(57)【要約】  本発明は、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、仮骨延長術、骨切り術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態を有する対象において骨成長を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む組成物の投与を利用する、方法を提供する。さらに提供されるのは、前記骨の状態において骨成長を促進する際に使用されるための、経口投与可能な医薬組成物である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、仮骨延長術、骨切り術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態を有する対象において骨成長を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む組成物の有効量を、前記対象に経口投与することを含む、方法。
【請求項２】
約０．５〜約１．５ｍｍ／日の骨成長速度を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記骨の状態後の機能的転帰の向上をさらに提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記骨の状態が、前記仮骨延長手順を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が、仮骨延長手順の待機期、仮骨延長手順の延長期、仮骨延長手順の緻密化期、またはそれらの任意の組み合わせの間に投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が、前記仮骨延長手順の施術から少なくとも２日後に投与が開始される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
骨延長後に骨緻密化を促進することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記骨の状態が、オッセオインテグレーション手順を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が、前記オッセオインテグレーション手順のインプラント挿入段階の後、前記オッセオインテグレーション手順のアバットメント挿入段階の後、またはそれらの組み合わせの後に投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記オッセオインテグレーション手順が、歯科インプラントの一体化を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記病的骨折が、骨粗しょう症、骨軟化症、悪性腫瘍、多発性骨髄腫、先天性骨形成不全、骨嚢胞、化膿性骨髄炎、大理石骨病、栄養障害またはそれらの組み合わせに関連する骨折を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記外部力による骨折が、非癒合骨折、変形癒合骨折、または遷延治癒骨折を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物は、１日あたり少なくとも１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物が、ＡＣＣ約０．５〜約５ｇの日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥおよびビタミンＫからなる群から選択されるビタミン類と併せて投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記安定化剤が、有機酸、リン酸化有機酸、ヒドロキシカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、リン酸化アミノ酸およびそれらの誘導体、ヒドロキシル基含有有機化合物、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、高齢者、喫煙者、糖尿病患者、骨粗しょう症患者；タンパク質栄養障害に罹った対象；ならびにコルチコステロイド、化学療法剤、非ステロイド系抗炎症薬、抗生物質、抗凝固剤、および骨溶解活性を低下させる薬剤を摂っている対象を含む、骨折治癒不良になり易い集団からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、仮骨延長術、骨切り術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態の処置において骨成長を促進する際に使用されるための、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む経口投与可能な医薬組成物。
【請求項１９】
約０．５〜約１．５ｍｍ／日の骨成長速度を提供するように適合されている、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２０】
前記仮骨延長手順において使用されるための、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２１】
前記骨延長手順の骨延長期の後に骨緻密化を促進する際に使用されるための、請求項２０に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２２】
前記オッセオインテグレーション手順において使用されるための、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２３】
前記オッセオインテグレーション手順が、歯科インプラントの一体化を含む、請求項２２に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２４】
前記少なくとも１種の安定化剤が、有機酸、リン酸化有機酸、ヒドロキシカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、リン酸化アミノ酸およびそれらの誘導体、ヒドロキシル基含有有機化合物、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２５】
前記リン酸化アミノ酸が、オリゴペプチドまたはポリペプチド中に存在する、請求項２４に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２６】
前記リン酸化アミノ酸が、ホスホセリンおよびホスホトレオニンから選択される、請求項２５に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２７】
前記安定化剤が、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、および多糖類から選択されるヒドロキシル基含有有機化合物である、請求項２４に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２８】
前記安定化剤が、さらに少なくとも１種のアルカリ水酸化物と併せて、ヒドロキシル基含有有機化合物を含む、請求項２４に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項２９】
前記安定化剤が、カルボン酸である、請求項２４に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項３０】
前記安定化剤が、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２９に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項３１】
前記ＡＣＣが、単離された甲殻類の胃石から得られる、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項３２】
担体、佐剤、希釈剤、または賦形剤をさらに含む、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項３３】
ＡＣＣ約０．５〜約５ｇの日用量を含む、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項３４】
カルシウム元素約０．１〜約１．５ｇの日用量を含む、請求項１８に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項３５】
外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、仮骨延長術、骨切り術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態の処置において骨成長を促進する際の、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む経口投与可能な医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、骨成長および骨折修復を促進するための組成物および方法に関する。本発明の経口投与可能な組成物は、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む。詳細には該組成物は、手術により行われた骨折を処置するのに有用である。
【背景技術】
【０００２】
背景
骨折は、骨の連続性に破断が存在する医学的状態である。骨折は、激しい衝突もしくはストレスの結果、生じる場合もあり、または骨粗しょう症もしくは骨癌など骨を脆弱化させる特定の医学的状態の結果生じる些細な損傷により起こり得る。骨は、小さな応力または歪みを繰り返した結果、破砕する可能性もある。このタイプの骨折は、疲労骨折として公知であり、スポーツ選手によく見られる。
【０００３】
骨折は、例えば整形外科術の際の骨切開により、意図的に実施される場合がある。骨切開を含む複数の手術が、広範囲で用いられている。例えば砕骨術は、変形を矯正するために、例えば骨折後に屈曲した状態で治癒した骨を真っ直ぐにするために、実施される意図的な破砕術である。骨切り術は、骨を切断して短縮する、延長する、またはアライメントを変更する手術である。それは、内反股、外反膝、内反膝、および顎顔面変形など、筋骨格の変形を矯正するために実施される。骨切り術は、骨切開、骨延長、および延長された骨のさらなる緻密化を含む仮骨延長術の一部でもある。
【０００４】
骨折の修復には、細胞および組織の増殖および分化の複雑な工程が含まれる。増殖因子、炎症性サイトカイン、抗酸化物質、骨を破壊する細胞（破骨細胞）および骨を構築する細胞（骨芽細胞）、ホルモン、アミノ酸、ならびに無数の栄養素をはじめとする多くの担い手が含まれる。
【０００５】
骨折の自然治癒工程は、３つの段階に分別することができる。
１．炎症期  −  骨折の直後に、血塊が形成し、創傷領域に炎症浄化細胞が流入する。この後、サイトカインカスケードが起こり、修復細胞が骨折間隙に入る。これらの細胞は直ちに、新しい骨組織（骨芽細胞）および新しい軟骨（軟骨芽細胞）を構築する専門の細胞に分化し始める。その後の数ヶ月にわたり、これらの細胞が修復工程を開始し、新しい骨基質および軟骨を定着させる。この初期段階で、破骨細胞が溶解し、骨片をリサイクルする。新しい骨材料を骨芽細胞により定着させる工程は、骨形成または骨化と呼ばれる。
２．修復期  −  この工程は、骨折の約２週間後に始まる。この段階では、骨芽細胞および軟骨芽細胞により産生されたタンパク質が、ソフトカルスとして知られるものに緻密化し始める。骨が６〜１２週間かけて互いに織り込まれると、この柔らかく新しい骨物質は、最後にはハードカルスに硬化する。
３．リモデリング期  −  この段階では、仮骨が成熟し始め、仮骨自身をリモデリングする。織り込まれた骨は、骨形成細胞である骨芽細胞と骨再吸収細胞である破骨細胞の両方の組織的作用によって、より強固な層状骨にリモデリングされる。
【０００６】
