(57)【要約】  本発明は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合し、高親和性の選択的な中和特性を有するとして特徴づけられる抗体を提供する。抗体は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、狼瘡およびメタボリックシンドロームからなる群から選択される、自己免疫性病態または炎症性病態の治療または予防において有用である。抗体は癌の治療においても有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖および重鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲがアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲがアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣＤＲ２が配列番号５であり、ＬＣＤＲ３が配列番号６であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３である、抗体。
【請求項２】
前記軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、該ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号８であり、該ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
２つの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および２つの重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、各々のＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号８であり、各々のＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号７である、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
前記軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０であり、前記重鎖のアミノ酸配列が配列番号９である、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項５】
２つの軽鎖および２つの重鎖を含み、各々の軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０であり、各々の重鎖のアミノ酸配列が配列番号９である、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
アミノ酸配列の配列番号１０を有する軽鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子。
【請求項７】
アミノ酸配列の配列番号９を有する重鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）が配列番号１１によってコードされ、前記軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）が配列番号１２によってコードされる、請求項８に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記重鎖が配列番号１３によってコードされ、前記軽鎖が配列番号１４によってコードされる、請求項８または９に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記ポリヌクレオチドが発現制御配列へ作動可能に連結される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項１１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１３】
請求項６に記載のＤＮＡ分子および請求項７に記載のＤＮＡ分子を含む組換え宿主細胞であって、その細胞が重鎖および軽鎖を含む抗体を発現でき、該重鎖がアミノ酸配列番号９を含み、該軽鎖がアミノ酸配列の配列番号１０を含む、組換え宿主細胞。
【請求項１４】
請求項８〜１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドにより形質転換された組換え宿主細胞であって、その細胞が重鎖および軽鎖を含む抗体を発現でき、該重鎖のアミノ酸配列が配列番号９であり、該軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０である、組換え宿主細胞。
【請求項１５】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞およびＣＯＳ細胞からなる群から選択される哺乳動物宿主細胞である、請求項１３または請求項１４に記載の組換え宿主細胞。
【請求項１６】
重鎖および軽鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体を産生するプロセスであって、該重鎖はアミノ酸配列の配列番号９を含み、該軽鎖はアミノ酸配列の配列番号１０を含み、
ａ）前記抗体が発現されるような条件下で請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を培養する工程と、
ｂ）前記宿主細胞から発現された抗体を回収する工程と
を含む、プロセス。
【請求項１７】
重鎖および軽鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体を産生するプロセスであって、該重鎖のアミノ酸配列が配列番号９であり、該軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０であり、
ａ）配列番号９によって与えられるポリペプチド配列をコードする第１のポリヌクレオチド配列および配列番号１０によって与えられたポリペプチド配列をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む組換え宿主細胞を、該ポリペプチド配列が発現されるような条件下で、培養する工程と、
ｂ）重鎖および軽鎖を含み、該重鎖のポリペプチド配列が配列番号９によって与えられ、該軽鎖のポリペプチド配列が配列番号１０によって与えられる抗体を前記宿主細胞から回収する工程と
を含む、プロセス。
【請求項１８】
請求項１６または請求項１７に記載のプロセスによって産生される抗体。
【請求項１９】
請求項１〜５および請求項１８のいずれか一項に記載の抗体ならびに１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１〜５および請求項１８のいずれか一項に記載の抗体の効果的な量をそれを必要とする患者へ投与することを含む患者における自己免疫性病態または炎症性病態を治療または予防する方法であって、該病態が、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、狼瘡およびメタボリックシンドロームからなる群から選択される、方法。
【請求項２１】
請求項１〜５および請求項１８のいずれか一項に記載の抗体の効果的な量をそれを必要とする患者へ投与することを含む、患者における癌を治療または予防する方法。
【請求項２２】
前記癌が、メラノーマ、結腸癌、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌、乳癌または胃癌である、請求項２１に記載の患者における癌を治療する方法。
【請求項２３】
治療法における使用のための請求項１〜５および請求項１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
前記病態が、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、狼瘡およびメタボリックシンドロームからなる群から選択される、自己免疫性病態または炎症性病態の治療における使用のための請求項１〜５および請求項１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
癌の治療における使用のための請求項１〜５および請求項１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
前記癌が、メラノーマ、結腸癌、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌、乳癌または胃癌である、請求項２５に記載の使用のための抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトインターロイキン−２３（ＩＬ−２３）を結合する抗体およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−２３（ＩＬ−２３）は、ｐ１９サブユニットおよびｐ４０サブユニットから構成されるジスルフィド結合されたヘテロダイマー性サイトカインである。ＩＬ−２３はサイトカインのインターロイキン１２（ＩＬ−１２）ファミリーの一部である。ＩＬ−１２は、共有結合で連結されたｐ４０サブユニットおよびｐ３５サブユニットからなる７０ｋＤａのヘテロダイマー性サイトカインである。ＩＬ−１２は、保護的な先天性免疫応答および適応的免疫応答の発達ならびに腫瘍監視において重要な役割を果たす。ＩＬ−１２は、Ｔヘルパータイプ１（Ｔｈ１）反応を促進する能力を介して炎症反応にも関与する。しかしながら、炎症反応におけるＩＬ−１２の機能的役割は関連するサイトカイン（ＩＬ−２３）の発見により再評価された。ＩＬ−２３はＩＬ−１２と同じｐ４０サブユニットから構成されるが、ｐ１９サブユニットと共有結合でペアになる。ＩＬ−１２の役割の査定に使用される多くの試薬は共有のＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対して向けられており、今までにＩＬ−１２へ割り当てられた活性がＩＬ−２３経由で媒介されていたかもしれないことを意味する。ＩＬ−２３欠損マウスの開発によってＩＬ−１２とＩＬ−２３の活性を区別することができ、自己免疫性応答／炎症性応答の必須の媒介因子としてＩＬ−２３が同定された。
【０００３】
機能的なＩＬ−２３受容体は、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニット（それはＩＬ−１２受容体と共有される）およびＩＬ−２３Ｒサブユニットのヘテロダイマーである。ＩＬ−２３についての受容体はＪａｎｕｓキナーゼ２（Ｊａｋ２）と構成的に会合し、ＳＴＡＴ３を優先的に活性化し、ＳＴＡＴ４活性化はＩＬ−１２よりも少ない。
【０００４】
ＩＬ−２３受容体は活性化Ｔ細胞／メモリーＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現する。単球、マクロファージおよび樹状細胞も低いレベルでＩＬ−２３受容体を発現する。ＩＬ−２３は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞がＴｈ１７細胞（それは古典的なＴｈ１およびＴｈ２細胞とは異なる）と呼ばれる新規の細胞のサブセットへと分化し維持することを支援する。Ｔｈ１７細胞はインターロイキン１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ）およびインターロイキン−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ）を産生する。Ｔｈ１７細胞は、広範囲にわたる炎症反応を推進することが公知である他の因子（炎症反応を推進することが公知である腫瘍壊死因子が含まれる）を産生し、それらには腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＸＣＬ１およびＣＣＬ２０が含まれる。ＮＫ細胞および先天性リンパ系組織（リンパ系組織誘導（ＬＴｉ）様細胞等）は、ＩＬ−２３受容体およびレチノイン酸関連オーファン受容体（ＲＯＲ）γを発現し、ＩＬ−２３に応答してＩＬ−１７を産生する。ＩＬ−１βおよびＩＬ−２３はγδＴ細胞も共刺激してＴ細胞レセプターとの係合なしにＩＬ−１７産生を誘導する。
