(57)【要約】  本願は、ＢＴＫを阻害する、一般式Ｉ（式中、全ての可変部は、本明細書に記載されるとおりに定義される）に係る化合物を開示する。本明細書に開示される化合物は、ＢＴＫの活性を調節し、そして、過剰のＢＴＫ活性に関係する疾患を処置するために有用である。該化合物は、更に、関節リウマチ等の異常なＢ細胞増殖に関係する炎症性疾患及び自己免疫疾患を処置するために有用である。また、式Ｉで表される化合物と、少なくとも１つの担体、希釈剤、又は賦形剤とを含有する組成物も開示する。
2016510051.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2016510051.tif 000075
（式中、
ｎは、１又は２であり；
Ｒ１は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ１’、又は−ＯＣ（Ｒ１’）２ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１’は、メチル又はモルホリンであり；
Ｒ２は、Ｈ又はＦであり；
Ｒ３は、クロロ又はＣ（ＣＨ２）２Ｒ３’であり；
Ｒ３’は、メチル、シアノ、又はヒドロキシメチルであり；
Ｘは、ＣＨ、ＣＨ２、又はＮであり；
Ｘ２は、ＣＨ又はＮであり；
Ｘ３は、ＣＨ又はＮであり；
Ｙは、ＣＨ又はＯであるが、
ただし、ｎが２であるとき、両Ｘは、ＣＨ２である）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３が、tert−ブチルである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ３が、ＣＨである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ２が、Ｎである、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’であり、Ｒ１’が、モルホリンである、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
ｎが、１である、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、ＣＨ又はＣＨ２である、請求項１〜７のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
Ｙが、ＣＨ又はＣＨ２である、請求項１〜８のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１０】
ｎが、２であり、Ｙが、Ｏである、請求項５に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ１’であり、Ｒ１’が、メチルであるか、又は、Ｒ１が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’であり、Ｒ１’が、モルホリンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
２−［２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−６−イル］−２−メチルプロパンニトリル；
２−［８−フルオロ−２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［５−［［５−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）オキシピリジン−２−イル］アミノ］−１−メチル−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−１−オキソイソキノリン−６−イル］−２−メチルプロパンニトリル；
４−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［（５−メチルスルホニルピリジン−２−イル）アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−８−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾオキサゼピン−５−オン；
５−クロロ−Ｎ−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリジン−３−イル］フェニル］−１，３−ジヒドロイソインドール−２−カルボキサミド；
６−tert−ブチル−２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリジン−３−イル］フェニル］−３，４−ジヒドロ−２，７−ナフチリジン−１−オン；
６−tert−ブチル−２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−３，４−ジヒドロ−２，７−ナフチリジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−メチル−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］フタラジン−１−オン；
８−tert−ブチル−４−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾオキサゼピン−５−オン；及び
８−tert−ブチル−４−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［（５−メチルスルホニルピリジン−２−イル）アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾオキサゼピン−５−オン
からなる群より選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１３】
炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
炎症状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１５】
関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１６】
喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１８】
炎症及び／又は自己免疫状態の処置における、請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項１９】
炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための医薬を調製するための、請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２０】
炎症及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２１】
本明細書に記載される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＢＴＫを阻害し、そして、異常なＢ細胞の活性化によって引き起こされる自己免疫疾患及び炎症性疾患を処置するために有用な新規化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは、ヒト酵素の最大のファミリーの１つを構成し、そして、タンパク質にリン酸基を付加することによって多くの様々なシグナル伝達プロセスを制御する（非特許文献１）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール部分においてタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の増殖、遊走、及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫疾患及び炎症性疾患を含む様々なヒトの疾患に関与しているとされている。プロテインキナーゼは、細胞のシグナル伝達の重要な制御因子であるので、低分子キナーゼ阻害剤で細胞機能を調節するための標的を提供し、したがって、優れた薬物設計標的をもたらす。キナーゼ媒介性疾患過程の処置に加えて、キナーゼ活性の選択的かつ有効な阻害剤は、細胞のシグナル伝達プロセスの研究及び治療対象となる他の細胞標的の同定にも有用である。
【０００３】
Ｂ細胞が自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患の発病において重要な役割を果たしているという良好な証拠が存在する。リツキサン等のＢ細胞を枯渇させるタンパク質に基づく治療法は、関節リウマチ等の自己抗体駆動炎症性疾患に対して有効である(非特許文献２)。したがって、Ｂ細胞の活性化において役割を果たしているプロテインキナーゼの阻害剤は、自己抗体産生等のＢ細胞媒介疾患の病態の有用な治療法であるはずである。
【０００４】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を通じたシグナル伝達は、増殖及び成熟抗体産生細胞への分化を含む様々なＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性にとって重要な制御点であり、そして、異常なシグナル伝達は、無秩序なＢ細胞増殖、並びに複数の自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を導く病原性自己抗体の形成を引き起こし得る。ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、膜近位の、そして、ＢＣＲの直下流の非ＢＣＲ会合キナーゼである。ＢＴＫの欠損は、ＢＣＲシグナル伝達をブロックすることが示されており、したがって、ＢＴＫの阻害は、Ｂ細胞媒介疾患過程をブロックするために有用な治療アプローチであり得る。
【０００５】
ＢＴＫは、Ｔｅｃファミリーのチロシンキナーゼのメンバーであり、早期のＢ細胞発生、並びに成熟Ｂ細胞の活性化及び生存の重要な制御因子であることが示されている（非特許文献３、非特許文献４)。ヒトにおけるＢＴＫの成熟は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）の状態を引き起こす（非特許文献５及び非特許文献６に概説)。これらの患者は、免疫無防備状態であり、そして、Ｂ細胞の成熟障害、免疫グロブリン及び末梢Ｂ細胞レベルの低下、Ｔ細胞非依存性免疫応答の減少、並びに、ＢＣＲ刺激後のカルシウム動員の減弱を示す。
【０００６】
また、自己免疫疾患及び炎症性疾患におけるＢＴＫの役割についての証拠は、ＢＴＫ欠損マウスモデルによっても提供されている。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルでは、ＢＴＫ欠損マウスは、疾患の進行の著しい回復を示す。加えて、ＢＴＫ欠損マウスは、コラーゲン誘導関節炎に対して耐性である（非特許文献７)。選択的ＢＴＫ阻害剤は、マウス関節炎モデルにおいて用量依存性効果を示した（非特許文献８）。
【０００７】
また、ＢＴＫは、疾患過程に関与している可能性があるＢ細胞以外の細胞によっても発現される。例えば、ＢＴＫは、肥満細胞により発現され、そして、ＢＴＫ欠損骨髄由来肥満細胞は、抗原誘導脱顆粒の障害を示す（非特許文献９）。これは、ＢＴＫが、アレルギー及び喘息等の病的肥満細胞応答の処置に有用であり得ることを示す。また、ＢＴＫ活性がないＸＬＡ患者由来の単球は、刺激後のＴＮＦアルファ産生の減少を示す（非特許文献１０）。したがって、ＴＮＦアルファ媒介炎症は、低分子のＢＴＫ阻害剤によって調節され得るだろう。また、ＢＴＫは、アポトーシスにおいても役割を果たしていることが報告されており（非特許文献１１）、したがって、ＢＴＫ阻害剤は、特定のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用だろう（非特許文献１２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】T. Hunter, Cell 1987 50:823-829
【非特許文献２】Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477
【非特許文献３】Khan et al. Immunity 1995 3:283
【非特許文献４】Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611
【非特許文献５】Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431
【非特許文献６】Lindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200
【非特許文献７】Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459
【非特許文献８】Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61
【非特許文献９】Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261
【非特許文献１０】Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003
【非特許文献１１】Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49
【非特許文献１２】Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837
【発明の概要】
【０００９】
本願は、本明細書において以下に記載するとおり、式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物、その使用方法を提供する。
【００１０】
本願は、式Ｉ：
【化１】
2016510051.tif 000003
（式中、
ｎは、１又は２であり；
Ｒ１は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ１’、又は−ＯＣ（Ｒ１’）２ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１’は、メチル又はモルホリンであり；
Ｒ２は、Ｈ又はＦであり；
Ｒ３は、クロロ又はＣ（ＣＨ２）２Ｒ３’であり；
Ｒ３’は、メチル、シアノ、又はヒドロキシメチルであり；
Ｘは、ＣＨ、ＣＨ２、又はＮであり；
Ｘ２は、ＣＨ又はＮであり；
Ｘ３は、ＣＨ又はＮであり；
Ｙは、ＣＨ又はＯであるが、
ただし、ｎが２であるとき、両Ｘは、ＣＨ２である）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００１１】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００１２】
本願は、少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（発明の詳細な説明）
定義
語句「ａ」又は「ａｎ」実体とは、本明細書で使用されるとき、その実体の１つ以上を指し、例えば、「ａ」化合物とは、１つ以上の化合物又は少なくとも１つの化合物を指す。このように、用語「ａ」（又は「ａｎ」）、「１つ以上の」、及び「少なくとも１つの」は、本明細書において互換的に用いることができる。
【００１４】
語句「本明細書において上に定義したとおり」とは、発明の概要又は最も広い請求項に提供される、各基についての最も広い定義を指す。以下に提供される全ての他の実施形態では、各実施形態に存在し得、そして、明確に定義されていない置換基は、発明の概要に提供される最も広い定義を保有する。
【００１５】
本明細書で使用されるとき、特許請求の範囲の移行句にあろうと本体にあろうと、用語「含む」及び「含んでいる」は、オープンエンドな意味を有すると解釈されるべきである。すなわち、この用語は、語句「少なくとも有する」又は「少なくとも包含する」の同義語として解釈されるべきである。方法に関連して用いられるとき、用語「含む」とは、その方法が、列挙された工程を少なくとも包含するが、追加の工程を包含してもよいことを意味する。化合物又は組成物に関連して用いられるとき、用語「含む」とは、その化合物又は組成物が、列挙された特徴又は成分を少なくとも包含するが、追加の特徴又は成分を包含してもよいことを意味する。
【００１６】
本明細書で使用されるとき、特に明確に他のことを指定しない限り、単語「又は」は、「及び／又は」という「包含的な」意味で用いられ、「いずれか／又は」という「排他的な」意味では用いられない。
【００１７】
用語「独立して」とは、可変部が、同じ化合物内の同じ又は異なる定義を有する可変部の有無にかかわらず、任意の１つの事例において適用されることを示すために本明細書で用いられる。したがって、Ｒ’’が２回出現し、そして、「独立して炭素又は窒素である」と定義されている化合物では、両方のＲ’’が炭素であってもよく、両方のＲ’’が窒素であってもよく、又は一方のＲ’’が炭素であり、他方が窒素であってもよい。
【００１８】
本発明で使用されるか又は特許請求される化合物を描写及び説明する任意の部分又は式において任意の可変部が２回以上出現する場合、各出現時におけるその定義は、全ての他の出現時における定義とは無関係である。また、置換基及び／又は可変部の組み合わせは、このような化合物から安定な化合物が得られる場合にのみ許容可能である。
【００１９】
結合の末端における記号「＊」又は結合を貫いて引かれている「------」は、それぞれ、官能基又は他の化学部分が、該官能基又は他の化学部分がその一部である分子の残りに結合する点を指す。したがって、例えば：
【化２】
2016510051.tif 000004
である。
【００２０】
（明確な頂点において接続されているのとは対照的に）環系の中に引かれている結合は、その結合が適切な環原子のいずれにも結合され得ることを示す。
【００２１】
用語「任意の」又は「場合により」とは、本明細書で使用されるとき、その後に記載する事象又は状況が生じる場合もあるが、必ずしもそうではないこと、そして、その記載が、事象又は状況が生じる場合及び生じない場合を含むことを意味する。例えば、「場合により置換される」とは、場合により置換される部分に水素原子又は置換基を組み込み得ることを意味する。
【００２２】
語句「任意結合」とは、結合が存在していても存在していなくてもよいこと、そして、その記載が、単結合、二重結合、又は三重結合を含むことを意味する。置換基が「結合」又は「存在しない」と記載されている場合、その置換基に連結されている原子は、直接接続される。
【００２３】
用語「約」は、およそ、ほぼ、大体、又は前後を意味するために本明細書で使用される。用語「約」が数値範囲と併用されている場合、記載されている数値の上限及び下限を広げることによって範囲を変化させる。一般的に、用語「約」は、指定の値の上下に２０％数値を変化させるために本明細書で使用される。
【００２４】
式Ｉで表される特定の化合物は、互変異性を示し得る。互変異性化合物は、２つ以上の相互変換可能な種として存在し得る。プロトトロピック互変異性体は、２つの原子間の共有結合されている水素原子の移動によって生じる。互変異性体は、一般的に、平衡状態で存在し、そして、個々の互変異性体を単離しようとする試みは、通常、その化学的特性及び物理学的特性が化合物の混合物と一致している混合物を生じる。平衡点は、分子内の化学的特徴に依存する。例えば、多くの脂肪族アルデヒド及びケトン（例えば、アセトアルデヒド）では、ケト型が優位であるが、一方、フェノールでは、エノール型が優位である。一般的なプロトトロピック互変異性体としては、ケト／エノール
【化３】
2016510051.tif 000005
、アミド／イミド酸
【化４】
2016510051.tif 000006
、及びアミジン
【化５】
2016510051.tif 000007
互変異性体が挙げられる。後者２つは、ヘテロアリール及び複素環式環において特に一般的であり、そして、本発明は、化合物の全ての互変異性型を包含する。
【００２５】
本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、特に他のことを定義しない限り、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書では当業者に公知の様々な方法論及び材料を参照する。薬理学の一般的原理について記載している標準的な参考資料としては、Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001)が挙げられる。当業者に公知の任意の適切な材料及び／又は方法を本発明の実施において利用することができる。しかしながら、好ましい材料及び方法を記載する。以下の明細書及び実施例で参照する材料、試薬等は、特に他に断りのない限り、商業的供給元から入手可能である。
【００２６】
本明細書に記載される定義は、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」等といった化学的に関連する組み合わせを形成するために付け加えられてもよい。用語「アルキル」を、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」におけるように別の用語の後に接尾辞として使用する場合、これは、他の具体的に命名された基から選択される１〜２個の置換基で置換されている、上に定義したとおりのアルキル基を指すことを意図する。したがって、例えば、「フェニルアルキル」とは、１〜２個のフェニル置換基を有するアルキル基を指し、したがって、ベンジル、フェニルエチル、及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２個のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」としては、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピル等が挙げられる。したがって、本明細書で使用されるとき、用語「ヒドロキシアルキル」は、以下に定義されるヘテロアルキル基のサブセットを定義するために用いられる。用語−（アル）アルキルとは、置換されていないアルキル又はアラルキル基のいずれかを指す。用語（ヘテロ）アリール又は（ヘト）アリールとは、アリール又はヘテロアリール基のいずれかを指す。
【００２７】
用語「スピロシクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、スピロ環式シクロアルキル基、例えば、スピロ［３．３］ヘプタン等を意味する。用語スピロヘテロシクロアルキルは、本明細書で使用されるとき、スピロ環式ヘテロシクロアルキル、例えば、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタン等を意味する。
【００２８】
用語「アシル」は、本明細書で使用されるとき、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、水素又は上に定義したとおりの低級アルキルである）で表される基を意味する。用語又は「アルキルカルボニル」は、本明細書で使用されるとき、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、上に定義したとおりのアルキルである）で表される基を意味する。用語Ｃ１−６アシルは、６個の炭素原子を含有する基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。用語「アリールカルボニル」は、本明細書で使用されるとき、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、アリール基である）で表される基を意味し；用語「ベンゾイル」は、本明細書で使用されるとき、Ｒがフェニルである「アリールカルボニル」基を意味する。
【００２９】
用語「エステル」は、本明細書で使用されるとき、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒは、上に定義したとおりの低級アルキルである）で表される基を意味する。
