(57)【要約】  本発明は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を阻害することが可能な、治療剤としての１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物に関連する。本発明はまた、前記治療剤の誘導体にも関連する。本発明はまた、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、又はＰＤ−Ｌにより誘発される免疫抑制シグナルの阻害を含む免疫強化を介した疾患の処置のための前記治療剤と誘導体の使用、及びそれらを用いた治療も包含する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、又は、その薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体であって：
【化１】
2016532711.tif 000038
式中、
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
ＸはＳ又はＯであり；
Ｒ２は水素又は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化され；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
−−−−は随意の単結合であり；
Ｒ４とＲ５は独立して水素であるか、又は存在しない
ことを特徴とする化合物。
【請求項２】
式（ＩＡ）の化合物：
【化２】
2016532711.tif 000039
又は、その薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体であり；式中
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
ＸはＳ又はＯであり；
Ｒ２は水素又は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化される、
ことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＢ）の化合物：
【化３】
2016532711.tif 000040
又は、その薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体であり；式中
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化される
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
式（ＩＣ）の化合物：
【化４】
2016532711.tif 000041
又は、その薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体であり；式中
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化される
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
ＸはＯである、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項６】
ＸはＳである、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１はＳｅｒ又はＴｈｒの側鎖であり；
Ｒ２は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ａａａはアミノ酸残基Ｓｅｒ又はＴｈｒであり；ここで、Ｃ末端は遊離しており；
Ｒ３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、又はＡｓｐの側鎖である
ことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２は水素である、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項９】
以下から成る群、又は、その薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体から選択される、請求項１に記載の化合物。
【表１−１】
2016532711.tif 000042
【表１−２】
2016532711.tif 000043
【表１−３】
2016532711.tif 000044
【表１−４】
2016532711.tif 000045
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１つに記載の少なくとも１つの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体、及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
抗癌剤、化学療法薬剤、又は抗増殖性化合物である、少なくとも１つの追加の医薬品を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
薬として使用するための、請求項１乃至９の何れか１つに記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体。
【請求項１３】
癌又は感染症の処置のための薬として使用するための、請求項１乃至９の何れか１つに記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体。
【請求項１４】
癌は、骨癌、頭部又は首部の癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、頚部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されるものを含む環境により誘導される癌、及び前記癌の組み合わせから選択される、ことを特徴とする請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
感染症は、細菌感染症、ウイルス性感染症、又は真菌類感染症である、ことを特徴とする請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
被験体におけるＰＤ−１シグナル伝達経路により媒介される免疫応答を変調する方法であって、請求項１乃至９の何れか１つに記載の治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１７】
被験体の腫瘍細胞の増殖及び／又は転移を阻害する方法であって、請求項１乃至９の何れか１つに記載の治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１８】
腫瘍細胞は、乳癌、結腸癌、肺癌、黒色腫、前立腺癌、及び腎癌から成る群から選択される癌である、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
腫瘍細胞は、骨癌、頭部又は首部の癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、頚部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されるものを含む環境により誘導される癌、及び前記癌の組み合わせから成る一覧から選択される癌である、ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
被験体の感染症を処置する方法であって、請求項１乃至９の何れか１つに記載の治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項２１】
被験体の細菌感染症、ウイルス性感染症、又は真菌類感染症を処置する方法であって、請求項１乃至９の何れか１つに記載の治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１３年９月６日出願のインド仮特許出願第４０１２／ＣＨＥ／２０１３号の利益を主張するものであり、それは参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
＜技術分野＞
本発明は、免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｅ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ）として治療上有用な１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物に関する。本発明はまた、治療剤としての前記１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）は、２つのリガンドであるＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２との相互作用の後に負のシグナルを送達するＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーである。ＰＤ−１とそのリガンドは広く発現され、他のＣＤ２８メンバーと比較して、Ｔ細胞の活性化と耐性においてより広範囲の免疫制御の役割を行う。ＰＤ−１とそのリガンドは、感染性免疫と腫瘍免疫を弱めて、且つ慢性感染症と腫瘍進行を促進することに関係する。ＰＤ−１とそのリガンドの生物学的意義は、様々なヒト疾患に対するＰＤ−１経路の操作の治療可能性を示唆する（Ａｒｉｅｌ  Ｐｅｄｏｅｅｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （２０１１）；  ３５０：１７−３７）。
【０００４】
