(57)【要約】  本発明は、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール (デンドロゲニンＡ)又はその薬学的に許容される塩と抗腫瘍薬を含む、がんの治療において使用するためのパーツキットに関する。さらに、本発明は、化学療法抵抗性のがんを治療するのに使用するためのデンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と抗腫瘍薬とを含む、がんの治療に使用するためのパーツキット。
【請求項２】
前記がんが、腺房腺がん、腺房細胞がん、末端黒子型黒色腫、光線角化症、腺がん、腺様嚢胞がん、腺扁平上皮がん、付属器がん、副腎遺残腫瘍、副腎皮質がん、アルドステロン分泌がん、胞巣状軟部肉腫、メラニン欠乏性黒色腫、エナメル上皮甲状腺がん、血管肉腫、アポクリンがん、アスキン腫瘍、星状細胞腫、基底細胞がん、類基底細胞がん、基底扁平細胞がん (basosquamous cell carcinoma)、胆道がん、骨がん、骨髄がん、ブドウ状肉腫、脳腫瘍、乳がん、気管支がん、気管支腺がん、気管支肺胞がん、悪性多形性腺腫、子宮頸がん、緑色腫、胆管細胞がん、軟骨肉腫、絨毛がん、脈絡叢がん、明細胞腺がん、結腸がん、結腸直腸がん、面皰がん、コルチゾール産生がん、円柱細胞がん、脱分化脂肪肉腫、前立腺導管がん、腺管がん、非浸潤性乳管がん、十二指腸がん、エクリン腺がん、胎児性がん、子宮体がん、子宮内膜間質細胞がん、類上皮肉腫、食道がん、ユーイング肉腫、外向発育がん、線維芽細胞肉腫、線維肉腫、線維性層板状がん、線維肉腫、甲状腺濾胞がん、胆嚢がん、胃腺がん、巨細胞がん、巨細胞性肉腫、骨巨細胞腫、神経膠腫、多形神経膠芽腫、顆粒膜細胞腫、頭頸部がん、血管腫、血管肉腫、肝芽腫、肝細胞がん、ヒュルトレ細胞がん腫、回腸がん、浸潤性小葉腺がん、炎症性乳がん、乳管がん、表皮内がん、空腸がん、カポジ肉腫、クルーケンベルグ腫瘍、Kulchitsky細胞がん、クッパー星細胞肉腫、大細胞がん、喉頭がん、悪性黒子黒色腫、脂肪肉腫、肝臓がん、小葉がん、非浸潤性小葉がん、肺がん、リンパ上皮腫、リンパ肉腫、悪性黒色腫、髄様がん、甲状腺髄様がん、髄芽腫、髄膜腫、メルケル細胞がん、微小乳頭がん、混合細胞肉腫、粘液がん、粘表皮がん、粘膜黒色腫、粘液脂肪肉腫、粘液肉腫、鼻咽頭がん、腎芽細胞腫、神経芽腫、結節性黒色腫、非淡明細胞型腎がん、非小細胞肺がん、燕麦細胞がん、眼内黒色腫、口腔がん、類骨がん、骨肉腫、卵巣がん、パジェットがん、膵臓がん、膵芽腫、乳頭状腺がん、乳頭がん、甲状腺乳頭がん、骨盤がん、乳頭部周囲がん、葉状腫瘍、下垂体がん、多形性脂肪肉腫、胸膜肺芽腫、原発性骨内がん腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、円形細胞肉腫、瘢痕がん、住血吸虫膀胱がん、シュナイダーがん腫、皮脂腺がん、印環細胞がん、皮膚がん、小細胞肺がん、小細胞骨肉腫、軟部組織肉腫、紡錘細胞がん、紡錘細胞肉腫、扁平上皮がん、胃がん、表在拡大型黒色腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性肉腫、終末管がん、精巣がん、甲状腺がん、移行上皮がん、管状腺がん、腫瘍形成性黒色腫、未分化がん、尿膜管腺がん、膀胱がん、子宮がん、子宮体がん、ブドウ膜黒色腫、膣がん、いぼ状がん、絨毛状がん、高分化型脂肪肉腫、ウィルムス腫瘍、又は卵黄嚢腫瘍である、請求項１に記載のパーツキット。
【請求項３】
前記がんが、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫である、請求項１に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項４】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩との組み合わせで患者に投与されない場合に前記抗腫瘍薬に対して化学療法抵抗性である腫瘍を有する患者におけるがんの治療において使用するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項５】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて患者に投与される抗腫瘍薬の用量が、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩との組み合わせで患者に投与されない場合の前記抗腫瘍薬の用量よりも少ない、前記抗腫瘍薬に化学療法感受性である腫瘍を有する患者におけるがんの治療における使用のための、請求項１又は２に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項６】
抗腫瘍薬が、DNA損傷剤、例えばカントテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、シクロホスファミド、クロラムブシル、クロルメチン、ブスルファン、トレオスルファン、若しくはチオテパ、抗腫瘍抗生物質、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン、アクチノマイシンD、マイトマイシン、ブレオマイシン、若しくはプリカマイシン、代謝拮抗剤、例えば5-フルオロウラシル、シタラビン、フルダラビン、若しくはメトトレキサート、抗有糸分裂剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、若しくはビノレルビン、又はその他の抗腫瘍薬、例えばボルテゾミブ、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、又はこれらの組み合わせ製品である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項７】
前記抗腫瘍薬がシタラビンと組み合わせたダウノルビシンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項８】
前記抗腫瘍薬がシスプラチンと組み合わせたフルオロウラシルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項９】
前記抗腫瘍薬がオールトランス型レチノイン酸と組み合わせた三酸化ヒ素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項１０】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩及び前記抗腫瘍薬の同時投与のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項１１】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩及び前記抗腫瘍薬の連続投与のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項１２】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩が、前記抗腫瘍薬の前に投与される、請求項１１に記載の使用のためのパーツキット。
【請求項１３】
化学療法抵抗性のがんを治療するのに使用するための、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
化学療法抵抗性のがんが、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、及び多発性骨髄腫である、請求項１３に記載の使用のための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
前記がんが、ダウノルビシン、シタラビン、フルオロウラシル、シスプラチン、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、ボルテゾミブ、又はこれらの組み合わせに対して化学療法抵抗性である、請求項１３又は１４に記載の使用のための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
抗腫瘍薬で治療される患者におけるがんの治療において使用するための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩であって、前記がんが前記抗腫瘍薬に対して化学療法抵抗性である、使用のための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
前記がんが、ダウノルビシン、シタラビン、フルオロウラシル、シスプラチン、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、ボルテゾミブ、又はこれらの組み合わせに対して化学療法抵抗性である、請求項１６に記載の使用のための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
前記化学療法抵抗性のがんが、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、及び多発性骨髄腫である、請求項１６又は１７に記載の使用のための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩が、がんが抵抗性である前記抗腫瘍薬の代わりに、又は該抗腫瘍薬と組み合わせて投与される、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の使用のための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの治療に関する。
【０００２】
より詳細には、本発明は、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と、抗腫瘍薬とを含む、がんの治療に使用するためのパーツキットに関する。
【０００３】
さらに、本発明は、化学療法抵抗性のがんの治療に使用するためのα-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【０００４】
がん治療としては、手術、放射線治療、及び化学療法が挙げられ、これらは単独又は組み合わせで同時に又は連続的に用いられ得る。
【０００５】
化学療法は、腫瘍の成熟及び増殖を防ぐ又は阻害する薬剤である抗腫瘍剤を用いる。抗腫瘍薬は、急速に分裂する細胞を効果的に標的にすることにより作用する。抗腫瘍薬が細胞分裂に作用すると、高成長部分を有する腫瘍（例えば、急性骨髄性白血病、ホジキン病等の中悪性度リンパ腫）は、より大きな割合の標的細胞が常に細胞分裂しているので、より化学療法に対して感受性である。より遅い成長速度の悪性腫瘍、例えば無痛性リンパ腫は、化学療法に対してよりずっと穏やかに反応する傾向がある。
