(57)【要約】  これは、ヒト治療におけるＩＧＦ−１模倣物の使用に関する。特に、本明細書で開示するのは、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の治療のための、Ｅペプチドを含むＩＧＦ−１前駆体タンパク質、とりわけヒトＩＧＦ−１前駆体タンパク質の使用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のためのＩＧＦ−１模倣物であって、Ｅペプチドを含むＩＧＦ−１前駆体タンパク質を含むポリペプチドである、ＩＧＦ−１模倣物。
【請求項２】
ＳＢＭＡに罹患している患者におけるＳＢＭＡに関連する症状を防止する、改善するまたは反転させるための、請求項１に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項３】
ＳＢＭＡに罹患している患者の運動ニューロンの変性を低減または防止するための、請求項１または請求項２に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項４】
ＳＢＭＡに罹患している患者における骨格筋の筋力低下および／または萎縮を防止するまたは反転させるための、請求項１から３までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項５】
骨格筋における突然変異アンドロゲン受容体（ＡＲ）凝集を低減させて、突然変異ＡＲ毒性を低減するための、請求項１から４までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項６】
前記前駆体タンパク質がヒトＩＧＦ−１前駆体タンパク質である、請求項１から５までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項７】
プロテアーゼによるＩＧＦ−１からのＥペプチドの切断が低減するように前記前駆体タンパク質が修飾されている、請求項１から６までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項８】
前記前駆体タンパク質がＥａ、ＥｂまたはＥｃペプチドを含む、請求項１から７までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項９】
前記前駆体タンパク質がＥａペプチドを含む、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項１０】
前記前駆体タンパク質のアミノ酸残基Ｅ３、Ｒ７１またはＳ７２の１つまたは複数が欠失し、アミノ酸の番号付けが配列番号５に対応する、請求項１から９までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１  Ｅａペプチド前駆体模倣物。
【請求項１１】
前記前駆体タンパク質の３７位におけるアルギニンがアラニンに突然変異している（Ｒ３７Ａ）、請求項１から１０までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項１２】
前記前駆体タンパク質が以下の修飾：ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１、ΔＳ７２を含み、アミノ酸の番号付けが配列番号５に対応する、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１  Ｅａペプチド前駆体模倣物。
【請求項１３】
前記前駆体タンパク質が配列番号６に示すアミノ酸配列を含む、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項１４】
前記前駆体タンパク質の側鎖に共有結合したポリ（エチレングリコール）部分をさらに含む、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項１５】
ペグ化前駆体タンパク質が配列番号６に示すアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
【請求項１６】
球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための、請求項６から１５までのいずれか一項に記載のＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１から５までのいずれか一項に記載の使用のための、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１６または請求項１７に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
予防または治療有効量の請求項６から１５までのいずれか一項に記載のＩＧＦ−１模倣物を含む、請求項１６から１８までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２０】
前記ＩＧＦ−１模倣物が０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、請求項１６から１９までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
前記ＩＧＦ−１模倣物が約０．０１、約０．０３、約０．０６、約０．１、約０．３、約０．５、約１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、請求項２０に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
前記ＩＧＦ−１模倣物が単回静脈内または皮下注入として投与される、請求項１６から２１までのいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２３】
請求項１から５までのいずれか一項に記載の球脊髄性筋萎縮症に罹患している患者における前記疾患を治療する方法であって、治療有効量の請求項６から１５までのいずれか一項に記載のＩＧＦ−１模倣物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
請求項１から５までのいずれか一項に記載の球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患の治療に使用する医薬の製造のための、請求項６から１５までのいずれか一項に記載のＩＧＦ−１模倣物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）修飾の分野に属する。特に、本発明は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）の療法における使用のための修飾ＩＧＦ−１ポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）は、進行性の筋力低下および筋萎縮を特徴とする遅発型Ｘ連鎖神経変性疾患であり、現在のところそれに対する有効な疾患修飾療法は存在しない。該疾患は、主として成人男性を冒し、推定罹患率は、１００，０００人当たり１〜２人である。ＳＢＭＡは、アンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子の第１エクソン内のポリグルタミン鎖をコードする三塩基ＣＡＧ反復配列の伸長により引き起こされる（Fischbeck KH (2012) Developing treatment for spinal and bulbar muscular atrophy. Prog Neurobiol; 99:257-61）。ＡＲは、核ホルモン受容体スーパーファミリーに属し、アンドロゲンの結合により核に転移し、そこでＤＮＡに結合し、標的遺伝子を活性化し、抑制する。ＳＢＭＡにおいては、ＡＲにおけるポリグルタミン鎖の伸長が、変異体タンパク質における毒性機能獲得をもたらし、運動ニューロンおよび他の罹患組織の核におけるその蓄積がもたらされる。いくつかの翻訳後修飾によってポリグルタミン伸長ＡＲの毒性が緩和されるが、これは、突然変異ＡＲクリアランスの増大による可能性がある（Palazzolo I, Burnett BG, Young JE, et al (2007) Akt blocks ligand binding and protects against expanded polyglutamine androgen receptor toxicity. Hum Mol Gent; 16:1593-603）。
【０００３】
ＳＢＭＡの主要な症状は、脊髄および脳幹下位運動ニューロンの変性に帰せられるが、感覚症状発現、アンドロゲン不感受性の徴候（女性化乳房および生殖能力の低下）ならびに一次性筋障害性異常も起こる（Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012) Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56）。この意味で、筋肉がＳＢＭＡの病因に関与している可能性が非常に高い。ＳＢＭＡ患者の筋肉生検で筋障害性ならびに神経原性変化が示され、ＳＢＭＡのノックインマウスモデルにおいて筋肉病変が運動ニューロン病変に先行し、野生型ＡＲの筋肉特異的過剰発現がＳＢＭＡ様表現型をもたらす（Banno H, Katsuno M, Suzuki K, et al (2012) Pathogenesis and molecular targeted therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Cell Tissue Res; 349:313-320）。
【０００４】
骨格筋におけるＩＧＦ−１の筋肉特異的イソ型を過剰発現するＳＢＭＡトランスジェニックマウスは、Ａｋｔ活性化の増大（Palazzolo I, Stack C, Kong L, et al (2009) Overexpression of IGF-1 in muscle attenuates disease in a mouse model of spinal and bulbar muscular atrophy. Neuron; 63:16-28）ならびにＡＲタンパク質のリン酸化の増大および凝集の低下を示した。Ａｋｔの活性化により、ＳＢＭＡマウスの行動および組織病理学的異常から効果的に救出され、寿命が延長し、筋肉および脊髄の病変が減少した（Rinaldi C, Bott LC, Chen KL, et al (2012) Insulinlike growth factor (IGF)-1 administration ameliorates disease manifestations in a mouse model of spinal and bulbar muscular atrophy. Mol Med; 18:1261-8）。
【０００５】
現在、ＳＢＭＡの有効な治療法は存在しない。アンドロゲン低下剤の臨床試験で臨床的に意味のある利益がもたらされなかったが、ＳＢＭＡにおける突然変異ＡＲの毒性がリガンド依存性であるという証拠が存在する（Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7.、Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012) Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56）。
【０００６】
インスリン様成長因子（ＩＧＦ）は、細胞がそれらの生理学的環境とコミュニケーションをとるために使用する複合システムの一部である。この複合システム（しばしばインスリン様成長因子軸と呼ばれる）は、２つの細胞表面受容体（ＩＧＦ−１ＲおよびＩＧＦ−２Ｒ）、２つのリガンド（ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２）、６つの高親和性ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ１〜６）のファミリーならびに関連ＩＧＦＢＰ分解酵素（プロテアーゼ）からなる。このシステムは、正常生理機能の調節に対してだけでなく、多くの病理学的状態に対しても重要なものである（Glass, Nat Cell Biol 5:87-90, 2003）。
【０００７】
インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）は、骨格筋の強力な同化因子であり、その肥大および抗萎縮特性のため、内因性ＩＧＦ−１の減少に関連する筋肉消耗状態と闘うための生物学的および臨床的に有望な候補となっている（Clemmons DR (2007) Modifying IGF1 activity: an approach to treat endocrine disorders, atherosclerosis and cancer. Nat Rev Drug Discov; 6:821-37）。その成熟形態では、ソマトメジンとも呼ばれている、ヒトＩＧＦ−１は、広範囲の培養細胞の成長を刺激することが示された７０アミノ酸の小タンパク質である。ＩＧＦ−１タンパク質は、３つの公知のスプライシング変異体ｍＲＮＡによって最初にコードされる。各ｍＲＮＡのオープンリーディングフレームは、７０アミノ酸ＩＧＦ−１（配列番号１）および特定のＩＧＦ−１  ｍＲＮＡに依存する、Ｃ末端における特定のＥペプチドを含む前駆体タンパク質をコードする。これらのＥペプチドは、Ｅａ（ｒｓｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ；配列番号２）、Ｅｂ（ｒｓｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｙｑｐｐｓｔｎｋｎｔｋｓｑｒｒｋｇｗｐｋｔｈｐｇｇｅｑｋｅｇｔｅａｓｌｑｉｒｇｋｋｋｅｑｒｒｅｕｉｇｓｒｎａｅｃｒｇｋｋｇｋ；配列番号３）およびＥｃ（ｒｓｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｙｑｐｐｓｔｎｋｎｔｋｓｑｒｒｋｇｓｔｆｅｅｒｋ；配列番号４）ペプチドと命名され、長さが３５〜８７アミノ酸の範囲にあり、Ｎ末端における共通配列領域およびＣ末端における可変配列領域を含む。例えば、ＩＧＦ−１−Ｅａの野生型オープンリーディングフレームは、リーダー配列を含む１３５アミノ酸のポリペプチドおよびリーダー配列を含まない１０５アミノ酸のポリペプチド（ｇｐｅｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｒｓｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ；配列番号５）をコードする。生理学的発現に際して、Ｅペプチドは、内因性プロテアーゼによって前駆体から切断されて、成熟７０アミノ酸ＩＧＦ−１を生じる。しかし、天然ＩＧＦ−１タンパク質は、その有効性を制限し得る特定の特性を有する。第一に、ＩＧＦ−１は、ＩＧＦ−１を血清中でインキュベートする場合に迅速なタンパク質溶解を可能にする二塩基性モチーフを含む、その受容体結合部位における切断によって不活性化され得る。第二に、ＩＧＦ−１は、ホルモンがその受容体（ＩＧＦ１Ｒ）に対して有するよりもＩＧＦ−１に対する高い親和性を有する、特定のＩＧＦ−１結合タンパク質、とりわけＩＧＦ結合タンパク質５（ＩＧＦＢＰ５）によって阻害され得る（Clemmons DR (2012) Metabolic actions of insulin-like growth factor-1 in normal physiology and diabetes. Endocrinol Metab Clin North Am; 41:425-43）。最後に、成熟形態のＩＧＦ−１は、腎ろ過によって循環から速やかに除去される小タンパク質（７，６００Ｄａ）である。これらの因子は、筋肉消耗の状態における臨床的有効性の欠如および天然ＩＧＦ−１の短い半減期に寄与すると考えられる。
【０００８】
ＩＧＦ−１に関連する薬物動態学的および薬力学的問題に対処するために、修飾型の天然タンパク質が開発された。そのタンパク質分解を減少させ、阻害性ＩＧＦＢＰ５への結合を減少させ、直鎖状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖をＮ末端に付加することによって、その有効性を増大させるために、このヒトＩＧＦ−１（ｈＩＧＦ−１）模倣物の配列の修飾が行われた（ＷＯ２００７／１４６６８９）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
進行性の筋力低下および筋萎縮を特徴とする神経変性疾患ＳＢＭＡに罹患している患者に介入することは、非常に革新的であり、満たされていない高い医学的要求を満たすであろう。実際、この患者集団は、現在のところ治療選択肢を有さない。したがって、突然変異ＡＲの毒性により引き起こされ、進行性の筋力低下および筋萎縮を特徴とする神経変性疾患に対処するための新規医薬組成物および方法を開発する必要がある。この目的は、本開示において提供する方法および組成物によって達成することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のためのＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物に関する。
