(57)【要約】  本発明は、体液中の脳に富化されたｍｉＲＮＡを定量することによって、パーキンソン病（ＰＤ）の早期診断、進行および処置のモニタリングならびに他の神経変性疾患からのその区別のための方法に向けられている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における第１の神経変性疾患を検出するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第１の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第１の神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、第１の神経変性疾患に罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、第１の神経変性疾患に罹患していないとして対象を同定すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
対象における第１の神経変性疾患を検出するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性のサンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、第１の神経変性疾患に罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、第１の神経変性疾患に罹患していないとして対象を同定すること
を含む、前記方法。
【請求項３】
以下のステップ：
ｆ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；および、
ｇ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除かないこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／または請求項１または２のステップ（ｄ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
以下のステップ：
ｆ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第２の神経変性疾患を患っている脳の領域（単数または複数）に富化されている；
ｇ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡを測定すること、
ここで該第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第３のｍｉＲＮＡとして同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第２の神経変性疾患の発症の間中、第３のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｈ）ステップ（ｆ）および（ｇ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｊ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、第１の神経変性疾患に加えて第２の神経変性疾患にも罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／または請求項１または２に記載のステップ（ａ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
第１の神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
第１の神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）であり、ならびに、第２の神経変性疾患が、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）からなる群から選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を検出するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されているニューロンのｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳の領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤの発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロールと比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、ＰＤに罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロールの比よりも高くないとき、ＰＤに罹患していないとして対象を同定すること
を含む、前記方法。
【請求項８】
対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を検出するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／また前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、ＰＤに罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、ＰＤに罹患していないとして対象を同定すること
を含む、前記方法。
【請求項９】
以下のステップ：
ｆ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、ＰＤとは異なる第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｇ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、第２神経変性疾患の診断を除かないこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／または請求項７または８に記載のステップ（ｄ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
以下のステップ：
ｆ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第２の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されており、かつ、該第２の神経変性疾患のためのバイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける事前に同定された（分数の）分子である；
ｇ）対象から採取された体液性サンプル中の第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、該第２の神経変性疾患用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける事前に同定された（分数の）分子であり、かつ、（ｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されており、第３のｍｉＲＮＡが富化されている細胞型とは異なるか、あるいは、（ｉｉｉ）第３のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第２の神経変性疾患の発症の間中、第３のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｈ）ステップ（ｆ）および（ｇ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｊ）（ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、ＰＤに加えて第２の神経変性疾患にも罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２の神経変性疾患の診断を除くこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／または請求項７または８に記載のステップ（ａ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１１】
第２の神経変性疾患に特徴的なｍｉＲＮＡの比の標準範囲が、第２の神経変性疾患と診断された対象の大規模コホートにおいて同じｍｉＲＮＡの比を決定することにより確立された値の統計学的に検証された所定の範囲である、請求項３、４、９および１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
第２の神経変性疾患と診断された対象のコホートが、該第２の神経変性疾患のあらゆる発症ステージを示す、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第２の神経変性疾患と診断された対象コホートが、該第２の神経変性疾患の１以上の発症ステージを示す、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
第２の神経変性疾患が、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）からなる群から選択される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１５】
対象における神経変性疾患発症の変化をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている;
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象における神経変性疾患が進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象における神経変性疾患が進行していなかったと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項１６】
対象における神経変性疾患発症の変化をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、または、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、または、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象における神経変性疾患が進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象における神経変性疾患が進行していなかったと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項１７】
対象が、以前に神経変性疾患と診断されていた、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象おけるパーキンソン病（ＰＤ）発症の変化をモニターするための方法であって、前記方法は、以下；
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されている、ならびに、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されているｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後期に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象におけるＰＤが進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象におけるＰＤが進行していなかったと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項１９】
対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）発症の変化をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡレベルを測定すること、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、相隔たる時点にて採取されている、ならびに、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、または、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象におけるＰＤが進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象におけるＰＤが進行していなかったと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項２０】
対象が、以前にＰＤと診断されていた、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患発症に対する処置の効果をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
（ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
（ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（e）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効でないと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項２２】
以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患発症に対する処置の効果をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、または、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、または、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じく体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること;
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること;
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効でないと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項２３】
以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤ発症に対する処置の効果をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、ＰＤ処置が有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、ＰＤ処置が有効でないと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項２４】
以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤ発症に対する処置の効果をモニターするための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、または、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、ＰＤ処置が有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、ＰＤ処置が有効でないと決定すること
を含む、前記方法。
【請求項２５】
以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、および、
ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること
を含む、前記方法。
【請求項２６】
以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、および、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、または、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、または、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること
を含む、前記方法。
【請求項２７】
以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、ならびに、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること
を含む、前記方法。
【請求項２８】
以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法であって、前記方法は、以下：
ａ）体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該体液サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、ならびに、
ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、
ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが、脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、または、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること
を含む、前記方法。
【請求項２９】
神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）である、請求項１５、１６、２１、２２、２５および２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、ニューロンのｍｉＲＮＡである、請求項１〜３、７〜９、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、ニューロンに富化されており、および、第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、グリア細胞に富化されている、請求項１、３、７、９、１５、１８、２１、２３、２５および２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
第１の脳に富化されるｍｉＲＮＡが、シナプスおよび／または神経突起のｍｉＲＮＡである、請求項１〜３、７〜９、１５、１６、１８、１９、２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
第２のｍｉＲＮＡが、（１）第１の神経変性疾患を患っていない脳領域に富化されているか、または、（２）第１の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されている、脳に富化されたｍｉＲＮＡである、請求項２、１６、２２および２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアが、以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１
からなる群から選択される、請求項１、３、７，９、１５、１８、２１、２３、２５および２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアが、以下：
ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａおよびｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６
からなる群から選択される、請求項２、３、８、９、１６、１９、２２、２４、２６および２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアが、以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１２７／４８７ｂ、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３２
からなる群から選択される、請求項３または９に記載の方法。
【請求項３７】
第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアが、以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−４８５−３ｐ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１３４およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ
からなる群から選択される、請求項３または９に記載の方法。
【請求項３８】
第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアが、以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５およびｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ
からなる群から選択される、請求項３または９に記載の方法。
【請求項３９】
第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアが、以下：
ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３４、およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１４６
からなる群から選択される、請求項３または９に記載の方法。
【請求項４０】
ｍｉＲＮＡの２以上の異なるペアについて、レベルを測定することおよびレベルの比を計算することを含む、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６，１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
以下：
（ａ）ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐおよびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−９＊、
（ｂ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４８７ｂその上ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ならびに、
（ｃ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０その上ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択される１以上のペアの組み合わせについて、レベルを測定することおよびレベルの比を計算することを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
対象から採取された２以上の体液性サンプル中のｍｉＲＮＡのレベルを測定することを含み、ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されている、請求項１〜４および７〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
体液性サンプルが、数カ月隔てて得られる、請求項１５、１６、１８、１９および４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
体液性サンプルが、３〜６カ月隔てて得られる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
第２のｍｉＲＮＡが、ＰＤに関与しない脳領域において主に発現されるｍｉＲＮＡ、グリア細胞において主に発現されるｍｉＲＮＡ、および、ＰＤにおいて下方調節されている脳に富化されたｍｉＲＮＡからなる群から選択される脳に富化されたｍｉＲＮＡである、請求項１、３、７、９、１５、１８、２１、２３、２５および２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルを、ノーマライザーｍｉＲＮＡのレベルに対して、ノーマライズすることをさらに含む、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８の方法。
