(57)【要約】本発明は、アクアグリセロポリンの発現および脂肪細胞に含まれるトリグリセリドの低減を増大させるための、イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体とのうちの１つの組み合わせの、痩身作用剤としての美容的使用に関する。また、本発明は、痩身効果を得るため、より詳細には局所的過剰体脂肪を減らすために、生理学的に許容可能な媒質を含む組成物における、イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体のうちの１つとの、体または顔の皮膚の少なくとも一部への局所的塗布を含む、美容ケア方法に関する。【選択図】なし
2016502976.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体重減少のための作用剤としてのイナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との会合物の美容的使用。
【請求項２】
前記イナゴマメ胚抽出物が、１．５〜３．５ｇ/ｌのペプチド化合物を含む、請求項１に記載の美容的使用。
【請求項３】
前記イナゴマメ胚抽出物がペプチド抽出物であり、前記ペプチド化合物が５ｋＤａ未満の分子量を有する、請求項１または２に記載の美容的使用。
【請求項４】
前記イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との会合物が、アクアグリセロポリン、より詳細にはアクアグリセロポリン７の発現の増大を引き起こす、請求項１〜３のいずれか１項に記載の美容的使用。
【請求項５】
前記イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との会合物が、脂肪分解を増大し、前記前記脂肪細胞からの脂質の排除およびグリセロールの排出を促進する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の美容的使用。
【請求項６】
体重減少の効果、より詳細には局所的過剰体脂肪を減らすために、生理学的に許容可能な媒質を含む組成物における前記イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との会合物の体または顔の皮膚の少なくとも一部への局所的塗布を含む、美容ケア方法。
【請求項７】
皮膚の「オレンジピール（ｏｒａｎｇｅ  ｐｅｅｌ）」様外観を軽減するために、生理学的に許容可能な媒質を含む組成物における前記イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との会合物の体または皮膚の少なくとも一部への局所的塗布を含む、美容ケア方法。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のイナゴマメ胚抽出物が、前記組成物の総重量の０．０００１％〜２０％の濃度、好ましくは前記組成物の総重量の０．０５％〜５％の濃度で存在する、請求項６または７に記載の美容ケア方法。
【請求項９】
カフェインまたはその誘導体が、前記組成物の総重量の０．０００１％〜２０％の濃度、好ましくは前記組成物の総重量の０．０５％〜５％の濃度で存在する、請求項６〜８のいずれか１項に記載の美容ケア方法。
【請求項１０】
前記組成物が、ビタミンＡ、レチノイン酸、レチノール、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＨ、ビタミンＫ、ビタミンＰＰ、補酵素Ｑ１０、メタロプロテアーゼ阻害剤、アミノ酸、カルニチン、カルノシン、タウリン、天然ペプチドもしくは合成ペプチド、植物ベースのペプチド、酵母抽出物、Ａｒｔｅｍｉａ  Ｓａｌｉｎａ抽出物、合成もしくは天然由来の植物ステロール、サリチル酸、オリゴ糖、多糖、アミノ糖、ポリフェノール、フラボノイド、脂質、リン脂質、サイクリックＡＭＰおよびその誘導体、アデニル酸シクラーゼ酵素作用剤、ホスホジエステラーゼ酵素阻害剤、テイン、テオフィリン、テオブロミン、フォルスコリン（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎｅ）、エスクリン、ＡＣＥ阻害剤、ヤマノイモ抽出物、ガラナ抽出物、ツタ抽出物、ヒバマタ科の海草（ｒｏｃｋｗｅｅｄ）抽出物、ダルス（Ｐａｌｍａｒｉａ  Ｐａｌｍａｔａ）などの藻類抽出物、加水分解したウツボグサ抽出物、またはエルダーベリー抽出物から選択される少なくとも１つの追加的な作用剤をさらに含む、請求項６〜９のいずれか１項に記載の美容ケア方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美容分野、より詳細には、美容的体重減少方法の分野に関する。本発明は、体重減少のための作用剤としての、イナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との組み合わせの美容的使用に関する。また本発明は、アクアグリセロポリンの発現を増大させ、脂肪細胞に含まれるトリグリセリドの排出を促進する、イナゴマメ胚抽出物とカフェインまたはその誘導体との組み合わせの美容的使用に関する。
【０００２】
また、本発明は、体重減少の効果を得るため、具体的には局所的過剰体脂肪を減らすために、生理学的に許容な媒質に含まれる組成物におけるイナゴマメ胚（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）抽出物とカフェインまたはその誘導体との体または顔の皮膚の少なくとも一部への局所的塗布を含む、美容ケア方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
皮下脂肪組織は皮下組織に局在する。皮下脂肪は、脂肪細胞が支配的であり、直径５ｍｍ前後の葉に構築されており、微細な結合性間橋により分離される種類の結合組織である。各脂肪細胞は、基本的にトリグリセリドを含み、４０〜１２０μｍの範囲であってよい直径の多量の脂質の液胞を含む。
【０００４】
脂肪組織は、動的な貯蔵場所であり、定期的に再生され、体のエネルギーの必要量と食事摂取量の均衡を保たせていると考えられている。したがって、脂肪細胞は、脂質の合成、蓄積、および放出を保証する。このプロセスは、インスリンまたはレプチンなどのホルモンに依存する。
【０００５】
