(57)【要約】本開示は、脳アミロイド斑を減少させる、または抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑えるための抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの使用に関する。例えば、本開示は、脳アミロイド斑を減少させる方法に関し、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、この投与が、血管アミロイドに影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができ、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳アミロイド斑を減少させる方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、前記投与が、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができ、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する、方法。
【請求項２】
脳アミロイド斑を減少させる方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、前記投与が、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができる、方法。
【請求項３】
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含み、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する、方法。
【請求項４】
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含む、方法。
【請求項５】
試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、
（ｂ）前記試験対象において生成された前記シグナルを、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、前記対照対象と比較して前記試験対象において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む、方法。
【請求項６】
治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、
（ｂ）前記患者において測定された前記シグナルと、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定された前記シグナルとの比較の考察時に、前記患者における疾患状態を評価することであって、前記対照対象と比較して前記患者において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、
（ｃ）前記患者の疾患状態に適した治療法で前記患者を治療することと、を含む、方法。
【請求項７】
試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、
（ｂ）前記試験対象において生成された前記シグナルを、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、前記対照対象と比較して前記試験対象において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む、方法。
【請求項８】
治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、
（ｂ）前記患者において測定された前記シグナルと、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定された前記シグナルとの比較の考察時に、前記患者における疾患状態を評価することであって、前記対照対象と比較して前記患者において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、
（ｃ）前記患者の疾患状態に適した治療法で前記患者を治療することと、を含む、方法。
【請求項９】
前記対照対象が、健常な個体、様々に異なる重度の神経変性障害を有する個体、またはそれらの組み合わせである、請求項５〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｂ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｃ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、を含む、方法。
【請求項１１】
脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することであって、前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｂ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｃ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、を含む、方法。
【請求項１２】
疾患進行のレベルに基づいて、前記患者の治療を調整することをさらに含む、請求項１０または請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者の疾患状態に適した前記治療法が、前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することを含む、請求項６、８、９〜１０、または１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者の疾患状態に適した前記治療法が、前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することを含む、請求項６、８、９、または１１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項６または８のいずれか１項に記載の方法であって、
（ｄ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｅ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、をさらに含む、方法。
【請求項１６】
前記薬剤が、１つ以上の放射性リガンドを含む、請求項５〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記リガンドが、１２５Ｉである、請求項５〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記薬剤によって生成された前記シグナルが、単光子放出コンピュータ断層撮影によって測定される、請求項５〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号３の相補性決定領域−１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号４の相補性決定領域−２（ＶＨＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号５の相補性決定領域−３（ＶＨＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号６の相補性決定領域−１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号７の相補性決定領域−２（ＶＬＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号８の相補性決定領域−３（ＶＬＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが配列番号１を含み、前記ＶＬが配列番号２を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＢＩＩＢ０３７抗体の抗原結合領域を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ａβ凝集体に選択的に結合する、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ａベータ原線維に結合することができるが、Ａベータモノマーには実質的に結合しない、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、脳アミロイド斑を減少させるのに有効な量で血液脳関門を通過することができる、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、血管アミロイドに対するよりも高い親和性で実質アミロイド斑に結合する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、実質アミロイド斑上よりもコンゴレッド親和性アミロイド血管症病変においてより低い程度で蓄積する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
脳内のアミロイド斑の減少が、Ｆｃ受容体の関与を含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗Ａβ抗体抗原結合フラグメントが、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトである、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラである、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象が、神経変性疾患を有する、請求項１〜５または７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認識障害、脳アミロイド血管症、血管性認知症、多発梗塞性認知症、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、ハンチントン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、嚢胞性線維症、またはゴーシェ病からなる群から選択される、請求項６または８〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
アルツハイマー病を治療もしくはその進行を予防するため、アルツハイマー病に関連する症状の改善のため、アルツハイマー病の存在について対象を診断もしくはスクリーニングするため、または対象がアルツハイマー病を発症する危険性を決定するための、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記投与が、末梢投与によるものである、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記投与が、非経口投与によるものである、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
本開示は、抗Ａβ抗体を使用して脳アミロイド斑を減少させる方法に関する。具体的に、本開示は、血管アミロイドに影響を及ぼすことなく脳アミロイド斑を減少させる方法に関し、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する、またはＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、この投与は、血管アミロイドに影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させ、ＢＩＩＢ０３７抗体は、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。さらに、本開示は、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドベータ（Ａβ）ペプチドは、アルツハイマー病（ＡＤ）に罹患した個体の脳実質におけるアミロイド斑（すなわち、実質アミロイド斑）の主要成分である。斑の形成は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の処理によるＡβの過剰産生、および特定の条件下でその可溶性形態から高秩序の原線維凝集体に変換するＡβの能力に起因する。神経変性は、アミロイド斑の付近で発生するが、いくつかの研究は、前原線維または単純オリゴマー等の中間体もＡＤの病因に関与し、さらに病態の発症においてより神経毒性の高い種であるように思われることを示唆している。さらに、異なるサイズの凝集体の毒素特性が調査され、得られた結果は、異なる凝集体のサイズが、異なる変性経路を誘導し得るという仮説を支持する（Ｄｉ  Ｃａｒｌｏ  Ｍ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３９（６）：８７７−８８８（２０１０））。
【０００３】
アルツハイマー病は、実質アミロイド斑および細胞内タングルの存在だけでなく、血管内のアミロイド沈着（すなわち、血管アミロイド沈着）、コンゴレッド親和性アミロイド血管症としても知られる、脳アミロイド血管症（ＣＡＡ）と呼ばれる状態の存在も特徴とする。アルツハイマー病患者およびトランスジェニックマウスモデルの一部の両方において観察されるＣＡＡは、主に短縮形態のＡβ、Ａβ１〜４０で構成されているが、実質中のアミロイド沈着の大部分は、Ａβ１〜４２で構成されている。コンパクトアミロイド沈着は、Ａβ１〜４０も含有する（Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  １（２４）：１−１１（２００４））。
【０００４】
アルツハイマー病の可能性のある治療としてのＡβ免疫療法の概念は、凝集したＡβでの能動免疫化が、ＡＤ様病態の発症を減少させるか、またはＡＰＰトランスジェニックマウスにおける既存の病態の進行を減速させることができ、またそれらの動物において改善した行動につながったという実証に続いて１０年以上前に出現した（Ｓｃｈｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４００：１７３−１７７（１９９９）、Ｊａｎｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  ２１：５４１−５４９（２０００）、Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：９８２−９８５（２０００））。ヒトにおける治療的アプローチへの変換は、患者の小集団における髄膜脳炎等の有害事象の発生によって阻まれた（Ｏｒｇｏｇｏｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６１：４６−５４（２００３））。追加として、アジュバントによるＴ細胞活性化、Ａβペプチド上のＴ細胞エピトープの存在、生理学的ＡＰＰ誘導体との交差反応性、および血管アミロイドの減少による血管の崩壊を含む、異なる可能性のある原因が議論されている（Ｓｃｈｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３：８２４−８２８）。
受動免疫化、例えば、抗Ａβ抗体を使用する、神経変性障害、例えば、アルツハイマー病の治療の安全な方法を開発する必要がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｄｉ  Ｃａｒｌｏ  Ｍ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３９（６）：８７７−８８８（２０１０）
【非特許文献２】Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  １（２４）：１−１１（２００４）
【非特許文献３】Ｓｃｈｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４００：１７３−１７７（１９９９）
【非特許文献４】Ｊａｎｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  ２１：５４１−５４９（２０００）
【非特許文献５】Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：９８２−９８５（２０００）
【非特許文献６】Ｏｒｇｏｇｏｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６１：４６−５４（２００３）
【非特許文献７】Ｓｃｈｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３：８２４−８２８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施形態は、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、脳アミロイド斑を減少させる方法を対象とし、この投与は、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができ、ＢＩＩＢ０３７抗体は、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。
【０００７】
またＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、脳アミロイド斑を減少させる方法も開示され、この投与は、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができる。
【０００８】
さらに、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含む、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法が開示され、ＢＩＩＢ０３７抗体は、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。
【０００９】
ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含む、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法も開示される。
【００１０】
さらに、試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法が開示され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、（ｂ）試験対象において生成されたシグナルを、１以上の対照対象への標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、対照対象と比較して試験対象において生成されたシグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む。
【００１１】
治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法も開示され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、（ｂ）患者において測定されたシグナルと、１以上の対照対象への標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定されたシグナルとの比較の考察時に、患者における疾患状態を評価することであって、対照対象と比較して患者において生成されたシグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、（ｃ）患者の疾患状態に適した治療法で患者を治療することと、を含む。
【００１２】
一実施形態は、試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法を対象とし、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、（ｂ）試験対象において生成されたシグナルを、１以上の対照対象への標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、対照対象と比較して試験対象において生成されたシグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む。
【００１３】
さらに、治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法が開示され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、（ｂ）患者において測定されたシグナルと、１以上の対照対象への標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定されたシグナルとの比較の考察時に、患者における疾患状態を評価することであって、対照対象と比較して患者において生成されたシグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、（ｃ）患者の疾患状態に適した治療法で患者を治療することと、を含む。
【００１４】
ある特定の実施形態において、対照対象は、健常な個体、様々に異なる重度の神経変性障害を有する個体、またはそれらの組み合わせである。
【００１５】
脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法も開示され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、シグナルが、投与後に患者において測定される、投与することと、（ｂ）標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、シグナルが、投与後に患者において測定される、投与することと、（ｃ）（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で患者において測定されたシグナルの変化に基づいて、患者における疾患の進行を評価することと、を含み、シグナルの増加が、患者における神経変性疾患の進行を示す。
【００１６】
さらに、脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法が開示され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、シグナルが、投与後に患者において測定される、投与することと、（ｂ）標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、シグナルが、投与後に患者において測定される、投与することと、（ｃ）（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で患者において測定されたシグナルの変化に基づいて、患者における疾患の進行を評価することと、を含み、シグナルの増加が、患者における神経変性疾患の進行を示す。
【００１７】
ある特定の実施形態は、疾患進行のレベルに基づいて、患者の治療を調整することをさらに含む、本明細書に記載される方法を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、患者の疾患状態に適した治療法は、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することを含む。
【００１９】
ある特定の実施形態は、患者の疾患状態に適した治療法が、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することを含む、本明細書に記載される方法を含む。
【００２０】
請求項６または８のいずれか１項に記載の方法は、（ｄ）標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、シグナルが、投与後に患者において測定される、投与することと、（ｅ）（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で患者において測定されたシグナルの変化に基づいて、患者における疾患の進行を評価することと、をさらに含み、シグナルの増加が、患者における神経変性疾患の進行を示す。
【００２１】
ある特定の実施形態において、薬剤は、１つ以上の放射性リガンド（複数可）を含む。
【００２２】
ある特定の実施形態において、リガンドは、１２５Ｉである。
【００２３】
ある特定の実施形態において、薬剤によって生成されたシグナルは、単光子放出コンピュータ断層撮影によって測定される。
【００２４】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号３の相補性決定領域−１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む。
【００２５】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号４の相補性決定領域−２（ＶＨＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む。
【００２６】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号５の相補性決定領域−３（ＶＨＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む。
【００２７】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６の相補性決定領域−１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む。
【００２８】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号７の相補性決定領域−２（ＶＬＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む。
【００２９】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号８の相補性決定領域−３（ＶＬＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む。
【００３０】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
【００３１】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
【００３２】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
【００３３】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号１を含み、ＶＬは配列番号２を含む。
【００３４】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＢＩＩＢ０３７抗体の抗原結合領域を含む。
【００３５】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ａβ凝集体に選択的に結合する。
【００３６】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ａベータ原線維に結合することができるが、Ａベータモノマーには実質的に結合しない。
【００３７】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、脳アミロイド斑を減少させるのに有効な量で血液脳関門を通過することができる。
【００３８】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、血管アミロイドに対するよりも高い親和性で実質アミロイド斑に結合する。
【００３９】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、実質アミロイド斑上よりもコンゴレッド親和性アミロイド血管症病変においてより低い程度で蓄積する。
【００４０】
ある特定の実施形態において、脳内のアミロイド斑の減少は、Ｆｃ受容体の関与を含む。
【００４１】
ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体抗原結合フラグメントは、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。一実施形態において、抗体はヒトである。別の実施形態において、抗体はキメラである。
【００４２】
