(57)【要約】  式：2016501219.tif 000016のＴＡＲＰγ８依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、その医薬的に許容される塩、使用、およびその調製方法が記載される。【選択図】なし
2016501219.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2016501219.tif 000013
の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項２】
６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンまたは医薬的に許容可能なその塩、および１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項４】
てんかんを有する哺乳動物において発作を治療する方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式：
【化２】
2016501219.tif 000014
の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与する工程を含む、方法。
【請求項５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記発作が単純型または複合型部分発作である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記発作が一次性または二次性全般発作である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記哺乳動物がヒトである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
治療に使用するための、請求項１または２に記載の化合物または塩。
【請求項１１】
てんかんを有する哺乳動物の発作の治療に使用するための、請求項１または２に記載の化合物または塩。
【請求項１２】
前記発作が単純型または複合型部分発作である、請求項１１に記載の使用のための化合物。
【請求項１３】
前記発作が一次性または二次性全般発作である、請求項１１に記載の使用のための化合物。
【請求項１４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１１、１２、及び１３のいずれか一項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１５】
前記使用が、別の抗てんかん薬を同時に、別々に、または経時的に組み合わせる、請求項１１、１２、１３、及び１４のいずれか一項に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１６】
前記別の抗てんかん薬がレベチラセタム、ガバペンチン、トピラマート、またはカルバマゼピンである、請求項１５に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１７】
哺乳動物の痛みを治療する方法であって、そのような治療が必要な哺乳動物に有効量の式：
【化３】
2016501219.tif 000015
の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与する工程を含む、方法。
【請求項１８】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
哺乳動物の痛みの治療に使用するための請求項１または２に記載の化合物または塩。
【請求項２０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１９に記載の使用のための化合物または塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＡＲＰ−ガンマ８依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストとしての６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンに関する。
【背景技術】
【０００２】
てんかんは世界的に見て５千万人以上に発症し、治療を受けた患者の３０〜４０％が現状の薬物治療に抵抗性であり、治療を受けた患者のたった約８％が発作なしに維持される。てんかんは、個人が二以上の非挑発性てんかん性発作を有した場合としてしばしば定義される。国際抗てんかん連盟（ＩＬＡＥ）は、てんかん性発作を「脳内の異常な過剰的または同時的神経活動に起因する徴候および／または症状の一過的発生」として定義する。発作は多くの基礎的因果関係を有していると考えられていて、それはてんかん治療に困難性を付与している。発作は臨床症状に従って分類され、一般的発作（失神性、アトニー性、強直間代性（大発作）、および筋クローヌス性）、単純型および複合型の部分発作、笑い発作、泣き（ｄａｃｒｙｓｔｉｃ）発作、並びにてんかん重積状態を含む。現状の治療法は種々のメカニズムを標的としており、ＧＡＢＡ（γーアミノ酪酸）受容体アゴニズム、Ｔ型カルシウムチャネル遮断薬、ナトリウムチャネル調節剤、シナプス小胞タンパク質ＳＶ２Ａ調節、およびＧＡＢＡトランスアミナーゼ阻害を含む。最近では、ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストが、発作の治療のためにも研究されている。
【０００３】
ＡＭＰＡ（αーアミノー３−ヒドロキシルー５−メチルー４−イソオキサゾーループロピオン酸）受容体は、中枢神経系における興奮性シナプスのシナプス後膜上のグルタミン酸感受性イオンチャネルであり、シナプス間隙間の早い神経伝達を媒介することを主に担当している。ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストは既知の抗痙攣薬であり、興奮性神経伝達を下方制御する能力は抗てんかん治療薬としての可能性にとって重要である。しかしながら、ＡＭＰＡ受容体活性はＣＮＳに遍在しているので、一般的拮抗作用はＣＮＳのほとんどの領域に影響を与えて、その結果望ましくない効果（例、運動失調、鎮静、および／または眩暈（全ての既知の一般的ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストに共通するもの））が生じる。典型的には、これらの一般的アンタゴニストは、非常に狭い治療投薬ウインドウを有している。つまり、典型的には、抗痙攣活性を得るのに必要な用量は、望ましくない効果が観察される用量に近いものであるかまたは重なるものである（非特許文献１）。
【０００４】
膜貫通型ＡＭＰＡ受容体制御タンパク質（ＴＡＲＰ）は、ＡＭＰＡ受容体の活性と関連およびそれを調節することが判明している、つい最近発見されたタンパク質ファミリーである。いくつかのＴＡＲＰは脳領域にかなり特異的であり、ＡＭＰＡ受容体活性の生理学的差異を導いている。例えば、ＴＡＲＰγ２（Ｓｔａｒｇａｚｉｎ（スターゲージン））依存性ＡＭＰＡ受容体は、主として小脳と大脳皮質に局在する。ＴＡＲＰγ８依存性ＡＭＰＡ受容体は、主として海馬（この領域は発作の発生および／または伝播に特に関連性がある）に局在する。個々のＴＡＲＰを標的化することは、シナプス伝達全般に影響を与えることなく特異的脳回路の選択的調節を可能にする可能性があるとする理論立てがなされてきた（非特許文献２）。
【０００５】
レベチラセタム（（Ｓ）−２−（２−オキソピロリジン−１−イル）ブタンアミド）、ガバペンチン（２−［１−（アミノメチル）シクロヘキシル］酢酸）、トピラマート（２，３：４，５−ビス−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−ベータ−Ｄ−スルファミン酸フルクトピラノース）、およびカルバマゼピン（５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン−５−カルボキサミド）が、てんかん性発作の現状の主治療薬である。現在承認されている薬物のいずれも、ＡＭＰＡ受容体の調節だけを通して作用すると思われるものはない。
