(57)【要約】本発明は、ＮＳ５Ａ阻害剤、新規な医薬組成物、抗ウイルス性薬剤、及びウイルス性疾病、特にＣ型肝炎（ＨＣＶ）及びＧＢＶ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされるものの予防及び治療のための方法に関する。提案されるものは、一般式１の結晶質又は多結晶質の形態の［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−｛５−［４−（４−｛２−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−メトキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２−イル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−ブタ−１，３−ジイニル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−ピロリジン−１−カルボニル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸アルキル・ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩であり、ここで：Ｒは、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。
2016507554.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式１：
【化１】
2016507554.tif 000008
｛式中、ＲはＣ１−Ｃ３アルキルである｝の、結晶質又は多結晶質の形態であってもよい
［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−｛５−［４−（４−｛２−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−メトキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２−イル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−ブタ−１，３−ジイニル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−ピロリジン−１−カルボニル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸アルキル・ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩。
【請求項２】
以下の式１．１の化合物：
【化２】
2016507554.tif 000009
であって、結晶質又は多結晶質の形態であってもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
医薬組成物又は医薬として使用するための、ＮＳ５Ａタンパク質阻害剤の特質を示す、請求項１−２のいずれか１項に記載の、結晶質又は多結晶質の形態であってもよい、
［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−｛５−［４−（４−｛２−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−メトキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２−イル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−ブタ−１，３−ジイニル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−ピロリジン−１−カルボニル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸アルキル・ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩。
【請求項４】
治療的に有効な量の請求項３に記載の化合物を活性成分として含んでなる、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＢＣ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のためのＮＳ５Ａタンパク質阻害剤の特質を示す医薬組成物。
【請求項５】
医薬的に受容可能な包装に入れられ、そして活性成分として治療的に有効な量の請求項３に記載の化合物、又は請求項４に記載の医薬組成物を治療的に有効な量で含んでなる、錠剤、カプセル又は注射の形態の、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＢＣ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のためのＮＳ５Ａタンパク質阻害剤の特質を示す医薬。
【請求項６】
治療的に有効な量の請求項１−２のいずれか１項に記載の化合物、又は請求項４に記載の医薬組成物を含んでなる、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＢＣ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のための治療キット。
【請求項７】
治療的に有効な量の請求項３に記載の化合物、又は請求項４に記載の医薬組成物、又は請求項５に記載の医薬、或いは請求項６に記載の治療キットを導入することにある、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＢＣ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＳ５Ａ阻害剤、新規な医薬組成物、抗ウイルス性医薬、特に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって起こされるウイルス感染症の予防及び治療のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ウイルス感染は、ヒトの健康及び人類の存在に対する害を創造する多くの疾病を起こすことができる。最近の２０年間中に、３０種より少なくない本質的に新しい感染性病原体、特に：ＨＩＶ、ウイルス性肝炎、急性及び持続性下痢、出血熱（エボラ、ベネズエラ、ブラジル、リフトバレー）が発見されている［ａ）Ｌｅｄｎｉｃｋｙ  Ｊ．Ａ．，Ｒａｙｎｅｒ  Ｊ．Ｏ．Ｕｎｃｏｍｍｏｎ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．２００６，１２（３），２３５−２３９．ｂ）Ｈａｙｄｅｎ  Ｆ．Ｇ．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｖｉｒａｌ  ｔｈｒｅａｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２００６，１９（２），１６９−１７８］。