【００３０】
用語「アルキル」は、本明細書で使用されるとき、１〜１０個の炭素原子を含有する非分枝又は分枝鎖の飽和一価炭化水素残基を意味する。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分枝鎖の炭化水素残基を意味する。「Ｃ１−１０アルキル」とは、本明細書で使用されるとき、１〜１０個の炭素原子から構成されるアルキルを指す。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチルを含む低級アルキル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
用語「アルキル」を、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」におけるように別の用語の後に接尾辞として使用する場合、これは、他の具体的に命名された基から選択される１〜２個の置換基で置換されている、上に定義したとおりのアルキル基を指すことを意図する。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、フェニルアルキル部分の結合点がアルキレンラジカル上に存在するという理解の下で、ラジカルＲ’Ｒ’’−（式中、Ｒ’は、フェニルラジカルであり、そして、Ｒ’’は、本明細書に定義するとおりのアルキレンラジカルである）を意味する。アリールアルキルラジカルの例としては、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。用語「アリールアルキル」又は「アラルキル」は、Ｒ’がアリールラジカルであることを除いて同様に解釈される。用語「（ヘト）アリールアルキル」又は「（ヘト）アラルキル」は、Ｒ’が場合によりアリール又はヘテロアリールラジカルであることを除いて同様に解釈される。
【００３２】
用語「ハロアルキル」又は「ハロ低級アルキル」又は「低級ハロアルキル」とは、１つ以上の炭素原子が１つ以上のハロゲン原子で置換されている、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分枝鎖の炭化水素残基を指す。
【００３３】
用語「アルキレン」又は「アルキレニル」とは、本明細書で使用されるとき、特に他に指定しない限り、１〜１０個の炭素原子の二価飽和直鎖炭化水素ラジカル（例えば、（ＣＨ２）ｎ）又は２〜１０個の炭素原子の分枝飽和二価炭化水素ラジカル（例えば、−ＣＨＭｅ−又は−ＣＨ２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ２−）を意味する。メチレンの場合を除き、アルキレン基のあいている原子価（open valences）は、同じ原子には結合しない。アルキレンラジカルの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１，１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
用語「アルコキシ」とは、本明細書で使用されるとき、−Ｏ−アルキル基（式中、アルキルは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（これらの異性体を含む）等、上に定義したとおりである）を意味する。「低級アルコキシ」とは、本明細書で使用されるとき、既に定義したとおりの「低級アルキル」基を有するアルコキシ基を意味する。「Ｃ１−１０アルコキシ」とは、本明細書で使用されるとき、−Ｏ−アルキル（式中、アルキルは、Ｃ１−１０である）を指す。
【００３５】
用語「ＰＣｙ３」とは、３つの環式部分で三置換されているホスフィンを指す。
【００３６】
用語「ハロアルコキシ」又は「ハロ低級アルコキシ」又は「低級ハロアルコキシ」は、１つ以上の炭素原子が１つ以上のハロゲン原子で置換されている低級アルコキシ基を指す。
【００３７】
用語「ヒドロキシアルキル」とは、本明細書で使用されるとき、異なる炭素原子上の１〜３個の水素原子がヒドロキシル基によって置換されている、本明細書に定義するとおりのアルキルラジカルを意味する。
【００３８】
用語「アルキルスルホニル」及び「アリールスルホニル」とは、本明細書で使用されるとき、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義するとおりである）で表される基を指す。用語「ヘテロアルキルスルホニル」は、本明細書で使用されるとき、基−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、本明細書に定義するとおりの「ヘテロアルキル」である）で表される基を、本明細書で指し、意味する。
【００３９】
用語「アルキルスルホニルアミノ」及び「アリールスルホニルアミノ」とは、本明細書で使用されるとき、式−ＮＲ’Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、Ｒ’は、水素又はＣ１−３アルキルであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義するとおりである）で表される基を指す。
【００４０】
用語「シクロアルキル」とは、本明細書で使用されるとき、３〜８個の炭素原子を含有する飽和炭素環式環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチルを指す。「Ｃ３−７シクロアルキル」とは、本明細書で使用されるとき、炭素環式環中の３〜７個の炭素から構成されるシクロアルキルを指す。
【００４１】
用語「カルボキシ−アルキル」とは、本明細書で使用されるとき、ヘテロアルキルラジカルの結合点が炭素原子を貫いているという理解の下で、１つの水素原子がカルボキシルで置換されているアルキル部分を指す。用語「カルボキシ」又は「カルボキシル」とは、−ＣＯ２Ｈ部分を指す。
【００４２】
用語「ヘテロアリール」又は「複素芳香族」とは、本明細書で使用されるとき、ヘテロアリールラジカルの結合点が芳香環又は部分不飽和環上に存在するという理解の下で、環１つ当たり４〜８個の原子を含有し、１つ以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子が組み込まれ、残りの環原子が炭素である少なくとも１つの芳香環又は部分不飽和環を有する、５〜１２個の環原子の単環式又は二環式のラジカルを意味する。当業者に周知であるとおり、ヘテロアリール環は、全てが炭素である対応物よりも低い芳香族特性を有する。したがって、本発明の目的のために、ヘテロアリール基は、ある程度の芳香族特性しか必要としていない。ヘテロアリール部分の例としては、５〜６個の環原子及び１〜３個のヘテロ原子を有する単環式芳香族複素環が挙げられ、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルバモイルアミノ及びアリールカルボニルアミノから選択される１つ以上、好ましくは１つ又は２つの置換基で場合により置換されていてもよい、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサゾリル、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール及びオキサジアゾリンが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分の例としては、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンズオキサゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，６］ナフチリジニル、及びベンズイソチアゾールが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分は、いずれかの環において場合により置換されていてもよいが、結合点は、ヘテロ原子を含有する環上に存在する。
【００４３】
用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、又は「複素環」とは、本明細書で使用されるとき、環１つ当たり３〜８個の原子を有し、１つ以上の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）０−２から選択される）が組み込まれている１つ以上の環、好ましくは１〜２個の環（スピロ環系を含む）からなり、そして、特に他を指定しない限り、場合により、独立して、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びこれらのイオン形態から選択される１つ以上、好ましくは１つ又は２つの置換基で置換されていてもよい、一価飽和環状ラジカルを意味する。複素環式ラジカルの例としては、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル、及びイミダゾリニル、並びにこれらのイオン形態が挙げられるが、これらに限定されない。また、例は、例えば、３，８−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタン、又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン等の二環式であってもよい。
【００４４】
ＢＴＫの阻害剤
本願は、式Ｉ：
【化６】
2016510051.tif 000008
（式中、
ｎは、１又は２であり；
Ｒ１は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ１’、又は−ＯＣ（Ｒ１’）２ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１’は、メチル又はモルホリンであり；
Ｒ２は、Ｈ又はＦであり；
Ｒ３は、クロロ又はＣ（ＣＨ２）２Ｒ３’であり；
Ｒ３’は、メチル、シアノ、又はヒドロキシメチルであり；
Ｘは、ＣＨ、ＣＨ２、又はＮであり；
Ｘ２は、ＣＨ又はＮであり；
Ｘ３は、ＣＨ又はＮであり；
Ｙは、ＣＨ又はＯであるが、
ただし、ｎが２であるとき、両Ｘは、ＣＨ２である）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００４５】
本願は、Ｒ２が、Ｈである、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００４６】
本願は、Ｒ３が、tert−ブチルである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４７】
本願は、Ｘ３が、ＣＨである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４８】
本願は、Ｘ２が、Ｎである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４９】
本願は、Ｒ１が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’であり、Ｒ１’が、モルホリンである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５０】
本願は、ｎが、１である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５１】
本願は、Ｘが、ＣＨ又はＣＨ２である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５２】
本願は、Ｙが、ＣＨ又はＣＨ２である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５３】
本願は、ｎが、２であり、Ｙが、Ｏである、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００５４】
本願は、ｎが、２であり、Ｙが、Ｏであり、Ｒ２が、Ｈであり、Ｒ３が、tert−ブチルであり、Ｘ３が、ＣＨであり、Ｘ２が、Ｎである、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００５５】
本願は、Ｒ１が、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ１’であり、Ｒ１’が、メチルであるか、又は、Ｒ１が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１’であり、Ｒ１’が、モルホリンである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５６】
本願は、以下からなる群より選択される、式Ｉで表される化合物を提供する：
２−［２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−６−イル］−２−メチルプロパンニトリル；
２−［８−フルオロ−２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［５−［［５−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）オキシピリジン−２−イル］アミノ］−１−メチル−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−１−オキソイソキノリン−６−イル］−２−メチルプロパンニトリル；
４−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［（５−メチルスルホニルピリジン−２−イル）アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−８−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾオキサゼピン−５−オン；
５−クロロ−Ｎ−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリジン−３−イル］フェニル］−１，３−ジヒドロイソインドール−２−カルボキサミド；
６−tert−ブチル−２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリジン−３−イル］フェニル］−３，４−ジヒドロ−２，７−ナフチリジン−１−オン；
６−tert−ブチル−２−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−３，４−ジヒドロ−２，７−ナフチリジン−１−オン；
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−メチル−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］フタラジン−１−オン；
８−tert−ブチル−４−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［［５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル］アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾオキサゼピン−５−オン；及び
８−tert−ブチル−４−［２−（ヒドロキシメチル）−３−［１−メチル−５−［（５−メチルスルホニルピリジン−２−イル）アミノ］−６−オキソピリダジン−３−イル］フェニル］−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾオキサゼピン−５−オン。
【００５７】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５８】
本願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５９】
本願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６０】
本願は、式Ｉで表される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００６１】
本願は、少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００６２】
本願は、炎症性障害を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６３】
本願は、自己免疫障害を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６４】
本願は、関節リウマチを処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６５】
本願は、喘息を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６６】
本願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための上記化合物の使用を提供する。
【００６７】
本願は、関節リウマチを処置するための上記化合物の使用を提供する。
【００６８】
本願は、喘息を処置するための上記化合物の使用を提供する。
【００６９】
本願は、本明細書に記載する化合物、方法、又は組成物を提供する。
【００７０】
化合物及び調製
本発明によって包含され、そして、本発明の範囲内である代表的な化合物の例を、以下の表に提供する。これらの例及び下記調製は、当業者が本発明をより明確に理解し、そして、実施できるようにするために提供されるものである。これらは、本発明の範囲を限定するとみなすべきではなく、単に、その例示及び代表例である。
【００７１】
一般に、本願で用いられる命名法は、ＩＵＰＡＣ体系的命名法の作成のためのBeilstein Instituteのコンピュータ化システムであるAUTONOMTM v.4.0に基づく。図示されている構造とその構造に与えられた名称との間に矛盾が存在する場合、図示されている構造により重きがおかれる。更に、ある構造又は構造の一部の立体化学が、例えば、太線又は破線で示されていない場合、該構造又は構造の一部は、その立体異性体を全て包含すると解釈されるべきである。
【００７２】
表Ｉは、一般式Ｉに係る化合物の例を示す。これらの化合物は、ピリダジノン核基と組み合わされた、より極性の高い（cLogP＜２）選択性基（例えば、ここにはtert−ブチルベンズアミドが位置する）を含有するように設計されて、この有益な組み合わせを含有しない類似の化合物でみられる肝毒性を最小化した。
【００７３】
【表１】
2016510051.tif 000009
2016510051.tif 000010
2016510051.tif 000011
2016510051.tif 000012
【００７４】
一般的な合成スキーム
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製され得る。これらの化合物を合成するのに適切なプロセスは、実施例に提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームに従って調製され得る。
【００７５】
【化７】
2016510051.tif 000013
【００７６】
５−フルオロ−インダン−１−オン１０をSchmidt反応に供してジヒドロ−イソキノリノン１１を得、これを、過剰のイソブチロニトリルカリウム塩で処理して、シアノ化合物１２を得た。ジブロモベンズアルデヒド１３とのBuckwald-Hartwigカップリングにより、モノ−ブロミド１４を得、これを予め形成しておいた１５のボロナートとのSuzukiカップリングを通してピリダジノン１６を得た。ベンジル型アルコールへの最終還元により、目的の化合物１を得た。
【００７７】
【化８】
2016510051.tif 000014
【００７８】
１−ブロモ−３，５−ジフルオロベンゼン１７をイソブチロニトリルのリチウム塩による芳香族求核置換に供して、選択的にシアノ化合物１８を得、これを、リチウムジイソプロピルアミドでそのリチウム塩に変換し、そして、二酸化炭素でクエンチして酸１９を得た。カルボニルジイミダゾール及び水酸化アンモニウムで処理した後、アミド２０を得た。エトキシ−ビニルボロナート２１とSuzukiカップリングさせ、次いで、酸処理して、イソキノリノン２２を得、これを２−ブロモ−６−フルオロ−ベンズアルデヒド及び炭酸カリウムによる求核芳香族置換に供して、中間体２３を得た。他方、６−アミノ−ピリジン−３−オール２４をエチルブロモ−イソブチラート２５でアルキル化して芳香族エーテル２６を得、これをブロモ−クロロ−ピリダジノン２７とのBuckwald-Hartwigカップリングに供して２８を得た。エステルをＬＡＨで還元してアルコール２９を得た。２９をそのボロナートエステルに変換し、次いで、ブロミド２３とSuzukiカップリングさせてアルデヒド３０を得、これを対応するアルコールに還元して目的の化合物２を得た。
【００７９】
【化９】
2016510051.tif 000015
【００８０】
クロロベンズアルデヒド３１から得たＯ−メチル−２−クロロ−ベンズアルドキシム３２を、Ｐｄ触媒Ｃ−Ｈ活性化下で選択的にオルト臭素化して(J. Org. Chem. 2011, 76, 6414-6420)、３３を得、これを中間体３４に加水分解した。他方、５−ブロモ−ピリジン−２−イルアミン３５をメタンスルフィン酸ナトリウムで処理して、スルホン３６を得、これをブロモ−ピリダジノン２７とカップリングさせて、中間体３７を得た。ｐ−メトキシベンズアルデヒド３８を還元的にアミノ化してアミノアルコール３９を得、これを、４−ブロモ−２−フルオロ安息香酸４０と縮合させた後、アミド４１に変換した。水素化ナトリウムで処理した後、ベンゾ−オキサゼピノン４２への分子内環化を達成した。塩基性条件下におけるイソブチルアルデヒドと４２とのパラジウム触媒縮合により、アルデヒド４３を得た。脱ベンジル化し、次いで、中間体３４とBuckwald-Hartwigカップリングさせて、ビス−アルデヒド４５を得た。クロロピリダジノン中間体３７とのSuzukiカップリングにより４６を得、これを還元して目的の化合物３を得た。
【００８１】
【化１０】
2016510051.tif 000016
【００８２】
ニトロアルコール４７をＯ保護し、そして、アニリン４９に還元し、これをボロナートエステル５０に変換し、そして、ブロミド５１とカップリングさせて５２を得、これを、そのイソシアナートを介して、クロロ−イソインドリン５３と縮合させて、尿素５４を得た。最終的な脱保護により、目的の化合物４を得た。
【００８３】
【化１１】
2016510051.tif 000017
【００８４】
硝酸銀及び過硫酸アンモニウムの存在下で、ニコチンアミド５５を２，２−ジメチル−プロピオン酸で処理して、tert−ブチルニコチンアミド５６を得、これを、再度硝酸銀及び過硫酸アンモニウムの存在下で、フタルイミドプロパン酸５７で処理して、５８を得た(Journal of Heterocyclic Chemistry 1989, 26, 45)。５８をヒドラジンで処理することにより当該フタルイミドを脱保護して、分子内環化後にジヒドロ−ナフチリジノン５９を得、これを、Buckwald-Hartwig条件下でジブロモベンズアルデヒド１３とカップリングさせて、ブロミド６０を得た。ハロゲン化物６１とSuzukiカップリングさせて６２を得、これを還元した後、目的の化合物５及び６を得た。
【００８５】
【化１２】
2016510051.tif 000018
【００８６】
フルオロフタラジノン６３（米国特許出願公開第２０１００２２２３２５号）をパラジウム（０）条件下でジブロモトルエン６４とカップリングさせて、モノブロミド６５を得、これをボロナートエステル６６に変換し、そして、Suzuki条件下で１５とカップリングさせて、目的の化合物７を得た。
【００８７】
【化１３】
2016510051.tif 000019
【００８８】
