(57)【要約】  この発明は、ナトリウム−ヨウ素シンポータ（ＮＩＳ）を阻害するための、特にＮＩＳ−発現細胞へのヨウ素の輸送および／または蓄積を低減するための医薬として使用するための式（Ｉ）の新規な化合物に関する。2016500096.tif 000024  本発明は、活性成分として少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物にも関する。また、本発明は特定の式（Ｉ）の化合物自体にも関する。【選択図】  なし
2016500096.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式：
【化１】
2016500096.tif 000020
（式中、
XはO、S または NR（ここで、R は水素原子、または任意に置換されていてもよいC1-C20 の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル、または任意に置換されていてもよいC3-C7 のシクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルは一つ以上のヘテロ原子もしくはカルボニル基を含んでいてもよく、
YはO、 S またはNHであり、
Z は単なる結合手、または任意に置換されていてもよいC2-C6の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキルもしくはアルケニル、または任意に置換されていてもよいC3-C6 シクロアルキルであり、
R1 は任意に置換されていてもよい芳香族環であり、
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9およびR10は、同一または異なって、水素原子、任意に置換されていてもよいC1-C20の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキル基から選択され、
ここで、X またはYの少なくとも一方はOまたはSである）
で表され、ナトリウム−ヨウ素シンポータ（ＮＩＳ）阻害用の医薬として用いられる化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
ＸがＮＨである、請求項１に記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
ＹがＯである、請求項１または２に記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｚが単なる結合手であるか、またはＣ2２重結合であり、好ましくはＺが単なる結合手である、請求項１〜３のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ1が任意に置換されていてもよいアリールもしくはヘテロアリール環である、請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ1が２，３−（メチレンジオキシ）フェニル基、または少なくとも一つのハロゲン原子、ニトロ（ＮＯ2）、アミノ（ＮＨ2）もしくはＣ1〜Ｃ6アルコキシ基で置換されたフェニル環である、請求項５に記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9 およびR10 が水素原子である、請求項１〜６のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
ＮＩＳ−発現細胞へのヨウ素の輸送および／または蓄積を低減するための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
機能的イメージングによりＮＩＳ病状をインビボ診断するための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
放射性ヨウ素種に曝された後の放射性ヨウ素の汚染を除去するための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項１１】
甲状腺障害、ならびにより具体的にはヨウ素の過剰負荷により惹き起こされる甲状腺機能亢進症、甲状腺中毒症、甲状腺炎、および有毒な小結節甲状腺腫の予防および／または治療のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項１２】
癌、およびより具体的には甲状腺癌および肺癌の予防および／または治療のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項１３】
自己免疫疾患、およびより具体的にはハシモトおよびバセドウ−グレーブ病の予防および／または治療のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）の化合物。
【請求項１４】
活性成分として請求項１〜７のいずれかに記載された少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物、および少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１５】
医薬として使用するための、次の式（Ｉ）：
【化２】
2016500096.tif 000021
（式中、
XはO、S または NR（ここで、R は水素原子、または任意に置換されていてもよいC1-C20 の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル、または任意に置換されていてもよいC3-C7 のシクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルは一つ以上のヘテロ原子もしくはカルボニル基を含んでいてもよく、
YはO、 S またはNHであり、
Z は単なる結合手、または任意に置換されていてもよいC2-C6の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキルもしくはアルケニル、または任意に置換されていてもよいC3-C6 のシクロアルキルであり、
R1 は任意に置換されていてもよい芳香族環であり、
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9およびR10は水素原子であり、
ここで、X またはYの少なくとも一方はOまたはSである）
で表される化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項１６】
活性成分として請求項１５に規定された少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物、および少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１７】
以下の式（Ｉ）の化合物：
【化３−１】
2016500096.tif 000022
【化３−２】
2016500096.tif 000023
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、医薬として使用するための、特にナトリウム−ヨウ素シンポータ（symporter）（NIS）の阻害剤、およびNIS−発現細胞へのヨウ素輸送および／または蓄積の低減剤として使用するための、式（Ｉ）の新規な化合物に関するものである。
【０００２】
また、本発明は、活性成分として少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物にも関する。
さらに、本発明は、式（Ｉ）の特定の化合物自体にも関する。
