(57)【要約】  ゴセレリン持効性・徐放性マイクロスフェア組成物であって、前記マイクロスフェアには、ゴセレリンと、少なくとも１種のラクチド−グリコリド共重合体と、ポロキサマー又はポリエチレングリコールとが含まれる。この徐放性マイクロスフェアは、投与後により高いバイオアベイラビリティを有し、薬物が完全に薬効を発揮するよう促すとともに、調製されるマイクロスフェアの封入率を９０％以上にまでも到達させることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴセレリン徐放性マイクロスフェア医薬組成物であって、ゴセレリンと、ラクチド−グリコリド共重合体と、ポロキサマー又はポリエチレングリコールとを含むゴセレリン徐放性マイクロスフェア医薬組成物。
【請求項２】
前記ポロキサマーがポロキサマー１８８又はポロキサマー４０７であり、前記ポリエチレングリコールがポリエチレングリコール２０００、ポリエチレングリコール４０００又はポリエチレングリコール６０００であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ゴセレリン徐放性マイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜１０％、好ましくは１〜６％、より好ましくは１〜４％であることを特徴とする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ゴセレリンの重量含有量が１〜１０％であり、好ましくは１〜８％であり、より好ましくは１〜５％であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ラクチド−グリコリド共重合体のラクチドとグリコリドとのモル比が９０：１０〜１０：９０、好ましくは７５：２５〜２５：７５、より好ましくは６０：４０〜４０：６０であり、とりわけ好ましくは５０：５０であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ラクチド−グリコリド共重合体の固有粘度が０．１０〜０．４０ｄＬ／ｇ、その好ましい範囲が０．１０〜０．３５ｄＬ／ｇ、より好ましい範囲が０．１０〜０．３０ｄＬ／ｇであることを特徴とする、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ラクチド−グリコリド共重合体の重量平均分子量が４０００〜４５０００ダルトンであり、好ましくは４０００〜３５０００ダルトンであり、より好ましくは４０００〜３００００ダルトンであることを特徴とする、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が８０〜９８％であり、好ましくは８６〜９８％であり、より好ましくは９１〜９８％であることを特徴とする、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ゴセレリン徐放性マイクロスフェア組成物における酢酸含有量が０．０１％より小さいことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ゴセレリンマイクロスフェアにおけるゴセレリンの重量含有量が１〜１０％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が８０〜９８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜１０％であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ゴセレリンマイクロスフェアにおけるゴセレリンの重量含有量が１〜８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が８６〜９８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜６％であることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ゴセレリンマイクロスフェアにおけるゴセレリンの重量含有量が１〜５％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が９１〜９８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜４％であることを特徴とする、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
組成物が、ポロキサマー又はポリエチレングリコールと酢酸ゴセレリンとを予備処理した後に、さらに油相に添加することを含むＳ／Ｏ／Ｗエマルション溶媒蒸発法によって調製されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物の調製方法。
【請求項１４】
前記ポロキサマー又はポリエチレングリコールとゴセレリン酢酸塩とを予備処理した後に、油相に添加して粒子の粒径を測定すると、その測定値がｄ（０．５）＝０．０１〜２マイクロメートルであることを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物の調製方法。
【請求項１５】
前記医薬組成物が、前立腺癌、性早熟症、子宮内膜症、女性不妊症、子宮筋腫を治療する医薬の調製において応用されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬製剤の分野に関し、具体的には、ゴセレリン持効性・徐放性マイクロスフェア組成物並びにその調製方法及び応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）は、黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）とも呼ばれ、生殖機能と密接に関係するホルモンである。外因性ＬＨＲＨ又はその類似体は、生理的パルス周波数（９０ｍｉｎごとに１回）で短期的に小剤量を投与する場合には、垂体性腺システムに対して促進作用を発揮するので、性機能低下、無排卵、思春期遅発症などの症状の治療に臨床で用いられるが、非生理的パルス周波数で長期的に大剤量を投与する場合には、垂体からの黄体形成ホルモンと卵胞刺激ホルモンの分泌を抑制できることで、性腺のホルモン分泌能力を低下させて、生殖器を萎縮させることになるので、前立腺癌、子宮筋腫、乳腺癌、子宮内膜症及び思春期早発症などのような一部のホルモン依存性疾患の治療に臨床で用いられている。
【０００３】
黄体形成ホルモン放出ホルモン類似体は垂体黄体ホルモン放出ホルモンの受容体の大部分との競合的結合により、ＬＨとＦＳＨの分泌をフィードバック阻害することで、卵巣エストロゲンの生成を抑制し、薬物療法によって卵巣切除の治療作用を達成するものである。放射線治療の後に、黄体形成ホルモン放出ホルモン類似体（例えば、ゴセレリン）を投与すると、前立腺癌患者の寿命を延ばすことができることも研究によって明らかになっている。既存の資料によっても明らかなように、それらは、少なくとも外科的去勢又はＣＭＦ化学療法と同様の治療効果を達成可能であるので、月経閉止前の乳腺癌患者の術後補助治療として用いられ、エストロゲン受容体陽性の腋窩リンパ節に転移がある患者に対しては、ＣＭＦ化学療法と同様の治療効果が得られる上、副作用もより小さいので、より患者に受け入れられやすい。近年、ゴセレリンは、子宮内膜症及び子宮腺筋症の臨床病状と症候の制御、子宮内膜症の術後再発の予防に使用され、いずれも良好な効果を有している。それ以外にも、ゴセレリンは、子宮内膜の菲薄化及び子宮筋腫などの症状にも用いることができる。それに関連する臨床製品も既に市販されていて、例えば、ゴセレリン製剤は既に、１９８７年にフランスでの市販が許可され、１９８９年１２月２９日にＦＤＡの市販承認を得ており、商品名は「ゾラデックス」である。その剤形はインプラント剤で、毎月の注射量が１回で３．６ｍｇ／本であり、成人は３．６ｍｇを２８日ごとに１回腹部前面に皮下注射するが、「ゾラデックスの腹部への皮下注射については、その薬栓をディスポーザブル注射筒にプリセットし、その注射針は１６号の穿刺針に相当し、長さが約３０ｍｍとなるので、一般的な薬物の皮下注射に比べると、注射時に引き起こされる痛みの程度が大きく、注射後に皮下出血を起こすケースが多い。」‐‐『中華現代臨床医学雑誌』＞２００８年７月６巻７期
【０００４】
ゴセレリン臨床適応症の投与特徴に応じて、患者に長期投与が必要なことが多いため、患者の順応性を向上させるために、持効性・徐放性製剤が開発されている。インプラント製剤に比べると、マイクロスフェア製剤を用いて患者に注射する場合には、患者の痛みと出血状況が大幅に低下することになる。市販されているいくつかのＬＨＲＨ類似体マイクロスフェアの多くはこのような薬物放出モードで、例えば、リュープロレリンマイクロスフェアである。しかしながら、予備処理なしのゴセレリンから調製されるマイクロスフェアを用いると、薬物封入率が低くなって、調製過程での損耗がより大きくなり、製造コストが増大することが研究によって発見されており、その調製されるマイクロスフェアの動物の体内における薬物動態学についての研究でも、そのバイオアベイラビリティが比較的低く、完全に薬効を発揮できないことが明らかになっている。