Ｔ細胞活性化と機能不全は、直接的且つ調節した受容体に依存する。それらの機能的な結果に基づき、共同シグナル伝達分子は、共同刺激物質と共同阻害剤とに分けることができ、それらは、Ｔ細胞反応のプライミング、増殖、分化、及び機能的な成熟を正に且つ負に制御する（Ｌｉ  Ｓｈｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１３，  ６：７４）。
【０００５】
プログラム細胞死のタンパク質−１（ＰＤ−１）の免疫チェックポイント経路を遮断する治療抗体は、Ｔ細胞のダウンレギュレーションを妨げて、癌に対する免疫応答を促進する。様々なＰＤ−１経路阻害剤が、臨床試験の様々な段階において頑丈な活性を示した（ＲＤ  Ｈａｒｖｅｙ，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  （２０１４）；  ９６  ２，  ２１４−２２３）。
【０００６】
プログラム死（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ）−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞により優勢的に発現されるコレセプターである。ＰＤ−１のそのリガンド（ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２）への結合は、免疫系の生理学的調節に重要である。ＰＤ−１シグナル伝達経路の主要な機能的役割は、自己免疫疾患に対する保護を行う役目を果たす、自己反応性Ｔ細胞の阻害である。それ故、ＰＤ−１経路の除去により、病原性自己免疫病の進行へと最終的に通じ得る、免疫寛容の衰弱を結果としてもたらすことができる。反対に、腫瘍細胞は時に、免疫監視機構から免れるＰＤ−１経路を同時選択することができる。それ故、ＰＤ−１経路の閉鎖は、癌治療において人目を引く標的になった。現在の方法は、中和抗体又は融合タンパク質を標的としたＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１である、６つの薬剤を含む。４０回を超える臨床試験が、様々な腫瘍のタイプにおけるＰＤ−１の閉鎖の役割をより良く定めるために、進行中である。（Ｈｙｕｎ−Ｔａｋ  Ｊｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）  （２０１４），  １５３（１），  １４５−１５２）。
【０００７】
国際出願ＷＯ０１／１４５５７、ＷＯ０２／０７９４９９、ＷＯ２００２／０８６０８３、ＷＯ０３／０４２４０２、ＷＯ２００４／００４７７１、ＷＯ２００４／０５６８７５、ＷＯ２００６１２１１６８、ＷＯ２００８１５６７１２、ＷＯ２０１００７７６３４、ＷＯ２０１１０６６３８９、ＷＯ２０１４０５５８９７、ＷＯ２０１４０５９１７３、ＷＯ２０１４１０００７９、及び米国特許ＵＳ０８７３５５５３は、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１阻害抗体又は融合タンパク質を報告している。
【０００８】
更に、国際出願ＷＯ２０１１１６１６９９、ＷＯ２０１２／１６８９４４、ＷＯ２０１３１４４７０４、及びＷＯ２０１３１３２３１７は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を抑える及び／又は阻害することが可能な、ペプチド又はペプチド模倣化合物を報告している。
【０００９】
また、ＰＤ−１経路のより強力な、より優れた、及び／又は選択的な免疫調節剤が必要とされる。本発明は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を抑える及び／又は阻害することが可能な、１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物を提供する。
【発明の概要】
【００１０】
本発明に従い、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を抑える及び／又は阻害することが可能な、１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体が、提供される。
【００１１】
１つの態様において、本発明は、式（Ｉ）の１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体を提供し：
【００１２】
【化１】
2016532711.tif 000002
式中、
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
ＸはＳ又はＯであり；
Ｒ２は水素又は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化され；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
−−−−は随意の単結合であり；
Ｒ４とＲ５は独立して水素であるか、又は存在しない。
【００１３】
本発明の更なる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物、又は薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体を含む医薬組成物、及びその調製のためのプロセスに関する。
【００１４】
本発明のまた別の態様において、本発明は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を抑える及び／又は阻害することが可能な、式（Ｉ）の１，３，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、又はＰＤ−Ｌ２により誘発される免疫抑制シグナルの阻害を含む免疫強化を介した疾患の処置に有用な、治療剤としての１，２，４−オキサジアゾールと１，３，４−チアジアゾールの化合物、及びそれらを用いた治療を提供する。
【００１６】
各実施形態は、本発明の制限ではなく、本発明の説明により提供される。実際、本発明の範囲又は精神から逸脱することなく、本発明において様々な改変と変更を行うことができることは、当業者に明白である。例えば、１つの実施形態の一部として示され又は記載される特徴が、別の更なる実施形態をもたらすために別の実施形態に使用され得る。故に、本発明は、添付の特許請求の範囲及びその同等物の範囲内で生ずるように、そのような改変と変更をカバーする。本発明の他の目的、特徴、及び態様は、以下の詳細な記載に開示されるか、又はそこから明白となる。現在の議論が例示的実施形態のみの記載であり、本発明のより広範囲の態様を制限すると解釈されるものでないことは、当業者によって理解されるものである。
【００１７】
１つの実施形態において、本発明は式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体に関するものであり
【００１８】
【化２】
2016532711.tif 000003
式中、
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
ＸはＳ又はＯであり；
Ｒ２は水素又は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化され；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
−−−−は随意の単結合であり；
Ｒ４とＲ５は独立して水素であるか、又は存在しない。
【００１９】
また別の実施形態において、本発明は、式（ＩＡ）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体を提供し；
【００２０】
【化３】
2016532711.tif 000004
式中、
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
ＸはＳ又はＯであり；
Ｒ２は水素又は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化される。
【００２１】
また別の更なる実施形態において、本発明は、式（ＩＢ）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体を提供し；
【００２２】
【化４】
2016532711.tif 000005
式中、
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化される。
【００２３】
また別の更なる実施形態において、本発明は、式（ＩＣ）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体を提供し；
【００２４】
【化５】
2016532711.tif 000006
式中、
Ｒ１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、又はＡｓｐから選択されたアミノ酸の側鎖であり；
Ａａａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＴｈｒから選択されたアミノ酸残基であり；ここで、そのＣ末端は遊離末端であり、アミノ化又はエステル化される。
【００２５】
また別の更なる実施形態に従って、本発明は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、
Ｒ１はＳｅｒ又はＴｈｒの側鎖であり；
Ｒ２は−ＣＯ−Ａａａであり；
Ａａａはアミノ酸残基Ｓｅｒ又はＴｈｒであり；ここで、Ｃ末端は遊離しており；
Ｒ３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、又はＡｓｐの側鎖である。
【００２６】