特に、いわゆる鳥インフルエンザによる感染の危険性について、特別な警告がある。［ａ）Ｌｉｕ  Ｊ．Ｐ．Ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ−ａ  ｐａｎｄｅｍｉｃ  ｗａｉｔｉｎｇ  ｔｏ  ｈａｐｐｅｎ，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．２００６，３９（１），４−１０．ｂ）Ｈｅｎｔｅｒ  Ｊ．Ｉ．；Ｃｈｏｗ  Ｃ．Ｂ．；Ｌｅｕｎｇ  Ｃ．Ｗ，Ｌａｕ  Ｙ．Ｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｓｅｖｅｒｅ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ（Ｈ５Ｎ１）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｎｃｅｔ．２００６  ３６７（９５１３），８７０−８７３．Ｒｅｖｉｅｗ］。統計によれば、６０−６５％の伝染性感染は、ウイルス性病因である。“ウイルス−宿主の器官−薬物”の三連構造中の相互作用の複雑さのために、殆どの現時点の抗ウイルス性薬物は、治療の過程で副作用を誘発し、そして耐性ウイルス株を形成する［Ｊａｉｎ  Ｒ．，Ｃｌａｒｋ  Ｎ．Ｍ．，Ｄｉａｚ−Ｌｉｎａｒｅｓ  Ｍ．，Ｇｒｉｍ  Ｓ．Ａ．Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．２００６，１２（９），１０６５−１０７４．］。現時点において、臨床実験において使用することができる抗ウイルス性薬物の数は、４３種の低分子量物質のみに極めて制約され［ｈｔｔｐ：／／ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ．ｐｒｏｕｓ．ｃｏｍ／ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ］、これは、ウイルス性疾病の予防及び治療の要求を満足するには程遠い。更に、その治療のための化学療法が存在しない疾病を起こす相当な数のウイルス感染が存在する。これは、例えば、パピローマ、アデノウイルス、ヘルペス−６、痘瘡、ＳＡＲＳ症候群、出血熱、西ナイル熱、トリインフルエンザ等のウイルスによって起こされる疾病に関する［Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ  Ｅ．Ｒｅｃｅｎｔ  ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｄｒｕｇｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００５，８（５），５５２−５６０］。
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルスは、他の重要なヒトの病原、例えば黄熱病ウイルス、西ナイルウイルス、デングウイルス及びＧＢＶ−Ｃ型肝炎ウイルスと一緒に、フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ属）の分類に入る。フラビウイルスは、類似のゲノム構造を示し、特に、これらは、非構造的ＮＳ５Ａタンパク質をコードする遺伝子を有する。ＮＳ５Ａタンパク質は、ウイルス複製複合体の構造要素であるウイルスのＲＮＡゲノムの複製において重要な役割を演じる。このタンパク質が、現在、持続性Ｃ型肝炎を治療するための医薬の設計のための標的として、臨床試験において確認されている限りは、ＮＳ５Ａは、先に臨床的に重要なフラビウイルスと同様にリストされた他のものに対する有望な標的であると考えられる。
【０００４】
従って、特に高い活性及び低い毒性を保有する新規な抗ウイルス性医薬の開発が、今や非常に重要である。
【０００５】
非構造的ＮＳ５Ａタンパク質のリガンドであり、そしてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を抑制する、２−ピロリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾールの各種の誘導体に向けられた特許文献の幾つかの出願公開が存在し［ＷＯ２００８０２１９２７Ａ２、ＷＯ２００９０２０８２５Ａ１、ＷＯ２００９０２０８２８Ａ１、ＷＯ２０１００６５６６８Ａ１、ＷＯ２０１００６５６８１Ａ１、ＷＯ２０１００９６３０２Ａ１、ＷＯ２０１００９６４６２Ａ１、ＷＯ２０１００９６７７７Ａ１、ＷＯ２０１０１１１５３４Ａ１、ＷＯ２０１０１１１６７３Ａ１、ＷＯ２０１０１１７６３５Ａ１、ＷＯ２０１０１１７９７７Ａ１］、特に特許は、既知のＲＵ２４５２７３５（２０１２）ＲＦであり、ここで、式Ａの［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−｛５−［４−（４−｛２−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−メトキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２−イル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−ブタ−１，３−ジイニル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−ピロリジン−１−カルボニル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸メチル及びその二塩酸塩Ａ・２ＨＣｌが記載されている。
【０００６】
【化１】
2016507554.tif 000003
【０００７】
然しながら、分子の厄介さのために、これらの化合物の精製は、非常に複雑である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際特許出願公開ＷＯ２００８０２１９２７Ａ２；
【特許文献２】ＷＯ２００９０２０８２５Ａ１；
【特許文献３】ＷＯ２００９０２０８２８Ａ１；
【特許文献４】ＷＯ２０１００６５６６８Ａ１；
【特許文献５】ＷＯ２０１００６５６８１Ａ１；
【特許文献６】ＷＯ２０１００９６３０２Ａ１；
【特許文献７】ＷＯ２０１００９６４６２Ａ１；
【特許文献８】ＷＯ２０１００９６７７７Ａ１；
【特許文献９】ＷＯ２０１０１１１５３４Ａ１；
【特許文献１０】ＷＯ２０１０１１１６７３Ａ１；
【特許文献１１】ＷＯ２０１０１１７６３５Ａ１；
【特許文献１２】ＷＯ２０１０１１７９７７Ａ１。
【特許文献１３】ＲＵ２４５２７３５（２０１２）ＲＦ
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｌｅｄｎｉｃｋｙ  Ｊ．Ａ．，Ｒａｙｎｅｒ  Ｊ．Ｏ．Ｕｎｃｏｍｍｏｎ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．２００６，１２（３），２３５−２３９；
【非特許文献２】Ｈａｙｄｅｎ  Ｆ．Ｇ．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｖｉｒａｌ  ｔｈｒｅａｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２００６，１９（２），１６９−１７８；
