(57)【要約】炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型のマクロファージに変換するための免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）であって、ＩＦＰが、少なくとも１つの成分Ａおよび少なくとも１つの成分Ｂを有し、成分Ａは、前記免疫調節性融合タンパク質の成分Ａが結合すると前記免疫調節性融合タンパク質を内部移行させるマクロファージの細胞外表面構造に対する結合ドメインを含むか、または これらからなり、成分Ｂは、マクロファージを調節し、且つ標的マクロファージに対する調節機能を示すＤＮＡオリゴヌクレオチドを含むか、もしくは このＤＮＡオリゴヌクレオチドからなるか、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを含むか、もしくは このＲＮＡオリゴヌクレオチドからなるか、または 化学小分子を含むか、もしくは この化学小分子からなるか、あるいは そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質を含むか、もしくは このマクロファージ調節タンパク質からなるポリペプチドを含むか、もしくは このポリペプチドからなるか、または そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質の少なくとも部分配列であってマクロファージ調節タンパク質が有する調節機能を維持している部分配列を含むか、もしくは この部分配列からなるポリペプチドを含むか、もしくは このポリペプチドからなる、免疫調節性融合タンパク質。
2016527189.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症促進性Ｍ１マクロファージを、抗炎症性Ｍ２様表現型を有するマクロファージに変換するための免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）であって、前記ＩＦＰが、少なくとも１つの成分Ａおよび少なくとも１つの成分Ｂを有し、
成分Ａは、前記免疫調節性融合タンパク質の成分Ａが結合すると前記免疫調節性融合タンパク質を内部移行させる、マクロファージの細胞外表面構造との結合ドメインを含むか、または この結合ドメインからなり、
成分Ｂは、前記マクロファージを調節し、且つ、
標的マクロファージに対する調節機能を示す、ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含むか、もしくは このＤＮＡオリゴヌクレオチドからなるか、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを含むか、もしくは このＲＮＡオリゴヌクレオチドからなるか、または 化学小分子を含むか、もしくは この化学小分子からなるか、あるいは 、
そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質を含むか、もしくは このマクロファージ調節タンパク質からなるポリペプチドを含むか、もしくは このポリペプチドからなるか、または そのアミノ酸配列が、前記マクロファージ調節タンパク質の少なくとも部分配列であってマクロファージ調節タンパク質が有する調節機能を維持している部分配列を含むか、もしくは この部分配列からなるポリペプチドを含むか、もしくは このポリペプチドからなる、
免疫調節性融合タンパク質。
【請求項２】
前記免疫調節性融合タンパク質が、ヒト免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）である、請求項１に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項３】
前記免疫調節性融合タンパク質の成分Ａが、抗体または その誘導体もしくは その断片、ｓｃＦｖ、ミモトープなどの合成ペプチド、または 炭水化物、脂質、核酸、ペプチド、ビタミンなどの化学分子、および ／または リガンド、特にペプチド性分子、非ペプチド性分子などの受容体結合活性を有する最大１００原子の小分子、および ／または レクチン、特にカルネキシン、ｃ型レクチン、ｌ型レクチン、ｍ型レクチン、ｐ型レクチン、ｒ型レクチン、ガレクチン、および それらの誘導体などの炭水化物結合タンパク質および それらのリガンド、および ／または ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ６４などのマクロファージ特異的分化抗原群（ＣＤ）に対する天然リガンド、ケモカイン、コロニー刺激因子、１型サイトカイン、２型サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、モノカインなどのサイトカインなどの受容体結合分子、および ／または これらの誘導体および 変異体を含む接着分子、および ／または これらの結合構造のいずれかの誘導体もしくは 組合せからなる、内部移行性マクロファージ特異的細胞表面受容体結合構造の群から選択される、請求項１または 請求項２に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項４】
成分Ａが、ＣＤ６４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯβからなる群から選択される、請求項１〜請求項３に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項５】
成分Ａが、配列番号１〜３３のポリペプチドから選択される、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項６】
成分Ａが、ケモカインまたはその特異的結合断片である、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項７】
成分Ａが、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１および ＸＣＬ２ＣなどのＣケモカイン／受容体ファミリー；あるいは ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、または ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、および ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリーからなる群から選択される、請求項６に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項８】
成分Ａが、ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；およびＩＬ−３５からなる群から特に選択されるインターロイキンまたはその特異的結合断片である、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項９】
成分Ｂが、マウスＣ／ＥＢＰβ、ヒトＣ／ＥＢＰβである、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項１０】
配列番号３４〜４４のいずれかのポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列のいずれかを有する少なくとも１つのタンパク質からなる群から選択される、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項１１】
成分Ａおよび／または Ｂが、遺伝子操作によって互いに化学的に結合または 融合しており、特に、配列番号４５〜４９のいずれかのポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列のいずれかを有するタンパク質である、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項１２】
・ 成分Ｂをクローニングしてポリヌクレオチドを得るステップ；および 
・ 成分Ｂをコードする前記ポリヌクレオチドを、成分Ａのタンパク質をコードするポリヌクレオチドと融合して、本発明の免疫調節性融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを得るステップ；
・ 前記本発明の免疫調節性融合タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドを大腸菌などの好適な宿主中で発現させるステップ；
・ 前記免疫調節性融合タンパク質を単離および 精製するステップ
を含むか、またはこれらのステップからなる、請求項１〜請求項１１のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質を製造するプロセス。
【請求項１３】
請求項１〜請求項１１のいずれか１項に記載のタンパク質性免疫調節性融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、または前記免疫調節性融合タンパク質のタンパク質性成分をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載のポリヌクレオチドの少なくとも１つを含むか、またはこのポリヌクレオチドからなるベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載のベクターを有する細胞。
【請求項１６】
請求項１〜請求項１１のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質を含むか、またはこの免疫調節性融合タンパク質からなる薬剤。
【請求項１７】
慢性炎症性疾患の治療において炎症促進性Ｍ１マクロファージの抗炎症性Ｍ２様表現型への変換に使用するための、請求項１〜請求項１１のいずれか１項に記載の免疫調節性融合タンパク質。
【請求項１８】
炎症促進性Ｍ１マクロファージが抗炎症性Ｍ２様表現型に変換されるのに十分な時間、炎症促進性Ｍ１マクロファージを請求項１〜請求項１１の少なくとも１項に記載の免疫調節性融合タンパク質と接触させることにより、炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型に変換する方法。
【請求項１９】
炎症促進性Ｍ１マクロファージが抗炎症性Ｍ２様表現型に変換されるのに十分な時間、炎症促進性Ｍ１マクロファージを請求項１〜請求項１１の少なくとも１項に記載の免疫調節性融合タンパク質と接触させることによる、炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型に変換することにより炎症を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症促進性Ｍ１マクロファージを、抗炎症性Ｍ２様表現型を有するマクロファージに変換するための免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードするポリヌクレオチド、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の製造プロセス、本発明のポリヌクレオチドを含むか、または このポリヌクレオチドなるベクター、本発明のベクターを含むか、または このベクターからなる細胞、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を含むか、または この免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）からなる薬剤、および慢性炎症性疾患の治療における免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の使用に関する。
【０００２】
マクロファージは、炎症の制御［１］および組織修復などの生理的プロセス［２］において重要な役割を果たす自然免疫系の主要な構成要素である。分化したマクロファージおよび それらの前駆体は、それらの表現型および 機能を変化させることにより微小環境シグナルに適応できる可変性の細胞（ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｃｅｌｌ）である［３］。これらについては長年研究されてきたが、ごく最近になって、これらの細胞が古典的Ｍ１および選択的Ｍ２として知られる別個の亜集団を含むことが示された。Ｔｈ１細胞の命名法を反映して、Ｍ１マクロファージは、ＩＦＮ−γおよびＬＰＳによって誘導される炎症促進性サブタイプのマクロファージとして記載される。これらは、エフェクター分子（例えば、活性酸素種）および 炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、および ＩＬ−６）を産生し、Ｔｈ１分化反応の引き金を引く［４］。Ｍ２マクロファージはさらに、Ｍ２ａ（ＩＬ−４または ＩＬ−１３への曝露による）、Ｍ２ｂ（免疫複合体および トール様受容体または ＩＬ−１ｂリガンド）、および Ｍ２ｃ（ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、および グルココルチコイドによって誘導される）に分類される。３つのサブタイプは全て、ＩＬ−１０ｈｉｇｈ（特にＭ２ｂ＋Ｍ２ｃ）、ＲＥＬＭ−αｈｉｇｈ（マウスのみ）、ＣＤ２０６ｈｉｇｈおよびＩＬ−１２ｌｏｗ（Ｍ２ａ）を特徴とする抗炎症性表現型を有する［５］。
【０００３】
通常の炎症において、マクロファージは、これらの分化状態の間で動的に転換される。Ｍ１マクロファージは初期段階において最も豊富であり、他のエフェクター細胞の除去および 動員を媒介するが、Ｍ２マクロファージは炎症の終盤で優勢になり、血管新生および 新組織形成を促進する［６、７］。炎症の過程は、この適切にバランスのとられたＭ１／Ｍ２マクロファージの比に強く依存する。Ｍ１優勢からＭ２への転換の失敗により、慢性炎症における炎症促進性環境の永続化および強化がもたらされ得る（図１ａ）。したがって、Ｍ１停止は炎症の回復を妨げ得る［８］。
【０００４】
