(57)【要約】マトリクスメタロプロテイナーゼの組成物が記載される。その使用は、組織からの細胞、特に幹細胞の、単離、組織、タンパク質の解離、様々な状態の処置を含む。【選択図】なし
2016520550.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの：マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、組成物。
【請求項２】
前記ＭＭＰ、前記不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）が、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
場合によっては少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤、少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または前記少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせが場合によってはカプセル封入される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
少なくとも１つのＭＭＰ、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせが制御放出処方物を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも２つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含む組成物であって、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、組成物。
【請求項８】
３以上の、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をさらに含み、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
場合によって少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤、少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または前記少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせが場合によってはカプセル封入される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つのＭＭＰ、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせが制御放出処方物を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物であって、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、組成物。
【請求項１４】
前記有効量の何れか１つのＭＭＰまたはそのプロ酵素が、脂肪組織を解離させるかまたは異化する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、脂肪組織を解離させるかまたは異化する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
１以上のＭＭＰの１以上の活性断片または前記活性断片を含むプロＭＭＰを含み、前記活性断片が脂肪組織を異化する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＭＭＰが活性または不活性またはそれらの組み合わせである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
不活性ＭＭＰを活性化する１以上の薬剤をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
医薬的に許容可能な賦形剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２０】
前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）が、核酸配列、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたはそれらの突然変異体および変異体を含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２１】
生体試料から幹細胞を単離する方法であって、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と前記生体試料を接触させることを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、前記組成物が、前記生体試料を異化するかまたは解離させ、それによって前記試料から幹細胞を単離することを含む、生体試料から幹細胞を単離する方法。
【請求項２２】
前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは前記活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＭＭＰまたはその断片が活性または不活性またはそれらの組み合わせである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を投与することをさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記生体試料が、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜または何らかの器官組織を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、前記生体試料を解離させるかまたは異化し、それにより前記幹細胞を単離する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
過剰な脂肪組織沈着が付随する状態を有する対象を処置する方法であって、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、前記組成物が、前記脂肪組織を解離させるかまたは異化する、過剰な脂肪組織蓄積が付随する状態を有する対象を処置する方法。
【請求項２８】
前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは前記活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含み、前記活性断片が脂肪組織を解離させるかまたは異化する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
脂肪組織が付随する状態が、セルライト、脂肪沈着、肥満、代謝性疾患またはそれらの組み合わせを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、前記脂肪組織を解離させるかまたは異化する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
局所的な脂肪沈着の減少を必要とする対象において局所的な脂肪沈着を減少させる方法であって、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む医薬組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３  ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物，医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、前記局所的な脂肪沈着が減少させられる、局所的な脂肪沈着を減少させる方法。
【請求項３２】
前記医薬組成物が非経口、局所、筋肉内、皮下または経皮の投与経路により投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記医薬組成物が、局所的な脂肪沈着に、またはその付近に投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、前記脂肪沈着を解離させるかまたは異化する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
組織から幹細胞を単離する方法であって、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と組織を接触させることを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、前記組成物が前記組織を解離させ、それによって幹細胞を前記組織から単離させる、組織から幹細胞を単離する方法。
【請求項３６】
前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは前記活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＭＭＰまたはその断片が、活性または不活性またはそれらの組み合わせである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を投与することをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが前記組織を解離させるかまたは異化する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記組織が、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜または何らかの器官組織を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
繊維症に罹患している患者を処置する方法であって、治療的有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物を前記患者に投与することを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、方法。
【請求項４２】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、前記繊維性組織を解離させるかまたは異化する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の少なくとも１以上をコードする発現ベクターであって、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、発現ベクター。
【請求項４４】
少なくとも２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする発現ベクターを含む医薬組成物であって、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、医薬組成物。
【請求項４５】
少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む時間放出処方物であって、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロＭＭＰが、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、時間放出処方物。
【請求項４６】
少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤、ＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせを場合によっては含む、請求項４７に記載の時間放出処方物。
【請求項４７】
有効量の少なくとも２以上、３以上、４以上または５以上の前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせをさらに含む、請求項４５に記載の時間放出処方物。
【請求項４８】
組織を解離させるための方法であって、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と前記組織を接触させることを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、組織を解離させるための方法。
【請求項４９】
前記組成物が、有効量の少なくとも２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記組織が、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜、繊維性組織、瘢痕組織または何らかの器官組織を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
タンパク質マトリクスを解離させる方法であって、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物とタンパク質マトリクスを接触させることを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、タンパク質マトリクスを解離させる方法。
【請求項５２】
前記組成物が有効量の少なくとも２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記タンパク質マトリクスが、コラーゲン、フィブロネクチン、ゼラチン、ラミニン、アグレガン（ａｇｇｒｅｇａｎ）、エラスチン、フィブリン、フィブリノーゲンまたはそれらの組み合わせを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする核酸配列を含む組成物であって、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、組成物。
【請求項５５】
前記組成物が、少なくとも２以上、少なくとも３以上、少なくとも４以上または５以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする核酸配列をさらに含み、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記組成物が、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤、少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせを場合によっては含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５７】
前記少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または前記少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせが、場合によってはカプセル封入される、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記少なくとも１つのＭＭＰ、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせが、制御放出処方物を含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５９】
瘢痕または創傷を処置または治癒させる方法であって、少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と瘢痕組織または創傷を接触させることを含み、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、瘢痕または創傷を処置または治癒させる方法。
【請求項６０】
前記ＭＭＰ、前記不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）が、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記組成物が、医薬的に許容可能な薬剤と、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグと、をさらに含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、前記瘢痕組織または創傷を解離させるかまたは異化する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
繊維性組織を解離させる方法であって、少なくとも１つの：マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と前記繊維性組織を接触させることを含み、前記マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む、繊維性組織を解離させる方法。
【請求項６４】
前記ＭＭＰ、前記不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）が、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記組成物が、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせが、前記繊維性組織を解離させるかまたは異化する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６７】
膵臓または膵臓組織から膵島細胞を単離する方法であって、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と前記膵臓または膵臓組織を接触させることを含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、前記組成物が、前記膵臓または膵臓組織を異化するかまたは解離させ、それにより前記膵島細胞を単離する、膵臓または膵臓組織から膵島細胞を単離する方法。
【請求項６８】
前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは前記活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＭＭＰまたはその断片が、活性または不活性またはそれらの組み合わせである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を投与することをさらに含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
有効量の２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む組成物と前記膵臓または膵臓組織を接触させることを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含むキットであって、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロＭＭＰが、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、前記ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰが、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む、キット。
【請求項７３】
少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項７２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本願は、２０１３年４月５日提出の米国仮出願第６１／８０８，８６１号、題名「ＭＡＴＲＩＸ  ＭＥＴＡＬＬＯＰＲＯＴＥＩＮＡＳＥＳ  ＡＮＤ  ＵＳＥＳ  ＴＨＥＲＥＯＦ」の優先権を主張し、これは、その全体において本明細書により組み込まれる。
【０００２】
実施形態は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の組成物、使用の方法および治療適応を対象とする。
【背景技術】
【０００３】
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、自己再生および骨芽細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、腱細胞および筋芽細胞を含む間葉系列細胞型への分化の能力を有し、様々な間葉系組織の再生に寄与することが知られている。ＭＳＣは、骨髄吸引手順に従い入手し、続いてそれらの幹細胞能を失うことなくインビトロで培養することができるので、細胞治療のための魅力的な標的となる。しかし、従来からの骨髄獲得手順は、疼痛および病的状態を含み得るために患者にとって苦痛であり、通常、処理時に回収されるＭＳＣ数は少ない。骨髄のように脂肪組織は間葉由来であり、容易に単離される支持的な間質を含有する。脂肪組織は、間葉系幹細胞に富み（Ｚｕｋ  ＰＡら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  ２００２，１３：４２７９−４２９５；Ｂｕｎｎｅｌｌ  ＢＡら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００８，４５：１１５−１２０）、患者の不快感が少なく、成体幹細胞の豊富で十分な供給源を提供する。脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）は、ヒト吸引脂肪組織から単離され得、骨髄幹細胞（ＢＭＳＣ）のような系列に分化させ得る。いくつかの研究から、ヒトＡＤＳＣが、インビトロおよびインビボでＢＭＳＣと同様の特徴を有することが示されている。したがって、脂肪組織は、ＢＭＳＣよりも侵襲性が少ない方法によって得ることが可能な大量の自家幹細胞の理想的な供給源であり得る。
【０００４】
ＡＤＳＣの単離は、クロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＩおよびＩＩ型コラゲナーゼおよびサーモリシンから構成されるリベラーゼＨＩ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で主に達成されてきた。全リベラーゼ調製物は内毒素を含有する。予備試験で様々なコラゲナーゼ調製物中の内毒素の相対量および単離細胞の健常性に対する影響が調べられ（Ｌｉｎｅｔｓｋｙ  Ｅ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．１９９８；３０：３４５−３４６；Ｊａｈｒ  Ｈ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（Ｂｅｒｌ．）１９９９；７７：１１８−１２０；Ｓａｌａｍｏｎｅ  Ｍら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．２０１０，４２：２０４３−２０４８）、内毒素の存在がＡＤＳＣ生存能に有害であることが分かった。内毒素混入問題に対する解決策は、ＡＤＳＣ単離での使用のための組み換え酵素の作製である。細胞単離は、単一コラゲナーゼを用いた場合、リベラーゼＨＩと比較して効率的ではない（Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｇ．Ｈ．Ｊ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  １９９５；４４：２２７−２３４）。重大な問題は、Ｉａ型が急速に自己触媒的にＩｂ型に分解されるので、Ｉ型コラゲナーゼがリベラーゼＨＩの中で最も不安定なコンポーネントであることである。分解されたコラゲナーゼは、膵島生存能において有害作用を有する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の実施形態は、１以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、ＭＭＰの不活性型（例えばプロＭＭＰ）、断片、突然変異体、変異体またはそれらの組み合わせを含む組成物を対象とする。医薬組成物は、医薬担体中で上記のものの１以上を含む。
【０００６】
実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のうち少なくとも１つを含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０００７】
好ましい実施形態において、組成物は、少なくとも２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０００８】
好ましい実施形態において、組成物は、３以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０００９】
好ましい実施形態において、ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む。
【００１０】
実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましい実施形態において、本組成物は、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、変異体、突然変異体、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本組成物は、３以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、変異体、突然変異体、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、有効量の５以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の核酸配列を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の２以上の核酸配列を含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の、２以上、３以上、４以上の核酸配列を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤、少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせを場合によっては含む。この少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤またはこの少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせは、長時間にわたる制御もしくは持続放出、生理的条件、温度などのために場合によってはカプセル封入される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つのＭＭＰ、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせは、制御放出処方物を含む。
【００１７】
他の実施形態において、組成物は有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、変異体、突然変異体、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましくは、有効量の何れか１つのＭＭＰまたはそのプロ酵素は、脂肪組織を異化するかまたは解離させる。別の実施形態において、有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、脂肪組織を異化するかまたは解離させる。
【００１８】
別の実施形態において、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片または活性断片を含むプロＭＭＰであり、この活性断片は脂肪組織を異化する。いくつかの実施形態において、ＭＭＰは、活性または不活性またはそれらの組み合わせである。別の好ましい実施形態において、本組成物は、不活性ＭＭＰを活性化する１以上の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、医薬的に許容可能な賦形剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。実施形態において、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）は、核酸配列、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたはそれらの突然変異体および変異体を含む。
【００１９】
別の好ましい実施形態において、生体試料から幹細胞を単離する方法は、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と生体試料を接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物またはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は、生体試料を異化するかまたは解離させ、それによって試料から幹細胞を単離する。いくつかの実施形態において、本組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物またはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は、生体試料を異化するかまたは解離させ、それによって試料から幹細胞を単離する。好ましくは、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含む。別の好ましい実施形態において、本方法は、不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を投与することをさらに含む。好ましい実施形態において、生体試料は、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜、繊維性組織、瘢痕組織または何らかの器官組織を含む。
【００２０】
