(57)【要約】  エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を有する組成物。エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を調製する方法。エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の様々な比を有するアムラ種子ブレンド組成物。総コレステロールを減少させ、トリグリセライドを減少させ、血糖値を減少させ、ＨＤＬ−Ｃレベルを増やし、総コレステロール比に対してＨＤＬ−Ｃレベルを増加して、ＬＤＬ−Ｃレベルを低下させ、ＣＲＰレベルを減少させ、内中膜複合体厚を減少させ、哺乳類特にヒトにおける抜け毛を減少させるための栄養補助食品上もしくは医薬上の種々の方法。エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物、もしくはアマラ種子ブレンド生成物は、エンブリカのオフィシナリスの果物から調整される色々な抽出物に比べてより効果的である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリテルペノイド、ヒドロキシ桂皮酸、脂肪酸およびポリフェノールを含むことを特徴とするエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物。
【請求項２】
前記トリテルペノイドはベータシトステロール、ベータアミリンおよびルペオールを含むことを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
前記ヒドロキシ桂皮酸はフェルラ酸およびｐ−クマル酸を含むことを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項４】
前記脂肪酸はアルファリノレン酸、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸およびパルミチン酸を含むことを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項５】
前記トリテルペノイドは前記抽出物に約０．５％乃至約２０％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項６】
前記ヒドロキシ桂皮酸は前記抽出物に約５％乃至約０．５％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項７】
前記脂肪酸は前記抽出物に約２５％乃至約５０％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項８】
前記ポリフェノールは前記抽出物に約１０％乃至約２０％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項９】
前記トリテルペノイドは前記抽出物に約９．５％含まれることを特徴とする請求項１に記載の前記抽出物。
【請求項１０】
前記ヒドロキシ桂皮酸は前記抽出物に約４．３％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項１１】
前記脂肪酸は前記抽出物に約４１．８％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項１２】
前記ポリフェノールは前記抽出物に約１５％含まれることを特徴とする請求項１に記載の抽出物。
【請求項１３】
前記種子抽出物はさらに、ラクトース、噴霧乾燥ラクトース、デンプン、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、および炭酸カルシュウムからなる群から選択される充填剤を含むことを特徴とする請求項１に記載の抽出物を含む種子抽出物製品。
【請求項１４】
剤形はヒト被験体における用量あたり約５ｍｇ乃至約５００ｍｇの範囲の用量を含み、当該剤形は一日当たり一回又は一回以上投与されることを特徴とする請求項１のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を含む剤形。
【請求項１５】
前記剤形はカプセル、錠剤、顆粒剤、小袋、粉末、ペースト、軟膏、点滴、注射、アンプル、溶液、懸濁液、乳濁液、丸薬、油及びクリームを含むことを特徴とする請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を含む剤形。
【請求項１６】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することを含むことを特徴とする総コレステロールを低下させる方法。
【請求項１７】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することを含むことを特徴とするトリグリセリドを減少させる方法。
【請求項１８】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することを含むことを特徴とする血糖値を低下させる方法。
【請求項１９】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の前記抽出物を投与することを含むことを特徴とするＨＤＬコレステロールを高める方法。
【請求項２０】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の前記抽出物を投与することを含むことを特徴とする総コレステロール対するＨＤＬコレステロールの比を増大させる方法。
【請求項２１】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の前記抽出物を投与することを含むことを特徴とするＬＤＬコレステロールレベルを低下させる方法。
【請求項２２】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することを含むことを特徴とするＶＬＤＬを低下させる方法。
【請求項２３】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の前記抽出物を投与することを含むことを特徴とするＣＲＰを低下させる方法。
【請求項２４】
請求項１に記載のエンブリカのオフィシナリスの種子の前記抽出物を投与することを含むことを特徴とする内中膜複合体厚を減少させる方法。
【請求項２５】
請求項１に記載のオフィシナリスのエンブリカの種子の前記抽出物を投与することを含むことを特徴とする抜け毛を低減させる方法。
【請求項２６】
エンブリカのオフィシナリス新鮮な果物の種子を除去してエンブリカのオフィシナリスの種子を得て、エンブリカのオフィシナリスの種子を粉砕して粉砕された種子を得て、９５％メタノールを用いて前記粉砕した種子を抽出して残滓及び上澄みを得て；
前記上澄みを濃縮して濃縮されたメタノール抽出物を得て、前記濃縮されたメタノール抽出物を乾燥させてエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末を得ることを特徴とする請求項１のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の調製する方法。
【請求項２７】
水中でエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末を浸軟して液体を得て、酢酸エチルを用いて前記液体を抽出して酢酸エチル相を得て、前記酢酸エチル相を濃縮し濃縮された酢酸エチル相を得て、当該濃縮された酢酸エチル相を乾燥させてエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の粉末を得ることを特徴とする請求項２６に記載のエンブリカ・オフィシナリスの種子の抽出物を調製する方法。
【請求項２８】
請求項２６に記載の方法により調製されることを特徴とするエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物。
【請求項２９】
請求項２７の記載の方法により調製されることを特徴とするエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物。
【請求項３０】
エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を調製する方法であって、当該方法は：
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物の種子を取り除いてエンブリカのオフィシナリスの種子を得て、エンブリカのオフィナリスの前記種子を粉砕して粉砕された種子を得て、酢酸エチルを用いて前記粉砕された種子を抽出し上澄みを得て、当該上澄みを濃縮して濃縮された酢酸エチル抽出物を得て、当該酢酸エチル抽出物を乾燥してエンブリカのオフィシナリスの種子の前記酢酸エチル粉末を得ることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法により調製されることを特徴とするエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物。
【請求項３２】
製品１は、アルファリノレン酸、リノール酸、およびオレイン酸を含み、製品２は、トリテルペノイドおよびヒドロキシ桂皮酸を含み、前記製品１と前記製品２の比は１：６０乃至約９９：約１の範囲であることを特徴とする前記製品１と前記製品２のブレンドを含むアムラ種子ブレンド。
【請求項３３】
前記トリテルペノイドは前記製品に約６％乃至約５０％含まれることを特徴とする請求項３２に記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項３４】
前記トリテルペノイドはベータシトステロール、ベータアミリン及びルペオールを含むことを特徴とする請求項３２記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項３５】
前記ヒドラキシ桂皮酸は前記アムラ種子ブレンドに約２％乃至約２０％含まれることを特徴とする請求項３２記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項３６】
前記ヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸およびｐ−クマル酸を含むことを特徴とする請求項３２に記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項３７】
さらに脂肪酸を約１０％乃至約６０％含むことを特徴とする請求項３２に記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項３８】
前記脂肪酸が不飽和脂肪酸を含むことを特徴とする、請求項３２に記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項３９】
前記不飽和脂肪酸は、アルファリノレン酸、リノール酸およびオレイン酸を含むことを特徴とする請求項３８に記載のアムラ種子ブレンド。
【請求項４０】
前記比は１０：１から１：１０からなる群から選択されることを特徴とする請求項３２のアムラ種子ブレンド。
【請求項４１】
前記剤形は約５ｍｇから約５００ｍｇの範囲の投与量を含むことを特徴とする請求項３２に記載のアムラ種子ブレンドを含む剤形。
【請求項４２】
剤形はカプセル、錠剤、顆粒剤、小袋、粉末、ペースト、軟膏、点滴、注射、アンプル、溶液、懸濁液、乳濁液、丸薬、オイル、およびクリームを含むことを特徴とする請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを含む剤形。
【請求項４３】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とする総コレステロールを減少させる方法。
【請求項４４】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とするトリグリセリドを低下させる方法。
【請求項４５】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とする血糖値を低下させる方法。
【請求項４６】
請求項３２に記載のアムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とするＨＤＬコレステロールを高める方法。
【請求項４７】
請求項３２に記載のアムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とする総コレステロールに対する前記ＨＤＬコレステロールを増加させる方法。
【請求項４８】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とするＬＤＬコレステロールレベルを低下させる方法。
【請求項４９】
請求項３２に記載の前記抽出物アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とするＶＬＤＬを低下させる方法。
【請求項５０】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とするＣＲＰレベルを減少させる方法。
【請求項５１】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とする内中膜複合体厚を減少させる方法。
【請求項５２】
請求項３２に記載の前記アムラ種子ブレンドを投与することを含むことを特徴とする抜け毛を低減する方法。
【請求項５３】
前記製品１と前記製品２をブレンドして前記アムラ種子ブレンドを得るすることを含む方法であって、前記製品１を調製する方法は、
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果実の種子を除去してエンブリカのオフィシナリスの種子を得て、
エンブリカのオフィシナリスの前記種子を粉砕して砕いた種子を得て、
９５％メタノールを用いて前記粉砕した種子を抽出し残渣及び上澄みを得て、
前記上澄みを濃縮して濃縮されたメタノール抽出物を得て、
前記濃縮されたメタノール抽出物を乾燥させエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末を得て、
水中のエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の前記粉末を分散して分散液を得て、
ヘキサンで前記分散液を抽出し水相とヘキサン相を得て、当該ヘキサン相を濃縮し濃縮したヘキサン抽出物の液体の形態を得て、
前記濃縮されたヘキサン抽出物の前記液体の形態を冷却し沈殿物または結晶及び液体部分を得て、
前記沈殿物または前記結晶から前記液体部分を分離して液体生成物１を得て、
酢酸エチルで前記水相を抽出し酢酸エチル相を得て、当該酢酸エチル相を濃縮し濃縮酢酸エチル相を得て、当該濃縮酢酸エチル相を乾燥し酢酸エチル抽出物の粉末を得て、
前記酢酸エチル抽出物の前記粉末を水と混合してクロマトグラフィー分離のための液体を得て、
クロマトグラフィー分離用の前記液体をイオン交換カラム上に装填し、水で前記イオン交換カラムを溶出して水フラクション（フラクション１）を得て、
前記フラクション１を濃縮してフラクション１の濃縮液を得て、
前記フラクション１の濃縮液を乾燥しフラクション１の粉末を得て、
５０％メタノールで前記イオン交換カラムを溶出してフラクション２を得て、
当該フラクション２を濃縮してフラクション２の濃縮液を得て、
フラクション２の前記濃縮液を乾燥してフラクション２の粉末を得て、
８０％メタノールで前記イオン交換カラムを溶出してフラクション３を得て、
前記フラクション３を濃縮してフラクション３の濃縮液を得て、
フラクション３の前記濃縮液を乾燥してフラクション３の粉末を得て、
フラクション１、フラクション２、フラクション３を組み合わせて製品２を得て、
製品２の製品１に対するある比で製品２と製品１とをブレンドするもので、当該比は約１：６０乃至約９９：１の範囲にあり前記アムラ種子ブレンドを得ることを特徴とする
請求項３２に記載の前記アムラシードブレンドを調製する方法。
【請求項５４】
請求項５３に記載の前記方法によって製造されることを特徴とするアムラ種子ブレンド。
【請求項５５】
約０．５乃至約２０％のトリテルペノイド、約２５％乃至約５０％の脂肪酸、及び約１０％乃至約２０％のポリフェノールを含むエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物であって、前記トリテルペノイドはベータシトステロール、ベータアミリン及びルペオールを含み、前記ヒドロキシ桂皮酸はフルリック酸及びｐ−クマル酸を含み、前記脂肪酸はアルファリノレン酸、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸及びパルミチン酸を含み、前記ヒドロキシ桂皮酸は前記ポリフェノールの約２．５％乃至約５０％を含むことを特徴とする抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示はエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の医療用組成物、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物からなる組成物を調製する方法に関し、特に、総コレステロールを減少させる、トリグリセリドを低下させる、血糖価を減少させる、ＨＤＬ−コレステロールを高め、総コレステロール対するＨＤＬ−コレステロールの比を増加させる、ＬＤＬコレストールを低下させる、ＣＲＰレベルを低下させる、内膜メディアの肥厚を減少させる、哺乳動物特にヒトの抜け毛を減少させるための栄養補助食品用もしくは医療用としての用途を有している。この組成物は総コレステロールを減少させる、トリグリセリドを低下させる、血糖値を減少させる、ＨＤＬ−コレステロールを高める、総コレステロール対するＨＤＬ−コレステロールの比を増加させる、ＬＤＬコレストールを低下させる、ＣＲＰレベルを低下させる、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させる、及び抜け毛を減少させるために低い用量でさえ効果的である。
【背景技術】
【０００２】
アムラ（またはアムラカ、アムラキ、もしくは変異体）は、アーユルべータハーブの最も頻繁に使用されるものの１つであり、それはまたエンブリカのオフィシナリスとも呼ばれるコミカンソウ属の果物である。この果物はアムラに植物学的に関係のない共通のグーズベリ−（スグリ属、スグリの一種）に外観が似ている。しかしながら、果物のクラスタの類似の外観のために、アムラは通常「インドのグーズベリ−」と呼ばれている。この植物、トウダイグサ科のメンバーは、海抜２００ｍから約２，０００ｍのインド亜大陸全体の平野と山岳地のような地域で成長して発見されている中規模の木になるように成長する。インドのグーズベリ−は不思議なハーブであり且つ人間にとって自然の貴重な贈り物の１つである。これは健康と長寿に貢献する。
