(57)【要約】  本開示は、ω３型のドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）（ＤＰＡ２２：５ｎ−３）またはその誘導体、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症を減少させるときのその使用に関する。特に、本開示は、食事後の設定でカイロミクロンの脂肪酸の取込みを有意に減少させる、ｎ−３ＤＰＡの能力に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に純粋な形態で、ｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）またはその誘導体を、薬剤的に許容可能な担体または賦形剤と一緒に含む医薬組成物。
【請求項２】
前記ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体が、前記組成物の少なくとも１０重量％含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
それを必要とする対象の高トリグリセリド血症または高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防に使用するためのｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）またはその誘導体を含む医薬組成物。
【請求項４】
対象の血中トリグリセリドの食後の上昇を治療または予防する、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記ｎ−３ＤＰＡが、遊離脂肪酸の形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ｎ−３ＤＰＡが、エチルエステルの形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
それを必要とする対象の高トリグリセリド血症または高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、または医薬組成物の使用。
【請求項８】
前記組成物が、対象の血中トリグリセリドの食後の上昇を治療または予防する、請求項７記載の使用。
【請求項９】
食後のトリグリセリド中のＥＰＡの比率が上昇しない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項７または８記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物が、食後の高カイロミクロン血症を減少させる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項７または８記載の使用。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、またはｎ−３ＤＰＡを含む医薬組成物の使用。
【請求項１２】
対象の高トリグリセリド血症または高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防用薬剤の製造での精製されたｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体の使用。
【請求項１３】
前記薬剤が、対象の血中トリグリセリドの食後の上昇を治療または予防する、請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
対象の空腹時のトリグリセリドを減少させる効果のある期間、前記対象への投与および請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）もしくはその誘導体、または医薬組成物の効果量を含む、それを必要とする前記対象の空腹時のトリグリセリドを減少させる方法。
【請求項１５】
それを必要とする対象の高トリグリセリド血症または高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防する方法であって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、または医薬組成物の効果量を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項１６】
対象の血中トリグリセリドの食後の上昇を治療または予防する、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、約４００ｍｇ／ｄｌ〜約２５００ｍｇ／ｄｌのベースライン空腹時トリグリセリド値を有する、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記治療を受けている対象が、約５００ｍｇ／ｄｌ〜約２０００ｍｇ／ｄｌの空腹時ベースライントリグリセリド値を有する、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｎ−３ＤＰＡが、遊離脂肪酸の形態、トリグリセリドの形態またはエチルエステルの形態で提供される、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体が、少なくとも１０重量％の前記ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体を含む、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用または請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記精製されたｎ−３ＤＰＡまたは組成物が、約１０％以下のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）またはＥＰＡおよびＤＨＡの組み合わせを含む、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用または請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
高トリグリセリド血症および／または高コレステロール血症に関連する障害が、（ｉ）心血管系障害、（ｉｉ）関節リウマチ、（ｉｉｉ）レイノー症候群、（ｉｖ）狼瘡、（ｖ）月経痛（ｖｉ）２型糖尿病、（ｖｉｉ）肥満症、（ｖｉｉｉ）クローン病、（ｖｉｖ）変形性関節症、（ｘ）甲状腺機能低下症、（ｘｉ）腎疾患および（ｘｉｉ）骨粗鬆症から選択される、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用または請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が、正常値より上に上昇する血漿トリグリセリドの原因となる薬物療法を受けている、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用または請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象は、（ｉ）タモキシフェン、（ｉｉ）ステロイド薬、（ｉｉｉ）β遮断薬、（ｉｖ）利尿薬、（ｖ）エストロゲン、（ｖｉ）経口レチノイドおよび（ｖｉｉ）経口避妊薬から選択される薬物療法を受けている、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用または請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、プロテアーゼ阻害薬の薬物療法を受けているＨＩＶ患者である、請求項１〜２４のいずれかに記載の使用、組成物または方法。
【請求項２６】
前記対象が、アルコール依存症である、請求項１〜２５のいずれかに記載の使用、組成物または方法。
【請求項２７】
前記対象が、家族性リポタンパク質リパーゼ欠損症（カイロミクロン血症症候群）である、請求項１〜２６のいずれかに記載の使用、組成物または方法。
【請求項２８】
前記対象が、１つ以上のｉ）スタチン系薬剤、ｉｉ）フィブラート系薬剤、ｉｉｉ）ニコチン酸、ｉｖ）ロバザ（登録商標）およびｖ）バスセパ（登録商標）から選択される薬剤で、以前に治療をされ、トリグリセリド値、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）値および非高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）値の上昇、または減少しないことを経験している、請求項１〜２７のいずれかに記載の使用、組成物または方法。
【請求項２９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、または組成物の効果量を、対象に投与することを含む、前記対象の超高血漿トリグリセリド値（例えば、ＩＶ型およびＶ型高脂血症）を治療または予防する方法。
【請求項３０】
前記対象が、５０ｍｇ〜約５０００ｍｇの間で、ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体の用量を投与される、請求項１〜２９のいずれかに記載の使用、組成物または方法。
【請求項３１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物を含む体重減少サプリメント。
【請求項３２】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物を含む、対象の肥満症を治療または予防するための体重減少サプリメントでの使用。
【請求項３３】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡまたは医薬組成物を含む食品添加剤。
【請求項３４】
機能性食品、栄養補助食品、乳児または未熟児の摂食に適切な調製粉乳、離乳食、妊婦または乳飲み子の母親用食品、および老人用食品から選択される１つ以上の使用用途の請求項３３記載の食品添加剤。
【請求項３５】
動物用飼料に補充用の食品添加剤としての、精製されたｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体の使用。
【請求項３６】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物を含む動物用飼料。
【請求項３７】
対象の高トリグリセリド血症または高トリグリセリド血症に関連する障害の治療のための使用用途で、指示書と一緒に包装された、請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、または組成物を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１２年１０月２３日に出願された米国特許仮出願第６１／７１７，１５７号（その全文は、参照により本明細書に組み入れられるものとする）の優先権を主張する。
【０００２】
本明細書に記載または参照により本明細書中に組み入れられるいずれもの文書中のいずれもの製品の製造者の指示書、説明書、製品仕様、および製品概要のいずれもと一緒に、本明細書中で引用または参照された全文書、および本明細書で引用された文書中で引用または参照された全文書は、その全文を参照することにより、本明細書に組み入れられるものとする。
【０００３】
技術分野
本開示は、ω３型（ＤＰＡ２２：５ｎ−３）のドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）またはその誘導体およびそれを必要とする対象の高トリグリセリド血症の軽減での使用に関する。特に、本開示は、ｎ−３ＤＰＡが、食後のカイロミクロンへの脂肪酸の取込みを有意に低減する能力に関する。
【背景技術】
【０００４】
長鎖ｎ−３ポリ不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）、すなわち、ＥＰＡおよびＤＨＡが心臓血管の健康に良いことは、莫大な量の情報が存在する。対照的に、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸またはクルパノドン酸としても公知の中間製品のドコサペンタエン酸（ＤＰＡ２２：５  ｎ−３）については、ほとんど知られていない。
【０００５】