【０００６】
しかしながら、化学療法抵抗性の発達は、化学療法治療の間においてなかなか解決しない問題である。例えば、急性骨髄性白血病(AML)の従来の治療は、シタラビンとダウノルビシン等のアントラサイクリンとの併用投与を含む。５年生存率は、若年成人で４０％であり、高齢の患者では約１０％である。奏功率は加齢に応じて大きく変化し、６０歳を超える患者では４０％〜５５％であり、７０歳を超える患者では２４％〜３３％である。これは、不利な細胞遺伝学的プロファイルを有する年配者にとって一層悪化し、治療後３０日間での死亡は加齢に伴って悪化し、１０％〜５０％の範囲である。さらに、これらの分子の使用の制限も、二次的影響、特に慢性心毒性の発生（アントラサイクリンに関連する）が原因で生じる。強化化学療法に関連する毒性死の割合は、６０歳を超える患者において１０〜２０％である。
【０００７】
従来の療法のこのベネフィット・リスクプロファイルによって、新たにAMLと診断された年配者の僅か３０％しか抗腫瘍化学療法を受けていない。過去数十年にわたって、ＡＭＬを患うより若い患者において僅かな結果の改善があったが、（ＡＭＬを患う患者の大部分である）６０歳を超える成人においては全くない。このデータは、化学療法感受性の腫瘍を治療する抗腫瘍薬の投与レジメンを低減させるとともに、抗腫瘍剤に対する化学療法抵抗性の腫瘍の抵抗性を回避する、新規な組み合わせアプローチの必要性をはっきりと示している。
【０００８】
これらの目的を達成するために、２つの大きな問題が解決されなければならない：１）化学療法抵抗性、２）抗腫瘍剤の内在する毒性。
【０００９】
化学療法抵抗性の現象を説明するために、様々な仮説が提案されてきた。こうした仮説として、原形質膜を横切る薬剤の変化した輸送、遺伝的応答、向上したDNA修復、標的分子、標的分子に対するアクセス、代謝効果、及び成長因子の変化が挙げられる。最近になって、化学療法薬を細胞内部から外部へ積極的に移動させるがん細胞の表面の小さなポンプが同定された。ｐ−糖タンパク質及び他のそうした化学療法の排出ポンプに対する研究が現在行われている。ｐ−糖タンパク質の機能を阻害する薬物療法が化学療法の効能を向上させるために探索されている。しかしながら、このアプローチは臨床評価の間で失敗に終わっている(非特許文献１及び２)。
【００１０】
組織の化学療法抵抗性に打ち勝ち、抗腫瘍薬に対する腫瘍の感受性を増加させるための新規な治療レジメンを開発する差し迫った必要性が存在する。
【００１１】
医薬的に活性な化合物である5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールは、デンドロゲニンＡという名称で知られている。この化学構造式Ｉは以下である。
【００１２】
【化１】
2016532709.tif 000002
【００１３】
デンドロゲニンＡは、特許文献１並びに非特許文献３及び４に記載されており、種々の腫瘍細胞株に細胞死を誘導することが示されている。
【００１４】
デンドロゲニンＡは、哺乳類で同定された最初の内因性ステロイド系アルカロイドである。デンドロゲニンＡは哺乳類の組織抽出物中で酵素的に形成され、コレステロールエポキシドヒドロラーゼの選択的阻害剤であることが確立された（非特許文献４）。デンドロゲニンＡは、腫瘍細胞の分化及び免疫細胞の浸潤を誘導する。デンドロゲニンＡの特性及びその腫瘍内での低下した濃度は、細胞の完全性及び分化の維持における生理的機能を示唆している。
【００１５】
驚くべきことに、本件発明者らは、デンドロゲニンＡが抗腫瘍薬に対して化学療法抵抗性を有する腫瘍の感受性を維持でき、又は、腫瘍に対する抗腫瘍薬の効能を増加できることを見出し、これが化学療法感受性の腫瘍に対する効果的な抗腫瘍薬の細胞毒性の用量を低下できることを見出した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】WO03/89449
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Kolitz JE et al, Blood 2010
【非特許文献２】Burnett AK et al, Br J Hematol 2009
【非特許文献３】de Medina et al, J. Med. Chem., 2009
【非特許文献４】de Medina et al, Nature Commun. 2013
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明の目的は、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と抗腫瘍薬とを含む、がん治療に用いるためのパーツキットである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
一実施形態において、がんは、腺房腺がん、腺房細胞がん、末端黒子型黒色腫、光線角化症、腺がん、腺様嚢胞がん、腺扁平上皮がん、付属器がん、副腎遺残腫瘍、副腎皮質がん、アルドステロン分泌がん、胞巣状軟部肉腫、メラニン欠乏性黒色腫、エナメル上皮甲状腺がん、血管肉腫、アポクリンがん、アスキン腫瘍、星状細胞腫、基底細胞がん、類基底細胞がん、基底扁平細胞がん(basosquamous cell carcinoma)、胆道がん、骨がん、骨髄がん、ブドウ状肉腫、脳腫瘍、乳がん、気管支がん、気管支腺がん、気管支肺胞がん、悪性多形性腺腫、子宮頸がん、緑色腫、胆管細胞がん、軟骨肉腫、絨毛がん、脈絡叢がん、明細胞腺がん、結腸がん、結腸直腸がん、面皰がん、コルチゾール産生がん、円柱細胞がん、脱分化脂肪肉腫、前立腺導管がん、腺管がん、非浸潤性乳管がん、十二指腸がん、エクリン腺がん、胎児性がん、子宮体がん、子宮内膜間質細胞肉腫、類上皮肉腫、食道がん、ユーイング肉腫、外向発育がん、線維芽細胞肉腫、線維肉腫、線維性層板状がん、線維肉腫、甲状腺濾胞がん、胆嚢がん、胃腺がん、巨細胞がん、巨細胞性肉腫、骨巨細胞腫、神経膠腫、多形神経膠芽腫、顆粒膜細胞腫、頭頸部がん、血管腫、血管肉腫、肝芽腫、肝細胞がん、ヒュルトレ細胞がん腫、回腸がん、浸潤性小葉腺がん、炎症性乳がん、乳管がん、表皮内がん、空腸がん、カポジ肉腫、クルーケンベルグ腫瘍、Kulchitsky細胞がん、クッパー星細胞肉腫、大細胞がん、喉頭がん、悪性黒子黒色腫、脂肪肉腫、肝臓がん、小葉がん、非浸潤性小葉がん、肺がん、リンパ上皮腫、リンパ肉腫、悪性黒色腫、髄様がん、甲状腺髄様がん、髄芽腫、髄膜腫、メルケル細胞がん、微小乳頭がん、混合細胞肉腫、粘液がん、粘表皮がん、粘膜黒色腫、粘液脂肪肉腫、粘液肉腫、鼻咽頭がん、腎芽細胞腫、神経芽腫、結節性黒色腫、非淡明細胞型腎がん、非小細胞肺がん、燕麦細胞がん、眼内黒色腫、口腔がん、類骨がん、骨肉腫、卵巣がん、パジェットがん、膵臓がん、膵芽腫、乳頭状腺がん、乳頭がん、甲状腺乳頭がん、骨盤がん、乳頭部周囲がん、葉状腫瘍、下垂体がん、多形性脂肪肉腫、胸膜肺芽腫、原発性骨内がん腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、円形細胞肉腫、瘢痕がん、住血吸虫膀胱がん、シュナイダーがん腫、皮脂腺がん、印環細胞がん、皮膚がん、小細胞肺がん、小細胞骨肉腫、軟部組織肉腫、紡錘細胞がん、紡錘細胞肉腫、扁平上皮がん、胃がん、表在拡大型黒色腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性肉腫、終末管がん、精巣がん、甲状腺がん、移行上皮がん、管状腺がん、腫瘍形成性黒色腫、未分化がん、尿膜管腺がん、膀胱がん、子宮がん、子宮体がん、ブドウ膜黒色腫、膣がん、いぼ状がん、絨毛状がん、高分化型脂肪肉腫、ウィルムス腫瘍、又は卵黄嚢腫瘍である。
【００２０】
一実施形態において、本発明のパーツキットは、抗腫瘍薬が5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて患者に投与されない場合に、この抗腫瘍薬に対して化学療法抵抗性である腫瘍を有する患者におけるがんの治療に使用するためのものである。
【００２１】
別の実施形態において、本発明のパーツキットは、抗腫瘍薬に対する化学療法抵抗性である腫瘍を有する患者におけるがんの治療に使用するためのものであって、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせてこの患者に投与される抗腫瘍薬の用量は、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせてこの患者に対して投与されない場合に投与される抗腫瘍薬の用量よりも少ない。
【００２２】
より具体的な一実施形態において、がんは、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫である。
【００２３】
一実施形態において、抗腫瘍薬は、DNA損傷剤、例えばカンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、シクロホスファミド、クロラムブシル、クロルメチン、ブスルファン、トレオスルファン、若しくはチオテパ、抗腫瘍抗生剤、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン、アクチノマイシンD、マイトマイシン、ブレオマイシン、若しくはプリカマイシン、代謝拮抗剤、例えば5-フルオロウラシル、シタラビン、フルダラビン、若しくはメトトレキサート、抗有糸分裂剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、若しくはビノレルビン、又はその他の抗腫瘍薬、例えばボルテゾミブ、オールトランス型レチノイン酸、若しくは三酸化ヒ素、又はこれらの組み合わせ製品である。
【００２４】
一実施形態において、抗腫瘍薬はシタラビンと組み合わせたダウノルビシンである。
【００２５】
一実施形態において、抗腫瘍薬はシスプラチンと組み合わせたフルオロウラシルである。
【００２６】
一実施形態において、抗腫瘍薬はオールトランス型レチノイン酸と組み合わせた三酸化ヒ素である。
【００２７】
一実施形態において、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と抗腫瘍薬は、同時に投与される。
【００２８】
一実施形態において、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と抗腫瘍薬は、連続して投与される。
【００２９】
本発明の別の目的は、化学療法抵抗性がんを治療するための5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩である。
