(57)【要約】  【解決手段】  本出願は、式（Ｉ）の化合物および／またはその塩を提供し、Ｘ，Ｒ１およびＲ２がここで定義される化合物および／またはその塩を提供する。構造および治療用途もまたここで説明される。2016520129.tif 000044  【選択図】      なし
2016520129.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、
【化１】
2016520129.tif 000039
および／またはその塩であり、
ＸはＣＨまたはＮであり、
Ｒ１はＨ、または選択的に少なくとも一個のＲ３で置換されたＣ１−Ｃ６アルキルから選択され、
少なくとも一個のＲ２はハロゲンであり、他のＲ２が水素またはハロゲンから選択され、
各Ｒ３はヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキオキシ、ＣＯＮ（Ｒ４）２、およびＯＣＯＲ４から独立に選択され、
各Ｒ４は水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、および少なくとも一個のハロゲンで置換されたフェニルである
化合物およびその塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物において、前記他のＲ２がハロゲンである、化合物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物において、前記他のＲ２が水素である、化合物。
【請求項４】
請求項１記載の化合物において、少なくとも一個のＲ２がフッ素である、化合物。
【請求項５】
請求項２記載の化合物において、前記他のＲ２がフッ素である、化合物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか記載の化合物において、ＸがＣＨである、化合物。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか記載の化合物において、ＸがＮである、化合物。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか記載の化合物において、Ｒ１がＨである、化合物。
【請求項９】
請求項１から７のいずれか記載の化合物において、Ｒ１が選択的に少なくとも一個のＲ３で置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである、化合物。
【請求項１０】
請求項９記載の化合物において、前記少なくとも一個のＲ３はヒドロキシルである、化合物。
【請求項１１】
請求項９記載の化合物において、前記少なくとも一個のＲ３はＣ１−Ｃ６アルキオキシである、化合物。
【請求項１２】
請求項９記載の化合物において、前記少なくとも一個のＲ３はＣＯＮ（Ｒ４）２である、化合物。
【請求項１３】
請求項９記載の化合物において、前記少なくともＲ３はＯＣＯＲ４である、化合物。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか記載の化合物において、Ｒ４は水素である、化合物。
【請求項１５】
請求項１から１３のいずれか記載の化合物において、Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルキルである、化合物。
【請求項１６】
請求項１から１３のいずれか記載の化合物において、Ｒ４は少なくとも一個のハロゲンで置換されたフェニルである、化合物。
【請求項１７】
請求項１６記載の化合物において、Ｒ４は少なくとも一個の臭素で置換されたフェニルである、化合物。
【請求項１８】
【化２】
2016520129.tif 000040
2016520129.tif 000041
2016520129.tif 000042
2016520129.tif 000043
から選択される単一エナンチオマーである化合物、および／またはその塩。
【請求項１９】
（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オールである請求項１８記載の単一エナンチオマー、および／またはその塩。
【請求項２０】
（±）−３，４−シス−１−（２−メトキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（±）−３，４−シス−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（±）−２−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−３，４−シス−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン；
（±）−２−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−２−（３，３−ジフルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−１−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−２−メチル−プロパン−２−オール；
（±）−２−（３，３−ジフルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−［４−（３，３−ジフルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン；
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン；
（３Ｒ，４Ｓ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（３Ｓ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−ｙｌアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
２−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（３Ｓ，４Ｓ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
４−ブロモ安息香酸２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エチルエステル；
２−（４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
から選択される化合物、および／またはそれらの塩。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか記載の化合物、および／またはその塩、および薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物。
【請求項２２】
それを必要とする対象においてＡＬＫキナーゼを阻害する方法であって、前記対象に、治療上有効な量の請求項１〜２０のいずれか記載の化合物、および／またはその塩を投与する工程を有する、方法。
【請求項２３】
それを必要とする患者においてＡＬＫ陽性の疾患／障害を治療する方法であって、前記対象に、治療上有効な量の請求項１〜２０のいずれか記載の化合物、および／またはその塩を投与する工程有する、方法。
【請求項２４】
それを必要とする患者において増殖性疾患を治療する方法であって、前記対象に、治療上有効な量の請求項１〜２０のいずれか記載の化合物、および／またはその塩を投与する工程を有する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
未分化リンパ腫キナーゼ（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｋｉｎａｓｅ：ＡＬＫ）は、細胞膜貫通受容体チロシンキナーゼであり、インスリン受容体サブファミリーに属する。ＡＬＫは新生児脳において最も豊富に発現しており、脳の発達におけるＡＬＫの役割の可能性が示唆されている（Ｄｕｙｓｔｅｒ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００１，２０，５６２３−５６３７）。
【０００２】
ＡＬＫはまた、特定の腫瘍の進行にも関係している。例えば、未分化大細胞型リンパ腫（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  ｌａｒｇｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：ＡＬＣＬ）の約６０パーセントが、ヌクレオホスミン（ｎｕｃｌｅｏｐｈｏｓｍｉｎ：ＮＰＭ）とＡＬＫの細胞内ドメインとから成る融合タンパク質を生成する染色体変異と関連している（Ａｒｍｉｔａｇｅ，Ｊ．Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，２２５６−２３１６；Ｋｕｔｏｋ  Ｊ．Ｌ．&  Ａｓｔｅｒ  Ｊ．Ｃ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２００２，２０，３６９１−３７０２）。この変異タンパク質であるＮＰＭ−ＡＬＫは、恒常活性型のチロシンキナーゼドメインを有し、これは下流のエフェクタの活性化を介してその癌化特性の要因となっている（Ｆａｌｉｎｉ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９９，９４，３５０９−３５１５；Ｍｏｒｒｉｓ，Ｓ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，２００１，１１３，２７５−２９５；Ｄｕｙｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｋｕｔｏｋ  &  Ａｓｔｅｒ）。さらに、この癌化ＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子は、非小細胞肺癌（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ：ＮＳＣＬＣ）の患者において同定されており（Ｓｏｄａ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４８，５６１−５６６）、ＡＬＫ阻害剤治療の有望な標的になるＡＬＫ融合タンパク質のリストの一つを成す。実験データにより、恒常的活性型ＡＬＫの異常な発現がＡＬＣＬの発病に直接関係し、ＡＬＫの阻害がＡＬＫ陽性リンパ腫細胞の増殖を顕著に弱めることが示されてきた（Ｋｕｅｆｅｒ，Ｍｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，１９９７，９０，２９０１−２９１０；Ｂａｉ，Ｒ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，６９５１−６９６１；Ｂａｉ，Ｒ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０００，９６，４３１９−４３２７；Ｅｒｇｉｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００１，２９，１０８２−１０９０；Ｓｌｕｐｉａｎｅｋ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００１，６１，２１９４−２１９９；Ｔｕｒｔｕｒｒｏ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００２，８，２４０−２４５）。恒常活性化されたキメラＡＬＫは、主に小児および若年層が罹る、進行の遅い肉腫である炎症性筋繊維芽細胞腫瘍（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｃ  ｔｕｍｏｒｓ：ＩＭＴｓ）の約６０％においても確認されてきた（Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，２０００，１５７，３７７−３８４；Ｄｕｙｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）。
【０００３】
さらに、ＡＬＫおよびその推定リガンドであるプレイオトロフィンは、ヒト膠芽細胞腫において過剰発現されている（Ｓｔｏｉｃａ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００１，２７６，１６７７２−１６７７９）。マウスの研究では、ＡＬＫの欠失によって、膠芽細胞腫の腫瘍増殖が低下し、動物の生存が延長されている（Ｐｏｗｅｒｓ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７，１４１５３−１４１５８；Ｍｅｎｔｌｅｉｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，８３，７４７−７５３）。
【０００４】
ＡＬＫ阻害剤は、ＡＬＣＬ、ＩＭＴ、増殖性疾患、膠芽細胞腫、および可能性のある他の固形腫瘍に対する現在の化学療法と組み合わせることによって持続的な治癒を可能にするかもしれず、または単体の治療薬としてこれらの患者における癌の再発を防止する維持的役割として使用することも可能である。種々のＡＬＫ阻害剤、例えば、インダゾロイソキノリン（国際公開第２００５／００９３８９号）、チアゾールアミドおよびオキサゾールアミド（国際公開第２００５／０９７７６５号）、ピロロピリミジン（国際公開第２００５／０８０３９３号）、ならびにピリミジンジアミン（国際公開第２００５／０１６８９４号）が報告されている。
【０００５】
要約すると、ＡＬＫの異常活性がヒトの特定の癌の発症および進行と関連する明確な遺伝学的および生物学的証拠が存在する。相当数の証拠が、ＡＬＫ陽性の腫瘍細胞の増殖および生存にこれらのガン遺伝子を必要としていることを示し、一方でＡＬＫシグナリングの阻害は腫瘍細胞の増殖停止またはアポトーシスをもたらし、目的である腫瘍縮小効果をもたらす。ＡＬＫは、健康な成人のほとんどの正常組織において最小限の発現しかなく、特定の癌の腫瘍発生時および／または悪性進行の初期に活性化されている。それ故に、ＡＬＫ阻害剤治療による正常細胞へのオンターゲットの影響は最小限であると考えられ、好ましい治療指数をもたらすものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は式（Ｉ）
【化１】
2016520129.tif 000003
【０００７】
の化合物および／またはその塩を提供する。
【０００８】
式（Ｉ）の化合物はＡＬＫ阻害能を持ち、ＡＬＫによる疾患および症状を治療するために用いられ得る。
【０００９】
