(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は、式Ｉの化合物を提供する。Ａ−Ｌ−Ｂ［式中、Ａは、Ｚｎ2+イオンに対して選択的な親油性キレート部分を意味し；Ｌは、共有結合またはリンカーであり；Ｂは、ベクターであり、前記ベクターは、バクテリア（好ましくは、バクテリア細胞壁内で）内で見られる１以上の生物学的構造と相互作用可能な部分か、例えばペニシリン−結合タンパク質（例えば、メタロ−β−ラクタマーゼもしくはＤＤ−トランスフェラーゼ）、または、バクテリア細胞膜を渡って前記化合物の輸送を強化可能な部分である。］このような化合物は、ヒトまたは非ヒトの哺乳動物におけるバクテリア感染の治療および／または予防の方法において用途が見出される。そのような方法において、式Ｉの化合物は、（同時に、別々に、または連続してのいずれかで）β−ラクタム抗生物質と共に、投与されてもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉによる化合物。
【化５３】
2016538244.tif 000092
［式中、
Ａは、Ｚｎ2+イオンに対して選択的な親油性キレート部分を意味し；
Ｌは、共有結合またはリンカーであり；
Ｂは、ベクターであり、前記ベクターは、
バクテリア内（好ましくは、バクテリア細胞壁内で）で見られる１以上の生物学的構造（例えばペニシリン−結合タンパク質（例えば、メタロ−β−ラクタマーゼもしくはＤＤ−トランスフェラーゼ））と相互作用可能な部分か、または、
バクテリア細胞膜を渡って前記化合物の輸送を強化可能な部分のいずれかである。］
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、部分ＡについてＺｎ2+との解離定数Ｋdが、１０-5Ｍまたはそれ未満であり、好ましくは１０-7Ｍ未満であり、例えば、１０-9Ｍ未満である化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物であって、
Ａが、式ＩＩの分子部分である化合物。
（Ｃ）mＲc（ＲL）        （ＩＩ）
［式中、
ｍは、２〜１０の整数であり；
各基Ｃは、ルイス塩基特性を有し、亜鉛原子へ電子を供与可能な少なくとも１つのヘテロ原子を有する、同一または異なる官能基であり；
Ｒcは、５０以下の原子を含んでもよく、かつ、官能基ＲLを保持する前記基Ｃを連結するユニットであり；
ＲLは、ここに定義する構成Ａ−Ｌ−Ｂ中のリンカーＬへの共有結合である。］
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であり、各ヘテロ原子が、独立して、酸素原子、窒素原子、硫黄原子またはリン原子、好ましくは窒素原子または硫黄原子である化合物。
【請求項５】
先行する請求項のいずれか一つに記載の化合物であり、前記キレート部分Ａが、少なくとも１つの、好ましくは２以上の、任意に置換された、不飽和複素環、例えば、６−員の複素環（例えば、Ｎ、ＳおよびＯから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を好ましくは含む環）を含み；
任意のいずれかの置換基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミンおよび置換アミンから選択されてもよい、化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であり、前記キレート部分が、１以上の任意に置換されたヘテロアリール基、好ましくは２以上のヘテロアリール基（たとえば、各ヘテロアリール環が、少なくとも１つの窒素原子を前記環構造中に有するような基）を含む化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であり、前記キレート部分が、ピコリン酸およびその誘導体（例えば、ピコリルアミンから）から誘導され、好ましくは、前記キレート部分は、２以上の（例えば、２または４の）２−ピリジル−メチルユニットを含む化合物。
【請求項８】
請求項１または２に記載の化合物であり、
Ａが、式ＩＩＩの基を含む化合物。
【化５４】
2016538244.tif 000093
［式中、
Ｒ1〜Ｒ8は、水素、Ｃ1-6アルキル（好ましくは、Ｃ1-3アルキル、例えばメチル）、−ＯＲ’（式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ1-6アルキル、好ましくはＣ1-3ルキル、例えばメチルである）、−ＮＲ’’2（式中、各Ｒ’’は、独立して、ＨまたはＣ1-6アルキル、好ましくはＣ1-3アルキル、例えばメチルである）から独立して選択されるか、または、
Ｒ1〜Ｒ8から選択される隣接する２以上の対は、介在する環原子と共に、任意に置換された、炭素環もしくは複素環、好ましくは５もしくは６つの環原子を含む環、例えば、任意に置換されたアリール環もしくはヘテロアリール環（任意のいずれの置換基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミンおよび置換アミンから選択してもよい）を形成し；
ｎは、０または１〜４の整数、好ましくは０、１または２であり；
＊は、前記リンカーＬへの基Ａの結合位置を意味する。］
【請求項９】
請求項８に記載の化合物であり、式Ｉ中、Ｒ1〜Ｒ8の各々は、水素である化合物。
【請求項１０】
請求項８または９に記載の化合物であり、式Ｉにおいてｎが１である化合物。
【請求項１１】
請求項１または２に記載の化合物であり、Ａが、式ＩＶの基を含む化合物。
【化５５】
2016538244.tif 000094
［式中、
Ｓ1は、水素またはＣ1-6アルキル基を意味し；
Ｓ2は、水素、Ｃ1-6アルコキシ基またはヒドロキシ基を意味し；
Ｅは、ＣＨまたはＮであり；
＊は、前記リンカーＬへの基Ａの結合位置を意味する。］
【請求項１２】
先行する請求項のいずれかに記載の化合物であり、前記リンカーＬは、部分Ａへの結合位置と部分Ｂへの結合位置の間に５０以下の原子の鎖を含む有機基である化合物。
【請求項１３】
先行する請求項のいずれかに記載の化合物であり、リンカーＬは、Ｃ1-3アルキル、−Ｏ（Ｃ1-3）アルキルおよび−ＯＲ’（式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ1-6アルキル、好まし
くはＣ1-3アルキル、例えばメチルである）から選択された１以上の基で任意に置換されたアルキレン鎖（好ましくは、Ｃ1-6アルキレン）を含み；かつ、前記アルキレン鎖の１以上の−ＣＨ2−基（例えば、全ての−ＣＨ2−基）が、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ’’−（式中、各Ｒ’’は、独立してＨまたはＣ1-6アルキル、好ましくはＣ1-3アルキル、例えばメチルである）および任意に置換された炭素環または複素環（単環式環、２環式環、３環式環および縮合環を含む；任意の置換基のいずれも、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミンおよび置換アミンから選択されてもよい。）から独立に選択された基により置き換えられていてもよい。］
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物であり、前記リンカーは、任意に置換された、アリール環またはヘテロアリール環、好ましくは、任意に置換されたフェニル環またはトリアゾール環により、割り込まれる化合物。
【請求項１５】
先行する請求項のいずれか一つに記載の化合物であり、前記リンカーＬは、亜鉛原子にキレート可能な電子供与性原子を１以上含む、例えば基Ａの金属キレート能をサポート可能な原子１以上を含む化合物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物であり、前記電子供与性原子が、酸素原子または窒素原子であり、例えば、そのような原子は、リンカーの骨格または置換する環構造もしくは割り込む環構造の１以上の内部に備えられる化合物。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか一つに記載の化合物であり、前記リンカーは、  以下の構造の少なくとも１つから誘導される化合物。
（式中、＊は、部分Ａへのリンカーの結合位置を意味する。）
【化５６】
2016538244.tif 000095
【化５７】
2016538244.tif 000096
【化５８】
2016538244.tif 000097
［式中、前記リンカーは、前記リンカー構造の末端上のいずれの位置で、任意に基Ｂに結合されてもよく、前記末端は、環（単環式、２環式もしくは３環式または縮合のいずれでもよい）を含んでもよく、前記環上のいずれの位置からも結合位置が存在してもよい。］
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物であり、前記構造は、式ＩにおけるリンカーＬおよびベクターＢを構成する化合物。
【請求項１９】
請求項１〜１１のいずれか一つに記載の化合物であり、−Ｌ−Ｂは、以下の構造の一つを含む化合物。
（式中、＊は、部分ＡへのＬの結合位置を意味する。）
【化５９】
2016538244.tif 000098
【請求項２０】
請求項１〜１７のいずれか一つに記載の化合物であり、ベクターＢは、酵素基質、好ましくはメタロ−β−ラクタマーゼまたはＤＤ−トランスフェラーゼの基質である化合物。
【請求項２１】
請求項１〜１７および２０のいずれか一つに記載の化合物であり、ベクターＢは、１以上の以下の基：Ｌ−リジン、Ｌ−アラニン、Ｄ−グルタミン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン、メソ−ジアミノピメリン酸、Ｄ−２，３−ジアミノプロパン酸、Ｄ−アラニンもしくはＤ−配置を有する他のアミノ酸；または例えば構成を模倣する分子を含む構成である化合物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の化合物であり、ベクターＢが、Ｄ−配置を有するアミノ酸の組み合わせを含む構成（例えば、以下：Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン、メソ−ジアミノピメリン酸およびＤ−アラニンの１以上を含む構成）である化合物。
【請求項２３】
請求項１〜１７および２０〜２２のいずれか一つに記載の化合物であり、ベクターＢが、−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａもしくは−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−乳酸またはその誘導体もしくは模擬体である化合物。
【請求項２４】
請求項１〜１７および２０〜２３のいずれか一つに記載の化合物であり、ベクターＢが、抗菌剤もしくは抗菌剤の誘導体、抗生物質もしくは抗生物質の誘導体（例えば、β−ラクタム抗生物質）である化合物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の化合物であり、Ｂが、ペニシリン（例えば、アモキシシリン）、セファロスポリン、モノバクタム、カルバペネム、クラブラン酸、スルバクタムおよびダゾバクタム  モノバクタム（例えば、アズトレオナム）、イミペネム、チオプロピオニルアミノ酸誘導体、チオエステル、コハク酸誘導体およびマレイン酸誘導体からなる群から選択される化合物。
【請求項２６】
請求項２５に記載の化合物であり、前記β−ラクタムが、ペニシリン、例えばアモキシシリン、ｐｉｖ−アモキシシリン、アンピシリン、ｐｉｖ−アンピシリンまたはクラブラン酸である化合物。
【請求項２７】
請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物であり、ベクターＢが、ペニシリン−結合タンパク質（ＰＢＰｓ）（例えば、ＭＢＬｓ、セリン  βラクタマーゼ−様タンパク質（ＬＡＣＴＢ）、Ｄ，Ｄ−トランスフェラーゼ、Ｄ−Ａｌａ（Ｄ，Ｄ）−カルボキシペプチダーゼならびにＤ−アラニル−Ｄ−アラニンジペプチダーゼＶａｎＡ、ＶａｎＸ、およびＶａｎＹからなる群から選択されるＰＢＰ）に対して親和性を有するβ−ラクタムを含む化合物。
【請求項２８】
請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物であり、ベクターBが、マクロライドまたはマクロライド誘導体（例えば、クロラムフェニコールまたはその誘導体）である化合物。
【請求項２９】
式ＩＩの請求項１に記載の化合物、または医薬的に許容されるその塩。
【化６０】
2016538244.tif 000099
［式中、
ｐは、０〜４の整数、好ましくは１、２または３、例えば１または２であり；
各Ｘは、Ｃ1-3アルキル（例えば、メチル）、Ｃ1-3アルコキシ（例えば、メトキシ）、−ＮＯ2、ハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、およびＣ1-3ハロアルキル（例えば、ＣＦ3）から独立して選択されるか、または、
介在する環原子と共に隣接する２つのＸ基は、任意に置換された炭素環または複素環（例えば、任意に置換されたフェニルまたはベンゾフラニル環）を形成する。］
【請求項３０】
式ＩＩＩの請求項１に記載の化合物、または医薬的に許容されるその塩。
【化６１】
2016538244.tif 000100
［式中、
Ｂは、請求項１８〜２６のいずれかにおいて定義したベクター、好ましくは１以上の以下の基：Ｌ−リジン、Ｌ−アラニン、Ｄ−グルタミン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン、メソ−ジアミノピメリン酸、Ｄ−２，３−ジアミノプロパン酸、Ｄ−アラニンもしくはＤ−配置を有する他のアミノ酸を含む構成、またはそのような構成体を模擬する分子である。］
【請求項３１】
以下の化合物から選択される、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
【化６２】
2016538244.tif 000101
【化６３】
2016538244.tif 000102
【化６４】
2016538244.tif 000103
【化６５】
2016538244.tif 000104
【化６６】
2016538244.tif 000105
【化６７】
2016538244.tif 000106
【化６８】
2016538244.tif 000107
【請求項３２】
先行する請求項のいずれかに記載の化合物であり、メタロ−β−ラクタマーゼでの半数阻害濃度ＩＣ50または半数効果濃度ＥＣ50が、１００μＭ未満、好ましくは１０μＭ未満、例えば１μＭ未満である化合物。
【請求項３３】
１以上の医薬的に許容される担体または賦形剤と共に請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項３４】
ヒトまたは非ヒトの哺乳動物におけるバクテリア感染を治療および／または予防する方法において用いるための、請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物または請求項３３に記載の医薬組成物であって、
前記方法が、前記化合物または前記組成物を、（同時に、別々に、または連続してのいずれかで）β−ラクタム抗生物質と組み合わせて投与することを含む化合物または医薬組成物。
【請求項３５】
ヒトまたは非ヒトの哺乳動物におけるバクテリア感染の治療および／または予防の方法であり、
前記方法は、前記哺乳動物へ、有効量の請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物または請求項３３に記載の組成物と、（同時に、別々に、または連続してのいずれかで）β−ラクタム抗生物質とを組み合わせて、投与する工程を含む方法。
【請求項３６】
ヒトまたは非ヒトの哺乳動物におけるバクテリア感染の治療および／または予防の方法において用いられる薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物の使用であって、
前記方法は、前記薬剤と、（同時に、別々に、または連続してのいずれかで）β−ラクタム抗生物質とを組み合わせて投与する工程を含む使用。
【請求項３７】
請求項３４〜３６のいずれかに記載の使用のための化合物、方法または使用であって、
前記感染が、１以上の抗生物質（例えば、β−ラクタム抗生物質）に耐性であるグラム陽性菌またはグラム陰性菌（好ましくはグラム陰性菌）と関連があり、
好ましくは前記菌が、メタロ−β−ラクタマーゼを含む化合物、方法または使用。
【請求項３８】
請求項３７に記載の使用のための化合物、方法または使用であって、
前記グラム陰性菌は、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosam)、アシネトバクターおよび腸内細菌を含む化合物、方法または使用。
【請求項３９】
請求項３４〜３６のいずれかひとつに記載の使用のための化合物、方法、または使用であり、
前記化合物およびβ-ラクタム抗生物質は、同じ製剤中に備えられる化合物、方法または使用。
【請求項４０】
請求項３４〜３６のいずれかひとつに記載の使用のための化合物、方法、または使用であり、
前記化合物およびβ−ラクタム抗生物質は、異なる製剤中に備えられる化合物、方法または使用。
【請求項４１】
β−ラクタム抗生物質と共に、請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物を含む製剤処方。
【請求項４２】
（ｉ）  請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物または、請求項３３に記載の医薬組成物を含む第１の容器および、
（ｉｉ）  β−ラクタム抗生物質を含む第２の容器
を含むキット。
【請求項４３】
β−ラクタム抗生物質と請求項１〜３２のいずれかに記載の化合物または、請求項３３に記載の医薬組成物とを含むキット。
【請求項４４】
請求項３４〜４３のいずれかに記載の、使用のための化合物、方法、使用、製剤処方またはキットであり、
前記β−ラクタム抗生物質は、以下：ペナム、セフェム、モノバクタム、ペネム、カルバペネムおよびクラバムから（好ましくはペナム、セファムおよびカルバペネムから）選択される化合物、方法、使用、製剤処方またはキット。
【請求項４５】
請求項４４に記載の、使用のための化合物、方法、使用、製剤処方またはキットであり、
前記β−ラクタム抗生物質は、ペニシリンＧ、メチシリン、セファロスポリン（例えば、セファロリジンまたはニトロセフィン）、セファマイシン、アズトレオナム、ファロペネム、イミペネムまたはクラブラン酸である使用のための化合物、方法、使用、製剤処方またはキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、亜鉛キレート化合物を含むメタロ−β−ラクタマーゼ（ＭＢＬ）の阻害剤、ＭＢＬを生産する抵抗性菌に対するβ−ラクタム抗生物質の効果を向上させるための、それらの使用に関する。その阻害剤は、バクテリア生物における構造物へ親和性を有する分子部分へ供給結合している亜鉛キレート剤を含み、宿主生物におけるバクテリア感染の治療のためのβ−ラクタム  抗生物質と組み合わせて用いることができる。その宿主生物は、標的生物による望ましくない侵入または感染を有する、生きている生物である。従って、好ましくは、それは、真核細胞を有する生物、より好ましくは温血動物、例えば、哺乳動物を含むものであるが、その宿主生物は、生きている生物であってもよい。標的生物は、原核生物であってもよく、好ましくはバクテリアであってもよい。
【背景技術】
【０００２】
感染性疾患は、世界中における死因のトップであり、１千３百万人以上が毎年死亡し、５歳未満の全幼児死亡率の２分の３の原因である。有効な治療を欠く、新しくかつ、再登場した感染性疾患に関して、深刻な心配が存在する(World Health Organization reports 1999, 2012 および 2014)。抗菌抵抗性は、段階的に高まり、非常に広い範囲のヒト疾患（結核菌、コレラ、マラリアおよびＡＩＤＳを含む）に影響を与える。特に心配なのは、通常の構成物質に対し多剤耐性を進行させるヒト病原体の数であり、耐性の重荷は、例えば、子宮頚癌のそれを超えているであろうと見積もられている（de Kraker MEAら、PLoS Med. 2011; e1001104)。現在の抗生物質の新しい、より強力な誘導体の導入は、一時的な解決策のみを生じる。というのも、存在する耐性メカニズムが、すばやく新しい誘導体に適応するよう、順応されるからである(Theuretzbacher U. Curr. Opin. Pharmacol. 2011:11:433-438)。耐性グラム陽性菌は、著しい脅威を示しているものの、通常のグラム陰性病原体（例えば、大腸菌）の多剤耐性（ＭＤＲ）菌株の発生は、特別な関心事である。汎薬剤耐性または著しい薬剤耐性は、現在、事実上全ての抗生物質に耐性な、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、アシネトバクター（Acinetobacter baumannii）および腸内細菌科の臨床的に重要な分離株を説明するのに通常、用いられる(Patel et al,  Front. Microbiol. 2013:4:48)。残念なことに、存在するならば、この重要な必要性に対処するフェーズＩ臨床試験にあるか、または、臨床試験に突入しようとしている、グラム陰性菌に対して有効な抗菌剤がわずかしか、存在しない。(Butler MS.ら、J. antibiotics 2013:66:571-591)。