別の好ましい実施形態において、過剰な脂肪組織蓄積が付随する状態を有する対象を処置する方法は、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物を対象に投与することを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は、脂肪組織を解離させるかまたは異化する。いくつかの実施形態において、過剰な脂肪組織沈着が付随する状態を有する対象を処置する方法は、有効量の２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物を対象に投与することを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は、脂肪組織を解離させるかまたは異化する。脂肪組織が付随する状態の例は、セルライト、脂肪沈着、肥満、代謝性疾患、糖尿病またはそれらの組み合わせを含む。
【００２１】
別の好ましい実施形態において、局所的な脂肪沈着の減少を必要とする対象において局所的な脂肪沈着を減少させる方法は、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３  ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、この局所的な脂肪沈着を減少させる。いくつかの実施形態において、本医薬組成物は、有効量の２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。いくつかの実施形態において、本医薬組成物は、非経口、局所、筋肉内、皮下または経皮投与経路によって投与される。いくつかの実施形態において、本医薬組成物は、局所的な脂肪沈着に、またはその付近に投与される。
【００２２】
別の好ましい実施形態において、幹細胞を組織から単離する方法は、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と組織を接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は組織を解離させ、それによって幹細胞を組織から単離する。好ましくは、本組成物は、有効量の少なくとも２以上、少なくとも３以上、少なくとも４以上の、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましい実施形態において、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含む。いくつかの実施形態において、このＭＭＰまたはその断片は、活性または不活性またはそれらの組み合わせである。いくつかの好ましい実施形態において、この方法は、不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を投与することをさらに含む。
【００２３】
さらに別の実施形態において、繊維症に罹患している患者を処置する方法は、治療的有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物を患者に投与することを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８，ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００２４】
別の好ましい実施形態において、発現ベクターは少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードし、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００２５】
別の好ましい実施形態において、発現ベクターは、２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードし、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００２６】
別の好ましい実施形態において、医薬組成物は、少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする発現ベクターを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００２７】
別の好ましい実施形態において、医薬組成物は、２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする発現ベクターを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００２８】
別の好ましい実施形態において、時間放出処方物は、少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロＭＭＰは、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。別の好ましい実施形態において、時間放出処方物は、２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロＭＭＰは、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、この時間放出処方物は、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤、ＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせを場合によっては含む。
【００２９】
別の好ましい実施形態において、組織を解離させるための方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と組織を接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。別の好ましい実施形態において、組織を解離させるための方法は、有効量の２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と組織を接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００３０】
好ましい実施形態において、この組織は、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜、繊維性組織、瘢痕組織または何らかの器官組織を含む。
【００３１】
別の好ましい実施形態において、タンパク質マトリクスを解離させる方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物とタンパク質マトリクスを接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。別の好ましい実施形態において、タンパク質マトリクスを解離させる方法は、有効量の２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物とタンパク質マトリクスを接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００３２】
好ましい実施形態において、このタンパク質マトリクスは、コラーゲン、フィブロネクチン、ゼラチン、ラミニン、アグレガン（ａｇｇｒｅｇａｎ）、エラスチン、フィブリン、フィブリノーゲンまたはそれらの組み合わせを含む。
【００３３】
他の好ましい実施形態において、瘢痕または創傷を処置または治癒させる方法は、少なくとも１つの：マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と瘢痕組織または創傷を接触させることを含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましくは、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む。好ましくは、本組成物は、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。他の好ましい実施形態において、この組成物は、有効量の何れかの２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含み、瘢痕組織または創傷を解離させるかまたは異化する。
【００３４】
別の好ましい実施形態において、繊維性組織を解離させる方法は、少なくとも１つの：マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と繊維性組織を接触させることを含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましくは、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む。
【００３５】
好ましくは、本組成物は、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。他の好ましい実施形態において、本組成物は、有効量の何れかの２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含み、繊維性組織を解離させるかまたは異化する。
【００３６】
別の好ましい実施形態において、キットは、少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロＭＭＰは、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８，ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、本キットは、少なくとも１つのＭＭＰ活性化剤または少なくとも１つのＭＭＰ阻害剤またはそれらの組み合わせをさらに含む。
【００３８】
本発明の他の態様、目的および長所は、説明および例により示される添付の図面、本発明のある一定の実施形態と併せて次の記述から明らかになろう。図面は、本明細書の一部を構成し、本発明の代表的な実施形態を含み、様々な目的およびその特性を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、組み換え酵素活性化を示すグラフである。５μｇ／ｍＬキモトリプシンを用いて３７℃で３０分間ＭＭＰ−３を活性化し（薄青色）、一方でＭＭＰ−１２をＴＳＢ中で一晩、３７℃で自己活性化させた。活性型でＭＭＰ−９を購入した。５μＭ  Ｋｎｉｇｈｔ基質を用いて３０分間にわたり酵素活性を試験した。
【図２】図２は、単離ＭＳＣの形態を示す写真のスキャンである。脂肪組織から新鮮単離され、組織培養皿で６から７日間増殖させたＭＳＣの形態（継代０、最上列）および継代５（下部列）でのＭＳＣの形態は、リベラーゼ（商標）（Ａ）、ＭＭＰ−３（Ｂ）、ＭＭＰ−１２（Ｃ）とＩ型コラゲナーゼ（Ｄ）単離細胞との間で明らかな差は全く示されなかった。
【図３】図３は、フローサイトメトリーによるＭＳＣの免疫表現型を示す。リベラーゼ（商標）、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２−単離ＭＳＣにより発現される表面マーカーの検出。白の柱状グラフは、アイソタイプ対照抗体で染色した細胞を表し、黒い柱は、特異的なマーカーでの染色を表す。陽性細胞のパーセンテージを各パネルで示す。
【図４】図４は、リベラーゼ（商標）、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２により単離されたＭＳＣ上でのＣＤ７３、ＣＤ９０およびＣＤ１０５の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を示すグラフである。
【図５】図５は、脂肪細胞へと誘導されるＭＳＣの組織化学的染色（オイルレッドＯ）を示す写真のスキャンである。ＭＳＣを１０日間脂肪生成に誘導した。「誘導第９日」のパネルにおいて油滴は黒色の点に見える。
【図６】図６は、冷凍による酵素保存後の酵素活性化を示す一連のグラフである。＊＊Ａ１１酵素を３０分間活性化。ヘッダーは時間酵素量が凍結であったことを示し、一方でｘ軸は、酵素活性の目安となる時間量を示す。
【図７】図７は、ＭＳＣ陽性マーカーに対するフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。＊＊＊リベラーゼ単離ＭＳＣ試料は６％非ＭＳＣ細胞（ＰＥ陰性対照）を含有し、一方で他の全てのものは、＜％の非ＭＳＣ細胞を含有した。＊＊＊ＭＳＣは、回転プラットフォーム上で１３Ｗｕｎｓｃｈ単位／ｍＬのリベラーゼ（商標）および４００ｎｇ／ｍＬの各ＭＭＰで３７℃で３０分間、脂肪組織を温置することによって単離した。Ｌｉｂ＝リベラーゼ（商標）、Ｍ１＝ＭＭＰ−１、Ｍ３＝ＭＭＰ−３、Ｍ８＝ＭＭＰ−８、Ｍ１２＝ＭＭＰ−１２、Ｓ１Ｃ＝ＭＭＰ−１触媒ドメイン、Ｓ３Ｃ＝ＭＭＰ−３触媒ドメイン、Ｓ１２Ｃ＝ＭＭＰ−１２触媒ドメイン、Ｓ１９Ｃ＝ＭＭＰ−１９触媒ドメイン、Ｓ２５Ｃ＝ＭＭＰ−２５触媒ドメインおよびＳ１９ＦＬ＝ＭＭＰ−１９。
【図８】図８は、ＣＤ７３強度により測定した場合の、ＭＭＰおよびリベラーゼ（商標）を用いた幹細胞の単離に対して得られたフローサイトメトリーの結果の比較を示すグラフである。Ｌｉｂ＝リベラーゼ（商標）、Ｍ１＝ＭＭＰ−１、Ｍ３＝ＭＭＰ−３、Ｍ８＝ＭＭＰ−８、Ｍ１２＝ＭＭＰ−１２、Ｓ１Ｃ＝ＭＭＰ−１触媒ドメイン、Ｓ３Ｃ＝ＭＭＰ−３触媒ドメイン、Ｓ１２Ｃ＝ＭＭＰ−１２触媒ドメイン、Ｓ１９Ｃ＝ＭＭＰ−１９触媒ドメイン、Ｓ２５Ｃ＝ＭＭＰ−２５触媒ドメインおよびＳ１９ＦＬ＝ＭＭＰ−１９。
【図９】図９は、ＣＤ９０強度により測定した場合の、ＭＭＰおよびリベラーゼ（商標）を用いた幹細胞の単離に対して得られたフローサイトメトリーの結果の比較を示すグラフである。Ｌｉｂ＝リベラーゼ（商標）、Ｍ１＝ＭＭＰ−１、Ｍ３＝ＭＭＰ−３、Ｍ８＝ＭＭＰ−８、Ｍ１２＝ＭＭＰ−１２、Ｓ１Ｃ＝ＭＭＰ−１触媒ドメイン、Ｓ３Ｃ＝ＭＭＰ−３触媒ドメイン、Ｓ１２Ｃ＝ＭＭＰ−１２触媒ドメイン、Ｓ１９Ｃ＝ＭＭＰ−１９触媒ドメイン、Ｓ２５Ｃ＝ＭＭＰ−２５触媒ドメインおよびＳ１９ＦＬ＝ＭＭＰ−１９。
【図１０】図１０は、ＣＤ１０５強度により測定した場合の、ＭＭＰおよびリベラーゼ（商標）を用いた幹細胞の単離に対して得られたフローサイトメトリーの結果の比較を示すグラフである。Ｌｉｂ＝リベラーゼ（商標）、Ｍ１＝ＭＭＰ−１、Ｍ３＝ＭＭＰ−３、Ｍ８＝ＭＭＰ−８、Ｍ１２＝ＭＭＰ−１２、Ｓ１Ｃ＝ＭＭＰ−１触媒ドメイン、Ｓ３Ｃ＝ＭＭＰ−３触媒ドメイン、Ｓ１２Ｃ＝ＭＭＰ−１２触媒ドメイン、Ｓ１９Ｃ＝ＭＭＰ−１９触媒ドメイン、Ｓ２５Ｃ＝ＭＭＰ−２５触媒ドメインおよびＳ１９ＦＬ＝ＭＭＰ−１９。
【図１１】図１１は、ＭＭＰ−１２触媒ドメインを用いて単離されたＭＳＣが、様々な系列（脂肪細胞、骨芽細胞および軟骨細胞）に分化するように誘導され得ることを示す顕微鏡写真のスキャンである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
ＡＤＳＣの単離は、クロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＩおよびＩＩ型コラゲナーゼおよびサーモリシンから構成されるリベラーゼ（商標）（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で主に達成されてきた。クロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）からの粗製調製物は、数種のコラゲナーゼを含有するだけでなく、スルヒドリル（ｓｕｌｈｙｄｒｙｌ）プロテアーゼ、クロストリパイン、トリプシン様酵素およびアミノペプチダーゼも含有する。リベラーゼ（商標）酵素産生中、コラゲナーゼアイソザイムは、原材料に存在する大量の内毒素を除去する過程によって精製される。従来のコラゲナーゼ調製物には、リベラーゼ（商標）の内毒素レベルと比較して、多岐にわたる内毒素混入がある。しかし、全リベラーゼ（商標）調製物は内毒素を含有する。したがって、起源にかかわらず、細菌ブリオンからの全精製コラゲナーゼおよび中性プロテアーゼに内毒素が混入している。先行研究では、様々なコラゲナーゼ調製物中の内毒素の相対量および単離細胞健常性に対する影響が調べられており、内毒素の存在は、ＡＤＳＣ生存能に有害である。
【００４１】
本発明の長所は多数あるが、それは、最高品質の結合組織分解酵素なしでは、良好で安定な増殖能がある生存可能なＡＤＳＣを遊離させることが事実上できないからである。細胞移植の成功は、単離幹細胞、培養された細胞および調製された同種移植片の品質に正比例する。本明細書中で具体化される組成物および方法は、公衆衛生に非常に役立つ。第一に、ＭＳＣ単離および移植技術の分野全体における飛躍的進歩が達成される。第二に、寿命が長い最高品質のＭＳＣの回収である。第三に、毒性をなくすことによって、脂肪組織処理およびＭＳＣ単離に対する標準的プロトコールがもたらされる。第四に、微生物起源の現在のコラゲナーゼの代わりとなり、新しい標準となる、（脂肪組織溶解のためだけでなく）組織解離実行のための高度に精製された新規組み換えＭＭＰカクテルが提供される。第五に、本組成物は、処置および美容手順の方法において有用である。他の利益は、本記述から明らかとなろう。
【００４２】
好ましい実施形態の次の記述は事実上単なる代表例であり、本発明、その適用または使用を何ら制限するものではない。本発明の実施形態は、提示される理論的態様なく実施され得る。さらに、出願者らが、提示される理論により縛られることを求めないことを理解した上で、理論的態様が提示される。
【００４３】
本発明の完全な理解をもたらすために、多くの具体的な詳細、関係および方法が示されることを理解されたい。しかし、関連技術分野の通常の技術者は、本発明が１以上の具体的な詳細なく、または他の方法を用いて実施され得ることを容易に認めよう。本発明は、一部の行為が異なる順序でおよび／または他の行為もしくは事象と同時に起こり得るので、行為または事象の例示される順序により限定されない。さらに、本発明に従う方法を実行するために、全ての例示される行為または事象が必要とされるわけではない。
【００４４】
本明細書中で開示される全ての遺伝子、遺伝子名および遺伝子産物は、本明細書中で開示される組成物および方法が適用可能であるあらゆる種からのホモローグに対応するものとする。したがって、この用語には、ヒトおよびマウスからの遺伝子および遺伝子産物が含まれるが限定されない。特定の種からの遺伝子または遺伝子産物が開示される場合、この開示は単なる代表例であり、それが出現する文脈から明らかに示されない限り、限定として解釈されるべきものではないことが理解される。したがって、例えば、いくつかの実施形態において哺乳動物核酸およびアミノ酸配列に関する本明細書中で開示される遺伝子または遺伝子産物に対して、他の哺乳動物、魚類、両生類、爬虫類および鳥類を含むが限定されない他の動物からの相同および／またはオルソロガスな遺伝子および遺伝子産物を包含するものとする。好ましい実施形態において、遺伝子、核酸配列、アミノ酸配列、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質はヒトである。
【００４５】
別段の定義がない限り、本明細書中で使用される全ての用語（技術および科学用語を含む。）は、本発明が属する技術分野の通常の技術者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。一般に使用される辞書で定義されるものなどの用語は、関連技術分野の文脈でのそれらの意味と一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書中でそのように明白に定義されない限り、理想的なまたは過度に形式的な意味で解釈されるべきものではないことがさらに理解されよう。
【００４６】
定義
本明細書中で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明する目的のためのものであり、本発明の限定ではないものとする。本明細書中で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別段の断りを示さない限り、複数形も含むものとする。さらに、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「とともに（ｗｉｔｈ）」という用語またはそれらの変形物が発明を実施するための形態または特許請求の範囲の何れかで使用される程度まで、このような用語が「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語と同様に包括的であるものとする。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」という用語およびその変形物は、物品、組成物、装置、方法、過程、系などの定義されるかまたは記載される要素を参照して、包括的またはオープンエンドであることを意味し、さらなる要素が許容され、それにより、定義されるかまたは記載される、物品、組成物、装置、方法、過程、系などが、これらの特定される要素または、必要に応じてその同等物を含み、他の要素が含まれ得、同様に、定義される、物品、組成物、装置、方法、過程、系などの範囲／定義内に入ることを示す。
【００４８】
「約」または「およそ」という用語は、当業者により決定される場合、特定の値に対する許容可能な誤差範囲内であることを意味し、これは、一部、値がどのように測定または決定されるか、すなわち測定系の限界に依存する。例えば、当技術分野での実施に対して、「約」は、１または１を超える標準偏差内であることを意味し得る。あるいは、「約」は、一定の値の、２０％以下、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下、さらにより好ましくは１％以下の範囲を意味し得る。あるいは、特に生物学的系または過程に関して、この用語は、１桁内、好ましくは値の５倍およびより好ましくは２倍内であることを意味し得る。明細書および特許請求の範囲において特定の値が記載される場合、別段の断りがない限り、特定の値に対する許容可能な誤差範囲内を意味する「約」という用語が想定されるべきである。
【００４９】
「任意の」または「場合によっては」は、その後に記載される事象または状況が起こってもよいしまたは起こらなくてもよく、その記載が、その事象または状況が起こる例およびそれが起こらない例を含むことを意味する。
【００５０】
本明細書中で使用される場合、別段の断りがない限り、「ペプチド」、「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、本明細書中で交換可能に使用され、様々なサイズのアミノ酸のポリマー、例えばＭＭＰの断片を指す。これらの用語は、具体的な長さのアミノ酸のポリマーを暗示しない。したがって、例えばオリゴペプチド、タンパク質および酵素という用語は、組み換え技術を用いて、化学的または酵素的合成を用いて産生されるかまたは天然であるかにかかわらず、ポリペプチドまたはペプチドの定義内に含まれる。この用語はまた、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などにより修飾されているかまたは誘導体化されているポリペプチドも含む。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、「核酸」または「核酸配列」または「ｃＤＮＡ」は、天然の状態でそれに隣接する配列から分離されている、核酸セグメントまたは断片を指し、例えば、一般にその断片に隣接する配列、例えばそれが天然に生じるゲノムにおいてその断片に隣接する配列から除去されているＤＮＡ断片であり、１以上のイントロンが除去されている核酸配列を指す。この用語はまた、天然でその核酸に付随する他のコンポーネント、例えば、細胞中で天然でそれに付随するＲＮＡまたはＤＮＡまたはタンパク質から実質的に精製されている核酸にも適用される。したがって、この用語は、例えば、ベクターに、自己複製するプラスミドもしくはウイルスに、または原核もしくは真核のゲノムＤＮＡに組み込まれるか、または他の配列とは独立して個別の分子として（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムまたはＰＣＲもしくは制限酵素消化により作製されるｃＤＮＡ断片として）存在する、組み換えＤＮＡを含む。これはまた、組み換えＤＮＡ、例えば、さらなるポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部であるＤＮＡも含む。
【００５２】
「ポリヌクレオチド」は、核酸の１本鎖または平行および逆平行鎖を意味する。したがって、ポリヌクレオチドは、１本鎖または２本鎖核酸の何れかであり得る。
【００５３】
「変異体」という用語は、ポリヌクレオチド配列の文脈で使用される場合、野生型遺伝子に関連するポリヌクレオチド配列を包含し得る。この定義はまた、例えば、「対立遺伝子」、「スプライシング」、「種」または「多型」変異体も含み得る。スプライシング変異体は、参照分子に対して顕著な同一性を有し得るが、一般にｍＲＮＡプロセシング中のエクソンのオルタナティブスプライシングゆえに、より多いかまたはより少ない数のポリヌクレオチドを有する。対応するポリペプチドは、さらなる機能ドメインを保持し得るかまたはドメインがなくてもよい。種変異体は、種により互いに異なるポリヌクレオチド配列である。本発明で特に有用なのは、野生型遺伝子産物の変異体である。変異体は、核酸配列における少なくとも１つの突然変異の結果生じ得、その結果、ｍＲＮＡの変化または構造もしくは機能が変化していてもよいしまたはしていなくてもよいポリペプチドが生じ得る。あらゆる天然または組み換え遺伝子が、対立遺伝子形態を全く有さないか、１つまたは多くの対立遺伝子形態を有し得る。変異体を生じさせる一般的な突然変異的変化は、一般に、ヌクレオチドの天然の欠失、付加または置換に帰する。これらの変化のタイプのそれぞれは、単独でまたは他のものと組み合わせて、ある一定の配列中で１回以上、出現し得る。
【００５４】
「コードする」は、遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡなど、ヌクレオチド（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）の定められた配列またはアミノ酸の定められた配列の何れかを有する生物学的過程において他のポリマーおよび巨大分子の合成のための鋳型となるための、ポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの特異的な配列の固有の性質およびそこから生じる生物学的特性を指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が、細胞または他の生体系においてタンパク質を生成させる場合、タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常配列リストで提供されるコード鎖および遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖の両者とも、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物を「コードする」と言われ得る。「コードすること」または「コードされる」、「コードする」は、特定の核酸に関して、特定のタンパク質への翻訳に対する情報を含むものとされる。タンパク質をコードする核酸は、核酸の翻訳される領域内に非翻訳配列（例えばイントロン）を含み得るか、または（例えばｃＤＮＡにおけるように）このような介入する非翻訳配列を欠き得る。タンパク質がコードされる情報は、コドンの使用により特定される。一般的には、アミノ酸配列は、「ユニバーサル」遺伝子コードを用いて核酸によりコードされる。
【００５５】
別段の断りがない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの変性型である、および同じアミノ酸配列をコードする、全ヌクレオチド配列を含む。タンパク質およびＲＮＡをコードするヌクレオチド配列は、イントロンを含み得る。
【００５６】
本明細書中で使用される場合、「プロＭＭＰ」は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（マトリクスメタロプロテアーゼとしても知られる。）のプロ型の発現の結果として得られるタンパク質を意味するために使用される。この用語の意味の範囲内で、プロＭＭＰは、プロＭＭＰ遺伝子またはｃＤＮＡ、欠失、置換およびトランケーションを含むそれらの突然変異体ならびにその修飾型によりコードされる全てのタンパク質を包含することが理解されよう。本明細書中で使用される場合、「プロＭＭＰ」という用語はまた、活性型にまだ完全にプロセシングされていない、部分的にプロセシングされた形態のプロＭＭＰも含む。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、「マトリクスメタロプロテイナーゼ」（ＭＭＰ）、例えばＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８は、何らかのＭＭＰ活性を有するあらゆるタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドを指す。「ＭＭＰ」という用語はまた、ＭＭＰ活性を有するあらゆるＭＭＰ−タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドをコードする核酸配列も指す。「ＭＭＰ」という用語はまた、他のＭＭＰアイソフォーム、突然変異体ＭＭＰ遺伝子、ＭＭＰ遺伝子のスプライシング変異体およびＭＭＰ遺伝子多型など、他のＭＭＰコード配列も含むものとする。したがって、例えばＭＭＰ−１２はまた、他のＭＭＰ−１２アイソフォーム、突然変異体ＭＭＰ−１２遺伝子、ＭＭＰ−１２遺伝子のスプライシング変異体およびＭＭＰ−１２遺伝子多型など、他のＭＭＰ−１２コード配列も含むものとする。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「活性化」という用語は、マトリクスメタロプロテイナーゼの不活性のプロ型（プロＭＭＰ）からマトリクスメタロプロテイナーゼの活性型（ＭＭＰ）へ変化させるために起こるプロセシングを指す。「ＭＭＰ活性化剤」は、ＭＭＰに特異的である、活性型に活性化するかまたは変換する分子である。逆に、「ＭＭＰ阻害剤」は、それが特異的に作用するＭＭＰを抑制または阻害または不活性化する分子である。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「活性」または「活性がある」という用語は、標準的な技術に従いインビボまたはインビトロで決定した場合、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）により発揮される活性を指す。「活性断片」という用語は、活性を付与する、分子の活性部位またはセグメントを含有する。このような活性の例としては、細胞外マトリクスコンポーネント（例えばコラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチンなど）の触媒活性などの直接的活性またはリガンドもしくはその類似体への結合能、転写活性の変化またはＭＭＰ活性によって直接的もしくは間接的に制御される遺伝子もしくは遺伝子産物のレベルの変化、ＭＭＰ活性によって発現が直接的もしくは間接的に影響を受け得る別のタンパク質に対する酵素活性の変化またはＭＭＰ活性の変化の結果で起こる細胞生理機能の機能的変化が挙げられるが限定されない。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、「活性部位」という用語は、動物組織、例えば脂肪の触媒活性に直接関与する、活性ＭＭＰ上の領域または活性ＭＭＰの構造モチーフを指す。好ましい実施形態において、動物はヒトである。特徴付けられるマトリクスメタロプロテイナーゼのポリペプチド配列に対して少なくとも９０％の同一性およびより好ましくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドの包含は、小規模な突然変異または他の変化を含むが酵素活性を保持するものなど、ＭＭＰの近縁関係がある形態を包含するものとする。類似体は、構造類似体と呼ばれ、一般に、関心のある配列がある候補ポリペプチドの残基をアライメントすることによって決定される。例えば、それらの配列の長さに沿って同一であるアミノ酸の数を最適化するために、ＭＭＰ−１２とともに、候補ＭＭＰ−１２酵素アミノ酸配列をＭＭＰ−１２の既知の配列とアライメントする。同一であるアミノ酸配列数を最適化するために、アライメントを行う際に何れかまたは両配列中のギャップが許容されるが、各配列中のアミノ酸は、それらの適正な順序で残存すべきである。好ましくは、Ｔａｔｕｓｏｖａら（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ，１７４：２４７−２５０（１９９９））により記載されるように、ＢＬＡＳＴ２検索アルゴリズムのＢｌａｓｔｐプログラムを用いて、２個のアミノ酸配列を比較する。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、「核酸配列」、「ポリヌクレオチド」および「遺伝子」という用語は、本願を通じて交換可能に使用され、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、直鎖状または環状オリゴマーまたは天然および／または修飾単量体のポリマーまたは結合を含み、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド、その置換およびアルファ−アノマー型、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ホスホチオアート、メチルホスホナートなどが含まれる。
