(57)【要約】本開示は、その一部が、うつ病処置に適切な候補化合物の同定方法に関する。いくつかの実施形態では、候補化合物はＮＭＤＡＲ部分アゴニストであり得る。一局面において、うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法が提供され、この方法は、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、または潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で上記細胞および／もしくは上記培養培地または上記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；Ｗｎｔ１の発現レベルの増大について上記サンプルを分析する工程、ならびにＷｎｔ１の上記発現レベルの増大に基づいてうつ病処置に適切なものであるとして上記候補化合物を同定する工程を含む。
2016501514.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法であって、
培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、または潜在的な化合物を動物に投与する工程；
１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；
Ｗｎｔ１の発現レベルの増大について前記サンプルを分析する工程、ならびに
Ｗｎｔ１の前記発現レベルの増大に基づいてうつ病処置に適切なものであるとして前記候補化合物を同定する工程
を含む、方法。
【請求項２】
うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法であって、
培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、または潜在的な化合物を動物に投与する工程；
１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；
Ｇを用いて示した表１または表２中に列挙した遺伝子のうちの少なくとも１つの発現レベルの増大またはＫを用いて示した表１または表２中に列挙した遺伝子のうちの少なくとも１つの発現レベルの減少について前記サンプルを分析する工程、ならびに
前記発現レベルの増大または前記発現レベルの減少に基づいてうつ病処置に適切なものであるとして前記化合物を同定する工程
を含む、方法。
【請求項３】
前記サンプルが表示「Ｇ」を用いて表１または表２中に提供した遺伝子発現パターンを有し、かつ前記同定する工程が前記遺伝子の発現の増大に基づく、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＮＤＭＡサブユニットＮＲ２Ｂシナプス可塑性について前記候補化合物を分析する工程をさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
うつ病処置に適切な化合物を同定するための方法であって、
培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、または潜在的な化合物を動物に投与する工程；
１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；
ＮＭＤＡ受容体ＮＲ２Ｂサブユニット可塑性について前記サンプルを分析する工程、ならびに
前記ＮＲ２Ｂ可塑性の誘導に基づいてうつ病処置に適切なものであるとして前記化合物を同定する工程
を含む、方法。
【請求項６】
うつ病処置に適切な候補化合物がケタミンと比較してＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を有意に誘導する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記組織が内側前前頭皮質である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記動物がげっ歯類またはヒトであり、そして前記細胞がヒト細胞またはげっ歯類細胞である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物がＮＭＤＡ受容体を調整する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
うつ病処置に適切な前記化合物がケタミンと比較して副作用が少ない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物は、実質的な嗜癖的な感覚運動ゲーティング（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｇｒａｔｉｎｇ）および／または鎮静作用を持たない、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞が真核細胞である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
化合物のライブラリーから前記候補化合物を選択する工程をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
患者のうつ病を処置することができる治療化合物を同定する方法であって、ＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を有意に誘導する化合物を選択する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１３年５月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／８２４，６６７号および２０１２年１０月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／７１３，０８５号（これらの各々は、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益およびそれらへの優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
背景
Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体（ＮＭＤＡＲ）は、神経変性障害（卒中関連脳細胞死、痙攣性障害が含まれる）ならびに学習および記憶に関連している。ＮＭＤＡＲはまた、中枢神経系における正常なシナプス伝達、シナプス可塑性、および興奮毒性の調整において中心的な役割を果たす。ＮＭＤＡＲは、長期増強（ＬＴＰ）にさらに関与する。
【０００３】
ＮＭＤＡＲは、ＮＭＤＡ、グルタマート（Ｇｌｕ）、およびアスパルタート（Ａｓｐ）の結合によって活性化される。ＮＭＤＡＲは、Ｄ−２−アミノ−５−ホスホノバレラート（Ｄ−ＡＰ５；Ｄ−ＡＰＶ）によって競合的にアンタゴナイズされ、フェンサイクリジン（ｐｈｅｎｙｌｃｙｃｌｉｄｉｎｅ）（ＰＣＰ）およびＭＫ−８０１によって非競合的にアンタゴナイズされる。最も興味深いことに、ＮＭＤＡＲはグリシン（Ｇｌｙ）によって同時活性化される（Ｋｏｚｉｋｏｗｓｋｉら，１９９０，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３：１５６１−１５７１）。グリシンの結合は、ＮＭＤＡＲ複合体上のアロステリック調節部位で起こり、これはチャネル開口時間の持続時間およびＮＭＤＡＲチャネルの開口頻度の両方を増大させる。
【０００４】
最近のヒト臨床研究で、ＮＭＤＡＲがうつ病処置に高い有益性を有する新規の標的と同定されている。これらの研究は公知のＮＭＤＡＲアンタゴニストＣＰＣ−１０１，６０６を使用して行われ、ケタミンが難治性うつ病患者におけるハミルトンうつ病評価尺度を有意に引き下げることが示されている。それにもかかわらず、有効性は有意であったが、これらのＮＤＭＡＲアンタゴニスト使用における副作用は重篤である。