【発明の概要】
【０００５】
踏み込んだ研究によって、ゴセレリンにポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加して予備処理をし、さらにマイクロスフェアに調製することによって、薬物封入率が高くなるとともに、薬物のバイオアベイラビリティを向上させ、薬物が完全に薬効を発揮するよう促すことができることが分かった。
【０００６】
本発明は、ゴセレリン又はその塩、ラクチド−グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）及びポロキサマー又はポリエチレングリコールを含むゴセレリン徐放性マイクロスフェア医薬組成物を提供するものである。そのうち、ポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量は１〜１０％であり、好ましくは１〜６％であり、より好ましくは１〜４％である。
【０００７】
医薬組成物におけるゴセレリン又はその塩の重量含有量は１〜１０％であり、好ましくは１〜８％であり、より好ましくは１〜５％である。ラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量は８０〜９８％であり、好ましくは８６〜９８％であり、より好ましくは９１〜９８％である。
【０００８】
ラクチド−グリコリド共重合体は、英語名称がＰｏｌｙ（ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）であり、ＰＬＧＡと略称される。前記ＰＬＧＡのラクチドとグリコリドとのモル比は９０：１０〜１０：９０、好ましくは７５：２５〜２５：７５、より好ましくは６０：４０〜４０：６０であり、とりわけ好ましくは５０：５０である。
【０００９】
ラクチド−グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）の固有粘度は０．１０〜０．４０ｄＬ／ｇで、その好ましい範囲は０．１０〜０．３５ｄＬ／ｇ、より好ましい範囲は０．１０〜０．３０ｄＬ／ｇである。ＰＬＧＡの固有粘度（ｉｎｈｅｒｅｎｔ  ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ）の測定方法は、ＰＬＧＡをクロロホルムと配合調整して約０．５％（ｗ／ｖ）の溶液とし、３０℃でキャノン・フェンスケガラス毛細管粘度計を使用してその固有粘度を測定するというものである。
【００１０】
本発明にいうラクチド−グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）の分子量は４０００〜４５０００ダルトンであり、好ましくは４０００〜３５０００ダルトンであり、より好ましくは４０００〜３００００ダルトンである。前記分子量とは、「重量平均分子量」を指すが、「分子量」と略称される。
【００１１】
説明しやすくするため、以下、ラクチドとグリコリドとのモル比及び固有粘度について括弧内に表示する。例えば、「ＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）」は、ラクチドとグリコリドとのモル比が５０：５０であり、固有粘度が０．１４ｄｌ／ｇであり、分子量が７２００ダルトンであるラクチド−グリコリド共重合体を表す。
【００１２】
本発明にいうポロキサマーは、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンエーテルブロック共重合体であって、適量のポリオキシプロピレンと適量のポリオキシエチレンから親水性親油性バランスが異なる化合物に共重合するものであり、好ましくはポロキサマー１８８又はポロキサマー４０７、より好ましくはポロキサマー１８８である。
【００１３】
本発明にいうポリエチレングリコールは、α−水素−ω−ヒドロキシル（オキシ−１，２−エタンジイル）の重合体、ポリオキシエチレン（ＰＥＯ−ＬＳ）とも呼ばれ、エチレングリコールの高重合体の総称である。好ましくはポリエチレングリコール２０００、ポリエチレングリコール４０００又はポリエチレングリコール６０００、より好ましくはポリエチレングリコール６０００である。
【００１４】
本発明にいう薬物積載量は、実際の薬物積載量であり、次の式に基づいて計算される。
薬物積載量＝［マイクロスフェアにおける薬物量／（マイクロスフェアにおける薬物量＋高分子量）］×１００％。
【００１５】
本発明にいう封入率は、次の式に基づいて計算される。
封入率（％）＝マイクロスフェアにおける薬物の測定薬物積載量／調製時のマイクロスフェアにおける薬物の理論的な薬物積載量（ｍｇ／ｍｇ）×１００％。
【００１６】
本発明で提供される徐放性マイクロスフェアにおけるゴセレリンの塩は、酢酸塩などの水溶性塩でありうる。
【００１７】
本発明で提供されるゴセレリン徐放性マイクロスフェアは、Ｓ／Ｏ／Ｗ溶媒蒸発法によって調製され、その方法は次の通りである。酢酸ゴセレリン、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを秤取し、混合して予備処理を行い、固体粉末混合物にする。ＰＬＧＡを有機溶媒に溶解させて油相にし、固体粉末混合物を油相に加えて剪断乳化することで、Ｓ／Ｏ一次エマルションが得られる。一次エマルションがさらに乳化剤含有水溶液に加えられて均質に乳化され、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションが得られた後に、有機溶媒を除去し、洗浄・濾過することで、マイクロスフェアが得られる。
【００１８】
本発明にいう有機溶媒は、酢酸エチル、クロロホルム又はジクロロメタンであってよく、好ましくはジクロロメタンである。
【００１９】
本発明にいう乳化剤は親水性乳化剤であり、Ｔｗｅｅｎ類、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ）、ブリジ（Ｂｒｉｊ）、ポリビニルピロリドン又はポリビニルアルコールであってよく、好ましくはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）である。
【００２０】
本発明にいう乳化剤は、水溶液における濃度範囲が０．０１％〜５％、好ましくは０．０２〜２％、より好ましくは０．５％〜１．０％である。
【００２１】
本発明は、さらに前立腺癌、性早熟症、子宮内膜症、女性不妊症、子宮筋腫を治療する薬物の調製におけるゴセレリンマイクロスフェアの応用を提供するものである。
【００２２】
本発明で提供されるマイクロスフェアは、ゴセレリンマイクロスフェア組成物とマンニトールを含む無菌粉末の形態に調製されてもよいが、次の方法を用いて調製することもできる。徐放性マイクロスフェア組成物を取り、注射用水で洗い流して、凍結乾燥プレートに移し、マンニトールと適量の注射用水を加えて、冷凍乾燥機に入れて凍結乾燥をし、凍結乾燥物を篩に通して均一に混合して、分けて無菌包装し、キャッピングすることで、無菌粉末が得られる。患者に投与する前に、無菌粉末を受容可能な分散溶媒中に懸濁させるが、前記分散溶媒は懸濁化剤、ｐＨ調節剤、等浸透圧調節剤、界面活性剤のうちの一又は複数、及び注射用水からなるもので、前記懸濁化剤はカルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、グリセリンのうちの一又は複数であってよく、前記等浸透圧調節剤は塩化ナトリウム、グルコース、マンニトール、ソルビトールのうちの一又は複数などであってよく、前記界面活性剤はポリソルベートシリーズ（ポリソルベート８０、ポリソルベート６０など）のようなノニオン界面活性剤である。本発明で提供されるゴセレリン徐放性マイクロスフェアには、筋肉注射又は皮下注射を用いる。
【００２３】
本発明で提供されるゴセレリン徐放性マイクロスフェアには、次のような利点がある。
１．ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加し、ゴセレリンと予備処理して調製されるマイクロスフェアでは、薬物封入率が９０％以上にまでも到達可能である。
２．マイクロスフェアの投与後に、体内でより高いバイオアベイラビリティを有して、薬物が完全に薬効を発揮するよう促す。
【００２４】
備考：本発明にいう粒度スパンは、中国薬典２０１０付録ＸＩＸＥマイクロカプセル、マイクロスフェアとリポソーム製剤の指導原則を参照する。
スパン＝（Ｄ９０−Ｄ１０）／Ｄ５０
式中では、Ｄ９０、Ｄ５０、Ｄ１０は、それぞれ粒径累積分布図において９０％、５０％、１０％の箇所に対応する粒径を指し、スパンが小さいほど分布が狭く、即ち粒子サイズが均一である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加した、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアのラット体内の薬物放出を比較する図である。