【０００５】
ＩＬ−２３応答性細胞が自己免疫性炎症性疾患および癌と関連するという実質的証拠がある。特に、ＩＬ−２３特異的阻害剤（すなわちＩＬ−１２ではなくＩＬ−２３を阻害する阻害剤）は、ＩＬ−１２に影響せずにＩＬ−２３を阻害するものとして特に有用であり、宿主防御の抑制のリスクを最小限にする一方で治療法上の利益を最大化するという仮説がある。
【０００６】
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ特異的に結合する抗体は可能性のある有用な阻害剤であり、例えば特許文献１および特許文献２を参照されたい。特許文献１中で開示される抗体に関する問題は、少なくとも組織交差反応性についての可能性（特に網膜組織に結合する可能性）であり、それは安全性についての懸念である。さらに、特許文献１中で開示される抗体は少なくとも、最適ではない物理化学的特性（例えば凝集をもたらす極度に高い疎水性）を有し、それは工業規模での抗体の産生への重要な障害を提示する。加えて、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットを標的化する抗体は、治療法上の使用のために承認されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００７／０２４８４６号
【特許文献２】国際公開第２００７／０２７７１４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、ＩＬ−２３抗体についての必要性が依然として存在する。特に、ＩＬ−２３（特にヒトＩＬ−２３）のｐ１９サブユニットへ高親和性で結合し、関連するサイトカインファミリーメンバー（ＩＬ−１２）のｐ４０サブユニットへ結合しない、ＩＬ−２３抗体についての必要性が依然として存在する。より特に、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ高親和性で結合し、組織交差反応性（特に網膜組織交差反応性）を観察可能に示さない、ＩＬ−２３抗体についての必要性が依然として存在する。開発、製造または製剤を促進する、医薬的に許容可能な物理化学的特性を保持する、ＩＬ−２３抗体についての必要性がさらにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、軽鎖および重鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲがアミノ酸配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲがアミノ酸配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４であり、ＬＣＤＲ２が配列番号５であり、ＬＣＤＲ３が配列番号６であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１であり、ＨＣＤＲ２が配列番号２であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３である、抗体を提供する。
【００１０】
本発明の一実施形態において、抗体は軽鎖および重鎖を含み、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号８であり、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号７である。
【００１１】
本発明のさらなる実施形態において、抗体は２つの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および２つの重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、各々のＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号８であり、各々のＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号７である。
【００１２】
本発明のなおさらなる実施形態において、抗体は軽鎖および重鎖を含み、軽鎖のアミノ酸配列は配列番号１０であり、重鎖のアミノ酸配列は配列番号９である。
【００１３】
本発明のなおさらなる実施形態において、抗体は２つの軽鎖および２つの重鎖を含み、各々の軽鎖のアミノ酸配列は配列番号１０であり、各々の重鎖のアミノ酸配列は配列番号９である。
【００１４】
本発明は、軽鎖および重鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲが相補性決定領域ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１がアミノ酸配列の配列番号４からなり、ＬＣＤＲ２がアミノ酸配列の配列番号５からなり、ＬＣＤＲ３がアミノ酸配列の配列番号６からなり、ＨＣＤＲ１がアミノ酸配列の配列番号１からなり、ＨＣＤＲ２がアミノ酸配列の配列番号２からなり、ＨＣＤＲ３がアミノ酸配の列配列番号３からなる、抗体を提供する。
【００１５】
本発明は、軽鎖および重鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、軽鎖が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲ鎖がアミノ酸配列の配列番号８を含み、ＨＣＶＲ鎖がアミノ酸配列の配列番号７を含む、抗体も提供する。
【００１６】
本発明は、軽鎖および重鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、軽鎖がアミノ酸配列の配列番号１０を含み、重鎖がアミノ酸配列の配列番号９を含む、抗体も提供する。
【００１７】
本発明は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、各々の軽鎖がアミノ酸配列の配列番号１０を含み、各々の重鎖がアミノ酸配列の配列番号９を含む、抗体も提供する。
【００１８】
本発明の抗体のアミノ酸配列を以下に提供する。
【表１】
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【００１９】
本発明は、配列番号１５のアミノ酸位置８１〜９９および１１５〜１４０内の立体配座的エピトープでヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体も提供する。
【００２０】
本発明は、配列番号１５のアミノ酸位置８１〜９９および１１５〜１４０内の立体配座的エピトープでヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体であって、抗体が配列番号１５の少なくともアミノ酸残基９４Ｐ、９５Ｓ、９７Ｌ、９８Ｐ、９９Ｄ、１２３Ｗ、１３０Ｓ、１３３Ｐおよび１３７Ｗに接触する、抗体も提供する。
【００２１】
本発明のなおさらなる実施形態において、本抗体はヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに対して選択的である。
【００２２】
本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合した場合に、ＩＬ−２３受容体のＩＬ−２３サブユニットへのヒトＩＬ−２３の結合を妨害する。したがって、本発明の抗体は、ＩＬ−２３受容体のヒトＩＬ−２３サブユニットでヒトＩＬ−２３の活性を阻害する。
【００２３】
本発明の抗体は、ＩＬ−２３受容体のＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットへのヒトＩＬ−２３の結合を妨害せず、したがってＩＬ−２３受容体のＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットでヒトＩＬ−２３の活性を阻害しない。
【００２４】
本抗体は、ヒトＩＬ−２３およびヒトＩＬ−１２によって共有されるｐ４０サブユニットへ検出可能に結合しない。
【００２５】
本発明のなおさらなる実施形態において、抗体はヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへの中和活性を有する。
【００２６】
本発明のなおさらなる実施形態において、本発明の抗体は約９０ｐＭ以下のＩＣ５０を有する。好ましくは、本発明の抗体は約７４ｐＭ以下のＩＣ５０を有する。ＩＣ５０値は、実施例１中の表題「マウス脾細胞における抗体ＩによるヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３のインビトロの中和」のセクション中で記載される通りに、インビトロのマウス脾細胞アッセイにおいて測定される。
【００２７】
本発明のなおさらなる実施形態において、本発明の抗体は選択的であり、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへの中和活性を有する。
【００２８】
本発明のなおさらなる実施形態において、本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２３について約１０ｐＭ〜約３０ｐＭの解離平衡定数（ＫＤ）を有する。好ましくは、本発明の抗体はヒトＩＬ−２３について約２１ｐＭのＫＤを有する。ＫＤ値は、実施例１中の表題「抗体Ｉについての表面プラズモン共鳴による親和結合測定（ＢＩＡｃｏｒｅ）」のセクション中で記載される通りに、３７℃での結合動態によって確定される。本発明の抗体は、約２．２×１０６Ｍ−１秒−１〜約２．６×１０６Ｍ−１秒−１のヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへのｋｏｎ速度でさらに特徴づけられる。好ましくは、本発明の抗体は約２．４３×１０６Ｍ−１秒−１のヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへのｋｏｎ速度を有する。本発明の抗体は、約０．３０×１０−４秒−１〜約０．７０×１０−４秒−１のヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへのｋｏｆｆ速度でなおさらに特徴づけられる。好ましくは、本発明の抗体は約０．５２×１０−４秒−１のヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへのｋｏｆｆ速度を有する。
【００２９】
本発明の抗体はヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ高親和性で結合する。本開示の目的のために、「高親和性」という用語は少なくとも約２１ｐＭのＫＤを指す。ＫＤ値は、実施例１中の表題「抗体Ｉについての表面プラズモン共鳴による親和結合測定（ＢＩＡｃｏｒｅ）」のセクション中で記載される通りに、３７℃での結合動態によって確定される。
【００３０】
ヒトＩＬ−２３へ結合する特定の先行技術抗体とは異なり、本発明の抗体は組織交差反応性を観察可能に示さない。特に、本発明の抗体は網膜組織へ観察可能に結合しない。
【００３１】
本発明の抗体は医薬的に許容可能な物理化学的特性を保持し、それには生理的条件および実験室条件において医薬的に許容可能な可溶性、ならびに医薬的に許容可能な化学的安定性および物理的安定性が含まれ、その場合、抗体はモノマー形状でとどまり、非常に少ない高分子量（ＨＭＷ）凝集が、実施例１中の表題「ＩＬ−２３抗体の物理化学的特性」のセクション中で記載されるような範囲の条件下で観察される。
【００３２】
本発明は、本発明の抗体および１つもしくは複数の医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物をさらに提供する。より特に、本発明の医薬組成物は１つまたは複数の追加の治療用薬剤をさらに含む。