本出願はさらに少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物またはその塩と少なくとも一つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】Ｓｕｐ−Ｍ２ヒト未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）の腫瘍異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにここで述べられる選ばれた化合物を経口投与する研究における薬物動態／薬力学的データを示す。
【図２】Ｓｕｐ−Ｍ２  ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける化合物１６ｂ（一日二回、経口投与）の抗腫瘍活性を示す。
【図３】重原子異常分散Ｘ線結晶構造解析による化合物１７の絶対立体化学の決定を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
Ｉ．定義
本明細書で用いられる以下の用語は、そうでないと明記されていない限りそれらに属する意味を持つ。
【００１２】
ここで述べられる化合物および中間体は国際純正・応用化学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：ＩＵＰＡＣ）またはケミカル・アブストラクツ・サービス（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ：ＣＡＳ）の命名法に基づいて命名されるものとする。
【００１３】
「Ｃｘ〜ｙ」の表現は基の中の炭素原子の数を示す。例えば、「Ｃ１〜６−アルキル」は、アルキル基が一個（１）〜六個（６）の炭素原子を有する。ある場合には、ｘ＝０、つまり、「Ｃｙ〜０」である。「Ｃｙ〜０」という表現はその基が存在せず（ｘ＝０）または存在し（ｘ＝１〜６）、存在する時は基の中に一個（１）〜六個（６）の炭素原子を有する。たとえば、「−Ｃ０〜６−アルキル−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ０〜６−アルキル−」は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１〜６−アルキル−Ｃ（＝Ｏ）−、および−Ｃ１〜６−アルキル−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜６−アルキル−を含む。−Ｃ０〜６−アルキル−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ０〜６−アルキル−の例は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−、および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−を含むがそれらに限られるものではない。
【００１４】
それ自身のみで、または他の用語および二つ以上の用語と共に用いられる、「アルキル」または「アルキル基」は分枝または非分枝状の鎖式飽和炭化水素基のモノラジカルを表す。例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、などを含むがこれらに限られるものではない。アルキル基は通常一個〜六個の炭素原子など、１〜１０個の炭素原子を有し置換されたり置換されなかったりすることが出来る。
【００１５】
それ自身のみで、または他の用語および二つ以上の用語と共に用いられる、「アルキルオキシ」は前記で説明されたように必要な数の炭素原子（アルキル基）を含み、酸素原子に結合している直鎖または分枝構造の炭化水素基を指す。ここで使われるように、アルキルオキシ基は、選択的に一個〜四個の置換基と置換してもよい。代表的なアルキルオキシ基は、例えば、メトキシ、エトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどを含むがそれに限られない。
【００１６】
「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素、そしてヨウ素原子を含む。
【００１７】
「医薬組成物」は、ヒトに投与するのに適した安全性／有効性のプロファイルを有する組成物を意味する。
【００１８】
「薬学的に許容される賦形剤」は、生理学的に許容され得る材料を意味し、この材料
はヒトに投与された場合に、通常アレルギー性または他の有害な反応、例えば、異常亢進、めまい等を生じない。
【００１９】
「薬学的に許容される塩」は、ヒトに投与するのに適した安全性／有効性のプロファイルを有する塩を意味する。
【００２０】
「対象」は、哺乳類に属する種を意味する。哺乳類の例は、ヒト、霊長類、チンパンジー、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、家畜、イヌ、ネコ、ヒツジ、およびウシを含むがそれらに限定されるものではない。
【００２１】
「治療上有効な量」は、特定の対象または対象群において治療される疾患または症状の悪化を、改善または抑制をするのに十分な化合物の量を意味する。適切な剤形、投与量、および投与経路の決定は、通常の薬学および医学の分野における当業者のレベル内であることが、理解されるべきである。例えばヒトまたは別の哺乳類では、治療される特定の疾患および対象への、治療上有効な量は、実験的にラボや臨床の場で決定されるか、または、Ｕｎｕｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、または他国の同様の機関によるガイドラインで求められる量でもよい。
【００２２】
「治療」は、治療される疾患に関連する、またはそれによって引き起こされる症状または特徴の少なくとも一つの、急性的若しくは予防的減弱または緩和を意味する。例えば、治療は、疾患の症状の減弱または疾患の完全な根絶を含むことが出来る。
【００２３】
「投与」は、対象に化合物を接触させる方法を意味する。「投与」の態様には、化合物を静脈内に、腹腔内に、鼻腔内に、経皮的に、局所的に、移植を介し、皮下に、経腸的に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）、筋肉内に、経口で、全身に、そして吸着によって接触させることが含まれるが、これらに限られるものではない。
【００２４】
本出願の目的において、「および／または」という表現は選択（これ「または」それ）と共に組み合わせ（これ「および」それ）を意味することを理解されるべきである。
【００２５】
ＩＩ．化合物
本発明は、式（Ｉ）
【化２】
2016520129.tif 000004
の化合物および／またはその塩を提供し、
ＸはＣＨまたはＮであり、
Ｒ１はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルを少なくとも一個のＲ３と置換したものから選択され、
少なくとも一個のＲ２がハロゲンでもう一個のＲ２が水素またはハロゲンから選択され；
各Ｒ３が独立にヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ、−（ＣＯ）Ｎ（Ｒ４）２、および−Ｏ（ＣＯ）Ｒ４から選択され、
各Ｒ４が独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、および少なくとも一個のハロゲンと置換されたフェニルから選択される
化合物および／またはその塩を提供する。
【００２６】
ある実施形態では、少なくとも一個のＲ２はハロゲンでもう一個のＲ２は水素である。別の実施形態では、両方のＲ２基はハロゲンである。さらに別の実施形態では、少なくとも一個のＲ２はフッ素である。さらにまた別の実施形態では、両方のＲ２基はフッ素である。
【００２７】
さらにある実施形態では、ＸはＣＨである。またさらに別の実施形態では、ＸはＮである。また別の実施形態ではＸはＣＨであり少なくとも一個のＲ２はハロゲンで、もう一個のＲ２は水素、および／または、ＸはＣＨで両方のＲ２基はハロゲンである。またさらに別の実施形態ではＸはＮで少なくとも一個のＲ２はハロゲンでもう一個のＲ２が水素、および／または、ＸがＮで両方のＲ２基はハロゲンである。
【００２８】
ある実施形態では、Ｒ１はＨである。また別の実施形態では、Ｒ１はＨであり、ＸはＮで少なくとも一個のＲ２はハロゲンでありもう一個のＲ２は水素、および／または、Ｒ１はＨであり、ＸはＮであり両方のＲ２基はハロゲンである。またさらに別の実施形態では、Ｒ１はＨであり、ＸはＣＨであり少なくとも一個のＲ２はハロゲンでありもう一個のＲ２は水素、および／または、Ｒ１はＨであり、ＸはＣＨで両方のＲ２基がハロゲンである。
【００２９】
また別の実施形態では、Ｒ１は選択的に少なくとも一個のＲ３と置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。ある実施形態では、Ｒ３はヒドロキシルである。別の実施形態では、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキルオキシである。またさらに別の実施形態では、Ｒ３は−（ＣＯ）Ｎ（Ｒ４）２である。またさらに別の実施形態では、Ｒ３は−Ｏ（ＣＯ）Ｒ４である。
【００３０】
またさらにある実施形態では、Ｒ４は水素である。またさらに別の実施形態では、Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルキルである。また別の実施形態では、Ｒ４は少なくとも一個のハロゲンと置換されたフェニルである。またさらに別の実施形態では、Ｒ４は少なくとも一個の臭素と置換されたフェニルである。
【００３１】
個別のエナンチオマー、ジアステレオアイソマーおよび／または立体異性体の混合物（いかなる、そして全ての比の）を含む全ての立体化学的配置が、式（Ｉ）の説明に含まれることが理解されるべきである。特に、本出願はラセミ体ジアステレオマー（すなわち、３，４−シス、または３，４−トランスステレオアイソマー）およびそれらの化合物の単一エナンチオマーとして単離される式（Ｉ）の化合物、そしてこれらのいかなる全ての混合物を提供する。例えば、本出願は式（Ｉ）の化合物またはその塩を提供し、Ｒ２が水素でない以下のいずれかの配置を持つ：
【化３】
2016520129.tif 000005
2016520129.tif 000006
2016520129.tif 000007
2016520129.tif 000008
【００３２】
ある実施形態では、これらの化合物は単一のエナンチオマーとして単離される。
【００３３】
また別の実施形態では、本出願は以下から選ばれた化合物、
（±）−３，４−シス−１−（２−メトキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（±）−３，４−シス−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（±）−２−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−３，４−シス−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン；
（±）−２−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−２−（３，３−ジフルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−１−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−２−メチル−プロパン−２−オール；
（±）−２−（３，３−ジフルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（±）−［４−（３，３−ジフルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン；
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン；
（３Ｒ，４Ｓ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（３Ｓ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
２−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ｐｈｅｎｙｌ）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
（３Ｓ，４Ｓ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール；
４−ブロモ−安息香酸  ２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エチルエステル；
２−（４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール；
および／またはその塩を提供する。
【００３４】
別の実施形態では、本出願は例えば、
【化４】
2016520129.tif 000009
2016520129.tif 000010
2016520129.tif 000011
2016520129.tif 000012
【００３５】
などの単一エナンチオマーとして単離される追加の化合物、および／またはその塩を提供する。
【００３６】
本出願は、またここで述べられる化合物の塩も提供する。この塩は、薬学的に許容されるものが好ましい。式Ｉの化合物で薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸、から得られる塩、および有機酸、例えば、脂肪族のモノ−およびジカルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、ならびに脂肪族および芳香族のスルホン酸、から得られる塩を含むが、それに限られるものではない。このような塩は、よって硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩を含むがこれらに限られるものではない。アルギニン酸塩、グルコン酸塩、ガラクツロン酸塩、ならびに同様のもの、例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ"，Ｊ，  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９７；６６：１−１９などの、アミノ酸の塩についても考慮されるものである。
【００３７】
塩基性化合物の前記酸付加塩は、前記遊離塩基形態を十分な量の求められる酸と接触させる従来の方法で前記塩が調製されてもよい。この遊離塩基形態は、前記塩形態を塩基と接触させ、従来の方法で遊離塩基を単離することにより再生されてもよい。この遊離塩基形態はそれらに対応する塩形態とは、極性溶媒への溶解度など多少物理的特性が異なるが、本出願の目的において前記塩は一般に、それらに対応する遊離塩基と同等である。
【００３８】