【００３０】
一実施形態において、がんは、ダウノルビシン、シタラビン、フルオロウラシル、シスプラチン、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、ボルテゾミブ、又はこれらの組み合わせに対して化学療法抵抗性である。
【００３１】
図面において、以下の略語が用いられる。
MTT = メチルチアゾリルジフェニル-テトラゾリウムブロミド
Conc. = 濃度
DNR又はDauno = ダウノルビシン
Arac = シタラビン
5-FU = 5-フルオロウラシル
CisP = シスプラチン
DDA = デンドロゲニンＡ
bort. = ボルテゾミブ
ATO = 三酸化ヒ素
ATRA = オールトランス型レチノイン酸
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、がん細胞株MV4-11、KG1、KG1a、及びHL60の細胞生存率についてのダウノルビシンの効果を示す曲線図である。
【図２】図２は、がん細胞株MV4-11、KG1、KG1a、及びHL60の細胞生存率についてのシタラビンの効果を示す曲線図である。
【図３】図３は、がん細胞株MV4-11、KG1、KG1a、及びHL60の細胞生存率についての5-フルオロウラシルの効果を示す曲線図である。
【図４】図４は、がん細胞株MV4-11、KG1、KG1a、及びHL60の細胞生存率についてのシスプラチンの効果を示す曲線図である。
【図５】図５は、がん細胞株MV4-11、KG1、KG1a、及びHL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡの効果を示す曲線図である。
【図６Ａ】図６Ａは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aにおける、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせの細胞死誘導を示す棒グラフである。
【図６Ｂ】図６Ｂは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aにおける、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせの細胞死誘導を示す棒グラフである。
【図７Ａ】図７Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1における、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせの細胞死誘導を示す棒グラフである。
【図７Ｂ】図７Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1における、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせの細胞死誘導を示す棒グラフである。
【図８Ａ】図８Ａは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせ（２５：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図８Ｃ】図８Ｃは、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせにおける、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図９Ａ】図９Ａは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせの効果を示す曲線図である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせ（５：１のモル比）の相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図９Ｃ】図９Ｃは、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせにおける、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１０Ａ】図１０Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせ（２５：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１１Ａ】図１１Ａは、薬剤感受性のがん細胞株MV4-11の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせ（２５：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株MV4-11の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株MV4-11の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１２Ａ】図１２Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせ（５：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１３Ａ】図１３Ａは、薬剤感受性のがん細胞株MV4-11の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせ（５：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株MV4-11の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株MV4-11の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１４Ａ】図１４Ａは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせ（１：１５４のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１４Ｃ】図１４Ｃは、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせにおける、がん細胞株HL60の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１５Ａ】図１５Ａは、がん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせ（１：１５４のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１６Ａ】図１６Ａは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせ（１：１５４のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせにおける、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１７Ａ】図１７Ａは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせ（１：１．３３のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１８Ａ】図１８Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせ（１：１．３３のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１８Ｃ】図１８Ｃは、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図１９Ａ】図１９Ａは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせ（１：１．３３のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図１９Ｃ】図１９Ｃは、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせにおける、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aの細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２０Ａ】図２０Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせ（１００：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２０Ｃ】図２０Ｃは、デンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２１Ａ】図２１Ａは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせ（１００：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２１Ｂ】図２１Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２１Ｃ】図２１Ｃは、デンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２２Ａ】図２２Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせ（１：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２２Ｂ】図２２Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２２Ｃ】図２２Ｃは、デンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２３Ａ】図２３Ａは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせ（１：１のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２３Ｃ】図２３Ｃは、デンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２４Ａ】図２４Ａは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとATRAの組み合わせ（１：２のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとATRAの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２４Ｃ】図２４Ｃは、デンドロゲニンＡとATRAの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株HL60の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２５Ａ】図２５Ａは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとATRAの組み合わせ（１：２のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとATRAの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２５Ｃ】図２５Ｃは、デンドロゲニンＡとATRAの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株KG1の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２６Ａ】図２６Ａは、薬剤感受性のがん細胞株Mcf7の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせ（１：１５４のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株Mcf7の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２６Ｃ】図２６Ｃは、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株Mcf7の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２７Ａ】図２７Ａは、薬剤感受性のがん細胞株SKMel28の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせ（１：１５４のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２７Ｂ】図２７Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株SKMel28の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２７Ｃ】図２７Ｃは、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株SKMel28の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２８Ａ】図２８Ａは、薬剤抵抗性のがん細胞株Mcf7の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせ（１：１．３３のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２８Ｂ】図２８Ｂは、薬剤抵抗性のがん細胞株Mcf7の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２８Ｃ】図２８Ｃは、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせにおける、薬剤抵抗性のがん細胞株Mcf7の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図２９Ａ】図２９Ａは、薬剤感受性のがん細胞株SKMel28の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせ（１：１．３３のモル比）の効果を示す曲線図である。
【図２９Ｂ】図２９Ｂは、薬剤感受性のがん細胞株SKMel28の細胞生存率についてのデンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせの相乗効果を示すアイソボログラムである。
【図２９Ｃ】図２９Ｃは、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせにおける、薬剤感受性のがん細胞株SKMel28の細胞生存率についての組み合わせ指数（ＣＩ）値を示す曲線図である。
【図３０】図３０は、患者からの核型及び表現型が異なる急性骨髄性白血病の細胞生存率に対するデンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせの効果を示す散布図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明の目的の一つは、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール(デンドロゲニンＡ)又はその薬学的に許容される塩と、抗腫瘍薬とを含む、がんの治療において使用するためのパーツキットである。
【００３４】
用語「パーツキット」は、患者に対する同時投与又は連続投与による併用療法に使用するための、活性成分が物理的に分離された組み合わせ製剤を意味する。
【００３５】
そのため、本発明により、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩及び抗腫瘍薬が、同時に又は連続して、がんの治療のために別々の形態で患者に投与される。
【００３６】
本明細書で用いられるとおり、用語「がん（「癌」とも言う）は、無秩序又は無調節（異常調節）な細胞増殖又は細胞死により特徴付けられる対象の生理学的状態を示す。用語「がん」は、悪性又は良性の、固体腫瘍及び血液由来の腫瘍を含む。
【００３７】
本発明は、化学療法感受性のがんの治療と併せて、化学療法抵抗性のがんの治療にも関する。
【００３８】
用語「化学療法抵抗性のがん」は、がん細胞の増殖が、患者にとって許容可能な用量でのそうしたがんの治療に通常用いられる抗腫瘍薬又は抗腫瘍薬の組み合わせの手段により抑制又は阻害されない患者におけるがんを意味する。腫瘍は、化学療法の前に本質的に抵抗性であることができ、又は、抵抗性は、当初は化学療法に対して感受性であった腫瘍により治療の間に獲得され得る。
【００３９】
用語「化学療法感受性のがん」は、抗腫瘍薬の効果に対して反応性（応答性）である患者におけるがんを意味し、すなわち、がん細胞の増殖が患者に対する許容される用量での抗腫瘍薬の手段により抑制できる患者におけるがんを意味する。
【００４０】
用語「患者に対して許容される用量」は、副作用による治療の停止を引き起こさない用量を意味する。
【００４１】
がんの例としては、これらに限定されないが、以下が挙げられる：
腺房腺がん、腺房細胞がん、末端黒子型黒色腫、光線角化症、腺がん、腺様嚢胞がん、腺扁平上皮がん、付属器がん、副腎遺残腫瘍、副腎皮質がん、アルドステロン分泌がん、胞巣状軟部肉腫、メラニン欠乏性黒色腫、エナメル上皮甲状腺がん、血管肉腫、アポクリンがん、アスキン腫瘍、星状細胞腫、基底細胞がん、類基底細胞がん、基底扁平細胞がん (basosquamous cell carcinoma)、胆道がん、骨がん、骨髄がん、ブドウ状肉腫、脳腫瘍、乳がん、気管支がん、気管支腺がん、気管支肺胞がん、悪性多形性腺腫、子宮頸がん、緑色腫、胆管細胞がん、軟骨肉腫、絨毛がん、脈絡叢がん、明細胞腺がん、結腸がん、結腸直腸がん、面皰がん、コルチゾール産生がん、円柱細胞がん、脱分化脂肪肉腫、前立腺導管がん、腺管がん、非浸潤性乳管がん、十二指腸がん、エクリン腺がん、胎児性がん、子宮体がん、子宮内膜間質細胞がん、類上皮肉腫、食道がん、ユーイング肉腫、外向発育がん、線維芽細胞肉腫、線維肉腫、線維性層板状がん、線維肉腫、甲状腺濾胞がん、胆嚢がん、胃腺がん、巨細胞がん、巨細胞性肉腫、骨巨細胞腫、神経膠腫、多形神経膠芽腫、顆粒膜細胞腫、頭頸部がん、血管腫、血管肉腫、肝芽腫、肝細胞がん、ヒュルトレ細胞がん腫、回腸がん、浸潤性小葉腺がん、炎症性乳がん、乳管がん、表皮内がん、空腸がん、カポジ肉腫、クルーケンベルグ腫瘍、Kulchitsky細胞がん、クッパー星細胞肉腫、大細胞がん、喉頭がん、悪性黒子黒色腫、脂肪肉腫、肝臓がん、小葉がん、非浸潤性小葉がん、肺がん、リンパ上皮腫、リンパ肉腫、悪性黒色腫、髄様がん、甲状腺髄様がん、髄芽腫、髄膜腫、メルケル細胞がん、微小乳頭がん、混合細胞肉腫、粘液がん、粘表皮がん、粘膜黒色腫、粘液脂肪肉腫、粘液肉腫、鼻咽頭がん、腎芽細胞腫、神経芽腫、結節性黒色腫、非淡明細胞型腎がん、非小細胞肺がん、燕麦細胞がん、眼内黒色腫、口腔がん、類骨がん、骨肉腫、卵巣がん、パジェットがん、膵臓がん、膵芽腫、乳頭状腺がん、乳頭がん、甲状腺乳頭がん、骨盤がん、乳頭部周囲がん、葉状腫瘍、下垂体がん、多形性脂肪肉腫、胸膜肺芽腫、原発性骨内がん腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、円形細胞肉腫、瘢痕がん、住血吸虫膀胱がん、シュナイダーがん腫、皮脂腺がん、印環細胞がん、皮膚がん、小細胞肺がん、小細胞骨肉腫、軟部組織肉腫、紡錘細胞がん、紡錘細胞肉腫、扁平上皮がん、胃がん、表在拡大型黒色腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性肉腫、終末管がん、精巣がん、甲状腺がん、移行上皮がん、管状腺がん、腫瘍形成性黒色腫、未分化がん、尿膜管腺がん、膀胱がん、子宮がん、子宮体がん、ブドウ膜黒色腫、膣がん、いぼ状がん、絨毛状がん、高分化型脂肪肉腫、ウィルムス腫瘍、又は卵黄嚢腫瘍。
【００４２】
一実施形態において、がんは、黒色腫、がん腫（上皮性悪性腫瘍）、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（非上皮性悪性腫瘍）、脂肪肉腫、骨髄腫、又はリンパ性悪性腫瘍である。こうしたがんのより具体的な例としては、扁平上皮がん（例えば、上皮扁平上皮がん）、肺がん、例えば小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、及び肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃がん、例えば胃腸がん、膵臓がん、神経膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮がん、唾液腺がん、腎臓又は腎臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝がん、肛門がん、陰茎がん、アグレッシブな（攻撃的な）又は転移性の黒色腫、又は頭頸部がんである。
【００４３】
本発明は、より具体的には、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫に関する。
