(57)【要約】  本発明は、ＮＡＭＰＴを阻害し、癌の治療に有用であり得る新規ピリジルオキシアセチルテトラヒドロイソキノリン化合物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
2016532648.tif 000062
（式中、
Ｒ１は、−ＮＨＳＯ２Ｒ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３、−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、または−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、
Ｒ２は、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、Ｎ−オキセタン−３−イル−ピペリジン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−Ｎ−カルボニル−ピペリジン−４−イル、２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパ−１−イル、メトキシエチル、２−イソプロポキシエチル、２−トリフルオロメチルエチル、シクロプロピルメチル、またはピリド−２−イルであり、
Ｒ３は、テトラヒドロピラン−２−イル、ｔ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ３）（ＯＨ）、−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、または−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＦ３）であり、
Ｒ４は、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−メチル、モルホリン−４−イル−メチル、または２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミドである請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミドである請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項６】
ニコチン酸をさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
哺乳動物における癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩の有効量を投与する工程を含み、前記癌が、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、および自律神経節癌を含む群から選択される、方法。
【請求項８】
前記癌が卵巣癌である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌がリンパ腫である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物または前記塩が、ニコチン酸と組み合わせて同時、別個または連続投与される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
療法に使用するための請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１３】
癌の治療に使用するための請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１４】
前記癌が、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、および自律神経節癌を含む群から選択される、請求項１３に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１５】
前記癌が卵巣癌である、請求項１４に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１６】
前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項１４に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１７】
前記癌がリンパ腫である、請求項１４に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１８】
前記化合物または塩が、ニコチン酸と組み合わせて同時、別個または連続投与される、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の使用のための化合物または塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）の活性を阻害する新規ピリジルオキシアセチルテトラヒドロイソキノリン化合物、その化合物を含む医薬組成物、および生理的傷害を治療するため、より特には、ＮＡＭＰＴが発現している間の癌を治療するために、その化合物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）は、多くの種類の癌細胞における代謝、エネルギー産生、ＤＮＡ修復、およびシグナル伝達に必要とされる。哺乳動物において、ＮＡＤ＋は、ニコチンアミド、ニコチン酸またはトリプトファンから合成され得る。ニコチンアミドをＮＡＤ＋に変換する２段階サルベージ経路は哺乳動物におけるＮＡＤ＋生合成に対する主要な経路を表す。
【０００３】
ＮＡＭＰＴもまた、多くの癌細胞におけるＮＡＤ＋の生合成に必須である。ＮＡＭＰＴはニコチンアミドのニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）への変換における律速段階を触媒する。ＮＡＭＰＴはまた、種々の癌細胞において上方制御することが見出されている。ＮＡＭＰＴの阻害はＮＡＤ＋の枯渇を導く。十分なＮＡＤ＋がないと、アデノシン−５’−三リン酸（ＡＴＰ）の合成が阻害され、癌細胞増殖の最終的な減衰が生じる。
【０００４】
ニコチン酸からＮＡＤ＋を回収するのに必須の酵素である、ニコチン酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＰＲＴ）はヒト組織およびいくつかの腫瘍において発現する。ＮＡＤ＋はＮＡＰＲＴ媒介性ニコチン酸経路を通して同時投与したニコチン酸から宿主組織において合成され続けるので、ニコチン酸と特定のＮＡＭＰＴ阻害剤との同時投与は治療指数を増強することが示されているが、結果として、ニコチン酸とこれらのＮＡＭＰＴ阻害剤との同時投与はＮＡＭＰＴ阻害剤の効果からＮＡＰＲＴの能力がある正常細胞を保護するのに対して、この同時投与は、ＮＡＰＲＴを欠損した腫瘍細胞上でＮＡＭＰＴ阻害剤の抗腫瘍活性に影響を与えないように見える。次に、このことは、特定のＮＡＭＰＴ阻害剤の標的毒性に対する可能性を最小化することによって治療指数を増強するために診療所における救助戦略の実施を可能にする。非特許文献１も参照のこと。
【０００５】
ＮＡＭＰＴ阻害剤は癌を治療するために当該分野において既に知られている。例えば、特許文献１に開示されているＦＫ８６６／ＡＰＯ８６６を参照のこと。また、当該分野において開示されている多くの他のＮＡＭＰＴ阻害剤も存在する。例えば、特許文献２を参照のこと。より特には癌を治療するための代替のＮＡＭＰＴ阻害剤を提供する必要性が存在したままである。したがって、本発明は癌を治療するのに有用であり得るＮＡＭＰＴ阻害剤を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第９７４８６９６号
【特許文献２】国際公開第２０１２０３８９０４号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｈａｓｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６３、７４３６−７４４２、２００３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ＮＡＭＰＴの阻害剤であり、異なる種類の癌、特に乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍（特に膠芽細胞腫および神経芽細胞腫）、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、肉腫（軟部組織肉腫を含む）、白血病、リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、および／または自律神経節癌を治療するための単剤として臨床的有用性を有し得る新規ピリジルオキシアセチルテトラヒドロイソキノリン化合物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、以下の式の化合物：
【化１】
2016532648.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、−ＮＨＳＯ２Ｒ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３、−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、または−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、
Ｒ２は、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、Ｎ−オキセタン−３−イル−ピペリジン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−Ｎ−カルボニル−ピペリジン−４−イル、２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパ−１−イル、メトキシエチル、２−イソプロポキシエチル、２−トリフルオロメチルエチル、シクロプロピルメチル、またはピリド−２−イルであり、
Ｒ３は、テトラヒドロピラン−２−イル、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）（ＯＨ）−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、または−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＦ３）であり、
Ｒ４は、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−メチル、モルホリン−４−イル−メチル、または２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１０】
好ましくは、Ｒ１は−ＮＨＳＯ２Ｒ２である。
【００１１】
本発明は、２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミドである化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【化２】
2016532648.tif 000003
【００１２】
本発明はまた、２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミドである化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【化３】
2016532648.tif 000004
【００１３】
本発明は、哺乳動物における乳癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００１４】
本発明は、哺乳動物における胃癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００１５】
本発明は、哺乳動物における大腸癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００１６】
本発明は、哺乳動物における肝癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００１７】
本発明は、哺乳動物における腎癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００１８】
本発明は、哺乳動物における脳腫瘍を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。特に、脳腫瘍は膠芽細胞腫および神経芽細胞腫である。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００１９】
本発明は、哺乳動物における黒色腫を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２０】
本発明は、哺乳動物における前立腺癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２１】
本発明は、哺乳動物における卵巣癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２２】
本発明は、哺乳動物におけるＮＳＣＬＣを治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２３】
本発明は、哺乳動物における肉腫、特に軟部組織肉腫を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２４】
本発明は、哺乳動物における白血病を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２５】
本発明は、哺乳動物におけるリンパ腫を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２６】
本発明は、哺乳動物における子宮内膜癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２７】
本発明は、哺乳動物における腎臓癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、本発明の化合物または塩の有効量を投与する工程を含む、方法を提供する。任意に、この方法は、ニコチン酸の同時、別個または連続投与をさらに含む。
【００２８】
本発明は、結晶形態の２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミドを提供する。本発明はまた、１７．９７ならびに２１．５９、１８．５３および１４．９６の１つ以上において発生する、２θ±０．２における特徴ピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶性無水遊離塩基形態の２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミドを提供する。
【００２９】
本発明は、結晶形態の２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミドを提供する。本発明はまた、２４．２１ならびに１５．７３、１８．９５および１８．２８の１つ以上において発生する、２θ±０．２における特徴ピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶性無水遊離塩基形態の２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミドを提供する。
【００３０】
本発明はまた、本発明の化合物または塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。任意に、組成物はニコチン酸をさらに含む。
【００３１】
本発明はまた、療法に使用するための本発明の化合物または塩を提供する。本発明はまた、癌の治療に使用するための本発明の化合物または塩を提供する。さらに、本発明は、癌を治療するための医薬の製造における本発明の化合物または塩の使用を提供する。さらに、本発明は、癌の治療に使用するための本発明の化合物または塩を提供する。特に、この癌は乳癌である。さらに、この癌は胃癌である。さらに、この癌は大腸癌である。さらに、この癌は肝癌である。さらに、この癌は腎癌である。さらに、この癌は脳腫瘍、より特には膠芽細胞腫および神経芽細胞腫である。さらに、この癌は黒色腫である。さらに、この癌は前立腺癌である。さらに、この癌は卵巣癌である。さらに、この癌はＮＳＣＬＣである。さらに、この癌は肉腫、より特には軟部組織肉腫である。さらに、この癌は白血病である。さらに、この癌はリンパ腫である。さらに、この癌は子宮内膜癌である。さらに、この癌は腎臓癌である。さらに、化合物または塩は任意に、ニコチン酸と組み合わせて同時、別個または連続投与される。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明の化合物は塩を形成できることは当業者に理解されるであろう。本発明の化合物は塩基性複素環を含有し、したがって任意の複数の無機および有機酸と反応して薬学的に許容可能な酸付加塩を形成する。このような薬学的に許容可能な酸付加塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当該分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８）、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ  ６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照のこと。