薬学的に許容される式Ｉの化合物の酸付加塩は、アルカリやアルカリ土類金属水酸化物、または有機アミンなどの、金属またはアミンから成る。カチオンとして用いられる金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、ならびにカルシウムを含むが、これらに限らない。適当なアミンの例は、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、塩化プロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン（エタン−１，２−ジアミン）、Ｎ−メチルグルカミン、およびプロカインを含むが、これらに限らない；例えば、前記Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７参照のこと。
【００３９】
酸性化合物の塩基付加塩は、前記遊離酸形態を十分な量の求められる塩基と接触させる従来の方法で前記塩が調製されてもよい。この遊離酸形態は、前記塩形態を酸と接触させ、従来の方法で遊離酸を単離することにより再生されてもよい。この遊離酸形態はそれらに対応する塩形態とは、極性溶媒への溶解度など多少物理的特性が異なるが、本出願の目的において前記塩は一般に、それらに対応する遊離酸と同等である。
【００４０】
ＩＩＩ．医薬組成物
本出願は、さらにここで述べられる化合物（例えば、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩、または本明細書、実施例または図に示される化合物を含む本出願で述べられる、あらゆる化合物）と、薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、または賦形剤からなる医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は二種類以上の化合物を含むこともある（つまり、前記医薬組成物内に二種以上の化合物が同時に使われる）。好ましくは、前記医薬組成物は、治療上有効な量の本発明の化合物の少なくとも一つを含むものである。別の実施形態では、これらの組成物はＡＬＫを介する疾患や症状の治療に有用である。本出願の化合物が癌または別のＡＬＫを介する疾患の治療に有効な化合物からなる医薬組成物内に混合することも可能である。
【００４１】
本出願の化合物は、シロップ、エリキシル剤、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、トローチ、水溶液、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、エマルジョンなどの形態で調製されることが出来る。好ましくは、本出願の化合物が質的および量的に計測されたＡＬＫを介する疾患に関連する症状や病気の兆候を減らすことが可能となる。
【００４２】
本出願の化合物を用いた医薬組成物の調製において、薬学的に許容されるキャリアは個体または液体でもよい。固体状の調製物には、粉末、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散顆粒を含む。個体キャリアは、一種類またはそれ以上の種類の物質からなり、それ自身がまた希釈剤、香料添加剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩壊剤、または封入剤としての役割を果たしても良い。
【００４３】
粉末の場合、前記キャリアは微粉化された有効成分（つまり、本出願の化合物）とともに混合された微粉化された個体である。錠剤の場合、前記有効成分は必要な結合特性を持つキャリアと好適な比で混合されて求められる形状およびサイズに圧縮される。
【００４４】
前記粉末および錠剤は１％〜９５％（ｗ／ｗ）の有効成分（つまり、本出願の化合物）を有する。別の実施形態では、有効成分は５％〜７０％（ｗ／ｗ）の範囲である。好適なキャリアは、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、でんぷん、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバター、および同様のものなどである。「調製」という言葉は、前記有効成分とキャリアとしての封入剤を調剤することにより、カプセル内で有効成分が別のキャリアと共にまたはそれのみで、キャリアに囲まれて、よってそれと連結していることを指す。同様に、カシェ剤およびロゼンジも含まれる。錠剤、粉末、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびロゼンジは経口投与に好適な個体製剤形態として使われることが出来る。
【００４５】
坐剤の調製には、低融点ワックス、例えば脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物が、まず溶融されて前記有効成分がその中に、撹拌によって、均質に分散される。前記溶融した均質な混合物は、その後都合の良いサイズの型に注入され、冷却されることによって、凝固される。
【００４６】
液体状の調製物は、溶液、懸濁液、およびエマルジョンを含み、例えば、水または水／プロピレングリコール溶液などを含む。非経口の注射には、液体の調製物は水溶性ポリエチレングリコール溶液中に調剤することが出来る。
【００４７】
経口使用に好適な水溶性溶液は前記有効成分を水に溶解し適切な着色剤、香料、安定剤、および増粘剤を必要に応じて加えることによって調製することが可能である。経口使用に好適な水溶性懸濁液は微粉化された前記有効成分を粘性材料、例えば天然または人工ゴム、レジン、メチルセルロース、カルボキシセルロースナトリウムなどと、および他のよく知られた懸濁化剤と共に水に溶解することによって作成することが可能である。
【００４８】
また、経口投与のため使用直前に液体状調製物に変えられる固体状調製物も含まれる。このような液体状調製物には、溶液、懸濁液、およびエマルジョンを含む。これらの調製物は、前記有効成分に加え、着色料、香料、安定剤、緩衝剤、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤および同様のものを含む。
【００４９】
前記医薬調製物は、単位用量の形態であるのが好ましい。このような形態では前記調製は適切な量の前記有効成分を含む単位容量に分注される。この単位用量形態は、パッケージされた調製物でもよく、パッケージは例えば小包された錠剤、カプセル、バイアルまたはアンプル容器に入った粉末など、個別の量の調製物を含むものである。また前記単位用量の形態は、カプセル、錠剤、カシェ剤、またはロゼンジそのもの、またはこれらのパッケージ化された形態のいずれでもよい。
【００５０】
前記医薬組成物における単位用量調製物あたりの有効成分の量は、特定の用途および前記有効成分の効能によって、０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ、好ましくは１．０ｍｇ〜１００ｍｇ、または単位用量の１％〜９５％（ｗ／ｗ）の間で変更および調製される。この組成物は、必要であれば、別の混合可能な治療剤を含むことも出来る。
【００５１】
薬学的に許容されるキャリアは、一部において、投与される特定の組成物、ならびにこの組成物を投与するのに使用される特定の方法によって決定される。その結果、本出願の医薬組成物には幅広い種類の適当な調製物が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照）。
【００５２】
本出願の化合物は、単一にまたは他の適切な化合物と共に、エアゾール製剤（つまり、これらは「噴霧」可能）として製造され吸入によって、投与されることが出来る。エアゾール製剤は、加圧下のジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素、または同様のものなど、許容され得る発射薬内に入れることが可能である。
【００５３】
例えば、静脈内、筋肉内、経皮、および皮下等経由などによる、非経口投与に適した調製物は、抗酸化剤、バッファー、静菌薬、および調製物を目的のレシピエントの血液と等浸透圧にする溶質を含む水性および非水性の無菌注射溶液、そして沈殿防止剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および防腐剤を含むことが出来る水性および非水性の滅菌懸濁液などがある。本出願の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入、経口、局所的に、腹腔内に、膀胱内に、および髄腔内などに投与されることが出来る。前記化合物の調製物は単位用量または複数単位用量ごとに密閉された容器、例えば、アンプル容器およびバイアル容器の形で提供することが出来る。注射液および懸濁液は、前記で述べたような滅菌済みの粉末、顆粒、および錠剤から調製されることが可能である。
【００５４】
対象に対して投与される用量は、本出願については、対象に経時的に有益な治療的応答をもたらすのに十分な量であるべきである。前記用量は、使用される特定の化合物の効能および前記対象の状態、および治療を受ける対象の体重、体表面積によって決定されるものである。用量の大きさもまた、特定の化合物を特定の対象への投与することに伴う、あらゆる有害な副作用の、有無、種類、および範囲によっても決定される。治療される疾患の治療または予防において投与される前記化合物の有効な量を決定するには、前記医師が循環血漿中の前記化合物のレベル、化合物の毒性、および／または疾患の進行度合いなどの要素を評価することが出来る。化合物の等価用量は通常の対象において、約１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。多くの異なる投与方法が当業者に周知されている。
【００５５】
投与には、本出願の化合物は、前記化合物のＬＤ５０、前記化合物の薬物動態プロフィール、禁忌薬、および前記化合物のさまざまな濃度における副作用、および前記対象の全般的な健康状態を含むが、これに限らない要素を、前記対象の質量や全般的な健康状態にあてはめることによって決定される頻度で投与されるこが出来る。投与は単一または分割投与によって達成されることが出来る。
【００５６】
ＩＶ．治療の方法
別の観点では、本出願はＡＬＫを介する疾患および症状を患う対象を治療する方法を提供し、治療上有効な量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む。別の観点によれば、本出願は、ＡＬＫを介する疾患または症状を患っている対象を治療するのに使用する、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。好ましくは、前記式Ｉの化合物はまたは薬学的に許容されるその塩形態は、薬学的に許容されるキャリアを有する医薬組成物中で、前記対象に投与される。別の観点によれば、本出願は、ＡＬＫを介する疾患または症状を患っている対象を治療するのに使用する、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩からなる医薬組成物を提供する。別の実施形態では、前記ＡＬＫを介する症状または疾患は癌である。別の実施形態では、前記ＡＬＫを介する症状は、未分化大細胞型リンパ腫、炎症性筋線維芽細胞腫、膠芽細胞腫、および他の固形腫瘍から選択される。別の実施形態では、前記ＡＬＫを介する症状は、大腸癌、乳癌、腎癌、肺癌、血管腫、扁平上皮骨髄性白血病、メラノーマ、膠芽細胞腫、および星状細胞腫から選択される。
【００５７】
前記ＡＬＫを介する疾患または症状は、その疾患または症状の種類に応じて、本出願の化合物を用いて、予防的に、急性的に、または長期的に治療することが可能である。他の哺乳類も本出願の化合物の投与によって利益を得るが、これらの各方法のホストおよび対象は通常ヒトである。
【００５８】
別の実施形態では、本出願は、対象における増殖性疾患を治療する方法であって、治療上有効な量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩形態の、前記対象への投与を有する方法を提供する。別の態様では、本出願は対象における増殖性疾患を治療するのに使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を提供する。好ましくは、前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態は、薬学的に許容されるキャリアを有する医薬組成物中で、前記対象に投与される。別の態様では、本出願は対象における増殖性疾患を治療するのに使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を有する医薬組成物を提供する。ある実施形態では、この増殖性疾患は癌である。ある実施形態では、前記増殖性疾患はＡＬＫを介するものである。ある実施形態では、前記増殖性疾患は癌である。ある実施形態では、前記増殖性疾患は未分化大細胞型リンパ腫、炎症性筋線維芽細胞腫、膠芽細胞腫、および他の固形腫瘍から選択される。ある実施形態では、前記増殖性疾患は、大腸癌、乳癌、腎癌、肺癌、血管腫、扁平上皮骨髄性白血病、メラノーマ、膠芽細胞腫、および星状細胞腫から選択される。
【００５９】
前記増殖性疾患は、前記疾患または症状の種類に応じて本出願の化合物を用い予防的に、急性的に、または長期的に治療することが可能である。他の哺乳類も本出願の化合物の投与によって利益を得るが、これらの各方法のホストおよび対象は通常ヒトである。
【００６０】
式Ｉの化合物はＡＬＫを介する疾患の治療への有効性とその有効性に必須なコア構造とを共有しでいる（つまり、式Ｉの化合物は全てピロロ「２，１−ｆ」［１，２，４］トリアジンの誘導体）。
【００６１】
治療的用途において、本出願の化合物は幅広い各種の経口および非経口の投与形態で調製および投与され得る。したがって、本出願の化合物は注射により、具体的には、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内に投与されることが可能である。また、ここで述べられる化合物は、吸入により、例えば、鼻腔内などに投与されることが出来る。さらに、本出願の化合物は、経皮的にも投与され得る。別の実施形態では、本出願の化合物は経口的に送達される。前記化合物は、直腸的、舌下的にまたは吹送法によっても送達されることが出来る。
【００６２】
本出願の薬学的手法に用いられる化合物は初期用量一日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ投与されることが可能である。別の実施形態では、前記一日当たりの用量の範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。前記用量は、しかしながら、対象の必要条件、治療される症状の重度、使われる化合物に応じて変化させることが出来る。特定の症状に対する適当な用量は施術者により決定される。通常、治療は前記化合物の最適な用量より少ない用量において開始する。その後、前記用量は前記状況下において最適の効果が得られるまで小さい増幅で増量される。便利のため、必要であれば、一日の総用量を分割し一日かけて一部ずつ投与してもよい
【００６３】
Ｖ．化学
