(57)【要約】  本開示は、特定の化合物、ならびに組成物、及び薬学的製剤を使用して、心臓リモデリング及び心疾患を治療するための新規方法を提供する。いくつかの実施形態において、化合物は、ＭＥＦ２転写因子のアセチル化を阻害し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における心機能を改善する方法であって、下記式Ｉを有する化合物の群から独立して選択される治療有効量の１種以上の化合物を前記対象に投与することを含み、該下記式Ｉを有する化合物の群はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、方法。
【化１】
2016535101.tif 000015
式Ｉ
式中、
Ａ環及びＢ環は、フェニル環及びピリジル環からなる群から独立して選択され、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは４、５又は６である。
【請求項２】
前記１種以上の化合物は、下記式ＩＩを有する化合物の群から独立して選択され、該下記式ＩＩを有する化合物の群はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【化２】
2016535101.tif 000016
式ＩＩ
式中、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは４、５又は６である。
【請求項３】
Ｒ１〜Ｒ３及びＲ５は水素であり、Ｒ４はハロゲンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５は水素であり、Ｒ３はハロゲンである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記１種以上の化合物は下記７ＭＩ又は８ＭＩの式を有し、前記１種以上の化合物はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【化３】
2016535101.tif 000017
７ＭＩ
【化４】
2016535101.tif 000018
８ＭＩ
【請求項６】
前記１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のアセチル化を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ６の阻害のために５０μＭを超えるＩＣ５０を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ１よりもＨＤＡＣ３を優先的に阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記対象は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、左室（ＬＶ）拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記対象は、心線維症、高血圧、大動脈弁狭窄、心筋梗塞、心筋炎、心筋症、弁逆流、弁膜症、左室機能不全、心虚血、拡張機能障害、慢性狭心症、頻脈、及び徐脈からなる状態の群から独立して選択される１つ以上の状態であると診断された、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
心機能は、請求項９に記載の前記対象の症状のうちの１つ以上を改善することによって改善される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
対象における心臓リモデリングを治療する方法であって、下記式Ｉを有する化合物の群から独立して選択される治療有効量の１種以上の化合物を前記対象に投与することを含み、該下記式Ｉを有する化合物の群はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、方法。
【化５】
2016535101.tif 000019
式Ｉ
式中、
Ａ環及びＢ環は、フェニル環及びピリジル環からなる群から独立して選択され、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは４、５又は６である。
【請求項１３】
Ｒ１〜Ｒ３及びＲ５は水素であり、Ｒ４はハロゲンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５は水素であり、Ｒ３はハロゲンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記１種以上の化合物は下記７ＭＩ又は８ＭＩの式を有し、前記１種以上の化合物はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【化６】
2016535101.tif 000020
７ＭＩ
【化７】
2016535101.tif 000021
８ＭＩ
【請求項１６】
前記心臓リモデリングは、心収縮力の低下、心臓の後壁の厚さの増加、心室重量の増加、心線維症、筋肥大、筋細胞壊死、筋細胞アポトーシス、線維芽細胞増殖の増大、及び線維性コラーゲンの増加からなる群から選択される１つ以上の症状として顕在化する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象は、心線維症、高血圧、大動脈弁狭窄、心筋梗塞、心筋炎、心筋症、弁逆流、弁膜症、左室機能不全、心虚血、拡張機能障害、慢性狭心症、頻脈、及び徐脈からなる群から独立して選択される１つ以上の状態であると診断された、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のアセチル化を阻害する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
対象における心線維症を治療する方法であって、下記式Ｉを有する化合物の群から独立して選択される薬学的に有効な量の１種以上の化合物を前記対象に投与することを含み、該下記式Ｉを有する化合物の群はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、方法。
【化８】
2016535101.tif 000022
式Ｉ
式中、
Ａ環及びＢ環は、フェニル環及びピリジル環からなる群から独立して選択され、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは４、５又は６である。
【請求項２０】
対象における左室機能不全を治療する方法であって、下記式Ｉを有する化合物の群から独立して選択される薬学的に有効な量の１種以上の化合物を前記対象に投与することを含み、該下記式Ｉを有する化合物の群はその薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む、方法。
【化９】
2016535101.tif 000023
式Ｉ
式中、
Ａ環及びＢ環は、フェニル環及びピリジル環からなる群から独立して選択され、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−又は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは４、５又は６である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１３年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６１／９００，００７号に対する優先権を主張するものであり、参照により、あたかも本明細書に完全に記載されているかのように、その全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
心臓は、心臓リモデリングを引き起こすことによって最初に心臓の外傷または病的負荷に応答する。そのような心臓リモデリングの変化は、異なる心臓負荷の状況を緩和するが、長期的には心機能不全、そして最終的には心不全をもたらす。心臓リモデリングは、心筋細胞内で起こる複雑な一連の転写、シグナル伝達、構造的、及び機能的な事象の頂点である。また、心臓リモデリングは、線維芽細胞、冠血管系、及び浸潤性炎症細胞を含む心室内の他の細胞成分にも関与する（Ｂｉｓｐｉｎｇ，２０１４）。心臓リモデリングは、筋肥大、壊死、アポトーシス、線維症、線維性コラーゲンの増加、及び線維芽細胞増殖を含む細胞変化を包含する。
【０００３】
現在、５００万人のアメリカ人が、多くの形態の心機能不全の最終共通路である慢性心不全に罹患している。人口の高齢化に伴い、あらゆる形態の心疾患の治療にかかる直接的な医療費は、２０１０年の２７２億ドルから２０３０年には８１８億ドルへと３倍になるであろうと予測されている（Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ，２０１１）。心不全診断の約５０％は、虚血性心疾患の非存在下における心臓リモデリング及び関連する収縮不全に関与する。現在のところ、人口の高齢化に伴って有病率が急増しているこの形態の心不全に対する特異的治療は存在しない。
【０００４】
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）、アルドステロン拮抗薬、及びβアドレナリン受容体遮断薬（β遮断薬）を含む多くの治療薬の有効性は、心拍出量低下または血流低下を矯正することのみを目的とし、症状の緩和を提供するが、これらは必ずしも心不全の進行を遅延させるか、または死亡率を低下させるわけではない（Ｃｏｈｎ，２０００）。この個人及び社会に対する非常に大きな負担を取り除くために、当該技術分野において心臓リモデリングを標的とする治療の必要性が存在する。
【０００５】
特定のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤は、心臓リモデリングを軽減する可能性を示す。トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、スクリプタイド、及びＳＡＨＡを含むこれらの強力な汎ＨＤＡＣ阻害剤は、低ナノモル範囲でＨＤＡＣを阻害する。しかしながら、ＨＤＡＣ阻害剤の治療効果は、それらが毒性を引き起こす可能性と慎重に比較検討されなければならない。悪心及び疲労の他に、血液毒性及びＱＴ延長が、ＨＤＡＣ阻害剤治療において報告されている（ＭｃＫｉｎｓｅｙ，２０１１）。汎ＨＤＡＣ阻害剤は、一過性の血小板減少症、また場合によっては骨髄抑制を引き起こす可能性がある。ＱＴ延長は、汎ＨＤＡＣ阻害剤を用いた治験において用量制限毒性として報告されている。したがって、当該技術分野において、毒性の副作用を起こさずに心臓リモデリングを抑制することができる新規化合物の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の一態様は、本明細書に開示される方法において使用することができる１種以上の化合物に関する。一実施形態において、１種以上の化合物は、式Ｉ
【化１】
2016535101.tif 000002
式Ｉ
の構造（その薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む）を含んでもよく、
式中、
Ａ環及びＢ環は、フェニル環及びピリジル環からなる群から独立して選択され、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは、４、５、または６である。
【０００７】
別の実施形態において、１種以上の化合物は、式ＩＩ
【化２】
2016535101.tif 000003
式ＩＩ
の構造（その薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む）を含んでもよく、
式中、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは、４、５、または６である。
【０００８】
別の実施形態において、１種以上の化合物は、７ＭＩまたは８ＭＩ
【化３】
2016535101.tif 000004
７ＭＩ、
【化４】
2016535101.tif 000005
８ＭＩ
の構造（その薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む）を含んでもよい。
【０００９】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物を対象に投与することを含む、対象における心機能を改善する方法に関する。別の実施形態は、対象において心機能を改善するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００１０】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を対象に投与することを含む、対象における心臓リモデリングを治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において心臓リモデリングを治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、心臓リモデリングは、心収縮力の低下、心臓の後壁の厚さの増加、及び／または心室重量の増加を含む症状として顕在化し得る。いくつかの実施形態において、心臓リモデリングは、心線維症、筋肥大、筋細胞壊死、筋細胞アポトーシス、線維芽細胞増殖の増大、及び／または線維性コラーゲンの増加として顕在化し得る。
【００１２】
