(57)【要約】  ＣＸＣケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）及びＣＸＣケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）に特異的に結合する１つ以上の分子を含む組成物、ならびに治療有効量のそのような組成物を対象に投与することにより、対象における病的骨損失の症状を治療し、改善するための方法が提供される。
2016516746.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＸＣケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）及びＣＸＣケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）に特異的に結合する１つ以上の分子を含む、組成物。
【請求項２】
前記分子のうちの少なくとも１つが、抗体またはその抗原結合断片である、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項３】
前記抗体が、二重特異性抗体、もしくは汎特異的抗体、またはそれらの抗原結合断片である、請求項２に記載の前記組成物。
【請求項５】
前記組成物が、２つの抗体、またはそれらの抗原結合断片を含む、請求項２に記載の前記組成物。
【請求項６】
前記１つ以上の分子が、共通の細胞内シグナル伝達経路を阻害するために、相乗的に作用する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項７】
前記組成物が、インターロイキン−８または別のＣＸＣＲリガンドが、ＣＸＣＲ１及び／またはＣＸＣＲ２に結合するのを阻止する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項８】
前記組成物が、ＣＸＣＲ１及び／またはＣＸＣＲ２の活性を阻害する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項９】
前記組成物が、破骨細胞の分化及び／または活性を阻害する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、骨芽細胞活性を促進する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、骨吸収を阻止し、かつ／または骨沈着を促進する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、対象における骨転移の成長を阻害する、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、追加の治療薬をさらに含む、請求項１に記載の前記組成物。
【請求項１４】
前記追加の治療薬が、ビスホスホネート、カルシトニン、テリパラチド、副甲状腺ホルモン類似体、カルシトニン、及び選択的エストロゲン受容体調節因子からなる群から選択される、請求項１４に記載の前記組成物。
【請求項１５】
骨溶解の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の治療有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１６】
投与後、前記組成物が、骨体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、総骨表面（ＢＳ）、骨表面密度（ＢＳ／ＢＶ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）、及び総体積（Ｄｅｎｓ  ＴＶ）からなる群から選択される骨パラメータを改善する、請求項１５に記載の前記方法。
【請求項１７】
投与後、前記組成物が、尿中ヒドロキシプロリン、尿中総ピリジノリン（ＰＹＤ）、尿中遊離デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）、尿中Ｉ型コラーゲン架橋Ｎ−テロペプチド（ＮＴＸ）、尿または血清中Ｉ型コラーゲン架橋Ｃ−テロペプチド（ＣＴＸ）、骨シアロタンパク質（ＢＳＰ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、及び酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ５ｂ（ＴＲＡＰ）からなる群から選択される骨吸収の血清バイオマーカーを減少させる、請求項１５〜１６のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項１８】
投与後、前記組成物が、総アルカリホスファターゼ、骨特異的アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、及びＩ型プロコラーゲン（Ｃ末端／Ｎ末端）からなる群から選択される骨沈着の血清バイオマーカーを増加させる、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項１９】
投与後、前記組成物が、骨吸収を阻害する、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２０】
投与後、前記組成物が、骨沈着を促進する、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２１】
投与後、前記組成物が、対象における骨転移の成長を阻害する、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２２】
投与後、前記組成物が、骨転移を有する対象の症状を改善する、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２３】
前記組成物の前記投与が、非経口または経口経路によるものである、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２４】
前記非経口経路が、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、くも膜下腔内、吸入、または関節内経路である、請求項２３に記載の前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１３年３月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／８０６，５８３号に関し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、溶骨性骨疾患を治療するのに有用な組成物及び方法に関する。より具体的には、本発明は、ＣＸＣケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）及びＣＸＣケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）に特異的に結合する１つ以上の分子を含む組成物、ならびに対象に治療有効量のそのような組成物を投与することにより、対象における病的骨損失の症状を治療し、改善するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
病的骨損失（骨溶解）は、世界的に主な罹患率の原因の１つである。いくつかの疾患及び年齢関連の状態が骨溶解を引き起こし、骨量の減少（骨粗鬆症）、骨痛及び関節痛、ならびに病的骨折をもたらす。米国だけで、１８００万人を超える個人が骨粗鬆症によりある程度の骨損失を経験し、１５０万件を超える病的骨折をもたらす。加えて、数種のヒト癌が骨に転移し、溶骨性骨損失及びその関連症状をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、当該技術分野において病的骨溶解の有効な治療法を緊急に開発する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、溶骨性骨疾患及び／または障害を治療するのに有用な組成物及び方法に関する。より具体的には、本発明は、ＣＸＣケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）及びＣＸＣケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）に特異的に結合する１つ以上の分子を含む組成物、ならびに対象に治療有効量のそのような組成物を投与することにより、対象における病的骨損失の症状を治療し、改善するための方法に関する。
【０００６】
したがって、一態様では、本発明は、ＣＸＣケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）及びＣＸＣケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）に特異的に結合する１つ以上の分子を含む組成物である。一実施形態では、本発明の分子のうちの少なくとも１つは、抗体またはその抗原結合断片である。別の実施形態では、抗体は、二重特異性抗体、または汎特異的抗体、またはそれらの抗原結合断片である。
【０００７】
別の実施形態では、本組成物は、２つの抗体またはそれらの抗原結合断片を含む。別の実施形態では、１つ以上の分子は、共通の細胞内シグナル伝達経路を阻害するために、相乗的に作用する。
【０００８】
一実施形態では、本組成物は、インターロイキン−８または別のＣＸＣＲリガンドがＣＸＣＲ１及び／もしくはＣＸＣＲ２に結合するのを阻止する。別の実施形態では、本組成物は、ＣＸＣＲ１及び／またはＣＸＣＲ２の活性を阻害する。
【０００９】
一実施形態では、本組成物は、破骨細胞分化及び／または活性を阻害する。別の実施形態では、本組成物は、骨芽細胞活性を促進する。別の実施形態では、本組成物は、骨吸収を阻止し、かつ／または骨沈着を促進する。さらに別の実施形態では、本組成物は、対象における骨転移の成長を阻害する。
【００１０】
一実施形態では、本組成物は、追加の治療薬をさらに含む。別の実施形態では、追加の治療薬は、ビスホスホネート、カルシトニン、テリパラチド、副甲状腺ホルモン類似体、カルシトニン、及び選択的エストロゲン受容体調節因子からなる群から選択される。
【００１１】
別の態様では、本発明は、骨溶解の治療を必要とする対象にそれを行うための方法を提供し、治療有効量の先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与することを含む。
【００１２】
一実施形態では、投与後、本組成物は、骨体積密度（ＢＶ／ＴＶ）、総骨表面（ＢＳ）、骨表面密度（ＢＳ／ＢＶ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨梁間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）、及び総体積（Ｄｅｎｓ  ＴＶ）からなる群から選択される骨パラメータを改善する。
【００１３】