特にそうでないと示されない限り、全ての試薬および溶媒は商業的供給源から得られ、受理後、使用された。１Ｈ  ＮＭＲはＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅよりテトラメチルシランを内部標準として示す溶媒中で４００ＭＨｚにおいて得られた。分析的ＨＰＬＣはＺｏｒｂａｘ  ＲＸ−Ｃ８、５×１５０ｍｍカラムを用い０．１％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルと水の混合物で１０％〜１００％の勾配で溶出された。ＬＣＭＳの結果は二つの機器のいずれかにより得られた。第一に、ＬＣＭＳ保持時間を示す実施例において、分析にはＷａｔｅｒｓ  Ａｑｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣで２．１ｍｍｘ５０ｍｍ  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍカラムを使用して行われた。目標カラム温度は４５℃であり、実行時間が二（２）分、流量０．６００ｍＬ／分、そして５％（０．１％ギ酸／水）：９５％（アセトニトリル／０。１％ギ酸）の溶媒混合液であった。質量分析データはＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＬＣ−ＺＱ  ２０００四重極型質量分析計によって得られた。第二に、ＬＣＭＳ保持時間が示されない実施例において、分析はＢｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ  ２００イオントラップによって行われた。自動カラムクロマトグラフィーはＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（ＩＳＣＯ，Ｉｎｃ．）によって実行された。融点は、Ｍｅｌ−Ｔｅｍｐ装置によって取られ修正されていない。
【００６４】
合成
本出願の化合物は有機合成の当業者によって知られている幅広い方法によって調製されることが可能である。本出願の化合物は以下に述べられる方法を使って、並びに有機化学の当業者により認識される別の方法およびそのバリエーションによって合成される。好ましい方法には、以下に述べられるが、それらに限定するものではなく、それらによって限定されるものでもない。特に断らない限り、化合物は商業的に供給される化合物、または有機合成の当業者によってよく知られている標準の方法で易しく合成される。
【００６５】
本出願の化合物はこのセクションで説明される反応および技法を用いて、調製されるものである。前記反応は前記試薬に適切な溶媒中で行われ、原料は成される変換に適切なものが使用される。また、下の合成方法の説明において、溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験時間および混成手順を含む、全ての反応条件は有機合成の当業者によって容易に認識される、その反応の標準条件から選ばれることが理解されるべきである。
【００６６】
ここで説明される実施例および実施形態は例示の目的に留まりそれらを考慮して、様々な修正および変更が当業者に推奨され、本出願の意図、範囲および添付の特許請求の範囲に含まれるものであることが理解されるべきである。特定の化学変換が次のスキームにリストされるが、リストにあるものに変わって多くの異なる試薬が使われてもよいことが当業者によって認識されるはずである。これらの試薬の一般的な代替物は、"Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ"  Ｌｅｏ  Ａ．  Ｐａｑｕｅｔｔｅ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎ  Ｌｔｄ  （１９９５、または"Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ"  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．  Ｌａｒｏｃｋ．  Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  ａｎｄ  "Ｓｔｒａｔｅｇｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｎａｍｅｄ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ"    Ｋｕｒｔｉ  ａｎｄ  Ｃｚａｋｏ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  ２００５、およびそれらの参考文献に見られるが、それらに限られるものではない。
【００６７】
全体反応スキーム
実施例１、２、４、および１４の合成はスキーム１に示される一般的な反応順序に従うものである。  
【化５】
2016520129.tif 000013
【００６８】
実施例３、５、８、１０および１３の合成はスキーム２に示される一般的な反応順序に従うものである。  
【化６】
2016520129.tif 000014
【００６９】
実施例９、１１、および１２の合成はスキーム３に示される一般的な反応順序に従うものである。  
【化７】
2016520129.tif 000015
【００７０】
実施例１６の合成はスキーム４に示される一般的な反応順序に従うものである。  
【化８】
2016520129.tif 000016
【００７１】
実施例１６ｂからの実施例１７の合成はスキーム５に略図が描かれている合成順序に従うものである。  
【化９】
2016520129.tif 000017
【００７２】
実験手順
【化１０】
2016520129.tif 000018
実施例１
（±）−３，４−シス−１−（２−メトキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
１ａ）４−クロロ−２−メトキシ−１−ニトロ−ベンゼン（１．１２ｇ、５．９６ｍｍｏｌ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボキシ酸第三級−ブチルエステル（１．８４ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸水素カリウム水溶液（７．４５ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ）、および１，４−ジオキサン（１８ｍＬ）を密閉された試験管内で混合し、その後この混合物を８０℃で加熱して一晩撹拌した。ＨＰＬＣは出発物質の完全な変換を示した。この生成物、４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステルを、フラッシュクロマトグラフィーにより単離し（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン２５〜５０％）、収量は９０％であった。
【００７３】
１ｄ）４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル、中間体１ａを、スキーム１で略述され、且つ米国特許第８，４７１，００５号明細書（国際公開第２０１０／０７１８８５号）において詳細に説明されるように、（±）−（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール（中間体１ｄ）に変換した。
【００７４】
１ｅ）（±）−（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール（中間体１ｄ、米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号において説明されるように調整される；６０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、１−ブロモ−２−メトキシ−エタン（２６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、および重炭酸ナトリウム（１３．６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１．５ｍＬ）中の混合物を、還流のために一晩加熱し、そしてその溶媒を真空下で蒸発させ、表題の生成物を分取逆送ｈｐｌｃ（Ｇｉｌｓｏｎ）によって黄色のフォームとして精製した（１４．５ｍｇ、収量２１．４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．６８（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４２（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．５４（ｍ，２Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），３．０６（ｍ，１Ｈ），２．６４（ｍ，４Ｈ），２．３５（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．６８（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：  ５０４．１（Ｍ＋Ｈ）。
【００７５】
【化１１】
2016520129.tif 000019
実施例２
（±）−３，４−シス−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
エチレンオキシド（４０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）をガラス試験管に−７８℃で採取し、そしてテトラヒドロフラン（２００μＬ）中の（±）−（３Ｒ，４Ｓ）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール（実施例４；４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を等温で添加して、試験管のキャップを閉め、この反応物を室温で一晩撹拌した。揮発性物質をその後減圧下で蒸発させ、この生成物を（Ｉｓｃｏ）フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨをシリカゲルで）で黄色のフォームとなるよう精製した（２５ｍｇ、収量５７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７０（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｍ，２Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｍ，２Ｈ），２．６４（ｍ，３Ｈ），２．３８（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２２（ｍ，４Ｈ），１．７２（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４９１．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００７６】
【化１２】
2016520129.tif 000020
実施例３
（±）−２−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン（実施例５；５５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、実施例２で述べられた方法と似た方法によって、黄色のフォーム（３５ｍｇ、収量５８％）を得るために、表題の生成物に変換した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．６９（ｓ、１Ｈ），８．３４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｍ，２Ｈ），４．６３（ｄｄｄｄ，Ｊ＝４８．４；９．７；９．７；４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．６５（ｍ，３Ｈ），２．５５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ；−ＯＨ），２．１９（ｍ，２Ｈ），１．８６（ｍ，２Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４９２．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００７７】
【化１３】
2016520129.tif 000021
実施例４
（±）−３，４−シス−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
ドラムバイアル（８）中に、７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−オール（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号に述べられているよう調整される；７０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１５ｍＬ）およびＮ−フェニルビス（トリフルオロメタンスルホンアミド）（１２４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、室温で一時間撹拌した。（±）−（３Ｒ，４Ｓ）−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボキシ酸第三級−ブチルエステル（中間体１２Ｐはスキーム２および米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号で述べられるように調整される；１１１．８ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を添加した。その反応物を８０℃で一晩加熱した。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃ層と重炭酸ナトリウム水溶液層に分離し、この有機溶媒抽出物を、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で蒸発させた。この粗残留物を、塩化メチレン（１ｍＬ）中に投入し、室温下でトリフルオロ酢酸（０．４５ｍＬ、５．７８ｍｍｏｌ）により、ＨＰＬＣがＢｏｃ基の完全な除去を示すまで処理した。この反応混合物は黄色のフォーム（８２．００ｍｇ、６３．５％）として得られ、真空下で濃縮し、この生成物が逆相プレｈｐｌｃ（Ｇｉｌｓｏｎ）で単離したた後、ｃａｔｃｈ／ｒｅｌｅａｓｅ  ａｃｉｄ−ｒｅｓｉｎ（Ｓｔｒａｔａ／Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）と混合することにより遊離塩基を単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｍ，２Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｍ，４Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．２４（ｍ，２Ｈ），２．８９（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｍ，２Ｈ），１．６４（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４４７．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００７８】