いくつかの実施形態において、心臓リモデリングは、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、左室（ＬＶ）拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状として顕在化し得る。
【００１３】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における心線維症を治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において心線維症を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００１４】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における左室機能不全を治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において左室機能不全を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、左室機能不全は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、ＬＶ拡張期径の増大、ＬＶ収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、及び／またはＬＶ重量の増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状として顕在化し得る。
【００１６】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における筋細胞アポトーシスを阻害する方法に関する。別の実施形態は、対象において筋細胞アポトーシスを阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００１７】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、心臓リモデリングの症状が顕在化している対象におけるＭＥＦ２のアセチル化を阻害する方法に関する。別の実施形態は、心臓リモデリングの症状が顕在化している対象においてＭＥＦ２のアセチル化を阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、症状は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、ＬＶ拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加を含む群から独立して選択される１つ以上の症状であり得る。
【００１９】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、左室機能不全を有する対象におけるＭＥＦ２のアセチル化を阻害する方法に関する。別の実施形態は、左室機能不全を有する対象においてＭＥＦ２のアセチル化を阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００２０】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、心線維症を有する対象におけるＭＥＦ２のアセチル化を阻害する方法に関する。別の実施形態は、心線維症を有する対象においてＭＥＦ２のアセチル化を阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００２１】
本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、対象は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、ＬＶ拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状を有し得る。
【００２２】
本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、対象は、心線維症、高血圧、大動脈弁狭窄、心筋梗塞、心筋炎、心筋症、弁逆流、弁膜症、左室機能不全、心虚血、拡張機能障害、慢性狭心症、頻脈、及び徐脈からなる群から独立して選択される１つ以上の状態であると診断されている場合がある。
【００２３】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞におけるＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞における心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞におけるαミオシン重鎖（α−ＭＨＣ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞におけるβミオシン重鎖（β−ＭＨＣ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞における筋小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰアーゼ（ＳＥＲＣＡ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞における１型コラーゲン（Ｃｏｌ  １）または３型コラーゲン（Ｃｏｌ  ３）の発現を阻害し得る。
【００２４】
本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のアセチル化を阻害し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣを核から細胞質に再局在化させ得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のその補因子（すなわち、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ）への結合を阻害し得る。
【００２５】
本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ６の阻害のために５０μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ１よりもＨＤＡＣ３を優先的または選択的に阻害し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨｅＬａ細胞核抽出物における全ヒストン脱アセチル化の阻害を検出するアッセイにおいて決定されるＨＤＡＣの阻害のために１μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨｅＬａ細胞核抽出物における全ヒストン脱アセチル化の阻害を検出するアッセイにおいて決定されるＨＤＡＣの阻害のために０．５μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】アセチル化欠損ＭＥＦ２Ｄ変異体が、筋細胞の肥大応答を低下させ、肥大のドミナントネガティブ阻害因子として作用したことを示す。新生仔ラット心室筋細胞（ＮＲＶＭ）をビヒクル（濃いグレーのバー）または２μＭノルエピネフリン（ＮＥ）（薄いグレーのバー）のいずれかで処理した。野生型（ＷＴ）または２つの異なるアセチル化欠損ＭＥＦ２変異体（Ｍｕｔ１、ＭＥＦ２Ｄ  Ｋ４２４ＲもしくはＭｕｔ２、ＭＥＦ２Ｄ  Ｉ４２３Ａ）のうちの一方の存在下において、ＮＥによりＮＲＶＭ培養物中で肥大を誘導した。
【図２】ＭＥＦ２阻害剤が、血清誘導性の肥大を阻害したことを示す。図２Ａは、ＮＲＶＭを用いたインビトロアッセイに使用したＭＥＦ２阻害剤（７ＭＩ及び８ＭＩ）ならびに対照阻害剤（トリコスタチンＡ）の化学構造を示す。図２Ｂは、ＭＥＦ２阻害剤（７ＭＩ（黒いバー）、８ＭＩ（白いバー）、またはＴＳＡ（縞模様のバー））を受容したＮＲＶＭが、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）に対する増殖応答の抑制を呈したことを示している。細胞はまた、陰性対照としてＤＭＳＯ（薄いグレーのバー）またはビヒクル（濃いグレーのバー）でも処理した。阻害剤の効力の順序は、ＤＭＳＯ＜７ＭＩ＜ＴＳＡ＜８ＭＩであった。生存率は変化しなかった（図示せず）。
【図３】ＭＥＦ２阻害剤が、横大動脈狭窄（ＴＡＣ）によって引き起こされた圧負荷誘導性心肥大をブロックしたことを示す。横大動脈バンディングの直後に開始して２週間、指定濃度のＭＥＦ２阻害剤８ＭＩを毎日注射してマウスを処理した。Ｎ＝１条件当たり少なくとも３匹。マウスを偽手術（濃いグレーのバー）またはＴＡＣ（薄いグレーのバー）のいずれかに供した。図３Ａは、屠殺時に測定した心臓重量／脛骨比の結果を示す。図３Ｂは、左室駆出率（ＬＶＥＦ）の結果を示す。２週間で屠殺する前に、Ｖｅｖｏ  ７７０超音波システム上の心エコーにより、収縮機能の尺度である駆出率を決定した。
【図４】心臓リモデリングが顕在化しているヒト心臓において、ＭＥＦ２のアセチル化が増加されたことを示す。図４Ａは、３つの対照心臓（対照）及び９つの心筋症心臓（心臓リモデリング）を表す一連のヒト左心室心筋サンプルにおいて決定された、アセチル化状態にあるＭＥＦ２の代表的なブロットを示す。図４Ｂは、アセチル−リジンに正規化された濃度測定単位（ｎ．ｄ．ｕ．、正規化された濃度測定単位）として定量化された図４Ａの免疫ブロットからのデータを用いたグラフを示す。
【図５】８ＭＩ処理マウスにおけるＴＡＣ後の心筋重量の正規化を示す。ＴＡＣまたは偽手術の２１日後、かつ指定用量（ｎ＝４〜５／群）の８ＭＩを投与した後、マウスにおいて心臓重量／脛骨（ＨＷ／ＴＬ）を決定した。図５Ｂは、図５Ａのように処理したマウスの心臓のマッソントリクローム染色した代表的な四腔断面を用いて、８ＭＩ処理マウスにおけるＴＡＣ後の心臓の幾何学形状の正規化を示す。原寸＝１Ｘ。図５Ｃは、指定用量の８ＭＩで図５Ａのように処理したマウスにおける心エコーによる後壁圧の正規化を示す。図５Ｄは、図５Ａのように、及び指定の通りに処理したマウスの心筋の代表的なコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）で染色した切片を用いたインビボでの筋細胞サイズの正規化を示す。図５Ｅは、１条件当たり３匹のマウスからの少なくとも４つの心筋切片中の細胞からのＷＧＡ染色切片における細胞サイズの定量化を示す。
【図６】８ＭＩが圧負荷に関連する線維症を軽減することを示す。図６Ａは、指定の処理を受けたマウスの心筋の代表的な切片のマッソントリクローム染色を示す。図６Ｂは、全組織の面積に対して定量化して表した線維化の面積を示す。データは、１群当たり３匹のマウスからの少なくとも４つの切片を要約している。
【図７】８ＭＩが圧負荷に関連する転写及び機能の変化を阻止することを示す。図７Ａ〜７Ｇは、図４のように処理したマウスから得られた心筋サンプル中の定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された、指定された遺伝子からのｍＲＮＡ転写を示す。図７Ａは、１型コラーゲン（Ｃｏｌ  １）の発現を示す。図７Ｂは、３型コラーゲン（Ｃｏｌ  ３）の発現を示す。図７Ｃは、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）の発現を示す。図７Ｄは、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）の発現を示す。図７Ｅは、筋小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰアーゼ（ＳＥＲＣＡ）の発現を示す。図７Ｆは、βミオシン重鎖（β−ＭＨＣ）の発現を示す。図７Ｇは、αミオシン重鎖（α−ＭＨＣ）の発現を示す。Ｎ．ｄ．ｕ．＝正規化された転写単位。
【図８】ＴＡＣ後の８ＭＩ処理マウスにおける心機能の保存を示す。図８Ａは、駆出率（ＥＦ）を示す。図８Ｂは、短縮率（％）を示す。図８Ｃは、一回拍出量（ｍｌ）を示す。図８Ｄは、拡張終期の左室内径（ＬＶｉＤｄ）を示す。図８Ｅは、収縮終期の左室内径（ＬＶｉＤｓ）を示す。図８Ｆは、左室収縮期容積（ＬＶ  Ｖｓ）を示す。図８Ｇは、左室拡張期容積（ＬＶ  Ｖｄ）を示す。図８Ｈは、心拍数を示す。図８Ａ〜Ｈにおいて、ＴＡＣまたは偽手術から２１日後に、８ＭＩ（５、２０、及び４０ｍｇ／ｋｇ）またはそのビヒクルを投与したマウスにおいて心エコーを行った。
【図９】８ＭＩが圧負荷に関連するＭＥＦ２のアセチル化を低下したことを示す。指定されたように、指定用量の８ＭＩ、またはそのビヒクル（０）で処理したＴＡＣまたは偽手術マウスの心筋ライセートにおいて、実施例９に記載されるようにアセチル−ＭＥＦ２及びアセチル−ＧＡＴＡ４を測定した。８ＭＩによる処理は、負荷をかけていない心臓においてアセチル−ＭＥＦ２レベルを減少させない。ＭＥＦ２のアセチル化は、ＴＡＣによって増加し、８ＭＩによって低下する。心筋ライセートを抗汎ＭＥＦ２またはＧＡＴＡ４抗体のいずれかで免疫沈降し、ＭＥＦ２、ＧＡＴＡ４、またはアセチル−リジン（対照）に対する抗体でプローブした。図９に示される定量化データは、１群当たり３匹のマウスに由来し、全アセチル−リジンに正規化された（ウエスタンブロットは図示せず）。
【図１０】８ＭＩがＴＡＣの間に筋細胞アポトーシスを用量依存的に予防したことを示す。図１０は、ＴＡＣ手術マウスにおいて、偽手術マウスと比較して筋細胞アポトーシスが増加することを示す。８ＭＩによるマウスの処理は、筋細胞アポトーシスレベルを低下させる。
