）式（Ｉ）の化合物で処置されている。
【００９８】
一実施形態では、他の治療剤は、抗がん剤である。
【００９９】
さらなる実施形態では、他の治療剤は、エピジェネティクスの分野における標的のモジュレーター、例えば、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の阻害剤またはヒストンメチル基転移酵素（ＨＭＴ）の阻害剤である。
【０１００】
一般的スキーム
典型的には、式（Ｉ）の化合物は、以下に提示するスキームに従って調製することができる。
【０１０１】
Ａが、
【０１０２】
【化１７】
2016520118.tif 000019
であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６が、実施形態１に定義された通りである、式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に記載のように調製され得る。
【０１０３】
【化１８】
2016520118.tif 000020
式中、
ＬＧは、好適な脱離基、例えば、メシル基であり、
ＰＧは、好適な酸保護基、例えば、メチルであり、
Ｍは、好適な金属、例えば、ＬｉまたはＮａである。
【０１０４】
スキーム１は、本発明の化合物（例えば、実施例１〜３）を調製するための一方法を例示している。３−置換２−ヒドラジニル−５−ニトロピリジン誘導体を、テトラヒドロフランまたはジオキサン中、０℃〜２５℃で、対応する無水酢酸誘導体を用いてアシル化する。ｉｎ  ｓｉｔｕでアシル化された誘導体を、高温、通常は１００〜１５０℃で、３，８−二置換６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン誘導体に変換し、これは、適切な溶媒（メタノール、エタノール、酢酸）中、好ましい触媒系として１０％Ｐｄ−Ｃ  ４０〜５０℃を用いて、接触水素化によってニトロ基を還元すると、３，８−二置換［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミンが得られた。例えば、（ａ）ピリジン（触媒量の４−ジメチルアミノピリジンとともに）もしくはトリエチルアミンなどの有機塩基の存在下、メタンスルホニルクロリドもしくはメタンスルホン酸無水物を用いて、または（ｂ）１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミンを用いて、対応する２−アリール−２−ヒドロキシ−アセテート誘導体の第二級アルコールを脱離基に変換し、続いて、０℃から５０℃の温度で３，８−二置換［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミンと反応させることにより、第二級アミン誘導体が形成される。あるいは、３，８−二置換［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミンを、０℃から２０℃の温度で、亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチルの存在下、アセトニトリル中、トリメチルシリルアジドを用いて、対応する６−アジド−３，８−二置換［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジンに変換する。アジド中間体を、４−置換フェニル−２−オキソアセテートの存在下、２０から１００℃の温度で、トリフェニルホスフィンを用いて還元し、続いて、生成されたイミノ−アセテートを、高温、最適には８０から１２０℃で、［Ｒｕ（ＣＯ）２（Ｐｈ４Ｃ４ＣＯ）］２の存在下、イソプロパノール−水を用いて還元して、第二級アミン中間体を得た。次に、周囲温度で、トリフルオロ酢酸銀（Ｉ）の存在下、β−ケト−チオエステル誘導体を用いてアシル化することにより、β−ケト−アミド誘導体が形成される。所要のβ−ケト−チオエステルは、低温で、強塩基（ＬｉＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ）の存在下、対応するＳ−ピリジン−２−イルカルボチオエート誘導体およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチルエタンチオエートから生成される。β−ケト−アミドの環化β−ジケトンへのクライゼン縮合は、塩基性条件下で、（ａ）２０℃から１００℃の温度で、ＤＭＦ中、ＣｓＦを用いて、または（ｂ）高温で、ＥｔＯＨ中、ナトリウムエトキシドを用いて行うことができる。β−ジケトン誘導体と対応するＲ４含有ヒドラジンとの縮合によって、最終のピラゾロ−ピロリジノン誘導体が生成される。縮合ステップの好ましい反応条件は、アルコール溶媒およびマイクロ波中８０〜１３０℃の温度である。
【０１０５】
あるいは、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６が、実施形態１に定義された通りである、式（Ｉ）の化合物は、スキーム２に記載のように調製され得る。
【０１０６】
【化１９】
2016520118.tif 000021
式中、ＰＧは、スキーム１について定義された通りであり、Ｘは、ハロである。
【０１０７】
スキーム２は、本発明の化合物（例えば、実施例４〜６）を調製するためのスキーム１に示された方法の変法を例示している。この方法は、Ｒ１／Ｒ６を含有する二環式ヘテロアリールフラグメントがチャン−ラムまたはパラジウム触媒Ｃ−Ｎカップリングによって導入されることを除いて、スキーム１に記載されたものと同様である。２−アリール−アミノ−エステル誘導体を、周囲温度で、トリフルオロ酢酸銀（Ｉ）の存在下、対応するβ−ケト−チオエステルと反応させて、ケト−アミド誘導体を得る。ラクタムへの環化および後続のＮ５−非置換５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン中間体への縮合は、スキーム１に記載されたものと同じ方法によって実行される。ラクタム中間体を、高温、好ましくは８０〜１２０℃で、ジオキサンまたはトルエンなどの適切な溶媒中、対応する二環式ヘテロアリール−ハロゲン化物および適切な金属触媒、例えば、Ｃｕ塩、好ましくはＣｕＩ、ならびにＫ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３、またはＫ３ＰＯ４などの塩基を用いてアリール化する。あるいは、Ｐｄで触媒されるＣ−Ｎ結合形成条件が適用され、好ましくは、Ｐｄ２（ｄｂａ）３およびキサントホスを、９０〜１２０℃で、ジオキサン中、塩基としてのＣｓ２ＣＯ３とともに用いる。
【０１０８】
本発明はさらに、その任意の段階で得られる中間生成物を出発材料として使用して残りのステップを実行する、または出発材料を反応条件下ｉｎ  ｓｉｔｕで形成させる、または反応構成成分をその塩または光学的に純粋な材料の形態で使用する、本発明のプロセスの任意の変異形を含む。
【０１０９】
本発明の化合物および中間体はまた、当業者に一般的に知られている方法に従って互いに変換することができる。
【実施例】
【０１１０】
合成方法
以下の実施例は、本発明を例示することを意図したものであり、それに対する限定であると解釈されるべきではない。温度はセルシウス度で示す。別段の記述がなければ、すべての蒸発は、減圧下で、典型的には、約１５ｍｍＨｇから１００ｍｍＨｇ（＝２０〜１３３ｍｂａｒ）で実施する。最終生成物、中間体、および出発材料の構造は、標準的な分析方法、例えば、微量分析および分光学的特徴、例えば、ＭＳ、ＩＲ、ＮＭＲによって確認する。使用する略語は、当技術分野で慣用のものである。
【０１１１】
本発明の化合物の合成に利用されるすべての出発材料、構成単位、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒、および触媒は、市販されているか、または当業者に公知の有機合成方法によって生成することができる。さらに、本発明の化合物は、以下の実施例に示すように、当業者に公知の有機合成方法によって生成することができる。
【０１１２】
略語
ＡＣＮ      アセトニトリル
Ａｃ２Ｏ      無水酢酸
ａｑ．      水性
Ａｒ      アルゴン
Ｂｏｃ      ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ブライン      （室温で）飽和した塩化ナトリウム溶液
ｂｒ．ｓ．      広幅一重線
ＣＨ２Ｃｌ２      ジクロロメタン
ＣｕＩ      ヨウ化銅（Ｉ）
ｄ      二重線
ＤＥＡ      ジエチルアミン
ＤＩＰＥＡ      ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ      ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ      Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＥＳＩ−ＭＳ      エレクトロスプレーイオン化質量分析
ＥｔＯＡｃ      酢酸エチル
ＥｔＯＨ      エタノール
ｈ      時間
Ｈ２Ｏ      水
Ｋ２ＣＯ３      炭酸カリウム
Ｋ３ＰＯ４      リン酸カリウム
ＬＣ−ＭＳ      液体クロマトグラフィー質量分析
ＬｉＨＭＤＳ      リチウムヘキサメチルジシラジド
ＭｅＯＨ      メタノール
ＭｇＳＯ４      硫酸マグネシウム
ｍ      多重線
ｍｉｎ      分
ｍＬ      ミリリットル
ＭＳ      質量分析
Ｍｓ２Ｏ      メタンスルホン酸無水物
ＭＷ      マイクロ波
ＮａＨＣＯ３      炭酸水素ナトリウム
ＮａＯＨ      水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４      硫酸ナトリウム
ＮＨ４Ｃｌ      塩化アンモニウム
ＮＭＲ      核磁気共鳴
Ｐｄ２（ｄｂａ）３      トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムＨＣＣｌ３錯体（０）
ＰＯＣｌ３      オキシ塩化リン
ｐｐｍ      パーツパーミリオン
Ｒｆ      移動比（ratio of fronts）
ｒｔ（またはＲＴ）      室温
ｓ      一重線
ｓａｔ．      飽和
ｓｃＣＯ２      超臨界二酸化炭素
ＳＦＣ      超臨界流体クロマトグラフィー
ｔ      三重線
ｔＲ      保持時間
ＴＦＡ      トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ      テトラヒドロフラン
ＵＰＬＣ      超高速液体クロマトグラフィー
Ｘａｎｔｐｈｏｓ      ４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン
【０１１３】
ＵＰＬＣ方法：
ＵＰＬＣ１：カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  Ｃ１８、１．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ、流速：１．０ｍＬ／分。カラム温度：３０℃。勾配：１．５分間で５％〜１００％Ｂ、１分間１００％Ｂ、Ａ＝水＋０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡ
ＬＣ−ＭＳ方法：
ＬＣ−ＭＳ１：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  Ｔ３、１．８μｍ、２．１×５０ｍｍ、６０℃のオーブン。流速：１．０ｍＬ／分。勾配：１．４０分間で５％〜９８％Ｂ、次いで０．４０分間９８％Ｂ、０．１０分間で９８％〜５％Ｂ、０．１０分間５％Ｂ；Ａ＝水＋０．０５％ギ酸＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０４％ギ酸。検出ＵＶ／ＶＩＳ（ＤＡＤ）、ＥＳＩ（＋／−）。質量分析計の範囲：１００〜１２００Ｄａ。
ＬＣ−ＭＳ２：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  Ｔ３、１．８μｍ、２．１×５０ｍｍ、６０℃のオーブン。流速：１．０ｍＬ／分。勾配：１．４０分間で５％〜９８％Ｂ、次いで０．４０分間９８％Ｂ、０．１０分間で９８％〜５％Ｂ、０．１０分間５％Ｂ；Ａ＝水＋０．０５％ギ酸＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０４％ギ酸。検出ＵＶ／ＶＩＳ（ＤＡＤ）、ＥＳＩ（＋／−）。質量分析計の範囲：１００〜１２００Ｄａ。
【０１１４】
実施例１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１１５】
【化２０】
2016520118.tif 000022
ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中の５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）−１−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピロリジン−２，４−ジオン（０．８ｍｍｏｌ、３３９ｍｇ）の溶液に、メチルヒドラジン（２．４ｍｍｏｌ、１１１ｍｇ）を添加し、反応混合物をＭＷ中１１０℃で３．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ８０：２０：４〜０：５：１）によって精製して、表題生成物（２１８ｍｇ、収率６０％）を薄黄色泡状物として得た。ｔＲ：０．８２２分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．９０分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４３３／４３５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.79 - 1.19 (m, 4 H) 1.88 - 2.10 (m, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.62 (s, 3 H) 3.47 (s, 3 H) 6.61 (s, 1 H) 7.29 (s, 1 H) 7.41 (s, 4 H) 8.36 (s, 1 H).