【００３３】
本発明は、本発明の抗体の効果的な量をそれを必要とする患者へ投与することを含む患者における病態を治療または予防する方法であって、病態が、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、狼瘡およびメタボリックシンドロームからなる群から選択される自己免疫性病態または炎症性病態である、方法も提供する。
【００３４】
本発明は、本発明の抗体の効果的な量をそれを必要とする患者へ投与することを含む患者における病態を治療または予防する方法であって、病態が癌である、方法も提供する。
【００３５】
本発明の一実施形態において、癌は、メラノーマ、結腸癌、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌、乳癌または胃癌である。
【００３６】
本発明は、治療法における使用のための本発明の抗体も提供する。
【００３７】
より特に、本発明は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、狼瘡およびメタボリックシンドロームからなる群から選択される、自己免疫性病態または炎症性病態の治療または予防における使用のための本発明の抗体を提供する。
【００３８】
本発明は、癌の治療または予防における使用のための本発明の抗体も提供する。
【００３９】
本発明の一実施形態において、癌は、メラノーマ、結腸癌、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌、乳癌または胃癌である。
【００４０】
本発明は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、狼瘡およびメタボリックシンドロームからなる群から選択される病態の治療または予防のための医薬品の製造における本発明の抗体の使用を提供する。
【００４１】
本発明は、癌の治療または予防のための医薬品の製造における本発明の抗体の使用も提供する。
【００４２】
本発明の一実施形態において、癌は、メラノーマ、結腸癌、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌、乳癌または胃癌である。
【００４３】
本発明は、本発明の上述の抗体をコードするポリヌクレオチドにも関する。
【００４４】
本発明は、アミノ酸配列の配列番号１０を有する軽鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００４５】
本発明は、アミノ酸配列の配列番号９を有する重鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子も提供する。
【００４６】
一実施形態において、本発明は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドであって、ＨＣＶＲが配列番号１１によってコードされ、ＬＣＶＲが配列番号１２によってコードされる、ポリヌクレオチドを提供する。
【００４７】
さらなる実施形態において、本発明は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドであって、重鎖が配列番号１３によってコードされ、軽鎖が配列番号１４によってコードされる、ポリヌクレオチドを提供する。
【００４８】
本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形状またはＤＮＡの形状（そのＤＮＡにはｃＤＮＡおよび合成ＤＮＡが含まれる）であり得る。ＤＮＡは二本鎖または一本鎖であり得る。本発明の抗体をコードするコード配列は、遺伝コードの冗長または縮重の結果として変動し得る。
【００４９】
本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドは、以下の、抗体についてのコード配列のみ、抗体についてのコード配列および追加のコード配列（リーダー配列もしくは分泌配列または前駆タンパク質配列等）；抗体についてのコード配列および非コード配列（イントロンまたはタンパク質についてのコード配列の５’および／もしくは３’の非コード配列等）を含み得る。したがって、「抗体をコードするポリヌクレオチド」という用語は、タンパク質についてのコード配列を含み得るポリヌクレオチドだけでなく、追加のコーディング配列および／または非コード配列を含むポリヌクレオチドも包含する。
【００５０】
本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列へ作動可能に連結された後に、宿主細胞中で発現されるだろう。発現ベクターは、典型的には、エピソームとしてまたは宿主染色体ＤＮＡの組込み部分として宿主生物中で複製可能である。一般的には、発現ベクターは選択マーカー（例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、ジヒドロ葉酸還元酵素）を含有して、所望されるＤＮＡ配列により形質転換された細胞の検出を可能にするだろう。
【００５１】
本発明は、アミノ酸配列の配列番号１０を有する軽鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子およびアミノ酸配列の配列番号９を有する重鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む組換え宿主細胞であって、その細胞が重鎖および軽鎖を含む抗体を発現でき、重鎖のアミノ酸配列が配列番号９であり、軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０である、細胞を提供する。
【００５２】
本発明の抗体は、哺乳動物細胞（ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＯＳ細胞等）中で；細菌細胞（Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓまたはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ等）中で；または菌類細胞もしくは酵母細胞中で容易に産生することができる。宿主細胞は当技術分野において周知の技法を使用して培養される。
【００５３】
対象となるポリヌクレオチド配列（例えば抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含有するベクターは、周知の方法によって宿主細胞の中へ移行させることができ、それは細胞の宿主のタイプに依存して変動する。例えば、塩化カルシウム形質転換は、原核生物細胞のために一般的には利用されるが、リン酸カルシウム処理または電気穿孔を他の細胞の宿主のために使用することができる。
【００５４】
タンパク質精製の様々な方法を用いることができ、かかる方法は当技術分野において公知であり、例えばＤｅｕｔｓｃｈｅｒおよびＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８２：８３−８９（１９９０）およびＳｃｏｐｅｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）中で記載される。
【００５５】
本発明は、重鎖および軽鎖を含む、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体を産生するプロセスであって、重鎖がアミノ酸配列の配列番号９を含み、軽鎖がアミノ酸配列の配列番号１０を含み、
ａ）請求項７に記載の組換え宿主細胞を前記抗体が発現されるような条件下で培養する工程と、
ｂ）前記宿主細胞から発現された抗体を回収する工程と
を含む、プロセスを提供する。
【００５６】
さらに、本発明は、重鎖および軽鎖を有する、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する抗体を産生するプロセスであって、重鎖のアミノ酸配列が配列番号９であり、軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０であり、
ａ）配列番号９によって与えられるポリペプチド配列をコードする第１のポリヌクレオチド配列および配列番号１０によって与えられたポリペプチド配列をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む組換え宿主細胞を、該ポリペプチド配列が発現されるような条件下で、培養する工程と、
ｂ）重鎖および軽鎖を含み、該重鎖のポリペプチド配列が配列番号９によって与えられ、該軽鎖のポリペプチド配列が配列番号１０によって与えられる抗体を該宿主細胞から回収する工程と
を含む、プロセスを提供する。
【００５７】
上述のプロセスの一実施形態において、配列番号９によって与えられるポリペプチド配列をコードする第１のポリヌクレオチド配列および配列番号１０によって与えられるポリペプチド配列をコードする第２のポリヌクレオチド配列は、同じ核酸分子の一部である。
【００５８】
一実施形態において、本発明は前述のプロセスによって産生された抗体を提供する。
【００５９】
さらなる実施形態において、前述のプロセスによって産生された抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖を有し、各々の重鎖のポリペプチド配列は配列番号９によって与えられ、各々の軽鎖のポリペプチド配列は配列番号１０によって与えられる。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
本発明の抗体はＩｇＧタイプ抗体であり、鎖内および鎖間のジスルフィド結合経由で架橋される４つのアミノ酸鎖（２つの「重」鎖および２つの「軽」鎖）を有する。特定の生物学的システムにおいて発現された場合、生来のヒトＦｃ配列を有する抗体はＦｃ領域中で糖鎖付加される。抗体は他の位置で同様に糖鎖付加され得る。
【００６１】
各々の重鎖はＮ末端のＨＣＶＲおよび重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）からなる。ヒト重鎖はγ、μ、α、δまたはεとして分類され、抗体のアイソタイプはそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥとして定義される。ヒトＩｇＧ抗体はサブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）へとさらに分けることができる。
【００６２】
好ましくは、本発明の抗体はＦｃ部分を含有し、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体媒介性炎症性機序への関与または補体の活性化の能力が減少しエフェクター機能の減少を生じるので、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域に由来する。
【００６３】
より好ましくは、本発明の抗体はＩｇＧ４−ＰＡＡ  Ｆｃ部分を含有する。ＩｇＧ４−ＰＡＡ  Ｆｃ部分は、位置２２３でセリンからプロリンへの変異（Ｓ２２３Ｐ；配列番号９）、位置２２９でフェニルアラニンからアラニンへの変異（Ｆ２２９Ａ；配列番号９）、および位置２３０でロイシンからアラニンへの変異（Ｌ２３０Ａ；配列番号９）を有する。Ｓ２２３Ｐ変異は、半抗体形成（ＩｇＧ４抗体における半分子の動的交換の現象）を妨害するヒンジ変異である。Ｆ２２９ＡおよびＬ２３０Ａの変異は、既に低いヒトＩｇＧ４アイソタイプのエフェクター機能をさらに減少させる。
【００６４】
各々の重鎖タイプは、当技術分野において周知の配列を備えた特定の定常領域も特徴とする。重鎖定常領域はＩｇＧについて３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）からなる。
【００６５】
軽鎖はκまたはλとして分類され、当技術分野において公知のように、各々は特定の定常領域を特徴とする。各々の軽鎖はＬＣＶＲおよび軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。好ましくは、本発明の抗体はκ軽鎖を含む。