【図１１】７ＭＩ及び８ＭＩが、肝臓においてＢＭＬ−２１０またはＴＳＡよりも良好に代謝されることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下の説明は、本開示の実施形態を完全に理解し、その記載を可能にするための特定の詳細を提供する。しかしながら、当業者は、本開示はこれらの詳細なしで実施され得ることを理解するであろう。他の場合において、本開示の実施形態の説明を不必要に分かりにくくすることを避けるために、周知の構造及び機能は、詳細に示されていないかまたは記載されていない。
【００２８】
心臓リモデリングは、心臓外傷または心臓負荷後の、心臓のサイズ、形状、及び機能における変化として臨床的に顕在化し得る。左室リモデリングを評価するための尺度は、心臓のサイズ、形状、及び重量、駆出率、拡張終期及び収縮終期容積、ならびにピーク収縮力を含む。心臓リモデリングは、心筋梗塞、心虚血、圧負荷（大動脈弁狭窄、高血圧）、炎症性心筋疾患（心筋炎）、特発性拡張型心筋症または用量負荷（弁逆流）の後に起こり得る生理的状態として説明され得る。高血圧及び大動脈弁狭窄におけるような持続性の負荷上昇に対する心臓の応答は、過負荷がかかった心室において筋量の増加をもたらす。
【００２９】
外傷または負荷の結果として、収縮組織の損失後に一回拍出量を維持するための初期代償プロセスの一部として、筋細胞数が減少し、生存する筋細胞が伸長または肥大する。心室壁の厚さも増加する。線維芽細胞は、負荷または外傷によって活性化されると、コラーゲンの合成を増加させ、それによって心室の線維症を引き起こすことにより、リモデリングに寄与する。
【００３０】
リモデリングの一般的なシナリオは、心筋梗塞または急性虚血の後である。心筋壊死（細胞死）及び不均衡な心臓の菲薄化が見られる。この菲薄化した脆弱な領域は、他の健常な組織と同じようには心臓にかかる圧力及び用量負荷に耐えることができない。その結果、梗塞領域から生じる心室の拡張が見られる。心筋梗塞後の初期リモデリング段階は、左心室の機能及び心拍出量に改善または維持が見られるため、ある程度有益であると考えられ得る壊死領域及び心筋瘢痕化の修復をもたらす。経時的に、心臓が継続的なリモデリングを経るにつれて、心臓はあまり楕円形ではなくなり、より球状になる。心室の重量及び体積が増加し、それが相まって心機能に有害な影響を及ぼす。最終的には、拡張機能、または収縮の間に弛緩する心臓の能力が損なわれ、さらに低下を引き起こす可能性がある。
【００３１】
ＭｃＫｉｎｓｅｙに要約された以前の報告は、心臓における病的負荷に応答してＭＥＦ２の転写活性が上方制御され、今度はそれが心臓リモデリングを誘導することを示した（ＭｃＫｉｎｓｅｙ，２０１１）。マウスの心臓における構成的活性型ＭＥＦ２の異所性過剰発現が、拡張型心筋症を引き起こした（ＭｃＫｉｎｓｅｙ，２０１１）。培養したラット心筋細胞におけるＨＤＡＣ４またはＨＤＡＣ９のいずれかの異所性過剰発現は、ＭＥＦ２依存性転写及びアゴニスト依存性心肥大を協調的に抑制した。対照的に、マウスにおいてＨＤＡＣ９をコードする遺伝子の破壊は、心臓のＭＥＦ２活性の超活性化をもたらし、マウスのＨＤＡＣ５またはＨＤＡＣ９遺伝子のノックアウトは、圧負荷及び加齢に伴う自発性の病的肥大に応答して心肥大の悪化を引き起こす。ＭｃＫｉｎｓｅｙに要約されるこれらの以前の報告は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣがＭＥＦ２に結合し、ＭＥＦ２依存性転写を阻止することによる心肥大の内在性阻害因子であることを示した。
【００３２】
この背景知識を考慮して、Ｊａｙａｔｈｉｌｉａｋａは、本明細書に開示される化合物がＭＥＦ２のクラスＩＩａ  ＨＤＡＣへの結合を妨害すると以前に報告しているため、本明細書に開示される化合物は、心臓リモデリングを軽減または阻害するとは予想されない（Ｊａｙａｔｈｉｌｉａｋａ，２０１２）。Ｊａｙａｔｈｉｌｉａｋａは、本化合物がクラスＩＩａ  ＨＤＡＣを細胞核から細胞質に再局在化させたと以前に報告した。細胞質において、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣは、細胞の核に位置するＭＥＦ２をもはや抑制することはできない。本化合物がＭＥＦ２のクラスＩＩａ  ＨＤＡＣへの結合を妨害する場合、ＭＥＦ２依存性転写は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣによってもはや阻止されないが、代わりに上方制御されるであろう。上方制御されたＭＥＦ２依存性転写は、心臓リモデリングを誘導する。したがって、本明細書に開示される化合物は、ＭＥＦ２依存性転写のクラスＩＩａ  ＨＤＡＣによる阻止を妨害したため、これらは、心臓リモデリングを阻害するのではなく、むしろ心臓リモデリングを誘導するまたは増加させると予想される。
【００３３】
本発明に記載の特定の実施形態は、いかに本明細書に開示される化合物が心臓リモデリングの影響を著しく軽減したかを示す後述の実施例において本明細書に提供される予想外の結果に関連する。驚いたことに、本明細書に開示される化合物のハロゲン置換基は、血清で刺激した新生仔ラット心室筋細胞において、別のＢＭＬ−２１０様またはＰＡＯＡ様化合物と比較して筋細胞の細胞サイズの著しい減少を引き起こした（データは開示せず）。
【００３４】
Ｉ．化合物
【００３５】
一実施形態において、本明細書に開示される方法において使用することができる１種以上の化合物は、７ＭＩまたは８ＭＩ
【化５】
2016535101.tif 000006
７ＭＩ、
【化６】
2016535101.tif 000007
８ＭＩ
（その薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む）の構造を含んでもよい。
【００３６】
別の実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物は、式Ｉ
【化７】
2016535101.tif 000008
式Ｉ
の構造（その薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む）を含んでもよく、
式中、
Ａ環及びＢ環は、フェニル環及びピリジル環からなる群から独立して選択され、
Ｒ１〜Ｒ５は、水素及びハロゲンからなる群から各々独立して選択され、
Ｘ１及びＸ２は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−から各々独立して選択され、
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは、４、５、または６である、
【００３７】
いくつかの実施形態において、−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｌ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である。
【００３８】
いくつかの実施形態において、−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｌ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である。
【００３９】
いくつかの実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＦ）である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、Ａはフェニル環であり、Ｂはピリジル環である。
【００４１】
いくつかの実施形態において、Ａはフェニル環であり、Ｂはピリジル環であり、Ｒ１〜Ｒ３及びＲ５は水素であり、Ｒ４はハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＦ）である。
【００４２】
いくつかの実施形態において、Ａはフェニル環であり、Ｂはピリジル環であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５は水素であり、Ｒ３はハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＦ）である。
【００４３】
別の実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物は、式ＩＩ
【化８】
2016535101.tif 000009
式ＩＩ
（その薬学的に許容される溶媒和化合物、薬学的に許容されるプロドラッグ、薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される立体異性体を含み、また、あらゆる比率のそれらの混合物をさらに含む）の構造を含んでもよく、式中、Ｒ１〜Ｒ５、Ｘ１、Ｘ２、及びＬ１は、上記と同様に定義される。
【００４４】
いくつかの実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ４のうちの少なくとも１つは、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＦ）である。
【００４５】
いくつかの実施形態において、−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｌ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｌ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である。
【００４７】
別途指定のない限り、全ての置換基は、任意選択的に置換された（すなわち、さらに置換されているかまたは置換されていない）置換基を含むことを意図する。
【００４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のアセチル化を阻害し得る。
【００４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣの機能を阻害し得る。
【００５０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣを細胞の核から細胞質に再局在化させ得る。
【００５１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ６の阻害のために５０μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。
【００５２】
いくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ１よりもＨＤＡＣ３を優先的または選択的に阻害し得る。
【００５３】
いくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨｅＬａ細胞核抽出物における全ヒストン脱アセチル化の阻害を検出するアッセイにおいて、０．５μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。
【００５４】
驚いたことに、本明細書に開示される化合物は、汎ＨＤＡＣ阻害剤よりも毒性が低いと考えられる。実施例２及び４の実験結果は、マウスが、いずれの腎疾患もしくは肝疾患または他の有害な影響の徴候もなく、４週間１００ｍｇ／ｋｇの８ＭＩの１日用量に耐容性を示すことができることを証明した。対照的に、マウスにおいてＴＳＡに関して以前に報告された耐容性を示した１日投与量は、１ｍｇ／ｋｇであり、全てのマウスが生き延びたわけではなかった。より微弱なＨＤＡＣ阻害活性、及び特定のＨＤＡＣの阻害に対する優先度または特異性が、本明細書に開示される化合物の優れた毒性プロファイルに寄与している可能性が高い。
【００５５】
７ＭＩ、８ＭＩ、式Ｉ及び式ＩＩの構造式を有する化合物は、肝臓においてトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）またはＢＭＬ−２１０よりも代謝的に著しく安定である（実施例１１及び図１１を参照のこと）。
【化９】
2016535101.tif 000010
ＢＭＬ−２１０
【化１０】
2016535101.tif 000011
ＴＳＡ
ＢＭＬ−２１０と７ＭＩ及び８ＭＩの構造は関連しているが、ベンゼン環上のハロゲン置換基は、驚いたことに、ＢＭＬ−２１０と比較して、経時的に肝臓における７ＭＩ及び８ＭＩの代謝安定性を増加させた（図１１）。したがって、ピメロイル−アニリドオルトアミノアニリド様化合物のハロゲン置換基が、予想外にかつ著しく、薬物の生物学的利用能を増強させ、ＣＹＰによって媒介される薬物間相互作用の可能性を低下させる。同様に、７ＭＩ及び８ＭＩもまた、ＴＳＡと比較して肝臓における代謝安定性が著しく高い。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」化合物または組成物は、妥当な利益／リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症を起こすことなく、生物学的対象の組織または器官との接触に使用するのに好適である。前記化合物または組成物が他の成分とともに使用される場合、前記化合物または組成物は、前記他の成分とも適合性である。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「溶媒和化合物」という用語は、溶質（例えば、本明細書に開示される化合物）及び溶媒によって形成される種々の化学量論の複合体を指す。本発明の目的のためのそのような溶媒は、溶質の生物学的活性に干渉しない場合がある。好適な溶媒の例は、限定されないが、水、水溶液（例えば、緩衝液）、メタノール、エタノール、及び酢酸を含む。好ましくは、使用される溶媒は、薬学的に許容される溶媒である。好適な薬学的に許容される溶媒の例は、限定されないが、水、水溶液（例えば、緩衝液）、エタノール、及び酢酸を含む。好適な溶媒和化合物の例は、本発明による化合物の一水和物もしくは二水和物またはアルコラートである。
