(57)【要約】  アルツハイマー病が、好ましくは過剰βアミロイドが蓄積される前にスズ-117m-DOTAアネキシンVを投与することにより、異常活性化小膠細胞を攻撃することにより治療される。この低い放射活性用量の化合物は、老化した異常活性化小膠細胞に選択的に結合し、異常活性化小膠細胞にアポトーシスを効果的に誘導する転換電子を放射する。血液脳関門を修復するためにスズ-アネキシンA1の追跡治療を処方することができる。アネキシンA1は血液脳関門の修復を助け、会合しているスズ-117mが血液脳関門に関連した老化した異常活性化小膠細胞でアポトーシスを誘導する。
2016522832.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病を有する個体に、脳の老化した異常活性化小膠細胞にアポトーシスを誘導するために有効な量のスズ-117m アネキシンを投与することを含む、アルツハイマー病を治療する方法。
【請求項２】
前記スズ-117mがキャリアを加えていないものである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記スズ-117m アネキシンがスズ-117m-DOTAアネキシンを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記スズ-117m-DOTAアネキシンがスズ-DOTAアネキシンVである、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
前記量が、動脈内注射された場合、半球あたり0.03ミリキュリー〜50ミリキュリーであり、静脈内注射された場合、3.0ミリキュリー〜10.0ミリキュリーである、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記量が、大槽又は腰髄注射により、くも膜下腔内に注入された場合、約0.03ミリキュリー〜約1.0ミリキュリーである、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記スズ-117m アネキシンがアルツハイマーの臨床症候の発生より前に投与される、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
前記スズ-117m アネキシンが動脈内投与される、請求項3に記載の方法。
【請求項９】
前記スズ-117m アネキシンが脊髄内投与される、請求項3に記載の方法。
【請求項１０】
前記スズ-117m アネキシンが脊椎の腰部領域に投与される、請求項8に記載の方法。
【請求項１１】
前記スズ-117m アネキシンが大槽内投与される、請求項8に記載の方法。
【請求項１２】
前記スズ-117m アネキシンが脳室に投与される、請求項3に記載の方法。
【請求項１３】
スズ-117m アネキシンA1を投与することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
前記スズ-117m アネキシンA1が、前記スズ-117m アネキシンVの投与の7日〜28日後に投与される、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
前記スズ-117m アネキシンVが、2回以上、3カ月〜1年間の間隔で投与される、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
前記スズ-117m アネキシンA1がスズ-117m-DOTA-アネキシンA1である、請求項12に記載の方法。
【請求項１７】
検出可能な放射性核種で標識したアネキシンVを個体に投与すること及び前記個体の脳の前記放射性核種を非侵襲的に検出することを含む、異常活性化小膠細胞を検出する方法。
【請求項１８】
前記放射性核種がTc-99mである、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記放射性核種がスズ-117mである、請求項17に記載の方法。
【請求項２０】
スズ-117m アネキシンA1を含む組成物。
【請求項２１】
スズ-117m-DOTA-アネキシンA1を含む、請求項20に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、2013年5月23日に出願された米国仮特許出願第61/826,701号に基づき、優先権を主張するものであり、その開示は参照によりその全体が完全に本明細書に記載されているものとして本出願に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病の原因及び発生には様々な理論がある。しかし、アルツハイマー病がβアミロイドの蓄積とそれに引き続く認知機能の劣化を伴うことは非常に明らかである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】米国特許第8,257,681号