【００６２】
核酸配列は「キメラ」であり得、すなわち異なる領域から構成される。本発明の文脈において、「キメラ」化合物はオリゴヌクレオチドであり、これは２以上の化学的領域、例えばＤＮＡ領域、ＲＮＡ領域、ＰＮＡ領域などを含有する。各化学的領域は、少なくとも１つの単量体単位、すなわちヌクレオチドから成り立つ。これらの配列は、一般的には、１以上の所望の特性を示すように配列が修飾される少なくとも１つの領域を含む。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「単量体」という用語は、一般的には、数単量体単位、例えば約３から４から、約数百単量体単位のサイズの範囲であるオリゴヌクレオチドを形成させるための、ホスホジエステル結合またはその類似体により連結される単量体を示す。ホスホジエステル連結の類似物としては、下記でより詳細に記載されるように、ホスホチオアート、ホスホロジチオアート、メチルホスホルナート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｎａｔｅ）、ホスホロセレノアート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホールアミダートなどが挙げられる。
【００６４】
本内容において、「核酸塩基」という用語は、天然の核酸塩基ならびに非天然の核酸塩基を包含する。当業者にとって明らかなように、以前に「非天然」とみなしてきた様々な核酸塩基がその後に天然で見出されてきた。したがって、「核酸塩基」は、既知のプリンおよびピリミジン複素環だけでなく、複素環類似体およびその互変異性体も含む。核酸塩基の実例となる例は、Ｂｅｎｎｅｒら、米国特許第５，４３２，２７２号に記載の、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシル、プリン、キサンチン、ジアミノプリン、８−オキソ−Ｎ６−メチルアデニン、７−デアザキサンチン、７−デアザグアニン、Ｎ４，Ｎ４−エタノシトシン、Ｎ６，Ｎ６−エタノ−２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ３−Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、シュードイソシトシン、２−ヒドロキシ−５−メチル−４−トリアゾロピリジン、イソシトシン、イソグアニン、イノシンおよび「非天然の」核酸塩基である。「核酸塩基」という用語は、これらの例ならびにその類似体および互変異性体のあらゆる全てを包含するものとする。特に関心がある核酸塩基は、アデニン、グアニン、チミン、シトシンおよびウラシルであり、これらは、ヒトでの治療および診断適用に関連して、天然の核酸塩基としてみなされる。
【００６５】
本明細書中で使用される場合、「ヌクレオシド」は、天然のヌクレオシドを含み、これには、例えばＫｏｒｎｂｅｒｇおよびＢａｋｅｒ，ＤＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，２ｎｄ  Ｅｄ．（Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９９２）で記載されるような、２’−デオキシおよび２’−ヒドロキシ型が含まれる。
【００６６】
ヌクレオシドに関する「類似体」は、例えば一般的にＳｃｈｅｉｔ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８０；Ｆｒｅｉｅｒ  ＆  Ａｌｔｍａｎｎ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３，Ｔｏｕｌｍｅ，Ｊ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９：１７−１８（２００１）；Ｍａｎｏｈａｒａｎ  Ｍ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １４８９：１１７−１３９（１９９９）；Ｆｒｅｉｅｒ  Ｓ．Ｍ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２５：４４２９−４４４３（１９９７），Ｕｈｌｍａｎ，Ｅ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３：２０３−２１３（２０００），Ｈｅｒｄｅｗｉｎ  Ｐ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．，１０：２９７−３１０（２０００），）により記載の修飾塩基部分および／または修飾糖部分；２’−Ｏ，３’−Ｃ−連結［３．２．０］ビシクロアラビノヌクレオシド（例えばＮ．Ｋ  Ｃｈｒｉｓｔｉｅｎｓｅｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２０：５４５８−５４６３（１９９８）参照）を有する合成ヌクレオシドを含む。このような類似体としては、例えば二重または三重安定性、特異性など、結合特性を促進するために設計される合成ヌクレオシドが挙げられる。
【００６７】
「変異体」という用語は、ポリヌクレオチド配列の文脈で使用される場合、野生型遺伝子に関するポリヌクレオチド配列を包含し得る。この定義は、例えば、「対立遺伝子」、「スプライシング」、「種」または「多型」変異体も含み得る。スプライシング変異体は、参照分子と顕著な同一性を有し得るが、一般に、ｍＲＮＡプロセシング中のエクソンのオルタナティブスプライシングゆえに、より多いかまたはより少ない数のポリヌクレオチドを有する。対応するポリペプチドは、さらなる機能ドメインを保持し得るか、またはドメインがなくてもよい。種変異体は、種により互いに異なるポリヌクレオチド配列である。本発明で特に有用なのは、野生型標的遺伝子産物の変異体である。変異体は、核酸配列における少なくとも１つの突然変異の結果生じ得、その結果、ｍＲＮＡの変化または構造または機能が変化していてもよいし、またはしていなくてもよいポリペプチドが得られ得る。あらゆる天然または組み換え遺伝子が、対立遺伝子形態を全く有さなくてもよいし、または１つまたは多く有してもよい。変異体を生じさせる一般的な突然変異的変化は、一般に、ヌクレオチドの天然の欠失、付加または置換に帰する。これらの変化のタイプのそれぞれは、単独でまたは他のものと組み合わせて、ある一定の配列中で１回以上出現し得る。
【００６８】
結果として得られるポリペプチドは、一般に互いに対して顕著なアミノ酸同一性を有する。多型変異体は、ある一定の種の個体間の特定の遺伝子のポリヌクレオチド配列中の変動である。多型変異体はまた、ポリヌクレオチド配列が１個の塩基により変動する「一塩基多型」（ＳＮＰ）または一塩基突然変異も包含し得る。ＳＮＰの存在は、例えば、感受性対耐性である、疾患状況に対する傾向がある一定の集団を示し得る。
【００６９】
本明細書中で使用される場合、ポリペプチドの「変異体」は、１以上のアミノ酸残基により変化しているアミノ酸配列を指す。変異体は「保存的」変化を有し得、置換されたアミノ酸は同様の構造または化学特性を有する（例えばイソロイシンによるロイシンの置き換え）。殆どないが、変異体は、「非保存的」変化を有し得る（例えばトリプトファンによるグリシンの置き換え）。類似の小さな変動はまた、アミノ酸欠失もしくは挿入または両方も含み得る。生物学的活性を無効にすることなくどのアミノ酸残基が置換、挿入または欠失され得るかを決定する際の指針は、当技術分野で周知のコンピュータープログラム、例えばＬＡＳＥＲＧＥＮＥソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ）を用いて見出され得る。
【００７０】
本明細書中で使用される場合、「組織」という用語は、患者の構造的または他の物質の１つを形成するそれらの細胞外物質と一緒に細胞の凝集体を指す。本明細書中で使用される場合、「組織」という用語は、毛細血管、血管、筋肉および器官組織、創傷組織、腫瘍組織、骨組織または軟骨組織を含むが限定されない、身体のあらゆる組織を含むものとする。また、「組織」という用語は、本明細書中で使用される場合、個々の細胞も指し得る。
【００７１】
本文脈において、「間質血管細胞群（ＳＶＦ）」は、脂肪組織から単離される細胞を指し、本明細書中で具体化される組成物で脂肪組織を処理することによる殆どの成熟脂肪細胞除去後の細胞の残存群を意味する。
【００７２】
「脂肪由来間質幹細胞」は、ＳＶＦから得られる間葉系幹細胞を意味し、「脂肪由来幹細胞（ＡＳＣ）」、「脂肪由来幹細胞（ＡＤＳＣ）」、「脂肪幹細胞」などとも呼ばれ得る。本発明における脂肪由来間質幹細胞は、特にそれらに限定されないが脂肪吸引または外科的切除によってヒト皮下脂肪組織から単離され得る。
【００７３】
「骨髄由来前駆細胞」（ＢＭＤＣ）または「骨髄由来幹細胞」は、構成的に活性である自己再生のための機構がある原始幹細胞を指す。この定義には、全能性の、多能性のおよび前駆体である幹細胞が含まれる。「前駆体細胞」は、より成熟した細胞への分化が可能である細胞分化経路における何らかの細胞であり得る。このようなものとして、「前駆体細胞集団」という用語は、より成熟した細胞に進むことが可能な細胞の群を指す。前駆体細胞集団は、全能性である細胞、多能性である細胞および制限される幹細胞系列である細胞（すなわち、全てではない造血系列にまたは例えば赤血球系列の細胞にのみ進むことが可能な細胞）を含み得る。本明細書中で使用される場合、「全能性の細胞」という用語は、全ての細胞系列に進むことが可能な細胞を指す。同様に「全能性の細胞集団」という用語は、全ての細胞系列に進むことが可能な細胞の組成物を指す。また、本明細書中で使用される場合、「多能性の細胞」という用語は、（全てではないが）様々な系列に進むことが可能であり、少なくとも全造血系列（例えば、リンパ球、赤血球および血小板系列）に進むことができる細胞を指す。骨髄由来幹細胞は、２種類のよく特徴が分かっている幹細胞型を含有する。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は通常、軟骨細胞および骨芽細胞を形成する。造血幹細胞（ＨＳＣ）は、血液および免疫系（例えば、赤血球、顆粒球／マクロファージ、マガカリオサイト（ｍａｇａｋａｒｙｏｃｉｔｅ）およびリンパ球系列）の細胞を通常は生じさせる中胚葉起源のものである。さらに、造血幹細胞はまた、肝臓（肝細胞、胆管細胞を含む。）、肺、腎臓（例えば腎尿細管上皮細胞および腎実質）、消化管、骨格筋繊維、ＣＮＳの星状細胞、プルキンエニューロン、心筋（例えば心筋細胞）、内皮および皮膚の細胞への分化能を有することも示されている。本明細書中で使用される場合、「幹細胞」という用語は、一般的用語であり、全てのタイプの幹細胞を包含するものとする。
【００７４】
細胞または幹細胞を「単離すること」は、細胞または幹細胞を組織試料から取り除き、組織の所望の細胞または幹細胞ではない他の細胞から分離する過程を指す。単離幹細胞は、一般に他の細胞型による混入がなく、一般にそれが単離された組織の成熟細胞を生成させるための増殖および分化能を有する。しかし、幹細胞の一群、例えば幹細胞の培養物を扱う場合、１００％純粋である幹細胞の一群を得ることは実際的に不可能であることが理解される。したがって、単離幹細胞は、他の分化した細胞型の分析または産生に対する幹細胞の利用を妨げない僅かな他の細胞型の存在下で存在し得る。単離幹細胞は、一般に、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％純粋である。好ましくは、本発明による単離幹細胞は、少なくとも９８％または少なくとも９９％純粋である。幹細胞はあらゆる組織から単離され得る。いくつかの実施形態において、組織は脂肪組織である。
【００７５】
「生体試料」は、固形（例えば組織、器官）および体液試料を含む。本発明で使用される生体試料は、細胞、タンパク質または細胞の膜抽出物、血液または体液、例えば腹水または脳液（例えば脳脊髄液）を含み得る。固形生体試料の例としては、中枢神経系、骨、乳房、腎臓、子宮頸部、子宮内膜、頭／頸部、胆嚢、耳下腺、前立腺、脳下垂体、筋肉、食道、胃、小腸、結腸、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺、心臓、肺、膀胱、脂肪、リンパ節、子宮、卵巣、副腎、精巣、扁桃腺および胸腺の組織から採取される試料が挙げられるが限定されない。「体液試料」の例としては、血液、血清、精液、前立腺液、精漿、尿、唾液、痰、粘液、骨髄、リンパおよび涙が挙げられるが限定されない。
【００７６】
「移植片」という用語は、受容対象哺乳動物において免疫反応を誘発し得る、何らかの細胞、器官、器官系または組織を含む。したがって、一般に、移植片としては、同種移植または異種移植細胞、器官、器官系または組織が挙げられる。同種移植片は、受容者と同じ種のメンバーから得られる移植片（細胞、器官、器官系または組織）を指す。異種移植片は、受容者と異なる種のメンバーから得られる移植片（細胞、器官、器官系または組織）を指す。
【００７７】
「処置」は、障害の病態または症状の発現を予防するかまたは変化させる意図を持って行われる介入である。したがって、「処置」は、治療的処置および予防的もしくは防御的手段の両方を指す。「処置」は、緩和ケアとしても規定され得る。処置を必要とする者としては、障害が既にある者ならびに障害を予防しようとする者が挙げられる。したがって、病状、障害または状態を「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」またはその「処置」としては、次のものが挙げられる：（１）病状、障害または状態に罹患している可能性があるかまたはそれに罹患し易いが病状、障害または状態の臨床もしくは無症状性症状をまだ経験もしくは呈していないヒトまたは他の哺乳動物で発現する病状、障害または状態の臨床症状の発生を予防または遅延させること；（２）病状、障害または状態を阻害すること、すなわち、疾患の発症またはその再発（維持療法の場合）または少なくとも１つのその臨床または無症状性症状を抑止、軽減または遅延させること；または（３）疾患を緩和すること、すなわち病状、障害もしくは状態またはその臨床もしくは無症状性症状の少なくとも１つの軽減を引き起こすこと。処置しようとする個体に対する利益は、患者または医師に対して、統計学的に有意であるかまたは少なくとも認知可能なものである。
【００７８】
「患者」または「個体」または「対象」という用語は、本明細書中で交換可能に使用され、処置しようとする哺乳動物対象を指し、ヒト患者が好ましい。いくつかの場合において、本発明の方法は、実験動物において、獣医学的適用において、およびマウス、ラットおよびハムスターを含むげっ歯類および霊長類を含むが限定されない、疾患に対する動物モデルの開発において利用されている。
【００７９】
本明細書中で定義されるように、化合物または薬剤の「治療的有効」量（すなわち有効な投与量）は、治療的に（例えば臨床的に）望ましい結果を生じさせるのに十分な量を意味する。本組成物は、１日あたり１回以上から週に１回以上投与され得；これには１日おきに１回も含まれる。当業者にとって当然のことながら、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の総体的健康状態および／または年齢および存在する他の疾患を含むが限定されないある一定の要因が、対象を効果的に処置するために必要とされる投与量およびタイミングに影響を及ぼし得る。さらに、治療的有効量の本発明の化合物での対象の処置には、単回処置または一連の処置が含まれ得る。
【００８０】
本明細書中で定義されるように、化合物または薬剤の「有効」量（すなわち有効投与量）は、（例えば臨床的に）望ましい結果を生じさせるのに十分な量を意味する。いくつかの実施形態において、所望の結果は、脂肪組織または脂肪沈着の分解である。他の実施形態において、所望の結果は、様々な組織、骨髄、器官からの幹細胞の単離である。他の実施形態において、所望の結果は、膵臓からの膵島単離である。他の実施形態において、所望の結果は、ヒト卵巣組織からの生きている濾胞の単離である。他の実施形態において、所望の結果は、心筋細胞、繊維芽細胞および樹状細胞を含む様々な細胞型を単離するための組織解離である。
【００８１】
「医薬的に許容可能なプロドラッグ」という用語は、本明細書中で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、アレルギー性反応などを伴う、ヒトおよび下等動物の組織と接触させる使用に適切であり、合理的なベネフィット／リスク比に釣り合っており、それらの意図する使用に有効である、本発明の過程により形成されるＭＭＰ化合物のプロドラッグならびに、可能な場合は、本発明の化合物の双性イオン型を指す。「プロドラッグ」は、本明細書中で使用される場合、本発明の処方により表される何らかの化合物を得るために代謝的手段によって（例えば加水分解によって）インビボで変換可能である化合物を意味する。例えばＢｕｎｄｇａａｒｄ（編），Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）；Ｗｉｄｄｅｒら（編）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．４，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎら（編）．「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５，１１３−１９１（１９９１）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，８：１−３８（１９９２）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７：２８５  ｅｔ  ｓｅｑ．（１９８８）；ＨｉｇｕｃｈｉおよびＳｔｅｌｌａ（編）Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９７５）；およびＢｅｒｎａｒｄ  Ｔｅｓｔａ  ＆  Ｊｏａｃｈｉｍ  Ｍａｙｅｒ，「Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  Ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｌｔｄ．（２００２）で論じられるように、プロドラッグの様々な形態が当技術分野で公知である。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、「医薬的に許容可能な塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、アレルギー性反応などなく、ヒトおよび下等動物の組織と接触させる使用に適切であり、合理的なベネフィット／リスク比に釣り合っている、本発明の過程により形成される化合物の塩を指す。医薬的に許容可能な塩は当技術分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９（１９７７）において詳細に医薬的に許容可能な塩を記載している。塩は、本発明の分子の最終単離および精製中にインシトゥで、または遊離塩基官能基を適切な有機酸と反応させることによって個別に調製され得る。医薬的に許容可能な無毒性酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸を用いて、または酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸を用いて、またはイオン交換などの当技術分野で使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ基の塩が挙げられるが限定されない。他の医薬的に許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリル酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられるが限定されない。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらなる医薬的に許容可能な塩としては、適切な場合、無毒性のアンモニウム、四級アンモニウムおよび、ハロゲン化物、ヒドロキシド、カルボン酸、硫酸、リン酸、硝酸、１から６個の炭素原子を有するアルキル、スルホン酸およびアリールスルホン酸などの対イオンを用いて形成されるアミン陽イオンが挙げられる。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、「キット」という用語は、物質を送達するための何らかの送達系を指す。「キット」という用語に含まれるのは、研究および臨床適用の両方のためのキットである。反応アッセイの文脈において、このような送達系には、ある場所から別の場所への、反応試薬（例えば適切な容器中のオリゴヌクレオチド、酵素など）の保管、輸送または送達を可能にする系および／または補助物質（例えば緩衝剤、アッセイを行うための書面の説明書など）が含まれる。例えば、キットには、関連の反応試薬および／または補助物質を含有する１以上の筐体（例えば箱）が含まれる。本明細書中で使用される場合、「断片化キット」という用語は、それぞれ全体的なキットコンポーネントのサブポーションを含有する２以上の個別の容器を含む送達系を指す。容器は、一緒にまたは個別に意図する受取人に送達され得る。例えば、第一の容器は、アッセイでの使用のための酵素を含有し得、一方で第二の容器はオリゴヌクレオチドを含有する。「断片化キット」という用語は、Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｆｏｏｄ，Ｄｒｕｇ，ａｎｄ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ａｃｔのｓｅｃｔｉｏｎ  ５２０（ｅ）のもと規制される検体特異的試薬（ＡＳＲ）を含有するキットを包含するものとするがこれに限定されない。実際に、それぞれが全キットコンポーネントのサブポーションを含有する２以上の個別の容器を含む何らかの送達系が「断片化キット」という用語に含まれる。それに対して、「複合キット」とは、１つの容器中（例えば所望のコンポーネントのそれぞれを収用する１つの箱の中）に反応アッセイのコンポーネント全てを含有する送達系を指す。「キット」という用語は断片化および複合キットの両方を含む。
【００８４】
一般的技術
本発明の実施において有用な一般的技術のさらなる精緻化のために、実行者は、細胞生物学、組織培養、発生学および生理学における標準的な教科書および概論を参照し得る。
【００８５】
組織培養および胚性幹細胞に関して、読者は、Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ａｎｄ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．１９８７）；Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（Ｐ．Ｍ．Ｗａｓｓｅｒｍａｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９３）；Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（Ｍ．Ｖ．Ｗｉｌｅｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２２５：９００，１９９３）；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｏｆ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ：Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｐ．Ｄ．Ｒａｔｈｊｅｎら、Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．Ｄｅｖ．１０：３１，１９９８）を参照することを願い得る。
【００８６】
分子および細胞生化学の一般的方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９９）；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｂｏｌｌａｇら、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９６）；Ｎｏｎｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｗａｇｎｅｒら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９９）；ウイルスベクター（Ｋａｐｌｉｆｔ  ＆  Ｌｏｅｗｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５）；Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ（Ｉ．Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９７）；およびＣｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄｏｙｌｅ  ＆  Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９８）のような標準的教科書で見出すことができる。本開示で言及される遺伝子操作のための試薬、クローニングベクターおよびキットは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈおよびＣｌｏｎＴｅｃｈなどの市販業者から入手可能である。
【００８７】
組成物
マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、コラーゲン、エラスチン、ラミニンおよびフィブロネクチンなどの細胞外マトリクスタンパク質を消化する構造的に関連がある亜鉛依存性タンパク質分解酵素のファミリーである。少なくとも２２種類の異なる哺乳動物ＭＭＰ−タンパク質が同定されており、これらは基質特異性およびドメイン構造に基づいてグループ分けされている。ＭＭＰの酵素活性は、様々な細胞型でのそれらの遺伝子発現によってだけではなく、それらの不活性酵素前駆体前駆体（プロＭＭＰ）の活性化およびメタロプロテイナーゼの内因性阻害剤および組織阻害剤（ＴＩＭＰ）による阻害によっても正確に調節される。酵素は、正常なホメオスタシス組織リモデリング事象で重要な役割を果たすが、また、関節炎、歯周炎および組織潰瘍などの多くの結合組織疾患において、および癌細胞浸潤および転移においても、マトリクスの病的破壊に関与すると考えられる。
【００８８】
本発明の実施形態は、１以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を含む組成物を対象とする。ＭＭＰは、活性化状態であるかまたは、例えばプロ酵素型（プロＭＭＰ）などの不活性型であり得るか、または活性断片を含有し得る。ＭＭＰは、本明細書中で具体化される様々な組成物において、少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む。他の実施形態において、ＭＭＰは、本明細書中で具体化される様々な組成物において、少なくとも２つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む。他の実施形態において、ＭＭＰは、本明細書中で具体化される様々な組成物において、少なくとも３つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む。他の実施形態において、ＭＭＰは、本明細書中で具体化される様々な組成物において、少なくとも４つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む。他の実施形態において、ＭＭＰは、本明細書中で具体化される様々な組成物において、少なくとも５つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む。他の実施形態において、ＭＭＰは、本明細書中で具体化される様々な組成物において、少なくとも６つの、７つのまたはより多くのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む。上記で論じられるように、「ＭＭＰまたはプロＭＭＰ」という用語は、別段の断りがない限り、本明細書中で具体化される様々な組成物において、核酸配列、アミノ酸配列、活性断片、合成断片、欠失、置換およびトランケーションを含む突然変異体、ならびにその修飾型、誘導体、変異体、相同体および／またはオルソロガス遺伝子、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、キメラ分子、アイソフォーム、突然変異体遺伝子、スプライシング変異体遺伝子、遺伝子多型またはそれらの何らかの組み合わせを含む。本明細書中で具体化される分子は、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００８９】
