(57)【要約】  本発明は、Mps−1キナーゼ阻害剤と有糸分裂阻害剤とを含む組合せに関する。本発明はまた、癌、特に膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を治療するための前記組合せの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（4−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，5−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，3−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、および
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩から選択される化合物Aと、
1種または複数の有糸分裂阻害剤とを含む組合せ。
【請求項２】
前記有糸分裂阻害剤が、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、デスオキシビンカミノール、ビンカミノール、ビンブルニン、ビンカマジン、ビネリジンおよびビンブルニンを含むビンカアルカロイドである、請求項1に記載の組合せ。
【請求項３】
前記有糸分裂阻害剤がドセタキセル、パクリタキセルおよびこれらの類似体を含むタキサンである、請求項1に記載の組合せ。
【請求項４】
前記有糸分裂阻害剤がドセタキセルおよびパクリタキセルから選択される、請求項1に記載の組合せ。
【請求項５】
前記化合物Aが
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、および
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物から選択される、請求項1から4のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
前記化合物AがN−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である、請求項1から4のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
前記化合物AがN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である、請求項1から4のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項８】
前記化合物AがN−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である、請求項1から4のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項９】
前記化合物AがN−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である、請求項1から4のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１０】
シスプラチンをさらに含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１１】
膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を治療または予防するための請求項1から10のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項１２】
膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を治療または予防するための医薬品を調製するための請求項1から10のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【請求項１３】
対象の膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を治療または予防する方法であって、治療上有効量の請求項1から10のいずれか一項に記載の組合せを前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項１４】
成分A：請求項1、5、6、7、8および9のいずれか一項に定義される1種または複数の化合物A；および
成分B：ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンを含む1種または複数の有糸分裂阻害剤；および場合により、
1種または複数のさらなる医薬品C
の組合せを含むキットであって、
場合により前記成分AおよびBの全てまたはいずれかが、同時に、並行して、別々にまたは逐次投与するために使用する準備ができている医薬製剤の形態である、キット。
【請求項１５】
前記有糸分裂阻害剤がドセタキセル、パクリタキセルから選択され、前記任意の医薬品Cがシスプラチンである、請求項14に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Mps−1キナーゼ阻害剤と有糸分裂阻害剤とを含む組合せに関する。本発明はまた、癌、特に膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を治療するための前記組合せの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Mps−1（単極紡錘体1）キナーゼ（チロシントレオニンキナーゼ、TTKとしても知られている）は、有糸分裂チェックポイント（紡錘体チェックポイント、紡錘体形成チェックポイントとしても知られている）の活性化において重要な役割を果たし、それによって有糸分裂中の適切な染色体分離を確保する二重特異性Ser／Thrキナーゼである［Abrieu A等、Cell、2001、106、83〜93］。全ての分裂細胞が、確実に複製した染色体を2つの娘細胞に等しく分離しなければならない。有糸分裂に入ると、染色体はその動原体で紡錘体装置の微小管に結合する。有糸分裂チェックポイントは、未結合動原体が存在する限り活性であり、有糸分裂細胞が分裂後期に入り、それによって未結合染色体があるにもかかわらず細胞分裂を完了させることを阻止する監視機構である［Suijkerbuijk SJおよびKops GJ、Biochemica et Biophysica Acta、2008、1786、24〜31；Musacchio AおよびSalmon ED、Nat Rev Mol Cell Biol.、2007、8、379〜93］。いったん全ての動原体が正しい両糸性（amphitelic）、すなわち、双極性様式で紡錘体と結合したら、チェックポイントが満たされ、細胞が分裂後期に入り、有糸分裂を進行する。有糸分裂チェックポイントは、MAD（有糸分裂停止欠損、MAD1〜3）およびBub（ベンズイミダゾールにより抑制されない発芽、Bub1〜3）ファミリーのメンバー、モータータンパク質CENP−E、Mps−1キナーゼならびに他の構成要素を含むいくつかの必須タンパク質の複雑なネットワークからなり、これらの多くは増殖している細胞（例えば、癌細胞）および組織で過剰発現している［Yuan B等、Clinical Cancer Research、2006、12、405〜10］。有糸分裂チェックポイントシグナル伝達におけるMps−1キナーゼ活性の必須の役割は、shRNAサイレンシング、遺伝生化学ならびにMps−1キナーゼの化学阻害剤によって示されている［Jelluma N等、PLos ONE、2008、3、e2415；Jones MH等、Current Biology、2005、15、160〜65；Dorer RK等、Current Biology、2005、15、1070〜76；Schmidt M等、EMBO Reports、2005、6、866〜72］。
【０００３】
低下した不完全な有糸分裂チェックポイント機能と異数性および腫瘍形成を結びつける十分な証拠が存在する［Weaver BAおよびCleveland DW、Cancer Research、2007、67、10103〜5；King RW、Biochimica et Biophysica Acta、2008、1786、4〜14］。対照的に、有糸分裂チェックポイントの完全な阻害は、腫瘍細胞における重度の染色体不分離（missegregation）およびアポトーシス誘発をもたらすと認識されている［Kops GJ等、Nature Reviews Cancer、2005、5、773〜85；Schmidt MおよびMedema RH、Cell Cycle、2006、5、159〜63；Schmidt MおよびBastians H、Drug Resistance Updates、2007、10、162〜81］。
【０００４】
これらの知見に基づき、Mps−1は癌治療のための最も有望な薬物標的の1つと考えられている。
【０００５】
Mps−1キナーゼの阻害効果を示す種々の化合物が先行技術で開示されている。国際公開第2010／124826号パンフレットは、Mps−1キナーゼの阻害剤として置換イミダゾキノキサリン化合物を開示している。国際公開第2011／026579号パンフレットは、Mps−1キナーゼ阻害剤として置換アミノキノキサリンを開示している。国際公開第2011／063908号パンフレット、国際公開第2011／064328号パンフレットならびに国際公開第2011／063907号パンフレットは、Mps−1キナーゼの阻害剤としてトリアゾロピリジン誘導体を開示している。
【０００６】
国際公開第2011／013729号パンフレットは、Mps−1キナーゼ阻害剤として縮合イミダゾール誘導体を開示している。開示されている縮合イミダゾール誘導体の中には、イミダゾ［1，2−b］ピリダジンもある。
【０００７】
国際公開第2012／032031号パンフレットは特に、Mps−1キナーゼ阻害剤としてのイミダゾ［1，2−b］ピリダジンに関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第2010／124826号パンフレット
【特許文献２】国際公開第2011／026579号パンフレット
【特許文献３】国際公開第2011／063908号パンフレット
【特許文献４】国際公開第2011／064328号パンフレット
【特許文献５】国際公開第2011／063907号パンフレット
【特許文献６】国際公開第2011／013729号パンフレット
【特許文献７】国際公開第2012／032031号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Abrieu A等、Cell、2001、106、83〜93
【非特許文献２】Suijkerbuijk SJおよびKops GJ、Biochemica et Biophysica Acta、2008、1786、24〜31
【非特許文献３】Musacchio AおよびSalmon ED、Nat Rev Mol Cell Biol.、2007、8、379〜93
【非特許文献４】Yuan B等、Clinical Cancer Research、2006、12、405〜10
【非特許文献５】Jelluma N等、PLos ONE、2008、3、e2415
【非特許文献６】Jones MH等、Current Biology、2005、15、160〜65
【非特許文献７】Dorer RK等、Current Biology、2005、15、1070〜76
【非特許文献８】Schmidt M等、EMBO Reports、2005、6、866〜72
【非特許文献９】Weaver BAおよびCleveland DW、Cancer Research、2007、67、10103〜5
【非特許文献１０】King RW、Biochimica et Biophysica Acta、2008、1786、4〜14
【非特許文献１１】Kops GJ等、Nature Reviews Cancer、2005、5、773〜85
【非特許文献１２】Schmidt MおよびMedema RH、Cell Cycle、2006、5、159〜63
【非特許文献１３】Schmidt MおよびBastians H、Drug Resistance Updates、2007、10、162〜81
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、上記先行技術は、本明細書に記載および定義され、以下で「本発明の化合物」またはその薬理活性および安定性と呼ばれるイミダゾピリダジン化合物を具体的に記載していない。
【００１１】
本発明の前記化合物が驚くべき有利な特性を有することが分かった。驚くべきことに、本発明の化合物は、以下で示すように、機能アッセイ（紡錘体形成チェックポイントアッセイ）、抗増殖活性（HeLa細胞を用いた増殖アッセイ）、代謝安定性（ラット肝細胞のインビトロ代謝安定性）および薬物−薬物相互作用可能性（肝臓酵素CYP3A4の阻害）においてMps−1関連活性に関して優れた全体特性を示す。
【００１２】
ビンカアルカロイド、タキサンまたはエポチロンなどの確立された抗有糸分裂薬は、微小管動態を安定化または不安定化することよってSACを活性化して有糸分裂停止をもたらす。この停止により、姉妹染色分体が分離して2個の娘細胞を形成することが妨げられる。有糸分裂の停止延長は、細胞を細胞質分裂なしの有糸分裂停止または細胞死につながる分裂期細胞死に追いやる。対照的に、Mps−1の阻害剤は、細胞の有糸分裂進行を加速して深刻な染色体不分離（chromosomal missegregation）、最終的には細胞死をもたらすSAC不活性化を誘導する。Mps−1のサイレンシングは、抗有糸分裂薬に応じた細胞の有糸分裂での停止失敗をもたらす。注目すべきことには、微小管干渉剤とMps−1阻害の組合せが、染色体分離エラーおよび細胞死を一層増加させる（Abrieu A、Magnaghi-Jaulin L、Kahana JA、Peter M、Castro A、Vigneron S、Lorca T、Cleveland DW、Labbe JC. Mps1 is a kinetochore-associated kinase essential for the vertebrate mitotic checkpoint. Cell 2001；106：83〜93、Stucke VM、Sillje HH、Arnaud L、Nigg EAらHuman Mps1 kinase is required for the spindle assembly checkpoint but not for centrosome duplication. EMBO J 2002；21：1723〜1732）。
【００１３】
そのため、抗有糸分裂薬とSAC阻害の組合せによって誘導される染色体分離エラーの組合せた増加は、腫瘍細胞を選択的に排除するための効率的戦略を構成する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（4−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，5−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，3−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、および
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物から選択される化合物Aと、
1種または複数の有糸分裂阻害剤とを含む組合せをカバーする。
【００１５】
本発明は、癌、特に膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌の治療または予防に使用するための上に定義される組合せにさらに関する。
【００１６】
本発明は、癌、特に膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を予防または治療するための上に定義される組合せの使用にさらに関する。
【００１７】
本発明は、癌、特に膵癌、膠芽腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌および／または胃癌を予防または治療するための医薬品を調製するための上に定義される組合せの使用にさらに関する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
第1の態様によると、本発明は、Mps−1キナーゼ阻害剤と、1種または複数の有糸分裂阻害剤とを含む組合せに関する。
【００１９】
Mps−1キナーゼ阻害剤は、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（R）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
（S）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（4−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，5−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，3−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、および
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物からなる群から選択される。
【００２０】
好ましい実施形態では、Mps−1キナーゼ阻害剤が、
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、および
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、
またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物からなる群から選択される。
【００２１】
別の好ましい実施形態では、Mps−1キナーゼ阻害剤がN−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である。
【００２２】
別の好ましい実施形態では、Mps−1キナーゼ阻害剤がN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である。
【００２３】
別の好ましい実施形態では、Mps−1キナーゼ阻害剤がN−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である。
【００２４】
別の好ましい実施形態では、Mps−1キナーゼ阻害剤がN−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド、またはそのN−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩である。
【００２５】
Mps−1キナーゼ阻害剤は水和物または溶媒和物として存在することができ、Mps−1キナーゼ阻害剤は例えば、化合物の結晶格子の構造要素として極性溶媒、特に水、メタノールまたはエタノールを含む。極性溶媒、特に水の量は、化学量論比または非化学量論比で存在し得る。化学量論的溶媒和物の場合、例えば、水和物、半−、（セミ−）、一−、セスキ−、二−、三−、四−、五−等溶媒和物、または水和物がそれぞれ可能である。本発明は、全てのこのような水和物または溶媒和物を含む。
【００２６】
さらに、Mps−1キナーゼ阻害剤は、遊離型で、例えば、遊離塩基もしくは遊離酸もしくは双性イオンとして存在することができる、または塩型で存在することができる。前記塩は任意の塩、有機または無機付加塩のいずれか、特に薬学で習慣的に使用される任意の薬学的に許容される有機または無機付加塩であり得る。
【００２７】
「薬学的に許容される塩」という用語は、Mps−1キナーゼ阻害剤の比較的非毒性の無機または有機酸付加塩を指す。例えば、S. M. Berge等「Pharmaceutical Salts」、J. Pharm. Sci. 1977、66、1〜19を参照されたい。
【００２８】
さらに、Mps−1キナーゼ阻害剤は、化合物の少なくとも1個の窒素が酸化されていると定義されるN−オキシドとして存在することができる。本発明は、全てのこのような可能なN−オキシドを含む。
