(57)【要約】本発明は、式Ｉの新規大環状化合物及びそれらの新たな治療剤としての使用に関し、例えば、  対象におけるプロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する方法に使用される新規化合物に関する。【選択図】なし
2016501848.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体
【化１】
2016501848.tif 000028
［式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである］。
【請求項２】
ＹがＣ（＝Ｏ）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が以下の立体化学を有する、請求項１又は２に記載の化合物。
【化２】
2016501848.tif 000029
【請求項４】
Ｒ１が、ロイシン若しくはフェニルアラニン側鎖又はこれらの側鎖の誘導体を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＢ（ＯＨ）２である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がＣ（＝Ｏ）Ｈである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｗが以下の立体化学を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【化３】
2016501848.tif 000030
【請求項８】
Ｘが原子なしであり、Ｗが原子なしであり、Ｒ３が（ＣＨ２）９−１３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが原子なしであり、Ｗが原子なしであり、Ｒ３が（ＣＨ２）１１である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが原子なしであり、Ｗが原子なしであり、Ｒ３が（ＣＨ２）２−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘが原子なしであり、Ｙが原子なしであり、Ｒ３が、１つ又は（ＣＨ２）６−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）８−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）若しくは（ＣＨ２）４−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｘが原子なしであり、Ｙが原子なしであり、Ｒ３が（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｚが、ヘテロシクロペンチル、ヘテロシクロヘキシイル（hexcyl）、５員複素環式芳香族環又は６員複素環式芳香族環である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
化合物が以下の式のうちの１つを有し、
【化４】
2016501848.tif 000031
式中、
Ａが、Ｏ、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ6であり、Ｒ6が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｂが、Ｏ、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ７であり、Ｒ７が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｃが、Ｓ、Ｏ、ＮＨ又はＮＲ８であり、Ｒ８が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｄが、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ９であり、Ｒ９が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｅが、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ１０であり、Ｒ１０が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｆが、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ１１であり、Ｒ１１が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｇが、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ１２であり、Ｒ１２が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシである
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
ＡがＣＨである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ＢがＣＨである、請求項１４又は１５に記載の化合物。
【請求項１７】
ＣがＮＨである、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
ＤがＣＨである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
ＥがＮである、請求項１４又は１８に記載の化合物。
【請求項２０】
ＦがＣＨである、請求項１４、１８又は１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
ＧがＮである、請求項１４又は１８〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｚがピロール環である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｚがピラジン環である、請求項１〜１４又は１８〜２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
化合物が、以下の式のうちの１つ及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を有する、請求項１に記載の化合物。
【化５】
2016501848.tif 000032
2016501848.tif 000033
【請求項２５】
プロテアーゼインヒビターとして使用される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
プロテアーゼがシステインプロテアーゼである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
システインプロテアーゼがカルパインである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
カルパインが、カルパインＩ及び／又はカルパインＩＩである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
化合物が２５０ｎＭ以下のＩＣ５０を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
以下の式のうちの１つの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体。
【化６】
2016501848.tif 000034
2016501848.tif 000035
【請求項３１】
プロテアーゼを阻害する方法であって、プロテアーゼを、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物に曝露することを含む方法。
【請求項３２】
プロテアーゼがインビボにある、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
医薬における、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３４】
治療有効量の請求項１〜２４のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項３５】
プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を対象において予防及び／又は治療する方法であって、治療有効用量の請求項１〜２４のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物を対象に投与することを含む方法。
【請求項３６】
疾患、状態又は状況が、システインプロテアーゼ活性の調節不全に関連する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
疾患、状態又は状況が、カルパイン活性の調節不全に関連する、請求項３５又は３６に記載の方法。
【請求項３８】
疾患、状態又は状況が、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離及び老視の１つ以上を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
疾患、状態又は状況が、炎症性の疾患、状態又は状況、免疫学的な疾患、状態又は状況、関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、胃腸系の炎症、潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病、心血管の疾患、状態又は状況、脳血管の疾患、状態又は状況、動脈性高血圧症、敗血症性ショック、虚血性又は出血性由来の心筋又は脳梗塞、虚血、血小板凝集につながる障害、中枢又は末梢神経系の障害、神経変性疾患、大脳又は脊髄外傷、くも膜下出血、てんかん、加齢、老人性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢神経障害、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、悪液質、繁殖性疾患、アテローム性動脈硬化症、狭窄の再発、聴力の損失、臓器移植、自己免疫性の疾患、状態又は状況、ウイルス性疾患、狼瘡、ＡＩＤＳ、寄生虫又はウイルス感染、糖尿病及びその合併症、多発性硬化症、癌、固形癌、血液由来の癌、悪性腫瘍、並びに多発性骨髄腫の１つ以上を含む、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離、老視、炎症性の疾患、状態又は状況、免疫学的な疾患、状態又は状況、関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、胃腸系の炎症、潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病、心血管の疾患、状態又は状況、脳血管の疾患、状態又は状況、動脈性高血圧症、敗血症性ショック、虚血性又は出血性由来の心筋又は脳梗塞、虚血、血小板凝集につながる障害、中枢又は末梢神経系の障害、神経変性疾患、大脳又は脊髄外傷、くも膜下出血、てんかん、加齢、老人性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢神経障害、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、悪液質、繁殖性疾患、アテローム性動脈硬化症、狭窄の再発、聴力の損失、臓器移植、自己免疫性の疾患、状態又は状況、ウイルス性疾患、狼瘡、ＡＩＤＳ、寄生虫又はウイルス感染、糖尿病及びその合併症、多発性硬化症、癌、固形癌、血液由来の癌、悪性腫瘍、並びに多発性骨髄腫を予防及び／又は治療する方法であって、治療有効用量の式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を対象に投与することを含み、
【化７】
2016501848.tif 000036
式中、
Ｒ１が、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２が、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４が、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚが、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙが、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５が、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗが、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３が、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘが、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである
方法。
【請求項４１】
プロテアーゼインヒビターを同定する方法であって、
（ｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を準備すること、
（ｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼを阻害する能力を決定すること、並びに
（ｉｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物をプロテアーゼインヒビターとして同定すること、
を含む方法。
【請求項４２】
プロテアーゼがシステインプロテアーゼを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
システインプロテアーゼがカルパインを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
カルパインが、カルパインＩ及び／又はカルパインＩＩを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
Ｐ１−Ｐ３大環状ペプチド模倣化合物が、式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を含み、
【化８】
2016501848.tif 000037
式中、
Ｒ１が、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２が、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４が、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚが、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙが、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５が、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗが、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３が、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘが、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである
請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤を同定する方法であって、
（ｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を準備すること、
（ｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する能力を決定すること、並びに
（ｉｉｉ）プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤としてＰ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を同定すること、
を含む方法。
【請求項４７】
疾患、状態又は状況が、カルパイン活性の調節不全に関連する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
疾患、状態又は状況が、カルパインＩ及び／又はカルパインＩＩ活性の調節不全に関連する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
疾患、状態又は状況が、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離又は老視を含む、請求項４７〜４８に記載の方法。
【請求項５０】
Ｐ１−Ｐ３大環状ペプチド模倣化合物が、式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を含み、
【化９】
2016501848.tif 000038
式中、
Ｒ１が、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２が、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４が、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚが、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙが、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５が、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗが、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３が、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘが、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである
請求項４６〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
実施例のいずれかを参照して実質的に前記されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項５２】
実施例のいずれかを参照して実質的に前記されている、大環状化合物。
【請求項５３】
実施例のいずれかを参照して実質的に前記されている、請求項１に記載の化合物の合成方法。
【請求項５４】
実施例のいずれかを参照して実質的に前記されている、大環状化合物の合成方法。
【請求項５５】
実施例のいずれかを参照して実質的に前記されている、プロテアーゼインヒビターを同定する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、大環状化合物、大環状化合物の使用及び大環状化合物のスクリーニングに関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテアーゼは、それらの触媒機能がタンパク質のペプチド結合を加水分解することであり、典型的には６つの幅広い群：セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ及びメタロプロテアーゼに分類される酵素群である。
【０００３】
プロテアーゼは、タンパク質の活性化、合成及び代謝回転を制御することにより、大部分の生理学的過程を何らかの方法で調節する。プロテアーゼ活性の調節不全は、多様な疾患又は望ましくない生理学的状態若しくは状況も引き起こしうる。このように、プロテアーゼは、これらの過程における重要な調節の役割のため、医療介入の重要な潜在的な標的を表す。
【０００４】
例えば、カルパインは、多種多様な生物学的過程の調節に関与するＣａ２＋依存性システインプロテアーゼである。カルパイン活性の上昇は、外傷性脳損傷、筋ジストロフィー及び白内障を含む多数の医学的状態に関係している。白内障の形成の場合、水晶体中の上昇したカルシウムレベル、およびその後のカルパインの過剰活性は、水晶体タンパク質の分解につながり、水晶体の不透明性、および最終的に失明をもたらす。
【０００５】
プロテアーゼの天然の基質を模倣する化合物が、潜在的な治療標的として調査されてきた。しかし、そのような化合物は、多数の欠点があるため、治療潜在性は限られている。これらの欠点の幾つかには、不十分な安定性、低い細胞透過性、低い可溶性、低い活性、不十分な選択性又は高い細胞毒性の１つ以上が含まれる。
【０００６】
したがって、プロテアーゼ活性を調節することに使用でき、かつ当該技術における１つ以上の問題に対処する及び／又は１つ以上の利点を提供する化合物を開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本開示は、大環状化合物、大環状化合物の使用及び新たな治療剤のための大環状化合物のスクリーニングに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示の特定の実施形態は、式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を提供し、
【０００９】
【化１】
2016501848.tif 000003
【００１０】
式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである。
【００１１】
本開示の特定の実施形態は、以下の式のうちの１つの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を提供する。
【００１２】
【化２】
2016501848.tif 000004
2016501848.tif 000005
【００１３】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム（proteosome）活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を対象（subject）において予防及び／又は治療する方法であって、治療有効用量の式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を対象に投与することを含む方法を提供し、
【００１４】
【化３】
2016501848.tif 000006
【００１５】
式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである。
【００１６】
本開示の特定の実施形態は、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離、老視、炎症性の疾患、状態又は状況、免疫学的な疾患、状態又は状況、関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、胃腸系の炎症、潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病、心血管の疾患、状態又は状況、脳血管の疾患、状態又は状況、動脈性高血圧症、敗血症性ショック、虚血性又は出血性由来の心筋又は脳梗塞、虚血、血小板凝集につながる障害、中枢又は末梢神経系の障害、神経変性疾患、大脳又は脊髄外傷、くも膜下出血、てんかん、加齢、老人性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢神経障害、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、悪液質、繁殖性疾患、アテローム性動脈硬化症、狭窄の再発、聴力の損失、臓器移植、自己免疫性の疾患、状態又は状況、ウイルス性疾患、狼瘡、ＡＩＤＳ、寄生虫又はウイルス感染、糖尿病及びその合併症、多発性硬化症、癌、固形癌又は血液由来の癌、悪性腫瘍、並びに多発性骨髄腫を予防及び／又は治療する方法であって、治療有効用量の式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を対象に投与することを含む方法を提供し、
【００１７】
【化４】
2016501848.tif 000007
【００１８】
式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである。
【００１９】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼインヒビターを同定する方法であって、
（ｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を準備すること、
（ｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼを阻害する能力を決定すること、並びに
（ｉｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物をプロテアーゼインヒビターとして同定すること、
を含む方法を提供する。
【００２０】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤を同定する方法であって、
（ｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を準備すること、
（ｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する能力を決定すること、並びに
（ｉｉｉ）プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤としてＰ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を同定すること、
を含む方法を提供する。
【００２１】
他の実施形態は、本明細書において開示される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
特定の実施形態が、以下の図面により例示される。以下の記載は特定の実施形態を記載する目的のためだけであり、記載に関して限定的であることを意図しないことも理解されるべきである。
【図１】図１は、６ａ（ＯＲＴＥＰ）の分子構造及び原子標識化スキーム（atom labelling scheme）を示す。置き換えた楕円形（Displacement ellipsoid）は、非Ｈ原子の確率が５０％の標識を示す。Ｈ原子は、任意の半径の小さな円形として描かれている。
【図２】図２（Ａ）は、ボルテゾミブ、ＭＧ１３２又は化合物１〜６に曝露されたＭＥＦｐ５３＋／＋又はｐ５３−／−の細胞生存率アッセイを示す。用量応答曲線が、付録図Ｓ３に提供されている。化合物１は、この系を使用してアッセイしなかった。図２（Ｂ）は、記載の濃度でＭＧ１３２により１６時間処理した後の、ＭＥＦｐ５３＋／＋又はｐ５３−／−におけるｐ５３タンパク質発現のウエスタンブロット分析を示す。β−チューブリンを負荷対照として使用する。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本開示は、大環状化合物、大環状化合物の使用及び大環状化合物のスクリーニングに関する。
【００２４】
本開示の特定の実施形態は、本明細書に記載されている大環状化合物を提供する。
【００２５】
特定の実施形態において、大環状化合物は、本明細書において「ペプチド模倣化合物」とも呼ばれるペプチド模倣体を含む。特定の実施形態において、大環状化合物は、Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を含む。
【００２６】
本開示の特定の実施形態は、式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を提供し、
【００２７】
【化５】
2016501848.tif 000008
【００２８】
式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである。
【００２９】
本明細書で使用されるとき、用語「天然又は非天然アルファ−アミノ酸の側鎖」は、式：ＮＨ２−ＣＨ（ＲＡ）−ＣＯＯＨの天然若しくは非天然アミノ酸及び／又はその誘導体における基ＲＡを意味する。
【００３０】