３−tert−ブチルフェノール６７をブロミド６８でアルキル化して芳香族エーテル６９を得、これを酸処理によってクロマノール７０に環化した。ＰＣＣで酸化して、クロマノン７１を得た。アジ化ナトリウム及びメタンスルホン酸とのSchmidt反応により、ジヒドロ−ベンズオキサゼピノン７２を得、これをジブロベンズアルデヒド１３とのBuckwald-Hartwigカップリングに供して、ブロミド７３を得た。対応するクロロピリダジノン１５又は３７とSuzukiカップリングさせて７４を得、これを還元して、目的の化合物８及び９を得た。
【００８９】
医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、広範な経口投与剤形及び担体に処方され得る。経口投与は、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形態であり得る。本発明の化合物は、他の投与経路の中でも、持続（点滴静注）局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透促進剤を含んでいてもよい）、バッカル、経鼻、吸入、及び坐剤投与を含む他の投与経路によって投与されたときに有効である。好ましい投与態様は、一般的に、苦痛の程度及び活性成分に対する患者の応答に従って調整することができる簡便な毎日の投与レジメンを用いる経口である。
【００９０】
本発明の化合物及び化合物群並びにそれらの薬学的に使用し得る塩は、１つ以上の従来の賦形剤、担体、又は希釈剤と共に、医薬組成物及び単位剤形の形態にしてもよい。医薬組成物及び単位剤形形態は、追加の活性化合物又は有効成分を含んで又は含まずに、従来の割合で従来の成分から構成されていてもよく、該単位剤形形態は、用いられるべき意図される日用投薬範囲と釣り合う任意の適切な有効量の活性成分を含有し得る。医薬組成物は、経口使用の場合、固体（錠剤又は充填カプセル剤等）、半固体、粉末、持続放出処方物、又は液体（液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、又は充填カプセル剤等）として；又は、直腸若しくは膣内投与の場合、坐剤の形態で；又は、非経口使用の場合、無菌注射溶液の形態で、使用され得る。典型例な製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物又は化合物群（w/w）を含有する。用語「製剤」又は「剤形」は、活性化合物の固体及び液体の処方物の両方を含むことを意図し、そして、活性成分が、標的器官又は組織に並びに所望の用量及び薬物動態パラメータに依存して、異なる製剤に存在し得ることを、当業者は理解する。
【００９１】
用語「賦形剤」とは、本明細書で使用されるとき、一般的に安全であり、非毒性であり、そして、生物学的にも他の点でも非所望であることがない、医薬組成物の調製において有用な化合物を指し、そして、獣医学的使用及びヒトの薬学的使用に許容し得る賦形剤を含む。本発明の化合物は、単独で投与してもよいが、一般的に、意図する投与経路及び標準的な薬務に関連して選択される１つ以上の適切な薬学的賦形剤、希釈剤、又は担体と混合して、投与される。
【００９２】
用語「薬学的に許容し得る」とは、一般的に安全であり、非毒性であり、そして、生物学的にも他の点でも非所望であることがない医薬組成物の調製において有用であることを意味し、そして、獣医学的使用及びヒトの薬学的使用に許容し得ることを含む。
【００９３】
また、「活性成分」の「薬学的に許容し得る塩」形態は、まず、非塩形態では存在していなかった所望の薬物動態特性を活性成分に対して付与し得、そして、更には、体内におけるその治療活性に関する該活性成分の薬物動態に正の影響を与え得る。化合物の「薬学的に許容し得る塩」という語句は、薬学的に許容し得、そして、親化合物の所望の薬理活性を有する塩を意味する。このような塩としては、以下が挙げられる：（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等といった無機酸と共に形成されるか；又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等といった有機酸と共に形成される、酸付加塩；或いは、（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン（例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、又はアルミニウムイオン）によって置換されるか；又は有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン等）と配位するかのいずれかのときに形成される、塩。
【００９４】
固体形態製剤としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、及び分散性顆粒剤が挙げられる。固体担体は、希釈剤、矯味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、又は封入材料としても作用し得る１つ以上の物質であり得る。散剤では、担体は、一般的に、微粉化された活性成分との混合物である微粉化された固体である。錠剤では、活性成分は、一般的に、必要な結合能を有する担体と適切な割合で混合され、そして、所望の形状及び大きさに押し固められる。適切な担体としては、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂等が挙げられるが、これらに限定されない。固体形態製剤は、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定化剤、緩衝剤、人工及び天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含有し得る。
【００９５】
また、液体処方物も経口投与に適切であり、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水性液剤、水性懸濁剤を含む液体処方物が挙げられる。これらは、使用直前に液体形態の製剤に変換されることを意図する固体形態の製剤を含む。乳剤は、溶液中、例えば、プロピレングリコール水溶液中で調製され得るか、又はレシチン、モノオレイン酸ソルビタン、若しくはアカシア等の乳化剤を含有し得る。水性液剤は、活性成分を水に溶解させ、そして、適切な着色剤、香料、安定化剤、及び増粘剤を添加することによって調製され得る。水性懸濁剤は、微粉化された活性成分を粘稠材料（例えば、天然又は合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び他の周知の懸濁化剤）と共に水に分散させることによって、調製され得る。
【００９６】
本発明の化合物は、（例えば、注入、例えば、ボーラス注入又は持続注入によって）非経口投与用に処方され得、アンプル、プレフィルドシリンジ、少量輸液の単位投与形態で、又は保存剤を添加した多回投与容器で、提示され得る。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、又は乳液、例えば、水性ポリエチレングリコール中の溶液のような形態をとり得る。油性又は非水性の担体、希釈剤、溶媒、又はビヒクルの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）、及び注入可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）が挙げられ、そして、保存剤、湿潤剤、乳化剤、若しくは懸濁化剤、安定剤、及び／又は分散剤等の調合剤（formulatory agent）を含有し得る。或いは、活性成分は、滅菌固体の無菌単離によって、又は適切なビヒクル（例えば、滅菌パイロジェンフリー水）を用いて使用前に構成するための溶液から凍結乾燥させることによって、得られる粉末形態であり得る。
【００９７】
本発明の化合物は、軟膏剤、クリーム剤、若しくはローション剤として、又は経皮パッチとして、表皮に局所投与するために処方され得る。軟膏剤及びクリーム剤は、例えば、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加した水性又は油性の基剤を用いて処方され得る。ローション剤は、水性又は油性の基剤を用いて処方され得、そして、一般に、１つ以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、又は着色剤も含有する。口内における局所投与に適切な処方物としては、好ましい基剤（通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント）中に活性剤を含むロゼンジ剤；不活性基剤（例えば、ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシア）中に活性成分を含むトローチ剤；及び適切な液体担体中に活性成分を含むマウスウォッシュが挙げられる。
【００９８】
本発明の化合物は、坐剤として投与するために処方され得る。脂肪酸グリセリドの混合物又はカカオ脂等の低融点ワックスは、まず融解させ、そして、例えば撹拌によって、活性成分を均質に分散させる。次いで、融解した均質な混合物を簡便な大きさの型に注ぎ入れ、冷却させて固化させる。
【００９９】
本発明の化合物は、膣内投与するために処方され得る。活性成分に加えてこのような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤又は噴霧剤は、適切であることが当該技術分野において公知である。
【０１００】
本発明の化合物は、経鼻投与するために投与され得る。液剤又は懸濁剤は、従来の手段によって、例えば、スポイト（dropper）、ピペット、又はスプレーを用いて鼻腔に直接適用される。この処方物は、単回投与又は多回投与の形態で提供され得る。スポイト又はピペットの後者の場合、これは、適切な所定の容量の液剤又は懸濁剤を患者に投与することによって達成され得る。スプレーの場合、これは、例えば、定量噴霧スプレーポンプによって、達成され得る。
【０１０１】
本発明の化合物は、特に呼吸器に、エアゾール投与（鼻内投与を含む）するために処方され得る。化合物は、一般的に、小さな粒子サイズ（例えば、ほぼ５ミクロン以下）を有する。このような粒子サイズは、当該技術分野において公知の手段によって（例えば、微粒子化によって）、得られ得る。活性成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、又はジクロロテトラフルオロエタン）、又は二酸化炭素、又は他の適切な気体等の適切な噴射剤と共に加圧パックで提供される。エアゾールはまた、簡便には、レシチン等の界面活性剤を含有し得る。薬物の用量は、定量バルブによって制御され得る。或いは、活性成分は、乾燥粉末、例えば、ラクトース、デンプン、デンプン誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の適切な粉末基剤中の化合物の粉末ミックスの形態で提供され得る。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばカプセル又はカートリッジ（例えば、ゼラチンの）中の単位投与形態で、或いは、吸入器によりそこから粉末が投与され得るブリスターパックで、提示してよい。
【０１０２】
望ましい場合、活性成分の持続又は制御放出投与のために適合された腸溶性コーティングを用いて、処方物を調製してもよい。例えば、本発明の化合物を、経皮又は皮下の薬物送達デバイス中に処方してもよい。これら送達系は、化合物の持続放出が必要であるときに、及び処置レジメンの患者のコンプライアンスが重要であるときに、有利である。経皮送達系における化合物は、皮膚接着性固体支持体に付着されていることが多い。また、目的の化合物は、浸透促進剤（例えば、アゾン（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わせてもよい。持続放出送達系は、手術又は注射によって皮下層中に皮下挿入される。皮下インプラントは、脂質溶解性の膜（例えば、シリコーンゴム）又は生分解性ポリマー（例えば、ポリ乳酸（polyactic acid））中に化合物を封入する。
【０１０３】
医薬担体、希釈剤及び賦形剤を伴う適切な処方物は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995、E. W. Martin編、Mack Publishing Company, 19th edition, Easton、Pennsylvaniaに記載されている。熟練の処方科学者は、本発明の組成物を不安定にしたり、その治療活性を損なわせたりすることなく、特定の投与経路のための多数の処方物を提供するために、本明細書の教示内で、処方物を改変し得る。
【０１０４】
本化合物を水又は他のビヒクルにおいてより可溶性にするための改変は、例えば、範囲の軽微な改変（塩の処方、エステル化等）によって容易に達成され得、これは、当該分野における通常の技術の十分範囲内である。また、患者において有益な効果を最大化するために本化合物の薬物動態を管理するために、特定の化合物の投与経路及び投薬レジメンを改変することも、当該分野における通常の技術の十分範囲内である。
【０１０５】
用語「治療的に有効な量」とは、本明細書で使用されるとき、個体における疾患の症状を低減するのに必要な量を意味する。用量は、それぞれの特定のケースにおける個々の要求に調整される。その投薬量は、処置されるべき疾患の重篤度、患者の年齢及び全体的な健康状態、患者が処置されている他の医薬、投与の経路及び形態、並びに担当医の嗜好及び経験等の多数の要因に依存して、広い範囲で変動し得る。経口投与の場合、単独療法及び／又は併用療法において、１日当たり約０．０１〜約１０００mg/kg（体重）の一日投薬量が適切であるはずである。好ましい一日投薬量は、１日当たり、約０．１〜約５００mg/kg（体重）、より好ましくは０．１〜約１００mg/kg（体重）、最も好ましくは１．０〜約１０mg/kg（体重）である。したがって、７０kgのヒトに投与する場合、投薬量の範囲は、１日当たり約７mg〜０．７ｇであろう。一日投薬量は、単回投薬量として、又は典型的に１日当たり１〜５回の投薬で、投与することができる。一般的に、処置は、化合物の最適用量未満のより少ない投薬で始められる。その後、個々の患者についての最適な効果に達するまで、少しずつ投薬を増加させる。当業者は、本明細書に記載される疾患を処置することにおける通常の技術を有する者は、過度の実験を行うことなく、そして、個人の知識、経験、及び本願の開示に頼って、所定の疾患及び患者についての本発明の化合物の治療的に有効な量を確認することができる。
【０１０６】
医薬製剤は、好ましくは、単位剤形にある。このような形態では、製剤は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。単位剤形は、包装製剤であってもよく、該包装は、個別量の製剤を含有する（例えば、パッケージ化された、錠剤、カプセル剤、及びバイアル又はアンプル入りの散剤）。また、単位剤形は、それ自体カプセル剤、錠剤、カシェ剤、又はロゼンジ剤であってもよいし、それは、パッケージ化された形態中の適切な数のこれらのいずれかのものであってもよい。
【０１０７】
適応症及び処置方法
一般式Ｉで表される化合物は、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）を阻害する。上流のキナーゼによるＢＴＫの活性化により、ホスホリパーゼ−Ｃγが活性化され、これは、続いて、前炎症性メディエーターの放出を刺激する。式Ｉで表される化合物は、関節炎、並びに他の抗炎症及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Ｉに係る化合物は、関節炎の処置に有用である。式Ｉで表される化合物は、細胞内のＢＴＫを阻害するため及びＢ細胞の発生を調節するために有用である。本発明は更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含有する医薬組成物を含む。
【０１０８】
本明細書に記載する化合物は、キナーゼ阻害剤、特にＢＴＫ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳類において、ＢＴＫ阻害及び／又はＢ細胞増殖阻害に応答する疾患を含む、キナーゼ阻害に応答する１つ以上の疾患を処置するために有用であり得る。いずれの特定の理論にも縛られることを望まないが、本発明の化合物とＢＴＫとの相互作用により、ＢＴＫ活性が阻害され、したがって、これらの化合物の薬学的有用性が得られると考えられる。したがって、本発明は、ＢＴＫ活性の阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を有する哺乳類（例えば、ヒト）を処置する方法であって、このような疾患を有する哺乳類に、有効量の本明細書に提供する少なくとも１つの化学的実体を投与することを含む方法を含む。有効濃度は、例えば化合物の血中濃度をアッセイすることにより、又は理論的に、バイオアベイラビリティを計算することによって、実験的に確認され得る。ＢＴＫに加えて影響を受け得る他のキナーゼとしては、他のチロシンキナーゼ及びセリン／スレオニンキナーゼが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
キナーゼは、増殖、分化、及び死（アポトーシス）等の基本的な細胞プロセスを制御するシグナル伝達経路において、顕著な役割を果たしている。異常なキナーゼ活性は、多発性癌、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を含む様々な疾患、並びに急性炎症反応に関与している。重要な細胞シグナル伝達経路におけるキナーゼの多面的な役割は、キナーゼ及びシグナル伝達経路を標的とする新規薬物を同定するための重要な機会を提供する。
【０１１０】
一実施形態は、ＢＴＫ活性及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患、或いは急性炎症反応を有する患者を処置する方法を含む。
【０１１１】
本発明に係る化合物及び組成物を用いて影響を受け得る自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患としては、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、シェーグレン病、 組織移植片拒絶反応、及び移植された器官の超急性拒絶反応、喘息、全身性エリテマトーデス（及び関連する糸球体腎炎）、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、血管炎（ＡＮＣＡ関連及び他の血管炎）、自己免疫性溶血性及び血小板減少性の状態、グッドパスチャー症候群（並びに関連する糸球体腎炎及び肺出血）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血症性ショック、並びに重症筋無力症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
本明細書に提供される少なくとも１つの化学的実体を抗炎症剤と組み合わせて投与する処置方法が本明細書に含まれる。抗炎症剤としては、ＮＳＡＩＤ、非特異的な及びＣＯＸ−２特異的なシクロオキシゲナーゼ酵素阻害剤、金化合物、コルチコステロイド、メトトレキサート、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）受容体アンタゴニスト、免疫抑制剤、並びにメトトレキサートが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
ＮＳＡＩＤの例としては、イブプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン及びナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、ジクロフェナクナトリウムとミソプロストールとの組み合わせ、スリンダク、オキサプロジン、ジフルニサル、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、ケトプロフェン、ナトリウムナブメトン、スルファサラジン、トルメチンナトリウム、並びにヒドロキシクロロキンが挙げられるが、これらに限定されない。また、ＮＳＡＩＤの例としては、セレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ、及び／又はエトリコキシブ等のＣＯＸ−２特異的阻害剤が挙げられる。
【０１１４】
幾つかの実施形態では、抗炎症剤は、サリチル酸塩である。サリチル酸塩としては、アセチルサリチル酸、すなわちアスピリン、サリチル酸ナトリウム、並びにサリチル酸コリン及びマグネシウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１５】
また、抗炎症剤は、コルチコステロイドであってもよい。例えば、コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、又はプレドニゾンであってもよい。
【０１１６】
更なる実施形態では、抗炎症剤は、金チオリンゴ酸ナトリウム又はオーラノフィン等の金化合物である。
【０１１７】
また、本発明は、抗炎症剤が、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤（例えば、メトトレキサート）又はジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ阻害剤（例えば、レフルノミド）等の代謝阻害剤である実施形態を含む。
【０１１８】
本発明の他の実施形態は、少なくとも１つの抗炎症化合物が、抗Ｃ５モノクローナル抗体（例えば、エクリズマブ又はパキセリズマブ）、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（entanercept））、又は抗ＴＮＦアルファモノクローナル抗体であるインフリキシマブである組み合わせに関する。
【０１１９】
本発明の更に他の実施形態は、少なくとも１つの活性剤が、メトトレキサート、レフルノミド、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、及びミコフェノール酸モフェチルから選択される免疫抑制化合物等の免疫抑制化合物である組み合わせに関する。
【０１２０】
ＢＴＫを発現するＢ細胞及びＢ細胞前駆体は、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫（ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含む）、ヘアリーセル白血病、多発性骨髄腫、慢性及び急性の骨髄性白血病、並びに慢性及び急性のリンパ性白血病を含むがこれらに限定されない、Ｂ細胞悪性腫瘍の病理に関与している。
【０１２１】
ＢＴＫは、Ｂ系統リンパ系細胞における、Ｆａｓ／ＡＰＯ−１（ＣＤ−９５）細胞死誘導複合体（ＤＩＳＣ）の阻害剤であることが示されている。白血病／リンパ腫細胞の運命は、ＤＩＳＣによって活性化されるカスパーゼの逆アポトーシス促進効果と、ＢＴＫ及び／又はその基質が関与する上流の抗アポトーシス制御機構とのバランスに帰し得る（Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656)。
【０１２２】
また、ＢＴＫ阻害剤は、化学増感剤として有用であり、したがって、他の化学療法薬、特にアポトーシスを誘導する薬物、との組み合わせにおいて有用であることが発見された。化学増感ＢＴＫ阻害剤との組み合わせにおいて用いることができる他の化学療法薬の例としては、トポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン又はトポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ダウノマイシン及びエトポシド）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン、及びＢＣＮＵ）、チューブリン指向剤（例えば、タキソール及びビンブラスチン）、及び生物剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体等の抗体、ＩＤＥＣ８、免疫毒素、及びサイトカイン）が挙げられる。
