(57)【要約】  ＨＥＲ２陽性腫瘍の癌患者を処置するための方法を開示する。本方法は、治療有効量の（ｉ）第１の抗ＨＥＲ２抗体である標的化部分を含むアントラサイクリン導入イムノリポソームと、（ｉｉ）第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬とを併用して患者に投与することを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者のＨＥＲ２陽性癌の処置方法において、治療有効量の（ｉ）封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体である標的化部分を含むイムノリポソームと、（ｉｉ）第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬とを各々前記患者に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記第１の抗ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２への結合において前記第２の抗ＨＥＲ２抗体と競合しないことを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、前記第１の抗ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２シグナル伝達の阻害剤ではなく、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２シグナル伝達の阻害剤であることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、前記患者はアントラサイクリン未処置患者であることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載の方法において、前記患者はａｄｏ−トラスツズマブエムタンシンおよびトラスツズマブの一方または両方による前処置を受けたことがあることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体が１回の投与につき６ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、前記イムノリポソームが１回の投与につき３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される少なくとも１つの４週間治療サイクルを含み；
かつ、前記少なくとも１つのサイクルが１つのサイクルであるとき、第１および第２のアリＨＥＲ２抗体は各々１回投与され；
かつ、前記少なくとも１つのサイクルが複数のサイクルであるとき、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体は３週間ごとに投与され、前記イムノリポソームは３週間ごとにまたは４週間ごとに投与される
ことを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１乃至５の何れか１項に記載の方法において、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体は初回負荷用量である第１の用量、および維持量である第２の用量で投与されることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項６または７に記載の方法において、前記少なくとも１つのサイクルは少なくとも４つのサイクルであることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の方法において、前記ＨＥＲ２陽性癌は膀胱癌、乳癌、進行／転移性乳癌、肉腫、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、食道胃接合部癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌および多発性骨髄腫からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１０】
方法請求項９において、前記ＨＥＲ２陽性癌は乳癌であることを特徴とする方法請求項９。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、前記乳癌は進行／転移性乳癌であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項９乃至１１の何れか１項に記載の方法において、前記ＨＥＲ２陽性癌から採取された生検標本は免疫組織化学的半定量検査によりＨＥＲ２１＋、ＨＥＲ２２＋またはＨＥＲ２３＋であることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１乃至１２の何れか１項に記載の方法において、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体は前記イムノリポソームの初回用量の投与前に投与される初回用量として投与されることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１乃至１３の何れか１項に記載の方法において、前記イムノリポソームは静脈内投与、髄腔内投与、膀胱内投与、腹腔内投与または筋肉内投与されることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１乃至１４の何れか１項に記載の方法において、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体は抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１乃至１５の何れか１項に記載の方法において、前記アントラサイクリンはドキソルビシンであることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１乃至１６の何れか１項に記載の方法において、前記イムノリポソームはＭＭ−３０２であることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１乃至１７の何れか１項に記載の方法において、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブまたはａｄｏ−トラスツズマブエムタンシンであることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１乃至１８の何れか１項に記載の方法において、前記イムノリポソームは単独療法としての前記イムノリポソームの投与に推奨されるよりも低い投与量で投与されることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１乃至１９の何れか１項に記載の方法において、前記イムノリポソームは単独療法としての前記アントラサイクリンの投与に推奨されるよりも高い前記アントラサイクリンの累積投与量を送達するように投与されることを特徴とする方法。
【請求項２１】
ヒト患者のＨＥＲ２陽性乳癌を処置する方法において、治療有効量のＭＭ−３０２および治療有効量のトラスツズマブを前記患者に併用投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
ヒト患者のＨＥＲ２陽性乳癌を処置する方法において、
前記患者にとってアントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームの安全かつ有効な投与量を判定すること；
前記イムノリポソームの前記安全かつ有効な投与量で前記イムノリポソームを前記患者に投与すること；
前記患者にとって抗ＨＥＲ２抗体の安全かつ有効な投与量を判定すること；および
前記抗体の前記安全かつ有効な投与量で前記抗体を前記患者に投与すること；
を含み、
前記イムノリポソームおよび前記抗ＨＥＲ２抗体は併用投与される
ことを特徴とする方法。
【請求項２３】
アントラサイクリン未処置ヒト患者のＨＥＲ２陽性癌の処置方法において、治療有効量の（ｉ）封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体である標的化部分を含むイムノリポソームと、（ｉｉ）第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬とを各々前記患者に併用投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項１乃至２３の何れか１項に記載の方法において、前記処置の結果、処置された患者の０．５％超または１％超または２％超で左室駆出率（ＬＶＥＦ）が１０％を超えて低下しないことを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法において、左室駆出率ＬＶＥＦの前記低下は５％以下であることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１乃至２５の何れか１項に記載の方法において、前記第２の抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブであることを特徴とする方法。
【請求項２７】
ｉ）封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗ＨＥＲ２イムノリポソームの調製物を含む第２の容器；
および
ｉｉ）前記イムノリポソームと第２の抗ＨＥＲ２抗体との併用投与に関する説明書
を含む第１の容器
を含むことを特徴とするキット。
【請求項２８】
請求項２７に記載のキットにおいて、前記第１の容器は少なくとも１つの用量の前記第２の抗ＨＥＲ２抗体をさらに含むことを特徴とするキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年１２月３日に出願された米国仮特許出願第６１／７３２，７３６号明細書、および２０１３年４月９日に出願された同第６１／８１０，２５４号明細書の利益および優先権を主張する。前述の出願各々の全内容について、その全体を参照により本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）（ＮＥＵ、ＥＲＢＢ−２、ＣＤ３４０またはｐ１８５とも呼ばれる）の過剰発現は、種々の癌、たとえば、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮癌、メラノーマおよび胆管癌などと関連している。たとえば、ＨＥＲ２の過剰発現は典型的には、高い再発率を有する侵襲性転移性の乳癌と関連している、および／または患者の予後不良と関連している。
【０００３】
