(57)【要約】  本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法に関し、当該方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程を含むまた、本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法にも関し、当該方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を控える工程を含む。また、本発明は、ＥＬＩＳＡを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供される、方法にも関する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程；
を含む、方法。
【請求項２】
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記所定の閾値が、約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＥＲ阻害剤が、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を控える工程；
を含む、方法。
【請求項１４】
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ  ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記控えられる治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択されるＨＥＲ阻害剤を用いてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を行うためのキット。
【請求項２５】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
当該決定された値を記録する工程；
を含む、方法。
【請求項２６】
更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記試料が、全血又は血清試料を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象が、ＥＧＦＲ増感変異を担持していない、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
ＥＬＩＳＡを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが：
（ａ）循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程；
（ｂ）新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程（ａ）を繰りかえす工程；及び
（ｃ）新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程；
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる、方法。
【請求項３７】
更に固相表面に停止溶液を添加することを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記洗浄緩衝剤のｐＨが７．２〜７．４である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に２０回以上循環させられる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く、請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン（ＨＲＧ）を特異的に認識する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４９】
前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトＨＲＧ抗体である、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトＨＲＧ抗体である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で８時間以上接触させられる、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記ブロッキング剤を含有する溶液が、ｐＨ７．２〜７．４のリン酸緩衝生理食塩水中の１％ウシ血清アルブミンを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項５５】
前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で１時間以上接触させられる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２時間接触させられる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５７】
前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２時間接触させられる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５８】
前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２０分間接触させられる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５９】
前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２０分間接触させられる、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
前記固相表面が１つ以上のウェルを有するマイクロプレートである、請求項３６に記載の方法。
【請求項６１】
循環工程（ａ）が、濯ぎ工程（ｃ）を実施する前に２回実施される、請求項４３に記載の方法。
【請求項６２】
前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである、請求項４０に記載の方法。
【請求項６３】
無作為化された臨床データに基づいてＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；
を含む、方法。
【請求項６５】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍の治療を選択する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を受ける工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程；
を含む方法。
【請求項６６】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
任意で当該決定された値を記録する工程；
を含む、方法。
【請求項６７】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を注文する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程；
を含む、方法。
【請求項６８】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を注文する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；
を含む、方法。
【請求項６９】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程
を含む、方法。
【請求項７０】
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記所定の閾値が、約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
更に、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７８】
前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＨＥＲ阻害剤が、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣを担持すると診断されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；
を含む、方法。
【請求項８２】
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下である場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８６】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
更に、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８８】
前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８９】
前記差し控えられる治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項９０】
更に、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択されるＨＥＲ阻害剤で治療する工程を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項９１】
更に、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トシスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤で治療する工程を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項９２】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、患者への抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から採取された生体試料を取得する工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
任意で当該決定された値を記録する工程；
を含む、方法。
【請求項９３】
更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ  ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９７】
更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９８】
前記試料が、全血又は血清試料を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９９】
前記対象が、ＥＧＦＲ増感変異を担持していない、請求項９２に記載の方法。
【請求項１００】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、請求項９２に記載の方法。
【請求項１０１】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項１０３】
無作為化された臨床データに基づいてＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、請求項６９〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
ＨＲＧ遺伝子発現が、規制当局に認可された試験を使用して評価される、請求項１〜１０３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記規制当局に認可された試験が、ＦＤＡ、ＥＭＡ又はＰＭＤＡに認可された試験である、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ及び約１０００００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０７】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ及び約１０００００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１０８】
前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ及び約１０００００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項１０９】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項６に記載の方法。
【請求項１１０】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項１８に記載の方法。
【請求項１１１】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項３４に記載の方法。
【請求項１１２】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項７４に記載の方法。
【請求項１１３】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項８６に記載の方法。
【請求項１１４】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項１０１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分子生物学、癌化学、臨床診断、臨床治療の分野に属し、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を実施する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの制癌剤は、ある患者には効果があるが、他の患者にはない。これは、腫瘍間の遺伝的バリエーションに起因し、同じ患者内の腫瘍間でさえ観察されうる。患者の可変的な応答は、標的化療法剤に関して特に顕著である。それ故に、どの患者がどの薬物から恩恵を受けるか決定するための適切な検査なしに、標的化療法の完全な潜在力を実現することができない。米国国立衛生研究所（ＮＩＨ：Ｎａｔｉｏｎａｌ    Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ    ｏｆ    Ｈｅａｌｔｈ）に従って、用語「生体マーカー」は、「正常な生物学的過程または病原過程、あるいは治療介入に対する薬理学的応答の指標として客観的に測定されかつ評価される特性」と定義される。（Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，  ２００１，  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ６９：８９−９５）
【０００３】
生体マーカーの発見に基づく改善された診断法の開発は、所定の薬物に対して臨床応答を示す可能性が最も高い患者を前もって特定することによって、新しい薬物の開発を加速する可能性を持つ。これは、臨床試験の規模、期間およびコストを著しく低減することになろう。ゲノミクス、プロテオミクスおよび分子イメージングのような技術は、現在、特異的な遺伝子変異、特定遺伝子の発現レベル、および他の分子生体マーカーの迅速、高感度で信頼性の高い検出を可能にする。腫瘍の分子キャラクタリゼーションのための様々な技術が利用可能であるにも関わらず、癌生体マーカーがほとんど発見されていないので、癌生体マーカーの臨床的使用は、概ね実現されないままである。例えば、最近の総説では、以下のことを述べている。「  癌の診断および処置を改善するために、生体マーカーの開発促進とそれらの使用に対する重大なニーズが存在する。（Ｃｈｏ，  ２００７，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ６：２５）」癌生体マーカーに関する別の最近の総説は、次のコメントを含んでいる。「課題は、癌生体マーカーを発見することである。分子的に標的化された薬剤を用いて、いくつかの腫瘍タイプ−例えば、慢性骨髄性白血病、消化管間質腫瘍、肺癌および多形神経膠芽腫−の分子的に定義されたサブセットを標的にすることに臨床的に成功したことがあったとはいえ、より広い状況においてかかる成功を適用する能力は、患者における標的化薬剤を評価するための効率的な戦略がないので大幅に制限される。問題は、主に、これらの興味深い新薬を評価するための臨床試験用に、分子的に定義された癌を持つ患者を選択することができないことにある。解決法は、特定の薬剤から恩恵を受ける可能性が最も高い患者を信頼性良く同定する生体マーカーを必要とする。（Ｓａｗｙｅｒｓ，  ２００８，  Ｎａｔｕｒｅ  ４５２：５４８−５５２，  ａｔ  ５４８）」前述のようなコメントは、臨床的に有用な生体マーカーの発見、およびかかる生体マーカーに基づく診断法の必要性に関する認識を示す。
【０００４】
癌生体マーカーには、（１）予後生体マーカー、（２）予測生体マーカー、および（３）薬力学生体マーカーの３つの異なったタイプがある。予後生体マーカーは、癌（例えば、固形腫瘍）を侵襲性、すなわち、成長および／または転移の速度、ならびに処置に対する不応性に従って、分類するために用いられる。これは、「結果が良好な」腫瘍を「結果が劣る」腫瘍から識別すると呼ばれることがある。予測生体マーカーは、特定の患者が特定の薬物を用いた処置から恩恵を受ける確率を評価するために用いられる。例えば、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２またはＮＥＵ）遺伝子が増幅される乳癌を患う患者は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を用いた処置から恩恵を受ける可能性が高いが、一方でＥＲＢＢ２遺伝子増幅がない患者は、トラスツズマブを用いた処置から恩恵を受ける可能性が低い。薬力学生体マーカーは、患者が薬物を服用している間のその分子標的に対する薬物の効果（単数または複数）の指標である。従って、薬力学生体マーカーは、新薬の臨床開発の早期段階の間に、しばしば投薬レベルおよび投与回数を指導するために用いられる。癌生体マーカーの議論については、例えば、Ｓａｗｙｅｒｓ，  ２００８，  Ｎａｔｕｒｅ  ４５２：５４８−５５２を参照のこと。
【０００５】