【００２９】
さらに、本発明は、Mps−1キナーゼ阻害剤の全ての可能な結晶型または多形を、単一多形としてまたは任意の比の2種以上の多形の混合物として含む。
【００３０】
要約すると、本発明はまた、本明細書に開示されるMps−1キナーゼ阻害剤の有用な形態、例えば、代謝産物、水和物、溶媒和物、プロドラッグ、塩、特に薬学的に許容される塩、および共沈物に関する。
【００３１】
本明細書に開示されるMps−1キナーゼ阻害剤およびMps−1キナーゼ阻害剤の任意の有用な形態は化合物Aとも呼ばれる。
【００３２】
本発明による組合せは、1種または複数の有糸分裂阻害剤をさらに含む。
【００３３】
有糸分裂阻害剤は、以下で化合物Bとも呼ばれる。
【００３４】
本発明の好ましい実施形態では、有糸分裂阻害剤が、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、デスオキシビンカミノール（desoxyvincaminol）、ビンカミノール、ビンブルニン、ビンカマジン、ビネリジンおよびビンブルニンを含むビンカアルカロイドである。
【００３５】
より好ましい実施形態では、有糸分裂阻害剤がビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンからなる群から選択される。
【００３６】
さらにより好ましい実施形態では、有糸分裂阻害剤がビノレルビンである。
【００３７】
本発明の別の好ましい実施形態では、有糸分裂阻害剤がドセタキセル、パクリタキセルおよびこれらの類似体を含むタキサンである。
【００３８】
タキサンは当技術分野で知られており、例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどを含む。
【００３９】
パクリタキセル：
（2α，4α，5β，7β，10β，13α）−4，10−ビス（アセチルオキシ）−13−｛［（2R，3S）−3−（ベンゾイルアミノ）−2−ヒドロキシ−3−フェニルプロパノイル］オキシ｝−1，7−ジヒドロキシ−9−オキソ−5，20−エポキシタキサ−11−エン−2−イルベンゾエート；商品名：Taxol、Anzatax、Paxene。
【００４０】
ドセタキセル：
1，7β，10β−トリヒドロキシ−9−オキソ−5β，20−エポキシタキサ−11−エン−2α，4，13α−トリイル4−アセテート2−ベンゾエート13−｛（2R，3S）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］−2−ヒドロキシ−3−フェニルプロパノエート｝；商品名：Taxotere。
【００４１】
タキサンに基づく癌治療レジメンは、卵巣癌、乳癌、非小細胞および小細胞肺癌、頭頸部癌、食道癌、前立腺癌、膀胱癌およびAIDS関連カポジ肉腫の治療に広く使用されている。パクリタキセル、ドセタキセルおよびこれらの類似体を含むタキサンは微小管阻害薬であり、細胞内の微小管構造を阻害し、細胞死を最終的に引き起こす。具体的には、パクリタキセルなどのタキサンは微小管に結合し、これを安定化し、細胞を有糸分裂で停止させ、細胞増殖抑制性または細胞傷害性反応をもたらす（E. Chuら編、Cancer Chemotherapy Drug Manual（2010）Jones and Bartlette Publishers）。
【００４２】
米国食品医薬品局（FDA）または外国の対応する機関によって承認された他のタキサンも本発明の方法および組合せに使用するのに好ましい。本発明に使用することができる他のタキサンには、例えば、その開示の全体が参照により本明細書に組み込まれる、10th NCI−EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy、アムステルダム、100頁、第382号および第383号（1998年6月16〜19日）；ならびに米国特許第4814470号明細書、第5721268号明細書、第5714513号明細書、第5739362号明細書、第5728850号明細書、第5728725号明細書、第5710287号明細書、第5637484号明細書、第5629433号明細書、第5580899号明細書、第5549830号明細書、第5523219号明細書、第5281727号明細書、第5939567号明細書、第5703117号明細書、第5480639号明細書、第5250683号明細書、第5700669号明細書、第5665576号明細書、第5618538号明細書、第5279953号明細書、第5243045号明細書、第5654447号明細書、第5527702号明細書、第5415869号明細書、第5279949号明細書、第5739016号明細書、第5698582号明細書、第5478736号明細書、第5227400号明細書、第5516676号明細書、第5489601号明細書、第5908759号明細書、第5760251号明細書、第5578739号明細書、第5547981号明細書、第5547866号明細書、第5344775号明細書、第5338872号明細書、第5717115号明細書、第5620875号明細書、第5284865号明細書、第5284864号明細書、第5254703号明細書、第5202448号明細書、第5723634号明細書、第5654448号明細書、第5466834号明細書、第5430160号明細書、第5407816号明細書、第5283253号明細書、第5719177号明細書、第5670663号明細書、第5616330号明細書、第5561055号明細書、第5449790号明細書、第5405972号明細書、第5380916号明細書、第5912263号明細書、第8808113号明細書、第5703247号明細書、第5618952号明細書、第5367086号明細書、第5200534号明細書、第5763628号明細書、第5705508号明細書、第5622986号明細書、第5476954号明細書、第5475120号明細書、第5412116号明細書、第5916783号明細書、第5879929号明細書、第5861515号明細書、第5795909号明細書、第5760252号明細書、第5637732号明細書、第5614645号明細書、第5599820号明細書、第5310672号明細書、第RE34277号明細書、米国特許第5877205号明細書、第5808102号明細書、第5766635号明細書、第5760219号明細書、第5750561号明細書、第5637723号明細書、第5475011号明細書、第5256801号明細書、第5900367号明細書、第5869680号明細書、第5728687号明細書、第5565478号明細書、第5411984号明細書、第5334732号明細書、第5919815号明細書、第5912264号明細書、第5773464号明細書、第5670673号明細書、第5635531号明細書、第5508447号明細書、第5919816号明細書、第5908835号明細書、第5902822号明細書、第5880131号明細書、第5861302号明細書、第5850032号明細書、第5824701号明細書、第5817867号明細書、第5811292号明細書、第5763477号明細書、第5756776号明細書、第5686623号明細書、第5646176号明細書、第5621121号明細書、第5616739号明細書、第5602272号明細書、第5587489号明細書、第5567614号明細書、第5498738号明細書、第5438072号明細書、第5403858号明細書、第5356928号明細書、第5274137号明細書、第5019504号明細書、第5917062号明細書、第5892063号明細書、第5840930号明細書、第5840900号明細書、第5821263号明細書、第5756301号明細書、第5750738号明細書、第5750562号明細書、第5726318号明細書、第5714512号明細書、第5686298号明細書、第5684168号明細書、第5681970号明細書、第5679807号明細書、第5648505号明細書、第5641803号明細書、第5606083号明細書、第5599942号明細書、第5420337号���細書、第5407674号明細書、第5399726号明細書、第5322779号明細書、第4924011号明細書、第5939566号明細書、第5939561号明細書、第5935955号明細書、第5919455号明細書、第5854278号明細書、第5854178号明細書、第5840929号明細書、第5840748号明細書、第5821363号明細書、第5817321号明細書、第5814658号明細書、第5807888号明細書、第5792877号明細書、第5780653号明細書、第5770745号明細書、第5767282号明細書、第5739359号明細書、第5726346号明細書、第5717103号明細書、第5710099号明細書、第5698712号明細書、第5683715号明細書、第5677462号明細書、第5670653号明細書、第5665761号明細書、第5654328号明細書、第5643575号明細書、第5621001号明細書、第5608102号明細書、第5606068号明細書、第5587493号明細書、第5580998号明細書、第5580997号明細書、第5576450号明細書、第5574156号明細書、第5571917号明細書、第5556878号明細書、第5550261号明細書、第5539103号明細書、第5532388号明細書、第5470866号明細書、第5453520号明細書、第5384399号明細書、第5364947号明細書、第5350866号明細書、第5336684号明細書、第5296506号明細書、第5290957号明細書、第5274124号明細書、第5264591号明細書、第5250722号明細書、第5229526号明細書、第5175315号明細書、第5136060号明細書、第5015744号明細書、第4924012号明細書、第6118011号明細書、第6114365号明細書、第6107332号明細書、第6072060号明細書、第6066749号明細書、第6066747号明細書、第6051724号明細書、第6051600号明細書、第6048990号明細書、第6040330号明細書、第6030818号明細書、第6028205号明細書、第6025516号明細書、第6025385号明細書、第6018073号明細書、第6017935号明細書、第6011056号明細書、第6005138号明細書、第6005138号明細書、第6005120号明細書、第6002023号明細書、第5998656号明細書、第5994576号明細書、第5981564号明細書、第5977386号明細書、第5977163号明細書、第5965739号明細書、第5955489号明細書、第5939567号明細書、第5939566号明細書、第5919815号明細書、第5912264号明細書、第5912263号明細書、第5908835号明細書および第5902822号明細書に記載されているものが含まれる。
【００４３】
本発明に使用することができる他の化合物は、タキサン機構を通して作用するものである。タキサン機構を通して作用する化合物には、腫瘍細胞または他の過剰増殖性細胞疾患などの急速に増殖している細胞に対して微小管安定化効果および細胞傷害活性を及ぼす能力を有する化合物が含まれる。このような化合物には、例えば、エポチロンA、B、C、D、EおよびFならびにこれらの誘導体などのエポチロン化合物が含まれる。FDAまたは外国の対応する機関によって承認されたタキサン機構を通して作用する他の化合物（例えば、エポチロン化合物）も本発明の方法および組合せに使用するのに好ましい。エポチロン化合物およびその誘導体は当技術分野で知られており、例えば、その開示の全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第6121029号明細書、第6117659号明細書、第6096757号明細書、第6043372号明細書、第5969145号明細書および第5886026号明細書；ならびに国際公開第97／19086号パンフレット、国際公開第98／08849号パンフレット、国際公開第98／22461号パンフレット、国際公開第98／25929号パンフレット、国際公開第98／38192号パンフレット、国際公開第99／01124号パンフレット、国際公開第99／02514号パンフレット、国際公開第99／03848号パンフレット、国際公開第99／07692号パンフレット、国際公開第99／27890号パンフレットおよび国際公開第99／28324号パンフレットに記載されている。
【００４４】
好ましい実施形態では、タキサンがパクリタキセルである。別の好ましい実施形態では、タキサンがドセタキセルである。
【００４５】
本発明の組合せは1種または複数のさらなる医薬品を含んでもよい。好ましい実施形態では、本発明の組合せがシスプラチンをさらに含む。
【００４６】
さらに、本発明は、
成分A：上記の1種または複数のMps−1キナーゼ阻害剤、またはその生理学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物；および
成分B：ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンを含む1種または複数の有糸分裂阻害剤；および場合により、
1種または複数のさらなる医薬品C
の組合せを含むキットであって、
場合により前記成分AおよびBのいずれかまたは両方が、同時に、並行して、別々にまたは逐次投与するために使用する準備ができている医薬製剤の形態であるキットに関する。
【００４７】
本発明の組合せのいずれの成分AおよびBのいずれかまたは両方も、実施例の全ての化合物の薬学的に許容される塩、共沈物、代謝産物、水和物、溶媒和物およびプロドラッグなどの有用な形態であり得る。
【００４８】
成分は経口、静脈内、局部、局所取り付け、腹腔内または経鼻経路によって互いに独立に投与され得る。
【００４９】
Mps−1キナーゼ阻害剤は、好ましくは経口投与される。タキサンは、好ましくは静脈内投与される。ビンカアルカロイドは、好ましくは静脈内投与される。
【００５０】
成分Aおよび／またはBは、薬学的に許容される担体と、薬学的有効量の本発明の化合物Aおよび／または化合物Bとで構成される医薬組成物の形態で通常投与される。
【００５１】
適当な剤形のこのような組成物を調製するための従来手順を利用することができる。成分および手順には、その各々が参照により本明細書に組み込まれる以下の参考文献に記載されているものが含まれる：Powell，M. F.ら、「Compendium of Excipients for Parenteral Formulations」PDA Journal of Pharmaceutical Science＆Technology 1998、52（5）、238〜311；Strickley，R.G「Parenteral Formulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in United States（1999）−Part−1」PDA Journal of Pharmaceutical Science＆Technology 1999、53（6）、324〜349；およびNema，S.ら、「Excipients and Their Use in Injectable Products」PDA Journal of Pharmaceutical Science＆Technology 1997、51（4）、166〜171。
【００５２】
本発明の組合せは、癌の治療または予防に使用され得る。
【００５３】
好ましい実施形態では、本発明の組合せが膵癌の治療に使用される。
【００５４】
別の好ましい実施形態では、本発明の組合せが膠芽腫の治療に使用される。
【００５５】
別の好ましい実施形態では、本発明の組合せが非小細胞肺癌の治療に使用される。
【００５６】
別の好ましい実施形態では、本発明の組合せが卵巣癌の治療に使用される。
【００５７】
別の好ましい実施形態では、本発明の組合せが胃癌の治療に使用される。
【００５８】
別の好ましい実施形態では、本発明の組合せが乳癌の治療に使用される。
【００５９】
本発明の組合せを利用して細胞増殖および／または細胞分裂を阻害する、遮断する、低減する、減少させる等、ならびに／あるいはアポトーシスをもたらすことができる。
【００６０】
本文書の全体にわたって述べられている「治療すること」または「治療」という用語は、慣習的に使用され、例えば、癌などの疾患または障害の状態等と戦う、これを緩和する、低減する、軽減する、改善する目的での対象の管理または介護である。
【００６１】
治療または予防は、障害を治療するのに有効な量の本発明の化合物Aおよび化合物B、またはその薬学的に許容される塩、異性体、多形、代謝産物、水和物、溶媒和物もしくはエステル等を、ヒトを含む、それを必要とする哺乳動物に投与するステップを含む。
【００６２】
非小細胞肺癌（NSCLC）は、小細胞肺癌（SCLC）以外の任意の種類の上皮性肺癌である。NSCLCは、クラスとして、小細胞癌と比べて化学療法に対して比較的非感受性である。可能な場合には、NSCLCを治癒目的での外科的切除によって主に治療するが、術前（ネオアジュバント化学療法）と術後（補助化学療法）の両方に化学療法がますます使用されている。
【００６３】
最も一般的な種類のNSCLCは、扁平上皮癌、大細胞癌および腺癌であるが、生じる頻度が少ないいくつかの他の種類も存在し、全ての種類が異常な組織学的変異体でおよび混合細胞型組合せとして生じ得る（「非小細胞癌治療−米国国立癌研究所」；2008−10−19；http://www.cancer.gov/CANCERTOPICS/PDQ/TREATMENT/NON-SMALL-CELL-LUNG/PATIENTを検索）。
【００６４】
非喫煙者の肺癌は、ほぼ全般的にNSCLCであり、かなり大部分が腺癌である。
【００６５】
比較的まれに、悪性肺腫瘍が、SCLCとNSCLCの両方の構成要素を含むのが見つかる。これらの場合、腫瘍を混合型小細胞肺癌（c−SCLC）と分類すべきであり、「純粋な」SCLCと同様に（通常は）治療する。
【００６６】
乳癌は、乳房組織、最も一般的には乳管の内側裏打ちまたは乳管に母乳を供給する小葉に由来する種類の癌である。乳管に由来する癌は腺管癌として知られており、小葉に由来する癌は小葉癌として知られている。乳癌はヒトおよび他の哺乳動物で生じる。ヒト症例の圧倒的多数が女性で生じるが、男性の乳癌も生じることがある。乳癌の例としては、それだけに限らないが、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非浸潤性乳管癌、および非浸潤性小葉癌が挙げられる。
【００６７】
卵巣癌は卵巣から生じる癌性増殖である。ほとんど（90％超）の卵巣癌が「上皮性」として分類され、卵巣の表面（上皮）から生じると考えられている。しかしながら、卵管がある卵巣癌の源となり得ることを示唆する証拠もある。卵巣と卵管は互いに密接に関わっているので、これらの卵管癌細胞が卵巣癌を模倣し得ると考えられる。他の種類は卵細胞（胚細胞腫瘍）または支持細胞から生じ得る。
【００６８】
胃癌（stomach cancer）としても知られている胃癌（gastric cancer）は、腹部の上部および肋骨のちょうど下に見られる胃に発症する。胃は体の消化系の一部である。胃は食物を小腸を通過させる前に分解する酸および酵素を産生する。癌は、胃のいずれの部分にも発症し、食道（口と胃をつなぐ管）に向かって上にまたは小腸に向かって下に広がる場合もある。
【００６９】
多形性膠芽腫（GBM）、WHO分類名「膠芽腫」は、グリア細胞に関する、ヒトの最も一般的かつ最も侵襲性の悪性原発性脳腫瘍である。
【００７０】
膵癌は、膵臓を形成する組織中に生じる形質転換細胞に由来する悪性新生物である。最も一般的な種類の膵癌は、膵臓の外分泌構成要素中に生じる腺癌（光学顕微鏡で腺構造を示す腫瘍）である。少数は膵島細胞から生じ、神経内分泌腫瘍として分類される。
【００７１】
用量および投与
哺乳動物において上で同定された状態の治療を決定するための標準的毒性試験および標準的薬理学的アッセイ、ならびにこれらの結果とこれらの状態を治療するために使用される既知の医薬品の結果との比較による、過剰増殖障害および血管新生障害の治療に有用な化合物を評価するために知られている標準的実験室技術に基づいて、本発明の化合物の有効投与量を各所望の適応症を治療するために容易に決定することができる。これらのうちのある状態の治療で投与されるべき有効成分の量は、使用される特定の化合物および投与量単位、投与様式、治療期間、治療される患者の年齢および性別、ならびに治療される状態の性質および程度などの考慮事項により広く変化し得る。
