(57)【要約】  本発明は、鏡像異性的に純粋な（即ち、９９％）７−（２’-トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（ＢＮＰ１３５０；カレニテシン；コシテカン）の化学全合成用の５つの新規高効率合成方法を開示し、請求する。これらの前述された合成方法は、まず、非常に新規の直接および収束性非線形合成ストラテジーを利用する７−（２’-トリメチルシリル）エチルカンプトテシンの全合成を開示し、それは、全合成されたカンプトテシン親化合物における最終合成ステップとして、Ｃ７−（トリメチルシリル）エチル側鎖を組み入れる従来方法を介するのではなく、鏡像異性的に純粋な三環形ピリドンへの重要なＣ７−（トリメチルシリル）エチル側鎖を有する重要なＡ環合成素子のアニーリングを含む。本明細書で報告される現在の新規合成アプローチは、予め取り付けられたトリメチルシリルエチル側鎖を有する所望の官能化されたＡ環を利用するため、前述された合成方法は、出発材料として、所望の官能化されたニトロもしくは保護されたアミノフェニルカルボキシＡ環を置換することによって、Ａ環置換されたＢＮＰ１３５０類似体の薬剤的に関連する広い範囲を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の化学全合成用の方法であって、
ステップ１）中間生成物１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシラニル−プロぺノンの合成と、
ステップ２）中間生成物１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンの合成と、
ステップ３）生成物７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の合成と
を含む合成スキーム１で説明される、
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の化学全合成用の方法であって、
ステップ１）中間生成物メトキシメチル（３−トリメチルシリル）プロピオンアミドの合成と、
ステップ２）中間生成物２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリンの合成と、
ステップ３）生成物７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の合成と
を含む合成スキーム２で説明される、
ことを特徴とする方法。
【請求項３】
７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の化学全合成用の方法であって、
ステップ１）中間生成物１−（２−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ）−３−トリメチルシリルプロピノンの合成と、
ステップ２）中間生成物２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリンの合成と、
ステップ３）生成物７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の合成と
を含む合成スキーム３で説明される、
ことを特徴とする方法。
【請求項４】
７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の化学全合成用の方法であって、
ステップ１）中間生成物１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシリル−２−プロピン−１−オールの合成と、
ステップ２）中間生成物２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−ニトロベンゼンの合成と、
ステップ３）中間生成物２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−アニリンの合成と、
ステップ４）生成物７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の合成と
を含む合成スキーム４で説明される、
ことを特徴とする方法。
【請求項５】
７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の化学全合成用の方法であって、
ステップ１）中間生成物２−ニトロベンゾイル塩化物の合成と、
ステップ２）中間生成物１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−１−オンの合成と、
ステップ３）中間生成物１−（２−アミノフェニル）−３−（トリメチルシリル）プロパン−１−オンの合成と、
ステップ４）中間生成物１−（２−アミノフェニル）−３−（トリメチルシリル）プロパン−１−オン塩酸塩の合成と、
ステップ５）生成物７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（カレニテシン）の合成と
を含む合成スキーム５で説明される、
ことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鏡像異性的に純粋な７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン（ＢＮＰ１３５０；カレニテシン；コシテカン）の全合成用の新規の化学的方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
[Ｉ．カンプトテシン（ＣＰＴ）および初期臨床試験]
カンプトテシン（ＣＰＴ；ＩＵＰＡＣ学名：（Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシル−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン）およびある特定のその類似体は、様々な程度の抗腫瘍活性を有することが示されてきた。現在、二つのＣＰＴ類似体（以下に議論されるような、イリノテカンおよびトポテカン）は、米国食品医薬局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＦＤＡ）によって米国における治療上の利用を承認されており、固形腫瘍に対する種々の形態に対して、他の監督機関によって幾つかの他の分野でも広く承認されている。
【０００３】
ＣＰＴは、カンレンボク（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  ａｃｃｕｍｉｎａｔａ，ヌマミヅキ科属）の中国産イチイから、Ｗａｌｌらによって１９６６年に最初に単離された。Ｗａｌｌ，Ｍ．Ｅ．らによるＰｌａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．Ｉ．  Ｔｈｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｌｋａｌｏｉｄａｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｒｏｍ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８８：３８８８−３８９０（１９９６）を参照されたい。
【０００４】
この最初に単離されたカンプトテシン（ＣＰＴ）の構造は以下に示される。
【化１】
2016501187.tif 000002
【０００５】
１９７０年代初期までに、ＣＰＴは、第一段階および第二段階の臨床試験に到達し、抗腫瘍活性を有することが見出されたものの、その利用に関して多くの有害な生理学的副作用が存在した。副作用は、これらに限定されるものではないが、深刻かつ予測不可能な骨髄機能抑制、胃腸に対する毒性、出血性膀胱炎、脱毛症、下痢、吐き気、嘔吐などを含んでいた。これらの有毒性は、初期の臨床試験中に見出され、この期間中にはこの薬物を“扱い難いもの”とした。Ｍｕｇｇｉａ，Ｆ．Ｍ．らによるＰｈａｓｅ  Ｉ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ｗｅｅｋｌｙ  ａｎｄ  Ｄａｉｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＮＳＣ−１００８８０）：Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  Ｗｉｔｈ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．５６：５１５−５２１（１９７２）ならびに、Ｓｃｈａｅｐｐｉ，Ｕ．らによるＴｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＮＳＣ−１００８８０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．５：２５−３６（１９７４）を参照されたい。
【０００６】
本発明の有用性および新規性の双方を示すために、非経口投与によって実施されたヒトの臨床試験に関する既刊文献の簡単な再考を行うことは有益であろう。ＣＰＴの物理化学的研究は、ＣＰＴの閉じたＥ環状ラクトン形態が、水に対する極度に低い溶解性を有するということを見出した（即ち、約０．１μｇの薬剤が１ｍＬの水に溶解する）。さらには、二つのＣＰＴ鏡像異性体の内で、天然に生じる（Ｓ）異性体が、（Ｒ）異性体よりもより強力な効能があることが分かった。Ｍｏｔｗａｎｉ，Ｍ．Ｖ．らによるＦｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ（Ｆｌａｖｏ）Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｔｈｅ  ＳＮ−３８−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐ２１  ｗａｆ１／ｃｉｐ１  ｉｎ  ＨＣＴ１１６  Ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４１：３２−４３（２０００）を参照されたい。これらの種々の類似体の異なる特性は、ＣＰＴの親構造体における異なる化学置換基によって引き起こされる。
【０００７】
このように、その極度に低い水に対する溶解性によって、従来手順の投与プロトコルを介して、ヒトの臨床試験においてＣＰＴを投与するために、そのカルボン酸ナトリウム形態（開いたラクトン形態）として、水酸化ナトリウムを利用して最初に処方される。これらの全ての初期臨床試験は、分子の水溶性（即ち親水性）を著しく増加させるために、ＣＰＴの水酸化ナトリウム処方を利用し、それによって、非経口ならびに、或る場合には、経口で十分な量の薬剤の投与を可能にしたことに注意することは重要である。ＣＰＴの水酸化ナトリウム処方によって、より少ない投与量でより高濃度のＣＰＴを臨床医が投与することを可能にする、より水溶性のあるＣＰＴ種を作り出し、それによって、第一段階および第二段階臨床試験を受けるがん患者に対して投与すべき、十分に多い服用量の薬剤を可能とする。しかしながら、この処方は結果として、カンプトテシン分子のラクトンＥ環の加水分解を引き起こし、それによって、元のＣＰＴの加水分解されていないラクトンの抗腫瘍効能の約１／１０以下しか有していないＣＰＴの水溶性カルボン酸塩形態を形成することが、続いて立証された。水酸化ナトリウム処方されたＣＰＴを利用して行われた臨床試験は、頻繁に観察され顕著な全身毒性および抗腫瘍活性の欠如の双方によって、期待外れなものであった。この薬剤の比較的低い親水性が、これらの副作用に対する最も重要な原因であったことが続いて確認された。このラクトン形態におけるＣＰＴの低い水溶性は、薬剤の実際的な臨床有用性を大いに制限するものである。なぜなら、薬剤の有効服用量を提供するために、患者に対して法外に大量の流体が投与されなければならないからである。ＣＰＴラクトン形態およびその類似体の多くの強力な抗腫瘍活性および低い水溶性のために、より高い水溶性を有する新規ＣＰＴラクトン類似体を生成することに対して多大な努力が行われてきた。水溶性ＣＰＴ類似体は、開いたＥ環形態では大量には存在しないが、その代わりに、活性を有するために、主に閉じた環状ラクトン形態で残存する。したがって、平衡状態が閉じた環状ラクトン形態に有利であるＣＰＴ類似体は、投与のために望ましい。
