(57)【要約】  本発明は、最適化された官能特性を有する微細藻類粉末の脂質に富む組成物の、発酵による製造方法であって、微細藻類が最少培地で培養されることを特徴とする方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
最適化された官能特性の脂質に富む微細藻類粉末組成物の、発酵による製造方法において、前記微細藻類が最少培地で培養されることを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記最少培地は、
−  硫黄源の含有量が低減されており、および／または
−  ビタミンＢ群から選ばれる一つ以上のビタミンＢが欠乏していることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記最少培地は、硫黄源の含有量が低減されていることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記最少培地は、ＭｇＳＯ４および／または（ＮＨ４）２ＳＯ４の含有量が低減されていることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記最少培地は、１ｇ／ｌ超のＭｇＳＯ４を含有しないことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記最少培地は、約１ｇ／ｌのＭｇＳＯ４を含有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記最少培地は、０．２ｇ／ｌ超の（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有しないことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記最少培地は、約０．２ｇ／ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記最少培地は、硫黄源として最大でも約１ｇ／ｌ当量のＭｇＳＯ４および約０．２ｇ／ｌ当量の（ＮＨ４）２ＳＯ４を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記最少培地は、前記ビタミンＢ群から選ばれる一つ以上のビタミンＢが欠乏していることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記最少培地は、コリンを含有しないことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記最少培地は、イノシトールを含有しないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記最少培地は、コリンまたはイノシトールのいずれも含有しないことを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記粉末組成物の官能特性が試食用組成物を用いて評価され、前記試食用組成物は、５〜１０％の微細藻類粉末組成物、０．５〜２％の糖、０．１〜０．５％のバニラエッセンスおよびスキムミルクを混合することによって調製される試食用組成物であって、その百分率が前記試食用組成物の重量で表され、前記試食用組成物が、６０〜８５℃で２〜１０分間加熱する前に均質化されることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記微細藻類は、クロレラ・プロトセコイデス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｒｏｔｏｔｈｅｃｏｉｄｅｓ）、クロレラ・ケスレリ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｋｅｓｓｌｅｒｉ）、クロレラ・ミヌチシマ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍａ）、クロレラ種（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．）、クロレラ・ソロキニアマ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｏｒｏｋｉｎｉａｍａ）、クロレラ・ルテオビリディス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｌｕｔｅｏｖｉｒｉｄｉｓ）、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、クロレラ・レイシグリイ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｒｅｉｓｉｇｌｉｉ）、クロレラ・エリプソイダ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅａ）、クロレア・サッカロフィラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓａｃｃａｒｏｐｈｉｌａ）、パラクロレラ・ケスレリ（Ｐａｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｋｅｓｓｌｅｒｉ）、パラクロレラ・ベイゼリンキイ（Ｐａｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｂｅｉｊｅｒｉｎｋｉｉ）、プロトテカ・スタグノラ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｓｔａｇｎｏｒａ）およびプロトテカ・モリフォルミス（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ
ｍｏｒｉｆｏｒｍｉｓ）から選択されることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記微細藻類は、クロレラ属に属することを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記微細藻類は、クロレラ・プロトセコイデス微細藻類であることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記微細藻類は、クロロフィル色素が欠乏していることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記微細藻類は暗所で培養されることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記微細藻類は、クロロフィル色素を生産することができないか、または生産する能力が低下していることを特徴とする、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記微細藻類を微細藻類粉末に変換する段階をさらに含むことを特徴とする、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１〜２１に記載の方法によって得られる、脂質に富む微細藻類粉末組成物。
【請求項２３】
食品組成物の調製における、請求項２２に記載の、脂質に富む微細藻類粉末組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、最適化された官能プロファイルを示す、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）属の脂質に富む微細藻類粉末組成物の、発酵による新規製造方法であって、望ましくない香りを発生させることなく、それらを食品処方に組み込むことを可能にする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
歴史的に、成長するために「水および日光のみ」を必要とする藻類は、食料源であると長い間考えられてきた。
【０００３】
食品に使用することができる数種の藻類が存在し、大多数は、昆布、アオサ（アルバ・ラクティューカ（Ｕｌｖａ  ｌａｃｔｕｃａ））およびアマノリ属（Ｐｏｒｐｈｙｒａ）（日本で培養）またはダルス（パルマリア・パルマータ（Ｐａｌｍａｒｉａ  ｐａｌｍａｔａ））型の紅藻類などの「大型藻類」である。
【０００４】
しかし、これらの大型藻類に加えて、バイオ燃料または食品用途向けに培養されている海洋起源または非海洋起源の「微細藻類」、すなわち、光合成または非光合成単細胞微細藻類に代表される他の藻類のソースもある。
【０００５】
例えば、スピルリナ（アルスロスピラ・プラテンシス（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ））が、栄養補助食品として、または菓子類もしくは飲料中に少量（一般に０．５％重量／重量未満）添加する使用のために、オープンラグーンで（光合成条件下において）栽培されている。
【０００６】
ある種のクロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）類などの、他の脂質に富む微細藻類はまた、栄養補助食品としてアジア諸国では非常に人気がある（オメガ−３−脂肪酸を生産するクリプテコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）属またはシゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属の微細藻類が挙げられる）。
【０００７】
クロレラ類の微細藻類粉末の製造および使用は、例えば、文書、国際公開第２０１０／１２０９２３号パンフレットおよび国際公開第２０１０／０４５３６８号パンフレットに記載されている。
【０００８】
一価不飽和油から本質的になる、微細藻類粉末の油留分は、従来の食品においてよく見られる飽和油、硬化油、および多価不飽和油と比較して、栄養上および健康上の利点を提供することができる。
【０００９】
それらのバイオマスから微細藻類粉末粉を工業的に製造することが望まれる場合、技術的観点からだけではなく、製造された組成物の官能プロファイルの観点からも、大きな課題が残っている。
【００１０】
これは、例えば野外の池で、または光バイオリアクターによって光合成により培養された藻類を使って製造された藻類粉末が商業的に入手可能であるが、それらは、暗緑色（クロロフィルに関連した）で、非常に不快な味を有するからである。
【００１１】
食品中、または栄養補給食品として処方された場合でさえも、これらの藻類粉末は依然として、視覚的に非常に魅力的でないこの緑色を、食品にまたは栄養補給食品に付与し、
嫌な魚のような味または海草の風味を有する。
【００１２】