一実施形態では、投与後、本組成物は、尿中ヒドロキシプロリン、尿中総ピリジノリン（ＰＹＤ）、尿中遊離デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）、尿中Ｉ型コラーゲン架橋Ｎ−テロペプチド（ＮＴＸ）、尿または血清中Ｉ型コラーゲン架橋Ｃ−テロペプチド（ＣＴＸ）、骨シアロタンパク質（ＢＳＰ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、及び酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ５ｂ（ＴＲＡＰ）からなる群から選択される骨吸収の血清バイオマーカーを減少させる。
【００１４】
一実施形態では、投与後、本組成物は、総アルカリホスファターゼ、骨特異的アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、及びＩ型プロコラーゲン（Ｃ末端／Ｎ末端）からなる群から選択される骨沈着の血清バイオマーカーを増加させる。
【００１５】
一実施形態では、投与後、本組成物は、骨吸収を阻害する。別の実施形態では、投与後、本組成物は、骨沈着を促進する。別の実施形態では、投与後、本組成物は、対象における骨転移の成長を阻害する。さらに別の実施形態では、投与後、本組成物は、骨転移を有する対象の症状を改善する。
【００１６】
一実施形態では、本組成物の投与は、非経口または経口経路によるものである。別の実施形態では、非経口経路は、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、くも膜下腔内、吸入、または関節内経路である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＩＬ−８媒介破骨細胞形成の機構ならびに抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＣＲ２抗体を有するＩＬ−８受容体の阻害の略図である。
【図２】ＣＸＣＲ１（図２Ａ）、ＣＸＣＲ２（図２Ｂ）、及びＩＬ−８（図２Ｃ）を遮断する抗体による破骨細胞形成の阻害を示す第１の一連グラフ、ならびに破骨細胞前駆体（図２Ｄ）、ＮＦＡＴ陽性前駆体の数（図２Ｅ）、及び破骨細胞核の数（図２Ｆ）を含む、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２抗体治療後の破骨細胞前駆体の数を特徴付ける第２の一連のグラフを含む。
【図３】抗ＣＸＣＲ１と抗ＣＸＣＲ２抗体との組み合わせによる破骨細胞形成の増加した阻害を示す、２つのグラフ（Ａ及びＢ）を含む。
【図４】抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＣＲ２抗体の相乗効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
Ａ．定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての専門及び科学用語は、当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００１９】
本明細書及び付属の特許請求の範囲に使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明確に指示されない限り、複数形の参照も含むことに留意する。
【００２０】
用語「約」または「およそ」は、所与の値または範囲の１０％以内、より好ましくは５％以内（もしくは１％以下）を意味する。
【００２１】
用語「投与する」または「投与」は、物質（例えば、抗体）が身体の外側に存在するとき、粘膜、皮内、静脈内、皮下、筋肉内送達、及び／または本明細書に記載される、もしくは当該技術分野において既知である物理的送達の任意の他の方法などにより、それを患者に注射する、ないしは別の方法で物理的に送達する行為を指す。疾患またはその症状が治療されるとき、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の開始後に生じる。疾患またはその症状が予防されるとき、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の開始前に生じる。
【００２２】
用語「ＣＸＣＲ１」は、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃ）受容体１を指し、用語「ＣＸＣＲ２」は、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃ）受容体２を指し、用語「ＣＸＣＲ１／２」は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２の両方を指す。用語「ＩＬ−８」は、インターロイキン−８を指す。
【００２３】
ＣＸＣＲ１／２の「拮抗薬」または「阻害剤」は、ＣＸＣＲ１／２を発現する細胞、またはＣＸＣＲ１／２リガンド（例えば、ＩＬ−８）を発現する細胞などにおける、ＣＸＣＲ１／２の生物活性のうちの１つ以上を阻害する、ないしは別の方法で減少させることができる１つ以上の分子を指す。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の１つ以上の抗体は、細胞表面発現ＣＸＣＲ１／２受容体（例えば、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２）を有する細胞におけるＣＸＣＲ１／２の活性を、前記抗体が前記細胞と接触する場合に阻害する、ないしは別の方法で減少させる拮抗薬抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ１／２の拮抗薬（例えば、本発明の抗体）は、例えば、ＣＸＣＲ１及び／またはＣＸＣＲ２受容体を発現する細胞の活性化及び／または細胞シグナル伝達経路を阻害する、ないしは別の方法で減少させ、それによって、拮抗薬の不在下のＣＸＣＲ１／２媒介生物活性に対して細胞のＣＸＣＲ１／２媒介生物活性を阻害することにより作用し得る。本発明のある特定の実施形態では、１つ以上の抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、拮抗的抗ＣＸＣＲ１／２抗体、好ましくは完全ヒト抗体、モノクローナル抗体、拮抗的抗ＣＸＣＲ１／２抗体である。
【００２４】
用語「抗体」、「免疫グロブリン」、または「Ｉｇ」は、本明細書において、互換的に使用され得る。用語「抗体」は、これらに限定されないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換えにより生成された抗体、多選択性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、細胞内抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性等を含む）、ラクダ化抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片が挙げられる。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、ＣＸＣＲ１／２抗原に特異的に結合する抗原結合部位（例えば、抗ＣＸＣＲ１／２抗体の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む抗原結合ドメインまたは分子を含む。抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）のものであってよい。ある特定の実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ヒト化モノクローナル抗ＣＸＣＲ１／２抗体など、ヒト化される。他の実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、完全ヒトモノクローナル抗ＣＸＣＲ１／２抗体など、完全ヒトである。
【００２５】
用語「組成物」及び「製剤」は、任意に、指定された量で、指定された成分（例えば、抗ＣＸＣＲ１／２抗体または抗体）を含む製品、ならびに任意に、指定された量で、指定された成分の組み合わせから直接的または間接的に生じるあらゆる製品を包含することが意図される。
【００２６】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗体の抗原への結合に直接的に関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を呈する軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。本用語は、抗原結合部位を含む可変ドメインである免疫グロブリンの他の部分に対してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の一部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン、及び軽鎖のＣＨＬドメインを含む。
【００２７】
用語「エピトープ」は、抗体の１つ以上の抗原結合領域に結合することができ、かつ免疫応答を引き起こすことができる動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトにおいて抗原活性または免疫原性活性を有する、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドまたはＣＸＣＲ１／２ポリペプチド断片などの抗原の表面上の局所領域を指す。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を引き起こすポリペプチドの一部分である。抗原活性を有するエピトープは、当該技術分野において周知の任意の方法、例えばイムノアッセイなどにより決定される、抗体が特異的に結合するポリペプチドの一部分である。抗原エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団（ｇｒｏｕｐｉｎｇｓ）からなり、特定の３次元構造特徴ならびに特定の電荷特徴を有する。エピトープに寄与するポリペプチドの領域は、ポリペプチドの近接するアミノ酸であるか、またはエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の近接しない領域から一緒になってよい。エピトープは、抗原の３次元表面特性であっても、そうでなくてもよい。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２エピトープは、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの３次元表面特性である。他の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２エピトープは、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの直鎖状特性である。抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＣＸＣＲ１／２の３次元または直鎖状エピトープに特異的に結合し得る。