【０００３】
おそらく、分布および臨床的関連性の観点で最も重要な抗生物質耐性メカニズムは、β-ラクタマーゼである(Bush K.ら、 Annu. Rev. Microbiol. 2011:65:455-478)。β−ラクタマーゼは、β−ラクタム抗生物質を加水分解する酵素であり、β−ラクタムの効果を損ない、７０年以上に渡って抗菌化学療法の最も大きな群であり、主力であった。明らかに、これらの基質活性を回復される、これらの酵素に対して向う阻害剤に対して必要性がある−安価で、非毒性で、通常、有効な抗生物質。セリンβラクタマーゼ阻害剤（クラブラン酸、スルバクタムおよびダゾバクタム）は、β−ラクタム抗生物質の治療寿命を延長するのに驚異的な成功を収め、世界中で、臨床的微生物学研究所において診断手段としても用いられる。対照的に、入手可能なメタロ−β−ラクタマーゼについて臨床的阻害剤は存在しない(MBLs; Drawzら、 Antimicrob. Agents Chemother. 2014:58:1835-1846)。後者は、現在、地球規模の普及を示す、β−ラクタマーゼの臨床的に最も重要なファミリーの一つになっている。
【０００４】
ＭＢＬｓは、菌中でのみ見られる大きな群のタンパク質に属し、様ペニシリン−結合タンパク質（ＰＢＰｓ）は、β−ラクタムと相互作用する能力を有する。ＰＢＰｓとβ−ラクタムに結合する酵素の例は、Sauvage E.らによりFEMS Microbiol Rev 32 (2008):234−258中で、論評されているように、ＭＢＬｓ、セリンβ−ラクタマーゼ−様タンパク質（ＬＡＣＴＢ）、Ｄ，Ｄ−トランスフェラーゼ、Ｄ−Ａｌａ（Ｄ，Ｄ）−カルボキシペプチダーゼ、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンジペプチダーゼ  ＶａｎＡ、ＶａｎＸ、ＶａｎＹ等である。このクラスのタンパク質は、バクテリア生物中でのみ、見られる。PBPsに対して親和性を有する化合物の例は、β-ラクタム抗生物質である。β-ラクタムは、ペニシリン、セファロスポリン、モノバクタムおよびカルバペネムを含む、抗バクテリア化学療法おける歴史的なアンカーであった(Bush K. et al, Annu. Rev. Microbiol. 2011:65:455-478)。β−ラクタム抗生物質の作用メカニズムは、これらが、菌がバクテリア壁中でペプチドグリカンを架橋するのに用いる小さなジペプチドＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａを模擬し、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａを基質として用いる酵素を共有結合的に破壊することである。β−ラクタマーゼは、最も一般化し、かつ臨床的に重要な、加水分解によりβ−ラクタムを不活性化する耐性メカニズムである。これらは、配列基準に従い分類され（Ａｍｂｌｅｒ  クラスＡ、Ｂ、ＣおよびＤ）、構造的に２つの大きなファミリー；セリンβ−ラクタマーゼ（クラスＡ、ＣおよびＤ）およびＭＢＬｓ（クラスＢ）にグループ分けされる。セリンβ−ラクタマーゼとは対照的に、活性部位におけるセリン部分により特徴づけられ、ＭＢＬｓは、２価のカチオン、通常亜鉛を、酵素活性の金属補助因子として必要とする(Palzkill T. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2013:91-404)。ＭＢＬｓは、以下の理由から、最も臨床的に重要なファミリーのβ−ラクタマーゼの一つとして登場してきた(Patelら、 Front. Microbiol. 2013:4:48; Walshら、 Int. J. Antimicrob. Agents 2010:S8-S14)。
【０００５】
（ｉ）獲得したＭＢＬ遺伝子は、遺伝子クラスター（ＩＳおよびＩＳＣＲ単位と関連）として他の耐性遺伝子をしばしば運ぶ、移動性遺伝子成分および／または多剤耐性分離株を生じるインテグロンアレイと関連する。世界中の多くの部分において、そのような成分は、今や、臨床的に重要な病原体（例えば、緑膿菌（P. aeruginosa）、A. baumanniiおよび幾つかの腸内細菌科 geni.）においても、通常、見られる。従って、これらの高度に移動性な耐性遺伝子クラスターの適用性と普及は、現在の治療制度を著しく危うくする。
【０００６】
（ｉｉ）ＭＢＬｓの加水分解スペクトルは、全てのβ−ラクタマーゼの最も広いものの一つであり、モノバクタム（アズトレオナム）を除いて、ほとんどすべてのβ−ラクタムを含む。従って、ＭＢＬｓを有する臨床的分離株は、モノバクタムを除いて全てのβ−ラクタム抗生物質に対して常に耐性である。しかし、事実上全てのＭＢＬ陽性菌が、アズトレオナムを加水分解可能な更なるβ−ラクタマーゼを有しており、従って、この治療は勧められない。
【０００７】
臨床的に最も重要なＭＢＬｓ、ＩＭＰ−、ＶＩＭ−およびＮＤＭ−群は、いまや、様々な  グラム陰性種中に広がっている。特に、ＶＩＭ−およびＮＤＭ−酵素は、主要なＭＢＬｓとして、登場してきた。ＮＤＭの前例のない地球規模の普及により、この問題の甚大さが強調された。２００８年に最初に報告されて以来、ＮＤＭは、オーストラリア、アフリカ、北アメリカ、アジアおよび多くの欧州の国において、同定されてきた(Johnson AP.ら、 J. Med. Microbiol. 2013:62:499-513)。厄介なことに、ＮＤＭは、多くのグラム陰性種および環境において、確認されている(Walsh TR. ら, Lancet Infect. Dis. 2011:11:355-362)。
【０００８】
クラスＡセリンβ−ラクタマーゼの成功した阻害剤は、臨床的に入手可能であり、しかし、ＭＢＬｓに対して阻害活性を欠く(Drawz SM. ら、 Clin. Microbiol. Rev. 2010:23:160-201)。典型的なオウグメンチン（クラブラン酸−セリンβ−ラクタマーゼの自殺基質−およびアモキシシリン）の市販の成功に触発されて、幾つかの研究グループが、阻害剤を開発するのに同様のアプローチに集中したが、複数のＭＢＬ標的に対する活性を有する活性を組み合わせた分子は、臨床試験に到達していない(Drawz SM.ら、 Antimicrob. Agents Chemother. 2014)。３つの最も驚異的なＭＢＬｓ−ＩＭＰ、ＮＤＭおよびＶＩＭ群−について、最も強い阻害剤はＩＭＰ−１と報告されており、一方、ＶＩＭ−２およびＮＤＭに対する阻害剤は見つかっていない。ＮＤＭについては、真菌性天然生成物、アスペルギロマラスミンＡが、ＭＢＬ阻害剤として同定されており、マウスも出るにおいて生体内活性を示している(King AM. ら、 Nature 2014:510:503-506)。しかしながら、相対的に多い用量のアスペルギロマラスミンＡは、カルバペネム耐性を逆転させる必要がある。他の治療選択肢(Martinez, Future Med. Chem. 2012)には、モノバクタムを組み込むトリ−β−ラクタム療法の使用を含む；しかし、ＭＩＣｓは、強い印象を与えず、バクテリア接種物により、その生体内活性は、著しく損なわれた(Page ら、Antimicrob. Agents Chemother 2011)。
【０００９】
従って、ＭＢＬ阻害剤に対する強力な臨床的要求は存在しない。ＩＭＰ−１の強力な阻害剤の大半は、チオール−カルボキシレートまたはジカルボキシレート薬理作用団を含み、一方、ＶＩＭ−２阻害剤の中で、チオカルボキシレートは、最も主要である。ＩＭＰ−１およびＶＩＭ−２を同時に標的にする唯一の阻害剤は、これらの構造的モチーフの中で見つけられた。しかし、マレイン酸誘導体は、広い阻害スペクトルを欠き、すなわち、臨床的に重要なＶＩＭおよびＮＤＭ−群酵素に対して低い阻害を示すことが、近年、調べられた。それにかかわらず、幾つかの構造的に非常に異なる阻害剤が、ＩＭＰ−１を好んで、選択的にＶＩＭ−２を標的としていることが報告されている(Weideら、 Med. Chem. Lett. 2010)。広範囲にわたる全細胞アッセイにおける、阻害剤の効果を測定する研究は少なく、動物モデルにおける生体内効果を測定する研究は、さらに少ない。大部分の阻害剤は、酵素的に結合した亜鉛イオンと錯体を形成するチオールまたはカルボキシレート基のような単座亜鉛−結合基にひどく依存している。興味深いことに、ヒドロキサメートのような他の亜鉛−含有メタロタンパク質の阻害剤のデザインにおいて、うまく適用された典型的な二座亜鉛−結合基は、１つの例外を除いて、報告されていない。入手可能な構造の比較によれば、全ての阻害剤は、二核亜鉛ＭＢＬｓにおいて橋掛け水酸基をヘテロ原子（例えば、ＳまたはＯ）により置換していることが判明した。
【００１０】
臨床的に重要な菌は、先行技術においてよく知られている。例えば、Wikipedia http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_clinically_important_bacteria参照。特に、緑膿菌は、著しい多剤耐性のため、深刻な問題を引き起こす。いわゆるスカベンジャー（例えば、通常、β−ラクタマーゼ阻害剤として用いられるスルバクタム、クラブラン酸およびダゾバクタム）は、活性中心にセリンを有するセリン−β−ラクタマーゼに大して効果があり、しかし、これらの薬は、ＭＢＬｓに対しては阻害効果を示さないか、効果が低い。従って、新しいＭＢＬ阻害剤への要求は、どんどん重要になった。重要なβ−ラクタム抗生物質は、ペニシリン、セファロスポリン（cephlosporin）およびカルバペネムのクラスである。多くの化合物が、ＭＢＬ阻害活性を有すると報告されている。ＷＯ９８／１１７６３９、ＷＯ９７／３００２７、ＷＯ９８／４００５６、ＷＯ９８／３９３１１およびＷＯ９７／１１０２２５において、β−チオプロピオニルアミノ酸誘導体のクラスが、ＭＢＬｓに対する阻害剤として説明されている。ＭＢＬ阻害剤として作用しうる他の化合物クラスは、チオエステル(BioI. Pharm. Bull. 1997, 20, 1136; FEMS Microbiology Letters 1997, 157, 171; Antimicrob. Agents Chemother. 1997, 41, 135; Chem. Commun. 1998, 1609; Biochem. 1.1998, 331, 703; ＷＯ００／０７６９６２）およびコハク酸誘導体（ＷＯ０１／０３０ｌ４８およびＷＯ０１／０３０１４９）である。
【００１１】
ウイルスまたは菌に対する金属キレートの使用は、先行技術、例えば、ＷＯ２０１１／６３３９４、ＷＯ２００４／７１４２５、ＷＯ２００６／１０９０６９、ＷＯ２００１／６０３４９、ＵＳ６，４１０，５７０、ＵＳ２００３／０２２５１５５、ＷＯ２００６／４３１５３およびＷＯ２００６／４３１５３において、詳細に説明されている。当業者であれば、先行技術において説明された様々な物質、金属イオンをキレート可能な物質を理解し、異なる目的のために適切なキレートを選択するであろう。例としては、
様々なアミノ基とヒドロキシル基を含むキレート、例えば、１，１０−フェナントロリン、クリオキノール、ｌ，２−ジメチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（ＤＭＨＰ）、１，２−ジエチル−３−ヒドロキシ−４−ピリジノン（ＤＥＨＰ）、デフェラシロクス；
様々なアミノ基、ヒドロキシ基およびカルボン酸基を含むキレート、例えば、エチレンジアミンｔｅｔｒａ−酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ'−ジ酢酸−Ｎ，Ｎ'−ジ−Ｂ−プロピオン酸（ＥＤＰＡ）、ジエチレントリアミン  ペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、ｔｒａｎｓ−１，２−シクロヘキサン−ジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラ酢酸
（ＣｙＤＴＡ）、カルノシン、ジヒドロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、ｌ，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラ酢酸（ＤＴＰＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ'−ジ酢酸（ＥＤＤＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ'−ジプロピオン酸（ＥＤＤＰ）、Ｎ−ヒドロキシ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−トリ酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、Ｎ，Ｎ'ビス（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ'−ジ酢酸（ＨＢＥＤ）、ヘキサメチレン−１，６−ジアミンテトラ酢酸（ＨＤＴＡ）、ヒドロキシエチルイミノジ酢酸（ＨＩＤＡ）、イミノジ酢酸（ＩＤＡ）、メチル−ＥＤＴＡ、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ニトリロトリプロピオン酸（ＮＴＰ）、トリエチレンテトラアミンヘキサ酢酸（ＴＴＨＡ）、エチレンジアミン−ジ（Ｏ−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、エチレングリコール  ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）、ｔｒａｎｓ−１，２−シクロヘキサンジアミンテトラ酢酸（ＣＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）  エチレンジニトリロ三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノジ酢酸（ＨＥＩＤＡ）、クエン酸、７，１９，３０−トリオキサ−ｌ，４，１０，１３，１６，２２，２７，３３−オクタアザビシクロ［１１，１１，１１］ペンタトリアコンタン（Ｏ−Ｂｉｓｔｒｅｎ）、ペニシラミン；
硫黄またはリンを含むキレート、例えば、ジエチルジチオカルバメート（ＤＥＤＴＣ）、２，３−ジメルカプト−ｌ−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、エチルマルトール（ＥＭ）、４−（６−メトキシ−８−キナルジニル−アミノスルホニル）安息香酸カリウム塩（ＴＦＬＺｎ）、ジチオゾン、Ｎ−（６−メトキシ−８−キノリル）−パラ−トルエンスルホンアミド（ＴＳＱ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ'−ビス（メチルホスホン）酸（ＥＤＤＰＯ）、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン）酸（ＥＤＴＰＯ）、ニトリロトリメチレンホルホン酸（ＮＴＰＯ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、デフェロキサミン、ジメルカプロール、ジメルカプトコハク酸およびエチドロン酸。しかしながら、これらのキレートは、異なる金属イオン間を区別する能力が比較的低い、非選択的なキレート剤として、先行技術、例えば、Smith, R. M.; Martell, A. E. NIST Critically Selected Stability Constants of Metal Complexes, Version 2.0; U.S. Department of Commerce: Gaithersburg, MD, 1995において公知である。従って、これらは、亜鉛、鉄、銅、ニッケル、コバルト、マンガンのような必須な金属イオン、および自然界（例えば、菌および哺乳動物において、）において、大部分の酵素において必須な他のイオンと結合する能力を同時に有してもよい。宿主生物におけるターゲット生物により特定の感染を治療する際、例えば、治療のためのターゲットではない宿主生物や他の種への毒性効果が低い一方、特定の微生物のみへ作用させるのが望ましい場合、この選択性の欠如により、望ましくない毒性や、他の生物学的効果を生じるかもしれない。
【００１２】
バクテリア細胞の通常の人生に必須な重要な要素は、亜鉛のホメオスタシスである。亜鉛は、ヒト身体において、二番目に豊富な遷移金属であり、６０００を超える酵素およびタンパク質の触媒機能および構造的安定性に対して役割をになっている(Bertiniら、 Journal of Inorganic Biochemistry 111 (2012) 150-156)。細胞における自由に入手可能な亜鉛の操作は、非常に広い範囲の疾患および症状に影響を与えることが示されている(Queら、 J. Chem. Rev. (Washington, DC, U. S.) 2008, 108, 1517-1549; Petersonら、 Mol. Biol. 2009, 388, 144-158; BarKalifaら、 Eur. J. Pharmacol. 2009, 618, 15-2; Maret ら、 Mol. Med. 2007, 13, 371-375）。遊離亜鉛の濃度は、亜鉛緩衝能力に応じて、生物細胞中で異なる。ＰＣ１２、ＨｅＬａおよびＨＴ−２９細胞ラインならびに試験管中の心臓筋細胞および神経単位の一次培養物において、遊離亜鉛の濃度は、約５ｎＭであると決定されている(Bozymら、 Exp. Biol. Med. 2010, 235, 741-750)。亜鉛は、柔らかい金属であり、自然においては、Ｚｎ酸化状態＋２で、サルフェライト（salpherite）または亜硫酸亜鉛として、見出される(Emsley, J. ’’zinc’’. Nature's Building Blocks: An A-Z Guide to the Elements.; Oxford University Press: New York, 2001)。亜鉛を選択的に、かつ高度に効果的にキレートするためには、柔らかい塩基性リガンドの使用が必要である。親油性亜鉛キレート、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）は、その亜鉛キレート特性および親油性特性のため、細胞膜透過特性を可能にし、多くの興味深い生物学的活性を示すと報告されている（Donadelliら、 J. Cell. Biochem. 2008: 104, 202-212）。ＴＰＥＮ分子において、亜鉛−結合能は、ピコリルアミン  ユニットの２以上のユニットの結合をベースにする（スキーム１参照）。
【００１３】
【化１】
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【００１４】