【０１２３】
また、ＢＴＫ活性は、９番及び２２番染色体の部分の転座から生じるｂｃｒ−ａｂｌ融合遺伝子を発現する幾つかの白血病と関連している。この異常性は、慢性骨髄性白血病において一般的に観察される。ＢＴＫは、ｂｃｒ−ａｂｌ細胞においてアポトーシスを回避する下流の生存シグナルを開始するｂｃｒ−ａｂｌキナーゼによって構成的にリン酸化される。(N. Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201(11):1837-1852)。
【０１２４】
処置方法
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２５】
本願は、炎症状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２６】
本願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２７】
本願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉを投与することを含む方法を提供する。
【０１２８】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２９】
本願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３０】
本願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３１】
本願は、Ｂ細胞増殖を阻害する方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３２】
本願は、式Ｉのいずれか１つで表されるＢＴＫ阻害剤化合物を投与することを含む、ＢＴＫ活性を阻害するための方法であって、前記ＢＴＫ阻害剤化合物が、ＢＴＫ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて５０マイクロモル濃度以下のＩＣ５０を示す方法を提供する。
【０１３３】
上記方法の１つの変形例では、ＢＴＫ阻害剤化合物は、ＢＴＫ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１００ナノモル濃度以下のＩＣ５０を示す。
【０１３４】
上記方法の別の変形例では、該化合物は、ＢＴＫ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１０ナノモル濃度以下のＩＣ５０を示す。
【０１３５】
本願は、炎症状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物と組み合わせて治療的に有効な量の抗炎症化合物を同時投与することを含む方法を提供する。
【０１３６】
本願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物と組み合わせて治療的に有効な量の抗炎症化合物を同時投与することを含む方法を提供する。
【０１３７】
本願は、リンパ腫又はＢＣＲ−ＡＢＬ１＋白血病細胞を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３８】
本発明は、治療活性物質として用いるための上記化合物の使用を提供する。
【０１３９】
本発明は、炎症性及び／又は自己免疫状態の処置における上記化合物の使用を提供する。
【０１４０】
本発明は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための医薬を調製するための上記化合物の使用を提供する。
【０１４１】
本発明は、炎症性及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための上記化合物を提供する。
【０１４２】
本発明は、関節リウマチの処置において使用するための上記化合物を提供する。
【０１４３】
本発明は、喘息の処置において使用するための上記化合物を提供する。
【０１４４】
本発明は、本明細書に記載される発明を提供する。
【実施例】
【０１４５】
一般的な略記
共通して用いられる略記としては、以下が挙げられる：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、雰囲気（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−tert−ブチルピロカーボナート又は無水ｂｏｃ（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ケミカルアブストラクト登録番号（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ジエチルアゾジカルボキシラート（ＤＥＡＤ）、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ）、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）、イソプロピルマグネシウムクロリド（ｉＰｒＭｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチ���モルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ピリジニウムクロロクロマート（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、ピリジニウムジクロマート（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１’−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、sec−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフラート又はＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−又はトシル（Ｔｓ）、並びにＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。接頭辞ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、二級（sec−）、三級（tert−）、及びネオを含む従来の命名法は、アルキル部分とともに用いられるとき、それらの慣例の意味を有する。(J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.)。
【０１４６】
一般的条件
本発明の化合物は、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって、市販の出発物質で始めて調製することができる。以下の概要は、このような化合物を調製するのに適切な反応スキームである。更なる例示は、具体的な実施例に見出すことができる。
【０１４７】
具体的な略記
ｂｏｃ              tert−ブトキシカルボニル
ＣＨ２Ｃｌ２          ジクロロメタン
Ｃｓ２ＣＯ３          炭酸セシウム
ＤＣＭ              ジクロロメタン
ＤＭＦ              Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ            ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ          酢酸エチル
ＨＡＴＵ            Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ヒューニッヒ塩基    Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＨＣｌ              塩化水素
ＬＣ−ＭＳ          液体クロマトグラフィー質量分析
ＨＰＬＣ            高圧液体クロマトグラフィー
ＭｅＯＨ            メチルアルコール
ＭｇＳＯ４          硫酸マグネシウム
ｎＢｕＬｉ          ｎ−ブチルリチウム
ＮａＣｌ            塩化ナトリウム
Ｎａ２ＣＯ３          炭酸ナトリウム
ＮａＯＭｅ          ナトリウムメトキシド
Ｎａ２ＳＯ４          硫酸ナトリウム
ＮＨ４ＯＨ          水酸化アンモニウム
ＮＭＰ              １−メチル−２−ピロリドン
ＮＭＲ              核磁気共鳴
Ｐｄ（ＯＡｃ）２    酢酸パラジウム（ＩＩ）
ＴＦＡ              トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ              テトラヒドロフラン
ＴＬＣ              薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳＣｌ          トリメチルシリルクロリド
【０１４８】
一般的な実験の詳細
試薬は、Aldrich、Oakwood、Matrix、又は他の供給業者から購入し、更に精製することなく用いた。加熱のためにマイクロ波照射を用いる反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを用いて実施した。数ミリグラム〜数グラムの規模の精製は、シリカゲルフラッシュカラムの溶離等の当業者に公知の方法によって実施し；また、場合によっては、CombiFlashシステムで溶離させる使い捨ての予め充填されたマルチグラムシリカゲルカラム（RediSep）を使用することによって、分取フラッシュカラム精製を行った。また、Biotage（商標）及びISCO（商標）も、中間体の精製のために、本発明で用いてもよかったフラッシュカラム装置である。
【０１４９】
化合物の同定及び純度の判断のために、以下のシステムを用いて、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）スペクトルを記録した。質量スペクトルの測定については、システムは、Micromass Platform II分光計：ポジティブモードのＥＳイオン化（質量範囲：１５０〜１２００）からなる。以下のＨＰＬＣシステムを用いて同時クロマトグラフィー分離を成し遂げた：ES Industries Chromegabond WR C-18 3u 120Å（３．２×３０mm）カラムカートリッジ；移動相Ａ：水（０．０２％ＴＦＡ）及び相Ｂ：アセトニトリル（０．０２％ＴＦＡ）；勾配：３分間で１０％Ｂから９０％Ｂ；平衡時間：１分間；流速：２mL/分。
【０１５０】
また、式１で表される多くの化合物は、当業者に周知の方法を用いて、逆相ＨＰＬＣによって精製した。場合によっては、Shimadzu分取ＨＰＬＣシステム及びLeap自動注入装置に取り付けられたGilson 215コレクターを制御するPE Sciex 150 EX Mass Specを用いて、分取ＨＰＬＣ精製を実施した。化合物は、陽イオン検出のＬＣ／ＭＳ検出を用いて溶離流から回収した：Ｃ−１８カラム（２．０×１０cm、２０mL/分で溶離）からの化合物の溶離は、１０分間にわたっての、溶媒（Ａ）０．０５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ＴＦＡ／アセトニトリルの適切な線形勾配モードを用いて行った。ＨＰＬＣシステムに注入するために、メタノール、アセトニトリル、及びＤＭＳＯの混合物に粗サンプルを溶解した。
【０１５１】
Bruker 400MHz NMR分光計を用いて１Ｈ−ＮＭＲによって化合物をそれぞれキャラクタライズした。
【０１５２】
本発明の化合物は、公知の技術に従って合成してもよい。以下の実施例及び参照文献は、本発明の理解を助けるために提供される。しかし、実施例は、本発明を限定することを意図するものではなく、本発明の真の範囲は、添付の特許請求の範囲に記載される。実施例における最終生成物の名称は、Isis AutoNom 2000を用いて生成した。
【０１５３】
製造例
【化１４】
2016510051.tif 000020
ＤＣＭ（１６８mL）中の５−フルオロ−インダン−１−オン（１５ｇ、１０４．８３mmol）の撹拌した溶液にメタンスルホン酸（１２０mL）を０℃で加えた。この清澄な溶液にナトリウムアジド（９．５ｇ、１４６．７６mmol）を−１０℃で４０分間かけて分割して加えた。混合物を−１０℃で２時間撹拌し、２０％ＮａＯＨ水溶液を０℃で滴下して、１５分間撹拌した（ＴＬＣ、シリカ；ヘキサン中の５０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．３）。ＤＣＭを分離した後、水性部分をＤＣＭ（２×５０mL）で抽出し、有機部分を乾燥させ濃縮し、粗生成物を通常のカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００−２００、生成物をヘキサン中の６０％酢酸エチルで溶離した）によって精製して、６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（１２．０ｇ、６９．３１％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：１６６．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１５４】
【化１５】
2016510051.tif 000021
乾燥ＴＨＦ（３０mL）中の６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（２．５ｇ、１５．１４mmol）の撹拌した溶液にイソブチロニトリル（３）（５．４mL、６０．５４mmol）を加えた。この溶液にトルエン中の０．５（Ｍ）ＫＨＭＤＳ（１０４mL、５２mmol）を０℃でゆっくりと加えると、これは黄色を帯びた粘性液体に変わった。混合物を７０℃で４時間加熱した（ＬＣＭＳによってモニタリングした）。室温に冷却し、イソブチロニトリルの第２ロット（３mL、３３．４２mmol）を加え、もう一度７０℃で加熱し１６時間撹拌した（ＴＬＣ、シリカ；ヘキサン中の５０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．２５）。反応混合物を冷やし；氷冷水（５０mL）でクエンチし、酢酸エチル（３×５０mL）で抽出した。合わせた有機部分を濃縮し、得られた粗生成物をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム（ヘキサン中の４０−６０％酢酸エチルを溶離剤として使用した）によって精製して、２−メチル−２−（１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−プロピオニトリル（２．５ｇ，７７．０９％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：２１５．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１５５】
【化１６】
2016510051.tif 000022
乾燥ジオキサン（５０mL）中の２−メチル−２−（１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル）−プロピオニトリル（２．５ｇ，１１．６８mmol）の撹拌した溶液に、２，６−ジブロモ−ベンズアルデヒド（４．６ｇ，１７．５２mmol）、Ｃｓ２ＣＯ３（７．６ｇ、２３．３６mmol）を加えた。反応混合物をアルゴンで脱気し、Ｐｄ（ｄｂａ）２（１３４mg、０．２３４mmol）及びキサントホス（２０６mg、０．３５mmol）を加え、もう一度脱気した。混合物を１００℃で３時間加熱し、室温に冷却し、セライトパッドで濾過し；酢酸エチル（３×５０mL）で洗浄した。混合物を濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム（ヘキサン中の４０％酢酸エチルで溶離した）によって精製して、２−［２−（３−ブロモ−２−ホルミル−フェニル）−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（２．５ｇ，５３．８７％）を明褐色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１５６】
【化１７】
2016510051.tif 000023
ジオキサン（３５mL）中の、６−クロロ−２−メチル−４−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（１．５ｇ，４．２９mmol）（米国特許出願公開第２０１２／４０９４９号）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．４ｇ、５．５７mmol）及びＫＯＡｃ（乾燥）（１．３ｇ、１２．８６mmol）の反応混合物をアルゴン下で脱気し、Ｘ−Ｐｈｏｓ（３０７mg、０．６４mmol）及びＰｄ（ＯＡｃ）２（９６mg、０．４３mmol）を加え、９８℃で１５分間撹拌した。褐色の反応混合物は緑がかった褐色の溶液に変わった（ＬＣＭＳによってモニタリングした）。フラスコを加熱浴から引き上げ、冷却し、ジオキサン−水（１：１；９０mL）、ｎ−ＢｕＯＨ（１０．５mL）中の２−［２−（３−ブロモ−２−ホルミル−フェニル）−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（１．５３ｇ，３．８６mmol）及びＫ２ＣＯ３（２．３７ｇ、１７．１５mmol）の脱気した懸濁液を含む第２のフラスコの中へアルゴン下でセライトの短いプラグを通して濾過した。反応混合物をアルゴンで脱気し、トリシクロヘキシルホスフィン（３５９mg、１．２８mmol）、及びＰｄ（ｄｂａ）２（３６９mg、０．６４２mmol）を加え、もう一度脱気し、１１０℃で１時間加熱した。反応系を室温に冷却し、セライトのプラグを通して濾過し；酢酸エチル（３×１００mL）で洗浄した。濾液を濃縮し、合わせた粗生成物を通常のカラムクロマトグラフィー（通常のシリカゲル１００−２００メッシュ、ＤＣＭ中の２〜２．５％ＭｅＯＨで溶離した）によって精製して、２−［２−（２−ホルミル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−イリダジン−３−イル｝−フェニル）−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（１．５ｇ、５５．５６％）を明褐色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６３２．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０１５７】
【化１８】
2016510051.tif 000024
ＤＣＭ（５５mL）及びＭｅＯＨ（３６mL）中の２−［２−（２−ホルミル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−イリダジン−３−イル｝−フェニル）−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（３ｇ，４．７５mmol）の撹拌した溶液に、水（３．６mL）中の水素化ホウ素ナトリウム（３６０mg、９．５１mmol）の溶液を０℃で加えた。反応混合物を同じ温度で２０分間撹拌した。反応をＴＬＣによりモニタリングした（シリカ、ＵＶ／ＤＮＰ、ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．３５）。反応を氷でクエンチし、有機部分を分離し乾燥させ濃縮した）。粗生成物を通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００−２００、ＤＣＭ中の２−２．５％ＭｅＯＨで溶離した）により精製した。精製した物質をＤＣＭ及びヘキサンで再結晶して２−［２−（２−ヒドロキシメチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−フェニル）−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（２．１ｇ、６９．７％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６３４．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０１５８】
【化１９】
2016510051.tif 000025
１−ブロモ−３，５−ジフルオロベンゼン（３００ｇ、１．５５mol、当量：１．００）、イソブチロニトリル（２１５ｇ、３．１１mol、当量：２）及びＴＨＦ（１．２Ｌ）を５Ｌの３首フラスコに室温で装填した。１M ＬｉＨＭＤＳ（１．７１Ｌ、１．７１mol、当量：１．１）溶液を冷水浴下で温度範囲１５−２２℃で滴下し；添加に２．５時間要した。２．５時間後、ＨＰＬＣによると９１％変換されていた（ＳＭ９％及びジアルキル化１２％）。更にＬｉＨＭＤＳ溶液０．１当量を加えた。一晩撹拌すると９７％変換された（ＳＭ３％及びジアルキル化２１％）。反応を６N ＨＣｌでｐＨ約３−４にクエンチした。トルエンで抽出し（２回）；次に合わせた有機物を濃縮し；更なるトルエンを使用して水及び過剰イソブチロニトリルも除去した。ジアルキル化した副生物が濃縮中に現れ；ｎ−ヘプタンおよそ６００mLを加え、次に室温で一晩撹拌した。溶液を濾過しほとんどの副生物を固体として除去し；ヘプタンで洗浄した。濾液を濃縮して９０％ＨＰＬＣ純度を有する２−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−メチルプロパンニトリル（３３７．９ｇ、１．２６mol、８０．８％収率）を得た（ＳＭは無くジアルキル化９％）。
【０１５９】
【化２０】
2016510051.tif 000026
２−（３−ブロモ−５−フルオロフェニル）−２−メチルプロパンニトリル（１７２ｇ、７１０mmol、当量：１．００）をＴＨＦ（１．０３Ｌ）中に溶解し、次に溶液を−７５℃に冷やした。２M ＬＤＡ（３７３mL、７４６mmol、当量：１．０５）を溶液に滴下し、−７０℃未満の温度に維持した。更に２時間撹拌し、アリコートをドライアイスを用いて試験し；完全に変換されていた。別の３Ｌの丸底フラスコにドライアイス及びＴＨＦを加えた。ドライアイスで逆クエンチし；アニオン溶液全体を移すのに３０分要し、−５０℃未満（−６０〜−５０℃）に温度を維持した。更なる１時間の撹拌の後、室温まで温まるにまかせた。水を加え、６N ＨＣｌ溶液（ｐＨ３−４）で酸性化した。
相を分離しＭＴＢＥ及びＤＣＭで抽出した。合わせた有機物を濃縮した。２−ブロモ−４−（２−シアノプロパン−２−イル）−６−フルオロ安息香酸（２４６ｇ、７６５mmol、１０８％収率）を油状物（約８９％のＨＰＬＣ純度）として得た。更なる精製をすることなく次反応へ移した。
【０１６０】
【化２１】
2016510051.tif 000027
ＣＤＩ（３．３３ｇ、２０．６mmol、当量：１．４）を２−ブロモ−４−（２−シアノプロパン−２−イル）−６−フルオロ安息香酸（４．２ｇ、１４．７mmol、当量：１．００）のＴＨＦ（４２mL）溶液に室温で分割して加えた。３時間撹拌した。水酸化アンモニウム（１７．１ｇ、１９．１mL、１４７mmol、当量：１０）を混合物に加えた。２時間撹拌した。２０％Ｋ２ＣＯ３溶液で洗浄し、未反応出発物質を除去し、次に１N ＨＣｌで洗浄した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタンから結晶化して２−ブロモ−４−（２−シアノプロパン−２−イル）−６−フルオロベンズアミド（３．４ｇ、１１．９mmol、８１．２％収率）を得た。
【０１６１】
【化２２】
2016510051.tif 000028