骨形成を含む別の生物学的工程が、オッセオインテグレーションである。オッセオインテグレーションは、生育している骨と耐荷重性人工インプラントの表面との直接の構造的および機能的接合を指す。オッセオインテグレーション手順は、整形外科および歯科での用途に広く使用される、極ありふれた通常の処置モダリティである。最も一般的なオッセオインテグレーション手順は、歯科インプラントの分野で用いられる。オッセオインテグレーション工程の更なる適用例には、整形外科補綴物または顔面エピテーゼの固着、および膝または関節置換術がある。オッセオインテグレーション手術は、二段階で実施され、各段階の後に長期の待機時間を含む。オッセオインテグレーション工程全体は、典型的には１２ヶ月かかるが、骨の性質が弱い一部の患者では、最長で１８ヶ月のより長い総リハビリテーション時間が必要となる。
【０００７】
幾つかのタイプの集団は、骨治癒不良になり易い。コルチコステロイド、化学療法剤、非ステロイド系抗炎症薬、抗生物質、抗凝固剤、および骨溶解活性を低下させる薬剤など、複数の薬剤の使用が、骨治癒に影響を及ぼすことが示された［Ｉ．  Ｐｏｕｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｊｕｒｙ  ２００８  ３９：３８４−３９４］。十分な血液供給もまた、骨折治癒に必須であるため、喫煙などの血流を減少させる行為は、治癒工程を遅延させる。骨折治癒工程は、糖尿病によっても影響を受ける［Ｄ．Ｔ．  Ｇｒａｖｅ  ｅｔ  ａｔ．，  ＪＥＣＭ，  ２０１１  ３  （１）：３−８］。さらに、高齢患者は、骨折治癒不全が起こり易い［Ｒ．  Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．  ２００６  ４１（１１）：１０８０−９３］。
【０００８】
骨治癒は、自然な工程である。骨折の処置は、治癒後に損傷部分が最良に可能な機能を確保することを目的としている。骨折の処置は、手術または保存に大きく分類される。骨折は、典型的には骨の破片を自然な位置に戻し（必要に応じて）、骨が治癒する際にその位置を維持させることにより処置される。骨折した患肢は通常、骨を適所に保持して骨折部上下の関節を固定する石膏またはファイバーガラスのギプスまたは副木で固定される。指などの小さな骨は、健常な隣の指に包帯で巻き付けることにより固定する場合もあり、それがギプスを作製するのと同様に働く。
【０００９】
しかし、骨折および骨切開の症例において骨折部位の治癒を刺激する能動的処置をテストするために、数多くの研究が試みられた。パルス式の電磁場デバイス、超音波（低周波デバイス）および注射可能な成長因子などの方法が、複数の発行物に記載された［Ｋｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｊｏｉｎｔ  Ｓｕｒｇ  Ａｍ．  １９９７  ７９（７）：９６１−９７３］。例えば米国特許第７，９４３，５７３号は、生体適合性の基質中に配置されたＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）溶液を含む組成物を用意すること、および少なくとも１つの骨延長部位に該組成物を適用すること、を含む、骨延長の間および／または骨延長後の骨形成を刺激する方法を対象とする。同じく薬物処置（副甲状腺ホルモンＰＴＨの注射）により骨折治癒を促進することができるが、成功率が非常に低い［Ａｓｐｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．  ２０１０  ２５（２）：  ４０４−４１４；  Ａｓｐｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  Ａｃｔａ  Ｏｒｔｈｏｐ．  ２０１０ ８１（２）：２３４−２３６］。
【００１０】
オッセオインテグレーション手順で骨成長を増進する同様の技術も、報告された。例えばパルス式の電磁気刺激が、粗面の歯科インプラント周辺で骨形成を増進するのに有用となり得ることが示された［Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｏｒａｌ  Ｉｍｐｌ  Ｒｅｓ  ２０００：１１：３５４−３６０］。別の試験において、歯科インプラントにおける骨再生およびオッセオインテグレーションの向上に及ぼす低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）の影響が、評価された［Ｚｏｕ  Ｄ，  Ｈｅ  Ｊ，  Ｚｈａｎｇ  Ｋ，  Ｄａｉ  Ｊ，  Ｚｈａｎｇ  Ｗ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ７（３）：  ｅ３２３５５］。
【００１１】
最大５０％の骨量からなる骨組織の無機成分が、骨芽細胞により付着されたリン酸カルシウムの無機質形態であるヒドロキシアパタイトである。カルシウムとビタミンＤ３を合わせた補助食品が、骨折後に処方される場合があるが、カルシウム補給自体が骨折のより急速な治癒に寄与するエビデンスはない。
【００１２】
カルシウムは、ヒトの体内にある最も重要な無機質の１つと考えられている。カルシウムは、骨量を維持するのに必要であり、神経伝達物質のエキソサイトーシスに不可欠であり、筋肉細胞の収縮に関与し、心臓内で脱分極無機質としてナトリウムと交換され、多くの他の生理学的機能に関与する。
【００１３】
過去２０年間で、非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）と称される炭酸カルシウムの熱力学的に不安定な非晶質多形への科学的関心が、急速に高まった。本質的にはＡＣＣは、一時的な無機質付着部位においてＡＣＣを安定化させる能力が発達した少数の生物体、主に甲殻類および他の無脊椎動物によって利用されている。これらの生物体は、カルシウムの周期的動員、吸収および沈着のために非常に優れた効率的無機質源を必要とする。淡水性ザリガニなどの一部の甲殻類では、ＡＣＣは、胃石と称される専門の一時的貯蔵器官に大量に貯蔵される。
【００１４】
国際特許出願ＷＯ２００５／１１５４１４号は、微粒子に粉砕された胃石器官を含む医薬的および栄養学的カルシウム組成物を対象とする。さらに、胃石成分を含む組成物の連日経口摂取が、骨障害、骨折、および癌などの一定範囲の状態を劇的に改善することが、開示された（ＷＯ２００８／０４１２３６号）。
【００１５】
国際特許出願ＷＯ２００９／０５３９６７号は、様々な障害および状態を処置するための、ＡＣＣと、リン酸化ペプチドまたはアミノ酸と、を含む医薬的および栄養学的組成物に関する。
【００１６】
経口投与可能な組成物を投与することを含む、骨折および手術での骨切開の症例で骨折部位の治癒を促進し、オッセオインテグレーション手順で骨成長を増進する方法が、依然として求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
発明の概要
本発明は、骨成長を急速かつ効果的に増進するための安定した非晶質炭酸カルシウムを含む組成物に関する。本発明の組成物は、有益には、損傷または手術により生じた骨折の治癒を促進するのに用いることができる。特別な実施形態によれば、該骨折は、手術による骨折である。他の実施形態において、該組成物は、オッセオインテグレーション手順において骨形成を促進するために経口投与される。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、一部として、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む医薬組成物の経口投与が、仮骨延長手順の間の骨折治癒を促進した、という驚くべき知見に基づいている。詳細には、緻密化期の期間が、承認された文献、および仮骨延長術を受けたがＡＣＣ供給源からのカルシウムを投与されていない患者の病歴ファイルのデータと比較して短縮されることが、見出された。新しい骨の成熟速度は、骨治癒指数（ＢＨＩ）を用いて評価したが、それは延長された骨切り術の部位１ｃｍあたりの緻密化に必要な時間（日数）（日／ｃｍ）と定義されており、仮骨延長手順の間のＡＣＣ投与後に、ＢＨＩの１０％低下が見出された。別の継続中の臨床試験は、橈骨遠位端骨折後の骨形成を促進するために安定したＡＣＣを含む経口投与可能な組成物の効果を評価するように設計されている。この経口投与可能な組成物は、外部力による骨折、手術による骨折、病的骨折または疲労骨折から選択された骨折の治癒の機能的転帰を改善することが企図される。
【００１９】
それゆえ一態様において本発明は、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、仮骨延長術、骨切り術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態を有する対象において骨成長を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む組成物の有効量を、上記対象に経口投与することを含む、方法を提供する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態によれば、該方法は、約０．２５〜約２ｍｍ／日の骨成長速度を提供する。別の実施形態によれば、該方法は、約０．５〜約１．５ｍｍ／日の骨成長速度を提供する。特定の実施形態によれば、該方法は、約１ｍｍ／日の骨成長速度を提供する。更なる実施形態によれば、該方法は、骨の状態後の機能的転帰の向上を提供する。更なる実施形態によれば、該方法は、骨折後の機能的転帰の向上を提供する。
【００２０】
特定の実施形態において、骨の状態は、仮骨延長手順を含む。更なる実施形態において、該方法は、仮骨延長手順の待機期（ｌａｔｅｎｃｙ  ｐｈａｓｅ）、仮骨延長手順の延長期、仮骨延長手順の緻密化期、またはそれらの任意の組み合わせの間に対象に少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む組成物を投与することを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の待機期に投与される。別の実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の延長期に投与される。追加的実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の緻密化期に投与される。更なる実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の延長期および緻密化期に投与される。更なる実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の待機期、延長期および緻密化期に投与される。
【００２１】
幾つかの実施形態によれば、該組成物は、仮骨延長手順の骨切開から少なくとも２日後に投与が開始される。他の実施形態によれば、該組成物は、仮骨延長手順の骨切開から少なくとも５日後に投与が開始される。追加的実施形態によれば、該組成物は、仮骨延長手順の骨切開から少なくとも１０日後に投与が開始される。
【００２２】
特定の実施形態において、該方法は、骨延長後に骨緻密化を促進することを含む。他の実施形態において、該方法は、骨切開後に骨緻密化を促進することを含む。
【００２３】
特定の実施形態において、骨の状態は、オッセオインテグレーション手順を含む。更なる実施形態において、該方法は、オッセオインテグレーション手順のインプラント挿入段階の後、オッセオインテグレーション手順のアバットメント挿入段階の後、またはそれらの組み合わせの後に、該組成物を投与することを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、オッセオインテグレーション手順は、歯科インプラントの一体化を含む。更なる実施形態において、本発明は、顎骨における歯科インプラントのオッセオインテグレーション手順において骨成長を促進する方法を提供する。別の実施形態において、オッセオインテグレーション手順は、整形外科インプラントの一体化を含む。
【００２４】
幾つかの実施形態において、該方法は、インプラントのオッセオインテグレーションの時間を減少させることを含む。別の実施形態において、該方法は、インプラントが接触する骨の品質を改善することを含む。
