(57)【要約】  本発明は還元型コエンザイムＱ１０粉末、その組成物及び製造方法を開示し、前記還元型コエンザイムＱ１０粉末は、酸化型コエンザイムＱ１０を還元剤が存在する場合で反応させ、反応完了後の反応液における有機溶剤及び他の不純物を除去してから油溶性還元型コエンザイムＱ１０液体を得、次に得られた還元型コエンザイムＱ１０油状物を直接にコールドスプレー成形して還元型コエンザイムＱ１０粉末を得、得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末は、結晶化度が低下し、Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折スペクトルでは、回折角２θが１８．９°であるところに強いピークを有し、２２．８°のところに特に強い吸収ピークを有する。本発明によって得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末は不完全な結晶状態にあり、安定性が良好で、経口生物学的利用度が優れ、健康食品、化粧品又は薬物等に適用する。
2016520037.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折スペクトルには、回折角２θが１８．９°であるところに強いピークを有し、２２．８°のところに特に強い吸収ピークを有し、且つ以下（ａ）〜（ｄ）特徴の１項又は１項以上を更に満たすことを特徴とする還元型コエンザイムＱ１０粉末。（ａ）２２．８°ピーク強度を１００とし、２０．０°のピーク強度が４０．０より小さい。（ｂ）２２．８°ピーク強度を１００とし、１８．９°のピーク強度が９０．０より小さい。（ｃ）２７．４°ピークと１８．９°ピークの強度比が０．１より小さい。（ｄ）３０．３°ピークと１８．９°ピークの強度比が０．１より小さい。
【請求項２】
前記還元型コエンザイムＱ１０粉末は、ＤＳＣによって測定された融点が４６．９℃であることを特徴とする請求項１に記載の還元型コエンザイムＱ１０粉末。
【請求項３】
（１）酸化型コエンザイムＱ１０を有機溶剤に加え、又は加えないままに、５０℃〜６０℃まで加熱し、還元剤を更に加えて反応させ、反応完了後有機溶剤を除去し、溶融された油状の還元型コエンザイムＱ１０液体を得、そのうち、前記還元剤は次亜硫酸又はその塩、アスコルビン酸又はその塩、カルボジチオ酸又はその塩、及び還元酵素のうちの１種又は複数種を含み、前記有機溶剤は親水性のアルコール類、ケトン類又は疎水性のアルカンであるステップ、及び  （２）前記還元型コエンザイムＱ１０液体を噴霧装置にスプレー噴霧し、噴霧後、冷気に入れて粒子を成形させ、類白色の還元型コエンザイムＱ１０粉末を得るステップを含むことを特徴とする請求項１〜２のいずれかに記載の還元型コエンザイムＱ１０粉末を製造する方法。
【請求項４】
前記次亜硫酸又はその塩はチオ硫酸又はチオ硫酸ナトリウムであり、前記アスコルビン酸又はその塩はアスコルビン酸又はアスコルビン酸ナトリウムであり、前記カルボジチオ酸又はその塩はカルボジチオ酸又はカルボジチオ酸ナトリウムであり、前記還元酵素はリン酸性化生物還元酵素であり、前記親水性のアルコールはエタノールであり、前記ケトン類はアセトンであり、前記疎水性のアルカンはノルマルヘキサンであることを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記冷気の温度が３０℃以下であることを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記冷気の温度が１０℃以下であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記冷気は、通常の空気、酸素ガスが除去された空気又は窒素ガスであることを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項８】
スプレー噴霧の時、遠心式又は圧力式噴霧装置を採用して噴霧することを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項９】
スプレー噴霧の前、前記還元型コエンザイムＱ１０液体に酸化防止剤、安定剤、吸収強化剤及び／又は賦形剤を補材として加え、補材を含有する還元コエンザイムＱ１０粉末を得るステップ、又は得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末又は補材を含有する還元型コエンザイムＱ１０粉末を再び溶融してから、酸化防止剤、安定剤、吸収強化剤及び／又は賦形剤と混合した後、噴霧乾燥法で還元型コエンザイムＱ１０粉末を得るステップを更に含むことを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記酸化防止剤はビタミンＥ、ブチル化ヒドロキシトルエンＢＨＴ、アスコルビン酸、ビタミンＡのうちの１種又は複数種であり、前記安定剤はゼラチン、カゼイン、カゼイン酸ナトリウム、ダイズタンパク質、変性殿粉、シクロデキストリン、アラビアゴムのうちの１種又は複数種であり、前記吸収強化剤はポリグリセリン脂肪酸エステル、グリセリン、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸のうちの１種又は複数種であり、前記賦形剤はサッカロース及び／又はデキストリンであることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記還元型コエンザイムＱ１０液体に酸化防止剤及び／又は安定剤、及び／又は賦形剤、及び／又は吸収強化剤を加えた後、噴霧装置に入れて噴霧し、スプレー噴霧された後の霧滴を１９０℃の熱風に入れて乾燥、定型した後、還元型コエンザイムＱ１０粉末を得ることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記還元型コエンザイムＱ１０粉末の応用剤型は錠剤又はカプセル剤であり、栄養補助剤として服用されることを特徴とする請求項３〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
含有量が１０％より大きい前記還元型コエンザイムＱ１０粉末を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の還元型コエンザイムＱ１０粉末を含有する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生物学的利用率が高い還元型コエンザイムＱ１０粉末に関する。更に、具体的には、本発明は生物学的利用率が高い不完全な結晶状態の還元型コエンザイムＱ１０粉末の製造及びその組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
コエンザイムＱ１０は生体内に幅広く存在する脂溶性化合物であり、それが自然界に広く分布し、主に酵母、植物の葉、シード及び動物の心臓、肝臓及び腎臓の細胞に存在し、人体の最も重要なコエンザイムの１つである。コエンザイムＱ１０の主要機能は、フリーラジカル消去、抗腫瘍、免疫力向上、代謝活性化及び心臓の低酸素耐性強化等である。
【０００３】
コエンザイムＱ１０は、通常の存在状態が酸化型及び還元型の２種である。還元型コエンザイムＱ１０は、ユビキノール（Ｕｂｉｑｕｉｎｏｌ）とも称され、白色結晶であり、酸化型コエンザイムＱ１０は、黄色結晶であり、ユビキノン（Ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ）とも称され、両者の構造式は下記である。
【化１】
2016520037.tif 000003
【化２】
2016520037.tif 000004
【０００４】
そのうち、還元型コエンザイムＱ１０は重要な細胞代謝呼吸活性化剤及び免疫強化剤であり、抗酸化、フリーラジカル消去、スキンケア、血糖降下、血圧降下、脂質低下作用、アテローム性動脈硬化症を防止し、慢性呼吸器疾患を改善するなどの効能を有する。且つ、酸化型コエンザイムＱ１０に比べ、還元型コエンザイムＱ１０は、より高い吸収性、より高い生物学的利用率を有する。還元型コエンザイムＱ１０は幅広く薬品、健康食品、食品、化粧品等の分野に適用されている。
【０００５】
従来技術では、還元型コエンザイムＱ１０の由来は、基本的に化学合成、微生物発酵及び動植物抽出の３つのカテゴリーに分けられる。従来の工業では、より多く使用されているのは、酸化型コエンザイムＱ１０を還元剤が存在する場合で還元反応させた後、有機溶剤、例えばアルコール類溶媒中で結晶させて得られ、例えば、ＵＳ２００４０１９７８８Ａ１では、還元型コエンザイムＱ１０を水溶液に結晶させる方法が提案され、それは、水で有機溶剤を置換する又は水と有機溶剤の混合液に結晶することを含む。また、特許もあり、例えば、ＵＳ２００５００７４８６０Ａ１では、還元型コエンザイムＱ１０結晶を油に溶解して再冷却して新たに結晶化する方法で新たな結晶を得ることが記述されており、得られた結晶の結晶型が変化し、生物学的利用率が向上したということで、Ｘ−回折スペクトルを比較すると、両者の結晶型の変化割合が大きくなく、生物学的利用率の向上も大きくなっていないと発見した。且つ、この方法を採用して得られた結晶表面の植物油を除去することは困難であり、又は結晶表面上の植物油を除去するためにノルマルヘキサン等の毒性溶媒を大量に使用して洗浄しなければならず、これらは、この結晶の幅広い応用を制限する。従い、結晶化度がより小さく、生物学的利用率がより高く、且つ応用しやすい還元型コエンザイムＱ１０粉末及びこの還元型コエンザイムＱ１０粉末を含む組成物を得るための方法を見つける必要がある 
【発明の概要】
【０００６】