【００６６】
各々の軽鎖／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの領域は、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と称されるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と称される超可変性の領域へと細分することができる。各々のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、以下の順序、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端までアレンジされる３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。本明細書において、重鎖の３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３」と称され、軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する大部分の残基を含有する。配列の概要説明のために使用される抗体についてのＣＤＲ割り当ての３つのシステムが現在ある。ＫａｂａｔのＣＤＲ定義（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））は、抗体配列可変性に基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１−９１７（１９８７）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７−９４８（１９９７））は、抗体の三次元構造およびＣＤＲループのトポロジーに基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義は、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２を例外としてＫａｂａｔのＣＤＲ定義に同一である。ＮｏｒｔｈのＣＤＲ定義（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．、「Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８−２５６（２０１１））は、多数の結晶構造による親和性伝播クラスタリングに基づく。
【００６７】
本発明の目的のために、３つの方法のコンセンサスを使用してＣＤＲを定義する。軽鎖ＣＤＲの事例において、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義が使用される。ＨＣＤＲ１の事例において、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義のハイブリッドが使用される。ＨＣＤＲ１のＫａｂａｔの定義は重鎖の第１のシステインの８残基後に開始し、５残基の長さであり、一方ＨＣＤＲ１のＣｈｏｔｈｉａの定義は重鎖のこのシステインの３残基後に開始し、７残基の長さである。本発明の抗体のＨＣＤＲ１はＣｈｏｔｈｉａの出発位置およびＫａｂａｔの終結位置によって定義される。ＨＣＤＲ２の事例において、ＫａｂａのＣＤＲ定義が使用される。ＨＣＤＲ３の事例において、Ｎｏｒｔｈ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義のハイブリッドが使用される。ＨＣＤＲ３のＫａｂａｔの定義は重鎖の残基９５〜１０２（本発明の抗体についての配列番号１３）を含み、典型的にはシステインの３残基後に開始する。ＨＣＤＲ３のＣｈｏｔｈｉａの定義はＫａｂａｔの定義と同じである。ＨＣＤＲ３のＮｏｒｔｈの定義は重鎖の残基９３〜１０２（本発明の抗体についての配列番号１３）を含み、典型的にはシステイン残基の直後に開始する。本発明の抗体のＨＣＤＲ３は、Ｎｏｒｔｈの出発位置およびＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｎｏｒｔｈの終結位置によって定義される。
【００６８】
表１は、本発明の抗体の例示的なＣＤＲ割り当てを示す。
【表２】
2016510744.tif 000003
【００６９】
本発明の抗体は、ヒトゲノム配列に由来するフレームワークおよび定常領域と同一かまたは実質的に同一である（実質的にヒト）、ヒト起源のフレームワーク、ヒンジ領域および定常領域を有するようにデザインした操作された抗体である。完全なヒトのフレームワーク、ヒンジ領域および定常領域は、それらのヒト生殖系列配列に加えて、天然に存在する体細胞変異を備えた配列および操作された変異を備えた配列である。本発明の抗体は、１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失または追加をその中に含有する完全なヒトのフレームワーク、ヒンジ、または定常領域に由来するフレームワーク、ヒンジ、または定常領域を含み得る。さらに、本発明の抗体は好ましくはヒトにおいて実質的に非免疫原性ある。
【００７０】
多様な異なるヒトフレームワーク配列は、本発明の抗体のための基礎として単独でまたは組み合わせで使用することができる。好ましくは、本発明の抗体のフレームワーク領域は、ヒト起源または実質的にヒト（少なくとも９５％、９７％または９９％がヒト起源）である。ヒト起源のフレームワーク領域の配列は、Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ、Ｍａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  Ｌａｆｒａｎｃ著、Ｇｅｒａｒｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１、ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から得ることができる。
【００７１】
本発明の抗体についてのフレームワーク配列は「ドナー」可変フレームワーク領域として役立ち、当技術分野において公知の方法論を用いて本明細書において規定された同じＣＤＲを備えた追加の抗体を生成するのに使用することができる。さらに、本発明の抗体についてのフレームワーク配列を他の公知のヒトフレームワーク配列に対して比較して、追加の抗体を生成することができる。したがって、この情報を使用して、別の選択された相同なヒトフレームワーク領域をこれらの位置でドナーアミノ酸残基へ「復帰変異」させることができる。さらに、任意の「まれな」アミノ酸を追加のヒトフレームワーク中で検出することができ、その結果コンセンサスなアミノ酸残基またはドナーアミノ酸残基を関連する位置で使用することができる。
【００７２】
抗体を産生するおよび精製する方法は当技術分野において周知であり、例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、チャプター５〜８および１５中で見出すことができる。例えば、マウスはヒトＩＬ−２３またはその断片により免疫付与することができ、次いで生じた抗体は精製し回収することができ、アミノ酸配列は当技術分野において周知の従来の方法を使用して決定される。本発明の抗体は非ヒト抗体に由来したＣＤＲを囲む１つまたは複数のヒトフレームワーク領域を含有するように操作される。ヒトフレームワークの生殖系列配列は、ウェブサイトｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ経由でＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）、またはＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ、Ｍａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  Ｌｅｆｒａｎｃ  ａｎｄ  Ｇｅｒａｒｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ著、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２００１、ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から得ることができる。本発明の抗体における使用のための特定の生殖系列の軽鎖フレームワークは０２を含む。
【００７３】
本発明の抗体における使用のための特定の生殖系列の重鎖フレームワーク領域はＶＨ１−６９を含む。
【００７４】
本発明の操作された抗体は公知の方法を使用して調製および精製することができる。例えば、重鎖（例えば配列番号９によって与えられるアミノ酸配列）および軽鎖（例えば配列番号１０によって与えられるアミノ酸配列）をコードするｃＤＮＡ配列は、クローン化しＧＳ（グルタミン合成酵素）発現ベクターの中へ操作することができる。次いで操作された免疫グロブリン発現ベクターをＣＨＯ細胞中に安定的にトランスフェクションすることができる。抗体の哺乳動物の発現は典型的にはＦｃ領域中の高度に保存されたＮ−糖鎖付加部位での糖鎖付加を生じるだろう。安定的クローンはヒトＩＬ−２３へ特異的に結合する抗体の発現について検証することができる。陽性クローンはバイオリアクター中での抗体産生のために無血清培地の中で増幅させることができる。抗体が分泌された培地は従来の技法によって精製することができる。例えば、培地は、好都合には、適合性のある緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水等）により平衡化されたプロテインＡまたはプロテインＧのセファロースＦＦカラムへ適用することができる。結合した抗体を例えばｐＨ勾配によって溶出し、抗体画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥ等によって検出し、次いでプールする。抗体は通常の技法を使用して濃縮および／または滅菌濾過することができる。可溶性の凝集物およびマルチマーは、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーまたはハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーが含まれる通常の技法によって効果的に除去することができる。産物は例えば直ちに−７０℃で凍結または凍結乾燥することができる。
【００７５】
本発明の抗体はモノクローナル抗体である。本明細書において使用される時「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、単一コピーまたはクローン（例えば任意の真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンが含まれる）に由来する抗体を参照し、それが産生される方法ではない。そのモノクローナル抗体は、例えばハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術（例えばＣＤＲグラフト）、またはかかる技術もしくは当技術分野において公知の他の技術の組み合わせによって産生することができる。
【００７６】
本発明の別の実施形態において、抗体またはそれをコードする核酸は単離された形態で提供される。
【００７７】
本発明の抗体またはそれを含む医薬組成物は、非経口的経路（例えば皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内または経皮）によって投与することができる。
【００７８】