数十年にわたり効果的な癌治療剤として使用されてきたものにアントラサイクリンがあり、アントラサイクリンを用いた療法は、乳癌処置に臨床効果があることが立証されている。残念ながら、こうしたアントラサイクリンを用いた療法には、著しい毒性、たとえば、急性および／または慢性心機能不全が伴い、その治療的使用が限定されてきた。現在利用できるアントラサイクリンの安全性および有効性の改善を目的として、ＨＥＲ２を過剰発現している癌細胞を標的とし、かつＨＥＲ２を介したシグナル伝達をブロックしない（たとえば、抗体がブロックしない）抗体をその外面に有するリポソームにアントラサイクリンドキソルビシンを含ませたイムノリポソーム製剤が調製されてきた。
【０００４】
ＨＥＲ２を過剰発現している癌を処置するもう１つのアプローチは、ＨＥＲ２シグナル伝達を阻害する抗ＨＥＲ２抗体の使用に焦点を当ててきた。たとえば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））は、ＨＥＲ２が介在する細胞内シグナル伝達をブロックする治療用抗ＨＥＲ２抗体であり、ＨＥＲ２を過剰発現している腫瘍の処置に広く使用されている。残念ながら、トラスツズマブの重要な用量制限毒性作用は心毒性である。心筋細胞はＨＥＲ２を発現することが知れられており、トラスツズマブを介した心毒性は、心筋細胞に発現するＨＥＲ２にトラスツズマブが結合した結果、ＨＥＲ２を発現する心筋細胞が損傷されることに起因すると一般に考えられる。アントラサイクリン薬剤および抗ＨＥＲ２抗体はどちらも関連する重篤な副作用（すなわち、心毒性）を伴うため、確立された治療剤を最適化して、抗癌作用を高め、心臓に対する有害作用を少なくすることにより、生活の質に対するマイナスの影響を抑えて患者を延命させる新しい治療剤を開発することは、依然として不可欠である。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書で提供されるのは、ヒト患者のＨＥＲ２陽性癌を処置するための組成物と、ヒト患者のＨＥＲ２陽性癌を処置するための方法であって、１）ＨＥＲ２標的化アントラサイクリン導入イムノリポソーム（封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体を含むイムノリポソーム、本明細書ではアントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームともいう）の調製物、および２）第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬を患者に併用投与することを含む方法である。この併用は、たとえば、本明細書に開示された臨床投与量レジメン（特定の投与スケジュールに従い個々の投与量が投与される）に従い併用投与される（または併用投与用である）。
【０００６】
一実施形態では、第１の抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２への結合において第２の抗ＨＥＲ２抗体と競合しない。
【０００７】
種々の実施形態では、第１の抗ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２シグナル伝達の阻害剤ではなく；第２の抗ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２シグナル伝達の阻害剤であり；本組成物は少なくとも１つの治療サイクルで投与されるものであり、本方法は少なくとも１つの治療サイクルを含み、このサイクルは４週間の期間であり、各サイクルで第２の抗ＨＥＲ２抗体を６ｍｇ／ｋｇの用量で週１回投与し、アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソーム調製物を総アントラサイクリン３０ｍｇ／ｍ２の用量で４週間に１回投与する。
【０００８】
なお別の実施形態では、治療有効量は、前記少なくとも１つのサイクルの前に単独療法としてアントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームを投与することを含む。別の実施形態では、アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームの単独療法を３週間ごとに実施し、第２の抗ＨＥＲ２抗体を６ｍｇ／ｋｇで第１の週に、および４ｍｇ／ｋｇで第２および第３の週に投与する。
【０００９】
種々の実施形態では、ＨＥＲ２陽性癌は乳癌である。ＨＥＲ２陽性乳癌はエストロゲン受容体が検査で陽性であってもよく、ＨＥＲ２非増幅浸潤性乳癌であってもよい。ＨＥＲ２陽性乳癌は進行していてもよい。乳癌は転移性であってもよい。ＨＥＲ２陽性乳癌は進行／転移性乳癌であってもよい。
【００１０】
他の実施形態では、癌は、膀胱癌、乳癌、肉腫、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、食道胃接合部癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌  膵癌および多発性骨髄腫からなる群から選択される。
【００１１】
ある種の実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体は、アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームの投与の前に投与される。
【００１２】
他の実施形態では、アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームは、静脈内、髄腔内、膀胱内、腹腔内および筋肉内からなる群から選択される経路により投与される。
【００１３】
種々の実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、抗ＨＥＲ２オリゴクローナル抗体または抗ＨＥＲ２ポリクローナル抗体である。さらなる実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブである。なおさらなる実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体はａｄｏ−トラスツズマブエムタンシンである。
【００１４】
他の実施形態では、アントラサイクリンはドキソルビシンである。他の実施形態では、アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームはＭＭ−３０２である。
【００１５】
なお他の実施形態では、ＨＥＲ２発現癌はさらにＨＥＲ２１＋、ＨＥＲ２２＋、ＨＥＲ２３＋（たとえば、ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴアッセイまたはポリクローナル抗ＨＥＲ２一次抗体を用いた別のそうした免疫組織化学的半定量アッセイによる）であることを特徴とするか、またはＨＥＲ２陽性、ＦＩＳＨ陰性（蛍光ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーション陰性）である。
【００１６】
他の実施形態では、アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームは、単独療法としてのアントラサイクリンの投与に推奨されるよりも低い投与量で投与される。
【００１７】
なお別の実施形態では、併用療法において第２の抗ＨＥＲ２抗体は、第２の抗ＨＥＲ２抗体が単独療法として投与される場合に使用されると考えられるよりも低い投与量で投与される。ある種の実施形態では、イムノリポソームは単独療法としてのアントラサイクリンの投与に推奨されるよりも高いアントラサイクリンの累積投与量を送達するように投与される。
【００１８】
別の態様では、本明細書の技術は、ヒト患者のＨＥＲ２陽性乳癌を処置するための組成物と、ヒト患者のＨＥＲ２陽性乳癌を処置する方法であって、治療有効量のＭＭ−３０２および治療有効量のトラスツズマブを患者に併用投与することを含む方法とを提供する。
【００１９】
別の態様では、本明細書に開示された技術は、ヒト患者のＨＥＲ２陽性癌の処置に使用される方法であって、封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体を含む安全かつ有効な量のイムノリポソームと、安全かつ有効な量の第２の抗ＨＥＲ２抗体とを含む方法を提供する。
【００２０】
別の実施形態では、ヒト患者のＨＥＲ２陽性乳癌を処置するための方法であって、患者にとってアントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソームの安全かつ有効な投与量を判定すること；イムノリポソームの安全かつ有効な投与量でイムノリポソームを患者に投与すること；患者にとって抗ＨＥＲ２抗体の安全かつ有効な投与量を判定すること；およびその抗体の安全かつ有効な投与量でその抗体を患者に投与することを含み、イムノリポソームおよび抗ＨＥＲ２抗体は併用投与される方法を提供する。
【００２１】
種々の実施形態では、イムノリポソームはＭＭ−３０２である。
【００２２】
他の実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体は静脈内投与用に２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの用量で製剤化される。
【００２３】
別の実施形態では、併用投与は、単独療法としての第２の抗ＨＥＲ２抗体の投与よりも大きな程度で患者に心毒性を引き起こさない。
【００２４】
別の態様では、本発明は、アントラサイクリン未処置ヒト患者のＨＥＲ２陽性癌の処置方法であって、治療有効量の（ｉ）封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体である標的化部分を含むイムノリポソームと、（ｉｉ）第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬とを各々患者に併用投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
ある種の実施形態では、処置の結果、処置された患者の０．５％超または１％超または２％超で左室駆出率（ＬＶＥＦ）が１０％を超えて低下しない。ある種の実施形態では、左室駆出率ＬＶＥＦの低下は５％以下である。ある種の実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブである。
【００２６】