脂質の合成、または脂質生合成は、食事由来のトリグリセリドおよびグルコースを用いて開始される。逆に、脂肪細胞に貯蔵されたトリグリセリドは、脂肪分解の間に加水分解されて、脂肪酸、グリセロール、ならびにモノグリセロールおよびグリセロールのジエステルを放出してもよい。
【０００６】
したがって、放出される非エステル型脂肪酸は、血液中を循環し、次いで体の他の細胞のエネルギー必要量に利用できてもよく、または、脂質生合成によりトリグリセリドを再生するために、脂肪細胞により迅速に再利用されてよい。
【０００７】
持続する不均衡が脂質生合成を促進する体内で起こる場合、脂肪細胞に貯蔵される脂質の量が増大しており、体脂肪の質量の過形成、具体的には、局所的過剰体脂肪の出現を引き起こす。実際に、成人では、性ホルモンの作用の下、脂肪組織は、性別にしたがって異なるように分布して輪郭を形成する。女性の場合、脂肪組織は、胸、尻、臀部部などに集まり、男性の場合は、項部および肩に集まる。さらに、局在した過剰体脂肪は、大抵の場合皮膚の改変に関連しており、これにより、外観に窪みまたは「オレンジピール（ｏｒａｎｇｅ−ｐｅｅｌ）」が現れる。この局所的過剰体脂肪は、現在美しくないものと考えられており、罹患したヒトは、美容的方法を使用して皮膚および輪郭の外観を改善したい場合がある。
【０００８】
したがって、脂肪分解または脂質生合成に作用し、体重減少を意図する多くの作用剤が同定されている。これらの内、以下を引用し得る。
−脂肪細胞の脂肪分解性の活性を促進する作用のため使用される、テオフィリン、カフェイン、テオブロミン（仏国特許第２６０９３９５号、同第２６７４０１号に記載）などの、キサンチンベース（キサンチン誘導体）
−補酵素の再酸化およびミトコンドリアにおけるＡＤＰのＡＴＰへのリン酸化間の脱共役作用に使用されるペプチド配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−ＮＨ２（仏国特許第２  ８５８  ７６９号に記載）、またはペプチド配列ｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ（仏国特許第２  ８７９  ９２４号に記載）などの合成ペプチド
−ＰａｌｍａｒｉａまたはＲｈｏｄｙｍｅｎｉａ属の海藻類の抽出物、（仏国特許第２  ８８７  ４４７号に記載）、イチョウ抽出物（仏国特許第２  ６６９  ５３７号参照）。またはダイズのイソフラボンもしくはイソフラボン（国際公開第０１／６４１７７号に記載）などの植物抽出物。
【０００９】
しかしながら、これらの生成物は、一般に、ある時間にわたる中程度のまたは低い有効性を有している。したがって、体重減少のための作用剤として顕著な有効性を有する新規の活性美容剤を提供することが重要である。
【００１０】
提示されるこの技術的な問題の解決策が、イナゴマメ胚抽出物とカフェインまたはその誘導体との会合物の美容的使用である。実際に本発明者らは、イナゴマメ胚抽出物がアグリセロポリンに作用し、それにより、脂肪細胞から脂肪分解の間に放出されるグリセロールの輸送を促進することを例証した。カフェインまたはその誘導体とこの抽出物の会合物のうち、後者は脂肪分解を増加させることがすでに知られており、顕著な特性を有する体重減少のための作用剤として入手することが可能である。
【００１１】
アクアポリンは、水および溶液中の小分子を、細胞と内部の媒質との間で輸送する膜貫通型タンパク質のクラスである。アクアポリンは、水の輸送のみを可能にするアクアポリン、および水の輸送に加えてグリセロールの輸送も可能であるアクアグリセロポリンといった、２つのサブグループに分類されてよい。
【００１２】
この第２のサブグループでは、アクアグリセロポリン７は、ヒトの脂肪細胞の膜の中で同定され、貯蔵脂肪の代謝に重要な役割を果たす（Ｍａｒｉｋｏ  Ｈａｒａ−Ｃｈｉｋｕｍａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ａｑｕａｐｏｒｉｎ−７  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ｖｏｌ．  ２８０，  ｎｏ．  １６，  Ａｐｒｉｌ  ２２，  ２００５）。
【００１３】
それゆえ、アクアグリセロポリンの特定の特性により、アクアグリセロポリンは、脂肪細胞に含まれる脂質の排除を促進する有益な生物学的標的となる。
【００１４】
「脂質の排除」は、脂肪細胞からグリセロールを排出させる脂肪分解の現象を指す。
【００１５】
本発明および得られる利点は、詳細な説明を読むことにより良好に理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】３Ｔ３−Ｌ１細胞におけるアクアグリセロポリン７の免疫検出
【図２】３Ｔ３−Ｌ１細胞における脂質の液滴の寸法の定量化
【００１７】
最初に、本発明は、体重減少作用剤としてのイナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との会合物の美容的使用に関する。
【００１８】
本発明により使用されるイナゴマメ胚抽出物とカフェインまたはその誘導体との会合物は、
脂肪分解の増加
アクアグリセロポリンの発現の増大
脂質の排除および脂肪細胞からのグリセロールの排出の促進
局所的過剰体脂肪の減少
皮膚の「オレンジピール」様外観の軽減
といった利点を提供する。
【００１９】
したがって、本発明の意味における「体重減少のための作用剤」は、魅力的ではなく、かつ大抵の場合皮膚に現れる「窪み」または「オレンジピール」に関連すると考えられる局所的過剰体脂肪を減らすために使用される、イナゴマメ胚抽出物とカフェインまたはその誘導体との会合物を指す。
【００２０】
イナゴマメの種（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ属の植物）、具体的にはこの種の胚乳画分は、「イナゴマメ胚（ｃａｒｏｂ  ｇｕｍ）」との名称で、食品産業においてガラクトマンナンを多く含有するとして広く使用されている。この胚は、タンパク質を最も多く含む種の一部であり、容易に単離できる。
【００２１】
酵素的加水分解により得られるイナゴマメ胚タンパク質抽出物はすでに記載されている（Ｊ．  Ｐａｒｒａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９９，  ２００８）。しかしながら、この抽出物は非常に高濃度の植物ホルモン、内物かく乱物質を有しているため、化粧品に使用することが困難である。
