(57)【要約】  本発明は、再生可能原料から不鹸化性画分を抽出する方法であって、脱水された原料を、少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と、前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と、少なくとも１種の触媒と、の存在下で、反応粉砕して、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の官能基により官能基化された脂質が富化された極性有機相の形成と、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基をまったくまたはほとんど含有しない脂質が富化された非極性有機相の形成と、を生じる工程と、その後、有機相を濃縮する工程と、を含む、方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の官能基により官能基化された脂質を含む再生可能固体原料から不鹸化性画分を抽出する方法であって、以下の工程、すなわち、
ａ）前記再生可能原料を、任意選択で調整する前または調整した後、脱水する工程と、
ｂ）少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と少なくとも１種の触媒との存在下で、脱水および任意選択で調整された前記原料を反応粉砕して、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の官能基により官能基化された脂質が富化された極性有機相の形成をもたらす工程と、
ｃ）任意選択で７５℃以上、好ましくは８０℃以上の温度で熱処理を行う前、行うのと同時、または行った後、前記極性有機相を濃縮して、不鹸化性画分が富化された混合物を取得する工程と、
を含み、
かつ任意選択で、以下の工程、すなわち、
ｄ）前記不鹸化性画分が富化された前記混合物を鹸化する工程と、
ｅ）前記鹸化された混合物から前記不鹸化性画分を抽出する工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
再生可能原料から不鹸化性画分を抽出する方法であって、以下の工程、すなわち、
ａ）前記再生可能原料を、任意選択で調整する前または調整した後、脱水する工程と、
ｂ）少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と少なくとも１種の触媒との存在下で、脱水および任意選択で調整された前記原料を反応粉砕して、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基をまったくまたはほとんど含有しない脂質が富化された非極性有機相の形成をもたらす工程と、
ｃ）前記非極性有機相を濃縮して不鹸化性画分が富化された混合物を取得する工程と、
を含み、
かつ任意選択で、以下の工程、すなわち、
ｄ）前記不鹸化性画分が富化された前記混合物を鹸化する工程と、
ｅ）前記鹸化された混合物から前記不鹸化性画分を抽出する工程と、
を含み、
前記再生可能原料が、任意選択で、工程ｂ）の前または工程ｂ）時、７５℃以上、好ましくは８０℃以上の温度で熱処理を受ける、方法。
【請求項３】
前記熱処理が脱水工程ａ）と同時に行われることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記再生可能原料が、アボカドの果実、核、葉、およびそれらの混合物から選択され、かつ前記熱処理が行われることを特徴とする、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記再生可能原料が、アボカドの果実、核、葉、およびそれらの混合物から選択され、かつ前記熱処理が行われ、かつ工程ａ）およびｂ）が、８０℃以下、好ましくは７５℃以下の温度で行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記脱水工程の終了時に取得される前記原料の重量と比較して３重量％以下の残留湿分を達成するように脱水が行われることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
軽質アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、エチル−２−ヘキサノール、およびそれらの異性体から選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記非極性共溶媒がアルカンまたはアルカンの混合物であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記触媒が塩基触媒であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記有機相の濃縮が分子蒸留により達成されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が工程ｄ）およびｅ）を含み、前記鹸化された混合物から前記不鹸化性画分を抽出する工程が、少なくとも１種の有機溶媒を用いて液液抽出により行われることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油化学分野に関する。より特定的には、本発明は、再生可能脂質原料から、特定的には、油糧果実とくにアボカドから、油糧種子から、あるいは動物、藻類、菌類、もしくは酵母または微生物に由来する原料から、不鹸化性物質を抽出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書で用いられる場合、脂質とは、非極性溶媒に可溶な生物起源の物質を意味することが意図される。脂質は、鹸化性であってもよいし（たとえば、トリグリセリド）、鹸化性でなくてもよい（たとえば、ステロイド型骨格で構成された分子）。
【０００３】
本明細書で用いられる場合、不鹸化性物質とは、脂肪の完全鹸化後、すなわち、アルカリ塩基の持続作用下で、水に不溶な状態を維持しかつ可溶な有機溶媒により抽出されうるすべての化合物を含むことが意図される。不鹸化性物質は、一般的には、脂肪中の副画分に相当する。
【０００４】
植物脂肪に由来する不鹸化性物質のほとんどに、５つの主要物質群、すなわち、飽和または不飽和の炭化水素と、脂肪族またはテルペンのアルコールと、ステロールと、トコフェロールおよびトコトリエノールと、カロテノイド色素とくにキサントフィルと、が存在する。
【０００５】
再生可能脂質原料は、きわめて多様な割合で不鹸化性化合物を含む。さまざまな公知の方法に従って種々の植物油を抽出することにより取得される不鹸化性画分の含有率は、不鹸化性物質の重量換算でアボカド油では１〜７％の範囲内であるのに対して、ヤシ油では０．５％およびダイズ油またはオリーブ油では１％である。
【０００６】
現在、不鹸化性物質の伝統的抽出方法では、脂質原料として植物油およびその誘導体ならびに脂質抽出産業（植物油、動物脂肪、海産油脂、植物含油樹脂）で精製および処理から生じる共生成物が一般に使用される。ほとんどの場合、粗植物油もしくは半精製植物油もしくは精製植物油から、または分子蒸留を介してもしくは超臨界流体を用いた抽出を介して取得される精製油由来の不鹸化性物質の濃縮物から、不鹸化性物質を抽出することが必要である。また、ステロール、スクアレン、トコフェロール、トコトリエノールなどのいくつかの不鹸化性画分は、植物油の化学精製または物理精製から生じる豊富な共生成物である植物油脱臭排出物から取得される。しかしながら、油の脱色に使用された漂白土、すなわち、脱蝋ユニットから取り出された漂白土により保持された酸含有油、石鹸ペースト、脂質もまた、脂質の精製から生じる他の共生成物として挙げられる。さらに、油糧種子または油糧果実の粉砕から生じる共生成物、たとえば、油粕、種子外皮または種子核、糖蜜、黒液もまた、使用されうる。
【０００７】
不鹸化性物質またはその画分を抽出するために、脂質処理の共生成物、たとえば、バイオディーゼル製造プラントで動物脂肪または植物脂肪の加水分解プロセスまたは鹸化プロセスから生じる粗グリセリン、動物脂肪加工産業からの油脂含有水、脂肪酸アルキルエステルスチルボトムもまた、使用されうる。
【０００８】
同様に、不鹸化性画分とくにステロールは、パルプ製造トール油のような産業共生成物から生成される。産業醸造所、ラム蒸留所、麦芽製造プラントなどで飲料の抽出プロセスから生じる共生成物の不鹸化性画分もまた、挙げられる。
【０００９】
原料（不鹸化性物質源）として、植物漿液（たとえば、トマト、柑橘果実の漿液）、種子、種皮、油糧もしくは非油糧の果実の含油樹脂、野菜、花、または葉の含油樹脂をさらに利用することが可能である。
【００１０】
不鹸化性物質の抽出方法は、ほとんどの場合、プレス処理により取得される脂肪のエステル交換もしくはエステル化の工程および／または脂肪の鹸化の工程、それに続く有機溶媒を利用した液液抽出の工程を含む。
【００１１】
不鹸化性画分の選択的抽出方法は、多くはない。
【００１２】
国際公開第２０１１／０４８３３９号パンフレットには、ａ）再生可能原料の脱水および調整、ｂ）軽質アルコールおよび触媒の存在下での調整済み脂質原料の反応粉砕によるエステル交換、ｃ）軽質アルコールの蒸発、ｄ）脂肪酸アルキルエステルに希釈された不鹸化性画分を含む濃縮物を取得するための液相の濃縮、ｅ）不鹸化性濃縮物の鹸化、ｆ）鹸化混合物からの不鹸化性画分の抽出、を含む、再生可能原料からの不鹸化性画分の抽出方法が記載されている。
【００１３】
アボカドは、その不鹸化性画分含有率が高いので、非常に特別な関心を払って検討されているはずである。次式：
【化１】
2016522293.tif 000002
を有するＨ７と記されるリノレイックフランを主要成分とするフラン型の特定の脂質は、公知の方式で利用可能である。
【００１４】
本明細書で用いられる場合、アボカド由来フラン脂質とは、次式：
【化２】
2016522293.tif 000003
を有する成分を意味することが意図される。式中、Ｒは、飽和であるかまたは１つ以上のエチレン不飽和もしくはアセチレン不飽和を含むＣ１１〜Ｃ１９、好ましくはＣ１３〜Ｃ１７の線状炭化水素鎖である。これらのアボカド由来フラン脂質は、とくに、Ｆａｒｉｎｅｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ，１９９５，Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７２，４７３に記載されている。通例、アボカド由来フラン脂質は、植物界に特有で、かつそれらに薬理学的性質、化粧的性質、および栄養的性質があるため、さらにはバイオ殺有害生物剤として、とりわけ需要の多い化合物である。