【００１１】
特に、本発明は、ＳＢＭＡに罹患している患者におけるＳＢＭＡと関連する症状を防止すること、改善することまたは反転させることによる療法における使用のためのＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物に関する。
【００１２】
本発明の１つの実施形態において、ＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、ＳＢＭＡに罹患している患者の脳幹および脊髄における運動ニューロンの変性を低減または防止する。
【００１３】
本発明の別の実施形態において、ＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、ＳＢＭＡに罹患している患者における筋力低下および／または筋萎縮を防止するまたは反転させるために用いられる。
【００１４】
本発明の１つの実施形態において、ＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、骨格筋における突然変異アンドロゲン受容体（ＡＲ）凝集を低減させる。
【００１５】
別の実施形態において、ＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、骨格筋における突然変異アンドロゲン受容体（ＡＲ）凝集を、ひいては突然変異ＡＲ毒性を低減させる。したがって、本発明の１つの実施形態において、ＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、骨格筋における突然変異アンドロゲン受容体（ＡＲ）の毒性を低減するために用いられる。
【００１６】
特定の実施形態において、本発明の方法に用いられるＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、例えば、ＷＯ２００７／１４６６８９に記載されているように特定の位置においてペグ化または突然変異させることにより、阻害性ＩＧＦ１結合タンパク質への結合を避けるために改変され、延長された血清半減期を有するＩＧＦ−１模倣物である。
【００１７】
本開示の特定の実施形態において、前述の実施形態のいずれか１つによる使用のための、それ自体または医薬組成物の一部としてのＩＧＦ−１模倣物は、Ｅペプチドを含むヒトＩＧＦ−１前駆体タンパク質、とりわけ、非修飾ＩＧＦ−１タンパク質と比較してプロテアーゼによるＩＧＦ−１からのＥペプチドの切断が少ないもしくは回避されるように修飾され、および／または非修飾ＩＧＦ−１タンパク質と比較して阻害性ＩＧＦ−１結合タンパク質に対するより低い親和性、特にＩＧＦ−１結合タンパク質５（ＩＧＦＢＰ５）に対するより低い親和性を有する、前駆体タンパク質を含むポリペプチドである。
【００１８】
本発明の特定の実施形態において、Ｅペプチドは、Ｅａ、ＥｂまたはＥｃペプチドであるが、特にＥａペプチドである。
【００１９】
ＩＧＦ−１前駆体タンパク質のＮ末端において、アミノ酸Ｇ１、Ｐ２またはＥ３の１つ、２つまたはすべてを欠失または突然変異させることができる。さらに、Ｒ３６およびＲ３７をそれぞれＲ３６ＡおよびＲ３７Ａに突然変異させることができる。
【００２０】
別の関連実施形態において、ＩＧＦ−１前駆体タンパク質は、以下の突然変異を含むＥａペプチドを含む：アミノ酸残基Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、３７位におけるＲがＡに突然変異しており、したがって、以下の修飾を含む：ΔＧ１、ΔＰ２、ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１、ΔＳ７２。
【００２１】
付加的な実施形態において、ＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質のアミノ酸Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｒ３７、Ｒ７１およびＳ７２を欠失させる（ＩＧＦ−１  Ｅａペプチド−ΔＧ１、ΔＰ２、ΔＥ３、ΔＲ７１およびΔＳ７２）。
【００２２】
別の特定の実施形態において、ＩＧＦ−１前駆体タンパク質の３７位におけるアルギニンをアラニン（Ｒ３７Ａ）に突然変異させる。
【００２３】
特定の好ましい実施形態において、ＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質は、以下の突然変異を含む：アミノ酸残基Ｅ３、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、３７位におけるアミノ酸Ｒがアラニンに突然変異しており、したがって、以下の修飾：ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１、ΔＳ７２を含み、アミノ酸の番号付けは、配列番号５に対応する。
【００２４】
本発明の特定の実施形態において、前述の実施形態のいずれか１つによる使用のための、とりわけ球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための、それ自体または医薬組成物の一部としてのＩＧＦ−１模倣物は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むまたはからなる。
【００２５】
特定の他の実施形態において、前述の実施形態のいずれか１つによる使用のための本明細書で述べる、それ自体または医薬組成物の一部としてのＩＧＦ−１模倣物は、ペグ化されている。特に、ＩＧＦ−１模倣物は、前駆体タンパク質の側鎖、とりわけＮ末端に共有結合した、ポリ（エチレングリコール）部分を含み、とりわけ直鎖状ポリ（エチレングリコール）鎖からなる。
【００２６】
特定の実施形態において、本発明は、前述の実施形態のいずれか１つによる使用のための、とりわけ球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための、ペグ化ＩＧＦ−１模倣物に、またはペグ化ＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物であって、前記ペグ化ＩＧＦ−１模倣物は、アミノ酸残基Ｅ３、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、３７位におけるアミノ酸ＲがＡに突然変異しており、したがって、以下の修飾：ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１、ΔＳ７２を含む、Ｅａペプチドを含む、医薬組成物に関する。
【００２７】
別の特定の実施形態において、本発明は、前述の実施形態のいずれか１つによる使用のための、とりわけ球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための、ペグ化ＩＧＦ−１模倣物に、またはペグ化ＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物であって、前記ペグ化ＩＧＦ−１模倣物は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むまたはからなる、医薬組成物に関する。
【００２８】
本発明はまた、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための本明細書で述べる本発明のＩＧＦ−１模倣物をコードする核酸分子を提供する。
【００２９】
特に、本発明は、前述の実施形態のいずれか１つによる使用のための、とりわけ球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の治療に使用する、配列番号６に示すアミノ酸配列をコードする核酸分子を提供する。特定の実施形態において、この核酸分子は、配列番号７に示すヌクレオチド配列を示す。
【００３０】
特定の別の実施形態において、本明細書で述べる医薬組成物は、予防または治療有効量のＩＧＦ−１模倣物およびさらなる薬学的に許容される担体を含む。
【００３１】
特に、治療における上述の使用のいずれかによる使用のための、本明細書で述べるＩＧＦ−１模倣物は、とりわけ単回静脈内注入の形で、０．１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、とりわけ約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【００３２】
本発明の別の態様は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患を治療する方法であって、本明細書で述べる、治療有効量のＩＧＦ−１模倣物またはＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法に関する。
【００３３】
特に、本発明は、ＳＢＭＡに罹患している患者におけるＳＢＭＡに関連する症状を防止する、改善するまたは反転させる方法であって、本明細書で述べる、治療有効量のＩＧＦ−１模倣物または治療有効量のＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法に関する。１つの実施形態において、前記ＩＧＦ−１模倣物は、ＩＧＦ−１前駆体タンパク質、とりわけヒトＩＧＦ−１前駆体タンパク質である。特に、本発明による方法は、プロテアーゼによるＩＧＦ−１からのＥペプチドの切断が低減するように修飾されているＩＧＦ−１前駆体タンパク質の投与を含む。本発明の特定の実施形態において、治療有効量で前記患者に投与されるＩＧＦ−１前駆体タンパク質は、Ｅａ、ＥｂまたはＥｃペプチド、とりわけＥａペプチドを含む。開示した方法の特定の他の実施形態において、治療有効量で前記患者に投与されるＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質の修飾は、アミノ酸残基Ｅ３、Ｒ７１、Ｓ７２の欠失および３７位におけるアルギニンの突然変異または欠失、とりわけ突然変異Ｒ３７Ａを含む。
【００３４】
特定の実施形態において、本発明は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患を治療する、またはＳＢＭＡに関連する症状を防止する、改善するもしくは反転させる方法であって、治療有効量のＩＧＦ−１前駆体タンパク質または治療有効量のＩＧＦ−１前駆体タンパク質を含む医薬組成物を前記患者に投与することを含み、前記ＩＧＦ−１前駆体タンパク質は、Ｅａペプチドおよび以下の修飾：ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１；ΔＳ７２を含むが、とりわけ前駆体タンパク質は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含む、方法に関する。
【００３５】
特に、上述の方法に用いるＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質は、ペグ化されており、ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１；ΔＳ７２修飾を含む。とりわけ前記ペグ化ＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含む。
【００３６】
特に、上述の方法に用いるＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質は、ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１；ΔＳ７２修飾（例えば、配列番号６に示すアミノ酸配列を含む前駆体タンパク質）および前駆体タンパク質のアミノ酸側鎖に共有結合した、ポリ（エチレングリコール）部分、とりわけ直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分を含む。
【００３７】
本開示の特定の実施形態において、上述のＩＧＦ−１模倣物に結合したポリ（エチレングリコール）部分は、２０〜１００ｋＤａ（キロダルトン）の全分子量を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分である。したがって、本開示の１つの実施形態において、上述のＩＧＦ−１模倣物に結合した直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分は、約３０ｋＤａの全分子量を有する。
【００３８】
別の態様において、本発明による、本明細書で述べる方法は、ＳＢＭＡに罹患している患者の脳幹および脊髄における運動ニューロンの変性を低減することまたは防止することをさらに含む。
【００３９】
さらに別の態様において、本発明による、本明細書で述べる方法は、ＳＢＭＡに罹患している患者における筋力低下および／または筋萎縮を防止することまたは反転させることならびに／あるいは骨格筋における突然変異アンドロゲン受容体（ＡＲ）凝集を低減させて、突然変異ＡＲ毒性を低減することをさらに含む。
【００４０】
本発明はまた、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における、ＳＢＭＡの治療に使用する、またはＳＢＭＡに関連する症状を防止する、改善するもしくは反転させるための医薬の製造のための本明細書で述べるＩＧＦ−１模倣物の使用に関する。
【００４１】
本開示の実施形態を以下の態様として述べる。
１．  球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のためのＩＧＦ−１模倣物であって、Ｅペプチドを含むＩＧＦ−１前駆体タンパク質を含むポリペプチドである、ＩＧＦ−１模倣物。
２．  ＳＢＭＡに罹患している患者におけるＳＢＭＡに関連する症状を防止する、改善するもしくは反転させるための、態様１に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
３．  ＳＢＭＡに罹患している患者の脳幹および脊髄における運動ニューロンの変性を低減または防止するための、態様１または態様２に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
４．  ＳＢＭＡに罹患している患者における骨格筋の筋力低下および／または萎縮を防止するもしくは反転させるための、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
５．  骨格筋における突然変異アンドロゲン受容体（ＡＲ）凝集を低減させて、突然変異ＡＲ毒性を低減するための、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
６．  前記前駆体タンパク質がヒトＩＧＦ−１前駆体タンパク質である、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
７．  プロテアーゼによるＩＧＦ−１からのＥペプチドの切断が低減するように前駆体タンパク質が修飾されている、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
８．  前駆体タンパク質がＥａ、ＥｂまたはＥｃペプチドを含む、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
９．  前駆体タンパク質がＥａペプチドを含む、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
１０．  前駆体タンパク質のアミノ酸残基Ｅ３、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体模倣物。
１１．  前駆体タンパク質の３７位におけるアルギニンがアラニンに突然変異している（Ｒ３７Ａ）、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
１２．  前駆体タンパク質が以下の修飾：ΔＥ３；Ｒ３７Ａ；ΔＲ７１、ΔＳ７２を含む、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体模倣物。
１３．  前駆体タンパク質が配列番号６に示すアミノ酸配列を含む、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
１４．  前駆体タンパク質の側鎖に共有結合したポリ（エチレングリコール）部分をさらに含む、上記の態様のいずれか１つに記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
１５．  ペグ化前駆体タンパク質が配列番号６に示すアミノ酸配列を含む、態様１４に記載の使用のためのＩＧＦ−１模倣物。