本発明の医薬組成物は、当技術分野において周知の方法（例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａ／Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版（１９９５）（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．））によって調製することができ、本明細書において開示されるような抗体および１つもしくは複数の医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む。例えば、本発明の抗体は薬剤（クエン酸ナトリウム、クエン酸およびポリソルベート８０および塩化ナトリウムおよびショ糖等）と共に製剤化することができ、次いで生じた組成物は凍結乾燥し、２℃〜８℃で保存することができる。次いで凍結乾燥された組成物は投与の前に注射用蒸留水により再構成することができる。
【００７９】
本明細書において使用される時「ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合する」という用語は、配列番号１５のアミノ酸配列によって与えられるヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニット上のエピトープとの本発明の抗体の検出可能な相互作用を指す。本発明の抗体とヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットとの間の相互作用は、実施例１中の表題「抗体Ｉについての表面プラズモン共鳴による親和結合測定（ＢＩＡｃｏｒｅ）」のセクション中で記載される通りに、３７℃での結合動態によって測定される。
【００８０】
本明細書において使用される時「エピトープ」という用語は、タンパク質（抗原）表面上でともに接近して、抗体と相互作用するアミノ酸残基を指す。２つの大まかなクラスのエピトープ（直線状エピトープおよび立体配座的エピトープ）がある。
【００８１】
本明細書において使用される時「直線状エピトープ」という用語は、タンパク質の特定の領域の連続的な一次的なアミノ酸配列を指す。
【００８２】
本明細書において使用される時「立体配座的エピトープ」という用語は、本発明の抗体によって接触される、抗原のアミノ酸配列の不連続セクションを指す。立体配座的エピトープは構造に加えて生来のタンパク質の配列によっても定義され、これらのエピトープは連続または不連続であり得る。エピトープの成分はタンパク質の異なる部分に位置することができ、折り畳まれた生来のタンパク質構造において互いに接近させられる。本発明の文脈において、本発明の抗体は、配列番号１５のアミノ酸位置８１〜９９および１１５〜１４０内の立体配座的エピトープでヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットへ結合し、抗体は配列番号１５の少なくともアミノ酸残基９４Ｐ、９５Ｓ、９７Ｌ、９８Ｐ、９９Ｄ、１２３Ｗ、１３０Ｓ、１３３Ｐおよび１３７Ｗに接触する。しかしながら、立体配座的エピトープはこれらのアミノ酸残基へ限定されず、配列番号１５のアミノ酸位置８１〜９９および１１５〜１４０内の追加のアミノ酸残基を含むことができる。
【００８３】
本明細書において使用される時「網膜組織に観察可能に結合しない」という用語は、ヒトおよびカニクイザル網膜組織と本発明の抗体の検出可能な相互作用が存在しないことを指す。本発明の抗体とヒトおよびカニクイザルの網膜組織との間の相互作用は、実施例１中の表題「網膜組織交差反応性：免疫組織化学によるインビトロの分析」のセクション中で記載される通りに、免疫組織化学アッセイにおいて査定される。本文脈中で使用される時「観察可能に」という用語は、本発明の抗体がヒトおよびカニクイザル網膜組織へ結合するかどうかを決定する該ヒトおよびカニクイザル網膜組織の視覚的評価を指す。
【００８４】
本発明の抗体に関して本明細書において使用される時「選択的である」という用語は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合するが、ヒトＩＬ−２３およびヒトＩＬ−１２によって共有されるｐ４０サブユニットへ結合しない抗体を指す。
【００８５】
本明細書において使用される時「中和すること」という用語は「中和抗体」を指し、ヒトＩＬ−２３の生物学的活性の阻害を指すことが意図される。マウス脾細胞バイオアッセイ（実施例１中の表題「マウス脾細胞における抗体ＩによるヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３のインビトロの中和」のセクションを参照）またはヒトＩＬ−２３中和アッセイ（実施例１中の表題「ヒトＩＬ−２３の中和：急性、局所的」のセクションを参照）のいずれかを使用して決定されるような、ＩＬ−２３生物学的活性の１つまたは複数の指標の測定は、ヒトＩＬ−２３の生物学的活性のこの阻害を査定することができる。
【００８６】
本明細書において使用される時「ＫＤ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すことが意図される。それは以下の式によって計算される。
Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ＝ＫＤ
【００８７】
本明細書において使用される時「ｋｏｎ」という用語は、単位Ｍ−１秒−１で測定される、順反応または複合体形成反応の会合もしくは結合の速度定数または特異的反応速度を指すことが意図される。
【００８８】
本明細書において使用される時「ｋｏｆｆ」という用語は、単位秒−１で測定される、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての解離もしくは離脱の速度定数または特異的反応速度を指すことが意図される。
【００８９】
本明細書において使用される時「ＩＣ５０」という用語は、実施例１中の表題「マウス脾細胞における抗体ＩによるヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３のインビトロの中和」のセクション中で記載されるバイオアッセイにおいて、マウス脾細胞上のＩＬ−２３の生物活性の５０％を中和するのに必要な本発明の抗体の有効濃度を指すことが意図される。
【００９０】
本明細書において使用される時「ポリヌクレオチド」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は一本鎖または二本鎖であり得る。
【００９１】
本明細書において使用される時「単離された」という用語は、細胞環境において見出される他の巨大分子種がないかまたは実質的にないタンパク質、ペプチドまたは核酸を指す。
【００９２】
本明細書において使用される時「実質的にない」という用語は、対象となるタンパク質、ペプチドまたは核酸が、存在する巨大分子種の８０％より多く（モルベース上で）、好ましくは９０％よりも多く、およびより好ましくは９５％より多くを構成することを意味する。
【００９３】
「患者」は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００９４】
「治療すること」（または「治療する」または「治療」）という用語は、既存の症状、障害、病態または疾患の進行または重症度を減速させるか、中断するか、阻止するか、軽減するか、停止するか、減少させるか、または回復させことを指す。
【００９５】
本明細書において使用される時「効果的な量」という用語は、患者への単一用量または複数用量の投与に際して、治療下の患者において所望される効果を提供する、本発明の抗体の量または用量を指す。効果的な量は、多数の因子（哺乳動物の種；大きさ、年齢および全体的な健康；関与する特異的疾患；疾患の程度または重症度；個別の患者の応答；投与された特定の抗体；投与のモード；投与された調製物の生物学的利用能特徴；選択された用量レジメン；ならびに任意の併用医薬物の使用等）を考慮して、当業者として参加する診断医によって容易に決定することができる。
【実施例】
【００９６】
以下の実施例は本発明をさらに例証する。しかしながら、実施例が限定ではなく例示のために記載され、様々な修飾が当業者によって行えることは理解される。
【００９７】
実施例１
抗体の産生
この実施例の抗体Ｉは２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、各々の重鎖は配列番号９によって与えられるアミノ酸配列を有し、各々の軽鎖は配列番号１０によって与えられるアミノ酸配列を有する。抗体Ｉを作製し、以下の通り精製することができる。適切な宿主細胞（ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ等）は、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比、または重鎖（配列番号９）および軽鎖（配列番号１０）の両方をコードする単一ベクターシステムを使用して、抗体を分泌するための発現システムにより一過性にまたは安定的にトランスフェクションする。一般的に使用される技法のうちのいずれかを使用して、抗体が分泌された清澄培地を精製する。例えば、培地は、好都合には、適合性のある緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）等）により平衡化されたプロテインＡまたはプロテインＧのカラムへ適用することができる。カラムを洗浄して非特異的結合成分を除去する。結合した抗体は、例えばｐＨ勾配（０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．８から０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ２．５等）によって溶出される。抗体画分を中和し（例えばｐＨ８．０の１Ｍ  ＴＲＩＳの１／１０の体積の添加によって）、検出し（ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって等）、次いでプールする。意図される使用に依存して、さらなる精製はオプションである。抗体は通常の技法を使用して濃縮および／または滅菌濾過することができる。可溶性の凝集物およびマルチマーは、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーまたはハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーが含まれる通常の技法によって効果的に除去することができる。これらのクロマトグラフィー工程後の抗体の純度は９９％を超える。産物は直ちに−７０℃で凍結または凍結乾燥することができる。
【００９８】
表面プラズモン共鳴による親和結合測定（ＢＩＡｃｏｒｅ）
ヒト、カニクイザルまたはウサギのＩＬ−２３への抗体親和性（ＫＤ）は、物質移動モデルの１：１結合によるＢＩＡｃｏｒｅ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ２０００およびＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して決定される。捕捉タンパク質（プロテインＡ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）は、Ｎ−エチル−Ｎ−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物を使用して、ＣＭ４バイオセンサーチップのフローセル１および２上のカルボキシル基へ遊離アミン基経由でカップルされる。フローセルは、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）、０．００５％界面活性剤Ｐ２０を含有する緩衝液を使用して、８０μＬ／分の流速でモニターする。抗体Ｉをフローセル２上で捕捉して、合計４０〜６０反応単位（ＲＵ）を得る。次いでＩＬ−２３を、濃度を増加させる複数のサイクルでフローセル１および２の上に注入し（ヒトおよびサルのＩＬ−２３について０．６２ｎＭ〜３０ｎＭおよびウサギＩＬ−２３について３０ｎＭ〜２４０ｎＭ）、各々のサイクルの間にはグリシンＨＣｌ（ｐＨ１．５）を使用する再生工程が続く。フローセル１を対照として使用してＩＬ−２３の非特異的結合をモニターし、データはフローセル１を引いたフローセル２を反映する。各々のサイクルは抗体捕捉工程、続いて３０分の解離期間による１つの濃度でのＩＬ−２３の注入、次いで再生を含む。緩衝液がＩＬ−２３の代わりに注入される２つのサイクルはベースラインサブトラクションのための対照として役立ち、プロテインＡ表面からの抗体Ｉの解離と関連したドリフトについて補正する。親和性を３７℃で測定する。アッセイはヒト、サルまたはウサギのＩＬ−２３により２回行う。抗体Ｉは、３３３ｎＭでマウスＩＬ−２３、２００ｎＭでラットＩＬ−２３、３３３ｎＭでヒトＩＬ−１２、５００ｎＭでヒトＩＬ−２７または８３３ｎＭでヒトＩＬ−３５により各々２回試験する。