【００１５】
アボカド由来フラン脂質は、最初は果実および葉に存在し、熱の作用により脱水および環化してフラン誘導体になる前駆体化合物の代謝物である。一例として、リノレイックフランＨ７は、Ｐ１Ｈ７と記される以下のケト−ヒドロキシル前駆体：
【化３】
2016522293.tif 000004
の熱変換から生じる。
【００１６】
大気圧下では、前駆体Ｐ１Ｈ７は、典型的には、８０〜１２０℃の範囲内の温度でリノレイックフランＨ７に変換される。
【００１７】
アボカドの葉または果実（核を含む）中のこれらのフラン化合物前駆体の存在が、品種に依存するだけではなく（ハス（Ｈａｓｓ）種およびフエルテ（Ｆｕｅｒｔｅ）種はそのような化合物が最も豊富である）、アボカドの油または他の植物抽出物（アボカドの葉からのヘキサン抽出物もしくはエタノール抽出物）の製造方法にも依存することは、今日では十分に認識されている。
【００１８】
さらに、最初はアボカドの果実および葉に存在するいくつかの化合物は、ポリヒドロキシル化脂肪アルコール形、ほとんどの場合、非アセチル化形、たとえば、以下の化合物：
【化４】
2016522293.tif 000005
で存在しうる。
【００１９】
本明細書で用いられる場合、アボカド由来ポリヒドロキシル化脂肪アルコールとは、飽和であるかまたは１つ以上のエチレン不飽和もしくはアセチレン不飽和を含みかつ少なくとも２個のヒドロキシル基を含むＣ１７〜Ｃ２１直線状炭化水素主鎖形のポリオールを意味することが意図される。ただし、前記ヒドロキシル基は、一般的には、主鎖の一部分、好ましくは、主鎖の一方または両方の末端の方向に位置し、したがって、他の部分は、ポリオールの脂肪鎖（疎水部分）を形成する。
【００２０】
果実中のポリヒドロキシル化脂肪アルコール含有率は、主に、天候条件、土壌の質、季節、および収穫時の果実の成熟に依存する。
【００２１】
結合組織に対して、とくに、関節症、歯周炎、強皮症などの炎症性疾患に対して、有益な治癒効果があるため、フラン脂質が豊富なアボカド不鹸化物の治療的関心を考慮すると、さらには、一般に高コストであることを考慮すると、フラン脂質が豊富であろうアボカド油由来不鹸化性画分をできるかぎり最良の収率で調製する強い必要性が存在する。同様に、プロセスのグローバル費用効果を向上させるために、果実を全体として最大収率で積極的に使用することに真の関心が存在する。
【００２２】
アボカド果実から、またはアボカド果実から抽出された油から、これらのフラン化合物または特定のポリオールを製造する公知の方法では、多くの他のアボカド由来不鹸化性化合物と組み合わされた場合のみ、これらの化合物を取得可能であるにすぎない。
【００２３】
仏国特許第２６７８６３２号明細書には、実際上前述のフラン脂質に対応するＨと呼ばれる一画分が富化されたアボカド油からアボカド不鹸化性画分を製造する方法が記載されている。含有率が３０〜６０％で変化しうるそのようなフラン脂質リッチ不鹸化性物質の調製は、あらかじめ薄くスライスされた新鮮果実を８０〜１２０℃の範囲内の温度で一定時間にわたり、好ましくは２４〜４８時間の選択された時間にわたり制御加熱することに本質的に依存する。この熱処理は、抽出後、フラン脂質リッチアボカド油の取得を可能にする。最後に、この油から出発して有機溶媒を用いた液液抽出工程で終了する伝統的鹸化方法に従って、不鹸化性画分が取得される。
【００２４】
国際公開第０１／２１６０５号パンフレットには、少なくとも８０℃の温度での果実の熱処理（制御乾燥）と、コールドプレス処理による油の抽出と、冷結晶化または液液抽出または分子蒸留による不鹸化性物質の富化と、エタノールカリ媒介鹸化と、有機溶媒を用いた向流カラムでの不鹸化物抽出と、続いて、濾過、洗浄、溶媒除去、脱臭、および最終分子蒸留の工程と、を含む、アボカドからフラン脂質化合物およびポリヒドロキシル化脂肪アルコールを抽出する方法が記載されている。この方法は、主にアボカドフラン脂質を含む留出物または主にアボカドフラン脂質およびポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含む留出物のいずれかの取得を可能にする。しかしながら、そのような方法は、果実の小部分を利用可能であるにすぎない。
【００２５】
実際に、このタイプのプロセスでは、分子蒸留による不鹸化性物質の濃縮工程から生じるボトムを形成する油、すなわち、果実から抽出される油の約９０％は、積極的に再使用することがほとんどできない。この強着色油は、実際には高温蒸留による熱処理を受けたものなので、クロロフィル色素さらにはリン脂質の自動的かつ非可逆的な破壊をもたらし、蒸留粗油の将来的精製に非常に有害な影響を及ぼす。最良のシナリオで、この油のきわめて先端的な精製によってのみ、比較的許容可能な色に戻すことが可能である。精製は、エネルギー入力（たとえば、漂白土）の大量消費を必要とし、しかも依然として不飽和脂肪酸（異性化）には非常に厳しい状態のままである。最後に、この精製油を商業上許容される期間にわたり保存するために、外因性抗酸化剤を添加しなければならない。したがって、結果として、精製油は、ヒト栄養のためにも専門家による医薬用途でも、絶対に再使用できない。
【００２６】
この方法のさらなる欠点は、動物飼養に適さない油粕が生成されることである。後者は、実際に、抗栄養化合物（バイオ殺有害生物剤として使用される毒性Ｈ前駆体フラン脂質）と、空気乾燥果実の機械プレス処理による抽出時に高分解（実際には高酸化）された消化率が非常に低いという問題を抱えるタンパク質と、を含有する。結果として、油粕またはそのタンパク質は、動物飼養に使用することができず、果実の果肉をヒトが普通に摂取するとしても（果実が直接摂取されるワカモレ）、ヒト栄養に使用できないことは言うまでもない。
【００２７】
同様に、医薬的性質、化粧的性質、および栄養的性質（たとえば、肝機能の向上）が実証されている植物界に特有の糖であるペルセイトールやナノヘプツロースなどの果実中の貴重な多糖は、乾燥果実の機械的圧力により誘導されるメイラード反応および／もしくはカラメル化プロセスにより部分的に破壊されるか、または繊維およびタンパク質含有マトリックスとの過剰な相互作用に起因して抽出が非常に困難になる。
【００２８】
結論として、このタイプの方法は、１５％未満であると推定可能な果実の不十分な再使用を可能にするにすぎない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
結果として、アボカドからフラン脂質および／またはポリヒドロキシル化脂肪アルコールを抽出する方法の収率さらには選択率を向上させることが依然として必要である。
【００３０】
したがって、より良好な将来的再使用のために果実の完全性を保持しつつ脂肪から不鹸化性物質を選択的に抽出する方法の必要性が依然として存在する。これが実現されれば、経済的であるうえに、遊離脂肪酸よりも付加価値の高いグリセリドまたは良好な栄養品質を有するタンパク質および多糖の共生成物を回収することが可能になろう。さらに、画分の極性に応じて不鹸化性物質を高収率で抽出する方法を開発することが望ましいであろう。実際に、果実の他の興味深い画分または部分を害することなく予想画分を選択的に生成するロバストな方法を提供することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００３１】
それに応じて、本発明の目的は、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の官能基により官能基化された脂質を含む再生可能原料から不鹸化性画分を抽出する方法であって、以下の工程、すなわち、
ａ）再生可能原料を、任意選択で調整する前または調整した後、脱水する工程と、
ｂ）少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と少なくとも１種の触媒との存在下で、脱水および任意選択で調整された脂質原料を反応粉砕して、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の官能基により官能基化された脂質が富化された極性有機相の形成をもたらす工程と、
ｃ）任意選択で７５℃以上、好ましくは８０℃以上の温度で熱処理を行う前、行うのと同時、または行った後、極性有機相を濃縮して、不鹸化性画分が富化された混合物を取得する工程と、
を含み、
かつ任意選択で、以下の工程、すなわち、
ｄ）不鹸化性画分が富化された混合物を鹸化する工程と、
ｅ）鹸化された混合物から不鹸化性画分を抽出する工程と、
を含む、方法を提供する。
【００３２】
本発明はさらに、再生可能原料から不鹸化性画分を抽出する方法であって、以下の工程、すなわち、
ａ）再生可能原料を、任意選択で調整する前または調整した後、脱水する工程と、
ｂ）少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と少なくとも１種の触媒との存在下で、脱水および任意選択で調整された脂質原料を反応粉砕して、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基をまったくまたはほとんど含有しない脂質が富化された非極性有機相の形成をもたらす工程と、
ｃ）非極性有機相を濃縮して不鹸化性画分が富化された混合物を取得する工程と、
を含み、
かつ任意選択で、以下の工程、すなわち、
ｄ）不鹸化性画分が富化された混合物を鹸化する工程と、
ｅ）鹸化された混合物から不鹸化性画分を抽出する工程と、
を含み、
前記再生可能原料が、任意選択で、工程ｂ）の前または工程ｂ）時、好ましくは工程ａ）の前、工程ａ）時、または工程ａ）と工程ｂ）との間、７５℃以上、好ましくは８０℃以上の温度で熱処理を受ける、方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明に係る両方法は、第１の方法が極性アルコール相（すなわち、そのような相には前駆体が可溶である）に可溶な不鹸化性画分の回収をめざし、第２の方法が非極性有機相（すなわち、そのような相には代謝物が可溶である）に可溶な不鹸化性画分の回収をめざすという点で、まさに異なる。しかしながら、アボカドの場合、両方法は、多くの工程が異なるが、積極的に再使用可能な非常に高品質の共生成物、すなわち、アボカド油の蒸留アルキルエステル、完全追跡アボカドグリセリン、抗栄養化合物が除去された油粕（タンパク質源、オリゴペプチド源、ペルセイトール源、およびナノヘプツロース源として潜在的に使用可能である）、アボカド繊維の生成を可能にしつつ、不鹸化性画分からフラン脂質を高収率で選択的に回収可能にするので、両方とも同様に有用である。
【００３４】