【００７２】
投与されるべき有効成分の総量は、一般的に約0.001mg／kg〜約200mg／kg体重／日、好ましくは約0.01mg／kg〜約20mg／kg体重／日に及ぶ。化合物の臨床的に有用な投与スケジュールは、1〜3回／日投与〜4週間に1度投与に及ぶ。さらに、患者が一定期間薬剤を投与されない「休薬日」が、薬理学的効果と耐容性との間の全体的なバランスに有益となり得る。単位投与量は約0.5mg〜約1500mgの有効成分を含み、1日1回もしくは複数回または1日1回未満投与することができる。静脈内、筋肉内、皮下および非経口注射を含む注射による投与、ならびに注入技術の使用のための平均1日投与量は、好ましくは0.01〜200mg／kg総体重となる。平均1日直腸投与レジメンは、好ましくは0.01〜200mg／kg総体重となる。平均1日膣投与レジメンは、好ましくは0.01〜200mg／kg総体重となる。平均1日局所投与レジメンは、好ましくは1日1〜4回、0.1〜200mg投与される。経皮濃度は、好ましくは0.01〜200mg／kgの1日量を維持するのに必要とされるものとなる。平均1日吸入投与レジメンは、好ましくは0.01〜100mg／kg総体重となる。
【００７３】
当然、各患者のための具体的な初期および継続投与レジメンは、主治診断医により決定される状態の性質および重症度、使用される具体的な化合物の活性、患者の年齢および全身状態、投与期間、投与経路、薬剤の排泄率、薬剤の組合せなどによって変化する。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルもしくは組成物の所望の治療様式および投与回数は、従来の治療試験を用いて当業者によって確認され得る。
【実施例】
【００７４】
以下の表は、この段落および実施例で使用される略語を列挙するものである。NMRピーク形態はスペクトルに現れる通りに言及し、可能性のあるより高次の効果は考慮しなかった。
【００７５】
【表１】
2016521740.tif 000002
【００７６】
本発明の方法により製造された化合物および中間体は精製を必要とし得る。有機化合物の精製は当業者に周知であり、同化合物を精製するいくつかの方法が存在し得る。ある場合には、精製は必要でない場合もある。ある場合には、結晶化によって化合物を精製することができる。ある場合には、適当な溶媒を用いて不純物を攪拌することができる。ある場合には、例えば、Separtis製の予備充填シリカゲルカートリッジ、例えば、Isolute（登録商標）Flashシリカゲル（シリカゲルクロマトグラフィー）またはIsolute（登録商標）Flash NH2シリカゲル（アミノ相−シリカゲルクロマトグラフィー）を適当なクロマトグラフィーシステム、例えば、Flashmaster II（Separtis）またはIsoleraシステム（Biotage）および溶離液、例えば、ヘキサン／酢酸エチルまたはDCM／メタノールの勾配と組み合わせて使用して、クロマトグラフィー、特にフラッシュクロマトグラフィーによって化合物を精製することができる。ある場合には、例えば、ダイオードアレイ検出器および／またはオンラインエレクトロスプレーイオン化質量分析計を備えるWaters自動精製装置を適当な予備充填逆相カラムおよび溶離液、例えば、トリフルオロ酢酸、ギ酸またはアンモニア水などの添加剤を含み得る水およびアセトニトリルの勾配と組み合わせて使用して、分取HPLCによって化合物を精製することができる。
【００７７】
分析UPLC−MSを以下の通り行った：
方法A：システム：PDA DetectorおよびWaters ZQ質量分析計を備えたUPLC Acquity（Waters）；カラム：Acquity BEH C18 1.7μm 2.1×50mm；温度：60℃；溶媒A：水＋0.1％ギ酸；溶媒B：アセトニトリル；勾配：99％A→1％A（1.6分）→1％A（0.4分）；流量：0.8mL／分；注入体積：1.0μl（0.1mg〜1mg／mL試料濃度）；検出：PDAスキャン範囲210〜400nm−固定およびESI（＋）、スキャン範囲170〜800m／z
概要：
特に明言しない限り、全ての反応を脱気溶媒中、アルゴン雰囲気下で行った。
【００７８】
比較例1：
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１】
2016521740.tif 000003
比較例1aにより調製した4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド300mg（622μmol）、テトラヒドロフラン2.0mL、ブロモ（3−フルオロ−4−メトキシベンジル）マグネシウム（テトラヒドロフラン中0.75M）8.29mLを含む混合物を23℃で一晩攪拌した。攪拌を50℃で5時間継続し、混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ入れた。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物261mg（77％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 2.32 (3H), 2.56-2.72 (2H), 2.80 (1H), 3.53 (2H), 3.76 (3H), 3.96 (2H), 6.20 (1H), 7.04-7.12 (2H), 7.20 (1H), 7.30 (1H), 7.46 (1H), 7.92-7.98 (3H), 8.27 (1H) ppm.
【００７９】
比較例1a
4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化２】
2016521740.tif 000004
比較例1bにより調製した6−ブロモ−3−ヨード−N−（3，3，3−トリフルオロプロピル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−8−アミン1.00g（2.3mmol）、比較例1fにより調製したN−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド976mg、（1，1−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）564mg、2M炭酸セシウム水溶液3.45mLおよびテトラヒドロフラン15mLを含む混合物を45℃で12時間攪拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルおよびメタノールで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物580mg（52％）が得られた。
【００８０】
比較例1b
6−ブロモ−3−ヨード−N−（3，3，3−トリフルオロプロピル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−8−アミン
【化３】
2016521740.tif 000005
比較例1cにより調製した6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン2.30g（5.71mmol）のN，N−ジメチルホルムアミド40mL中溶液に3，3，3−トリフルオロプロパン−1−アミン2.0gを添加し、混合物を40℃で一晩攪拌した。水を添加し、混合物をジクロロメタンおよびメタノールで抽出した。有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物2.0g（81％）が得られた。
【００８１】
比較例1c
6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化４】
2016521740.tif 000006
比較例1dにより調製した6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン3.64g（10.5mmol）、N−ヨードスクシンイミド2.8g、N，N−ジメチルホルムアミド72.6mLを含む混合物を60℃で3時間加熱した。N−ヨードスクシンイミド1.4gを添加し、加熱をさらに4時間継続した。溶媒のほとんどを除去し、水を添加し、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を水、チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物3.64g（86％）が得られた。
【００８２】
比較例1d
6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化５】
2016521740.tif 000007
比較例1eにより調製した8−ブロモ−6−クロロ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン5.0（14.0mmol）、臭化水素溶液（酢酸中33％）30mLの混合物をマイクロ波照射下120℃で1時間攪拌した。混合物を水に注ぎ入れ、ジクロロメタンで抽出した。有機相をチオ硫酸ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物3.0g（78％）が得られた。
【００８３】
比較例1e
8−ブロモ−6−クロロ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化６】
2016521740.tif 000008
米国特許出願公開第2007／78136号明細書（国際公開第2007／38314号パンフレット）に記載されている手順により調製した8−ブロモ−6−クロロイミダゾ［1，2−b］ピリダジン100g（430mmol）、N−ヨードスクシンイミド145g、5％／重量濃度塩酸およびトリクロロメタン1Lを含む混合物を6時間加熱還流した。N−ヨードスクシンイミド20gを添加し、加熱をさらに3時間継続した。沈殿を除去し、濾液を1N水酸化ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、ジイソプロピルエーテルを添加し、残渣を23℃で一晩攪拌した。沈殿を濾別し、乾燥させると標記化合物66.6g（43％）が得られた。
【００８４】
比較例1f
N−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド
【化７】
2016521740.tif 000009
23℃の比較例1gにより調製した4−ブロモ−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド260g（1.02mol）のジオキサン2L中溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン390g、2−ジシクロヘキシルホスフィノ−2’，4’，6’−トリイソプロピルビフェニル19.5g、酢酸カリウム150gおよびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0）9.37gを添加し、混合物を6時間還流した。23℃に冷却した後、水および酢酸エチルを添加し、混合物を15分間攪拌した。有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物308g（56％）が得られた。
【００８５】
比較例1g
4−ブロモ−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化８】
2016521740.tif 000010
23℃の4−ブロモ−2−メチル安息香酸300g（1.4mol）のジクロロメタン8.4L中攪拌溶液に、シクロプロパンアミン79.6gおよびEDC320.9gを添加した。一晩攪拌した後、溶液を水で洗浄し、水相をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残っている固体をジイソプロピルエーテルを用いて研和し、濾過し、洗浄し、真空中で乾燥させると標記化合物260g（73％）が得られた。
【００８６】
比較例2：
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−ヒドロキシベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化９】
2016521740.tif 000011
比較例2aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−メトキシベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド14.2mg（26μmol）のジクロロメタン1mL中溶液に、ジクロロメタン中1M三臭化ホウ素溶液131μLを添加し、混合物を23℃で1時間攪拌した。メタノールを添加し、溶媒を除去した。残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物4.9mg（32％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.20分；m／z（ES＋）528.5［MH＋］必要MW＝527.5。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49 (2H), 0.65 (2H), 2.29 (3H), 2.56-2.70 (2H), 2.80 (1H), 3.52 (2H), 4.04 (2H), 6.15 (1H), 6.74 (1H), 6.96-7.06 (2H), 7.26 (1H), 7.41 (1H), 7.88-7.96 (3H), 8.23 (1H), 8.70 (1H) ppm.
【００８７】
比較例2a
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−メトキシベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１０】
2016521740.tif 000012
比較例2bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド30mg（48μmol）、メタノール800μL、テトラヒドロフラン200μL、ジクロロニッケル六水和物18.8mgおよび水素化ホウ素ナトリウム15.0mgを含む混合物を23℃で2時間攪拌した。濾過した後、水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、標記化合物24.2mg（93％）が得られ、これをさらに精製することなく使用した。UPLC−MS：RT＝1.30分；m／z（ES＋）542.6［MH＋］必要MW＝541.6。
【００８８】
比較例2b
N−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１１】
2016521740.tif 000013
比較例2cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド150mg（270μmol）、エタン−1，2−ジチオール340μLおよび三フッ化ホウ素酢酸錯体37.5μLを含む混合物を60℃で16時間加熱した。酢酸エチルを添加し、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水酸化ナトリウム溶液（1M）および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物63.0mg（37％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.37分；m／z（ES＋）632.7［MH＋］必要MW＝631.7。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.51 (2H), 0.59-0.68 (2H), 2.58-2.72 (3H), 2.77 (1H), 3.13 (2H), 3.32-3.40 (2H), 3.42 (3H), 3.50-3.69 (4H), 6.71 (1H), 7.06 (1H), 7.17 (1H), 7.23-7.33 (1H), 7.53-7.60 (2H), 7.69 (1H), 7.83 (1H), 8.00 (1H), 8.19 (1H) ppm.
【００８９】
比較例2c
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１２】
2016521740.tif 000014
比較例2dにより調製したメチル3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキシレート460mg（997mmol）、テトラヒドロフラン10mLおよびN−メトキシメタンアミン塩酸塩126mgを含む混合物を−5℃に冷却した。テトラヒドロフラン中ブロモ（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）マグネシウム溶液（0.5M）35.9mLを添加し、混合物を23℃で一晩攪拌し、冷塩酸に注ぎ入れた。酢酸エチルを添加し、混合物を食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物306mg（55％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.30分；m／z（ES＋）556.5［MH＋］必要MW＝555.5。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.51 (2H), 0.59-0.70 (2H), 2.10 (3H), 2.64-2.83 (3H), 3.62 (3H), 3.72 (2H), 6.79 (1H), 7.00-7.06 (1H), 7.14 (1H), 7.26 (1H), 7.50 (1H), 7.54 (1H), 7.71 (1H), 7.82 (1H), 7.94 (1H), 8.22 (1H) ppm.
【００９０】
比較例2d
3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボン酸メチルメチル
【化１３】
2016521740.tif 000015
比較例1aにより調製した4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド5.0g（10.37mmol）、メタノール100mL、テトラヒドロフラン10mL、（1，1−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）1.7g、トリエチルアミン1.6mLを含む混合物を一酸化炭素雰囲気下100℃、9〜12barで24時間反応させた。溶媒を除去した後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物3.32g（63％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.11分；m／z（ES＋）462.5［MH＋］必要MW＝461.5。
【００９１】
比較例3：
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１４】
2016521740.tif 000016
比較例3aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド45mg（75μmol）を比較例2aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物16.3mg（42％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.30分；m／z（ES＋）556.5［MH＋］必要MW＝555.5。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 2.32 (3H), 2.56-2.72 (2H), 2.80 (1H), 3.54 (2H), 4.05 (2H), 6.22 (1H), 7.03 (1H), 7.15-7.23 (2H), 7.26-7.38 (2H), 7.46 (1H), 7.91-7.99 (3H), 8.24 (1H) ppm.