【０００８】
[ＩＩ．ＣＰＴの薬理学的活性]
これらの初期の期待外れの副作用にもかかわらず、その作用メカニズム（即ち、トポイソメラーゼＩ阻害）が明らかになった結果、ＣＰＴに対する臨床的な関心は、１９８０年代に呼び起された。このＣＰＴ類似体の作用機構に関する新しい情報は、抗腫瘍薬剤として利用するために新規ＴｏｐｏＩ阻害剤を開発することに関する関心を再燃させるのに役立ち、その結果、幾つかの研究グループは、がん治療用の新規ＣＰＴ類似体を開発する試みを開始した。Ｈｓｉａｎｇ，Ｙ．Ｈ．らによるＣａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  ＤＮＡ  Ｂｒｅａｋｓ  Ｖｉａ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ＤＮＡ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１４８７３−１４８７８（１９８５）ならびにＨｓｉａｎｇ，Ｙ．Ｈ；Ｌｉｕ，Ｌ．Ｆ．によるＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ＤＮＡ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ａｓ  ａｎ  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：１７２２−１７２６（１９８８）ならびにＨｓｉａｎｇ，Ｙ．Ｈ．らによるＡｒｒｅｓｔ  ｏｆ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｆｏｒｋｓ  ｂｙ  Ｄｒｕｇ−Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ＤＮＡ  Ｃｌｅａｖａｂｌｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ａｓ  ａ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｋｉｌｌｉｎｇ  ｂｙ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４９：５０７７−５０８２（１９８９）を参照されたい。
【０００９】
幾つかの臨床的に重要な抗がん剤は、ＤＮＡトポイソメラーゼに作用することによって腫瘍細胞を死滅させる。トポイソメラーゼは、ＤＮＡ複製中に、かつ、複製、転写およびおそらくは他のＤＮＡプロセス中に通常生じる３次構造的修飾（例えば、オーバーワインディング、アンダーワインディングおよびカテネーション）で機能する必須の核酵素である。全ての真核生物の細胞のいたるところに存在する二つの主なトポイソメラーゼは、（ｉ）一本鎖ＤＮＡを切断するトポイソメラーゼＩ（ＴｏｐｏＩ）および（ｉｉ）二本鎖ＤＮＡを切断するトポイソメラーゼＩＩ（ＴｏｐｏＩＩ）である。トポイソメラーゼＩは、ＤＮＡ複製に関連し、移動する複製フォークの前に導入されたねじれ張力を取り除く。
【００１０】
トポイソメラーゼＩ（ＴｏｐｏＩ）は、７６５個のアミノ酸を含む１００ｋＤａlの単量体ポリペプチドであり、染色体２０ｑ１２−１３．２上に位置する遺伝子によってエンコードされている。Ｃｒｅｅｍｅｒｓ，Ｇ．Ｊ．らによるＴｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ａｎｄ  Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．２０：７３−９６（１９９４）ならびにＴａｋｉｍｏｔｏ，Ｃ．Ｈ；Ａｒｂｕｃｋ，Ｓ．Ｇ．Ｔｈｅ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｌ．Ｃｈａｂｎｅｒ，Ｄ．Ｌ．Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ））４６３−３８４（１９９６）を参照されたい。トポイソメラーゼＩは、ＤＮＡ複製およびＲＮＡ転写において必須の酵素であり、全ての真核生物の細胞（腫瘍を含む）に存在する。通常のＤＮＡはスーパーコイルであり、かつ、染色体内にしっかりとはまっているため、ＤＮＡ複製フォークは、この形態的に制約を受けるＤＮＡから新しいＤＮＡを合成することはできない。ＴｏｐｏＩはＡＴＰとは関係なく作用し、スーパーコイルＤＮＡへと結合してリン酸ジエステル結合を切断することによって、結果として一本鎖切断を生じる。同時に、ＴｏｐｏＩは、ＴｏｐｏＩの位置７２３におけるチロシン残基と一本鎖ＤＮＡ分子の３’端との間に、クリーバブル複合体と呼ばれる共有結合性可逆的付加反応物を形成する。ＤＮＡ分子は、無損傷の一本鎖ＤＮＡ周囲で自由に回転することができ、ＤＮＡの弛緩が起こる。切断の再連結後、ＴｏｐｏＩはＤＮＡと解離する。クリーバブル複合体は、切断されていない一本鎖ＤＮＡを解くことを可能にするために、通常ほんの短期間だけ存在する。
【００１１】
具体的には、ＣＰＴはＴｏｐｏＩ−ＣＰＴ−ＤＮＡを含む可逆的共有結合性複合体を形成することがわかった。簡潔に言うと、ＣＰＴの主要な作用機構は、ＴｏｐｏＩの切断／再連結反応の再結合ステップをブロックすることによる、ＴｏｐｏＩの阻害であり、結果として、共有結合反応中間生成物（即ち、クリーバブル複合体）の蓄積を生じる。ＣＰＴに基づく細胞のアポトーシスは、進行方向複製フォークとＴｏｐｏＩ・ＤＮＡ複合体との間の潜在的に致命的な衝突を介するＳ期特有の細胞死である。ＴｏｐｏＩの共有結合性修飾を含む、ＴｏｐｏＩによって媒介されるＤＮＡ損傷に対する二つの修復反応が同定されてきた。第一の修復反応は、ユビキチン／２６Ｓプロテアソーム経路の活性化を含み、ＴｏｐｏＩの分解（ＣＰＴ誘発ＴｏｐｏＩ発現低下）を引き起こす。第二の修復反応は、ＴｏｐｏＩに対する低分子ユビキチン様修飾因子（Ｓｍａｌｌ  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｌｉｋｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒ：ＳＵＭＯ）結合を含む。ＴｏｐｏＩによって媒介されるＤＮＡ損傷に対するこれらの修復機構は、腫瘍細胞におけるＣＰＴ感受性／耐性を決定するうえで重要な役割を果たす。
【００１２】
ヒト結腸癌細胞もしくはウシ胸線から精製されたＴｏｐｏＩは、ＣＰＴによって阻害されることが示されている。ＣＰＴ，イリノテカン（ＣＰＴ−１１）およびさらなるＴｏｐｏＩ阻害剤であるトポテカンは、あるタイプのヒトの癌を治療するための臨床試験で使用されてきた。本発明の目的のために、ＣＰＴ類似体は、７−エチル−１０−［４−（１−ピペリジノ）−１−ピペリジノ］カルボニルオキシカンプトテシン（イリノテカンもしくはＣＰＴ−１１）、１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトテシン（ＨＥＣＰＴ）、９−アミノカンプトテシン、１０，１１メチレンジオキシカンプトテシンおよび９−ジメチルアミノメチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（トポテカン）を含む。これらのＣＰＴ類似体は、ＴｏｐｏＩを阻害するために同一の機構を利用し、それらは、触媒機構における中間生成物である、酵素および鎖切断ＤＮＡの共有結合複合体を安定化させる。これらの類似体は、単離ＤＮＡもしくはＴｏｐｏＩのいずれかに対しては結合親和性を有さないが、酵素−ＤＮＡ複合体に対しては、測定可能な親和性で結合する。ＣＰＴおよび類似体によるＴｏｐｏＩ“クリーバブル複合体”の安定化は、容易に可逆的である。
【００１３】
トポイソメラーゼＩＩ（ＴｏｐｏＩＩ）は、ＴｏｐｏＩと類似の方法で作用するが、トポイソメラーゼＩＩ酵素は、可逆的二本鎖ＤＮＡ切断を引き起こすために、ＤＮＡの弛緩において、ＡＴＰに依存して作用するという相違がある。ＴｏｐｏＩＩとＣＰＴの直接の阻害作用は記述されていない。しかしながら、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）治療は、２４および４８時間後にＴｏｐｏＩＩ  ｍＲＮＡの発現を増加させることによって、マウスにおける或る腫瘍異種移植片をＴｏｐｏＩＩ阻害剤に対して敏感にさせることが報告されている。これは、ヒト固形腫瘍に対する化学療法を対象とするＴｏｐｏＩおよびＴｏｐｏＩＩによる併用療法が、有用である可能性があることを示唆する。ＣＰＴ類似体は、酵素を介した切断の５’末端におけるグアニン残基を支持するＴｏｐｏＩ部位におけるクリーバブル複合体の安定化を選択的に誘発することによって、ＴｏｐｏＩの再連結反応を阻害する。例えば、Ｓｖｅｊｓｔｒｕｐ，Ｊ．Ｑ．らによるＴｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  Ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  ａｎｄ  Ｒｅｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ．Ｔｈｅ  Ｍｏｄｅ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ａｔ  ａ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  Ｓｉｔｅ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：６６９−６７８（１９９１）ならびにＪａｘｅｌ，Ｃ．らによるＥｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｌｏｃａｌ  ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｒ  Ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：２０４１８−２０４２３（１９９１）ならびにＴａｎｉｚａｗａ，Ａ．らによるＩｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  ｉｎ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ｃ−ＤＮＡ  ｂｙ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ｃａｌｆ  Ｔｈｙｍｕｓ  ａｎｄ  Ｗｈｅａｔ  Ｇｅｒｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：５１５７−５１６６（１９９４）を参照されたい。この自体における安定化は可逆的であるが、複製フォークがクリーバブル複合体に遭遇すると、不可逆的二本鎖切断が起こる。ＴｏｐｏＩのレベルがより高くなると、クリーバブル複合体の頻度がより高くなり、ＤＮＡの切断数が増える。これらの切断は、Ｓ／Ｇ２期における細胞周期阻害につながり、アポトーシス経路の活性化、最終的には細胞死につながることがある。例えば、Ｈｓｉａｎｇ，Ｙ．Ｈ．らによるＡｒｒｅｓｔ  ｏｆ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｆｏｒｋｓ  ｂｙ  Ｄｒｕｇ−Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ＤＮＡ  Ｃｌｅａｖａｂｌｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ａｓ  ａ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｋｉｌｌｉｎｇ  ｂｙ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４９：５０７７−５０８２（１９８９）を参照されたい。この結果として、ＴｏｐｏＩ阻害剤は、進行中のＤＮＡ複製もしくはＲＮＡ転写の存在下でのみ致命的である。