さらに、ある種の藍藻類は、土のようなまたはカビ臭い匂いを発生する、ゲオスミン（トランス−１，１０−ジメチル−トランス−９−デカロール）またはＭＩＢ（２−メチルイソボルネオール）などの、悪臭のある化学分子を自然に生成することが知られている。
【００１３】
クロレラ科微細藻類に関して、この分野で一般的に認められている評価用語は、大麦若葉粉末または小麦若葉粉末などの他の緑色植物粉末に幾分似ている「緑茶」風味であり、この風味は、その高いクロロフィル含有量に起因する。
【００１４】
それらの風味は、通常、高度に香り付けされた野菜または柑橘類の果汁と混合されている場合にのみマスクされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
このように、より多数のおよびより多様な食品におけるこれらの組成物の使用を可能にする、好適な官能特性のクロレラ属の微細藻類粉末の利用可能な組成物という、満たされていないニーズが依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本出願人企業は、クロレラ属の脂質に富む微細藻類粉末組成物の、発酵による新規製造方法を提供することによって、このニーズを満たすことが可能であることを見いだした。
【００１７】
したがって、本発明は、微細藻類が「最少」培地で培養される発酵法に関する。
【００１８】
好ましくは、この最少培地は、
−  硫黄源の含有量が低減されており、および／または
−  ビタミンＢ群から選ばれる一つ以上のビタミンＢ、特にコリンおよびイノシトール型のビタミンが欠乏している。
【００１９】
一実施形態によれば、最少培地は、硫黄源の含有量が低減されており、好ましくはＭｇＳＯ４および／または（ＮＨ４）２ＳＯ４の含有量が低減されている。特に、最少培地は、１ｇ／ｌ超のＭｇＳＯ４を含有しなくてもよいか、または約１ｇ／ｌのＭｇＳＯ４を含有してもよい。それはまた、０．２ｇ／ｌ超の（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有しなくてもよいか、または約０．２ｇ／ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有してもよい。
【００２０】
別の実施形態によれば、最少培地は、ビタミンＢ群から選ばれる一つ以上のビタミンＢが欠乏している。特に、最少培地は、コリンおよび／またはイノシトールを含有しなくてもよい。好ましくは、コリンもイノシトールも含有しない。
【００２１】
粉末組成物の官能特性は、５〜１０％の微細藻類粉末組成物、０．５〜２％の糖、０．１〜０．５％のバニラエッセンスおよびスキムミルクを混合することによって調製される試食用組成物であって、百分率が試食用組成物の重量で表され、組成物が、それを６０〜８５℃で２〜１０分間加熱する前に均質化される試食用組成物を用いて評価することができる。
【００２２】
微細藻類は、クロレラ・プロトセコイデス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｒｏｔｏｔｈｅｃｏｉｄｅｓ）、クロレラ・ケスレリ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｋｅｓｓｌｅｒｉ）、クロレラ・ミヌチシマ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍａ）、クロレラ種（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．）、クロレラ・ソロキニアマ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｏｒｏｋｉ
ｎｉａｍａ）、クロレラ・ルテオビリディス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｌｕｔｅｏｖｉｒｉｄｉｓ）、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、クロレラ・レイシグリイ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｒｅｉｓｉｇｌｉｉ）、クロレラ・エリプソイダ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅａ）、クロレア・サッカロフィラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓａｃｃａｒｏｐｈｉｌａ）、パラクロレラ・ケスレリ（Ｐａｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｋｅｓｓｌｅｒｉ）、パラクロレア・ベイゼリンキイ（Ｐａｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｂｅｉｊｅｒｉｎｋｉｉ）、プロトテカ・スタグノラ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｓｔａｇｎｏｒａ）およびプロトテカ・モリフォルミス（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｍｏｒｉｆｏｒｍｉｓ）から選択することができる。
【００２３】
好ましくは、微細藻類は、クロレラ属に属し、非常に特に好ましくはクロレラ・プロトセコイデス微細藻類である。