別の態様では、ｉ）封入されたアントラサイクリンおよび第１の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗ＨＥＲ２イムノリポソームの調製物を含む第２の容器、およびｉｉ）上記の態様および実施形態によるイムノリポソームと第２の抗ＨＥＲ２抗体との併用投与に関する説明書を含む第１の容器を含むキットを提供する。ある種の実施形態では、第１の容器は、少なくとも１つの用量の第２の抗ＨＥＲ２抗体をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１Ａは、１μΜの蛍光標識ＭＭ−３０２（ＤＩｉ５−フルオルフォア；左図）および１μΜのトラスツズマブ（４８８−フルオロフォア；中図）と同時インキュベートし、両薬が細胞膜に共局在すること（右図）を示すＢＴ−４７４細胞の共焦点顕微鏡観察を示す３つの画像である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、細胞をトラスツズマブとインキュベートしてもその後のＭＭ−３０２の結合が妨げられないことを示すグラフである。ＨＥＲ２を発現するＭＣＦ７細胞を最初に０μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌのトラスツズマブとインキュベートし（ｘ軸）、次いで３μｇ／ｍｌの蛍光標識（ＤＩｉ５）ＭＭ−３０２に曝露した。細胞について、リポソームのＤＩｉ５標識脂質（平均蛍光強度（ＭＦＩ）としての左のｙ軸）およびリポソームに封入されたドキソルビシン（ＭＦＩとしての右のｙ軸）の両方をフローサイトメトリーにより評価した。
【図２Ａ】図２Ａは、ＮＣＩ−Ｎ８７  ＨＥＲ２陽性細胞株においてＭＭ−３０２およびトラスツズマブを併用すると、インビトロで単剤に比べて活性の増強が示されることを示すグラフである。ＮＣＩ−Ｎ８７細胞は、未処理、単剤（トラスツズマブまたはＭＭ−３０２）または併用（ＭＭ−３０２＋トラスツズマブ）で試験した。トラスツズマブおよびＭＭ−３０２はそれぞれ１μΜおよび０．１μｇ／ｍＬで使用し、併用処理の場合、各薬を同時に加えた。細胞生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（登録商標）ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて９６時間で評価した（未処理対照の％としてｙ軸に示す）。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＭＭ−３０２およびトラスツズマブをインビトロで併用すると、様々なＨＥＲ２陽性細胞株において単剤に比べて活性の増強が示されることを示すグラフである。一連の細胞株は、図２ＡでＮＣＩ−Ｎ８７細胞について記載したように処理した。最良の単剤と比較した併用作用を示す。値が１未満である場合、何れかの単剤と比較してＭＭ−３０２およびトラスツズマブの併用に効果があることを示す。
【図３Ａ】図３Ａは、乳房異種移植モデル（ＢＴ−４７４−Ｍ３）におけるＭＭ−３０２の抗腫瘍活性を図示する２つのグラフを示す。図３Ａ（ＢＴ−４７４−Ｍ３）では、各腫瘍モデルについて２つの試験を行い（左図および右図）、各試験で腫瘍の大きさを週２回測定した。図３Ａの左図では、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇのＭＭ−３０２の活性を、同じ濃度の非標的化リポソーム（ＵＴ−ＰＬＤ）のそれと比較する。図３Ａの右図では、ＭＭ−３０２の活性を、すべて３ｍｇ／ｋｇで投与されたＵＴ−ＰＬＤおよび遊離ドキソルビシンのそれと比較する。ＭＭ−３０２は、腫瘍増殖を阻害するのに遊離ドキソルビシンおよびＵＴ−ＰＬＤよりも強力であった。
【図３Ｂ】図３Ｂは、胃異種移植モデル（ＮＣＩ−Ｎ８７）におけるＭＭ−３０２の抗腫瘍活性を図示する２つのグラフを示す。図３Ｂ（ＮＣＩ−Ｎ８７）では、各腫瘍モデルについて２つの試験を行い（左図および右図）、各試験で腫瘍の大きさを週２回測定した。図３Ｂの左図では、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇのＭＭ−３０２の活性を、同じ濃度の非標的化リポソーム（ＵＴ−ＰＬＤ）のそれと比較する。図３Ｂの右図では、ＭＭ−３０２の活性を、すべて３ｍｇ／ｋｇで投与されたＵＴ−ＰＬＤおよび遊離ドキソルビシンのそれと比較する。ＭＭ−３０２は、腫瘍増殖を阻害するのに遊離ドキソルビシンおよびＵＴ−ＰＬＤよりも強力であった。
【図３Ｃ】図３Ｃは、乳房異種移植モデル（ＢＴ−４７４−Ｍ３）および胃異種移植モデル（ＮＣＩ−Ｎ８７）におけるＭＭ−３０２の抗腫瘍活性を図示する２つのグラフを示す。図３Ｃに示すように、互いに併用して投与されたＭＭ−３０２およびトラスツズマブは、図３Ａおよび３Ｂに示すのと同じＨＥＲ２を過剰発現している乳房モデル（左図）および胃モデル（右図）を用いて試験すると、何れかの薬単独よりも有効性が高かった。
【図４Ａ】図４Ａは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２の単独療法で処置した、アントラサイクリン未処置９例の患者を図示する。アントラサイクリン未処置サブグループでは、１例の患者が完全奏効（ＣＲ）を示し、３例の患者が部分奏効（ＰＲ）を示した。塗りつぶしたバーは試験を離脱している患者を表し、格子バーはまだ試験中の患者を表す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２の単独療法で処置した、アントラサイクリン曝露１５例の患者を図示する。アントラサイクリン曝露サブグループの患者は奏効を示さなかった。塗りつぶしたバーは試験を離脱している患者を表し、格子バーはまだ試験中の患者を表す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２の単独療法で処置した、アントラサイクリン未処置９例の患者を図示する。アントラサイクリン未処置患者の無増悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値は１０．９ヶ月であった（９５％信頼区間（ＣＩ）：１．６−ＮＲ）。塗りつぶしたバーは試験を離脱している患者を表し、格子バーはまだ試験中の患者を表す。
【図４Ｄ】図４Ｄは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２の単独療法で処置した、アントラサイクリン曝露患者を図示する。アントラサイクリン曝露患者のＰＦＳの中央値は５．６ヶ月であった（９５％ＣＩ：１．９−８．６）。塗りつぶしたバーは試験を離脱している患者を表し、格子バーはまだ試験中の患者を表す。
【図５Ａ】図５Ａは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２および５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２単独療法を受けた、アントラサイクリン未処置患者の腫瘍容積の変化を示すグラフである。患者５００−１０３８、２００−１０３６および５００−１０４５は試験を継続しているが、それ以外の患者は試験を離脱している。
【図５Ｂ】図５Ｂは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２および５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２単独療法を受けた、アントラサイクリン曝露患者の腫瘍容積の変化を示すグラフである。患者５００−１０４２は試験を継続しているが、それ以外の患者は試験を離脱している。
【図５Ｃ】図５Ｃは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２および５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２単独療法を受けた、アントラサイクリン未処置患者のＰＦＳを示すグラフである。患者５００−１０３８、２００−１０３６および５００−１０４５は試験を継続しているが、それ以外の患者は試験を離脱している。
【図５Ｄ】図５Ｄは、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２および５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２単独療法を受けた、アントラサイクリン曝露患者のＰＦＳを示すグラフである。患者５００−１０４２は試験を継続しているが、それ以外の患者は試験を離脱している。
【図６】図６は、ＭＭ−３０２単独療法およびＭＭ−３０２＋トラスツズマブ療法の心臓安全性を立証するグラフおよび表である。本解析の評価対象の４７例の患者で臨床的に問題となる左室駆出率（ＬＶＥＦ）低下は観察されなかった。ＬＶＥＦの測定値を、ベースライン（灰色）およびベースライン後の最低測定値（黒）を対にして示す。水平な黒線は５０％ＬＶＥＦを表す。ドキソルビシン累計量、以前のドキソルビシン曝露量および試験中に投与されたＭＭ−３０２の量を示す。網掛けの枠内の値は、＞５００ｍｇ／ｍ２のドキソルビシン累計量を投与した患者を表す。＊は、まだ試験中の患者を表す。＋データカット後、１例の患者が、鬱血性心不全ではないＬＶＥＦの＜５０％、かつベースラインから＞１０絶対パーセントポイント（ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｐｏｉｎｔ）の低下を呈した。再評価時にＬＶＥＦは＞５０％に回復し、患者は処置を継続している。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
特に記載がない限り、あるいは、文脈から明らかである場合を除き、本明細書で使用する場合、「約」という用語は、当該技術分野における一般的な許容差の範囲内、たとえば２標準偏差内と理解される。「約」は、表示値の１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、０．５％以内、０．１％以内、０．０５％以内または０．０１％以内と理解してもよい。他に文脈から明らかである場合を除き、本明細書に記載された数値はすべて、「約」という用語で修飾されている。
【００２９】
「軽減する」は、疾患の発生または進行を低下させる、抑制する、減弱する、減少させる、阻止するまたは安定化することを意味する。
【００３０】
「抗体」という用語は、抗体、およびＨＥＲ２に特異的に結合する少なくとも１つ抗体由来の抗原結合部位（たとえば、ＶＨ／ＶＬ領域またはＦｖ）を含む抗体変異体を含む。抗体は公知の形態の抗体を含む。たとえば、抗体はヒト抗体でも、ヒト化抗体でも、二重特異性抗体でも、あるいはキメラ抗体でもよい。抗体はさらにＦａｂでも、Ｆａｂ’２でも、ＳｃＦｖでも、ＳＭＩＰでも、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）でも、ナノボディでも、あるいはドメイン抗体でもよい。抗体はさらに、以下のアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤおよびＩｇＥの何れであってもよい。
【００３１】
本明細書で使用する場合、「抗体変異体」という用語は、抗体の特性を変化させる少なくとも１つの変異アミノ酸を含むように改変された（たとえば突然変異、欠失、置換、非抗体部分へのコンジュゲーションにより）天然に存在する抗体を含む。たとえば、半減期、エフェクター機能および／または患者の抗体に対する免疫反応に影響を与えるそうした多くの改変が当該技術分野において公知である。抗体変異体という用語は、少なくとも１つの抗体由来の結合部位を含む人工ポリペプチドコンストラクトをさらに含む。