【特許文献２】米国特許第8,283,167号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
βアミロイドは脳のマクロファージである小膠細胞から形成される。小膠細胞は脳においていくつかの重要な機能を有している。しかしながら、小膠細胞は異常活性化することがあり、その結果、引き続く認知力劣化の原因となる脳におけるβアミロイドの生成と蓄積をもたらすことがある。一般的に、ほとんどのβアミロイドは、軽度の認知機能障害であったとしても、そのあらゆる臨床検出より前に生成する。診断の時点までに、脳の50%に上る質量が失われていることがある。従って、アルツハイマー病の治療はいかなるものも、認知症の発症前に、好ましくは、かなり早い時期に実施するべきである。
【０００５】
さらに、ほとんどの神経変性疾患と同様に、血液脳関門の劣化も存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、βアミロイドの蓄積を老化した異常活性化小膠細胞を破壊することによって阻止することができるという認識を前提としている。異常活性化小膠細胞は、短飛程放射性同位元素を老化した異常活性化小膠細胞のみに結合させることにより破壊することができる。このことは、老化した異常活性化小膠細胞のアポトーシスを誘導することによりこれらの小膠細胞の破壊をもたらし、βアミロイドを生成する事象のカスケードへの関与を妨げる。特に、本発明はスズ-117m、特には、スズ-117m-アネキシンVを異常活性化小膠細胞に結合させる放射性核種として利用する。
【０００７】
本発明の更なる実施態様においては、第2の投与量のアネキシンA1に結合させたスズ-117mを投与することができる。アネキシンA1は血液脳関門の修復を助け、一方、スズ-117mはあらゆる異常活性化小膠細胞及び血液脳関門の劣化に関連する他の炎症性の免疫反応性細胞を破壊する。
【０００８】
本発明の目的及び長所は、以下の詳細な記載を踏まえればより理解される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、500マイクロキュリーのDOTAアネキシンVに結合させたスズ-117mを患者の末梢静脈に注射したときの、脳での観測投与量を示す。
【図２】図２は、脱塩カラムで精製したSn-117m-アネキシンA-1を含む生成物ピークが画分7〜10に溶出したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明によれば、アルツハイマー病は患者に異常活性化小膠細胞のアポトーシスを誘導するために有効な量のスズ-アネキシンVを投与することにより治療される。
【００１１】
スズ-117m  アネキシンは、好ましくはキャリアを加えていないスズ-117mから形成される。キャリアを加えていないスズ-117mを生成するための様々な方法がある。そのような方法の1つは、Stevensonの米国特許第8,257,681号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれるが、他の方法もまた本発明に利用することができる。スズ-117-mは独特な性質を持つ放射性同位元素である。それはいくらかのガンマ線を放射するが、その放射線の主要な源は転換電子である。転換電子からの放射は290ミクロンの設定距離を貫通するため、スズ原子から290ミクロンよりも遠く離れた細胞にはダメージを与えない。
【００１２】
一方、スズ-117mはアネキシン分子に結合される。アネキシンは、ミリモル濃度のカルシウムの存在下で、膜脂質に高い親和性で結合する能力を持つ分子の種類である。いくつかの異なるアネキシンが存在する。「アネキシン」の用語には、ヒトの胎盤のような天然源から精製された天然アネキシンや、例えば、遺伝子操作又は他の手段により生成された天然配列を含むアネキシン分子が含まれる。アネキシンの用語には、他に指定しないかぎり、下記に定義するような任意の供給源に由来する又はそこから生成されたアネキシンを含む。
【００１３】