アボカドの特定の場合、第１の方法では、原料は、とくに、最初に高温で加熱されないが（反応粉砕工程の後で初めて加熱される）、第２の方法では、熱処理されたアボカドのフラン化合物特性をより初期に生成するように反応粉砕工程の前に加熱される。第１の方法の場合、反応粉砕工程は、アボカドを用いて実行されるが、そのような熱処理を受けなかったので、この段階では、まさにフラン脂質前駆体を含有する。
【００３５】
したがって、本発明は、一般的には植物または動物、好ましくは植物に由来する再生可能脂質原料から不鹸化性画分を抽出することをめざす。この原料は、とくに、油糧果実、油糧種子、油糧タンパク質種子、種子外皮、油糧アーモンド、萌芽、果実核、およびクチクラ、藻類、菌類、もしくは酵母または微生物に由来する動物原料から選択され、しかも脂質が豊富である。
【００３６】
第１の実施形態では、実際に利用される原料は、油糧果実であり、限定されるものではないが、オリーブ、シア、アマランス、パーム、ブリチ、ツクマン、カボチャ、セレノア・レペンス（Ｓｅｒｅｎｏａ  ｒｅｐｅｎｓ）、アフリカパーム、またはアボカドでありうる。
【００３７】
第２の実施形態では、原料は、ナタネ、ダイズ、ヒマワリ、ワタ、コムギ、トウモロコシ、コメ、ブドウ（種子）、クルミ、ヘーゼルナッツ、ホホバ、ルピナス、カメリナ、アマ、ココヤシ、サフラワー、ハマナ、コプラ、ラッカセイ、ジャトロファ、トウゴマ、ニーム、アサ、クフェア、レスクエレラ、インカインチ、シソ、エキウム、マツヨイグサ、ボラージ、クロフサスグリ、チョウセンマツ、シナキリ、ワタ、ケシ（種子）、ゴマ、アマランス、コーヒー、エンバク、トマト、マスティック、マリーゴールド、カランジャ、コメヌカ、ブラジルナッツ、アンジローバ、シザンドラ、ウクフバ、クプアス、ムルムル、ペキ、レモン種子、マンダリン種子、オレンジ種子、スイカ種子、ククルビタ・ペポ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ  ｐｅｐｏ）種子、およびトマト種子から選択される植物原料の種子、子実、萌芽、クチクラ、または核である。脂質原料はまた、動物、藻類、菌類、または酵母に由来する原料でありうる。好ましい動物原料として挙げられるのは、魚の肝臓および皮膚、とりわけ、サメ、タラ、およびギンザメのもの、さらには食肉産業からの固体廃棄物（脳、腱、羊毛脂…）である。
【００３８】
不鹸化性物質が豊富な含油樹脂を含有する他の植物原料は、トマト、マリーゴールド、パプリカ、ローズマリーである。
【００３９】
興味深い不鹸化性化合物を含有する藻類の好適な例として挙げられるのは、微細藻類デュナリエラ・サリナ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ  ｓａｌｉｎａ）（β−カロテンが豊富である）およびヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）（アスタキサンチンが豊富である）である。興味深い不鹸化性化合物を含有する微生物とくに細菌の好適な例は、菌糸体もしくは他のカビおよび菌類（エルゴステロールの産生）、ファフィア属（Ｐｈａｆｆｉａ）の種（アスタキサンチンの産生）、ブラケスレア・トリスポラ（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ  ｔｒｉｓｐｏｒａ）（リコペンおよびフィトエンの産生）、ムリエロプシス属（Ｍｕｒｉｅｌｌｏｐｓｉｓ）の種（ルテインの産生）を含むか、またはとくに、国際公開第２０１２／１５９９８０号パンフレット（スクアレンの産生に適合化された微細藻株）、米国特許第７６５９０９７号明細書（とくにファルネソールおよびファルネセンを産生する細菌）、出版物Ｐｕｒｅ  ＆  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．１０，ｐｐ．２１６９−２１７３，１９９７（カロテノイドの産生）、もしくはＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２；２０１２：６０７３２９，ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１２／６０７３２９（補酵素Ｑ１０のバイオテクノロジー産生）に挙げられている。
【００４０】
本発明に係る方法に使用される原料は、３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満の酸性度を有することが望ましい。実際に、これらの原料中の遊離脂肪酸の含有率が高くなると、塩基性媒体中で石鹸の形成を引き起こすであろう。本明細書で用いられる場合、脂肪酸とは、いくつかの特定の有機官能基（ヒドロキシル、エポキシの官能基…）を含んでいてもよい飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和の線状または分岐状の環式または非環式のＣ４〜Ｃ２８モノ、ジ、またはトリカルボン酸の脂肪族酸を意味することが意図される。
【００４１】
次に、本発明に係る第１の方法を詳細に提示する。
【００４２】
本発明に係る第１の方法に実際に利用される原料は、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の極性官能基により官能基化された脂質成分を含み、例としては、アボカド、カランジャ、ジャトロファ、アンジローバ、ニーム、シザンドラ、ルピナス外皮、カシューナッツ、ゴマ、コメヌカ、ワタ、またはフィトステロールが豊富な油産生原料、たとえば、トウモロコシ、ダイズ、ヒマワリ、ナタネであり、これらはすべて、そのような化合物が非常に豊富である。
【００４３】
これらの原料は、新鮮な原料、またはいくつかのプロセス、たとえば、原料抽出の第１の工程、たとえば、プレス処理、遠心分離などに事前に付された原料でありうる。アボカドに関して、挙げられるのは、果肉のプレス処理により取得されるアボカドミルク、遠心分離を介して部分的に脱脂された果肉の除去から生じる生成物、一般的にはシーブ遠心分離機の出力に存在する副生成物、分離時に生成される遠心分離ペレット、果実（新鮮または乾燥）をコールドプレスした時または有機溶媒を利用して新鮮果実または乾燥果実からアボカド油を液固抽出した時に同時に生成されるアボカド粕、アボカドの核および葉である。
【００４４】
この方法は、再生可能原料の脱水および任意選択の調整の第１の工程ａ）を含む。脱水および調整は、８０℃以下、好ましくは７５℃以下の温度で行われる場合、制御されると言われる（これはアボカドに必要とされる）。前記温度は、好ましくは−５０℃以上である。他の実施形態によれば（アボカドには適用可能でない）、温度は、５０〜１２０℃、より好ましくは７５〜１２０℃でさまざまに設定される。脱水は、とくに、温度上昇時に酸化されるおそれのある壊れやすい化合物を含有する原料の場合、不活性雰囲気下に行われうる。好ましくは、大気圧下で行われる。
【００４５】
アボカド（本出願で用いられる場合、アボカドの果実、核、葉、またはそれらの混合物を意味することが意図される）の場合、７５または８０℃を超えて温度が上昇しないようにすることにより、フラン脂質前駆体からフラン脂質への変換を防止する。
【００４６】
脱水は、（所要により）調整の前または後、実現されうる。好ましくは、アボカドのような油糧果実は、調整前に脱水されるが、それとは対照的に、油糧種子は、脱水前に最初に調整される。
【００４７】
本明細書で用いられる場合、脱水とは、原料からの水の完全除去または部分除去を可能にする当業者に公知のすべての技術を含むことが意図される。これらの技術中で挙げられるのは、限定されるものではないが、流動床乾燥、熱気流下もしくは不活性雰囲気（たとえば、窒素）下での乾燥、充填床乾燥、大気圧下もしくは真空下での乾燥、厚層乾燥もしくは薄層乾燥、連続ベルト乾燥機中もしくは回転ファン付き熱風乾燥機中での乾燥、またはマイクロ波乾燥、スプレー乾燥、凍結乾燥、および溶液中（直接浸透）もしくは固相中（たとえば、浸透圧バッグ中での乾燥）での浸透圧脱水、ゼオライトやモレキュラーシーブなどの固体吸収剤を用いた乾燥である。
【００４８】
より好ましくは、乾燥時間および乾燥温度は、残留湿気が、脱水工程の終了時に取得される脂質原料の重量と比較して、３重量％以下、好ましくは２重量％以下になるように選択される。原料の残留湿気は、熱重量測定により決定されうる。この乾燥工程は、後続のエステル交換工程を最良の条件下で続けるために重量である。とくに、原料の細胞を破裂させ、かつこの原料中に存在する水中油型エマルジョンを破壊するので、脂質成分の抽出をより効率的にするであろう。さらに、原料の調整、とくに、破砕操作またはミル処理操作を促進しうるので、溶媒の接触表面が奏効して、溶媒媒介抽出をより効率的にするであろう。
【００４９】
本方法の枠内では、産業的実現を促進するためにおよびコストの理由で、薄層かつ熱気流下の温度調節されたベント付き乾燥機（乾燥オーブン）中での乾燥が好ましい。温度は、好ましくは７０〜７５℃の範囲内であり、かつ脱水は、好ましくは８〜３６時間持続される。
【００５０】
原料の任意選択の調整の目的は、とくに、単純なパーコレーション現象を介して、抽出溶媒および触媒が脂肪に最もアクセス可能になるようにすることである。調整はまた、これらの反応剤に接触する原料の比表面積および多孔度を増加させうる。原料の調整は、脂肪抽出をなんらもたらさない。
【００５１】
好ましくは、再生可能原料は、粉末の形態でフラット処理、フロック処理、ブロー処理、またはグラインド処理により調整される。一例として、原料は、トースト処理、またはフロック処理、または蒸発、スプレー、機械粉砕、凍結粉砕、デハリング、フラッシュ緩和（真空生成および急速減圧による急速乾燥）による調整処理および／または乾燥処理、パルス電磁場、反応押出しまたは非反応押出し、平滑ローラーまたはコルゲートローラーを備えたメカニカルフラットナーを利用したフラット化、熱風供給または過熱蒸気供給を介するブローイングによる調整処理が行われうる。アボカドの場合、主に、カットされたアボカド果実が使用され、その後、制御脱水工程に付され、そして最後に、一般的には新鮮な果肉を粉砕することにより、乾燥果実が調整されるであろう。
【００５２】
脱水および任意選択で調整した後、原料は、少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と、（反応粉砕操作の条件で）前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と、少なくとも１種の触媒と、の存在下で、反応粉砕の工程ｂ）に付される。
【００５３】