【図２】異なるＰＬＧＡで調製され、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加した、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアのラット体内の薬物放出を比較する図である。
【図３】酢酸含有量を制御しないゴセレリンマイクロスフェアの６ヶ月の安定性実験の前後の、ラット体内の薬物放出を比較する図である。
【図４】酢酸含有量を制御したゴセレリンマイクロスフェアの６ヶ月の安定性実験前後の、ラット体内の薬物放出を比較する図である
【発明を実施するための形態】
【００２６】
下記に、実施例及び試験例によってさらに本発明を説明するが、これに限定されるものではない。
【００２７】
実施例１
適量のゴセレリンとポロキサマー１８８とを秤取してボールミル混合し、１５Ｈｚの周波数、５分間の時間でボールミルした後、固体粉末混合物を得る。ゴセレリンとポロキサマー１８８との混合物４３０ｍｇ（ゴセレリン２１５ｍｇを含むことを測定）を精密に秤取して、使用に備える。１．７２１ｇのＰＬＧＡ（７５／２５、０．３５、４２０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させ（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させ、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションにする。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は９．０１％であり、封入率は９０．１％である。
【００２８】
実施例２
ホットメルト押出機のホットメルト温度を８０℃に設定し、温度が予め設定された値に達してから、適量のゴセレリンとポロキサマー４０７を篩に通して混合した後、機器のチャンバーに加え、攪拌速度ｎ＝４０に設定し、攪拌混合時間３分間の後、バルブハンドルを開いて溶融材料を押し出し、自然冷却させる。その後、材料を２分間ボールミル粉砕して、ボールミル後のゴセレリンとポロキサマー１８８との混合物３１６ｍｇ（ゴセレリン１５８ｍｇを含むことを測定）を精密に秤取して、使用に備える。１．６７２ｇのＰＬＧＡ（２５／７５、０．２４、２５０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とする。処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させ（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は７．２１％であり、封入率は９０．７％である。
【００２９】
実施例３
適量の酢酸ゴセレリンとポロキサマー１８８とを秤取して水に溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を噴霧乾燥して固体粉末混合物を得る。噴霧乾燥後のゴセレリンとポロキサマー１８８との混合物４７ｍｇ（ゴセレリン２３ｍｇを含むことを測定）を精密に秤取して、ペニシリンボトルに入れる。１．９５１ｇのＰＬＧＡ（６５／３５、０．２９、３２０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は１．０２％であり、封入率は９０．１％である。
【００３０】
実施例４
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、２１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９０８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．６２％であり、封入率は９１．４％である。
【００３１】
実施例５
８３ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン７２ｍｇを含むことを測定）、４１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．８７６ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．５６％であり、封入率は９８．６％である。
【００３２】
実施例６
９１ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン７９ｍｇを含むことを測定）、１０１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水２０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末混合物を得る。１．８１１ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させて、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションにする。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．６１％であり、封入率は９１．３％である。
【００３３】
実施例７
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、２０１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水２０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．７２３ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．５８％であり、封入率は９０．２％である。
【００３４】
実施例８
６２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン５４ｍｇを含むことを測定）、４１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９６４ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００：５０／５０、０．２０、１８０００＝１：１）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は２．５４％であり、封入率は９７．３％である。
【００３５】
実施例９
２６ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン２３ｍｇを含むことを測定）、５８ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末混合物を得る。１．８０１ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００：５０／５０、０．２０、１８０００＝１：３）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は１．１５％であり、封入率は９５．８％である。
【００３６】
実施例１０
１２９ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン１１２ｍｇを含むことを測定）、８２ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．８６１ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００：５０／５０、０．２０、１８０００＝３：１）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させるとて、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は５．３１％であり、封入率は９８．０％である。
【００３７】
実施例１１
９１ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン７９ｍｇを含むことを測定）、６ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９２４ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相として、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は２．９８％であり、封入率が７６．１％である。
【００３８】
実施例１２
９３ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８１ｍｇを含むことを測定）、４１ｍｇのＰＥＧ６０００を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９３１ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相として、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．６４％であり、封入率は９２．９％である。