【０００３】
エンブリカのオフィシナリス（ＥＯ）は、医学のアーユルベーダインドの土着システムにおいて神聖な位置を享受している。古代インドの神話によれば、それは宇宙で創出されるべき最初の木である。エンブリカのオフィシナリスの果物はバイタライジングと癒しの健康強壮剤として何千年もの間インドで使用されている有名なアーユルベーダの調合剤、チャンワンプラッシュの主要な構成成分のひとつである。アーユルベーダによれば、アムラはすべての三つのドーシャのバランスをとる。それはアーユルベーダによって認識される６味のうち５つ含まれるという点でアムラは珍しいものであるが、ビィーリヤもしくは潜在的な効果、及びビパーカの各効力もしくはポスト消化力を認識することが最も重要である。ＥＯの種々の果物はアーユルベーダで広く使用されており、そして色々な疾患に対する防御を増加させるものと信じられる。
【０００４】
冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）はほとんどの先進国及び発展途上国における早期死亡の主要な原因であり続けている。ＨＤＬコレステロールの低レベルは、多数の臨床的及び疫学的研究(Gorden,D及びRifkind,H.M,N.Engl.J.Med.J.,1989,321:1311-1315;Brewer.Jr.H.B.,New Engl.J.Med,2004,350;1491-94)において実証されているようにＣＨＤのための第２の最も重要な危険因子であり、そしてＨＤＬは過去十年間の間心血管疾患の治療のための新たな潜在的なターゲットとして現れてきた。逆コレステロール輸送経路における過剰な細胞コレステロールの担体としてのＨＤＬの大切な役割は、アテローム性動脈硬化に対する保護を提供するものと信ぜられる。逆コレステロール輸送において、抹消組織、例えば血管壁のマクロファージはプリベータＨＤＬを形成する不十分な脂質化アポリポタンパク質Ａ−１へのＡＴＰ結合カッセットトランスポータ１（ＡＢＣＡ１）を通ってそれらの過剰なコレステロールを除去する。レシチンコレステロールアクリルトランスフェラーゼは次いで遊離コレステロールをコレステリルエステルへエステル化して、プレベータＨＤＬを成熟した球面アルファーＨＤＬへ変換する。
【０００５】
ＨＤＬコレステロールは２つの経路によって肝臓に輸送される。即ち１）それはスカベンジャー受容体、クラスＢ、タイプＩ（ＳＲ−ＢＩ：２）との相互作用を介して肝臓に直接供給される。２）ＨＤＬ中のコレステロールエステルは非常に低密度のリポタンパク質及び低密度のリポタンパク質（ＬＤＬ）に前記コレステロールエステルトランスフェラーゼタンパク質（ＣＥＴＰ）によって転写され、そして次いで前記ＬＤＬ受容体を介して前記肝臓に戻される。肝臓によって取り込まれるＨＤＬコレステロールは次いで胆汁酸およびコレステロールの形で排泄され、コレステロール逆輸送のプロセス(Brewer,H.B.Jr.,Arterioscl.Thromb.Vasc.Biol.,2004,24:387-91)を完了する。
【０００６】
ＨＤＬは色々なマクロファージからコレステロールを除去して泡沫細胞の形成を阻止する能力を有すると信ぜられる。
【０００７】
アテローム性動脈硬化症におけるＨＤＬの第２の有益な役割は、酸化からＬＤＬを保護することである（Navab,M.ら,circulation,2002,105,290-92）。正常なＬＤＬとは異なり、酸化されたＬＤＬは泡沫細胞の形成をもたらすマクロファージスカベンジャー受容体ＳＲ−ＡまたはＣＤ３６に容易に取り込まれる。各泡沫細胞は、早期アテローム性動脈硬化病変の主要成分である。また、ＨＤＬは血管壁への細胞の取り込みを促進する内皮細胞接着分子の産生を選択的に減少させることによって、病変の進行を遅らせることができる（Barter,P.J.,ら,Curr.Opin.Lipid,2002,13:285-88）。ＨＤＬはまた、プロスタサイクリンの半減期を延長し、そしてその血管拡張作用を維持することができる（Mackness,M.I.ら,Atherosclerosis,1993,104:129-35）。
【０００８】
いくつかの証拠は、ＨＤＬレベルを増加させることがアテローム性動脈硬化症の発症に対する防御を提供し得るという考えを支持する。疫学的研究は、ＨＤＬコレステロールレベルと心血管疾患のリスクの間の逆の関係を示した。１ｍｇによってＨＤＬコレステロールレベルを増加させると２乃至３パーセントだけ心血管疾患のリスクを減少させることができる。全体に亘り、トランスジェニックマウスおよびウサギにおいてアポＡ−１遺伝子を発現させること、及び高脂血症ウサギにアポＡ−ｌおよびリン脂質からなる錯体を浸出させることはＨＤＬコレステロールレベルを増加させ、そしてアテローム性動脈硬化症（ブリューワー、ＨＢ、ジュニア、前掲）の進行を減少させる。ヒトでは、これらの錯体もしくはプローアポーＡ―Ｉの何れかの浸出は、ＨＤＬコレステロール、胆汁コレステロール及び糞便コレステロール損失における短期間の増加となり、ＨＤＬコレステロールレベルの増加が心血管疾患のリスクを低下させるという概念を強固にする。
【０００９】
心筋梗塞患者の４０％以上は、心臓の危険因子としての低ＨＤＬ−Ｃを持っている。（Genest,J.J.ら,Am.J.Cardiol.,1991,67：1185-89）。血栓障害、喉頭炎、狭心症に関する将来的で且つ多中心的な欧州の協調行動（ECAT）における研究では、Bolibarら（Thromb. Haemost,2000,84:955-61）は、低ＨＤＬ−Ｃと低アポＡ−Ｉを血管造影評価ＣＨＤを有する患者における冠動脈イベントのための最も重要な生化学的危険因子として同定した。慣例により、ＨＤＬ−Ｃのリスク閾値は、男性で３５ｍｇ／ｄＬ未満（０．９ミリモル／Ｌ）および女性では４５ｍｇの／ｄＬ未満（１．１５ミリモル／Ｌ）［成人における高い血中コレステロールの検出、評価および治療に関する専門家パネル。成人における高い血中コレステロールの検出、評価および治療に関する全米コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）専門家パネルの第２報告書（成人治療パネルＩＩ）.Curculation.1994;89:1329-1445)。］相互作用のために、ＨＤＬ−Ｃおよび心血管リスクとの間の関連の強さは、追加の危険因子の存在に依存する。それ故、閾値は、糖尿病又は高コレステロール血症を有する男性または複数の危険因子の存在下で高い（フォンエッカルトシュタインＡ、及びアスマンG. CURR OPIN Lipidol 2000; 1:627から637）。低いＨＤＬ−Ｃは早発性心筋梗塞を有する患者において最も頻繁な家族性の異常リポ蛋白血症として同定されてきた（Genest, J.J.Jr.,Circulation.1992;85:2025-2033）。最後に、ヘルシンキ心臓研究で（Manninen、V.等、循環1992; 85:37-45）および退役軍人局（ＶＡ−ＨＩＴ）研究の高密度リポ蛋白コレステロールの介入試験（Rubins,H.B.ら、N Engl J Med.1999; 341:410-418）、ゲムフィブロジルを用いた治療上のＨＤＬ−Ｃの増加がＣＨＤイベントの予防と相関していた。かくして、ＨＤＬ−Ｃはアルゴリズムの重要な構成要素となって、患者の全体的な心血管リスクと治療的介入のためおよび治療目標の定義のための標的とを評価した。
【００１０】
アテローム性動脈硬化症に脂質異常症を修正するための戦略は、一般的に食事療法および／または薬物を含む。ダイエットや薬物療法が開始されるべきそれより上のしきい値血清総コレステロールおよびＬＤＬコレステロール濃度、ならびに治療の目標は全米コレステロール教育プログラム（JAMA、1993、269:3015-23）によって定義されてきた。目標の血清ＬＤＬ−Ｃは、危険因子を持たないかもしくはＣＨＤのための危険因子がたった１つある患者のとっては＜１６０ｍｇ／ｄｌ（４．３ミリモル／ｌ）であり、２もしくはそれ以上の危険因子を有する患者にとっては＜１３０ｍｇ／ｄｌ（３．４ミリモル／ｌ）であり、更にＣＨＤを有する患者にとっては、１００ｍｇ／ｄｌ（２．６ミリモル／ｌ）未満である。糖尿病の人はまた、第三のカテゴリーに分類される。トリグリセリド濃度のための合理的な目標は、２００ｍｇ／ｄｌ以下である。血清コレステロール濃度が２４０ｍｇ／ｄｌを超える場合もしくはＬＤＬ−Ｃ／ＨＤＬ−Ｃ比が５：１を超える場合に、より高い値は心血管疾患のリスクの倍増と関連していた。
【００１１】
多数の研究は、低い血清コレステロール濃度おけるコレステロール心臓病の関連が希薄化するため（グランディ、ＳＭ、循環、１９９８、９７：１４３６から１４３９）、前記ターゲットレベル以下の血清がＬＤＬ−Ｃの濃度を減少させるとＣＨＤの危険における比例削減に必ずしもなるわけではないことを示した；１３８３年から１３８９年：目標レベル以下に必ずしもなるわけではないことを示した［（スカンジナビアシンバスタチン生存研究会）。冠状動脈性心臓病を有する４４４４人の患者にコレステロール低下の無作為化試験、Lancet,1994,344:1383-89,Shepherd,J.ら,N. Engl.J.Med.,1995,333:1301-7;Sachs,F.M.ら.N.Engl.1998,315:1001-9,Circulation,1998,97:1446-52;スコットランド予防研究会グループ, Circulation,1998,1440-45; Pederson,T.R.Circulation,1998 97:1453-60］
【００１２】
高脂血症の食事療法は、薬物治療のために必要な基礎である。高脂血症の程度に応じて、ステップＩ及びステップＩＩダイエットを順次導入することができる。ステップＩＩダイエットは一日あたりの飽和脂肪酸とコレステロール２００ｍｇ未満から脂肪からのカロリーの３０％以下、カロリーの７％未満が含まれていない。長期的な研究では、ステップＩＩダイエットは、血清ＬＤＬ−Ｃ濃度を８から１５パーセントだけ減少させた（knopp、R.H.ら、JAMA、1997、278:1509-15;Walden,C.E.,Arterioscl Thromb.Vase.Biol.,1997,17:375-82; Denke,M.A.,Arch.Intern.Med,1995,156:176-26）。ステップＩＩダイエット食よりも脂肪においてより制限されたダイエット食は、ＬＤＬ−Ｌにおける付加的な減少はほとんどなく血清ＴＧ濃度を上昇させると共にＨＤＬ−Ｃを低下させる。
【００１３】
上記から、注意すべき点は、単独でＬＤＬ−Ｃを低減することがＣＨＤのリスクを減らすにはほとんど価値がないということである。また、食事療法はＬＤＬ−Ｃを同程度にＨＤＬ−Ｃを減少させることができる（Hunninghake,DBら.,N.Engl.J.Med.,1993,328:1213-19;Schaefer,E.J.ら,Arterioscl Thromb. Vasc.Biol.,1995,15:1079-1085);Stefanick、M.L.,N.Engl.J.Med,1998,339:12-20）。
【００１４】
薬物療法は、所望の効果を単独でダイエットを用いて達成されていないときに頼っている。スタチンは、脂質低下薬の中で最も人気がある。ＬＤＬ受容体の活性をアップレギュレートするだけでなく、循環系へのＬＤＬの侵入を低減することにより、これらの薬剤は血清ＬＤＬ−Ｃの濃度を低下させる。最大の減少は２４から６０パーセントからスタチン範囲で達成した。スタチンはまた、血清ＴＧレベルを低下させる。しかし、それらはしばしば不十分である。スタチンは、カイロミクロン血症を有する患者の治療に効果がない。スタチンの副作用は、胃腸障害、筋肉痛や肝炎を含む。まれな問題は、睡眠中ミオパチー（リットル当たり１０００Ｕ以上の血清クレアチンキナーゼ濃度の筋肉痛）、発疹、末梢神経障害、不眠症、悪夢または鮮明な夢や集中又は睡眠傷害を含む（Abramowica、M.、Med Lett,1996,38:67-70;Vgontzas,A.N.ら、Clin.Phartinen,M.ら,1991,50:730-737;Roth, T.ら、Clin Cardiol、1992,15:426-32;Partinen,M.ら,Am.J.Cardiol、1994,73:876-880）。他の脂質低下薬は、胆汁酸結合樹脂（例えば、コレステラミンおよびコレスチポール）、ニコチン酸、およびフィブラートを含む。
【００１５】
薬物療法は、３５歳未満の閉経前の女性と男性には、２２０ｍｇ／ｄｌ以上（５．７ミリモル／１）の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度でない限り、心臓病の彼らの差し迫ったリスクが低いため、推奨されていない。［全米コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）の第二のレポートの概要：３０１５から２３：検出、成人の高い血中コレステロールの評価と治療、JAMA、1993、269:3015-23の専門家パネル］。
【００１６】
このように、ダイエット単独で、または脂質低下薬と併用して、安全な脂質低下の所望の目標を得るために失敗する。しかし、この目標は、エンブリカのオフィシナリスの種子の活性成分を含有する本発明の組成物で達成可能である。エンブリカは、アーユルヴェーダ製剤の構成要素として何千年もの間インドで安全に使用されてきた。エンブリカのオフィシナリスの種子からの組成物は、有害なＬＤＬコレステロールを減少させ、望ましいＨＤＬコレステロールを高めるツインメリットを提供していた。
【００１７】
多くの研究は、エンブリカのオフィシナリスが総コレステロールを低下させる、ＬＤＬコレステロールを低下させる、ＨＤＬコレステロールを高める、トリグリセリドを減少させるために有用であることを示している。
【００１８】
Ｒｉｔｕマートゥルらは、コレステロール食ウサギにおけるエンブリカのオフィシナリスのフルーツジュースの脂質低下効果を示し、ジュースは種子を除去したエンブリカのオフィシナリスから得られる。ＵＳ６１２４２６８、Ｇｈｏｓａｌは新鮮な果実（エンブリカのオフィシナリス）の果皮を使用して、エンブリカのオフィシナリスからの天然の抗酸化組成物を開示している。ビスワスゴパらは、アムラ（エンブリカのオフィシナリス）の脂質低下効果を示した。アムラの使用は、アムラ果汁粉末を乾燥させた。モハメドらは、正常及び糖尿病のヒトボランティアにエンブリカのオフィシナリスの粉末の抗高血糖および脂質低下特性を評価した。Ｚｈａｎｇらはエンブリカのオフィシナリスのジュースのフェノール成分を開示している。チャタジーらは、エンブリカのオフィシナリス（ＥＯ）果実抽出物から脂質低下作用を有する新規化合物を開示している。米国特許第７７８０９９６、８１５８１６７および８４５５０２０は、コレステロール、脂質異常症およびエンブリカのオフィシナリスの抽出により、トリグリセリドを低減する方法を治療する方法を低減する方法を開示している。
【００１９】
アムラは、薬効の広い範囲で果実である。私たちの努力は、ほとんどの生物活性分子／（複数可）またはアムラ果実からの生物活性を有するその精製フラクション（画分）を見出すことであった。アムラ果実の肉質部分（果皮）は、人間の消費のために使用されいるにも関わらず、アムラの種子は食用に適さず廃棄されていた。我々は様々なアムラ抽出物を評価した。アムラの新鮮な果実から調製した抽出物；アムラの肉質部分および種子を含む全アムラのフルーツジュース；肉質の部分（果皮）のジュース；ドライフルーツ；種子なしアムラ果実の果肉；もしくは単独アムラの種子が抗高脂血症活性のために評価された。すべてのグループのメタノール抽出物は、有益な活性を示したが、ほとんどの予想外の優れた結果は、アムラ種子単独抽出物から得られた。アムラ種子単独抽出物は、著しく総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、ＶＬＤＬコレステロールを低下させ、ＨＤＬコレステロール値のレベルを高めることができた。アムラ種子はヒトの消費のなんらかの歴史を有することが知られていないが、我々は、アムラの種の様々な抽出物のリードに従い、アムラの種子抽出物の酢酸エチルの部分が最も活性であることを見出した。この酢酸エチル部分は、アムラ種子の他の抽出物と、アムラの他の抽出物に比べてはるかに優れた活性を示していた。
【００２０】
上記の観点において、本開示は、悪玉コレステロールや、脂質異常症を低減させる治療のため及びトリグリセリドを減少させるための用途を見出し、特にその果実から抽出物がエンブリカのオフィシナリスから調製される他の参考文献とは異なり、エンブリカのオフィシナリスの種子から抽出物を調製する組成物および方法を提供する。本開示は、エンブリカのオフィシナリスの抽出物と、ポリフェノールの成分と親油性成分が含まれている導出される組成物とを調製する方法を提供する。エンブリカのオフィシナリスの種子から調製された抽出物は、低い用量レベルで総コレステロールを減少させ、トリグリセリドを低下させ、血中グルコースレベルを低下させる、ＨＤＬコレステロールレベルを高め、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比を増加させ、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる、ＣＲＰレベルを減少させる、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させるために有用である。さらに。エンブリカのオフィシナリスの種子から調製した抽出物は、局所的に適用することによって、または経口投与により、ヒトにおける抜け毛を低減するために有用である。
【発明の概要】
【００２１】
本開示は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物（アムラ種子抽出物）の医薬組成物を提供する。アムラ種子抽出物組成物は、総コレステロールを低下させる、トリグリセリドを低下させる、血糖値を低下させる、ＨＤＬ−コレステロールレベルを高め、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールのＨＤＬを増加させ、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる、ＣＲＰレベルを減少させ、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させ、哺乳動物、特にヒトにおいて抜け毛を減少させる減少させるためにそれらの作用を含む栄養補助食品または医薬品の用途を有する。