【請求項４７】
ノーマライザーｍｉＲＮＡが、多数の組織に発現されているが、脳においては有意に発現していないｍｉＲＮＡである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
コントロール比が、第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルの統計的に検証された閾値比を表わす所定の値（単一の「カットオフ」値）であって、前記値が、同年齢の健康な対象における対応する値の範囲内で可能な限り高い値に等しい、請求項１、２、７および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
コントロール比が、過去に採取された同じ対象からの同様に処理された体液性サンプル中の第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルの比である、請求項１、２、７および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
対象が、ヒトである、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
対象が、実験動物である、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
体液が、血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）および唾液からなる群から選択される、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
方法が、対象から体液性サンプル（単数または複数）を採取するステップを含む、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
ｍｉＲＮＡのレベルが、ハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲおよびシークエンシングからなる群から選択される方法を使用して決定される、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
ｍｉＲＮＡレベルを測定することに先立ち、ｍｉＲＮＡが、体液性サンプルから精製される、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６，１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
ｍｉＲＮＡの分解を低減または回避するステップをさらに含む、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８、１９および２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
神経変性疾患を有するとして、または、より重症度の高い神経変性疾患へ進行するリスクがあるとして、診断されている対象へ治療的または予防的処置を施すことをさらに含む、請求項１、２、１５および１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
ＰＤを有するとして、または、より重症度の高いＰＤへ進行するリスクがあるとして、診断された対象へ治療的または予防的処置を施すことをさらに含む、請求項７、８、１８および１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
治療的処置が、ドーパミン補充化合物、ドーパミン模倣化合物、ドーパミン促進剤、カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、ドーパミンレセプターアゴニスト、モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯＩ）阻害剤、アマンタジン、抗コリン作動性化合物、抗グルタミン酸作動性化合物、ニュールツリン、抗アポトーシス化合物、プロミトコンドリア化合物、カルシウムチャンネル遮断薬、成長因子およびアルファ−シヌクレインを標的とする化合物からなる群から選択される１以上の化合物の投与を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
治療的処置が、外科手術を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
外科手術が、脳中のバッテリー駆動電極のインプランテーション、視床切開、淡蒼球切断、腹側視床切開およびドーパミン作動性細胞移植からなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
予防的処置が、生活様式の変化（単数または複数）または理学療法である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
臨床治験に対象を募ることをさらに含む、請求項１〜４、７〜１０、１５、１６、１８および１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
第２のｍｉＲＮＡが、（１）ＰＤを患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（２）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されている、脳に富化されたｍｉＲＮＡである、請求項８、１９、２４および２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１８１／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａおよびｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択されるｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、パーキンソン病（ＰＤ）を検出するためのキット。
【請求項６６】
以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３２；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ
からなる群から選択されるｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）からパーキンソン病（ＰＤ）を区別するためのキット。
【請求項６７】
以下：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−４８５−３ｐ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１３４、およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３４およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択されるｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、アルツハイマー病（ＡＤ）からパーキンソン病（ＰＤ）を区別するためのキット。
【請求項６８】
以下：
（ａ）ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐおよびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−９＊、
（ｂ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４８７ｂおよびｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ならびに、
（ｃ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択されるｍｉＲＮＡのペアの１以上の組み合わせに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、キット。
【請求項６９】
ｍｉＲＮＡの単離および／または精製の手段をさらに含む、請求項６５〜６８のいずれかいずれか一項に記載のキット。
【請求項７０】
使用のための説明書をさらに含む、請求項６５〜６８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項７１】
病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法であって、前記方法が、以下のステップ：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を計算すること；
（ｅ）研究された全ｍｉＲＮＡ間でステップ（ｄ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を比較すること、および、一方のｍｉＲＮＡについてステップ（ｄ）で計算された差が、他方のｍｉＲＮＡについて計算された差の少なくとも１．５倍である、それらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で選択された潜在的な各バイオマーカーｍｉＲＮＡペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；ならびに、
（ｇ）ステップ（ｆ）で計算されたその（ｒ）値が少なくとも０．８である場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとして、ｍｉＲＮＡペアを同定すること
を含む、前記方法。
【請求項７２】
病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法であって、前記方法は、以下のステップ：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された少なくとも０．８の（ｒ）値を有するそれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを計算すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を計算すること；
（ｇ）一方のｍｉＲＮＡについてステップ（ｆ）で計算された差が、他方のｍｉＲＮＡについて計算された差の少なくとも１．５倍である場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとしてｍｉＲＮＡペアを同定すること
を含む、前記方法。
【請求項７３】
病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーペアを選択するための方法であって、前記方法は、以下のステップ：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された少なくとも０．８の（ｒ）値を有するそれらのｍｉＲＮＡペアを潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡペアについて、２つの対象コホート分離のＰ値を計算すること；ならびに、
（ｆ）このペアが、統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとしてｍｉＲＮＡペアを同定すること
を含む、前記方法。
【請求項７４】
病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法であって、前記方法は、以下のステップ：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群を選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを電気的に計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を電気的に計算すること；
（ｅ）第１のｍｉＲＮＡおよび第２のｍｉＲＮＡを各々含む一組の潜在的なｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、
ここで第１のｍｉＲＮＡのステップ（ｄ）で計算された平均レベルの差が、第２のｍｉＲＮＡの平均レベルの計算された差の少なくとも１．５倍である；
（ｆ）ステップ（ｅ）で選択された各々の潜在的なｍｉＲＮＡペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｇ）病変の診断および／またはモニタリングに好適であるそれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なｍｉＲＮＡペアの組から選択すること、
ここでステップ（ｆ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；ならびに、
（ｈ）ステップ（ｇ）で選択されたｍｉＲＮＡペアの全部または一部を表示すること
を含む、前記方法。
【請求項７５】
病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法であって、前記方法は、以下のステップ：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群を選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｄ）一組の潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、
ここでステップ（ｃ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを電気的に計算すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を電気的に計算すること；
（ｇ）第１のｍｉＲＮＡおよび第２のｍｉＲＮＡを各々含む一組の好適なｍｉＲＮＡバイオマーカーペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、
ここで好適な各バイオマーカーｍｉＲＮＡペアについて、第１のｍｉＲＮＡのステップ（ｆ）で計算された平均レベルの差が、第２のｍｉＲＮＡの平均レベルの計算された差の少なくとも１．５倍である；ならびに、
（ｈ）ステップ（ｇ）で選択された好適なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアの全部または一部を表示すること
を含む、前記方法。
【請求項７６】
病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法であって、前記方法は、以下のステップ：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群を選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、ステップ（ｂ）で測定されたレベルのスピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｄ）一組の潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、
ここでステップ（ｃ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡペアについて、２つの対象コホート分離のＰ値を電気的に計算すること；
（ｆ）このｍｉＲＮＡペアが、統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとして、ｍｉＲＮＡペアを同定すること；ならびに、
（ｇ）ステップ（ｆ）で選択された好適なバイオマーカーｍｉＲＮＡの全部または一部を表示すること
を含む、前記方法。
【請求項７７】
ｍｉＲＮＡレベルが、ＲＴ−ＰＣＲベースの方法、ｍｉＲＮＡアレイベースの方法、新世代シークエンシングおよびハイブリダイゼーションからなる群から選択される方法によって測定される、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
２つの対象コホートが、（１）病変を有する対象、ならびに、（２）同じ年齢、性別および民族性の健康な対象である、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
２つの対象コホートが、器官の２つの異なる病変を有する対象である、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
２つの対象コホートが、（１）若年の対象、および、（２）高齢の対象である、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
２つの対象コホートが、同じ年齢および民族性の（１）男性ならびに（２）女性である、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
体液が、プラズマ、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿および唾液からなる群から選択される、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
対象が、ヒトである、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
対象が、実験動物である、請求項７１〜７６いずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
Ｐ値が、ステップ（ｅ）でマン・ホイットニー検定を使用して計算される、請求項７３または７６に記載の方法。
【請求項８６】
統計的に有意なＰ値が、少なくとも０．０５である、請求項７３または７６記載の方法。
【請求項８７】
病変が、神経変性疾患である、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）および軽度認知機能障害（ＭＣＩ）からなる群から選択される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
病変を患っている器官が、脳である、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2013年11月18日に出願された米国仮出願第61/905,703号、および、2014年2月4日に出願された米国仮出願第61/935,806号に対して優先権を主張するものであり、それらの開示はそれらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本発明の技術分野
本発明は、体液中の、脳に富化されたｍｉＲＮＡを定量することによる、パーキンソン病（ＰＤ）の早期診断、進行および処置のモニタリング、ならびに、他の神経変性疾患からのその区別のための方法に向けられている。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
パーキンソン病（ＰＤ）は、２番目に多い神経変性疾患である。各年、およそ６０，０００名のアメリカ人がパーキンソン病と診断され、USAおよび全世界の夫々において、５０万名および7００〜１０００万名と推定される人々がパーキンソン病とともに暮らしている（http://www.parkinson.org/parkinson-s-disease.aspx；http://www.pdf.org/en/parkinson_statistics）。
合衆国におけるパーキンソン病の年間の経済的影響は、約＄１０．８億であり増加しつつあると推定されている（http://www.parkinsoninfo.org/about-parkinsons-disease/economic-impact/）。
【０００３】
ＰＤ発症のメカニズムは、多くの根本的プロセスが説明されてきたが、十分に理解されていない（Walter and Schulz-Schaeffer. Acta Neuropathol. 2010; 120: 131-143；David Sulzer. Trends in Neurosciences. 2007; 30: 244-250）。ＰＤは、アルファ−シヌクレインの異常なプロセシングを含む代謝障害によって開始され、前記プロセシングにより、レビー小体と呼ばれる形態が凝集し、後にシナプスの機能不全、破壊、最終的にはニューロン死が続く（Kazantsev AG, Kolchinsky AM. Arch Neurol. 2008; 65:1577-1581）。中脳における黒質のニューロンは、ＰＤにおいて極限まで悪くなっている（Walter and Schulz-Schaeffer. Acta Neuropathol. 2010; 120: 131-143）が、前頭皮質などの他の脳領域もまた、ＰＤ発症の異なるステージにて病変に関与する（Braak et al. Neurobiology of Aging. 2003; 24: 197-211; Hou et al. J. Clin. Neuroscience. 2010; 17: 628-633）。中脳における黒質はドーパミンを産生するが、これは、運動調節に関与する線条体へシグナルを伝送するものであり、ドーパミン産生における著しい低下は、ＰＤに特徴的な多数の運動障害を引き起こす。後者（震戦、姿勢の不安定性およびパーキンソン歩行、硬直、能面様の顔ならびに動作緩慢）は現在、ＰＤ診断用に使用される主要な症状である（Parkinson’s Disease: Diagnosis and Clinical Management. Editors: Factor and Weiner, 2nd edition. 2008, Demos Medical Publishing, LLC, New York, NY）。数名のＰＤ患者らが発症する他の症状には認知問題などもあり、これらは、ＰＤ認知症、うつ病、皮膚の問題、嗅覚機能不全等々の原因となり得る（Aarsland et al. Mov. Disord. 2005; 20: 1255-1263; Song et al. Eur. Neurol. 2008; 59: 49-55; Mollenhauer et al. Neurology. 2013; 81:1226-1234）。いくつかのデータは、ＰＤ発症における炎症プロセスの関与を示す（Tansey and Goldberg. Neurobiol. Dis. 2010; 37:510-518; Amor et al. Immunology. 2013 Dec 16. [Epub ahead of print]）。
【０００４】
現在、薬物療法および手術はＰＤのいくつかの症状を改善し得るが、ＰＤに有効な治療は存在しない（Gazewood et al. Am. Fam. Physician. 2013; 87: 267-273）。例えば、Ｌ−ＤＯＰＡなどのドーパミン補充薬およびドーパデカルボキシラーゼ阻害剤とそれとの組み合わせが広く使用されている。ドーパミンレセプターアゴニスト、モノアミンオキシダーゼおよびカテコールｏ−メチルトランスフェラーゼの阻害剤は、ＰＤを処置するのに使用される他の類の薬物である（Kansara et al. J. Neural Transm. 2013; 120: 197-210）。生活様式の変化および理学療法は、ＰＤ進行を遅くするのに役立つ。
【０００５】
他の神経変性疾患に関する限り、長期の無症状の期間がＰＤに特徴的であり、ＰＤの臨床兆候時までに、ドーパミン産生ニューロンの６０〜８０％が死んでいる。それ故に、早期ＰＤ検出用のバイオマーカーは、抗ＰＤ薬の開発、臨床治験、適時の疾患処置ならびに疾患および処置のモニタリングにとって極めて必要とされる（Lang. Neurology. 2009; 72 （Suppl. 7）: S39-43；Jann MW. Am. J. Manag. Care. 2011; 17 Suppl 12:S315-21；Sharma et al. Neurochem Int. 2013; 63:201-229）。ＡＤと同様に、イメージング技術（de la Fuente-Fernandez et al. Expert Opin. Med. Diagn. 2011; 5:109-120；Huddleston et al. Clin. Med. Res. 2013; 11:141）および脳脊髄液中タンパク質の分析（Parnetti et al. Nat. Rev. Neurol. 2013; 9:131-140）は有望な結果を実証したが、侵襲性および高コストに起因して、これらの技術は１次スクリーニング用には使用され得ない。血漿中のα−シヌクレインの分析に関するデータ（Foulds et al. Sci. Rep. 2013; 3:2540）および他のアプローチ（Sharma et al. Neurochem Int. 2013; 63:201-229）は有望であると思われるが、追加の検証研究を必要とする。意味のある臨床的意義に関する別の問題点は、例としてアルツハイマー病（ＡＤ）および軽度認知症（ＭＣＩ）などの他の神経変性疾患および症候群からのＰＤの区別である（Pahwa and Lyons. Am. J. Manag. Care. 2010; 16 Suppl. Implications: S94-99）。