他の技術は、硫黄ベースのリガンドを用い、また、他の内因性金属イオンと比較して、亜鉛への高い選択性を生じる(Zhangら、 Tetrahedron 2013, 69, 15−21)。菌における亜鉛感知は、ＳｍｔＢ／ＡｒｓＲ、ＭｅｒＲ、ＴｅｔＲ、ＭａｒＲおよびＦｕｒファミリーを含む異なるファミリーの調節因子により、行われる(Napolitanoら、Journal of Bacteriology 2012, p. 2426-2436)。MBLｓのX-線構造は、活性部位において亜鉛イオンがしっかりと結合していることを示し、しばしば、その構造は、触媒部位における２つのZn原子、１つはしっかりと、もう１つはゆるく結合していることを示している(Palzkill T. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2013:91-404)。サブクラスＢ１は、最も大きなＭＢＬファミリーであり、ＩＭＰｓ、ＶＩＭｓおよびＮＤＭｓのような大部分の酵素を含む。Ｂｌ酵素は、保護されたＺｎ（ＩＩ）結合モチーフを特徴とし、Ｂｌ酵素の活性部位には、２つのＺｎ２＋が存在し、Ｚｎｌは３つのＨｉｓ残基により結合し、Ｚｎ２は１つのＨｉｓ、１つのＣｙｓおよび１つのＡｓｐにより結合する。さらに、その２つのZnイオンの間には、橋状の水またはヒドロキシリガンドが存在し、これは、基質（例えば、β−ラクタム抗生物質）を加水分解する求核試薬と考えられている。その亜鉛イオンは、酵素を活性にするのに必須である。ある実施形態において、そのＭＢＬ阻害剤は、中央金属イオンに協力に相互作用可能な、Ｚｎ（ＩＩ）結合基を有します。先行技術、例えば、ＷＯ２００６／１１７６６０、ＷＯ２００１／６０３４９またはＵＳ  ６，４１０，５７０において、亜鉛キレートは、多くの疾患の同時阻害剤として説明されています。亜鉛キレートは、例えば、ＷＯ２００９／１４０２１５において、抗菌剤としても示唆されており、例えば、ＷＯ２０１１／６３３９４およびＷＯ２００９／１５５０８８において、生物膜形成の阻害剤としても示唆されており、または、例えば、ＷＯ２００４／７１４２５およびＷＯ２００６／４３１５３において、抗ウィルス剤としても示唆されている。耐性メカニズムに関与している、魅力的なバクテリア亜鉛-依存性ターゲットは、先行技術において、亜鉛キレート剤により阻害されることが知られている。３つの例が、バクテリア亜鉛取り込みシステムZur(Ellisonら、PLOS ONE 8 (2013), e75389)、生体膜(Conrady ら、 PNAS (2008) 105 (49), 19456-19461)およびＭＲＳＡにおけるペプチダーゼＨｍｒＡをしっかりと調節する。これらのターゲット全ては、ＴＰＥＮ、ＥＤＴＡまたはフェナントロリンのようなａｒｔ亜鉛キレートの状態により、阻害される。しかし、これらの剤は、バクテリア生物に対して特別な親和性を有さず、また、哺乳動物に対して毒性である。極めて重要な亜鉛-依存性組織の別の例は、外向きポンプのバクテリア使用であり(Nikaidoら、 FEMS Microbiology Reviews 36 (2012) 340-363)、ほとんど全ての近年の抗生物質は、基質として適合されており、これらをバクテリア細胞から排泄する。さらに別の例は、亜鉛−依存性デアセチラーゼＬｐｘＣである(Liang ら、 J. Med. Chem. 2013, 56, 6954-6966)。別の例は、高度に亜鉛-依存性なバクテリアリボソーム機能である(Grahamら、J. Biol. Chem. 284 (2009) pp. 18377-18389)。後者は、７０ｓのリボソームユニットに対して、8つの亜鉛原子を用いる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】World Health Organization reports 1999, 2012 および 2014
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
しかしながら、これらの説明において、標的種において、宿主生物が、例えば毒性に関する問題を避けるの十分低いレベルで影響をうけつつ、亜鉛キレート治療の選択的効果をどのようにして得るのか、案内は無い。従って、宿主生物において低い毒性を有し、一方、標的有機体に対しては選択的効果を有する、亜鉛キレート剤に対する医薬的要求があった。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
ここに、合成した新規化合物のライブラリーにおいて、リード候補阻害剤が、抵抗性バクテリア菌株収容ＭＢＬｓに影響を与えることを、驚くべきことに見出した。そのリード化合物は、最も重要なＭＢＬｓの幾つかを収容する最も臨床的に関連があるバクテリア菌株の幾つかに対してナノモル範囲でＥＣ50値を示す。そのリード候補は、構成において、先行技術において既に説明されていない、３つの大事な構造的要素を含む（スキーム２参照）。
【００１８】
【化２】
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【００１９】
部分Ａは、親油性、選択的なＺｎ（ＩＩ）キレート基である。用語「キレート」は、少なくとも２つの接触点を経て対象を結合するカニの爪意味するギリシャ語の「ｃｈｅｌｏｓ」に関連する。従って、化学におけるキレート剤は、分子部分：
（Ｃ）ｍＲｃ（ＲＬ）        （ＩＩ）
として、定義してもよい。
【００２０】
［式中、ｍは、２〜１０の整数であり；
各基Cは、ルイス塩基特性を有し、かつ、ルイス酸、M（本発明においては、亜鉛原子である）に電子を供与可能なN、S、OまたはPから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を有し、同一または異なっていてもよい官能基であり；
Ｒcは、５０以下の原子を有してもよく、官能基ＲLを有する基Ｃを連結するユニットであり；
ＲLは、ここに定義する構成Ａ−Ｌ−ＢにおけるリンカーＬへの共有結合連結基を含む。］
【００２１】
部分Ｌは、ＡおよびＢに共有結合連結するリンカーまたは結合である。前記リンカーＬは、Ｚｎ（ＩＩ）キレート基をサポートするリガンド基を任意に有してもよい。
【００２２】
部分Ｂは、菌中に見られる生物学的存在と相互作用する基であってもよく、例えば、ＭＢＬｓ、ＤＤ−トランスフェラーゼまたはヒト生物に見られず、そのため、ヒトに対して毒性が低いか、または、バクテリア膜を通って輸送を促進してもよい、他の酵素に対して特異的であってもよい。
【００２３】
より詳細には、Ｂは、菌のような原核細胞または、ウイルスもしくは寄生虫中で見られる生物学的構造に対して親和性を有する化学的部分であってもよい。同時に、部分Ｂは、毒性のサインのような、望ましくない効果を誘導しないよう、真核細胞を含む有機体において、例えば、哺乳動物において、特にヒトのような高度な哺乳動物において、見られる生物学的構造に、十分低い親和性を有する。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
従って、一つの実施態様において、前記部分Ｂは、菌において見られるものの、寄主有機体において見られない分子部分であってもよい。そのような部分の例は、菌において見られるペプチドグリカン類に限定されない。これらは、２つの交互アミノ糖、Ｎ−アセチル−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）およびＮ−アセチルムラミン酸（ＭｕｒＮＡｃ）の直鎖を含む。各ＭｕｒＮＡｃは、短い（４−または５−残基）アミノ酸鎖に結合している。これらのアミノ酸鎖は、哺乳動物生物において見られない構成単位からなり、しばしば、α−アミノ酸官能基を含む分子中でＤ配置に対応するＲ配置のアミノ酸官能基を有する。構成単位の以下の非限定的リストは、本発明において用いられる部分Ｂに存在してもよい：Ｌ−リジン、Ｌ−アラニン、Ｄ−またはＬ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン、メソ−ジアミノピメリン酸、Ｄ−２，３−ジアミノプロパン酸、Ｄ−アラニンまたはＤ配置を有する他のアミノ酸、および、その誘導体（例えば、エステル誘導体）。Ｄ−アミノ酸は、タンパク質中に存在せず、真核有機体中には見られない。従って、一つの実施形態において、部分Bは、上記に挙げられた構成単位または、そのような構成を模擬する分子の組み合わせを含む構成であってもよい。Ｄ配置を有するアミノ酸を含むトリペプチドを模擬する化合物の一例は、アスペルギロマラスミンであり、これは、先行技術、例えば、Mikamiら、Agricultural and Biological Chemistry (1983), 47(11):2693-5において説明されている。D配置を有するアミノ酸の組み合わせは、例えば、D-グルタミン酸、D-グルタミン、メソ−ジアミノピメリン酸およびD-アラニンの組み合わせが好ましい。アミノ酸の他の組み合わせ、D-アラニンの組み合わせ、例えば構成単位Ｄ−アラニン−Ｄ−アラニン自体またはその誘導体（例えば、グリシル−Ｌ−α−アミノ−ε−ピメリル−Ｄ−アラニン−Ｄ−アラニン）を用いてもよい。これらの構成のうち、アミノ酸構成単位におけるカルボン酸部分は、ボロン酸、−Ｂ（ＯＨ）2、リン酸、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）2またはスルホン酸、−ＳＯ3Ｈのような等電子官能基に置換されていてもよい。これらの等電子官能基のカルボン酸またはいずれも、エステル化されてもよい。部分Ｂは、また、バクテリア壁または膜を構成する工程における基質として、これらの構成谷の構成を用いる、酵素のいずれかの基質であってもよい（例えば、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａを用いるＤ，Ｄ−トランスフェラーゼ）。
【００２５】
別の実施形態において、部分Ｂは、菌においてのみ見られるタンパク質の大きなき（ペニシリン−結合タンパク質（ＰＢＰ）を意味する）に対して親和性を有するβ−ラクタム構造ユニットを含んでもよい。ＰＢＰｓの例は、ＭＢＬｓ、セリン  ベータラクタマーゼ−様タンパク質（ＬＡＣＴＢ）、Ｄ，Ｄ−トランスフェラーゼ、Ｄ−Ａｌａ（Ｄ，Ｄ）−カルボキシペプチダーゼ、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン  ジペプチダーゼ  ＶａｎＡ、ＶａｎＸ、ＶａｎＹおよび他のものであり、Sauvageら、FEMS Microbiol Rev 32 (2008) 234−258中に論評されている。このタンパク質クラスの他のものは、バクテリア膜を通る輸送を促進してもよい。哺乳動物には見られず、バクテリア生物中にのみ見られるこのクラスのタンパク質は、本発明による構成における分子部分Ｂにとって好ましいクラスの標的である。ＰＢＰに親和性を有する化合物の例は、β−ラクタム抗生物質である。従って、ペニシリン、セファロスポリン、カルバペネムおよびモノバクタムの誘導体は、本発明における部分Ｂとして用いてもよい分子部分の例である。これらのクラスは、市場における抗生物質の大きなクラスを表わし、その合成方法における多くの構成単位は、本発明における構成Ａ−Ｌ−Ｂにおいて用いるために市販で入手可能である。
【００２６】
上記のように、ＤＤ−トランスフェラーゼ基質の例は、部分Ｂユニットとして有用であり、ＤＡｌａ−Ｄ−Ａｌａであり、バクテリア壁合成の構成単位として用いられる。抗菌剤は、ヒトには見られず、菌において見られる生物学的構造と選択的に相互作用を有する分子を有する。例えば、ペニシリン模擬Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、従って、ＤＤ−トランスフェラーゼに対して拮抗剤として作用する。さらに、βラクタム抗生物質は、ＭＢＬｓの基質である。従って、部分Ｂは、バクテリア生物学的構造について、基質であってもよい。部分Ｂの非限定的な例に、ペニシリン、セファロスポリン、カルバペネム、クラブラン酸、スルバクタム、ダゾバクタム、モノバクタム（例えば、アズトレオナム）、チオプロピオニルアミノ酸誘導体、チオエステル、コハク酸誘導体およびマレイン酸誘導体を含む。
【００２７】
亜鉛結合ユニットＡは、亜鉛に選択性を有する、親油性金属キレート官能基を少なくとも１つ含む。好ましい、しかし、非限定的な例の分子部分Ａは、隣接するドナー原子Ｄが、亜鉛キレートしているジピコリルユニットを安定化する手助けをしている（スキーム３、Ａ−Ｃ）、２つの２−ピリジル−メチル  ユニット（ジピコリルを意味する）を含む部分である（スキーム３、Ａ、Ｂ参照）。部分Ａは、２以上の２−ピリジル−メチル  ユニット、例えば、新規ＴＰＥＮ誘導体を含んでもよい。ＴＰＥＮは、上記で定義したように、先行技術における多くの生物学的適用において、広く使用されている。ＴＰＥＮは、４つの２−ピリジル−メチルユニットを有し、亜鉛キレート能力をより強くしている。スキーム３Ｄに描かれたＴＰＥＮ誘導体は、リンカー基Ｌに共有結合を有し、先行技術において知られておらず、本発明の一部である。スキーム３Ｅは、適切なキレート部分Ａの例の更なる例を示す。
【００２８】
【化３】
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【００２９】
D=電子供与性原子、L=ここに定義したリンカー;S1=Hまたはアルキル基、S2=H、低級アルコキシまたはヒドロキシ基;E=CHまたはN。
【００３０】
ＭＢＬｓが適切に作用するために必要な、必須な亜鉛原子との強力な相互作用を得るため、好ましい亜鉛−キレート機能には、亜鉛との解離定数  Ｋｄができるだけ低い必要がある。解離定数Ｋｄは、金属錯体生成定数Ｋｆ逆であり、Ｋｄ＝１／Ｋｆである。本発明において、一般にＫｄ値は、好ましくは１×１０-5Ｍより低く、より好ましくは１×１０-8Ｍより低く、さらに好ましくは２０×１０-10Ｍより低いか、または、１×１０-10Ｍより低い。一般に、スキーム３ＡおよびＢにおけるジピコリルユニットは、亜鉛とのＫｄが、１〜１０×１０-10Ｍの範囲である(Astrandら、Tetrahedron 69 (2013) 8645-8654)。親油性の細胞貫通亜鉛キレーターＴＰＥＮは、０．２６×１０-15Ｍの亜鉛との解離定数（Ｋｄ）を有する(Makhovら, Cell Death Differ. 2008, 15, 1745)。
【００３１】
ｏ−ヒドロキシベンジリデン−ヒドラジド部分（スキーム３Ｅ）は、本発明において用いられてもよく、先行技術においても、１〜３０×１０-10ＭのＫｄ値を有する亜鉛−キレート特性を有することが報告されている(Puttら, Nat. Chem. Biol. 2006, 2, 543; Charkoudian, J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 12424; Hsuら, ACS Comb. Sci. 2012, 14, 44)。
【００３２】
Gantaら, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19 (2009) 1618〜1622において、ＭＢＬに対して親和性を有する基として、同じ分子部分における亜鉛キレート部分として、ヒドロキサメート基を有する化合物の一群が報告されている。しかしながら、Smith, R. M.; Martell, A. E. NIST Critically Selected Stability Constants of Metal Complexes, Version 2.0; U.S. Department of Commerce: Gaithersburg, MD, 1995によれば、亜鉛とのそのヒドロキサメート錯体解離定数は、10-4の範囲と報告されており、これは、ジピコリルアミンについて示されているものより５オーダー高い。さらに、ヒドロキサメート基は、非選択的なキレート基であり、Fe2+/Fe2+および他の多くの金属イオンの結合も示し、ヒドロキサメートリガンドは特異性が低く、ヒト生物と相互作用する傾向がより高いので、ヒトへの毒性も高まる。2-ピリジル-メチルユニットをベースにしたリガンドは、亜鉛およびカドミウムに対して著しい選択性を示し(Xuら, J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 601)、後者は生体システム中で天然の金属ではない。亜鉛キレート剤は、先行技術、ＷＯ２０１２／０８８２８３中で、ＭＢＬ阻害剤として作用することも示唆されており、チアゾリジンおよび類似化合物は、ベータラクタムと共にＭＢＬ阻害剤として示唆されている。亜鉛キレート中のジピコリルアミン基の使用は、ここには言及されない。しかしながら、これらの剤も、ナノモル範囲より著しく高い亜鉛との錯体解離定数を有する。また、ＭＢＬアッセイにおいてマイクロモル範囲未満のＩＣ50値は、ＷＯ２０１２／０８８３８３中に見当たらない。
【００３３】
以下のスキーム４〜６のそれぞれは、本発明を説明する目的であり、かつ一部を説明するものであり、本発明を限定することを意図しない。従って、今までに製造した化合物のライブラリーのメンバーをスキーム４〜６に例示するが、これに限定されない。
【００３４】
【化４】
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【００３５】
【化５】
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【００３６】
【化６】
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【００３７】
全ての例示分子は、1×10-10M未満の亜鉛との解離定数を有する。
【００３８】
幾つかのライブラリー・メンバーの一般的な製造方法をスキーム７に例示する。
【００３９】
【化７】
2016538244.tif 000008
【００４０】
本発明の好ましい化合物、OAA4033(実施例24)は、スキーム８に示すようにして製造した。
【００４１】
【化８】
2016538244.tif 000009
【００４２】
化合物ＯＡＡ４０３３（実施例２４）は、本発明の核の例であり、概略的に、一般的に、Ａ−Ｌ−Ｂとして表す。前記亜鉛キレートは、ジピコリルアミン部分（Ａ）であり、前記リンカーは、カルボニルアミノ−フェニル基であり、前記ベクターは、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａペプチドである。または、前記亜鉛キレートは、前記ジピコリルアミノメチル−カルボニルアミノ部分（Ａ）として考えられ、前記リンカーは、前記フェニル−エチル基として考えられ、前記ベクター（Ｂ）は、前記Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａペプチドとして考えられる。
【００４３】
上記のように、全てのβ−ラクタム抗生物質のメカニズムは、バクテリア細胞壁の製造において、バクテリア酵素ＤＤ−トランスフェラーゼにより用いられる、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ構成単位を模擬するものである。通常、立体化学Ｌを有するアミノ酸は、ヒト生物に見られる。従って、ジペプチドのバクテリア基質Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａは、バクテリア酵素ＤＤ−トランスフェラーゼに対して親和性を有する。
【００４４】
本発明の２つの特に好ましい例は、ＡＢ７７３およびＡＢ７７７であり、本発明においてベクターＢとして定義される、市販の化合物クラブラン酸およびアモキシシリンから製造される（スキーム９参照）。
【００４５】
【化９】
2016538244.tif 000010
【００４６】
新しい化学的実態は、ここではＭＢＬの阻害剤として試験していないが、期待が持てるＥＣ50値、例えばＶＩＭ−２に対して、コントロール阻害剤に匹敵すの値を示す。同じ阻害剤は、大腸菌寄生ＶＩＭ−２を用いた酵素およびバクテリアの両方の細胞アッセイにおいて、活性を示した。最も活性な阻害剤は、他のＭＢＬｓ（例えば、ＮＤＭ−１およびＧＩＭ−１）に対してより良い活性（サブ−μＭ）を示し、大腸菌寄生ＧＩＭ−１を用いたバクテリア全細胞アッセイにおいて、より良い活性（サブ−μＭ）を示した。その阻害剤は、異なる臨床的Ｐ．  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対するβ−ラクタム抗生物質メロペネムを用いたバクテリア相乗作用アッセイにおいて、期待が持てる性能を示し、大腸菌およびＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、ＭＢＬｓ（ＶＩＭ−２、ＶＩＭ−１、およびＮＤＭ−１）とは異なる寄生を単離し、これらが、β−ラクタム−β−ラクタマーゼ阻害剤組み合わせ治療として用いられうる可能性を有する証拠を示した。幾つかのライブラリーの候補が、メロペネムとの相乗作用効果を示している。我々は、亜鉛−結合フラグメント（フラグメントＡ）をバクテリア生物中に見られるが、ヒト生物中に見られない構造に親和性を有する分子部分（フラグメントＢ）を組み合わせることにより、行った。生じた化合物（ＯＡＡ４０３３、実施例２４）は、今のところ試験管中で期待できる性能を示し、メロペネムとの相乗作用アッセイにおいても良い効果を示した。これらの結果は、概念的に新しい種類の抗菌剤の種類の方向性を示している。
【００４７】
本発明による他の化合物には、スキーム１０中の構造物を含む。
【００４８】
【化１０】
2016538244.tif 000011
【００４９】