修飾されたアネキシンとは、アネキシンの膜結合親和性を実質的に変化させることが無いように改変させた分子の天然配列を有する分子である。そのようなアネキシンは、当業者に既知である化学、遺伝子操作又は組み換え技術により生成することができる。修飾は、いくつかのアミノ酸残基の付加及び/又は天然若しくは遺伝操作された配列の単一部位でのアミノ酸の付加/削除による配列の修飾を含む。例えば、アネキシンは、そのアミノ酸の少なくとも1つが接近可能なスルフヒドリル基を提供するアミノ酸残基の付加により、N末端で修飾されうる。接近可能なスルフヒドリル基は、コンジュゲーションの間に使用されてもよく、又は更なるコンジュゲーションのために使用可能であるように保持しておいてもよい。「修飾されたアネキシン」の用語はアネキシン多量体を含む。
【００１４】
アネキシン多量体は、２つ以上の修飾されたアネキシン分子の単量体の組み合わせであり、その多量体の構成成分は、単量体のアネキシンと同様の又は改良された膜結合親和性をもたらす天然若しくは組み換え体又はその任意の組み合わせであってもよい。20までの修飾されたアネキシンから構成される多量体は、本発明において有用である。アネキシン多量体の1つの例としては、修飾されたアネキシン上の接近可能なシステイン基間でのジスルフィド結合により連結された2つの修飾されたアネキシンから構成されうるアネキシン二量体がある。アネキシン二量体はまた、融合タンパク質として直接生成されうる。
【００１５】
典型的には、連結分子はスズ-117mをアネキシンに付加するために使用される。そのような連結分子には、1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1,4,7,10-四酢酸、すなわちDOTAがある。通常、アミノベンジルDOTAが使用される。この分子の形成は、米国特許第8,283,167号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。下記に検討するように、アネキシンVは異常活性化小膠細胞に結合し、アポトーシスの誘導により異常活性化小膠細胞を破壊するために好ましく使用される。アネキシンA1は血液脳関門を修復するために使用される。
【００１６】
アルツハイマー病は、通常はDOTAと連結させたスズ-117m アネキシンVの有効用量を投与することにより治療される。本発明において使用される用量は投与の様式に依存して変化する。生理食塩水のような適切なキャリア中のスズ-117m アネキシンVは、動脈内、腰髄内を含む脊髄内、若しくは大槽内、血管内又は脳室に直接的に投与されうる。スズ-117mについて脳への経路がより直接的であればあるほど、必要な用量は低くなる。好ましくは、脳にホルミシス用量で転換電子療法を提供するのに十分である用量を適用することが望ましい。一般的には、はるかに低い用量、一般的に各々の脳半球について0.03ミリキュリー〜0.3ミリキュリー周辺でホルミシスを提供する。しかしながら、全身の注入された投与量は幅広く変動することがあり、約3ミリキュリー〜50ミリキュリーまで、一般的には約3ミリキュリー〜約20ミリキュリー又は5ミリキュリー〜10ミリキュリーでありうる。
【００１７】
異常活性化小膠細胞においては、アネキシンが本来的に結合しているホスファチジルセリンが露出している。これがスズ-117mを異常活性化小膠細胞に結合させる。スズ-117mの治療エネルギーは、290ミクロンを移動する転換電子の形態で、低い治療用量(つまり、非DNA切断用量又はホルミシス用量)でしかないので、小膠細胞に取り付けた際には、放射線は主に、老化した小膠細胞が位置する脳の介在ニューロン領域に影響を及ぼす。
【００１８】
投与の時期はできるだけ早くあるべきであり、事実、あらゆるアルツハイマーの臨床症候より前に起こってもよい。βアミロイド蓄積、タウタンパク質形成又はアルツハイマー病に関連する他の潜在的な変化の任意の徴候があるならば、即座にそれはスズ-117m アネキシンVの投与の正当な理由となる。βアミロイドの蓄積はアルツハイマーの臨床症候よりも何年も先立つものであるので、アルツハイマーの任意の臨床症候が検出されたならば、確実に即座に本発明の組成物を投与するべきである。スズ-117m アネキシンVは再投与されうる。スズ-117は400時間を大幅に超える長い期間脳に残存するため、スズ-117mを再投与する前に、少なくとも1半減期〜2半減期待つべきである。スズ-117m アネキシンは2回以上、一般的に患者の余命に対して3カ月〜1年間の間隔で再投与されうる。同様に、スズ-117m アネキシンA1は、同じ間隔で再投与されうる。
【実施例１】
【００１９】
