(57)【要約】ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の複製を阻害する方法が開示される。様々な構成では、これらの方法は、治療的有効量のブロモドメイン阻害剤を治療の必要な被験体に投与することを含む。メチルトリアゾロジアゼピン関連化合物、３，５−ジメチルイソキサゾール関連化合物、３−メチルジヒドロキナゾリノン関連化合物、Ｎ−アセチル−２−メチルテトラヒドロキノリン関連化合物、キナゾロン関連化合物、ジアゾベンゼン関連化合物、およびトリアゾロピリダジン関連化合物を含むブロモドメイン阻害剤は、ウイルス複製を阻害するために使用することができる。【選択図】図２
2016510039.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量のブロモドメイン阻害剤を治療の必要な被験体に投与することを含む、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の複製を阻害する方法。
【請求項２】
前記ブロモドメイン阻害剤は（＋）−ＪＱ１である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項３】
前記ブロモドメイン阻害剤はＰＦＩ−１である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ５２５７６２Ａである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項５】
前記ブロモドメイン阻害剤はＲＶＸ−２０８である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項６】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ１２１０１５１Ａである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項７】
前記ブロモドメイン阻害剤はＯＴＸ−１５である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項８】
前記ブロモドメイン阻害剤はＣＰＩ−２０３である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項９】
前記ブロモドメイン阻害剤はブロモスポリンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１０】
前記ブロモドメイン阻害剤は、下記構造
【化１】
2016510039.tif 000015
であって、式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
ＲＢはＨ、アルキル、ヒドロキシルアルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり、その各々は任意で置換され；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立してアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；あるいは任意の２つのＲＡはその各々に付着された原子と一緒に、縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成することができ；
Ｒはアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであって、各々が、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニル；−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニルであって、その各々が任意で置換されてもよい−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６；
からなる群より選択され；
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
またはＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであって、その各々は任意で置換され；またはＲ４およびＲ６はそれらに付着されている炭素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であり；
ただし、下記を条件とする：
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルである場合、そうするとＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になって、モルホリノ環を形成せず；および
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の１つがＨである場合、そうすると、Ｒ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルではない、
構造またはその塩、溶媒和物もしくは水和物を有する、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１１】
Ｒはアリールまたはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項１０に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１２】
Ｒはフェニルまたはピリジルであり、その各々は任意で置換される、請求項１１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１３】
Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである、請求項１１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１４】
Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である、請求項１０に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１５】
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであり；その各々は任意で置換される、請求項１０に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１６】
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項１０に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１７】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７６２である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１８】
前記ブロモドメイン阻害剤は６−スピロ−置換トリアゾロジアゼピンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項１９】
前記ブロモドメイン阻害剤はジヒドロベンゾジアゼピンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２０】
前記ブロモドメイン阻害剤はイソオキサゾロアゼピンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２１】
前記ブロモドメイン阻害剤は６ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２２】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４１７である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２３】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７２６である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２４】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４３６である、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２５】
前記ブロモドメイン阻害剤はトリアゾロピリダジンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２６】
前記ブロモドメイン阻害剤はピロロピリジノンである、請求項１に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項２７】
治療的有効量のブロモドメイン阻害剤を治療の必要な被験体に投与することを含む、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項２８】
前記ブロモドメイン阻害剤は（＋）−ＪＱ１である、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項２９】
前記ブロモドメイン阻害剤はＰＦＩ−１である、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３０】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ５２５７６２Ａである、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３１】
前記ブロモドメイン阻害剤はＲＶＸ−２０８である、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３２】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ１２１０１５１Ａである、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３３】
前記ブロモドメイン阻害剤はＯＴＸ−１５である、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３４】
前記ブロモドメイン阻害剤はＣＰＩ−２０３である、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３５】
前記ブロモドメイン阻害剤はブロモスポリンである、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３６】
前記ブロモドメイン阻害剤は、下記構造
【化２】
2016510039.tif 000016
であって、式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
ＲＢはＨ、アルキル、ヒドロキシルアルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり、その各々は任意で置換され；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立してアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；あるいは任意の２つのＲＡはその各々に付着された原子と一緒に、縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成することができ；
Ｒはアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであって、各々が、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニル；−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニルであって、その各々が任意で置換されてもよい−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６；