［式中、Ｌは、ここに定義するリンカーであり、Ｖは、ここに定義する部分Ｂに対応するベクターである。］
マクロライドは、マクロライド環の存在から、その活性が由来する構成物質の一群です。これらは、バクテリアリボソームに結合し、ｔＲＮＡへのリボソーム移送を阻害し、リボソームの転移も阻害することにより、バクテリアタンパク質生合成を阻害します。上記のように、バクテリアリボソームは、高度に亜鉛依存性バクテリアタンパク質の一例です。マクロライド化学は、先行技術、例えば、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19 (2009) 4079~4083において、Ｌｉｕらにより、よく説明されている。マクロライドおよびその誘導体は、従って、ここに説明する構成において存在してもよい、ベクターＢの更なる例である。例えば、スキーム１１中に記述するカルボニル−イミダゾール（ＣＤＩ）−活性クラリスロマイシン誘導体は、本発明において用いられる多数の化合物を製造するための出発物質として用いてもよい。
【００５０】
【化１１】
2016538244.tif 000012
【００５１】
本発明においてベクターＢとして有用な別のクラスの分子には、クロラムフェニコールおよびその誘導体を含む。クロラムフェニコールは、バクテリアリボソームへ結合することにより、タンパク質合成を阻害することにより、静菌作用がある。
【００５２】
理解されるであろうように、ここに説明する化合物のいずれも、医薬的に許容される塩の形態で提供されてもよい。本発明による化合物は、その塩、特に、無機または有機の酸または塩との、その医薬的に許容される塩へ変換してもよい。この目的のために用いてもよい酸には、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、スルホン酸、メタンスルホン酸、リン酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸およびアスコルビン酸を含む。この目的のために適切に用いられるであろう塩基には、アルカリ金属水酸化物およびアルカリ土類金属水酸化物を含む。例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化セシウム、アンモニアアおよび有機アミン（例えば、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、シクロヘキシルアミンおよびジシクロヘキシルアミン）を含む。塩形成の方法は、当該分野で従来のものである。
【００５３】
また、本発明による化合物と、少なくとも１つの医薬的に許容される希釈剤または担体とを含む医薬組成物も提供される。
【００５４】
前記ＭＢＬ阻害剤を含む組成物は、好ましくは、投与前に製剤化される。そのような組成物中の活性成分は、製剤に対して０．０５重量％〜９９重量％含んでもよい。適切な用量は、用いられる調節者、治療される正確な症状、年齢、および患者の体重等に左右されてもよく、当該分野においてよく知られる原理に従い、熟練医者により慣例的に決定されてもよい。例示のため、代表的な用量には、１〜２００または１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５〜７０、５〜５０、または１０〜７０または１０〜５０ｍｇ／ｋｇを含んでもよい。
【００５５】
「医薬的に許容される」により、その成分は、前記組成物の他の成分と親和性でなければならず、かつ、需要者に生理的許容可能でなければならないことを意味する。本発明による医薬組成物は、当該分野においてよく知られ、文献に広く説明された技術と方法に従い製剤化されてもよく、他の公知の担体、希釈剤または賦形剤を含んでもよい。もちろん、他の成分（例えば、安定剤、保存剤等）も、当該分野でよく知られた技術に従い、含んでもよい。製剤は、医薬的活性剤の滅菌水溶液および／または懸濁液、エアゾル剤、軟膏剤等の形態であってもよい。その製剤は、また、徐方性放出形態（例えば、マイクロ粒子、ナノ粒子、エマルジョン、ナノ懸濁液、液体粒子または油）であってもよい。さらに、抗菌剤の製剤の重要な観点は、ＭＢＬ阻害剤をその表面にコートしてある、フィルム剤、パッチ剤または、フォリオ（ｆｏｌｉｏ）の形態であることです。これらは、本発明において、用いられ得ます。
【００５６】
投与は、経口、非経口、局所、皮下投与または、吸入による投与を含む医学分野において公知の適切な方法により行われてもよい。ＭＢＬ阻害剤またはそのＭＢＬ阻害剤を含む製剤は、通常の間隔で（例えば、１日に１度または２度、４８時間毎に１度、または７２時間毎に１度）、摂取すべき単回投与において、投与されてもよい。徐方性製剤は、例えば、１ヶ月毎または３ヶ月毎に１〜２度の長い間隔で投与されてもよい。投与される活性化合物の正確な用量、１日または１ヶ月の用量の数、および治療の長さは、患者の年齢や体重を含む多くの因子に左右されるであろう。前記組成物は、文献でよく知られている技術や方法に従い製剤化されてもよく、公知の担体、希釈剤または賦形剤のいずれも含んでもよい。例えば、非経口投与に適した、本発明において用いられうる前記組成物／製剤は、塩化ナトリウム、グリセリン、グルコース、マンニトール、ソルビトール等を一般的に用いて、好ましくは受取人の血液と等張に作られ、医薬的活性成分の滅菌水溶液および／または懸濁液を通常、含んでもよい。加えて、前記組成物は、多数の補助物質（例えば、緩衝液、保存剤、分散剤、作用を素早く始める剤、または、作用を長引かせる剤）のいずれかを含んでもよい。経口投与に適する組成物／製剤は、滅菌精製ストック粉末形態で存在してもよく、好ましくは外皮で覆われてもよく、または、多数の補助物質（例えば、緩衝液、保存剤、素早い放出を促進する剤、または長引く放出を促進する剤）のいずれかを含む外皮で覆われてもよい。局所または表面の投与に適した本発明において用いられる組成物／製剤は、公知の適切な成分（例えば、パラフィン、ワセリン、セタノール、グリセロール等）と混合したＭＢＬ阻害剤を含んで、適切な軟膏剤またはクリーム剤を形成してもよい。
【００５７】
本発明は、以下の詳細に説明するが、以下の例に限定されない。
【００５８】
＜一般的な方法＞
用いた全ての試薬および溶媒は、使用前に更なる精製を行わずに用いた。ＮＭＲ（1Ｈ、13Ｃ）スペクトルは、ブルーカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＡＶＩＩ−４００  ＭＨｚ、ＤＰＸ−３００ＭＨｚまたはＤＰＸ−２００ＭＨｚスペクトロメーターを用いて記録した。結合定数（Ｊ）は、ヘルツで報告し、ケミカルシフトは、ＣＤＣｌ3（1Ｈについては７．２６ｐｐｍ、13Ｃについては７７．１６  ｐｐｍ）および［Ｄ6］ＤＭＳＯ（1Ｈについては２．５０  ｐｐｍ、13Ｃについては３９．５２ｐｐｍ）に対して、百万分の一（ｐｐｍ）で報告した。ＩＲスペクトルは、パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）スペクトラムＢＸシリーズＦＴ−ＩＲスペクトロメーターを用いて得、選択したピークのみを報告した。全ての収率は不正確である。
実施例１
Ｎ，Ｎ’−ジピコリル−Ｎ−プロパギルアミンの合成
Ｎ，Ｎ'−ジピコリルアミン（５．０ｍＬ，２２．９ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ．）を、ＴＨＦ（５５．７ｍＬ，７００ｍｍｏｌ，２５ｅｑ．）中で希釈し、次いでＫ2ＣＯ3（１５．４０ｇ，１１１．４ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ．）および臭化プロパギル（４．３４ｍＬ  ８０％，３９．０ｍｍｏｌ，１，４ｅｑ．）を添加した。この混合物を激しく攪拌しながら還流加熱し、３時間放置した。次いで濃赤色スラリーを室温まで冷却し、グラスフィルターを用いて濾過し、そのろ液を２ｘ２０ｍＬのジクロロメタンで洗浄し、合せた有機相を減圧下で赤さび色油まで濃縮した。その粗生成物を、カラムクロマトグラフィーを用いて精製し、その生成物を、ジクロロメタン中メタノール（１〜５％）によりアルミナカラムから溶離させて、５．５５ｇ（８６％）を得た。1Ｈおよび13Ｃ  ＮＭＲは、公開された結果と一致した。
【００５９】
実施例2
トリアゾールを合成するための一般的な方法
２．５ｍｌのＨ2Ｏ中の硫酸銅七水和物（２５０ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ．）と２．５ｍｌのＨ2Ｏ中の（＋）アスコルビン酸ナトリウム（３９６  ｍｇ，２，０ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）を、２．５ｍｌのｔＢｕＯＨ中の前記アルキン（１．０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ．）の攪拌溶液へ同時に添加した。前記アジド溶液（４．０ｍＬ、ｔＢｕＯＭｅ中２５％，１．０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）をその後、添加し、その溶液を室温で１６時間攪拌した。ＥＤＴＡ（２９３ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ）をその後前記攪拌溶液に添加し、その混合物を５０ｍＬのＨ2Ｏで希釈し、その混合物のｐＨを１ＭのＮａＯＨで＞１０に調整し、その後、６０分間放置した。その後、そのスラリーを５０ｍＬのＥｔＯＡｃおよび５０ｍＬのジクロロメタンで抽出した。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、減圧下で濃縮して、暗赤色／半固体を得た。その粗生成物を、ジクロロメタン中１〜１０％のメタノールで中性Ａｌ2Ｏ3カラムを溶離することにより、カラムクロマトグラフィーを用いて精製した。
【００６０】
実施例３
１−（１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン（ＯＡＡ２１６８）の製造
【００６１】
【化１２】
2016538244.tif 000013
【００６２】
収率：１８８ｍｇ（４９％）。
【００６３】
【数１】
2016538244.tif 000014
【００６４】
HRMS e/z C22H23N6O(M+1)について計算:387.1928,測定値387.1927。
【００６５】
実施例４
１−（１−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０６７）の製造
【００６６】
【化１３】
2016538244.tif 000015
【００６７】
収率：２８６ｍｇ（８６％）。
【００６８】
【数２】
2016538244.tif 000016
【００６９】
HRMS e/z C26H25N6O(M+H)について計算:437.2084,測定値437.2086。
【００７０】
実施例５
１−（ピリジン−２−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）−Ｎ−（（１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０６９）の製造
【００７１】
【化１４】
2016538244.tif 000017
【００７２】
収率：２６１ｍｇ（７８％）。
【００７３】
【数３】
2016538244.tif 000018
【００７４】
HRMS e/z C24H27N6O3(M+H)について計算: 447.2139,測定値447.2143。
【００７５】
実施例６
１−（１−（４−ニトロベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン  （ＯＡＡ４０７１）の製造
【００７６】
【化１５】
2016538244.tif 000019
【００７７】
収率：１７６ｍｇ（４２％）。
【００７８】
【数４】
2016538244.tif 000020
【００７９】
HRMS e/z C22H22N7O2 (M+H)について計算:416.1829,測定値：416.1825。
【００８０】
実施例７
１−（ピリジン−２−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）−Ｎ−（（１−（３，４，５−トリメトキシベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０７３）の製造
【００８１】
【化１６】
2016538244.tif 000021
【００８２】
収率：１３８ｍｇ（３０％）。
【００８３】
【数５】
2016538244.tif 000022
【００８４】
HRMS e/z C25H29N6O3(M+H)について計算: 461.2296, 測定値：461.2296。
【００８５】
実施例８
１−（１−（４−メトキシ−３−ニトロベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０７５）の製造
【００８６】
【化１７】
2016538244.tif 000023
【００８７】
収率：１９１ｍｇ（４３％）。
【００８８】
【数６】
2016538244.tif 000024
【００８９】
HRMS e/z C23H24N7O3(M+H)について計算: 446.1935, 測定値：446.1940。
【００９０】
実施例９
１−（１−（３−ブロモ−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン  （ＯＡＡ４０７７）の製造
【００９１】
【化１８】
2016538244.tif 000025
【００９２】
収率: 228mg(48%)。HRMS e/z C23H24N6OBr (M+H)について計算: 479.1189, 測定値：479.1196。
【００９３】
実施例１０
１−（１−（ジベンゾ［ｂ，ｄ］フラン−４−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０７９）の製造
【００９４】
【化１９】
2016538244.tif 000026
【００９５】
収率：２３１ｍｇ（５２％）。
【００９６】
【数７】
2016538244.tif 000027
【００９７】
HRMS e/z C27H23N6O (M+H)について計算: 447.1928, 測定値：447.1931。
【００９８】
実施例１１
１−（１−（２，４−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０８１）の製造
【００９９】
【化２０】
2016538244.tif 000028
【０１００】
収率：１１２ｍｇ（２７％）。
【０１０１】
【数８】
2016538244.tif 000029
【０１０２】
HRMS e/z C23H25N6O2 (M+H)について計算: 417.2034,測定値： 417.2033。HRMS e/z C23H25N6O2 (M+H)について計算: 417.2034,測定値：417.2033。
【０１０３】
実施例１２
１−（ピリジン−２−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）−Ｎ−（（１−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）メタンアミン（ＯＡＡ４０８５）の製造
【０１０４】
【化２１】
2016538244.tif 000030
【０１０５】
収率：２０８ｍｇ（４９％）。
【０１０６】
【数９】
2016538244.tif 000031
【０１０７】
HRMS e/z C22H20N6F3(M+H)について計算: 425.1696,測定値：425.1698。
【０１０８】
実施例１３
１−（１−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イルメチル）メタンアミン（ＯＡＡ２１７２）の製造
【０１０９】
【化２２】
2016538244.tif 000032
【０１１０】
収率：１６７ｍｇ（４２％）。
【０１１１】
【数１０】
2016538244.tif 000033
【０１１２】
HRMS e/z C22H23N6O (M+1)について計算: 387.1928,測定値：387.1927。
【０１１３】
実施例１４
ｔｅｒｔ−ブチル  （４−アミノフェネチル）カルバメートの製造
４−（２−アミノエチル）アニリン（５．００グラム，３６．７ｍｍｏｌ，１．０  ｅｑ）を５０ｍＬのＥｔＯＡｃ中に溶解させ、水浴中に配置した。すばやく攪拌させた溶液中に、５０ｍＬのＥｔＯＡｃ中のｂｏｃ無水物（８．２５グラム，３７．８ｍｍｏｌ，１．０３ｅｑ）の混合物を滴下して加えた。前記無水物の添加の際、その混合物は白色スラリーに変化し、４時間後、薄黄色透明溶液になった。反応を終夜放置した。粗混合物を減圧下で薄黄色油まで濃縮し、１０ｍＬの熱ＥｔＯＡｃで希釈し、５０ｍＬの熱ヘプタンと混合した。その混合物を氷浴中に配置し、沈殿を促進させた。白色結晶をろ取して乾燥し、７．１１グラム（８２％）を生じた。
【０１１４】
【数１１】
2016538244.tif 000034
【０１１５】
実施例１５
ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（２−クロロアセトアミド）フェネチル）カルバメートの製造
実施例１４に従って製造したｔｅｒｔ−ブチル  （４−アミノフェネチル）カルバメート（７．５０グラム、３１．７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＣＨ2Ｃｌ2（５００ｍＬ）中に溶解させ、氷浴中で０℃に冷却した。ＤＭＡＰ（６．２３ｇ、５１．０ｍｍｏｌ、１．６ｅｑ）を一回で添加し、塩化クロロアセチルの１００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中の溶液（３．００ｍｌ、３７．７ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を攪拌溶液に２０分に渡って滴下して添加する前に、その混合物を１０分間放置した。減圧下で濃縮する前に、その後、その混合物を０℃で３０分間放置し、室温で３時間放置した。粘着性の赤色残渣を、ＣＨ2Ｃｌ2（２５０ｍＬ）中に溶解させ、０．５Ｍの水性酢酸（２ｘ２００ｍＬ）、０．５Ｍの水性ＮａＨＣＯ3（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｋ2ＣＯ3で乾燥した。その溶液をヘプタン中７５％酢酸エチルを用いて、（４ｃｍ×５ｃｍ長さ）シリカゲルプラグを通して濾過し、溶離させた。減圧下に揮発性物質を除去して、７．４６ｇの標題化合物（２３．８ｍｍｏｌ、７５％）を生じた。
【０１１６】
【数１２】
2016538244.tif 000035
【０１１７】
実施例１６
ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）  アセトアミド）フェネチル）カルバメートの製造
実施例１５で製造したα−クロロアミド（７．４４ｇ、２３．８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）およびＫＩ（２．３７ｇ、１４．３ｍｍｏｌ、０．６ｅｑ．）を５００ｍＬのＭｅＣＮ中に溶解させ、ＤＰＡ（５．２ｍＬ、２８．９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を攪拌中のその混合物へ添加した。その後、ＤＩＰＥＡ（４０．５ｍＬ、０．２３３ｍｏｌ、９．７ｅｑ．）を添加し、その混合物を還流加熱し、１４時間放置した。室温まで冷却した後、その混合物を減圧下で濃縮し、ＣＨ2Ｃｌ2中１０％のＭｅＯＨを用いてアルミナのプラグを通過させて溶離して精製した。減圧下に揮発性物質を除去して、標題化合物を定量的収率で得た。更なる精製を行わず、その物質を用いた。
【０１１８】
【数１３】
2016538244.tif 000036
【０１１９】
実施例１７
Ｎ−（４−（２−アミノエチル）フェニル）−２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミドの製造
実施例１６で製造したｂｏｃ−保護されたアミン（２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。その後トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を５分間にわたって攪拌中の溶液に添加した。その反応を０℃で１５分間放置し、その後、室温まで温めた。その反応をさらに２時間放置し、次いで、減圧下で茶色油まで濃縮した。その粗物質を３０ｍＬの０．５ＭのＮａＨＣＯ3に溶解させ、３×２０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合せた有機相を溜め、５０ｍＬの０．５ＭのＮａＨＣＯ3で洗浄し、Ｋ2ＯＣ3で乾燥し、濾過して減圧下で濃縮して、１５５ｍｇの標題化合物（９８％）を薄茶色油として得た。