【０００５】
治療で使用できる可能性のあるＮＭＤＡ調整小分子アゴニスト化合物およびＮＭＤＡ調整小分子アンタゴニスト化合物が開発されている。しかし、これらの多くは、非常に狭い治療指数および望ましくない副作用（幻覚、運動失調、非理性的な行動、および有意な毒性が含まれる）が付随し、その全てがその有効性および／または安全性を制限している。さらに、５０％以上のうつ病患者が公知の投与薬に適切な治療反応を経験しない。現在、うつ病、不安症、および他の関連疾患のための有効な処置は皆無である。
【０００６】
したがって、有効性が増大し、且つ望ましくない副作用が軽減された化合物を使用したうつ病、不安症、および／または他の関連する疾患の改良された処置が依然として必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｋｏｚｉｋｏｗｓｋｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９０）３３：１５６１〜１５７１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
概要
本開示は、うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法に一部関する。いくつかの実施形態では、候補化合物はＮＭＤＡＲ部分アゴニストであり得る。
【０００９】
１つの態様では、うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法を提供する。本方法は、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；Ｗｎｔ１の発現レベルの増大または減少についてサンプルを分析する工程、および／または前記Ｗｎｔ１の発現レベルの増大に基づいてうつ病処置に適切なものとして候補化合物を同定する工程を含む。
【００１０】
別の態様では、うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法を提供する。本方法は、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；Ｇを用いて示した表１または表２中に列挙した遺伝子のうちの少なくとも１つの発現レベルの増大またはＫを用いて示した表１または表２中に列挙した遺伝子のうちの少なくとも１つの発現レベルの減少について前記サンプルを分析する工程、および前記発現レベルの増大または発現レベルの減少に基づいてうつ病処置に適切なものとして前記化合物を同定する工程を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、サンプルは表示「Ｇ」を用いて表１または表２中に提供した遺伝子発現パターンを有し、同定はこれらの遺伝子の発現の増大に基づく。
【００１２】
いくつかの実施形態では、意図する方法は、ＮＤＭＡサブユニットＮＲ２Ｂシナプス可塑性について候補化合物を分析する工程をさらに含む。
【００１３】
別の態様では、うつ病処置に適切な化合物を同定するための方法を提供する。本方法は、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；ＮＭＤＡ受容体ＮＲ２Ｂサブユニット可塑性について前記サンプルを分析する工程、および前記ＮＲ２Ｂ可塑性の誘導に基づいてうつ病処置に適切なものとして化合物を同定する工程を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、うつ病処置に適切な候補化合物は、ケタミンと比較してＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を有意に誘導する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、組織は内側前前頭皮質である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、動物はげっ歯類またはヒトであり、細胞はヒト細胞またはげっ歯類細胞である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、化合物はＮＭＤＡ受容体を調整する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、うつ病処置に適切な化合物はケタミンと比較して副作用が少ない。
【００１９】
いくつかの実施形態では、化合物は、実質的な嗜癖的な感覚運動ゲーティング（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｇｒａｔｉｎｇ）および／または鎮静作用を持たない。
【００２０】
いくつかの実施形態では、細胞は真核細胞である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、意図する方法は、化合物のライブラリーから候補化合物を選択する工程をさらに含む。
【００２２】
さらに別の態様では、患者のうつ病を処置することができる治療化合物を同定するための方法を提供する。本方法は、ＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を有意に誘導する化合物を選択する工程を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、ＩＶ注射１時間後および２４時間後の成体ラットの内側前前頭皮質における遺伝子発現に及ぼすＧＬＹＸ−１３およびケタミンの影響を示す。
【図２】図２は、ビヒクルコントロールと比較したＷｎｔ経路特異的遺伝子発現に及ぼすＧＬＹＸ−１３の影響を示す。
【図３】図３は、Ｗｎｔシグナル伝達経路の略図を示す。
【図４】図４は、複数のラットモデルにおけるＧＬＹＸ−１３の抗うつ薬様効果を示す。
【図５】図５は、ＧＬＹＸ−１３がケタミン様の嗜癖的な感覚運動ゲーティングまたは鎮静副作用を示さないことを示す種々の試験由来の結果を示す。
【図６】図６は、ＧＬＹＸ−１３がケタミンと比較して抗うつ薬に類似することを証明しているポーソルト試験の結果を示す。
【図７】図７は、ＧＬＹＸ−１３がＮＲ２Ｂ依存性可塑性を誘導することを証明している結果を示す。
【図８】図８は、ＧＬＹＸ−１３の抗うつ薬様効果がシナプス可塑性に関連することを示す。
【図９】図９は、ＧＬＹＸ−１３が投与１時間後にラット内側前前頭皮質１においてｅｘ  ｖｉｖｏ［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合を増大させることを示す。
【図１０】図１０は、ＧＬＹＸ−１３を使用した投与後時間の関数としてのホスホセリン１３０３ＮＲ２Ｂ（ｐＳ１３０３  ＮＲ２Ｂ）タンパク質レベル（左パネル）および総ＮＲ２Ｂタンパク質レベル（中央のパネル）のプロットを示し、ＧＬＹＸ−１３を使用した投与後時間の関数としての総ＮＲ２Ｂタンパク質レベルに対するｐＳ１３０３ＮＲ２Ｂタンパク質レベルの比の棒グラフ（右パネル）を示す。
【図１１】図１１は、ＧＬＹＸ−１３を使用した投与後時間の関数としてのホスホセリン１４８０ＮＲ２Ｂ（ｐＳ１４８０ＮＲ２Ｂ）タンパク質レベル（左パネル）および総ＮＲ２Ｂタンパク質レベル（中央のパネル）のプロットを示し、ＧＬＹＸ−１３を使用した投与後時間の関数としての総ＮＲ２Ｂタンパク質レベルに対するｐＳ１４８０ＮＲ２Ｂタンパク質レベルの比の棒グラフ（右パネル）を示す。
【図１２】図１２は、ＣＫ２基質のリン酸化によって計算したＧＬＹＸ−１３を使用した投与１５分後のＣＫ２キナーゼ活性の棒グラフ（左パネル）を示し、ＣＫ２キナーゼ活性アッセイの検量線のプロット（右パネル）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
詳細な説明