【００２２】
本発明を実行するために、たとえば、欧州特許出願第０  ６８９７７１号に記載される方法などの、当業者に知られているいずれかの抽出方法または精製方法を使用してもよい。
【００２３】
「ペプチド抽出物」は、大量の水または他の溶媒またはこれら溶媒の混合物の溶液中にあるペプチド化合物により優性的に表される化合物の混合物を指す。
【００２４】
「ペプチド化合物」は、本発明に係るペプチド抽出物に存在するタンパク質画分およびペプチドを指す。
【００２５】
「局所的塗布」は、本発明に係る作用剤、または本発明に係る作用剤を含む組成物を、皮膚の表面または粘膜上での塗布または伝搬を指す。
【００２６】
「生理学的に許容可能」は、毒性または不耐性の反応を引き起こすことなく皮膚または粘膜との接触に適したいずれかの化合物を指す。
【００２７】
「過度に局在化した体脂肪」は、皮下脂肪組織が肥大した領域であり、「オレンジピール」の外観を有する場合がある領域を指す。
【００２８】
以下の記載では、用語「体重減少のための作用剤」および「イナゴマメ胚抽出物とカフェインまたはその誘導体との会合物」は、互換的に使用される。
【００２９】
本発明に係るイナゴマメ胚抽出物は、植物由来のタンパク質を抽出し、次いで生物学的に活性なペプチド化合物を放出する制御された加水分解を行うことにより得られてもよい。
【００３０】
ペプチド抽出物、特に、低分子量のペプチド抽出物の使用は、化粧品に多くの利点をもたらす。開始時のタンパク質混合物に本来存在しないペプチド化合物を作製する場合を除き、加水分解および精製により、再生成が容易であり、かつ化粧品のアレルギー反応を引き起こさないより安定した組成物との混合物を得ることが可能である。
【００３１】
この抽出を実行するために、イナゴマメの種の胚（植物のイナゴマメ）を使用する。当業者に知られているいずれかの抽出方法または精製方法を使用して本発明に係る抽出物を調製してもよい。たとえば、制御した加水分解により、この胚からペプチド化合物を遊離することが可能である。本発明を実行するために、考慮されるタンパク質を抽出し、次いでこれらを加水分解するか、または未加工の抽出物で加水分解を実施し、次いでペプチド化合物を精製することは可能ではあるが、必ずしも必要ではない。
【００３２】
第１のステップでは、種に含まれる胚をすりつぶして粉体または細粉を入手する。このように入手した粉体をまず、糖、特に不溶性の多糖の排出を促進するためにセルラーゼで処置してもよい。
【００３３】
次いで、胚のタンパク質の抽出を、改変した従来の工程により実施する（Ｏｓｂｏｒｎｅ，  Ｔ．  Ｂ．，  Ｔｈｅ  Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．  Ｌｏｎｇｍａｎｓ，  Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，  Ｌｏｎｄｏｎ，  １９２４）。すりつぶしたイナゴマメ胚を、不溶性であり吸着性のポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）生成物（０．０１〜２０％）を含むアルカリ性の溶液中に懸濁する。実際、その後の加水分解および精製がこの方法により容易になることが知られている。特に、タンパク質と相互作用するフェノール物質の濃度が明らかに低下する。次いで、イオン強度を変動し、または媒質を酸性化することによりタンパク質を沈殿させることにより、可溶性成分および核酸を除去することが可能である。次いで、たとえばエタノールまたはメタノールなどの有機溶媒でこの沈殿物を洗浄し、溶媒を真空乾燥により蒸発させる。タンパク質を多く含む沈殿物を、水または別の溶媒である溶液中に配置することにより、精製した形態の抽出物を構成する。
【００３４】
また、中性または酸性の媒質、さらにポリビニルポリピロリドンの存在する中で抽出を実施してもよい。濾過ステップの後、沈殿ステップを、塩（塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム）などの従来の沈殿剤、または有機溶媒（アルコール、アセトン）を用いて実行する。入手した沈殿物を、水または別の溶媒の溶液中に配置した後、透析により沈殿剤から分離してもよい。
【００３５】
タンパク質、炭水化物、可能な場合は脂肪を含む可溶画分を、濃縮および濾過のステップの後に回収する。次いで、可溶ペプチドを作製するため、未加工の溶液を制御した条件の下加水分解する。加水分解は、水により分子を切断することを含む化学反応であり、中性、酸性、または塩基性の媒質で行うことができる反応として定義される。本発明によれば、加水分解は、植物をベースとするエンドプロテアーゼが引用され得るタンパク質分解性酵素（パパイン、ブロメリン、フィカイン）により化学的かつ／または有利に実施される。
【００３６】
本発明の第１の実施形態によると、体重減少のための作用剤は、このステップで得た加水分解したイナゴマメ胚を含む。
【００３７】
上述と同一の理由、すなわち、ポリフェノール物質の排出のため、ある量のポリビニルポリピロリドンを、この制御した加水分解のステップの最中に反応媒質に添加してもよい。入手した抽出物を、低分子量のペプチド化合物を選択するために再度精製してもよい。限外濾過および／またはクロマトグラフィー法により分画を有利に実施してもよい。
【００３８】
次いで、水または任意の溶媒の混合物中の希釈段階を実施する。したがって、本発明の有利な実施形態によると、本発明に係るイナゴマメ胚抽出物を、水、グリセロール、エタノール、プロパンジオール、ブチレン、グリコール、ジプロピレングリコール、エトキシル化またはプロポキシル化ジグリコール、環状ポリオール、またはこれら溶媒のいずれかの混合物などの１つ以上の生理学的に許容可能な溶媒中に有利に希釈する。次いで、希釈したイナゴマメ胚抽出物を限外濾過により滅菌する。
【００３９】
この希釈の後にペプチド抽出物を入手する。この抽出物は、２〜５ｇ／ｋｇの乾燥重量、１〜１０ｇ/ｌ、好ましくは、１、５〜３．５ｇ/ｌのペプチド化合物の濃度、０．５〜１ｇ/ｌ、好ましくは０.１〜０．３ｇ/ｌの糖濃度、および乾燥重量に対して１％未満のポリフェノール濃度により特徴付けられる。
【００４０】