【０１２０】
【数１４】
2016538244.tif 000037
【０１２１】
HRMS e/z C22H25N5Oについて計算: 375.2059,測定値：376.2133 (M+H)。
【０１２２】
実施例１８
４−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）  アセトアミド）フェネチル）アミノ）−４−オキソブタン酸の製造
実施例１７で製造したアミン（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトン中に溶解させ、０℃まで氷水浴中で冷却した。その後、無水コハク酸（２７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を攪拌している溶液へ一度に添加した。氷水浴を取り除き、室温で攪拌させて、終夜、反応させた。その後、粗混合物を減圧下で濃縮し、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）中に懸濁させた。その混合物を振盪させ、薄色沈殿物を濾過して除き、３６ｍｇの標題化合物を薄黄色固体（２８％）として得た。
【０１２３】
【数１５】
2016538244.tif 000038
【０１２４】
HRMS e/z C26H29N5O4について計算: 475.2220,測定値：476.2293(M+H)。
【０１２５】
実施例１９
メチル  （４−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）  アセトアミド）フェネチル）アミノ）−４−オキソブタノイル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
【０１２６】
【化２３】
2016538244.tif 000039
【０１２７】
実施例１８で製造した遊離酸（０．２５０ｇ、０．５２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。次いでＤ−アラニル−Ｄ−アラニン  メチルエステル塩酸塩（１１６ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑｕｉｖ．）およびＨＡＴＵ（２１１ｍｇ、０．５５５ｍｍｏｌ、１．０６ｅｑｕｉｖ）を添加し、その後、ＮＭＭ（１２０ｕＬ、１．０９ｍｍｏｌ、２．１ｅｑｕｉｖ．）を攪拌する混合物へ添加した。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、徐々に室温まで加熱した。その後、その混合物を１８時間室温で放置した。その後、その混合物を５０ｍＬの０．５ＭのＫ2ＣＯ3で希釈し、５×１０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を合せ、新鮮な０．５ＭのＫ2ＣＯ3（４×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｋ2ＣＯ3で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。これにより、０．１５９ｍｇの標題化合物（０．２５２ｍｍｏｌ、４８％）を薄色半固体として得た。
【０１２８】
【数１６】
2016538244.tif 000040
【０１２９】
e/z C33H41N7O6について計算: 631,測定値：632.3 (M+H)。
【０１３０】
実施例２０
メチル  （４−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−４−オキソブタノイル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン酸（alanoic acid）の製造
【０１３１】
【化２４】
2016538244.tif 000041
【０１３２】
実施例１９で製造したエステル（５０ｍｇ、７９μｍｏｌ）を、氷水浴を用いて０℃まで冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）、ならびに水（１５０μＬ）および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液（１６０μＬ、８０μｍｏｌ）中に溶解した。その反応を、ＴＬＣ（ＣＨ2Ｃｌ2中５％ＭｅＯＨ、アルミナ）が前記エステルの消費を示すまで、２．５時間攪拌した。その溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節し、溶媒は減圧下に除去された。その混合物を、エタノール中に溶解させ、塩を除去し、減圧下に溶媒を除去した。これにより、２２ｍｇの標題化合物を薄緑色固体（３６μｍｏｌ、５０％）として生じた。
【０１３３】
【数１７】
2016538244.tif 000042
【０１３４】
e/z C32H39N7O6について計算: 617, 測定値：618.3 (M+H)。
【０１３５】
実施例２１
メチル  （４−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−４−オキソブタノイル）−Ｄ−アラニナートの製造
【０１３６】
【化２５】
2016538244.tif 000043
【０１３７】
実施例１８で製造した遊離酸（１．０１３ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。その後、Ｄ−アラニル−メチルエステル塩酸塩（３１５ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ、１．０６ｅｑｕｉｖ．）およびＨＡＴＵ（８５０ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑｕｉｖ）を添加し、その後、ＮＭＭ（５００μＬ、４．５５ｍｍｏｌ、２．１４ｅｑｕｉｖ．）を攪拌する混合物へ添加した。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、室温まで徐々に加熱した。その後、その混合物を１８時間室温で放置した。その後、その混合物を、１５０ｍＬの０．５ＭのＫ2ＣＯ3で希釈し、５×５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合せた有機相を合せ、新鮮な０．５ＭのＫ2ＣＯ3（１００ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｋ2ＣＯ3で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。これにより、１．００ｇの標題化合物を薄色半固体（１．７８ｍｍｏｌ、８４％）として得た。
【０１３８】
【数１８】
2016538244.tif 000044
【０１３９】
e/z C30H36N6O5について計算: 560,測定値：561.3 (M+H)。
【０１４０】
実施例２２
メチル  （４−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−４−オキソブタノイル）−Ｄ−アラニン酸の製造
【０１４１】
【化２６】
2016538244.tif 000045
【０１４２】
実施例２１で製造したエステル（０．８５７ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１５ｍＬ）中に溶解させ、０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液（３．４ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２．５時間、ＴＬＣ（ＣＨ2Ｃｌ2中５％ＭｅＯＨ，アルミナ）が出発物質の消費を示すまで、攪拌した。この溶液のｐＨを０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節し、溶媒を減圧下に除去した。この混合物を最小限のエタノール（３ｍＬ）に溶解させ、過剰なアセトン（４０ｍＬ）で沈殿させた。生じた沈殿物（ｐｒｅｃｉｐａｔｅ）を濾過して集め、再度、新鮮なエタノール中に溶解させた。濾過して塩を除去した後、溶媒を減圧下に除去した。これにより、０．４３７ｇの標題化合物を薄緑色固体（０．７９９ｍｍｏｌ、５２％）として得た。
【０１４３】
【数１９】
2016538244.tif 000046
【０１４４】
e/z C29H36N6O5について計算: 546, 測定値：547.3 (M+H)。
【０１４５】
実施例２３
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−１−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−フェネチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメートの製造
実施例１６で製造した遊離アミン（２．８８ｇ、７．６７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。Ｂｏｃ−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン酸（alanioic acid）（２．００ｇ、７．６８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑｕｉｖ．）およびＨＢＴＵ（２．９２ｇ、７．７０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑｕｉｖ）を添加し、その後、ＮＭＭ（１．７０ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ、２．０２ｅｑｕｉｖ．）を攪拌する混合物に添加した。その混合物を氷水浴中で１５分間放置し、その後、徐々に室温に加熱した。その後、その混合物を４．５時間室温で放置した。その後、その混合物を、２００ｍＬの０．５  ＭのＫ2ＣＯ3で希釈し、４×１００ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合せた有機相を合わせ、新鮮な０．５ＭのＫ2ＣＯ3（２×１５０ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。茶色油性残渣をＣＨ2Ｃｌ2に溶解させ、ＣＨ2Ｃｌ2中１〜２％のＭｅＯＨを用い、中性アルミナのカラムクロマトグラフィーにより精製して溶離させ、３．６６ｇの標題化合物を茶色半固体（５．９２ｍｍｏｌ，７７％）として得た。
【０１４６】
【数２０】
2016538244.tif 000047
【０１４７】
実施例２４
（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−１−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−アミニウム  クロリド（ＯＡＡ４０３３）の製造
【０１４８】
【化２７】
2016538244.tif 000048
【０１４９】
実施例２３で製造されたｂｏｃ−保護アミン（３．４９１ｇ、５．６５ｍｍｏｌ）を２６ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。ＣＨ2Ｃｌ2（６．５ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（６．５ｍＬ、８４．９ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑｕｉｖ）をその後、攪拌溶液へ５分間にわたって添加した。その反応を、０℃で１５分間放置し、その後、室温まで温めた。その反応をさらに３時間室温で放置し、その後、ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中のＴＦＡ（１ｍｌ）を迅速に更に添加した。１時間攪拌後、ＴＬＣ（ＣＨ2Ｃｌ2中の５％のＭａＯＨ、アルミナ）が、前記カルバメートの消費を示し、揮発性物質を減圧下に除去した。生じた茶色油をＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）に溶解させ、Ｅｔ2Ｏ（９ｍＬ）中の２ＭのＨＣｌで処理した。３０分攪拌後、その混合物を油に浸し、さらに、エーテル（１００ｍＬ）を添加して、薄茶色固体の沈殿とその油の部分的滴定を生じた。細かい薄色粉末を濾過により集め、過剰な新鮮なエーテルで洗浄し、真空下で乾燥して、１．２５ｇの標題化合物を生じた。残りの粘着性の油をエーテルで洗浄し、その後、熱エタノール中に溶解させ、フラスコへ移し、溶媒を減圧下に除去して、さらに１．３５ｇの薄茶色固体を生じた。全体で、２．６０ｇの標題化合物を、薄茶色固体（４．６９ｍｍｏｌ、８３％）として得た。
【０１５０】
【数２１】
2016538244.tif 000049
【０１５１】
HRMS e/z について計算C28H36N7O3:518.2880,測定値：518.2879。
【０１５２】
実施例２５
（Ｒ）−２−アセトアミド−Ｎ−（（Ｒ）−１−（（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミドの製造
【０１５３】
【化２８】
2016538244.tif 000050
【０１５４】
実施例２３で製造されたｂｏｃ−保護アミン（１７３ｍｇ、０．２８０ｍｍｏｌ）を、２．５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。トリフルオロ酢酸（３３０ｕＬ、４．３０ｍｍｏｌ、１５．４ｅｑｕｉｖ）をその後、攪拌溶液へ５分間に渡って添加した。その反応を１５分間、０℃で放置し、その後、室温まで温め、３時間攪拌し、その後、揮発性物質を減圧下に除去した。生じた茶色油をＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）中に溶解させ、Ａｃ2Ｏ（６０ｕＬ、０．６３４ｍｍｏｌ、２．２５ｅｑｕｉｖ．）を添加し、反応物を１８時間攪拌した。その反応を０．５ＭのＫ2ＣＯ3（５ｍＬ）でクエンチした。１５分攪拌後、層を分離し、水層を３×１０ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。合せた有機相を新鮮な０．５ＭのＫ2ＣＯ3（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下に除去して、７８ｍｇの粗物質を得た。この粗物質は、カラムクロマトグラフィーによる更なる精製をして、標題化合物を生じうる。
【０１５５】
実施例２６
ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（２−（ジベンジルアミノ）アセトアミド）フェネチル）カルバメートの製造
ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（２−クロロアセトアミド）フェネチル）カルバメート（１．００２ｇ、３．２０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）およびＫＩ（０．５９７ｇ、３．６０ｍｍｏｌ、１．２５ｅｑ．）を、３５０ｍＬのＭｅＣＮ中に溶解させ、ジベンジルアミン（０．７４ｍＬ、３．８５ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を攪拌する混合物へ添加した。ＤＩＰＥＡ（５．５ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ、９．８７ｅｑ．）をその後添加し、その混合物を還流加熱し、１７時間放置した。室温まで冷却した後、その混合物を減圧下で濃縮し、シリカのカラムクロマトグラフィーを用いて精製した。生成物は、ヘプタン中２０〜５０％酢酸エチルを用いて溶離され、１０３０ｍｇ（６８％）の標題化合物を生じた。
【０１５６】
【数２２】
2016538244.tif 000051
【０１５７】
実施例２７
Ｎ−（４−（２−アミノエチル）フェニル）−２−（ジベンジルアミノ）アセトアミドの製造
実施例２６で製造されたｂｏｃ−保護アミン（５５０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を２５ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。トリフルオロ酢酸（６ｍＬ、７８．３５ｍｍｏｌ、６７．５ｅｑ）をその後、５分間にわたって、攪拌溶液へ滴下して添加した。反応を１時間室温で放置し、その後、明茶色油まで減圧下で濃縮した。粗物質を２５ｍＬの酢酸エチル中に溶解させ、５０ｍＬの０．５ＭのＫ2ＣＯ3で抽出した。水相を３×２０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合せた有機相をため、２５ｍＬの０．５ＭのＫ2ＣＯ3で洗浄し、次いで、Ｋ2ＣＯ3で乾燥し、濾過し、４０４ｍｇの標題化合物を薄明色の油（９３％）まで減圧下で濃縮した。
【０１５８】
【数２３】
2016538244.tif 000052
【０１５９】
実施例２８
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−１−（（４−（２−（ジベンジルアミノ）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
実施例２７で製造されたＮ−（４−（２−アミノエチル）フェニル）−２−（ジベンジルアミノ）アセトアミド（０．４０４ｇ、１．０１７ｍｍｏｌ、１  ｅｑ）を４ｍＬのＤＭＦ中に溶解させた。メチル  Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナート塩酸塩（０．２８５ｇ、１．０９５ｍｍｏｌ、１  ｅｑ）およびＨＢＴＵ（０．４１３ｇ、１．０９０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を攪拌溶液に添加し、氷水浴中で０℃まで冷却した。ＮＭＭ（０．１１５ｍＬ、１．０４４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を添加し、その溶液を３０分間氷水浴上に放置し、その後、３時間室温で放置した。その混合物を２００ｍＬの水で希釈し、３×５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合せた有機相をため、２５ｍＬの０．５ＭのＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｋ2ＣＯ3で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、４９８ｍｇ（８０％）を生じた。
【０１６０】
【数２４】
2016538244.tif 000053
【０１６１】
実施例２９
（Ｒ）−２−（クロロ−ｌ５−アザニル）−Ｎ−（（Ｒ）−１−（（４−（２−（ジベンジルクロロ−ｌ５−アザニル）アセトアミド）フェネチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
【０１６２】
【化２９】
2016538244.tif 000054
【０１６３】
実施例２８で製造したｂｏｃ−アミン（０．２５４ｇ、０．４１３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を２５ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。ＴＦＡ（２ｍＬ、２６．１２ｍｍｏｌ、６３ｅｑ）を２５ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、５分間にわたって攪拌溶液に滴下して添加した。反応を室温で１次間放置した。その溶液を減圧下で濃縮した。塊を５ｍＬの無水ＤＣＭ中に再溶解させ、１ｍＬのジエチルエーテル中２ＭのＨＣｌを添加した。沈殿物が存在した。その沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄して減圧下に乾燥した。
【０１６４】
【数２５】
2016538244.tif 000055
【０１６５】
実施例３０
メチル  （２−クロロアセチル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
【０１６６】