【００３２】
「アントラサイクリン」は、ストレプトマイセス・ピューセチウス・バル・ケシウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓ）に由来するダウノルビシンに構造的に関連した、ダウノルビシンを含む薬剤のクラスを意味し、癌化学療法に使用される。例示的なアントラサイクリンとして、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびバルルビシンがあるが、これに限定されるものではない。
【００３３】
本明細書で使用する場合、「癌」は、異常かつ制御不能な悪性細胞の増殖を特徴とする状態をいう。いくつかの実施形態では、癌腫瘍はＨＥＲ２＋充実性腫瘍型、たとえば、メラノーマ、胆管癌、明細胞肉腫、または食道腫瘍、頭頸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、胃腫瘍、食道胃接合部（ＧＥＪ）腫瘍、結腸腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、唾液腺腫瘍、肝臓腫瘍、皮膚腫瘍、脳腫瘍もしくは腎臓腫瘍である。他の実施形態では、癌は扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌もしくは甲状腺癌である。
【００３４】
「併用投与」は、２つの異なる治療薬（第１の治療薬および第２の治療薬）の同時または連続投与を意味し、２つの投与が互いに十分に接近した時間に投与されるため、第１および第２の治療薬が併用投与を受ける患者に同時に存在する。
【００３５】
「疾患」は、細胞、組織または器官の正常機能を損傷または妨害する任意の状態または障害を意味する。
【００３６】
「ドキソルビシン」という用語は、化学名（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−（４−アミノ−５ヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロテトラセン−５，１２−ジオンの薬剤をいう。ドキソルビシンは、商標名アドリアマイシンＰＦＳ（登録商標）、アドリアマイシンＲＤＦ（登録商標）またはＲｕｂｅｘ（登録商標）で販売されている。ドキソルビシンは、天然物ダウノマイシンと密接に関連するアントラサイクリン系抗生物質であり、すべてのアントラサイクリンと同様に、ＤＮＡにインターカレートすることにより作用すると考えられる。典型的には、本薬剤は、たとえば、塩酸塩の形態で静脈内投与される。ドキソルビシンは光に不安定であり、ドキソルビシンを含む容器は、多くの場合、光がドキソルビシンに影響を与えないようにアルミニウムバッグおよび／または褐色の蝋紙で被覆される。
【００３７】
「ＭＭ−３０２」は、ゲル化または沈殿状態のドキソルビシンを含む内水相空間を内包する、直径が約７５〜１１０ｎｍの単層の脂質二重層小胞を意味する。脂質膜は、ホスファチジルコリン、コレステロール、および２００のリン脂質分子に対して約１ＰＥＧ分子の量のポリエチレングリコール誘導体化ホスファチジルエタノールアミンからなり、１７８０のリン脂質分子ごとに約１本のＰＥＧ鎖が、小胞の外表面に露出してＨＥＲ２に結合するＦ５単鎖Ｆｖ抗体フラグメントをその末端に有する。ＭＭ−３０２は、たとえば、その内容全体を参照により本明細書に援用する同時係属のＰＣＴ特許公開国際公開第２０１２／０７８６９５号パンフレット（２０１３年６月６日に出願された米国特許出願第１３／９１２，１６７号明細書）に記載されている（ＭＭ−３０２の作製法および使用法と共に）。
【００３８】
本明細書に規定した範囲は、その範囲内のすべての値を略記したものと理解される。たとえば１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０からなる群の任意の数、数の組み合わせまたは部分範囲のほか、前述の整数の間にあるすべての小数値、たとえば、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８および１．９を含むと理解される。部分範囲では、その範囲のどちらかの端点から広がる「入れ子の部分範囲（ｎｅｓｔｅｄ  ｓｕｂ−ｒａｎｇｅ）」を特に意図している。たとえば、１〜５０の例示的な範囲の入れ子の部分範囲は、一方の方向の１〜１０、１〜２０、１〜３０および１〜４０を含んでもよいし、あるいは他方の方向の５０〜４０、５０〜３０、５０〜２０および５０〜１０を含んでもよい。
【００３９】
「基準」は、標準または対照条件を意味する。一実施形態では、細胞に対する薬の作用を対照細胞に対する薬の作用と比較する。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「被検体」または「患者」という用語はヒト癌患者をいう。
【００４１】
「治療薬」は、生体の機能に作用する可能性を有する物質を意味する。こうした物質は、たとえば、天然に存在する半合成薬もしくは合成薬または生体分子、たとえば抗体であっても、あるいは複合体、たとえばリポソームもしくはイムノリポソームであってもよい。たとえば、薬は生体の特定の機能を標的とする薬剤でも、あるいは抗生物質でもよい。治療薬は、真核宿主生物における疾患、障害もしくは感染症の発生または進行を低下させる、抑制する、減弱する、減少させる、阻止するまたは安定化することができる。
【００４２】
「治療有効量」という用語は、所望の生物学的結果、治療結果および／または予防結果が得られる薬の量をいう。そうした結果は、疾患の徴候、症状もしくは原因の１つまたは複数を減少させても、軽減しても、緩和しても、低下させても、遅延させても、および／または和らげてもよいし、あるいは生体システムの他の任意の所望の変化であってもよい。癌（たとえば、ＨＥＲ２を過剰発現している癌）の場合、治療有効量は、腫瘍を縮小するおよび／または腫瘍の増殖速度を低下させる（たとえば腫瘍増殖を抑制する）、あるいは他の望ましくない細胞増殖を予防するまたは遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、治療有効量は、腫瘍発生を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、腫瘍再発を予防するまたは遅延させるのに十分な量である。治療有効量は、１回または複数回の投与で投与してもよい。治療有効量の薬剤または組成物は、（ｉ）癌細胞の数を減少させる；（ｉｉ）腫瘍の大きさを縮小させる；（ｉｉｉ）ある程度、癌細胞の周辺臓器への浸潤を阻害する、遅延させる、遅くする、および／または停止させる；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅くし、停止させ得る）；（ｖ）腫瘍増殖を阻害する；（ｖｉ）腫瘍の発生および／もしくは再発を予防するまたは遅延させる；ならびに／または（ｖｉｉ）癌に関連する症状の１つまたは複数をある程度軽減する。一例では、「治療有効量」は、乳癌を臨床的に有意に低下させる、または乳癌の進行を遅くするのに必要とされる量である。
【００４３】
ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）であり、組織学的または細胞学的に確認された進行癌の患者の処置に効果的な組成物および方法を提供する。ＨＥＲ２＋癌は、腫瘍細胞がＨＥＲ２を過剰発現している癌である。ＨＥＲ２を過剰発現している腫瘍は、免疫組織化学的検査により（たとえば、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（登録商標）により）ＨＥＲ２「３＋」またはＨＥＲ２「２＋」と、または蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより遺伝子増幅陽性（ＦＩＳＨ＋）と判定された腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は免疫組織化学的検査により判定するとＨｅｒ２＋であるが、ＦＩＳＨにより判定するとＨｅｒ２陰性であってもよい。さらに、ＦＩＳＨの結果が利用できない場合、化学発色ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）を使用してもよい。患者は、処置前、処置中または処置後に上述の臨床特性の１つまたは複数を試験するか、あるいは上述の臨床特性の１つまたは複数で選択すればよい。
【００４４】
本明細書で使用する場合、「癌」は、異常かつ制御不能な悪性細胞の増殖を特徴とする状態をいう。いくつかの実施形態では、癌腫瘍はＨＥＲ２＋充実性腫瘍型、たとえば、メラノーマ、胆管癌、明細胞肉腫、または食道腫瘍、頭頸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、胃腫瘍、食道胃接合部（ＧＥＪ）腫瘍、結腸腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、唾液腺腫瘍、肝臓腫瘍、皮膚腫瘍、脳腫瘍もしくは腎臓腫瘍である。他の実施形態では、癌は扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌または甲状腺癌である。
【００４５】
一実施形態では、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体と併用して使用するＭＭ−３０２を含む組成物、および乳癌の処置のためにその組成物を使用する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、トラスツズマブと併用して投与されるＭＭ−３０２を含む組成物であって、その併用は特定の臨床投与量レジメンに従い（すなわち、個々の量で、かつ特定の投与スケジュールに従い）投与される（または投与用である）組成物を提供する。
【００４６】
驚くべきことに、ＨＥＲ２標的化アントラサイクリン導入イムノリポソーム（たとえば、ＭＭ−３０２）および抗ＨＥＲ２抗体（たとえば、トラスツズマブ）を同時または連続的に併用投与すると、心毒性のリスクを増加させることなく効果的な乳癌の処置が得られることが発見された。
【００４７】
ＭＭ−３０２リポソーム