【００４４】
本明細書で用いられるとおり、用語「抗腫瘍薬」は、腫瘍の成熟及び増殖を抑制又は阻害する薬剤又は薬剤の組み合わせを意味する。
【００４５】
抗腫瘍薬は、それらの作用機序に基づいて分類される。抗腫瘍薬の種々の分類としては、特にDNA損傷剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、抗有糸分裂剤、及びその他の抗腫瘍薬が挙げられる。
【００４６】
DNA損傷剤としては、アルキル化剤及びトポイソメラーゼ阻害剤が挙げられる。
【００４７】
トポイソメラーゼ阻害剤（医療用医薬品の分類（ATC）コード：L01CB及びL01XX）は、I又はII型のトポイソメラーゼを阻害し、これにより適切なDNA超らせん構造を破壊することでDNAの転写及び複製の両方を妨害する薬剤である。I型トポイソメラーゼ阻害剤の例としては、カンプトテシン、イリノテカン、及びトポテカンが挙げられる。II型阻害剤の例としては、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスフェート、及びテニポシドが挙げられる。
【００４８】
アルキル化剤（ATCコード：L01A）は、細胞内の条件下で多くの求核性官能基をアルキル化する能力により命名されている。これらは生物学的に重要な分子中のアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、及びリン酸基と共有結合を形成することにより細胞機能を損傷させる。アルキル化剤の例としては、シクロホスファミド、クロラムブシル、クロルメチン、ブスルファン、トレオスルファン、チオテパ、及び白金化合物、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンが挙げられる。
【００４９】
抗腫瘍抗生物質としては、主にアントラサイクリン類（ATCコード：L01DB）、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、又はバルルビシン、及び他の抗腫瘍抗生物質(ATCコード：L01DC)、例えばアクチノマイシンD、マイトマイシン、ブレオマイシン、又はプリカマイシンが挙げられる。
【００５０】
代謝拮抗剤(ATCコード：L01B)は、細胞の生存能力及び分裂に必要とされる自然に発生する化合物と同様の構造を有する。腫瘍細胞の範囲に対する最も重要な代謝拮抗剤の効能は、DNA合成に必要とされるプリン又はピリミジンヌクレオシドの合成経路の阻害に基づく。
【００５１】
代謝拮抗剤は、いくつかに分類され、葉酸拮抗剤、例えばメトトレキサート、プリン拮抗剤、例えばフルダラビン、並びにピリミジン拮抗剤、例えばフルオロウラシル及びシタラビンが挙げられる。
【００５２】
抗有糸分裂剤としては、タキサン類及びビンカアルカロイド類が挙げられる。
【００５３】
タキサン類(ATCコード：L01CD)は、微小管を妨害する。これらは、有糸分裂を停止させることにより細胞増殖を阻害する。タキサン類の例としては、パクリタキセル及びドセタキセルが挙げられる。
【００５４】
ビンカアルカロイド類(ATCコード：L01CA)は、チューブリンの特定の部位に結合し、チューブリンが微小管へ組み合わさるのを阻害する(細胞周期のM期)。これらは、ニチニチソウ（ビンカロセアとしても知られている、Madagascar periwinkle、Catharanthus roseus）に由来する。
【００５５】
ビンカアルカロイド類の例としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシンが挙げられる。
【００５６】
その他の抗腫瘍薬としては、例えばボルテゾミブ、オールトランス型レチノイン酸、及び三酸化ヒ素が挙げられる。
【００５７】
一実施形態において、抗腫瘍薬は、DNA損傷剤、例えばカンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、シクロホスファミド、クロラムブシル、クロルメチン、ブスルファン、トレオスルファン、若しくはチオテパ、抗腫瘍抗生物質、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン、アクチノマイシンD、マイトマイシン、ブレオマイシン、若しくはプリカマイシン、代謝拮抗剤、例えば5-フルオロウラシル、シタラビン、フルダラビン、若しくはメトトレキサート、抗有糸分裂剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、若しくはビノレルビン、若しくはボルテゾミブ、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、又はこれらの組み合わせ製品である。
【００５８】
一実施形態において、抗腫瘍薬は、少なくとも２つの活性成分の組み合わせ製品である。２つの活性成分は、患者に対して別々に投与することもでき、又は同じ製剤中で投与することもできる。
【００５９】
一実施形態において、抗腫瘍薬はシタラビンと組み合わせたダウノルビシンである。
【００６０】
一実施形態において、抗腫瘍薬はシスプラチンと組み合わせたフルオロウラシルである。
【００６１】
一実施形態において、抗腫瘍薬はオールトランス型レチノイン酸と組み合わせた三酸化ヒ素である。
【００６２】
デンドロゲニンＡの薬学的に許容される塩はとしては、これらに限定されないが、例えば、無機酸、８個以下の炭素原子を含む非環式脂肪族カルボン酸又はスルホン酸、及び４つ以下のアリール基を含む芳香族カルボン酸又はスルホン酸からなる群から選択される酸で形成される酸付加塩が挙げられる。
【００６３】
好ましい酸としては、塩酸、硫酸、酢酸、L-乳酸（2(S)-ヒドロキシプロパン酸）、酒石酸、L-リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルタル酸、L-酒石酸、D-酒石酸、2(S)-ヒドロキシプロパン酸、クエン酸、マロン酸、酒石酸（DまたはL）、メシル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、4-メチルベンゼンスルホン酸、及びパモ酸(4,4'-メチレンビス(3-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸))からなる群から選択される。
【００６４】
本発明は、化学療法抵抗性の腫瘍、すなわち、抗腫瘍薬を用いる治療では不十分な腫瘍の治療に有用である。腫瘍は、本質的に化学療法抵抗性であってもよく、又は治療の間に化学療法に対する抵抗が発達したものでもよい。
【００６５】
そのため、一実施形態において、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩は、抗腫瘍薬を用いる治療と組み合わせて用いられ、この抗腫瘍薬に対して抵抗性の腫瘍の感受性を回復（復活）させ、特に、この抗腫瘍薬の細胞死誘導を回復させる。
【００６６】
そのため、一実施形態において、本発明のパーツキットは、特に、患者に対して5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与しない場合に抗腫瘍薬に対して化学療法抵抗性である腫瘍を有する患者のがんの治療に使用するためのものである。
【００６７】
別の実施形態において、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩は、抗腫瘍薬の有効な用量を減らすためにこの抗腫瘍薬との併用治療に用いられる。この実施形態において、デンドロゲニンＡは抗腫瘍薬の治療効果を高めることができ、そのため有効な投与量を低減することを通じて抗腫瘍薬の内在する毒性を制限するのに用いることができ、これにより例えばこの抗腫瘍薬での治療に当初はふさわしくない高齢の患者の治療を可能にできる。
【００６８】
そのため、別の実施形態において、本発明のパーツキットは、抗腫瘍薬に対して化学的感受性な腫瘍を有する患者のがんの治療に用いるためのものであり、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせてこの患者に投与される抗腫瘍薬の用量は、この患者に対して5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与されない場合の抗腫瘍薬の用量よりも少ない。
【００６９】
本発明によれば、デンドロゲニンＡは、許容される投与様式のいずれか、好ましくは静脈内経路又は経口経路により、治療上有効な量の医薬製剤として投与され得る。
【００７０】
好適な投薬量は、が、典型的には１日当たり（毎日）０．１〜５００００μｇ／ｋｇ（体重）であり、好ましくは１日当たり１０００〜４００００μｇ／ｋｇ（体重）であり、最も好ましくは１日当たり４００００μｇ／ｋｇ（体重）であり、これは治療されるがんの重症度、対象の年齢及び相対的な健康状態、投与の経路及び形態等の多数の要因に応じて変化する。
【００７１】
抗腫瘍薬は、通常の態様の医薬製剤として投与されることができ、これは、治療されるがんの種類、その重症度、対象の年齢及び相対的な健康状態、用いられる抗腫瘍薬の有効性、投与の経路及び形態、投与の目的とする効能（適応症）、及び対処する医師の選択及び経験に応じて変化する。こうした疾患を治療する一当業者は、個人の知識に基づいて、所定のがんにおける本発明の治療上有効量の抗腫瘍薬を決定することができるだろう。
【００７２】
医薬組成物は、追加の活性化合物又は成分と共に又はこれらを含まずに、通常の成分を通常の割合で含むことができ、単位剤形は、採用される意図された１日当たりの用量範囲に見合った活性成分の任意の好適な有効量を含み得る。
【００７３】
一実施形態において、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩及び抗腫瘍薬は同時に投与される。
【００７４】
別の実施形態において、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩及び抗腫瘍薬は連続して投与される。
【００７５】
特定の好ましい実施形態において、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩は、抗腫瘍薬の前に投与される。
【００７６】
特定の実施形態において、デンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩は抗腫瘍薬の後に投与される。
【００７７】
本発明の別の目的は、上述したとおりの、治療上有効量の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール(デンドロゲニンＡ)又はその薬学的に許容される塩と、治療上有効量の抗腫瘍薬とを患者に投与することを含む、患者におけるがんを治療するための方法である。