【化３０】
2016538244.tif 000056
【０１６７】
クロロメチル酢酸（１１２ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンメチルエステル塩酸塩（２５０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４５２ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）をその後、添加し、次いで、ＮＭＭ（２８８μＬ、２．６２ｍｍｏｌ）を攪拌する混合物へ添加した。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、次いで、ゆっくりと室温まで加熱した。その混合物をその後、４時間室温で放置した。その混合物をその後、３００ｍＬの水で希釈し、５×３０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合せた有機相をため、０．５ＭのＮａＨＣＯ3（５０ｍＬ）、０．１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。その粗物質をその後、ＳｉＯ2を固定相として、ヘプタン中５０〜１００％のＥｔＯＡｃを溶離液として用い、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。これにより、２７４ｍｇの標題化合物を白色粉末として得た（９２％）。
【０１６８】
【数２６】
2016538244.tif 000057
【０１６９】
HRMS e/z C9H15N2O4Clについて計算:250.0720,測定値：273.0616(M+H)。
【０１７０】
実施例３１
メチル  ビス（ピリジン−２−イルメチル）グリシル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
【０１７１】
【化３１】
2016538244.tif 000058
【０１７２】
実施例３０で製造されたα−クロロアミド（２００ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）およびＫＩ（８０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、０．６ｅｑ．）を、２００ｍＬのＭｅＣＮ中に溶解させ、ＤＰＡ（１７３μＬ、０．９６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を攪拌する混合物へ添加した。ＤＩＰＥＡ（１．３５ｍＬ、７．７４ｍｍｏｌ、９．７ｅｑ．）をその後添加し、その混合物を還流加熱し、１６時間放置した。室温まで冷却した後、その混合物を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーを用いて精製した。ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨを用いて中性アルミナカラムから生成物を溶離し、２１２ｍｇ（６４％）を得た。
【０１７３】
【数２７】
2016538244.tif 000059
【０１７４】
HRMS e/z C21H27N5O4について計算: 413.2063,測定値：414.2134 (M+H)。
【０１７５】
実施例３２
メチル  （２−アジドアセチル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
２−アジド酢酸（１７８μＬ、２．３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、氷水浴中で０℃まで冷却した。Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンメチルエステル塩酸塩（５００ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（９０４ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）をその後添加し、次いでＮＭＭ（５７６μＬ、５．２４ｍｍｏｌ）を攪拌する混合物へ添加した。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、ゆっくり室温まで加熱した。その混合物をその後４時間室温で放置した。その混合物をその後、３５０ｍＬの水で希釈し、５×５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合せた有機相をため、０．５ＭのＮａＨＣＯ3（５０ｍＬ）、０．１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗物質をその後、ＳｉＯ2を固定相として、ヘプタン中５０〜１００％ＥｔＯＡｃを溶離液として用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。これにより、５２０ｍｇの標題化合物を白色粉末として得た（８５％）。
【０１７６】
【数２８】
2016538244.tif 000060
【０１７７】
実施例３３
メチル  （２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセチル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
【０１７８】
【化３２】
2016538244.tif 000061
【０１７９】
２．５ｍＬのＨ2Ｏ中の酢酸銅（２００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）および２．５ｍＬのＨ2Ｏ中の（＋）アスコルビン酸ナトリウム（３９６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）を、同時に、２．５ｍＬのｔＢｕＯＨ中のアルキン（２３７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）の攪拌溶液へ添加した。実施例３２で製造したアジド（２５７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をその後添加し、その溶液を室温で１６時間攪拌した。ＥＤＴＡ（２９３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をその後攪拌溶液に添加し、６０分間放置し、その後、その混合物を５０ｍＬのＨ2Ｏで希釈し、その混合物のｐＨを１ＭのＮａＯＨで＞１０に調節した。そのスラリーをその後、２×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出した。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、減圧下で濃縮して、暗赤色油を得た。その粗生成物を、中性Ａｌ2Ｏ3カラムを  ジクロロメタン中０〜５％のメタノールで溶離することにより、カラムクロマトグラフィーを用いて精製し、１３４ｍｇ（２７％）の薄橙色油として標題化合物を得た。
【０１８０】
【数２９】
2016538244.tif 000062
【０１８１】
HRMS e/z C24H30N8O4について計算:494.2390,測定値：495.2463 (M+H)。
【０１８２】
実施例３４
メチル  （２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセチル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン酸（ａｌａｎｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）の製造
【０１８３】
【化３３】
2016538244.tif 000063
【０１８４】
実施例３３で製造したエステル（４９ｍｇ、９９ｕｍｏｌ）を氷水浴を用いて０℃へ冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液（２２０ｕＬ、０．１１０ｍｍｏｌ）中に溶解させた。ＴＬＣ（ＣＨ2Ｃｌ2中５％ＭｅＯＨ、アルミナ）  がエステルの消費を示すまで、この反応物を２．５時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残渣を水（５ｍＬ）中に溶解させた。溶液のｐＨを０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節し、その後、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。溶媒をその後、減圧下に水層から除去し、生じた固体をエタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、溶媒を減圧下に除去した。これにより、３５ｍｇの標題化合物を薄緑色固体として得た（７３ｕｍｏｌ、７４％）。
【０１８５】
【数３０】
2016538244.tif 000064
【０１８６】
e/z C23H28N8O4について計算:480,測定値481.3。
【０１８７】
実施例３５
メチル  （２−（４−（２−（ジエトキシホスホリル）−３−メルカプト−プロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセチル）アラニルアラニナートの製造
【０１８８】
【化３４】
2016538244.tif 000065
【０１８９】
無水ＤＭＦ（０．３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中のホスホノ酢酸（１）（１ｅｑ）を０℃で攪拌した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．７ｅｑ）を添加し、その溶液を塩基が溶解するまで０℃で攪拌した。臭化プロパルギル（２）（０．７ｅｑ）を反応混合物へ滴下して添加し、氷浴を除去して溶液を室温（ｒｔ）にした。その後、反応混合物を６０℃で少なくとも１８時間加熱した。
【０１９０】
塩化リチウム溶液（５％）をその混合物へ添加し、精製物を３回ジエチルエーテルで抽出し、水およびブラインで洗浄した。有機相を濾過し、硫酸ナトリウム（Ｎａ2ＳＯ4）で乾燥させ、溶媒を真空下に除去した。生成物を、酢酸エチル：ヘキサン（６０：４０）を溶離液として用いて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、黄色油を生じた。
【０１９１】
水素化ホウ素リチウム（ＬｉＢＨ4）を無水ＴＨＦ（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に０℃で溶解させ、ゆっくりアルキル化ホスホノ酢酸（３）を０℃で添加した。その反応混合物を室温で３０分間攪拌し、その後、８０℃でマイクロ波の下で１０分間攪拌した。混合物が室温に達した際、メタノールを攪拌しながら、過剰なＬｉＢＨ4が中和されるまで、ゆっくり添加した。その混合物を１０％クエン酸で酸性化し、その生成物をジエチルエーテルで抽出し、ブライン溶液で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。溶媒を真空下で除去した。その生成物を、酢酸エチル：アセトン９０：１０を溶離液として用いてフラッシュクロマトグラフィーで精製して無食油とした。
【０１９２】
トリエチルアミン（１．０５ｅｑ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、２０％）を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中にアルコール誘導体（４）を含むフラスコへ添加した。反応混合物を５分間室温で攪拌した。その後、メタンスルホニルクロリドをゆっくりその溶液に添加し、終夜、室温で攪拌した。粗生物を５０ｍＬの水性ＮＨ4Ｃｌでクエンチし、ジエチルエーテル（３〜５０ｍＬ）で抽出した。その後、合せた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させた。
【０１９３】
その粗生物をＤＭＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に溶解させた。カリウム  チオアセテートをＤＭＦ中に溶解させ、その粗生物に添加した。その後、反応混合物を終夜攪拌した。溶媒を真空下で除去し、生じた茶色固体を５０ｍＬのＮＨ4Ｃｌ中に溶解させ、ジエチルエーテル（２×１００）で抽出し、水（２×１００）で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物（５）を酢酸エチル：アセトン（９５：０５）を用いてフラッシュクロマトグラフィーで精製して、橙色油を得た。
【０１９４】
【数３１】
2016538244.tif 000066
【０１９５】
HRMS: (ESI): (M+H)+:C11H20O4PSについて計算:279.0817;測定値：279.0814。
【０１９６】
アルキン（５）（１ｅｑ）およびアジド（６）（１．２ｅｑ）をＴＨＦ溶液中へ添加し、室温で攪拌する。Ｈ2Ｏ中の硫酸銅５水和物（１ｅｑ）およびＨ2Ｏ中の（＋）アスコルビン酸ナトリウム（２．５ｅｑ）を反応混合物へ滴下して添加し、その後、その溶液を室温で４８時間攪拌する。ＥＤＴＡ（１ｅｑ）を１ＭのＮａＯＨと共に攪拌溶液へ添加し、ｐＨ＞１０調節する。この反応混合物をその後、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで抽出する。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、減圧下で濃縮する。粗生成物（７）をカラムクロマトグラフィーを用いて精製する。
【０１９７】
２Ｍのメタノール中のナトリウム  チオメトキシド（１ｅｑ）を（７）（１ｅｑ）へ−２０℃でＮ2下で添加する。その混合物を３０分間−２０℃で攪拌する。生じた混合物を３ＮのＨＣｌ（ｍＬ）で酸性化し、酢酸エチル（３×−−ｍＬ）で抽出する。合せた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮して（８）を得る。
【０１９８】
実施例３６
メチル  （６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサノイル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
Ｂｏｃ−６−アミノヘキサン酸を適切な溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＤＣＭ）中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却した。Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン  メチルエステル塩酸塩およびＨＡＴＵをその後添加し、そして、ＮＭＭ（５７６μＬ、５，２４ｍｍｏｌ）を攪拌混合物へ添加した。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、ゆっくりと室温へ加熱した。その混合物をその後、室温で４時間放置した。その混合物をその後、水で希釈し、５×５０ｍＬｂのＥｔＯＡｃで抽出した。合せた有機相をため、０．５ＭのＮａＨＣＯ3（５０  ｍＬ）、０．１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗物質をその後、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１９９】
実施例３７
メチル  （６−アミノヘキサノイル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
実施例３６で製造されたｂｏｃ−アミンを適切な溶媒（例えば、ＤＣＭ）中に溶解させ、氷浴中で０℃へ冷却し、その後、５〜５０当量のＴＦＡをこの混合物へ添加する。この混合物を０℃で３０分間攪拌し、その後、４〜２４時間室温で攪拌し、その後、減圧下に濃縮する。粗物質をその後、ＤＣＭ中に再溶解させ、０．５ＭのＫ2ＣＯ3溶液３×５０ｍＬで抽出する。有機相をその後、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過して、濃縮する。この化合物が十分に純粋ではない場合、カラムクロマトグラフィーに付して標題化合物を得る。
【０２００】
実施例３８
メチル  （６−（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１５Ｒ，１５ａＲ）−１０−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−３−アセトキシ−４−（ジメチルアミノ）−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−１１−メトキシ−３ａ，４，７，９，１１，１３，１５−ヘプタメチル−２，６，８，１４−テトラオキソドデカヒドロ−２Ｈ−［１］オキサシクロテトラデシノ［４，３−ｄ］オキサゾール−１（４Ｈ）−イル）ヘキサノイル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートの製造
【０２０１】
【化３５】
2016538244.tif 000067
【０２０２】
２’−Ｏ−アセチル−１０，１１−ジジヒドロ−１１−デオキシ−１２−Ｏ−（１Ｈ−１−イミダゾイルカルボニル）−３−Ｏ−デス  クラジノシル−３−オキソ−６−Ｏ−メチル−エリスロマイシンＡを、適切な溶媒混合物（例えば、水：ＭｅＣＮ）中に、実施例３７で製造したメチル  （６−アミノヘキサノイル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニナートと共に懸濁させる。この混合物を５０℃まで１２〜７２時間、加熱する。この粗混合物を５％のＫＨ2ＰＯ4で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮する。この物質を、その後、カラムクロマトグラフィーにより精製して標題化合物を得る。
【０２０３】
実施例３９
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−２−（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１５Ｒ，１５ａＲ）−１−（４−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）フェネチル）−１１−メトキシ−３ａ，４，７，９，１１，１３，１５−ヘプタメチル−２，６，８，１４−テトラオキソテトラデカヒドロ−２Ｈ−［１］オキサシクロテトラデシノ［４，３−ｄ］オキサゾール−１０−イル）オキシ）−４−（ジメチルアミノ）−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル  アセテートの製造
【０２０４】
【化３６】
2016538244.tif 000068
【０２０５】
２’−Ｏ−アセチル−１０，１１−ジデヒドロ−１１−デオキシ−１２−Ｏ−（１Ｈ−１−イミダゾイルカルボニル）−３−Ｏ−デス  クラジノシル−３−オキソ−６−Ｏ−メチル−エリスロマイシンＡを、適切な溶媒混合物（例えば、水：ＭｅＣＮ）中にＮ−（４−（２−アミノエチル）フェニル）−２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミドと共に懸濁させる。その混合物を５０℃まで１２〜７２時間、加熱する。その粗混合物を５％のＫＨ2ＰＯ4およびＥｔＯＡｃで希釈し、抽出する。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。その物質は、その後、カラムクロマトグラフィーにより精製して標題化合物を得る。
【０２０６】
実施例４０
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−クロロアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
（＋）−６−アミノペニシラン酸を水とアセトンの混合物中に溶解させ、氷浴中で０℃に冷却する。炭酸カリウムを添加し、その混合物を５〜１０分間０℃で攪拌する。クロロアセチルクロリドをその後、攪拌混合物へ滴下して添加し、その混合物を０℃〜室温で完了するまで４〜４８時間放置する。アセトンを減圧下に除去し、その混合物を酸性化する。生成物を、沈殿物の濾過または、適切な有機溶媒による酸性水相の抽出により集めて単離する。さらなる精製が必要であれば、その化合物は再結晶またはカラムクロマトグラフィーにより精製される。