【化１４】
2016520129.tif 000022
実施例５
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン
５ａ）．（±）−３，４−トランス−３−ヒドロキシ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（中間体１６ａ、スキーム４および米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号に説明されるよう調整される；２００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン（６ｍＬ）溶液を、〜０℃において三フッ化ジエチルアミノ硫黄（１８８ｕＬ、１．４２ｍｍｏｌ）で処理し、この反応混合物を一晩撹拌し、室温にまで温めた。この反応混合物を、希釈されたＮａＨＣＯ３水溶液で急冷し、この生成物をＤＣＭによって抽出した。この有機溶媒抽出物を水で一度洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして濾過し、そして粗生成物、（±）−３−フルオロ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２００ｍｇ、収量９９％）を提供するため、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物は精製なしで使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ７．８６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８７〜７．００（ｍ，２Ｈ），４．５８（ｂｒ．  ｓ．，２Ｈ），４．１３〜４．３２（ｍ，１Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），２．７０〜２．９２（ｍ，３Ｈ），１．９３（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６８〜１．８３（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【００７９】
５ｂ）．（±）−３−フルオロ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステルのメタノール（１０ｍＬ）溶液に、パラジウム炭素１０％（１：９  パラジウム：カーボンブラック、４０ｍｇ）を添加した。この混合物を、水素雰囲気下（３５ＰＳＩ）で一晩Ｐａｒｒ装置内において振盪させた。Ｃｅｌｉｔｅでの濾過、および溶媒の蒸発により、粗性の（±）−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３−フルオロ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１８０ｍｇ、９８％）を提供し、これは精製なしで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ６．６３〜６．７１（ｍ，３Ｈ），４．５２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．０５〜４．２６（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），２．６３〜２．８６（ｍ，３Ｈ），１．８８（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），１．６２〜１．７９（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【００８０】
５ｃ）．７−（２メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−オール（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国公開第２０１０／０７１８８５号に述べられるよう調製される；１２０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）および（±）−３，４−トランス−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３−フルオロ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１９４ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を、実施例４に述べられる方法と似た手順によって表題の生成物に変換した：黄色のフォーム（１１１．００ｍｇ、収量５０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．６９（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝４８．５；９．７；９．７；５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０８（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），２．６８（ｍ，３Ｈ），１．９２（ｍ，１Ｈ），１．７６（ｍ，２Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４４８．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００８１】
【化１５】
2016520129.tif 000023
実施例６および７
２−（（３Ｓ，４Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−アセトアミド
および
２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−アセトアミド
鏡像異性的に純粋な実施例６および７を、（±）−２−（３，４−シス−３，４−ジヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−アセトアミドのラセミ体（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号明細書で例示されている）から実施例１６ａおよび１６ｂに示される方法と似たＳＦＣ法でクロマト分離によって調製した。実施例６（ｅｅ>９９％）がカラムから一番に溶出され、そして実施例７が二番目にカラムから溶出される（ｅｅ>９９％）。
【００８２】
【化１６】
2016520129.tif 000024
実施例８
（±）−２−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
メタノール（０．４ｍＬ）中の、エチレンオキシドおよび（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン（実施例１３、６０ｍｇ）を、実施例２に示される方法に似た手順により、ただし５０ｏＣにおいて、表題の生成物に変換し、黄色のフォームを得た（３４ｍｇ、収量５２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．２５（ｍ，１Ｈ），７．４９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．８２（ｍ，３Ｈ），４．６５（ｄｄｄｄ，Ｊ＝４８（Ｈ−Ｆカップリング），１１．２，１１．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｍ，２Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），２．６７（ｍ，３Ｈ），２．２２（ｍ，３Ｈ），１．９２（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４９３．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００８３】
【化１７】
2016520129.tif 000025
実施例９
（±）−２−（３，３−ジフルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
（±）−［４−（３，３−ジフルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン（実施例１２と同様の方法で調製される；６８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、黄色のフォームを得るために、実施例８に述べられる方法と同様の方法によって表題の生成物に変換した（４７ｍｇ、収量６３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７０（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｍ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｍ，２Ｈ），３．２４（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｍ，１Ｈ），２．８７（ｍ，１Ｈ），２．６８（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｄｄ，Ｊ＝２８．２（Ｆ−Ｈ  ビシナルカップリング），１１．６Ｈｚ，１Ｈ），２．２７（ｍ，３Ｈ），１．８９（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：５０９．９（Ｍ＋Ｈ）。
【００８４】
【化１８】
2016520129.tif 000026
実施例１０
（±）−１−（３，４−トランス−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−２−メチル−プロパン−２―オール
１，２−エポキシ−２−メチルプロパンおよび（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン（実施例１３、５８ｍｇ）を、黄色のフォームを得るために、実施例８に述べられる方法と同様の方法によって、表題の生成物に変換した（３６ｍｇ、収量５３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７１（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｍ，２Ｈ），４．６４（ｄｄｄｄ，Ｊ＝４８．３（Ｆ−Ｈ  ジェミナルカップリング），９．８，９．８，４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．６０（ｍ，１Ｈ），２．４７（ｍ，４Ｈ），１．８７（ｍ，２Ｈ），１．２２（ｓ，３Ｈ），１．２１（ｓ，３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：５２１．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００８５】
【化１９】
2016520129.tif 000027
実施例１１
（±）−２−（３，３−ジフルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
エチレンオキシドおよび（±）−［４−（３，３−ジフルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン（実施例１２、６８ｍｇ）を、黄色のフォームを得るために、実施例８に説明された方法と同様の方法によって表題の生成物に変換した（５１ｍｇ、収量６８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｍ，１Ｈ），３．１０（ｍ，１Ｈ），２．９０（ｍ，１Ｈ），２．７４（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｄｄ，Ｊ＝２８．３（Ｆ−Ｈ  ビシナルカップリング），１１．７Ｈｚ，１Ｈ），２．２７（ｍ，３Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：５１０．５４（Ｍ＋Ｈ）。
【００８６】
【化２０】
2016520129.tif 000028
実施例１２
（±）−［４−（３，３−ジフルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン
１２ａ）．１−ブロモ−３−メトキシ−ベンゼン（１０ｇ、５３．５ｍｍｏｌ），４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−３、６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１６．５g、５３．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３．１ｇ、２．７ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（６７ｍＬ、１３３．７ｍｍｏｌ）、を丸底フラスコ内において１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）中に混合し、その混合物を８０℃で一晩加熱した。この生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって、４−（３−メトキシ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１２．５ｇ、収量８１％）を得るために単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２６（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．０４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），４．０７（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．６０〜３．６８（ｍ，２Ｈ），２．５２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【００８７】