【００９９】
各々の抗原についての結合速度（ｋｏｎ）および離脱速度（ｋｏｆｆ）は物質移動モデルの１：１結合を使用して評価する。親和性（ＫＤ）は、関係性ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎに従う結合動態から計算される。
【表３】
2016510744.tif 000004
【０１００】
抗体Ｉは、この方法を使用してヒト、カニクイザルおよびウサギのＩＬ−２３により濃度依存的結合応答を生じる。ＩＬ−２３の結合の飽和は、チップ表面上で捕捉された８０〜１００反応単位の抗体Ｉを使用して３０ｎＭ（ヒトおよびサル）および２４０ｎＭ（ウサギ）の濃度で達成される。試験された条件下で、抗体Ｉへのヒト、サルまたはウサギのＩＬ−２３の結合親和性（ＫＤ）は、それぞれ２１、５５または５３，０００ｐＭである（表１）。マウスＩＬ−２３、ラットＩＬ−２３、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２７またはヒトＩＬ−３５は、これらの条件下で抗体Ｉへ結合しない。
【０１０１】
ＩＬ−２３受容体へのＩＬ−２３結合のインビトロ阻害
組換えヒトＩＬ−２３Ｒ／Ｆｃは、Ｎ−エチル−Ｎ−（ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物を使用して、ＣＭ４バイオセンサーチップのフローセル２上のカルボキシル基へ遊離アミン基経由でカップルされる。組換えヒトＩｇＧ１Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）は同じ方法を使用して同じチップのフローセル１へカップリングされる。マウス抗６×ＨＩＳ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）は同じ方法を使用して同じチップのフローセル４へカップリングされる。マウス抗６×ＨＩＳを使用して、ＨＩＳタグを含有するヒトＩＬ−１２Ｒβ１／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を前捕捉する。フローセルは、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４、１５０のｍＭ  ＮａＣｌ）、０．００５％界面活性剤Ｐ２０を含有する緩衝液を使用して、３０μＬ／分の流速でモニターする。組換えヒトＩＬ−２３は、１６倍モル過剰の抗体Ｉの添加の有りまたは無しで９０分間プレインキュベーションする。各々の組み合わせを１５０μＬの全体積でフローセル１、２および４の上に注入し、各々の試験の間にはグリシンＨＣｌ（ｐＨ１．５）を使用する再生工程が続く。フローセル１を対照として使用してチップへのＩＬ−２３の非特異的結合をモニターする。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して個別の結合センサーグラムのオーバーレイを作成する。
【０１０２】
抗体Ｉはインビトロの機能アッセイを使用して、ヒトＩＬ−２３を中和する。さらに、抗体ＩはＩＬ−２３Ｒ／ＦｃへのＩＬ−２３の結合を防止する。表３中のデータは、
（Ａ）ＩＬ−２３はＩＬ−２３Ｒ／Ｆｃへ結合する；
（Ｂ）抗体Ｉ／ＩＬ−２３複合体はＩＬ−２３Ｒ／Ｆｃへ結合しない；
（Ｃ）ＩＬ−２３はＩＬ−１２Ｒβ１／Ｆｃへ結合する；および
（Ｄ）抗体Ｉ／ＩＬ−２３複合体はＩＬ−１２Ｒβ１／Ｆｃへ結合する
ことを示す。
【表４】
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【０１０３】
したがって、抗体ＩがＩＬ−２３ＲサブユニットへのＩＬ−２３の結合を阻害するので、抗体ＩはＩＬ−２３を中和する。加えて、抗体ＩはＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットへのＩＬ−２３の結合を阻害しない。
【０１０４】
マウス脾細胞における抗体ＩによるヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３のインビトロ中和
抗体Ｉの評価のために、ＩＬ−１７の最大産出のおよそ５０％を与えるヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３の濃度を使用する（１６ｐＭ）。８００，０００〜４．４ｐＭの範囲の抗体Ｉの用量応答を評価する。抗体ＩまたはＩｇＧ４対照抗体は、細胞への添加の前に分離したウェル中でヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３と３７℃で９０分間組み合わせる（前インキュベーション混合）。
【０１０５】
ＩＬ−２３およびＩＬ−２により刺激されたＣ５７ＢＬ／６マウスからの脾細胞は、ＩＬ−１７を産生する（Ａｇｇａｒｗａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．、「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２３  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＣＤ４  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｓｔａｔｅ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７８（３）：１９１０−１９１４  ２００３）。マウス脾細胞を、アッセイ培地（１０％ＦＢＳ、１％非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、０．０００３５％２−メルカプトエタノール、５０ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ−２を含有するＬ−グルタミン入りＲＰＭＩ１６４０）中で５×１０６ＷＢＣ／ｍＬで再懸濁し、９６ウェル培養プレートの中へ１ウェルあたり体積１００μＬで分注する。抗体Ｉ／ＩＬ−２３の前インキュベーション混合物を１ウェルあたり１００μＬとして分注し、５％ＣＯ２中で３７℃でインキュベーションする。４８時間後に、培養上清は、各々の希釈で二重でウェルを使用してキット中の説明書に従ってＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓからの商業的なＥＬＩＳＡキット（ＤＹ４２１）を使用して、ｍＩＬ−１７について試験する。ＩＣ５０はデータの４パラメーター曲線フィッティングを使用して決定する。
【０１０６】
マウス脾細胞はヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３に応答してＩＬ−１７を産生する。抗体ＩはヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３を中和する。計算されたＩＣ５０はヒトについて８２±１１ｐＭおよびカニクイザルＩＬ−２３について１２０±１４ｐＭであり、各々についてｎ＝２である（表４）。これらの結果は抗体ＩがインビトロでヒトまたはカニクイザルのＩＬ−２３を中和できることを実証する。
【表５】
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【０１０７】
ヒトＩＬ−２３の中和：急性、局所的
動物（Ｃ５７ＢＬ／６メス、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓからの８週齢）を収容し（到着後最小７２時間）、実験の前および研究の継続の間に正常に給餌する。体毛を電気バリカンによりマウスの背から除去し、３日後にマウス（１群あたりｎ＝１０）に抗体ＩまたはＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（１マウスあたり０．５４ｍｇ）を皮下注射する。その後の２日間、背の１つの側面上の１つの場所においてヒトＩＬ−２３（５０μＬ中の１μｇを滅菌生理食塩水により希釈した）を、２９ゲージ針を使用してマウスに皮内注射する。滅菌生理食塩水を背の他の側面上で賦形剤対照として使用する。最後のヒトＩＬ−２３注射の２４時間後にマウスを屠殺し、皮膚サンプルを、体毛の境界から少なくとも５ｍｍ離して、ＩＬ−２３を注射した側面および滅菌生理食塩水を注射した側面から摘出する。皮膚サンプルはｍＲＮＡ研究のために液体窒素中で直接凍結する。
【０１０８】
全ＲＮＡは、Ｌｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ａシェーカーチューブ（Ｑｂｉｏｇｅｎｅ  Ｉｎｃ．／Ｂｉｏ１０１  Ｓｙｓｔｅｍｓ）中でのホモジナイゼーション、続いてＲＮｅａｓｙミニキットクリーンアップ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．）によって凍結皮膚組織から単離する。ＲＮＡ濃度は２６０ｎｍでの分光測光吸収から決定する。ＲＮＡはＨｉｇｈ−Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してｃＤＮＡへと逆転写する。すべての反応はＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７９００ＨＴ（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で三重で行って、アッセイしたｍＲＮＡの相対的存在量を決定する。マウスＩＬ−１７Ａ（Ｍｍ００４３９６１８＿ｍ１）、マウスＩＬ−１７Ｆ（Ｍｍ００５２１４２３＿ｍ１）およびマウスケラチン−１６（Ｍｍ００４９２９７９＿ｇ１）についてのプライマープローブセットは、ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから得る。１８ＳおよびＧＡＰＤの両方を内因性の対照として測定して、遺伝子発現レベルにおける変動性を正規化する。発現データはデルタ（Δ−Δ）Ｃｔ方法を使用して分析する。個別のＣｔ値は三重測定の平均として計算される。実験は２回行う。非対合ｔ検定は必要に応じて使用する。Ｐ＜０．０５は統計的に有意であると判断される。
【０１０９】
抗体Ｉの全身投与がヒトＩＬ−２３への局所的反応を中和できるかどうか調査するために、ヒトＩＬ−２３タンパク質をマウスへ皮内注射して皮膚のＩＬ−２３曝露の下流の帰結を調査する。毎日生理食塩水で処理した野生型マウスからの皮膚は検出可能なレベルのマウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆを示さない。
【０１１０】
しかしながら、ヒトＩＬ−２３の注射はマウスＩＬ−１７ＡおよびマウスＩＬ−１７ＦのｍＲＮＡ発現を誘導する（表５）。抗体Ｉによる処理はヒトＩＬ−２３誘導性のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦのｍＲＮＡ発現を無効にしたが、アイソタイプ対照抗体ではそのようなことはなかった。
【表６】
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【０１１１】
さらに、ヒトＩＬ−２３注射はケラチン−１６（増殖関連性サイトケラチン）の発現増加と関連した表皮肥厚を誘導する。ケラチン−１６の誘導は抗体Ｉの投与によって有意に阻害される（マウスケラチン−１６が何倍誘導されたかは、アイソタイプ対照抗体について５．２１±２．７２ｖｓ抗体Ｉについて１．２３±０．７２である；ｐ＝０．０００３）。
【０１１２】
総合すると、これらの結果は、抗体Ｉが急性の局所的なインビボのアッセイにおいてヒトのＩＬ−２３誘導性のマウスＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆおよびケラチン−１６のｍＲＮＡ産生を効果的に阻害することを示す。