【００３９】
実施例１３
９０ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン７８ｍｇを含むことを測定）、４２ｍｇのＰＥＧ４０００を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９２５ｇのＰＬＧＡ（８５／１５、０．３６、４４０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．４３％であり、封入率は９０．１％である。
【００４０】
実施例１４
９４ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８２ｍｇを含むことを測定）、４２ｍｇのＰＥＧ２０００を秤取して水２０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９２３ｇのＰＬＧＡ（１０／９０、０．２７、２９０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．５９％であり、封入率は９０．４％である。
【００４１】
比較例１
９３ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８１ｍｇを含むことを測定）を秤取して水４ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成する。得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９０８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は２．１２％であり、封入率は５２．４％である。
【００４２】
試験例１：実施例、比較例の封入率の検測
検測方法：約２５ｍｇのゴセレリン参照物質を精密に秤取し、純水を加え溶解させて、１ｍｌごとにゴセレリン約０．０２ｍｇの溶液を生成し、参照物質溶液とする。約２０ｍｇのゴセレリンマイクロスフェアを秤取して１０ｍｌのメスフラスコに入れて、適量の純酢酸で溶解した後で、標線までゆっくりと純水を加えて、遠心分離して上澄液を回収し、高速液体クロマトグラフィー分析を行う。
クロマトカラム：Ｃ１８カラム（２５ｃｍ×４．６ｍｍ、５μｍ）、
カラム温度：４０℃±０．５℃、
移動相：０．５％リン酸アセトニトリル−０．５％リン酸水溶液（２５：７５）（Ｖ：Ｖ）、
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、
検測波長：２２０ｎｍ、
サンプル注入体積：１０μｌ。
上記の供試品溶液と参照物質溶液をそれぞれ１０μｌずつ精密に吸い取り、液体クロマトグラフィーに注入して測定し、クロマトグラムのピーク保持時間とピーク面積を記録し、外部標準法によってマイクロスフェアにおけるゴセレリンの量を計算して求め、前記の公式に基づいて封入率を計算する。具体的には、実施例、比較例の封入率は表１のとおりとなる。
2016516785.tif 000002
表１から導かれるように、ゴセレリンとポロキサマー又はポリエチレングリコールの予備処理によってゴセレリンマイクロスフェアを調製すると同時に、ポロキサマー又はポリエチレングリコールがマイクロスフェア重量において合計重量の１％以上を占めると、マイクロスフェアの封入率が９０％以上にまでも到達可能である。ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加しないゴセレリンマイクロスフェアの封入率は５０％程度となる。
【００４３】
試験例２：ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加した、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアの体内での放出の比較試験
試材：
試験薬品：実施例１１、４、５、６、７に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（それぞれ０．３％（ｗ／ｗ）、１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）のポロキサマー１８８を含むゴセレリンマイクロスフェア）。実施例１２に基づいて調製される２％のＰＥＧ６０００を含むゴセレリンマイクロスフェア。サンプルに使用する高分子はいずれもＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）である。
対照群：比較例１に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（薬物積載量が約２．４２％で、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まない）。
実験動物：
ＳＤラット（山東緑葉製薬有限公司動物室）
実験装置：
イオン噴霧イオン化源付きのＱＴＲＡＰ５５００型質量分析計、米国・アプライドバイオシステムズ社製
二元輸液ポンプ、オートサンプラー、カラムコンパートメントを備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １２９０高速液体クロマトグラフィーシステム
Ａｎｋｅ  ＴＧＬ−１６Ｇフライングピジョン卓上遠心分離機、上海安亭科学儀器廠製
Ｔｕｒｂｏ  Ｖａｐ  ＬＶ窒素ガス吹付機、バイオタージ社製
実験方法：
ａ）実験動物：ＳＤラット、体重１９０±１０ｇ、雄性、各組４匹、
ｂ）投与法及び剤量：筋肉内注射、投与剤量０．９ｍｇ／匹、投与体積０．５ｍＬ／匹、
ｃ）採血タイミング：投与前（０時間）及び投与後１ｈ、６ｈ、１ｄ、４ｄ、７ｄ、９ｄ、１１ｄ、１３ｄ、１５ｄ、１７ｄ、１９ｄ、２３ｄ、２８ｄ、
ｄ）生物サンプル測定：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によってラットの血中遊離薬物を測定、
ｅ）データ処理：ＤＡＳ２．０ソフトウェア。
結果は、表２及び図１のとおり。
2016516785.tif 000003
結果から明らかなように、ゴセレリンマイクロスフェアは体内に進入した後すぐに放出され、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含むゴセレリンマイクロスフェアのＡＵＣは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まないゴセレリンマイクロスフェのＡＵＣより明らかに高く、すなわち、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加することで体内におけるゴセレリンマイクロスフェアのバイオアベイラビリティを向上させることができる。マイクロスフェアのバイオアベイラビリティは、同時にポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量と関係しており、ポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量が１％以上である場合、ゴセレリンマイクロスフェアは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加しないゴセレリンマイクロスフェアに対して、そのバイオアベイラビリティが２０％以上向上する。
【００４４】
実施例１５
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、６ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水４ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９０２ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は２．７６％であり、封入率は７４．６％である。
【００４５】
実施例１６
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、２０ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．８８８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．４９％であり、封入率は９０．１％である。
【００４６】
実施例１７
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、３９ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．８７０ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．６７％であり、封入率は９５．７％である。
【００４７】
実施例１８