ＥＧＦＲもしくはＨＥＲ２によって駆動される腫瘍はしばしば、ＥＧＦＲもしくはＨＥＲ２の阻害剤による治療に応答するが、これら腫瘍は、これら阻害剤に対する耐性を常に発生させる。抗ＥＧＦＲもしくは抗ＨＥＲ２処置に対する獲得耐性に関する少なくとも１つの機構は、ＨＥＲ３（ＥＲＢＢ３としても公知）シグナル伝達の活性化である。例えばＥｎｇｅｌｍａｎ    ｅｔ    ａｌ．，    ２００６，    Ｃｌｉｎ．    Ｃａｎｃｅｒ    Ｒｅｓ．    １２：４３７２；Ｒｉｔｔｅｒ    ｅｔ    ａｌ．，    ２００７，    Ｃｌｉｎ．    Ｃａｎｃｅｒ    Ｒｅｓ．    １３：４９０９；Ｓｅｒｇｉｎａ    ｅｔ    ａｌ．，    ２００７，    Ｎａｔｕｒｅ    ４４５：４３７を参照のこと。ＨＥＲ３は、薬物耐性の発生において重要な役割を果たし、そしてＥＧＦＲおよびＨＥＲ２とのそのヘテロダイマー化を介して、腫瘍の始まりおよび維持に関与する。結論として、ＨＥＲ３は、キナーゼ活性を欠いているので、ＨＥＲ３阻害剤（特に、抗ＨＥＲ３抗体）の開発が重要である。
【０００６】
他の種類の標的化治療と同様に、いくらかの（しかし全てではない）腫瘍は、抗ＨＥＲ３治療に応答する。従って、ＨＥＲ３阻害剤（例えば、抗ＨＥＲ３抗体）での処置に応答する可能性が高い（もしくはその可能性が低い）腫瘍を有する患者を同定するために使用され得る推定生体マーカーに基づいた診断法が、必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法に関し、当該方法は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程を含む。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程、及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程を含む。
【０００９】
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価することを注文する工程、及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程を含む。
【００１０】
本発明の特定の態様において、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される。
【００１１】
幾つかの態様において、前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される。幾つかの態様において、前記所定の閾値が、約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される。
【００１２】
幾つかの態様において、前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する。好ましい態様において、前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している。より好ましい態様において、ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療（全身療法）の前に対象から除去されたものである。
【００１３】
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される。
【００１４】
幾つかの態様において、前記生体試料が全血又は血清試料を含む。
【００１５】
幾つかの態様において、前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される。
【００１６】
幾つかの態様において、前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
【００１７】
例えば、幾つかの態様において、前記ＨＥＲ阻害剤が、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択される。
【００１８】
幾つかの態様において、前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される。しかしながら、他の化学治療剤が適用されても良い。
【００１９】
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法にも関し、当該方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を控える工程；を含む。
【００２０】
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価することを注文する工程、及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を控える工程を含む。
【００２１】
幾つかの態様において、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価される。
【００２２】
幾つかの態様において、前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される。幾つかの態様において、前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される。
【００２３】
幾つかの態様において、前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する。好ましい態様において、前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している。より好ましい態様において、ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療（全身療法）の前に対象から除去されたものである。
【００２４】
幾つかの態様において、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される。
【００２５】
幾つかの態様において、前記生体試料が全血又は血清試料を含む。
【００２６】
幾つかの態様において、前記控えられる治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
【００２７】
幾つかの態様は、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択されるＨＥＲ阻害剤を用いてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む。
【００２８】
幾つかの態様は、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む。
【００２９】
幾つかの態様は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高い又は低いと評価されたヒト対象をクリゾチニブで治療する工程を含む。幾つかの態様において、当該クリゾチニブで治療される対象は、ＡＬＫ遺伝子の再編成又は融合を有している。
【００３０】
本発明は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を行うためのキットにも関する。
【００３１】
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法にも関し、当該方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び任意で当該決定された値を記録する工程；を含む。
【００３２】
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程；当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び任意で当該決定された値を記録する工程を含む。
【００３３】
幾つかの態様は、更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む。幾つかの態様において、前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される。
【００３４】
幾つかの態様は、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと特定する工程を含む。
【００３５】
幾つかの態様は、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと特定する工程を含む。
【００３６】
幾つかの態様は、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む。
【００３７】
幾つかの態様において、前記試料が、全血又は血清試料を含む。
【００３８】
幾つかの態様において、前記対象が、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）増感変異を担持していない。好ましい態様において、前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する。より好ましい態様において、前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している。より好ましい態様において、ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療（全身療法）の前に対象から除去されたものである。
【００３９】
幾つかの態様において、前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
【００４０】
本発明は、無作為化された臨床データに基づいてＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される方法にも関する。
【００４１】
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法にも関する。幾つかの態様において、当該方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程；及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；を含む。
【００４２】
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍の治療を選択する方法にも関する。幾つかの態様において、当該方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を受ける、又は実施する工程；及びタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程；を含む。
【００４３】
本発明は、ＥＬＩＳＡを実施する方法にも関し、当該方法は、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが：
（ａ）循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程；
（ｂ）新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程（ａ）を繰りかえす工程；及び
（ｃ）新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程；
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。
【００４４】
幾つかの態様は、更に固相表面に停止溶液を添加することを含む。
【００４５】
幾つかの態様は、更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む。
【００４６】
幾つかの態様において、前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する。
【００４７】
幾つかの態様において、前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含有する。
【００４８】
好ましい態様において、前記洗浄緩衝剤のｐＨが７．２〜７．４である。
【００４９】
幾つかの態様において、前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む。
【００５０】
幾つかの態様において、前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に２０回以上循環させられる。
【００５１】
幾つかの態様において、前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する。
【００５２】
幾つかの態様において、前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く。
【００５３】
幾つかの態様において、前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される。
【００５４】
幾つかの態様において、前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン（ＨＲＧ）を特異的に認識する。
【００５５】
幾つかの態様において、前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する。
【００５６】
幾つかの態様において、前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトＨＲＧ抗体である。
【００５７】
幾つかの態様において、前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトＨＲＧ抗体である。
【００５８】
幾つかの態様において、前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである。
【００５９】
幾つかの態様において、前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである。
【００６０】
幾つかの態様において、前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で８時間以上接触させられる。
【００６１】
幾つかの態様において、前記ブロッキング剤を含有する溶液が、ｐＨ７．２〜７．４のリン酸緩衝生理食塩水中の１％ウシ血清アルブミンを含む。
【００６２】
幾つかの態様において、前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で１時間以上接触させられる。
【００６３】
幾つかの態様において、前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２時間接触させられる。
【００６４】
幾つかの態様において、前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２時間接触させられる。
【００６５】
幾つかの態様において、前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２０分間接触させられる。
【００６６】
幾つかの態様において、前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２０分間接触させられる。
【００６７】
幾つかの態様において、前記固相表面が１つ以上のウェルを有するマイクロプレートである。
【００６８】
幾つかの態様において、循環工程（ａ）が、濯ぎ工程（ｃ）を実施する前に２回実施される。
【００６９】
幾つかの態様において、前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである。
本発明は以下の（１）〜（９７）を含むが、それらに限定されない。
１．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程；
を含む、方法。
２．局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、項目１に記載の方法。
３．前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目２に記載の方法。
４．前記所定の閾値が、約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目２に記載の方法。
５．前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、項目１に記載の方法。
６．前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目５に記載の方法。
７．前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目１に記載の方法。
８．前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目２に記載の方法。
９．前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
１０．前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目１に記載の方法。
１１．前記ＨＥＲ阻害剤が、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択される、項目１０に記載の方法。
１２．前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、項目１０に記載の方法。
１３．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を控える工程；
を含む、方法。
１４．局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価される、項目１３に記載の方法。
１５．前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目１４に記載の方法。
１６．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ  ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
１７．前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、項目１３に記載の方法。
１８．前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目１７に記載の方法。
１９．前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目１３に記載の方法。
２０．前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目１４に記載の方法。
２１．前記控えられる治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目１３に記載の方法。