【非特許文献３】Ｌｉｕ  Ｊ．Ｐ．Ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ−ａ  ｐａｎｄｅｍｉｃ  ｗａｉｔｉｎｇ  ｔｏ  ｈａｐｐｅｎ，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．２００６，３９（１），４−１０；
【非特許文献４】Ｈｅｎｔｅｒ  Ｊ．Ｉ．；Ｃｈｏｗ  Ｃ．Ｂ．；Ｌｅｕｎｇ  Ｃ．Ｗ，Ｌａｕ  Ｙ．Ｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｓｅｖｅｒｅ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ（Ｈ５Ｎ１）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｎｃｅｔ．２００６  ３６７（９５１３），８７０−８７３．Ｒｅｖｉｅｗ；
【非特許文献５】Ｊａｉｎ  Ｒ．，Ｃｌａｒｋ  Ｎ．Ｍ．，Ｄｉａｚ−Ｌｉｎａｒｅｓ  Ｍ．，Ｇｒｉｍ  Ｓ．Ａ．Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．２００６，１２（９），１０６５−１０７４；
【非特許文献６】ｈｔｔｐ：／／ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ．ｐｒｏｕｓ．ｃｏｍ／ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ；
【非特許文献７】Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ  Ｅ．Ｒｅｃｅｎｔ  ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｄｒｕｇｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００５，８（５），５５２−５６０。
【発明の概要】
【００１０】
従って、新規な高度に有効な抗ウイルス性医薬を探求することは、今もなお、幅広い、そして多様化された種類のウイルス感染を治療するための、新しい薬理学的薬剤の開発における主要な方向の一つである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の文脈において、用語は、一般的に以下のように定義される：
“アルキル”は、１−１２個の炭素原子を持つ直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素を意味する。分枝は、少なくとも一つ又はそれより多い“低級アルキル”置換基を持つアルキル鎖を意味する。アルキル基は、ハロゲン、アルケニルオキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アロイル、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、アルキニルオキシ、アラルコキシ、アリールオキシ、アリールオキシカルボニル、アルキルチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、アリールスルホニル、アルキルスルホニルヘテロアラルキルオキシ、環縮合ヘテロアリールシクロアルケニル、環縮合ヘテロアリールシクロアルキル、環縮合ヘテロアリールヘテロシクレニル、環縮合ヘテロアリールヘテロシクリル、環縮合アリールシクロアルケニル、環縮合アリールシクロアルキル、環縮合アリールヘテロシクレニル、環縮合アリールヘテロシクリル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、ヘテロアラルキルオキシカルボニル或いはＲｋａＲｋ＋１ａＮ−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＣ（＝Ｏ）−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＣ（＝Ｓ）−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＳＯ２−を含む、同一又は異なった構造の一つ又はそれより多い置換基（“アルキル置換基”）を有することができ、ここで、Ｒｋａ及びＲｋ＋１ａは、互いに独立に、その意味が本項で定義される“アミノ基置換基”、例えば、水素、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであるか、或いはＲｋａ及びＲｋ＋１ａは、これらが接続しているＮ−原子と一緒に、Ｒｋａ及びＲｋ＋１ａを経由して、４−７員のヘテロシクリル又はヘテロシクレニルを形成する。好ましいアルキル基は、メチル、トリフルオロメチル、シクロプロピルメチル、シクロペンチルメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、メトキシエチル、カルボキシメチル、メトキシカルボニルメチル、エトキシカルボニルメチル、ベンジルオキシカルボニルメチル及びピリジルメチルオキシカルボニルメチルである。好ましい“アルキル置換基”は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アラルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、ヘテロアラルキルオキシカルボニル又はＲｋａＲｋ＋１ａＮ−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＣ（＝Ｏ）−、環縮合アリールヘテロシクレニル及び環縮合アリールヘテロシクリルである。
【００１２】
“アミノ基置換基”は、アミノ基に接続される置換基を意味する。アミノ基置換基は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アシル、アロイル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、ヘテロシクリルアミノカルボニル、アルキルアミノチオカルボニル、アリールアミノチオカルボニル、ヘテロアリールアミノチオカルボニル、ヘテロシクリルアミノチオカルボニル、環縮合ヘテロアリールシクロアルケニル、環縮合ヘテロアリールシクロアルキル、環縮合ヘテロアリールヘテロシクレニル、環縮合ヘテロアリールヘテロシクリル、環縮合アリールシクロアルケニル、環縮合アリールシクロアルキル、環縮合アリールヘテロシクレニル、環縮合アリールヘテロシクリル、アルコキシカルボニルアルキル、アラルコキシカルボニルアルキル、ヘテロアラルキルオキシカルボニルアルキルである。
【００１３】
“活性成分”（薬物物質）は、薬理学的活性を示す合成又は他の（生命工学、植物、動物、微生物等）起源の、医薬の製造及び調製において使用される医薬組成物の活性成分である生理学的に活性な化合物を意味する。
【００１４】
“医薬”は−ヒト及び動物の生理学的機能の回復、改善又は改変を意図し、そして疾病の治療及び予防、診断、麻酔、避妊、美容術等のための錠剤、カプセル、注射、軟膏及び他の既成の形態の化合物（又は医薬組成物としての化合物の混合物）である。
