(57)【要約】  栽培化されていない、即ち、熱帯、特にドミニカ共和国で成長するクリオロ種のアボカドを使用して、ヒト及び下級動物、特にペット、例えば、イヌ及びネコによって経口摂取される栄養組成物を調製する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マンノヘプツロース、ペルセイトール、及びこれらの混合物からなる群から選択される物質を食用の食品組成物成分に供給する方法において、前記食品組成物成分が、タンパク質、脂肪、炭水化物、及びこれらの混合物からなる群から選択されるアボカドに由来しない物質を含み、前記方法が、前記マンノヘプツロース、ペルセイトール、又はこれらの混合物を含むクリオロアボカド由来成分を前記食品組成物成分と組み合わせるステップによることを特徴とする、方法。
【請求項２】
クリオロが、西インド諸島系クリオロアボカド、西インド諸島系／グアテマラ系ハイブリッドクリオロアボカド、及びこれらの混合物からなる群から選択されるクリオロアボカドであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記クリオロアボカドが、ドミニカ共和国で成長することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記クリオロアボカドが、早期収穫クリオロアボカドであることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記クリオロアボカド由来成分が、クリオロアボカド果肉と、アボカドの種、アボカドの皮、又は種と皮との両方から選択されるものとを含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記クリオロアボカド由来成分が、前記マンノヘプツロース及び任意選択的にペルセイトールを含む水性抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記食品組成物成分が動物タンパク質であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記食品組成物成分が、デンプン源に由来する植物炭水化物であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記食品組成物成分が、オメガ−３脂肪酸部分を含む非アボカド脂肪であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記タンパク質、炭水化物、脂肪、任意選択のビタミン及びミネラルの栄養学的にバランスの取れた混合物、並びに動物でのカロリー制限の効果を模倣するのに十分な有効量のマンノヘプツロースを供給する一定量のクリオロアボカド由来成分を含むことを特徴とする、請求項１に記載の動物用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
栽培化されていない、即ち、熱帯、特にドミニカ共和国で成長するクリオロ種（ｃｒｉｏｌｌｏ−ｔｙｐｅ）のアボカドを使用して、ヒト及び下級動物、特にペット、例えば、イヌ及びネコによって経口摂取される栄養組成物を調製する。
【背景技術】
【０００２】
６０年を超える研究により、カロリー制限が、動物の寿命を確実に延ばす栄養学的介入を構成することが示された。ペットフード組成物は、炭水化物代謝の特定の性状をブロック又は阻害し、従って、カロリー制限の効果を模倣し得る特定の物質、例えば、マンノヘプツロースを含むことが報告されている。本発明は、クリオロアボカド（ｃｒｉｏｌｌｏ  ａｖｏｃａｄｏ）が、マンノヘプツロース及び他の所望の物質、例えば、Ｃ７糖アルコール、ペルセイトール、及び様々なＣ６糖の予想外に豊富な供給源であることが見出されたことに基づいている。
【０００３】
マンノヘプツロースは、合成により生成しても良く、又は天然植物源、特にアボカドから抽出しても良い。食品組成物、特にイヌ及びネコ用のペットフードの製造者は、顧客が、このような組成物に天然由来原料を好むことを十分に承知している。従って、天然由来のマンノヘプツロースは、食品用途に好ましい。
【０００４】
経済的に実行可能な方法で大量に天然由来のマンノヘプツロースの供給源を確保することが、この所望の物質を含む食品の商業化にとって重要である。アボカドからマンノヘプツロースを抽出する様々な実験室規模の方法が報告されているが、現在、このような方法は、更なる処理（即ち、濃縮及び乾燥）を必要とする流体濃縮物が発生し得ることが分かっている。更に、このような方法は、高額な資金が必要な処理機を必要とする。
【０００５】
アボカドから調製される単離物を含むペットフードが知られているが、上述の問題及びこのような単離物を調製する費用により、このような方法は、大規模では経済的に魅力的ではない。さらに、一部の市販のペットフードは、アボカド自体を一定の割合で含むとされているが、この量は、非常に少ないため、測定可能な量のマンノヘプツロースは実質的に存在しない。レベルを測定できないという事実は、果実中の開始レベル、最終材料形態でのマンノヘプツロースの不安定性、及び最終製品を製造するために使用される処理条件に起因する可能性が高い。
【０００６】
経済的な観点から、単離物又は濃縮物を使用するのではなく、アボカド果実全体を使用できると最も有利であろう。しかしながら、現在、このような使用は、いくつかの理由から問題があり得ることが分かっている。
【０００７】
第１に、多くの種のアボカドの果肉は、少量（典型的には、約０．０２重量％未満）しかマンノヘプツロースを含まない。従って、有効量のマンノヘプツロースを食品に含めるには、製品の所望の官能特性を不所望に変化させ得るこのような高レベルのアボカド果肉を添加する必要がある。例えば、本来は食肉製品を模倣するように設計され、配合されるドッグフード製品は、より野菜のような性状を取り得、従って、ペットには受け入れられにくい。
【０００８】
更に、多種多様なアボカドが、そのマンノヘプツロース分のためではなく、高い油分を有するハスアボカドに類似した味覚特性のために交配されてきた。いずれの場合も、このような高レベルの油性アボカド材料は、配合の柔軟性に悪影響を及ぼし得る。このような問題は、本明細書では、クリオロアボカドを使用することによって最小限になる。
【０００９】
加えて、多種多様なアボカドは、果実の熟成、保存、及び処理中にそのマンノヘプツロースが相当量減少する。しかしながら、収穫されたばかりの未熟果実からのマンノヘプツロースの抽出は、果実の相当な硬度により問題であり得る。いずれの場合も、収穫後の保存中にもマンノヘプツロースがさらに減少し得、この保存には、マンノヘプツロース分の維持を助けるために冷蔵又は凍結保存施設が必要であるため、更なる費用が必要となる。
【００１０】
今回、クリオロアボカドをマンノヘプツロース及びペルセイトールの供給源として使用することによって、食品、特に、ヒトはもちろん、コンパニオンアニマル、例えば、イヌ、ネコ、及びウマなどのための食品に、炭水化物代謝の特定の性状をブロック又は阻害し、従って、カロリー制限の効果を模倣するのに十分な量のこれらの有益な物質を含めることができることが見出された。