ある特定の実施形態において、対象は、神経変性障害を有する。ある特定の実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認識障害、脳アミロイド血管症、血管性認知症、多発梗塞性認知症、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、ハンチントン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、嚢胞性線維症、またはゴーシェ病からなる群から選択される。
【００４３】
ある特定の実施形態は、アルツハイマー病を治療もしくはその進行を予防するため、アルツハイマー病に関連する症状の改善のため、アルツハイマー病の存在について対象を診断もしくはスクリーニングするため、または対象がアルツハイマー病を発症する危険性を決定するための、本明細書に記載される方法を含む。
【００４４】
ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非経口投与によって投与される。
【００４５】
ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、末梢投与によって投与される。
【００４６】
ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非経口投与によって投与される。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】（Ａ〜Ｄ）：キメラＢＩＩＢ０３７（「ｃｈＢＩＩＢ０３７」）は、Ａβ凝集体に選択的に結合する。（Ａ）ｃｈＢＩＩＢ０３７または３Ｄ６のＡβ（１〜４２）凝集体への結合。（Ｂ）ｃｈＢＩＩＢ０３７ではないが、ＥＬＩＳＡプレート上に間接的に固定化された３Ｄ６による可溶性モノマーＡβ（１〜４０）の捕捉。（Ｃ）凝集（レーン２）またはモノマーＡβ（１〜４２）（レーン１）の調製物を、ＢＩＩＢ０３７または３Ｄ６のいずれかを使用して免疫沈降させた。（Ｄ）ＦＩＴＣ複合体化ｃｈＢＩＩＢ０３７を使用するヒトアルツハイマー病脳組織の免疫染色。
【図２】（Ａ〜Ｄ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける単回腹腔内投与後のＢＩＩＢ０３７の脳浸透。（Ａ）ＢＩＩＢ０３７レベルを、単回投与（３０ｍｇ／ｋｇ）後、３週間にわたって血漿（μｇ／ｍＬ）および脳（ｎｇ／ｇ）において測定した。（Ｂ）血漿Ａβ濃度（ｐｍｏｌ／ｍＬ）を、ＢＩＩＢ０３７または３Ｄ６抗体の単回投与後に測定した。（Ｃ）Ｔｇ２５７６マウスにおける単回投与後のＢＩＩＢ０３７のアミロイド沈着へのインビボ結合を、（Ｄ）ｐａｎ−Ａβ抗体を用いる連続切片の染色と比較した。
【図３】（Ａ〜Ｅ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける急性投薬後の実質アミロイド斑へのｃｈＢＩＩＢ０３７の結合。脳内のアミロイド沈着への（Ａ）Ｃｙ３標識ｃｈＢＩＩＢ０３７または（Ｃ）Ｃｙ３標識３Ｄ６の結合は、蛍光顕微鏡下で明らかにされ、（Ｂ、Ｄ、Ｅ）は、ＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアを使用して定量された。（Ｅ）１つまたは他のアミロイドコンパートメントと関連するＣｙ３染色は、総脳領域染色のパーセントとして表され、血管アミロイドに対し、実質アミロイドへのｃｈＢＩＩＢ０３７の優先的結合を実証した。
【図４】（Ａ〜Ｃ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の６ヶ月の長期投薬後の曝露。（Ａ）血漿（μｇ／ｍＬ）中のｃｈＢＩＩＢ０３７濃度は、０．３、１、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇのｃｈＢＩＩＢ０３７治療群に対して、最終用量の２４時間後に測定した。ＰＢＳ群中の検出限界を上回るｃｈＢＩＩＢ０３７レベルは、アッセイによって測定された内因性抗Ａβ抗体に起因する。（Ｂ）ｃｈＢＩＩＢ０３７濃度は、０．３、１、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇのｃｈＢＩＩＢ０３７治療群に対して、ＤＥＡ（界面活性剤を含まない）脳分画中でも測定した。（Ｃ）血漿（白丸）または脳（三角形）中の薬物濃度と投与量との相関。各記号は１つの動物を表し、破線はアッセイの検出限界を表す。
【図５】（Ａ〜Ｄ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける６ヶ月の長期投薬後のアミロイド負荷の減少。Ａβ４２濃度は、ＰＢＳ対照群との比較で３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇのｃｈＢＩＩＢ０３７治療群に対して、（Ａ）可溶性ＤＥＡおよび（Ｃ）不溶性グアニジン脳分画の両方において著しく減少した。（Ｂ）皮質および（Ｄ）海馬における総脳アミロイド負荷は、６Ｅ１０免疫組織化学によって明らかになり、ＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアを使用して定量した。（データは、平均±標準誤差として表され、破線は、ＰＢＳ治療した対照群との比較で５０％の減少を表す。治療群と対照群との間の差は、ランクに基づくクラスカル−ウォリス一元配置分散分析の後、ダンの事後検定によって決定した。ビヒクルからの統計的に有意な差は、アスタリスク（＊）で示される。ｐ＜０．０５）。
【図６】（Ａ〜Ｄ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬後の血管アミロイドへのｃｈＢＩＩＢ０３７の結合。（Ａ）コンパクトアミロイド斑およびＣＡＡのチオフラビンＳ（チオ−Ｓ）染色は、蛍光顕微鏡下で明らかになり、（Ｂ）Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ（登録商標）ソフトウェアを使用して、血管沈着から実質沈着を区別し、各実体に占められる面積を定量した。（Ｃ）皮質および（Ｄ）海馬における血管アミロイド負荷は、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ用量のｃｈＢＩＩＢ０３７に対して、チオフラビンＳ染色によって評価した。（Ｅ）０、１０、７０、および５００ｍｇ／ｋｇでのｃｈＢＩＩＢ０３７、および５００ｍｇ／ｋｇのＢＩＩＢ０３７の１３週間の静脈内治療後にペルルス染色によって定義される、Ｔｇ２５７６マウスにおける微小出血のレベルの差。（データは、平均±標準誤差として表され、１群当たりｎ＝１８〜２０匹）。
【図７】（Ａ〜Ｂ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の６ヶ月の長期投薬後のアミロイド負荷の減少。（Ａ）ｗｔ  ｃｈＢＩＩＢ０３７、アグリコシル化（Ａｇｌｙ）ｃｈＢＩＩＢ０３７、または３Ｄ６を、Ｔｇ２５７６マウスにおいて毎週の腹腔内注射を介して３ｍｇ／ｋｇで投薬した。脳ホモジネートから調製された不溶性（グアニジン）分画中で測定された脳Ａβ４２レベル（ｐｍｏｌ／ｇ）を、ＰＢＳ治療対照群と比較した。（治療群と対照群との間の差は、ダンの事後検定によって決定した。ｐ＜０．０１、１群当たりｎ＝１２〜１４、平均±標準誤差）。（Ｂ）チオ−Ｓ染色（染色面積％）によって定量された皮質コンパクトアミロイド斑負荷を、ｗｔ  ｃｈＢＩＩＢ０３７、Ａｇｌｙ  ｃｈＢＩＩＢ０３７、および３Ｄ６治療群において、チオ−Ｓで染色された面積の定量によって評価し、ＰＢＳ対照群と比較した。（治療群と対照群との間の差は、ダンの事後検定によって決定した。ｐ＜０．０１、１群当たりｎ＝１２〜１４、平均±標準誤差）。Ａｇｌｙ  ｃｈＢＩＩＢ０３７および３Ｄ６は、コンパクトアミロイド斑負荷に影響を及ぼさなかった。
【図８】（Ａ〜Ｃ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬後のアミロイド負荷減少は、全てのサイズの斑に影響を及ぼす。（Ａ、Ｂ）６Ｅ１０で染色されたアミロイド斑を、ＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアを使用して定量した。斑のサイズを面積によって定義した：斑＜１２５μｍ２（番号４）、１２５〜２５０μｍ２（番号３）、２５０〜５００μｍ２（番号２）、および＞５００μｍ２（番号１）。（Ｃ）全てのサイズ範囲内の斑数を、ｃｈＢＩＩＢ０３７治療群において決定し、ＰＢＳ治療対照と比較した。（ｔ検定、＊＝ｐ＜．０．００５）。
【図９】（Ａ〜Ｂ）：Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬後のアミロイド斑のミクログリア媒介クリアランス。（Ａ）ＰＢＳまたはｃｈＢＩＩＢ０３７で治療したマウスのいずれかからの脳切片を、Ａβ（６Ｅ１０−薄い灰色）およびミクログリアのマーカー（Ｉｂａ１−濃い灰色）について免疫染色した。（Ｂ）マクロファージによって７０以上が囲まれた円周を有する斑を計算し、斑サイズに基づいて層別化した。ミクログリアによって７０％囲まれた斑のパーセンテージを、ｃｈＢＩＩＢ０３７治療群（透明な棒）とＰＢＳ対照群（灰色の棒）との間で、≧２５０μｍ２の斑について比較した（ｔ検定、＊＝ｐ＜．０．００５）。
【図１０Ａ】（Ａ〜Ｂ）：ＢＩＩＢ０３７／Ａβ複合体の構造（Ａ）ヒトＢＩＩＢ０３７とＡβ２〜９。酸素を薄い灰色、窒素を濃い灰色、および炭素を白色で着色した棒表示のＡβ２〜９ペプチド。ペプチドに接触するＣＤＲ：ＶＨＣＤＲ１（Ｈ１）、ＶＨＣＤＲ２（Ｈ２）、ＶＨＣＤＲ３（Ｈ３）、ＶＬＣＤＲ１（Ｌ１）、ＶＬＣＤＲ２（Ｌ２）、およびＶＬＣＤＲ３（Ｌ３）。ペプチドに接触するＣＤＲのみが示される。（Ｂ）ＢＩＩＢ０３７（白色）およびＷ０２（中間の灰色）の構造におけるＡβ（３〜６）ペプチド骨格の重ね合わせ。
【図１０Ｂ】（Ａ〜Ｂ）：ＢＩＩＢ０３７／Ａβ複合体の構造（Ａ）ヒトＢＩＩＢ０３７とＡβ２〜９。酸素を薄い灰色、窒素を濃い灰色、および炭素を白色で着色した棒表示のＡβ２〜９ペプチド。ペプチドに接触するＣＤＲ：ＶＨＣＤＲ１（Ｈ１）、ＶＨＣＤＲ２（Ｈ２）、ＶＨＣＤＲ３（Ｈ３）、ＶＬＣＤＲ１（Ｌ１）、ＶＬＣＤＲ２（Ｌ２）、およびＶＬＣＤＲ３（Ｌ３）。ペプチドに接触するＣＤＲのみが示される。（Ｂ）ＢＩＩＢ０３７（白色）およびＷ０２（中間の灰色）の構造におけるＡβ（３〜６）ペプチド骨格の重ね合わせ。
【図１１】（Ａ〜Ｂ）：マウスＡβへのＢＩＩＢ０３７の結合（Ａ）ヒトおよびマウスＡβ（１〜４２）配列のアラインメント。（Ｂ）ヒトおよびマウスＡβ（１〜１６）ペプチドへのＢＩＩＢ０３７の結合
【図１２−１】（Ａ〜Ｃ）：（Ａ）［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７を使用したＴｇ２５７６（Ｔｇ）および野生型（ＷＴ）マウスの中枢神経系（ＣＮＳ）、続いて（Ｂ）標識抗体の静脈内投与後７日、および（Ｃ）１４日における単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）撮像データの概要。
【図１２−２】（Ａ〜Ｃ）：（Ａ）［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７を使用したＴｇ２５７６（Ｔｇ）および野生型（ＷＴ）マウスの中枢神経系（ＣＮＳ）、続いて（Ｂ）標識抗体の静脈内投与後７日、および（Ｃ）１４日における単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）撮像データの概要。
【図１３Ａ】（Ａ〜Ｃ）：（Ａ）Ｔｇ２５７６（ａ）およびＷＴ（ｂ）マウスのＣＮＳへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の正規化された取り込みの代表的な矢状例。（Ｂ）Ｔｇ２５７６マウスのＣＮＳへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ蓄積の代表的な４８日目の画像。（Ｃ）（ａ）Ｔｇおよび（ｂ）ＷＴマウス脳における［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の平均正規化脳取り込み。
【図１３Ｂ】（Ａ〜Ｃ）：（Ａ）Ｔｇ２５７６（ａ）およびＷＴ（ｂ）マウスのＣＮＳへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の正規化された取り込みの代表的な矢状例。（Ｂ）Ｔｇ２５７６マウスのＣＮＳへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ蓄積の代表的な４８日目の画像。（Ｃ）（ａ）Ｔｇおよび（ｂ）ＷＴマウス脳における［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の平均正規化脳取り込み。
【図１３Ｃ】（Ａ〜Ｃ）：（Ａ）Ｔｇ２５７６（ａ）およびＷＴ（ｂ）マウスのＣＮＳへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の正規化された取り込みの代表的な矢状例。（Ｂ）Ｔｇ２５７６マウスのＣＮＳへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ蓄積の代表的な４８日目の画像。（Ｃ）（ａ）Ｔｇおよび（ｂ）ＷＴマウス脳における［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の平均正規化脳取り込み。
【図１４−１】（Ａ〜Ｃ）：Ｔｇおよび野生型マウス対血液プールにおける［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ取り込み。図１４Ａは、Ｔｇ２５７６（左）対ＷＴ（右）マウスにおける４８日目（Ｄ４８）の、次にＰＢＳによる還流後（Ｄ４８還流）と比較した、平均脳取り込みを示す。図１４Ｂ〜Ｃは、２８日目のデータからの関心領域（ＲＯＩ）生成プロットを示す。放射能濃度（μＣｉ／ｍｍ３）は、血液プールと組織との間で測定される。
【図１４−２】（Ａ〜Ｃ）：Ｔｇおよび野生型マウス対血液プールにおける［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ取り込み。図１４Ａは、Ｔｇ２５７６（左）対ＷＴ（右）マウスにおける４８日目（Ｄ４８）の、次にＰＢＳによる還流後（Ｄ４８還流）と比較した、平均脳取り込みを示す。図１４Ｂ〜Ｃは、２８日目のデータからの関心領域（ＲＯＩ）生成プロットを示す。放射能濃度（μＣｉ／ｍｍ３）は、血液プールと組織との間で測定される。
【図１５Ａ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１５Ｂ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１５Ｃ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１５Ｄ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１５Ｅ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１５Ｆ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１５Ｇ】（Ａ〜Ｇ）：（Ａ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（２２ヶ月のＴｇ２５７６）、または（Ｄ）１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２（３ヶ月のＷＴ）の投与後のＴｇ２５７６マウス脳におけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要。（Ｂ）高齢Ｔｇ２５７６マウス（２２ヶ月）におけるインビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の定量的脳地図分析。（Ｅ）高齢Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析。（Ｆ）Ｔｇマウス画像における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みおよび貯留を示すように任意にスケーリングされた選択矢状および冠状画像の比較。（Ｇ）高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的ＲＯＩ分析の全体概要。データは、４つの撮像時点にわたって、小脳におけるデータに正規化された皮質における％ＩＤ／ｇとして表される。
【図１６】高齢Ｔｇ２５７６マウス脳のＣＮＳへの［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（１ｍｐｋおよび１０ｍｐｋ）のインビボ蓄積を示す、代表的な４８日目の画像。若齢Ｔｇ２５７６マウス脳において、ならびに［１２５Ｉ］Ｐ１．１７標識アイソタイプ対照（１０ｍｐｋ）を使用して、ＣＮＳ特異的インビボ蓄積も試験した。
【図１７】低および高取り込み動物を表す２４時間取得時のＡｂに対する５Ｆ３免疫染色およびＳＰＥＣＴ画像（左）。右のプロットは、撮像された全ての動物について、皮質における定量的ＳＰＥＣＴ  ＲＯＩ対エクスビボアミロイド領域（１匹当たり２切片）の相関を示す。
【図１８】組織学的およびオートラジオグラフ分析のためのマウス脳の試料採取。
【図１９】Ｔｇマウス１０１およびＷＴマウス２０１における海馬領域内のミクロオートラジオグラフィー（ｍＡＲＧ）。
【図２０】Ｔｇマウス１０１におけるｍＡｒｇおよび海馬領域内の隣接した切片におけるＡβの免疫組織化学（ＩＨＣ）染色。
【図２１】Ｔｇマウス１０１におけるｍＡＲＧおよび海馬領域内の隣接した切片におけるＡβのチオフラビン−Ｓ染色。
【図２２】ＴｇおよびＷＴマウスにおける標的および非標的組織／器官内の［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の生体分布。データは、組織全体の％ＩＤ／ｇとして表される。
【図２３】Ｔｇ２５７６およびＷＴマウスにおけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２の全身ＳＰＥＣＴ画像。
【図２４】高齢Ｔｇ２５７６および若齢ＷＴマウスの非標的組織における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のインビボ生体分布の定量的全身分析。データは、Ｔｇ２５７６（べた塗りの棒）およびＷＴ（縞状の棒）マウスからの組織全体の％ＩＤ／ｇとして表される。［Ｈ  心臓、Ｋ  腎臓、Ｌ  肝臓、Ｌｕ  肺、Ｍ  筋肉、Ｓ  胃、Ｔ  甲状腺、ＷＢ  全身］。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
Ｉ．定義
「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、その実体のうちの１つ以上を指すことに留意されたい。例えば、「１つの抗Ａβ抗体」は、Ａβに特異的に結合する１つ以上の抗体を表すと理解される。そのようなものとして、「１つの（ａまたはａｎ）」、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」は、本明細書において交換可能に使用することができる。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「神経変性疾患」という用語は、アルツハイマー病、軽度認知障害、前頭側頭認知症、レヴィー体病、パーキンソン病、ピック病、ビンスヴァンガー病；コンゴレッド親和性アミロイド血管症、脳アミロイド血管症、ダウン症候群、多発脳梗塞性認知症、ハンチントン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、エイズによる認知症症候群、うつ病、不安障害、恐怖症、ベル麻痺、てんかん、脳炎、多発性硬化症；神経筋障害、神経腫瘍学的障害、脳腫瘍、脳卒中、神経免疫学的障害、神経耳鼻科的疾患を含む神経血管障害、脊髄損傷を含む神経外傷、神経因性疼痛を含む疼痛、小児神経学的および神経精神学的障害、睡眠障害、トゥレット症候群、軽度認知障害、血管性認知症、多梗塞性認知症、嚢胞性線維症、ゴーシェ病、他の運動障害、および一般的な中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患を含むが、これらに限定されない。特に断りのない限り、「神経変性」、「神経学的」、または「神経性神学的」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。
【００５０】
特に断りのない限り、「障害」、「疾患」、および「疾病」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。
【００５１】
特に断りのない限り、「Ａβ」、「Ａベータ」と「ベータアミロイド」は、本明細書において交換可能に使用される。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「結合分子」または「抗原結合分子」という用語は、その最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の非限定の例は、抗原特異的結合を保持する抗体およびそのフラグメント、ならびにＡβに結合する他の非抗体分子であり、ホルモン、受容体、リガンド、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）等のシャペロン、ならびにカドヘリン、インテグリン、Ｃ型レクチン、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバー等の細胞間接着分子を含むが、これらに限定されない。したがって、明確化のためだけに、本開示の範囲を制限することなく、以下の実施形態の大部分は、治療薬および診断薬の開発のための結合分子を表す抗体および抗体様分子に関して論じられる。別の実施形態において、開示される結合分子は、抗体分子の少なくとも１つの重鎖または軽鎖ＣＤＲを含む。別の実施形態において、開示される結合分子は、１つ以上の抗体分子から少なくとも２つのＣＤＲを含む。別の実施形態において、開示される結合分子は、１つ以上の抗体分子から少なくとも３つのＣＤＲを含む。別の実施形態において、開示される結合分子は、１つ以上の抗体分子から少なくとも４つのＣＤＲを含む。別の実施形態において、開示される結合分子は、１つ以上の抗体分子から少なくとも５つのＣＤＲを含む。別の実施形態において、開示される結合分子は、１つ以上の抗体分子から少なくとも６つのＣＤＲを含む。
【００５３】
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、血管アミロイドに影響を及ぼすことなく脳アミロイド斑を減少させる方法が、本明細書において開示される。具体的に、天然に存在する抗体等のフルサイズの抗体に言及しない限り、「抗Ａβ抗体」という用語は、フルサイズの抗体、ならびにそのような抗体の抗原結合フラグメント、変異体、類似体、または誘導体、例えば、天然に存在する抗体、または免疫グロブリン分子、または抗体分子と同様に抗原に結合する、操作された抗体分子もしくはフラグメントを包含する。
【００５４】
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。抗体または免疫グロブリンは、少なくとも重鎖の可変ドメインを含み、通常は少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的よく理解されている。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）を参照されたい。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に区別することができる様々な広いクラスのポリペプチドを含む。当業者であれば、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはエプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として分類され、その中にいくつかのサブクラス（例えば、γ１〜γ４）を有することを理解するであろう。それは、抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定する、この鎖の性質である。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１等は、十分に特徴付けがなされ、機能的特殊性を付与することが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾バージョンは、本開示を考慮して熟練者には容易に区別可能であり、したがって本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明らかに本開示の範囲内である。以下の考察は、一般にＩｇＧクラスの免疫グロブリン分子を対象とする。ＩｇＧに関して、標準免疫グロブリン分子は、分子量約２３，０００ダルトンの２つの同一軽鎖ポリペプチドと、分子量５３，０００〜７０，０００の２つの同一重鎖ポリペプチドとを含む。４つの鎖は、典型的にジスルフィド結合によって「Ｙ」構造で結合され、軽鎖が重鎖を一括し、「Ｙ」の口部から始まり、可変領域を通して継続する。
【００５６】
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合することができる。一般に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合され、免疫グロブリンが、ハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって生成されるとき、２つの重鎖の「尾」部分は、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ構造の分岐した端部のＮ末端から各鎖の底部のＣ末端に達する。
【００５７】
軽鎖および重鎖の両方は、構造的および機能的相同性の領域に分割される。「定常」および「可変」という用語は、機能的に使用される。この点において、軽鎖（ＶＬまたはＶＫ）および重鎖（ＶＨ）部分の両方の可変ドメインが、抗原認識および特異性を決定することが理解されるであろう。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合等の重要な生物学的特性を付与する。慣習により、定常領域ドメインの付番は、それらが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端からより遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であって、Ｃ末端部分は定常領域であり、ＣＨ３およびＣＬドメインは、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を実際に含む。
【００５８】
上に示されるように、可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識し、特異的に結合するのを許す。つまり、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメイン、またはこれらの可変ドメイン内の相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットを組み合わせて、３次元抗原結合部位を定義する可変領域を形成する。この四次抗体構造は、Ｙの各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的に、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖のそれぞれにある３つのＣＤＲによって定義される。いくつかの例において、例えば、ラクダ種由来の、またはラクダ免疫グロブリンに基づいて操作された、ある特定の免疫グロブリン分子において、完全な免疫グロブリン分子は、重鎖のみからなることができ、軽鎖を有しない。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）を参照されたい。
【００５９】
天然に存在する抗体において、各抗原結合ドメイン内に存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が水性環境においてその３次元構造を呈するため、抗原結合ドメインを形成するように特異的に位置決めされたアミノ酸の短い非連続配列である。「フレームワーク」領域と呼ばれる抗原結合ドメイン内のアミノ酸の残りは、より低い分子間可変性を示す。フレームワーク領域は、主にβシート立体配座を採用し、ＣＤＲは、そのβシート構造に接続するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間非共有相互作用によって正しい配向でＣＤＲの位置決めを提供する足場を形成するように作用する。位置決めされたＣＤＲによって形成された抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を定義する。この相補的表面は、抗体のその同族エピトープへの非共有結合を促進する。それぞれＣＤＲおよびフレームワーク領域を含むアミノ酸は、正確に定義されているため、任意の所与の重鎖または軽鎖可変ドメインに対して、当業者によって容易に特定され得る（下記参照）。