【００２２】
エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の組成物は、総コレステロールを減少させ、トリグリセリドを減少させ、血糖値を低下させ、ＨＤＬコレステロールレベルを向上させ、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比を増加させ、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させ、ＣＲＰレベルを減少させ、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させ、抜け毛を減少させことを含む表示のためのエンブリカのオフィシナリスの果実から抽出物と比較して優れている。
【００２３】
アムラの果実抽出物またはアムラ種子抽出物の同じ用量が投与された場合、アムラ種子抽出物はアムラの果実抽出物と比較して優れた結果を示した。
【００２４】
アムラの果実抽出物の投与量は、アムラ種子抽出物と比較して増加した場合であっても、アムラ種子抽出物投与はアムラ果実抽出物と比較して優れた結果を示した。
【００２５】
いくつかの実施の形態では、アムラ種子ブレンド組成物（また、アムラ種子ブレンド又は製品３と呼ばれる）を提供する。製品３は、製品１と製品２製品のブレンドである。製品１は、アルファリノレン酸、リノール酸、オレイン酸を含む。製品２は、トリテルペノイドおよびヒドロキシ桂皮酸を含む。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：６０乃至約９９：１の範囲の割合で配合される。
【００２６】
本開示は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を調製する方法を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物は、栄養補助食品として使用することができる。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物は、医薬品として使用することができる。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、総コレステロールレベルを低下させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物を投与することは、トリグリセリドレベルを減少した。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物を投与すると、血糖値を低下させた。いくつかの実施の形態においては、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与は、ＨＤＬ−コレステロールのレベルを増加させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、総コレステロールのＨＤＬコレステロールの比を増加させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種の開示された抽出物を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与は、ＣＲＰレベルを減少させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与は、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物を投与は、抜け毛を減少させた。
【００２７】
いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を製造する方法が開示されている。この方法は、エンブリカのオフィしナリスの果物の種子を除去することに続いて原材料（エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物）を選択することを含む。次いで、エンブリカのオフィシナリスの種子が粉砕され、そして溶媒を用いて抽出される。溶媒は、混合物を得るために、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ｎ−ブチルおよびそれらの組み合わせを含む。この混合物が濾過される。その濾液は、濃縮した抽出物を得るために、濃縮される。濃縮された抽出物が乾燥され乾燥された抽出物を形成した。この乾燥抽出物が水に浸軟されて、酢酸エチルで分離された。酢酸エチル部分と水性部分が形成され、そして酢酸エチル部分を収集する。酢酸エチル部分が濃縮され、そして乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子の酢酸エチル抽出物の粉末を形成する。
【００２８】
エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、エンブリカのオフィシナリスの新鮮な及び乾燥した種子から調製することができる。
【００２９】
本開示はまた、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の剤形を提供する。この開示は、経口投与のためのエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の剤形を提供する。抽出物の剤形は、カプセル、錠剤、顆粒剤、小袋、粉末、ペースト、軟膏、点滴、注射、アンプル、溶液、懸濁液、乳濁液、丸薬、オイル、クリームなどからなる群から選択される。
【００３０】
さらにエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の剤形は、約５ｍｇから約５００ｍｇの範囲に亘る用量でヒト被験体に投与するために開示されている。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
開示された各教示の上記目的および利点は、その中で、添付図面を参照して詳細に好ましい実施の形態において説明することによってより明らかになるであろう。
【図１】図１はエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の調製方法を示すフローチャートである。
【図２】図２はエンブリカのオフィシナリスの種子の酢酸エチル抽出物の調製方法を示すフローチャートである。
【図３】図３はエンブリカのオフィシナリスの果実のペクチナーゼ処理された水抽出物の調製方法を示すフローチャートである。
【図４】図４はエンブリカのオフィシナリスの果実のアルコール抽出物の調製方法を示すフローチャートである。
【図５】図５は種子なしエンブリカのオフィシナリスの果実のペクチナーゼ処理された水抽出物の調製方法を示すフローチャートである。
【図６】図６は種子なしエンブリカのオフィシナリスの果実のアルコール抽出物の調製方法を示すフローチャートである。
【図７】図７はエンブリカのオフィシナリスの乾燥種子の粉末の調製方法を示すフローチャートである。
【図８】図８はエンブリカのオフィシナリスの乾燥種子の水抽出物の粉末の調製方法を示すフローチャートである。
【図９】図９はエンブリカのオフィシナリスの乾燥種子のメタノール抽出物の粉末の調製方法を示すフローチャートである。
【図１０】図１０はエンブリカのオフィシナリスの果実の粉末の調製方法を示すフローチャートである。
【図１１】図１１はエンブリカのオフィシナリスの果物の水抽出物の粉末の製造方法を示すフローチャートである。
【図１２】図１２はエンブリカのオフィシナリスの果物のメタノール抽出物の粉末の調製方法を示すフローチャートである。
【図１３】図１３はアムラ種子ブレンド組成物の調製方法を示すフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本開示は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を提供する。本開示はまた、アムラ種子抽出物ブレンド組成物を提供する。
【００３３】
本開示はエンブリカのオフィシナリスの新鮮なまたは乾燥種子から調製されたエンブリカのオフィシナリスの種子抽出物を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種の開示された抽出物は、栄養補助食品として使用することができる。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物は、医薬品として使用することができる。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、総コレステロールレベルを低下させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、トリグリセリドレベルを減少させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、血糖値を低下させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、ＨＤＬコレステロールのレベルを増加させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比を増加させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物を投与は、ＣＲＰレベルを減少させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させた。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物の投与は、抜け毛を減少させた。
【００３４】
いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の開示された抽出物を投与することは毛髪の成長を促進させた。
【００３５】
エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の組成物は、総コレステロールを減少させる、トリグリセリドを低下させる、血糖値を低下させる、ＨＤＬ−コレステロールのレベルを高める、総コレステロール対するＨＤＬコレステロールの比を増加させる、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる、ＣＲＰレベルを減少させる、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させる、抜け毛を減少させる、更に毛髪の成長を促進するためにエンブリカのオフィシナリスの果物からの抽出物と比較して優れている。
【００３６】
アムラ種子抽出物またはアムラの果実抽出物の同じ用量が投与された場合、アムラ種子抽出物の投与はアムラの果実抽出物の投与と比較して優れた結果を示した。
【００３７】
アムラの果実抽出物の投与量は、アムラ種子抽出物と比較して増加した場合であっても、アムラ種子抽出物の投与はアムラの果実の抽出物と比較して優れた結果を示した。
【００３８】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を提供する。このエンブリカのオフィシナリスの抽出物は、トリテルペノイド、ヒドロキシ桂皮酸、脂肪酸やポリフェノールが含まれている。当該トリテルペノイドは、ベータシトステロール、ベータアミリンおよびルペオールを含む。このヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸およびｐ−クマル酸を含む。前記脂肪酸は、アルファリノレン酸、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸を含む。いくつかの実施の形態において、エンブリカのオフィシナリスの種子から調製される前記抽出物はポリフェノール成分及び親油性成分を含む。
【００３９】
エンブリカのオフィシナリスの種子の前記抽出物のいくつかの実施の形態では、トリテルペノイドは、抽出物の約０．５乃至約２０重量％の範囲である。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、ヒドロキシ桂皮酸の約０．５％乃至約５％を有する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、脂肪酸の約２５％乃至約５０％を有している。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、約１０％乃至約９５％のポリフェノールを有している。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、ポリフェノールの約１０％乃至約２０％を有している。いくつかの実施の形態は、約０．５乃至約２０％のトリテルペノイド、約２５％乃至約５０％の脂肪酸、及び約１０％乃至約２０％のポリフェノールを有するエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を提供する。前記トリテルペノイドは、ベータシトステロール、ベータアミリン及びルペオールを含み、、前記ヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸およびｐ−クマール酸を含み、前記脂肪酸は、アルファリノレン酸、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸を含み、およびポリフェノールの約２．５％乃至約５０％ヒドロキシ桂皮酸である。
【００４０】
いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、約９．５％のトリテルペノイドを有する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、ヒドロキシ桂皮酸の約４．３％である。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、約４１  ．８％の脂肪酸を有する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、約１５％のポリフェノールを有する。
【００４１】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を有する種子抽出物の製品を提供する。種子抽出物製品は、ラクトース、噴霧乾燥ラクトース、デンプン、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、または炭酸カルシウムなどの充填剤を含む。
【００４２】
本開示はエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物から得られたポリフェノール成分および親油性成分を有する組成物に関し、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物内に存在するポリフェノール成分は１０％乃至９５％の範囲である。同様にエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は５％及びそれ以上の範囲の親油性成分含んでいる。
【００４３】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を調製する方法を提供する。この方法は、エンブリカのオフィシナリスの種子を得るために、エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物の種子を除去することを含んでいる。これらの種子は粉砕される。粉砕された種子は、残滓及び上澄みを得るために９５％メタノールで抽出される。上澄みが濃縮され濃縮されたメタノール抽出物を得た。濃縮されたメタノール抽出物が乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末を得た。この方法はさらに、エンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末が水に浸軟され液体を得た。この液体は、酢酸エチル相を得るために、酢酸エチルで抽出した。この酢酸エチル相が濃縮され酢酸エチル相を得た。この濃縮酢酸エチル相が乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の粉末を得た。
【００４４】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を調製する方法を提供する。この方法は、エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物の種子を除去してエンブリカの種子を得た。これらの種子は粉砕される。粉砕された種子は酢酸エチルで抽出され上澄みを得た。この上澄みが濃縮され酢酸エチル抽出物を得た。この濃縮酢酸エチル抽出物が乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子の酢酸エチル抽出物の粉末を得た。
【００４５】
いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物が洗浄され、そして種子が除去される。これらの種子は粉砕され、そして還流式濃縮器を備えた抽出器内で約Ｉの時間抽出がメタノールを用いて行なわれ残滓及び上澄みを得る。これらの残滓と上澄み液は濾布を通して抽出器底から上澄みを排出することによって分離される。得られた上澄みは６５℃の温度において撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内で濃縮されて濃縮された抽出物を形成する。その後この濃縮抽出物は、水銀の上記の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥されてエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末を形成する。
【００４６】
エンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末が水で浸軟され、そして酢酸エチルで分離される。酢酸エチルの一部が収集される。前記攪拌式薄膜蒸発器で酢酸エチル部分が濃縮され、そして水銀の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥させられエンブリカのオフィシナリスのメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の粉末を形成した。［図１］
【００４７】