本開示は、うつ病処置に適切な候補化合物を同定する方法に一部関する。いくつかの実施形態では、候補化合物はＮＭＤＡＲ部分アゴニストであり得る。別の態様では、本開示は、臨床的に関連するうつ病の処置ならびに／またはうつ病および／もしくは不安症の全般的な処置のための同定された化合物の使用に一部関する。
【００２５】
うつ病は、一般的な心理学的問題であり、気分低下および活動に対する嫌悪の精神状態をいう。うつ病に関連する種々の症状には、継続的な不安感または悲しみの感情、無力感、絶望感、悲観、および／または倦怠感、低エネルギー（ｌｏｗ  ｅｎｅｒｇｙ）、不穏状態、被刺激性、疲労、愉快な活動または趣味における興味の喪失、過剰な睡眠、過食、食欲喪失、不眠症、自殺念慮（ｔｈｏｕｇｈｔｓ  ｏｆ  ｓｕｉｃｉｄｅ）、および自殺企図が含まれる。上記症状の存在、重症度、頻度、および持続時間は、症例によって異なる。いくつかの実施形態では、患者は、これらの症状のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つを有し得る。
【００２６】
最も一般的なうつ病状態には、大うつ病性障害および気分変調性障害が含まれる。他のうつ病状態は、固有の環境下で発症する。かかるうつ病状態には、精神病性うつ病、産後うつ病、季節性感情障害（ＳＡＤ）、気分障害、慢性病状（癌または慢性疼痛など）、化学療法、慢性ストレス、外傷後ストレス障害、および双極性障害（または躁うつ性障害）によって引き起こされるうつ病が含まれるが、これらに限定されない。難治性うつ病は、標準的な薬理学的処置（三環系抗うつ薬、ＭＡＯＩ、ＳＳＲＩ、ならびにダブルおよびトリプル取り込みインヒビターならびに／または抗不安薬が含まれる）に耐性を示し、非薬理学的処置（精神療法、電気痙攣療法、迷走神経刺激、および／または経頭蓋磁気刺激など）にも耐性を示すうつ病患者で起こる。処置抵抗性患者を、１つ以上の標準的な薬理学的処置または非薬理学的処置を受けたにもかかわらず１つ以上のうつ病の症状（例えば、継続的な不安感または悲しみの感情、無力感、絶望感、悲観）の緩和を経験できなかった患者と同定することができる。一定の実施形態では、処置抵抗性患者は、２種の異なる抗うつ薬での処置を受けたにもかかわらず１つ以上のうつ病の症状の緩和を経験できなかった患者である。他の実施形態では、処置抵抗性患者は、４種の異なる抗うつ薬での処置を受けたにもかかわらず１つ以上のうつ病の症状の緩和を経験できなかった患者である。処置抵抗性患者を、１つ以上の標準的な薬理学的処置または非薬理学的処置の副作用に耐えようとしないか耐えることができない患者と同定することもできる。一定の実施形態では、有効量の同定した化合物を必要とする処置抵抗性患者に投与することによる難治性うつ病の処置方法を意図する。１つの実施形態では、例えば、５、６、７、８週間以上、または１ヶ月以上、患者がうつ病を罹患している場合におけるうつ病の処置方法を意図する。
【００２７】
１つの実施形態では、うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法であって、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；Ｗｎｔ１の発現レベルの増大について前記サンプルを分析する工程、および／または前記Ｗｎｔ１の発現レベルの増大に基づいてうつ病処置に適切な候補化合物を同定する工程を含む、方法を提供する。
【００２８】
別の実施形態では、うつ病処置に適切な候補化合物を同定するための方法であって、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；Ｇを用いて示した表１または表２（以下に提供）中に列挙した遺伝子のうちの少なくとも１つの発現レベルの増大またはＫを用いて示した表１または表２中に列挙した遺伝子のうちの少なくとも１つの発現レベルの減少について前記サンプルを分析する工程、および前記発現レベルの増大または発現レベルの減少に基づいてうつ病処置に適切な前記化合物を同定する工程を含む、方法を提供する。
【００２９】
意図するサンプルは表示「Ｇ」を用いて表１または表２中に提供した遺伝子発現パターンを有することができ、前記同定はこれらの遺伝子の発現の増大に基づく。
【００３０】
意図する方法は、ＮＤＭＡサブユニットＮＲ２Ｂシナプス可塑性について候補化合物を分析する工程をさらに含み得る。
【００３１】
うつ病または他の適応症の処置に適切な化合物を同定するための方法であって、前記方法が、培養培地中で細胞を潜在的な化合物に曝露するか、潜在的な化合物を動物に投与する工程；１つ以上の所定の時点で前記細胞および／もしくは前記培養培地または前記動物の脳もしくは神経組織からサンプルを回収する工程；ＮＭＤＡ受容体ＮＲ２Ｂサブユニット可塑性について前記サンプルを分析する工程、および前記ＮＲ２Ｂ可塑性の誘導に基づいてうつ病処置に適切な化合物を同定する工程を含み得る、方法を本明細書中の１つの実施形態中に提供する。うつ病処置に適切な候補化合物は、ケタミンと比較してＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を有意に誘導することができる。
【００３２】
本明細書中で意図する組織は、内側前前頭皮質の組織であり得る。意図する動物は、げっ歯類またはヒトであり得、細胞はヒト細胞またはげっ歯類細胞であり得る。意図する候補化合物は、ＮＭＤＡ受容体を調整することができる。例えば、候補化合物はＮＭＤＡ部分アゴニストであり得る。
【００３３】
うつ病処置に適切な候補化合物は、ケタミンと比較して副作用が少ないかもしれない。例えば、化合物は、実質的な嗜癖的な感覚運動ゲーティング（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｇｒａｔｉｎｇ）および／または鎮静作用を持たないかもしれない。
【００３４】
１つの実施形態では、患者のうつ病を処置することができる治療化合物を同定するための方法であって、ＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を有意に誘導する化合物を選択する工程を含む、方法を提供する。
【００３５】
同定した化合物は、主にＮＲ２Ｂ含有ＮＭＤＡＲで作用することができ、公知のＮＭＤＡＲモジュレーター（ＣＰＣ−１０１，６０６およびケタミンなど）の古典的副作用を示さないかもしれない。例えば、同定した化合物は、ラット海馬器官型培養物において長期抑圧（ＬＴＤ）を同時に減少させながら長期増強（ＬＴＰ）を顕著に上昇させることができる。いくつかの実施形態では、同定した化合物は、治療量を被験体に投与した場合に解離性副作用を本質的に伴わずに抗うつ効果を得ることができる。一定の実施形態では、本質的に鎮静を伴わない抗うつ効果を、治療量を被験体に投与した場合に同定した化合物によって得ることができる。さらなる他の実施形態では、同定した化合物は乱用の可能性がないであろう（例えば、習慣性がないであろう）。
【００３６】
いくつかの実施形態では、化合物は、例えば、ケタミンと比較して、ＡＭＰＡ  ＧｌｕＲ１セリン−８４５リン酸化を増大させることができるか、Ｗｎｔ１またはＷｎｔのシグナル伝達における発現を減少させることができる。
【００３７】
さらに、同定した化合物は、多くの以前のグリシン部位リガンドと比較して血液脳関門（ＢＢＢ）透過性がより良好であり得（Ｌｅｅｓｏｎ  ＆  Ｉｖｅｒｓｅｎ，Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３７：４０５３−４０６７，１９９４）、ＢＢＢを容易に通過し得る。いくつかの実施形態では、同定した化合物または前記化合物を含む組成物は、例えば、ケタミンと比較して、血漿レベルよりも良好な静脈内ｉｎ  ｖｉｖｏ効力および／または脳レベル濃度を得ることができる。
【００３８】