「ＭＭ−３０２」は、アントラサイクリン抗癌治療薬を含むＨＥＲ２標的化イムノリポソームをいう。イムノリポソームは、抗体の標的となる細胞表面抗原を有する細胞に選択的に取り込まれるため、非イムノリポソーム調製物より利点がある抗体（典型的には抗体フラグメント）標的化リポソームである。こうした抗体およびイムノリポソームは、たとえば、以下の米国特許および特許出願：米国特許第７，８７１，６２０号明細書、同第６，２１４，３８８号明細書、同第７，１３５，１７７号明細書および同第７，５０７，４０７号明細書（「標的細胞への取り込みを最適化するイムノリポソーム（Ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｔｈａｔ  ｏｐｔｉｍｉｚｅ  ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  ｔａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌｓ）」）；同第６，２１０，７０７号明細書（「タンパク質結合脂質微小粒子およびその組成物を形成する方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｌｉｎｋｅｄ  ｌｉｐｉｄｉｃ  ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ））；同第７，０２２，３３６号明細書（「タンパク質を高効率で脂質微小粒子に結合する方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ａｔｔａｃｈｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｏ  ｌｉｐｉｄｉｃ  ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）」）；および米国特許第７，８９２，５５４号明細書および同第７，２４４，８２６号明細書（「ＥｒｂＢ２抗体の取り込み（Ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｉｎｇ  ＥｒｂＢ２  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」）に記載されている。ＨＥＲ２を標的とするイムノリポソームは、前述の特許の開示に従い調製することができる。こうしたＨＥＲ２標的化イムノリポソームは、Ｆ５抗ＨＥＲ２抗体フラグメントを含み、かつドキソルビシンを含むＭＭ−３０２を含む。ＭＭ−３０２は、１リポソーム当たり平均４５コピーの哺乳動物由来Ｆ５−ｓｃＦｖ（抗ＨＥＲ２）を含む。
【００４８】
ＭＭ−３０２リポソームは、ドキソルビシンを含む水相空間を内包する、直径が約７５〜１１０ｎｍの単層の脂質二重層小胞である。脂質膜は、ホスファチジルコリン、コレステロール、および２００リン脂質分子に対して約１ＰＥＧ分子の量のポリエチレングリコール誘導体化ホスファチジルエタノールアミンからなり、１７８０のリン脂質分子ごとに約１本のＰＥＧ鎖が、免疫特異的にＨＥＲ２に結合するＦ５単鎖Ｆｖ抗体フラグメントをその末端に有する。
【００４９】
ＭＭ−３０２を用いた処置に好ましい腫瘍は、腫瘍細胞がＨＥＲ２を過剰発現している腫瘍である。ＨＥＲ２を過剰発現している腫瘍は、ＨＥＲ２３＋もしくはＨＥＲ２２  ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）、または蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによりＨＥＲ２  ＦＩＳＨ＋と判定された腫瘍である。いくつかの実施形態では、ＭＭ−３０２は、ＨＥＲ２１＋であるが、さらにＦＩＳＨ＋である腫瘍を有する患者に投与してもよい。あるいは、ＭＭ−３０２は、ＦＩＳＨ陰性だが、ＩＨＣによりＨＥＲ２３＋またはＨＥＲ２２＋とスコア評価された腫瘍を有する患者に投与してもよい。あるいは、ＨＥＲ２を過剰発現する好ましい腫瘍は、実施例に記載された方法により定量した場合に１細胞当たり平均２００，０００以上の受容体を発現する腫瘍である。
【００５０】
ある種の実施形態では、ＭＭ−３０２は、上の表１に記載した用量で単独療法として投与する。表１の「ｍｇ／ｍ２」は、患者の体表面積１平方メートル当たりのドキソルビシン（ＭＭ−３０２として製剤化された）のｍｇを示す。ＭＭ−３０２の場合、＊で示した投与レジメンが好ましい。投与レジメンは、「進行」（転移性腫瘍）と比較して「初期」（転移前の、たとえば、補助療法における乳癌）の充実性腫瘍の患者で異なってもよい。ある実施形態では、ＭＭ−３０２は、アントラサイクリン治療薬で以前に処置されたことがない患者（「アントラサイクリン未処置」患者）に単独療法として投与する。
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【００５１】
ある種の実施形態では、ＭＭ−３０２は上記の表２に記載した用量でトラスツズマブと併用して投与する。他の実施形態では、ＭＭ−３０２は別のＨＥＲ２標的化モノクローナル抗体、たとえば、ペルツズマブ、ＴＤＭ−１またはＭＭ−１１１と併用して投与する。
【００５２】
ＭＭ−３０２の投薬量および投与
ＭＭ−３０２は、１週間サイクル、２週間サイクル、３週間サイクル、４週間サイクルまたは５週間サイクルの各初日に６０分かけてＩＶ注入により投与してもよい。第１のサイクルの１日目は、固定された日である。その後の投与は、各サイクルの初日±３日に投与すればよい。投与の前に、ＭＭ−３０２の適切な用量を５％デキストロース注射液ＵＳＰで希釈しなければならない。インラインフィルターまたは任意の静菌剤、たとえばベンジルアルコールを使用しないように注意すべきである。
【００５３】
ＭＭ−３０２は、約１００ｍｇ／ｍ２〜約１ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与することができる。他の実施形態では、ＭＭ−３０２は約５０ｍｇ／ｍ２〜約２ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与してもよい。他の実施形態では、ＭＭ−３０２は約４０ｍｇ／ｍ２〜約３．２２ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与してもよい。なお他の実施形態では、ＭＭ−３０２は６０ｍｇ／ｍ２、５５ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、４５ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、３５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、１６ｍｇ／ｍ２、１４ｍｇ／ｍ２、１２ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２および／または３．２ｍｇ／ｍ２の用量で投与してもよい。別の実施形態では、ＭＭ−３０２は５０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、１６ｍｇ／ｍ２または８ｍｇ／ｍ２の用量で投与してもよい。
【００５４】
施設のガイドライに従い、制吐薬による前処置または制吐薬の併用を考慮してもよい。投与されるＭＭ−３０２の実際の用量は、各サイクルの開始時に患者の体表面積を計算することにより決定される。各投与をしやすくするため、算出された総投与量における±５％の相違は、許容することができる。
【００５５】
心収縮不全に対応した用量調節
心機能は、処置中にモニターすべきである。左室駆出率（ＬＶＥＦ）がベースラインから１０絶対パーセントポイントよりも大きく低下して５０％以下にとどまる場合、ＭＭ−３０２の投与は、個々の患者の利益がリスクを上回らないと見なされるとき、メディカルモニターと話し合ったことを記録後、控えるべきである。ＭＭ−３０２を再投与する場合、各追加投与の前に繰り返し心エコー図（ＥＣＨＯ）またはマルチゲート収集放射性核種血管造影（ＭＵＧＡ）を実施しなければならない。ＭＵＧＡまたはＥＣＨＯを繰り返してＬＶＥＦの＞１０絶対パーセントポイントのさらなる低下あるいは５０％未満の駆出率の何れかが示されたら、患者はＭＭ−３０２療法を永久的に中止する。
【００５６】
ＬＶＥＦにベースラインから＜５０％の最終値までに、＞５絶対パーセントポイントだが＜１０絶対パーセントポイントの低下が見られる患者は、メディカルモニターの判断により患者に臨床効果が認められる場合、ＭＭ−３０２処置を継続してもよい。ＭＭ−３０２を再投与する場合、各追加投与の前に繰り返しＥＣＨＯまたはＭＵＧＡを実施すべきである。ＭＵＧＡまたはＥＣＨＯを繰り返してＬＶＥＦのさらなる低下が示される場合、患者はＭＭ−３０２療法を永久的に中止すべきである。
【００５７】
正常なベースライン測定値の患者のＬＶＥＦがベースラインから１０絶対パーセントポイント以上、かつ５０％未満に低下する場合、ＭＭ−３０２は中止して、約３週以内に繰り返しＬＶＥＦの評価を実施すべきである。ＬＶＥＦが改善しない、あるいはさらに低下する場合、ＭＭ−３０２は中止すべきである。ＭＭ−３０２を再投与する場合、各追加投与の前に繰り返しＥＣＨＯまたはＭＵＧＡを実施すべきである。ＭＵＧＡまたはＥＣＨＯを繰り返してＬＶＥＦのさらなる低下が示される場合、患者はＭＭ−３０２療法を永久的に中止すべきである。
【００５８】
個々の患者の利益がＬＶＥＦの無症状の変化のリスクを上回ると見なされる場合、ＭＭ−３０２を用いた処置を継続してもよい。
【００５９】
処置中に症候性心不全が発症した場合（ＮＹＨＡクラスＩＩＩまたはＩＶ）、ＭＭ−３０２は中止すべきである。
【００６０】
トラスツズマブの用量、調製および投与
トラスツズマブの調製は、添付文書の記載に従うべきである。一実施形態では、トラスツズマブの週１回投与の初回用量は、約５０ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。たとえば一実施形態では、併用コホートの患者に投与されるのは、トラスツズマブの週１回投与の初回用量が９０分間注入として４ｍｇ／ｋｇ、続いてその後３０分間のＩＶ注入として２ｍｇ／ｋｇの週間投与量である。最後のコホートの患者に投与されるのは、３週間に１回投与の初回用量が９０分間のＩＶ注入により８ｍｇ／ｋｇ、続いて３０〜９０分間のＩＶ注入により６ｍｇ／ｋｇである。
【００６１】
トラスツズマブに関連する毒性の管理
用量減量が関連するおよび／または重要であると治験責任医師が感じたら、添付文書に従い管理すべきである。ＭＭ−３０２およびトラスツズマブを併用して投与しているときに心毒性が発生したら、本明細書にＭＭ−３０２について概説したようにトラスツズマブも同時に延期または中止すべきである。
【００６２】
進行乳癌のＭＭ−３０２単独療法
ＭＭ−３０２は、ＦＩＳＨもしくはＩＨＣにより判定してまたは１細胞当たりのＨＥＲ２受容体の平均数の測定によりＨＥＲ２を過剰発現している局所進行／切除不能または転移性進行乳癌の患者に、８ｍｇ／ｍ２、１６ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２で静脈内（ＩＶ）注入により６０分かけて４週間に１回投与してもよい。患者は、１）好中球絶対数（ＡＮＣ）≧１，５００／μＬ；２）血小板数≧１００，０００／μＬおよび３）ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ（輸血を許容）により証明されるような十分な骨髄予備能を有すべきである。患者は、１）血清総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮおよび２）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の正常または最大２．５×正常上限（ＵＬＮ；肝臓転移および／または骨転移が存在する場合、ＡＬＰでは５×ＵＬＮが許容可能である）により証明されるような十分な肝機能を有すべきである。患者は、血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮにより証明されるような十分な腎機能を有すべきである。患者は、何らかの事前の手術、放射線治療または乳癌の処置のための他の治療の臨床的に問題となる任意の毒性作用から回復しているべきである。妊娠の可能性がある女性のほか、妊孕性のある男性およびそのパートナーについては、処置中およびＭＭ−３０２の最終投与後９０日間、性交渉を控えるまたは効果的な形態の避妊法を使用するように警告しなければならない。患者は、処置から約３０日以内にＥＣＨＯまたはＭＵＧＡにより測定された左室駆出率が≧５０％であることにより証明されるような十分な心機能を有するべきである。妊娠中もしくは授乳中の患者、およびＮＹＨＡクラスＩＩＩもしくはＩＶの鬱血性心不全、または左室駆出率（ＬＶＥＦ）＜５０％、またはＱＴｃ間隔の延長（≧４６０ｍｓ）の患者は、好ましくはＭＭ−３０２による処置を行わない。
【００６３】
ＭＭ−３０２のインビトロでの薬理
インビトロでのＭＭ−３０２の前臨床薬理試験から、ＭＭ−３０２はカニクイザルのＨＥＲ２と交差反応を示すが、ラットのＨＥＲ２と交差反応を示さないことが立証された。加えて、ＭＭ−３０２の結合を最適化するのに必要な１細胞当たりのＨＥＲ２受容体の数は、１細胞当たり約２００，０００ＨＥＲ２受容体である。このレベルを下回ると、結合は低く、非標的化ｐｅｇ化リポソームドキソルビシンと同程度である。このレベルを上回ると、受容体数の増加が小さくなるにつれ結合が劇的に増加する。ＭＭ−３０２は、ヒト心筋細胞に効率的に結合しないまたは進入しない。ヒト心筋細胞に取り込まれるＭＭ−３０２のレベルは、非標的化ｐｅｇ化リポソームのドキソルビシンと同程度である。一方、遊離ドキソルビシンの取り込みは、ＭＭ−３０２および非標的化ｐｅｇ化リポソームドキソルビシンの両方と比較して相対的に非常に高い。ＭＭ−３０２の主な作用機序は、ＨＥＲ２受容体を１細胞当たり約２００，０００よりも多く発現する腫瘍細胞にドキソルビシンを選択的に送達するＨＥＲ２タンパク質の利用である。
【００６４】
医薬組成物
患者への投与に好適な医薬組成物は、好ましくは静脈内投与用の液体形態である。
【００６５】
一般に、組成物は典型的には薬学的に許容されるキャリアを含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、米国薬局方または一般に認められた別の薬局方に収載された政府の規制当局により、動物、特にヒトでの使用について承認されていることを意味する。「キャリア」という用語は、それと共に治療薬が投与される希釈液、アジュバント、賦形剤またはビヒクルをいう。こうした薬学的キャリアは、滅菌液、たとえば水および油、たとえば石油起源、動物起源、植物起源または合成起源の油、たとえばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油および同種のものであってもよい。特に注射用キャリアとして、水または食塩水溶液ならびにブドウ糖水溶液およびグリセロール水溶液を利用してもよい）。非経口投与用の液体組成物は、注射または持続注入による投与用に製剤化してもよい。注射または注入による投与経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内および皮下がある。一実施形態では、ＭＭ−３０２および抗ＨＥＲ２抗体の両方を（たとえば、所定の期間、たとえば、１時間の期間を通して別々にまたは一緒に）静脈内投与する。
【００６６】
点滴静注用の（たとえば、１時間の期間にわたる）ＭＭ−３０２は、２〜８℃で保存すべきである、２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．５中に２５ｍｇ／ｍｌの濃度で１０．１ｍｌのＭＭ−３０２を含む滅菌単回用バイアルの透明な液体溶液として提供してもよい。
【００６７】
ドキソルビシンは、ラクトースを含む赤橙色の滅菌凍結乾燥粉末のヒドロクロリド形態として、および塩化ナトリウムを含む滅菌非経口用等張液として提供され、さらに塩化ナトリウム０．９％を含む赤橙色の滅菌水溶液としても提供される。ドキソルビシンはＩＶ使用に限られる。ドキソルビシンは下記の構造式を有する。
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【００６８】
併用療法
本明細書の技術によれば、抗ＨＥＲ２抗体は、乳癌を有する被検体の改善を行うためＭＭ−３０２と併用して投与してもよい。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブである。
【００６９】
本明細書で使用する場合、補助または組み合わせ投与（併用投与）は、同一または異なる剤形の治療薬の同時投与を含んでもよいし、あるいは治療薬の別々の投与（たとえば、ＭＭ−３０２およびトラスツズマブの連続投与）を含んでもよい。たとえば、別の治療用抗体（たとえば、トラスツズマブ）はＭＭ−３０２と同時に投与してもよく、この場合、別の治療用抗体およびＭＭ−３０２の両方が一緒に製剤化される。あるいは、別の治療用抗体はＭＭ−３０２と併用して投与してもよく、この場合、別の治療用抗体およびＭＭ−３０２の両方が別々の投与用に製剤化され、同時または連続的に投与される。たとえば、ＭＭ−３０２を最初に投与し、続いて抗ＨＥＲ２治療用抗体を投与してもよい。あるいは、治療用抗体を最初に投与し、続いてＭＭ−３０２を投与してもよい。こうした同時または連続的な併用投与の結果、好ましくはＭＭ−３０２およびトラスツズマブの両方が処置した患者に同時に存在する。
【００７０】
別の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は静脈内投与用に製剤化してもよい。特定の実施形態では、治療用抗体は約１００ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与してもよい。他の実施形態では、治療用抗ＨＥＲ２抗体は約５０ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与してもよい。他の実施形態では、治療用抗ＨＥＲ２抗体は約４０ｍｇ／ｋｇ〜約３．２２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与してもよい。なお他の実施形態では、治療用抗ＨＥＲ２抗体は、４０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇおよび／または３．２ｍｇ／ｋｇの用量として投与してもよい。一実施形態では、治療用抗体の用量は時間経過と共に変化してもよい。たとえば、治療用抗体を最初に高用量で投与してもよく、経時的に低用量にしてもよい。別の実施形態では、治療用抗体を最初に低用量で投与し、経時的に高用量にしてもよい。別の実施形態では、４０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＨＥＲ２抗体を２週間にわたり週１回投与し、続いて２０ｍｇ／ｋｇの用量の治療用抗ＨＥＲ２抗体をＭＭ−３０２と併用して投与してもよい。
【００７１】
処置プロトコル
好適な処置プロトコルは、たとえば、（Ａ）アントラサイクリン導入イムノリポソーム（たとえば、ＭＭ−３０２）を、たとえば３週間サイクル１４回の期間中（１サイクル当たり３０〜５０ｍｇ／ｍ２の用量で）３週間ごとに１回患者（すなわち、ヒト被験者）に投与することができ、さらに（Ｂ）第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬を、３週間サイクル１４回の期間中３週間ごとに少なくとも１回患者に投与するプロトコルを含む。
【００７２】
一実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体（たとえば、トラスツズマブ）を含む抗癌治療薬は、少なくとも７日の測定された間隔で一定量のＭＭ−３０２と併用して投与してもよい。好適な週１回のトラスツズマブの投与量は２ｍｇ／ｋｇである。
【００７３】
一実施形態では、アントラサイクリン導入イムノリポソームおよび／または第２の抗ＨＥＲ２抗体の初回用量は負荷用量である、すなわち、その後の投与で投与される用量（たとえば、維持量）よりも大きな用量である。
【００７４】
別の実施形態では、ＭＭ−３０２を３週に１回または４週に１回投与する。投与サイクルは、必要に応じて繰り返してもよい。
【００７５】
別の実施形態では、第２の抗ＨＥＲ２抗体を含む抗癌治療薬の投与される量は、投与ごとに一定であってもよい。別の実施形態では、投与される抗体の量は投与ごとに変化してもよい。たとえば、維持（すなわち２回目以降の）量の抗体は、最初に投与される負荷用量より高くても、あるいは同じでもよい。別の実施形態では、抗体の維持量は負荷用量より低くても、あるいは同じでもよい。
【００７６】
一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、抗ＨＥＲ２抗体／ＭＭ−３０２併用療法の少なくとも１つのサイクルの前に単独療法として投与してもよい。一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体の単独療法は２週間実施してもよく、その抗ＨＥＲ２抗体は第１週に６ｍｇ／ｋｇで、第２週に４ｍｇ／ｋｇで投与してもよい。
【００７７】
一実施形態では、ＭＭ−３０２は、抗ＨＥＲ２抗体／ＭＭ−３０２併用療法の少なくとも１つのサイクルの前に単独療法として投与してもよい。一実施形態では、ＭＭ−３０２単独療法は４週間ごとに実施してもよく、ＭＭ−３０２は４週間に１回３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２で投与してもよい。
【００７８】
キットおよび単位剤形
アントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソーム（たとえば、ＭＭ−３０２）、および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物を、前述の方法に使用するのに適した治療有効量で含むキットも提供する。キットは、抗ＨＥＲ２抗体（たとえば、トラスツズマブ）、および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物を、前述の方法に使用するのに適した治療有効量でさらに含んでもよい。キットは任意選択的に、実施者（たとえば、医師、看護師または患者）が、中に入っている組成物を単独あるいは組み合わせて乳癌を有する患者に投与できるように説明書、たとえば、投与スケジュールをさらに含んでもよい。一実施形態では、キットはトラスツズマブをさらに含む。別の実施形態では、キットはシリンジを含む。