一実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物が洗浄され、そして種子が除去される。これらの種子が粉砕され、ソックスレー抽出器中で７８℃において酢酸エチルを用いて５時間抽出され、次いで濾過される。得られた抽出物は、濃縮抽出物を形成するために、７５℃の温度において撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内で濃縮される。その後濃縮されたエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物が水銀の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥されてエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の粉末を形成した。［図２］
【００４８】
別の実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの果実のペクチナーゼ処理済水抽出部の粉末を製造する方法は、スラリーを創製すべく脱イオン水でエンブリカのオフィシナリスの果物をパルプ化することによって実行される。当該スラリーはペクチナーゼで処理され、次いで溶液を得るために濾過される。この溶液は濃縮され、真空下で乾燥させられる。乾燥された生成物を粉砕され、そして３０メッシュを通して篩い分けされエンブリカのオフィシナリス果実のペクチナーゼ処理された水抽出物の粉末を得た。［図３］
【００４９】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの果実のアルコール抽出物の粉末を調製する方法を開示している。エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果実が粉砕され、約１時間９５％メタノールを使用して還流式濃縮器を備えた抽出器内で濃縮して残滓及び上澄みを得た。これらの残留物と上澄みが上澄み濾過布を通して抽出器底を排出することによって分離される。得られた上澄みは、６５℃の温度において撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内で濃縮され濃縮された抽出物を形成する。その後濃縮抽出物は、水銀の５００ミリメートル以上の真空下で乾燥されエンブリカのオフィシナリスの果実のメタノール抽出物の粉末を形成した。［図４］
【００５０】
いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子が除去された果実のペクチナーゼ処理水抽出物の粉末の製造方法が開示されている。これらのエンブリカのオフィシナリスの種子が除去された果実は、脱イオン水と一緒にパルプ化されスラリーを作成する。このスラリーはペクチナーゼで処理され、次いで濾過され溶液を得た。この溶液が濃縮され、そして真空下で乾燥させられる。乾燥した材料は粉砕されエンブリカのオフィシナリスの種子が除去された果実がペクチナーゼ処理され水抽出物の粉末を得て３０メッシュを通して篩い分けされる。［図５］
【００５１】
別の実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子が除去された果実のアルコール抽出物の粉末を調製する方法が開示されている。エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果実は種子が除去され、これらの種子が除去された果実が粉砕され、そして還流式濃縮器を備えた抽出器内で９５％メタノールを使用して約１時間抽出され残滓及び上澄みを得た。これら残滓と上澄み液を濾布を通して抽出器底から上澄みを排出することによって分離される。得られた上澄みは、６５℃の温度において撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内で濃縮して濃縮された抽出物を形成する。その後濃縮抽出物は水銀の５００ミリメートル以上の真空下で乾燥させエンブリカのオフィシナリスの種子が除去された果実のメタノール抽出物の粉末を形成した。［図６］
【００５２】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を有する組成物を提供する。いくつかの実施の形態は、いくつかの実施の形態のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物約５ｍｇ乃至約５００ｍｇをヒト被験体にを投与することによる治療方法を提供するエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を有する剤形を提供する。この剤形は、約５ｍｇから約５００ｍｇの範囲のエンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物の投与量を含む。方法のいくつかの実施の形態は、ヒトへの一日あたり約５００ｍｇと約５ｍｇの用量が投与される。いくつかの実施の形態では、ヒトへの一日あたり約５００ｍｇと約５ｍｇ、２回または３回の用量が投与される。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物は、ヒトにおいては５ｍｇから１００ｍｇの用量で投与される。１日１回または複数回の用量で投与される。いくつかの実施の形態は、カプセル、錠剤、顆粒剤、小袋、粉末、ペースト、軟膏、点滴、注射、アンプル、溶液、懸濁液、乳濁液、丸薬、油、又は、クリームの剤形を提供する。
【００５３】
いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、総コレステロールを低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、トリグリセリドを低減する方法を提供する。いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより血糖値を低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、ＨＤＬコレステロールを増強する方法を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、総コレステロールとＨＤＬコレステロールの比を増加させる方法を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、ＶＬＤＬを低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、ＣＲＰレベルを減少させる方法を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させる方法を提供する。いくつかの実施の形態では、エンブリカのオフィシナリスの種子の抽出物を投与することにより、抜け毛を低減する方法を提供する。
【００５４】
いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンドの組成物を提供する。アムラ種子ブレンド組成物のいくつかの実施の形態は、製品３と呼ばれる。このアムラ種子ブレンド組成物は、製品１と製品２の様々な比のブレンドである。この製品１は、アルファリノレン酸、リノール酸及びオレイン酸を含んでいる。製品２は、トリテルペノイドおよびヒドロキシ桂皮酸を含んでいる。製品２は、トリテルペノイド及びポリフェノールを含んでいる。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：１乃至約９９：  １の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされる。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：６０乃至約９９：１の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：１乃至約１：１０の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約２：３の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態においては、製品２および製品１は、約１：２の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：１の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は約３：２の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１０：１もしくは９０：９の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約９５：５もしくは１９：１の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２と製品１は約３：１あるいは７５：２５の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：５の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：１０の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：３の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。
【００５５】
いくつかの実施の形態では、製品２と製品１の配合は、トリテルペノイドの約６％乃至約５０％を有するアムラシードブレンド組成物を提供する。このトリテルペノイドは、とりわけ、ベータシトステロール、ベータアミリン、及びルペオールを含む。いくつかの実施の形態では、製品２と製品１のブレンドは、ヒドロキシ桂皮酸の約２％乃至約２０％を有するアムラ種子製品を提供する。このヒドロキシ桂皮酸は、フェルラ酸、ｐ−クマル酸が含まれる。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、脂肪酸の約１０％乃至約６０％を有するアムラ種子製品となる。この脂肪酸は、不飽和および飽和脂肪酸を含む。この不飽和脂肪酸は、アルファリノレン酸、リノレン酸及びオレイン酸を含む。
【００５６】
いくつかの実施の形態は、製品１と製品２を有する製品１の製造方法を提供する。いくつかの実施の形態は製品１を調製する方法を提供する。エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物は種子が除去されてエンブリカのオフィシナリスの種子を得た。これらの種子は破砕される。当該粉砕された種子は、９５％メタノールで抽出されて残滓及び上澄みを得た。この上澄みが濃縮され、濃縮されたメタノール抽出物を得られた。この濃縮されたメタノール抽出物が乾燥されエンブリカのオフィしナリスの種子のメタノール抽出物の粉末を得た。このエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末は水に分散して分散液を得た。この分散液は、液体−液体抽出器内でヘキサンを用いて抽出され、それに続いてヘキサン及び水相が回収される。このヘキサン相が濃縮され濃縮されたヘキサン抽出物の液体形態を得た。この濃縮されたヘキサン抽出物の液体形態は冷却され、それによって沈殿物を得るか、結晶が形成されそして液体部分が得られた。この液体部分は、沈殿物または結晶から分離され液体製品１を得た。いくつかの実施の形態はアムラの種子から製品２を調製する方法を提供する、この方法は、酢酸エチルを用いてヘキサン抽出後上記で回収された前記水相を抽出して酢酸エチル相を得ることが含まれる。この酢酸エチル相が濃縮され酢酸エチル相を得た。この濃縮酢酸エチル相が乾燥され酢酸エチル抽出物の粉末を得た。酢酸エチル抽出物の粉末が水と混合され酢酸エチル抽出物の粉末の液体を得た。この酢酸エチル抽出物の粉末の液体は、イオン交換カラム上に装填される。このイオン交換カラムは、水画分を得るために水で溶出される（また、フラクション１とも呼ばれる）。次に、前記イオン交換カラムは５０％のメタノールで溶出されフラクション２を得た。次に、前記イオン交換カラムは８０％のメタノールで溶出されフラクション３を得た。フラクション１の濃縮物は乾燥されこのフラクション１の濃縮物の粉末を得た。このフラクション２はフラクション２の粉末を得るために乾燥される。フラクション３の濃縮物はフラクション３の粉末を得るために濃縮される。フラクション１の粉末、フラクション２の粉末及びフラクション３の粉末は組み合わされ製品２を得る。製品２のいくつかの実施の形態は、フラクション１：フラクション２：粉末フラクション３の０．５：１：０．７５比でフラクション１の粉末、フラクション２の粉末及びフラクション３の粉末を有する。製品１はα−リノレン酸、リノール酸、オレイン酸を含む。製品２はトリペルペノイドおよびヒドロキシ桂皮酸を含む。いくつかの実施の形態において、製品２および製品１は、約１：１乃至約９９：１の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされる。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：６０乃至約９９：１の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１０：１乃至約１：１０の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約２：３の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態においては、製品２お���び製品１は、約１：２の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：１の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は約３：２の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１０：１もしくは９０：９の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約９５：５もしくは１９：１の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２と製品１は約３：１あるいは７５：２５の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：５の範囲にある製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：１０の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。いくつかの実施の形態では、製品２および製品１は、約１：３の製品１に対する製品２の割合でブレンドされている。［図１３］
【００５７】
いくつかの実施の形態は、製品１と製品２のブレンドであるアムラ種子ブレンド組成物を有する剤形を提供する。剤形はヒト被験体における用量あたり
約５ｍｇ乃至約５００ｍｇの範囲のアムラ種子ブレンド組成物の薬剤を含む。剤形は、１日１回または複数回の用量で投与される。いくつかの実施の形態は、例えば、カプセル、錠剤、顆粒剤、小袋、粉末、ペースト、軟膏、点滴、注射、アンプル、溶液、懸濁液、乳濁液、丸薬、油、又は、クリームの剤形を提供する。
【００５８】
いくつかの実施の形態は、製品１と製品２のブレンドであるアムラ種子ブレンド組成物を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することにより、総コレステロールを低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することにより、トリグリセリドを低減する方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することにより血糖値を低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することにより、ＨＤＬコレステロールを増強する方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することによって、総コレステロールとＨＤＬコレステロールの比を増加させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラシードブレンド組成物を投与することにより、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラシードブレンド組成物を投与することによって、ＶＬＤＬを低下させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することにより、ＣＲＰレベルを減少させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラ種子ブレンド組成物を投与することにより、内膜中膜複合体厚の厚みを減少させる方法を提供する。いくつかの実施の形態は、アムラシードブレンド組成物を投与することによって抜け毛を減少させる方法を提供する。
【実施例１】
【００５９】
エンブリカのオフィシナリスの種子（アムラ種子抽出物）のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の調製方法
【００６０】
エンブリカのオフィシナリス（アムラ）の新鮮な果物（５００キログラム）が収集された。各果物は種子除去マシーンによって種子の除去が行われて、そして新鮮な種子（７５キログラム）がローラーミルを通して粉砕された。粉砕された種子の量の２倍の量の９５％メタノールが前記粉砕された種子に加えられメタノール抽出用混合物を形成した。この抽出は、還流式凝縮器を備えた抽出器を用いて行なわれた。当該抽出器の底部には、ポリプロピレン（１００ミクロン）濾布が取り付けられた。この混合物は６５℃で１時間還流させられ最初の残滓及び上澄みを得た。この残滓及び上澄みは、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を介して抽出器底部から前記上澄みを排出することによって分離された。最初の抽出後、前記最初の残滓は６５℃でメタノールの２倍の量を用いて更に抽出され第２の残滓及び上澄みを得た。この第２の残滓は６５℃でメタノールの量の２倍で更に抽出され、第３の残滓及び上澄みを得た。すべての上澄みは６５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内でプールされ且つ濃縮され濃縮されたメタノール抽出物を形成した。濃縮されたメタノール抽出物は、水銀５００ミリメートル以上の真空下で乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末５ｋｇを取得した。