従来技術の欠陥を克服するために、本発明の一つの目的は、Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折スペクトルには、回折角２θが１８．９°であるところに強いピークを有し、２２．８°のところに特に強い吸収ピークを有し、且つ以下（ａ）〜（ｄ）特徴の１項又は１項以上を更に満たすことを特徴とする新たな還元型コエンザイムＱ１０粉末を提供することである。  （ａ）２２．８°ピーク強度を１００とし、２０．０°のピーク強度が４０．０より小さい。  （ｂ）２２．８°ピーク強度を１００とし、１８．９°のピーク強度が９０．０より小さい。  （ｃ）２７．４°ピークと１８．９°ピークの強度比が０．１より小さい。  （ｄ）３０．３°ピークと１８．９°ピークの強度比が０．１より小さい。  
【０００７】
好ましくは、前記還元型コエンザイムＱ１０粉末は、ＤＳＣによって測定された融点が４６．９℃である。それは、通常の溶媒法で結晶化して得られた結晶の融点（４９．５℃）より著しく低い。  
【０００８】
本発明の別の目的は、前記還元型コエンザイムＱ１０粉末を製造する方法を提供することであり、前記方法は、（１）酸化型コエンザイムＱ１０を有機溶剤に加え、又は加えないままに、５０℃〜６０℃まで加熱し、還元剤を更に加えて反応させ、反応完了後、有機溶剤を除去し、溶融された油状の還元型コエンザイムＱ１０液体を得、そのうち、前記還元剤は次亜硫酸又はその塩、アスコルビン酸又はその塩、カルボジチオ酸又はその塩、及び還元酵素のうちの１種又は複数種を含み、前記有機溶剤は親水性のアルコール類、ケトン類又は疎水性のアルカンであるステップ、及び（２）前記還元型コエンザイムＱ１０液体を噴霧装置にスプレー噴霧し、噴霧後、冷気に入れて粒子を成形させ、類白色の還元型コエンザイムＱ１０粉末を得るステップを含む。  
【０００９】
好ましくは、前記次亜硫酸又はその塩はチオ硫酸又はチオ硫酸ナトリウムであり、前記アスコルビン酸又はその塩はアスコルビン酸又はアスコルビン酸ナトリウムであり、前記カルボジチオ酸又はその塩はカルボジチオ酸又はカルボジチオ酸ナトリウムであり、前記還元酵素はリン酸性化生物還元酵素であり、前記親水性のアルコール類はエタノールであり、前記ケトン類はアセトンであり、前記疎水性のアルカンはノルマルヘキサンである。  
【００１０】
好ましくは、前記冷気の温度が３０℃以下であり、更に好ましくは、前記冷気の温度が１０℃以下である。  
【００１１】
好ましくは、前記冷気は通常の空気、酸素ガスが除去された空気又は窒素である。  
【００１２】
好ましくは、スプレー噴霧の時、遠心式又は圧力式噴霧装置を採用して噴霧する。  
【００１３】
本発明による前記方法は、スプレー噴霧の前、前記還元型コエンザイムＱ１０液体に酸化防止剤、安定剤、吸収強化剤、及び／又は賦形剤等の他の補材を加え、補材を含有する還元コエンザイムＱ１０粉末を得るステップ、又は得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末又は補材を含有する還元型コエンザイムＱ１０粉末を再び溶融してから、酸化防止剤、安定剤、吸収強化剤及び／又は賦形剤と混合した後、噴霧乾燥法で還元型コエンザイムＱ１０粉末を得るステップを更に含む。  
【００１４】
好ましくは、前記酸化防止剤はビタミンＥ、ブチル化ヒドロキシトルエンＢＨＴ、アスコルビン酸、ビタミンＡのうちの１種又は複数種であり、前記安定剤はゼラチン、カゼイン、カゼイン酸ナトリウム、ダイズタンパク質、変性殿粉、シクロデキストリン、アラビアゴムのうちの１種又は複数種であり、前記吸収強化剤はポリグリセリン脂肪酸エステル、グリセリン、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸のうちの１種又は複数種であり、前記賦形剤はサッカロース及び／又はデキストリンである。  
【００１５】
好ましくは、前記還元型コエンザイムＱ１０液体に酸化防止剤及び／又は安定剤、及び／又は賦形剤、及び／又は吸収強化剤を加えた後、噴霧装置に入れて噴霧し、スプレー噴霧された後の霧滴を１９０℃の熱空気に入れて乾燥、定型した後、還元型コエンザイムＱ１０粉末を得る。  
【００１６】
好ましくは、前記還元型コエンザイムＱ１０粉末の応用剤型は錠剤又はカプセル剤であり、栄養補助剤として服用される。  
【００１７】
本発明のもう一つの目的は、前記還元型コエンザイムＱ１０粉末を含む組成物を提供することであり、そのうち、前記組成物は含有量が１０％より大きい前記還元型コエンザイムＱ１０粉末を含む。  
【００１８】
好ましくは、前記還元型コエンザイムＱ１０粉末の剤型は粉剤、錠剤又はカプセル剤であり、栄養補助剤として服用される。  
【００１９】
具体的には、前記方法は、酸化型コエンザイムＱ１０結晶を溶融又は有機溶剤存在する場合で、還元剤と混合して反応させ、反応完了後、水洗又は揮発で有機溶剤を除去し、還元型コエンザイムＱ１０が溶融された状態の液体を得、更に、冷風を吹き込んだ場合、噴霧方式で還元型コエンザイムＱ１０を粉状にし、最終的に結晶化度が低い干粉状ソリッドを得る。  
【００２０】