【０２０７】
実施例４１
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−クロロアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
７−アミノセファロスポラニン酸を水およびアセトンの混合物に溶解させ、氷浴中で０℃まで冷却する。炭酸カリウムを添加し、その混合物を０℃で５〜１０分間攪拌する。クロロアセチル  クロリド  をその後、攪拌混合物へ滴下して添加し、その混合物を０℃〜室温で完了するまで４〜４８時間放置する。アセトンを減圧下に除去し、その混合物を酸性化する。生成物を、沈殿物の濾過または、適切な有機溶媒による酸性水相の抽出により集めて単離する。さらなる精製が必要であれば、その化合物は再結晶またはカラムクロマトグラフィーにより精製される。
【０２０８】
実施例４２
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２０９】
【化３７】
2016538244.tif 000069
【０２１０】
予め製造したアルファ−クロロアミドをアセトニトリルまたは他の適切な有機溶媒中に溶解させる。アミン系塩基、例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１〜２０ｅｑ）をＫＩおよびジピコリルアミンと共に添加する。この混合物を２５〜１００℃で完了するまで１〜７２時間攪拌する。粗混合物を、カラムクロマトグラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により精製する。
【０２１１】
実施例４３
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２１２】
【化３８】
2016538244.tif 000070
【０２１３】
予め製造したアルファ−クロロアミドをアセトニトリルまたは他の適切な有機溶媒中に溶解させる。アミン系塩基、例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１〜２０ｅｑ）をＫＩおよびジピコリルアミンと共に添加する。この混合物を２５〜１００℃で完了するまで１〜７２時間攪拌する。粗混合物を、カラムクロマトグラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により精製する。
【０２１４】
実施例４４
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−アジドアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
２−アジド酢酸をＤＭＦ中溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却する。（＋）−６−アミノペニシラン酸および適切なカップリング剤（例えば、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ、ＣＤＩ）をその後添加し、ＮＭＭを攪拌混合物へ添加する。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、ゆっくり室温へ加熱する。その混合物をその後、室温で７２時間以下、放置した。その混合物をその後、減圧下で濃縮する。粗物質をその後、フラッシュカラムクロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２１５】
実施例４５
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−アジドアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
２−アジド酢酸をＤＭＦ中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却する。７−アミノセファロスポラニン酸および適切なカップリング剤（例えば、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ、ＣＤＩ）をその後添加し、その後、ＮＭＭを攪拌混合物へ添加する。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、ゆっくり室温へ加熱する。その混合物をその後、室温で７２時間以下、放置した。その混合物をその後、減圧下で濃縮する。粗物質をその後、フラッシュカラムクロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２１６】
実施例４６
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２１７】
【化３９】
2016538244.tif 000071
【０２１８】
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−アジドアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸およびジピコリル−プロパギルアミンを水およびｔｅｒｔ−ブタノールの混合物中に溶解させる。酢酸銅または硫酸銅および（＋）−アスコルビン酸ナトリウムを、それぞれ水中に溶解させ、同時に攪拌混合物へ滴下して添加する。その混合物をその後、２〜７日間または完了するまで、室温で静置する。その混合物をその後、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２１９】
実施例４７
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２２０】
【化４０】
2016538244.tif 000072
【０２２１】
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−アジドアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸およびジピコリル−プロパギルアミンを水およびｔｅｒｔ−ブタノールの混合物中に溶解させる。酢酸銅または硫酸銅および（＋）−アスコルビン酸ナトリウムを、それぞれ水中に溶解させ、同時に攪拌混合物へ滴下して添加する。その混合物をその後、２〜７日間または完了するまで、室温で静置する。その混合物をその後、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２２２】
実施例４８
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−３，３−ｄｉメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２２３】
【化４１】
2016538244.tif 000073
【０２２４】
標題化合物を、追加された塩基を有する有機溶媒中での２−クロロメチルピリジン塩酸塩による（＋）−６−アミノペニシラン酸のアルキル化または、適切な溶媒（例えば、エタノール）中、ＮａＢ（ＣＮ）3Ｈを２−ピリジンカルボアルデヒドと一緒に添加するか、または、ＮａＢＨ4を出発物質が全て消費された後に添加するかいずれかで、２−ピリジンカルボアルデヒドにより、還元的アルキル化のいずれかにより、製造する。粗生成物は、その後、カラムクロマトフラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により、精製する。
【０２２５】
実施例４９
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２２６】
【化４２】
2016538244.tif 000074
【０２２７】
標題化合物を、追加された塩基を有する有機溶媒中での２−クロロメチルピリジン塩酸塩による７−アミノセファロスポラニン酸のアルキル化、または、適切な溶媒（例えば、エタノール）中、ＮａＢ（ＣＮ）3Ｈを２−ピリジンカルボアルデヒドと一緒に添加するか、または、ＮａＢＨ4を出発物質が全て消費された後に添加するかいずれかで、２−ピリジンカルボアルデヒドにより、還元的アルキル化のいずれかにより、製造する。粗生成物は、その後、カラムクロマトフラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により、精製する。
【０２２８】
実施例５０
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２２９】
【化４３】
2016538244.tif 000075
【０２３０】
エステルエチル  ビス（ピリジン−２−イルメチル）グリシネートを、Ｈ2Ｏおよび５ＭのＫＯＨ溶液中に溶解させる。その混合物を室温で６０分間攪拌し、ｐＨを１ＭのＨＣｌで７に調節する。その溶液を減圧下で薄橙色粘性固体まで濃縮し、それを熱無水エタノールで洗浄する。合せたエタノールをその後、減圧下で茶色油まで濃縮し、その油をさらなる精製を行わずに次の工程で用いる。（＋）−６−アミノペニシラン酸を、その粗酸、Ｎ−メチル  モルホリン、ＨＯＢＴおよび無水エタノールと混合し、１０℃まで冷却する。ＥＤＣをその後、攪拌溶液へ添加する。その溶液をその後室温まで加熱し、４時間攪拌する。その混合物を減圧下で濃縮し、Ｈ2Ｏ中に希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出する。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、濃縮する。その粗生成物を、カラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を生じる。
【０２３１】
実施例５１
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２３２】
【化４４】
2016538244.tif 000076
【０２３３】
エステルエチル  ビス（ピリジン−２−イルメチル）グリシネートを、Ｈ2Ｏおよび５ＭのＫＯＨ溶液中に溶解させる。その混合物を室温で６０分間攪拌し、ｐＨを１ＭのＨＣｌで７に調節する。その溶液を減圧下で薄橙色粘性固体まで濃縮し、それを熱無水エタノールで洗浄する。合せたエタノールをその後、減圧下で茶色油まで濃縮し、その油をさらなる精製を行わずに次の工程で用いる。７−アミノセファロスポラニン酸を、その粗酸、Ｎ−メチル  モルホリン、ＨＯＢＴおよび無水エタノールと混合し、１０℃まで冷却する。ＥＤＣをその後、攪拌溶液へ添加する。その溶液をその後室温まで加熱し、４時間攪拌する。その混合物を減圧下で濃縮し、Ｈ2Ｏ中に希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出する。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、濃縮する。その粗生成物を、カラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を生じる。
【０２３４】
実施例５２
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アミノ−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
（＋）−６−アミノペニシラン酸のメタノール溶液を氷浴中で０℃まで冷却し、ゆっくり、ＳＯＣｌ2、（ＣＯＣｌ）2、ＴＭＳ−ＣＨＮ2またはＣＨ2Ｎ2のいずれかを添加する。反応を完了させ、その後、減圧下で濃縮する。生じたエステルは、抽出、再結晶もしくはカラムクロマトグラフィーにより精製するか、または、更なる精製を行わずに次の反応で用いる
実施例５３
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−アミノ−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
７−アミノセファロスポラニン酸のメタノール溶液を氷浴中で０℃まで冷却し、ゆっくり、ＳＯＣｌ2、（ＣＯＣｌ）2、ＴＭＳ−ＣＨＮ2またはＣＨ2Ｎ2のいずれかを添加する。反応を完了させ、その後、減圧下で濃縮する。生じたエステルは、抽出、再結晶もしくはカラムクロマトグラフィーにより精製するか、または、更なる精製を行わずに次の反応で用いる。．
実施例５４
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−アジドアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
２−アジド酢酸をＤＭＦ中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却する。メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アミノ−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートおよび適切なカップリング剤（例えば、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ、ＣＤＩ）をその後添加し、その後、ＮＭＭを攪拌混合物へ添加する。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、ゆっくり室温へ加熱する。その混合物をその後、室温で７２時間以下、放置した。その混合物をその後、減圧下で濃縮する。粗物質をその後、フラッシュカラムクロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２３５】
実施例５５
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−アジドアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
２−アジド酢酸をＤＭＦ中に溶解させ、氷水浴中で０℃まで冷却する。メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−アミノ−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートおよび適切なカップリング剤（例えば、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ、ＣＤＩ）をその後添加し、その後、ＮＭＭを攪拌混合物へ添加する。その混合物を氷水浴中に３０分間放置し、その後、ゆっくり室温へ加熱する。その混合物をその後、室温で７２時間以下、放置した。その混合物をその後、減圧下で濃縮する。粗物質をその後、フラッシュカラムクロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２３６】
実施例５６
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−アジドアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートおよびジピコリル−プロパギルアミンを水およびｔｅｒｔ−ブタノールの混合物中に溶解させる。酢酸銅または硫酸銅および（＋）−アスコルビン酸ナトリウムを、それぞれ水中に溶解させ、同時に攪拌混合物へ滴下して添加する。その混合物をその後、２〜７日間または完了するまで、室温で静置する。その混合物をその後、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２３７】
実施例５７
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−アジドアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートおよびジピコリル−プロパギルアミン  を水およびｔｅｒｔ−ブタノールの混合物中に溶解させる。酢酸銅または硫酸銅および（＋）−アスコルビン酸ナトリウムを、それぞれ水中に溶解させ、同時に攪拌混合物へ滴下して添加する。その混合物をその後、２〜７日間または完了するまで、室温で静置する。その混合物をその後、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーまたは再結晶により精製する。
【０２３８】
実施例５８
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２３９】
【化４５】
2016538244.tif 000077
【０２４０】
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレート  氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。。  最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２４１】
実施例５９
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２４２】
【化４６】
2016538244.tif 000078
【０２４３】
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（４−（（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを、氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２４４】
実施例６０
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−クロロアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アミノ−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートを水およびアセトンの混合物中に溶解させ、氷浴中で０℃まで冷却する。炭酸カリウムを添加し、その混合物を０℃で５〜１０分間攪拌する。クロロアセチルクロリドをその後、攪拌混合物へ滴下して添加し、その混合物を０℃〜室温で完了するまで４〜４８時間放置する。アセトンを減圧下に除去し、その混合物を酸性化する。生成物を、沈殿物の濾過または、適切な有機溶媒による酸性水相の抽出により集めて単離する。さらなる精製が必要であれば、その化合物は再結晶またはカラムクロマトグラフィーにより精製される。
【０２４５】
実施例６１
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−クロロアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−アミノ−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを水およびアセトンの混合物中に溶解させ、氷浴中で０℃まで冷却する。炭酸カリウムを添加し、その混合物を０℃で５〜１０分間攪拌する。クロロアセチルクロリドをその後、攪拌混合物へ滴下して添加し、その混合物を０℃〜室温で完了するまで４〜４８時間放置する。アセトンを減圧下に除去し、その混合物を酸性化する。生成物を、沈殿物の濾過または、適切な有機溶媒による酸性水相の抽出により集めて単離する。さらなる精製が必要であれば、その化合物は再結晶またはカラムクロマトグラフィーにより精製される。
【０２４６】
実施例６２
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−クロロアセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートをアセトニトリルまたは他の適切な有機溶媒中に溶解させる。アミン系塩基、例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１〜２０ｅｑ）をＫＩおよびジピコリルアミンと共に添加する。この混合物を２５〜１００℃で完了するまで１〜７２時間攪拌する。粗混合物を、カラムクロマトグラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により精製する。
【０２４７】
実施例６３