【００１５】
“治療キット”は、異なった薬理学的作用の機構を示し、そして疾病の過程に加わる各種の生体標的を指向する二つ又はそれより多い医薬の同時に投与される組合せである。
【００１６】
“医薬組成物”は、一般式Ｉの化合物並びに医薬的に受容可能な、そして薬理学的に適合性な充填剤、溶媒、希釈剤、担体、助剤、分配及び感作剤、送達剤、例えば保存剤、安定剤、充填剤、崩壊剤、加湿剤、乳化剤、懸濁剤、増粘剤、甘味剤、香味剤、芳香化剤、抗細菌剤、殺真菌剤、潤滑剤、及び延長供給調節物質からなる群から選択される少なくとも一つの成分を含んでなる組成物を意味し、その選択及び適した比率は、種類並びに投与の方法及び投与量に依存する。適した懸濁剤の例は、エポキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエテン、ソルビトール及びソルビトールエーテル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカントゴム、並びに同様にこれらの混合物である。微生物の作用に対する保護は、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸、及び類似の化合物のような各種の抗細菌及び抗真菌剤によって提供することができる。組成物は、更に、例えば、糖、塩化ナトリウム、及び類似の化合物のような等張剤を含有することができる。組成物の延長した作用は、活性剤の吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンによって達成することができる。適した担体、溶媒、希釈剤及び到達剤の例は、注射のための、水、エタノール、ポリアルコール、及びこれらの混合物、天然油（例えばオリーブ油）、並びに有機エステル（例えばオレイン酸エチル）を含む。充填剤の例は、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム等である。崩壊剤及び分配剤の例は、デンプン、アルギン酸及びその塩、並びにケイ酸塩である。適した潤滑剤の例は、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク及び高分子量のポリエチレングリコールである。単独の又はもう一つの活性化合物との組合せ中の活性成分の経口、舌下、経皮、筋肉内、静脈内、皮下、局所又は直腸投与のための医薬組成物は、標準的な投与形態で、或いは伝統的な医薬的担体との混合物中で、ヒト又は動物に投与することができる。適した標準的な投与形態は、経口形態、例えば、錠剤、ゼラチンカプセル、丸薬、粉末、顆粒、チューインガム及び経口溶液又は懸濁液；舌下及び頬側経由投与形態；エアゾール；インプラント；局所、経皮、皮下、筋肉内、静脈内、鼻腔内又は眼内の形態並びに直腸投与形態を含む。
【００１７】
本出願人等は、以前には知られていなかった以下の一般式１の［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−｛５−［４−（４−｛２−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−メトキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２−イル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−ブタ−１，３−ジイニル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−ピロリジン−１−カルボニル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸アルキル・ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩の立体異性体を発見し、式中：
【００１８】
【化２】
2016507554.tif 000004
【００１９】
Ｒは、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。
【００２０】
本発明によれば、更に好ましいものは、更に以下の式１．１：
【００２１】
【化３】
2016507554.tif 000005
【００２２】
の［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−｛５−［４−（４−｛２−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−メトキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２−イル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−ブタ−１，３−ジイニル）−フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−ピロリジン−１−カルボニル）−２−メチルプロピル］−カルバミン酸メチル・ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩  １．１である。
【００２３】
一般式１の塩基を、特許ＲＵ２４５２７３５ＲＦ（２０１２）の６６−６８頁に記載されている方法を使用して調製した。
【００２４】
本発明によれば、一般式１のナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩は、式１の塩基とメタノール、エタノール又はイソ−プロパノール中のナフタレン−１，５−ジスルホン酸の反応によって調製される。
【００２５】
本発明によって調製される一般式１の塩は、薬局方に使用するために要求される高い純度によって区別され、そしてこれらは、低温（４．７℃）で十分に保存することができるものである。
【００２６】
新規な化合物の構造及びその純度は、分析用クロマトグラフィー及びＬＣＭＳによって確認された。化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗプログラム（Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｏｆｔ  Ｉｎｃ．）を使用して命名された。
【００２７】
本発明の主題は、一般式１又は式１．１の化合物の、(恐らくは、possibly)結晶質又は多結晶質の形態であり得る、ＮＳ５Ａタンパク質の阻害剤である。
【００２８】
本発明の主題は、ＮＳ５Ａタンパク質の阻害剤として、治療的に有効な量の一般式１又は式１．１の化合物を含んでなる、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＢＶ−型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の治療及び予防のための医薬組成物である。
【００２９】
医薬組成物は、医薬的に受容可能な賦形剤を含むことができる。医薬的に受容可能な賦形剤は、製薬の分野で適用される希釈剤、助剤及び／又は担体を意味する。本発明によれば、一般式１の化合物或いはその結晶質の形態、又は多結晶質の形態と一緒の医薬組成物は、他の活性成分を、これらが好ましくない効果、例えばアレルギー反応を起こさないことを条件として、含むことができる。