【０００６】
近年、本発明者らは、体液中の循環無細胞ｍｉＲＮＡの分析に基づく神経変性疾患の早期検出用の新しいアプローチを提案している。（Sheinerman et al. Aging （Albany NY）. 2012; 4: 590-605；Sheinerman and Umansky. Cell Cycle. 2013; 12: 1-2；Sheinerman and Umansky. Front Cell Neurosci. 2013; 7: 150；Sheinerman et al. Aging （Albany NY）.2012; 5: 925-938; International Pat. Publ. Nos. WO2012/145363 and WO2011/057003）。
【０００７】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は非コードＲＮＡの類であり、その最終産物はおよそ２２ｎｔの機能性ＲＮＡ分子である。それらは、メッセンジャー転写物の相補領域に結合してそれらの翻訳を抑制するかまたは分解を調節することによって、標的遺伝子の調節において重要な役割を果す（Griffiths-Jones Nucleic Acids Research, 2006, 34, Database issue:D140-D144）。しばしば、１つのｍｉＲＮＡが複数のｍＲＮＡを標的とし得、１つのｍＲＮＡが、３’ＵＴＲの異なる領域を標的とする複数のｍｉＲＮＡにより調節され得る。いったんｍＲＮＡに結合すると、ｍｉＲＮＡは、例としてｍＲＮＡの翻訳および安定性に影響を与えることによって、遺伝子発現およびタンパク質産生を調整し得る（Baek et al. Nature. 2008; 455:64；Selbach et al. Nature. 2008; 455:58；Ambros. Nature. 2004; 431: 350-355；Bartel. Cell. 2004; 116: 281-297；Cullen. Virus Research. 2004; 102: 3-9；He et al. Nat. Rev. Genet. 2004; 5: 522-531；およびYing et al. Gene. 2004; 342: 25-28）。あまり特徴付けられていない低分子ＲＮＡ(small RNA)には他の類も存在する（Kim. Mol. Cells. 2005; 19: 1-15に概説される）。
【０００８】
ｍｉＲＮＡの多くは、ある器官／組織／細胞に（例としてHua et al., BMC Genomics, 2009, 10:214；Liang et al., BMC Genomics. 2007, 8:166；Landgraf et al., Cell. 2007, 129:1401-1414；Lee et al., RNA. 2008, 14:35-42を参照）、ならびに、海馬、中脳、前頭皮質、下垂体などの異なる脳領域に、ならびに、ニューロンおよびグリア細胞などの異なる細胞型に特異的であるか、または、それらにおいて過剰発現されている（Sempere et al. Genome Biol. 2004; 5: R13；Deo et al. Dev. Din. 2006; 235:2538-2548；Bak et al. RNA. 2008; 14: 432-444；Trivedi and Ramakrishna Int.J.Neurosci. 2009; 119: 1995-2016；Weng et al. Biomed. Res. 2011; 32: 135-141; He et al. Neuron. 2012; 73: 35-48）。
【０００９】
いくつかのｍｉＲＮＡは、細胞特異的なものを含め、ある細胞区画において、とくに軸索、樹状突起、シナプスにおいて、富化されている（例として、Schratt et al., Nature. 439:283-289, 2006；Lugli et al., J Neurochem. 106:650-661, 2008；Bicker and Schratt, J Cell Mol Med., 12:1466-1476, 2008；Smalheiser and Lugli, Neuro Molecule Med. 11:133-140, 2009；Rajasethupathy, Neuron. 63:714-716, 2009；Kye, RNA 13:1224-1234, 2007；Yu et al., Exp Cell Res. 314:2618-2633, 2008；Cougot, et al., J Neurosci. 28:13793-13804, 2008；Kawahara, Brain Nerve. 60:1437-1444, 2008；Schratt G. Rev Neurosci. 2009; 10:842-849；Pichardo-Casas et al. Brain Research. 1436:20-33, 2012を参照）。
【００１０】
ｍｉＲＮＡの発現および濃度は、様々な生理学的および病変学的なシグナルによって調節されている。いくつかのｍｉＲＮＡの発現の変化は、パーキンソン病、アルツハイマー病および他の神経変性疾患患者のニューロンにおいて見出されている（Hebert and De Strooper, Trends Neurosci. 32:199-206, 2009；Saba et al., PLoS One. 2008; 3:e3652；Kocerha et al., Neuromolecular Med. 2009; 11:162-172；Sethi and Lukiw, Neurosci Lett. 2009, 459:100-104；Zeng, Mol Pharmacol. 75:259-264, 2009；Cogswell et al., Journal of Alzheimer disease 14: 27-41, 2008；Schaefer et al., J. Exp. Med. 204:1553-1558, 2007; Hebert, Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105:6415-6420；Wanget al., J Neurosci. 2008, 28:1213-1223；Nelson et al., Brain Pathol. 2008; 18:130-138；Lukiw, Neuroreport. 2007; 18:297-300）。
【００１１】
パーキンソン病（ＰＤ）におけるｍｉＲＮＡの関与の調査は、中脳におけるｍｉＲＮＡ発現の、ならびに、ドーパミン作動性ニューロンの機能およびアルファ−シヌクレイン合成におけるｍｉＲＮＡの役割の、分析に焦点を当てている。ＰＤ患者の中脳における（Kim et al. Science. 2007; 317: 1220-1224）、および、ＰＤのマウスモデルにおける、ｍｉＲ−１３３ｂの下方調節は、数種の研究において報告されている（概説：Filatova et al. Biochemistry （Mosc）. 2012; 77: 813-819；Harraz et al. J. Chem. Neuroanat. 2011; 42: 127-130；Mouradian. Neurobiol Dis. 2012; 46: 279-284）。ｍｉＲ−７およびｍｉＲ−１５３は、α−シヌクレインの合成を下方調節することが見出されている（Doxakis. J. Biol. Chem. 2010; 285:12726-12734；Junn et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2009; 106: 13052-13057）。それらの小さいサイズに起因して、ｍｉＲＮＡは、血液−脳、胎盤および腎臓の障壁を超え得る。細胞／組織に特異的な体液中のｍｉＲＮＡの分析が、in vivoでの細胞死の検出用に提案された（U.S. Patent Pub. No 20090081640；Laterza et al. Clin. Chem. 2009; 55:1977-1983）。
【００１２】
診断におけるｍｉＲＮＡの使用のためには、ｍｉＲＮＡの分泌が細胞生理に依存して変わることもまた重要である（Palma et al. Nucleic Acids Res. 2012; 40:9125-9138；Pigati et al. PLoS One. 2010; 5: e13515）。ｍｉＲＮＡの、細胞死に起因する細胞外空間中への放出および続く体液における出現に加え、ｍｉＲＮＡは、アポトーシス体のブレブ形成、微小胞の出芽および脱落、エキソソームの形態でのおよびタンパク質（ＡＧＯ２、ＮＰＭ１等々）と高密度リポプロテイン（ＨＤＬ）とのｍｉＲＮＡ複合体の形態での能動分泌に起因して循環系において出現する（概説：Sun et al. Clin. Chem. Lab. Med. 2012; 50: 2121-2126；Zandberga et al. Genes Chromosomes Cancer. 2013; 52: 356-369）。無細胞ｍｉＲＮＡのこれらの全ての形態は、血流および他の体液において極めて安定している。ｍｉＲＮＡの分泌は選択的であり、様々な病変プロセスにより著しく変化され得る。例えば、非感染細胞と比較して、プリオンに感染した神経細胞からのエキソソーム中に分泌されたｍｉＲＮＡのスペクトラムにおける変化が実証されている（Belingham et al. Nucleic Acids Res. 2012; 40: 10937-10949）。
【００１３】
２つのアプローチが、体液中の、様々な疾患のｍｉＲＮＡバイオマーカーを検索するために広く使用されており、以下：
１．ｍｉＲＮＡアレイまたは次世代シークエンシング（ＮＧＳ）を使用する、関心のある病変を持つ患者からのおよびコントロール対象からの体液中の数百もの異なるｍｉＲＮＡの測定（Qin et al. Cancer Inform. 2013; 12: 83-101）。このアプローチは、膨大の数の様々なｍｉＲＮＡを分析することを可能とするが、現在、ｍｉＲＮＡアレイベースのおよびシークエンシングの技術は、体液中の濃度が相対的に低い多くのｍｉＲＮＡを検出するのに充分な感度はない。その結果、アレイおよびＮＧＳによる検出可能な体液中のｍｉＲＮＡのほとんどは、全てのまたは多くの組織において発現した遍在性ｍｉＲＮＡであり、これらの多くが血液細胞に由来する（Pritchard et al. Cancer Prev. Res. （Phila）. 2012; 5:492-497；Leidner and Thompson. PLoS One. 2013; 8: 57841）。ある病変を持つ患者におけるかかる遍在性ｍｉＲＮＡ濃度の変化の検出は、同じｍｉＲＮＡが、異なる器官の他の疾患に関与し得ないことを意味するものではない。多くのｍｉＲＮＡは、がん、炎症、低酸素その他などの特定の病変型に関連しており、体液中のこれらの濃度の変化は、異なる器官の疾患に関連し得る。例えば、ｍｉＲ−１５５濃度の変化が、乳がん、食道がん、肺がん、膵臓がんおよびリンパ腫を持つ患者の血流において見出された（Blair and Yan. DNA Cell Biol. 2012; 31 Suppl. 1: S49-61；Xie et al. Bioinformatics. 2013; 29: 638-644）。ｍｉＲ−２１のレベルは、骨肉腫、膀胱がん、食道がん、胃がん、肺がん、乳がん、結腸直腸がん、頚部扁平上皮癌および他の腫瘍を持つ患者のプラズマ／血清において増加する（Blair and Yan. DNA Cell Biol. 2012; 31 Suppl. 1: S49-61；Farazi et al. J. Pathol. 2011; 223: 102-115；Xie et al, Bioinformatics. 2013; 29: 638-644）。ｍｉＲＮＡアレイによって見出された潜在的なバイオマーカーはまた、健康なコントロール対象だけでなく、他の病変においても試験されるはずということになる。
【００１４】
２．第２のアプローチは、病変および正常な組織、器官または細胞型から単離されたｍｉＲＮＡの比較によって同定された疾患特異的なｍｉＲＮＡの分析に基づく。ここで、疾患特異的なｍｉＲＮＡの同定（例として、アレイに続くＲＴ−ＰＣＲによる）に次いで、体液におけるこれらの存在が分析される。この戦略において、限定された数の循環ｍｉＲＮＡが試験されるため、分析の感度および再現性を高め得る個々のＲＴ−ＰＣＲの使用が可能である。しかしながら、この方法が適用された多くのケースにおいて、組織中および体液中のｍｉＲＮＡ濃度と病変に誘導された変化との間の相関は検出されなかった（Boeri et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2011; 108: 3713-3718；Cuk et al. Int. J. Cancer. 2013; 132: 1602-1612）。
【発明の概要】
【００１５】
本発明の概要
上の背景の節に概説されているとおり、近年の進歩にかかわらず、当該技術分野おいてパーキンソン病（ＰＤ）などの神経変性疾患の早期検出の高感度な方法に強いニーズがある。本発明は、体液中の脳に富化されたｍｉＲＮＡを定量することによって、ＰＤの早期診断、進行および処置のモニタリング、ならびに、他の神経変性疾患からのその区別のための方法を提供することで、このニーズや他のニーズにも対処する。
【００１６】
一側面において、本発明は、対象における第１の神経変性疾患を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第１の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第１の神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること;
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、第１の神経変性疾患に罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、第１の神経変性疾患に罹患していないとして対象を同定すること。
【００１７】
関連側面において、本発明は、対象における第１の神経変性疾患を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性のサンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
e）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、第１の神経変性疾患に罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、第１の神経変性疾患に罹患していないとして対象を同定すること。
【００１８】
上の２つ方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；ならびに、
ｇ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２の神経変性疾患の診断を除くこと、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除かないこと
による診断を精緻化させること(refining)をさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／または上の２つの方法のステップ（ｄ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【００１９】
上の２つの方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第２の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｇ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡを測定すること、ここで該第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第３のｍｉＲＮＡとして同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第２の神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｈ）ステップ（ｆ）および（ｇ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｊ）（ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、第１の神経変性疾患に加えて第２の神経変性疾患にも罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／または上の２つの方法のステップ（ａ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【００２０】
上の方法のいずれかの一態様において、該第１の神経変性疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）である。
上の疾患区別の方法の一態様において、該第１の神経変性疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）であり、該第２の神経変性疾患は、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）からなる群から選択される。
【００２１】
一側面において、本発明は、対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されているニューロンのｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳の領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤの発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロールと比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、ＰＤに罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロールの比よりも高くないとき、ＰＤに罹患していないとして対象を同定すること。
【００２２】
関連側面において、本発明は、対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を検出するための方法を提供し、前記方法は、以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／また前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、ＰＤに罹患しているとして対象を同定すること、または、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、ＰＤに罹患していないとして対象を同定すること。
【００２３】
ＰＤを検出するための上の２つの方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、ＰＤとは異なる第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｇ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、第２神経変性疾患の診断を除かないこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／またはＰＤを検出するための上の２つの方法のステップ（ｄ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【００２４】
ＰＤを検出するための上の２つの方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第２の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されており、かつ、該第２の神経変性疾患のためのバイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける事前に同定された（分数の）分子(numerator)である；
ｇ）対象から採取された体液性サンプル中の第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、該第２の神経変性疾患のためのバイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける事前に同定された（分数の）分子であって、かつ、（ｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されており、および、第３のｍｉＲＮＡが富化されている細胞型とは異なるか、あるいは、（ｉｉｉ）第３のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第２の神経変性疾患の発症の間中、第３のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
【００２５】
ｈ）ステップ（ｆ）および（ｇ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｊ）（ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、ＰＤに加え第２の神経変性疾患にも罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２の神経変性疾患の診断を除くこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップが、互いとおよび／またはＰＤを検出するための上の２つの方法のステップ（ａ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【００２６】
疾患検出の上の方法のいずれかの一態様において、コントロール比は、第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルの統計的に検証された閾値比を表わす所定の値（単一の「カットオフ」値）であって、前記値は、同年齢の健康な対象における対応する値の範囲内で可能な限り高い値に等しい。疾患検出の上の方法のいずれかの別の態様において、コントロール比は、過去に採取された同じ対象からの同様に処理された体液性サンプル中の該第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルの比である。
【００２７】
疾患区別の上の方法のいずれかの一態様において、第２の神経変性疾患に特徴的なｍｉＲＮＡの比の標準範囲は、第２の神経変性疾患と診断された対象の大規模コホートにおいて同じｍｉＲＮＡの比を決定することにより確立された値の統計学的に検証された所定の範囲である。具体的な一態様において、第２の神経変性疾患と診断された対象のコホートは、該第２の神経変性疾患のあらゆる発症ステージを示す。別の具体的な態様において、第２の神経変性疾患と診断された対象のコホートは、該第２の神経変性疾患の１以上の発症ステージを示す。
【００２８】
疾患区別の上の方法のいずれかの一態様において、該第２の神経変性疾患は、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）からなる群から選択される。
【００２９】
別の側面において、本発明は、対象（例として以前に該神経変性疾患と診断されていた対象）における神経変性疾患発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている;
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象における神経変性疾患が進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象における神経変性疾患が進行していなかったと決定すること。
【００３０】
関連側面において、本発明は、対象（例として以前に神経変性疾患と診断されていた対象）における該神経変性疾患発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象における神経変性疾患が進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象における神経変性疾患が進行していなかったと決定すること。
【００３１】
関連側面において、本発明は、対象（例として以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象）おけるＰＤ発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されていた、ならびに、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されているｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象におけるＰＤが進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象におけるＰＤが進行していなかったと決定すること。