からなる群より選択され、
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
またはＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；またはＲ４およびＲ６はそれらに付着されている炭素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であり；
ただし、下記を条件とする：
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルである場合、そうするとＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になって、モルホリノ環を形成せず；および
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の１つがＨである場合、そうすると、Ｒ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルではない、
構造またはその塩、溶媒和物もしくは水和物を有する、請求項２７に記載のヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法。
【請求項３７】
Ｒはアリールまたはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項３６に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項３８】
Ｒはフェニルまたはピリジルであり、その各々は任意で置換される、請求項３７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項３９】
Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである、請求項３７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４０】
Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である、請求項３６に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４１】
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであり；その各々は任意で置換される、請求項３６に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４２】
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項３６に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４３】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７６２である、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４４】
前記ブロモドメイン阻害剤は６−スピロ−置換トリアゾロジアゼピンである、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４５】
前記ブロモドメイン阻害剤はジヒドロベンゾジアゼピンである、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４６】
前記ブロモドメイン阻害剤はイソオキサゾロアゼピンである、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４７】
前記ブロモドメイン阻害剤は６ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピンである、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４８】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４１７である、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項４９】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７２６である、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項５０】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４３６である、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項５１】
前記ブロモドメイン阻害剤はトリアゾロピリダジンである、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項５２】
前記ブロモドメイン阻害剤はピロロピリジノンである、請求項２７に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項５３】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染の治療のためのブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項５４】
前記ブロモドメイン阻害剤は（＋）−ＪＱ１である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項５５】
前記ブロモドメイン阻害剤はＰＦＩ−１である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項５６】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ５２５７６２Ａである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項５７】
前記ブロモドメイン阻害剤はＲＶＸ−２０８である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項５８】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ１２１０１５１Ａである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項５９】
前記ブロモドメイン阻害剤はＯＴＸ−１５である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６０】
前記ブロモドメイン阻害剤はＣＰＩ−２０３である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６１】
前記ブロモドメイン阻害剤はブロモスポリンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６２】
前記ブロモドメイン阻害剤は、下記構造
【化３】
2016510039.tif 000017
であって、式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
ＲＢはＨ、アルキル、ヒドロキシルアルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり、その各々は任意で置換され；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立してアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；あるいは任意の２つのＲＡはその各々に付着された原子と一緒に、縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成することができ；
Ｒはアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであって、各々が、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニル；−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニルであって、その各々が任意で置換されてもよい−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６；
からなる群より選択され；
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
またはＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；またはＲ４およびＲ６はそれらに付着されている炭素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であり；
ただし、下記を条件とする：
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルである場合、そうするとＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になって、モルホリノ環を形成せず；および
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の１つがＨである場合、そうすると、Ｒ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルではない、
構造またはその塩、溶媒和物もしくは水和物を有する、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６３】
Ｒはアリールまたはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項６２に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６４】
Ｒはフェニルまたはピリジルであり、その各々は任意で置換される、請求項６３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６５】
Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである、請求項６３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６６】
Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である、請求項６２に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６７】
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであり；その各々は任意で置換される、請求項６２に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６８】
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項６２に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項６９】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７６２である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７０】
前記ブロモドメイン阻害剤は６−スピロ−置換トリアゾロジアゼピンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７１】