本明細書で使用されるとき、用語「天然アルファ−アミノ酸には、生物系における大部分のポリペプチドを含む２０個のＬ−アミノ酸（又はその残基）、例えば、アラニン（Ａｌａ）；アルギニン（Ａｒｇ）；アスパラギン（Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ａｓｐ）；システイン（Ｃｙｓ）；グルタミン（Ｇｌｎ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ）；グリシン（Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉｌｅ）；ロイシン（Ｌｅｕ）；リシン（Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐｒｏ）；セリン（Ｓｅｒ）；トレオニン（Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｔｒｐ）；チロシン（Ｔｙｒ）；及びバリン（Ｖａｌ）が含まれる。用語には、希なアミノ酸、例えば、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリシン、Ｎ−メチルリシン、３−メチルヒスチジン、デスモシン及びイソデスモシン、並びにタンパク質において見出されない天然に生じるアミノ酸（例えば、ガンマ−アミノ酪酸、ホモシステイン、ホモセリン、シトルリン、オルニチン、カナバニン、ジェンコル酸及びベータ−シアノアラニン）も含まれる。他の天然アミノ酸が考慮される。
【００３１】
官能性置換基、例えば、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシ、メルカプト、グアニジル、イミダゾリル又はインドリル基を特徴的な側鎖に含有する天然アルファ−アミノ酸には、アルギニン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、チロシン及びシステインが含まれる。
【００３２】
本明細書で使用されるとき、用語「非天然アルファ−アミノ酸」には、上記に列記された天然のアミノ酸以外の任意のアルファ−アミノ酸（又はその残基）が含まれる。非天然アミノ酸には、天然Ｌ−アミノ酸のＤ−異性体が含まれる。非天然アミノ酸には、Ｄ−フェニルアラニン、ノルロイシン、ヒドロキシプロリン、アルファ−カルボキシグルタミン酸及びピログルタミン酸も含まれるが、これらに限定されない。他のアミノ酸が考慮される。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される塩」には、本開示の化合物に存在しうる任意の塩基性部分の酸付加塩及び本開示の化合物に存在しうる任意の酸性部分の塩基付加塩が含まれる。そのような塩は、典型的には化合物を適切な有機若しくは無機の酸又は塩基と反応させることにより調製される。塩基性部分の薬学的に許容される塩の例には、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、乳酸塩及びフマル酸塩が含まれる。酸性部分の薬学的に許容される塩の例には、アンモニウム塩；ナトリウム塩及びカリウム塩のようなアルカリ金属塩；並びにカルシウム塩及びマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩が含まれる。他の薬学的に許容される塩が考慮され、当業者には明白である。
【００３４】
本明細書で使用されるとき、用語「プロドラッグ誘導体」には、本開示の化合物の官能誘導体が含まれ、その薬理学的作用は、体内の代謝過程による本開示Ｉの化合物への変換によってもたらされる。プロドラッグ誘導体は、一般に、修飾がインビボで修飾されて親化合物（parent compound）を生じるような方法で官能基を修飾することによって調製される。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製の従来の手順は当業者に知られており、例えば、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＶ．Ｓｔｅｌｌａ、新規送達系としてのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズ第１４巻、１９８７年及びＥ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ（編）、薬剤設計における生体可逆的担体（Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年において考察されている。
【００３５】
本開示の化合物は、薬学的に許容される溶媒を伴う互変異性体、水和物又は溶媒和物の形態でありうる。本開示は、そのような互変異性体、水和物及び溶媒和物、並びに対応する非溶媒和形態を考慮する。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、用語「場合により置換されている」には、記載の基における１個以上の水素原子が独立して選択された１つ以上の適切な置換基に代えられていることを含むが、但し、任意の置換基が結合しているそれぞれの原子の正常な原子価を超えないこと及び置換が安定した化合物をもたらすことが条件である。
【００３７】
化合物の部分が非置換であると定義されない限り、その部分は、場合により置換されうる。特定の実施形態において、任意の置換基は、アルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、アリールアルコキシ、アリールオキシ、ヘテロシクリル（heterocyclyl）、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルコキシ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールオキシ、カルボキシ、オキソ、アシル、アミド、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル及びハロ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−Ｒｘ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒｘ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒｘ、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒｘ、−Ｓ−Ｒｘ、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒｘ及びＳ（＝Ｏ）２−Ｒｘ（ここでＲｘは、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びヘテロアリールから独立して選択される）、−ＮＲｙＲｚ、−アルキル−ＮＲｙＲｚ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＲｚ、−Ｓ（＝Ｏ）−ＮＲｙＲｚ及び−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＲｚ（ここで各Ｒｙ及びＲｚは、水素、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びヘテロアリールから独立して選択される）からなる群から独立して選択される。
【００３８】
本明細書の式に使用される一般的な化学用語は、通常の意味を有する。
【００３９】
この点において、用語「アルキル」には、直鎖、分岐鎖又は環状の飽和炭化水素基が含まれる。特定の実施形態において、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を含む。特定の実施形態において、アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル又はシクロブチルである。他のアルキル基が考慮される。アルキル基は、場合により置換されうる。
【００４０】
用語「アルケニル」には、直鎖、分岐鎖又は環状の一価不飽和炭化水素基が含まれる。アルケニル基は、場合により置換されうる。
【００４１】
用語「アルコキシ」には、基アルキル−Ｏ−が含まれる。
【００４２】
用語「アリール」には、フェニル、ナフチル、インダニル、ビフェニルなどが含まれるが、これらに限定されない芳香族ラジカルが含まれる。アリール基は、場合により置換されうる。特定の実施形態において、アリール基は、４〜１０個の炭素原子を含む。
【００４３】
用語「アリールオキシ」には、基アリール−Ｏ−が含まれる。
【００４４】
用語「アリールアルコキシ」には、基アリール−アルキル−Ｏ−が含まれる。
【００４５】
用語「アリールアルキル」には、基アリール−アルキル−が含まれる。
【００４６】
用語「ヘテロアリール」には、ピリミジニル、ピリジル、ピロリル、フリル、オキサゾリル、チオフェニルなどが含まれるが、これらに限定されない芳香族複素環式ラジカルが含まれる。ヘテロアリール基は、場合により置換されうる。
【００４７】
用語「ヘテロアリールオキシ」には、基ヘテロアリール−Ｏ−が含まれる。
【００４８】
用語「ヘテロアリールアルコキシ」には、基ヘテロアリール−アルキル−Ｏが含まれる。
【００４９】
用語「ヘテロアリールアルキル」には、基ヘテロアリール−アルキル−が含まれる。
【００５０】
用語「ヘテロシクリル」には、ピペリジニル、ピロリジニル、ピペラジニル、１，４−ジオキサニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニルなどが含まれるが、これらに限定されない非芳香族飽和複素環式ラジカルが含まれる。ヘテロシクリル基は、場合により置換されうる。
【００５１】
用語「ヘテロシクリルアルキル」には、基ヘテロシクリル−アルキル−が含まれる。
【００５２】
用語「チオアルコキシ」には、基アルキル−Ｓ−が含まれる。
【００５３】
特定の実施形態において、Ｙは、式Ｉの化合物においてＣ（＝Ｏ）である。
【００５４】
特定の実施形態において、Ｒ１は、式Ｉの化合物において以下の立体化学を有する。
【００５５】
【化６】
2016501848.tif 000009
【００５６】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物におけるＲ１は、ロイシン若しくはフェニルアラニン側鎖又はこれらの側鎖の誘導体を含む。他の側鎖が考慮され、本明細書に記載されている。
【００５７】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物におけるＲ２は、Ｂ（ＯＨ）２である。
【００５８】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物におけるＲ２は、Ｃ（＝Ｏ）Ｈである。
【００５９】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物におけるＷは、以下の立体化学を有する。
【００６０】
【化７】
2016501848.tif 000010
【００６１】
特定の実施形態において、Ｗが原子なしの場合、式Ｉの化合物におけるＲ３は、上記に示されたＷと同じ立体化学を有しうる。
【００６２】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｗは原子なし、（ＣＨ２）、（ＣＨＲ）又は（ＣＲ２）であり、ここでＲは、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシである。
【００６３】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｗは原子なし又は（ＣＨ２）である。
【００６４】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なし、（ＣＨ２）、（ＣＨＲ）又は（ＣＲ２）であり、ここでＲは、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシである。
【００６５】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なし又は（ＣＨ２）である。
【００６６】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは原子なしである。
【００６７】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは（ＣＨ２）である。
【００６８】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは原子なしである。
【００６９】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｒ３は、（ＣＨ２）９−１３、（ＣＨ２）１１、（ＣＨ２）２−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）６−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）８−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）４−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、  （ＣＨ２）５−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）９−１２、（ＣＨ２）１０、（ＣＨ２）−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）７−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）３−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）４−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）８−１２、（ＣＨ２）１０、（ＣＨ２）２−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）６−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）８−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）７−１１、（ＣＨ２）９、（ＣＨ２）−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）７−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）３−Ｐｈｅ、または（ＣＨ２）４−Ｐｈｅである。Ｐｈｅ基は、場合により置換されうる。
【００７０】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）９−１３である。
【００７１】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）１１である。
【００７２】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）２−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である。
【００７３】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は、１つ又は（ＣＨ２）６−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）８−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）若しくは（ＣＨ２）４−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である。
【００７４】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である。
【００７５】
特定の実施態様において、Ｘは（ＣＨ２）である。
【００７６】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）９−１２である。
【００７７】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）１０である。
【００７８】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である。
【００７９】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）なしであり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は、１つ又は（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）、（ＣＨ２）７−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）若しくは（ＣＨ２）３−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である。
【００８０】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは原子なしであり、Ｒ３は（ＣＨ２）４−Ｐｈｅ−（ＣＨ２）である。
【００８１】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）８−１２である。
【００８２】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）１０である。
【００８３】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）２−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅである。
【００８４】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）６−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）８−Ｐｈｅ又は（ＣＨ２）４である。
【００８５】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは原子なしであり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）５−Ｐｈｅである。
【００８６】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）７−１１である。
【００８７】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）９である。
【００８８】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）−Ｐｈｅ−Ｏ−（ＣＨ２）４−Ｏ−Ｐｈｅである。
【００８９】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は、１つ又は（ＣＨ２）５−Ｐｈｅ、（ＣＨ２）７−Ｐｈｅ若しくは（ＣＨ２）３−Ｐｈｅである。
【００９０】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｘは（ＣＨ２）であり、Ｗは（ＣＨ２）であり、Ｒ３は（ＣＨ２）４−Ｐｈｅである。
【００９１】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｚは、ヘテロシクロペンチル、ヘテロシクロヘキシイル、５員複素環式芳香族環又は６員複素環式芳香族環である。
【００９２】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下の式のうちの１つを有し、
【００９３】
【化８】
2016501848.tif 000011
【００９４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｙ、Ｘ、Ｒ３及びＷは、本明細書において前に記載されたとおりであり、
Ａは、Ｏ、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ6であり、Ｒ6は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｂは、Ｏ、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ７であり、Ｒ７は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｃは、Ｓ、Ｏ、ＮＨ又はＮＲ８であり、Ｒ８は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｄは、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ９であり、Ｒ９は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｅは、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ１０であり、Ｒ１０は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｆは、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ１１であり、Ｒ１１は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｇは、Ｎ、ＣＨ又はＣＲ１２であり、Ｒ１２は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシである。
【００９５】
特定の実施形態において、式ＩＩの化合物では、ＡはＣＨである。
【００９６】
特定の実施形態において、式ＩＩの化合物では、ＢはＣＨである。
【００９７】
特定の実施形態において、式ＩＩの化合物では、ＣはＮＨである。
【００９８】
特定の実施形態において、式ＩＩＩの化合物では、ＤはＣＨである。
【００９９】
特定の実施形態において、式ＩＩＩの化合物では、ＥはＮである。
【０１００】
特定の実施形態において、式ＩＩＩの化合物では、ＦはＣＨである。
【０１０１】
特定の実施形態において、式ＩＩＩの化合物では、ＧはＮである。
【０１０２】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｚはピロール環である。
【０１０３】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物では、Ｚはピラゾール環である。
【０１０４】
特定の実施形態において式Ｉの化合物は、以下の式のうちの１つ及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を有する。
【０１０５】
【化９】
2016501848.tif 000012
2016501848.tif 000013
【０１０６】
本開示の特定の実施形態は、以下の式のうちの１つの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を提供する。
【０１０７】
【化１０】
2016501848.tif 000014
2016501848.tif 000015
【０１０８】
本開示の特定の実施形態は、実施例のいずれかを参照して記載される式１の化合物を提供する。
【０１０９】
本開示の特定の実施形態は、実施例のいずれかを参照して記載される大環状化合物を提供する。
【０１１０】
本開示の化合物は、不斉炭素原子を有することができ、このように、そのような化合物の立体異性体（鏡像異性体とジアステレオマーの両方）が存在しうる。本開示は、純粋な立体異性体及び異性体の任意の混合物を考慮する。例えば、本明細書に記載されている化合物の純粋な鏡像異性体は、従来の光学分割技術を使用して鏡像異性体の混合物から単離することができる。エノール形及び互変異性体も考慮される。
【０１１１】
本開示の化合物は、本明細書及び実施例に記載されている一般的な方法論に従って調製することができる。当業者は、過剰な実験を行うことなく、その技能及び本開示を考慮することにより、本明細書に記載されている化合物を生成するために、これらの方法論を変更するのに適した試薬及び条件を選択することができる。
【０１１２】
当業者は、他の合成経路を、本明細書に記載されている化合物を合成するために使用できることも理解する。加えて、当業者は、本明細書に記載されている化合物を調製する過程において、中間化合物の官能基が保護基により保護される必要がありうることを理解する。保護することが望ましいことがありうる官能基には、ヒドロキシル、アミノ及びカルボン酸基が含まれるが、これらに限定されない。保護基を当業者に周知の技術に従って付加及び除去することができる。保護基の使用は、例えば、Ｊ．Ｗ．Ｆ．ＭｃＯｍｉｅ（編）、有機化学における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９７３年、並びにＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｚ、有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年に記載されている。
【０１１３】
式Ｉの化合物を合成する方法は、本明細書において、特に実施例を参照して記載されている。
【０１１４】
本開示の特定の実施形態は、実施例のいずれかを参照して、記載されている式１の化合物の合成方法を提供する。
【０１１５】
本開示の特定の実施形態は、実施例のいずれかを参照して、記載されている本明細書の大環状化合物の合成方法を提供する。
【０１１６】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、プロテアーゼインヒビターとしての使用を有する。特定の実施形態において、プロテアーゼは、システインプロテアーゼである。特定の実施形態において、システインプロテアーゼはカルパインである。特定の実施形態において、カルパインは、カルパインＩ及び／又はカルパインＩＩである。
【０１１７】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、プロテアーゼインヒビターとして２５０ｎＭ以下のＩＣ５０を含む。
【０１１８】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼを阻害する方法であって、プロテアーゼを本明細書に記載されている化合物に曝露することを含む方法を提供する。特定の実施形態において、プロテアーゼは、インビトロにある。特定の実施形態において、プロテアーゼは、インビボにある。
【０１１９】
用語「曝露すること」、並びに「曝露する」及び「曝露」のような関連用語は、種（例えば、インビボ又はインビトロの酵素、インビボ又はインビトロの細胞）を、本明細書に記載されている化合物で直接的及び／又は間接的に接触及び／又は処理することを意味する。
【０１２０】
例えば、インビトロの細胞に存在するプロテアーゼでは、本明細書に記載されている化合物を、細胞を化合物に曝露させるために培養培地中の細胞に添加すること又は誘導体を培養培地に添加して、化合物の生成をもたらし、それによって細胞を化合物に曝露させることができる。対象の細胞に存在するプロテアーゼでは、本明細書に記載されている化合物を対象に投与して、細胞を化合物に曝露させることができ、又は誘導体を対象に投与して、対象において化合物の生成をもたらし、それによって細胞をインビボで化合物に曝露させることができる。投与経路の例は、本明細書に記載されている。
【０１２１】
特定の実施形態において、本開示は、細胞中のプロテアーゼを阻害する方法であって、細胞を本明細書に記載されている化合物に曝露する方法を提供する。特定の実施形態において、細胞は、インビトロにある。特定の実施形態において、細胞は、インビボにある。特定の実施形態において、細胞は、単離された細胞である。特定の実施形態において、細胞は、生体系に存在する。用語「生体系は任意の細胞系を意味する。例えば、生体系は、組織培養物中の細胞、組織又は臓器、或いは本明細書に記載されている疾患、状態又は状況に罹患している又は感受性があるヒト又は動物対象を含む、動物又はヒトの全身でありうる。
【０１２２】
特定の実施形態において、プロテアーゼ又は細胞は、有効量の本明細書に記載されている化合物に曝露される。
【０１２３】
用語「有効量」は、本明細書で使用されるとき、プロテアーゼ又は細胞のような標的に曝露されたとき、所望の応答又は結果を誘発するのに十分な作用物質の量を意味する。有効量は、例えば、使用される作用物質の特定の活性及び細胞型を含む多数の要因に応じて変わる。
【０１２４】
特定の実施形態において、細胞は、インビボに存在する。特定の実施形態において、細胞は、本明細書に記載されている対象に存在する。
【０１２５】
本開示の特定の実施形態は、本明細書に記載されている疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載されている化合物を対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１２６】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況である。