【００５８】
本明細書で使用される場合、化合物の薬学的に許容される塩は、化合物（例えば、本明細書に開示される化合物）の任意の薬学的に許容される酸付加塩及び／または塩基付加塩を指す。好適な酸は、有機及び無機の酸を含む。好適な塩基は、有機及び無機の塩基を含む。好適な無機酸の例は、限定されないが、塩酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、及びホウ酸を含む。好適な有機酸の例は、限定されないが、酢酸、トリフルオロ酢酸、ギ酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、安息香酸、グリコール酸、乳酸、クエン酸、及びマンデル酸を含む。好適な無機塩基の例は、限定されないが、アンモニア、ヒドロキシエチルアミン、及びヒドラジンを含む。好適な有機塩基の例は、限定されないが、メチルアミン、エチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチレンジアミン、ヒドロキシエチルアミン、モルホリン、ピペラジン、及びグアニジンを含む。本発明は、本明細書に記載の化合物の全ての水和物及び多形をさらに提供する。
【００５９】
ＩＩ．組成物
【００６０】
本明細書に開示される化合物は、１つ以上のキラル原子を含有してもよいか、またはさもなければ、通常、鏡像異性体及び／またはジアステレオマーである２つ以上の立体異性体として存在することが可能であってもよい。したがって、本明細書に開示される化合物を含む組成物は、立体異性体の混合物または鏡像異性体の混合物だけでなく、精製された立体異性体、精製された鏡像異性体、立体異性体的に富化された混合物、または鏡像異性的に富化された混合物を含んでもよい。本明細書に提供される組成物はまた、上記構造によって表される化合物の個々の異性体、及び任意の全体的または部分的に平衡化されたその混合物も含む。本明細書に開示される組成物はまた、１つ以上のキラル中心が反転されたその異性体との混合物として、上記構造によって表される化合物の個々の異性体も包含する。また、上記構造の全ての互変異性体及び互変異性体の混合物が本構造の範囲内に含まれ、好ましくは、本構造がそれに対応していることを理解されたい。
【００６１】
得られたラセミ体は、それ自体が既知である方法によって機械的にまたは化学的に異性体に分割することができる。ジアステレオマーは、好ましくは、光学活性分割剤を用いた反応によってラセミ混合物から形成される。好適な分割剤の例は、Ｄ及びＬ型の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、またはカンファースルホン酸等の種々の光学活性なカンファースルホン酸等の、光学活性酸である。また、光学活性分割剤を充填したカラムの助けを借りた鏡像異性体の分割も有益である。また、ジアステレオマーの分割も、例えば、クロマトグラフィーまたは分別再結晶等の標準的な精製プロセスによって実行することができる。
【００６２】
また、既に光学活性である出発材料を使用して、前述の方法によって、本明細書に開示される化合物の構造を含む光学活性化合物を得ることも可能である。
【００６３】
ＩＩＩ．薬学的製剤
【００６４】
本明細書で使用される場合、薬学的製剤は、治療有効量の１つ以上の本明細書に開示される化合物またはその組成物を含む。特定の実施形態において、薬学的製剤は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」、「治療有効濃度」、または「治療有効用量」は、そのような量を投与されていない対応する対象と比較して、疾患、障害、もしくは副作用の治療、治癒、予防、もしくは改善の向上、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらす量である。
【００６６】
この量は、限定されないが、化合物、組成物、またはその薬学的製剤の特徴（その活性、薬物動態、薬物動力学、及び生物学的利用能を含む）、治療される対象（年齢、性別、疾患の種類及び段階、全身健康状態、所与の投与量に対する応答性、ならびに薬物の種類を含む）または細胞の生理的条件。薬学的に許容される担体または製剤中の担体の性質、及び投与経路を含む様々な要因に依存して異なる。さらに、有効量または治療有効量は、化合物、組成物、またはその薬学的製剤が、単独で投与されるか、または他の薬物（複数可）、他の治療（単数／複数）、または他の治療方法（複数可）もしくはモダリティー（単数／複数）と組み合わせて投与されるかどうかに依存して異なり得る。臨床及び病理学分野の当業者は、通常の実験を通して、すなわち、１種以上の化合物、組成物、またはその薬学的製剤の投与に対する細胞または対象の応答を監視し、それに応じて投与量を調節することによって、有効量または治療有効量を決定することができるであろう。典型的な投与量は、上記要因に応じて、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であってもよい。他の実施形態において、投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ；または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ；または約５ｍｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。さらなる手引きについては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（ＵＳＩＰ），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５を参照されたく、これは、治療有効量を決定するためのさらなる手引きについて、あたかも本明細書に完全に記載されているように、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、「約」に続く値の±１０％、±５％、または±１％を指す。
【００６８】
「薬学的に許容される担体」は、ある位置、体液、組織、器官（内部及び外部）、または体の部分から、別の位置、体液、組織、器官、または体の部分に活性成分を運搬または輸送することに関与する、液体または固体の充填剤、賦形剤、添加剤、溶媒、またはカプセル化材料等の薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルである。各担体は、他の成分、例えば、製剤の本明細書に記載の化合物または他の成分と適合性であり、妥当な利益／リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症を起こすことなく、生物学的対象の組織または器官と接触して使用するのに好適であるという意味において「薬学的に許容される」。
【００６９】
薬学的に許容される担体は、当該技術分野で周知であり、限定されないが、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロース等；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン等；（３）セルロース、及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース等；（４）粉末トラガント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバター及び坐剤ワックス等；（９）油、例えば、ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及びダイズ油等；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール等；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール等；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル等；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質不含水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）アルコール、例えば、エチルアルコール及びプロパンアルコール等；（２０）リン酸緩衝液；ならびに（２１）薬学的製剤に用いられる他の非毒性の適合性物質を含む。
【００７０】
本明細書に開示される薬学的製剤は、必要に応じて、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤等、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム等の、生理的条件に近づけるための薬学的に許容される補助物質を含有してもよい。
【００７１】
薬学的製剤中の本明細書に開示される１種以上の化合物の濃度は、大きく異なってもよく、選択された特定の投与様式及び生物学的対象の必要性に応じて、主に、液量、粘度、体重等に基づいて選択される。例えば、本明細書に開示される化合物の濃度は、約０．０００１重量％〜１００重量％、約０．００１重量％〜５０重量％、約０．０１重量％〜３０重量％、約０．１重量％〜２０重量％、または約１重量％〜１０重量％であり得る。
【００７２】
好適な薬学的に許容される担体は、選択された投与様式、ならびに化合物の物理的及び化学的特性を考慮に入れて選択され得る。
【００７３】
当業者は、本明細書に開示される１種以上の化合物またはその組成物を含有する薬学的製剤は、経口的または静脈内等の非経口的経路を含む種々の経路によって対象に投与できることを認識するであろう。組成物はまた、皮下注射、皮下埋め込み、胃内、局所、及び／または膣内投与によっても投与され得る。組成物はまた、注射または挿管によっても投与され得る。
【００７４】
一実施形態において、薬学的担体は液体であってもよく、薬学的製剤は溶液の形態であろう。別の実施形態において、薬学的に許容される担体は固体であり、薬学的製剤は、散剤、錠剤、丸薬、またはカプセル剤の形態である。別の実施形態において、薬学的担体はゲルであり、薬学的製剤は、坐剤またはクリームの形態である。
【００７５】
固体担体は、香味剤、滑沢剤、可溶化剤、懸濁剤、増量剤、流動促進剤、圧縮助剤、結合剤、またはテーブル崩壊剤としても作用し得る１つ以上の物質を含むことができ、またそれは、カプセル化材料であってもよい。散剤中、担体は、微粉化された活性成分との混合物である微粉化された固体である。錠剤中、活性成分は、好適なで必要な圧縮特性を有する担体と混合され、所望の形状及びサイズに圧縮される。散剤及び錠剤は、好ましくは、最大約９９％の本明細書に開示される１種以上の化合物を含有する。好適な固体担体は、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖類、ラクトース、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、ポリビニルピロリジン、低融点ワックス、及びイオン交換樹脂を含む。
【００７６】
有効量の本明細書に記載の１種以上の化合物またはその組成物を含有する他に、本明細書に提供される薬学的製剤はまた、好適な希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、及び／または担体を含んでもよい。
【００７７】
薬学的製剤は、他の溶質または懸濁剤、例えば、例えば、溶液を等張にするのに十分な生理食塩水またはグルコース、胆汁塩、アカシア、ゼラチン、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０（ソルビトールのオレイン酸エステル、及びエチレンオキシドと共重合したその無水物）等を含有する滅菌溶液または懸濁液の形態で使用されてもよい。
【００７８】
持続送達または制御送達製剤中に結合剤分子を含む製剤を含むさらなる薬学的製剤は、当業者には明らかであろう。リポソーム担体、生体内分解性微小粒子、または多孔性ビーズ、及びデポー注射等の様々な他の持続送達または制御送達手段を考案するための技術は、当業者には既知である。例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９４８を参照されたく、これは、薬学的製剤の送達のための多孔性ポリマー微小粒子の制御放出の技術について、あたかも本明細書に完全に記載されているように、参照により本明細書に組み込まれる。持続放出調製物のさらなる例は、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリックスを含む。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含んでもよい。また、持続放出組成物もリポソームを含み、これは、当該技術分野で既知のいくつかの方法のうちのいずれかによって調製することができる。
【００７９】
ＩＶ．治療方法
【００８０】