【０１１６】
ステップ１．１：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート
【０１１７】
【化２１】
2016520118.tif 000023
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中のエチル２−（４−クロロフェニル）−２−ヒドロキシアセテート（２．１４６ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ３（６．９７ｍＬ、５０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｍｓ２Ｏ（３．１３６ｇ、１８．００ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物に３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン（１．９４６ｇ、１２．００ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温に加温した。４０〜４５℃で３時間加熱した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液およびＥｔＯＡｃに添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を少量のブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ７５：２５：３〜０：５０：５）によって精製して、表題生成物（１．１５ｇ、収率３０％）をベージュ色固体として得た。ｔＲ：０．８５６分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．９２分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３５９／３６１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３０（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.17 (t, J=7.2 Hz, 3 H) 2.42 (s, 3 H) 2.52 (s, 3 H) 4.04 - 4.15 (m, 1 H) 4.16 - 4.26 (m, 1 H) 4.83 (m, 1 H) 6.38 (s, 1 H) 6.61 (s, 1 H) 7.30 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 7.38 (d, J=8.6 Hz, 2 H).
【０１１８】
ステップ１．２：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート
【０１１９】
【化２２】
2016520118.tif 000024
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のエチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート（８５１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチル３−シクロプロピル−３−オキソプロパンチオエート（３９０ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ、ステップ１．４）の溶液に、トリフルオロ酢酸銀（４３１ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。得られた暗褐色溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をセライト越しに濾過し、濾液を濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０．１％ＮＥｔ３を含有する、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９０：１０：１〜０：１００：１０）によって精製して、表題生成物（６０４ｍｇ、収率８３％）を黄色泡状物として得た。ｔＲ：０．８７０分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．９５分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４６５／４６７［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０１２０】
ステップ１．３：５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）−１−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピロリジン−２，４−ジオン
【０１２１】
【化２３】
2016520118.tif 000025
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のエチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート（５６０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣｓＦ（３７０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）をＡｒ下室温で添加し、得られた暗褐色溶液を６０℃で１４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を冷１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４に添加した。生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、６０℃で乾燥させて、表題生成物（１０１ｍｇ、１８％）を黄色泡状物として得た。ｔＲ：０．８８１分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．７７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４２３／４２５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０１２２】
ステップ１．４：Ｓ−ピリジン−２−イルシクロプロパンカルボチオエート
【０１２３】
【化２４】
2016520118.tif 000026
ＴＨＦ（２６０ｍＬ）中のピリジン−２−チオール（２９．２ｇ、２６０ｍｍｏｌ）の溶液に、シクロプロパンカルボニルクロリド（２７．７ｇ、２６０ｍｍｏｌ）をＡｒ下室温で添加し、反応混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。沈殿したＨＣｌ塩を濾別し、Ｅｔ２Ｏ−ヘキサン  １：４およびヘキサンで洗浄した。薄黄色沈殿物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液およびＥｔＯＡｃに添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（３７．３ｇ、収率８０％）を黄色油状物として得た。ｔＲ：０．７９分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：１８０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.83 - 1.03 (m, 2 H) 1.09 - 1.28 (m, 2 H) 1.91 - 2.16 (m, 1 H) 7.10 - 7.28 (m, 1 H) 7.60 - 7.74 (m, 1 H) 8.55 (dd, J=4.8, 1.1 Hz, 1 H).
【０１２４】
ステップ１．５：Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチル３−シクロプロピル−３−オキソプロパンチオエート
【０１２５】
【化２５】
2016520118.tif 000027
ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中のＳ−ピリジン−２−イルシクロプロパンカルボチオエート（１６．５ｇ、９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中１Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ溶液（２２９ｍＬ、２２９ｍｍｏｌ）をＡｒ下＜−７０℃で添加した。反応混合物に、ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＳ−ｔｅｒｔ−ブチルエタンチオエート（１４．０ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）の溶液を−７０℃未満で添加した。−７８℃で０．５時間撹拌した後、反応混合物を１時間かけてゆっくりと−５０℃まで加温した。完了後、反応混合物を３００ｍＬの冷１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４および氷に添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗油状物をＥｔ２Ｏに再溶解し、１４時間０℃に保ち、シリカゲルの短いプラグに通して濾過し、再度濃縮して、表題生成物（１８．３ｇ、収率９５％）を黄色油状物として得た。ｔＲ：１．０８９分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：１．０６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２０１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．５９（ＥｔＯＡｃ）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.80 (m, 2 H) 0.91 - 0.99 (m, 2 H) 1.33 (s, 9 H) 1.92 (m, 1 H) 3.53 (s, 2 H).
【０１２６】
実施例２：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１２７】
【化２６】
2016520118.tif 000028
６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例１）（２１０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：ＳＦＣ−ＰｉｃＬａｂ−Ｐｒｅｐ  １００；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ５０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ  ４０：６０（定組成）；流速：１５０ｇ／分；検出ＵＶ：２４５ｎｍ）を行い、得られた残留物をＥｔ２Ｏ中ですり混ぜた後、表題化合物（６９ｍｇ、収率３４％）を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に白色固体として得た。ｔＲ：０．８２７分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．９０分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４３３／４５５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.79 - 1.19 (m, 4 H) 1.88 - 2.10 (m, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.62 (s, 3 H) 3.47 (s, 3 H) 6.61 (s, 1 H) 7.29 (s, 1 H) 7.41 (s, 4 H) 8.36 (s, 1 H).第２の鏡像異性体、（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オンを、同じ分離により、鏡像異性的に純粋な形態（９９％ｅｅ）で白色固体（７５ｍｇ、収率３６％）として得た。
【０１２８】
実施例３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１２９】
【化２７】
2016520118.tif 000029
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のエチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート（５４０ｍｇ、０．９４１ｍｍｏｌ）の溶液に、メチルヒドラジン（０．１５ｍＬ、２．８２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、ＭＷ中、１００℃で３時間、１２０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９０：１０：１〜０：１００：１０）によって精製した。得られた残留物をＳＦＣ（Ｒｅｐｒｏｓｉｌ７０−ＮＨ２（２５０×３０ｍｍ、５μｍ）、勾配：６分間で１１〜１６％Ｂ、Ａ：ｓｃＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ；流速：１００ｍＬ／分）によってさらに精製して、Ｅｔ２Ｏ中ですり混ぜた後に表題生成物（２５５ｍｇ、収率３０％）を白色固体として得た。ｔＲ：１．０４６分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：１．０３分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４６９／４７１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．２４（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.90 - 1.15 (m, 4H) 1.91 - 2.10 (m, 1) 2.52 (s, 3H) 3.34 (s, 3 H) 6.71 (s, 1 H) 7.38 - 7.48 (m, 4 H) 7.59 (s, 1 H) 7.71 (t, J=51.2 Hz, 1 H) 8.65 (s, 1 H).
【０１３０】
ステップ３．１：３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン
【０１３１】
【化２８】
2016520118.tif 000030
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の２−ヒドラジニル−３−メチル−５−ニトロピリジン（２ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃のＴＨＦ（２ｍＬ）中の２，２−ジフルオロ酢酸無水物（１．６８ｍＬ、１３．０８ｍｍｏｌ）の溶液を０．５時間かけて添加した。反応混合物を０℃で０．５時間撹拌し、最初に形成された２，２−ジフルオロ−Ｎ’−（３−メチル−５−ニトロピリジン−２−イル）アセトヒドラジドを、その後ＭＷ中１４０℃で４時間加熱した。反応混合物を濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０：１０：１〜５０：５０：５）によって精製して、表題生成物（２．３１ｇ、収率８５％）を褐色固体として得た。ｔＲ：０．６８分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２２９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．４８（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ５０：５０：５）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.69 (s, 3 H) 7.77 (t, J=56.7 Hz, 1 H) 8.09 (s, 1 H) 9.60 (s, 1 H).