【００１１】
更に、今回、ドミニカ共和国で成長するクリオロアボカドが、予想外に高濃度のマンノヘプツロース及びペルセイトール、並びに比較的低い油分を有することが見出された。更に、本明細書に開示される方法で使用されるクリオロアボカド中のマンノヘプツロースの予想外に高い濃度及び安定性は、全官能受容性のリスクなしで、かつ過剰な油分を含めることなく、有効量のマンノヘプツロースを食品に含めることができることを意味する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の最も広い態様では、本発明は、経口摂取可能な組成物の製造でのクリオロアボカドの使用に関する。
【００１３】
一態様では、本発明は、マンノヘプツロース、ペルセイトール、及びこれらの混合物からなる群から選択される物質を食用の食品組成物成分に供給する方法であって、前記食品組成物成分は、タンパク質、脂肪、炭水化物、及びこれらの混合物からなる群から選択されるアボカドに由来しない物質を含み、この方法は、前記マンノヘプツロース、ペルセイトール、又はこれらの混合物を含むクリオロアボカド由来成分を前記食品組成物成分と組み合わせるステップによる、方法を提供する。一方法では、前記クリオロは、西インド諸島系クリオロアボカド、西インド諸島系／グアテマラ系ハイブリッドクリオロアボカド、及びこれらの混合物からなる群から選択され、特に、ドミニカ共和国で成長するクリオロアボカドである。最適には、前記クリオロアボカドは、早期収穫クリオロアボカドである。本発明のこの方法は、食品組成物を提供し、前記クリオロアボカド由来成分は、クリオロアボカド果肉と、アボカドの種、アボカドの皮、又は種と皮との両方から選択されるものとを含む。あるいは、クリオロアボカド由来成分は、前記マンノヘプツロース及び任意選択的にペルセイトールを含む水性抽出物であり得る。
【００１４】
この方法は、前記食品組成物成分が、動物タンパク質である、又は植物炭水化物、例えば、デンプン源に由来する植物炭水化物である、又はオメガ−３脂肪酸部分を含む非アボカド脂肪である、又はこれらの混合物である態様を含む。従って、この方法は、前記タンパク質、炭水化物、脂肪、任意選択のビタミン及びミネラルの栄養学的にバランスの取れた混合物、並びに特に前記動物でのカロリー制限の効果を模倣する所望の生理反応をもたらすのに十分な有効量のマンノヘプツロースを供給する一定量のクリオロアボカド由来成分を含む動物用食品組成物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書で使用される「マンノヘプツロース」とは、一般的には「Ｄ−マンノヘプツロース」とも呼ばれる、周知の７炭素原子単糖Ｃ７Ｈ１４Ｏ７のことである。「ペルセイトール」は、実験式Ｃ７Ｈ１６Ｏ７を有し、ポリオール、即ち、マンノヘプツロースの還元型である。このような化合物は、「Ｃ７」物質と呼ばれることもある。
【００１６】
アボカドから得ることができる様々な他の所望のＣ６及びＣ７代謝拮抗物質として、限定されるものではないが：２−デオキシ−Ｄ−グルコース；５−チオ−Ｄ−グルコース；３−Ｏ−メチルグルコース；１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール；これらの互いの混合物並びにこれらとペルセイトール及びマンノヘプツロースとの混合物が挙げられる。以降に開示されるように、今回、クリオロアボカド（ｃｒｉｏｌｌｏ  ａｖｏｃａｄｏ）が、予想外にマンノヘプツロース及びペルセイトールの両方の豊富な供給源であることが見出された。従って、マンノヘプツロースとペルセイトールとの混合物を提供するクリオロアボカドの使用を実施するプロセスは、特に有用であるが非限定の本発明の実施形態を含む。
【００１７】
本明細書で使用される全ての百分率、部、及び比率は、特段の記載がない限り、全組成物の重量に対してのものである。列記される原料に関連する全てのこのような重量は、活性レベルに基づき、従って、特段の記載がない限り、市販の材料に含まれ得る溶媒又は副産物を含まない。全ての数の単位は、特段の記載がない限り、当技術分野での通常の精度の範囲内である。
【００１８】
西インド諸島系アボカド及びハイブリッドアボカド
本発明は、西インド諸島系アボカド又は西インド諸島系／グアテマラ系ハイブリッドアボカドを利用する。本明細書の「西インド諸島系」とは、十分に特徴付けられた植物種ペルセア・アメリカーナ変種アメリカーナ（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  ｖａｒ．）のことである。「グアテマラ系」とは、ペルセア・アメリカーナ変種グアテマレンシス（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  ｖａｒ．ｇｕａｔｅｍａｌｅｎｓｉｓ）のことである。本明細書の「西インド諸島系ハイブリッド」とは、前記西インド諸島系種とグアテマラ系種との交配によって得られたハイブリッドのことである。
【００１９】
本明細書で使用される西インド諸島系アボカド及び西インド諸島系／グアテマラ系ハイブリッドアボカドの非限定の例は次の通りである：
西インド諸島系  −  バトラー（Ｂｕｔｌｅｒ）；ファッチ（Ｆｕｃｈｓ）；ジェネラル・ビューロウ（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｂｕｒｅａｕ）；モアズ（Ｍａｏｚ）；ポロック（Ｐｏｌｌｏｃｋ）；ルックル（Ｒｕｃｈｌｅ）；ラッセル（Ｒｕｓｓｅｌｌ）；サイモンズ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓ）；トラップ（Ｔｒａｐｐ）；ワルディン（Ｗａｌｄｉｎ）；アルザモラ（Ａｌｚａｍｏｒａ）；アビラ（Ａｖｉｌａ）；ファリア（Ｆａｒｉａ）；ガルシア（Ｇａｒｃｉａ）；ヘルナンデス（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ）；セントジャスト（Ｓｔ．Ｊｕｓｔ）；アマドル（Ａｍａｄｏｒ）；ガロ（Ｇａｌｏ）；ヒメネス（Ｇｉｍｅｎｅｚ）；ルイス（Ｌｅｗｉｓ）；トルレス（Ｔｏｒｒｅｓ）；トルヒーヨ（Ｔｒｕｊｉｌｌｏ）；ヤマガタ（Ｙａｍａｇａｔａ）。
【００２０】
西インド諸島系／グアテマラ系ハイブリッド  −  ボニータ（Ｂｏｎｉｔａ）；ブース１（Ｂｏｏｔｈ  １）；ブース７（Ｂｏｏｔｈ  ７）；ブース８（Ｂｏｏｔｈ  ８）；チェケット（Ｃｈｅｑｕｅｔｔｅ）；コリンソン（Ｃｏｌｌｉｎｓｏｎ）；ファッチ−２０（Ｆｕｃｈｓ−２０）；グランデ（Ｇｒａｎｄｅ）；ホール（Ｈａｌｌ）；ヘルマン（Ｈｅｒｍａｎ）；ヒクソン（Ｈｉｃｋｓｏｎ）；カハルウ（Ｋａｈａｌｕｕ）；シンプソン（Ｓｉｍｐｓｏｎ）；ウインスローソン（Ｗｉｎｓｌｏｗｓｏｎ）；グリピナ２（Ｇｒｉｐｉｎａ  ２）；グリピナ５（Ｇｒｉｐｉｎａ  ５）；グリピナ１２（Ｇｒｉｐｉｎａ  １２）；セミル２３（Ｓｅｍｉｌ  ２３）；セミル３１（Ｓｅｍｉｌ  ３１）；セミル３４（Ｓｅｍｉｌ  ３４）；セミル４２（Ｓｅｍｉｌ  ４２）；セミル４３（Ｓｅｍｉｌ  ４３）；セミル４４（Ｓｅｍｉｌ  ４４）。