【００７８】
本発明の別の目的は、化学療法抵抗性のがんを治療するための使用するためのデンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩であり、ここで、デンドロゲニンＡは、唯一の活性成分として用いられ、すなわち、別の抗腫瘍薬のいずれとも組み合わせないで用いられる。
【００７９】
一実施形態において、がんは、ダウノルビシン、シタラビン、フルオロウラシル、シスプラチン、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、ボルテゾミブ、又はこれらの組み合わせに対して化学療法抵抗性である。
【００８０】
一実施形態において、化学療法抵抗性のがんは、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫である。
【００８１】
一実施形態において、がんは、ダカルバジンに対して抵抗性の転移性黒色腫ではない。
【００８２】
一実施形態において、がんはB16F10転移性黒色腫ではない。
【００８３】
B16F10転移性黒色腫は、Braf遺伝子、ras遺伝子、及びp53遺伝子においていかなる変異も有していないマウス黒色腫である。
【００８４】
一実施形態において、がんはダカルバジンに抵抗性の転移性黒色腫であり、このがんはras遺伝子に変異を有している。
【００８５】
一実施形態において、がんはダカルバジンに抵抗性の転移性黒色腫であり、このがんはBRaf遺伝子に変異を有している。
【００８６】
一実施形態において、がんはダカルバジンに抵抗性の転移性黒色腫であり、このがんはp53遺伝子に変異を有している。
【００８７】
一実施形態において、がんはダカルバジンに抵抗性の転移性黒色腫であり、このがんはras遺伝子、Braf遺伝子、及びp53遺伝子に変異を有している。
【００８８】
本発明の別の目的は、ヒトの化学療法抵抗性のがんを治療するために使用するためのデンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩であり、ここで、デンドロゲニンＡは唯一の活性成分として使用され、すなわち、別の抗腫瘍薬と組み合わせないで用いられる。
【００８９】
一実施形態において、ヒトのがんは、ダウノルビシン、シタラビン、フルオロウラシル、シスプラチン、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、ボルテゾミブ、又はこれらの組み合わせに対して化学療法抵抗性である。
【００９０】
一実施形態において、ヒトの化学療法抵抗性のがんは、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫である。
【００９１】
本発明の別の目的は、治療上有効量の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール(デンドロゲニンＡ)又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、患者における化学療法抵抗性のがんを治療する方法である。
【００９２】
本発明の別の目的は、抗腫瘍薬で治療される患者におけるがんの治療において使用するためのデンドロゲニンＡ又はその薬学的に許容される塩であり、ここで、このがんはこの抗腫瘍薬に対して化学療法抵抗性である。
【００９３】
一実施形態において、がんは、ダウノルビシン、シタラビン、フルオロウラシル、シスプラチン、オールトランス型レチノイン酸、三酸化ヒ素、ボルテゾミブ、又はこれらの組み合わせに対して、化学療法抵抗性である。
【００９４】
一実施形態において、化学療法抵抗性のがんは、血液がん、例えば白血病、特に急性骨髄性白血病若しくは急性リンパ性白血病、リンパ腫、特に非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫である。
【００９５】
本発明は、がんに罹患しており、抗腫瘍薬に対して抵抗性が発達している患者の治療を特に目的にしている。この場合、デンドロゲニンＡは、がんが抵抗性である抗腫瘍薬の代わりに、又はこの抗腫瘍薬と組み合わせて投与され得る。
【００９６】
本発明はまた、がんに罹患しており、抗腫瘍薬で化学療法を受けている患者の治療の改善も目的にしている。この場合、デンドロゲニンＡは、患者に投与される抗腫瘍薬の用量を減らすために抗腫瘍薬と組み合わせて投与することができ、治療を改善する。
【００９７】
本発明を以下の実施例により更に説明する。これらの実施例は、本発明を詳細に説明するものであり、本発明をどのような面においても限定するものとしては見なされるべきではない。
【実施例】
【００９８】
試験は、Chou及びTalalayが以前に開示した薬物の組み合わせの相乗効果を定量するための方法に適合するように設計した（Chou Cancer Res 2010及びChou & Talalay, Eur J biochem 1985）。簡単に説明すると、薬物単体及び薬物の組み合わせの効果を、薬物の濃度の３〜５ｌｏｇスケールの濃度において、組み合わせ治療に用いられる２種の薬剤の間の一定の比率で測定した。細胞を96ウェルプレートに播種した（50000細胞／ウェル）。細胞を播種直度から４８時間処理した。細胞の生存率をＭＴＴアッセイで測定した。細胞を１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培地を除去し、１００μＬのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍＬ）を加え、３７℃で２時間培養し、遠心分離し、ＭＴＴ溶液を除去し、ＤＭＳＯ（１００μＬ）を加えて生存細胞により形成された紫色のホルマザンを溶解した。この溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定した。この一般手順を試験例１〜５及び８〜２５に用いた。
【００９９】
試験例１
表現型及ぶ遺伝子型が異なるがん細胞株の細胞生存率におけるダウノルビシンの効果
【０１００】
HL60、KG1、KG1a、及びMV4-11細胞を９６ウェルプレートに播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からダウノルビシンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を以下のＭＴＴアッセイで測定した：細胞を１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培地を除去し、１００μＬのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍＬ）を加え、３７℃で２時間培養し、遠心分離し、ＭＴＴ溶液を除去し、ＤＭＳＯ（１００μＬ）を加えて生存細胞により形成された紫色のホルマザンを溶解した。この溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定した。
【０１０１】
ダウノルビシン濃度の関数としての生存細胞の割合を図１に示す。
【０１０２】
図１は、KG1細胞に比べて、KG1a細胞がダウノルビシンに対して抵抗性である傾向があることを示している。ＨＬ６０及びＭＶ４−１１細胞は、KG1と同じ程度にダウノルビシンに対して感受性の傾向がある。
【０１０３】
試験例２
表現型及ぶ遺伝子型が異なるがん細胞株の細胞生存率におけるシタラビンの効果
【０１０４】
HL60、KG1、KG1a、及びMV4-11細胞を９６ウェルプレートに播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からシタラビンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１０５】
シタラビン濃度の関数としての生存細胞の割合を図２に示す。
【０１０６】
図２は、KG1細胞に比べて、KG1a細胞がシタラビンに対して抵抗性である傾向があることを示している。ＨＬ６０及びＭＶ４−１１細胞は、シタラビンに対してKG1細胞よりも感受性である傾向がある。
【０１０７】
試験例３
表現型及ぶ遺伝子型が異なるがん細胞株の細胞生存率における5-フルオロウラシルの効果
【０１０８】
HL60、KG1、KG1a、及びMV4-11細胞を９６ウェルプレートに播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度から5-フルオロウラシルの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１０９】
5-フルオロウラシル濃度の関数としての生存細胞の割合を図３に示す。
【０１１０】
図３は、KG1細胞に比べて、シタラビンと比べて同じ程度であるがダウノルビシンよりも低い程度で、KG1a細胞が5-フルオロウラシルに対して抵抗性である傾向があることを示している。ＨＬ６０及びＭＶ４−１１細胞は、ダウノルビシン又はシタラビンに比べて、5-FUに対してより抵抗性である傾向がある。
【０１１１】
試験例４
表現型及ぶ遺伝子型が異なるがん細胞株の細胞生存率におけるシスプラチンの効果
【０１１２】
HL60、KG1、KG1a、及びMV4-11細胞を９６ウェルプレートに播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からシスプラチンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１１３】
シスプラチン濃度の関数としての生存細胞の割合を図４に示す。
【０１１４】
図４は、KG1細胞に比べて、ダウノルビシン又はシタラビンよりも低い程度であるが、KG1a細胞がシスプラチンに対して抵抗性である傾向があることを示している。ＨＬ６０細胞は、ダウノルビシン及びシタラビンと同じ程度にシスプラチンに対して感受性であるが、ＭＶ４−１１細胞は、ダウノルビシン又はシタラビンと比べて、シスプラチンに対してより抵抗性である傾向がある。
【０１１５】
試験例５
表現型及ぶ遺伝子型が異なるがん細胞株の細胞生存率におけるデンドロゲニンＡの効果
【０１１６】
HL60、KG1、KG1a、及びMV4-11細胞を９６ウェルプレートに播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１１７】
デンドロゲニンＡ濃度の関数としての生存細胞の割合を図５に示す。
【０１１８】