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−クロロアセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを、アセトニトリルまたは他の適切な有機溶媒中に溶解させる。アミン系塩基、例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１〜２０ｅｑ）をＫＩおよびジピコリルアミンと共に添加する。この混合物を２５〜１００℃で完了するまで１〜７２時間攪拌する。粗混合物を、カラムクロマトグラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により精製する。
【０２４８】
実施例６４
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２４９】
【化４７】
2016538244.tif 000079
【０２５０】
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートを氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２５１】
実施例６５
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２５２】
【化４８】
2016538244.tif 000080
【０２５３】
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを、氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２５４】
実施例６６
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
標題化合物を、追加された塩基を有する有機溶媒中での２−クロロメチルピリジン塩酸塩によるメチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アミノ−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートのアルキル化か、または、適切な溶媒（例えば、エタノール）中、ＮａＢ（ＣＮ）3Ｈを２−ピリジンカルボアルデヒドと一緒に添加するか、または、ＮａＢＨ4を出発物質が全て消費された後に添加するかいずれかで、２−ピリジンカルボアルデヒドにより、還元的アルキル化のいずれかにより、製造する。粗生成物は、その後、カラムクロマトフラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により、精製する。
【０２５５】
実施例６７
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
標題化合物を、追加された塩基を有する有機溶媒中での２−クロロメチル  ピリジン塩酸塩によるメチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−アミノ−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートのアルキル化か、または、適切な溶媒（例えば、エタノール）中、ＮａＢ（ＣＮ）3Ｈを２−ピリジンカルボアルデヒドと一緒に添加するか、または、ＮａＢＨ4を出発物質が全て消費された後に添加するかいずれかで、２−ピリジンカルボアルデヒドにより、還元的アルキル化のいずれかにより、製造する。粗生成物は、その後、カラムクロマトフラフィーまたは適切な溶媒混合物からの再結晶により、精製する。
【０２５６】
実施例６８
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２５７】
【化４９】
2016538244.tif 000081
【０２５８】
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートを氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２５９】
実施例６９
（６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２６０】
【化５０】
2016538244.tif 000082
【０２６１】
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２６２】
実施例７０
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートの製造
エステルエチル  ビス（ピリジン−２−イルメチル）グリシネートを、Ｈ2Ｏおよび５ＭのＫＯＨ溶液中に溶解させる。その混合物を室温で６０分間攪拌し、ｐＨを１ＭのＨＣｌで７に調節する。その溶液を減圧下で薄橙色粘性固体まで濃縮し、それを熱無水エタノールで洗浄する。合せたエタノールをその後、減圧下で茶色油まで濃縮し、その油をさらなる精製を行わずに次の工程で用いる。メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−アミノ−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートを前記粗酸、Ｎ−メチルモルホリン、ＨＯＢＴおよび無水エタノールと混合し、１０℃まで冷却する。ＥＤＣをその後、攪拌溶液へ添加する。その溶液をその後室温まで加熱し、４時間攪拌する。その混合物を減圧下で濃縮し、Ｈ2Ｏ中に希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出する。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、濃縮する。その粗生成物を、カラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を生じる。
【０２６３】
実施例７１
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートの製造
エステルエチル  ビス（ピリジン−２−イルメチル）グリシネートを、Ｈ2Ｏおよび５ＭのＫＯＨ溶液中に溶解させる。その混合物を室温で６０分間攪拌し、ｐＨを１ＭのＨＣｌで７に調節する。その溶液を減圧下で薄橙色粘性固体まで濃縮し、それを熱無水エタノールで洗浄する。合せたエタノールをその後、減圧下で茶色油まで濃縮し、その油をさらなる精製を行わずに次の工程で用いる。メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−アミノ−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを、粗酸、Ｎ−メチルモルホリン、ＨＯＢＴおよび無水エタノールと混合し、１０℃まで冷却する。ＥＤＣをその後、攪拌溶液へ添加する。その溶液をその後室温まで加熱し、４時間攪拌する。その混合物を減圧下で濃縮し、Ｈ2Ｏ中に希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出する。合せた有機相をＫ2ＣＯ3で乾燥し、濃縮する。その粗生成物を、カラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を生じる。
【０２６４】
実施例７２
（２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボン酸の製造
【０２６５】
【化５１】
2016538244.tif 000083
【０２６６】
メチル  （２Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−３，３−ジメチル−７−オキソ−４−チア−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタン−２−カルボキシレートを、氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２６７】
実施例７３
６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸の製造
【０２６８】
【化５２】
2016538244.tif 000084
【０２６９】
メチル  （６Ｓ，７Ｒ）−３−（アセトキシメチル）−７−（２−（ビス（ピリジン−２−イルメチル）アミノ）アセトアミド）−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボキシレートを、氷水浴を用いて０℃に冷却したＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解させ、水および０．５Ｍの水酸化リチウム水溶液と混合する。反応は完了するまで１〜４８時間攪拌する。溶液のｐＨは、０．１ＭのＨＣｌを用いて７に調節され、減圧下に溶媒を除去する。その混合物を無水エタノール中に溶解させ、濾過して塩を除去し、減圧下に溶媒を除去する。最終生成物は、適切な溶媒もしくは溶媒混合物からの再結晶を用いるか、または、クロマトグラフィーにより、精製してもよい。
【０２７０】
実施例７４
精製したＭＢＬｓに対する化合物のＩＣ50値の測定
ＩＣ50値を測定するための一般的な計画案
緩衝液：
Ａ：  ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ  ７．２、１００μＭ  ＺｎＣｌ2
Ｂ：  ５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ  ７．２、１００μＭ  ＺｎＣｌ2および４００μｇ／ｍｌ  ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
装置：
ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ９６ウェル・リーダー
９６  ウェル・プレート
キュベット
一般的なプラスチック類：  希釈チューブ、エッペンドルフ等。
方法：
阻害剤：
ａ．  １００％ＤＭＳＯ中に１０ｍＭの濃度で溶解させる
ｂ．  阻害剤を緩衝液Ａ中に２５％ＤＭＳＯの濃度になるまで溶解させる。２．５％ＤＭＳＯより高い濃度はアッセイにおいて許容されない。１００％ＤＭＳＯ（１０ｍＭ）；２５％ＤＭＳＯ（０．２５ｍＭ）；２．５％ＤＭＳＯ（２．５ｍＭ）
ｃ．  前記阻害剤の２倍の希釈シリーズを作成する。少なくとも８つの希釈を作成すべき。表１の例を参照。
レポーター基質（ニトロセフィン）：
ａ．  ＤＭＳＯ中に少量のニトロセフィンを希釈する
ｂ．  ９９０μｌの緩衝液Ａ＋１０μｌのニトロセフィンを、キュベットへ加える
ｃ．  基質について特異的な吸光度で最初のＯＤを測定する
ｄ．  精製した酵素を前記キュベットに加え、加水分解を完全に起こさせる（酵素の濃度が高いほど、加水分解が早く進行）
ｅ．  最終のＯＤを測定
ｆ．  基質の濃度を算出：［（最終ＯＤ−最初のＯＤ）×希釈因子］／△ε（△εニトロセフィン＝１７４００）
ｇ．  ニトロセフィンを１００μＭまで緩衝液Ａ中で希釈
酵素：  緩衝液Ｂ中の精製酵素を１０ｎＭの濃度まで希釈。
アッセイ：
ａ．  Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ／ソフトウェアの設定と温度をセットする：
Ｉ．  動力学
ＩＩ．  λ：４８２
ＩＩＩ．  時間：２０分
ＩＶ．  間隔：２〜５秒
Ｖ．  最初の読み取り：５秒の前に混合
ＶＩ．  温度：２５℃
ｂ．  ３０μｌの緩衝液Ａ、１０μｌの精製酵素（最終濃度１ｎＭ）および１０μｌの阻害剤を、アッセイ・ウェルへ添加する（各阻害剤濃度について二重に）。また、ネガティブ・コントロールも含める。阻害剤を添加しない、単に４０μｌの緩衝液Ａのみのウェル。表１参照
ｃ．  リーダー中のプレートを５分間インキュベートする
ｄ．  ５０μｌのニトロセフィン（最終濃度５０μＭ）をアッセイ・ウェルに添加する。これはすばやく行うべきである。好ましくは、電気的マルチチャンネルのピペットを用いて
ｅ．  読み取りをすばやくスタートする
測定：
各阻害剤濃度についての最初の側度（Ｖ０）およびＩＣ50を算出する。
【０２７１】
【表１】
2016538244.tif 000085
【０２７２】
結果:
ＩＣ５０測定の結果を表２に示す。阻害カーブの例は、以下の図に示す。
A.  実施例３の化合物
【０２７３】
【数３２】
2016538244.tif 000086
【０２７４】
B.  実施例１３の化合物
【０２７５】
【数３３】
2016538244.tif 000087
【０２７６】
C.  実施例２４の化合物
【０２７７】
【数３４】
2016538244.tif 000088
【０２７８】
【表２】
2016538244.tif 000089
【０２７９】
結果により、これらの化合物は、３つの異なる精製ＭＢＬをμＭ（ＶＩＭ−２）およびサブμＭ範囲（ＮＤＭ−１およびＧＩＭ−１）で阻害することが示された。
【０２８０】
実施例77:
ＭＢＬを発現した構成された大腸菌細胞中のＭＢＬ阻害活性の結果
ＭＢＬを発現した大腸菌細胞中で阻害活性を測定するための一般的な計画案
緩衝液：  緩衝液Ａ：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ  ７．２、１００μＭ  ＺｎＣｌ2
装置：  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ９６ウェル・リーダー
９６ウェル・プレート
キュベット
一般的なプラスチック類：希釈チューブ、エッペンドルフ等。
【０２８１】
方法:
第１日め：
１．  ５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢプレート中にバクテリア細胞を固定する
第２日め：
１．  ５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含む１００ｍｌのＬＢ中に、２〜４のコロニーを接種する
２．  振動させながら３７℃で終夜、接種する
第３日め：
阻害剤：
ａ．  エッペンドルフ・チューブ中に少量の阻害剤（〜５ｍｇ）を量り入れる
ｂ．  阻害剤を緩衝液Ａまたは２５％ＤＭＳＯ有りの緩衝液Ａで、１００ｍＭの濃度まで希釈する
レポーター基質（ニトロセフィン）
ａ．  少量のニトロセフィンを１ｍｌのＤＭＳＯ中に希釈する
ｂ．  ９９０μｌの緩衝液Ａ＋１０μｌのニトロセフィンをキュベットに加える
ｃ．  吸光度４８２で最初のＯＤを測定
ｄ．  Ａｄｄ  精製ＭＢＬ酵素を前記キュベットに加え、加水分解を完全に起こさせる
ｅ．  最終のＯＤを測定
ｆ．  基質の濃度を算出：［（最初のＯＤ−最終ＯＤ）×希釈因子］／△ε
g.  ニトロセフィンを緩衝液AまたはH2O中で3.2mMまで希釈する。
【０２８２】
終夜培養：
ａ．  終夜培養物をＬＢ培地中、ＯＤ600＝１まで希釈する。
【０２８３】
アッセイ：
ａ．  ５０μｌのＬＢを０．８ｍＭのＩＰＴＧ（アッセイにおいて０．４ｍＭの最終濃度）と共に各ウェルへ移す
ｂ．  １μｌの阻害剤／ポジティブ・コントロール（アッセイにおいて５００／１０００μＭ最終濃度）を選択したウェルに添加
ｃ．  ５０μｌの終夜培養物（ＯＤ600＝１）を各ウェルに添加
ｄ．  プレート・リーダーを３７℃で２０分間、振動させながらインキュベートする
ｅ．  マルチチャンネルピペットを用いて５μｌのニトロセフィン（３．２ｍＭ）を選択したウェルに添加する
ｆ．  プレート・リーダーを３時間、インキュベートし、ニトロセフィン加水分解をＡ482で振動の間に毎分測定する
ｇ．  終点をＡ600で測定し、どのように阻害剤のみがバクテリア成長に影響したのか、確認する
ｈ．  プレートを２８００ｒｐｍで１０分間、遠心分離して、新しいウェルへ５０μｌを移す
ｉ．  Ａ482終点を測定する。
【０２８４】
結果：
大腸菌で発現したＶＩＭ−２およびＧＩＭ−１の阻害を示す結果を表３に示す。
【０２８５】
【表３】
2016538244.tif 000090
【０２８６】
結果により、これらの化合物は、大腸菌の外側膜を通過可能であり、ペリプラスム間隙に位置するＭＢＬを阻害することが示された。化合物ごとに様々な程度の阻害が、観察され、阻害活性は、ＧＩＭ−１と比較してＶＩＭ−２に対するものが最も強かった。
【０２８７】
実施例７８
メロペネムと化合物の相乗作用効果を測定するためのマイクロブロス希釈方法の結果
化合物の抗バクテリア活性または化合物-抗生物質組み合わせの相乗作用効果を測定するための、マイクロブロス希釈方法のための一般的な計画案
菌の準備
第１日め: 
・バクテリア菌株を適切なメディア上に固定する:
・ESBLsまたはカルバペネマーゼとグラム陰性菌:100mg/Lのアンピシリンを有するグリーン・寒天培地プレート
・β-ラクタマーゼ無しのグラム陰性菌:グリーン・寒天培地プレート
・グラム陽性菌(Staphylococci and Enterococci):血液寒天培地プレート
・３７℃またはそれに近い温度でインキュベート
第２日め：
バクテリア接種物の準備：
・０．８５％  ＮａＣｌ中の菌のマクファーランド（ＭｃＦａｒｌａｎｄ）懸濁液を調製する（１５分以内の調製品を用いるべき）。
【０２８８】
・その０．５  マクファーランド懸濁液１：１００をＭＨ培地中に希釈する。調製したバクテリア懸濁液１：１００（１０μｌのバクテリア懸濁液＋９９０μｌの０．８５％のＮａＣｌ）を希釈することにより、接種物をチェックする。１０μｌの希釈液をＭＨ寒天培地プレート上に固定する（×２）。３７℃またはそれに近い温度でインキュベートし、コロニーを数え、プレート中の最終ＣＦＵ／ｍｌの接種物を、コロニーの平均数×１０００、次いで２で割ることにより、算出する。最終接種物は、３〜７×１０5ＣＦＵ／ｍｌである
・５０μｌの調製したバクテリア懸濁液を、ネガティブ成長コントロールを除き、マイクロタイター・プレート中の各ウェルに添加する。
【０２８９】
化合物／抗生物質の準備
・アッセイにおいて、所望の濃度範囲および容量の化合物／抗生物質を算出する。抗生物質については、これは、試験されるバクテリア菌株のメロペネムへのＭＩＣに左右される。ＭＨ培地中のストック溶液を希釈する。次いで、濃度範囲を試験すべき範囲内である場合、所望濃度のＭＨ培地中で２倍に希釈する
（アッセイプレートにおいて余分な希釈因子を覚えておく）。常にピペット用に余分な量を含む。バクテリア成長に影響がある緩衝液中で形成されたストック溶液を考慮にいれる（例えば、ＤＭＳＯ）。
【０２９０】
アッセイ：
・化合物／抗生物質単独のＭＩＣの測定：
・２５μｌの各濃度の化合物／抗生物質を列２〜１１（列２を最も高い濃度にする）に添加する
・２５μｌのＭＨ培地を列２〜１１に添加する
・５０μｌのＭＨ培地を列１２に添加する（ポジティブ・コントロール）
・１００μｌのＭＨ培地を列１に添加する
・５０μｌのバクテリア懸濁液を列２〜１２に添加する
・抗生物質＋化合物のＭＩＣを測定する：
・２５μｌの各濃度の抗生物質を列２〜１１（列２を最も高い濃度にする）へ添加する
・２５μｌの化合物を列２〜１１へ添加する
・５０μｌのＭＨ培地を列１２へ添加する（ポジティブ・コントロール）
・１００μｌのＭＨ培地を列１へ添加する
・５０μｌのバクテリア懸濁液を列２〜１２へ添加する
・このプレートを３７℃で２０時間インキュベートし、阻害剤が存在する場合と不在の場合のＭＩＣを測定する。
【０２９１】
結果：
化合物の存在下および不在下における、ＭＢＬｓのポジティブおよびネガィブの両方について臨床的グラム陰性隔離物に対するメロペネムの最小阻害濃度（ＭＩＣ）は、表４に示す。
【０２９２】
【表４】
2016538244.tif 000091
【０２９３】
まとめると、首位はＯＡＡ４０３３（実施例２４）であり、我々の候補の幾つかは、異なる臨床的菌株のＭＢＬ生産Ｐ．  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｋ．  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよび大腸菌に対する抗菌活性を保全するメロペネムの強い相乗作用能力を示した。その相乗作用効果は、種を問わなかった。ＯＡＡ４０３３（実施例２４）とＯＡＡ４０８５（実施例１２）には、ＭＢＬネガティブ臨床的菌株において相乗作用効果は観察されなかった。このことは、この効果がＭＢＬ−生産隔離物について、特異的であることを示している。化合物の本来備わっている抗菌活性を試験することにより、全てが、≧１０００μＭのＭＩＣを有し、化合物が本来備わっている抗菌活性は除外されることが示された。メロペネムおよびＴＰＥＮとの相乗作用効果は、予期したように観察された。ＴＰＥＮが、アッセイにおいて試験濃度（１２５μＭ）よりほんの上の濃度で、幾つかの隔離物に対して本来備わっている抗菌活性（ＭＩＣｓ  ２５０μＭ〜１０００μＭ）を示すことは、注目されるべきである。カプトプリルとの間には相乗作用効果は観察されなかった。
【国際調査報告】
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