ある一定の組織コンポーネント、最初に例えばコラーゲンを分解することが所望され得る。実施形態において、本組成物は、活性および不活性型両方のＭＭＰを含む。例えば、一方のＭＭＰが活性型であり得、第二のＭＭＰは不活性型であり得る。不活性ＭＭＰは、活性化剤、例えば酵素を添加することによっていつでも活性化され得る。したがって、ある組織コンポーネントを最初に分解させ、それに続いて別のものなどを分解させ得る。
【００９０】
好ましい実施形態において、組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９１】
好ましい実施形態において、組成物は、有効量の少なくとも２つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９２】
好ましい実施形態において、組成物は、有効量の少なくとも３つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９３】
好ましい実施形態において、組成物は、有効量の少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つまたは７つまたはそれを超えるマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９４】
好ましい実施形態において、ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む。
【００９５】
他の実施形態において、本組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。他の実施形態において、本組成物は、有効量の少なくとも２つ、少なくとも３つ、４つまたはそれを超えるマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９６】
好ましい実施形態において、組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、医薬組成物において、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９７】
好ましい実施形態において、組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、医薬組成物において、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【００９８】
いくつかの実施形態において、有効量の何れか１つのＭＭＰまたはそのプロ酵素（すなわちプロＭＭＰ）は脂肪組織を異化する。他の実施形態において、有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、脂肪組織を解離させるかまたは異化する。
【００９９】
脂肪組織細胞外マトリクス（ＥＣＭ）は「疎性結合組織」として記載されている。ウシ脂肪組織ＥＣＭの免疫蛍光染色から、Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶおよびＶＩ型コラーゲン、ラミニンおよびフィブロネクチンが明らかになった。より詳細なプロテオミック分析から、種に基づく幾分かの変動が示されたが、コラーゲンは一貫している。デコリンまたは他のプロテオグリカンは脂肪組織ＥＣＭにおいて重要であり得る。ヒト脂肪組織ＥＣＭの定量から、顕著なレベルの酸溶解性コラーゲンおよびエラスチンが示されたが、硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は低レベルでしかなかった。マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンおよびエラスチンを含む、実際上全てのＥＣＭコンポーネントの分解を触媒可能な酵素のファミリーである。ＭＭＰの幅広いスペクトル阻害によって、脂肪組織増殖が損なわれるが、一方でＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１１欠損マウスは、野生型マウスよりも多くの脂肪組織を発達させた。このことから、ＭＭＰが脂肪組織リモデリングに関与することが示される。
【０１００】
脂肪組織ＥＣＭ組成を考慮すると、いくつかの実施形態において、本組成物は、ＥＣＭの効率的な消化およびＡＤＳＣの放出のためのＭＭＰの混合物を含む。例えば、ＭＭＰ−１またはＭＭＰ−８の組み合わせ（ＩおよびＩＩＩ型コラーゲンに対するもの）、ＭＭＰ−３またはＭＭＰ−１９（ＩＶ型コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンに対するもの）およびＭＭＰ−２またはＭＭＰ−９（ＩＶおよびＶ型コラーゲンに対するもの）が必要とされ得る。ＶＩ型コラーゲンの消化が所望される場合、ＭＭＰ−１１が使用され得、一方でエラスチン消化はＭＭＰ−１２を必要とする。
【０１０１】
ＭＭＰおよびそれらの特異的な基質の例としては、次のものが挙げられるが限定されない：ＭＭＰ−１、基質としては、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、Ｘ型コラーゲン、ゼラチンが挙げられる。ＭＭＰ−２、基質としては、ゼラチン、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩＩ、Ｘ型コラーゲンが挙げられる。ＭＭＰ−３、基質としては、ＩＩ、ＩＶ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ型コラーゲン、ゼラチンが挙げられる。ＭＭＰ−７、基質としては、フィブロネクチン、ラミニン、ＩＶ型コラーゲン、ゼラチンが挙げられる。ＭＭＰ−８、基質としては、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、Ｘ型コラーゲン、アグリカン、ゼラチンが挙げられる。ＭＭＰ−９、基質としては、ゼラチン、ＩＶ、Ｖ型コラーゲンが挙げられる。ＭＭＰ−１０、基質としては、ＩＶ型コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、エラスチンが挙げられる。ＭＭＰ−１１、基質としては、ＩＶ型コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、アグリカンが挙げられる。ＭＭＰ−１２、基質としては、エラスチン、フィブロネクチン、ＩＶ型コラーゲンが挙げられる。ＭＭＰ−１３、基質としては、ＣｏｌＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩＶ、ゼラチンが挙げられる。ＭＭＰ−１４、基質としては、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニンが挙げられる。ＭＭＰ−１５、基質としては、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニンが挙げられる。ＭＭＰ−１６、基質としては、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニンが挙げられる。ＭＭＰ−１７、基質としては、フィブリノーゲン、フィブリンが挙げられる。ＭＭＰ−１８は、コラゲナーゼ４、ｘｃｏｌ４、アフリカツメガエルコラゲナーゼとしても知られる。ＭＭＰ−１９はＲＡＳＩ−１としても知られ、場合によりストロメリシン−４と呼ばれる。ＭＭＰ−２０はエナメリシンとしても知られる。ＭＭＰ−２１はＸ−ＭＭＰ−としても知られる。ＭＭＰ−２３Ａ（ＣＡ−ＭＭＰ−）膜結合ＩＩ型膜貫通システインアレイ。ＭＭＰ−２３Ｂ−膜結合ＩＩ型−膜貫通システインアレイ。ＭＭＰ−２４（ＭＴ５−ＭＭＰ−）膜結合Ｉ型膜貫通ＭＭＰ−。ＭＭＰ−２５（ＭＴ６−ＭＭＰ−）膜結合グリコシルホスファチジルイノシトール−連結。ＭＭＰ−２６はマトリライシン−２、エンドメターゼとしても知られる。ＭＭＰ−２７はＭＭＰ−２２、Ｃ−ＭＭＰ−としても知られる。ＭＭＰ−２８はエピリシンとしても知られる。
【０１０２】
したがって、細胞塊（例えば腫瘍）、タンパク質、組織および器官を解離させるために、または様々な組織および器官から異なる細胞型を単離するために使用されるＭＭＰの組成物は、解離させようとする細胞塊、タンパク質、組織または器官のタイプまたは単離のための所望の細胞を含む組織もしくは器官の解離に依存して変化し得る。例えば、脂肪組織の効率的な異化のためのＭＭＰの混合物は、２以上のＭＭＰを含み、例えばＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１９およびＭＭＰ−２５などが含まれる。この場合において、Ｉ−ＩＩＩ型コラーゲンを効率的に切断する能力に基づき、ＭＭＰ−１およびＭＭＰ−８が選択されよう。ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９はＩＶおよびＶ型コラーゲンを切断する。ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１９はＩＶ型コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンに対する活性を有し、ＭＭＰ−１２はエラスチンを効率的に切断し、ＭＭＰ−１１はＶＩ型コラーゲンを切断する。ＭＭＰは、一般的にはセリンプロテアーゼ（トリプシン、キモトリプシン）を用いて活性化され、次いでセリンプロテアーゼ阻害剤を用いる。
【０１０３】
別の実施形態において、膵臓または膵臓組織から膵島細胞を単離するための組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物またはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０１０４】
別の好ましい実施形態において、パンクレアーゼ（ｐａｎｃｒｅａｓｅ）または膵臓組織から膵島細胞を単離する方法は、有効量の少なくとも２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）または不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と生体試料を接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物またはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は、膵臓または膵臓組織を異化するかまたは解離させ、それによって幹細胞を単離する。好ましくは、ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、場合によっては１以上のＭＭＰの１以上の活性断片、不活性ＭＭＰまたは活性断片を含むプロＭＭＰを含む。別の好ましい実施形態において、本方法は、不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を投与することをさらに含む。
【０１０５】
別の実施形態において、心筋細胞を単離するための組成物は有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、有効量の２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１０６】
別の実施形態において、組織解離のための組成物は有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、有効量の２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。上記で論じられるように、組織は、あらゆるタイプの組織であり得、細胞はあらゆるタイプの細胞であり得る。例えば、繊維芽細胞、樹状細胞、幹細胞などである。
【０１０７】
別の実施形態において、ヒト卵巣組織から生きている濾胞を単離するための組成物は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、有効量の２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１０８】
本組成物が無毒性であるため、単離細胞は、患者を処置するための様々な手順、例えば細胞のエクスビボ増殖および対照への細胞の再注入、移植、単離細胞の移植、再生医療における幹細胞の使用、細胞もしくは組織塊の破壊、例えば繊維症を処置することなどにおけるものに対して使用され得る。
【０１０９】
他の実施形態において、本組成物は、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片または活性断片を含むそのプロＭＭＰを含み、この活性断片は脂肪組織を異化する。いくつかの実施形態において、ＭＭＰは活性もしくは不活性であるか、または本組成物は、活性および不活性型のＭＭＰの組み合わせを含む。他の実施形態において、本組成物は、活性化剤、例えば酵素をさらに含む。他の実施形態において、活性化剤は、独立に投与されるか、または組成物のコンポーネントであり得る。他の実施形態において、本組成物は、医薬賦形剤を含む。
【０１１０】
本明細書中で具体化される組成物は、様々な濃度、比率、タイプの１以上のＭＭＰを含む。特定の組成物に存在するＭＭＰは、特定の細胞型の単離のための、または組織、組織および細胞塊または器官などを消化するかまたは解離させるための、組織または器官のタイプに依存して、タイプ、量などの両方が変動する。例えば、組織が間質コラーゲンを含む場合、「コラーゲン溶解性」ＭＭＰ−［それらの三重ヘリックスドメイン内で間質コラーゲン（ＩからＩＩＩ型）のうち１以上の加水分解を触媒するもの］が使用される。コラーゲン溶解性ＭＭＰとしては、分泌型プロテアーゼＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３および膜結合型プロテアーゼＭＴ１−ＭＭＰ−およびＭＴ２−ＭＭＰ−が挙げられる。この特定の組織を消化し、必要に応じて特定の細胞を単離するために、本組成物は、ＭＭＰ−１および／またはＭＭＰ−８（ＩおよびＩＩＩ型コラーゲンに対して）、ＭＭＰ−３および／またはＭＭＰ−１９（ＩＶ型コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンに対して）およびＭＭＰ−２および／またはＭＭＰ−９（ＩＶおよびＶ型コラーゲンに対して）の組み合わせを含む。組織がＶＩ型コラーゲンを含む場合、ＭＭＰ−１１はＭＭＰ−組成物のコンポーネントである。エラスチン消化が必要とされる場合、ＭＭＰ−１２が使用され得る。
【０１１１】
他の実施形態において、組成物は、ある１つのタイプのＭＭＰおよび／またはそのプロ酵素ＭＭＰを含む。別の実施形態において、組成物は、２つのタイプのＭＭＰおよび／またはそのプロ酵素ＭＭＰを含む。別の好ましい実施形態において、組成物は、１以上の不活性ＭＭＰを含む。別の実施形態において、組成物は、１以上のＭＭＰまたはそのプロ酵素、その活性化剤および阻害剤を含む。このような実施形態において、本組成物は個別であり得、すなわち、ＭＭＰ、そのプロ酵素は、１以上の活性化剤（例えばトリプシン、キモトリプシン、４−アミノフェニル酢酸第二水銀）を含む組成物またはＭＭＰの阻害剤（例えばメタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）、マリマスタット）を含むさらに別の組成物とは分けて維持され得る。
【０１１２】
例えば、ＭＭＰは、プロテイナーゼにより、またはインビトロでチオール修飾剤（４−アミノフェニル酢酸第二水銀、ＨｇＣｌ２およびＮ−エチルマレイミド）、酸化グルタチオン、ＳＤＳ、カオトロピック剤および反応性酸素などの化学剤により活性化され得る。低ｐＨおよび熱処理も活性化をもたらし得る。ＭＭＰのタンパク質分解性活性化は多くの場合段階的である。最初のタンパク質分解性攻撃は、プロペプチドの第一のヘリックスと第二のヘリックスとの間の露出されるループ領域で起こる。ベイト領域の切断特異性は、各ＭＭＰで見出される配列により決定される。プロペプチドの一部が除去されると、これは、おそらくそのプロペプチドの残りの部分を不安定化し、これにより、部分的に活性化されたＭＭＰ中間体または他の活性ＭＭＰにより分子間プロセシングが可能となる。したがって、活性化の最終段階がＭＭＰにより行われる。
【０１１３】
プラスミンによるプロＭＭＰの活性化は、インビボでの関連経路である。フィブリンに結合する組織プラスミノーゲン活性化因子および特異的な細胞表面受容体に結合するウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子によって、プラスミノーゲンからプラスミンが生じる。プラスミノーゲンおよびウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子の両者とも膜結合型であり、それによって局所化したプロＭＭＰ活性化が生成し、その後ＥＣＭターンオーバーが生成する。プラスミンは、プロＭＭＰ−１、プロＭＭＰ−３、プロＭＭＰ−７、プロＭＭＰ−９、プロＭＭＰ−１０およびプロＭＭＰ−１３を活性化することが報告されている。活性化されたＭＭＰは、他のＭＭＰをプロセシングすることに寄与し得る。段階的活性化系は、ＭＭＰが完全に活性化される前に中間体ＭＭＰと相互作用することによってＴＩＭＰが活性化を妨害し得るので、破壊性酵素を調節するためのより優れた制御機序に適合するために考案されてきたものであり得る。
【０１１４】
殆どのプロＭＭＰは細胞から分泌され、細胞外で活性化される。例えば、プロＭＭＰ−１１（ストロメリシン３）はフューリンにより細胞内で活性化される。プロＭＭＰ−１１は、プロペプチドのＣ末端でフューリン認識配列、ＫＸ（Ｒ／Ｋ）Ｒを保持する。６個のＭＴ−ＭＭＰ、ＭＭＰ−２３およびエピリシン（ＭＭＰ−２８）を含むいくつかの他のＭＭＰは、プロペプチド中に同様の塩基性モチーフを有する。これらのタンパク質は活性酵素として分泌される可能性が最も高いので、内因性阻害剤によるそれらの遺伝子発現および阻害は、活性の制御にとって重大である。
【０１１５】
ＴＩＭＰは、１：１化学量論でＭＭＰに結合する特異的な阻害剤である。４つのＴＩＭＰ（ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３およびＴＩＭＰ−４）は脊椎動物で同定されており、それらの発現は、発生および組織リモデリング中に制御される。不均衡なＭＭＰ活性が付随する病的状態下で、ＴＩＭＰレベルの変化は、ＭＭＰ活性のレベルに直接影響を与えるので重要であるとみなされる。
【０１１６】
血漿α−マクログロブリンなどのタンパク質は、阻害剤のベイト領域のタンパク質分解後にマクログロブリン内で殆どのプロテイナーゼを捕捉することによって殆どのプロテイナーゼを阻害する一般的なエンドペプチダーゼ阻害剤である。ＭＭＰ−１は、溶液中でＴＩＭＰ−１よりもα２−マクログロブリンと容易に反応する。
【０１１７】
他の実施形態において、ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片または活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含み、この活性断片は脂肪組織を異化する。
【０１１８】
他の実施形態において、ＭＭＰまたはその断片は活性もしくは不活性であるか、または本組成物はＭＭＰまたはその断片の組み合わせを含有する。いくつかの実施形態において、本組成物は、不活性ＭＭＰまたはその断片を活性化する１以上の薬剤を含む。
【０１１９】
ペプチド：単なる実例となる目的に対して、「ＭＭＰ」という用語はまた、プロＭＭＰ型、活性型、不活性型およびその活性断片も含む。この用語は、対立遺伝子変異体、種変異体、スプライシング変異体、突然変異体、断片などを含むが限定されない。
【０１２０】
実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましい実施形態において、本組成物は、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、変異体、突然変異体、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、本組成物は、３以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、変異体、突然変異体、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、有効量の５以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）のペプチドまたはタンパク質を含む。
【０１２３】
好ましい実施形態において、ＭＭＰペプチドが「活性」ペプチドであることを理解すると、ＭＭＰペプチドは、少なくとも５つの連続アミノ酸残基を含む。「活性」とは、本明細書中で記載のような既知の機能だけでなくＭＭＰ分子に対して天然である何らかの他の機能も含むか、またはエンドユーザーによる何らかの操作に基づき改変され得るものを含む、各ＭＭＰの１以上の機能を含む。
【０１２４】
別の好ましい実施形態において、ＭＭＰペプチドは、ペプチドそれ自身、それに対する化学的同等物、その異性体（例えば、異性体、立体異性体、レトロ異性体、レトロ−インベルソ異性体、全−［Ｄ］異性体、全−［Ｌ］異性体またはその混合［Ｌ］および［Ｄ］異性体）、そこにおける保存的置換、その前駆体型、その細胞内タンパク質分解性にプロセシングされる形態、例えばＮまたはＣ末端からの単一アミノ酸の切断または本発明のペプチドの活性代謝産物、医薬的に許容可能なその塩およびエステルおよび翻訳後修飾の結果生じる他の形態などを含む。１０、９、８、７、６、５および４アミノ酸長以下のあらゆる親配列（コア親配列からの環化または直鎖状または分岐状）も含まれ、特定の配列は部分配列である。当業者にとって当然のことながら、ペプチドが単量体、二量体、三量体などであり得る場合である。本発明のペプチドの使用は、活性断片（単数または複数）が１以上の結合パートナーと複合体化されるというペプチドの使用を含む。本発明のペプチドの活性を保持する修飾ペプチドは、本発明の範囲内に包含される。
【０１２５】
別の好ましい実施形態において、ＭＭＰペプチドは、少なくとも１つの非ネイティブアミノ酸残基または非アミノ酸分子を含む。「非ネイティブ」アミノ酸残基は、ＭＭＰ核酸配列によりコードされるアミノ酸に対する何らかの変化を含む。したがって、非ネイティブアミノ酸残基または非アミノ酸分子は、化学的同等物、類似体、合成分子、誘導体、変異体、置換、ペプチド核酸、リンカー分子、無機分子などを含むが限定されない。
【０１２６】
核酸レベルでまたはアミノ酸レベルで突然変異が導入され得る。特定の核酸配列に関して、遺伝コードの縮重のために、多数の機能的に同一である核酸がある一定のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵは全て、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより特定される全ての位置で、コドンはコードされるポリペプチドを変化させることなく記載される対応するコドンの何れかに変更され得る。このような核酸変動は「サイレント変化」であり、これは、保存的に修飾された変異の１種である。特定のアミノ酸をコードするために核酸レベルでの突然変異が導入される場合、１以上の核酸が変更される。例えばプロリンはＣＣＣ、ＣＣＡ、ＣＣＧ、ＣＣＵによってコードされ；したがって、１塩基変化、例えばＧＣＣへのＣＣＣ（プロリン）の変化はアラニンを生じさせる。したがって、例として、天然または非天然ポリペプチドをコードする本明細書中の全ての天然または非天然核酸配列はまた、天然または非天然核酸の全ての可能なサイレント変異も示す。当業者は、機能的に同一である分子または異なる分子を得るために、天然または非天然核酸中の各コドン（通常はメチオニンに対する唯一のコドンであるＡＵＧおよび通常はトリプトファンに対する唯一のコドンであるＴＧＧを除く。）を修飾し得ると認識するであろう。したがって、天然または非天然ポリペプチドをコードする天然または非天然核酸の各サイレント変異は、各記載配列に潜在している。
【０１２７】
アミノ酸配列、コードされる配列において１個の天然および非天然アミノ酸または小さい割合の天然および非天然アミノ酸を変化、付加または欠失させる、核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失または付加に関しては、変更の結果、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加または化学的に類似のアミノ酸での天然および非天然アミノ酸の置換が生じる。機能的に類似の天然アミノ酸を提供する保存的置換表は当技術分野で周知である。このような保存的に改変される変異体は、さらに、本明細書中に記載の方法および組成物の多型変異体、種間ホモローグおよび対立遺伝子を除外しない。
【０１２８】
「非天然アミノ酸」は、２０種類の一般的アミノ酸またはピロリシンまたはセレノシステインのうち１つではないアミノ酸を指す。「非天然アミノ酸」という用語と同義的に使用され得る他の用語は、「非天然コードアミノ酸」、「天然ではないアミノ酸」、「天然で生じないアミノ酸」およびその様々にハイフンで結ばれる、およびハイフンで結ばれない形態である。「非天然アミノ酸」という用語は、天然でコードされるアミノ酸の修飾により天然で生じるアミノ酸を含むが限定されない（２０種類の一般的アミノ酸またはピロリシンおよびセレノシステインを含むが限定されない。）が、使用者の操作なくしては、翻訳複合体によって伸長するポリペプチド鎖にそれ自身が組み込まれない。天然ではコードされない天然で生じるアミノ酸の例としては、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−スレオニンおよびＯ−ホスホチロシンが挙げられるが限定されない。さらに、「非天然アミノ酸」という用語は、天然ではなく、合成により得ることができるかまたは非天然アミノ酸の修飾により得ることができるアミノ酸を含むが限定されない。
【０１２９】
いくつかの場合において、非天然アミノ酸置換または組み込みは、他の化学的、物理学的、薬理学的および／または生物学的形質に影響を与えるために、ポリペプチド内での他の付加、置換または欠失と組み合わせられる。いくつかの場合において、他の付加、置換または欠失によって、ポリペプチドの（タンパク質分解性の分解に対する耐性を含むが限定されない）安定性が向上し得るかまたはその適切な受容体、リガンドおよび／または結合タンパク質に対するポリペプチドの親和性が向上し得る。いくつかの場合において、他の付加、置換または欠失によって、ポリペプチドの溶解度が向上し得る。いくつかの実施形態において、組み換え宿主細胞での発現後のポリペプチド溶解度を向上させる目的のために、非天然アミノ酸の組み込みのための別の部位に加えて、天然でコードされるアミノ酸または非天然アミノ酸での置換のための部位が選択される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、会合するリガンド、結合タンパク質および／または受容体に対する親和性を調節し、受容体二量体化を調整し（向上させるかまたは低下させることを含むが限定されない。）、受容体二量体を安定化し、循環半減期を調整し、放出またはバイオアベイラビリティーを調整し、精製を促進し、または特定の投与経路を改善もしくは変化させる、別の付加、置換または欠失を含む。同様に、非天然アミノ酸ポリペプチドは、検出（ＧＦＰを含むが限定されない。）、精製、組織または細胞膜を通じた輸送、プロドラッグ放出または活性化、サイズ縮小またはポリペプチドの他の特質を改善する、化学的または酵素切断配列、プロテアーゼ切断配列、反応基、抗体結合ドメイン（ＦＬＡＧまたはポリ−Ｈｉｓを含むが限定されない。）または他の親和性に基づく配列（ＦＬＡＧ、ポリ−Ｈｉｓ、ＧＳＴなどを含むが限定されない。）または連結される分子（ビオチンを含むが限定されない。）を含み得る。
【０１３０】
本明細書中に記載の方法および組成物は、ポリペプチドへの１以上の非天然アミノ酸の組み込みを含む。１以上の非天然アミノ酸は、ポリペプチドの活性を破壊しない１以上の特定の位置で組み込まれ得る。これは、疎水性アミノ酸を非天然または天然疎水性アミノ酸で、大型アミノ酸を非天然または天然大型アミノ酸で、親水性アミノ酸を非天然または天然親水性アミノ酸で置換することおよび／または活性に必要ではない位置で非天然アミノ酸を挿入することを含むが限定されない「保存的」置換をなすことによって達成され得る。
【０１３１】
ポリペプチド内での非天然アミノ酸での置換のための所望の部位を選択するために、様々な生化学的および構造的アプローチを使用し得る。ポリペプチド鎖のあらゆる位置が、非天然アミノ酸を組み込むための選択に適切であり、選択は、合理的設計に基づき得るか、または何らかの特定の所望の目的のための、または特定の所望の目的のない、無作為選択によるものであり得る。所望の部位の選択は、アゴニスト、超アゴニスト、部分的アゴニスト、インバースアゴニスト、アンタゴニスト、受容体結合調整因子、受容体活性調整因子、結合パートナーへの結合の調整因子、結合パートナー活性調整因子、結合パートナー立体構造調整因子、二量体または多量体形成、ネイティブ分子と比較して活性または特性に対する変化がないことまたは、溶解度、凝集もしくは安定性など、ポリペプチドの何らかの物理学的または化学的特性を操作することを含むが限定されない、何らかの所望の特性または活性を有する（さらに修飾されてもよいし、または未修飾のままであってもよい）非天然アミノ酸ポリペプチドを作製することに基づき得る。例えば、ポリペプチドの生物学的活性に必要とされるポリペプチド中の位置は、点突然変異分析、アラニンスキャニングまたはホモローグスキャンニング法を含むが限定されない方法を用いて同定され得る。アラニンまたはホモローグスキャンニング突然変異誘発を含むが限定されない方法によって生物学的活性に重大であると同定される残基以外の残基は、ポリペプチドに対して求められる所望の活性に依存して、非天然アミノ酸での置換に対する良好な候補であり得る。あるいは、生物学的活性に対して重大であるとして同定された部位は、ポリペプチドに対して求められる所望の活性に依存して、これもまた、非天然アミノ酸での置換に対する良好な候補であり得る。別の代替物は、非天然アミノ酸によりポリペプチド鎖上の各位置で連続的置換を行い、ポリペプチドの活性における影響を観察することである。何らかのポリペプチドへの非天然アミノ酸での置換のための位置を選択するための、あらゆる手段、技術または方法は、本明細書中に記載の方法、技術および組成物での使用に適切である。
【０１３２】