Ｍ１／Ｍ２比の乱れが、いくつかの自己免疫疾患および 慢性炎症性疾患、ならびに 糖尿病および メタボリックシンドロームなどの代謝関連疾患で観察されている［９］。肥満個体由来の脂肪組織マクロファージ（ＡＴＭ）が、Ｍ２（ＣＤ２０６＋、ＣＤ３０１＋、Ａｒｇ１＋）から、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、および ＩＬ−１βなどの炎症促進性サイトカインを産生するＭ１（ＮＯＳ２＋、ＣＤ１１ｃ＋）へと表現型シフトして［１０］、レプチンおよび アディポネクチンの影響と拮抗する［１１］ことが示されている。Ｍ１に関連する同様の病状が、アテローム性動脈硬化症［１２］などの心臓血管疾患、ならびに 関節リウマチ［１３］、多発性硬化症［１４］、全身性エリテマトーデス［１５］、および クローン疾患［１６］などの自己免疫疾患と関連付けられている。
【０００５】
初期炎症反応におけるＭ１マクロファージの持続もまた、いくつかの慢性皮膚疾患における炎症の回復を妨げ得る。糖尿病性皮膚潰瘍において炎症促進性Ｍ１マクロファージの数を減少させることで、創傷炎症を軽減し、創傷閉鎖を促進することができる。慢性静脈性潰瘍のヒト患者において、Ｍ１マクロファージの持続は、ＤＮＡ損傷を生じさせて不完全な組織修復をもたらす、活性酸素種の産生を誘導する。活性化された（おそらくＭ１）マクロファージは、罹患率が増加している別の慢性皮膚疾患であるアトピー性皮膚炎にも関連しており、工業国において子供の１０〜２０％ および成人の１〜３％ が発症し、経済的影響は数十億ドルに上る。
【０００６】
国際公開第２０１０／０４５５８４号は、炎症性疾患を治療するための、葉酸受容体を介してｓｉＲＮＡをマクロファージにターゲティングする複合体を開示する。
【０００７】
Mati Fridkin et al., Journal of Peptide Science Vol. 11, No. 1, 1 January 2005, pp. 37-44は、ＡＩＤＳを治療するためのタフトシン（Ｔｕｆｔｓｉｎ）とＡＺＴとの複合体の使用を報告している。
【０００８】
Aouadi Myriam et al., Nature Vol. 458, No. 7242, p. 1180は、全身性炎症を抑制するためにマクロファージ中へｓｉＲＮＡを送達することを開示する。デクチン−１受容体を介して食作用が引き起こされる。
【０００９】
Ferkol, T. et al., PNAS, Vol. 93, 1 January 1996, pp. 101-105は、マンノース受容体を介してマンノシル化ポリリジンと遺伝子との複合体をマクロファージ中に導入することを開示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的の１つは、慢性炎症性疾患を治療するための効果的な薬剤を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、慢性炎症性疾患を治療可能な化合物を提供することである。
【００１２】
したがって、慢性炎症におけるＭ１マクロファージのターゲティングは、Ｍ１マクロファージおよび Ｍ２マクロファージ間の不均衡ならびに それによる炎症促進性サイトカインの蓄積を正すことによって慢性炎症の回復の成功を促進する、有望な介入戦略であり得る。
【００１３】
本発明は、マウスおよび ヒトの両方において、インビトロおよび インビボでＭ１マクロファージを特異的に除去することで例示される。特に、トランスジェニックモデルマウスにおけるインビボでのＭ１マクロファージの除去、およびアトピー性皮膚炎患者由来の皮膚外植片におけるエクスビボでのＭ１マクロファージの除去により、抗炎症性Ｍ２マクロファージの蓄積を促進するように微小環境条件が変化した。Ｍ１特異的な除去に加えて、本明細書は、逆刺激（Ｍ１に対してＩＬ−４およびＭ２に対してＩＦＮ−γ）への曝露後に両集団が表現型の可塑性を示すことを開示する。再分化は、表面マーカーおよび 可溶性サイトカインの観点から、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’に対する感受性の変化と一致し、両方向（Ｍ１からＭ２および その逆）で可能であることが示された。
【００１４】
本発明は、細胞死滅ではなく免疫調節アプローチを用いて慢性炎症性疾患に対処する。分化アプローチは、組織浸潤性単球に影響を与えるだけでなく、既に分化している組織マクロファージにも影響を与える。本発明は、ＣＤ６４をゲートウェイサンプルとして用いて、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβ（ＣＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質β）が炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型へと転換させる可能性を例として実証する。
【００１５】
総合すると、免疫調節性融合分子を用いたＭ１マクロファージの適切な表面受容体のターゲティングにより、大部分の慢性炎症性疾患に対する新規な介入戦略の開発が促進される。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の目的は、炎症促進性Ｍ１マクロファージを、抗炎症性Ｍ２様表現型を有するマクロファージに変換する免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）によって達成され、ＩＦＰは、少なくとも１つの成分Ａおよび少なくとも１つの成分Ｂを有し、
成分Ａは、前記免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａが結合すると前記免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を内部移行させる、マクロファージの細胞外表面構造との結合ドメインを含むか、または これらからなり、
成分Ｂは、マクロファージを調節し、且つ
標的マクロファージに対する調節機能を示すＤＮＡオリゴヌクレオチドを含むか、もしくは このＤＮＡオリゴヌクレオチドからなるか、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを含むか、もしくは このＲＮＡオリゴヌクレオチドからなるか、または 化学小分子を含むか、もしくは この化学小分子からなるか、あるいは 、
そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質を含むか、もしくは このマクロファージ調節タンパク質からなるポリペプチドを含むか、もしくは このポリペプチドからなるか、または そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質の少なくとも部分配列であってマクロファージ調節タンパク質が有する調節機能を維持している部分配列を含むか、もしくは この部分配列からなるポリペプチドを含むか、もしくは このポリペプチドからなる。
【００１７】
ある実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ヒト免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）である。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、抗体または その誘導体もしくは 断片、ｓｃＦｖ、ミモトープなどの合成ペプチド、または 炭水化物、脂質、核酸、ペプチド、ビタミンなどの化学分子、および ／または リガンド、特にペプチド性分子、非ペプチド性分子などの受容体結合活性を有する最大１００原子の小分子、および ／または レクチン、特にカルネキシン、ｃ型レクチン、ｌ型レクチン、ｍ型レクチン、ｐ型レクチン、ｒ型レクチン、ガレクチン、および それらの誘導体などの炭水化物結合タンパク質および それらのリガンド、および ／または ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ６４などのマクロファージ特異的分化抗原群（ＣＤ）に対する天然リガンド、ケモカイン、コロニー刺激因子、１型サイトカイン、２型サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、モノカインなどのサイトカインなどの受容体結合分子、および ／または これらの誘導体および 変異体を含む接着分子、および ／または 上記の結合構造のいずれかの誘導体もしくは 組合せを含むか、または これらからなる、内部移行性マクロファージ特異的細胞表面受容体結合構造の群から選択することができる。
【００１９】
さらに別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、以下のリストから選択されてもよい。ＣＤ６４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯβ。
【００２０】
具体的には、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、特に配列番号１〜３３（図１５）のポリペプチドから選択されてもよい。
【００２１】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、ケモカインまたはその特異的結合断片であり得る。
【００２２】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１および ＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；あるいは ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、または ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、および ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリーからなる群から選択されてもよい。
【００２３】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片であり得る。インターロイキンは、具体的には、ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；およびＩＬ−３５からなる群から選択される。
【００２４】
具体的な実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ｂは、図１６の配列番号３４〜４４のいずれかのポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列のいずれかを有するタンパク質などの、マウスＣ／ＥＢＰβ、ヒトＣ／ＥＢＰβからなる群から選択されてもよい。
【００２５】
本発明によれば、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａおよび成分Ｂは、配列番号４５〜４９（図１７）のいずれかのポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列のいずれかを有するタンパク質などの、遺伝子操作によって互いに化学的に結合または融合している。
【００２６】
本発明の主題はまた、
・ 成分Ｂをクローニングしてポリヌクレオチドを得るステップ；および 
・ 成分Ｂをコードする前記ポリヌクレオチドを、成分Ａのタンパク質をコードするポリヌクレオチドと融合して、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードするポリヌクレオチドを得るステップ；
・ 本発明の免疫調節融性合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする前記ポリヌクレオチドを大腸菌などの好適な宿主中で発現させるステップ；
・ 本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を単離および 精製するステップ
を含むか、またはこれらのステップからなる、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の製造プロセスでもある。
【００２７】
本発明の別の主題は、本発明のタンパク質性免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードするポリヌクレオチド、または免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）のタンパク質性成分をコードするポリヌクレオチドである。
【００２８】
本発明の別の主題は、本発明のポリヌクレオチドの少なくとも１つを含むか、またはこのポリヌクレオチドからなるベクターである。
【００２９】
本発明の別の主題は、本発明のベクターを有する細胞である。
【００３０】
本発明のさらに別の主題は、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を含むか、またはこの免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）からなる薬剤である。本発明の別の主題は、慢性炎症性疾患の治療に用いることができる本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）である。
【００３１】
本発明の免疫調節性融合タンパク質は特に、慢性炎症性疾患の治療における炎症促進性Ｍ１マクロファージの抗炎症性Ｍ２様表現型への変換での使用に適している。
【００３２】
したがって、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、Ｍ１マクロファージが抗炎症性Ｍ２様表現型に変換されるのに十分な時間、Ｍ１マクロファージを本発明の免疫調節性融合タンパク質と接触させることによる、炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型に変換する方法において使用することができる。
【００３３】