【００２４】
一実施形態によれば、微細藻類は、クロロフィル色素が欠乏している。これらの微細藻類は特に、暗所で培養することができるか、またはクロロフィル色素を生産することができないか、もしくは生産する能力が低下している。
【００２５】
本発明はまた、本発明による方法によって得られる脂質に富む微細藻類粉末組成物、および食品組成物の調製におけるこの粉末組成物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明の意味の範囲内において、食品処方における（例えば、アイスクリームにおける、または下記の試食用組成物における）官能パネルによるその評価が、微細藻類粉末のこれらの組成物を含有する前記食品処方の官能特性に悪影響を及ぼすオフノートが存在しないと結論される場合に、微細藻類粉末組成物は、「最適化された官能プロファイル」または「最適化された官能特性」を示す。
【００２７】
用語「官能特性」は、味、匂い、外観、色および硬さの観点からの食品の特性を意味すると理解される。
【００２８】
これらのオフノートは、感覚をもたらすために必要な感覚刺激の最小値に対応する知覚閾値によって特徴付けられる、特定の望ましくない臭気および／または芳香族分子の存在と関連している。
【００２９】
「最適化された官能プロファイル」または「最適化された官能特性」はその結果、４つの感覚基準（外観、テクスチャ、味および風味）の評価の尺度で最良のスコアを達成することによって官能パネルにより与えられる。
【００３０】
用語「総含有量」は、リストの揮発性有機化合物のそれぞれについての含有量の合計を意味すると理解される。
【００３１】
本明細書で用いるところでは、用語「約」は、値±２０％、１０％、５％または２％を意味する。
【００３２】
本発明の意味する範囲では、用語「微細藻類粉末」は、その最も広い解釈で、かつ、例えば、微細藻類のバイオマスの複数の粒子を含む組成物を意味すると理解されるべきである。微細藻類のバイオマスは、全細胞もしくは破裂した細胞、または全細胞と破裂した細胞との混合物である、微細藻類の細胞に由来する。
【００３３】
たとえば、国際特許出願国際公開第２０１０／１２０９２３号パンフレットなどの、最
新技術の多数の文献が、クロレラ微細藻類のバイオマスの調製方法および食品における使用について記載している。
【００３４】
したがって本発明が関係している微細藻類は、好ましくは、クロレラ属、より特にクロレラ・プロトセコイデスの微細藻類、より特にさらに、当業者にそれ自体公知の任意の方法によって（暗所で培養されているか、またはもはやこれらの色素を生成しないように株が変異されているか、のいずれかにより）、クロロフィル色素が欠乏したクロレラ微細藻類である。特に、脂質に富む微細藻類は、非網羅的に、クロレラ・プロトセコイデス、クロレラ・ケスレリ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｋｅｓｓｌｅｒｉ）、クロレラ・ミヌチシマ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍａ）、クロレラ種、クロレラ・ソロキニアマ、クロレラ・ルテオビリディス、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、クロレラ・レイシグリイ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｒｅｉｓｉｇｌｉｉ）、クロレラ・エリプソイダ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅａ）、クロレア・サッカロフィラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓａｃｃａｒｏｐｈｉｌａ）、パラクロレラ・ケスレリ（Ｐａｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｋｅｓｓｌｅｒｉ）、パラクロレア・ベイゼリンキイ（Ｐａｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｂｅｉｊｅｒｉｎｋｉｉ）、プロトテカ・スタグノラ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｓｔａｇｎｏｒａ）およびプロトテカ・モリフォルミス（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｍｏｒｉｆｏｒｍｉｓ）から選ぶことができる。このように、ごく特定の実施形態では、微細藻類粉末組成物は、クロレラ粉末の、特にクロレラ・プロトセコイデス粉末の組成物である。
【００３５】
特許出願国際公開第２０１０／１２０９２３号パンフレットに記載されている発酵プロセスは、可変の官能特性の微細藻類粉末の多くの組成物の製造を可能にする。
【００３６】
この特許出願で推奨されている培地は、
−  炭素源（グルコース、フルクトース、スクロース、ガラクトース、キシロース、マンノース、ラムノース、アラビノースなど）、
−  窒素源（タンパク質、大豆粉末、酵母エキス、トウモロコシの浸漬水など）、