【０１３２】
ステップ３．２：３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン
【０１３３】
【化２９】
2016520118.tif 000031
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（３．３ｇ、１０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．８６ｇ）上で、５０℃にて１０００ｍｂａｒのＨ２で３時間水素化した。反応混合物をセライト越しに濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０．２％ＮＥｔ３を含有する、ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １００：１００：５〜０：１００：５）によって精製して、表題生成物（１．０５ｇ、収率４９％）を白色固体として得た。ｔＲ：０．４６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：１９９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３５（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １９：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.52 (s, 3H) 5.41 (s, 2 H) 6.95 (s, 1 H) 7.61 (t, J=53.9 Hz, 1 H) 7.56 (s, 1 H).
【０１３４】
ステップ３．３：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート
【０１３５】
【化３０】
2016520118.tif 000032
ジオキサン（１２ｍＬ）中のエチル２−（４−クロロフェニル）−２−ヒドロキシアセテート（８９０ｍｇ、４．１５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ３（２．９ｍＬ、２０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｍｓ２Ｏ（１．３ｇ、７．４６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた反応混合物を０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物に３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン（９８６ｍｇ、４．９８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＭＷ中１６０℃で１時間加熱した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液およびＥｔＯＡｃに添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を少量のブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９０：１０：１〜５０：５０：５）によって精製して、表題生成物（４６０ｍｇ、収率２７％）を赤みがかった泡状物として得た。ｔＲ：１．０７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３９５／３９７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．４０（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１０：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.15 (t, J=7.03 Hz, 3 H) 2.53 (s, 3H) 4.07 - 4.12 (m 1 H) 4.14 - 4.23 (m, 1 H) 5.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.89 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.25 (s, 1 H) 7.35 (s, 1 H) 7.44 - 7.62 (m, 5 H).
【０１３６】
ステップ３．４：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート
【０１３７】
【化３１】
2016520118.tif 000033
表題化合物は、エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート（ステップ３．３）およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチル３−シクロプロピル−３−オキソプロパンチオエート（ステップ１．５）を使用し、ステップ１．２に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．０４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５０３／５０５［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３０（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１０：１）。
【０１３８】
ステップ３．５：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート
【０１３９】
【化３２】
2016520118.tif 000034
表題化合物は、エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−Ｎ−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート（ステップ３．４）を使用し、ステップ１．３に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．８６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５９／４６１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０１４０】
実施例４：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１４１】
【化３３】
2016520118.tif 000035
ジオキサン中の６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（１７０ｍｇ、０．５１２ｍｍｏｌ）および６−ブロモ−３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（１５１ｍｇ、０．６６６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣｕＩ（４８．８ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（２１８ｍｇ、１．０２５ｍｍｏｌ）およびＮ−Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１５１ｍｇ、０．６６６ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、反応混合物を１１０℃で３０時間加熱した。反応混合物を、若干の濃ＮＨ３水溶液を含有する飽和ＮａＨＣＯ３溶液に添加し、生成物をＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨ  ２０：１で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ８０：２０：４〜０：２０：４）によって精製した。得られた生成物をＳＦＣ（プロピル−ピリジル−尿素（２５０×３０ｍｍ、５μｍ）、勾配：６分間で１５〜１０％Ｂ、Ａ：ｓｃＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ；流速：１００ｍＬ／分）によってさらに精製して、Ｅｔ２Ｏ中ですり混ぜた後に表題生成物（６５ｍｇ、収率２６％）を白色固体として得た。ｔＲ：０．８６３分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．９１分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４７７／４７９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.95 - 1.05 (m, 2 H) 1.09 - 1.26 (m, 2 H) 1.96 - 2.06 (m, 1 H) 2.50 (s, 3 H) 2.58 (s, 3 H) 3.28 (s, 3 H) 3.44 -3.67 (m, 3 H) 3.88 - 3.96 (m, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 7.13 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.27 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.98 (s, 1 H).
【０１４２】
ステップ４．１：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−３−オキソプロパンアミド）アセテート
【０１４３】
【化３４】
2016520118.tif 000036
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のエチル２−アミノ−２−（４−クロロフェニル）アセテート（８．０８ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチル３−シクロプロピル−３−オキソプロパンチオエート（９．０５ｇ、４５．４ｍｍｏｌ、ステップ１．５）の溶液に、トリフルオロ酢酸銀（１１．０７ｇ、４９．１ｍｍｏｌ）をＡｒ下室温で添加した。得られた暗褐色溶液を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をセライト越しに濾過し、濾液を濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ８０：２０：４〜０：２０：４）によって精製して、表題生成物（１１．５ｇ、収率９４％）を薄褐色油状物として得た。ｔＲ：０．９９８分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．９８分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３２２／３２４［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．６３（ＥｔＯＡｃ）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.98 - 1.31 (m, 7 H) 1.95 - 2.05 (m, 1 H) 3.54 - 3.73 (m, 2 H) 4.11 - 4.31 (m, 2 H) 5.45 - 5.62 (m, 1 H) 7.35 (s, 4 H) 8.46 (br. s., 1 H).
【０１４４】
ステップ４．２：５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−２，４−ジオン
【０１４５】
【化３５】
2016520118.tif 000037
表題化合物は、エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（３−シクロプロピル−３−オキソプロパンアミド）アセテート（ステップ４．１）を使用し、ステップ１．３に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９３分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２７８／２８０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３８（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.05 - 1.34 (m, 5 H) 2.81 (br. s., 1 H) 5.06 (s, 1 H) 7.33 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.47 (d, J=8.4 Hz, 2H) 9.34 (br. s., 1 H).
【０１４６】
ステップ４．３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１４７】
【化３６】
2016520118.tif 000038
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ４．２）および（２−メトキシエチル）ヒドラジンを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．８７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３３２／３３４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.96 (dd, J=8.4, 2.2 Hz, 2 H) 1.06 - 1.21 (m, 2 H) 1.90 - 1.99 (m, 1 H) 3.21 (s, 3 H) 3.42 (dt, J=9.7, 3.5 Hz, 1 H) 3.52 (td, J=9.6, 2.6 Hz, 1 H) 3.61 (ddd, J=14.1, 9.5, 3.8 Hz, 1 H) 3.86 (dt, J=14.1, 3.2 Hz, 1 H) 5.46 (s, 1 H) 5.68 (s, 1 H) 7.14 - 7.19 (m, 2 H) 7.24 - 7.34 (m, 2 H).
【０１４８】
実施例５：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１４９】
【化３７】
2016520118.tif 000039
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）および６−ブロモ−８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（ステップ５．３）を使用し、実施例４に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．８６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４４９／４５１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３１（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.94 - 1.17 (m, 4 H) 1.93 - 2.08 (m, 1 H) 2.60 (s, 3 H) 3.48 (m, 3 H) 3.92 (m, 3 H) 6.66 (s, 1 H) 6.87 (s, 1 H) 7.42 (s, 4 H) 8.12 (s, 1 H).
【０１５０】
ステップ５．１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１５１】
【化３８】
2016520118.tif 000040
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ４．２）およびメチルヒドラジンを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．８５分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２８８／２９０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.96 (dd, J=8.4, 2.5 Hz, 2 H) 1.11 (ddd, J=17.0, 5.1, 2.3 Hz, 3 H) 1.90 - 2.00 (m, 1 H) 3.40 (s, 3 H) 5.37 (s, 1 H) 5.65 (s, 1 H) 7.14 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.30 (d, J=8.4 Hz, 2 H).
【０１５２】
ステップ５．２：Ｎ’−（５−ブロモ−３−メトキシピリジン−２−イル）アセトヒドラジド
【０１５３】
【化３９】
2016520118.tif 000041
ジオキサン（５ｍＬ）中の５−ブロモ−２−ヒドラジニル−３−メトキシピリジン（５０５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ａｃ２Ｏ（０．２８ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を０〜１０℃で添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。反応混合物を氷水上に注ぎ、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を少量のブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題生成物（５０５ｍｇ、収率８４％）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．５６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６０／２６３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３４（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.87 (s, 3 H) 3.85 (s, 3 H) 7.32 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.71 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 8.04 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 9.65 (d, J=2.2 Hz, 1 H).
【０１５４】
ステップ５．３：６−ブロモ−８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン
【０１５５】
【化４０】
2016520118.tif 000042
ＡＣＮ（５ｍＬ）中のＮ’−（５−ブロモ−３−メトキシピリジン−２−イル）アセトヒドラジド（５５０ｍｇ、１．６７２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．２２ｍＬ、１．２５４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＰＯＣｌ３（０．３０ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）をＡｒ下でゆっくりと添加した。反応混合物を９０℃で５時間加熱した。反応混合物を４０℃のＨ２Ｏにゆっくりと添加し、ＮａＨＣＯ３で慎重にｐＨ６．５に中和した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を少量のブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、Ｅｔ２Ｏですり混ぜた後に表題生成物（３４０ｍｇ、収率８２％）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．５７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４２／２４４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３９（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.66 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.85 (s, 1 H) 8.35 (s, 1 H).