【００２１】
このようなアボカドは、典型的には、標準的な園芸技術、例えば、剪定、施肥、灌がい、及び農薬散布などを用いて栽培化され、かつ適度に高いレベルの所望のマンノヘプツロース及び／又はペルセイトール化合物を含む。
【００２２】
「クリオロ」アボカド
驚くべきことに、今回、いわゆる「クリオロ」アボカドが、マンノヘプツロース及びペルセイトールの予想外に豊富な供給源であり、かつ本方法及び組成物に使用するのに非常に好ましいことが見出された。本発明で使用されるクリオロアボカドは、北緯２５度〜南緯２５度の帯域で一般に成長することが分かっている栽培化されていない熱帯西インド諸島系種及び西インド諸島系／グアテマラ系ハイブリッド種、例えば、上記の種を含む。特に、今回、最も高いレベルのマンノヘプツロース及びペルセイトールを有することが見出されたクリオロは、ドミニカ共和国、特に山岳地帯で成長する。クリオロアボカドは、本方法でこれらのＣ７物質の市販の供給源として使用するのに十分な量が入手可能である。供給者として、ドミニカ共和国のＦｒｅｓｈ  Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ  Ｄｏｍｉｎｉｃａｎａ及び米国フロリダ州のＢｒｏｏｋｓ  Ｔｒｏｐｉｃａｌｓが挙げられる。
【００２３】
クリオロアボカドは、その産地で主に地元民が使用する以外は殆ど看過されており、本発明の方法でのマンノヘプツロース及びペルセイトールの供給源としての使用は、報告されていないと思われる。このクリオロは、栽培化されていないため、施肥、人工灌がい、及び農薬なしで、未耕作地で成長する。良く知られているアボカド種とは異なり、クリオロの木は、典型的には、刈り込まれていないため、その高さから、背の低い栽培化されたアボカドの木とは容易に区別がつく。これらの果実は、比較的大きく、緑であり、そして表皮が滑らかな傾向にある。
【００２４】
本発明を除き、クリオロアボカドは、かつてその産地以外で大きな商業的関心と見なされた可能性は低い。なぜなら、食用アボカドは、一般に、マンノヘプツロース分及びペルセイトール分のためではなく高い脂肪分、即ち、アボカド油を得るために交配される。例えば、ハスアボカドの果肉のマンノヘプツロース分は、未熟果実で平均して僅か約１．４（重量）％であり、成熟果実ではかなり低下するが、クリオロの果肉は、未熟果実で平均して約２．１（重量）％のマンノヘプツロースであり、本明細書に記載の最適な方法で処理されたクリオロ果実では減少しない。更に、種及び皮は、更なる量のＣ７物質を含む。結果として、クリオロ果実全体を使用すると、マンノヘプツロース及びペルセイトールの予想外に豊富な供給源となる。クリオロ中の高レベルのマンノヘプツロース及びその予想外の保持、又はこのような方法での処理後の上昇により、クリオロは、これらのＣ７物質の供給源としての商業的使用に比類なく適する。更なる見込みとして、本方法で処理されたハス果実は、クリオロの非常に高いマンノヘプツロースレベルに対して、約０．５７％のマンノヘプツロースを有する。著しく対照的に、従来の市販のハス果実の果肉の典型的なマンノヘプツロースレベルは、測定不能又は０．１％未満である。
【００２５】
更に、今回、他の重要なアボカド由来の糖の含有量も、クリオロアボカドの果肉では、栽培化されたアボカド、例えば、ハスの果肉よりもかなり多いことが分かった。例えば、ハスは、平均して、未熟果実でグルコースが４７３ｐｐｍ、ペルセイトールが５，９８１ｐｐｍであり、成熟果実ではグルコースが１，４２１ｐｐｍ、ペルセイトールが６２１である。著しく対照的に、西インド諸島系クリオロアボカドは、平均して、グルコースが未熟果実で９３１ｐｐｍ、成熟果実で１，９８５ｐｐｍであり、ペルセイトールが未熟果実で１４，２０７ｐｐｍ、成熟果実で１１，９６３ｐｐｍである。
【００２６】
Ｃ７化合物のレベルは、収穫期によってアボカドの種類で異なり得ることに留意されたい。一般に、早期収穫された果実は、最高レベルのマンノヘプツロースを有し、従って、本明細書での使用に最適である。種によって収穫期が異なることは栽培者に良く知られている。収穫期は、果実の大きさ又は重量などの因子によって決まる。６月は、クリオロでは「早期」収穫と見なされるが、Ｓｅｍｉｌ  ３４では９月下旬が早期収穫である。いずれの場合も、重要なことは、果実のマンノヘプツロース又はマンノヘプツロースとペルセイトールのレベルがピークに達したときに果実を収穫することである。必要に応じて、ピークレベルを定量的に決定して、「早期」収穫期の定義を提供するために使用することができるクロマトグラフィー分析が以降に開示される。しかしながら、通常は、いつが「早期」収穫であるかの習熟した栽培者による判断に任せれば十分である。早期収穫とは対照的に、「晩期」収穫は、果実の油分が、典型的には最大であるときである。「晩期」収穫は、油分の多い晩期に収穫されたアボカドが、典型的にはヒトの食品に所望の官能量を有するため、当産業ではより一般的な基準である。必要に応じて、以降に開示されるクロマトグラフィー法を使用して、その高いマンノヘプツロース分によって早期に収穫されたクリオロを識別することができる。
【００２７】
最適化されたアボカドのエチレンガスでの処理
上記のように、収穫期の早期に収穫されたアボカドは、収穫期の晩期に収穫されたアボカドよりも高いマンノヘプツロースレベルを有する傾向にある。従って、本明細書に記載される処理条件は、収穫期の早期に収穫されたクリオロアボカドについてである。針入度計の測定値が２ＬＢＦ（０．９１ｋｇｆ）の下限を下回るとマンノヘプツロースの許容できない減少が起こるため、この測定値に達しないように、本発明の方法のエチレンガス処理段階の間、４時間ごとに果実を監視する。従って、この方法は、果実が、好ましくは５ＬＢＦ（２．２７ｋｇｆ）未満の針入度計の測定値に必ず達するように監視される。最適なマンノヘプツロースとペルセイトールレベルとの間の適切なバランスは、以下に詳細に説明されるように、２ＬＢＦ（０．９１ｋｇｆ）超から５ＬＢＦ（２．２７ｋｇｆ）未満の目標の針入度計の測定値と一致する。
【００２８】
ハスなどのアボカドに対するクリオロの新規な全くの予想外の利点は、クリオロの短縮された処理時間である。一般論として、クリオロアボカドは、エチレンガス雰囲気に約１日曝露するだけで十分であるが、ハスは約３日必要である。もちろん、これは、クリオロのもう１つの重要な処理上の利点となる。
【００２９】
一般的な提案として、収穫期の晩期に収穫された全てのアボカド果実は、２４時間よりも前に最適な硬度に達し得る。果実の各バッチは、幾分異なり得るが、調合者は、常にこれらの試験を用いて、そのまま使用する場合又はパルプにして使用する場合の果実の準備状態を示すことができる。
【００３０】
典型的であるが非限定の方法では、クリオロアボカドは、「熟成室」で約２４時間、エチレンガスに曝露される。熟成室の条件：温度１８〜２２℃、エチレンガス１００ｐｐｍ；湿度９５〜９９％；部屋を換気して空気を循環させる。
【００３１】