【００３２】
別の関連側面において、本発明は、対象（例として以前にＰＤと診断されていた対象）におけるＰＤ発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡレベルを測定すること、ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されていた、ならびに、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象におけるＰＤが進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象におけるＰＤが進行していなかったと決定すること。
【００３３】
別個の側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００３４】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効でないと決定すること。
【００３５】
関連側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００３６】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること;
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること;
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）における異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効でないと決定すること。
【００３７】
別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤ発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００３８】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）における異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、ＰＤ処置が有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、ＰＤ処置が有効でないと決定すること。
【００３９】
さらに別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤ発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００４０】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）における異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、ＰＤ処置が有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、ＰＤ処置が有効でないと決定すること。
【００４１】
別個の側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与前に、対象から採取されている、および、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物の投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００４２】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物の投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【００４３】
関連側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、および、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００４４】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【００４５】
別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与前に対象から採取されている、および、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、または、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、または、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物の投与後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００４６】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【００４７】
さらに別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、ならびに、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物の投与後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【００４８】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物の投与後に、対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【００４９】
上の方法のいずれかの一態様において、神経変性疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）である。
上の方法のいずれかの一態様において、第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡは、ニューロンのｍｉＲＮＡである。上の方法のいずれかの一態様において、第１の脳に富化されるｍｉＲＮＡは、シナプスおよび／または神経突起のｍｉＲＮＡである。
上の方法のいずれかの一態様において、第２のｍｉＲＮＡは、（１）第１の神経変性疾患（例としてＰＤ）を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（２）第１の神経変性疾患（例としてＰＤ）を患っていない脳細胞型に富化されている、脳に富化されたｍｉＲＮＡである。上の方法のいずれかの一態様において、第２のｍｉＲＮＡは、ＰＤに関与しない脳領域において主に発現されるｍｉＲＮＡ、グリア細胞において主に発現されるｍｉＲＮＡ、および、ＰＤにおいて下方調節されている脳に富化されたｍｉＲＮＡからなる群から選択される脳に富化されたｍｉＲＮＡである。
【００５０】
脳に富化された第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の方法のいずれかの一態様において、第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡは、ニューロンに富化されており、および、第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡは、グリア細胞に富化されている。
脳に富化された第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の方法のいずれかの一態様において、第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアは、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１からなる群から選択される。
【００５１】
一方が脳に富化され他方が炎症に関連する、脳に富化された第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の方法のいずれかの一態様において、第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアは、以下：ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａおよびｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６からなる群から選択される。
【００５２】
脳に富化された第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の疾患区別の方法のいずれかの一態様において、第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアは、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１２７／４８７ｂ、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３２からなる群から選択される。
【００５３】
脳に富化された第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の疾患区別の方法のいずれかの別の態様において、第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアは、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−４８５−３ｐ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１３４およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐからなる群から選択される。
【００５４】
一方が脳に富化され他方が炎症に関連する第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の疾患区別の方法の一態様において、第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアは、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５およびｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａからなる群から選択される。一方が脳に富化され他方が炎症に関連する第１および第２のｍｉＲＮＡを伴う上の疾患区別の方法の別の態様において、第１のｍｉＲＮＡと第２のｍｉＲＮＡとのペアは、以下：ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３４、およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１４６からなる群から選択される。
【００５５】
上の方法のいずれかの一態様において、方法は、ｍｉＲＮＡの２以上の異なるペアについて、レベルを測定することおよびレベルの比を計算することを含む。具体的な一態様において、方法は、以下：
（ａ）ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐおよびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−９＊、
（ｂ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４８７ｂ、その上ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ならびに、
（ｃ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、その上ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択される１以上のペア組み合わせについて、レベルを測定することおよびレベルの比を計算することを含む。
【００５６】
上の疾患検出または区別の方法のいずれかの一態様において、方法は、対象から採取された２以上の体液性サンプル中のｍｉＲＮＡのレベルを測定することを含み、ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されている。
相隔たる時点にて採取された体液性サンプルを伴う上の方法のいずれかの一態様において、体液性サンプルは、数カ月隔てて（例として３〜６カ月隔てて）得られる。
上の方法のいずれかの一態様において、方法は、第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルを、ノーマライザーｍｉＲＮＡのレベルに対して、ノーマライズすることをさらに含む。具体的な一態様において、ノーマライザーｍｉＲＮＡは、多数の組織において発現されているが、脳においては有意に発現されていないｍｉＲＮＡである。
【００５７】
上の方法のいずれかの一態様において、対象はヒトである。上の方法のいずれかの別の態様において、対象は、実験動物（例えば、例としてＰＤなどの神経変性疾患の動物モデル）である。
上の方法のいずれかの一態様において、体液は、血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）および唾液からなる群から選択される。
上の方法のいずれかの一態様において、方法は、対象から体液性サンプル（単数または複数）を採取するステップを（例としてステップ（ａ）に先立ち）含む。
上の方法のいずれかの一態様において、ｍｉＲＮＡのレベルは、ハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲおよびシークエンシングからなる群から選択される方法を使用して決定される。
上の方法のいずれかの一態様において、ｍｉＲＮＡレベルを測定するのに先立ち、ｍｉＲＮＡは、体液性サンプルから精製される。
【００５８】
上の方法のいずれかの一態様において、方法は、ｍｉＲＮＡの分解を低減または回避するステップをさらに含む。
上の疾患検出または疾患モニタリングの方法のいずれかの一態様において、方法は、神経変性疾患（例としてＰＤ）を有するとして、または、より重症度の高い神経変性疾患（例としてＰＤ）へ進行するリスクがあるとして、診断されている対象へ治療的または予防的処置を施すことをさらに含む。ＰＤのケースにおいて、有用な薬物処置の非限定例は、例えば、例としてレボドパなどのドーパミン補充またはドーパミン模倣化合物の投与またはレボドパ併用処置の施し、これは、ドーパデカルボキシラーゼ阻害剤（例としてカルビドパ、ベンセラジド）との投与（施し）を含んでもよい；
【００５９】
カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤（例としてエンタカポン、トルカポン）などのドーパミン促進剤；ドーパミンレセプターアゴニスト（例としてロピニロール、プラミペキソールロチゴチン、アポモルフィン、ペルゴリド、ブロモクリプチン）；単独でまたはレボドパと共に使用され得るモノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯＩ）（例としてセレギリン、ラサギリン、ザイディスセリギリンＨＣｌ塩）；アマンタジン（レボドパ投与の振戦および副作用に闘うために使用される）；抗コリン作動薬(anti-cholinergenic)（例としてトリヘキシフェニジル、ベンズトロピン）の投与を含む。現在研究中の、ＰＤの処置に有用な他の潜在的な薬物は、抗グルタミン酸作動薬（例としてメマンチン、サフィナミド）；ニュールツリン療法；抗アポトーシス薬（例としてオミガピル(omigapil)、CEP-1347）；プロミトコンドリア薬（例としてコエンザイムＱ１０、クレアチン）；イスラジピンを含むカルシウムチャンネルブロッカーおよびＧＤＮＦなどの成長因子；ならびにアルファ−シヌクレインを標的とする薬物またはワクチンを含む。
【００６０】
有用な外科手術の非限定例は、例えば、脳におけるバッテリー駆動電極のインプランテーションを伴う深部脳刺激（ＤＢＳ）；神経組織に対する直接的な手術（例として視床切開、淡蒼球切断、腹側視床切開）；およびドーパミン作動性細胞移植を含む。食事および身体運動レジメンもまた、ＰＤ症状を緩和するために（別々にまたは他の処置と組み合わせて）使用されてもよい。有用な栄養補助食品の非限定例は、例えば、ビタミンＣおよびＥ、カルシウム、根生姜、緑茶および緑茶抽出物、セイヨウオトギリソウ、Ginkgo biloba、オオアザミ、ビタミンＢ１２および葉酸などの抗酸化物質を含む。現在、ＰＤが回復し得るかは不明である。有効な処置は、ＰＤの改善（バイオマーカーｍｉＲＮＡ比の低下）またはＰＤのさらなる進行の予防／阻害（バイオマーカーｍｉＲＮＡ比は、同じままかまたはより遅く増加する）を意味し得る。
【００６１】
上の疾患検出または疾患進行のモニタリングの方法のいずれかの一態様において、方法は、臨床治験に対象を募ることをさらに含む。
【００６２】
本発明の上の方法と併せて、本発明はまた、様々なキットも提供する。本発明のキットの非限定例は、以下：
１．ＰＤを検出するためのキットであって、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１８１／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａおよびｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂからなる群から選択されるｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む。
【００６３】
２．ＭＣＩからＰＤを区別するためのキットであって、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３２；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａからなる群から選択されるｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む。
【００６４】
３．ＡＤからＰＤを区別するためのキットであって、以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−４８５−３ｐ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１３４、およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３４およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１４６ｂからなる群から選択されるｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む。
【００６５】
４．以下：
（ａ）ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐおよびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−９＊、
（ｂ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４８７ｂおよびｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ならびに、
（ｃ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択されるｍｉＲＮＡのペアの１以上の組み合わせに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、キット。
【００６６】
上のキットのいずれかは、ｍｉＲＮＡの単離および／または精製の手段および／または使用のための説明書をさらに含む。
別個の側面において、本発明は、病変の診断および/またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）において選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を計算すること；
（ｅ）研究された全ｍｉＲＮＡ間でステップ（ｄ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を比較すること、および、一方のｍｉＲＮＡについてステップ（ｄ）で計算された差が、他方のｍｉＲＮＡについて計算された差の少なくとも１．５倍である、それらのｍｉＲＮＡペアを潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で選択された潜在的な各バイオマーカーｍｉＲＮＡペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；ならびに、
（ｇ）ステップ（ｆ）で計算されたその（ｒ）値が少なくとも０．８である場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとして、ｍｉＲＮＡペアを同定すること。
【００６７】
関連側面において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された少なくとも０．８の（ｒ）値を有するそれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを計算すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で計算された平均のｍｉＲＮＡレベル間の差を計算すること；
ｇ）一方のｍｉＲＮＡについてステップ（ｆ）で計算された差が、他方のｍｉＲＮＡについて計算された差の少なくとも１．５倍である場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとしてｍｉＲＮＡペアを同定すること。
【００６８】
別の関連側面において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された少なくとも０．８の（ｒ）値を有するそれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡペアについて、２つの対象コホート分離のＰ値を計算すること；ならびに、
（ｆ）このペアが、統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとしてｍｉＲＮＡペアを同定すること。
【００６９】
さらに別の関連側面において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群を選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを電気的に計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を電気的に計算すること；
（ｅ）第１のｍｉＲＮＡおよび第２のｍｉＲＮＡを各々含む一組の潜在的なｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここで第１のｍｉＲＮＡのステップ（ｄ）で計算された平均レベルの差が、第２のｍｉＲＮＡの計算された平均レベルの差の少なくとも１．５倍である；
（ｆ）ステップ（ｅ）で選択された各々の潜在的なｍｉＲＮＡペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｇ）病変の診断および／またはモニタリングに好適であるそれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なｍｉＲＮＡペアの組から選択すること、ここでステップ（ｆ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；ならびに、
（ｈ）ステップ（ｇ）で選択されたｍｉＲＮＡペアの全部または一部を表示すること。
【００７０】
さらなる関連側面において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群から選択すること
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｄ）一組の潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここでステップ（ｃ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを電気的に計算すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を電気的に計算すること；
（ｇ）第１のｍｉＲＮＡおよび第２のｍｉＲＮＡを各々含む一組の好適なｍｉＲＮＡバイオマーカーペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここで好適な各バイオマーカーｍｉＲＮＡペアについて、第１のｍｉＲＮＡのステップ（ｆ）で計算された平均レベルの差が、第２のｍｉＲＮＡの計算された平均レベルの差の少なくとも１．５倍である；ならびに、