欠失を含有するポリペプチドの天然で生じる突然変異体の構造および活性はまた、非天然アミノ酸での置換に耐えると思われるタンパク質の領域を決定するために調べられ得る。非天然アミノ酸での置換に耐えられないと思われる残基を削除したら、関連ポリペプチドおよび何らかの会合するリガンドまたは結合タンパク質の三次元構造を含むが限定されない方法を用いて、残存する位置それぞれでの提案される置換の影響を調べ得る。多くのポリペプチドのＸ線結晶構造およびＮＭＲ構造は、タンパク質および核酸の大型分子の三次元構造データを含有する集中型のデータベースであるＰｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ、ｒｃｓｂ．ｏｒｇ）において利用可能であり、非天然アミノ酸で置換され得るアミノ酸位置を同定するために使用することができる。さらに、三次元構造データが利用可能でない場合、ポリペプチドの二次元および三次元構造を調べてモデルを作製し得る。したがって、非天然アミノ酸で置換され得るアミノ酸位置の同一性は容易に得られ得る。非天然アミノ酸の組み込みの代表的な部位は、受容体結合領域または結合タンパク質への結合のための領域またはリガンド候補から除外されるものが挙げられるが限定されず、完全にまたは部分的に溶媒に露出され得、近隣残基との水素結合相互作用は殆どないかまたは全くなく、近隣の反応性残基への露出は最小限であり得、および／またはその会合受容体、リガンドまたは結合タンパク質がある特定のポリペプチドの三次元結晶構造により予想されるように非常に柔軟な領域にあり得る。
【０１３３】
ポリペプチド中のある一定の位置で多岐にわたる非天然アミノ酸を置換し得るかまたはそこに組み込み得る。例として、その会合リガンド、受容体および／または結合タンパク質とのポリペプチドの三次元結晶構造の試験に基づき、組み込みのために、特定の非天然アミノ酸が選択され得、保存的置換が好ましい。
【０１３４】
本明細書中でさらに使用される場合、本発明のペプチドの「化学的同等物」は、本明細書中に記載のペプチドと同じ所望の活性、例えばコラゲナーゼ活性を保持し、些細な化学的相違を呈する分子または穏やかな条件下で本発明のペプチド（例えば、本発明のペプチドのエステル、エーテル、還元生成物および複合体）に変換される分子である。
【０１３５】
さらに、本明細書中で使用される場合、「保存的置換」は、アミノ酸置換が同様の極性または立体的配置を有するか、またはアミノ酸置換が置換残基と同じクラス（例えば、疎水性、酸性または塩基性）に属するかの何れかのために、置換アミノ酸残基と機能的に同等であるアミノ酸置換である。「保存的置換」という用語は、本明細書中で定義されるように、本発明のペプチドの自然免疫促進能に対して重要ではない影響を有する置換を含む。保存的置換の例としては、極性（親水性）残基の、別のものに対する置換（例えばアルギニン／リジン、グルタミン／アスパラギンまたはスレオニン／セリン）；非極性（疎水性）残基（例えばイソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン）の、別のものに対する置換、酸性残基（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）の、別のものに対する置換；または塩基性残基（例えば、アルギニン、ヒスチジン、リジンまたはオルニチン）の、別のものに対する置換が挙げられる。
【０１３６】
「類似体」という用語は、本明細書中で使用される場合、少なくとも１つの残基が機能的に類似の残基で保存的に置換されている、本明細書中に記載の配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するあらゆるペプチドを含む。「類似体」は、ＭＭＰ−ペプチドのアミノ酸配列の機能的変異体および明らかな化学的同等物を含む。本明細書中でさらに使用される場合、「機能的変異体」という用語は、酵素能を示す、例えば間質性コラーゲンの１以上の加水分解を触媒する、ペプチドの活性を指す。「類似体」は、本明細書中に記載のような類似体のあらゆる医薬的に許容可能な塩をさらに含む。
【０１３７】
「誘導体」は、本明細書中で使用される場合、官能側鎖の反応により化学的に誘導体化された１以上のアミノ酸を有する本発明のペプチドを指す。代表的な誘導体化分子としては、アセチル基、アミン塩酸塩、カルボベンゾキシ基、クロロアセチル基、ホルミル基、ｐ−トルエンスルホニル基またはｔ−ブチルオキシカルボニル基を付加することによって塩またはアミドを形成させるために遊離アミノ基が誘導体化されているペプチド分子が挙げられるが限定されない。遊離ヒドロキシル基は、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体を形成させるために誘導体化され得る。さらに、塩、エステル（例えば、メチルおよびエチルエステル）またはヒドラジドを形成させるために遊離カルボキシル基を誘導体化し得る。したがって、「誘導体」は、本明細書中に記載のような誘導体のあらゆる医薬的に許容可能な塩をさらに含む。
【０１３８】
本発明のある実施形態において、ＭＭＰペプチドは、修飾Ｃ末端および／または修飾Ｎ末端を含む。例えば、単離ペプチドはアミド化Ｃ末端を有し得る。例えば、アミノ末端はアセチル化（Ａｃ）され得るか、またはカルボキシ末端がアミド化（ＮＨ２）され得る。しかし、本発明のある実施形態において、本発明のペプチドは、このような修飾の結果、所望の活性が失われる場合、好ましくはアセチル化されない。アミノ末端修飾には、メチル化（すなわち−−ＮＨＣＨ３または−−ＮＨ（ＣＨ３）２、アセチル化、カルボベンゾイル基を付加することまたはＲＣＯＯ−−（式中、Ｒは、ナフチル、アクリジニル、ステロイジルおよび類似の基からなる群から選択される。）により定義されるカルボキシル官能基を含有する何らかの保護基でアミノ末端をブロックすることが含まれる。カルボキシ末端修飾には、カルボキサミド基での遊離酸の置換または構造の束縛を導入するためのカルボキシ末端での環状ラクタムの形成が含まれる。
【０１３９】
ある実施形態において、ＮＨからＮＣＨ３など、骨格置換をなし得る。ペプチドはまた、修飾も有し得る（例えば、挿入または欠失またはトランケーションなどの点突然変異）。例として、ペプチドは、所望の活性が保持される限り、Ｄアミノ酸の少なくとも１つの点挿入によって、修飾された残基を含むアミノ酸配列を含み得る。例えば、プロリン残基の環サイズが５員から４、６または７員に変化しているプロリン類似体を使用し得る。環状基は、飽和または不飽和であり得、不飽和である場合、芳香族または非芳香族であり得る。
【０１４０】
別の好ましい実施形態において、２０種類の遺伝コードされるアミノ酸（またはＤアミノ酸）の天然の側鎖が、同様の特性を有する他の側鎖で、例えばアルキル、低級アルキル、環状４−、５−、６−から７−員アルキルアミド、アミド低級アルキルアミドジ（低級アルキル）、低級アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシおよびその低級エステル誘導体で、および４−、５−、６−から７−員の複素環などの基で置き換えられる。
【０１４１】
このような置換としては、（１）オルニチン、Ｎｌｙのような、標準的ではない正荷電アミノ酸；「Ｎ末端」に連結されるリジン側鎖を有するＮ−（４−アミノブチル）−グリシンおよびグリシンのアミノ基に連結されるアミノプロピルまたはアミノエチル基がある化合物；（２）Ｃｉｔなど、正味荷電がなく、アルギニンと類似の側鎖がある非天然アミノ酸；シトルリンおよびＨｃｉ；１以上のメチレン基があるシトルリン；（３）ＯＨがある標準的ではない非天然アミノ酸（例えばセリンのようなもの）、例えばｈＳｅｒなど；ホモセリン（もう１つのメチレン基、Ｈｙｐ；ヒドロキシプロリン、Ｖａｌ（ｐＯＨ）；ヒドロキシバリン、Ｐｅｎ；ペニシラミン、（Ｖａｌ（βＳＨ）；（４）プロリン誘導体、例えばＤ−Ｐｒｏなど、例えば３，４−デヒドロプロリンなど、Ｐｙｒ；ピログルタミン、環上にフッ素置換があるプロリン、１，３−チアゾリジン−＋カルボン酸（環中にＳがあるプロリン）；（５）ヒスチジン誘導体、例えばＴｈｉなど；ベータ−（２−チエニル）−アラニン；または（６）アルキル誘導体、例えばＡｂｕなど；２−アミノ酪酸（Ｃａ上のエチル基）、Ｎｖａ；ノルバリン（Ｃα上のプロピル基）、Ｎｌｅ；ノルロイシン（Ｃα上のブチル基）、Ｈｏｌ；ホモロイシン（Ｃα上のプロピル基）、Ａｉｂ、アルファ−アミノイソ酪酸（メチレン基がないバリン）が挙げられ得るが、必ずしも限定されない。当業者は、親ペプチド／配列の活性を保持する置換を認識する。
【０１４２】
別の代替的な実施形態において、環状ペプチドを形成させるためにそれぞれＮ末端アミノ基があるカルボキシル基またはエステルの−−ＯＨまたはエステル（−−ＯＲ）の内部の置き換えによって環化するようにＣ末端カルボキシル基またはＣ末端エステルを誘導し得る。例えば、ペプチド酸を与えるための合成および切断後、溶液中、例えば塩化メチレン（ＣＨ２Ｃ１２）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）混合液中で、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などの適切なカルボキシル基活性化因子によって、遊離酸を活性化エステルに変換する。次いで、Ｎ末端アミンでの活性化エステルの内部置き換えによって、環状ペプチドを形成させる。重合化とは対照的に、内部環化は、非常に希薄な溶液の使用により促進され得る。このような方法は当技術分野で周知である。
【０１４３】
本発明のペプチドは、例えば活性化剤が投与されるような時間まで不活性のままとするために、またはペプチドの立体構造を制限するために、環化するか、またはペプチドの末端のデスアミノまたはデスカルボキシ残基を組み込んで、末端アミノまたはカルボキシル基がないようにすることができる。本発明の化合物のＣ末端官能基は、アミド、アミド低級アルキル、アミドジ（低級アルキル）、低級アルコキシ、ヒドロキシおよびカルボキシおよびその低級エステル誘導体および医薬的に許容可能なその塩を含む。
【０１４４】
Ｎおよび／またはＣ末端システインを付加し、ジスルフィド結合または他の側鎖相互作用を通じてペプチドを環化することによって、本発明のペプチドを環化することができる。
【０１４５】
核酸：本発明の実施形態はまた、核酸配列、ＭＭＰ、プロＭＭＰ、その活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの組み合わせをコードする核酸を含む組成物も対象とする。ＭＭＰ−核酸配列は、１以上の突然変異、置換、欠失、挿入、修飾、修飾核酸塩基、結合、類似体、誘導体などを含み得る。「ＭＭＰ」という用語は、これらの分子全てを包含するものとする。したがって、ＭＭＰ−１に言及する場合、その用語は、ＭＭＰ−１タンパク質、プロＭＭＰ−１、その活性断片、突然変異体、変異体、１以上の突然変異、置換、欠失、挿入、修飾、修飾核酸塩基、結合、類似体、誘導体などを含むＭＭＰ−１核酸配列を指す。「核酸配列」という用語は、簡潔にするために使用され、これには、単離核酸またはｃＤＮＡ配列、合成されるまたは合成核酸配列、キメラ核酸配列、ホモローグ、オルソログ、変異体、突然変異体またはそれらの組み合わせが含まれるが限定されない。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする単離核酸またはｃＤＮＡ配列または合成核酸配列を有する発現ベクターを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの好ましい実施形態において、本組成物は、２以上または３以上または４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）をコードする単離核酸またはｃＤＮＡ配列または合成核酸配列を有する発現ベクターを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、発現ベクターは、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の核酸配列をコードし、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、野生型マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）と少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９９％または９９．９％の配列同一性を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の核酸配列を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の２以上の核酸配列を含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、本組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の２以上、３以上、４以上の核酸配列を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）の核酸配列を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、野生型マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）に対して少なくとも約５０％の配列同一性を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、本組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせのうち、２以上、３以上、４以上の核酸配列を含む。
【０１５２】
他の実施形態において、ＭＭＰ核酸配列は、野生型ＭＭＰまたはそのｃＤＮＡ配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を含む。
【０１５３】
他の実施形態において、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）核酸配列であり、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰ核酸配列は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８または活性断片またはそのｃＤＮＡ配列を含み、野生型ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片またはそのｃＤＮＡ配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、ＭＭＰの核酸配列は、１以上の突然変異、置換、欠失、変異体またはそれらの組み合わせをさらに含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、１以上の突然変異、置換、欠失、変異体またはそれらの組み合わせを含むＭＭＰ核酸配列とＭＭＰのネイティブまたは野生型またはｃＤＮＡ配列との間の、相同性、配列同一性または相補性は、約５０％から約６０％である。いくつかの実施形態において、相同性、配列同一性または相補性は、約６０％から約７０％である。いくつかの実施形態において、相同性、配列同一性または相補性は、約７０％から約８０％である。いくつかの実施形態において、相同性、配列同一性または相補性は、約８０％から約９０％である。いくつかの実施形態において、相同性、配列同一性または相補性は、約９０％、約９２％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％である。
【０１５６】
ある実施形態において、ベクターは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、変異体、突然変異体またはその活性断片を含む、ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰをコードするポリヌクレオチドを含む。
【０１５７】
ある実施形態において、１以上のＭＭＰを発現するベクターは、患者に投与され得、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、変異体、突然変異体またはその活性断片を含む、ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰの発現は、処置しようとする状態に付随するタンパク質または組織を解離させる
【０１５８】
当技術分野で公知であるように、および本明細書中に記載のように、多くのベクターが哺乳動物細胞への遺伝子産物の転移に介在可能であることが知られている。「ベクター」（遺伝子送達または遺伝子転移「ビヒクル」と呼ばれることがある。）は、インビトロまたはインビボの何れかで宿主細胞に送達しようとするポリヌクレオチドを含む巨大分子または分子の複合体を指す。送達しようとするポリヌクレオチドは、遺伝子治療において関心のあるコード配列を含み得る。ベクターとしては、例えば、ウイルスベクター（アデノウイルス（「Ａｄ」）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）および水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）およびレトロウイルスなど）、リポソームおよび他の脂質含有複合体および宿主細胞へのポリヌクレオチドの送達に介在可能な他の巨大分子複合体が挙げられる。ベクターはまた、遺伝子送達および／または遺伝子発現をさらに調整するかまたはさもなくば標的細胞に有利な特性を提供する他のコンポーネントまたは官能基も含み得る。下記でより詳細に記載し、例示するように、このような他のコンポーネントとしては、例えば、細胞への結合または標的化に影響を与えるコンポーネント（細胞型または組織特異的な結合に介在するコンポーネントを含む。）；細胞によるベクター核酸の取り込みに影響を与えるコンポーネント；取り込み後の細胞内でのポリヌクレオチドの局在化に影響を与えるコンポーネント（核局在化に介在する物質など）；およびポリヌクレオチドの発現に影響を与えるコンポーネントが挙げられる。このようなコンポーネントとしてはまた、マーカー、例えばベクターにより送達された核酸を取り込み、発現している細胞を検出または選択するために使用され得る検出可能および／または選択可能マーカーなども挙げられ得る。このようなコンポーネントは、ベクターの天然の特性として提供され得るか（結合および取り込みに介在するコンポーネントまたは官能基を有するある一定のウイルスベクターの使用など）、またはベクターは、このような機能を提供するように修飾され得る。他のベクターとしては、Ｃｈｅｎら；ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，３４：１６７−１７１（２００３）により記載されるものが挙げられる。非常に多岐にわたるこのようなベクターが当技術分野で公知であり、一般的に利用可能である。
【０１５９】
「組み換えウイルスベクター」は、１以上の異種遺伝子産物または配列を含むウイルスベクターを指す。多くのウイルスベクターがパッケージングに関連してサイズの制約を示すので、異種遺伝子産物または配列は、一般的には、ウイルスゲノムの１以上の部分を置き換えることによって導入される。このようなウイルスは、（例えば、複製および／またはキャプシド形成のために必要とされる、ヘルパーウイルスまたは遺伝子産物を担うパッケージング細胞株を使用することによって）ウイルス複製およびキャプシド形成中に欠損機能がトランスで提供されることを必要とする、複製欠損となり得る。送達しようとするポリヌクレオチドがウイルス粒子の外側に持ち込まれる修飾ウイルスベクターも記載されている（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，ＤＴら、ＰＮＡＳ  ８８：８８５０−８８５４，１９９１参照）。
【０１６０】
適切な核酸送達系は、ウイルスベクター、一般的にはアデノウイルス、アデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ヘルパー依存性アデノウイルス、レトロウイルスまたはセンダイウイルス−リポソーム（ＨＶＪ）複合体のうち少なくとも１つからの配列を含む。好ましくは、ウイルスベクターは、ポリヌクレオチド、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターに操作可能に連結される強力な真核プロモーターを含む。
【０１６１】
さらに好ましいベクターとしては、ウイルスベクター、融合タンパク質および化学的複合物が挙げられる。レトロウイルスベクターとしては、モロニーマウス白血病ウイルスおよびＨＩＶに基づくウイルスが挙げられる。ある好ましいＨＩＶに基づくウイルスベクターは、ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子がＨＩＶゲノム由来であり、ｅｎｖ遺伝子が別のウイルス由来である少なくとも２つのベクターを含む。ＤＮＡウイルスベクターが好ましい。これらのベクターとしては、オルソポックスまたはトリポックスベクターなどのポックスベクター、Ｉ型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターなどのヘルペスウイルスベクター［Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，６４：４８７（１９９５）；Ｌｉｍ，Ｆ．ら、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ）（１９９５）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．：Ｕ．Ｓ．Ａ．：９０  ７６０３（１９９３）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ：８７：１１４９（１９９０）］、アデノウイルスベクター［ＬｅＧａｌ  ＬａＳａｌｌｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：９８８（１９９３）；Ｄａｖｉｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３：２１９（１９９３）；Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２００４（１９９５）］およびアデノ随伴ウイルスベクター［Ｋａｐｌｉｔｔ，Ｍ．Ｇ．ら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．８：１４８（１９９４）］が挙げられる。
【０１６２】
ポックスウイルスベクターは、遺伝子を細胞質に導入する。トリポックスウイルスベクターは、結果として、核酸を短時間だけ発現させる。アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターは、いくつかの本発明の実施形態に対して示され得る。アデノウイルスベクターは、結果として、アデノ随伴ウイルスよりも発現時間が短く（例えば約１カ月未満）、いくつかの実施形態においては、かなり長い発現を示し得る。選択される特定のベクターは、標的細胞および処置されている状態に依存する。適切なプロモーターの選択は容易に遂行され得る。好ましくは、高発現プロモーターを使用する。適切なプロモーターの例は、７６３塩基対のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）（Ｄａｖｉｓら、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：１５１（１９９３））およびＭＭＴプロモーターも使用し得る。それらのネイティブプロモーターを用いてある一定のタンパク質を発現させ得る。発現を促進し得る他のエレメントもまた、エンハンサーまたはｔａｔ遺伝子およびｔａｒエレメントなどの高レベル発現を生じさせる系として含まれ得る。次いで、このカセットは、ベクター、例えばプラスミドベクター、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）複製起点を含むｐＵＣ１９、ｐＵＣ１１８、ｐＢＲ３２２または他の公知のプラスミドベクターなど、に挿入され得る。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照。プラスミドベクターはまた、アンピシリン耐性に対するβ−ラクタマーゼ遺伝子などの選択可能マーカーも含み得るが、ただし、マーカーポリペプチドは、処置されている生物の代謝に悪影響を及ぼさないものとする。カセットはまた、合成送達系において核酸結合部分にも結合させることができる。
【０１６３】
必要に応じて、本発明のポリヌクレオチドはまた、陽イオン性リポソームおよびアデノウイルスベクターなどのミクロ送達（ｍｉｃｒｏｄｅｌｉｖｅｒｙ）ビヒクルとともに使用することもできる。
【０１６４】
複製欠損組み換えアデノウイルスベクターは、公知の技術に従い作製され得る。Ｑｕａｎｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：２５８１−２５８４（１９９２）；Ｓｔｒａｔｆｏｒｄ−Ｐｅｒｒｉｃａｄｅｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：６２６−６３０（１９９２）；およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ，６８：１４３−１５５（１９９２）参照。
【０１６５】
ＭＭＰの発現は当技術分野で公知の何らかのプロモーター／エンハンサーエレメントにより調節され得るが、これらの制御エレメントは、発現のために選択された宿主において機能性でなければならない。ＭＭＰ−遺伝子発現を調節するために使用され得るプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第５，３８５，８３９号および同第５，１６８，０６２号）、ＳＶ４０初期プロモーター領域（ＢｅｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ  ２９０：３０４−３１０）、ラウス肉腫ウイルスの３’の長い末端反復中に含有されるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ  ２２：７８７−７９７、１９８０）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５，１９８１）、メタロチオネイン遺伝子の制御配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９−４２，１９８２）；β−ラクタマーゼプロモーターなどの原核発現ベクター（ＶＩＩＩａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７５：３７２７−３７３１，１９７８）またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１−２５，１９８３）が挙げられるが限定されず；またＧａｌ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼプロモーターなどの酵母または他の真菌由来のプロモーターエレメント；および組織特異性を示し、トランスジェニック動物で利用されてきた動物転写調節領域：膵臓腺房細胞において活性があるエラスターゼＩ遺伝子調節領域（Ｓｗｉｆｔら、Ｃｅｌｌ  ３８：６３９−６４６，１９８４；Ｏｒｎｉｔｚら、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９，１９８６；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ７：４２５−５１５，１９８７）；膵臓ベータ細胞において活性があるインスリン遺伝子調節領域（Ｈａｎａｈａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：１１５−１２２，１９８５）、リンパ球細胞において活性がある免疫グロブリン遺伝子調節領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、Ｃｅｌｌ  ３８：６４７−６５８，１９８４；Ａｄａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１８：５３３−５３８，１９８５；Ａｌｅｘａｎｄｅｒら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ  ７：１４３６−１４４４，１９８７）、精巣、乳房、リンパ球および肥満細胞において活性があるマウス乳癌ウイルス調節領域（Ｌｅｄｅｒら、Ｃｅｌｌ  ４５：４８５−４９５，１９８６）、肝臓において活性があるアルブミン遺伝子調節領域（Ｐｉｎｋｅｒｔら、Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−２７６，１９８７）、肝臓において活性があるアルファ−フェトプロテイン遺伝子調節領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９−１６４８，１９８５；Ｈａｍｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３５：５３−５８，１８７）、肝臓において活性があるα１−アンチトリプシン遺伝子調節領域（Ｋｅｌｓｅｙら、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−１７１，１９８７）、骨髄細胞において活性があるベータ−グロビン遺伝子調節領域（Ｍｏｇｒａｍら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：３３８−３４０，１９８５；Ｋｏｌｌｉａｓら、Ｃｅｌｌ  ４６：８９−９４，１９８６）、脳のオリゴデンドロサイト細胞において活性があるミエリン塩基性タンパク質遺伝子調節領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら、Ｃｅｌｌ  ４８：７０３−７１２，１９８７）、骨格筋において活性があるミオシン軽鎖−２遺伝子調節領域（Ｓａｎｉ，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２８３−２８６，１９８５）および視床下部において活性がある性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子調節領域（Ｍａｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３４：１３７２−１３７８，１９８６）も参照のこと。
【０１６６】