−  微量元素（ＺｎＣｌ２、Ｈ３ＢＯ４、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、ＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏおよび（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏの形態で導入される、亜鉛、ホウ素、コバルト、銅、マンガンおよびモリブデン）、
−  任意選択的にｐＨ緩衝剤、および
−  リン酸塩（リン酸塩はリン源として使用することができる）
を含む複合発酵培地である。
【００３７】
微細藻類のコレクションのために、ＡｕｓｔｉｎのＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓによって維持されている株（ＵＴＥＸ）については、様々な培地が提供されている（そのインターネットサイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｔｅｗ．ｏｒｇ／を参照されたい）。
【００３８】
さらに、特許出願国際公開第２０１０／１２０９２３号パンフレットには、高含有量のオイルは、炭素源を過剰にかつ窒素を制限しながら供給することによって生産できることが明記されている。
【００３９】
しかし、この文献では、微細藻類の増殖をもたらすことについても、最適化された官能プロファイルを示す粉末組成物の製造を促進することについても、最少培地の使用について記載も示唆もない。
【００４０】
最少培地は、従来、特定の要件を有さない微細藻類によって利用される形態で、微細藻類の増殖のために必須の化学元素のみを含む培地と定義されている。
【００４１】
最少培地はその結果、
−  炭素源およびエネルギー源：一般にグルコース；
−  カリウム源およびリン源：例えばＫ２ＨＰＯ４；
−  窒素源および硫黄源：例えば（ＮＨ４）２ＳＯ４；
−  マグネシウム源および硫黄源：例えばＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ；
−  カルシウム源：例えばＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ；
−  鉄の供給源：例えばＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ；
−  微量元素の供給源：Ｃｕ、Ｚｎ、Ｃｏ、Ｂ、Ｍｎ、Ｍｏの塩；および
−  ビタミン（チアミン、ビオチン、ビタミンＢ１２など）
を含有する。
【００４２】
実際に、下に例示されるように、本出願人企業は、この最少培地の硫黄供給がさらに低減することにより、および／またはある種のビタミン（特に、ビタミンＢ群に属する、コリンおよびイノシトール）が欠乏する場合に、最適化された官能プロファイルを示すこれらの微細藻類粉末組成物が得られることを見いだした。
【００４３】
この官能プロファイルを測定するために、本出願人企業は、アイスクリームまたはブリオッシュなどの、はるかに複雑で、全く異なるレシピで得られるものと同様の官能評価をそれでも実施することを可能にする非常に単純な試食用マトリックスを定義した。
【００４４】
微細藻類粉末組成物のためのこの試食用マトリックスは：
−  ５〜１０％、好ましくは約７％の微細藻類粉末組成物；
−  ０．５〜２％、好ましくは約１％の糖；
−  ０．１〜０．５％、好ましくは約０．２５％のバニラエッセンス；および
−  残余はスキムミルクとして、好ましくは約９１．７５％
を含み、百分率は、試食用組成物の重量で表される。
【００４５】
上記の試食用組成物の調製物は均質化され、６０〜８５℃、好ましくは約７５℃で２〜１０分、好ましくは約５分間加熱される。
【００４６】
官能パネルは、上記の試食用組成物中に含まれる微細藻類粉末組成物の官能特性をテストし、評価するために定義される。
【００４７】
この官能パネルは、微細藻類粉末の、特にクロレラ・プロトセコイデスバイオマスの粉末組成物の異なるバッチの官能特性を評価するために形成される。
【００４８】
一群の人々、少なくとも１０人、２０人または３０人、詳細には約１５人が集められ、好ましくは、適合すると特定される、すなわち、許容可能な官能特性の微細藻類粉末の参照試料（参照バッチＮｏ．１）、および非常に許容できない官能特性の別の試料（参照バッチＮｏ．２）と比較して、微細藻類粉末の幾つかの組成物の評価用語を評価する。
【００４９】
好ましくは、微細藻類粉末組成物は、本明細書による試食用組成物の形態で試験される。あるいは、組成物は、当業者が望む任意の他の形態で、例えばアイスクリーム、またはブリオッシュなどの製パン生成物の形態で試験することができる。
【００５０】
好ましくは、以下の表に示されるような参照製品が各評価用語と関連している。
【００５１】
【表１】
2016527898.tif 000002
【００５２】
当然のことながら、当業者は、必要に応じて他の参照製品を定義することができる。
【００５３】
各試食セッションでは、幾つかの生成物、例えば４〜５つの生成物が、参照バッチまたは試料、好ましくは許容可能な官能特性のものであると見なされる参照バッチまたは試料と比較して、各評価用語に関して評価される。
【００５４】
生成物は全て、以下の方法で、例えば、１〜９の範囲の尺度で順次評価される：
１の値：評価される評価用語が、生成物中に存在しない；
５の値：評価される評価用語が、許容可能な官能特性の参照製品におけるものと全く同様に生成物中に存在する；
９の値：評価される評価用語が、生成物中に多く存在する。
【００５５】