したがって、本発明の有益な実施形態によると、イナゴマメ胚抽出物は、２．５ｇ/ｋｇの乾燥重量を有し、１．５〜３．５ｇ/ｌのペプチド化合物を含む。
【００４１】
本発明により得られる抽出物の物理化学的特徴ならびにタンパク質およびペプチド化合物の含有量を、当業者に良く知られている従来技術により、定性的かつ定量的に解析する。
【００４２】
入手した抽出物は、５ｋＤａ未満の分子量を有するペプチドを含み、乾燥重量に対して１５％未満の糖濃度および１％未満のポリフェノール濃度により特徴付けられる。
【００４３】
したがって、本発明の有利な実施形態によると、イナゴマメ胚抽出物は、イナゴマメ胚抽出物中のペプチド化合物が５ｋＤａ未満の分子量を有するペプチド抽出物である。
【００４４】
カフェインは、プリン塩基の群の一部を形成する植物由来の複素環分子、具体的にはメチルキサンチンである。
【００４５】
カフェインの脂肪分解性の作用は、多くのｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの試験により例証されている。カフェインは、それ自体がトリグリセリドをグリセロールおよび遊離脂肪酸に変換するため脂肪細胞に作用するトリグリセリドリパーゼを活性化するサイクリックＡＭＰの会合を促進する。
【００４６】
カフェイン誘導体は、カフェインの溶解度、皮膚の浸透、生物学的利用率、または有効性を改善するために開発されている。カフェイン誘導体は、カフェイン酸誘導体、カフェイン塩、およびより詳細にはカフェインカルボン酸金属塩から選択されてよい。
【００４７】
また、本発明は、アクアグリセロポリン、具体的にはアクアグリセロポリン７の発現を増大させるためのイナゴマメ胚抽出物とカフェインまたはその誘導体との会合物の使用に関する。
【００４８】
本発明の特徴的な分子活性は、アクアグリセロポリンのタンパク質合成を増大させ（アクアグリセロポリンの遺伝子発現の直接的もしくは間接的な調節により）るか、またはアクアグリセロポリンタンパク質の安定化もしくはメッセンジャーＲＮＡの転写物の安定化などの他の生物学的工程のいずれかにより、アクアグリセロポリンの発現を増大させるため、体重減少のための作用剤の特質によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで定義される。
【００４９】
好ましくは、本発明によれば、アクアグリセロポリンはアクアグリセロポリン７である。
【００５０】
また、本発明は、脂肪分解を増大させ、かつ脂肪細胞からの脂質の排除およびグリセロールの排出を促進するためのイナゴマメ胚の抽出物とカフェインまたはその誘導体との会合物の使用に関する。
【００５１】
本発明の特徴的な生物学的活性は、脂肪細胞の脂質の液滴の寸法および数を減少させるための体重減少のための作用剤の特質によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで定義される。
【００５２】
また、本発明は、体重減少の効果を得るため、より詳細には、過度に局在する体脂肪を減らすための、生理学的に許容可能な媒質を含む組成物におけるイナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との体または顔の皮膚の少なくとも一部に局所的塗布を含む、美容ケア方法に関する。
【００５３】
また、本発明は、皮膚の「オレンジピール」様外観を軽減するための、生理学的に許容可能な媒質を含む組成物におけるイナゴマメ胚抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）とカフェインまたはその誘導体との体または顔の皮膚の少なくとも一部への局所的塗布を含む、美容ケア方法に関する。
【００５４】
イナゴマメ胚抽出物は、生理学的に許容可能な媒質の中で本組成物の総重量の０．０００１％〜２０％の濃度、好ましくは本組成物の総重量の０．０５％〜５％の濃度で存在することが有利である。
【００５５】
カフェインまたはその誘導体は、生理学的に許容可能な媒質の中で、本組成物の総重量の０．０００１％〜２０％の濃度、好ましくは本組成物の総重量の０．０５％〜５％の濃度で存在することが有利である。
【００５６】
本発明の別の有益な実施形態によると、イナゴマメ胚抽出物を、リポソームまたは、化粧品の分野で使用されるか、または粉体の有機ポリマー、タルクおよびベントナイトなどの鉱物の担体に吸着する他のいずれかのマイクロカプセル中に包有または含んでもよい。
【００５７】
本発明を実施するための組成物は、特に、水性、水−アルコール、または油状の溶液、油中水のエマルジョン、水中油のエマルジョン、または複合性のエマルジョンの形態であってもよく、またこれらは、皮膚、粘膜、唇、および／または髪への塗布に適する懸濁物または粉体の形状であってもよい。
【００５８】
これらの組成物は、おおよそ流体であってもよく、かつクリーム、ローション、ミルク、セラム、ポマード、ゲル、ペースト、またはフォームの形状を有していてもよい。これらの組成物はまた、スティックなどの固体の形態であってもよく、またはエアロゾルの形態で皮膚に提供してもよい。
【００５９】
これらの組成物はまた、溶媒、増粘剤、希釈剤、抗酸化剤、着色剤、日焼け止め、日焼け剤、色素、賦形剤、保存剤、芳香剤、臭気吸収剤、美容的または薬学的作用剤、精油、ビタミン、必須脂肪酸、界面作用剤、膜形成ポリマーなどの製剤化に必要と予想される適用分野に共通して使用されるいずれかの添加剤およびアジュバントを含んでもよい。
【００６０】
どの場合でも、当業者は、これらアジュバントおよびそれらの比率が、本発明の組成物の望ましい有益な特性に干渉しないよう選択される。これらのアジュバントは、たとえば、本組成物の総重量の０．０１〜２０％に対応する。本発明の組成物がエマルジョンである場合、この脂肪相は、本組成物の総重量に対して５〜８０重量％、好ましくは５〜５０重量％を表してもよい。本組成物に使用される乳化剤および共乳化剤は、考慮される分野で従来使用されるものから選択される。たとえば、これらは、本組成物の総重量に対して、０．３〜３０重量％の範囲の比率で使用してもよい。
【００６１】
有利なことに、本発明に使用できる組成物は、本発明に係る体重減少のための作用剤に加えて、本発明の作用剤と同様かつ/または相補的な美容的効果を有する少なくとも１つの他の作用剤を含んでもよい。本発明によれば、この作用剤は、「追加的な作用剤」として定義される。
【００６２】