種々のうつ状態が、同定した化合物を用いて、例えば、行動または運動協調性に影響を及ぼさず、且つ発作活動を誘導も促進もせずに処置されることが期待される。本態様によって処置されることが期待される例示的なうつ状態には、大うつ病性障害、気分変調性障害、精神病性うつ病、産後うつ病、月経前症候群、月経前不快気分障害、季節性感情障害（ＳＡＤ）、不安症、気分障害、癌または慢性疼痛などの慢性病状、化学療法、慢性ストレス、外傷後ストレス障害、自殺の恐れ、および双極性障害（または躁うつ性障害）によって引き起こされるうつ病が含まれるが、これらに限定されない。双極性障害によって引き起こされるうつ病を双極性うつ病ということができると理解すべきである。さらに、任意のうつ病形態を罹患した患者は、しばしば、不安症を経験する。不安症に関連する種々の症状には、特に、恐怖、パニック、心悸亢進、息切れ、疲労、悪心、および頭痛が含まれる。本状態の方法を使用して不安症またはその任意の症状を処置することができることが予期される。
【００３９】
さらに、種々の他の神経学的状態が、本法によって処置されることが予期される。例示的な状態には、学習障害、自閉症性障害（ａｕｔｉｓｔｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、恐怖症、心的外傷後ストレス障害、認知症、エイズ認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、痙縮、ミオクローヌス、筋痙攣、双極性障害、物質乱用障害、尿失禁、および統合失調症が含まれるが、これらに限定されない。
【００４０】
処置抵抗性患者または難治性うつ病患者（例えば、適切な過程の少なくとも１種または少なくとも２種の他の抗うつ化合物または抗うつ治療薬に応答せず、そして／または応答しなかったうつ障害を罹患した患者）におけるうつ病の処置方法も本明細書中に提供する。例えば、処置抵抗性患者におけるうつ病の処置方法であって、ａ）患者を処置抵抗性と任意選択的に同定する工程およびｂ）有効用量の同定した化合物を前記患者に投与する工程を含む、方法を本明細書中に提供する。
【００４１】
うつ病の症状およびその軽減を、医師または精神学者が、例えば、精神状態試験によって確認することができる。症状には、絶望感、自傷もしくは自殺の念慮、および／または積極的な思考もしくは計画の欠如が含まれる。
【００４２】
意図する方法には、処置方法を必要とする患者における自閉症および／または自閉症スペクトラム障害の処置方法であって、有効量の同定した化合物を前記患者に投与する工程を含む、方法が含まれる。例えば、投与の際、同定した化合物は、自閉症の１つ以上の症状（アイコンタクトの回避、社会化不全、注意欠陥、気分不良、多動、異常音感（ａｂｎｏｒｍａｌ  ｓｏｕｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）、不適切な発語、途切れがちな睡眠（ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ）、および保続症など）の発生率を低下させることができる。かかる発生率の低下を、未処置個体における発生率と比較して測定することができる。いくつかの実施形態では、自閉症患者はまた、別の病状（脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、先天性風疹症候群、および未処置フェニルケトン尿症など）を罹患している。
【００４３】
別の実施形態では、処置を必要とする患者の障害の処置方法であって、前記障害が、癲癇、エイズ認知症、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、フリードライヒ運動失調症（Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ’ｓ  ａｔａｘｉａ）、自閉症、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、注意欠陥障害、オリーブ橋小脳萎縮症（ｏｌｉｖｉｏ−ｐｏｎｔｏ−ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、脳性麻痺、薬物誘発性視神経炎、末梢神経ニューロパシー、脊髄症、虚血性網膜症、緑内障、心停止、行動障害、および衝動調節障害からなる群から選択され、同定した化合物を投与する工程を含む、方法を意図する。
【００４４】
１つの実施形態では、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ（注意欠陥多動障害）、統合失調症、不安症の処置方法、アヘン、ニコチン、および／またはエタノールの嗜癖の改善（例えば、かかる嗜癖の処置方法またはかかる嗜癖からの脱離の副作用の改善方法）、脊髄損傷糖尿病性網膜症、外傷性脳損傷、心的外傷後ストレス症候群、および／またはハンティングトン舞踏病の改善方法であって、同定した化合物を投与する工程を含む、前記方法を必要とする患者における方法を本明細書中で意図する。例えば、統合失調症、嗜癖（例えばエタノールまたはアヘン）、自閉症、ハンティングトン舞踏病、外傷性脳損傷、脊髄損傷、心的外傷後ストレス症候群、および糖尿病性網膜症を罹患した患者は全て、ＮＭＤＡ受容体の発現または機能の変化を受け得る。
【００４５】
別の実施形態では、アルツハイマー病の処置方法または、例えば、記憶喪失（例えば、初期アルツハイマー病を併発する）の処置方法であって、同定した化合物を投与する工程を含む、前記方法を必要とする患者における方法を提供する。
【００４６】
本化合物の毒性および治療有効性を、例えば、ＬＤ５０およびＥＤ５０の決定のための細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる。
【００４７】
本明細書中で使用する場合、用語「ＧＬＹＸペプチド」は、ＮＭＤＡＲグリシン部位部分的アゴニスト／アンタゴニスト活性を有するペプチドをいう。ＧＬＹＸペプチドを、周知の組換え方法または合成方法（本明細書中で参考として援用される米国特許第５，７６３，３９３号および同第４，０８６，１９６号に記載の方法など）によって得ることができる。いくつかの実施形態では、ＧＬＹＸは、アミノ酸配列Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ（配列番号１３）（すなわち、Ｌ−トレオニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−トレオニンアミド）を有するテトラペプチドをいう。いくつかの実施形態では、候補化合物は、ＧＬＹＸ−１３および／または以下の化合物と同一のマイクロアレイの結果を有する。
【００４８】
例えば、ＧＬＹＸ−１３は、以下：
【００４９】
【化１】
2016501514.tif 000003
【００５０】
のように描写される化合物をいう。
【００５１】
ＧＬＹＸ−１３の多形、同族化合物、水和物、溶媒和物、遊離塩基、および／または適切な塩形態（酢酸塩などであるが、これに限定されない）も意図する。ペプチドは、米国特許第５，７６３，３９３号にさらに記載のように、環状化形態または非環状化形態であり得る。いくつかの実施形態では、ＧＬＹＸ−１３アナログは、Ｔｈｒ基またはＰｒｏ基のうちの１つ以上における部分の挿入または欠失（ＣＨ２、ＯＨ、またはＮＨ２部分の欠失など）を含み得る。他の実施形態では、ＧＬＹＸ−１３を、１つ以上のハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（ハロゲンまたはアミノと任意選択的に置換された）、ヒドロキシル、および／またはアミノで任意選択的に置換することができる。ＮＭＤＡＲのグリシン部位部分的アゴニストは、米国特許第５，７６３，３９３号、同第６，１０７，２７１号、およびＷｏｏｄら，ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ，１９，１０５９−１０６１，２００８（その全内容が本明細書中で参考として援用される）に開示されている。
【００５２】
候補化合物は、以下の化合物：
【００５３】
【化２】