【背景技術】
【０００３】
血液から甲状腺へのヨウ素の輸送は、甲状腺ホルモンT３およびT４の生合成に必須である。これらのヨウ素化されたホルモン類は、代謝調節および中枢神経系の発達のような脊椎動物における多くの生体メカニズムに責任がある。（S. P. Porterfield ら、Endocr. Rev., 1993, 14, 94-106）。
【０００４】
甲状腺によるヨウ素の捕捉は、甲状腺細胞の基底外側に位置する膜貫通型の糖タンパク質であるナトリウム−ヨウ素シンポータ（NIS）により媒介されている。
NISの分子の特徴づけは、1996年にラットおよびヒトの型をクローニングして行われた（G. Dai, Nature, 1996, 379, 458-460; P. A. Smanik, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996, 226, 339-345）。
NISは、甲状腺小胞細胞中、ならびに唾液腺、胃粘膜および乳腺を含むその他いくつかの組織中にも必然的に発現される。
【０００５】
そのほか、ClO4-、SCN-、BF4-、PF6-、NO3- のような１価のアニオンも、NISにより輸送され得る（J. Wolff, Physiol. Rev., 1964, 44, 45-90; P. A. Jones, Toxicology in vitro, 1996, 10, 149-160）。それらはラットの甲状腺−由来細胞（FRTL5）におけるヨウ素輸送を、それぞれ0.14、14、0.75、0.009および250 μMのIC50 値でもって競合的に抑制する（F. Waltz et al., Anal. Biochem., 2010, 396, 91-95）。
【０００６】
生化学的な分析により、ヨウ素の取り込みのメカニズムが明らかとなり、多くの甲状腺疾患ならびに癌（甲状腺、肺、・・・）（T. Kogaiら、Endocr. Relat. Cancer, 2006, 13, 797-826）、自己免疫疾患（ハシモトおよびバセドウ−グレイブ病）、毒性小結節、甲状腺炎、多結節性甲状腺腫などのような甲状腺外疾患（O. Dohan ら、Endocr. Rev., 2003, 24, 48-77）におけるNISの重要な役割が明らかになった。
【０００７】
これらの甲状腺関連障害の罹患割合は、西洋諸国で７０％に近い。さらに、原子力事故の場合、甲状腺によるヨウ素の放射性同位元素の危険性は、この蓄積が癌発症率の増大に直接的に関与しているので、問題の主な根源となっている。
【０００８】
この劇的な例は、チェルノブイリ（1986）およびフクシマ（2011）の事故である（G. Brumfielら、Nature, 2011, 471, 273-275）。
核反応容器崩壊の影響は悲惨であり、早急に放射能汚染を予防し、処理する方法を見出すことが求められている。
一つの解決方法は、放射性ヨウ素の取込みを阻止できる、そして／またはより好ましくは汚染が起こってしまった後で化学療法できる、放射線防護可能な低分子を開発することである。
【０００９】
他方、放射性ヨウ素を蓄積する甲状腺の能力は、甲状腺障害の診断および治療のための基礎を長期にわたって提供してきた（E. L. Mazzaferri, The thyroid: a fundamental and clinical text 7th ed.; Braverman, L. E.; Utiger R. D. Eds; Lippincott-Raven: Philadelphia, 1996; pp. 922-945）。
【００１０】
今日、標的となったNIS遺伝子の伝達後に、131Ｉによる癌細胞の診断および破壊のために、この戦略を甲状腺外の組織に広げることが提案されている（D. P. Carvalho ら、Arq. Bras. Endocrinol. Metabol., 2007, 51, 672-682; C. Spitzweg ら、Clin. Endocrinol., 2002, 57, 559-574）。
【００１１】
この場合、NIS−発現細胞中に放射性ヨウ素の停滞を増す化合物は、強力かつ特定の毒性効果を確保するのに極めて有用である（N. Lecat-Guilletら、ChemMedChem, 2008, 3, 1211-1216; T. Kogai ら、Endocr. Relat., Cancer, 2006, 13, 797-826）。
多くの甲状腺および非甲状腺機能障害の研究および治療のために、NIS機能に影響する低分子はユニークなツールである。
【００１２】
最近になって、高処理量のスクリーニングにより、新しい強力なヨウ素取込み阻害剤が発見されている（ITB-1〜ITB-10、スキーム１）（N. Lecat-Guillet ら、ChemBioChem, 2008, 9, 889-895）。
【００１３】
これらの化合物は、ヒトNIS（hNIS-HEK293）を安定的に発現するヒト胎児の腎臓細胞、ならびにラットの甲状腺−由来の細胞株（FRTL5）におけるアイソトープの流動測定を用いて、阻害濃度値（IC50）ナノモル−およびマイクロモルの範囲で、ヨウ素伝達の速やかで総体的な阻害を示した。
【００１４】
この阻害は、キセノプス・ラエヴィス（Xenopus laevis）からの. hNIS−発現性卵母細胞におけるヨウ素誘発性流れの測定によって、さらに確認された。
化合物１および２のIC50値は、FRTL5細胞において、0.4 μMおよび0.3 μMであったと報告されている。
さらなる分析は、化合物１および２が200 μMまでの濃度で 細胞毒性のないことを示した。
【００１５】
強力なヨウ素取込み阻害剤としての化合物１および２の発見は、テトラヒドロ−β−カルボリンが低コストで大規模に合成できる小さくて融通のきく構造であるから、特に魅力的である。この化合物の基本型は、多くの天然の物質、医薬および医薬候補品に見られる。
【００１６】
NIS阻害剤の第２のファミリーは、ITB-9から導かれる。ITB-9コアについての化学的利用および構造−活性研究により、ナノ−〜サブナノモルのNIS阻害剤が最近になって発見された（P. Lacotte ら、ChemMedChem, doi: 10.1002/cmdc.201200417）。
【００１７】
HTSにより見出されたこれら２つのクラスの阻害剤のほかに、ITB-11 と称されるもう一つの低分子がFRTL5細胞においてIC50 値 0.4 μM でヨウ素取込み阻害作用を有することが確認された（N. Lecat-Guillet ら、ChemMedChem, 2008, 3, 1207-1209）。
【００１８】
ITB-11は、それがNIS基質 BF4- と構造的な類似性を共有しているため、論理的なデザインから見出された。
【００１９】
【化１】
2016500096.tif 000003
【００２０】
スキーム１：ハイスループット・スクリーニングにより見出されたITB類（ITB1〜10）の一般的な構造、および論理的なデザインから特定されたITB-11。強調されているのはITB-1およびITB-2（化合物１および２）である。
【発明の概要】
【００２１】
本発明者らは、驚くべきことに、FRTL5細胞中におけるヨウ素の取込みに対する改善された効果を有する新しい化合物群を、それらのIC50 値を測定することにより見出した。
【００２２】
この新しい化合物群は、化合物１および２と比べて、NIS機能を阻害する生理活性が強力に高められていることを示す。そのため、本発明のこれらの化合物はインビボで適用するのに、より適している。
【００２３】
その上、（甲状腺機能亢進症および甲状腺中毒症のいくつかの場合に）冷ヨウ素の過剰蓄積の逆効果に対して、ヨウ素の放射性同位元素による汚染に抵抗でき、かつNISの機能的イメージングに使用できる化合物は、今のところ入手できない。