【００３３】
当業者は、本発明の特定の化合物が少なくとも１つのキラル中心を含有することを理解するであろう。本発明は、全ての個々の鏡像異性体またはジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む前記化合物の鏡像異性体およびジアステレオマーの混合物を意図する。少なくとも１つのキラル中心を含有する本発明の化合物は、単一の鏡像異性体またはジアステレオマーとして存在することが好ましい。単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、キラル試薬で開始して調製され得るか、または立体選択的もしくは立体特異的合成技術によって調製され得る。あるいは、単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは標準的なキラルクロマトグラフまたは結晶化技術によって混合物から単離され得る。
【００３４】
本発明の化合物は当該分野において周知で理解されている合成方法に従って調製され得る。これらの反応の工程のための適切な反応条件は当該分野において周知であり、溶媒および共試薬の適切な置換は当該分野の範囲内である。同様に、合成中間体は、必要または所望の場合、種々の周知の技術によって単離および／または精製され得ること、ならびに頻繁に、ほとんどまたは全く精製せずに後の合成工程において種々の中間体を直接使用することができることは当業者により理解されるであろう。さらに、当業者は、いくつかの状況において、部分を導入する順序は重要でないことを理解するであろう。本発明の化合物を生成するのに必要な工程の特定の順序は、当業者に十分に理解されるように、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的傾向に依存する。他に示さない限り、全ての置換は以前に定義されている通りであり、全ての試薬は当該分野において周知であり、理解される。
【００３５】
反対に示されない限り、本明細書に例示される化合物は、ＡＣＤＬＡＢＳまたはＡｃｃｅｌｒｙｓ  Ｄｒａｗ  ４．０のいずれかを使用して命名され、番号付けされる。
【００３６】
本明細書に使用される場合、以下の用語は示した意味を有する。「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＡＴＰ」はアデノシン−５’−三リン酸を指し、「ＢＩＤ」は１日に２回を指し、「ＢＯＣ」はジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボネートを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し、「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し、「ＨＡＴＵ」はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＥＰＥＳ」は４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「異性体２」はカラムから２回目に溶出する異性体を指し、「ＩＶＴＩ」はインビボ標的阻害を指し、「ＬＣ」は液体クロマトグラフィーを指し、「ＭＳ」は質量分析を指し、「ＮＡＤ＋」はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを指し、「ＮＡＤＨ」はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元型を指し、「ＮＡＭＰＴ」はニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼを指し、「ＮＡＰＲＴ」はニコチン酸ホスホリボシルトランスフェラーゼを指し、「ＮＭＮ」はニコチンアミドモノヌクレオチドを指し、「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を指し、「ＮＳＣＬＣ」は非小細胞肺癌を指し、「ＳＤ」は標準偏差を指し、「ＳＥ」は標準誤差を指す。
【００３７】
本発明の化合物は、Ｒ１〜Ｒ４が以前に定義されている通りである、以下のスキームに例示されるように合成できる。
【化４】
2016532648.tif 000005
式Ｉの化合物を作製するためのアミド形成
【００３８】
本発明の化合物は当業者に周知のアミド形成条件によって調製できる。化合物１は、適切な溶媒（ジメチルホルムアミドなど）中の適切なアミド結合形成試薬（ＨＡＴＵ、１−プロパンホスホン酸環状無水物またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリドなど）および適切な塩基（トリエチルアミンなど）の存在下で、適切に置換された化合物２または化合物２の適切な塩（塩酸塩など）と反応して、式Ｉの所望の化合物が得られる。
【００３９】
【化５】
2016532648.tif 000006
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３である場合、化合物２のサブセットを作製するための方法
【００４０】
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３である場合、化合物２のサブセットは、Ｒ２およびＲ３が以前に定義されている通りであるスキームＩＩに例示されるように調製できる。
【００４１】
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２である場合、化合物３は、適切な溶媒（ジメチルホルムアミドなど）中の適切なスルホンアミド結合形成試薬（ＨＡＴＵ、１−プロパンホスホン酸環状無水物またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリドなど）および適切な塩基（トリエチルアミンなど）の存在下で、適切に置換されたスルホニルクロリドと反応して、化合物４が得られる。
【００４２】
Ｒ１が−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３である場合、化合物３は、適切な溶媒（ジメチルホルムアミドなど）中の適切なアミド結合形成試薬（ＨＡＴＵ、１−プロパンホスホン酸環状無水物またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリドなど）および適切な塩基（トリエチルアミンなど）の存在下で適切に置換されたカルボン酸と反応して、化合物５が得られる。
【００４３】
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３である場合、化合物４または５は、適切な脱保護試薬（トリフルオロ酢酸または塩酸など）によって脱保護されて化合物２が得られ得る。
【００４４】
【化６】
2016532648.tif 000007
Ｒ１が−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である場合、化合物２のサブセットを作製するための方法
【００４５】
Ｒ１が−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である場合、化合物２のサブセットは、Ｒ４が以前に定義されている通りである、スキームＩＩＩに例示されているように調製できる。
【００４６】
化合物６は、適切な溶媒（テトラヒドロフランなど）中の適切な還元剤（水素化アルミニウムリチウムなど）で還元されて、化合物７が得られる。化合物７は、適切な溶媒（ジクロロメタンなど）中の酸化試薬（酸化マンガン（ＩＶ）など）によって酸化されて、化合物８が得られ得、これはさらに、当業者に周知の還元アミノ化条件下で化合物９と反応して、化合物１０が得られる。例えば、化合物８は、適切な溶媒（ジクロロメタンなど）中の適切な還元剤（トリアセトキシボロヒドリドなど）および適切な酸（酢酸など）の存在により化合物９と反応して、化合物１０が得られ得る。Ｒ１が−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である場合、化合物１０は、適切な脱保護試薬（トリフルオロ酢酸または塩酸など）によって脱保護されて、化合物２が得られ得る。
【００４７】
【化７】
2016532648.tif 000008
【００４８】
Ｒ１が−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である場合、化合物２のサブセットを作製するための方法
【００４９】
Ｒ１が−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である場合、化合物２のサブセットは、Ｒ４が以前に定義されている通りであるスキームＩＶに例示されているように調製され得る。
【００５０】
化合物１１は、上記のアミド結合形成条件下でＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩と反応して、化合物１２が得られ得る。化合物１２は、適切な溶媒（テトラヒドロフランなど）中でメチルマグネシウムブロミドと反応して、化合物１３が得られ得る。化合物１３は、上記の還元的アミノ化条件下で化合物９と反応して、化合物１４が得られ得、それを、適切な脱保護試薬（トリフルオロ酢酸または塩酸など）によってさらに脱保護して、Ｒ１が−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４である化合物２が得られ得る。
【００５１】
調製例１
ｔｅｒｔ−ブチル６−（メタンスルホンアミド）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化８】
2016532648.tif 000009
メタンスルホニルクロリド（６２．１６ｇ、４２．００ｍＬ、５４２．６３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（９００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（９０．００ｇ、３６２．４３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７３．３５ｇ、１０１．０３ｍＬ、７２４．８６ｍｍｏｌ）の溶液に加え、それを０℃に冷やす。混合物を室温にて一晩撹拌する。
【００５２】
混合物を水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、４００ｍＬ）で処理し、４８時間還流で反応混合物を加熱する。室温に冷やし、水（２００ｍＬ）を加え、相を分離する。水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で赤橙色油に濃縮する。赤橙色油をジクロロメタン（３００ｍＬ）およびヘプタン（５００ｍＬ）に溶解し、濃縮乾固し、次いで物質を４５℃にて一晩真空オーブン中に維持して、標題化合物（１２０ｇ、３６７．６３ｍｍｏｌ）を得る。淡橙色の固体としてＭＳ（ｍ／ｚ）：２７１（Ｍ＋１−ｔＢｕ）。
【００５３】
以下の化合物を本質的に調製例１の方法によって調製する。
【表１】
2016532648.tif 000010
【００５４】
調製例７
ｔｅｒｔ−ブチル６−（２−メトキシエチルスルホニルアミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化９】
2016532648.tif 000011
トリエチルアミン（４２．７１ｇ、５８．８２ｍＬ、４２２．０３ｍｍｏｌ）を、０℃にて乾燥テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（５２．４０ｇ、２１１．０１ｍｏｌ）の溶液、続いて２−メトキシエタンスルホニルクロリド（４２．７１ｇ、５８．８２ｍＬ、４２２．０３ｍｍｏｌ）に２５分にわたって加える。反応物を室温にて９０分間撹拌する。反応物を０℃に冷やし、水（２５０ｍＬ）を５分にわたって加える。メチルｔｅｒｔブチルエーテルで抽出する。有機層を水（２×２５０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（６５ｇ、２１１．８７ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７１（Ｍ＋１−ＢＯＣ）。
【００５５】
調製例８
ｔｅｒｔ−ブチル６−［（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）スルホニルアミノ］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化１０】
2016532648.tif 000012
ヘキサン（２５５．３０ｇ、３７０．００ｍＬ、９２５．００ｍｍｏｌ）中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウムを、−７８℃にてテトラヒドロフラン（２Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−（メタンスルホンアミド）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（１２０．００ｇ、３６７．６３ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくり加える。混合物を−７８℃にて３０分間撹拌し、アセトン（２７．６５ｇ、３５．００ｍＬ、４７６．１３ｍｍｏｌ）を混合物に５分にわたって加え、室温に加温する。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）を混合物に加え、水（４００ｍＬ）で希釈し、次いで相を分離する。水層を酢酸エチル（４×８００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ヘキサン／酢酸エチル（９０分にわたって０％〜５０％酢酸エチル）の移動相で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して標題化合物（４８．００ｇ、１２４．８４ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１−ＢＯＣ）。以前の精製からのピークの混合物を含有する画分を合わせて２０ｇの物質にする。それを、クロロホルム／イソプロパノール（４５分にわたって０％〜５％イソプロパノール）の移動相で溶出する、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、さらなる標題化合物（５．６０ｇ、１４．５６ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１−ＢＯＣ）。
【００５６】
調製例９
ｔｅｒｔ−ブチル６−（２−イソプロポキシエチルスルホニルアミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化１１】
2016532648.tif 000013
ｔｅｒｔ−ブチル６−（ビニルスルホニルアミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（６３５．００ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）、ナトリウムイソプロポキシド（９２４．０３ｍｇ、１１．２６ｍｍｏｌ）および乾燥イソプロピルアルコール（４．９９ｇ、６．３５ｍＬ）をマイクロ波バイアルに加える。マイクロ波反応器中で混合物を１１０℃にて１時間加熱する。混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ、酢酸エチル（２×４０ｍＬ）で抽出し、有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（６９５．００ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９９（Ｍ＋１）。
【００５７】
調製例１０
ｔｅｒｔ−ブチル６−［（３−ヒドロキシ−３−メチル−ペンタノイル）アミノ］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化１２】
2016532648.tif 000014