【００２８】
用語「賦形剤」は、薬物の希釈剤、ビヒクル、保存剤、結合剤、安定剤等として通常使用される不活性物質を指し、これらに限定されないが、タンパク質（例えば、血清アルブミン等）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン等）、脂肪酸及びリン脂質（例えば、アルキルスルホネート、カプリレート等）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤等）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース等）、ならびにポリオール（例えば、マニトール、ソルビトール等）を含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａも参照。
【００２９】
ペプチドまたはポリペプチドの文脈において、用語「断片」は、完全長アミノ酸配列未満を有するペプチドまたはポリペプチドを指す。そのような断片は、例えば、アミノ酸末端での切り詰め、カルボキシ末端での切り詰め、及び／またはアミノ酸配列からの残基（複数可）の内部欠失から生じる。断片は、例えば、選択的ＲＮＡスプライシング、またはインビボプロテアーゼ活性によって生じ得る。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２断片は、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドのアミノ酸配列の少なくとも５０、１００アミノ酸残基、少なくとも１２５の近接するアミノ酸残基、少なくとも１５０の近接するアミノ酸残基、少なくとも１７５の近接するアミノ酸残基、少なくとも２００の近接するアミノ酸残基、少なくとも２５０の近接するアミノ酸残基、少なくとも３００の近接するアミノ酸残基、または少なくとも３５０の近接するアミノ酸残基を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２抗原に特異的に結合するＣＸＣＲ１／２ポリペプチドまたは抗体の断片は、完全長ポリペプチドまたは抗体のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの機能を維持する。
【００３０】
用語「完全ヒト抗体」または「ヒト抗体」は、本明細書において、互換的に使用され、ヒト可変領域、最も好ましくはヒト定常領域を含む抗体を指す。特定の実施形態では、本用語は、ヒト起源の可変領域及び定常領域を含む抗体を指す。ある特定の実施形態では、「完全ヒト」抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドに結合する抗体も包含し得、ヒト生殖系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体性変異体である核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、完全ヒト抗体である。用語「完全ヒト抗体」は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．ら（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）によって説明されるヒト生殖系列免疫グロブリン配列に対応する可変領域及び定常領域を有する抗体を含む。完全ヒト抗体を生成する方法は、当該技術分野において既知である。
【００３１】
句「組換えヒト抗体」は、宿主細胞内にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子の遺伝子導入及び／または導入染色体である動物（例えば、マウスまたはウシ）から単離された抗体（例えばＴａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５）、または他のＤＮＡ配列に対してヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを伴ういずれの他の手段により調製、発現、作製、または単離された抗体など、組換え手段により調製、発現、作製、または単離されるヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）に由来する可変領域及び定常領域を有し得る。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（またはヒトＩｇ配列遺伝子導入動物が使用される場合、インビボ体性突然変異誘発）を受け、よって、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、それらに関連するが、インビボヒト抗体生殖系列レパートリー内に自然に存在しない可能性がある配列である。
【００３２】
用語「重鎖」は、抗体を参照して使用される場合、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、アルファ（α）、デルタ（Δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と呼ばれる５つの個別の型を指す。重鎖のこれらの個別の型は、当該技術分野において周知であり、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、それぞれ、５つのクラスの抗体ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを生じる。好ましくは、重鎖は、ヒト重鎖である。
【００３３】
「単離された」または「精製された」抗体は、細胞材料、または抗体が由来する細胞もしくは組織源からの他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、または化学的に合成される場合、化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。用語「細胞材料を実質的に含まない」は、抗体が、単離されるか、または組換えにより生成される細胞の細胞コンパートメントから分離される、抗体の調製物を含む。よって、細胞材料を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、または５％未満（乾燥重量）の異種タンパク質（本明細書において「汚染タンパク質」とも称される）を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換えにより生成される場合、好ましくは、培養培地も実質的に含まない、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の容量の約２０％、１０％、または５％未満を表す。抗体が化学合成により生成される場合、好ましくは、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、タンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のそのような調製物は、対象の抗体以外の約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量）未満の化学前駆体または化合物を有する。好ましい実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、単離または精製される。
【００３４】
用語「Ｋａｂａｔ番付」などの用語は、当該技術分野において認識されており、抗体の重鎖及び軽鎖可変領域またはそれらの抗原結合部分において、他のアミノ酸残基より可変（すなわち、超可変）であるアミノ酸残基の番付システムを指す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１  ａｎｄ，Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域に関して、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０〜６５、及びＣＤＲ３についてはアミノ酸位置９５〜１０２の範囲である。軽鎖可変領域に関して、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置２４〜３４、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０〜５６、及びＣＤＲ３についてはアミノ酸位置８９〜９７の範囲である。
【００３５】
用語「軽鎖」は、抗体を参照して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）またはラムダ（λ）と呼ばれる２つの個別の型を指す。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。好ましい実施形態では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。
【００３６】
用語「管理する（ｍａｎａｇｅ）」、「管理（ｍａｎａｇｉｎｇ）」、及び「管理（ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ）」は、対象が疾患または障害の治癒をもたらさない療法（例えば、予防薬または治療薬）から得る有益な作用を指す。ある特定の実施形態では、対象は、疾患の進行または悪化を阻止するように、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患（例えば、病的骨溶解）、またはその１つ以上の症状を「管理」するために、１つ以上の療法（例えば、予防薬または治療薬）を投与される。
【００３７】
用語「モノクローナル抗体」は、同種または実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、各モノクローナル抗体は、典型的には、抗原上の単一エピトープを認識する。好ましい実施形態では、「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマまたは他の細胞により生成された抗体である。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に記載されるハイブリドーマ法により作製されるか、またはファージライブラリから単離され得る。それによって発現されたクローナル細胞系及びモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章を参照）。
【００３８】
用語「薬学的に許容される」は、動物、より具体的にはヒトにおける使用に関して、連邦政府もしくは州政府の規制機関により承認された、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般的に認識される薬局方に列記されることを意味する。