前記ブロモドメイン阻害剤はジヒドロベンゾジアゼピンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７２】
前記ブロモドメイン阻害剤はイソオキサゾロアゼピンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７３】
前記ブロモドメイン阻害剤は６ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７４】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４１７である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７５】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７２６である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７６】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４３６である、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７７】
前記ブロモドメイン阻害剤はトリアゾロピリダジンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７８】
前記ブロモドメイン阻害剤はピロロピリジノンである、請求項５３に記載のブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項７９】
ＨＣＭＶに感染した宿主細胞を含む培養物を提供すること；および
前記宿主細胞をブロモドメイン阻害剤と接触させること
を含むインビトロでヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）複製を阻害する方法。
【請求項８０】
前記ブロモドメイン阻害剤は（＋）−ＪＱ１である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ブロモドメイン阻害剤はＰＦＩ−１である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ５２５７６２Ａである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記ブロモドメイン阻害剤はＲＶＸ−２０８である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記ブロモドメイン阻害剤はＧＳＫ１２１０１５１Ａである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
前記ブロモドメイン阻害剤はＯＴＸ−１５である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８６】
前記ブロモドメイン阻害剤はＣＰＩ−２０３である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記ブロモドメイン阻害剤は、ブロモスポリンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記ブロモドメイン阻害剤は、下記構造
【化４】
2016510039.tif 000018
であって、式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
ＲＢはＨ、アルキル、ヒドロキシルアルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり、その各々は任意で置換され；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立してアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；あるいは任意の２つのＲＡはその各々に付着された原子と一緒に、縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成することができ；
Ｒはアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであって、各々が、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニル；−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニルであって、その各々が任意で置換されてもよい−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６；
からなる群より選択され；
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；
またはＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；またはＲ４およびＲ６はそれらに付着されている炭素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であり；
ただし、下記を条件とする：
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルである場合、そうするとＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になって、モルホリノ環を形成せず；および
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の１つがＨである場合、そうすると、Ｒ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルではない、
構造またはその塩、溶媒和物もしくは水和物を有する、請求項７９に記載の方法
【請求項８９】
Ｒはアリールまたはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
Ｒはフェニルまたはピリジルであり、その各々は任意で置換される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９３】
各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールであり；その各々は任意で置換される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９４】
Ｒ６はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換される、請求項１０に記載のＨＣＭＶ複製を阻害する方法。
【請求項９５】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７６２である、請求項７９に記載の方法。
【請求項９６】
前記ブロモドメイン阻害剤は６−スピロ−置換トリアゾロジアゼピンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９７】
前記ブロモドメイン阻害剤はジヒドロベンゾジアゼピンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９８】
前記ブロモドメイン阻害剤はイソオキサゾロアゼピンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９９】
前記ブロモドメイン阻害剤は６ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項１００】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４１７である、請求項７９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ブロモドメイン阻害剤はＩ−ＢＥＴ７２６である、請求項７９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ブロモドメイン阻害剤はＭＳ−４３６である、請求項７９に記載の方法
【請求項１０３】
前記ブロモドメイン阻害剤はトリアゾロピリダジンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ブロモドメイン阻害剤はピロロピリジノンである、請求項７９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年２月２８日に出願された米国仮特許出願６１／７７０，８８６号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の恩典を主張する。
【０００２】
政府支援
この研究は国立衛生研究所から、助成金番号ＮＩ／ＨＮＣＩＲ０１ＣＡ１２０７６８号の下、政府支援を受けた。政府は発明において一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
導入
ＨＣＭＶ感染は、癌患者において合併症の最も一般的な原因の１つである。ブロモドメインを含むタンパク質の機能を阻害する多くの化合物が同定されている。これらのブロモドメイン阻害剤のいくつか（時としてＢＥＴブロモドメイン阻害剤と呼ばれる）、例えばＪＱ１、は、様々な疾患、例えば癌、炎症疾患、心血管疾患、および男性妊娠促進に適用されている（Ａｎａｎｄ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１３，  Ｄｅｌｍｏｒｅ，  Ｊ．  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１，  Ｌｏｃｋｗｏｏｄ，  Ｗ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；  Ｏｔｔ，  Ｃ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２；  Ｚｕｂｅｒ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ，  ２０１１；  Ｍａｘｍｅｎ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２；  Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；およびＭａｔｚｕｋ，  Ｍ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。ＪＱ１およびその誘導体その抗癌適用のために臨床試験中である。
【０００４】
Ｐａｌｅｒｍｏ、Ｒ．Ｄ．ら、２０１１は細胞をＪＱ１で処理すると、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）における転写物の産生が阻害されることを見出した。これらの著者はまた、ＪＱ１の可能性のある抗ＥＢＶ剤としての使用を示唆する。しかしながら、これらの転写物は、Ｂ細胞におけるその長期潜伏／発癌のためにＥＢＶでユニークであり、ヘルペスウイルス間で保存されない。ＥＢＶおよびＨＣＭＶは異なるウイルスであり；それらは異なる細胞型に影響し、異なる疾患症状を有する。
【０００５】