処理の様々な任意選択の態様もまた、限定のためではなく、調合者の都合のためだけに以降に開示される。マンノヘプツロース及び他の糖の含有量の定量的に分析するためのクロマトグラフィー法及び脂肪分を測定する方法も以降に開示される。
【００３２】
一態様では、方法に使用される収穫されたアボカドは、全てが同じ一般サイズ（±１５〜２０％）である。これにより、エチレンガスに接触したいずれのバッチのアボカドも全て、同時に目標の針入度計の測定値に達する。別の態様では、アボカドは、任意選択であるが好ましくは、処理の前に、例えば、２００ｐｐｍの塩素での１分間の曝露によって消毒することができる。マンノヘプツロース及びペルセイトールのレベルを最高にするために、果実は、好ましくは、収穫の４８時間以内に４５°Ｆ（７．２℃）に冷却する。処理後、アボカドを、すり潰して柔らかくし、Ｃ７化合物のクリオロ由来供給源として使用することができる。
【００３３】
次いで、アボカド材料を、任意選択で、防腐剤、例えば、食品グレードのアスコルビン酸、クエン酸、又はこれらの混合物と混合し、任意選択でバッグに入れ（例えば、真空パックして）、好ましくは後の使用のために凍結させる。アスコルビン酸（又はその塩）は、典型的には０．１〜０．５重量％で使用され；クエン酸（又はその塩）は、典型的には０．１〜０．５重量％で使用される。凍結クリオロ材料に特に有用な防腐剤には、粉砕された材料の０．３重量％アスコルビン酸と０．１６重量％クエン酸の混合物を含む。理想的には、凍結パルプ組成物は、解凍されたときに４．５以下のｐＨを有し、このｐＨは、水を加えずに柔らかにされたパルプで測定される。酸性ｐＨは、安定性を高める。様々な処理の安全装置、例えば、金属検出器を使用して、製品の安全性及び衛生状態などを保障することができる。
【００３４】
（−２０℃で）凍結保存されたクリオロパルプのマンノヘプツロース安定性は、９０日後に１１．０％のマンノヘプツロースの減少である。ヒト又は動物用の食品組成物を調製するための凍結クリオロアボカドの使用は、材料の凍結ブロックを破壊／粉砕するステップであって、この破壊／粉砕された材料が、そのまま使用される又は水を加えて流動性ペーストとして使用される、ステップ；及び任意選択で、水での更なる希釈によって目標のマンノヘプツロース及び／又はペルセイトール含有量にしてペーストを標準化するステップを含み得る。
【００３５】
別の態様では、Ｃ７物質を含有する水性抽出物は、果実固体から分離して、以降に開示される様々な食品組成物を調製するためにクリオロ成分として使用することができる。
【００３６】
針入度計試験の手順
針入度計は、指定のサイズのプランジャー先端部をアボカド果肉に押し込むために必要な力を測定する。これらの力の測定値は、適切なアボカド収穫期の決定、及びエチレンガスにより処理中の果実の軟化の監視に役立つ。
【００３７】
試験する果実をエチレン処理から取り出すときにその温度は１８〜２２℃であり、果実がその温度範囲であるときに針入度計試験を行う。針入度計での測定を、先端部が１３ｍｍのＧａｇｅ  ＦＤＫ４０を備えたＷａｇｎｅｒ  Ｐｅｎｅｔｒｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｎｏ．ＦＴ４０を用いて果実の２つの部位で行う。これは、４０ＬＢＦ（１８．１８ＫＦ）の測定能力であり、かつ±１の目盛精度である。１３ｍｍの先端部が使用される。この計測器は、Ｗａｇｎｅｒ  ＦＴＫ試験スタンドを用いて使用される。
【００３８】
１．果実の茎と底部との間の果実の真ん中で、Ｗａｇｎｅｒ  ＦＴ／ＰＲＬフルーツピーラーを用いて薄い円板状の皮を取り除く。次いで、果実を約４５度回転させて、ピーラーで第２の円板状の皮を取り除く。これらは、針入度計の試験部位である。
【００３９】
２．制御された試験のために、Ｗａｇｎｅｒ  ＦＴＫ試験スタンドにアボカドを配置する。
【００４０】
３．（３秒かかる）一定の遅い速度で先端部を垂直に果肉の中に押し込み、この先端部を、この先端部の印が付けられた線の切れ目又はこの先端部の切れ目まで進入させなければならない。
【００４１】
４．最も近い目盛のＬＢＦ（重量ポンド）で測定値を記録する。
【００４２】
５．２つの測定値を平均する。
【００４３】
針入度計試験では、果実は全て、ほぼ同じ大きさ及び重量でなければならい。典型的なモードでは、エチレンに接触されたバッチからの最少で３つのアボカドを監視の各段階で試験する。監視は、４時間ごとに行う。監視は、２ＬＢＦ（０．９１ｋｇｆ）超〜５ＬＢＦ（２．２７ｋｇｆ）未満の範囲の最適な目標に達したら終了する。収穫されるべき果実の針入度計試験は、現場で行うことができる。一般に、収穫したての果実は、非常に硬く、５を超える針入度計の測定値を有し、測定値が２０に達することもあり得る。あるいは、このような硬いクリオロアボカドは、Ｃ７の供給源として使用することができるが、特に種を除去しなければならない場合は、処理が困難であり得る。
【００４４】
使用法及び配合
クリオロアボカド材料は、２−デオキシ−Ｄ−グルコース；５−チオ−Ｄ−グルコース；３−Ｏ−メチルグルコース；１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール；２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール；マンノヘプツロース；ペルセイトール；並びにこれらの混合物及び組合せから選択される成分を提供する。使用法は、化合物又は混合物が投与されるヒト又は下級動物の体格及び状態によって異なる。特にマンノヘプツロースでは、約０．０００１又は約０．００１ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの範囲の使用が、一部の実施形態で有益であり得る。本明細書において、ｍｇ／ｋｇの量が使用される場合、「ｍｇ」は、成分、例えば、マンノヘプツロースのレベルを指し、そして「ｋｇ」は、ヒト及びペット、例えば、イヌやネコを含む動物の体重のキログラムを指す。低い範囲での使用も、２−デオキシ−Ｄ−グルコースを大きい動物に用いる場合に適切であり得る。特に５−チオ−Ｄ−グルコース又はマンニトールのような大量の化合物も容易に許容され得る。一実施形態では、毎日哺乳動物に与えられる化合物は、約０．１、０．５、１．２、又は５ｍｇ／ｋｇ〜約１５、２０、５０、１００、１５０、又は２００ｍｇ／ｋｇとし、かつこれらの範囲の全ての組合せとすることができる。一実施形態では、毎日哺乳動物に与えられる量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇとすることができる。一実施形態では、毎日哺乳動物に与えられる量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇとすることができる。特定の実施形態では、これらの量は、それぞれ本組成物の約５重量％未満、又は約２重量％未満、又は約０．０００１重量％〜約０．５重量％、又は約０．１重量％〜約１０重量％、又は約０．１重量％〜約５重量％のマンノヘプツロース及び／又はペルセイトールの成分を含む組成物に変換することができる。これらの間の全ての範囲も考えられる。成分のレベルは、様々な因子、例えば、組成物の形態（例えば、乾燥組成物、半湿潤組成物、湿潤組成物、又はサプリメント、又は任意の他の形態、又はこれらの混合物であるか否か）に基づいて当業者が決定することができる。当業者は、与えられる好ましい量を使用して、所与の与えられる組成物の範囲で成分の最適なレベルを決定することができる。