【００７９】
任意選択的に、キットは、上記に規定した方法に従い単独投与用または併用投与用に、有効量の抗ＨＥＲ２抗体（たとえば、トラスツズマブ）および／または有効量のアントラサイクリン導入抗ＨＥＲ２イムノリポソーム（たとえば、ＭＭ−３０２）を含む単回投与の医薬組成物の複数のパッケージを含んでもよい。任意選択的に、キットには、医薬組成物の投与に必要な機器または装置を含めてもよい。たとえば、キットは、上記の方法における投与に用いられるｍｇ／ｋｇ単位の用量の約１００倍の量のＭＭ−３０２を含む１つまたは複数のプレフィルドシリンジを備えていてもよい。任意選択的に、キットは、投与に所望の単位剤形（たとえば、トラスツズマブの製造者が販売する単位剤形）のトラスツズマブをさらに含んでもよい。別の実施形態では、キットはドキソルビシンをさらに含んでもよい。
【００８０】
本開示を読むと多くの変更形態および均等物が当業者に明らかになるため、以下の実施例は例示にすぎず、いかなる意味でも本開示の範囲を限定するものと解釈してはならない。
【実施例】
【００８１】
本実施例に使用した材料および方法：
材料：ドキソルビシンは、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ，Ｉｎｃ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）製である。ＦＩＴＣコンジュゲートレクチン（トマト（ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ  ）（トマト（ｔｏｍａｔｏ））レクチン、Ｃａｔ＃  ＦＬ−１１７１）はＶｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）から購入する。酢酸、メタノールおよびアセトニトリルは、ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）製である。水およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）はＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，ＮＪ）製である。ＨＯＥＣＨＳＴ  ３３３４２トリヒドロクロリド三水和物、ＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（登録商標）、およびＤｉＩＣ１８（５）−ＤＳ（ＤｉＩ５）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）製である。コレステロールおよび１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩）（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ．製である。水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）はＬｉｐｏｉｄ（Ｎｅｗａｒｋ，ＮＪ）製である。ＲＰＭＩはＬｏｎｚａ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）製、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）はＴｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ製、およびペニシリンＧ／ストレプトマイシンスルフェート混合物はＧＩＢ  ＣＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）製である。
【００８２】
イムノリポソームの調製：リポソームを調製し、以前記載されたように硫酸アンモニウム勾配を用いてドキソルビシンを導入する（Ｋｉｒｐｏｔｉｎ  ｅｔ．ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６；６６：６７３２−４０；Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００２；８：１１７２−８１）。脂質成分は、ＨＳＰＣ、コレステロールおよびＰＥＧ−ＤＳＰＥ（３：２：０．３、ｍｏｌ：ｍｏｌ：ｍｏｌ）である。Ｎｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ．２００５；２１：２０５−２０；Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ．２００５；２１：２２１−３２）により報告されたように、抗ＥｒｂＢ２（Ｆ５）−ＰＥＧ−ＤＳＰＥコンジュゲートを調製し、リポソームに挿入してイムノリポソームを形成する。ＤｉＩ−５標識リポソーム、ＭＭ−３０２−ＤｉＩ５およびＰＬＤ−ＤｉＩ５については、上記のように調製するが、ＤｉＩＣ１８（５）−ＤＳ（ＤｉＩ５）色素を０．３ｍｏｌ％の総リン脂質濃度の脂質成分で可溶化するのが異なる。すべての場合において、Ｈｅｐｅｓ緩衝食塩水（ｐＨ６．５）で溶出したＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−７５サイズ排除カラムを用いて、未導入遊離ドキソルビシンを除去する。Ｆ５−ｌｉｐｏ−ＤｉＩ５は上述と同じように調製するが、ドキソルビシンを用いずに、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（ｐＨ６．５）を加える。
【００８３】
実施例１：ＭＭ−３０２およびトラスツズマブは、ＨＥＲ２上の異なるエピトープを標的とする
ＭＭ−３０２およびトラスツズマブはどちらもＨＥＲ２標的化剤である。したがって、共局在実験を行った。ＢＴ−４７４−Ｍ３（Ｎｏｂｌｅ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９  ６４：７４１−５１を参照）細胞をＤＩｉ５標識ＭＭ−３０２および４８８−フルオロフォア標識トラスツズマブ（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８，カタログ番号Ａ１０２３５，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と同時インキュベートした。結果を図１Ａに示す。ＭＭ−３０２（赤色、左図）およびトラスツズマブ（緑色、中図）はどちらも細胞膜に結合し、さらに右図に、ＭＭ−３０２およびトラスツズマブの両方の結合を重ね合わせたもの（黄色）を示した。
【００８４】
トラスツズマブがＭＭ−３０２のＨＥＲ２への結合をブロックしないことを立証するため、ＨＥＲ２を発現するＭＣＦ７細胞を最初に０μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌのトラスツズマブとインキュベートし、次いで３μｇ／ｍｌの蛍光標識（ＤＩｉ５）ＭＭ−３０２に３７℃で３時間曝露した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、次いでフローサイトメトリーによりリポソームシグナル（ＤＩｉ５）およびドキソルビシンシグナル（Ｄｏｘ）を評価した。図１Ｂに示すように、トラスツズマブとのインキュベーションは、ＭＭ−３０２のその後のＭＣＦ７細胞への結合を妨げなかった。
【００８５】
実施例２：ＨＥＲ２陽性細胞株におけるＭＭ−３０２およびトラスツズマブの併用
様々なＨＥＲ２発現細胞株に対してＭＭ−３０２＋トラスツズマブの併用を試験した。２９種のＨＥＲ２発現細胞株を１μｇ／ｍＬのＭＭ−３０２、１μΜのトラスツズマブまたはＭＭ−３０２およびトラスツズマブの併用（同時に添加）で処理した。ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（登録商標）ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、未処理対照と比較した９６時間の細胞生存率を評価した。図２Ａは、未処理、またはＭＭ−３０２単独、トラスツズマブ単独もしくはＭＭ−３０２＋トラスツズマブで処理したＮＣＩ−Ｎ８７細胞の生存率データを示す。細胞をＭＭ−３０２＋トラスツズマブで処理すると、どちらかの薬剤単独と比較して細胞殺傷作用の増加が観察される。
【００８６】
ＭＭ−３０２＋トラスツズマブの併用で処理した細胞の生存率と、ＭＭ−３０２単独あるいはトラスツズマブ単独に対する最大奏効とで分類して、各細胞株の併用効果を判定した。下記実施例２に要約したように、ほぼすべての場合でＭＭ−３０２およびトラスツズマブの併用は、最も効果的な単剤と比較して細胞生存率を低下させた。さらに、細胞株の約６２％（１８／２９）では併用により、何れかの単剤単独より効果的が高まった。結果を図２Ｂに示す。使用した細胞株の概要は、下記表にある。
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【００８７】
実施例２：ＭＭ−３０２のインビボでの薬理
どちらもＨＥＲ２を過剰発現しているヒト乳癌株（ＢＴ−４７４−Ｍ３）およびヒト胃癌株（ＮＣＩ−Ｎ８７）を用いた２種の腫瘍異種移植モデルを対象にＭＭ−３０２について試験した。ＭＭ−３０２を３ｍｇ／ｋｇで３週間にわたり週１回投与し、トラスツズマブを３．５ｍｇ／ｋｇで３日ごとに投与した。腫瘍モデルごとに２つの試験を行い、各試験で腫瘍の大きさを週２回測定した。図３Ａ（ＢＴ−４７４−Ｍ３）および図３Ｂ（ＮＣＩ−Ｎ８７）に示すように、ＭＭ−３０２は、腫瘍増殖の阻害において遊離ドキソルビシンより著しく強力であった。マウスから採取した血液サンプルの解析により、ＭＭ−３０２および非標的化リポソームドキソルビシンは類似の薬物動態プロファイルを示すことが立証されたことから、ＭＭ−３０２と非標的化リポソームドキソルビシンとの抗腫瘍活性の相違は薬物動態の相違によるものではないと考えられ、ＨＥＲ２標的化に起因する可能性が高いことが示唆された。
【００８８】
図３Ｃに示すように、互いに併用して投与されたＭＭ−３０２およびトラスツズマブは、ＨＥＲ２を過剰発現している同じ乳房モデルおよび胃モデルを用いて試験すると、何れかの薬単独より有効性が高かった。クリニックで腫瘍奏効の評価に使用されるものと同様の奏効基準を適用することにより、腫瘍を腫瘍の変化率に基づき奏効例、安定（ＳＤ）または進行（ＰＤ）に分類することができる。この評価を図２のデータに適用すると、ＭＭ−３０２およびトラスツズマブを併用するとき、ＢＴ−４７４−Ｍ３モデルおよびＮＣＩ−Ｎ８７モデルで奏効率が大きく改善することが観察されたことから（表Ｅ１）、ＨＥＲ２発現癌におけるこれらの薬の併用の相加を上回る活性および治療可能性が立証された。
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【００８９】