ジオキサン−水（７：１；１６mL）中の２−ブロモ−４（シアノ−ジメチル−メチル）−６−フルオロ−ベンズアミド（２ｇ，７．０１８mmol）及び２−（（Ｅ）−２−エトキシ−ビニル）−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン（１．７８３mL、８．４２１mmol）の撹拌した溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．９４gm、１４．０４mmol）、続いてトリシクロヘキシルホスフィン（１５７mg、０．５６１mmol）を加えた。反応混合物を窒素でよく脱気した。この反応混合物にＰｄ（ｄｂａ）２（１６１mg、０．２８１mmol）を加え、もう一度窒素で脱気し、９０℃で１６時間加熱し、６N ＨＣｌ（６mL）を加え、４０℃に５時間加熱した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中５０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．３）。反応混合物からジオキサンを減圧下で除去し、得られた粗残留物をヘキサン中の１０％ＥｔＯＡｃで洗浄することによって精製して２−（８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル（１．２６ｇ、７７．９８％）を褐色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：２２９．２（Ｍ−Ｈ）．
【０１６２】
【化２３】
2016510051.tif 000029
ＤＭＡ（２８mL）中の２−（８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル（１．２６gm、５．４７８mmol）の撹拌した溶液に、２−ブロモ−６−フルオロ−ベンズアルデヒド（１．６６gm、８．２１７mmol）、炭酸カリウム（１．５１２gm、１０．９５７mmol）、続いて塩化テトラエチルアンモニウム（１１８mg、０．７１２mmol）を、アルゴン下で加えた。反応混合物を７８℃で２４時間加熱し（シリカＴＬＣ；ヘキサン中５０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５０）、水を加えＤＣＭ（２×９０mL）で抽出した。合わせた抽出物を濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィー（通常のシリカゲル１００−２００メッシュ；ヘキサン中２５％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用した）により精製して、２−［２−（３−ブロモ−２−ホルミル−フェニル）−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（８４０mg、３７．１１％）を明黄色の固体として得た。ＬＣ／ＭＣ：４１２．８（Ｍ＋）、４１４．８（Ｍ＋２）．
【０１６３】
【化２４】
2016510051.tif 000030
ジオキサン（５０mL）中の、６−クロロ−４−［５−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（１ｇ、３．０８mmol）（国際公開第２０１２０２０００８Ａ１号）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．０６ｇ、４．００mmol）及びＫＯＡｃ（乾燥）（９０７mg、９．２３mmol）の反応混合物をアルゴン下で脱気した。Ｘ−Ｐｈｏｓ（２２０mg、０．４６mmol）及びＰｄ（ＯＡｃ）２（６９mg、０．３１mmol）を加え、９８℃で１５分間撹拌した（ＬＣＭＳによってモニタリングした）。フラスコを加熱浴から引き上げ、冷却し、２−［２−（３−ブロモ−２−ホルミル−フェニル）−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（１．１４ｇ、２．７７mmol）及びＫ２ＣＯ３（１．７ｇ、１２．３１mmol）の脱気した懸濁液、ジオキサン（１５．６mL）、水（１５mL）、ｎ−ＢｕＯＨ（３．７mL）を含む第２のフラスコの中へアルゴン下でセライトの短いプラグを通して濾過した。反応混合物をもう一度アルゴンで脱気し、トリシクロヘキシルホスフィン（２５７mg、０．９２mmol）、Ｐｄ（ｄｂａ）２（２６４mg、０．４６mmol）を不活性雰囲気下で加え、反応混合物を１１０℃で１時間加熱した。反応系を室温に冷却し、セライトのプラグを通して濾過し、酢酸エチル（３×１００mL）で洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、得られた粗生成物を通常のシリカカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００−２００メッシュ、ＤＣＭ中２−２．５％ＭｅＯＨで溶離した）により精製して、２−［８−フルオロ−２−（２−ホルミル−３−｛５−［５−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−フェニル）−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（１．１ｇ、５７．３８％、４００mgの混合物）を褐色の粘着性固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６２２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１６４】
【化２５】
2016510051.tif 000031
ＤＣＭ（４６．７mL）及びＭｅＯＨ（３０．８mL）中の２−［８−フルオロ−２−（２−ホルミル−３−｛５−［５−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−フェニル）−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（２．４ｇ、３．８５mmol）の撹拌した溶液に、水（３．４mL）中の水素化ホウ素ナトリウム（２９２mg、７．７０mmol）の溶液を０℃で加えた。反応混合物を同じ温度で１５分間撹拌した（シリカＴＬＣ；ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．４）。反応を氷（１００ｇ）でクエンチし、有機部分をＤＣＭ（２００mL）で希釈し、分離し、乾燥させ濃縮した。得られた粗生成物を通常のシリカカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００−２００、ＤＣＭ中２％ＭｅＯＨで溶離した）により精製した。精製した物質をＤＣＭ及びエーテルで再結晶して２−［８−フルオロ−２−（３−｛５−［５−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−ｓｏキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリル（１．６ｇ、６６．４５％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６２５．３（Ｍ＋Ｈ）．
【０１６５】
【化２６】
2016510051.tif 000032
ＡＣＮ（８０mL）中の６−アミノ−ピリジン−３−オール（４gm、３６．３６４mmol）の撹拌した溶液に炭酸セシウム（４７．４１gm、１４５．４５mmol）を加え、室温で１時間撹拌し、２−ブロモ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（５．６６gm、３８．１８mmol）を加え１６時間撹拌した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．５）。反応系に水（２００mL）を加え、酢酸エチル（３×１００mL）で抽出した。合わせた抽出物を濃縮し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（通常のシリカゲル１００−２００メッシュ、ヘキサン中１８〜２２％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用した）により精製して２−（６−アミノ−ピリジン−３−イルオキシ）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（４．４ｇ、５３．９６％）を明黄色の固体として得た。ＬＣ／ＭＳ：２２４．８（Ｍ＋Ｈ）．
【０１６６】
【化２７】
2016510051.tif 000033
乾燥ジオキサン（８０mL）中の２−（６−アミノ−ピリジン−３−イルオキシ）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（２ｇ、８．９２９mmol）及び４−ブロモ−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（２．５８８gm、１１．６０７mmol）の撹拌した溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１０．１８８gm、３１．２５mmol）を加えた。反応混合物をアルゴンでよく脱気し、キサントホス（７７４mg、１．３３９mmol）及びＰｄ２（ｄｂａ）３（６５４mg、０．７１４mmol）をアルゴン雰囲気下で加え、９０℃で１８時間加熱した。反応混合物を冷やし、セライトのプラグを通して濾過し；ジオキサン（５０mL）で洗浄した。合わせた抽出物を濃縮し、粗生成物を得、これを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離剤としてヘキサン中の１８％ＥｔＯＡｃを使用して精製して、２−［６−（６−クロロ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ピリダジン−４−イルアミノ）−ピリジン−３−イルオキシ］−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（２．７gm、８２．４４％）を黄色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３６７．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１６７】
【化２８】
2016510051.tif 000034
乾燥ＴＨＦ（２５mL）中の２−［６−（６−クロロ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ピリダジン−４−イルアミノ）−ピリジン−３−イルオキシ］−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１ｇ、２．７３mmol）の撹拌した溶液に、ＬＡＨ［３．８mL、３．８mmol、ＴＨＦ中１（Ｍ）溶液］を−４０℃で（１５分かけてシリンジを介して）滴下した。反応混合物を同じ温度で１時間撹拌した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用；Ｒｆ＝０．２）。水（０．１mL）を加えることによりクエンチし、１０分間撹拌し、５％ＮａＯＨ溶液（０．２mL）を加え、１０分間撹拌し、もう一度水（０．２mL）を加え、１０分間撹拌し、清澄な有機部分を分離し、乾燥させ濃縮し、粗生成物を通常のシリカカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００−２００メッシュ、ヘキサン中４０−５０％酢酸エチルで溶離した）により精製して６−クロロ−４−［５−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（６５０mg、７３．４２％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３２５．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１６８】
【化２９】
2016510051.tif 000035
メタノール（１５０mL）中の４−メトキシベンズアルデヒド（２０ｇ、１４７．０５mmol）の撹拌した溶液に、アミノエタノール（３５．８８ｇ、５８８．２３mmol）、酢酸（４０．５８ｇ、６７６．４７mmol）を加え、室温で２０時間撹拌し、反応系にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（５．５４ｇ、８８．２３mmol）を加え、室温で３６時間撹拌した（シリカＴＬＣ；ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨを溶離剤として使用した；Ｒｆ＝０．２）。反応混合物に水（５００mL）中の飽和ＮａＨＣＯ３を加え、ＥｔＯＡｃ（３×３００mL）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、減圧下で濃縮して２−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−エタノール（６．０ｇ、２２．５１％）を赤色油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：１８２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１６９】
【化３０】
2016510051.tif 000036
ＤＣＭ（２０mL）中の２−（４−メトキシベンジルアミノエタノール（１．０ｇ、５．５２mmol）の撹拌した溶液に、４−ブロモ−２−フルオロ安息香酸（１．２１ｇ、５．５２）、ＤＩＰＥＡ（１．１８mL、７．１８mmol）及びＨＡＴＵ（２．１ｇ、５．５２mmol）を加え、室温で１６時間撹拌した（シリカＴＬＣ；移動相としてＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ；Ｒｆ＝０．５）。反応混合物を濃縮し；残留物に、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（５０mL）を加えＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。合わせた有機相を１％水性ＨＣｌ（３０mL）及び水（２０mL）で洗浄した。分離した有機部分を乾燥させ、濃縮して粗製の固まりを得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中４０％ＥｔＯＡｃで溶離した）により精製して４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシ−エチル）−Ｎ−（４−メトキシ−ベンジル）−ベンズアミド（０．５ｇ、２３．６８％）を黄色の液体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３８２．２（Ｍ＋）、３８４．２（Ｍ＋２）．
【０１７０】
【化３１】
2016510051.tif 000037
ＤＭＦ（１０mL）中の４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−（４−メトキシベンジル）−ベンズアミド（１．０ｇ、２．６１mmol）の撹拌した溶液に、ＮａＨ［（パラフィン油中６０％）；０．１２５ｇ、３．１４mmol］を室温で加え、アルゴン下で１６時間撹拌した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．５）。反応混合物に水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（３０mL）を加えＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（５０mL）、続いてブライン（３０mL）で洗浄し；乾燥させ濃縮して粗製の固まりを得、これをフラッシュクロマトグラフィー（通常のシリカゲル、ヘキサン中２５％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用した）により精製して、８−ブロモ−４−（４−メトキシ−ベンジル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オン（０．６ｇ、６３．２８％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３６２．２（Ｍ＋）、２６４．２（Ｍ＋２）．
【０１７１】
【化３２】
2016510051.tif 000038
密閉したチューブ中で、８−ブロモ−４−（４−メトキシ−ベンジル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オン（２ｇ、５．５２mmol）、ＢＩＮＡＰ（０．２０６ｇ、０．３３mmol）及びＣｓ２ＣＯ３（４．６７ｇ、１４．３６mmol）をジオキサン（３５mL）中に取った。反応混合物をアルゴンで５分間脱気し、イソブチルアルデヒド（２７）（１．０３ｇ、１４．３６mmol）及びＰｄ（ＯＡｃ）２（５０mg、０．２２mmol）をアルゴン雰囲気下で加えた。反応混合物を８０℃にゆっくりと加熱し、１６時間撹拌した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中４０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．４）。反応混合物に水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０mL）を室温で加え、ＥｔＯＡｃ（２×４０mL）で抽出し、合わせた抽出物を水（５０mL）で洗浄し、乾燥させ濃縮した。得られた粗生成物混合物を、フラッシュクロマトグラフィー（通常のシリカゲル、移動相としてヘキサン中２５％ＥｔＯＡｃを使用した）により精製して純粋な２−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−８−イル］−２−メチル−プロピオンアルデヒド（１．０ｇ、５１．２２％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３５４．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１７２】
【化３３】
2016510051.tif 000039
ＴＦＡ（６６．７７mL、８６６．８５mmol）中の２−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−８−イル］−２−メチル−プロピオンアルデヒド（１．５ｇ、４．２４mmol）の撹拌した溶液を密閉したチューブに取り、反応混合物を１００℃で１時間加熱した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．２）。揮発物を減圧下で除去し；残留物を水性飽和ＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃ（２×２００mL）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ濃縮して、粗残留物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（通常のシリカゲル、ヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用した）により精製して２−メチル−２−（５−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−８−イル）−プロピオンアルデヒド（０．７ｇ、７０．６％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：２３４．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０１７３】
【化３４】
2016510051.tif 000040
ジオキサン（１５mL）中の２−メチル−２−（５−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−８−イル）−プロピオンアルデヒド（０．５ｇ、２．１４mmol）及び２−ブロモ−６−クロロ−ベンズアルデヒド（３０）（１．１７５ｇ、５．３６mmol）の撹拌した溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．７４ｇ、５．３６mmol）を加えアルゴンで５分間脱気した。脱気した反応混合物に、キサントホス（０．１２４ｇ、０．２１５mmol）及びＰｄ（ｄｂａ）２（０．０６２ｇ、０．１０７mmol）をアルゴン下で加えた。反応系を密閉条件下で１０５℃に６時間加熱し、続いて室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００mL）で希釈し、水（１００mL）で洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗残留物をフラッシュクロマトグラフィー（通常のシリカゲル、ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、２−クロロ−６−［８−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル］−ベンズアルデヒド（０．４５ｇ、５６．４％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３７２．２（Ｍ＋）、３７４．２（Ｍ＋２）．
【０１７４】
【化３５】
2016510051.tif 000041
６−クロロ−４−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（０．７５ｇ、２．３８mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．２ｇ、４．７６mmol）、（Ｘ−ｐｈｏｓ）（０．１７ｇ、０．３５７mmol）及びＫＯＡｃ（０．７ｇ、７．１４mmol）の撹拌した溶液を乾燥ジオキサン（７５mL）中に取り、減圧下に置き、アルゴンで充填しなおした。これに酢酸パラジウム（０．０５３ｇ、０．２３８mmol）を加え、フラスコを排気し、アルゴンで充填しなおした。混合物を油浴中で１００℃に加熱し、３０分間撹拌した（ＬＣＭＳによってモニタリングした）。少量の脱Ｃｌ物質が観察された。加熱を８０℃まで下げた。フラスコを加熱浴から引き上げたが、撹拌を続け、以下の試薬：２−クロロ−６−［８−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル］−ベンズアルデヒド（０．８８３ｇ、２．３８mmol）、Ｋ２ＣＯ３（１．６４ｇ、１１．９０mmol）、水（５mL；別々に脱気した）、トリシクロヘキシルホスフィン（２００mg、０．７１mmol）及びＰｄ（ｄｂａ）２（２０５mg、０．３６mmol）を加えた。フラスコを撹拌し、８０℃で２時間加熱し、次に室温に冷却した。水（１００mL）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×１５０mL）で抽出し、合わせた抽出物をブライン（２００mL）で洗浄し、水性部分をＤＣＭ（２００mL）中５％ＭｅＯＨで再抽出した。有機抽出物の両方を合わせ、乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中７０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、２−［８−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル］−６−［５−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ベンズアルデヒド（０．５５ｇ、３７．５％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６１６．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１７５】
【化３６】
2016510051.tif 000042