本明細書で用いられる場合、反応粉砕とは、好ましくは１種以上の反応剤の存在下で、鹸化性の脂質（または脂肪）（とくにトリグリセリド）を脂肪酸アルキルエステル（一般的には脂肪酸アルキルモノエステル）およびグリセロールに変換することを目的とする任意の操作を意味することが意図される。本件では、粉砕は、軽質アルコールと非極性共溶媒と触媒との存在下で行われる。特定の実施形態では、無水の溶媒および共溶媒、好ましくは、蒸留を可能にするのに十分な程度に低い沸点を有する溶媒が使用されるであろう。
【００５４】
さらなる実施形態では、高極性化合物とくにヒドロキシル化化合物をとりわけより効率的に抽出するために、二成分溶媒混合物に水を添加することが可能である。この場合、水の量は、好ましくは、溶媒混合物の０．１〜２０重量％、好ましくは０．５〜５重量％を占める。
【００５５】
この工程は、同時にエステル交換を行いつつ、脱水された原料から脂肪とくに油を抽出することだけでなく、不鹸化性であるか否かにかかわらず、ヒドロキシル（好ましくは脂肪族）、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、および（遊離）アミンの官能基から選択される１個以上の官能基を含有する極性脂質成分が富化された画分、さらには非極性または弱極性の脂質成分、とくに、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基をまったく含まない成分が富化された画分を単離することも可能にする。
【００５６】
非極性共溶媒を添加すると、不均一媒体および２つの脂質相の形成が促進される。それらは、組成に関して互いに非常に異なるであろう。一方では、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基により官能基化されていない脂質成分が、好ましくは、非極性相に見いだされるであろう。他方では、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により官能基化された脂質成分が、好ましくは、極性相（軽質アルコール）に見いだされるであろう。
【００５７】
この工程は、１個以上のヒドロキシル（好ましくは脂肪族）、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基、好ましくは、それらのいくつかにより官能基化された脂質成分（不鹸化性または鹸化性）の選択的抽出を可能し、それらは、エステル交換反応の終了時、媒体中に存在するそのような官能基を含まない脂質成分混合物（とくに脂肪酸エステル）から分離されない。使用される原料のタイプに依存して、これらの官能基化脂質成分は、限定されるものではないが、アボカド中に存在するフラン脂質前駆体（とくに、リノレイックフランＨ７の前駆体であるすでに述べた化合物Ｐ１Ｈ７）であるポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびケト−ヒドロキシル化化合物、非エステル化ステロール、または次の脂肪酸、すなわち、リシノール酸（１２−ヒドロキシｃｉｓ９−オクタデセン酸）、とくに、ヒマシ油に存在するもの、レスクエロール酸（１４−ヒドロキシ−１１−エイコサン酸）、デンシポリン酸（１２−ヒドロキシ−９，１５−オクタデカジエン酸）、およびアウリコール酸（１４−ヒドロキシ−１１，１７−エイコサジエン酸）、とくに、３つともすべてレスクエレラ属（Ｌｅｓｑｕｅｒｒｅｌｌａ）属の種に存在するもの、コリオール酸（１３−ヒドロキシ−９，１１−オクタデカジエン酸）、カムロレン酸（１８−ヒドロキシ−９，１１，１３−オクタデカテン酸）、とくに、カマラツリーの種子から抽出された油に存在するもの、コロナル酸（９，１０−エポキシ−ｃｉｓ−オクタデク−１２−エン酸）、とくに、ヒマワリ油に存在するもの、ベルノール酸（ｃｉｓ−１２，１３−エポキシオレイン酸）、とくに、ユーフォルビア・ラガスカエ（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｌａｇａｓｃａｅ）の種子からまたはベルノニア属（Ｖｅｒｎｏｎｉａ）の植物から抽出された油に存在するもの、のエステルでありうる。
【００５８】
工程ｂ）は、原料からトリグリセリドおよび他の脂質成分を抽出することと、前記トリグリセリドをエステル交換して、とくに、脂肪酸エステル、グリセロール、天然不鹸化性画分（この工程により修飾されない）、ならびに使用される原料のタイプに依存して、可溶性多糖、フェノール化合物、グルコシノレート、イソシアネート、極性アルカロイド、極性テルペン、グリセロール、および油粕を含む混合物の形成をもたらすことと、を可能にするのに十分な温度、撹拌、および時間の条件で行われる。
【００５９】
しかしながら、工程ｂ）は、とくにアボカドの場合、８０℃以下、好ましくは７５℃以下の温度で行われ、そのような温度制御を行えば、フラン脂質前駆体からフラン脂質への変換が防止される。これらは、反応粉砕時、依然としてそれらのヒドロキシル化形で存在する（フランに環化されない）。
【００６０】
他の場合、工程ｂ）は、温度に関して限定されることなく行われうる。すなわち、７５または８０℃を超えて温度を設定しうる。したがって、原料がアボカドに由来しない場合、工程ｂ）は、４０〜１００℃の範囲内の温度で加熱プロセスを実行することにより行われうる。工程ｂ）は、一般的には、室温で行われるが、好ましくは少なくとも４０℃、好ましくは８０℃以下、好ましくは７５℃以下の温度で加熱プロセスを実行することによっても行われうる。
【００６１】
一般的出版物、たとえば、Ｂａｉｌｅｙ’ｓ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｏｉｌ  ａｎｄ  Ｆａｔ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５），Ｆｅｒｅｉｄｏｏｎ  Ｓｈａｈｉｄｉ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．およびＭａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１），Ｍ．Ｂ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅには、エステル交換工程さらには任意選択の鹸化工程の条件がさらに詳細に記載されており、それについては、これ以降で提示する。
【００６２】
本明細書で用いられる場合、軽質アルコールとは、分子量が１５０ｇ／ｍｏｌ以下である線状または分岐状の好ましくはＣ１〜Ｃ６、より好ましくはＣ１〜Ｃ４のアルコール（１個以上のヒドロキシル官能基を含む）を意味することが意図される。好ましくは、軽質アルコールは、モノアルコールである。好ましくは、脂肪族アルコール、最も好ましくは、脂肪族モノアルコール、好ましくは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、ｎ−ヘキサノール、エチル−２−ヘキサノール、およびそれらの異性体から選択されるものである。このようなモノアルコール、最も好ましくはメタノールの使用により、グリセリドの脂肪酸モノエステルへの変換をもたらす。
【００６３】
（反応粉砕条件で）軽質アルコールと混和しない非極性共溶媒は、好ましくは、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により官能基化された、抽出される脂質成分が、この共溶媒に可溶でないように、選択される。それらの化学的性質を考慮すると、これらの官能基化脂質成分は、必然的に、あまり可溶でない（好ましくは可溶でない）非極性溶媒相よりも軽質アルコール相と強い親和性を有するであろう。
【００６４】
非極性共溶媒とは、とくに、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、ビシクロヘキシル、シクロヘキサン、植物起源のパラフィンアルカン（天然アルコール（もしくはそのゲルベ同族体）の脱水により、または脂質もしくはバイオマスの水素化処理（水添液化方法）により、または脂肪酸の脱カルボキシル化により取得される）、デカリン、デカン、ケロシン、ケルダン（ヘキサンよりも重い可燃性炭化水素カット）、ガス油、ランプ油、メチルシクロヘキサン、テトラデカン、超臨界ＣＯ２、加圧プロパンもしくはブタン、天然非極性溶媒、たとえば、テルペン（リモネン、αおよびβ−ピネンなど）でありうる有機溶媒のことである。好ましくは、アルカンまたはアルカンの混合物、好ましくはヘキサンであろう。
【００６５】
好ましい極性溶媒（軽質アルコール）／非極性共溶媒対は、メタノール／ヘキサン対である。
【００６６】
好ましくは、触媒は、好ましくは、アルコールソーダ、固体ソーダ、アルコールカリ、固体カリ、アルカリアルコラート、たとえば、リチウム、ナトリウム、もしくはカリウムのメチラート、エチラート、ｎ−プロピラート、イソプロピラート、ｎ−ブチラート、ｉ−ブチラート、もしくはｔ−ブチラート、アミン、およびポリアミンから選択される塩基触媒、または好ましくは、硫酸、硝酸、パラトルエンスルホン酸、塩酸、およびルイス酸から選択される酸触媒である。酸触媒は、より特定的には、脂肪の遊離酸性度が４ｍｇＫＯＨ／ｇよりも高い極限状況で使用されるであろう。この工程は、遊離脂肪酸のエステル化をもたらし、本方法では、続いて、反応粉砕の後、塩基触媒エステル交換反応が行われる。
【００６７】
工程ｂ）は、とくに、撹拌床付きバッチ反応器または連続抽出器型の可動ベルト付き連続反応器で行われうる。好ましい実施形態では、有機溶媒および非極性共溶媒は、互いに向流で反応器内に導入される。極性相と非極性相との間で種々の脂質成分の分離を最適化するために、ならびに／またはモノ、ジ、およびトリグリセリドから脂肪酸（アルキル）（モノ）エステルへの完全変換を達成するために、たとえば、国際公開第２０１０／０８４２７６号パンフレットに記載されるように、カスケード方式のいくつかの反応器および中間取出しシステムを実現することにより、抽出／粉砕プロセスを数回繰り返しうる。
【００６８】
反応粉砕工程は、一方では、２つの液体すなわち非混和性脂質相、グリセロール、他方では、溶媒含有油粕の回収を可能にする（とくに、濾過および軽質アルコールなどの溶媒を用いた油粕の洗浄の後）。
【００６９】
最も好ましくは、エステル交換工程から生じる混合物は、少量のモノ、ジ、またはトリグリセリドを含む。グリセリドは、全体として、一般的には混合物の全重量の３重量％未満、好ましくは１重量％未満を占める。
【００７０】