トリエチルアミン（９４８．３ｍｇ、１．３ｍＬ、９．３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２３．３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（４．７ｍｍｏｌｅ；１．２ｇ）、３−ヒドロキシ−３−メチル−ペンタン酸（４．７ｍｍｏｌｅ；６１５．０ｍｇ）、ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリド（１．４ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて一晩撹拌する。ジクロロメタン（３０ｍＬ）を加え、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を減圧下で濃縮し、得られた油をメタノール（５ｍＬ）に溶解する。１０％メタノール／ジクロロメタン、続いてメタノール中２ＮのＮＨ３で溶出するイオン交換クロマトグラフィーにメタノール溶液を移す。メタノール画分を濃縮して、標題化合物（１．６ｇ、４．４１ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３（Ｍ＋１）。
【００５８】
調製例１１
ｔｅｒｔ−ブチル６−［（４，４，４−トリフルオロ−３−ヒドロキシ−３−メチル−ブタノイル）アミノ］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化１３】
2016532648.tif 000015
トリエチルアミン（４０７．５０ｍｇ、５６１．２９μＬ、４．０３ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（５００．００ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）、４，４，４−トリフルオロ−３−ヒドロキシ−３−メチル−ブタン酸（３４６．５３ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）および（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１．５３ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて一晩撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、ジクロロメタン（３０ｍＬ）を加え、２０ｍＬの水で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物（０．８１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０３（Ｍ＋１）。
【００５９】
以下の化合物を本質的に調製例１１の方法によって調製する。
【００６０】
【表２】
2016532648.tif 000016
【００６１】
調製例１５
２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）プロパン−１−スルホンアミド塩酸塩
【化１４】
2016532648.tif 000017
塩化水素（ジオキサン中４Ｍ、１２０．００ｇ、１２０．００ｍＬ、４８０．００ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−［（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）スルホニルアミノ］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（５３．６ｇ、１３９．２２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を室温にて一晩撹拌する。混合物を減圧下で濃縮し、それを５０℃にて真空下でさらに乾燥させて標題化合物（４６．９０ｇ、１４６．１８ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１−ＨＣｌ）。
【００６２】
以下の化合物を本質的に調製例１５の方法によって調製する。
【００６３】
【表３−１】
2016532648.tif 000018
【表３−２】
2016532648.tif 000019
【００６４】
調製例２６
２−メトキシ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）エタンスルホンアミド塩酸塩
【化１５】
2016532648.tif 000020
塩化アセチル（６０．３１ｍＬ、６６．５３ｇ、８４７．４９ｍｍｏｌ）を、０℃にて１５分にわたってイソプロピルアルコール（２３５．８３ｇ、３００．００ｍＬ、３．９２ｍｏｌ）に加え、溶液を室温にて３０分間撹拌する。イソプロピルアルコール（７８．６１ｇ、１００．００ｍＬ、１．３１ｍｏｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−（２−メトキシエチルスルホニルアミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（８４．４０ｇ、２１１．８７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を４０℃にて９０分間加熱する。混合物を室温、その後４℃にて３０分間冷やす。固体を濾過して標題化合物（５８．８０ｇ、１９１．６５ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７１（Ｍ＋１）。
【００６５】
調製例２７
１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−アミン
【化１６】
2016532648.tif 000021
塩化水素（ジオキサン中４Ｍ、３２．２２ｍＬ、１２８．８６ｍｍｏｌ）を、室温にてジクロロメタン（１２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（８．００ｇ、３２．２２ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。混合物を１．５時間撹拌する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジ（１００ｇ）上に充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。減圧下でメタノール洗浄物を濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジ（５０ｇ）上に再充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。合わせ、両方の精製から塩基性溶離液を濃縮して、標題化合物（４．８５ｇ、３２．７２ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４９（Ｍ＋１）。
【００６６】
調製例２８
１−（６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−（３−ピリジルオキシ）エタノン
【化１７】
2016532648.tif 000022
２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（５．２７ｇ、３４．４１ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール（５．５８ｇ、３４．４１ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、Ｎ２でパージし、次いで乾燥テトラヒドロフラン（１０２．００ｍＬ）を加え、４５℃で１時間加熱する。混合物を滴下漏斗に移し、その混合物を、ジメチルホルムアミド（４０．８０ｍＬ）中の１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−アミン（５．１０ｇ、３４．４１ｍｍｏｌ）の懸濁液を含有するＮ２パージしたフラスコに１時間にわたって加える。混合物を１時間撹拌し、減圧下で濃縮する。テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）を加え、沈殿物が形成するまで撹拌する。混合物を氷浴中で冷やし、濾過し、次いで残渣をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）で洗浄する。固体を乾燥させて、標題化合物（５．６６ｇ、１９．９８ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８４（Ｍ＋１）。液体を減圧下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル：８０ｇをジクロロメタン（４０ｍＬ）を使用して充填、アイソクラチック流：ジクロロメタン中５％メタノール）により精製して、標題化合物（３．２１ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８４（Ｍ＋１）。
【００６７】
調製例２９
ｔｅｒｔ−ブチル４−［［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］スルファモイル］ピペリジン−１−カルボキシレート
【化１８】
2016532648.tif 000023
ｔｅｒｔ−ブチル４−クロロスルホニルピペリジン−１−カルボキシレート（１．００ｇ、６７６．７４μＬ、３．５３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１７．６５ｍＬ）中の１−（６−アミノ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−（３−ピリジルオキシ）エタノン（１．００ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。次いでトリエチルアミン（１．４８ｍＬ、１０．５９ｍｍｏｌ）を加え、室温にて２時間撹拌する。ｔｅｒｔ−ブチル４−クロロスルホニルピペリジン−１−カルボキシレート（５００．７９ｍｇ、３３８．３７μＬ、１．７６ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１時間撹拌する。ｔｅｒｔ−ブチル４−クロロスルホニルピペリジン−１−カルボキシレート（２００．３１ｍｇ、１３５．３５μＬ、７０５．８９μｍｏｌ）を加え、室温にて３０分間撹拌する。ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加え、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。アセトンによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して標題化合物（１．４７ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３１（Ｍ＋１）。
【００６８】
調製例３０
Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］ピペリジン−４−スルホンアミド
【化１９】
2016532648.tif 000024
塩化水素（４．１４ｇ、３．９５ｍＬ、１５．７９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１３．１６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−［［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］スルファモイル］ピペリジン−１−カルボキシレート（１．４７ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて１時間撹拌する。塩化水素（４．１４ｇ、３．９４ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１６時間撹拌する。減圧下で濃縮する。ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。減圧下で塩基性画分に濃縮して標題化合物（１．３４ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３１（Ｍ＋１）。
【００６９】
調製例３１
６−ヒドロキシメチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２０】
2016532648.tif 000025
水素化アルミニウムリチウム（７１６．４９ｍｇ、１８．８８ｍｍｏｌ）を、０℃にてテトラヒドロフラン（８５．８１ｍＬ）中のＯ２−ｔｅｒｔ−ブチルＯ６−メチル３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２，６−ジカルボキシレート（５．００ｇ、１７．１６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加え、その温度で１時間撹拌する。次いで水（６ｍＬ）を加え、０℃にて１５分間撹拌し、ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過し、ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）を酢酸エチルで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮して標題化合物（４．５ｇ、１７．０９ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６４（Ｍ＋１）。
【００７０】
調製例３２
ｔｅｒｔ−ブチル６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化２１】
2016532648.tif 000026
活性酸化マンガン（ＩＶ）（２．８５ｇ、３２．７７ｍｍｏｌ）を、室温にてジクロロメタン（５０．００ｍＬ）中の６−ヒドロキシメチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８６３．００ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）の溶液に加え、その温度で１６時間撹拌する。ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）のパッドで濾過し、ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）パッドをジクロロメタンで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮して標題化合物（７４０ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０６（Ｍ＋１−ｔＢｕ）。
【００７１】
調製例３３
ｔｅｒｔ−ブチル６−［メトキシ（メチル）カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化２２】
2016532648.tif 000027
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（２６．３４ｇ、９４．８６ｍｍｏｌ）を、メタノール（５６３．７０ｍＬ）中の２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−カルボン酸（１８．７９ｇ、６７．７６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（７．９３ｇ、８１．３１ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（１３．７１ｇ、１４．９５ｍＬ、１３５．５１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて一晩撹拌する。減圧下で濃縮する。次いで酢酸エチル（２５０ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）を混合物に加える。層を分離し、水層を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、塩酸水溶液（２Ｍ、２００ｍＬ）で洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。減圧下で濃縮して標題化合物（２４．２８ｇ、７５．７８ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２１（Ｍ＋１）。
【００７２】
調製例３４
ｔｅｒｔ−ブチル６−アセチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化２３】
2016532648.tif 000028