本発明の一態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を対象に投与することを含む、対象における心臓リモデリングを治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において心臓リモデリングを治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００８１】
いくつかの実施形態において、心臓リモデリングは、心収縮力の低下、心臓の後壁の厚さの増加、及び／または心室重量の増加として顕在化し得る。いくつかの実施形態において、心臓リモデリングは、心線維症、筋肥大、筋細胞壊死、筋細胞アポトーシス、線維芽細胞増殖の増大、及び／または線維性コラーゲンの増加として顕在化し得る。
【００８２】
いくつかの実施形態において、心臓リモデリングは、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、左室（ＬＶ）拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状として顕在化し得る。
【００８３】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を対象に投与することを含む、対象における心機能を改善する方法に関する。別の実施形態は、対象において心機能を改善するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００８４】
いくつかの実施形態において、心機能は、心収縮力を高めることによって改善され得る。いくつかの実施形態において、心機能は、対象における心線維症を軽減することによって改善され得る。いくつかの実施形態において、心機能は、心臓の後壁の厚さを減少させることによって改善され得る。いくつかの実施形態において、心機能は、心室重量を減少させることによって改善され得る。いくつかの実施形態において、心機能は、左心室または右心室の拡張及び／または収縮機能を改善することによって改善され得る。他の実施形態において、心機能は、一回拍出量、短縮率、及び／または駆出率を増加させることによって改善され得る。特定の実施形態において、心機能は、ＬＶ拡張期径及び／または収縮期径を縮小することによって改善され得る。いくつかの実施形態において、心機能は、ＬＶ拡張終期圧を低下させることによって改善され得る。いくつかの実施形態において、心機能は、ＬＶ収縮終期及び／または拡張終期容積を減少させることによって改善され得る。特定の実施形態において、心機能は、心室壁応力及び／または心室壁張力を低下させることによって改善され得る。
【００８５】
いくつかの実施形態において、心機能は、循環するＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）のレベルを減少させることによって改善され得る。Ｂ型ナトリウム利尿ペプチドをコードする遺伝子の発現は、病的心肥大の間に心室筋細胞内で増強され、循環するＢＮＰのレベルは、心不全の代替測定値として臨床的に用いられる。いくつかの実施形態において、心機能は、αミオシン重鎖及び／またはβミオシン重鎖の発現を低下させることによって改善され得る。
【００８６】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における心線維症を治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において心線維症を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００８７】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における左室機能不全を治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において左室機能不全を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、左室機能不全は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、ＬＶ拡張期径の増大、ＬＶ収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、及び／またはＬＶ重量の増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状として顕在化し得る。
【００８９】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における右室機能不全を治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において右室機能不全を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００９０】
いくつかの実施形態において、右室機能不全は、右室拡張機能の低下、右室収縮機能の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、右室（ＲＶ）拡張期径の増大、ＲＶ収縮期径の増大、ＲＶ拡張終期圧の上昇、ＲＶ収縮期容積の増加、ＲＶ拡張期容積の増加、及び／またはＲＶ重量の増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状として顕在化し得る。
【００９１】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における心肥大を治療する方法に関する。別の実施形態は、対象において心肥大を治療するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００９２】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、対象における筋細胞アポトーシスを阻害する方法に関する。別の実施形態は、対象において筋細胞アポトーシスを阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００９３】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、心臓リモデリングの症状が顕在化している対象におけるＭＥＦ２のアセチル化を阻害する方法に関する。別の実施形態は、心臓リモデリングの症状が顕在化している対象においてＭＥＦ２のアセチル化を阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００９４】
いくつかの実施形態において、症状は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、ＬＶ拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加からなる群から独立して選択される１つ以上の症状であり得る。
【００９５】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、左室機能不全を有する対象におけるＭＥＦ２のアセチル化を阻害する方法に関する。別の実施形態は、左室機能不全を有する対象においてＭＥＦ２のアセチル化を阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００９６】
本発明の別の態様は、本明細書に開示される治療有効量の１種以上の化合物、組成物、または薬学的製剤を投与することを含む、心線維症を有する対象におけるＭＥＦ２のアセチル化を阻害する方法に関する。別の実施形態は、心線維症を有する対象においてＭＥＦ２のアセチル化を阻害するための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。
【００９７】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、対象は、左室拡張機能の低下、左室収縮機能の低下、心収縮力の低下、一回拍出量の減少、短縮率の低下、駆出率の低下、ＬＶ拡張期径の増大、左室収縮期径の増大、ＬＶ拡張終期圧の上昇、心室壁応力の増加、心室壁張力の増加、ＬＶ収縮期容積の増加、ＬＶ拡張期容積の増加、心室重量の増加、及び心臓の後壁の厚さの増加からなる群から独立して選択される１つ以上を有し得る。
【００９８】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、対象は、心線維症、高血圧、大動脈弁狭窄、心筋梗塞、心筋炎、心筋症、弁逆流、弁膜症、左室機能不全、心虚血、拡張機能障害、慢性狭心症、頻脈、及び徐脈からなる群から独立して選択される１つ以上の状態であると診断されている場合がある。
【００９９】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞におけるＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞における心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞におけるαミオシン重鎖（α−ＭＨＣ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞におけるβミオシン重鎖（β−ＭＨＣ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞における筋小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰアーゼ（ＳＥＲＣＡ）の発現を阻害し得る。本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、筋細胞における１型コラーゲン（Ｃｏｌ  １）または３型コラーゲン（Ｃｏｌ  ３）の発現を阻害し得る。
【０１００】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のアセチル化を阻害し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣを核から細胞質に再局在化させ得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連する他の実施形態において、１種以上の化合物は、ＭＥＦ２のその補因子（すなわち、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣ）への結合を阻害し得る。
【０１０１】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ６の阻害のために５０μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨＤＡＣ１よりもＨＤＡＣ３を優先的または選択的に阻害し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、１種以上の化合物は、ＨｅＬａ細胞核抽出物における全ヒストン脱アセチル化の阻害を検出するアッセイにおいて決定されるＨＤＡＣの阻害のために１μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。本明細書で論じられる全ての方法に関連する他の実施形態において、１種以上の化合物は、ＨｅＬａ細胞核抽出物における全ヒストン脱アセチル化の阻害を検出するアッセイにおいて決定されるＨＤＡＣの阻害のために０．５μＭを超えるＩＣ５０を有し得る。
【０１０２】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、投与は、１種以上の化合物の経口投与を含み得る。実施例１１に示されるように、８ＭＩは、肝臓においてＢＭＬ−２１０またはＴＳＡよりも安定しており、それによってその生物学的利用能及び経口投与される投与量における有効性を増加させる。
【０１０３】
本明細書に開示される全ての方法に関連するいくつかの実施形態において、投与は、静脈内投与を含み得る。
【０１０４】
投与される最適な投与量は、当業者によって決定され得、使用される特定の化合物、組成物、または製剤、調製物の強度、投与様式、及び病状の進行によって変化する。治療される特定の対象に依存するさらなる要因は、限定されないが、対象の年齢、体重、性別、食生活、投与期間、投与の期間及び頻度、薬物の併用（複数可）、反応感受性、ならびに治療に対する応答を含む。化合物、組成物、または薬学的製剤の投与は、連続的または断続的に達成され得る。任意の治療計画において、化合物、組成物、または薬学的製剤は、単独で、または、限定されないが、耐性誘導剤、増強剤、及び副作用緩和剤を含む２つ以上の化合物もしくはその組成物、他の治療薬、組成物等を含有するカクテルで対象に投与され得る。これらの薬剤は全て、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，４１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ  Ｅｄｗａｒｄ  Ｒ．Ｂａｒｎｈａｒｔ，Ｎ．Ｊ．（１９８７）（参照により、あたかも本明細書に完全に記載されているように本明細書に組み込まれる）に開示されるもの等の一般的に許容される有効用量範囲で投与される。特定の実施形態において、適切な投与量レベルは、一般的に、単回または複数回用量で投与することができる、約０．００１〜約５０ｍｇ／対象の体重１ｋｇ／日である。好ましくは、投与量レベルは、約０．００５〜約２５ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、さらにより好ましくは約０．０５〜約１ｍｇ／ｋｇ／日である。いくつかの実施形態において、１日の投与量は、体重の約１０−６ｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇであり得る。