本発明に係る方法から生じる溶媒含有油粕は、機械的圧力の工程を必要とする先行技術の方法とは対照的に、反応粉砕工程の後、抗栄養化合物を含有しないかまたは少なくともごくわずかに含有することを考えると、乾燥させてから、とくに、動物飼養に直接使用されうる。ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基から選択される１個以上の官能基を含有する脂質、たとえば、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびフラン脂質前駆体（アボカドの場合）がとくに可溶である（アルコール性の）極性相は、非極性相から分離される。前記極性相は、とくに脂肪酸エステルをさらに含む。種々の画分の分離は、多種多様な方法により、とくに、遠心分離、デカンテーション、および／または蒸留により、行われうる。
【００７１】
たとえば、非極性溶媒相は、真空下および好適な温度で行われる溶媒蒸発工程に付されうる。次いで、蒸発溶媒は、リサイクルのために凝縮される。次いで、主にアルキルエステルおよび不鹸化性（または鹸化性）非極性化合物で構成される非極性重質相（相Ａ）は、一方では精製エステル（留出物中）、他方では非極性副次化合物が富化された蒸留残渣を取得するために、分子蒸留に組み込まれる。これらの本質的に不鹸化性の化合物の抽出は、当業者に公知の方法に従って行われる。たとえば、次のシーケンス、すなわち、
１）アルキルエステルの鹸化、
２）石鹸からの不鹸化性化合物の分離を可能にする液液抽出、
３）不鹸化性物質が富化された溶媒相の脱溶媒、
４）不鹸化性物質の最終精製、
が行われる。
【００７２】
他の選択肢は、相Ａを直接鹸化すること、および
１）石鹸からの不鹸化性化合物の分離を可能にする液液抽出、
２）不鹸化性物質が富化された溶媒相の脱溶媒、
３）不鹸化性物質の最終精製、
により本質的に非極性不鹸化性の化合物を抽出することである。
【００７３】
軽質アルコール（極性溶媒）は、とくに減圧下で極性相から蒸発される。アボカドの場合、蒸発温度が高いと（とくに、約８０℃以上であると）、この初期段階でフラン脂質前駆体からフラン脂質への環化がすでに行われるおそれがある。
【００７４】
取得された脂質生成物は、好ましくは酸を介して、中和工程に付され（軽質アルコールの蒸発の前または後、好ましくは前）、次いで、一方ではグリセロール残留物および他方では脂質相の回収を可能にするデカンテーションまたは遠心分離の工程および／または濾過の工程に付されうる。次いで、残留脂質相は、水で洗浄され、真空下で乾燥されうる。
【００７５】
次いで、得られた脂質相（典型的にはアルキルエステルを含有しかつ極性不鹸化性（またはそうでない）化合物が富化された相）は、不鹸化性画分が富化された混合物を取得するために濃縮工程ｃ）および任意選択で７５℃以上、好ましくは８０℃以上の温度で熱処理に付される。濃縮は、熱処理（仮に行うのであれば）の前または後に実現されうるか、または濃縮が好適な温度での加熱プロセスを必要とする場合、これらの２つ工程は、同時に行われうる。濃縮は、好ましくは、熱処理を達成する前に行われる。
【００７６】
不鹸化物に対する油の予備濃縮により、可能な後続の鹸化工程時に組み込まれる物質の量、したがって、抽出される量を低減することが可能である。
【００７７】
濃縮工程ｃ）は、特定的には液液抽出、蒸留または結晶化、とくに冷結晶化もしくは真空下での蒸発を介する結晶化により行われうる。本明細書で用いられる場合、蒸留とは、当業者に公知の任意の方法、とくに、分子蒸留、大気圧下または真空下での蒸留、逐次多段蒸留（とくに、ワイプトフィルム蒸発器または流下膜式蒸発器によるもの）、共沸蒸留、水蒸留、水蒸気蒸留、脱臭、とくにスチーム注入または不活性ガス注入（窒素、二酸化炭素）を用いたまたは用いない真空下での薄層脱臭器によるものを意味することが意図される。
【００７８】
最も好ましい方法は、高真空下かつ高温下での、ただし、感熱分子の変性を防止または制限する非常に短い接触時間での分別蒸留を意味することが意図される分子蒸留である。
【００７９】
この工程の分子蒸留さらには本発明に係る方法で実施可能なすべての他の分子蒸留は、ショートパス蒸留ユニット、好ましくは、遠心分離型の分子蒸留デバイスおよびワイプトフィルム型の分子デバイスから選択されるデバイスを用いて行われる。
【００８０】
遠心分離型の分子蒸留デバイスは、当業者に公知である。たとえば、欧州特許第０４９３１４４号明細書には、この型の分子蒸留デバイスが記載されている。一般的に言えば、蒸留される生成物は、高速度で回転するコニカルローターの加熱表面（熱表面）上に薄層で展延される。蒸留チャンバーは、真空下に配置される。これらの条件では、不鹸化性成分の蒸発は、沸騰ではなく、熱表面から行われるので、壊れやすい生成物が蒸発時に分解されないという利点がある。
【００８１】
ワイプトフィルム型の分子蒸留デバイスもまた、当業者に公知であり、蒸発表面（熱表面）上への蒸留される生成物の連続展延を可能にする回転スクレーパーを備えた蒸留チャンバーを含む。生成物の蒸気は、蒸留チャンバーの中央に配置されたコールドフィンガーを利用して凝縮される。外部パワーおよび真空供給システムは、遠心分離型の蒸留ユニットのものに非常に類似している（供給ポンプ、スライドベーンおよび油拡散を備えた真空ポンプなど）。ガラスフラスコ中の残渣および留出物の回収は、重力フローにより行われる。
【００８２】
分子蒸留は、好ましくは、圧力を１０−３〜１０−２ｍｍＨｇの範囲内、好ましくは約１０−３ｍｍＨｇに保持することにより１００〜２６０℃の範囲内の温度で行われる。これらの条件は、脂肪酸モノエステルの代わりにトリグリセリドの蒸留を必要とする先行技術の方法よりも温和であるので、残渣のほぼ非可逆的な着色をもたらす着色色素の分解を回避することが可能である。
【００８３】
留出物中の不鹸化性物質の濃度は、６０重量％を達成しうる。アボカドの場合、化合物と加熱領域との接触時間が非常に短くても、いくつかのフラン脂質前駆体は、この段階でフラン脂質に環化される可能性がある。しかしながら、そのような現象は、依然としてわずかである。また、伝統的蒸留を行うことも可能であり、これにより、ボカドの場合、７５℃以上、好ましくは８０℃以上での加熱プロセスを介してフラン脂質前駆体の完全環化が可能になろう。
【００８４】
蒸留は、一般的には、不鹸化性画分から分離された高純度の脂肪酸のエステル（典型的にはアルキルエステル）を含む軽質画分（第１の留出物）と、残留脂肪酸のエステル（典型的にはアルキルエステル）に希釈された不鹸化性画分を含む少なくとも１種のより重質の画分（第２の留出物または残渣）と、の取得を可能にする。
【００８５】
好ましくは９８重量％超のエステル含有率と、好ましくは１％未満、より好ましくは０．１重量％未満の不鹸化物含有率と、を有する高純度脂肪酸エステル含有画分（すなわち、一般的には無色透明エステル）は、とくに化粧品または医薬品に直接使用されうる。濃縮工程の終了時に取得されるエステル画分の純度が不十分な場合、この画分は、その純度を向上させるために、とくに分子蒸留により精製されうる。
【００８６】
アボカドの場合、不鹸化性画分が富化された（かつ脂肪酸エステルが枯渇した）濃縮物は、これ以降に記載される熱処理工程が濃縮工程前または濃縮工程時に行われた場合、この段階で、フラン脂質前駆体（弱揮発性である）および／またはフラン脂質（脂肪酸モノエステルよりも揮発性が低い）を含有する。
【００８７】
アボカドの場合、７５〜８０℃またはそれ以上での濃縮されたまたはされていない脂質相の熱処理工程は、必須である。それは、フラン脂質前駆体からフラン脂質への環化を効果的にすることが意図される。この工程は、鹸化工程（仮に行うのであれば）の前または後、好ましくは前に、行われうる。なぜなら、さもなければ、鹸化によりフラン脂質前駆体がそれほど興味深くない修飾された不鹸化性誘導体（すなわち、フラン化合物とは異なる）に変換されるおそれがあるからである。そのような処理の持続時間は、使用される加熱方法に依存して、一般的には０．５〜５時間の範囲内である。処理のために設定される温度は、一般的には１５０℃以下、好ましくは１２０℃以下である。温度および反応時間は、フラン脂質前駆体の環化の促進である熱処理の予想結果に関して、互いに強く依存する２つのパラメーターであることを、当然ながら理解すべきである。
【００８８】
有利には、この熱処理は、不活性雰囲気下で、とくに窒素連続フロー下で行われる。好ましくは、大気圧下で行われる。
【００８９】
熱処理工程は、酸触媒の存在下または不在下で実現されうる。本明細書で用いられる場合、酸触媒とは、均一であると言われる鉱質触媒および有機触媒、たとえば、塩酸、硫酸、酢酸、またはパラトルエンスルホン酸だけでなく、好ましくは、不均一固体触媒、たとえば、シリカ、アルミナ、シリカアルミナ、ジルコニア、ゼオライト、酸性樹脂をも意味することが意図される。高い比面積、すなわち、少なくとも２００ｍ２／ｇに等しい比面積を有する酸性アルミナが、とくに選択されるであろう。本発明に係る方法を実現するのに好ましいのは、酸性アルミナ型の触媒である。
【００９０】
任意選択で熱処理を受けた濃縮物は、次いで、使用される原料のタイプに依存して、不鹸化性画分が富化された混合物の鹸化工程ｄ）および鹸化された混合物から不鹸化性画分を抽出する工程ｅ）に付されうる。アボカドの場合、とくに、工程ｄ）およびｅ）は、グリセリドを分離するために行われる。他の場合、工程ｄ）およびｅ）は、省略可能であり、（モノ）脂肪酸エステルなどの他の化合物と共に不鹸化性画分を含有する油を単離可能である。
【００９１】
鹸化は、エステルを水溶性カルボキシレートイオンおよびアルコールに変換する化学反応である。本件では、鹸化は、とくに、脂肪酸エステルを脂肪酸およびアルコールに変換し、放出されるアルコールは、主に、エステル交換を効果的にするために反応粉砕工程時に使用される軽質アルコールである。
【００９２】
鹸化工程は、アルコール媒体中、好ましくはエタノール中でカリまたはソーダの存在下で実現されうる。典型的な実験条件は、エタノールの還流下、１２Ｎカリの存在下での４時間にわたる反応を含む。この段階では、任意選択で、とくに、反応速度を向上させるためにまたは塩基性ｐＨ値の影響を受けやすい不鹸化性化合物を保護するために、有利には共溶媒を使用しうる。この共溶媒は、特定的には、テルペン（リモネン、αおよびβ−ピネンなど）、アルカン、とくにパラフィンから選択されうる。
【００９３】
その後、不鹸化性画分は、鹸化された混合物から１回以上抽出される。この工程は、好ましくは、少なくとも１種の好適な有機溶媒、すなわち、鹸化から生じるアルコール性溶液または水性アルコール性溶液と混和しない有機溶媒を利用した液液抽出により達成される。それにより、不鹸化性画分の鹸化プロセス時に形成された脂肪酸塩（石鹸）を分離することが可能である。
【００９４】