【００２５】
幾つかの実施形態において、本発明は、病的骨折を有する対象において骨成長を促進する方法を提供する。更なる実施形態によれば、該病的骨折は、骨粗しょう症、骨軟化症、悪性腫瘍、多発性骨髄腫、先天性骨形成不全、骨嚢胞、化膿性骨髄炎、大理石骨病、栄養障害またはそれらの組み合わせに関連する骨折を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００２６】
幾つかの実施形態において、本発明は、外部の力による骨折を有する対象において、骨成長を加速する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、外部の力による骨折を有する対象において、骨の修復を加速する方法を提供する。
【００２７】
更なる実施形態によれば、骨折は、上腕骨、尺骨、橈骨、大腿骨、脛骨、腓骨、膝蓋骨、距骨、手首の骨、手根骨、中手骨、趾骨、足根骨、中足骨、肋骨、胸骨、脊椎、肩甲骨、鎖骨、骨盤、仙骨および頭蓋骨の骨折を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特別な実施形態において、橈骨遠位端骨折が、本発明の組成物で処置される。追加的実施形態によれば、該組成物は、非癒合骨折、変形癒合骨折、または遷延治癒骨折を有する対象に投与される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００２８】
幾つかの実施形態において、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む該組成物は、１日あたり少なくとも１回投与される。更なる実施形態によれば、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む該組成物は、１日あたり少なくとも２回投与される。更なる実施形態によれば、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む該組成物は、１日あたり４回投与される。
【００２９】
幾つかの実施形態によれば、該方法は、ＡＣＣ約０．５〜約５ｇを含む日用量で上記組成物を投与することを含む。他の実施形態によれば、該方法は、カルシウム元素約０．１〜約１．５ｇを含む日用量で上記組成物を投与することを含む。
【００３０】
特別な実施形態によれば、本発明の方法は、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む組成物を、ビタミン類と併せて投与することを含む。幾つかの実施形態によれば、該ビタミン類は、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥおよびビタミンＫからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。特別な実施形態によれば、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む該組成物は、ビタミンＤ３と共に投与される。幾つかの実施形態において、本発明の組成物およびビタミン類は、同時に投与される。他の実施形態において、本発明の組成物およびビタミン類は、連続して投与される。
【００３１】
更なる実施形態によれば、骨の修復を必要とする対象は、高齢者、喫煙者、糖尿病患者、骨粗しょう症患者；タンパク質栄養障害に罹った対象；ならびにコルチコステロイド、化学療法剤、非ステロイド系抗炎症薬、抗生物質、抗凝固剤、および骨溶解活性を低下させる薬剤を摂っている対象をはじめとし、骨折治癒不良になり易い集団からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。さらに別の実施形態によれば、上記対象は、骨切り術、砕骨術、仮骨延長術またはオッセオインテグレーション術を受けた患者から選択される。
【００３２】
別の態様において、本発明は、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、骨切り術、仮骨延長術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態の処置において骨成長を促進する際に使用するための、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む経口投与可能な医薬組成物を提供する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、上記経口投与可能な組成物は、約０．５〜約１．５ｍｍ／日の骨成長速度を提供するように適合されている。別の実施形態において、該経口投与可能な医薬組成物は、仮骨延長手順において骨成長を促進する際に使用されるためのものである。更なる実施形態によれば、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む経口投与可能な医薬組成物は、仮骨延長手順の骨延長期の後に骨緻密化を促進する際に使用されるためのものである。
【００３３】
幾つかの実施形態によれば、本発明の組成物は、仮骨延長手順の待機期、仮骨延長手順の延長期、仮骨延長手順の緻密化期、またはそれらの任意の組み合わせの間に使用されるためのものである。幾つかの実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の待機期に使用されるためのものである。別の実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の延長期に使用されるためのものである。追加的実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の緻密化期に使用されるためのものである。更なる実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の延長期および緻密化期に使用されるためのものである。更なる実施形態において、該組成物は、仮骨延長手順の待機期、延長期および緻密化期に使用されるためのものである。
【００３４】
幾つかの実施形態において、該経口投与可能な医薬組成物は、オッセオインテグレーション手順において骨成長を促進する際に使用されるためのものである。オッセオインテグレーション手順は、歯科インプラントまたは整形外科インプラントの一体化を含んでいてもよい。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００３５】
幾つかの実施形態によれば、該経口投与可能な医薬組成物は、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含み、該安定したＡＣＣは、合成起源に由来する。他の実施形態によれば、該安定したＡＣＣは、天然起源に由来する。
【００３６】
幾つかの実施形態によれば、該安定化剤は、有機酸、ヒドロキシカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、ヒドロキシル基含有有機化合物、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、上記安定化剤は、有機酸、リン酸化有機酸、ヒドロキシカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、リン酸化アミノ酸およびそれらの誘導体、ならびにヒドロキシル基含有有機化合物からなる群から選択される少なくとも１種の成分を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００３７】
幾つかの実施形態において、上記安定化剤は、リン酸化アミノ酸から選択される少なくとも１種の成分を含む。上記アミノ酸は、アミノ酸誘導体またはオリゴペプチドまたはポリペプチド中に存在し得る。幾つかの実施形態によれば、該リン酸化アミノ酸は、ホスホセリンおよびホスホトレオニンから選択される。幾つかの実施形態において、上記安定化剤は、ポリオールから選択される少なくとも１種の成分を含む。上記ポリオールは、アルコールまたは糖類を含んでいてもよい。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態によれば、上記安定化剤は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、および多糖類から選択される少なくとも１種の糖類を含む。幾つかの実施形態によれば、上記安定化剤は、さらに少なくとも１種のアルカリ水酸化物と併せて、ヒドロキシル基含有有機化合物を含む。幾つかの実施形態によれば、該安定化剤は、カルボン酸である。更なる実施形態において、該カルボン酸は、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。幾つかの実施形態において、上記安定化剤は、リン酸化アミノ酸、リン酸化ペプチド、少なくとも１種のペプチドを含むキチン、およびアルカリ水酸化物を含むポリオールから選択される少なくとも１種の化合物を含む。
【００３８】
幾つかの模範的実施形態によれば、上記ＡＣＣは、単離された甲殻類の胃石から得られる。一実施形態によれば、上記天然ＡＣＣは、キチンおよびポリペプチドにより安定化される。他の実験的実施形態によれば、該ＡＣＣは、合成であり、上記合成ＡＣＣは、ホスホセリンまたはホスホトレオニンから選択されるリン酸化アミノ酸により安定化される。別の実施形態によれば、上記合成ＡＣＣは、クエン酸と併せたホスホセリンにより安定化される。さらに別の実施形態によれば、上記合成ＡＣＣは、クエン酸により安定化される。さらに別の実施形態によれば、上記ＡＣＣは、水酸化ナトリウムと併せたスクロースにより安定化される。
【００３９】
幾つかの実施形態による該医薬組成物は、担体、佐剤、希釈剤、または賦形剤をさらに含んでいてもよい。該医薬組成物は、錠剤、カプセル、丸薬、粉末、顆粒、エリキシル、チンキ、懸濁剤、シロップ、エマルジョンおよびゲルからなる群から選択される投与剤型に配合されていてもよい。更なる実施形態において、該経口投与可能な医薬組成物は、ＡＣＣ約０．２〜約１ｇの単位用量を含む。追加的実施形態によれば、該経口投与可能な医薬組成物は、ＡＣＣ約０．５〜約５ｇの日用量を含む。幾つかの実施形態において、該経口投与可能な医薬組成物は、カルシウム元素約０．０５〜約０．３ｇの単位用量を含む。更なる実施形態によれば、該経口投与可能な医薬組成物は、カルシウム元素約０．１５〜約１．５ｇの日用量を含む。
【００４０】
さらに別の態様において、本発明は、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、骨切り術、仮骨延長術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態を有する対象において骨成長を促進する際の、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）の使用を提供する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００４１】
さらに別の態様において、本発明は、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、骨切り術、仮骨延長術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態の処置において、骨成長を促進する医薬組成物、栄養組成物または補助食品の調製における、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）の使用を提供する。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００４２】
本発明の前述の、そして他の特徴および利点の全てが、その実施形態の以下の例示的で非限定的な記載と共に添付の図面を参照することにより、さらに理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】試験群および対照群の骨治癒指数（ＨＩ）。バーは、ＳＥＭを表す。
【図２】試験群（●）および対照群（■）の治癒指数の累積百分率。ログランク検定：ｐ＜０．００７。