【０００６】
タランパネル（（８Ｒ）−７−アセチル−５−（４−アミノフェニル）−８，９−ジヒドロ−８−メチル−７Ｈ−１，３−ジオキソロ［４，５−ｈ］［２，３］ベンゾジアゼピン）、セルランパネル（ｓｅｌｕｒａｍｐａｎｅｌ）（ＢＧＧ４９２）（Ｎ−［７−イソプロピル−６−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル］メタンスルホンアミド）、及びパランパネル（ｐａｒａｍｐａｎｅｌ）（５’−（２−シアノフェニル）−１’−フェニル−２，３’−ビピリジニル−６’（１’Ｈ）−オン）は、抗てんかん薬として試験されている一般的（非ＴＡＲＰ依存性／非選択性）ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｍｉｃｈａｅｌ  Ａ．  Ｒｏｇａｗｓｋｉ、「Ｒｅｖｉｓｉｔｉｎｇ  ＡＭＰＡ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｓ  ａｎ  Ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ」、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ  Ｃｕｒｒｅｎｔｓ、１１．２（２０１１）
【非特許文献２】Ｇｉｌｌ，  Ｍａｒｔｉｎ  ＢおよびＢｒｅｄｔ，  Ｄａｖｉｄ  Ｓ．、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３６（１）：３６２−３６３（２０１１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
選択的、非競合的ＴＡＲＰγ８依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストが、一般的（非ＴＡＲＰ依存性／非選択性）ＡＭＰＡアンタゴニストまたはＴＡＲＰγ２依存性ＡＭＰＡアンタゴニスト（小脳におけるＡＭＰＡ受容体拮抗作用により関連するもの）の有する副作用（例、鎮静、運動失調、および／または眩暈）なしに、効果的抗発作／抗てんかん治療薬となり得ることを、ここに指摘する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、強力かつ選択的なＴＡＲＰγ８依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストのインビトロ活性および発作と痛みの動物モデルにおける効力を示す化合物を提供する。従って、本発明は、てんかん（例えば、単純型および／もしくは複合型部分発作ならびに／または一次性および／もしくは二次性全般発作）を有する患者の発作治療に有用であると考えられている化合物を提供する。さらに、本発明の化合物は、痛みの治療にも有用である可能性がある。さらに特に、本発明は式Ｉの化合物：
【化１】
2016501219.tif 000003
（つまり、６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン）または医薬的に許容可能なその塩を提供する。
【００１０】
本発明の別の観点では、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩、及び１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。さらにまた、本発明のこの観点は、てんかん患者において発作（例えば、単純型および／もしくは複合型部分発作ならびに／または一次性および／もしくは二次性全般発作）を治療するための医薬組成物であって、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩、及び１種以上の医薬的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。さらに、本発明のこの観点は、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩、抗てんかん薬である第二治療剤（例えば、レベチラセタム、ガバペンチン、トピラマート、若しくはカルバマゼピン）、及び１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
本発明はまた、てんかんを有する哺乳動物において発作（例えば、単純型および／もしくは複合型部分発作ならびに／または一次性および／もしくは二次性全般発作）を治療する方法であって、そのような治療が必要な哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与する工程を含む方法を提供する。本発明のこの観点の別の実施形態では、前記方法はさらに、抗てんかん薬である第二治療剤（例えば、レベチラセタム、ガバペンチン、トピラマート、若しくはカルバマゼピン）を、同時に、別々に、または経時的に組み合わせて投与する工程を含む。これら治療方法のある一つの特定の実施形態では、前記哺乳動物はヒトである。
【００１２】
本発明は、治療に使用するための、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩も提供する。この観点の範囲内で、本発明は、てんかんを有する哺乳動物（特に、ヒト）において、発作（例えば、単純型および／もしくは複合型部分発作ならびに／または一次性および／もしくは二次性全般発作）の治療に使用するための式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩を提供する。さらに、本発明のこの観点は、てんかんを有する哺乳動物（特に、ヒト）の発作の治療において、抗てんかん薬（例えば、レベチラセタム、ガバペンチン、トピラマート、若しくはカルバマゼピン）を、同時に、別々に、または経時的に組み合わせて使用する式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩も提供する。
【００１３】
本発明の別の観点は、てんかんを有する哺乳動物（特に、ヒト）において、発作（例えば、単純型および／もしくは複合型部分発作ならびに／または一次性および／もしくは二次性全般発作）の治療に使用するための医薬品の製造における、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用を提供する。さらに、本発明は、てんかんを有する哺乳動物（特に、ヒト）において、発作（例えば、単純型および／もしくは複合型部分発作ならびに／または一次性および／もしくは二次性全般発作）の治療に使用するための医薬品（ここで、前記医薬品は、抗てんかん薬である第二治療剤（例えば、レベチラセタム、ガバペンチン、トピラマート、若しくはカルバマゼピン）を、同時に、別々に、または経時的に組み合わせて投与される）の製造における、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【００１４】
本発明のさらに別の観点は、痛みを治療する医薬組成物であって、式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩、及び１種以上の医薬的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明の他の観点は、哺乳動物の痛みを治療する方法であって、そのような治療が必要な哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与する工程を含む方法を提供する。この治療方法のある一つの特定の実施形態では、前記哺乳動物はヒトである。
【００１６】