例えば、Ｄ‘Ａｒｐａ，Ｐ．��によるＩｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｋｉｌｌｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  Ｐｏｉｓｏｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：６９１９−６９２４（１９９０）を参照されたい。Ｓ期に合成された細胞は、Ｇ１もしくはＧ２／Ｍ細胞と比較すると、ＴｏｐｏＩ阻害剤に対してより感受性が高いことが明らかとなり、このタイプの薬剤に対してＳ期に特有の細胞毒性を示唆している。例えば、Ｔａｋｉｍｏｔｏ，Ｃ．Ｈ．らによるＰｈａｓｅ  Ｉ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ａｓ  ａ  ９６−Ｈｏｕｒ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｗｅｅｋｌｙ  ｔｏ  Ａｄｕｌｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：６５９−６６７（２０００）を参照されたい。結腸、前立腺、卵巣および食道の腫瘍において、ＴｏｐｏＩレベルの上昇が見出されたが、一方、腎臓腫瘍および非ホジキン（ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ）リンパ腫においては、これが当てはまらない。例えば、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｚｅｅ，Ａ．らによるＰ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ＤＮＡ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｂｅｎｉｇｎ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｖａｒｙ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｖａｒｙ，Ｂｅｆｏｒｅ  ａｎｄ  Ａｆｔｅｒ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ／Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：５９１５−５９２０（１９９１）を参照されたい。最近の治験は、イリノテカンおよびトポテカンが血管新生の阻害剤でもあり、それらの化学療法活性に寄与することがあるという特性を有することを示している。新血管新生は、種々のヒトの腫瘍の浸潤および転移の増加と正の相関を有する。マウスの角膜モデルにおいては、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）を含む幾つかのＣＰＴの抗血管新生効果が研究された。血管新生は、繊維芽細胞増殖因子によって誘発されるが、イリノテカンＣＰＴ−１１の投与量を増加させることによって、腫瘍内の血管新生領域が負の指数関数曲線に従って減少する。２１０ｍｇ／ｋｇの投与量において、血管新生の顕著な減少が観察された。
【００１４】
ＣＰＴおよび前述されたＣＰＴ類似体は、ＴｏｐｏＩＩに対して識別可能な直接の影響を有さないが、これらのＣＰＴ類似体は、エピポドフィロトキシングリコシドおよび種々のアントラサイクリンがＴｏｐｏＩＩを阻害するのと類似の方法で、“クリーバブル複合体”を安定化させると信じられている。
【００１５】
ＣＰＴおよび類似体によるＴｏｐｏＩの阻害は、たんぱく質関連一本鎖ＤＮＡ切断を誘発する。ＣＰＴで処理された生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）細胞で観察されたＤＮＡ鎖切断の事実上全ては、たんぱく質で結合される。しかしながら、ＣＰＴ処理されたＬ１２１０細胞において、予期されていない無たんぱく質切断の増加が検出された。類似体は、末端標識された線形ＤＮＡにおける同一のＤＮＡ切断パターンを作成すると思われる。ＣＰＴもしくはＣＰＴ類似体は、ＴｏｐｏＩ酵素がなくてもＤＮＡを切断することが示されていない。
【００１６】
[ＩＩＩ．細胞周期特有のカンプトテシン活性]
ＣＰＴの活性は、細胞周期特有である。ＣＰＴに晒された細胞内に観察される最大定量化された生化学的影響は、Ｓ期の間に起きる一本鎖ＤＮＡ切断である。Ｓ期は細胞周期のうちで比較的短い期であるため、薬剤に対する長い曝露は、結果として細胞死の増加を引き起こす。腫瘍細胞の薬剤に対する短時間の曝露は、あまり細胞死を引き起こさないか、全く引き起こさず、静止細胞は無反応である。これらの前述された結果は二つの要因によるものである。
（ｉ）この種の薬剤は、ＴｏｐｏＩの通常の活性を可逆的に抑制する。それらは、ＤＮＡ複製中にＤＮＡ構造の潜在的に致命的な修飾を生成するが、ＤＮＡ鎖の切断は、薬剤の洗浄後に修復されることがある。
（ｉｉ）ＣＰＴなどのＴｏｐｏＩ阻害剤で処理された細胞は、薬剤が除去され、切断されたＤＮＡが修復されるまで、細胞周期のＧ０に留まる傾向がある。これらの酵素の阻害剤は、複製、転写、組み換えおよび染色体分離を含む細胞代謝の多くの態様に影響を与える可能性がある。
【００１７】
[ＩＶ．カレニテシン／ＢＮＰ１３５０]
高親油性カンプトテシン誘導体（ＨＬＣＤ）、具体的には、シリコンベース部分を含む高親油性カンプトテシン誘導体は、有効な抗がん剤である。最も有名なシリコン含有ＨＬＣＤのうちの一つは、カレニテシン（登録商標）（ＢＮＰ１３５０、コシテカンとしても知られる；７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン；ＩＵＰＡＣ学名：（４Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−１１−［２−（トリメチルシリル）エチル］−１Ｈ−ピラノ［３’：４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン）であって、米国内および国際的に、現在、第三段階のヒトの臨床試験中である。カレニテシンは、以下に示されるような一般構造式を有する。
【化２】
2016501187.tif 000003
ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３＝カレニテシン分子のシリコン含有側鎖に共有結合されたメチル（−ＣＨ３）官能基である。
【００１８】
本発明において開示され、請求されるカレニテシンおよびその種々の類似体は、これらに限定されるものではないが、肺がん、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、結腸がんおよびメラノーマを含むがそのいずれにも限定はされない一般的タイプのがんに対する強力な抗腫瘍活性を示した化学療法化合物の新規クラスを表す。カレニテシン（およびその類似体）は、他のカンプトテシン誘導体に類似するトポイソメラーゼＩ阻害活性を有するが、優れた生物学的利用性および組織浸透性を有するように合理的に設計された新規の構造的修飾を有し、付随して、ヒトおよび他の哺乳類のがんにおいて一般的である不都合な代謝および薬剤耐性を回避する。
【００１９】
薬理学および生化学的データから、従来合成されたカンプトテシン類似体の多くは、抗がん剤としての有用性を劇的に減少させる多数の固有の制限を有することが確認された。対照的に、カレニテシンは、十分なラクトン安定性および長い血漿内半減期によって特徴づけられる高親油性カンプトテシン誘導体である。２０以上のヒトのがん細胞株対象に実施された生体外研究は、トポテカンもしくはＳＮ−３８、イリノテカンの活性代謝物のいずれかよりも、カレニテシンが顕著に強力な抗がん剤であることを示した。ヒト血漿での平衡透析研究は、カレニテシンが、９８から９９％たんぱく質結合であることを示した。血漿中の遊離薬剤濃度は、概して、臨床薬理学における薬理学的活性形態であると考えられる。
【００２０】
カレニテシンは、以前開示されたカンプトテシン誘導体よりも顕著に低い毒性を潜在的に有する。さらに、カレニテシンは、Ａ環もしくはＢ環グルクロン酸抱合（および、暗黙で脱グルクロン酸抱合）を経験しない。グルクロン酸抱合の欠如は、有害な生理学的副作用（例えば、下痢、白血球減少）を軽減し、薬剤レベルにおける遊離代謝産物およびそのグルクロニド抱合体の患者間の実質的な変動をも軽減することがある。カレニテシンおよびその類似体は代謝活性化を必要とするプロドラッグではない。
【００２１】
このように、カレニテシンは、（ｉ）生体外でヒトおよび動物の腫瘍細胞の増殖を阻害するための強力な抗腫瘍活性（即ち、ナノモルもしくはサブナノモル濃度）を有し、（ｉｉ）トポイソメラーゼＩの強力な阻害剤であり、（ｉｉｉ）ＭＤＲ／ＭＲＰ薬剤耐性に対する感受性を欠き、（ｉｖ）代謝薬剤活性化を必要とせず、（ｖ）Ａ環もしくはＢ環のグルクロン酸抱合を欠き、（ｖｉ）血漿蛋白に対する薬剤結合親和性を減少させ、（ｖｉｉ）ラクトン安定性を保持し、（ｖｉｉｉ）薬剤効能を保持し、（ｉｘ）低分子量（例えば、ＭＷ＜６００）を有する。
【発明の概要】
【００２２】
本明細書で開示され、請求される本発明は、この発明の概要で説明されるか、記述されるか、参照されるものを含む多くの属性および実施形態を有するが、そのいずれにも限定はされることはない。発明の概要は、全て包括的であることを意図されているものではなく、本明細書で記述され、請求される本発明は、限定される目的ではなく例示する目的でのみ含まれる、この発明の概要で同定される特徴もしくは実施形態へと限定されることはなく、または特徴もしくは実施形態によって限定されることはない。
【００２３】
一実施形態においては、本発明は、カレニテシン（ＢＮＰ１３５０、コシテカンとしても知られる；７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン；ＩＵＰＡＣ学名：（４Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−１１−［２−（トリメチルシリル）エチル］−１Ｈ−ピラノ［３’：４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン）の化学全合成用のプロセスを開示する。本実施形態においては、出発物質は、対費用効果が高い市販の２−ニトロベンズアルデヒドである。全合成プロセスの第一ステップは、前述の出発物質に対する２−（トリメチルシリル）ビニルマグネシウムブロマイドのグリニヤール付加を含み、その後、ビニルアリルケトンを生成するために、この中間生成物の酸化が行われる。Ｐｄ／Ｃの存在下での産業的規模で実現可能な水素負荷は、重要なＡ環中間生成物１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンを生成した。市販の鏡像異性的に純粋なＣＤＥ環中間生成物（三環形ピリドン）との、１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンのフリードレンダー縮合（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ）によって、所望のＢＮＰ１３５０生成物が生じた。
【００２４】
別の実施形態においては、本発明は、カレニテシン（ＢＮＰ１３５０、コシテカンとしても知られる）の化学全合成用のプロセスを開示する。本実施形態においては、出発試薬は、対費用効果の高い市販のＮ−Ｂｏｃ−アニリンである。合成プロセスは、まずｔｅｒｔ−ブチルリチウムによるＮ−Ｂｏｃ−アニリンの処理を含み、その後、メトキシメチル（３−トリメチルシリル）プロピオンアミドへ添加され、Ａ環重要中間生成物として、２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリンを生成する。市販の鏡像異性ＣＤＥ環中間生成物による（７−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリンのフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０生成物が生じた。