【図３】延長を遂げた値による、試験対象と対照の対象との組み合わせでの骨治癒指数（ＢＨＩ）。バーは、ＳＥＭを表す。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
発明の詳細な説明
用語「安定したＡＣＣ」は、炭酸カルシウムが長期間、例えば数週間〜数年間にわたり非晶質状態に維持され、結晶形態への変換率が上記期間で５％以下であることを示すために本明細書で用いられる。ＡＣＣの結晶化は、本発明によれば、リン酸化アミノ酸、他の有機酸、ペプチド、塩、糖類または脂質などの有機または無機原材料から選択される１種以上の安定化剤を添加することにより阻害される。上記塩は、例えばマグネシウム、カリウム、ストロンチウム、およびナトリウムから選択されるカチオンと、炭酸塩、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、臭化物、フッ化物、クエン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、または他の有機アニオンから選択されるアニオンと、を含んでいてもよく、用語アニオンおよびカチオンは、単に塩組成物を記載するために用いられており、上記
分子の溶解度またはｐＨについての何かを意味するものではない。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「安定化剤」または「安定化する薬剤」は、互換的に用いられており、炭酸カルシウムを非晶質状態に維持する任意の物質を指す。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「有効量」は、任意の医療処置または栄養処置に適用可能な合理的利益／リスク比で骨折治癒または骨インプラントの一体化を向上させる安定したＡＣＣを含む組成物の十分量を指す。
【００４７】
本明細書で用いられる用語「修復」は、骨形成期を含む骨折治癒を指す。
【００４８】
本明細書で用いられる用語「骨の状態」は、骨形成により利益、処置、救済、または治癒を受ける骨の任意の疾患、状態、障害、症候群もしくは外傷、またはその骨を指す。そのような骨の状態の例としては、骨折、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、遷延治癒、癒合不全、変形治癒、仮骨延長術、骨切り術およびオッセオインテグレーションが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４９】
本明細書で用いられる用語「骨折」は、単純または複雑にかかわらず、骨格の骨の骨折を指す。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「仮骨延長術」は、骨断片の間隙のサイズを増加させること、および新しい骨を上記間隙の中で成長させること、を含む骨を延長する工程または骨格変形を修復する工程を指す。
【００５１】
本明細書で用いられる用語「骨切り術」は、手術による骨の切断または手術による骨の穿孔を指す。
【００５２】
本明細書で用いられる用語「オッセオインテグレーション」は、骨と外科的インプラントまたは補綴物（歯科または骨の手術において）との境界に線維性組織を形成させずに、上記外科的インプラントまたは補綴物の周辺または内部に骨を成長させることにより上記外科的インプラントまたは補綴物を強固に固定することを指す
【００５３】
幾つかの実施形態において用いられる通り、互換的に用いられ得る用語「骨形成」または「骨成長」は、骨芽細胞の存在および活性と、上記骨芽細胞による骨組織の直接的形成とを増加させることを指す。
【００５４】
本発明による、非晶質炭酸カルシウムを基にした組成物は、骨の修復工程で市販のカルシウムサプリメントを越える優れたカルシウム供給源になることが見いだされた。ＡＣＣを含む組成物は、骨のリモデリングの間に能動的な（ａｃｔｉｖｅ）石灰化に対して驚くべき効果を有し、そのため骨折治癒工程を促進する。幾つかの実施形態によれば、本発明の経口投与可能な組成物は、１日あたり約０．５〜約１．５ｍｍ、好ましくは１日あたり約０．７５〜約１．２５ｍｍ、より好ましくは１日あたり約１ｍｍの骨成長速度を提供するように適合されている。本発明の組成物は、外部力による骨折、手術による骨折、病的骨折、および疲労骨折による骨折の後の骨修復において有用である。経口投与可能な組成物は、歯科または整形外科的補綴物移植などオッセオインテグレーション手順における砕骨術の刺激にも有用である。
【００５５】
それゆえ幾つかの実施形態において、本発明は、骨折の修復を促進する際に用いられるための、有機酸、リン酸化有機酸、ヒドロキシカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、リン酸化アミノ酸およびそれらの誘導体、ならびにヒドロキシル基含有有機化合物からなる群から選択される少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む医薬組成物を提供する。他の実施形態において、本発明は、必要とする対象において骨の修復を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む組成物の有効量を、上記対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、必要とする対象において骨成長を促進する方法であって、上記組成物の有効量を上記対象に投与することを含む、方法を提供する。幾つかの実施形態によれば、骨の修復は、外部力による骨折、手術による骨折、病的骨折、および疲労骨折から選択される骨折の後に行われる。特別な実施形態によれば、必要とする対象は、手術による骨折により生じた骨折を有する。幾つかの実施形態によれば、手術による骨折は、骨切り術、砕骨術、および仮骨延長術に由来する骨折を含む。更なる実施形態によれば、骨折を有する対象における骨の修復は、骨折後の機能的転帰を向上させることをさらに含む。
【００５６】
追加的実施形態によれば、本発明は、外部力による骨折、手術による骨折、病的骨折、疲労骨折およびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨折を有する対象において骨成長を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む組成物の有効量を、上記対象に経口投与することを含む、方法を提供する。他の実施形態によれば、本発明は、オッセオインテグレーションにおいて骨成長を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含む組成物の有効量を、オッセオインテグレーションを受ける対象に経口投与することを含む、方法を提供する。
【００５７】
更なる実施形態によれば、本発明は、外部力による骨折、病的骨折、疲労骨折、骨切り術、仮骨延長術、オッセオインテグレーションおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される骨の状態を有する対象において骨成長を促進する際に使用するための、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む組成物を提供する。別の態様において、本発明は、上記骨の状態を有する対象において骨成長を促進する方法であって、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む組成物の有効量を、上記対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５８】
処置の方法
安定したＡＣＣを含む該組成物の使用は、手術による骨折後の骨成長を促進するのに特に有益である。本発明の組成物は、非限定的に骨切り術、砕骨術、および仮骨延長手順から生じた骨折から選択される手術による骨折を処置するのに用いることができる。
【００５９】
幾つかの実施形態において、本発明の組成物は、骨切り術または砕骨術の後に、骨折部の骨成長を促進するために用いられる。骨切り術および砕骨術は、骨を切断して短縮する、延長する、またはアライメントを変更する手術である。上記手術は、骨の変形を矯正するために実施されてもよい。骨切り術の非限定的例は、内反股、外反膝、および内反膝の矯正、ならびに腰部、膝、顎全体およびオトガイの骨切り術である。骨切り術は、骨折後に屈曲したまま治癒した骨を真っ直ぐにするために実施されてもよい。
【００６０】
別の実施形態において、本発明の組成物は、仮骨延長術の後の骨折部の骨成長を促進するために用いられる。仮骨延長手順は、骨格変形部を再建して、体の長骨を延長させるために用いられる外科的工程である。コルチコトミーを用いて、骨を２つの断片へ破砕して、骨の２つの骨末端がを延長期に徐々に離れさせ、間隙の中に新しい骨を形成させる。所望のまたは可能な長さに達すると、緻密化期に入り、骨の治癒を維持させる。仮骨延長術は、骨の長さおよび周囲の軟組織の体積を同時に増加させるという利益を有する。仮骨延長手順は、整形外科および／または顎顔面の整形外科の分野で、例えば下肢および上肢延長において、または頭蓋顔面変形患者の小顎、中顔面、および前頭眼窩形成不全（ｆｒｏｎｔｏ−ｏｒｂｉｔａｌ  ｈｙｐｏｐｌａｓｉａ）の矯正において、用いることができる。
【００６１】
仮骨延長術による患肢の延長の最も古くかつ最も一般的な方法であるイリザロフ法は、以下の段階からなる：
１．経皮的皮質切開  −髄内および骨膜の血流を可能な限り最大限に維持することを目的として、骨を骨膜下骨切り術により２つの断片に破断する。
２．皮膚および筋肉を通して骨に穿通する円形枠のディストラクター（イリザロフ装置）を含む外部固定器による、延長している骨の安定化。骨切り術部位の完全な固定など均一な骨形成に理想的な生体力学的環境と、加力の可能性と、を確保するように、ディストラクターを適合させる。
３．待機期  −  仮骨の延長は、骨切り術後５〜１０日の待機期によって、より良好に増進される。１５〜２０日よりも長い待機期は、早期仮骨成熟のリスクを増大させる。延長が開始するまでの待機期は、軟組織損傷のリハビリテーションに十分な時間を与え、最良の可能な方法で仮骨延長の生物学的作用を促す。
４．延長期  −  骨の中程に取り付けられたスクリューを１日あたり１ミリメートル（ｍｍ）回すと、成長ゾーンに形成された新しい骨組織が徐々に引き離されて、間隙を増大させる。１日あたり１ミリメートルの延長が、骨形成手順にとって理想的である。１日あたり４回の延長率（６時間ごとに０．２５ｍｍ）が、著しく有益である。延長速度および延長率は、患者の年齢、骨の性質および軟組織損傷の程度により修正される。
５．緻密化期  −  新しい骨は、延長の後に安定化する。緻密化期は、多くの場合、小児なら延長期の２倍、成人であれば延長期の３〜４倍もの長期間持続する。この期間には、骨はもはや延長しないが、患者は外部ディストラクターの装着を続ける。
６．骨の成熟を増進するために患肢全体に荷重する。この期間に患者は、施術された患肢の使用を徐々に再開する。
【００６２】
本発明の組成物は、待機期、延長期、緻密化期またはそれらの任意の組み合わせの間に対象に投与されてもよい。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの模範的実施形態において、仮骨延長手順の間に骨成長を促進する方法は、延長期および緻密化期に少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む経口投与可能な組成物の投与を含む。別の実験的実施形態において、該方法は、待機期、延長期および緻密化期に該組成物の投与を含んでいた。
【００６３】
該組成物の投与は、仮骨延長術の前に開始されてもよい。あるいは該組成物の投与は、仮骨延長術と同じ日に開始されてもよい。他の実施形態において、該投与は、該手術後の少なくとも１日目に開始される。別の実施形態において、該組成物は、仮骨延長術から２日、５日、１０日、１５日、または２０日後に投与が開始される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
【００６４】