メタノール（９０mL）及びジクロロメタン（１５０mL）中の２−［８−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル］−６−［５−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ベンズアルデヒド（２．５ｇ、４．０６５mmol）の撹拌した溶液を氷浴で冷やした。これに水素化ホウ素ナトリウム（０．９２ｇ、２４．３９mmol）を加えた。混合物を１０分間撹拌し（シリカＴＬＣ；ＥｔＯＡｃのみを溶離剤として使用した；Ｒｆ＝０．２）、水（６００mL）で希釈しジクロロメタン（２×６００mL）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６００mL）で洗浄し、乾燥させ減圧下で濃縮した。得られた残留物をヘキサン中８０％ＥｔＯＡｃで洗浄して、８−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−４−｛２−ヒドロキシメチル−３−［５−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−フェニル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オン（２ｇ、７９．３９％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６２０．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０１７６】
【化３７】
2016510051.tif 000043
ＤＣＭ（２２０mL）中の２−クロロ−ベンズアルデヒド（１０ｇ、７１．４２mmol）の撹拌した溶液に、Ｏ−メチル−ヒドロキシルアミン塩酸塩（３５）（７．１１ｇ、８５．７１mmol）及びピリジン（２３mL）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した（シリカＴＬＣ；ヘキサン中１５％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．６）。反応混合物を濃縮し、得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用して精製して［（２−クロロフェニル）メチリデン］（メトキシ）アミン（９ｇ、７４．３％）を無色の油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：１７０．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０１７７】
【化３８】
2016510051.tif 000044
密閉したチューブ中で［（２−クロロフェニル）メチリデン］（メトキシ）アミン（５ｇ、２９．５８mmol）をＤＣＥ（１００mL）中に取り、続いてＮ−ブロモスクシンイミド（５．２３ｇ、２９．５８mmol）、トリフルオロ酢酸銀（０．６５ｇ、２．９５mmol）、酢酸パラジウム（０．６６ｇ、２．９５mmol）及び酢酸（１．７７ｇ、２９．５８mmol）を加えた。得られた混合物を１２０℃に２４時間加熱した。室温で水（１５０mL）及びＤＣＭ（３００mL）を加え、混合物をセライトパッドで濾過した。有機層を分離し、水層をジクロロメタン（２００mL）で再抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮し、得られた粗製の固まりをフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサンのみを使用して精製して、［（２−ブロモ−６−クロロフェニル）メチリデン］（メトキシ）アミン（４．０ｇ、５４．４％）を黄色に着色した液体として得た。
【０１７８】
【化３９】
2016510051.tif 000045
密閉したチューブ中で［（２−ブロモ−６−クロロフェニル）メチリデン］（メトキシ）アミン（４．０ｇ、１６．１２mmol）をＴＨＦ−Ｈ２Ｏ（１０：１；１１０mL）中に取った。反応混合物に、ＰＴＳＡ（６．１２ｇ、３２．２５mmol）、続いてパラホルムアルデヒド（４．８３ｇ、１６１．２９mmol）を加え、１００℃に３０分間加熱した（シリカＴＬＣ；ヘキサンのみを溶離剤として使用した；Ｒｆ＝０．３）。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００mL）で希釈し、水（２００mL）で洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗残留物をフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサン中５％ＥｔＯＡｃを溶離剤として使用して精製して２−ブロモ−６−クロロ−ベンズアルデヒド（３．０ｇ、８４．７５％）を黄色の固体として得た。
【０１７９】
【化４０】
2016510051.tif 000046
アルゴン下の丸底フラスコに、５−ブロモ−ピリジン−２−イルアミン（１０ｇ、５７．８mmol）、メタンスルフィン酸ナトリウム（９．４ｇ、９２．４８mmol）、銅（Ｉ）トリフラート−ベンゼン錯体（１．７４ｇ、３．４６８mmol）、ラセミtrans−１，２−ジアミノシクロヘキサン（４０）（１．４１mL、１１．７４２mmol）及びＤＭＳＯ（５０mL）を入れた。反応混合物を１１０℃で１６時間加熱した。反応の完了後、混合物を氷冷した水に注ぎ、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で抽出した。合わせた有機層を飽和ブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ減圧下で濃縮した。粗製の固まりを、ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶離させる通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミン（４．０ｇ、４０．１８％）を褐色の固体として得た。
【０１８０】
【化４１】
2016510051.tif 000047
ＴＨＦ（４０mL）中の５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミン（１．９ｇ、１１．０４７mmol）の溶液にカリウムtert−ペントキシド（ＴＨＦ中２M溶液）（４．２mL、８．４mmol）を滴下した。混合物を室温で１０分間撹拌し、次に、氷浴中で冷却し、４−ブロモ−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（２．９６ｇ、１３．２５６mmol）をＴＨＦ（２０mL）中に溶解し、先の混合物に滴下した。混合物全体をもう一度室温に暖め、１．５時間撹拌した。反応の完了後、それを１M ＨＣｌでクエンチし、混合物をＤＣＭ中に取り、焼結式漏斗で濾過した。濾液を飽和ブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ減圧下で濃縮して粗製の６−クロロ−４−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（１．０ｇ、２８．７６％）をオフホワイトの固体として得、これを更なる精製をすることなく次の工程に直接使用した。
【０１８１】
【化４２】
2016510051.tif 000048
ＤＣＭ（１５０mL）中の（２−ブロモ−６−ニトロ−フェニル）−メタノール（１５．０ｇ、６４．６５mmol）の溶液に、tert−ブチルジメチルシリルクロリド（２９．２３３ｇ、１９３．９４mmol）及びＴＥＡ（１９．６mL、１９３．９４mmol）を順次加えた。得られた混合物を６０℃で４０時間撹拌した。反応をＴＬＣによりモニタリングした（酢酸エチル：ヘキサン＝１：９；Ｒｆ＝０．７）。溶媒を減圧下で除去した。反応混合物を酢酸エチル（１．５Ｌ）と水（１．０Ｌ）との間で分配した。有機層を乾燥させ、濾過し濃縮した。粗生成物を、ヘキサンからヘキサン中５％酢酸エチルで溶離するシリカゲル（通常の、１００−２００メッシュ）カラムクロマトグラフィーで精製して純粋な（２−ブロモ−６−ニトロ−ベンジルオキシ）−tert−ブチル−ジメチル−シラン（２１．０gm、９３．８１％）を明黄色の液体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３４６．４（Ｍ＋）、３４８．４（Ｍ＋２）．
【０１８２】
【化４３】
2016510051.tif 000049
エタノール−水（１：１；３４０mL）中の、（２−ブロモ−６−ニトロ−ベンジルオキシ）−tert−ブチル−ジメチル−シラン（７．０gm、２０．２９mmol）、鉄粉末（３．８３gm、６８．５８mmol）及び塩化アンモニウム（６．１２１gm、１１４．４４mmol）の混合物を９０℃で４時間加熱した（シリカＴＬＣ；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１９、Ｒｆ＝０．４）。反応混合物を焼結式漏斗中のセライトパッドで濾過し、酢酸エチル（２×２０mL）で洗浄した。合わせた濾液と洗浄液を濃縮し、酢酸エチル（１．５Ｌ）を粗生成物に加え水（７００mL）で洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し濃縮し、得られた粗生成物を、ヘキサン〜ヘキサン中２％酢酸エチルで溶離する中性アルミナカラムクロマトグラフィーによって精製して、純粋な３−ブロモ−２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−フェニルアミン（５．８gm、９０．３７％）を明橙色の液体として得た。
【０１８３】
【化４４】
2016510051.tif 000050
ジオキサン（６０．０mL）中の３−ブロモ−２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−フェニルアミン（１．０gm、３．１６４mmol）の溶液に、４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］（４．０１８gm、１５．８２１mmol）及びＫＯＡｃ（０．９３２gm、９．４９３mmol）を加えた。混合物をアルゴンで脱気し、この混合物にＰｄ（ＯＡｃ）２（７１mg、０．３１６mmol）及びＸ−Ｐｈｏｓ（２１１mg、０．４４３mmol）を加え、脱気をアルゴンを用いて更に５分間続け、次に、９０℃で３時間加熱した（シリカＴＬＣ；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１９、Ｒｆ＝０．４）。反応混合物をセライトパッドで濾過し、ジオキサン（２×５mL）で洗浄し濾液と合わせた。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を、ヘキサン〜ヘキサン中２％酢酸エチルで溶離する中性アルミナカラムクロマトグラフィーにより精製して純粋な２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミン（３５０mg、３０．４４％）を明橙色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３６４．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１８４】
【化４５】
2016510051.tif 000051
密閉したチューブ中でジオキサン（５２．０mL）中の２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミン（１．３ｇ、３．５８mmol）及び５−ブロモ−１−メチル−３−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−１Ｈ−ピリジン−２−オン（１．４０７ｇ、３．５８mmol）の撹拌した混合物に、１（Ｍ）Ｋ２ＣＯ３水溶液（１０．７mL）を加えアルゴンで脱気した。Ｓ−Ｐｈｏｓ（２２０mg、０．５４mmol）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０７mg、０．１８mmol）を加え、続いてもう一度アルゴンで脱気し；密閉し９０℃で２．５時間加熱した（シリカＴＬＣ；酢酸エチルのみ、Ｒｆ＝０．５）。反応混合物を室温に冷却し酢酸エチル（２５０mL）を加えた。有機部分を水（１２０mL）及びブライン（１２０mL）で洗浄し、乾燥させ濾過し、真空中で濃縮して粗製の固まりを得、これを通常のシリカゲル（通常の、１００−２００メッシュ）カラムクロマトグラフィーによりヘキサン中５０％酢酸エチルから純酢酸エチルへの勾配極性溶離液を使用して精製して、純粋な５−［３−アミノ−２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−フェニル］−１−メチル−３−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−１Ｈ−ピリジン−２−オン（１．３１ｇ、６６．６１％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：５５０．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０１８５】
【化４６】
2016510051.tif 000052
ＤＣＭ（７０．０mL）中の５−［３−アミノ−２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−フェニル］−１−メチル−３−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−１Ｈ−ピリジン−２−オン（７００mg、１．２７mmol）の溶液にトリエチルアミン（０．４４mL、３．１８mmol）を加え氷浴で０℃に冷却し、続いてホスゲン溶液［０．８mL、１．５３mmol（トルエン中２０％）］を添加し、０℃で１０分間撹拌し、続いて５−クロロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール（４８９mg、３．１８mmol）を加え、更に３０分間撹拌した（シリカＴＬＣ；酢酸エチル１００％、Ｒｆ＝０．４５）。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗生成物をシリカゲル（通常の、１００−２００メッシュ）カラムクロマトグラフィーによりヘキサン中５０％酢酸エチルから１００％酢酸エチルへの勾配溶離液を使用して精製して、５−クロロ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸（２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−フェニル）−アミド（９１０mg、９７．９９％）を褐色の粘着性固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：７２９．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０１８６】
【化４７】
2016510051.tif 000053
メタノール（４５．０mL）及びＤＣＭ（１８．０mL）中の５−クロロ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸（２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−フェニル）−アミド（９００mg、１．２３mmol）の溶液に１２（Ｎ）ＨＣｌ（０．９mL）を室温で加え、１０分間撹拌した（シリカＴＬＣ；メタノール：ＤＣＭ＝１：１９を溶離剤として使用した、Ｒｆ＝０．４）。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を泡立ちが止まるまで滴下した。反応物の固まりをＤＣＭ（６００mL）で希釈し、水（１００mL）、ブライン（１００mL）で洗浄し、乾燥させ真空中で濃縮して粘着性の粗製の固まりを得、これをＤＣＭ−ヘキサン混合物から再結晶により精製して純粋な５−クロロ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸（２−ヒドロキシメチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−フェニル）−アミド（６２０mg、８１．６９％）を灰色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６１５．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１８７】
【化４８】
2016510051.tif 000054
１０％Ｈ２ＳＯ４（８２mL）中のニコチンアミド（１０．０ｇ、８１．８８mmol）の撹拌した溶液に、２，２−ジメチル−プロピオン酸（４１．８ｇ、４０９．４mmol）及びＡｇＮＯ３（４．２ｇ、２４．５６４mmol）を加え、混合物を撹拌しながら７０℃で加熱した。Ｈ２Ｏ（１２２mL）中の（ＮＨ４）２Ｓ２Ｏ８（５６．１ｇ、２４５．６４mmol）の溶液を、ＣＯ２発生が止まるまで加えた。反応系をアルゴン雰囲気下で同じ温度で更に１時間撹拌した。ＴＬＣによりモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却し、水性ＮＨ３の添加によりｐＨ約９に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×２００mL）で抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製化合物をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラムクロマトグラフィーにより溶離溶媒としてＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して６−tert−ブチル−ニコチンアミド（９．６ｇ、６６％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣＭＳ：１７９．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１８８】
【化４９】
2016510051.tif 000055
１０％Ｈ２ＳＯ４（９０mL）中の６−tert−ブチル−ニコチンアミド（２ｇ、１１．２２１mmol）の撹拌した溶液に、３−フタリミドプロパン酸（９．８４ｇ、４４．８８３mmol）、ＡｇＮＯ３（１．９１ｇ、１１．２２１mmol）、（ＮＨ４）２Ｓ２Ｏ８（２０．５ｇ、８９．７６７mmol）及びセチルトリメチルアンモニウムブロミド（１．８ｇ、４．９３７mmol）をそれぞれ加え、混合物全体を９０℃で３０分間加熱した。この混合物を７０℃に冷却し、ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ（３：７）（１００mL）中の（ＮＨ４）２Ｓ２Ｏ８（２０．５ｇ、８９．７６７mmol）の溶液を加え、混合物をもう一度９０℃で３時間加熱した。混合物をもう一度７０℃に冷却し、ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ（３：７）（１００mL）中の（ＮＨ４）２Ｓ２Ｏ８（２０．５ｇ、８９．７６７mmol）の溶液を加え、９０℃に１６時間維持した。ＲＭをＳｉＯ２ＴＬＣによりモニタリングし、少量のＳＭがなお存在していたので、混合物をもう一度７０℃に冷却し、ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ（３：７）（１００mL）中の（ＮＨ４）２Ｓ２Ｏ８（２０．５ｇ、８９．７６７mmol）の溶液を加え、更に６時間９０℃に維持した。ある程度の量の出発物質が混合物中に存在し、これは長時間の加熱後でも消費されなかった。反応混合物を室温に冷却し、水性ＮＨ３の添加によりｐＨ約７に中和し、ＤＣＭ（２×３００mL）で抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ減圧下で濃縮して粗製の固まりを得、これを通常のシリカゲルカラムの小さなベッドに通して所望でない不純物を除去し、６−tert−ブチル−４−［２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−エチル］−ニコチンアミド（１．７ｇの粗製）を褐色の粘性油状物として他のいくつかの不純物と一緒に得た。この純粋でない物質を更なる精製をすることなく次の工程に直接使用した。ＬＣＭＳ：３５３．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１８９】
【化５０】
2016510051.tif 000056
ＣＨ３ＣＮ（４０mL）中の（２．５５ｇ粗生成物、７．２５６mmol）の撹拌した溶液に、ＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（０．６８mL、１４．５１３mmol）を加え混合物を３時間還流した。ＳｉＯ２ＴＬＣによってモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却し、焼結式漏斗で濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して６−tert−ブチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−［２，７］ナフチリジン−１−オン（１６５mg、２ステップで４．５％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣＭＳ：２０５．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９０】
【化５１】
2016510051.tif 000057
６−tert−ブチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−［２，７］ナフチリジン−１−オン（０．４６ｇ、２．２５２mmol）、２，６−ジブロモ−ベンズアルデヒド（２．９７ｇ、１１．２６mmol）、キサントホス（６５．２mg、０．１１３mmol）及びＣｓ２ＣＯ３（１．０３ｇ、３．１５３mmol）を１，４−ジオキサン（４．５mL）に取り、１０分間混合物にアルゴンガスを通してバブリングした。Ｐｄ（ｄｂａ）２（３８．８mg、０．０６８mmol）をそれに加え、１００℃で４時間撹拌した。（ＴＬＣによりモニタリングして）反応の完了後、得られた混合物を室温に冷却し、これをＥｔＯＡｃと水との間で分配した。有機層を集め、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーでＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−ベンズアルデヒド（４１６．０mg、４７．７％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣＭＳ：３８７．０（Ｍ）及び３８９．０（Ｍ＋２）．
【０１９１】
【化５２】
2016510051.tif 000058
