(57)【要約】【課題】骨関節炎の治療のための医薬組成物において、抗炎症作用および鎮痛作用に対して同時に相乗作用を示すピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の特定の配合比を有する、骨関節炎治療用医薬組成物を提供すること。【解決手段】本発明によれば、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩を０．２５〜１０．０重量％、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を０．５〜５．０重量％で含むが、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の重量比は１：１〜１：３であることを特徴とする、骨関節炎治療用医薬組成物を提供する。本発明に係る液状の医薬組成物は、炎症および疼痛に対して同時に優れた治療効果を有するため、骨関節炎治療のための相乗的治療効果を示す関節腔内液状注射剤を提供することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩と、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩と、を含む骨関節炎治療用医薬組成物であって、
前記ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩を０．２５〜１０．０重量％、前記ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を０．５〜５．０重量％で含み、
前記ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩と前記ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の重量比は１：１〜１：３である、骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩を０．３３〜３．０重量％、前記ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を１．０〜３．０重量％で含む、請求項１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物のｐＨは、５．５〜８．５である、請求項１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項４】
前記ｐＨは、７．０〜８．５である、請求項３に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項５】
前記ピロキシカムの薬学的に許容される塩は、塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、クエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、コハク酸、酒石酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、（Ｄ）または（Ｌ）リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、マロン酸、ナトリウム塩、カリウム塩であるアルカリ金属塩、およびカルシウム塩、マグネシウム塩であるアルカリ土類金属塩からなる群から選択される、請求項１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項６】
前記ピロキシカムの薬学的に許容される塩は、カリウム塩である、請求項５に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項７】
前記ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、ヒアルロン酸コバルト、およびヒアルロン酸テトラブチルアンモニウムからなる群から選択される、請求項１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項８】
前記ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩はナトリウム塩である、請求項７に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩は、２つの塩の混合物である、請求項７に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項１０】
前記ヒアルロン酸は、ヒアルロン酸とその薬学的に許容される塩の混合物である、請求項１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項１１】
前記医薬組成物は、注射剤形である、請求項１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【請求項１２】