下記の実施形態は本発明の実例であり、特許請求の範囲を、例証された特異的な実施形態に制限するようには意図されていない。
【００２７】
１つの実施形態に従い、ＸがＯである、式（Ｉ）と（ＩＡ）の化合物が特異的に提供される。
【００２８】
また別の実施形態に従い、ＸがＳである、式（Ｉ）と（ＩＡ）の化合物が特異的に提供される。
【００２９】
また別の実施形態に従い、Ｒ２が水素である、式（Ｉ）と（ＩＡ）の化合物が特異的に提供される。
【００３０】
また別の実施形態に従い、Ｒ４とＲ５が水素である、式（Ｉ）の化合物が特異的に提供される。
【００３１】
また別の実施形態に従い、Ｒ４とＲ５が存在しない、式（Ｉ）の化合物が特異的に提供される。
【００３２】
また別の実施形態に従い、Ｒ２が−ＣＯ−Ｓｅｒである、式（Ｉ）の化合物が特異的に提供される。
【００３３】
また別の実施形態に従い、Ｒ２が−ＣＯ−Ｔｈｒである、式（Ｉ）の化合物が特異的に提供される。
【００３４】
また別の実施形態に従い、Ｒ１がＳｅｒの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００３５】
また別の実施形態に従い、Ｒ１がＴｈｒの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００３６】
また別の実施形態に従い、Ｒ１がＰｈｅ、Ａｌａ、又はＡｓｎの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００３７】
また別の実施形態に従い、Ｒ３がＡｓｎの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００３８】
また別の実施形態に従い、Ｒ３がＳｅｒの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、及び（ＩＢ）の化合物が特異的に提供される。
【００３９】
また別の実施形態に従い、Ｒ３がＧｌｎの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００４０】
また別の実施形態に従い、Ｒ３がＧｌｕの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００４１】
また別の実施形態に従い、Ｒ３がＡｌａ又はＡｓｐの側鎖である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、及び（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００４２】
また別の実施形態に従い、ＡａａがＳｅｒである、式（ＩＢ）と（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００４３】
また別の実施形態に従い、ＡａａがＴｈｒである、式（ＩＣ）の化合物が特異的に提供される。
【００４４】
また別の実施形態に従い、１以上の全てのアミノ酸がＤアミノ酸である、式（Ｉ）、（ＩＡ）、及び（ＩＢ）の化合物が特異的に提供される。
【００４５】
一実施形態において、任意の制限のない式（Ｉ）の特異的な化合物、又はその薬学的に許容可能な塩或いは立体異性体を、表（１）に列挙する：
【００４６】
【表１−１】
2016532711.tif 000007
【００４７】
【表１−２】
2016532711.tif 000008
【００４８】
【表１−３】
2016532711.tif 000009
【００４９】
本発明に開示される化合物は、製剤の投与のために処方される。
【００５０】
１つの実施形態において、本発明は、開示される化合物、及び薬学的に許容可能な担体又は希釈剤を含む、医薬組成物を提供する。
【００５１】
別の実施形態において、前記医薬組成物は更に、抗癌剤、化学療法薬剤、又は抗増殖性化合物の少なくとも１つを更に含む。
【００５２】
１つの実施形態において、本発明は、薬として使用するための、本発明に開示される化合物を提供する。
【００５３】
別の実施形態において、本発明は、癌又は感染症の処置用の薬として使用するための、本発明に開示される化合物を提供する。
【００５４】
別の実施形態において、本発明は、骨癌、頭部又は首部の癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、頚部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性又は急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む）、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されるものを含む環境により誘導される癌、及び前記癌の組み合わせのための薬として使用するための、本発明に開示される化合物を提供する。
【００５５】
別の実施形態において、本発明は、癌の処置に使用するための、本発明に開示される化合物を提供する。
【００５６】
別の実施形態において、本発明は、感染症の処置に使用するための、本発明に開示される化合物を提供する。
【００５７】
１つの実施形態において、本発明は、細菌感染症、ウイルス性感染症、又は真菌類感染症の処置用の薬として使用するための、本発明に開示される化合物を提供する。
【００５８】
１つの実施形態において、本発明は癌の処置方法を提供し、該方法は、有効な量の本発明の化合物の、必要とする被験体への投与を含む。
【００５９】
別の実施形態において、本発明は、被験体のＰＤ−１シグナル伝達経路により媒介される免疫応答を調節する方法を提供し、該方法は、治療上有効な量の本発明の化合物を被験体に投与する工程を含み、それにより被験体の免疫応答が調節される。
【００６０】
また別の実施形態において、本発明は、被験体における腫瘍細胞の増殖及び／又は転移を阻害する方法を提供し、該方法は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を阻害することが可能な、治療上有効な量の本発明の化合物を被験体に投与する工程を含む。
【００６１】
前記腫瘍細胞は癌を含むが、癌は、骨癌、頭部又は首部の癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性又は急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む）、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盤癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されるものを含む環境により誘導される癌、及び前記癌の組み合わせに限定されない。
【００６２】
また別の更なる実施形態において、本発明は、被験体の感染症を処置する方法を提供し、該方法は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を阻害することが可能な、治療上有効な量の本発明の化合物を被験体に投与する工程を含み、それにより被験体の感染症が処置される。
【００６３】
また更に別の実施形態において、本発明は、被験体の細菌感染症、ウイルス性感染症、及び真菌類感染症を処置する方法を提供し、該方法は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）シグナル伝達経路を阻害することが可能な、治療上有効な量の本発明の化合物を被験体に投与する工程を含み、それにより被験体の細菌感染症、ウイルス性感染症、及び真菌類感染症が処置される。
【００６４】
感染症は、限定されないが、ＨＩＶ、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、ウイルス肝炎（Ａ、Ｂ、＆Ｃ）、ヘルペスウイルス（例えばＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、及びＣＭＶ、エプスタイン−バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス（ｃｏｒｎｏｖｉｒｕｓ）、呼吸系発疹ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス、パピロマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、及びアルボウイルス脳炎ウイルスによる病原性の感染症、細菌クラミジア、リケッチア属の細菌、ミコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎レンサ球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌及びｃｏｎｏｃｏｃｃｉ、クレブシェラ、プロテウス菌、セラチア、シュードモナス、大腸菌、ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、ジフテリア、サルモネラ、バチルス、コレラ、テタヌス、ボツリスム、炭疽、ペスト、レプトスピラ症、及びライム病細菌、菌類カンジダ属（アルビカンス、クルセイ、グラブラータ、トロピカリスなど）による病原性の感染症、クリプトコッカス−ネオフォルマンス、アスペルギルス（フミガタス、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ属（ケカビ、アブシジア、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロスリックスシェンキー、ブラストミセスデルマティティディス、パラコクシジオイデス−ブラジリエンシス、コクシジオイデスイミチス、及びヒストプラスマカプスラーツムによる病原性の感染症、及び、寄生生物エントアメーバヒストリティカ、大腸バランチジウム、ネグレリアフォーレリ、アカントアメーバ菌種（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ  ｓｐ．）、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム菌種（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．）、ニューモシスチス・カリニ、三日熱プラスモジウム、バベシア−ミクロチ、トリパノソーマ−ブルーセイ、クルーズトリパノソーマ、リーシュマニアドノバニ、トキソプラズマ・ゴンディ、ブラジル鉤虫による病原性の感染症を含む。