必須ω３型脂肪酸α−リノール酸（ＡＬＡ、１８：３ｎ−３）は、伸長および不飽和化酵素により、生体内で代謝されて、ｎ−３系の一連のポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を生成し得る。潜在的に、ＡＬＡから代謝されることに加えて、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５ｎ−３）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、２２：６ｎ−３）およびドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、２２：５ｎ−３）は、食事、主に魚および魚油製品から供給されるが、ＤＰＡレベルは、魚油中、非常に低い。
【０００６】
以前の試験は、動物が、アザラシ油を摂取したとき、組織脂質中のＤＰＡ濃度の有意な上昇（非特許文献１）だけでなく、ヒト対象が、アザラシ油を摂取したとき、循環脂質画分中のＤＰＡレベルの有意な上昇（非特許文献２〜４）を示した。しかしながら、それは、鎖伸長による多量のＤＰＡを生成する能力を有するさらに高レベルのＥＰＡを含有するアザラシ油中の約５％の脂肪酸に相当するので、かかる効果は、ＤＰＡ消費に、直接的に起因し得ない。
【０００７】
ラットでは、純粋ＤＰＡを含有する短期間の補給は、おそらく、逆変換（retroconversion）により、肝臓中のＤＨＡ濃度および肝臓、心臓および骨格筋中のＥＰＡ濃度を有意に増加させた（非特許文献５）。特に、ラットの腎臓中の、ＤＰＡからＥＰＡへの見かけの逆変換も、他者による最近の研究で見出された。
【０００８】
ヒトでは、食後の代謝および精製ｎ−３ＤＰＡの生物学的作用に関する知識は、わずかである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Murphyら, (1999) Mol Cell Biochem 177, 257-69
【非特許文献２】Conquerら, (1999) Thromb Res 96,239-50
【非特許文献３】Meyerら, (2009) Lipids 44, 827-35
【非特許文献４】Mannら, (2010) Lipids 45, 669-681
【非特許文献５】Kaurら, (2010) Br J Nutr 130, 32-7
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
高レベルのトリグリセリドに関連する症状、例えば、心血管系疾患、肥満症、およびアルコール依存症の発生頻度が、最近、世界的に増加を考慮すると、これらの症状の治療の改善が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、これらの脂肪酸の消費に続く、ヒト対象におけるドコサペンタエン酸；ＤＰＡ（２２：５ｎ−３）およびエイコサペンタエン酸；ＥＰＡ（２０：５ｎ−３）の食後代謝を調査して、比較する努力をした。カイロミクロントリアシルグリセロール（ＴＡＧ）およびリン脂質のｎ−３ポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の代謝の特定の試験で、ヒト血漿中の脂質の構造および組成を調査するため、分子レベルのリピドーム解析法を用いた。
【００１２】
本発明者らは、驚くべきことに、該血漿およびカイロミクロンに富む画分中のトリグリセリド値が、ＤＰＡ単独の消費後、空腹時のレベルに近いままであり、さらに、ＤＰＡが、トリグリセリド中のＥＰＡの比率を上昇させないことを発見した。この発見は、実質的に精製されたＤＰＡが、心血管系疾患、カイロミクロン血症症候群および肥満症などの高血漿トリグリセリドに関連する障害のトリグリセリド値を低下させるために有利であることになると強く示唆していた。
【００１３】
本開示は、薬剤的に許容可能な担体または賦形剤と一緒に、ｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）またはその誘導体を、実質的に純粋な形態で含む医薬組成物を提供する。１つの例では、該組成物は、食後のトリグリセリド中のＥＰＡ比率を上昇させない。１つの例では、該組成物は、食後のカイロミクロン血症を低減させる。
【００１４】
１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、遊離脂肪酸の形態で提供される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、トリグリセリドの形態で提供される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、エチルエステルの形態で提供される。
【００１５】
１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体は、少なくとも１０重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、少なくとも９６重量％、少なくとも９７重量％、少なくとも９８重量％、少なくとも９９重量％、少なくとも９９．５重量％、少なくとも９９．８重量％の該組成物を含む。
【００１６】
本開示は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症の治療もしくは予防または血中トリグリセリドの食後上昇を治療もしくは予防するのに使用するため、ｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）またはその誘導体を含む医薬組成物も提供する。
【００１７】
本発明は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防するのに使用するため、ｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）またはその誘導体を含む医薬組成物も提供する。
【００１８】
１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、遊離脂肪酸の形態で提供される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、トリグリセリドの形態で提供される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、エチルエステルの形態で提供される。
【００１９】
本開示は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症の治療もしくは予防または血中トリグリセリドの食後上昇を治療もしくは予防のため、精製されたｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）もしくはその誘導体、または精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の使用を提供する。
【００２０】
本開示は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防するのに使用するため、精製されたｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）もしくはその誘導体、または精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の使用も提供する。１つの例では、該対象は、精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の有効量を投与される。
【００２１】
本発明者により特定された重要な発見は、ＤＰＡの投与が、カイロミクロン中の脂肪酸の取込みを、ほとんど完全に排除し、その効果は、ＥＰＡの投与では見られないことであった。１つの例では、該組成物の投与は、食後のトリグリセリド中のＥＰＡの比率を上昇させない。別の例では、該組成物は、食後のカイロミクロン血症を低減させる。１つの例では、食後のカイロミクロン血症を低減は、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物の投与の５時間以内に起こる。
【００２２】
本開示は、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の薬用使用も提供する。
【００２３】
本開示は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症を治療もしくは予防または血中トリグリセリドの食後上昇を治療もしくは予防するための医薬品の製造での精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体の使用も提供する。１つの例では、本開示に記載の医薬品は、対象の高トリグリセリド血症に関連する障害を治療または予防する。
【００２４】
本開示は、精製されたドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）もしくはその誘導体、またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の効果量を、対象の空腹時のトリグリセリドを低減するため有効な期間、該対象に投与することを含む、該対象の空腹時のトリグリセリドを低減する方法も提供する。１つの例では、該方法は、食後のトリグリセリド中のＥＰＡ比率を上昇させない。１つの例では、該方法は、食後のカイロミクロン血症を低減する。
【００２５】
１つの例では、治療される該対象は、少なくとも約２００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約３００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約４００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約５００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約６００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約７００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約８００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約９００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１０００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１１００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１２００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１３００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１４００ｍｇ／ｄｌ、少なくとも約１５００ｍｇ／ｄｌのベースラインとなる空腹時トリグリセリド値を有する。１つの例では、治療される該対象は、約４００ｍｇ／ｄｌ〜約２５００ｍｇ／ｄｌ、約４５０ｍｇ／ｄｌ〜約２０００ｍｇ／ｄｌまたは約５００ｍｇ／ｄｌ〜約１５００ｍｇ／ｄｌの摂食時または空腹時のベースラインとなるトリグリセリド値を有する。
【００２６】
１つの例では、該対象は、約５００ｍｇ／ｄｌ〜約２０００ｍｇ／ｄｌの空腹時のベースラインとなるトリグリセリド値を有する。
【００２７】
当業者が、空腹時トリグリセリドの低減が対象に起こったかどうかを、容易に決定できるだろうということは、理解されるだろう。１つの例では、ｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）もしくはその誘導体の投与前および投与後に測定される空腹時のトリグリセリド値間で、比較が成される。トリグリセリド値の測定間の期間は、臨床医の自由裁量であろうが、少なくとも２４時間、数日、数週または数ヶ月の期間であり得る。空腹時トリグリセリド値の減少％は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％またはそれ以上であり得る。