２２．トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択されるＨＥＲ阻害剤を用いてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、項目１３に記載の方法。
２３．シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、項目１３に記載の方法。
２４．タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を行うためのキット。
２５．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
当該決定された値を記録する工程；
を含む、方法。
２６．更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、項目２５に記載の方法。
２７．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目２６に記載の方法。
２８．更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、項目２６に記載の方法。
２９．更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、項目２６に記載の方法。
３０．更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、項目２５に記載の方法。
３１．前記試料が、全血又は血清試料を含む、項目２５に記載の方法。
３２．前記対象が、ＥＧＦＲ増感変異を担持していない、項目２５に記載の方法。
３３．前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、項目２５に記載の方法。
３４．前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目３３に記載の方法。
３５．前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目２５に記載の方法。
３６．ＥＬＩＳＡを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが：
（ａ）循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程；
（ｂ）新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程（ａ）を繰りかえす工程；及び
（ｃ）新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程；
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる、方法。
３７．更に固相表面に停止溶液を添加することを含む、項目３６に記載の方法。
３８．更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む、項目３７に記載の方法。
３９．前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する、項目３６に記載の方法。
４０．前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含有する、項目３９に記載の方法。
４１．前記洗浄緩衝剤のｐＨが７．２〜７．４である、項目４０に記載の方法。
４２．前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む、項目３６に記載の方法。
４３．前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に２０回以上循環させられる、項目４２に記載の方法。
４４．前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する、項目３６に記載の方法。
４５．前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く、項目３６に記載の方法。
４６．前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される、項目４２に記載の方法。
４７．前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン（ＨＲＧ）を特異的に認識する、項目３６に記載の方法。
４８．前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する、項目３６に記載の方法。
４９．前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトＨＲＧ抗体である、項目４７に記載の方法。
５０．前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトＨＲＧ抗体である、項目４９に記載の方法。
５１．前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである、項目５０に記載の方法。
５２．前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである、項目５１に記載の方法。
５３．前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で８時間以上接触させられる、項目４９に記載の方法。
５４．前記ブロッキング剤を含有する溶液が、ｐＨ７．２〜７．４のリン酸緩衝生理食塩水中の１％ウシ血清アルブミンを含む、項目３６に記載の方法。
５５．前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で１時間以上接触させられる、項目５４に記載の方法。
５６．前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２時間接触させられる、項目４８に記載の方法。
５７．前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２時間接触させられる、項目５０に記載の方法。
５８．前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２０分間接触させられる、項目５１に記載の方法。
５９．前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で約２０分間接触させられる、項目５２に記載の方法。
６０．前記固相表面が１つ以上のウェルを有するマイクロプレートである、項目３６に記載の方法。
６１．循環工程（ａ）が、濯ぎ工程（ｃ）を実施する前に２回実施される、項目４３に記載の方法。
６２．前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである、項目４０に記載の方法。
６３．無作為化された臨床データに基づいてＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、項目１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
６４．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；
を含む、方法。
６５．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍の治療を選択する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を受ける工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程；
を含む方法。
６６．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
任意で当該決定された値を記録する工程；
を含む、方法。
６７．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を注文する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程；
を含む、方法。
６８．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を注文する工程；及び
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；
を含む、方法。
６９．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与する工程
を含む、方法。
７０．局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、項目６９に記載の方法。
７１．前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目７０に記載の方法。
７２．前記所定の閾値が、約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目７０に記載の方法。
７３．前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、項目６９に記載の方法。
７４．前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目７３に記載の方法。
７５．更に、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目６９に記載の方法。
７６．前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目７０に記載の方法。
７７．前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、項目６９に記載の方法。
７８．前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目６９に記載の方法。
７９．前記ＨＥＲ阻害剤が、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択される、項目７８に記載の方法。
８０．前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、項目７８に記載の方法。
８１．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって：
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣを担持すると診断されたヒト対象に、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程；
を含む、方法。
８２．局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下である場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価される、項目８１に記載の方法。
８３．前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目８２に記載の方法。
８４．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目８２に記載の方法。
８５．前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、項目８１に記載の方法。
８６．前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目８５に記載の方法。
８７．更に、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目８１に記載の方法。
８８．前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目８２に記載の方法。
８９．前記差し控えられる治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目８１に記載の方法。
９０．更に、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択されるＨＥＲ阻害剤で治療する工程を含む、項目８１に記載の方法。
９１．更に、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トシスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤で治療する工程を含む、項目８１に記載の方法。
９２．局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、患者への抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から採取された生体試料を取得する工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
任意で当該決定された値を記録する工程；
を含む、方法。
９３．更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、項目９２に記載の方法。
９４．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ  ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目９３に記載の方法。
９５．更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、項目９３に記載の方法。
９６．更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、項目９３に記載の方法。
９７．更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、項目９２に記載の方法。
９８．前記試料が、全血又は血清試料を含む、項目９２に記載の方法。
９９．前記対象が、ＥＧＦＲ増感変異を担持していない、項目９２に記載の方法。
１００．前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、項目９２に記載の方法。
１０１．前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目１００に記載の方法。
１０２．前記治療が、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目９２に記載の方法。
１０３．無作為化された臨床データに基づいてＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、項目６９〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
１０４．ＨＲＧ遺伝子発現が、規制当局に認可された試験を使用して評価される、項目１〜１０３のいずれか１項に記載の方法。
１０５．前記規制当局に認可された試験が、ＦＤＡ  （Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）、ＥＭＡ  （Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ａｇｅｎｃｙ，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｕｎｉｏｎ）、又はＰＭＤＡ  （Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ，  Ｊａｐａｎ）に認可された試験である、項目１０４に記載の方法。
１０６．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ及び約１０００００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
１０７．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ及び約１０００００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目２６に記載の方法。
１０８．前記所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ及び約１０００００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、項目２に記載の方法。
１０９．ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目６に記載の方法。
１１０．ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目１８に記載の方法。
１１１．ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目３４に記載の方法。
１１２．ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目７４に記載の方法。
１１３．ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目８６に記載の方法。
１１４．ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目１０１に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、実施例２における全試験対象の無増悪生存率（高及び低用量パフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７１】
【図２】図２は、実施例２における全試験対象の全生存率（高及び低用量パフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７２】
【図３】図３は、タンパク質レベルで高ＨＲＧ遺伝子発現を示すと評価された実施例３の試験対象における無増悪生存率（高及び低用量パフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７３】
【図４】図４は、タンパク質レベルで高ＨＲＧ遺伝子発現を示すと評価された実施例３の試験対象における無増悪生存率（プールされたパフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７４】
【図５】図５は、タンパク質レベルで高ＨＲＧ遺伝子発現を示すと評価された実施例４の試験対象における全生存率（高及び低用量パフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７５】
【図６】図６は、タンパク質レベルで高ＨＲＧ遺伝子発現を示すと評価された実施例４の試験対象における全生存率（プールされたパフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７６】