【００２４】
したがって、本発明の第１の課題は、ナトリウム−ヨウ素シンポータ（NIS）阻害用医薬として使用するための、次の式（Ｉ）：
【化２】
2016500096.tif 000004
（式中、
XはO、S または NR（ここで、R は水素原子、または任意に置換されていてもよいC1-C20 の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル、または任意に置換されていてもよいC3-C7 のシクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルは一つ以上のヘテロ原子もしくはカルボニル基を含んでいてもよく、
YはO、 S またはNHであり、
Z は単なる結合手、または任意に置換されていてもよいC2-C6直鎖もしくは分枝鎖状のアルキルもしくはアルケニル鎖、または任意に置換されていてもよいC3-C6 シクロアルキルであり、好ましくはZ は単なる結合手であるかまたはC2 ２重結合であり、さらに好ましくはZ は単なる結合手であり、
R1 は任意に置換されていてもよい芳香族環であり、
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9およびR10は、同一または異なって、水素原子、任意に置換されていてもよいC1-C20直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキル基から選択され、
ここで、X またはYの少なくとも一方はOまたはSである）
の化合物または医薬的に許容されるその塩である。
【００２５】
本発明において、NIS阻害剤は、NIS−発現細胞が濃度に関係なく、ヨウ素で0.3 μmol.L-1より低い濃度の化合物とともに培養されたときに、NIS−発現細胞中へ輸送されるヨウ素の量を50％より多く低減させ得る化合物である。
【００２６】
NIS−発現細胞中へ輸送されるヨウ素の量は、例えばN. Lecat-Guilletら、 ChemMedChem, 2008、および S. Lindenthal ら、Journal of Endocrinology (2009) 200, 357-365に記載されているように、該細胞をヨウ素とともに培養した後のNIS−発現細胞中のヨウ素の濃度、NIS−発現細胞中へのヨウ素の正味流入量、またはNIS−発現細胞の膜間のヨウ素勾配を測定することにより、評価することができる。
【００２７】
本発明の枠組みにおいて、NIS阻害剤は次のようにして評価される：
ラット甲状腺由来細胞（FRTL5細胞発現NIS）ヨウ素およびトレーサとしての125−Iとともに、種々の濃度の化合物の存在下に１時間培養される。試験された化合物の各濃度について、細胞中のヨウ素の量が放射線計数により定量される。
【００２８】
半数阻害濃度（IC50） は、用量−応答データから（ヒル等式）への回帰分析により、各化合物について評価される。詳細なプロトコルは、実験の部、およびN. Lecat-Guillet ら、ChemMedChem, 2008にも記述されている。
【００２９】
本発明の意味において：
−  アルキル基は、（C1-C20）アルキル基、好ましくはメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、イソブチル、ペンチルおよびヘキシル基のような（C1-C6）アルキル基から選択される。
【００３０】
−  シクロアルキル基は、好ましくは３〜７の環原子を有する１価の環状炭化水素基のことをいう。該シクロアルキル基は、一つ以上の２重結合を有していてもよく、任意に置換されていてもよい。「シクロアルキル」という用語は、例えばシクロプロピル、シクロヘキシル、シクロヘキセニルなどを含む。
【００３１】
−  ヘテロアルキル基は、アルキルのいずれかの炭素に結合している一つ以上の水素原子、またはアルキル鎖の一つの炭素原子が、N、O、P、B、S、Si、Sb、Al、Sn、As、SeおよびGeからなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられている、上記で定義されたアルキル基を意味する。炭素原子とヘテロ原子との間の結合は、飽和されていても飽和されていなくてもよい。
好ましいヘテロアルキル基は、シアノ、ベンゾイル、メトキシ、アセタミド、ボレート類、スルホン類、スルフェート類、チアン類、ホスフェート類、ホスホネート類、シラン類などを含む。
【００３２】
−  アルコキシ基は、（C1-C20）アルコキシ基、好ましくはメチルオキシ、エチルオキシ、n-プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、n-ブチルオキシ、sec-ブチルオキシ、tert-ブチルオキシおよびイソブチルオキシ基のような（C1-C4）アルコキシ基から選択される。
【００３３】
−  アリール基は、少なくとも一つの単純な芳香環から誘導される官能基もしくは置換基；環の各原子がp-軌道を含み、該p-軌道自体が重複している非局在化(システムを有する平面環状化合物に相当する芳香環を意味する。
より具体的には、この用語はフェニル、ビフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、アントラシル、ピレニル、およびそれらの置換体を含むが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
−  ヘテロアリール基は、P、S、OおよびNから選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含む、少なくとも一つの上記で定義された芳香環から誘導される官能基もしくは置換基を意味する。
ヘテロアリールという用語は、フラン、ピリジン、ピロール、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、テトラゾール、ピリダゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、インドール、イソインドール、ベンゾチオフェン、ベンゾ[c]チオフェン、ベンズイミダゾール、インダゾール、ベンズオキサゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾチアゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プリンおよびアクリジンを含むが、これらに限定されるものではない。
【００３５】
本発明の上記のアリールおよびヘテロアリールは、好ましくは１〜１２の炭素原子、より好ましくは５または６の炭素原子を含む。
【００３６】
−  アリールアルキルは、水素原子がアリールもしくはヘテロアリール基で置き換えられている上記のようなアルキル基から誘導される基を意味する。
【００３７】
本発明の鎖または基が任意に置換されているとき、その置換基は例えばハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシレート、カルボキシエステル、アミノ、ケトン、C1-C12 アルキル、ヘテロアルキルもしくはアルコキシ基、C3-C7 シクロアルキル基、C1-C12 アリールまたはヘテロアルキル基から選択され得る。
【００３８】
本発明によれば、ハロゲン原子は臭素、塩素、フッ素およびヨウ素から選択され、好ましくは臭素、塩素およびフッ素から選択される。
【００３９】
本発明によれば、ヘテロ原子はN、O、P、B、S、Si、Sb、Al、Sn、As、SeおよびGeから選択され、好ましくはN、OおよびSから選択される。