図５は、デンドロゲニンＡに対して、KG1a細胞がKG1細胞と同程度に感受性であるが、KG1a細胞がダウノルビシン、シタラビン、5-フルオロウラシル、及びシスプラチンに対して抵抗性である傾向があることを示している。さらに、ＭＶ４−１１及びＨＬ６０細胞は、KG1又はKG1a細胞と同程度にデンドロゲニンＡに対して感受性である傾向がある。
これらの結果は、化学療法抵抗性のがんを治療するためのデンドロゲニンＡの能力を示唆している。
【０１１９】
表１は、試験例１〜５で試験された種々の抗腫瘍薬の細胞生存アッセイを用いて測定されたIC50を示している。
【０１２０】
【表１】
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【０１２１】
表１のデータは、デンドロゲニンＡが化学療法感受性及び化学療法抵抗性の細胞株の間でより小さいIC50の差異を示す薬剤であることを示している。KG1a/KG1のIC50比は、シスプラチンの場合の２．９、シタラビンの場合の４．５、５−フルオロウラシルの場合の５．３、及びダウノルビシンの場合の１７に比べて１．５である。これは、デンドロゲニンＡが、腫瘍の他の抗腫瘍薬に対する抵抗性の状態に関わらず、腫瘍を効果的に治療できることを示唆している。そのため、デンドロゲニンＡは、他の抗腫瘍薬に対して抵抗性である腫瘍を治療するのに優良な候補であると言える。
【０１２２】
試験例６
デンドロゲニンＡは、化学療法抵抗性のがん細胞株KG1aに対するダウノルビシン及びシタラビンによる細胞死誘導を回復させる。
【０１２３】
６マイクロウェルプレート中に、０．５×１０６のKG1a細胞株の細胞を播種した。同日に、溶剤ビヒクル、又は異なる濃度のデンドロゲニンＡ（最終濃度：５及び１０μＭ）単独、若しくはダウノルビシン（最終濃度：０．５μＭ）若しくはシタラビン（最終濃度：１μＭ）と組み合わせたデンドロゲニンＡをウェルに加えた。培養４８時間後、細胞懸濁液を遠心分離し、細胞ペレットをトリパンブルー溶液（ＰＢＳ中に０．２５％（ｗ／ｖ））中に再懸濁し、光学顕微鏡でMalassezセルを用いて計量した。結果を図６Ａ及び図６Ｂ（それぞれ、ダウノルビシン及びシタラビン）に示す。
【０１２４】
図６Ａは、KG1a細胞がダウノルビシンに対して抵抗性である傾向があり、デンドロゲニンＡがこの抵抗性を取り除くことができることを示している。
【０１２５】
図６Ｂは、KG1aがシタラビンに対して抵抗性である傾向があり、デンドロゲニンＡがこの抵抗性を取り除くことができることを示している。
【０１２６】
試験例７
デンドロゲニンＡは、ダウノルビシン及びシタラビンの薬剤感受性のがん細胞株KG1に対する細胞毒性を増加させる。
【０１２７】
６マイクロウェルプレート中に、０．５×１０６のKG1細胞株の細胞を播種した。同日に、溶剤ビヒクル、又はデンドロゲニンＡ（最終濃度：２．５μＭ）をウェルに、２４時間加えた。次いで、ダウノルビシン（最終濃度：０．０５、０．１、０．２５、及び０．５μＭ）又はシタラビン（最終濃度：０．１、０．２、０．５、及び１μＭ）をKG1a細胞に加えた。細胞をさらに４８時間培養した後、細胞懸濁液を遠心分離し、細胞ペレットをトリパンブルー溶液（ＰＢＳ中に０．２５％（ｗ／ｖ））中に再懸濁し、光学顕微鏡でMalassezセルを用いて計量した。結果を図７Ａ及び図７Ｂ（それぞれ、ダウノルビシン及びシタラビン）に示す。
【０１２８】
図７Ａは、KG1細胞がKG1a細胞に比べてダウノルビシンに対して感受性である傾向があることを示し、デンドロゲニンＡがこの感受性を増大できることを示す。
【０１２９】
図７Ｂは、KG1細胞がKG1a細胞に比べてシタラビンに対して感受性である傾向があることを示し、デンドロゲニンＡがこの感受性を増大できることを示す。
【０１３０】
試験例８
化学療法抵抗性の細胞株KG1aに対するデンドロゲニンＡ／ダウノルビシンの組み合わせの相乗活性
【０１３１】
９６ウェルプレート中に、KG1a細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びダウノルビシンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１３２】
図８ａ、８ｂ、及び８ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせは、化学療法抵抗性の細胞株KG1aの生存率を相乗的に低減する。
【０１３３】
試験例９
化学療法抵抗性の細胞株KG1aに対するデンドロゲニンＡ／シタラビンの組み合わせの相乗活性
【０１３４】
９６ウェルプレート中に、KG1a細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシタラビンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１３５】
図９ａ、９ｂ、及び９ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせは、化学療法抵抗性の細胞株KG1aの生存率を相乗的に低減する。
【０１３６】
試験例１０
細胞毒性（傷害性）薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／ダウノルビシンの組み合わせの相乗活性
【０１３７】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びダウノルビシンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１３８】
図１０ａ、１０ｂ、及び１０ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。
【０１３９】
試験例１１
細胞毒性薬剤感受性の細胞株MV4-11に対するデンドロゲニンＡ／ダウノルビシンの組み合わせの相乗活性
【０１４０】
９６ウェルプレート中に、MV4-11細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びダウノルビシンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１４１】
図１１Ａ、１１Ｂ、及び１１Ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株MV4-11の生存率を相乗的に低減する。
【０１４２】
試験例１２
細胞毒性薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／シタラビンの組み合わせの相乗活性
【０１４３】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシタラビンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１４４】
図１２に示すとおり、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。
【０１４５】
試験例１３
細胞毒性薬剤感受性の細胞株MV4-11に対するデンドロゲニンＡ／シタラビンの組み合わせの相乗活性
【０１４６】
９６ウェルプレート中に、MV4-11細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシタラビンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１４７】
図１３ａ、１３ｂ、及び１３ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシタラビンの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株MV4-11の生存率を相乗的に低減する。
【０１４８】
試験例１４
細胞毒性薬剤感受性の細胞株HL60に対するデンドロゲニンＡ／5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗活性
【０１４９】
９６ウェルプレート中に、HL60細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び5-フルオロウラシルの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１５０】
図１４ａ、１４ｂ、及び１４ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株HL60の生存率を相乗的に低減する。
【０１５１】
試験例１５
細胞毒性薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗活性
【０１５２】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び5-フルオロウラシルの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１５３】
図１５ａ、１５ｂ、及び１５ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。
【０１５４】
試験例１６
化学療法抵抗性の細胞株KG1aに対するデンドロゲニンＡ／5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗活性
【０１５５】
９６ウェルプレート中に、KG1a細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び5-フルオロウラシルの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１５６】
図１６ａ、１６ｂ、及び１６ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせは、化学療法抵抗性の細胞株KG1aの生存率を相乗的に低減する。
【０１５７】
試験例１７
細胞毒性薬剤感受性の細胞株HL60に対するデンドロゲニンＡ／シスプラチンの組み合わせの相乗活性
【０１５８】
９６ウェルプレート中に、HL60細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシスプラチンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１５９】
図１７ａ、１７ｂ、及び１７ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株HL60の生存率を相乗的に低減する。
【０１６０】
試験例１８
細胞毒性薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／シスプラチンの組み合わせの相乗活性