１６．  球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための、態様６から１５までのいずれか１つに示すＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物。
１７．  態様１から５までのいずれか１つに示す使用のための、態様１６の組成物。
１８．  薬学的に許容される担体をさらに含む、態様１６または態様１７に記載の使用のための組成物。
１９．  予防または治療有効量の態様６から１５までのいずれか１つに示すＩＧＦ−１模倣物を含む、態様１６から１８までのいずれか１つに記載の使用のための組成物。
２０．  ＩＧＦ−１模倣物が０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、態様１６から１９までのいずれか１つに記載の使用のための組成物。
２１．  ＩＧＦ−１模倣物が約０．０１、約０．０３、約０．１、約０．３、約０．５、約１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、態様２０に記載の使用のための組成物。
２２．  ＩＧＦ−１模倣物が単回静脈内注入として投与される、態様１６から２１までのいずれか１つに記載の使用のための組成物。
２３．  態様１から５までのいずれか１つに示す球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患を治療する方法であって、治療有効量の態様６から１５までのいずれか１つに示すＩＧＦ−１模倣物を前記患者に投与することを含む、方法。
２４．  態様１から５までのいずれか１つに示す球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患の治療に使用する医薬の製造のための、態様６から１５までのいずれか１つに示すＩＧＦ−１模倣物の使用。
【００４２】
定義
本開示がより容易に理解され得るために、特定の用語を最初に定義する。本出願の範囲内で用いる技術用語および表現は、本明細書で特に示さない限り、一般的に当該技術分野でそれらに一般的に適用される意味が付与されるものとする。さらなる定義は、詳細な説明を通して示す。
【００４３】
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明白に他の状態を規定すると判断されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」への言及は、１つまたは複数の化合物を含む。
【００４４】
「を包含する（comprising）」という用語は、「を含む（including）」を意味し、例えば、Ｘ「を包含する」組成物は、もっぱらＸからなっていることがあり得るか、または追加のもの、例えば、Ｘ＋Ｙを含むことがあり得る。
【００４５】
数値ｘに関する「約」という用語は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【００４６】
「前駆体」という用語は、本発明の状況において用いる場合、シグナルペプチドを含まないが、それぞれＥａ、ＥｂまたはＥｃペプチドを含む成熟ヒトＩＧＦ−１タンパク質の前駆体を意味するものとする。「前駆体」という用語はまた、成熟７０アミノ酸タンパク質を含むヒトＩＧＦ−１前駆体タンパク質、またはＩＧＦ１受容体および成熟領域からしばしば切断されるが、必ずしも切断されるとは限らないＣＯＯＨ末端Ｅペプチドに結合するのに十分である、同じもしくは同様のサイズのＩＧＦ−１模倣物を意味する。
【００４７】
本発明の目的のための「患者」または「対象」は、互換的に用いられ、ヒトを指すものとする。したがって、方法は、ヒトにおける療法に適用できる。
【００４８】
タンパク質を記述するという状況における記号「Δ」または文字「ｄ」もしくは「Ｄ」（例えば、「ｈＩＧＦ−１−Ｅａ−Δ１〜３、Ｒ３７Ａ、Δ７１〜７２」）は、アミノ酸の欠失を意味する。特に断らない限り、特定のアミノ酸位置の番号付けは、配列番号５に対応する。一文字アミノ酸コードは、以下の一般的に用いられる一文字コードを意味する。
一文字アミノ酸コード
Ｇ−グリシン（Ｇｌｙ）；Ｐ−プロリン（Ｐｒｏ）；Ａ−アラニン（Ａｌａ）；Ｖバリン（Ｖａｌ）；Ｌ−ロイシン（Ｌｅｕ）；Ｉ−イソロイシン（Ｉｌｅ）；Ｍ−メチオニン（Ｍｅｔ）；Ｃ−システイン（Ｃｙｓ）；Ｆ−フェニルアラニン（Ｐｈｅ）；Ｙ−チロシン（Ｔｙｒ）；Ｗ−トリプトファン（Ｔｒｐ）；Ｈ−ヒスチジン（Ｈｉｓ）；Ｋ−リシン（Ｌｙｓ）；Ｒ−アルギニン（Ａｒｇ）；Ｑ−グルタミン（Ｇｌｎ）；Ｎ−アスパラギン（Ａｓｎ）；Ｅ−グルタミン酸（Ｇｌｕ）；Ｄ−アスパラギン酸（Ａｓｐ）；Ｓ−セリン（Ｓｅｒ）；Ｔ−トレオニン（Ｔｈｒ）
【００４９】
「治療」、「治療する」などの用語は、一般的に所望の薬理および／または生理的効果を得ることを意味するように本明細書で用いる。効果は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に防止するという点で予防的であり得、ならびに／または疾患および／もしくは疾患に起因する有害影響を部分的もしくは完全に癒すという点で治療的であり得る。「治療」という用語は、本明細書で用いられる場合対象におけるあらゆる治療をカバーし、（ａ）疾患の素因があり得る対象において疾患が起こることを防止すること、（ｂ）疾患を抑制すること、すなわち、その発症を止めること、または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患の退行をもたらすことを含む。「防止する」、「改善する」または「を反転させる」という用語は、本発明の状況（治療）において用いられる場合ＳＢＭＡ患者に認められる病状および／または病因の防止、改善もしくは反転を意味する（例えば、Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012) Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56参照）。したがって、「防止する」、「改善する」または「反転させる」は、とりわけ対象における病徴の低減、すなわち、筋肉量および筋力の増加を意味する。そのような増加の個別の程度またはレベルは、少なくとも１５％、２５％、３５％、５０％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上の範囲にあり得る。防止、改善または反転の程度は、患者における病状および／または病因の異常な点が本発明の組成物の投与を受けなかった患者ほど統計的に有意に顕著でないというように部分的でもあり得る。部分的な治療結果は、病徴の重症度の低下、無病徴期間の頻度および持続期間の増加、または疾患の苦しみによる障害もしくは機能障害の防止であり得る。
【００５０】
「治療有効量」は、所定の条件および投与計画において治療効果をもたらすその量を意味する。特に、「治療有効量」は、疾患の症状を防止、軽減もしくは改善するのに、または治療を受けている患者の生存期間を延長させるのに有効な量を意味する。治療有効量の決定は、当業者の技術の範囲内にある。本発明による化合物の治療有効量または用量は、広い限度内で変化し得るものであり、従来技術で公知の方法で決定することができる。用量は、広い限度内で変化し得るものであり、もちろん、それぞれの個別の場合における個々の要求に沿うように調節しなければならない。
【００５１】
「インスリン様成長因子１タンパク質」という語句は、インスリン様成長因子１遺伝子によりコードされるタンパク質を意味し、とりわけ好ましいものは、ヒトインスリン様成長因子１（ｈＩＧＦ−１）タンパク質およびその変異体である。ＩＧＦ−１タンパク質変異体またはＩＧＦ−１模倣物は、ＩＧＦ−１野性型配列と少なくとも１つのアミノ酸が異なるタンパク質であり、「野性型配列」という用語は、少なくとも１つの天然に存在する生物体において利用可能なポリペプチドもしくは遺伝子配列または人により変化、突然変異もしくは別の方法で操作されていないポリペプチドもしくは遺伝子配列を意味する。ＩＧＦ−１変異体およびＩＧＦ−１模倣物という用語は、本文書を通して互換的に用いられる。ＩＧＦ−１変異体は、ＩＧＦ−１前駆体タンパク質またはペプチドリーダー配列を含むプロＩＧＦ−１タンパク質でもある。ＩＧＦ−１変異体は、ＩＧＦ−１タンパク質を含む融合タンパク質、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分またはヒトＩｇＧ  ｆｃドメインと融合したＩＧＦ−１タンパク質を含むタンパク質でもあり得る。ＩＧＦ−１変異体の例は、とりわけ特許出願ＷＯ２００７１４６６８９に開示されている（安定化ＩＧＦ−１前駆体タンパク質）。上述のＩＧＦ−１変異体は、タンパク質が野性型ＩＧＦ−１の機能的等価体と考えることができるという意味でその生物学的活性を保持している。
【００５２】
ＩＧＦ−１タンパク質に関する機能的等価体は、自然または人工的突然変異を含むＩＧＦ−１タンパク質と理解しなければならない。突然変異は、ＩＧＦ−１タンパク質の生物学的活性を低下させない１つまたは複数の核酸の挿入、欠失または置換であり得る。機能的等価体は、ＩＧＦ−１野性型タンパク質、例えば、ヒトＩＧＦ−１タンパク質配列番号１との少なくとも８０％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％以上の同一性、非常に特に好ましくは少なくとも９８％の同一性、ただし１００％未満の同一性を有する。融合タンパク質の場合、同一性％は、そのような融合タンパク質のＩＧＦ−１部分のみに基づいて定義するものとする。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本開示の様々な態様を以下のサブセクションでさらに詳細に述べる。現在、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）の有効な治療法は存在しない。アンドロゲン低下剤は、臨床的に意味のある利益をもたらさなかった（Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7.、Katsuno M, Tanaka F, Adachi H, et al (2012). Pathogenesis and therapy of spinal and bulbar muscular atrophy (SBMA). Prog Neurobiol; 99:246-56）。
【００５４】
本発明の範囲内で、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患を効果的に治療する手段および方法を提供する。
【００５５】
本発明は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の療法における使用のための、ＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドのＥペプチドから活性ＩＧＦ−１を遊離させる原因となる典型的なプロテアーゼ切断を防止、低減または回避するために修飾したＥペプチドを実質的に含むＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドに関する。
【００５６】
いかなる特定の仮説にも拘束されるものではないが、突然変異ＡＲの毒性のＩＧＦ−１／Ａｋｔ媒介性抑制は、ＳＢＭＡをｉｎ  ｖｉｖｏで治療する効果的な戦略であると考えられる。本発明によるＩＧＦ−１前駆体ポリペプチド模倣物は、骨格筋、末梢神経または他の関連細胞における突然変異ＡＲの毒性を特異的に減少させ、ひいては、筋変性を直接的に減少させ、ＳＢＭＡを有する患者における機能を改善する可能性を有する。
【００５７】
ＩＧＦ−１治療法は、１）ＩＧＦ−１欠乏の治療について、または２）糖尿病におけるインスリン療法に取って代わるようにそのインスリン様特性を活用すること、または３）成長ホルモンの第二メッセンジャーとしてのその役割のため一般的アナボリックとして、試みられたにすぎなかった。従来技術において記載された前臨床／臨床研究で、主として筋肉組織におけるＩＧＦ−１治療法による有益な変化が示され、これは、筋肉機能の改善に関連していた。ＳＢＭＡの病変は、主として延髄および脊髄運動ニューロンに及ぶ。従来技術において（ｉ）ＩＧＦ−１模倣物による治療が脊髄運動ニューロンに影響を及ぼす疾患に対する効果を有し得ることもなく、（ｉｉ）突然変異ＡＲ毒性のＡｋｔ媒介性抑制を推進するためにＩＧＦ−１模倣物を用いることができないことも示された。
【００５８】
天然ＩＧＦ−１は、優れた薬物様特性を有さない。天然ＩＧＦ−１は、非常に速やかに除去され、また阻害性ＩＧＦ１結合タンパク質により結合され、その有効性が妨げられる。その結果として、天然ＩＧＦ−１は、低血糖をもたらす、インスリン受容体の交差刺激のおそれのある、高いＣｍａｘをもたらす用量で投与する必要がある。驚くべきことに、開示したＩＧＦ−１模倣物、とりわけ、１つまたは複数のアミノ酸残基Ｅ３、Ｒ７１またはＳ７２が欠失し、前駆体タンパク質の３７位におけるアルギニンがアラニンに突然変異した（Ｒ３７Ａ）、ＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質は、上述の問題を引き起こすことなく、骨格筋、末梢神経または他の関連細胞における突然変異ＡＲの毒性を特異的に減少させ、ひいては、筋変性を直接的に減少させ、ＳＢＭＡを有する患者における機能を改善する可能性を有する。そのような前駆体タンパク質は、配列番号６に示すアミノ酸配列を含む可能性がある。別の特定の実施形態において、上述のＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質は、該前駆体タンパク質の側鎖に共有結合したポリ（エチレングリコール）部分をさらに含む。好ましい実施形態において、ポリ（エチレングリコール）部分は、上述のＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質、例えば、配列番号６に示すアミノ酸を含むタンパク質のＮ末端に共有結合している。
【００５９】
本開示の別の好ましい実施形態において、ＳＢＭＡに罹患している患者の治療用の、ＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質模倣物または前記ＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、配列番号６に示すアミノ酸および前記タンパク質のＮ末端に共有結合した約３０ｋＤａの全分子量を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分を含む。
【００６０】
本開示のさらなる好ましい実施形態において、ＳＢＭＡに罹患している患者の治療用の、ＩＧＦ−１  Ｅａ前駆体タンパク質模倣物または前記ＩＧＦ−１模倣物を含む医薬組成物は、配列番号６に示すアミノ酸からなり、前記タンパク質のＮ末端に共有結合した約３０ｋＤａの全分子量を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分を含む。
【００６１】
本開示の別の好ましい実施形態は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患を治療する方法であって、治療有効量のＩＧＦ−１前駆体タンパク質模倣物または治療有効量の前記ＩＧＦ−１前駆体タンパク質模倣物を含む組成物を前記患者に投与することを含み、前記ＩＧＦ−１前駆体タンパク質は、配列番号６に示すアミノ酸および前記タンパク質のＮ末端に共有結合した約３０ｋＤａの全分子量を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分を含む、方法に関する。
【００６２】
本開示の別の好ましい実施形態は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡまたはケネディ病）に罹患している患者における前記疾患を治療する方法であって、治療有効量のＩＧＦ−１前駆体タンパク質模倣物または治療有効量の前記ＩＧＦ−１前駆体タンパク質模倣物を含む組成物を前記患者に投与することを含み、前記ＩＧＦ−１前駆体タンパク質は、配列番号６に示すアミノ酸からなり、前記タンパク質のＮ末端に共有結合した約３０ｋＤａの全分子量を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分を含む、方法に関する。
【００６３】
活性ＩＧＦ前駆体ポリペプチドのスクリーニング
本発明のポリペプチドのいずれかの有用性は、内容が参照により本明細書に組み込まれる、安定性試験、ＡＫＴリン酸化アッセイ、ＩＧＦ−１受容体の特異性の測定、肥大のマウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験、筋萎縮モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験を含むＷＯ２００７／１４６６８９（例えば、８〜１４頁参照）に開示されているアッセイを用いることにより評価することができる。
【００６４】