【００４０】
好ましい実施態様によれば、X = NHである。
もう一つの好ましい実施態様によれば、Y = Oである。
【００４１】
より好ましくは、R1 は任意に置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール環であり、アリールまたはヘテロアリール環が置換されているとき、３位において置換されているのが有利である。
そのようなアリール環は、フェニル環、例えば少なくとも一つのハロゲン原子、ニトロ（NO2）、アミノ（NH2）またはC1-C6 アルコキシ基で置換されたフェニル環であり得る。
【００４２】
好ましい実施態様によれば、R1 は2,3-（メチレンジオキシ）フェニル基、または少なくとも一つのハロゲン原子、ニトロ（NO2）、アミノ（NH2）もしくはC1-C6 アルコキシ基で置換されたフェニル環であり、さらに好ましくはR1 は2,3-（メチレンジオキシ）フェニル基または少なくとも一つのアミノ（NH2）で置換されたフェニルである。
【００４３】
好ましい実施態様によれば、R2および／またはR3および／またはR4および／またはR5および／またはR6および／またはR7および／またはR8および／またはR9および／またはR10 は水素原子であり、より好ましくはR2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9 およびR10 は水素原子である。
【００４４】
特に好ましい実施態様によれば、R1 は置換フェニルであり、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9およびR10は水素原子である。
【００４５】
本発明は、ナトリウム−ヨウ素シンポータ（NIS）を阻害するための医薬：
−  NIS−発現細胞中へのヨウ素輸送および／または蓄積の低減用、
−  機能的なイメージングによるNIS病状のインビボ診断用、
−  放射性ヨウ素種に曝された後のヒトまたは動物の放射性ヨウ素の除染用、
−  甲状腺障害、より具体的にはヨウ素の過剰蓄積により惹き起こされる甲状腺機能亢進症、甲状腺中毒症、甲状腺炎および中毒性小結節性甲状腺腫の予防および／または治療用、
−  癌、より具体的には甲状腺癌および肺癌の予防および／または治療用、
−  自己免疫疾患、より具体的にはハシモトおよびバセドウ−グレイブス病の予防および／または治療用
の医薬として用いられる、式（I）の化合物に関するものでもある。
【００４６】
NISの機能的イメージングは、体内のNISの空間的な分布における変化を検出または測定する方法である。
これを達成するために、本発明の式（I）の化合物は、類似の化学的および生物学的特性に加えて、検出用の化学的なタグを有するプローブ中に誘導される必要がある。
【００４７】
化学的なタグとしては、陽電子放射断層撮影（PET）に用いられるC-11、N-13、O-15およびF-18、単一光子発光コンピューター断層装置（SPECT）で用いられるテクネチウム−99ｍのような、放射性同位元素が一般に用いられる。
【００４８】
本発明のもう一つの課題は、活性成分としての本発明の式（I）の少なくとも一つの化合物、および少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。
【００４９】
「医薬的に許容される賦形剤」という表現は、希釈剤、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、溶剤、分散媒、被覆剤、抗菌および抗かび剤、等張化剤および吸収遅延剤などのようなアジュバントまたはビヒクルのことをいう。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、適当な経路により、例えば経口、バッカル、吸入、舌下、経鼻、経皮すなわち皮膚経由、または（静脈内、筋肉内、皮下および歯冠内を含む）非経口投与により適用され得る。
【００５１】
したがって、本発明の医薬組成物は、硬カプセル剤、カプセル剤、圧縮錠剤、経口摂取される懸濁液剤、ロゼンジまたは注射溶液のような種々の剤形で、あるいは投与方法に適したその他の剤形で提供され得る。
【００５２】
本発明による医薬組成物は、式（I）の化合物が意図された目的を達成するのに有効な量で投与される組成物を含む。有効量の決定は、充分に当業者の能力の範囲内である。
【００５３】
「治療的に有効な用量」とは、所期の効果を達成できる結果をもたらす式（I）の化合物の量のことをいう。
式（I）の化合物の毒性および治療的効力は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的方法、すなわちＬＤ50（５０％致死量）およびＥＤ50（５０％有効量）を決定することにより容易に決定できる。毒性量と治療的有効量との比は治療指数であり、それはＬＤ50とＥＤ50との比として表される。
【００５４】
そのようなデータから得られるデータは、ヒトでの用量の範囲を処方するのに用いられ得る。式（I）の化合物の用量は、好ましくは毒性がないかもしくは殆どなくてＥＤ50を含む循環濃度の範囲内である。その用量は、適用される投与形態および投与経路によって、この範囲内で変動し得る。
【００５５】
正確な製剤、投与経路および用量は、患者の症状を考慮して個々の医師により選択され得る。投与量および投与間隔は、予防または治療効果を維持するのに充分な式（I）の化合物の血漿レベルをもたらすように、個別に調整され得る。
したがって、投与される医薬組成物の量は、治療される患者、その患者の体重、病気の重篤度および投与方法に依存する。
【００５６】
ヒトおよびその他の哺乳動物用に、式（I）の化合物は単独で投与され得るが、好ましくは医薬的に許容される少なくとも一つの担体との混合物の形態で投与される。該担体の性状は意図された投与経路および剤形に依存する。
【００５７】
かくして、本発明による使用のための医薬組成物は、式（I）の化合物を医薬的に用いられる製剤に加工するのを容易にする一つ以上の賦形剤および／または補助物を含む、一つ以上の生理学的に許容される担体を用いて、通常の方法により製剤化され得る。
【００５８】
本発明による医薬組成物において用いられ得る賦形剤および／または補助物としては、抗凝固剤、保存剤、色素、ビタミン類、無機塩類、矯味剤、滑沢剤、被覆剤、分離剤、安定化剤、湿潤剤、抗固化剤、分散剤、乳化剤、芳香剤、浸透剤、可溶化剤など、およびこれらの混合物、ならびに一般に製薬産業で通常用いられる賦形剤が挙げられる。
【００５９】
例えば、医薬組成物が経口的に投与されるとき、担体はタルク、乳糖、澱粉もしくは調製澱粉、セルロースもしくはセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、アクリル酸ポリマー、ゼラチン、ステアリン酸マグネシウム、天然もしくは合成由来の動物性もしくは植物性脂肪、パラフィン誘導体、グリコールなどのような１種または数種の賦形剤を含み得る。
【００６０】
医薬組成物の製剤および投与についての一般的な情報として、書籍「Remington's Pharmaceutical Sciences」最新版を明らかに参照することができる。
勿論、任意に用いられる賦形剤および／または補助物は、本発明による医薬組成物に付随した固有の性状に適合するものであるということを、当業者はこの機会に留意するであろう。
【００６１】
これらの医薬組成物は、通常の方法、すなわち通常の混合、溶解、造粒、糖衣、乳化、カプセル化、エントラッピング、凍結乾燥の方法により製造され得る。適当な製剤は選択される投与経路に依存する。
【００６２】
本発明は、医薬として使用されるための、次の式（I）の化合物または医薬的に許容されるその塩に関するものでもある。