たとえば、追加的な作用剤は、アンチエイジング剤、調色剤（ｔｏｎｉｎｇ）、明剤（ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ）、水和剤、排出剤、および微小循環促進剤、医薬品、剥離剤、スクラブ剤、細胞外マトリックス刺激剤、エネルギー代謝活性化剤、抗菌剤、抗真菌剤、鎮静剤（ｃａｌｉｍｉｎｇ）、抗フリーラジカル剤、抗ＵＶ剤、および抗アクネ剤、抗炎症剤、麻酔剤、温化剤、着色剤、ならびに体重減少剤から選択されてよい。
【００６３】
このような追加的な薬剤は、
ビタミンＡ、具体的にはレチノイン酸、レチノール、プロピオン酸レチノール、パルミチン酸レチノールと、
ビタミンＢ３、具体的にはナイアシンアミド、トコフェロールニコチン酸エステルと、
ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２と、
ビタミンＣ、具体的にはアスコルビン酸、アスコルビルグルコシド、アスコルビルテトラパルミタート、リン酸アスコルビルマグネシウム、およびリン酸アスコルビルナトリウムと、
ビタミンＥ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、ＰＰ、補酵素Ｑ１０と、
メタロプロテアーゼ阻害剤、ＴＩＭＰアクチベータと、
ＤＨＥＡ、ならびにその前駆体および誘導体と、
アルギニン、オルニチン、ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｌｉｎｅ）、ヒドロキシプロリンジパルメート（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ  ｄｉｐａｌｍａｔｅ）、パルミトイルグリシン、ヒドロキシリジン、メチオニンおよびその誘導体、Ｎ−アシルアミノ酸化合物などのアミノ酸と、
ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、およびヘキサペプチド、ならびにそれらの脂溶性誘導体、アイソマーを含み、金属イオン（たとえば銅、亜鉛、マンガン、マグネシウムなど）などの他の種と組み合わされた天然ペプチドまたは合成ペプチド（たとえば、このペプチドは、ＭＡＴＲＩＸＹＬ（登録商標）、ＡＲＧＩＲＥＬＩＮＥ（登録商標）、ＣＯＬＬＡＸＹＬＴＭ、ＰＥＰＴＩＤＥ  ＶＩＮＣＩ  ０２（商標）、ＣＨＲＯＮＯＧＥＮ（商標）、ＬＡＭＩＮＩＸＹＬ  ＩＳ（商標）、ＰＥＰＴＩＤＥ  Ｑ１０（商標）の名称で、商業的に知られている）と、
ダイズ、スペルト小麦、ブドウ、ナタネ、亜麻仁、イネ、トウモロコシ、エンドウマメの抽出物などの植物ベースのペプチド抽出物と、
酵母抽出物、Ａｒｔｅｍｉａ  Ｓａｌｉｎａ抽出物と、
デヒドロ酢酸（ＤＨＡ）と、
合成または天然由来の植物ステロールと、
サリチル酸およびその誘導体、α‐ヒドロキシ酸、ならびにβ‐ヒドロキシ酸と、
アミノ糖、グルコサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｎ‐アセチル‐グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、Ｎ‐アセチル‐ガラクトサミンと、
ブドウ抽出物、マツ抽出物、およびオリーブ抽出物などのポリフェノール、イソフラボン、フラボノイドの抽出物と、
セラミドまたはリン脂質、スクアレンまたはスクアランなどの動物由来の油、スイートアーモンド油、コプラ油、リシン油、ホホバ油、オリーブ油、ナタネ油、ピーナッツ油、ヒマワリ油、コムギ胚芽油、トウモロコシの胚油、ダイズ油、綿実油、アルファファ油、ポピー油、ウインタースカッシュ（ｗｉｎｔｅｒ  ｓｑｕａｓｈ）油、マツヨイグサ油、アワ油、オオムギ油、ライムギ油、ベニバナ油、パッションフルーツ油、ヘーゼルナッツ油、パーム油、キョウニン油、アボカド油、およびキンセンカ油などの植物油、エトキシルカ植物油、ならびにシアバターなどの脂質と、
すべてのＵＶスクリーンおよび日焼け止めと
を含む群から選択されてよい。
【００６４】
特に有利なことに、本発明は、サイクリックＡＭＰおよびその誘導体、アデニル酸シクラーゼ酵素作用剤およびホスホジエステラーゼ酵素阻害剤、ｃｅｎｔａｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ抽出物、アジアチコサイドおよびアジア酸、メチルキサンチン、テイン、テオフィリン、テオブロミン、フォルスコリン（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎｅ）、エスクリンおよびエスクロシド、ＡＣＥ阻害剤、ペプチドＶａｌ−Ｔｒｐ、ニューロペプチドＹ阻害剤、エンケファリン、イチョウ抽出物、ヤマノイモ抽出物、ルチン、イェルバ・マテ抽出物、ガラナ抽出物、オリゴ糖、多糖、カルニチン、ツタ抽出物、ヒバマタ科の海草（ｒｏｃｋｗｅｅｄ）抽出物、加水分解したウツボグサ抽出物、加水分解したケイトウ抽出物、Ａｎｏｇｅｉｓｓｕｓ  ｌｅｉｏｃａｒｐｕｓ抽出物、キャッサバの葉の抽出物、パルミトイルカルニチン、カルノシン、タウリン、エルダーベリー抽出物、ダルス（Ｐａｌｍａｒｉａ  Ｐａｌｍａｔａ）などの藻類抽出物、ＡＴＰｅｐｔｉｄｅ（商標）の名称で販売される配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−ＮＨ２などの合成ペプチド、ＡＴＰｅｐｔｉｄｅ（商標）の名称で販売される配列Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎの合成ペプチドなどの、脂質生合成を阻害し、脂肪分解を刺激する、体重減少用に知られている少なくとも１つの作用剤を含んでもよい。
【００６５】
本発明に従って使用可能な組成物は、特定の経口または外部の局所において任意の適切な経路により塗布してもよく、かつ本組成物の製剤は、当業者により調節されるものである。
【００６６】
有利なことに、本発明に係る組成物は、局所的塗布に適した形態である。それゆえ、これら組成物は、生理学的に許容可能な媒質を含まなければならず、すなわち、皮膚または皮膚の付属器と適合し、かつすべての美容的形態を包有しなければならない。
【００６７】
本発明は、一般的に哺乳類、より詳細にはヒトを考慮することが明らかである。
【００６８】
この美容的処置方法の特定の実施形態は、上記の記載からももたらされる。本発明の他の利点および特色は、例示的かつ非限定的な工程で提供される実施例を読むことにより、より明らかとなる。