本発明の別の観点は、特にヒトにおける痛みの治療に使用される式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩を提供する。
【００１７】
本発明の別の観点は、痛みの治療のための医薬品の製造における式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の化合物は塩基性および酸性部分を持っているので、したがって、多数の有機および無機の酸ならびに塩基と反応して医薬的に許容される塩を形成する。本発明の化合物の医薬的に許容される塩は、本出願の範囲内で予定される。本明細書において使用される用語「医薬的に許容される塩」は、生物に実質的に無毒である、本発明の化合物の任意の塩のことを指す。そのような医薬的に許容される塩とそれら塩を調製するための一般的方法論は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、「ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，  ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ（医薬用塩ハンドブック：特性、選択、および使用）」（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８）；およびＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ（医薬用塩）」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照されたい。
【００１９】
本明細書中で使用される略称は以下のように定義される。
「ＡＭＰＡ」は、α−アミノ−３−ヒドロキシル−５−メチル−４−イソオキサゾール−プロピオン酸を意味する。
「ブライン」は、飽和ＮａＣｌを意味する。
「ＣＨＯ」は、チャイニーズハムスター卵巣を意味する。
「ＣＴＺ」は、シクロチアジドを意味する。
「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを意味する。
「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコ最少イーグル培地を意味する。
「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシド（ＮＭＲ用には、重水素置換［ｄ６］されたもの）を意味する。
「ＥＤ５０」は、観察される最大効果の５０％を生み出す用量を意味する。
「Ｅｑ」は、モル当量を意味する。
「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを意味する。
「ＥｔＯＨ」は、エタノールを意味する。
「ＦＬＩＰＲ」は、蛍光イメージングプレートリーダーを意味する。
「ＨＢＳＳ」は、ハンクス緩衝塩溶液を意味する。
「ＨＥＰＥＳ」は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を意味する。
「ＨＰＬＣ」は、高圧液体クロマトグラフィーを意味する。
「ｈｒ．」または「ｈ」は、一または複数時間を意味する。
「ＩＣ５０」は、最大阻害の５０％が達成される濃度を意味する。
「ＬＣＭＳ」は、液体クロマトグラフィー質量分析法を意味する。
「ＭｅＯＨ」は、メタノールを意味する。
「ｍｉｎ．」または「ｍ」は、分を意味する。
「ＭＳ」は、質量分光測定法または質量スペクトルを意味する。
「ｐ．ｏ．」は、経口、つまり口によることを意味する。
「ＰＴＺ」は、ペンチレンテトラゾールを意味する。
「ＲＴ」は、保持時間を意味する。
「Ｓ．Ｃ．」は、皮下を意味する。
「ＳＥＭ」は、平均値の標準誤差を意味する。
「ＴＡＲＰ」は、膜貫通型ＡＭＰＡ受容体制御タンパク質を意味する。
「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを意味する。
「ＶＣＤ」は、振動円二色性を意味する。
「ＸＲＰＤ］は、粉末Ｘ線回折を意味する。
【００２０】
一般的化学
本発明の化合物は、当該技術分野で周知かつ認められている一般的方法により調製可能である。これらスキームの工程のための適切な反応条件は当該技術分野で周知であり、溶媒や共に用いる試薬の適切な代替品も当該技術分野の技術の範囲内である。同様に、合成中間体を、必要または所望ならば、各種周知技術により単離および／または精製可能であること、そして、ほとんど又は全く精製することなしに次の合成工程に各種中間体を直接使用することをしばしば可能にすることが当業者により理解される。さらにまた、当業者が理解するのは、いくつかの状況では、部分（ｍｏｉｅｔｉｅｓ）が導入される順序が重要でないことである。
【実施例】
【００２１】
以下の説明的調製例および実施例においては、溶媒を減圧下で一般的に除去（蒸発）する。いくつかの手順においては、記載される収率は、蒸発または濾過により単離され、そして、さらに精製することなく直接使用される生成物の代表的粗収率である。
【００２２】
調製例１：６−アセチル−３−（メトキシメチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン
【化２】
2016501219.tif 000004
炭酸セシウム（１．５Ｅｑ；３１０．５ｍｍｏｌ；１０１．１ｇ）を、ジメチルホルムアミド（６９０ｍＬ）中の６−アセチル−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（４０．０ｇ、２０７ｍｍｏｌ）の溶液に加える。クロロメチルメチルエーテル（１．３Ｅｑ、２６９ｍｍｏｌ、２０．４ｍＬ）を滴下し、１８時間室温で撹拌する。分離漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を加え、水（２×２００  ｍＬ）、その後ブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。ＤＣＭ（３００ｍＬ）で逆抽出する。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮する。濃縮物を２００ｍｌのヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７５：２５）中でスラリーにし、そして、濾過して６−アセチル−３−（メトキシメチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンを白色固形物（３７．０ｇ、１５６ｍｍｏｌ、収率７５％）として得る。ＬＣＭＳ（低）、ｒｔ＝１．６８分、Ｍ＋１＝２３８。
【００２３】
調製例２：６−［１−ヒドロキシ−１−（１−テトラヒドロピラン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エチル］−３−（メトキシメチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（ジアステレオマーのラセミ混合物）
【化３】
2016501219.tif 000005