【化３】
2016500096.tif 000005
（式中、
XはO、S または NR（ここで、R は水素原子、または任意に置換されていてもよいC1-C20 の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル、または任意に置換されていてもよいC3-C7 のシクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルは一つ以上のヘテロ原子もしくはカルボニル基を含んでいてもよく、
YはO、 S またはNHであり、
Z は単なる結合手、または任意に置換されていてもよいC2-C6直鎖もしくは分枝鎖状のアルキルもしくはアルケニル鎖、または任意に置換されていてもよいC3-C6 シクロアルキルであり、
R1 は任意に置換されていてもよい芳香族環であり、
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9およびR10は、同一または異なって、水素原子であり、
ここで、X またはYの少なくとも一方はOまたはSである）。
【００６３】
好ましい実施態様によれば、X = NHである。
もう一つの好ましい実施態様によれば、Y = Oである。
より好ましくは、R1 は任意に置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール環であり、該アリールまたはヘテロアリール環が置換されているときは、３位で置換されているのが有利である。
【００６４】
該アリール環は、例えば少なくとも一つのハロゲン原子、ニトロ（NO2）、アミノ（NH2）またはC1-C6 アルコキシ基で置換されたフェニル環であってよい。
【００６５】
好ましい実施態様によれば、R1 は2,3-（メチレンジオキシ）フェニル基、または少なくとも一つのハロゲン原子、ニトロ（NO2）、アミノ（NH2）もしくはC1-C6 アルコキシ基で置換されたフェニル環であり、より好ましくはR1 は2,3-（メチレンジオキシ）フェニル基または少なくとも一つのアミノ（NH2）基で置換されたフェニルである。
【００６６】
最後に、本発明は、以下の式に相当する式（Ｉ）の化合物自体に関するものでもある。
【００６７】
【化４−１】
2016500096.tif 000006
【００６８】
【化４−２】
2016500096.tif 000007
【００６９】
これら特定の化合物は、医薬として、より具体的には前記のような医薬として用いられ得る：
−  ナトリウム−ヨウ素シンポータ（NIS）を阻害し、NIS−発現細胞中へのヨウ素輸送および／または蓄積の低減用、
−  機能的なイメージングによるNIS病状のインビボ診断用、
−  放射性ヨウ素種に曝された後のヒトまたは動物の放射性ヨウ素の除染用、
−  甲状腺障害、より具体的にはヨウ素の過剰蓄積により惹き起こされる甲状腺機能亢進症、甲状腺中毒症、甲状腺炎および中毒性小結節性甲状腺腫の予防および／または治療用、
−  癌、より具体的には甲状腺癌および肺癌の予防および／または治療用、
−  自己免疫疾患、より具体的にはハシモトおよびバセドウ−グレイブス病の予防および／または治療用。
【００７０】
上記に加えて、本発明は以下の実施例に記載された、式（Ｉ）の化合物のIC50を測定することによる、FRTL5細胞中のヨウ素取込みに対するそれらの化合物の構造的な変化による効果の評価から明らかになる事項にも関する。
【実施例】
【００７１】
Ｉ−  合成手順
Ｉ−１）化学的合成および特徴づけの一般的な方法
反応試剤および溶媒はSigma-Aldrichからのものであり、さらに精製することはしなかった。
フラッシュ・クロマトグラフィは、通常のフェーズRedisep （Teledyne Isco） またはSNAP （Biotage）カートリッジを用いて、CombiFlash Rf システム（Teledyne Isco）で行われた。
【００７２】
HPLC-MS 分析は、バイナリ・グラジエント・ソルベント・デリバリ・システム（2525, Waters）、フォトダイオード・アレイ・ディテクタ（2996, Waters; 200-400 nm）およびエバポレイティブ・ライト−スキャッタリング・ディテクタ（PL-ELS 1000, Polymer Laboratory）を備えたシステムで行われた。
このシステムは、ポジティブおよびネガティブ・モードの両方で操作されるエレクトロスプレイ・イオナイゼーションMicromass-ZQ スペクトロメータ（Waters）に連結されていた。
【００７３】
各化合物（7-10 μg）は、アセトニトリル／水／ギ酸 = ５／９５／０．１(1 mL／分)で平衡化された100 x 4.6 mm (3.5 μm) C18-XBridge (Waters)に適用された。試料はアセトニトリルを100%（8分）、次いで100% （13 分）に増すことにより溶出された。
【００７４】
1H、13C および 19F NMR スペクトルは、400 MHz（1H）、100 MHz （13C）および 160 MHz （19F）で操作されるBruker Avance DPX 400スペクトロメータで記録された。ケミカルシフト（δ）はppmで表された。
【００７５】
高分解能マススペクトル（HRMS）は、Imagif platform（CNRS - Gif sur Yvette, France）で行われ、フロー・インジェクション分析モードを用いるESI/TOF LCP premier XE マススペクトロメータ（Waters）で記録された。
【００７６】
Ｉ‐２）化合物４−１３の合成および分析データ
化合物４−１３の同定は、それが適当なとき、MS、HRMS、1H、13C NMRおよび19F NMRで確認された。
試験されたすべての化合物の純度は、高速液体クロマトグラフィ（HPLC）システムを用いて、９５％を超えていることが分かった。
【００７７】
１−（３−ニトロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物４）の製造
【化５】
2016500096.tif 000008
【００７８】
３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（3.22 g、20 mmol）および３−ニトロベンズアルデヒド（3.0 g、20 mmol）を、アルゴン雰囲気下で無水トルエン（100 mL）中に溶解した。ビスマストリクロライド（6.30 g、20 mmol）を加え、混合物を80℃で６時間撹拌した。溶媒を減圧下に蒸発させ、シリカゲル・クロマトグラフィ（cHex／AcOEt 94／6）により、化合物４を黄色の固体（1.18 g、20%）として得た。
【００７９】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.84-2.88 (m, 1H), 3.08-3.14 (m, 1H), 3.97-4.01 (m, 1H), 4.29-4.34 (m, 1H), 5.91 (s, 1H), 7.13-7.20 (m, 2H), 7.26 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 (bs, 1H), 7.53-7.58 (m, 2H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 65.1, 75.3, 109.6, 111.3, 118.7, 120.2, 122.7, 123.4, 124.7, 127.1, 130.1, 132.2, 134.7, 136.5, 142.1, 148.7.
HPLC: tR = 8.78 min.