【０１２７】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離、老視、炎症性の疾患、状態又は状況、免疫学的な疾患、状態又は状況、関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、胃腸系の炎症、潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病、心血管の疾患、状態又は状況、脳血管の疾患、状態又は状況、動脈性高血圧症、敗血症性ショック、虚血性又は出血性由来の心筋又は脳梗塞、虚血、血小板凝集につながる障害、中枢又は末梢神経系の障害、神経変性疾患、大脳又は脊髄外傷、くも膜下出血、てんかん、加齢、老人性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢神経障害、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、悪液質、繁殖性疾患、アテローム性動脈硬化症、狭窄の再発、聴力の損失、臓器移植、自己免疫性の疾患、状態又は状況、ウイルス性疾患、狼瘡、ＡＩＤＳ、寄生虫又はウイルス感染、糖尿病及びその合併症、多発性硬化症、癌、固形癌又は血液由来の癌、悪性腫瘍、並びに多発性骨髄腫を含む。
【０１２８】
用語「治療有効量」は、本明細書で使用されるとき、対象に投与されたとき、予防及び／又は治療を実施するのに十分な作用物質の量を意味する。治療有効量は、例えば、使用される作用物質の特定の活性、対象における疾患、状態又は状況の重篤度、対象の年齢、健康状態、他の病状の存在及び栄養状態を含む多数の要因に応じて変わる。
【０１２９】
特定の実施形態において、化合物は、以下の選択された範囲：１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ；１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ；１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ；１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ；１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ；１０μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ；１０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ；１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ；１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ；１００μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ；１００μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ；１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ；１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ；及び１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重のうちの１つの範囲の量で対象に投与される。他の範囲が考慮される。投与用量及び頻度は、当業者により決定されうる。
【０１３０】
本明細書に記載されている化合物は、適切な形態で対象に投与されうる。この点において、用語「投与すること」又は「提供すること」には、化合物を投与すること、又は対象の体内に治療有効量の化合物を形成する化合物のプロドラッグ若しくは誘導体を投与することが含まれる。用語には、全身的（例えば、静脈内注射のような注射、錠剤、丸剤、カプセル剤又は医薬品の全身投与に有用な他の剤形による経口を介する）及び局所的（例えば、局所経口投与用のクリーム剤、洗口剤のような液剤を含む液剤など）である投与経路が含まれる。
【０１３１】
特定の実施形態において、化合物は、経口投与される。特定の実施形態において、化合物は、静脈内投与される。特定の実施形態において、化合物は、静脈内注射のような注射を介して投与される。特定の実施形態において、化合物は、噴霧投与により、エアゾール化投与により又は肺への滴下注入により投与される。
【０１３２】
化合物を単独で投与することができる又はインヒビターの活性を増強、安定化若しくは維持する他の治療剤及び／若しくは作用物質との混合物により送達することができる。特定の実施形態において、投与ビヒクル（例えば、丸剤、錠剤、インプラント、注射用液剤など）は、本明細書に記載されている化合物と追加の作用物質の両方を含有する。 
【０１３３】
対象に投与されるとき、治療有効投与量は、利用される特定の化合物、投与様式、状態及びその重篤度、並びに治療される対象に関する多様な身体的要因に応じて変わりうる。本明細書において考察されているように、適切な１日用量は、１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。１日投与量は、投与経路及び投与される化合物の性質により変わることが予測される。特定の実施形態において、方法は、化合物の漸増用量及び／又は反復用量を対象に投与することを含む。特定の実施形態において、化合物は、経口投与される。特定の実施形態において、化合物は、静脈内注射のような注射を介して投与される。特定の実施形態において、化合物は、非経口投与される。特定の実施形態において、化合物は、エアゾール投与、噴霧投与及び肺への滴下注入のように、肺に直接導入することによって投与される。特定の実施形態において、化合物は、インプラントにより投与される。特定の実施形態において、化合物は、皮下注射、関節内、直腸内、鼻腔内、眼内、膣内又は経皮により投与される。
【０１３４】
「静脈内投与」は、血管への物質の直接的な投与である。
【０１３５】
「経口投与」は、物質が口を介して摂取される投与経路であり、口腔、唇下及び舌下投与、また経腸投与を含み、かつ医薬が口腔粘膜のいずれかに直接接触しないように、例えば管を介しない限り、気道を介する投与経路である。治療剤の経口投与の典型的な形態には、錠剤又はカプセル剤の使用が含まれる。
【０１３６】
特定の実施形態において、化合物は、即時放出製剤として投与される。用語「即時放出製剤」は、治療剤を短時間で素早く体内に放出するように設計されている製剤である。
【０１３７】
特定の実施形態において、化合物は、持続放出製剤として投与される。用語「持続放出製剤」は、治療剤を長時間にわたってゆっくりと体内に放出するように設計されている製剤である。
【０１３８】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、薬学的組成物に使用することができる。特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、本明細書に記載されている本開示の方法に使用される薬学的組成物に使用することができる。
【０１３９】
本開示の特定の実施形態は、治療有効量の本明細書に記載されている化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【０１４０】
本開示の特定の実施形態は、医薬の調製における本明細書に記載されている化合物の使用を提供する。
【０１４１】
特定の実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む。
【０１４２】
本開示の特定の実施形態は、医薬の調製における本明細書に記載されている化合物の使用を提供する。
【０１４３】
本開示の特定の実施形態は、本明細書に記載されている疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する医薬の調製における、本明細書に記載されている化合物の使用を提供する。
【０１４４】
特定の実施形態において、医薬は、静脈内投与、気管内投与、噴霧投与、エアゾール化投与、肺への滴下注入、経口投与、非経口投与、インプラント、皮下注射、関節内、直腸内、鼻腔内、眼内、膣内又は経皮のうちの１つ以上による対象への送達に適している。
【０１４５】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、薬学的組成物を対象に投与するのに適した薬学的に許容される担体によって提供される。担体は、本明細書に記載されている投与経路、標的組織の位置、送達されるインヒビター、薬剤の送達の時間経過などに基づいて選択されうる。用語「薬学的に許容される担体」は、任意の種類の実質的に不活性な固体、半固体若しくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料又は製剤補助剤を意味する。薬学的に許容される担体の例は、生理食塩水である。他の生理学的に許容される担体及びこれらの処方は、当分野において知られている。薬学的に許容される担体として機能することができる材料の幾つかの例には、ラクトース、グルコール及びスクロースのような糖；トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンのようなデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースのようなセルロース及びその誘導体；粉末トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；カカオバター及び坐剤ロウのような賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油のような油；プロピレングリコールのようなグリコール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのようなエステル；寒天；ＴＷＥＥＮ  ８０のような洗剤；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質無含有水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；及びリン酸塩緩衝液、並びにラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムのような他の非毒性で適合性のある潤滑剤が含まれ、並びに着色剤、放出剤、被覆剤、甘味、風味及び芳香剤、防腐剤及び酸化防止剤が存在することもできる。
【０１４６】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、薬学的に許容される塩として、薬学的組成物により投与されうるか、又は薬学的組成物中に存在しうる。用語「薬学的に許容される塩」は、製薬産業において一般的に使用されている酸付加塩又は金属錯体を意味する。酸付加塩の例には、酢酸、乳酸、パモン酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸又はトリフルオロ酢酸などのような有機酸、タンニン酸及びカルボキシメチルセルロースなどのようなポリマー酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などのような無機酸が含まれる。金属錯体には、亜鉛、鉄などが含まれる。
【０１４７】
特定の実施形態において、薬学的組成物又は医薬は、活性剤の活性を増強、安定又は維持する他の治療剤又は作用物質を含む。
【０１４８】
本明細書に記載されている化合物を含有する経口製剤は、錠剤、カプセル剤、口腔剤形態（buccal forms）、トローチ剤、ロゼンジ剤（lozenges）及び経口液体、懸濁剤又は液剤を含む従来使用されている任意の経口形態を含むことができる。カプセル剤は、活性化合物と、薬学的に許容されるデンプン（例えば、トウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、糖、人工甘味剤、結晶質及び微晶質セルロースのような粉末セルロース、小麦粉、ゼラチン、増粘剤などのような不活性充填剤及び／又は希釈剤との混合物を含有することができる。有用な錠剤の製剤は、従来の圧縮、湿式造粒又は乾式造粒法により作製することができ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、微晶質セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアゴム、キサンタンガム、クエン酸ナトリウム、複合ケイ酸塩、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロール、ソルビトール、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプン及び粉糖を含む、薬学的に許容される希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、表面改質剤（界面活性剤を含む）、懸濁剤又は安定剤を利用しうる。表面改質剤には、非イオン性及びアニオン性表面改質剤が含まれる。表面改質剤の代表的な例には、ポロキサマー１８８、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ロウ、ソルビタンエステル、コロイド二酸化ケイ素、リン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム及びトリエタノールアミンが含まれるが、これらに限定されない。経口製剤は、標準的な遅延又は時効性製剤を利用して、ペプチドの吸収を変更することができる。経口製剤は、必要であれば適切な可溶化剤又は乳化剤を含有する水又は果汁中の活性成分を投与するように構成することもできる。
【０１４９】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物をエアゾールの形態により気道に直接投与することが望ましい場合がある。エアゾール形態で投与するための処方は、知られている。
【０１５０】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物を、非経口的に（例えば、関節腔に直接）又は腹腔内に投与することもできる。例えば、これらの化合物の非イオン化形態又は薬学的に許容される塩の溶液又は懸濁液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と適切に混合された水中で調製することができる。分散物も、グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びその油中混合物において調製することができる。通常の保存及び使用条件下では、これらの調合剤は、微生物の増殖を防止するため、典型的には防腐剤を含有する。
【０１５１】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、注射により投与することもできる。注射使用に適した薬学的な形態には、滅菌水溶液又は分散物及び滅菌注射可能な溶液又は分散物の即時調製用の滅菌粉末が含まれる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール、（例えばグリセロール、プロピレングルコール及び液体ポリエチレングルコール）、これらの適切な混合物、並びに植物油を含む溶媒又は分散媒でありうる。
【０１５２】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、静脈内投与することもできる。静脈内投与に適した本明細書に記載されているインヒビターを含有する組成物は、当業者により処方することができる。
【０１５３】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、経皮投与することもできる。経皮投与は、上皮及び粘膜組織を含む、身体の表面および身体の管の内壁を通る全ての投与を含むことが理解される。そのような投与は、本明細書に記載されているインヒビター又はその薬学的に許容される塩を使用して、ローション剤、クリーム剤、フォーム剤、パッチ剤、懸濁液、溶液、並びに坐剤（直腸内及び膣内）により実施することができる。
【０１５４】
経皮投与は、活性化合物と、活性化合物に対して不活性であり、皮膚に対して非毒性であり、作用物質の全身吸収のために皮膚を介した血流への送達を可能にする担体とを含有する、経皮パッチ剤の使用を介して達成することもできる。担体は、クリーム剤及び軟膏剤、ペースト剤、ゲル剤、並びに閉鎖装置（occlusive devices）のような任意の多数の形態をとりうる。クリーム剤及び軟膏剤は、水中油（oil-in-water）又は油中水（water-in-oil）のいずれの型の粘性液体又は半固体乳剤でありうる。活性成分を含有する石油又は親水性石油に分散された吸収性粉末から構成されるペースト剤も、適切でありうる。多様な閉鎖装置を使用して、活性成分を血流に放出することができ、例えば、担体を有する若しくは有さないで活性成分を含有するリザーバー（reservoir）又は活性成分を含有するマトリックスを覆う半透過性膜である。  
【０１５５】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物は、坐剤により投与することもできる。坐剤の製剤は、坐剤の融点を変更するロウを添加した又はしないカカオバター及びグリセリンを含む伝統的な材料から作製することができる。多様な分子量のポリエチレングリコールのような水溶性坐剤の基剤を使用することもできる。
【０１５６】
本明細書に記載されている化合物の投与及び／又は医薬若しくは薬学的組成物への処方に関する使用に適している追加的な多数の多様な賦形剤、剤形、分散剤など。処方は、知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８５年に記載されており、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【０１５７】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を対象において予防及び／又は治療する方法であって、治療有効用量の本明細書に記載されている１つ以上の化合物を対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１５８】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、システインプロテアーゼ活性の調節不全に関連する。
【０１５９】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、カルパイン活性の調節不全に関連する。
【０１６０】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離及び老視の１つ以上を含む。
【０１６１】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、炎症性の疾患、状態又は状況、免疫学的な疾患、状態又は状況、関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、胃腸系の炎症、潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病、心血管の疾患、状態又は状況、脳血管の疾患、状態又は状況、動脈性高血圧症、敗血症性ショック、虚血性又は出血性由来の心筋又は脳梗塞、虚血、血小板凝集につながる障害、中枢又は末梢神経系の障害、神経変性疾患、大脳又は脊髄外傷、くも膜下出血、てんかん、加齢、老人性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢神経障害、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、悪液質、繁殖性疾患、アテローム性動脈硬化症、狭窄の再発、聴力の損失、臓器移植、自己免疫性の疾患、状態又は状況、ウイルス性疾患、狼瘡、ＡＩＤＳ、寄生虫又はウイルス感染、糖尿病及びその合併症、多発性硬化症、癌、固形癌、血液由来の癌、悪性腫瘍、並びに多発性骨髄腫の１つ以上を含む。
【０１６２】
本開示の特定の実施形態は、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離、老視、炎症性の疾患、状態又は状況、免疫学的な疾患、状態又は状況、関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、胃腸系の炎症、潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病、心血管の疾患、状態又は状況、脳血管の疾患、状態又は状況、動脈性高血圧症、敗血症性ショック、虚血性又は出血性由来の心筋又は脳梗塞、虚血、血小板凝集につながる障害、中枢又は末梢神経系の障害、神経変性疾患、大脳又は脊髄外傷、くも膜下出血、てんかん、加齢、老人性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢神経障害、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、悪液質、繁殖性疾患、アテローム性動脈硬化症、狭窄の再発、聴力の損失、臓器移植、自己免疫性の疾患、状態又は状況、ウイルス性疾患、狼瘡、ＡＩＤＳ、寄生虫又はウイルス感染、糖尿病及びその合併症、多発性硬化症、癌、固形癌、血液由来の癌、悪性腫瘍、並びに多発性骨髄腫を予防及び／又は治療する方法であって、治療有効用量の式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を対象に投与することを含む方法を提供し、
【０１６３】
【化１１】
2016501848.tif 000016
【０１６４】
式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである。
【０１６５】
式Ｉの化合物は、本明細書に記載されている。
【０１６６】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼインヒビターを同定する方法を提供する。
【０１６７】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼインヒビターを同定する方法であって、
（ｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を準備すること、
（ｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼを阻害する能力を決定すること、並びに
（ｉｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物をプロテアーゼインヒビターとして同定すること、
を含む方法を提供する。
【０１６８】
特定の実施形態において、プロテアーゼは、システインプロテアーゼを含む。
【０１６９】
特定の実施形態において、システインプロテアーゼはカルパインを含む。
【０１７０】
特定の実施形態において、カルパインは、カルパインＩ及び／又はカルパインＩＩを含む。
【０１７１】
特定の実施形態において、Ｐ１−Ｐ３大環状ペプチド模倣化合物は、本明細書に記載されている式Ｉの化合物を含む。
【０１７２】
特定の実施形態において、Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼを阻害する能力を決定することは、Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼをインビトロで阻害する能力を決定することを含む。
【０１７３】
特定の実施形態において、Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼを阻害する能力を決定することは、Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼをインボで阻害する能力を決定することを含む。
【０１７４】
プロテアーゼインヒビターを同定する方法は、本明細書において、特に実施例を参照して記載されている。
【０１７５】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤を同定する方法を提供する。
【０１７６】
本開示の特定の実施形態は、プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤を同定する方法であって、
（ｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を準備すること、
（ｉｉ）Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する能力を決定すること、並びに
（ｉｉｉ）プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する治療剤としてＰ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物を同定すること、
を含む方法を提供する。
【０１７７】
プロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況は、本明細書に記載されている。
【０１７８】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、カルパイン活性の調節不全に関連する。
【０１７９】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、カルパインＩ及び／又はカルパインＩＩの活性の調節不全に関連する。
【０１８０】
特定の実施形態において、疾患、状態又は状況は、眼の障害、白内障、視神経症、虚血性視神経症、糖尿病性神経障害、糖尿病性黄斑浮腫、緑内障、黄斑変性、網膜虚血、網膜損傷、網膜剥離又は老視を含む。
【０１８１】
特定の実施形態において、Ｐ１−Ｐ３大環状ペプチド模倣化合物は、式Ｉの化合物及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、互変異性体、水和物若しくはプロドラッグ誘導体を含み、
【０１８２】
【化１２】
2016501848.tif 000017
【０１８３】
式中、
Ｒ１は、アルキル、アリール、ヘテロアルキル又は天然若しくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ２は、ＣＨ（＝Ｏ）、ＣＨＲ４ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、ＣＨＲ４ＮＨＲ４、Ｂ（ＯＨ）２又は複素環であり、Ｒ４は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｚは、複素環又はヘテロアリールであり；
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（＝ＮＲ5）、ＣＨ２、ＣＨＲ5であり、Ｒ５は、Ｈ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているヘテロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、場合により置換されているアリールアルコキシ又は場合により置換されているヘテロアリールアルコキシであり；
Ｗは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリールであり；
Ｘは、原子なし、アルキル、ヘテロアルキル、複素環、アリール又はヘテロアリールである。
【０１８４】
式Ｉの化合物は、本明細書に記載されている。
【０１８５】
Ｐ１−Ｐ３又はＰ２−Ｐ４大環状ペプチド模倣化合物がプロテアーゼ活性の調節不全及び／又はプロテオソーム活性の調節不全に関連する疾患、状態又は状況を予防及び／又は治療する能力を決定する方法は、動物モデルの使用を含む。
【０１８６】
本開示の特定の実施形態は、実施例のいずれかを参照して、本明細書に記載されているプロテアーゼインヒビターを同定する方法を提供する。
【実施例】
【０１８７】
特定の実施形態が、幾つかの以下の実施例により例示される。以下の記載は特定の実施形態を記載する目的のためだけであり、上記記載に関して限定的であることを意図しないことも理解されるべきである。
【０１８８】
実施例１−カルパインアッセイ