【００３０】
臨床治療に本発明による医薬組成物を使用するために必要な場合、これらは、各種の形態；例えば、経口形態（例えば、錠剤、ゼラチンカプセル、丸薬、溶液、又は懸濁液）；注射のための形態（例えば、注射のための溶液又は懸濁液、或いは注射のための乾燥粉末、これは使用前に注射用水の添加のみを要する）；局所形態（例えば、軟膏又は溶液）の調製のために混合することができ、ここにおいて、これらは、伝統的な医薬的担体を含むことができる。
【００３１】
本発明によれば、医薬組成物中に使用される担体は、普通に使用される形態の調製のために製薬の分野で使用される担体であり、特に、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、溶媒、希釈剤、安定剤、懸濁剤、着色剤、味覚香料が経口形態で使用され；防腐剤、可溶化剤、安定剤が注射のための形態で使用され；基剤物質、希釈剤、潤滑剤、防腐剤が局所形態で使用される。
【００３２】
医薬組成物は、少なくとも一つの一般式１の化合物或いはその結晶質の形態又は多結晶の形態を、不活性の充填剤及び／又は溶媒と混合することによって調製された。
【００３３】
活性成分として一般式１の化合物を含んでなる医薬組成物の患者における臨床投与量は：患者の器官における活性成分の治療効率及び生体利用性、その交換及び器官からの除去の速度、年齢、性別及び患者の徴候の重篤度によって補正することができる。従って、成人のための毎日の摂取量は、通常１０−５００ｍｇである。投与単位として本発明による医薬組成物を調製する場合、上記の有効な投与量は、考慮されるべきであり、ここにおいて、組成物のそれぞれの投与単位は、１０−５００ｍｇの式１の化合物を含有しなければならない。医師又は薬剤師の指示に従って、医薬は、規定された時間にわたって、数回（好ましくは、１ないし６回）摂取することができる。
【００３４】
本発明の主題は、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＶＢ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のための医薬的に受容可能な包装中に入れられた、ＮＳ５Ａタンパク質阻害剤として、少なくとも一つの一般式１又は式１．１の化合物、或いは新規な医薬組成物を、治療的に有効な量で含んでなる錠剤、カプセル又は注射の形態の医薬である。
【００３５】
本発明の主題は、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＶＢ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のための、少なくとも一つの一般式１又は式１．１の化合物、或いは新規な医薬組成物、或いは新規な医薬を、治療的に有効な量で含んでなる治療キットである。
【００３６】
Ｃ型肝炎及びＧＢＶ−Ｃ型肝炎を含む上記フラビウイルス疾病の予防及び治療のための治療キットは、本発明中で開示される医薬と共に：イノシン−５−一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、例えば、リバビリン（認可）及びリバミジン；Ｃ型肝炎ＮＳ３プロテアーゼの阻害剤、例えば、テラプレビル、シルプレビル（ｓｉｌｕｐｒｅｖｉｒ）及びＳＣＨ−５０３０４３；ＲＮＫポリメラーゼＮＳ５Ｂの阻害剤、例えば、ＸＴＬ−２１２５；アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、例えば、アミノ炭水化物セルゴシビル（Ｓｅｌｇｏｚｉｖｉｒ）を；そして更に、ＴＬＲ受容体アゴニスト、肝保護物質、シクロスポリン、各種のタンパク質（例えば、インターフェロン）、抗体、ワクチン等を含むことができる。
【００３７】
組合せ療法のために、いずれものクラスの薬剤は、本発明のビス−アゾールと組合せた場合に有用であることができ、そしてこれは、例えば、ＨＣＶポリメラーゼのヌクレオシド及び非ヌクレオシド阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、ＮＳ４Ｂ阻害剤、及び配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を機能的に阻害する医学的薬剤、並びにＨＣＶ細胞付着又はウイルス進入、ＨＣＶのＲＮＡ転位、転写、複製又はＨＣＶ成熟、濃度、或いはウイルス放出を阻害する他の医薬を意味することができる。これらのクラスの、そして本発明において有用である具体的な化合物は、制約されるものではないが、大環状複素環及び直鎖のＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、例えば、テラプレビル（ＶＸ−９５０）、ボセプレビル（ＳＣＨ−５０３０３４）、ナルラプレビル（ｎａｒｌａｐｒｅｖｉｒ）（ＳＣＨ−９００５１８）、ＩＴＭＮ−１９１（Ｒ−７２２７）、ＴＭＣ−４３５３５０、（別名ＴＭＣ−４３５）、ＭＫ−７００９、ＢＩ−２０１３３５、ＢＩ−２０６１（シルプレビル）、ＢＭＳ−６５００３２、ＡＣＨ−１６２５、ＡＣＨ−１０９５（ＨＣＶ  ＮＳ４Ａ  プロテアーゼ補助因子阻害剤）ＶＸ−５００、ＶＸ−８１３、ＰＨＸ−１７６６、ＰＨＸ２０５４、ＩＤＸ−１３６、ＩＤＸ−３１６、ＡＢＴ−４５０  ＥＰ−０１３４２０（及び同類物）及びＶＢＹ−３７６を含む；本発明において有用なヌクレオシドのＨＣＶポリメラーゼ（レプリカーゼ）阻害剤は、制約されるものではないが、Ｒ７１２８、ＰＳＩ−７８５１、ＩＤＸ−１８４、ＩＤＸ−１０２、Ｒ１４７９、ＵＮＸ−０８１８９、ＰＳＩ−６１３０、ＰＳＩ−９３８及びＰＳＩ−８７９、並びに各種の他のヌクレオシド及びヌクレオチド類似体、並びに２’−Ｃ−メチル修飾ヌクレオシド及びヌクレオチド（制約されるものではないが）として誘導されたもの；並びに７’デアザ修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドを含むＨＣＶ阻害剤を含む。本発明において有用な非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ（レプリカーゼ）阻害剤は、制約されるものではないが、ＨＣＶ−７９６、ＨＣＶ−３７１、ＶＣＨ−７５９、ＶＣＨ−９１６、ＶＣＨ−２２２、ＡＮＡ−５９８、ＭＫ−３２８１、ＡＢＴ−３３３、ＡＢＴ−０７２、ＰＦ−００８６８５５４、ＢＩ−２０７１２７、ＧＳ−９１９０、Ａ−８３７０９３、ＪＫＴ−１０９、ＧＬ−５９７２８及びＧＬ−６０６６７を含む。
【００３８】