【００２５】
さらに別の実施形態においては、本発明は、カレニテシン（ＢＮＰ１３５０、コシテカンとしても知られる）の化学全合成用のプロセスを開示する。本実施形態においては、出発試薬は、対費用効果の高い市販のＮ−Ｂｏｃ−２−イオドアニリンである。合成プロセスは、まずエチニルトリメチルシランとのＮ−Ｂｏｃ−２−イオドアニリンの結合を含み、その後、Ｐｄ／Ｃの存在下での水素付加によって、２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリンを生成し、Ａ環重要中間生成物を得る。市販の鏡像異性ＣＤＥ環部との２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリンのフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物を得た。
【００２６】
さらに別の実施形態においては、本発明は、カレニテシン（ＢＮＰ１３５０、コシテカンとしても知られる）の化学全合成用のプロセスを開示する。本実施形態においては、出発試薬は、対費用効果の高い市販のエチニルトリメチルシランであり、エチニルトリメチルシランにｎ−ブチルリチウムおよび０−ニトロベンズアルデヒドの溶液が添加され、１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシリル−２−プロピン−１−オールを形成する。二酸化マグネシウムによるプロピン−１−オールの酸化は、２−（３’−トリメチルシリルプロピオリル）−ニトロベンゼンを生成し、これは、Ｐｄ／Ｃの存在下の水素付加によって、重要なＡ環中間生成物１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンに対して協調する。市販の鏡像異性ＣＤＥ環部による１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンのフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０生成物を得た。
【００２７】
さらなる実施形態においては、本発明は、カレニテシン（ＢＮＰ１３５０、コシテカンとしても知られる）の化学全合成用のプロセスを開示する。本実施形態においては、出発試薬は、対費用効果の高い市販の２−ニトロ安息香酸である。合成プロセスは、まず、より活性の高い２−ニトロベンゾイル塩化物への２−ニトロ安息香酸の活性化を含み、その後、ビス（トリメチルシリル）アセチレンとこの粗精製酸塩化物のフリーデルクラフトアルキニル化によって、１−フェニル−３−トリメチルシリル−プロピノンを生成する。その後のＰｄ／Ｃの存在下での前述の中間生成物の水素付加によって、重要なＡ環中間生成物合成素子、１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンを生成し、１ＮのＨＣｌの存在下での１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンの結晶化は、１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン塩を生じた。市販の鏡像異性ＣＤＥ環部による１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン塩のフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０生成物を得た。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ＨＰＬＣに基づく鏡像異性分析の結果を示す。パネルＡは、米国特許第７，０３０，２４３号明細書で説明された前述されたプロトコルを利用して合成された（Ｒ）−ＢＮＰ１３５０および（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対するＨＰＬＣピークを示す。パネルＢは、本特許出願において開示された合成スキーム１を利用して合成された結果の（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対するＨＰＬＣピークを示す。確認できるように、天然の（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対する値（パネルＡ；１５．０１２分）および合成（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対する値（パネルＢ；１４．６９９分）は極めて近い。
【図２】本発明の全合成スキームを介して準備されたＢＮＰ１３５０と天然生成物から準備されたＢＮＰ１３５０に対する平均ＩＣ５０値の概要を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本明細書で記述される実施形態は、網羅的であることを意図するものではなく、また、開示された詳細な形態に本発明を限定することを意図するものではない。それらは、本発明の原則を最良に示すために選択されたものであって、その適用および実際的な利用は、当業者がこの教示に従うことを可能にするために使用する。
【００３０】
前述で開示されたように、カンプトテシンは、カンレンボク（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  ａｃｃｕｍｉｎａｔａ，ヌマミヅキ科属）の中国産イチイから単離された（Ｗａｌｌ，Ｍ．Ｅ．らによるＰｌａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．Ｉ．Ｔｈｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｌｋａｌｏｉｄａｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｒｏｍ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８８：３８８８−３８９０（１９９６）を参照されたい）。この種の中国産イチイは、中国の南東省でのみ育ち、あらゆる実質的もしくは長期の気候変動および／もしくは昆虫、カビ、もしくは真菌の寄生は、生存可能な樹木数における著しい減少を引き起こし、それに付随して収穫できるカンプトテシンの量も減少する。近年、インド由来の二つの他の植物種、クサミズキ（Ｎｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ  ｎｉｍｍｏｎｉａｎａおよびＮｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ  ｆｏｅｔｉｄａ）が、カンプトテシン（ＣＰＴ）の単離用の別の天然源、モノテルペンインドールアルカロイドのメンバーとして同定された。カンプトテシンおよびその同族種は、単離部分を根、樹皮、葉および種子として含む前述の樹木種の種々の部分において多様であることも興味深い。
【００３１】
ＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）は、自然発生カンプトテシンによって開始する高収率の収束性半合成方法を通して合成することができ、自然発生カンプトテシンの豊富かつ信頼できる源は、従来、製薬産業における継続的な懸念であった。したがって、自然発生カンプトテシンの単離に依存しない、ＢＮＰ１３５０の全合成用の頑健で対費用効果の高い産業的規模の合成方法は、計り知れない価値を有するであろう。
【００３２】
文献には既知のカンプトテシン全合成スキームが幾つか存在するが、それらの全合成スキームは、一般的に学術的利用／関心に限定されており、製薬産業における利用のためには、極度に限られた価値でしかない。前述された合成方法は、大規模ではないため、および／もしくは、合成において高価な試薬もしくは中間生成物の利用を含むためである。
【００３３】
本発明は、鏡像異性的に純粋な（即ち９９％）ＢＮＰ１３５０（カレニテシン：コシテカン）の化学全合成用の５つの新規高効率合成方法を開示し、請求する。これらの前述された合成方法は、非常に新規の直接および収束性非線形合成ストラテジーを利用するＢＮＰ１３５０の全合成をまず開示する。非常に新規の直接および収束性非線形合成ストラテジーは、全合成されたカンプトテシン親化合物における最終合成ステップとして、Ｃ７−（トリメチルシリル）エチル側鎖を組み入れる従来方法を介するのではなく、市販の鏡像異性的に純粋な三環形ピリドンへの重要なＣ７−（トリメチルシリル）エチル側鎖を有する重要なＡ環合成素子のアニーリングを含む。本明細書で報告されるこの新規合成アプローチは、予め取り付けられたトリメチルシリルエチル側鎖を有する所望の官能化されたＡ環を利用するため、前述された合成方法は、出発物質として所望の官能化されたニトロもしくは保護されたアミノフェニルカルボキシＡ環を置換することによって、広範囲の薬剤的に関連するＡ環置換されたＢＮＰ１３５０類似体を有する。
【００３４】
[ＢＮＰ１３５０（カレニテシン）の全合成用スキームの具体的実施例]
[手順全般]：全ての反応は、乾燥アルゴンもしくは窒素の不活性雰囲気下で実行された。市販の試薬は追加精製なしで利用された。１Ｈおよび１３ＣＮＭＲスペクトルは、他に特に言及されない限り、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３００ＭＨｚ分光計および溶媒として重水素化クロロホルムを利用して得られた。化学的シフトは、テトラエチルシランから低磁場の百万分率（ｐｐｍ）で報告された。
【００３５】
[ＨＰＬＣ法]：反応混合物および化合物の純度は、Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５  ＨＰＬＣ装置によって監視された。それは、１ｍＬ／分の流速で、０．０５％ギ酸における１０〜９０％アセトニトリルの勾配を利用して、Ｗａｔｅｒｓ  ４７４  走査蛍光検出器（λｅｘ３７０ｎｍ；λｅｍ４３０ｎｍ）で、ＸＴｅｒｒａ  Ｃ１８  反転位相カラム（４．６×２５０ｍｍ）を利用する。
【００３６】
[１．合成スキーム１]
【化３】
2016501187.tif 000004
スキーム１は、ＢＮＰ１３５０を合成するために使用される本発明の第一プロセスを示す。図示されたように、出発試薬は、対費用効果の高い市販の２−ニトロベンズアルデヒド（１）であった。プロセスは、まず、２−（トリメチルシリル）ビニルマグネシウムブロマイドの添加を含み、その後、ビニルアリルケトン（２）を生成するための粗精製物の酸化を含む。Ｐｄ／Ｃの存在下での水素付加によって、重要なＡ環部１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）を生成し、この中間生成物（３）は、精製なしで次のステップに直接使用できるほど十分に純粋であった。市販のＣＤＥ環部（４）と１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オンのフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物が９０％収率で得られた。
【００３７】
１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシラニル−プロぺノン（２）
テトラハイドロフラン（ＴＨＦ；２．５ｍＬ）中の２−ブロモビニルトリメチルシラン（０．５ｇ）およびマグネシウムターニング（０．１ｇ）の混合物に対して、一片のイオジンが添加された。混合物は、１時間環流され、２．５ｍＬのＴＨＦに溶解された。反応は、その後、室温まで冷却されて、必要とされる２−（トリメチルシリル）ビニルマグネシウムブロマイド溶液を生成する。結果として生じるグリニヤールは、−３０℃でＴＨＦ（２．５ｍＬ）中の２−ニトロベンズアルデヒド（２８１ｍｇ）溶液に添加された。反応混合物は、−３０℃で１時間撹拌された。その後、４％塩化アンモニウム溶液が添加された。５ｍＬエチルアセテートで、合計３回（ＥｔＯＡｃ，３×５ｍＬ）、水相が抽出された。化合された有機相はフィルタ処理され、濾過液は減圧下で蒸発して、褐色油を得た。
【００３８】