【００９２】
比較例3a
N−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１５】
2016521740.tif 000017
比較例3bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド80mg（152μmol）を比較例2bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物45mg（49％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.39分；m／z（ES＋）602.7［MH＋］必要MW＝601.7。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.46-0.53 (2H), 0.61-0.68 (2H), 2.30 (3H), 2.52-2.65 (2H), 2.76-2.85 (1H), 3.32-3.41 (2H), 3.48-3.62 (4H), 6.26 (1H), 7.06-7.13 (1H), 7.26 (1H), 7.34 (1H), 7.39-7.43 (1H), 7.48 (1H), 7.63 (1H), 7.91 (1H), 8.05 (2H), 8.25 (1H) ppm.
【００９３】
比較例3b
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１６】
2016521740.tif 000018
比較例3cにより調製した3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−N−メトキシ−N−メチル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキサミド400mg（0.816mmol）のTHF30mL中溶液に、−20℃でブロモ（3−フルオロフェニル）マグネシウム（THF中1M溶液）12.23mL（15当量）を添加した。この温度でさらに30分攪拌した後、溶液を氷冷0.5M HCl溶液50mLに滴加すると、後処理および精製後に、標記化合物334mg（78％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.32分；m／z（ES＋）526.5［MH＋］必要MW＝525.5。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.52 (2H), 0.59-0.69 (2H), 2.20 (3H), 2.62-2.84 (3H), 3.70 (2H), 6.74 (1H), 7.10 (1H), 7.24 (1H), 7.51-7.66 (2H), 7.79-7.96 (4H), 8.15 (1H), 8.23 (1H) ppm.
【００９４】
比較例3c
3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−N−メトキシ−N−メチル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキサミド
【化１７】
2016521740.tif 000019
比較例2dにより調製したメチル3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキシレート6.62g（14.34mmol）およびN−メトキシメタンアミン塩酸塩2.10g（21.52mmol）（1：1）のTHF30mL中懸濁液に、−20℃で塩化リチウム−クロロ（プロパン−2−イル）マグネシウム（1：1）33mL（3当量、THF中1.3M溶液）を滴加した。この温度で2時間攪拌した後、塩化リチウム−クロロ（プロパン−2−イル）マグネシウム（1：1）溶液さらに55mL（5当量）を添加した。40分後、20％塩化アンモニア溶液を添加することによって反応をクエンチすると、後処理および精製後に、標記化合物3.8g（55％）が得られた。UPLC−MS：RT＝1.05分；m／z（ES＋）491.5［MH＋］必要MW＝490.5。
1H-NMR (DMSO-d6):δ = 0.44-0.53 (2H), 0.60-0.69 (2H), 2.35 (3H), 2.57-2.73 (2H), 2.81 (1H), 3.54-3.69 (5H), 6.36 (1H), 7.36 (1H), 7.81 (1H), 7.90 (1H), 7.95 (1H), 8.04 (1H), 8.28 (1H) ppm.comparative
【００９５】
比較例4：
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−メトキシベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１８】
2016521740.tif 000020
比較例1aにより調製した4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド100mg（207μmol）をブロモ（3−メトキシベンジル）マグネシウムを用いて比較例1と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物28.7mg（25％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 2.33 (3H), 2.56-2.72 (2H), 2.80 (1H), 3.53 (2H), 3.69 (3H), 3.99 (2H), 6.28 (1H), 6.77 (1H), 6.87-6.97 (2H), 7.20 (1H), 7.32 (1H), 7.54 (1H), 7.93-8.05 (3H), 8.28 (1H) ppm.
【００９６】
比較例5
N−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンジル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化１９】
2016521740.tif 000021
比較例5aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（4−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド30mg（49μmol）を比較例2aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物7.9mg（29％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 2.33 (3H), 2.55-2.71 (2H), 2.80 (1H), 3.52 (2H), 3.68 (3H), 3.94 (2H), 6.16 (1H), 6.85 (2H), 7.25 (2H), 7.31 (1H), 7.43 (1H), 7.91-8.01 (3H), 8.27 (1H) ppm.
【００９７】
比較例5a
N−シクロプロピル−4−｛6−［2−（4−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２０】
2016521740.tif 000022
実施例9により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド100mg（186μmol）を比較例2bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物60.2mg（53％）が得られた。
【００９８】
本発明の化合物
化合物A1
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２１】
2016521740.tif 000023
−78℃のメチル（トリフェニル）ホスホニウムブロミド386mgのテトラヒドロフラン6.8mL中懸濁液にn−ブチルリチウム（ヘキサン中2.5M）421μLを添加した。混合物を0℃で0.5時間攪拌した後、中間体実施例1aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド150mg（270μmol）のテトラヒドロフラン3.2mL中溶液を添加し、攪拌を一晩継続した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物127mg（81％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48 (2H), 0.64 (2H), 2.17 (3H), 2.61-2.73 (2H), 2.78 (1H), 3.61 (2H), 3.84 (3H), 5.73 (1H), 5.93 (1H), 6.36 (1H), 7.13-7.23 (3H), 7.30 (1H), 7.54 (1H), 7.82 (1H), 7.88 (1H), 8.01 (1H), 8.21 (1H) ppm.
【００９９】
中間体実施例1a
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２２】
2016521740.tif 000024
二塩化エタンジオイル82μLのジクロロメタン2.5mL中溶液に、−78℃でジメチルスルホキシド133μL、引き続いて中間体実施例1bにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド262mg（470μmol）のジクロロメタン2.5mLおよびジメチルスルホキシド0.6mL中溶液を添加した。1時間後、トリエチルアミン393μLを添加し、混合物を23℃で20分間撹拌した。水を添加し、混合物をジクロロメタンおよびメタノール（9：1）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物210mg（80％）が得られた。
【０１００】
中間体実施例1b
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２３】
2016521740.tif 000025
中間体実施例1cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド500mg（1.16mmol）のテトラヒドロフラン20mL中溶液に、0℃で4−ブロモ−2−フルオロ−1−メトキシベンゼン598μL、マグネシウム113mgおよびテトラヒドロフラン5mLから新たに調製したブロモ（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）マグネシウムの溶液を添加した。1時間後、混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ入れた。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物319mg（46％）が得られた。
【０１０１】
中間体実施例1c
N−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２４】
2016521740.tif 000026
中間体実施例1dにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（ヒドロキシメチル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド1.60g（3.69mmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物1.50g（94％）が得られた。
【０１０２】
中間体実施例1d
N−シクロプロピル−4−｛6−（ヒドロキシメチル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２５】
2016521740.tif 000027
0℃の比較例2dにより調製したメチル3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキシレート2.17g（4.70mmol）のテトラヒドロフラン220mL中溶液にジイソブチルアルミニウムヒドリド溶液（テトラヒドロフラン中1M）23.5mLを添加した。1時間後、混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ入れた。水を添加し、混合物を酢酸エチルおよびメタノール（9：1）で抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物1.56g（73％）が得られた。
【０１０３】
化合物A2：
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２６】
2016521740.tif 000028
0℃の1−（クロロメチル）−4−フルオロ−1，4−ジアゾニアビシクロ［2.2.2］オクタンジテトラフルオロボレート32.5mgおよびピリジンフッ化水素酸塩1.16mLの混合物に、中間体実施例2aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド29mg（46μmol）のジクロロメタン0.5mL中溶液を添加した。混合物を23℃で一晩攪拌し、水に注ぎ入れた。有機層を水および食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物14.6mg（52％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49 (2H), 0.65 (2H), 2.23 (3H), 2.61-2.84 (3H), 3.68 (2H), 3.86 (3H), 6.58 (1H), 7.24 (1H), 7.31 (1H), 7.42 (1H), 7.50 (1H), 7.72-7.81 (2H), 7.97 (1H), 8.09 (1H), 8.27 (1H) ppm.
【０１０４】
中間体実施例2a
N−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２７】
2016521740.tif 000029
中間体実施例1aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド50mg（90μmol）を比較例2bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物29mg（51％）が得られた。
【０１０５】
化合物A3：
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２８】
2016521740.tif 000030
中間体実施例3aにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド25.0mg（45μmol）、ナトリウムメタンチオレート25.1mgおよびジメチルスルホキシド900μLの混合物をマイクロ波下130℃で5分間加熱した。塩酸を添加し、溶媒を除去した。残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物8.2mg（32％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 2.29 (3H), 2.56-2.72 (2H), 2.79 (1H), 3.57 (2H), 6.00 (1H), 6.33 (1H), 6.33 (1H), 6.79 (1H), 7.03 (1H), 7.24 (1H), 7.27 (1H), 7.44 (1H), 7.86-7.92 (2H), 8.96 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１０６】
中間体実施例3a
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２９】
2016521740.tif 000031
中間体実施例1cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド500mg（1.16mmol）をブロモ（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）マグネシウムを用いて中間体実施例1bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物519mg（80％）が得られた。
【０１０７】
化合物A4：
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３０】
2016521740.tif 000032
中間体実施例4aにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド23.5mg（41μmol）を実施例3と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物9.5mg（39％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 1.91 (3H), 2.32 (3H), 2.52-2.65 (2H), 2.80 (1H), 3.49 (2H), 6.22 (1H), 6.69 (1H), 7.00 (1H), 7.18 (1H), 7.28 (1H), 7.35 (1H), 7.93 (1H), 7.96-8.02 (2H), 8.25 (1H), 8.59 (1H) ppm.
【０１０８】
中間体実施例4a
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）−1−ヒドロキシエチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３１】
2016521740.tif 000033
−78℃の中間体実施例4bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド50mg（90μmol）のテトラヒドロフラン2.5mL中溶液に、メチルリチウム（ジエチルエーテル中2.5M）225μLを添加した。混合物を−50℃で30分間攪拌し、水に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物29mg（56％）が得られた。
【０１０９】
中間体実施例4b
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−2−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３２】
2016521740.tif 000034
中間体実施例3aにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−2−メトキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド442mg（793μmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物317mg（72％）が得られた。
【０１１０】
化合物A5：
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［フルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３３】
2016521740.tif 000035
中間体実施例5aにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド50mg（95μmol）を実施例2と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物4.3mg（7％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 2.31 (3H), 2.50 (1H), 2.61-2.74 (2H), 2.80 (1H), 3.63 (2H), 6.41 (1H), 6.68 (1H), 7.22 (1H), 7.29 (1H), 7.33-7.39 (1H), 7.46 (1H), 7.75 (1H), 7.87-7.90 (2H), 8.02 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１１１】
中間体実施例5a
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３４】
2016521740.tif 000036
比較例3bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド210mg（400μmol）のジクロロメタン5mL中溶液に、3℃で水素化ホウ素ナトリウム151mgを添加し、攪拌を1時間および23℃で1時間継続した。水を添加し、有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、標記化合物209mg（96％）が得られ、これをさらに精製することなく使用した。
【０１１２】
化合物A6：
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（3−フルオロフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３５】
2016521740.tif 000037
比較例3aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（3−フルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド28mg（46μmol）を化合物A2について記載される調製と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物7.9mg（31％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49 (2H), 0.65 (2H), 2.24 (3H), 2.61-2.84 (3H), 3.70 (2H), 6.61 (1H), 7.23 (1H), 7.41 (1H), 7.46-7.53 (2H), 7.57 (1H), 7.74 (1H), 7.75 (1H), 7.97 (1H), 8.09 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１１３】
化合物A7：
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３６】
2016521740.tif 000038
中間体実施例7aにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［ヒドロキシ（3−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド52mg（96μmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物34mg（62％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47 (2H), 0.64 (2H), 2.19 (3H), 2.62-2.82 (3H), 3.69 (2H), 3.76 (3H), 6.71 (1H), 7.23 (1H), 7.27 (1H), 7.48 (1H), 7.54 (1H), 7.61 (1H), 7.84 (1H), 7.89 (1H), 7.96 (1H), 8.15 (1H), 8.22 (1H) ppm.
【０１１４】
中間体実施例7a
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［ヒドロキシ（3−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３７】
2016521740.tif 000039
中間体実施例1cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド110mg（255μmol）をブロモ（3−メトキシフェニル）マグネシウムを用いて中間体実施例1bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物79mg（55％）が得られた。
【０１１５】
化合物A8：
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３８】
2016521740.tif 000040
化合物A7について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド175mg（326μmol）を化合物A1について記載される調製法と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物96.3mg（55％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48 (2H), 0.64 (2H), 2.18 (3H), 2.60-2.72 (2H), 2.78 (1H), 3.60 (2H), 3.71 (3H), 5.75 (1H), 5.98 (1H), 6.34 (1H), 6.92-6.99 (3H), 7.21 (1H), 7.29 (1H), 7.53 (1H), 7.84 (1H), 7.89 (1H), 8.01 (1H), 8.21 (1H) ppm.
【０１１６】
化合物A9
N−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３９】
2016521740.tif 000041
中間体実施例9aにより調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［ヒドロキシ（4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド400mg（741μmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物264mg（66％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.51 (2H), 0.66 (2H), 2.34 (3H), 2.56-2.72 (2H), 2.81 (1H), 3.56 (2H), 3.68 (3H), 6.31 (1H), 6.86 (2H), 7.33 (1H), 7.38 (2H), 7.49 (1H), 7.93-8.02 (3H), 8.29 (1H) ppm.
【０１１７】
中間体実施例9a
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［ヒドロキシ（4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４０】
2016521740.tif 000042
中間体実施例1cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド500mg（1.16mmol）をブロモ（4−メトキシフェニル）マグネシウムを用いて中間体実施例1bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物501mg（72％）が得られた。
【０１１８】
化合物A10
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（4−メトキシフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４１】
2016521740.tif 000043
化合物A9について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド73mg（136μmol）を化合物A1について記載される調製法と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物36.1mg（45％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47 (2H), 0.63 (2H), 2.17 (3H), 2.60-2.72 (2H), 2.78 (1H), 3.60 (2H), 3.76 (3H), 5.66 (1H), 5.85 (1H), 6.32 (1H), 6.93 (2H), 7.22 (1H), 7.35 (2H), 7.52 (1H), 7.84 (1H), 7.89 (1H), 8.00 (1H), 8.21 (1H) ppm.