許容可能な官能特性の参照バッチは、全てのこれらの評価用語の「良好な」官能プロファイルを示すという意味で適合する微細藻類粉末組成物である。全く許容できない官能特性の参照バッチは、例えば、ひどい野菜の後味を示すため、芳香のノート、すなわち、味および風味に関連する評価用語を満たさないバッチである。
【００５６】
許容可能な官能特性の参照バッチが必ずしも、最適化された官能プロファイルを示す微細藻類粉末組成物ではないことに留意することは重要である。好ましくは、試験された評価用語全ては、５のグレードを特に示す、「良好」と官能パネルによって認められる微細藻類粉末組成物である。この実施形態では、試験される微細藻類粉末組成物は、許容可能な官能特性のこの参照バッチの両側に、官能パネルによって分類される。
【００５７】
一般に、試験された組成物は、許容可能なまたは許容できない官能特性の参照バッチに対して、好ましくは許容可能な官能特性の参照バッチに対して、官能パネルによって分類される。
【００５８】
したがって、第１段階は、試験される微細藻類粉末の様々な組成物の、それらの官能特性の関数としての分類をもたらす。
【００５９】
特に、分散分析（ＡＮＯＶＡ）は、評価用語の識別能力を評価するために実施される（その評価用語である、Ｆｉｓｈｅｒ試験  −  タイプ−３  ＡＮＯＶＡ  −  に関連したｐ−値は、モデル評価用語における組成影響について０．２０未満である〜組成物＋判断
）。組成影響は、評価用語の識別能力として解釈される。影響が全くない場合（臨界確率＞０．２０）、組成物は、この判定基準に従って識別されなかった。
【００６０】
この臨界確率が小さければ小さいほど、評価用語はより識別力がある。主成分分析（ＰＣＡ）が、組成物の官能マッピングと、すべての評価用語に関して全ての組成物の同時表現とを得るために次に実施される。
【００６１】
したがって、本発明は、最適化された官能特性の脂質に富む微細藻類粉末組成物の、発酵による製造方法に関する。
【００６２】
本発明による方法では、微細藻類、好ましくはクロレラ属の微細藻類、より特にクロレラ・プロトセコイデス微細藻類は、最少培地で培養される。このようにして得られるバイオマスは、その後微細藻類粉末へ変換することができる。
【００６３】
本発明に使用されるような最少培地は、炭素、カリウム、リン、窒素、マグネシウム、カルシウム、鉄、微量元素およびビタミンの供給源を含む。
【００６４】
特定の実施形態によれば、最少培地は、次の化合物：グルコース、ＫＨ２ＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４、ＭｇＳＯ４、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＣａＣｌ２、ＦｅＳＯ４、ＭｎＳＯ４、ＣｏＳＯ４、ＣｕＳＯ４、ＺｎＳＯ４、Ｈ３ＢＯ３、Ｎａ２ＭｏＯ４、チアミン、ビオチン、ビタミンＢ１２、パントテン酸カルシウムおよびｐ−アミノ安息香酸、ならびに任意選択的にイノシトールおよび／または塩化コリン、を含む。
【００６５】
好ましくは、この最少培地は、硫黄源の含有量が低減されており、および／またはビタミンＢ群から選ばれる一つ以上のビタミンＢが欠乏している。
【００６６】
一実施形態によれば、最少培地は、硫黄源の含有量が低減されている。
【００６７】
本明細書で用いるところでは、用語「量が低減されている」は、好ましくは、培地中に存在する量が、株の要求を満たすと知られている量未満であることを意味する。好ましくは、この用語は、株の要求を満たすと知られている量よりも２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０％低い量を意味する。あるいは、量が低減されているとは、培地中に存在する量が、培養される株の要求のわずか５０、５５、６０、６５、７０、７５または８０％であることを意味する。
【００６８】
最少培地中に存在する硫黄は、この元素を含有する多量要素に本質的に由来する。これは、微量要素の寄与が通常無視できるからである。したがって、一実施形態によれば、最少培地中に存在する硫黄は、ＭｇＳＯ４および／または（ＮＨ４）２ＳＯ４に本質的に由来する。
【００６９】
したがって、特定の実施形態によれば、使用される最少培地は、硫黄源として最大でも約１ｇ／ｌ当量のＭｇＳＯ４および約０．２ｇ／ｌ当量の（ＮＨ４）２ＳＯ４を含む。好ましくは、使用される最少培地は、硫黄源として最大でも１ｇ／ｌ当量のＭｇＳＯ４および０．２ｇ／ｌ当量の（ＮＨ４）２ＳＯ４を含む。
【００７０】
好ましい実施形態によれば、使用される最少培地は、硫黄源として約１ｇ／ｌ当量のＭｇＳＯ４および約０．２ｇ／ｌ当量の（ＮＨ４）２ＳＯ４、より好ましくは１ｇ／ｌ当量のＭｇＳＯ４および０．２ｇ／ｌ当量の（ＮＨ４）２ＳＯ４を含む。
【００７１】
一実施形態によれば、最少培地は、ビタミンＢ群から選ばれる一つ以上のビタミンＢが
欠乏している。
【００７２】
好ましくは、最少培地は、コリンおよび／またはイノシノールを含まない。より特に好ましくは、最少培地は、コリンもイノシトールも含まない。
【００７３】
好ましくは、微細藻類は、発酵の継続時間の全体にわたって、すなわち粉末へ変換されるのに十分なバイオマスが得られるまで、最少培地で培養される。典型的には、発酵は、５０時間超、好ましくは５０〜１５０時間の継続時間を有する。生産されるバイオマスは好ましくは、１リットルの培地当たり１００または１５０ｇ超、非常に特に好ましくは１リットルの培地当たり１００〜２５０ｇである。