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、７０ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水４ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．８３８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．７４％であり、封入率は９９．３％である。
【００４８】
実施例１９
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、１２１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水４ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．７８６ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．３８％であり、封入率は９１．２％である。
【００４９】
実施例２０
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、２０１ｍｇのポロキサマー１８８を秤取して水１０ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．６９３ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．５１％であり、封入率は９０．１％である。
【００５０】
実施例２１
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）、７０ｍｇのＰＥＧ６０００を秤取して水４ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．８３８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．５７％であり、封入率は９０．７％である。
【００５１】
比較例２
９２ｍｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８０ｍｇを含むことを測定）を秤取して水４ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末を得て、使用に備える。１．９０８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させて、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションにする。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は２．８６％であり、封入率は５７．１％である。
【００５２】
試験例３：ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加する、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアの体内での放出の比較試験
試材：
試験薬物：実施例１５、１６、１７、１８、１９、２０に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（それぞれ０．３％（ｗ／ｗ）、１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３．５％（ｗ／ｗ）、６．０％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）のポロキサマー１８８を含むゴセレリンマイクロスフェア）。実施例２１に基づいて調製される、３．５％のＰＥＧ６０００を含むゴセレリンマイクロスフェア。サンプルに使用する高分子はいずれもＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）である。
対照群：比較例２に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（薬物積載量が約２．７４％で、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まない）。
実験動物：
ＳＤラット（山東緑葉製薬有限公司動物室）
実験装置：
イオン噴霧イオン化源付きのＱＴＲＡＰ５５００型質量分析計、米国・アプライドバイオシステムズ社製
二元輸液ポンプ、オートサンプラー、カラムコンパートメントを備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １２９０高速液体クロマトグラフィーシステム
Ａｎｋｅ  ＴＧＬ−１６Ｇフライングピジョン卓上遠心分離機、上海安亭科学儀器廠製
Ｔｕｒｂｏ  Ｖａｐ  ＬＶ窒素ガス吹付機、バイオタージ社製
実験方法：
ａ）実験動物：ＳＤラット、体重１９０±１０ｇ、雄性、各組４匹、
ｂ）投与法及び剤量：筋肉内注射、投与剤量０．９ｍｇ／匹、投与体積０．５ｍＬ／匹、
ｃ）採血タイミング：投与前（０時間）及び投与後１ｈ、６ｈ、１ｄ、４ｄ、７ｄ、９ｄ、１１ｄ、１３ｄ、１５ｄ、１７ｄ、１９ｄ、２３ｄ、２８ｄ、
ｄ）生物サンプル測定：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によってラットの血中遊離薬物を測定、
ｅ）データ処理：ＤＡＳ２．０ソフトウェア。
結果は、表３及び図２のとおり。
2016516785.tif 000004
結果から明らかなように、ゴセレリンマイクロスフェアは体内に進入した後すぐに放出され、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含むゴセレリンマイクロスフェアのＡＵＣは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まないゴセレリンマイクロスフェのＡＵＣより明らかに高く、すなわち、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加することで体内におけるゴセレリンマイクロスフェアのバイオアベイラビリティを向上させることができる。マイクロスフェアのバイオアベイラビリティは、同時にポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量と関係しており、ポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量が１％以上である場合、ゴセレリンマイクロスフェアは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加しないゴセレリンマイクロスフェアに対して、そのバイオアベイラビリティが２０％以上向上する。
【００５３】
実施例２２
９．２ｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８．０ｇを含むことを測定）、７．０ｇのポロキサマー１８８を秤取して水４００ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末混合物を得る（中間体、すなわち、酢酸ゴセレリンとポロキサマーとの凍結乾燥粉末の酢酸含有量を検測する。具体的な検測方法は試験例４を参照）。１８３．８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８００ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１００Ｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．７３％であり、封入率は９７．４％である。
【００５４】
実施例２３
９．２ｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８．０ｇを含むことを測定）、７．０ｇのポロキサマー１８８を秤取して水４００ｍｌに溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末混合物を得る（中間体、すなわち、酢酸ゴセレリンとポロキサマーとの凍結乾燥粉末の酢酸含有量を検測する。具体的な検測方法は試験例４を参照。検測される酢酸含有量が０．５％より小さくなるまで凍結乾燥時間を延長し、乾燥温度を引き上げる）。１８３．８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８００ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１００Ｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．７１％であり、封入率は９９．６％である。
【００５５】
実施例２４