【００６１】
エンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末は水で浸軟され、液体−液体抽出器内に移送され、そして酢酸エチルで抽出された。酢酸エチル相と水相が分離された。抽出後酢酸エチル相が回収された。この酢酸エチル相は攪拌式薄膜蒸発器内で濃縮され濃縮された酢酸エチル抽出物を形成した。酢酸エチル濃縮物は真空ストリッパーに供給され、そして水銀の５００ｍｍ以上で真空下で乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の粉末２．５キログラムを取得した。［図１］
【実施例２】
【００６２】
エンブリカのオフィシナリスの種子（アムラ種子抽出物）の酢酸エチル抽出物の調製方法  
【００６３】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（５００キログラム）が収集された。各果物は、種子除去マシーンによって種子が除去され、そして新鮮な種子（７５キログラム）がローラーミルを通して粉砕された。粉砕された種子は、ソックスレー抽出器に充填され、そして酢酸エチル（３００リットル）で抽出された。この抽出は、約７８℃の温度で５時間行なわれた。抽出の完了後、７５℃の温度で撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内で上澄みは濾過され、そして濃縮され濃縮された酢酸エチル抽出物を形成した。この濃縮された酢酸エチル抽出物は水銀５００ｍｍの以上の真空下で乾燥されてエンブリカのオフィシナリスの種子の酢酸エチル抽出物の粉末２キログラムを取得した。［図２］
【実施例３】
【００６４】
エンブリカのオフィシナリス（アムラ）の果物のペクチナーゼ処理された水抽出物の調製方法
【００６５】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（１００キログラム）が収集された。エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物は、脱イオン水でパルプ化されスラリーを創製した。当該スラリーはペクチナーゼで処理され、次いで濾過されて溶液を得た。この溶液は濃縮され、そして真空下で乾燥された。乾燥された生成物（５キログラム）は粉砕されると共に３０メッシュで篩過されエンブリカのオフィシナリスのペクチナーゼ処理水抽出物の粉末を得た。
【実施例４】
【００６６】
エンブリカのオフィシナリス（アムラ）の果物のアルコール抽出物の調製方法
【００６７】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（１００キログラム）が収集された。エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物が粉砕された。粉砕された果実の２倍の量（２００リットル）の量の９５％メタノールが加えられてメタノール抽出用の混合物を形成した。この抽出は還流式凝縮器を備えた抽出器を用いて行なわれた。この抽出器の底部には、ポリプロピレン（１００ミクロン）濾布が取り付けられた。この混合物は６５℃で１時間還流させられ最初の残滓及び上澄み得た。この残滓及び上澄みは遠心ポンプを用いて前記ポリプロピレン濾布を介して前記抽出器の底部から上澄みを排出することによって分離された。最初の抽出後、前記最初の残滓は、６５℃でメタノールの量の２倍を用いて更に抽出され第２の残滓及び上澄みを得た。この第２の残滓は、６５℃でメタノールの２倍の量を用いて更に抽出され第３の残滓および上澄みを得た。すべての上澄みは６５℃の温度で撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内にプールされると共に濃縮されて濃縮メタノール抽出物を形成した。濃縮されたメタノール抽出物は、水銀５００ミリメートル以上の真空下で乾燥させられエンブリカのオフィシナリスの果実のメタノール抽出物の粉末５キロを得た。［図４］
【実施例５】
【００６８】
種子を除去したエンブリカのオフィシナリス（アムラ）のペクチナーゼ処理水の抽出物の調製方法
【００６９】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（１００キログラム）が収集された。エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物は、種子除去マシンによって種子が除去された。種子が除去されたエンブリカのオフィシナリスの果物（８５キログラム）は、脱イオン水でパルプ化されてスラリーを創製した。このスラリーはペクチナーゼで処理され、次いで濾過され溶液を得た。この溶液は濃縮され、そして真空下で乾燥させられた。乾燥された生成物（４キログラム）は粉砕され、そして３０メッシュで篩過されて種子が除去されたエンブリカのオフィシナリスのペクチナーゼ処理水抽出物の粉末を得た。［図５］
【実施例６】
【００７０】
種子を除去されたエンブリカのオフィシナリス（アムラ）のアルコール抽出物の調製方法
【００７１】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（１００キログラム）が収集された。エンブリカのオフィシナリスの各果物は種子除去マシーンによって種子の除去が行われた。種子の除去が行われたエンブリカのオフィシナリスの果物（８５キログラム）が粉砕された。粉砕された果物の量（１７０リットル）の２倍の量の９５％メタノールが加えられメタノール抽出用混合物を形成した。この抽出は、還流式凝縮器を備えた抽出器を用いて行なわれた。当該抽出器の底部には、ポリプロピレン（１００ミクロン）濾布が取り付けられた。この混合物は６５℃で１時間還流させられ最初の残滓及び上澄みを得た。この残滓及び上澄みは、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を介して抽出器底部から上澄みを排出することによって分離された。最初の抽出後、前記最初の残滓は６５℃でメタノールの量の２倍を用いて更に抽出され第２の残滓及び上澄みを得た。前記第２の残滓は６５℃でメタノールの２倍の量を用いて更に抽出され第３の残滓および上澄みを得た。すべての上澄みは６５℃の温度で撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内にプールされ且つ濃縮され濃縮されたメタノール抽出物を形成した。この濃縮されたメタノール抽出物は、水銀の５００ミリメートル以上の真空下で乾燥させられエンブリカのオフィシナリスの種子が除去された果物のメタノール抽出物の粉末３．５キログラムを取得した。［図６］
【実施例７】
【００７２】
乾燥アムラ種子の粉末の調製方法
【００７３】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（アムラ）の（１０キログラム）が収集された。各果物は、種子除去マシーンによって種子が除去され、そして新鮮な種子（１．５キログラム）が４０℃において棚型乾燥機内で乾燥させられた。乾燥させられた材料は、粉末化されてエンブリカのオフィシナリス（０．７５キログラム）の乾燥された種子の粉末を得た。［図７］
【実施例８】
【００７４】
乾燥アムラ種子の水抽出物の調製方法
【００７５】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（アムラ）（５００キログラム）が収集された。各果物は、種子除去マシンによって種子が除去され、そして新鮮な種子（７５キログラム）が４０℃において棚型乾燥機内で乾燥された。各乾燥された種子は粉砕され、そして抽出器に詰め込まれた。約水２００リットルが前記粉砕種子内に加えられ、そして、接触時間３時間維持された。次いで水部分が回収され、そして新鮮な水が再び種子内に加えられ、抽出を三回繰り返した。乾燥された種子の濃縮水抽出物が容器の底部に到達した際、すべての水の部分がプールされ、濾過され、蒸発器内で濃縮され、そして濃縮物が乾燥機内に供給され、水銀の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥された。乾燥された生成物は容器の底部から吐出され、そして粉砕されてエンブリカのオフィシナリスの乾燥種子（４キログラム）の水抽出物の粉末を得た。［図８］
【実施例９】
【００７６】
乾燥アムラ種子のメタノール抽出物の調製方法
【００７７】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（アムラ）（５００キログラム）が収集された。各果物は、種子除去マシーンによって種子が除去され、そして新鮮な種子（７５キログラム）が４０℃において棚型乾燥機内で乾燥された。これらの乾燥された種子は粉砕され、そして抽出器に詰め込まれた。９５％メチルアルコールの約２００リットルが抽出器内に圧送され、そして接触時間３時間維持された。次いで、溶剤部分（メタノール部分）が回収され、そして新しいメチルアルコールが抽出器内に再び圧送され、更に抽出が三回繰り返された。すべての抽出物（メタノール部分）は、プールされ、濾過され、そして真空７００ミリメートル水銀の下で稼働する攪拌式薄膜乾燥機（ＡＴＦＤ）内で乾燥された。乾燥された生成物は、容器の底部から吐出され、その後、粉砕されてエンブリカのオフィシナリスの種子のアルコール抽出物の粉末（５キログラム）を得た。［図９］
【実施例１０】
【００７８】
乾燥アムラ果実の粉末の調製方法
【００７９】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物の１ＯＯキログラムが洗浄され、みじん切りされてフレークにされ、更に１０時間、約１１０℃の熱風オーブン中で乾燥させられた。乾燥された材料（９キログラム）は粉末化されてエンブリカのオフィシナリスの乾燥果実の粉末を得た。［図１０］
【実施例１１】
【００８０】
乾燥アムラ果実の水抽出物の調製方法
【００８１】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（１００キログラム）が収集された。これらの新鮮な果物が洗浄され、細断されてフレークにされて、そして１０時間約１１０℃の熱風オーブン中で乾燥させられた。乾燥させられたフレークは、抽出装置に詰め込まれ、そして水の約２００リットルが乾燥フレークに加えられ、そして３時間の接触時間維持された。次いで、水部分が回収され、そして水が再度フレークに加えられ、三度繰り返えされた。すべての水の部分は、プールされ、濾過され、そして乾燥果物の濃縮水抽出物が容器の底部に到達した際、濃縮され濃縮物が乾燥機に供給され、水銀の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥させられた。乾燥された生成物（６キログラム）は、容器の底部から吐出され、そして粉砕されたオフィシナリスエンブリカの乾燥された果物の水抽出物の粉末を得た。［図１１］
【実施例１２】
【００８２】
乾燥アムラ果実のメタノール抽出物の調製方法。
【００８３】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（１００キログラム）が収集された。新鮮な果物が洗浄され、そしてフレークに細断され、更に１０時間約１１０℃で熱風オーブン中で乾燥された。乾燥した各フレークは抽出器に詰め込まれ、そして９５％メチルアルコールの約２００リットルが抽出器に圧送され、そして３時間の接触時間の間維持された。次いで、溶剤部分（メタノール部分）が回収され、そして新鮮なメチルアルコールが抽出器内に再び圧送され、そして抽出が三回繰り返された。すべての抽出物（メタノール部）は、プールされ、そして濾過されて、更に水銀７００ミリメートルの真空の下で稼働する攪拌式薄膜乾燥機（ＡＴＦＤ）内で乾燥された。乾燥された生成物（５キログラム）は、容器の底部から吐出され、その後粉砕されてエンブリカのオフィしナリスの果実のアルコール抽出物の粉末を得た。［図１２］
【実施例１３】
【００８４】
エンブリカのオフィシナリスの新鮮な果物（アムラ）が（５００キログラム）が収集された。これらの果実は、種子除去マシーンによって種子が除去されアムラの新鮮な種子を得た。新鮮な種子（７５キログラム）は、ローラーミルを通して粉砕された。粉砕種子の量の２倍の９５％メタノールが、前記粉砕された種子に加えられメタノール抽出用混合物を形成した。この抽出は、還流式濃縮器を備えた抽出器を用いて行なわれた。当該抽出器の底部には、ポリプロピレン（１００ミクロン）濾布が取り付けられた。この混合物は６５℃で１時間還流させられ最初の残滓及び上澄みを得た。この最初の残滓及び上澄むは遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を介して抽出器底から上澄みを排出することによって分離された。最初の抽出後、最初の残滓は、６５℃でメタノールの量の２倍を用いて更に抽出され第２の残滓及び上澄みを得た。この第２の残滓は、６５℃でメタノールの量の２倍を用いて更に抽出され第３の残滓および上澄みを得た。すべての上澄みは６５℃の温度で撹拌式薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）内でプールされ、そして濃縮され濃縮メタノール抽出物を形成した。この濃縮されたメタノール抽出物は、水銀の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥させられエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末の５ｋｇを取得した。
【００８５】
エンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の粉末が水内に分散され、そして液体−液体抽出器に移送され、更にヘキサンで抽出された。抽出後、ヘキサン相と水相が分離された。次いで、前記ヘキサン相は側弁を介して収集された。このヘキサン相は攪拌式薄膜蒸発器で濃縮され、濃縮されたヘキサン抽出物（２キログラム）を形成した。この濃縮ヘキサン抽出物は４℃で冷却され、そして２４時間冷たく維持された。この濃縮されたヘキサン抽出物の組成物の中には、この冷却によって沈殿もしくは結晶化されるものがあった。これらの結晶または沈殿物は、冷却され且つ濃縮されたヘキサン抽出物をフィルタープレスを通過させることによって前記液体の冷却され且つ濃縮されたヘキサン抽出物から分離された。これらの沈殿物または結晶は、パルミチン酸、ステアリン酸等の高融点成分を含有することが見出された。（製品１）の１．５キログラムの液体がフィルタープレス内で冷却され、濃縮されたヘキサン抽出物を通過させた後得られた。生成物１は、例えば、アルファリノレン酸、リノレン酸、オレイン酸などの不飽和脂肪酸を含有することが判明した。
【００８６】
酢酸エチルが抽出のために液体−液体抽出器で水相に加えられた。抽出の後、酢酸エチル相と水相が分離され、そして酢酸エチル相が側弁を通して回収された。酢酸エチル相は攪拌式薄膜蒸発器内で濃縮され濃縮された酢酸エチル抽出物を形成した。酢酸エチル濃縮物は真空ストリッパーに供給され、そして水銀の５００ｍｍ以上の真空下で乾燥させられエンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の粉末の２．５キログラムを得た。この抽出物はトリテルペノイド及びポリフェノールを含有することが見出された。ポリフェノールは、ヒドロキシ桂皮酸を含んでいた。
【００８７】
エンブリカのオフィシナリスの種子のメタノール抽出物の酢酸エチル抽出物の粉末が水に混合され、そしてＦＰＸ６６イオン交換樹脂（ローム・アンド・ハース社、フィラデルフィア、米国）を有するカラムに装填された。カラムクロマトグラフィーは、トリテルペノイドを更に精製すると共に他のポリフェノールからヒドロキシ桂皮酸を分離するために行なわれた。カラムは最初に水を用いて溶出処理され、そして水フラクションが回収された。次いで、前記カラムはメタノールの異なる濃度（５０％メタノール、８０％メタノール）で溶出処理され、そして異なったメタノールフラクションを回収した。水フラクションは濃縮され、そして真空下で乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子（０．１ｋｇ）（フラクション１）の酢酸エチル抽出物を水溶出成分の粉末を形成した。フラクション１はＨＰＬＣによって確認されたトリテルペノイドの少量を含有することが判明した。前記５０％メタノールフラクションは濃縮され、そしてエンブリカのオフィシナリスの種子（１ｋｇ）（フラクション２）の酢酸エチル抽出物を５０％メタノール溶出成分の粉末が形成された。フラクション２は、トリテルペノイドを含有することが判明し、これがＨＰＬＣで確認された。
【００８８】
８０％メタノールフラクションは濃縮され、そして真空下で乾燥されエンブリカのオフィシナリスの種子（０．７５キログラム）（フラクション３）の酢酸エチル抽出物の８０％メタノール溶出成分の粉末を形成した。フラクション３は、ＨＰＬＣ法により確認されたヒドロキシ桂皮酸を含有することが判明した。
【００８９】
フラクション１，２および３は組み合わされ生成物２を形成した。生成物２は２：３の比で生成物１にブレンドされアムラ種子ブレンド生成物３（３．３５  ｇ）を形成した。［図１３］生成物３は約２０％のトリテルペノイド、約１１．７％のヒドロキシ桂皮酸、約４６．２％の不飽和脂肪酸と、更に約０．３％の飽和脂肪酸を有していた。生成物３は、約９％のベータシトステロール、約６％のベータアミリン、約５％のルペオール、約７．５％のフェルラ酸、約４．２％クマル酸、約２０．５％のアルファリノレン酸、約１５．８％リノレン酸、約９．９％のオレイン酸、約０．２％のステアリン酸および約０．１％パルミチン酸を含んでいた。
【実施例１４】
【００９０】
ＨＰＬＣによるトリテルペノイドの分析
【００９１】
トリテルペノイドはＣＩ８カラム（２５０×４．６ｍｍ）の上の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ）により評価された。移動相は、１ｍｌ／分の溶出流速を備えた定組成条件下で使用されるアセトニトリルであった。標準は、標準ルペオール、ベータアミリン及びベータシトステロール（９５％純度）の５ｍｇを秤量することによって調製され、そしてアセトニトリルを用いて１０ｍｌまで製造され、４℃において暗所で保存された。試料は、抽出物の５０ｍｇを秤量することによって調製され、そしてアセトニトリルで５０ｍｌまでになるよう製造され、更に４℃において暗所で保存された。試料および標準の両方がＨＰＬＣカラムへの注入前に、０．２μｍ内膜フィルターを介して別々に濾過された。注入量は２０μｌであった。トリテルペノイドは、２１０  ｎｍで検出された。標準および試料の面積を比較することにより、試料中に存在するトリテルペノイドの割合が定量化された。（薄層クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーによるいくつかの一般的な異性体の植物トリテルペノイドの分離及び同定、Mitja等、J Chromatogr A 2009年9月18日、1216(38):6662から70 doi:0.1016 / j.chroma。 2009.07.038。電子出版2009年7月29）