Ｂｒａｄｎｅｒ、Ｊ．Ｅ．らのＰＣＴ出願ＰＣＴＵＳ２０１１／０３６７０１号およびＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６６４７号、ＢａｍｂｏｒｏｕｇｈらのＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６７１４号、Ａｌｂｒｅｃｈｔ、Ｂ．Ｋ．らのＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６３１７３号、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３６５６９号、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０４２８２５号、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０４４４４４号、Ｓｃｈｍｅｅｓ、Ｎ．らのＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０６６６００号、Ｆｉｓｈ、Ｐ．Ｖ．らのＰＣＴ／ＩＢ２０１２／０５４２１１号、Ｄｅｍｏｎｔ、Ｅ．Ｈ．らのＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６７０１号、Ｇｏｓｍｉｎｉ、Ｒ．Ｌ．Ｍ．らのＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６１５１８号、およびＺｈｏｕ、Ｍ．Ｍ．らの米国特許出願ＵＳ２０１２００２８９１２  Ａｌは、ブロモドメイン阻害剤を投与することによるＨＣＭＶの治療を開示していない。さらに、いくつかのウイルスは、そのウイルスＤＮＡを宿主染色体に固着させるためにＢＲＤ４を使用すると考えられる。しかしながら、ＨＣＭＶはＢＲＤ４をアンカーとして使用せず；代わりに、それ自体のＩＥ−１タンパク質をこのために使用すると考えられる（Ｍｕｃｋｅ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１４）。よって、ブロモドメイン阻害剤が、ＨＣＭＶ感染を阻害するために使用できるかどうかはわかっていなかった。
【０００６】
Ｂａｉｌｅｙ、Ｊ．らのＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６６９７号、Ｃｈｕｎｇ，ＣらのＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６６９５号、Ｗａｎｇ、Ｌ．らのＰＣＴ／ＣＮ２０１２／０８６３５７号、およびＢｏｕｉｌｌｏｔ、Ａ．Ｍ．Ｊ．らのＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６６９９号は、ブロモドメイン阻害剤は、炎症反応を治療するのに有用となり得ることを述べている。しかしながら、ウイルスにより引き起こされた炎症反応の治療はウイルス感染の治療とは異なる。これらの出願は、ＨＣＭＶ感染を治療するためのブロモドメイン阻害剤の使用を開示しない。
【０００７】
ＭｃＬｕｒｅ、Ｋ．Ｇ．らのＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／０００９６８号は、ブロモドメイン阻害剤としてキナゾリノン誘導体を記載し、ブロモドメイン阻害剤は、ヘルペス、ＨＰＶ、およびＨＩＶを含むウイルス感染に対する応答を調節することができることを述べている。ＭｃＬｕｒｅはまた、開示された組成物は、ウイルス感染により引き起こされる疾患または障害を治療するために使用することができることを述べている。しかしながら、ウイルス感染により引き起こされる疾患症状の治療は、ウイルス感染自体の治療とは異なる。ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／０００９６８号はＨＣＭＶを含むβ−ヘルペスウイルス感染を治療するために、ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／０００９６８号で開示された組成物を使用することを支持する例を開示しない。
【０００８】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の感染を阻害するために、ＪＱ１またはその誘導体を含むブロモドメイン阻害剤を使用することを記載する公開された開示はない。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、様々なブロモドメイン阻害剤は、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を含むサイトメガロウイルスのウイルス複製を妨害することができることを示している。よって、ブロモドメイン阻害剤は、治療的にサイトメガロウイルス感染に対して使用することができる。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本発明者らは、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の複製を阻害する方法を開示する。様々な構成では、これらの方法は、治療的有効量のブロモドメイン阻害剤を治療の必要な被験体に投与することを含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本発明者らは、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法を開示する。様々な構成では、これらの方法は、治療的有効量のブロモドメイン阻害剤を治療の必要な被験体に投与することを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本発明者らは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染の治療のためのブロモドメイン阻害剤の使用を開示する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本発明者らは、インビトロでヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）複製を阻害する方法を開示する。様々な構成では、これらの方法は、ＨＣＭＶに感染した宿主細胞を含む培養物を提供すること、および宿主細胞をブロモドメイン阻害剤と接触させることを含む。
【００１４】
様々な構成では、ブロモドメイン阻害剤、例えばブロモアンドエクストラターミナル（ｂｒｏｍｏ  ａｎｄ  ｅｘｔｒａ  ｔｅｒｍｉｎａｌ）（ＢＥＴ）ファミリーのブロモドメインに対する阻害剤は、開示される方法と共に使用することができる。
【００１５】
本教示のブロモドメイン阻害剤は、様々な構成では、メチルトリアゾロジアゼピン関連化合物、３，５−ジメチルイソキサゾール関連化合物、３−メチルジヒドロキナゾリノン関連化合物、Ｎ−アセチル−２−メチルテトラヒドロキノリン関連化合物、キナゾロン関連化合物、ジアゾベンゼン関連化合物、トリアゾロピリダジン関連化合物、およびピロロピリジノン関連化合物を含む。
【００１６】
本教示のメチルトリアゾロジアゼピン関連化合物は、限定はされないが、下記とすることができる：（＋）ＪＱ−１（ＴＥＮ−１０）（４−（４０クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−１，１−ジメチルエチルエステル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ｝｛１，４｝ジアゼピン−６Ｓ−酢酸）、Ｉ−ＢＥＴ７６２（ＧＳＫ５２５７６２Ａ）（２−［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−８−メトキシ−１−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］−Ｎ−エチルアセトアミド）、ＯＴＸ−０１５（（Ｓ）−２−［４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ−［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル］−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド）、ＣＰＩ−２０３（（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミド）、６−スピロ−置換トリアゾロジアゼピン、例えば（１Ｒ，２Ｒ）−４’−（４−クロロフェニル）−Ｎ−エチル−２’，３，９，−トリメチルスピロ−［シクロプロパン−１，６’−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン］−２−カルボキサミド、ジヒドロベンゾジアゼピン、例えば４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，５］ベンゾジアゼピン、５，６−ジヒドロ−１，４−ジメチル−８−（６−アミノピリジン−＆３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）、イソオキサゾロアゼピン、６ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３ａ］［１，４］ジアゼピンまたはＭＳ−４１７（メチル２−（（６Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセテート。
【００１７】
本教示の３，５−メチルイソキサゾール関連化合物は、限定はされないが、Ｉ−ＢＥＴ  １５１（ＧＳＫ１２１０１５１Ａ）（７−（３，５−ジメチル−１，２−オキサゾール−４−イル）−８−メトキシ−１−［（１Ｒ）−１−（２−ピリジニル）エチル］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン）とすることができる。
【００１８】
本教示の３−メチルジヒドロキナゾリノン関連化合物は、限定はされないが、ＰＦＩ−１（２−メトキシ−Ｎ−（３−メチル−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キナゾリニル）ベンゼンスルホンアミド）とすることができる。
【００１９】
本教示のＮ−アセチル−２−メチルテトラヒドロキノリン関連化合物は、限定はされないが、Ｉ−ＢＥＴ７２６（ＧＳＫ１３２４７２６Ａ）（４−（２Ｓ，４Ｒ）−｛−１−アセチル−４−［（４−クロロフェニル）アミノ］−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル｝安息香酸）とすることができる。
【００２０】
本教示のキナゾロン関連化合物は、限定はされないが、ＲＶＸ−２０８（２−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３，５−ジメチル−フェニル］−５，７−ジメトキシ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン）とすることができる。
【００２１】
本教示のジアゾベネン（ｄｉａｚｏｂｅｎｅｎｅ）関連化合物は、限定はされないが、ＭＳ４３６（２−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３５−ジメチル−フェニル］−５，７−ジメトキシ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン）とすることができる。
【００２２】
本教示のトリアゾロピリダジン関連化合物は、限定はされないが、トリアゾロピリダジン、例えば（Ｓ）−１−エチル−３−（３−メチル−６−（メチル（１−フェニルエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−８−イル）尿素、またはブロモスポリン（Ｎ−［６−（３−メタンスルホンアミド−４−メチルフェニル）−３−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−８−イル］カルバメート）とすることができる。
【００２３】
本教示のピロロピリジノン関連化合物は、限定はされないが、ピロロピリジノン、例えばＮ−［４（２，４−ジフルオロフェノキシ）−３−（６−メチル−７−オキソ−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−４−イル）フェニル］エタンスルホンアミドとすることができる。
【００２４】
本教示のブロモドメイン阻害剤は、限定はされないが、表１で明記される化合物とすることができる：
【表１】
2016510039.tif 000003