前述のステップから得られた粗精製物は、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２；８ｍＬ）に溶解した。２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ，２ｍｇ）、臭化ナトリウム（９６ｍｇ）および水（４ｍＬ）が添加された。この混合物に対して、水（４ｍＬ）中の次亜塩素酸ナトリウム（水中４．８１％、２．２ｇ）および重炭酸ナトリウム（１０４ｍｇ）がゆっくりと添加された。反応は、１時間室温で撹拌された。その後、水（５ｍＬ）中の次亜塩素酸ナトリウム（水中４．８１％、４．３ｇ）および重炭酸ナトリウム（３７２ｍｇ）の別の部分が添加された。反応は、さらに２時間続けられた。水相は、１０ｍＬのジクロロメタンで合計３回（３×１０ｍＬ）抽出された。化合された有機相は、フィルタ処理されて、濾過液は、減圧下で蒸発した。粗精製物は、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン内の１０％エチルアセテート；ＳｉＯ２）に晒されて、所望の１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシラニル−プロぺノン（２）（１２１ｍｇ；５６％収率）を生成した。
【００３９】
１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０，１．２Ｈｚ），７．７７−７．７１（ｍ，１Ｈ），７．６６−７．６１（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ、１Ｈ，Ｊ＝７．５，１．５Ｈｚ），６．７１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２６．２５，１９．２Ｈｚ），０．１２５（ｓ，９Ｈ）。
【００４０】
１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）
エチルアセテート（４ｍＬ）中の１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシラニル−プロぺノン（２）（９８ｍｇ）および木炭上のパラジウム（５％，４９ｍｇ）の混合物は、水素バルーン圧下で１６時間、室温で撹拌された。セライトでのフィルタ処理の後、濾過液は、減圧下で蒸発乾固し、１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）を淡黄色油として生じ、これは、追加精製なしで、次の合成ステップで使用するほど十分に純粋であった。
【００４１】
１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４，１．２Ｈｚ），７．２９−７．２４（ｍ，１Ｈ），６．６９−６．６３（ｍ，２Ｈ），２．９４−２．８８（ｍ，２Ｈ），０．９３−０．８７（ｍ，２Ｈ），０．０５８（ｓ，９Ｈ）。
【００４２】
（４Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−１１−［２−（トリメチルシリル）エチル］−１Ｈ−ピラノ［３’：４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン（ＢＮＰ１３５０）
酢酸（０．５ｍＬ）およびトルエン（１ｍＬ）中の１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）（３４ｍｇ）およびＣＤＥ環部（４）（２４ｍｇ）の溶液に対して、ｐ−トルエンスルホン酸（１ｍｇ）が添加された。反応溶液は、２０時間１００℃で撹拌された。室温への冷却後、反応溶液は減圧下で濃縮されて、残留物は、ヘキサン（１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）およびアセトン（５ｍＬ）とヘキサン（５ｍＬ）の混合物で洗浄された。黄色固体は、真空で蒸発乾固して、３９ｍｇ（９８％収率）のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン；７−（２’−トリメチルシリル）エチルカンプトテシン；ＩＵＰＡＣ学名：（４Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−１１−［２−（トリメチルシリル）エチル］−１Ｈ−ピラノ［３’：４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン）を生じた。
【００４３】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．８２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．７１−７．６６（ｍ，２Ｈ），５．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），５．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），５．２６（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），３．１５−３．０９（ｍ，２Ｈ），１．９６−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），０．９１−０．９８（ｍ，２Ｈ），０．１９（ｓ，９Ｈ）。
【００４４】
１３ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７４．１５，１５７．９１，１５２．１７，１５０．４１，１４９．７５，１４７．３４，１４７．２４，１３０．９８，１３０．２０，１２７．８４，１２６．８３，１２６．２８，１２３．４９，１１８．６７，９８．２１，７３．０１，６６．５９，４９．４８，３１．８６，２４．３２，１８．００，８．０４，−１．６５。
ＭＳ：４４９（Ｍ＋１）；鏡像異性純度：１００％ｅｅ。
【００４５】
１Ｈおよび１３ＣＮＭＲ分析
天然源から単離されたカンプトテシンを利用する“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”と題された米国特許第７，０３０，２４３号明細書（本特許出願と同一の譲受人を有する）において説明されたように生成されたＢＮＰ１３５０に対して、合成スキーム１によって生成されたＢＮＰ１３５０における任意の相違を確認するために、１Ｈおよび１３ＣＮＭＲ分析が実施された。
【００４６】
合成スキーム１を介して準備されたＢＮＰ１３５０の１ＨＮＭＲおよび１３ＣＮＭＲスペクトルは、天然由来カンプトテシンを用いて製造されたＢＮＰ１３５０と一致した。
【００４７】
[天然由来カンプトテシン由来のＢＮＰ１３５０のＮＭＲ分析]
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．８０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．６９−７．６４（ｍ，２Ｈ），５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ），５．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ），５．２４（ｓ，２Ｈ），３．１４−３．０８（ｍ，２Ｈ），１．９６−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．０４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．９０−０．９６（ｍ，２Ｈ），０．１８（ｓ，９Ｈ）。
【００４８】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７４．０７，１５７．８２，１５１．９６，１５０．３１，１４９．４７，１４７．３９，１４７．１１，１３０．７７，１３０．２６，１２７．８４，１２６．７５，１２６．２４，１２３．４５，１１８．６８，９８．３５，７２．９９，６６．５４，４９．４７，３１．８０，２４．３５，１７．９９，８．０８，−１．６３。
【００４９】
[合成スキーム１由来のＢＮＰ１３５０のＮＭＲ分析]
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．８２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．７１−７．６６（ｍ，２Ｈ），５．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），５．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），５．２６（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），３．１５−３．０９（ｍ，２Ｈ），１．９６−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），０．９１−０．９８（ｍ，２Ｈ），０．１９（ｓ，９Ｈ）。
【００５０】
１３ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７４．１５，１５７．９１，１５２．１７，１５０．４１，１４９．７５，１４７．３４，１４７．２４，１３０．９８，１３０．２０，１２７．８４，１２６．８３，１２６．２８，１２３．４９，１１８．６７，９８．２１，７３．０１，６６．５９，４９．４８，３１．８６，２４．３２，１８．００，８．０４，−１．６５。
【００５１】
ＨＰＬＣに基づくＢＮＰ１３５０鏡像異性分析
天然源から単離されたカンプトテシンを利用する“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”と題された米国特許第７，０３０，２４３号明細書（本特許出願と同一の譲受人を有する）において説明されたように生成されたＢＮＰ１３５０に対して、合成スキーム１によって生成されたＢＮＰ１３５０の鏡像異性における任意の相違を確認するために、ＨＰＬＣに基づく鏡像異性分析に使用された条件は以下のとおりである。
[鏡像異性確認用ＨＰＬＣ条件（０２２８１２）]
(1)カラム：鏡像異性ＡＧＰカラム（ＣｈｒｏｍＴｅｃｈ，４．０×１００ｍｍ）
(2)移動相：１１％アセトニトリルおよび８９％１０ｎＭアンモニウムアセテート
(3)流速：１．０ｍＬ／分
(4)カラム温度：３０℃
(5)検出：ＰＤＡ＠２５４ｎｍ
(6)分離は、ＷＡＴＥＲＳ（２６９５）ＨＰＬＣ−（２９９６）ＵＶシステムで実行された（０２２７１２でＧＭＰ公認分析機器）。
【００５２】
図１は、ＨＰＬＣに基づく鏡像異性分析の結果を示す。パネルＡは、米国特許第７，０３０，２４３号明細書で説明された前述のプロトコルを利用して合成された（Ｒ）−ＢＮＰ１３５０および（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対するＨＰＬＣピークを示す。パネルＢは、本特許出願で開示された合成スキーム１を利用して合成された結果の（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対するＨＰＬＣピークを示す。確認できるように、天然の（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対する値（パネルＡ；１５．０１２分）と合成（Ｓ）−ＢＮＰ１３５０に対する値（パネルＢ；１４．６９９分）は極めて近い。
【００５３】
[２．合成スキーム２]
【化４】
2016501187.tif 000005