【実施例１５】
【００９２】
ＨＰＬＣによるヒドロキシ桂皮酸の分析
【００９３】
ヒドロキシ桂皮酸は、ＣＩ８カラム（２５０×４．６ｍｍ）の上の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ）により評価された。移動相は、溶媒Ａ即ち水中の１％酢酸、溶媒Ｂ即ち１％酢酸／水／アセトニトリル（２：６８：３０）あった。グラジエント：０分。７％Ｂは９０％まで増加した。流速は１ｍｌ／分であった。３２０ｎｍにおける検出。
【００９４】
標準は、標準フェルラ酸及びＰ−クマル酸（純度９５％）の５ｍｇを秤量することによって調製され、そしてメタノールで１０ｍｌまで製造され、更に４℃で暗所で保存された。試料は、抽出物の５０ｍｇを秤量することによって調製され、そしてメタノールで５０ｍｌまで製造され、更に４℃で暗所で保存された。試料および標準の両方がＨＰＬＣカラムへの注入前に、０．２μｍ内膜フィルターを介して別々に濾過された。注入量は２０μｌであった。ヒドロキシ桂皮酸は３２０ｎｍで検出された。標準および試料の面積を比較することにより、試料中に存在するヒドロキシ桂皮酸の割合が定量化された。（「チコリの葉組織中のヒドロキシケイ皮酸の分析のための新規プロトコル」Ｌ．、キク科インティブス（チコリ）、Meriem Bahri等、科学の世界ジャーナル、ボリューム２０１２、文書番号１４２９８３．）
【実施例１６】
【００９５】
ＧＣによる脂肪酸の分析
【００９６】
脂肪酸は、ガスクロマトグラフィー法で分析された。標準油脂肪酸メチルエステルの２５０ｍｇが、２５ｍｌの標準フラスコ内で秤量され、そしてイソオクタンを用いて２５ミリリットルまで製造された。前記標準溶液の１マイクロリットルがＧＣ内に注入された。各成分の保持時間が判明した。
【００９７】
試料（抽出物）の０．３ｇｍは１００ミリリットル丸底フラスコ内に秤量され、そして０．５ＮのＮａＯＨメタノールの１．５ミリリットルが加えられた。試料は水濃縮器を備えた沸騰水槽中で維持され、そして５分間、１００℃で加熱された。冷却され、そしてボロントリフルオライド（ＢＦ３）−メタノール溶液の２ｍｌが加えられて、そして３０分間１００℃で加熱された。３０〜４０℃まで冷却され、そして５ミリリットルのイソオクタンが加えられ、そして３０秒間激しく振動を受けた。
【００９８】
飽和ＮａＣｌ溶液の５ｍｌがすぐに加えられ、そして激しく振られ、更に室温まで冷却された。イソオクタン層が分離されて、そして水層が再びイソオクタンを用いて抽出された。各イソオクタン層は混合され、そして乾燥させられた。次いで、イソオクタンを用いて２５ｍｌまで残滓が製造され、そして２マイクロリットルがＧＣに注入された。各成分の保持時間が判明され、そして同じ保持時間を用いて標準の構成要素と比較された。標準および試料の面積を比較することにより、試料中に存在する脂肪酸の割合が定量化された。（欧州薬局方、第五版、第１巻、ＩＳＢＮ：９２−８７１−５２８１−０、Ｐ−１１０）
【実施例１７】
【００９９】
ポリフェノール含有量の決定
【０１００】
ポリフェノールは、Ｃ１８カラム（２５０×４．６ｍｍ）の上の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ）により評価された。移動相は、水中の溶剤Ａ−０．１％トリフルオロ酢酸、溶剤Ｂ−メタノールであった。アイソクラティック（９０：１０）流速１ｍｌ／ｍｉｎ  ２５４ｎｍにおける検出。
【０１０１】
標準は、標準没食子酸およびエラグ酸（純度９５％）の５ｍｇを秤量することによって調製され、そしてメタノールを用いて１０ｍｌまで製造され、更に４℃において暗所で保存された。試料は、前記抽出物の５０ｍｇを秤量することによって調製され、そしてメタノールを用いて５０ｍｌまで製造され、更に４℃において暗所で保存された。試料および標準の両方はＨＰＬＣカラムへの注入前に、０．２μｍ内膜フィルターを介して別々に濾過された。注入量は２０μｌであった。ポリフェノールは、２５４ｎｍで検出された。標準および試料の面積を比較することにより、試料中に存在するポリフェノールの割合が定量化された。（薬用植物に存在する標準フェノール化合物のＨＰＬＣプロフィール、グプタ等、生薬や植物化学研究の国際ジャーナル２０１２；４（３）；１６２−１６７）
【実施例１８】
【０１０２】
トリトンＷＲ１３３９により誘発される脂質異常症モデルを使用するアムラ種子抽出物の脂質低下作用のスクリーニング
【０１０３】
約２５０乃至３００グラムの重量を秤量する２４匹の雄アルビノラット（スプラーグドーリー株）が、研究のために選択された。これらの動物は温度２４±２℃、６５％相対湿度および１２時間の明／暗サイクルに維持された動物ハウス内に留め置かれた。これらのラットは２週間、そしてそれらのラットが標準的なペレットダイエット及び水を自由にアクセスしていたこの期間に順応させられた。順化の２週間後、すべてのラットはトリトンＷＲ１３３９（チロキサポール）の注入及び試験抽出物／標準の投与の前に一晩絶食させられた。これらの動物は４つの群に分けられた。以下の処置が一晩絶食させた各ラットに与えられた。
【０１０４】
グループＩ：正常な対照（賦形剤のみ）
グループＩＩ：トリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＩＩ：実施例１（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＶ：アトルバスタチン（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に続くトリトンＷＲ  １３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
【０１０５】
これらの動物は、次の２４時間絶食させられたが、水を自由に摂取することへのフリーアクセスを有していた。薬物処理の２４時間の後、２ｍｌの血液サンプルが眼窩叢から採取された。血液は凝固させられ、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離されて、血清が注意深く別々のチューブに引き込まれて回収された。当該血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析がされた。
【０１０６】
【表１Ａ】
2016532724.tif 000002
【０１０７】
【表１Ｂ】
2016532724.tif 000003
【０１０８】
結果は、治療前に、全てのグループにおける総コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬのベースライン値が同等であることを示した。単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、大幅に２６５．６ｍｇ／ｄｌに総コレステロールレベルを増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、コレステロール値はトリトン単独群と比較して２．２倍低い１２０．８７ｍｇ／ｄｌであった。
【０１０９】
グループＩＩでは、トリトン注射はトリグリセリドレベルを６９２．７ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩでは、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して４．５倍低い１５２．２３ｍｇ／ｄｌであった。
【０１１０】
トリトン単独グループでは、トリトン注射後には、総コレステロールに対するＨＤＬの比率は０．１８であった。グループＩＩＩでは、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、総コレステロールのＨＤＬコレステロールの比率は、トリトン単独グループと比較して２．２倍高い０．３９であった。
【０１１１】
グループＩＩでは、トリトン注射はＬＤＬレベルを７７．５９ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩでは、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して１．８倍低い４３．１５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１１２】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１３８．５５ｍｇ／ｄｌに増加させた。ＩＩＩグループでは、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して４．６倍低い３０．４４ｍｇ／ｄｌであった。
【０１１３】
標準薬アトルバスタチンはまた、コレステロール値並びにトリグリセリドレベルを低下させるのに有効であった。これらの結果は、ラットでのトリトン誘発性高脂血症におけるアムラ種子抽出物の脂質低下作用を示している。
【実施例１９】
【０１１４】
トリトンＷＲ１３３９により誘発される脂質異常症モデルを用いた、異なる用量でのアムラ種子抽出物の脂質低下作用
【０１１５】
約２５０乃至３００グラムの重量を秤量する６０匹の雄アルビノラット（スプラーグドーリー株）が、研究のために選択された。これらの動物は、温度２４±２℃、６５％相対湿度および１２時間の明／暗サイクルにおいて維持された動物ハウスに留め置かれた。各ラットを２週間、そしてそれらのラットが標準的なペレットダイエット食及び水を自由にアクセスしていたこの期間に順応させられた。順化の２週間後、すべてのラットはトリトンＷＲ１３３９（チロキサポール）の注入及び試験抽出物／標準の投与の前に一晩絶食させられた。これらの動物は１０のグループに分けられた。以下の処置が一晩絶食させた各ラットに与えられた。
【０１１６】
グループＩ：正常は対照（賦形剤のみ）
グループＩＩ：トリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＩＩ：実施例１（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＶ：実施例１（７．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物のトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶ：実施例１（経口あたり５ｍｇ／ｋｇに従って調製したアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩ：実施例１（２．５ｍｇ／ｋｇ）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩ：実施例１（２ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩＩ：実施例１（１ｍｇ／ｋｇ、経口あたり）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＸ：実施例１（０．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ミリグラム／キログラム、腹腔内）
グループＸ：アトルバスタチン（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
【０１１７】
これらの動物は、次の２４時間絶食させられたが、水を自由に摂取することへのフリーアクセスを有していた。薬物処理の２４時間の後、２ｍｌの血液サンプルが眼窩叢から採取された。血液は凝固させられ、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離されて、血清が注意深く別々のチューブに引き込まれて回収された。当該血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析がされた。
【０１１８】
【表２Ａ】
2016532724.tif 000004
【０１１９】
【表２Ｂ】
2016532724.tif 000005
【０１２０】
結果は、トリトンの腹腔内注射が大幅にベースライン値に亘って２倍程度総コレステロール値を増加させたことを示した。同様に、トリグリセリドレベルもトリトン注射に続いて非常に高いレベル（グループＩＩ）まで増加した。トリトン注射されたラットにおけるアムラ種子抽出物の様々な用量の同時経口投与はほとんど正常レベル（グループＩＩＩからＩＸ）へのコレステロールの増加を低下させた。トリトン単独グループと比較して、トリグリセリドレベルはまた、アムラ種子抽出物を用いてトリトンの全ての投与量によって低下させられた。標準薬アトルバスタチンはまた、コレステロール並びにトリグリセリドレベル（グループＸ）を低下させるのに有効であった。これらの結果は、ラットにおけるトリトンにより誘発される高脂血症での様々な用量レベルでアムラ種子抽出物の脂質低下作用を示した。
【実施例２０】
【０１２１】
トリトンＷＲ１３３９により誘発される脂質異常モデルを使用して他のアムラ抽出物と比較したアムラ種子抽出物の脂質低下作用
【０１２２】
約２５０乃至３００グラムの重量を秤量する４８匹の雄アルビノラット（スプラーグドーリー株）が、研究のために選択された。これらの動物は温度２４±２℃、６５％相対湿度および１２時間の明／暗サイクルにおいて維持された動物ハウスに留め置かれた。これらのラットを２週間、そしてそれらのラットが標準的なペレットダイエット及び水を自由にアクセスしていたこの期間に順応させられた。順化の２週間後、すべてのラットはトリトンＷＲ１３３９（チロキサポール）の注入及び試験抽出物／標準の投与の前に一晩絶食させられた。これらの動物８つのグループに分けられた。以下の処置が一晩絶食させた各ラットに与えられた。
【０１２３】
グループＩ：正常な対照（賦形剤のみ）
グループＩＩ：トリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＩＩ：実施例１（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＶ：実施例３（１０ｍｇ／ｋｇ，経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶ：実施例４（４０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩ：実施例５（４０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ミリグラム／キログラム、腹腔内）
グループＶＩＩ：実施例６（４０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩＩ：アトルバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従うトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
【０１２４】
これらの動物は、次の２４時間絶食させたが、水を自由に摂取することへのフリーアクセスを有していた。薬物処理の２４時間の後、２ｍｌの血液サンプルが眼窩叢から採取された。血液は凝固させられ、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離されて、血清が注意深く別々のチューブに引き込まれて回収された。当該血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析がされた。
【０１２５】
【表３Ａ】
2016532724.tif 000006
【０１２６】
【表３Ｂ】
2016532724.tif 000007
【０１２７】
本研究では、アムラ種子抽出物の有効性（２．５ｍｇの抽出物／被検体のｋｇ）を実施例３乃至６のように製造された他のアムラ抽出物と比較された。
【０１２８】
結果は、治療前に、全ての群における総コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬのベースライン値が同等であることを示した。単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、大幅に総コレステロールレベルを３４８．８７ミリグラム／デシリットルに増加させた。ＩＩＩ群において、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、コレステロールレベルはトリトン単独グループと比較して３．１倍低い１１２．２３ｍｇ／ｄｌであった。
【０１２９】
グループＩＩでは、トリトン注射はトリグリセリドレベルを６１４．２１ｍｇ／ｄｌに増加させました。ＩＩＩ群でのに対し、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して６．４倍低かった９５．８８ｍｇ／ｄｌであった。
【０１３０】
トリトン単独のグループでは、トリトン注射の後、総コレステロ−ルに対するＨＤＬの比は０．１４であった。グループＩＩＩでは、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、総コレステロールのＨＤＬコレステロールの比はトリトン単独グループと比較して３倍高い０．４２であった。
【０１３１】
グループＩＩでは、トリトン注射はＬＤＬレベルを１７４．８ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩ群では、トリトン注射したラットのアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して３．８倍低い４５．５５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１３２】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１２２．８４ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して６．４倍低い１９．１７ｍｇ／ｄｌであった。
【０１３３】