有機溶媒は、特定的には、任意選択でハロゲン化されたアルカン（とくに、石油エーテルまたはジクロロメタン）、芳香族溶媒（とくに、トリフルオロトルエン、ヘキサフルオロベンゼン）、ハロゲノアルカン、エーテル（とくに、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチル第３級ブチルエーテル、メチルテトラヒドロフラン、２−エトキシ−２−メチルプロパン）、ケトン（とくに、メチルイソブチルケトン、２−ヘプタノン）、プロピオネート（とくに、エチルプロピオネート、ｎ−ブチルプロピオネート、イソアミルプロピオネート）、ヘキサメチルジシロキサン、テトラメチルシラン、ジアセトンアルコール、１−ブトキシメトキシブタン、３−メトキシ−３−メチル−１−ブタノール（ＭＭＢ）、またはテルペンから選択される天然有機溶媒、たとえば、リモネン、αピネン、βピネン、ミルセン、リナロール、シトロネロール、ゲラニオール、メントール、シトラール、シトロネロール、または天然起源の酸素化有機誘導体、とくに、エーテル、アルデヒド、アルコール、およびエステル、たとえば、フルフラールおよびフルフロールなどから選択される合成有機溶媒でありうる。好ましくは、テルペンが選択されよう。抽出は、並流または向流の抽出カラムで、または一連のミキサー−セトラー、抽出カラム、もしくは遠心抽出器を利用して行われうる。
【００９５】
工業スケールに適合化させるために、連続抽出は、連続液液抽出用のデバイス、たとえば、パルスカラム、ミキサー−セトラー、または等価物で提供可能である。
【００９６】
抽出後、不鹸化性画分は、好ましくは、とくに、遠心分離（鹸化除去）、脱溶媒、洗浄、乾燥、濾過、および／または真空下での脱臭により精製される。より精密には、精製工程は、とくに、次のサブ工程、すなわち、
・残留石鹸を抽出するための溶媒相の遠心分離、次いで、濾過、
・アルカリ性残留痕跡物を除去するための水による、任意選択で塩化ナトリウムで飽和された水による溶媒相の洗浄、
・真空下での蒸留、水蒸留、または共沸蒸留を介する抽出溶媒の蒸発による乾燥、
・脱臭条件で、いずれの残留汚染物質も、とくに、抽出溶媒、殺有害生物剤、多環式芳香族炭化水素を抽出するための真空下での不鹸化性画分の脱臭、
の１つ以上を実現することにより行われうる。
【００９７】
本発明に係る第１の方法は、極性化合物（アボカドの場合のフラン脂質は例外で、これは特別であり、極性化合物の選択的抽出工程の後に極性前駆体からｉｎ  ｓｉｔｕで形成されたものであり、弱極性であるので、本発明に係る第１の方法により単離された不鹸化性画分中に存在する）が富化された高純度不鹸化性画分の取得を可能にする。網羅的ではないが、本方法の実現の終了時に取得される最終的に単離された画分中の不鹸化性化合物は、使用される原料の性質に依存して、任意選択でポリヒドロキシル化された脂肪アルコール、フラン脂質（アボカドの場合）、ステロールおよび非エステル化（遊離）または非グリコシル化トリテルペンアルコール、遊離およびグリコシル化ポリフェノール、遊離または硫酸化コレステロール、リグナン、ホルボールエステル、トリテルペン酸（たとえば、ウルソール酸）、極性テルペン（アルコール官能基を有するモノ、ジ、およびセスキテルペン）、アルカロイド、ポリコサノール、リモノイド、遊離形のキサントフィル（ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン）、ゴシポール、カランジン、シザンドリン、アザジラクチン、補酵素Ｑ１０、アフラトキシンとくにＢ１およびＢ２、イソフラボン、カフェイン、テオブロミン、ヨヒンビン、シリマリン、ルペオール、アルセトインでありうる。
【００９８】
一般的には、これらのさまざまな工程（なかでもとくに工程ｄ）およびｅ））の後で得られるアボカド不鹸化物の平均組成は、不鹸化物の全重量を基準にした重量パーセントで表した場合、以下のようになる。
・フラン脂質  ５０〜７５％
・ポリヒドロキシル化脂肪アルコール  ５〜３０％
・スクアレン  ０．１〜５％
・ステロール  ０．１〜５％
・その他  ０〜１５％
【００９９】
本発明によれば、記載したように取得された不鹸化性物質は、次いで、それらの純度をさらに向上させるために、蒸留の（第２の）工程、好ましくは分子蒸留、好ましくは１００〜１６０℃、より好ましくは１００〜１４０℃の範囲内の温度で、好ましくは１０−３〜５・１０−２ｍｍＨｇの範囲内の圧力下で行われる分子蒸留に付されうる。他の実施形態によれば、設定温度は、１３０〜１６０℃でさまざまに設定される。
【０１００】
この蒸留のために選択される温度および圧力は、回収される留出物の形成に影響を及ぼす。たとえば、この（第２の）蒸留は、アボカドの場合、主にアボカドフラン脂質を含む留出物の取得を可能にしうるとともに、その純度は、蒸留温度を１００〜１４０℃でさまざまに設定した場合、９０重量％超でありうる。蒸留温度が１３０〜１６０℃でさまざまに設定される場合、一般的には、主にアボカドフラン脂質およびそれほどでもないがアボカド由来ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを含む留出物が取得され、その合計は、９０重量％を超えうる。
【０１０１】
したがって、本発明に係るこの第１の方法は、アボカドフラン脂質だけでなく、所望により、アボカドポリヒドロキシル化脂肪アルコールの選択的抽出の提供も可能にする。
【０１０２】
さらに、本方法の実現の終了時に取得される非極性溶媒相から単離された画分中の不鹸化性化合物は、使用される原料の性質に依存して、最終的に、ステロールエステル、エステル化トリテルペンアルコール、コレステロールエステル、トコフェロール（および対応するトコトリエノール）、セサモリン、セサミン、ステレン、スクアレン、パラフィン炭化水素、弱極性〜非極性テルペン（アルデヒドおよび／またはケトン官能基を有するモノ、ジ、およびセスキテルペン）、エステル化キサントフィル（ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン）、カロテノイド型顔料（β−カロテン、リコペン）、ワックス、カルシフェロール、コレカルシフェロール、ポンガモールでありうる。
【０１０３】
次に、本発明に係る第１の方法と比較して差異を本質的に説明することにより、本発明に係る第２の方法を提示する。本発明に係る第１の方法の説明は、両方の方法に共通するすべての他の特性に関して、参照可能であることに留意すべきである。
【０１０４】
本発明に係る第２の方法で使用される再生可能原料は、とくに限定されるものではなく、任意選択で、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により官能基化された脂質成分を含む。それらは、必然的に、以上に挙げた官能基のいずれかにより（または少数のこれら官能基により）官能基化されていない脂質成分を含み、これらの成分は、自然界で最も一般的に遭遇するものである。
【０１０５】
この方法は、再生可能原料の脱水および任意選択の調整の第１の工程ａ）を含む。脱水および調整は、必ずしも８０℃または７５℃以下の温度で行われるとはかぎらない。前記温度は、好ましくは−５０℃以上である。加熱プロセスが提供される場合、温度は、一般的には５０〜１２０℃、より好ましくは７５〜１２０℃でさまざまに設定される。
【０１０６】
第１の方法に関しては、脱水は、調整（仮に行うのであれば）の前または後で実現されうる。それは、好ましくは、８〜３６時間継続する。
【０１０７】
再生可能原料は、任意選択で、反応粉砕の工程ｂ）の前または工程ｂ）時、好ましくは工程ａ）の前、工程ａ）時、または工程ａ）と工程ｂ）との間に、７５℃以上、好ましくは８０℃以上の温度で、とくに仏国特許第２６７８６３２号明細書に記載の熱処理に付される（このことは、とくにアボカドの場合にあてはまる）。最も好ましくは、原料の熱処理および脱水は、同時に行われ、単一工程を形成する。
【０１０８】
アボカドの場合、あらかじめ調整および／または脱水が行われたまたは行われていない７５℃以上での原料のこの熱処理工程は、必須である。記載の第１の方法に関しては、それは、フラン脂質前駆体からフラン脂質への環化を促進することが意図される。そのような処理の持続時間は、使用される加熱方法に依存して、一般的には８〜３６時間でさまざまに設定される。処理のために設定される温度は、一般的には１５０℃以下、好ましくは１２０℃以下である。有利には、熱処理は、不活性雰囲気下で、とくに窒素連続フロー下で行われる。好ましくは、大気圧下で行われる。
【０１０９】
脱水および任意選択で調整した後、原料は、少なくとも１種の軽質アルコールを含む少なくとも１種の極性有機溶媒と、前記軽質アルコールと混和しない少なくとも１種の非極性共溶媒と、少なくとも１種の触媒と、の存在下で、反応粉砕の工程ｂ）に付される。第１の方法と同様に、これらの溶媒および共溶媒は、無水であってもそうでなくてもよく、抽出溶媒混合物に水を添加してもよい。
【０１１０】
この工程は、一方では、脱水された原料から脂肪とくに油を抽出すること、および同時にそれをエステル交換すること、他方では、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基を少しも含有しない（またはほとんど含有しない）脂質成分が富化された画分と、とくに、１個以上のヒドロキシル（好ましくは脂肪族）、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により官能基化された極性脂質成分が富化された画分と、を単離すること、を可能にする。
【０１１１】
非極性共溶媒を添加すると、不均一媒体および２つの脂質相の形成が促進される。それらの組成は、かなり異なる。一方では、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基により官能基化されていない脂質成分が、好ましくは、非極性相に見いだされるであろう。他方では、とくに、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により官能基化された最も極性の高い脂質成分が、好ましくは、極性相（軽質アルコール）に見いだされるであろう。
【０１１２】
この工程は、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により少しも官能基化されていない（または少なくともほとんどされていない）非極性または弱極性の脂質成分（不鹸化性または鹸化性）の選択的抽出を可能にする。これらは、エステル交換反応後に媒体中に存在する１個以上、好ましくは数個のこれら官能基（たとえばポリオール）を含む脂質成分混合物から分離される。
【０１１３】
使用される原料のタイプに依存して、非極性またはわずかに弱極性のこれらの脂質成分は、限定されるものではないが、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基を少しも含有しない脂肪酸エステル（アボカドの場合、フラン脂質前駆体は、反応粉砕工程の開始前にすでにフラン脂質に変換され、これらのフラン脂質は、ヒドロキシル化されていない）、弱極性アルコール、たとえば、トコフェロール、スクアレン、キサントフィル、およびエステル化ステロールでありうる。