合成スキーム２は、ＢＮＰ１３５０を合成するために使用された本発明の第二のプロセスを示す。図示されたように、出発試薬は、対費用効果の高い市販のＮ−Ｂｏｃ−アニリン（５）であった。合成プロセスは、まず、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムでのＮ−Ｂｏｃ−アニリン（５）の処理を含み、その後、新たに製造されたメトキシメチル（３−トリメチルシリル）プロピオンアミド（６）に対する添加によって、２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリン（７）を生成した。市販のＣＤＥ環部（４）による２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリン（７）のフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物を良好な収率で得た。
【００５４】
メトキシメチル（３−トリメチルシリル）プロピオンアミド（６）
丸底フラスコは、３−トリメチルシリルプロピオン酸（５００ｍｇ）で満たされた。塩化オキサリル（１．４５ｍＬ）が添加され、反応混合物は、室温で１．５時間撹拌された。過剰な塩化オキサリルは、減圧下で除去された。酸塩化物は、追加精製なしで利用された。酸塩化物およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４３３ｍｇ）は、無水塩化メチレン中に溶解された。溶液は、０℃まで冷却され、ピリジン（８３０μＬ）が添加された。混合物は、室温で２時間撹拌され、真空中で蒸発した。残留物は、塩水と塩化メチレンとの間に分布した。有機層は、硫酸ナトリウム上で乾燥して、真空中で濃縮された。粗精製アミドは、シリカゲルカラムによって精製され、６１２ｍｇ（９４％）の収率で生成した。
【００５５】
１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．６９（３Ｈ，ｓ），３．１９（３Ｈ，ｓ），２．４２−２．３５（２Ｈ，ｍ），０．８６−０．８１（２Ｈ，ｍ），０．０２４（９Ｈ，ｓ）。
【００５６】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７９．４５，６１．４０，２６．６７，１９．９１，１１．３９，−１．６７。
【００５７】
２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリン（７）
無水ジエチルエーテル中のＮ−Ｂｏｃ−アニリン（１００ｍｇ）溶液は、−２０℃まで冷却されて、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムの２．５等価物（ペンタン中１．７Ｍ；１．３ｍＭ）で処理され、−１０℃で２時間撹拌されて、その後、０℃で１時間撹拌された。混合物は−７６℃まで冷却された後、１．１等価物のＷｅｉｎｒｅｂアミド（６）（１０９ｍｇ）の希薄溶液が添加され、結果として生じた混合物は、室温でゆっくりと温められ、一晩撹拌されて、０．１Ｎの塩酸でクエンチングされた。混合物は、その後、ジクロロメタンで抽出された。有機溶液は、硫酸ナトリウム上で乾燥され、真空下で蒸発した。粗精製物質は、シリカゲルによるクロマトグラフィーによって生成され、１０３ｍｇ（６２％）の総収率で生成した。
【００５８】
１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４９−８．４６（１Ｈ，ｍ），７．８９−７．８６（１Ｈ，ｍ），７．５４−７．４８（１Ｈ，ｍ），７．０６−７．００（１Ｈ，ｍ），２．９９−２．９４（２Ｈ，ｓ），１．５３（９Ｈ，ｓ），０．９３−０．８７（２Ｈ，ｍ），０．０６５（９Ｈ，ｓ）。
【００５９】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ２０５．６４，１５３．４１，１４２．０４，１３４．７８，１３０．８１，１２１．１９，１２１．１１，１１９．５９，８０．６３，３４．７４，２８．５２，１１．６１，−１．５９。
【００６０】
ＢＮＰ１３５０
Ａ環（７）（２０ｍｇ）およびＣＤＥ環（４）（１６ｍｇ）は、酢酸およびトルエン（１ｍＬ；１：１ｖ／ｖ）の混合物中に溶解した。トルエンスルホン酸（１ｍｇ）が添加され、反応混合物は１００℃で２４時間撹拌された。反応混合物は、室温まで冷却され、減圧下で濃縮された。その後、残留物は、ヘキサンで２回（２×１０ｍＬ）洗浄されて、真空下で乾燥した。粗精製物質は、シリカゲルカラムによって精製され、収率は２７ｍｇ（９６％）であった。スペクトルデータは、市販のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）と同一であることが確認された。
【００６１】
[３．合成スキーム３]
【化５】
2016501187.tif 000006
スキーム３は、ＢＮＰ１３５０を合成するために使用される本発明の第三のプロセスを示す。図示されたように、出発試薬は、対費用効果の高い市販のＮ−Ｂｏｃ−２−イオドアニリン（８）であった。プロセスは、まず、エチニルトリメチルシランによるＮ−Ｂｏｃ−２−イオドアニリン（８）の結合を含み、その後、Ｐｄ／Ｃの存在下での水素付加によって、２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリン（７）を生成する。市販のＣＤＥ環部（４）との２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリン（７）のフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物を得た。
【００６２】
１−（２−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ）−３−トリメチルシリルプロピノン（９）
丸底フラスコ内に、Ｎ−Ｂｏｃ−２−イオドアニリン（５０ｍｇ）、エチニルトリメチルシラン（２７μＬ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１５ｍｇ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（８．９ｍｇ）、トリエチルアミン（４５μＬ）およびテトラハイドロフラン（ＴＨＦ）が配置された。フラスコは、一酸化炭素（ＣＯ）雰囲気（１００ｐｓｉ）下で、“Ｐａｒｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ”反応器へと配置された。反応混合物は、室温で４８時間撹拌された。一酸化炭素（ＣＯ）圧力は解放され、反応混合物は、塩化メチレンおよび０．１Ｎ塩酸を含む分液漏斗へと注がれた。水相は、塩化メチレンで抽出され、化合された有機相は、硫酸ナトリウム上で乾燥されて、減圧下で蒸発された。粗精製物質は、シリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製され、１７ｍｇ（３３％）収率を得た。
【００６３】
１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．６９（１Ｈ，ｓ），８．４８−８．４５（１Ｈ，ｍ），８．２８−８．２６（１Ｈ，ｍ），７．５９−７．５３（１Ｈ，ｍ），７．１１−７．０５（１Ｈ，ｍ），１．５３（９Ｈ，ｓ），０．３３（９Ｈ，ｓ）。
【００６４】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１８０．６６，１５３．１５，１４３．０４，１３６．１３，１３５．０２，１２１．３１，１１８．８４，１０１．９３，１０１．０３，８１．０３，２８．４７，−０．５０。
【００６５】
２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−Ｎ−Ｂｏｃ−アニリン（７）
１−（２−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ）−３−トリメチルシリルプロピノン（５０ｍｇ）は、エチルアセテート（３ｍＬ）中に溶解された。炭素上のパラジウム（５ｍｇ）が添加され、反応混合物は、バルーンによって提供される水素雰囲気下に置かれた。反応混合物は、室温で６時間撹拌された。反応完了後、炭素上のパラジウムは、セライトパッド（Ｃｅｌｉｔｅ  ｐａｄ）を利用してフィルタ処理され、溶液は真空下で濃縮された。粗精製物質は、シリカゲルカラムによるクロマトグラフィーによって精製され、４６ｍｇ（９２％）の収率を得た。
【００６６】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４９−８．４６（１Ｈ，ｍ），７．８９−７．８６（１Ｈ，ｍ），７．５４−７．４８（１Ｈ，ｍ），７．０６−７．００（１Ｈ，ｍ），２．９９−２．９４（２Ｈ，ｓ），１．５３（９Ｈ，ｓ），０．９３−０．８７（２Ｈ，ｍ），０．０６５（９Ｈ，ｓ）。
【００６７】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ２０５．６４，１５３．４１，１４２．０４，１３４．７８，１３０．８１，１２１．１１，１１９．５９，８０．６３，３４．７４，２８．５２，１１．６１，−１．５９。
【００６８】
ＢＮＰ１３５０
Ａ環（２０ｍｇ，０．０６２ｍＭ）およびＣＤＥ環（１６ｍｇ，０．０６２ｍＭ）は、酢酸およびトルエン（１ｍＬ；１：１ｖ／ｖ）の混合物中に溶解された。トルエンスルホン酸（１ｍｇ）が添加され、反応混合物は、１００℃で２４時間撹拌された。反応混合物は、室温まで冷却され、減圧下で濃縮された。残留物は、ヘキサンで２回（２×１０ｍＬ）洗浄され、真空下で乾燥された。粗精製物質は、シリカゲルカラムによって精製され、２７ｍｇ（９６％）の収率を得た。スペクトルデータは、市販のＢＮＰ１３５０に対して得られたスペクトルデータと同一であることが示された。
【００６９】
[４．合成スキーム４]
【化６】
2016501187.tif 000007
スキーム４は、ＢＮＰ１３５０を合成するために使用される本発明の第四のプロセスを示す。出発試薬は、対費用効果の高い市販のエチニルトリメチルシランであり、エチニルトリメチルシランに、ｎ−ブチルリチウムおよびｏ−ニトロベンズアルデヒドの溶液が添加され、１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシリル−２−プロピン−１−オール（１０）を生成した。プロピン−１−オール（１０）の酸化は、二酸化マンガンによって生成された２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−ニトロベンゼン（１１）と行われ、それは、Ｐｄ／Ｃの存在下での水素付加によって、重要なＡ環部１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）に対して協調された。市販のＣＤＥ環部（４）との１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）のフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０生成物を得た。
【００７０】
１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシリル−２−プロピン−１−オール（１０）
丸底フラスコ内へ、エチニルトリメチルシラン（４．９０ｍＬ）およびテトラハイドロフラン（ＴＨＦ）がおかれ、−７６℃まで冷却された。ヘキサン中の２．０Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液（１５．８ｍＬ）が滴下された。反応混合物は、−７６℃で３０分間撹拌され、無水ＴＨＦ中のｏ−ニトロベンズアルデヒド（３．０ｇ）溶液が添加された。反応混合物は、−７６℃で６０分間撹拌され、水でクエンチングされた。反応混合物は、室温まで温められ、ＴＨＦは、真空下で除去された。水相は、エチルアセテートで抽出された。化合された有機相は硫酸ナトリウム上で乾燥して、蒸発乾固した。粗精製物質は、シリカゲルにおけるクロマトグラフィーによって精製され、４．３ｇ（８７％）の収率を得た。
【００７１】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９７−７．９２（２Ｈ，ｍ），７．７１−７．６５（１Ｈ，ｍ），７．５４−７．４９（１Ｈ，ｍ），５．９７（１Ｈ，ｓ），０．１９（９Ｈ，ｓ）。
【００７２】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３５．２４，１３３．９４，１２９．８１，１２９．５８，１２５．２６，１０２．５４，６２．０４，−０．１１。