MS: m/z 293 ([M-H]-).
HRMS-ESI-TOF : m/z 計算値293.0926、実測値293.0925 ([M-H]-).
【００８０】
１−（３−ニトロフェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ［１］ベンゾフロ［２，３−ｃ］ピリジン（化合物５）の製造
【化６】
2016500096.tif 000009
【００８１】
３−ニトロベンズアルデヒド（111.8 mg、0.74 mmol）および２−（ベンゾフラン−３−イル）エタンアミン（119.3 mg、0.74 mmol）を無水ジクロロメタン（5 mL ）中に溶解した。この混合物を０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（73.4 μL、0.96 mmol）をシリンジを介してゆっくり加えた。この混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで１４時間加熱還流した。反応を完結させるため、過剰のトリフルオロ酢酸（76.5 μL、1.0 mmol）を加え、この混合物をさらに２４時間加熱還流した。溶媒を減圧下に除去した。得られた残渣をジエチルエーテル（15 mL）中で擦り、濾過し、乾燥して、化合物５のTFA 塩を褐色の固体（105 mg、48%）として得た。
【００８２】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 3.04-3.17 (m, 2H), 3.48-3.60 (m, 2H), 6.28 (s, 1H), 7.36-7.38 (m, 2H), 7.56-7.58 (m, 1H), 7.73-7.75 (m, 1H), 7.79-7.86 (m, 2H), 8.38-8.40 (m, 2H), 9.88 (bs, 1H), 10.15 (bs, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 7.9, 54.4, 111.6, 113.9, 120.0, 123.5, 124.8, 125.1, 125.4, 126.3, 130.7, 134.7, 136.4, 145.5, 147.9, 154.4.
HPLC: tR = 5.75 min.
MS: m/z 295 ([M+H]+).
【００８３】
１−（３−ニトロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロチオピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物６）の製造
【化７】
2016500096.tif 000010
【００８４】
チオトリプトフォルをI. Jirkovsky ら, J. Het. Chem., 1975, 5, 937-940に記載されているようにして合成した。
チオトリプトフォル（200.3 mg、1.13 mmol）および３−ニトロベンズアルデヒド（204 mg、1.35 mmol）をアルゴン雰囲気下で無水トルエン中に溶解し、７０℃で３０分間撹拌した。次いで、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（106.5 mg、0.56 mmol）を加え、この混合物をさらに１４時間加熱還流した。溶媒を減圧下に蒸発させ、シリカゲル・クロマトグラフィ（cHex／AcOEt 10／0〜7／3）により、化合物６を白色固体（109 mg、31%）として得た。
【００８５】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.95-3.08 (m, 2H), 3.11-3.26 (m, 2H), 5.30 (s, 1H), 7.14-7.26 (m, 3H), 7.48 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.55-7.59 (m, 3H), 8.13-8.15 (m, 2H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 23.5, 25.6, 41.0, 111.0, 112.9, 118.7, 120.1, 123.0, 123.1, 123.3, 127.6, 129.4, 129.9, 134.4, 135.4, 144.1, 148.7.
HPLC: tR = 9.63 min.
MS: m/z 311 ([M+H]+)
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値：309.0698、実測値：309.0697 ([M-H]-).
【００８６】
１−（２，５−ジフルオロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物７）の製造
【化８】
2016500096.tif 000011
【００８７】
２，５−ジフルオロベンズアルデヒド（264 mg、1.86 mmol）の乾燥ジクロロメタン（10 mL）溶液に、３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（200 mg、1.24 mmol）の乾燥ジクロロメタン（4 mL）溶液を加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。次いで、トリフルオロ酢酸（28.5 μL、0.37 mmol）の乾燥ジクロロメタン（1 mL）溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、さらに４時間加熱還流した。減圧下に溶媒を留去し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物７を白色固体（67 mg、19%）として得た。
【００８８】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.80-2.86 (m, 1H), 3.05-3.13 (m, 1H), 3.98-4.05 (m, 1H), 4.34-4.38 (m, 1H), 6.20 (s, 1H), 6.98-7.03 (m, 1H), 7.07-7.13 (m, 4H), 7.29 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67 (bs, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 65.2, 70.1 (d, J = 3.1 Hz), 109.3, 111.3, 116.0 (dd, J = 25.1, 4.6 Hz), 116.5-117.0 (m), 118.6, 120.0, 122.5, 127.0, 129.2 (dd, J = 16.0, 6.9 Hz), 132.1, 136.3, 156.5 (dd, J = 240.0, 2.3 Hz), 159.2 (dd, J = 242.4, 2.3 Hz).
19F RMN (160 MHz, CDCl3) δ -125.36 (d, J = 7.5 Hz), -117.44 (d, J = 7.5 Hz).
HPLC: tR = 9.35 min.
MS: m/z 286 ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z calculated 284.0887, found 284.0885 ([M-H]-).
【００８９】
１−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物８）の製造
【化９】
2016500096.tif 000012
【００９０】
乾燥ジクロロメタン（10 mL）中の２，３−（メチレンジオキシ）ベンズアルデヒド（279 mg、1.86 mmol）の溶液に、乾燥ジクロロメタン（4 mL）中の３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（200 mg、1.24 mmol）の溶液を加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。次いで、乾燥ジクロロメタン（１mL）中のトリフルオロ酢酸（28.6 μL、0.37 mmol）の溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、さらに４時間加熱還流した。減圧下に溶媒を留去し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物８を白色固体（73 mg、20%）として得た。
【００９１】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.80-2.87 (m, 1H), 3.03-3.07 (m, 1H), 3.99-4.05 (m, 1H), 4.34-4.37 (m, 1H), 5.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.08 (s, 1H), 6.09 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.79-6.83 (m, 3H), 7.11-7.17 (m, 2H), 7.28 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.77 (bs, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.5, 65.1, 70.1, 101.4, 109.0, 109.1, 111.2, 118.5, 119.8, 121.2, 121.6, 122.2, 122.2, 127.1, 132.9, 136.2, 145.6, 147.8.
HPLC: tR = 8.97 min.