【００４５】
同様に、毎日哺乳動物に与えられる成分の全量は、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日とすることができる。このような日量は、組成物を摂取する哺乳動物の体格に左右され得る。例えば、一実施形態では、大きめの動物は、小さめの動物よりも多く摂取することができる。もちろん、これは、哺乳動物の質量に対して本明細書に開示された量に一致している。従って、一実施形態では、哺乳動物が大きければ大きいほど、より多くの組成物を与えることができる。
【００４６】
従って、一実施形態では、このような日量は、本明細書に記載される、哺乳動物の質量当たりの毎日の量に一致し得る。特に、日量は、一部の実施形態では、哺乳動物の体格及び上記の日量に基づいて、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日又はそれ以上の範囲とすることができる。他の実施形態では、日量は、約１ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約８０ｍｇ／日、又は約１０ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約４０ｍｇ／日とすることができる。これらの間の全ての範囲も考えられる。
【００４７】
上記のように、本発明の実施形態は、哺乳動物に摂取されることを目的とした組成物に関する。本組成物は、必要栄養量及びおやつ（例えば、ビスケット）又は他の食品サプリメントを供給することを意図した食品を含む。任意選択で、本発明の組成物は、乾燥組成物（例えば、粗びき穀物）、半湿潤組成物、湿潤組成物、又はこれらの任意の混合物とすることができる。あるいは、又はこれに加えて、本組成物は、サプリメント、例えば、グレイビー、飲料水、ヨーグルト、粉末、懸濁液、チューズ、おやつ（例えば、ビスケット）、又は任意の他の送達形態である。
【００４８】
本発明の組成物は、完全で栄養的にバランスし得る。完全で栄養的にバランスが取れた組成物は、唯一の食料割当として与えるために混ぜることができ、かつ水を除いて、一切の追加の物質を摂取しなくても生命を存続させることができる。あるいは、本組成物は、日常の食事に加えて投与される栄養補助食品とすることができる。
【００４９】
本発明で使用される組成物は、任意選択で、１つ以上のさらなる成分を含み得る。他の成分は、本発明で使用される組成物中に含めるのは有益であるが、本発明の目的では任意選択である。一実施形態では、本組成物は、乾物ベースで、本組成物の約１０重量％〜約９０重量％の粗タンパク質、あるいは約２０重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、あるいは約２０重量％〜約４０重量％の粗タンパク質、あるいは本組成物の約２０重量％〜約３５重量％の粗タンパク質を含み得る。粗タンパク質物質は、植物系タンパク質、例えば、大豆、穀物（トウモロコシ、小麦など）、綿の実、及び落花生、又は、より好ましくは動物系タンパク質、例えば、カゼイン、アルブミン、及び食肉タンパク質を含み得る。本明細書において有用な食肉タンパク質の非限定の例として、牛肉、豚肉、子羊の肉、家禽の肉、魚、及びこれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質供給源が挙げられる。
【００５０】
更に、本組成物の実施形態は、乾物ベースで、本組成物の約５重量％〜約４０重量％の脂肪、あるいは約１０重量％〜約３５重量％の脂肪を含み得る。
【００５１】
本発明の組成物の実施形態は、炭水化物の供給源を含み得る。一実施形態では、本組成物は、本組成物の約３５重量％〜約５０重量％の炭水化物供給源を含み得る。他の実施形態では、本組成物は、本組成物の約３５重量％〜約４５重量％、又は約４０重量％〜約５０重量％の炭水化物供給源を含み得る。穀類又は穀物、例えば、米、トウモロコシ、ミロ、ソルガム、大麦、及び小麦などは、例示的な炭水化物供給源である。トウモロコシのレベルは、８０％以上の範囲とすることができる。
【００５２】
本組成物は、他の物質、例えば、限定されるものではないが、乾燥ホエー及び他の乳製品副産物、ビートパルプ、セルロース、繊維、魚油、亜麻、ビタミン、ミネラル、香味料、抗酸化物質、及びタウリンも含み得る。
【００５３】
本組成物は、他の任意選択の原料も含み得る。任意選択の原料は、プロバイオティクス成分（ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）及び／又はラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ））及びプレバイオティクス（フラクトオリゴ糖）成分を含み得る。含めることができるプロバイオティクス成分及びプレバイオティクス成分の例及び量は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０１５８２９４号明細書に開示されている。含めることができる他の任意選択の原料は、オメガ６及びオメガ３脂肪酸、カルニチン、ヘキサメタホスフェート、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、βカロテンを含むカロテノイド、ビタミンＥ、及びルテイン、及びこれらの混合物である。
【００５４】
粗びき穀物組成物
表１は、以下の成分を有する２つの粗びき穀物組成物を例示し、近似で示されている量は、押出しを含む当技術分野で標準的な方法を用いて調製され、イヌ及び／又はネコに毎日の餌として与えられる。
【００５５】
【表１】
2016521547.tif 000002
【００５６】
以下の例は、本発明の範囲内で実施形態を更に説明し、実証する。これらの例は、例示の目的のためだけに示され、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなくこれらの例の多数の変形形態が可能であるため、本発明の限定と解釈されるべきではない。以下の例は全て、ヒト又は下級動物によって使用される組成物である。
2016521547.tif 000003
【００５７】
例Ａ〜Ｆの乾燥組成物は、まず粉砕し、次いで穀物をタンパク質ミール、卵製品、ビタミン、及びミネラル、及び繊維源、及びアボカド果肉又はマンノヘプツロース又はグルコース代謝拮抗物質と混合することによって得ることができる。次いで、混合して乾燥させた原料を、食肉製品及び脂肪源に添加する。原料を押し出して粗びき穀物にする。この粗びき穀物を乾燥させる。完成品を包装する。
【００５８】
他の任意選択の原料及び範囲：