【０１０５】
状態を「治療すること」または「治療」は、状態を予防すること、状態の発症または発生の速度を遅延させること、状態を発生するリスクを軽減すること、状態に関連する症状の発症を予防するかまたは遅延させること、状態に関連する症状を軽減するかまたは終了させること、状態の完全または部分的な退行を起こすこと、またはこれらのいくつかの組み合わせを指し得る。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される１種以上の化合物またはその組成物もしくは薬学的製剤は、本明細書に提供される方法において１つ以上のさらなる治療薬と組み合わせて投与されてもよい。「組み合わせて」または「〜と組み合わせて」は、本明細書で使用される場合、２つ以上の薬剤、薬物、治療計画、治療モダリティー、またはそれらの組み合わせを任意の順序で用いる同じ対象の同じ心肥大を治療する過程において。これは、同時投与（同じまたは別個の製剤中）、及び最大数日の間隔を空けた時間的に離れた順序での投与を含む。そのような併用治療はまた、薬剤、薬物、治療計画、または治療モダリティーのうちのいずれか１つ以上の単回より多くの投与も含み得る。さらに、２つ以上の薬剤、薬物、治療計画、治療モダリティー、またはそれらの組み合わせの投与は、同じかまたは異なる投与経路によってもよい。
【０１０７】
本明細書に開示される化合物またはその組成物もしくは薬学的製剤と組み合わせて投与され得る治療薬の例は、限定されないが、βアドレナリン受容体遮断薬、降圧薬、アリールオキシアルカン酸／フィブリン酸誘導体、樹脂／胆汁酸捕捉剤、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ニコチン酸誘導体、甲状腺ホルモン及び類似体、高蛋白血症改善薬、抗動脈硬化薬、抗血栓薬／血栓溶解薬、抗凝固薬、抗血小板薬、血小板溶解薬、血液凝固剤、抗凝血作用薬、血小板溶解薬アンタゴニスト及び抗血栓薬、抗不整脈薬、ナトリウムチャネル遮断薬、β遮断薬、再分極延長薬、カルシウムチャネル遮断薬／作用薬、抗不整脈薬、α遮断薬、α／β遮断薬、アンジオテンション（ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ）ＩＩ阻害剤、交感神経遮断薬、血管拡張薬、昇圧薬、うっ血性心不全の治療薬、後負荷−前負荷軽減薬、利尿薬、変力薬、及び／または抗狭心症薬を含む。
【０１０８】
別の実施形態において、治療薬は、抗癌剤である。本明細書に記載の特定の実施形態に従って使用され得る抗癌剤は、細胞傷害性または細胞増殖抑制性の性質であることが多く、限定されないが、アルキル化剤；代謝拮抗薬；抗腫瘍性抗生物質；トポイソメラーゼ阻害剤；有糸分裂阻害剤；ホルモン（例えば、副腎皮質ステロイド）；標的治療薬（例えば、選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ））；毒素；免疫アジュバント、免疫調節物質、及び他の免疫治療薬（例えば、治療抗体及びその断片、組換えサイトキナーゼ及び免疫賦活分子（合成、または全微生物もしくは微生物成分に由来する））；酵素（例えば、腫瘍部位でプロドラッグを細胞傷害性薬物に切断するための酵素）；ヌクレアーゼ；アンチセンスオリゴヌクレオチド；核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子、またはＲＮＡｉ分子、例えば、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ等）；キレート剤；ホウ素化合物；光活性剤、及び色素を含んでもよい。本開示の実施形態に従って治療薬として使用され得る抗癌剤の例は、限定されないが、１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アリトレチノイン、オールトランスレチノイン酸、αインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミホスチン、アナグレリド、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、三酸化ヒ素、アムサクリン、アミノカンプトテシン、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、アザシチジン、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、ベンダムスチン、ベキサロテン、ビカルタミド、ボルテゾミブ、ブレオマイシン、ブスルファン、ロイコボリンカルシウム、シトロボラム因子、カペシタビン、カネルチニブ、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルチゾン、シクロホスファミド、シタラビン、ダルベポエチンα、ダサチニブ、ダウノマイシン、デシタビン、デニロイキンジフチトクス、デキサメタゾン、デキサゾン、デクスラゾキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキシフルリジン、エニルウラシル、エピルビシン、エポエチンα、エルロチニブ、エベロリムス、エキセメスタン、エストラムスチン、エトポシド、フィルグラスチム、フルオキシメステロン、フルベストラント、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、オゾガマイシン、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘキサメチルメラミン、ヒドロコルチゾンヒドロキシウレア、インターフェロンα、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イソトレチノイン、イキサベピロン、イダルビシン、メシル酸イマチニブ、イホスファミド、イリノテカン、ラパチニブ、レナリドマイド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、リポソームＡｒａ−Ｃ、ロムスチン、メクロレタミン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メチルプ���ドニゾロン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ニルタミド、オクトレオチド、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペメトレキセド、ＰＥＧインターフェロン、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ペントスタチン、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、ロミプロスチム、ラリトレキセド（ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、サパシタビン、サルグラモスチム、サトラプラチン、ソラフェニブ、スニチニブ、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テガフール、テガフール−ウラシル、テムシロリムス、テモゾラミド、テニポシド、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トレチノイン、トリミトレキサート（ｔｒｉｍｉｔｒｅｘａｔｅ）アルルビシン（ａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、及びゾレドロン酸を含んでもよい。
【０１０９】
本開示の特定の実施形態に従って抗癌剤として使用され得る治療抗体及びその機能的断片は、限定されないが、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エドレコロマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、及びトラスツズマブ、ならびに本明細書に列挙される特定の疾患に関連した他の抗体を含む。
【０１１０】
本開示の特定の実施形態に従って抗癌剤として使用され得る毒素は、限定されないが、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、及びシュードモナス内毒素を含む。
【０１１１】
本開示の特定の実施形態に従って治療薬として使用され得る放射性同位体は、限定されないが、３２Ｐ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、９９Ｍｏ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、及び２２５Ａｃを含む。
【０１１２】
投薬頻度は、使用される薬学的製剤（例えば、本明細書に開示される１種以上の化合物）中の治療薬の薬物動態パラメータに依存する。典型的には、薬学的製剤は、所望の効果を達成する投与量に達するまで投与される。したがって、製剤は、単回用量として、または経時的に複数用量として（同じもしくは異なる濃度／投与量で）、または持続点滴として投与されてもよい。適切な投与量のさらなる微調整は日常的に行われる。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用を通して確認され得る。長時間作用性の薬学的製剤は、特定の製剤の半減期及びクリアランス速度に依存して毎３〜４日、毎週、または隔週投与されてもよい。
【０１１３】
別の態様は、１つ以上の転写因子及び／または補因子によって制御可能な状態の治療のための薬物の製造における、本明細書に開示される１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤の使用に関する。この態様では、１種以上の化合物、またはその組成物もしくは薬学的製剤、転写因子及び／または補因子、ならびに転写因子及び／または補因子によって制御可能な状態は、上で開示したものと同じであり、状態の治療は、上述したものと同じである。
【０１１４】
文脈上、明確に必要とされない限り、本明細書及び特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の語は、排他的または網羅的な意味とは対照的に、包括的な意味で（すなわち、「限定されないが、〜を含む」の意味で）解釈されるものとする。「本明細書において（ｈｅｒｅｉｎ）」、「上で（ａｂｏｖｅ）」、「後に（ｂｅｌｏｗ）」、「上記（ｓｕｐｒａ）」及び同様の語は、本出願で使用される場合、本出願を全体として指すものであり、本出願のいずれか特定の部分を指すものではない。文脈が許す場合、単数または複数を用いた上の詳細な説明中の語は、それぞれ、単数または複数も含み得る。２つ以上の項目のリストに関連して「または」または「及び／または」は、以下の語の解釈の全てを包含する：リスト中の項目のうちのいずれか、リスト中の項目の全て、及びリスト中の項目の任意の組み合わせ。
【０１１５】
以下の実施例は、本発明の種々の実施形態を例示することを意図する。そのため、論じられる特定の実施形態は、本発明の範囲に対する制約であると解釈されるべきではない。当業者には、本発明の範囲から逸脱することなく、種々の均等物、変更、及び修正が行われ得ることは明白であり、そのような均等な実施形態は、本明細書に含まれるべきであることを理解されたい。さらに、本開示に引用される全ての参考文献は、参照により、あたかも本明細書に完全に記載されているかのように、その全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１１６】
実施例１：７ＭＩ及び８ＭＩは、インビトロで心筋肥大を阻害した
ｐ３００によってアセチル化される能力を欠く２つの異なるＭＥＦ２突然変異構築物、Ｍｕｔ１及びＭｕｔ２を、ＭＥＦ２のシグナル伝達の効果的な妨害の陽性対照として使用した。ｐ３００の存在下で、野生型ＭＥＦ２（ＷＴ）ではなく、これらの変異体のいずれかのトランスフェクションが、ノルエピネフリンで誘導した心筋肥大を完全にブロックした（図１）。
【０１１７】
次に、７ＭＩ及び８ＭＩがインビトロで肥大を阻害する能力を調べた（図２Ａ）。α１−アドレナリン作動性化合物（ノルエピネフリン等）、アンジオテンシンＩＩ、及びＩＧＦ−１を含む増殖因子を含む数多くのアゴニストは、本明細書で使用されるインビトロ系において肥大を誘導することが以前に示されている。しかしながら、変化に富んだ増殖因子を含有するウシ胎仔血清が、利用可能な心筋細胞の増殖に対する最も安定した多因子性の刺激として選択され、同様に安定した強力な阻害剤が、この肥大をブロックするために必要とされるであろうと推論される。様々な用量の試験化合物を用いた新生仔ラット心室筋細胞（ＮＲＶＭ）の前処理が、以前に観察されたそれらのインビトロでの転写抑制活性と同様に、血清で刺激した筋細胞の増殖を作用強度の順に低下させた（図２Ｂ、データは示さず）。総合すると、これらの結果は、化合物７ＭＩ及び８ＭＩを使用して心筋におけるＭＥＦ２の活性化を阻害することが、狭い及び広い範囲の両方で作用する増殖信号に応じて筋肥大をブロックするのに十分であったことを示している。
【０１１８】
実施例２：７ＭＩ及び８ＭＩは、インビボで心筋肥大を阻害した