（ｈ）ステップ（ｇ）で選択された好適なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアの全部または一部を表示すること。
【００７１】
追加の関連側面において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群から選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、ステップ（ｂ）で測定されたレベルのスピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｄ）一組の潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここでステップ（ｃ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；
ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡペアについて、２つの対象コホート分離のＰ値を電気的に計算すること；
（ｆ）このｍｉＲＮＡペアが、統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとして、ｍｉＲＮＡペアを同定すること；ならびに、
（ｇ）ステップ（ｆ）で選択された好適なバイオマーカーｍｉＲＮＡの全部または一部を表示すること。
【００７２】
バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、ｍｉＲＮＡレベルは、ＲＴ−ＰＣＲベースの方法、ｍｉＲＮＡアレイベースの方法、新世代シークエンシングおよびハイブリダイゼーションからなる群から選択される方法によって測定される。
バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、２つの対象コホートは、（１）病変を有する対象、および、（２）同じ年齢、性別および民族性の健康な対象である。バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、２つの対象コホートは、器官の２つの異なる病変を有する対象である。バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかのさらに別の態様において、２つの対象コホートは、（１）若年の対象および（２）高齢の対象である。バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかのさらなる態様において、２つの対象コホートは、同じ年齢および民族性の（１）男性および（２）女性である。
【００７３】
バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、体液は、プラズマ、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿および唾液からなる群から選択される。
バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、対象はヒトである。バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの別の態様において、対象は実験動物である。
Ｐ値を伴うバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、Ｐ値は、ステップ（ｅ）においてマン・ホイットニー検定を使用して計算される。Ｐ値を伴うバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、統計的に有意なＰ値は少なくとも０．０５である。
バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、病変は、神経変性疾患（例としてパーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）および軽度認知機能障害（ＭＣＩ））である。
バイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための上の方法のいずれかの一態様において、病変を患っている器官は脳である。
本発明のこれらのおよび他の側面は、以下の説明、クレームおよび図面から、当業者には明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
図面の簡単な説明
【図１Ａ−Ｂ】図１Ａ〜Ｆは、同年齢のコントロール（ＡＭＣ）およびパーキンソン病（ＰＤ）患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値ならびに中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣとの間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図１Ｃ−Ｄ】図１Ａ〜Ｆは、同年齢のコントロール（ＡＭＣ）およびパーキンソン病（ＰＤ）患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値ならびに中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣとの間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図１Ｅ−Ｆ】図１Ａ〜Ｆは、同年齢のコントロール（ＡＭＣ）およびパーキンソン病（ＰＤ）患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値ならびに中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣとの間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【００７５】
【図２Ａ−Ｂ】図２Ａ〜Ｆは、ＭＣＩおよびＰＤ患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値および中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣと間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図２Ｃ−Ｄ】図２Ａ〜Ｆは、ＭＣＩおよびＰＤ患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値および中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣと間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図２Ｅ−Ｆ】図２Ａ〜Ｆは、ＭＣＩおよびＰＤ患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値および中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣと間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【００７６】
【図３Ａ−Ｂ】図３Ａ〜Ｆは、ＡＤおよびＰＤ患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値および中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣとの間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図３Ｃ−Ｄ】図３Ａ〜Ｆは、ＡＤおよびＰＤ患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値および中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣとの間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図３Ｅ−Ｆ】図３Ａ〜Ｆは、ＡＤおよびＰＤ患者のプラズマ中のｍｉＲＮＡレベル（バイオマーカーペア）の比を示すグラフである。Ａ、ＣおよびＥは、Ｌｏｇ１０スケールにおける箱髭図を提示する。箱の上限および下限ならびに箱内側の線は夫々、第７５および第２５パーセンタイル値および中央値を示す。上下の水平バーは夫々、第９０および第１０パーセンタイル値を意味する。ポイントは、８０％データの外側に位置するアッセイ値を示す。Ｂ、ＤおよびＦは、ＰＤ患者とＡＭＣとの間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【００７７】
【図４Ａ−Ｂ】図４Ａ〜Ｃは、ＰＤ患者ＡＭＣとの（Ａ）、ＰＤとＭＣＩ患者との（Ｂ）、ならびに、ＰＤとＡＤ患者との（Ｃ）間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【図４Ｃ】図４Ａ〜Ｃは、ＰＤ患者ＡＭＣとの（Ａ）、ＰＤとＭＣＩ患者との（Ｂ）、ならびに、ＰＤとＡＤ患者との（Ｃ）間を区別する受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析を提示する。各バイオマーカー／ノーマライザーペアの感度、特異度および精度は、「カットオフ」ポイント（各プロット上に点として示される）−予測の精度が最も高いペアのｍｉＲＮＡの比の値について計算される。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
本発明の詳細な説明
本発明は、本発明者らによってなされた以下の概念および知見に基づく：
（１）脳において、より具体的には特定の病変に関与する脳領域において、富化されている循環ｍｉＲＮＡ濃度の変化は、遍在性のまたは他の脳に富化されたｍｉＲＮＡより、脳における関連する病変プロセスを反映する傾向が強い；
（２）神経突起およびシナプスに存在しているｍｉＲＮＡは分析されるべきである。なぜならば、神経突起およびシナプスの機能不全ならびに破壊は、神経変性の早期ステージの特徴であり、したがって、これらのｍｉＲＮＡの発現および分泌に影響を与え得る；
（３）特定の病変に直接関係しないプロセス、例として血液脳関門の透過性における変化を相殺するために、本発明者らは、損傷した脳領域（単数または複数を）のニューロン中に富化されたｍｉＲＮＡを、診断されている特定の神経変性疾患の早期ステージに関与しない脳領域または細胞型に発現され得る他の脳に富化されたｍｉＲＮＡによって、ならびに、関心のある領域に富化されているｍｉＲＮＡと比較したとき血漿レベルで異なって変化するｍｉＲＮＡによって、ノーマライズするという「バイオマーカーペア」アプローチを使用した；
（４）バイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける（分数の）分子および分母として使用されるｍｉＲＮＡのプラズマ濃度の高い相関は、その感度および特異度にとって極めて重要である。
【００７９】
本発明は、体液中の循環無細胞ｍｉＲＮＡペアについて、レベルの比の分析に基づき、ここでペアにおける両ｍｉＲＮＡは、脳に富化されており、かつ、（ｉ）ＰＤ進行に（ペアにおける一方のｍｉＲＮＡが）関与するかまたは（ペアにおける他方のｍｉＲＮＡが）関与しない、ある脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）異なる細胞型（例としてニューロンおよびグリア細胞）に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）同じ脳領域に富化されているが、ＰＤ進行に起因してその発現および／または分泌が異なって変化するか、のいずれかである。本発明のｍｉＲＮＡペアにおける（分数の）分子として特に有用である脳に富化されたｍｉＲＮＡペアは、神経突起およびシナプスに存在しているニューロンのｍｉＲＮＡ（すなわちシナプスおよび／または神経突起のｍｉＲＮＡ）を含み、その正常な機能が、ＰＤ、ＡＤおよび他の神経変性疾患の早期ステージで悪くなる。本発明はまた、炎症プロセスに関与するｍｉＲＮＡ（例としてｍｉＲ−１５５）の分析、および、病変に関与する脳領域（単数または複数）に富化されているｍｉＲＮＡとの組み合わせにおける潜在的なバイオマーカーとしてのそれらの使用をも包含する。様々な神経変性疾患が、異なる脳領域における神経病変によって特徴づけられるため、かかるバイオマーカーｍｉＲＮＡペアは、（もしあれば）それらの臨床症状とは無関係に、それらの病変を互いに区別するために使用され得る。加えて、発見されたバイオマーカーは、病変進行における重要な事象を反映するが、疾患および処置のモニタリングならびに薬物スクリーニングのために使用され得る。
【００８０】
脳に富化されたｍｉＲＮＡの使用は、プラズマ中のそれらのレベルの変化が脳の病変によって引き起こされるという可能性を著しく高め、特定の脳領域に富化されているｍｉＲＮＡの体液濃度の変化は、その脳の部分における病変を示すはずである。例えば、海馬または中脳に富化されているｍｉＲＮＡのレベルの変化は、夫々ＡＤおよびＰＤに関連しており、これらの脳領域におけるシナプスおよびニューロンの機能不全を反映しているであろう。加えて、血液細胞における器官に富化されているｍｉＲＮＡの濃度は低く、これは、これらの体液の精製の間中のｍｉＲＮＡの漏出によるプラズマおよび血清の混入を減少させる。
【００８１】
体液において検出されるｍｉＲＮＡの濃度は、多くの生物学的および技術的な因子に依存している。生物学的な因子は、様々な組織におけるｍｉＲＮＡレベル、細胞外空間中への分泌および排出の強度、循環ｍｉＲＮＡの形態（エキソソームおよび他の小胞、タンパク質と脂質との複合体）（これは、様々な障壁、例として血液−脳、胎盤および腎臓の障壁を超えるそれらの能力に影響を与える）、ならびに、血流におけるｍｉＲＮＡの安定性および半減期を含む。技術的な因子は、体液の採取および保存の方法、ｍｉＲＮＡ抽出のために使用される方法における多様性、ならびに、ｍｉＲＮＡの精製および定量に影響を与える様々な因子の体液中の存在を含む。その結果、ｍｉＲＮＡノーマライザーションの重要性は広範に認識されている（Meyer et al., Biotechnol. Lett. 2010; 32: 1777-1788）。同時に、単一のノーマライザーション方法は一般的に受け入れられていない。
【００８２】
本発明は、遍在性ＲＮＡまたは多数のｍｉＲＮＡの平均ごとのノーマライザーションの代りに（またはそれに加えて）脳に富化されたｍｉＲＮＡペアの使用に基づく。脳に富化されたｍｉＲＮＡペア（一方を比における（分数の）分子として、他方を分母として）の使用は、数個の利点を有する。第１に、いずれの病変も通常、いくつかのｍｉＲＮＡの上方調節および他のｍｉＲＮＡの下方調節に関連する。それ故に、上方および下方調節されるｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡペアを考慮することによって、試験の感度および特異度が向上され得る。第２に、脳に富化されたｍｉＲＮＡのペアの使用は、むしろ１つの脳に富化されたｍｉＲＮＡより、他の器官の病変との潜在的な重複を減少させる。第３に、例として血液供給、血液−脳透過性等々における変化などの、関心のある病変に関連しないか、または、それに非特異的である変化が、同じ器官に富化されているｍｉＲＮＡのペアを使用することによって、より良好に相殺されるであろうことは予測することができる。例えば、異なる脳領域または異なる細胞型（例としてニューロンおよびグリア細胞）に富化されているｍｉＲＮＡの相対濃度における変化は、疾患進行などの指標であってもよい。
【００８３】
本発明において、様々なｍｉＲＮＡが異なるプロセスの調節に関与するため、数個のｍｉＲＮＡペアの組み合わせはまた、最高の試験精度を提供するｍｉＲＮＡペアの群を見出すために試験された。かかる群の非限定例は、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３その上ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−９＊；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４８７ｂその上ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０その上ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１４６ｂを含む（図４を参照）。
【００８４】
定義
脳における富化に関連して本明細書に使用される用語「富化されている（富化された）」は、脳におけるｍｉＲＮＡ濃度が、他の器官より少なくとも４〜５倍高いことを意味する。
脳のある領域における富化に関連して本明細書に使用される用語「富化されている（富化された）」は、脳の該領域におけるｍｉＲＮＡ濃度が、一般の脳より高い（好ましくは少なくとも２倍高い、より好ましくは少なくとも５倍高い、最も好ましくは少なくとも１０倍高い）ことを意味する。用語は、脳領域内の濃度（例としてｑＲＴ−ＰＣＲを使用して測定される）における差を指す。
【００８５】
本発明の意義の範囲内で、用語「シナプスおよび／または神経突起のｍｉＲＮＡ」は、（ｉ）「脳に富化された」、ならびに、（ｉｉ）シナプスおよび／または神経突起（すなわち軸策および／または樹状突起および／または脊髄）に存在する、ｍｉＲＮＡを指す。本発明の方法において有用であるために、シナプスおよび／または神経突起のｍｉＲＮＡは、ニューロンからのそれらの放出の結果として（例として分泌、神経突起／シナプス破壊またはニューロン死に起因して）体液において検出可能であるべきである。
用語「軽度認知機能障害」または「ＭＣＩ」は、正常な老化の予測される認知機能低下と認知症のより深刻な低下との間の中間ステージを指す。それは、加齢に関する正常な変化よりも大きい記憶、言語、思考および判断に係る問題を伴い得る。
【００８６】
本明細書に使用される用語「神経突起」は、ニューロンの細胞体(cell body)からのいずれの突起をも指す。この突起は、軸策、樹状突起または脊髄であり得る。
用語「軸策」は、ニューロンの細胞体(cell body)または細胞体(soma)から離れて電気インパルスを伝導するニューロンの長く、細い突起を指す。軸策は、形状（樹状突起はテーパーであることが多いが、軸策は通常、一定の半径を維持している）、長さ（樹状突起は、細胞体周囲の小さな領域に制限されているが、軸策はより長い）および機能（樹状突起は通常、シグナルを受けるが、軸策は通常、それらを伝送する）を含む数個の特性によって樹状突起から識別される。軸策および樹状突起は、シナプスと呼ばれる接合部にて他の細胞（通常、他のニューロンであるが、ときには筋肉細胞または腺細胞）と接触する。
用語「樹状突起」は、他の神経細胞から受けた電気化学的刺激をニューロンの細胞体(cell body)（そこから樹状突起が突き出す）へ伝導するように作用するニューロンの分岐した突起を指す。
【００８７】
用語「シナプス」は、特殊化した接合部を指し、そこを通じてニューロンが、互いへおよび筋肉または腺における細胞などの非ニューロン細胞へシグナルを送る。典型的なニューロンは、数千のシナプスを生み出す。ほとんどのシナプスは、軸策を樹状突起へ接続させるが、軸策−細胞体(cell-body)、軸策−軸策および樹状突起−樹状突起を含む他のタイプの接続もまた存在する。脳において、各々のニューロンは、他の多くとシナプスを形成し、同様に各々は、他の多くからシナプス入力を受ける。その結果として、ニューロンの出力は、他の多くの入力に依存することがあり、その各々は、そのニューロンが持つそのシナプスの強度に依存して異なる影響度合いを有することがある。シナプスの２つの主要なタイプには、化学シナプスおよび電気シナプスがある。電気シナプスにおいて、細胞は、化学シナプスにて細胞を隔てる２０〜４０ｎｍの距離よりむしろ、互いから約３．５ｎｍ以内に近づく。化学シナプスにおいて、シナプス後電位は、化学伝達物質によるイオンチャネルの開口によって引き起こされる一方、電気シナプスにおいて、それは、両方のニューロン間の直接の電気的カップリングによって引き起こされる。したがって、電気シナプスは化学シナプスよりも速い。
【００８８】
本明細書に使用される用語「ノーマライザーｍｉＲＮＡ」は、プラズマ中のｍｉＲＮＡの出現および安定性に影響を与える様々な因子を説明するためのｍｉＲＮＡ濃度のノーマライゼーション用に使用されるｍｉＲＮＡを指す。
用語「神経変性疾患」は、例として、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病、オリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）などの脳の病変、ならびに、後にシナプスの機能不全、神経突起およびシナプスの破壊が、最終的にはニューロン死が続く代謝変化によって特徴づけられる他の病変を指すために本明細書に使用される。
【００８９】
本明細書に使用される用語「神経変性疾患の進行ステージ」は、神経変性疾患の重症度の具体的な程度を指す（例として無症状ステージ、いくつかの症状を持つ早期疾患、疾患の後期ステージ等）。
用語「神経変性疾患の進行」は、個々のニューロンにおける代謝的なおよび／または構造的な変化の程度／重症度におけるあらゆる負の変化をも、および／または、影響を与えられたニューロンの数のあらゆる増加をも、指すために本明細書に使用される。語句「神経変性疾患の改善」および類似の用語は、個々のニューロンにおける代謝的なおよび／または構造的な変化の程度／重症度のあらゆる正の変化も、および／または、影響を与えられたニューロンの数のあらゆる減少をも、指す。
用語「に関連する」は、あらゆる相関、共起およびあらゆる因果関係を包含するために使用される。
【００９０】
本明細書に使用される用語「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」は、およそ２２ｎｔ長の小さな非コードＲＮＡ分子の類を指す。それらは、メッセンジャー転写産物（ｍＲＮＡ）の相補領域に結合することで、それらの翻訳を抑制または分解を調節することにより、標的遺伝子の調節に重要な役割を果たしている（Griffiths-Jones Nucleic Acids Research, 2006, 34, Database issue: D140-D144）。しばしば、１つのｍｉＲＮＡは、複数のｍＲＮＡを標的とすることができ、１つのｍＲＮＡは３’ＵＴＲの異なる領域を標的とする複数のｍｉＲＮＡによって調節され得る。いったん、あるｍＲＮＡに結合すると、ｍｉＲＮＡは、例としてｍＲＮＡの翻訳および安定性に影響を与えることによって、遺伝子発現およびタンパク質産生を調整し得る（Baek et al., Nature 455（7209）:64 （2008）；Selbach et al., Nature 455（7209）:58 （2008）；Ambros, 2004, Nature, 431, 350-355；Bartel, 2004, Cell, 116, 281-297；Cullen, 2004, Virus Research., 102, 3-9；He et al., 2004, Nat. Rev. Genet., 5, 522-531；およびYing et al., 2004, Gene, 342, 25-28）。特に指摘しない限り、具体的なｍｉＲＮＡの名称は、成熟ｍｉＲＮＡ配列を指す。現在の命名規則では、ヒトｍｉＲＮＡは、接頭辞「ｈｓａ−」（すなわちHomo sapiensの略語）が前に付けられる。明細書および図全体を通じて、ｈｓａ−接頭辞は、省略を目的として略されてもよく、それ故に、例えば「ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５」および「ｍｉＲ−１５５」は、同じＲＮＡ配列を表すことになる。
【００９１】
本発明の方法において有用な神経突起および／またはシナプスｍｉＲＮＡの例は、限定せずに、Ｌｅｔ−７ｅ、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２８ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１８２、ｍｉＲ−１８３、ｍｉＲ−２１３、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−３２９、ｍｉＲ−３３７、ｍｉＲ−３６９−３、ｍｉＲ−３６９−５ｐ、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−３８２、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４２５、ｍｉＲ−４３３−５ｐ、ｍｉＲ−４８３−３ｐ、ｍｉＲ−４８５−５ｐ、ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−４９６、ｍｉＲ−５４１、ｍｉＲ−５４３、ｍｉＲ−６５６、ｍｉＲ−６６８、ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−８８９、ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−９３９、ｍｉＲ−９＊およびｍｉＲ１８１ａ−１＊を含む。現在知られているほとんどのｍｉＲＮＡの情報は、ｍｉＲＮＡデータベースmiRBase（mirbase.orgにてワールドワイドウェブで入手可能）において見出され得る。Burside et al., BMC Genomics 9:185 （2008）; Williams et al., BMC Genomics 8:172 （2007）；Landgraf et al., Cell 129:1401 （2007）もまた参照。