【００２８】
本開示は、精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、または精製されたｎ−３ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）もしくはその誘導体の効果量を、対象に投与することを含む、それを必要とする該対象の高トリグリセリド血症を治療もしくは予防または血中トリグリセリドの食後上昇を治療もしくは予防する方法も提供する。
【００２９】
本開示は、精製された形態の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の効果量を、対象に投与することを含む、それを必要とする該対象の高トリグリセリド血症に関連する障害を治療もしくは予防する方法も提供する。
【００３０】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該ｎ−３ＤＰＡは、遊離脂肪酸の形態で提供される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、トリグリセリドの形態で提供される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡは、エチルエステルの形態で提供される。
【００３１】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該治療は、血漿トリグリセリドの減少を引き起こす。１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該治療は、血漿カイロミクロン血症の低減を引き起こす。
【００３２】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、血中トリグリセリドは、血漿トリグリセリド、血清トリグリセリドまたは該血中のカイロミクロンに富む画分である。
【００３３】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物は、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を投与されない対象と比較して、リポタンパク質粒子サイズを減少させた。
【００３４】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物は、少なくとも１０重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、少なくとも９６重量％、少なくとも９７重量％、少なくとも９８重量％、少なくとも９９重量％、少なくとも９９．５重量％、少なくとも９９．８重量％含む。
【００３５】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物は、約１０％以下、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）またはＥＰＡとＤＨＡの組み合わせを含む。別の例では、本開示の組成物は、実質的に、ＤＨＡおよび／またはＥＰＡを含まない。別の例では、本開示の組成物は、実質的に、ＤＨＡおよび／またはＥＰＡもその誘導体も含まない。別の例では、該ｎ−３ＤＰＡは、アルブミンに結合している。
【００３６】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、高トリグリセリド血症に関連する障害は、（ｉ）心血管系障害、（ｉｉ）関節リウマチ、（ｉｉｉ）レイノー症候群、（ｉｖ）狼瘡、（ｖ）月経痛（ｖｉ）２型糖尿病、（ｖｉｉ）肥満症、（ｖｉｉｉ）クローン病、（ｖｉｖ）変形性関節症、（ｘ）甲状腺機能低下症、（ｘｉ）腎疾患および（ｘｉｉ）骨粗鬆症から選択される。別の例では、該障害は、家族性リポタンパク質リパーゼ欠損症（カイロミクロン血症症候群）である。
【００３７】
１つの例では、本開示のいずれかの使用または方法に従って、該対象は、血漿トリグリセリドを、正常レベルより高く（すなわち、＞１５０ｍｇ／ｄｌ）する原因となる薬物で治療中である。１つの例では、該対象は、（ｉ）タモキシフェン、（ｉｉ）ステロイド薬、（ｉｉｉ）β遮断薬、（ｉｖ）利尿薬、（ｖ）エストロゲン、（ｖｉ）経口レチノイドおよび（ｖｉｉ）経口避妊薬から選択される薬物療法を受けている。
【００３８】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該対象は、プロテアーゼ阻害薬で治療中であるＨＩＶ対象である。
【００３９】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該対象は、アルコール依存症である。
【００４０】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従って、該対象は、家族性リポタンパク質リパーゼ欠損症（カイロミクロン血症症候群）である。
【００４１】
１つの例では、本開示のいずれかの使用、組成物または方法に従った対象は、１つ以上のｉ）スタチン系薬剤、ｉｉ）フィブラート系薬剤、ｉｉｉ）ニコチン酸、ｉｖ）ロバザ（登録商標）（ｎ−３ＥＰＡエチルエステルおよびｎ−３ＤＨＡエチルエステルを含む処方物）およびｖ）バスセパ（登録商標）（ｎ−３ＥＰＡを含む処方物）から選択される薬剤で、以前治療を受け、血漿トリグリセリド値の上昇の経験、または減少しない経験を有する。１つの例では、１つ以上の上記薬剤での治療は、中断して、本開示の使用または方法により、置き換えられる。
【００４２】
１つの例では、該対象は、１つ以上の次のものｉ）血圧の薬、ｉｉ）抗凝固薬、ｉｉｉ）糖尿病薬、ｉｖ）アスピリン、ｖ）シクロスポリンおよびｖｉ）慢性乾癬治療用外用副腎皮質ホルモン剤で治療を受けていない。
【００４３】
１つの例では、本開示は、スタチン系薬剤またはナイアシン持続放出単独療法での治療が、不十分であると考えられるとき（フレデリクソンＩＶ型高脂血症）、対象の高トリグリセリド血症を低減する方法を提供する。
【００４４】
１つの例では、本開示は、本明細書に開示の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体、またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物の効果量を、対象に投与することを含む、該対象の非常に高い血漿トリグリセリド値（例えば、ＩＶ型およびＶ型高脂血症）を治療または予防する方法を提供する。
【００４５】
１つの例では、本開示の使用、組成物または方法に従って治療される該対象は、約２５０ｎｍｏｌ／ｍｌ以下、約２００ｎｍｏｌ／ｍｌ以下、約１５０ｎｍｏｌ／ｍｌ以下、約１００ｎｍｏｌ／ｍｌ以下または約５０ｎｍｏｌ／ｍｌ以下の全脂肪酸の空腹時ベースライン絶対血漿レベルを示す。
【００４６】
別の例では、該対象は、約７０μｇ／ｍｌ以下、約６０μｇ／ｍｌ以下、約５０μｇ／ｍｌ以下、約４０μｇ／ｍｌ以下、約３０μｇ／ｍｌ以下、または約２５μｇ／ｍｌ以下の空腹時ベースライン血漿、血漿、または赤血球膜ｎ−３ＤＰＡレベルを示す。
【００４７】
別の例では、該対象は、血漿中、約０．４０％以下の全脂肪酸の空腹時ベースライン血漿ｎ−３ＤＰＡレベルを示す。
【００４８】
別の例では、該対象は、赤血球中、約１．８％以下の全脂肪酸の空腹時ベースライン赤血球ｎ−３ＤＰＡレベルを示す。
【００４９】
１つの例では、本開示の方法は、治療を開始前に、対象のベースライン脂質プロファイルを測定する工程を含む。別の例では、本開示の方法は、１つ以上の次のもの：
（ｉ）約２００ｍｇ／ｄｌ〜約４００ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２１０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２２０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２３０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２４０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２５０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２６０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２７０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２８０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２９０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｄｌのベースラインｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃレベル；
（ｉｉ）約２５０ｍｇ／ｄｌ〜約４００ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２６０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２７０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２８０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約２９０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｄｌのベースライン総コレステロール値；
（ｉｉｉ）約１４０ｍｇ／ｄｌ〜約２００ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約１５０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約１６０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約１７０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約１８０ｍｇ／ｄｌ、または少なくとも約１９０ｍｇ／ｄｌのベースラインＶＬＤＬ−Ｃ値；
（ｉｖ）約１０ｍｇ／ｄｌ〜約６０ｍｇ／ｄｌ、または約４０ｍｇ／ｄｌ以下、または約３５ｍｇ／ｄｌ以下、または約３０ｍｇ／ｄｌ以下、または約２５ｍｇ／ｄｌ以下、または約２０ｍｇ／ｄｌ以下、または約１５ｍｇ／ｄｌ以下のベースラインＨＤＬ−Ｃ値；および／または
（ｖ）約５０ｍｇ／ｄｌ〜約３００ｍｇ／ｄｌ、または約１００ｍｇ／ｄｌ以上、または約９０ｍｇ／ｄｌ以上、または約８０ｍｇ／ｄｌ以上、または約７０ｍｇ／ｄｌ以上、または約６０ｍｇ／ｄｌ以上、または約５０ｍｇ／ｄｌ以上のベースラインＬＤＬ−Ｃ値
を有する対象を識別する工程を含む。
【００５０】
別の例では、本開示の方法は、対象の空腹時ａｐｏＢ−４８レベルを測定する工程を含む。理論に束縛されるものではないが、血清ａｐｏＢ−４８レベルは、血漿トリグリセリド濃度と相関があるが、コレステロール値とは相関がないことが発見された（Sakai N et al (2003) Journal of Lipid Research vol 44:1256）。
【００５１】
１つの例では、本開示に従った精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡを含む組成物を用いた治療に続いて、該対象は、１つ以上の次の結果：
（ｉ）ベースラインと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％の血清または血漿トリグリセリド値の減少；
（ｉｉ）ベースラインと比較して、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ値の３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満の増加もしくは増加がない、または少なくとも約１％、少なくとも約３％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％もしくは少なくとも約７５％のｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ値の減少；