本発明の有効性を確証するために、図に示すように500マイクロキュリーのDOTAアネキシンVに結合させたスズ-117mを患者の末梢静脈に注射した。最初は、脳での観測投与量は1.5マイクロキュリーであったが、すぐに0.5マイクロキュリーに落ち込み、400時間を超える期間の間、.4マイクロキュリー〜.1マイクロキュリーの間で安定した。このことは、スズDOTAアネキシンは血液脳関門を通り抜け、脳に局在し、長期間脳において有効であり続けたことを実証する。400時間を超える顕著な減少は、14日間というスズ-117mの半減期のためであると期待される（添付の図面参照）。
【００２０】
第2の治療化合物、スズ-117m アネキシンA1(スズ-117mアミノベンジルDOTA アネキシンA1)は、スズ アネキシンVと同じ概算用量で投与されうる。アネキシンA1は、アルツハイマー病の個体において通常破損している血液脳関門の修復に役立ち、会合したスズ-117mは存在する老化した異常活性化小膠細胞のアポトーシスを誘導するだろう。
【００２１】
スズ-117m-アネキシンA1複合体はスズ-117m-アネキシンV複合体と同時に投与されうるが、好ましくは、スズ-117m-アネキシンA1が血液脳関門を通り抜けたスズ-117m-アネキシンVと干渉しないように、スズ-117m-アネキシンA1の投与の前におよそスズの半減期の2分の1(すなわち7日間)、約2半減期(すなわち28日間)に至るまで待つべきである。
【実施例２】
【００２２】
4659 Ci/gの比放射能を有する4M HCl中に溶解した1mCiのSn-117mをバイアルに入れ、蒸発乾固させた。二官能性キレート剤、アミノベンジル-DOTA、の水溶液を溶液中、キレート剤対全メタルが10:1の比率で加えた。溶液を密封し、140℃で15分間加熱した。形成したSn-117m-DOTAキレート剤を、逆相HPLCにより精製し、サンプル中の過剰のキレート剤及び他の不純物を除去した。得られた精製キレート剤は0.2マイクロリットルの純チオホスゲンで処理し、過剰のチオホスゲンはエーテルで3回抽出することにより除去した。このことにより、アニリン基がイソチオシアナト基に変換される。キレート剤のpHを約6に調整し、その後、0.367マイクロリットル中の0.37mgのアネキシンVを加えた。炭酸水素塩バッファーでpHを9.2に調整し、溶液を振盪させながら37℃で90分間加熱した。バイアルの内容物を10mLの重力送り脱塩カラム(バイオラッド社  エコノパック-10DG)で精製し、0.5mLの画分を収集した。Sn-117m-アネキシンA-1(リポコルチンとも呼ばれる)を含む生成物ピークは画分7〜10に溶出した。Sn-117mの活性に基づく収率は12%である。
【００２３】
本発明の別の実施形態において、スズ-117m-アネキシン-Vは、スズ-117m-DOTAを投与して脳を画像化することにより、異常活性化小膠細胞の存在を判定するための診断ツールとして使用することができる。スズ-117mはガンマ線を放射し、これはSPECTにより検出できる。或いは、Tc-99m アネキシンVのような化合物を純粋に診断目的で使用することができる。脳において検出される通常の放射線よりも高い値は、認知機能障害前であったとしてもアルツハイマー病の指標となる。
【００２４】
従って、本発明によれば、βアミロイドの大量蓄積及び関連する脳質量並びに認知機能の損失以前に、異常活性化小膠細胞を破壊することにより、アルツハイマー病を非常に初期の段階で検出及び/又は治療することができる。本発明は、異常活性化小膠細胞を非常に初期の段階で検出する方法を可能にし、異常活性化小膠細胞への特定攻撃機構を提供する。比較的低い用量が必要であるので、ホルミシス作用が達成される。さらに、スズ-117mからの放出放射線の短い有効距離のために、白質のみが影響を受け、灰白質、又は脳のニューロンは本療法により有害な影響を受けることはない。化合物は、有害作用がもしあったとしても極小であるため、本法は必要に応じて繰り返すことができる。さらに、本発明は血液脳関門を修復する事が可能であるという付加利益も提供する。
【００２５】
以上が本発明を実施する好ましい方法を付した本発明の記述であった。しかしながら、発明自体は添付の特許請求の範囲によってのみ規定されるべきである。
【図１】
2016522832.tif 000003
【図２】
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【国際調査報告】
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2016522832.tif 000006
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