且つ、溶媒又は植物油結晶化によって得られた結晶に比べ、該還元型コエンザイムＱ１０粉末は、Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折スペクトルで、異なった結晶特徴を呈し、示差走査熱量分析装置（ＤＳＣ）で測定した結果も、それらの融点が異なったことを示す。更に具体的には、まず酸化型コエンザイムＱ１０を有機溶剤に加え、又は加えないままに、６０℃ほどまで加熱し、還元剤を加えて反応させ、反応完了後、有機溶剤を除去して油状の還元型コエンザイムＱ１０液体を得る。  
【００２１】
反応に使用する還元剤は、次亜硫酸又はその塩類、アスコルビン酸又は塩類、カルボジチオ酸又はその塩類、酵素類等のうちの１種又は複数種を含む。  
【００２２】
反応に使用する有機溶剤は例えばアルコール類、ケトン類のような親水性の有機溶剤であってもよく、例えばアルカン類のような疎水性の有機溶剤であってもよい。コエンザイムＱ１０の融点がほぼ５０℃であるため、有機溶剤を加えずに、反応液を直接に６０℃ほどまで加熱し、反応物を溶融状態で還元剤と反応させるようにしてもよい。  
【００２３】
反応過程中に使用するのは親水性有機溶剤であると、反応完了後、十分な水を加え、反応液の温度を６０℃に維持し、下層水を除去し、一方では有機溶剤を持ち出し、他方では反応に完了していない還元剤を除去し、上層の油状物を保留する。  
【００２４】
反応過程中に使用するのは疎水性有機溶剤であると、反応完了後、十分な水を加えて後、静置分層させ、余分な還元剤及び水溶性不純物を除去し、真空状態で有機層における有機溶剤を揮発して還元型コエンザイムＱ１０の油状物を得る。  
【００２５】
得られた還元型コエンザイムＱ１０油状物を噴霧乾燥塔内でスプレー噴霧する。通常の噴霧乾燥塔に熱い空気を送り込むことと異なり、その時送り込まれたのが冷たい空気であり、還元型コエンザイムＱ１０の融点がほぼ５０℃であるため、噴霧後の還元型コエンザイムＱ１０の小液滴が冷たい空気に遭遇した後直ちに白色又は類白色の固体粉末に凝縮する。  
【００２６】
還元型コエンザイムＱ１０結晶が溶融した後、噴霧時、遠心式又は圧力式であってもよく、他の通常の噴霧方式であってもよい。本発明における典型的な噴霧方式は、噴霧前の液体温度が５５℃、粘着性が４５０ｃＰａ、霧化デスクの回転数が１５０００ｒｐｍ、得られた製品の粒子の粒径が１８０μｍほどである。所要な粒子製品の粒径及び生産方式に応じ、これらのパラメータを適当に調整することができる。  
【００２７】
この過程では、冷たい空気の温度は３０℃以下であり、好ましくは、１０℃以下であり、温度が低ければ低いほど、還元型コエンザイムＱ１０液滴の凝縮固化に有利である。還元型コエンザイムＱ１０を再び酸化型に酸化することを避けるために、冷たい空気については、好ましくは酸素ガスが除去された空気、例えば窒素ガスを送り込む。  
【００２８】
且つ、得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末の安定性を増加する又はその生物学的利用度を強化するために、必要に応じ、溶融状態での還元コエンザイムＱ１０液体に適当な酸化防止剤、例えばビタミンＥ、ＢＨＴ、アスコルビン酸、ビタミンＡ等を加えてもよく、吸収強化剤、例えば界面活性剤、グリセリン酸類、脂肪酸類等を加えてもよい。  
【００２９】
更に、得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末の安定性を強化するために、噴霧の前、溶融された還元型コエンザイムＱ１０と補材を混合してから噴霧し、これらの補材はゼラチン、カゼイン、カゼイン酸ナトリウム、ダイズタンパク質等のコロイド類であってもよく、変性殿粉、シクロデキストリン等の澱粉類であってもよく、アラビアゴム等の多糖類であってもよい。所定量の賦形剤、例えばサッカロース、デキストリン等であってもよい。乳化剤、安定剤等であってもよい。混合してから熱い空気を送り込んで噴霧乾燥した後、還元型コエンザイムＱ１０粉末を得る。  
【００３０】
本発明の方法により、得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末では、還元型コエンザイムＱ１０の純度が高く、いずれも９８％以上であり、融点が通常の溶媒法で結晶化して得られた結晶の融点より低く、その原因は、安定型結晶の融点が高いが、準安定型結晶の融点が低いことである。この結果から分かるように、還元型コエンザイムＱ１０の結晶化度が低下し、アモルファス化度を向上させた。  
【００３１】
通常の溶媒法で結晶化して得られた結晶に対し、本発明は、噴霧凝縮成形して得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末のＸ−回折スペクトルで、回折角２θが１８．９°であるところに強いピークを有し、２２．８°のところに特に強い吸収ピークを有し、且つ他の回折角のところにピーク強度が著しく低下し、特に１８．９°ピークに対し、２７．４°ピーク及び３０．３°ピークの強度がいずれも０．１より小さく、２２．８°ピーク強度を１００とし、２０．０°のピーク強度が４０．０より小さく、１８．９°のピーク強度が９０．０より小さい。  
【００３２】