乾燥１，４−ジオキサン（２２mL）中の、５−クロロ−１−メチル−３−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−１Ｈ−ピリジン−２−オン（５０６mg、１．２９mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４２４．７mg、１．６７mmol）、Ｘ−ｐｈｏｓ（９２mg、０．１９３mmol）及びＫＯＡｃ（３７９mg、３．８６mmol）の溶液を減圧下に置き、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ＯＡｃ）２（３１．７mg、０．１４２mmol）をそれに加え、フラスコを排気し、５分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを０．５時間還流し、次に室温に冷却した。固体をセライトベッドで濾別し、濾液を次反応のために直接使用した。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−ｎ−ブタノール（１：１：０．４）（１３．６mL）中の、２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−ベンズアルデヒド（０．５ｇ、１．２９mmol）、Ｋ２ＣＯ３（８８８mg、６．４４mmol）及びＣｙ３Ｐ（１０８mg、０．３９mmol）の混合物を脱気し、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ｄｂａ）２（１１１mg、０．１９３mmol）、続いて先の反応の粗溶液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を１１０℃で１時間加熱した。ＴＬＣ及びＬＣ−ＭＳによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃを使用して粗生成物を得て２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−６−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−ベンズアルデヒド（４８８mg、２ステップで６１％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣＭＳ：６２１．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９２】
【化５３】
2016510051.tif 000059
メタノール−ＤＣＭ（２：３）（１５．２mL）中の２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−６−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−ベンズアルデヒド（１１３０mg、１．８２mmol）の溶液を０℃に冷却し、水（３．８mL）中のＮａＢＨ４（３４４ｇ、９．１１mmol）の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を５分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム（３４４ｇ、９．１１mmol）を分割して加え、１０分間撹拌した。ＬＣＭＳによってモニタリングして反応の完了後、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュシリカゲルでＤＣＭ中の塩基性溶液（６０：１０：１のＤＣＭ−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ）を使用して、６−tert−ブチル−２−（２−ヒドロキシメチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−［２，７］ナフチリジン−１−オンを得、これをジエチルエーテル及びｎ−ペンタンで洗浄することによって更に精製し、オフホワイトの固体として６−tert−ブチル−２−（２−ヒドロキシメチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル｝−フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−［２，７］ナフチリジン−１−オン（２１５mg、１８．９６％）を得た。ＬＣＭＳ：６２３．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９３】
【化５４】
2016510051.tif 000060
乾燥１，４−ジオキサン（１２．５mL）中の、６−クロロ−２−メチル−４−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（２８０mg、０．８０１mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２６４．３mg、１．０４１mmol）、Ｘ−ｐｈｏｓ（５７．２mg、０．１２mmol）及びＫＯＡｃ（２３５．７mg、２．４０２mmol）の溶液を減圧下に置き、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１９．７mg、０．０８８mmol）をそれに加え、フラスコを排気し５分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを１６分間還流し、次に室温に冷却した。固体をセライトベッドで濾別し、濾液を次反応のために直接使用した。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−ｎ−ブタノール（１：１：０．２５）（８．１mL）中の、２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−ベンズアルデヒド（５６）（３０５．０mg、０．７８８mmol）、Ｋ２ＣＯ３（５４３．４mg、３．９３８mmol）及びＣｙ３Ｐ（６６．３mg、０．２３６mmol）の混合物を脱気し１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ｄｂａ）２（６７．９mg、０．１１８mmol）、続いて先の反応の粗溶液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を１１０℃で１時間加熱した。ＴＬＣ及びＬＣ−ＭＳによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗製の固まりを得、これを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてＥｔＯＡｃを使用して精製して２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−６−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−ベンズアルデヒド（２９１．０mg、２ステップで５９．４４％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：６２２．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９４】
【化５５】
2016510051.tif 000061
メタノール−ＤＣＭ（２：３）（２２．２mL）中の２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−［２，７］ナフチリジン−２−イル）−６−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−ベンズアルデヒド（７００mg、１．１３mmol）の溶液を０℃に冷却し、水（４mL）中のＮａＢＨ４（２１３mg、５．６３mmol）の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を５分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム（２１３mg、５．６３mmol）を分割して加え、もう一度その温度で１０分間撹拌した。ＬＣＭＳによってモニタリングして反応の完了後、水を加えＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュシリカゲルでＤＣＭ中の４−６％マジック溶液（比率６０：１０：１のＤＣＭ−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ）を使用して精製して６−tert−ブチル−２−（２−ヒドロキシメチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−［２，７］ナフチリジン−１−オンを得、これをジエチルエーテル及びｎ−ペンタンで洗浄することによって更に精製してオフホワイトの固体（３２２mg、４６．００％）を得た。ＬＣＭＳ：６２４．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９５】
【化５６】
2016510051.tif 000062
ＤＭＳＯ（１０mL）中の、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（５８）（１ｇ、４．５４５mmol）、１，３−ジブロモ−２−メチル−ベンゼン（２．２７ｇ、９．０９１mmol）、ＣｕＩ（０．２６ｇ、１．３６４mmol）及びＫ２ＣＯ３（０．６３ｇ、４．５４５mmol）の懸濁液を脱気し、続いて密閉したチューブ中で１５分間アルゴンで充填しなおし、混合物を１４０℃で１８時間加熱した。ＬＣ−ＭＳによってモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ−Ｈ２Ｏで希釈した。有機層を飽和ブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルで溶離溶媒としてＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して２−（３−ブロモ−２−メチル−フェニル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（４．６５ｇ、４３％）を明黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：３８９．０（Ｍ＋）、３９１．２（Ｍ＋２）．
【０１９６】
【化５７】
2016510051.tif 000063
２−（３−ブロモ−２−メチル−フェニル）−６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１．５５ｇ、３．９８５mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．０２ｇ、７．９６９mmol）、Ｘ−ｐｈｏｓ（０．２３ｇ、０．３９８mmol）及びＫＯＡｃ（０．９ｇ、９．１６５mmol）の混合物を、密閉したチューブ中でジオキサン（１２mL）に取り、脱気し、続いて１５分間アルゴンで充填しなおした。それにＰｄ（ＯＡｃ）２（５４mg、０．２３９mmol）を加え、８０℃で６時間加熱した。反応はＬＣ−ＭＳ及びＴＬＣによれば完了していなかったので、試薬全量の半分をもう一度加え、同じ温度で１６時間加熱し続けた。ＴＬＣ及びＬＣ−ＭＳによりモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却しセライトのベッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗製の固まりをＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用する通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーの小さなベッドを通して、半純粋な６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（０．８ｇ、約４６．０１％）を得、これを更なる精製をすることなく次反応に直接使用した。ＬＣＭＳ：４３７．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９７】
【化５８】
2016510051.tif 000064
１０％水性ジオキサン（６９mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−［２−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン（２．４ｇ、５．５１mmol）及び６−クロロ−２−メチル−４−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（１．５４ｇ、４．４mmol）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（６．７５ｇ、２０．８mmol）を加え、この混合物をマイクロ波条件下に１２０℃で３時間加熱した。反応の完了後、混合物をセライトのベッドで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物をＤＣＭ中の１０％マジック溶液（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ、比率６０：１０：１）を使用するフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（２−メチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−フェニル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン（１．５ｇ、４３．７％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：６２４．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０１９８】
【化５９】
2016510051.tif 000065
水（２０mL）中の水酸化ナトリウム（３．４６ｇ、８６．６６７mmol）の撹拌した溶液に３−tert−ブチルフェノール（１０ｇ、６６．６６７mmol）を加え、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。それに２−（２−ブロモ−エチル）−［１，３］ジオキサン（１４．３ｇ、７３．３３mmol）を加え、得られた混合物を４１時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、次にＥｔＯＡｃ（１５０mL）を加え、撹拌しながら酢酸を加えてｐＨ約４にし、続いて水（１００mL）及びＥｔＯＡｃ（１５０mL）で希釈した。分配後に層を分離し、有機層を水（３×１００mL）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して２−［２−（３−tert−ブチル−フェノキシ）−エチル］−［１，３］ジオキサン（１６ｇの粗生成物、約９０．７９％）を得、これを更なる精製をすることなく次の工程に直接使用した。ＧＣ−ＭＳ：２６４．０（Ｍ＋）．
【０１９９】
【化６０】
2016510051.tif 000066
濃ＨＣｌ（８０mL）を氷浴で冷やし、それにＴＨＦ（４０mL）を加えた。ＴＨＦ（４０mL）中の２−［２−（３−tert−ブチル−フェノキシ）−エチル］−［１，３］ジオキサン（１０ｇ粗製、３７．８７９mmol）を撹拌しながらその温度でゆっくりと加えた。添加の完了後、氷浴を取り除き、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。出発物質全部が消費された後、エーテル（１００mL）を混合物に加え、層を分離した。合わせた有機層を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮して、粗製の７−tert−ブチル−クロマン−４−オール（７．０ｇ、粗製）を明黄色の油状物として得、これを更なる精製をすることなく次の工程に移した。
【０２００】
【化６１】
2016510051.tif 000067
７−tert−ブチル−クロマン−４−オール（７ｇ粗製、３３．９８１mmol）をＤＣＭ（３００mL）に取り、撹拌しながらＰＣＣ（１４．６５ｇ、６７．９６１mmol）を分割して加えた。添加完了後、反応混合物を室温で３時間撹拌した。（ＬＣＭＳによってモニタリングして）反応の完了後、ヘキサンを反応混合物に加え、セライトベッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗製の固まりを、通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して７−tert−ブチル−クロマン−４−オン（３．８ｇ、２ステップで４９．１８％）を明褐色の固体として得た。ＬＣＭＳ：２０５．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０１】
【化６２】
2016510051.tif 000068
７−tert−ブチル−クロマン−４−オン（５．０ｇ、２４．５１mmol）及びメタンスルホン酸（７．５mL）をＤＣＭ（１２mL）に取り、０℃に冷却した。固体ナトリウムアジド（３．２ｇ、４９．０２mmol）をこの混合物に加え、得られた混合物をその温度で３時間撹拌した。反応混合物をＮａＯＨの２０％水溶液に０℃で注ぎ、もう一度１０分間撹拌した。水性部分全体をＣＨ２Ｃｌ２（３×５０mL）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーでＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して８−tert−ブチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オン（５．０ｇ、９３．０３％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣＭＳ：２２０．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０２】
【化６３】
2016510051.tif 000069
８−tert−ブチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オン（０．９２ｇ、４．２０１mmol）、２，６−ジブロモ−ベンズアルデヒド（４．９９ｇ、１８．９０４mmol）、キサントホス（１０９．４mg、０．１８９mmol）及びＣｓ２ＣＯ３（１．９１ｇ、５．８８１mmol）を１，４−ジオキサン（１５mL）に取り、アルゴンガスを混合物に通して１０分間バブリングした。Ｐｄ（ｄｂａ）２（７２．５mg、０．１２６mmol）をそれに加え、１００℃で３時間撹拌した。ＴＬＣによりモニタリングして反応の完了後、得られた混合物を室温に冷却し、これをＥｔＯＡｃと水との間で分配した。有機層を回収し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーでＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して精製して２−ブロモ−６−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−ベンズアルデヒド（１．１ｇ、６５．０９％）を明褐色の固体として得た。ＬＣＭＳ：４０２．０（Ｍ−Ｈ）及び４０４．０（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０３】
【化６４】
2016510051.tif 000070
乾燥１，４−ジオキサン（３０mL）中の、６−クロロ−２−メチル−４−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（０．８６ｇ、２．４６４mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１００１．４mg、３．９４３mmol）、Ｘ−ｐｈｏｓ（１７６．２mg、０．３７mmol）及びＫＯＡｃ（７２５．６mg、７．３９３mmol）の溶液を減圧下に置き、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ＯＡｃ）２（５５．３mg、０．２４６mmol）をそれに加え、フラスコを排気し、５分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを１００℃で３０分間加熱し、次に室温に冷却した。固体をセライトベッドで濾別し、濾液を次の反応に直接使用した（Ｍ＋Ｈ：３１６．２）。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−ｎ−ブタノール（１：１：０．４）（２４mL）中の、２−ブロモ−６−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−ベンズアルデヒド（１ｇ、２．４８１mmol）、Ｋ２ＣＯ３（１．０３ｇ、７．４４４mmol）及びＣｙ３Ｐ（０．２１ｇ、０．７４４mmol）の混合物を脱気し、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ｄｂａ）２（０．２１ｇ、０．３７２mmol）、続いて先の反応の粗製の濾液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を１１０℃で１．５時間加熱した。ＴＬＣ及びＬＣ−ＭＳによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗製の固まりを得、これを溶離溶媒としてＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃを使用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラムクロマトグラフィーにより精製して、２−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−６−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−ベンズアルデヒド（１．０ｇ、２ステップで６３．３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：６３７．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０４】
【化６５】
2016510051.tif 000071
メタノール−ＤＣＭ（２：３）（６９mL）中の２−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−６−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−ベンズアルデヒド（４．６ｇ、３．１４５mmol）の溶液を０℃に冷却し、水（６．９mL）中のＮａＢＨ４（１．３８ｇ、１５．７２３mmol）の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を１０分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム（２．７ｇ、３１．４４７mmol）を分割して加え、もう一度その温度で１時間撹拌した。（ＬＣＭＳによってモニタリングして）反応の完了後、水を加えＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりをＤＣＭ中１０−３０％マジック溶液（比率６０：１０：１のＤＣＭ−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ）を使用するフラッシュシリカゲルで精製して８−tert−ブチル−４−（２−ヒドロキシメチル−３−｛１−メチル−５−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イルアミノ］−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル｝−フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オンを得、これをジエチルエーテル及びｎ−ペンタンで洗浄することによって更に精製してオフホワイトの固体（２．１２ｇ、４５．８７％）を得た。ＬＣＭＳ：６３９．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０５】
【化６６】
2016510051.tif 000072