2016501514.tif 000004
【００５４】
【化３】
2016501514.tif 000005
【００５５】
【化４】
2016501514.tif 000006
【００５６】
のうちの１つ以上と同一の遺伝子発現効果を実質的に有し得る。
【００５７】
本開示は、以下の非限定的な実施例によって例示された複数の態様を有する。
【実施例】
【００５８】
実施例１：ＧＬＹＸ−１３またはケタミン投与後の遺伝子発現パターン
本研究では、内側前前頭皮質（ｍＰＦＣ）内の遺伝子発現パターンを、ＧＬＹＸ−１３およびケタミンによって異なる影響を受けた機能的に関連する遺伝子組を同定するためのオントロジー分析と組み合わせたフォーカストマイクロアレイ（ｆｏｃｕｓｅｄ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）プラットフォームを使用して、ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ；ポーソルト試験において抗うつ効果を生じる最少の用量）またはケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ；ポーソルト試験において長く持続する抗うつ効果を生じる用量）のいずれかに続いて試験した。これらのうちで最も興味深いのはＷｎｔシグナル伝達経路であった。Ｗｎｔ経路特異的ｑＲＴ−ＰＣＲアレイを使用してこれらの知見を裏付けた。このｑＲＴ−ＰＣＲアレイを使用して、結果は、ＧＬＹＸ−１３注射１時間後、食塩水で処置したコントロールラットと比較して５遺伝子が異なって発現されたことを示した。ＧＬＹＸ−１３投与２４時間後、４遺伝子が上方制御された。ケタミン投与１時間後および２４時間後、たった１遺伝子しか下方制御されなかった。まとめると、これらのデータから、ポーソルト試験においてＧＬＹＸ−１３およびケタミンの両方によって迅速な抗うつ薬様効果が得られるにもかかわらず、これらは異なる細胞シグナル伝達経路（かかる一例はＷｎｔシグナル伝達経路である）を変化させる可能性が高いことが示唆される。
【００５９】
方法：
動物：成体（２〜３月齢）雄スプレーグ・ドーリーラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）の３匹をケージに収容し、以下のうちの１つを注射した（ＩＶ）−ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ）、または食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ）。注射１時間後および２４時間後（各処置群についてＮ＝５／時点）、ラットを屠殺し、その脳を迅速に切開し、凍結し、次いで、−８０℃で保存した。内側前前頭皮質（ｍＰＦＣ）を、氷上で凍結組織から切開した。等体積の均質化組織を使用して、マイクロアレイ分析のためにＲＮＡを抽出および精製し、ｑＲＴ−ＰＣＲ分析のためにｃＤＮＡを作製した。全手順はノースウェスタン大学ＩＡＣＵＣ委員会によって承認されており、ＮＩＨの実験動物の管理と使用に関する指針に従って実施した。
【００６０】
トランスクリプトミクス：インハウスマイクロアレイ（Ｋｒｏｅｓら，２００６）を使用して、本発明者らは、ＧＬＹＸ−１３、ケタミン、または食塩水（処置群あたり各時点でＮ＝５成体雄ラット）での注射（ＩＶ）１時間後または２４時間後にラットのｍＰＦＣ内で、ラット脳に特異的であり、主な遺伝子オントロジーカテゴリーの９０％超を占める１，１７８遺伝子の発現をアッセイした。等アリコートのラット基準ＲＮＡ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を、組織サンプルと同時に処理した。５ｕｇのＲＮＡ（Ｔ７プロモーターを保有するオリゴ（ｄＴ）プライマーでプライミングした）の逆転写後に、アミノ−アリルｄＵＴＰの存在下でｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写した。ａＲＮＡを変性させ、ハイブリッド形成させ、高ストリンジェンシーで洗浄した。次いで、蛍光ハイブリッド形成を、ＱｕａｎｔＡｒｒａｙソフトウェアを利用した高解像度共焦点レーザースキャナーによって定量し、ＧｅｎｅＴｒａｆｆｉｃ（Ｉｏｂｉｏｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を使用して分析した。１０％未満の偽発見率を使用した並び替えベースのマイクロアレイの有意性分析（ＳＡＭ）アルゴリズムを使用して統計分析を行った。本発明者らは、ＳＡＭを使用して得た遺伝子リスト内の相互関連遺伝子を試験するために、アノテーション、視覚化、および統合発見のためのデータベース（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｆｏｒ  Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ  Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（ＤＡＶＩＤ）遺伝子機能分類および遺伝子機能アノテーション表を利用した。
【００６１】
ｑＲＴ−ＰＣＲアレイ：１．０μｇの４ラット由来のＤＮＡｓｅ処理した総ＲＮＡの逆転写を、オリゴ（ｄＴ）およびランダムヘキサマーでプライミングした。本発明者らは、製造者の仕様書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に従ってＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩを利用した。ｃＤＮＡの１０倍希釈物を、定量リアルタイムＰＣＲのテンプレートとして使用し、Ｍｘ３０００ＰリアルタイムＰＣＲシステムにおいてＢｒｉｌｌｉａｎｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して分析を行った。ＲＯＸ基準色素を全反応物に含めた。各データポイントについて三連で実験を行い、転写物存在量をラットＷｎｔＰＣＲアレイ中に含まれる基準遺伝子に合わせて正規化した（Ｑｉａｇｅｎ，３３０２３１）。
【００６２】
結果：
図１に示すように、ＧＬＹＸ−１３およびケタミンは、注射（ＩＶ）１時間後および２４時間後に成体ラットのｍＰＦＣ中の遺伝子発現パターンに異なる影響を及ぼす。図１では、数値は、ＳＡＭ分析（ＦＤＲ１０％未満）を使用してビヒクルコントロールラットと比較した場合、ＧＬＹＸ−１３注射またはケタミン注射（ＩＶ）のいずれかの１時間後および２４時間後に有意に異なって発現したことを示した遺伝子の総数を示す。図１中の各群のサンプルサイズは、５成体雄ラットであった。
【００６３】
ＧＬＹＸおよびケタミンは、Ｗｎｔシグナル伝達経路に対して異なる効果を示した（表１および図２）。図２は、ＧＬＹＸ−１３およびケタミンの両方の注射の１時間後（パネルＡ）および２４時間後（パネルＢ）のｍＰＦＣ中のＷｎｔシグナル伝達経路遺伝子発現を示す。市販のラットＷｎｔ  ｑＰＣＲアレイ（Ｑｉａｇｅｎ，３３０２３１）を使用して、ケタミン注射後に認められたＷｎｔ特異的遺伝子発現変化と比較した場合、ビヒクルコントロールラットと比較してＧＬＹＸ−１３注射１時間後および２４時間後により多くの有意な遺伝子発現の変化が観察された（ｐ＜０．０５）。０．０を超える変化倍率値は食塩水ビヒクルコントロールと比較した遺伝子発現の上方制御を示すのに対して、０．０未満の値はその発現がビヒクルコントロールと比較して下方制御された遺伝子である。図２中の各群のサンプルサイズは４ラットであった。ＧＬＹＸ−１３注射１時間後のｍＰＦＣ中のＷｎｔ１１発現の有意な減少は、ＧＬＹＸ−１３媒介効果の少なくとも一部が非標準Ｗｎｔシグナル伝達の減少に関与し得ることを示唆している。
【００６４】