１２ｂ）．４−（３−メトキシ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２ｇ、６．９ｍｍｏｌ）はさらにフラッシュクロマトグラフィー（１００ＤＣＭをシリカゲルで）によって、ベースラインの不純物（おそらくは鈴木反応からの残留パラジウム）を除去して、塩化メチレン（２８．９ｍＬ、４５１ｍｍｏｌ）中に溶解して、室温においてｍ−ＣＰＢＡ  ７０〜７５％（７０：３０、ｍ−クロロ過安息香酸：３−クロロ安息香酸、２．４ｇ、９．７ｍｍｏｌ）で一晩処理した。この反応物を、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で処理し、その後飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理することによって急冷し、さらにジクロロメタンによって二回抽出した。併せた有機抽出物は、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）そして濾過され、溶媒は減圧下で蒸発させた。その生成物は追加の精製なしで次の工程で用いられた：（±）−６−（３−メトキシ−フェニル）−７−オキサ−３−アザ−ビシクロ｛４．１．０］ヘプタン−３−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２ｇ、収量９５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ７．２６（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９３〜４．１９（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．５３〜３．７９（ｍ，２Ｈ），３．１０〜３．２４（ｍ，２Ｈ），２．３８〜２．５１（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）。
【００８８】
１２ｃ）．（±）−６−（３−メトキシ−フェニル）−７−オキサ−３−アザ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２ｇ）のメタノール（１１５ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム担持炭素（１０：９０、パラジウム：カーボンブラック、４００ｍｇ）を添加した。この混合物は水素雰囲気下（５０ＰＳＩ）においてＰａｒｒ装置で一晩振盪した。Ｃｅｌｉｔｅによる濾過および溶媒の蒸発によって粗生成物を得た。その生成物はフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって単離し、（±）−３−ヒドロキシ−４−（３−メトキシ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１．７９ｇ、収量８９％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ７．２６（ｓ，１Ｈ），６．７２〜６．９２（ｍ，３Ｈ）、４．３１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）３．９６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．０１（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７０〜２．９２（ｍ，２Ｈ），２．１３〜２．３４（ｍ，１Ｈ），１．６４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【００８９】
１２ｄ）．０℃の塩化メチレン（７０ｍＬ）中の（±）−３−ヒドロキシ−４−（３−メトキシ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１．２７ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）およびピリジン（３３４ｕＬ、４ｍｍｏｌ）を、デス・マーチンペルヨージナン（３．５ｇ、８．３ｍｍｏｌ）で処理し、この反応物を室温で二時間撹拌した。この反応はＮａ２Ｓ２Ｏ３の飽和溶液とＮａＨＣＯ３の飽和溶液の混合物（１：１  ｖ：ｖ）（５０ｍｌ）を添加することにより急冷し、続いてエーテルで抽出した。この生成物はフラッシュクロマトグラフィーにより単離され、（±）−４−（３−メトキシ−フェニル）−３−オキソ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（０．９４ｇ、収量７５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ７．２７（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７０〜６．７５（ｍ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｄ，Ｊ＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝１８．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，５．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、２．１９〜２．３５（ｍ，２Ｈ）、１．４４〜１．５３（ｍ，９Ｈ）。
【００９０】
１２ｅ）．（±）−４−（３−メトキシ−フェニル）−３−オキソ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（９００ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン（５０ｍＬ）溶液を、〜０℃で三フッ化ジエチルアミノ硫黄（９７４ｕＬ．７．４ｍｍｏｌ）によって処理し、その反応混合物を一晩撹拌し、室温まで温めた。この反応混合物を、希釈されたＮａＨＣＯ３水溶液で急冷し、その生成物はＤＣＮにより抽出した。この有機溶媒抽出物を水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、そして減圧下において溶媒を蒸発させた。この粗生成物は精製なしで用いられた：（±）−３，３−ジフルオロ−４−（３−メトキシ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（５１５ｍｇ、収量５３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ７．２２〜７．３０（ｍ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．１３〜４．６７（ｍ，２Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、２．９２〜３．１７（ｍ，２Ｈ）、２．８３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．０９〜２．２４（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【００９１】
１２ｆ）．硝酸（７７ｕＬ、１．８ｍｍｏｌ）を無水酢酸（８６５ｕＬ、９．２ｍｍｏｌ）に０℃の窒素雰囲気下で添加し、この混合物を５〜１０分間撹拌した。この溶液を（±）−３，３−ジフルオロ−４−（３−メトキシ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１２ｍＬ）溶液に０℃の窒素雰囲気下で添加し、その反応物は、この温度で２時間撹拌した。冷やされたＤＣＭを添加し、そしてこの反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液によって急冷した。その有機溶媒抽出物を、減圧下で乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、そして濃縮した。所望の位置異性体生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  １：４）により単離し、（±）−３，３−ジフルオロ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２４０ｍｇ，収量４２％）を白色フォーム個体として得た。１Ｈ  ＮＭＲおよびＮＯＥＤｉｆｆ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ７．８４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），２．７３〜３．２０（ｍ，３Ｈ），２．０９〜２．２７（ｍ，１Ｈ），１．９１（ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，１Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ）。
【００９２】
１２ｇ）．（±）−３，３−ジフルオロ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２３０．００ｍｇ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％パラジウム担持炭素（１０：９０，パラジウム：カーボンブラック、４０ｍｇ）を添加した。この混合物をＰａｒｒ装置により水素雰囲気下（３５ＰＳＩ）で２時間振盪した。Ｃｅｌｉｔｅによる濾過、および溶媒の蒸発によって、（±）−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３，３−ジフルオロ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（２００ｍｇ、収量９５％）を得て、精製なしで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ６．６５〜６．７７（ｍ，３Ｈ），４．１５〜４．６５（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ）、３．７７（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），２．７２〜３．１３（ｍ，３Ｈ）、２．０３〜２．２４（ｍ，１Ｈ），１．８５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）３１２４−６７。
【００９３】
１２ｈ）．７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−オール（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号で説明される方法で調製される；６５ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）および（±）−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３，３−ジフルオロ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、実施例４と似た方法によって表題の生成物に変換し、黄色のフォームを得た（８６ｍｇ、収量６９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．８６（ｍ，３Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．３０（ｍ，１Ｈ），３．２１（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｍ，１Ｈ），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝３０．８（Ｆ＿Ｈ  ビシナルスピン結合），１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｍ，１Ｈ），２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９５（ｍ，２Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４６７．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００９４】
【化２１】
2016520129.tif 000029
実施例１３
（±）−［４−（３，４−トランス−３−フルオロ−ピペリジン−４−イル）−２−メトキシ−フェニル］−［７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−アミン
７−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−オール（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号で説明される手順で調製される；１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）および（±）−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３−フルオロ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（中間体５ｂ，スキーム２；１４６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を、実施例４と同様の手順によって、表題の生成物に変換し、黄色のフォームを得た（１１９ｍｇ、収量６４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ  ８．７０（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．２８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、８．１９〜８．２６（ｍ，１Ｈ）、７．４８（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１〜７．０９（ｍ，１Ｈ）、６．７７〜６．８７（ｍ，３Ｈ）、４．４６〜４．６９（ｍ，１Ｈ）、４．０２（ｓ，３Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、３．４４〜３．５０（ｍ，２Ｈ），３．０８（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），２．６０〜２．８０（ｍ，３Ｈ）、１．６８〜１．８３（ｍ，２Ｈ）。
【００９５】
【化２２】
2016520129.tif 000030
実施例１４