乾燥１，４−ジオキサン（７０mL）中の、６−クロロ−４−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（０．７８ｇ、２．４８４mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１００９．５mg、３．９７５mmol）、Ｘ−ｐｈｏｓ（１７７．６mg、０．３７３mmol）及びＫＯＡｃ（７３１．４mg、７．４５２mmol）の溶液を減圧下に置き、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ＯＡｃ）２（５５．８mg、０．２４８mmol）をそれに加え、フラスコを排気し、５分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを１００℃で１時間加熱し、次に室温に冷却した。この溶液を次の反応に直接使用した（Ｍ＋Ｈ：３２３．６）。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−ｎ−ブタノール（１：１：０．２５）（２７mL）中の、２−ブロモ−６−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−ベンズアルデヒド（１ｇ、２．４８１mmol）、Ｋ２ＣＯ３（１．７１ｇ、１２．４０７mmol）及びＣｙ３Ｐ（０．２１ｇ、０．７４４mmol）の混合物を脱気し、１５分間アルゴンで充填しなおした。Ｐｄ（ｄｂａ）２（０．２１ｇ、０．３７２mmol）、続いて先の反応の粗製の溶液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を１１０℃で１．５時間加熱した。ＴＬＣ及びＬＣ−ＭＳによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗製の固まりを得、これを溶離溶媒としてＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃを使用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラムクロマトグラフィーにより精製して、２−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−６−［５−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ベンズアルデヒド（５１０mg、２ステップで３４．１６％）を明黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：６０２．２（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０６】
【化６７】
2016510051.tif 000073
メタノール−ＤＣＭ（２：３）（３０mL）中の２−（８−tert−ブチル−５−オキソ−２，３−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−４−イル）−６−［５−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ベンズアルデヒド（１ｇ、１．５７２mmol）の溶液を０℃に冷却し、水（３mL）中のＮａＢＨ４（０．３ｇ、７．８６２mmol）の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を１０分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム（０．５９ｇ、１５．７２３mmol）を分割して加え、もう一度その温度で１時間撹拌した。ＬＣＭＳによってモニタリングして反応の完了後、水を加えＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりをＤＣＭ中の１０−３０％マジック溶液（比率６０：１０：１のＤＣＭ−ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ）を使用するフラッシュシリカゲルで精製して８−tert−ブチル−４−｛２−ヒドロキシメチル−３−［５−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−フェニル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オンを得、これをジエチルエーテル及びｎ−ペンタンで洗浄することによって更に精製してオフホワイトの固体（５４０mg、５６．８９％）を得た。ＬＣＭＳ：６０４．４（Ｍ＋Ｈ）．
【０２０７】
生物学的実施例
ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害アッセイ
このアッセイは、濾過を通した放射性３３Ｐリン酸化生成物の捕捉である。ＢＴＫ、ビオチン化ＳＨ２ペプチド基質（Ｓｒｃ相同）、及びＡＴＰの相互作用により、ペプチド基質がリン酸化される。ビオチン化生成物を、ストレプトアビジンセファロースビーズに結合させる。全ての結合している放射標識された生成物をシンチレーションカウンターで検出する。
【０２０８】
アッセイするプレートは、９６ウェルポリプロピレン（Greiner）及び９６ウェル１．２μm親水性ＰＶＤＦフィルタープレート（Millipore）である。本明細書に報告する濃度は、最終アッセイ濃度である：ＤＭＳＯ（Burdick and Jackson）中１０〜１００μM 化合物、５〜１０nM ＢＴＫ酵素（Ｈｉｓタグ付き、完全長）、３０μM ペプチド基質（ビオチン−Ａｃａ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ−ＮＨ２）、１００μM ＡＴＰ（Sigma）、８mMイミダゾール（Sigma、pH７．２）、８mM グリセロール−２−リン酸（Sigma）、２００μM ＥＧＴＡ（Roche Diagnostics）、１mM ＭｎＣｌ２（Sigma）、２０mM ＭｇＣｌ２（Sigma）、０．１mg/mL ＢＳＡ（Sigma）、２mM ＤＴＴ（Sigma)、1μCi ３３Ｐ  ＡＴＰ（Amersham）、２０％ストレプトアビジンセファロースビーズ（Amersham）、５０mM ＥＤＴＡ（Gibco）、２M ＮａＣｌ（Gibco）、１％リン酸を含む２M ＮａＣｌ（Gibco）、microscint−２０（Perkin Elmer）。
【０２０９】
ＩＣ５０の決定は、標準的な９６ウェルプレートアッセイテンプレートから得られるデータを利用して、１化合物当たり１０個のデータ点から計算する。１つの対照化合物及び７つの未知阻害剤を各プレートにおいて試験し、そして、各プレートで２回測定した。典型的には、化合物は、１００μMで始まり３nMで終わる半対数（half-log）で希釈を行った。対照化合物は、スタウロスポリンであった。バックグラウンドは、ペプチド基質の非存在下で計数した。総活性は、ペプチド基質の存在下で決定した。以下のプロトコールを用いて、ＢＴＫ阻害を決定した。
【０２１０】
１）  サンプルの調製：試験化合物を、アッセイバッファ（イミダゾール、グリセロール−２−リン酸、ＥＧＴＡ、ＭｎＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＢＳＡ）中、半対数増分で希釈した。
【０２１１】
２）  ビーズの調製：
ａ．）  ５００ｇで遠心分離することによってビーズをすすぐ。
ｂ．）  該ビーズをＰＢＳ及びＥＤＴＡで再構成して２０％ビーズスラリーを生成する。
【０２１２】
３）  ３０℃で１５分間、基質を含まない反応ミックス（アッセイバッファ、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ  ＡＴＰ）及び基質を含むミックス（アッセイバッファ、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ  ＡＴＰ、ペプチド基質）をプレインキュベートする。
【０２１３】
４）  アッセイを開始するために、酵素バッファ（イミダゾール、グリセロール−２−リン酸、ＢＳＡ）中ＢＴＫ １０μL及び試験化合物 １０μLを室温で１０分間プレインキュベートする。
【０２１４】
５）  基質を含まないか又は含む反応混合物３０μLをＢＴＫ及び化合物に添加する。
【０２１５】
６）  全アッセイミックス５０μLを３０℃で３０分間インキュベートする。
【０２１６】
７）  アッセイの４０μLをフィルタープレート中のビーズスラリー１５０μLに移して、反応を停止させる。
【０２１７】
８）  ３０分間後、以下の工程を用いてフィルタープレートを洗浄する
ａ．  ３×ＮａＣｌ ２５０μL
ｂ．  ３×１％リン酸を含有するＮａＣｌ ２５０μL
ｃ．  １×Ｈ２Ｏ ２５０μL
【０２１８】
９）  ６５℃で１時間又は室温で一晩プレートを乾燥させる。
【０２１９】
１０）  microscint−２０ ５０μLを添加し、そして、シンチレーションカウンターで３３Ｐ cpmを計数する。
cpmの生データから％活性を計算する。
％活性＝（サンプル−ｂｋｇ）／（総活性−ｂｋｇ）×１００
１サイト用量応答シグモイドモデルを用いて、％活性からＩＣ５０を計算する。
ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）Ｄ））））
ｘ＝化合物の濃度、ｙ＝％活性、Ａ＝最小、Ｂ＝最大、Ｃ＝ＩＣ５０、Ｄ＝１（ヒル勾配）
【０２２０】
ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害のＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイ
このＢＴＫ競合アッセイは、ＦＲＥＴ（フェルスター／蛍光共鳴エネルギー転移）技術を用いて、ブルトン型チロシンキナーゼの不活性化状態についての化合物の力価（ＩＣ５０）を測定する。５０nM BTK-Bioease（商標）：１０nM Ｅｕ−ストレプトアビジン（Perkin-Elmer  カタログ番号ＡＤ００６２）の開始濃度で用いる１時間前に、ＢＴＫ−Ｅｕ複合体を氷上でインキュベートした。アッセイバッファは、２０mM ＨＥＰＥＳ（pH ７．１５）、０．１mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ２、３％キナーゼ安定化剤（Fremont Biosolutions、カタログ番号ＳＴＢ−Ｋ０２）を含む０．５mg/mL ＢＳＡからなっていた。１時間後、上記で得られた反応混合物をアッセイバッファ中１０倍希釈して、５nM ＢＴＫ：１nM Ｅｕ−ストレプトアビジン複合体（ドナーフルオロフォア）を作製した。次いで、０．１１nM ＢＴＫ−Ｅｕ及び０．１１nM キナーゼトレーサー１７８（Invitrogen、カタログ番号ＰＶ５５９３）の混合物 １８μLを、ネガティブコントロールなしとしてのＢＴＫ−Ｅｕのみと共に、３８４ウェル平底プレート（Greiner、７８４０７６）に分注した。アッセイにおいて試験する化合物は、１０倍濃縮物として調製し、そして、１０点曲線を作成するために半対数増分の連続希釈をＤＭＳＯ中で行った。ＦＲＥＴ反応を開始させるために、ＤＭＳＯ中の１０倍ストックとして調製した化合物をプレートに添加し、該プレートを１４℃で１８〜２４時間インキュベートした。
【０２２１】
インキュベートした後、プレートをBMG Pherastar蛍光プレートリーダー（又は等価物）で読み取り、そして、ユウロピウムドナーフルオロフォア（６２０nm発光）及びＦＲＥＴ（６６５nm発光）からの発光エネルギーを測定するために用いた。ネガティブコントロールのウェルの値を平均して平均最小値を得た。「阻害剤を含まない」ポジティブコントロールのウェルを平均して、平均最大値を得た。最大ＦＲＥＴの％を以下の等式を用いて計算した：
％最大ＦＲＥＴ＝１００×［（ＦＳＲ化合物−ＦＳＲ平均最小値）／（ＦＳＲ平均最大値−ＦＳＲ平均最小値）］
（式中、ＦＳＲ＝ＦＲＥＴシグナル比）。％最大ＦＲＥＴ曲線をActivity Base（Excel）にプロットし、そして、ＩＣ５０（％）、ヒル勾配、ｚ’及び％ＣＶを決定した。Microsoft Excelを用いて二連曲線（２つの独立な希釈液から得た１本の阻害曲線）から平均ＩＣ５０及び標準偏差を得る。
【０２２２】
このアッセイについての代表的な化合物のデータを以下の表ＩＩに列挙する。
【０２２３】
【表２】
2016510051.tif 000074
【０２２４】
ＣＤ６９の発現によって測定した全血におけるＢ細胞活性化の阻害
ヒト血液におけるＢ細胞のＢ細胞受容体媒介活性化を抑制するＢＴＫ阻害剤の能力を試験するための手順は、以下のとおりである：
【０２２５】
２４時間薬物を服用していない非喫煙者という制限条件で、健常ボランティアからヒト全血（ＨＷＢ）を得る。ヘパリンナトリウムで抗凝固処理したVacutainerチューブに静脈穿刺によって血液を採取する。試験化合物を、ＰＢＳ（２０×）で所望の出発薬物濃度に１０倍希釈し、次いで、ＰＢＳ中１０％ＤＭＳＯ中３倍連続希釈して、９点用量応答曲線を作成する。各化合物の希釈液５．５μLを９６ウェルＶ底プレート（Analytical Sales and Services、＃５９６２３−２３）２mLに二連で添加し；ＰＢＳ中１０％ＤＭＳＯ ５．５μLを対照及び非刺激ウェルに添加する。ＨＷＢ（１００μL）を各ウェルに添加し、そして、混合した後、プレートを３７Ｃ、５％ＣＯ２、湿度１００％で３０分間インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Southern Biotech、＃２０２２−１４）（５００μg/mL溶液 １０μL、最終濃度５０μg/mL）を混合しながら各ウェル（非刺激ウェルを除く）に添加し、そして、プレートを更に２０時間インキュベートする。
【０２２６】
２０時間のインキュベートの最後に、３７Ｃ、５％ＣＯ２、湿度１００％で３０分間、蛍光プローブ標識した抗体（ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０ １５μL、BD Pharmingen、＃５５５６２３及び／又はＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９ ２０μL、BD Pharmingen、＃５５５５３３）と共にサンプルをインキュベートする。補償調整及び初期電圧設定のために、誘導された対照、未染色、及び単回染色を含める。次いで、１×Pharmingen Lyse Buffer（BD Pharmingen  ＃５５５８９９）１mLでサンプルを溶解させ、そして、プレートを１８００rpmで５分間遠心分離する。吸引を介して上清を除去し、そして、残りのペレットを別の１×Pharmingen Lyse Buffer １mLで再度溶解させ、そして、プレートを上記のとおりスピンダウンする。上清を吸引し、そして、残りのペレットをＦＡＣｓバッファ（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）で洗浄する。最後のスピンの後、上清を除去し、そして、ペレットをＦＡＣｓバッファ １８０μLに再懸濁させる。BD LSR IIフローサイトメーターにおけるHTS９６ウェルシステムで測定するのに適した９６ウェルプレートにサンプルを移す。
【０２２７】
用いるフルオロフォアに適切な励起及び発光波長を用いて、データを取得し、そして、Cell Questソフトウェアを用いて陽性細胞率の値を得る。結果は、まず、FACS解析ソフトウェア（Flow Jo）によって解析する。試験化合物についてのＩＣ５０は、抗ＩｇＭによる刺激後にＣＤ２０陽性でもあるＣＤ６９陽性細胞の割合が５０％低下する濃度として定義される（非刺激バックグラウンドについての８つのウェルの平均を減じた後の８つの対照ウェルの平均）。ＩＣ５０値を、XLfitソフトウェア、バージョン３、式２０１を用いて計算する。
【０２２８】
Ｂ細胞活性化の阻害−Ramos細胞におけるＢ細胞ＦＬＩＰＲアッセイ
本発明の化合物によるＢ細胞活性化の阻害は、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞の応答に対する試験化合物の効果を決定することによって示される。
【０２２９】
Ｂ細胞ＦＬＩＰＲアッセイは、抗ＩｇＭ抗体による刺激から細胞内のカルシウム増加の潜在的阻害剤の効果を決定する、細胞に基づく機能的方法である。Ramos細胞（ヒトバーキットリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）を増殖培地（下記）で培養した。アッセイの１日前、Ramos細胞を新鮮増殖培地（上記と同じ）に再懸濁させ、そして、組織培養フラスコ内において０．５×１０６/mLの濃度に設定した。アッセイ当日、細胞を計数し、そして、組織培養フラスコ内においてFLUO-3AM（TefLabsカタログ番号０１１６、無水ＤＭＳＯ及び１０％プルロニック酸中で調製）１μMを補充した増殖培地中１×１０６/mLの濃度に設定し、そして、３７℃（４％ＣＯ２）で１時間インキュベートする。細胞外色素を除去するため、遠心分離（５分間、１０００rpm）によって細胞を回収し、１×１０６細胞/mLでＦＬＩＰＲバッファ（下記）に再懸濁させ、次いで、１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンでコーティングされた黒色／透明プレート（ＢＤカタログ番号３５６６９２）に分注する。試験化合物を、１００μMから０．０３μMまでの範囲の様々な濃度（７濃度、詳細は後述）で添加し、そして、室温で３０分間細胞と共にインキュベートさせる。１０μg/mL 抗ＩｇＭ（Southern Biotech、カタログ番号２０２０−０１）を添加することによってRamos細胞のＣａ２＋シグナル伝達を刺激し、そして、ＦＬＩＰＲ（Molecular Devices、４８０nM励起のアルゴンレーザーを備えるＣＣＤカメラを用いて９６ウェルプレートの画像を捕捉）で測定する。
【０２３０】
培地／バッファ：
増殖培地：Ｌ−グルタミン（Invitrogen、カタログ番号６１８７０−０１０）、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ、Summit Biotechnology、カタログ番号ＦＰ−１００−０５）；１mM ピルビン酸ナトリウム（Invitrogen、カタログ番号１１３６０−０７０）を含むＲＰＭＩ１６４０培地。
【０２３１】
ＦＬＩＰＲバッファ：ＨＢＳＳ（Invitrogen、カタログ番号１４１１７５−０７９）、２mM ＣａＣｌ２（Sigma、カタログ番号Ｃ−４９０１）、ＨＥＰＥＳ（Invitrogen、カタログ番号１５６３０−０８０）、２．５mM プロベネシド（Sigma、カタログ番号Ｐ−８７６１）、０．１％ＢＳＡ（Sigma、カタログ番号Ａ−７９０６）、１１mM グルコース（Sigma、カタログ番号Ｇ−７５２８）。
【０２３２】
化合物の希釈の詳細：
１００μMの最大最終アッセイ濃度を達成するために、１０mM 化合物ストック溶液（ＤＭＳＯ中に作製）２４μLをＦＬＩＰＲバッファ ５７６μLに直接添加する。（Biomek 2000ロボットピペッターを用いて）ＦＬＩＰＲバッファ中に試験化合物を希釈し、以下の希釈スキームを得る：ビヒクル、１．００×１０−４M、１．００×１０−５、３．１６×１０−６、１．００×１０−６、３．１６×１０−７、１．００×１０−７、３．１６×１０−８。
【０２３３】
アッセイ及び分析：
カルシウムの細胞内増加を、最大−最小統計値（Molecular DevicesのＦＬＩＰＲコントロール及び統計学的エクスポートソフトウェアを用いて刺激性抗体の添加によって引き起こされるピークから静止ベースラインを減じる）を用いて報告した。非線形曲線フィット（GraphPad Prismソフトウェア）を用いてＩＣ５０を決定した。
【０２３４】
マウスコラーゲン誘発関節炎（ｍＣＩＡ）
０日目に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中ＩＩ型コラーゲンのエマルションをマウスの尾の付け根又は背中の数ヶ所に注射する（i.d.）。コラーゲン免疫後、動物は、約２１〜３５日目に関節炎を発症する。関節炎の発症は、２１日目に不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；i.d.）中コラーゲンを全身投与することによって同期（追加免疫）される。追加免疫に対するシグナルである軽度の関節炎（スコア１又は２；以下のスコアの詳細を参照）の任意の発症について、２０日目後から毎日動物を検査する。追加免疫後、マウスをスコアリングし、所定の期間（典型的には、２〜３週間）及び投与頻度（１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で投与する。
【０２３５】
ラットコラーゲン誘発関節炎（ｒＣＩＡ）
０日目に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中ウシＩＩ型コラーゲンのエマルションをラットの背中の数ヶ所に皮内（i.d.）注射する。約７日目、尾の付け根又は背中の別の部位にコラーゲンエマルションの追加免疫注射（i.d.）を行う。関節炎は、一般的に、最初のコラーゲン注射の１２〜１４日後に観察される。１４日目以降、下記（関節炎の評価）のとおり関節炎の発症について動物を評価し得る。２回目のチャレンジ時点から始めて、所定の期間（典型的には、２〜３週間）及び投与頻度（１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で、動物に候補治療剤を予防的に投与する。
【０２３６】
関節炎の評価：
両モデルにおいて、下記基準に従って４本の足を評価することを含む採点システムを用いて、足及び肢関節の発症している炎症を定量する。
【０２３７】
採点：  １＝足又は１本の指の腫脹及び／又は発赤
２＝２つ以上の関節における腫脹
３＝２つ超の関節を含む、足の肉眼的腫脹
４＝足及び指全体の重篤な関節炎
【０２３８】
ベースライン測定については０日目に評価を行い、最初の徴候又は腫脹から再度始めて、実験の最後まで１週間に最大３回行う。個々の足の４つのスコアを足すことによって各マウスについての関節炎指数を得、動物１匹当たり最大１６のスコアを与える。
【０２３９】
ラットインビボ喘息モデル
雄性Brown-Norwayラットを、ミョウバン ０．２mL中ＯＡ（オボアルブミン） １００μgで３週間にわたって週１回（０、７、及び１４日目）i.p.感作する。２１日目（最後の感作の１週間後）に、ＯＡエアゾールでチャレンジ（１％ＯＡで４５分間）する０．５時間前に、ラットにビヒクル又は化合物処方物のいずれかを皮下q.d.投与し、そして、チャレンジの４又は２４時間後に終了する。供死時に、それぞれ血清検査及びＰＫのために全ての動物から血清及び血漿を回収する。気管カニューレを挿入し、そして、肺をＰＢＳで３回洗浄する。ＢＡＬ液を全白血球数及び白血球百分率について分析する。細胞のアリコート（２０〜１００μL）中の全白血球数は、Coulter Counterにより決定する。白血球百分率については、サンプル ５０〜２００μLをCytospinで遠心分離し、そして、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を用いて光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球及びリンパ球の割合を計数し、そして、百分率として表す。ＢＴＫの代表的な阻害剤は、対照レベルと比較して、ＯＡ感作及びチャレンジしたラットのＢＡＬにおいて全白血球数の減少を示す。
【０２４０】
前述の発明は、明確性及び理解のために、説明及び実施例によって、幾分詳細に説明されている。添付の特許請求の範囲の範囲内で変更及び改変を行い得ることが当業者には明らかである。したがって、上記説明は、例示を意図するものであって、限定を意図するものではないことが理解される。したがって、本発明の範囲は、上記説明を参照して決定されるべきではなく、特許請求の範囲が権利を与える等価物の全範囲と共に、以下の添付の特許請求の範囲を参照して決定されるべきである。
【０２４１】
本願で引用される全ての特許、特許出願及び刊行物は、各個々の特許、特許出願又は刊行物が個々に表されているのと同程度に、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に援用される。
【国際調査報告】
2016510051.tif 000076
2016510051.tif 000077
2016510051.tif 000078
2016510051.tif 000079