前記医薬組成物は、関節腔内に投与されるものである、請求項１１に記載の骨関節炎治療用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨関節炎（退行性関節炎）の治療のための医薬組成物において、抗炎症作用と鎮痛作用の両方に対して相乗作用を示す、ピロキシカムとヒアルロン酸を特定の配合比で含有する骨関節炎治療用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
退行性関節炎と呼ばれる骨関節炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）は、関節と骨の構造的変化と共に関節軟骨の損傷により激しい疼痛や関節運動障害などの症状または症候を示す疾患である（Ｄｉ  Ｄｏｍｅｎｉｃａ等、２００５）。骨関節炎は、放射線検査を介して軟骨損失および骨変化の程度を含む関節の生理的状態を評価する疾患なので、明確な定義を下すことは難しいが（Ａｙｒａｌ等、２００５）、一般に「軟骨損失を特徴とする、滑液嚢、関節および関節周囲の骨の構造的変化が確認される状態」と定義されている（Ａｌｔｍａｎ、１９８７；Ａｌｔｍａｎ等、１９９０）。実際、退行性関節炎患者の膝関節を評価した結果、関節を保護している軟骨の損傷、または関節をなす骨や靭帯などに損傷が生じて不可逆的に軟骨組織が破壊されていることを確認することができる。このような不可逆的軟骨損傷は、関節運動能力を消失させることにより、活動障害を起こし且つ炎症や痛みを伴わせる。特に、膝の骨関節炎は、高齢者の健康問題の主要要素であって、階段のぼりや座った状態からの立ち上がり、ウォーキングなどの活動の際に疼痛と身体機能障害を伴う。さらに、関節の運動障害、疼痛、筋力低下、関節の屈曲変形および内反変形、拘縮などの臨床症状を伴ううえ、身体機能の損傷により個人の生活の質に大きな影響を及ぼす（Ｋｉｍ等、２０１１）。
【０００３】
現行の骨関節炎患者の治療目標は、なるべく治療の副作用を避けながら疼痛を抑えるうえ、機能および生活の質を向上させることである。骨関節炎の基本的な治療方法としては非薬物的方法と薬物治療がある。体重減量、下肢筋肉強化運動、理学療法などの非薬物療法とともに、アセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）あるいは非ステロイド性抗炎症薬（ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ、以下「ＮＳＡＩＤｓ」という）の服用、ステロイド薬またはヒアルロン酸ナトリウムの関節腔内注射などの薬物療法、そして関節置換術などの手術療法などが使用されている（Ｄｉｒａｃｏｇｌｕ等、２００９；Ｉｗａｍｏｎｏ等、２００７；Ｔｕｎａｙ等、２０１０）。
【０００４】
退行性関節炎または関節リウマチなどの治療薬として、高分子ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が関節腔内注射剤の形で使用されている。ヒアルロン酸またはその塩は、通常、液状注射剤の形で、患部である膝や肩などの関節に直接投与され、関節腔の内部に直接注入された粘弾性（Ｖｉｓｃｏ−ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）の高分子物質は、関節炎患者の消失した軟骨組織による関節運動の際に衝撃を緩和させるとともに潤滑作用を助けることで、関節の疼痛軽減および機能正常化だけでなく、関節炎による機能障害の改善機能および疼痛抑制機能を有すると報告されている（Ｊｅｕｎｇ  Ｔａｋ  Ｓｕｈ、ヒアルロン酸の臨床的意味と適用、家庭医学会誌２００２；２３（９）：１０７１−１０７９；；Ｄｏｎｇ  Ｃｈｕｌ  Ｌｅｅ、Ｓｅｕｎｇ  Ｈｅｅ  Ｂａｃｋ、Ｗｏｏｋ  Ｊｉｎ  Ｓｏｈｎなど、退行性膝関節炎におけるヒアルロン酸の効果、大韓膝関節学会誌２００２；１４（２）：２１３−２２１；Ｙｅｏｎｇ  Ｗｏｏｋ  Ｓｏｎｇ、退行性関節炎の薬物治療、大韓医師協会誌２００３；４６（１１）：９５８−９６４；Ｓｅｕｎｇ  Ｓｏｏｋ  Ｎｏ、Ｊａｅ  Ｊｕｎ  Ｌｅｅ、Ｓｕｎｇ  Ｍｉ  Ｈｗａｎｇ等、退行性膝関節炎に対するヒアルロン酸ナトリウムの治療効果、大韓疼痛学会誌２００４；１７（２）：１７０−１７４）。
【０００５】
ピロキシカムは、ベンゾチアジン誘導体系の非ステロイド抗炎症薬であって、プロスタグランジンの合成を抑制して消炎作用を示す物質であり、鎮痛および消炎作用に優れるうえ、血中半減期が長いため、退行性関節炎の治療に現在使用されている。現在、経口剤、筋肉注射剤、外用パッチ剤またはゲルなどとして開発されて使用されている。
【０００６】
日本特願１９９２−１８０２２号は、ピロキシカム、水溶性高分子、ヒアルロン酸、界面活性剤からなる、安定したピロキシカムの組成物を開示している。この組成物は、ピロキシカムを０．１〜０．５ｗ／ｖ％、ヒアルロン酸を０．０３〜０．０５ｗ／ｖ％含有する。ところが、ヒアルロン酸、水溶性高分子および界面活性剤を、ピロキシカムを安定化させるための添加剤として使用しており、ヒアルロン酸を有効成分として含んでいない。