【００７４】
本明細書で用いるところでは、用語「脂質に富む微細藻類」は、より具体的には、バイオマスの乾燥重量で３０、３５、４０または４５％超の脂質を含むバイオマスを生産する微細藻類を意味する。
【００７５】
微細藻類は好ましくは、クロロフィル色素が欠乏している。特に、発酵は、暗所で実施することができる。あるいは、微細藻類はまた、クロロフィル色素を生産することができないか、または生産する能力が低下している。
【００７６】
したがって、好ましい実施形態によれば、微細藻類は、従属栄養条件下で、すなわち光がなく、炭素源およびエネルギー源として炭素系基質（好ましくはグルコース）を使用して、培養される。
【００７７】
好ましい実施形態によれば、得られるバイオマスは、一価不飽和脂肪酸の酸化分解の生成物などの、官能的に望ましくない化合物をほとんどまたは全く含有しない。特に、バイオマスは、オレイン酸の酸化分解の生成物をほとんどまたは全く含有しない。好ましくは、リノール酸（オレイン酸の酸化分解の生成物）の含有量は、乾燥バイオマス中の脂肪酸の総重量に対して、１８、１５、１０、８または７重量％未満である。
【００７８】
本方法はより小さい規模で使用することができるが、本方法は、好ましくは、工業的規模で、すなわち（約１〜１００ｍ３の）中容量および（１００ｍ３超の）大容量の発酵槽で実施される。一実施形態によれば、本方法は、少なくとも１、１０、２５、５０、７５、１００、５００または１０００ｍ３の容量の発酵槽で実施される。
【００７９】
本発明による方法はまた、得られたバイオマスの微細藻類粉末への変換の段階を含むことができる。この段階は、微細藻類粉末を得るための当技術分野の当業者に公知の任意の方法を含むことができる。
【００８０】
本発明はまた、本発明の方法により得られる脂質に富む微細藻類粉末組成物に関する。
【００８１】
それはまた、食品、栄養補助食品、菓子類または飲料などの、食品組成物の調製のためのこの粉末組成物の使用に関する。
【００８２】
本発明のより良い理解は例示的であり、かつ非限定的であることを意図する以下の実施例を用いて得られるであろう。
【実施例】
【００８３】
実施例１：脂質に富むクロレラ・プロトセコイデス微細藻類の生産  −  ＭｇＳＯ４またはビタミンの寄与の低減
使用した株は、クロレラ・プロトセコイデスＵＴＥＸ  ２５０である。
【００８４】
前培養：
−  ２リットルのＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコに５００ｍｌの培地；
−  培地の組成（ｇ／ｌまたはｍｇ／ｌ）。
【００８５】
【表２】
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【００８６】
培養は、次の条件下で行う：継続時間：７２時間；温度：２８℃；攪拌：１１０ｒｐｍ（Ｉｎｆｏｒｓ  Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ培養器）。
【００８７】
前培養物をその後３０リットルのＳａｒｔｏｒｉｕｓ型の発酵槽へ移す。
【００８８】
バイオマスを生産するための培養：
基本培地は、次の通りである。
【００８９】
【表３】
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【００９０】
ＭｇＳＯ４の寄与を試験２では１ｇ／ｌに減らし、塩化コリンおよびイノシトールを試験３では除去する。
【００９１】
発酵槽の初期体積（Ｖｉ）を接種後に７リットルに調整する。それを最終的には１５〜２０リットルにする。
【００９２】
発酵を実施するためのパラメータは、次の通りである。
【００９３】
【表４】
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【００９４】
グルコースの残存濃度が１０ｇ／ｌを下回ったときに、発酵槽でグルコースの含有量を０〜２０ｇ／ｌに維持するように、７００ｇ／ｌの濃縮液の形態でのグルコースの添加を連続的に実施する。
【００９５】
１０００ｇのグルコースが消費されたとき、およびバイオマスが７０ｇ／ｌの濃度に達したときに、ｐＨの調整のためのアンモニア水を、水酸化カリウムで置き換える。これにより、バイオマスは脂質を蓄積できるようになる。
【００９６】
結果：
【表５】
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【００９７】
官能パネルによって与えられるグレードが高ければ高いほど、組成物は、オフノートの存在によって特徴付けられる。
【００９８】
試験２および３で得られた粉末組成物は、５未満のグレード、すなわち良好な官能特性の参照組成物よりも低いグレードである。したがって、試験２および３の組成物は、参照組成物よりも良好な官能特性を有する。
【００９９】
したがって、これらの結果は、特に硫黄の主要源であるＭｇＳＯ４の濃度を低減させることによる、培地における硫黄の制限、または特定のビタミン、特にイノシトールおよび／もしくはコリンの不存在が、オフノートのレベルの有意な低下をもたらし、これにより、組成物の官能特性の改善をもたらすことを示す。
【国際調査報告】
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