実施例３：ＭＭ−３０２および／またはトラスツズマブ処置の患者選択の基準
この実施例では、単独療法のＭＭ−３０２処置に適格な患者は進行乳癌（たとえば、局所進行／切除不能または転移性）陽性である。ＭＭ−３０２単独療法コホート、さらにＭＭ−３０２およびトラスツズマブ併用コホートに適格な患者は進行ＨＥＲ２陽性癌陽性である。患者はさらに、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ：Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ）Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｃｏｒｅ（ＰＳ）の０または１を有するべきである。
【００９０】
加えて、適格な患者は、１）好中球絶対数（ＡＮＣ）≧１，５００／μＬ、２）血小板数≧１００，０００／μＬ、および３）ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ（輸血を許容）により証明されるような十分な骨髄予備能を有する。適格な患者はまた、１）正常範囲内の血清総ビリルビン、および２）最大２×正常上限のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）により証明されるような十分な肝機能を有すべきである。加えて、適格な患者はさらに、血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮにより証明されるような十分な腎機能を有する。患者は、試験組み入れから約２８日以内にＥＣＨＯまたはＭＵＧＡにより測定された左室駆出率が≧５０％であることにより証明されるような十分な心機能を有する。
【００９１】
いくつかの実施形態では、患者は、アントラサイクリン未処置の進行／転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有する。さらなる実施形態では、患者は以前トラスツズマブおよびＴ−ＤＭ１により処置されたことがある。
【００９２】
実施例４：アントラサイクリン未処置患者およびアントラサイクリン曝露患者におけるＭＭ−３０２単独療法の活性。
２７例の患者を治療用量の３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２および５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２単独療法で処置したが、１８例の患者はアントラサイクリンによる前処置を受けたことがあり、９例の患者はアントラサイクリン未処置であった（表Ｅ２および図４）。以前アントラサイクリンで処置された１８例の患者のうち、１６例（８９％）の患者は以前にネオアジュバントまたはアジュバント疾患に対してアントラサイクリンを含むレジメンで処置されたことがあり、転移段階でアントラサイクリンにより再チャレンジされた患者はなかった。転移段階で以前アントラサイクリンにより処置された２例の患者はＰＬＤを投与されたことがあるが、疾患の初期処置に以前アントラサイクリンを用いた治療を受けたことがなかった。
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【００９３】
無増悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値のカプランマイヤー推定値は、平均して、アントラサイクリン未処置群のＰＦＳの中央値が１０．９ヶ月（９５％ＣＩ；１．６−未到達）であり、アントラサイクリン曝露群で観察された５．６ヶ月（９５％ＣＩ；１．９−８．６）より高かったことを示す。ＭＭ−３０２単独療法で処置されたＣＲおよびＰＲを呈した患者は、ＭＭ−３０２の投与前にアントラサイクリン未処置であった。同様の効果の改善は、アントラサイクリン曝露群とアントラサイクリン未処置群との間のＯＲＲおよびＣＢＲに関しても観察される。アントラサイクリン未処置患者とアントラサイクリン曝露患者では、それぞれＯＲＲ４４％と０％、ＣＢＲ５６％と２８％が観察された。
【００９４】
図４に示すように、アントラサイクリン未処置の９例の患者およびアントラサイクリン曝露の１５例の患者を、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２のＭＭ−３０２の単独療法で処置した。アントラサイクリン未処置サブグループでは、１例の患者が完全奏効（ＣＲ）を示し、３例の患者が部分奏効（ＰＲ）を示したのに対し（図４Ａ）、アントラサイクリン曝露サブグループの患者は奏効を示さなかった（図４Ｂ）。アントラサイクリン未処置患者の無増悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値は１０．９ヶ月であった一方（９５％信頼区間（ＣＩ）：１．６−ＮＲ）（図４Ｃ）、アントラサイクリン曝露患者のＰＦＳの中央値は５．６ヶ月であった（９５％ＣＩ：１．９−８．６）（図４Ｄ）。
【００９５】
実施例３：ＭＭ−３０２（３０ｍｇ／ｍ２）／トラスツズマブ（４ｍｇ／ｋｇ）併用療法
ＨＥＲ２陽性癌と診断された患者を、以下の通りＭＭ−３０２とトラスツズマブとの併用により処置する：
表Ｅ２に示すように、ＭＭ−３０２は、６０分の時間をかけて静脈内注射により４週間に１回３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与する。トラスツズマブは、４ｍｇ／ｋｇの用量で２週ごとに投与する（トラスツズマブの初回用量はＩＶ注入により９０分かけて投与される６ｍｇ／ｋｇの負荷用量であり、その後３０〜９０分かけて４ｍｇ／ｋｇで２週ごとに投与する）。
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【００９６】
実施例４：ＭＭ−３０２（４０ｍｇ／ｍ２）／トラスツズマブ（４ｍｇ／ｋｇ）併用療法
ＨＥＲ２陽性癌と診断された患者を、以下の通りＭＭ−３０２とトラスツズマブとの併用により処置する：
表Ｅ３に示すように、ＭＭ−３０２は、６０分の時間をかけて静脈内注射により４週間に１回４０ｍｇ／ｍ２の用量で投与する。ＭＭ−３０２の初回用量は単独療法として投与する。次いでトラスツズマブを２週ごとに４ｍｇ／ｋｇの用量で投与する（トラスツズマブの初回用量はＩＶ注入により９０分かけて投与される６ｍｇ／ｋｇの負荷用量であり、その後３０〜９０分かけて４ｍｇ／ｋｇで２週ごとに投与する）。
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【００９７】
実施例６：ＭＭ−３０２（３０ｍｇ／ｍ２）／トラスツズマブ（６ｍｇ／ｋｇ）併用療法
ＨＥＲ２陽性癌と診断された患者を、以下の通りＭＭ−３０２とトラスツズマブとの併用により処置する：
表Ｅ４に示すように、ＭＭ−３０２は、６０分の時間をかけて静脈内注射により３週間に１回３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与する。次いでトラスツズマブを３週間ごとに６ｍｇ／ｋｇの用量で投与する（トラスツズマブの初回用量はＩＶ注入により９０分かけて投与される８ｍｇ／ｋｇの負荷用量であり、その後３０〜９０分かけて６ｍｇ／ｋｇで３週間ごとに投与される）。
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【００９８】
実施例７：ＭＭ−３０２（４０ｍｇ／ｍ２）／トラスツズマブ（６ｍｇ／ｋｇ）併用療法
ＨＥＲ２陽性癌と診断された患者を、以下の通りＭＭ−３０２とトラスツズマブとの併用により処置する：
表Ｅ５に示すように、ＭＭ−３０２は、６０分の時間をかけて静脈内注射により４週間に１回４０ｍｇ／ｍ２の用量で投与する。次いでトラスツズマブを最初のサイクルにおいて８ｍｇ／ｋｇの初回負荷用量で、続いて２週ごとに６ｍｇ／ｋｇの維持量で投与する）。トラスツズマブはＩＶ注入により３０〜９０分かけて９０分にわたり投与する）。
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【００９９】
実施例８：アントラサイクリン未処置患者およびアントラサイクリン曝露患者におけるＭＭ−３０２およびトラスツズマブ
ＭＭ−３０２＋トラスツズマブで処置した患者では、８例の患者がアントラサイクリン曝露患者であったのに対し、５例の患者がアントラサイクリン未処置患者であった。この群では、アントラサイクリン未処置の４例の患者のうち２例にＰＲが認められ、４例のうち３例が試験を続けており、本解析の時点で少なくとも５サイクルの処置を受けている。ＭＭ−３０２＋トラスツズマブの併用で処置し、試験を離脱したアントラサイクリン未処置患者１例は、以前にＴ−ＤＭ１による処置を受けていた。ＭＭ−３０２＋トラスツズマブの初回用量後に採取した生検標本の免疫組織化学的解析から、この患者の腫瘍はＭＭ−３０２処置の開始時のＩＨＣによりＨＥＲ２「０」であったことが示される。これらの結果は、この患者に作用が見られないことを説明し得るものであり、Ｔ−ＤＭ１の獲得耐性のメカニズムの１つがＨＥＲ２シグナル伝達のダウンレギュレーションであるという新たな仮説と整合的である。入手可能なデータを下記の表Ｅ６にまとめ、図５に示す。ＰＦＳ、ＯＲＲおよびＣＢＲの推定値は、解析時のサンプルサイズが非常に小さいため除いてある。
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【０１００】
実施例９：ＨＥＲ２陽性転移性乳癌を処置するための抗ＨＥＲ２抗体との併用療法に使用するアントラサイクリンの安全性
図６に示すように、進行中の臨床試験では、一定範囲の用量のＭＭ−３０２単独療法またはＭＭ−３０２＋トラスツズマブ併用療法を受けている患者に、処置後のＬＶＥＦ低下が認められなかった。これは、累積で５００ｍｇ／ｍ２を超えるドキソルビシンを投与された患者でも観察された（ただし本試験の１例の患者がその後ＬＶＥＦの低下を示した）。これらのデータは、単独療法としてまたは他のＨＥＲ２標的化治療薬と併用して、ＭＭ−３０２を患者に安全に投与できることを示す。
【０１０１】
均等物
当業者であれば、ごく通常の実験を用いるのみで、本明細書に記載した具体的な実施例に対する均等物を数多く認識するか、あるいは確認して実行することができるであろう。こうした均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることを意図している。従属請求項に開示された実施形態の任意の組み合わせは、本開示の範囲内であることを意図している。
【０１０２】
文献の引用
本明細書で言及したありとあらゆる米国および外国特許ならびに係属中の特許出願および刊行物の開示は、参照により具体的にその全体を本明細書に援用する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【国際調査報告】
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