【０１１３】
網膜組織の交差反応性：免疫組織化学によるインビトロ分析
新鮮な凍結したヒトおよびカニクイザルの網膜組織（５〜７μｍ厚）の切片をクライオスタット上で切断する。切片は室温でおよそ１０分間アセトン中で固定し、室温で一晩乾燥させ、使用までおよそ−８０℃で保存する。続いてアセトン固定したスライドをフリーザーから取り出し、室温で一晩乾燥させる。以下の工程は室温で行う。スライドを１×Ｍｏｒｐｈｏｓａｖｅ（商標）中でおよそ１５分間インキュベーションして形態を維持する。スライドを１×ＰＢＳ中で１０分間洗浄し、次いで１×ＰＢＳ中の０．３％Ｈ２Ｏ２中で室温でおよそ２０分間インキュベーションして内因性のペルオキシダーゼ活性をクエンチングする。インキュベーション後に、スライドを１×ＰＢＳ中でおよそ５分間２回洗浄する。内因性のビオチンを、アビジン溶液およびビオチン溶液中での連続的なインキュベーション（各々およそ１５分）によってブロックする。ビオチン中でのインキュベーションに後続して、組織切片をブロッキング抗体溶液により３０分間ブロックする。抗体Ｉまたは対照ヒトＩｇＧ４を最適濃度（２．５μｇ／ｍＬまたは５μｇ／ｍＬ）または最適濃度の５倍（２５μｇ／ｍＬ）で切片へ適用し、室温で１時間インキュベーションする。次いでスライドをリンスし、ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ４抗体（２．５μｇ／ｍＬ）により３０分間インキュベーションする。結合した一次抗体／二次抗体複合体は、ストレプトアビジン−ビオチン−ホースラディシュペルオキシダーゼコンジュゲートおよびジアミノベンジジンクロモゲン基質により検出する。
【０１１４】
ヒトＩＬ−２３によりトランスフェクションしたＣＨＯ細胞をすべての実験において陽性対照サンプルとして使用する。親ＣＨＯ（トランスフェクションしなかった）細胞を陰性対照サンプルとして使用し、染色しなかった。結合は、アイソタイプ対照抗体（ヒトＩｇＧ４）により染色した連続切片において観察されない。抗体Ｉは観察可能に網膜組織に結合しない。
【０１１５】
抗体Ｉについてのエピトープマッピング：アラニンスキャニング
酵母ディスプレイ抗原を使用するエピトープマッピングに対する背景
エピトープマッピング研究を行って、抗体Ｉ結合のために必要とされるヒトＩＬ−２３  ｐ１９サブユニット（配列番号１５）中の特異的アミノ酸を決定する。抗体Ｉのエピトープマッピングは、酵母ディスプレイプラットフォームと併用したアラニンスキャニングの利用によって行う。
【０１１６】
ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの曝露されるアミノ酸位置はＰｙＭＯＬにおける分析によって同定する。ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの曝露される位置または部分的に曝露される位置を表６中で示す。曝露されないことが決定された位置はこの研究から省略される（すなわち、曝露されるかまたは部分的に曝露されるヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットのアミノ酸位置のみが変異された）。したがって、すべての位置が調査されるとは限らない。
【０１１７】
エピトープマッピングはＩＬ−２３のｐ１９サブユニット上のみで行われるが（抗体Ｉに関してＩＬ−２３のｐ４０サブユニット上で行われたエピトープマッピングは、ｐ４０サブユニットへ検出可能に結合しない）、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットおよびｐ４０サブユニットの両方は、酵母ディスプレイプラットフォーム中で共発現されなくてはならない。
【０１１８】
エピトープを同定するために、単一酵母にディスプレイされたヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットのアラニン変異体を構築し、抗体結合を決定する。酵母にディスプレイされた野生型抗原に比較した変異体の抗体への親和性を測定することによって、抗体結合へのアミノ酸側鎖のエネルギー的寄与を決定することは可能である。
【０１１９】
変異体ライブラリー構築
ｐ４０遺伝子は、可溶性発現プラスミドｐＹＫＹ（ウラシル選択マーカーを有する）の中へクローン化される。ｐ１９サブユニット遺伝子は、酵母ディスプレイプラスミドｐＥＭＤ３（Ｎ末でのトリプトファン選択マーカーおよびＶ５タグならびにトリプトファン選択可能なマーカー下で酵母の表面上でディスプレイされるＣ末でのＧＰＤＬ２アンカータンパク質を含有する）の中へクローン化される。クローニングのために使用される制限部位は、それぞれｐＹＫＹプラスミド中のＸｈｏＩおよびＢａｍＨＩならびにｐＥＭＤ３プラスミド中のＡｖｒＩＩおよびＸｍａＩである。
【０１２０】
アラニン変異をすべての曝露される位置で導入し、Ｖ５抗体および抗体Ｉにより二重陽性染色について試験する。ｐ１９アラニン変異体のパネルは、部位特異的変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ変異誘発）を使用してｐＥＭＤ３プラスミドにおいて構築する。簡潔には、ＣＪ２３６（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）の中への形質転換後に、ｐＥＭＤ３ベクターのウラシル含有ｓｓＤＮＡが産生される。形質転換した単一コロニーを一晩増殖させ、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）による感染後にｓｓＤＮＡをレスキューし、ＱＩＡｐｒｅｐ  ｓｐｉｎ  Ｍ１３  ｋｉｔを使用してｓｓＤＮＡを精製する。アラニン変異をコードするオリゴヌクレオチドは、８５℃で５分間変性させ、１時間にわたって５５℃へ上昇させ、５５℃で５分間維持し、次いで氷上で冷却することによって、ウラシルテンプレートへ２０：１モル比でアニールさせる。次いで第２の鎖合成は、Ｔ４ポリメラーゼ、Ｔ４リガーゼおよびｄＮＴＰｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により行う。反応物をＴｏｐ１０大腸菌（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の中へエレクトロポレーションし、単一コロニーをピックアップし、ｄｓＤＮＡをＱＩＡｐｒｅｐミニプレップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して調製し、変異をシーケンシングによって確認する。次いで、ｐ１９変異体をｐ４０  ｐＹＫＹプラスミドと共にＢＪ５４６４酵母（ＡＴＣＣ）に共形質転換し、トリプトファンおよびウラシルなしの完全最少培地中で増殖させる。
【０１２１】
抗原結合の損失についての変異抗原ライブラリーの選択
抗体エピトープを同定するために、変異抗原ライブラリーをフローサイトメトリーによって抗体結合の損失について選択する。酵母細胞を、２つの抗体（そのうちの１つのはマッピングされ、そのうちの１つはされない）により染色する。酵母にディスプレイされた抗原変異体は、第１の抗体への結合は損失しているが第２の抗体への結合は保持していることについて選択する。第２の抗体の結合が保持されていることは、変異体がエピトープ中の変異に基づいて選択されており、折畳まれないかまたは提示が不十分である変異体を選択しているのではないことを保証する。
【０１２２】
本分析のために、第１の抗体（すなわちそのエピトープがマッピングされる抗体）は抗体Ｉであり、第２の抗体は抗Ｖ５の抗体である。酵母は、初めに抗Ｖ５抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および抗体Ｉ、続いて抗Ｖ５抗体（発現／ディスプレイ）を検出するために二次ヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７）および抗体Ｉを検出するためにヤギ抗ヒトκＲＰＥ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）により染色する。酵母はＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＬＳＲＩＩ上でのフローサイトメトリーによって分析し、光散乱（Ｖ５／Ａｌｅｘａ６４７および抗体Ｉ／ＰＥ染色）による細胞のゲーティングに基づいて５０，０００イベントを収集する。各々の抗体Ｉおよび抗Ｖ５の抗体の結合についてのデータ解析は、ＦＡＣＳＤｉｖａ  ｖ６．１．２ソフトウェア（二重染色された酵母細胞のパーセンテージを計算する）を使用して行う。
【０１２３】
結果
提示されたタンパク質分割に起因して、最もよい時で酵母の５０％がＩＬ−２３  ｐ１９をディスプレイするだろう。二重陽性酵母細胞の検出は、調査中のアミノ酸位置がＩＬ−２３への抗体Ｉの結合と関連しないことを実証する。Ｖ５染色のみの検出は、タンパク質が発現されて酵母の表面にディスプレイされ、かつ調査中のアミノ酸位置が抗体Ｉの結合のために重要であることを実証する。隣接した残基に比較して二重陽性染色において＞５０％の減少を実証した残基が、結合のために重要であると決定する。これらの残基は表７中で強調される。いくつかの位置はＶ５および抗体Ｉの結合の両方の欠如を実証し、アミノ酸残基はタンパク質立体配座について必要かもしれないことを示唆する。ＩＬ−２３  ｐ１９サブユニット（配列番号１５）中の各々の曝露されるかまたは部分的に曝露されるアミノ酸位置の体系的調査は、Ｖ５および抗体Ｉの結合についての二重陽性染色の量の減少に基づいて、位置９４Ｐ、９５Ｓ、９７Ｌ、９８Ｐ、９９Ｄ、１２３Ｗ、１３０Ｓ、１３３Ｐおよび１３７ＷがヒトＩＬ−２３へ抗体Ｉ結合のために重要であることを実証する（表７）。
【０１２４】
エピトープマッピングは水素−重水素交換を使用しても行う。この水素−重水素交換エピトープマッピングの結果は、抗体ＩのエピトープがヒトＩＬ−２３の残基８１〜９９および１１５〜１４０（配列番号１５）内の立体配座的エピトープであることを例証する。
【表７−１】
2016510744.tif 000008
【表７−２】
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【表８】
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【０１２５】
ＩＬ−２３抗体の物理化学的特性
抗体Ｉは医薬的に許容可能な可溶性、化学的安定性および物理的安定性を有する。
Ａ．可溶性
十分に高い可溶性が好都合な用量を可能にするために所望される。例えば、１００ｋｇの患者への１．０ｍＬ注射によって投与される１ｍｇ／ｋｇの用量は、１００ｍｇ／ｍＬの可溶性を必要とするだろう。加えて、高濃度で高分子量（ＨＭＷ）凝集なしにモノマー状態で抗体を維持することも所望される。
【０１２６】
抗体Ｉは、生理的な緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で、２つの薬剤製品製剤条件（１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ６、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ有りおよび無し）下でおよそ１ｍｇ／ｍＬで製剤化される。抗体をＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  ３０ｋＤａ分子量フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＦＣ８０３２０４）を介して２０００×Ｇで遠心分離して、同じ緩衝液条件を維持しながら抗体を濃縮する。装置の溶解限度または最小のホールドアップ体積が達成されるまで、遠心分離を継続する。１００ｍｇ／ｍＬを超える可溶性が３つのすべての条件下で達成される。