【００６５】
本発明の化合物は、単一の薬剤として、又は、化合物が様々な薬理学的に許容可能な材料と混合された医薬組成物として使用されてもよい。
【００６６】
医薬組成物は、経口又は吸入の経路により通常は投与されるが、非経口投与経路によっても投与することができる。本発明において、組成物は、例えば経口投与、静脈内注入、局所投与、腹腔内投与、膀胱内投与、又は鞘内投与され得る。非経口投与の例は、限定されないが、関節内（関節の中）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、及び皮下の経路を含み、水性及び非水性の等張性の無菌注射液を含み、これは、抗酸化剤、バッファー、静菌剤、及び、製剤を意図したレシピエントの血液と等張にする溶質、及び、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含み得る水性且つ非水性の無菌の懸濁液を含むことができる。経口投与、非経口投与、皮下投与、及び静脈内投与は、投与の好ましい方法である。
【００６７】
本発明の化合物の投与量は、年齢、体重、症状、治療効力、投薬レジメン、及び／又は処置時間に依存して異なる。一般的に、それらは、成人の場合、２・３日に１回、３日に１回、２日に１回、１日１回乃至１日複数回の時間につき、１ｍｇ乃至１００ｍｇの量で、経口又は吸入の経路により投与されるか、或いは、１日に１乃至２４時間、経口又は吸入の経路により連続して投与されてもよい。投与量は様々な条件に影響されるので、上記の投与量未満の量が十分に作用することもあり、或いは、それより高い投与量が幾つかの場合に必要とされることもある。
【００６８】
本発明の化合物は、（１）本発明の予防薬物及び／又は治療薬物の予防効果及び／又は治療効果の補足及び／又は増強、（２）本発明の予防薬物及び／又は治療薬物の動態、吸収改善、投与量の減少、及び／又は、（３）本発明の予防薬物及び／又は治療薬物の副作用の減少のために、他の薬物と組み合わせて投与されてもよい。
【００６９】
本発明の化合物と他の薬物を含む併用薬は、両方の構成成分が単一の製剤で含まれる組み合わせの調製物として投与されるか、又は別個の製剤として投与されてもよい。別個の製剤による投与は、同時投与と、幾つかの時間間隔を伴う投与を含む。幾つかの時間間隔を伴う投与の場合、本発明の化合物は最初に投与され、その後に別の薬物が投与され、又は、別の薬物が最初に投与され、その後に本発明の化合物が投与され得る。それぞれの薬物の投与方法は同じか又は異なっていてもよい。
【００７０】
他の薬物の投与量は、臨床的に使用された投与量に基づいて、適切に選択され得る。本発明の化合物と他の薬物の配合比は、投与される被験体の年齢と体重、投与方法、投与時間、処置する疾患、症状、及びそれらの組み合わせに従って、適切に選択され得る。例えば、他の薬物は、１質量部の本発明の化合物に基づいて、０．０１乃至１００質量部の量で使用されてもよい。他の薬物は、適切な比率で２種類以上の任意の薬物の組み合わせであってもよい。本発明の化合物の予防効果及び／又は治療効果を補足及び／又は増強する他の薬物は、既に発見されたものだけでなく、上記の機構に基づいて、今後発見されるものも含む。
【００７１】
この併用が予防効果及び／又は治療効果を及ぼす疾患は、特に限定されない。併用薬は、本発明の化合物の予防効果及び／又は治療効果を補足及び／又は増強する限り、任意の疾患に使用され得る。
【００７２】
本発明の化合物は、既存の化学療法剤と併用して、又は混合形態で使用され得る。化学療法剤の例は、アルキル化剤、ニトロソ尿素薬剤、抗代謝剤、抗癌抗生物質、植物由来のアルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、ホルモン拮抗薬、アロマターゼ阻害剤、Ｐ−グリコプロテイン阻害剤、白金錯体誘導体、他の免疫療法薬、及び他の抗癌剤を含む。更に、化学療法剤は、白血球減少症（好中球減少症）処置薬、血小板減少症処置薬、制吐剤、及び癌性疼痛介入薬物などの癌治療補助剤と併用して、又は混合形態で使用され得る。
【００７３】
１つの実施形態において、本発明の化合物は、他の免疫調節剤及び／又は増強剤と併用して、又は混合形態で使用され得る。免疫調節剤の例は、様々なサイトカイン、ワクチン、及びアジュバントを含む。免疫応答を刺激するこれらサイトカイン、ワクチン、及びアジュバントの例は、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−α、β、又はγ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ポリ（Ｉ：Ｃ）、及びＣｐＧを含むが、これらに限定されない。
【００７４】
別の実施形態において、増強剤は、シクロホスファミド及びシクロホスファミドのアナログ、抗ＴＧＦβ及びイマチニブ（Ｇｌｅｅｖａｃ）、有糸分裂阻害剤（パクリタキセルなど）、スニチニブ（スーテント）又は他の血管新生阻害剤、アロマターゼ阻害剤（レトロゾールなど）、Ａ２ａアデノシン受容体（Ａ２ＡＲ）アンタゴニスト、血管形成阻害剤、アントラサイクリン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、ＴＬＲ４アンタゴニスト、及びＩＬ−１８アンタゴニストを含む。
【００７５】
他に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語及び科学用語は、本明細書における主題が属する技術分野における当業者によって、一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用されるように、以下の定義は、本発明についての理解を促進するために提供される。
【００７６】
本明細書で使用されるように、用語「化合物（複数）」は本発明に開示された化合物を指す。
【００７７】
本明細書で使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」又は「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）の意味で通常は使用され、つまり１以上の機能又は構成成分の存在を許容することを言う。
【００７８】
本明細書で使用されるように、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」といった他の形態と同じく、制限されない。
【００７９】
本明細書で使用されるように、用語「アミノ」は、−ＮＨ２基を指す。それとは反対に説明又は詳述されない限り、本明細書に記載され又は請求されるアミノ基は全て、置換されるか又は置換されなくてもよい。
【００８０】
本明細書で使用されるように、用語「アミノ酸」は、アルファ炭素においてＬ又はＤ原子配置を有するアミノ酸を指す。
【００８１】
「薬学的に許容可能な塩」は、その塩の１つの形態において、特に、活性成分の遊離形態又は以前に使用した活性成分の他の塩形態と比較して、この塩の形態が活性成分に改善された薬物速度論的特性を与える場合に、式（Ｉ）の化合物を含む活性成分を意味すると、捉えられる。活性成分の薬学的に許容可能な塩形態はまた、以前になかった所望の薬物速度論的特性を伴うこの活性成分を初めて提供することができ、更に、身体におけるその治療効果に関するこの活性成分の薬動力学に対する陽性の影響を有し得る。
【００８２】
「薬学的に許容可能な」は、通常安全であり、無毒であり、生物学的にも望ましくない医薬組成物の調製に有用なものを意味し、獣医学、同様にヒトの薬学的使用に許容可能なものを含む。
【００８３】
用語「立体異性体」は、式（Ｉ）の化合物の任意のエナンチオマー、ジアステレオマー、又は幾何異性体を指し、その場合は常に、それらはキラルであり、又は１以上の二重結合を有する。式（Ｉ）及び関連する式の化合物がキラルである場合、それらは、ラセミ体又は光学的に活性な形態で存在することができる。本発明に従う化合物のラセミ体又は立体異性体の医薬活性は異なり得るので、エナンチオマーを使用することが望ましいこともある。これらの場合、最終生成物、又は中間体までもが、当業者に既知の、又は合成などにおいても利用される、化学的又は物理的測定によりエナンチオマー化合物に分離され得る。ラセミアミンの場合、ジアステレオマーは、光学的に活性な分割剤との反応により混合物から形成される。適切な分割剤の例は、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、適切なＮ保護したアミノ酸（例えば、Ｎ−ベンゾイルプロリン又はＮ−ベンゼンスルホニルプロリン）、或いは様々な光学的に活性なカンファースルホン酸のＲ及びＳの形態などの、光学的に活性な酸である。また、光学的に活性な分割剤（例えば、シリカゲル上に固定された、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン、三酢酸セルロース、又は炭水化物の他の誘導体、或いはキラルに誘導されたメタクリル酸塩重合体）の補助によるクロマトグラフィーのエナンチオマー分解能も利点である。
【００８４】
用語「被験体」は、家庭動物（例えば、ネコとイヌを含む家庭のペット）及び非家庭動物（野生生物など）といった、哺乳動物（特にヒト）及び他の動物を含む。
【００８５】