【０１１９】
化合物A11
（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４２】
2016521740.tif 000044
中間体実施例1cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド400mg（927μmol）をブロモ（2，5−ジフルオロフェニル）マグネシウムを用いて中間体実施例1bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物326mg（64％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49 (2H), 0.65 (2H), 2.27 (3H), 2.58-2.74 (2H), 2.79 (1H), 3.60 (2H), 5.94 (1H), 6.41 (1H), 6.54 (1H), 7.12-7.27 (3H), 7.44 (1H), 7.57 (1H), 7.82 (1H), 7.88 (1H), 7.99 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１２０】
化合物A12
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，5−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４３】
2016521740.tif 000045
化合物A11について記載される方法により調製した（RS）−N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド300mg（550μmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物82mg（27％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48 (2H), 0.64 (2H), 2.14 (3H), 2.63-2.82 (3H), 3.71 (2H), 6.79 (1H), 7.18 (1H), 7.46 (1H), 7.55 (1H), 7.65 (1H), 7.73 (1H), 7.81 (1H), 7.99 (1H), 8.18 (1H), 8.23 (1H) ppm.
【０１２１】
化合物A13
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４４】
2016521740.tif 000046
中間体実施例1bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［（3−フルオロ−4−メトキシフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド262mg（470μmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物210mg（80％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48 (2H), 0.64 (2H), 2.24 (3H), 2.64-2.75 (2H), 2.78 (1H), 3.68 (2H), 3.94 (3H), 6.67 (1H), 7.28 (1H), 7.34 (1H), 7.85 (1H), 7.89 (1H), 7.93-7.99 (3H), 8.13 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１２２】
化合物A14
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４５】
2016521740.tif 000047
中間体実施例14aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［（2，3−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド296mg（543μmol）を中間体実施例1aと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物165mg（56％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47 (2H), 0.64 (2H), 2.13 (3H), 2.63-2.82 (3H), 3.71 (2H), 6.80 (1H), 7.17 (1H), 7.40 (1H), 7.55 (1H), 7.68-7.84 (3H), 8.04 (1H), 8.19 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１２３】
中間体実施例14a
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，3−ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４６】
2016521740.tif 000048
中間体実施例1cにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−ホルミル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド400mg（927μmol）をブロモ（2，3−ジフルオロフェニル）マグネシウムを用いて中間体実施例1bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物326mg（64％）が得られた。
【０１２４】
化合物A15
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４７】
2016521740.tif 000049
化合物A14について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド75mg（138μmol）を化合物A1について記載される調製法と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物67.2mg（83％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.66 (2H), 2.14 (3H), 2.68-2.83 (3H), 3.69 (2H), 5.81 (1H), 6.47 (1H), 6.65 (1H), 7.14 (1H), 7.22-7.32 (2H), 7.51 (1H), 7.58 (1H), 7.69 (1H), 7.75 (1H), 8.03 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１２５】
化合物A16
N−シクロプロピル−4−｛6−［ジフルオロ（4−メトキシフェニル）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４８】
2016521740.tif 000050
比較例5aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（4−メトキシフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド30mg（49μmol）を化合物A2と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物6.0mg（21％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49 (2H), 0.65 (2H), 2.23 (3H), 2.61-2.84 (3H), 3.67 (2H), 3.77 (3H), 6.55 (1H), 7.04 (2H), 7.24 (1H), 7.55 (2H), 7.78 (2H), 7.94 (1H), 8.09 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１２６】
化合物A17
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４９】
2016521740.tif 000051
［ヨード（ジメチル）オキシド−λ6−スルファニル］メタン68.3mg、水素化ナトリウム（60％）12.3mgおよびジメチルスルホキシド0.82mLを含む混合物を60℃で1.5時間攪拌した。実施例15により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，3−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド21mg（39μmol）のジメチルスルホキシド0.43mL中溶液を添加し、攪拌をマイクロ波照射下130℃で1.5時間継続した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過および溶媒の除去後、残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物9.8mg（41％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49 (2H), 0.65 (2H), 1.36 (2H), 1.65 (2H), 2.24 (3H), 2.50-2.67 (2H), 2.80 (1H), 3.52 (2H), 5.73 (1H), 7.16 (1H), 7.22 (1H), 7.30 (1H), 7.34-7.49 (2H), 7.74 (1H), 7.79 (1H), 7.96 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１２７】
化合物A18
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，3−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５０】
2016521740.tif 000052
中間体実施例18aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（2，3−ジフルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド21mg（34μmol）を化合物A2と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物7.8mg（41％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48 (2H), 0.64 (2H), 2.15 (3H), 2.62-2.82 (3H), 3.71 (2H), 6.66 (1H), 7.14 (1H), 7.43 (1H), 7.56 (1H), 7.61 (1H), 7.65 (1H), 7.75 (1H), 8.07 (1H), 8.11 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１２８】
中間体実施例18a
N−シクロプロピル−4−｛6−［2−（2，3−ジフルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５１】
2016521740.tif 000053
化合物A14について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド50mg（92μmol）を比較例2bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物23.6mg（41％）が得られた。
【０１２９】
化合物A19
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５２】
2016521740.tif 000054
化合物A12について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（2，5−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド150mg（276μmol）を化合物A1と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物96.2mg（61％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47 (2H), 0.64 (2H), 2.12 (3H), 2.62-2.81 (3H), 3.66 (2H), 5.78 (1H), 6.42 (1H), 6.61 (1H), 7.12 (1H), 7.23-7.35 (3H), 7.56 (1H), 7.67 (1H), 7.75 (1H), 8.01 (1H), 8.23 (1H) ppm.
【０１３０】
化合物A20
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５３】
2016521740.tif 000055
化合物A19について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［1−（2，5−ジフルオロフェニル）ビニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド30mg（55μmol）を化合物A17と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物9.9mg（31％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.50 (2H), 0.65 (2H), 1.36 (2H), 1.63 (2H), 2.26 (3H), 2.52-2.64 (2H), 2.80 (1H), 3.52 (2H), 5.75 (1H), 7.16-7.26 (3H), 7.35 (1H), 7.40 (1H) 7.75 (1H), 7.81 (1H), 7.95 (1H), 8.23 (1H) ppm.
【０１３１】
化合物A21
N−シクロプロピル−4−｛6−［（2，5−ジフルオロフェニル）（ジフルオロ）メチル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５４】
2016521740.tif 000056
中間体実施例21aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［2−（2，5−ジフルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド48mg（77μmol）を比較例2bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物17.3mg（38％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48 (2H), 0.65 (2H), 2.16 (3H), 2.64-2.82 (3H), 3.71 (2H), 6.65 (1H), 7.16 (1H), 7.46 (1H), 7.56 (1H), 7.60-7.65 (2H), 7.67 (1H), 8.03 (1H), 8.11 (1H), 8.23 (1H) ppm.
【０１３２】
中間体実施例21a
N−シクロプロピル−4−｛6−［2−（2，5−ジフルオロフェニル）−1，3−ジチオラン−2−イル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５５】
2016521740.tif 000057
化合物A12について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（2，5−ジフルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド100mg（184μmol）を比較例2bと同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物54mg（47％）が得られた。
【０１３３】
化合物A22：
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５６】
2016521740.tif 000058
中間体実施例22aにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−メトキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド27.0mg（49μmol）、トリブロモボラン85.5mgおよびDCM2000μLを含む混合物を氷冷下で30分間攪拌すると、後処理および精製後に、標記化合物5.7mg（22％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.52 (2H), 0.64 (2H), 2.15 (3H), 2.59-2.73 (2H), 2.78 (1H), 3.61 (2H), 5.59 (1H), 6.17 (1H), 6.41 (1H), 6.79 (1H), 7.00 (2H), 7.15 (1H), 7.41 (1H), 7.71-7.78 (1H), 7.84 (1H), 7.98 (1H), 8.20 (1H), 9.21 (1H) ppm.
【０１３４】
中間体実施例22a
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−メトキシフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５７】
2016521740.tif 000059
中間体実施例22bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（5−フルオロ−2−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド1740mg（1.16mmol）を化合物A1と同様に変換すると、後処理後に、標記化合物1270mg（73％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.43-0.52 (2H), 0.59-0.69 (2H), 2.14 (3H), 2.57-2.73 (2H), 2.73-2.84 (1H), 3.50 (3H), 3.56-3.67 (2H), 5.59 (1H), 6.25 (1H), 6.45 (1H), 6.98-7.16 (3H), 7.19 (1H), 7.46 (1H), 7.71 (1H), 7.78 (1H), 8.00 (1H), 8.23 (1H) ppm.
【０１３５】
中間体実施例22b
N−シクロプロピル−4−｛6−（5−フルオロ−2−メトキシベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５８】
2016521740.tif 000060
比較例3cにより調製した3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−N−メトキシ−N−メチル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキサミド2000mg（4.078mmol）をブロモ（5−フルオロ−2−メトキシフェニル）マグネシウムを用いて比較例3bと同様に変換すると、後処理後に、標記化合物1740mg（77％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.43-0.51 (2H), 0.60-0.69 (2H), 2.13 (3H), 2.62-2.83 (4H), 3.60 (3H), 3.70 (2H), 6.75 (1H), 7.15 (1H), 7.21 (1H), 7.33-7.46 (2H), 7.72 (1H), 7.80 (1H), 7.92 (1H), 8.18 (1H), 8.25 (1H) ppm.
【０１３６】
化合物A23：
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（5−フルオロ−2−ヒドロキシフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化５９】
2016521740.tif 000061
中間体実施例23aにより調製した4−（6−｛1−［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロフェニル］シクロプロピル｝−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル）−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド584mg（907μmol）およびPd／C50mgのエタノール7HOAC8：2 50mL中混合物を1atmの水素雰囲気下室温で8日間攪拌すると、後処理後に、標記化合物68mg（14％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47-0.58 (2H), 0.63-0.72 (2H), 1.21-1.29 (2H), 1.55-1.63 (2H), 2.51-2.65 (3H), 2.82 (1H), 3.46 (2H), 5.75 (1H), 6.81 (1H), 6.93-7.03 (1H), 7.11 (1H), 7.27 (1H), 7.37 (1H), 7.85-8.01 (3H), 8.30 (1H), 9.33 (1H) ppm.
【０１３７】
中間体実施例23a
4−（6−｛1−［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロフェニル］シクロプロピル｝−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル）−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化６０】
2016521740.tif 000062
中間体実施例23bにより調製した4−（6−｛1−［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロフェニル］エテニル｝−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル）−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド2060mg（3.27mmol）を化合物A17と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物692mg（33％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.49-0.57 (2H), 0.64-0.73 (2H), 1.26-1.33 (2H), 1.58-1.66 (2H), 2.31 (3H), 2.42-2.55 (2H), 2.83 (1H), 3.41 (2H), 4.98 (2H), 5.72 (1H), 6.97-7.04 (2H), 7.05-7.11 (4H), 7.14 (1H), 7.25-7.30 (2H), 7.32 (1H), 7.83-7.88 (1H), 7.92 (1H), 7.96 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１３８】
中間体実施例23b
4−（6−｛1−［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロフェニル］ブタ−3−エン−1−イル｝−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル）−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化６１】
2016521740.tif 000063
中間体実施例23cにより調製した4−｛6−［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロベンゾイル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド14.06g（22.26mmol）を化合物A1と同様に変換すると、後処理後に、粗標記化合物21.83g（150％）が得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.46-0.54 (2H), 0.62-0.70 (2H), 2.14 (3H), 2.52-2.68 (2H), 2.74-2.87 (1H), 3.59 (2H), 4.84 (2H), 5.65 (1H), 6.16 (1H), 6.39 (1H), 6.77 (2H), 6.93 (2H), 7.02-7.29 (5H), 7.43 (1H), 7.74 (1H), 7.82 (1H), 8.03 (1H), 8.21 (1H) ppm.
【０１３９】
中間体実施例23c
4−｛6−［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロベンゾイル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化６２】
2016521740.tif 000064
THF300mL中比較例3cにより調製した3−［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］−N−メトキシ−N−メチル−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−6−カルボキサミド15.96g（32.54mmol）を［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロフェニル］（ブロモ）マグネシウムの新たに調製した溶液（THF200mL中231mmol）を用いて比較例3bと同様に変換すると、後処理後に、標記化合物13.26g（64.5％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47-0.56 (2H), 0.62-0.71 (2H), 2.12 (3H), 2.67 (2H), 2.80 (1H), 3.68 (2H), 4.96 (2H), 6.68 (1H), 6.83 (2H), 6.97 (2H), 7.07 (1H), 7.18 (1H), 7.32 (1H), 7.40-7.50 (2H), 7.73 (1H), 7.81 (1H), 7.88 (1H), 8.20 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１４０】
中間体実施例23d
［2−（ベンジルオキシ）−5−フルオロフェニル］（ブロモ）マグネシウム
【化６３】
2016521740.tif 000065
マグネシウム5.62g（231mmol）のTHF100mL中攪拌懸濁液に、アルゴン雰囲気下室温で、ヨウ素1結晶および1−（ベンジルオキシ）−2−ブロモ−4−フルオロベンゼン64.95g（231mmol）のTHF100mL中溶液40mLを滴加した。脱色するまで混合物を60℃に加熱し、1−（ベンジルオキシ）−2−ブロモ−4−フルオロベンゼンの残りの溶液を、温度を50℃に保ちながら滴加した。
室温に冷却した後、グリニャール溶液を中間体実施例23cに直接使用した。
【０１４１】
化合物A24：
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化６４】
2016521740.tif 000066
比較例3bにより調製したN−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロベンゾイル）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド80.0mg（152μmol）を化合物A1について記載される調製法と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物27mg（33.7％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.51 (2H), 0.60-0.66 (2H), 2.16 (3H), 2.59-2.72 (2H), 2.77 (1H), 3.62 (2H), 5.81 (1H), 6.06 (1H), 6.41 (1H), 7.15-7.23 (2H), 7.23-7.30 (2H), 7.38-7.47 (1H), 7.55 (1H), 7.77-7.83 (1H), 7.85 (1H), 8.01 (1H), 8.20 (1H) ppm.
【０１４２】
化合物A25：
N−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロフェニル）シクロプロピル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化６５】
2016521740.tif 000067
化合物A23について記載される調製法により調製したN−シクロプロピル−4−｛6−［1−（3−フルオロフェニル）エテニル］−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド27.0mg（52μmol）を化合物A1と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物9mg（32％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47-0.53 (2H), 0.61-0.69 (2H), 1.32-1.38 (2H), 1.54-1.59 (2H), 2.32 (3H), 2.57 (2H), 2.80 (1H), 3.51 (2H), 5.99 (1H), 7.03-7.11 (1H), 7.14-7.23 (2H), 7.27-7.40 (2H), 7.51 (1H), 7.84-7.91 (2H), 8.08 (1H), 8.26 (1H) ppm.