タンパク性物質、デンプン性物質、ビタミン物質、及びミネラル物質に加えて、本発明の組成物は、一般に、他の任意選択の添加物、例えば、香味料、防腐剤、乳化剤、及び保湿剤も含み得る。ビタミン、ミネラル、タンパク質、脂肪、及び炭水化物の相対的割合を含む栄養バランスは、獣医学及び栄養学の分野で既知の食事基準に従って決定される。以下の範囲は、単に例示目的であり、限定することを意図するものではない。
【００５９】
乾燥組成物の非限定例は、任意選択で、乾物ベースで、この組成物の約１重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、約０．５重量％〜約２５重量％の粗脂肪、約１重量％〜約１０重量％の補足繊維（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ  ｆｉｂｅｒ）を含み得る。乾燥組成物は、約１％〜約３０％の水分の全水分量を有し得る。あるいは、乾燥組成物は、乾物ベースで、この組成物の約５重量％〜約３５重量％の粗タンパク質、約５重量％〜約２５重量％の粗脂肪、約２重量％〜約８重量％の補足繊維を含み得る。乾燥組成物は、約２％〜約２０％の水分の全水分量を有し得る。あるいは、乾燥組成物は、乾物ベースで、それぞれこの組成物の約９．５重量％〜約３５重量％の最低タンパク質レベル、約８重量％〜約２０重量％の最低脂肪レベル、約３重量％〜約７重量％の最低補足繊維レベルを含む。乾燥動物用組成物はまた、約３．５Ｋｃａｌ／ｇの最低代謝エネルギーレベルも有し得る。乾燥組成物は、約３％〜約１０％の全水分量を有し得る。
【００６０】
半湿潤組成物の非限定の例は、任意選択で、乾物ベースで、この組成物の約０．５重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、約０．５重量％〜約２５重量％の粗脂肪、約０．５重量％〜約１５重量％の補足繊維を含み得る。半湿潤組成物は、約３０％〜約５０％の水分の全水分量を有し得る。あるいは、半湿潤組成物は、乾物ベースで、この組成物の約５重量％〜約３５重量％の粗タンパク質、約５重量％〜約２５重量％の粗脂肪、約１重量％〜約５重量％の補足繊維を含み得る。半湿潤組成物は、約３５％〜約４５％の水分の全水分量を有し得る。あるいは、半湿潤組成物は、乾物ベースで、それぞれこの組成物の約９．５重量％〜約２２重量％の最低タンパク質レベル、約８重量％〜約１３重量％の最低脂肪レベル、約２重量％〜約３重量％の最低補足繊維レベルを有し得る。半湿潤組成物は、約３８％〜約４２％の全水分量を有し得る。半湿潤組成物はまた、約３．５Ｋｃａｌ／ｇの最低代謝エネルギーレベル、約０．１％〜約２０％の灰分、及び約０．００１％〜約５．０％のタウリンも有し得る。
【００６１】
湿潤組成物の非限定の例は、任意選択で、乾物ベースで、それぞれこの組成物の約０．５重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、約０．５重量％〜約２５重量％の粗脂肪、約０．０１重量％〜約１５重量％の補足繊維を含み得る。湿潤組成物は、約５０％〜約９０％の水分の全水分量を有し得る。あるいは、湿潤組成物は、乾物ベースで、それぞれこの組成物の約５重量％〜約３５重量％の粗タンパク質、約５重量％〜約２５重量％の粗脂肪、約０．０５重量％〜約５重量％の補足繊維を含み得る。湿潤組成物は、約６０％〜約８５％の水分の全水分量を有し得る。あるいは、湿潤動物用組成物は、乾物ベースで、それぞれこの組成物の約９．５重量％〜約２２重量％の最低タンパク質レベル、約８重量％〜約１３重量％の最低脂肪レベル、約０．１重量％〜約３重量％の最低補足繊維レベルを含み得る。湿潤組成物は、約６５％〜約８０％の全水分量を有し得る。湿潤組成物はまた、約１．０Ｋｃａｌ／ｇの最低代謝エネルギーレベル、約０．１％〜約２０％の灰分、及び約０．００１％〜約５．０％のタウリンも有し得る。
【００６２】
本発明の一実施形態では、組成物は、乾燥、湿潤、半湿潤、又はその他の状態であろうとなかろうと、乾物ベースで、この組成物の約５重量％〜約５０重量％、あるいは２０重量％〜約５０重量％の動物由来原料を含む。動物由来原料の非限定の例として、鶏肉、牛肉、豚肉、子羊の肉、七面鳥（又は他の動物）のタンパク質又は脂肪、卵、及びフィッシュミールなどが挙げられる。
【００６３】
組成物がグレイビーの形態である場合は、組成物は、少なくとも１０％のブロス又はストックを含み得、この非限定の例として、野菜入りの牛肉、鶏肉、又はハムのストックが挙げられる。典型的なグレイビー組成物は、乾物ベースで、約０．５％〜約５％の粗タンパク質、及び約２％〜約５％の粗脂肪を含み得る。
【００６４】
組成物が、サプリメント又は「おやつ」、例えば、ビスケット、チューズ、及び他のおやつの形態である場合は、このサプリメントは、乾物ベースで、このサプリメント組成物の約２０重量％〜約６０重量％のタンパク質、約２２重量％〜約４０重量％のタンパク質を含み得る。別の非限定の例として、組成物は、最適なビタミン及びミネラルと共に、乾物ベースで、このサプリメント組成物の約５重量％〜約３５重量％の脂肪、又は約１０重量％〜約３０重量％の脂肪を含むサプリメントを含み得る。動物、例えば、ネコ又はイヌに使用されることを目的とした組成物、おやつ、及びサプリメント組成物は、当技術分野で一般的に知られている。
【００６５】
本発明の組成物は、広範囲の他の任意選択の原料を更に含み得る。この組成物は、野菜、アボカド以外の果実、卵ベースの材料（ｅｇｇ−ｂａｓｅｄ  ｍａｔｅｒｉａｌ）、非変性タンパク質、食品グレートポリマー添加剤、ゲル、ポリオール、デンプン、ガム、調味料、塩、着色剤、徐放性化合物、ミネラル、ビタミン、抗酸化物質、芳香修正剤（ａｒｏｍａ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）、テクスチャード小麦タンパク質、テクスチャード大豆タンパク質、テクスチャードルピナスタンパク質、テクスチャード植物タンパク質、パン粉（ｂｒｅａｄｉｎｇ）、小麦粉、粉砕パスタ、及びこれらの組合せを含み得ることを理解されたい。
【００６６】
任意選択の原料の他の例として、少なくとも１つの野菜を挙げることができる。野菜の非限定の例として、ニンジン、エンドウマメ、ジャガイモ、キャベツ、セロリ、マメ、トウモロコシ、トマト、ブロッコリ、カリフラワー、ニラネギ、及びこれらの組合せが挙げられる。
【００６７】
充填材も、任意選択の原料として本発明に有用である。充填材は、固体、液体、又は充填空気とすることができる。充填材は、可逆性（例えば、ゼラチンを含む熱可逆性）及び／又は不可逆性（例えば、卵白を含む熱不可逆性）とすることができる。充填材の非限定の例として、グレイビー、ゲル、ゼリー、アスピック、ソース、水、空気（例えば、窒素、二酸化炭素、及び大気を含む）、ブロス、及びこれらの組合せが挙げられる。
【００６８】
着色剤の非限定の例として、限定されるものではないが、合成又は天然の着色剤及びこれらの任意の組合せが挙げられる。存在する場合、着色剤は、乾物ベースで、前記着色剤の約０．０００１％〜約５％、約０．００１％〜約１％、約０．００５％〜約０．１％である。
【００６９】