更に、本発明のＮＳ５Ａ阻害剤は、シクロフィリン（ｃｙｃｌｏｐｈｙｌｌｉｎ）及びイムノフィリン（ｉｍｍｕｎｏｐｈｙｌｌｉｎ）アンタゴニスト（例えば、制約されるものではないが、ＤＥＢＩＯ化合物、ＮＭ−８１１、並びにシクロスポリン及びその誘導体）、キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質（例えば、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０）の阻害剤、制約されるものではないが、インターフェロン（アルファ−、ベータ−、オメガ−、ガンマ−、ラムダ−又は合成）、例えば、イントロンＡＴＭ、ロフェロン−ＡＴＭ、キャンフェロン−Ａ３００ＴＭ、アドバフェロンＴＭ、インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）ＴＭ、フモフェロン（Ｈｕｍｏｆｅｒｏｎ）ＴＭ、スミフェロンＭＰＴＭ、アルファフェロン（Ａｌｆａｆｅｒｏｎ）ＴＭ、ＩＦＮ−βＴＭ、フェロン（Ｆｅｒｏｎ）  ＴＭ、等、ポリエチレングリコール誘導（ペグ化）インターフェロン化合物、例えば：ＰＥＧインターフェロン−α−２ａ（ペガシスＴＭ）、ＰＥＧインターフェロン−α−２ｂ（ＰＥＧイントロンＴＭ）、ペグ化ＩＦＮ−α−ｃｏｎ１等；インターフェロン化合物の長時間作用製剤及び誘導体、例えばアルブミン縮合インターフェロン、アルブフェロンＴＭ、ロクテロン（Ｌｏｃｔｅｒｏｎ）ＴＭ、等；各種の制御された供給系を伴うインターフェロン（例えば、ＩＴＣＡ−６３８、ＤＵＲＯＳ皮下供給系によって供給されるオメガ−インターフェロン）；細胞中のインターフェロンの合成を刺激する化合物、例えばレシキモド等；インターロイキン；１型ヘルパーＴ細胞反応の発生を向上する化合物、例えばＳＣＶ−０７等；ＴＯＬＬ様受容体アゴニスト、例えば：ＣｐＧ−１０１０１（アクチロン（ａｃｔｉｏｎ））、イソトラビン（ｉｓｏｔｏｒａｂｉｎｅ）、ＡＮＡ７７３等；チモシンα−１、ＡＮＡ−２４５及びＡＮＡ−２４６、ヒスタミン二塩酸塩、プロパゲルマニウム；テトラクロロデカオキシド；アンプリジェン（ａｍｐｌｉｇｅｎ）；ＩＭＰ−３２１；ＫＲＮ−７０００；抗体、例えば：シバシル（ｃｉｖａｃｉｒ）、ＸＴＬ−６８６５等、並びに予防及び治療用ワクチン、例えば：Ｉｎｎｏ  Ｖａｃ、ＨＣＶ  Ｅ１Ｅ２／ＭＦ５９等を含むことができる他の免疫調節剤と組合せて使用することができる。更に、ＮＳ５Ａ阻害剤、１型インターフェロン受容体アゴニスト（例えば、ＩＦＮ−α）及びＩＩ型インターフェロン受容体アゴニスト（例えばＩＦＮ−γ）の投与に関係する上記の方法のいずれかは、有効な量のＴＦＮ−αアンタゴニストの投与によって増強することができる。このような組合せ療法において使用するために適した例示的な非制約的ＴＮＦ−αアンタゴニストは、ＥＮＢＲＥＬＴＭ及びＨＵＭＩＲＡＴＭを含む。
【００３９】
更に、本発明のＮＳ５Ａ阻害剤は、ＨＣＶ感染の治療において有効であると考えられる抗原虫剤及び他の抗細菌剤、例えばプロドラッグニタゾキサニドと組合せて使用することができる。ニタゾキサニドは、本発明に開示される化合物と組合せて、同様にＨＣＶ感染の治療において有用な他の薬剤、例えばペグインターフェロンアルファ−２ａ及びリババリンと組合せて薬剤として使用することができる（例えば、Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ，ＪＦ  ａｎｄ  Ｋｅｅｆｆｅ，ＥＢ，Ｆｕｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３：５３９−５４５，２００８を参照されたい）。
【００４０】
本発明のＮＳ５Ａ阻害剤は、更に、インターフェロン及びペグ化インターフェロンの別の形態、リバビリン又はその誘導体（例えば、タラババリン（Ｔａｒａｂａｖａｒｉｎ）、レヴォビリオン（ｌｅｖｏｖｉｒｉｏｎ））、マイクロＲＮＡ、小分子干渉ＲＮＡ化合物（例えば、ＳＩＲＰＬＥＸ−１４０−Ｎ）等、ヌクレオチド又はヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、肝保護物質、抗炎症剤及びＮＳ５Ａの他の阻害剤と組合せて使用することもできる。ＨＣＶの生活環中の他の標的の阻害剤は、ＮＳ３ヘリカーゼ阻害剤；ＮＳ４Ａ補助因子阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤、例えば、ＩＳＩＳ−１４８０３、ＡＶＩ−４０６５等；ベクターにコード化された低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）；ＨＣＶ特異的リボザイム、例えばへプタザイム（ｈｅｐｔａｚｙｍｅ）、ＲＰＩ、１３９１９９等；侵入阻害剤、例えばＨｅｐｅＸ−Ｃ、ＨｕＭａｘ−ＨｅｐＣ等；アルファグルコシダーゼ阻害剤、例えばセルゴシビル、ＴＵ−２３１Ｂ等；ＫＰＥ−０２００３００２及びＢＩＶＮ４０１並びにＩＭＰＤＨ阻害剤を含む。他の例示的な化合物のＨＣＶ阻害剤化合物は、既知の科学及び特許刊行物中に開示されているものを含む。
【００４１】
更に、例えばリバビリン及びインターフェロンの組合せは、少なくとも一つの式１の化合物又は化合物１．１との組合せ療法として投与することができる。本発明は、前述のクラス又は化合物に制約されず、そして既知の及び新しい化合物並びに生物学的に活性な薬剤の組合せを意図している。本発明の組合せ療法が、組合せが、この独創的な群の化合物の抗細菌性活性を、又は医薬組成物自体の抗細菌性活性を除去しない限り、この独創的な群のビス−アゾールの、独創的な群の他の化合物、又は独創的な群の外部の他の化合物とのいずれもの化学的に混和性の組合せを含むことは意図されている。
【００４２】
組合せ療法は、連続的であることができ、これは、最初一つの薬剤、そして次いで二番目の薬剤（例えば、治療のそれぞれの段階が、本発明の異なった化合物を含んでなる場合、或いは治療の一つの段階が本発明の化合物を含んでなり、そして他方が一つ又はそれより多い生物学的な活性剤を含んでなる場合）による治療であるか、又はこれは、同時の両方の薬剤による治療であることができる。連続療法は、最初の治療の完了後、二番目の治療の開始前に妥当な時間を含むことができる。同時の両方の薬剤による治療は、同じ日量又は別個の投与量であることができる。組合せ療法は、二つの薬剤に制約される必要はなく、そして三つ又はそれより多い薬剤を含むことができる。同時的及び連続的組合せ療法の両方の投与量は、組合せ療法の成分の吸収、分布、代謝及び排出速度、並びに当業者にとって既知の他の因子に依存するものである。投与量値は、緩和される症状の重篤度により変動するものである。いずれもの特定の患者において、具体的な投与計画及び予定は、個人の必要性及び組合せ療法の投与を管理又は監督するヒトの職業的判断により時間をかけて調節することができる。
【００４３】
本発明の主題は、Ｃ型肝炎ウイルス及びＧＢＶ−Ｃ型肝炎ウイルスによって起こされる疾病の予防及び治療のための、治療的に有効な量の一般式１、又は式１．１の少なくとも一つの化合物、又は新規な医薬組成物、又は新規な医薬、或いは治療キットの導入からなる方法である。
【００４４】
以下に、本発明は、例示的であるが、しかし本発明の範囲を制約するものではない具体的な実施例によって記載される。
【実施例】
【００４５】
実施例１．  一般式１のナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩の調製のための一般的方法。
【００４６】