本発明の組成物は、骨延長後に骨の緻密化を促進するために用いることができる。これらの実施形態において、該組成物は、緻密化期の開始前、または延長期の開始前に投与することができる。本発明の組成物はさらに、骨延長後の緻密化期を短縮させるように適合される。
【００６５】
本発明の組成物はさらに、オッセオインテグレーション手順の間に骨成長を促進するために用いることができる。
【００６６】
オッセオインテグレーション術は、一般に、２度の外科的介入と、該外科的介入後の２つの治癒期間と、を含む。最初の段階で、専用に設計されたインプラントを髄腔に入れて、創傷を完全に閉鎖させる。オッセオインテグレーション術の治癒期間であるステージ１の施術の後、骨がスレッド内に成長するまでインプラントに荷重しないことが、重要である。オッセオインテグレーションが起こる、ステージ１の施術後の待機期は通常、６ヶ月であるが、歯科用では、インプラントの荷重をより早期に開始してもよい。ステージ２の施術の間に、植え込まれたフィクスチャを再度露出させて、アバットメントをフィクスチャに取り付ける。ステージ２の施術の後、可動期に入り、それは典型的にはさらに６ヶ月かかる。この期間は、インプラントが全体重を受け留められるようになるまで、補綴物に徐々に荷重をかける。
【００６７】
本発明の幾つかの実施形態において、該経口投与可能な組成物は、インプラント挿入段階の後に投与される。他の実施形態において、該経口投与可能な組成物は、アバットメント挿入段階の後に投与される。該経口投与可能な組成物は、両方の段階の後に投与することができる。
【００６８】
本発明の組成物は、歯科インプラントのオッセオインテグレーションにおいて骨成長促進のために用いられてもよい。追加または代わりとして、該組成物は、整形外科インプラントのオッセオインテグレーションにおいて骨成長促進のために用いられてもよい。該インプラントは、具体的には歯科インプラント、頭蓋顔面構造、ならびに骨および関節の置換部品をはじめとする、骨構造を置換または支持するために体の骨格構造と係合するように設計された様々な生体適合性構造を含んでいてもよい。
【００６９】
本発明の組成物はさらに、非限定的に、上腕骨、尺骨、橈骨、大腿骨、脛骨、腓骨、膝蓋骨、距骨、手首の骨、手根骨、中手骨、趾骨、足根骨、中足骨、肋骨、胸骨、脊椎、肩甲骨、鎖骨、骨盤、仙骨および頭蓋骨の骨折から選択される骨折において、骨成長を促進する際に用いられてもよい。特別な実施形態において、橈骨遠位端の骨折が、本発明の組成物で処置される。本発明の組成物は、以下の骨折：亀裂骨折、若木骨折、横骨折、斜骨折、らせん骨折、分節骨折、粉砕骨折、剥離骨折、圧迫骨折、陥没骨折などのいずれかを有する対象に投与されてもよい。安定したＡＣＣの投与は、非癒合骨折、変形癒合骨折、または遷延治癒骨折の症例において特に有益である。上記骨折は、外部力による骨折または病的骨折であってもよい。
【００７０】
該病的骨折はさらに、非限定的に、骨粗しょう症、骨軟化症、悪性腫瘍、多発性骨髄腫、先天性骨形成不全、骨嚢胞、化膿性骨髄炎、大理石骨病、および栄養障害に関連する骨折から選択され得るが、それらに限定されない。
【００７１】
本発明の方法および組成物は、さらに、骨折治癒後の機能的転帰の向上を提供する。例えば患肢の骨折後に、骨折修復の明白な成功にもかかわらず、患肢の強度および運動の有意な欠如が見られる場合がある。本発明は、骨折治癒後の機能的転帰を向上させる方法であって、骨折を有する対象に、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む組成物の有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００７２】
本発明の方法は、少なくとも１種の安定化剤を含む安定した非晶質炭酸カルシウムを含む組成物の、１日１回ベースでの投与を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、１日あたり少なくとも１回投与される。他の実施形態において、該組成物は、１日あたり１〜４回投与される。
【００７３】
本発明の組成物は、骨折の処置のための他の薬剤と併せて投与されてもよい。幾つかの実施形態によれば、上記組成物は、他の無機質と併せて投与される。該無機質は、亜鉛、銅、カルシウム、リン、およびケイ素から選択される。ＡＣＣを含む組成物は、さらにビタミン類と併せて投与されてもよい。ビタミン類は、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥまたはビタミンＫから選択されるが、それらに限定されない。ビタミンＤは、ビタミンＤ１、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＤ４、ビタミンＤ５またはそれらの組み合わせを含んでいてもよい。一実施形態によれば、少なくとも１種の安定化剤を含む安定したＡＣＣを含む組成物は、ビタミンＤ３と併せて投与される。本発明の文脈において、用語「併用療法」は、２種以上の有効成分を１つの投与剤型または別個の投与剤型で投与することを包含する。別個の投与剤型は、同時にもしくは連続して投与されてもよく、または完全に独立した別のレジメンで投与されてもよい。例えばＡＣＣは、１日１日回投与されてもよく、ビタミンＤ３は、より少ない回数で投与されてもよい。
【００７４】
幾つかの実施形態によれば、本発明の組成物は、高齢者、喫煙者、糖尿病患者、骨粗しょう症患者、タンパク質栄養障害に罹った対象、ならびにコルチコステロイド、化学療法剤、非ステロイド系抗炎症薬、抗生物質、抗凝固剤、および骨溶解活性を低下させる薬剤を摂っている対象をはじめとし、骨折治癒不良になり易い集団に投与される。別の実施形態によれば、骨の修復促進の必要がある対象は、骨切り術、砕骨術、および仮骨延長術後の患者から選択される。
【００７５】
安定したＡＣＣを含む組成物
幾つかの実施形態において、本発明は、安定したＡＣＣと、ＡＣＣを非結晶状態で維持するのに十分な安定化剤の量と、を含む合成（人工）組成物を提供する。該安定化剤は、有機酸、リン酸化有機酸、ヒドロキシカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、リン酸化アミノ酸およびそれらの誘導体、ならびにヒドロキシル基含有有機化合物から選択されるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態によれば、上記安定化剤は、ホスホエノールピルビン酸塩、ホスホセリン、ホスホトレオニン、スルホセリンまたはスルホトレオニンなどのヒドロキシルカルボン酸のリン酸または硫酸エステル、ならびに単糖類、二糖類、オリゴ糖類、および多糖類、例えばスクロース、マンノース、グルコースから選択されるヒドロキシル基含有有機化合物から選択される少なくとも１種の成分を含む。ヒドロキシル基含有化合物を含む安定化剤は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの少なくとも１種のアルカリ水酸化物をさらに含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、上記安定化剤は、リン酸化アミノ酸およびポリオールから選択される。該リン酸化された酸は、オリゴペプチドおよびポリペプチド中に存在してもよい。本発明の他の実施形態において、該安定化剤は、有機酸、好ましくはカルボン酸である。該カルボン酸は、好ましくはクエン酸、酒石酸、またはリンゴ酸から選択される。実験的実施形態によれば、該合成組成物は、クエン酸を含む安定したＡＣＣを含む。
【００７６】
別の実施形態において、本発明は、単離されたザリガニの胃石から得られた安定したＡＣＣを含む天然組成物を提供する。粉砕された胃石は、ＡＣＣと、主にキチンおよびポリペプチドからなる有機物質と、塩と、を含む。該有機物質中に存在する成分は、ＡＣＣを安定化させ、その結晶化を防止する。
【００７７】
本発明による組成物の特定の利点は、経口投与のための、確証された低毒性および高い安定性である。本発明の組成物は、好ましくは、非限定的に錠剤、カプセル、丸薬、粉末、顆粒、エリキシル、チンキ、懸濁剤、シロップ、エマルジョンおよびゲル形態をはじめとする様々な経口剤型で経口投与され得る。経口投与が錠剤またはカプセルの形態である例において、該組成物の成分は、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、改質糖、化工デンプン、メチルセルロースおよびその誘導体、マンニトール、ソルビトール、ならびに他の還元および非還元糖、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルフマル酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、非晶質シリカゲルまたは他のデシカント材などの非毒性の医薬的に許容し得る不活性担体または賦形剤と組み合わせることができる。
【００７８】
本発明の組成物は、典型的にはＡＣＣ約０．５〜約５ｇの日用量で投与されてもよい。代わりの実施形態によれば、本発明の組成物は、典型的にはＡＣＣ約２〜約３ｇの日用量で投与されてもよい。本発明の組成物は、典型的にはＡＣＣ約０．２〜約１ｇの日用量で投与されてもよい。本発明の組成物は、典型的には約０．１５〜約１．５ｇの範囲内のカルシウム元素を含む日用量で投与されてもよい。代わりの実施形態によれば、本発明の組成物は、典型的には約０．５〜約１ｇの範囲内のカルシウム元素を含む日用量で投与されてもよい。幾つかの実施形態において、本発明の組成物は、典型的にはカルシウム元素約０．０５〜約０．３ｇを含む単位用量で投与される。ＡＣＣ由来のカルシウム元素は、骨石灰化工程における効能が高く、およびそれにより骨折治癒工程により大きく寄与することから、結晶性炭酸カルシウムに比較してより低用量で投与することができる。
【００７９】
液体形態での経口投与の場合、該組成物の成分は、エタノール、グリセロール、水などの非毒性の医薬的に許容し得る不活性担体と組み合わせることができる。所望または必要ならば、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、および香味剤を、該混合物に組み込むこともできる。
【００８０】
本発明者らは、骨の手術による骨折を修復する際の安定したＡＣＣを含む組成物の効能を評価する目的で実験を実施した。本発明者らは、さらに、非意図的な骨折を修復する際の安定したＡＣＣを含む組成物の効能を評価することを目的とした実験を実施した。骨の修復は、骨折が完治するのに必要な時間に関して、そして骨折後の機能的転帰を評価すること、の両方で評定される。骨折治癒は、３または４名の独立した検閲者による放射線検査、および画像解析ツールにより評価される。骨折後の機能的転帰は、四肢専用の質問票（Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｒｍ，  Ｓｈｏｕｌｄｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｎｄ（ＤＡＳＨ））およびＶｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）質問票の両方の記入により、そしてペインフリーグリップ（ｐａｉｎ−ｆｒｅｅ  ｇｒｉｐ）およびフォースプレート（ｆｏｒｃｅ  ｐｌａｔｅ）テストの評定により、評価される。
【００８１】
実施例
実施例１：仮骨延長の間に骨の修復に及ぼす天然ＡＣＣの影響
試験は、上記のイリザロフ法により実施された仮骨延長術の間に、単離された胃石から得られた安定した非晶質炭酸カルシウムを投与することの安全性および効能をテストするための前向き非盲検試験であった。仮骨延長のための主な追跡方法は、単純Ｘ線検査である。Ｘ線検査は、骨切りの部位で早期仮骨の存在を確認して延長を開始するために、術後１０日目〜１５日目に実施した。
【００８２】
試験は、仮骨延長術を受けた患者１０名（４〜１５歳）の試験群を含んでいた。施術された骨の回復を、放射線像により評定した。外部固定器を外すまで、延長期の最後の１週間および緻密化期全体の間、試験群の患者は、単離された胃石から得られたＡＣＣ粉末を毎日摂取した。新しい骨の成熟率は、延長された骨切り部位１ｃｍあたりの緻密化に必要な時間（日数）（日／ｃｍ）と定義された骨治癒指数（ＢＨＩ）を利用して評価した。ＡＣＣ粉末を投与された試験群から回収されたデータを、仮骨延長を受けたが無処置の患者２１名（５〜１６歳）の病歴ファイルのデータと比較した。