（ｉｉｉ）ベースラインと比較して、ＨＤＬ−Ｃ値が、実質的に変化がない、ＨＤＬＣ値が、変化がない、またはＨＤＬ−Ｃ値が、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、もしくは少なくとも約７５％の増加；
（ｉｖ）ベースラインと比較して、ＬＤＬ−Ｃ値の６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満の増加もしくは増加しない、またはＬＤＬ−Ｃ値の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約５５％、もしくは少なくとも約７５％の減少；
（ｖ）ベースラインと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％または少なくとも約１００％のＶＬＤＬ値の減少
を示す。
【００５２】
１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、アポリポタンパク質Ｂ１００（ａｐｏＢ）値の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、アポリポタンパク質Ｂ４８値の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ａｐｏＡ−Ｉ）値の上昇を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、ａｐｏＡ−Ｉ／ａｐｏＢ１００比の増加を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、リポタンパク質（ａ）値の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、平均ＬＤＬ粒子数の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、酸化ＬＤＬの減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、ホスホリパーゼＡ２の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、細胞内接着分子１の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、プラスミノーゲン活性化因子抑制因子１の減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、総コレステロールの減少を示す。１つの例では、該対象は、ベースラインと比較して、高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）の減少を示す。
【００５３】
本開示に記載のいずれかの方法または使用に従った１つの例では、該対象は、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物の消費前に、１２時間まで絶食する。１つの例では、該対象は、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物の消費前に、１０時間絶食する。
【００５４】
１つの例では、該精製されたｎ−３もしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物は、食後のトリグリセリド値の上昇を防止する。１つの例では、食後のトリグリセリドは、少なくとも約１〜１２時間、少なくとも約２〜１０時間、少なくとも約３〜８時間、または少なくとも約２〜５時間、上昇するのを防止される。
【００５５】
本開示は、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物を含む体重減少サプリメントも提供する。１つの例では、該体重減少サプリメントは、固形食品または飲料と混合できる経口剤形で提供される。１つの例では、該体重減少サプリメントは、経口摂取用カプセル剤として提供される。１つの例では、該体重減少サプリメントは、肥満症患者を治療するため使用される。
【００５６】
本開示は、対象の肥満症を治療または予防するための体重減少サプリメントで、本発明に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物の使用も提供する。
【００５７】
本開示は、精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物を含む食品添加剤も提供する。１つの例では、該食品添加剤は、固形食に添加される。１つの例では、該食品添加剤は、流動食に添加される。１つの例では、該食品添加剤は、動物用飼料に添加される。
【００５８】
本開示は、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む医薬組成物を含む動物用飼料も提供する。
【００５９】
本開示は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症に関連する障害の治療または予防用食品添加剤として、精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体の使用も提供する。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体は、機能性食品、栄養補助食品、乳児または未熟児の摂食に適切な調製粉乳、離乳食、妊婦または乳飲み子の母親用食品、および老人用食品から選択される食品への食品添加剤として使用される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体は、カルニチンおよび／またはフィブラート系薬剤と組み合わされる。
【００６０】
本開示は、動物用飼料に補充する食品添加物として、精製されたｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体の使用も提供する。
【００６１】
本開示は、化粧品処方で、精製されたｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体の使用も提供する。１つの例では、該化粧品処方は、局所製剤である。１つの例では、該局所製剤は、保湿クリームもしくはローション、固形石鹸、口紅、シャンプーまたは乾燥、湿疹および乾癬のための治療用皮膚製剤である。
【００６２】
本開示は、それを必要とする対象の高トリグリセリド血症または高トリグリセリド血症に関連する障害の治療のための使用用途で、指示書と一緒に包装された、本明細書に開示の精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物を含むキットも提供する。
【００６３】
１つの例では、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物は、１日に１回〜約４回、該対象に投与される。
【００６４】
１つの例では、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物は、食事摂取前、食事摂取中または食事摂取後直ぐに、該対象に投与される。１つの例では、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物は、食事摂取前、１時間以内、１時間半以内、または１５分以内に、該対象に投与される。１つの例では、該精製されたｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体またはｎ−３ＤＰＡもしくはその誘導体を含む組成物は、食事摂取後、１５分以内、３０分以内または４５分以内に、該対象に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】図１は、オリーブ油（白丸）、またはＥＰＡ（黒四角）もしくはＤＰＡ（黒三角）と一緒にオリーブ油を含む食事後、血漿（Ａ）およびカイロミクロンに富む画分（Ｂ）中のトリアシルグリセロール濃度（ｍｍｏｌ／ｌ＋／−標準偏差、ｎ＝１０）を示す。該ＤＰＡ食事後のカイロミクロンＴＡＧ曲線下増分面積は、該オリーブ油食事後の相当する面積（ｐ＝０．０２１）または該ＥＰＡ食事後の面積（ｐ＝０．０３４）と比較したとき、有意に減少していた。血漿中、ＤＰＡ後のＴＡＧ面積と対照食事間の差は、有意である（ｐ＝０．０７８）傾向であった。該オリーブ油朝食と該ＤＰＡ朝食間の個々の時点での有意差（ｐ＜０．０５）を、星印で示した。
【図２】図２は、オリーブ油のみ（オリーブ、白色棒）またはエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、灰色棒）もしくはドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、黒色棒）と混合したオリーブ油を含む食事後、１〜５時間の食後カイロミクロントリアシルグリセロール脂肪酸（２０：４ｎ−６、２０：５ｎ−３、２２：５ｎ−３および２２：６ｎ−３）を示す。一連の棒は、血液が採血された回数（１〜５時間）を示し、星印は、相当する時点の食事差間の有意性を示す。値は、全カイロミクロントリアシルグリセロール脂肪酸のモル比（平均＋／−標準偏差、ｎ＝１０）である。観察差：ＥＰＡ（２０：５ｎ３）１〜５時間ＥＰＡ食事およびオリーブ油食事；１〜５時間ＥＰＡ食事およびＤＰＡ食事；ＤＰＡ（２２：５ｎ３）２時間、３時間（ｐ＝０.０６）、４〜５時間ＤＰＡ食事およびオリーブ油食事；３〜５時間ＤＰＡ食事およびＥＰＡ食事；ＤＨＡ（２２：６ｎ３）２時間、３時間ＤＰＡ食事およびオリーブ油食事；５時間ＥＰＡ食事〜オリーブ油食事。
【図３】図３は、オリーブ油のみ（オリーブ、白色棒）またはエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、灰色棒）もしくはドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、黒色棒）と混合したオリーブ油を含む食事後、１〜５時間の食後カイロミクロンリン脂質脂肪酸（２０：４ｎ−６、２０：５ｎ−３、２２：５ｎ−３および２２：６ｎ−３）を示す。一連の棒は、血液が採血された回数（１〜５時間）を示し、星印は、相当する時点の食事差間の有意性を示す。値は、全カイロミクロンリン脂質脂肪酸のモル比（平均＋／−標準偏差、ｎ＝１０）である。観察差：ＥＰＡ（２０：５ｎ３）２時間ＥＰＡ食事およびオリーブ油食事；２時間ＥＰＡ食事およびＤＰＡ食事；ＤＰＡ（２２：５ｎ３）２時間ＥＰＡ食事およびオリーブ油食事；ＤＨＡ（２２：６ｎ３）２時間ＥＰＡ食事およびオリーブ油食事。
【図４】図４は、オリーブ油（白色棒）、エイコサペンタエン酸と混合したオリーブ油（ＥＰＡ、２０：５ｎ−３、灰色棒）およびドコサペンタエン酸と混合したオリーブ油（ＤＰＡ、２２：５ｎ−３、黒色棒）を含む朝食後、それぞれ、１時間、３時間および５時間において、トリアシルグリセロール（アシル炭素数：二重結合数）を含むＰＵＦＡを示す。半定量値を、全カイロミクロンＴＡＧのモル％（平均＋／−標準偏差、ｎ＝１０）として表す。ニュートラルロス実験に基づいた最もよく見られるトリアシルグリセロールを、各群の棒の上にマークする。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
一般的事項
本開示で特定される様々な定量値における数値の使用は、特に明示的に明記しない限り、あたかも、定められた範囲以内の最小値および最大値が、「約」という単語が前にあるかのように、近似として定められる。また、範囲の開示は、かかる値により形成され得るいずれもの範囲だけでなく、記載の最小値と最大値間の全ての値を含む連続した範囲として意図される。
【００６７】
「および／または」という語、例えば、「Ｘおよび／またはＹ」は、「ＸおよびＹ」または「ＸまたはＹ」のどちらかを意味すると理解すべきであり、両方の意味またはどちらかの意味への明確な支持（サポート）を提供するものとする。
【００６８】
本明細書を通して、特に具体的にそうでないと明記されない、または文脈上他の意味が要求されない限り、単一の工程、物質の組成、工程群または物質の組成群の参照は、１つおよび複数（すなわち、１つ以上）のそれらの工程、物質の組成、工程群または物質の組成群を包含するものとする。
【００６９】