「治療上有効な量」又は「有効な量」は、（ｉ）特定の疾患、障害、又は症候群を処置又は予防し、（ｉｉ）特定の疾患、障害、又は症候群の１以上の症状を減らし、回復し、又は除去し、或いは（ｉｉｉ）本明細書に記載される特定の疾患、障害、又は症候群の１以上の症状の発症を遅らせるのに十分な量の、本発明の化合物を指す。癌の場合、治療上有効な量の薬物は、癌細胞の数を減らし；癌の大きさを小さくし；末梢器官への癌細胞侵入を阻害し（即ち、ある程度まで遅くし、或いは止める）；腫瘍転移を抑え（即ち、ある程度まで遅くし、或いは止める）；腫瘍増殖をある程度まで阻害し；及び／又は、癌に関連した１以上の症状をある程度まで和らげることがある。感染症状態の場合、治療上の有効な量は、感染症、最近、ウイルス、及び菌により引き起こされる感染の症状を低下させる又は緩和するのに十分な量である。
【００８６】
自然発生のアミノ酸は、以下の表２に示される従来の３文字の略語により、全体にわたって同定される：
【００８７】
【表２】
2016532711.tif 000010
【００８８】
本明細書全体において使用される略語を、その特定の意味とともに以下に要約する。
【００８９】
℃（摂氏温度）；δ（デルタ）；％（パーセンテージ）；ブライン（ＮａＣｌ溶液）；ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＣＭ（ジクロロメタン）；ｂｒ  ｓ（広範囲の一重項）；Ｃｓ２ＣＯ３（炭酸セシウム）；ｄ（二重項）；ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；ＤＭＳＯ−ｄ６（重水素化ＤＭＳＯ）；ＥＤＣ．ＨＣｌ／ＥＤＣＩ（１−（３−ジメチル・アミノプロピル）−３−カルボジイミド塩酸塩）；Ｅｔ２ＮＨ（ジエチルアミン）；Ｆｍｏｃ（フルオレニルメチルオキシカルボニル塩化物）；ｇ又はｇｒ（グラム）；Ｈ又はＨ２（水素）；Ｈ２Ｏ（水）；ＨＯＢｔ／ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシ・ベンゾトリアゾール）；ＨＣｌ（塩酸）；ｈ又はｈｒ（時間）；Ｈｚ（ヘルツ）；ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）；Ｉ２（ヨウ素）；Ｋ２ＣＯ３（炭酸カリウム）；ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ｍｍｏｌ（ミリモル）；Ｍ（モル）；μｌ（マイクロリットル）；ｍＬ（ミリリットル）；ｍｇ（ミリグラム）；ｍ（ジクロロへキシルカルボジイミド）；ＭＨｚ（多重項）；ＭＳ（ＥＳ）（質量分析−電気噴霧）；ｍｉｎ．（分）；Ｎａ（ナトリウム）；ＮａＨＣＯ３（重炭酸ナトリウム）；ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（ヒドラジン水和物）；ＮＭＭ（Ｎ−メチルモルホリン）；Ｎａ２ＳＯ４（硫酸ナトリウム）；Ｎ２（窒素）；ＮＭＲ（核磁気共鳴法）；ＰＤ−Ｌ１（プログラム死−リガンド１）；ＰＤ−Ｌ２（プログラム細胞死１  リガンド２）；ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ／分取ＨＰＬＣ（分取高速液体クロマトグラフィー）；Ｓ（一重項）；ｔＢｕ（第三級ブチル）；ＴＥＡ／Ｅｔ３Ｎ（トリエチルアミン）；ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＴＩＰＳ（トリイソプロピルシラン）；ＴＦＡ／ＣＦ３ＣＯＯＨ（トリフルオロ酢酸）；ｔ（三重項）；ｔＲ＝（保持時間）；ＴＰＰ（トリフェニルホスフィン）；など。
【００９０】
＜実験＞
本発明の実施形態は、適切な材料を使用して、以下の実施例の手順に従い、式（Ｉ）の化合物の調製を提供する。当業者は、以下の調製手順の条件とプロセスの既知の様々な変形が、これら化合物を調製するのに使用され得ることを理解する。更に、詳述された手順の利用により、当業者は、本発明の付加的な化合物を調製することができる。
【００９１】
出発物質は通常、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（アメリカ合衆国又はドイツ）；Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ（アメリカ合衆国）；Ｇ．Ｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ（中国）、及びＳｐｅｃｔｒｏｃｈｅｍ（インド）などの、商業的供給減から利用可能である。
【００９２】
＜化合物の精製と特徴化＞
分析ＨＰＬＣ方法：ＺＩＣ  ＨＩＬＩＣ  ２００Ａ°カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎを使用して、分析ＨＰＬＣを行う。使用される溶出条件は次のとおりである：バッファーＡ：５ｍｍｏｌの酢酸アンモニウム、バッファーＢ：アセトニトリル、カラムと９０％のバッファーＢとの平衡、及び、３０分の間、９０％乃至４０％のバッファーＢの勾配による溶出。
【００９３】
分取ＨＰＬＣ方法：ＳｅＱｕａｎｔ  ＺＩＣ  ＨＩＬＩＣ  ２００Ａ°カラム（１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）、流速：５．０ｍｌ／ｍｉｎを使用して、分取ＨＰＬＣを行う。使用される溶出条件は次のとおりである：バッファーＡ：５ｍｍｏｌの酢酸アンモニウム（酢酸によりｐＨ−４に調節する）、バッファーＢ：アセトニトリル、カラムと９０％のバッファーＢとの平衡、及び、２０分の間、９０％乃至４０％のバッファーＢの勾配による溶出。
【００９４】
Ｍｅｒｃｕｒｙ  ＭＳカラムを使用する、Ｇ１３１５  Ｂ  ＤＡＤを伴うＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズのＨＰＬＣを備えるＡＰ１  ２０００  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ  ｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄ（Ａｐｐｌｉｅｄ  ｂｉｏ  ｓｙｓｔｅｍｓ）の上で、又は、Ｍｅｒｃｕｒｙ  ＭＳカラムを使用する、Ｇ１３１５  Ｂ  ＤＡＤを伴うＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズのＨＰＬＣを備えるＡｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＶＬ  ｓｉｎｇｌｅ  ｑｕａｄを使用して、又は、ＳＰＤ−２０  Ａ  ＤＡＤを伴うＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＵＦＬＣシステムを備えるＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣＭＳ２０２０  ｓｉｎｇｌｅ  ｑｕａｄを使用して、ＬＣＭＳを行った。
【００９５】
＜実施例１：化合物１の合成＞
【００９６】
【化６】
2016532711.tif 000011
2016532711.tif 000012
炭酸カリウム（７．９ｇ、５７．３９ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（１．３ｍＬ、２１．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３５ｍＬ）における化合物１ａ（５．０ｇ、１９．１３ｍｍｏｌ）の溶液に加えて、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応混合物を水と酢酸エチルの間で分割した。有機質層を水とブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて、５．０ｇの化合物１ｂ（収率：９６．１％）を得た。ＬＣＭＳ：１７６．１（Ｍ−Ｂｏｃ）＋。
【００９７】
【化７】
2016532711.tif 000013
ヒドラジン水和物（７．２ｍＬ）を、メタノール（３０ｍＬ、）における化合物１ｂ（５．０ｍＬ、１８．１６ｍｍｏｌ）の溶液に加えて、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応混合物を減圧下で蒸発させて、得られた残留物を水と酢酸エチルの間で分割した。有機質層を水とブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて、４．０ｇの化合物１ｃ（収率：８０．０％）を得た。ＬＣＭＳ：２７６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９８】
【化８】
2016532711.tif 000014
ＮＭＭ（０．６７ｍｌ、６．５２ｍｍｏｌ）を、０℃で、ＤＭＦ（１５ｍＬ）における１ｃ（１．２ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）、１ｄ（１．４３ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．７ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）、及びＥＤＣ．ＨＣｌ（０．９９ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ゆっくり加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応物を氷でクエンチし、沈降した固形物を濾過し、真空下で乾燥して、２．０ｇの純生成物１ｅ（収率：８３．３％）を得た。ＬＣＭＳ：５９１．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９９】
【化９】