【００６０】
当該技術分野において使用されるおよび／または許容される用語の２つ以上の定義が存在する場合、本明細書で使用される用語の定義は、明示的にそれと反対の記載がない限り、全てのそのような意味を含むことが意図される。特定の例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見出される非連続抗原結合部位を説明するための「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。この特定領域は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，″Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ″ａｎｄ  ｂｙ  Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）によって説明されており、定義は、互いに対して比較されるとき、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはその変異体のＣＤＲを指すいずれかの定義の適用は、本明細書で定義され、使用される用語の範囲内であることが意図される。上で引用される参照文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基は、比較として下表１に記載される。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて異なる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、どの残基が特定のＣＤＲを含むかを日常的に決定することができる。
【表１】
2016501247.tif 000002
【００６１】
Ｋａｂａｔらは、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列の付番方式も定義した。当業者は、「Ｋａｂａｔ付番」のこの方式を、配列自体を超える任意の実験データに依存することなく、任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔ付番」は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，″Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ″に記載される付番方式を指す。別段の定めがない限り、本開示の抗Ａβ抗体、またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体における特定アミノ酸残基位置の付番は、Ｋａｂａｔ付番方式に従う。
【００６２】
本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体としては、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化、またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬもしくはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されたフラグメント、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ＳｃＦｖ分子は、当該技術分野において既知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２等）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子であり得る。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「重鎖部分」という用語は、免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、重鎖部分を含むポリペプチドは、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中間、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはその変異体もしくはフラグメントのうちの少なくとも１つを含む。例えば、本開示における使用のための結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部分、およびＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部分、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部分、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含むことができる。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示における使用のための結合ポリペプチドは、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部分（例えば、ＣＨ２ドメインの全てまたは一部）を欠失し得る。上記のように、これらのドメイン（例えば、重鎖部分）が、天然に存在する免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることは、当業者によって理解されるであろう。
【００６４】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される抗Ａβ抗体、またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体、マルチマーの１つのポリペプチド鎖の重鎖部分は、そのマルチマーの第２のポリペプチド鎖上のものと同一である。代替として、本開示の重鎖部分を含有するモノマーは同一ではない。例えば、各モノマーは、例えば、二重特異性抗体を形成する、異なる標的結合部位を含むことができる。
【００６５】
本明細書に開示される方法における使用のための結合分子の重鎖部分は、異なる免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドの重鎖部分は、ＩｇＧ１分子由来のＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ３分子由来のヒンジ領域とを含むことができる。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子由来の、および部分的にＩｇＧ３分子由来のヒンジ領域を含むことができる。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子由来の、および部分的にＩｇＧ４分子由来のキメラヒンジを含むことができる。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「軽鎖部分」という用語は、免疫グロブリン軽鎖、例えば、カッパまたはラムダ軽鎖由来のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖部分は、ＶＬまたはＣＬドメインのうちの少なくとも１つを含む。
【００６７】
先に示したように、様々な免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および３次元構造は周知である。本明細書で使用される場合、「ＶＨドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖の第１の（最アミノ末端）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対するアミノ末端である。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「ＣＨ２ドメイン」という用語は、例えば、従来の付番スキームを使用して、抗体のおよそ残基２４４から残基３６０まで伸長する重鎖分子の部分を含む（残基２４４〜３６０、Ｋａｂａｔ付番方式、および残基２３１〜３４０、ＥＵ付番方式；Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．前掲書参照）。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合しないという点で固有である。むしろ、２つのＮ結合分枝炭水化物鎖が、無傷の天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に介在している。ＣＨ３ドメインが、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで伸長し、約１０８残基を含むことも十分に立証されている。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、約２５残基を含み、可撓性であるため、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して移動するのを可能にする。ヒンジ領域は、３つの別個のドメイン（上、中央、および下ヒンジドメイン）に細分され得る（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３（１９９８））。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「ジスルフィド結合」という用語は、２つの硫黄原子間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とのジスルフィド結合または架橋を形成することができる、チオール基を含む。大部分の天然に存在するＩｇＧ分子において、ＣＨ１およびＣＬ領域は、ジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔ付番方式を使用して２３９および２４２に対応する位置（位置２２６または２２９、ＥＵ付番方式）で２つのジスルフィド結合によって連結される。
【００７１】
本明細書に開示される抗Ａβ抗体、またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、抗原、例えば、それらが認識するか、または特異的に結合する、本明細書に開示される標的ポリペプチド（例えば、Ａβ）のエピトープ（複数可）または部分（複数可）に関して説明または特定され得る。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的ポリペプチドの部分は、「エピトープ」または「抗原決定基」である。標的ポリペプチドは、単一エピトープを含むことができるが、典型的に、少なくとも２つのエピトープを含み、抗原のサイズ、立体配座、およびタイプに応じて、任意の数のエピトープを含むことができる。さらに、標的ポリペプチド上の「エピトープ」が、非ポリペプチド要素であり得るか、またはそれを含むことができ、例えば、エピトープが、炭水化物側鎖を含み得ることに留意すべきである。
【００７２】
抗体のペプチドまたはポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４〜５個のアミノ酸であると考えられる。ペプチドまたはポリペプチドエピトープは、例えば、少なくとも７個、少なくとも９個、または少なくとも約１５個〜約３０個のアミノ酸を含むことができる。ＣＤＲは、抗原ペプチドまたはポリペプチドを、その三次形態で認識することができるため、エピトープを含むアミノ酸は連続である必要はなく、場合によっては、同じペプチド鎖上に存在することさえできない。本開示の抗Ａβ抗体によって認識されるペプチドまたはポリペプチドエピトープは、Ａβの少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、または約１５個〜約３０個の連続または非連続アミノ酸の配列を含むことができる。
【００７３】
「特異的に結合する」とは、一般に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にいくらかの相補性を伴うことを意味する。この定義に従って、抗体は、それがランダムな非関連エピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介してそのエピトープに結合するとき、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、本明細書において、ある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対的親和性を適格とするために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、所与のエピトープに対して抗体「Ｂ」よりも高い特異性を有すると見なすことができるか、または抗体「Ａ」は、それが関連するエピトープ「Ｄ」に対して有するよりも高い特異性を有するエピトープ「Ｃ」に結合すると言うことができる。
【００７４】
「優先的に結合する」とは、抗体が、関連する同様の相同または同様のエピトープに結合するよりも容易に、エピトープに特異的に結合することを意味する。したがって、所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのような抗体が関連するエピトープと交差反応することができるとしても、関連するエピトープよりもそのエピトープに結合する可能性が高い。
【００７５】
非限定の例として、抗体は、第２のエピトープに対する抗体の解離定数（ＫＤ）より低いＫＤで第１のエピトープに結合する場合、該第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。別の非限定の例において、抗体は、それが第２のエピトープに対する抗体のＫＤより少なくとも一桁低い親和性で第１のエピトープに結合する場合、第１の抗原に優先的に結合すると見なすことができる。別の非限定の例において、抗体は、それが第２のエピトープに対する抗体のＫＤより少なくとも二桁低い親和性で第１のエピトープに結合する場合、第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。
【００７６】
別の非限定の例において、抗体は、それが第２のエピトープに対する抗体のｋ（ｏｆｆ）より低いオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で第１のエピトープに結合する場合、第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。別の非限定の例において、抗体は、それが第２のエピトープに対する抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも一桁低い親和性で第１のエピトープに結合する場合、第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。別の非限定の例において、抗体は、それが第２のエピトープに対する抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも二桁低い親和性で第１のエピトープに結合する場合、第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。
【００７７】
本明細書に開示される抗体または抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、毎秒５×１０−２、毎秒１０−２、毎秒５×１０−３、または毎秒１０−３以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、本明細書に開示される標的ポリペプチド（例えば、Ａβ）またはそのフラグメントもしくは変異体に結合すると言うことができる。ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、毎秒５×１０−４、毎秒１０−４、毎秒５×１０−５、または毎秒１０−５、毎秒５×１０−６、毎秒１０−６、毎秒５×１０−７、または毎秒１０−７以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、本明細書に開示される標的ポリペプチド（例えば、ヒトＡβ）またはそのフラグメントもしくは変異体に結合すると言うことができる。
【００７８】
本明細書に開示される抗体または抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、毎秒１０３Ｍ−１、毎秒５×１０３Ｍ−１、毎秒１０４Ｍ−１、または毎秒５×１０４Ｍ−１以下のオンレート（ｋ（ｏｎ））で、本明細書に開示される標的ポリペプチド（例えば、Ａβ）またはそのフラグメントもしくは変異体に結合すると言うことができる。ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、毎秒１０５Ｍ−１、毎秒５×１０５Ｍ−１、毎秒１０６Ｍ−１、または毎秒５×１０６Ｍ−１、または毎秒１０７Ｍ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で、本明細書に開示される標的ポリペプチド（例えば、Ａβ）またはそのフラグメントもしくは変異体に結合すると言うことができる。
【００７９】
抗体は、それがエピトープへの参照抗体の結合をある程度阻止する程度まで、そのエピトープに優先的に結合する場合、所与のエピトープへの参照抗体の結合を競合的に阻害すると言われる。競合的な阻害は、当該技術分野において既知の任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイによって決定され得る。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％だけ競合的に阻害すると言うことができる。本明細書に記載されるように、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、個々のエピトープと免疫グロブリン分子のＣＤＲとの結合の強度の尺度を指す。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．）ｐａｇｅｓ  ２７−２８を参照されたい。
【００８１】
本明細書に開示される抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、血管アミロイドに対するよりも高い親和性で実質アミロイド斑に結合する。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「結合活性」という用語は、免疫グロブリンの集団と抗原との間の複合体の全体的安定性、つまり、抗原との免疫グロブリン混合物の機能的結合強度を指す。例えば、Ｈａｒｌｏｗの２９〜３４頁を参照されたい。結合活性は、特異的エピトープを有する集団内の個々の免疫グロブリン分子の親和性、ならびに免疫グロブリンおよび抗原の原子価の両方に関する。例えば、二価モノクローナル抗体と、ポリマー等の高度に反復するエピトープ構造を有する抗原との間の相互作用は、高い結合活性のうちの１つであろう。
【００８３】
本明細書に開示される抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、それらの交差反応性に関して説明または特定することもできる。本明細書で使用される場合、「交差反応性」という用語は、１つの抗原に特異的な抗体が第２の抗原と反応する能力、２つの異なる抗原性物質の間の関連性の尺度を指す。したがって、抗体は、それがその形成を誘導したもの以外のエピトープに結合する場合、交差反応性である。交差反応性エピトープは、一般に、誘導エピトープと同じ相補的構造特徴の多くを含み、場合によっては、実際に元のよりも良好に適合することができる。
【００８４】
例えば、ある特定の抗体は、それらが関連するが非同一のエピトープ、例えば、参照エピトープに対して少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、および少なくとも５０％の同一性（当該技術分野において既知であり、本明細書に記載される方法を使用して計算される）を有するエピトープに結合することにおいて、ある程度の交差反応性を有する。抗体は、それが参照エピトープに対して９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、および５０％未満の同一性（当該技術分野において既知であり、本明細書に記載される方法を使用して計算される）を有するエピトープに結合しない場合、交差反応性をほとんど有しない、または全く有しないと言うことができる。抗体は、それがそのエピトープの任意の他の類似体、オルトログ、または相同体に結合しない場合、ある特定のエピトープに対して「高度に特異的」と見なすことができる。
【００８５】
本明細書に記載される抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、本開示のポリペプチド、例えば、Ａβに対するそれらの結合親和性に関して説明または特定することもできる。結合親和性は、５×１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５×１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ、１０−５Ｍ、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍ、または１０−１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄを有するものを含むことができる。
【００８６】
一本鎖抗体を含む抗体フラグメントは、可変領域（複数可）を単独で、またはヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの全体もしくは一部分と組み合わせて含むことができる。可変領域（複数可）と、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせを含む抗原結合フラグメントも含まれる。結合分子、例えば、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合フラグメントは、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物が起源であり得る。抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリ抗体であり得る。別の実施形態において、可変領域は（例えば、サメからの）コンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）起源であり得る。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、任意の抗体を意味するように保持され、免疫反応性領域または部位は、第１の種から得られるか、またはそれに由来し、定常領域（無傷、部分的、または本開示に従って修飾され得る）は、第２の種から得られる。例えば、標的結合領域または部位は、非ヒト起源（例えば、マウスまたは霊長類）であり得、定常領域は、ヒトであり得る。代替として、完全ヒト結合領域は、非ヒト（例えば、マウス）定常領域と組み合わせることができる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「マウス化抗体」または「マウス化免疫グロブリン」という用語は、本開示のヒト抗体から１つ以上のＣＤＲと、マウス抗体配列に基づくアミノ酸置換および／または欠失および／または挿入を含むヒトフレームワーク領域とを含む抗体を指す。ＣＤＲを提供するヒト免疫グロブリンは、「親」または「受容体」と呼ばれ、フレームワーク変化を提供するマウス抗体は、「ドナー」と呼ばれる。定常領域が存在する必要はないが、存在する場合、それらは通常、マウス抗体定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％または約９５％以上同一である。したがって、いくつかの実施形態において、全長マウス化ヒト重鎖または軽鎖免疫グロブリンは、マウス定常領域と、ヒトＣＤＲと、多数の「マウス化」アミノ酸置換を有する実質的ヒトフレームワークとを含む。典型的に、「マウス化抗体」は、マウス化可変軽鎖および／またはマウス化可変重鎖を含む抗体である。例えば、マウス化抗体は、例えば、キメラ抗体の可変領域全体が非マウスであるため、典型的なキメラ抗体を包含しないであろう。「マウス化」のプロセスによって「マウス化」された修飾抗体は、ＣＤＲを提供する親抗体と同じ抗原に結合し、通常は親抗体と比較してマウスにおける免疫原性が低い。
【００８９】
本明細書で使用される場合、「操作された抗体」という用語は、重鎖または軽鎖のいずれかまたは両方における可変ドメインが、既知の特異性の抗体から１つ以上のＣＤＲの少なくとも部分的な置換によって、ならびに必要に応じて、部分的フレームワーク領域の置換および配列変化によって改変される、抗体を指す。ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスまたはさらにサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲが異なるクラスの抗体、例えば、異なる種の抗体に由来することが想定される。既知の特異性の非ヒト抗体から１つ以上の「ドナー」ＣＤＲがヒト重鎖または軽鎖フレームワーク領域に移植された操作された抗体は、本明細書において「ヒト化抗体」と称される。１つの可変ドメインの抗原結合能力を別の可変ドメインに移すために、ＣＤＲの全てをドナー可変ドメインからの完全ＣＤＲと置換する必要がない場合がある。むしろ、標的結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すことのみが必要であり得る。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、以下に記載される、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されるように、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つ以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックの動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、少なくとも重鎖の可変ドメイン、または少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む抗体も含み、可変ドメイン（複数可）は、ヒト免疫グロブリン可変ドメイン（複数可）のアミノ酸配列を有する。
【００９１】
「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、本明細書に記載される抗体分子（例えば、ＶＨ領域および／またはＶＬ領域）の変異体（誘導体を含む）を含む、それから本質的になる、またはそれからなる、本明細書に記載される「ヒト」または「完全ヒト」抗体も含み、抗体またはそのフラグメントが、Ａβポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは変異体に免疫特異的に結合する。当業者に既知の標準技法を使用して、ヒト抗Ａβ抗体をコードするヌクレオチド配列に突然変異を導入することができ、アミノ酸置換をもたらす部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、変異体（誘導体を含む）は、参照ＶＨ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬ領域、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３に対して５０未満のアミノ酸置換、４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、または２未満のアミノ酸置換をコードする。
【００９２】