【００８３】
実験の詳細
臨床試験用製品
表１に、誘導結合プラズマ発光分光分析法（ＩＣＰ−ＡＥ）、紫外（ＵＶ）分光法、強熱減量（ＬＯＩ）および炎光光度計を利用した、単離された胃石から得られたＡＣＣ粉末の化学分析を要約している。分析は、イスラエル、ベエルシェバ所在のベングリオン大学およびイスラエル、ベエルシェバ所在のＥｒｎｉｅ  Ｍｉｌｌｅｒ  ｌａｂｓ  Ｌｔｄ．という２つの独立した検査所により実施された。他に明記されていなければ、測定値の精度は、±１０％である。
【００８４】
延長期の最終週およびその後は毎月、患者に、密閉容器内のＡＣＣ粉末の一月供給分（経口使用のための５００ｍｇからなるカプセル６５個）を提供した。各カプセルは、カルシウム元素１２５±５ｇを含んでいた。延長期の最終週の初日に開始して、外部固定器が外されるまで緻密化期全体の間、対象は全員、１日あたり５００ｍｇカプセル２個を、１ｇのサワーシュガー（ｓｏｕｒ  ｓｕｇａｒ）（服薬遵守のため）と共に摂取した。容器は、冷蔵庫（約４℃）に保持された。
【表１】
2016507553.tif 000002
【００８５】
試験計画
各患者（および小児の場合は患者の親）は、適格性基準にかなっており、試験に参加する前に署名されたインフォームドコンセントを提出した。患者は、標準の外科的処置を受け、緻密化期の最終週および外部固定器を外すまで、サプリメントが投与された。
【００８６】
追跡調査を、当該科の慣例である日常的な追跡調査と同じ手法で実施した。患者および医師には、質問票に記入するように要請した。
【００８７】
実施された延長の程度に合わせた緻密化期の期間を測定して、ＡＣＣ粉末の補充が骨石灰化を促すか、そして承認された文献、および仮骨延長術を受けたがＡＣＣ供給源からのカルシウムを投与されていない患者の病歴ファイルのデータと比較して緻密化期を短縮するか否か、についてテストした。
【００８８】
臨床での決定は全て、試験への参加にかかわらず処置する整形外科医により行われた。データの解析は、延長および緻密化工程で得られた臨床データおよび放射線像に基づくものであった。
【００８９】
患者全員が、研究スタッフの助けを借りて、手術の前、入院中、および外部固定器を外した後に、一般健康診断についての質問票に記入した。このデータを記録して、臨床経過、ピン部位および他の感染を含む合併症、ピンの破壊などに関する外科医のデータとまとめた。
【００９０】
放射線像での評価
放射線像は、延長期は週に１回ベースで日常的に、そして緻密化期には週に２回、または臨床上の必要な時に撮影した。整合性を持たせるために、Ｘ線暴露パラメータを、工程の開始時に患者ごとに決定し、その後の各放射線像に用いた。患肢の延長を知っているが放射線像の撮影時期を知らない３名の別の整形外科医が、放射線像を分析した。これらの外科医は、全ての患者の放射線像をレビューして、外部固定器を外すのに最適な時間を独立して決定した。骨折治癒の期間を、医療センターの病歴参考資料の治癒指数と比較した。
【００９１】
統計解析
結果は、本明細書では平均±ＳＥＭとして表す。一元配置分散分析およびフィッシャーＬＳＤ事後比較検定を、ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ  ６．１ソフトウエア（ＳｔａＳｏｆｔ、オクラホマ州タルサ所在）を利用して実施した。ｐ値＜０．０５を、有意と判断した。
【００９２】
結果
表２は、ＡＣＣ粉末を投与された試験群から回収されたデータ、および無処置患者２１名の病歴ファイルのデータを表す。
【００９３】
試験の第一の目的は、ＡＣＣ粉末の連日経口投与が仮骨延長術の緻密化期の骨石灰化を促して処置時間を短縮するという仮説を立てて、仮骨延長の間の石灰化率に及ぼすＡＣＣ粉末機能性食品の影響をテストし、それにより骨折、特に手術による骨折の修復を加速する方法を提供することであった。
【表２】
2016507553.tif 000003
【００９４】
天然ＡＣＣ（胃石）処置群における平均骨治癒指数（ＢＨＩ）は、２２日／ｃｍ（範囲１１〜３８）に比較して１６日／ｃｍ（範囲１３〜２２）であった。差は、統計学的に有意であった（ｐ＜０．０２；図１および２）。同じく試験群の平均標準偏差は、対照群に比較して有意に低く（それぞれ２．８８および８．１５）、治癒工程の標準化が示唆された。ＢＨＩが、遂げられた延長の程度によって影響を受けることは公知であるため、各群のうち延長が同程度であった対象７名を、比較した（図３）。対応させて比較することで、実施された延長の値とは無関係に、天然ＡＣＣ（胃石）処置後にＢＨＩの全体的な１０％低下が示された。
【００９５】
先の試験の結果から、単離された甲殻類胃石から得られた安定したＡＣＣを投与すると、骨折治癒が促進され、より標準化された治癒工程がもたらされることが確証された。
【００９６】
実施例２：仮骨延長の間の骨修復に及ぼす合成ＡＣＣの影響
仮骨延長の間に少なくとも１種の安定化剤を含む合成の安定した非晶質炭酸カルシウムを投与することの効能を評価することを目的とした実験を、実施する。多施設前向き無作為化並行二重盲検実薬対照試験により、仮骨延長による下肢骨切開および延長後の骨治癒時間に及ぼす非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）の影響を結晶性炭酸カルシウム（ＣＣＣ）と比較する。
【００９７】
試験の第一の目的は、仮骨延長術により下肢延長を受けた対象の骨治癒指数に対し、ＡＣＣからのカルシウムによる処置の効能をＣＣＣと比較して評定することである。第二の目的は、仮骨延長術の後の機能的転帰の改善に及ぼすＡＣＣの影響をＣＣＣと比較して評価することである。さらなる第二の目的は、この集団でＡＣＣの安全性プロファイルを評価することである。
【００９８】
試験集団の選択
試験集団は、仮骨延長術により延長を受けた対象４０名を含み、各処置群は対象２０名からなる。
【００９９】
組み入れ基準：
−  仮骨延長手順により患肢の延長を受ける意思のある対象。
−  外部固定器。
−  年齢４〜３０歳（範囲内全て）
−  通院計画およびプロトコル要件を固守することができ、試験を完了する時間のある対象。
−  ＩＣＦに署名した対象。
【０１００】
除外基準
−  血清カルシウムが高値（＞１０．２ｍｇ／ｄＬ）
−  活動性の肝疾患または臨床上の黄疸に罹患している対象
−  現在、悪性腫瘍を有する、または試験前５年以内の悪性腫瘍の病歴を有する対象。
−  認知障害
−  甲状腺または副甲状腺に影響を及ぼしている任意の疾患
−  慢性腎不全
−  胃腸管からの吸収に影響を及ぼしている任意の既知の疾患
−  活動性の代謝性骨疾患
−  グルココルチコイド療法
−  妊娠中または授乳中の女性
【０１０１】
臨床試験用製品の記載
【表３】
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【０１０２】
試験で用いられる安定した非晶質炭酸カルシウムは、Ａｍｏｒｐｈｉｃａｌ  Ｌｔｄにより提供された、低濃度のホスホセリンおよびクエン酸塩（最終生成物中に０．５％未満）により安定化された合成ＡＣＣである。リン酸化セリンおよび有機クエン酸は、非毒性であり、天然に豊富に存在し、単独での補助食品として摂取されることもあり、経口摂取された場合の有害作用は報告されていない。
【０１０３】
表３に、誘導結合プラズマ発光分光分析法（ＩＣＰ−ＡＥ）、紫外（ＵＶ）分光法、強熱減量（ＬＯＩ）および炎光光度法を利用して、炭酸カルシウムに関する米国薬局方パラメータにより評定されたＡＣＣの化学分析を概要している。
【０１０４】
対照製品の記載
対照製品は、各錠剤中に、結晶性炭酸カルシウム５００ｍｇ（カルシウム元素２００±５ｍｇ）およびスクロース１６７ｍｇを含有した。非晶質炭酸カルシウムの影響を結晶性炭酸カルシウムに比較して評価するために、対照製品中のカルシウム元素レベルを、処置群のカルシウム元素レベルと等しくした。
【０１０５】
投与量および投与
適格な対象が、無作為に２つの処置の一方を受けた。試験サプリメントの各用量は、表４に示された通り、各錠剤中の、カルシウム元素２００ｍｇを含むＡＣＣ  ６４０ｍｇ、またはＣＣＣ  ５００ｍｇからなった。
【表４】
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【０１０６】
投与量の選択は、１９〜５０歳の対象のためのカルシウム元素の推奨１日摂取量（１０００ｍｇ／日）に基づく。対照のカルシウム投与量は、ＡＣＣ製品中のカルシウム元素量と等しい。
【０１０７】
対象の処置への割り当て
対象を、無作為化リストに従って処置群の１つに無作為に割り付ける。２つの試験群それぞれへの無作為化は、施設内でのブロックランダム化を利用して実施する。
【０１０８】
盲検
臨床試験で投与される経口カルシウム処置は、盲検である。対象、研究者、ならびに対象の評定、モニタリング、分析およびデータ管理に関与する任意の職員は、臨床試験用製品の調製、分配およびラベル表示を担うスポンサーを除き、対象への配合物割り付けについて伏せられている。内容を認識しているスポンサーにより、投薬の前に、盲検用ラベルをバイアルに貼付する。
【０１０９】
無作為化手順
本試験は二重盲検であり、それゆえＣＲＣの職員および対象は、試験全体を通してコード割り付けについて伏せられたままである。投与前に、各対象を個々の数字で割り付けて、所定のコンピュータ作成の無作為化リストに従って処置する。コンピュータ作成のアルゴリズムを用いて、対象を処置群に割り付ける。処置組成物は、スポンサーが調製し、運搬の前にラベルをバイアルに貼付する。病院薬剤師を、コホート割り付けリストに従って製品をＣＲＣに分配するように指導する。
【０１１０】
試験計画
対象４０名を２群のうちの１つ（Ｎ＝２０）に無作為に割り付ける。処置群内の対象は、非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を受け、活性対照群の対象は、結晶性炭酸カルシウム（ＣＣＣ）を受ける。製剤は両方とも、ビタミンＤが補充されている。
【０１１１】
安全性パラメータを、試験全体を通して評価する。
【０１１２】
仮骨延長術のために医療施設に入院している対象を、日常的に評価する。組み入れ基準の全てを遵守し、除外基準のいずれにも従わない適格な対象が、試験の候補と判断され、スクリーニングのためにＣＲＣに通院する。
【０１１３】
スクリーニング（−７日目）  −  対象（および小児の場合には対象の親）は、インフォームドコンセントの用紙（ＩＣＦ）に署名する。血液化学検査：ナトリウム、カリウム、ヘモグロビン、赤血球沈降速度、白血球、カルシウム（総量、アルブミン補正）、リン酸塩、アルカリホスファターゼ、クレアチニンおよびアルブミンを、実施する。同じく血清ＰＴＨ、２５−ヒドロキシビタミンＤ、および甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）を、検査する。カルシウムおよびクレアチニンの尿中排出量を、測定する。一般健康診断を、医療歴および身体検査により検査する。組み入れ基準の全てを遵守し、除外基準のいずれにも従わない適格な対象を、試験に登録する。
【０１１４】
対象は、試験への参加に適格であるかどうかを電話で、または試験施設で報告される。
【０１１５】
術前
通院１（０日目）  −  適格な対象は、施術の前にＣＲＣに通院する。Ｘ線検査を、ベースラインとして実施する。
【０１１６】
延長期
通院１（７日目）  −  制御Ｘ線前後像および側面像撮影を実施する。対象は、各錠剤が製剤の１つ（ＡＣＣまたはＣＣＣ）のカルシウム元素２００ｍｇを含む錠剤のパック（合計１００個錠。２１日の供給分＋予備の１６錠）を受け取る。対象は、手術の２日後に処置を開始するように指導される。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。対象は、医師の決定に基づいてビタミンＤ３のサプリメントを摂取するように勧められる。
【０１１７】
通院２  −  （１４±１日目）−制御Ｘ線前後像および側面像撮影を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。
【０１１８】