MS : m/z 294 ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値292.0974、実測値292.0981（[M-H]-）
【００９２】
１−（３−クロロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物９）の製造
【化１０】
2016500096.tif 000013
【００９３】
乾燥ジクロロメタン（10 mL）中の３−クロロベンズアルデヒド（262 mg、1.86 mmol）の溶液に、乾燥ジクロロメタン（4 mL）中の３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（300 mg, 1.86 mmol）の溶液を加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。次いで、乾燥ジクロロメタン（1 mL）中のトリフルオロ酢酸（42.7 μL、0.56 mmol）の溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、さらに３時間加熱還流した。溶媒を減圧下に留去し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物９を白色固体（121 mg、23%）として得た。
【００９４】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.82-2.88 (m, 1H), 3.07-3.15 (m, 1H), 3.96-4.02 (m, 1H), 4.29-4.34 (m, 1H), 5.76 (s, 1H), 7.14-7.21 (m, 2H), 7.23-7.31 (m, 2H), 7.32-7.39 (m, 3H), 7.52 (bs, 1H), 7.58 (d, J = 7.2 Hz).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 65.1, 75.7, 109.2, 111.3, 118.6, 120.0, 122.4, 126.7, 127.1, 128.7, 129.3, 130.3, 133.0, 135.0, 136.3, 141.8.
HPLC: tR = 9.65 min.
MS : m/z 284 ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値 282.0686、実測値 282.0693 ([M-H]-).
【００９５】
１−（２−フルオロ−５−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物１０）の製造
【化１１】
2016500096.tif 000014
【００９６】
乾燥ジクロロメタン（10 mL）中の２−フルオロ−５−メトキシベンズアルデヒド（287 mg、1.86 mmol）の溶液に、乾燥ジクロロメタン（4 mL）中の ３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（300 mg、1.86 mmol）の溶液を加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。次いで、乾燥ジクロロメタン（1 mL）中のトリフルオロ酢酸（42.7 μL, 0.56 mmol）の溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、さらに３時間加熱還流した。減圧下に溶媒を留去し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物１０を黄色固体（105 mg、19%）として得た。
【００９７】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.83-2.87 (m, 1H), 3.10-3.18 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 4.01-4.07 (m, 1H), 4.39-4.43 (m, 1H), 6.22 (s, 1H), 6.83-6.87 (m, 1H), 6.91-6.93 (m, 1H), 7.07-7.12 (m, 1H), 7.14-7.21 (m, 2H), 7.25.7.28 (m, 1H), 7.57-7.59 (m, 1H), 7.81 (bs, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 56.0, 65.4, 69.2 (d, J = 3.2 Hz), 109.0, 111.3, 113.6 (d, J = 3.7 Hz), 115.6 (d, J = 8.0 Hz), 116.3 (d, J = 23.7 Hz), 118.5, 119.9, 122.2, 127.1, 127.8 (d, J = 15.0 Hz), 132.9, 136.2, 155.4 (d, J = 236.7 Hz), 156.3 (d, J = 1.9 Hz).
19F RMN (160 MHz, CDCl3) δ -130.22.
HPLC: tR = 9.08 min.
MS : m/z 298 ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値 296.1087、実測値 296.1082 ([M-H]-).
【００９８】
１−（３−ブロモフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物１１）の製造
【化１２】
2016500096.tif 000015
【００９９】
乾燥ジクロロメタン（10 mL）中の３−ブロモベンズアルデヒド（344 mg、1.86 mmol）の溶液に、乾燥ジクロロメタン（4 mL）中の３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（300 mg、1.86 mmol）の溶液を加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。次いで、乾燥ジクロロメタン（1 mL）中のトリフルオロ酢酸（42.7 μL, 0.56 mmol）の溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、さらに３時間加熱還流した。溶媒を減圧下に留去し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物１１を白色固体（116 mg、19%）として得た。
【０１００】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.83-2.88 (m, 1H), 3.07-3.15 (m, 1H), 3.95-4.02 (m, 1H), 4.29-4.34 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 7.15-7.22 (m, 2H), 7.24-7.28 (m, 2H), 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50-7.55 (m, 3H), 7.59 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 65.0, 75.6, 109.2, 111.3, 118.6, 120.0, 122.4, 123.1, 127.1, 127.2, 130.6, 131.5, 132.2, 132.9, 136.3, 142.0.
HPLC: tR = 9.82 min.
MS : m/z 328(50) and 330(50) ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値 326.0181、実測値 326.0192 ([M-H]-).
【０１０１】
１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物１２）の製造
【化１３】
2016500096.tif 000016
【０１０２】
乾燥ジクロロメタン（10 mL）中の３−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（295 mg、1.86 mmol）の溶液に、乾燥ジクロロメタン（4 mL）中の３−（２−ヒドロキシエチル）インドール（300 mg、1.86 mmol）の溶液を加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下に置いた。次いで、乾燥ジクロロメタン（1 mL）中のトリフルオロ酢酸（42.7 μL、0.56 mmol）の溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、さらに３時間加熱還流した。溶媒を減圧下に留去し、次いでシリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物１２を黄色固体（90 mg、16%）として得た。
【０１０３】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.84-2.89 (m, 1H), 3.07-3.15 (m, 1H), 3.96-4.02 (m, 1H), 4.27-4.32 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 7.13-7.23 (m, 3H), 7.24-7.28 (m, 2H), 7.44 (dd, J = 7.2, 2.0 Hz, 1H), 7.57 (bs, 1H), 7.60 (d, J = 7.6 Hz).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 65.0, 75.1, 109.5, 111.3, 117.1 (d, J = 21.1 Hz), 118.7, 120.1, 121.7 (d, J = 17.8 Hz), 122.5, 127.1, 128.4 (d, J = 7.6 Hz, 130.9, 132.8, 136.4, 137.0 (d, J = 3.6 Hz), 158.5 (d, J = 249.1 Hz).
19F RMN (160 MHz, CDCl3) δ -114.80.
HPLC: tR = 9.80 min.
MS : m/z 302 ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値 300.0591、実測値 300.0597 ([M-H]-).