2016510039.tif 000004
2016510039.tif 000005
2016510039.tif 000006
2016510039.tif 000007
2016510039.tif 000008
【００２５】
本教示のブロモドメイン阻害剤は、限定はされないが、表２で明記される化合物とすることができる：
【表２】
2016510039.tif 000009
【００２６】
いくつかの実施形態では、本教示の方法において使用することができるブロモドメイン阻害剤は下記構造；またはその塩、溶媒和物もしくは水和物を有することができ
【化１】
2016510039.tif 000010
式中、ＸはＮまたはＣＲ５であり；Ｒ５はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；ＲＢは、Ｈ、アルキル、ヒドロキシルアルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３とすることができ、その各々は任意で置換され；環Ａは、アリールまたはヘテロアリールとすることができ；各ＲＡは、独立してアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールとすることができ、その各々は任意で置換され；あるいは任意の２つのＲＡはその各々に付着された原子と一緒に、縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成することができ；Ｒはアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、その各々は任意で置換され；各Ｒ３は、独立して下記からなる群より選択することができ：（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；（ｉｉｉ）−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、各々が、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２または３個のヘテロ原子を含む；−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３−Ｃ１２シクロアルケニル、その各々が任意で置換されてもよい；および（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６；各Ｒ４は独立してＨ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールとすることができる、その各々は任意で置換される；またはＲ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になり、４−１０員環を形成することができ；Ｒ６は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールとすることができ、その各々は任意で置換され；またはＲ４およびＲ６はそれらに付着されている炭素原子と一緒になり、４−１０員環を形成し；ｍは０、１、２、または３であり；ただし、下記を条件とする：（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルである場合、そうすると、Ｒ３およびＲ４は、それらに付着されている窒素原子と一緒になって、モルホリノ環を形成せず；および（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２は、Ｈとすることができ、ＲＢはメチルであり、Ｒ３およびＲ４の１つがＨである場合、そうすると、Ｒ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルではない。
【００２７】
いくつかの構成では、Ｒは、アリールまたはヘテロアリールとすることができ、その各々は、任意で置換することができる。
【００２８】
いくつかの構成では、Ｒは、フェニルまたはピリジルとすることができ、その各々は、任意で置換することができる。
【００２９】
いくつかの構成では、Ｒは、ｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルとすることができる。
【００３０】
いくつかの構成では、Ｒ３は、Ｈ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６とすることができる。
【００３１】
いくつかの構成では、各Ｒ４は、独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールとすることができ；その各々は任意で置換される。
【００３２】
いくつかの構成では、Ｒ６は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールとすることができ、その各々は任意で置換される。
【００３３】
本教示はＨＣＭＶ感染の治療のための医薬製剤、およびＨＣＭＶ感染の治療のための医薬製剤の投与方法を含む。そのような医薬製剤はブロモドメイン阻害剤および賦形剤を含むことができる。投与は、当業者に知られている任意の投与経路、例えば、限定はされないが、注射、経口、または非経口投与とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞は、ＪＱ１処理で「巨細胞」形態を損失し、死滅することを示す。（Ａ）位相差または蛍光顕微鏡法における感染後７２時間での感染細胞。（Ｂ）感染後９６時間での位相差または蛍光顕微鏡法における感染細胞。
【図２】ＨＣＭＶ複製のＪＱ１阻害を示す。（Ａ）感染後５日での培地中のウイルス子孫の数。（Ｂ）感染後６日での培地中のウイルス子孫の数。
【図３】４および３パラメータ計算を使用する、ＨＣＭＶ複製に対するＪＱ１のＩＣ５０を示す。
【図４】ＪＱ１は、ＨＣＭＶ後期タンパク質の蓄積を穏やかに阻害するにすぎないことを示す。
【図５】ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染線維芽細胞の透過型電子顕微鏡写真を示す。
【図６】ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の代表例はＨＣＭＶ感染および伝播を阻害することを示す。
【図７】ＨＣＭＶ実験室および臨床株に対する、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の代表的なインビトロ用量−応答曲線を示す。
【図８】ＢＥＴブロモドメイン阻害剤および現在ＦＤＡに認可されているＣＭＶ抗ウイルス薬の代表的なインビトロ用量−応答曲線を示す。
【図９】ウイルス粒子の放出により決定される、ＨＣＭＶ実験室および臨床株のＢＥＴブロモドメイン阻害剤に対する感受性を示す（培養上清のＴＣＩＤ５０アッセイ）。
【図１０】現在のＣＭＶ抗ウイルス薬（ガンシクロビル、レテルモビル、またはシドフォビル）または代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ１、Ｉ−ＢＥＴ７６２、またはＯＴＸ−０１５）の添加時間のＨＣＭＶ複製に対する効果を示す。
【図１１】代表的なブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ−１ありまたはなしでのＨＣＭＶ臨床株感染線維芽細胞の透過型電子顕微鏡写真を示す。
【図１２】代表的なブロモドメイン阻害剤（ＪＱ−１）は、ＨＣＭＶ感染により誘導されるグルタミン取り込みおよび代謝に関与する遺伝子の転写を阻害することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
略語
ＡＣ：細胞質構築コンパートメント
ＢＥＴ：ブロモドメインアンドエクストラターミナル（ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  ｅｘｔｒａ  ｔｅｒｍｉｎａｌ）
ＢＲＤ：ブロモドメイン
ＣＭＶ：サイトメガロウイルス
Ｃｙｔ：細胞質
ＤＰＩ：感染後日数
ＧＦＰ：緑色蛍光タンパク質
ＧＦＰＵ：ＧＦＰユニット
ＥＭ：電子顕微鏡法
ＨＣＭＶ：ヒトサイトメガロウイルス
ＨＦＦ：ヒト包皮線維芽細胞
ｈｐｉ：感染後時間
ＩＣ：抑制濃度
ＭＯＩ：感染多重度
Ｎｕｃ：核
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＴＣＩＤ：組織培養感染量
【００３６】
方法
本明細書で記載される方法および組成物は当業者によく知られている研究室技術を利用し、研究室マニュアル、例えば下記において見出すことができる：Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ３ｒｄ  ｅｄ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  ２００１；  Ｓｐｅｃｔｅｒ，  Ｄ．  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  １９９８；  Ｎａｇｙ，  Ａ．，  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  ２００３およびＨａｒｌｏｗ，  Ｅ．，  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  １９９９。医薬品の投与方法および投与レジームは、当業者によく知られた薬理学の標準原理に従い、標準参照テキスト、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．  １９ｔｈ  ｅｄ．  １９９５）；  Ｈａｒｄｍａｎ，  Ｊ．Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  １９９６；およびＲｏｗｅ，  Ｒ．Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，  ２００３により提供される方法を用いて決定することができる。この説明および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別様に示されない限り、同様に複数の形態も含むことが意図される。
【００３７】
実施例
実施例で提供される説明を含む本教示は、いずれの特許請求の範囲または態様の範囲も制限することを意図しない。過去形で特定的に示されない限り、実施例は、予言的または実際の実施例とすることができる。下記非限定的な例は、さらに本教示を説明するために提供される。当業者は、本開示を考慮すると、多くの変更が、開示された特定の実施形態において可能であり、依然として、本教示の精神および範囲から逸脱せずに同様または類似の結果が得られることを認識するであろう。
【００３８】
実施例１
この実施例はＨＣＭＶ細胞は（＋）−ＪＱ−１処理で「巨細胞」形態を損失し、死滅することを証明する。
【００３９】
これらの実験では、ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）を、ＨＣＭＶ、ＡＤ１６９株に、３の感染多重度（ＭＯＩ）で、ＪＱ１（５００ｎｍ）ありまたはなしで感染させた。培地を２４時間毎に交換しＪＱ１の濃度を維持した。感染細胞を、位相差または蛍光顕微鏡法により感染後７２または９６時間に（ｈｐｉ）検査した。「巨大」細胞はより大きなサイズを示し、特徴的な核内、均質、好酸球性封入体を有し、これは細胞の核全体を占める可能性がある。ＪＱ１なしでの感染後７２時間には、ＨＦＦ細胞は「巨細胞」形態を示した（図１Ａ）。一方、ＪＱ１存在下での感染後７２時間には、ＨＦＦ細胞は「巨細胞」形態を損失し、死細胞の蓄積が存在した（図１Ａ）。ＪＱ１なしでの感染後９６時間には、ＨＦＦ細胞は「巨細胞」形態を示した（図１Ｂ）。ＪＱ１存在下での感染後９６時間には、ＨＦＦ細胞「巨細胞」形態を損失し、感染後７２時間と比べて浮遊死細胞のより多くの蓄積が存在した（図１Ｂ）。これらのデータは、ＪＱ１処理ではＨＣＭＶ感染細胞は「巨細胞」形態を損失し、死滅することを証明する。理論により制限されないが、巨細胞の損失は、ＨＣＭＶの脂質生合成が破壊されていることを示唆する。