同様に、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、Ｍ１マクロファージが抗炎症性Ｍ２様表現型に変換されるのに十分な時間、Ｍ１マクロファージを本発明の免疫調節性融合タンパク質と接触させることによる、炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型に変換することにより炎症を治療する方法に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１ａ】炎症反応の惹起および増幅についての文献に基づく試験的仮説を示す図である。
【図１ｂ】ｈＣＤ６４ｔｇマウスマクロファージ上のＭ１特異的表面マーカーおよびＭ２特異的表面マーカーのスクリーニングを示す図である。Ｍ１／Ｍ２比＞０＝Ｍ１細胞における発現増加；Ｍ１／Ｍ２比＜０＝Ｍ２細胞における発現増加。
【図１ｃ】ヒトＰＢＭＣ由来マクロファージ上のＭ１特異的表面マーカーおよびＭ２特異的表面マーカーのスクリーニングを示す図である。Ｍ１／Ｍ２比＞０＝Ｍ１細胞における発現増加；Ｍ１／Ｍ２比＜０＝Ｍ２細胞における発現増加。
【図１ｄ】分化マクロファージによる可溶性サイトカインの発現を示す図である。値は、平均値±ＳＤである；＊＊＊ｐ≦０．００１（独立両側スチューデントｔ検定）。
【図２−１】インビトロでの分化マクロファージのＭ１特異的除去を示す図である。
【図２−２】インビトロでの分化マクロファージのＭ１特異的除去を示す図である。
【図３−１】ａ：Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’によるＭ１マクロファージにおけるアポトーシスの選択的な誘導を示す図である。
【図３−２】ｂ：図３のａで得られた結果の定量分析を示す図である。ゼオシン（Ｚｅｏｃｉｎ）を対照 として用いた。値は平均値±ＳＤである；＊ｐ≦０．０５、＊＊＊ｐ≦０．００１（一元配置分散分析）。
【図４ａ】インビボでのトランスジェニックマウスにおけるＭ１マクロファージの選択的除去を示す図である。
【図４ｂ】Ｍ１特異的マーカーおよびＭ２特異的マーカーについて染色したマウス皮膚切片の代表的画像を示す図である。染色された細胞の例を矢印で示す。対物レンズ：１０倍。
【図４ｃ】マウス皮膚においてＭ１マクロファージの選択的除去によりＭ１／Ｍ２比が抗炎症状態へシフトすることを示す図である。
【図５ａ】炎症細胞の浸潤を示す非処理皮膚のＨ＆Ｅ染色を示す図である。
【図５ｂ】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’によるエクスビボ処理後にＭ１特異的マーカーおよびＭ２特異的マーカーについて染色したヒト皮膚切片の代表的画像を示す図である。染色された細胞の例を矢印で示す。対物レンズ：１０倍。
【図５ｃ】培地のみでインキュベートした対照 と比べて、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’処理によりＣＤ６４＋ＣＤ１４＋Ｍ１細胞の数が減少したことを示す図である。対照 的に、ＣＤ２０６＋ＣＤ３０１＋Ｍ２マクロファージの数は増加した。値は平均値±ＳＤである；＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１（一元配置分散分析）。
【図５ｄ】ヒト皮膚においてＭ１マクロファージの選択的除去によりＭ１／Ｍ２比が抗炎症状態へシフトすることを示す図である。
【図５ｅ】Ｍ１マクロファージの除去により炎症促進性ＩＬ−６のレベルが低減し、抗炎症性ＩＬ−１０の産生が誘導されたことを示す図である。値は平均値±ＳＤである；＊＊＊ｐ≦０．００１（一元配置分散分析）。
【図６ａ】インビトロにおける分化マクロファージの表現型の可塑性を示す図である（表面マーカー）。
【図６ｂ】インビトロにおける分化マクロファージの表現型の可塑性を示す図である（可溶性マーカー）。値は平均値±ＳＤである；＊＊＊ｐ≦０．００１（一元配置分散分析）。ＭＣ：培地交換。
【図６ｃ】インビトロにおける分化マクロファージの機能的可塑性を示す図である。
【図７】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβのベクターマップを示す図である。
【図８】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβの発現カセットを示す図である。
【図９ａ】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβのクーマシーブリリアントブルー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す図である。
【図９ｂ】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβのウエスタンブロットを示す図である。
【図１０】標的細胞へのＨ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβの結合を示す図である。
【図１１】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβにより誘導されたＭ１マクロファージにおける炎症促進性サイトカイン（ＩＬ−１２およびＩＬ−６）の減少を示す図である。
【図１２】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβによるＭ１マクロファージにおける抗炎症性サイトカインの誘導を示す図である。
【図１３】Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβにより誘導されたＭ１マクロファージにおける炎症促進性サイトカインＴＮＦ−αの減少を示す図である。
【図１４】Ｍ２マクロファージにおける表面マーカーの発現に対するＨ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβの影響およびハイブリッド表現型（ＣＤ１４ｈｉｇｈ／ＣＤ３６ｈｉｇｈ／ＣＤ２０６ｈｉｇｈ／ＣＤ３０１ｌｏｗ）の誘導を示す図である。
【図１５】Ｍ１マクロファージにより発現される例示的な表面標的のＯＲＦを示す図である。
【図１６】例示的なマクロファージ調節タンパク質のＯＲＦを示す図である。
【図１７】例示的な免疫調節性融合タンパク質のＯＲＦを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明は、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）に関し、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａが結合すると内部移行させる、マクロファージ細胞外表面構造への結合ドメインを含むか、または この結合ドメインからなる少なくとも１つの成分Ａ、および少なくとも１つの成分Ｂから形成され、成分Ｂは、そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質を含むか、もしくこのマクロファージ調節タンパク質からなるポリペプチドであるか、または そのアミノ酸配列が、マクロファージ調節タンパク質の少なくとも部分配列であってマクロファージ調節タンパク質が有する調節機能を維持している部分配列を含むか、もしくは この部分配列からなるポリペプチドであることを特徴とする。具体的な実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ヒト免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）である。別の実施形態では、成分Ｂは、標的マクロファージに対する調節機能を示す、ＤＮＡオリゴヌクレオチドもしくは ＲＮＡオリゴヌクレオチドまたは 化学小分子である。
【００３６】
本発明のある実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａは、抗体または その誘導体もしくは 断片、ｓｃＦｖ、ミモトープなどの合成ペプチド、または 炭水化物、脂質、核酸、ペプチド、ビタミンなどの化学分子、および ／または リガンド、特に単一原子、ペプチド性分子、非ペプチド性分子などの受容体結合活性を有する最大１００原子の小分子、および ／または レクチン、特にカルネキシン、Ｃ型レクチン、ｌ型レクチン、ｍ型レクチン、ｐ型レクチン、ｒ型レクチン、ガレクチン、および それらの誘導体などの炭水化物結合タンパク質および それらのリガンド、および ／または ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ６４などのマクロファージ特異的分化抗原群（ＣＤ）に対する天然リガンド、ケモカイン、コロニー刺激因子、１型サイトカイン、２型サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、モノカインなどのサイトカインなどの受容体結合分子、および ／または これらの誘導体および 変異体を含む接着分子、および ／または 上記の結合構造のいずれかの誘導体もしくは 組合せからなる、内部移行性細胞表面受容体結合構造の群から選択される。
【００３７】
成分Ａは特に、分化抗原群および主要組織適合遺伝子複合体抗原に属する、マクロファージの細胞表面マーカーに結合する。例えば、成分Ａは、細胞毒性成分Ｂに結合していてもよい、ＣＤ６４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択される免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を含むか、またはこれらからなる。
【００３８】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、マクロファージ調節タンパク質と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００３９】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、マウスＣ／ＥＢＰβと結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４０】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ヒトＣ／ＥＢＰβと結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４１】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、チオレドキシンと結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４２】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ１と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４３】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ２と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４４】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ３と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４５】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ４と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４６】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ５と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４７】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ６と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４８】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＳＯＣＳ７と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００４９】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）はさらに、ＣＤ６４、ＣＤ１４、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ３９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ２７３、ＣＤ２８４、ＨＬＡ−Ａ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ａ、ＨＬＡ−Ｂ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ主要組織適合抗原複合体、クラスＩ、Ｇ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα１、ＨＬＡ−ＤＱＡ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱα２、ＨＬＡ−ＤＱＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ２主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＱβ２、ＨＬＡ−ＤＲＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＲβ５、ＣＤ７４分子、主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ不変鎖、ＨＬＡ−ＤＰＡ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＭＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯＡ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯＢ主要組織適合抗原複合体、クラスＩＩ、およびＤＯβからなる群から選択され、ＫＬＦ４  Ｋｒｕｐｐｅｌ様因子４と結合している化合物を含んでいてもよい。