メチルマグネシウムブロミド（７８．４４ｇ、７５．７８ｍＬ、２２７．３５ｍｍｏｌ）を、Ｎ２および−５℃下でテトラヒドロフラン（５０５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−［メトキシ（メチル）カルバモイル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（２４．２８ｇ、７５．７８ｍｍｏｌ）の溶液に１時間にわたって滴下して加える。フラスコをＮ２でパージし、乾燥テトラヒドロフラン（５０５．２２ｍＬ）を充填する。混合物を−５℃にて５０分間添加しながら撹拌する。飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ、５分撹拌し、メチルｔｅｒｔブチルエーテル（１５０ｍＬ）で希釈する。層を分離し、有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させる。濾液を減圧下で濃縮して標題化合物（２０．４ｇ、７４．０９ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７６（Ｍ＋１）。
【００７３】
調製例３５
ピペラジン−１−イル（テトラヒドロピラン−４−イル）メタノン
【化２４】
2016532648.tif 000029
テトラヒドロピラン−４−カルボニルクロリド（１．２ｇ、８．１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．５ｇ、８．１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。次いでトリエチルアミン（８９６．４ｍｇ、１．２ｍＬ、８．９ｍｍｏｌ）を加え、室温にて２時間撹拌する。水（３０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮する。ジクロロメタン（３０ｍＬ）を得られた物質に加え、塩化水素（１０．６ｇ、１０．１ｍＬ、４０．３ｍｍｏｌ）を加え、室温にて３０分間撹拌する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。塩基性画分を減圧下で濃縮して標題化合物（１．６ｇ、８．１ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９９（Ｍ＋１）。
【００７４】
調製例３６
２−モルホリノ−１−ピペラジン−１−イル−エタノン
【化２５】
2016532648.tif 000030
トリエチルアミン（１．３６ｇ、１．８７ｍＬ、１３．４２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（２６．８５ｍＬ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（２．５９ｇ、８．０５ｍｍｏｌ）中のｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．００ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）、２−モルホリノ酢酸（７７９．３６ｍｇ、５．３７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて４時間撹拌する。減圧下で濃縮し、ジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解し、塩化水素（７．０５ｇ、６．７１ｍＬ、２６．８５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温にて３０分間撹拌する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。塩基性画分を減圧下で濃縮して、標題化合物（１．４ｇ、６．５８ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１４（Ｍ＋１）。
【００７５】
以下の化合物を本質的に調製例３６の方法によって調製する。
【００７６】
【表４】
2016532648.tif 000031
【００７７】
調製例３９
ｔｅｒｔ−ブチル６−［［４−（テトラヒドロピラン−４−カルボニル）ピペラジン−１−イル］メチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化２６】
2016532648.tif 000032
酢酸（１０４．８０ｍｇ、１００．００μＬ、１．７５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１３．３９ｍＬ）中のピペラジン−１−イル（テトラヒドロピラン−４−イル）メタノン（７９６．６４ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（７００．００ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）の溶液に加える。室温にて１５分撹拌し、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（６８１．２８ｍｇ、３．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温にて一晩撹拌する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。減圧下で塩基性画分を合わせる。次いでヘキサン：酢酸エチル（１：１）から酢酸エチル：メタノール（９５：５）によるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（０．７１ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４４（Ｍ＋１）。
【００７８】
以下の化合物を本質的に調製例３９の方法によって調製する。
【００７９】
【表５】
2016532648.tif 000033
【００８０】
調製例４２
ｔｅｒｔ−ブチル６−［［４−（３−ヒドロキシ−３−メチル−ブタノイル）ピペラジン−１−イル］メチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化２７】
2016532648.tif 000034
チタンテトラ（イソプロポキシド）（８１８．４７ｍｇ、８５３．２０μＬ、２．８８ｍｍｏｌ）を、エタノール（３．８ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（６０２．００ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）および３−ヒドロキシ−３−メチル−１−ピペラジン−１−イル−ブタン−１−オン（５５７．７９ｍｇ、２．９９ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を６０℃にて一晩撹拌する。室温に冷やし、混合物にナトリウムテトラヒドロボレート（１３０．７３ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌する。次いで水を加え、４８時間撹拌し、フリットで濾過し、その後ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。塩基性画分を減圧下で濃縮して、標題化合物（０．０３５ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３２（Ｍ＋１）。
【００８１】
調製例４３
ｔｅｒｔ−ブチル６−［１−［４−（テトラヒドロピラン−４−カルボニル）ピペラジン−１−イル］エチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート
【化２８】
2016532648.tif 000035
チタンテトラ（イソプロポキシド）（２．５２ｇ、２．６３ｍＬ、８．８６ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でテトラヒドロフラン（４．０３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−アセチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（１．２２ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−イル（テトラヒドロピラン−４−イル）メタノン（１．０５ｇ、５．３２ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を５０℃にて２０時間撹拌する。混合物を氷浴中で冷やし、ナトリウムテトラヒドロボレート（５０２．８８ｍｇ、１３．２９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温にて３０分間撹拌する。氷浴中で冷やし、５０％クエン酸水溶液（２０ｍＬ）を滴下してクエンチし、３０分間撹拌する。相を分離し、５０％飽和クエン酸水溶液（１０ｍＬ）で有機層を抽出する。水層を合わせ、ｐＨ１０になるまで炭酸カリウム水溶液で中和する。酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出し、有機層を水（１５ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（１．２ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ＋１）。
【００８２】
調製例４４
［４−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イルメチル）ピペラジン−１−イル］−テトラヒドロピラン−４−イル−メタノン
【化２９】
2016532648.tif 000036
トリフルオロ酢酸（５４７．５２ｍｇ、３６３．０７μＬ、４．８０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（８．００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−［［４−（テトラヒドロピラン−４−カルボニル）ピペラジン−１−イル］メチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（７１０．００ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて１５分間撹拌する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。塩基性画分を減圧下で濃縮して標題化合物（０．４９０ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４４（Ｍ＋１）。
【００８３】
調製例４５
［４−［１−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］−テトラヒドロピラン−４−イル−メタノン
【化３０】
2016532648.tif 000037
調製例４５を本質的に調製例４４の方法によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５８（Ｍ＋１）。
【００８４】
調製例４６
２−モルホリノ−１−［４−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イルメチル）ピペラジン−１−イル］エタノン
【化３１】
2016532648.tif 000038
塩化水素（２０６．０６ｍｇ、１９６．２５μＬ、７８５．００μｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５．００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−［［４−（２−モルホリノアセチル）ピペラジン−１−イル］メチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボキシレート（１２０．００ｍｇ、２６１．６７μｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて１０分間撹拌する。減圧下で濃縮し、ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、メタノールで洗浄し、２Ｍメタノールアンモニアで溶出する。塩基性画分を減圧下で濃縮して標題化合物（０．０８５ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５９（Ｍ＋１）。
【００８５】
以下の化合物を本質的に調製例４６の方法によって調製する。
【００８６】
【表６】
2016532648.tif 000039
【実施例】
【００８７】
実施例１
２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミド
【化３２】
2016532648.tif 000040
１−プロパンホスホン酸環状無水物（１２２．３０ｇ、１００．００ｍＬ、１９２．１８ｍｍｏｌ）を、０℃にて２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）プロパン−１−スルホンアミド塩酸塩（４６．９０ｇ、１４６．１８ｍｍｏｌ）、２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（２７．００ｇ、１７６．３１ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（７０８．９８ｇ、７５０．００ｍＬ、９．７０ｍｏｌ）、トリエチルアミン（５９．５３ｇ、８２．００ｍＬ、５８８．３１ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくり加える。反応物を室温にゆっくり加温し、一晩撹拌する。飽和硫酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）および水（５００ｍＬ）を加える。ジクロロメタン（３×１Ｌ）で抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ジクロロメタン／メタノール（９０分にわたって０％〜１０％メタノール）の移動相で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。以前の精製からのピークの混合物を含有する画分を合わせ、ジクロロメタン／メタノール（４５分にわたって０％〜１０％メタノール）の移動相で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して標題化合物（８．００ｇ、１９．０５ｍｍｏｌ）を得る。
【００８８】
２つの画分を合わせて標題化合物（３８．００ｇ、９０．５８ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２０（Ｍ＋１）。
【００８９】
実施例２
２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミド
【化３３】
2016532648.tif 000041
６℃にてトリエチルアミン（７６．１２ｇ、１０４．８５ｍＬ、７５２．２５ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０００ｍＬ）中の２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（３３．１２ｇ、２１６．２７ｍｍｏｌ）および２−メトキシ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）エタンスルホンアミド塩酸塩（５７．７０ｇ、１８８．０６ｍｍｏｌ）の懸濁液に少しの時間にわたって加え、続いて１−プロパンホスホン酸環状無水物（１５５．５８ｇ、１４５．５４ｍＬ、２４４．４８ｍｍｏｌ）の５０％酢酸エチル溶液を１５分にわたって加える。混合物を１０℃にて３０分間撹拌し、その後室温にて６０分間撹拌する。１５℃に冷やし、水（２００ｍＬ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）およびメタノール（１００ｍＬ）を加え、混合物を５分間撹拌し、２相に分離する。水層を酢酸エチル中の１０％メタノール（２×１０００ｍＬ）の混合物で抽出する。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮するが、乾燥させない。４℃に冷やし、固体を濾過し、冷酢酸エチルおよびメチルｔｅｒｔブチルエーテルで洗浄する。固体を加熱し、エタノール（１３００ｍＬ）中で還流し、溶液を室温にてゆっくり冷やし、溶液を室温に１２時間維持し、次いで４℃で３時間維持する。固体を濾過し、冷エタノールおよびメチルｔｅｒｔブチルエーテルで洗浄して標題化合物（６１ｇ、１５４．４４ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０６（Ｍ＋１）。
【００９０】
実施例３
Ｎ−｛２−［（ピリジン−３−イルオキシ）アセチル］−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル｝ピリジン−２−スルホンアミド
【化３４】
2016532648.tif 000042
ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリド（４０６．７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６７８．３ｍｇ、９３２．６μＬ、６．７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（７ｍＬ）中のＮ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）ピリジン−２−スルホンアミド塩酸塩（４８２．０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（２０３．９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を室温にて３時間撹拌する。水を加え、ジクロロメタンで２回抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ジクロロメタン：メタノール（９５：５）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより予備精製する。ＣＯ２／メタノール（１００ｇ／分で５．５分にわたって１５％〜３０％メタノール）の移動相で溶出する超臨界流体クロマトグラフィー（Ｌｕｎａ  Ｈｉｌｉｃカラム）により粗物質を精製して、標題化合物（２５６ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２５（Ｍ＋１）。
【００９１】
以下の化合物を本質的に実施例３の方法によって調製する。
【００９２】
【表７】
2016532648.tif 000043
【００９３】
実施例６
１−シクロプロピル−Ｎ−｛２−［（ピリジン−３−イルオキシ）アセチル］−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル｝メタンスルホンアミド
【化３５】
2016532648.tif 000044
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５８４．５６ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３０６．１１ｍｇ、４２１．６３μＬ、３．０２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）中の１−シクロプロピル−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）メタンスルホンアミド（３２２．３０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）および２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（１８５．３０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて１８時間撹拌する。減圧下で濃縮する。１０％メタノール／ジクロロメタン、続いてメタノール中２ＮのＮＨ３で溶出するイオン交換クロマトグラフィーにより予備精製する。後の塩基性画分を濃縮し、ｐＨ９にて水／ＡＣＮ（２５ｍＬ／分にて８分にわたって２０％〜４０％ＡＣＮ）中の２０ｍＭ炭酸アンモニウムの移動相で溶出するＨＰＬＣ（ＸＴｅｒｒａ（登録商標）ＭＳ  Ｃ１８  ２１×１００ｍ）により粗物質をさらに精製して標題化合物（２０３ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０２（Ｍ＋１）。
【００９４】
実施例７
２−イソプロポキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミド
【化３６】
2016532648.tif 000045
１−プロパンホスホン酸環状無水物（１．２７ｇ、１．１９ｍＬ、１．９９ｍｍｏｌ）を、２−イソプロポキシ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）エタンスルホンアミド塩酸塩（４４４．００ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）、２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（２２３．３５ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４０２．５１ｍｇ、５５４．４２μＬ、３．９８ｍｍｏｌ）および酢酸エチル（７ｍＬ）の溶液にゆっくり加える。混合物を室温にて１時間撹拌する。飽和炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで２回抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ（登録商標）１０Ｍｉｃｒｏｎ  ５０×１５０ｍｍＣ−１８）（１０ｍＭ炭酸アンモニウムと共にＣＨ３ＣＮおよび水、１２０ｍＬ／分にて１２分にわたって１０％〜１００％ＣＨ３ＣＮ）（２回の注入）により精製する。所望の画分を合わせ、濃縮して、標題化合物（３１５ｍｇ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３４（Ｍ＋１）。
【００９５】
実施例８
１−（オキセタン−３−イル）−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］ピペリジン−４−スルホンアミド
【化３７】
2016532648.tif 000046
オキセタン−３−オン（２７５．６８ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１３ｍＬ）中のＮ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］ピペリジン−４−スルホンアミド（１．２２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて１時間撹拌し、次いでナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８０７．１９ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ）を加え、室温にて一晩撹拌する。減圧下で濃縮する。メタノール、続いてメタノール中２ＮのＮＨ３で溶出するイオン交換クロマトグラフィーによりプレ精製する。後の塩基性画分を濃縮し、ｐＨ９にて水／ＡＣＮ（２５ｍＬ／分にて８分にわたって２０％〜３０％）中の２０ｍＭ炭酸アンモニウムの移動相で溶出するＨＰＬＣ（ＸＢＲＩＤＧＥ（商標）Ｃ１８  １９×１００ｍｍ）により粗物質をさらに精製して、標題化合物（５５３ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８７（Ｍ＋１）。
【００９６】
実施例９
１−メチル−Ｎ−｛２−［（ピリジン−３−イルオキシ）アセチル］−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル｝ピペリジン−４−スルホンアミド
【化３８】
2016532648.tif 000047
実施例９を本質的に実施例８の方法によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４５（Ｍ＋１）。
【００９７】
実施例１０
Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］−１−（テトラヒドロピラン−４−カルボニル）ピペリジン−４−スルホンアミド
【化３９】
2016532648.tif 000048
トリエチルアミン（２８１．６０ｍｇ、３８７．８８μＬ、２．７８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のＮ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］ピペリジン−４−スルホンアミド（５１２．００ｍｇ、９２７．６１μｍｏｌ）の溶液に加え、３０分間撹拌し、ジクロロメタン（１ｍＬ）中のテトラヒドロ−ピラン−４−カルボニルクロリド（１６５．４０ｍｇ、１１５９．６５μＬ、１１ｍｍｏｌ）の溶液に０℃にて滴下して加え、混合物をその温度にて３０分間撹拌する。ジクロロメタン（５ｍＬ）を加え、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）を加え、有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ｐＨ９にて水／ＡＣＮ（６０ｍＬ／分にて１０分にわたって１０％〜１００％ＣＨ３ＣＮ）中の１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムの移動相で溶出するＨＰＬＣにより精製し、軽質留分を蒸発させ、酢酸エーテルで粉砕し、濾過して標題化合物（１９０．４０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（Ｍ／ｚ）：５４３（Ｍ＋１）。
【００９８】
実施例１１
３−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］ペンタンアミド
【化４０】
2016532648.tif 000049
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４３４．８０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５４．２８ｍｇ、２１２．５１μＬ、１．５２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（３．８１ｍＬ）中の３−ヒドロキシ−３−メチル−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）ペンタンアミド（２００．００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）および２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（１１６．７４ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温にて１８時間撹拌する。減圧下で濃縮する。１０％メタノール／ジクロロメタン、続いてメタノール中の２Ｎ  ＮＨ３で溶出するイオン交換クロマトグラフィーによって予備精製する。後の塩基性画分を濃縮し、ｐＨ９にて水／ＡＣＮ（２５ｍＬ／分にて８分にわたって３０％〜５０％ＡＣＮ）中の２０ｍＭ炭酸アンモニウムの移動相で溶出するＨＰＬＣ（ＸＴｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８  ２１×１００ｍｍ）により粗物質をさらに精製して標題化合物（８６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９８（Ｍ＋１）。
【００９９】
以下の化合物を本質的に実施例１１の方法によって調製する。
【０１００】
【表８】
2016532648.tif 000050
【０１０１】
実施例１６
２−（ピリジン−３−イルオキシ）−１−［６−｛［４−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］エタノン
【化４１】
2016532648.tif 000051
トリエチルアミン（１４４．３６ｍｇ、１９８．８５μＬ、１．４３ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（３．５７ｍＬ）中の［４−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イルメチル）ピペラジン−１−イル］−テトラヒドロピラン−４−イル−メタノン（２４５．００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４０６．８４ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（１４２．０１ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて一晩撹拌する。ジクロロメタン（３０ｍＬ）を加え、飽和塩化ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。メタノール、続いてメタノール中２ＮのＮＨ３で溶出するイオン交換クロマトグラフィーによってプレ精製する。ＣＯ２／メタノール（１００ｇ／分にて５．５分にわたって１５％〜３０％メタノール）の移動相で溶出する超臨界流体クロマトグラフィー（Ｌｕｎａ  Ｈｉｌｉｃカラム）によって精製し、軽質留分を蒸発させ、エチルエーテルで粉砕し、濾過して標題化合物（２３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７９（Ｍ＋１）。
【０１０２】
以下の化合物を本質的に実施例１６の方法によって調製する。
【０１０３】
【表９】
2016532648.tif 000052
【０１０４】
実施例２１
２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミド結晶性無水遊離塩基
酢酸エチル（４ｍＬ）中の２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミド（実施例１、２５６ｍｇ）を加え、室温にて一晩１０００ｒｐｍでスラリーにして白色スラリーを得る。スラリーを真空濾過により濾過し、真空および空気流下で１０分間、フィルタ上の適所で固体を乾燥させて標題化合物（２４５ｍｇ、収率９５．７％）を得る。
【０１０５】
結晶性固体のＸ線回折（ＸＲＤ）パターンを、３５ｋＶおよび５０ｍＡにて作動する、ＣｕＫａ源λ＝１．５４０６０ÅおよびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計で得る。試料を、２θにおいて０．００９°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度、ならびに０．６ｍｍ発散、５．２８固定散乱防止および９．５ｍｍ検出器スリットで２θにおいて４から４０°の間で走査する。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、スライドガラスを使用して滑面を得る。結晶形回折パターンを周囲温度および相対湿度にて収集する。任意の所与の結晶形について、回折ピークの相対強度は、結晶形態および晶癖などの要因から得られる好ましい配向に起因して変化し得ることは結晶学の分野において周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変わるが、多形の特徴ピーク位置は変化しない。さらにまた、任意の所与の結晶形について角ピーク位置はわずかに変化し得ることは結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度または湿度の変化、試料の変位または内部標準の存在もしくは非存在に起因して変化し得る。この場合、２θにおいて０．２のピーク位置変動性は、示した結晶形の明確な識別を妨げずにこれらの潜在的変化を考慮に入れる。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位）、典型的により突出したピークの任意の特有の組み合わせに基づいてなされ得る。周囲温度および相対湿度にて収集した結晶形回折パターンは、８．８５３および２６．７７４°２シータにおいてピークを有するＮＢＳ標準参照物質６７５（雲母）に基づいて調節する。
【０１０６】
このように、結晶性遊離塩基の調製した試料は、０．２°の回折角に対する許容度で、以下の表１に記載される回折ピーク（２シータ値）を有するとして、特に２１．５９、１８．５３および１４．９６からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて１７．９７におけるピークを有するとしてＣｕＫａ放射を使用してＸ線回折パターンによって特徴付けられる。
【０１０７】
【表１０】
2016532648.tif 000053
【０１０８】
示差走査熱量計（ＤＳＣ）分析を、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣユニットＱ２０００で実施する。試料を、５０ｍＬ／分の窒素パージで１０℃／分にて２５から３００℃まで圧着アルミニウム皿で加熱する。ＤＳＣ温度を１５６．３〜１５６．９℃で開始してインジウム標準で較正する。この結晶性無水遊離塩基はＤＳＣにより１６４．０６℃にて融点開始を示す。
【０１０９】
実施例２２
２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミド結晶性無水遊離塩基