通院３  −  （２１±１日目）−制御Ｘ線前後像および側面像撮影を実施する。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。対象は、医師の決定に基づいてビタミンＤ３のサプリメントを摂取するよう勧められる。
【０１１９】
通院４  −  （２８±１日目）−制御Ｘ線前後像および側面像撮影を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。対象は、０日目に受け取ったのと同じ製剤の、カルシウム元素２００ｍｇを含む錠剤のさらなるパック（合計１００錠。２１日の供給分＋予備の１６錠）を受け取る。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。伸長期を完了しなかった対象は、医師の決定に基づいてさらなる放射線像の評定のために通院する。
【０１２０】
緻密化期
通院１  −  （０日目）−制御Ｘ線前後像および側面像を撮影する。機能的評定の測定を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。対象は、０日目に受け取ったのと同じ製剤の、カルシウム元素２００ｍｇを含む錠剤のさらなるパック（合計１００錠個。２１日の供給分＋予備の１６錠）を受け取る。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。伸長期を完了しなかった対象は、医師の決定に基づいてさらなる放射線像の評定のために通院する。
【０１２１】
通院２  −  （１４±１日目）−制御Ｘ線前後像および側面像を撮影する。機能的評定の測定を実施する。対象は、０日目に受け取ったのと同じ製剤の、カルシウム元素２００ｍｇを含む錠剤のさらなるパック（合計１００錠個。２１日の供給分＋予備の１６錠）を受け取る。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。伸長期を完了しなかった対象は、医師の決定に基づいてさらなる放射線像の評定のために通院する。
【０１２２】
通院３  −  （３５±１日目）−制御Ｘ線前後像および側面像を撮影する。機能的評定の測定を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。対象は、０日目に受け取ったのと同じ製剤の、カルシウム元素２００ｍｇを含む錠剤のさらなるパック（合計１００錠個。２１日の供給分＋予備の１６錠）を受け取る。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。伸長期を完了しなかった対象は、医師の決定に基づいてさらなる放射線像の評定のために通院する。
【０１２３】
通院４  −  （５６±１日目）−制御Ｘ線前後像および側面像撮影を実施する。機能的評定の測定を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。放射線像で治癒を示さなかった対象は、医師の決定に基づいてさらなる放射線評定のために通院する。対象は、０日目に受け取ったのと同じ製剤の、カルシウム元素２００ｍｇを含む錠剤のさらなるパック（合計１００錠個。２１日の供給分＋予備の１６錠）を受け取る。対象は、１日あたり４錠摂取するように指導される。伸長期を完了しなかった対象は、医師の決定に基づいてさらなる放射線像の評定のために通院する。
【０１２４】
転帰の測定
−  骨治癒指数（ＢＨＩ）−骨治癒指数。外部固定器の取り外しに関する決定を、以下の２つの手法で、Ｘ線前後像および側面像における４つのうち少なくとも３つの皮質架橋の同定により行う：
−  各追跡評価の際に独立した観察者３名による
−  画像解析ツールを使用することによる
−  画像解析ツールを用いた延長間隙および仮骨石灰化の定量的測定
−  緻密化時間（ＣＴ）−仮骨延長のための骨切り術の終了時から緻密化全体、または固定器取り外しまでの時間（日）
−  機能的評定：
−  体重負荷：
−  橈骨遠位端骨折に関係する症状および兆候の評定：
−  カルシウム副作用の評定：
−  安全性パラメータ：血清および尿のカルシウム検査
−  試験全体を通して記録された有害事象
【０１２５】
安全性の分析
安全性の分析は、本質的に記述および口述によるものである。安全性のエンドポイントは、試験処置に関連する、しないかにかかわらず、有害事象（ＡＥ）および重篤な有害事象（ＳＡＥ）である。同じく含まれるのが、血清中カルシウムレベル、尿中カルシウムおよびクレアチニンレベルである。
【０１２６】
効能の分析
効能の第一のエンドポイントは、治癒が観察された週を基準にして半連続的にスコアリングされる、医師の放射線像評価による骨治癒指数である。骨治癒指数などの「事象が起こるまでの時間」変数は、打ち切りデータがないため、連続データ（平均、中央値など）として記載される。治癒の時間パターンに関する情報を提供するために、生存曲線も作成する。
【０１２７】
これらがほぼ正規分布していれば、生データに関する対応のないｔ−検定により仮説を検定する。データが正規から実質的に外れている場合には、対数変換を利用してデータを正規化する。後者を適用した後、データが尚も正規から外れる場合には、ノンパラメトリックなウィルコクソン順位和検定を利用する。
【０１２８】
この試験は、延長の度合いの関数としての骨治癒指数が、対照と比較して処置で有意に低下している場合には、成功と見なされる。
【０１２９】
以下に示すのは、本試験の効能の第二のエンドポイントである：
−  コンピュータ化された画像解析により解析された放射線像により評定された骨治癒指数
−  骨折間隙および仮骨石灰化の定量的測定、例えば
−  仮骨が骨折部を架橋するまでの時間
−  皮質骨が主骨折線を交差するまでの時間
−  骨折間隙のエリアの骨新生の量および密度
−  仮骨形成の量および密度
−  術後早期機能の変化
【０１３０】
コンピュータ化された画像解析による治癒指数などの「事象が起こるまでの時間」エンドポイントは、連続変数として表されていることに加えて、生存曲線により記載される。骨新生の密度などの連続エンドポイントは、データが正規から意味有りげに外れている場合には、分散分析（ＡＮＯＶＡ）またはノンパラメトリック検定を利用して群間で比較する。連続した第二のエンドポイントに関するデータの欠測は、最終観察繰越（ＬＯＣＦ）法を利用して帰属させる。変動スコアは、ベースラインの単純な減算を利用して計算する。
【０１３１】
実施例３：橈骨遠位端骨折の処置のための合成ＡＣＣ
骨折の修復を促進するために、少なくとも１種の安定化剤を含む合成の安定した非晶質炭酸カルシウムを投与することの効能を評価することを目的とした実験を、実施する。前向き無作為化並行二重盲検対照試験により、橈骨遠位端骨折の機能的転帰および放射線像での治癒時間に及ぼす非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）の影響を、結晶性炭酸カルシウム（ＣＣＣ）またはプラセボのいずれかと比較する。
【０１３２】
橈骨遠位端の骨折は、骨格系への損傷の最も一般的なタイプの１つであり、ギプスからピンニング、そしてプレートおよびスクリューを用いた直視下手術まで、様々な異なる技術を利用して処置される。橈骨遠位端は、海綿骨および皮質骨の両方を含み、放射線像で確認でき、放射線像を歪曲させ得る軟組織をほとんど有さず、複数の機能的エンドポイントで検査可能であるため、コーレス骨折を、骨折治癒に及ぼすＡＣＣ処置の影響をテストするモデルとして選択した。
【０１３３】
本試験の第一の目的は、橈骨遠位端骨折を有する対象において放射線像での治癒時間に及ぼすＡＣＣ由来カルシウムでの処置の効能をＣＣＣまたはプラセボと比較して評定することである。
【０１３４】
第二の目的は、橈骨遠位端骨折後の手首の機能的転帰の改善に及ぼすＡＣＣの影響をＣＣＣまたはプラセボと比較して評価することである。さらなる第二の目的は、この集団においてＡＣＣの安全性プロファイルを評価することである。
【０１３５】
試験集団の選択
試験集団は、橈骨遠位端骨折を有する対象７５名を含み、各処置群は対象２５名からなる。
【０１３６】
組み入れ基準：
−  Ｘ線により可視となる橈骨遠位端の非開放性の片側背側転位型骨折（コーレス）を有する対象
−  骨折事象から厳密に７（＋１）日後に試験処置を開始することができる対象
−  非観血的整復および固定により保存的に処置された対象
−  年齢５０〜９０歳（範囲内全て）
−  通院計画およびプロトコル要件を固守することができ、試験を完了する時間のある対象
−  ＩＣＦに署名した対象
【０１３７】
除外基準
−  手術による骨折固定の基準に適合する関節内骨折または関節外骨折を有する対象
−  手首にピンまたはプレートを入れられた対象
−  現在骨折した前腕遠位端に、過去の骨折が持続しているか、または骨手術を受けた
−  複数の損傷（一度に複数の骨折）を有する対象
−  損傷した腕の手首および／または手の機能に影響する関節疾患に罹患している対象
−  血清カルシウムが高値（＞１０．２ｍｇ／ｄＬ）
−  ２５−ヒドロキシビタミンＤ＜２０ｎｇ／ｍＬ
−  活動性の肝疾患または臨床上の黄疸に罹患している対象
−  現在、悪性腫瘍を有する、または試験前５年以内の悪性腫瘍の病歴を有する対象
−  認知障害
−  甲状腺または副甲状腺に影響を及ぼしている任意の疾患
−  慢性腎不全（第３〜５期）
−  糸球体濾過量（ＣＦＲ）＜６０ｍｌ／分
−  高リン酸血症、Ｐ＞５ｍｇ／ｄｌ
−  胃腸管からの吸収に影響を及ぼしている任意の既知の疾患：
−  炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）
−  慢性下痢
【０１３８】
臨床試験用製品の記載
試験で用いられる安定した非晶質炭酸カルシウムは、先に記載された通り、Ａｍｏｒｐｈｉｃａｌ  Ｌｔｄにより提供された、低濃度のホスホセリンおよびクエン酸塩（最終生成物中に０．５％未満）により安定化された合成ＡＣＣである。
【０１３９】
対照製品の記載
ＡＣＣによる橈骨遠位端骨折の処置の効能を、結晶性炭酸カルシウムおよびプラセボと比較した。最初の対照製品は、各錠剤に結晶性炭酸カルシウム５００ｍｇ（カルシウム元素２００±５ｍｇ）およびスクロース１６７ｍｇを含んでいた。非晶質炭酸カルシウムの効果を結晶性炭酸カルシウムと比較して評価するために、対照製品中のカルシウム元素レベルを、処置群のカルシウム元素レベルと等しくした。第二の対照製品は、各錠剤にデンプン５００ｍｇを含んでいた。安定した非晶質炭酸カルシウム供給源からのカルシウムの投与を含む、橈骨遠位端骨折の治癒を、結晶性炭酸カルシウムまたはプラセボのいずれかによる治癒と比較した。
【０１４０】
投与量および投与
適格な対象が、無作為に３つの処置の１つを受けた。試験サプリメントの各用量は、表５に示された通り、各錠剤中の、カルシウム元素２００ｍｇを含むＡＣＣ  ６６７ｍｇ、またはＣＣＣもしくはデンプン５００ｍｇからなった。
【表５】
2016507553.tif 000006
【０１４１】
投与量の選択は、１９〜５０歳の対象用のカルシウム元素の推奨１日摂取量（１０００ｍｇ／日）に基づく。対照のカルシウム投与量は、ＡＣＣ製品中のカルシウム元素量と等しい。
【０１４２】
対象の処置への割り当て
対象を、無作為化リストに従って処置群の１つに無作為に割り付ける。２つの試験群それぞれへの無作為化は、施設内でのブロックランダム化を利用して実施する。
【０１４３】
盲検
臨床試験で投与される経口カルシウム処置は、盲検である。対象、研究者、ならびに対象の評価、モニタリング、分析およびデータ管理に関与する任意の職員は、臨床試験用製品を調製、分配およびラベル表示を担うスポンサーを除き、対象への配合物割り付けについて伏せられている。内容を認識しているスポンサーにより、投薬の前に盲検用ラベルをバイアルに貼付する。
【０１４４】
無作為化手順
本試験は二重盲検であり、それゆえＣＲＣの職員および対象は、試験全体を通してコード割り付けについて伏せられたままである。投与前に、各対象を個々の数字で割り付けて、所定のコンピュータ作成の無作為化リストに従って処置する。コンピュータ作成のアルゴリズムを用いて、対象を処置群に割り付ける。処置組成物は、スポンサーが調製し、運搬の前にラベルをバイアルに貼付する。病院薬剤師を、コホート割り付けリストに従って製品をＣＲＣに分配するよう指導する。
【０１４５】
試験計画