【００９２】
用語「ｍｉＲＮＡアレイ」は、分子生物学および医学において使用される多重化技術を指す。それは、オリゴヌクレオチドの配列された一連の複数の（例として数千の）微視的スポットからなり、各々は特定の標的ｍｉＲＮＡと相補的である特異的な配列（プローブ）を含有する。高ストリンジェンシー条件下でのプローブ−標的ハイブリダイゼーションの後、生じたハイブリッドは通常、ｍｉＲＮＡの相対存在量を決定するためにフルオロフォア−、銀−または化学発光−標識の標的を定量することによって、検出および定量される。本発明の方法において、特注のおよび市販のｍｉＲＮＡアレイの両方が使用され得る。有用な市販のｍｉＲＮＡアレイ（標的の標識化、ハイブリッドの検出および分析の様々な方法に基づく）の例は、Agilent、Illumina、Invitrogen、FebitおよびLC Sciencesによって生産されたアレイを含む。
【００９３】
用語「次世代シークエンシング技術」は広範に、複数のシークエンシング反応を並行して発生させるシークエンシング方法を指す。これは、大幅に増大したデータの処理能力およびデータ量を可能にする。一般的に使用される次世代シークエンシングプラットホームの非限定例は、Helicos small RNA sequencing、miRNA BeadArray（Illumina）、Roche 454（FLX-Titanium）およびABI SOLiDを含む。
本明細書に使用される「個体」または「対象」または「動物」は、ヒト、獣医学に関する動物(veterinary animal)（例としてネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ等）および神経変性疾患の実験動物モデルを指す。好ましい態様において、対象はヒトである。
【００９４】
本明細書に使用される用語「精製された」は、材料が得られる天然材料を含む、無関係の材料、すなわち混入物、の存在を低減または排除する条件下で単離されている材料を指す。例えば、ＲＮＡ精製は、タンパク質、脂質、塩、および、体液に存在する他の無関係の化合物の排除を含む。なおまた、分析のいくつかの方法において、精製されたｍｉＲＮＡは、好ましくは、体液サンプル中に含有される他のＲＮＡオリゴヌクレオチド（例として、ほぼ全ての組織において高レベルで発現されている、ｒＲＮＡおよびｍＲＮＡの断片、遍在性ｍｉＲＮＡ［例としてｍｉＲ−１６］等々）が、実質的にない。本明細書に使用される用語「実質的にない」は、材料の分析試験という背景で、操作上、使用される。好ましくは、混入物が実質的にない精製材料は、少なくとも５０％純粋であり；より好ましくは少なくとも９０％純粋であり；さらにより好ましくは少なくとも９９％純粋である。純度は、クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、組成分析、生物学的アッセイ、および、当該技術分野において知られている他の方法によって評価され得る。
本明細書に使用される用語「同様に処理された」は、同じプロトコールを使用して得られているサンプル（例として体液サンプルまたは精製されたＲＮＡ）を指す。
用語「約」または「およそ」は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを意味する。かかる範囲は、与えられた値または範囲の１桁以内に、好ましくは５０％以内に、より好ましくは２０％以内に、さらにより好ましくは１０％以内に、および、なお一層より好ましくは５％以内に、あり得る。用語「約」または「およそ」によって包含される許容可能な変動は、研究下にある特定のシステムに依存しており、当業者によって容易に理解され得る。
【００９５】
本発明に従って、当該技術分野の技能の内、従来の分子生物学、微生物学および組み換えＤＮＡ技術が採用されてもよい。かかる技術は、文献において充分に説明されている。例として、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989（本明細書において“Sambrook et al., 1989”）；DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (D.N. Glover ed. 1985)；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait ed. 1984)；Nucleic Acid Hybridization [B.D. Hames & S.J. Higgins eds. (1985)]；Transcription And Translation [B.D. Hames & S.J. Higgins, eds. (1984)]；Animal Cell Culture [R.IFreshney, ed. (1986)]；Immobilized Cells And Enzymes [IRL Press, (1986)]；B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984)；Ausubel, F.M. et al. (eds.). Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc., 1994を参照。これらの技術は、Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488-492 (1985), 米国特許第5,071,743号, Fukuoka et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 263: 357-360 (1999)；Kim and Maas, BioTech. 28: 196-198 (2000)；Parikh and Guengerich, BioTech. 24: 4 28-431 (1998)；Ray and Nickoloff, BioTech. 13: 342-346 (1992)；Wang et al., BioTech. 19: 556-559 (1995)；Wang and Malcolm, BioTech. 26: 680-682 (1999)；Xu and Gong, BioTech. 26: 639-641 (1999), 米国特許第5,789,166号および第5,932,419号, Hogrefe, Strategies l4. 3: 74-75 (2001), 米国特許第5,702,931等, 第5,780,270号および第6,242,222号, Angag and Schutz, Biotech. 30: 486-488 (2001), Wang and Wilkinson, Biotech. 29: 976-978 (2000), Kang et al., Biotech. 20: 44-46 (1996), Ogel and McPherson, Protein Engineer. 5: 467-468 (1992), Kirsch and Joly, Nucl. Acids. Res. 26: 1848-1850 (1998), Rhem and Hancock, J. Bacteriol. 178: 3346-3349 (1996), Boles and Miogsa, Curr. Genet. 28: 197-198 (1995), Barrenttino et al., Nuc. Acids. Res. 22: 541-542 (1993), Tessier and Thomas, Meths. Molec. Biol. 57: 229-237ならびにPons et al., Meth. Molec. Biol. 67: 209-218に記載の部位特異的突然変異誘発法を含む。
【００９６】
診断用ｍｉＲＮＡペアの同定のための方法
最も有望なバイオマーカーペアを同定するために、本発明者らは、以下のアプローチ：異なる個体の夫々の体液において有意に相関する（スピアマンの順位相関係数ｒ＞０．８）それらの循環ｍｉＲＮＡから、各ペアについて、（分数の）分子および分母の選択、を使用した。プラズマ中のｍｉＲＮＡの濃度は、（ｉ）様々な器官および組織中のｍｉＲＮＡ発現のレベル；（ｉｉ）異なる細胞型からのｍｉＲＮＡ分泌のレベル；（ｉｉｉ）エキソソームおよび他の微小小胞、タンパク質、脂質、および、場合により他の分子との複合体などの異なる形態での、細胞外空間におけるｍｉＲＮＡの安定性ならびにプラズマにおけるそれらの出現；ならびに（ｉｖ）脳に富化されたｍｉＲＮＡにおける血液−脳障壁の透過性を含む、多数の因子に依存する。病変プロセスは、これらの因子のいくつかまたは全てに影響を与え得る。本発明者らは、有効なバイマーカーｍｉＲＮＡペアの（分数の）分子および分母が、こられの基礎的な共通の因子のいくつかを共有するはずであり（例として、両者は脳に富化されており、エキソソーム中に分泌される）、病変に応えて異なって変化するであろうと示唆する。これは、いずれの相関するｍｉＲＮＡも、良好なバイオマーカーペアを形成するであろうことを意味するものではない。なぜなら、それらが病変によって同様に変化する場合、それらの比は、これらの変化を隠すであろうからである。
【００９７】
本発明は「有望な」ｍｉＲＮＡペアの選択の方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
１．関心のある器官（例として脳）におけるそれら富化に基づいて事前に選択されたｍｉＲＮＡの濃度は、少なくとも２つの比較コホート（例として、疾患と診断試験用のコントロール、２つの病変を区別することができる試験のための２つの疾患、病変プロセス進行の異なるステージでの疾患、または、モニタリング試験のための処置前と処置後の疾患）の体液（例としてプラズマ、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）、唾液、尿）において測定される。
２．各ｍｉＲＮＡ濃度の平均が、比較コホートについて計算される。
３．２つの比較コホートからの各ｍｉＲＮＡについての平均間の差が計算され、ｍｉＲＮＡが２つの群：（ｉ）差分値が高いもの；および（ｉｉ）差分値が低いかまたは異符号を持つもの、に分けられる。
４．ステップ３で決定されたパラメーターが少なくとも１．５倍異なる場合、異なる群からのｍｉＲＮＡが、潜在的なバイオマーカーペアとして組み合わされる。潜在的で「有望な」ｍｉＲＮＡペアにおいて、一方のｍｉＲＮＡは（分数の）分子として使用され、他方のｍｉＲＮＡは分母として使用される。
５．プラズマまたは他の体液における各特定のｍｉＲＮＡ濃度の個体差の影響をさらに低減するために、高い正の相関を持つｍｉＲＮＡ（比較される群における全サンプルについてスピアマンの順位相関係数ｒが≧０．８である）が、バイオマーカーペアのために（分数の）分子および分母として選択される。このステップは、潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアの数を有意に減少させ、２つの比較コホートを区別するプロセスと無関係な因子により引き起こされる選択されたバイオマーカーの変動を低減させ、ならびに、試験の感度および特異度を有意に増加させる。
【００９８】
ステップ３〜４およびステップ５の順番は、以下のように切り替えられ得る：
ステップ１の後、全ての体液サンプルにおいてステップ１で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算する。次いで、高い正の相関（ｒ≧０．８）を持つｍｉＲＮＡを、潜在的なバイオマーカーペアとして選択し、選択された各ｍｉＲＮＡペアについて２つの対象コホートにおけるｍｉＲＮＡ濃度の比を比較し、ならびに、このペアが統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、好適なバイオマーカーとしてｍｉＲＮＡペアを決定する。
【００９９】
バイオマーカーペアのためのｍｉＲＮＡの選択は、体液における無細胞循環ｍｉＲＮＡの分析に基づく発症スクリーニング、診断およびモニタリング試験において重要なステップである。本発明は、有効なバイオマーカーのペアの選択のための以下の方法を提供することによって、この問題点に対処する。
一態様において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法を提供し、該方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を計算すること；
（ｅ）研究された全ｍｉＲＮＡ間でステップ（ｄ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を比較すること、および、一方のｍｉＲＮＡについてステップ（ｄ）で計算された差が、他方のｍｉＲＮＡについて計算された差の少なくとも１．５倍である、それらのｍｉＲＮＡペアを潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で選択された潜在的な各バイオマーカーｍｉＲＮＡペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；ならびに、
（ｇ）ステップ（ｆ）で計算されたその（ｒ）値が、少なくとも０．８である場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとして、ｍｉＲＮＡペアを同定すること。
【０１００】
別の態様において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリングのためのバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法を提供し、該方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、ステップ（ｂ）で測定されたスピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された少なくとも０．８の（ｒ）値を有するそれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを計算すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を計算すること；
（ｇ）一方のｍｉＲＮＡについてステップ（ｆ）で計算された差が、他方のｍｉＲＮＡについて計算された差の少なくとも１．５倍である場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとしてｍｉＲＮＡペアを同定すること。
【０１０１】
さらなる態様において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するための方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られている少なくとも４種のｍｉＲＮＡを選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された少なくとも０．８の（ｒ）値を有するそれらのｍｉＲＮＡペアを潜在的なバイオマーカーペアとして選択すること；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡペアについて、２つの対象コホート分離のＰ値を計算すること；ならびに、
（ｆ）このペアが、統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとしてｍｉＲＮＡペアを同定すること。
【０１０２】
別の態様において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群を選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを電気的に計算すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を電気的に計算すること；
（ｅ）第１のｍｉＲＮＡおよび第２のｍｉＲＮＡを各々含む一組の潜在的なｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここで第１のｍｉＲＮＡのステップ（ｄ）で計算された平均レベルの差が、第２のｍｉＲＮＡの計算された平均レベルの差の少なくとも１．５倍である；
（ｆ）ステップ（ｅ）で選択された各々の潜在的なｍｉＲＮＡペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｇ）病変の診断および／またはモニタリングに好適であるこれらのｍｉＲＮＡペアを、潜在的なｍｉＲＮＡペアの組から選択すること、ここでステップ（ｆ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；ならびに、
（ｈ）ステップ（ｇ）で選択されたｍｉＲＮＡペアの全部または一部を表示すること。
【０１０３】
さらなる別の態様において、本発明は、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群から選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）ステップ（ｂ）で測定された個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、スピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｄ）一組の潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここでステップ（ｃ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡの平均レベルを電気的に計算すること；
（ｆ）ステップ（ｅ）で計算された平均ｍｉＲＮＡレベルの間の差を電気的に計算すること；
（ｇ）第１のｍｉＲＮＡおよび第２のｍｉＲＮＡを各々含む一組の好適なｍｉＲＮＡバイオマーカーペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここで好適な各バイオマーカーｍｉＲＮＡペアについて、第１のｍｉＲＮＡのステップ（ｆ）で計算された平均レベルの差が、第２のｍｉＲＮＡの計算された平均レベルの差の少なくとも１．５倍である；ならびに、
（ｈ）ステップ（ｇ）で選択された好適なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアの全部または一部を表示すること。
【０１０４】
さらなる態様において、病変の診断および／またはモニタリング用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを選択するためのコンピューター実行方法を提供し、前記方法は、以下のステップを含む：
（ａ）病変を患っている器官に富化されていると知られているｍｉＲＮＡの群から選択すること；
（ｂ）２つの対象コホートからの体液性サンプル中の、ステップ（ａ）で選択された各ｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
（ｃ）個々のｍｉＲＮＡの全ての可能なペアについて、ステップ（ｂ）で測定されたレベルのスピアマンの順位相関係数（ｒ）を電気的に計算すること；
（ｄ）一組の潜在的なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを、測定されたｍｉＲＮＡの群から選択すること、ここでステップ（ｃ）で計算された（ｒ）値が、少なくとも０．８である；
（ｅ）ステップ（ｄ）で選択された各ｍｉＲＮＡペアについて、２つの対象コホート分離のＰ値を電気的に計算すること；
（ｆ）このｍｉＲＮＡペアが、統計的に有意なＰ値を持つ２つの対象コホートを区別する場合、該病変の診断および／またはモニタリングに好適なバイオマーカーペアとして、ｍｉＲＮＡペアを同定すること；ならびに、
（ｇ）ステップ（ｆ）で選択された好適なバイオマーカーｍｉＲＮＡの全部または一部を表示すること。
【０１０５】
本発明の上の方法のいずれかにおいてｍｉＲＮＡレベルを測定するために使用され得る方法の非限定例は、例としてＲＴ−ＰＣＲベースの方法、ｍｉＲＮＡアレイベースの方法、新世代シークエンシングおよびハイブリダイゼーションを含む。
本発明の上の方法のいずれかにおいて使用され得る体液性サンプルの非限定例は、例としてプラズマ、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿および唾液を含む。
【０１０６】
本発明の上の方法のいずれかにおいて、対象は、例としてヒトまたは実験動物であり得る。
本発明の上の方法のいずれかにおいて、いずれか２つのコホートが比較され得る。かかるコホートの非限定例は、例として、病変対コントロール［例として、同じ年齢、性別および民族性の健康な対象］、器官のある病変対同じ器官の別の病変、２つの年齢群［例として２０〜５０歳対６０〜８０歳］、男性対女性［例として、同じ年齢および民族性の］、２つの異なる民族性または人種の群［例として、同じ年齢および性別の］等々を含む。
本発明の方法において使用されるスピアマン相関アルゴリズムは、以下：
【数１】
2016538851.tif 000002
【０１０７】
本発明の上の方法において２つのコホート間の統計的に有意な差を得るのに充分なサンプルの最小数は、症例対照研究用の標準的な式によって計算され得る（例としてEng J. Radiology 2003, 227:309-313を参照）。
本発明の方法において、統計的に有意なＰ値は、当該技術分野において知られているいずれの方法を使用しても計算され得る。かかる方法の非限定例は、ステューデントのt検定（正規分布を持つサンプルについて）およびマン・ホイットニー検定（非ラムダム分布を持つサンプルについて）である（Mann and Whitney, Annals Math Stat. 1947, 18: 50-60）。Ｐ値≧０．０５は通常、統計学的に有意であるとして認められる。多数の潜在的なバイオマーカーが試験される場合、ボンフェローニ補正が適用され得る。
【０１０８】
本発明の診断、モニタリングおよびスクリーニングの方法
本発明は、対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を診断およびモニターするための新規な高感度かつ非侵襲または低侵襲の方法を提供し、該方法は、対象からの体液性サンプル中の（例として血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、唾液）、２以上の特異的なｍｉＲＮＡのレベルの比を決定することを含む。
本発明の診断方法における特異的なｍｉＲＮＡペアの使用は、感度および信頼性を極めて高いものとさせ、ＰＤの早期診断ならびにそれを他の神経変性疾患および状態（例として軽度認知機能障害（ＭＣＩ）およびアルツハイマー病（ＡＤ））から区別することを可能にする。このアプローチはまた、ニューロン中の様々な具体的事象（例として、ｍｉＲＮＡプロフィールにおける変化、それらの分泌、神経突起の分解、シナプスの損失、および、最終的なニューロン死）が検出および定量され得るので、ＰＤ進行および処置の有効性をモニターするための詳細かつ包括的な情報をも提供する。
本発明の方法に有用なｍｉＲＮＡペアの非限定例は、例として以下を含む：
【０１０９】
ＰＤを検出するためのｍｉＲＮＡペア
脳に富化されている：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１。
【０１１０】
炎症の：
ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ。
【０１１１】
ＰＤおよびＭＣＩを区別するためのｍｉＲＮＡペア
脳に富化されている：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１２７／４８７ｂ、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３２。
【０１１２】
炎症の：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ。
【０１１３】
ＰＤとＡＤとを区別するためのｍｉＲＮＡペア
脳に富化されている：
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−４８５−３ｐ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ。
【０１１４】
炎症の：
ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１４６ｂ。
【０１１５】
一側面において、本発明は、対象における第１の神経変性疾患を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第１の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第１の神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること;