臨界突然変異：そのＥペプチドを実質的に含むＩＧＦ前駆体ポリペプチドが血清の存在下で依然として生物活性を有し、安定であることがＷＯ２００７／１４６６８９において示された。Ｅペプチドが二塩基性プロテアーゼ部位を標的とする内因性プロテアーゼによって切断されることを保証するために、一般的に前駆体におけるＥペプチドの２つのＮ末端二塩基性アミノ酸のどちらも欠失させ、突然変異させ、または他の方法でマスクする。ｈＩＧＦ−１の場合、これらの２つのアミノ酸は、Ｒ７１およびＳ７２である。
【００６５】
成熟ＩＧＦのＮ末端における突然変異：本発明の特定の実施形態において、ＩＧＦ前駆体ポリペプチドは、最初の少数のＮ末端アミノ酸の欠失または突然変異を有する。ＩＧＦ−１の場合、最初の３つのＮ末端アミノ酸を、単独でまたは一緒に欠失または突然変異させることができる。
【００６６】
代替突然変異部位および内因性プロテアーゼによるＥペプチドの切断の防止を可能にする修飾に関するさらなる詳細は、内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００７／１４６６８９（例えば、１４および１５頁参照）に記載されている。
【００６７】
ＩＧＦ−１の半減期を延長させるための戦略が従来技術において記載された。企図された戦略は、以下の通りである。
（ｉ）セリンプロテアーゼによるヒト血清中のＩＧＦ−１の切断を防止すること、またはＩＧＦ−１の可用性もしくは血清半減期に対するＩＧＦ−１結合タンパク質の負の影響を軽減することを目的とする特定の突然変異を含むＩＧＦ−１変異体の生成（ＷＯ２０００４０６１３、ＷＯ０５０３３１３４、ＷＯ２００６０７４３９０、ＷＯ２００７／１４６６８９）、
（ｉｉ）成熟ＩＧＦ−１タンパク質がヒト免疫グロブリンＦｃ領域に融合している、ＩＧＦ−１融合タンパク質の生成（ＷＯ２００５０３３１３４、ＷＯ２０００４０６１３）、
（ｉｉｉ）プロテアーゼによるＩＧＦ−１からのＥペプチドの切断が前駆体タンパク質の修飾により低減しているＩＧＦ−１前駆体タンパク質の使用（ＷＯ２００７１４６６８９）、
（ｉｖ）上述の戦略の組合せ（（ｉ）／（ｉｉ）ＷＯ０５０３３１３４、（ｉ）／（ｉｉ）ＷＯ２０００４０６１３、（ｉ）／（ｉｉｉ）ＷＯ２００７１４６６８９）。
【００６８】
したがって、本明細書で述べたｈＩＧＦ−１−Ｅａ前駆体ポリペプチド変異体に加えて、以下のさらなるタンパク質変異体を生成し、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の治療に本発明に従って使用することができる。
ａ）野性型ＩＧＦ−１アミノ酸配列の２７、３７、６５、６８位における最大３アミノ酸において突然変異したことを特徴とする、ＷＯ２００６０６６８９１に記載されているＩＧＦ−１変異体。
ｂ）前記融合タンパク質がリシン位置２７、６５および／または６８におけるアミノ酸置換を含む、ＷＯ２００８０２５５２８に記載されているＩＧＦ−１変異体。
ｃ）ＷＯ２０００４０６１３に記載されているＩＧＦ−１変異体、特に、（ａ）アミノ酸残基１〜３、３７および６５〜７０の欠失を有する配列番号１のヒトＩＧＦ１変異体ポリペプチドならびに（ｂ）ヒトＩｇＧ  ｆｃドメインを含む融合ポリペプチド。
【００６９】
上述のｈＩＧＦ−１−Ｅａ前駆体ポリペプチド変異体に加えて、以下のさらなるタンパク質変異体を生成し、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の治療に本発明により使用することができる。
（１）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号８）。
（２）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号９）。
（３）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１０）。
（４）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１１）。
（５）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１２）。
（６）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１３）。
（７）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１４）。
（８）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１５）。
（９）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号１６）。
（１０）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｒａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１７）。
（１１）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号１８）。
（１２）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号１９）。
（１３）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２０）。
（１４）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２１）。
（１５）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号２２）。
（１６）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２３）。
（１７）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２４）。
（１８）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号２５）。
（１９）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２６）。
（２０）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２７）。
（２１）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号２８）。
（２２）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号２９）。
（２３）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｋｓａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号３０）。
（２４）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３１）。
（２５）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３２）。
（２６）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３３）。
（２７）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３４）。
（２８）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｑｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３５）。
（２９）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｒａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３６）。
（３０）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３７）。
（３１）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号３８）。
（３２）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｒａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号３９）。
（３３）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４０）。
（３４）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４１）。
（３５）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸（Ｅ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｅａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号４２）。
（３６）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４３）。
（３７）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４４）。
（３８）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号４５）。
（３９）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４６）。
（４０）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４７）。
（４１）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３７がプロリン（Ｐ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｒｐａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号４８）。
（４２）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｒｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号４９）。
（４３）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号５０）。
（４４）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４およびＲ７７がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｒｍ（配列番号５１）。
（４５）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６およびＲ３７の両方がグルタミン（Ｑ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑｑａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号５２）。
（４６）Ｅ３が欠失し、アミノ酸Ｒ３６がグルタミン（Ｑ）により置換され、Ｒ３７がアラニン（Ａ）により置換され、アミノ酸Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１およびＳ７２が欠失し、アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７およびＲ１０４がグルタミン（Ｑ）に突然変異している。
ｇｐｔｌｃｇａｅｌｖｄａｌｑｆｖｃｇｄｒｇｆｙｆｎｋｐｔｇｙｇｓｓｓｑａａｐｑｔｇｉｖｄｅｃｃｆｒｓｃｄｌｒｒｌｅｍｙｃａｐｌｋｐａｖｑａｑｑｈｔｄｍｐｋｔｑｋｅｖｈｌｋｎａｓｒｇｓａｇｎｋｎｙｑｍ（配列番号５３）。
【００７０】
別の実施形態において、本開示は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の治療における、上述のタンパク質（例えば、配列番号６および８〜５３に示す）の使用であって、前記分子は、３位において突然変異させる代わりにアミノ酸１〜３の欠失を含む、使用に関する。
【００７１】
さらに、別の実施形態において、本開示は、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）に罹患している患者における前記疾患の治療における、上述のタンパク質（例えば、配列番号６および８〜５３に示す）の使用であって、アミノ酸Ｇ４２は、欠失しているか、またはアミノ酸セリンにより置換されている、使用に関する。
【００７２】
グリコシル化の使用：本発明のポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期は、Ｎ−結合グリコシル化が可能な哺乳類または他の真核細胞において発現させる場合には前駆体のＩＧＦまたはＥペプチド部分内へのＮ−結合グリコシル化部位の付加によって改善することができる。Ｅａのこれらの部分がＮ−Ｘ−Ｓ／ＴのコンセンサスＮ−結合グリコシル化配列に適合するので、ヒトＩＧＦ−１  Ｅａは、Ｎ９２およびＮ１００においてグリコシル化されることがｉｎ  ｖｉｔｒｏで示された。ここで、Ｘは、任意のアミノ酸であってよく、トリプレットの第３のアミノ酸は、ＳまたはＴのいずれかである。コンセンサスの隣接アミノ酸の状況がアスパラギンがどの程度強くグリコシル化されるかに影響を及ぼすことも公知である。したがって、グリコシル化部位をＥｂまたはＥｃに導入するための１つの戦略は、コンセンサス配列の周囲のＥａアミノ酸をＥｂまたはＥｃの大体同じ部分に挿入することである。この戦略の個別の実施は、ＷＯ２００７／１４６６８９に開示されている実施例に例示されている。いずれにしても、当業者に公知の、周囲のアミノ酸の状況を含む、他のコンセンサスＮ−結合グリコシル化部位は、本発明の前駆体ポリペプチドに挿入することができる。さらに、本発明のポリペプチドのＯ−結合グリコシル化は、ポリペプチドの産生に用いる特定の宿主を選択することによって実施することができる。例えば、ＩＧＦ−１の発現のための特定の酵母株を用いることにより、セリンまたはトレオニンへのオリゴ糖の付加がもたらされる。例えば、米国特許第５，２７３，９６６号を参照のこと。
【００７３】
ポリ（エチレングリコール）の付加：
ＩＧＦ−１に関連する薬物動態学的および薬力学的問題に対処するために、修飾型の天然タンパク質が開発された。タンパク質分解を減少させ、阻害性ＩＧＦＢＰ５への結合を減少させ、直鎖状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖をＮ末端に付加することによって、その有効性を増大させるために、このヒトＩＧＦ−１（ｈＩＧＦ−１）模倣物の配列の修飾が行われた（ＷＯ２００７／１４６６８９）。
【００７４】
神経筋障害の治療用のＰＥＧ化型のＩＧＦ−１変異体の調製は、ＷＯ２００８０２５５２８、ＷＯ２００９１２１７５９Ａ２およびＷＯ２００６０６６８９１にも記載されている。通常ＰＥＧは、タンパク質のアミノ基に結合させる。しかし、このアミノペグ化アプローチの重大な制約は、タンパク質が典型的にかなりの量のリシン残基を含み、したがって、ポリ（エチレングリコール）基がタンパク質に非特異的に結合することである。生物活性のために要求されるアミノ残基（例えば、タンパク質の活性部位の近くまたは活性部位の残基）のペグ化は、タンパク質の低い特異活性または不活性化をもたらし得る。上述の欠点のいくつかを避けるためにＷＯ２００６０６６８９１は、ＩＧＦ−１変異体を野性型ＩＧＦ−１アミノ酸配列の２７、３７、６５および／または６８位において突然させたことを特徴とする、ＩＧＦ−１変異体および１つまたは２つのポリ（エチレングリコール）基からなるコンジュゲートの使用を記載している。しかし、ランダムなペグ化を最小限にするためにタンパク質に導入された各突然変異は、同時に免疫原性のリスクを増大させる。ＷＯ２００８０２５５２８は、組換えヒトＩＧＦ−１融合タンパク質の調製を開示しており、前記融合タンパク質は、リシン位置２７、６５および／または６８におけるアミノ酸置換を含む。ＷＯ２００８０２５５２８に記載されている方法は、Ｎ末端ＰＥＧ化を有さない組換えヒトＩＧＦ−１突然変異タンパク質の調製を可能にするものである。ＷＯ２００６０６６８９１およびＷＯ２００８０２５５２８で使用されたＰＥＧ化試薬は、ランダムにペグ化されたタンパク質をもたらす、メトキシポリエチレングリコールのＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＰＥＧ−ＮＨＳ）であった。Ｎ末端ＰＥＧ化および位置異性体の創製を避けるために、１つを除くすべてのリシンを極性アミノ酸により置換し、プロペプチドをＮ末端に結合させた。最初のステップにおいてＩＧＦ−１突然変異タンパク質をＰＥＧ化し、その後、プロペプチドをＩｇＡプロテアーゼによりＩＧＦ−１から切断し、１つのリシン残基のみにおいてＰＥＧ化されたＩＧＦ−１突然変異タンパク質を残した。メトキシポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド（ＰＥＧ−ＣＨＯ）試薬を用いた還元的アルキル化は、部位特異的ＰＥＧ化法として一般的に認識されている（Roberts et al, Chemistry for peptide and protein PEGylation. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476）。Ｎ末端ＰＥＧ化は、Ａｍｇｅｎｅ関連特許ファミリー（ＵＳ７０９０８３５Ｂ２、ＵＳ６９５６０２７Ｂ２、ＥＰ０８２２１９９Ｂ１）に記載された。還元的アルキル化の反応は、５．０のｐＨの酸性条件下で行われた（ＥＰ０８２２１９９Ｂ１）。