ヒツジのカルパイン１及び２の蛍光定量アッセイ（励起：４８５ｎｍ、発光：５２０ｎｍ）を、９６ウエル黒色（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ）マイクロアッセイプレートにおいて３７．０±０．２℃により（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）Ｆｌｕｏｓｔａｒ  Ｏｐｔｉｍａプレート読み取り機を用いて実施した。ヒツジの肺から疎水性相互作用及びイオン交換クロマトグラフィーにより部分的に精製されたカルパイン１及び２を、２ｍＭのＥＧＴＡ、２ｍＭのＥＤＴＡ及び０．０３５％ｖ／ｖの２−メルカプトエタノールを含有する２０ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．５で希釈し、アッセイの期間にわたって線形応答を得た。基質ＢＯＤＩＰＹ−Ｆｌカゼインを報告されたように調製した。｛１｝１０ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＣａＣｌ２、０．１ｍＭのＮａＮ３、０．１％ｖ／ｖの２−メルカプトエタノール中の基質の０．０００５％溶液を、各実験の前に新たに調製した。インヒビターの貯蔵溶液（５ｍＭ）をＤＭＳＯで新たに調製し、ＤＭＳＯ／水の混合物で希釈して、総ＤＭＳＯ濃度の４％ｖ／ｖを得た。
【０１８９】
阻害研究を、２００μＬの体積により、７つの異なるインヒビター濃度及び１％ｖ／ｖのＤＭＳＯの存在下で実施した。５０μｌのインヒビター溶液をマイクロアッセイウエルに加え、続いて５０μｌのカルパイン含有溶液を加えた。反応は、１００μｌのＢＯＤＩＰＹ−Ｆｌカゼイン溶液を各ウエルに加えることにより開始させ、進行曲線を３０秒毎に５７０秒間にわたってモニターした。非阻害酵素活性は、水中４％ｖ／ｖのＤＭＳＯを、インヒビター溶液の代わりに加えることにより決定した。各実験は、２つのブランク、Ｃａ２＋ブランク及びＥＤＴＡブランク、を含んでいた。Ｃａ２＋ブランクは、５０μｌの水及び５０μｌの２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．０３５％ｖ／ｖ  ２−メルカプトエタノールを、それぞれインヒビター及び酵素溶液の代わりに含有していた。ＥＤＴＡブランクでは、インヒビター溶液の代わりに、５０μｌの５０ｍＭ  ＥＤＴＡ／ＮａＯＨ、ｐＨ７．５をウエルに加えた。
【０１９０】
酵素触媒基質加水分解の速度は、経時的な進行曲線の線形回帰により得た。緩徐結合阻害（slow-binding inhibition）が生じる場合｛２｝、酵素−インヒビター相互作用の定常状態を表すデータポイントのみ、すなわち、３９０秒と５７０秒の間のデータポイントのみ、を考慮した。酵素反応の速度は、２つのブランクから得た速度の平均値と相関し、インヒビターの不在下での速度を１００％に設定した。
【０１９１】
それぞれ三重に実施した２つの別々の実験で得られた速度の平均値を、インヒビター濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を以下の方程式により計算した。
【０１９２】
【数１】
2016501848.tif 000018
【０１９３】
式中、［Ｉ］は、インヒビター濃度であり、ν０及びνは、インヒビターの不存在下及び存在下での酵素活性である。全ての分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ、バージョン５．０２、ウインドウズ版、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ、ｗｗｗ．ｇｒａｐｈｐａｄ．ｃｏｍのプログラムにより実施した。
【０１９４】
実施例２−ウシキモトリプシンアッセイ
ｂＣＴの活性を、サーモスタットマルチセルホルダーを備えたＶａｒｉａｎ  Ｃａｒｙ  ５０００  ＵＶ−ＶＩＳ−ＮＩＲ分光光度計により２５．０±０．１℃で分光光度的にアッセイした。アッセイ緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（７７ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２０ｍＭ）、ｐＨ７．８（α−キモトリプシンに最適なｐＨ｛３｝）であった。ＨＣｌ水溶液（１ｍＭ）中のｂＣＴ（２１．９μｇ／ｍＬ）の溶液を、ＨＣｌ水溶液（１ｍＭ）による貯蔵溶液（８７４μｇ／ｍＬ）の１：４０希釈により毎日調製し、０℃で保存した。氷冷ＨＣｌ水溶液（１ｍＭ）による１：１００希釈を、各測定を開始する直前に調製した。基質Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮａ（１０ｍＭ）及び全てのインヒビター（５ｍＭ）の貯蔵溶液をＤＭＳＯにより新たに調製し、室温で保存した。全ての化合物を５つの異なるインヒビター濃度、［Ｉ］で分析した。進行曲線を４０５ｎｍで６分間にわたってモニターし、基質の線形定常代謝回転により特徴決定した。
【０１９５】
阻害研究を、０．０１１μｇ／ｍＬのｂＣＴ、異なる濃度のＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮａ（１０〜１００μＭ）及びインヒビターを含有する１ｍＬの体積により６％ｖ／ｖのＤＭＳＯの存在下で実施した。８９０μＬのアッセイ緩衝液を含有するキュベットに、１０μＬの基質溶液（１〜１０ｍＭ）、貯蔵インヒビター及びＤＭＳＯを加えて、総体積を９５０ｍＬにした。キュベットの内容物を十分に混合した後、酵素反応を、５０μＬのｂＣＴ溶液の添加により開始させた。非阻害酵素活性は、ＤＭＳＯを、インヒビター溶液の代わりに加えることにより決定した。Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡの非酵素加水分解は、ＤＭＳＯ及び１ｍＭのＨＣｌ水溶液をそれぞれインヒビター及び酵素溶液に代わりに加えることにより分析し、無視できるほどであることが見出された。１００μＭの基質の酵素触媒加水分解の速度を、各実験においてインヒビターなしで決定し、１００％に設定した。インヒビターのＫｉ値は、２つの異なる基質濃度、［Ｓ］での３つの別々の実験により得た速度率の平均値を使用して、Ｄｉｘｏｎに従って図式的に決定した｛４｝。
【０１９６】
一般的方法：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ）及び１３Ｃ  ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ）スペクトルを、Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｏｖａ  ６００ＭＨｚ分光計により記録した。全てのＮＭＲスペクトルをＣＤＣｌ３又はＤＭＳＯ−ｄ６により測定した。化学シフトは、百万分率（ｐｐｍ、δ）により報告される。ＣＤＣｌ３（δＣ＝７７．００ｐｐｍ）、ＤＭＳＯ−ｄ６（δＣ＝３９．７０ｐｐｍ）又はテトラメチルシラン（ＴＭＳ、δＨ＝０．００ｐｐｍ）の化学シフトを、１３Ｃ  ＮＭＲ実験及び１Ｈ  ＮＭＲ実験における内部標準として使用した。分子量は、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  Ｉｏｎ  Ｔｒａｐ質量分析計のエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）質量分析により決定し、条件は以下であった。針電位  ４５００Ｖ；管レンズ  ６０Ｖ；加熱キャピラリー  ２００℃、３０Ｖ；シースガス流  ３０ｐｓｉ。旋光度測定を、９．９９ｍｍパス長を有するＡＴＡＧＯ  ＡＰ−１００偏光計により実施した。測定値は、λ＝５８９ｎｍでＤＭＳＯ中において２３℃で取得した。［α］Ｄ値は、ｍ／ｇ．ｄｍの単位で示され、試料濃度は、１０ｍｇ／ｍＬの単位で示される。融点はＲｅｉｃｈｅｒｔ  Ｔｈｅｒｍｏｖａｒ  Ｋｏｆｌｅｒ機器により得たが、補正していない。薄層クロマトグラフィーは、シリカゲル６０Ｆ２５４を有するＭｅｒｃｋアルミニウムシートにおいて実施し、Ｖｉｌｂｅｒ  Ｌｏｕｒｍａｔ  ＶＬ−６Ｃ（６Ｗ−２５４ｎｍ管）により可視化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ｓｃｈａｒｌａｕシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）を使用して実施した。報告される全ての収率は、単離された収率であり、ＮＭＲ分光法により純粋であることが決定される。アミノ酸は、特に記述のない限り（Ｌ）−立体配置を有していた。Ｂｏｃ−アリル−Ｇｌｙは、Ｂｏａｏｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．から購入した。（Ｌ）−Ｐｈｅｎａｌａｎｉｎｏｌ、ＨＡＴＵ及びＥＤＣＩは、ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｌｉｍｉｔｅｄから購入した。Ｂｏｃ−Ｔｒｙ（Ａｌｌ）−ＯＨ、（Ｌ）−Ｌｅｕｃｉｎｏｌ及びＤｅｓｓ  Ｍａｒｔｉｎ  Ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅは、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（ＣＩＩ）から購入した。他の試薬及び化学薬品は、全てＳｉｇｍａ−Ａｌｒｄｉｃｈから購入した。
【０１９７】
フリーデル−クラフツアシル化：ニトロメタン中のそれぞれの酸塩化物（２当量）（６ｍＬ／酸塩化物１ｇ）に、それぞれのピロール（１当量）を加え、続いてトリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム（ＩＩＩ）（０．１当量）を加えた。得られた暗赤色溶液を大気温度（ambient temperature）で２１時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ３飽和水溶液の添加により停止させ、混合物をジエチルエーテル（３×）により抽出した。有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液、Ｈ２Ｏ（２×）、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、揮発物を真空下で除去し、得られた粗油状物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の純粋なピロールを得た。
【０１９８】
一般的手順Ｂ：ＫＯＨによるエステル加水分解：１：１のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中のそれぞれのエステル（１．０当量）の溶液（２０ｍＬ／エステル１ｇ）に、水酸化カリウム（８．０当量）を一度に加え、４０〜５０℃で１８時間撹拌した。反応混合物を冷却し、ジエチルエーテルと水に分配した。水層を収集し、０℃に冷却し、３２％ＨＣｌ水溶液によりｐＨ１に酸性化した。沈殿物を収集し、水で洗浄し、揮発物を真空下において大気温度で一晩かけて除去して、所望のカルボン酸を得た。
【０１９９】
一般的手順Ｃ：ＨＡＴＵ仲介ペプチドカップリング：乾燥ジクロロメタン中のそれぞれのカルボン酸（１．０当量）（４５ｍＬ／カルボン酸１ｇ）に、適切なアミン（１．１５当量）、ＨＡＴＵ（１．２当量）及びＨＯＢｔ（１．２当量）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下において大気温度で５分間撹拌した。溶液に、ＤＩＰＥＡ（４．０当量）を加え、窒素雰囲気下で１８時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンと１ＭのＨＣｌ水溶液に分配した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３、水（２×）及び食塩水で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の純粋なアミドを得た。
【０２００】
一般的手順Ｄ：ＥＤＣＩ仲介ペプチドカップリング：乾燥ジクロロメタン中のそれぞれの酸（１．０当量）（５０ｍＬ／カルボン酸１ｇ）に、適切なアミン（１．１５当量）、ＥＤＣＩ（１．４当量）及びＨＯＢｔ（１．５当量）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下において大気温度で５分間撹拌した。溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．６当量）を加え、窒素雰囲気下で１８時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンと２ＭのＨＣｌ水溶液に分配した。有機相を分離し、２ＭのＨＣｌ水溶液（２×）、水（２×）及び食塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の純粋なアミドを得た。
【０２０１】
一般的手順Ｅ：閉環メタセシス（熱環流）：無水ジクロロメタン中のそれぞれの非環状ジエン（１．０当量）（２．５ｍＬ／非環状ジエン１ｍｇ）に、Ｇｒｕｂｂｓ第２世代触媒（１０ｍｏｌ％）を加えた。混合物を４５℃に加熱し、窒素雰囲気下で３０分間撹拌した。Ｇｒｕｂｂｓ第２世代触媒（１０ｍｏｌ％）の追加の部分を加え、溶液を４５℃で１８時間撹拌した。反応を活性炭の添加により停止させ、大気温度で１８時間撹拌した。揮発物を真空下で除去し、粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の純粋な大環状分子を得た。
【０２０２】
一般的手順Ｆ：炭素−炭素二重結合の水素化：酢酸エチル中のそれぞれのオレフィン（１．０当量）（４００ｍＬ／オレフィン１ｇ）に、炭素触媒担持パラジウム（１０％、２．０当量）を加えた。混合物を、水素雰囲気下において大気温度及び大気圧で１８時間撹拌した。懸濁液をＣｅｌｉｔｅで濾過し、真空下で濃縮し、粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望のアルカンを得た。
【０２０３】
一般的手順Ｇ：ＮａＯＨによるエステル加水分解：１：１のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中のそれぞれのエステル（１．０当量）の溶液（２０ｍＬ／エステル１ｇ）に、２Ｍ水酸化ナトリウム（８．０当量）を一度に加え、室温で１８時間撹拌した。ＴＨＦを真空下で除去した。得られた溶液をＨＣｌ  ３２％水溶液で中和し、凍結乾燥して、所望のカルボン酸を得て、それを精製することなく次の工程に使用した。
【０２０４】
一般的手順Ｈ：アミノアルコールの酸化：無水ＤＣＭ中のそれぞれのアミノアルコール（１．０当量）の溶液（７０ｍＬ／アミノアルコール１ｇ）に、Ｄｅｓｓ  Ｍａｒｔｉｎ  Ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ（２．０当量）を加え、窒素雰囲気下において室温で１時間撹拌した。反応をＮａＨＣＯ３及びＮａ２Ｓ２Ｏ５飽和水溶液の添加により停止させ、室温で１５分間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２×）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、揮発物を真空下で除去した。得られた粗物質をＨＰＬＣにより精製して、所望のアルデヒドを得た。
【０２０５】
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−２−イル）−２，１６−ジオキソ−３，２０−ジアザビシクロ［１５．２．１］イコサ−１（１９），１７−ジエン−４−カルボキサミド１ａ
【０２０６】
大環状エステル１６（６１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｇ）、カルボン酸にし、これを（Ｌ）−Ｌｅｕｃｉｎｏｌとカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物を、酢酸エチルと石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１ａ（４２ｍｇ、６２％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．８４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），０．８８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），０．８５−１．３５（ｍ，１８Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）２（ＣＨ２）８），ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．５８−１．５９（ｍ，２Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．６６−１．６７（ｍ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２ＣＨ２），１．７７−１．７９（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），２．６１−２．６２（ｍ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），２．８８−２．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），３．２０−３．２４（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＯＨ），３．２８−３．３３（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＯＨ），３．８１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），４．４８（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），４．６２（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），６．８１（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．９１（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），８．４１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），１２．１６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２１．９，２３．４，２４．２，２５．９，２６．９，２７．３，２７．５，２７．７，２７．９，２８．１，２８．６，３１．５，４８．７，５２．６，６３．８，１１４．０，１１５．０，１３１．０，１３４．０，１５９．１，１７１．５，１９３．０；ＨＲＭＳ（ＥＳ）４４８．３１４９（ＭＨ＋）；Ｃ２５Ｈ４２Ｎ３Ｏ４は４４８．３１７０を要する；［α］Ｄ＝＋１．３  （（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）。
【０２０７】
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−ヒドロキシ-３−フェニルプロパン−２−イル）−２，１６−ジオキソ−３，２０−ジアザビシクロ［１５．２．１］イコサ−１（１９），１７−ジエン−４−カルボキサミド１ｂ
【０２０８】
大環状エステル１６（７９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｇ）、カルボン酸にし、これを（Ｌ）−Ｐｈｅｎａｌａｎｉｎｏｌとカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物を、酢酸エチルと石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１ｂ（６２ｍｇ、５８％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．６４−１．４７（ｍ，１６Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）２（ＣＨ２）８），１．７４−１．８０（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），１．８１−１．８６（ｍ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２ＣＨ２），２．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），２．５１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），２．８８−２．９２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ａｒ），３．０８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），３．７７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），４．１０−４．１８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），４．２４（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），５．３６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．７４（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．９５−６．９８（ｍ，２Ｈ，ピロール  Ｈ，ＮＨＣＨ），７．１４−７．２６（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），８．１９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），１１．４２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２４．９，２６．９，２７．３，２８．３，２９．０，２９．２，２９．５，２９．６，２９．８，３７．４，３９．１，５２．５，５３．６，６２．５，１１８．０，１２６．５，１２８．６，１２９．５，１３１．１，１３４．１，１３８．４，１５９．８，１７１．９，１９５．６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）４８２．２９９１（ＭＨ＋）；Ｃ２８Ｈ４０Ｎ３Ｏ４は４８２．３０１３を要する；［α］Ｄ＝＋１．６（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）。＼
【０２０９】
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−４−メチル−１−オキソペンタン−２−イル）−２，１６−ジオキソ-３，２０−ジアザビシクロ［１５．２．１］イコサ−１（１９），１７−ジエン−４−カルボキサミド１ｃ
【０２１０】
アルコール１ａ（３５ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を酸化し（一般的手順Ｈ）、粗生成物をｒｐ−ＨＰＬＣにより精製して、１ｃ（１３ｍｇ、３７％）を透明な油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．７９−１．３５（ｍ，１７Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＨＨ（ＣＨ２）７），０．９４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．３８−１．４４（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＨＨ），１．４６−１．５０（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＣＨ（ＣＨ３）２），１．６９−１．７６（ｍ，２Ｈ，ＣＨＨＣＨ（ＣＨ３）２），１．６６−１．６７（ｍ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）８ＣＨＨ），２．０７−２．１０（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），２．６９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ（ＣＨ２）１０），２．８８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ（ＣＨ２）１０），４．５２−４．５５（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），４．８９−４．９０（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．８０（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），７．０９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，２×ＮＨ），９．５９（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），１０．８７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２２．０，２３．２，２４．７，２５．０，２６．８，２８．５，２９．０，２９．３，２９．５，３１．０，３７．８，３９．３，５３．５，５７．６，１１２．０，１１６．８，１３０．５，１３４．５，１６０．３，１７２．６，１９４．６，１９９．２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）４４６．３００１（ＭＨ＋）；Ｃ２５Ｈ４０Ｎ３Ｏ４は４４６．３０１３を要する；［α］Ｄ＝＋２．２（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）。
【０２１１】
（Ｓ）−２，１６−ジオキソ−Ｎ−（（Ｓ）−１−オキソ-３−フェニルプロパン−２−イル）−３，２０−ジアザビシクロ［１５．２．１］イコサ−１（１９），１７−ジエン−４−カルボキサミド１ｄ
【０２１２】
アルコール１ｂ（５８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を酸化し（一般的手順Ｈ）、粗生成物をｒｐ−ＨＰＬＣにより精製して、１ｄ（２０ｍｇ、３４％）を透明な油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．７８−１．２９（ｍ，１５Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）２（ＣＨ２）７ＣＨＨ），１．３８−１．４０（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）９ＣＨＨ），１．６８−１．８６（ｍ，３Ｈ，ＣＯＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）８ＣＨＨ），２．００−２．０４（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），２．６９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），２．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），３．０８−３．１２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＡｒ），３．１７−３．２０（ＣＨＨＡｒ），４．７３（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），４．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．７７（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．９１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ピロール  Ｈ，ＮＨＣＨ），７．０６−７．２２（ｍ，６Ｈ，ＡｒＨ，ＮＨＣＨ），９．６６（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），１０．８２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２４．７，２６．８，２８．２，２８．５，２９．０，２９．３，２９．５，２９．９，３０．５，３１．１，３５．２，３９．３，５３．３，６０．０，１１６．９，１２７．３，１２８．９，１２９．４，１３０．４，１３４．５，１３５．６，１６０．２，１７２．３，１９４．５，１９８．７；ＨＲＭＳ（ＥＳ）４８０．２８３４（ＭＨ＋）；Ｃ２８Ｈ３８Ｎ３Ｏ４は４８０．２８５７を要する；［α］Ｄ＝＋１．８（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）。