【０１４３】
化合物A26
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化６６】
2016521740.tif 000068
3−フルオロ−4−メトキシフェノール128mg（900μmol）のジメチルスルホキシド2mL中溶液を水素化ナトリウム36mg（900μmol）で処理し、室温で1時間攪拌した。次いで、中間体実施例26aにより調製した4−｛6−ブロモ−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド68mg（150μmol）を添加し、混合物を130℃で1時間および120℃で一晩加熱すると、HPLC精製後に、標記化合物17mg（20％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.43-0.50 (2H), 0.59-0.68 (2H), 2.11 (3H), 2.77 (1H), 3.35 (1H), 3.61 (2H), 3.83 (3H), 4.34 (2H), 4.63 (2H), 6.09 (1H), 7.02-7.09 (1H), 7.13-7.25 (2H), 7.30 (1H), 7.61-7.68 (1H), 7.77 (1H), 7.83 (1H), 7.91 (1H), 8.22 (1H)ppm.
【０１４４】
中間体実施例26a
4−｛6−ブロモ−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化６７】
2016521740.tif 000069
中間体実施例26bにより調製した4−［6−ブロモ−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド3000mg（6677μmol）のTHF150mL中懸濁液に、1−（オキセタン−3−イル）メタンアミン873mg（1002μmol）およびDIPEA2589mg（2003μmol）を添加し、混合物を60℃で72時間加熱した。1−（オキセタン−3−イル）メタンアミン100mgをさらに添加し、60℃で8時間加熱した後、溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄した。形成した沈殿を濾別すると標記化合物0.99g（33％）が得られた。残りの水相をDCMで再抽出し、合わせた有機相を蒸発させた。残渣を75℃でTHFを用いて研和すると標記化合物さらに1.65g（53％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.46-0.53 (2H), 0.61-0.69 (2H), 2.35 (3H), 2.75-2.85 (1H), 3.25 (1H), 3.54-3.69 (2H), 4.31 (2H), 4.62 (2H), 6.45 (1H), 7.36 (1H), 7.84 (1H), 7.90 (1H), 7.94 (1H), 8.12 (1H), 8.30 (1H) ppm.
【０１４５】
中間体実施例26b
4−［6−ブロモ−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化６８】
2016521740.tif 000070
中間体実施例26cにより調製した4−［6−ブロモ−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド12.5g（28.75mmol）のDMF400mL中溶液に、ペルオキシ一硫酸カリウム（5：1：1：2）53.03g（86.26mmol）を添加し、混合物を室温で一晩攪拌すると、水性後処理後に、標記化合物8.6g（60％）（不純物は4−［6−ブロモ−8−（メチルスルフィニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドである）が得られた。
UPLC−MS：RT＝0.98分；m／z（ES＋）450.3［MH＋］必要MW＝449.3。
【０１４６】
中間体実施例26c
4−［6−ブロモ−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化６９】
2016521740.tif 000071
中間体実施例26dにより調製した6−ブロモ−3−ヨード−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン55.69g（150mmol）、中間体実施例26gにより調製したN−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド68g（225mmol）、（1，1−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）11g（15mmol）、1M炭酸カリウム水溶液450mLおよびテトラヒドロフラン632mLを含む混合物を60℃で12時間攪拌すると、水性後処理後に、粗生成物130gが得られた。残渣をDCMを用いて研和すると、標記化合物15.15g（24％）が得られた。濾液をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物さらに2.65g（3％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47-0.54 (2H), 0.62-0.71 (2H), 2.36 (3H), 2.63 (3H), 2.77-2.85 (1H), 7.17 (1H), 7.40 (1H), 7.85 (1H), 7.90 (1H), 8.12 (1H), 8.31 (1H) ppm.
【０１４７】
中間体実施例26d
6−ブロモ−3−ヨード−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化７０】
2016521740.tif 000072
中間体実施例26eにより調製した6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン174g（432mmol）のジオキサン3.8L中溶液にナトリウムメタンチオレート30.28g（432mmol）を添加し、混合物を60℃で5日間攪拌した。ナトリウムメタンチオレートさらに25gを添加し、混合物を80℃で2時間攪拌した。冷却後、溶液を水4Lに注ぎ入れ、水相を酢酸エチルで抽出した。有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させると標記化合物102g（64％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 6.79 (1H), 7.67 (1H)ppm.
【０１４８】
中間体実施例26e
6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化７１】
2016521740.tif 000073
中間体実施例26fにより調製した6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン156g（563mmol）、N−ヨードスクシンイミド190g（1637mmol）およびクロロホルム1.3Lを含む混合物に濃HCl5.5mLを添加し、懸濁液を70℃で一晩加熱した。沈殿を濾別し、ジイソプロピルエーテルを用いて研和すると標記化合物119g（52％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 7.92 (1H), 8.00 (1H) ppm.
【０１４９】
中間体実施例26f
6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化７２】
2016521740.tif 000074
中間体実施例26gにより調製した4，6−ジブロモピリダジン−3−アミン235g（931mmol）、2−ブロモ−1，1−ジエトキシエタン421mL（2792mmol）、水2.93LおよびTHF227mLを含む混合物を125℃で時間および室温で一晩加熱した。固体NaHCO3を添加して溶液を中和し、沈殿を濾別し、水で洗浄し、乾燥させると標記化合物156g（80％）が茶色がかった固体として得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 7.81 (1H), 8.40 (1H) ppm.
【０１５０】
中間体実施例26g
6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化７３】
2016521740.tif 000075
中間体実施例26hにより調製した6−ブロモピリダジン−3−アミン285g（1638mmol）、NaHCO3 275g（3276mmol）およびMeOH2815mLを含む混合物に、室温で臭素85mL（1638mmol）を滴加し、これを室温で一晩攪拌した。臭素34mL（655mmol）およびNaHCO3 55g（655mmol）をさらに添加した後、混合物を再度一晩攪拌した。溶媒を約1000mLまで減少させ、混合物を水5Lに注ぎ入れた。沈殿を濾別し、水で洗浄し、乾燥させると標記化合物411g（99％）が得られた。
1H-NMR (CDCl3):δ= 6.14 (1H), 9.92 (2H) ppm.
【０１５１】
中間体実施例26h
6−ブロモピリダジン−3−アミン
【化７４】
2016521740.tif 000076
3，6−ジブロモピリダジン250g（1.05mol）の25％アンモニア水1.2L中溶液をオートクレーブ中100℃11.7barで一晩加熱した。冷却後、沈殿を濾別し、水で洗浄し、乾燥させると標記化合物137g（75％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 6.58 (1H), 6.69 (2H), 7.41 (1H) ppm.
【０１５２】
中間体実施例26i
N−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド
【化７５】
2016521740.tif 000077
23℃の中間体実施例26jにより調製した4−ブロモ−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド260g（1.02mol）のジオキサン2L中溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン390g、2−ジシクロヘキシルホスフィノ−2’，4’，6’−トリイソプロピルビフェニル19.5g、酢酸カリウム150gおよびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0）9.37gを添加し、混合物を6時間還流した。23℃に冷却した後、水および酢酸エチルを添加し、混合物を15分間攪拌した。有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィーにより精製すると標記化合物308g（56％）が得られた。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3):δ = 0.59 (2H), 0.85 (2H), 1.33 (6H), 2.41 (3H), 2.87 (1H), 5.94 (1H), 7.28 (1H), 7.60 (1H), 7.63 (1H) ppm.
【０１５３】
中間体実施例26j
4−ブロモ−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化７６】
2016521740.tif 000078
23℃の4−ブロモ−2−メチル安息香酸300g（1.4mol）のジクロロメタン8.4L中攪拌溶液に、シクロプロパンアミン79.6gおよびEDC320.9gを添加した。一晩攪拌した後、溶液を水で洗浄し、水相をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残っている固体をジイソプロピルエーテルを用いて研和し、濾過し、洗浄し、真空中で乾燥させると標記化合物260g（73％）が得られた。
【０１５４】
化合物A27
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化７７】
2016521740.tif 000079
2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノール31.9g（199mmol）のジメチルスルホキシド450mL中溶液を水素化ナトリウム7.96g（199mmol）で処理し、室温で1時間攪拌した。次いで、中間体実施例27aにより調製した4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド16g（33.2mmol）を添加し、混合物を130℃で一晩加熱した。冷却後、酢酸エチル300mLを添加し、有機相を水で洗浄する。有機相を蒸発させた後、残渣をエタノール200mLを用いて研和すると標記化合物12.05g（65％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.47-0.53 (2H), 0.62-0.70 (2H), 2.11 (3H), 2.72 (2H), 2.80 (1H), 3.64 (2H), 3.92 (3H), 6.22 (1H), 7.12 (1H), 7.18 (1H), 7.27 (1H), 7.63 (1H), 7.72 (1H), 7.75-7.81 (1H), 7.97 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１５５】
中間体実施例27a
4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化７８】
2016521740.tif 000080
中間体実施例27bにより調製した6−ブロモ−3−ヨード−N−（3，3，3−トリフルオロプロピル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−8−アミン127g（292mmol）、中間体実施例27cにより調製した［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］ボロン酸95.93g（438mmol）、（1，1−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）23.8g（29mmol）、1M炭酸カリウム水溶液438mLおよびテトラヒドロフラン973mLを含む混合物を80℃で8時間および60℃でさらに6日間攪拌した。酢酸エチルを分離した有機相に添加し、混合物を水で洗浄した。ALLOX上を濾過した後、有機相を蒸発させた、残渣をエタノール200mLを用いて研和すると標記化合物71.2g（51％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.48-0.58 (2H), 0.63-0.73 (2H), 2.38 (3H), 2.68 (2H), 2.83 (1H), 3.61 (2H), 6.49 (1H), 7.40 (1H), 7.87 (1H), 7.93 (1H), 7.96-8.04 (2H), 8.32 (1H) ppm.
【０１５６】
中間体実施例27b
6−ブロモ−3−ヨード−N−（3，3，3−トリフルオロプロピル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−8−アミン
【化７９】
2016521740.tif 000081
中間体実施例26eにより調製した6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン119g（295mmol）のTHF800mL中溶液に3，3，3−トリフルオロプロパン−1−アミン66.8g（590.8mmol）を添加し、混合物を80℃で2時間および50℃で一晩攪拌した。溶液を蒸発させ、酢酸エチル600mLを添加し、混合物を水で洗浄した。有機相を乾燥させ、蒸発させると、標記化合物127g（99％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 2.63 (2H), 3.55 (2H), 6.43 (1H), 7.59 (1H), 7.89-7.98 (1H) ppm.
【０１５７】
中間体実施例27c
［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］ボロン酸
【化８０】
2016521740.tif 000082
室温の中間体実施例26iにより調製したN−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド（20.2g、67.13mol）のアセトン（300mL）中溶液に、過ヨウ素酸ナトリウム（43.1g、201.40mol）および酢酸アンモニウム（134.26mol、1M水溶液134mL）を添加し、混合物を3時間攪拌した。さらなる水を添加し（120mL）、混合物を40℃でさらに2時間攪拌した。4N HCl（32mL）を添加した後、有機相を真空中で除去し、残りを酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、Whatmanフィルタを通して濾過し、蒸発させた。残渣をトルエンに再溶解し、蒸発させる（2回）と、［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］ボロン酸14.59g（94.3％）が得られた。
1H-NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ =8.21 (1H), 8.04 (2H), 7.56 (2H), 7.17 (1H), 2.77 (1H), 2.25 (3H), 0.62 (2H), 0.47 (2H) ppm.
【０１５８】
化合物A28
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化８１】
2016521740.tif 000083
室温の中間体実施例28aにより調製したN−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミド52mg（0.1mmol）のNMP（2mL）中溶液に、1−（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル）メタンアミン（35mg、0.3mmol）およびDIPEA（0.3mmol、51μL）を添加し、混合物を110℃で72時間攪拌すると、HPLC精製後に、標記化合物26.9mg（47％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.43-0.50 (2H), 0.58-0.69 (2H), 1.22 (2H), 1.62 (2H), 1.86-2.02 (1H), 2.04-2.11 (3H), 2.77 (1H), 3.19-3.30 (4H), 3.82 (2H), 3.89 (3H), 6.16 (1H), 7.03-7.13 (1H), 7.15 (1H), 7.20-7.30 (1H), 7.57-7.63 (1H), 7.69 (1H), 7.80 (1H), 7.93 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１５９】
中間体実施例28a
N−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミド
【化８２】
2016521740.tif 000084
中間体実施例28bにより調製したN−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミド986mg（1986μmol）を中間体実施例26bと同様に変換すると、後処理後に、標記化合物1040mg（99％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.51 (2H), 0.61-0.69 (2H), 2.11 (3H), 2.73-2.84 (1H), 3.66 (3H), 3.91 (3H), 7.13-7.21 (1H), 7.23 (1H), 7.33-7.42 (1H), 7.64-7.70 (3H), 8.30 (1H), 8.40 (1H) ppm.
【０１６０】
中間体実施例28b
N−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミド
【化８３】
2016521740.tif 000085
中間体実施例26bにより調製した4−［6−ブロモ−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド3.1g（7428μmol）を2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノールを用いて化合物A27と同様に変換すると、後処理および精製後に、標記化合物1010mg（27％）が得られた。
1H-NMR (DMSO-d6):δ= 0.44-0.50 (2H), 0.59-0.70 (2H), 2.09 (3H), 2.67 (3H), 2.73-2.83 (1H), 3.90 (3H), 7.06 (1H), 7.14 (1H), 7.19 (1H), 7.31 (1H), 7.58-7.65 (1H), 7.67 (1H), 8.09 (1H), 8.26 (1H)ppm.