【００７５】
Ｅペプチドの多量体：特定の薬理学的状況において、血液脳関門の一側または他側に留まることを保証するためにペプチドまたはタンパク質薬のサイズを増加させることは、有益である。成熟ＩＧＦ分子が比較的短いペプチドであるので、Ｅペプチドが結合したままであるとしても、本発明のポリペプチドのサイズを増大させることは、有益であり得る。これを行う１つの手段は、ＷＯ２００７／１４６６８９に記載されている特定の実施例で例示されているように、ＩＧＦ前駆体ポリペプチドのＣ末端におけるＥペプチドの多量体を提供することである。
【００７６】
医薬組成物
１つの態様において、本発明は、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された、上述のＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドの１つまたは組合せを含む、組成物、例えば、医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、併用療法で、すなわち、他の薬物と併用して投与することもできる。併用療法で用いることができる治療薬の例は、以下でより詳細に述べる。
【００７７】
「薬学的に許容される」という用語は、連邦もしくは州政府の規制当局により承認されている状態、または動物、さらにとりわけヒトにおける使用のために米国薬局方もしくは他の一般的に認められている薬局方に列挙されている状態を意味する。「担体」という用語は、治療薬がともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤または媒体を意味する。そのような医薬担体は、水および落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物もしくは合成起源のものを含む油などの滅菌液体であり得る。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどがある。組成物は、所望の場合、少量の湿潤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含んでいてもよい。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などの形態をとり得る。組成物は、伝統的な結合剤およびトリグリセリドなどの担体を用いて坐剤として製剤化することができる。経口製剤は、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等などの標準的担体を含み得る。適切な医薬担体の例は、”Remington's Pharmaceutical Sciences” by E. W. Martinに記載されている。
【００７８】
好ましい実施形態において、組成物は、常用の手順に従ってヒトへの静脈内投与に適応される医薬組成物として製剤化される。必要な場合、組成物は、可溶化剤および注射部位の痛みを軽減するためのリドカインなどの局所麻酔薬も含み得る。組成物を注入により投与すべき場合、組成物は、滅菌医薬品等級の水および生理食塩水を含む注入ビンを用いて投薬することができる。組成物を注射により投与する場合、投与前に成分を混合することができるように、滅菌注射用水または生理食塩水のアンプルを備えることができる。
【００７９】
薬学的に許容される担体は、生理的に適合性のある、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適するものであるべきである。投与経路によって、活性化合物、すなわち、抗体、免疫複合体または二重特異性分子は、不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護するための材料で被覆することができる。
【００８０】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される抗酸化剤も含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどのような水溶性抗酸化剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなどのような油溶性抗酸化剤；クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などのような金属キレート化剤などがある。
【００８１】
本発明の医薬組成物に用いることができる適切な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、オリーブ油のような植物油ならびにオレイン酸エチルのような注射用有機エステルなどがある。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング材料を用いることによって、分散体の場合には必要とする粒径を維持することによって、また界面活性剤を用いることによって、維持することができる。
【００８２】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤のようなアジュバントも含み得る。微生物の存在の防止は、上記の滅菌処置によるのと、種々の抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによるのと両方によって保証することができる。糖、塩化ナトリウムなどのような等張剤を組成物に含めることも望ましいことがあり得る。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンのような吸収を遅延させる薬剤を含めることによって注射製剤の持続的吸収をもたらすことができる。
【００８３】
薬学的に許容される担体は、滅菌注射液または分散体の即時調製用の滅菌水性溶液または分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質用のそのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で公知である。通常の媒体および薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、本発明の医薬組成物にそれらを使用することが考えられる。補助活性化合物も組成物に入れることができる。
【００８４】
治療用組成物は、製造および保存条件下で典型的に無菌で、安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソームまたは高薬物濃度に適する他の秩序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングを用いることによって、分散体の場合には必要とする粒径を維持することによって、また界面活性剤を用いることによって、維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物に含めることができる。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含めることによって注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。
【００８５】
滅菌注射液は、必要量の活性化合物を必要に応じて上で列挙した薬剤の１つまたは組合せとともに適切な溶媒に入れた後、精密ろ過することによって調製することができる。一般的に、分散体は、活性化合物を、基礎分散媒および上で列挙したもののうちの必要な他の薬剤を含む滅菌媒体に入れることによって調製することができる。滅菌注射液の調製用の滅菌粉末の場合、調製の方法は、その事前に無菌化ろ過した溶液から活性剤とさらなる所望の薬剤の粉末を生じる真空乾燥および冷凍乾燥（凍結乾燥）である。
【００８６】
担体材料と混ぜ合わせて、単一剤形を生成することができる活性剤の量は、治療を受ける対象および個別の投与法によって異なる。担体材料と混ぜ合わせて、単一剤形を生成することができる活性剤の量は、一般的に治療効果をもたらす組成物のその量である。一般的に、１００％のうち、この量は、約０．０１％〜約９９％の活性剤、約０．１％〜約７０％、または約１％〜約３０％の範囲の薬学的に許容される担体と組み合わせた活性剤である。
【００８７】
投与計画は、最適の所望の反応（例えば、治療反応）をもたらすように調節する。例えば、単回のボーラスを投与することができ、数回の分割量を時間をかけて投与することができ、または緊急の治療状況によって示されたとき、用量を比例的に減少もしくは増加させることができる。投与の容易さおよび用量の均等のために非経口組成物を単位剤形で処方することが特に有利である。単位剤形は、本明細書で用いられる場合治療を受ける対象に対する単位用量として適合する物理的に別個の単位を意味し、各単位は、必要とされる医薬担体と共同して所望の治療効果をもたらすように計算された活性化合物のあらかじめ決定された量を含む。本発明の単位剤形の明細は、活性化合物の固有の特性および達成すべき個別の治療効果、ならびに個人における感受性（sensitivity）の治療のためにそのような活性化合物を調合する技術分野における固有の制限によって決定づけられ、また直接依存する。
【００８８】
本開示のＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドまたは前記ＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドを含む組成物を投与する状況におけるポリペプチドの治療有効量は、約０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜３ｍｇ／ｋｇ、より通常は０．０１〜０．３ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲にある。例えば、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．０３ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．０４ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．０６ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．３ｍｇ／ｋｇ体重であってよく、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重であってよい。当業者は、投与経路（例えば、静脈内または皮下）によって異なる、適切な有効量を特定することを知っている。具体例としての治療計画は、１日１回、週１回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回または月１回の投与を必要とする。そのような投与は、静脈内または皮下に行うことができる。本発明のＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドの投与計画は、静脈内投与による０．０１ｍｇ／ｋｇ体重または０．０２ｍｇ／ｋｇ体重または０．０３ｍｇ／ｋｇ体重または０．０５ｍｇ／ｋｇ体重または０．１ｍｇ／ｋｇ体重または０．３ｍｇ／ｋｇ体重または１ｍｇ／ｋｇ体重を含む。本発明のＩＧＦ−１前駆体ポリペプチドの投与計画は、皮下投与による０．０１ｍｇ／ｋｇ体重または０．０２ｍｇ／ｋｇ体重または０．０３ｍｇ／ｋｇ体重または０．０５ｍｇ／ｋｇ体重または０．１ｍｇ／ｋｇ体重または０．３ｍｇ／ｋｇ体重または１ｍｇ／ｋｇ体重を含む。例えば、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０２ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０３ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０４ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０５ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０６ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、静脈内投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．１ｍｇ／ｋｇである。
【００８９】
本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０２ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０３ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０４ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０５ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．０６ｍｇ／ｋｇである。本開示の別の実施形態において、皮下投与ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量は、０．１ｍｇ／ｋｇである。
【００９０】
あるいは、より低い頻度の投与が要求される場合、組成物は、徐放性製剤であり得る。用量および頻度は、患者における抗体の半減期によって異なる。用量および投与頻度は、治療が予防的であるかまたは治療的であるかによって異なり得る。予防的適用では、比較的に低い用量を比較的に低い頻度での間隔で長期間にわたって投与する。一部の患者は、生涯の残りの期間治療を受け続ける。治療的適用では、疾患の進行が少なくなるかもしくは終了するまで、または患者が疾患の症状の部分的もしくは完全な改善を示すまで、比較的に短い間隔での比較的に高い用量が時として要求される。その後は、予防的計画で患者に投与することができる。
【００９１】
本発明の医薬組成物中の活性剤の実際の用量レベルは、患者に有毒でない、個々の患者、組成物および投与方法に対する所望の治療反応を達成するのに有効である活性剤の量を得るために変化させることができる。選択される用量レベルは、用いられる本発明の個別の組成物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、用いられる個別の化合物の排泄の速度を含む様々な薬物動態因子、治療期間、用いられる個別の組成物と併用される他の薬物、化合物および／または材料、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、状態、一般健康状態および既往歴、ならびに医療技術分野で周知の同様の因子に依存する。
【００９２】
本発明の組成物に含まれるＩＧＦ−１変異体の治療有効量の投与は、病徴の重症度の低下、無病徴期間の頻度および期間の増加、または疾患の苦しみによる障害もしくは作業不能の防止、すなわち、筋肉量および筋力の増大をもたらし得る。
【００９３】
患者は、有効量、すなわち問題の疾患または障害を検出、治療、改善または防止するのに十分な量のポリペプチド有効成分の投与を受ける。治療効果は、身体症状の減少も含み得る。個々の対象に対する治療用タンパク質の最適な有効量および濃度は、患者の年齢、体格、健康状態および／または性別、状態の性質および程度、個別の治療用タンパク質の活性、身体によるそのクリアランスの速度を含む様々な因子に、また治療用タンパク質と組み合わせて施行される可能なさらなる治療法にも依存する。所定の状況で送達される有効量は、常用の実験により決定することができ、臨床医の判断の範囲内にある。投与は、単回投与スケジュールまたは反復投与スケジュールによるものであり得る。
【００９４】
本発明の組成物は、当技術分野で公知の様々な方法の１つまたは複数を用いて１つまたは複数の投与経路により投与することができる。当業者により十分に理解されるように、投与の経路および／または方法は、所望の結果によって異なる。本発明の治療用タンパク質の投与経路は、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または例えば、注射もしくは注入による、他の非経口投与経路を含む。「非経口投与」という語句は、本明細書で用いられる場合、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与方法を意味し、制限なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射ならびに注入を含む。１つの実施形態において、抗体含有組成物を静脈内投与する。別の実施形態において、抗体を皮下投与する。