一態様において、本開示の抗体は、ヒトＢ細胞に由来するようなヒトモノクローナル抗体である。任意に、ヒト抗体のフレームワーク領域は、データベース内の関連するヒト生殖系可変領域配列に従って整列および採用される。例えば、ＭＲＣタンパク質工学センター（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）によってホストされるＶｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）を参照されたい。例えば、真の生殖系配列から逸脱する可能性があると見なされるアミノ酸は、クローニングプロセス中に組み込まれたＰＣＲプライマー配列に起因し得る。ファージディスプレイ抗体ライブラリーまたは異種マウスからの単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）等の人工的に生成されたヒト様抗体と比較して、本開示のヒトモノクローナル抗体は、（ｉ）動物代理のものではなく、ヒト免疫応答を使用して得られること、すなわち、抗体がヒトの体内でその関連立体配座における天然のＡβに応答して生成されたこと、（ｉｉ）個体を保護しているか、またはＡβの存在に対して少なくとも重要であること、および（ｉｉｉ）抗体がヒト起源であるため、自己抗原に対する交差反応性のリスクが最小限に抑えられることを特徴とする。したがって本開示によれば、「ヒトモノクローナル抗体」、「ヒトモノクローナル自己抗体」、「ヒト抗体」等という用語を使用して、ヒト起源の、すなわち、Ｂ細胞もしくはそのハイブリドーマ等のヒト細胞から単離されたＡβ結合分子、またはヒト細胞、例えば、ヒト記憶Ｂ細胞のｍＲＮＡから直接クローン化されたｃＤＮＡを示す。ヒト抗体は、アミノ酸置換が、例えば、結合特性を改善するために抗体内で行われる場合でも、依然として「ヒト」である。
【００９３】
以下に記載される、および例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号における、ヒト免疫グロブリンライブラリーまたは１つ以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニックな動物に由来し、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体は、本開示の真のヒト抗体からそれらを区別するためにヒト様抗体と示される。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」という用語は、治療的処置および予防的または保護的措置の両方を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化、感染、または障害を予防または減速させる（減少させる）ことである。有益なまたは所望の臨床結果としては、検出可能または検出不可能のどちらかである、症状の軽減、疾患の程度の低減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、対象における感染因子のクリアランスまたは減少、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的または全体的のどちらか）が挙げられるが、これらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けない場合の予測生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。治療を必要とするものとしては、既に感染、症状、または障害を有するもの、ならびにその症状もしくは障害を有する傾向があるもの、またはその症状もしくは障害が予防されるものが挙げられる。
【００９５】
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後診断、または治療が所望される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象としては、ヒト、家畜、農場動物、および動物園、スポーツ、またはペット動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛、クマ等が挙げられる。
【００９６】
ＩＩ．抗Ａβ抗体
本明細書に開示されるように、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合し、ＢＩＩＢ０３７抗体は、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。ヒトＢＩＩＢ０３７抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２００８／０８１００８号において、ＮＩ−１０１．１２Ｆ６Ａとして記載されている。特に断りのない限り、「１２Ｆ６Ａ」、「ｈｕ１２Ｆ６Ａ」、および「ＢＩＩＢ０３７」は、本明細書において交換可能に使用される。本明細書に開示される「ｃｈＢＩＩＢ０３７」という用語は、ＢＩＩＢ０３７のマウスキメラバージョンを指す。
【００９７】
本明細書に記載されるヒトおよびキメラ抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ａβおよびそのエピトープ、ならびにＡβおよびそのエピトープの様々な立体配座に特異的に結合する。例えば、Ａβ凝集体に選択的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが、本明細書において開示される。本明細書で使用される場合、Ａβに「選択的に結合する」、「特異的に結合する」、または「優先的に結合する」抗体への言及は、他の非関連タンパク質に結合しない抗体を指す。Ａβ配座異性体に「選択的に結合する」または「特異的に結合する」抗体は、Ａβの全ての立体配座に結合するわけではない、すなわち、少なくとも１つの他のＡβ配座異性体に結合しない抗体を指す。例えば、Ａβのモノマー形態および凝集形態を区別することができる、すなわち、ＡβモノマーではなくＡβ原線維に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントが、本明細書において開示される。
【００９８】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、ＢＩＩＢ０３７抗体のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、約８５％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、または約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。さらなる実施形態において、結合分子は、ＢＩＩＢ０３７抗体に対して、少なくとも約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％の配列同一性を共有する。ある特定の実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じＡβエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）および免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、表２に示されるように、ＶＨが、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、ＶＨおよびＶＬを含み、表２に示されるように、ＶＨが、配列番号１と同一、または１個、２個、３個、４個、５個、もしくはそれ以上のアミノ酸置換を除いて同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２と同一、または１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸置換を除いて同一のアミノ酸配列を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態は、ＶＨを含む、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体を含み、表３に示されるように、ＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、またはＶＨＣＤＲ３領域のうちの１つ以上が、配列番号３、配列番号４、配列番号５のうちの１つ以上の、１つ以上の参照重鎖ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／またはＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一である。
【０１０１】
さらに、ＶＨを含む、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体が開示され、表３に示されるように、ＶＨのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、またはＶＨＣＤＲ３領域のうちの１つ以上が、配列番号３、配列番号４、配列番号５のうちの１つ以上の、１つ以上の参照重鎖ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、またはＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列と同一であるか、または４個、３個、２個、または１個のアミノ酸置換を除いて同一である。
【０１０２】
ＶＬを含む、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体も開示され、表３に示されるように、ＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３領域のうちの１つ以上が、配列番号６、配列番号７、配列番号８のうちの１つ以上の、１つ以上の参照重鎖ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一である。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、ＶＬを含み、表３に示されるように、ＶＬのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３領域のうちの１つ以上が、配列番号６、配列番号７、配列番号８のうちの１つ以上の、１つ以上の参照重鎖ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列と同一であるか、または４個、３個、２個、または１個のアミノ酸置換を除いて同一である。
【０１０４】
他の実施形態において、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、表２に示されるように、配列番号１および配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、ＢＩＩＢ０３７抗体を含む。
【表２】
2016501247.tif 000003
【表３】
2016501247.tif 000004
【０１０６】
本明細書に記載される方法における使用のための、本明細書に記載される抗Ａβ抗体、またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体をコードするポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター、およびそのようなベクターまたはポリヌクレオチドを含む宿主細胞も含まれ、全ては本明細書に記載される方法において使用するための抗Ａβ抗体、またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体を産生するためである。
【０１０７】
本明細書に記載される抗Ａβ抗体の好適な生物活性変異体を、本開示の方法において使用することができる。そのような変異体は、親抗Ａβ抗体の所望の結合特性を保持する。抗体変異体を作製するための方法は、一般に、当該技術分野において利用可能である。
【０１０８】
突然変異誘発およびヌクレオチド配列変異のための方法は、当該技術分野において周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｌｋｅｒ  ａｎｄ  Ｇａａｓｔｒａ，ｅｄｓ．（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２（１９８５）、Ｋｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２（１９８７）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）、米国特許第４，８７３，１９２号、およびそこで引用される参照文献を参照されたい。関心のポリペプチドの生物活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、タンパク質配列および構造の地図（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．），ｐｐ．３４５−３５２（１９７８）におけるＤａｙｈｏｆｆらのモデルにおいて見出すことができる。Ｄａｙｈｏｆｆらのモデルは、受容点突然変異（ＰＡＭ）アミノ酸類似性マトリックス（ＰＡＭ２５０マトリックス）を使用して、好適な保存的アミノ酸置換を決定する。１つのアミノ酸を、類似特性を有する別のアミノ酸と交換する等の保存的置換を行うことができる。ＤａｙｈｏｆｆらのモデルのＰＡＭ２５０マトリックスによって教示される保存的アミノ酸置換の例としては、
【化１】
2016501247.tif 000005
が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、異性体、もしくは誘導体の結合特異性を測定する方法としては、標準競合的結合アッセイ、Ｔ細胞またはＢ細胞によって免疫グロブリン分泌を監視するためのアッセイ、Ｔ細胞増殖アッセイ、アポトーシスアッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイ等が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、国際公開第９３／１４１２５号、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：６３３−６４２（２０００）、Ｋｕｍａｎｏｇｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：１１７５−１１８１（２００２）、Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７：４３２１−４３２８（２００１）、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９７：３４９８−３５０４（２００１）、およびＧｉｒａｕｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２（２）：１２４６−１２５５（２００４）に開示されるそのようなアッセイを参照されたい（それらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる）。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の「配列同一性のパーセント（％）」という用語は、２つの配列の最適アラインメントのために導入されなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮して、比較ウィンドウ上の配列によって共有される同一のマッチした位置の数を指す。マッチした位置は、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が、標的配列および参照配列の両方に提示される任意の位置である。ギャップはヌクレオチドまたはアミノ酸ではないため、標的配列内に提示されるギャップはカウントされない。同様に、標的配列ヌクレオチドまたはアミノ酸はカウントされるが、参照配列からのヌクレオチドまたはアミノ酸はカウントされないため、参照配列内に提示されるギャップはカウントされない。
【０１１０】
配列同一性のパーセンテージは、同一のアミノ酸残基または核酸塩基が両方の配列内に発生する位置の数を決定し、マッチした位置の数を得ること、マッチした位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割ること、およびその結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【０１１１】
本明細書に開示される定常領域、ＣＤＲ、ＶＨドメイン、またはＶＬドメインを含む任意の特定のポリペプチドが、別のポリペプチドと少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはさらに約１００％同一であるかどうかが、本明細書において論じられるとき、配列の比較および２つの配列間の配列同一性パーセントの決定は、オンライン使用およびダウンロードの両方のために容易に入手可能なソフトウェアを使用して達成することができる。好適なソフトウェアプログラムは、様々な供給源から、タンパク質およびヌクレオチド配列の両方のアラインメントのために入手可能である。配列同一性のパーセントを決定するための１つの好適なプログラムは、ｂｌ２ｓｅｑであり、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センターＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴスイートのプログラムの一部である。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮを使用して、核酸配列を比較するが、ＢＬＡＳＴＰを使用して、アミノ酸配列を比較する。他の好適なプログラムは、例えば、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａにおいて欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）から入手可能なＥＭＢＯＳＳスイートのバイオインフォマティクスプログラムの一部である。
【０１１２】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する単一ポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれが独自の配列同一性のパーセントを有することができる。配列同一性パーセントの値は、小数第１位に四捨五入されることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、および８０．１４は、８０．１に切り捨てられるが、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、および８０．１９は、８０．２に切り上げられる。長さの値は常に整数であることも留意されたい。
【０１１３】
当業者は、配列同一性パーセントの計算のための配列アラインメントの生成が、一次配列データによって排他的に駆動されるバイナリ配列間比較に限定されないことを理解するであろう。配列アラインメントは、複数の配列アラインメントに由来し得る。複数の配列アラインメントを生成するための１つの好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔｒａｌ．ｏｒｇから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能なＭＵＳＣＬＥである。代替として、ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、例えば、ＥＢＩから入手可能である。
【０１１４】
配列アラインメントは、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、突然変異の位置）、または系統発生データ等の異種ソースからのデータと配列データを統合することによって生成され得ることも理解されるであろう。複数の配列アラインメントを生成するための異種データを統合する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇにおいて、および代替として、例えば、ＥＢＩから入手可能なＴ−Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一性のパーセントを計算するために使用される最終アラインメントは、自動または手動のいずれかで精選され得ることも理解されるであろう。
【０１１５】
変異体は、例えば、わずか１〜１５個のアミノ酸残基、わずか１〜１０個のアミノ酸残基、例えば、６〜１０個、わずか５個、わずか４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ酸残基が参照抗Ａβ抗体とは異なり得る。「保存的アミノ酸置換」は、その中でアミノ酸残基が同様の電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基と置換されるものである。同様の電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。代替として、突然変異は、例えば飽和突然変異誘発によって、コード配列の全てまたは一部に沿ってランダムに導入されることができ、得られた変異体は、活性を保持する変異体を特定する生物活性（例えば、Ａβポリペプチドを結合する能力）についてスクリーニングされ得る。
【０１１６】
例えば、抗体分子のフレームワーク領域内のみ、またはＣＤＲ領域内のみに突然変異を導入することが可能である。導入された突然変異は、サイレントまたは中性ミスセンス突然変異であり得、すなわち、抗原に結合する抗体の能力に対する効果がないか、またはほとんどない。これらのタイプの突然変異は、コドン使用を最適化するか、またはハイブリドーマの抗体産生を改善するために有用であり得る。代替として、非中性ミスセンス突然変異は、抗原に結合する抗体の能力を改変することができる。当業者であれば、抗原結合活性の改変がない、または結合活性の改変（例えば、抗原結合活性の改善または抗体特異性の変化）等の所望の特性を持つ突然変異分子を設計および試験することができるであろう。突然変異誘発に続いて、コードされたタンパク質を日常的に発現させることができ、コードされたタンパク質の機能的および／または生物活性（例えば、Ａβポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに免疫特異的に結合する能力）は、本明細書に記載される技法を使用して、または当該技術分野において既知の技法を日常的に修正することによって決定することができる。
【０１１７】
ＩＩＩ．抗Ａβ抗体を使用する治療方法
本開示は、抗Ａβもしくはその抗原結合フラグメントの長期投薬中に、脳アミロイド斑を減少させる、または微小出血の発生を最小限に抑えるための方法に関し、抗Ａβ抗体もしくはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、「最小限に抑える」という用語は、減少させること、予防すること、一定に保つこと、増加させないこと等を意味する。
【０１１９】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、脳アミロイド斑を減少させることを対象とし、この投与は、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができ、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、脳アミロイド斑を減少させることを対象とし、この投与は、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができる。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳アミロイド斑を減少させること」という用語は、血管アミロイド沈着の量が、対照（すなわち、未治療）群と比較して、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント治療によって実質的に減少も実質的に増加もしないことを意味する。
【０１２２】
脳アミロイド斑を減少させるための方法がさらに提供され、脳内のアミロイド斑の減少は、Ｆｃ受容体の関与を含む。１つ以上のＦｃ受容体は、ミクログリア、星状細胞、オリゴデンドロサイト、およびニューロン内で発現する。Ｆｃ受容体は、神経疾患におけるそれらの関与についてますます認識されている。抗Ａβ抗体／Ａβ免疫複合体は、ミクログリアのＦｃ依存性活性化に続くＡβ沈着の食作用（Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２３（９）：３７４５−３７５１（２００３））またはＦｃ非依存性機序（Ｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２３（２４）：８５３２−８５３８（２００５））によってクリアされ得る。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、本明細書に記載される抗Ａβ抗体（その抗原結合フラグメント、変異体、および誘導体を含む）の使用を対象とする。さらに、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含む、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法が提供され、ＢＩＩＢ０３７抗体は、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される方法は、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑え、これは、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含む。さらなる実施形態によって、本明細書に記載される抗Ａβ抗体（その抗原結合フラグメント、変異体、および誘導体を含む）は、血液試料、リンパ試料、または任意の他の体液試料であり得る試験される個体から体液試料を入手すること、および抗体−抗原複合体の形成を可能にする条件下で、体液試料を本明細書に記載される抗Ａβ抗体と接触させることによって、個体における神経変性障害を診断またはスクリーニングのための方法において使用することもできる。次にそのような複合体のレベルは、当該技術分野において既知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光、蛍光活性化細胞ソーター（ＦＡＣＳ）、磁気セルソーターによって決定され、対照試料中で形成されるよりも著しく高いレベルは、試験される個体における疾患を示す。同様に、本明細書に記載される抗Ａβ抗体によって結合される特異的抗原を使用することもできる。したがって、本開示は、抗Ａβ結合分子、例えば、本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む、インビトロ免疫アッセイに関する。
【０１２４】
さらなる実施形態によって、本明細書に記載される抗Ａβ抗体（その抗原結合フラグメント、変異体、および誘導体を含む）は、個体における神経変性障害を治療もしくはその進行を予防するため、または神経変性障害と関連する症状の緩和のための方法において使用することもできる。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」という用語は、治療的処置および予防的または保護的措置の両方を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化、感染、または障害を予防または減速させる（減少させる）ことである。有益なまたは所望の臨床結果としては、検出可能または検出不可能のどちらかである、症状の軽減、疾患の程度の低減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、対象における感染因子のクリアランスまたは減少、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的または全体的のどちらか）が挙げられるが、これらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けない場合の予測生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。治療を必要とするものとしては、既に感染、症状、または障害を有するもの、ならびにその症状もしくは障害を有する傾向があるもの、またはその症状もしくは障害が予防されるものが挙げられる。本明細書で使用される場合、「治療の方法」という用語は、個体における神経変性障害を治療もしくはその進行を予防するため、または神経変性障害と関連する症状の緩和のための、本明細書に記載される抗Ａβ抗体（その抗原結合フラグメント、変異体、および誘導体を含む）の使用を包含する。本明細書で使用される場合、「治療の方法」という用語は、個体における神経変性障害を治療もしくはその進行を予防するため、または神経変性障害と関連する症状の緩和のための、本明細書に記載される抗Ａβ抗体（その抗原結合フラグメント、変異体、および誘導体を含む）も包含する。