【０１５６】
実施例６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１５７】
【化４１】
2016520118.tif 000043
ジオキサン中の６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）（１２０ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）、６−ブロモ−４−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール（ステップ６．３）（１５１ｍｇ、０．６２６ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２７２ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、キサントホス（４８．３ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（３８．２ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応混合物をセライト越しに濾過し、濾液を濃縮した。得られた残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、Ｈ２Ｏで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をＳＦＣ（シリカ（２５０×３０ｍｍ、５μｍ）、勾配：６分間で１９〜２４％Ｂ、Ａ：ｓｃＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ；流速：１００ｍＬ／分）によって精製して、Ｅｔ２Ｏ中ですり混ぜた後に表題生成物（１２１ｍｇ、収率６４％）を白色固体として得た。ｔＲ：１．０３分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４４９／４５１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.97 - 1.18 (m, 4 H) 1.99 - 2.06 (m, 1 H) 3.48 (s, 3 H) 3.97 (s, 3 H) 4.15 - 4.19 (m, 3 H) 6.80 (s, 1 H) 7.01 (d, J=1.2 Hz, 1 H) 7.40 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.44 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.50 (d, J=1.4 Hz, 1 H).
【０１５８】
ステップ６．１：５−ブロモ−３−メトキシ−Ｎ−メチル−２−ニトロアニリン
【０１５９】
【化４２】
2016520118.tif 000044
ＴＨＦ（４４ｍＬ）中の５−ブロモ−１−フルオロ−３−メトキシ−２−ニトロベンゼン（５．５ｇ、２２．００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液（４４．０ｍＬ、８８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２時間加熱還流した。冷反応混合物の形成された沈殿物を濾別し、濾液を濃縮して、表題生成物（５．６ｇ、収率９８％）を橙色固体として得た。
【０１６０】
ステップ６．２：５−ブロモ−３−メトキシ−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミン
【０１６１】
【化４３】
2016520118.tif 000045
ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１（４００ｍＬ）中の５−ブロモ−３−メトキシ−Ｎ−メチル−２−ニトロアニリン（８．８４ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）の溶液を、ラネーニッケル（１．０ｇ）上で、室温にて１０００ｍｂａｒのＨ２で２１時間水素化した。反応混合物をセライト越しに濾過し、濾液を濃縮して、表題生成物（７．９２ｇ、収率９９％）を褐色油状物として得た。ｔＲ：０．９０分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２３１／２３３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０１６２】
ステップ６．３：６−ブロモ−４−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール
【０１６３】
【化４４】
2016520118.tif 000046
８Ｎ  ＨＣｌ（４２．２ｍＬ、３３８ｍｍｏｌ）中の５−ブロモ−３−メトキシ−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミン（７．８ｇ、３３．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ２Ｏ（２５ｍＬ）中のＮａＮＯ２（２．５６ｇ、３７．１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下添加した。添加後、反応混合物を、０℃で１５分間、室温で３０分間撹拌した。反応混合物をブラインに添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ９７：３〜６０：４０）によって精製して、表題生成物（４．０ｇ、収率４９％）を暗黄色固体として得た。ｔＲ：０．３５分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４３／２４５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.04 (s, 3 H) 4.25 (s, 3 H) 6.99 (d, J=1.1 Hz, 1 H) 7.75 (d, J=1.3 Hz, 1 H).
【０１６４】
実施例７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１６５】
【化４５】
2016520118.tif 000047
ラセミ混合物６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例３）のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール  ６０：４０（定組成）、流速：５０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０１６６】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：２．２３分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）  ６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１６７】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：３．１９分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）  ６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１６８】
実施例８：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１６９】
【化４６】
2016520118.tif 000048
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）および６−ブロモ−１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール（ステップ８．１）を使用し、実施例４に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．０７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４３３／４３５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．５０（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.97 - 1.12 (m, 4 H) 2.01 (m, 1 H) 2.59 (s, 3 H) 3.46 (s, 3 H) 4.20 (s, 3 H) 6.73 (s, 1 H) 7.33 - 7.44 (m, 4 H) 7.74 (s, 1 H).
【０１７０】
ステップ８．１：５−ブロモ−Ｎ，３−ジメチル−２−ニトロアニリン
【０１７１】
【化４７】
2016520118.tif 000049
５−ブロモ−１−フルオロ−３−メチル−２−ニトロベンゼン（５００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ中２Ｍメチルアミン（５ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロ波中１００℃で３０分間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮して、表題生成物（５２０ｍｇ、収率９９％）を黄色固体として得た。ｔＲ：１．１９分（ＬＣ−ＭＳ２）；ＥＳＩ−ＭＳ：イオン化せず（ＬＣ−ＭＳ２）。
【０１７２】
ステップ８．２：５−ブロモ−Ｎ１，３−ジメチルベンゼン−１，２−ジアミン
【０１７３】
【化４８】
2016520118.tif 000050
ＴＨＦ（１００ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の５−ブロモ−Ｎ，３−ジメチル−２−ニトロアニリン（ステップ８．１）（２．７ｇ、１１．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、ラネーニッケル（１８９ｍｇ、２．２０３ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を水素雰囲気下室温で１６時間撹拌した。反応物をセライトのパッドに通して濾過し、得られた濾液を減圧下で濃縮して、表題生成物（２．５ｇ、収率９６％）をオフホワイトの固体として得た。ｔＲ：０．９４分（ＬＣ−ＭＳ２）；ＥＳＩ−ＭＳ：２１５／２１７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ２）。
【０１７４】
ステップ８．３：６−ブロモ−１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール
【０１７５】
【化４９】
2016520118.tif 000051
濃ＨＣｌ（１５ｍＬ、４９４ｍｍｏｌ）中の５−ブロモ−Ｎ１，３−ジメチルベンゼン−１，２−ジアミン（ステップ８．２）（２．５ｇ、１１．６２ｍｍｏｌ）の溶液に、水（２５ｍＬ）中のＮａＮＯ２（０．９６２ｇ、１３．９５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃でゆっくりと添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いでＮａＯＨ水溶液で塩基性化した。沈殿した固体を濾別し、水で洗浄し、減圧下で乾燥させて、表題生成物（２．５ｇ、収率８６％）をベージュ色固体として得た。ｔＲ：０．９３分（ＬＣ−ＭＳ２）；ＥＳＩ−ＭＳ：２２６／２２８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ２）。
【０１７６】
実施例９：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１７７】
【化５０】
2016520118.tif 000052
６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例８）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール  ５０：５０（定組成）、流速：４０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０１７８】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：３．０１分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）  ５０：５０（定組成）、流速：２ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１７９】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：５．６５分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）  ５０：５０（定組成）、流速：２ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１８０】
実施例１０：６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１８１】
【化５１】
2016520118.tif 000053
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−１−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシニコチノイル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ１０．４）およびヒドラジンを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４８６／４８８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．５０（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.46 (s, 3 H) 2.64 (s, 3 H) 4.07 (m, 3 H) 6.68 (s, 1 H) 7.26 (dd, J=7.6, 4.9 Hz, 1 H) 7.32 - 7.47 (m, 5 H) 8.29  (dd, J= 4.9, 1.9 Hz, 1H) 8.51 (s, 1 H) 9.03 (dd, J=7.5, 1.9 Hz, 1 H).
【０１８２】
ステップ１０．１：Ｓ−ピリジン−２−イル２−メトキシピリジン−３−カルボチオエート
【０１８３】
【化５２】
2016520118.tif 000054
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２−メトキシニコチン酸（０．７６６ｇ、５ｍｍｏｌ）および１，２−ジ（ピリジン−２−イル）ジスルファン（１．１２４ｇ）の溶液に、ＰＰｈ３（１．３３７ｇ、５ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加し、反応混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、表題生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ８０：２０〜５０：５０）の後に白色固体として得た（０．９０２ｇ、収率７２％）。ｔＲ：０．７９５分（ＵＰＬＣ１）；ｔＲ：０．８７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３６（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.61 (ddd, J=4.9, 1.9, 0.9 Hz, 1 H), 8.29 (dd, J=4.9, 2.0 Hz, 1 H), 8.12 (dd, J=7.6, 2.0 Hz, 1 H), 7.76 - 7.62 (m, 2 H), 7.26 (ddd, J=7.4, 4.8, 1.3 Hz, 1 H), 6.95 (dd, J=7.6, 4.9 Hz, 1 H), 4.05 (s, 3 H).
【０１８４】
ステップ１０．２：Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−３−オキソプロパンチオエート
【０１８５】
【化５３】
2016520118.tif 000055
表題化合物は、Ｓ−ピリジン−２−イル２−メトキシピリジン−３−カルボチオエート（ステップ１０．１）およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチルエタンチオエートを使用し、ステップ１．５に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．１４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６８［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０１８６】
ステップ１０．３：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（Ｎ−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート
【０１８７】
【化５４】
2016520118.tif 000056
表題化合物は、エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート（ステップ１．１）およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−３−オキソプロパンチオエート（ステップ１０．２）を使用し、ステップ１．２に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．００分および１．２１分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５３４／５３６［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．４５（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）。
【０１８８】
ステップ１０．４：５−（４−クロロフェニル）−１−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシニコチノイル）ピロリジン−２，４−ジオン
【０１８９】
【化５５】
2016520118.tif 000057
表題化合物は、エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（Ｎ−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−３−オキソプロパンアミド）アセテート（ステップ１０．３）を使用し、ステップ１．３に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．６５分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９０／４９２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０１９０】
実施例１１：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１９１】
【化５６】
2016520118.tif 000058
６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例１０）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＥｔＯＨ  ６０：４０（定組成）、流速：５０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０１９２】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：２．８８分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＤ−３  ４．６×１５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＥｔＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）  ６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：３．５４分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＤ−３  ４．６×１５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＥｔＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）  ６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１９３】
実施例１２：６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１９４】
【化５７】
2016520118.tif 000059
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−１−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシニコチノイル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ１０．４）およびメチルヒドラジンを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９２分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５００／５０２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３７（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.46 (s, 3 H) 2.63 (s, 3 H) 3.63 (s, 3 H) 3.94 (m, 3 H) 6.73 (s, 1 H) 7.14 (dd, J=7.4, 4.9 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=1.7 Hz, 1 H) 7.51 - 7.36 (m, 4 H) 8,26 (dd, J=5.0, 1.9 Hz, 1 H) 8.32 (dd, J=7.5, 1.9 Hz, 1 H) 8.42 (s, 1 H).