【０１１４】
工程ｂ）は、原料からトリグリセリドおよび他の脂質成分を抽出することと、前記トリグリセリドをエステル交換して、とくに、脂肪酸エステル、グリセロール、天然不鹸化性画分（この工程により修飾されない）、および油粕を含む混合物の形成をもたらすことと、を可能にするのに十分な温度、撹拌、および持続時間の条件下で行われる。この工程ｂ）は、第１の方法のものとは対照的に、温度に関して制限されることなく行われる。すなわち、いかなる場合においても７５または８０℃を超えうる。工程ｂ）は、一般的には、室温で行われるが、４０〜１００℃の範囲内の温度で加熱プロセスを実現することによっても行われうる。
【０１１５】
（反応粉砕条件で）軽質アルコールと混和しない非極性共溶媒は、好ましくは、とくに、１個以上のヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、またはアミンの官能基により官能基化された、抽出されない脂質成分が、そのような共溶媒に可溶でないように、選択される。それらの化学的性質を考慮すると、これらの官能基化脂質成分は、必然的に、あまり可溶でない（好ましくは可溶でない）非極性溶媒相よりも軽質アルコール相と強い親和性を有するであろう。
【０１１６】
反応粉砕工程は、一方では、２つの非混和性液体脂質相、グリセロール、他方では、溶媒含有油粕の回収を可能にする（とくに、濾過および軽質アルコールなどの溶媒を用いた油粕の洗浄の後）。とくに、ヒドロキシル基（好ましくは脂肪族）および／またはエポキシド基により官能化された脂質、たとえば、ポリヒドロキシル化脂肪アルコールが可溶である極性相（Ａと記されるアルコール相）は、非極性相から分離される。前記非極性相はさらに、とくに高い割合で脂肪酸エステルを含有する。種々の画分の分離は、さまざまな方法により、とくに、遠心分離、デカンテーション、および／または蒸留により、行われうる。
【０１１７】
たとえば、極性溶媒相は、真空下および好適な温度で行われる溶媒蒸発工程に付されうる。次いで、蒸発溶媒は、リサイクルのために凝縮される。次いで、デカンテーション（続いて、水による洗浄操作を行ってまたは行わずに）によりグリセロールから分離した後、主にアルキルエステルおよび不鹸化性（または鹸化性）極性化合物で構成される極性相（相Ａ）は、一方では精製エステル（留出物中）、他方では極性副次化合物が富化された蒸留残渣を取得するために、分子蒸留に組み込まれる。これらの本質的に不鹸化性の化合物の抽出は、当業者に公知の方法に従って行われる。たとえば、次のシーケンス、すなわち、１）アルキルエステルの鹸化、２）石鹸からの不鹸化性化合物の分離を可能にする液液抽出、３）不鹸化性物質が富化された溶媒相の脱溶媒、４）不鹸化性物質の最終精製、が行われる。さらなる選択肢は、相Ａを直接鹸化すること、および１）石鹸からの不鹸化性化合物の分離を可能にする液液抽出、２）不鹸化性物質が富化された溶媒相の脱溶媒、３）不鹸化性物質の最終精製により本質的に極性不鹸化性の化合物を抽出することである。
【０１１８】
非極性共溶媒は、ヒドロキシル、エポキシド、ケトン、チオール、アルデヒド、エーテル、およびアミンの官能基を少しも含有しない（またはほとんど含有しない）（不鹸化性または鹸化性）脂質が富化された非極性相から、とくに減圧下で、蒸発される。取得された脂質生成物は、好ましくは酸を介して、中和工程に付され（非極性共溶媒の蒸発の前または後、好ましくは前）、次いで、一方では残留グリセロールおよび他方では脂質相の回収を可能にするデカンテーションまたは遠心分離の工程および／または濾過の工程に付されうる。次いで、残留脂質相は、水で洗浄され、真空下で乾燥されうる。
【０１１９】
次いで、得られた脂質相（典型的には、アルキルエステルを含有し、かつ、非極性不鹸化性（またはそうでない）化合物が富化された相）は、不鹸化性画分が富化された混合物を取得するために濃縮の工程ｃ）に付される。第１の方法に関しては、好ましい濃縮方法は、分子蒸留である。
【０１２０】
蒸留は、一般的には、脂肪酸の高純度のエステル（典型的にはアルキルエステル）を含む軽質画分（第１の留出物）と、無視できない量で存在する脂肪酸のエステル（典型的にはアルキルエステル）に希釈された不鹸化性画分を含む少なくとも１種のより重質の画分（第２の留出物または残渣）と、の取得を可能にする。
【０１２１】
アボカドの場合、不鹸化性画分が富化された（かつ脂肪酸エステルが枯渇した）濃縮物は、この段階で、脂肪酸モノエステルよりも揮発性の低いフラン脂質（一般的には約１０〜１５重量％を示す）で含有する。これらのフラン化合物は、本質的に脂肪酸エステルを含む軽質画分中に痕跡物として存在するにすぎない。
【０１２２】
次いで、濃縮物は、任意選択で、不鹸化性画分が富化された混合物を鹸化する工程ｄ）および鹸化された混合物から不鹸化性画分を抽出のする工程ｅ）に付される。抽出後、不鹸化性画分は、好ましくは、本発明に係る第１の方法に記載のものと同一の方法を用いて精製される。
【０１２３】
本発明に係る第２の方法は、弱極性または非極性の化合物が富化された非常に純粋な不鹸化性画分の取得を可能にする。網羅的ではないが、そのような方法の実現の終了時に取得される最終的に単離された画分中の不鹸化性化合物は、使用される原料の性質に依存して、フラン脂質（アボカドの場合）、ステロールエステル、エステル化トリテルペンアルコール、コレステロールエステル、トコフェロール（および対応するトコトリエノール）、セサモリン、セサミン、ステレン、スクアレン、パラフィン炭化水素、弱極性〜非極性テルペン（アルデヒドおよび／またはケトン官能基を有するモノ、ジ、およびセスキテルペン）、エステル化キサントフィル（ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン）、カロテノイド型顔料（β−カロテン、リコペン）、ワックス、カルシフェロール、コレカルシフェロール、ポンガモールでありうる。
【０１２４】
一般的には、これらのさまざまな工程（なかでもとくに工程ｄ）およびｅ））の後で得られるアボカド不鹸化物の平均組成は、不鹸化物の全重量を基準にした重量パーセントで表した場合、以下のように与えられる。
・フラン脂質  ６０〜８０％
・スクアレン  １〜７％
・その他  ５〜２０％（炭化水素、トコフェロール、脂肪ケトン、重質色素…）
・ポリヒドロキシル化脂肪アルコール  ０．１〜１０％。
【０１２５】
本発明によれば、記載したように取得された不鹸化性物質は、次いで、それらの純度をさらに向上させるために、蒸留の（第２の）工程、好ましくは分子蒸留、好ましくは１００〜１６０℃、より好ましくは１００〜１４０℃の範囲内の温度で、好ましくは１０−３〜５・１０−２ｍｍＨｇの範囲内の圧力下で行われる分子蒸留に付されうる。この（第２の）蒸留は、アボカドの場合、主にアボカドフラン脂質を含む留出物の取得を可能にするとともに、その純度は、９０重量％超でありうる。
【０１２６】
したがって、本発明に係るこの第２の方法は、反応粉砕工程時に極性相に抽出されたアボカド由来ポリヒドロキシル化脂肪アルコールを除いて、アボカドフラン脂質の選択的抽出の達成を可能にする。
【０１２７】
さらに、そのような方法の実現の終了時に取得される極性溶媒相から単離された画分中の不鹸化性化合物は、使用される原料の性質に依存して、最終的に、任意選択でポリヒドロキシル化された脂肪アルコール、フラン脂質（アボカドの場合）、ステロールおよび非エステル化（遊離）または非グリコシル化トリテルペンアルコール、遊離およびグリコシル化ポリフェノール、遊離または硫酸化コレステロール、リグナン、ホルボールエステル、トリテルペン酸（たとえば、ウルソール酸）、極性テルペン（アルコール官能基を有するモノ、ジ、およびセスキテルペン）、アルカロイド、ポリコサノール、リモノイド、遊離形のキサントフィル（ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン）、ゴシポール、カランジン、シザンドリン、アザジラクチン、補酵素Ｑ１０、アフラトキシンとくにＢ１およびＢ２、イソフラボン、カフェイン、テオブロミン、ヨヒンビン、シリマリン、ルペオール、アルセトインでありうる。
【０１２８】
本発明は、油または脱臭排出物からの抽出に使用される伝統的な既存の方法と比較して、多くの長所を有する。まず最初に、本発明に係る方法は、伝統的方法の実質的投資を必要としないので、経済的である。投資に関して、本発明に係る方法は、スクリュープレスやヘキサン抽出器のような機械粉砕ツールおよび精製ツール（粘液除去、中和）の回避を可能にする。さらに、機械粉砕またはヘキサンを用いた蒸発粉砕および精製とは対照的に、本発明に係る反応粉砕は、高エネルギー消費を必要としない。さらに、それは、粗油の精製操作よりも低い淡水消費を必要とする。
【０１２９】
それに加えて、本発明は、本発明に係る方法の実現により高付加価値の共生成物、たとえば、
・化粧品または医薬品に直接利用可能な高純度のエステル、一般的にはアルキルエステル（トリグリセリド含有混合物の蒸留工程を必要とする先行技術の方法とは対照的であり、そのような蒸留は、エステル交換から得られるトリグリセリドよりも軽質の脂肪酸モノエステルを含有する混合物に関連する本発明で任意選択で使用されるものよりも高い温度を必要とするので、強着色油を生成して、精製が困難である）、
・化粧品、医薬品、衛生品、抗ゲル流体などの多くの用途を有するグリセロール、
・任意選択で初期バイオマス中に存在する毒性化合物または抗栄養化合物が除去されたかつ動物飼養またはヒト栄養に直接利用可能な油粕、または興味深いオリゴペプチドおよび／またはオリゴ糖の供給源の油粕、
・化粧品、医薬品、ならびに動物飼養およびヒト栄養に利用可能な多糖およびポリフェノール、
がもたらされるので、共利用に関して非常に興味深い。
【０１３０】
経済および環境の観点から、本発明に係る方法は、現在の方法とは対照的に、果実のほぼ１００％の再使用、したがって、バイオマスさらには耕作地の節約を可能にするだけでなく、上流の農業者から下流のユーザーまでの前記不鹸化性物質の全価値連鎖の向上も可能にする。最後に、それらは、多くの用途で、とくに、エネルギー目的および産業目的で開発されつつある今日のバイオリファイナリーモデルの基本原理を重視している。
【０１３１】
本発明に係る方法により取得される不鹸化性画分は、処理前に原料中に存在する不鹸化物に近いさらには類似した組成を共有する。
【０１３２】