【００６９】
実施例１：イナゴマメ抽出物（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）の調製
粉体の形態のイナゴマメ胚（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ  Ｌ．）を、７０容量の水溶液中に配置し、ｐＨを、４．５〜５．５に調節する。
【００７０】
不溶性の糖を排除するために、セルラーゼを用いた加水分解を実施する。ここでは、２％のｃｅｌｌｕｃｌａｓｔ  ＣＬ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）および２％のＰＯＬＹＣＬＡＲ（登録商標）１０（ポリビニルピロリドン−ＰＶＰＰ−不溶性）を、反応媒質に添加する。次いで、反応媒質を５０℃で２時間加熱し、次いで、８０℃で１時間不活性化する。濾過ステップにより、固体残渣のみを保存するために、炭水化物を多く含む濾過物を分離することが可能である。
【００７１】
後者は、４５〜５０％のタンパク質含有量および２０〜３０％の糖含有量により特徴付けられる。
【００７２】
このように入手した乾燥残渣を、２％のＰＯＬＹＣＬＡＲ（登録商標）１０の存在する１００容量の水溶液に配置する。この混合物を、２Ｍの水性ソーダ溶液で８．０〜８．５のｐＨに調節する。
【００７３】
タンパク質の抽出を改善するために、２％のＡｌｃａｌａｓｅ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）を用いて第１の加水分解を実施する。加水分解を、５５℃で撹拌しながら２時間後に行う。８０℃で２時間溶液を加熱することにより酵素を不活性化する。不活性化後に、反応混合物を濾過し、濾過物を回収する、これは、イナゴマメ胚タンパク質抽出物の中間物質である。
【００７４】
調製におけるこの段階では、この濾過物のペプチドおよびタンパク質の化合物は、ポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓプレキャストゲル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の電気泳動により特徴づけられる。この電気泳動のため、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＬＤＳ試料調製バッファーの変性還元条件下で、７０℃で１０分間濾過物を加熱する。電気泳動の最中に還元したタンパク質が再度酸化するのを防ぐため、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）抗酸化剤溶液を内部のバット（陰極）に添加する。分子量標準物質（青の＋２を参照）が存在する中で、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）  ＭＥＳ泳動バッファー中でタンパク質の泳動を実施する。タンパク質の染色を、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ（登録商標）Ｂｌｕｅ  Ｒ−２５０を用いて実施する。したがって入手したタンパク質のプロファイルから、濾過物のペプチドおよびタンパク質の化合物は、５０〜１０ｋＤａの分子量を有することが示される。
【００７５】
中間物質のイナゴマメ胚抽出物を、２％ＰＯＬＹＣＬＡＲ（登録商標）１０の存在下で１００容量の水溶液中に置いた。この混合物を、１Ｍの塩酸水溶液を用いて４〜５のｐHに調整した。
【００７６】
次いで、タンパク質の加水分解のステップを、エンドプロテアーゼを用いて実施する。このため、２％のブロメラインを反応媒質に添加する。加水分解を、５０℃での撹拌から２時間後に行う。８０℃で２時間溶液を加熱することにより酵素を不活性化する。
【００７７】
このように入手した抽出物の精製を、澄んだ明るい溶液を入手するために、空隙率を（０．２μｍまで）減少させるＳｅｉｔｚ−Ｏｒｉｏｎ  フィルタープレートで連続的に濾過することにより続行する。この一連の濾過の後に、イナゴマメ胚抽出物は、２０〜２５ｇ／ｋｇの乾燥重量、１０〜１５ｇ／ｌのタンパク質含有量、５〜６ｇ／ｌの糖含有量、１〜２ｇ／ｌのアミノ酸含有量、および０．５〜１ｇ／ｌの総ポリフェノール含有量により特徴付けられる。タンパク質を、特定の比色分析法（ローリー法）により解析する。
【００７８】
この抽出物のタンパク質プロファイルを電気泳動ゲルにより解析する。上記と同一の条件下で、２つの大きなタンパク質ファミリーが観察され、このうち第１のファミリー（第２のファミリーより少ない）は、２５〜２０ｋＤａの分子量を有するタンパク質に対応し、第２のタンパク質ファミリー（第１のファミリーよりかなり多い）は、５ｋＤａ未満の分子量を有するタンパク質に対応する。
【００７９】
次いで、タンジェンシャルフロー濾過ステップにより、５ｋＤａ超の分子量を有するタンパク質を排除することにより、この抽出物を精製した。このため、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２  Ｂｉｏｍａｘカセット  ３０ｋＤａを備えたＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）の物質を介して存在する中で、イナゴマメ胚抽出物を汲み出す。入手した第１の濾過物を再び回収して別のＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２  Ｂｉｏｍａｘ  ５  ｋＤａカセットを介して再び濾過する。
【００８０】
精製の終わりに、明瞭な明るい黄色〜オレンジのイナゴマメ胚抽出物を得る。これは、８〜０ｇ/ｋｇの乾燥重量、６〜７ｇ/ｌのタンパク質含有量、０．３〜０．５ｇ/ｌの糖含有量、および０．１ｇ/ｌ未満の総ポリフェノール含有量により特徴付けられる。
【００８１】
次いで、希釈段階を、２〜５ｇ/ｋｇ、好ましくは２．５ｇ/ｋｇの乾燥重量、１．５〜３．５ｇ/ｌのペプチド化合物濃度、０．１〜０．３ｇ/ｌ（１５％未満）の糖濃度、および１％未満のポリフェノール濃度により特徴付けられるペプチド抽出物を入手するために、水−グリセロール混合物中で実施する。
【００８２】
この精製かつ希釈した抽出物は、本発明に係るイナゴマメ胚ペプチド抽出物に対応する。この抽出物は、ペプチド化合物が、５ｋＤａ未満の分子量を有し、１％未満のポリフェノール含有量を有する事実により特徴付けられる。