９．２ｇの酢酸ゴセレリン（ゴセレリン８．０ｇを含むことを測定）、７．０ｇのポロキサマー１８８を秤取して４００ｍｌ、０．１％のアンモニア水に溶解させて清澄溶液を形成し、得られた溶液を凍結乾燥して固体粉末混合物を得る（中間体、すなわち、酢酸ゴセレリンとポロキサマーとの凍結乾燥粉末の酢酸含有量を検測する。具体的な検測方法は試験例４を参照）。１８３．８ｇのＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）を秤取し、８００ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させて（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１００Ｌ、１．０％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は３．７３％であり、封入率は９９．４％である。
【００５６】
試験例４：異なるゴセレリンマイクロスフェアの酢酸含有量の検測及び体内放出への影響
検測方法：ガスクロマトグラフィー法「中国薬典２０００年版二部付録ＶＥ第（３）法」に従って測定する。
クロマトグラフィー条件とシステム適合性試験
クロマトカラム：長さが１０メートル、内径が０．３２ｍｍで、内層は０．３３μｍのＦＦＡＰ−ＣＢ熔融シリカキャピラリーチューブでコーティングされている。
サンプル注入口温度：２２０℃
検出器温度：２５０℃
分割比：１００：１
カラム温度のプログラム：開始温度が５０℃、滞留時間が０．１０分、昇温速度が３０℃／分、最終温度が２３０℃、滞留時間が５分である。
サンプル注入量：１μｌ
理論段数：酢酸ピークに基づいて計算され、５０００以上であるべきである。
酢酸ピークと内部標準ピークの分離度：規定に適合すべきである。
補正係数の測定
ｎ−ヘキサデカン１．０ｍｌを５０ｍｌ計量フラスコに入れ、ジメチルホルムアミド３０ｍｌを加えて溶解して標線まで希釈し、振り混ぜて内部標準溶液とする。別に酢酸参照物質約６２５ｍｇを取り、その重量を正確に秤量して１００ｍｌ計量フラスコに入れ、ジメチルホルムアミドで溶解して標線まで希釈し、振り混ぜて使用に備える。上記の溶液１０ｍｌを精密に量り取って、１００ｍｌ計量フラスコに入れ、内部標準溶液５ｍｌを精密に加えて、ジメチルホルムアミドで溶解して標線まで希釈し、振り混ぜる。１μｌを取ってガスクロマトグラフィーに注入し、サンプル注入を３〜５回連続して、ピーク面積平均値に基づいて補正係数を計算する。
供試品溶液の調製及び測定
実施例２２、２３、２４に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア約５０ｍｇを取り、正確に秤量して２ｍｌ計量フラスコに入れ、ジメチルホルムアミド１ｍｌを加えて溶解し、内部標準溶液１００μｌを精密に加えて、ジメチルホルムアミドで標線まで希釈し、振り混ぜる。１μｌを取ってガスクロマトグラフィーに注入し、内部標準法に基づいて計算する。
検測結果は表４のとおり。
2016516785.tif 000005
実施例２２、２３、２４に合わせて調製されるゴセレリンマイクロスフェアについて、調製の完了及び安定性考察（温度２５℃、湿度７５％の条件で６ヶ月放置）の完了の後にサンプルの体内放出の比較試験を行なう。具体的な検測方法については試験例２を参照し、その検測結果は表５及び図３、図４のとおりとなる。
2016516785.tif 000006
結果から明らかなように、酢酸ゴセレリンについては、マイクロスフェアの調製過程で、酢酸の含有量の制御が製品の封入率と薬物積載量に影響しなかったが、安定性考察（温度２５℃、湿度７５％の条件で６ヶ月放置）の後で体内放出に変化があり、酢酸含有量が０．０１％より小さいマイクロスフェアには体内放出の変化がない一方、酢酸含有量を制御しないマイクロスフェアは体内放出が２０％以上低下している。
【００５７】
試験例５：油相における固体粉末の粒径及びマイクロスフェアに調製された粒径の測定
試験薬物：実施例１５、１６、１７、１８、１９、２０に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（それぞれ０．３％（ｗ／ｗ）、１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３．５％（ｗ／ｗ）、６．０％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）のポロキサマー１８８を含むゴセレリンマイクロスフェア）。サンプルに使用する高分子はいずれもＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）である。
対照群：比較例２に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（薬物積載量が約２．７４％で、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まない）。
実験方法：粒度及び粒度分布測定法（中国薬典２０１０年版二部付録ＩＸＥ第三法）によって測定する。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液を分散剤として、分散剤約１２０ｍｌを粒度計のサンプル分散装置に入れ、が毎分２１００回転の回転速度で回転速度制御装置を調節して攪拌し、まず、分散剤のバックグラウンドを測定してから、一次エマルション０．１ｍｌ又は凍結乾燥粉末マイクロスフェア５０ｍｇを取って分散剤に入れ、サンプルが均一に分散した後に、その粒径を測定する。３回並行測定し、測定結果の平均値を取る。
測定結果は表６のとおり。
2016516785.tif 000007
結果から明らかなように、マイクロスフェアの調製過程で、一次エマルションの粒径の制御はマイクロスフェアの粒径には比較的大きな影響を与え、一次エマルションの粒径を制御して調製されるマイクロスフェアは、一次エマルションを制御せずに調製されるマイクロスフェアに対して、そのスパンの差が最大で１０倍となるので、一次エマルションの粒径を制御することで、粒径がより均一なマイクロスフェア製品が得られる。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明で調製されるマイクロスフェアでは、封入率が９０％以上にまでも到達す可能である。提供されるゴセレリン徐放性マイクロスフェアは、投与後により高いバイオアベイラビリティを有し、薬物が完全に薬効を発揮するよう促すので、産業上の利用に適するものである。
【図１】
2016516785.tif 000008
【図２】
2016516785.tif 000009
【図３】
2016516785.tif 000010
【図４】
2016516785.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成27年12月28日(2015.12.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴセレリン徐放性マイクロスフェア医薬組成物であって、ゴセレリン又はその塩及びその類似体と、ラクチド−グリコリド共重合体と、ポロキサマー又はポリエチレングリコールとを含むゴセレリン徐放性マイクロスフェア医薬組成物。
【請求項２】
前記ポロキサマーがポロキサマー１８８又はポロキサマー４０７であり、前記ポリエチレングリコールがポリエチレングリコール２０００、ポリエチレングリコール４０００又はポリエチレングリコール６０００であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ゴセレリン徐放性マイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜１０％、又は１〜６％、又は１〜４％であることを特徴とする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ゴセレリンの重量含有量が１〜１０％であり、又は１〜８％であり、又は１〜５％であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ラクチド−グリコリド共重合体のラクチドとグリコリドとのモル比が９０：１０〜１０：９０、又は７５：２５〜２５：７５、又は６０：４０〜４０：６０であり、又は５０：５０であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ラクチド−グリコリド共重合体の固有粘度が０．１０〜０．４０ｄＬ／ｇであり、又は０．１０〜０．３５ｄＬ／ｇの範囲内であり、又は０．１０〜０．３０ｄＬ／ｇの範囲内であることを特徴とする、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ラクチド−グリコリド共重合体の重量平均分子量が４０００〜４５０００ダルトンであり、又は４０００〜３５０００ダルトンであり、又は４０００〜３００００ダルトンであることを特徴とする、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が８０〜９８％であり、又は８６〜９８％であり、又は９１〜９８％であることを特徴とする、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ゴセレリン徐放性マイクロスフェア組成物における酢酸含有量が０．