【０１０４】
１−（３−アミノフェニル−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（化合物１３）の製造
【化１４】
2016500096.tif 000017
【０１０５】
メタノール（80 mL）中の１−（３−ニトロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロピラノ［３，４−ｂ］インドール（４）（500 mg、1.70 mmol） の溶液に、Pd/C 10% w/w（181 mg、0.1 eq）を加えた。この溶液を水素雰囲気下（1.1 bar）に置き、室温で２時間撹拌した。懸濁液をセライト・パッドで濾過した。濾液を蒸発させ、シリカゲル・クロマトグラフィ（cHex/AcOEt 94/6）に付して、化合物１３を橙色固体（391 mg, 87%）として得た。
【０１０６】
1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2.78-2.82 (m, 1H), 3.02-3.06 (m, 1H), 3.89-3.93 (m, 1H), 3.95 (bs, 2H), 4.26-4.28 (m, 1H), 5.60 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02-7.10 (m, 4H), 7.55-7.57 (m, 1H), 7.93 (bs, 1H).
13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ 22.5, 65.2, 76.4, 108.7, 111.2, 115.1, 116.1, 118.5, 119.1, 119.8, 122.1, 127.2, 130.0, 134.0, 136.2, 140.9, 146.6.
HPLC: tR = 6.58 min.
MS : m/z 265 ([M+H]+).
HRMS-ESI-TOF: m/z 計算値 263.1184、実測値 263.1188 ([M-H]-).
【０１０７】
II  生物学的結果
FRTL5 細胞中のヨウ素トラップの阻害活性について、放射性ヨウ素取込みアッセイを用いて、上記で合成された化合物を評価した。
ＩＣ50値は、少なくとも２回の独立した実験で測定した。化合物２（ITB-2）を参照化合物（IC50 = 0.4 μM）として、また過塩素酸ナトリウムをアッセイ・コントロール（IC50 = 0.1 μM）として用いた。
【０１０８】
II−１）生物学的評価のためのプロトコール
合成された化合物の生物学的評価
２４穴プレート方式の放射性ヨウ素取込みアッセイを用いて、各化合物の生物学的活性をFRTL5 細胞中で決定した。それぞれの実験を４通り、少なくとも２回は独立して行った。化合物の効力をＩＣ50、ヨウ素取込みの５０％阻害を達成するのに必要な化合物の濃度として表した。NaClO4 および化合物２をアッセイ・コントロールとして試験した。
【０１０９】
２４穴プレート中での細胞培養および細胞播種
T. Mosmann, J. Immunol. Methods, 1983, 65, 55-63に記載されているようにして、FRTL5細胞を培養した。
５％熱不活化ウシ胎児血清（Invitrogen）、2 mM L‐グルタミン、100 U/mL ペニシリン、0.1 mg/mL ストレプトマイシン、10 μg/mL インシュリン、10 nM ヒドロコルチゾン、10 ng/mL Gly-His-Lys アセテート、1 mU/mL TSH、5 μg/mL トランスフェリンを補足したCoon's 改変F12 培地中、37°Cおよび5% CO2下で、FRTL5 細胞を培養した。
ヨウ素取込みアッセイのために、濃度250,000細胞／mLを有するFRTL5細胞1.25 mL を空のポリスチレン製平底２４穴マイクロプレート(BD Falcon 3047）の各ウェル中に分配し、さらに70-90%のコンフルエンス（3-4 日）になるまで培養した。
【０１１０】
化学品および溶液：
すべての化学品は、特に断りのないかぎり、Sigma-Aldrich からのものである。
取込みバッファ：Hepes （10 mM 最終）を補ったハンクス平衡塩類溶液（HBSS）
H2Oで1 mCi/mL に調整された［125-I］−NaI（Perkin Elmer）
H2O中2 mMのNaI
DMSO中20 mM の化合物２、４〜１３およびH2O中20 mMのNaClO4
溶出バッファ：H2O中 SDS 0.1%およびTriton 0.5%
一つの２４穴プレートについての作業用溶液：
中間的な「10倍の」放射性ヨウ素取込みバッファ溶液〜1.5 mL/プレートの調製：
取込みバッファ（HBSS/Hepes）中NaI（100 μM）および［125-I］−NaI （20 μCi/mL）
【０１１１】
試験化合物の各濃度について、1.12 倍最終濃度で、取込みバッファ（HBSS/Hepes 10 mM）中、〜2.5 mL までの化合物溶液の調製し、この溶液450 μL に放射性ヨウ素取込みバッファ50 μLを足して所望の最終濃度（NaI 10μM 最終、1 μCi/ウェル）とする。
【０１１２】
一つの２４穴プレートについての放射性ヨウ素取込みアッセイ
この方法は、充分に換気されたフード中、20 ± 2 °Cで行われた。FRTL5細胞の培養培地は、アスピレーションによって除去された。４倍（450 μL/ウェル）の化合物の溶液が２４穴プレートに加えられ、その後すぐに［125I］-NaI放射性ヨウ素取込みバッファ（50 μL/ウェル、10 μM 最終、1 μCi/ウェル）が加えられた。この２４穴プレートは６０分間放置された。
【０１１３】
放射性の上澄液はアスピレーションによって除去され、細胞は冷取込みバッファ（4°CのHBSS/Hepes）500 μLで２回洗浄された。最後に、残った上澄液はアスピレーションにより除去され、500 μLの 溶出バッファ（SDS 0.1%、トリトン0.5%） が各ウェルに加えられた。
【０１１４】
２４穴プレートを６０〜１２０分間ゆるく振とうした。放射性の細胞溶出液は集められ、シンチレーション・バイアル中へ移された。シンチレーション・カクテル（Ultima gold LLT, Perkin Elmer）が各バイアル（4 mL）に加えられ、放射能が測定された（Wallac 1409）。
ＩＣ50を決定するために、平均DPM値が非線形回帰（最少二乗リースト・スクェア）により４変数のヒル方程式のＳ字曲線にフィットさせた。
【０１１５】
II−２）結果
【表１−１】
2016500096.tif 000018
【０１１６】
【表１−２】
2016500096.tif 000019
【０１１７】
ＩＣ50値は、２〜４回の独立した試験の平均である。２−倍の標準偏差は許容できると判定された。NaClO4 および化合物２はアッセイ・コントロールとして試験された。
【国際調査報告】
2016500096.tif 000025
2016500096.tif 000026
2016500096.tif 000027
2016500096.tif 000028