【０１６１】
増殖アッセイ
培養腫瘍細胞（MCF7、ホルモン依存性ヒト乳癌細胞、ATCC HTB22；NCI−H460、ヒト非小細胞肺癌細胞、ATCC HTB−177；DU145、ホルモン非依存性ヒト前立腺癌細胞、ATCC HTB−81；HeLa−MaTu、ヒト子宮頸癌細胞、EPO−GmbH、ベルリン；HeLa−MaTu−ADR、多剤耐性ヒト子宮頸癌細胞、EPO−GmbH、ベルリン；HeLaヒト頸部腫瘍細胞、ATCC CCL−2；B16F10マウスメラノーマ細胞、ATCC CRL−6475）を10％ウシ胎児血清を補充したそれぞれの増殖培地200μlに96ウェルマルチタイタープレート中5000個細胞／ウェル（MCF7、DU145、HeLa−MaTu−ADR）、3000個細胞／ウェル（NCI−H460、HeLa−MaTu、HeLa）または1000個細胞／ウェル（B16F10）の密度で蒔いた。24時間後、1プレート（0ポイントプレート）の細胞をクリスタルバイオレットで染色し（以下参照）、他のプレートの培地を、試験物質を種々の濃度（0μM、ならびに0.01〜30μMの範囲；溶媒ジメチルスルホキシドの最終濃度は0.5％とした）で添加した新鮮な培養培地（200μl）に取り替えた。細胞を試験物質の存在下で4日間インキュベートした。細胞をクリスタルバイオレットで染色することによって細胞増殖を測定した：室温で15分間、20μl／測定点の11％グルタルアルデヒド溶液を添加することによって細胞を固定した。固定細胞の水による3回洗浄サイクル後、プレートを室温で乾燥させた。100μl／測定点の0.1％クリスタルバイオレット溶液（pH3.0）を添加することによって細胞を染色した。染色細胞の水による3回洗浄サイクル後、プレートを室温で乾燥させた。100μl／測定点の10％酢酸溶液を添加することによって染料を溶解した。595nmの波長での測光によって吸光度を測定した。測定値を0ポイントプレート（＝0％）の吸光度および未処理（0μm）細胞（＝100％）の吸光度値に正規化することによって、細胞数の変化（％）を計算した。会社の自己のソフトウェアを用いて4パラメータ当てはめによってIC50値を測定した。
【０１６２】
Mps−1キナーゼアッセイ
ヒトキナーゼMps−1はビオチン化基質ペプチドをリン酸化する。リン酸化産物の検出は、供与体としてのユーロピウム標識抗ホスホセリン／トレオニン抗体から受容体としての架橋アロフィコシアニン（SA−XLent）で標識したストレプトアビジンへの時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（TR−FRET）によって達成する。化合物をキナーゼ活性の阻害について試験する。
【０１６３】
N末端GSTタグ化ヒト全長組換えMps−1キナーゼ（Invitrogen、Karslruhe、ドイツから購入、カタログ番号PV4071）を使用した。キナーゼ反応の基質として、アミノ酸配列PWDPDDADITEILG（アミド型のC末端、Biosynthan GmbH、ベルリンから購入）のビオチン化ペプチドを使用した。
【０１６４】
アッセイのために、試験化合物のDMSO中100倍濃縮溶液50nLを黒色低容積384ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio−One、Frickenhausen、ドイツ）にピペットで入れて、Mps−1のアッセイ緩衝液［0.1mMオルトバナジン酸ナトリウム、10mM MgCl2、2mM DTT、25mM Hepes pH7.7、0.05％BSA、0.001％Pluronic F−127］中溶液2μlを添加し、混合物を22℃で15分間インキュベートして、キナーゼ反応の開始前に試験化合物とMps−1の予備結合を可能にした。次いで、16.7アデノシン三リン酸（ATP、16.7μM→5μlアッセイ体積中最終濃度は10μMである）およびペプチド基質（1.67μM→5μlアッセイ体積中最終濃度は1μMである）のアッセイ緩衝液中溶液3μlを添加することによってキナーゼ反応を開始し、得られた混合物を22℃で60分の反応時間インキュベートした。アッセイにおけるMps−1の濃度は酵素のロットの活性に応じて調整し、線形範囲のアッセイを有するよう適当に選択し、典型的な濃度は約1nM（5μlのアッセイ体積中最終濃度）の範囲にあった。HTRF検出試薬の溶液（100mM Hepes pH7.4、0.1％BSA、40mM EDTA、140nMストレプトアビジン−XLent［＃61GSTXLB、Fa. Cis Biointernational、Marcoule、フランス］、1.5nM抗ホスホ（Ser／Thr）−ユーロピウム抗体［＃AD0180、PerkinElmer LAS、Rodgau-Jugesheim、ドイツ］3μlを添加することによって反応を停止した。
【０１６５】
得られた混合物を22℃で1時間インキュベートしてリン酸化ペプチドと抗ホスホ（Ser／Thr）−ユーロピウム抗体を結合させた。その後、ユーロピウム標識抗ホスホ（Ser／Thr）抗体からストレプトアビジン−XLentへの共鳴エネルギーを測定することによって、リン酸化基質の量を評価した。そのため、350nmでの励起後の620nmおよび665nmでの蛍光発光をViewlux TR−FRETリーダー（PerkinElmer LAS、Rodgau-Jugesheim、ドイツ）で測定した。「ブランク補正正規化比」（665nmおよび622nmでの発光の伝統的な比と類似のViewlux特定読出、ここでは比を計算する前にブランクおよびEu供与体のクロストークを、665nmシグナルから減じる）をリン酸化基質の量の尺度とみなした。データを正規化した（阻害剤を用いない酵素反応＝0％阻害、酵素を用いない全ての他のアッセイ成分＝100％阻害）。試験化合物を、20μM〜1nMの範囲の10の異なる濃度で（20μM、6.7μM、2.2μM、0.74μM、0.25μM、82nM、27nM、9.2nM、3.1nMおよび1nM、希釈系列は、連続1：3希釈により100倍濃縮ストック溶液のレベルでアッセイの前に調製）、各濃度につき2連の値で同じマイクロタイタープレートで試験し、社内ソフトウェアを用いて4パラメータ当てはめによりIC50値を計算した。
【０１６６】
【表２】
2016521740.tif 000086
【０１６７】
紡錘体形成チェックポイントアッセイ
紡錘体形成チェックポイントにより、有糸分裂中の適切な染色体分離が確保される。有糸分裂に入ると、染色体が凝縮し始め、これはセリン10上のヒストンH3のリン酸化によって達成される。セリン10上のヒストンH3の脱リン酸化は分裂後期に始まり、分裂終期の初期に終了する。したがって、セリン10上のヒストンH3のリン酸化を有糸分裂中の細胞のマーカーとして利用することができる。ノコダゾールは、微小管不安定化物質である。例えば、ノコダゾールは微小管動態に干渉し、紡錘体形成チェックポイントを起動する。細胞はG2／M移行で有糸分裂に停止し、セリン10上のリン酸化ヒストンH3を示す。Mps−1阻害剤による紡錘体形成チェックポイントの阻害は、ノコダゾールの存在下で有糸分裂妨害を無効化し、細胞が有糸分裂を早まって完了する。この変化は、セリン10上のヒストンH3のリン酸化を有する細胞の減少によって検出される。この減少を、本発明の化合物が有糸分裂打破を誘導する能力を決定するためのマーカーとして使用する。
【０１６８】
ヒト頸部腫瘍細胞系HeLa（ATCC CCL−2）の培養細胞を1％（v／v）グルタミン、1％（v／v）ペニシリン、1％（v／v）ストレプトマイシンおよび10％（v／v）ウシ胎児血清を補充した20μl ダルベッコ培地（w／oフェノールレッド、w／oピルビン酸ナトリウム、w 1000mg／mlグルコース、w ピリドキシン）に384ウェルマイクロタイタープレート中2500個細胞／ウェルの密度で蒔いた。37℃で一晩のインキュベーション後、0.1μg／mlの最終濃度の10μl／ウェルノコダゾールを細胞に添加した。24時間のインキュベーション後、細胞を細胞周期進行のG2／M期で停止した。ジメチルスルホキシド（DMSO）に可溶化した試験化合物を種々の濃度（0μM、ならびに0.005μM〜10μMの範囲；溶媒DMSOの最終濃度は0.5％（v／v）でとした）で添加した。細胞を試験化合物の存在下37℃で4時間インキュベートした。その後、細胞を4℃で一晩リン酸緩衝食塩水（PBS）中4％（v／v）パラホルムアルデヒドに固体し、次いで、室温で20分間PBS中0.1％（v／v）Triton X（商標）100で透過処理し、室温で15分間PBS中0.5％（v／v）ウシ血清アルブミン（BSA）でブロックした。PBSで洗浄した後、20μl／ウェルの抗体溶液（抗ホスホヒストンH3クローン3H10、FITC；Upstate、カタログ番号16−222；1：200希釈）を細胞に添加し、これを室温で2時間インキュベートした。その後、細胞をPBSで洗浄し、20μl／ウェルのHOECHST33342染料溶液（5μg／ml）を細胞に添加し、細胞を暗所中室温で12分間インキュベートした。細胞をPBSで2回洗浄し、次いで、PBSで覆い、分析まで4℃で保管した。Perkin Elmer OPERA（商標）High−Content Analysisリーダーを用いて画像を取得した。Cell Cycleアプリケーションモジュールを利用してMolecular devices製の画像解析ソフトウェアMetaXpress（商標）を用いて画像を解析した。このアッセイでは、HOECHST33342とセリン10上のリン酸化ヒストンH3の両標識を測定した。HOECHST33342はDNAを標識するので、細胞数を計数するために使用する。セリン10上のリン酸化ヒストンH3の染色により、有糸分裂細胞の数を測定する。Mps−1の阻害により、不適切な有糸分裂進行を示すノコダゾールの存在下での有糸分裂数が減少する。4パラメータロジスティック回帰分析によって各試験化合物についてのIC50値を決定することにより、アッセイの生データをさらに分析した。
【０１６９】
ラット肝細胞におけるインビトロ代謝安定性の研究（肝臓インビボ血液クリアランス（CL）の計算を含む）
Han Wistarラットの肝細胞を2段階灌流法を介して単離した。灌流後、肝臓をラットから慎重に取り出し、肝被膜を開き、肝細胞を氷冷WMEを用いてペトリ皿に穏やかに振り出した。得られた細胞懸濁物を滅菌ガーゼを通して濾過して50mlファルコンチューブに入れ、室温において50×gで3分間遠心分離した。細胞ペレットをWME30mlに再懸濁し、Percoll（登録商標）勾配を通して100×gで2回遠心分離した。肝細胞をウイリアムス培地E（WME）で再度洗浄し、5％FCSを含む培地に再懸濁した。トリパンブルー排除によって細胞生存率を決定した。
【０１７０】
代謝安定性アッセイのために、肝細胞をガラスバイアルに5％FCSを含むWME中1.0×106個生活細胞／mlの密度で分配した。試験化合物を最終濃度1μMで添加した。インキュベーション中、肝細胞懸濁物を連続的に振盪し、一定分量を2、8、16、30、45および90分にとり、これに等体積の冷メタノールを直ちに添加した。試料を−20℃で一晩凍結し、その後3000rpmで15分間遠心分離し、上清をLCMS／MS検出を備えるAgilent 1200 HPLCシステムによって分析した。
【０１７１】
試験化合物の半減期を濃度−時間プロットから決定した。半減期から、固有クリアランスを計算した。追加のパラメータ肝血流、インビボおよびインビトロでの肝細胞量と一緒に。肝臓インビボ血液クリアランス（CL）および最大経口バイオアベイラビリティ（Fmax）を計算した。以下のパラメータ値を用いた：肝血流−4.2L／h／kgラット；比肝臓重量−32g／kgラット体重；インビボ肝細胞−1.1×108個細胞／g肝臓、インビトロ肝細胞−0.5×106／ml。
【０１７２】
ヒトCYP3A4での阻害能力の決定
ヒト肝ミクロソームおよび基準基質ミダゾラムを用いて、試験化合物がCYP3A4の競合阻害剤として作用する能力をインビトロアッセイで評価した。試験化合物をアセトニトリルに溶解した。ヒト肝ミクロソーム調製物（HLMのプール）をアッセイに適用した。
【０１７３】
試験化合物のストック溶液を、EDTA、NADP、グルコース6−リン酸およびグルコース6−リン酸脱水素酵素を含むリン酸緩衝液に添加した。この混合物をGenesis Workstation（Tecan、Crailsheim、FRG）で逐次希釈した。予熱後、プローブ基質（ミダゾラム）の混合物を添加して反応を開始した。最終的に、インキュベーション混合物は、総体積200μLのタンパク質濃度60μg／mLのヒト肝ミクロソーム、NADPH再生系（1mM NADP、5.0mMグルコース6−リン酸、グルコース6−リン酸脱水素酵素（1.5U／mL））、1.0mM EDTA、6つの異なる濃度の試験化合物、プローブ基質としての2.5μMミダゾラムおよびリン酸緩衝液（50mM、pH7.4）を含んでいた。37℃で、96ウェルプレート（マイクロタイタープレート、96ウェルプレート）において、Genesis Workstation（Tecan、Crailsheim、FRG）でインキュベーションを行った。プローブ基質のストック溶液を水に調製した（ミダゾラム10mM）。ケトコナゾールを直接作用阻害剤の陽性対照として使用した。基準試料（基質、阻害剤を含まない）を6連で並列にインキュベートし、これらは試験インキュベーションと同量の溶媒を含んでいた。内部標準を含むアセトニトリル100μLを添加して反応を停止した。ウェルプレートを遠心分離して沈殿したタンパク質を除去し、上清をLC−MS／MSによって分析した。
【０１７４】
試験化合物の存在下でのCYP3A4媒介代謝活性を対応する基準値の割合として表した。対照活性％対試験阻害剤の濃度のプロットの非線形最小二乗回帰分析を用いて、シグモイド型曲線をデータに当てはめて酵素阻害パラメータIC50を計算した。50％未満の阻害を観察し、データを外挿しなかった；したがって、IC50が、適用した試験化合物の最高濃度より高いと報告された。
【０１７５】
化合物A26、A27およびA28は、紡錘体形成チェックポイントアッセイにおける活性＜1.0nM、HeLa細胞を用いた増殖アッセイにおける活性＜25nM、ラット肝細胞におけるインビトロ代謝安定性Fmax≧39％および肝臓酵素CYP3A4の阻害≧5μMによって特徴付けられる。
【０１７６】
表2、3、4、5および6は、3つのセットの化合物の肝臓インビボ血液クリアランス（CL）および最大経口バイオアベイラビリティ（Fmax）として表されるラット肝細胞のインビトロ代謝安定性を比較している。
【０１７７】
【表３】
2016521740.tif 000087
【０１７８】
【表４】
2016521740.tif 000088
【０１７９】
【表５】