【０００７】
米国特許第５，０９５，０３７号では、ヒアルロン酸ナトリウムやピロキシカムなどの非ステロイド性抗炎症薬（Ｎｏｎ−Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ）を組み合わせて関節炎動物モデルに投与し、その相加的または相乗的抗炎症効果を評価した。試験結果、インドメタシン、ジクロフェナク、イブプロフェンをヒアルロン酸ナトリウムと併用する場合、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）注入を介して誘発した足むくみモデルに対して相加的または相乗的な作用があるとしながらも、ピロキシカム４ｍｇ／ｋｇとヒアルロン酸ナトリウム４ｍｇ／ｋｇを投与した場合には併用効果が微々たるものであると指摘している。また、カラギーナン注入を介して炎症を誘発した部位は足蹠（ｆｏｏｔｐａｄ）であって、実際骨関節炎が誘発される膝関節、手指遠位部、手根中手骨、近位関節、中足趾節関節、手首、股関節、腰椎、頚椎、足首の部位と大きな差があり、実際に骨関節炎とは機序的に違いがあるため、ＮＳＡＩＤとヒアルロン酸の併用による骨関節炎治療効果の評価には適切でないという問題がある。
【０００８】
このように、既存の先行技術では、ピロキシカムとヒアルロン酸の組成物において、抗炎症作用および鎮痛作用に関連して前記両化学物の相関関係が骨関節炎の治療に対する相加的または相乗的な治療効果を全く予想することができなかった。
【０００９】
ところが、本発明者は、驚くべきことに、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を特定の配合比率で組み合わせることにより、抗炎症作用および鎮痛作用に対して同時に相乗作用を示して骨関節炎の治療に非常に効果的であることを見出し、様々な試験を経て本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、骨関節炎の治療のための医薬組成物において、抗炎症作用および鎮痛作用の両方に対して相乗作用を示す、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を特定の配合比で含有する、骨関節炎治療用医薬組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記目的を達成するために、本発明は、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩０．２５〜１０．０重量％、およびヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩０．５〜５．０重量％を含み、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の重量比は１：１〜１：３であることを特徴とする、骨関節炎治療用医薬組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩０．２５〜１０．０重量％と、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩０．５〜５．０重量％を含むが、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は１：１〜１：３の重量比を有する液状組成物から、骨関節炎の治療のための相乗的治療効果を示す関節腔内への液状注射剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】骨関節炎誘発ラットモデルでピロキシカムとヒアルロン酸の比率がそれぞれ（ａ）１：４、（ｂ）１：３、（ｃ）１：２、（ｄ）１：１、(ｅ)２：１および（ｆ）３：１である場合の炎症減少効果を示す図である。
【図２】骨関節炎誘発ラットモデルでピロキシカムとヒアルロン酸の比率がそれぞれ（ａ）１：４、（ｂ）１：３、（ｃ）１：２、（ｄ）１：１、（ｅ）２：１および（ｆ）３：１である場合の疼痛減少効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１５】
本発明は、ピロキシカムまたはその薬学的に許容される塩とヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を、総重量に対してそれぞれ０．２５〜１０．０重量％、０．５〜５．０重量％で含み、好ましくは０．３３〜３．０重量％、１．０〜３．０重量％で含み、１：１〜１：３の重量比で配合された液状の医薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明に係る液状の医薬組成物は、注射剤形に製剤化することが好ましく、骨関節炎の治療のために関節腔内注射で投与される。
【００１７】