実施例１の結果に基づいて、最も強力な阻害剤（８ＭＩ）を、横大動脈狭窄（ＴＡＣ）によって生じさせた圧負荷のインビボアッセイにおいて調べた。ＴＡＣは、高血圧、大動脈弁疾患、及び他の種類の圧負荷の臨床的肥大性刺激をモデル化するために広く使用されている。Ｗｅｉ  ｅｔ．  ａｌ．２００８に以前に記載されたように、右頸動脈及び左頸動脈の起点間の横大動脈に外科的制限を生じさせることにより、野生型Ｃ５７／Ｂ１６においてインビボ圧負荷を生じさせた。対照同腹仔を偽手術に供した。手術による死亡率は＜５％であった。経大動脈勾配は、右心房のレベルでゼロ化したＳｔａｔｈａｍ圧力変換器（Ｐ２３ＸＬモデル、Ｖｉｇｇｏ−Ｓｐｅｃｔｒａｍｅｄ、Ｏｘｎａｒｄ，ＣＡ）を使用して、右頸動脈及び左頸動脈からの同時測定によって決定した。Ｗｅｉ  ｅｔ．ａｌ．２００８に記載されるように継続的に圧力を記録した。術後、規定の間隔で、対になったＴＡＣ及び対象動物を屠殺し、分析のために心臓を除去した。
【０１１９】
Ｃ５７／Ｂｌ６マウスを８ＭＩで２週間処理し、心エコーにより心機能を評価し、屠殺後に、標準的な指標である心臓重量／脛骨（ＨＷ／ＴＬ）を用いて心筋重量を評価した。ＴＡＣは、術後２週間で心筋重量に＞５０％の有意な増加を引き起こした（図３Ａ、０μｇ／ｇの８ＭＩ、薄いグレーのバー）。８ＭＩによる処理は、この増加を用量依存的に有意に鈍らせた（図３Ａ、２０μｇ／ｇ及び４０μｇ／ｇの８ＭＩ、薄いグレーのバー）。ＴＡＣに関連する肥大は、約８０％から約５０％への左室駆出率（ＬＶＥＦ）の低下に反映されるように、収縮期心不全の発生を伴った（図３Ｂ、０μｇ／ｇの８ＭＩ、濃いグレーのバー（約８０％）を０μｇ／ｇの８ＭＩ、薄いグレーのバー（約５０％）と比較）。予想外に、８ＭＩによる処理は、この機能障害を大きく阻止し、たとえ最も低い用量でも有益な効果が見られた（図３Ｂ、５μｇ／ｇ、２０μｇ／ｇ、及び４０μｇ／ｇの８ＭＩ、薄いグレーのバー）。８ＭＩは、様々な細胞の培養物において２０μＭまでは明確な毒性を示さなかった。１００ｍｇ／Ｋｇの８ＭＩで４週間毎日処理したマウスは、腎障害もしくは肝障害または他の有害作用の徴候を示さなかったことから、８ＭＩが動物モデルにおいて良好な耐容性を示したことが示唆される。さらに、いずれの群においても死亡は認められなかった。
【０１２０】
これらの所見は、血行力学的負荷に対する肥大応答を低下させるためにＭＥＦ２の活性化を標的とすることの利点を証明するものである。さらに、これらの結果は、この機構によって肥大を鈍らせることが、圧負荷への適応中に収縮機能を損なわなかったことを示している。実際、その反対の場合が示された：肥大成長を阻止することは機能の改善と関連しており、心不全を遅延させるかまたは予防するために肥大を標的とすることの強力な理論的根拠を提供する。
【０１２１】
実施例３：心臓リモデリングを経験しているヒト心臓においてＭＥＦ２のアセチル化が増加する
心臓リモデリングまたは心不全の症状を示さない３つの心臓（対照）及び心臓リモデリング及び心不全の症状を示す９つの心臓を表す一連のヒト左心室心筋サンプルにおいて、ＭＥＦ２のアセチル化状態を決定した。表１は、対照心臓及び９つの症候性心臓の特徴を提供する。
【０１２２】
【表１】
2016535101.tif 000012
【０１２３】
Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋを通して匿名のドナーからヒト左心室心筋サンプルを入手し、使用するまで−８０℃に維持した。死後４時間以内に組織を採取した。サンプルをホモジナイズし、その後のライセートを抗アセチル−リジン抗体（Ｕｐｓｔａｔｅ、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）で免疫沈降した。免疫沈降物を電気泳動的に分離し、抗ＭＥＦ２抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びローディング対照としての抗アセチル−リジンで免疫ブロットした。代表的なブロットを図４Ａに示す。図４Ｂのグラフは、免疫ブロットからのデータをアセチル−リジンに正規化された濃度測定単位（ｎ．ｄ．ｕ．、正規化された濃度測定単位）として定量化している。対照心臓サンプルと比較して、心臓リモデリングの症状を示す心臓サンプルにおいてＭＥＦ２種のアセチル化が上昇した（図４Ｂ）。この結果は、心臓リモデリングを経験している心疾患においてＭＥＦ２のアセチル化が増加することを示している。
【０１２４】
実施例４：８ＭＩは、インビボで心臓リモデリングを予防した
中程度の圧負荷のモデルにおいて、肥大に対する８ＭＩの効果をさらに調べた（図５Ａ〜５Ｅ）。横大動脈狭窄（ＴＡＣ）の直前及び２１日後に、８ＭＩまたはそのビヒクル（ＤＭＳＯ）を様々な濃度にわたって投与した。全ての実験は、２〜３月齢の野生型Ｃ５７／ＢＬ／６マウスに対して行われた。Ｗｅｉ  ｅｔ．ａｌ．２００８に記載されるように、ＴＡＣによって心肥大を誘導した。ＴＡＣによって誘導した圧力勾配をパルス波ドプラ心エコーにより術後に評価し、全ての動物において均等の勾配を確認した（４５±５ｍｍＨｇ）。外科的介入の１日前、及びその後は毎日２１日間、８ＭＩを尾静脈注射によって送達した。術後２１日目の屠殺時に血液サンプルを得、血清を分析するまで８０℃で凍結させた。
【０１２５】
マッソントリクロームを用いて心臓四腔の解剖学的構造を可視化した。染色にはパラフィン包埋切片を使用した（図５Ｂ）。代表的なコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）で染色したマウスの心筋切片を調製した。心エコー（図５Ｃ）のために、４０ｍｇ／ｋｇのケタミン及び５ｍｇ／ｋｇのキシロカインを用いてマウスに麻酔し、仰臥位で固定した。Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｏｎｉｃｓ  ７７０  Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ上の４０ヘルツのトランスデューサーを使用して、マウスを評価した。心室の単軸像及び長軸像でＢモードを用いて心室の壁運動異常を評価し、長軸像でＭモードを用いて、心室中隔の厚さ、後壁の厚さ、ならびに収縮期及び拡張期の左心室の大きさを評価した。
【０１２６】
ヘマトキシリン及びエオジン（ＨＥ）ならびにＦＩＴＣ結合ＷＧＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて心筋細胞のサイズを評価した（図５Ｄ及び５Ｅ）。１条件当たり３匹のマウスからの少なくとも４つの心筋切片から、細胞のサイズを測定した（図５Ｅ）。ＷＧＡサンプルをＤＡＰＩで対比染色し、ＤＡＰＩ及びＦＩＴＣチャネルから画像をマージした。
【０１２７】
ビヒクル処理した動物において、２１日の終わりに、ＴＡＣは、偽手術を経験したマウスと比較して、正規化された心臓重量（心臓重量／脛骨、ＨＷ／ＴＬ）の５０％の増加を誘導した（図５Ａ）。図５Ａ中、白いバーは、偽手術を受けたマウスを表し、黒いバーは、ＴＡＣ手術を受けたマウスを表す。８ＭＩの投与は、心臓重量の増加を用量依存的に鈍らせ、使用された最も高い用量（４０ｍｇ／ｋｇ）では、ＨＷ／ＴＬを白いバーによって示される正常レベルまで実質的に減少させた（図５Ａ）。ＴＳＡに関して以前に公開された結果と比較して、８ＭＩは、有意に優れた結果を示した。
【０１２８】
心臓の四腔断面は、８ＭＩを用いた治療が、心筋のリモデリングも同様に用量依存的に予防したことを示していた（図５Ｂ）。これらの所見の裏付けとして、ビヒクル処理動物では、心エコーによる壁厚が３５．９％±１．０％増加したが、８ＭＩの最も高い用量のマウスではわずか６．９％±１．４％の増加であった（図５Ｃ）。筋細胞の断面積は、ＴＡＣに応答して２．２倍増加し（ＴＡＣ：３１９±２２μｍ２対偽手術：１４６±１７）、８ＭＩによる処理は、この２．２倍の増加を効果的に排除した（図５Ｄ及び５Ｅ）。ここでも同様に、ＴＳＡに関して以前に公開された結果と比較して、８ＭＩは、筋細胞の断面積を減少させる上で有意に優れた結果を示した。
【０１２９】
実施例５：８ＭＩは、インビボで心室線維症を阻害した
実施例４に記載される実験条件下で処理した同じマウスから得られた心組織サンプルを使用して、マッソントリクロームを用いて線維化組織を染色した（図６Ａ）。線維化の面積を定量化して全組織の面積に対して表した（図６Ｂ）。心室線維症は、ＴＡＣ後２１日のマウスにおいて顕著であったが、偽手術を受けたマウスではそうではなかった（図６Ａ及び６Ｂ）。驚くべきことに、この線維化応答は、最も高い用量の８ＭＩによって排除され、用量依存的に有意に低下した（図６Ａ及び６Ｂ）。
【０１３０】
実施例６：８ＭＩは、インビボで良好な耐容性を示す
屠殺前に、実施例４に記載されるように処理したマウスの血液から血清を抽出した。血清化学の分析により、３匹の対照マウスのうち２匹（４番及び６番）において、ＴＡＣによって著しい腎機能不全及び／または肝機能不全が誘導されたが、任意の容量の８ＭＩを投与された９匹のマウスでは、１匹のみ（１４番）であったことが明らかになった（表Ｉ）。これらの結果は、８ＭＩが良好な耐容性を示すことを示している。
【０１３１】
【表２】
2016535101.tif 000013
【０１３２】
実施例２において前述したように、８ＭＩは、様々な細胞の培養物において２０μＭまでは明確な毒性を示さなかった。また、実施例２に記載されるように、８ＭＩ（１００ｍｇ／Ｋｇ）で４週間毎日処理したマウスは、腎障害もしくは肝障害または他の有害作用の徴候を示さなかった。さらに、いずれの群（偽手術またはＴＡＣ手術）においても死亡が認められなかったことから、８ＭＩは、より強力な汎ＨＤＡＣ阻害剤よりも動物モデルにおける耐容性が高いという主張が支持される。
【０１３３】
実施例７：８ＭＩは、心臓リモデリングに関連する転写を鈍らせる
実施例４に記載される実験からの平行サンプルにおいて、心臓の構造及び肥大に関連する一群の遺伝子の発現を定量化した。ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して左心室組織から全ＲＮＡを抽出した。以下の条件でＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ試薬（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用してｃＤＮＡを増幅した：ＡＢＩ  ７９００ＨＴサーモサイクラ―内にて５０℃で２分、９５℃で１０分、４０サイクル：９５℃で１５秒、及び６０℃で１分）。ｍＲＮＡの発現レベルを内部標準である１８Ｓ  ｒＲＮＡの発現レベルに正規化した。全てのサンプルは２通り実行した。以下のプライマーセットを使用した：ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＳＥＲＣＡ、ＭＨＣ、及び１８Ｓ。Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓからのＲＱ  ｍａｎａｇｅｒ  １．２ソフトウェアを使用してデータを分析した。
【０１３４】
実施例４及び５に開示される形態学的データと一致して、１型コラーゲン及び３型コラーゲン（Ｃｏｌ１及びＣｏｌ３）（図７Ａ及び７Ｂ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）（図７Ｃ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）（図７Ｄ）、ＳＥＲＣＡ２（図７Ｅ）、ならびにα及びβミオシン重鎖（図７Ｆ及び７Ｇ）の負荷誘導性の発現は、８ＭＩ処理によって著しく減衰した。
【０１３５】
実施例８：８ＭＩは、ＴＡＣ手術後のマウスにおいて心機能を保存する
マウスの心エコー試験を行って、実施例４に記載の実験条件下で収縮機能を調べた。心エコー試験により、ベースラインの全てのマウス、及びＤＭＳＯまたは８ＭＩのいずれかで処理した偽手術マウスにおいて、正常な心機能が明らかになった（図８Ａ〜８Ｈ）。予想されたように、ＴＡＣは、２１日で駆出率における３７％の減少を誘導した（偽手術：８２．４±１．８％対ＴＡＣ：５１．７±５．１％）（図８Ａ）。８ＭＩによる処理は、持続的な圧負荷にもかかわらず、収縮機能を用量依存的に保存した。マウスは、最も高い用量の８ＭＩで、７５．４％のほぼ正常な駆出率を維持した（図８Ａ）。短縮率（ＦＳ）（図８Ｂ）及び一回拍出量（図８Ｃ）は、ＴＡＣにより低下し、８ＭＩの存在下で同様に回復した。ＬＶ拡張終期径（ＬＶｉＤｄ）（図８Ｄ）、ＬＶ収縮終期径（ＬＶｉＤｓ）（図８Ｅ）、ＬＶ収縮期容積（ＬＶ  Ｖｓ）（図８Ｆ）、及びＬＶ拡張期容積（ＬＶ  Ｖｄ）（図８Ｇ）は、ＴＡＣによって増加し、８ＭＩの存在下で減少した。これらの結果は、図４Ｂで述べたような心臓リモデリングの軽減と一致していた。心拍数は、全てのマウスにおいて影響を受けなかった（図８Ｈ）。
【０１３６】
実施例９：８ＭＩは、圧負荷に関連するＭＥＦ２のアセチル化をインビボで阻害する
実施例４に記載される実験条件下、ビヒクルまたは８ＭＩの存在下において、偽手術及びＴＡＣ手術を受けたマウスからの心筋組織においてＭＥＦ２のアセチル化を決定した。タンパク質サンプルをＲＩＰＡ（Ｓｉｇｍａ）中に採取した。５００ｎｇのタンパク質サンプルを、５μｇのアセチル−リジンまたはＧＡＴＡ４抗体（Ｕｐｓｔａｔｅ、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）またはＭＥＦ２抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）（５μｇ）でインキュベートした。ＴｒｕｅＢｌｏｔ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズを使用して免疫複合体を捕捉し、ウエスタン分析に供した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で免疫複合体を分離し、ニトロセルロース膜に転写した。０．５％ＴＢＳ−Ｔ中の５％牛乳で膜を１時間室温でブロックした後、適切な希釈度の一次抗体で一晩インキュベーションした。ＨＲＰ結合二次抗体で膜を２時間室温でインキュベートし、化学発光を用いて展開した。