少なくとも１つのアボカド以外の果実も、任意選択の原料として本明細書において有用である。非限定の例として、トマト、リンゴ、洋ナシ、モモ、サクランボ、アンズ、プラム、ブドウ、オレンジ、グレープフルーツ、レモン、ライム、クランベリー、ラズベリー、ブルーベリー、スイカ、カンタロープ、マスクメロン、ハネジューメロン、イチゴ、バナナ、及びこれらの組合せが挙げられる。
【００７０】
組成物は、任意選択で、他の物質、例えば、乾燥ホエー及び他の乳製品副産物を含み得る。
【００７１】
組成物は、任意選択で、他の活性剤、例えば、長鎖脂肪酸及び亜鉛を含み得る。適切な長鎖脂肪酸は、αリノール酸、γリノール酸、リノール酸、エイコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸を含む。魚油は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の適切な供給源である。有用なＤＨＡレベルは、それぞれ乾物ベースで、動物用食品組成物の少なくとも約０．０５％、あるいは少なくとも約０．１％、あるいは少なくとも約０．１５％である。有用なＥＰＡレベルは、それぞれ乾物ベースで、動物用食品組成物の少なくとも約０．０５％、あるいは少なくとも約０．１％、あるいは少なくとも約０．１５％である。
【００７２】
分析
Ｉ．イオンクロマトグラフィー（ＩＣ）によるアボカド原材料及び乾燥ペットフードにおける糖プロファイル。
【００７３】
原理：
この方法は、アボカド原料及び乾燥ペットフード中のペルセイトール、マンノヘプツロース、グルコース、スクロース、及びフルクトースの分析のためのものである。この方法では、１８．２ｍΩの水で糖を抽出し、次いで、電気化学的検出を用いてＩＣカラムで糖を分離する。
2016521547.tif 000004
【００７４】
試薬及び溶液：（均等な試薬及び溶液を使用しても良い）
５０％Ｗ／Ｗ水酸化ナトリウム  −  Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  ３７２７−０１
2016521547.tif 000005
【００７５】
手順：
標準原液の調製
１．Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＭＴ５天秤を用いて５つの糖をそれぞれ１０ｍｇ秤量し、１Ｌメスフラスコに移す。
【００７６】
２．１８．２ｍΩの精製水を印まで入れる。
【００７７】
３．撹拌子及びプレートを用いて１０分間撹拌する。
【００７８】
標準原液は、冷蔵庫に保存すると２か月間安定である。この原液中の各糖の近似濃度は１０μｇ／ｍＬである。希釈を行う前に、標準原液を室温にする。
【００７９】
直線性の標準液（ｌｉｎｅａｒｉｔｙ  ｓｔａｎｄａｒｄ）の調製
示された透明なオートサンプラーバイアルに指定量の原液を加えて希釈し、直線性の標準液を調製する。１８．２ｍΩの精製水で一定量まで希釈する。
2016521547.tif 000006
【００８０】
オートサンプラーバイアル内の直線性の標準液は、調製後１週間安定である。このバイアルは、器具オートサンプラーに４℃で保存される。このバイアルは、週末に廃棄される。
【００８１】
サンプルの調製：抽出
調製されたサンプルは、４℃で器具内に保管されたオートサンプラーバイアルで１週間安定である。対照サンプルは、未知のサンプルとして同じ手順で抽出される。
【００８２】
１．１５ｍＬ遠心分離管の重さを量る。
【００８３】
２．Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ４桁天秤を用いて１．０００〜１．１００グラムのサンプルを正確に計量して遠心分離管に入れる。
【００８４】
３．１０ｍｌの１８．２ｍΩを加える（１：１０の希釈）。
【００８５】
４．遠心分離管をボルテックスに装着して、最大の設定で１０分間ボルテックスする。
【００８６】
５．遠心分離管をＩＥＣ  Ｃｅｎｔｒａ  ＧＰ８Ｒに装着して２４５０ＲＰＭで５分間遠心分離する。
【００８７】
６．水層（透明な中間層）の約１ｍｌを、注入器で０．２μｍのナイロン遠心分離フィルターに移す。
【００８８】
７．フィルターを微量遠心分離機に装着して１４，８００ＲＣＦに設定する（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｃｏ  ２１では１２，４００ＲＰＭ）。
【００８９】
サンプルの調製：希釈
抽出ステップは、全てのサンプルの１：１０の希釈を含む。異なるサンプルには、異なる希釈法が必要である。以下は、一連の標準希釈法である。
2016521547.tif 000007
【００９０】
溶離液の調製：
溶離液Ａ（１８．２ｍΩの水）：１８．２ｍΩの水で溶離液容器を３回すすぎ、１．８Ｌの印まで１８．２ｍΩの水を入れる。撹拌プレート上で撹拌しながら窒素で２０分間脱気する。脱気直後に、器具の上部に容器を配置し、窒素を充填してキャップをする。溶離液Ａは、２週間安定である。
【００９１】
溶離液Ｂ（０．２Ｍ  ＮａＯＨ）：２Ｌの溶離液ビンの中で２Ｌ又は１８．２ｍΩの水を２０分間脱気する。注入器を用いて、５０％ＮａＯＨの容器の中心部分からの２１ｍｌの５０％ＮａＯＨを２Ｌメスフラスコに移す。（５０％ＮａＯＨの容器を揺すってはいけない。重炭酸ナトリウム沈殿物による汚染を回避するために容器の底部又は上部からＮａＯＨを移してはいけない。炭酸塩フレークが容器の縁に集まっているため、容器からＮａＯＨを注いではいけない。）ＮａＯＨを２Ｌメスフラスコにゆっくりと移し、１８．２ｍΩの水を印まで入れる。キャップを逆さにして溶液を混合する。溶液を溶離液容器にゆっくりと注ぎ、窒素で２０分間脱気する。脱気直後に、容器を器具の上部及びキャップに配置する。溶離液Ｂは、３か月間安定である。
【００９２】
溶離液Ｃ（１Ｍ  ＮａＯＨ）：２Ｌの溶離液ビンの中で２Ｌの１８．２ｍΩの水を２０分間脱気する。注入器を用いて、５０％ＮａＯＨの容器の中心部分からの１０４．６ｍｌの５０％ＮａＯＨを２Ｌメスフラスコに移す。（５０％ＮａＯＨの容器を揺すってはいけない。重炭酸ナトリウム沈殿物による汚染を回避するために容器の底部又は上部からＮａＯＨを移してはいけない。炭酸塩フレークが容器の縁に集まっているため、容器からＮａＯＨを注いではいけない。）ＮａＯＨを２Ｌメスフラスコにゆっくりと移し、１８．２ｍΩの水を印まで入れる。キャップを逆さにして溶液を混合する。溶液を溶離液容器にゆっくりと注ぎ、窒素で２０分間脱気する。脱気直後に、容器を器具の上部及びキャップに配置する。溶離液Ｃは、３か月間安定である。
【００９３】
溶離液Ｄ（２Ｍ  ＮａＯＨ）：２Ｌの溶離液ビンの中で２Ｌの１８．２ｍΩの水を２０分間脱気する。注入器を用いて、５０％ＮａＯＨの容器の中心部分からの２０９．２ｍｌの５０％ＮａＯＨを２Ｌメスフラスコに移す。（５０％ＮａＯＨの容器を揺すってはいけない。重炭酸ナトリウム沈殿物による汚染を回避するために容器の底部又は上部からＮａＯＨを移してはいけない。炭酸塩フレークが容器の縁に集まっているため、容器からＮａＯＨを注いではいけない。）ＮａＯＨを２Ｌメスフラスコにゆっくりと移し、１８．２ｍΩの水を印まで入れる。キャップを逆さにして溶液を混合する。溶液を溶離液容器にゆっくりと注ぎ、窒素で２０分間脱気する。脱気直後に、容器を器具の上部及びキャップに配置する。溶離液Ｄは、３か月間安定である。