【０１２７】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、高分子量（ＨＭＷ）ポリマーの増加が１００ｍｇ／ｍＬを超える抗体製剤の濃度に後続して起こったかどうかを査定する。出発の抗体溶液および濃縮された抗体溶液を、１２ｍＭリン酸塩、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４からなる移動相を使用してＴＳＫ３０００  ＳＷＸＬカラム（ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の上に注入する。可溶性ポリマーの大きな増加は試験された任意の製剤条件下で観察されない（ＳＥＣによって＜０．６％のＨＭＷポリマー）。
【０１２８】
Ｂ．化学的安定性
抗体Ｉを１０ｍＭ緩衝液（ｐＨ４、５、６および７について１０ｍＭクエン酸塩；ｐＨ８について１０ｍＭ  ＴＲＩＳ）中の１ｍｇ／ｍＬで製剤化し、４、２５または４０℃で４週間インキュベーションする。化学的安定性は、ＳＥＣ（上述の方法を参照）、陽イオン交換クロマトグラフィー［ＣＥＸ；ダイオネックス、緩衝液Ａ（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ５．８）および０．３６％ＣＨＡＰＳ）と緩衝液Ｂ（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ５．８）、０．３６％ＣＨＡＰＳ、２００ｍＭ塩化ナトリウム）との間の勾配を使用して］、ＣＥ−ＳＤＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ、還元条件下でタンパク質２３０チップによる）および酵素消化された材料のＬＣ−ＭＳ特徴づけによって、モニターする。
【０１２９】
抗体Ｉは、４０℃で４週間後でさえｐＨ５〜８にわたりポリマー形成（ＳＥＣ）に対して安定的である。ｐＨ４では、有意なポリマーは２５℃で観察されないが４０℃で観察される（４週間）。予想されるペプチド結合の加水分解または短縮は、ＣＥ−ＳＤＳによってｐＨ４（４０℃）で明白である。ｐＨ４．０での分解レベルはＩｇＧ４抗体に特有である。ｐＨ４より上（ｐＨ５〜８）では、レベルは低く時間とともに一貫して変化せず、したがって恐らくバックグラウンドノイズを表わす。
【０１３０】
この仮説は、ｐＨ６で短縮を検出しないがｐＨ４で典型的なレベルの抗体短縮を測定するＬＣ−ＭＳ分析と一致する。チャージしたバリアントにおける変化をＣＥＸによってモニターする。出発材料は、このアッセイの解像力を最小化にする３つの有意な主要なピークからなる。一般に、２５℃および４０℃でストレスをかけたサンプルは４℃対照よりも高いが、レベルはインキュベーション時間と共に増加しなかった（実際に多くの事例において減少した）。ｐＨ６．０でのパーセント変化（４週間の２５℃対照マイナス４℃対照）は２．５％である。ＬＣ−ＭＳ分析から、大部分の修飾がＣＤＲ領域の外部であり他のＩｇＧ４抗体に特有なレベルであることが示される。ＣＤＲ内の３つの分解部位が同定され、１％未満で変化する（ｐＨ６；４週間の２５℃対照マイナス４℃対照）。ＣＤＲ内の分解部位の欠如は、ｐＨ４、６、または８のいずれかでの４０℃の４週間のインキュベーション後に、ＢＩＡＣｏｒｅ親和性または化学量論において有意な変化がないこととも一致する。
【０１３１】
Ｃ．物理的安定性
ｉ）凍解安定性
抗体Ｉは以下の条件下で製剤化される。
ａ）１０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．０）中で１ｍｇ／ｍＬ；
ｂ）１０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．０）、０．０２％ツイーン８０中で１ｍｇ／ｍＬ；
ｃ）１０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中で１または５０ｍｇ／ｍＬ；および
ｄ）１０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％ツイーン８０中で１または５０ｍｇ／ｍＬ。
【０１３２】
これらの製剤を１℃／分で制御される凍結コンテナ（Ｎａｌｇｅｎｅ、５１００−０００１）中に配置し、−８０℃で少なくとも８時間フリーザー中で凍結し、次いで取り出し、少なくとも室温で８時間融解する。この凍結／融解サイクルを最大３回反復する。サンプルを１回および３回の凍結融解サイクル後に取り出し、ＳＥＣ（上述のパートＡ中で記載されるＳＥＣ方法を参照）によってＨＭＷポリマーおよびＨＩＡＣ粒子計数器（低体積アタッチメントを備えたＰａｃｉｆｉｃ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃモデル９７０３）によって不溶性の粒子形成について分析する。ＨＭＷポリマー形成における有意な増加は、試験された任意の条件下での３回の凍結融解サイクル後に観察されない。１ｍｇ／ｍｌの製剤について、ＨＩＡＣ粒子カウントにおける有意な増加がツイーン８０非含有製剤中でのみ観察される。５０ｍｇ／ｍｌで、粒子カウントは他のよく動作するＩｇＧ４抗体に特有なものであり、粒子カウント（＞１０ミクロン）はツイーン８０なしでおよそ１５００カウント／ｍＬで、ツイーン８０ありでおよそ２８０へ低下した。
【０１３３】
ｉｉ）高濃度での静的保持
抗体は以下の条件下で５０ｍｇ／ｍＬの製剤である。
ａ）１０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；および
ｂ）１０ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％ツイーン８０。
【０１３４】
これらの製剤を４℃および２５℃で４週間静的に保持する。ＨＩＡＣ粒子カウントにおける変化（低体積アタッチメントを備えたＰａｃｉｆｉｃ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃモデル９７０３）を４週間後に２５℃で測定する。
【０１３５】
Ｔｗｅｅｎ含有製剤についてのＨＩＡＣ粒子カウント（＞１０ミクロン）は平均２９０カウント／ｍＬ（２７０および３１０）であり、Ｔｗｅｅｎなしの製剤について８０４カウント／ｍＬ（７２８および８８０）と中程度に高い。これらの結果は良好な物理的安定性を示す他のＩｇＧ４抗体に特有である。これらの２つの製剤を標準プラスチックエッペンドルフチューブの代わりにガラス中でも保存した。ガラス中で保存されたサンプルについての粒子カウントは４〜８倍低い（Ｔｗｅｅｎの存在および非存在下で、それぞれの平均で３５および１９１カウント／ｍＬ）。
配列表
重鎖ＣＤＲ
配列番号１      gykftryvmh
配列番号２      yinpynDgtnynekfkg
配列番号３      ARnwdtgl
軽鎖ＣＤＲ
配列番号４      kasdhilkFlT
配列番号５      gatslEt
配列番号６      qmywstpft
重鎖可変領域
配列番号７（抗体Ｉ）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYKFTRYVMHWVRQAPGQGLEWMGYINPYNDGTNYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNWDTGLWGQGTTVTVSS
軽鎖可変領域
配列番号８（抗体Ｉ）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASDHILKFLTWYQQKPGKAPKLLIYGATSLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQMYWSTPFTFGGGTKVEIK
完全な重鎖
配列番号９（抗体Ｉ）
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgykftryvmhwvrqapgqglewmgyinpynDgtnynekfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycarnwdtglwgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslg
完全な軽鎖
配列番号１０（抗体Ｉ）
diqmtqspsslsasvgdrvtitckasdhilkFlTwyqqkpgkapklliygatslEtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqmywstpftfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
ヌクレオチド配列
重鎖可変領域
配列番号１１（抗体Ｉ）
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATATAAATTCACTCGTTATGTTATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATATATTAATCCTTACAATGATGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAACTGGGACACAGGCCTCTGGGGCCAAGGCACCACTGTCACAGTCTCCTCA
ヌクレオチド配列
軽鎖可変領域
配列番号１２（抗体Ｉ）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAGGCAAGTGACCACATTCTCAAATTTTTAACTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCAACCAGTTTGGAAACTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAAATGTATTGGAGTACTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGGTGGAAATAAAA
ヌクレオチド配列
完全な重鎖
配列番号１３（抗体Ｉ）
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATATAAATTCACTCGTTATGTTATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATATATTAATCCTTACAATGATGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAACTGGGACACAGGCCTCTGGGGCCAAGGCACCACTGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
ヌクレオチド配列
完全な軽鎖
配列番号１４（抗体Ｉ）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAGGCAAGTGACCACATTCTCAAATTTTTAACTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCAACCAGTTTGGAAACTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAAATGTATTGGAGTACTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGGTGGAAATAAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGAC AGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
タンパク質配列
成熟ヒトＩＬ−２３  ｐ１９サブユニットアミノ酸配列
配列番号１５
RAVPGGSSPAWTQCQQLSQKLCTLAWSAHPLVGHMDLREEGDEETTNDVPHIQCGDGCDPQGLRDNSQFCLQRIHQGLIFYEKLLGSDIFTGEPSLLPDSPVGQLHASLLGLSQLLQPEGHHWETQQIPSLSPSQPWQRLLLRFKILRSLQAFVAVAARVFAHGAATLSP
【配列表】
2016510744000001.app
【国際調査報告】
2016510744.tif 000011
2016510744.tif 000012