【００４０】
実施例２
この実施例は、代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤ＪＱ１は、ＨＣＭＶウイルス子孫の生成を阻害することを証明する。
【００４１】
この実験では、発明者らはＴＣＩＤ５０アッセイを使用して、ＨＣＭＶ−感染細胞から放出された培養上清中の感染ウイルス粒子の量を決定した。ＨＦＦを、ＨＣＭＶ、ＡＤ１６９株に、３のＭＯＩで、異なる濃度のＪＱ１の存在下で感染させた。培地を２４時間毎に交換し、ＪＱ１の濃度を維持した。感染後５日（図２Ａ）および６日（図２Ｂ）（ＤＰＩ）に、感染培地を収集し、培地中のウイルス子孫の力価を、ＴＣＩＤ５０アッセイにより、Ｐｅｒｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１により記載されるように決定した。検出限界は、点線により示される（図２）。
【００４２】
感染後５日に、１２５ｎＭ用量のＪＱ１はウイルス力価をおよそ１０００倍だけ低減させた（図２Ａ）。ＪＱ１の濃度を２５０ｎＭ用量まで増加させると、さらにウイルス力価が低減し、５００ｎＭ用量のＪＱ１では、ウイルス力価は検出不能となった。感染後６日では、１２５ｎＭ用量のＪＱ１はウイルス力価を１０００倍超低減させた（図２Ｂ）。ウイルス力価は２５０ｎＭおよび５００ｎＭ用量のＪＱ１で、感染後６日、検出不能となった（図２Ｂ）。このデータは、ＪＱ１はＨＣＭＶ複製を阻害することを証明する。
【００４３】
ＢＥＴブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ−１の処理で、上清中のウイルス子孫は劇的に低減した。理論により制限されないが、これにより、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤は、細胞媒介性ＨＣＭＶ感染だけでなく、ウイルス粒子の放出もブロックするという証拠が提供される。
【００４４】
実施例３
この実施例は、代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤ＪＱ１のＨＣＭＶ複製に対するＩＣ５０は、抗癌実験で使用される用量より低いことを証明する。
【００４５】
ＨＦＦを、ＨＣＭＶ、ＡＤ１６９株に、３のＭＯＩで、０−２０００ｎＭの範囲のＪＱ１の存在下で感染させた。培地を２４時間毎に交換し、ＪＱ１の濃度を維持した。感染後５日に、ウイルス力価を、ＴＣＩＤ５０により決定した。ＩＣ５０（５０％ウイルス複製抑制濃度）を、用量反応曲線から、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアを使用して計算した。４つのパラメータを使用して計算したＪＱ１のＩＣ５０は２１．６ｎＭであった（図３Ａ）。３つのパラメータを使用して計算したＪＱ１のＩＣ５０は１７．８ｎＭであった（図３Ｂ）。これらの計算したＩＣ５０値は、癌の治療において使用される公表された値よりずっと低い。
【００４６】
発明者らはＴＣＩＤ５０アッセイを使用して、３のＭＯＩでのＨＣＭＶ感染における（＋）−ＪＱ−１のＩＣ５０を定量した（図３）。ＩＣ５０は、蛍光減少アッセイにより決定したＩＣ５０より低い（表３）。理論により制限されないが、これにより、増殖性ウイルス粒子の放出は、細胞間媒介性ウイルス伝播よりも、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤に対してより感受性が高いことが示唆される。理論により制限されないが、これらの実験結果は、ＨＣＭＶ感染患者の全身性ウイルス血症の制御に対する作用様式および利点を提供する。
【表３】
2016510039.tif 000011
【００４７】
実施例４
この実施例は、ＪＱ１は、高い用量であっても、ＨＣＭＶ後期タンパク質の蓄積を穏やかに阻害することを証明する。
【００４８】
方法は、Ｐｅｒｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１により記載されている通りである。ＨＦＦを、ＨＣＭＶ、ＡＤ１６９株に、３のＭＯＩで異なる濃度のＪＱ１の存在下で感染させた。培地を２４時間毎に交換しＪＱ１の濃度を維持した。細胞を感染後２４、４８および７２時間に収集した。ＨＣＭＶタンパク質、前初期タンパク質（ＩＥ１）、初期タンパク質（ＵＬ６９）、および後期タンパク質（ｐｐ７１、ｐｐｌ５０およびｐｐ２８）を、免疫ブロット分析により決定した（図４）。
【００４９】
理論により制限されないが、ウイルスタンパク質発現プロファイル（図４）は、ＨＣＭＶ感染のＢＥＴブロモドメイン阻害剤による阻害は主に、ウイルス遺伝子発現を制御することにより媒介されないという証拠を提供する。この阻害は他のヘルペスウイルス、例えばＥＢＶ、γヘルペスウイルスの研究における所見とは異なる（Ｐａｌｅｒｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。（ＣＭＶはβヘルペスウイルスである）。
【００５０】
実施例５
この実施例は、代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ−１ありまたはなしでの、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染線維芽細胞の透過型電子顕微鏡写真を示す（図５）。
【００５１】
これらの実験では、ＨＦＦを、ＡＤ１６９株に３のＭＯＩでＪＱ１（５００ｎＭ）ありまたはなしで感染させた。培地を２４時間毎に交換し、ＪＱ１の濃度を維持した。７２ｈｐｉで、細胞を収集し、固定し、透過型電子顕微鏡法により分析した。
【００５２】
図５の電子顕微鏡写真は、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ−１）は感染ウイルス粒子の産生をブロックするという証拠を提供する。構築コンパートメントは処理では示されなかった。カプシドは核から放出されなかった。わずかなカプシドしか核では見られなかったが、そのほとんどは核Ｂカプシドであり、それらはウイルスＤＮＡを含んでいない。よって、理論により制限されないが、主要欠陥は核内でのＤＮＡ含有（成熟）カプシドの形成または核から細胞質へのカプシド放出の工程で起こり得る。
【００５３】
核内では：Ａカプシドは足場ならびにウイルスＤＮＡを欠いており、不完全なウイルスＤＮＡカプシド形成に起因する可能性がある。Ｂカプシドは足場を含むが、ウイルスＤＮＡを欠く。理論により制限されないが、それらは、不完全なカプシドの形成またはＤＮＡカプシド形成に起因する可能性がある。ＣカプシドはウイルスＤＮＡを含み、足場を欠き、それらは成熟の過程でヌクレオカプシドを表し得る。
【００５４】
細胞質では：濃密体はｐｐ６５外被タンパク質を主構成要素として有する非感染性のカプシドなし粒子である。非感染性のエンベロープを持った粒子（ＮＩＥＰ）は、Ｂカプシドが成熟すると、産生させることができる。感染ウイルス粒子（ビリオン）は、Ｃカプシドが成熟すると産生させることができ、カプシドに包まれたウイルスＤＮＡを含む。
【００５５】
実施例６
この実施例は、ブロモドメイン阻害剤がＨＣＭＶ感染および伝播を阻害することを示す。
【００５６】
ＨＦＦ細胞を、ＨＣＭＶ実験室株、ＡＤ１６９−ＧＦＰに、０．５のＭＯＩで感染させた。ウイルス吸着後、ウイルス接種材料を、個々のＢＥＴブロモドメイン阻害剤を含む新鮮培地と置き換え、続いて、連続２倍希釈した。培地を２４時間毎に交換し、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の濃度を維持した。感染細胞を、位相差または蛍光顕微鏡法（Ｌｅｉｃａ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）により、感染後１０日に（ｄｐｉ）検査した。
【００５７】
図６は、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の処理は、ＨＣＭＶウイルス感染の伝播をブロックすることを示す。ＧＦＰ−蛍光画像は、ＢＥＴブロモドメイン処理は、ＨＣＭＶウイルス感染（ウイルス発現ＧＦＰに示される）を低減させたという証拠を提供する。明視野画像は、これらの実験におけるＢＥＴブロモドメイン阻害剤の濃度は、１０日処理後であっても、正常細胞の生存率に影響しないという証拠を提供する。これは、個々のＢＥＴブロモドメイン阻害剤の研究に関する前の文献報告と矛盾する。この実験で使用される濃度は個々の研究で使用されるものと同様であり、またはそれより低い：Ｉ−ＢＥＴ１５１（Ｄａｗｓｏｎ，  Ｍ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１）、Ｉ−ＢＥＴ７６２（Ｄａｗｓｏｎ，  Ｍ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１およびＮｉｃｏｄｅｍｅ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０）、ＲＶＸ−２０８（Ｂａｉｌｅｙ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０）、ＰＦＩ−１（Ｐｉｃａｕｄ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１３）。
【００５８】
実施例７
この実施例は、ＨＣＭＶ実験室および臨床株に対する、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の代表的なインビトロ用量−応答曲線を示す。
【００５９】
ＨＣＭＶおよび臨床株の用量−応答曲線（図７）を、Ｌｉｓｃｈｋａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０により記載される、ＧＦＰに基づく蛍光減少アッセイにより決定した。標準アッセイでは、ＨＦＦ細胞を黒色９６−ウェルプレートで培養し（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）、組換え実験室適応株ＡＤ１６９−ＧＦＰ（ＭＯＩ０．３）または組換え臨床株ＴＲ−ＧＦＰ（ＭＯＩ０．３）のいずれかに感染させた。ウイルス吸着後、ウイルス接種材料を、個々のブロモドメイン阻害剤を含む２００μｌ培地と置き換え、続いて、連続２倍希釈した。薬物濃度を少なくとも２組で試験し、２４時間毎に置き換えられた培地により薬物濃度を維持した。プレートを、３７Ｃで７−８日間インキュベートした。培地を、２００μｌのＰＢＳで置き換え、ＧＦＰユニット（ＧＦＰＵ）を、蛍光検出器（ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１、ＵＳＡ）により決定した。薬物効果を、薬物がない場合に決定されたＧＦＰＵと比較した、各薬物濃度の存在下でのＧＦＰＵの低減パーセンテージとして計算した。用量−応答曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＵＳＡ）を使用して計算した。
【００６０】
この実験では、（＋）−ＪＱ−１の立体異性体、（−）−ＪＱ−１を対照として使用した。発明者らは、実験室株（ＡＤ１６９−ＧＦＰ）および臨床株（ＴＲ−ＧＦＰ）の両方を試験した。実験室株および臨床株の両方において、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤は、図７に示されるように、ＨＣＭＶ感染をブロックした。
【００６１】
実施例８
この実施例はＢＥＴブロモドメイン阻害剤および現在ＦＤＡに認可されているＣＭＶ抗ウイルス薬の代表的なインビトロ用量−応答曲線を示す。
【００６２】