当業者は、本明細書に記載の本発明が、具体的に記載されたもの以外の変形および修正可能であることを認識しているだろう。本発明は、かかる全ての変形および修正を包含するものと理解されるものとする。本発明は、個々にまたは集合的に、本明細書中に参照または指示された全ての工程、特徴、組成物および化合物、および前記工程または特徴のいずれかおよび全ての組み合わせまたはいずれか２つ以上も包含する。
【００７０】
本発明は、例示する目的だけを意図する、本明細書に記載の特定の実施形態により、範囲が限定されるものではない。機能的に均等な製品、組成物および方法は、本明細書に記載の通り、明白に、本発明の範囲内である。
【００７１】
本明細書中のいずれの実施例も、特にそうでないと明記しない限り、変更すべき点を変更して、いずれの他の実施例にも適用されるものとする。
【００７２】
選択された定義
「含む（comprise）」という語、または「含む（comprises）」もしくは「含む（comprising）」などの変化形は、定められた要素、要素の整数もしくは段階、または群、整数または段階を含むことを意味するが、いずれもの他の要素、要素の整数もしくは段階、または群、整数または段階を除外することを意味しないと理解されるだろう。
【００７３】
本明細書で使用される「カイロミクロン」という語は、トリグリセリド（８５〜９２％）、リン脂質（６〜１２％）、コレステロール（１〜３％）およびタンパク質（１〜２％）から成るリポタンパク質粒子を表す。カイロミクロンは、脂肪およびコレステロールが、血流内で移動を可能にする１つまたは５種の主要群のリポタンパク質（カイロミクロン、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）である。
【００７４】
本明細書で使用される「ＤＰＡ」という語は、ω３（ω３またはｎ−３）を表し、化学的修飾により合成される誘導体型、複合体、その塩または前述のいずれもの混合物だけでなく、トリグリセリド型、遊離脂肪酸型、リン脂質型である天然型を含むことを意図される。
【００７５】
ＤＰＡの「その誘導体」という語は、アルキルエステル、エチルエステル、メチルエステル、プロピルエステル、またはブチルエステルを含むと理解される。別の例では、該ＤＰＡは、エチルＤＰＡ、リチウムＤＰＡ、モノ−、ジ−、もしくはトリグリセリドＤＰＡまたはＤＰＡのいずれもの他のエステルもしくは塩、またはＤＰＡの遊離酸型の形態である。ＤＰＡは、その酸化速度が遅くなるが、実質的な程度で、別の方法で、その生物作用を変化しない２−置換誘導体または他の誘導体の形態でもあり得る。
【００７６】
本明細書で使用される「心血管系疾患」という語は、心臓または血管（すなわち、動脈および静脈）のいずれもの疾病または障害およびその症状を表す。心血管系疾病および障害の制限されない例としては、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、混合型脂質異常症、冠動脈心疾患、血管疾患、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、不整脈、高血圧症、心筋梗塞および他の心血管系イベントが挙げられる。
【００７７】
本開示に記載の「対象」という語は、ヒトまたは非ヒト対象を含むいずれもの対象を意味するものとする。該非ヒト対象は、非ヒト霊長類、有蹄動物（ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、水牛およびバイソン）、イヌ、ネコ、ウサギ（ラビット、ノウサギおよびナキウサギ）、げっ歯類（マウス、ラット、モルモット、ハムスターおよびスナネズミ）、トリ、および魚を含み得る。１つ例では、該対象は、ヒトである。１つの例では、該対象は、伝統的洋風の食事を摂取する。
【００７８】
本明細書で使用される「洋風の食事」という語は、一般に、総カロリーの割合で、約４５％〜約５０％の炭水化物、約３５％〜約４０％の脂肪および約１０％〜約１５％のタンパク質から成る典型的な食事を表す。洋風の食事は、代わりにまたは加えて、例えば、これらの原料から総カロリーの５０％より多い、６０％以上または７０％の比較的大量摂取の赤身および加工肉、スイーツ、精製穀物およびデザートにより特徴付けられ得る。
【００７９】
本明細書で使用される「トリグリセリド」という語は、３つの脂肪酸と結合したグリセロールから構成されるエステルを表すことを意図される。トリグリセリドは、飽和および不飽和化合物に分けられ得る。飽和化合物は、水素で飽和され、水素原子が、炭素原子に結合するはずである全ての可能な位置が占有されていることを意味する。不飽和化合物は、炭素原子間の二重結合を有し、水素原子が、炭素原子に結合し得る位置の数が少なくなっている。飽和化合物は、炭素原子間の一重結合を有し、他の結合は、水素原子と結合している。不飽和脂肪は、より高い融点を有し、固体である可能性が高い。トリグリセリドは、細胞膜を自由に通過できない。リポタンパク質リパーゼが、トリグリセリドを、遊離脂肪酸およびグリセロールに分解しなければならない。それから、該遊離脂肪酸は、該脂肪酸のトランスポーターにより、細胞に取り込まれ得る。トリグリセリドは、超低密度リポタンパク質およびカイロミクロンの主要成分であり、エネルギー源および食事性脂肪のトランスポーターとして、代謝の重要な役割を果たしている。
【００８０】
本明細書で使用される「高トリグリセリド血症」という語は、空腹時のレベルより上に血漿または血清トリグリセリド値の上昇を表し、通常、トリグリセリドの高血中濃度を表すことが意図される。高トリグリセリド値は、通常、約２００〜約４９９ｍｇ／ｄｌの範囲である。非常に高いトリグリセリド値は、通常、＞５００ｍｇ／ｄｌである。ベースラインとなるトリグリセリドは、通常、該対象が、空腹状態、すなわち、該対象が、８時間と１２時間の間の期間、絶食したとき、測定される。
【００８１】
本明細書で使用される「脂肪酸」という語は、トリグリセリドまたはリン脂質由来の分子を表し、飽和あるいは不飽和である長い脂肪族末端（鎖）を有するカルボン酸から構成される。他の分子に結合していないとき、それらは、「遊離」脂肪酸として知られている。ほとんどの天然脂肪酸は、４〜２８個の偶数個の炭素原子鎖を有する。短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、６個より少ない炭素の脂肪族末端を有する脂肪酸である。中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、中鎖トリグリセリドを形成し得る６〜１２個の炭素の脂肪族末端を有する脂肪酸である。長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）は、１３〜２１個の炭素の脂肪族末端を有する脂肪酸である。超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）は、２２個の炭素より長い脂肪族末端を有する脂肪酸である。
【００８２】
本明細書で使用される「ポリ不飽和脂肪酸」またはＰＵＦＡは、その骨格に１つ以上の二重結合を含有する脂肪酸を表すことを意図される。不飽和は、該分子が、最大量より少ない水素を含有する事実を表す。ポリ不飽和脂肪酸は、ω３およびω６型脂肪酸に分割され得る。ω３脂肪酸は、メチル炭素から離れた３個の炭素である二重結合を有する。ω３ポリ不飽和脂肪酸の例としては、ヘキサデカトリエン酸（１６：３（ｎ−３））、αリノレン酸（１８：３（ｎ−３））、ステアリドン酸（１８：４（ｎ−３））、エイコサトリエン酸（２０：３（ｎ−３））、エイコサテトラエン酸（２０：４（ｎ−３））、エイコサペンタエン酸（２０：５（ｎ−３））、ヘネイコサペンタエン酸（２１：５（ｎ−３））、ドコサペンタエン酸（２２：５（ｎ−３））、ドコサヘキサエン酸（２２：６（ｎ−３））、テトラコサペンタエン酸（２４：５（ｎ−３））、テトラコサヘキサエン酸（２４：６（ｎ−３））が挙げられる。
【００８３】
本明細書で使用される「効果量」という語は、５００ｍｇ／ｄｌ〜約２０００ｍｇ／ｄｌの空腹時ベースライントリグリセリド値を有する該対象の空腹時トリグリセリドを低減するのに、十分な量のＤＰＡまたはその誘導体もしくは複合体および／または対象の心血管疾患または障害を低減または軽減するのに十分であることを意味するものとする。当業者は、かかる量が、例えば、該特定の対象および／または疾病のタイプもしくは重篤度もしくはレベルに依存して変わるだろうことを知っているだろう。従って、この語は、本開示の組成物が、特定の量、例えば、ＤＰＡおよび／または誘導体の重量または量に限定されると解釈されるものではなく、むしろ、本開示は、対象の定められた結果を達成するために十分なＤＰＡおよび／または誘導体のいずれの量も包含する。１つの例では、「効果量」は、治療効果量である。
【００８４】
本明細書で使用される「治療効果量」という語は、トリグリセリド値の上昇に関連する臨床的障害の１つ以上の症状を、その障害の臨床的兆候または臨床的特徴として観察および認容されるものより低いレベルに低減、抑制または予防するため、十分な量のＤＰＡを意味するものとする。該語は、問題の物質が、該対象に認容できない毒性または該組成物の他成分との相互作用を生じないことも意味する。当業者は、当業者は、かかる量が、例えば、該特定の対象および／または疾病のタイプもしくは重篤度もしくはレベルに依存して変わるだろうことを知っているだろう。従って、この語は、本開示の組成物が、特定の量、例えば、ＤＰＡおよび／または誘導体の重量または量に限定されると解釈されるものではなく、むしろ、本開示は、対象の定められた結果を達成するために十分なＤＰＡおよび／または誘導体のいずれの量も包含する。
【００８５】
本明細書で使用される「治療（treating）」、「治療（treat）」または「治療（treatment）」は、特定の障害の少なくとも１つの症状を低減または排除するために十分な、本明細書に記載のｎ−３ＤＰＡの治療効果量を投与することを含む。１つの例では、該治療は、血漿トリグリセリド値を低減するため、治療効果量のｎ−３ＤＰＡを投与することを含む。１つの例では、該減少は、空腹時血漿トリグリセリドのベースライン値に対して、特定時間にわたって、測定される。１つの例では、血漿トリグリセリド値の該減少は、ベースラインと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０％である。１つの例では、治療は、予防的治療も表す。
【００８６】
本明細書で使用される「予防（preventing）」、「予防（prevent）」または「予防（prevention）」という語は、特定の障害の少なくとも１つの症状の発症を停止または防止するために十分な、本明細書に記載のｎ−３ＤＰＡの治療効果量を投与することを含む。１つの例では、ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体の投与は、血漿トリグリセリドの食後の上昇を予防する。
【００８７】
「実質的に精製された」という語は、該ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体が、該ＤＰＡの由来の原料から、細胞物質または他の混入タンパク質を、実質的に含んでいないことを意味すると理解される。１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体は、少なくとも１０重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、少なくとも９６重量％、少なくとも９７重量％、少なくとも９８重量％、少なくとも９９重量％、少なくとも９９．５重量％、少なくとも９９．８重量％含む。該語は、ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体を含む組成物が、約１０％以下、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下のＥＰＡまたはＤＨＡまたはＥＰＡとＤＨＡの組み合わせも含むことを意味すると理解される。
【００８８】
トリグリセリドおよびコレステロールリポタンパク質の測定