１−テトラヒドロピラン−２−イル−ピラゾール（１．５Ｅｑ、２０２ｍｍｏｌ、３０．８ｇ）（アルドリッチ）及びＴＨＦ（９００ｍＬ）を、火で乾燥させた２Ｌの三つ首丸底フラスコに加え、−７８℃（ドライアイス／アセトン浴）に冷却する。少なくとも−６８℃に維持して、ｔ−ブチルリチウム（ＴＨＦ中に２．５Ｍ）（１．５Ｅｑ、２０２ｍｍｏｌ；８１．０ｍＬ）を滴下し、そして、−７８℃で６０分間撹拌する。ＴＨＦ（４５０ｍＬ）中の６−アセチル−３−（メトキシメチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（３２．０ｇ、１３４ｍｍｏｌ）の溶液を４５分かけて滴下し、そして、３０分間−７８で撹拌する。ドライアイス浴を取り外し、−５０℃に温めて、そして１時間撹拌する（温度を−４５℃より高くしてはならない）。反応をＭｅＯＨ（８０ｍＬ）を用いてクエンチする。分離漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（２０００ｍＬ）を加え、そして、水（５００ｍＬ）及びその後ブライン（５００ｍＬ）で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮して粗製黄色オイルを得る。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（６：４）を使って溶出しながらＨＰＬＣでこの物質を精製し、６−［１−ヒドロキシ−１−（１−テトラヒドロピラン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エチル］−３−（メトキシメチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンを白色フォーム（ｆｏａｍ）（４４ｇ、１１３ｍｍｏｌ、収率８４％）（ジアステレオマーのラセミ混合物）として得る。ＬＣＭＳ（低）、ｒｔ＝１．７６分、Ｍ＋１＝２８８及びｒｔ＝１．８６分、Ｍ＋１＝２８８。
【００２４】
調製例３：３−（メトキシメチル）−６−［１−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エテニル］−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン  
【化４】
2016501219.tif 000006
トリフルオロ酢酸（２０Ｅｑ（モル濃度）、２．２６ｍｏｌ、１７０ｍＬ）を、ＤＣＭ（０．２Ｍ、８．８１ｍｏｌ、５６５ｍＬ）中の６−［１−ヒドロキシ−１−（１−テトラヒドロピラン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エチル］−３−（メトキシメチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（４４ｇ、１１３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、そして一晩（〜１６時間）室温で撹拌する。得られた黒紫色の反応混合物を濃縮し、それをＥｔＯＡｃ（２Ｌ）中に溶解し、そして、その溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液をゆっくりと加えて中和する。分離漏斗に移し、ＥｔＯＡｃに抽出し、そして、水（３００ｍＬ）及びその後ブライン（３００ｍＬ）で洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮する。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使って溶出しながらＨＰＬＣで物質を精製して、３−（メトキシメチル）−６−［１−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エテニル］−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（３０ｇ、１０４ｍｍｏｌ、収率９２％）を濃黄色オイルとして得る。ＬＣＭＳ（低）の所望の生成物のピークは、ｒｔ＝１．８２分、Ｍ＋１＝２８８。
【００２５】
調製例４：３−（メトキシメチル）−６−［１−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エチル］−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン
【化５】
2016501219.tif 000007
５％のパラジウム／炭素（１５ｇ；７．０ｍｍｏｌ）をＮ２でパージしたフラスコに加え、そして、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）を加える。溶液としての３−（メトキシメチル）−６−［１−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エテニル］−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（２９ｇ、１０１ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）中に加える。吸引下で脱気して、そして、バルーンを介して水素をチャージする。一晩撹拌し、加圧下で過剰な水素を排気し、そして、Ｎ２をフラッシュする。ケイ藻土を通して濾過し、そして、濃縮して３−（メトキシメチル）−６−［１−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エチル］−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンを濃黄色オイル（２７ｇ、９３ｍｍｏｌ；収率９２％）として得る。さらに精製することなく、物質を次の工程に持ち込んでもよい。ＬＣＭＳ（低）、ｒｔ＝１．７３分、Ｍ＋１＝２９０。
【００２６】
調製例５：２−フルオロ−５−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エトキシ］ピリジン
【化６】
2016501219.tif 000008
炭酸セシウム（３Ｅｑ、５３．０５ｍｍｏｌ；１７．２ｇ）を、ジメチルホルムアミド（０．３Ｍ；７６２．３７ｍｍｏｌ；５９．０ｍＬ）中の２−フルオロ−５−ヒドロキシピリジン（２．０ｇ、１．００Ｅｑ、１７．６８ｍｍｏｌ）の溶液に加える。その後、２−（２−ブロモエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（１７．７ｍｍｏｌ、３．７ｇ）を加え、そして、一晩室温で撹拌する。分離漏斗に移し、そして、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を加える。有機層を洗浄し、水（３００ｍＬ）、その後ブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮する。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７／３）を使って溶出しながらＨＰＬＣで粗製混合物を精製し、２−フルオロ−５−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エトキシ］ピリジンを淡黄色オイル（３．９ｇ、１６．２ｍｍｏｌ；収率９１％）として得る。ＬＣＭＳ（低）、ｒｔ＝１．８分、Ｍ＋１＝２４２。
【００２７】
調製例６：３−（メトキシメチル）−６−｛１−［１−（５−｛２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エトキシ｝ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エチル｝−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（ジアステレオマーのラセミ混合物）
【化７】
2016501219.tif 000009