対象７５名を３群のうちの１つ（Ｎ＝２５）に無作為に割り付ける。処置群内の対象は、非晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を受け、活性対照群の対象は、対照製品を受け、プラセボ群の対象は、プラセボ製品を受ける。製剤は全て、ビタミンＤが補充されている。安全性パラメータを、試験全体を通して評価する。
【０１４６】
新たな橈骨遠位端骨折後に医療施設の手の専門科に入院している対象を、日常的に評価する。最初、現行の骨折管理法（即ち、放射線評価、および焼き石膏内での副木による骨折固定）に従って処置され、手術の候補でなく非侵襲性処置を目指す対象が、本試験の候補と判断され、スクリーニングのためにＣＲＣに通院する。
【０１４７】
スクリーニング（−７日目）  −  対象は、インフォームドコンセントの用紙（ＩＣＦ）に署名する。血液化学検査：ナトリウム、カリウム、ヘモグロビン、赤血球沈降速度、白血球、カルシウム（総量、アルブミン補正）、リン酸塩、アルカリホスファターゼ、クレアチニンおよびアルブミンを、実施する。同じく血清ＰＴＨ、２５−ヒドロキシビタミンＤ、および甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）を、検査する。カルシウムおよびクレアチニンの尿中排出量を、測定する。一般健康診断を、医療歴および身体検査により検査する。組み入れ基準の全てを遵守し、除外基準のいずれにも従わない適格な対象を、試験に登録する。
【０１４８】
対象は、試験への参加に適格であるかどうかを電話で、または試験施設で報告される。
【０１４９】
通院１  −  骨折の１週間後−（０（−７／＋１）日目）−適格な対象が、ＣＲＣに通院する。Ｘ線撮影を実施して、整復不良を除外する。対象は、ＡＣＣまたは対照製品の錠剤のうち１つのパックを無作為に受け取るが、臨床試験用製品は、カルシウム元素２００ｍｇを含有している（合計１８０錠、４２日の供給分＋予備の１２錠）。０日目前に到着した対象は、厳密に骨折事象から７日後に処置を開始するように指導される。対象は、最初の６週間（０〜４２日目）は１日あたり４錠を午前に２錠、午後に２錠（臨床試験群では１日あたりカルシウム元素合計８００ｍｇ）で食後に摂取するように指導される。カルシウム関連の副作用のリスクを最小限に抑えるために、カルシウムを定期的に摂取している臨床試験群および対照群（対照製品はＣＣＣまたはプラセボのいずれか）の対象は、試験の間は最後までカルシウムサプリメントの摂取を中断するよう指導される。対象は、医師の決定に基づいてビタミンＤ３サプリメントを摂取するよう勧められる。
【０１５０】
通院２  −  骨折の３週後−（１４±１日目）−投与前の血清中カルシウム濃度を、測定する。ギプスを外し、制御Ｘ線前後像および側面像撮影を実施する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を実施する。手首を、調節可能なブレースを用いて固定する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。対象は、ＣＲＣの代表者と共にＴＳＱＭ質問票に記入する。
【０１５１】
通院３  −  骨折の５週後−（２８±１日目）−投与前の血清中カルシウム濃度を、測定する。制御Ｘ線前後像および側面像撮影を、ブレースを外して実施する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。
【０１５２】
通院４  −  骨折の７週後−（４２±１日目）−投与前の血清中カルシウム濃度、尿中カルシウムおよびクレアチニン濃度を、測定する。制御Ｘ線前後像および側面像撮影を、ブレースを外して実施する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を実施する。対象は、錠剤のさらなるパックを受け取るが、臨床試験用製品の錠剤は、０日目に受け取ったのと同じ製剤で、カルシウム元素２００ｍｇを含む（合計１８０錠。４２日の供給分＋予備の１２錠）。対象は、次の６週間（４２〜８４日目）に１日あたり４錠を午前に２錠、午後に２錠（臨床試験群では１日あたりカルシウム元素合計８００ｍｇ）で食後に摂取するように指導される。カルシウム関連の副作用のリスクを最小限に抑えるために、カルシウムを定期的に摂取している臨床試験群および対照群（対象製品はＣＣＣまたはプラセボのいずれか）の対象は、試験の間は最後までカルシウムサプリメントの摂取を中断するよう指導される。対象は、医師の決定に基づいてビタミンＤ３サプリメントを摂取するよう勧められる。Ｘ線測定で放射線像上の治癒を示さなかった対象は、５６日目にさらなる放射線評定のために通院する。
【０１５３】
通院５  −  骨折の９週後−（５６±１日目）−このテストは、これまでの通院で実施されたＸ線検査で放射線像上の治癒を示さなかった対象のみで実施される。制御Ｘ線前後像および側面像撮影を、ブレースを外して実施する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。Ｘ線測定で放射線像上の治癒を示さなかった対象は、７０日目にさらなる放射線評定のために通院する。
【０１５４】
通院６  −  骨折の１１週後−（７０±１日目）−このテストは、これまでの通院で実施されたＸ線検査で放射線像上の治癒を示さなかった対象のみで実施される。制御Ｘ線前後像および側面像撮影を、ブレースを外して実施する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。
【０１５５】
通院７  −  骨折の１３週後−（８４±１日目）−投与前の血清中カルシウム濃度、尿中カルシウムおよびクレアチニン濃度を、測定する。制御された前後および側方Ｘ線像を、撮影する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。対象は、ＣＲＣの代表者と共にＴＳＱＭ質問票に記入する。対象は、試験処置投与を中断するよう指導される。試験の開始時に定期的なカルシウムサプリメントを中断された対象は、カルシウムの定期的摂取を継続するよう指導される。
【０１５６】
通院８  −  骨折の２４週後−（１６１±１日目）−血清中カルシウム濃度、尿中カルシウムおよびクレアチニン濃度を、測定する。制御Ｘ線前後像および側面像撮影を、実施する。機能的評定（ペインフリーグリップおよびフォースプレート）測定および問診（ＶＡＳ、ＤＡＳＨ）を、実施する。対象は、生じ得る任意の副作用または有害事象について質問される。
【０１５７】
転帰の測定
−  放射線像上の治癒期間−放射線像上の治癒は、骨折が起こった日と、４つのうちの３つの皮質において架橋がＸ線像に見られた時間と、の日数間隔として定義される。Ｘ線前後像で可視となる２つの皮質（橈側および尺側）および側面像で認められた２つの皮質（背側および掌側）について、以下の２つの手法で決定する：
−  各追跡評価の際に独立した観察者３名による
−  画像解析ツールを使用することによる
−  画像解析ツールを用いた骨折間隙および仮骨石灰化の定量的測定
−  機能的評定：
−  ペインフリーグリップ−ＪＡＭＡＲダイナモメータによる握力の評定。ダイナモメータは、握力を容易かつ正確に測定するソフトウエアに連結されている。ダイナモメータは、０．１ｋｇの増分で測定する。２分間隔での測定３回の平均を、個々の通院時の患者の握力と判断する。握力において利き手を調整するために、利き手でない手が損傷を受けていれば、百分率に１．０７を掛け、利き手が損傷を受けていれば、百分率に０．９３を掛ける。
−  ペインフリーでの体重負荷−手の体重負荷の評定を、ＦＰ２フォースプレートを用いて測定する。ＦＰ２フォースプレートは、加えられた力の量により制御され、０．１ｋｇの増分で設定することができる。フォースプレートは、非常に感度が高く、指の接触程度でも反応する。発生した最大の力を、フォースプレートに接続されたソフトウエアにより測定する。
−  橈骨遠位端骨折に関係する症状および兆候の評定：
−  ＤＡＳＨスコア−上肢の複数の筋骨格障害のいずれかを有する人において身体機能および症状を測定するように設計された３０の項目からなる自己申告質問票
−  ＶＡＳ質問票による疼痛評価
−  カルシウム副作用の評定：
−  安全性パラメータ：血清および尿のカルシウム検査
−  治療満足度評価スケール（ＴＳＱＭ）
−  試験全体を通して記録された有害事象
【０１５８】
安全性の分析
安全性の分析は、本質的に記述および口述によるものである。安全性のエンドポイントは、試験処置に関連する、しないかにかかわらず、有害事象（ＡＥ）および重篤な有害事象（ＳＡＥ）である。同じく含まれるのが、血清中カルシウムレベル、尿中カルシウムおよびクレアチニンレベル、ならびに治療満足度評価スケール（ＴＳＱＭ）の副作用領域である。
【０１５９】
効能の分析
効能の第一のエンドポイントは、治癒が観察された週を基準にして半連続的にスコアリングされる、医師の放射線像評価による治癒までの時間である。治癒までの時間などの「事象が起こるまでの時間」変数は、打ち切りデータがないため、連続データ（平均、中央値など）として記載される。治癒の時間パターンに関する情報を提供するために、生存曲線も作成する。
【０１６０】
これらがほぼ正規分布していれば、生データに関する対応のないｔ−検定により仮説を検定する。データが正規から実質的に外れている場合には、対数変換を利用して、データを正規化する。後者を適用した後、データが尚も正規から外れる場合には、ノンパラメトリックなウィルコクソン順位和検定を利用する。
【０１６１】
この試験は、治癒までの時間が、対照と比較して処置で有意に短い場合には、成功と見なされる。
【０１６２】
以下に示すのは、本試験の効能の第二のエンドポイントである：
−  コンピュータ化された画像解析により解析された放射線像により評定された治癒までの時間
−  骨折間隙および仮骨石灰化の定量的測定、例えば
−  仮骨が骨折部に架橋するまでの時間
−  皮質骨が主骨折線を交差するまでの時間
−  骨折から３、５、７および１３週後の骨折間隙のエリアの骨新生の量および密度
−  骨折から３、５、７および１３週後の仮骨形成の量および密度
−  術後早期機能の変化（ペインフリーグリップおよびフォースプレート測定）
−  橈骨遠位端骨折に関係する症状および兆候の変化：ＤＡＳＨおよびＶＡＳ
−  ＴＳＱＭ領域：有効性、簡便性および全体的満足度
【０１６３】
コンピュータ化された画像解析による治癒までの時間などの「事象が起こるまでの時間」エンドポイントは、連続変数として表されていることに加えて、生存曲線により記載される。骨新生の密度などの連続エンドポイントは、データが正規から意味有りげに外れている場合には、分散分析（ＡＮＯＶＡ）またはノンパラメトリック検定を利用して群間で比較する。連続した第二のエンドポイントに関するデータの欠測は、最終観察繰越（ＬＯＣＦ）法を利用して帰属させる。変動スコアは、ベースラインの単純な減算を利用して計算する。
【０１６４】
実施例４：歯科インプラント一体化を促進するための合成ＡＣＣ
歯科インプラントを、ウサギの脛骨に手術により挿入し、２〜６週間、治癒させる。ウサギに、合成ＡＣＣまたはＣＣＣ（結晶性炭酸カルシウム）のいずれかを含有する１つのゼラチンカプセルを経口投与する。治癒期間の後、動物を殺処分し、脛骨を回収する。インプラントの一部を、走査電子顕微鏡測定（ＳＥＭ）のために取り出す。
【０１６５】
具体的な実施形態の前述の記載は、他者が過度の実験を行わず、かつ全体的概念を逸脱することなく、現在の知識を適用することにより、そのような特定の実施形態を様々な適用例に向けて即座に改良および／または適合させ得る、本発明の全般的性質をより完全に表しており、それゆえそのような適合および修正は、開示された実施形態の均等物の意義および範囲内のものと解釈されなければならず、そして解釈されることを意図している。本明細書で用いられる表現法または用語法は、記述を目的としており、限定ではないことが理解されなければならない。様々な開示された機能を実行するための手段、材料、およびステップは、本発明を逸脱することなく様々な別の形態をとることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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