０１％より小さいことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ゴセレリンマイクロスフェアにおけるゴセレリンの重量含有量が１〜１０％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が８０〜９８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜１０％であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ゴセレリンマイクロスフェアにおけるゴセレリンの重量含有量が１〜８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が８６〜９８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜６％であることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ゴセレリンマイクロスフェアにおけるゴセレリンの重量含有量が１〜５％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるラクチド−グリコリド共重合体の重量含有量が９１〜９８％であり、ゴセレリンマイクロスフェアにおけるポロキサマー又はポリエチレングリコールの重量含有量が１〜４％であることを特徴とする、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
組成物が、ポロキサマー又はポリエチレングリコールと酢酸ゴセレリンとを予備処理した後に、さらにＰＬＧＡを含む油相に添加することを含むＳ／Ｏ／Ｗエマルション溶媒蒸発法によって調製されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物の調製方法。
【請求項１４】
前記ポロキサマー又はポリエチレングリコールとゴセレリン酢酸塩とを予備処理した後に、油相に添加して粒子の粒径を測定すると、その測定値がｄ（０．５）＝０．０１〜２マイクロメートルであることを特徴とする、請求項１３に記載の医薬組成物の調製方法。
【請求項１５】
前記医薬組成物が、前立腺癌、性早熟症、子宮内膜症、女性不妊症、子宮筋腫を治療する医薬の調製において応用されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
説明しやすくするため、以下、ラクチドとグリコリドとのモル比及び固有粘度、分子量について括弧内に表示する。例えば、「ＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）」は、ラクチドとグリコリドとのモル比が５０：５０であり、固有粘度が０．１４ｄｌ／ｇであり、分子量が７２００ダルトンであるラクチド−グリコリド共重合体を表す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明にいう薬物積載量は、実際の薬物積載量であり、次の式に基づいて計算される。
薬物積載量＝［マイクロスフェアにおける薬物量／（マイクロスフェアにおける薬物量＋高分子補助剤の量）］×１００％。前記高分子補助剤は、ＰＬＧＡとポロキサマー、又はＰＬＧＡとポリエチレングリコールなどの、前述の重合体を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明にいう封入率は、次の式に基づいて計算される。
封入率（％）＝マイクロスフェアにおける薬物の測定薬物積載量／マイクロスフェアにおける薬物の理論的な薬物積載量（ｍｇ／ｍｇ）×１００％。前記マイクロスフェアにおける薬物の理論的な薬物積載量は、調製時に秤量された薬物及び高分子補助剤の量を示し、上記の式に基づき直接計算で得られる、薬物積載量である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明で提供されるゴセレリン徐放性マイクロスフェアは、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルション溶媒蒸発法によって調製され、その方法は次の通りである。酢酸ゴセレリン、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを秤取し、混合して予備処理を行い、固体粉末混合物にする。ＰＬＧＡを有機溶媒に溶解させて油相にし、固体粉末混合物を油相に加えて剪断乳化することで、Ｓ／Ｏ一次エマルションが得られる。一次エマルションがさらに乳化剤含有水溶液に加えられて均質に乳化され、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションが得られた後に、有機溶媒を除去し、洗浄・濾過することで、マイクロスフェアが得られる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【図１】ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加した、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアのラット体内の薬物放出を比較する図である。
【図２】ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加した、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアのラット体内の薬物放出を比較する図である。
【図３】酢酸含有量を制御しないゴセレリンマイクロスフェアの６ヶ月の安定性実験の前後の、ラット体内の薬物放出を比較する図である。
【図４】酢酸含有量を制御したゴセレリンマイクロスフェアの６ヶ月の安定性実験前後の、ラット体内の薬物放出を比較する図である
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
実施例１
適量の酢酸ゴセレリンとポロキサマー１８８とを秤取してボールミル混合し、１５Ｈｚの周波数、５分間の時間でボールミルした後、固体粉末混合物を得る。ゴセレリンとポロキサマー１８８との混合物４３０ｍｇ（ゴセレリン２１５ｍｇを含むことを測定）を精密に秤取して、使用に備える。１．７２１ｇのＰＬＧＡ（７５／２５、０．３５、４２０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とし、処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させ（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させ、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションにする。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は９．０１％であり、封入率は９０．１％である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
実施例２
ホットメルト押出機のホットメルト温度を８０℃に設定し、温度が予め設定された値に達してから、適量の酢酸ゴセレリンとポロキサマー４０７を篩に通して混合した後、機器のチャンバーに加え、攪拌速度ｎ＝４０に設定し、攪拌混合時間３分間の後、バルブハンドルを開いて溶融材料を押し出し、自然冷却させる。その後、材料を２分間ボールミル粉砕して、ボールミル後のゴセレリンとポロキサマー１８８との混合物３１６ｍｇ（ゴセレリン１５８ｍｇを含むことを測定）を精密に秤取して、使用に備える。１．６７２ｇのＰＬＧＡ（２５／７５、０．２４、２５０００）を秤取し、１０ｍｌのジクロロメタンに溶解させて油相とする。処理済みの薬物固体粉末を上記の油相に加え、高剪断力乳化機で乳化させ（６５００ｒｐｍ、３ｍｉｎ）、Ｓ／Ｏ一次エマルションを得る。１８００ｒｐｍの均質下で一次エマルションを６℃の１０００ｍｌ、０．５％のＰＶＡ溶液に加え２分間乳化させると、Ｓ／Ｏ／Ｗ複合エマルションになる。引き続き攪拌して有機溶媒を蒸発除去し、収集し洗浄した後に凍結乾燥することで、粉末状マイクロスフェアを得る。マイクロスフェアの薬物積載量は７．２１％であり、封入率は９０．７％である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
試験例２：ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加した、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアの体内での放出の比較試験
試材：
試験薬品：実施例１１、４、５、６、７に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（それぞれ０．３％（ｗ／ｗ）、１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）のポロキサマー１８８を含むゴセレリンマイクロスフェア）。実施例１２に基づいて調製される２％のＰＥＧ６０００を含むゴセレリンマイクロスフェア。サンプルに使用するＰＬＧＡはいずれもＰＬＧＡ（５０／５０、０．１４、７２００）である。