【０１２６】
特定の実施形態において、本明細書に記載される方法は、アルツハイマー病に関連する症状の改善のため、アルツハイマー病の存在について対象を診断もしくはスクリーニングするため、または対象がアルツハイマー病を発症する危険性を決定するために、アルツハイマー病を治療もしくはその進行を予防することを対象とする。
【０１２７】
Ａβのレベルは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法によって評価されることができ、例えば、ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）、二次元ゲル電気泳動、質量分析（ＭＳ）、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化−飛行時間−ＭＳ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）、表面強化レーザー脱離イオン化−飛行時間（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ）、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、多次元液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に続くタンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）、およびレーザー密度測定から選択される１つ以上の技法によってＡβを分析することを含む。ある特定の実施形態において、Ａβのインビボ撮像法は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、近赤外線（ＮＩＲ）光学画像法、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を含む。
【０１２８】
医学分野において周知であるように、任意の１患者のための投薬量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与の時間および経路、一般健康状態、同時に投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。
【０１２９】
ある特定の実施形態において、例えば、Ａβに特異的に認識する本開示の抗Ａβ抗体または等価の抗原結合分子が負荷される、抗体系アレイを使用することができる。マイクロアレイ免疫アッセイの設計は、Ｋｕｓｎｅｚｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ５：１６８１−１６９６（２００６）に要約されている。したがって、本開示は、本開示に従って特定された抗Ａβ結合分子を負荷したマイクロアレイにも関する。
【０１３０】
ＩＶ．抗Ａβ抗体を使用する診断または追跡方法
本開示は、試験対象における脳アミロイド斑の量を測定するため、神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価するため、または治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療するための、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体の使用を提供する。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される方法において有用な抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、治療薬、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物応答調節剤、医薬品、またはＰＥＧに複合体化され得る。
【０１３２】
従来の抗体を含む免疫毒素である複合体は、当該技術分野において広く記載されている。毒素は、従来の連結技法によって抗体に連結され得るか、またはタンパク質毒素部分を含有する免疫毒素は、融合タンパク質として産生され得る。
【０１３３】
免疫療法のために本明細書に開示される抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体に連結され得る治療薬の例は、薬物、放射性同位体、レクチン、および毒素である。
【０１３４】
例えば、免疫療法のために本明細書に提供される方法において有用な放射性同位的に複合体化された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体を使用する際に、白血球の分布ならびに安定性および放出のような因子に応じて、ある特定の同位体を選択することができる。自己免疫応答に応じて、いくつかの放射体を使用することができる。一般に、αおよびβ粒子放出放射性同位体は、免疫療法に利用されている。ある特定の実施形態において、２１２Ｂｉ等の短距離高エネルギーα放射体を使用することができる。治療目的で本開示の抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体に結合され得る放射性同位体の例としては、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、２１２Ｂｉ、２１２Ａｔ、２１１Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、および１８８Ｒｅが挙げられるが、これらに限定されない。結合分子、例えば、本明細書に開示される抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体に連結され得る他の治療薬、ならびにエクスビボおよびインビボ治療プロトコルは、既知であるか、または当業者によって容易に確認され得る。適切な場合、当業者は、タンパク質性物質自体の代わりに、上記抗体、抗原、または対応するベクターのうちのいずれか１つをコードする本発明のポリヌクレオチドを使用することができる。
【０１３５】
当業者であれば、複合体は、複合体化される選択薬剤に応じて種々の技法を使用して組み立てることもできることを理解するであろう。例えば、ビオチンとの複合体は、例えば、結合ポリペプチドと、ビオチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル等のビオチンの活性化エステルとの反応によって調製される。同様に、蛍光マーカーとの複合体は、例えば、イソチオシアネート、例えばフルオレセインイソチオシアネートとの反応によって、カップリング剤の存在において調製され得る。本開示の抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体の複合体は、同様の方法で調製される。
【０１３６】
さらに、試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法が提供され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する、またはＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、本明細書に記載される測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、（ｂ）試験対象において生成されたシグナルを、１以上の対照対象への標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することとを含み、対照対象と比較して試験対象において生成されたシグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する。
【０１３７】
薬剤によって生成されたシグナルは、例えば、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）によって測定され得る。
【０１３８】
診断薬または治療薬に複合体化された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、または誘導体が、本明細書に開示される。検出は、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、または誘導体を、検出可能な物質、すなわち、測定可能なシグナルを生成する薬剤に連結することによって容易になり得る。検出可能な物質の例としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、様々な陽電子放出撮影を使用する陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。例えば、本開示に従う診断薬としての使用のために、抗体に複合体化され得る金属イオンについては、米国特許第４，７４１，９００号を参照されたい。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ、好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが挙げられ、発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ、好適な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、または９９Ｔｃが挙げられる。
【０１３９】
「対照対象（複数可）」とは、任意の健常な対象（または対象のプール）、異なる程度の疾患を持つ対象（複数可）、またはさらに疾患の早期段階の実際の試験対象を意味する。
【０１４０】
さらに、脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法も提供され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する、またはＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、本明細書に記載される測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、投与後に患者においてシグナルが測定される、投与することと、（ｂ）標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、投与後に患者においてシグナルが測定される、投与することと、（ｃ）（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で患者において測定されたシグナルの変化に基づいて、患者における疾患の進行を評価することと、を含み、シグナルの増加が、患者における神経変性疾患の進行を示す。
【０１４１】
本明細書に開示される標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを診断的に使用して、例えば、臨床試験手順の一部として、神経変性疾患の発症または進行を監視し、例えば、所与の治療および／または予防計画の有効性を決定することができる。患者の治療は、神経変性疾患の進行のレベルに基づいて調整することができる。
【０１４２】
さらに、治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法も提供され、（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、（ｂ）患者において測定されたシグナルと、１以上の対照対象への標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定されたシグナルとの比較の考察時に、患者における疾患状態を評価することであって、対照対象と比較して患者において生成されたシグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、（ｃ）患者の疾患状態に適した治療法で患者を治療することと、を含む。
【０１４３】
患者の状態に適した治療法は、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する、またはＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することを含む。本明細書に開示される脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法は、（ｄ）標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、シグナルが、投与後に患者において測定される、投与することと、（ｅ）（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で患者において測定されたシグナルの変化に基づいて、患者における疾患の進行を評価することとをさらに含むことができ、シグナルの増加が、患者における神経変性疾患の進行を示す。
【０１４４】
Ｖ．組成物および投与方法
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体を調製し、それを必要とする対象に投与する方法は、当業者に周知であるか、または容易に決定される。抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体の投与経路は、例えば、末梢、経口、非経口、吸入、または局所であり得る。
【０１４５】
本明細書で論じられるように、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、投与を容易にし、活性剤の安定性を促進するように配合され得る。ある特定の実施形態において、本開示に従う薬物学的組成物は、生理食塩水、非毒性緩衝剤、保存剤等の薬学的に許容される非毒性滅菌担体を含む。本出願の目的で、薬学的に有効な量の抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、標的への有効な結合を達成するため、および利益を達成するため、例えば、血管アミロイドに影響を及ぼすことなく脳アミロイド斑を減少させる、または抗Ａβ抗体もしくはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑えるために十分な量を意味するように保持される。いくつかの実施形態において、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体、もしくは誘導体は、脳アミロイド斑を減少させるのに有効な量で血液脳関門を通過することができる。
【０１４６】
本開示で使用される薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含み、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、リン酸塩等の緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸、水、塩または電解質の部分グリセリド混合物、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂を含む。
【０１４７】
微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール等）、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことができる。注射可能組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを、組成物中に含むことによってもたらされ得る。
【０１４８】
非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入または負荷ボーラス用量に続いて維持用量であり得る。これらの組成物は、特定の固定または変動時間間隔、例えば、１日１回または「必要」ベースで投与され得る。
【０１４９】
非経口投与の調製物は、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液、および乳液を含む。非水性溶液の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性担体としては、水、アルコール／水性溶液、乳液または懸濁液が挙げられ、生理食塩水および緩衝媒体を含む。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンガー液または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、液体および栄養補充薬、電解質補充薬（例えば、リンガーデキストロースに基づくもの）等が挙げられる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、および不活性ガス等の保存剤および他の添加剤も存在し得る。さらに、本開示の薬学的組成物は、その薬学的組成物の意図される用途に応じて、ドーパミンまたは精神薬理薬等のさらなる薬剤を含むことができる。さらに、例えば、本開示の薬学的組成物が、受動免疫のために抗Ａβ抗体を含む場合、薬学的組成物をワクチンとして配合することもできる。
【０１５０】
本明細書に開示されるある特定の薬学的組成物は、例えば、カプセル、錠剤、水性懸濁液、または溶液を含む許容される投与形態で経口投与され得る。ある特定の薬学的組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与することもできる。そのような組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の好適な保存剤、生物学的利用能を強化する吸収促進剤、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用いて、生理食塩水中の溶液として調製され得る。
【０１５１】
単一投薬形態を産生するために担体物質と組み合わされる抗Ａβ抗体、またはそのフラグメント、変異体、もしくは誘導体の量は、治療されるホストおよび特定の投与形態に応じて異なるであろう。組成物は、単一用量、複数用量として、または確立された注入期間にわたって投与され得る。投薬計画は、最適な所望の応答（例えば、治療的または予防的応答）を提供するために調整することもできる。
【０１５２】
本明細書で使用される場合、「末梢投与」という用語は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または膣投与を含む。全てのこれらの投与形態は、本開示の範囲内として明らかに企図されるが、投与のための形態の例は、注射用、特に静脈内または動脈内注射または点滴用の溶液である。注射に好適な薬学的組成物は、緩衝剤（例えば、酢酸塩、リン酸塩、またはクエン酸塩緩衝剤）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意に安定化剤（例えば、ヒトアルブミン）等を含み得る。末梢投与のための調製物としては、水性および非水性溶液、懸濁液、および乳液が挙げられる。非水性溶液の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性担体としては、例えば、水、アルコール／水性溶液、乳液、または懸濁液が挙げられ、生理食塩水および緩衝媒体を含む。対象開示において、薬学的に許容される担体としては、０．０１〜０．１Ｍリン酸緩衝液または０．８％生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。他の一般的な非経口ビヒクルとしては、リン酸ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンガー液または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、液体および栄養補充薬、電解質補充薬、例えば、リンガーデキストロースに基づくもの等が挙げられる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、および不活性ガス等の保存剤および他の添加剤も存在し得る。
＊＊＊
【０１５３】
本開示の実践は、別途示されない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学を用い、それらは当該技術分野内である。そのような技法は、文献において完全に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：（１９８９）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２），ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（１９８５）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ  ｅｄ．，（１９８４）、Ｍｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，１９５号、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．（１９８４）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．（１９８４）、Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ，Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，（１９８７）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）、Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、論文Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ，Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ  ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４および１５５（Ｗｕら編）、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９８７）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＶ，Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）、およびｉｎ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）を参照されたい。
【０１５４】
免疫学の一般原理を記載する標準的な参照研究としては、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｋｌｅｉｎ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）、Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．，Ｂｒｏｓｔｏｆｆ，Ｊ．  ａｎｄ  Ｍａｌｅ  Ｄ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｍｏｓｂｙ（２００１）、Ａｂｂａｓ  Ａ．，Ａｂｕｌ，Ａ．  ａｎｄ  Ｌｉｃｈｔｍａｎ，Ａ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄ．５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ（２００５）、およびＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）が挙げられる。
【０１５５】
これで本開示を詳細に説明したが、単なる例示の目的で本明細書に含まれ、本開示を限定することを意図しない以下の実施例を参照することによって、それはより明らかに理解されるであろう。本明細書で言及される全ての特許および刊行物は、参照によりそれら全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
【実施例】
【０１５６】
本明細書で用いられるもの等の従来方法に関する詳細な説明は、引用文献において見出すことができる。以下に別途示されない限り、関心対象の特異性ならびにそれらの組換え発現および機能的特性化を示すＡβ特異的Ｂ細胞の特定および抗Ａβ抗体の分子クローニングは、国際公開第２００８／０８１００８号として公開された国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００００５３号、および第２０１０／０６９６０３号として公開された国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００９１８６号の実施例および捕足方法に記載されるように行われてきたか、または行うことができ、その開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（実施例１）
ヒトＢＩＩＢ０３７（「ＢＩＩＢ０３７」）およびキメラＢＩＩＢ０３７（「ｃｈＢＩＩＢ０３７」）の一般化およびインビトロ特性化
【０１５７】
この実施例は、ＢＩＩＢ０３７およびｃｈＢＩＩＢ０３７抗体生成について説明する。加えて、この実施例は、本明細書に記載される一連の生化学方法を使用して評価された、ＡβのＢＩＩＢ０３７およびｃｈＢＩＩＢ０３７抗体の結合親和性および選択性について説明している。
【０１５８】
優れた認知能力、または軽度認知障害（ＭＣＩ）または良性アルツハイマー病（ＡＤ）からの寛解を持つ健康な高齢者対象群を、Ａβ反応性記憶Ｂ細胞についてスクリーニングした。陽性Ｂ細胞クローンを、国際公開第２００８／０８１００８号に前述されるように、ｃＤＮＡクローニングおよび組換え発現に供し、Ａβに対してヒトモノクローナル抗体を生成した。候補抗体は、ＡＤおよびＡＰＰトランスジェニックマウス脳切片の両方における組織斑免疫反応性（ＴＡＰＩＲ）アッセイを使用して、インビトロで凝集Ａβおよびエクスビボでアミロイド斑の両方を認識するそれらの能力によって選択した（Ｈｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ３８：５４７−５５４（２００３））。１つのそのような候補、ＢＩＩＢ０３７と指定されるヒトＩｇＧ１／κモノクローナル抗体を、ヒトＡＤ脳またはＡＰＰトランスジェニックマウスのいずれかからの組織切片上で、インビトロで凝集Ａβおよびエクスビボでβアミロイド斑の両方を認識するその能力に基づいて、さらなる特性化のために選択した（Ｈｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８（１１）：１２７０−１２７５（２００２））。重鎖および軽鎖の定常領域が、それぞれマウスＩｇＧ２ａおよびマウスκ鎖配列と置換された、ＢＩＩＢ０３７のキメラバージョン（すなわち、ｃｈＢＩＩＢ０３７）を生成した。このキメラ分子（ｃｈＢＩＩＢ０３７）を、ＡＰＰトランスジェニックマウスにおける長期投薬研究に使用した。ｃｈＢＩＩＢ０３７のｍＩｇＧ２ａ骨格は、マウスＦｃγ受容体に対して高い親和性で結合し、この抗体が脳内のミクログリア等の免疫エフェクター細胞を動員できるようにする。
【０１５９】