【００５０】
具体例を図１５の配列番号１〜３３に示す。
【００５１】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、ケモカインまたはその特異的結合断片である。本発明によれば、ケモカインは特に表１から選択される。表１に含まれるケモカインは、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または 、ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリーである。
【００５２】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、マクロファージ調節タンパク質と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５３】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、マウスＣ／ＥＢＰβと結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ヒトＣ／ＥＢＰβと結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５４】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、チオレドキシンと結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５５】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ１と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５６】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ２と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５７】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ３と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５８】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ４と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、または ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ５と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００６０】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ６と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、または ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００６１】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＳＯＣＳ７と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００６２】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、ＫＬＦ４  Ｋｒｕｐｐｅｌ様因子４と結合した、特に表１、すなわちＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＫＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６などのＣＸＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＸＣＬ１およびＸＣＬ２などのＣケモカイン／受容体ファミリー；または ＣＸ３ＣＬ１などのＣＸ３Ｃケモカイン／受容体ファミリー、もしくは ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬＳ、（ＣＣＬ６）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、（ＣＣＬ９／１０）、ＣＣＬ１１、（ＣＣＬ１２）ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８などのＣＣケモカイン／受容体ファミリー、から選択されるケモカインまたは その特異的結合断片である。
【００６３】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびマクロファージ調節タンパク質の組合せによって形成される。
【００６４】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびマウスＣ／ＥＢＰβの組合せによって形成される。
【００６５】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびヒトＣ／ＥＢＰβの組合せによって形成される。
【００６６】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびチオレドキシンの組合せによって形成される。
【００６７】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ１の組合せによって形成される。
【００６８】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ２の組合せによって形成される。
【００６９】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ３の組合せによって形成される。
【００７０】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ４の組合せによって形成される。
【００７１】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ５の組合せによって形成される。
【００７２】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ６の組合せによって形成される。
【００７３】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＳＯＣＳ７の組合せによって形成される。
【００７４】
本発明の別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に示されるようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。すなわち、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、以下のインターロイキン：ＩＬ−１；ＩＬ−２；ＩＬ−３；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−８；ＩＬ−９；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７；ＩＬ−２８；ＩＬ−２９；ＩＬ−３０；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３５；およびＫＬＦ４  Ｋｒｕｐｐｅｌ様因子４の組合せによって形成される。
【００７５】
本発明の別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ｂは、マクロファージ調節タンパク質、特にマウスＣ／ＥＢＰβ、ヒトＣ／ＥＢＰβ、チオレドキシン、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ６、ＳＯＣＳ７、およびＫＬＦ４  Ｋｒｕｐｐｅｌ様因子４であってもよい。成分Ｂのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの代表例を図１６の配列番号３４〜４４に記載する。
【００７６】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ｂは、マクロファージ調節化学小分子、ＤＮＡオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。
【００７７】
さらに別の実施形態では、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、配列番号４５〜４９（図１７）のいずれかのポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列のいずれかを有するタンパク質などの、遺伝子操作によって互いに化学的に結合または 融合された成分Ａおよび ／または Ｂを含むか、または 成分Ａおよび ／または Ｂからなる。
【００７８】
本発明の別の主題は、
・ 成分Ｂをクローニングしてポリヌクレオチドを得ること；および 
・ 成分Ｂをコードする前記ポリヌクレオチドを、成分Ａのタンパク質をコードするポリヌクレオチドと融合して、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードするポリヌクレオチドを得ること；
・ 本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする前記ポリヌクレオチドを大腸菌などの好適な宿主中で発現させること；
・ 本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を単離および 精製すること
による、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の製造プロセスである。
【００７９】
本発明の主題はさらに、本発明のポリヌクレオチドの少なくとも１つを含むか、またはこのポリヌクレオチドからなるベクター、および本発明のベクターを有する細胞である。
【００８０】
さらに、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を含むか、または この免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）からなる薬剤、および慢性炎症性疾患の治療に使用するための本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を含むか、または この免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）からなる組成物も本発明の主題である。
【００８１】
本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、少なくとも２つのドメイン、すなわちマクロファージ調節タンパク質を有する１つのドメインおよび少なくとも１つの細胞特異的結合ドメインを含むか、またはこれらからなる化合物である。本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、慢性炎症性疾患の治療に使用することができる。
【００８２】
本明細書において、「免疫毒素」という用語は、細胞結合性モノクローナル抗体または その断片が、細菌または 植物タンパク質系毒素と化学的に結合または 遺伝子的に融合しているキメラ分子を指す。免疫毒素自体およびその作製は当業者に周知である。
【００８３】
本明細書において、「免疫調節性融合タンパク質」という用語は、細胞結合ヒトリガンドまたは その断片がマクロファージ調節タンパク質、または 調節機能を維持しているマクロファージ調節タンパク質の少なくとも部分配列と、化学的に結合または 遺伝子的に融合しているキメラまたは 完全なヒト二機能性融合タンパク質を指す。
【００８４】
本明細書において、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の「成分Ａ」という用語は、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）のマクロファージ細胞特異的結合構造を意味する。成分Ａは、抗体または その誘導体もしくは その断片、ｓｃＦｖ、ミモトープなどの合成ペプチド、または 炭水化物、脂質、核酸、ペプチド、ビタミンなどの化学分子、および ／または リガンド、特に単一原子、ペプチド性分子、非ペプチド性分子などの受容体結合活性を有する最大１００原子の小分子、および ／または レクチン、特にカルネキシン、ｃ型レクチン、ｌ型レクチン、ｍ型レクチン、ｐ型レクチン、ｒ型レクチン、ガレクチン、および それらの誘導体などの炭水化物結合タンパク質および それらのリガンド、および ／または ＣＤ３０、ＣＤ４０などの分化抗原群（ＣＤ）に対する天然リガンド、ケモカイン、コロニー刺激因子、１型サイトカイン、２型サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、モノカインなどのサイトカインなどの受容体結合分子、および ／または これらの誘導体および 変異体を含む接着分子、および ／または 上記の結合構造のいずれかの誘導体もしくは 組合せからなる、内部移行性細胞表面受容体結合構造の群から選択される。
【００８５】
本発明の別の目的では、成分Ａは、分化抗原群および主要組織適合遺伝子複合体抗原に属する健康細胞または疾患細胞の細胞表面マーカーに結合する（図１５、配列番号１〜３３）。
【００８６】
別の具体的実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表１に記載されているようなケモカインまたはその特異的結合断片である。