本発明のＤＮＡ配列を発現させることにおいて、多岐にわたる宿主／発現ベクターの組み合わせを使用し得る。有用な発現ベクターは、例えば、染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列のセグメントからなり得る。適切なベクターとしては、ＳＶ４０の派生物および既知の細菌プラスミド、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）プラスミドｃｏｌ  Ｅ１、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭａｌ−Ｃ２、ｐＥＴ、ｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈら、Ｇｅｎｅ  ６７：３１  −４０、１９８８）、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体、プラスミド、例えばＲＰ４など；ファージＤＮＡ、例えばファージ１、例えばＮＭ９８９および他のファージＤＮＡの多数の誘導体、例えばＭ１３および繊維状１本鎖ファージＤＮＡ；酵母プラスミド、例えば２μプラスミドまたはその誘導体など、真核細胞において有用なベクター、例えば昆虫または哺乳動物細胞において有用なベクターなど；プラスミドおよびファージＤＮＡの組み合わせ由来のベクター、例えばファージＤＮＡまたは他の発現調節配列を使用するために修飾されているプラスミドなどが挙げられる。
【０１６７】
ＭＭＰを発現させるために、本発明に従い、酵母発現系を使用することもできる。例えば、例を２つ挙げると、非融合ｐＹＥＳ２ベクター（ＸｂａＩ、ＳｐｈＩ、ＳｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＧｓｔＸＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢｓｔＸＩ、ＢａｍＨＩ、ＳａｃＩ、ＫｐｎＩおよびＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）または融合ｐＹＥＳＨｉｓＡ、Ｂ、Ｃ（ＸｂａＩ、ＳｐｈＩ、ＳｈｏＩ、ＮｏｔＩ、ＢｓｔＸＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨ１、ＳａｃＩ、ＫｐｎＩおよびＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位、ＰｒｏＢｏｎｄレジンで精製し、エンテロキナーゼで切断したＮ末端ペプチド；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を本発明に従い使用し得る。本発明に従い、酵母２−ハイブリッド発現系を調製し得る。
【０１６８】
ある好ましい送達系は、そこにポリヌクレオチドの１以上、好ましくは約１個のポリヌクレオチドを組み込む組み換えウイルスベクターである。好ましくは、本発明の方法で使用されるウイルスベクターは、約１０８から約５ｘ１０１０ｐｆｕのｐｆｕ（プラーク形成単位）を有する。ポリヌクレオチドを非ウイルスベクターを用いて投与しようとする実施形態において、約０．１ナノグラムから約４０００マイクログラムの間の使用は有用であることが多く、例えば約１ナノグラムから約１００マイクログラムである。
【０１６９】
使用、処方、投与
本組成物は、インビトロおよびインビボでの様々な手順および方法において有用である。例えば、幹細胞の単離、膵臓からの膵島細胞の単離または何らかの組織もしくは器官からの何らかのタイプの細胞の単離、選択組織の分解、組織もしくは細胞塊の分解、組織コンポーネントもしくは組織足場材料（例えばフィブリン、コラーゲン、エラスチンなど）の分解、化粧用途、例えば脂肪沈着、セルライトなどの異化など。
【０１７０】
幹細胞：ある好ましい実施形態において、膵臓から膵島細胞を単離する方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む組成物と膵臓を接触させることを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。膵臓にＭＭＰカクテルを灌流させることができるか、または本明細書中で具体化される組成物とともに温置する前に膵臓を薄切りにすることができ、当技術分野で公知の方法により膵島を単離および精製することができる。いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１７１】
別の好ましい実施形態において、様々な細胞型を単離するために組織または器官を解離させる方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む組成物と組織または器官を接触させることを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１７２】
組織または器官にＭＭＰカクテル（例えば２以上のＭＭＰ分子の組み合わせ）を灌流させることができるか、または本明細書中で具体化される組成物とともに温置する前に器官を薄切りにすることができ、当技術分野で公知の方法により所望の細胞を単離および精製することができる。細胞型の例としては、心筋細胞、繊維芽細胞、樹状細胞、卵巣組織からの濾胞などが挙げられるが限定されない。
【０１７３】
実施形態において、脂肪組織から幹細胞を単離する方法は、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む組成物と脂肪組織を接触させることを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７，ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、この組成物は組織を異化し、それによって組織から幹細胞を単離する。いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１７４】
実施形態において、生体試料から幹細胞を単離する方法は、有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む組成物と生体試料を接触させることを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。例えば、生体試料は、臍帯血、骨髄、骨、胎盤、脂肪組織、膵臓、心臓などであり得る。臍帯血中の幹細胞の例：（ａ）体細胞；（ｂ）間葉系幹細胞；（ｃ）内皮前駆細胞および血管形成促進細胞；および（ｄ）造血幹細胞。いくつかの実施形態において、生体試料は、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜、繊維性組織、瘢痕組織または何らかの器官組織を含む。
【０１７５】
組織から単離される幹細胞または前駆体細胞としては、例えば、骨髄から単離される末梢血幹細胞（ＰＢＳＣ）、幹細胞（骨髄細胞；ＢＭＣ）；脂肪組織から単離される幹細胞；間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、臍帯血、月経液、心臓由来細胞、胚性幹細胞、ＣＤ３０＋細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ３４−細胞、ＣＤ９＋細胞、ＣＤ２９＋細胞、ＣＤ４４＋細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ４９＋細胞、ＣＤ５４＋細胞、ＣＤ５６＋細胞、ＣＤ５９＋細胞、ＣＤ７１＋細胞、ＣＤ９０＋細胞、例えばＣＤ９０．１＋またはＣＤ９０．２＋細胞、ＣＤ１０５＋細胞、ＣＤ１３３＋細胞、ＣＤ１３５＋（ｆｌｔ−３＋）細胞、ＣＤ１４０ａ＋細胞、ＣＤＣＰ１＋細胞、ＣＤ１４６＋（ｍｕｃ−１８＋）細胞、ＡＢＣＧ２＋細胞、ＣＤ１４４＋細胞、胎児肝臓キナーゼ１＋細胞、Ｓｔｒｏ−１＋細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−キット＋）細胞、ネスチン＋細胞、ＰＳＡ−ＮＣＡｍ＋細胞、ＣＤ３０＋細胞、ｐ７５ニューロトフィン（ｎｅｕｒｏｔｏｐｈｉｎ）＋細胞、ＣＤ１０６＋細胞、ＣＤ１２０ａ＋細胞、ＣＤ１２４＋細胞、ＣＤ１６６＋細胞、幹細胞因子＋（ＳＣＦ＋）細胞、Ｓｃａ−１＋細胞、ＳＨ２＋細胞、ＳＨ３＋細胞、ＨＬＡ、例えば、ＨＬＡ−ＡＢＣ細胞、骨形成タンパク質タンパク質＋（ＢＭＰ）細胞、例えば、ＢＭＰ２＋およびＢＭＰ４＋細胞、Ｇａｐ４３＋細胞、グリア線維酸性タンパク質＋（ＧＦＡＰ＋）細胞、ミエリン塩基性タンパク質＋（ＭＢＰ＋）細胞、Ｏ４＋細胞、Ｏ１＋細胞、シナプトフィジン＋細胞、アルカリホスファターゼ＋細胞、クリプト＋（ＴＤＧＦ−１＋）細胞、ポドカリキシン＋細胞、硫酸化プロテオグリカン＋細胞、例えば、シリル化ケラチン表面プロテオグリカン＋細胞、段階特異的な胚性抗原＋（例えば、ＳＳＥＡ−１、−３および−４）細胞、ＴＲＡ−ｌ−６０＋細胞、ＴＲＡ−１−８１＋細胞、オステオカルシン＋細胞、マトリクスｇｌａタンパク質＋細胞、オステオポンチン＋細胞、Ｔｈｙ１＋細胞、ＩＩ型コラーゲン＋細胞、ＩＶ型コラーゲン＋細胞、脂肪酸輸送体＋細胞およびβ１インテグリン＋細胞から単離される幹細胞が挙げられるが限定されない。
【０１７６】
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、サイトカインなどの生物学的活性因子からの様々な影響に依存して複数の特異的なタイプの間葉系または結合組織（すなわち、固有のエレメントを支持する身体の組織；例えば脂肪、骨、間質、軟骨、弾性および繊維性結合組織）に分化可能な、骨髄、血液、真皮および骨膜でとりわけ見られる形成的な多能性芽細胞である。
【０１７７】
プラスチックに接着するヒト骨髄穿刺細胞のおよそ３０％がＭＳＣとみなされる。これらの細胞は、インビトロで増殖させ、次いで分化させるために誘導することができる。成人ＭＳＣをインビトロで増殖させ、刺激して骨、軟骨、腱、筋肉または脂肪細胞を形成させることができるという事実から、組織工学および遺伝子治療ストラテジーに対して成人ＭＳＣは魅力的となる。ＭＳＣ機能をアッセイするために、インビボアッセイが開発されてきた。循環に注入されたＭＳＣは、本明細書中で上記に記載の多くの組織に統合することができる。具体的に、５−アザシチジンへの曝露によって骨格筋および心筋を誘導することができ、培養におけるラットおよびヒトＭＳＣの神経分化は、β−メルカプトエタノール、ＤＭＳＯまたはブチル化ヒドロキシアニソールへの曝露により誘導することができる［Ｗｏｏｄｂｕｒｙ（２０００）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．６１：３６４−３７０］。さらに、ＭＳＣ由来細胞は、末梢注入後ならびにラット脳へのヒトＭＳＣの直接注入後に脳に深く統合することが分かっており；これらは、発生的に神経幹細胞の遊走中に使用される経路に沿って移動し、広く分布するようになり、ＨＳＣ特殊分化のマーカーを喪失し始める［Ａｚｉｚｉ（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：３９０８−３９１３］。間葉系幹細胞および系列特異的な細胞の増殖を促進するための方法は、米国特許第６，２４８，５８７号で開示されている。
【０１７８】
ヒト間葉系幹細胞（ｈＭＳＣ）の表面上のエピトープ、例えば米国特許第５，４８６，３５９号に記載のＳＨ２、ＳＨ３およびＳＨ４などは、例えば骨髄に存在するものなど、不均一な細胞集団から間葉系幹細胞集団をスクリーニングし、捕捉するための試薬として使用され得る。前駆体間葉系幹細胞は、ＣＤ４５に対して陽性である。これらの前駆間葉系幹細胞は、様々な間葉系系列に分化し得る。
【０１７９】
別の好ましい実施形態において、単離幹細胞は、胚性幹細胞、成体幹細胞、臍帯血幹細胞、体性幹細胞、癌幹細胞または心臓幹細胞である。
【０１８０】
さらに、本発明の幹細胞は、造血幹細胞または間葉系幹細胞であり得る。本発明の幹細胞は、全能性、多能性、多分化能性または単能性幹細胞であり得る。本発明の幹細胞は、初代幹細胞であってもよいし、または樹立された幹細胞株、前癌性幹細胞株、癌細胞株または何らかの幹細胞マーカーを顕在化する何らかの細胞株由来であってもよい。初代幹細胞は、癌患者または健康な患者由来であり得る。
【０１８１】
本発明のこの態様による好ましい幹細胞はヒト幹細胞である。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、幹細胞は、脂肪組織から単離される。幹細胞は、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５またはそれらの組み合わせを含むマーカーにより同定される。
【０１８３】
脂肪、脂肪沈着、セルライト：本組成物は、脂肪沈着を減少させるための美容目的で、または例えば脂肪腫などの脂肪沈着が付随する状態の処置において使用され得る。脂肪貯蔵の蓄積は、身体で不均一に起こり得る。例えば、ある一部の者は、腹腔に主に脂肪が蓄積し得、一方で他の者では主に皮下組織に蓄積し得る。性差も明らかになり得、女性では大腿部および臀部外側に脂肪が蓄積し、男性では胴回りに蓄積する。女性は、大腿部の脂肪沈着を蓄積し得、これは、皺のある、または「橙皮状」の外観を有し、その結果、セルライトと呼ばれる状態となる。セルライトは、脂肪乳頭と呼ばれることがある皮下脂肪ヘルニア形成をもたらす皮膚の構築に関連し得る。セルライトに関連し得る他の要因としては、液体貯留および炎症につながる、結合組織隔壁の変化および／または減少、血管およびリンパ変化が挙げられる。脂肪組織はまた、脂肪腫として知られる繊維性脂肪沈着の形態でも蓄積し得る。脂肪貯蔵の利用は不均一に起こり得る。実質的な体重減少がある者は、依然として、不健康な過剰な体重減少が達成されない限り、減量に耐性がある局所的な脂肪蓄積ポケットを有し得る。運動は、皮下脂肪貯蔵に異なるように影響を及ぼし得、脂肪分解に反応するより深部の組織および表面的貯蔵はより耐性がある。セルライトはまた、体重減少にもかかわらず依然として存在し得、脂肪腫は一般的には体重減少により影響を受けない。
【０１８４】
局所的な脂肪、脂肪組織、セルライトおよび脂肪細胞減少療法を達成するための、医薬組成物、処方物、方法および系も本明細書中で提供される。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、局所的な脂肪沈着の減少を必要とする対象（例えば肥満である対象）において局所的な脂肪沈着を減少させる方法は、その対象に有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む医薬組成物を投与することを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、局所的な脂肪沈着を減少させる。
【０１８６】
ある実施形態において、局所的な脂肪沈着の減少を必要とする対象（例えば肥満である対象）において局所的な脂肪沈着を減少させる方法は、その対象に有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む医薬組成物を投与することを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２５、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、局所的な脂肪沈着を減少させる。いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１８７】
実施形態において、本医薬組成物は、非経口、局所、筋肉内、皮下または経皮投与経路により投与される。ある一定の態様において、本医薬組成物は局所的な脂肪沈着に、またはその付近に投与される。
【０１８８】
ある実施形態において、脂肪組織増加が付随する状態を有する対象を処置する方法は、その対象に有効量の少なくとも１つのマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む組成物を投与することを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含み、本組成物が脂肪組織を異化する。いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０１８９】
実施形態において、ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、１以上のＭＭＰの１以上の活性断片または活性断片を含むプロＭＭＰを場合によっては含み、この活性断片が脂肪組織を異化する。脂肪組織増加が付随する状態の例は、セルライト、脂肪沈着、脂肪腫、肥満、糖尿病、代謝性疾患またはそれらの組み合わせを含む。したがって、本組成物は、美容または健康の理由の何れかのために何らかの脂質または脂肪沈着を異化することにおいて有効である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、本組成物は、皮下または筋肉内注射を介して局所的に投与される。いくつかの実施形態において、１以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰがカプセル封入され、対象に注射されたら時間をかけて放出される。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、治療的有効量の脂肪組織を異化するための少なくとも１つの化合物を含む医薬組成物または持続放出医薬組成物が投与された対象において脂肪吸引手順が行われる。
【０１９２】
組織、タンパク質、マトリクス、器官：他の実施形態において、本明細書中で具体化される組成物は、タンパク質、マトリクス、組織または器官を解離させる。好ましい実施形態において、組織を解離させるための方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と組織を接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。組織の非限定例としては、上皮、結合組織、脂肪組織、内皮、基底膜、基底層、心臓組織、心内膜、頂端膜、側底膜、細胞外マトリクス、高密度結合組織、繊維性結合組織、嗅上皮、疎性結合組織、ムチン、中皮、間質、網状結合組織、骨髄、血液、血管、リンパ系組織、肺、心血管系組織、脳組織、脳脊髄組織および液、脳血管組織および液、神経組織、脳、骨組織、皮膚、筋肉、膵臓組織、卵巣濾胞、臍帯血組織、胎盤、腸の内層、脳組織、脊髄組織、心血管系組織、結合組織、脳脊髄液または組織、骨髄、真皮、血液、骨膜、繊維性組織、瘢痕組織または何らかの器官組織が挙げられる。組織または器官の具体的な供給源としては、脂肪／脂肪分、副腎、骨、脳、軟骨、結腸、内皮、上皮、眼、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、乳房、種々の筋肉、神経、膵臓、耳下腺、下垂体、前立腺、生殖系、鱗屑、皮膚、脾臓、脳幹、胸腺、甲状腺／副甲状腺、扁桃腺または腫瘍が挙げられるが限定されない。
【０１９３】
別の好ましい実施形態において、タンパク質マトリクスを解離させる方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物とタンパク質マトリクスを接触させることを含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。タンパク質マトリクスの例は、コラーゲン、フィブロネクチン、ゼラチン、ラミニン、アグレガン（ａｇｇｒｅｇａｎ）、エラスチン、フィブリン、フィブリノーゲンまたはそれらの組み合わせを含む。本組成物は、多くの医学または美容分野で適用され得る。例えば瘢痕化の減少または除去、組織塊、創傷治癒、組織の選択的除去などである。
【０１９４】
他の好ましい実施形態において、瘢痕または創傷を処置または治癒させる方法は、少なくとも１つの：マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と瘢痕組織または創傷を接触させることを含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましくは、ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む。好ましくは、本組成物は、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。他の好ましい実施形態において、本組成物は、有効量の何れか２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含み、瘢痕組織または創傷を解離させるかまたは異化する。
【０１９５】
別の好ましい実施形態において、繊維性組織を解離させる方法は、少なくとも１つの：マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む組成物と繊維性組織を接触させることを含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含む。好ましくは、ＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはプロ酵素（プロＭＭＰ）は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸配列、ｃＤＮＡ、リボ核酸配列、キメラ分子、ペプチド模倣物、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはそれらの組み合わせを含む。好ましくは、本組成物は、医薬的に許容可能な薬剤、医薬的に許容可能なその塩またはプロドラッグをさらに含む。他の好ましい実施形態において、本組成物は、有効量の何れかの２以上のＭＭＰまたはプロＭＭＰ、活性断片、変異体、突然変異体またはそれらの何らかの組み合わせを含み、繊維性組織を解離させるかまたは異化する。
【０１９６】
したがって、本組成物はまた、熱傷および潰瘍除去、創傷治癒、瘢痕化または瘢痕化組織に対する局所的処置、ぺイロニー病の処置、骨（例えば異常な骨形成または成長）の処置、異常なまたはヘルニア状態の椎間板の再形成に対しても有用である。
【０１９７】
疾患：本明細書中で具体化される組成物は、ＭＭＰカクテルが有益である疾患のインビボ処置または予防に有用である。これらには、ウイルス疾患、細菌感染、原虫感染症の寄生生物、癌、自己免疫疾患、炎症、移植、神経性疾患または障害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、アルツハイマー病、肝臓疾患または障害、胃腸疾患または障害、糖尿病、癌、自己免疫、免疫関連疾患または障害、神経性疾患または障害、神経変性疾患または障害、神経修復および麻痺、神経内分泌分化、炎症性疾患、筋肉疾患または障害、感染性生物が関連する疾患または障害などが含まれる。
【０１９８】
特定の例において、本明細書中の組成物は、例えば、繊維症、癌、タンパク質蓄積が付随する疾患、例えばアルツハイマー病など、腫瘍性疾患、炎症性疾患、冠動脈疾患、閉塞性心血管系疾患、変性疾患および感染性疾患、白内障、異常なタンパク質沈着などの処置において使用し得る。腫瘍性疾患のいくつかの例は、癌、リンパ腫、白血病および脳腫瘍であり得るが限定されない。炎症性疾患のいくつかの例は、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、クローン病、大腸炎、皮膚炎、紅斑性狼瘡などであり得るが限定されない。感染性疾患のいくつかの例としては、細菌、ウイルス、真菌、マイコプラズマ、ある種の遺伝性疾患および他の感染症が挙げられ得るが限定されない。
【０１９９】
ある好ましい実施形態において、繊維症に罹患しているかまたはその発症リスクがある患者を処置する方法は、有効量のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）またはそのプロＭＭＰを含む治療的有効量の組成物を投与することを含み、このＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、２以上、３以上、４以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０２００】
「治療的有効量」は、疾患を処置するために対象に投与された場合に、その疾患に対するこのような処置をもたらすのに十分である化合物の量を意味する。「治療的有効量」は、化合物、疾患およびその重症度、および処置しようとする対象の年齢、体重などに依存して変動し得る。「医薬的に許容可能な」という句は、生理学的に耐容性であり、一般的にはヒトへの投与時にアレルギー性または同様の有害な反応、例えば胸焼け、眩暈などを生じない分子部分および組成物を指す。
【０２０１】
治療化合物としての使用のためのＭＭＰのタイプおよび量は、当業者にとって入手可能な何らかの情報に基づき治療活性を有すると考えられ得る。例えば、原型化合物は、医師用卓上参考書に含有される情報に基づき治療活性を有すると考えられ得る。さらに、非限定例として、治療化合物は、臨床家の経験、化合物の構造、構造活性関係データ、ＥＣ５０、アッセイデータ、ＩＣ５０アッセイデータ、動物または臨床研究または何らかの他の基礎またはこのような基礎の組み合わせに基づき治療活性を有すると考えられ得る。
【０２０２】
治療的に活性のある化合物は、治療活性を有する化合物であり、例えば化合物が対象に投与されるかまたはインビトロで試験された場合に特別な反応を誘導する能力を含む。治療活性は、予防および緩和処置の両方を含め、疾患または状態の処置を含む。疾患または状態の処置は、疾患または状態の予防、緩和および排除を含む、何らかの量による、疾患または状態の改善を含み得る。例えば組織または細胞塊の解離から利益を得る何らかの疾患または障害に対する好ましい実施形態におけるものを含め、何らかの疾患または状態に対して治療活性が果たされ得る。治療活性を決定するために、化合物の治療活性が評価され得る何らかの方法を使用し得る。例えば臨床評価、ＥＣ５０およびＩＣ５０アッセイおよび用量反応曲線を含め、例えばインビボおよびインビトロの両方の方法を使用し得る。
【０２０３】
処方物、投与：本明細書中で具体化される組成物は、何らかの適切な方法によって、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）に記載のように投与のために処方される。
【０２０４】
投与の代表的な経路としては、非経口、経口、皮下、局所、筋肉内、経皮、経粘膜、舌下、鼻腔内、経血管、皮下、眼窩またはそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。いくつかの実施形態において、本組成物は、処置が所望される領域、例えば局所的な脂肪沈着での注射のために処方される。別の実施形態において、本組成物は、例えば対象において瘢痕化をなくすかまたは減少させるために、局所処方物として処方され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも１以上または少なくとも２以上または少なくとも３以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、ｃＤＮＡ配列、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、本組成物は、４以上または５以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含む。
【０２０６】
本発明の核酸、タンパク質、ペプチドまたは薬剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内注射または経口によるものを含め、何らかの適切な経路を介して、処置を必要とする患者に投与され得る。正確な用量は、核酸、タンパク質、ペプチドまたは薬剤が診断のため、または処置のため、または予防のためであるか否かを含むいくつかの要因に依存する。成人患者の投与量または投与計画は、小児および幼児に対して比例的に調整され得、また、例えば分子量に比例して他の投与または他の方式に対しても調整され得る。医師の裁量により、適切な間隔で投与または処置を反復し得る。
【０２０７】
本発明の核酸、タンパク質、ペプチドまたは薬剤は、通常、核酸、タンパク質、ペプチドまたは薬剤に加えて少なくとも１つのコンポーネントを含み得る医薬組成物の形態で投与される。したがって、本発明による、および本発明による使用のための医薬組成物は、活性成分に加えて、医薬的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定化剤または当業者にとって周知の他の物質を含み得る。このような物質は、無毒性であるべきであり、活性成分の効果を妨害すべきではない。担体または他の物質の的確な性質は、経口であり得るか、または注射、例えば静脈内によるか、または腫瘍部位での蓄積による、投与経路に依存する。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、ＭＭＰ、プロＭＭＰ、活性薬剤、ＭＭＰの阻害剤またはそれらの組み合わせは、放出を延長させ、それにより組織、タンパク質マトリクス、器官などの異化をさらに維持するために、結晶性微粒子懸濁液として処方される。本組成物は、局所適用、静脈内点滴または注射、皮下、筋肉内、腹腔内、頭蓋内および脊髄注射、経口経路を介した摂取、吸入、経上皮拡散または埋め込み型、時間放出薬物送達装置によって投与され得る。
【０２０９】
他の実施形態において、本明細書中で具体化される組成物は、担体とともに処方され、ＭＭＰ、プロＭＭＰ、活性薬剤、ＭＭＰの阻害剤またはそれらの組み合わせの時間放出のために構成され得る。様々な時間放出配列が企図される。例えば、特定のＭＭＰの連続または時間放出があるように、本組成物においてＭＭＰの連続放出を有することは有益であり得る。これは、組織、マトリクス、異なる基質層がある器官への適用において特に所望される。例えば、第一の層がコラーゲンであり、第二の層がフィブロネクチンである場合、コラーゲンを分解するためにＭＭＰ−２を放出させ、続いてフィブロネクチンを異化するためにＭＭＰ１２を放出させることが所望され得る。さらに、ＭＭＰの不活性型が使用される場合、同時に、一方を他方の前に、一方を他方の後にまたはそれらの組み合わせで、ＭＭＰおよび特異的な活性薬剤を放出することが所望され得る。さらに、ＭＭＰに特異的な阻害剤を含むことが所望される場合、これらは、ＭＭＰが所望の組織またはタンパク質マトリクスを異化した後の時間点で放出するように処方され得る。
【０２１０】