ＡβのＢＩＩＢ０３７およびｃｈＢＩＩＢ０３７の結合親和性および選択性は、一連の生化学的方法を使用して評価した。Ａβ（１〜４２）凝集体を、３７℃でのインキュベーションによって調製し、国際公開第２００８／０８１００８号に記載されるＥＬＩＳＡプレート上に直接コーティングされる。Ａβの予備形成された線維性凝集体をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングしたとき、ｃｈＢＩＩＢ０３７は、十分に特性化された抗体３Ｄ６に相当する０．１ｎＭのＥＣ５０で結合した（Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６：９１６−９１９（２０００））（図１Ａ）。ｃｈＢＩＩＢ０３７を固定し、それを使用して可溶性の新たに調製したモノマーＡβ（１〜４０）を捕捉したとき、可溶性Ａβ（１〜４０）を１ｎＭのＥＣ５０で捕捉した３Ｄ６とは対照的に、シグナルは観察されなかった（図１Ｂ）。ＢＩＩＢ０３７がＡβの可溶性モノマー形態に結合できないことは、新たに調製したモノマーＡβ１〜４２またはＡβの予備形成した線維性凝集体のいずれかの調製物を使用する免疫沈降研究によって確認した（図１Ｃ）。具体的に、凝集またはモノマーＡβ（１〜４２）の調製物は、ＢＩＩＢ０３７または３Ｄ６のいずれかでインキュベートし、タンパク質Ａセファロースビーズを使用して捕捉した。ビーズを洗浄し、ジチオトレイトールを含有するＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液中に再懸濁し、煮沸して、上清を１６％トリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥの上に負荷した。ニトロセルロースブロットを調製し、製造業者の推奨する希釈でマウス抗βアミロイドモノクローナル抗体６Ｅ１０（Ｃｏｖａｎｃｅ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を使用して、ウェスタンブロットによって総Ａβについて染色した。合成Ａβ１〜４２（Ａβ４２）ペプチド（ＡｎａＳｐｅｃ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を、１ｍｇ／ｍＬの濃度でヘキサフルオロイソプロパノール中で再構成し、空気乾燥させて膜を形成して、１ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＳＯに溶解した。ＤＭＳＯ再構成モノマーＡβ４２を、１００μｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳ中に希釈し、３７℃で少なくとも２４時間インキュベートすることによって、Ａβ４２アミロイド線維を調製した。新たに調製したモノマーまたは線維性Ａβ４２のいずれかの試料を、ＢＩＩＢ０３７または３Ｄ６のいずれかでインキュベートし、タンパク質Ａセファロースビーズを使用して捕捉した。ビーズを洗浄し、ジチオトレイトールを含有するＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液中に再懸濁し、煮沸して、上清を１６％トリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥの上に負荷し、ニトロセルロース膜に対してブロットして、マウスモノクローナル抗体６Ｅ１０（Ｃｏｖａｎｃｅ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を使用してＡβ４２を検出した。
【０１６０】
凝集体に対する抗体の高い結合親和性と一致して、ｃｈＢＩＩＢ０３７は、ＡＤ脳組織中のアミロイド斑を免疫染色した（図１Ｄ）。組織をホルマリン固定パラフィン包埋し、５μｍで切断し、脱パラフィンして、ＥＤＴＡ−ホウ酸系熱誘導性エピトープ回収（Ｖｅｎｔａｎａ  ＣＣ１）を使用した。その後に、ＦＩＴＣ標識ｃｈＢＩＩＢ０３７を、１：５０の希釈でヒツジ抗ＦＩＴＣ抗体とともに、後続インキュベーションで組織（１．７μｇ／ｍＬ）に適用した。次に、組織をヘマトキシリンで染色した。
（実施例２）
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける単回腹腔内投与後のＢＩＩＢ０３７の脳浸透
【０１６１】
この実施例は、ＢＩＩＢ０３７が脳に浸透し、Ａβに結合する能力について説明する。ＢＩＩＢ０３７の脳への浸透は、２２ヶ月齢の雌Ｔｇ２５７６マウス（Ｋａｗａｒａｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２１（２）：３７２−３８１（２００１））において、急性投薬後、すなわち、３０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与されたＢＩＩＢ０３７の単回投与後に評価した。
【０１６２】
ＢＩＩＢ０３７血漿および脳濃度を、抗体の単一用量の投与後１日および３日、ならびに１週間、２週間、および３週間でＥＬＩＳＡによって決定した（図２Ａ）。具体的に、冷凍した脳を、プロテアーゼ阻害剤とともに５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．２％ジエチルアミン（ＤＥＡ）を含む１０体積（１０ｍＬ／ｇの湿性組織）の溶液中に均質化し、約１５〜２０秒間氷上で超音波分解した。次に、試料を１００，０００ｇで３０分間４℃で遠心分離した。上清をＤＥＡ抽出した可溶性Ａβ分画として保持した。残りのペレットを、１０体積の５Ｍグアニジン−塩酸塩（Ｇｕ−ＨＣｌ）中に再懸濁し、超音波分解して、上記のように遠心分離した。得られた上清を、グアニジン抽出した不溶性Ａβ分画として保持し、残りのペレットを破棄した。血漿および脳ＢＩＩＢ０３７濃度の場合、９６ウェルマイクロプレート（Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ，Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ）を、冷たいコーティング緩衝液中５μｇ／ｍＬの濃度のＡβ（１〜４２）ペプチド（Ａβ４２）で、終夜４℃でコーティングした。血漿またはＤＥＡ抽出した（すなわち、洗剤を含まない）脳ホモジネート試料を、最終作用濃度に希釈し、２時間室温でインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体化ヤギ抗ヒトポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用し、続いて基質ＴＭＢを使用するＨＲＰ活性の測定によって結合を決定した。精製された抗体を使用して生成された標準曲線との比較によって濃度を決定した。血漿中のＣｍａｘは、１８１μｇ／ｍＬであると決定され、２．５日の半減期を有していた。脳中のＣｍａｘは、１０６２ｎｇ／ｇの組織であることが決定され、半減期は１３日であった。図２Ｂに示されるように、血漿Ａβ濃度は、単一用量のＢＩＩＢ０３７後に変化しなかった。脳ＢＩＩＢ０３７レベルの低下は、血漿中の低下と平行せず、薬物が脳内に蓄積するが、血漿からはクリアされることを示唆する。対照的に、３Ｄ６抗体は、血漿Ａβスパイクを誘発した。
【０１６３】
Ｔｇ２５７６マウスにおける単一用量後のＢＩＩＢ０３７のＡβ沈着へのインビボ結合は、ビオチン化抗ヒト二次抗体を使用して明らかになり、連続切片上でエクスビボで行われるｐａｎ−Ａβ抗体５Ｆ３での染色と比較した。全身投与されたＢＩＩＢ０３７は、典型的に、高い親和性で実質アミロイド斑に結合する（図２Ｃ）。ＢＩＩＢ０３７による実質斑の染色は、注射後１日目に観察されたが、注射後３日目に明確に定義され、次にｐａｎ−Ａβ抗体５Ｆ３での染色と同様であった（図２Ｄ）。組織をホルマリン固定パラフィン包埋し、５μｍで切断し、脱パラフィンして、ＥＤＴＡ−ホウ酸系熱誘導性エピトープ回収（Ｖｅｎｔａｎａ  ＣＣ１）を使用した。その後に、ヤギ抗ヒト二次抗体を、１：５００の希釈で組織に適用した。次に、組織をヘマトキシリンで染色した。
（実施例３）
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける急性投薬後の実質アミロイド斑へのｃｈＢＩＩＢ０３７の結合
【０１６４】
この実施例は、異なるｃｈＢＩＩＢ０３７結合についてさらに説明する。２２ヶ月齢のＴｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける急性投薬後の実質アミロイド斑へのｃｈＢＩＩＢ０３７の結合。単一用量（３０ｍｇ／ｋｇ）のＣｙ３標識ｃｈＢＩＩＢ０３７またはＣｙ３標識３Ｄ６を、Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスに腹腔内投与し、投薬後１８日目に脳を回収した。血管を定義するために、冷凍した脳切片を、平滑筋αアクチン（ＳＭＡ）について免疫染色し、実施例２において上述されるように得られた。Ａβ沈着への抗体の結合は、蛍光顕微鏡下で明らかになり、異なるタイプのアミロイド沈着へのＣｙ３−ｃｈＢＩＩＢ０３７結合の直接可視化を可能にした（図３Ａ）。Ｃｙ３標識３Ｄ６抗体を、この研究の比較器として使用した（図３Ｃ）。標識抗体によって装飾された実質および血管アミロイド沈着の総面積は、ＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェア（Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ  Ａ／Ｓ，Ｈｏｅｒｓｈｏｌｍ，Ｄｅｎｍａｒｋ）で書かれたアルゴリズムを使用し、定量的画像分析によって決定した。（図３Ｂ、ＤおよびＥ）。１つまたは他のアミロイドコンパートメントと関連するＣｙ３染色は、総染色のパーセントとして表され、血管アミロイドに対し、実質アミロイドへのｃｈＢＩＩＢ０３７の優先的結合を実証した（Ａ、Ｂ、およびＥ）。比較により、３Ｄ６は、実質アミロイド斑上の血管アミロイド沈着に優先的に結合した（Ｃ、Ｄ、およびＥ）。ｃｈＢＩＩＢ０３７または３Ｄ６のいずれかの結合も野生型マウスの治療後に検出されなかった（Ｅ）。
（実施例４）
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の６ヶ月の長期投薬後の曝露
【０１６５】
アミロイド負荷を減少させることにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の有効性を、Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおいて、６ヶ月の長期投薬後に評価した。用量０．３、１、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇの抗体またはＰＢＳを、腹腔内注射によって毎週投与した。マウス抗ヒト抗体応答の生成を最小限に抑えるため、動物にマウスキメラバージョンのＢＩＩＢ０３７、ｃｈＢＩＩＢ０３７を投与した。実施例２において上述されるように、血漿および脳薬物レベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。最終用量の２４時間後に血漿試料を回収し、ｃｈＢＩＩＢ０３７レベルの測定は、曝露が用量と線形相関したことを示した（図４Ａ、４Ｃ）。ＰＢＳ群中の検出限界を上回るｃｈＢＩＩＢ０３７レベルは、アッセイによって測定された内因性抗Ａβ抗体に起因する。ジエチルアミン（ＤＥＡ）抽出分画において測定された平均脳薬物濃度は、投与した投薬量および対応する血漿薬物濃度の両方に比例していた（図４Ｂ、４Ｃ）。脳濃度が正確に定量された（３〜３０ｍｇ／ｋｇ）用量群の平均血漿濃度に対する平均脳薬物濃度の比は、０．７〜１．０％であった。
（実施例５）
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の６ヶ月の長期投薬後のアミロイド負荷の減少
【０１６６】
この実施例は、実施例２において上述されるように、脳ホモジネート分画を使用してＥＬＩＳＡによって測定された脳Ａβ負荷の用量依存的減少について説明する。個々のＡβ種（Ａβ１〜３８（Ａβ３８）、Ａβ１〜４０（Ａβ４０）、およびＡβ１〜４２（Ａβ４２））の濃度は、製造業者の指示に従い、ＤＥＡ分画において、およびＧｕ−ＨＣｌ分画において、マルチスポットヒト（４Ｇ８）Ａベータトリプレックスアッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＤ）を使用して決定した。Ａβ４２濃度は、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇのｃｈＢＩＩＢ０３７治療群の場合、可溶性ＤＥＡ（図５Ａ）およびグアニン分画（図５Ｃ）の両方において著しく減少し、減少率はＰＢＳ対照と比較して、３９〜５０％の範囲であった。Ａβ４０の著しい減少または減少に向かう傾向は、３ｍｇ／ｋｇ以上の用量で観察された。
【０１６７】
皮質および海馬における総脳アミロイド負荷は、免疫組織化学によって明らかになった。具体的に、脳を解剖し、１０％中性緩衝ホルマリンに４８〜７２時間浸漬することによって固定した。次に、固定した脳を水平配向で処理および包埋した。海馬が特定されるまで各ブロックを分割し、その時点で３００個の連続５μｍ切片（１スライド当たり３切片）が得られた。６Ｅ１０およびチオフラビン−Ｓ染色の両方の場合、１４枚ごとにスライドを染色した（２２５μｍごとに約１切片）。脳アミロイドを定義する免疫組織化学は、マウス抗Ａβ１〜１６モノクローナル抗体（クローン６Ｅ１０、Ｃｏｖａｎｃｅ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を一次抗体として１：７５０希釈で、およびウルトラマップ抗マウスアルカリホスファターゼキット（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）を使用し、本明細書に記載されるＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアを使用して定量した。Ｖｅｎｔａｎａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＴ免疫染色器上に置く前に、スライドを８８％ギ酸溶液で前処理した。スライドをＶｅｎｔａｎａヘマトキシリン（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）で対比染色し、封入処理して終夜空気乾燥させた。
【０１６８】
６Ｅ１０免疫染色後、Ａｐｅｒｉｏ  ＸＴ（Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｖｉｓｔａ，ＣＡ）全スライド撮像システムを倍率２０倍で用い、製造業者の指示に従ってスライドを走査した。次にデジタル画像を考察し、各スライド上の３つのうち最良の切片を特定した。この切片からの海馬および皮質を、別個のマスクとして手動で注釈付けし、次にＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアで書かれたアルゴリズムを使用して分析した。このアルゴリズムは、１０倍の仮想倍率で、これらの解剖学的領域における注釈付き海馬または皮質の面積、ならびに実質および血管アミロイドの面積を決定した。ソフトウェアのトレーニングは、５０スライドのセットで行った。
【０１６９】
スライドを、前述のチオフラビン−Ｓ（チオ−Ｓ）でも染色し（Ｂｕｓｓｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６５：９８７−９９５（２００４））、ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）封入媒体をＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）とともに用いて封入処理した。チオフラビン−Ｓ染色後、スライドを考察し、各スライド上の３つの切片のうちの最良画像をＡｐｅｒｉｏ  ＦＬ（Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｖｉｓｔａ，ＣＡ）蛍光全スライド撮像システムを２０倍の倍率で用い、製造業者の指示に従って走査した。６Ｅ１０と同様に、この切片からの海馬または皮質を、別個のマスクとして手動で注釈付けし、次にＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアで書かれたアルゴリズムを使用して分析し、蛍光のために適応した。このアルゴリズムは、１０倍の仮想倍率で、これらの解剖学的領域における海馬および皮質の面積、ならびに実質および血管アミロイドの面積を決定した。ソフトウェアのトレーニングは、１０スライドのセットで行った。
【０１７０】
染色された沈着によって占有される総面積は、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ用量の場合に著しく減少し、減少率はＰＢＳ対照と比較して４９〜７０％の範囲であった。（図５Ｂおよび５Ｄ）。チオ−Ｓ染色によって評価されたコンパクトアミロイド斑は、コンパクト斑が、最高３０ｍｇ／ｋｇの用量で、海馬において最大６３％（図５Ｂ）、および皮質において最大５３％（図５Ｄ）だけ減少したことを示した。
（実施例６）
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおける血管アミロイドに対するｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬の影響
【０１７１】
この実施例は、Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬後の血管アミロイドおよび微小出血に対する影響を調べる。コンパクトアミロイド斑およびＣＡＡのチオ−Ｓ染色は、蛍光顕微鏡下で明らかになり（図６Ａ）、実施例５において上述されるようにＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェア（図６Ｂ）を使用して定量した。皮質（図６Ｃ）および海馬（図６Ｄ）における血管アミロイド負荷を、実施例５において上述されるように３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ用量に対して、チオ−Ｓ染色によって評価した。図６Ａ〜Ｄにおいて実証されるように、Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬は、血管アミロイド負荷に対して影響を及ぼさなかった。
【０１７２】
実質および血管系の両方に広範なアミロイド病理を有する２２ヶ月齢のＴｇ２５７６トランスジェニックマウスにおいて、微小出血を評価した。マウスを、０、１０、７０、１００、または５００ｍｇ／ｋｇ（１群当たり雌雄それぞれ９〜１０匹のマウス）のｃｈＢＩＩＢ０３７、５００ｍｇ／ｋｇのＢＩＩＢ０３７（１群当たり雌雄それぞれ１０匹のマウス）、またはＰＢＳ（対照群）の静脈内（ｉ．ｖ．）治療を介して、１３週間長期的に治療した。剖検において、脳を採取し、ホルマリン固定して、横方向に配向し、脳全体に広がる５つの異なるブロックに切り取った。１ブロック当たり３つの５μｍ組織切片をスライド上に置き、ニュークリアファストレッド対比染色でのペルルス染色で染色した。微小出血の採点は、ペルルス陽性プロファイルが、採点される２つの連続切片上で特定される必要があることを除いて、前述されるものの適応に基づいている（Ｒａｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２５：６２９−６３６（２００５））。図６Ｅに示されるように、１０ｍｇ／ｋｇおよび７０ｍｇ／ｋｇならびに対照群において、治療群間にｐ≦０．０５レベルで微小出血のレベルに統計的に著しい差はなかった。上昇レベルに向かう非有意な傾向は、５００ｍｇ／ｋｇのｃｈＢＩＩＢ０３７またはＢＩＩＢ０３７の用量漸増時に観察された。
（実施例７）
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の６ヶ月の長期投薬後のアミロイド負荷の減少
【０１７３】
この実施例は、１０ヶ月齢のＴｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の６ヶ月長期投薬後のアミロイド負荷の減少について説明する。具体的に、野生型（ｗｔ）ｃｈＢＩＩＢ０３７またはｃｈＢＩＩＢ０３７−Ａｇｌｙを、Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスにおいて３ｍｇ／ｋｇで毎週の腹腔内注射を介して投与し、実施例２および５において上述されるように、異なる生化学または組織学的エンドポイントを測定した。Ｆｃ領域のＮ−グリコシル化を排除し、Ｆｃγ受容体結合を著しく減少させる、単一点突然変異（Ｎ２９７Ｑ、標準Ｋａｂａｔ  ＥＵ付番を使用する）を組み込む、ｃｈＢＩＩＢ０３７のアグリコシル化変異体（ｃｈＢＩＩＢ０３７−Ａｇｌｙ）を、Ｔａｏ  ａｎｄ  Ｍｏｒｉｓｏｎ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：２５９５−２６０１（１９８９）に記載されるように生成した。動物群を、同じ用量の比較抗体、３Ｄ６、またはＰＢＳ対照で治療した。脳ホモジネートから調製した不溶性（グアニジン）分画中で測定された脳Ａβ４２レベルは、ＰＢＳ治療した対照と比較して最大５５％だけ著しく減少したが、アグリコシル化（Ａｇｌｙ）ｃｈＢＩＩＢ０３７および３Ｄ６は、影響を及ぼさなかった（図７Ａ）。チオ−Ｓ染色によって定量された皮質コンパクトアミロイド斑負荷は、ｗｔ  ｃｈＢＩＩＢ０３７治療群において著しく減少し、実施例５において上述されるように、チオ−Ｓで染色された面積の定量によって評価した。ｃｈＢＩＩＢ０３７−Ａｇｌｙおよび３Ｄ６は、コンパクトアミロイド斑負荷に影響を及ぼさなかった（図７Ｂ）。
（実施例８）
９．５ヶ月齢のＴｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投薬後のアミロイド負荷の減少は、全てのサイズの斑に影響を及ぼす
【０１７４】
拡散およびコンパクト実質βアミロイド斑、ならびに血管アミロイドまたはＣＡＡを含む総アミロイド負荷は、６Ｅ１０免疫組織化学によって明らかになり（図８Ａ）、実施例５において上述されるように、ＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアを使用して定量した（図８Ｂ）。Ａβ染色された沈着が占める総面積は、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ用量の場合に著しく減少し、減少率はビヒクル対照と比較して４９〜７０％の範囲であった。より低いアミロイド負荷に向かう傾向は、より低い用量の０．３、１、および３ｍｇ／ｋｇで観察された。アミロイド斑を、サイズに基づいて４つのカテゴリーに分類した：斑＜１２５μｍ２（４）、１２５〜２５０μｍ２（３）、２５０〜５００μｍ２（２）、および＞５００μｍ２（１）（図８Ｂ）。図８Ｃに示されるように、ｃｈＢＩＩＢ０３７治療は、ＰＢＳ治療対照と比較して、全てのサイズ範囲において斑数の著しい減少と関連した。
（実施例９）
９．５ヶ月齢のＴｇ２５７６トランスジェニックマウスにおけるｃｈＢＩＩＢ０３７の長期投与後のアミロイド斑のミクログリア媒介クリアランス
【０１７５】
ＰＢＳまたはＢＩＩＢ０３７治療したマウスのいずれかからの脳切片を、Ａβ（６Ｅ１０−薄い灰色）およびミクログリアのマーカー（Ｉｂａ１−濃い灰色）に対して免疫染色した。抗Ａβ抗体６Ｅ１０による免疫染色は、ＰＢＳ対照群と比較して、ｃｈＢＩＩＢ０３７治療群におけるアミロイド斑の異なる形態を明らかにした。対照動物において、アミロイド斑の輪郭は、不明瞭な「ファジー」縁部で不規則であるが、６ヶ月の治療後に脳内に残留する大部分の斑は、明確に定義された境界を有する高密度コアからなる。（図９Ａ）。活性化ミクログリアマーカーＩｂａ−１による共免疫染色は、ミクログリア細胞がコンパクト斑と密に関連し、多くの場合、その斑を完全に囲むことを明らかにした。これらの細胞は、神経網への分岐をほとんど有しない形態のアメーバ状であった。対照的に、ＰＢＳ治療対照群において、ミクログリアは斑をほとんど囲まず、多くの場合、神経網に伸長する豊富な分岐とともに提示された。ＶＩＳＩＯＰＨＡＲＭ（登録商標）ソフトウェアを使用する分析は、個々のアミロイド斑の面積を計算し、Ｉｂａ１染色されたミクログリアを、斑を囲む（斑の２５μｍ内）または斑と関連しない（斑から＞２５μｍ）のいずれかの２カテゴリーに分類した。（Ｂ）マクロファージによって７０％以上が囲まれた円周を有する斑を計算し、斑サイズに基づいて層別化した。ミクログリアによって７０％囲まれた斑のパーセンテージは、斑≧２５０μｍ２（＊＝ｐ＜．０．００５）の場合、ＰＢＳ治療対照群（灰色の棒）と比較して、ｃｈＢＩＩＢ０３７治療群（透明な棒）において著しく高かった（図９Ｂ）。
（実施例１０）
Ａβ認識の構造基盤
【０１７６】
抗原認識の分子基盤を理解するために、Ａβ（１〜１１）ペプチドとの複合体中のＢＩＩＢ０３７のＦａｂフラグメントを結晶化した。ＢＩＩＢ０３７のＦａｂフラグメントは、パパインによる完全抗体の消化によって生成した。要約すると、４０ｍｇのＢＩＩＢ０３７抗体を、消化緩衝液中（２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、および２０ｍＭシステイン−ＨＣｌ）、１ｍＬの固定されたパパインビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の存在下、３７℃で１８時間回転混合しながらインキュベートした。遠心分離によってビーズを除去し、消化された抗体溶液をリン酸緩衝生理食塩水に対して透析した。次に、溶液を５ｍＬのタンパク質Ａセファロースカラムの上に負荷し、消化されたＦｃフラグメントを減損させて、精製ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂフラグメントを得た。ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂを、ナノ小滴蒸気拡散法によって、２９７Ｋの温度で、２００ｎＬの７．６ｍｇ／ｍＬ  ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂ溶液（１０ｍＭトリスｐＨ８、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）を、１９％  ＰＥＧ３３５０、３００ｍＭ硫酸リチウム、および１００ｍＭ酢酸ナトリウムを含有するｐＨ４の２００ｎＬの保存溶液と混合することによって結晶化した。Ａｐｏ  ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂ結晶を、グルタルアルデヒドで架橋し、１９％  ＰＥＧ３３５０、１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）、および１０ｍＭ  Ａβ１〜１１（ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥ、配列番号９）を含有する浸漬液に移し、収穫して液体窒素中でフラッシュ冷凍する前に２４時間浸漬した。１８０°の揺動範囲の回析データを、ＦＲ−Ｅ  ＳｕｐｅｒＢｒｉｇｈｔ銅回転陽極Ｘ線発生器（Ｒｉｇａｋｕ  Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）上で、１００ＫでＲａｘｉｓ−４＋＋撮像プレート面積検出器（Ｒｉｇａｋｕ  Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）を使用して収集し、反射強度を測定した。ＨＫＬ２０００を使用してデータを統合し、減少させて、スケーリングした。ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂ：Ａβ１〜１１結晶を、単斜晶系空間群Ｃ２においてインデックス付けした。ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂ：Ａβ１〜１１の構造を、プログラムＭｏｌＲｅｐでの検索モデルとしてａｐｏ  ＢＩＩＢ０３７  Ｆａｂ構造を使用して、分子置換によって２．５５Å解像度に決定した。明確に定義された電子密度は、クートを用いて手動で構築されたＡβ１〜１１の残基Ａｌａ２〜Ｇｌｙ９に対して観察された。ＡβのＡｓｐ１またはＴｙｒ１０〜Ｇｌｕ１１に対してモデル化され得る結合溝の外側で、電子密度は観察されなかった。ＲＥＦＭＡＣプログラムを使用して、構造の精密化を行った。最終モデルは、１Ｆａｂ分子（鎖ＨおよびＬ）、Ａβ２〜９ペプチド（鎖Ｑ）、および１２４個の水分子を非対称単位で含む。モデル精密化の進行は、データの５％を含むランダムに割り当てられた試験セットから計算された相互検証Ｒｆｒｅｅによって監視された。最終Ｒ因子は１９．４％であり、２３．８％のＲｆｒｅｅ因子を有する。ラマチャンドランプロット分析は、全ての残基が許容される領域内にあることを示した。
【０１７７】
ＡβのＡｓｐ１またはＴｙｒ１０〜Ｇｌｕ１１に対して、電子密度は観察されなかった。この構造は、Ａβ２〜９が、Ａｓｐ７およびＳｅｒ８からなるショートターンに終わる、Ｎ末端からＣ末端まで２０Åを引張する主に伸長した立体配座を採用することを明らかにする（図１０Ａ）。Ａβ上の一次接触残基は、Ｇｌｕ−３、Ｐｈｅ−４、Ａｒｇ−５、およびＨｉｓ−６を含み、Ｎ末端およびＣ末端切除したペプチドを使用して生成されたエピトープマッピングデータを確認する。ＢＩＩＢ０３７  ＦａｂとＡβ２〜９との相互作用は、ＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ３、Ｈ２、およびＨ３からなる抗原結合ループのうちの４つで見出される。特に、残基Ｐｈｅ４およびＨｉｓ６は、ＣＤＲ  Ｈ２、Ｈ３、およびＬ３内の明確に定義されたポケット内で結合する。Ａβ２〜９ペプチドは、１１５７Å２の総表面積を有し、そのうちの４６％（５３０Å２）は、高い形状相補性（０．７５％）を有する抗体界面において埋設される。
【０１７８】