４０ｍｇ／ｋｇにおける（実施例３乃至６において調製された）他の各アムラ抽出物は、コレステロールおよびトリグリセリドレベルを減少させることができたが、これらの抽出物は実施例１で調整されたアムラ種子抽出物よりも有効でなかった。標準薬アトルバスチンは、コレステロール並びにトリグリセリドレベル（グループＶＩＩＩ）を低下させるのに有効でもあった。
【実施例２１】
【０１３４】
トリトンＷＲ１３３９によって誘発される脂質異常症モデルを用いて、他のアムラ抽出物と比較したアムラ種子抽出物の脂質低下作用を評価するための単一の投薬研究
【０１３５】
約２５０乃至３００グラムの重量を秤量する４８匹の雄アルビノラット（スプラーグドーリー株）が、研究のために選択された。これら動物は温度２４±２℃、６５％相対湿度および１２時間の明／暗サイクルにおいて維持された動物ハウスに留め置かれた。これらのラットを２週間、そしてそれらのラットが標準的なペレットダイエット食及び水を自由にアクセスしていたこの期間に順応させられた。順化の２週間後、すべてのラットはトリトンＷＲ１３３９（チロキサポール）の注入及び試験抽出物／標準の投与の前に一晩絶食させられた。これらの動物８つのグループに分けられた。以下の処置が一晩絶食させた各ラットに与えられた。
【０１３６】
グループＩ：正常な対照（賦形剤のみ）
グループＩＩ：トリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＩＩ：実施例１（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ種子抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＶ：実施例３（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶ：実施例４（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩ：実施例５（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩ：実施例６（経口あたり、２．５ｍｇ／ｋｇ）に従って調製されたアムラ抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩＩ：アトルバスタチン（１０ｍｇ／ｋｇの経口あたり）に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
【０１３７】
これらの動物は、次の２４時間絶食させたが、水を自由に摂取することへのフリーアクセスを有していた。薬物処理の２４時間の後、２ｍｌの血液サンプルが眼窩叢から採取された。血液は凝固させられ、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離されて、血清が注意深く別々のチューブに引き込まれて回収された。当該血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析がされた。
【０１３８】
【表４Ａ】
2016532724.tif 000008
【０１３９】
【表４Ｂ】
2016532724.tif 000009
【０１４０】
本研究では、アムラ種子抽出物（２．５ｍｇの抽出物／被検体のｋｇ）は、同じ用量レベルすなわち被検体の抽出物／ｋｇの２．５ミリグラムで実施例３乃至６におけるように製造された他のアムラ抽出物と比較された。
【０１４１】
結果は、治療前に、全てのグループにおける総コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬのベースライン値が同等であることを示した。単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、大幅に３８５．５４ｍｇ／ｄｌに総コレステロールレベルが増加した。グループＩＩＩ群においては、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、コレステロール値はトリトン単独グループと比較して３．６倍低い１０８．２５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１４２】
グループＩＩでは、トリトン注射は６４４．６５ｍｇ／ｄｌにトリグリセリドレベルを増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して５．８倍低い１１１．３６ｍｇ／ｄｌであった．
【０１４３】
トリトン注射後のトリトン単独グループでは、総コレステロールに対するＨＤＬの比率は０．１５であった。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与内であるのに対して、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比率は、トリトン単独グループと比較して２．８倍高い０．４２であった。
【０１４４】
グループＩＩでは、トリトン注射はＬＤＬレベルを１９７．０７ｍｇ／ｄｌに増加させた。ＩＩＩ群において、トリトン注射したラットにおけるＬＤＬレベルのアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、トリトン単独グループと比較して４．９倍低い３９．７５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１４５】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１２８．９３ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいては、トリトン注射したラットにおけるアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して５．８倍低い２２．２７ｍｇ／ｄｌであった。
【０１４６】
２．５  ｍｇ／ｋｇにおける（実施例３乃至６で調製した）他のアムラ抽出物は、コレステロールおよびトリグリセリドレベルをある程度だけ減少させることができたが、これらの抽出物は、同じ用量レベルでアムラ種子抽出物ほど有効ではなかった。実施された研究は、標準薬アトルバスタチンは、コレステロール並びにトリグリセリドレベル（第ＶＩＩＩ族）を低下させるのに有効ではあるが、アムラ種子抽出物と比較した場合にあまり効果的ではなかったことを示す。
【実施例２２】
【０１４７】
ストレプトゾトシンにより誘発される糖尿病ラットにおけるアムラ種子抽出物の抗糖尿病活性
【０１４８】
実施例１で調製されたアムラ種子抽出物は、実験用ラットにおける抗糖尿病活性のために評価がなされた。雄／雌のアルビノビスタ―ラットは、標準的なガイドラインに従って維持された。即ち、２４±２℃の温度での１２時間の人工明闇のサイクルの下で、標準ペレットダイエット食及び水が自由に摂取されるとして、ポリプロピレンケージに収容された。これらの動物は、実験を始める前の一週間動物舎条件に順応させられた。
【０１４９】
糖尿病がｐＨ  ４．５の０．１クエン酸緩衝液に溶解した３５ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシン腹腔内に注射することによって誘発された。糖尿病の誘発５日後（研究日１）、これらの動物は１２時間絶食させられ且つ空腹時血糖（ＦＢＧ）が、糖尿病ラットを診断するために評価された。２００ｍｇ／ｄｌ以上のＦＢＧを有する各動物は、糖尿病と見なされた。これらの糖尿病の動物は無作為に６匹ずつの３グループに分けられた。
【０１５０】
以下の表５には、２８日間の動物のそれぞれのグループに与えられた治療スケジュールを示す。
【０１５１】
【表５】
2016532724.tif 000010
【０１５２】
ラットの空腹時血糖値および体重は、最初及び研究日７日目、１４日目、２１日目および２８日目において測定された。血漿ＣＲＰレベルは、最初と研究日２８日目において測定された。
【０１５３】
【表６】
2016532724.tif 000011
【０１５４】
【表７】
2016532724.tif 000012
【０１５５】
これらの結果に示されるように、ストレプトゾトシンの単回腹腔内注射は、血中グルコースレベルを非常に高いレベルに増加させ、ラットを糖尿病にさせた。アムラ種子抽出物を用いた糖尿病ラットの処置は、２８日間経過して血糖値を著しく低下させた。前者は２８日間のアムラ種子抽出物の投与後のベースライン（１日目）と比較して、糖尿病ラットの血中グルコースレベルを空腹時における２．７倍の減少に相当する。グリベンクラミドを用いた処置はまた、２８日後にほぼ正常に血糖値を低下させた。アムラ種子抽出物で処置した糖尿病ラットの体重は、賦形剤グループに比べて著しく回復した。ＣＲＰレベルは、アムラ種子抽出物が供給されたグループで著しく減少したが、グリベンクラミドは、初期ＣＲＰ値と比較して著しくＣＲＰレベルを減少させることができなかった。糖尿病ラットに対するアムラ種子抽出物を用いた２８日間の処置は、ＣＲＰレベルを初期レベルよりも１．６倍減少させた。
【実施例２３】
【０１５６】
コレステロールが飼料として与えられたウサギにおけるアムラ種子抽出物の脂質低下作用  
【０１５７】
実施例１で調製されたようなアムラ種子抽出物は、実験用ラットの脂質低下活性ために評価がなされた。１．５乃至２．０キログラムの雄ＮＺ白ウサギは、実験のために使用された。それらの白ウサギは、「１２時間の明と１２時間の暗」のサイクルを有するクリーンなステンレス製ケージ内の温度制御室（２５±２℃）に収容され、通常のペレットダイエット食と水が自由に飼料として与えられた。
【０１５８】
１０日間の順応期間の後、血液サンプルが全てのウサギの辺縁耳静脈から採取された。血液は凝固され、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離され、更に血清は注意深く別々のチューブに引き込まれ、そして回収された。この血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析された。
【０１５９】
ベースライン脂質プロファイルを取った後、これらの動物は各グループにおいて６匹の動物からなる４グループに分けられた。以下の処理が３カ月間それらの動物に与えられた。
【０１６０】
【表８】
2016532724.tif 000013
【０１６１】
血液サンプルは、処置の３ヶ月後、すべてのウサギから回収され、そして血清が脂質プロフィールについて分析された。採血後、動物はペントバルビタールを注射した後に屠殺され、そして大動脈が摘出され、食塩水で洗浄され、組織病理学のために１０％ホルマリン中で保存された。各切片はミクロトームを用いて切断され、ヒーマトキシリン及びエオシン色素で染色され、そしてスライドガラス上に載置された。各スライドが顕微鏡下で観察され、大動脈内中膜複合体厚（ＩＭＴ）が組織形態計測によって測定された。
【０１６２】
【表９Ａ】
2016532724.tif 000014
【０１６３】
【表９Ｂ】
2016532724.tif 000015
【０１６４】
【表１０】
2016532724.tif 000016
【０１６５】
結果は、治療前に、全てのグループにおける総コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬのベースライン値は同程度であったことを示す。３ヶ月間の飼料コレステロールは、総コレステロールおよびトリグリセリドレベルを非常に高い値に増加させた。
【０１６６】
コレステロールの単独投与（グループＩＩ）では，総コレステロールレベルを大幅に２１９．８１ｍｇ／ｋｇに増加させた。グループＩＩＩにおいては、コレステロール＋アムラ種子エキスの経口投与であるのに対し、総コレステロール値は、コレステロール単独グループと比較して２．３倍低い９４．１８ｍｇ／ｄｌであった。
【０１６７】
グループＩＩでは、コレステロール投与がトリグリセリドレベルを１８８．２５ｍｇ／ｋｇに増加させた。グループＩＩＩにおいては、コレステロール＋アムラ種子エキスの経口投与であるのに対し、トリグリセリドレベルは、コレステロール単独群と比較して２．３倍低かった８３．２３ｍｇ／ｄｌであった。
【０１６８】
グループＩＩＩでは、コレステロール＋アムラ種子抽出物の投与は、ＨＤＬ（善玉コレステロール）を３ヶ月の治療後に１５．４２のベースライン値から３７．２７に著しく増加させた。前者は３ヶ月の治療後のＨＤＬコレステロールの２．４倍の増加であった。
【０１６９】
コレステロール投与後に、コレステロール単独グループは総コレステロールに対するＨＤＬの比率が０．０５であることを示した。グループＩＩＩにおいては、コレステロール＋アムラ種子エキスの経口投与であるのに対して、総コレステロールのＨＤＬコレステロールの比率は、コレステロール単独グループと比較して７．８倍高い０．３９であった。
【０１７０】
グループＩＩでは、コレステロールの単独投与がＬＤＬレベルを１７０．６６ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいて、コレステロール＋アムラ種子エキスの経口投与であるのに対し、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して４．２倍低い４０．２６ｍｇ／ｄｌであった。
【０１７１】
グループＩＩでは、単独でのコレステロールの投与が３７．６５ｍｇ／ｄｌのにＶＬＤＬレベルを増加させた。グループＩＩＩにおいて、コレステロール＋アムラ種子エキスの経口投与であるのに対して、ＶＬＤＬレベルはコレステロール単独グループと比較して２．３倍低い１６．６５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１７２】
アトルバスタチンはまた、未処理の対照グループと比較して総コレステロールおよびトリグリセリドレベルを著しく減少させたが、アムラ種子抽出物は、特にＨＤＬレベルを上昇させる際には良好であった。
【０１７３】
また、アムラの種子抽出物の投与は、未処置対照グループと比較して、ウサギの大動脈の内中膜複合体厚において１．９倍の減少を示した。
【実施例２４】
【０１７４】
ヒトにおけるアムラ種子抽出物の抜け毛防止および髪の成長促進作用
【０１７５】
方法：
【０１７６】
（皮膚科医によって検出されるような）脱毛症および重度の抜け毛に罹患している１０人の被験者は、各５人の被験者からなる２グループにランダムに分けられた。
【０１７７】
グループＩ−実施例１の通りに調製したアムラ種子抽出物グループ
グループＩＩ−プラセボグループ
【０１７８】
すべての被験者は、研究開始に先立ち１ヶ月間ミノキシジル、フィナステリドなどのような毛髪成長促進を有する（経口または局所）薬の任意の種類を摂取することを禁止された。グループＩの各被験者は、患部に一日二回、５％アムラ種子抽出物を含む５ミリリットルココナッツオイルを適用して、そして１日２回アムラ種子エキスカプセルの１００ｍｇを摂取することもした。プラセボグループの被験者は、一日二回患部に適用される（アムラ種子抽出物なしの）ココナッツオイルが与えら、そして１日２回摂取されるプラセボカプセルが提供された。治療は、３ヶ月間継続され、そして観察が研究前後に皮膚科医によって行われた。各被験者からランダムに摘み取られた毛の長さと厚さも測定された。
【０１７９】
結果：
【０１８０】
アムラ種子抽出物を用いて処置された各被験者の毛髪は、プラセボグループと比較して、輝きがあって光沢があり、更により高密度であった。抜け毛はアムラ種子抽出物で処理した被験者においてほぼ止まった。対照的に、プラセボグループの被験者は、それは治療開始前と同じ速度で抜け毛が観察された。アムラ種子抽出物で処置された被験者の毛髪の平均の長さは、プラセボグループの被験者よりも約２５％以上であった。毛の厚さは、プラセボグループの被験者と比較して、アムラ種子抽出物グループにおいても約２０％以上であった。それ故、アムラ種子抽出物は、抜け毛を減少させる並びに髪の成長を促進させる点で役に立った。このアムラ種子抽出物はまた毛に光沢をもたせ且つ輝きのあるものにした。
【実施例２５】
【０１８１】
トリトンＷＲ  １３３９によって誘発される脂質異常症モデルを用いて、他のアムラ抽出物と比較したアムラ種子抽出物の脂質低下作用
【０１８２】
約２５０乃至３００グラムの重量を秤量する４８匹の雄アルビノラット（スプラーグドーリー株）が、研究のために選択された。これらの動物は温度２４±２℃、６５％相対湿度および１２時間の明／暗サイクルにおいて動物ハウス内に留め置かれた。これらのラットは２週間、そしてそれらのラットが標準的なペレットダイエット食及び水を自由にアクセスしていたこの期間に順応させられた。順化の２週間後、すべてのラットはトリトンＷＲ１３３９（チロキサポール）の注入及び試験抽出物／標準の投与の前に一晩絶食させられた。これらの動物１２のグループに分けられた。以下の処置が一晩絶食させた各ラットに与えられた。
【０１８３】
グループＩ：正常な対照（賦形剤のみ）
グループＩＩ：トリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＩＩ：実施例１（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により、）に従って調製されたアムラ種子メタノール抽出物の酢酸エチル抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＶ：実施例１（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により、）に従って調製されたアムラ種子のメタノール抽出物の水部に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶ：実施例２（２．５ｍｇ／ｋｇ，経口により）に従って調製したアムラ種子の酢酸エチル抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩ：実施例７（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製した乾燥アムラ種子の粉末に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩ：実施例８（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製された乾燥アムラ種子粉末の水抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＶＩＩＩ：実施例８（２．５  ｍｇ／ｋｇ、経口により、）に従って調製された乾燥アムラ種子粉末のメタノール抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＸ：実施例１０（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製された乾燥アムラ果実の粉末が続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＸ：  実施例１１（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製された乾燥アムラ果実粉末の水抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＸＩ：実施例１２（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に従って調製された乾燥アムラ果実粉末のメタノール抽出物に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＸＩＩ：アトルバスタチン（２．５ｍｇ／ｋｇ、経口により）に続く