脂質パラメーターの測定は、臨床的に許容できる方法に従ったものであり得る。例えば、トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬ−Ｃおよび空腹時血糖は、血漿から採取されて、標準測光技術を用いて、または当業者に公知の方法に従ったガスクロマトグラフィーにより分析される。ＬＤＬ−ＣおよびＶＬＤＬ−Ｃは、調製用超遠心法および引き続いて、屈折率測定法または分析用超遠心法による定量分析による血漿リポタンパク質分画法を用いて算出または決定され得る。ＡｐｏＡ１、ＡｐｏＢおよびｈｓＣＲＰは、標準比濁法技術を用いて、血漿から決定され得る。リポタンパク質（ａ）は、標準免疫比濁法技術を用いて、血漿から決定され得る。ホスホリパーゼＡ２は、酵素免疫分離法技術を用いて、ＥＤＴＡ血漿または血清から決定され得る。酸化ＬＤＬおよび細胞内接着分子１は、標準酵素免疫法技術を用いて、血漿から決定され得る。これらの技術は、標準的教科書、例えば、Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 6th Ed. (Burtis, Ashwood and Borter Eds), WB Saunders Companyに詳細に記載されている。
【００８９】
ドコサペンタエン酸（２２：５ｎ−３）ＤＰＡ
血漿および赤血球両方の中のｎ−３ＤＰＡは、食事の魚または長鎖ｎ−３脂肪酸の摂取と相関がほとんどないことが示された（Jing Qi Sun et al (2008) Am J Clin Nutr 88:216-23）。
【００９０】
生体内で、ＤＰＡのＤＨＡへの転換が、２４：５ｎ−３への伸長およびペルオキソームβ酸化前に２４：６ｎ−３へ不飽和化してＤＨＡを得る一方、ＤＰＡは、脂肪酸エロンガーゼ２および５の作用による、ＥＰＡの鎖伸長により生成される。最近の調査では、ＡＬＡの補給は、一般に、血漿ＥＰＡおよびＤＰＡの上昇をもたらすが、ＤＨＡ値にほとんど、または全く効果がない（Brenna et al., (2009) Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids 80:85-91）。
【００９１】
ｎ−６脂肪酸であるＤＰＡの別の異性体がある。該ｎ−６ＤＰＡ含有率は、精巣組織を除く、ほとんどの哺乳類組織中で低い。魚および魚油中、ＤＰＡの該ｎ−３異性体は、該ｎ−６異性体より、実質的に高い。ｎ−３およびｎ−６ＤＰＡの生理的作用は、アシル鎖中の２つの二重結合の位置が異なるのみにもかかわらず、大いに異なる。
【００９２】
ｎ−３ＤＰＡは、その純粋な化合物の入手が限定されているので、広範に研究されていない。生体外では、ｎ−３ＤＰＡは、ＥＰＡに逆転換されるが、容易にＤＨＡに代謝されないように思われる。生体内では、研究により、主に肝臓中で、ｎ−３ＤＰＡが、ＤＨＡへ限定転換されるが、加えて、多くの組織中で、ＥＰＡへの逆転換が明らかであることが示された。
【００９３】
ｎ−３ＤＰＡの有用性
本発見は、それを必要とする対象の血漿トリグリセリド値の低下で、精製ｎ−３ＤＰＡの重要な役割を示唆している。かかる対象は、食事あるいは遺伝機構に起因する心血管疾患のリスクをあるものであり得る。
【００９４】
トリグリセリド値が、ｎ−３ＤＰＡ単独の消費後、空腹時レベルに近いままであった事実は、ｎ−３ＤＰＡ単独が、販売されているＥＰＡ含有化合物の有力な代替物を提供し得、特に、重量制御または体重減少を望む対象のため、有用な体重減少サプリメントを提供し得る。従って、本発見は、精製されたｎ−３ＤＰＡの肥満症治療での役割も示唆している。肥満症の流行の拡大と戦う新規なツールが、世界的に望まれている。現在、オーリスタット、リパーゼ阻害薬は、肥満症に対する唯一の入手可能な長期治療法である。過去何年かで、多くの薬剤が、肥満症の治療用に承認された；しかしながら、アンフェタミン、リモナバンおよびシブトラミンなどそれらのほとんどは、その副作用のため、市場から撤退した。
【００９５】
グラクソスミスクライン社から販売のロバザ（米国内）およびオマコール（登録商標）（欧州内）は、超高トリグリセリド値を低下させることで、米国食品医薬品局により承認された。各１ｇのカプセル剤は、少なくとも９００ｍｇの魚油から供給されるω３脂肪酸のエチルエステルを含有する。これらは、残りが、魚油からの他の脂肪酸を構成して、主に、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ−約４６５ｍｇ、約５０％ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ−約３７５ｍｇ、約４０％）の組み合わせである。ロバザは、不活性な成分αトコフェロール、ゼラチン、グリセロールおよび精製水（処方情報参照）も含有する。ロバザは、高または超高トリグリセリドを有する患者のトリグリセリドを減少させることが示され、ＶＬＤＬコレステロールおよびｎｏｎ−ＨＤＬコレステロールの減少、およびＨＤＬコレステロールの増加することが示された。しかしながら、ロバザは、ＬＤＬコレステロールを４５％まで上昇させ、肝障害をもたらし得るアラニントランスアミナーゼ値を上昇させ得る。
【００９６】
２０１２年７月、アマリン社の薬剤、バスセパが、ＦＤＡの承認を取得した。該薬剤は、超高トリグリセリドだけでなく、高トリグリセリドの治療用に承認された。バスセパの各カプセル剤は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）のエチルエステルを含有する。
【００９７】
この試験で観察された精製ｎ−３ＤＰＡの効力は、精製ｎ−３ＤＰＡが、現在販売されているトリグリセリド低下薬の実行可能で、おそらく優れた代替品を提供し売ることを示唆している。
【００９８】
ＤＰＡの精製
ω３脂肪酸は、トリグリセリド型（３つの脂肪酸が結合したグリセロール）およびリン脂質型（２つの脂肪酸および１つのコリンなどの塩基が結合したグリセロール）で、天然で見られる。これらは、進化の過程で生じるヒトの祖先により摂取されてきた主要な脂質である。魚油およびアザラシ油は、ｎ−３ＥＰＡおよびｎ−３ＤＨＡだけでなく、ｎ−３ＤＰＡを含有することが発見された。しかしながら、他の脂肪酸と比較して、ｎ−３ＤＰＡの低比率を考慮すると、対象の分析用の純粋な形でのｎ−３ＤＰＡの単離は、極めて困難であった。
【００９９】
ｎ−３ＤＰＡは、マアジ、イワシ、タラ、マグロ、サンマ等および動物性海洋プランクトンなどの海生動物の脂肪および油またはアザラシ脂肪もしくは油から得られ得、しかしながら、その濃度は、これらの供給源中、非常に低い。さらに、治療利用に十分な量で、アザラシ脂肪または油から、ｎ−３ＤＰＡを得ることに関連する著しい倫理的問題がある。ｎ−３ＤＰＡは、ｎ−３ＥＰＡに２個の炭素原子を追加して、次いで、ＨＰＬＣを用いてクロマトグラフィーで精製して、抗酸化剤をブレンドすることにより、ｎ−３ＥＰＡから、標準技術で合成して製造もされ得る。
【０１００】
ｎ−３ＥＰＡの製造のための様々な方法が、記載されてきた。例えば、米国特許第５８４０９４４号は、天然油および脂肪から製造した脂肪酸またはそのエステルの混合物を、複数の蒸留カラムを用いて高真空下、精密蒸留して、ＥＰＡを含む画分を取り出し、それから、逆相分配カラムクロマトグラフィーで処理することによる、純粋ＥＰＡまたはそのエステルの製造方法を記載している。ＥＰＡ精製の他の例は、例えば、米国特許第４３３１６９５号、米国特許第４３７７５２６号、米国特許第４６１５８３９号、米国特許第４７９２４１８号、米国特許第５００６２８１号、米国特許第５５１８９１８号、米国特許第５１３００６１号、米国特許第６４５１５６７号、米国特許第６８００２９９号、米国特許第６８４４６９４２号、米国特許公開第２００５/０１２９７３９号、米国特許公開第２０１１/００９８３５６号、米国特許第７１１９１１８号、Abu-Nasr et al (1954) J. Am. Oil Chemists Soc 31:41-45, Teshima et al (1978) in Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries 44(8):927、およびBelarbi El Hassan et al (2000) Enzyme and Microbial Technology 26:516-529)に記載されている。
【０１０１】
限定されない例として、ＥＰＡを製造する１つの方法は、次の段落に記載される。ＥＰＡが得られる該油は、好ましくは、該脂肪酸のいずれもの実質的分解を回避するために、できるだけ新鮮である。好ましくは、該原料の魚は、できるだけ冷たい環境から得られる。エイコサテトラエン酸のＥＰＡへの転換を触媒する酵素Δ５不飽和化酵素の最適な酵素活性は、９℃で起こる。従って、冷たい環境からの魚は、より暖かい水からの魚であるより、ＥＰＡがより高い。もし、該魚が、制御された環境で上げられるならば、さらにより大きい収率のＥＰＡを得られ得る。もし、該魚が、αリノレン酸に豊富な食事を摂取し、９℃の塩水を維持したならば、最適な量のＥＰＡが製造されるだろう。
【０１０２】
ＥＰＡを含む天然脂肪または油は、該トリグリセリドを遊離脂肪酸または脂肪酸エステルに転換するため、けん化またはアルコール分解を受けられる。しかしながら、選択された方法は、これらが、過酸化およびシス・トランス転換し得るような高温および強塩基条件を回避するものであるべきである。１つの例では、加水分解の該方法は、約３５〜４０℃で約６〜７のｐＨにおいて、酵素リパーゼを用いる酵素加水分解である。該リパーゼは、通常通り、微量のシステインまたはアスコルビン酸により活性化されるべきである。該天然脂肪および油を加水分解する代替方法は、これらの脂肪および油を、リパーゼまたは塩基で、部分的加水分解によるものである。水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基も、該天然脂肪または油を部分的加水分解するために使用され得る。油の原料は、該トリグリセリドを部分的加水分解するため、約１５〜２０分間、該塩基で処理される。
【０１０３】
加水分解工程後、非けん化物質は、塩化メチレン、石油エーテル、エチルエーテル等の無極性有機溶媒で除去される。該有機溶媒は、コレステロール、ＰＣＢ類およびビタミンＡおよびＤならびに炭化水素を含む他の非けん化物質を除去する。この手順は、所望の純度に達するまで、数回繰り返される。
【０１０４】
遊離脂肪酸は、該ナトリウム塩またはカリウム塩から、該水相の酸性化により生成され得る。酢酸などの薬剤的に許容可能なものが好ましいが、いずれの酸も、この工程で使用され得る。この酸性化は、該遊離脂肪酸を、分離した有機相中への分離を引き起こすだろう。それから、該水相は、廃棄される。塩化ナトリウムなどの少量の塩の添加は、該分離を強めるだろう。それから、遊離脂肪酸を含む該有機相は、アセトン中に溶解され、約−２０℃で、一夜冷蔵される。該飽和脂肪酸は固化し、濾過により、取り除かれ得る。
【０１０５】
ω３脂肪酸は、水酸化ナトリウムおよびエタノールなどの塩基混合物の添加により、該アセトン溶液から得られ得る。それから、該混合物は、約−２０℃の冷蔵下、一夜放置される。それから、該アセトンは、蒸発される。水の量を減少させるため、この手順が、数回繰り返され得る。該脂肪酸は、パルミチン酸アスコルビルまたはγトコフェロールなどの通常の薬剤的に許容可能なまたは食品等級の抗酸化剤の添加により、酸化から保護され得る。
【０１０６】
個々のＤＨＡおよびＥＰＡω３脂肪酸は、異なる溶解度を有する該酸塩を生成することにより、互いから分離され得る。例えば、該酸のマグネシウム塩は、アセトン中、異なる溶解度を有する。該溶液は、約−２０℃において、冷蔵で一夜放置される。該ＤＨＡ塩より、アセトン中で溶解しない該ＥＰＡ塩は、白色フレークとして沈殿する。該白色フレークは、濾過され、酸性化により、該塩から再構成される。該ＤＨＡ塩は、溶液中に残留し、該ＤＨＡは、該溶液の酸性化および常法による該遊離ＤＨＡの回収により、得られ得る。純粋なω３脂肪酸は、該脂肪酸のアセトン中に可溶塩である該マグネシウム塩または他の第２族金属塩のアセトン中への溶解度の差に基づいて、得られ得る。該例証となる方法は、該脂肪酸ＥＰＡ塩が、冷却時に沈殿される有機溶媒として、アセトンの使用に関して説明されたが、他の有機溶媒が、この目的で使用され得ることは、理解されるべきである。
【０１０７】
該溶液が、ＥＰＡをＤＨＡから分離するために冷却される正確な温度、および容積減少の正確な量は、特定のＥＰＡおよびＤＨＡならびに特定の溶媒に依存して異なるだろう。これらのパラメーターは、必要以上の実験をしないで、当業者により、経験的に決定され得る。該溶媒は、沈殿が開始する僅かに低い温度まで冷却され、沈殿が完結するまで、その温度で維持され得る。
【０１０８】