【００８７】
別の実施形態では、成分Ａは、その特異的細胞受容体に結合する、表２に記載されているようなインターロイキンまたはその特異的結合断片である。
【００８８】
本明細書において、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、および Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、および 親抗体の有する抗原結合機能および 特異性を保持しているその他の断片などのこれらの断片を指す。
【００８９】
本明細書において、「モノクローナル抗体」という用語は、均一な抗体集団を有する抗体組成物を指す。この用語は、抗体の種または供給源に関して限定されず、その製造方法によっても限定されない。この用語は、全免疫グロブリン、及び Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、および 抗体の有する抗原結合機能および 特異性を保持しているその他のものなどの断片を包含する。本発明では、任意の哺乳動物種のモノクローナル抗体が使用され得る。しかし、実際、モノクローナル抗体の作製に必要なハイブリッド細胞株または ハイブリドーマの作製に用いるためのラット細胞株または マウス細胞株の入手し易さのため、抗体は通常ラットまたは マウス起源である。
【００９０】
本明細書において、「ヒト抗体」という用語は、免疫グロブリンのフレームワーク領域がヒト免疫グロブリン配列に由来することを意味する。
【００９１】
本明細書において、「単鎖抗体断片」（ｓｃＦｖ）という用語は、結合抗体の結合ドメイン（重鎖および軽鎖の両方）を決定し、結合機能の保存を可能にする連結部分を付加することにより作製された抗体を指す。これは、基本的には、抗原への結合に必要な部分のみを有する、徹底的に短縮された抗体を形成する。単鎖抗体の決定および構築は、Ｌａｄｎｅｒ他に付与された米国特許第４，９４６，７７８号に記載されている。
【００９２】
本発明の「成分Ｂ」は、マクロファージのＭ１表現型の分化に関わるシグナル経路（例えば、ＮＦ−κＢ経路または ＳＴＡＴ１経路）と相互作用する、タンパク質、化学小分子、ＤＮＡオリゴヌクレオチド、または ＲＮＡオリゴヌクレオチドを意味する。本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ｂは、配列番号３４〜４４（図１６）のポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列を有するタンパク質によって表される、マクロファージ調節タンパク質からなる群から選択される。
【００９３】
「標的細胞」という用語は、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａが能動的または受動的に結合する細胞外表面構造を保有する細胞を指す。したがって、標的細胞は、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の成分Ａが結合可能な細胞である。標的細胞はまた、成分Ａが結合すると本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を内部移行する能力を特徴とする。標的細胞はまた、それらの炎症促進性（Ｍ１またはＭ１様）分化状態を特徴とする。
【００９４】
「可溶性」という用語は、組換えにより発現させた場合、特にタンパク質精製において、高収率を可能にする、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）が溶液中に留まる能力を指す。「可溶性」という用語はまた、標的細胞／組織に特異的に結合するまでの、生物内の流体系における免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の状態も指す。この用語はまた、任意の種類の取込み小胞から放出された後の細胞内での免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の状態も指す。
【００９５】
「内在性」という用語は、所与の標的細胞の周囲／環境中における免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の局在を指す。
【００９６】
「合成」という用語は、天然には見出されない人工の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を指す。この用語はまた、「組換え」の意味を含むか、またはその意味からなる。
【００９７】
「組換え」という用語は、分子生物学の公知の方法のいずれかによる、分子の調製、特に異なる供給源に由来する分子の共有結合化を指す。本発明において、「組換え」という用語は特に、分子生物学の公知の方法のいずれか、例えば単鎖抗体の作製による、調節活性を有するタンパク質への抗体部分の融合を指す。
【００９８】
抗体部分および調節活性を有するタンパク質を含むか、またはこのタンパク質からなる、組換え免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）（この場合は融合タンパク質）をコードする組換えＤＮＡ分子は、組換えにより発現される。このようにして生産された組換え免疫調節性融合タンパク質は、この目的に適した組換えＤＮＡ発現技術分野で公知の任意の方法によって単離されてもよい。
【００９９】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、可溶性、内在性、合成および／または組換えにより生産された免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）であってもよい。
【０１００】
「誘導体」という用語は、その特徴的活性、すなわち結合活性または 微小管安定化活性を保持している、変異タンパク質または 改変されたタンパク質を指す。恒常的に活性な誘導体が特に好ましい。誘導体という用語は、少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失、付加、単一ドメインの交換、または 少なくとも１つのアミノ酸の少なくとも１つの修飾を有するタンパク質を含むか、または これらからなる。好ましくは、誘導体は、２０個のそのような変化、より好ましくは１０個のそのような変化、最も好ましくは１〜５個のそのような変化を有する。起こり得る修飾は、リン酸化、アセチル化、メチル化、プレニル化、および硫酸化である。
【０１０１】
本明細書において、「ベクター」という用語は、ＤＮＡ形態およびＲＮＡ形態の、プラスミド、コスミド、ファージ、ファージミド、それらの誘導体、または ウイルスを含むか、または これらからなる。ベクターは、調節配列およびコード配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１０２】
組換え免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）が単鎖抗体−毒素部分融合ポリペプチドである、「組換え免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする組換え遺伝子の発現」という用語は、そのような免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする核酸または ベクターを用いた宿主細胞の形質転換および ／または 遺伝子導入、ならびに 大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの細菌、および ／または 出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの酵母、および ／または ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＨＫ細胞、２９３Ｔ細胞、および ＭＤＣＫ細胞などの株化された哺乳動物細胞株または 昆虫細胞株、および ／または ヒト細胞、非ヒト脊椎動物細胞などの初代細胞、および ／または 昆虫細胞などの無脊椎動物細胞の群から選択される前記宿主細胞の培養、ならびに 最終的に組換えタンパク質、すなわち組換え免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）が生成する、対応するｍＲＮＡの合成および 翻訳、を意味する。より具体的には、「組換え免疫調節融性合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする組換え遺伝子の発現」という用語は、以下のステップを含むか、またはこれらのステップからなる。
【０１０３】
適切な調節エレメント、特に細胞宿主のポリメラーゼによって認識されるプロモーターの制御下に、融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列が挿入された組換えベクターを用いた、適切な細胞宿主の形質転換。原核生物宿主の場合、融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列に適切なリボソーム結合部位（ＲＢＳ）も先行して、前記細胞宿主中における翻訳を可能にする。真核生物宿主の場合、任意の人工シグナル配列またはプレ／プロ配列を付与してもよく、天然シグナル配列を使用してもよい。形質転換された細胞宿主は、前記挿入断片の発現が可能な条件下で培養される。
【０１０４】
本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）、特に可溶性の、内在性免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、代表的な成分Ａを成分Ｂの１つと化学的に連結することにより作製することもできる。当業者は、２つのタンパク質を化学的に自由に組み合わせる多くの方法を有する。例えば、成分Ａおよび 成分Ｂを直接結合させることができるが、結合反応および 結合されるタンパク質を考慮した場合に当業者に知られる理由のため、２つの成分の間に「スペーサー」が付与される。２つのタンパク質間のスペーサーは、２つのタンパク質がある程度離れたままになり、例えば２つの成分間に起こり得る立体相互作用が減少するので、有利である。
【０１０５】
「追加成分Ｓ」という用語は、ＡおよびＢを含むか、またはこれらからなる免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の付加的成分を指す。追加成分Ｓは、免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の効率的な製造を可能にするおよび ／または有効性を改変する、以下の特徴および 特性を免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）に付与する。
・ 標的細胞中へのマクロファージ調節タンパク質の移行（例えば、移行ドメイン、膜転移ペプチド（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、両親媒性配列）
・ 成分Ｂの細胞内活性化／分離（細胞内プロテアーゼ）
【０１０６】
したがって、追加成分Ｓは、他の文献［１７、１８］で例示されているように、移行ドメイン、膜転移ペプチド、両親媒性配列、および細胞内プロテアーゼのコンセンサス配列の群から選択される。
【０１０７】
本発明はさらに、本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードするか、または 免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を作製するための個々の成分をコードする、ＤＮＡおよび／または ＲＮＡなどの核酸分子、あるいは ベクターに関する。本明細書では、ヒト起源の真核細胞における組換え免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする核酸の発現の実現可能性、およびヒト起源の真核細胞における微小管との相互作用のための特異的物質として免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）を使用することの実現可能性の実証に成功した。このことは、本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする核酸が、非生殖系列遺伝子治療アプローチにも適していることを示唆している。当業者は、治療対象の種々の疾患に関連する遺伝子治療的介入の種々の態様および可能性を認識することができる。
【０１０８】
さらに、本発明に係る核酸分子または ベクターを用いた形質転換および／または 遺伝子導入あるいは その付加の後に、本発明に係る完全な免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）または その個々の成分を合成する、細胞または インビトロ翻訳系も特許請求される。
【０１０９】
本発明に係る細胞または 生物は、原核生物起源、特に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ、Ｓ．ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ、Ｍａｒｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．に由来するか、真核生物起源、特にＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｓｐ．、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ、初代もしくは 培養哺乳動物細胞、真核細胞株（例えば、ＣＨＯ、Ｃｏｓ、または ２９３）、または 植物（例えば、Ｎ．ｔａｂａｃｕｍ ）に由来する。
【０１１０】