ＨＣＭＶおよび現在ＦＤＡに認可されているＣＭＶ抗ウイルス薬の用量−応答曲線（図８）を、Ｌｉｓｃｈｋａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０により記載されるＧＦＰに基づく蛍光減少アッセイにより決定した。標準アッセイでは、ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）を黒色９６−ウェルプレートで培養し（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）、組換え実験室適応株ＡＤ１６９−ＧＦＰ（ＭＯＩ０．３）に感染させた。ウイルス吸着後、ウイルス接種材料を、個々のブロモドメイン阻害剤またはＦＤＡに認可されたＣＭＶ抗ウイルス薬を含む２００μｌ培地と置き換え、続いて、連続２倍希釈した。薬物濃度を少なくとも２組で試験し、薬物濃度を２４時間毎に置き換えられた培地により維持した。プレートを、３７Ｃで７−８日間インキュベートした。培地を、２００μｌのＰＢＳで置き換え、ＧＦＰユニット（ＧＦＰＵ）を、蛍光検出器（ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１、ＵＳＡ）により決定した。薬物効果を、薬物がない場合に決定されたＧＦＰＵと比較した、各薬物濃度の存在下でのＧＦＰＵの低減パーセンテージとして計算した。用量−応答曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＵＳＡ）を使用して計算した。
【００６３】
この実験では、我々はＩ−ＢＥＴ７６２の立体異性体、Ｉ−ＢＥＴ７６８を対照として使用した。発明者らは、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の用量−応答曲線を、現在ＦＤＡに認可されている／評価中のＣＭＶ抗ウイルス薬と比較した。図８は濃度および用量−応答に関する、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤およびＣＭＶ抗ウイルス薬の比較を示す。
【００６４】
実施例９
この実施例はＨＣＭＶ実験室および臨床株の、線維芽細胞における、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤および現在ＦＤＡに認可されているＣＭＶ抗ウイルス薬に対する感受性を示す。
【００６５】
これらの実験では、発明者らは個々のＢＥＴブロモドメイン阻害剤のＨＣＭＶ感染に対するＩＣ５０およびＩＣ９０値を、蛍光減少アッセイを使用して決定した（図９；表３）。ＩＣ５０およびＩＣ９０値（ＧＦＰＵの５０％および９０％減少を生成させる薬物濃度）をＬｉｓｃｈｋａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０により記載される、ＧＦＰに基づく蛍光減少アッセイにより決定した。標準アッセイでは、ＨＦＦ細胞を黒色９６−ウェルプレートで培養し（Ｃｏｍｉｎｇ、ＵＳＡ）、組換え実験室適応株ＡＤ１６９−ＧＦＰ（ＭＯＩ０．３）またはＴＲ−ＧＦＰ（ＭＯＩ０．３）に感染させた。ウイルス吸着後、ウイルス接種材料を、個々のブロモドメイン阻害剤またはＦＤＡに認可されたＣＭＶ抗ウイルス薬を含む２００μｌ培地と置き換え、続いて、連続２倍希釈した。薬物濃度を少なくとも２組で試験し、薬物濃度を２４時間毎に置き換えられた培地により維持した。プレートを、３７Ｃで７−８日間インキュベートした。培地を、２００μｌＰＢＳで置き換え、ＧＦＰユニット（ＧＦＰＵ）を、蛍光検出器（ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１、ＵＳＡ）により決定した。ＩＣ５０およびＩＣ９０値を、非線形回帰曲線フィットを使用して可変勾配（４パラメータ）を用いて計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６を分析のために使用した。
【００６６】
測定された値はＢａｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０；  Ｄａｗｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１；  Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ、Ｐ．、ｅｔ  ａｌ．  ２０１０；  Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１３；  Ｎｉｃｏｄｅｍｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０；  Ｐｉｃａｕｄ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１３；およびＺｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１におけるこれらの化合物のものより低い。
【００６７】
実施例１０
この実施例は、代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ１の処理による、ＨＣＭＶ感染のＭＯＩ依存性を示す。
【００６８】
ＩＣ５０およびＩＣ９０値（ＧＦＰＵの５０％および９０％減少を生成させる薬物濃度）を、Ｌｉｓｃｈｋａ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０により記載される、蛍光減少アッセイにより決定した（表４）。標準アッセイでは、ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）を黒色９６−ウェルプレートで培養し（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）、ＡＤ１６９−ＧＦＰの組換え実験室適応株に様々なＭＯＩで感染させ、（＋）−ＪＱ−１処理のＭＯＩ依存性を比較した（１、０．３、０．１、および０．０３のＭＯＩ）。ウイルス吸着後、ウイルス接種材料を、個々のブロモドメイン阻害剤を含む２００μｌ培地と置き換え、続いて、連続２倍希釈した。薬物濃度を少なくとも２組で試験し、薬物濃度を２４時間毎に置き換えられた培地により維持した。プレートを、３７Ｃで７−８日間インキュベートした。培地を、２００μｌのＰＢＳで置き換え、ＧＦＰユニット（ＧＦＰＵ）を、蛍光検出器（ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１、ＵＳＡ）により決定した。ＩＣ５０およびＩＣ９０値を、非線形回帰曲線フィットを使用し、可変勾配（４パラメータ）を用いて計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を分析のために使用した。
【００６９】
【表４】
2016510039.tif 000012
【００７０】
この実験は、ＩＣ５０結果を通して、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ−１によるＨＣＭＶ感染のブロッキングは、公知のＣＭＶ抗ウイルス薬に比べて、ＭＯＩ依存性がより低いことを示す。ＢＥＴブロモドメイン阻害剤はＭＯＩ依存性がより低いので、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤は、現在のことろ、感染を抑制するのに高い量のＣＭＶ抗ウイルス薬を必要とし、重篤な薬物毒性問題を伴う、重篤なＨＣＭＶウイルス血症を治療するのに使用することができる。
【００７１】
実施例１１
この実施例は、ウイルス粒子の放出により決定される、ＨＣＭＶ実験室および臨床株のＢＥＴブロモドメイン阻害剤に対する感受性を示す（培養上清のＴＣＩＤ５０アッセイ）。
【００７２】
これらの実験では、発明者らはＴＣＩＤ５０アッセイを使用して、ＨＣＭＶ実験室適応および臨床株の両方において、（＋）−ＪＱ−１のＩＣ５０を定量した（図９；表５）。ＨＦＦを、実験室株ＡＤ１６９−ＧＦＰまたは実験室株ＦＩＸＧＦＰ＆Ｔｏｌｅｄｏに、３のＭＯＩで、０−２，０００ｎＭの範囲の（＋）−ＪＱ−１の存在下で感染させた。培地を２４時間毎に交換しＪＱ１の濃度を維持した。５ｄｐｉで、ウイルス力価を、ＴＣＩＤ５０により決定した。ＩＣ５０（５０％ウイルス複製抑制濃度）を用量反応曲線から、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアの助けにより計算した。
【００７３】
理論により制限されないが、低いＩＣ５０値は、増殖性ウイルス粒子の放出はウイルス株に関係なく、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤の影響を受けやすいことを示唆する。
【表５】
2016510039.tif 000013
【００７４】
実施例１２
この実施例は、現在のＣＭＶ抗ウイルス薬（ガンシクロビル、レテルモビル、またはシドフォビル）または代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ１、Ｉ−ＢＥＴ７６２、またはＯＴＸ−０１５）の添加時間のＨＣＭＶ複製に対する効果を示す。
【００７５】
方法は、Ｌｉｓｃｈｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０により記載される通りである。ＨＦＦ細胞を、ＨＣＭＶ実験室株ＡＤ１６９−ＧＦＰに感染させ、固定したウイルス抑制濃度（約６．５×ＩＣ５０）の、現在のＦＤＡに認可されている／評価中のＣＭＶ抗ウイルス薬（ガンシクロビル、レテルモビル、シドフォビル）またはブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ−１、ＩＢＥＴ７６２、ＯＴＸ−０１５）で、感染後の示された時間に（ｈｐｉ）処理した。７日後、細胞上清をＰＢＳで置き換え、ＧＦＰユニットを決定した。化合物処理細胞中のＧＦＰユニットを、未処理細胞中のものと比較し、活性のパーセンテージを図１０でプロットする。結果は、３つの実験に対する平均である。エラーバーは標準偏差を示す。
【００７６】
薬物アッセイの追加により、代表的なブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ−１／ＯＴＸ−０１５／Ｉ−ＢＥＴ７６２）は、感染後の時間に関係なく、ＨＣＭＶ感染をブロックすることが示される（図１０）。ウイルス感染を制御するために必要とされる用量は低く（６．５×ＩＣ５０は、ウイルス感染を効率的に制御した）。対照的に、現在のＣＭＶ抗ウイルス薬（ガンシクロビル、シドフォビル）は、ウイルス感染を制御するために少なくとも１０×ＩＣ５０を必要とする。レテルホビル（Ｌｅｔｅｒｆｏｖｉｒ）は、感染後４８時間前に添加されると、ウイルス感染を制御することができるが、しかしながら、レテルホビル（Ｌｅｔｅｒｆｏｖｉｒ）は、感染後４８時間後では、ウイルス感染を制御することができない。ＢＥＴブロモドメイン阻害剤はウイルス感染の制御に対してより多くのフレキシビリティを提供する。
【００７７】
実施例１３
この実施例は、代表的なＢＥＴブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ−１ありまたはなしでの、ＨＣＭＶ臨床株感染線維芽細胞の透過型電子顕微鏡写真を示す。
【００７８】
ＨＦＦを、ＨＣＭＶ臨床株ＴＲ−ＧＦＰに３のＭＯＩで、（＋）−ＪＱ−１（２５０ｎＭ）ありまたはなしで感染させた。培地を２４時間毎に交換し、ＪＱ１の濃度を維持した。７２ｈｐｉに、細胞を収集し、固定し、透過型電子顕微鏡法により分析した。
【００７９】
ＥＭ分析（図１１）は、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ−１）はＨＣＭＶの感染ウイルス粒子の産生を、臨床株であっても、ブロックするという証拠を提供する。低用量の（（＋）−ＪＱ−１を使用した（２５０ｎＭ、ΜΟＩによって約５−６．５のＩＣ５０）。表現型は、カプシドは核から放出されなかった、わずかなカプシドしか核内では見られず、それらのほとんどは核Ｂカプシドであり、これらはウイルスＤＮＡを含まないことを示した。この濃度下では、ほとんどのウイルス子孫産生および細胞間ウイルス伝播は阻害される（表３）。しかしながら、ウイルスタンパク質発現プロファイルに基づき、ウイルスタンパク質のクラスは普通に発現される（図４）。理論により制限されないが、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤のＨＣＭＶ感染に対する作用様式は、ウイルス遺伝子発現の制御以外の何かにより媒介される。