本発明において、ピロキシカムの薬学的に許容される塩は、「患者に対して比較的非毒性且つ無害な有効作用を有する濃度であって、この塩に起因した副作用がピロキシカムの塩基化合物の有益な効果を低下させないピロキシカムの有機または無機付加塩」のすべてを意味する。これらの塩は、遊離酸として無機酸と有機酸を使用することができ、無機酸としては塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、リン酸などを使用することができ、有機酸としてはクエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコン酸、コハク酸、酒石酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、（Ｄ）または（Ｌ）リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、マロン酸などを使用することができる。また、これらの塩は、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩など）およびアルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）などを含む。例えば、酸付加塩としては酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グロクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、糖酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタン、亜鉛塩を使用することができ、好ましくは、アルカリ金属塩、アミン類、およびアルギニンまたはリジンなどのアミノ酸塩を使用する。これらの薬学的に許容される塩を結合させたピロキシカムの塩を用いて前記組成物の製造を開始することができ、それだけでなく、ピロキシカムを溶媒に溶解させる過程で塩を共に滴加した後、十分に攪拌して製造過程でピロキシカムの塩を形成させることもできる。
【００１８】
また、本発明は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩、またはヒアルロン酸とヒアルロン酸の薬学的に許容される塩の混合物を含む。ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩には、例えば、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、ヒアルロン酸コバルトなどの無機塩と、ヒアルロン酸テトラブチルアンモニウムなどの有機塩をすべて含む。場合に応じては、これらの少なくとも２つの組み合わせを使用することもできる。本発明におけるヒアルロン酸の分子量は特に限定されないが、例えば、平均分子量５００，０００乃至１０，０００，０００であることが好ましい。
【００１９】
本発明に係る液状の医薬組成物は、ピロキシカムとヒアルロン酸を総重量に対してそれぞれ０．２５〜１０．０重量％と０．５〜５．０重量％で含み、好ましくは０．３３〜３．０重量％と１．０〜３．０重量％で含み、その比率は１：１〜１：３の重量比が適する。それを満たないか、それを超える比率では相加的または相乗的な骨関節炎治療効果を期待することが難しい。
【００２０】
ピロキシカムまたはその塩は全体注射液に対して０．２５〜１０．０重量％で含むことができる。０．２５重量％未満の濃度では治療効果が微々たるものであり、１０．０重量％を超える濃度では過量の可溶化剤が必要であり、可溶化剤の浮遊およびピロキシカムの沈殿が発生することがある。
【００２１】
また、液状組成物中のヒアルロン酸またはその塩は、全体水溶液に対してヒアルロン酸濃度で０．５〜５．０重量％含むことができる。ヒアルロン酸濃度が０．５重量％未満の場合には、治療効果が微々たるものであり、ヒアルロン酸濃度が５．０重量％を超える場合には、組成物の急激な粘性増加に起因してフリーフィールドシリンジまたはアンプル容器の充填に困難があるうえ、患者の患部への投与の際に難しさを引き起こすおそれがある。
【００２２】
ヒアルロン酸とピロキシカムの複合液状注射剤の好ましい液状組成物のｐＨは５．５〜８．５であり、好ましくは７．０〜８．５である。５以下のｐＨでは冷蔵または室温保管の際にピロキシカムの物理的安定性が低下して沈殿が析出するおそれがあり、８．５を超えるｐＨではヒアルロン酸が不安定であるうえ、関節内への前記液状組成物の投与時に局所刺激による疼痛、浮腫、炎症などの副作用が現れるおそれがある。
【００２３】
以下、本発明の理解を助けるために実施例などを挙げて詳細に説明する。しかし、本発明に係る実施例は、様々な他の形態に変形することができ、本発明の範囲を限定すると解釈されてはならない。本発明の実施例は、当業界における通常の知識を有する者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。
【００２４】
実施例１：本発明に係るピロキシカムおよびヒアルロン酸液状組成物の製造
リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）約３５０ｍｌに５．５８ｇのピロキシカムカリウムおよび適量の可溶化剤を加え、３０℃で１時間攪拌して溶解させた後、緩衝生理食塩水をさらに加えて５００ｍｌに合わせた。シリンジフィルターを用いて滅菌した後、ヒアルロン酸ナトリウム５．０ｇを添加し、オーバーヘッドミキサーを用いて３０〜４０℃の温度で１２時間撹拌することにより組成物を製造した。
【００２５】
実施例２および３：本発明に係るピロキシカムおよびヒアルロン酸液状組成物の製造
下記表１に示した組成と含量で前記実施例１と同様の方法によってピロキシカムおよびヒアルロン酸液状組成物を製造し、それぞれ実施例２および３とした。
【００２６】
比較例１〜３：本発明に係るピロキシカムおよびヒアルロン酸液状組成物の製造
下記表１に示した組成と含量で前記実施例１と同様の方法によってピロキシカムおよびヒアルロン酸液状組成物を製造し、それぞれ比較例１〜３とした。
【００２７】
対照群１〜７：ピロキシカム液状組成物の製造
下記表１に示した組成と含量で前記実施例１と同様の方法によってピロキシカム液状組成物を製造し、それぞれ対照群１〜７とした。
【００２８】
【表１】
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【００２９】
実験例１：モノヨード酢酸（Ｍｏｎｏ−ｉｏｄｏａｃｅａｔｅ）誘発骨関塩モデルにおける抗炎症効力の評価
本評価では、８週齢の雄ＳＤラットを（株）大韓バイオリンクから入手した後、温度２３±２℃、相対湿度４０〜６０％、換気回数１０回以上／時間、アンモニア濃度２０ｐｐｍ以下、平均照度１５０〜３００ｌｕｘ、騒音６０ｐｈｏｎ以下、および１２時間明暗サイクルが維持される清浄区域（研究所新館地下２階の動物飼育室）で４週間安定化した。実験の開始時に、右関節腔内３ｍｇ／３０μｌ／ｈｅａｄでモノヨード酢酸（Ｍｏｎｏ−ｉｏｄｏａｃｅａｔｅ、以下「ＭＩＡ」という）を投与した。投与後１日で、それぞれの群は関節の直径を測定してその平均が群別に同等レベルとなるように構成した。群構成の後に１回、それぞれの群に応じて薬物を投与し、ＭＩＡ投与３日目に節の直径を測定した。その結果を図１に示した。
【００３０】
試験日程：
Ｄａｙ  ０−関節腔の直径の測定、骨関節炎の誘発
Ｄａｙ  １−関節腔の直径の測定、薬物処置
Ｄａｙ  ３−関節腔の直径の測定
【００３１】
【表２】
2016521741.tif 000004
【００３２】
炎症程度の評価：関節の炎症性変化により起こる浮腫を炎症の重症度（ｓｅｖｅｒｉｔｙ）に対する指標として使用した。Ｅｎｄｐｏｉｎｔとしては関節の直径を使用した。関節の直径（ｄｉａｍｅｔｅｒ）測定装備としてはデジマチックキャリパ（Ｄｉｇｉｍａｔｉｃ  ｃａｌｉｐｅｒｓ）（ミツトヨ、日本）を使用した。
【００３３】
Joint  swelling  =  Absolute(Right  joint  diameter  -  Left  joint  diameter)
【００３４】
図１から分かるように、比較例１（Ｐｉ：ＨＡ＝１：４）では抗炎症効果における相乗作用が現れたが、比較例２（Ｐｉ：ＨＡ＝２：１）および比較例３（Ｐｉ：ＨＡ＝３：１）では抗炎症効果における相乗作用が現れなかった。
これに対して、本発明に係る実施例１（Ｐｉ：ＨＡ＝１：１）、実施例２（Ｐｉ：ＨＡ＝１：２）、実施例３（Ｐｉ：ＨＡ＝１：３）ではいずれもピロキシカム、ヒアルロン酸単一対照群に比べて炎症減少の相乗作用が観察された。
【００３５】
実験例２：モノヨード酢酸（Ｍｏｎｏ−ｉｏｄｏａｃｅａｔｅ）誘発骨関炎モデルにおける鎮痛効力の評価
本評価では、８週齢の雄ＳＤラットを（株）大韓バイオリンクから入手した後、温度２３±２℃、相対湿度４０〜６０％、換気回数１０回以上／時間、アンモニア濃度２０ｐｐｍ以下、平均照度１５０〜３００ｌｕｘ、騒音６０ｐｈｏｎ以下、および１２時間明暗サイクルが維持される清浄区域（研究所新館地下２階の動物飼育室）で４週間安定化した。実験の開始時に、右関節腔内３ｍｇ／３０μｌ／ｈｅａｄでモノヨード酢酸（Ｍｏｎｏ−ｉｏｄｏａｃｅａｔｅ、以下「ＭＩＡ」という）を投与した。投与後１日で、それぞれの群は体重バランスを測定してその平均が群別に同等レベルとなるように構成した。群構成の後に１回、それぞれの群に応じて薬物を投与し、ＭＩＡ投与３日目に体重バランスを測定した。その結果を図２に示した。
【００３６】
試験日程：
Ｄａｙ  ０−体重バランスの測定、骨関節炎の誘発
Ｄａｙ  １−体重バランスの測定、薬物処置
Ｄａｙ  ３−体重足ルンスの測定
【００３７】
【表３】
2016521741.tif 000005
【００３８】
疼痛程度の評価：疼痛の程度を評価する方法として最も一般によく用いられる重量配分（ｗｅｉｇｈｔ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）（％）を使用した。重量配分（Ｗｅｉｇｈｔ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）は、インキャパシタンスメーター（Ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ  ｍｅｔｅｒ）にラットをのせた後、後肢足蹠が測定板の上に乗っているときの５秒間の両側後肢に伝わる平均体重値を得て、次の式によって計算した。