【０１９５】
実施例１３：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０１９６】
【化５８】
2016520118.tif 000060
６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例１２）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール  ５０：５０（定組成）、流速：４０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０１９７】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：２．９０分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）５０：５０（定組成）、流速：２ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１９８】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−３−（２−メトキシピリジン−３−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：５．５１分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）５０：５０（定組成）、流速：２ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０１９９】
実施例１４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２００】
【化５９】
2016520118.tif 000061
６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例５）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ  ６０：４０（定組成）、流速：５０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０２０１】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：２．３７分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０２０２】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（８−メトキシ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：３．７１分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０２０３】
実施例１５：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２０４】
【化６０】
2016520118.tif 000062
６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例４）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ  ６０：４０（定組成）、流速：５０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０２０５】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：２．１８分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０２０６】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：３．７４分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０２０７】
実施例１６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２０８】
【化６１】
2016520118.tif 000063
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）および６−ブロモ−３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（ステップ１６．５）を使用し、実施例４に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９８分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５１／４５３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．４２（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.68 (s, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.42 (s, 4 H), 6.66 (s, 1 H), 6.03 - 5.85 (m, 2 H), 3.47 (s, 3 H), 2.51 (s, 3 H), 2.05 - 2.00 (m, 1 H), 1.15 - 1.09 (m, 1 H), 1.09 - 0.96 (m, 3 H).
【０２０９】
ステップ１６．１：２−ヒドラジニル−３−メチル−５−ニトロピリジン
【０２１０】
【化６２】
2016520118.tif 000064
ヒドラジン水和物（１２．７ｍＬ、０．２６ｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）中の２−クロロ−３−メチル−５−ニトロピリジン（１５ｇ、８７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。氷浴中で冷却して結晶性生成物を得、これを濾別し、Ｈ２ＯおよびＥｔ２Ｏで洗浄して、表題化合物（１４．６ｇ、９５）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．４２分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：１６９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）
【０２１１】
ステップ１６．２：２−フルオロ酢酸無水物
【０２１２】
【化６３】
2016520118.tif 000065
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１４．５ｇ、７０．５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（６４ｍＬ）中の２−フルオロ酢酸（５ｇ、６４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を２５℃で２時間撹拌した。沈殿物を濾別し、濾液をステップ１６．３に直接使用した。
【０２１３】
ステップ１６．３：２−フルオロ−Ｎ’−（３−メチル−５−ニトロピリジン−２−イル）アセトヒドラジド
【０２１４】
【化６４】
2016520118.tif 000066
２−ヒドラジニル−３−メチル−５−ニトロピリジン（５ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中の２−フルオロ酢酸無水物の溶液（６５．４ｍＬ、約３２ｍｍｏｌ、ステップ１６．２）に添加した。反応混合物を１０分間撹拌し、次いで部分的に濃縮した。残留物をＨ２Ｏ（２５０ｍＬ）で希釈すると、生成物が沈殿し、これを濾別し、Ｈ２Ｏおよび少量のＥｔ２Ｏで洗浄した。ｔＲ：０．４９分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２２９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；約４０％の１，３−ジシクロヘキシル尿素を含有する。
【０２１５】
ステップ１６．４：３−（フルオロメチル）−８−メチル−６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン
【０２１６】
【化６５】
2016520118.tif 000067
ＡＣＮ（１５０ｍＬ）中の２−フルオロ−Ｎ’−（３−メチル−５−ニトロピリジン−２−イル）アセトヒドラジド（９．１ｇ、２３．９ｍｍｏｌ、ステップ１６．３）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（３．１３ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＰＯＣｌ３（３．３５ｍＬ、３５．９ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を、室温で１時間、７０℃で１６時間撹拌し、室温に冷却し、濃縮し、次いで少量の温水に注ぎ入れ、３０分間撹拌した。ＮａＨＣＯ３でｐＨ４に中和した後、生成物をＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）９０：１０〜０：１００］によって精製して、表題生成物（４．３２ｇ、７７％）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．５９分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２１１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０２１７】
ステップ１６．５：３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン
【０２１８】
【化６６】
2016520118.tif 000068
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の３−（フルオロメチル）−８−メチル−６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（４．３ｇ、２０．４６ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ  １０％（１．３ｇ）の混合物を、５５℃で６時間水素化した。触媒を濾別し、濾液を濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）５０：５０〜０：１００］によって精製して、表題化合物（１．１５ｇ、３１％）を褐色油状物として得た。ｔＲ：０．４０分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：１８１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.48 (s, 1H), 6.89 (s, 1 H), 5.86 (d, J=49 Hz, 2 H), 5.26 (s, 2 H), 2.49 (s, 3 H).
【０２１９】
実施例１７：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２２０】
【化６７】
2016520118.tif 000069
６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例１６）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｔｈａｒ  ＳＦＣ２００；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ５０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ  ６０：４０（定組成）、流速：１５０ｇ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９７％ｅｅ）に得た。
【０２２１】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、Ｒｔ：１．７０分（システム：Ｔｈａｒ／Ｗａｔｅｒｓ  ＳＦＣ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ  ＭＳ；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＥｔＯＨ  ６５：３５（定組成）、流速：４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２５４ｎｍ）。
【０２２２】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、Ｒｔ：３．５２分（システム：Ｔｈａｒ／Ｗａｔｅｒｓ  ＳＦＣ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ  ＭＳ；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＥｔＯＨ  ６５：３５（定組成）、流速：４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２５４ｎｍ）。
【０２２３】
実施例１８：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２２４】
【化６８】
2016520118.tif 000070
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（２−メトキシエチル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ４．３）および３−（フルオロメチル）−８−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン（ステップ１６．５）を使用し、実施例４に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９９分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９５／４９７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.92 - 1.21 (m, 4 H) 1.94 - 2.10 (m, 1 H) 2.51 (s, 3 H) 3.12 (s, 3 H) 3.45 (t, J=5.3 Hz, 2 H) 3.64 - 3.79 (m, 1 H) 3.87 - 4.03 (m, 1 H) 5.92 (dq, J=49.3, 12.0 Hz, 2 H) 6.58 (s, 1 H) 7.35 - 7.44 (m, 4 H) 7.52 (s, 1 H) 8.69 (s, 1 H).
【０２２５】
実施例１９：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２２６】
【化６９】
2016520118.tif 000071
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ１９．１）および６−ブロモ−３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジンを使用して、実施例４に記載した手順と同様にして調製し、ＳＦＣ（プロピル−ピリジル−尿素（２５０×３０ｍｍ、５μｍ）、６分間で２０〜２５％Ｂ、Ａ：ｓｃＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ；流速：１００ｍＬ／分）による分離の後に（２Ｒ，６Ｒ）−および（２Ｒ，６Ｓ）−ジアステレオ異性体を得た。
【０２２７】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ピーク１）。
ｔＲ：１．００分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５３１／５３３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.99 - 1.11 (m, 3 H) 1.15 - 1.22 (m, 1 H) 2.05 (s, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.63 (s, 3 H) 3.41 - 3.51 (m, 1 H) 4.15 - 4.31 (m, 2 H) 6.60 (s, 1 H) 7.01 (d, J=6.5 Hz, 1 H) 7.37 (s, 1 H) 7.42 (s, 4 H) 8.42 (s, 1 H).
【０２２８】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ピーク２）。
ｔＲ：０．９４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９５／４９７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.97 - 1.19 (m, 4 H) 1.97 - 2.09 (m, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.63 (s, 3 H) 3.73 - 3.81 (m, 1 H) 3.94 - 4.04 (m, 1 H) 4.32 - 4.45 (m, 1 H) 6.61 (s, 1 H) 6.68 (d, J=6.9 Hz, 1 H) 7.30 (s, 1 H) 7.39 (s, 4 H) 8.38 (s, 1 H).
【０２２９】
ステップ１９．１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２３０】
【化７０】
2016520118.tif 000072
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ４．２）および（Ｒ）−１，１，１−トリフルオロ−３−ヒドラジニルプロパン−２−オールを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９２分および０．９８分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３８６／３８８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０２３１】
実施例２０：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２３２】
【化７１】
2016520118.tif 000073
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ２０．１）および６−ブロモ−３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジンを使用して、実施例４に記載した手順と同様にして調製し、ＳＦＣ（プロピル−ピリジル−尿素（２５０×３０ｍｍ、５μｍ）、６分間で２０〜２５％Ｂ、Ａ：ｓｃＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ；流速：１００ｍＬ／分）による分離の後に（２Ｒ，６Ｒ）−および（２Ｒ，６Ｓ）−ジアステレオ異性体を得た。
【０２３３】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ピーク１）。
ｔＲ：１．００分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５３１／５３３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.99 - 1.21 (m, 4 H) 1.95 - 2.06 (m, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.57 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=14.1, 9.8 Hz, 1 H) 4.24 (d, J=13.8 Hz, 1 H) 4.53 (br. s., 1 H) 6.18 (s, 1 H) 6.86 (s, 1 H) 7.28 - 7.32 (m, 2 H) 7.33 - 7.40 (m, 2 H) 7.62 (br. s., 1 H) 8.36 (s, 1 H).
【０２３４】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ピーク２）。
ｔＲ：０．９４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９５／４９７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.03 - 1.19 (m, 3 H) 1.23 - 1.31 (m, 1 H) 2.08 (s, 1 H) 2.57 (s, 3 H) 2.65 (s, 3 H) 4.03 (d, J=5.0 Hz, 2 H) 4.38 - 4.50 (m, 1 H) 5.16 - 5.26 (m, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.93 (s, 1 H) 7.22 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.37 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H).