2016532711.tif 000015
乾燥ＴＨＦ（１５．０ｍＬ）とＤＭＦ（５．０ｍＬ）における１ｅ（１．５ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフェニルホスフィン（１．３８ｇ、５．２７ｍｍｏｌ）とヨウ素（１．３３ｇ、５．２７ｍｍｏｌ）を、０℃で加えた。ヨウ素が完全に溶解した後、Ｅｔ３Ｎ（１．５２ｍＬ、１０．５４ｍｍｏｌ）を、氷冷温度で反応混合物に加えた。反応混合物を室温にし、４時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応物を氷水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機質層を、飽和チオ硫酸ナトリウムとブライン溶液で洗浄した。分離した有機質層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮することで、残留物を得て、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて３０％の酢酸エチル）により精製して、０．８ｇの化合物１ｆ（収率：５５％）を得た。ＬＣＭＳ：５５１．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１００】
【化１０】
2016532711.tif 000016
０℃でＣＨ２Ｃｌ２（２０．０ｍＬ）における化合物１ｆ（０．８ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液にジエチルアミン（２０．０ｍＬ）を加えることにより、Ｆｍｏｃ基を脱保護した。反応物を室温で２時間撹拌した。結果として生じる溶液を真空中で濃縮して、濃い粘着性の残留物を得た。粗製の化合物を中性のアルミナカラムクロマトグラフィー（溶出：クロロホルムにおいて２％のメタノール）により精製して、０．３８ｇの化合物１ｇ（収率：８０．０％）を得た。ＬＣＭＳ：３２９．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０１】
【化１１】
2016532711.tif 000017
化合物１ｇ（０．３８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解したＴＥＡ（０．３３ｍＬ、２．３２ｍｍｏｌ）を、尿素結合形成のために０℃で、１ｈ（０．５５ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）の溶液に滴下で加え、混合物を室温で２時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応物を氷水でクエンチし、沈殿した固形物を濾過し、真空下で乾燥することで、粗製の化合物を得て、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−３５％の酢酸エチル）により精製して、０．４ｇの生成物１ｉ（収率：５９．７％）を得た。ＬＣＭＳ：５８６．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０２】
【化１２】
2016532711.tif 000018
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）における化合物１ｉ（０．４ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）と触媒量のトリイソプロピルシランを加え、室温で３時間撹拌することで、酸に感受性のある保護基を取り除いた。結果として生じる溶液を窒素下で濃縮し、固形材料を実験条件下で記載されるような分取ＨＰＬＣ方法によって精製した（収量：０．０５ｇ）。ＬＣＭＳ：３１８．０（Ｍ＋Ｈ）＋。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１０．９６ｍｉｎ。
【０１０３】
＜化合物１ｈ（ＮＯ２−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＯ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ）の合成＞
【０１０４】
【化１３】
2016532711.tif 000019
ＤＣＭ（２５．０ｍＬ）における４−ニトロフェニルクロロホルメート（４．７９ｇ、２３．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）におけるＨ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕ（５．０ｇ、２１．６１ｍｍｏｌ）ＴＥＡ（６．２ｍＬ、４３．２２ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり加え、３０分間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応の完了の後、それをＤＣＭで希釈し、１．０Ｍのクエン酸、そして１．０Ｍの炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機質層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮することで、粗製の化合物１ｈを得て、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−５％の酢酸エチル）により精製して、３．０ｇの生成物１ｈを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ１．１７（ｓ、９Ｈ）、１．２８（ｄ、３Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）、４．１１（ｍ、１Ｈ）、４．２８（ｍ、１Ｈ）、５．８９（ｄ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、２Ｈ）、８．２６（ｄ、２Ｈ）。
【０１０５】
＜実施例２：化合物２の合成＞
【０１０６】
【化１４】
2016532711.tif 000020
ＮＭＭ（１．８ｍｌ、１８．１５ｍｍｏｌ）を、０℃で、ＤＭＦ（１５ｍＬ）における１ｃ（２．０ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）、２ｄ（４．３ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．１７ｇ、８．７ｍｍｏｌ）、及びＥＤＣ．ＨＣｌ（１．６６ｇ、８．７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ゆっくり加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応物を氷でクエンチし、沈降した固形物を濾過し、真空下で乾燥して、３．７ｇの純生成物２ｅ（収率：５９．６％）を得た。ＬＣＭＳ：８５４．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０７】
【化１５】
2016532711.tif 000021
乾燥ＴＨＦ（２５．０ｍＬ）とＤＭＦ（１０．０ｍＬ）における２ｅ（３．７ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフェニルホスフィン（２．２８ｇ、８．６６ｍｍｏｌ）とヨウ素（２．２ｇ、８．６６ｍｍｏｌ）を、０℃で加えた。ヨウ素が完全に溶解した後、Ｅｔ３Ｎ（２．５ｍＬ、１７．３２ｍｍｏｌ）を、同じ温度で加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応物を氷水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機質層を、飽和チオ硫酸ナトリウムとブライン溶液で洗浄した。分離した有機質層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて３０％の酢酸エチル）により精製して、２．０ｇの化合物２ｆ（収率：５５％）を得た。ＬＣＭＳ：８５８．４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０１０８】
【化１６】
2016532711.tif 000022
ジエチルアミン（３０．０ｍＬ）を、０℃でＣＨ２Ｃｌ２（３０．０ｍＬ）における化合物２ｆ（２．０ｍＬ、１．１７ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。結果として生じる溶液を真空中で濃縮して、濃い粘着性の残留物を得た。粗製の化合物を中性のアルミナカラムクロマトグラフィー（溶出：クロロホルムにおいて２％のメタノール）により精製して、１．０ｇの化合物２ｇ（収率：７１．４％）を得た。ＬＣＭＳ：６１４．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０９】
【化１７】
2016532711.tif 000023
ＤＭＦ（１０ｍＬ）の中に溶解した化合物２ｇ（１．０ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（０．４７ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を０℃で、１ｈ（０．７ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）の溶液に滴下で加えた。そして、反応混合物を室温にし、２時間撹拌を続けた。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応物を氷水でクエンチし、沈降した固形物を濾過し、真空下で乾燥した。得られた粗製の化合物を更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−５％の酢酸エチル）により精製して、０．８ｇの生成物２ｉ（収率：５７．１％）を得た。ＬＣＭＳ：８７１．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１０】