【０１６１】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシスプラチンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１６２】
図１８ａ、１８ｂ、及び１８ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。
【０１６３】
試験例１９
化学療法抵抗性の細胞株KG1aに対するデンドロゲニンＡ／シスプラチンの組み合わせの相乗活性
【０１６４】
９６ウェルプレート中に、KG1a細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシスプラチンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１６５】
図１９ａ、１９ｂ、及び１９ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせは、化学療法抵抗性の細胞株KG1aの生存率を相乗的に低減する。
【０１６６】
試験例２０
細胞毒性薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／ボルテゾミブの組み合わせの相乗活性
【０１６７】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びボルテゾミブの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１６８】
図２０ａ、２０ｂ、及び２０ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。
【０１６９】
試験例２１
細胞毒性薬剤感受性の細胞株HL60に対するデンドロゲニンＡ／ボルテゾミブの組み合わせの相乗活性
【０１７０】
９６ウェルプレート中に、HL60細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びボルテゾミブの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１７１】
図２１に示すとおり、デンドロゲニンＡとボルテゾミブの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株HL60の生存率を相乗的に低減する。
【０１７２】
試験例２２
細胞毒性薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／三酸化ヒ素の組み合わせの相乗活性
【０１７３】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び三酸化ヒ素の用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１７４】
図２２ａ、２２ｂ、及び２２ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。相乗効果は、大部分のがん細胞に作用した場合にのみ認められ、そのため、最適な相乗効果の範囲になるように、腫瘍のデンドロゲニンＡ及び三酸化ヒ素に対する感受性の有益な知見が必要とされる。
【０１７５】
試験例２３
細胞毒性薬剤感受性の細胞株HL60に対するデンドロゲニンＡ／三酸化ヒ素の組み合わせの相乗活性
【０１７６】
９６ウェルプレート中に、HL60細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び三酸化ヒ素の用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１７７】
図２３ａ、２３ｂ、及び２３ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと三酸化ヒ素の組み合わせは、薬剤感受性の細胞株HL60の生存率を相乗的に低減する。相乗効果は、大部分のがん細胞に作用した場合にのみ認められ、そのため、最適な相乗効果の範囲になるように、腫瘍のデンドロゲニンＡ及び三酸化ヒ素に対する感受性の有益な知見が必要とされる。
【０１７８】
試験例２４
細胞毒性薬剤感受性の細胞株KG1に対するデンドロゲニンＡ／オールトランス型レチノイン酸の組み合わせの相乗活性
【０１７９】
９６ウェルプレート中に、KG1細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びオールトランス型レチノイン酸の用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１８０】
図２４ａ、２４ｂ、及び２４ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとオールトランス型レチノイン酸の組み合わせは、薬剤感受性の細胞株KG1の生存率を相乗的に低減する。
【０１８１】
試験例２５
細胞毒性薬剤感受性の細胞株HL60に対するデンドロゲニンＡ／オールトランス型レチノイン酸の組み合わせの相乗活性
【０１８２】
９６ウェルプレート中に、HL60細胞を播種した（５００００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びオールトランス型レチノイン酸の用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１８３】
図２５ａ、２５ｂ、及び２５ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとオールトランス型レチノイン酸の組み合わせは、薬剤感受性の細胞株HL60の生存率を相乗的に低減する。
【０１８４】
試験例２６
薬剤感受性の細胞株MCF-7に対するデンドロゲニンＡ／5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗活性
【０１８５】
９６ウェルプレート中に、MCF-7細胞を播種した（５０００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び5-フルオロウラシルの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１８６】
図２６ａ、２６ｂ、及び２６ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株MCF-7の生存率を相乗的に低減する。相乗効果は、大部分のがん細胞に作用した場合にのみ認められ、そのため、最適な相乗効果の範囲になるように、腫瘍のデンドロゲニンＡ及び5-フルオロウラシルに対する感受性の有益な知見が必要とされる。
【０１８７】
試験例２７
薬剤感受性の細胞株SK-MEL-28に対するデンドロゲニンＡ／5-フルオロウラシルの組み合わせの相乗活性
【０１８８】
９６ウェルプレート中に、SK-MEL-28細胞を播種した（５０００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及び5-フルオロウラシルの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１８９】
図２７ａ、２７ｂ、及び２７ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡと5-フルオロウラシルの組み合わせは、薬剤感受性の細胞株SK-MEL-28の生存率を相乗的に低減する。
【０１９０】
試験例２８
薬剤抵抗性の細胞株MCF-7に対するデンドロゲニンＡ／シスプラチンの組み合わせの相乗活性
【０１９１】
９６ウェルプレート中に、MCF-7細胞を播種した（５０００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシスプラチンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１９２】
図２８ａ、２８ｂ、及び２８ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせは、薬剤抵抗性の細胞株MCF-7の生存率を相乗的に低減する。相乗効果は、大部分のがん細胞に作用した場合にのみ認められ、そのため、最適な相乗効果の範囲になるように、腫瘍のデンドロゲニンＡ及びシスプラチンに対する感受性の有益な知見が必要とされる。
【０１９３】
試験例２９
薬剤抵抗性の細胞株SK-MEL-28に対するデンドロゲニンＡ／シスプラチンの組み合わせの相乗活性
【０１９４】
９６ウェルプレート中に、SK-MEL-28細胞を播種した（５０００細胞／ウェル）。細胞を播種直度からデンドロゲニンＡ及びシスプラチンの用量を増加させつつ４８時間処理した。細胞の生存率を試験例１で説明したＭＴＴアッセイで測定した。
【０１９５】
図２９ａ、２９ｂ、及び２９ｃに示すとおり、デンドロゲニンＡとシスプラチンの組み合わせは、薬剤抵抗性の細胞株SK-MEL-28の生存率を相乗的に低減する。相乗効果は、大部分のがん細胞に作用した場合にのみ認められ、そのため、最適な相乗効果の範囲になるように、腫瘍のデンドロゲニンＡ及びシスプラチンに対する感受性の有益な知見が必要とされる。
【０１９６】
試験例３０
デンドロゲニンＡは、核型及び表現型が異なるAML患者サンプルのダウノルビシンに対する細胞毒性感受性を増加させる
【０１９７】
６マイクロウェルプレート中に、０．５×１０６の患者細胞を播種した。同日に、溶剤ビヒクル、又は種々の濃度のデンドロゲニンＡ（最終濃度：５μＭ）単独、若しくはダウノルビシンとの組み合わせ（最終濃度：１０ｎＭ）をウェルに加えた。４８時間の培養後、細胞懸濁液を遠心分離し、ＰＢＳで洗浄し、キットプロトコル(アネキシンV-FitC／7-AAD染色キット、Roche Applied Science)に記載されているとおりに、細胞ペレットをアネキシンV-FitC及び7-AADを含む標識溶液中で再懸濁した。次いで、細胞を室温、暗所で１５分間培養し、Facsフローサイトメトリーにより解析した。結果を図３０に示す。
【０１９８】
この試験例は、デンドロゲニンＡが、ダウノルビシンに対して抵抗性である腫瘍細胞の高い又は中程度の細胞死の割合をもたらすことができることを示し、また、デンドロゲニンＡとダウノルビシンの組み合わせが、同じ腫瘍細胞の完全な細胞死の割合をもたらすことができることを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図２９Ｃ】
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【図３０】
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【国際調査報告】
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