【図７】図７は、タンパク質レベルで低ＨＲＧ遺伝子発現を示すと評価された実施例５の試験対象における無増悪生存率（プールされたパフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７７】
【図８】図８は、タンパク質レベルで低ＨＲＧ遺伝子発現を示すと評価された実施例５の試験対象における全生存率（プールされたパフリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルリトニブ）を示す。
【００７８】
【図９】図９は、ウエスタンブロッティングによりホスホ−ＨＥＲ３及びホスホ−ＡＫＴレベルの減少を測定することによるインビトロで決定された効率を示す。
【００７９】
【図１０】図１０は、Ｕ３−１２８７がリガンド依存的な基底ＨＥＲ３リン酸化をブロックし得ることを示すウエスタンブロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
定義
本願において、他に言及の無い限り、数値について言及するとき、「約」は、示された数値の±１０％を意味する。
【００８１】
本願において、「抗体」は、全形（ｉｎｔａｃｔ）抗体、モノクローナル又はポリクローナル抗体を意味する。抗体は、組換えＤＮＡ技術を使用して作製されてもよい。抗体は、マウス、ラット、ブタ又は他の任意の哺乳類を起源としてもよい。抗体は、例えばヒトＩｇ遺伝子を発現出来るトランスジェニック非ヒト哺乳類から取得され得るヒト抗体であってもよい。抗体は、例えば１つ以上の非ヒト起源の相補性決定領域を含み得るヒト化抗体であってもよい。また、抗体は、ヒト抗体の表面残基及び／又はヒト抗体のフレームワーク領域を含んでいても良い。また、抗体は、例えば、非ヒト抗体の可変ドメインとヒト抗体の定常ドメインを含み得るキメラ抗体であってもよい。
【００８２】
本願において、「癌」と「腫瘍」は、相互置換可能に用いられる。
【００８３】
本願において、「治療」は、対象又は患者に対する医学的ケア、又は一定の用量の医薬の投与を意味する。幾つかの態様において、「治療」は、抗ＨＥＲ３抗体等のＨＥＲ阻害剤を含有し得る「医薬組成物」、「医薬」又は「薬剤」であり得る。幾つかの態様において、「治療」は、「化学治療」、「免疫治療」、又は「放射線治療」であってもよい。
【００８４】
本願において、「ＥＧＦＲ変異」は、ＥＧＦＲ遺伝子における任意の変異を意味する。「ＥＧＦＲ変異」は、例えば、ＥＧＦＲエキソン１９欠失及び／又はエキソン２１（Ｌ８５８Ｒ）置換変異である。しかしながら、「ＥＧＦＲ変異」は、それらに限定されない。
【００８５】
本願において、「ＨＥＲ」は、ＨＥＲ１（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４からなる群から選択される。
【００８６】
本願において、「ＨＥＲ３」は、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ  Ｎｏ．  ２０６５で同定された遺伝子にコードされたヒトタンパク質、及びそのアレル変異体を意味する。
【００８７】
本願において、「ＨＥＲ阻害剤」は、ＨＥＲの少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去する分子（低分子又は巨大分子、例えば抗体又はその抗原結合断片）を意味する。好ましくは、ＨＥＲ阻害剤はＨＥＲに結合する。しかしながら、「ＨＥＲ阻害剤」は、ＨＥＲの少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去するものである限り、ＨＥＲに直接結合しないものであってもよい。ＨＥＲ１阻害剤（ＥＧＦＲ阻害剤）の例は、ラパチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、パニツムマブ、及びＫＤ−０１９を含む。ＨＥＲ２阻害剤の例は、トラツズマブ、ペルツズマブ、及びトラツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）を含む。
【００８８】
本願において、「ＨＥＲ３阻害剤」は、ＨＥＲ３の少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去する分子（低分子又は巨大分子、例えば抗体又はその抗原結合断片）を意味する。好ましくは、ＨＥＲ３阻害剤はＨＥＲ３に結合する。しかしながら、「ＨＥＲ３阻害剤」は、ＨＥＲの少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去するものである限り、ＨＥＲ３に直接結合しないものであってもよい。「生物活性」に対する効果は、直接又は間接的で有り得、例えば下流シグナル伝達及び他のＨＥＲファミリー分子、例えばＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ４とのヘテロダイマー化である。例えば、ＨＥＲ３阻害剤は、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３、ＨＥＲ４／ＨＥＲ３ヘテロダイマー化の阻害剤、又はこれらのヘテロダイマー化のいずれかに由来するシグナル伝達の阻害剤であり得る。ここで、「ＨＥＲ３阻害剤」は、例えばペルツズマブ、ニモツズマブ、ＭＭ−１１１及びセツキシマブを含む。更に、理論に拘束されず、ＨＥＲ３はＭＥＴ（ｃ−ＭＥＴ）等の非ＨＥＲ受容体とヘテロダイマーを形成する。従って、幾つかの態様において、「ＨＥＲ３阻害剤」は、例えばオナルツズマブ及び／又はチバンチニブを含む。
【００８９】
本願において、「ＨＲＧ」（ニューレグリン−１、ＮＲＧ１、ヘレグリン、及びＨＲＧ１としても知られる）は、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ  Ｎｏ．  ３０８４により同定された遺伝子にコードされたヒトタンパク質、及びそのアリル変異体を意味する。
【００９０】
本願において、「非小細胞肺癌」及び「非小細胞肺癌腫」は置換可能に使用される。
【００９１】
本願において、「所定の閾値（値）」は、分類者が偽陰性及び偽陽性の間（のコスト）の望ましいバランスをもたらす閾値の数値を意味する。
【００９２】
好ましくは、「所定の閾値（値）」は、全集団を２つ（以上）のサブ集団に区分して、閾値以上の（ＨＲＧ）遺伝子発現を示す患者（本願において「高ＨＲＧ」サブ集団）に対して、閾値を下回る（ＨＲＧ）遺伝子発現を示す患者（本願において「低ＨＲＧ」サブ集団）と比較して、臨床的利益をもたらし得る、潜在的な閾値を意味する。
【００９３】
閾値がｄＣｔである場合、好ましくは、「所定の閾値（値）」は、全集団を２つ（以上）のサブ集団に区分して、閾値以上の数値を示す患者（本願において「高ＨＲＧ」サブ集団）に対して、閾値を下回る数値を示す患者（本願において「低ＨＲＧ」サブ集団）と比較して、臨床的利益をもたらし得る、潜在的な閾値を意味する。
【００９４】
幾つかの態様において、「所定の閾値」は、臨床的研究及びその結果の解析（「臨床データ」と総称する）に基づき、統計的（及び臨床的）に決定され、調えられ、調整され、及び／又は確認され、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化する。
【００９５】
幾つかの態様において、「所定の閾値」は、臨床的データ（及び任意で非臨床的データ）に基づき、更により好ましくは無作為化された臨床的データ（及び任意で非臨床的データ）に基づき、統計的（及び臨床的）に決定され、調えられ、調整され、及び／又は確認され、治療から利益を受けた全ての患者は高ＨＲＧサブ集団に含まれることが確認される。
【００９６】
より好ましくは、「所定の閾値」は、薬理的特性（即ち作用機序）、前臨床又は非臨床研究データ、臨床研究データ、及び外部企業等から購入した商業的試料のデータに基づき、決定され、調えられ、調整され、及び／又は確認され、「低ＨＲＧ」サブ集団と比較して、「高ＨＲＧ」サブ集団からの臨床的利益を最大化する。Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  （即ち最大尤度アプローチ），  Ｊｉａｎｇ  Ｗ，  Ｆｒｅｉｄｌｉｎ  Ｂ，  Ｓｉｍｏｎ  Ｒ．  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ−Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｄｅｓｉｇｎ：  Ａ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｗｉｔｈ  Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ−Ｄｅｆｍｅｄ  Ｓｕｂｓｅｔ  Ｅｆｆｅｃｔ，  Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．  ２００７；９９（１３）：  １０３６−４３等の幾つかの統計的方法が、全ての利用可能な前／非臨床研究、臨床研究、商業試料等を使用した閾値を決定し、調え、調整し、及び／又は確認するのに使用される（治療から利益を受けた全ての患者は高ＨＲＧサブ集団に含まれることを確認するため）。幾つかの態様において、「所定の閾値」は、高ＨＲＧサブ集団が、より大きく、又は治療空の利益を駆動する全ての患者を含み得るように決定される。
【００９７】
本願において、「対象」、「ヒト対象」及び「患者」は、置換可能に用いられる。
【００９８】
本願において、「癌に罹患した対象」及び「癌を担持した対象」は、置換可能に用いられる。
【００９９】
幾つかの好ましい態様において、癌に罹患した患者の群が、更なる医薬を用いて、又は用いずに、ＨＥＲ３阻害剤又は偽薬を投与して治療され、当該群が、所定の閾値を用いて「高ＨＲＧ」サブ集団及び「低ＨＲＧ」サブ集団に分けられる場合、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも良好な臨床的（有意な）利益を示し、一方、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「低ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも僅かに良好な、又はより良好ではない、臨床的（有意な）利益を示す。より好ましい態様において、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好な臨床的（有意な）利益を示し、一方、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「低ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好ではない、臨床的（有意な）利益を示す。
【０１００】
他の好ましい態様において、癌に罹患した患者の群が、所定の閾値を用いて「高ＨＲＧ」サブ集団及び「低ＨＲＧ」サブ集団に分けられ、そして各群が更なる医薬を用いて、又は用いずに、ＨＥＲ３阻害剤又は偽薬を投与して治療される場合、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも良好な臨床的（有意な）利益を示し、一方、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「低ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも僅かに良好な、又はより良好ではない、臨床的（有意な）利益を示す。より好ましい態様において、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好な臨床的（有意な）利益を示し、一方、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「低ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好ではない、臨床的（有意な）利益を示す。
【０１０１】
他の態様において、「所定の閾値」は、例えばＨＲＧレベルが測定可能な又は検出可能な癌に罹患した患者の群における、前／非臨床研究、臨床研究及び／又は商業試料において測定されるＨＲＧのレベルの中央値であり得る。他の好ましい態様において、癌、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）等に罹患した患者の群が他の医薬を用いて又は用いず、ＨＥＲ３阻害剤又は偽薬が投与されて治療され、当該群が、所定の閾値として患者のＨＲＧレベルの中央値を用いて「高ＨＲＧ」サブ集団及び「低ＨＲＧ」サブ集団に分けられる場合、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも良好な臨床的（有意な）利益を示し、一方、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「低ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも僅かに良好な、又はより良好ではない、臨床的（有意な）利益を示す。より好ましい態様において、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好な臨床的（有意な）利益を示し、一方、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「低ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好ではない、臨床的（有意な）利益を示す。幾つかの態様において、前記所定の閾値は、癌に罹患した患者の群のＨＲＧレベルの中央値であり、当該閾値は、（治療から利益を受ける全患者が高ＨＲＧサブ集団に含まれるように）調えられ、又は調整され得る。
【０１０２】
他の好ましい態様において、癌に罹患した患者の群が所定の閾値を用いて「高ＨＲＧ」サブ集団及び「低ＨＲＧ」サブ集団に分けられ、「高ＨＲＧ」サブ集団が、他の更なる医薬を用いて又は用いず、ＨＥＲ３阻害剤又は偽薬が投与されて治療される場合、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも良好な臨床的（有意な）利益を示す。より好ましい態様において、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、「高ＨＲＧ」サブ集団において、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好な臨床的（有意な）利益を示す。
【０１０３】
他の好ましい態様において、癌に罹患した「高ＨＲＧ」の患者が所定の閾値を使用して同定され、当該患者が、他の更なる医薬を用いて又は用いず、ＨＥＲ３阻害剤又は偽薬が投与されて治療される場合、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、対象（例えば偽薬）よりも良好な臨床的（有意な）利益を示す。より好ましい態様において、投与されるＨＥＲ３阻害剤の平均の抗癌効率は、対象（例えば偽薬）よりも統計的に有意に良好な臨床的（有意な）利益を示す。
【０１０４】
本願において、「更なる医薬」は、ＨＥＲ３阻害剤以外の他の任意の治療分子又は予防分子であって、ＨＥＲ３阻害剤と組み合わせて使用され得るものを意味する。幾つかの態様において、「更なる医薬」は、１つ以上のＨＥＲ阻害剤、化学治療、又は放射線治療である。
【０１０５】
幾つかの態様において、「抗癌効率」の指標は、無増悪生存率（ＰＦＳ）又は全生存率（ＯＳ）であり得るが、それらに限定されない。当該指標は、ＨＥＲ３阻害剤の抗癌効率の任意の代理マーカー（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ  ｍａｒｋｅｒ）であってもよい。
【０１０６】
本願において、「高ＨＲＧ」は、所定の閾値以上のレベルのＨＲＧ遺伝子発現を示す数値である。本願において、「高ＨＲＧ」、「高ＨＲＧ（サブ）集団」及び「高ＨＲＧ患者（又は対象）」は、（所定の）閾値以上のレベルのＨＲＧ遺伝子発現、（所定の）閾値以上のレベルのＨＲＧ遺伝子発現を示す（サブ）集団、及び（所定の）閾値以上のレベルのＨＲＧ遺伝子発現を示す患者（又は対象）をそれぞれ意味する。ＨＲＧ分類は、例えばＲＮＡレベルでのＨＲＧ遺伝子発現に基づいても良い。
【０１０７】
本願において、「低ＨＲＧ」は、所定の閾値以下のレベルのＨＲＧ遺伝子発現を示す数値である。本願において、「低ＨＲＧ」、「低ＨＲＧ（サブ）集団」及び「低ＨＲＧ患者（又は対象）」は、（所定の）閾値以下のレベルのＨＲＧ遺伝子発現、（所定の）閾値以下のレベルのＨＲＧ遺伝子発現を示す（サブ）集団、及び（所定の）閾値以下のレベルのＨＲＧ遺伝子発現を示す患者（又は対象）をそれぞれ意味する。ＨＲＧ分類は、例えばＲＮＡレベルでのＨＲＧ遺伝子発現に基づいても良い。
【０１０８】
本願において、治療に対する「応答」は、治療される腫瘍に関して、当該腫瘍が、（ａ）増殖の遅延、（ｂ）増殖の停止又は（ｃ）退縮を示すことを意味する。
【０１０９】
本願方法は、腫瘍又は癌細胞を担持する、又はそう診断された対象、例えばヒト対象を同定するのに使用され得る。幾つかの態様において、当該対象は、ＨＥＲ３経路によって駆動され得る、又はＨＥＲ３経路に仲介される他の治療に耐性を有し得る、固形又は液性腫瘍を担持する。幾つかの態様において、当該対象は、肺癌、直腸結腸癌、頭部及び頸部癌、乳癌、胃腸癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、内皮癌、唾液腺癌、膵臓癌、結腸癌、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、グリオーマ、メラノーマ、転移性乳癌、上皮癌、食道癌、子宮頸癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌又は非小細胞肺癌を担持する。幾つかの態様において、本願方法は、局所進行性又は転移性腫瘍、例えば局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ（腫瘍）又は局所進行性又は転移性頭部頸部癌を担持する対象を同定するのに使用され得る。幾つかの態様において、本願方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ（腫瘍）を担持し、抗ＨＥＲ３抗体又は低分子量のＨＥＲ３阻害剤を含む治療により利益を受けられる者を同定するのに使用され得る。幾つかの態様において、前記対象は、ステージＩＩＩ、例えばステージＩＩＩｂ、又はステージＩＶの腫瘍を担持している。対象を同定する方法は、例えば、腫瘍又は癌と診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価することを含む。
【０１１０】
幾つかの態様において、本願方法は、所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ（腫瘍）を担持し、抗ＨＥＲ３抗体又は低分子量のＨＥＲ３阻害剤を含む治療（投与）により利益を受けられる者を同定するのに使用され得、但し、ＡＬＫ遺伝子の融合又は再編成を有する対象は、本方法を適用する者から除外される。
【０１１１】