【００３９】
用語「薬学的に許容される賦形剤」は、好ましいまたは便利な投薬形態を調製するために、モノクローナル抗体などの活性分子と組み合わされる任意の不活性物質を意味する。「薬学的に許容される賦形剤」は、採用される投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性である賦形剤であり、モノクローナル抗体を含む製剤の他の成分と適合性がある。
【００４０】
用語「阻止する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「阻止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、及び「阻止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、本明細書に提供される療法または療法の組み合わせ（例えば、予防薬もしくは治療薬の組み合わせ）の投与によりもたらされる、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患及び／もしくはそれに関連する症状の発症、再発、開始、または拡散の完全または部分的阻害を指す。
【００４１】
用語「ＣＸＣＲ１／２抗原」は、抗体もしくは抗体の組み合わせなど、１つ以上の結合剤が特異的に結合するＣＸＣＲ１／２ポリペプチドのその部分を指す。ＣＸＣＲ１／２抗原は、抗体が特異的に結合するＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの類似体もしくは誘導体、またはその断片も指す。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ１／２抗原は、単量体ＣＸＣＲ１／２抗原または二量体ＣＸＣＲ１／２抗原である。エピトープに寄与するＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの領域は、ポリペプチドの近接するアミノ酸であるか、またはエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の近接しない領域から一緒になってよい。エピトープは、抗原の３次元表面特性であっても、そうでなくてもよい。免疫応答を引き起こすことができるＣＸＣＲ１／２抗原の表面上の局所領域は、ＣＸＣＲ１／２エピトープである。本明細書で使用される、ＣＸＣＲ１／２抗原の「類似体」は、本明細書に記載されるＣＸＣＲ１／２ポリペプチド、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの断片、もしくはＣＸＣＲ１／２エピトープと類似する、または同一の機能を保有するポリペプチドを指す。例えば、類似体は、本明細書に記載されるＣＸＣＲ１／２ポリペプチドのアミノ酸配列（例えば、配列番号１または配列番号２）、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの断片、ＣＸＣＲ１／２エピトープ、または抗ＣＸＣＲ１／２抗体に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含み得る。加えて、または別の方法としては、ポリペプチドは、厳密な条件下で、本明細書に記載されるＣＸＣＲ１／２ポリペプチド、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチドの断片、またはＣＸＣＲ１／２エピトープをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる。
【００４２】
用語「ヒトＣＸＣＲ１／２」、「ｈＣＸＣＲ１／２」、または「ＣＸＣＲ１／２ポリペプチド」及び類似する用語は、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書において、互換的に使用される）、ならびにそのＳＮＰ変異体を含む関連するポリペプチドを指す。関連するポリペプチドは、対立遺伝子変異体（例えば、ＳＮＰ変異体）；スプライス変異体；断片；誘導体；置換、欠失、及び挿入変異体；融合ポリペプチド、ならびに好ましくはＣＸＣＲ１／２活性を維持し、かつ／または抗ＣＸＣＲ１／２免疫応答を生成するのに十分である種間相同体を含む。抗ＣＸＣＲ１／２免疫学的応答を生成するのに十分であるＣＸＣＲ１／２の可溶形態も包含される。当業者が理解するように、エピトープは、同時により大きなポリペプチドの一部である、より大きなポリペプチド断面の一部である、より大きな抗原の一部であるため、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチド、ポリペプチド断片、抗原、及び／またはエピトープに結合することができる。ｈＣＸＣＲ１／２は、二量体または単量体の形態で存在することができる。
【００４３】
用語「ＣＸＣＲ１／２媒介疾患」及び「ＣＸＣＲ１／２媒介障害」は、互換的に使用され、ＣＸＣＲ１／２、例えば、ｈＣＸＣＲ１／２に完全に、もしくは部分的に起因するか、またはその結果である任意の疾患もしくは障害を指す。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２は、異常に発現される。他の実施形態では、ＩＬ−８は、異常に発現される。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ１／２またはＩＬ−８は、特定の細胞型において、異常に上方調節され得る。他の実施形態では、正常、異常、または過剰な細胞シグナル伝達は、ＩＬ−８がＣＸＣＲ１／２受容体に結合することに起因する。ある特定の実施形態では、ＩＬ−８受容体（例えば、ＣＸＣＲ１／２受容体）は、骨芽細胞、破骨細胞、またはいずれの細胞型の前駆体などの、細胞の表面上に発現される。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患は、病的骨溶解などの変性骨疾患である。
【００４４】
用語「特異的に結合する」または「特異的結合」は、抗原またはその断片（例えば、ＣＸＣＲ１／２）に特異的に結合し、他の抗原に特異的に結合しないことを意味する。抗原に特異的に結合する抗体は、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ、または当該技術分野において既知の他のアッセイにより決定される、低親和性の他のペプチドまたはポリペプチドに結合し得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、異なる非ＣＸＣＲ１／２抗原よりも２倍を超える親和性のＣＸＣＲ１／２（例えば、ｈＣＸＣＲ１／２）に特異的に結合し得る。抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、関連する抗原と交差反応性であってよい。例えば、ある特定の実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ｈＣＸＣＲ１／２と別のＣＸＣＲ１／２抗原（例えば、ゲッ歯類または非ヒト霊長類ＣＸＣＲ１／２抗体）と交差反応し得る。好ましくは、抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、他の非ＣＸＣＲ１／２抗原と交差反応しない。ＣＸＣＲ１／２抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、または当業者に既知の他の技法により特定され得る。典型的には、特定のまたは選択的反応は、少なくとも２倍の背景シグナルまたはノイズ、より典型的には、１０倍の背景である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質または抗体は、１×１０−６Ｍ〜１×１０−７の解離定数で、その抗原、例えば、ＣＸＣＲ１／２に結合する。他の実施形態では、解離定数は、１×１０−６Ｍ〜１×１０−８である。抗体特異性に関する論考に関しては、例えば、Ｐａｕｌ，ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ３３２−３３６を参照。
【００４５】
用語「対象」及び「患者」は、互換的に使用される。本明細書で使用される、対象は、好ましくは、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット等）または霊長類（例えば、サル及びヒト）などの哺乳類、最も好ましくはヒトである。一実施形態では、対象は、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患を有する哺乳類、好ましくはヒトである。別の実施形態では、対象は、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患を発症するリスクにある哺乳類、好ましくは、ヒトである。
【００４６】
用語「治療薬」は、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患及び／またはそれに関連する症状の治療、管理、または寛解に使用され得る任意の薬剤を指す。ある特定の実施形態では、用語「治療薬」は、ＣＸＣＲ１／２抗体を指す。ある特定の他の実施形態では、用語「治療薬」は、ＣＸＣＲ１／２抗体以外の薬剤を指す。好ましくは、治療薬は、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患またはそれに関連する１つ以上の症状の治療、管理、または寛解に有用であることが知られている、それに使用されてきた、または現在使用されている薬剤である。
【００４７】
用語「療法」は、ＣＸＣＲ１／２媒介疾患（例えば、病的骨溶解）の防止、管理、治療、及び／または寛解に使用され得る任意のプロトコル、方法、及び／または薬剤を指す。ある特定の実施形態では、用語「療法（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」及び「療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、医療関係者などの当業者に既知のＣＸＣＲ１／２媒介疾患の防止、管理、治療、及び／または寛解に有用な生物療法、支持療法、及び／または他の療法を指す。
【００４８】
用語「治療する」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、及び「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、１つ以上の療法の投与（これらに限定されないが、１つ以上の予防薬または治療薬の投与を含む）により生じるＣＸＣＲ１／２媒介疾患（例えば、病的骨溶解）の進行、重篤度、及び／もしくは期間の減少または寛解を指す。特定の実施形態では、そのような用語は、ＩＬ−８のＣＸＣＲ１／２受容体への結合の減少もしくは阻害、対象のＣＸＣＲ１／２受容体を発現する細胞からのＩＬ−８の産生もしくは分泌の減少または阻害、対象のＣＸＣＲ１／２受容体を発現しない細胞からのＩＬ−８の産生もしくは分泌の減少または阻害、細胞により発現されるＣＸＣＲ１／２受容体の活性の阻害、及び／あるいは病的骨溶解などのＣＸＣＲ１／２媒介疾患に関連する１つ以上の症状の阻害または減少を指す。