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、第１の神経変性疾患に罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、第１の神経変性疾患に罹患していないとして対象を同定すること。
【０１１６】
関連側面において、本発明は、対象における第１の神経変性疾患を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、第１の神経変性疾患に罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、第１の神経変性疾患に罹患していないとして対象を同定すること。
【０１１７】
上の２つ方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；ならびに、
ｇ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２の神経変性疾患の診断を除くこと、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除かないこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップは、互いとおよび／または上の２つの方法のステップ（ｄ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【０１１８】
上の２つの方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第２の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｇ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡを測定すること、ここで該第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第３のｍｉＲＮＡとして同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第２の神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｈ）ステップ（ｆ）および（ｇ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｊ）（ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、第１の神経変性疾患に加えて第２の神経変性疾患にも罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップは、互いとおよび／または上の２つの方法のステップ（ａ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【０１１９】
上の方法のいずれかの一態様において、該第１の神経変性疾患はパーキンソン病（ＰＤ）である。
上の疾患区別の方法の一態様において、該第１の神経変性疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）であり、該第２の神経変性疾患は、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）からなる群から選択される。
【０１２０】
一側面において、本発明は、対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されているニューロンのｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳の領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤの発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロールと比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、ＰＤに罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロールの比よりも高くないとき、ＰＤに罹患していないとして対象を同定すること。
【０１２１】
関連側面において、本発明は、対象におけるパーキンソン病（ＰＤ）を検出するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／また前頭皮質に富化されている脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、対応するコントロール比と比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高いとき、ＰＤに罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、対応するコントロール比よりも高くないとき、ＰＤに罹患していないとして対象を同定すること。
【０１２２】
ＰＤを検出するための上の２つの方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、ＰＤとは異なる第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｇ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２神経変性疾患の診断を除くこと、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、第２神経変性疾患の診断を除かないこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップは、互いとおよび／またはＰＤを検出するための上の２つの方法のステップ（ｄ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【０１２３】
ＰＤを検出するための上の２つの方法の一態様において、方法は、以下のステップ：
ｆ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第３の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、第２の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されており、かつ、該第２の神経変性疾患用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける事前に同定された（分数の）分子である；
ｇ）対象から採取された体液性サンプル中の第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第４の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、該第２の神経変性疾患用のバイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける事前に同定された（分数の）分子であり、かつ、（ｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）第２の神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されており、および、第３のｍｉＲＮＡが富化されている細胞型とは異なるか、あるいは、（ｉｉｉ）第３のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、第２の神経変性疾患の発症の間中、第３のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｈ）ステップ（ｆ）および（ｇ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲と比較すること；
ｊ）（ｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まる場合、ＰＤに加えて第２の神経変性疾患にも罹患しているとして対象を同定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｈ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、第２の神経変性疾患に特徴的な該ｍｉＲＮＡの比の標準範囲内に収まらない場合、対象における第２の神経変性疾患の診断を除くこと
による診断を精緻化させることをさらに含み、前記ステップは、互いとおよび／またはＰＤを検出するための上の２つの方法のステップ（ａ）〜（ｅ）と、同時にまたは連続的に実施され得る。
【０１２４】
疾患検出の上の方法のいずれかの一態様において、コントロール比は、第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルの統計的に検証された閾値比を表わす所定の値（単一の「カットオフ」値）であって、前記値は、同年齢（例として±２．５歳）の健康な対象における対応する値の範囲内で可能な限り高い値に等しい。かかる統計的に検証された閾値（「カットオフ」値）は、同年齢の選択集団における健康な個体の大規模コホートを分析すること、および、好適な統計モデルを使用することによって確立されてもよい（例とてKnapp、R. G.、and Miller、M.E. （1992） Clinical Epidemiology and Biostatistics、William and Wilkins、Harual Publishing Co. Malvern、Pa.を参照）。疾患検出の上の方法のいずれかの別の態様において、コントロール比は、過去に採取された同じ対象からの同様に処理された体液性サンプル中の該第１および第２のｍｉＲＮＡのレベルの比である。
【０１２５】
様々な神経変性疾患に特徴的な病変プロセスが、同じ患者の脳においてしばしば観察されるため（Hu WT et al. Acta Neuropathol. 2010; 120: 385-399；Farlow MR et al. Dement. Geriatr. Cogn. Disord. Extra 2013; 3: 281-290；Stern RA et al. 2011; 3: S460-S467; Costanza A. et al. Neuropathol. 2011; 37: 570-584）、本発明はまた、鑑別診断(differential diagnosis)のための方法をも提供するが、これは、２以上の異なるバイオマーカーペアの使用を含み得、かつ、追加の病変の存在を除き得るか、または、かかる追加の病変の同時存在（すなわち混合病変）を実証し得る。
【０１２６】
本発明の診断方法において、さらに診断を精緻化し、ＰＤと他の神経変性疾患（例としてアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、ハンチントン病（ＨＤ）、プリオンに起因する疾患、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＧＤ）、ピック病およびオリーブ橋小脳変性症（ＯＰＣＡ）などの）との間を区別するために、対象のサンプル中のバイオマーカーペア内のｍｉＲＮＡのレベルの比は、ＰＤまたは異なる神経変性疾患を有する対象（好ましくは同年齢、例として±２．５歳の）において見出された同じｍｉＲＮＡのレベルの比の標準範囲と比較される。かかる「精緻化」の比較は、初期診断の後（すなわち健康なコントロール閾値との比較）かまたはかかる初期診断と同時のいずれかに実施され得る。
【０１２７】
かかる「精緻化」の比較は、いくつかの異なる疾患について同時にまたは連続的に実施され得る。「精緻化」の比較において使用される比の疾患特異的な標準範囲は通常、選択集団（好ましくは同年齢、例として±２．５歳の）において具体的な神経変性疾患を持つと診断された個体の大規模コホートを分析すること、および、統計モデルを使用することによって確立されてもよい値の統計的に検証された所定の範囲である。具体的な疾患のみならずかかる疾患の進行の程度を決定するためのさらなる「精緻化」は、比較のための、疾患ステージに特異的である標準的な比（該標準範囲は、具体的なステージの具体的な神経変性疾患を持つと診断された個体の大規模コホートを分析することによって確立される）を使用することによって実施され得る。
【０１２８】
別の側面において、本発明は、対象における神経変性疾患発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている;
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象における神経変性疾患が進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象における神経変性疾患が進行していなかったと決定すること。
【０１２９】
関連側面において、本発明は、対象（例として以前に神経変性疾患と診断されていた対象）における該神経変性疾患発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象において神経変性疾患が進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象における神経変性疾患が進行していなかったと決定すること。
【０１３０】
関連側面において、本発明は、対象おけるパーキンソン病（ＰＤ）発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されていた、ならびに、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されているｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で、比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象におけるＰＤが進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象におけるＰＤが進行していなかったと決定すること。
【０１３１】
別の関連側面において、本発明は、対象（例として以前にＰＤと診断されていた対象）におけるパーキンソン病（ＰＤ）発症の変化をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）対象から採取された２以上の体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡレベルを測定すること、ここでサンプルが、相隔たる時点にて採取されていた、ならびに、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）ステップ（ａ）と同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが、炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）各体液性サンプルについて、ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を、先に採取された体液性サンプル（単数または複数）と後に採取されたそれとの間で比較すること；ならびに、
ｅ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が増加している場合、対象におけるＰＤが進行していたと決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、先に採取されたサンプル（単数または複数）と比較して、後に採取された体液性サンプル（単数または複数）の方が変化していない場合、対象におけるＰＤが進行していなかったと決定すること。
【０１３２】
別個の側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始前に、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１３３】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効でないと決定すること。
【０１３４】
関連側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１３５】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること;
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること;
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、処置が、該神経変性疾患にとって有効でないと決定すること。
【０１３６】
別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤ発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１３７】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、ＰＤ処置が有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、ＰＤ処置が有効でないと決定すること。
【０１３８】
さらに別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤ発症に対する処置の効果をモニターするための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）処置の開始に先立ち、対象から採取された体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）処置の過程またはその後において、対象から採取された１以上の体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１３９】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）各体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること、および任意に、ステップ（ｄ）の異なるサンプル間で、ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高い場合、ＰＤ処置が有効であると決定すること、あるいは、（ｉｉ）ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｆ）で計算された対応する比（単数または複数）よりも高くない場合、ＰＤ処置が有効でないと決定すること。
【０１４０】
別個の側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、および、ここで該第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡが、（ｉ）神経変性疾患を患っていない脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）神経変性疾患を患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、神経変性疾患の発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に、対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１４１】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に、対象から採取された各々の体液性サンプル中の、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【０１４２】
関連側面において、本発明は、以前に神経変性疾患と診断されていた対象における該神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、および、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）第１の神経変性疾患を患っている脳領域（単数または複数）に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１４３】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、神経変性疾患の進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【０１４４】
別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液性サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、ならびに、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、中脳および／または前頭皮質に富化されている；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２の脳に富化されたｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡが、（ｉ）ＰＤを患っていない脳領域に富化されているか、あるいは、（ｉｉ）ＰＤを患っていない脳細胞型に富化されているか、あるいは、（ｉｉｉ）第１のｍｉＲＮＡと同じ脳領域に富化されているが、その発現および／または分泌は、ＰＤ発症の間中、第１のｍｉＲＮＡの発現および／または分泌とは異なって変化する；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１４５】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に対象から採取された各々の体液性サンプル中の、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【０１４６】
さらに別の関連側面において、本発明は、以前にパーキンソン病（ＰＤ）と診断されていた対象におけるＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用な化合物を同定するための方法を提供し、前記方法は以下を含む：
ａ）体液性サンプル中の第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該体液サンプル（単数または複数）が、試験化合物投与に先立ち、対象から採取されている、ならびに、ここで該第１のｍｉＲＮＡが、（ｉ）中脳および／または前頭皮質に富化されている、脳に富化されたニューロンのｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）炎症に関連するｍｉＲＮＡである；
ｂ）対象から採取された同じ体液性サンプル中の第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること、ここで該第２のｍｉＲＮＡは、（ｉ）第１のｍｉＲＮＡが脳に富化されたｍｉＲＮＡである場合、炎症に関連するｍｉＲＮＡであるか、あるいは、（ｉｉ）第１のｍｉＲＮＡが炎症に関連するｍｉＲＮＡである場合、脳に富化されたｍｉＲＮＡである；
ｃ）ステップ（ａ）および（ｂ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｄ）試験化合物投与の後に対象から採取された１以上の体液性サンプル中の、ステップ（ａ）と同じ第１のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
【０１４７】
ｅ）ステップ（ｄ）と同じ体液性サンプル（単数または複数）中の、ステップ（ｂ）と同じ第２のｍｉＲＮＡのレベルを測定すること；
ｆ）試験化合物投与の後に対象から採取された各々の体液性サンプルについて、ステップ（ｄ）および（ｅ）で測定されたｍｉＲＮＡのレベルの比を計算すること；
ｇ）ステップ（ｃ）および（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比を比較すること；ならびに、
ｈ）（ｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比（単数または複数）よりも低い場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用であると同定すること；（ｉｉ）ステップ（ｆ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比が、ステップ（ｃ）で計算されたｍｉＲＮＡのレベルの比よりも低くない場合、試験化合物が、ＰＤの進行を遅くするのにまたは処置するのに有用でないと同定すること。
【０１４８】