本発明はさらに、本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）、および ／または 本発明の免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする核酸もしくは ベクターを含むか、または この免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）、および ／または 核酸もしくは ベクターからなる薬剤に関する。通常は、本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）は、生理学的に許容可能な剤形で投与される。これらには、例えば、Ｔｒｉｓ、ＮａＣｌ、リン酸バッファー、および特に認可されたタンパク質安定剤が添加されていることを特徴とするバッファー系などの全ての認可されたバッファー系が含まれる。投与は、特に、非経口投与、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、腫瘍内投与、経鼻投与により、および経粘膜投与により行われる。
【０１１１】
投与される本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）の投与量は、第Ｉ相臨床試験（用量漸増試験）によって、新たに治療される各疾患における各投与について確立 されなければならない。
【０１１２】
本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）をコードする核酸またはベクターは、生理学的に許容可能な剤形で投与されることが有利である。これらには、例えば、Ｔｒｉｓ、ＮａＣｌ、リン酸バッファー、ならびに 特に使用される核酸および ／またはベクターに対する認可された安定剤が添加されていることを特徴とするバッファー系をなどの全ての認可されたバッファー系が含まれる。投与は、特に、非経口投与、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、腫瘍内投与、経鼻投与により、および経粘膜投与により行われる。
【０１１３】
したがって、本発明に係る免疫調節性融合タンパク質（ＩＦＰ）、それをコードする核酸分子、および／または 細胞もしくは インビトロ翻訳系は、慢性炎症性疾患を治療するための薬剤の製造に用いることができる。
【０１１４】
本発明はさらに、例として、Ｍ１に分化したマクロファージ上で発現増加しているＣＤ６４への結合に特異的なＨ２２（ｓｃＦｖ）との融合物として選択された、マクロファージ調節タンパク質候補（Ｃ／ＥＢＰβ）のクローニング、および大腸菌におけるこの免疫調節性融合タンパク質の発現により説明される。アフィニティー精製後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、続いてクーマシー染色および ウエスタンブロッティングにより、得られたタンパク質の同一性および 純度を確認した。フローサイトメトリーにより特異的結合を確認した。ＣＤ６４をゲートウェイサンプルとして用いて、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβが炎症促進性Ｍ１マクロファージを抗炎症性Ｍ２様表現型に転換させる可能性をインビトロで実証した。総合すると、これらの結果は、免疫調節性融合分子を用いたＭ１マクロファージの適切な表面受容体のターゲティングが、大部分の慢性炎症性疾患に対する新規介入戦略の開発に有望なアプローチであることを示唆している。
【０１１５】
以下に、非限定的な例を用いて本発明をさらに説明する。
【実施例】
【０１１６】
分化マクロファージの表現型の特性評価
ヒトＣＤ６４（ｈＣＤ６４ｔｇ）を発現し、ＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ（Ｍ１）またはＩＬ−４（Ｍ２）による刺激によってインビトロで分化する、トランスジェニックマウスのマクロファージ上の複数の表面タンパク質の相対的発現レベルを分析した。ヒトＦｃγＲＩ（ｈＣＤ６４）、ＬＰＳの共受容体（ＣＤ１４）、ＭＨＣＩ、およびＭＨＣＩＩを含む８種の受容体がＭ１マクロファージにおいて発現増加していることが見出された（図１ｂ）。対照 的に、Ｍ２マクロファージは、ｈＣＤ６４および ＣＤ１４の両方をより低いレベルで発現していたが、マンノース受容体（ＣＤ２０６）および マクロファージガラクトース型Ｃ型レクチン（ＣＤ３０１）を含む他の９種の受容体をＭ１マクロファージより高いレベルで発現していた（図１ｂ）。さらに、文献から適切なマーカーを選択し、ヒトマクロファージ上での表面マーカーの発現プロファイルを調べた。ヒトＭ１マクロファージにおけるＣＤ６４および ＣＤ１４の発現増加はマウス細胞と同様であり、ヒトＭ２マクロファージもまた、ＣＤ２０６および ＣＤ３０１レベルの上昇ならびに 低いレベルのＣＤ６４および ＣＤ１４を示した（図１ｃ）。これらのマーカーのいくつかは、既にＭ１マクロファージまたはＭ２マクロファージに割り当てられていたが、インビトロおよび インビボでＭ１および Ｍ２の亜集団間の区別を可能にするマーカーのセットが同定された（図１ｂおよび 図１ｃ）。
【０１１７】
分化により、可溶性サイトカインの発現の変化もまた誘導された。マウスおよびヒトのＭ１マクロファージはいずれも炎症促進性サイトカインＩＬ−１２を分泌したが、この分子はＭ２マクロファージでは産生されなかった。ＩＬ−６およびＴＮＦ−αもまたＭ１マクロファージで大きく発現増加していたが、一方、マウスＭ２マーカーであるＲＥＬＭ−αはＭ２マクロファージでＭ１マクロファージより２倍以上豊富であった。回復を仲介することが知られている抗炎症性サイトカインＩＬ−１０［１９］は、両方のマクロファージ集団において同等なレベルで検出された（図１ｄ）。
【０１１８】
インビトロでのＭ１マクロファージの除去
Ｍ１およびＭ２の発現プロファイルを明らかにし、Ｍ１マクロファージによるｈＣＤ６４の優先的発現を確認した後、ｈＣＤ６４のターゲティングによるこれらの細胞の操作について調べた。これまでに、抗炎症性Ｍ２細胞集団に悪影響を与えることなくＭ１マクロファージをターゲティングすることは不可能であることが実証されている。ターゲティング成分としてｈＣＤ６４特異的単鎖抗体であるＨ２２（ｓｃＦｖ）を用いることで、細菌の免疫毒素であるＨ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’がｈＣＤ６４ｔｇ  Ｍ１マクロファージを選択的に死滅させ、Ｍ２および非分化集団のいずれにも影響を与えないことが示された。毒素を用いずにＨ２２（ｓｃＦｖ）単独ではマクロファージ集団のいずれにも影響を与えなかった（図２）。
【０１１９】
これに続き、ヒトマクロファージ亜集団に対しても免疫毒素を試験し、同じ結果を得た。さらに、２種の完全ヒトＨ２２（ｓｃＦｖ）をベースとした細胞溶解性融合タンパク質であるＨ２２（ｓｃＦｖ）−アンジオゲニン（Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）およびグランザイムＢ−Ｈ２２（ｓｃＦｖ）（Ｇｒａｎｚｙｍｅ  Ｂ−Ｈ２２（ｓｃＦｖ））もまた、ヒトＭ１マクロファージを選択的に死滅させ、細胞毒性の特異性がエフェクタータンパク質とは無関係であることが示された。Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’とのインキュベート後にアネキシンＶ−ＦＩＴＣを用いて染色することにより、作用様式がＭ１マクロファージにおけるアポトーシスの選択的な誘導であることが確認された（図３）。
【０１２０】
慢性皮膚炎症のモデルマウスにおけるＭ１マクロファージの除去
以前に確立 されているｈＣＤ６４ｔｇマウスにおけるラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）誘導皮膚炎症モデルを用いて、Ｍ１炎症性マクロファージの特異的除去をインビボで確認した。ＳＬＳの局所投与により、Ｍ１マクロファージが優位である局所的皮膚炎症が生じた。Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’による局所的皮内処理により、ｈＣＤ６４＋ＣＤ１４＋（Ｍ１）マクロファージが減少したが、ＣＤ２０６＋ＣＤ３０１＋（Ｍ２）マクロファージは影響されないままであった（図４ａおよび図４ｂ）。炎症部位からＭ１マクロファージを除去することにより、Ｍ２に偏った微小環境がもたらされ、Ｍ１／Ｍ２比が全体的に抗炎症性状態へとシフトした（図４ｃ）。これは、Ｍ１特異的表面マーカーおよび Ｍ２特異的表面マーカーの全ての組合せ（ｈＣＤ６４／ＣＤ２０６、ｈＣＤ６４／ＣＤ３０１、ＣＤ１４／ＣＤ２０６、および ＣＤ１４／ＣＤ３０１）について確認された。
【０１２１】
アトピー性皮膚炎患者由来の慢性炎症皮膚生検材料のエクスビボ処理
本発明者らの発見の潜在的な臨床的意義を調べるために、ヒトアトピー性皮膚炎患者の病変皮膚から取った皮膚生検材料を、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’を用いてエクスビボで処理した。ヘマトキシリン・ エオシン（Ｈ＆Ｅ）組織染色により、炎症細胞の存在が確認された（図５ａ）。モデルマウスから得られたデータと一致して、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’はＭ１マクロファージ（ＣＤ１４＋）の数を減少させ、Ｍ２マクロファージ（ＣＤ２０６＋および ＣＤ３０１＋）の数を有意に増加させることに有効であることが示された（図５ｂおよび 図５ｃ）。したがって、Ｍ１／Ｍ２比は、特異的マーカーの両方の組合せ（ＣＤ１４／ＣＤ２０６およびＣＤ１４／ＣＤ３０１）により確認されるように、Ｍ２集団へとシフトした（図５ｄ）。表面受容体に加えて、可溶性サイトカイン産生に対するＨ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’の影響も分析した。ヒト皮膚生検材料由来の上清を、処理の前後で、関連するサイトカインの存在について分析した。ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、および ＩＬ−４の濃度は検出限界未満であったが、炎症促進性サイトカインＩＬ−６および 抗炎症性サイトカインＩＬ−１０のレベルを測定することができた。表面受容体の分布と一致し、ＩＬ−６レベルはＨ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’処理の２４時間後に急激に低下したが、ＩＬ−１０レベルは有意に上昇した。ＩＬ−１０は、非処理対照 では検出されなかった（図５ｅ）。
【０１２２】
分化マクロファージの表現型の可塑性
表現型の可塑性および機能の可塑性は分化マクロファージの重要な特徴であり、マクロファージのＭ１からＭ２への表現型の転換が病的に不能であると、慢性炎症が起こり得る［２０］。初期刺激の逆転（Ｍ１に対してＩＬ−４、Ｍ２に対してＩＦＮ−γ）によるマウス腹腔マクロファージの再分化能を分析し、本発明者らの特異的表面マーカーのパネルを用いて、表現型転換の証拠が見出された。Ｍ１分化マクロファージは最初、低レベルのＭ２マーカー（ＣＤ２７３、ＣＤ２０６、およびＣＤ３０１）のみを発現したが、Ｍ１刺激を除去してＭ２刺激で置換した後、それらの発現が強力に誘導された。Ｍ２分化マクロファージをＭ１刺激に曝した場合には逆のプロセスが観察された（図６ａ）。それぞれＩＦＮ−γおよびＩＬ−４により誘導された表面受容体発現の転換により、細胞がそれらの受容体プロファイルを調節することにより反応するという証拠が得られた。しかし、慢性炎症中のＭ１マクロファージの重大且つ有害な活性は炎症促進性サイトカインの産生であり、これは、例えばＴｈ１細胞を活性化することにより、炎症反応を増幅する。そこで、本発明者らは、再分化したマクロファージ由来の上清を、重要な可溶性サイトカインであるＩＬ−１２およびＩＬ−６について再度分析した。Ｍ１細胞によるＩＬ−１２の産生は、ＩＬ−４を用いた再分化により完全に抑制することができた。ＩＬ−６レベルも、程度ははるかに小さいが、低下した。対照 的に、ＩＦＮ−γ刺激によりＭ２細胞においてＩＬ−１２およびＩＬ−６の発現を強く誘導することができた（図６ｂ）。
【０１２３】
分化マクロファージの可逆的感受性
本発明者らはさらに、免疫毒素であるＨ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’に対する分化マクロファージの感受性を逆転することにより、それらの機能的可塑性を実証することができた。本来感受性であるＭ１マクロファージをＩＬ−４で刺激するとＨ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’に対する抵抗性が生じ、一方、本来抵抗性であるＭ２マクロファージをＩＦＮ−γで刺激すると、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’に対する感受性が生じた（図６ｃ）。
【０１２４】
Ｍ１マクロファージの標的調節
Ｍ１マクロファージを非炎症性表現型へと転換できるタンパク質候補の選択は、炎症促進性サイトカインの遺伝子転写の活性化に決定的に関与するタンパク質の同定に基づく。 ２つの中心的存在であるＮＦ−κＢおよびＳＴＡＴ１がこのプロセスの制御に関与している。これらのタンパク質は複雑なシグナル伝達経路の一部であり、核ＮＦ−κＢおよびホスホリル化（活性化）ＳＴＡＴ１の濃度低下は炎症の可能性の低下に関連付けられている。これらの因子の制御に介入するために、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質β（Ｃ／ＥＢＰβ）をＭ１マクロファージの潜在的免疫調節物質として選択した。
【０１２５】