【０２３５】
ステップ２０．１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２３６】
【化７２】
2016520118.tif 000074
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ４．２）および（Ｓ）−１，１，１−トリフルオロ−３−ヒドラジニルプロパン−２−オールを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９２分および０．９７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３８６／３８８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）。
【０２３７】
実施例２１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２３８】
【化７３】
2016520118.tif 000075
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ２１．１）および６−ブロモ−１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール（ステップ８．３）を使用し、実施例４に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．１０分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９９／５０１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.33 - 1.05 (m, 4 H) 2.21 - 2.09 (m, 1 H) 2.60 (s, 3 H) 3.32 (s, 3 H) 4.21 (s, 3 H) 6.14 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 6.83 (s, 1 H) 7.33 - 7.16 (m, 4 H) 7.41 (s, 1 H) 7.48 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.77 (s, 1 H).
【０２３９】
ステップ２１．１：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２４０】
【化７４】
2016520118.tif 000076
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ４．２）および５−ヒドラジニル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾールを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．８９分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３５４／３５６［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.87 - 1.30 (m, 4 H) 1.95 - 2.22 (m, 1 H) 3.46 (s, 3 H) 5.70 (s, 1 H) 6.21 (d, J=2.1 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.35 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.41 (d, J=2.1 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H).
【０２４１】
実施例２２：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２４２】
【化７５】
2016520118.tif 000077
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）−１−（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ２２．８）およびメチルヒドラジンを使用し、実施例１に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．０３分（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３８（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４８５／４８７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.17 - 0.95 (m, 4 H) 2.07 - 1.99 (m, 1 H) 3.47 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.76 (s, 1 H) 7.14 (s, 1 H) 7.50 - 7.39 (m, 4 H) 7.69 (t, J=51.4 Hz, 1 H) 8.41 (s, 1 H).
【０２４３】
ステップ２２．１：２，２−ジフルオロ−Ｎ’−（３−メトキシ−５−ニトロピリジン−２−イル）アセトヒドラジド
【０２４４】
【化７６】
2016520118.tif 000078
ジオキサン（２５ｍＬ）中の２−ヒドラジニル−３−メトキシ−５−ニトロピリジン（２．５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、２，２−ジフルオロ酢酸無水物（１．７５ｍＬ、１４．０ｍｍｏｌ）を室温で滴下添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した後、懸濁液を氷水（１００ｍＬ）に添加した。沈殿した生成物を濾別し、水で洗浄し、減圧下５０℃で２０時間乾燥させて、表題生成物（３．４５ｇ、９７％）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．５６分（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３４（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.99 (s, 3 H), 6.45 (t, J=52.8 Hz, 1 H), 7.79 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 8.65 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 9.64 (s, 1 H), 11.02 (s, 1 H).
【０２４５】
ステップ２２．２：３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン
【０２４６】
【化７７】
2016520118.tif 000079
ＡＣＮ（２０ｍＬ）中の２，２−ジフルオロ−Ｎ’−（３−メトキシ−５−ニトロピリジン−２−イル）アセトヒドラジド（３．４５ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．７２ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＰＯＣｌ３（１．８５ｍＬ、１９．７５ｍｍｏｌ）をＡｒ下でゆっくりと添加した。反応混合物を９０℃で１５時間加熱した。反応混合物を４０℃のＨ２Ｏにゆっくりと添加し、ＮａＨＣＯ３で慎重にｐＨ６．５に中和した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた抽出物を少量のブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１）７５：２５〜０：１００］によって精製して、表題生成物（２．２９ｇ、６９％）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．６４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.16 (s, 3 H) 7.50 (s, 1 H) 7.89 (t, J=51.5 Hz, 1 H) 9.38 (s, 1 H).
【０２４７】
ステップ２２．３：３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン
【０２４８】
【化７８】
2016520118.tif 000080
ＭｅＯＨ（７５ｍＬ）中の３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−６−ニトロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（２．２ｇ、８．３ｍｍｏｌ）の溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．８６ｇ）上で、５０℃にて１０００ｍｂａｒのＨ２で４時間水素化した。反応混合物をセライト越しに濾過し、濾液を濃縮した。固化した粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１中ですり混ぜ、固体を濾別し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、乾燥させて、表題生成物（１．４４ｇ、収率７５％）をベージュ色固体として得た。ｔＲ：０．４４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２１５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.96 (s, 3 H) 5.43 (s, 2 H) 6.56 (s, 1 H) 7.35 (s, 1 H) 7.61 (t, J=51.5 Hz, 1 H).
【０２４９】
ステップ２２．４：６−アジド−３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン
【０２５０】
【化７９】
2016520118.tif 000081
ＡＣＮ（１０ｍＬ）中の３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−アミン（１．４２ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリメチルシリルアジド（２．６５ｍＬ、１９．９ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。０〜５℃で１０分間撹拌した後、３０分間にわたるＡＣＮ（２０ｍＬ）中の亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（４．７３ｍＬ、３９．８ｍｍｏｌ）の溶液。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１）５０：５０〜０：１００］によって精製して、表題生成物（２．２９ｇ、６９％）を黄色固体として得た。ｔＲ：０．７０分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.07 (s, 3 H) 6.83 (s, 1 H) 7.73 (t, J=51.6 Hz, 1 H) 8.15 (s, 1 H).
【０２５１】
ステップ２２．５：（Ｅ）−エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）イミノ）アセテート
【０２５２】
【化８０】
2016520118.tif 000082
ＴＨＦ（１２ｍＬ）中の６−アジド−３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（５００ｍｇ、２．０８２ｍｍｏｌ）およびエチル２−（４−クロロフェニル）−２−オキソアセテート（４６５ｍｇ、２．１８６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフェニルホスフィン（６５５ｍｇ、２．４９８ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。反応混合物を、室温で１時間、７０℃で２４時間、９０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ７５：２５〜０：１００）の後に表題生成物（５１８ｍｇ、５８％）を黄色固体として得た。Ｒｆ＝０．５５（ＥｔＯＡｃ）；ｔＲ：１．１３分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４０９／４１１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.98 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 4.05 (s, 3 H), 4.24 (q, J=7.1 Hz, 2 H), 6.85 (s, 1 H), 7.69 (d, J=8.4 Hz, 2 H), 7.73 (t, J=51.0 Hz, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.92 (d, J=8.4 Hz, 2 H).
【０２５３】
ステップ２２．６：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート
【０２５４】
【化８１】
2016520118.tif 000083
トルエン（８ｍＬ）、イソプロパノール（４．６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．１ｍＬ）中の（Ｅ）−エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）イミノ）アセテート（５１０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、［Ｒｕ（ＣＯ）２（Ｐｈ４Ｃ４ＣＯ）］２（２８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、Can. J. Chem, 2005, 83, 909）をアルゴン下で添加し、反応混合物をマイクロ波中１１０℃で４５分間加熱した。反応混合物を濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ７５：２５〜０：１００）によって精製して、表題生成物（４６１ｍｇ、８８％）を薄黄色固体として得た。Ｒｆ＝０．３５（ＥｔＯＡｃ）；ｔＲ：１．０７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４１１／４１３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.16 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 3.96 (s, 3 H), 3.99 - 4.26 (m, 2 H), 5.34 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 6.83 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 6.89 (s, 1 H), 7.13 (s, 1 H), 7.49 (d, J=8.4 Hz, 2 H), 7.56 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.57 (t, J=52.4 Hz, 1 H).
【０２５５】
ステップ２２．７：エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート
【０２５６】
【化８２】
2016520118.tif 000084
表題化合物は、エチル２−（４−クロロフェニル）−２−（（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）アミノ）アセテート（ステップ２１．６）およびＳ−ｔｅｒｔ−ブチル３−シクロプロピル−３−オキソプロパンチオエート（ステップ１．５）を使用し、ステップ１．２に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．０４分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５２１／５２３［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；Ｒｆ＝０．３４（ＥｔＯＡｃ）。
【０２５７】
ステップ２２．８：５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）−１−（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピロリジン−２，４−ジオン
【０２５８】
【化８３】
2016520118.tif 000085
表題化合物は、５−（４−クロロフェニル）−３−（シクロプロパンカルボニル）−１−（３−（ジフルオロメチル）−８−メトキシ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）ピロリジン−２，４−ジオン（ステップ２１．７）を使用し、ステップ１．３に記載した手順と同様にして調製した。Ｒｆ＝０．１３（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）；ｔＲ：０．８８分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４７５／４７７［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.06 - 1.19 (m, 4 H), 3.13 - 3.21 (m, 1 H), 3.93 (s, 3 H), 5.87 (s, 1 H), 7.16 (s, 1 H), 7.65 (t, J=51.0 Hz, 1 H), 8.63 (s, 1 H).
【０２５９】
実施例２３：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２６０】
【化８４】
2016520118.tif 000086
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）および６−クロロ−３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（ＣＡＳ  Ｒｅｇ．２３０６９−７２−９）を使用し、実施例６に記載した手順と同様にして調製した。Ｒｆ＝０．２４（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９：１）；ｔＲ：１．０６分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４３４／４３６［Ｍ−Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.98 - 1.16 (m, 4 H), 1.99 - 2.09 (m, 1 H), 2.55 (s, 3 H), 2.57 (s, 3 H), 3.46 (s, 3 H), 6.71 (s, 1 H), 7.40 - 7.54 (m, 4 H), 8.16 (s, 1 H).