【０２１３】
ＸＸＸ  ２ａ
【０２１４】
大環状エステル１７（２９ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｇ）、カルボン酸にし、これを（Ｌ）−Ｌｅｕｃｉｎｏｌとカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物を、酢酸エチルと石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２ａ（３０ｍｇ、８３％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．８７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），０．８９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．３３−１．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．４４−１．６６（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２，ＯＣＨ２ＣＨＨＣＨ２ＣＨ２），１．７０−１．７６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＨ（ＣＨ２）２），１．８０−１．８６（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨＨ），２．２０−２．２６（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨＨ），２．８９−２．９５（ｍ，４Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２，ＣＨ２ＯＨ），３．００−３．０４（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．６６−３．６７（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＯＨ），３．７５−３．７７（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＯＨ），３．８９−３．９３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），３．９６−４．００（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．０７−４．０９（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），４．７９−４．８０（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．３８−６．３９（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．５２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．６２（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．７８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），６．８５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），９．１３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２２．６，２３．０，２５．１，２９．０，２９．２，２９．５，３３．９，３８．７，４０．４，４９．１，５２．６，６４．８，１１０．３，１１４．３，１１７．２，１１８．７，１３０．７，１３３．２，１３３．４，１３９．３，１５９．７，１７１．７，１９３．０；ＨＲＭＳ  （ＥＳ）４７０．２６３６（ＭＨ＋）；Ｃ２６Ｈ３６Ｎ３Ｏ５は４７０．２６４９を要する；［α］Ｄ＝＋１．４（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．１）。
【０２１５】
ＸＸＸ  ２ｂ
【０２１６】
大環状エステル１７（６９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｇ）、カルボン酸にし、これを（Ｌ）−Ｐｈｅｎａｌａｎｉｎｏｌとカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物を、酢酸エチルと石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２ｂ（３２ｍｇ、３６％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．４２−１．５５（ｍ，２Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ２ＣＨ２），１．５９−１．６２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＨ（ＣＨ２）２），１．７２−１．８２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＨＣＨ２ＣＨＨ），２．１９−２．２２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＨ），２．８３−２．９１（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２，ＣＨＣＨ２Ａｒ），２．９２−３．０３（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．１７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），３．６９−３．７５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），３．８７−３．９０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），３．９４−３．９７（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．２０−４．２１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２Ａｒ），４．８８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．３３−６．３４（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．５３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．５８−６．６０（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ，ピロール  Ｈ），６．８２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１６−７．２６（ｍ，６Ｈ，５×ＡｒＨ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），９．４３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２０．１，２８．２，３１．２，３４．０，３７．２，４１．９，５２．８，６３．３，６６．０，１１０．０，１１７．２，１２６．８，１２８．７，１２８．８，１２９．３，１２９．４，１３１．２，１３５．５，１３７．８，１５７．４，１５９．６，１７１．３，１９３．４；ＨＲＭＳ（ＥＳ）５０４．２４８１（ＭＨ＋）；Ｃ２９Ｈ３４Ｎ３Ｏ５は５０４．２４９３を要する；［α］Ｄ＝＋１．３（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）。
【０２１７】
ＸＸＸ  ２ｃ
【０２１８】
アルコール２ａ（１５ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を酸化し（一般的手順Ｈ）、粗生成物をｒｐ−ＨＰＬＣにより精製して、２ｃ（６ｍｇ、３７％）を透明な油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．９６−１．００（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．４１−１．５５（ｍ，３Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ２ＣＨ２，ＣＨＨＣＨ（ＣＨ３）２），１．６９−１．７７（ｍ，４Ｈ，ＣＨＨＣＨ（ＣＨ３）２，ＯＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）２），１．７７−１．８４（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨＨ），２．２８−２．３２（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨＨ），２．８６−２．９５（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．０４−３．０６（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．９０−３．９５（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．０２−４．０７（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．５９−４．６３（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），４．６５−４．６８（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．２１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），６．３６−６．３７（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．４１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．５２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．７０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７１−６．７２（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），８．４１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ），９．６０（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ１９．６，２２．１，２３．２，２５．１，２７．６，３０．６，３４．０，３８．０，４２．３，５７．６，６５．７，１０９．８，１１５．９，１２９．１，１３１．７，１３５．２，１５７．４，１７１．４，１９２．１，１９８．８；ＨＲＭＳ（ＥＳ）４６８．２４８１（ＭＨ＋）；Ｃ２６Ｈ３４Ｎ３Ｏ５は４６８．２４９３を要する；［α］Ｄ＝＋１．８（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．１）。
【０２１９】
ＸＸＸ  ２ｄ
【０２２０】
アルコール２ｂ（２６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を酸化し（一般的手順Ｈ）、粗生成物をｒｐ−ＨＰＬＣにより精製して、２ｄ（４ｍｇ、１５％）を透明な油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００  ＭＨｚ）δ１．３９−１．５４（Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ２ＣＨ２），１．６２−１．６９（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）２），１．７２−１．８２（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨＨ），２．１９−２．２３（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨＨ），２．８５−２．９８（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），３．０２−３．０７（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），３．１３−３．２１（ｍ，２Ｈ，ＣＨＣＨ２Ａｒ），３．８９−３．９３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．００−４．０５（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．６１−４．６２（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），４．７８（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），６．３３−６．３５（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．４２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．４３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），６．４６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．６８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７１−６．７３（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．２０−７．２８（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），８．４７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ），９．６６（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ１９．６，２７．５，３１．１，３４．０，３５．２，４２．３，５９．８，６５．６，１０９．９，１１５．９，１２７．６，１２８．９，１２９．０，１２９．１．１２９．３，１２９．４，１３１．７，１３５．０，１３５．２，１５７．２，１５９．４，１７１．３，１９２．２，１９８．２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）５０２．２３２５（ＭＨ＋）；Ｃ２９Ｈ３２Ｎ３Ｏ５は５０２．２３３６を要する；［α］Ｄ＝＋２．０（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．１）。
【０２２１】
ＸＸＸ  ３ａ
【０２２２】
大環状エステル１８（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｇ）、カルボン酸にし、これを（Ｌ）−Ｌｅｕｃｉｎｏｌとカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物を、酢酸エチルと石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３ａ（２５ｍｇ、５４％）を白色の固体として得た。融点  １２２〜１２５℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．８４，（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），０．８５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．３０−１．３８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．５３−１．５８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．９２−１．９５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．６７−２．７０（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），２．９１−３．０４（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２，ＣＨＣＨＨＡｒ），３．１３−３．１８（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），３．３４（ｄｄ，Ｊ＝１４．４及び４．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨＨＡｒ），３．５０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），３．７２（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＨＯＨ），３．８２（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＨＯＨ），３．８５−３．９８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２Ｏ），４．０８−４．１４（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２ＯＨ），４．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２Ａｒ），６．１１−６．１２（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．１６−６．１７（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．４０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），１０．５３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２２．６，２２．９，２５．１，２５．４，２５．５，３２．８，３７．２，４０．３，４０．４，４９．６，５４．０，６５．４，６７．２，６７．５，１１０．３，１１４．４，１１４．８，１１７．９，１２８．１，１２９．７，１３０．３，１３０．６，１３２．１，１３４．６，１５７．５，１５８．１，１６０．１，１７１．３，１９２．８；ＨＲＭＳ（ＥＳ）５７６．３０６８２（ＭＨ＋）；Ｃ３３Ｈ４２Ｎ３Ｏ６は５７６．３０６８１を要する；［α］Ｄ＝＋４．０（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．１）。
【０２２３】
ＸＸＸ  ３ｂ
【０２２４】
大環状エステル１８（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｇ）、カルボン酸にし、これを（Ｌ）−Ｐｈｅｎａｌａｎｉｎｏｌとカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物を、酢酸エチルと石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３ｂ（２８ｍｇ、５５％）を白色の固体として得た。融点  １１８〜１２０℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．９２−１．９９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．７０−２．７３（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），２．８４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨＣＨ２Ａｒ），２．９５−３．０５（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２，ＣＨＣＨＨＡｒＯ），３．１７−３．２１（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），３．３４（ｄｄ，Ｊ＝１４．４及び６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨＨＡｒＯ），３．７６−３．８５（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），３．９０−４．０２（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２Ｏ），４．２２−４．２６（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２Ａｒ），５．１５（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２ＡｒＯ），６．０７−６．０８，６．１４−６．１５（ｍ，２Ｈ，２×ピロール  Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１０−７．１２（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．１６−７．１９（ｍ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨ２ＯＨ），１０．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２５．４，２５．５，３３．１，３７．３，３７．４，４０．７，５２．７，５３．５，６３．１，６７．２，６７．６，１１０．２，１１４．３，１１４．７，１１８．４，１２６．５，１２７．９，１２８．６，１２９．５，１２９．８，１３０．５，１３０．８，１３２．２，１３４．６，１３８．１，１５７．６，１５８．０，１５９．９，１７１．３，１９３．２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）６１０．２９１１４（ＭＨ＋）；Ｃ３６Ｈ４０Ｎ３Ｏ６は６１０．２９１１６を要する；［α］Ｄ＝＋１．４（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）。
【０２２５】
ＸＸＸ  ３ｃ
【０２２６】
アルコール３ａ（２４ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を酸化し（一般的手順Ｈ）、粗生成物をｒｐ−ＨＰＬＣにより精製して、３ｃ（１０ｍｇ、４１％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．８４，（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．４３−１．５１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＣＨ（ＣＨ３）２），１．６６−１．７４（ｍ，２Ｈ，ＣＨＨＣＨ（ＣＨ３）２），１．９３（ｂｒ  ｓ，４Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．６８−２．７１（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），２．９４−３．０７（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２，ＣＨＣＨＨＡｒ），３．０９−３．１３（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），３．３３（ｄｄ，Ｊ＝１４．４及び４．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨＨＡｒ），３．８１−３．９７（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２Ｏ），４．５２−４．６０（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），４．７４−４．７９（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），６．０７−６．０９（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．１４−６．１５（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．２４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ），６．６３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．０１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．０５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），９．６１（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），１０．０２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２２．０，２３．１，２４．９，２５．３，２５．３，３２．８，３６．３，３７．８，４０．３，５４．３，５７．６，６７．１，６７．３，１１０．６，１１４．４，１１４．６，１１７．２，１２７．８，１２９．０，１２９．７，１３０．３，１３２．２，１３４．９，１５７．５，１５８．２，１６０．４，１７１．５，１９２．３，１９９．２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）５７４．２９００（ＭＨ＋）；Ｃ３３Ｈ４０Ｎ３Ｏ６は５７４．２９１２を要する；［α］Ｄ＝＋３．５（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．１）。
【０２２７】
ＸＸＸ  ３ｄ
【０２２８】
アルコール３ｂ（１８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を酸化し（一般的手順Ｈ）、粗生成物をｒｐ−ＨＰＬＣにより精製して、３ｄ（１２ｍｇ、６５％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．９２（ｂｒ  ｓ，４Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．６８−２．７０（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），２．９３（ｄｄ，Ｊ＝１４．７及び１０．５Ｈｚ，１Ｈ  ＣＨＣＨＨＡｒＯ），２．９６−３．０４（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．０６−３．１４（ｍ，２Ｈ，ＣＨＣＨＨＡｒ，ＡｒＣＨ２ＣＨＨ），３．１７（ｄｄ，Ｊ＝１４．３及び６．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨＨＡｒ），３．２６（ｄｄ，Ｊ＝１４．７及び４．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨＨＡｒＯ），３．７９−３．９７（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２Ｏ），４．６７−４．７１（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＯ），４．７４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２Ａｒ），６．００−６．０２，６．１４−６．１５（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＯ，ピロール  Ｈ），６．１１−６．１２（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．０８−７．１３（ｍ，６Ｈ，ＡｒＨ，ＮＨＣＨＣＨＯ），９．６７（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），９．８９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０  ＭＨｚ）δ２５．３，３２．８，３５．１，３５．８，４０．３，５４．１，５９．９，６７．１，６７．３，１１０．３，１１４．４，１１５．１，１１７．１，１２７．３，１２７．８，１２８．８，１２９．０，１２９．４，１２９．７，１３０．３，１３２．２，１３５．４，１５７．５，１５８．２，１６０．４，１７１．３，１９２．３，１９８．５；ＨＲＭＳ（ＥＳ）６０８．２７３６（ＭＨ＋）；Ｃ３６Ｈ３８Ｎ３Ｏ６は６０８．２７５５を要する；［α］Ｄ＝＋１．１（（ＣＨ３）２ＳＯではｃ０．２）．