【００３９】
Weight  distribution(%)  =  100  *  Right  limb  weight/(left  limb  weight  +  right  limb  weight)
【００４０】
すべての結果はｍｅａｎ±ＳＥＭで表示し、実験結果に対する有意性はＳｉｇｍａＳｔａｔのｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔを用いて各群間における統計処理の後に評価した。
図２から分かるように、比較例２（Ｐｉ：ＨＡ＝２：１）では疼痛減少効果における相乗作用が現れたが、比較例１（Ｐｉ：ＨＡ＝１：４）、比較例３（Ｐｉ：ＨＡ＝１：３）では疼痛減少効果における相乗作用が現れなかった。
【００４１】
これに対して、本発明に係る実施例１（Ｐｉ：ＨＡ＝１：１）、実施例２（Ｐｉ：ＨＡ＝１：２）、実施例３（Ｐｉ：ＨＡ＝１：３）ではピロキシカム、ヒアルロン酸単一対照群に比べて疼痛減少の相乗作用が観察された。
【００４２】
したがって、本発明は、抗炎症と鎮痛作用において対照群に比べて相乗作用を同時に示すことが分かるため、消炎鎮痛用医薬組成物として非常に有用であるといえる。
【図１】
2016521741.tif 000006
【図２】
2016521741.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成27年12月9日(2015.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
日本特許出願公開平４−１８０２２号は、ピロキシカム、水溶性高分子、ヒアルロン酸、界面活性剤からなる、安定したピロキシカムの組成物を開示している。この組成物は、ピロキシカムを０．１〜０．５ｗ／ｖ％、ヒアルロン酸を０．０３〜０．０５ｗ／ｖ％含有する。ところが、ヒアルロン酸、水溶性高分子および界面活性剤を、ピロキシカムを安定化させるための添加剤として使用しており、ヒアルロン酸を有効成分として含んでいない。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明において、ピロキシカムの薬学的に許容される塩は、「患者に対して比較的非毒性且つ無害な有効作用を有する濃度であって、この塩に起因した副作用がピロキシカムの塩基化合物の有益な効果を低下させないピロキシカムの有機または無機付加塩」のすべてを意味する。これらの塩は、遊離酸として無機酸と有機酸を使用することができ、無機酸としては塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、リン酸などを使用することができ、有機酸としてはクエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、コハク酸、酒石酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、（Ｄ）または（Ｌ）リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、マロン酸などを使用することができる。また、これらの塩は、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩など）およびアルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）などを含む。例えば、酸付加塩としては酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グロクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、糖酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタン、亜鉛塩を使用することができ、好ましくは、アルカリ金属塩、アミン類、およびアルギニンまたはリジンなどのアミノ酸塩を使用する。これらの薬学的に許容される塩を結合させたピロキシカムの塩を用いて前記組成物の製造を開始することができ、それだけでなく、ピロキシカムを溶媒に溶解させる過程で塩を共に滴加した後、十分に攪拌して製造過程でピロキシカムの塩を形成させることもできる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
すべての結果はｍｅａｎ±ＳＥＭで表示し、実験結果に対する有意性はＳｉｇｍａＳｔａｔのｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔを用いて各群間における統計処理の後に評価した。
図２から分かるように、比較例２（Ｐｉ：ＨＡ＝２：１）では疼痛減少効果における相乗作用が現れたが、比較例１（Ｐｉ：ＨＡ＝１：４）、比較例３（Ｐｉ：ＨＡ＝３：１）では疼痛減少効果における相乗作用が現れなかった。
【国際調査報告】
2016521741.tif 000008
2016521741.tif 000009