有利には、本発明に係るこれらの不鹸化性画分およびこれらの共生成物は、残留毒性溶媒を少しも含んでいないので、伝統的方法から得られる生成物と比較して、かなり良好な規制上の安全性および許容性を有する。これらの特定の特徴があるため、本発明に係る方法により取得される不鹸化性画分および／または提供される共生成物は、ヒトおよび／または動物のための化粧品、薬剤、食品組成物、または食品サプリメントもしくは添加物における使用をより適合化させることが可能である。
【０１３３】
同様に、本発明に係る方法によれば、植物または動物のバイオマス中に存在しうる汚染物質、すなわち、多環式芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、殺有害生物剤、ポリクロロビフェニル（ＰＣＢ）、ジオキシン、臭素化遅炎剤、医薬品などを、それらの極性に依存して、分離および／または濃縮することが可能になろう。
【０１３４】
本発明に係る方法により取得されるアボカド不鹸化性画分は、たとえば、関節疾患、より特定的には骨関節炎を治療するためのおよび関節炎（すなわち、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライム病、および／または任意の他のタイプの関節炎）を治療するための薬剤を調製するためにとくに使用されうる。こうして調製された薬剤は、歯周病の治療、とくに歯周炎の治療が意図されうる。この薬剤はさらに、骨粗鬆症の治療用でありうる。さらに、この薬剤は、ＮＧＦ（神経成長因子）により誘導される神経細胞分化をモジュレートすることが意図されうる。最後に、この薬剤は、特定的には外皮適用の枠内で、組織とくに皮膚組織を修復することが意図されうる。
【０１３５】
本発明に係る方法から得られるアボカド不鹸化性画分はまた、賦形剤および／または化粧上許容可能な媒体の存在下で、皮膚、近接粘膜、および／または角質化皮膚付属器（老化、瘢痕…）の、毛細繊維または毛乳頭の化粧処理を行うための化粧組成物とくに皮膚化粧品でも利用されうる。
【０１３６】
同様に、本方法の共生成物、たとえば、タンパク質および炭水化物は、それらの性質に依存して、そのまままたは変換後、医薬品、化粧品、およびヒト栄養または動物飼養の用途に使用するための活性成分または賦形剤の生成をもたらしうる。
【実施例】
【０１３７】
アボカドからの不鹸化性化合物の選択的抽出
４０ｋｇのホールハス（Ｈａａｓ）アボカドを最大０．５ｃｍ厚さのスライスにカットする（核が含まれる）。次いで、２０ｋｇのそのようなスライスを７０℃の通気乾燥オーブンで１６時間乾燥させる（バッチＡ）。結果として、乾燥の後、１２５４ｇの乾燥アボカドが得られる。
【０１３８】
２％の残留湿分を達成するように、他の２０ｋｇを９０℃で１６時間乾燥させる（バッチＢ）。結果として、乾燥の後、１３２７ｇの乾燥アボカドが得られる。
【０１３９】
次いで、標準方法（ＮＦ  ＥＮ  ＩＳＯ６５９）に準拠して、ホモジネートＡおよびＢ中の脂質の量を決定する。
【０１４０】
次いで、バッチＡを以下の作用に付す。
１）粗粉末を粉砕する（直径０．３〜０．８ｃｍの範囲内の粒子サイズ）。
２）ホモジネートを充填床パーコレーションカラムに導入する（１１００ｇ）。
３）次いで、二相溶媒混合物エタノール（１１００ｇ）／ヘキサン（１１００ｇ）および触媒としての３．６ｇのカセイソーダフレーク（エタノールに事前に溶解されたソーダ）をフレーク床に４０℃で３０分間送る。
４）次いで、二相ミセラ（液固抽出から生じる溶媒相）を取り出す。次いで、４０℃のエタノール／ヘキサン混合物を用いた５回の逐次洗浄操作を介してフレーク床を洗浄する（５分間／洗浄）。
５）次いで、エタノール相とヘキサン相とを分離するために、二相ミセラを遠心分離する。次いで、両方の回収された有機相の溶媒を２０ｍｂａｒの真空下９０℃で２０分間蒸発させる。次いで、単純遠心分離により脂質相抽出エタノールからグリセロールを分離する。
６）不溶性ガム（プロセス時にフレークから抽出された油不溶性生成物）を伴ってまたは伴わずにそれらのそれぞれの溶媒（エタノールまたはヘキサン）の蒸発後に得られた脂質を、熱水添加および遠心分離により中性になるまで洗浄する。最後に、２０ｍｂａｒの真空下９０℃で５分間乾燥させる。結果として、それぞれ、４１２ｇのエタノール相由来の脂質および１７６ｇのヘキサン相由来の脂質が取得される。
【０１４１】
次いで、ヘキサン相の脂質は、以下のように分析される。
・鹸化価（方法ＮＦ  ＩＳＯ３６５７）：１８６．４ｍｇＫＯＨ／ｇ
・酸価（方法ＮＦＴ  ６０−２０４）：２．１ｍｇＫＯＨ／ｇ
・不鹸化物含有率（抽出溶媒としてジクロロエタンを用いるように変更を加えた方法ＮＦ  ＩＳＯ３５９６）：０．３２％。
【０１４２】
脂質は、わずかな痕跡量のアボカドポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよびフラン前駆体を含有するにすぎないことが、薄層クロマトグラフィー分析から示唆される。
【０１４３】
結果として、本方法は、実際に、アボカド不鹸化性極性化合物が枯渇した非極性脂質相の形成をもたらす。
【０１４４】
次いで、エタノール相から得られた脂質をディーンスターク付きのフラスコ内で１２０℃で１２時間加熱する。この熱処理の後、脂質は、アボカドフラン化合物およびポリヒドロキシル化脂肪アルコールを多量に含むことが、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析から示唆される。これらの化合物は、ＴＬＣに特異的なスポットを有する。
【０１４５】
エタノール相の脂質は、分析により以下のように分析される。
・鹸化価（方法ＮＦ  ＩＳＯ３６５７）：１７１．１ｍｇＫＯＨ／ｇ
・酸価（方法ＮＦＴ  ６０−２０４）：３．３ｍｇＫＯＨ／ｇ
・不鹸化物含有率（抽出溶媒としてジクロロエタンを用いるように変更を加えた方法ＮＦ  ＩＳＯ３５９６）：６．１％。
【０１４６】
分析キャラクタリゼーションを考慮すると、実現された抽出方法は、実際に、卓越した収率（４％よりもかなり高い不鹸化物含有率）を伴って、乾燥アボカド不鹸化性極性化合物の選択的抽出を可能にする（ポリヒドロキシル化脂肪アルコールおよび熱処理から生じるフラン前駆体の環化に由来するフラン脂質に特異的なＴＬＣスポット）。
【０１４７】
次いで、国際公開第２０１１／０４８３３９号パンフレットの実施例番号２と同一のプロトコルに従って、不鹸化性画分を洗浄し、乾燥させ、分子蒸留により濃縮し、鹸化し、抽出し、そして精製する。
【０１４８】
不鹸化性物質のＴＬＣ分析から、フラン脂質（非常に強いスポット）、ヒドロキシル化脂肪アルコール（より弱いスポット）、およびフィトステロール（弱いスポット）に特異的なスポットが明らかにされる。
【０１４９】
次いで、バッチＢを以下の作用に付す。
１）粗粉末を粉砕する（直径０．３〜０．８ｃｍの範囲内の粒子サイズ）。
２）ホモジネートを充填床パーコレーションカラムに導入する。
３）次いで、二相溶媒混合物エタノール（１１００ｇ）／ヘキサン（１１００ｇ）および触媒としての３．６ｇのカセイソーダフレーク（エタノールに事前に溶解されたソーダ）をフレーク床に４０℃で３０分間送る。
４）次いで、二相ミセラ（液固抽出から生じる溶媒相）を取り出す。次いで、４０℃のエタノール／ヘキサン混合物を用いた５回の逐次洗浄操作を介してフレーク床を洗浄する（５分間／洗浄）。
５）次いで、エタノール相とヘキサン相とを分離するために、二相ミセラを遠心分離する。次いで、両方の回収された有機相を２０ｍｂａｒの真空下９０℃で２０分間蒸発させる。次いで、単純遠心分離により抽出エタノール脂質相からグリセロールを分離する。
６）不溶性ガム（プロセス時にフレークから抽出された油不溶性生成物）を伴ってまたは伴わずにそれらのそれぞれの溶媒（エタノールまたはヘキサン）の蒸発後に得られた脂質を、熱水添加および遠心分離により中性になるまで洗浄する。最後に、２０ｍｂａｒの真空下９０℃で５分間乾燥させる。結果として、それぞれ、４１２ｇのエタノール相由来の脂質および１７６ｇのヘキサン相由来の脂質が取得される。
【０１５０】
次いで、ヘキサン相の脂質は、以下のように分析される。
・鹸化価（方法ＮＦ  ＩＳＯ３６５７）：１７９．５ｍｇＫＯＨ／ｇ
・酸価（方法ＮＦＴ  ６０−２０４）：０．９ｍｇＫＯＨ／ｇ
・不鹸化物含有率（抽出溶媒としてジクロロエタンを用いるように変更を加えた方法ＮＦ  ＩＳＯ３５９６）：５．３％。
【０１５１】
ヘキサン相の脂質は、主に、いくつかの痕跡量のポリヒドロキシル化脂肪アルコールを伴ってフラン脂質から形成されることが、薄層クロマトグラフィー分析から示唆される。
【０１５２】
結果として、本方法は、実際に、フラン脂質が富化されたかつポリヒドロキシル化脂肪アルコールなどのアボカド不鹸化性極性化合物が枯渇した非極性脂質相の形成をもたらす。
【０１５３】
エタノール相から得られる脂質は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により分析される。この相は、多量のアボカドポリヒドロキシル化脂肪アルコール、さらには痕跡物としてフラン脂質を含有することが、そのような分析から示唆される。
【０１５４】
エタノール相の脂質は、分析により以下のように特徴付けられる。
・鹸化価（方法ＮＦ  ＩＳＯ３６５７）：１７６．１ｍｇＫＯＨ／ｇ
・酸価（方法ＮＦＴ  ６０−２０４）：３．１ｍｇＫＯＨ／ｇ
・不鹸化物含有率（抽出溶媒としてジクロロエタンを用いるように変更を加えた方法ＮＦ  ＩＳＯ３５９６）：１．２％。
【０１５５】
分析キャラクタリゼーションを考慮すると、実現された抽出は、実際に、乾燥アボカド不鹸化物からの極性化合物の選択的抽出を可能にする（ポリヒドロキシル化脂肪アルコールに特異的なＴＬＣスポット）。
【０１５６】
次いで、国際公開第２０１１／０４８３３９号パンフレットの実施例番号２と同一のプロトコルに従って、ヘキサン相から得られた脂質の不鹸化性画分を洗浄し、乾燥させ、分子蒸留により濃縮し、鹸化し、抽出し、そして精製する。
【０１５７】
得られた不鹸化性物質のＴＬＣ分析から、フラン脂質（非常に強いスポット）、ヒドロキシル化脂肪アルコール（非常に弱いスポット）、およびフィトステロール（非常に弱いスポット）に特異的なスポットが明らかにされる。
【０１５８】
次いで、乾燥果実のバッチＡおよびＢの変換から得られた溶媒含有油粕を７０℃の乾燥オーブンで１６時間脱溶媒する。脂質中のそれらのそれぞれの含有率は、規格ＮＦ  ＥＮ  ＩＳＯ６５９に記載の方法を用いて決定した場合、以下のとおりである。
・油粕バッチＡ：０．７％／乾物
・油粕バッチＢ：０．６％／乾物
【０１５９】
結果として、本方法は、脱脂質化された、したがって、タンパク質および多糖が富化された油粕の生成をもたらし、これは、活性成分および／もしくは賦形剤の供給源であるか、またはヒト栄養および動物飼養の用途でそのままでも使用されうる。
【国際調査報告】
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