【化１８】
2016532711.tif 000024
ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）における化合物２ｉ（０．８ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（６ｍＬ）と触媒量のトリイソプロピルシランを加え、室温で３時間撹拌した。結果として生じる溶液を窒素下で濃縮し、固形材料を実験条件下で記載されるような分取ＨＰＬＣ方法によって精製した（収量：０．０６５ｇ）。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１２．０１ｍｉｎ。ＬＣＭＳ：３６１．３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１１】
＜実施例３：化合物３の合成＞
【０１１２】
【化１９】
2016532711.tif 000025
ローソン試薬（２．８５ｇ、７．０３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（４０ｍＬ）における化合物２ｅ（４ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）の溶液に加えて、７５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応混合物を減圧下で蒸発させて、得られた残留物を氷水と酢酸エチルの間で分割した。有機質層を、ＮａＨＣＯ３溶液、そしてブライン溶液で洗浄した。有機質層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することで、残留物を得て、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−５％の酢酸エチル）により精製して、２．７ｇの化合物３ａ（収率：６７．６６％）を得た。ＬＣＭＳ：８５２．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１３】
【化２０】
2016532711.tif 000026
ＣＨ２Ｃｌ２（３．８ｍＬ）における化合物３ａ（１ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の溶液にジエチルアミン（３．８ｍＬ）を加えることにより、化合物３ａの上にあるＦｍｏｃ基を脱保護した。反応混合物を３０分間、室温で撹拌した。結果として生じる溶液を真空中で濃縮して、濃い粘着性の残留物を得た。粗製の化合物を中性のアルミナカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−５％の酢酸エチル、そしてクロロホルムにおいて０−５％のメタノール）により精製して、０．６２ｇの化合物３ｂを得た。ＬＣＭＳ：６３０．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１４】
【化２１】
2016532711.tif 000027
ＣＨ２Ｃｌ２（７．５ｍＬ）における化合物３ｂ（０．６ｇ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２．５ｍＬ）と触媒量のトリイソプロピルシランを加え、室温で３時間撹拌した。結果として生じる溶液を真空中で濃縮して、０．１３ｇの化合物３を得て、それを実験条件の下で、記載された分取ＨＰＬＣ方法により精製した。ＬＣＭＳ：２３２．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１５】
＜実施例４：化合物４の合成＞
【０１１６】
【化２２】
2016532711.tif 000028
化合物３ｂ（０．５ｇ、７．９ｍｍｏｌ）を、室温でＴＨＦ（１０ｍＬ）の中で、化合物４ｅ（０．３４ｇ、７．９ｍｍｏｌ）とカップリングすることにより、尿素結合を行った。ＴＨＦ（１０ｍＬ）におけるＴＥＡ（０．１６ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の追加によりカップリングを開始して、結果として生じる混合物を室温で撹拌した。１２時間後、ＴＨＦを反応質量から蒸発させて、水と酢酸エチルの間で分割した。有機質層を水とブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮することで、４ａを得て、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−５％の酢酸エチル）により精製して、０．４５ｇの生成物４ａ（収率：６１．６４％）を得た。ＬＣＭＳ：９２１．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１７】
【化２３】
2016532711.tif 000029
メタノール（２０ｍＬ）における化合物４ａ（０．５５ｇ）の溶液に、不活性雰囲気下で１０％のＰｄＣ（０．１５ｇ）を加えた。混合物をＨ２大気の下、１時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。その後、Ｐｄ−Ｃ触媒をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドに通す濾過により取り除き、２０ｍＬのメタノールで洗浄した。減圧下での蒸発後の組み合わせた有機濾液は、生成物４ｂ（収率：０．４２ｇ、８５．７１％）の分離を結果としてもたらした。ＬＣＭＳ：８３１．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１８】
【化２４】
2016532711.tif 000030
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）における化合物４ｂ（０．２ｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）と触媒量のトリイソプロピルシランを加え、室温で３時間撹拌した。結果として生じる溶液を真空下で濃縮し、固形材料を実験条件下で、記載されるような分取ＨＰＬＣ方法によって精製した（収量：０．０６５ｇ）。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１４．１ｍｉｎ。ＬＣＭＳ：３７７．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１９】
＜化合物４ｅ（ＮＯ２−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＯ−Ｔｈｒ（ＯｔＢｕ）−Ｂｚｌ）の合成＞
【０１２０】
【化２５】
2016532711.tif 000031
１００ｍＬのＤＭＦにおける化合物Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（１５ｇ、３７．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１４．７５ｇ、４５．２ｍｍｏｌ）を加え、結果として生じる混合物を０℃に冷却した。冷却した反応混合物に、臭化ベンジル（７．７４ｇ、４５．２ｍｍｏｌ）を加え、溶液を氷冷温度で３０分間撹拌し、そして室温で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、酢酸エチルで希釈した。有機質層を、水、そしてブライン溶液で連続して洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過した溶液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−３０％の酢酸エチル）により精製して、白色固形物として１８ｇの４ｃを得た。ＬＣＭＳ：４３３．１（Ｍ−ＯｔＢｕ）＋、３９７．２（Ｍ−ＯＢｚｌ）＋。
【０１２１】
室温で撹拌することで、１時間、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）における化合物４ｄ（２５ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）にジエチルアミン（１００ｍＬ）を加えることにより、化合物４ｃ（２５ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）の上にあるＦｍｏｃ基を脱保護した。結果として生じる溶液を真空中で濃縮し、濃い残留物を中性のアルミナカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−５０％の酢酸エチル、そしてクロロホルムにおいて０−５％のメタノール）により精製して、１０．６ｇの化合物４ｄを得た。ＬＣＭＳ：２６６．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２２】
【化２６】
2016532711.tif 000032
【０１２３】
ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）における化合物４ｄ（１．５ｇ、５．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１．１４ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で５−１０分間撹拌した。この混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）における４−クロロギ酸ニトロフェニル（１．４ｇ、６．７８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、結果として生じる混合物を室温で１２時間撹拌した。ＴＬＣ分析により反応の完了を確認した。反応の完了後、それをＤＣＭで希釈し、１．０Ｍの重硫酸ナトリウム溶液、そして１．０Ｍの炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機質層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することで、粗製の化合物４ｅを得て、それを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出：ヘキサンにおいて０−２０％の酢酸エチル）により精製して、０．７ｇの生成物４ｅを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、３００ＭＨｚ）：δ１．０４（ｓ、９Ｈ）、１．１６（ｄ、３Ｈ）、４．１１（ｍ、１Ｈ）、５．１１（ｍ、３Ｈ）、６．９１（ｄ、２Ｈ）、７．４０（ｍ、５Ｈ）、８．１０（ｄ、２Ｈ）、８．２６（ｂｒｓ、１Ｈ）。
【０１２４】
以下の表３の化合物を、上述の実験手順に基づいて調製した。
【０１２５】
【表３−１】
2016532711.tif 000033
【０１２６】
【表３−２】
2016532711.tif 000034
【０１２７】
【表３−３】
2016532711.tif 000035
【０１２８】
以下の表４に示される化合物は、当業者に既知の適切な改良により上述のような次の同様の手順によって調製することができ、また、本出願の範囲内に含まれる。
【０１２９】
【表４】
2016532711.tif 000036
【０１３０】
＜組み換え型ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２の存在下でのマウス脾細胞増殖の救済＞
組み替えマウスＰＤ−Ｌ１（ｒｍ−ＰＤＬ−１、ｃａｔ  ｎｏ：１０１９−Ｂ７−１００及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ＰＤ−Ｌ１のソースとして使用した。
【０１３１】
＜要件＞
６−８週齢のＣ５７  ＢＬ６マウスから採取したマウス脾細胞；ＲＰＭＩ  １６４０（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃１１８７５）；高グルコースを備えたＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃Ｄ６４２９）；ウシ胎児血清［Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｃａｔ＃ＳＨ３００７１．０３］；ペニシリン（１００００単位／ｍｌ）−ストレプトマイシン（１０，０００μｇ／ｍｌ）の液体（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃１５１４０−１２２）；ＭＥＭピルビン酸ナトリウム溶液１００ｍＭ（１００ｘ）、液体（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃１１３６０）；非必須アミノ酸（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃１１１４０）；Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃２５０３０）；抗ＣＤ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ−  １６−００３２）；抗ＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ−  １６−０２８１）；ＡＣＫ溶解バッファー（１ｍＬ）（ＧＩＢＣＯ、Ｃａｔ＃―Ａ１０４９２）；Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（密度−１．０８３ｇｍ／ｍＬ）（ＳＩＧＭＡ  １０８３１）；トリパンブルー溶液（ＳＩＧＭＡ−Ｔ８１５４）；２ｍＬのＮｏｒｍ  Ｊｅｃｔ  Ｌｕｅｒ  Ｌｏｃｋ  ｓｙｒｉｎｇｅ−（Ｓｉｇｍａ  ２０１４−１２）；４０μｍのナイロン細胞（ｎｙｌｏｎ  ｃｅｌｌ）ストレーナー（ＢＤ  ＦＡＬＣＯＮ３５２３０）；血球計（Ｂｒｉｇｈｔ  ｌｉｎｅ−ＳＩＧＭＡ  Ｚ３５９６２９）；ＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ／０．１％のＢＳＡ）：０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（ＳＩＧＭＡ  Ａ７０５０）とナトリウムアジド（ＳＩＧＭＡ  ０８５９１）を備えたリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ  ７．２（ＨｉＭｅｄｉａ  ＴＳ１００６）；ＣＦＳＥの５ｍＭの貯蔵溶液：ＣＦＳＥ貯蔵溶液は、１８０μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ  Ｃ２Ｈ６ＳＯ、ＳＩＧＭＡ−Ｄ−５８７９）により、凍結乾燥したＣＦＳＥの希釈によって調製され、更なる使用のためにチューブに等分された。作用濃度（Ｗｏｒｋｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）は、１０μＭから１μＭまで滴定された。（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−６５０８５０−８５）；０．０５％のトリプシンと０．０２％のＥＤＴＡ（ＳＩＧＭＡ５９４１７Ｃ）；９６−ウェル・フォーマットＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＣＬＳ３３９０）；
ＢＤ  ＦＡＣＳキャリバー（Ｅ６０１６）；組み替えマウスＢ７−Ｈ１／ＰＤＬ１  Ｆｃキメラ（ｒｍ−ＰＤ−Ｌ１  ｃａｔ  ｎｏ：１０１９−Ｂ７−１００）。
【０１３２】
＜プロトコル＞
＜脾細胞の調製と培養＞
４０μｍの細胞ストレーナーの中でマウスの脾臓をつぶすことにより５０ｍＬのファルコン・チューブに採取した脾細胞を、室温で５分間、１ｍＬのＡＣＫ溶解バッファーで更に処理した。９ｍＬのＲＰＭＩ完全培地での洗浄後、１５ｍＬのチューブの中にある３ｍＬの１×ＰＢＳにおいて細胞を再懸濁した。脾細胞懸濁液が重なるのを妨げることなく、３ｍＬのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅをチューブの底に注意深く加えた。室温で２０分間、８００ｘｇで遠心分離した後、脾細胞の不透明な層を、妨害／混合することなく、注意深く集めた。脾細胞を冷たい１×ＰＢＳで２回洗浄し、その後、トリパンブルー除去法を使用して細胞を計数して、更に細胞ベースのアッセイに使用した。
【０１３３】
脾細胞をＲＰＭＩ完全培地（ＲＰＭＩ＋１０％のウシ胎仔血清＋１ｍＭのピルビン酸ナトリウム＋１０，０００単位／ｍＬのペニシリンと１０，０００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン）の中で培養し、３７℃で５％のＣＯ２を伴うＣＯ２インキュベーターの中で維持した。
【０１３４】
＜ＣＦＳＥ増殖アッセイ＞
ＣＦＳＥは、細胞に受動的に拡散し、且つ細胞内タンパク質に結合する色素である。１×１０６細胞／ｍＬの採取した脾細胞を、３７℃で１０分間、予め暖めた１×ＰＢＳ／０．１％のＢＳＡ溶液の中で、５μＭのＣＦＳＥで処理した。５の容量（ｖｏｌｕｍｅ）の氷冷培地を使用して過剰なＣＦＳＥをクエンチし、５分間氷の上でインキュベートした。ＣＦＳＥ標識脾細胞を更に、氷冷の完全ＲＰＭＩ培地で３回洗浄した。ＣＦＳＥ標識の１×１０５脾細胞を、ＭＤＡＰ−ＭＢ２３１細胞（高グルコースＤＭＥＭ培地の中で培養された１×１０５細胞）又は組み換え型ヒトＰＤＬ−１（１００ｎｇ／ｍＬ）の何れかと、試験化合物とを含有するウェルに加えた。抗マウスＣＤ３抗体と抗マウスＣＤ２８抗体（各々１μｇ／ｍＬ）で脾細胞を刺激し、培養物を５％のＣＯ２により３７℃で７２時間、更にインキュベートした。細胞を採取し、氷冷ＦＡＣＳバッファーで３回洗浄し、４８８ｎｍの励起フィルタと５２１ｎｍの発光フィルタを備えたフローサイトメトリーにより％増殖を分析した。
【０１３５】
＜データの編集、処理、及び推測＞
細胞探究（ｃｅｌｌ  ｑｕｅｓｔ）ＦＡＣＳプログラムを使用してパーセント脾細胞増殖を分析し、％バックグラウンド増殖値の演繹と、刺激した脾細胞増殖（正の対照）の％を１００％に標準化した後、化合物による脾細胞増殖のパーセント救済を推測した。
刺激された脾細胞：脾細胞＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８刺激
バックグラウンド増殖：脾細胞＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＰＤ−Ｌ１
化合物増殖：脾細胞＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＰＤ−Ｌ１＋化合物
リガンド（ＰＤＬ−１）の存在下で、所望の濃度の化合物を、抗ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激した脾細胞に加えることにより、化合物の効果を調べる。
【０１３６】
【表５】
2016532711.tif 000037
【国際調査報告】
2016532711.tif 000046
2016532711.tif 000047
2016532711.tif 000048