通常の溶媒法で結晶化して得られた結晶では、３．０°、４．６°、２０．１°、２２．８°、２７．４°、３０．３°に強い吸収ピークが出現し、１８．７°、１８．９°に特に強い吸収ピークが出現し、且つ、１８．９°ピークに対し、２７．４°ピーク及び３０．３°ピークの強度がいずれも０．１より大きく、２２．８°ピーク強度を１００とし、２０．０°のピーク強度が４０．０より大きく、１８．９°のピーク強度が２００．０より大きい。  
【００３３】
比較により、本発明の方法では、還元型コエンザイムＱ１０粉末のＸ−回折スペクトルで、１８．７°のところの強いピークが消失し、他のところ、例えば３．０°、４．６°、１８．９°、２０．１°、２２．８°、２７．４°、３０．３°のピーク強度が著しく低下した。回折ピークの高さが結晶化度の大きさを表し、従い、明らかなように、本発明で得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末の結晶化度が低下した。  
【００３４】
また、得られた白色又は類白色の還元型コエンザイムＱ１０粉末に対して一連の結晶型特徴分析及び動物体内での生物学的利用率実験を行う。薬物粉末結晶化度の低下は薬物的生物学的利用率を増加することができる。  
【００３５】
本発明による結晶化度が低下した還元型コエンザイムＱ１０粉末は、安定性が向上するとともに、生体内に高い生物学的利用率を示す。この還元型コエンザイムＱ１０粉末は、食品、栄養保健食品、化粧品、医薬品等の面に応用することができ、応用形式は直接に粉末形式で応用してもよく、例えば賦形剤、着色剤、酸化防止剤、希釈剤、吸収促進剤及び粉剤、錠剤、カプセル剤又は他の適当な組成物を加える形式で応用してもよい。本発明によって得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末は不完全な結晶状態にあり、安定性が良好で、経口生物学的利用率が優れ、健康食品、化粧品又は薬物等に適用する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は油性還元型コエンザイムＱ１０を、冷風を送り込んだ場合で噴霧して得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末のＸ−回折スペクトルである。
【図２】図２は通常の方法でエタノール溶媒中に結晶化して得られた還元型コエンザイムＱ１０結晶のＸ−回折スペクトルである。
【図３】図３は、油性還元型コエンザイムＱ１０を、冷風を送り込んだ場合で噴霧して得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末のＤＳＣスペクトルである。
【図４】図４は、通常の方法でエタノール溶媒中に結晶化して得られた還元型コエンザイムＱ１０結晶のＤＳＣスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、実施例により本発明を更に説明し、本発明の実施例は本発明の技術方案を説明するためのものに過ぎず、本発明を限定するものではない。
【００３８】
実施例１  １００ｇ酸化型コエンザイムＱ１０を１０００ｍＬのノルマルヘキサン中に加え、混合後、５０℃まで加熱する。１０００ｍＬのチオ硫酸ナトリウム溶液（２０％ｗ／ｗ）を反応溶液に加え、５０℃で１時間継続撹拌する。反応完了後、静置分層させ、下層の水層を分離し、ノルマルヘキサン層を２５％塩水（ｗ／ｗ）で洗浄する。真空化状態で３５℃の時に溶媒であるノルマルヘキサンを回収する。得られたスラリーを５０℃まで加熱し、噴霧装置に入れて噴霧し、遠心式噴霧装置で噴霧し、噴霧後、１０℃の冷たい空気に入れて粒子を成形させ、類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末９６．８ｇ（サンプル１）を得、純度が９９．５％、粉末の平均粒径が１５４μｍでる。  
【００３９】
ＨＰＬＣ法で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶における還元型コエンザイムＱ１０の比例を測定する実験
同時にＨＰＬＣ法で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶における還元型コエンザイムＱ１０の比例を測定し、検出条件は、以下のとおりである。
計器：Ａｇｉｌｉｅｎｔ  １２１０
コラム：Ｃ１８コラム
イオンクロマトグラフィー：エタノール：メタノール＝４：３（Ｖ／Ｖ）
検出波長：２１０ｎｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
【００４０】
ＨＰＬＣ法で測定した結果、得られたサンプル１中において還元型コエンザイムＱ１０／酸化型コエンザイムＱ１０の重量比が９９．２／０．８である。
【００４１】
明らかに、本発明に得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末における還元型コエンザイムＱ１０の純度が高く、いずれも９８％以上である。
【００４２】