特に図３に示すように、ＧＬＹＸ−１３は、ビヒクルコントロールラットと比較して注射１時間後および２４時間後にＷｎｔ経路特異的遺伝子発現においてより多くの変化を生じた。ＧＬＹＸ−１３注射後に認められた有意な遺伝子発現の変化を暗灰色で示し、有意に変化しなかったｑＰＣＲアレイ上に存在する遺伝子を明灰色で示し、アレイ上に存在しない遺伝子を中間の灰色で示す。ケタミン注射後の有意な遺伝子発現の変化を、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ２（Ｆｚｄ）について観察した。
【００６５】
表１．ＧＬＹＸ−１３およびケタミンは、注射（ＩＶ）１時間後および２４時間後に成体ラットのｍＰＦＣ中のＷｎｔシグナル伝達経路遺伝子発現に異なった影響を及ぼす。
【００６６】
【表１】
2016501514.tif 000007
【００６７】
表２中のデータは、マイクロアレイの有意性分析（偽発見率１０％未満）を使用してビヒクル（ＧＬＹＸ−１３対ビヒクルまたはケタミン対ビヒクル）と比較するか、相互に（ＧＬＹＸ−１３対ケタミン）比較してＧＬＹＸ−１３処置ラットおよびケタミン処置ラットにおいて有意に異なって発現された遺伝子を示す。Ｇ：ＧＬＹＸ−１３処置ラットにおけるより高い遺伝子発現レベルを示す；Ｋ：ケタミン処置ラットにおけるより高い遺伝子発現レベルを示す；Ｖ：食塩水ビヒクル処置ラットにおけるより高い遺伝子発現レベルを示す（表示のようにＧＬＹＸ−１３またはケタミン処置ラットにおいて下方制御される）。Ｎ＝５ラット／群。
【００６８】
表２．ＧＬＹＸ−１３ラット、ケタミンラット、およびビヒクルコントロールラットについてのマイクロアレイデータの有意性分析。
【００６９】
【表２−１】
2016501514.tif 000008
【００７０】
【表２−２】
2016501514.tif 000009
【００７１】
【表２−３】
2016501514.tif 000010
【００７２】
【表２−４】
2016501514.tif 000011
【００７３】
【表２−５】
2016501514.tif 000012
【００７４】
【表２−６】
2016501514.tif 000013
【００７５】
【表２−７】
2016501514.tif 000014
【００７６】
【表２−８】
2016501514.tif 000015
【００７７】
【表２−９】
2016501514.tif 000016
【００７８】
【表２−１０】
2016501514.tif 000017
【００７９】
【表２−１１】
2016501514.tif 000018
【００８０】
【表２−１２】
2016501514.tif 000019
【００８１】
【表２−１３】
2016501514.tif 000020
【００８２】
【表２−１４】
2016501514.tif 000021
【００８３】
【表２−１５】
2016501514.tif 000022
【００８４】
【表２−１６】
2016501514.tif 000023
【００８５】
【表２−１７】
2016501514.tif 000024
【００８６】
【表２−１８】
2016501514.tif 000025
【００８７】
【表２−１９】
2016501514.tif 000026
【００８８】
【表２−２０】
2016501514.tif 000027
【００８９】
【表２−２１】
2016501514.tif 000028
【００９０】
【表２−２２】
2016501514.tif 000029
【００９１】
【表２−２３】
2016501514.tif 000030
【００９２】
【表２−２４】
2016501514.tif 000031
【００９３】
【表２−２５】
2016501514.tif 000032
【００９４】
【表２−２６】
2016501514.tif 000033
【００９５】
【表２−２７】
2016501514.tif 000034
【００９６】
【表２−２８】
2016501514.tif 000035
【００９７】
【表２−２９】
2016501514.tif 000036
【００９８】
【表２−３０】
2016501514.tif 000037
【００９９】
実施例２：ＧＬＹＸ−１３は、解離性副作用を伴うことなく迅速な抗うつ薬様効果を誘導する。
【０１００】
本研究は、複数のうつ病ラットモデルを使用して臨床的に関連する抗うつ薬としての潜在性についてＧＬＹＸ−１３を調査し、ラットにおけるケタミン様副作用について試験した。本研究はまた、ＧＬＹＸ−１３の抗うつ薬様効果がＡＭＰＡグルタマート受容体活性化を必要とするかどうか、および、ＧＬＹＸ−１３がメタ可塑性を促進することができるかどうかを調査した。
【０１０１】
方法：
行動薬理学：雄スプラーグドーリー（ＳＤ）ラット（２〜３月齢）に、ポーソルト試験の２０〜６０分前または２４時間前のいずれかにＧＬＹＸ−１３（１〜５６ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ；１〜１００ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ；０．１〜１０μｇ  ＭＰＦＣ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ；０．１〜１０μｇ  ＭＰＦＣ）、フルオキセチンポジティブコントロール（１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣで３つの用量）、または滅菌０．９％食塩水ビヒクルを注射した。ＮＢＱＸ（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）での前処置を使用して、ポーソルト試験におけるＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）の抗うつ薬様効果におけるＡＭＰＡＲの役割を試験した。抗うつ薬様薬の効果を、ポーソルト試験における浮遊時間の減少、新規性誘発食欲減退（ＮＩＨ）試験のための新規であるが、見慣れた環境での摂食潜時の減少、および学習性無力感（ＬＨ）試験における回避失敗数の減少によって測定した。ケタミン様の乱用潜在性および報酬を、薬物弁別試験におけるケタミン様応答および条件付け場所嗜好性アッセイにおける薬物ペア側での経過時間によって測定した。感覚運動ゲーティングのケタミン様破壊を、プレパルス阻害の減少によって測定した。ケタミン様鎮静を、オープンフィールド歩行活動の減少および薬物弁別研究におけるオペラント応答率によって測定した。分子薬理学：成体雄ＳＤラットに、ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、または食塩水ビヒクルを投与し、投与２４時間後に屠殺した。ＭＰＦＣおよび海馬の切片を調製し、ビオチン化によって細胞表面発現タンパク質を架橋させた。ＧｌｕＲ１およびＮＲ２Ｂの細胞表面発現を、ウェスタンブロットによって測定した。電気生理学：海馬切片を、ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、またはビヒクルの単回注射２４時間後に成体雄ＳＤラットから調製した。高頻度シェーファー側副枝刺激（２×１００Ｈｚ／８００ｍｓ）の３つの最大下発作に応答したシェーファー側副枝−ＣＡ１シナプスでのＬＴＰを測定した。薬理学的に絶縁された総ＮＭＤＡＲコンダクタンスに対するＮＲ２ＢおよびＮＲ２Ａを含有するＮＭＤＡＲの寄与率を、ＮＲ２Ｂ選択性ＮＭＤＡＲアンタゴニストであるイフェンプロジル（１０μＭ）およびＮＲ２Ａ−ＮＭＤＡＲ選択性アンタゴニストであるＮＶＰ−ＡＭ０７７（１００ｎＭ）の使用によってＣＡ１錐体ニューロンのシェーファー側副枝誘発ＥＰＳＣにおいて測定した。
【０１０２】
結果：
図４に示すように、ＧＬＹＸ−１３は、複数のラットモデルにおいて抗うつ薬様効果を生じる。データを、方法および以下に記載のように収集した。
【０１０３】