トリトンＷＲ  １３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
【０１８４】
これらの動物は、次の２４時間絶食させたが、水を自由に摂取することへのフリーアクセスを有していた。薬物処理の２４時間の後、２ｍｌの血液サンプルが眼窩叢から採取された。血液は凝固させられ、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離されて、血清が注意深く別々のチューブに引き込まれて回収された。当該血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析がされた。
【０１８５】
【表１１Ａ】
2016532724.tif 000017
【０１８６】
【表１１Ｂ】
2016532724.tif 000018
【０１８７】
この研究では、実施例１及び２で作製されたアムラ種子抽出物（２．５ｍｇの抽出物／ｋｇ体重）は、同じ用量レベルで、すなわち２．５ｍｇ抽出物／ｋｇ体重で実施例７乃至１２におけるように製造された他のアムラ抽出物と比較された。、
【０１８８】
結果は、治療前に、全てのグループにおける総コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬのベースライン値が同程度であったことを示した。
【０１８９】
単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、総コレステロールレベルを大幅に２８８．１８ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいては、トリトン注射したラットでは、実施例１に従って調製されたアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、コレステロールレベルはトリトン単独グループと比較して２．７倍低い１０６．４１ｍｇ／ｄｌであった。
【０１９０】
グループＩＩにおいて、トリトン注射はトリグリセリドレベルを５８１．４２ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいては、トリトン注射したラットでは、実施例１に従って調製されたアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して６．４倍低い９０．４７ｍｇ／ｄｌであった。
【０１９１】
トリトン単独グループではトリトン注射後に、総コレステロールに対するＨＤＬの比率は０．１５であった。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおける実施例１に従って調製されたアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比率は、トリトン単独グループと比較して３倍高い０．４５であった。
【０１９２】
グループＩＩでは、トリトン注射は１２９．２８ｍｇ／ｄｌにＬＤＬレベルを増加させた。ＩＩＩ群において、トリトン注射したラットにおける（実施例１に従って調製された）アムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、ＬＤＬレベルがトリトン単独グループと比較して３．２倍低い４０．１７ｍｇ／ｄｌであった。
【０１９３】
グループＩＩでは、トリトン注射がＶＬＤＬレベルを１１６．２８ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおける（実施例１に従って調製した）アムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループに比較して６．４倍低い１８．０９ｍｇ／ｄｌであった。
【０１９４】
２．５ｍｇ／ｋｇにおける（実施例２で調製された）アムラ種子の酢酸エチル抽出物はある程度（グループＶ）コレステロール及びトリグリセリドのレベルを低下させることができた。
【０１９５】
結果は、治療前に、全てのグループにおける総コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬのベースライン値は同程度であったことを示している。  
【０１９６】
単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、総コレステロールレベルを大幅に２８８．１８ｍｇ／ｄｌに増加させた。ＩＩＩ群においては、トリトン注射されたラットでは実施例２に従って調製されたアムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、コレステロール値はトリトン単独グループと比較して２．３倍低い１２２．２５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１９７】
グループＩＩでは、トリトン注射は５８１．４２ｍｇ／ｄｌにトリグリセリドレベルを増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおいて実施例２に従って調製されたアムラ種子抽出物の同時経口投与あるのに対して、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して５．８倍低い９９．５ｍｇ／ｄｌであった。
【０１９８】
トリトン単独グループでは、注射後に、総コレステロールに対するＨＤＬの比率は０．１５であった。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおいて実施例２に従って調製されたアムラの種子抽出物の同時経口投与であるのに対して、総コレステロールのＨＤＬコレステロールの比率は、トリトン単独グループと比較して２．３倍高い０．３５であった。
【０１９９】
グループＩＩでは、トリトン注射は１２９．２８ｍｇ／ｄｌにＬＤＬレベルを増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットにおいて、（実施例２に従って調製された）アムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対し、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して２．１倍低い５９．８４ｍｇ／ｄｌであった。
【０２００】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１１６．２８ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループ１１１においては、トリトン注射したラットにおいて（実施例２に従って調製された）アムラ種子抽出物の同時経口投与であるのに対しては、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループに比較して５．８倍低い１９．９ｍｇ／ｄｌであった。
【０２０１】
（実施例１において調製された）メタノール抽出物の水部、アムラ種子粉及び（実施例７乃至１２で調製された）他の水とメタノール抽出物は、コレステロールまたはトリグリセリドレベルを低下させる点で、アクティブではなかった。とは言え、標準薬アトルバスタチンは、コレステロール並びにトリグリセリドレベル（グループＸＩＩ）を低下させる点で効果的であったが、（実施例１に従った）アムラ種子メタノール抽出物の酢酸エチル）もしくは（実施例２に従った）アムラ種子の酢酸エチル抽出物と比較した場合、あまり効果的ではなかった。
【実施例２６】
【０２０２】
トリトンＷＲ１３３９によって誘発される脂質異常症モデルを用いて、アムラ種子粉末に比べたアムラ種子抽出物（製品３）の脂質低下作用
【０２０３】
約２５０乃至３００グラムの重量を秤量する２８匹の雄アルビノラット（スプラーグドーリー株）が、研究のために選択された。これらの動物は、温度２４±２℃、６５％相対湿度および１２時間の明／暗サイクルにおいて動物ハウス内に留め置かれた。これらのラットは２週間、そしてそれらのラットが標準的なペレットダイエット食及び水を自由にアクセスしていたこの期間に順応させられた。順化の２週間後、すべてのラットはトリトンＷＲ１３３９（チロキサポール）の注入及び試験抽出物／標準の投与の前に一晩絶食させられた。これらの動物は７つの群に分けられた。以下の処置が一晩絶食させた各ラットに与えられた。
【０２０４】
グループＩ：正常な対照（賦形薬のみ）
グループＩＩ：トリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）
グループＩＩＩ：トリトン投与（０．５ｍｇ／ｄｌ、経口により）と同日にアムラ種子抽出物の製品（製品３）に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｄｌ、腹腔内）
グループＩＶ：トリトン投与（０．５ｍｇ／ｄｌ、経口により）と同日にアムラ種子抽出物の製品２（５０％メタノールフラクション＋８０％メタノールフラクション＋水のフラクション）に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｄｌ、腹腔内）
グループＶ：トリトン投与（０．５ｍｇ／ｄｌ、経口により）と同日にアムラ種子抽出物の製品１（ヘキサンフラクション）に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｄｌ、腹腔内）
グループＶＩ：実施例８（０．５ｍｇ／ｄｌ、経口により）に従って調製した乾燥アムラ種子の粉末に続くトリトンＷＲ  １３３９（３００ｍｇ／ｄｌ、腹腔内）。乾燥アムラ種子の粉末はトリトンが投与された日に投与された。
グループＶＩＩ：同日にアトルバスタチン投与（１０ｍｇ／ｋｇ、経口により）に続くトリトンＷＲ１３３９（３００ｍｇ／ｄｌ、腹腔内）
【０２０５】
これらの動物は、次の２４時間絶食させたが、水を自由に摂取することへのフリーアクセスを有していた。薬物処理の２４時間の後、２ｍｌの血液サンプルが眼窩叢から採取された。血液は凝固させられ、次いで、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離されて、血清が注意深く別々のチューブに引き込まれて回収された。当該血清は、自動分析装置を用いて、総コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルについて分析がされた。
【０２０６】
【表１２Ａ】
2016532724.tif 000019
【０２０７】
【表１２Ｂ】
2016532724.tif 000020
【０２０８】
単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、総コレステロールレベルを大幅に３８６．４ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射済みラットにおいてアムラ種子抽出物の製品３の経口投与に続いているのに、コレステロール値は９５．６ｍｇ／ｄｌであった。それ故、製品３（グループＩＩＩ）を投与すると、トリトン単独治療（グループＩＩ）に比べてコレステロールのレベルは４倍低くなった。
【０２０９】
グループＩＩではトリトン注射はトリグリセリドレベルを５８３．３３ｍｇ／ｄｌに増加させた。グループＩＩＩにおいて、トリトン注射したラットへの商品３の経口投与では、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループ（グループ２）に比べて９．３倍低い６２．４ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１０】
トリトン単独グループでは、トリトン注射の後では、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比率は０．１１ｄであった。一方で、グループＩＩＩにおいては、総コレステロールに対するＨＤＬの比率はトリトン単独グループに比較して４．６倍高い０．５１であった。
【０２１１】
グループＩＩでは、トリトン注射はＬＤＬレベルを２２６．５３ｍｇ／ｄｌに増加させた。一方で、グループＩＩＩにおいては、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して６．７倍低い３３．７６ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１２】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１１６．６７ｍｇ／ｄｌに増加させた。一方で、グループＩＩＩにおいて、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して９．３倍低い１２．４８ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１３】
単独のトリトン（グループＩＩ）を注入すると、総コレステロールレベルを３８６．４  ｍｇ／ｄｌに大幅に増加させた。一方で、グループＩＶ（製品２の投与に続くトリトン）において、コレステロール値は、トリトン単独グループと比較して２．９倍低い１３２．３６ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１４】
グループＩＩにおいて、トリトン注射を行うと、トリグリセリドレベルが５８３．３３ｍｇ／ｄｌに増加された。一方で、トリトン注射したラットへの製品２の経口投与したグループＩＶにおいて、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して５．６倍低い１０３．５ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１５】
トリトン単独グループでは、トリトン注射後に、総コレステロールに対するＨＤＬの比率は０．１１であった。トリトン注射したラットへのアムラ種子抽出物（製品２）の経口投与したグループＩＶにおいて、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比率は、トリトン単独グループと比較して２．７倍高い０．３０であった。
【０２１６】
グループＩＩでは、トリトン注射はＬＤＬレベルを２２６．５３ｍｇ／ｄｌに増加させた。一方で、トリトン注射したラットへの製品２の経口投与したグループＩＶにおいて、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して３．２倍低い７０．６３ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１７】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１１６．６７ｍｇ／ｄｌのに増加させた。一方で、トリトン注射したラットへの製品２の経口投与したグループＩＶにおいてＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループ（グループ１１）に比べて５．６倍低い２０．７ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１８】
単独のトリトン（グループＩＩ）を注射すると、３８６．４ｍｇ／ｄｌに大幅に総コレステロールレベルを増加させた。一方で、トリトン注射したラットにおける実施例１３に従って調製された製品１の同時経口投与したグループＶにおいて、コレステロール値は、トリトン単独グループと比較して２．０９倍低い１８４．５ｍｇ／ｄｌであった。
【０２１９】
グループＩＩでは、トリトン注射を行うと、トリグリセリドレベルが５８３．３３ｍｇ／ｄｌに増加された。一方で、トリトン注射したラットにおける製品１の同時経口投与したグループＶにおいて、トリグリセリドレベルはトリトン単独グループと比較して４．９倍低い１１９．４ｍｇ／ｄｌであった。
【０２２０】
トリトン単独グループでは、注射後、総コレステロールに対するＨＤＬの比率は０．１１であった。トリトン注射したラットで実施例１３に従って調製された製品１の同時経口投与したグループＶにおいて、総コレステロールに対するＨＤＬコレステロールの比率は、トリトン単独グループと比較して２．４倍高い０．２６であった。
【０２２１】
グループＩＩでは、トリトン注射はＬＤＬレベルを２２６．５３ｍｇ／ｄｌに増加させた。トリトン注射したラットにおいて、実施例１３に従って調製した製品１の同時経口投与したグループＶにおいて、ＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して２倍低い１１２．６５ｍｇ／ｄｌであった。
【０２２２】
グループＩＩでは、トリトン注射はＶＬＤＬレベルを１１６．６７ｍｇ／ｄｌに増加させた。トリトン注射したラットにおいて実施例１３に従って調製された製品１の同時経口投与したグループＶにおいて、ＶＬＤＬレベルはトリトン単独グループと比較して４．９倍低い２３．８８ｍｇ／ｄｌであった。
【図１】
2016532724.tif 000021
【図２】
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【図３】
2016532724.tif 000023
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2016532724.tif 000028
【図９】
2016532724.tif 000029
【図１０】
2016532724.tif 000030
【図１１】
2016532724.tif 000031
【図１２】
2016532724.tif 000032
【図１３】
2016532724.tif 000033
【国際調査報告】
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