幾つかの態様において、本願方法は、腫瘍又は癌細胞を担持すると同定された対象を治療するのに使用され得る。幾つかの態様において、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ（腫瘍）を担持するヒト対象を同定又は治療する方法は、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価することを含む。幾つかの態様において、前記対象は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦＲ）増感変異を有しない。幾つかの態様において、前記対象は、野生型ＥＧＦＲを有する。幾つかの態様において、前記対象は、ＡＬＫ遺伝子の融合又は性変性を有しない。幾つかの態様において、前記疾患又は腫瘍は、つ以上の過去の全身療法、例えば化学治療に対して進行している。幾つかの態様は、ｍＲＮＡでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に抗ＨＥＲ３抗体を投与することを含む。幾つかの態様において、治療は、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、ＨＥＲ３以外のＨＥＲファミリー受容体を阻害する１つ以上の薬剤との組み合わせを含む。幾つかの態様において、治療は、抗ＨＥＲ３抗体の投与と、非ＨＥＲファミリーチロシンキナーゼ受容体を阻害する１つ以上の薬剤との組み合わせを含む。幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、他の非特異的化学治療と組み合わせて投与される。
【０１１２】
幾つかの好ましい態様において、本願方法が適用され得る患者は、高ヘレグリン、野生型ＥＧＦＲの対象で、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌を有し、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している者である。幾つかの態様において、当該患者は、ＨＥＲ阻害剤感受性である。好ましい態様において、ＨＥＲ遺伝子発現が評価される腫瘍組織その断片は、全身療法の前に対象又は患者から採取されたものである。
【０１１３】
幾つかの好ましい態様において、本願方法が適用される患者は、セツキシマブ、シスプラチン、パニツムマブ、５−フルオルウラシル、放射線治療及び放射線療法（局所進行性のみ）の１つ以上による治療が併用され得る、第一線（ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ）の転移性又は局所進行性の頭部頸部癌を有する患者を含む。
【０１１４】
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、ドカタキセルによる治療が併用され得る、第二線（ｓｅｃｏｎｄ−ｌｉｎｅ）の転移性又は局所進行性のＮＳＣＬＣ又は他の癌を有する患者を含む。
【０１１５】
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、免疫療法が併用され得る、ＮＳＣＬＣ又は他の癌を有する患者を含む。
【０１１６】
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤による治療が併用され得る、第三線（ｔｈｉｒｄ  −ｌｉｎｅ）のＨＥＲ２陽性の（転移性）乳癌を有する患者を含む。
【０１１７】
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、ホルモン療法又はＰＩ３Ｋ経路阻害剤による治療が併用され得る、第三線（ｔｈｉｒｄ  −ｌｉｎｅ）のＨＥＲ２陰性の（転移性）乳癌を有する患者を含む。
【０１１８】
本願発明において、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤及びＡＫＴ阻害剤を含む。
【０１１９】
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、エルロチニブ、ゲフィチニブ及びアフィチニブの１つ以上による治療が併用され得る、第一線（ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ）の転移性ＥＧＦＲ増感変異陽性ＮＳＣＬＣを有する対象を含む。
【０１２０】
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、プラチナベースの化学治療が併用され得る、第一線（ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ）の転移性Ｅ  ＮＳＣＬＣ又は他の癌を有する対象を含む。
【０１２１】
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、セツキシマブ、パニツムマブ及び化学治療の１つ以上の治療が併用され得る、ＲＡＳ野生型直腸結腸癌を有する対象を含む。
【０１２２】
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、トラスズマブ、パクリタキセル、ドカタキセル、Ｔ−ＤＭ１及びペルツズマブの１つ以上の治療が併用され得る、ＨＥＲ２陽性第一線転移性乳癌又は他の癌を有する対象を含む。
【０１２３】
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、ラパチニブ、カペシタビン、トラスズマブ及びパクリタキセルの１つ以上の治療が併用され得る、ＨＥＲ２陽性第二線以降（ｓｅｃｏｎｄ  ｏｒ  ｌａｔｅｒ  ｌｉｎｅ）転移性乳癌又は他の癌を有する対象を含む。
【０１２４】
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、より早期の線の治療に失敗していない。幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、より早期の線の治療に失敗しておらず、当該患者は、「高ＨＲＧ」と分類されている。
【０１２５】
幾つかの態様において、本願方法は、高ＨＲＧ、野生型ＥＧＦＲで、局所進行性又は転移性ＮＥＳＬＣを担持し、ＨＥＲ阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び／又は治療するのに使用される。
【０１２６】
幾つかの態様において、本願方法は、高ＨＲＧ、野生型ＥＧＦＲで、局所進行性又は転移性ＮＥＳＬＣを担持し、化学療法と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び／又は治療するのに使用される。
【０１２７】
幾つかの態様において、本願方法は、高ＨＲＧ、ＥＧＦＲ変異を有する対象、例えば局所進行性又は転移性ＮＥＳＬＣを担持し、ＨＥＲ阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び／又は治療するのに使用される。
【０１２８】
幾つかの態様において、本願方法は、高ＨＲＧ、ＥＧＦＲ変異を有し、局所進行性又は転移性ＮＥＳＬＣを担持し、化学療法と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び／又は治療するのに使用される。
【０１２９】
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高ＨＲＧ」患者であって、免疫療法と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び／又は治療するのに使用される。そのような癌は、ＮＳＣＬＣを含む。
【０１３０】
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高ＨＲＧ」患者であって、ホルモン療法又はＰＩ３Ｋ（ホスホイノシチド３−キナーゼ）経路阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び／又は治療するのに使用される。そのような癌は、乳癌、好ましくはＨＥＲ２陰性乳癌を含む。そのようなＰＩ３Ｋ経路阻害剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤及びｍＴＯＲ（哺乳類のラパマイシン標的）阻害剤を含む。
【０１３１】
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高ＨＲＧ」患者であって、ＰＩ３Ｋ阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び／又は治療するのに使用される。そのような癌は、乳癌、好ましくはＨＥＲ２陰性乳癌を含む。
【０１３２】
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高ＨＲＧ」患者であって、ＡＬＫ阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び／又は治療するのに使用される。そのような癌は、ＮＳＣＬＣを含む。そのようなＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）阻害剤は、クリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ）を含む。
【０１３３】
幾つかの態様において、本願方法は、急性呼吸困難症候群、肺線維症、統合失調症、心疾患、アテローム性動脈硬化及びデュシェーヌ筋ジストロフィーを同定及び／又は治療するのに使用される。
【０１３４】
ＨＥＲ３抗体
治療に適した抗体は特に限定されず、ＨＥＲ３に結合できる任意のタンパク質又はリガンドであり得る。幾つかの態様において、当該抗体は、ＨＥＲ３に結合し得る結合タンパク質又はその断片であり得る。幾つかの好ましい態様において、前記抗体は、ＨＥＲ３の少なくとも一部の生物活性を、阻害する、中和する、妨げる、又は除去することが出来る。
【０１３５】
ＨＥＲ３抗体は、例えば、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６（糖改変された抗ＨＥＲ３モノクローナル抗体）、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はＨＥＲ３に結合できるこれらのいずれかの誘導体又は断片の１つ以上であり得る。
【０１３６】
抗体断片は、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ジアボディー（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９０：６４４４−  ６４４８）、単鎖抗体分子（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ：  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ，  ｅｄｓ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９４），  ２６９−３１５）、ｓｃＦｖ断片、及びＨＥＲ３を阻害し得る他の断片を含む。
【０１３７】
抗体の誘導体又は抗体断片は、例えば、二特異性抗体、多特異性抗体、ｂｉｓｃＦｖ断片、ジアボディー、ナノボディー、抗体薬物コンジュゲート、免疫毒素及び／又は免疫サイトカインを含み得るが、それらに限定されない。
【０１３８】
更なる適切な抗体の例は、例えば、Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ７，７０５，１３０に見いだされ、当該文献は、その全体が参照により援用される。
【０１３９】
本発明において、ＨＥＲ３に結合できる単離された結合タンパク質は、ＨＥＲ３の細胞外部分の１つ以上のエピトープと相互作用する。当該エピトープは、好ましくは、アミノ末端のＬ１ドメイン、２つのシステインリッチドメインのＳ１及びＳ２、又は２つのシステインリッチドメインに挟まれたＬ２ドメイン中に位置する。当該エピトープは、限定されないが、Ｌ１及びＳ１の部分に含まれるエピトープ等の、ドメインの組み合わせの中に位置してもよい。
【０１４０】
生体試料
対象、例えば局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断された対象から採取した生体試料が、タンパク質又は免疫組織化学（ＩＨＣ）用の薄片の供給源として使用され、当該試料中のＨＲＧ遺伝子発現のレベルが決定され得る。当該生体試料は、例えば、血液、例えば全血又は血液由来物、例えばエキソソーム、血清、血漿、組織、細胞及び又は循環系組織細胞を含み得る。幾つかの態様において、当該生体試料は、腫瘍から取り出されても良い。
【０１４１】
生体試料は、静脈穿刺等の公知の手段により、又は公知の腫瘍生検装置や手順を用いて、取得されてもよい。内視鏡生検、切除生検、切開生検、微細針生検、パンチ生検、切削生検及び皮膚生検が、腫瘍試料を取得するために当業者が使用し得る認識される医学的手順の例である。生体試料は、ＨＲＧ遺伝子発現を測定するための十分なタンパク質、又は薄片を提供するのに十分に大きいべきである。
【０１４２】
幾つかの態様において、本願方法は、自家組織試料を提供する、又は自家組織試料を採取することに同意して、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象ヒト対象におけるタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含む。
【０１４３】
前記生体試料は、ＨＲＧ発現又は量の測定を可能とする任意の形態であってもよい。即ち、当該試料は、タンパク質抽出又は薄片調製に充分でなければならない。従って、当該試料は、新鮮で、適切な低温技術を用いて保存され、又は非低温技術を用いて保存され得る。例えば、臨床生検試料を操作する標準的なプロセスは、組織試料をホルマリン中で固定し、それをパラフィン中に包埋する。この形態の試料は、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織として通常知られている。その後の解析のための組織調製の適切な技術は、当業者に周知である。
【０１４４】
ＨＲＧ遺伝子発現
本願において、生体試料中のＨＲＧ遺伝子発現レベルの決定又は測定は、適切な方法を用いて実施される。幾つかのそのような方法は、当該技術分野で周知である。例えば、ＨＲＧ遺伝子発現の決定は、試料中のタンパク質のレベル又は量を測定することによってなされる。
【０１４５】
ＨＲＧは、ＨＲＧ遺伝子の発現に際して多くのアイソフォームの形態で生産される。理論に拘束されず、ＨＲＧのＥＧＦ様ドメインは、ＨＥＲ３への結合にとって必須と考えられている。従って、本願においてＨＲＧ遺伝子発現のレベルを決定する場合、ＨＲＧアッセイは、例えば、好ましくは、全てではないまでも、殆どの存在するＨＲＧアイソフォームを検出するために、少なくともＨＲＧのＥＧＦ様ドメインを検出するように設計される。抗ＨＲＧ抗体がＨＲＧタンパク質を検出するのに使用される場合、当該抗体は、ＥＧＦ様ドメインを認識し得る。幾つかの態様において、しかしながら、ＨＲＧタンパク質を検出するのに使用される抗体は、ＥＧＦ様ドメインを認識しない。
【０１４６】
ＨＲＧ遺伝子発現は、任意の公知の方法によって検出され得る。タンパク質レベルでＨＲＧ遺伝子発現のレベルを測定する適切な検出方法の非限定的な例として、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及びＩＨＣ解析が挙げられる。
【０１４７】
ＥＬＩＳＡ
ＨＲＧについてＥＬＩＳＡを実施するには、例えば検出抗体等の一つ以上のＨＲＧに対する抗体が必要である。解析すべき試料からのＨＲＧタンパク質は、ポリスチレンマイクロタイタープレート等の固相支持体上で不動化され得る。この不動化は、表面への吸着塔の非特異的な結合によるものであってもよい。あるいは、「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡにおいて、不動化は、捕捉抗体による試料中のＨＲＧの結合による、特異的な結合であってもよい。ＨＲＧが不動化された後、検出抗体が添加され、検出抗体は、結合したＨＲＧと複合体を形成し得る。当該検出抗体は、直接又は間接的に、例えば検出抗体を特異的に認識する二次抗体を介して、酵素と連結させられ得る。各工程の間に、ＨＲＧが結合したプレートは、穏和な洗剤溶液で洗浄される。典型的なＥＬＩＳＡプロトコールは、１つ以上のブロッキング工程を含み得て、当該工程は、プレートに対するタンパク質試薬の望ましくない非特異的結合をブロックするために、ウシ血清アルブミン等の非特異的結合タンパク質を使用することを含む。最後の洗浄工程の後、当該プレートは、試料中のＨＲＧの量の指標となる可視的なシグナルを生じる適切な酵素基質を添加することにより、現像される。斯かる基質は、例えば、色素基質又は蛍光基質等であってもよい。ＥＬＩＳＡの手法、試薬及び設備は、当業者に周知であり、市販されている。
【０１４８】
ＥＬＩＳＡを実施する幾つかの態様を下記に示す。記載されている方法は、多くの異なるタンパク質を含有する生体試料（例えば血漿や血清）を含む、様々な種類の試料に対してＥＬＩＳＡを実施する場合に、正しい結果を提供する。一つの側面において、開示されるＥＬＩＳＡ法は、天然及び／又は組換えヒトヘレグリン（ＨＲＧ）を検出するために実施されてもよい。
【０１４９】
本願ＥＬＩＳＡ法は、ＥＬＩＳＡを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが：
（ａ）循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程；
（ｂ）新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程（ａ）を繰りかえす工程；及び
（ｃ）新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程；
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。
【０１５０】
前記洗浄緩衝剤の循環工程は、「ピストン」動作を用いて、迅速かつ反復的に、固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む。当該「ピストン」動作は、関連するピペットチップの中及び外に洗浄緩衝剤を移動させるように、ピペット（例えば排気ピペット、容積式ピペット、又はマルチチャンネルピペット）のプランジャーエンドを反復的にポンプすることによって実施されてもよい。あるいは、トランスファーピペット又はパスツールピペットの球状末端を繰り返し圧迫及び開放して、ピストン動作を実施する。他の洗浄緩衝剤を供給及び除去する同様の方法が採用されてもよい。
【０１５１】
理論に拘束されず、そのようなピストン動作は、非特異的に吸着したタンパク質を洗浄緩衝剤に効率的に暴露し、タンパク質を効果的に除去すると考えられる。洗浄緩衝剤は、固相表面が充分に洗浄されたことを示す泡が観察されるまで、固相表面上及び外に循環される。幾つかの態様において、洗浄緩衝剤は固相表面上及び外に１０〜３０回循環される。幾つかの態様において、洗浄緩衝剤は固相表面上及び外に２０回循環される。幾つかの態様において、洗浄緩衝剤は固相表面上及び外に１０回以上、２０回以上又は３０回以上循環される。
【０１５２】
幾つかの態様において、前記循環工程（ａ）が、濯ぎ工程（ｃ）を実施する前に１又は２、３又は４回実施される。好ましい態様において、前記循環工程（ａ）が、濯ぎ工程（ｃ）を実施する前に２回実施される。幾つかの態様において、前記循環工程（ａ）が、濯ぎ工程（ｃ）を実施する前に２回以上実施される。