【００９５】
あるいは、本発明の組成物を構成するＩＧＦ−１変異体は、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下または局所のような非注射経路により投与することができる。
【００９６】
活性化合物は、インプラント、経皮貼付剤およびマイクロカプセル化送達システムを含む、放出制御製剤のように急速な放出から化合物を防護する担体を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。そのような製剤を調製する多くの方法は、特許権が与えられているか、または一般的に当業者に公知である。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。
【００９７】
治療用組成物は、当技術分野で公知の医療用具を用いて投与することができる。例えば、１つの実施形態において、本発明の治療用組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に示されている装置のような、無針皮下注射器を用いて投与することができる。本発明に有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で薬剤を投薬するための埋込み型微量注入ポンプを示している、米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療用装置を示している、米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを示している、米国特許第４，４４７，２３３号；連続薬物送達のための可変流量埋込み型注入装置を示している、米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧性薬物送達システムを示している、米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧性薬物送達システムを示している、米国特許第４，４７５，１９６号などがある。多くの他のそのようなインプラント、送達システムおよびモジュールが当業者に公知であり、ＭｉｃｒｏＣＨＩＰＳＴＭ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）などが挙げられる。
【００９８】
特定の実施形態において、本発明の組成物を構成するヒトＩＧＦ−１変異体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適切な分布を保証するように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。本発明の治療用化合物がＢＢＢを越えることを保証するために（所望の場合）、それらは、例えば、リポソームで製剤化することができる。リポソームを製造する方法については、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号および第５，３９９，３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または臓器中に選択的に輸送され、ひいては標的薬物の送達を促進する１つまたは複数の部分を含む（例えば、V. V. Ranade, 1989 J. Clin Pharmacol. 29:685参照）。具体例としての標的部分は、葉酸またはビオチン（例えば、米国特許第５，４１６，０１６号参照）；マンノシド（Umezawa et al., 1988 Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038）；抗体（P. G. Bloeman et al., 1995 FEBS Lett. 357:140；M. Owais et al., 1995 Antimicrob. Agents Chernother. 39:180）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Briscoe et al., 1995 Am. J. Physiol. 1233:134）；ｐ１２０（Schreier et al., 1994 J. Biol. Chem. 269:9090）を含む。K. Keinanen; M. L. Laukkanen, 1994 FEBSLett. 346:123; J. J. Killion; I. J. Fidler, 1994 Immunomethods 4:273も参照のこと。
【００９９】
様々な送達システムが公知であり、本発明のポリペプチドを投与するために用いることができる。例えば、リポソーム、ミクロ粒子、マイクロカプセルへの封入、タンパク質を発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Wu and Wu, J Biol Chem 262:4429-4432, 1987参照）、レトロウイルス、アデノ関連ウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルス（例えば、アビポックスウイルス、とりわけ鶏痘ウイルス）の一部としての核酸または他のベクターの構築などである。導入の方法は、経腸的または非経口的であってよく、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、肺、鼻腔内、眼内、硬膜外および経口経路を含むが、これらに限定されない。ポリペプチドは、例えば、注入またはボーラス注射により、あらゆる好都合な経路により、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜等）を通しての吸収により投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の医薬組成物を脳室内およびクモ膜下腔内注射を含む適切な経路により中枢神経系に導入することが望ましいことがあり得る。脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバーのようなリザーバーに取り付けた脳室内カテーテルにより容易にすることができる。例えば、吸入器または噴霧器およびエアゾール化剤を用いた製剤を用いることにより、肺投与も用いることができる。
【０１００】
特定の実施形態において、本発明の医薬組成物を治療を必要とする部位に局所的に投与することが望ましいことがあり得る。これは、例えば、また制限なしに、例えば、注射による、カテーテルによる、またはインプラントによる手術中の局所注入、局所適用により実現することができ、インプラントは、シアラスティック膜などの膜、繊維を含む、多孔性、非多孔性もしくはゼラチン状材料、または市販の皮膚代用品である。
【０１０１】
別の実施形態において、活性剤は、小胞、特にリポソームで送達することができる（Langer, Science 249:1527-1533, 1990参照）。さらに別の実施形態において、活性剤は、制御放出システムで送達することができる。１つの実施形態において、ポンプを用いることができる。別の実施形態において、ポリマー材料を用いることができる（Howard et al., J Neurosurg 71:105, 1989参照）。本発明の活性剤が本発明のポリペプチドをコードする核酸である、別の実施形態において、例えば、レトロウイルスベクターを用いることにより（例えば、米国特許第４，９８０，２８６号参照）、核酸が細胞内に入るようになるように適切な核酸発現ベクターの一部としてそれを構築し、それを投与することにより、または直接注射により、または微粒子照射を用いることにより（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクティング剤によるコーティングにより、または核に侵入することが公知であるホメオボックス様ペプチドに連結させて核酸を投与すること（例えば、Joliot et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868, 1991参照）等により、核酸をｉｎ  ｖｉｖｏで投与して、そのコードされたタンパク質の発現を促進することができる。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡに組み込むことができる。
【０１０２】
細胞トランスフェクションおよび遺伝子治療：本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞のトランスフェクションのための本発明のポリペプチドをコードする核酸の使用を含む。これらの核酸は、標的細胞および生物体のトランスフェクションのために多数の周知のベクターのいずれかに挿入することができる。核酸は、ベクターと標的細胞との相互作用により、ｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで細胞内にトランスフェクトされる。組成物は、治療反応を引き起こすのに十分な量で対象に投与する（例えば、筋肉内への注射により）。
【０１０３】
別の態様において、本発明は、本発明のポリペプチドをコードし、標的融合ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結された誘導プロモーターを含む、核酸を細胞にトランスフェクトすることを含む、ヒトまたは他の動物における標的部位、すなわち、標的細胞または組織を治療する方法を提供する。ヒト疾患の治療または防止における遺伝子治療の手順については、例えば、Van Brunt Biotechnology 6:1149-1154, 1998を参照のこと。
【０１０４】
患者群
ＳＢＭＡと診断され、遺伝子検査により確認された診断を有する患者は、本発明による治療に適格であるものとする。
【０１０５】
併用療法
この治療法は、筋消耗過程の主原因を標的とする治療薬と併用することができる。そのような併用は、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン薬、抗癌薬、エリスロポイエチン、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦまたはその他のような成長因子、糖尿病の治療に用いられる薬物（インスリンおよび経口血糖降下薬を含む）、抗結核薬および抗生物質を含み得る。併用は小分子および生体分子剤の両方を含み得る。
【０１０６】
本発明の医薬組成物は、単独の活性剤として、または他の薬物、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、可溶性ＡｃｔＲＩＩＢデコイ模倣物、抗ミオスタチン抗体、ミオスタチンプロペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢに結合するが、それを活性化しないミオスタチンデコイタンパク質、ベータ２アゴニスト、グレリンアゴニスト、ＳＡＲＭ、ＧＨアゴニスト／模倣物またはホリスタチンと併用して、例えば、そのアジュバントとしてまたはそれと組み合わせて投与することができる。例えば、本発明の薬物は、ＷＯ２０１０１２５００３に開示されているＡｃｔＲＩＩＢ抗体と併用することができる。
【０１０７】
本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、それらにより限定されない。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】試験概要−パートＡを示す図である。
【図２】試験概要−パートＢを示す図である。
【０１０９】
配列
【０１１０】
【表１−１】
2016535080.tif 000002
【０１１１】
【表１−２】
2016535080.tif 000003
【０１１２】
【表１−３】
2016535080.tif 000004
【０１１３】
本開示の１つまたは複数の実施形態の詳細は、上記の付随説明に示されている。本明細書で述べたものと類似または同等の方法および材料を本開示の実施または試験に用いることができるが、好ましい方法および材料をこれから述べる。本開示の他の特徴、目的および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかとなろう。特に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術および科学用語は、本開示が属する分野における当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本開示の好ましい実施形態をより十分に例示するために、以下の実施例を示す。これらの実施例は、添付の特許請求の範囲により規定されている、開示した特許内容の範囲を限定すると解釈すべきではない。
【実施例】
【０１１４】
Ａ．  一般的説明
活性化合物：以下の試験の基礎をなす仮説は、突然変異ＡＲの毒性のＩＧＦ−１／Ａｋｔ媒介性の抑制がＳＢＭＡをｉｎ  ｖｉｖｏで治療するための効果的な戦略であり得るということである。ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３が突然変異ＡＲの毒性を特異的に低下させて、筋変性を直接的に減少させ、ＳＢＭＡを有する患者における機能を改善すると仮定される。
【０１１５】
ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３は、そのタンパク質分解を減少させ、阻害性ＩＧＦＢＰ５への結合を減少させ、直鎖状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を付加することによって、その有効性を増大させるためにその配列が修飾されたヒトＩＧＦ−１（ｈＩＧＦ−１）模倣物である。
【０１１６】
１．  試験目的／目標および治験計画
本試験の目的は、ＩＧＦ−１のレベルの低下を有するＳＢＭＡを有する患者におけるＩＧＦ−１模倣物ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の安全性、忍容性および予備的有効性を評価することである。本試験は、２部二重盲検プラセボ対照試験としてデザインされた。
【０１１７】
本試験のパートＡの目的は、ＳＢＭＡを有する患者における選択された用量のｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の安全性および忍容性を確認し、標的組織に対するその薬物動態効果を予備的に検討することである。
【０１１８】
パートＡにおけるＳＢＭＡを有する患者におけるｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の安全性および忍容性の成功裏での実証の後に、週１回投与するｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の１回量（パートＡで決定される）の治療有効性をパートＢで検討するものとする。
【０１１９】
治験計画
これは、約３８例のＳＢＭＡ患者における二重盲検無作為化プラセボ対照非確認試験である。
【０１２０】
試験は、パートＡおよびパートＢの２部で実施する。パートＡは、パートＢが開始できる前に完了しなければならない。試験のパートＡで投与を受けた患者は、少なくとも６０日の「ウォッシュアウト」期間の後にパートＢに参加することができる。患者は、パートＢに同意することを必要とするものとし、スクリーニングおよびベースライン来院は、患者を試験の第２の部分に適格とするために繰り返すものとする。
【０１２１】
３回の計画中間解析がある。中間解析時に、安全性、薬物動態および薬力学データを審査する。この審査には、有害事象、安全性に関する臨床検査、薬物動態データ、ＩＧＦ−１様活性、ＩＧＦ−１抗体およびＩＧＦＢＰを含める。中間解析は、内部ノバルティス（Novartis）チームにより実施される。さらに、各中間解析時に、独立データモニタリング委員会（ＤＭＣ）がすべての安全性関連データの個別の審査を行う。中間解析は、以下のように試験期間全体を通して予定される。
１．  最初の２例のオープンラベル患者が試験を完了した後、パートＡの無作為化部分に進むことは、最初の中間解析の後に行う。
２．  パートＡの完了時に、安全性および薬力学データの審査に加えて、ＰＫ解析により、パートＢで用いるために用量および治療の間隔を確認する。パートＡにおいて忍容性が良好であると判断され、ＰＤ効果が確認された最大用量をパートＢで用いる。
３．  １２例の患者が試験のパートＢを完了した後に中間解析を行う。
【０１２２】
２．  試験デザイン
２．１  パートＡ
試験のこのパートは、スクリーニング期間、ベースライン期間、５用量を用いる治療期間、追跡来院および試験完了評価からなる。パートＡの試験デザインを図１に示す。