【００７３】
２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−ニトロベンゼン（１１）
１−（２−ニトロフェニル）−３−トリメチルシリル−２−プロピン−１−オール（５．０ｇ）は、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中に溶解された。溶液に対して、二酸化マンガン（８．７ｇ）が添加された。反応混合物は、その後、室温で２４時間撹拌された。反応完了後、二酸化マンガンは、セライトパッドを使用してフィルタ処理され、溶液は蒸発乾固した。粗精製物質は、真空下で乾燥されて、４．５ｇ（９１％）の収率を得た。スペクトルデータは、結果として生じた化合物が追加精製なしで次の合成ステップで使用されるのに十分な純度を有することを示した。
【００７４】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９２−７．８８（１Ｈ，ｍ），７．８５−７．８２（１Ｈ，ｍ），７．７４−７．６７（２Ｈ，ｍ），０．２６（９Ｈ，ｓ）。
【００７５】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７５．５７，１３３．７４，１３３．０９，１３２．７７，１３０．４１，１２４．３０，１０３．１２，１００．３０，−０．７１。
【００７６】
２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−アニリン（３）
２−（３’−トリメチルシリルプロピオニル）−ニトロベンゼン（１１）（５００ｍｇ）は、無水トルエン（８ｍL）中に溶解された。その後、炭素上のパラジウム（３０ｍｇ）が添加され、反応混合物は、バルーンによって提供された水素雰囲気下に置かれた。反応混合物は、室温で２４時間撹拌された。反応完了後、炭素上のパラジウムは、セライトパッドを使用してフィルタ処理され、溶液は真空下で濃縮された。粗精製物質は、シリカゲルカラムによって精製され、３８０ｍｇ（８６％）の収率を得た。
【００７７】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９３−７．９０（１Ｈ，ｍ），７．４７−７．４１（１Ｈ，ｍ），６．８６−６．８１（１Ｈ，ｍ），６．４５（２Ｈ，ｂｒｓ），３．１２−３．０６（２Ｈ，ｍ），１．１１−１．０５（２Ｈ，ｍ），０．２３（９Ｈ，ｓ）。
【００７８】
１３ＣＮＭＲ（７５．４ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ２０４．１２，１５０．５８，１３４．２８，１３１．２６，１１７．６０，１１５．９３，３３．９６，１１．８２，−１．５４。
【００７９】
ＢＮＰ１３５０
Ａ環（３）（１．６８ｍｇ）およびＣＤＥ環（４）（２０ｍｇ）は、酢酸およびトルエンの混合物（１ｍＬ；１：１ｖ／ｖ）に溶解された。Ｐ−トルエンスルホン酸（１ｍｇ）が添加され、反応混合物は、１００℃で２４時間撹拌された。反応混合物は、室温まで冷却され、減圧下で濃縮された。残留物は、ヘキサンで２回（２×１０ｍＬ）洗浄され、真空下で乾燥された。粗精製物質は、シリカゲルカラムによって精製され、３２ｍｇ（９４％）のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物を得た。スペクトルデータは、市販のＢＮＰ１３５０に対して得られたスペクトルデータと同一であることが示された。
【００８０】
[５．合成スキーム５]
【化７】
2016501187.tif 000008
スキーム５は、ＢＮＰ１３５０を合成するために使用される本発明の第五のプロセスを示す。図示されたように、出発試薬は、対費用効果の高い、市販の２−ニトロ安息香酸（１２）であった。プロセスは、まず、２−ニトロ安息香酸（１２）のより活性化した２−ニトロベンゾイル塩化物（１３）への変換を含み、続いて、ビス（トリメチルシリル）アセチレンと粗精製酸塩化物（１３）のフリーデルクラフトアルキニル化によって、１−フェニル−３−トリメチルシリル−プロピノン（１１）を生成した。Ｐｄ／Ｃの存在下での粗精製物（１１）の水素付加によって、重要なＡ環部１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン（３）を生成し、１ＮのＨＣｌの存在下で粗精製物（３）の結晶化によって、１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン塩（１４）を得た。市販のＣＤＥ環部（４）と１−（２−アミノ−フェニル）−３−トリメチルシラニル−プロパン−１−オン塩（１４）のフリードレンダー縮合によって、所望のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物を良好な収率で得た。
【００８１】
２−ニトロベンゾイル塩化物（１３）
ＤＣＭ（２．５Ｌ）中の２−ニトロ安息香酸（２００ｇ）および触媒量のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ；５ｍＬ）の懸濁液に対して、オキシアリルジクロライド（３０４ｇ）が、３０分間隔で室温で滴下された。滴下後、反応物は、約１時間室温で撹拌され、懸濁液は透明液体になった。反応完了は、ＴＬＣ（一般的には〜１時間）によって監視された。反応混合物は、乾燥物に３５℃で濃縮されて、明黄色油もしくは固体（ｍｐ：１７℃，ｌｉｔ）として、２２５ｇ粗精製物を生じ、追加精製なしで次のステップ用に直接使用された。
【００８２】
１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−オン（１１）
ジクロロメタン（３Ｌ）中の２−ニトロベンゾイル塩化物（１３）（２２５ｇ；１．２モル）および１，２−ビス（トリメチルシリル）エチン（２０５ｇ；１．２モル）の溶液は、０℃まで冷却された。塩化アルミニウム（１５９．２グラム、１．２モル）は、０℃で１０分間かけてゆっくりと添加され、その間、内部反応温度は１０℃未満に保たれた。添加後、反応混合物は、５−１０℃で１時間撹拌された。撹拌によって、黒色反応混合物は、氷水混合物（２ｋｇの氷と１ｋｇの水）へと注がれた。結果として生じた懸濁液は、フィルタ処理され、濾過ケークは、ジクロロメタン（２００ｍL）で洗浄された。化合濾過液のうちの有機相は、分離された。水相は、ジクロロメタンで２回（２×２Ｌ）抽出された。化合された有機相は、水（２Ｌ）で洗浄され、セライトパッド（２００ｇ）を通してフィルタ処理され、硫酸ナトリウム（１２０ｇ）上で乾燥して、３０℃未満の温度（水槽温度）で乾燥物に濃縮され、９５％ＨＰＬＣ純度における所望の２９４ｇの生成物（９９％収率）を得た。
【００８３】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９２−７．８９（ｄｄ，Ｊ＝７．４９，１．２９Ｈｚ，１Ｈ），７．８６−７．８３（ｄｄ，Ｊ＝７．５０，１．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６−７．６６（ｍ，２Ｈ），０．２７（ｓ，９Ｈ）。
【００８４】
１−（２−アミノフェニル）−３−（トリメチルシリル）プロパン−１−オン（３）
トルエン（４．５Ｌ）中の１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−オン（１１）（２９４ｇ；１．１９モル）溶液が、Ｎ２下でＰｄ／Ｃ（１０％ｗｔ；３０ｇ）に添加された。結果として生じた懸濁液は、真空下でガスを抜かれて、Ｈ２で３回満たされた。混合物は、室温で７２時間、０．３ＭＰａ水素の下で水素付加された。反応の進行は、ＨＰＬＣによって監視された。ＨＰＬＣ分析が化合物（１１）の消失を示したとき、触媒は、セライトパッドを通ってフィルタ処理された。濾過液は、真空下で濃縮されて、黒色液体の粗精製物を得た。ＨＰＬＣ分析は、９０％の純度を示した。粗精製物は、エチルアセテート（７．５Ｌ）中に溶解され、４Ｎ塩酸（６００ｍＬ）で処理された。相分離の後、ＨＰＬＣ分析は、９２．８％純度を示した。有機相は、再度、４Ｎ塩酸（６００ｍＬ）で洗浄された。有機相は、さらに、もう一度、４Ｎ塩酸（５００ｍＬ）で洗浄された。有機相は、硫酸ナトリウム（２００ｇ）上で乾燥して、粗精製物（３）（２２０ｇ；８４％収率）を得た。
ＨＰＬＣ純度：９２．２％
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ２２２（ＭＨ＋）
【００８５】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７６−７．７３（ｄ，Ｊ＝７．４９Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．２４（ｔ，Ｊ＝７．６１Ｈｚ，１Ｈ），６．６９−６．６４（ｔ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，２Ｈ），６．２７（ｂｒｓ，２Ｈ），２．９４−２．８９（ｍ，２Ｈ），０．９４−０．８８（ｍ，２Ｈ），０．０７（ｓ，９Ｈ）。
【００８６】
１−（２−アミノフェニル）−３−（トリメチルシリル）プロパン−１−オン塩酸塩（１４）
エチルエーテル（４５０ｍＬ）中の粗精製物（３）（２２０ｇ，９２．２％ＨＰＬＣ純度）の溶液に対して、室温で３０分以上かけて、飽和塩酸／エチルエーテル溶液を滴下された。沈殿固体はフィルタ処理され、濾過ケークは、混合溶媒（エチルエーテル：ｎ−ヘキサン１：１ｖ／ｖ；４００ｍＬ）で洗浄されて、室温で２時間真空下で乾燥され、明黄褐色の固体として、所望の生成物（１４）（１６０ｇ；収率：６２．４％）を得た。
ＨＰＬＣ純度：９８％；ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ２２２（ＭＨ＋）
【００８７】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９（ｂｒｓ，３Ｈ），８．０５−８．０３（ｄ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．２４（ｄ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．６９−７．６４（ｔ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ），７．５３−７．４８（ｔ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ），３．０６−２．９７（ｍ，２Ｈ），０．９２−０．８７（ｍ，２Ｈ），０．０６（ｓ，９Ｈ）。
【００８８】
ＢＮＰ１３５０
酢酸（２９ｍＬ）およびトルエン（２９ｍＬ）中の１−（２−アミノフェニル）−３−（トリメチルシリル）プロパン−１−オン塩酸塩（１４）（１１６５．５ｍｇ）溶液に対して、ｐ−トルエンスルホン酸（５８．５ｍｇ）が添加され、明黄色溶液を得た。結果として生じた溶液は、１００℃で２４時間撹拌された。室温への冷却後、溶液は乾燥物に濃縮された。残留物は、イソプロパノール（１２ｍＬ）中で懸濁され、室温で３０分間撹拌された。固体生成物は、真空フィルタ処理によって収集された。湿ったケークは、イソプロパノールで３回（３×１ｍＬ）洗浄され、灰白色固体を生成し、真空下で乾燥され、８２０ｍｇ（５８．８％収率）の所望のＢＮＰ１３５０（カレニテシン；コシテカン）生成物を９９．２％の純度で得た。１Ｈ−ＮＭＲ分析は、ＢＮＰ１３５０の構造と一致した。
【００８９】
１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−１−オン（１１）の合成用の別の方法
【化８】