Ｘ−回折装置で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶の回折ピークを測定する実験
Ｘ−回折装置で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶の回折ピークを測定する。Ｘ−回折スペクトルにおける回折ピークのところ及び強度に基づいて結晶型の変化を判断することができる。本発明では、Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折装置で検出し、具体的な検出条件は以下のとおりである。
計器型番：粉末Ｘ−線回折装置Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ
放射線強度：４０ｋＶ、１００ｍＡ
角度範囲：２θ＝２−６０°
走査速度：２°／ｍｉｎ
走査ステップサイズ：０．０５°
発散スリット：１°
受光スリット：０．６０°
散射スリット：１°
【００４３】
サンプル１は、Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折法で測定されたＸ回折スペクトルが図１に示され、該回折スペクトルでは、回折角２θが１８．９°であるところに強いピークを有し、２２．８°のところに特に強い吸収ピークを有し、且つ他の回折角にピーク強度が著しく低下し、特に１８．９°ピークに対し、２７．４°ピーク及び３０．３°ピークの強度がいずれも０．１より小さく、２２．８°ピーク強度を１００とし、２０．０°のピーク強度が４０．０より小さく、１８．９°のピーク強度が９０．０より小さい。
【００４４】
重量熱分析器で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶の融点を測定する実験
重量熱分析器で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶の融点を測定する。融点の高さに基づいて還元型コエンザイムＱ１０結晶化度及びアモルファス化度の高さを判断することができる。本発明では、具体的な検出条件は以下のとおりである。
計器：Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｖ４．７Ａ  ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ
温度範囲：３０−１００℃
加熱速度：２．５℃／ｍｉｎ
サンプル量：１５ｍｇ
【００４５】
サンプル１は、示差走査熱量分析装置で融点走査を行い、その示差走査後、スペクトルが図３に示され、明らかに、その融点が４６．９℃である。
【００４６】
明らかなように、本発明の結晶融点が通常の溶媒法で結晶化して得られた結晶の融点より低く、その原因は、安定型結晶の融点が高いが、準安定型結晶の融点が低くなることである。この結果は、還元型コエンザイムＱ１０結晶化度が低下し、アモルファス化度が向上したと証明した。
【００４７】
実施例２（比較実施例：結晶法）
１００ｇの酸化型コエンザイムＱ１０を１０００ｍＬのノルマルヘキサンに加え、混合後、５０℃まで加熱する。１０００ｍＬの次亜硫酸ナトリウム溶液（２０％ｗ／ｗ）を反応溶液中に加え、５０℃で１時間継続撹拌する。反応完了後、静置分層させ、下層の水層を分離し、ノルマルヘキサン層を２５％塩水（ｗ／ｗ）で洗浄する。真空化状態で、３５℃の時、溶媒であるノルマルヘキサンを回収する。得られたスラリーに１１００ｍＬ無水エタノールを加え、５０℃まで加熱して溶解し、更に撹拌する場合でこの溶液に３５０ｍＬの水を加え、５℃まで冷却して結晶させ、濾過後、真空乾燥して類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末９５．２ｇ（サンプル２）を得、純度が９９．４％であり、粉末の平均粒径が１４８μｍである。
【００４８】
実施例１に記載の方法に従い、ＨＰＬＣ法でサンプル２中にける還元型コエンザイムＱ１０の比例を測定し、ＨＰＬＣ法で測定した結果、得られたサンプル２において還元型コエンザイムＱ１０／酸化型コエンザイムＱ１０の重量比が９９．０／１．０である。
【００４９】
実施例１に記載の方法に従い、Ｘ−回折装置でサンプル２の回折ピークを測定し、サンプル２は、Ｃｕ−Ｋα放射線のＸ回折法で測定されたＸ回折スペクトルが図２に示され、該回折スペクトル中では、回折角２θが３．０°、４．６°、２０．１°、２２．８°、２７．４°、３０．３°であるところに強い吸収ピークが出現し、１８．７°、１８．９°で特に強い吸収ピークが出現し、且つ、１８．９°ピークに対し、２７．４°ピーク及び３０．３°ピークの強度がいずれも０．１より大きく、２２．８°ピーク強度を１００とし、２０．０°のピーク強度が４０．０より大きく、１８．９°のピーク強度が２００．０より大きい。
【００５０】
実施例１に記載の方法に従い、重量熱分析器でサンプル２の融点を測定し、サンプル２は、示差走査熱量分析装置で融点走査を行い、その示差走査後、スペクトルが図４に示され、明らかに、その融点が４９．５５℃である。