【０２２９】
メチル３−（４−アリルオキシフェニル）プロパノエート５
【０２３０】
ＤＭＦ（６６ｍＬ）中のメチル３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノエート４（９．０５ｇ、５０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１３．９ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（１．８９ｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び臭化アリル（７．５９ｇ、６３ｍｍｏｌ）を連続して加えた。得られた溶液を窒素雰囲気下において大気温度で１８時間撹拌し、氷水に注いだ。混合物を酢酸エチル（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物を１ＭのＨＣｌ水溶液、Ｈ２Ｏ（２×）、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、揮発物を真空下で除去して、５を定量収率（１１．０１ｇ）で黄色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ２．６０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），２．８９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．６６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．５０−４．５２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２５−５．３０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．３７−５．４４（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．９９−６．１２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ３０．１，３５．９，５１．６，６８．８，１１４．７，１１７．６，１２９．２，１３２．７，１３３．４，１５７．１，１７３．４。
【０２３１】
３−（４−アリルオキシフェニル）プロパン酸６
【０２３２】
水酸化リチウム（６．３４ｇ、２４６ｍｍｏｌ）を、３：１のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１１０ｍＬ）中のメチル３−（４−アリルオキシフェニル）プロピオネート５（１１．０１ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）に加え、４０℃で３．５時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、２ＭのＨＣｌ水溶液によりｐＨ１に酸性化した。得られた混合物を酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（２×）及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、揮発物を真空下で除去して、カルボン酸６を定量収率（１０．３１ｇ）で黄色の固体として得た。融点  ８７〜８９℃、文献の融点（lit. m.p.）  ８９〜９０℃｛５｝；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ）δ２．４５−２．５０（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），２．７４（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），４．５０−４．５３（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２２−５．２６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．３４−５．４１（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．９６−６．０９（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），１２．１１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＯＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，７５ＭＨｚ）δ２９．７，３５．８，６８．３，１１４．７，１１７．５，１２９．４，１３３．１，１３４．１，１５６．７，１７４．０。
【０２３３】
３−（４−アリルオキシフェニル）プロパノイルクロリド７
【０２３４】
乾燥ジクロロメタン（２６ｍＬ）中のカルボン酸６（１．６６９ｇ、８．０ｍｍｏｌ）を０℃で塩化チオニル（３．９８ｍＬ、４８．０ｍｍｏｌ）と反応させた。溶液を０℃で１０分間撹拌し、４０℃に加熱し、１８時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、酸塩化物７を定量収率（１．８１７ｇ）で暗黄色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ２．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．１８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），４．５２−４．５５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２８−５．３３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．３９−５．４６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），６．００−６．１３（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ３０．１，４８．７，６８．７，１１４．９，１１７．５，１２９．２，１３０．７，１３３．２，１５７．４，１７３．０。
【０２３５】
２−トリクロロアセチル−１Ｈ−ピロール９
【０２３６】
エーテル（１５ｍＬ）中のピロール（６．７２ｇ、１００ｍｍｏｌ）を、エーテル（５０ｍＬ）中の塩化トリクロロアセチル（２０．０ｇ、１１０ｍｍｏｌ）の溶液に１時間かけて滴下した。反応を水（３５ｍＬ）中の炭酸カリウム（８．９７ｇ）の添加によにゆっくりと停止させる前に、得られた混合物を３時間撹拌した。層を分離し、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。揮発物を真空下で除去して、灰色の結晶質固体を得て、これをシリカゲル６０（６ｇ）の添加によりｎ−ヘキサン（３５０ｍＬ）から再結晶させた。高温混合物を濾過し、濾液を−１２℃に冷ました。白色の沈殿物を濾過により収集し、濾液の体積を真空下で低減した（〜５０ｍＬ）。濾液を４℃に冷却し、灰色の結晶質固体を収集した。全ての沈殿物を真空下において大気温度で乾燥して、化合物１（１７．８ｇ、８４％）を白色の結晶質固体として得た。融点  ７１〜７３℃、文献の融点  ７２〜７４℃｛６｝；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ６．３７−６．４０（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ４），７．１８−７．２０（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ３），７．３９−７．４２（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ５），９．７９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ９４．９，１１１．８，１２１．３，１２２．８，１２７．３，１７３．２。文献の実験データ。｛６｝
【０２３７】
エチル１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート１０
【０２３８】
ナトリウム金属（０．１５ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を、無水エタノール（２０ｍＬ）の溶液に加え、ナトリウムが溶解すると、ピロール１（１０．４５ｇ、４９．２ｍｍｏｌ）を１０分間かけて少量ずつ加えた。完了すると、混合物を大気温度で４０分間撹拌し、揮発物を真空下で除去して、暗赤色の油状物を得て、それをジエチルエーテル（３０ｍＬ）に再溶解し、３Ｍの塩酸水溶液（６ｍＬ）で抽出した。エーテル相を分離し、水相をジエチルエーテル（２０ｍＬ）で更に抽出した。エーテル相を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。揮発物を真空下で除去して、褐色の油状物を得て、それを放置して結晶化させて、黄褐色の結晶（６．５６２ｇ）を形成させた。黄褐色の結晶を減圧下での蒸留（１３０℃、５ｍｍＨｇ）により精製して、化合物１０（６．２１３ｇ、９１％）を無色の油状物として得て、それを放置して結晶化させて、白色の結晶を形成させた。融点  ３６〜３７℃、文献の融点  ３８〜３９．５℃｛６｝；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．３６（ｔ，３Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ３），４．３３（ｑ，３Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ３），６．２５−６．２７（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ４），６．９１−６．９３（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ３），６．９４−６．９５（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ５），９．３１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ１４．４３，６０．２９，１１０．３５，１１５．０７，１２２．７０，１２２．９９，１６１．２５。文献の実験データ。｛６｝
【０２３９】
エチル５−ウンデカ−１０−エノイル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート１１ａ
【０２４０】
エチル１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート１０（５０５ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）を、１０−ウンデセノイルクロリド（１．６ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）とカップリングさせ（一般的手順Ａ）、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチルの９：１）により精製して、化合物１１ａ（５８８ｍｇ、５３％）を黄色の油状物として得て、これを放置して結晶化させた。融点  ４１〜４３℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．２５−１．３９（ｍ，１３Ｈ，（ＣＨ２）２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２，ＯＣＨ２ＣＨ３），１．７２（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）６ＣＨＣＨ２），２．０４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，（ＣＨ２）２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），２．７９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２），４．３６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ３），４．９３（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨＨ），４．９９（ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨＨ），５．７８−５．８４（ｍ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨ２），６．８３−６．８３（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．８８−６．８９（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），９．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ１４．５，２４．９，２９．０，２９．２，２９．４，２９．５，３３．９，３８．６，６１．３，１１４．３，１１５．５，１１５．６，１２７．２，１３４．１，１３９．３，１６０．５，１９１．８；ＨＲＭＳ（ＥＳ）３０６．２０５２（ＭＨ＋）；Ｃ１８Ｈ２８ＮＯ３  は３０６．２０６４を要する。
【０２４１】
５−ウンデカ−１０−エノイル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸１１ｂ
【０２４２】
エステル１１ａ（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｂ）、カルボン酸１２ｂ（７７ｍｇ、８５％）を淡黄色の固体として得た。融点  １１３〜１１５℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ１．２４−１．４２（ｍ，１０Ｈ，（ＣＨ２）２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），１．６９−１．７７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），２．０１−２．０７（ｍ，２Ｈ，（ＣＨ２）２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２），４．９２−５．０２（ｍ，２Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨ２），５．７５−５．８８（ｍ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨ２），６．９５−７．０４（ｍ，２Ｈ，ピロール  Ｈ），１１．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ２５．０，２９．０，２９．２，２９．４，２９．５，３３．９，３８．９，１１４．３，１１７．２，１１７．４，１２８．０，１３４．６，１３９．３，１６４．２，１９３．５；ＨＲＭＳ（ＥＳ）２７８．１７４０（ＭＨ＋）；Ｃ１６Ｈ２４ＮＯ３は２７８．１７５１を要する。
【０２４３】
エチル５−［３−（４−アリルオキシフェニル）プロパノイル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート１２ａ
【０２４４】
エチル１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート１０（２．２３ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）を、酸塩化物７（７．１９ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）とカップリングさせ（一般的手順Ａ）、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチルの４：１）により精製して、化合物１２ａ（２．０７６ｇ、４０％）を黄色の油状物として得て、これを放置して結晶化させた。融点  ６９〜７３℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ１．３７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ３），２．９６−３．０１（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．０７−３．１３（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），４．３６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ３），４．５０−４．５２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２６−５．３０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．３６−５．４４（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．９８−６．１１（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．８０−６．８８（ｍ，４Ｈ，ピロール  Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），９．８３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５０ＭＨｚ）δ１４．５，２９．６，４０．５，６１．３，６９．０，１１４．９，１１５．６，１１７．７，１２７．３，１２９．４，１３３．１，１３３．５，１３３．９，１５７．２，１６０．５，１９０．６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）３２８．１５４１（ＭＨ＋）；Ｃ１９Ｈ２２ＮＯ４は３２８．１５４９を要する。
【０２４５】
５−［３−（４−アリルオキシフェニル）プロパノイル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸１２ｂ
【０２４６】
エステル１２ａ（５８４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を加水分解して（一般的手順Ｂ）、カルボン酸１２ｂ（５１１ｍｇ、９６％）を黄色の固体として得た。融点  １６９〜１７２℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ３．０１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．１６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），４．５１（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２８（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．４０（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．９９−６．１１（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．９２（ｂｒ  １Ｈ，ピロール  Ｈ），７．０１（ｂｒ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），１０．９９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ），ＣＯＯＨは観察されず；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ２９．６，４０．７，６８．８，１１４．９，１１７．１，１１７．４，１１７．７，１２７．３，１２９．４，１３３．１，１３３．５，１３３．９，１５７．２，１６４．１，１９２．１；  ＨＲＭＳ：（ＥＳ）３００．１２４１（ＭＨ＋）Ｃ１７Ｈ１８ＮＯ４は３００．１２３６を要する。
【０２４７】
（Ｓ）−メチル２−（５−ウンデカ−１０−エノイル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド）ペンタ−４−エノエート１３
【０２４８】
カルボン酸１１ｂ（４１９ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を（Ｓ）−アリル−Ｇｌｙ−ＯＭｅ（３１４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）とカップリングさせ（一般的手順Ｃ）、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチルの４：１）により精製して、非環状ジエン１４（２８０ｍｇ、４８％）を淡黄色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．２６−１．３７（ｍ，１０Ｈ，（ＣＨ２）２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），１．６８−１．７３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），２．０３（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，（ＣＨ２）２（ＣＨ２）５ＣＨ２ＣＨＣＨ２），２．５７−２．６３（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＨ），２．６７−２．７２（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＨ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２），３．７９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．８６（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），４．９３（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨＨ），４．９９（ｄ，Ｊ＝１８．０Ｈｚ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨＨ），５．１５（ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．６５−５．７６（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．７７−５．８４（ｍ，１Ｈ，（ＣＨ２）８ＣＨＣＨ２），６．５７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．６０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．８３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），９．９７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２４．９，２９．０，２９．２，２９．４，２９．５，３３．９，３６．８，３８．５，５１．８，５２．７，１１０．３，１１４．３，１１５．５，１１９．７，１２９．６，１３２．１，１３３．７，１３９．３，１５９．６，１７２．２，１９１．５；ＨＲＭＳ（ＥＳ）３８９．２４２７（ＭＨ＋）；Ｃ２２Ｈ３３Ｎ２Ｏ４は３８９．２４３５を要する。
【０２４９】
メチル（２Ｓ）−２−［［５−［３−（４−アリルオキシフェニル）プロパノイル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボニル］アミノ］ペンタ−４−エノエート１４
【０２５０】
カルボン酸１２ｂ（４８０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を（Ｓ）−アリル−Ｇｌｙ−ＯＭｅ（２９７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）とカップリングさせ（一般的手順Ｄ）、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチルの１：１）により精製して、非環状ジエン１４（６２１ｍｇ、９４％）を暗黄色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ２．５８−２．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），２．９５−３．００（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．０５−３．１１（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．７９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．５１（ｄｔ，Ｊ＝５．１及び１．５Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），４．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．７及び５．６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．１２−５．１８（ｍ，２Ｈ，ＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２８（ｄｑ，Ｊ＝１０．４及び１．６Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ）５．４０（ｄｑ，Ｊ＝１７．４及び１．６Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．６５−５．７９（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．９９−６．１１（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．５３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．５７（ｄｄ，Ｊ＝４．０及び２．７Ｈｚ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．０及び２．７Ｈｚ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．８４（ｄｔ，Ｊ＝８．７及び２．３Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１３（ｄｔ，Ｊ＝８．７及び２．３Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），９．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ２９．５，３６．６，４０．３，５１．６，５２．６，６８．８，１１０．１，１１３．１，１１４．９，１１７．６，１１９．４，１２９．３，１２９．４，１３０．９，１３２．２，１３３．４，１３３．５，１５７．１，１５９．７，１７２．４，１９０．３；ＨＳＭＳ：（ＥＳ）４１１．１９０９（ＭＨ＋）Ｃ２３Ｈ２７Ｎ２Ｏ５は４１１．１９２０を要する。
【０２５１】
メチル（２Ｓ）−３−（４−アリルオキシフェニル）−２−［［５−［３−（４−アリルオキシフェニル）プロパノイル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボニル］アミノ］プロパノエート１５
【０２５２】