Ｃ／ＥＢＰβは、受容体依存性エンドサイトーシスを介さずに細胞に侵入することができない。したがって、Ｃ／ＥＢＰβをＨ２２（ｓｃＦｖ）と遺伝子的に融合し、これによりＣＤ６４を介した融合タンパク質の取込みが可能となった。Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβをｐＭＴベクター（図７および図８）にクローニングし、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換し、Ｂａｒｔｈ他［２１］に記載されているペリプラズムのストレス発現プロトコル（ｐｅｒｉｐｌａｓｍｉｃ  ｓｔｒｅｓｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）を用いて発現させた。１回の固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）精製ステップおよび 分子ふるいクロマトグラフィー（ＳＥＣ）の後、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβの濃縮度および 同一性を、それぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥ、続いてクーマシーブリリアントブルー染色またはウエスタンブロッティングにより決定した（図９ａおよび 図９ｂ）。フローサイトメトリーにより、マウス腹腔マクロファージへの特異的結合活性が確認された（図１０）。調節実験により、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβに媒介される、Ｍ１マクロファージにおけるＩＬ−１２産生の強い発現低下が示された（図１１）。さらに、Ｃ／ＥＢＰβは、Ｍ０マクロファージおよびＭ１マクロファージにおいて抗炎症性ＩＬ−１０の産生を誘導した（図１２）。ＩＬ−１２とは対照 的に、ＩＬ−６（図１３）、ＴＮＦ−α（図１２および １４）などの他の炎症促進性サイトカインは、Ｍ１マクロファージにおけるレベル低下ならびに Ｍ０マクロファージおよび Ｍ２マクロファージにおけるレベル上昇を示した。しかし、これらのサイトカインは、Ｔ細胞によって主に産生されるので、Ｍ１マクロファージに対する適切な可溶性マーカーであるとはいえない。表面受容体のレベルでは、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβがＭ１マクロファージに軽微な影響を与えた。興味深いことに、Ｍ２マクロファージをＨ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβとインキュベートすると、ハイブリッドな表現型ＣＤ１４ｈｉｇｈ／ＣＤ３６ｈｉｇｈ／ＣＤ２０６ｈｉｇｈ／ＣＤ３０１ｌｏｗがもたらされた（図１４）。ＣＤ６４を介したＭ１マクロファージ調節により、慢性炎症中の不均衡なＭ１／Ｍ２比への介入方法についての原理が証明された。
【０１２６】
Ｍ１標的治療の潜在的な適応症
本明細書に記載のコンストラクトは、以下の疾患に適用され得る。すなわち、関節リウマチ、関節炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、乾癬、多発性硬化症、１型および２型糖尿病、アトピー性皮膚炎、慢性創傷、心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、急性心筋梗塞、末梢血管疾患）である。
【０１２７】
方法
倫理声明
ヒト皮膚生検材料は、ドイツ、アーヘン大学病院の倫理委員会の指針に従って、ドイツ、アーヘンのＳａｎｋｔ  Ｆｒａｎｚｉｓｋｕｓ病院で採取された。本研究は委員会に特別に承認された。書面によるインフォームド・ コンセントを患者から得た。
【０１２８】
ヒト患者材料
本発明者らは、アトピー性皮膚炎患者由来の１つの皮膚生検標本を分析した。標本（直径４ｍｍ）は炎症領域から採取した。標本を４片に分け、１μＭのＨ２２（ｓｃＦｖ）−ＥＴＡ’を添加した、１０％ ウシ胎児血清、５０μｇ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（ドイツ、インビトロジェン社）を補足した完全ＲＰＭ Ｉ１６４０培地中で２４時間または４８時間インキュベートした。対照 標本を、免疫毒素非依存性のマクロファージの死滅または血管外遊走を決定するためだけに、完全培地中で２４時間インキュベートした。１片の組織は液体窒素中で即座に凍結して、免疫組織化学による分析まで−８０℃で保存した（「非処理」と表記）。
【０１２９】
動物およびＳＬＳ誘導皮膚炎症モデル
動物実験は、地域の動物管理使用審査委員会による承認を受けた。全ての動物は、ドイツ動物保護法、第８条第１項の規定、および２０１１年に国立衛生研究所により発行された実験動物の管理と使用に関する指針（ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｒｅ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌ）に従ってヒトの処置を受けた。全ての実験において、ヒトＣＤ６４（ｈＣＤ６４）を発現する６週齢超のヌード無毛トランスジェニック雄Ｃ５７／Ｂｌ６／ＳＫＨ１−Ｅマウスを用いた。このモデルマウスは、ヒトにおける状態と非常に類似していることが示されている［２２］。他の文献［２３］に記載されているように、慢性皮膚炎症が誘発された。要するに、５％ （ｗ／ｖ）ＳＬＳのＰＢＳ溶液を、各マウスの両側腹部の１．５×１．５ｃｍ皮膚表領域に連続１１日間塗布した。免疫毒素投与のために、動物をイソフルランで麻酔した。２０μｌの１μＭ免疫毒素またはＰＢＳ対照 を皮内注射で３回対側投与した。その後、動物を屠殺し、皮膚生検材料を採取し、液体窒素中で急速凍結し、分析まで−８０℃で保存した。
【０１３０】
マクロファージの単離およびインビトロ分化
１ｍｌの２％ （ｗ／ｖ）ＢｉｏＧｅｌ  Ｐ−１００（ドイツ、ＢｉｏＲａｄ社）の腹腔内注射によりｈＣＤ６４トランスジェニックマウスにおいて腹腔マクロファージを誘導した。３日後、マウスを屠殺し、５ｍｌの冷ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いた腹腔洗浄によりマクロファージを単離した。赤血球の溶解後、Ｔ７５組織培養フラスコを用いて完全培地中で２〜４時間、０．５〜１．０×１０６細胞／ｍｌの濃度でマクロファージを培養した。冷ＰＢＳを用いた洗浄により非接着細胞を除去し、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡの冷ＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）と氷上で１０分間インキュベートすることによりマクロファージを剥離した。その後、適切な数の細胞をアッセイプレートに播種し、一晩インキュベートした。その後、Ｍ１マクロファージを生成するために１００Ｕ／ｍｌ  ＩＦＮ−γ（ドイツ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）および１μｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（ドイツ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）で２４時間細胞を刺激するか、またはＭ２マクロファージを生成するために２０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−４（ドイツ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）で２４時間刺激した。非分化マクロファージを対照 として用いた。フィコール（ドイツ、ＶＷＲ社）を用いた勾配遠心分離によりバフィーコートからヒト単球を単離し、前述したように一晩培養した。適切な刺激後、細胞を７２時間インキュベートした。その後、刺激を初期量の５０％ で２４時間ブーストし、マクロファージを機能的アッセイに用いた。
【０１３１】
分化マクロファージのインビトロ可塑性
分化マクロファージの可塑性を調べるために、細胞を逆刺激に２４時間曝した。再分化の前に、初期刺激を含む培地を交換し、細胞を新鮮な培地で１回洗浄した。表面発現および サイトカインプロファイルをそれぞれフローサイトメトリーおよび ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｉｘで分析した。
【０１３２】
フローサイトメトリー
マクロファージ上での細胞表面受容体の発現をフローサイトメトリーにより分析した。細胞を、２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．５％ （ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）中のフルオロフォア標識抗体と氷上で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳで２回洗浄した。その後、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ドイツ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）を用いて蛍光を分析した。以下の抗体を用いた。マウス抗ヒトＣＤ６４［１０．１］：ＦＩＴＣ；ラット抗マウスＣＤ３０１：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８；ラット抗マウスＣＤ２０６：ＦＩＴＣ；ハムスター抗マウスＣＤ１１ｃ：ＲＰＥ；ラット抗マウスＣＤ２０４：ＦＩＴＣ（全て、ドイツ、Ｓｅｒｏｔｅｃ社）；マウス抗マウスＣＤ２８４：ＰＥ；マウス抗ヒトＣＤ２８４：ＰＥ；ラット抗マウスＣＤ２７３：ＰＥ；マウス抗ヒトＣＤ２７３：ＰＥ；ラット抗マウスＣＤ１４：ＦＩＴＣ；ラット抗マウスＣＤ２０５：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８；マウス抗ヒトＣＤ２００Ｒ：ＰＥ；マウス抗マウスＭＨＣＩ：ＦＩＴＣ；ラット抗マウスＭＨＣＩＩ：ＦＩＴＣ；マウス抗ヒトＣＤ２０６：ＰＥ；ラット抗マウスＣＤ２５：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８；ラット抗マウスＣＤ３６：ＰＥ；ラット抗マウスＣＤ３９：ＰＥ（全て、ドイツ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）；マウス抗ヒトＣＬＥＣ１０Ａ／ＣＤ３０１：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ドイツ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）。マウス抗ラットＩｇＧ：ＦＩＴＣ（ドイツ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）は、ＭＯＭＡ−１、ＭＯＭＡ−２、およびＥＲＴＲ−９（オランダ、アムステルダムのＫｒａａｌ博士の厚意による提供）に対する二次抗体として用いた。ラットＩｇＧ２ａ  Ｋアイソタイプ対照 は、ＰＥまたはＦＩＴＣで標識した（いずれも、ドイツ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）。結果を以下のように計算した相対蛍光強度として表す。相対的表面発現＝（ＭＦＩ抗体−ＭＦＩアイソタイプ対照 ）／ＭＦＩアイソタイプ対照 。Ｍ１分化マクロファージおよびＭ２分化マクロファージ間の比較は、ｌｏｇ（Ｍ１／Ｍ２）またはｌｏｇ（Ｍ２／Ｍ１）として表す。全ての実験は３連（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）で行った。
【０１３３】
サイトカインＥＬＩＳＡおよび ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｉｘ
ＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α、および ＩＬ−１０などの可溶性サイトカインの産生を、製造業者の説明書（ドイツ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）に従ってＦｌｏｗＣｙｔｏｍｉｘにより測定した。サンドウィッチ酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によりマウスＲＥＬＭ−αの濃度を決定した。そのため、高結合９６ウェル平底マイクロタイタープレート（ドイツ、ＶＷＲ社）を、１μｇ／ｍｌのウサギ抗マウスＲＥＬＭ−α捕捉抗体（ドイツ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）のＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶液で４℃にて一晩コーティングした後、２％ （ｗ／ｖ）ＢＳＡ（ドイツ、Ｓｉｇｍａ社）のＰＢＳ溶液で室温にて２時間ブロッキングした。全ての中間洗浄ステップは、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０）を用いて５分間、５回行った。標準的なサンプルおよび上清をプレートに総容量１００μｌでアプライし、４℃で一晩インキュベートした。捕捉されたサイトカインは、０．５μｇ／ｍｌのビオチン化ウサギ抗マウスＲＥＬＭ−α（ドイツ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）と室温で１時間インキュベートすることにより検出した。結合抗体は、濃度１μｇ／ｍｌの西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合型ストレプトアビジン（米国、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）を室温で３０分間用いて検出した。その後、ウェルをＰＢＳＴで十分に洗浄し、発色が観察されるまでＴＭＢ基質（ドイツ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）とインキュベートした。１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４で染色反応を停止し、Ｅｐｏｃｈマイクロプレート分光光度計（ドイツ、Ｂｉｏｔｅｋ社）を用いてＥ４５０〜５７０ｎｍでシグナルを検出した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を用いてデータを分析した。全ての実験は３連で行った。
【０１３４】
免疫組織化学