【００４９】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、軽鎖及び重鎖の一部分、典型的には、重鎖において、アミノ末端約１２０〜１３０のアミノ酸、及び軽鎖において約１００〜１１０のアミノ酸を指し、これは、抗体中の配列において広く異なり、その特定の抗原の各特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるこれらの領域に濃縮されるが、可変ドメインにおけるより高度な保存領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、主に、抗原を有する抗体の相互作用に関与する。アミノ酸位置の番付は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．）５ｔｈ  ｅｄ．（「Ｋａｂａｔら」）などの、ＥＵ指数に従う。好ましい実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
【００５０】
Ｂ．骨生物学
脊椎動物の骨格は、イオン輸送調節のために構造、支持、保護、及び鉱物源を提供する、生きている石灰化組織である骨から構成される。骨は、細胞及び無細胞構成要素の両方から構成される特殊な結合組織である。無細胞細胞外基質（ＥＣＭ）は、コラーゲン及び非コラーゲンタンパク質の両方を含み、その両方は、石灰化プロセスに関与する。
【００５１】
用語「皮質骨」または「緻密骨」は、高密度で、堅く、丈夫な骨の外層を指す。用語「骨梁骨」または「海綿骨」は、皮質骨より軽く、低密度の骨の海綿質の内層を指す。用語「骨梁」は、ロッドのような形状のもので、コラーゲン性組成物である、海綿質の骨の微細な構造単位を指す。
【００５２】
骨は、一定の再構築を受ける動的組織である。用語「骨芽細胞」は、類骨を蓄積する細胞を形成する最終分化骨を指す。用語「類骨」は、主にＩ型コラーゲンから構成される未熟な非石灰化骨を指す。用語「前骨芽細胞」は、完全に分化していない増殖性の未熟な骨芽細胞を指す。用語「骨細胞前駆細胞」は、骨芽細胞を含むいくつかの間葉系細胞型を引き起こす多能性細胞を指す。一般的に「間葉系幹細胞」と称される骨細胞前駆細胞は、骨髄で発生し、循環血液から少数で単離され得る。用語「破骨細胞」は、骨髄単核細胞に由来する（ｄｅｓｃｅｎｄｅｄ  ｆｒｏｍ）細胞を再吸収する多核性最終分化骨を指す。用語「前破骨細胞」は、単一核で、増殖性未熟破骨細胞を指す。破骨細胞は、いくつかの前破骨細胞の融合により形成される。前破骨細胞は、核因子κ  Ｂ（ＲＡＮＫ）細胞内シグナル伝達の受容体活性因子の転写活性因子である活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴ）のタンパク質核因子の核局在により特定され得る。ＲＡＮＫリガンド（ＲＡＮＫＬ）のＲＡＮＫへの結合は、破骨細胞の分化及び成熟の主な媒体である。成熟破骨細胞は、ＣＤ５１／６１または酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）の発現により、及びそれらの平らな多核性の外見により特定することができる。
【００５３】
正常な恒常性条件下で、骨芽細胞及び破骨細胞は、骨の完全性を維持するために連動する。液性因子は、骨芽細胞を増殖させ、機能的に分化し、骨沈着をもたらす。同時に、ＲＡＮＫＬなどの骨芽細胞分泌型因子は、破骨細胞形成（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｓｉｓ）及び骨吸収を刺激する。骨沈着及び骨吸収が脱共役となる場合、病変が生じる。例えば、大理石骨病は、吸収されない破骨細胞の結果である極端に高密度で、堅い骨を特徴とする骨疾患であり、一方、骨粗鬆症は、破骨細胞活性の増加により生じ得る脆性で多孔質の骨を特徴とする骨障害である。
【００５４】
乳癌及び前立腺癌などのある特定の癌は、骨に転移する傾向があり、この場合、骨の恒常性を妨害する。前立腺癌の転移は、性質上、造骨性である傾向があり、一方、乳癌の転移は、典型的には、溶骨性である。転移性乳癌は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、骨シアロタンパク質（ＢＳＰ）、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）、及びインターロイキン−８（ＩＬ−８）を含む、骨芽細胞及び破骨細胞の分化ならびに機能に影響を及ぼすことが知られるいくつかのサイトカイン及び成長因子を分泌する。
【００５５】
ＩＬ−８は、炎症の局所媒体である分泌型サイトカインである。ＩＬ−８リガンドの最も一般的な受容体のうちの２つは、Ｇタンパク質結合受容体ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２である。ＣＸＣＲ２は、ＩＬ−８ならびに他のリガンドに結合することが知られているが、ＩＬ−８は、ＣＸＣＲ１が結合することが知られている唯一のリガンドである。腫瘍細胞分泌型ＩＬ−８は、骨芽細胞においてＲＡＮＫＬ発現を増加させ、同様に前破骨細胞の増殖及び分化、ならびに成熟破骨細胞の活性を促進することが知られている。図１は、ＩＬ−８媒介骨吸収、及び抗ＣＸＣＲ１／２抗体による阻害の推定上の機構の略図を提供する。本開示は、抗ＣＸＣＲ１／２抗体による破骨細胞の分化及び活性を阻害する組成物及び方法を含む。
【００５６】
骨の構造、密度、及び質を測定し、特徴付けるために、組織学及び組織形態計測、原子間力顕微鏡法、共焦点ラマン顕微鏡検査、ナノインデンテーション、３点曲げ試験、Ｘ線撮像、及びマイクロコンピュータ断層撮影（μ−ＣＴ）を含む、いくつかの方法が使用され得る。例示的な実施形態では、骨は、これらの方法のうちの少なくとも１つにより測定され、特徴付けされる。
【００５７】
用語「骨体積密度」は、石灰質（骨体積またはＢＶ）から構成される骨の所与の体積分率（総体積またはＴＶ）を指す。したがって、骨体積密度は、ＢＶ／ＴＶとして計算され、パーセンテージとして報告される。用語「比骨表面」は、骨の所与の体積当たりの総骨表面（ＢＳ）を指す。したがって、比骨表面は、ＢＳ／ＴＶとして計算される。他の一般的な骨測定は、骨面積（Ｂ．Ａｒ）、骨梁数（Ｔｂ．Ｎ）、骨梁間隔（Ｔｂ．Ｓｐ）、破骨細胞数（Ｎ．Ｏｃ）、破骨細胞表面積（Ｏｃ．Ｓ）、総骨表面当たりの破骨細胞（Ｏｃ．Ｓ／ＢＳ）、骨芽細胞数（Ｎ．Ｏｂ）、骨芽細胞表面積（Ｏｂ．Ｓ）、骨芽細胞周囲長（Ｏｂ．Ｐｍ）、及び前記測定のいずれかの派生物を含む。より大きいＯｃ．Ｓ／ＢＳは、破骨細胞による骨吸収の増加を示す。
【００５８】
Ｃ．ＣＸＣケモカイン受容体
ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーは、細胞膜を７回（７−ＴＭ）貫通する共通の構造特徴を共有する７つのメンバー（ＣＸＣＲ１〜ＣＸＣＲ７）を含む。ＣＸＣケモカイン受容体は、細胞ホーミングならびにサイトカインの上方調節及び分泌を含む、様々な細胞機能を媒介する。ヒトＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２（それぞれ、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ受入番号Ｐ２５０２４及びＰ２５０２５）は、それらの生物学的活性状態においてＩＬ−８に結合する、単量体Ｇタンパク質結合受容体に密接に関係する。ＣＸＣＲ１の３５０のアミノ酸配列及びＣＸＣＲ２の３６０のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１及び配列番号２によって表される。
ｈＣＸＣＲ１（配列番号１）
【００５９】
【表１】
2016516746.tif 000003
【００６０】
ｈＣＸＣＲ２（配列番号２）
【００６１】
【表２】
2016516746.tif 000004
【００６２】
Ｄ．ＣＸＣＲ１／２に結合する分子
本発明は、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子を対象に投与することを含む方法を含む。ＣＸＣＲ１／２結合剤は、抗体、融合タンパク質（例えば、イムノアドヘシン）、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、または小分子有機化合物などの、任意の結合分子であってよい。例えば、本発明は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２の両方に結合する１つの分子を含む。別の方法としては、本発明は、１つの分子がＣＸＣＲ１に結合し、２つ目の分子がＣＸＣＲ２に結合する、２つの分子を含む。
【００６３】
ある特定の実施形態では、本発明は、ＣＸＣＲ１／２（抗ＣＸＣＲ１／２抗体）、またはその変異体、もしくはその抗原結合断片に結合する１つ以上の抗体を含む。例えば、本発明は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２両方に結合する二重特異性抗体または汎特異的抗体などの、１つの抗体を含む。別の方法としては、本発明は、１つの抗体がＣＸＣＲ１に結合し、２つ目の抗体がＣＸＣＲ２に結合する、２つの抗体を含む。抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＣＸＣＲ１／２タンパク質、ポリペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する。ＣＸＣＲ１／２に結合する分子は、いずれの種からであってよい。
【００６４】
ある特定の例示的な実施形態では、ＣＸＣＲ１／２に結合する抗体は、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはそれらの変異体、もしくはそれらの抗原結合断片である。好ましい抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＩＬ−８のその受容体との結合を阻止し、かつ／またはＣＸＣＲ１／２生物活性（例えば、ＣＸＣＲ１／２受容体媒介破骨細胞形成及び破骨細胞活性）を阻害する。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２遮断抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；それぞれ、カタログ＃ＭＡＢ３３０及びＭＡＢ３３１）である。
【００６５】