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合成の第二の方法は、ＢＮＰ１３５０の化学全合成用に前述された合成スキーム５で使用される重要な中間生成物１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−１−オン（１１）を生成するために使用されてもよい。図示されたように、市販のエチニルトリメチルシラン（１５）は、ｎ−ブチルリチウムおよび塩化亜鉛（ＩＩ）で処理されて、（（トリメチルシリル）エチニル）亜鉛（ＩＩ）塩化物（１６）を形成し、その後、２−ニトロベンゾイル塩化物（１３）に添加されて、所望の中間生成物、１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−１−オン（１１）を得た。
【００９０】
（（トリメチルシリル）エチニル）亜鉛（ＩＩ）塩化物（１６）
Ｎ２雰囲気下でＴＨＦ（１０ｍＬ）中のトリメチルシリルアセチレン（５００ｍｇ）の溶液に対して、−７８℃でｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中の２．５Ｍ；２．４５ｍＬ）を滴下され、−７８℃で1時間撹拌を続けた。その後、乾燥ＴＨＦ中の塩化亜鉛（ＩＩ）（１．１８ｇ）の溶液が滴下され、撹拌は、その後−６０℃未満で一時間続けられた。反応混合物は、中間生成物（１３）との次の結合反応に対して直接使用された。
【００９１】
１−（２−ニトロフェニル）−３−（トリメチルシリル）ｐｒｏｐ−２−イン−１−オン（１１）
ＴＨＦ中の（トリメチルシリル）エチニル亜鉛（ＩＩ）塩化物（１６）は０℃まで温められ、テトラハイドロフラン中の２−ニトロベンゾイルクロライド（０．９４ｇ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１７６ｍｇ）の混合物に対して、０℃、Ｎ２雰囲気下で添加された。反応混合物は、０℃で３０分間保持された。反応物をクエンチングするために、水成塩化アンモニウム溶液が添加された。その後、反応物は、ＥｔＯＡｃで３回（３×１００ｍＬ）抽出され、硫酸ナトリウム上で乾燥され、真空下でフィルタ処理されて濃縮された。残留物は、予備ＴＬＣによって精製され、３００ｍｇの所望の生成物（１１）を得た。
【００９２】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９２−７．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４９Ｈｚ，Ｊ＝１．２９Ｈｚ），７．８６−７．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５０Ｈｚ，Ｊ＝１．５６Ｈｚ），７．７６−７．６６（ｍ，２Ｈ），０．２７（ｓ，９Ｈ）。
【００９３】
[細胞毒性試験]
本明細書で説明された全合成スキームを介して合成されたＢＮＰ１３５０に対して、天然に単離されたカンプトテシンから合成されたＢＮＰ１３５０の細胞毒性の比較が実施された。
【化９】
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【００９４】
[材料および方法]
野生型ヒト卵巣がん細胞（Ａ２７８０／ＷＴ）およびドキソルビシン耐性ヒト卵巣がん細胞（Ａ２７８０／ＤＸ５）は、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭグルタミンを加えられたＲＰＭＩ１６４０培地中で培養され、５％ＣＯ２の３７℃インキュベータ内で培養された。カンプトテシン天然生成物（ＡＰＡＣから購入）から合成されたＢＮＰ１３５０およびＢｉｏＮｕｍｅｒｉｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．におけるＴｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｃｈｅｍｅを介して合成されたＢＮＰ１３５０は、細胞毒性実験での利用のためにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解され、細胞成長の阻害は、ＳＲＢアッセイを利用して測定された。簡潔に言うと、細胞は、９６ウェルマイクロタイタープレートに播種され（１００μＬ体積中の４５０細胞／ウェル）、天然生成物ＢＮＰ１３５０もしくは全合成ＢＮＰ１３５０のいずれかを２時間処理する前に、２４時間付着させた。この２時間の処理に続いて、ＢＮＰ１３５０は除去され、細胞は、薬剤のない培地（２００μＬ）で洗浄され、その後、薬剤のない培地（２００μＬ）が細胞に添加され、ＳＲＢアッセイが実施される前に、３７℃、５％ＣＯ２で培養を続けられた（最初の播種時間からの総実験時間は５日間で、その間に５倍の細胞倍加が生じた）。
【００９５】
[結果]
天然生成物由来で準備されたＢＮＰ１３５０に対するＩＣ５０値、全合成を介して準備されたＢＮＰ１３５０に対するＩＣ５０値は、非常に類似し（表１；グラフ２を参照）、双方のＢＮＰ１３５０調剤薬は、ナノモルＩＣ５０値でのＡ２７８０／ＷＴおよびＡ２７８０／ＤＸ５細胞成長の強力な阻害剤であることが示された。ＢＮＰ１３５０試験態様の双方は、野生型およびドキソルビシン耐性ヒト卵巣がん細胞の双方で効能を示し（表１、表２、グラフ２参照）、２．０未満の抵抗性因子率を示した（表２参照）。
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【００９６】
本明細書で参照されるか、言及される全ての特許、出版物、科学記事、ウェブサイトおよび他の文書および材料は、本発明の関連する当業者の技術レベルを示し、当該参照文献および材料の各々は、個々にその全体において参照によって組み入れられるか、その全体において本明細書で説明されるのと同程度に、参照によって本明細書に組み入れられる。出願人は、当該あらゆる特許、出版物、科学記事、ウェブサイト、電子利用可能な情報および他の参照材料もしくは文書から、この明細書へと任意のおよび全ての材料および情報を物理的に組み入れる権利を保持する。
【００９７】
本特許の明細書記載部分（ｗｒｉｔｔｅｎ  ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｒｔｉｏｎ）は、全ての請求項を含む。さらに、任意のおよび全ての優先文書からの全請求項と共に全ての本訴請求項を含む全請求項は、本明細書によって、その全体において明細書の記載部分に参照によって組み入れられ、出願人は、本出願の記載部分もしくは任意の他の部分へと、任意のおよび全ての当該請求項を物理的に組み入れる権利を保持する。したがって、例えば、請求項の詳細な表現が、特許の明細書記載部分においてそのように説明されていないという主張によって、特許は、請求項に対する記載部分を提供しなかったとして解釈されることはない。
【００９８】
請求項は、法律に従って解釈される。しかしながら、任意の請求項もしくはその一部の解釈が申し立てられたか、認知されたか、容易か、困難かに関わらず、本特許に至る（複数の）出願の遂行中に行われる、請求項もしくはその任意の部分の調整もしくは補正は、従来技術の一部を形成しない任意のおよび全ての均等物に対して、失われたあらゆる権利を有するものとして解釈されることはない。
【００９９】
本明細書で開示されたすべての特徴は、任意の組み合わせで組み合わせられてもよい。したがって、特に言及されない限り、開示された各特徴は、均等もしくは類似する一連の特徴の一実施例でしかない。
【０１００】
本発明は、その詳細な説明と組み合わせて説明されたが、前述の説明は、添付の請求項の範囲によって定義される本発明の範囲を例示することを意図するものであって、限定することを意図するものではないことを理解されたい。したがって、前述から、本発明の特定の実施形態が例示の目的のために本明細書で記述されてきたが、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、種々の改変がなされてもよいことを理解されたい。他の態様、利点および改変は、以下の請求項の範囲内にあり、本発明は、添付の請求項以外によって限定されることはない。
【０１０１】
本明細書で記述された特定の方法および構成は、好ましい実施形態を代表するものであり、かつ例示的なものであって、本発明の範囲に対する限定することを意図するものではない。他の対象、態様、および実施形態は、本明細書の考慮によって当業者に対して生じ、請求項の範囲によって定義されるように、本発明の趣旨内に包含される。様々な置換および改変が、本発明の範囲および本発明の趣旨から逸脱することなく、本明細書で開示された本発明に対してなされてもよいことは、当業者には容易に理解されるであろう。本明細書で例示的に記述された本発明は、本明細書で必須であるものとして特に開示されていないあらゆる（複数の）構成要素もしくは（複数の）限定がない状態で適切に実践されてもよい。したがって、例えば、本明細書の各実施例においては、本発明の実施形態もしくは実施例において、“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”，“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ”，“ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ”などの用語は、限定することなく拡張的に読解されるべきである。本明細書で例示的に記述された方法およびプロセスは、異なる順序のステップで実践されてもよいし、本明細書もしくは請求項で示されるステップの順序に必ずしも限定されることはない。
【０１０２】
使用されている用語および表現は、説明する目的で使用されるものであり、限定する目的で使用されるものではない。示され、記述された特徴もしくはその一部のあらゆる均等物を排除するために、当該用語および表現を利用することを意図するのではなく、種々の改変が請求されたような本発明の範囲内で可能であることが認識される。したがって、本発明は、種々の実施形態および／もしくは好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されてきたが、当業者によって頼みの綱とされうる本明細書で開示された概念の任意のおよび全ての改変および変更は、添付の請求項によって定義されるように、本発明の範囲内にあるものと考えられることを理解されたい。
【０１０３】
本発明は、本明細書で広くかつ一般的に記述されてきた。一般的開示内にあるより狭い範囲の種類および下位概念グループの各々もまた、本発明の一部を形成する。これは、本明細書において削除された物質が特に言及されているか否かに関わらず、総括請求範囲からの任意の主題を除くような但し書きもしくは否定的限定を有する本発明の包括的記述を含む。
【０１０４】
本明細書および添付の請求項で使用されるように、“ａ”，“ａｎ”，“ｔｈｅ”の単数形は、明確に否定されていない限り、複数形を含み、用語“Ｘ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｙ”は“Ｘ  ｏｒ  Ｙ”もしくは“Ｘ”および“Ｙ”の双方を意味し、名詞に続く“ｓ”は、当該名詞の複数および単数形の双方を示すことを理解されたい。さらに、本発明の特徴もしくは態様は、マーカッシュグループの点から記述される場合、本発明は、マーカッシュグループのあらゆる個別のメンバーおよび、メンバーのあらゆるサブグループを包含し、それによって記述され、出願人は、マーカッシュグループのあらゆる個々のメンバーもしくはメンバーのあらゆるサブグループに対して具体的に言及するために、本出願もしくは請求項を補正する権利を保持することを当業者が理解するよう意図される。
【０１０５】
他の実施形態は以下の請求項の範囲内にある。特許は、具体的におよび／もしくは明示的に本明細書で開示された特定の実施例もしくは実施形態もしくは方法に限定されることを意図されない。出願人による応答において、ステートメントが具体的にかつ条件もしくは但し書きなしで明白に採択されない限りは、特許商標庁（Ｐａｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｄｅｍａｒｋ  Ｏｆｆｉｃｅ）のあらゆる審査官もしくは任意の他の事務官もしくは従業者によってなされたあらゆるステートメントによって、特許は解釈されるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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