パートＡを通しての安全性評価には、身体的検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、標準臨床検査評価（血液学、血液化学、尿検査、凝固パネル）、グルコースモニタリング、有害事象および重篤有害事象モニタリング、顔写真、眼底検査、視力および免疫原性を含める。薬力学的評価には、ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−１様活性、細胞バイオマーカー、ＩＧＦ結合タンパク質、可溶性タンパク質マーカーおよび筋肉生検を含める。
【０１２３】
２．１．１  スクリーニング
患者は、スクリーニング来院のために治験責任医師のセンターに出頭することが要求され、当該センターにおいて試験に対する適合性が治験責任医師により評価される。スクリーニングで適格性基準を満たしている患者は、ベースライン評価に参加することが求められる。
【０１２４】
２．１．２  ベースライン
成功裏でのスクリーニング来院の完了の後、患者は、ベースライン評価のために診療所に戻るように求められる。要求されるベースライン評価に合格した患者は、治療期間に進むことに適格となる。
【０１２５】
試験に参加するために要求されるすべてのベースライン結果は、患者が無作為化され、治療期間に進む前に治験責任医師により入手可能となり、審査されるべきである。
【０１２６】
２．１．３  治療
ベースライン評価の成功裏での完了の後に、最初の２例の患者がオープンラベル実薬（ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３）を受ける。用量レベルは、下表に示すように増加させる。これらの２例の患者が治療および追跡を完了した後に、最初の中間解析が行われる。中間解析による十分な審査の後、パートＡにおける残りの６例の患者は、２：１の比でｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３またはプラセボの５回を受けるように無作為化される。この期間中の薬物動態評価により、ＳＢＭＡ患者におけるｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の生物学的利用能の評価が可能である。
【０１２７】
パートＡの投与計画を下表に示す。
【０１２８】
【表２】
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【０１２９】
投与来院時に、患者は、毎回の投与の約２時間前に試験施設への入場が許可され、投与後２４時間における評価が完了するまで滞在する。投与前および後に、安全性、薬物動態および薬力学的評価が行われる。患者は、４８時間および週１回の投与後評価のために試験施設に戻る。
【０１３０】
２．１．４  試験の終了（ＥＯＳ）
患者は、薬物動態および試験完了評価のためにｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３またはプラセボの患者の最終投与の後に外来来院のために診療所に戻るものとする。
【０１３１】
２．２．  パートＢ
中間解析は、パートＡの終了時に行われる。パートＢにおける投与は、パートＡにおけるＰＫ、ＰＤおよび安全性評価によって決定される。３０例の患者を、皮下投与されたパートＡにおける忍容性が良好であると判断されたｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の用量（０．１ｍｇ／ｋｇまで）またはプラセボ［２：１の比］を受けるように無作為化される。最初の１２例の無作為化患者がパートＢを完了した後に、ＰＫ、ＰＤおよび安全性データを審査するために中間解析が行われる。試験のこのパートは、スクリーニング期間、単一ベースライン期間、１２回の治療来院および試験完了評価からなる。
【０１３２】
パートＢの試験デザインの概要を図２に示す。
【０１３３】
パートＢを通しての安全性評価には、身体的検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、標準臨床検査評価（血液学、血液化学、尿検査、凝固パネル）、グルコースモニタリング、有害事象および重篤有害事象モニタリング、顔写真、眼底検査、視力および免疫原性を含める。薬力学的評価には、ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−１様活性、細胞バイオマーカー、ＩＧＦ結合タンパク質および可溶性タンパク質マーカーを含める。有効性の尺度は、ＭＲＩによるＴＭＶ、ＡＭＡＴ、ＤＸＡによるＬＢＭおよび筋力および筋肉機能の尺度を含む。
【０１３４】
２．２．１  スクリーニング
患者は、スクリーニング来院のために治験責任医師のセンターに出頭することが要求され、当該センターにおいて試験に対する適合性が治験責任医師により評価される。スクリーニングで適格性基準を満たしている患者は、ベースライン評価に参加することが求められる。
【０１３５】
２．２．２  ベースライン
成功裏でのスクリーニング来院の完了の後、患者は、ベースライン評価のために診療所に戻るように求められる。要求されるベースライン評価に合格した患者は、治療期間に進むことが適格となる。述べたように、パートＡを完了した患者は、パートＢに適格であるが、パートＢのすべての関連来院評価を完了することが要求される。
【０１３６】
試験に参加するために必要とされるすべてのベースライン結果は、治療期間に進む前に治験責任医師により入手可能となり、審査されるべきである。
【０１３７】
２．２．３  治療
ベースライン評価の成功裏での完了の後に、患者は、２：１の比でｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３またはプラセボの１２回の投与を受けるように無作為化される。
【０１３８】
パートＢの投与計画を下表に示す。
【０１３９】
【表３】
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【０１４０】
投与来院時に、患者は、毎回の投与の約２時間前に試験施設への入場が許可され、４時間の評価の完了後に退院する。すべての来院は、外来来院である。
【０１４１】
２．２．４  試験の終了（ＥＯＳ）
患者は、試験完了評価を受け、被験薬の最終投与の１週間後に試験から解放される。
【０１４２】
３．  試験デザインの理論的根拠
パートＡでは、患者にｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３またはプラセボの５回の投与（０．０１ｉ．ｖ．、０．０１ｓ．ｃ．、０．０３ｓ．ｃ．、０．０６ｓ．ｃ．および０．１ｓ．ｃ．ｍｇ／ｋｇ）を２週ごとに施行し、患者を最終投与後の３週間にわたり追跡する。さらなる安全性評価処置として、最初の２例の患者にオープンラベルｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３を投与し、試験の完了まで追跡する。安全性評価には、身体的／神経学的検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、標準臨床検査評価（血液学、血液化学、尿検査、凝固パネル）、グルコースモニタリング、有害事象および重篤有害事象モニタリング、ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−１様活性、顔写真、眼底検査、視力および免疫原性を含める。ＳＢＭＡ患者におけるｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の薬物動態を記述し、生物学的利用能を評価するために最初の投与はｉ．ｖ．で施行し、その後はｓ．ｃ．投与する。漸増ｓ．ｃ．投与により、ｉ．ｖ．経路と比較してピーク対トラフ比を低下させ、ひいてはより高いＣｍａｘに伴うリスクの可能性を最小限にすることができる。大腿筋肉容量（ＴＭＶ）および筋肉生検（パートＡのみ）をベースライン時および治療後にＰＤ尺度を得るために行う。前者（ＴＭＶ）については、標的組織に対する効果の観察により、パートＢの成功の可能性のさらなる裏付けが得られる。生検時に得られる筋肉組織におけるＰＤ尺度は、供試用量のｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３が筋肉における測定可能な効果を有するかどうかに関する追加データとなる。
【０１４３】
非治療患者との直接的な比較での慢性疾患における治療の期間を最大限にすることが望ましいので、並行群デザインを選択した。統計的有意性を維持しながら適格患者の募集を促進するために２：１の実薬：プラセボ比を選択した。試験の期間（１２週間）は、１３週間の治療の前臨床的毒性学的評価に基づいており、述べたように、継続的治療は、治療反応を検出する可能性を最適化するのに必要であり得る。
【０１４４】
パートＢは、ＳＢＭＡを有する患者に１２週間にわたり週１回投与したパートＡにおける忍容性が良好であると判断された投与計画（０．１ｍｇ／ｋｇまで）でのｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の予備的有効性を判定するためにデザインされた。安全性に加えて、筋肉量／容量に対するｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の作用機序を考慮して、主要有効性尺度（ＴＭＶ）を、治療効果を観察する可能性に基づいて選択した。筋力および筋肉機能の副次的および探索的尺度は、筋肉の大きさの変化がＳＢＭＡ患者において機能的に関連性があるかどうかを判断するものとする。
【０１４５】
４．  用量／用法、治療期間の理論的根拠
パートＢにおける適切な投与計画を選択するために、少数の患者におけるＰＫおよびＰＤ情報を速やかに得るために０．０１ｉ．ｖ．、０．０１ｓ．ｃ．、０．０３ｉ．ｖ．、０．０３ｓ．ｃ．、０．０６ｓ．ｃ．および０．１ｓ．ｃ．ｍｇ／ｋｇの投与計画を選択した。
【０１４６】
パートＡでは、上限曝露値を超えないことを保証するために最初の２例のオープンラベル患者の後に総ＩＧＦ−１様活性を検討する。同様に、パートＡの完了の後に、これらのデータを検討し、パートＢに移る前に許容できると評価されるものとする。パートＢでは、中間解析時および少なくとも１２例の患者が試験を完了した後に総ＩＧＦ−１様活性を検討する。ＩＧＦ−１レベル／活性の低下という参加要件を考慮すると、これらの防止措置により、ＳＢＭＡ患者における十分な安全性がもたらされ、したがって、上記の生理的ＩＧＦ−１レベルを超えることに伴う有害所見が避けられるはずである。登録患者は、４０〜６０歳の健常対照男性の平均値を１標準偏差（ＳＤ）以上下回る、１７０ｎｇ／ｍＬ未満のＩＧＦ−１の低いベースライン血清レベルを有さなければならない（Colao A, Di Somma C, Cascella T, et al (2008) Relationships between serum IGF-1 levels, blood pressure and glucose tolerance; an observational exploratory study in 404 subjects. Eur J Endocrinol; 159:389-97）。
【０１４７】
パートＡの用量および投与間隔は、ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の観察された半減期に基づいて選択した。投与間隔は、ＳＢＭＡを有する患者にｉ．ｖ．およびｓ．ｃ．の両方で投与する最初の機会を提供する、パートＡの結果に基づいて修正することができる。
【０１４８】
５．  比較対照薬の選択の理論的根拠
ＳＢＭＡに対する公知の療法が存在しないことから、また筋力および筋肉機能の評価には、バイアスをもたらす可能性がある、患者および観察者の参加および意欲による影響を受ける身体能力を測定する検査（時限アップアンドゴー、時限歩行、定量的筋肉検査）を用いることが必要であるため、プラセボ対照が提案される。現在のところ、プラセボを比較対照薬として用いることに代わるべき利用可能なＳＢＭＡに対する有効な治療薬は存在しない。
【０１４９】
６．  中間解析／デザインの適応の目的および時期
中間解析時に、安全性、薬物動態および薬力学的データを審査する。この審査には、有害事象、安全性に関する臨床検査、薬物動態データ、ＩＧＦ−１様活性、ＩＧＦ−１抗体およびＩＧＦＢＰを含める。試験中止基準を解析の指針として用いる。中間解析は、非盲検審査委員会（トランスレーショナル医療専門家、統計専門家、臨床試験リーダー、バイオマーカー専門家およびＰＫ専門家からなる臨床試験チームのサブチーム）によって実施される。
【０１５０】
さらに、各中間解析時に、独立データモニタリング委員会（ＤＭＣ）は、すべての安全性関連データの独立した審査を行う。
【０１５１】
一般的にまたは安全性に対する懸念がある場合に現用の臨床試験、臨床開発プロジェクトに関する意思決定を支援するために追加の中間解析を行うことができる。
【０１５２】
６．１  中間解析１：オープンラベルフェーズ（パートＡの最初の２例の患者）
安全性の尺度として、最初の２例の患者が投与および３週間の追跡期間を完了した後に、中間解析を実施する。パートＡの無作為化部分への進行は、安全性／忍容性が確認され、ＰＫプロファイルが満足のいくものであるならば、進める。
【０１５３】
６．２  中間解析２：パートＡからパートＢへの移行
パートＡの完了時に、安全性、薬物動態および薬力学データを審査して、パートＢに用いるための用量および治療の間隔を確認する。パートＡにおける忍容性が良好であると判断された最大用量をパートＢに用いる。
【０１５４】
６．３  中間解析３：パートＢ
適切な用量および間隔がパートＢに選択されることを保証するために、少なくとも１２例の患者がパートＢを完了した後に中間解析を実施する。
【０１５５】
有効性データの予備的審査もこの中間解析時に実施することができ、審査は、トランスレーショナル医療専門家、統計専門家、臨床試験リーダーおよびＰＫ専門家により非盲検的に実施され、予備的有効性評価として評価されるものとする。この中間解析の目的は、一般的に現用の臨床試験ならびに臨床開発プロジェクトに関する早期の意思決定を支援することである。
【０１５６】
７．  集団
試験集団は、男性ＳＢＭＡ患者を含む。合計約３８例の患者を試験に参加するように登録し、無作為化するものとする。
【０１５７】
被験者の選択は、以下で規定するように、スクリーニングおよびベースライン来院時にすべての選択／除外基準により確認することによって確立するものとする。いずかの参加基準から逸脱している場合、試験への登録から被験者を除外する。
【０１５８】
８．  選択基準
本試験への参加に適格な被験者は、以下の基準を満たさなければならない。
１．  あらゆる評価を実施する前に同意書を取得しなければならない。
２．  ＳＢＭＳの確認遺伝子診断および症候性筋力低下を有する１８歳以上の男性。
３．  スクリーニングにおける血清ＩＧＦ−１≦１７０ｎｇ／ｍＬ。
４．  スクリーニングおよびベースラインにおいて補助用具の補助によりまたは補助によらずに２分の時限歩行を完了することができる。
５．  治験責任医師と十分に意思疎通し、試験の要求事項を理解し、それに従うことができる。
【０１５９】
９．  除外基準
以下の基準のいずれかを満たす患者は、本試験への参加に適格でない。
１．  登録時、または登録の５半減期以内、または予想されるＰＤ効果がベースラインに戻るまでのいずれか長いほうの期間、または現地の規則により要求されている場合には長いほうの期間における他の治験薬の使用。
２．  被験薬または類似の化学的クラスの薬物に対する過敏症の病歴。
３．  医学的に治療されている糖尿病、または低血糖の既知の病歴。
４．  ベルまひ、頭蓋内圧の上昇、乳頭浮腫、偽脳腫瘍または網膜症の病歴。
５．  スクリーニングまたはベースラインにおける球評価尺度の項目ＡまたはＢの１または２のスコアによって実証された重症顔面脱力。
６．  全身性コルチコステロイド（＞１０ｍｇ／日プレドニゾンもしくは同等物）、アンドロゲンもしくはアンドロゲン減少薬、または全身性ベータアゴニストもしくはベータブロッカー、またはハーブ製品もしくは栄養補助食品を含む、事前の３カ月以内の筋肉代謝に影響を及ぼすことが公知の薬物の使用。
７．  切除された非黒色腫皮膚癌以外の癌の病歴。
８．  臨床的に重大な心血管疾患［制御されていない高血圧、虚血性心疾患（例えば、心筋梗塞、狭心症、異常な冠動脈造影または心臓負荷試験／撮像）、上室性もしくは心室性不整脈、心不全もしくはＬＶ機能不全を含む］、または臨床的に重大な脳血管疾患（卒中もしくは一過性虚血発作）の既知病歴。
９．  施設治験責任医師により臨床的に意味があり、試験参加の容認できない危険性があると判断されるスクリーニングまたはベースライン来院時の異常なＥＣＧ。
１０．  試験に参加する場合に患者を危険にさらす可能性がある外科的または内科的状態。治験責任医師は、以下のいずれかの患者の病歴および／または臨床上もしくは臨床検査上の証拠を考慮して、この判断をくだすべきである。
・  炎症性腸疾患、潰瘍、消化管および直腸出血；
・  正常な血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）の存在下でのＳＧＯＴ（ＡＳＴ）、ＳＧＰＴ（ＡＬＴ）、γ−ＧＴ、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）または血清ビリルビンなどの異常な肝機能検査により示された肝臓疾患または肝損傷。