【００５１】
実施例３（比較実施例：結晶法）
３０ｇの実施例２で得られたサンプル２を２０倍のひまわり油中に溶解し、６０℃で撹拌して溶解し、その後、５℃まで冷却して結晶させ、濾過し、ノルマルヘキサンで結晶の表面の植物油を洗浄し、且つ減圧乾燥して２５．６ｇの還元型コエンザイムＱ１０（サンプル３）を得、純度が９８．９％である。
【００５２】
実施例１に記載の方法に従い、ＨＰＬＣ法でサンプル３における還元型コエンザイムＱ１０の比例を測定し、ＨＰＬＣ法で測定した結果、得られたサンプル３において還元型コエンザイムＱ１０／酸化型コエンザイムＱ１０の重量比が９９．１／０．９である。
【００５３】
実施例４：安定性実験結果の比較
実施例１、実施例２、実施例３で得られたサンプル１、サンプル２、サンプル３をそれぞれ１８℃で、遮光、窒素条件において二ヶ月保存し、それぞれ一ヶ月、二ヶ月時間内にサンプルにおける還元型コエンザイムＱ１０の保留率を検出する。その結果は表１に示される。
【００５４】
【表１】
2016520037.tif 000005
【００５５】
表１の結果から分かるように、本願の方法で得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末の安定性が最もよく、二ヶ月後、９５．５％に達し、通常の方法で得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末サンプル２の６６．３％、サンプル３の８５．４％より遥かに高い。
【００５６】
実施例５：化合物の薬動態学パラメータ及び相対生物学的利用率を計算する実験
実施例１、実施例２（比較実施例）、実施例３（比較実施例）で得られたサンプル１、サンプル２、サンプル３に対し、それぞれビーグル犬摂食試験を行い、摂食後のビーグル犬の血液における還元型コエンザイムＱ１０の濃度を測定し、基本薬動態学パラメータ及び相対生物学的利用率を計算する。
【００５７】
実験方案は以下のとおりである。
ビーグル犬は４匹、雄雌がそれぞれ半分、体重が９−１２ｋｇであり、上海薬物研究所実験動物センターに提供され、実験動物使用許可証番号がＳＹＸＫ（滬）２０１０〜００４９である。２期間クロスオーバー試験を行い、それぞれサンプル１、２、３を強制経口投与し、強制経口投与用量が２０ｍｇ／ｋｇであり、投与体積が２ｍｌ／ｋｇであり、サンプルをダイズ油で懸濁液に調製して投与し（投与後２０ｍｌの水を補充）、試験の前、通常に飲食し、投与当日の早、肉を含有する飼料を摂食させ、３０ｍｉｎ後、強制経口投与する。両サイクル試験の間隔は一週間である。
【００５８】
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ５．３ソフトウェアで化合物の薬動態学パラメータを計算する。
ピーク到達時間Ｔｍａｘ及びピーク到達濃度Ｃｍａｘは実測値を採用し、薬物濃度−時間曲線下面積ＡＵＣ０−ｔは台形法で算出された値を採用し、ＡＵＣ０−∞は公式、ＡＵＣ０−∞＝ＡＵＣ０−ｔ＋Ｃｔ／ｋｅで計算され、Ｃｔは最後の測定可能時点の濃度であり、ｋｅは消失速度定数であり、片対数プロットで、消失相の濃度点で計算し、血漿消失半減期はｔ１／２＝０．６９３／ｋｅである。相対生物学的利用率はＦ＝（ＡＵＣ０−ｔ、サンプル２、又は３／ＡＵＣ０−ｔ、サンプル１）×１００％である。ビーグル犬に２０ｍｇ／ｋｇサンプルを強制経口投与した後の主要薬動態学パラメータは下記の表２に示される。
【００５９】
【表２】
2016520037.tif 000006
【００６０】
表２から分かるように、本方法で得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末（サンプル１）はビーグル犬での生物学的利用率が他の２種の方式で得られた結晶の生物学的利用率より著しく高い。
【００６１】
実施例１〜５から分かるように、比較実施例の結晶法に比べ、本発明は、還元型コエンザイムＱ１０液体を噴霧装置でスプレー噴霧し、噴霧後、冷気に入れて粒子を成形させる方法で得られた粉末結晶化度が低下し、安定性及び生物学的利用率が向上した。
【００６２】
実施例６
６０ｇの酸化型コエンザイムＱ１０に１２０ｍｌのアセトン及び８０ｍＬの脱イオン水を加え、撹拌して５０℃まで加熱し、６０ｇのアスコルビン酸ナトリウムを加えた後、１．０ｈｒ撹拌して反応させる。反応完了後、１５０ｍＬのノルマルヘキサンを加えて静置し、下層の水層を除去し、上層のノルマルヘキサン層を２５％塩水で洗浄する。ノルマルヘキサンを回収した後ペーストを得、このペーストを５０℃まで加熱し、１ｇの天然ビタミンＥ、０．５ｇのアスコルビン酸を酸化防止剤として加え、噴霧装置に入れて噴霧し、圧力式噴霧装置で噴霧し、噴霧後、霧滴を０℃の窒素流中に入れて直ちに定型し、最後に類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末を５９．５ｇ得る。純度が９６．３％、粉末の平均粒径が２１０μｍである。
【００６３】