３−（メトキシメチル）−６−［１−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）エチル］−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（７．７ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（０．２Ｍ；１３３ｍＬ）中に溶解する。リチウムｔ−ブトキシド（（ＴＨＦ中の１．００モル濃度溶液の１．５Ｅｑ）、３９．９ｍｍｏｌ；３９．９ｍＬ））を加え、１５分間撹拌する。２−フルオロ−５−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エトキシ］ピリジン（２．００Ｅｑ；５３．２ｍｍｏｌ；１２．８ｇ）を加える。反応物を油浴中で１４０℃に加熱し、そして、Ｎ２でパージしてＴＨＦを除去する。混合物を５時間還流加熱する。その混合物を室温に冷却し、そして、飽和塩化アンモニウムでクエンチする。ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）中に抽出して、水（２×１００ｍＬ）、その後ブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮する。４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使って溶出しながらＨＰＬＣ（シリカ）で精製し、３−（メトキシメチル）−６−｛１−［１−（５−｛２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エトキシ｝ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エチル｝−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンを淡黄色オイル（１０ｇ；；１９．６ｍｍｏｌ、収率７４％）として得る。ＬＣＭＳ（低）、ｒｔ＝２．６、Ｍ＋１＝５１１。
【００２８】
実施例１：６−（１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン、ラセミ体
【化８】
2016501219.tif 000010
３−（メトキシメチル）−６−｛１−［１−（５−｛２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エトキシ｝ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エチル｝−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（１４０ｍｇ、２７４．１８μｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（０．０５Ｍ；７３ｍｍｏｌ；５．５ｍＬ）中に溶解し、そして、（〜７２℃）Ｎ２下２時間還流加熱する（オレンジ色が、約１０分後７０℃にて観察される）。反応物を室温に冷却し、そして、減圧下で濃縮する。残渣をＴＨＦ（０．０５Ｍ；６７ｍｍｏｌ、５．５ｍＬ）に溶解し、２８％の水酸化アンモニウム（０．２Ｍ；９．９ｍｍｏｌ；１．４ｍＬ）を加え、そして、室温で〜１時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で希釈し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして、濃縮する。へキサン中の６０〜８０％ＥｔＯＡｃの濃度勾配を使って溶出しながら、２５ｇのシリカゲルカラム上での液体クロマトグラフィーにより精製して、６−（１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンを白色フォーム（８０ｍｇ；２０９μｍｏｌ；収率７６％）として得る。ＬＣＭＳ（低）、ｒｔ  １．８分、Ｍ＋１＝３８３。
【００２９】
実施例２：６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（異性体１）
【化９】
2016501219.tif 000011
６−（１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（３３０ｍｇ）を、ＭｅＯＨ（３．０ｍＬ）およびＤＣＭ（２．５ｍＬ）中に溶解する。そして、一回のラン当たり３００μＬのアリコートを注入し、２２５ｎｍで検出し、７０ｍＬ／分で４０％ＭｅＯＨ／液体ＣＯ２を使って溶出しながら、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標）ＯＪ−Ｈ（２．１×１５ｃｍ、５μｍカラム、Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｅｕｒｏｐｅ）を使用するキラルクロマトグラフィーにより複数の光学異性体へと分離する。分離した光学異性体を含む画分を合わせて、そして吸引下で濃縮して、異性体１（１５０ｍｇ）および異性体２（１６９ｍｇ）を非晶質白色固形物として得る。２２５ｎｍで検出して、５ｍＬ／分で４０％ＭｅＯＨ／液体ＣＯ２を使って溶出しながら、Ｃｈｉｒａｃｅｌ（登録商標）ＯＪ−Ｈ（４．６×１５０ｍｍ、５μｍのカラム、Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｅｕｒｏｐｅ）を使用する分析的キラルクロマトグラフィーは、異性体１をｒｔ＝２．０３で、異性体２をｒｔ＝２．６６ｍｉｎで特徴づけた。ＬＣＭＳ（低）：異性体１、ｒｔ  １．８分、Ｍ＋１＝３８３；異性体２、ｒｔ  １．８分、Ｍ＋１＝３８３。
【００３０】
結晶化：Ｉ型：
７０℃で２０分間撹拌して、６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（異性体１）（５６．９ｍｇ）を、１：１のＥｔＯＨ：ヘプタン（３．０ｍＬ）に溶解する。熱い間に溶液を濾過し、二つの等量ポーションへと分割する；その一つを、外気温のバイアルに移し、蓋をして、そして、５℃で一晩撹拌する。固形物を濾過により回収し、そして、窒素下で乾燥して、結晶型Ｉ（２３．９ｍｇ、収率８４％）を得る。
【００３１】
異性体Ｉの絶体立体化学が、６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オンであることを、単結晶Ｘ線回折により確認する。
【００３２】
粉末Ｘ線回折法
結晶性固形物のＸＲＰＤパターンを、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）とＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ粉末Ｘ線回折装置上で３５ｋＶおよび５０ｍＡで稼働しながら得る。サンプルを、２Θでの４〜４０°で、２Θでのステップサイズ０．００８７°及びスキャン速度０．５秒／ステップを用い、並びに０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定アンチスキャッターおよび９．５ｍｍの検出器スリットを用いてスキャンする。乾燥粉末を石英サンプルホルダに詰めて、滑面をガラススライドを用いて得る。結晶学技術分野において周知なのは、任意の所定の結晶形に関して、回折ピークの相対強度が、複数因子（例、結晶形態および晶癖）から生じる優先配向に起因して異なる可能性があることである。優先配向の効果が存在する場所では、ピーク強度が変化するが、多形体の特徴的ピーク位置は変化しない。例えば、米国薬局方３３−国民医薬品集２８章＜９４１＞粉末Ｘ線回折法（ＸＲＰＤ）による結晶性固形物の特徴解析、公定、２０１０年１０月１日〜２０１１年２月１日を参照されたい。さらに、任意の所定の結晶形に関して、ピーク角度位置が若干変化する場合があるということも結晶学技術分野では周知である。例えば、サンプルを解析する温度若しくは湿度、サンプル変位、または内部標準の存在若しくは非存在の変動に起因して、ピーク位置はシフトする場合がある。本件では、２Θでの±０．２のピーク位置変動は、記載される結晶形の明白な同定を妨げることなく、これらの潜在的変動を考慮にいれることにする。結晶形の確認は、区別可能な（°（２Θ）単位での）複数ピーク、典型的にはより顕著な複数ピークの任意のユニークな組み合わせに基づいて実行する。外気温および相対湿度で得られる結晶形回折パターンを、８．８５および２６．７７°（２Θ）でのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整する。
【００３３】
６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（異性体１）を、ＣｕＫａ放射を使用して、ＸＲＰＤパターンにより特徴解析する。そして、以下の表１に記載される回折ピーク（２Θ値）を得る。具体的には、回折角度０．２°の許容誤差を有する１６．６２、１４．３９、１４．０５、１１．５４および１０．９９からなる群より選択される一又は複数のピークと組み合わされる１５．８１のピークを、前記パターンは含む。