本発明の方法は、体液中のあるｍｉＲＮＡのレベルの測定に基づく。非侵襲的または低侵襲的な技術によって採取され得る体液の使用は、（例として脳中の検出とは対照的に）費用効果が高く、低侵襲的または非侵襲的な診断手順を可能にする。本発明の方法における使用のための好ましい体液は、血漿、血清、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）および唾液である。しかしながら、他のあらゆる体液もまた使用され得る。
【０１４９】
体液中のｍｉＲＮＡレベルを測定するのに有用な方法の例は、選択的なプローブとのハイブリダイゼーション（例としてノーザンブロッティング、ビーズベースのフローサイトメトリー、オリゴヌクレオチドマイクロチップ［マイクロアレイ］、または、Ambion mirVana miRNA Detection Kitなどの溶液ハイブリダイゼーションアッセイを使用する）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ベースの検出（例としてステムループ逆転写ポリメラーゼ連鎖反応［ＲＴ−ＰＣＲ］、定量的ＲＴ−ＰＣＲベースのアレイの方法［ｑＰＣＲ−アレイ］、次世代シークエンシング技術の１つによる直接シークエンシング（例としてHelicos低分子ＲＮＡシークエンシング、miRNA BeadArray（Illumina）、Roche 454（FLX-Titanium）およびABI SOLiD）または様々なマイクロ流体技術を含む。追加の利用可能な技術の概説には、例として、Chen et al., BMC Genomics, 2009, 10:407；Kong et al., J Cell Physiol. 2009; 218:22-25を参照。好ましいタイプの技術の１つはＲＴ−ＰＣＲベースの技術である。なぜなら、かかる技術は、良好な感度および特異度を達成することを可能にするからである。
【０１５０】
いくつかの態様において、ｍｉＲＮＡは、定量に先立ち精製される。ｍｉＲＮＡは、商業的なキット（例としてmiRNeasyキット［Qiagen］、MirVana ＲＮＡ単離キット［Ambion/ABI］、miRACLE［Agilent］、High Pure miRNA単離キット［Roche］およびmiRNA Purificationキット［Norgen Biotek Corp.］、トリゾール抽出（下の例１を参照）、アニオン交換体上の濃縮および精製、ＲＮＡ結合物質に覆われた磁気ビーズ、または、相補オリゴヌクレオチド上のあるｍｉＲＮＡの吸着の使用を含む、様々な方法によって体液から単離および精製され得る。
いくつかの態様において、体液性サンプル中のおよび／またはｍｉＲＮＡ精製の間中の、ｍｉＲＮＡ分解は、低減または回避される。ｍｉＲＮＡ分解を低減または回避するのに有用な方法は、限定せずに、ＲＮアーゼ阻害剤（例としてRNasin Plus［Promega］、SUPERase-In［ABI］等々）を加えること、塩化グアニジン、グアニジンチオシアナート、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の使用またはこれらの組み合わせを含む。体液性サンプル中のｍｉＲＮＡ分解の低減は、ｍｉＲＮＡ定量に先立ちサンプル保管および輸送が必要とされるとき、特に重要である。
【０１５１】
精製の間中の所与のｍｉＲＮＡの可能な損失潜在的なＲＴ−ＰＣＲ阻害、サンプルの単離および処置の間中の死にかけの(dying)または損傷した血液または尿の細胞に由来するｍｉＲＮＡ混入物、腎臓のろ過における変動等々を説明するために、実験データのノーマライザーションの様々な追加の方法が採用され得る。例えば、以下の品質管理（ＱＣ）およびノーマライザーションの方法は本発明に使用され得る：
ａ）遍在性ｍｉＲＮＡが、対象のプラズマ中のそれらの濃度を、事前に確立された正常値と比較することによってＱＣ用に使用され得る。
ｂ）合成低分子ＲＮＡ（例として非ヒトのｍｉＲＮＡ）オリゴヌクレオチドが、精製の間中の損失用およびＲＴ−ＰＣＲ阻害用のコントロールとして（これらをＲＮＡ精製前の体液性サンプルへ加えることによって）合成および使用され得る。
ｃ）腎臓のろ過における変動（尿サンプルとともに働くとき）を説明するために、尿中のｍｉＲＮＡ濃度は、クレアチニンおよび／またはアルブミンレベルでノーマライズされ得る。
【０１５２】
本発明のキット
上の診断、モニタリングおよびスクリーニングの方法と併せて、本発明は、診断用ｍｉＲＮＡペアの検出に特異的な１以上のプライマーおよび／またはプローブの組を含む様々なキットを提供する。
本発明のキットの非限定例は、以下を含む：
１．ｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、パーキンソン病（ＰＤ）を検出するためのキットであって、前記ｍｉＲＮＡが以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１８１／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａおよびｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂからなる群から選択される。
【０１５３】
２．ｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）からパーキンソン病（ＰＤ）を区別するためのキットであって、前記ｍｉＲＮＡが以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４８７ｂ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−１３２；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１およびｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａからなる群から選択される。
【０１５４】
３．ｍｉＲＮＡの１以上のペアに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含む、アルツハイマー病（ＡＤ）からパーキンソン病（ＰＤ）を区別するためのキットであって、前記ｍｉＲＮＡが以下：ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−３３５、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−８７４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１３４、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−４８５−３ｐ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１３４、およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐ；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−９＊、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３４およびｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−１４６ｂからなる群から選択される。
【０１５５】
４．ｍｉＲＮＡのペアの１以上の組み合わせに特異的なプライマーおよび／またはプローブを含むキットであって、前記ｍｉＲＮＡが以下：
（ａ）ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３２３−３ｐおよびｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−９＊、
（ｂ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４８７ｂおよびｍｉＲ−９／ｍｉＲ−１４６ａ、ならびに、
（ｃ）ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−２１０およびｍｉＲ−１８１ａ／ｍｉＲ−１４６ｂ
からなる群から選択される。
【０１５６】
かかるキットは、ＱＣの検出に特異的なプライマーおよび／またはプローブの組ならびに追加のノーマライザーｍｉＲＮＡをさらに含み得る。
かかるキットは、患者から単離された体液性サンプル中の直接的なｍｉＲＮＡ検出に有用であり得るか、または、精製されたＲＮＡサンプルに使用され得る。
本発明のキットはまた、プライマー伸長および増幅反応用の試薬をも提供し得る。例えば、いくつかの態様において、このキットは、以下の構成要素：逆転写酵素、ＤＮＡポリメラーゼ酵素（例として熱安定性ＤＮＡポリメラーゼなどの）、ポリメラーゼ連鎖反応バッファー、逆転写酵素バッファーおよびデオキヌクレオシドトリホスファート（ｄＮＴＰｓ）のうち１以上をさらに含んでもよい。代わりに（または加えて）、キットは、ハイブリダイゼーションアッセイを実施するための試薬を含み得る。検出剤は、ヌクレオチド類似体および／または標識部分、例として、フルオロフォア（蛍光色素）または放射性同位体元素などの直接的に標識可能な部分、あるいは、ビオチンなどの結合ペアのメンバー、または、非水溶性の比色反応または発光反応を触媒することが可能な酵素などの間接的に標識可能な部分を含み得る。
【０１５７】
加えて、キットは、電気泳動された核酸の検出用の試薬を含有する少なくとも１つの容器をさらに含んでもよい。かかる試薬は、蛍光インターカーレート剤または銀染色試薬などの直接的に核酸を検出するもの、あるいは、限定されないがＥＣＬ試薬などの標識された核酸を検出することに向けられたそれらの試薬を含む。キットは、ｍｉＲＮＡの単離または精製の手段ならびに正および負のコントロールをさらに含み得る。キットはまた、診断用キットの製造、使用または販売を規制する政府機関によって指示された形式でそれらに関連する通知書をも含み得る。使用、保管およびトラブルシューティングのための詳細な説明書もまた、キットとともに提供されてもよい。キットはまた、任意に、ハイスループット設定におけるロボット操作に好ましくは有用である好適な筐体中に提供され得る。
【０１５８】
キットの構成要素は、乾燥粉末（単数または複数）として提供されてもよい。試薬および／または構成要素が乾燥粉末として提供されるとき、粉末は、好適な溶媒の添加によって再構成され得る。溶媒はまた、別の容器においても提供されてもよいことが想定される。容器は一般的に、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジおよび/または他の容器手段を含み、その中へ溶媒が入れられ、任意に等分される。キットはまた、滅菌された薬学的に許容し得るバッファーおよび／または他の溶媒を含有するための第２容器手段をも含んでもよい。
【０１５９】
１より多い構成要素がキット中にある場合、キットはまた一般的に、第２、第３または他の追加の容器をも含有してもよく、その中へ追加の構成要素が別個に入れられてもよい。しかしながら、構成要素の様々な組み合わせは、容器中に含まれてもよい。
かかるキットはまた、核酸分解に対して保護する試薬などの、ＤＮＡまたはＲＮＡの保存または維持する構成要素をも含んでもよい。かかる構成要素は、例えば、ヌクレアーゼまたはＲＮアーゼがないか、または、ＲＮアーゼに対して保護してもよい。本明細書に説明されている組成物または試薬のいずれも、キット中の構成要素であってもよい。
【０１６０】
例
本発明はまた、以下の例によっても説明され実証される。しかしながら、明細書のどこにでもあるこれらのおよび他の例の使用は例示に過ぎず、本発明のまたは例証されたあらゆる用語の範囲および意義を何ら限定するものではない。同様に、本発明は、ここに説明される特に好ましいあらゆる態様に限定されない。実際に、本発明の多くの改変および変動は、本明細書を読めば当業者に明らかであり、かかる変動は、精神または範囲において本発明から逸脱することなくなされ得る。したがって、本発明は、均等物の全範囲とともに添付のクレームの用語によってのみ限定されるべきものであって、前記均等物に対してそれらクレームが権利を与えられる。
【０１６１】
例１：試験用のｍｉＲＮＡの選択
本発明の方法は、異なる脳領域に富化されているｍｉＲＮＡの（分数の）分子および分母としての使用に基づき、前記使用は、試験の感度および特異度を有意に改善する。下の表１は、脳に富化されたｍｉＲＮＡ、シナプス、軸策、樹状突起および脊髄に富化されたｍｉＲＮＡ（「シナプスおよび／または神経突起のｍｉＲＮＡ」）ならびに異なる脳領域に富化されたｍｉＲＮＡのリストを提示する。
【表１】
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【０１６２】
神経炎症プロセスがＰＤ病因に関与するため、炎症プロセスに関連するいくつかのｍｉＲＮＡもまた試験した（ｍｉＲ−１４６ａ、ｂ、ｍｉＲ−１５５およびｍｉＲ−３１）。低酸素に関連するｍｉＲ−２１０もまた、脳に富化されたｍｉＲＮＡと組み合わせて分析し、筋肉に富化されているｍｉＲ−２０６を、ＰＤに特徴的な運動障害がプラズマ中のその濃度に影響を与えるか確認するために試験した。最終的に、遍在性のｍｉＲ−１６およびｍｉＲ−１９６ａは、実際的に脳に発現されておらず、潜在的な分母として試験した。
【０１６３】
試験されたｍｉＲＮＡを最初に、脳の区画におけるそれらの富化ならびに神経突起（すなわち軸策および／または樹状突起および／または脊髄）および／またはシナプスにおけるそれらの存在に関する文献データ（Hua et al. BMC Genomics. 2009; 10: 214；Liang et al. BMC Genomics. 2007; 8:166；Landgraf et al. Cell. 2007; 129: 1401-1414；Lee et al. RNA. 2008; 14: 35-42；Schratt et al. Nature. 2006; 439: 283-289；Lugli et al. J. Neurochem. 2008; 106: 650-661；Bicker and Schratt. J. Cell Mol. Med. 2008; 12: 1466-1476；Smalheiser and Lugli. Neuromolecular Med. 2009; 11: 133-140；Rajasethupathy. Neuron. 2009; 63: 714-716；Kye. RNA. 2007; 13: 1224-1234；Yu et al. Exp. Cell Res. 2008; 314: 2618-2633；Cougot et al. J. Neurosci. 2008; 28: 13793-13804；Kawahara. Brain Nerve. 2008; 60: 1437-1444；Schratt. Rev. Neurosci. 2009; 10: 842-849；Pichardo-Casas et al. Brain Research. 2012; 1436: 20-33）、ならびに、神経突起関連およびシナプス関連のプロセスへのそれらの示唆された関与に関する文献データ（The miR-Ontology Data Base: http://ferrolab.dmi.unict.it/miro/）に基づき選択した。
【０１６４】
ＰＤおよび他の神経変性疾患の発症における炎症プロセスの関与を示すデータが存在するため、いくつかの炎症に関連するｍｉＲＮＡならびに低酸素に関連するｍｉＲ−２１０もまた、事前に選択した。最終的に、本発明者らは、運動障害がＰＤの特徴であることから、筋肉細胞に富化されているｍｉＲ−２０６を、および、潜在的なノーマライザーとしていくつかの遍在性ｍｉＲＮＡを試験した。次いで、本発明者らは、どのｍｉＲＮＡがプラズマ中で検出可能であるか見出すために文献を分析した。本研究において３２種のｍｉＲＮＡを分析した（表２）。
【表２】
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【０１６５】
例２：定量分析
マン・ホイットニーＵ検定を、様々なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアによっていずれか２つの患者群の区別の有意性を評価するために使用した。ボンフェローニ補正を、有意なＰ値を推定するために適用した。全ての実験（同年齢のコントロール[ＡＭＣ]、ＭＣＩおよびＡＤからのＰＤの区別）において、３２種のｍｉＲＮを試験し、それ故にＰ値＜０．０００１（０．０５／４９６として計算した;４９６はここでは、検討されたｍｉＲＮＡペアの総数を示す）を有意とみなした。症例対照研究のための標準的な式（Eng J. Radiology. 2003; 227:309-313）を、統計的検出力０．９０を生成するために必要なサンプルサイズを推定するために適用した。
【０１６６】
例３：同年齢のコントロール（ＡＭＣ）からのＰＤ患者の区別
プラズマサンプルを、２０名のＰＤ患者および２０名のＡＭＣ（±２．５歳）から得た。脳に富化されたｍｉＲＮＡ、炎症に関連するｍｉＲＮＡ、筋肉に富化されたｍｉＲ−２０６およびいくつかの遍在性ｍｉＲＮＡの、プラズマ中の濃度を、個々のｍｉＲＮＡ各々について、プライマーおよびプローブを用いるＲＴ−ｑＰＣＲを使用して分析した（Life Technologies）。２５μＬのプラズマに相当するＲＮＡの量を各ＲＴ反応において取り、２μＬプラズマに相当するｍｉＲＮＡ（ｃＤＮＡ）の量を最終ＰＣＲへ取った。各ｍｉＲＮＡについて得られた結果を、潜在的ノーマライザーｍｉＲＮＡごとにノーマライズし、ABIプロトコル（２−ΔＣｔ）に従いｍｉＲＮＡの相対濃度（ＲＣ）へ変換し、同年齢のコントロール（ＡＭＣ）からのｍｉＲＮＡプロフィールと比較した。バイオマーカーペアを、上で説明されたとおりに選択した。両方のアプローチから同様の結果を得た。最良のｍｉＲＮＡペアについて、プラズマ濃度の相関、ＡＭＣからのＰＤ患者の区別のためのＰ値およびＡＵＣ（ＲＯＣ曲線下面積）を、表３および図１に提示する。
【表３】
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【０１６７】
結論：
１．中脳に富化されたｍｉＲＮＡ（例としてｌｅｔ−７ｅ）および前頭皮質に富化されたｍｉＲＮＡ（例としてｍｉＲ−１０７）、ＰＤにおいて悪くなっている脳領域に富化されたｍｉＲＮＡ、ならびに、神経突起およびシナプスにおいて存在するｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡペアにおける最良の（分数の）分子であり、ＡＭＣと比較して、ＰＤ患者からのｍｉＲＮＡ比が増加していることを実証する。本発明者らは、特定の脳領域におけるｍｉＲ−４９１−５ｐの富化に関する文献データにおいて同定することができなかったが、それは、ＰＤ対象およびＭＣＩ対象を識別する、ｍｉＲＮＡペアにおける極めて良好な（分数の）分子として振る舞う。
２．ＰＤに関与するかまたは損傷が有意に少ない脳領域からの脳に富化されたｍｉＲＮＡは、ＰＤとＡＭＣとを区別することが可能なｍｉＲＮＡペアにおける最も良好な分母の１つである（例として海馬に富化されているｍｉＲ−１３２およびｍｉＲ−３３５−５ｐ）。
３．炎症に関連するｍｉＲＮＡを２群に分類する。ｍｉＲ−１５５と、それほどまでの重要性はないが、ｍｉＲ−３１とを、良好な（分数の）分子とし、ｍｉＲ−１４６ａとｍｉＲ−１４６ｂとを、良好な分母とする。これは、それらがＰＤ発症において異なる役割を果たし、異なる細胞型に位置することを示す。
４．筋肉に富化されたｍｉＲ−２０６は、ＰＤ検出用の良好なマーカーではない。
【０１６８】
例４：ＰＤ患者とＭＣＩ患者との間の区別
実験のスキームは、上の例２において説明したのと同じものであったが、ＰＤ患者を、ＰＤとＭＣＩとを区別することが可能なバイオマーカーｍｉＲＮＡのペアを見出すために、ＭＣＩ患者と比較した。ＭＣＩは、ＡＤ、前頭側頭型認知症、血管性認知症、いくつかのケースのＰＤおよび他の神経変性疾患の、早期ステージに特徴的な、異質な症候群(heterogeneous syndrome)である。様々なｍｉＲＮＡペアの、ＰＤ患者とＭＣＩ患者とを区別する能力に関するデータを、図２および表４に提示する。提示された結果は、主として、ＡＭＣからＰＤを識別する同じｍｉＲＮＡペアが、ＭＣＩからＰＤを区別することを実証する。
【表４】
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【０１６９】
例５：ＰＤ患者とＡＤ患者との間の区別
重ねて、実験のスキームは、上の例２において説明したものと同じものであるが、ＰＤ患者をＡＤ患者と比較することで、これら２つの神経変性疾患を区別することが可能なバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを見出した。異なるｍｉＲＮＡペアの、ＰＤ患者とＡＤ患者とを区別する能力に関するデータを、図３および表５に提示する。提示された結果は重ねて、主として、ＡＭＣおよびＭＣＩからＰＤを識別する同じｍｉＲＮＡペアが、ＡＤからＰＤを区別することを実証する。興味深いことに、後者の２つのケース（ＡＤおよびＭＣＩからのＰＤの区別）において、低酸素に関連するｍｉＲ−２１０は良好な分母として振舞う。
【表５】
2016538851.tif 000007
【０１７０】
概要
ＰＤ検出ならびにＭＣＩおよびＡＤからの区別の感度および特異度は極めて高く、いくつかのペアについては１００％の精度に達する：
ＰＣ対ＡＭＣ
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−１８１ｂ／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１４６ａ
ＰＤ対ＭＣＩ
ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−１４６ａ；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−３３５；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−９＊；ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ｂ
ＰＤ対ＡＤ
ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−１４６ａ；ｍｉＲ−１０７／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−１２７／ｍｉＲ−３２３−３ｐ；ｌｅｔ−７ｅ／ｍｉＲ−４１１；ｍｉＲ−９９ｂ／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−１４６ａ；ｍｉＲ−４９１−５ｐ／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−１３２；ｍｉＲ−１５５／ｍｉＲ−３３５；ｍｉＲ−７４４／ｍｉＲ−３３５。
【０１７１】
より低い精度でＰＤを検出するかまたはそれを他の神経変性病変から区別する、いくつかのバイオマーカーｍｉＲＮＡペアを組み合わせることによってもまた、高い感度および特異度を実証することもまた重要である（図４）。表６は、バイオマーカーｍｉＲＮＡペアにおける（分数の）分子と分母との間の相関−相関が高くなるにつれ、２つの対象コホートを区別するためのＰ値が低くなる−の有意性を実証する典型的なデータを提示する。
【表６】
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【０１７２】
表７は、最も良好なバイオマーカーｍｉＲＮＡペア（Ｐ値＜２Ｅ−０４で、ＡＭＣ、ＭＣＩおよびＡＤからＰＤを区別することが可能な）における（分数の）分子および分母として使用されたｍｉＲＮＡのリストを提示する。
【表７】
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【０１７３】
本発明は、具体的な態様によって本明細書に説明された範囲に限定されるべきではない。実際、本発明の様々な改変は、本明細書に説明したものに加え、前述の説明から当業者に明らかになるであろう。かかる改変は、添付のクレームの範囲内に収まることが意図される。
本明細書に引用される全ての特許、出願、刊行物、試験方法、文献および他の材料はこれによって、あたかも本明細書中に物理的に存在するかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ−Ｂ】
2016538851.tif 000010
【図１Ｃ−Ｄ】
2016538851.tif 000011
【図１Ｅ−Ｆ】
2016538851.tif 000012
【図２Ａ−Ｂ】
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【図２Ｃ−Ｄ】
2016538851.tif 000014
【図２Ｅ−Ｆ】
2016538851.tif 000015
【図３Ａ−Ｂ】
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【図３Ｃ−Ｄ】
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【図３Ｅ−Ｆ】
2016538851.tif 000018
【図４Ａ−Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【国際調査報告】
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