別の態様において、本発明は、医薬的に許容可能な担体と一緒に、ＭＭＰ、プロＭＭＰ、活性薬剤、ＭＭＰの阻害剤またはそれらの組み合わせまたは医薬的に許容可能なそのエステル、塩またはプロドラッグを含む医薬組成物を提供する。本明細書中で具体化される組成物は、何らかの従来の経路、特に腸内的に、例えば経口的に、例えば錠剤またはカプセルの形態で、または非経口的に、例えば注射用の溶液または懸濁液の形態で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏もしくはクリームの形態で、または鼻腔または坐剤形態で、医薬組成物として投与され得る。遊離形態、または少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体または希釈剤と会合された医薬的に許容可能な塩の形態の、本発明の、ＭＭＰ、プロＭＭＰ、活性化剤、ＭＭＰの阻害剤またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物は、混合、粒状化またはコーティング法により従来の方式で製造され得る。例えば、経口組成物は、ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）潤滑剤、例えばシリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤の場合はまた、ｃ）結合剤、例えば，ケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプン糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびまたはポリビニルピロリドン；必要に応じて、ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩または発泡性混合物；および／またはｅ）吸収剤、着色剤、香味料および甘味料と一緒に活性成分を含む錠剤またはゼラチンカプセルであり得る。注射用組成物は水性等張溶液または懸濁液であり得、坐剤は、脂肪エマルションまたは懸濁液から調製され得る。本組成物は、安定化され得、および／または、保存剤、安定化剤、湿潤剤または乳化薬剤、溶液プロモーター、浸透圧を制御するための塩および／または緩衝剤などのアジュバントを含有し得る。さらに、これらはまた、他の治療的に価値のある物質も含有し得る。経皮適用のための適切な処方物は、担体とともに有効量の本発明の化合物を含む。担体は、宿主の皮膚を通じた通過を支援するために、吸収性の薬理学的に許容可能な溶媒を含み得る。例えば、経皮装置は、裏打ち部材、場合によっては担体とともに本化合物を含有する貯留槽、場合によっては長期間にわたり調節され、予め決定された速度で宿主の皮膚に本化合物を送達するための速度調節バリアおよび皮膚にその装置を固定するための手段を含む包帯の形態である。マトリクス経皮処方物も使用され得る。例えば皮膚および眼への局所適用のための適切な処方物は、好ましくは当技術分野で周知の水性溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。このようなものは、可溶化剤、安定化剤、等張性促進剤、緩衝剤および保存剤を含有し得る。特定の投与経路に適切な何らかの適切な医薬的に許容可能な賦形剤が使用され得る。医薬的に許容可能な担体の例としては、緩衝剤、塩水または他の水媒体が挙げられるが限定されない。本発明の化合物は、好ましくはそれらの投与（例えば皮下）のために使用される担体中で可溶性である。あるいは、適切な担体中の活性化合物または化合物の懸濁液（例えば結晶性微粒子の懸濁液）が使用される。いくつかの実施形態において、液体担体中で、例えば溶液、懸濁液、ゲルおよび／またはエマルションとして、ＭＭＰまたはプロＭＭＰの１以上が処方される。いくつかの実施形態は、何らかの適切な脂溶性担体、例えば変性油（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（商標）ＢＡＳＦ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ダイズ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、誘導体化ポリエーテル、それらの組み合わせなどを含む。いくつかの実施形態は、ＭＭＰまたはプロＭＭＰの少なくとも１つに対する微粒子および／またはナノ粒子担体を含む。いくつかの実施形態は、１以上の時間放出薬剤、持続または制御放出担体または薬剤、例えばポリマーミクロスフェアを含む。時間放出薬剤の例は、グリセロール、グリコール、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、マンニトール、ソルビトール、イソマルト（ｉｓｏｍａｌｔ）、マルチトール、ラクチトールおよびポリビニルアルコール、単糖類及び二糖類を含む。長時間にわたり放出されるようにＭＭＰなどがカプセル封入され得る。いくつかの実施形態は、ＭＭＰ、プロＭＭＰまたはその活性断片、その活性化剤または阻害剤の微粒化粒子のための安定な懸濁液に適切な賦形剤を含む。
【０２１１】
本明細書中で具体化される組成物は、１以上のＭＭＰ、プロＭＭＰ、ＭＭＰまたはそれらの組み合わせの活性化剤、阻害剤の放出のための送達ビヒクルを提供しながら生体適合性および好ましくは生分解性および生体吸収性などの物理学的特性の組み合わせを呈するように適合化された担体物質とともに処方され得る。使用される担体物質は、埋め込まれるか、分解されるかまたは吸収されたときに炎症または刺激の誘導が生じないように、生体適合性である。
【０２１２】
したがって、本発明による担体は、生分解性であるかまたは非生分解性であるかの何れかであり得る。生分解性組成物の代表例としては、アルブミン、ヒアルロン酸、デンプン、セルロースおよびセルロース誘導体（例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、酢酸コハク酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、カゼイン、デキストラン、多糖類、フィブリノーゲン、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシブチラート）、ポリ（アルキルカルボナート）およびポリ（オルトエステル）、ポリエステル、ポリ（ヒドロキシ吉草酸）、ポリジオキサノン、ポリ（エチレンテレフタラート）、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（タルトロン酸）、ポリ無水物、ポリホスファゼン、ポリ（アミノ酸）およびそれらのコポリマーが挙げられる。
【０２１３】
非分解性ポリマーの代表例としては、ポリ（エチレン酢酸ビニル）（「ＥＶＡ」）コポリマー、シリコーンゴム、アクリルポリマー（ポリアクリル酸、ポリメチルアクリル酸、ポリメチルメタクリラート、ポリアルキルシノアクリラート（ｐｏｌｙａｌｋｙｌｃｙｎｏａｃｒｙｌａｔｅ））、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアミド（ナイロン６，６）、ポリウレタン、ポリ（エステルウレタン）、ポリ（エーテルウレタン）、ポリ（エステル−尿素）、ポリエーテル（ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（酸化プロピレン）、プルロニックおよびポリ（テトラメチレングリコール））、シリコーンゴムおよびビニルポリマー（ポリビニルピロリドン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸フタル酸ビニル）が挙げられる。陰イオン性（例えば、アルギン酸塩、カルボキシメチルセルロースおよびポリ（アクリル酸）または陽イオン性（例えば、キトサン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリエチレンイミンおよびポリ（アリルアミン））の何れかであるポリマーもまた開発され得る。
【０２１４】
ポリマー性担体としては、ポリ（エチレン酢酸ビニル）、ポリウレタン、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）オリゴマーおよびポリマー、ポリ（Ｌ−乳酸）オリゴマーおよびポリマー、ポリ（グリコール酸）、乳酸およびグリコール酸のコポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（バレロラクトン）、ポリ無水物、ポリエチレングリコールとのポリ（カプロラクトン）またはポリ（乳酸）のコポリマー（例えばＭｅＰＥＧ）および上記のものの何れかのブレンド、混合物またはコポリマーが挙げられる。他の好ましいポリマーとしては、多糖類、例えばヒアルロン酸、キトサンおよびフカンなど、および分解性ポリマーと多糖類のコポリマーが挙げられる。
【０２１５】
これらの適用に有用な他のポリマーとしては、カルボン酸ポリマー、ポリアセタート、ポリアクリルアミド、ポリカーボネート、ポリエーテル、ポリエステル、ポリエチレン、ポリビニルブチラール、ポリシラン、ポリウレア、ポリウレタン、ポリ酸化物、ポリスチレン、ポリスルフィド、ポリスルホン、ポリスルホニド、ポリビニルハロゲン化物、ピロリドン、熱硬化性ポリマー、架橋性アクリルおよびメタクリルポリマー、エチレンアクリル酸コポリマー、スチレンアクリルコポリマー、酢酸ビニルポリマーおよびコポリマー、酢酸ビニルポリマーおよびコポリマー、エポキシ、メラミン、他のアミノ樹脂、フェノール性ポリマーおよびそのコポリマー、水不溶性セルロースエステルポリマー（プロピオン酸酢酸セルロース、酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロース、硝酸セルロース、フタル酸酢酸セルロースおよびそれらの混合物を含む。）、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリエーテル、多糖類、親水性ポリウレタン、ポリヒドロキシアクリラート、デキストラン、キサンタン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロースおよび、Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルラクタム、Ｎ−ビニルブチロラクタム、Ｎ−ビニルカプロラクタム、極性ペンダント基を有する他のビニル化合物のホモポリマーおよびコポリマー、親水性エステル化基を有するアクリラートおよびメタクリラート、ヒドロキシアクリラートおよびアクリル酸およびそれらの組み合わせ、セルロースエステルおよびエーテル、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、硝酸セルロース、酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロース、プロピオン酸酢酸セルロース、ポリウレタン、ポリアクリラート、天然および合成エラストマー、ゴム、アセタール、ナイロン、ポリエステル、スチレンポリブタンジエン、アクリル樹脂、塩化ポリビニリデン、ポリカーボネート、ビニル化合物のホモポリマーおよびコポリマー、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニル酢酸ビニルが挙げられる。全般的に、Ｗｉｌｌｉａｍｓに対する米国特許第６，５１４，５１５号；Ｐａｒｋらに対する米国特許第６，５０６，４１０号；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚらに対する米国特許第６，５３１，１５４号、Ｃｈｕｄｚｉｋらに対する米国特許第号６，３４４，０３５号；Ｚｄｒａｈａｌａらに対する米国特許第６，３７６，７４２号；およびＧｒｉｆｆｉｔｈ，Ｌ．Ａ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ，ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，９６１：８３−９５（２００２）；およびＣｈａｉｋｏｆら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，９６１：９６−１０５（２００２）を参照のこと。
【０２１６】
さらに、本明細書中で記載のようなポリマーは、必要に応じて様々な組成物中でブレンドするかコポリマー化することもできる。論じられるようなポリマー性担体は、所望の放出特徴および／または特異的な所望の特性を有する様々な形態で適応させ得る。例えば、ｐＨなどの具体的な惹起事象への曝露時にＭＭＰを放出させるために、ポリマー性コーティングを適応させ得る。ｐＨ感受性ポリマーの代表例としては、ポリ（アクリル酸）およびその誘導体（例えば、ポリ（アミノカルボン酸）などのホモポリマー；ポリ（アクリル酸）；ポリ（メチルアクリル酸）、このようなホモポリマーのコポリマーおよび上記で論じられるものなどのポリ（アクリル酸）およびアクリル単量体のコポリマーを含む。）が挙げられる。他のｐＨ感受性ポリマーとしては、多糖類、例えば酢酸フタル酸セルロース；ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート；酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース；トリメリラート（ｔｒｉｍｅｌｌｉｌａｔｅ）酢酸セルロース；およびキトサンが挙げられる。また他のｐＨ感受性ポリマーとしては、ｐＨ感受性ポリマーおよび水溶性ポリマーの何らかの混合物が挙げられる。
【０２１７】
同様に、ポリマー性担体を温度感受性になるように適応させ得る。熱ゲル化ポリマーおよびそれらのゼラチン温度の代表例としては、ホモポリマー、例えばポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド）（１９．８℃）；ポリ（Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド）（２１．５℃）；ポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）（２２．３℃）；ポリ（Ｎ−ｎ−プロピルメタクリルアミド（２８．０℃）；ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）（３０．９℃）；ポリ（Ｎ，ｎ−ジエチルアクリルアミド）（３２．０℃）；ポリ（Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド）（４４．０℃）；ポリ（Ｎ−シクロプロピルアクリル−アミド）（４５．５℃）；ポリ（Ｎ−エチルメチアクリルアミド（ｅｔｈｙｌｍｅｔｈｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ））（５０．０℃）；ポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアクリルアミド）（５６．０℃）；ポリ（Ｎ−シクロプロピルメタクリルアミド）（５９．０℃）；ポリ（Ｎ−エチルアクリルアミド）（７２．０℃）が挙げられる。さらに、上記の単量体間でコポリマーを調製することによって、またはこのようなホモポリマーをアクリル単量体（例えばアクリル酸およびその誘導体、例えばメチルアクリル酸、アクリル酸およびその誘導体、例えばブチルメタクリラート、アクリルアミドおよびＮ−ｎ−ブチルアクリルアミド）などの他の水溶性ポリマーと組み合わせることによって、熱ゲル化ポリマーが作製され得る。
【０２１８】
当技術分野で公知の何らかの方法を用いて、例えば単針、複数針を用いて、および／または無針注射装置を用いて、注射用処方物を投与する。いくつかの実施形態において、活性成分の組織ローディング用量は、注射により送達される適切な担体中で処方される。いくつかの実施形態において、送達は、単針注射を含む。いくつかの実施形態において、送達は複数針アレイを用いた注射を含み、いくつかの実施形態において、これは標的組織における処方物の幅広い分散をもたらす。いくつかの実施形態において、局所的な脂肪がある領域の組織または皮下脂肪の適切な層への分散をもたらすように処方物を注射する。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、ＭＭＰ、プロＭＭＰ、活性化剤または何らかのそれらの組み合わせは、例えば個別の処方物として注射されるかまたは、あるいは個別の系路により投与される。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、処方物は、ＭＭＰまたはプロＭＭＰまたは活性化剤または活性断片またはそれらの何らかの組み合わせの持続性または制御放出を提供するために、１以上の持続または制御放出剤を含む。このような処方物において、ＭＭＰまたはプロＭＭＰまたは活性化剤または活性断片またはそれらの何らかの組み合わせは、または、持続または制御放出剤または担体中にカプセル封入され、これに結合され、および／または複合化される。いくつかの実施形態において、生体適合性、生分解性の持続または制御放出処方物は局所組織活性を提供する。持続放出は、約１２時間から約１２カ月、例えば１日、３日、７日、１０日、１カ月、４５日、２カ月、３カ月、４カ月、６カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、または約１２時間から約１２カ月の何らかの他の時間にわたり得る。適切な持続または制御放出剤または担体としては、ポリマー、巨大分子、活性成分複合物、ヒドロゲル、その混入物などが挙げられる。持続放出担体のいくつかの実施形態は、脂肪、例えばリポソームを標的とする。好ましくは、持続放出物質は、単位時間あたりの活性物質の実質的に等しい量の送達を促進するために選択される。単一領域を処置するために、数ラウンドの持続放出処方物の注射が時間をかけてなされ得る。いくつかの実施形態において、持続放出は、ＭＭＰなどを結晶性薬物微粒子の懸濁液として処方される結果である。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、持続放出剤は、ポリマー、例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチドグリコリド）ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリエーテルエステル、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリカーボネート、ポリシアノアクリラート、ポリウレタン、ポリアクリラートおよび上記のもののブレンド物、混合物またはコポリマーを含み、これらは活性成分ととともにカプセル封入するか、結合させるかまたは複合化させるために使用される。持続放出ポリマーのいくつかの実施形態は、活性成分の１以上が複合化されるポリエチレングリコール基を含む。いくつかの実施形態において、持続放出剤は、ポリ（ラクチドグリコリド）（ＰＬＧＡ、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸））コポリマーを含む。
【０２２２】
持続放出剤のいくつかの実施形態は、修飾アルギナートを含む１以上のヒドロゲルを含む。適切な修飾アルギナートの例としては、ＷＯ９８／１２２２８で開示されるものが挙げられる。持続放出剤のいくつかの実施形態は、アルブミンに基づくナノ粒子担体または賦形剤を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、プレポリマー溶液を含む処方物を標的組織部位に注射し、次いでこれがインビボで（例えば光重合化により）ポリマー化または（例えば温度感受性のゲル化物質を用いることにより）固化する。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、制御放出物質は、組織、タンパク質またはマトリクス減少の特定の適用のために設計された放出特徴を有する。いくつかの実施形態において、持続放出または制御放出薬剤は、注射用の溶液および／またはゲルとして処方されるミクロスフェアなどの微粒子に形成される。いくつかの実施形態において、微粒子は、直径約１０μｍから約１００μｍ（例えば、約１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、４０μｍ、５０μｍ、６０μｍ、７０μｍ、８０μｍ、９０μｍまたは約１０μｍから約１００μｍの何らかの他の直径）の範囲である。いくつかの実施形態において、微粒子は、サイズが均一である。他の実施形態において、微粒子は、約１０％から約３００％、例えば、３０％、４０％、５０％、７０％、８０％、９０％、１２０％、１５０％、１７０％、１９０％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％または約１０％から約３００％の何らかの他の％のサイズ変動で変動し得る。いくつかの実施形態において、ＭＭＰなどを含む処方物は、注射用ゲルとして提供されるか、またはミクロスフェアに加工される。他の実施形態において、これらは結晶性微粒子として形成される。微粒子形成に適切な注射用生分解性、生体適合性物質の他の例としては、キトサン、デキストラン、ハイドロキシアパタイトおよびシリコンが挙げられる。
【０２２５】
ミクロスフェアおよび／または微粒子は、溶媒蒸発および／またはエマルションポリマー化によることを含め、何らかの方法を用いて形成される。いくつかの実施形態において、ミクロスフェアの平均直径は、約５μｍから約６０μｍ、好ましくは約２０μｍである。いくつかの実施形態において、活性成分の所望の放出速度に依存して、様々なラクチドとグリコリドとの比でＰＬＧＡが製造される。このコポリマーの分解速度はその結晶性および処方物中のグリコリドの割合に比例するので、ラクチドおよび／またはグリコリドの非ラセミ混合物は、結晶性を向上させ、分解速度を遅くする。グリコリドの割合が高いほど、分解速度が速くなる。いくつかの実施形態において、約６５％から７５％ラクチドと約２５％から３５％グリコリドとの比率により、約２週間から約４５日にわたり放出される活性成分が提供される。他の実施形態において、ラクチドとグリコリドとの比率は、約０：１００から約１００：０であり、それにより他の放出速度がもたらされる。
【０２２６】
ミクロスフェアまたは微粒子のいくつかの実施形態は、空洞を含みおよび／または内部が多孔性である。いくつかの実施形態において、ミクロスフェアは、固形または多孔性の外殻を含む。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、多孔性外殻および／またはミクロスフェアを含む処方物は、活性成分の２相性の放出プロファイルを示し、活性成分の最初の突発的放出、それに続いてポリマー性ミクロスフェアの分解を伴う持続放出が起こる。理論に縛られることを望むものではないが、最初の突発的放出は、活性成分の有効な脂肪分解または異化濃度を組織に負荷し、続いて所望の濃度を持続させる、よりゆっくりとした放出が起こると考えられる。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、活性成分の１以上を、ポリマー性ミクロスフェアに対して約１０から１２質量％の比率でポリマーにカプセル封入し、結合させ、および／または複合化させる。担体（例えば微粒子またはミクロスフェア）の質量％としての活性成分の量は、本明細書中で「活性成分負荷量」と呼ぶ。本明細書中で使用される場合、「負荷される」および「負荷（量）」という用語は、担体に実質的にカプセル封入され、結合され、および／または複合化される活性成分を指す。いくつかの実施形態において、活性成分負荷量は約７５％以下である。したがって、いくつかの好ましい処方物は、１以上の活性成分および／またはそれらの生理学的に許容可能な塩および溶媒和物を含み、約１０ｍｇから約２００ミリグラムのポリマーあたり約１ｍｇから約２０ｍｇの活性成分（例えば、約２ｍｇ、５ｍｇ、７ｍｇ、１０ｍｇ、１２ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇまたは約１ｍｇから約２０ｍｇの何らかの他の量の活性成分）でポリマー性ミクロスフェアに負荷される。いくつかの実施形態において、この活性成分負荷量がある処方物は、本明細書中で具体化されるように脂肪分解を生じさせるのに適切な濃度で活性成分を約１２時間から約４５日（例えば、約３日、７日、１６日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、４２日または約１２時間から約４５日の何れかの他の時間）放出させるのに十分である。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、２以上の活性成分を同じ微粒子に、例えばリポソームまたはＰＬＧＡにおいて負荷する。したがって、いくつかの実施形態、１以上のＭＭＰをカプセル封入するポリマーなどは、脂肪組織に同時に送達される。あるいは、２種類の活性成分を個々の微粒子に負荷する。次に２種類のタイプのミクロスフェアを混合して、それぞれの所望の比率で処方物を得て、次いで同時に投与する。あるいは、この２種類のタイプの微粒子を連続的に投与する。
【０２３０】
活性成分を含むミクロスフェアを約１０ｍＬから約２０ｍＬの適切な生理学的に許容可能な液体担体中で懸濁する。活性成分の個別のミクロスフェアを用いたいくつかの実施形態において、ミクロスフェアを液体担体中で一緒に混合する。他の実施形態において、各タイプのミクロスフェアを液体担体と個別に混合する。いくつかの実施形態において、次いでミクロスフェア懸濁液を皮下、真皮の直下に１．０ｍＬアリコートで注射して、例えばセルライトの処置の場合、ミクロスフェア懸濁液１ｍＬあたり約２．０ｃｍの面積を被覆する。いくつかの実施形態において、約２０ｃｍ２から約４０ｃｍ２の面積を被覆するために、約１０から約２０回の注射を行う。より大きいおよび／またはより小さい面積を様々な実施形態で処置する。あるいは、いくつかの実施形態において、１．０ｍＬから１０．０ｍＬのボーラス注射を、顎下領域、側腰部および臀部または組織などの脂肪沈着部に注射する。あるいは、上記のような注射は、各活性成分をカプセル封入する２種類のミクロスフェア処方物を用いて同じ位置で、個別におよび連続的になされる。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、無針（ｎｅｅｄｌｅｓｓ）注射を使用して、懸濁液としてまたは粉末化負荷微粒子として、すなわち液体担体なしで、微粒子製剤を投与する。
【０２３２】
ＰＬＧＡ１５ミクロスフェアは、親水性化合物よりも容易に疎水性化合物をカプセル封入する。親水性活性成分の負荷量を増加させるために、いくつかの実施形態において、ミクロスフェアをポリエチレングリコール単位で修飾する。ある一定のサイズのミクロスフェアは、実質的に血液に吸収されないか、またはリンパにより除去されず、それによって、標的領域内で活性成分の放出が局所化される。例えば、いくつかの実施形態において、ミクロスフェアは、直径約２０μｍから約２００μｍ、例えば、約３０μから１７５μｍ、約５０μｍから約１５０μｍ、約７５μｍから約１２５μｍまたは約２０μｍから約２００μｍの何らかの他の直径である。ミクロスフェアのサイズはまた、組織における活性成分の放出プロファイルにも影響を与える。一般に、大きいミクロスフェアほど、より長く均一な放出プロファイルをもたらす。したがって、いくつかの実施形態において、処方物中の平均粒径は、所望の放出期間に基づいて選択される。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、処置しようとする対象に対して非持続放出処方物が提供される。いくつかの実施形態において、非持続放出処方物は、単回投与後、１以上のＭＭＰなどの活性を提供する。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、処方物は、当技術分野で公知の何らかの適切な方法を用いて経皮的に、例えば局所適用されるクリームとして、またはパッチを通じて送達される。あるいは、例えば電気的な、当技術分野で公知の他の経皮送達手段もまた有用である。例えば本明細書中に記載のような生分解性、生体適合性活性成分−ポリマー処方物またはリポソーム処方物を用いて、経皮的に送達可能な処方物の持続放出実施形態を提供することもできる。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、薬物または薬物の組み合わせの局所適用が利用される。個々の物質に対して、分配係数は、一般にオクタノール：水比または「ＬｏｇＰ」として測定され、これは、オクタノール対水に対するある種の物質の相対的親和性の目安である。ＬｏｇＰが大きいほど、物質はオクタノールに引き付けられる傾向が高く、ＬｏｇＰが小さいほどその傾向が低い。言い換えると、これは、ある種の物質に対する、親油性対親水性の相対的な目安を与える。薬剤の皮膚への送達の場合、最適ＬｏｇＰは１．０から５．０の範囲である。フォルモテロールのＬｏｇＰは、２から４の範囲である。ケトチフェンは、それが皮膚に、および皮膚を横切って送達されるようにする同様の物理学的特性を有する。
【０２３６】
軟膏およびクリームを含む様々な局所処方物は、薬物または薬物の組み合わせの送達に適切である。提案される組み合わせに対する代表的な局所ビヒクルとしては、テルペン（例えばシネオール、酢酸リナリル、メンタノン、ｄ／ｌ−メントール）、脂肪酸エステル（例えばミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸エチル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ブチル）およびより長鎖のアルコール（１−オクタノール、１−デカノール、１−ドデカノール）が挙げられるが限定されない。テルペン、脂肪酸エステルおよびより長鎖のアルコールと組み合わせたＮ−メチル−ピロリドン。テルペン、脂肪酸エステルおよびより長鎖のアルコールとＮ−メチル−ピロリドンとの比率は、１００：０から最大６０：４０重量対重量であり得る。いくつかの実施形態において、皺、瘢痕化および他の皮膚状態の処置のために、薬物または薬物の組み合わせの無針（ｎｅｅｄｌｅｓｓ）皮内注射が使用される。
【０２３７】
本発明は、本発明の医薬的に許容可能な局所処方物を包含する。「医薬的に許容可能な局所処方物」という用語は、本明細書中で使用される場合、表皮への処方物の適用による、本発明の化合物の皮内投与に対して医薬的に許容可能な何らかの処方物を意味する。本発明のある一定の実施形態において、局所処方物は担体系を含む。医薬的に有効な担体としては、溶媒｛例えばアルコール、ポリアルコール、水）、クリーム、ローション、軟膏、油、硬膏、リポソーム、粉末、エマルション、マイクロエマルションおよび緩衝化溶液（例えば低張または緩衝食塩水）または局所的に医薬を投与するための当技術分野で公知の何らかの他の担体が挙げられるが限定されない。当技術分野で公知の担体のより完全なリストは、例えば、その開示がその全体において参照により本明細書中に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８０および１７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８５、両者ともＭａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．により刊行、など、当技術分野で標準的である参考書により提供される。ある一定の他の実施形態において、本発明の局所処方物は賦形剤を含み得る。本発明の医薬的に許容可能な局所処方物を調製するために、当技術分野で公知の何らかの医薬的に許容可能な賦形剤を使用し得る。本発明の局所処方物中に含まれ得る賦形剤の例としては、保存剤、抗酸化剤、保湿剤、皮膚軟化剤、緩衝剤、可溶化剤、他の浸透剤、皮膚保護剤、界面活性剤および噴霧剤および／または本発明の化合物と組み合わせて使用されるさらなる治療剤が挙げられるが限定されない。適切な保存剤としては、アルコール、四級アミン、有機酸、パラベンおよびフェノールが挙げられるが限定されない。適切な抗酸化剤としては、アスコルビン酸およびそのエステル、亜硫酸水素ナトリウム、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、トコフェロールおよびＥＤＴＡのようなキレート剤およびクエン酸が挙げられるが限定されない。適切な保湿剤としては、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、尿素およびプロピレングリコールが挙げられるが限定されない。本発明との使用のための適切な緩衝剤としては、クエン酸、塩酸および乳酸緩衝液が挙げられるが限定されない。適切な可溶化剤としては、四級塩化アンモニウム、シクロデキストリン、安息香酸ベンジル、レシチンおよびポリソルベートが挙げられるが限定されない。本発明の局所処方物中で使用され得る適切な皮膚保護剤としては、ビタミンＥ油、アラトイン（ａｌｌａｔｏｉｎ）、ジメチコン、グリセリン、ペトロラタムおよび酸化亜鉛が挙げられるが限定されない。