あるいは、該ＥＰＡの遊離脂肪酸は、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）の使用により、他の脂肪酸から分離され得る。精製は、該脂肪酸が低級アルコールのエステルに転換された後にも、実行され得る。エステル化は、公知の条件を用いて、例えば、５〜１０％のＨＣＬ−無水エタノール溶液、１０〜５０％のＢＦ３−エタノール溶液などの試薬により、室温で１〜２４時間、処理することにより、実行され得る。カラムクロマトグラフィー、低温結晶化、尿素添加、液液向流分配クロマトグラフィーなどは、該混合物から、該ＥＰＡエチルエステルを単離するため、単独または組み合わせて使用され得る。
【０１０９】
該精製されたＥＰＡエチルエステルから遊離ＥＰＡを得るため、該エステルは、アルカリにより加水分解され、それから、エーテル、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出され得る。得られた遊離ＥＰＡは、それから、ＤＰＡを誘導するために使用される。
【０１１０】
ＥＰＡからＤＰＡの製造は、伸長反応を必要とする。かかる技術は、当業者にはよく知られているが、例えば、米国特許第７９６８６９２号、および米国特許第８０７１３４１号参照。該ＤＰＡは、それから、クロマトグラフィー、例えば、ＨＰＬＣにより、精製される。
【０１１１】
精製されたｎ−３ＤＰＡ（例えば、Maxomega DPA 97 FFA）は、商業的供給元、例えば、Equateq社（現ＢＡＳＦ社）から得られ得る。Maxomega DPA 97 FFAは、遊離脂肪酸型で、９７重量％のＤＰＡを含有し、天然海洋ＥＰＡエチルエステル濃縮物（ＥＰＡ９８ＦＦＡ）から製造された合成脂肪酸である。ＥＰＡ（Maxomega EPA 98 FFA）は、魚油由来の精製製品である。魚油は、標準精製法および精製技術により精製され、エステル交換反応、蒸留およびクロマトグラフィーによる濃縮、加水分解による脂肪酸型への転換、精製および抗酸化剤とのブレンドの処理が成される。ＤＰＡ９７ＦＦＡは、ＥＰＡ９８ＦＦＡから、精製および抗酸化剤とのブレンド前に、標準的合成方法により製造される。
【０１１２】
組成物
いずれもの生物学的に許容可能な剤形、およびその組み合わせは、本開示により考慮され得る。かかる剤形の例としては、咀嚼錠剤、易溶解錠剤、発泡錠剤、再構成可能な散剤、エリキシル剤、液剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、多層錠剤、二層錠剤、カプセル剤、軟質ゼラチンカプセル剤、硬質ゼラチンカプセル剤、カプレット剤、トローチ剤、チュアブルトローチ剤、ビード剤、散剤、顆粒剤、粒子剤、微粒子剤、分散顆粒剤、カシェ剤、洗浄剤、坐剤、クリーム剤、局所剤、吸入剤、エアロゾル吸入剤、パッチ剤、粒子状吸入剤、植込錠、デポー植込錠、摂取可能剤、注射剤、輸液剤、健康バー、糖剤、シリアル、シリアル被膜、食品、栄養食品、機能性食品およびその組み合わせが挙げられるが、これに限定されない。上記剤形の製剤は、当業者に周知である。
【０１１３】
本開示の方法に従って有用な医薬組成物は、経口送達可能である。本明細書で、「経口送達可能」または「経口投与」という語は、治療薬（例えば、ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体）またはその組成物を、対象に、送達するいずれもの形態を含み、該薬剤または組成物は、該薬剤または組成物が、飲み込まれるか否かにかかわらず、該対象の口内に入れられる。従って、「経口投与」は、食道投与だけでなく、口腔内および舌下を含む。１つの例では、該精製ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体は、カプセル剤、例えば、軟質ゼラチンカプセル剤中に存在する。
【０１１４】
本開示に記載の医薬組成物は、それらの使用方法に関して、限定されない。使用の代表的方法としては、食品、食品添加剤、薬物、体重増加サプリメント、薬物添加剤および飼料が挙げられる。
【０１１５】
ゼラチン食品に加えて、食品組成物の例は、機能性食品、栄養補助食品、乳児または未熟児の摂食に適切な調製粉乳、離乳食、妊婦または乳飲み子の母親用食品、および老人用食品である。該組成物は、スープ、油および脂肪がドーナツなどの熱媒として使用される食品、バターなどの油および脂肪食品、油および脂肪がクッキーなどの加工中に添加される加工食品または油および脂肪がハードビスケットなどの加工完了時に噴霧または塗布される食品など調理中に添加され得る。
【０１１６】
さらに、本開示の組成物は、通常、油または脂肪を含まない食品または飲料に添加され得る。
【０１１７】
食品の定義は、機能性食品も含む。機能性食品および薬物は、栄養を増進するような経腸薬、散剤、顆粒剤、トローチ剤、内液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等に加工された形態で提供され得る。
【０１１８】
本開示に記載の組成物は、１つ以上の投薬単位として処方され得る。本明細書で、「用量単位」および「投薬単位」という語は、治療効果を提供する１回の投与に適切な治療薬の量を含有する一部の組成物を表す。かかる投薬単位は、１日に、１回もしくは複数回（すなわち、１〜約１０回、１〜８回、１〜６回、１〜４回または１〜２回）または治療応答を誘発するために必要なだけの回数で、投与され得る。
【０１１９】
１つの例では、本開示の組成物は、約１〜約２００週、約１〜約１００週、約１〜約８０週、約１〜約５０週、約１〜約４０週、約１〜約２０週、約１〜約１５週、約１〜約１２週、約１〜約１０週、約１〜約５週、約１〜約２週、または約１週の期間にわたって、対象に投与される。
【０１２０】
１つの例では、本開示の組成物は、約０．５％以下、または０．０５％以下の量で、１つ以上の抗酸化剤（例えば、トコフェロール）または他の不純物を含む。別の例では、本開示の組成物は、約０．０５％〜約０．４％のトコフェロール、または約０．４％のトコフェロール、または約０．２重量％のトコフェロールを含む。
【０１２１】
１つの例では、本開示の組成物は、これに限定されないが、ゼラチン、グリセロール、ポリオール、ソルビトールおよび水を含む、１つ以上の追加の賦形剤を含む。
【０１２２】
１つの例では、該ｎ−３ＤＰＡまたはその誘導体は、約５０ｍｇ〜約５０００ｍｇ、約７５ｍｇ〜約２５００ｍｇ、ｏｒ約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９５０ｍｇ、または約２０００ｍｇの量で、該組成物中に存在する。
【０１２３】
１つの例では、本開示の組成物は、カプセル剤中、約３００ｍｇ〜約１ｇの該組成物を含む。１つの例では、該剤形は、ゲル剤または液カプセル剤であり、シート当たり、約１〜約２０個のカプセル剤のブリスター包装で包装される。
【０１２４】
１つの例では、本開示の組成物は、１日に１回または２回、対象に投与される。別の例では、該組成物は、１日に、１個、２個、３個、または４個のカプセル剤として、対象に投与される。
【０１２５】
該組成物は、食事の直前、食事の摂取中または食事後直ぐに、それを必要とする対象に投与され得る。
【０１２６】
別の例では、本開示の組成物は、局所適用、例えば、化粧品で処方される。本開示に記載のｎ−３ＤＰＡを組込み得る局所用製品としては、保湿クリームおよびローション、固形石鹸、口紅、シャンプーならびに乾燥、湿疹および乾癬のための治療用皮膚製剤が挙げられる。
【０１２７】
キット
本開示は、本治療方法の使用用指示書と一緒に、本開示に記載の精製されたｎ−３ＤＰＡまたは組成物を含むキットも提供する。かかるキットは、一般に、シート当たり、約１〜約２０個のカプセル剤のブリスター包装または約２０〜１００個、または約２０〜５０個の個別カプセル剤の適切な容器手段で包装された剤形を含むだろう。
【０１２８】
本発明を、次の限定されない実施例で、さらに説明する。
【実施例】
【０１２９】
方法
有志の対象
２０〜３０歳の１０名の健康な正常な体重の女性が、３つの異なる朝食を用いた無作為化されたクロスオーバー試験に参加した。該対象は、２０〜２５ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有し、ＰＵＦＡ食品の頻度に関するアンケートから査定して、彼らの習慣的なω３ＰＵＦＡの総消費量は、１日当たり５００ｍｇ以下であった（Sullivan et al., (2006) Lipids 41:845-850; Swierk et al., (2011) Nutr 6:641-646）。赤血球中のＥＰＡおよびＤＨＡの比率のベースライン値は、１．０±０．１および６．７±０．６％（平均±平均の標準誤差）であった。自己報告の医学的状態および家族の病歴に基づいた心血管疾患のいずれかの形態を有する対象は、該試験から除外される。全対象は、同意書を提出した。Deakin University Human Research Ethics Committee (EC2011-023)から、倫理的承認を得た。
【０１３０】
試験手順
これは、空腹時の血液を採取し、次いで、プラセボ（オリーブ油）または活性油（ＥＰＡまたはＤＰＡ）を含む朝食を摂取して、それから、５時間まで、１時間毎の食後の血液試料を採取する摂食後の試験であった。その後の６日目、該対象は、プラセボまたは活性油の摂食を続け、それから、空腹時の血液試料を、７日目に採取後、該対象は、該７日の期間後に、２週間の「ウォッシュアウト」期間を有した。
【０１３１】
該試験前の夜、該参加者は、標準の夕食（トマトソース（７０ｇ）を絡めたパスタ（乾燥２００ｇ）を含む）および小パックのプリンを摂取し、該夕食後１０時間、一夜、断食するように指示を受けた。
【０１３２】
該試験の朝食は、７０ｍｌの沸騰させた水および２０グラムの油を混合した１８０グラムのインスタントマッシュポテト（Continental Deb（登録商標）、ユニリーバ、オーストラレーシア）から構成された。各３回の食事では、１８グラムの脂質は、オリーブ油（La Espanola Pure Olive Oil、スペイン国セビリア）から構成された。該ＤＰＡ朝食は、２ｇのＤＰＡ（Equateq Ltd, Breasclete、カラニッシュ、スコットランド）を含み、該ＥＰＡ朝食は、２ｇのＥＰＡ（Equateq Ltd, Breasclete、カラニッシュ、スコットランド）を含み、該対照（オリーブ油）食事は、２ｇのオリーブ油が追加された。ＥＰＡおよびＤＰＡは、遊離脂肪酸として、オリーブ油中に含有された。該対象は、食事に、塩、胡椒またはチキンフレーバー塩を使用してもよく、自由に、該試験の期間を通して、水を提供された。対象は、１５分以内に、該試験食を摂取した。
【０１３３】
該ＤＰＡ食事後、下痢症の２ケースおよび胃のむかつきがあるが下痢はない１ケースがあった。下痢症の１ケースは、該ＥＰＡ食事後に報告され、該オリーブ油後に病訴はなかった。全ての病訴は、該朝食後２〜３時間で起こった。
【０１３４】
クロスオーバー治験の３週間の間に、対象は、魚、赤身肉およびω３強化製品を含む長鎖ω３ＰＵＦＡ製品の多い製品（＜２つの海生および／または２つの赤身肉食事／週および＜２つのω３強化製品／週）の摂取をしないうに要求された。
【０１３５】
血漿、カイロミクロンおよびカイロミクロン脂質の単離
静脈血を、空腹状態および１〜５時間に１時間毎の食後に採血した。ＥＤＴＡ血液試料を、５９１ｘｇ１５分間、直ぐに遠心分離して、血漿を単離した。
【０１３６】
カイロミクロン豊富な画分（Svedberg浮上装置（Ｓｆ）＞４００）（以後、「カイロミクロン」と略す）を、ベックマン超遠心機および前に記載したＴＬＡ１００．４ローター（ベックマンインスツルメンツ社、米国カリフォルニア州パロアルト）を用いて、超遠心分離法により、血漿から単離した（Agren et al., 2006）。簡潔に、１．８ｍｌのＥＤＴＡ血漿を、超遠心分離用チューブ中、生理食塩水（密度＝１．００６ｋｇ／ｌ）で表面を覆って、２３℃において、３０分間、３５，０００ｘｇで遠心分離した。該最上部１ミリリットルを、吸引して、カイロミクロン豊富な画分を取り除いた。全試料を、分析前に、−８０℃で冷凍した。
【０１３７】
ＴＡＧ濃度分析
血漿中ＴＡＧ濃度および単離カイロミクロンを、製造者の指示書（ロシュ社、カナダ国ケベック州Lavel）に従って、市販のキット（ＴＲＩＧＬ）を用いて、酵素比色分析法により、Roche Cobas Integra 400 plus autoanalyser（ロシュ社、カナダ国ケベック州Lavel）で測定した。
【０１３８】
脂肪酸分析