【０１５３】
濯ぎ工程は、固相表面への、又はからの洗浄緩衝剤の適用又は除去を含む。濯ぎ工程は、標準的な「充填及び吸引」方法を含んでも良く、従って、固相表面は、洗浄緩衝剤と１回接触し、その後それは即座に吸引によって除去される。あるいは、洗浄緩衝剤は、デカントによって除去されてもよい。洗浄工程は、固相表面上に泡が残らないことを保証するように実施される。従って、幾つかの態様において、濯ぎ工程は、複数の循環又はピストン動作の実施を含まない。固相表面がウェル又は隆起した縁を有する場合、洗浄緩衝剤を除去した後、当該表面を反転させて、乾燥した平らな吸収表面上にブロットされて、洗浄緩衝剤を完全に除去する。
【０１５４】
ＥＬＩＳＡ固相表面
幾つかの態様において、本願ＥＬＩＳＡ法は、１つ以上のウェルを有する細胞培養プレートである固相表面上で実施される。本願ＥＬＩＳＡ法で使用される固相表面の例として、マイクロタイタープレート（マイクロプレート又はマイクロウェルプレートともいう）が挙げられる。適切なプレートは、ポリスチレン、ポリカーボネート又はポリプロピレン製であり得る。特定の態様において、ＥＬＩＳＡは、９６ウェルマイクロプレートを用いて実施される。
【０１５５】
捕捉抗体を含有するＥＬＩＳＡ溶液
本願ＥＬＩＳＡ法は、固相表面に捕捉抗体を含有する溶液を接触させることを含む。捕捉抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて検出すべき解析物である所望の光源を認識するモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。幾つかの態様において、捕捉抗体は、特定のヒトタンパク質又はペプチドに対するマウス抗体である。特定の態様において、捕捉抗体は、マウス抗ヒトＨＲＧ抗体である。
【０１５６】
捕捉抗体を含有する溶液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で再構築された抗体を含有してもよい。幾つかの態様において、当該溶液は、約１．５〜約５．０μｇ／ｍｌの抗体を含有し得る。特定の態様において、当該溶液は、ＰＢＳ中に、約４．０μｇ／ｍｌの抗体を含有し得る。
【０１５７】
幾つかの態様において、固相表面は、捕捉抗体を含有する溶液と、約６５°Ｆ〜８０°Ｆの温度で４時間以上接触させられる。幾つかの態様において、固相表面は、捕捉抗体を含有する溶液と、約７０°Ｆの温度で約８時間接触させられる。特定の態様において、固相表面は、捕捉抗体溶液と接触させられる間、被覆及び／又は密封される。
【０１５８】
ブロッキング剤を含有するＥＬＩＳＡ溶液
固相表面は、ブロッキング剤を含有する溶液を添加してブロックされる。幾つかの態様において、ブロッキング剤溶液は、ｐＨ約７．２〜約７．４のＰＢＳ中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する。幾つかの態様において、ブロッキング剤溶液は、約０．５％未満のプロテアーゼを含有する。
【０１５９】
固相表面は、１時間以上ブロッキング剤とインキュベーションされ得る。幾つかの態様において、固相表面は、約７０°Ｆでブロッキング剤とインキュベーションされ得る。
【０１６０】
解析物を含有すると思われる試料を含有する溶液は、無希釈の生体試料からなるか、又はＰＢＳ等の溶液で希釈された生体試料を含有してもよい。特定の態様において、当該試料溶液は、無希釈の血清又は血漿を含有し、当該血清又は血漿は、固相表面に直接接触させられる。
【０１６１】
解析物は、例えば、タンパク質やペプチド等の抗原を含有してもよい。特定の態様において、当該解析物は、ＨＲＧや、特に可溶性ＨＲＧ等の増殖因子である。
【０１６２】
固相表面は、約７０°Ｆで、約２時間以上、試料溶液とインキュベーションされてもよい。特定の態様において、固相表面は、試料溶液とインキュベーションされている間、被覆及び／又は密封される。
【０１６３】
検出抗体を含有するＥＬＩＳＡ溶液
検出抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて検出される解析物である所望の抗原を認識する抗体である。前記捕捉抗体及び検出抗体はいずれも同一の抗体を認識する。しかしながら、これらの２つの抗体は、抗原の同一の領域又はエピトープを認識しなくてもよい。検出抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。幾つかの態様において、検出抗体は、特定のタンパク質又はペプチドに対するヤギ抗体である。特定の態様において、捕捉抗体は、ヤギ抗ヒトＨＲＧ抗体である。
【０１６４】
検出抗体を含有する溶液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又はＢＳＡ溶液で再構築された抗体を含有してもよい。幾つかの態様において、当該溶液は、ｐＨ７．２〜７．４のＰＢＳ中の１％ＢＳＡ溶液中に、約１００〜２００ｎｇ／ｍｌの抗体を含有してもよい。特定の態様において、当該溶液は、ｐＨ７．２〜７．４のＰＢＳ中の１％ＢＳＡ溶液中に、約１５０ｎｇ／ｍｌの抗体を含有してもよい。幾つかの態様において、検出抗体溶液は、正常ヤギ血清を含有しない。
【０１６５】
検出抗体は、ビオチン等の検出剤とコンジュゲートしている。そのような検出剤は、検出抗体と、アビジン又はストレプトアビジン連結酵素のような酵素／基質検出システムとの結合を可能とする。特定の態様において、検出抗体は、ビオチン化抗ヒトＨＲＧ抗体である。
【０１６６】
幾つかの態様において、固相表面は、約７０°Ｆの温度で１．５、２又は３時間以上、検出抗体溶液とインキュベーションされる。幾つかの態様において、固相表面は、検出抗体溶液とインキュベーションされている間、被覆及び／又は密封される。
【０１６７】
酵素コンジュゲートを含有するＥＬＩＳＡ溶液
本願ＥＬＩＳＡ法は、固相表面に、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）やホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）等のレポーター酵素と結合した結合剤を含有する酵素コンジュゲートを接触させる工程を含む。結合剤は、検出抗体とコンジュゲートした検出剤と結合する。ストレプトアビジンは、ビオチン化抗体と結合する例示的結合剤である。レポーター酵素は、無色の基質を検出可能な有色の産物に変換する。例示的な酵素はホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で、過酸化水素／テトラメチルベンジジン基質混合物を検出可能な色素に変換する。幾つかの態様において、ＥＬＩＳＡに採用される酵素コンジュゲートは、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）である。
【０１６８】
幾つかの態様において、酵素コンジュゲート溶液は、ｐＨ７．２〜７．４のＰＢＳ中の１％ＢＳＡの溶液中に希釈された酵素コンジュゲートを含有する。幾つかの態様において、固相表面は、約７０°Ｆで、直接光を遮り、約２０分間酵素コンジュゲートとインキュベーションされてもよい。固相表面は、インキュベーションされている間、被覆及び／又は密封されてもよい。
【０１６９】
酵素基質を含有するＥＬＩＳＡ溶液
酵素コンジュゲート連続行程に続く洗浄プロセスの終了後、固相表面は、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。適切な基質として、酵素コンジュゲートの結合剤と連結した酵素に暴露されると有色産物に変換される無色産物を含む。無色産物から有色産物に変換されると、固相表面上の酵素基質溶液の光学密度が、標的の波長においてＥＬＩＳＡプレートリーダー上で測定され得る。
【０１７０】
例えば、適切な酵素基質として、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）と５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）（アルカリホスファターゼ基質）、ファストレッドＴＲ／ナフトールＡＳ−ＭＸと４−クロロ−２−メチルベンゼンジアゾニウム／３−ヒドロキシ−２−ナフト酸２，４−ジメチルアニリドホスフェート（アルカリホスファターゼ基質）及び１：１の過酸化水素及びテトラメチルベンジジン混合物（ＨＲＰ基質混合物）が挙げられる。
【０１７１】
幾つかの態様において、酵素基質溶液は、約７０°で、直接光を遮り、約２０分間固相基質とインキュベーションされてもよい。
【０１７２】
ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝剤
固相表面は、捕捉抗体、ブロッキング剤、試料、検出抗体及び酵素コンジュゲート溶液のそれぞれと接触させられた後に洗浄される。洗浄緩衝剤は、ポリソルベート界面活性剤等の界面活性剤を含有する。特に適切な界面活性剤は、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）  ２０，  Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，  ＵＳＡ）である。界面活性剤は、例えば、Ｐｈ７．２〜７．４のＰＢＳ、又はｐＨ８．０のＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中に存在してもよい。特定の態様において、洗浄緩衝剤は、ｐＨ７．２〜７．４のＰＢＳ中に、０．０５％のポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートを含有する。
【０１７３】
ＥＬＩＳＡの固相表面は、酵素基質溶液とのインキュベーションが終了した後、停止溶液と接触させられてもよい。幾つかの態様において、停止溶液は、２−ＮＨ２ＳＯ４を含有してもよい。停止溶液は、添加後に、プレート上に存在する溶液と激しく混合され得る。
【０１７４】
ＥＬＩＳＡ固相表面の光学密度は、停止溶液と固相表面との接触後、分光光度計読み取りによって決定され得る。幾つかの態様において、光学密度は、停止溶液の添加直後に決定される。
【０１７５】
本願ＥＬＩＳＡ法の一つの態様において、当該方法は、ＤｕｏＥＬｌＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔキット又はｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ＮＲＧｌ−ｂｌ／ＨＲＧｌ−ｂｌ  （Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＵＳＡ；  ｃａｔａｌｏｇ  ｎｕｍｂｅｒ  ＤＹ３７７）を用いて実施される。
【０１７６】
免疫組織化学
試料中のＨＲＧの存在及びレベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）又は免疫蛍光（ＩＦ）によって決定されてもよい。ＩＨＣ又はＩＦによるＨＲＧの定量には、１つ以上の抗ＨＲＧ抗体を必要とする。ＩＨＣ及びＩＦに適した抗ＨＲＧ抗体は、市販されている。例えば、適切な抗体は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  （Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ），  ａｂｅａｍ  （Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ），  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｎｃ．  （Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  ＣＡ），  又はＮｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  （Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ，  ＣＯ）から購入できる。標準的な技術を用いて、抗ＨＲＧ抗体は、薄片、例えばＦＦＰＥ切片及び凍結腫瘍切片を含む腫瘍から得られた５ミクロン切片等中のＨＲＧタンパク質の存在を検出するのに使用できる。典型的には、腫瘍切片は、最初に、腫瘍材料を収集及び保存する最初のプロセスにおいて固定されたタンパク質の抗原的構造を検索するように最初に処理される。そしてスライドは、抗ＨＲＧ検出抗体による非特異的結合を防ぐように、ブロッキングされる。ＨＲＧタンパク質の存在は、抗ＨＲＧ抗体（一次抗体）の、ＨＲＧタンパク質への結合によって検出される。一次抗体を認識し、結合する、検出抗体（二次抗体）は、フルホロフォア又は検出可能な酵素に連結している。典型的には、各工程の間に、腫瘍切片は洗浄され、ウシ血清アルブミン等の非特異的タンパク質でブロッキングされる。検出抗体が検出可能な酵素と連結している場合、スライドは、可視的シグナルを生じるように、適切な酵素基質を使用して現像される。検出抗体がフルオロフォアと連結している場合、スライドは、蛍光顕微鏡を用いて観察される。試料は、ヘマトキシリン等によって対比染色される。
【０１７７】
ＨＲＧ遺伝子発現の評価
ＨＲＧ遺伝子発現は、ヒト患者から取得した、取り出した、又は受け取った生体試料等のヒト患者由来の生体試料において評価され得る。そのような態様は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を注文する、又は受け取る工程を含む。幾つかの態様は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の数値を決定する工程、及び任意で決定された数値を記録する工程を含む。
【０１７８】
幾つかの態様において、タンパク質レベルでのＨＲＧ発現は、規制当局に認可された試験を使用して評価される。幾つかの態様において、前記規制当局に認可された試験が、ＦＤＡ、ＥＭＡ又はＪＰＭＡに認可された試験である。
【０１７９】
ＨＲＧ遺伝子発現レベルは、所定の閾値に関連して解釈され得る。閾値スコアと等しい又はより高いＨＲＧ遺伝子発現レベルは、対象が、抗ＨＥＲ３抗体等のＨＥＲ３阻害剤による治療に応答し得る可能性が予想できると解釈される。幾つかの態様において、ＨＥＲ遺伝子発現レベルが閾値スコアを下回る場合、腫瘍がＨＥＲ３阻害剤による治療に耐性（非応答性）であると予想できると解釈される。
【０１８０】
幾つかの態様において、生体試料中のＨＲＧ遺伝子発現のレベルを表す数値に基づいて、ＨＲＧ遺伝子発現は、「高ＨＲＧ」又は「低ＨＲＧ」と評価され得る。対象は、例えば、タンパク質レベルでのＨＲＧ発現に基づいて、高ＨＲＧ又は低ＨＲＧと評価され得る。
【０１８１】
例えば、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現は、生体試料からのタンパク質濃度値が所定の閾値と同等以上である場合に、「高ＨＲＧ」と評価され得る。幾つかの態様において、前記所定の閾値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択され、例えば、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ又は約１０００００  ｐｇ／ｍＬであってもよい。幾つかの態様において、生体試料中のタンパク質濃度値が約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ又は約１０００００  ｐｇ／ｍＬ以上である場合に、「高ＨＲＧ」と評価され得る。幾つかの態様において、生体試料中のタンパク質濃度値が約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ��ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ又は約１０００００  ｐｇ／ｍＬ以上である場合に、「高ＨＲＧ」と評価され得る。幾つかの態様において、生体試料中のタンパク質濃度値が約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、約５０００  ｐｇ／ｍＬ、約６０００  ｐｇ／ｍＬ、約７０００  ｐｇ／ｍＬ、約８０００  ｐｇ／ｍＬ、約９０００  ｐｇ／ｍＬ、約１００００  ｐｇ／ｍＬ、約１１０００  ｐｇ／ｍＬ、約１２０００  ｐｇ／ｍＬ、約１３０００  ｐｇ／ｍＬ、約１４０００  ｐｇ／ｍＬ、約１５０００  ｐｇ／ｍＬ、約１６０００  ｐｇ／ｍＬ、約１７０００  ｐｇ／ｍＬ、約１８０００  ｐｇ／ｍＬ、約１９０００  ｐｇ／ｍＬ、約２００００  ｐｇ／ｍＬ、約２２０００  ｐｇ／ｍＬ、約２４０００  ｐｇ／ｍＬ、約２６０００  ｐｇ／ｍＬ、約２８０００  ｐｇ／ｍＬ、約３００００  ｐｇ／ｍＬ、約３５０００  ｐｇ／ｍＬ、約４００００  ｐｇ／ｍＬ、約５００００  ｐｇ／ｍＬ、約６００００  ｐｇ／ｍＬ、約７００００  ｐｇ／ｍＬ、約８００００  ｐｇ／ｍＬ、約９００００  ｐｇ／ｍＬ又は約１０００００  ｐｇ／ｍＬ未満である場合に、「低ＨＲＧ」と評価され得る。
【０１８２】
幾つかの態様において、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現は、１つ以上の供給源を起源とし得る可溶性ＨＲＧに基づいて評価され得る。例えば、幾つかの態様において、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現は、正常及び腫瘍細胞の両方を起源とし得る。
【０１８３】
幾つかの態様において、より高いＨＲＧ遺伝子発現は、より良好な危険率及びｐ−値に相関する。
【０１８４】
治療
幾つかの態様において、前記対象は、癌又は他の疾患に罹患しており、ＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価され、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を投与して治療され得る。幾つかの態様において、前記対象は、癌又は他の疾患に罹患しており、ＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価され、抗ＨＥＲ３抗体を含有する治療剤を控えることにより治療され得る。
【０１８５】
幾つかの態様において、前記対象は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合、抗ＨＥＲ抗体の投与が行われることにより、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合、抗ＨＥＲ抗体の投与が控えられることにより、治療され得る。
【０１８６】
幾つかの態様において、前記対象は、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと評価された場合、抗ＨＥＲ抗体による治療を差し控える選択をすることにより、又はタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された場合、抗ＨＥＲ抗体の投与を選択することにより、治療され得る。
【０１８７】
抗ＨＥＲ３抗体は、ＨＥＲ３に結合するタンパク質又はリガンド、例えば上記で議論したものであってもよい。幾つかの態様において、前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８の一つ以上である。