カルボン酸１２ｂ（１９９ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を（Ｓ）−アリル−Ｔｒｙ−ＯＭｅ（２０７ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）とカップリングさせ（一般的手順Ｃ）、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチルの１：１）により精製して、非環状ジエン１５（３２３ｍｇ、９４％）を黄色を帯びた褐色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ２．９４−２．９９（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．０４−３．１０（ｍ，２Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２），３．１５（ｄｄ，Ｊ＝５．１及び５．１Ｈｚ，２Ｈ，ＮＨＣＨ），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．４８−４．５２（ｍ，４Ｈ，２×ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．０２（ｄｔ，Ｊ＝７．８及び５．７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），５．２５−５．３０（ｍ，２Ｈ，２×ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ）５．３６−５．４３（ｍ，２Ｈ，２×ＯＣＨ２ＣＨＣＨＨ），５．９７−６．１１（ｍ，２Ｈ，２×ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６．５０（ｄｄ，Ｊ＝４．１及び２．６Ｈｚ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．７７（ｄｄ，Ｊ＝４．１及び２．６Ｈｚ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），１０．０７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ２９．６，３７．２，４０．４，５２．７，５３．４，６８．９，６９．０，１１０．４，１１４．９，１１５．０，１１５．７，１１７．８，１１７．９，１２７．７，１２９．４，１２９．８，１３０．４，１３３．３，１３３．５，１５７．２，１５７．９，１５９．４，１７２．１，１９０．３；ＨＲＭＳ（ＥＳ）５１７．２３２１（ＭＨ＋）Ｃ３０Ｈ３３Ｎ２Ｏ６は５１７．２３３９を要する。
【０２５３】
（Ｓ）−メチル２，１６−ジオキソ−３，２０−ジアザビシクロ［１５．２．１］イコサ−１（１９），１７−ジエン−４−カルボキシレート１６
【０２５４】
非環状ジエン１３（３０８ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）のＲＣＭ（一般的手順Ｅ）によって、シス及びトランス大環状分子の混合物（１００ｍｇ、３５％）を得た。粗混合物を水素化し（一般的手順Ｆ）、酢酸エチル及び石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１６（７９ｍｇ、７９％）を白色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ０．８０−０．９４（ｍ，２Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）８ＣＨ２），０．９６−１．１３（ｍ，２Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＨ２），１．１８−１．３８（ｍ，１２Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），１．６８−１．７５（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），１．７８−１．８８（ｍ，２Ｈ，ＣＯＣＨ２ＣＨ２），２．１７−２．２５（ｍ，１Ｈ，ＣＯ（ＣＨ２）１０ＣＨＨ），２．６０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），２．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＨ），３．８０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．９３（ｄｔ，Ｊ＝８．０及び３．９Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ３），６．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．７１（ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．９１−６．９２（ｍ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），１０．１９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２４．０，２６．７，２７．７，２８．４，２９．０，２９．３，２９．４，２９．７，３０．１，３９．０，５２．６，５２．７，１１０．８，１１６．５，１３０．２，１３４．１，１５９．５，１７３．０，１９４．１；ＨＲＭＳ（ＥＳ）３６３．２２７４（ＭＨ＋）；Ｃ２０Ｈ３１Ｎ２Ｏ４は３６３．２２７８を要する。
【０２５５】
ＸＸＸ  １７
【０２５６】
非環状ジエン１４（２０９ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）のＲＣＭ（一般的手順Ｅ）によって、シス及びトランス大環状分子の混合物（１０３ｍｇ、５３％）を得た。粗混合物を水素化し（一般的手順Ｆ）、酢酸エチル及び石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチルから再結晶させて、１７（６９ｍｇ、６７％）を白色の針状結晶として得た。融点  １９８〜２００℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．３３−１．４０（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨＨＣＨ２），１．４５−１．５２（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨＨＣＨ２），１．６４−１．７０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＨ（ＣＨ２）２），１．７２−１．８１（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＨＣＨ２ＣＨＨ），２．３１−２．３７（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＨ），２．８３−２．９５（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．０４−３．０８（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．８０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．８９−３．９２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．０３−４．０６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨ（ＣＨ２）３），４．７５−４．７８（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．３７−６．４０（ｍ，２Ｈ，ピロール  Ｈ，ＯＡｒＨ），６．５０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．６１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  Ｈ），６．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＯＡｒＨ），７．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＯＡｒＨ），８．３４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ，０ｏＣ）δ１９．１，２７．４，２９．５，３３．９，４２．５，５２．０，５２．９，６５．２，１０９．５，１１５．７，１２９．２，１３１．８，１３５．０，１５７．４，１５８．８，１７２．６，１９２．０；ＨＲＭＳ（ＥＳ）３８５．１７７８（ＭＨ＋）；Ｃ２１Ｈ２５Ｎ２Ｏ５は３８５．１７５８を要する。
【０２５７】
ＸＸＸ  １８
【０２５８】
非環状ジエン１５（１５０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＲＣＭ（一般的手順Ｅ）によって、シス及びトランス大環状分子の混合物（８８ｍｇ、６２％）を得た。粗混合物を水素化し（一般的手順Ｆ）、酢酸エチル及び石油エーテル（５０／７０）の勾配を使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１８（８０ｍｇ、９１％）を黄色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ）δ１．８８−１．９８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．６７−２．７１（ｍ，１Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），２．９３−３．０３（ｍ，３Ｈ，ＡｒＣＨ２ＣＨ２，ＮＨＣＨＣＨＨ），３．１１（ｄｔ，Ｊ＝１２．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＣＨＨＣＨ２），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１４．１及び５．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣＨＨ），３．８４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，（ＣＨ２）２ＡｒＯＣＨ２），３．９５−４．０４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＡｒＣＨ２ＣＨ），４．８５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．０８−６．１２（ｍ，２Ｈ，ピロール  Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＡｒＨ），６．８８−６．９２（ｍ，４Ｈ，ＯＡｒＨ），９．７１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ピロール  ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１５０ＭＨｚ）δ２５．４，２５．５，３２．９，３６．２，４０．３，５２．８，５３．２，６７．２，６７．６，１１０．１，１１４．２，１１４．９，１１７．０，１２７．２，１２９．８，１２９．９，１３０．４，１３２．３，１３４．５，１５７．５，１５８．１，１５９．５，１７２．２，１９２．１；ＨＲＭＳ（ＥＳ）４９１．２１９５（ＭＨ＋）；Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ６は４９１．２１７７を要する。
【０２５９】
参考文献：｛１｝Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｖ．Ｆ．；Ｓａｌｄａnａ，Ｓ．；Ｃｏｎｇ，Ｊ．；Ｇｏｌｌ，Ｄ．Ｅ．Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０００年、２７９、１７０〜１７８。｛２｝Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｆ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９８２年、７、１０２〜１０５。｛３｝Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ，Ａ．；Ｋａｎｅｒｖａ，Ｌ．Ｔ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００６年、６２、５８３１。｛４｝Ｄｉｘｏｎ，Ｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９５３年、５５、１７０。｛５｝Ｓｔｏｅｓｓｌ，Ａ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９６６年、７、２２８７〜２２９２。｛６｝Ｗａｌｌａｃｅ，Ｄ．Ｍ．；Ｌｅｕｎｇ，Ｓ．Ｈ．；Ｓｅｎｇｅ，Ｍ．Ｏ．；Ｓｍｉｔｈ，Ｋ．Ｍ．Ｊ．Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．１９９３年、５８、７２４５〜７２５１。
【０２６０】
実施例３−カルパインのインヒビターとしての１８員及び２４員大環状分子の合成及び生物学的評価
本研究は、あまりペプチドに似てなく、かつプロテアーゼへの結合の際にインヒビター及び基質により一般的に採用される立体配座であるβストランドジオメトリーを採用するように設計されている、伸張大環状分子に基づいている。
【０２６１】
構造研究は、１７員及び１８員環系が最も好まれ、Ｐ３位置へのフェニル基の組み込みが結合に好まれ、同時にβストランド立体配座の採用を助けることも示している。この研究において、本発明者たちは、ペプチド骨格への芳香族基の付加によってこのことを排除し、これは側鎖の柔軟性及び極性の調査を可能にする。
【０２６２】
したがって、本発明者たちは、Ｐ３アミノ酸残基の代わりにピロール基を組み込む閉環メタセシス（ＲＣＭ）によりＰ２−Ｐ４アミノ酸を束縛し、それによって、ペプチド様の性質を低減するが、依然として、必要な骨格のβストランドジオメトリーを維持することにより、一連の１８員及び２４員大環状分子を合成した。Ｐ２及びＰ４側鎖の極性／芳香族性は、フェニル基の組み込みにより変わり、それは、大環状分子の側鎖の柔軟性にも影響を与える。大環状分子は、Ｃ末端端部に伸張してＰ１残基を組み込み、これは特定の酵素への選択性を組み込むために使用される。この場合、カルパインのＰ１部位は嵩高いアミノ酸を収容することが知られているので、Ｌｅｕ及びＰｈｅが、以下のとおり、選択される。
【０２６３】
【化１３】
2016501848.tif 000019
大環状ペプチド模倣テンプレートをこの研究に使用した。Ｌｅｕ＝ロイシン、Ｐｈｅ＝フェニルアラニン。
【０２６４】
インヒビターの有効性は、ヒツジのカルパインをインビトロアッセイに使用して評価した。ヒツジとヒトの結晶の配列の近い相同性によって示されるように、ヒツジの水晶体タンパク質がラットよりヒトの水晶体タンパク質に類似していることが見出されたので、齧歯類モデルよりもヒツジモデルが選択された。本発明者たちのインヒビターを、２つのカルパインイソフォームの間に選択性が存在するかを決定するために、ヒツジのカルパイン２に対して試験し、ヒツジのカルパイン１に対して最も強力なものを試験した。加えて、インヒビターを、Ｐ１部位のＰｈｅ基を収容することが知られているウシβ−キモトリプシン（セリンプロテアーゼ）に対して試験し、プロテアーゼの部類にわたる本発明者たちのインヒビターの選択性を評価すること及び本発明者たちのインヒビター設計の多用性を検査することを可能にした。
【０２６５】
大環状分子１〜３の合成は、容易に入手可能な簡単な構成単位から調製されたジエン１３〜１５のＲＣＭに基づいていた（スキーム２）。必要なジエンの合成は、２つの構成単位の調製に分けられており、１．ヒドロキシフェニル７の修飾及び２．ピロール１０の連結であった（スキーム１）。最初に、７は、４と臭化アリルとの反応により５を得て、それを加水分解して６にし、塩化チオニルにより処理して、必要な酸塩化物７を得ることによって調製した。１０は、塩化トリクロロアセチルによるピロール８のアセチル化により９を得て、それをナトリウムエトキシドにより処理して、必要なエステル１０を得ることによって調製した。次にエステル１０を、１０−ウンデセノイルクロリド及び酸塩化物７と、Ｙｂ（ＯＴｆ）３の存在下で別々に反応させて、１１ａ及び１２ａを得て、それらを加水分解して、それぞれ中程度の収率で必要な酸１１ｂ及び１２ｂにした。必要なジエン１３は、酸１１ｂを（Ｓ）−アリル−Ｇｌｙ−ＯＭｅ（＊）とカップリングさせることにより調製し、一方、ジエン１４及び１５は、（Ｓ）−アリル−Ｇｌｙ−ＯＭｅ（＊）及び（Ｓ）−アリル−Ｔｙｒ−ＯＭｅ（＊＊）によりそれぞれ処理することによって酸１２ｂから同様に調製した（スキーム２）。
【０２６６】
【化１４】
2016501848.tif 000020
スキーム１．１１〜１２の合成。ａ）ＡｌｌＢｒ、Ｋ２ＣＯ３、ＴＢＡＩ、ＤＭＦ、室温（１００％）；ｂ）ＬｉＯＨ×Ｈ２Ｏ、ＴＨＦ、Ｈ２Ｏ、４０℃、（１００％）；ｃ）ＳＯＣｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２、Δ、（１００％）；ｄ）（Ｃｌ）３ＣＣＯＣｌ、Ｅｔ２Ｏ、室温、（８４％）；ｅ）ＮａＯＥｔ、ＥｔＯＨ、室温、（９６％）；ｆ）Ｙｂ（ＯＴｆ）３、ＣＨ３ＮＯ２、室温、１０−ウンデセノイルクロリド（１１ａ：１７％）又は７（１２ａ：３１％）；ｇ）  ＫＯＨ、ＴＨＦ、Ｈ２Ｏ、４０〜５０℃、１１ａ（１１ｂ：８１％）又は１２ａ（１２ｂ：９６％）。ＴＢＡＩ＝ヨウ化テトラブチルアンモニウム。
【０２６７】
必要なジエンを手にすると、１３〜１５のＲＣＭをＧｒｕｂｂｓ第二世代触媒の使用により実施して、必要な大環状分子を中程度の収率で得た。非環状ジエン１３〜１６のＲＣＭによって、シス／トランスアルケンの混合物を得て、それを直接水素化して、大環状エステル１７〜１９にした。その後、大環状エスエル１７〜１９を加水分解して、これらの対応するカルボン酸にし、続いて（Ｌ）−ｌｅｕｃｉｎｏｌ又は（Ｌ）−ｐｈｅｎａｌａｎｉｎｏｌのいずれかとペプチドカップリングさせて、大環状アルコール１ａ〜３ａ及び１ｂ〜３ｂをそれぞれ得た。次にアルコール１ａ〜３ａ及び１ｂ〜３ｂをＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬により酸化して、アルデヒド１ｃ〜３ｃ及び１ｄ〜３ｄを中程度の収率で得た（スキーム２）。
【０２６８】
【化１５】
2016501848.tif 000021
スキーム２．１〜３の合成。ａ）ＨＡＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＥＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、（Ｓ）−アリル−Ｇｌｙ−ＯＭｅ、１１ｂ（１３：４８％）、ｂ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＥＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、（Ｓ）−アリル−Ｇｌｙ−ＯＭｅ、１２ｂ（１４：９４％）、ｃ）ＨＡＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＥＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、（Ｓ）−アリル−Ｔｙｒ−ＯＭｅ、１２ｂ（１５：８４％）；ｄ）Ｇｒｕｂｂｓ第二世代触媒、ＣＨ２Ｃｌ２、Δ、次にＨ２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＡｃ（１６：２８％、１７：３６％、１８：５６％）；ｅ）２Ｍ  ＮａＯＨ、ＴＨＦ、室温、（１６〜１８は定量）；次にＨＡＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、（Ｌ）−Ｌｅｕｃｉｎｏｌ、（１ａ：６２％、２ａ：８１％、３ａ：５４％）；又はＨＡＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、（Ｌ）−Ｐｈｅｎａｌａｎｉｎｏｌ、（１ｂ：５８％、２ｂ：３６％、３ｂ：５５％）；ｆ）Ｄｅｓｓ  Ｍａｒｔｉｎ  Ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温（１ｃ：３７％、１ｄ：３４％、２ｃ：３７％、２ｄ：１５％、３ｃ：４１％、３ｄ：６５％）。ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＥＤＣＩ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、ＨＯＢｔ＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール。
【０２６９】
アルコール及びアルデヒド１〜３を、ヒツジのカルパイン２（ｏ−ＣＡＰＮ２）及びウシのα−キモトリプシン（ｂＣＴ）に対してアッセイして、インビトロ効力及びプロテアーゼ選択性を決定した。ヒツジのカルパイン１（ｏ−ＣＡＰＮ１）のアッセイも、イソフォーム選択性が存在するかを決定するために最も強力な化合物によって実施した。全てのアルコール１ａ〜３ａ及び１ｂ〜３ｂは、ｏ−ＣＡＰＮ２及びｂＣＴに対して不活性であることが見出され（データ示されず）、非共有阻害がないこと及びアルデヒド基の存在がプロテアーゼの共有阻害にとって好ましいことを示している。最も強力なｏ−ＣＡＰＮ２インヒビターは、１８員大環状アルデヒド１ｃであることが見出され、これは環のより大きな柔軟性及びＰ１におけるＬｅｕ基の存在に起因すると推定される（ＩＣ５０＝６６ｎＭ）。他の全ての大環状化合物は、ｏ−ＣＡＰＮ２に対して等しく効力があることが見出され、１５０〜２５０ｎＭの範囲であった。このことは、ペプチド骨格へのピロール環の組み込みが、結合に好ましいβストランド立体配座の採用を可能にしたことを示唆している。
【０２７０】
表１は、ヒツジのカルパイン及びウシのα−キモトリプシンインビトロ阻害アッセイデータを示す。
【０２７１】
【表１】
2016501848.tif 000022
【０２７２】
表１において、［ａ］値は、三重に実施した２つの実験の平均である。実験間の変動は、±１０％未満である。［ｂ］値は、実施した３つの実験の平均である。実験間の変動は、＋１０％未満である。［ｃ］本発明者たちが０．３×Ｋｍ及び０．７５×Ｋｍで実施した阻害研究。［ｄ］決定されず。［ｅ］阻害なし、分析されたインヒビターの最高濃度（２５〜１２５μＭ）。これは、これらの条件下で可溶性の化合物の最大量に相当する。
【０２７３】
２つの１８員大環状分子１ｃ及び２ｃを比較すると、２ｃの効力の減少は、環へのフェニル基の導入による化合物の剛性に起因する可能性が高かった。１７のＸ線結晶構造解析は、１８員環系の剛性を示して（図１）、この示唆を支持した。興味深いことに、化合物３ｃは、大きな環系（２４員）を有していても、２ｃとちょうど同じ効力があることが見出された。３ｃの環系への２つのフェニル環の導入は、その剛性を増加させることができ、その大きなサイズにもかかわらず、カルパインの結合ポケットに所望の配向で適合することができた。
【０２７４】
Ｐ１基のみが異なる１ｃと１ｄを比較すると、Ｐ１位置ではＬｅｕがＰｈｅより好ましいことが分かる。加えて、ｏ−ＣＡＰＮ２とｂＣＴのプロテアーゼ選択性は、Ｐ１基をＰｈｅからＬｅｕに変えることによって観察された。全ての大環状アルデヒドがｏ−ＣＡＰＮ２に対して活性であることが見出されたが、Ｐ１にＰｈｅを有する全ての化合物は、ｂＣＴに対して効力があることも見出された。故に、プロテアーゼ選択性は、Ｐ１にＬｅｕを有することによって確実になりうる。強力なｏ−ＣＡＰＮ２インヒビターの１ｃ、及び比較のために１８員大環状インヒビターの２ｃを、ｏ−ＣＡＰＮ１に対してアッセイした。アッセイの結果は、インヒビター１ｃ（ＩＣ５０＝６６ｎＭ（ｏ−ＣＡＰＮ２）対４２ｎＭ（ｏ−ＣＡＰＮ１））又はインヒビター２ｃ（ＩＣ５０＝２４９ｎＭ（ｏ−ＣＡＰＮ２）対３２４ｎＭ（ｏ−ＣＡＰＮ１））にイソフォーム選択性がないことを示した。
【０２７５】
結論として、１８員及び２４員大環状分子の合成及び生物学的評価は、カルパインに対する強力なインヒビターを同定した。骨格設計へのピロール部分の組み込みは、βストランド立体配座及びインヒビターのペプチド様性質の減少を確実にした。アルデヒド１ｃは、より柔軟な環系を有する、最も強力なカルパインインヒビターであることを実証した。Ｐ１基の修飾を介することによって、インヒビターの選択性を、異なるプロテアーゼ基のために設計することができる。
【０２７６】
実施例４−キモトリプシン様活性及びｐ５３依存性細胞毒性に対して高い選択性を有する新たな２６Ｓ−プロテアソーム（proteasome）インヒビター
ここで、本発明者たちは、プロテアソームのキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）活性に対する選択性が増加するように設計された新たなトリペプチドアルデヒドの合成及び特徴決定を報告する。基準のＭＧ１３２及びボルテゾミブと対照的に、これらの類似体は、ＣＴ−Ｌ活性の高度に特異的なインヒビターであり、正常な非悪性細胞に対する非特異的細胞毒性を有することなく、肉腫細胞系に強力な活性を示す。本発明者たちの知見は、ｐ５３経路が、細胞死を誘発するこれらの新規プロテアソームインヒビターの能力における主なエフェクターであることを示唆している。
【０２７７】
結論及び考察
【０２７８】
インヒビターの設計
【０２７９】
多数のＣＴ−Ｌ特異的インヒビターが報告されているが、これらのうちでインビボにおける抗癌剤として広く研究され、試験されたものはほとんどない。勇気づけられることに、ＣＴ−Ｌ活性に対して選択性及び妥当な効力を示す２−アミノベンジルスタチンに基づいたインヒビターは、細胞に基づいたアッセイにおいて高い抗繁殖活性を示す。ペプチド性アルデヒドのＰ２に立体的に嵩高い置換基を導入することは、ＣＴ−Ｌ活性に対する選択性を増強することが報告されているが、対応するＳ２ポケットは、不明確であり、結合に重要ではないと考えられる。Ｐ２のＡｓｐ（ｔ−Ｂｕ）による１つのそのような例は、Ｔ−Ｌ、ＣＰ−Ｌ、更にシステインプロテアーゼのカルパインよりもＣＴ−Ｌに対して中程度の効力を及び選択性を示す。プロテアソームのＣＴ−Ｌサブユニットへのペプチド性アルデヒドの活性を更に良好に適合させ、同時に非標的プロテアーゼに対する活性を低減するためにも、更なる改善が必要である。
【０２８０】
ここで報告されているインヒビター（化合物１〜６、下記参照）は、基準のペプチド性アルデヒドインヒビターのＭＧ１３２の構造に基づいて開発されており、３つ全てのプロテアソーム活性に対して高い効力を示す（表１参照）。
【０２８１】
【化１６】
2016501848.tif 000023
トリペプチドＭＧ１３２類似体
【０２８２】
本発明者たちは、ＣＴ−Ｌサブユニットの対応するＳ１ポケットが疎水性基に結合することが知られているので、アセチレン置換アリール基をＰ１に組み込むことを選択した。比較すると、結合に対するＰ３の重要性は、あまり十分に研究されておらず、対応するＳ３結合ポケットの構成は、３つの異なる活性において変わることが知られている。本発明者たちは、この部位を、インヒビターに選択性を導入するための比較的探求されていない好機であると見なした。ここで、本発明者たちは、Ｐ３への脂肪族アジド（１〜５）又は芳香族アジド（６）の組み込みを、この位置への以前に試験していない置換基として報告している。これらのアジドも、骨格をβストランドジオメトリーに束縛する効果を調査するため、Ｈｕｉｓｇｅｎ付加環化を介したＰ１のアセチレンの環化を可能にする（化合物３ａ及び４ａ参照）。このジオメトリーは、プロテアソーム及び実際に他の全てのプロテアーゼへ結合する好ましいリガンドのようである。プロテアソームのインヒビターは、このジオメトリーにおける結合に特徴的である、プロテアーゼとの水素結合を採用するが、他のプロテアーゼと異なり、Ｐ２基は、活性部位と重要な接触を形成しないようである。おそらく、このことは、対応するＳ２ポケットがＣＴ−Ｌサブユニットとの結合に重要でないという初期観察の主要因である。本発明者たちは、ＭＧ１３２との直接的な比較を可能にするため、本発明者たちの新たなインヒビターのＰ２にＬｅｕとわずかな変種（Ｉｌｅ）の両方を組み込むことを選択した。
【０２８３】
トリペプチドＭＧ１３２類似体の合成
【０２８４】