トリヘプタデカノイン（シグマアルドリッチ社、米国ミズーリー州セントルイス）、ジノナデカノイルホスファチジルコリン（シグマアルドリッチ社、米国ミズーリー州セントルイス）およびコレステリルペンタデカノエート（Nu-Chek Prep. Inc.、米国ミネソタ州エリジアン）も内部標準混合物を、該単離カイロミクロンに添加した。それから、１．５ｍｌのメタノール、３ｍｌのクロロホルムおよび０．８ｍｌの０．８８％ＫＣｌ水溶液を添加し、該混合物を、各添加後、徹底的にボルテックスした。該チューブを、３分間、２０００ｘｇで遠心して、該層を分離し、該クロロホルム主体の層を除去し、蒸発乾固した（Folch et al., (1957) J Biol Chem 226:497-509）。ＴＡＧおよびリン脂質を、シリカカラムベース固相抽出で、抽出した脂質混合物から単離した（Hamilton and Comai, (1988) Lipids 23:1146-1149）。
【０１３９】
脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）を、ナトリウムメトキシド法で合成した。簡単に言えば、該脂質を、１ｍｌの乾燥ジエチルエーテルに懸濁した。２５μｌの酢酸メチルおよび２５μｌのナトリウムメトキシドを添加し、該混合物を、同時に振とうしながら、５分間、インキュベートした。該反応を、６μｌの酢酸で停止した。該チューブを、５分間、２０００ｘｇで遠心分離し、その後、上澄みを除去して、穏やかに蒸発乾固した。得られたＦＡＭＥを、ヘキサン中の１００μｌインサートに移動した（Christie (1982) J Lipid Res 23:1072-1075）。該ＦＡＭＥを、ガスクロマトグラフィー（ＡＯＣ−２０ｉオートインジェクター、水素炎イオン化検出器を装備した島津ＧＣ−２０１０（島津製作所、日本国、京都市）およびＷＣＯＴカラムＤＢ−２３（６０ｍｘ０．２５ｍｍ径、液膜０．２５μｍ、アジレントテクノロジー社、J.W. Scientific、米国カリフォルニア州サンタクララ））で分析した。スプリットレス／スプリット注入を使用し、該スプリットを、１分後に開いた。Supelco 37 Component FAME Mix （スペルコ、米国ミズーリー州セントルイス）、６８Ｄ（Nu-Chek Prep. Inc.、米国ミネソタ州エリジアン）およびＧＬＣ−４９０（Nu-Chek Prep. Inc.、米国ミネソタ州エリジアン）を、外部標準として使用した。
【０１４０】
リピドミクス
１、３および５時間カイロミクロン試料のリピドミクス分析を、Ａｎａｌｙｓｔ１．５ソフトウェアを起動した、アプライドバイオシステムズ社４０００ＱＴＲＡＰ質量分析を用いて、液体クロマトグラフィー電気スプレー電離型タンデム質量分析法により実施した。液体クロマトグラフィーを、ＺｏｒｂａｘＣ１８、１．８μｍ、５０ｘ２．１ｍｍカラム（アジレントテクノロジー社、米国カリフォルニア州サンタクララ）で実施した。該カイロミクロンの脂質を、クロロホルム：メタノール（２：１、２０倍容積）で抽出、混合、超音波処理（３０分）して、２０分間、放置した。試料を、遠心分離（１６０００ｘｇ、１０分）して、上澄みを、９６ウェルＰＰＥプレートに移動して、窒素気流が４０℃になるまで乾燥した。分析直前、試料を、１０ｍＭギ酸アンモニウム（ＮＨ４ＣＯＯＨ）を含有する、ブタノールおよびメタノール飽和水溶液中に再懸濁した。移動相は、両方とも１０ｍＭのＮＨ４ＣＯＯＨを含有する、３０：２０：５０（Ａ）および７５：２０：５（Ｂ）の比率のテトラヒドロフラン：メタノール：水であった。ＴＡＧを、８５％移動相Ｂのアイソクラティック流（１００μＬ／分）を使用して分離した。リン脂質およびコレステリルエステルを、８分にわたって、０％Ｂおよび１００％Ａから、１００％Ｂおよび０％Ａまでの勾配により分離し、それから開始条件に平衡になる前２分間、１００％Ｂを保持する。個々のＴＡＧ化学種の定量化を、陽イオンモードで、scheduled multiple-reaction monitoring（ＭＲＭ）を用いて実施した（Murphy et al., (2007) Anal Biochem 366:59-70）。脂質濃度（ｐｍｏｌ／ｍＬ）を、各化学種のピーク面積を、内部標準の、ＴＡＧ用のトリヘプタデカノイン（シグマアルドリッチ社、米国ミズーリー州セントルイス）、コレステリルエステル用のコレスチルエステル−１８：０Ｄ６（ＣＤＮアイソトープス社、カナダ国ケベック州）、ホスファチジルコリン用のホスファチジルコリン−１３：０／１３：０（Avanti Polar Lipids社、米国アラバマ州アラバスター）およびエタノールアミン用のホスファチジルエタノールアミン−１７：０／１７：０（Avanti Polar Lipids社、米国アラバマ州アラバスター）およびホスファチジルイノシトールのピーク面積に関連付けることにより算出した（Multiquant 1.2ソフトウェアを用いて）。標準品が、各ＴＡＧ化学種用に入手できないとき、種々の応答係数に調整が成されず、種々の化学種の相対的比率が、半定量的として得られるべきである。
【０１４１】
アラキドン酸、ＥＰＡ、ＤＰＡまたはＤＨＡを含むらしいＴＡＧを、さらにニュートラルロス実験のため選択した。選択された各分子種は、１６：０、１６：１、１８：１、１８：２、１８：３、２０：４、２０：５、２２：５および２２：６のニュートラルロスをスクリーニングした。最もありそうなＴＡＧ脂肪酸の組み合わせを、結果から推定した。
【０１４２】
統計的解析
データの正規分布を、シャピロ−ウィルク検定で試験した。該データの正規化に依存して、対標本ｔ検定またはウィルコクソンマッチドペア符号順位検定を、対照に対して、測定された応答を比較するため使用した。反復測定用ＡＮＯＶＡ（ＧＬＭ）を、多重比較のため使用した。ボンフェローニ補正を用いた、対標本ｔ検定またはウィルコクソンマッチドペア符号順位検定を、事後比較のため使用した。統計的有意性を、ｐ＜０．０５により示した。統計的解析を、ＳＰＳＳ１８．０ソフトウェア（ＳＰＳＳ社、米国イリノイ州シカゴ）を用いて実施した。
【０１４３】
結果
実施例１  トリアシルグリセロール濃度（ｍｍｏｌ／ｌ）
カイロミクロンＴＡＧは、該ＤＰＡ朝食後、ほとんど空腹時のレベルで残留した（図１）。該ＤＰＡ食事後の該カイロミクロンＴＡＧ曲線下の面積増分は、該オリーブ油後の相当する面積（ｐ＝０．０２１）または該ＥＰＡ食事後の面積（ｐ＝０．０３４）と比較したとき、有意に減少した。血漿中、ＤＰＡおよび対照食事後のＴＡＧ面積間の差は、有意である傾向であった（ｐ＝０．０７８）。個々の時点の該ＴＡＧ濃度は、該対照食事と比較して、１時間および２時間において、該ＤＰＡ朝食後、より小さかった（血漿で、それぞれ、ｐ＝０．０２４およびｐ＝０．０１４およびカイロミクロンで、それぞれ、ｐ＝０．０１７およびｐ＝０．０６８）（図１）。
【０１４４】
実施例２  カイロミクロンＴＡＧポリ不飽和脂肪酸
食後１〜５時間において、ＥＰＡは、オリーブ油のみまたはＤＰＡ含有朝食後より、ＥＰＡ含有朝食後の該カイロミクロンＴＡＧで、有意に高かった（図２）。同様に、該ＤＰＡ含有率は、該オリーブ油食事後（２〜５時間、０．０６である３時間のｐ値差）または該ＥＰＡ食事後（３〜５時間）より、該ＤＰＡ朝食後、有意に高かった。ＤＰＡは、カイロミクロンＴＡＧ中のＥＰＡの比率を増加させなかった。ＤＨＡは、２時間および３時間で、該オリーブ油朝食と比較して、該ＤＰＡ朝食後、有意に増加し、５時間で、該オリーブ油朝食と比較して、該ＥＰＡ朝食後、有意に増加した（図２）。
【０１４５】
実施例３  カイロミクロンリン脂質
カイロミクロンリン脂質の該脂肪酸組成物は、カイロミクロンＴＡＧのものより、該食事により影響されなかった。２時間で、ＥＰＡの比率は、該２つの他の朝食と比較して、該ＥＰＡ朝食後、増加し、２時間で、該ＥＰＡ朝食は、該オリーブ油朝食と比較して、ＤＰＡおよびＤＨＡの量も増加させた（表１および図３）。他の時点における、ポリ不飽和脂肪酸の分布度の差はなかった。
【０１４６】
【表１】
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【０１４７】
実施例４  カイロミクロンＴＡＧ含有ＰＵＦＡ
該朝食群間のＰＵＦＡを含有するＴＡＧ濃度に有意差があった（図４）。ＴＡＧのこれらの群に寄与する主な化学種は、脂肪酸の中性脱離をモニターする、より広範な多反応モニター試験の使用により推定された。該ＥＰＡ朝食後のＥＰＡを含有する主要化学種は、２０：５／１８：１／１８：１および２０：５／１８：１／１６：０を含んでいた。ＤＰＡの全体的存在は、該ＴＡＧ濃度および脂肪酸組成データからも分かるＥＰＡのものより低かった。該ＤＰＡ朝食後のＰＵＦＡを含有する主要ＴＡＧは、２２：５／１８：１／１６：０、２２：５／１８：２／１８：１および２２：５／１８：１／１８：１であった。ＴＡＧ５４：５（２０：４／１８：１／１６：０である可能性が強い）は、全食事後、同量で検出された。
【０１４８】
該全体的応答で非常に少ないが、いくつかの明白なＤＨＡへの転換は、該３時間および５時間の時点で、該オリーブ油朝食と比較して、該ＥＰＡおよびＤＰＡ朝食後、このＴＡＧが有意により多いので、該ＴＡＧ５８：９（２２：６／１８：２／１８：１である可能性が強い）で認識できた。図４中に示したＴＡＧを含有する該ＰＵＦＡは別として、ＴＡＧ１８１／１８：１／１６：０、１８：１／１８：１／１８：１および１８：２／１８：１／１６：０は、全食事後、ＴＡＧに富んでいた。
【０１４９】
測定された該リン脂質化学種のホスファチジルコリンは、ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳで測定して、カイロミクロン中の最も多いリン脂質化学種であり、次いで、イノシトール、エタノールアミンおよびセリンであった。測定した時点以内において、個々のリン脂質または明らかな増加もしくは減少傾向は、朝食間の差がなかった。
【０１５０】
朝食間または３つの測定時点（１，３、および５時間）間のカイロミクロンコレステリルエステル化学種に差は見られなかった。カイロミクロンコレステリルエステルで最も多い脂肪酸は、１８：２であり、次いで、約同量で、１６：０、１８：１および２０：４、それから、１６：１、１８：３、２０：５および２２：６であった。
【０１５１】
注釈
ＤＰＡは、ＥＰＡの伸長代謝物であり、ＥＰＡとＤＨＡ間の中間生成物の１つである。本開示は、食事を含むオリーブ油中の純粋ＤＰＡおよびＥＰＡの食後代謝作用を試験した。
【０１５２】
本試験からの主要な発見は、ほんの２ｇのｎ−３ＤＰＡから該１８ｇのオリーブ油が、５時間以内に、カイロミクロン中の脂肪酸の取込みを、完全に排除することであった。対照的に、この効果は、ＥＰＡの添加では見られなかった。
【０１５３】
理論に束縛されるものではないが、ＤＰＡに起因する高カイロミクロン血症の減少は、もし、ＤＰＡが、膵臓リパーゼ阻害因子として作用していたならば、説明されることになる。もし、ＤＰＡが、該リパーゼの作用を邪魔したならば、結果は、高カイロミクロン血症の減少または遅延させることになり、カイロミクロンＴＡＧ値の減少、特に、オレイン酸（１８ｇの摂食オリーブ油から）とのものであるはずである。これらの効果の両方が、この試験で観察された。さらに、もし、いくつかの摂取脂肪が、該リパーゼにより、徹底的にまたは効率的に消化されないならば、いくつかの該摂取脂肪は、該リパーゼにより、徹底的にまたは効率的に消化されず、いくつかの該脂肪は、吸収不良で、排泄物中に失われることになる。この仮説は、１０対象からの３名が、該ＤＰＡ朝食後３時間で、下痢症または胃のむかつきを報告した観察記録により支持される。
【０１５４】
もう１つの可能性のある説明は、赤血球中に存在することが分かっているＴＡＧリザーバに関する（Lambert (2012) Biochim Biophys Acta 1821:721-726）。
【０１５５】
他の可能性のある機序、例えば、胆汁酸塩を含むもの、粘膜細胞への吸収、ＴＡＧ合成またはカイロミクロンのパッケージングの破壊、およびカイロミクロン排除の増強も可能性がある。しかしながら、いくつかの該対象により観察された下痢症は、該粘膜細胞または血液中よりもむしろ腸中で起こっている作用を支持している。
【０１５６】
本試験で存在するデータは、該ＥＰＡおよびＤＰＡが、摂食後、種々に代謝されることを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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