【００３４】
表１：６−（（Ｓ）−１−｛１−［５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−ピリジン−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−エチル）−３Ｈ−１，３−ベンゾチアゾール−２−オン（異性体１）１型の粉末Ｘ線回折ピーク
【００３５】
【表１】
2016501219.tif 000012
【００３６】
インビトロおよび動物試験で得られたデータは、発作の治療におけるＴＡＲＰγ８依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストおよび特に本発明の化合物の役割を支持する。具体的に見出されるのは、本発明の化合物が、ＴＡＲＰγ８依存性ＡＭＰＡ受容体を強力に選択的に拮抗し、およびペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）誘導性発作ラットモデルにおいて発作を防ぐことである。本発明の化合物はまた、マウスのホルマリン誘導性疼痛モデルにおいて鎮静剤活性を示す。
【００３７】
本発明の化合物の特性をさらに実証するために、化合物を以下のインビトロおよびインビボアッセイで実施してもよい。
【００３８】
ＦＬＩＰＲアンタゴニスト機能アッセイ
ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト化合物のＴＡＲＰサブタイプ選択性を、海馬に多く含まれるＴＡＲＰ（ＴＡＲＰγ８）または小脳に多く含まれるＴＡＲＰ（ＴＡＲＰγ２）のいずれかを有するＣＨＯ−Ｓ細胞に共発現するＡＭＰＡ  ＧｌｕＡ１フロップアイソフォーム受容体サブユニットにおける化合物活性を比較することにより実証する。ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト化合物のＴＡＲＰ依存性を、共発現ＴＡＲＰが存在しないＣＨＯ−Ｓ細胞に発現するＡＭＰＡ  ＧｌｕＡ１フリップアイソフォーム受容体サブユニットにおける活性と、上記活性とを比較することにより実証する。
【００３９】
手短に述べると、ＣＨＯ−Ｓ（インビトロジェン社）細胞を５０／５０カスタム培地で１×１０７細胞／ｍｌの密度に懸濁して増殖させる。（５０／５０カスタム培地は、ＣＤ  ＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ社＃１０７４３）とカスタム完全培地の１：１（ｖ／ｖ）混合物として作製される低カルシウム培地である。カスタム完全培地は、０．４０ｍｇ／Ｌトロポロン、５．００ｍｇ／Ｌインスリン、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、及び０．０７５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８を、以下の組成を有するカスタム基本培地に加えることで作製する：（特に断りがない限り、数値はｍｇ／Ｌである）１１．０１無水塩化カルシウム；０．０５０硝酸第二鉄−９Ｈ２Ｏ；０．４２０硫酸第一鉄−７Ｈ２Ｏ；２８．６４無水塩化マグネシウム；４８．８４無水硫酸マグネシウム；３１２．１４ＫＣｌ；５５０５．９６ＮａＣｌ；６２．５７第一リン酸ナトリウム；７１．２８無水第二リン酸ナトリウム；０．４３２硫酸亜鉛−７Ｈ２Ｏ；１０．０エタノールアミンＨＣｌ；６０００Ｄ−グルコース（デキストロース）；０．２１０ＤＬリポ酸（チオクト酸）；０．０８１プトレシン２ＨＣｌ；４．７８ヒポキサンチンナトリウム；２２０．２４ピルビン酸ナトリウム；０．７３０チミジン；８．９０Ｌ−アラニン；２１１．２３Ｌ−アルギニンＨＣｌ；１５．０２Ｌ−アスパラギンＨ２Ｏ；１３，３１Ｌ−アスパラギン酸；６２．６７シスチン２ＨＣｌ；７．３６０Ｌ−グルタミン酸；１４６．１６Ｌ−グルタミン；３０．０グリシン（ｇｙｌｉｃｉｎｅ）；４２．０４Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ  ２Ｈ２Ｏ；１０５．１１Ｌ−イソロイシン（ｉｓｏｌｕｅｃｉｎｅ）；１０５．１１Ｌ−ロイシン（ｌｕｅｃｉｎｅ）；１４６．１６Ｌ−リジンＨＣｌ；３０．０３Ｌ−メチオニン；６６．０７Ｌ−フェニルアラニン；１７．２７Ｌ−プロリン；４２．０４Ｌ−セリン；９５．１Ｌ−スレオニン；１６．０２Ｌ−トリプトファン（ｔｙｐｔｏｐｈａｎ）；１０４．１１Ｌ−チロシンジナトリウム塩；９４．１Ｌ−バリン；８．９９塩化コリン；４．００葉酸；１２．６１イノシトール；４．００ナイアシンアミド；４．００ピリドキサールＨＣｌ；０．０３１ピリドキシンＨＣｌ；０．４００リボフラビン；４．００パントテン酸ナトリウム；４．００チアミンＨＣｌ；０．６８０ビタミンＢ１２；および２２００炭酸水素ナトリウム）。細胞を１０００×ｇで１５分間遠心分離し、そして、２×１０６細胞／ｍｌで新しい５０／５０カスタム培地に再懸濁する。バッチトランスフェクションのために、２ｍｇのトータルＤＮＡ（複数可）を各リットルの細胞用に使用する。ＣＨＯ−Ｓ細胞へのＧｌｕＡ１−γ８のトランスフェクションに関しては、ＧｌｕＡ１Ｑｆｌｏｐ−Ｃａｃｎｇ８−ｐＢｕｄＣＥ４．１ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ社）およびヒトＥＡＡＴ３  ｐＡＮ１０４ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ社、グルタミン輸送体）を２：３の比率で混ぜる。ＣＨＯ−Ｓ細胞へのＧｌｕＡ１−γ２のトランスフェクションに関しては、ヒトＧｌｕＡ１Ｑｆｌｏｐ−Ｃａｃｎｇ２−ｐＢｕｄＣＥ４．１（Ｑｉａｇｅｎ社）を使用する。ＣＨＯ−Ｓ細胞へのＧｌｕＡ１フリップのトランスフェクションに関しては、ヒトＧｌｕＡ１ｆｌｉｐ  ｐｃＤＮＡ３．１ＤＮＡ（Ｑｉ���ｇｅｎ社）を使用する。ＤＮＡ（複数可）およびＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬（インビトロジェン社カタログ＃１６４４７−５００）を、ＤＮＡ複合体を形成するために、１０μｇトータルＤＮＡ：１０μｌＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬：１ｍｌ培地の割合で基本カスタム培地（上記参照）に添加する。１５分後、適切な量（２０％ｖ／ｖ）のＤＮＡ複合体を、準備した細胞培養物に加える。一過性にトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｓ細胞を４８時間後に回収し、後で使用するために複数のアリコートにて凍結する。トランスフェクトした細胞中のＡＭＰＡ受容体の機能と薬理を、新たに調製した細胞アリコートと融解した細胞アリコートの両者において確認する。
【００４０】