実施例１に記載の方法に従い、ＨＰＬＣ法で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶における還元型コエンザイムＱ１０の比例を測定し、ＨＰＬＣ法で測定した結果、還元型コエンザイムＱ１０／酸化型コエンザイムＱ１０の比例が９９．４／０．６である。
【００６４】
上記還元型コエンザイムＱ１０粉末をサフラワー油、ミツロウ、レシチン等と混合した後、軟カプセル剤を製造し、そのうち、還元型コエンザイムＱ１０は、軟カプセル剤１粒あたりの含有量が５０ｍｇであり、栄養補助剤として服用することができる。
【００６５】
実施例７
３０ｇの実施例６で得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末を取り、１ｇのビタミンＡを酸化防止剤として加え、１００ｇのゼラチン、１００ｇのサッカロース、３５ｇのデキストリン、２５ｇのグリセリン溶液と混合して噴霧装置に入れて噴霧し、圧力式噴霧装置で噴霧し、スプレー噴霧後、霧滴を１９０℃の熱風中に入れて乾燥して直ちに定型し、最後に類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末を２８４．５ｇ得る。そのうち、還元型コエンザイムＱ１０の含有量が１０．６％である。
【００６６】
実施例１に記載の方法に従い、ＨＰＬＣ法で還元型コエンザイムＱ１０粉末又は結晶における還元型コエンザイムＱ１０の比例を測定し、ＨＰＬＣ法で測定した結果、還元型コエンザイムＱ１０／酸化型コエンザイムＱ１０の比例が９６．５／３．５である。
【００６７】
実施例８
７２ｇの酸化型コエンザイムＱ１０中に１５０ｍＬの脱イオン水を加え、撹拌して５０℃まで加熱し、３５ｇのリン酸性化生物還元酵素を加えて４．０ｈｒ撹拌する。静置し、１２０ｍＬのノルマルヘキサンを加え、下層の水層を除去し、上層のノルマルヘキサン層を２５％塩水で洗浄する。ノルマルヘキサンを回収した後、ペーストを得、このペーストを５０℃まで加熱し、ＢＨＴ０．５ｇ、ステアリン酸０．５ｇ、オレイン酸３．０ｇ、リノール酸１．０ｇを加え、圧力式噴霧装置で噴霧し、噴霧後、霧滴を１０℃の脱酸素空気流に入れて直ちに定型し、最後に類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末を６０．５ｇ得、純度が４５．９％、粉末の平均粒径が１９２μｍである。
【００６８】
実施例９
５５ｇの酸化型コエンザイムＱ１０中に１５０ｍＬのエタノールを加え、撹拌して５０℃まで加熱し、５０ｇのカルボジチオ酸ナトリウムを加えた後１．０ｈｒ撹拌して反応させる。反応完了後、静置し、１２０ｍＬのノルマルヘキサン、１００ｍＬの脱イオン水を加え、下層の水層を除去し、上層のノルマルヘキサン層を２５％塩水で洗浄する。ノルマルヘキサンを回収した後、ペーストを得、このペーストを５０℃まで加熱し、酸化防止剤としてのブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）０．８ｇ及びビタミンＡ０．８ｇ、ポリグリセリン脂肪酸エステル３．０ｇを加え、圧力式噴霧装置で噴霧し、噴霧後、霧滴を３０℃の窒素流に入れて直ちに定型し、最後に類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末を５３．５ｇ得、純度が９０．９％、粉末の平均粒径が２０３μｍである。
【００６９】
実施例１０
４０ｇの実施例９で得られた還元型コエンザイムＱ１０粉末を取り、２５ｇのカゼイン酸ナトリウム、１８ｇの変性殿粉、３７ｇのシクロデキストリン、１６ｇのアラビアゴム、１０ｇのダイズタンパク質溶液と混合して噴霧装置に入れて噴霧し、遠心式噴霧装置で噴霧し、スプレー噴霧後、霧滴を１８０℃の熱風に入れて乾燥して直ちに定型し、最後に類白色還元型コエンザイムＱ１０粉末を１４２．５ｇ得る。そのうち、還元型コエンザイムＱ１０の含有量が２０．８％である。
【００７０】
本発明は、実施例にて例を挙げて説明したが、しかしながら、本発明はここで説明した特殊な実施例及び実施方案に限定されないことはいうまでもない。これらの特殊な実施例及び実施形態は本発明を実施する当業者を支援するためのものである。いずれかの当業者は本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、改良及び変更を容易に行うことができ、従い、本発明は、本発明の特許請求の範囲の内容及び範囲のみに限定され、特許請求の範囲に限定された本発明の精神及び範囲内に含まれる代替方案及び同等方案を含む。
【図１】
2016520037.tif 000007
【図２】
2016520037.tif 000008
【図３】
2016520037.tif 000009
【図４】
2016520037.tif 000010
【国際調査報告】
2016520037.tif 000011
2016520037.tif 000012
2016520037.tif 000013
2016520037.tif 000014
2016520037.tif 000015