一般式１の塩基（５ｇ）を、メタノール（１５０ｍｌ）中に溶解した。得られた溶液を、セライトを通して濾過し、そしてナフタレン−１，５−ジスルホン酸の四水和物（１．０５当量）のメタノール中の溶液を、５ｇの塩基に対して５０ｍｌの量で撹拌しながらこれに加えた。混合物を４５−６０分間撹拌し（しかし、撹拌時間の増加は、極めて微細に分割された沈殿物の発生をもたらすため、それ以上ではなく）、沈殿した固体を遠心によって収集し、メタノール、エーテルで二回洗浄し（それぞれの洗浄後、固体を遠心した）、エーテルと共に丸底フラスコに移し、そして回転蒸発機で乾燥し、そして次いで凍結乾燥にかけた。これにより、一般式１の化合物を得た、収率、７５％より多いナフタレン−１，５−ジスルホン酸：
１．１，  ＬＣＭＳ，７１１（Ｍ＋１Ｈ）１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  ０．９６−１．０５（ｄ，Ｊ１＝６．１，１２Ｈ），１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．９４（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｍ，２Ｈ），３．４８（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｓ，６Ｈ），３．５８（ｍ，２Ｈ），４．１６（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｂｄ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ１＝７．８，２Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｂｓ，２Ｈ），８．０２（ｔ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ１＝７．８，２Ｈ），９．５６（ｄ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），１１．６０（ｂｓ，２Ｈ），ＨＰＬＣ法による化合物の純度は９８．８％；
１．２，  ＬＣＭＳ，７３９（Ｍ＋１Ｈ）１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  ０．９６−１．０５（ｄ，Ｊ１＝６．１，１２Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ１＝７．１，６Ｈ），１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．９４（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｍ，２Ｈ），３．４８（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｍ，２Ｈ），４．１６（ｍ，２Ｈ），４．１９（ｑ，Ｊ１＝７．１，４Ｈ），４．５６（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｂｄ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ１＝７．８，２Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｂｓ，２Ｈ），８．０２（ｔ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ１＝７．８，２Ｈ），９．５６（ｄ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），１１．６０（ｂｓ，２Ｈ），ＨＰＬＣ法による化合物の純度は９８．６％；
１．３，  ＬＣＭＳ，７６７（Ｍ＋１Ｈ），１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  ０．９６−１．０５（ｄ，Ｊ１＝６．１，１２Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ１＝７．１，６Ｈ），１．６０（ｍ，４Ｈ），１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．９４（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｍ，２Ｈ），３．４８（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｍ，２Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ１＝７．１，４Ｈ），４．１６（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｂｄ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ１＝７．８，２Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｂｓ，２Ｈ），８．０２（ｔ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ１＝７．８，２Ｈ），９．５６（ｄ，Ｊ１＝８．０，２Ｈ），１１．６０（ｂｓ，２Ｈ），ＨＰＬＣ法による化合物の純度は９８．５％；
生成物の純度が９８．５％以下の場合、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩のもう一回の沈殿によって、更なる精製を行った。この目的のために、塩１．１、１．２又は１．３を二回目のために塩基に移動した。そうするために、塩をエタノール（１００ｍｌ）中に懸濁し、次いで炭酸ナトリウムの１０％溶液（１００ｍｌ）をこれに加え、そして塩の完全な溶解後、塩化メチレン（４００ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水及び塩化ナトリウムの飽和溶液で一回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、４０℃以下の温度の真空中で蒸発した。次いで化合物１．１、１．２又は１．３のナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩を、先に記載した方法によって沈殿させた。
【００４７】
９９％以上の純度を持つナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩の調製のために、塩基の精製をカラムクロマトグラフィーの方法によって行った。溶出剤−ジオキサン：トルエン＝１：１．５。中間の画分を混合し、４０℃以下の温度で真空中で蒸発した。次いで化合物１．１、１．２又は１．３のナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩を先に記載した方法を使用して沈殿させた。収率−６０％、純度−９９％以上。
【００４８】
実施例２．  一般式１の化合物の抗ウイルス活性の決定（ＮＳ５Ａタンパク質の阻害能力）。
【００４９】
ＮＳ５Ａタンパク質の式１の化合物の阻害能力を、サブゲノムのＲＮＡ−レプリコンＨＣＶ（遺伝子型１ｂ、ｃｌｏｎ  Ｃｏｎ１）を含んでなるヒト肝細胞腫の細胞系Ｈｕｈ７中で決定した。９６ウェルプレート中のウイルスタンパク質ＮＳ５Ａに対する免疫酵素アッセイ（ＩＥＡ）のバージョンを実験方法として使用した。化合物の細胞毒性を、並行投与計画で推定した。
【００５０】