【０１３７】
最大容量（４０ｍｇ／ｋｇ）の８ＭＩを投与された偽手術マウスと、ビヒクル（ＤＭＳＯ）を投与されたマウスとで、総アセチル−ＭＥＦ２含有量の差は認められなかったことから、基本的なＭＥＦ２のアセチル化に対する効果の欠如が示唆される（図９）。しかしながら、ＴＡＣは、アセチル−ＭＥＦ２含有量の有意な増加を誘導した。図９に示されるように８ＭＩの用量を増加させることにより、アセチル−ＭＥＦ２含有量は、偽手術マウスのレベルかまたはそれ以下に減少した。同じ条件下で、総レベル及びＡｃ−ＧＡＴＡ４も増加したが、８ＭＩによる有意な変化は見られなかった。
【０１３８】
実施例１０：８ＭＩは、ＴＡＣの間に筋細胞アポトーシスを予防する
実施例４に記載される実験からの平行サンプルにおいて、ビヒクルまたは８ＭＩの存在下で、偽手術及びＴＡＣ手術マウスからの心筋組織におけるアポトーシスを定量化した。市販の末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ媒介ｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）アッセイキット（Ｃａｒｄｉｏｔａｃｓ、Ｔｒｅｖｉｇｎｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ）の推奨プロトコルに従ってアポトーシスを検出した。アポトーシスは、ＴＡＣサンプルにおいて、偽手術サンプルと比較して有意に増強される（図１０）。アポトーシスは、８ＭＩによってＴＡＣ手術マウスにおいて用量依存的に低下した（図１０）。最も高い用量（４０ｍｇ／ｋｇ）の８ＭＩでは、アポトーシスは、偽手術マウスに観察されたアポトーシスとほぼ同じレベルまで低下する（図１０）。
【０１３９】
実施例１１：７ＭＩ及び８ＭＩは、肝臓においてＢＭＬ−２１０またはＴＳＡよりも代謝的に著しく安定である
薬物クリアランスは、体または臓器が血液循環から薬物を排除する能力の尺度である。全身クリアランスは、体全体が薬物を排除する能力の尺度である。臓器クリアランスは、特定の臓器（肝臓または腎臓）が薬物を排除する能力の尺度である。肝クリアランスの場合、肝臓が、薬物代謝のための主要な臓器であり、また、薬物クリアランスのための重要な臓器である。ＮＡＤＰＨで強化されたヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）は、インビトロ代謝を測定し、インビボでのクリアランスを予測するための標準的な方法である。ＣＬｉｎｔ（固有クリアランス）は、インビトロ試験とインビボ試験との関連であり、単一指数関数的減衰モデルに基づいて推測することができる：Ｃｔ＝Ｃ  Ｘｅ−ｋｔ。
【０１４０】
ＮＡＤＰＨで強化されたヒト肝ミクロソームは、ＣＹＰ（チトクロムＰ４５０）酵素によって媒介される代謝安定性をインビトロで評価するための標準的な手法である。反応混合物（０．４ｍＬ）は、０．５ｍｇ／ｍＬのヒト肝ミクロソーム、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、及び５ｍＭの試験化合物を含有していた。混合物は、最初に、３７℃の振盪水浴中で最長５分間加温し、次いで、最終濃度１ｍＭのＮＡＤＰＨを加えて反応を開示させた。所定の時点でアリコート（５０ｍＬ）を採取し、氷冷メタノール（内部標準を含有する）と混合して反応を停止した。混合物を短期間ボルテックスし、遠心分離してタンパク質を沈殿させた。１０ｍＬの上清のアリコートをＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析に供した。化合物の消失率を用いて代謝速度を算出した。
【０１４１】
【表３】
2016535101.tif 000014
【０１４２】
この結果は、所与の化合物がどのように肝代謝クリアランスを受けるかの指標を提供する。ＢＭＬ−２１０は、７ＭＩ及び８ＭＩと構造的類似性を共有するが、現在のデータは、７ＭＩまたは８ＭＩよりもはるかに迅速に代謝的に除去されることを示しており、ＢＭＬ−２１０が高クリアランス化合物であることが示唆される（図１１）。表３は、ＢＭＬ−２１０が、７ＭＩよりも４．３倍高く、８ＭＩよりも２．５倍高い固有クリアランス（Ｃｌｉｎｔ）速度を有することを示している。同様に、ＴＳＡは、７ＭＩまたは８ＭＩよりもはるかに迅速に代謝的に除去され（図１１）、７ＭＩよりも３．２倍高く、８ＭＩよりも１．９倍高いＣｌｉｎｔ速度を有する（表３）。肝臓において代謝的に安定ではない化合物は、通常、低い経口生物学的利用能を示し、ＣＹＰによって媒介される薬物間相互作用を受ける傾向がある。これらの結果は、７ＭＩ及び８ＭＩが、ＢＭＬ−２１０またはＴＳＡよりも高い経口生物学的利用能を示す可能性が高く、また、ＣＹＰによって媒介される薬物間相互作用を受けにくいことを示している。
【０１４３】
参考文献
以下に列挙する参考文献、特許、及び公開特許出願、ならびに上記明細書で引用された全ての参考文献は、参照により、あたかも本明細書に完全に記載されているかのように、その全体が本明細書に組み込まれる。
１．Ｂｅｒｒｙ，Ｊ．Ｍ．，Ｃａｏ，Ｄ．Ｊ．，Ｒｏｔｈｅｒｍｅｌ，Ｂ．Ａ．，ａｎｄ  Ｈｉｌｌ，Ｊ．Ａ．（２００８）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ．７（１）：５３−６７．
２．Ｂｉｓｐｉｎｇ  Ｅ．，Ｗａｋｕｌａ，Ｐ．，Ｐｏｔｅｓｅｒ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｆ．Ｒ．（２０１４）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ：Ｔｏｗａｒｄ  ａ  Ｃａｕｓａｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６４：２９３−３０５．
３．Ｃｈｅｎｇ  Ｓ，Ｘａｎｔｈａｋｉｓ  Ｖ，Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ＬＭ，Ｌｉｅｂ  Ｗ，Ｍａｓｓａｒｏ  Ｊ，Ａｒａｇａｍ  Ｊ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ  ＥＪ，Ｖａｓａｎ  ＲＳ（２０１０）Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｏｆ  ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ  ｉｎｄｉｃｅｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｖｅｒ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｌｉｆｅ  ｃｏｕｒｓｅ：ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｓｔｕｄｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２２（６）：５７０−５７８．
４．Ｃｏｈｎ  ＪＮ，Ｆｅｒｒａｒｉ  Ｒ，Ｓｈａｒｐｅ  Ｎ（２０００）Ｃａｒｄｉａｃ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ−−ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ａ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｐａｐｅｒ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｆｏｒｕｍ  ｏｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ３５（３）：５６９−５８２．
５．Ｃｏｘ  ＤＭ，Ｄｕ  Ｍ，Ｍａｒｂａｃｋ  Ｍ，Ｙａｎｇ  ＥＣ，Ｃｈａｎ  Ｊ，Ｓｉｕ  ＫＷ，ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  ＪＣ（２００３）Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆｓ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｙｏｃｙｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｆａｃｔｏｒ  ２Ａ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７８（１７）：１５２９７−１５３０３．
６．Ｄｏｒｎ  ＧＷ，２ｎｄ，Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｊ，Ｓｕｇｄｅｎ  ＰＨ（２００３）Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ：ｅｓｃｈｅｗ  ｏｂｆｕｓｃａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ９２（１１）：１１７１−１１７５．
７．Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ．ａｌ．，（２０１１）Ｆｏｒｃａｓｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ：ａ  ｐｏｌｉｃｙ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（１２３）（８）：９３３−９４４．
８．Ｊａｙａｔｈｉｌｉａｋａ，Ｎ．，Ｈａｎ，Ａ．，Ｇａｆｆｎｅｙ，Ｋ．Ｊ．，Ｄｅｙ，Ｒ．，Ｊａｒｕｓｉｅｗｉｃｚ，Ｊ．Ａ．，Ｎｏｒｉｄｏｍｉ，Ｋ．，Ｐｈｉｌｉｐｓ，Ｍ．Ａ．，Ｌｅｉ，Ｘ．，Ｈｅ，Ｊ．，Ｙｅ，Ｊ．，Ｇａｏ，Ｔ．，Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．，ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．（２０１２）Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩａ  ＨＤＡＣｓ  ｂｙ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｔｈｅｉｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＭＥＦ２．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４０（１２）：５３７８−５３８８．
９．Ｋａｎｅ  ＧＣ，Ｋａｒｏｎ  ＢＬ，Ｍａｈｏｎｅｙ  ＤＷ，Ｒｅｄｆｉｅｌｄ  ＭＭ，Ｒｏｇｅｒ  ＶＬ，Ｂｕｒｎｅｔｔ  ＪＣ，Ｊｒ．，Ｊａｃｏｂｓｅｎ  ＳＪ，Ｒｏｄｅｈｅｆｆｅｒ  ＲＪ（２０１１）Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．ＪＡＭＡ  ３０６（８）：８５６−８６３．
１０．Ｋａｎｎｅｌ  ＷＢ（２０００）Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌ  Ｒｅｖ  ５（２）：１６７−１７３．
１１．Ｋｏｎｇ  Ｙ．，Ｔａｎｎｏｕｓ，Ｐ．，Ｌｕ，Ｇ．，Ｂｅｒｅｎｊｉ，Ｋ．Ｒｏｔｈｅｒｍｅｌ，Ｂ．Ａ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．Ｎ．，ａｎｄ  Ｈｉｌｌ，Ｊ．Ａ．（２００６）Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏ  ｏｆ  Ｃｌａｓｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  Ｂｌｕｎｔｓ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ−Ｏｖｅｒｌｏａｄ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１３：２５７９−２５８８．
１２．Ｌａｍ  ＣＳ，Ｄｏｎａｌ  Ｅ，Ｋｒａｉｇｈｅｒ−Ｋｒａｉｎｅｒ  Ｅ，Ｖａｓａｎ  ＲＳ（２０１１）Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｗｉｔｈ  ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ  ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌ  １３（１）：１８−２８．
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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