【０２３８】
これもまた当然のことながら、併用療法において本発明の医薬組成物を使用し得、すなわち、本明細書中で具体化される化合物および医薬組成物を、１以上の他の所望の治療または医学的手順と同時に、その前に、またはその後に投与し得る。併用計画で使用するための治療の特定の組み合わせ（治療または手順）は、所望の治療および／または手順および達成させようとする所望の治療効果の適合性を考慮する。これもまた当然のことながら、使用される治療は、同じ障害に対して所望の効果を達成し得るか、またはこれらは、異なる効果を達成し得る（例えば何らかの有害作用の調節）。
【０２３９】
ある一定の実施形態において、本発明の医薬的に許容可能な局所処方物は、少なくとも１つの本発明の化合物および浸透促進剤を含む。局所処方物の選択は、処置しようとする状態、本発明の化合物の物理化学的特徴および存在する他の賦形剤、処方物中でのそれらの安定性、利用可能な製造装置およびコストの制約を含むいくつかの要因に依存する。本明細書中で使用される場合、「浸透促進剤」という用語は、角質層を通じて、および表皮または真皮に、好ましくは全身性吸収が殆どないかまたは全くなく、薬理学的に活性である化合物を輸送することが可能な薬剤を意味する。多岐にわたる化合物が、皮膚を通じた薬物の浸透速度を促進することにおけるそれらの効果について評価された。例えば、様々な皮膚浸透促進剤の使用および試験を調べる、Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ，Ｍａｉｂａｃｈ  Ｈ．Ｉ．およびＳｍｉｔｈ  Ｈ．Ｅ．（編），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）およびＢｕｙｕｋｔｉｍｋｉｎら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅａｎｓ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｏｓｈ  Ｔ．Ｋ．，Ｐｆｉｓｔｅｒ  Ｗ．Ｒ．，Ｙｕｍ  Ｓ．Ｉ．（編），Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＵ．（１９９７）を参照のこと。ある一定の代表的な実施形態において、本発明との使用のための浸透剤としては、トリグリセリド（例えばダイズ油）、アロエ組成物（例えばアロエベラジェル）、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、オクトリフェニル（ｏｃｔｏｌｙｐｈｅｎｙｌ）ポリエチレングリコール、オレイン酸、ポリエチレングリコール４００、プロピレングリコール、Ｎ−デシルメチルスルホキシドが挙げられるが限定されない。脂肪酸エステル（例えばミリスチン酸イソプロピル、ラウリン酸メチル、モノオレイン酸グリセロールおよびモノオレイン酸プロピレングリコール）およびＮ−メチルピロリジン。
【０２４０】
ある一定の実施形態において、本組成物は、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入またはパッチの形態であり得る。ある一定の代表的な実施形態において、本発明による組成物の処方物はクリームであり、これは、飽和または不飽和脂肪酸、例えばステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、パルミト−オレイン酸、セチルまたはオレイルアルコールをさらに含有し得、特にステアリン酸が好ましい。本発明のクリームはまた、非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシ−４０−ステアラートも含有し得る。ある一定の実施形態において、滅菌状態下で活性コンポーネントを医薬的に許容可能な担体および必要とされ得る場合は何らかの必要な保存剤または緩衝液と混合する。眼用処方物、点耳薬および点眼薬も、本発明の範囲内であるものとして企図される。さらに、本発明は経皮パッチの使用を企図し、これは、身体への化合物の制御送達をもたらすというさらなる長所を有する。このような剤形は、化合物を的確な溶媒中で溶解または分散させることにより作製される。上記で論じられるように、皮膚を横切る化合物の流動を向上させるために、浸透促進剤もまた使用され得る。速度調節膜を提供するかまたはポリマーマトリクスもしくはゲル中で化合物を分散させるかの何れかによって、速度を調節することができる。
【０２４１】
キット
ここで、本発明による方法での即時使用のための、パッケージ中にコンポーネントを含むキットが提供される。一般的には、本発明の方法を実施するための書面の説明書も提供される。キットは１以上のＭＭＰなど、溶媒等を含み得る。活性成分を希釈するかまたは再構成するための適切緩衝液も提供され得る。コンポーネントのうち一部は乾燥形態で提供され得、再構成を必要とし得る。
【０２４２】
実施形態において、キットは、１以上のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、不活性ＭＭＰまたはそのプロ酵素（プロＭＭＰ）を含み、このＭＭＰ、不活性ＭＭＰまたはそのプロＭＭＰは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２８、活性断片、突然変異体、変異体、その医薬組成物、医薬的に許容可能なその塩もしくはプロドラッグまたはそれらの何らかの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、キットは、１以上のＭＭＰ、プロＭＭＰ、断片および／または活性化剤を含む。活性化剤の例としては、酵素、例えばプロＭＭＰを切断してそれらの活性型にするプロテアーゼが挙げられる。他の例において、例えばＭＭＰ活性部位の修飾、例えばグリコシル化などによってＭＭＰが不活性化される場合、修飾を除去する薬剤は活性化剤である。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、幹細胞の単離のためのキットは、１以上のＭＭＰ、プロＭＭＰ、断片および／または活性化剤を含む。活性化剤の例としては、酵素、例えばプロＭＭＰを切断してそれらの活性型にするプロテアーゼが挙げられる。他の例において、例えばＭＭＰ活性部位の修飾、例えばグリコシル化などによってＭＭＰが不活性化される場合、修飾を除去する薬剤は活性化剤である。
【０２４４】
他の実施形態において、脂肪沈着の減少、脂肪細胞組織の異化のためのキットは、１以上のＭＭＰ、プロＭＭＰ、断片および／または活性化剤を含む。
【０２４５】
本願で引用される全ての刊行物および特許文書は、それぞれ個々の刊行物または特許文書が個々にそのように示されているかのように、同程度まで全ての目的に対して関連部分で参照により組み込まれる。本文書における様々な参考文献のそれらの引用によって、出願者らは、何ら特定の参考文献がそれらの発明に対する「先行技術」であることを許容しない。
【０２４６】
上記開示は一般的に本発明を記載する。単なる例示目的で本明細書中に提供され、本発明の範囲を限定するものではない次の具体的な例に対する参照によって、より完全な理解が達成され得る。
【０２４７】
実施例
実施例１：脂肪組織からの幹細胞のＭＭＰ誘導性単離
脂肪由来の間質幹細胞（ＡＤＳＣ）の単離は、主に、Ｉ型コラゲナーゼまたはＩおよびＩＩ型コラゲナーゼおよびサーモリシンから構成されるリベラーゼを用いて達成されてきた（Ｐｒｉｙａ，Ｓａｒｃａｒら（２０１２）Ｊ．Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．Ｊｕｌ．２７：１−９）。
【０２４８】
ＩおよびＩＩ型コラゲナーゼを、ガス壊疽の病原物質である非常に危険性の高いバチルス・クロストリジウム（ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）から精製する。さらに、クロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）からの粗製調製物は、数種のコラゲナーゼだけでなく、スルヒドリル（ｓｕｌｈｙｄｒｙｌ）プロテアーゼ、クロストリパイン、トリプシン様酵素およびアミノペプチダーゼも含有する。リベラーゼ酵素産生中に、原材料中に存在する大量の内毒素を除去する過程によってコラゲナーゼアイソザイムを精製する。リベラーゼの内毒素レベルと比較して、従来のコラゲナーゼ調製物の多岐にわたる内毒素混入物がある。しかし、供給源にかかわらず、細菌ブリオンからの全精製コラゲナーゼおよび中性プロテアーゼには内毒素が混入する（Ｐｒｉｙａ，Ｓａｒｃａｒら、（２０１２）Ｊ．Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．Ｊｕｌ．２７：１−９）。先行研究では、様々なコラゲナーゼ調製物中の内毒素の相対量および単離細胞の健常性における影響が調べられ（Ｌｉｎｅｔｓｋｙ，Ｅ．，Ｌ．Ｉｎｖｅｒａｒｄｉら（１９９８）．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．３０：３４５−３４６；Ｊａｈｒ，Ｈ．，Ｇ．Ｐｆｅｉｆｆｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（Ｂｅｒｌ．）７７：１１８−１２０；Ｓａｌａｍｏｎｅ，Ｍ．，Ｇ．Ｓｅｉｄｉｔａら（２０１０）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．４２：２０４３−２０４８）、内毒素の存在がＡＤＳＣ生存能に有害であることが認められた。さらに、細胞移植の成功は、単離され、培養される幹細胞および調製される同種移植片の品質に正比例する。
【０２４９】
内毒素混入問題に対する解決策は、ＡＤＳＣ単離での使用のための組み換え酵素の作製である。深刻な問題は、Ｉａ型はＩｂ型に自己触媒的に急速に分解されるので、Ｉ型コラゲナーゼがリベラーゼの最も不安定なコンポーネントであることである。分解されたコラゲナーゼは膵島生存能に対して有害な作用がある（Ｂｒａｎｄｈｏｒｓｔ，Ｈ．，Ｎ．Ｒａｉｍｓｃｈ−Ｇｕｅｎｔｈｅｒら（２００８）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．４０：３７０−３７１）。
【０２５０】
Ｉ型コラゲナーゼおよびリベラーゼ（商標）（Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，Ｌｔｄ．）と比較した場合の、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１２を用いた脂肪組織からの間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の単離が本明細書中に記載される。単離ＭＳＣを組織培養中で増殖させ、形態学的におよび免疫表現型的に（ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｔｙｐｉｃａｌｌｙ）特徴を評価した。ＭＳＣ分化能を評価するために、脂肪細胞細胞分化を誘導した。
【０２５１】
材料および方法
酵素：脂肪組織の効率的な異化を達成するために、ＭＭＰの混合物を使用した。ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１９およびＭＭＰ−２５を含む幅広い範囲のＭＭＰが含まれた。ＩからＩＩＩ型コラーゲンを効率的に切断するその能力に基づき、ＭＭＰ−１およびＭＭＰ−８を選択した。ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９はＩＶおよびＶ型コラーゲンを切断する。ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１９は、ＩＶ型コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンに対する活性を有し、ＭＭＰ−１２はエラスチンを効率的に切断し、ＭＭＰ−１１はＶＩ型コラーゲンを切断する。この研究室は、長年にわたり、組み換えＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１２を作製してきた。発明者らの研究室において、関心のある他のＭＭＰ（ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１９およびＭＭＰ−２５）の組み換え産生物を合成することができる。
【０２５２】
酵素活性化：緩衝試薬およびキモトリプシンはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。リベラーゼ（商標）はＲｏｃｈｅ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）から入手した。Ｉ型コラゲナーゼ型はＷｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｌａｋｅｗｏｏｄ，ＮＪ）から入手した。Ｒ＆Ｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２を得て、一方で活性ＭＭＰ−９はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）から入手した。ＭＭＰ−３は、２０ｎｇ／μＬ濃度で５ｎｇキモトリプシン／５ｎｇトリプシン混合物により３７℃で３０分間活性化した。２ｍＭ  ＰＭＳＦ（Ｂｉｏｓｙｎｔｈ，Ｉｔａｓｃａ，ＩＬ）の添加により反応を停止させた。ＭＭＰ−１２は、ＴＳＢ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、１μＭ  ＺｎＣｌ２、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、ｐＨ７．５）中で３０時間、自己活性化された。ＴＳＢ中で５μＭ  Ｋｎｉｇｈｔ基質を用いて、１２５ｎｇ／μＬのＭＭＰ−３および２０ｎｇμＬのＭＭＰ−１２で酵素活性を試験した。以前に記載の方法によって、Ｋｎｉｇｈｔ１本鎖ペプチド（ＳＳＰ）［Ｍｃａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｄｎｐ）−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ２（配列番号１）］を合成した（Ｎａｇａｓｅ，Ｈ．，Ｃ．Ｇ．Ｆｉｅｌｄｓら（１９９４）．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２０９５２−２０９５７；Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｕ．，Ｈ．Ｋｕｂｏｔａら（２００４）．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２８：１６６−１７３）。
【０２５３】
脂肪組織からの間葉系幹細胞単離：脂肪吸引によって吸引脂肪組織を患者から回収した。組織をＰＢＳで１回（５０／５０）洗浄した。次に、ＴＳＢ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、１μＭ  ＺｎＣｌ２、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、ｐＨ７．５）中で酵素（４００ｎｇ／ｍＬ脂肪組織の各ＭＭＰ−、１２０Ｕ／ｍＬ脂肪組織Ｉ型コラゲナーゼおよび対照として０．４５Ｗｕｎｓｃｈ単位／ｍＬ脂肪組織リベラーゼ（商標））で間欠的に振盪させながら３７℃で６０分間、２から１０ｍＬの組織を消化した。等体積のＤＭＥＭ−ＬＧ／１０％ＳＣ−認定ＦＢＳを添加することによって反応を停止させ、３０００ｘｇで２０分間遠心した。最上部の分画を廃棄し、ＭＳＣを含有する残りの間質血管細胞分画（ＳＶＦ）を２０ｍＬのＤＭＥＭ−ＬＧ／１０％ＦＢＳ中で再懸濁し、１００μｍナイロンメッシュに通してろ過し、１，２００ｘｇで２０分間遠心した。ＲＢＣ溶解緩衝液（８．７ｇ／Ｌ塩化アンモニウム）中で３７℃で１０分間、ＳＶＦを温置することによって残りのＲＢＣを除去した。１，２００ｘｇで５分間の遠心によりＤＭＥＭ−ＬＧ／１０％ＦＢＳで細胞を洗浄した。ＤＭＥＭ−ＬＧ、１０％ＦＢＳおよび１ｘペニシリン／ストレプトマイシン中で細胞を再懸濁し、組織培養皿に５０００個細胞／ｃｍ２の密度でプレーティングした。細胞接着１日後に培養液を交換した。７０から８０％の細胞コンフルエンスを達成するまで、培地を３日ごとに交換し、その時点でＴＲＹＰＬＥ（商標）試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）により細胞を剥がし、ＭＥＳＥＮＰＲＯ  ＲＳ（商標）培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に２００個細胞／ｃｍ２で継代した。
【０２５４】
単離ＡＤＳＣの評価−生存能：トリパンブルーで細胞を染色し、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｔ４  Ａｕｔｏ自動細胞カウンター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｗｒｅｎｃｅ，ＭＡ）で評価した。
【０２５５】
単離ＡＤＳＣの評価−フローサイトメトリー：ＶＧＴＩフローサイトメトリーコア施設（Ｐｏｒｔ  Ｓｔ．Ｌｕｃｉｅ，ＦＬ）でフローサイトメトリー実験を行った。ｈＭＳＣ陽性マーカー（ＣＤ７３、ＣＤ９０およびＣＤ１０５）、ｈＭＳＣ陰性マーカー（ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ４５およびＨＬＡ−ＤＲ）およびアイソタイプ対照抗体を含むＢＤ  ＳＴＥＭＦＬＯＷ（商標）ヒトＭＳＣ分析キット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）でＭＳＣを染色した。異なる方法により単離し、継代５まで増殖させたＭＳＣを暗所にて４℃で３０分間、陽性、陰性の両方およびアイソタイプ抗体染色対照で染色した。各試料に対して、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩ分析器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）で５０，０００事象を得て、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアによりデータを分析した。
【０２５６】
単離ＡＤＳＣの評価−脂肪生成分化：ＳＴＥＭＰＲＯ（登録商標）脂肪生成分化キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて、１０日間、コンフルエントの培養物において脂肪生成を誘導した。１０日後、油滴形成を検出するために、２００μＬのオイルレッドＯ溶液（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で室温にて１０分間細胞を染色した。
【０２５７】
結果
酵素活性化：製造者の説明書に従い、市販の組み換えＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２酵素を活性化し、一方でＭＭＰ−９は活性型で購入した。内部で作製した蛍光Ｋｎｉｇｈｔ基質を用いて酵素活性を試験した。全酵素が、Ｋｎｉｇｈｔ基質に対して同等の活性を示した（図１）。
【０２５８】
ＭＳＣの単離：Ｉ型コラゲナーゼ、リベラーゼ（商標）、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１２の何れかで、３７℃にて３０分間、脂肪組織吸引物を処理した。ＳＶＦの結果、総細胞数は様々となり、ＭＭＰ−３処理試料の場合の６３．９％からＭＭＰ−１２処理試料の場合の８２．５％までの生存能を示した（表１）。１０ｃｍ３組織培養皿に１０４個細胞／ｃｍ２の密度で単離ＳＶＦをプレーティングし、非吸着細胞を２４時間後に除去した。細胞を５から７日間培養して、８０％コンフルエント継代０培養を達成した。
表１．単離ＳＶＣ総細胞数およびパーセント生存能
【表１】
2016520550.tif 000003
【０２５９】
最初のＭＭＰ−９−単離ＳＶＦ試料のロバストな生存能にかかわらず、発明者らは、この試料においてＭＳＣ増殖を促進することができなかった。ＳＶＦは、ＡＤＳＣだけでなく、前駆脂肪細胞、繊維芽細胞、常在単球、リンパ球、血管平滑筋細胞なども含有する細胞の不均一な混合物なので、最初の数および生存能は、単離を生き延びるＡＤＳＣなく、上記の細胞全てを含んでいるはずである。全ての他の処理済み試料から、形態学的に同様の細胞があるロバストなＭＳＣ培養物が得られた（図２）。さらに継代５の後、全試料からの細胞（上述のＭＭＰ−９単離物を除く。）は、優れた生存能および同様の形態を保持した。倍加時間および継代１０を通じた異なる試料間での細胞拡散などの増殖パラメーターにおいて相違は認められなかった。Ｉ型コラゲナーゼおよびＬＩＢＥＲＡＳＥ（商標）により単離された細胞の同様の特徴ゆえに、ここで示されるさらなる実験では、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１２およびリベラーゼ（商標）単離試料を比較した。
【０２６０】
ＭＳＣの免疫表現型の特徴：独特にＭＳＣを定義する表面マーカーがないにもかかわらず、ＭＳＣを定義するために、共通する表面マーカープロファイル（例えば、ＣＤ３４−、ＣＤ４５−（ＨＳＣマーカー）、ＣＤ３１−（内皮細胞マーカー）、ＣＤ４４＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋）が頻繁に使用されてきた。リベラーゼ（商標）、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２により単離された試料中の表現型ＭＳＣマーカーのフローサイトメトリー分析を継代５で行った（図３）。全試料が、９９．８％以上でＭＳＣマーカーＣＤ７３、ＣＤ９０およびＣＤ１０５に対して陽性であった。他のＭＭＰを用いて単離されたＭＳＣの分析から同様の結果が得られた（図７から１０）。さらに、これらの試料中のＭＳＣは、非常に類似したマーカー発現レベルを示した（図４）。ＭＭＰ−３およびリベラーゼ（商標）により単離された細胞は、マーカーＣＤ４４に対して１００％陽性であり、一方でＭＭＰ−１２により単離された試料は、試料中の細胞数が少ないがゆえに、このマーカーに対して信頼できる結果が得られなかった。ＭＳＣ陰性マーカー（ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＣＤ４５およびＨＬＡ−ＤＲ）およびアイソタイプ対照抗体の発現に対して全試料を試験し、陰性の結果となった。
【０２６１】
脂肪生成：オイルレッドＯでの脂質滴形成の染色によって、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１２、リベラーゼ（商標）（図５）およびＩ型コラゲナーゼにより単離された試料の脂肪細胞分化能を検出した。脂肪生成は、顕微鏡評価により示されるように全試料で同等であった。ＭＭＰ−１２単離後のＭＳＣの骨形成および軟骨形成分化も観察した（図１１）。
【０２６２】
考察
間葉系幹細胞を得るための大量の蓄積および信頼できる単離方法は、将来の臨床用途でのこれらの細胞の適用成功のために重大である。殆ど全ての幹細胞適用には、それらの標的化された使用前にある程度のエクスビボ増殖および操作が必要なので、十分なＭＳＣ供給源が必要である。脂肪組織は、ユビキタスであり、骨髄などの他のＭＳＣ供給源と比較して、患者の不快感が最小である、成体幹細胞の容易に利用可能な供給源なので、これらのＭＳＣ（ＡＤＳＣ）の理想的な供給源である。これらのＡＤＳＣの単離は、容易に利用可能で対費用効果が高く、回収した細胞に害を与え得る毒性副産物がないものでなければならない。組み換えＭＭＰを使用することによるＡＤＳＣの単離は、これらの要件に対処し得る。
【０２６３】
この例において、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２でのＡＤＳＣの単離が首尾よく明らかにされており、一般的に使用されるＩ型コラゲナーゼおよびリベラーゼ（商標）で単離されたＡＤＳＣの形態、表現型および脂肪生成能を比較した。
【０２６４】
ＡＤＳＣの形態学的特徴は培養における繊維芽細胞様の形であり、多分化能、高い増殖能および共通表面マーカープロファイル（例えば、ＣＤ３４−、ＣＤ４５−（ＨＳＣマーカー）、ＣＤ３１−（内皮細胞マーカー）、ＣＤ４４＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋）である。ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２により単離されたＡＤＳＣは、基本的に細菌由来Ｉ型コラゲナーゼおよびリベラーゼ（商標）により単離された細胞と同一の形態学的および表現型の特徴を呈した。ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１２およびリベラーゼ（商標）で単離した試料のＣＤ７３、ＣＤ９０およびＣＤ１０５レベルは、フローサイトメトリーにより決定した場合同等であり、陰性マーカーについて陰性であった。さらに、リベラーゼ（商標）およびＩ型コラゲナーゼで単離した細胞と比較して、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１２により単離されたＡＤＳＣの脂肪形成能が保持されることが明らかになった。
【０２６５】
興味深いことに、脂肪組織のＭＭＰ−９処理によって、ＡＤＳＣは全く得られなかった。これは、ＭＭＰ−９がゼラチナーゼであり、脂肪組織内に含有されるインタクトな膠原線維性ＥＣＭネットワーク内に存在するＡＤＳＣに接近できないという事実故であり得る。さらなる実験には、ＭＭＰおよび他のＭＭＰ（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８、（ＩおよびＩＩＩ型コラーゲンの場合）、ＭＭＰ−１９（ＩＶ型コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンの場合）およびＭＭＰ−１１（ＶＩ型コラーゲンの消化の場合））のカクテルを試験することが含まれる。
【０２６６】
結論
本明細書に記載のＡＤＳＣを単離するための組み換えＭＭＰの適用は非常に重要であるが、それは、最高品質の結合組織分解酵素なしでは、毒性副産物なく生存可能なＡＤＳＣを遊離させることが実質的に不可能だからである。この画期的アプローチは、次の成果をもたらすと予想される。第一に、ＭＳＣ単離および移植技術の分野全体におけるブレークスルーが達成される。第二に、予想寿命が長い最高品質のＭＳＣの回収が可能となる。第三に、酵素毒性を消失させることによって、脂肪組織処理およびＭＳＣ単離に対する標準的なプロトコールが開発される。第四に、組織解離の実施において、微生物起源の現在のコラゲナーゼの代わりになり、新しい標準となる、高度に精製された新規組み換えＭＭＰカクテルが導入される。第五に、このアプローチが、現在の標準が依然として細菌由来のコラゲナーゼに依存している、膵島細胞などの他の細胞の単離に適用され得る。結論として、ここに記載の研究は、複数の組織および器官起源からの細胞単離に大きな影響がある。
【０２６７】
実施例２：様々な細胞の単離
膵臓からの膵島単離：３つの主要な段階がある：ＭＭＰ−カクテル（例えば２以上のＭＭＰ）でのインシトゥ膵臓灌流、膵臓消化および膵島精製。
【０２６８】
最初にマウスにペントバルビタールまたは類似物で麻酔をかけ、次いでフードに移した。各マウスを腹側が上になるようにして横たえ、その皮膚を７０％エタノールで消毒する。上腹部付近を切開して肝臓および腸を露出させる。マウス膨大部を十二指腸壁上で手術用鉗子で固定し、十二指腸への胆汁経路を塞ぐ。５ｍＬの１ｘＨＢＳＳでＭＭＰカクテルを溶解させることによって３ｍＬの緩衝液を作製し、３０Ｇ１／２−Ｇ針が付いた５ｍＬシリンジに吸い取る。次いで肝管および胆嚢管の結合部を通じて針を総胆管に挿入し、顕微鏡下で総胆管の中ほどに到達させる。溶液をゆっくりと注入して、膵臓を膨らませる。膵臓を摘出し、２ｍＬの上述の緩衝液を含有する５０ｍＬ試験管に入れる。試験管を短時間振盪し、次いで３７．５℃の水浴に１５分間入れる。温置後、試験管を手動で振盪して、懸濁液が均一になるまで膵臓を破壊する。組織懸濁液が非常に細かい粒子になったら、試験管を氷上に置くことによって消化を終了させ、２５ｍＬの１ｘＨＢＳＳ中の１ｍＭ  ＣａＣｌ２を添加する。これを４℃で２９０ｇで３０秒間遠心し、上清を廃棄する。次いで、２０ｍＬの１ｘＨＢＳＳ緩衝液中の氷冷１ｍＭ  ＣａＣｌ２でペレットを再懸濁し、２９０ｇで４℃で３０秒間再び遠心し、上清を廃棄する。得られたペレットを１５ｍＬの１ｘＨＢＳＳ中１ｍＭ  ＣａＣｌ２で再懸濁し、次いで予め湿らせた７０μｍ細胞ストレーナー上に注ぐ。試験管を２０ｍＬの１ｍＭ  ＣａＣｌ２で洗浄し、再びストレーナー上に注ぐ。フィルターを通じて１ｘＨＢＳＳ中１ｍＭ  ＣａＣｌ２中のさらなる２５ｍＬを注ぐ。新しいペトリ皿上でストレーナーを裏返して、捕捉した膵島をＲＰＭＩ１６４０培地中に、Ｌ−グルタミン（２０ｍＭ）、ペニシリン（１００ＵｍＬ−１）、ストレプトマイシン（１００μｇｍＬ−１）およびＦＢＳ（１０％）からなる１５ｍＬの緩衝液で皿上に洗い流す。大きく開いたチップ付きのピペットを用いて単離膵島を手動で採取し、計数して、３７℃の５％Ｃ０２インキュベーターに入れる。
【０２６９】
心筋細胞、繊維芽細胞および樹状細胞を含む様々な細胞型を単離するための組織解離：細胞懸濁液を調製するための方法は次のとおりである：（ａ）機械的に細切し、ふるいにかけるかまたは剥ぎ取る；（ｂ）二価陽イオンの非存在下で化学的に；および（ｃ）ＭＭＰ、コラゲナーゼ、ＤＩＳＰＡＳＥ（登録商標）、トリプシン、パパイン、エラスターゼ、プロナーゼ、ヒアルロニダーゼで、またはこれらの酵素の選択された組み合わせでの消化によって酵素的に行う。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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