ＡＭＰＡ受容体を発現する凍結トランスフェクトＣＨＯ−Ｓ細胞を融解し、３８４穴ポリＤーリジンコートプレート（ベクトン・ディッキンソン社カタログ＃３５４６６３）の１ウエル当たり５０，０００細胞で、（５％透析済みウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ社カタログ＃２６４００−０３６）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含む）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ培地）（Ｇｉｂｃｏ社カタログ＃１１９６０）中に播種し、３７℃で一晩培養する。実験当日に、２種類の蛍光色素ローディングバッファーを調製する。Ｆｌｕｏ−４  ＡＭ色素ローディングバッファーは、（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２．５ｍＭのプロベネシド（シグマ社カタログ＃Ｐ８７６１；細胞輸送体が前記色素を汲み出すのを阻害するもの）、および５ｎＭのＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−１２７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅｓ社カタログ＃Ｐ３０００ＭＰ）を含む）ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中の５μＭのＦｌｕｏ−４  ＡＭ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社カタログ＃Ｆ−１４２０２）からなる。Ｆｌｕｏ−４  ＮＷ色素ローディングバッファーは、１００ｍｌの（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および２．５ｍＭのプロベネシドを含む）ＨＢＳＳをＦｌｕｏ−４  ＮＷ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社、高スループットパック、カタログ＃Ｆ３６２０５）の一瓶に加えることにより調製される。培養したＧｌｕＡ１−γ８およびＧｌｕＡ１−γ２ＣＨＯ−Ｓ細胞に、Ｆｌｕｏ−４  ＡＭ色素ローディングバッファーを加えて、２２℃で２時間インキュベートする。ＧｌｕＡ１フリップＣＨＯ−Ｓ細胞に、Ｆｌｕｏ−４  ＮＷ色素ローディングバッファーを加え、３７℃で３０分間インキュベートし、その後、さらに９０分間２２℃でインキュベートする。細胞を化合物に暴露開始する前に、細胞プレート中の色素ローディングバッファーを除去し、新しいアッセイバッファーを加える。アッセイバッファーは、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２．５ｍＭのプロベネシド、および４ｍＭのＣａＣｌ２を有するＨＢＳＳからなる。アッセイは、化合物を添加することにより開始し、その後、細胞をアッセイバッファー中のグルタメート（終濃度＝４５μＭ）およびシクロチアジド（ＣＴＺ、終濃度＝２０μＭ）で刺激する。細胞内［Ｃａ＋＋］の変化を蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）により動力学的に記録する。試験化合物によるグルタメート作用効果の阻害は、化合物非存在下で見られる効果に対する試験化合物の存在下でグルタメートプラスＣＴＺにより刺激される応答の割合として表される。相対的ＩＣ５０を、４パラメータ非線形ロジスティック式を使用して計算する。同様に、ＧｌｕＡ１フリップ単独またはＧｌｕＡ１フロップγ２を発現するＣＨＯ−Ｓ細胞を使って化合物を評価して、ＴＡＲＰ依存性およびＴＡＲＰ選択性活性を確認する。
【００４１】
実施例２の化合物を、基本的には上記のようにしてアッセイする。実施例２の化合物は、ＴＡＲＰγ８依存性ＧｌｕＡ１フロップ受容体のグルタメートプラスＣＴＺによる活性化を、約８５．６±０．７％（平均値±ＳＥＭ、ｎ＝９）（ＩＣ５０は７４．５±１７．８ｎＭ（平均値±ＳＥＭ、ｎ＝９））で阻害することが分かる。実施例２の化合物は、しかしながら、ＴＡＲＰのないフリップアイソフォームもＴＡＲＰγ２依存性ＧｌｕＡ１フロップ受容体（ＩＣ５０＞アッセイ限界の９２６０ｎＭ）も阻害しなかった。
【００４２】
従って、本発明の化合物の生理学的に妥当な用量は、インビボでＴＡＲＰγ８ＡＭＰＡ受容体を実質的に阻害するが、他の生理学的に妥当な受容体（例えば、非ＴＡＲＰ依存性受容体またはＴＡＲＰγ２依存性受容体）と実質的に相互作用しないことが期待される。従って、前記用量は、非ＴＡＲＰ依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストと関連する望ましくない効果を回避しながら発作の治療に有用である可能性がある。
【００４３】
ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）誘導性発作ラットモデル：
スプラーグドーリーラットの雄（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙより、インディアナポリス、ＩＮ）で試験時の体重が９０〜１１０グラムのものを、標準的照明サイクル（午前６時に点灯、午後６時に消灯）の大型コロニー部屋の中で、自由に飼料と水にアクセスさせて、１ケージに５匹飼育する。動物は、試験前少なくとも３日間コロニー部屋で維持される。動物を試験開始１時間前に静かな部屋に移動する。動物の使用は一度きりである。
【００４４】
動物を取り出し、試験化合物またはビヒクル（５％ＤＭＳＯ、１０％アカシア、および０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）１５１０−米国消泡剤）を経口で１０ｍＬ／Ｋｇ投薬し、その後元のケージに戻す。投薬後２５分に、動物をスクリーン上に載せ、そのスクリーンを１８０度反転させて運動障害を試験する。反転後６０秒で、動物を以下のように点数化する：
０  動物がスクリーン上に昇る場合
１  動物がスクリーンの底部に掴まっている場合
２  動物がスクリーンから落ちてしまった場合。
スクリーン試験を完了した後、動物に生理食塩水中の３５ｍｇ／ｋｇのＰＴＺを１ｍｌ／ｋｇの容量で皮下投薬する。その動物を、その後観察ケージに入れて、ＰＴＺ後３０分間観察する。クローヌスは、ラットが起き上がれなくなっている際の前脚と後脚の間代性発作として定義される。強直性発作は、強直に後脚が伸びて起き上がれなくなったものとして定義される。観察期間中に死んだ場合も記録される。観察期間中の任意の時間での特異的発作型の存在に従って、動物を点数化する。所定の発作型を有する動物の数としてデータを報告する（例えば、４／５間代性発作とは、動物５匹中４匹が観察期間中の任意の時間で任意の期間少なくとも一回の間代性発作を示したことを意味する）。
【００４５】
実施例２の化合物を１〜１０ｍｇ／Ｋｇの用量範囲で基本的には上記のように試験する。実施例２の化合物は、１．７４ｍｇ／Ｋｇでの推定ＥＤ５０と１０ｍｇ／Ｋｇでの１００％保護で、ＰＴＺ誘導性発作からラットを保護することが分かり、反転スクリーン試験で測定される場合に如何なる運動障害も観察されない。このデータが指示するのは、実施例２の化合物がラットの発作モデルで効力があり、したがって、本発明の化合物が、非ＴＡＲＰ依存性ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストに関連する望ましくない効果を回避しながら発作の治療に有用である可能性があるということである。
【００４６】
マニュアルホルマリン誘導性疼痛モデル
マニュアルホルマリン誘導性疼痛モデルは、化合物を鎮痛剤特性に基づいてスクリーニングすることに関して周知である（Ｍｏｇｉｌ  Ｊ．Ｓ．ら、「Ｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ  Ｉ：  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  １１  ｉｎｂｒｅｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｏｎ  １２  ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｏｆ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ．（痛覚の遺伝率Ｉ：１１種類の純系マウスの痛覚の１２種類の測定に関する応答）」、Ｐａｉｎ、８０、（１９９９）、６７−８２）。アッセイを、Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ（登録商標）箱（約１０ｃｍ×１０ｃｍ×１０ｃｍのサイズのもの）の中で実施する。ケージの背面に設置されるミラーは、ホルマリンを注入した脚の観察が妨げられないことを可能にする。