ポーソルト試験：２〜３月齢スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットを、単回用量のＧＬＹＸ−１３（ＴＰＰＴ−ＮＨ３；１〜５６ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）、スクランブルＧＬＹＸ−１３（ＰＴＴＰ−ＮＨ３；３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）、３用量のフルオキセチン（２０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ；試験２４、５、および１時間前；（Ｄｅｔｋｅら、１９９５））、または滅菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ、ＩＶ）で試験３０〜６０分前に処置するか、単回用量のＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）、３用量のフルオキセチン（２０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ；最後の投与は試験２４時間前）、もしくは食塩水ビヒクルで処置したラットを投与２４時間後に試験した。ＮＩＨ試験：ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）、または食塩水を投与し、投与１時間後に試験したＳＤラットの新規性誘発食欲減退（ＮＩＨ）試験における摂食潜時。ＬＨ試験：試験２４時間前に単回用量のＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ；試験２４時間前）、３用量のフルオキセチン（２０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ；最後の投与は試験１時間前）、または滅菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ  ＩＶ；尾静脈）を投与したＳＤラットのフットショック誘発学習性無力感（ＬＨ）試験における回避失敗。ナイーブコントロール動物は、ＬＨ試験前にプレショックや注射を受けなかった。ＵＳＶ試験：２分間の異種特異的プレイ（ｈｅｔｅｒｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｌａｙ）（１５秒間の刺激後に１５秒間刺激しないという交互のブロック）を受けた成体ＳＤラットの快楽および嫌悪のＵＳＶ。データを、平均（±ＳＥＭ）として示す。Ｎ＝７〜２１匹／群。Ｐ＜．０５（ビヒクルに対するフィッシャーのＰＬＳＤ事後検定）。
【０１０４】
図５に示した種々の試験の結果は、ＧＬＹＸ−１３がケタミン様の嗜癖的な感覚運動ゲーティングまたは鎮静副作用を示さないことを証明している。データを、方法および以下に記載のように収集した。
【０１０５】
薬物弁別：１０ｍｇ／ｋｇケタミン（Ｋｅｔ）（ＩＰ）と食塩水（Ｓａｌ）を識別するように訓練したＳＤラットにおける異なる用量のケタミン（ＩＰおよびＳＣ）およびＧＬＹＸ−１３（ＳＣ）についてのケタミンレバー応答率（％）。ＳａｌおよびＫｅｔ上の値は、各用量反応曲線の試験前に行った対照試験の結果である。場所嗜好性：薬物ペア室における％時間によって測定した場合、条件付け場所嗜好性は、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）で誘導されたが、ＧＬＹＸ−１３（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）では誘導されなかった。プレパルス阻害：プレパルス阻害によって測定した場合、感覚運動ゲーティングは、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）によって減少したが、ＧＬＹＸ−１３（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）によって減少しなかった。オープンフィールド：ラインクロスによって測定した場合、オープンフィールド内の歩行活動は、鎮静用量のケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ）によって低下したが、ＧＬＹＸ−１３（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）によって低下しなかった。Ｎ＝８〜１１匹／群。データを、平均（±ＳＥＭ）として示す。＊Ｐ＜．０５（ビヒクルに対するフィッシャーのＰＬＳＤ事後検定）。
【０１０６】
図６に示すように、前前頭皮質内へのＧＬＹＸ−１３の注射は、ポーソルト試験において抗うつ薬様効果を示す。データを下記のように収集した。
【０１０７】
（ａ）内側前前頭皮質または運動皮質（背側コントロール）カニューレを植え込み、ＧＬＹＸ−１３（０．１、１、１０μｇ／側面）または滅菌食塩水ビヒクル（０．５μｌＬ／１分間）を注射し、投与１時間後に試験した２〜３月齢の雄ラットまたはケタミン（０．１、１、１０μｇ）、ＧＬＹＸ−１３（１μｇ）、または食塩水をＭＰＦＣ注射し、投与２０分後および２４時間後に試験したラットにおけるポーソルト試験での平均（±ＳＥＭ）静止経過時間（秒）。投与１日前に、動物に１５分間の水泳訓練セッションを受けさせた。ＧＬＹＸ−１３（１μｇ）、ケタミン（０．１μｇ）、または滅菌食塩水ビヒクルのＭＰＦＣ注入２０分後のオープンフィールドにおける平均（±ＳＥＭ）ラインクロス。歩行活動の増大が偽陽性の抗うつ薬様応答を生じるので、用量０．１μｇのケタミンによって歩行活動が増大することを考慮して、その用量のポーソルトデータを分析に含めなかった。代表的なＨ＆Ｅ染色切片はＭＰＦＣカニューレ配置を示し、矢印は注射部位を示す。Ｎ＝５〜１０匹／群。＊Ｐ＜．０５（ビヒクルに対するフィッシャーＰＬＳＤ）。
【０１０８】
図７中のデータは、ＧＬＹＸ−１３がＮＲ２Ｂ依存性シナプス可塑性を誘導することを証明している。データを、方法および以下に記載のように収集した。
【０１０９】
ｅｘ  ｖｉｖｏ細胞表面タンパク質レベル：屠殺２４時間前にＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、または滅菌食塩水ビヒクルで処置したＳＤラットにおいてウェスタンブロットによって測定した場合の内側前前頭皮質（ＭＰＦＣ）または海馬内のビオチン化細胞表面ＧｌｕＲ１タンパク質レベル。ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＮＭＤＡＲ電流：ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、または滅菌食塩水ビヒクル（ＩＶ）を投与し、その２４時間後にｅｘ−ｖｉｖｏ  ＮＭＤＡ電流測定を行ったラットにおけるＣＡ１薬理学的絶縁ＮＭＤＡ電流におけるＮＲ２Ｂ選択性ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストであるイフェンプロジル（１０μＭ）の存在下でのＮＭＤＡ受容体依存性単回ショック誘発ＥＰＳＣ。ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＬＴＰ：投与２４時間後に、ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）またはケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）により、シェーファー側副枝−ＣＡ１シナプスでのシナプス伝達のｅｘ  ｖｉｖｏ長期増強（ＬＴＰ）の規模が増強される。データを、平均（±ＳＥＭ）として示す。Ｎ＝５〜１１／群。＊Ｐ＜．０５、＊＊Ｐ＜．０１（ビヒクルに対するフィッシャーＰＬＳＤ事後検定）。
【０１１０】
図８では、データは、ＧＬＹＸ−１３の抗うつ薬様効果がシナプス可塑性に関連することを示す。データを、方法および以下に記載のように収集した。
【０１１１】