【００８３】
次いで、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアにより制御されるＨＰ１０００装置を用いた高圧液体クロマトグラフィーによりこの溶液を解析する。イナゴマメ抽出物の溶液の溶出の最中に使用するカラムはＮｕｃｌｅｏｓｉｌ（登録商標）３００−５  Ｃ４  ＭＰＮ（１２５×４ｍｎ）である。このカラムにより、（適切な溶媒の勾配により）０．２〜２５ｋＤａの分子量を有するタンパク質をクロマトグラフィーにより解析することが可能となる。これらのクロマトグラフィーの条件下で、複数のペプチド画分を単離した。これら多様な画分を、画分の分子のピークを同定するために質量分析により解析する。アミノ酸の組成も同様に判定した。これは、酸加水分解および高圧液体クロマトグラフィーによる同定の後、ＰＩＣＴ（フェニル−イソチオシアネート）を用いて前分化する手段による高圧液体クロマトグラフィーにより得られる。
【００８４】
実施例２：アクアグリセロポリン７の発現の評価
この試験の目的は、分化した３Ｔ３‐Ｌ１脂肪細胞におけるアクアグリセロポリン７の発現に関する、実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物の影響を決定することにある。
【００８５】
プロトコル
３Ｔ３‐Ｌ１細胞の培養および分化：
３Ｔ３‐Ｌ１脂肪細胞を、４．５ｇ／グルコース、２ｍＭのグルタミン、および１０％のウシ胎児血清を備えるＤＭＥＭ培地中で培養する。
【００８６】
細胞のコンフルエンス段階から２日後に、３Ｔ３‐Ｌ１細胞の脂肪細胞への分化を、０．５ｍｌのＩＢＭＸ、１μＭのデキサメタゾン、および１０μｇ／ｍｌのインスリン（Ｓｉｇｍａ，米国ミズーリ州セントルイス）を含む培養培地の溶液を３日間添加することにより誘導する。次いで、インスリンのみを、３〜４日の追加的な培養のため保存する。次いで、細胞を、標準的な培地である培養液中でさらに３日間保存する。
【００８７】
処置：
分化誘導期が開始してから、未処置の対照としての１×ＰＢＳ（Ｌｏｎｚａ、米国メイン州ロックランド）、ＰＢＳ中１％に希釈された実施例１にて入手した２．５ｇ／ｋｇの乾燥重量のイナゴマメ胚抽出物、または、ＰＢＳ中に１％に希釈され、処置の最後の５時間の間２ｍＭのカフェインを添加した実施例１にて入手したイナゴマメ胚抽出物を、１２日間、毎日塗布することによる処置を実施した。同様に、５時間、２ｍＭのカフェインでの処置を実施した。
【００８８】
アクアグリセロポリン７の免疫標識
細胞を、１×ＰＢＳ（Ｌｏｎｚａ、米国メイン州ロックランド）で３回洗浄し、３．７％のホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）で、１０分間、環境温度で固定する。この細胞膜を、アセトンで、４分間、−２０℃で透過処理する。非特異的な部位を、３％のウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ドイツシュタインハイム）で１５分間飽和させる。一次抗体（ウサギポリクローナル抗アクアグリセロポリン７（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。１／１００で希釈）を、１．５時間適用する。複数回すすいだ後、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８プローブ（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  ｄｏｎｋｅｙ  抗ウサギ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｆｉｓｈｅｒ）。１／１０００で希釈）に結合した第２の抗体を、１時間適用する。次いで、スライドを、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ  Ｇ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、イギリスハットフィールド）に配置する。
【００８９】
この細胞を、４０倍の対物レンズを備えるニコンの顕微鏡「Ｅｃｌｉｐｓｅ  ８０ｉ」で検査し、ニコンのデジタルカメラ「ＤＸＭ１２００Ｃ」で撮影する。
【００９０】
各条件の３つの画像を、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ６．３ソフトウェアを使用して解析する。光強度の合計を、表面培養に応じて調節する（ＭｃＭｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。
【００９１】
統計解析に、片側データ用のｔ−スチューデント検定を使用する。ここで、ｐ＜０．０５が有意であることが考えられる。ｐ＜０．１は、非常に有意性があると考えられ、ｐ＜０．００５は大いに有意性があると考えられる。
【００９２】
結果
顕微鏡での観察により、未処置の対照と比較して、カフェインで処置した、分化した３Ｔ３−Ｌ１細胞の蛍光がわずかに１２．６％増加したことが示される。未処置の対照と比較して、蛍光において１８．７％といった顕著な増加は、実施例１に係る１％のイナゴマメ抽出物で処置した細胞で観察される。定量的な解析により、図１に示されるように、未処置の対照と比較して、細胞の蛍光が、非常に顕著な４９．５％の増加したことが最終的に示される。
【００９３】
結論
実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物は、分化した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるアクアグリセロポリン７の発現を非常に顕著に増大させる。カフェインは、実施例１に係る１％のイナゴマメ抽出物の効果を実質的に高く増強する。
【００９４】
実施例３：脂肪細胞に含まれる脂質液滴の評価
この試験の目的は、実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物の、分化した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に含まれる脂質液滴の寸法および数に関する影響を測定することにある。
【００９５】