アミノ酸４〜１０は、Ａβ上の免疫優性エピトープとして記載されている（ＭｃＬａｕｒｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，８：１２６３（２００２）、Ｔｏｗｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔ．，２０７（２）：１０１−４（２００１））。したがって、いくつかのモノクローナル抗体は、Ａβ配列のこの領域内で同様の直鎖状エピトープに結合することが報告されている。これらは、ａ）ＣＤＲのうちのいくつかにおいて顕著な程度の配列類似性を有し、全てがＡβ（３〜７）領域内で類似の三次構造を持つＡβに結合する抗体のセット（１２Ａ１１、１０Ｄ５、１２Ｂ４、ＰＦＡ１、ＰＦＡ２、およびＷＯ２）（Ｂａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．ＪＢＣ，（２０１０））、およびｂ）１２Ａ１１ファミリーとは異なる全体構造を持つＡβの残基１〜１１に結合するガンテネルマブを含む（Ｂｏｈｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚ．Ｄｉｓｅａｓｅ，２６：１−２１（２０１１））。これらの抗体によって認識される同様の直鎖状エピトープにもかかわらず、それらは、立体配座選択性の範囲を表示し、モノマーＡβと凝集Ａβとを区別しないもの（例えば、１２Ｂ４）および凝集Ａβに選択的に結合するもの（例えば、１０Ｄ５、１２Ｂ４、およびガンテネルマブ）を含む。ＢＩＩＢ０３７の構造は、抗体−ペプチド界面の三次構造、および結合したＡβペプチド自体の立体配座の両方において、１２Ａ１１ファミリーおよびガンテネルマブの両方とはさらに異なる（図１０Ｂ）。
（実施例１１）
抗体ＢＩＩＢ０３７のエピトープマッピング
【０１７９】
ＢＩＩＢ０３７のエピトープは、Ａβペプチドの合成フラグメントを使用して、ＥＬＩＳＡによって特定した。Ｎ末端切断したＡβペプチドの場合、タグの付いていないペプチドを使用した。ＥＬＩＳＡの場合、ペプチドを使用して９６ウェルマイクロプレートを、コーティング緩衝液（１５ｍＭ  Ｎａ２ＣＯ３、３５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの濃度で、終夜４℃でコーティングした。プレートを洗浄し、非特異的結合部位を、２％  ＢＳＡを含有するＰＢＳで１時間、２５℃で遮断した。アッセイ緩衝液（２％  ＢＳＡを含有するＰＢＳ）中に希釈した抗体を添加し、プレートを２時間２５℃でインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体化ヤギ抗ヒトポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いるインキュベート、続いて基質ＴＭＢを使用するＨＲＰ活性の測定によって結合を決定した。
【０１８０】
Ｃ末端切断したＡβペプチドの場合、ビオチン複合体化ペプチドを使用した。ビオチンは、非天然のリジン残基の組み込みによって、タンパク質のカルボキシル末端に合成的に結合した。ＥＬＩＳＡの場合、ビオチン複合体化ペプチドを、１時間２５℃で、アッセイ緩衝液中５μｇ／ｍＬの濃度でＮｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄプレート）で予備コーティングされたプレートを用いてインキュベートした。プレートを洗浄し、アッセイ緩衝液中に希釈した抗体を添加し、プレートを２時間２５℃でインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体化ヤギ抗ヒトポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いるインキュベート、続いて基質ＴＭＢを使用するＨＲＰ活性の測定によって結合を決定した。
【０１８１】
表４に示されるように、Ａβの残基Ｇｌｕ−３を超えるＮ末端切断、および残基Ｈｉｓ−６を超えるＣ末端切断は、親和性の著しい喪失をもたらした。これらの結果は、ＢＩＩＢ０３７の主要結合部位が、ヒトＡβの残基３〜６を含むことを示す。
【表４】
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【０１８２】
ＢＩＩＢ０３７のエピトープは、ヒトおよびマウスＡβペプチドへの相対結合を測定することによってさらに調査した。ヒトおよびマウスＡβペプチド配列は、５位、１０位、および１３位において３つのアミノ酸が異なる（図１１Ａ）。Ａβ（１〜１６）配列に対応するビオチン化合成ペプチドを使用して、上述されるように、ＥＬＩＳＡによってＢＩＩＢ０３７の結合を測定した（図１１Ｂ）。このペプチドは、ヒト配列とマウス配列との間に３つの相違を全て含むが、ＢＩＩＢ０３７エピトープ内には（Ａβ残基３〜６、ペプチドフラグメントとの結合研究によって確立された）、５位に単一のアミノ酸の相違がある。ヒトおよびマウスＡβのＥＣ５０値は、それぞれ０．５および４３ｎＭである。マウスペプチド上の結合ＥＣ５０における約９０倍の減少は、ＢＩＩＢ０３７がヒトＡβに選択的に結合すること、および残基Ａｒｇ−５が結合の重要な決定因子であることを示した。
（実施例１２）
［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７、［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７、および［１２５Ｉ］ヒトＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２’を使用した、Ｔｇ２５７６およびＷＴマウスＣＮＳにおけるＳＰＥＣＴ撮像データの概要
【０１８３】
単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）画像を用いて、野生型（ＷＴ）およびＴｇ２５７６（Ｔｇ）マウスの脳へのＢＩＩＢ０３７抗体のマウスキメラおよびヒト変異体の進入を追跡した。ＢＩＩＢ０３７、Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７、およびヒトＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２のヨード化は、ヨードゲン法（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ／Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の修正版を使用して行った。要約すると、６００μｇのｃｈＢＩＩＢ０３７またはＡｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７を、２０ｍＣｉ１２５Ｉ−Ｎａｌにより、５０μｇのヨードゲン（Ｐｉｅｒｃｅ  ヨード化試薬、１５０μｇのｃｈＢＩＩＢ０３７、Ａｇｌｙ−ｃｈ１２Ｆ６Ａ、またはヒトＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２、および５ｍＣｉ１２５Ｉ−Ｎａｌ／管）およびトリスヨード化緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｉｓ−ＨＣｌ、０．４ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．５、および２００μＬの総インキュベーション体積を付与する）で予備コーティングされた４本のＰｉｅｒｃｅヨード化管中で処理した。室温で９分間、管を穏やかに攪拌した後、５０μＬの洗浄緩衝液（トリスヨード化緩衝液中１０ｍｇ／ｍＬチロシン）を添加し、混合液をさらに５分間穏やかに攪拌した後、１ｍＬの２５ｍＭトリス−ＨＣｌ、０．４ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％アジ化ナトリウムを４本の管のそれぞれに添加した。その後に、４本の管から複合した産物をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ  ３０Ｋ限外濾過ユニットに添加し、６０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次にカラムを１ｍＬの生理食塩水で４回洗浄した。ＯＤ測定のために、１０μＬの試料を０．５ｍＬに希釈し、ＨＰＬＣ分析のために、１００μＬの試料を１ｍＬで希釈した。残りは研究に使用可能であった。これらの研究において、５ｍＣｉの［１２５Ｉ］を使用して、０．１５ｍｇ  ｃｈＢＩＩＢ０３７またはＡｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７を約８０％標識効率で標識し、１抗体当たり約１．８ヨウ素を生じた。標識抗体の活性は、非放射性ヨウ素で標識された試料を平行して生成し、同一条件下で、ＥＬＩＳＡを使用してＡβの結合親和性を測定することによって確認した。
【０１８４】
２２ヶ月齢の雌Ｔｇ２５７６（Ｔｇ、ｎ＝１４）および非トランスジェニックＣ５７／ＢＬ／６（ＷＴ、ｎ＝１４）マウスに、担体添加した［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７（１．２５〜１．５ｍＣｉ）、１０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍＬを、尾静脈注射によって、表５に強調表示されるように０日目、７日目、１４日目、および２１日目に投与した。ヨウ化カリウム（０．２ｇ／Ｌ）を含有する飲料水をマウスに付与し、甲状腺内の遊離ヨウ素の取り込みを減少させた。ＳＰＥＣＴ／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）撮像は、表５に強調表示されるように、７日目および１４日目、ならびに２８日目、４８日目、および４９日目に放射標識抗体の後続注射の直前に行った。ＳＰＥＣＴ／ＣＴ撮像の場合、マウスを１００％酸素中２〜３％のイソフルオランで麻酔した。１．４ｍｍ径の開口ピンホールコリメーター（×９）を備える、小動物専用のＮａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴカメラ（Ｂｉｏｓｃａｎ／Ｍｅｄｉｓｏ）を使用して走査を行った。ＳＰＥＣＴデータのバッチ処理再構成をｉｎｖｉＣＲＯ  ＬＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によって行い、ＳＰＥＣＴ再構成のＣＴ同時登録と合わせた独自のマウス脳地図分析プロトコルを利用して分析した。動物１０３および１１１（Ｔｇ）、ならびに動物２０５および２１０（ＷＴ）には、放射性ヨウ素の代わりに臨床的に許容される放射性同位体を使用する予備的比較としてのヨウ素標識研究の最後に、［１１１Ｉｎ］ｃｈＢＩＩＢ０３７も投与した（表５）。
【表５】
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【０１８５】
ＳＰＥＣＴデータのバッチ処理再構成をｉｎｖｉＣＲＯ  ＬＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によって行い、ＳＰＥＣＴ再構成のＣＴ同時登録と合わせた独自のマウス脳地図分析プロトコルを利用して分析した。
【０１８６】
インビボ［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７抗体の取り込みは、Ｔｇ２５７６およびＷＴマウスの脳内で評価した（ｎ＝１４匹／群）。この研究における全ての動物から平均したデータの概要ＳＰＥＣＴ画像は、図１２Ａに強調表示され、野生型マウスではなく、Ｔｇ２５７６マウスにおいて、［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ皮質取り込みを示す。［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７抗体の静脈内投与から７日、２１日、２８日、および４８日後に得られた収集データは、ＷＴ対照と比較して、Ｔｇ２５７６マウスのＣＮＳにおいて、放射能の時間および累積用量依存性の蓄積を示した（図１２Ｂ〜Ｅ）。データは、組織１グラム当たりの注射用量のパーセント（％ＩＤ／ｇ）、濃度（μＣｉ／ｍｍ３）として、または小脳内濃度に正規化された関心領域内の濃度の比率として（ヌル組織）としてのいずれかで提示される。研究の過程にわたる脳内の放射能の量は、全ての領域全体で２〜１０ｎＣｉ／ｍｍ３の範囲であった。
【０１８７】
図１２Ｂ〜Ｃは、同様のスケーリングを有する［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のＴｇ２５７６マウス皮質への累積インビボ組み込みを表し、研究および２回の１．５ｍＣｉ放射標識の静脈内注射に続いて、１４日目（図１２Ｃ）との比較で７日目（図１２Ｂ）に矢状（ｂ）、水平（ｃ）、および冠状（ｄ）平面で示される。各パネルの画像（ａ）は、同時登録ＳＰＥＣＴ画像に使用されるＣＴ画像、および放射能の蓄積の後続定量のための脳地図（ｉｎｖｉＣＲＯ  ＬＬＣ）を表す。Ｔｇ２５７６（左）およびＷＴ（右）マウスにおける［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の高レベルの取り込みを有する代表的な７日目および１４日目のＳＰＥＣＴ画像は、ＷＴマウス脳ではなく、Ｔｇ２５７６の皮質領域におけるインビボ取り込みを示す。
【０１８８】
Ｔｇ２５７６マウスにおける［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の蓄積は、高レベル、中レベル、および低レベルの取り込みとして３つの群に（任意に）分類され得る（図１３）。図１３Ａ〜Ｂは、経時的なＴｇ２５７６のＣＮＳコンパートメントへの［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ取り込みおよび蓄積を示し、これはＷＴマウスには存在せず、低濃度、中濃度、および高濃度の放射標識を蓄積するマウスにランク付けすることができる。図１３Ｃは、７日ごとに４週間の放射標識の反復投与後４８日間のマウス脳内の［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の平均正規化取り込みを表す。ＴｇおよびＷＴマウスにおいて７日目、およびＴｇマウスにおいて２８日目に示される矢印は、甲状腺への標識遊離ヨウ素の取り込みを示す。Ｔｇマウスにおいて４８日目に示される矢印は、Ｔｇ２５７６（ａ）マウスのＣＮＳコンパートメントへの取り込みを示し、ＷＴ対照脳（ｂ）への取り込みはない。
【０１８９】
図１４は、血液プールに対してＴｇおよびＷＴマウス脳における［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の生体内取り込みを示す。上パネルは、４８日目（Ｄ４８）のＴｇ２５７６（左）対ＷＴ（右）マウスにおける、次にＰＢＳによる還流後（Ｄ４８還流後）と比較した平均脳取り込みを示す。下パネルは、２８日目のデータからの関心領域（ＲＯＩ）生成プロットを示し、Ｔｇ２５７６マウスの脳内の取り込みが、血液プールに起因しないこと（ＷＴマウスの場合はこれに起因する）を示し、血液プールと組織との間の放射能の測定濃度（μＣｉ／ｍｍ３）に有意差はない。
【０１９０】
図１５〜１８は、［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７および［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２によるインビボＳＰＥＣＴ画像を表す。具体的に、２２ヶ月齢（ｎ＝１５）の雌Ｔｇ２５７６（Ｔｇ）および３ヶ月齢（ｎ＝４）の雌ＷＴマウスに、担体添加した［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７（１．３ｍＣｉ）を１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）で、または［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２を、０．１ｍＬ体積中１ｍｇ／ｇ（ｎ＝７  Ｔｇおよび４ＷＴ）で０日目に尾静脈注射により投与した（表６）。ヨウ化カリウム（０．２ｇ／Ｌ）を含有する飲料水をマウスに付与し、甲状腺内の遊離ヨウ素の取り込みを減少させた。ＳＰＥＣＴ／ＣＴ撮像は、表６に強調表示されるように、７日目、１０日目、１４日目、および２１日目に［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７に対して行った。［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２  ＳＰＥＣＴ／ＣＴ撮像は、放射標識物質の静脈内投与から４時間、２４時間、７２時間、および１６８時間後に行った（表６）。全ての場合において、マウスを麻酔し、上述されるように走査を行った。
【表６】
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【０１９１】
群２および４の場合、集束脳ＳＰＥＣＴ走査を約３０分間行った後、注射後４時間、２４時間、７２時間、および１６８時間の時点でＣＴ走査した。群３および５の場合、全身ＳＰＥＣＴ走査を約３０分間行い、続いて集束脳ＳＰＥＣＴ走査を約３０分間行った後、注射後４時間、２４時間、７２時間、および１６８時間の時点でＣＴ走査した。走査後、用量較正器を使用して、全身活性をカウントした。１４日または１６８時間の撮像セッション後に動物を屠殺した。撮像前に、ｉｎｖｉＣＲＯは、品質管理措置として、システム上で解像度、較正、および定量研究を行った。撮像のために１３匹のマウスを選択した。
【０１９２】
１２５Ｉ標識Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７およびｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２の放射化学純度は、表７に提示される。
【表７】
2016501247.tif 000009
【０１９３】
インビボ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７ｎ取り込みは、２２ヶ月齢のＴｇ２５７６マウスの脳内で評価した（ｎ＝５）。群１の全動物からの平均データの画像は、１ｍｇ／ｋｇ［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ取り込みおよびＣＮＳ内の放射標識の保持を示す（図１５Ａ）。データは、ＣＴ走査と同時登録され、各画像の９９パーセンタイルに正規化された研究期間にわたる集束頭部走査からの矢状画像を表す。動物１００１〜１００３を、中間取り込み動物として分類し、動物１００４を、高い取り込みおよび放射標識生物学の保持を有するとして分類した。動物１００５は、観察されたシグナルが第３心室内の放射標識から生じる可能性に基づいて、低い取り込みとして分類した。
【０１９４】
各時点にわたって図１５Ａに表されるデータの関心領域（ＲＯＩ）分析は、線条体および視床に対する約２．０の標的／小脳比と比較して、２１日目に５匹の動物から得たデータ全体で平均して、脳梁、皮質、海馬、脳室、嗅球、および白質において約２．５の最大シグナル：ノイズ比を明らかにした。分析された他の領域は、１未満の比を有していた（図１５Ｂ）。
【０１９５】
群２および３における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２のインビボ取り込みの集束脳走査を、６匹の動物において評価した。図１５Ｃは、ＣＴ走査と同時登録され、各画像の９９パーセンタイルに正規化された研究期間にわたる集束頭部走査からの矢状画像を表す。データは、高齢Ｔｇ２５７６マウス脳における［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２の取り込みおよび保持を示す。動物１００６〜１０１０は、低／中間取り込みとして分類された１００８を除いて、低／無取り込み動物として分類される。動物１０１１は、高い取り込みおよび放射標識生物学の保持を有するとして分類される。この動物において、高い保持は、放射標識の投与後１６８時間もの間観察された。
【０１９６】
［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２の取り込みおよび保持は、若齢（３ヶ月）のＷＴマウス脳において測定した。図１５Ｄは、ＣＴ走査と同時登録され、各画像の９９パーセンタイルに正規化された研究期間にわたる集束頭部走査からの矢状画像を表し、低保持または高保持としての分類をより明らかに定義する。若齢ＷＴマウスは［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２の低／無取り込みおよび保持を示す。
【０１９７】
動物１００８および１０１１の分類は、図１５Ｅに強調表示されるＲＯＩ定量によってさらに確認された。左側のパネルは、４つの撮像時点にわたって小脳内のそれに対して正規化された皮質内の％ＩＤ／ｇとして表される平均データを示し、ＷＴマウス脳と比較して、Ｔｇ２５７６マウス脳の皮質においてより高い保持を示す。右側のパネルは、個々の取り込みデータを表し、ＷＴのそれ（赤線）と比較してより高い［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２の保持を有していた２匹のＴｇ２５７６マウス１００８および１０１１、ならびに残りの４匹のＴｇ２５７６（黒線）マウスを強調表示する。
【０１９８】
Ｔｇ２５７６マウスにおける［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２の生体内取り込みおよび保持を示すように選択した。図１５Ｆは、ＣＴ走査と同時登録され、放射能の空間的局在をより明らかに可視化するために、背景シグナルを減少させるように、各動物に対して任意にスケーリングされた研究期間にわたる集束頭部走査からの矢状および冠状画像を表す。動物１０１１は、２時間〜１６８時間にわたって、脳内の放射能の比較的高い蓄積および保持を示す。動物１００８は、動物１０１１と比較して、研究の期間全体で同様であるがより低い定量可能な皮質：小脳の比を示し、ここでもいくらかの取り込みおよび保持を示す。対照的に、動物１００７は、最小の定量可能なシグナルを示し、この任意のスケーリングの下でも、放射標識の有意な取り込みまたは保持を示さない。
【０１９９】
図１５Ｇは、高齢Ｔｇ２５７６および野生型マウス脳におけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２結合の定量的関心領域分析の全体概要を示す。４つの撮像時点にわたって小脳内のそれに対して正規化された皮質内の％ＩＤ／ｇとして表されるデータは、ＷＴ（下パネル）マウス脳と比較して、Ｔｇ２５７６（中間パネル）マウス脳の皮質、海馬、および線条体内の［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２のより高い保持を示す。上パネルは、同じ領域内の［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ｃｈＢＩＩＢ０３７のインビボ蓄積を示す以前のデータを確認する。
【０２００】
図１６は、Ｔｇ２５７６高齢マウス脳のＣＮＳへの［１２５Ｉ］Ａｇｌｙ−ＣｈＢＩＩＢ０３７（１および１０ｍｐｋ）のインビボ蓄積を示す、代表的な４８日目の画像を示す。ＣＮＳ特異的インビボ蓄積は、［１２５Ｉ］Ｐ１．１７標識アイソタイプ対照（１０ｍｐｋ）を使用して、若年Ｔｇ２５７６マウス脳内で観察されない。
【０２０１】
図１７は、低い斑負荷が３匹のうち３匹で良好に示され、高い斑負荷が３匹のうち２匹で示されたことを示す。１つの高い斑負荷動物は、偽陰性（高い斑負荷、低いＳＰＥＣＴシグナル）として提示された。
（実施例１３）
Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス脳における［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の免疫組織化学および組織学的染色対マウス脳切片のミクロオートラジオグラフィー（ｍＡＲＧ）
【０２０２】
この実施例は、Ｔｇ２５７６およびＷＴマウス内の［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の免疫組織化学および組織学的染色、ならびに脳組織のオートラジオグラフ評価を開示する。
【０２０３】
組織試料採取に使用されるプロトコルは、ＭＰＩ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍａｔｔａｗａｎ，ＭＩによって提供された。本質的に、脳を解剖後に受け取り、１０％中性緩衝ホルマリンに浸漬した。次に、固定した脳を処理し、パラフィン包埋した。脳全体を処理する場合、組織を冠状切断するように配向した。脳を冠状に切り取る場合、脳の前面から始まる数値でブロックを標識した（例えば、ブロック１＝前脳、ブロック７＝後脳）。５μｍおよび／または１０μｍの連続切片のいずれかは、脳全体で最小６つのレベルから得られた。ＩＨＣのために最小１切片、およびＡＲＧのために最小２切片を各レベルで得た。Ａβ  ＩＨＣ染色の場合、脳の各レベルから１つのスライドを染色した（約２５０〜５００μｍごと）。特定の厚さ、切片の数、およびレベル間の距離を、研究データに記録する（図１８）。
【０２０４】
脳アミロイドを定義するための免疫組織化学（ＩＨＣ）は、Ｃｏｖａｎｃｅマウス抗ヒトβアミロイド１〜１６モノクローナル抗体（クローン６Ｅ１０、ＳＩＧ−３９３２０）を、最終濃度２μｇ／ｍＬで一次抗体として利用した。Ｂｉｏｃａｒｅ  ＭＭ−ＡＰポリマーを、色素原としてのＶｕｌｃａｎファストレッドとともに、二次抗体として使用した。要約すると、スライドを８８％ギ酸溶液中に３分間浸漬し、次に蒸留水中で５分間洗浄し、緩衝液に移して手動で染色した。アイソタイプ（ＩｇＧ１）陰性対照を同時に実行した。スライドをＲｉｃｈａｒｄ  Ａｌｌｅｎヘマトキシリン２で対比染色し、封入処理して終夜空気乾燥させた。
【０２０５】
ＭＰＩ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓプロトコルから、冷凍マウス屠体からの頭部を２％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）マトリックス中に包埋し、−２０℃で維持されたミクロトームステージ上に載置した。４つの品質管理基準を、切断前に冷凍ブロックに入れた（切片厚品質管理のため）。４０μｍ厚の皮質切片を切断し、接着テープ上に捕捉した。
【０２０６】
ＭＰＩ／ｉｎｖｉＣＲＯとの契約下にあるＱＰＳ（Ｄｅｌａｗａｒｅ，ＭＤ）によって、Ｔｇ２５７６マウス１０１、１０２、および１０６、ならびにＷＴマウス２０１および２０６から調製されたスライドについて脳切片ｍＡＲＧを評価した。各マウスの脳は、ミシガン州マッタワンにあるＭＰＩ研究施設において採取および冷凍した。冷凍した脳をドライアイス上に出荷し、切断するまで−７０℃で保存した。冠状断面は、側坐核、視床下部腹内側部、視床下部背内側、背側縫線、孤束核、および最後野を包含するセクションを得るために可能な限り、各脳の６つの解剖学的領域から得た。ｍＡＲＧ切片中の脳Ａβを局在化するＩＨＣ染色手順を行い、結果を評価して、Ａβおよび放射標識された試験物品の共局在化が可能であるかどうかを判断した。
【０２０７】
２つのＴｇおよび２つのＷＴマウスを２８日目（ｎ＝２  Ｔｇ、ｎ＝１  ＷＴ）または７日目（ｎ＝１ＷＴ）に屠殺し、放射能が関連脳領域（複数可）内の標的（アミロイド斑）において局在化されたかどうかをエクスビボで決定した。代表的なデータは、ＷＴマウスから採取した同様の領域における非特異的活性と比較して、Ｔｇマウス脳の海馬層中の放射性病巣の存在を示す（図１９）。
【０２０８】
図２０は、Ｔｇ２５７６脳の隣接した切片における６Ｅ１０由来のＡβ免疫染色およびｍＡＲＧ由来の放射能の共局在化を示す。さらに、ｍＡＲＧ切片を使用する海馬の領域における隣接した切片中のＡβに対するチオフラビン−Ｓ染色は、あいまいな結果を示した（図２１）。
（実施例１４）
［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７および［１２５Ｉ］ヒトＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２’を使用する生体分布研究
【０２０９】
２匹のＷＴおよび３匹のＴｇマウスを研究の最後に利用し（表５）、いくつかの組織における［１２５Ｉ］ｃｈＢＩＩＢ０３７の生体分布を評価した。放射標識抗体の最後の静脈内投与後に７日間、研究の２８日目にこれらの動物を屠殺した。脾臓、全脳、心臓、腎臓、筋肉、肝臓、膀胱、肺、胃、腸、および血液を含む臓器および組織を除去した。臓器および組織の試料を計量し、自動γカウンターを使用して放射能を測定した。希釈した標準溶液および減衰補正された注射用量を使用して、注射用量のパーセント（％ＩＤ）を計算した。したがって、放射能濃度を、湿性組織１グラム当たりの注射用量のパーセントとして表した（％ＩＤ／ｇ）（表８および図２２）。
【表８】
2016501247.tif 000010
【０２１０】
表８および図２２は、組織全体で％ＩＤ／ｇとして表されたデータを含み、ＷＴマウス脳と比較して、Ｔｇにおいてより高い放射能のインビボ蓄積によって示されるように、脳組織内で最低であるが選択的な蓄積を示す。
【０２１１】