【０２６１】
実施例２４：（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２６２】
【化８５】
2016520118.tif 000087
６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（実施例２２）のラセミ混合物のキラル分取クロマトグラフィー（システム：Ｍｇ  ＩＩ分取ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ  ６０：４０（定組成）、流速：５０ｍＬ／分）の後、表題化合物を鏡像異性的に純粋（＞９９％ｅｅ）に得た。
【０２６３】
（Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：２．７５分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０２６４】
（Ｒ）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン、ｔＲ：５．０６分（システム：Ｔｈａｒ分析ＳＦＣ；カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ  ４．６×２５０ｍｍ；移動相：ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）６０：４０（定組成）、流速：２．４ｍＬ／分；検出ＵＶ：２２０ｎｍ）。
【０２６５】
実施例２５：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２６６】
【化８６】
2016520118.tif 000088
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ２１．１）および６−クロロ−３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（ＣＡＳ  Ｒｅｇ．２３０６９−７２−９）を使用し、実施例６に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．０７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５００／５０２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.09 - 1.32 (m, 4 H), 2.17 (tt, J=8.4, 5.1 Hz, 1 H), 2.52 (s, 3 H), 2.58 (s, 3 H), 3.47 (s, 3 H), 6.13 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 6.76 (s, 1 H), 7.32 (s, 4 H), 7.44 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 8.15 (d, J=1.5 Hz, 1 H).
【０２６７】
実施例２６：６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２６８】
【化８７】
2016520118.tif 000089
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−５−（１，４−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−６−イル）−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ２１．１）および６−ブロモ−３，８−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジンを使用し、実施例４に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９３分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９９／５０１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.03 - 1.30 (m, 4 H) 2.14 (d, J=4.7 Hz, 1 H) 2.45 (s, 3 H) 2.62 (s, 3 H) 3.48 (s, 3 H) 6.10 (s, 1 H) 6.71 (s, 1 H) 7.23 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.31 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.34 (br. s., 1 H) 7.47 (s, 1 H) 8.37 (s, 1 H).
【０２６９】
実施例２７：ｔｅｒｔ−ブチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート
【０２７０】
【化８８】
2016520118.tif 000090
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）およびｔｅｒｔ−ブチル（６−ブロモ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート（ステップ２７．３）を使用し、実施例６に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：１．１５分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５３４／５３６［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.95 - 1.05 (m, 4 H) 1.49 (s, 9 H) 2.02 (m, 1 H) 2.62 (s, 3 H) 3.46 (s, 3 H) 6.58 (s, 1 H) 7.40 (m, 4 H) 7.78 (s, 1 H) 8.21(s, 1 H) 9.18 (s, 1 H).
【０２７１】
ステップ２７．１：Ｎ’−（３，５−ジブロモピリジン−２−イル）アセトヒドラジド
【０２７２】
【化８９】
2016520118.tif 000091
表題化合物は、３，５−ジブロモ−２−ヒドラジニルピリジン（ＣＡＳ  ｒｅｇ．１２８９０２４−９５−８）および無水酢酸を使用し、実施例５（ステップ５．２）に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．６５分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３０８／３１０／３１２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.89 (s, 3 H), 8.12 (d, J=2.1 Hz, 1 H), 8.18 (d, J=2.1 Hz, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 9.78 (s, 1 H).
【０２７３】
ステップ２７．２：６，８−ジブロモ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン
【０２７４】
【化９０】
2016520118.tif 000092
ジオキサン（１５ｍＬ）中のＮ’−（３，５−ジブロモピリジン−２−イル）アセトヒドラジド（１．５ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、酢酸（６．９５ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を密封チューブ内１２０℃で４８時間加熱した。反応混合物を濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１）５０：５０〜０：１００］によって精製して、表題生成物（１．２６ｇ、８８％）を無色固体として得た。ｔＲ：０．６３分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２９０（２９２／２９４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.69 (s, 3 H), 7.94 (d, J=1.4 Hz, 1 H), 8.83 (d, J=1.4 Hz, 1 H).
【０２７５】
ステップ２７．３：ｔｅｒｔ−ブチル（６−ブロモ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート
【０２７６】
【化９１】
2016520118.tif 000093
ジオキサン（１５ｍＬ）中の６，８−ジブロモ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン（１．０ｇ、３．４０ｍｍｏｌ、ステップ２７．２）、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（０．５９８ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２．２１７ｇ、６．８１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、キサントホス（０．２９５ｇ、０．５１０ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３ＣＨＣｌ３（０．１７６ｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、反応混合物を１００℃で８時間加熱した。反応混合物をブラインに添加し、生成物をＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ  ５：１で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１）８０：２０〜０：１００］によって精製して、表題生成物（０．６ｇ、５３％）を無色固体として得た。ｔＲ：０．９７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：３２７／３２９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.50 (s, 9 H), 2.67 (s, 3 H), 7.72 (d, J=1.5 Hz, 1 H), 8.42 (d, J=1.5 Hz, 1 H), 9.46 (s, 1 H).
【０２７７】
実施例２８：５−（８−アミノ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル）−６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン
【０２７８】
【化９２】
2016520118.tif 000094
ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート（５９ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ、実施例２７）の溶液に、ＴＦＡ（０．３３４ｍＬ、４．３３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン／（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１）８０：２０〜０：１００］によって精製して、表題生成物（２４ｍｇ、４９％）を薄黄色固体として得た。ｔＲ：０．８７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：４３４／４３６［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.95 - 1.15 (m, 4 H) 2.00 (m, 1 H) 2.56 (s, 3 H) 3.46 (s, 3 H) 6.06 (s, 1 H) 6.34 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 6.47 (s, 1 H) 7.32 - 7.46 (m, 4 H) 7.75 (s, 1 H).
【０２７９】
実施例２９：エチル（６−（６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−４−オキソピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート
【０２８０】
【化９３】
2016520118.tif 000095
表題化合物は、６−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−１−メチル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−４（１Ｈ）−オン（ステップ５．１）、エチル（６−ブロモ−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−８−イル）カルバメート（ステップ２９．１）および塩基としてのＫ３ＰＯ４を使用し、実施例６に記載した手順と同様にして調製した。ｔＲ：０．９７分（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：５０６／５０８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ１）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.96 - 1.16 (m, 4 H), 1.26 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 1.97 - 2.05 (m, 1 H), 2.64 (s, 3 H), 3.48 (s, 3 H), 4.18 (q, J=7.1 Hz, 2 H), 6.60 (s, 1 H), 7.37 - 7.44 (m, 4 H), 7.82 (s, 1 H), 8.27 (d, J=1.8 Hz, 1 H), 9.74 (s, 1 H).
【０２８１】
アッセイ
本発明による化合物の活性は、以下の方法によって評価することができる。
【０２８２】
ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、およびＢＲＤ４に対するＴＲ−ＦＲＥＴ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ：