対照群：比較例１に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（薬物積載量が約２．４２％で、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まない）。
実験動物：
ＳＤラット（山東緑葉製薬有限公司動物室）
実験装置：
イオン噴霧イオン化源付きのＱＴＲＡＰ５５００型質量分析計、米国・アプライドバイオシステムズ社製
二元輸液ポンプ、オートサンプラー、カラムコンパートメントを備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １２９０高速液体クロマトグラフィーシステム
Ａｎｋｅ  ＴＧＬ−１６Ｇフライングピジョン卓上遠心分離機、上海安亭科学儀器廠製
Ｔｕｒｂｏ  Ｖａｐ  ＬＶ窒素ガス吹付機、バイオタージ社製
実験方法：
ａ）実験動物：ＳＤラット、体重１９０±１０ｇ、雄性、各組４匹、
ｂ）投与法及び剤量：筋肉内注射、投与剤量０．９ｍｇ／匹、投与体積０．５ｍＬ／匹、
ｃ）採血タイミング：投与前（０時間）及び投与後１ｈ、６ｈ、１ｄ、４ｄ、７ｄ、９ｄ、１１ｄ、１３ｄ、１５ｄ、１７ｄ、１９ｄ、２３ｄ、２８ｄ、
ｄ）生物サンプル測定：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によってラットの血中遊離薬物を測定、
ｅ）データ処理：ＤＡＳ２．０ソフトウェア。
結果は、表２及び図１のとおり。
2016516785.tif 000012
結果から明らかなように、ゴセレリンマイクロスフェアは体内に進入した後すぐに放出され、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含むゴセレリンマイクロスフェアのＡＵＣは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まないゴセレリンマイクロスフェのＡＵＣより明らかに高く、すなわち、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加することで体内におけるゴセレリンマイクロスフェアのバイオアベイラビリティを向上させることができる。マイクロスフェアのバイオアベイラビリティは、同時にポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量と関係しており、ポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量が１％以上である場合、ゴセレリンマイクロスフェアは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加しないゴセレリンマイクロスフェアに対して、そのバイオアベイラビリティが２０％以上向上する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
試験例３：ポロキサマー又はポリエチレングリコールを異なる割合で添加する、及び、それらを添加しない、ゴセレリンマイクロスフェアの体内での放出の比較試験
試材：
試験薬物：実施例１５、１６、１７、１８、１９、２０に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（それぞれ０．３％（ｗ／ｗ）、１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３．５％（ｗ／ｗ）、６．０％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）のポロキサマー１８８を含むゴセレリンマイクロスフェア）。実施例２１に基づいて調製される、３．５％のＰＥＧ６０００を含むゴセレリンマイクロスフェア。サンプルに使用するＰＬＧＡはいずれもＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）である。
対照群：比較例２に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（薬物積載量が約２．７４％で、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まない）。
実験動物：
ＳＤラット（山東緑葉製薬有限公司動物室）
実験装置：
イオン噴霧イオン化源付きのＱＴＲＡＰ５５００型質量分析計、米国・アプライドバイオシステムズ社製
二元輸液ポンプ、オートサンプラー、カラムコンパートメントを備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １２９０高速液体クロマトグラフィーシステム
Ａｎｋｅ  ＴＧＬ−１６Ｇフライングピジョン卓上遠心分離機、上海安亭科学儀器廠製
Ｔｕｒｂｏ  Ｖａｐ  ＬＶ窒素ガス吹付機、バイオタージ社製
実験方法：
ａ）実験動物：ＳＤラット、体重１９０±１０ｇ、雄性、各組４匹、
ｂ）投与法及び剤量：筋肉内注射、投与剤量０．９ｍｇ／匹、投与体積０．５ｍＬ／匹、
ｃ）採血タイミング：投与前（０時間）及び投与後１ｈ、６ｈ、１ｄ、４ｄ、７ｄ、９ｄ、１１ｄ、１３ｄ、１５ｄ、１７ｄ、１９ｄ、２３ｄ、２８ｄ、
ｄ）生物サンプル測定：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によってラットの血中遊離薬物を測定、
ｅ）データ処理：ＤＡＳ２．０ソフトウェア。
結果は、表３及び図２のとおり。
2016516785.tif 000013
結果から明らかなように、ゴセレリンマイクロスフェアは体内に進入した後すぐに放出され、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含むゴセレリンマイクロスフェアのＡＵＣは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まないゴセレリンマイクロスフェのＡＵＣより明らかに高く、すなわち、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加することで体内におけるゴセレリンマイクロスフェアのバイオアベイラビリティを向上させることができる。マイクロスフェアのバイオアベイラビリティは、同時にポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量と関係しており、ポロキサマー又はポリエチレングリコールの含有量が１％以上である場合、ゴセレリンマイクロスフェアは、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを添加しないゴセレリンマイクロスフェアに対して、そのバイオアベイラビリティが２０％以上向上する。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
試験例５：油相における固体粉末の粒径及びマイクロスフェアに調製された粒径の測定
試験薬物：実施例１５、１６、１７、１８、１９、２０に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（それぞれ０．３％（ｗ／ｗ）、１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３．５％（ｗ／ｗ）、６．０％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）のポロキサマー１８８を含むゴセレリンマイクロスフェア）。サンプルに使用するＰＬＧＡはいずれもＰＬＧＡ（５０／５０、０．２０、１６０００）である。
対照群：比較例２に基づいて調製されるゴセレリンマイクロスフェア（薬物積載量が約２．７４％で、ポロキサマー又はポリエチレングリコールを含まない）。
実験方法：粒度及び粒度分布測定法（中国薬典２０１０年版二部付録ＩＸＥ第三法）によって測定する。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液を分散剤として、分散剤約１２０ｍｌを粒度計のサンプル分散装置に入れ、が毎分２１００回転の回転速度で回転速度制御装置を調節して攪拌し、まず、分散剤のバックグラウンドを測定してから、一次エマルション０．１ｍｌ又は凍結乾燥粉末マイクロスフェア５０ｍｇを取って分散剤に入れ、サンプルが均一に分散した後に、その粒径を測定する。３回並行測定し、測定結果の平均値を取る。
測定結果は表６のとおり。
2016516785.tif 000014
結果から明らかなように、マイクロスフェアの調製過程で、一次エマルションの粒径の制御はマイクロスフェアの粒径には比較的大きな影響を与え、一次エマルションの粒径を制御して調製されるマイクロスフェアは、一次エマルションを制御せずに調製されるマイクロスフェアに対して、そのスパンの差が最大で１０倍となるので、一次エマルションの粒径を制御することで、粒径がより均一なマイクロスフェア製品が得られる。
【国際調査報告】
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