【００９４】
ＩＣパラメーター：
流量：０．４ｍＬ／分
カラム温度：３０℃
オートサンプラートレー温度：４℃
注入量：１０μＬ
溶離液：Ａ＝水、Ｂ＝０．２Ｍ  ＮａＯＨ、Ｃ＝１Ｍ  ＮａＯＨ、Ｄ＝２Ｍ  ＮａＯＨ
勾配溶離：
０分    ９６％Ａ  ４％Ｂ  ０％Ｃ  ０％Ｄ
２４分    ９６％Ａ  ４％Ｂ  ０％Ｃ  ０％Ｄ
２５分    ０％Ａ  ０％Ｂ  ０％Ｃ  １００％Ｄ
４０分    ０％Ａ  ０％Ｂ  ０％Ｃ  １００％Ｄ
４１分    ９６％Ａ  ４％Ｂ  ０％Ｃ  ０％Ｄ
５２分    ９６％Ａ  ４％Ｂ  ０％Ｃ  ０％Ｄ
運転時間：  ５２分
【００９５】
クロマトグラフィーの進行：
各運転の開始時に１８．２ｍΩを少なくとも１回注入する。直線性の標準液１〜５を、サンプルの前後のそれぞれで１回注入する。対照サンプルを、サンプルの前後のそれぞれで１回注入する。
【００９６】
システム適合性：
１．最初の５つの標準注入液のマンノヘプツロースの平均保持時間の％ＲＳＤは５．０％以下である。
【００９７】
２．最初の５つの標準注入液のマンノヘプツロースのピーク非対称は２．０以下である。
【００９８】
３．直線性は、全ての標準注入液を用いて決定される。各トコフェロールの相関係数（ｒ２）は９８．０以上である。
【００９９】
４．対照は、クロマトグラフィーの進行中のドリフトを監視するために含められる。対照は、少なくとも５００ｐｐｍのマンノヘプツロースを含み、かつ干渉ピークのないあらゆる食物又は原料とすることができる。
【０１００】
計算：Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェアで実施
【０１０１】
【数１】
2016521547.tif 000008
【０１０２】
結果：
報告では、各糖について４桁の有効数字のｐｐｍとする。例えば、１００．１ｐｐｍ。
【０１０３】
クロマトグラフィー溶出時間：
本発明で対称となる様々な物質のクロマトグラフィー分離では、溶出時間がかなり異なり、これらの物質を容易に識別して定量することができる。代表的な溶出時間が表１に示される。
2016521547.tif 000009
【０１０４】
ＩＩ．酸加水分解による脂肪定量
重量分析による脂肪率の定量手順は次の通りである。
2016521547.tif 000010
【０１０５】
2016521547.tif 000011
【０１０６】
手順
試薬の調製
塩酸（２５／１１希釈）
１０００ｍＬの濃縮ＨＣｌを４４０ｍＬの脱イオン水に添加。
【０１０７】
サンプルの調製
１．サンプルをすり潰して均一なテクスチャーにする。
【０１０８】
２．２ｇのサンプル（食事又は果実）又は１ｇのサンプル（糞便）を秤量し、Ｍｏｊｏｎｎｉｅｒフラスコに入れる。
【０１０９】
３．サンプルの重量を記録する。
【０１１０】
４．２ｍｌのエチルアルコールでサンプルを湿潤させて、サンプルを確実に浸す（糞便サンプルの場合にはやや多くのエチルアルコールが必要であり得る）。
【０１１１】
５．１０ｍｌのＨＣｌを加える。
【０１１２】
６．Ｍｏｊｏｎｎｉｅｒを予熱された振蘯水槽（７５℃）に４５分間入れる。
【０１１３】
７．水槽から取り出して、室温まで冷却する。
【０１１４】
８．透明で乾燥した１５０ｍｌガラスビーカーを秤量する。
【０１１５】
９．重量を記録する。
【０１１６】
１０．綿栓を長脚漏斗に入れて、ビーカーをこの漏斗の下にセットする。
【０１１７】
１１．１０ｍｌのエチルアルコールをＭｏｊｏｎｎｉｅｒに加えて混合する。
【０１１８】
１２．２５ｍｌのエチルエーテル（無水エーテル）をＭｏｊｏｎｎｉｅｒに加え、栓をして（機械シェーカーを用いて）１分間振盪する。
【０１１９】
１３．２５ｍｌの石油エーテルをＭｏｊｏｎｎｉｅｒに加え、栓をして１分間振盪する。
【０１２０】
１４．Ｍｏｊｏｎｎｉｅｒを遠心分離機に入れて約１分間遠心分離してエーテルと残余とを分離する。
【０１２１】
１５．上部のエーテル層を綿栓に通して漏斗に注ぐ。
【０１２２】
１６．エーテルを１５ｍｌずつに減らすことを除いて、ステップ１３〜１５をあと２回繰り返す（これにより合計３回の注ぎになる）。
【０１２３】
１７．漏斗の側面及び綿栓を２つのエーテルの５０／５０混合物ですすぐ。
【０１２４】
１８．栓を使用して綿栓からいずれも押し出す。
【０１２５】
１９．エーテルを蒸発させる（スチームテーブルが最も良く機能する）。
【０１２６】
２０．ビーカーを１３５℃のエアオーブンに１０分間入れる。
【０１２７】
２１．秤量しなおし、重量を記録し、そして計算する。
【０１２８】
酸加水分解による脂肪の液中消化
１．５ｇのサンプルを秤量する。
【０１２９】
２．サンプル全体がＭｏｊｏｎｎｉｅｒの球状部に入るようにする。
【０１３０】
３．サンプルが完全に球状部に入るようにするために、使い捨てシリンジ及び曲がるストローを使用する。このストローは、球状部に達する適切な長さであり、曲がるため、Ｍｏｊｏｎｎｉｅｒの曲面に適合する。
【０１３１】
計算
【０１３２】
【数２】
2016521547.tif 000012
【０１３３】
結果
結果を小数第１位まで示す脂肪率（％）として報告する。
【０１３４】
備考：
考えらえる誤差の原因
・  あらゆるキャリーオーバーを排除するために使用のたびに漏斗を洗浄するべきである。
【０１３５】
・  エーテルの混合物を１：１にするべきである。エチルエーテルが多すぎると高い結果となり、石油エーテルが多すぎると低い結果となる。
【０１３６】
・  秤量しなおす前にビーカーを室温まで確実に冷却する。熱は、重量の変動を招く。
【０１３７】
本明細書中に示されるそれぞれの最大の数値限定が、それぞれの下の数値限定を、このような下の数値限定が本明細書に明確に記載されているかのように含むことを理解されたい。本明細書中に示されるそれぞれの数値範囲が、このような広い数値範囲内に収まるいずれの狭い数値範囲も、このような数値範囲が本明細書に明確に記載されているかのように含む。
【０１３８】
発明の詳細な説明で言及された全ての文献は、関連する部分が、参照により本明細書に組み入れられ；いずれの文献の言及も、本発明に対する従来技術であることを認めると解釈するべきではない。
【０１３９】
本発明の特定の実施形態が例示され説明されてきたが、当業者には、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な他の変更形態及び修正形態が可能であることは明らかであろう。従って、本発明の範囲内である全てのこのような変更形態及び修正形態が添付の特許請求の範囲に含まれるものとする。
【国際調査報告】
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2016521547.tif 000014
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