研究の時間経過にわたって非標的末梢臓器内の［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２の生体分布を、それらの臓器のＲＯＩ分析を使用して決定した。図２３は、Ｔｇ２５７６およびＷＴマウスにおけるインビボ［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２の全身ＳＰＥＣＴ画像を示す。脳内で最高の［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７Ｆ（ａｂ’）２を示した動物１０１１（左）の全身最大強度投影（ＭＩＰ）を、ＷＴマウスＡ１０１４（右）のそれと比較する。画像は、ＭＩＰの２つのセットとして提示され、データが最初の画像（上）の最大ボクセルの９９パーセンタイルに正規化されるか、または各画像（下）の最大ボクセルの９９パーセンタイルに正規化される。
【０２１２】
図２４は、高齢Ｔｇ２５７６および若年ＷＴマウスの非標的組織において、［１２５Ｉ］ｈｕＢＩＩＢ０３７  Ｆ（ａｂ’）２のインビボ生体分布の定量的全身分析を示す。Ｔｇ２５７６の甲状腺組織における蓄積は、ＷＴ（ｎ＝２）と経時的に比較して、より高い放射能のインビボ蓄積（ｎ＝３）によって示される。腎臓蓄積は、放射標識物質の腎クリアランスを反映して経時的に減少する。
＊＊＊
【０２１３】
本開示は、本開示の個々の態様の単一例示として意図される、記載の特定の実施形態によって範囲が限定されず、機能的に等価である任意の組成物または方法は、本開示の範囲内である。実際に、本開示の様々な修正は、本明細書に示される、および記載されるものに加えて、前述の説明および添付の図面から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。
【０２１４】
本明細書に記載される全ての刊行物および特許出願は、各個別の刊行物または特許出願が、明確かつ個別に参照により組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2016501247.tif 000011
【図２】
2016501247.tif 000012
【図３】
2016501247.tif 000013
【図４】
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【図５】
2016501247.tif 000015
【図６】
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【図７】
2016501247.tif 000017
【図８】
2016501247.tif 000018
【図９】
2016501247.tif 000019
【図１０Ａ】
2016501247.tif 000020
【図１０Ｂ】
2016501247.tif 000021
【図１１】
2016501247.tif 000022
【図１２−１】
2016501247.tif 000023
【図１２−２】
2016501247.tif 000024
【図１３Ａ】
2016501247.tif 000025
【図１３Ｂ】
2016501247.tif 000026
【図１３Ｃ】
2016501247.tif 000027
【図１４−１】
2016501247.tif 000028
【図１４−２】
2016501247.tif 000029
【図１５Ａ】
2016501247.tif 000030
【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
2016501247.tif 000033
【図１５Ｅ】
2016501247.tif 000034
【図１５Ｆ】
2016501247.tif 000035
【図１５Ｇ】
2016501247.tif 000036
【図１６】
2016501247.tif 000037
【図１７】
2016501247.tif 000038
【図１８】
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【図１９】
2016501247.tif 000040
【図２０】
2016501247.tif 000041
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年8月6日(2015.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳アミロイド斑を減少させる方法に使用するための組成物であって、
（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合するか、（ｂ）またはＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する、抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、
前記抗体またはフラグメントの投与が、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させる、組成物。
【請求項２】
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法に使用するための組成物であって、
（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合するか、または（ｂ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体であって、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する、抗Ａβ抗体を含む、組成物。
【請求項３】
試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法に使用するための組成物であって、
（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合するか、または（ｂ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、
前記方法は、
（ａ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、
（ｂ）前記試験対象において生成された前記シグナルを、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、前記対照対象と比較して前記試験対象において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む、組成物。
【請求項４】
治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法に使用するための組成物であって、
（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合するか、または（ｂ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、
前記方法は、
（ａ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、
（ｂ）前記患者において測定された前記シグナルと、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定された前記シグナルとの比較の考察時に、前記患者における疾患状態を評価することであって、前記対照対象と比較して前記患者において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、
（ｃ）前記患者の疾患状態に適した治療法で前記患者を治療することと、を含む、組成物。
【請求項５】
前記対照対象が、健常な個体、様々に異なる重度の神経変性障害を有する個体、またはそれらの組み合わせである、請求項３または４に記載の組成物。
【請求項６】
脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法に使用するための組成物であって、
（ａ）ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合するか、または（ｂ）ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、
前記方法は、
（ａ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｂ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｃ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、を含む、組成物。
【請求項７】
前記方法が、疾患進行のレベルに基づいて、前記患者の治療を調整することをさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記患者の疾患状態に適した前記治療法が、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与すること、あるいは
（ｂ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与すること
を含む、請求項４〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
請求項４に記載の組成物であって、前記方法が、
（ｄ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｅ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、をさらに含む、組成物。
【請求項１０】
（ａ）前記薬剤が、１つ以上の放射性リガンドを含み、および／または
（ｂ）前記リガンドが、１２５Ｉであり、および／または
（ｃ）前記薬剤によって生成された前記シグナルが、単光子放出コンピュータ断層撮影によって測定される、
請求項３〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
（ａ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号３の相補性決定領域−１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列を含み、および／または
（ｂ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号４の相補性決定領域−２（ＶＨＣＤＲ２）アミノ酸配列を含み、および／または
（ｃ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号５の相補性決定領域−３（ＶＨＣＤＲ３）アミノ酸配列を含み、および／または
（ｄ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号６の相補性決定領域−１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列を含み、および／または
（ｅ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号７の相補性決定領域−２（ＶＬＣＤＲ２）アミノ酸配列を含み、および／または
（ｆ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号８の相補性決定領域−３（ＶＬＣＤＲ３）アミノ酸配列を含み、および／または
（ｇ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、および／または
（ｈ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、および／または
（ｉ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、および／または
（ｊ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが配列番号１を含み、前記ＶＬが配列番号２を含む、
請求項３〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＢＩＩＢ０３７抗体の抗原結合領域を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
（ａ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ａβ凝集体に選択的に結合し、および／または
（ｂ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ａベータ原線維に結合することができるが、Ａベータモノマーには実質的に結合せず、および／または
（ｃ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、脳アミロイド斑を減少させるのに有効な量で血液脳関門を通過することができ、および／または
（ｄ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、血管アミロイドに対するよりも高い親和性で実質アミロイド斑に結合し、および／または
（ｅ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、実質アミロイド斑上よりもコンゴレッド親和性アミロイド血管症病変においてより低い程度で蓄積し、および／または
（ｆ）脳内のアミロイド斑の減少が、Ｆｃ受容体の関与を含み、および／または
（ｇ）前記抗Ａβ抗体抗原結合フラグメントが、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントであり、および／または
（ｈ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトであり、および／または
（ｉ）前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラである、
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記対象が、神経変性疾患を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認識障害、脳アミロイド血管症、血管性認知症、多発梗塞性認知症、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、ハンチントン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、嚢胞性線維症、またはゴーシェ病からなる群から選択される、請求項４〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
アルツハイマー病を治療もしくはその進行を予防するのに使用するため、アルツハイマー病に関連する症状の改善に使用するため、アルツハイマー病の存在について対象を診断もしくはスクリーニングするのに使用するため、または対象がアルツハイマー病を発症する危険性を決定するのに使用するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記投与が、末梢投与によるものであるか、または非経口投与によるものである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非経口投与によって投与される。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
脳アミロイド斑を減少させる方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、前記投与が、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができ、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する、方法。
（項目２）
脳アミロイド斑を減少させる方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、前記投与が、血管アミロイドに実質的に影響を及ぼすことなく脳内のアミロイド斑を減少させることができる、方法。
（項目３）
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体と同じエピトープに結合する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含み、ＢＩＩＢ０３７抗体が、Ａβのアミノ酸３〜６を含むエピトープに結合する、方法。
（項目４）
抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの長期投薬中の微小出血の発生を最小限に抑える方法であって、ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体を対象に投与することを含む、方法。
（項目５）
試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、
（ｂ）前記試験対象において生成された前記シグナルを、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、前記対照対象と比較して前記試験対象において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む、方法。
（項目６）
治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、
（ｂ）前記患者において測定された前記シグナルと、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定された前記シグナルとの比較の考察時に、前記患者における疾患状態を評価することであって、前記対照対象と比較して前記患者において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、
（ｃ）前記患者の疾患状態に適した治療法で前記患者を治療することと、を含む、方法。
（項目７）
試験対象における脳アミロイド斑の量を測定する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に、試験対象の脳内で生成されたシグナルを測定することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、測定することと、
（ｂ）前記試験対象において生成された前記シグナルを、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与時に生成されたシグナルと比較することであって、前記対照対象と比較して前記試験対象において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、比較することと、を含む、方法。
（項目８）
治療を必要とする患者において脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患を治療する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識される、投与することと、
（ｂ）前記患者において測定された前記シグナルと、１以上の対照対象への前記標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定された前記シグナルとの比較の考察時に、前記患者における疾患状態を評価することであって、前記対照対象と比較して前記患者において生成された前記シグナルの増加が、脳アミロイド斑の増加と相関する、評価することと、
（ｃ）前記患者の疾患状態に適した治療法で前記患者を治療することと、を含む、方法。
（項目９）
前記対照対象が、健常な個体、様々に異なる重度の神経変性障害を有する個体、またはそれらの組み合わせである、項目５〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｂ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｃ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、を含む、方法。
（項目１１）
脳アミロイド斑を特徴とする神経変性疾患の治療を受けている患者における疾患の進行を評価する方法であって、
（ａ）前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することであって、前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、測定可能なシグナルを生成する薬剤で標識され、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｂ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｃ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、を含む、方法。
（項目１２）
疾患進行のレベルに基づいて、前記患者の治療を調整することをさらに含む、項目１０または項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記患者の疾患状態に適した前記治療法が、前記ＢＩＩＢ０３７抗体と同じ立体配座エピトープに結合する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することを含む、項目６、８、９〜１０、または１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記患者の疾患状態に適した前記治療法が、前記ＢＩＩＢ０３７抗体を競合的に阻害する抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記神経変性疾患の治療を必要とする前記患者に投与することを含む、項目６、８、９、または１１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
項目６または８のいずれか１項に記載の方法であって、
（ｄ）前記標識された抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記（ａ）の投与後に１つ以上の時間間隔で投与することであって、前記シグナルが、前記投与後に前記患者において測定される、投与することと、
（ｅ）（ａ）の投与後に前記１つ以上の時間間隔で前記患者において測定された前記シグナルの変化に基づいて、前記患者における疾患の進行を評価することであって、前記シグナルの増加が、前記患者における前記神経変性疾患の進行を示す、評価することと、をさらに含む、方法。
（項目１６）
前記薬剤が、１つ以上の放射性リガンドを含む、項目５〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記リガンドが、１２５Ｉである、項目５〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記薬剤によって生成された前記シグナルが、単光子放出コンピュータ断層撮影によって測定される、項目５〜１７のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号３の相補性決定領域−１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む、項目１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号４の相補性決定領域−２（ＶＨＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号５の相補性決定領域−３（ＶＨＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む、項目１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号６の相補性決定領域−１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む、項目１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号７の相補性決定領域−２（ＶＬＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号８の相補性決定領域−３（ＶＬＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む、項目１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、項目１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＬが、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、配列番号３、４、５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号６、７、８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが配列番号１を含み、前記ＶＬが配列番号２を含む、項目１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＢＩＩＢ０３７抗体の抗原結合領域を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ａβ凝集体に選択的に結合する、項目１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ａベータ原線維に結合することができるが、Ａベータモノマーには実質的に結合しない、項目１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、脳アミロイド斑を減少させるのに有効な量で血液脳関門を通過することができる、項目１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、血管アミロイドに対するよりも高い親和性で実質アミロイド斑に結合する、項目１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、実質アミロイド斑上よりもコンゴレッド親和性アミロイド血管症病変においてより低い程度で蓄積する、項目１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
脳内のアミロイド斑の減少が、Ｆｃ受容体の関与を含む、項目１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
前記抗Ａβ抗体抗原結合フラグメントが、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである、項目１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトである、項目１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
前記抗Ａβ抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラである、項目１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記対象が、神経変性疾患を有する、項目１〜５または７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、ダウン症候群、軽度認識障害、脳アミロイド血管症、血管性認知症、多発梗塞性認知症、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、ハンチントン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、嚢胞性線維症、またはゴーシェ病からなる群から選択される、項目６または８〜３９のいずれか１項に記載の方法。
（項目４１）
アルツハイマー病を治療もしくはその進行を予防するため、アルツハイマー病に関連する症状の改善のため、アルツハイマー病の存在について対象を診断もしくはスクリーニングするため、または対象がアルツハイマー病を発症する危険性を決定するための、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記投与が、末梢投与によるものである、項目１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記投与が、非経口投与によるものである、項目１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
2016501247.tif 000046
2016501247.tif 000047
2016501247.tif 000048