（±）−３，４−シス−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
実施例１４のラセミ体、（±）−３，４−シス−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オールを、米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号およびスキーム１で述べられる方法により調製した。
【００９６】
【化２３】
2016520129.tif 000031
実施例１４ａおよび実施例１４ｂ
（３Ｒ，４Ｓ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
および
（３Ｓ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
鏡像異性的に純粋な実施例１４ａおよび１４ｂを、実施例１４のラセミ体（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号で例示されている）から実施例１６ａおよび１６ｂで説明される方法と似たＳＦＣ法によってクロマト分離することにより調製した。実施例１４ａ（ｅｅ>９９％）が一番にカラムから溶出され、そして実施例１４ｂが二番目にカラムから溶出される（ｅｅ>９９％）。
【００９７】
【化２４】
2016520129.tif 000032
実施例１５ａおよび１５ｂ
２−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
および
２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−フルオロ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
鏡像異性的に純粋な実施例１５ａおよび１５ｂを、実施例３のラセミ体から実施例１６ａおよび１６ｂで説明される方法と似たＳＦＣ法によりクロマト分離することにより調製した。実施例１５ａ（ｅｅ>９９％）が一番にカラムから溶出され、そして実施例１５ｂが二番目にカラムから溶出される（ｅｅ>９９％）。
【００９８】
【化２５】
2016520129.tif 000033
実施例１６
（±）−３，４−トランス−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
１６ａ）この反応物を窒素雰囲気下に置いた。乾燥ジメトキシエタン（１０ｍｌ）中の０℃の冷４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（中間体４、４．０ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）に、水素化ホウ素ナトリウム（７２８ｍｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。５分後、乾燥ジメトキシエタン（５ｍＬ）中の三フッ化ホウ素エーテラート溶液（３．０ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）を滴下（シリンジ）し、そして冷却槽を除去し、この反応物を一晩撹拌した（同時に室温まで温めた）。この反応物は０℃に冷却され、発砲が収まるまで水を滴下し（余剰の水素化物を抑える）、続いて１０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（７．６ｍＬ、７６ｍｍｏｌ）、及びその後３０％過酸化水素水（７．６ｍＬ、７４ｍｍｏｌ）を滴下した。添加後、その反応物を室温まで温め、二時間撹拌した。水で希釈した後、ＥｔＯＡｃによって抽出した。混合した抽出物を３％ＮＨ３水溶液によって、その後水によって洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、蒸発させ、そして残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  ２５〜４０％）により精製し、２ｇ（収量４７％）の中間体１６ａ、（±）−３，４−トランス−３−ヒドロキシ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステルを得た。
【００９９】
１６ｂ）．（±）−３，４−トランス−３−ヒドロキシ−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステル（中間体１６ａ、７ｇ）のメタノール（３５０ｍＬ）溶液に１０％パラジウム担持炭素（１０：９０、パラジウム：カーボンブラック、１ｇ）を添加した。その混合物を水素雰囲気下（３５ＰＳＩ）においてＰａｒｒ装置によって一晩振盪した。Ｃｅｌｉｔｅによる濾過と溶媒の蒸発により粗生成物を得た。この粗生成物は、ジクロロメタン中で懸濁液にされ、希釈されたＮａＨＣＯ３水溶液により二回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、溶媒を蒸発した。この生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  〜４０−７０％）により精製し、５．１ｇ（収量８０％）の中間体１６ｂ、（±）−３，４−トランス−４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステルを得た。
【０１００】
中間体１６ｂを、実施例１６のラセミ体に、スキーム４で略述され、且つ米国特許第８，４７１，００５号明細書（国際公開第２０１０／０７１８８５号）で詳細に説明されるように変換した。
【０１０１】
【化２６】
2016520129.tif 000034
実施例１６ａ
（３Ｓ，４Ｓ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
および
実施例１６ｂ
（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール
エナンチオマーの分離：実施例１６ａおよび１６ｂは実施例１６から以下のように得られる：実施例１６のラセミ体（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号において例示されている）を、実施例１６ａおよび１６ｂの単一エナンチオマーを得るため、超臨界流体（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ：ＳＦＣ）高速液体クロマトグラフィーのキラル固定相カラムにかけた。ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（１０ｘ１５０ｍｍまたは２１ｘ１５０ｍｍ）を、温度Ｔ＝３５ｏＣおよび背圧Ｐ＝１２０ｂａｒ、波長２２０ｎｍに設定されたＵＶ検出器と共に用いた。流量６．０ｍＬ／分で移動相は４０％のＭｅＯＨ（０．１％ＤＥＡと共に）−６０％ＣＯ２であった。実施例１６ａ（ｅｅ>９９％）が一番にカラムより溶出され、そして実施例１６ｂが二番にカラムから溶出される（ｅｅ>９９％）。
【０１０２】
【化２７】
2016520129.tif 000035
実施例１７
４−ブロモ安息香酸  ２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エチルエステル
（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−ヒドロキシ−エチル）−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−３−オール（実施例１６ｂ；４０．００ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２ｕＬ、０．０９ｍｍｏｌ）の塩化メチル（０．４００ｍＬ、６．２４ｍｍｏｌ）中の混合物に、４−ブロモ−ベンゾイルクロリド（１９ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を０℃において添加した。この反応物は一晩、撹拌し、冷却槽／反応物をゆっくり室温に温めた。揮発性物質を蒸発させ、粗残留物を高真空下でさらに乾燥した。この生成物を分取逆送ｈｐｌｃ（Ｇｉｌｓｏｎ）によって単離し、遊離塩基を強陽イオン交換樹脂カラム（Ｓｔｒａｔａ，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）によってリリースし、３３ｍｇ（収量６０％）の４−ブロモ安息香酸  ２−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エチルエステルを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．７０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．９６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６０（ｄＪ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ），７．４７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４６〜７．４０（ｍ，１Ｈ），７．１２（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５０（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｍ，１Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、３．０４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３５（ｍ，１Ｈ）、２．２６（ｍ，１Ｈ）、２．１５（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．８６（ｍ，２Ｈ），１．６７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）。
【０１０３】
【化２８】
2016520129.tif 000036
実施例１８
２−（４−｛３−メトキシ−４−［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イルアミノ］−フェニル｝−ピペリジン−１−イル）−エタノール
［７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］−（２−メトキシ−４−ピペリジン−４−イル−フェニル）−アミン（６０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、収量６０％で、７−（２−メトキシ−フェニル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−２−オール（米国特許第８，４７１，００５号明細書／国際公開第２０１０／０７１８８５号で説明される）および４−（４−アミノ−３−メトキシ−フェニル）−ピペリジン−１−カルボン酸第三級−ブチルエステルから、実施例４に似た方法で調製し、実施例８で説明された手順と同様の手順で表題の化合物に変換し、黄色のフォーム（３５ｍｇ、収量５３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．６９（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４３（ｍ，２Ｈ）、７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｍ、１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．６５（ｍ、２Ｈ），３．０５（ｍ，２Ｈ），２．５９（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｍ、１Ｈ），２．１９（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｍ，５Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：４７４．０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０４】
実施例１６ｂの絶対立体化学の決定。実施例１７のＸ線データ
鏡像異性的に純粋な実施例１６ｂはスキーム５および前記で示されるように実施例１７に誘導体化される。この絶対立体化学は以下に述べられるように、Ｘ線結晶構造解析によって決定された。臭素原子の重原子効果（別の実施例として、Ｍｕｄｉａｎｔａ，  Ｉ．Ｗ．Ｋａｔａｖｉｃ，  Ｐ．Ｌ．；Ｌａｍｂｅｒｔ，  Ｌ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２０１０，  ６６，  ２７５２を参照）に基づいて、実施例１７および１６ｂの絶対立体化学は、Ｘ線の異常分散による結晶構造解析により（３Ｒ，４Ｒ）となるよう決定した。ＯＲＴＥＰ図は、図３に示した。
【０１０５】
Ｘ線結晶学的実験的手法−実施例１７
全ての反射強度は、ＫＭ４／Ｘｃａｌｉｂｕｒ（検出器：Ｓａｐｐｈｉｒｅ３）を用いて、増幅グラファイトで単色化されたＭｏＫα線（λ＝０．７１０７３オングストローム）で、ＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏプログラム（バージョン１．１７１．３３．５５，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｌｔｄ．，２０１０）によって計測した。このＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏプログラム（バージョン１．１７１．３３．５５，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｌｔｄ．，２０１０）はセル寸法を精密化するために用いた。データ整理はＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏプログラム（バージョン１．１７１．３３．５５，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｌｔｄ．，２０１０）を用いて行われた。構造はＳＨＥＬＸＳ−９７プログラム（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，  ２００８）を用いて解明され、ＳＨＥＬＸＬ−９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、２００８）を用いてＦ２に対して精密化した。多面的な結晶モデルに基づいた分析的な数値吸収補正はＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏ（バージョン１．１７１．３３．５５，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｌｔｄ．，２０１０）を用いて行われた。データ収集の温度はＣｒｙｏｊｅｔシステム（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓにより製造）によって制御した。Ｈ原子（Ｎ２ｎおよびＯ３ｎに位置するＨ原子を除く、ｎ＝Ａ、Ｂ）は、ＡＦＩＸ１３、ＡＦＩＸ２３、ＡＦＩＸ４３またはＡＦＩＸ１３７に従って、計測された位置に置かれ、等方性の変位パラメーターは付随Ｃ原子のＵｅｑの１．２または１．５倍であった。このＮ２ｎおよびＯ３ｎ（ｎ＝Ａ、Ｂ）に位置するＨ原子は差フーリエマップから見つけられ、これらの位置はＮ−ＨおよびＯ−Ｈの距離が０．８８（３）および０．８４（３）オングストロームにそれぞれなるよう固定された。