プロトコル：
培養液中で３Ｔ３−Ｌ１細胞を分化し、次いで、試験する化合物での処置を実施例２のように実施する。
【００９６】
ナイルレッドによる脂質の検出
ナイルレッドの蛍光染色、細胞内の脂質を強く標識するフェノキサゾンを使用して脂質の検出を実施する。
【００９７】
観察される蛍光の色は、周辺培地の疎水性に直接依存する。このナイルレッドの特異的な特性により、赤色に標識したリン脂質から金色を帯びた黄色に標識された中性脂質を区別することが可能となる。
【００９８】
この細胞を、３．７％のホルムアルデヒド溶液で１０分間固定し、１００ｎＭのナイルレッドを含むＰＢＳ溶液により１０分間標識化し、最後にＰＢＳですすぐ。
【００９９】
この細胞を、蛍光顕微鏡で試験する。定量化および統計解析を実施例２のように実施する。
【０１００】
結果：
実施例１に係る１％のイナゴマメ抽出物、２ｍＭのカフェイン、ならびに実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物で処置した、分化した３Ｔ３―Ｌ１細胞における、ナイルレッド標識の強度、液滴の寸法、ならびに数は、未処置の細胞と比較して減少する。
【０１０１】
実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物に関する定量解析から、未処置の細胞と比較して、４２．７８％の顕著な標識強度の減少、２７．７％の液滴の寸法の減少、および３３％の顕著な液滴の数の減少が示される。脂質の液滴の、染色強度、寸法、および体積の定量化を、表１、２、および３に記載する。脂質の液滴の寸法の定量化を、図２に例示する。
【０１０２】
【表１】
2016502976.tif 000003
【０１０３】
【表２】
2016502976.tif 000004
【０１０４】
【表３】
2016502976.tif 000005
【０１０５】
結論：
実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物により、分化した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における脂質の液滴の寸法および数の顕著な減少が引き起こされる。
【０１０６】
実施例４：実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物の体重減少の効果の臨床評価第１号
この試験の目的は、実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物のヒトにおける体重減少の効果を、センチメートルでの測定により評価することにある。
【０１０７】
プロトコル
３４〜６３歳（平均年齢５２歳）の３９名の志願者の異なる試験領域（腰、腹、尻部、臀部、太腿）で、１日２回、２８日間、臨床試験を行った。
【０１０８】
試験した生成物は、２％のカフェインおよび２％の実施例１に係るイナゴマメ抽出物を含む標準的な美容組成物である。
【０１０９】
この有効性をＴ０およびＴ２８日での測定を比較することにより評価する。ここでは、各志願者自身が対照となる。
【０１１０】
結果：
実験条件の下、塗布してから２８日後に、センチメートルでの測定における顕著に平均値が減少したことが太腿（平均−０．８ｃｍ）、腰（平均−０．６ｃｍ）、および腹（平均−０．９ｃｍ）で観察される。
【０１１１】
この一連のデータは正規分布を有する。統計解析は、片側データでのｔ−スチューデント検定を使用し、ここでは、ｐ＜０．０５は有意性があると考慮される。※に留意されたい。
【０１１２】
【表４】
2016502976.tif 000006
【０１１３】
結論：
実施例１に係るイナゴマメ抽出物と２％のカフェインとの会合物を、１ヶ月間、１日に２回塗布することにより、太腿、腰、および腹の顕著な痩身が可能となる。
【０１１４】
実施例５：実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物の体重減少の効果の臨床評価その２
この試験の目的は、実施例１に係るイナゴマメ抽出物とカフェインとの会合物の、ヒトにおける体重減少の効果を、センチメートルでの測定により評価することにある。
【０１１５】
プロトコル
３０〜６５歳（平均年齢４３．７歳）の２６名の志願者の異なる試験領域（腰、腹、尻部、臀部、太腿）で、１日２回、２８日間、臨床試験を行った。
【０１１６】
試験した生成物は、２％のカフェインおよび２％の実施例１に係るイナゴマメ抽出物を含む標準的な美容組成物である。
【０１１７】
Ｔ０およびＴ２８の日での測定を比較することにより有効性を評価する。ここでは、各志願者自身が対照となる。
【０１１８】
結果：
実験条件下で、試験から２８日後に、腹部の外周が平均２．２ｃｍ減少し、上大腿の外周が平均１．２ｃｍ減少し、太腿の体幹の体積の平均が顕著に減少したことが観察された。
【０１１９】
この一連のデータは正規分布を有する。統計解析は、片側データでのｔ−スチューデント検定を使用する。ここでは、ｐ＜０．０５は、有意であると考慮される。
【０１２０】
さらに、アンケートにより、大多数の志願者が、処置した領域が硬く滑らかになり、「オレンジピール」様外観が軽減したと推定したことを確立することが可能である。
【０１２１】
結論：
実施例１に係るイナゴマメ抽出物と２％のカフェインとの会合物を、１ヶ月間、１日２回塗布することにより、太腿および腹の顕著な痩身、ならびに「オレンジピール」様外観の軽減が可能である。
【０１２２】
実施例６
組成物の調製
１．体重減少クリーム１
【０１２３】
【表５】
2016502976.tif 000007
2016502976.tif 000008
【０１２４】
【表６】
2016502976.tif 000009
2016502976.tif 000010
【図１】
2016502976.tif 000011
【図２】
2016502976.tif 000012
【国際調査報告】
2016502976.tif 000013
2016502976.tif 000014
2016502976.tif 000015
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2016502976.tif 000017
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