2016521740.tif 000089
【０１８０】
【表６】
2016521740.tif 000090
【０１８１】
【表７】
2016521740.tif 000091
【０１８２】
表7は追加の化合物の肝臓インビボ血液クリアランスおよび最大経口バイオアベイラビリティを列挙している。
【０１８３】
【表８】
2016521740.tif 000092
【０１８４】
ヌードマウスにおけるA2780cisヒト卵巣癌モデルのパクリタキセルと組み合わせた本発明のMps−1キナーゼ阻害剤のインビボ抗腫瘍有効性
本発明のMps−1キナーゼ阻害剤とパクリタキセルの併用療法の効果を、適応性シスプラチン抵抗性およびパクリタキセル内因的抵抗性A2780cis異種移植モデルで試験した。化合物A27を、1日2回間欠（2日間オン／5日間オフ）投与スケジュールで組み合わせて最適以下用量（MTDの40％および60％）で経口適用した。パクリタキセルを、それぞれのMTD（最大耐量）で1週間に1回静脈内適用したが、パクリタキセルに対する予期しない高い反応のために、用量を腫瘍接種後19日目からMTDの75％に減少させた。動物の体重および腫瘍サイズを1週間に3回測定した。全ての群についての処理を腫瘍サイズ29mm2、腫瘍細胞接種後6日目に開始した。併用療法のために、化合物A27とパクリタキセルを4時間の時間枠内で同日に適用した。対照および化合物A27単独療法群の動物を15日の期間処理した。パクリタキセル単独療法およびパクリタキセル／化合物A27併用療法群の動物を33日の期間処理した。最後の1処理後の試験の最後に、血漿および腫瘍をPK分析用に採取し、最終的な腫瘍重量を測定した。
【０１８５】
化合物A27は、2日間オン／5日間オフ経口で2mg／kgまたは3mg／kgの1日2回の最適以下（MTDの40％および60％）の投与で15処理日後に単独療法有効性を全く達成しないまたは弱い単独療法有効性しか達成せず、それぞれT／C重量0.98または0.88、および相対T／C面積1.00または0.90を達成した（表8）。
【０１８６】
1日オン／6日間オフ静脈内（静脈内（intravenous（ly））で適用したMTD／75％MTD（20／15mg／kg）のパクリタキセル単独療法と、2日間オン／5日間オフで、2mg／kgおよび3mg／kgで1日2回経口（経口（per os）、口により、経口的）でMTDの40％および60％で投与した化合物A27とのパクリタキセル併用療法の両方が、15処理日後のビヒクル処理対照群と比べて腫瘍サイズの比較できる統計学的に有意な減少を達成し、0.04〜0.07の間の相対T／C面積を示した。パクリタキセル単独療法およびパクリタキセル／化合物A27併用群をさらに18日間処理した。33日の処理日後、パクリタキセル／化合物A27  3mg／kg  1日2回経口2日間オン／5日間オフでの併用療法群においてパクリタキセル単独療法有効性の統計学的に有意な改善が達成された。パクリタキセル単独療法群とパクリタキセル／化合物A27併用療法群の両方で進行性疾患が観察されたが、A2780cis卵巣腫瘍において、パクリタキセル単独療法と比べて、併用療法において明らかな腫瘍成長遅延が観察された（表8）。
【０１８７】
3mg／kg  1日2回間欠単独処理群において、一過的な体重減少が生じた。3mg／kg  1日2回間欠パクリタキセル併用療法群において、10日目および12日目に毒性が生じた（10匹のうち2匹死亡）。全体的に、処理の耐容性は許容できるものであった（表8）。
【０１８８】
要約すると、この試験により、パクリタキセル内因的抵抗性卵巣癌モデルA2780cisにおいてMps−1キナーゼ阻害剤化合物A27とパクリタキセルの協同作用が証明され、パクリタキセル単独療法と比べて有意な腫瘍成長遅延が達成された。
【０１８９】
【表９】
2016521740.tif 000093
【０１９０】
ヌードマウスにおけるNCI−H1299ヒトNSCLCモデルのパクリタキセルと組み合わせた本発明のMps−1キナーゼ阻害剤のインビボ抗腫瘍有効性
本発明のMps−1キナーゼ阻害剤とパクリタキセルの併用療法の効果を、ヌードマウスにおけるNCI−H1299タキサン内因的抵抗性ヒト肺癌（NSCLC）異種移植モデルで試験した。化合物A27を、1日2回間欠（2日間オン／5日間オフ）投与スケジュールで組み合わせて最適以下用量（MTDの40％および60％）で経口適用した。パクリタキセルを、それぞれのMTDで1週間に1回静脈内適用したが、パクリタキセルに対する予期しない高い反応のために、用量を腫瘍接種後24日からMTDの75％に減少させた。物質を最適なビヒクルに製剤化して溶液を得た。動物の体重および腫瘍サイズを1週間に3回測定した。全ての群についての処理を腫瘍サイズ30mm2、腫瘍細胞接種後8日目に開始した。併用療法のために、化合物A27とパクリタキセルを4時間の時間枠内で同日に適用した。対照および化合物A27単独療法群の動物を22日の期間処理した。パクリタキセル単独療法群およびパクリタキセル／化合物A27併用療法群の動物を36日の期間処理した。最後の1処理後の試験の最後に、血漿および腫瘍をPK分析用に採取し、最終的な腫瘍重量を測定した。
【０１９１】
化合物A27は、2日間オン／5日間オフ経口で2mg／kgまたは3mg／kgの1日2回の最適以下（MTDの40％および60％）の投与で22処理日後に単独療法有効性を全く達成しないまたは弱い単独療法有効性しか達成せず、それぞれT／C重量1.18または0.74、および相対T／C面積0.99または0.75を達成した（表9）。
【０１９２】
1日オン／6日間オフ静脈内で適用したMTD／75％MTD（20／15mg／kg）のパクリタキセル単独療法と、2日間オン／5日間オフで、2mg／kgおよび3mg／kgで1日2回経口でMTDの40％および60％で投与した化合物A27とのパクリタキセル併用療法の両方が、22処理日後のビヒクル処理対照群と比べて腫瘍サイズの統計学的に有意な減少を達成し、パクリタキセル単独については相対T／C面積0.13、パクリタキセルと化合物A27の組合せ2mg／kgまたは3mg／kgで1日2回経口で2日間オン／5日間オフについては相対T／C面積それぞれ0.01および−0.03を示した。パクリタキセル単独療法群およびパクリタキセル／化合物A27併用群をさらに14日間処理した。36日の処理日後、パクリタキセル／化合物A27  3mg／kg  1日2回経口2日間オン／5日間オフでの併用療法群においてパクリタキセル単独療法有効性の統計学的に有意な改善が達成された。NCI−H1299  NSCLC腫瘍において、パクリタキセル単独療法では進行性疾患が観察されたが、パクリタキセル／化合物A27併用療法群、特に、パクリタキセル／化合物A27  3mg／kg  1日2回経口2日間オン／5日間群において、腫瘍成長停滞の誘導による疾患安定化の明らかな兆候が示された（表9）。
【０１９３】
2mg／kgおよび3mg／kg  1日2回間欠パクリタキセル併用療法群において、それぞれ14日目（10匹のうち2匹死亡）ならびに11、14および15日目（10匹のうち3匹死亡）に毒性が生じた。全体的に、処理の耐容性は許容できるものであった（表9）。
【０１９４】
要約すると、この試験により、パクリタキセル内因的抵抗性NSCLCモデルNCI−H1299においてMps−1キナーゼ阻害剤化合物A27とパクリタキセルの協同作用が証明され、疾患安定化を誘導するパクリタキセル単独療法有効性の有意な改善が達成された。
【０１９５】
【表１０】
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【０１９６】
ヌードマウスにおけるNCI−H1299ヒトNSCLCモデルのドセタキセルと組み合わせたMps−1キナーゼ阻害剤のインビボ抗腫瘍有効性
Mps−1キナーゼ阻害剤と、NSCLC患者のケアの標準として使用される、ドセタキセル、別のSAC活性化、微小管不安定化、抗有糸分裂薬の併用療法の効果を、ヌードマウスにおけるNCI−H1299タキサン内因的抵抗性ヒト肺癌（NSCLC）異種移植モデルで試験した。
【０１９７】
Mps−1キナーゼ阻害剤を、ドセタキセルと組み合わせた最適化1日2回間欠（2日間オン／5日間オフ）投与スケジュールで最適以下用量（MTDの80％）で経口適用した。ドセタキセルをそれぞれのMTDで1週間に1回静脈内適用した。物質を最適なビヒクルに製剤化して溶液を得た。動物の体重および腫瘍サイズを1週間に2回測定した。全ての群についての処理を腫瘍サイズ28mm2、腫瘍細胞接種後10日目に開始した。併用療法のために、Mps−1キナーゼ阻害剤とドセタキセルを4時間の時間枠内で同日に適用した。対照およびMps阻害剤単独療法群の動物を20日の期間処理した。ドセタキセル単独療法群およびドセタキセル／Mps−1キナーゼ阻害剤併用療法群の動物を42日の期間処理した。最後の1処理後の試験の最後に、血漿および腫瘍をPK分析用に採取し、最終的な腫瘍重量を測定した。
【０１９８】
ヌードマウスにおけるMDA−MB  231ヒトトリプルネガティブ乳癌モデルのパクリタキセルと組み合わせたMps−1キナーゼ阻害剤のインビボ抗腫瘍有効性
Mps−1キナーゼ阻害剤とパクリタキセルの併用療法の効果を、ヌードマウスにおけるMDA−MB  231ヒトトリプルネガティブ（Her2／neu、プロゲステロン受容体、エストロゲン受容体の発現がない）異種移植モデルで試験した。
【０１９９】
Mps−1キナーゼ阻害剤を、パクリタキセルと組み合わせた最適化1日2回間欠（2日間オン／5日間オフ）投与スケジュールで最適以下用量（MTDの40％）で経口適用した。パクリタキセルをそれぞれのMTDで1週間に1回静脈内適用した。物質を最適なビヒクルに製剤化して溶液を得た。動物の体重および腫瘍サイズを1週間に3回測定した。全ての群についての処理を腫瘍サイズ27mm2、腫瘍細胞接種後24日目に開始した。併用療法のために、Mps−1キナーゼ阻害剤とパクリタキセルを4時間の時間枠内で同日に適用した。対照および単独療法群（Mps−1キナーゼ阻害剤のみ）の動物を28日の期間処理した。パクリタキセル単独療法群およびパクリタキセル／Mps−1キナーゼ阻害剤処理群の動物を50日の期間処理した。最後の1処理後の試験の最後に、血漿および腫瘍をPK分析用に採取し、最終的な腫瘍重量を測定した。
【０２００】
MKN1ヒト胃癌モデルにおけるMps−1キナーゼ阻害剤とパクリタキセルの組合せ
化合物A27とパクリタキセルの併用療法の効果を、ヌードマウスにおけるタキサン感受性MKN1ヒト胃癌モデルで試験することができる。化合物A27を、最大で単剤処理でのそれぞれのMTDおよび組合せでの単剤MTDの40％の用量で2QD間欠（2日間オン／5日間オフ）投与スケジュールで経口投与することができる。パクリタキセルを、それぞれのMTDでQW（1週間に1回（1日オン／6日間オフの処理スケジュールを意味する））で静脈内投与することができる。全ての群についての処理を腫瘍細胞接種後7日目に開始することができる。併用療法のために、化合物A27とパクリタキセルを4時間の時間内で同日に投与することができる。対照および化合物A27単剤処理群の動物を40日間処理することができる。パクリタキセル単剤および化合物A27とパクリタキセル併用療法群の動物を78日間処理することができる。ビヒクル処理対照および化合物A27単剤処理群は、重大な体重減少および毒性を誘導するMKN1腫瘍関連悪液質のために、最大腫瘍面積に達する前に終了しなければならない。
【０２０１】
要約すると、この試験により、パクリタキセル感受性胃癌モデルMKN1におけるMps−1キナーゼ阻害剤とパクリタキセルの協同作用が証明される。
【０２０２】
MiaPaCa2ヒト膵臓腫瘍モデルにおけるMps−1キナーゼ阻害剤とビンクリスチンの組合せ
パクリタキセルと組み合わせたMps−1キナーゼ阻害剤化合物A27の有効性および耐容性を、ヌードマウスに異種移植したMiaPaCa2ヒト膵臓腫瘍モデルで評価することができる。
【０２０３】
細胞培養液から得たMiaPaCa2細胞を、雌ヌードマウスの鼠径部に皮下埋め込みすることができる。腫瘍のサイズが30〜40mm2になったら処理を開始することができる。1週間に2回、キャリパ測定によって腫瘍面積を測定することができる。処理群は以下とすることができる：
1）ビヒクル、PEG400／エタノール／Solutol（70：5：25）、1日2回2オン／5オフ経口
2）化合物A27、0.45mg／kg  1日2回2オン／5オフ経口
3）化合物A27、0.6mg／kg  1日2回2オン／5オフ経口
4）パクリタキセル、24.0mg／kg静脈内  過量1オン／6オフ
5）化合物A27、0.45mg／kg  1日2回2オン／5オフ経口＋パクリタキセル、24.0mg／kg静脈内  過量1オン／6オフ
6）化合物A27、0.6mg／kg  1日2回2オン／5オフ経口＋パクリタキセル、24.0mg／kg静脈内  過量1オン／6オフ
【０２０４】
要約すると、タキサン半感受性膵臓腫瘍モデルMiaPaCa2において、パクリタキセル単独療法と比べて優れた耐容性のMTDのパクリタキセルと低用量の化合物A27の組合せによる腫瘍成長阻害の有意な改善が証明される。
【０２０５】
ヒト膠芽腫モデルU87 MGにおけるMps−1キナーゼ阻害剤とビンクリスチンの組合せ
単独でのまたはビンクリスチンと組み合わせた化合物A27の用量依存的腫瘍阻害効果を、ヌードマウスに異種移植したヒト膠芽腫モデルU87 MGで調査することができる。
【０２０６】
固定用量で単独と、共に単独療法スケジュールで使用される化合物A27より低い2つの異なる用量でビンクリスチンと組み合わせた、治験化合物A27およびビンクリスチンによる処理に対するこの膠芽腫モデルの反応を決定するよう試験を設計する。膠芽腫のサイズを反応についての読み取りパラメータとして使用することができる。
【０２０７】
腫瘍細胞をマウス脳の左半球に移植することによって、細胞培養由来ヒト異種移植片U87 MGを開始することができる。3日目〜19日目の間に3サイクルで処理を行うことができる。マウスを24日目に屠殺し、脳を単離し、2−メチルブタンに衝撃凍結することができる。染色後の凍結切片から腫瘍成長阻害についての尺度として腫瘍サイズを測定することができる。
【０２０８】
要約すると、化合物A27とビンクリスチンの組合せは、ヒトU87−MGマウス異種移植片における腫瘍成長の有意な阻害をもたらし、これは単剤による処理よりも優れている。処理に、ビヒクルに対する不耐性によっておそらく引き起こされる重度の胃腸毒性が伴うことがある。
【配列表】
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【国際調査報告】
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