【０１０６】
データは１１０（２）Ｋにおいて結晶が瞬間冷却された後に収集した。化合物Ｃ３４Ｈ３４ＢｒＮ５Ｏ５の構造を解明し、非中心対称空間群Ｐ１中でＺ’＝２（つまり、非対称単位中に結晶学的に独立な分子が存在する）によって精密化した。実施例１７の構造を配置した。この絶対配置は、結晶の回析測定における異常分散効果によって決定され、そしてこのモデルはＣ１１ｎおよびＣ１２ｎ（ｎ＝Ａ、Ｂ）でキラリティーＲを持つ。二つのキラル中心がトランス構造中に見られた。このＦｌａｃｋパラメーターが０．０１９（５）まで精密化した（このパラメーターの０の値は構造精密化によってもたらされた絶対構造が正しく決定されていたことを表していることに留意）。
【０１０７】
Ｆ２に対しての最終的な精密化は許容されるものであった。このＲ因子［Ｆ２>２σ（Ｆ２）］は、約０．０４４であった。最終的な差フーリエマップは比較的平坦であり、残差ピークは０．６７ｅオングストローム−３未満であった。この残差ピークＱ１（０．６７ｅオングストローム−３）およびＱ３（０．４３ｅオングストローム−３）は、Ｎ−Ｈ…Ａ（Ａ＝アクセプター）のアクセプター候補の位置にあるように見えた。しかしながら、これらのピークは格子水分子であるには小さすぎた。Ｃ３４Ｈ３４ＢｒＮ５Ｏ５、Ｆｗ＝６７２．５７、黄色ロッド、０．４０´０．１５´０．１０ｍｍ３、三斜晶、Ｐ１（ｎｏ．１）、ａ＝７．３２７１３（１２）、ｂ＝１１．１２７８１（１７）、ｃ＝１９．６６６４（３）オングストローム、α＝１０６．２１１１（１４）、β＝９１．７０１５（１３）、γ＝９３．２４３７（１２）°、Ｖ＝１５３５．５４（４）オングストローム３、Ｚ＝２、Ｄｘ＝１．４５５ｇｃｍ−３、m＝１．３９０ｍｍ−１、絶対に正確な範囲：０．６３１〜０．９０５であった。３７７９６反射が（ｓｉｎq／l）ｍａｘ＝０．６２オングストローム−１の精度まで計測された。１２０１９の反射が固有（Ｒｉｎｔ＝０．０３８０）であるもので、１０７７８が観察された［Ｉ>２s（Ｉ）］。８２７のパラメーターが、７点において精密化された。Ｒ１／ｗＲ２［Ｉ>２s（Ｉ）］：０．０４４２／０．１１８７．Ｒ１／ｗＲ２［全反射］：０．０４８６／０．１２０２．Ｓ＝１．０９２。残留電子密度は−０．４７と０．６８ｅオングストローム−３の範囲であった。
【０１０８】
生物学的データ
酵素アッセイおよび細胞アッセイによるＡＬＫ自己リン酸化に対する阻害活性（ＩＣ５０）決定の実験的手法は、米国特許第８，４７１，００５号明細書およびＣｈｅｎｇ  Ｍ．，  Ｑｕａｉｌ  Ｍ．Ｒ．，  Ｇｉｎｇｒｉｃｈ  Ｄ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２０１２；１１，  ６７０−６７の説明に従って行われる。例示的な化合物における阻害活性は表１に与えられる。
【０１０９】
【表１】
2016520129.tif 000037
【０１１０】
ラット薬物動態（ＰＫ）実験
ラットＰＫ同定の実験プロトコルは（Ｏｔｔ，  Ｇ．Ｒ．；  Ｗｅｌｌｓ，  Ｇ．Ｊ．；  Ｔｈｉｅｕ，  Ｔ．Ｖ．；  Ｑｕａｉｌ，  Ｍ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１１，  ５４，  ６３２８−６３４１）にて以前説明された手法に従って行われた。実施例１４（ラセミ体、シス）および１６（ラセミ体、トランス）は許容範囲内のラットＰＫ特性を有するとみなされる。下記表２を参照のこと。
【０１１１】
【表２】
2016520129.tif 000038
実施例１４および実施例１６の二つのジアステレオマーラセミ体におけるラットＰＫパラメーターは同等である。
【０１１２】
ＩＮ  ＶＩＶＯ実験
実験手法
げっ歯類でのｉｎ  ｖｉｖｏＰＫ／Ｐおよび腫瘍増殖抑制実験は以下に述べられる以前発表されたプロトコルに従って行われる：  Ｃｈｅｎｇ  Ｍ．，  Ｑｕａｉｌ  Ｍ．Ｒ．，  Ｇｉｎｇｒｉｃｈ  Ｄ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２０１２；１１，  ６７０−６７９およびＯｔｔ，  Ｇ．Ｒ．；Ｗｅｌｌｓ，  Ｇ．Ｊ．；Ｔｈｉｅｕ，  Ｔ．Ｖ．；  Ｑｕａｉｌ，  Ｍ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  ２０１１，  ５４，  ６３２８−６３４１。
【０１１３】
細胞株
前記ＮＰＭ−ＡＬＫ陽性ＡＬＣＬ細胞株、Ｋａｒｐａｓ−２９９およびＳｕｐ−Ｍ２は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨより購入した。
【０１１４】
動物
重症複合免疫不全（Ｓｅｖｅｒｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ：ＳＣＩＤ）／ｂｅｉｇｅあるいはＮｕ／Ｎｕマウス（週齢６週〜８週のメス）は１ケージあたり５匹ずつのマイクロアイソレータ―ユニットにて標準の実験動物用飼料（Ｔｅｋｌａｄ  Ｌａｂｃｈｏｗ）によって飼育された。動物は湿度および温度制御された環境下において１２時間間隔の明暗周期で飼育され、特定および日和見感染菌の無菌状態下において維持された。マウスは実験的操作の少なくとも１週間前には隔離された。動物実験はすべてＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｃｅｐｈａｌｏｎ，  Ｉｎｃ．またはＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｕｒｉｎ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコルに従って行われた。
【０１１５】
イムノブロット解析
リン酸化および全ＡＬＫ、ならびに前記下流ターゲットのイムノブロッティングは抗体供給先より提供されるプロトコルに従って行われた。手短に、処理後、細胞はＦＲＡＫリシスバッファー［１０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、５０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリム、２０ｍｍｏｌ／Ｌフッ化ナトリウム、２ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム、０．１％ＢＳＡ、フレッシュの１ｍｍｏｌ／Ｌの活性バナジン酸ナトリウム、１ｍｍｏｌ／ＬＤＴＴ、１ｍｍｏｌ／Ｌフッ化フェニルメチルスルホニル、およびプロテアーゼ阻害剤カクテルＩＩＩ（１：１００に希釈、カタログ番号５３９１３４；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）］内で溶解された。ソニケーション後、前記溶解物は遠心により分離され、サンプルバッファーと混ぜ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけられた。メンブレンに転写後、そのメンブレンは個別の一次抗体、二次抗体でブロットされ、ＴＢＳ／０．２％Ｔｗｅｅｎで洗われ、そして前記タンパク質のバンドがＥｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅによって可視化された。リン酸化および全ＮＰＭ−ＡＬＫの各バンドはスキャンされ、Ｇｅｌ−Ｐｒｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒソフトウエア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）で数値化された。
【０１１６】
ＰＫ／ＰＤ実験
指数増殖している細胞が、各マウスの左脇腹に移植された。このマウスはモニターされて異種間腫瘍移植片の体積が約３００〜５００ｍｍ３に達すると、マウスは賦形剤であるＰＥＧ−４００または目的の前記化合物（例えば、実施例１４、１６、１６ａおよび／または１６ｂ）を賦形剤内に調製したもののいずれかを、経口投与にて一回投与された。投与後の表示される時点において、前記マウスは安楽死させられ、その血液が回収および遠心分離されて、血漿が回収される。前記腫瘍は摘出され、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含まない完全なＦＲＡＫリシスバッファー内で手持ち用の組織用ブレンダ―で撹拌される。短時間のソニケーションの後、その溶解物がサンプルバッファーと混合され、そして前記で説明したＡＬＫイムノブロッティングのためＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけられた。リン酸化および全ＮＰＭ−ＡＬＫの各バンドはスキャンされ、Ｇｅｌ−Ｐｒｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒソフトウエア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）で数値化された。そして表示される時点における各サンプルの相対ＮＰＭ−ＡＬＫチロシンリン酸化（リン酸化ＮＰＭ−ＡＬＫ／ＮＰＭ−ＡＬＫ比）が算出され、賦形剤のみを投与されたサンプルの平均値が１００とされた。血漿中と腫瘍溶解物中の化合物レベルは、液体クロマトグラフ・タンデム質量分析計（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｔａｎｄｅｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ）によって測定された。
【０１１７】
ＰＫ／ＰＤの結果および考察
実施例１４（シス相対立体化学）および１６（トランス相対立体化学）はより良く、かつ同等のｉｎ  ｖｉｔｒｏプロファイルおよびラットＰＫ特性を持つ（表２）。よって、これらのｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＮＰＭ−ＡＬＫ自己リン酸化阻害活性を評価するには、ラセミ体化合物のどちらもが、ＳＣＩＤマウスにＡＬＫ依存Ｓｕｐ−Ｍ２皮下異種移植を用いた一回投与ＰＫ／ＰＤに進められた（それぞれ図１Ａ、１Ｂの順）。これらの実験において実施例１４のラセミ体は、３０ｍｇ／ｋｇで経口投与されたとき、ＡＬＫ自己リン酸化に対するゆるやかな阻害活性を示し、賦形剤のみ投与された動物に比べて、２４時間以内のどの時点でも<７５％阻害を持つ（図１Ａ）。独立のＰＫ／ＰＤ実験において、別の、実施例１４の単一エナンチオマー、実施例１４ａおよび１４ｂは３０ｍｇ／ｋｇ投与で同等のゆるやかな阻害を示す（データは本明細書に示されない）。
【０１１８】
対照的に、実施例１６（トランス）におけるラセミ体は１２時間後までの間、等量で７５％〜８７％のＡＬＫ自己リン酸化阻害が見られたものの、２４時間の時点でリン酸化の回復が見られた（図１Ｂ）。このポジティブな結果は実施例１４と１６のｉｎ  ｖｉｔｒｏのデータが同様であることを鑑みると予期しないものである。さらに、前記別の単一エナンチオマー１６ａと１６ｂは独立に実験された場合、異なるｉｎ  ｖｉｖｏのＰＫ／ＰＤの反応を見せ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性プロファイルに基づくと予期しない結果であった。特に、実施例１６ａは酵素ＩＣ５０が３．７６ｎＭのであり細胞ＩＣ５０は１００ｎＭであるが、実施例１６ｂは酵素ＩＣ５０が３．５２ｎＭで細胞ＩＣ５０は１２０ｎＭである。（表１参照のこと）ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける同等のデータにも関わらず、単一エナンチオマー実施例１６ａはＡＬＫ自己リン酸化に対しわずかな影響を持ち：３０ｍｇ／ｋｇ一回経口投与後、１６時間にわたり４０〜６０％阻害（図１Ｃ）、それに対して単一エナンチオマー実施例１６ｂは、同じ実験条件下、１６時間までに８０〜１００％のシグナルを阻害する（図１Ｄ）。投与後６時間および１６時間の実施例１６ｂで達成される血漿および腫瘍レベル（図１Ｆ）もまた実施例１６ａによって達成される同じ時点での血漿および腫瘍レベルよりも予想外に高かった（４〜１０倍の範囲内）（図１Ｅ）。これらの立体選択的であるｉｎ  ｖｉｖｏのＰＫ／ＰＤ反応の発見を鑑みて、より好ましい単一エナンチオマーである実施例１６ｂが抗腫瘍効果の実験に進み、それは以下に説明される。
【０１１９】
抗腫瘍効果の実験
腫瘍を持つマウスはランダムに別の治療グループに分かられ（８〜１０匹／グループ）賦形剤（ＰＥＧ−４００，または水）または実施例１６ｂを賦形剤中に調製したもののいずれかを表示される用量ずつ、表示される頻度にて１００ｍＬの体積で経口投与する（遊離塩基と同等であるｍｇ／ｋｇで表される）。各々腫瘍の長さ（Ｌ）と幅（Ｗ）はノギスによって測定され、それらのマウスの体重は２〜３日ごとに測定された。そして前記腫瘍の体積は０．５２３６×Ｌ×Ｗ×（Ｌ＋Ｗ）／２の式で算出された。腫瘍の体積の統計学的解析はＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  ｒａｎｋ  ｓｕｍ  ｔｅｓｔを用いて行われた。血漿および腫瘍サンプルは最終投与の２時間後に回収され。血漿および腫瘍溶解物中の前記化合物レベルはＬＣ／ＭＳ−ＭＳにて測定された。
【０１２０】
顕著なＰＫ／ＰＤ反応に基づき、（図１Ｄ）、前記単一エナンチオマー実施例１６ｂはＳＣＩＤマウスへのＳｕｐ−Ｍ２異種移植による抗腫瘍効果研究に選ばれた。完全な腫瘍退縮が実施例１６ｂを３０ｋｇ／ｋｇまたは５５ｍｇ／ｋｇのいずれかを１０日間一日二回経口投与したときに、観察された（図２）。１０日間投与後、腫瘍の残存は見られなかった。どちらの投薬計画においても、体重減少または明らかな毒性は測定されなかった。単一エナンチオマー実施例１６ｂでのｉｎ  ｖｉｖｏのＰＫ／ＰＤや抗腫瘍効果の実験で見られたような好ましい結果は実施例１４、実施例１６または実施例１６ａにおけるｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏデータを鑑みると予期できないものであった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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