トリエチルアミン（３０６．１１ｍｇ、０．４２ｍｌ、３．０２ｍｍｏｌ）を、６ｍｌのジメチルホルムアミド中の２−メトキシ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル）エタンスルホンアミド（３２７．１３ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、２−（３−ピリジルオキシ）酢酸（１８５．３０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５８４．５６ｍ、１．８２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて一晩撹拌する。減圧下で濃縮する。メタノール、続いてメタノール中２ＮのＮＨ３で溶出するイオン交換クロマトグラフィーによって予備精製する。後の塩基性画分を濃縮し、ｐＨ９にて水／ＡＣＮ（２５ｍＬ／分にて８分にわたって１５％〜３５％ＡＣＮ）中の２０ｍＭ炭酸アンモニウムの移動相で溶出するＨＰＬＣ（ＸＴｅｒｒａ（登録商標）ＭＳ  Ｃ１８  １９×１００ｍ）によって粗製物質をさらに精製して、標題化合物（１３０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０６（Ｍ＋１）。
【０１１０】
結晶性固体のＸ線回折（ＸＲＤ）パターンを本質的に上記の実施例２１に記載されるものと同様に得る。
【０１１１】
このように、結晶性遊離塩基の調製した試料を、０．２度の回折角に対する許容度で、以下の表２に記載される回折ピーク（２シータ値）を有するとして、特に、１５．７３、１８．９５および１８．２８からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて２４．２１におけるピークを有するとしてＣｕＫａ放射を使用してＸ線回折パターンによって特徴付ける。
【０１１２】
【表１１】
2016532648.tif 000054
【０１１３】
生物学的アッセイ
ＮＡＭＰＴは、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍、黒色腫、前立腺癌、ＮＳＣＬＣおよび他を含む数種類の腫瘍細胞内で過剰発現することが文献に報告されており、その発現は腫瘍進行に関連しているように見える。例えば、Ｂｉ，Ｔ．Ｑ．ら、Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．２６、１２５１−７、２０１１；Ｈｕｆｔｏｎ，Ｓ．Ｅ．ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４６３、７７−８２、１９９９；Ｖａｎ  Ｂｅｉｊｎｕｍ．Ｊ．Ｒ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １０１、１１８−１２７、２００２；Ｗａｎｇ，Ｂ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ３０、９０７−２１、２０１１；Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｔ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．４４、６８５−９０、２００９；Ｗａｎｇ，Ｂ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ３０、９０７−２１、２０１１；Ｏｋｕｍｕｒａ  Ｓら、Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｏｎｃｏｌ．７：４９−５６、２０１２；Ｍａｌｄｉ，Ｅ．ら、Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  ＆  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１２年１０月にオンラインで公開された）；Ｂａｊｒａｍｉ  Ｉら、ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．４：１０８７−９６、２０１２；Ｚｈａｎｇ，ＬＱら、Ｊ  Ｂｉｏａｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄ．３：０１３−０２５、２０１１；Ｗａｔｓｏｎ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９、５８７２−８８、２００９；Ｗｉｅｓｅｒ  Ｖら、Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、３０（５）：５０８−１３．２０１２；ｖａｎ  Ｈｏｒｓｓｅｎ  Ｒら、Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．７０（１２）：２１７５−９０，２０１３．；Ｄｒｅｖｓ  Ｊら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２３：４８５３−４８５８、２００３；Ｚｏｐｐｏｌｉ  Ｇら、Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ．３８（１１）：９７９−８８、２０１０；Ａｌｅｓｋｏｇ  Ａら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ、１２：８２１−８２７、２００１を参照のこと。
【０１１４】
以下のアッセイにより、実施例１から２０、ＮＡＭＰＴの阻害剤がＮＡＭＰＴ触媒活性を阻害することが実証される。また、以下のアッセイの結果により、実施例１から２０は、癌細胞の治療として癌細胞内で標的ＮＡＭＰＴに対してインビトロで細胞活性を有し、これらの化合物はそれらのＮＡＤ＋形成および細胞生存を減少させることが実証される。さらに、本発明の特定の化合物は、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ工程の前およびそのときの解糖中間体の増加ならびにグリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ工程の後の解糖中間体の減少によって示されるように解糖の減衰を導く。解糖の減衰はＡＴＰの枯渇および腫瘍細胞成長の遅延を導く。また、以下のアッセイの結果により、本発明の特定の化合物は、減少したＮＡＤ＋形成によって示されるように腫瘍異種移植片内で標的ＮＡＭＰＴに対してインビボで活性を有することが実証される。さらに、本発明の特定の化合物は異なる腫瘍異種移植片の成長を阻害する。
【０１１５】
ＮＡＭＰＴ生化学アッセイ
このアッセイの目的はＮＡＭＰＴ触媒活性を阻害する化合物の能力を測定することである。１μＭ〜５０ｐＭまたは０．１μＭ〜５ｐＭ（最終）のいずれかからの１０点連続希釈後にｐＨ７．５において５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．００５％ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１．５μＭホスホリボシル−ピロリン酸、０．５μＭニコチンアミド（ＮＡＭ）、１．５ｎＭ  ＮＡＭＰＴ、２．５ｍＭ  ＡＴＰ、１．２５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、４％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯおよび化合物を含有する反応混合物（２５μＬ）を調製する。反応混合物を室温にて２時間インキュベートする。内部標準（最終濃度：５μＭ）としてニコチンアミドモノヌクレオチド−ｄ４（ＮＭＮ−ｄ４）を含有するＡＣＮ（２５μＬ）の添加により反応を開始する。ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）の形成を以下のように液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）法によって定量する。ＮＭＮは、移動相Ａについて０．１％ギ酸および移動相ＢについてＡＣＮを使用して５μＬの注入体積および１ｍＬ／分の流量でＴｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ  Ｊａｖｅｌｉｎカラム（２．１×２０ｍｍ、５μｍ）において分析する。勾配は以下の通りである。０分、０％Ｂ；０．３分、０％Ｂ；１．５分、３５％Ｂ；１．５１分、９５％Ｂ；２．０分、９５％Ｂ、２．０１分、０％Ｂ、３分、停止。陽性対照群（酵素およびＤＭＳＯであるが、化合物なし）を使用して、ＮＭＮ形成の最小阻害（０％）を測定する。化合物処置群の阻害パーセントを最小阻害群に対して算出する。各化合物についての相対ＩＣ５０を用量反応研究から算出し、これは１μＭ〜５０ｐＭ（最終）の上記で開示された範囲を使用してこの時点で５０％阻害を達成するのに必要な濃度である。用量反応研究から生成したデータを、ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ  ４．０  Ｅｑｕａｔｉｏｎ  ２０５を使用して４パラメーターロジスティック式に適合させる。このアッセイの結果により、実施例１から２０がＮＡＭＰＴ触媒活性を阻害すること、すなわちこれらの実施例の化合物が１６．７ｎＭ以下のＩＣ５０でＮＡＭＰＴを阻害することが実証される。例えば、実施例１および実施例２はそれぞれ、３．１および１．１ｎＭのＩＣ５０値を有する。
【０１１６】
Ａ２７８０細胞内のＮＡＤ＋／ＮＭＮレベルについてのアッセイ
このアッセイの目的は、Ａ２７８０腫瘍細胞内のＮＡＤ＋／ＮＭＮの生合成に必要なＮＡＭＰＴ活性を阻害する化合物の能力を実証することである。Ａ２７８０（ＮＣＩ−ＤＣＴＤ腫瘍リポジトリ）腫瘍細胞、卵巣癌細胞株を、１０％ＦＢＳを補足したＲＰＭＩ  １６４０（ＳＨ３０２５５．０１、Ｈｙｃｌｏｎｅ）中で培養する。細胞を９６ウェル培養プレート（８×１０４細胞／ウェル）内に播種し、５％ＣＯ２中で３７℃にて４時間インキュベートし、次いで本発明の化合物（各化合物の有効性に依存して１μＭ〜０．００２μＭまたは１０ｎＭ〜０．０２ｎＭ）で２４時間処理する。ＦＫ８６６（１００ｎＭ）も最大阻害（１００％）についての陽性対照として含まれる。各化合物をこのアッセイにおいて１〜４回試験する。
【０１１７】
細胞内のＮＡＤ＋／ＮＭＮレベルを評価するために、上記に参照した９６ウェルプレート中で成長したＡ２７８０細胞をＲＩＰＡ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）で溶解し、続いて５０μＬの０．２Ｎ  ＨＣｌを添加する。得られた細胞溶解物を６０℃にて１０分間インキュベートし、５０μＬの０．２Ｎ  ＮａＯＨで中和する。２０００×ｇで１５分間の遠心分離後、上清（５０μＬ）を収集する。ＮＡＤ＋／ＮＭＮアッセイは改変されてＰｕｔｔおよびＨｅｒｇｅｎｒｏｔｈｅｒ（Ｐｕｔｔ，Ｋ．ＳおよびＨｅｒｇｅｎｒｏｔｈｅｒ，Ｐ．Ｊ．、Ａｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ−１（ＰＡＲＰ−１）  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＡＤ＋：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００４、３２６、７８−８６）に記載されている。得られた溶解物を２０μＬの０．２Ｎ  ＫＯＨおよび２０μＬの２０％アセトフェノンと混合し、９０℃で１０分間インキュベートし、続いて９０μＬのギ酸を添加する。９０℃で１０分間のインキュベーション後、ＰｕｔｔおよびＨｅｒｇｅｎｒｏｔｈｅｒ（２００４）に記載されるように、得られた沈殿物をそれぞれ３６０および４５０ｎｍの励起および発光波長においてそれらの蛍光について測定する。このアッセイにより、実施例１から２０が、１９５ｎＭ以下のＩＣ５０値でＡ２７８０腫瘍細胞内でＮＡＭＰＴにより媒介されるＮＡＤ＋／ＮＭＮ形成を阻害することが実証される。例えば、実施例１および実施例２はそれぞれ、２．６±１．４ｎＭ（ＳＤ、ｎ＝５）および５．７ｎＭ±３．３（ＳＤ、ｎ＝４）の平均ＩＣ５０値を有する。
【０１１８】
細胞増殖アッセイ±ＮＡ（ニコチン酸）
このアッセイの目的は、インビトロでＮＡ（１０μＭ）の存在下または非存在下でＮＡＭＰＴ媒介性ＮＡＤ＋形成に依存する子宮内膜、腎臓、副腎および自律神経節の癌細胞株の増殖を阻害する化合物の能力を測定することである。アッセイの化合物処理部分の計画した開始の前日に、アッセイの準備をした凍結細胞の１つのバイアルを解凍し、３７℃にて５％ＣＯ２下で表３に示されるように細胞を培地中で一晩成長させる。次いで、細胞層を０．２５％（ｗ／ｖ）トリプシン−０．０３８％（ｗ／ｖ）ＥＤＴＡ溶液で手短にすすぎ、続いて３．０ｍｌのトリプシン−ＥＤＴＡ溶液を加える。一旦、細胞層を分散させ、８．０ｍｌの完全成長培地（表３）を加え、細胞を穏やかなピペット操作により吸引する。細胞懸濁液を遠心分離管に移し、８００〜１０００ｒｐｍにて３〜５分間遠心分離する。真空ポンプを使用して上清を捨てる。細胞ペレットを穏やかなピペット操作により完全培地中に懸濁する。細胞膜を計数し、適切な密度に調節する（表３）。４８、９６および１２０時間、試験する細胞株について、１００μＬの細胞懸濁液を９６ウェルプレート（白壁の透明底）において各ウェルに加える。１４４時間、試験する細胞株について、２００μＬの細胞懸濁液を加える。プレートを３７℃にて一晩インキュベートする。翌日、別のプレートに、化合物（２．０μＭ〜０．０００１μＭ）についての１０点化合物希釈系列（各々３倍）を、１０μＭ  ＮＡ（最終）を有さないかまたは有する０．５％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）を含有する成長培地中で調製する。次いで、１０点連続希釈後、０．５μＬまたは１Ｌの化合物を、１００または２００μＬの細胞懸濁液を含有する各ウェルに加える。細胞プレートを覆い、３７℃にて４８、９６、１２０または１４４時間インキュベートする。インキュベーション後、細胞プレートを約３０分間、室温に平衡化する。アッセイの前に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を解凍し、室温に平衡化する。凍結乾燥したＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）も室温に平衡化する。凍結乾燥した酵素／基質混合物を再構成するために、適切な体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ基質を含有する琥珀色のボトルに移し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を形成する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（１００μｌ）を細胞プレートに加える。プレートをオービタルシェーカーで２分間振盪して、細胞溶解を誘導し、次いで室温にて１０分間インキュベートする。各プレートの底には裏が白いシールを貼り、以下の設定（５００ｍｓの発光および積分時間でＦｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ３を使用して発光）を記録する。
【０１１９】
このアッセイにより、実施例１が、インビトロでＮＡの存在下または非存在下で多くの腎臓、子宮内膜、副腎および自律神経節の癌細胞株の増殖を阻害することが実証される。またこのアッセイにより、試験される癌細胞株のいくつかに対する実施例１の抗増殖活性が、２．０μＭ超のＩＣ５０値の増加によって示されるように、成長培地への１０μＭ  ＮＡの添加により回復または反転することが実証され、実施例１は細胞内でＮＡＭＰＴを特異的に阻害するのに対して、試験される多くの他の癌細胞株に対する実施例１の抗増殖活性は、比較的変化していないＩＣ５０値によって示されるように、成長培地への１０μＭ  ＮＡの添加により回復または反転しないことを示す。したがって、このアッセイはさらに、癌細胞株を表す癌の種類のかなりの部分がＮＡＰＲＴを発現しないか、非常に低いレベルのＮＡＰＲＴを発現することを実証する。
【０１２０】
【表１２】
2016532648.tif 000055
【０１２１】
【表１３】
2016532648.tif 000056
【０１２２】
Ａ２７８０増殖アッセイ±ＮＡＭ（ニコチンアミド）
このアッセイの目的は、インビトロでより高い濃度のＮＡＭ（１０ｍＭ）の存在下または非存在下でＮＡＭＰＴ媒介性ＮＡＤ＋形成に依存するＡ２７８０細胞（ＮＣＩ−ＤＣＴＤ腫瘍リポジトリ）の増殖を阻害する化合物の能力を測定することである。Ａ２７８０細胞増殖アッセイはアッセイの準備をした凍結細胞を使用する。アッセイの準備をした凍結Ａ２７８０細胞を調製するために、Ａ２７８０細胞、卵巣癌細胞株を、Ｔ−１５０フラスコ中に１０％ＦＢＳを補足したＲＰＭＩ  １６４０（Ｇｉｂｃｏ  ３０−２００１）を含有する成長培地中で３〜４日間培養する。次いで細胞を４ｍＬの０．２５％（ｖ／ｖ）トリプシンで１分間処理する（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＳＨ３００４２）。次いでトリプシン処理した細胞を１０ｍＬの成長培地で希釈し、細胞スラリーを穏やかに混合し、次いで遠心分離管にデカントする。細胞を計数し、次いで１４００ｒｐｍにて５分間遠心分離によってペレット化する。遠心分離後、上清を除去し、細胞ペレットを、２〜５×１０６細胞／ｍＬにてＧＩＢＣＯ（登録商標）ＲＥＣＯＶＥＲＹ（商標）Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １２６４８−０１０）中に再懸濁し、次いでクライオバイアル（ｃｒｙｏｖｉａｌ）中に１ｍＬ体積にてアリコートする。クライオバイアルを最初、−８０℃にて１６時間保存し、次いで長期保存のために液体窒素に移す。