本発明の例示的な実施形態では、ＣＸＣＲ１／２に結合する抗体は、ヒト化または完全ヒト抗体である。ヒト化または完全ヒト抗体イソ型の例としては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが挙げられる。好ましくは、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＩｇＧ抗体である。４つの形態のＩｇＧがある。好ましくは、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ＩｇＧ２ａ抗体である。本発明の一実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、ヒト化ＩｇＧ２ａ抗体である。本発明の別の実施形態では、抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、完全ヒトＩｇＧ２ａ抗体である。
【００６６】
上述のように、本発明のある特定の実施形態は、抗ＣＸＣＲ１／２抗体の変異体または誘導体も含む。抗ＣＸＣＲ１／２抗体の変異体は、それらの高い類似性に基づく類似した物理化学性質を有し得、したがって、本発明の範囲内にも含まれる。変異体は、本明細書に記載される抗ＣＸＣＲ１／２抗体に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％、例えば、最低９８％または９９％相同であるアミノ酸配列を有する抗体として定義され、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチド、ＣＸＣＲ１／２ポリペプチド断片、またはＣＸＣＲ１／２エピトープへの結合に対して競合することができる。好ましくは、変異体は、ＩＬ−８がそのＣＸＣＲ１／２受容体及びＣＸＣＲ１／２生物活性（例えば、ＣＸＣＲ１／２受容体媒介破骨細胞の分化及び活性）と結合するのを寛解、中和、ないしは別の方法で阻害する。標的への結合に対する競合の決定は、当業者に既知の日常的な方法により行うことができる。好ましくは、変異体は、ヒト抗体であり、好ましくは、ＩｇＧ２ａ分子である。用語「変異体」は、抗ＣＸＣＲ１／２抗体のアミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸により変更されるアミノ酸配列を含む抗体を指す。変異体は、アミノ酸置換、修飾、付加、及び欠失を含む、保存配列修飾を有し得る。
【００６７】
修飾の例としては、これらに限定されないが、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化反応、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解、切断、及び細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合が挙げられる。アミノ酸修飾は、抗体をコードする核酸における、部位特異的突然変異誘発、分子クローニング、オリゴヌクレオチド指向突然変異誘発、及びランダムＰＣＲ媒介突然変異誘発など、当該技術分野において既知の標準的な技法により導入され得る。保存アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似する構造または化学性質を有するアミノ酸残基と置換されるものを含む。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝状側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）を有するアミノ酸を含む。上記に使用されるもの以外のアミノ酸残基ファミリーの分類も採用され得ることは当業者には明らかであろう。さらに、変異体は、例えば、アミノ酸を、異なる構造または化学性質を有するアミノ酸残基と置換する、非保存アミノ酸置換を有し得る。類似するわずかな変化は、アミノ酸欠失もしくは挿入、またはその両方も含む。どのアミノ酸残基が免疫学的活性を消失させることなく置換、修飾、挿入、または欠失され得るかを決定するガイダンスは、当該技術分野において周知のコンピュータプログラムを使用して見出すことができる。とりわけ、当業者に知られているギャップまたはベストフィットなどのコンピュータアルゴリズムが、比較されるアミノ酸配列を最適に整合し、類似するまたは同一のアミノ酸残基を定義するために使用され得る。変異体は、抗ＣＸＣＲ１／２抗体と比較して、同じまたは異なる、高いかまたは低いかのいずれかの結合親和性を有し得るが、尚もＣＸＣＲ１／２に特異的に結合することができ、抗ＣＸＣＲ１／２抗体と同じ、高い、または低い生物活性を有し得る。
【００６８】
本発明の実施形態は、抗ＣＸＣＲ１／２抗体の抗原結合断片も含み得る。用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」、及び類似する用語は、抗原と相互作用し、抗原のその特異性及び親和性を結合剤に付与する（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））アミノ酸残基を含む抗体のその部分を指す。抗原結合領域は、ゲッ歯類（例えば、ウサギ、ラット、またはハムスター）及びヒトなどの任意の動物種に由来し得る。好ましくは、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。抗原結合断片の非限定的な例としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、ｄＡｂ断片、及び抗体の超可変領域を摸倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。
【００６９】
Ｅ．治療的投与
本明細書に記載される組成物及び方法は、治療有効量のＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子を対象に投与することを含む。本明細書で使用される、句「治療有効量」は、病的骨溶解に関連する１つ以上の症状において検出可能な改善をもたらす、または溶骨性骨損失の状態または症状（複数可）を引き起こす根本的な病的機構（複数可）と相関関係がある生物作用を生じる（例えば、特定のバイオマーカーのレベルの減少）ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子の用量を意味する。例えば、骨ミネラル密度を増加する、骨量及び／もしくは骨強度を増加する、骨折を減少させる、ならびに／または病的骨溶解の任意の診断測定を改善するＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子の用量は、治療有効量と見なされる。
【００７０】
ある実施形態では、骨ミネラル密度、骨量、及び／または骨強度は、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の抗体での治療後、約５％〜約２００％増加する。ある特定の実施形態では、骨ミネラル密度、骨量、及び／または骨強度は、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子での治療後、約５％〜約１０％、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約３０％〜約３５％、約３５％〜約４０％、約４０％〜約４５％、約４５％〜約５０％、約５０％〜約５５％、約５５％〜約６０％、約６０％〜約６５％、約６５％〜約７０％、約７０％〜約７５％、約７５％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、約９５％〜約１００％、約１００％〜約１０５％、約１０５％〜約１１０％、約１１０％〜約１１５％、約１１５％〜約１２０％、約１２０％〜約１２５％、約１２５％〜約１３０％、約１３０％〜約１３５％、約１３５％〜約１４０％、約１４０％〜約１４５％、約１４５％〜約１５０％、約１５０％〜約１５５％、約１５５％〜約１６０％、約１６０％〜約１６５％、約１６５％〜約１７０％、約１７０％〜約１７５％、約１７５％〜約１８０％、約１８０％〜約１８５％、約１８５％〜約１９０％、約１９０％〜約１９５％、または約１９５％〜約２００％増加する。
【００７１】
ある特定の実施形態では、尿中ヒドロキシプロリン、尿中総ピリジノリン（ＰＹＤ）、尿中遊離デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）、尿中Ｉ型コラーゲン架橋Ｎテロペプチド（ＮＴＸ）、尿または血清中Ｉ型コラーゲン架橋Ｃテロペプチド（ＣＴＸ）、骨シアロタンパク質（ＢＳＰ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、及び酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ５ｂ（ＴＲＡＰ）などの骨吸収の血清バイオマーカーを減少させる分子の用量は、治療有効量と見なされる。ある実施形態では、骨吸収の血清バイオマーカーは、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子での治療後、約５％〜約２００％減少する。
【００７２】
ある実施形態では、尿中ヒドロキシプロリン、尿中総ピリジノリン（ＰＹＤ）、尿中遊離デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）、尿中Ｉ型コラーゲン架橋Ｎテロペプチド（ＮＴＸ）、尿または血清中Ｉ型コラーゲン架橋Ｃテロペプチド（ＣＴＸ）、骨シアロタンパク質（ＢＳＰ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、及び酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ５ｂ（ＴＲＡＰ）などの骨吸収の血清バイオマーカーは、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子での治療後、約５％〜約１０％、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約３０％〜約３５％、約３５％〜約４０％、約４０％〜約４５％、約４５％〜約５０％、約５０％〜約５５％、約５５％〜約６０％、約６０％〜約６５％、約６５％〜約７０％、約７０％〜約７５％、約７５％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、約９５％〜約１００％、約１００％〜約１０５％、約１０５％〜約１１０％、約１１０％〜約１１５％、約１１５％〜約１２０％、約１２０％〜約１２５％、約１２５％〜約１３０％、約１３０％〜約１３５％、約１３５％〜約１４０％、約１４０％〜約１４５％、約１４５％〜約１５０％、約１５０％〜約１５５％、約１５５％〜約１６０％、約１６０％〜約１６５％、約１６５％〜約１７０％、約１７０％〜約１７５％、約１７５％〜約１８０％、約１８０％〜約１８５％、約１８５％〜約１９０％、約１９０％〜約１９５％、または約１９５％〜約２００％減少する。
【００７３】