トリペプチドアルデヒド１〜６は、スキーム１及び２に描かれている標準的なペプチドカップリングにより調製した。７〜１０とＬｅｕ−ＯｔＢｕ又はＩｌｅ−ＯｔＢｕとのＥＤＣＩ及びＨＯＢｔの存在下での別々の反応によって、ジペプチド１２〜１６を得て、そのｔｅｒｔ−ブチルエステルを加水分解して、カルボン酸１７〜２１を得た。これらのそれぞれとアミノアルコール１１とのＥＤＣＩ及びＨＯＢｔの存在下でのカップリングによって、トリペプチド２２〜２６を得て、これらをＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ（ＤＭＰ）により酸化して、必要な非環状アルデヒド１〜５をそれぞれ得た。トリペプチド２４及び２５も、ＣＨ２Ｃｌ２中のＣｕ（Ｉ）Ｂｒによる処理によって環化して、２７及び２８を得て、これらをＤＭＰにより酸化して、３ａ及び４ａを得た。誘導体と短鎖（２２及び２３）との類似の反応によっては、対応する大環状分子を得ることはできず、それは対応する小さな環系に関連する立体歪みによると推定される。大環状分子の３ａ及び４ａは、ペプチド骨格のジオメトリーを必要なβストランドジオメトリーに束縛することが、初期の研究において見られている。
【０２８５】
【化１７】
2016501848.tif 000024
スキーム１．試薬及び条件：（ｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、Ｌｅｕ−ＯｔＢｕ又はＩｌｅ−ＯｔＢｕ、ＣＨ２Ｃｌ２、（８０％、１２及び１３；７８％、１６）；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、（８５％、１７、１８及び２１）；（ｉｉｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、１１、（７５％、２２；７４％、２３；７５％、２６）；（ｉｖ）ＣｕＢｒ、ＤＢＵ  ＣＨ２Ｃｌ２、（７０％、２７及び２８）；（ｖ）ＤＭＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、（８０％、１及び２；７５％、５、８０％  ３ａ及び４ａ）。
【０２８６】
Ｐ１とＰ３の両方にアリール基を有する化合物６を、スキーム２に示されているものと同様に調製した。２９とＬｅｕ−ＯｔＢｕとのＥＤＣＩ及びＨＯＢｔの存在下での反応によって、ジペプチド３０を得て、それを加水分解して、３１を得た。このカルボン酸とアミノアルコール１１とのＥＤＣＩ及びＨＯＢｔの存在下でのカップリングによって、トリペプチド３２を得て、そのアルデヒドをＤＭＰにより酸化して、必要なアルデヒド６を得た。ＣＨ２Ｃｌ２中のＣｕ（Ｉ）Ｂｒを用いる処理による３２の環化の試みでは、対応する大環状分子を得ることはできず、これも関連する環の立体的な束縛に起因すると推定される。
【０２８７】
【化１８】
2016501848.tif 000025
スキーム２．ａ試薬及び条件：（ｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、Ｌｅｕ−ＯｔＢｕ又はＩｌｅ−ＯｔＢｕ、ＣＨ２Ｃｌ２、７０％；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、８０％；（ｉｉｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、１１、８２％；（ｉｖ）ＤＭＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、７５％；（ｖ）ＣｕＢｒ、ＤＢＵ、ＣＨ２Ｃｌ２。
【０２８８】
プロテアソームの阻害
【０２８９】
本発明者たちは、新規のトリペプチドＭＧ１３２類似体１〜６、並びに大環状分子３ａ及び４ａの、２０Ｓプロテアソームの３つの別々のプロテアーゼ活性（ＣＴ−Ｌ、−Ｔ−Ｌ及びＣＰ−Ｌ）を阻害する能力を最初に決定した。アッセイは、精製した２０Ｓプロテアソーム／インヒビターの混合物を使用してインビトロで実施し、プロテアソームの各サブユニットの活性を、それぞれの標的ペプチドと共にインキュベートして評価した。ＭＧ１３２及びボルテゾミブは、このアッセイにおいて、ＣＴ−Ｌ活性の極めて強力なインヒビターであった（表１参照）。しかし、ＭＧ１３２は２０ＳプロテアソームのＴ−Ｌ及びＣＰ−Ｌ活性も有意に阻害し、このことは以前の報告と一致している。新たなペプチド性アルデヒド１〜６も、ＣＴ−Ｌ活性に対して極めて強力であり、誘導体５及び６は、最も強力なインヒビターであった（それぞれ２１ｎＭ及び２３ｎＭのＩＣ５０値）。しかし、ボルテゾミブ及びＭＧ１３２と異なり、全ての化合物（１〜６）は、プロテアソームのＴ−Ｌ及びＣＰ−Ｌ活性の両方に対して、試験した最高濃度（２５，０００ｎＭ）まで不活性であった。Ｐ２へのＩｌｅの導入（化合物５参照）が、Ｐ２にＬｅｕを有する直接的なＭＧ１３２類似体（化合物４参照）と比べて、ＣＴ−Ｌタンパク質分解活性に対する効力に７．５倍の増加を生じたことは、興味深く注目される。加えて、鎖の長さに対して明らかで明確な優先傾向はなく（化合物１〜４を比較すること）、一方、Ｐ３へのアリール基の導入は（６のように）十分に耐容されている。
【０２９０】
環化誘導体（３ａ及び４ａ）は、ＣＴ−Ｌに対して、これらの非環状対応物３及び４よりも効力が平均して１０倍を超えて少なかった。したがって、プロテアソームは、βストランド立体配座に束縛されたペプチド骨格を有する構造よりも、立体配座的に柔軟な非環状リガンドに結合することを好むと思われる。これは、βストランドへの環化が効力を有意に増加するカルパインのような他のプロテアーゼと対照的である（表１）。したがって、ペプチドアルデヒドの環化は、プロテアソームとカルパインプロテアーゼとの特異性を決める新規の道筋を提供する。
【０２９１】
トリペプチドアルデヒド化合物１、３、５及び６において観察されたプロテアソームのＣＴ−Ｌ活性に対する高い効力と選択性の組み合わせは、まれにしか観察されない。一連のトリペプチドに基づいたビニルスルホン及び幾つかのα−ケトアミドを除いて、ＣＴ−Ｌへの幾らかの選択性を示す大部分のインヒビターは、効力を欠いている。ここで、本発明者たちは、ＣＴ−Ｌに対する高い効力と選択性の組み合わせがＭＧ１３２のＰ１及びＰ３における適切な修飾により達成されうることを、初めて示す。第ＩＩｂ相試験中のプロテアソームインヒビターであるカルフィルゾミブは、ＣＴ−Ｌサブユニットへの特異性を誘発することが実験的に示された、現在臨床試験中の唯一のプロテアソームである。しかし、そのようなＣＴ−Ｌ特異性は、高用量が２０Ｓプロテアソームの３つの活性を全て阻害したので、低用量のカルフィルゾミブにおいてのみ観察された。興味深いことに、このペプチドに基づいたインヒビターは、Ｃ末端エポキシド、Ｐ２及びＰ４にアリール基、並びにＰ１及びＰ３にＬｅｕを有する。
【０２９２】
【表２】
2016501848.tif 000026
【０２９３】
トリペプチドＭＧ１３２類似体は癌細胞を特異的に死滅させる
【０２９４】
本発明者たちは、次に、本発明者たちのインヒビターが有する、ＣＴ−Ｌ活性に対する高い効力と選択性の組み合わせを、培養された癌細胞系に対する改善された細胞毒性に転換できるかを調査した。４つの肉腫細胞系のパネルの生存率は、ボルテゾミブ、ＭＧ１３２、非環状化合物１〜６又は環状化合物３ａ及び４ａの滴定濃度への４８時間の曝露後に決定した（表２）。平行生存率研究を、正常な初代ヒト線維芽細胞又は初代骨芽細胞のいずれかを使用して実施し、これによって、これらの化合物の細胞毒性が癌細胞特異的であるかを決定し、したがって、それぞれの化合物のインビトロ治療濃度域を決定することを可能にした（表２）。 
【０２９５】
化合物３、５及び６は、癌細胞に対して極めて強力であり、平均ＩＣ５０値（それぞれ、１．６、０．８８及び１．５μＭ）は、ＭＧ１３２（０．６１μＭ）に匹敵する。事実、これらの３つの化合物は、幾つかの癌細胞系において、これらの前駆体ＭＧ１３２よりも高レベルの細胞毒性を示した。重要なことには、ＭＧ１３２と対照的に、これらの化合物の細胞毒性は、正常な細胞系に対して有意に低減した毒性を有して、癌細胞に対して、より特異的であった。特に、化合物６は、正常細胞よりも癌細胞に対して１９倍多くの効力を示し、ＭＧ１３２の治療濃度域を、４倍を超えて効果的に増加した。事実、化合物５及び６は両方とも、正常細胞よりも癌細胞に対して、２つの基準プロテアソームインヒビターのＭＧ１３２及びボルテゾミブより増加した特異性を示した。大環状化合物３ａ及び４ａは全て、それらの非環状対応物と比較して、癌細胞に対して効力が有意に少なかった。このことは、前に考察されたようにこれらの低いＣＴ−Ｌインビトロ活性を考慮すると、予測されることである。
【０２９６】
抗癌療法としてＣＴ−Ｌサブユニットを特異的に標的にすることの重要性は、依然として未解決であり、文献において矛盾した報告がある。例えば、ＣＴ−Ｌ特異的インヒビターによる抗新生物活性についての本発明者たちの知見は、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫及び白血病の細胞系に選択的細胞死をもたらすカルフィルゾミブの使用によるＣＴ−Ｌサブユニットの特異的阻害を実証したＰａｒｌａｔｉらの以前の報告と一致する。しかし、カルフィルゾミブが、これらの細胞の免疫プロテアソームにおけるＣＴ−Ｌ部位に対応する同様のサブユニットであるＬＭＰ７も阻害したことに注目することは、重要である。対照的に、Ｋｉｓｓｅｌｅｖ研究所による包括的な研究は、ＣＴ−Ｌサブユニットと、Ｔ−Ｌ又はＣＰ−Ｌサブユニットのいずれかとを同時阻害することが、多発性骨髄腫細胞系への最大細胞毒性を達成するために必要であったことを実証した。これらの観察は、肉腫細胞系を使用する本明細書における本発明者たちの知見と一致せず、したがって、固形腫瘍（肉腫）と血液学的悪性腫瘍（多発性骨髄腫）とのプロテアソーム機能の基本的な差を潜在的に強調している。更に、プロテアソームインヒビターの作用機構は、特に、過剰量の誤って折り畳まれたタンパク質に関連し、故にプロテアソームの再潤滑因子機能により強く依存する多発性骨髄腫のような悪性腫瘍に関して、疾患特異的でありうる。
【０２９７】
したがって、本明細書に報告されている非環状誘導体は、基準インヒビターのＭＧ１３２及びボルテゾミブと比較して優れた治療濃度域を有する。重要なことには、これらの新たな化合物の幾つかは、ＭＧ１３２と比較して、プロテアソームのＣＴ−Ｌ活性に対する高い効力と、癌細胞を選択的に死滅させる改善された能力とを組み合わせる。
【０２９８】
【表３】
2016501848.tif 000027
【０２９９】
トリペプチドＭＧ１３２類似体はｐ５３経路を部分的に介して細胞死を仲介する
【０３００】
プロテアソームインヒビターは過去十年間にわたって実験台から臨床へと転換されてきたが、これらの特定の作用機構は、十分に理解されていないままである。前に考察されたように、腫瘍細胞におけるプロテアソームの過剰活性は、アポトーシス促進腫瘍サプレッサーであるｐ５３を含む多数の重要な癌関連プロタンパク質の異常な分解に寄与している。しかし、プロテアソーム阻害に応答する細胞死の下流メディエーターとしてのｐ５３の役割は、不明のままである。したがって、本発明者らは、ＣＴ−Ｌ特異的プロテアソームインヒビターの本発明者らの小さなライブラリー（化合物１〜６）を、これらの細胞毒性作用におけるｐ５３の役割を決定するために使用した。この目的のため、本発明者たちは、トランスジェニックｐ５３＋／＋及びｐ５３−／−同腹子からのマウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）を利用した。細胞系のこの同質遺伝子対は、ｐ５３タンパク質において応答能（ＭＥＦ  ｐ５３＋／＋）又は欠乏性（ＭＥＦ  ｐ５３−／−）のいずれかがあり、ここでは、プロテアソーム阻害に応答する細胞死の下流インデューサーとしてのｐ５３の潜在的な役割を評価するために使用される。
【０３０１】
ｐ５３＋／＋  ＭＥＦは、化合物２、３、４、５及び６に対して中程度の感受性があり、ＩＣ５０値は、２．７〜１０．３μＭの範囲であった（図２）。対照的に、ｐ５３を欠いている（ｐ５３−／−）ＭＥＦは、これらの化合物の細胞毒性効果に対して感受性が有意に少なく、ｐ５３の欠乏は、ＭＥＦを化合物５及び６の細胞毒性に対して抵抗性にする。ｐ５３依存性細胞毒性における同様の傾向が、ＭＧ１３２による処理において観察された。ＭＥＦ  ｐ５３＋／＋細胞は、ＭＥＦ  ｐ５３−／−対応物（ＩＣ５０値０．９４μＭ）と比較して、ＭＧ１３２に対して２倍を超えた（ＩＣ５０値０．４１μＭ）より多くの感受性があった。重要なことには、ＭＧ１３２へのＭＥＦ  ｐ５３＋／＋の曝露は、ｐ５３タンパク質レベルの増加とも関連し（図３Ｂ）、プロテアソーム阻害がこれらの細胞におけるｐ５３細胞の蓄積によりもたらされることを実証した。まとめると、データは、トリペプチドアルデヒドを使用するプロテアソームの阻害が、生物学的に活性なｐ５３の安定化に関連し、細胞死をもたらすことを実証している。
【０３０２】
ｐ５３＋／＋又はｐ５３−／−細胞の同質遺伝子対に対するこれらの研究は、プロテアソーム阻害後の細胞死の重要なメディエーターとしてのｐ５３の寄与を実証している。このプロセスにおけるｐ５３の役割は、以前は不明であり、報告は、ｐ５３が、プロテアソーム阻害に関連する抗癌活性に必須又は重要ではないことを示唆していた。興味深いことに、プロテアソーム阻害後の細胞毒性メディエーターとしてのｐ５３の役割に異議を唱える報告は、血液学的悪性腫瘍に限定されており、本明細書に提示されている同質遺伝子系ではなく、一般に、任意のｐ５３関連応答を妨げうる多種多様な遺伝子背景を有する細胞系パネルの使用を伴う。ｐ５３依存性様式の細胞毒性作用についての本発明者らの結論は、プロテアソームインヒビターの小さなライブラリー（ボルテゾミブ、ＭＧ１３２及び化合物２〜６）による結果と一致することにより更に強化され、単一のプロテアソームインヒビターの使用に制限されない。
【０３０３】
要約すると、本発明者らは、非環状アルデヒドのＰ３へのアジド基の組み込みが、Ｔ−ＬとＣＰ−Ｌの両方よりＣＴ−Ｌへの高い程度の選択性を有する化合物（１〜６を参照すること）をもたらすことを示した。アジド基の正確な役割を確定するために更なる研究が必要であるが、効果は、文献のペプチド性アルデヒドＭＧ１３２において観察されたものより有意に際立っている。更なるインヒビター設計における一般的な有意性は、Ｐ２におけるＬｅｕに代わるＩｌｅの組み込みが、ＣＴ−Ｌタンパク質分解活性に対する効力を有意に増加するという観察である。Ｐ１のアリールアセチレンによるＰ３アジドのＨｕｉｓｇｅｎ付加環化は、βストランドジオメトリーへの大環状分子の束縛を生じた。他のプロテアーゼ（特に、本明細書において考察されたカルパインＩＩ）についての報告と異なり、このことによって、低減された効力及び低減された抗癌有効性も有する化合物を得た。これは、Ｓ２ポケットがＣＴ−Ｌサブユニットへの結合に重要でないという前の観察を反映しうる、特有で意味のある知見である。したがって、ペプチドアルデヒドの特定の環化は、プロテアソームと他のプロテアーゼとの特異性を決める新規の道筋を提供する。
【０３０４】
新たな非環状ＣＴ−Ｌ特異的インヒビター（化合物１〜６）は、ＭＧ１３２と比較して、癌細胞に対して有意により特異的であった。特に、Ｐ３への芳香族アジドの付加（化合物６）は、ＭＧ１３２の治療濃度域の１０倍の改善に関連した。最後に、本発明者たちは、強力なプロテアソームインヒビターのこの新たなパネルを、プロテアソーム阻害に関連する細胞毒性のメディエーターとしてのｐ５３腫瘍サプレッサータンパク質の重要な役割を実証するために使用した。
【０３０５】
材料及び方法
化学薬品：ＭＧ１３２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｓｅ，ＭＯ，ＵＳＡ）、ボルテゾミブ（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｔ  Ｐａｕｌ，ＭＮ，ＵＳＡ）又はＭＧ１３２誘導体を、１０ｍＭのＤＭＳＯに溶解し、−２０℃で保存した。
【０３０６】
インビトロプロテアソーム活性のアッセイ
精製したウサギ２０Ｓプロテアソーム及び蛍光性ＣＴ−Ｌ基質（Ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ）を、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。Ｔ−Ｌ及びＣＰ−Ｌ蛍光性基質（Ａｃ−ＲＬＲ−ＡＭＣ及びＺ−ｎＬＰｎＬＤ−ＡＭＣ）を、Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ，ＵＳＡ）から購入した。２０Ｓプロテアソームを、２０Ｓプロテアソーム緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．６、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び１ｍＭのＤＤＴ）により０．２μｇ／μＬに希釈し、−８０℃で保存した。精製した２０Ｓプロテアソーム（８ｎｇ）を、記載の濃度のインヒビターと共に１５分間、続いてアッセイ緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のＮＰ−４０及び０．００１％のＳＤＳ（ｗ／ｖ））中のＡＭＣ標識基質ペプチド（５０μＭ）に加えて、３７℃で２時間プレインキュベートした。２０Ｓプロテアソームによる蛍光性基質の切断は、このインキュベーション時間枠では線形であった（付録図Ｓ４。続いて、加水分解した７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）をＦＬＵＯｓｔａｒ  ＯＰＴＩＭＡマイクロプレート蛍光計により３９０／４６０ｎｍの励起／発光で検出した。活性を相対的蛍光単位により推定し、プロテアソームの最大阻害活性の半分をＩＣ５０値により表す。最小限の３回の生物学的反復を、各データポイントで実施した。
【０３０７】
細胞生存率アッセイ
【０３０８】
細胞生存率アッセイを以前に記載されたように実施した。簡潔には、細胞を、記載の化学薬品の存在下において各ウエルあたり３×１０４細胞の密度で９６ウエルマイクロタイタープレートに接種した。処理の４８時間後に細胞を採取し、１，３００×ｇで遠心分離し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、７ＡＡＤ溶液（２μ／ｍＬ）（７−アミノ−アクチノマイシン−Ｄ、Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）により室温で１０分間染色した。生存細胞を、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の使用により決定し、ＦＬＯＷＪＯ（Ｔｈｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ）及びＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ）の使用により分析した。
【０３０９】
細胞系及び培養条件
【０３１０】
ＷＥ−６８及びＶＨ−６４ユーイング肉腫細胞は、親切にもＦ．ｖａｎ  Ｖａｌｅｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｗｅｓｔｆａｅｌｉｓｃｈｅ−Ｗｉｌｈｅｌｍｓ−Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から供給された。ＴＣ−２５２及びＳＴＡ−ＥＴ−１ユーイング肉腫細胞は、親切にもＧ．Ｈａｍｉｌｔｏｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）又はＰ．Ａｍｂｒｏｓ（Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｔ．Ａｎｎａ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）から提供された。初代ヒト胎児線維芽細胞又は初代ヒト骨芽細胞は、Ｗｏｍｅｎ’ｓ  ａｎｄ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｎｏｒｔｈ  Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ｓｏｕｔｈ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）又はＲｏｙａｌ  Ａｄｅｌａｉｄｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌから患者の同意を得て収集した。マウス胎児線維芽細胞（ＭＥＦ）及びそのｐ５３ヌル誘導体は、親切にもＧｕｉｌｌｅｒｍｉｎａ  Ｌｏｚａｎｏ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）から供給された。ＷＥ−６８細胞系は、ＲＰＭＩ−１６４０培地において増殖させ、一方、ヒト胎児線維芽細胞及びＭＥＦは、ダルベッコー修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）において増殖させた。培地には、１０％のＦＣＳ、１％のＰＳＧ及び１０ｍＭのＨＥＰＥＳを補充した。全ての細胞を５％ＣＯ２の加湿雰囲気下に３７℃で維持した。
【０３１１】
ウエスタンブロッティング
【０３１２】
ウエスタンブロット分析を以前に記載されたように実施した。簡潔には、細胞を採取し、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、２５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０ｍＭのＮａＦ、０．５％のＴｒｉｔｏｎＸ−１０、０．５ｍＭのＮａ３ＶＯ４及び１×プロテアソームインヒビター（Ｒｏｃｈｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）に溶解した。溶解産物を氷上で８分間インキュベートし、Ｖｉｂｒａ−Ｃｅｌｌ  ＶＣＸ１３０（Ｓｏｎｉｃｓ  ＆  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ）を使用して２５％の振幅により１０秒間超音波処理した。タンパク質濃度を、ビシンコニン酸アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）によりアッセイし、続いて１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを使用して分割した。タンパク質をニトロセルロース膜（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｃ  Ｅｘｔｒａ，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に移し、遮断し（１０％のミルク／ＴＢＳＴ、３０分間）、適切な一次又はＨＲＰ結合二次抗体とハイブリッド形成させ、続いてＥｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して可視化した。
【０３１３】
抗体
【０３１４】
使用した抗体には、マウス抗β−アクチン（Ｓｉｇｍａ）、抗ｐ５３（１Ｃ１２−マウス特異的）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ，ＵＳＡ）、ヒツジ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）又はロバ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が含まれた。
【０３１５】
実施例５−インビトロ水晶体培養アッセイ
記載されている大環状化合物の、成体ヒツジ水晶体におけるカルシウム誘発性白内障の形成を防止する能力は、Ｊ．Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．Ｍａｒｃｉａｎｔｏｎｉｏ及びＧ．Ａ．Ｄｕｎｃａｎ（２０００年）Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４１：２２５５の手順を使用してアッセイすることができる。
【０３１６】
例えば、多数の水晶体対を試験することができる。各対の一方の水晶体を、ＥＭＥＭ培養培地中の１μＭの化合物と共に３時間プレインキュベートすることができ、他方を、３５℃、５％ＣＯ２でインキュベートすることができる。次に、５ｍＭの塩化カルシウムを、インヒビターで処理した水晶体及び他の水晶体の両方に加え、次に両方の水晶体を２０時間インキュベートすることができる。水晶体を撮影し、画像を不透明性についてデジタル的に分析することができる。
【０３１７】
実施例６−インビボ試験
１％の、本明細書に記載されている大環状化合物を含む軟膏剤（５０ｍｇ）を、子ヒツジの一方の眼に、１日３回適用し、刺激のあらゆる兆候をモニターすることができる。 
【０３１８】
遺伝的に白内障に罹患しやすい子ヒツジを使用することができる。１％の、本明細書に記載されている大環状化合物を含む軟膏剤（２５ｍｇ）を、一群の子ヒツジの右眼に、３〜４か月齢のときから開始して毎日２回、３か月間適用することができる。またプラセボ軟膏剤（２５ｍｇ）を、別の群の子ヒツジの右眼に、３〜４か月齢のときから出発して毎日２回、３か月間適用することができる。
【０３１９】
白内障の進行は、細隙灯顕微鏡を用いて獣医眼科医により決定することができる。
【０３２０】
実施例７−処方
【０３２１】
軟膏剤
【０３２２】
眼内適用に適切であり、以下の組成（ｗ／ｗ）を有する軟膏剤を調製することができる。
１％の、本明細書に記載されている大環状化合物 
２５％のセチルステアリルアルコール 
３５％の羊毛脂 
３９％の亜白色鉱油（paraffinum subl.）
【０３２３】
セチルステアリルアルコールを、融解するまで加熱することができる。次に化合物を加え、油状物を、化合物が溶解するまで撹拌することができる。次に羊毛脂及び亜白色鉱油を加え、混合物を、全ての成分が融解するまで加熱することができる。混合物を、軟膏剤が形成されるまで一定に撹拌しながら冷ました。
【０３２４】
乳剤
【０３２５】
眼内適用に適切であり、以下の組成（ｗ／ｗ）を有する乳剤を、下記に記載されている手順に従って調製することができる。
０．７％の、本明細書に記載されている大環状化合物
２０％セチルステアリルアルコール 
２５％の羊毛脂 
２５％の亜白色鉱油 
１％のラウリル硫酸ナトリウム 
０．１％の安息香酸ナトリウム 
２８．３％の水
【０３２６】
疎水性相（セチルステアリルアルコール、羊毛脂、亜白色鉱油）及び親水性相（ラウリル硫酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、水）を、別々に５０℃に加熱することができる。次に化合物を疎水性相に加え、化合物が溶解するまで撹拌することができる。次に親水性相を疎水性相に加え、加熱源を取り外すことができる。次に混合物を、室温に達するまで撹拌することができる。次に得られた乳剤を、使用した化合物の融点で示差走査熱量測定により結晶が含まれないことについて検査する。
【産業上の利用可能性】
【０３２７】
本開示がプロテアーゼ阻害特性を有する新規化合物を提供することは、本明細書の記載から明らかである。これらの化合物を、白内障の予防及び／又は治療のような、これらの活性が適した治療用途に使用される医薬に処方することができる。本明細書に記載されている化合物は、研究及び／又は試験の目的のためのプロテアーゼのインヒビターとしての用途も有する。
【０３２８】
本明細書の全体を通して、文脈から必要とされない限り、語「含む」又は「含み」若しくは「含んでいる」のような変形は、記述される要素若しくは整数又は要素若しくは整数の群を包含するが、他の任意の要素若しくは整数又は要素若しくは整数の群を除外しないことを意味することが理解される。
【０３２９】
本明細書に記載されている全ての方法は、本明細書において特に指定のない限り又は文脈において明らかに相反しない限り、任意の適切な順番で実施することができる。本明細書に提供されている任意及び全ての例又は例示的な言葉（例えば「のような」）は、単に例の実施形態をより良好に説明することが意図され、特に請求項に記載されていない限り、請求される本発明の範囲に制限を課すものではない。本明細書における言葉には、任意の請求項の非記載要素を必須であると示すと考慮されるべきものはない。
【０３３０】
本明細書に提供されている記載は、共通の特徴及び特質を共有しうる幾つかの実施形態に関係する。１つの実施形態の１つ以上の特徴は、他の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせ可能でありうることが理解されるべきである。加えて、実施形態の単一の特徴又は特徴の組み合わせは、追加の実施形態を構成することができる。
【０３３１】
本明細書に使用されている見出し語は、読者の参照の容易さのためだけに含まれており、開示又は特許請求の範囲において見出される主題を制限するために使用されるべきではない。見出し語は、特許請求の範囲又は請求項の限界を考慮するために使用されるべきではない。
【０３３２】
本開示は特定の例及び実施形態を参照して記載されてきたが、開示は他の多くの形態により具現化されうることが、当業者には明らかである。
【図１】
2016501848.tif 000039
【図２】
2016501848.tif 000040
【国際調査報告】
2016501848.tif 000041
2016501848.tif 000042
2016501848.tif 000043
2016501848.tif 000044
2016501848.tif 000045
2016501848.tif 000046