【０１２３】
アッセイの化合物処理部分の計画した開始の前日に、アッセイの準備をした凍結細胞の１つのバイアルを解凍し、細胞を５０ｍＬの成長培地で洗浄する。細胞を計数し、次いで２．８×１０４細胞／ｍＬに希釈し、次いで２５００細胞／ウェル（９０μＬ／ウェル）の割合でＢＤポリ−Ｄ−リシン、９６ウェルブラックプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｃｏａｔ  ３５−４６４０）に播種する。次いでプレートを覆い、３７℃にて５％ＣＯ２下で一晩インキュベートする。翌日、別のプレート（Ｖ底Ｎｕｎｃ  ２４９９４６）に、各化合物について１０点化合物希釈系列を、１００ｍＭ  ＮＡＭ（１０ｍＭ最終）を有するかまたは有さない２％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ、０．２％最終）を含有する成長培地中に調製する。次いで２または０．１μＭ（各化合物の有効性に依存する）から５０ｐＭまたは５ｐＭ（最終）のいずれかからの１０点連続希釈後の１０μＬの化合物を細胞プレートのウェルに加える。細胞プレートを覆い、３７℃にて５％ＣＯ２下で７２時間インキュベートする。
【０１２４】
生存評価の日に、ＧＦ−ＡＦＣ基質（ＣＥＬＬ  ＴＩＴＥＲ−ＦＬＵＯＲ（商標）Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ６０８１）の１つのバイアルをボルテックスし、基質を解凍したＣＥＬＬ  ＴＩＴＥＲ−ＦＬＵＯＲ（商標）アッセイ緩衝液の１つのバイアルに移す。次いで得られたＣＥＬＬ  ＴＩＴＥＲ−ＦＬＵＯＲ（商標）試薬を、基質を完全に溶解するように十分にボルテックスする。次いでＣＥＬＬ  ＴＩＴＥＲ−ＦＬＵＯＲ（商標）試薬を成長培地中で希釈し（１：２）、５０μＬの希釈したＣＥＬＬ  ＴＩＴＥＲ−ＦＬＵＯＲ（商標）試薬を細胞プレートの各ウェルに加える。細胞プレートを覆い、３７℃にて５％ＣＯ２下で１〜３時間インキュベートする。最後に、細胞プレートをインキュベータから除去し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｌｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、λｅｘ３５５／λｅｍ４９５）でウェル蛍光を測定する。化合物処理したウェルからの蛍光を、細胞なしおよび化合物なし処理対照ウェルと比較して阻害パーセントを算出する。阻害パーセントおよび１０点化合物濃度データを、ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ  ４．０  Ｅｑｕａｔｉｏｎ  ２０５を使用して４パラメーターロジスティック式に適合する。このアッセイにおいて各化合物を２〜４回試験する。このアッセイにより、実施例１から２０は、６７７ｎＭ以下のＩＣ５０値でインビトロでＮＡＭの非存在下でＡ２７８０細胞の増殖を阻害することが実証される。例えば、実施例１および実施例２はそれぞれ、１１．８±３．０ｎＭ（ＳＤ、ｎ＝４）および３４．３±１４．４ｎＭ（ＳＤ、ｎ＝３）のＩＣ５０を有する。Ａ２７８０癌細胞に対する実施例１および実施例２の抗増殖活性は、０．１μＭ超の増加したＩＣ５０値によって示されるように、成長培地への１０ｍＭニコチンアミドの添加により回復または反転し、実施例１および実施例２は細胞内でＮＡＭＰＴを特異的に阻害することを示す。
【０１２５】
細胞生存アッセイ
このアッセイの目的は、インビトロでＮＡＭＰＴ媒介性ＮＡＤ形成に依存する異なる癌細胞の生存率を減少させる化合物の能力を測定することである。ＨＣＣ１９３７（乳癌）細胞を、１０％ＦＢＳを補足したＲＰＭＩ−１６４０中で培養する。Ｃａｌｕ−６（肺癌）細胞およびＭＣＦ−７（乳癌）細胞を、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ  １１３６０）、１％非必須アミノ酸溶液（１００Ｘ；Ｇｉｂｃｏ  １１１４０）および１０％ＦＢＳを補足した最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ１１０９５）中で培養する。ＮＣＩ−Ｈ１１５５（肺癌）細胞を、１０％ＦＢＳを有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ  １１９６５）中で培養する。細胞（接着細胞について２０００／ウェルおよび懸濁細胞について１００００／ウェル）を９６ウェルプレートに播種し、一晩（約１８時間）培養し、本発明の化合物（１．０００μＭ〜０．０５１ｎＭの濃度にてＤＭＳＯ中で製剤化した）を用いて２〜３回反復して７２時間処理する。また、細胞を陽性対照としてスタウロスポリン（１０μＭ）および陰性対照として０．１％ＤＭＳＯで処理する。以下のように製造業者の指示書に従ってアッセイキット（ＣＹＴＯＴＯＸ−ＧＬＯ（商標）細胞傷害性アッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することによって細胞生存率を分析する。５０μＬのＣＹＴＯＴＯＸ−ＧＬＯ（商標）細胞傷害性アッセイ試薬を各ウェルに加える。オービタルシェーカーによって手短にプレートを混合する。プレートを室温にて１５分間インキュベートする。Ｗａｌｌａｃ  Ｖｉｃｔｏｒ３Ｖ  １４２０  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して発光（死細胞発光と称される）を測定する。５０μＬの溶解試薬を各ウェルに加え、プレートをオービタルシェーカーによって手短に混合する。プレートを室温にて１５分間インキュベートした後、プレートリーダーを使用して発光（総発光と称される）を測定する。生存細胞発光（ＣＰＳ）を総発光から死細胞発光を引くことによって算出する。細胞生存の阻害を以下の式に基づいて算出する。
阻害（％）＝（ＣＰＳ陰性−ＣＰＳ試料）／（ＣＰＳ陰性−ＣＰＳ陽性）＊１００
式中、ＣＰＳは生存細胞の発光である。
【０１２６】
【表１４】
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【０１２７】
このアッセイにより、実施例１および実施例２が、ＮＣＩ−Ｈ１１５５、Ｃａｌｕ−６、ＨＣＣ１９３７およびＭＣＦ−７細胞株において細胞死を誘導することが実証される。
【０１２８】
Ａ２７８０癌細胞におけるＮＡＤ＋および炭水化物代謝のＬＣ−ＭＳ分析
このアッセイの目的は、癌細胞におけるＮＡＤ＋形成に対するＮＡＭＰＴ阻害剤の効果を測定することである。ＮＡＤ＋代謝産物：ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＨＭＮ）、ＮＡＤ＋、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）およびニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）のＬＣ−ＭＳ分析を、選択された反応モニタリング検出を用いてポジティブ加熱型エレクトロスプレーモードにおいて作動するＴｈｅｒｍｏ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｕｌｔｒａ三連四重極質量分析計に接続したＨＰＬＣシステムで実施する。細胞抽出物について、５０μＬの抽出物および１０μＬの１０μＭの内部標準（ＩＳ）溶液を９６ウェルプレートに移し、窒素下で乾燥させ、５０μＬの水で再構成する。組織抽出物について、２０μＬの抽出物および１０μＬのＩＳ溶液を乾燥させ、５０μＬの水で再構成する。ＩＳ溶液は、メタノール中に１０μＭニコチンアミド−ｄ４（Ｃ／Ｄ／Ｎアイソトープ）、ニコチン酸−ｄ４（Ｃ／Ｄ／Ｎアイソトープ）、ニコチンアミドモノヌクレオチド−ｄ４（カスタム合成によって調製した）およびニコチンアミド１，Ｎ６−エテノアデニンジヌクレオチドを含有する。代謝産物は、移動相Ａについて９５％アセトニトリル中の１０ｍＭ酢酸アンモニウムおよび移動相Ｂについて５０％アセトニトリル中の１０ｍＭ酢酸アンモニウムを使用して１０μＬの注入体積および１ｍＬ／分の流速でＷａｔｅｒｓ  ＸＢＲＩＤＧＥ（商標）Ａｍｉｄｅ（２．１×５０ｍｍ、３μｍ）で分離する。勾配は以下の通りである。０分、０％Ｂ；２．５分、７０％Ｂ；２．５１分、１００％Ｂ；２．８分、１００％Ｂ；２．８１分、０％Ｂ、３．６分、０％Ｂ。
【０１２９】
このアッセイの目的は、腫瘍細胞における解糖、ＴＣＡサイクルおよびペントースリン酸経路に由来する、ヘキソースリン酸（ＨＰ）と総称されるグルコース−６−リン酸／フルクトース−６−リン酸／フルクトース−１−リン酸、フルクトース−１，６−ビスホスフェート（ＦＢＰ）、グリセルアルデヒド−３−リン酸（Ｇ３Ｐ）、ジヒドロキシアセトンリン酸（ＤＨＡＰ）、３−ホスホグリセリン酸（３ＰＧ）、２−ホスホグリセリン酸（２ＰＧ）、ホスホエノイルピルビン酸（ＰＥＰ）、グルコネート−６−リン酸（ＧＮ６Ｐ）、キシルロース−５−リン酸（Ｘ５Ｐ）、リブロース−５−リン酸（Ｒｕ５Ｐ）、リボース−５−リン酸（Ｒ５Ｐ）、セドヘプツロースリン酸（ＳＰ）と総称されるセドヘプツロース−７−リン酸／セドヘプツロース−１−リン酸、エリトロース−４−リン酸（Ｅ４Ｐ）およびα−ケトグルタル酸（α−ＫＧ）などの代謝産物のレベルに対するＮＡＭＰＴ阻害剤の効果を測定することである。細胞（５０，０００／ウェル）を、１０％ＦＢＳ（透析した）および２５ｍＭグルコースを補足した１００μＬのダルベッコ改変イーグル培地中で上記のように成長させ、１０μＭニコチン酸の存在下または非存在下で化合物を３連で処理する。処理の２４時間後、成長培地を取り除き、２００μＬの８０％メタノールを各ウェルに加える。室温にて１５分間のインキュベーション後、得られた抽出物を９６−ディープウェルプレートに移し、２００μＬの８０％メタノール／水で２回洗浄する。次いで、プレートをヒートシールし、−８０℃にて保存するか、または乾燥させ、１００μＬの２５μＭエチレンジアミン四酢酸中で再構成し、分析のためにＬＣ−ＭＳに注入する。
【０１３０】
炭水化物代謝産物についてのＬＣ−ＭＳ分析を以下のように実施する。クロマトグラフ分離を、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ三連四重極ＬＣ−ＭＳ質量分析計に接続したＨＰＬＣシステムを用いて実施する。リン酸による分析を以下のように実施する。試料を乾燥させ、ＡＣＮ／水溶液中で再構成し、Ｙｕａｎら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２０１２、１７、８７２−８８１）に記載される条件下でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＬｕｎａアミノＨＰＬＣカラム（２．１×３０ｍｍ  ３μｍ）で分離する。質量分析計はネガティブＥＳＩ  ＭＲＭモード下で作動する。
【０１３１】
このアッセイにより、本発明の特定の化合物はＮＡＤ形成を阻害することが実証される。例えば、実施例１はＮＡＤ形成の用量依存的阻害を実証する。特定の化合物、例えば実施例１によって実証されるＮＡＤ枯渇は、Ｇ３Ｐデヒドロゲナーゼ段階の前およびそのときの解糖中間体（ＨＰ、ＦＢＰおよびＤＨＡＰ／Ｇ３Ｐ）の用量依存的増加、ならびにＧ３Ｐデヒドロゲナーゼ段階の後の中間体（ＰＥＰおよびＰＧ）の用量依存的減少によって示されるようにＧ３Ｐデヒドロゲナーゼ段階において解糖の減衰を導く。続いて、特定の化合物、例えば実施例１によって実証される解糖の減衰により、例えばＳＰを含む重要な中間体が増加するので、ペントースリン酸経路などの他の代謝経路の撹乱を生じる。
【０１３２】
【表１５】
2016532648.tif 000058
【０１３３】
【表１６】
2016532648.tif 000059
【０１３４】
ＩＶＴＩアッセイ
このアッセイの目的は、動物モデルにおける腫瘍内のＮＡＭＰＴ媒介性ＮＡＤ＋形成を阻害する試験化合物の能力を測定することである。Ａ２７８０細胞（ＡＴＣＣ）を、ＮＡＤ＋アッセイ（Ａ２７８０細胞におけるＮＡＤ＋／ＮＭＮレベルについてのアッセイ）について上記されているように増殖させる。細胞（５×１０６／動物）をＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）（１：１）と混合し、マウス（メスのヌードマウス、Ｈａｒｌａｎ）のひ腹の皮下に移植する。移植した腫瘍細胞は固形腫瘍として成長する。腫瘍体積および体重を、カリパスを用いて１週間に２回測定する。腫瘍体積が約３００〜５００ｍｍ３に到達した後、動物を無作為化し、陽性対照（本明細書に記載される、５匹の動物／群）および化合物処置群（５匹の動物／群）に分類する。化合物（２０％のＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）および２５ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ２中で製剤化した）および陽性対照（２０％のＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）および２５ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ２）を経口強制投与により投与する。化合物用量は０．１０〜２５ｍｇ／ｋｇの範囲である。マウスを単回投与の１７時間後または２回目の投与の７時間後（１回目の投与の１９時間後）に屠殺する。腫瘍組織を収集し、以下に記載されるように均質化する。腫瘍組織（各々約１００ｍｇ）をドライアイス上の管（Ｌｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｄ  ｔｕｂｅ、ＭＰＢｉｏ＃６９１３−１００）に入れ、Ｂｉｏ１０１  ＦａｓｔＰｒｅｐ  ＦＰ１２０ホモジナイザー（設定５）を使用して抽出緩衝液（各々０．８ｍＬ）（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ、カタログ番号Ｋ３３７−１００−１）中で４５秒間（３×１５秒）均質化する。得られた沈殿物（各々０．５ｍＬ）を濾過し（１０Ｋカットオフフィルタを用いる）、赤色が吸光度を妨げるのでヘモグロビンを取り除く。製造業者の指示書（９５００ＲＰＭ  Ｘ  ４０分、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って、得られた沈殿物を遠心分離する。フロースローを収集し、それらをアッセイするまで−８０℃にて保存する。９６ウェルプレートにおいて、収集した試料（各々約３１μＬ）を抽出緩衝液（各々約２４９μＬ）（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、カタログ番号３３７−１００−１）中で約２８０μＬの最終体積に希釈する（１：８）。得られた製剤（各々約１４０μＬ）を別の９６ウェルプレートに移し、それを３０分間６０℃で加熱する。プレートを約４〜１０分間室温に冷やし、次いで手短に遠心分離する。ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ循環アッセイキット（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、カタログ番号３３７−１００−１）を使用してＮＡＤ＋定量を実施する。陽性対照（ビヒクル群）を使用して、ＮＡＤ＋形成の最小阻害（０％）を測定する。化合物処置群の阻害パーセントを最小阻害群に対して算出する。ＴＥＤ５０を用量反応研究から算出し、これはこの時点で５０％阻害を達成するのに必要な用量である。このアッセイにより、動物モデルにおける腫瘍内のＮＡＭＰＴ媒介性ＮＡＤ＋形成を阻害する試験化合物の能力が実証される。例えば、実施例１は、２回の投薬後、２．５６±０．３７ｍｇ／ｋｇ（ＳＥ）のＴＥＤ５０値を有する。
【０１３５】
Ａ２７８０およびＮＣＩ−Ｈ１１５５腫瘍異種移植片におけるＮＡＤ＋のＬＣ−ＭＳ分析
このアッセイの目的は、上記されているようにインビボでＮＡＤ＋レベルに対するＮＡＭＰＴ阻害剤の効果を測定することである。腫瘍を成長させ、以下の異種移植片腫瘍モデル（７匹の動物／群）において有効性について以下に記載されるように試験する。また、各化合物は以下の異種移植片腫瘍モデルにおける有効性について記載されているように製剤化する。ビヒクルは化合物を有さない２０％のＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）および２５ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ２である。処置の完了後、腫瘍組織（各々約５０ｍｇ）を、氷冷抽出緩衝液（１ｍＬのＨＰＬＣグレード７０％メタノール／水、組織ライザー（ｔｉｓｓｕｅ  ｌｙｓｅｒ）ＩＩ（ＱＩＡＧＥＮ（商標））において、周波数３０Ｈｚにて２分間）中で均質化する。得られた製剤を１４０００×ｇにて６分間遠心分離する。上清画分（各々５００μＬ）を収集し、クロロホルム（０．５ｍＬ）で抽出する。水性画分（各々０．３ｍＬ）をＬＣ−ＭＳ分析について用意した９６ウェルプレート内に収集する。ＮＡＤ＋代謝産物のＬＣ−ＭＳ分析を上記のように実施する。