ある特定の実施形態では、総アルカリホスファターゼ、骨特異的アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、及びＩ型プロコラーゲン（Ｃ末端／Ｎ末端）などの骨沈着の血清バイオマーカーを増加させる１つ以上の分子の用量は、治療有効量と見なされる。ある実施形態では、骨沈着の血清バイオマーカーは、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子での治療後、約５％〜約２００％増加する。
【００７４】
ある実施形態では、総アルカリホスファターゼ、骨特異的アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、及びＩ型プロコラーゲン（Ｃ末端／Ｎ末端）などの骨沈着の血清バイオマーカーは、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子での治療後、約５％〜約１０％、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約３０％〜約３５％、約３５％〜約４０％、約４０％〜約４５％、約４５％〜約５０％、約５０％〜約５５％、約５５％〜約６０％、約６０％〜約６５％、約６５％〜約７０％、約７０％〜約７５％、約７５％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、約９５％〜約１００％、約１００％〜約１０５％、約１０５％〜約１１０％、約１１０％〜約１１５％、約１１５％〜約１２０％、約１２０％〜約１２５％、約１２５％〜約１３０％、約１３０％〜約１３５％、約１３５％〜約１４０％、約１４０％〜約１４５％、約１４５％〜約１５０％、約１５０％〜約１５５％、約１５５％〜約１６０％、約１６０％〜約１６５％、約１６５％〜約１７０％、約１７０％〜約１７５％、約１７５％〜約１８０％、約１８０％〜約１８５％、約１８５％〜約１９０％、約１９０％〜約１９５％、または約１９５％〜約２００％増加する。
【００７５】
他の実施形態は、転移性癌を治療するために、治療有効量の１つ以上の分子を投与することを含む。例えば、骨転移の成長を阻止するＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子の用量は、治療有効量と見なされる。別の例では、骨転移を有する対象の任意の症状を改善するＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子の用量は、治療有効量と見なされる。
【００７６】
本発明の方法によると、対象に投与される治療有効量のＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子は、対象の年齢及び大きさ（例えば、体重または身体表面積）、ならびに投与経路、及び当業者に周知の他の要因により変動する。
【００７７】
ある特定の例示的な実施形態では、１つ以上の抗ＣＸＣＲ１／２抗体は、皮下用量として対象に投与される。他の例示的な投与形式は、これらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路を含む。組成物は、任意の簡便な経路によって、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮もしくは粘膜皮膚裏層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）を通した吸収によって投与されてよく、他の生物学的活性剤と一緒に投与され得る。投与は、全身または局所であってよい。１つ以上のＣＸＣＲ１／２抗体は、非経口または皮下投与され得る。
【００７８】
様々な送達系、例えば、リポソームにおける被包、微小粒子、マイクロカプセル、受容体媒介エンドサイトーシスが既知であり、薬学的組成物を投与するために使用され得る（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照）。治療用組成物は、改善された輸送、送達、抵抗性などを改善するために、製剤に組み込まれる好適な担体、賦形剤、及び他の薬剤と共に投与される。多数の適切な製剤が全ての薬剤師に既知の処方集において見出すことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、小胞を含む脂質（カチオン性またはアニオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡ抱合体、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含む半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１も参照。
【００７９】
薬学的組成物は、活性成分の用量を組み込むのに適した単位用量の投薬形態に調製され得る。単位用量におけるそのような投薬形態は、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射剤（アンプル）、坐剤等を含む。
【００８０】
薬学的組成物はまた、任意の許容可能な装置または機構を使用して対象に投与され得る。例えば、投与は、注射器及び針を使用して、または再利用可能なペン及び／もしくは自動注入送達装置により達成することができる。本発明の方法は、ＣＸＣＲ１／２結合剤（または結合剤を含む薬学的製剤）を投与するための、多くの再利用可能なペン及び／または自動注入送達装置の使用を含む。そのような装置の例としては、これらに限定されないが、いくつか列挙するならば、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｅｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及びＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。薬学的組成物の皮下送達における用途を有する使い捨てペン及び／または自動注入送達装置の例としては、これらに限定されないが、いくつか列挙するならば、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫＴＭ  Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴＴＭ（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、及びＨＵＭＩＲＡＴＭペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）が挙げられる。
【００８１】
ＣＸＣＲ１／２結合剤（または結合剤を含む薬学的製剤）を対象に送達するための微小注入装置の使用も、本明細書において想定される。本明細書で使用される、用語「微小注入装置」は、長い時間をかけて（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０分以上）、大量（例えば、最大約２．５ｍＬ以上）の治療用製剤をゆっくり投与するように設計された皮下送達装置を意味する。例えば、Ｕ．Ｓ．６，６２９，９４９、ＵＳ６，６５９，９８２、及びＭｅｅｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ４６：１０７−１１６（１９９６）を参照。微小注入装置は、高濃度（例えば、約１００、１２５、１５０、１７５、２００ｍｇ／ｍＬ以上）及び／または粘性溶液内に含まれる大用量の治療用タンパク質の送達に特に有用である。
Ｆ．併用療法
併用療法は、獲得抵抗性の減少、改善された毒性で有効性を達成するために、併用療法のうちのいずれか１つ以上の用量の減少、併用療法のうちの１つ以上のメンバーに対して細胞を感作するため、または個々の療法の活性と比較して、付加的または付加を超える（例えば、相乗的）作用を達成する目的のために採用され得る。付加的及び相乗的作用を測定する計算法は、日常的であり、当業者に既知である。例えば、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（９）：４５８−４６６、及びＹａｎ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ，（２０１０）ＢＭＣ  Ｓｙｓｔ．Ｂｉｏｌ．４：５０を参照。
【００８２】
ある特定の態様では、本発明は、少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子を、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む、溶骨性骨疾患を治療するための方法を含む。本発明の方法の実践において、１つ以上の抗ＣＸＣＲ１／２抗体と組み合わせて投与され得る追加の治療薬の例としては、これらに限定されないが、ビスホスホネート、カルシトニン、テリパラチド、及び対象における溶骨性骨疾患を治療、予防、または寛解することが知られる任意の他の化合物が挙げられる。
【００８３】
本発明の方法では、追加の治療薬（複数可）は、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子と同時に、または順次投与され得る。例えば、同時投与に関しては、ＣＸＣＲ１／２に結合する分子、及び少なくとも１つの追加の治療薬の両方を含む薬学的製剤が作製され得る。
【００８４】
ある実施形態では、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子は、薬学的ビスホスホネート（例えば、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート（Ｎｅｒｉｄｒｏｎａｔｅ）、オルパドロネート（Ｏｌｐａｄｒｏｎａｔｅ）、アレンドロネート、イバンドロネート、ゾレドロネート、及びリセドロネート）と組み合わせて投与される。別の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子は、副甲状腺ホルモン類似体及びカルシトニンなど、骨形成を刺激する薬物と組み合わせて投与される。さらに別の実施形態では、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子は、選択的エストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）と組み合わせて投与される。本発明の方法の実践において、ＣＸＣＲ１／２に結合する１つ以上の分子と組み合わせて投与される追加の治療薬の量は、当該技術分野において既知であり、容易に利用できる日常的な方法を使用して容易に決定することができる。
【実施例】
【００８５】
溶骨性疾患は、前破骨細胞の増殖及び分化の増加、ならびに成熟骨再吸収破骨細胞の活性化による、過剰な骨吸収を特徴とする。ＩＬ−８は、ＣＸＣＲ１／２を発現する前破骨細胞及び成熟破骨細胞に直接作用し、ＣＸＣＲ１／２を発現する骨芽細胞に間接的に作用し、それによって、骨芽細胞にＲＡＮＫＬの発現を上方調節させることにより骨吸収を刺激する。
【実施例１】
【００８６】
実施例１：ＩＬ−８の阻害は破骨細胞分化を遮断する