Ｃｒｙｏｓｔａｔ  ＣＭ  ３０５０（ドイツ、Ｌｅｉｃａ社）で生検標本を８μｍ切片に切断し、スーパーフロストスライド（ドイツ、Ｍｅｎｚｅｌ社）にマウントした。４８〜７２時間乾燥した後、乾燥アセトンを用いて１０分間切片を固定し、風乾した。一次抗体とのインキュベーションを、マウス抗ヒトＣＤ６４［１０．１］：ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、ドイツ、１：４０）、マウス抗ヒトＣＤ１４−ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、ドイツ、１：４０）、ラット抗マウスＣＤ１４−ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、ドイツ、１：４０）を含む１％ （ｖ／ｖ）正常マウス血清のＰＢＳ溶液、またはマウス抗ヒトＣＤ２０６、マウス抗ヒトＣＤ３０１、ラット抗マウスＣＤ２０６、およびラット抗マウスＣＤ３０１を含む１％ （ｖ／ｖ）正常ヤギ血清のＰＢＳ溶液を用いて４℃で一晩行った。スライドをＰＢＳＴで５分間３回洗浄し、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）結合型ヒツジ抗ＦＩＴＣ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、ドイツ、１：４００）を含む１％ （ｖ／ｖ）ヒツジ血清のＰＢＳ溶液（３０分間）またはＡＰ結合型ヤギ抗ラット抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、ドイツ、１：４００）を含む１％ （ｖ／ｖ）ヤギ血清のＰＢＳ溶液（３０分）とインキュベートした。ＰＢＳＴで２回、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（０．１Ｍ、ｐＨ８．５）で１回洗浄した後、基質としてナフトールＡＳ−ＢＩリン酸塩（ナトリウム塩、５０ｍｇ／１００ｍｌ；ドイツ、Ｓｉｇｍａ社）、色素原として０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．５に溶解したニューフクシン（１０ｍｇ／１００ｍｌ；米国、Ｍｅｒｃｋ社）を用いてピンク／赤色染色を得、ＡＰ活性を検出した。反応混合物に０．３５ｍｇ／ｍｌのレバミソール（ドイツ、Ｓｉｇｍａ社）を加えることで内在性ＡＰ活性を阻害した。スライドをヘマトキシリンで軽く対比染色した。
【０１３５】
細胞生存率アッセイ
前述のように［２４］、ＸＴＴから水溶性橙色ホルマザン色素への変換を測定することにより、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）をベースとした免疫毒素またはヒト細胞溶解性融合タンパク質の細胞毒性効果を評価した。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を用いて、非処理対照 細胞と比べてタンパク質合成を５０％ 低減するのに必要な濃度（ＩＣ５０）を算出した。全ての実験は３連で行った。３つの亜集団（Ｍ１、Ｍ２、および非分化）は、様々なスケールの細胞生存率をもたらす多様な代謝活性を示した。
【０１３６】
ＰＬＴＰおよびＨ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβのオープンリーディングフレームの構築
Ｈ２２（ｓｃＦｖ）を種々のマクロファージ調節タンパク質（ＭＭＰ）と共にオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）にクローニングした。ＰＣＲ、続いてＨ２２（ｓｃＦｖ）の配列を既に含むＮｏｔＩ／ＡｓｃＩ線状化ｐＭＴベクター中へのライゲーションにより、３′核移行配列（ＮＬＳ）ならびに ５′−ＮｏｔＩおよび ３′−ＡｓｃＩ制限酵素部位でＣ／ＥＢＰβのＯＲＦを改変した（図２３）。試験的な消化およびシークエンシングによりクローニングの成功を確認した。ＭＭＰの例示的なＯＲＦを配列により記載する。図２７の配列番号１〜１７のリストを参照のこと。 
【０１３７】
組換えＭＭＰの発現および精製
前述のように［２１］、適合する溶質の存在下でのペリプラズムのストレス発現プロトコルを用いて大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｅ．ｃｏｌｉ）中でＭＭＰを発現させた。要するに、形質転換後、細菌をＯＤ１．６まで成長させ、次いで、５００ｍＭ  Ｄ−ソルビトール、１０ｍＭベタイン一水和物、および４％ （ｗ／ｗ）ＮａＣｌでストレス誘導した。２６℃で３０分間振盪（１８０ｒｐｍ ）しながらインキュベートした後、２ｍＭ  ＩＰＴＧでタンパク質発現を誘導した。誘導の１８時間後に、遠心分離（４，０００×ｇ、１０分間、４℃）により細菌を回収し、−８０℃で一晩凍結した。凍結ペレットを４℃の調製バッファー（７５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０％ （ｖ／ｗ）グリセロール、ｐＨ８．０、コンプリートプロテアーゼインヒビターカクテル（ドイツ、Ｒｏｃｈｅ社）を含む）中に再懸濁し、２００Ｗで６０秒間の超音波処理を５回行った。遠心分離（２４，０００×ｇ、２０分間、４℃）により細胞片を除去し、ＥＤＴＡを除去するためにタンパク質調製物をＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して４℃で一晩透析した。製造業者の説明書に従い、Ｎｉ−ＮＴＡセファロース（ドイツ、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いた固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、およびＢｉｏ−Ｐｒｅｐ  ＳＥ−１００／１７（ドイツ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）カラムを用いたＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対する分子ふるいクロマトグラフィー（ＳＥＣ）によりＭＭＰを精製した。
【０１３８】
ＭＭＰのＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび ウエスタンブロット分析
前述のように［１７］、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）および ウエスタンブロットにより純度および 量を評価した。クーマシー染色後にＡＩＤＡソフトウェアを用いたデンシトメトリーにより、ウシ血清アルブミン標準との比較でタンパク質濃度を定量し、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（ドイツ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）により検証した。ウエスタンブロットによるＭＭＰの検出は、アルカリホスファターゼ結合型抗マウスＩｇＧ  ｍＡｂ（１：５，０００；ドイツ、Ｓｉｇｍａ社）とマウス抗Ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ（１：５，０００；ドイツ、Ｑｉａｇｅｎ社）を組み合わせて用い、次いで、１ｍｇ／ｍｌ  Ｆａｓｔ−Ｒｅｄ（ドイツ、Ｓｅｒｖａ社）を添加したＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）および０．２ｍｇ／ｍｌナフトールＡＳ−Ｂｉリン酸塩（ドイツ、Ｓｉｇｍａ社）を用いて染色することにより行った。図２６に、ＩＭＡＣおよびＳＥＣによる精製後の種々のＭＭＰの１２％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（Ａ：クーマシー染色；Ｂ：ウエスタンブロット）を示す。ゲルは以下を含む：１、ＰＬＴＰ；２、Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβ。タンパク質サイズはｋＤａで示される。
【０１３９】
フローサイトメトリーによるＭＭＰの結合分析
精製ＭＭＰの細胞結合活性をフローサイトメトリーで評価した。ｈＣＤ６４トランスジェニックマウス由来のマウス腹腔マクロファージを用いて結合を試験した。したがって、細胞を、分析の２４時間前にＩＦＮ−γ（１００Ｕ／ｍｌ；ドイツ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）で刺激した。合計４×１０５個の細胞を５０〜１００ｎＭのＭＭＰと３０分間氷上でインキュベートし、次いで、０．５％ （ｗ／ｖ）ＢＳＡおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡを含むＰＢＳで洗浄した。Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβに対して、Ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（１：１００；ドイツ、Ｑｉａｇｅｎ社）を用いて氷上で３０分間細胞を染色した（図１１）。染色された細胞を前述したように２回洗浄し、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ（ドイツ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）で分析した。
【０１４０】
分化マクロファージの免疫調節
非分化マウスマクロファージを１２ウェルプレート中で３〜５×１０５個／ｍｌの細胞密度で１００ｎＭ  Ｈ２２（ｓｃＦｖ）−Ｃ／ＥＢＰβと共に２４時間培養した後、それぞれの分化刺激を与えた。さらに２４時間インキュベートした後、上清を回収して分泌型サイトカインの分析を行った。その後、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡの冷ＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）を用いて１０分間氷上で細胞を剥離させ、Ｍ１マクロファージおよびＭ２マクロファージの選択された表面マーカーの発現についてフローサイトメトリーで分析した。
【０１４１】
統計解析
ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を用いて統計解析を行った。データは、示されているように、平均値±標準偏差（ＳＤ）または平均値の標準誤差（ＳＥＭ）で表した。独立両側スチューデントｔ検定、および一元または二元配置分散分析を適宜用いて統計比較を行った。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。
【０１４２】
【表１−１】
2016527189.tif 000003
【０１４３】
【表１−２】
2016527189.tif 000004
【０１４４】
【表２−１】
2016527189.tif 000005
【０１４５】
【表２−２】
2016527189.tif 000006
【０１４６】
【表２−３】
2016527189.tif 000007
【０１４７】
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【図７】
2016527189.tif 000008
【図９Ａ】
2016527189.tif 000009
【図９Ｂ】
2016527189.tif 000010
【図１５】
2016527189.tif 000011
【図１５−１】
2016527189.tif 000012
【図１５−２】
2016527189.tif 000013
【図１５−３】
2016527189.tif 000014
【図１５−４】
2016527189.tif 000015
【図１５−５】
2016527189.tif 000016
【図１５−６】
2016527189.tif 000017
【図１５−７】
2016527189.tif 000018
【図１５−８】
2016527189.tif 000019
【図１５−９】
2016527189.tif 000020
【図１６】
2016527189.tif 000021
【図１６−１】
2016527189.tif 000022
【図１６−２】
2016527189.tif 000023
【図１６−３】
2016527189.tif 000024
【図１７】
2016527189.tif 000025
【図１７−１】
2016527189.tif 000026
【図１７−２】
2016527189.tif 000027
【図１ａ】
2016527189.tif 000028
【図１ｂ】
2016527189.tif 000029
【図１ｃ】
2016527189.tif 000030
【図１ｄ】
2016527189.tif 000031
【図２−１】
2016527189.tif 000032
【図２−２】
2016527189.tif 000033
【図３−１】
2016527189.tif 000034
【図３−２】
2016527189.tif 000035
【図４ａ】
2016527189.tif 000036
【図４ｂ】
2016527189.tif 000037
【図４ｃ】
2016527189.tif 000038
【図５ａ】
2016527189.tif 000039
【図５ｂ】
2016527189.tif 000040
【図５ｃ】
2016527189.tif 000041
【図５ｄ】
2016527189.tif 000042
【図５ｅ】
2016527189.tif 000043
【図６ａ】
2016527189.tif 000044
【図６ｂ】
2016527189.tif 000045
【図６ｃ】
2016527189.tif 000046
【図８】
2016527189.tif 000047
【図１０】
2016527189.tif 000048
【図１１】
2016527189.tif 000049
【図１２】
2016527189.tif 000050
【図１３】
2016527189.tif 000051
【図１４】
2016527189.tif 000052
【配列表】
2016527189000001.app
【国際調査報告】
2016527189.tif 000053
2016527189.tif 000054
2016527189.tif 000055