非絶食雄マウス（Ｈａｒｌａｎ（ＨＳＤ）ＣＤ１−Ｉｃｒ）を、実験前少なくとも６０分間それぞれ個人用小室に入れる。全ての試験は、０８：００〜１６：００時の間に行い、試験室の温度を２１〜２３℃に維持する。複数用量の試験化合物（３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ）、ビヒクル（１０％アカシア中の５％ＤＭＳＯ、０．０５％消泡剤）、およびポジティブコントロール（１％ＨＥＣ中のトラマドール８０ｍｇ／ｋｇ、０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０、０．０５％消泡剤）を、ホルマリン注入する前の異なる時間に末梢（経口）投与する。ホルマリン（０．９％生理食塩水中の５％溶液２０μＬ）を、左後脚の足底に２７ゲージ針を使って皮下注射する。ホルマリン注射直後に、観察を開始する。５分間の間隔中における舐める行為のそれぞれが持続する秒数を記録することにより、ホルマリン誘導性疼痛を定量する。疼痛スコアを、ホルマリン注射後６０分間測定する。二相の疼痛行動が、以前に記載されるように観察される（Ｗｈｅｅｌｅｒ−Ａｃｅｔｏ，  Ｈ．、Ｐｏｒｒｅｃａ，  Ｆ．およびＣｏｗａｎ，  Ａ．、「Ｔｈｅ  ｒａｔ  ｐａｗ  ｆｏｒｍａｌｉｎ  ｔｅｓｔ：  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｎｏｘｉｏｕｓ  ａｇｅｎｔｓ（ラット脚ホルマリン試験：有害物質の比較）」、Ｐａｉｎ、４０（１９９０）、２２９−２３８）。初期相は、ホルマリン注射直後に始まり、約５分間持続する。その後、後期相が１０〜１５分で開始し、最大応答がホルマリン注射後約２５〜４０分で典型的に観察される。６０分間の観察期間の後、動物をＣＯ２とその後頚椎脱臼により屠殺する。ホルマリン試験に関して報告される様々なスコアパラメータの中で、注射された脚を舐めたり噛んだりするのに使われた合計時間が最も適切であると考えられる。（Ａｂｂｏｔｔら、「Ｔｈｅ  ｆｏｒｍａｌｉｎ  ｔｅｓｔ：  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ａｎｄ  ｓｅｃｏｎｄ  ｐｈａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐａｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｒａｔｓ（ホルマリン試験：ラットの疼痛応答の第一および第二相のスコア特性）」、Ｐａｉｎ、６０（１９９５）、９１−１０２；Ｃｏｄｅｒｒｅら、「Ｔｈｅ  ｆｏｒｍａｌｉｎ  ｔｅｓｔ：  ａ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｗｅｉｇｈｔｅｄ−ｓｃｏｒｅｓ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ｐａｉｎ  ｒａｔｉｎｇ（ホルマリン試験：行動的疼痛評価の重み付けスコア方法の検証）」，Ｐａｉｎ、５４（１���９３）、４３−５０）。初期相スコアは、０時〜５分の間に舐めるのに要した時間（秒）の合計である。後期相スコアは、観察期間の１５分〜５５分の間に舐めるのに要した合計秒数を加えて得られる。データを、平均値と平均値の標準誤差（±ＳＥＭ）として提示する。データを、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）と両側比較ダネット「ｔ」検定により解析される適切な対比とにより評価する。もしＰ値が０．０５未満の場合、差異は有意であると考えられる。（Ａｂｂｏｔｔ（上記）；Ｃｏｄｅｒｒｅ（上記）；およびＷｈｅｅｌｅｒ−Ａｃｅｔｏ（上記））。
【００４７】
実施例２の化合物を、基本的には上記のように試験する。実施例２の化合物は、以下の用量応答から導かれる２．６１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で疼痛行動を優位に減少させることが分かる。
用量（ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）     舐めた合計時間の減少％    Ｓ．Ｅ．Ｍ．
３０                             ９０．０              ３．４％
１０                             ８０．４              ８．６％
３                             ５３．９              ７．２％
従って、本発明の化合物は、痛みの治療にも有用である場合がある。
【００４８】
任意の処方を直接用いずに、本発明の方法に採用される化合物を投与することも可能である。一方、前記化合物は、有効成分としての式Ｉの化合物または医薬的に許容可能なその塩ならびに少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物の形態で通常投与される。これらの化合物は、（経口、舌下、経鼻、皮下、静脈内、および筋中を含む）各種経路により投与可能である。そのような医薬組成物とそれらを調製する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：「Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（調剤の科学と実践）」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（フィラデルフィア科学大学）、編集第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｃｏ．、２００５年）を参照されたい。
【００４９】
前記組成物を、好ましくは、単位用量形態で処方する。各投与量は、活性成分を約２５〜約１０００ｍｇ、より通常は約５０〜約５００ｍｇ、例えば約１００ｍｇ含有する。用語「単位用量形態」は、ヒト被検者および他の哺乳動物用の単位用量として適切な、物理的に分離した単位のことを指す。各単位は、少なくとも一つの適切な医薬的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤と関連して所望の治療効果を生み出すために計算された活性物質所定量を含む。
【００５０】
式Ｉの化合物は、広い投与量範囲に渡り一般的に効果的である。例えば、一日当たりの投与量は、通常約０．３ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約１５ｍｇ／ｋｇ、より通常には約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇ、例えば約１．５ｍｇ／ｋｇの範囲に収まる。いくつかの例では、前記範囲の下限未満の投与量レベルが十分である場合がある。一方、他のケースでは、上記範囲より多い用量が、全く有害副作用を引き起こすことなしに用いられる場合もある。従って、上記投与量範囲は、いかなる意味でも本発明の範囲を限定する意図はない。各日の過程において一日当たりの用量を複数回に分けて投与することが有利な場合もある（１／２用量を一日二回または１／３用量を一日３回）。実際に投与される化合物量は、医師が適切な状況（治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（複数可）、個々の患者の年齢、体重、および応答、ならびに患者の症状の重症度を含むもの）を鑑みて決定することになる。
【００５１】
考慮されるのは、本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩（例えば、本発明の医薬組成物中のもの）は、発作を防止するために慢性投与によるか及び／又は現在起こっている発作を制御または阻止するために急性投与により、発作を治療するために使用されることになる。
【国際調査報告】
2016501219.tif 000017
2016501219.tif 000018