Ｅｘ  ｖｉｖｏ細胞表面タンパク質レベル：屠殺２４時間前にＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）または滅菌食塩水ビヒクルで処置したＳＤラットにおいてウェスタンブロットによって測定した場合の内側前前頭皮質（ＭＰＦＣ）または海馬内のビオチン化細胞表面ＧｌｕＲ１タンパク質レベル。ＡＭＰＡＲ拮抗作用：ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）投与前にＡＭＰＡ受容体アンタゴニストＮＢＱＸ（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）で前処置し、投与１時間後に試験した動物におけるポーソルト試験での平均（±ＳＥＭ）浮遊時間。
【０１１２】
まとめ：
全体として、データは、（ｉ）ＧＬＹＸ−１３が解離性副作用を伴うことなく頑強な抗うつ薬様効果を生じること、および（ｉｉ）ＧＬＹＸ−１３がＭＰＦＣ内のシナプス可塑性を容易にすることによって抗うつ薬様効果を生じることを示す。
【０１１３】
実施例３：ＧＬＹＸ−１３は、投与１時間後のラット内側前前頭皮質においてｅｘ  ｖｉｖｏ［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合（ＮＭＤＡ受容体の非競合的アンタゴニスト）が増大する。
【０１１４】
図９は、ラット内側前前頭皮質内のｅｘ  ｖｉｖｏ［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合がＧＬＹＸ−１３投与１時間後に増大することを示す。データを下記のように収集した。
【０１１５】
ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）または滅菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ尾静脈）で処置し、投与１時間後に麻酔を使用せずに断頭し、脳を迅速に（６０秒）取り出し、ドライアイスで凍結し、アッセイまで−８０℃で保存した２〜３月齢雄ＳＤラットにおける十分に洗浄したラットＭＰＦＣ膜（２００μｇ）への平均±ＳＥＭ比［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合（５ｎＭ；２２．５  Ｃｉ／ｍｍｏｌ）。［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合を、１ｍＭグリシンの存在下にて平衡条件下（２時間）で測定した。非特異的結合を、任意のグリシンリガンドの非存在下および３０μＭ  ５，７ＤＣＫＡの存在下で決定した。最大刺激を、１ｍＭグリシンの存在下で測定した。全反応物中に５０μＭグルタマートが存在していた。Ｎ＝５〜６／群。＊各ビヒクルに対してＰ＜．０５。
【０１１６】
実施例４：ＧＬＹＸ−１３の迅速な抗うつ効果をＥ−ＬＴＰ様機構によって媒介することができる
ＧＬＹＸ−１３の即効性を試験するために、早期長期増強（Ｅ−ＬＴＰ）の誘導の基礎をなす生化学的過程を研究した。
【０１１７】
いかなる理論にも拘束されることを望まないが、Ｅ−ＬＴＰは、プロテインキナーゼ（Ｃａ２＋／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼ（ＣＡＭＫＩＩ）、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、およびカゼインキナーゼＩＩ（ＣＫ２）が含まれる）の持続的活性化に依存する。ＧＬＹＸ−１３（３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）またはビヒクルを成体（２〜３月齢）雄スプレーグ・ドーリーラットに投与し、内側前前頭皮質サンプルを、投与１５、３０、６０、および１２０分後に回収した（ｎ＝７〜９／群）。全細胞タンパク質を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、ＧｌｕＮ２Ｂ（４２０７Ｓ，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，ＭＡ）、ｐＳ−１３０３  ＧｌｕＮ２Ｂ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＭＡ）、またはｐＳ−１４８０  ＧｌｕＮ２Ｂ（ａｂ７３０１４，Ａｂｃａｍ，ＭＡ）に指向する抗体でプローブした。増強型化学発光を使用して、各バンドを定量した。ＣＫ２活性を、［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＭＡ）のγ−ホスファートの移行を使用したＣＫ２基質ペプチドのリン酸化によって測定した。総タンパク質（７．５マイクログラム）を、ＣＫ２基質ペプチドと０．１マイクロリットルのストック［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰ（１００ｎＣｉ／反応）の存在下で１０分間インキュベートした。
【０１１８】
ＧＬＹＸ−１３は、投与１５分以内に総ＧｌｕＮ２Ｂタンパク質を有意に増大させ（ビヒクルに対して１．５３倍、Ｐ＜．０５）、３０分でピークに到達し（１．７１倍、Ｐ＜．０５）、６０分までにコントロールレベルに戻った（６０分、１．１３倍、Ｐ＞．０５；１２０分、１．１６倍、Ｐ＞．０５）（図１０および１１）。ＧｌｕＮ２ＢレベルのＣＡＭＫＩＩ／ＰＫＣ媒介セリン−１３０３リン酸化は、３０分（１．９３倍、Ｐ＜．０５）、６０分（２．２３倍、Ｐ＜．０５）、および１２０分（２．６７倍、Ｐ＜．０５）の時点で増大したが、１５分の時点では変化しなかった（１．０２倍、Ｐ＞．０５）（図１０）。ＧｌｕＮ２ＢレベルのＣＫ２媒介セリン−１４８０リン酸化は、ＧＬＹＸ−１３投与から１５分以内にピークに到達し（２．０１倍、Ｐ＜．０５）、１２０分後まで有意に上昇し続けた（３０分、１．８０倍、Ｐ＜．０５；６０分、１．４８倍、Ｐ＜．０５；１２０分、１．５０倍、Ｐ＜．０５）（図１１）。ＣＫ−２比活性の有意な増大も１５分で認められた（３．０８倍、Ｐ＜．０５）（図１２）。ＣＫ２活性およびＣＡＭＫＩＩ活性は、ＬＴＰの発生時に迅速に増大することが示されている（Ｃｈａｒｒｉａｕｔ−Ｍａｒｌａｎｇｕｅら，１９９１，ＰＮＡＳ，８８，１０２３２；Ｆｕｋｕｎａｇａら，１９９３，ＪＢＣ，２６８，７８６３）。ここに報告した結果と共に、この観察により、ＧＬＹＸ−１３の抗うつ効果の迅速な発生が少なくとも一部はＥ−ＬＴＰを調節する同一の機構によって媒介されることが示唆される。
【０１１９】
均等物
本開示の特定の実施形態を考察してきたが、上記明細書は例示であり、本発明を制限するものではない。本明細書を検討して開示の多数の変形形態が当業者に自明となるであろう。開示の全範囲を、特許請求の範囲をその均等物の全範囲と共に参照し、明細書をかかる変形形態と共に参照することによって決定すべきである。
【０１２０】
他で示さない限り、明細書および特許請求の範囲で使用した成分、反応条件、パラメーター、および記述的特徴などの量を表示する全ての数値は、全ての場合において用語「約」で修飾されると理解されるべきである。したがって、特にそれとは反対の指示がない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記述されている数値パラメーターは近似値であり、この近似値は本発明によって獲得しようと努める所望の性質に応じて変化し得る。
【０１２１】
参照による援用
本明細書中で言及した全ての刊行物および特許（以下に列挙した文献が含まれる）は、各刊行物または特許が具体的且つ個別に参照として援用されることを示すかのように、その全体が本明細書中で参考として援用される。矛盾する場合、本明細書中の任意の定義が含まれる本出願に従うものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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