溶骨性疾患の治療は、治療薬に曝露されると、分化段階に関わらず、治療薬が破骨細胞形成の遮断に有効であることを必要とする。破骨細胞分化カスケード全体を通して、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２両方の同時阻害の有効性を検証するために、両受容体に対する抗体の遮断の追加が、分化の開始後、様々な間隔で遅延された。
【００８７】
実施例１．１
破骨細胞前駆体細胞（Ｌｏｎｚａ；カタログ＃２Ｔ−１１０）を、多重ウェル組織培養プレートに播種し、製造者の指示に従い補足された破骨細胞前駆体培地（Ｌｏｎｚａ；カタログ＃ＰＴ−８００１）中で培養した。破骨細胞分化を誘発するために、培養培地をＭＣＳＦ（３３ｎｇ／ｍＬ）及びＲＡＮＫＬ（３３ｎｇ／ｍＬ）で補足した。それぞれ、３０μｇ／ｍＬ、３０μｇ／ｍＬ、及び５０μｇ／ｍＬの最終抗体濃度を達成するために５μＬの４０×濃縮された抗体を添加することにより、ＣＸＣＲ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ＃ＭＡＢ３３０）、ＣＸＣＲ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ＃ＭＡＢ３３１）、及びＩＬ−８遮断抗体を、実験０〜６、１〜６、２〜６、３〜６、４〜６、または５〜６日目に、各ウェルに毎日添加した。実験６日目に、培養物を３．７％のパラホルムアルデヒドで固定し、破骨細胞形成を調節する転写因子ＮＦＡＴｃ１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；カタログ＃ｓｃ−１３０３３）に対する抗体及び抗ＣＤ５１／ＣＤ６１（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；カタログ＃５５００３７）抗体を使用して、それぞれ、分化及び成熟破骨細胞のマーカーに関して染色した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ａｒｒａｙｗｏｒｘのマルチフォーマット読取装置で画像を取得し、破骨細胞セグメンテーションアルゴリズムを備えたＩｍａｇｅＲａｉｌパブリックドメインソフトウェアを使用して、分割し、定量化した。
【００８８】
図２Ａ〜Ｃに見られるように、全ての遮断抗体による治療は、少ない前破骨細胞及び成熟多核性破骨細胞をもたらし、０、１、または２日目に始まって、毎日処置された処置群において、最も大きな作用が観察された。ＩＬ−８の阻害は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２のいずれかの阻害よりも少ないＮＦＡＴ陽性前破骨細胞をもたらし、ＩＬ−８リガンドの遮断がＩＬ−８受容体のいずれかを単独で遮断するよりも前破骨細胞の阻害に有効であることを示唆する。これらのデータは、ＩＬ−８阻害において時間遅延があり、破骨細胞の融合及び成熟を阻止するために、阻害剤が破骨細胞分化の０〜２日目に添加されなければならないことを示唆する。
【００８９】
実施例１．２
全ての条件は、ＲＡＮＫＬを含まない負の対照（ｎｅｇ  ｃｎｔｌ）を除き、３３ｎｇ／ｍＬのＭＣＳＦ及び３３ｎｇ／ｍＬのＲＡＮＫＬを含んだ。正の対照（ｐｏｓ  ｃｎｔｌ）は、ＲＡＮＫＬを含んだが、抗体を含まなかった。治療は、表３のスケジュールごとに５μＬの４０×濃縮抗体溶液として毎日添加されたＣＸＣＲ１抗体（４５μｇ／ｍＬ、最終濃度）及びＣＸＣＲ２抗体（４５μｇ／ｍＬ、最終濃度）の組み合わせからなった。培地は実験中交換されなかった。培養物は４、５、６、７、及び８日に固定された。
【００９０】
表３。８日目に固定された培養物について、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２抗体は示される日に４０×最終濃度で添加された。より早い日に固定された培養物について、同じスケジュールが使用されたが、固定日に抗体は添加されなかった。負または正の対照について、抗体は添加されなかった。
【００９１】
【表３】
2016516746.tif 000005
【００９２】
抗体添加２４時間後のＮＦＡＴ陽性前駆体の数の減少（図２Ｅ）、及び抗体添加４８時間後の破骨細胞核の数の減少（図２Ｆ）により示されるように、ＣＸＣＲ１＋ＣＸＣＲ２抗体添加の日に関わらず、破骨細胞融合は減少した。全てのデータは平均±ＳＥＭとして表される。ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２抗体添加の組み合わせは、抗体が培養の初期に添加される場合に大きな増加を伴う正の対照と比較して、未分化破骨細胞前駆体の数も増加する（図２Ｄ）。
【実施例２】
【００９３】
実施例２：抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＣＲ２抗体の等モル混合物は破骨細胞の分化を阻害する
破骨細胞前駆体細胞（Ｌｏｎｚａ；カタログ＃２Ｔ−１１０）を、９６ウェル組織培養プレートに播種し、製造者の指示に従い補足された破骨細胞前駆体培地（Ｌｏｎｚａ；カタログ＃ＰＴ−８００１）中で培養した。破骨細胞の分化を誘発するために、培養培地を、ＭＣＳＦ（３３ｎｇ／ｍＬ）及びＲＡＮＫＬ（３３ｎｇ／ｍＬ）で補足し、２００μＬの培地を各ウェルに添加した。ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２遮断抗体（それぞれ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ＃ＭＡＢ３３０及びＭＡＢ３３１）を、製品の仕様ごとに再構築し、単独または組み合わせのいずれかで、最終濃度２０００、５００、１２５、及び３１．２５μｇ／ｍＬ）の４０倍に希釈した。それぞれ、５０、１２．５、３．１２５、及び０．７８μｇ／ｍＬの最終抗体濃度のために、実験０、１、２、３、４、５、及び６日目に、５ｕＬの４０×濃縮抗体を、各ウェルに添加した。各条件は、６つの独立したウェルにおいて繰り返された。実験７日目に、培養物を３．７％のパラホルムアルデヒドで固定し、抗ＮＦＡＴｃ１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；カタログ＃ｓｃ−１３０３３）及び抗ＣＤ５１／ＣＤ６１（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；カタログ＃５５００３７）抗体を使用して、それぞれ、分化及び成熟破骨細胞のマーカーに関して染色した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ａｒｒａｙｗｏｒｘのマルチフォーマット読取装置で画像を取得し（９視野／ウェル）、破骨細胞セグメンテーションアルゴリズムを備えたＩｍａｇｅＲａｉｌパブリックドメインソフトウェアを使用して、分割し、定量化した。データは、ウェル当たりの平均としてプロットされた（ｎ＝６ウェル＋／−ＳＥＭ）。
【００９４】
図３に示されるように、抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＣＲ２抗体での併用処置は、いずれかの抗体単独での処置と比較して、少ない分化破骨細胞及び成熟破骨細胞をもたらす。この作用は、試験された全ての濃度で観察され、最大の作用は、１２．５〜０．７８μｇ／ｍＬの濃度範囲で観察された。これらの結果は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２活性が破骨細胞分化経路において相乗的に作用し得ることを示唆する。抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＣＲ２抗体が相乗的に作用するか否かを決定するために、ロエベ相加性（Ｌｏｅｗｅ  ａｄｄｉｔｉｖｉｔｙ）及びブリス非依存性（Ｂｌｉｓｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ）が、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄら（例えば、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（９）：４５８−４６６）により記載される方法により、抗体用量応答から計算された。図４に示される、ロエベ相加性曲線は、ブリス非依存性曲線の左側、及び抗ＣＸＣＲ１／２用量応答曲線の右側に現れ、抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＲ２抗体の組み合わせが共通経路を通して相乗的に作用することを示す。ロエベ相加性曲線（＋）は、ブリス非依存性曲線（ｏ）の左側、及び抗ＣＸＣＲ１／２用量応答曲線「１＋２」の右側に現れる。ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２曲線は両方とも他の曲線の右側である。これらの結果は、抗ＣＸＣＲ１及び抗ＣＸＲ２抗体での併用療法が相乗的改善をもたらし、抗体が共通経路を通して作用することを示す。Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（９）：４５８−４６６（ロエベ相加性及びブリス非依存性の分析も詳述する）に記載されるように、そのような相乗効果は、併用療法が単独療法と同じ用量を伴う（但し、有効性は大きい）垂直相乗効果と、２つの阻害剤の濃度が一定レベルの組み合わされた有効性を達成するように下方調節され得る水平相乗効果との２通りで見ることができる。この図の水平及び垂直の矢印は、水平及び垂直相乗効果の両方がこの組み合わせにより生成されることを示す。
【００９５】
総合して、これらの実施例は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２受容体が破骨細胞形成及び骨溶解を阻止するために標的とされ得ることを確認する。
【００９６】
等価物
当業者は、単に日常的な実験を使用して、本明細書に記載される発明（複数可）の特定の実施形態の多くの等価物を認識するか、または確認することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されるものとする。任意の独立請求項及び従属請求項のうちのいずれかに開示される実施形態のうちの１つ以上の任意の組み合わせも、本発明の範囲内であると想定される。
【００９７】
参照による組み込み
本明細書に言及される各及び全ての特許、係属中の特許出願、及び刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
2016516746.tif 000006
【図２ＡＢＣ】
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【図２Ｄ】
2016516746.tif 000008
【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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