【０１３６】
このアッセイにより、本発明の特定の化合物が、腫瘍異種移植片においてＮＡＤ＋形成を阻害することが実証される。また、このアッセイにより、実施例１および実施例２が、腫瘍内のＮＡＤ＋レベルを減少させるので、癌細胞のインビトロだけではなく、腫瘍のインビボでも標的ＮＡＭＰＴを阻害することが実証される。
【０１３７】
【表１７】
2016532648.tif 000060
【０１３８】
【表１８】
2016532648.tif 000061
【０１３９】
異種移植片腫瘍モデルにおける有効性
このアッセイの目的は、試験化合物投与に反応する腫瘍体積の減少を測定することである。Ａ２７８０およびＮＣＩ−Ｈ１１５５（ＮＳＣＬＣ）細胞をＩＶＴＩ研究について上記されているように成長させる。細胞を収集し、ヌードマウスのひ腹に皮下注射する。腫瘍が確立すると（移植から７〜２１日後）、動物を無作為化し、対照および試験群（７匹の動物／群）に分ける。試験化合物を、２０％のＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）および２５ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ２で製剤化する。試験化合物およびビヒクル（化合物を有さない２０％のＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）および２５ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ２）を強制経口投与により投与する。腫瘍反応を、処置過程の間、１週間に２回実施する腫瘍体積測定（カリパス）によって決定し、ビヒクル対照群の腫瘍体積で割られる各処置群の腫瘍体積のパーセントとして報告する。実施例１および実施例２は、Ａ２７８０およびＮＣＩ−Ｈ１１５５異種移植片腫瘍モデルにおいて用量依存性抗腫瘍活性を実証する。例えば、Ｈ１１５５腫瘍モデルにおいて実施例１は、１７日間で４日間投薬（４−ｄａｙ−ｏｎ）および３日間休薬（３−ｄａｙ−ｏｆｆ）のスケジュールで１０ｍｇ／ｋｇ（１日２回（ＢＩＤ）にて投与した場合、５．５のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００１）を達成し、同じスケジュールで２０ｍｇ／ｋｇにて投与した場合、−８１．１のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００１）を達成する。Ｈ１１５５腫瘍モデルにおいて実施例２は、１７日間で４日間投薬および３日間休薬のスケジュールで８ｍｇ／ｋｇ（１日２回（ＢＩＤ）にて投与した場合、５．２のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００１）を達成し；同じスケジュールで１６ｍｇ／ｋｇで投与した場合、−８２．７のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００１）を達成する。Ａ２７８０腫瘍モデルにおいて実施例１は、１７日間で４日間投薬および３日間休薬のスケジュールで１０ｍｇ／ｋｇ（１日に２回（ＢＩＤ）にて投与した場合、４１．７のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００７）を達成し、同じスケジュールで２０ｍｇ／ｋｇにて投与した場合、２．４のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００１）を達成する。Ａ２７８０腫瘍モデルにおいて実施例２は、１７日間で４日間投薬および３日間休薬のスケジュールで８ｍｇ／ｋｇ（１日に２回（ＢＩＤ）にて投与した場合、４０．５のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．０６３）を達成し、同じスケジュールで１６ｍｇ／ｋｇにて投与した場合、１．５のＴ／Ｃ（Ｔ検定に基づいてＰ値＜０．００１）を達成する。このデータにより、実施例１および実施例２がこの腫瘍モデルにおいて腫瘍異種移植片成長を阻害することが実証される。
【０１４０】
本発明の化合物は好ましくは、種々の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。より好ましくは、このような組成物は経口または静脈内投与用である。このような医薬組成物およびそれを調製するプロセスは当該分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ｄ．Ｔｒｏｙら、ｅｄｓ、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００５）を参照のこと。さらにより好ましくは、例えば、医薬組成物は、純粋中のヒドロキシエチルセルロース１％／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０  ０．２５％／消泡剤０．０５％と共に本発明の化合物または塩を含む。最も好ましくは、ヒドロキシエチルセルロースはＮａｔｒｏｓｏｌ（登録商標）２５０Ｌ  Ｐｈａｒｍであり、消泡剤はＤＯＷ  ＣＯＲＮＩＮＧ（登録商標）ＡＮＴＩＦＯＡＭ  １５１０−ＵＳである。任意に、組成物はニコチン酸をさらに含む。
【０１４１】
本発明の化合物は概して広範囲の投薬範囲にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬は、通常、約１〜１０００ｍｇの日用量の範囲内である。好ましくは、このような用量は２５〜４００ｍｇの日用量の範囲内である。より好ましくは、このような用量は１００〜１２０ｍｇの日用量の範囲内である。さらに、必要な場合、ニコチン酸、例えばＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）（ニコチン酸を持続放出する）の１日当たりの投薬量は、通常、約５０〜２０００ｍｇ／日の範囲内である。いくつかの場合、上述の範囲の下限値未満の投薬レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに多い用量が利用されてもよく、したがって上記の投薬量範囲は本発明の範囲を限定するものと決して意図されない。実際に投与される化合物の量は、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（複数も含む）、個々の患者の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況を考慮して医師により決定されることは理解される。
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月6日(2016.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
2016532648.tif 000063
（式中、
Ｒ１は、−ＮＨＳＯ２Ｒ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３、−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、または−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、
Ｒ２は、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、Ｎ−オキセタン−３−イル−ピペリジン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−Ｎ−カルボニル−ピペリジン−４−イル、２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパ−１−イル、メトキシエチル、２−イソプロポキシエチル、２−トリフルオロメチルエチル、シクロプロピルメチル、またはピリド−２−イルであり、
Ｒ３は、テトラヒドロピラン−２−イル、ｔ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ３）（ＯＨ）、−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、または−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＦ３）であり、
Ｒ４は、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−メチル、モルホリン−４−イル−メチル、または２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミドである請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミドである請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項６】
ニコチン酸をさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
療法に使用するための請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項８】
癌の治療に使用するための請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項９】
前記癌が、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、および自律神経節癌を含む群から選択される、請求項８に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１０】
前記癌が卵巣癌である、請求項９に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１１】
前記癌がＮＳＣＬＣである、請求項９に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１２】
前記癌がリンパ腫である、請求項９に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１３】
前記化合物または塩が、ニコチン酸と組み合わせて同時、別個または連続投与される、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の使用のための化合物または塩。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
本発明の化合物は概して広範囲の投薬範囲にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬は、通常、約１〜１０００ｍｇの日用量の範囲内である。好ましくは、このような用量は２５〜４００ｍｇの日用量の範囲内である。より好ましくは、このような用量は１００〜１２０ｍｇの日用量の範囲内である。さらに、必要な場合、ニコチン酸、例えばＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）（ニコチン酸を持続放出する）の１日当たりの投薬量は、通常、約５０〜２０００ｍｇ／日の範囲内である。いくつかの場合、上述の範囲の下限値未満の投薬レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに多い用量が利用されてもよく、したがって上記の投薬量範囲は本発明の範囲を限定するものと決して意図されない。実際に投与される化合物の量は、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（複数も含む）、個々の患者の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況を考慮して医師により決定されることは理解される。
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
以下の式の化合物：
【化４２】
2016532648.tif 000064

（式中、
Ｒ１は、−ＮＨＳＯ２Ｒ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｒ３、−ＣＨ２−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、または−ＣＨ（ＣＨ３）−ピペラジニル−Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、
Ｒ２は、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、Ｎ−オキセタン−３−イル−ピペリジン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−Ｎ−カルボニル−ピペリジン−４−イル、２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパ−１−イル、メトキシエチル、２−イソプロポキシエチル、２−トリフルオロメチルエチル、シクロプロピルメチル、またはピリド−２−イルであり、
Ｒ３は、テトラヒドロピラン−２−イル、ｔ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ３）（ＯＨ）、−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、または−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）（ＣＦ３）であり、
Ｒ４は、テトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロピラン−４−イル−メチル、モルホリン−４−イル−メチル、または２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
[２]
Ｒ１が−ＮＨＳＯ２Ｒ２である、[１]に記載の化合物。
[３]
２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］プロパン−１−スルホンアミドである[１]に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
[４]
２−メトキシ−Ｎ−［２−［２−（３−ピリジルオキシ）アセチル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−６−イル］エタンスルホンアミドである[１]に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
[５]
[１]〜[４]のいずれかに記載の化合物または塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
[６]
ニコチン酸をさらに含む、[５]に記載の医薬組成物。
[７]
哺乳動物における癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、[１]〜[４]のいずれかに記載の化合物または塩の有効量を投与する工程を含み、前記癌が、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、および自律神経節癌を含む群から選択される、方法。
[８]
前記癌が卵巣癌である、[７]に記載の方法。
[９]
前記癌がＮＳＣＬＣである、[７]に記載の方法。
[１０]
前記癌がリンパ腫である、[７]に記載の方法。
[１１]
前記化合物または前記塩が、ニコチン酸と組み合わせて同時、別個または連続投与される、[８]〜[１０]のいずれかに記載の方法。
[１２]
療法に使用するための[１]〜[４]のいずれかに記載の化合物または塩。
[１３]
癌の治療に使用するための[１]〜[４]のいずれかに記載の化合物または塩。
[１４]
前記癌が、乳癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、脳腫瘍、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、肉腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、白血病、リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、および自律神経節癌を含む群から選択される、[１３]に記載の使用のための化合物または塩。
[１５]
前記癌が卵巣癌である、[１４]に記載の使用のための化合物または塩。
[１６]
前記癌がＮＳＣＬＣである、[１４]に記載の使用のための化合物または塩。
[１７]
前記癌がリンパ腫である、[１４]に記載の使用のための化合物または塩。
[１８]
前記化合物または塩が、ニコチン酸と組み合わせて同時、別個または連続投与される、[１３]〜[１７]のいずれかに記載の使用のための化合物または塩。
【国際調査報告】
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