【０１８８】
抗ＨＥＲ３抗体は、任意の適切な用量で投与され得る。例えば、当該抗体は、約９ｍｇ／ｋｇ以上、約１２ｍｇ／ｋｇ以上、約１５ｍｇ／ｋｇ以上、約１８ｍｇ／ｋｇ以上で投与され得る。幾つかの態様において、当該抗体は、約９ｍｇ／ｋｇ以下、約１２ｍｇ／ｋｇ以下、約１５ｍｇ／ｋｇ以下、約１８ｍｇ／ｋｇ以下で投与され得る。
【０１８９】
抗ＨＥＲ３抗体は、任意の適切な方法によって投与され得る。例えば、幾つかの態様において、前記抗体は静脈内投与される。しかしながら、投与経路は静脈内に限らず、他の適切な経路であってもよい。
【０１９０】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、毎週１回以上、又はより高頻度で、又は２週間ごと、又は３週間ごと、又はより低頻度で投与される。
【０１９１】
幾つかの態様において、前記治療は、チロシンキナーゼ阻害剤又はＨＥＲ阻害剤、例えば上皮成長因子受容体阻害剤と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与であってもよい。当該治療は、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブの１つ以上と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与であってもよい。
【０１９２】
幾つかの態様において、前記治療は、化学治療剤と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与であってもよい。当該治療は、シスプラチン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、カペシタビン、及び他の化学治療剤の１つ以上と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与であってもよい。
【０１９３】
幾つかの態様において、前記治療は、チロシンキナーゼ阻害剤又はＨＥＲ阻害剤と化学治療の両方と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む。当該治療は、例えば、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブの１つ以上、並びにの１つ以上、シスプラチン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、カペシタビン、及び他の化学治療と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与であってもよい。
【０１９４】
幾つかの態様において、前記治療は、放射線治療と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む。幾つかの態様において、前記治療は、放射線治療、並びにチロシンキナーゼ阻害剤、ＨＥＲ阻害剤及び化学治療の１つ以上と組み合わせての、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む。
【０１９５】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、放射線治療及び放射線療法セツキシマブ、シスプラチン、及び／又は５−フルオルウラシル等の、第一線（ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ）の転移性又は局所進行性の頭部頸部癌の治療と組み合わせて投与される。
【０１９６】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、転移性又は局所進行性の頭部頸部癌における第一線の治療、例えばセツキシマブ、シスプラチン及び／又は５−フルオルウラシルと組み合わせて投与され得る。
【０１９７】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、エルロチニブ又はプラチナベースの化学療法等の、第一線のＮＳＣＬＣの治療と組み合わせて投与される。
【０１９８】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、ドセタキセル等の、第二線のＮＳＣＬＣの治療と組み合わせて投与される。
【０１９９】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ及び／又は化学治療等の、ＲＡＳ野生型癌、直腸結腸癌、及び他の癌の治療と組み合わせて投与される。
【０２００】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、放射線、セツキシマブ、シスプラチン、５−フルオルウラシル、及び／又は他のＨＥＲ阻害剤又は化学治療と組み合わせて投与される。
【０２０１】
幾つかの態様において、抗ＨＥＲ３抗体は、トラスズマブ、パクリタキセル、ラパマイシン、カペシタビン及び／又は他のＨＥＲ阻害剤又は化学治療の１つ以上と組み合わせて投与される。
【０２０２】
試験キット
幾つかの態様において、試験キットは、ＩＨＣによりＨＲＧ含有を決定するための材料を備える。例えば、ＨＲＧに対する一次抗体、及びホースラディッシュペルオキシダーゼ等のレポーター酵素とコンジュゲートした二次抗体を備え得る。幾つかの態様において、二次抗体は、一次抗体を特異的に認識するコンジュゲートされたポリマーで置き換えられても良い。
【実施例】
【０２０３】
本発明は、下記実施例によって更に例示される。実施例は例示のみを目的として提供され、いかなる場合も本発明のの範囲又は内容を限定することを意図しない。
【０２０４】
略語
ＡＥ有害事象（ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔ）；
ＣＩ信頼区間（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｒｖａｌ）；
ＣＲ完全寛解（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）；
ＤＬＴ用量制限毒性（ｄｏｓｅ  ｌｉｍｉｔｉｎｇ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ）；
ＦＡＳ  全解析セット（ｆｕｌｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｅｔ）；
ＦＦＰＥ  ホルマリン固定パラフィン包埋（ｆｏｒｍａｌｉｎ−ｆｉｘｅｄ，  ｐａｒａｆｆｉｎ−  ｅｍｂｅｄｄｅｄ）；
ＨＲ  危険率（ｈａｚａｒｄ  ｒａｔｉｏ）；
ＩＮ  静脈内（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ）；
ＩＴＴ  包括解析（ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ）；
ＭＴＤ最大耐量（ｍａｘｉｍｕｍ  ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ｄｏｓｅ）；
ＯＳ  全生存率（ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）；
ＰＤ  進行性疾患ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）；
ＰＦＳ  無増悪生存率（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）；
ＰＨ  比例ハザード（ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  ｈａｚａｒｄｓ）；
ＰＯ  経口（ｏｒａｌ）；
ＰＲ  部分反応（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）；
ＳＤ  安定型疾患（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）．
【０２０５】
実施例１−第１ｂ／２相臨床試験
この及び他の実施例は、無作為化された、偽薬コントロールされた、二重盲検第１ｂ／２相試験を提供して、ステージＩＩＩｂ／ＩＶのＮＳＣＬＣを有し、１つ以上の過去の化学治療計画の後にそれが進行している、ＥＧＦＲ阻害剤治療に感受性の対象における、エルロチニブと組み合わせたパトリツマブの安全性及び効率を評価する。
【０２０６】
本試験は、エルロチニブとパトリツマブの組み合わせの安全性及び耐容性を評価するための、及び第２相部分における用量を決定するための、第１ｂ相非盲検、シングルアーム部分を含み、続いて、当該組み合わせ治療のエルロチニブ及び偽薬と比較しての効率及び安全性を評価するための、無作為化及び偽薬コントロールされた第２相部分を含む。最大耐量に達しなかった第１相の試験結果に基づいて、予備的ヒト薬物動態プロフィールは、実験動物モデルにおける最高の効率及び薬物動態を示したレベルを超える循環レベルに達するように、３週間に１回９ｍｇ／ｋｇ以上の静脈内パトリツマブ投与を支持した。より高い１８ｍｇ／ｋｇのレベルの維持用量も、動物モデルに対する臨床的設定における腫瘍組織穿孔の効果の可能性を受け入れるために含まれた。単一治療第１相研究における用量制限毒性の欠如のため、第１ｂ相は、ｄｏｓｅ−ｄｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ試験として設計され、エルロチニブ１５０ｍｇの１日１回の経口投与及び３週間毎のパトリツマブ１８ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与が行われ、但し、ＭＴＤを越えた場合、この最大量からのｄｏｓｅ  ｄｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎが備えられる。この第１ｂ相コホートにおいてＤＬＴは見られなかったので、このレベル以下での用量は、第２相部分に許容される。
【０２０７】
上記試験の両方の部分において、対象は、１日１回１５０ｍｇのエルロチニブの経口投与を受けた。３週間の治療サイクルの毎回の開始時、対象は、パトリツマブ又は偽薬のＩＶ吸入を受けた（第２相部分）。３つの治療計画：１５０ｍｇエルロチニブの毎日投与と１８ｍｇ／ｋｇパトリツマブの３週間毎投与との組み合わせ（高用量）；１５０ｍｇエルロチニブの毎日投与と９ｍｇ／ｋｇパトリツマブ維持をロードした１８ｍｇ／ｋｇパトリツマブの３週間毎投与との組み合わせ（低用量）；及び１５０ｍｇエルロチニブの毎日投与と偽薬の３週間毎投与との組み合わせ（偽薬）；が評価された。腫瘍は、最初の２４週間は６週間毎（±３日）に、以降は１２週間毎（±７日）に、試験サイクルから独立して評価された。
【０２０８】
「高ＨＲＧ」対象は、観察された可溶性ＨＲＧ濃度が９８０ｐｇ／ｍＬ、試料セットのＱｕａｔｉｌｅ３である対象として定義された。
【０２０９】
この試験において、無作為化された２１５名の対象から２０２個の血清試料が回収され
た。これらの試料中の可溶性ＨＲＧの濃度は、５バッチの複製において測定され、各対象において、可溶性ＨＲＧ濃度の平均値が取得された。測定の過程で、アッセイの再現性は、濃度４０００ｐｇ／ｍＬのウシ胎児血清中の組換えヘレグリンである対照試料の反復測定によって確認された。７０名の対照において、０ｐｇ／ｍｌを超えるＨＲＧデータが取得された。Ｑｕａｒｔｉｌｅ３は、２０２個の全ての試料を使用して決定された。
【０２１０】
第２相部分における試料サイズは、片側アルファ＝０．１の有意性レベルでの対象と比較されたいずれかのパトリツマブアームの間の中間ＰＦＳ３．３対２．２における、５０％改善（即ちＨＲ０．６６７）を検出する８０％のパワーを有する片側ログランク試験に基づいて計算された。
【０２１１】
この試験の一次解析は、１６２個のＰＦＳ事象（そしてパトリツマブ１８ｍｇ／ｋｇ＋エルロチニブ及びコントロールアーム、並びに９ｍｇ／ｋｇ＋エルロチニブ及びコントロールアームの比較あたり１１０個のＰＦＳ事象）が観察された時に行われた。一次解析の点において、全ての対象における治療割当（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ）は、データが調整及び整理された後の解析のための指定された研究要員に対し非盲検であり、整理されたデータベースのスナップショットが作成された。潜在的なバイアスを最小化するため、個々の治療割当は、試験が終了するまで、対象又は調査者に打ち明けられなかった。
【０２１２】
全ての有効性解析は全解析セットに対して実施され、それは、１つ以上の用量の無作為化された試験医薬を受け取った無作為化された解析セットにおける全ての対象を含む。一次有効性終点は、ＰＦＳであった。ＰＦＳは、無作為化の日付からＸ線写真での疾患進行の最初の客観的記載の日、又は何らかの原因での死亡の日の早い方までの時間として定義される。カットオフ日までに（Ｘ線写真での）疾患進行の客観的記載無しに生存した対象は、最後の評価できる腫瘍評価の日に打ち切るべきであった。鍵第二有効性終点、全生存率、は、無作為化の日付から何らかの原因での死亡までの時間として定義され、一次有効性終点ＰＦＳと同様に解析された。
【０２１３】
ＰＦＳにおける一次解析は、用量応答関係における層別ログランク線形傾向、続いて各パトリツマブアーム及び対象のペアワイズ比較を、層別ログランク検定を使用して、ランダム化での層別要素：組織学（腺癌対比腺癌）及び従来の治療に対する最良の応答（ＣＲ／ＰＲ対ＳＤ対ＰＤ）を考慮して、使用した。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線がＰＦＳのために作成され、各治療群における中間及び９５％ＣＩを計算するのに使用された。各パトリツマブアーム及び対象の間のＨＲの推定は、９５％ＣＩと共に、層別化Ｃｏｘ比例ハザードモデルを使用して計算された。
【０２１４】
ＦＡＳ上での高ＨＲＧ群におけるＦＰＳにおける一次解析は、各パトリツマブアーム及び対象の層別ログランク検定、並びに組み合わせられたパトリツマブアーム及び対象の比較を使用した。層別化因子は、組織学（腺癌対非腺癌）及び従来の治療に対する最良の応答（ＣＲ／ＰＲ／ＳＤ対ＰＤ）を含んでいた。各パトリツマブアーム及び対照の間の、並びに組み合わせられたパトリツマブアーム及び対照の間の、ＨＲの推定は、９５％ＣＩと共に、層別化ログランク検定に使用された層別化因子を用いて層別化Ｃｏｘ比例ハザードモデルを使用して計算された。
【０２１５】
他に言及の無い限り、ＰＦＳ及びＯＳにおけるログランクｐ値及びＨＲは、上記のランダム化における層別化で調整された一次解析に基づくものであった。
【０２１６】
前記試験の第１ｂ相部分には７人の対象（男性４名、年齢の中間値［範囲］６８歳［４８〜７８］）が参加し、全員が、１５０ｍｇエルロチニブの毎日投与と、３週間毎の１８ｍｇ／ｋｇパトリツマブ投与の組み合わせを受けた。２名でＡＥグレードが３を上回り：１つのグレード３ケースは、疼痛、疲労、頭痛、脱水、下痢、及び血中クレアチン増大を示し；いずれもパトリツマブと関連しなかった。３名の対象は４つの深刻なＡＥを有し：１人の対象において、グレード３の疼痛（試験治療と無関係）、グレード３の脱水（エルロチニブ関連）、及びグレード１の食欲減退（エルロチニブ及びパトリツマブ関連）、及びグレード１の発熱（無関係）が見られた。最も報告的なＡＥは、グレード１又は２で、エルロチニブ関連と見做された。２を超える対象において報告された唯一のパトリツマブ関連のＡＥは、食欲減退であった（２名の対象）。
【０２１７】
反応は記録されず、４名の対象において、安定な疾患が示された（８３、８７、９０及び１１７日）。７名の対象全員が、疾患進行により試験治療から非継続となり；６名の対象は死亡するまで追跡され、１名の対象は、フォローアップの同意を取り下げた。
【０２１８】
第１ｂ相の試験の間に、ＤＬＴは報告されなかった。従って、第２相の用量計画は、パトリツマブ１８ｍｇ／ｋｇロード用量、続いて９ｍｇ／ｋｇパトリツマブ又は１８ｍｇ／ｋｇパトリツマブ維持用量の投与のいずれかとした。対象には、第２相試験の間に、１５０ｍｇ／日のエルロチニブも投与された。
【０２１９】
第２相部分において、３名の対象が無作為化されたが、治療されず、従って、ＦＡＳ及び安全性解析セットにおいて、２１２名の対象が存在した。下記解析結果は、ロックされたデータベース（カットオフ日が２０１２年１０月３０日のデータ）からの有効性データ（ＯＳ以外）の一次解析に基づく。ＯＳデータは、一次解析の時点ではまだ成熟しておらず、カットオフ日が２０１３年４月１９日のデータに基づく更新されたＯＳ解析からの予備的結果を、下記に示す。
【０２２０】
前記試験の無作為化された第２相部分に参加した２１５人の対象の傾向を、表１にまとめた。全解析セットにおける統計学的情報を、表２にまとめた。統計学的な特性に関して、治療群間で意義のある相違は存在しなかった。
表１：第２相対象の傾向
【表１】
2016540993.tif 000003
注：パーセンテージは、参加した／無作為化された解析セットにおける対象の数に基づく。［ａ］：試験中の死亡＝Ｙ死亡日が、最初の薬物投与日以後かつＡＥ回収期間内（パトリツマブの最後の投与後５３日以内、又はエルロチニブの最後の投与後３０日超、のいずれか遅い方）である場合。
表２：統計学的及びベースライン特性（全解析セット）
【表２】
2016540993.tif 000004
注：パーセンテージの分母は、ＦＡＳの対象の数である。［ａ］：年齢は、インフォームドコンセント日及び誕生日を使用して計算される。
【０２２１】
ＮＳＣＬＣ歴及び事前の治療に関する対象のベースラインの特徴を表３に示す。対象は、治療群間で良好なバランスを有するように見える。
表３：ベースライン予後及び疾患特性（全解析セット）
【表３】
2016540993.tif 000005
注：パーセンテージは、全解析セット（ＦＡＳ）の対象の割合を反映する。ベースライン＝試験治療の最初の実施前の最後の非欠測値、［ａ］：対象が２つのラインの事前の化学治療計画を有する場合、最近の化学治療計画に対する最良の応答（「該当無し」を除く）が使用された。
【０２２２】
実施例２−全解析セットにおける無増悪生存率及び全生存率
ＦＡＳにおけるＰＦＳの一次解析を、表８に示す。ＦＡＳにおける無増悪生存率のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定を図１に示す（高及び低用量パトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）。無選択のＦＡＳにおける全生存率（ＯＳ）結果を、表９及び図２に示す（高及び低用量パトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）。全解析セットにおいて、パトリツマブとエルロチニブとの組み合わせにおいて、エルロチニブと偽薬と比較して、ＰＦＳ又はＯＳの顕著な改善は無く、この試験は、無選択ＩＴＴ集団において否定的と見做された。
【０２２３】
低及び高用量パトリツマブ治療におけるＣＲ／ＰＲである応答を有する対象の数は、それぞれ９名（１２．９％）及び５名（７．１％）であるのに対し、偽薬では４名（５．６％）であった。
表４：全解析セットにおける無増悪生存率の解析
【表４】
2016540993.tif 000006