すべてのアッセイは、３８４ウェルマイクロタイタープレート中で実施した。各アッセイプレートは、４０種の試験化合物の８点段階希釈液、ならびに１６種の高濃度対照および１６種の低濃度対照を含有した。液体ハンドリングおよびインキュベートステップは、ロボットアームを装備したＩｎｎｏｖａｄｙｎｅ  Ｎａｎｏｄｒｏｐ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  ＣａｔＸ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｔｗｉｓｔｅｒ  ＩＩ）およびインキュベーター（Ｌｉｃｏｎｉｃ  ＳＴＸ４０、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｃｙｔｏｍａｔ  ２Ｃ４５０）で行った。ＨｕｍｍｉｎｇＢｉｒｄナノディスペンサー（Ｚｉｎｓｓｅｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃ）を用いて、９０％ＤＭＳＯ中の化合物溶液５０ｎｌ／ウェルを添加することによって、アッセイプレートを調製した。４．５μｌ／ウェルのブロモドメインタンパク質（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％ＢＳＡ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４５ｎＭ  Ｈｉｓ−Ｂｒｄ２（６０〜４７２）または４５ｎＭ  Ｈｉｓ−Ｂｒｄ３（２０〜４７７）または４５ｎＭ  Ｈｉｓ−Ｂｒｄ４（４４〜４７７）、タンパク質はすべて自社で生産した）および４．５μｌ／ウェルのペプチド溶液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％ＢＳＡ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、６０ｎＭアセチル−ヒストンＨ４（ＡｃＫ５、８、１２、１６）（Ｂｉｏｓｙｎｔａｎ  ＧｍｂＨ））を段階的に添加することによって、アッセイを開始した。反応物を３０℃で３５分間インキュベートした。その後、４．５μｌ／ウェルの検出ミックス（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％ＢＳＡ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｎＭ  Ｅｕ標識抗Ｈｉｓ６抗体、２１ｎＭストレプトアビジン−アロフィコシアニン）を添加した。３０℃で３５分間インキュベートした後、プレートをＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで測定した。５０％の阻害を引き起こす濃度（ＩＣ５０値）を、異なる化合物濃度における阻害パーセント値から、非線形回帰分析によって決定した。
【０２８３】
ＣＲＥＢＢＰに対するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ
ブロモドメイン選択性を評価するため、本発明者らは、ＣＲＥＢＢＰ遺伝子によってコードされるブロモドメインを使用する結合アッセイを計画した。同様のプロトコールを用いて、ただし、検出読み出しとしてＴＲ−ＦＲＥＴの代わりにＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ａｓｓａｙ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、化合物をＣＲＥＢＢＰアッセイにおいて試験した。４．５μｌ／ウェルのブロモドメインタンパク質（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０２％ＢＳＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３２４ｎＭ  Ｈｉｓ−ＣＲＥＢＢＰ（１０８１〜１１９７）（Ｖｉｖａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｌｔｄ．で注文生産））および４．５μｌ／ウェルのペプチド溶液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０２％ＢＳＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１２０ｎＭアセチル−ヒストンＨ４（ＡｃＫ５、８、１２）（Ｂｉｏｓｙｎｔａｎ  ＧｍｂＨ））を段階的に添加することによって、アッセイを開始した。反応物を３０℃で３５分間インキュベートした。その後、４．５μｌ／ウェルの検出ミックス（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０２％ＢＳＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４５μｇ／ｍｌ  Ｎｉ−キレートアクセプタービーズ、４５μｇ／ｍｌストレプトアビジン−ドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ））を添加した。室温で６０分間インキュベートした後、プレートをＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで測定した。ＩＣ５０値を、異なる化合物濃度における阻害パーセント値から、非線形回帰分析によって決定した。
【０２８４】
さらなるブロモドメイン選択性プロファイリングのため、類似のプロトコールを個々のアッセイに特異的な若干の改変をして使用し、ＴＲ−ＦＲＥＴまたはＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎのいずれかを検出に使用して、追加のパネルアッセイを実施した。
【０２８５】
化合物希釈液の調製
試験化合物をＤＭＳＯ（１０ｍＭ）に溶解し、固有の２Ｄマトリックスを有する１．４ｍＬ平底またはＶ型Ｍａｔｒｉｘチューブに移した。ストック溶液は、すぐに使用しない場合、＋２℃で保存した。試験手順については、バイアルを解凍し、スキャナーによって同定し、それによって後続の作業ステップの指針となる作業シートを作成した。
【０２８６】
化合物希釈液は、９６ウェルプレート中で作製した。この形式は、所望の場合４種の参照化合物（本アッセイおよび本明細書に開示されたタイプの他のアッセイのための先行技術による公知のＢＥＴ阻害剤）を含む、最大で４０種の個々の試験化合物の８濃度（１点）でのアッセイを可能にした。希釈プロトコールには、「プレ希釈プレート」、「マスタープレート」、および「アッセイプレート」の生成が含まれた。
【０２８７】
プレ希釈プレート：９６ポリプロピレンウェルプレートをプレ希釈プレートとして使用した。プレート位置Ａ１〜Ａ１０のそれぞれに１０種の試験化合物、Ａ１１に１種の標準化合物、およびＡ１２に１種のＤＭＳＯ対照を含む、合計４つのプレ希釈プレートを調製した。すべての希釈ステップは、ＨａｍｉｌｔｏｎＳＴＡＲロボットで行った。
【０２８８】
マスタープレート：４つの「プレ希釈プレート」の標準化合物および対照を含む個々の化合物希釈液３０μＬを３８４「マスタープレート」に移し、これらは、９０％のＤＭＳＯ中、それぞれ以下の濃度：１００００、３００３、１０００、３００、１００、３０、１０、および３μＭを含んでいた。
【０２８９】
アッセイプレート：次いで、ＨｕｍｍｉｎｇＢｉｒｄ  ３８４チャネルディスペンサーを用いて、「マスタープレート」の化合物希釈液各５０ｎＬを３８４ウェル「アッセイプレート」にピペッティングすることによって、同一の「アッセイプレート」を調製した。これらのプレートを、１３．５５μＬの総体積で実施されたアッセイに直接使用した。これは、アッセイにおいて、３７、１１、３．７、１．１、０．３７、０．１１、０．０３７、および０．０１１μＭの最終化合物濃度、ならびに０．３７％の最終ＤＭＳＯ濃度をもたらした。
【０２９０】
細胞成長阻害アッセイ
ヒト白血病細胞株ＭＶ−４−１１、ＴＨＰ−１、およびＫ−５６２を用いて、細胞の増殖および生存率に対するＢＥＴ阻害剤の作用を特徴付けた。細胞は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手し、３７℃で、加湿した５％ＣＯ２のインキュベーターにて、以下の培地中で培養した：ＭＶ−４−１１：ＤＭＥＭ高グルコース（Ａｎｉｍｅｄ  ＃１−２６Ｆ０１−Ｉ）、１０％ＦＣＳ（Ａｎｉｍｅｄ  ＃２−０１Ｆ２６−Ｉ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ａｎｉｍｅｄ  ＃５−１０Ｋ５０）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ａｎｉｍｅｄ  ＃Ｇ０３６２５Ｐ）、１×ペニシリン−ストレプトマイシン（Ａｎｉｍｅｄ  ＃Ｆ１２４７８Ｐ）；Ｋ−５６２：イスコフＭＥＭ（Ａｎｉｍｅｄ  ＃１−２８Ｆ１６−Ｉ）、１０％ＦＣＳ（Ａｎｉｍｅｄ  ＃２−０１Ｆ２６−Ｉ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ａｎｉｍｅｄ  ＃５−１０Ｋ５０）、１×ペニシリン−ストレプトマイシン（Ａｎｉｍｅｄ  ＃Ｆ１２４７８Ｐ）；ＴＨＰ−１：ＲＰＭＩ−１６４０（Ａｎｉｍｅｄ  ＃１−４１Ｆ０１−Ｉ）、１０％ＦＣＳ（Ａｎｉｍｅｄ  ＃２−０１Ｆ２６−Ｉ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ａｎｉｍｅｄ  ＃５−１０Ｋ５０）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ａｎｉｍｅｄ  ＃５−３１Ｆ１００）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ａｎｉｍｅｄ  ＃Ｇ０３６２５Ｐ）、１×ペニシリン−ストレプトマイシン（Ａｎｉｍｅｄ  ＃Ｆ１２４７８Ｐ）。ＡＭＬ株ＭＶ−４−１１およびＴＨＰ−１は、ＢＥＴ阻害剤に非常に感受性であり、ＢＥＴ阻害により大量の細胞死を示す（Zuber et al., Nature, 478 (2011), 524-8）。化合物により媒介される細胞増殖／生存率の抑制を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、細胞ＡＴＰレベルを定量することによって評価した。簡潔に言えば、細胞を２０μｌの新鮮な培地中で３８４ウェルプレートに播種し、続いて、その意図した最終濃度の５倍の化合物希釈液を含有する５μｌの培地を添加した。用量応答作用を、１０μＭから開始する試験化合物の３倍段階希釈によって評価した。細胞を３７℃および５％ＣＯ２で４日間インキュベートした後、細胞生存率に対する阻害剤の作用を、相応に装備されたＴｅｃａｎ  Ｍ２００マルチモードプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ、スイス）を使用して、供給業者のマニュアル通りに、２０μｌのＣＴＧの添加および発光定量（積分時間：１００ｍｓ）後に定量した。データ分析のため、培地を含有するが細胞を含有しないウェルにおいて決定されたアッセイバックグラウンド値を、すべてのデータ点から差し引いた。細胞毒性化合物と細胞増殖抑制化合物の区別を可能にするため、生細胞の数を、別個の細胞プレートを使用した化合物添加時（０日目）に観察された数に対して評価する。細胞増殖／生存率に対する特定の試験化合物濃度の作用を、ビヒクルのみ（ＤＭＳＯ、最終濃度０．１％）で処理した細胞について得られたバックグラウンドおよび０日目で補正された発光読み取り値を１００％として設定し、それに対するパーセンテージとして表し、培地を含有するウェルのその発光読み取り値を−１００％として設定する。最大半量（ＩＣ５０）および全成長阻害（ＴＧＩ）をもたらす化合物濃度を、標準的な４パラメーター曲線フィッティングを使用して決定した。
【０２９１】
Ｎｕｔフォーカス形成アッセイ
ＨＣＣ２４９４  ＮＵＴ正中部癌細胞（ＢＲＤ４−ＮＵＴ融合を発現している）をＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎから入手し、３７℃で、加湿した５％ＣＯ２のインキュベーターにて、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。
【０２９２】
化合物により媒介されるＢＲＤ４活性の阻害を、自動免疫蛍光顕微鏡法を使用して、核内ＢＲＤ４−ＮＵＴフォーカスの数および強度を定量することによってモニタリングした。簡潔に言えば、２０μｌの新鮮な培地中の５０００個の細胞をポリ−Ｄ−リシンでプレコーティングされた３８４ウェルプレートに播種し、３７℃および５％ＣＯ２で終夜インキュベートし、続いて、その意図した最終濃度の５倍の化合物希釈液を含有する５μｌの培地を添加した。用量応答作用を、１０μＭから開始する試験化合物の３倍段階希釈によって評価した。細胞を３７℃および５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、細胞を３．７％ホルムアルデヒドとともに１０分間インキュベートすることによって固定し、続いて、一次抗体としてのウサギ抗ＮＵＴ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃３６２５）および二次抗体としてのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８標識ヤギ抗ウサギ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃Ａ１１００８）（後者は、ＤＮＡ色素としての１μｇ／ｍＬ  Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２で補完した）を使用して、免疫蛍光染色を行った。Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴｉ自動蛍光顕微鏡法プラットフォーム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で適切なフィルターセットを使用して、アッセイプレートを画像化し、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  Ｓｐｏｔ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＢｉｏＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ画像分析アルゴリズム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、核あたりのＮＵＴフォーカス数の母集団平均を定量する。ＮＵＴフォーカスの数および強度に対する特定の試験化合物濃度の作用を、ビヒクルのみ（ＤＭＳＯ、最終濃度０．１％）で処理した細胞について得られた値を１００として設定し、それに対するパーセンテージとして表す。上述の読み出しパラメーターの最大半量（ＩＣ５０）阻害をもたらす化合物濃度を、標準的な４パラメーター曲線フィッティングを使用して決定した。
【０２９３】
本出願に記載された生化学および細胞アッセイを使用すると、本発明の化合物は、以下に提示する表１および２による阻害効能を示す。
【０２９４】
【表１】
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【０２９５】
【表２−１】
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【０２９６】
【表２−２】
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【国際調査報告】
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