Ｈｕｈ７細胞を９６ウェルプレートに播種した（それぞれのウェルの１００μｌの培養培地中に７．５×１０３細胞）。ＤＭＥＭ培地（ＤＭＥＭ  １×；供給源；Ｃｅｌｌｇｒｏ；カタログ：１０−０１３−ＣＶ）中の試験化合物の溶液を、使用の直前に調製した。２０ｎＭから０．２ｐＭまでの濃度の変化を持つ１１個の一連の３倍希釈液を調製した。播種後４時間目に、化合物の一連の希釈液を細胞に加えた（それぞれのウェルに１００μｌ）。試験化合物の最終濃度は、１０ｎＭから０．１ｐＭまで変化し、そしてＤＭＳＯは−０．５％であった。必要な場合、より高い濃度の開示される化合物を調査した。化合物のそれぞれの希釈液を二つの同じウェルで試験した。次いで、細胞を３日間３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートし、そしてアセトン／メタノール（１：１）の混合物の２５０μｌ／ウェルの添加によって固定した。１分以内に、細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）溶液で三回洗浄した。次いで細胞をＰＢＳ溶液中の１０％胎児ウシ血清の１５０μｌ／ウェルの添加によって、室温で１時間遮断した。その後、細胞をｃｏｒ−抗原ＨＣＶ、ｃｌｏｎＣ７−５０に対するマウスのモノクローナル抗体（供給源：Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ；カタログ：ＭＡ１−０８０）（１００μｌ／ウェル、作業希釈度−ＰＢＳ溶液中の１０％胎児ウシ血清中の１：５００）と共に、３７℃で２時間インキュベートした。細胞をＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０溶液で６回洗浄し、次いで。これをヤギ抗マウス免疫グロブリン抗体（ホースラディッシュペルオキシダーゼと複合、１００μｌ／ウェル、作業希釈度−ＰＢＳ溶液中の１０％胎児ウシ血清中の１：２５００）と共に１時間インキュベートした。細胞をＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０溶液で６回、ＰＢＳ溶液で一回洗浄し、その後、基質（ｏ−フェニレンジアミン（ｏＰＤ）＋１２ｍｌのクエン酸／リン酸緩衝液＋５μｌの３０％Ｈ２Ｏ２の１個の錠剤）を１００μｌ／ウェルの量で加えた。プレートを室温の暗所に３０分間保った。反応を２Ｎの１００μｌ／ウェルの量のＨ２ＳＯ４の添加によって停止し、そして光学密度（波長４９０ｎｍ）を、マルチスキャンプレートリーダーＶｉｃｔｏｒ３  Ｖ  １４２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって測定した。全ての試験されたビス−アゾールに対するＩＣ５０値（アゾール濃度、ウイルスのＲＮＡ−レプリコンのレベルを５０％低下する）を、ＸＬｆｉｔ４プログラムの援助で計算した。
【００５１】
一般式１の化合物の細胞毒性を、ヒト肝細胞腫の細胞系Ｈｕｈ７に対する実験で試験した。生細胞の量を、ＡＴＰＬｉｔｅキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＵＳＡ）の援助で、製造業者の説明書によって決定した。細胞毒性の作用を、透明な底を持つ黒色のマイクロプレート（９６ウェル、それぞれのウェルに１０４個の細胞）に細胞を播種することによって推定した。それぞれのビス−アゾールに対して、三つの独立の繰返しを使用した。試験アゾールを１８時間内に加え、その後、細胞を、化合物と一緒に９６時間インキュベートした。それぞれのウェルを、リン酸緩衝生理食塩水（０．２ｍｌ／ウェル）で二回洗浄し、そして次いで細胞を、細胞緩衝液（５０μｌ／ウェル）の添加によって溶解した（全ての記述した試薬はＡＴＰＬｉｔｅキット中に含まれている）。マイクロプレートを、回転プラットフォーム上で６００回転／分で５分間インキュベートし、その後、５０μｌの基質溶液（ＡＴＰＬｉｔｅキットの一部）をそれぞれのウェルに加えた。マイクロプレートを、更に５分間、回転プラットフォーム上で６００回転／分でインキュベートし、１０分間暗所に保ち；その後、ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ装置（Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して測定した。細胞の５０％が破壊されるビス−アゾール濃度に対応するＣＣ５０値を、細胞毒性の推定のための定量的特徴として使用した。ＣＣ５０値の計算：阻害の有効性（％Ｉｎｈ）の計算のために、次の式を使用した：％Ｉｎｈ＝［（Ｌｐｏｓ−Ｌｅｘ）／  Ｌｐｏｓ−Ｌｎｅｇ）］×１００％、式中、Ｌｐｏｓ−正の対照、化合物を伴わない細胞によるウェルの蛍光；Ｌｎｅｇ−負の対照、細胞を伴わない培地によるウェルの蛍光；Ｌｅｘ−限定濃度の化合物を伴うウェルの蛍光。次いでＣＣ５０値を、ＸＬｆｉｔ４プログラムの援助により計算した。
【００５２】
一般式１の新規な化合物に対する試験結果は、その高いピコモルの活性を証拠を与える。遺伝子型１ｂ、１ａ及び２ａのＨＣＶに対する新規な化合物の阻害活性を表に表す。
【００５３】
【表１】
2016507554.tif 000006
【００５４】
実施例３．  一般式１のナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩の保存の調査
全ての試料を、ゴムコルク及びアルミニウムキャップで密封したガラスバイアル中で、約４．７℃の温度で冷蔵庫中で保存した。混合物の量を、内部正規化の方法によって決定し、検出はＵＶ検出器を２２０ｎｍで使用して行った。以下に、化合物１．１に対する４．７℃の温度におけるその安定性を示す試験結果を与える。
【００５５】
【表２】
2016507554.tif 000007
【００５６】
実施例４．  錠剤の形態の医薬組成物の調製。
【００５７】
デンプン（１６００ｍｇ）、顆粒のラクトース（１６００ｍｇ）、タルク（４００ｍｇ）及び化合物１．１（１０００ｍｇ）を、注意深く一緒に混合した。調製した煉瓦状物を顆粒に粉砕し、そして篩を通して篩い分けし、１４−１６メッシュのサイズの顆粒を集めた。得られた顆粒を、それぞれ５６０ｍｇ単位で適した形態の錠剤にペレット化した。
【００５８】
実施例５．  カプセルの形態の医薬組成物の調製。
【００５９】
化合物１．２を、ラクトースの粉末と２：１の比で注意深く混合した。得られた粉末の混合物を、３００ｍｇ単位で適したサイズのゼラチンカプセルに包装した。
【００６０】
実施例６．  筋肉内、腹腔内又は皮下注射のための注射用組成物の形態の医薬組成物の調製。
【００６１】
化合物１．１（５００ｍｇ）を、クロロブタノール（３００ｍｇ）、プロピレングリコール（２ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）と混合した。得られた溶液を濾過し、そして１ｍｌのアンプルに入れ、これをその後密封した。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明は、医学及び獣医学において使用することができる。
【国際調査報告】
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