注：ＰＦＳは、無作為化の日付から患進行の最初の客観的記載の日、又は何らかの原因での死亡の日の早い方までの時間として定義され、［ａ］：Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定。中間値のＣＩは、Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ−Ｃｒｏｗｌｅｙ法を使用して算出された、［ｂ］：層別化ログランク及び層別化Ｃｏｘ  ＰＨは、事前の治療に対する最良の応答及び組織学サブタイプ（腺癌対非腺癌）によって層別化された。
表５：全解析セットにおける全生存率の解析
【表５】
2016540993.tif 000007
注：ＯＳは、無作為化の日から死亡日までの時間として定義される。［ａ］：Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定。中間値のＣＩは、Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ−Ｃｒｏｗｌｅｙ法を使用して算出された、［ｂ］：層別化ログランク及び層別化Ｃｏｘ  ＰＨは、事前の治療に対する最良の応答及び組織学サブタイプ（腺癌対非腺癌）によって層別化された。
【０２２４】
実施例３−ＨＲＧを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象における無増悪生存率
タンパク質濃度＞９８０ｐｇ／ｍＬと定義される、タンパク質レベルでの高ＨＲＧ発現腫瘍を担持する対象における無増悪生存率のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定を、図３（高及び低用量パトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）及び図４（プールされたパトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）に示す。
【０２２５】
実施例４−可溶性ＨＲＧを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象における全生存率
タンパク質濃度＞９８０ｐｇ／ｍＬで定義されるタンパク質レベルでＨＲＧを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象の見込みサブセットにおける予備的ＯＳ結果を、図５（高及び低用量パトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）及び図６（プールされたパトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）に示す。
【０２２６】
実施例５−可溶性ＨＲＧを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象における有効性
ＨＲＧの発現レベルの高い腫瘍を担持する対象と対照的に、ＨＲＧを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象は、ＰＦＲ及びＯＳにおいて明確な治療差を示さなかった。タンパク質濃度＜９８０ｐｇ／ｍＬで定義されるＨＲＧを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象におけるＰＦＳのＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定を、図７（プールされたパトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）に示す。タンパク質濃度＜９８０ｐｇ／ｍＬで定義されるＨＲＧを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象におけるＯＳのＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定を、図８（プールされたパトリツマブ＋エルロチニブ対偽薬＋エルロチニブを示す）に示す。
【０２２７】
実施例６−可溶性ＨＲＧタンパク質濃度対臨床的利益における可能なカットオフ値
データは、ＨＲＧタンパク質濃度における幾つかの可能なカットオフ値に基づくプールされた用量のパトリツマブと偽薬との間のハザード比を計算するのに使用された。これらのハザード比は、表６に示されている。より高いＨＲＧ発現は、ＰＦＳに関してより良好な臨床的利益と一般に相関しているように見える。カットオフを９８０ｐｇ／ｍＬから３０００ｐｇ／ｍＬに上げると、ハザード比によって判定されるような平均の利益の更なる改善をもたらす。
表６：カットオフに応じた高可溶性ＨＲＧ群中のＰＦＳにおけるハザード比及びｐ値
【表６】
2016540993.tif 000008
【０２２８】
ＥＬＩＳＡは、ヒトＮＲＧｌ−ｂｌ／ＨＲＧｌ−ｂｌ  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｋｉｔ  （Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ；  ｃａｔａｌｏｇ  ＃ＤＹ３７７）を使用して、血清試料中の可溶性ＨＲＧを検出するために実施された。このアッセイを実施するために、ＰＢＳ中に４．０μｇ／ｍｌマウス抗ヒトＮＲＧ１−ｂ１を含有する捕捉抗体溶液１００μｌを、９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。捕捉抗体溶液は、ＰＢＳで１８０倍に希釈して調製された（例えば、８ウェル分調製するために、８９５μｌのＰＢＳに、キット中のオリジナル溶液５μｌが添加された）。このプレートを被覆し、室温で一昼夜置いた。
【０２２９】
捕捉抗体溶液を吸引し、以下のいずれかによりウェルを洗浄した。（ｉ）「調整洗浄（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｗａｓｈ）」法、噴出ボトルを使用して４００μｌの洗浄緩衝剤をウェルに充填し、この洗浄緩衝剤を除去し、このプロセスをもう２回、全部で３回繰り返す。又は（ｉｉ）「改善洗浄（ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｗａｓｈ）」法、マルチチャンネルピペッターを使用して１８０μｌの洗浄緩衝剤を各ウェルに添加し、洗浄緩衝剤が泡立つまで２０回ピストン動作を繰り返して、この洗浄緩衝剤を循環させる。そして洗浄緩衝剤を吸引し、新しく１８０μｌの洗浄緩衝剤を添加して、この洗浄緩衝剤が泡立つまで２０回ピストン動作を繰り返して、前記循環を反復する。この洗浄緩衝剤を吸引し、濯ぎ工程を実施する。各ウェルに２００μｌの洗浄緩衝剤を添加し、すぐに吸引して、全ての泡を除去する。従って、この改善洗浄は、ピストン動作及び１つの濯ぎ工程を使用する、２つの洗浄工程を含む。洗浄緩衝剤は、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０を含有するｐＨ７．２〜７．４のＰＢＳで、提供された溶液を蒸留水で２５倍に希釈して調製された（即ち４ｍｌオリジナル溶液＋９６ｍｌ蒸留水）。
【０２３０】
１％ＢＳＡを含有する０．２μｍメッシュで濾過したｐＨ７．２〜７．４のＰＢＳである試薬希釈剤３００μＬを各ウェルに添加し、プレートを被覆し、室温で１時間置いた。この間に、ヘレグリン標準を調製した（下記参照）。１時間のインキュベーション後、試薬希釈剤を吸引し、ウェルを、上記調整洗浄法又は改善洗浄法のいずれかを使用して洗浄した。
【０２３１】
１００μｌの無希釈血清又は血漿（又はヘレグリン標準）を各ウェルに添加し、然る後プレートを被覆して室温で２時間置いた。試料（又は標準）を吸引し、ウェルを、上記上記調整洗浄法又は改善洗浄法のいずれかを使用して洗浄した。
【０２３２】
試薬希釈剤中に１５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ヤギ抗ヒトＮＲＧ１−ｂ１抗体を含有する検出抗体溶液１００μｌを各ウェルに添加し、プレートを被覆し、２時間室温で置いた。検出抗体溶液は、オリジナル溶液を試薬希釈剤で１８０倍に希釈して調製した（例えば、８ウェル分調製するために、８９５μｌの試薬希釈剤に、オリジナル溶液５μｌが添加された）。キットの説明書には２％熱不活性化ヤギ血清（ＮＧＳ）の添加が要求されているが、これらの実験において、ＮＧＳは検出抗体溶液中に含有されなかった。
【０２３３】
検出抗体溶液を吸引し、ウェルを、調整洗浄法又は改善調整法のいずれかを使用して洗浄した。ストレプトアビジン−ＨＲＧ溶液のワーキング溶液１００μｌを各ウェルに添加し、遮光条件下、室温で２０分間インキュベーションした。前記キット中のストレプトアビジン−ＨＲＰ溶液のバイアルには、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジン１．０ｍｌが含まれており、このバイアルの内容物を、バイアルのラベルの指示通りに試薬希釈剤で希釈することによって、ワーキング濃度が調製された。２０分間のインキュベーション後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ溶液を吸引し、ウェルを、調整洗浄法又は改善調整法のいずれかを使用して洗浄した。
【０２３４】
過酸化水素（カラー試薬Ａ）及びテトラメチルベンジジン（カラー試薬Ｂ）の１：１混合物を含有する基質１００μｌを各ウェルに添加し、遮光条件下、室温で２０分間インキュベーションし、その後各ウェルに５０μｌの停止溶液を添加した。停止溶液は、２−ＮＨ２ＳＯ４を含有している。そして、各ウェルの光学密度をＯＤ４５０で測定した（ＯＤ５７０で補正）。
【０２３５】
ヘレグリン標準は、下記のように調製された。
表７：ヘレグリン標準の調製
【表７】
2016540993.tif 000009
【０２３６】
公表されているキットの指示を用いた可溶性ＨＲＧを検出する試行（調整洗浄法）は、一貫して失敗した。しかしながら、様々範囲の血清中の可溶性ＨＲＧが、改善洗浄法を用いたプロセスを使用して高い再現性で測定することが出来た。
【０２３７】
実施例８−生体マーカーの同定
ＨＲＧ生体マーカーは、インビボでの様々なヒト癌異種移植物に対する抗ＨＥＲ３抗体Ｃ３−１２８７の抗腫瘍活性を解析することにより、及びインビトロでのこれらの細胞株のＨＲＧの発現の解析によって同定された。様々な症候のヒト腫瘍細胞株をマウス中で異種移植物として増殖させ、数週間に渡り抗ＨＥＲ３抗体Ｃ３−１２８７で治療した。腫瘍増殖の阻害は、対照マウスとＵ３−１２８７で治療したマウスとの間で腫瘍体積を比較することにより解析した。ヒト腫瘍細胞株はインビトロで増殖し、ＨＲＧのタンパク質発現は、ウエスタンブロットによって解析された。この解析の結果を、表８に示す。ウエスタンブロットにより測定したＨＥＲ３の基底活性は、Ｕ３−１２８７のインビボ有効性と相関しておらず、ＦＩＳＨ陽性乳癌モデルにおいて裕生であった。対照的に、解析された１７モデル中１５モデルにおいて、ＨＲＧの発現は、Ｕ３−１２８７のインビボ有効性と、非常に良く相関していた。
表８：インビボ異種移植物に使用された細胞株の遡及的インビトロ解析
【表８】
2016540993.tif 000010
【０２３８】
Ｕ３−１２８７の有効性は、ホスホ−ＨＥＲ３及びホスホ−ＡＫＴレベルの減少を測定することによりインビトロで決定された。基底ＨＥＲ３リン酸化は、内在的にヘレグリン（Ａ５４９）を発現する細胞株、及び基底ＨＥＲ３活性化を有しない細胞においてブロックされたが、外来的ヘレグリン（ＣａＯＶ３）によって刺激された。Ｕ３−１２８７の有効性の結果を図９に示す。
【０２３９】
予想外なことに、規定ＨＥＲ３リン酸化を有するがヘレグリンを発現しない細胞はＵ３−１２８７治療に対し有効性を示さず（ＢＴ４７４ｂａｓａｌ）、なおもより驚くべきことに、これは、図１０に示すように、外来的に加えられたヘレグリン（ＢＴ４７４＋ＨＲＧ）により克服することができた。
【０２４０】
参照による援用
本願で引用している各特許文献及び学術文献は、あらゆる目的で参照により援用される。
【図１】
2016540993.tif 000011
【図２】
2016540993.tif 000012
【図３】
2016540993.tif 000013
【図４】
2016540993.tif 000014
【図５】
2016540993.tif 000015
【図６】
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【図７】
2016540993.tif 000017
【図８】
2016540993.tif 000018
【図９】
2016540993.tif 000019
【図１０】
2016540993.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成28年5月31日(2016.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価された、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍と診断されたヒト患者において、局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣ腫瘍を治療するための、抗HER3抗体を含有する医薬組成物の使用。
【請求項２】
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現を評価する工程を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択され、前記所定の閾値が、約０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記対象が野生型ＥＧＦＲを担持する、又はEGFR増感変異を担持しない、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記腫瘍が、１つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記抗ＨＥＲ３抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ（ＭＥＨＤ−７９４５Ａ）、セリバンツマブ（ＭＭ−１２１），  ＭＭ−１１１  ，  ＬＪＭ７１６，  ＲＧ−７１１６、三重特異性抗ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ３  ｚｙｂｏｄｙ，  ｈｕＨＥＲ３−８、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
（ｉ）ＨＥＲ阻害剤、
（ｉｉ）化学治療剤、
（ｉｉｉ）放射線照射、及び
（ｉｖ）他の標的化された治療剤、
と組み合わせられ、前記ＨＥＲ阻害剤が、トラスズマブ、Ｔ−ＤＭ１、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、ＫＤ−０１９及びエルロチニブからなる群から選択され、かつ前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、５−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
請求項２に記載の工程に従いタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の評価を行うためのキット。
【請求項１０】
前記評価が、以下の工程：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
当該決定された値を記録する工程；
を含む、請求項２に記載の使用。
【請求項１１】
無作為化された臨床データに基づいてＨＲＧ遺伝子発現が高いと評価される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
ＨＲＧ遺伝子発現が、規制当局に認可された試験を使用して評価され、当該規制当局に認可された試験が、ＦＤＡ、ＥＭＡ又はＰＭＤＡに認可された試験である、請求項２に記載の使用。
【請求項１３】
ＨＲＧ遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項６に記載の使用。
【請求項１４】
局所進行性又は転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗ＨＥＲ３抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって：
局所進行性又は転移性ＮＳＣＬＣと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程；
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現の値を決定する工程；及び
前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程；
を含む、方法。
【請求項１５】
更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が高いと特定し、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのＨＲＧ遺伝子発現が低いと特定する工程を含み、当該所定の閾値が、０  ｐｇ／ｍＬ、約９８０  ｐｇ／ｍＬ、約１６２２  ｐｇ／ｍＬ、約２０００  ｐｇ／ｍＬ、約３０００  ｐｇ／ｍＬ、約４０００  ｐｇ／ｍＬ、及び約５０００  ｐｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＥＬＩＳＡを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが：
（ａ）循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程；
（ｂ）新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程（ａ）を繰りかえす工程；及び
（ｃ）新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程；
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる、方法。
【請求項１７】
更に固相表面に停止溶液を添加することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン（ＨＲＧ）を特異的に認識し；前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有し；前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトＨＲＧ抗体であり；前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトＨＲＧ抗体であり；前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼであり；及び／又は前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである、請求項１６に記載の方法。
【国際調査報告】
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