【００８０】
実施例１４
この実施例は、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ−１）は、ＨＣＭＶ感染により誘導されるグルタミン取り込みおよび代謝に関与する遺伝子の転写を阻害することを示す。
【００８１】
ＨＦＦ細胞を、実験室株ＡＤ１６９−ＧＦＰに、３のＭＯＩでモック感染またはＨＣＭＶ感染させた（図１２Ａ）。ＨＦＦ細胞を、ＡＤ１６９−ＧＦＰに３のＭＯＩで、２５０μＭ（＋）−ＪＱ−１ありまたはなしで感染させた（図１２Ｂ）。（Ａ）および（Ｂ）の両方からの細胞を４８ｈｐｉに収集し、全ＲＮＡをカラムに基づくＲＮＡ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して抽出した。ＲＮＡ完全性をＮａｎｏ−ｄｒｏｐ分光計（ＮａｎｏＤｒｏｐ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）を用いて評価した。メッセンジャーＲＮＡ精製、断片化、シークエンシングライブラリの作成およびシークエンシングを実施した。２つのｃ−Ｍｙｃ誘導性遺伝子、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）および溶質輸送体ファミリー３８メンバー５（ＳＬＣ３８Ａ５）の発現プロファイル差を、ＥｄｇｅＲ手順を使用して決定した。
【００８２】
ＦＡＳＮおよびＳＬＣ３８Ａ５は脂質生合成およびグルコース／グルタミン栄養分経路に関与する２つの遺伝子である。これらのどちらもｃ−ｍｙｃにより誘導され、ＨＣＭＶ感染で上方制御されることが示されている（（Ｗｉｓｅｅｔａｌ．，２００８）。発明者のＲＮＡ−ｓｅｑ分析は、どちらの遺伝子もＨＣＭＶ感染により上方制御されることを示す（図１２Ａ）。しかしながら、上方制御は、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤（（＋）−ＪＱ−１）により反転させられる（図１２Ｂ）。脂質生合成およびグルタミン関連代謝経路はブロックされる。理論により制限されないが、これは、ＨＣＭＶが「巨細胞」を処理で損失する理由に対する説明となる（図１）。エネルギー供給の不足は、ウイルスタンパク質発現への影響がより小さい場合であっても、ＨＣＭＶウイルス粒子の成熟をブロックする（それは脂質生合成／グルタミンｇｌｕ−関連経路により変化されることがより少ない）。
【００８３】
ＢＥＴブロモドメイン阻害剤は、ｃ−ｍｙｃの下流シグナル伝達をブロックすることが知られている（Ｄｅｌｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。ＢＥＴタンパク質／ｃ−ｍｙｃをウイルス感染に対して標的させることによる、脂質生合成またはグルタミン代謝のブロッキングは以前知られていない。ＨＣＭＶ阻害のためにｃ−ｍｙｃおよび下流脂質生合成／グルコース−グルタミン栄養分経路をブロックするためのＢＥＴブロモドメイン阻害剤の使用は以前知られていない。
【００８４】
ＫＳＨＶ、ＤＮＡウイルスはまた、ヘルペスウイルスファミリーに属し、潜伏ウイルス感染中に脂質生合成を誘導する（Ｄｅｌｇａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１２）。しかしながら、溶解感染中、ＫＳＨＶは、脂質生合成マスター遺伝子ｃ−ｍｙｃを抑制し、急性／溶解感染を促進する必要がある（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１４）。
【００８５】
ＢＲＤ４は、必要に応じて、Ｂ細胞におけるその不死化のためのある一定のＥＢＶ遺伝子発現の転写を促進することが報告された。ＪＱ−１の処理はある一定の遺伝子プロモーターの活性をブロックした（Ｐａｌｅｒｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。しかしながら、これらの遺伝子はＢ細胞におけるその長期潜伏／発癌のためにＥＢＶにおいてユニークであり、ヘルペスウイルス間では保存されない。理論により制限されないが、我々の実施例は、ＢＥＴタンパク質は、ＨＣＭＶ遺伝子発現の調節においてほとんど役割を果たさないことを示した（図４）。理論により制限されないが、ＢＥＴブロモドメイン阻害剤はＣＭＶ駆動脂質生合成および代謝経路を調節解除することによりＨＣＭＶ感染をブロックする。
【００８６】
実施例１５
この実施例は、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の複製を阻害する方法を示す。
【００８７】
患者はＨＣＭＶに感染している。医療関係者は、治療的有効量のブロモドメイン阻害剤（＋）−ＪＱ１を腹腔内注射により投与する。患者のＨＣＭＶ力価は減少する。
【００８８】
実施例１６
この実施例は、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の複製を阻害する方法を示す。
【００８９】
患者はＨＣＭＶに感染している。医療関係者は、１９μΜのブロモドメイン阻害剤ＲＶＸ−２０８を提供するように計算された量を腹腔内注射により投与する。患者のＨＣＭＶ力価は減少する。
【００９０】
実施例１７
この実施例は、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法を示す。
【００９１】
患者はＨＣＭＶに感染している。医療関係者は、治療的有効量のブロモドメイン阻害剤ＯＴＸ−１５を経口投与により投与する。患者のＨＣＭＶ力価は減少する。
【００９２】
実施例１８
この実施例は、被験体においてヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染を治療する方法を示す。
【００９３】
患者はＨＣＭＶに感染している。医療関係者は、０．５μΜのブロモドメイン阻害剤ＧＳＫ１２１０１５１を提供するように計算された量を腹腔内注射により投与する。患者のＨＣＭＶ力価は減少する。
【００９４】
実施例１９
この実施例は、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染の治療のためのブロモドメイン阻害剤の使用を示す。
【００９５】
患者はＨＣＭＶに感染している。医療関係者は、１μΜのブロモドメイン阻害剤ＧＳＫ５２５７６２Ａを提供するように計算された量を腹腔内注射により投与する。患者のＨＣＭＶ力価は減少する。
【００９６】
実施例２０
この実施例は、インビトロでヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）複製を阻害する方法を示す。
【００９７】
ＨＣＭＶに感染した宿主細胞を含む細胞培養を提供する。実験室技術者は、宿主細胞を１μΜのブロモドメイン阻害剤ＰＦＩ−１を提供するように計算された量と接触させる。
【００９８】
実施例２１
この実施例は、培養初代ヒト線維芽細胞においてブロモドメイン阻害剤の抗ＨＣＭＶ活性を示す。これらの細胞においてＨＣＭＶ複製を阻害する濃度は、表６で報告される。細胞毒性はこれらの有効濃度では観察されなかった。
【表６】
2016510039.tif 000014
【００９９】
これらのデータは、ブロモドメイン阻害剤が、細胞毒性を引き起こさずに、ＨＣＭＶ複製を阻害することができることを示す。
【０１００】
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Ｗｏｌｍｅｒ−Ｓｏｌｂｅｒｇ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ？  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１３  Ｎｏｖ  １５；１３３（１０）：２３５１−６１。
Ｙｏｕ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｏｖｉｎｅ  ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  Ｅ２  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｗｉｔｈ  Ｂｒｄ４  ｔｅｔｈｅｒｓ  ｔｈｅ  ｖｉｒａｌ  ＤＮＡ  ｔｏ  ｈｏｓｔ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ．  Ｃｅｌｌ．  ２００４  Ａｐｒ  ３０；  １１７（３）：３４９−６０。
Ｙｏｕ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｋａｐｏｓｉ’ｓ  ｓａｒｃｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｌａｔｅｎｃｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｒｄ４  ｏｎ  ｈｏｓｔ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ２００６  Ｓｅｐ；８０（１８）：８９０９−１９。
Ｙｕ，  Ｙ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｖｉｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１１  Ｊｕｌ；１９（７）：３６０−７。
Ｙｕ，  Ｙ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅ−ｌｉｋｅ  ｌｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ２０１２  Ｍａｒ，８６（６）：２９４２−９。
Ｚｈａｎｇ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２０１２  Ａｕｇ  ２６；３（８）：  １６７−７４。
Ｚｈｕ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｔｅｎｔ  ＨＩＶ−１  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＲＤ４．  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．  ２０１２  Ｏｃｔ  ２５；２（４）：８０７−１６。
Ｚｕｂｅｒ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  ＲＮＡｉ  ｓｃｒｅｅｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ｂｒｄ４  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．  Ｎａｔｕｒｅ．  ２０１１  Ａｕｇ  ３；４７８（７３７０）：５２４−８。
【０１０１】
本出願で引用される刊行物は全て、各々個々の刊行物、特許、特許出願または他の参考文献が、参照により組み込まれることが特定的に、かつ個々に示されたかのように、本明細書でその全体が参照により組み込まれる。
【図１】
2016510039.tif 000019
【図２】
2016510039.tif 000020
【図３】
2016510039.tif 000021
【図４】
2016510039.tif 000022
【図５−１】
2016510039.tif 000023
【図５−２】
2016510039.tif 000024
【図６】
2016510039.tif 000025
【図７】
2016510039.tif 000026
【図８】
2016510039.tif 000027
【図９】
2016510039.tif 000028
【図１０】
2016510039.tif 000029
【図１１】
2016510039.tif 000030
【図１２】
2016510039.tif 000031
【国際調査報告】
2016510039.tif 000032
2016510039.tif 000033
2016510039.tif 000034