治験責任医師は、以下の基準を指針とすべきである。
・  単一パラメーターは、正常値の上限（ＵＬＮ）×３を超えてはならない。３×ＵＬＮまでおよびそれを含む値に上昇した単一パラメーターは、検査過誤を排除するためにできる限り、またすべての場合に、少なくとも登録／無作為化の前に再び再確認すべきである。異常な肝機能検査については、正常値の上限×５までのＡＬＴおよびＡＳＴは、血清ＣＫ＞１０００ＩＵ／Ｌの存在下では許容できる。
・  血清ＣＫ＞１０００ＩＵ／Ｌである場合、他の肝検査が正常である限り≦５×ＵＬＮへのＡＬＴおよびＡＳＴの上昇は、許容できる。
・  総ビリルビン濃度が１．５×ＵＬＮを上回って増加した場合、総ビリルビンを直接ビリルビンと間接ビリルビンとに差別化すべきである。いずれにせよ、血清ビリルビンは、１．６ｍｇ／ｄＬ（２７μｍｏｌ／Ｌ）を超えるべきでない。
１１．  スクリーニング時の陽性ＨＩＶ（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）検査結果を含む、免疫不全症の病歴。
１２．  スクリーニング時の陽性Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）またはＣ型肝炎検査結果。
１３．  ＭＲＩ評価を除外するような既知の閉所恐怖症、体内のペースメーカーおよび／または強磁性物質の存在を有する患者。
１４．  既知の出血性疾患を有する、または抗凝固剤による治療中である患者。
１５．  投与前の１２カ月以内の薬物もしくはアルコール乱用の既往歴、またはスクリーニング時に実施された実験室検定により示されたそのような乱用の証拠。
【０１６０】
試験集団がすべての適格被験者を代表することを保証するために、追加の除外は、治験責任医師によって適用され得ない。
【０１６１】
１０．  治療
１０．１  プロトコールにより要求される治療
ベースラインにおいて評価された被験者の体重を薬物の投与量の計算に用いる。
【０１６２】
ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３の１０ｍｇをバイアル入り凍結乾燥物として供給する。これは、注射用水で再構成し、ｓ．ｃ．またはｉ．ｖ．を介して投与する必要がある。プラセボも供給する。ｉ．ｖ．注入は、最低限１時間にわたり行う。注入の後に生理食塩水を１時間流す。
【０１６３】
１０．２  治療群
１０．２．１  パートＡ
最初の２例の患者は、下表におけるシーケンス１に示すようにオープンラベルｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３を受ける。次の６例の患者は、２つの治療シーケンスの１つに２：１の比で無作為化する。
【０１６４】
【表４】
2016535080.tif 000007
【０１６５】
試験治療は、以下のように規定する。
・  Ａ：０．０１ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｉ．ｖ．の単回投与
・  Ｂ：０．０１ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．の単回投与
・  Ｃ：０．０３ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．の単回投与
・  Ｄ：０．０６ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．の単回投与
・  Ｅ：０．１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．の単回投与
・  Ｆ：ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｉ．ｖ．に対するプラセボの単回投与
・  Ｇ：ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．に対するプラセボの単回投与
【０１６６】
１０．２．２  パートＢ
患者は、２：１の比で無作為化し、０．１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．またはｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  ｓ．ｃ．に対するプラセボの週１回の投与を受けるように割り当てる。用量および間隔は、パートＡの中間解析時に検討されたデータに基づいて調節することができる。
【０１６７】
１１．  必須の評価
１１．１  有効性および薬力学的評価
１１．１．１  ＭＲＩによる大腿筋肉容量（ＴＭＶ）
大腿筋肉容量は、本試験の主要なアウトカムであり、ＭＲＩにより評価するものとする。筋肉を取り囲み、浸潤する脂肪組織は、筋消耗における骨格筋の代謝および機能異常に関連付けることができるので、用いるＭＲＩパルスシーケンスは、大腿筋領域における脂質の定量化（すなわち、皮下脂肪−ＳＣおよび筋肉間脂肪組織−ＩＭＡＴ）も可能にする。
【０１６８】
データの収集および処理
被験者は、すべての施設における同様のスキャナー（１．５Ｔ）およびＱボディコイルを用いて撮像する。スキャン中の患者の動きを最小限にし（例えば、折り畳んだパッド／シートを脚の下に置くことにより）、同じ位置決めをすべての後続のスキャンに用いることを保証するように注意を払うものとする。
【０１６９】
急速サーベイスキャンの後、大腿全体（膝から股関節まで）を対象にするように２次元マルチスライスパルスシーケンスを用いて大腿の画像を取得する。総シーケンス時間は、患者の不快感を最小限にするのに十分に速いものとする。プロトン密度ファストスピンエコー（ＦＳＥ）ＭＲＩパルスシーケンスは、画質の損失なしに比較的に短時間に大腿部全体の画像の取得を可能にし、筋肉と周囲脂肪組織との間の十分なコントラストを生じさせるので、好ましいアプローチと考えられた。
【０１７０】
１１．１．２  球評価尺度
球評価尺度（ＢＲＳ）は、それぞれが異常から正常までの１〜４の尺度に基づいて評価される８つのドメインを含む（Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7）。ドメインは、以下の筋肉群／機能：眼輪筋、口輪筋、開口、閉口、舌前突、舌偏位、軟口蓋挙上および咽頭後壁収縮からなっている。各ドメインは、治験責任医師によりベッドサイド検査／観察により筋力／機能について評価される。
【０１７１】
データ収集および処理
各ドメインは、治験責任医師により１〜４の尺度に基づいて採点され、各ドメインのそれぞれのスコアが加算されて、ＢＲＳスコア（８〜３２）が得られる。ＢＲＳスコアが指示とともに別個のマニュアルで提供される。ＢＲＳスコアの結果は、ＣＲＦに保存される。
【０１７２】
平均値、標準偏差（ＳＤ）および標準誤差（ＳＥ）などの記述統計量は、ＢＲＳ結果を明らかにするために計算される。
【０１７３】
有効性パラメーター
ベースラインからの変化は、ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３治療患者においてプラセボと比較して評価する。
【０１７４】
１１．１．３  成人ミオパチー評価ツール（ＡＭＡＴ）
成人ミオパチー評価ツール（ＡＭＡＴ）（Fernandez-Rhodes LE, Kokkinis AD, White MJ et al (2011) Efficacy and safety of dutaseride in patients with spinal and bulbar muscular atrophy: a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol; 10:140-7）は、身体機能および筋持久力を評価するものであり、スコアが高いほど能力が良好であることを示し、７つの時限機能課題および６つの持久力課題を含む（０＝最悪、４５＝最良）。これは、ＳＢＭＡにより特に影響を受ける筋肉（体軸および肢近位筋）および機能（肩／腰帯、体軸筋力低下）を評価する。近位および体軸筋群の時限または反復測定を用いる。ＡＭＡＴは、医師またはＳＢＭＡを有する患者の管理の経験を積んだ評価者によって実施されなければならない。
【０１７５】
データ収集および処理
ＡＭＡＴは、次の１３の機能／持久力課題からなっている：持続的頭部挙上、仰臥位から腹臥位への体位変換、変法腕立て伏せ、反復変法腕立て伏せ、上体起こし、仰臥位から座位への体位変換、腕上げ、持続的腕上げ、座位から立位への体位変換、持続的股関節屈曲、持続的膝伸展、反復踵上げおよび踏み台登り。各課題は、治験責任医師により採点される（尺度０［より悪い／最弱］〜３または４［最強］）。評価ツールが指示とともに別個のマニュアルで提供される。ＡＭＡＴの結果は、ＣＲＦに保存される。
【０１７６】
１１．１．４  二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）スキャンによる総除脂肪体重（ＬＢＭ）
ＤＸＡは、骨格筋量を大部分反映する、総除脂肪体重（ＬＢＭ）の変化をモニターするために試験中に用いる。ＤＸＡ機器は、体脂肪量および除脂肪体重が推定される、骨塩量および軟組織を測定するための２つのエネルギーを発生するまたはそれらに分割されるＸ線源を使用している。検査は、迅速（１〜２分）、正確（０．５〜１％）および非侵襲的である。ＤＸＡスキャナーは、５％と小さい筋肉量の変化を検出するのに必要な正確さを有する。
【０１７７】
ＤＸＡによる放射線曝露は、ごく少ない。米国国立放射線防護測定委員会（ＮＣＲＰ）は、一般の低頻度曝露の年間有効線量限界が５，０００μＳｖであり、１０μＳｖの年間有効線量を無視できる個別線量と判断することを推奨した。成人における二重エネルギーＸ線吸収測定全身スキャンの有効線量は、２．１μＳｖである。
【０１７８】
試験により、身体組成を測定するためにＤＸＡスキャンを使用するに際して品質保証が重要な問題であることが示された。ＤＸＡ機器製造業者およびモデルは、一貫性をもたせるべきであり、それらの校正は、試験を通してモニターすべきである。標準化スキャン取得プロトコールならびに適切かつ不変のスキャン取得および解析ソフトウエアを使用することは、一貫性のある結果を達成するのに必須である。同様に、スキャンの解釈に変動があるため、経験を積んだスタッフによる集中型スキャン解析を利用することが重要である。
【０１７９】
１１．１．５  定量的筋肉検査（ＱＭＴ）
定量的筋肉検査（ＱＭＴ；最大等尺性随意収縮検査（ＭＶＩＣＴ）とも呼ばれている）は、ＱＭＡシステム（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｏｕｒｃｅ、Ａｔｌａｎｔａ、Ｇｅｏｒｇｉａ）またはＢｉｏｄｅｘシステム（Ｂｉｏｄｅｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて実施する。これらのシステムでは、０．５〜１，０００ニュートンの荷重を用いる力変換器に接続されている非弾性ストラップに患者の腕または脚を取り付けるための調節可能なカフを使用する。
【０１８０】
１１．１．６  時限アップアンドゴー（ＴＵＧ）検査
該検査は、座位から立ち上がり、３メートル歩行し、１８０°向きを変え、椅子に歩いて戻り、再び方向転換し、座る人の能力を評価する。必要な場合には検査を実施するために歩行補助具を用いることができる。巻き尺、ストップウォッチおよび標準的な高さの椅子が必要である（Rutkove SB, Parker RA, Nardin RA, et al (2002) A pilot randomized trial of oxandrolone in inclusion body myositis. Neurology; 58:1081-7.）。
【０１８１】
１１．１．７  ２分または６分時限歩行
試験のパートＡに適格であるためには、患者は、スクリーニングおよびベースラインにおいて２分の時限歩行を行うことが要求される。６分の歩行は、試験への参加については２分に修正されている。
【０１８２】
パートＢの試験に適格であるためには、患者は、スクリーニングおよびベースラインにおいて２分の時限歩行を行うことが要求されるが、行うことができる場合には全６分の歩行検査を行うことが要求される。
【０１８３】
６分歩行検査では、患者が６分に歩くことができる距離を評価する（Rutkove SB, Parker RA, Nardin RA, et al (2002) A pilot randomized trial of oxandrolone in inclusion body myositis. Neurology; 58:1081-7.）。これは、歩行の機能的能力を評価する広く利用される臨床的検査である。６分間に移動した距離、すなわち、６分歩行距離は、神経筋、肺および心血管系を含む、歩行に関係するすべての系の全体的および総合的応答を評価するパラメーターである。この検査の妥当性は、球脊髄性筋萎縮症を含む様々な神経筋障害において検証された。
【０１８４】
患者がパートＢの試験に適格となった後には、患者が６分間歩行することができない場合、２分歩行検査（２ＭＷＴ）をその代わりに行うものとする。
【０１８５】
略語の一覧
ＡＥ          有害事象
ＡＥＳＩ      特に興味深い有害事象
ＡＬＴ        アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＬＰ        アルカリホスファターゼ
ＡＭＡＴ      成人ミオパチー評価ツール
ＡＮＣＯＶＡ  共変量分析
ａＰＴＴ      活性化部分トロンボプラスチン時間
ＡＲ          アンドロゲン受容体
ＡＳＴ        アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＢＭＩ        肥満指数
ＢＲＳ        球評価尺度
ＣＦＲ        連邦規則集
ＣＫ          クレアチンキナーゼ
ＣＮ          脳神経
ＣＲＦ        症例報告書
ＣＲＯ        開発業務受託機関
ＣＶ          変動係数
ＤＭＣ        データモニタリング委員会
ＤＸＡ        二重エネルギーＸ線吸収測定
ＥＣ          倫理委員会
ＥＣＧ        心電図
ＥＬＩＳＡ    酵素結合免疫吸着検定法
ＥＯＳ        試験の終了
ＦＤＡ        食品医薬品局
ＧＣＰ        医薬品の臨床試験の実施に関する基準
γ−ＧＴ      ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ
ＨＡＱ        健康評価質問票
ＨＡＱ−ＤＩ  健康評価質問票を用いた機能障害指数
ｈＩＧＦ−１  ヒトＩＧＦ−１
ｈＩＧＦ１−Ｅａ−ｍｕｔ３  該タンパク質のＮ末端に共有結合した約３０ｋＤａの総分子量を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）部分を含む配列番号６に示すヒトＩＧＦ−１前駆体ポリペプチド
ＨＩＶ        ヒト免疫不全ウイルス
ＩＣＨ        日米欧医薬品規制調和国際会議
ＩＥＣ        独立倫理委員会
ＩＧＦ−１    インスリン様成長因子１
ＩＧＦＢＰ    ＩＧＦ結合タンパク質
ＩＧＦＢＰ３  ＩＧＦ結合タンパク質３
ＩＧＦＢＰ５  ＩＧＦ結合タンパク質５
ｉ．ｖ．      静脈内
ＩＲ          インスリン抵抗性
ＩＲＢ        治験審査委員会
ＬＢＭ        除脂肪体重
ＬＬＯＱ      定量下限
ＭＲＩ        磁気共鳴画像法
ＭＴＤ        最大耐量
ＰＤ          薬力学
ＰＥＧ        ポリエチレングリコール
ＰＧ          薬理遺伝学
ＰＫ          薬物動態
ＱＭＴ        定量的筋肉検査
ＲＥＢ        研究倫理委員会
ＳＡＥ        重篤な有害事象
ＳＢＭＡ      球脊髄性筋萎縮症
ｓ．ｃ．      皮下
ＳＧＯＴ      血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ
ＳＧＰＴ      血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ
ＳＤ          標準偏差
ＴＢＬ        総ビリルビン
ＴＭＶ        大腿筋肉容量
ＴＵＧ        時限アップアンドゴー
ＵＬＮ        正常値の上限
ＵＬＯＱ      定量上限
【図１】
2016535080.tif 000008
【図２】
2016535080.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月5日(2016.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2016535080000001.app
【国際調査報告】
2016535080.tif 000010
2016535080.tif 000011
2016535080.tif 000012