(57)【要約】Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの株の少なくとも１つに対して殺菌性がある抗体を誘発することができる、バリアント３  ｆＨｂｐ由来の天然に生じないＨ因子結合タンパク質及びそのようなタンパク質の使用の方法が提供される。ある特定の実施形態において、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐ由来の天然に生じないＨ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）が開示される。非天然のｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含んでもよく、この場合、２２３位の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づく。天然に生じないｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）に対してｆＨｂｐ  ＩＤ７９よりも低い親和性を有してもよい。【選択図】図３
2016527278.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然に生じるバリアント３  Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）由来の天然に生じないｆＨｂｐであって、前記非天然のｆＨｂｐは、  前記天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含み、２２３位の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づき、  前記天然に生じないｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）に対してｆＨｂｐ  ＩＤ７９よりも低い親和性を有する、前記天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項２】
前記ヒスチジンはアルギニンにより置換される、請求項１に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項３】
前記バリアント３  ｆＨｂｐは、モジュール群Ｖ  ｆＨｂｐである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項４】
前記バリアント３  ｆＨｂｐは、モジュール群ＩＩ  ｆＨｂｐである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項５】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項６】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ２８を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項７】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ６７またはｆＨｂｐ  ＩＤ１７５を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項８】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ７９を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項９】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ４５を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項１０】
ａ）請求項１〜９のいずれかに記載の天然に生じないｆＨｂｐ；及び  ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む、免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、前記ｆＨｂｐを発現するＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株から調製されたベシクル調製物の表面に発現する、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、単離ポリペプチドとして存在する、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記薬学的に許容される賦形剤は、アジュバントを含む、請求項１１〜１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
付加的なＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原をさらに含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
請
求項１〜９のいずれかに記載の天然に生じないｆＨｂｐまたは請求項１０〜１４のいずれかに記載の免疫原性組成物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物において抗体応答を誘発する方法。
【請求項１６】
前記投与することは、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する殺菌抗体の産生をもたらす、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１０のいずれかに記載のｆＨｂｐをコードする核酸。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項１９】
請求項１７に記載の核酸または請求項１８に記載の組換え発現ベクターを含む、遺伝子改変宿主細胞。
【請求項２０】
ａ）請求項１〜９のいずれかに記載の天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸により遺伝子改変された遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞であって、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐが前記遺伝子改変宿主細胞によって産生されるよう遺伝子改変された遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞から得られ、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐを含む、ベシクル；及び  ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む、免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記ベシクルは、天然の外膜ベシクルである、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記宿主細胞は、ｌｐｘＬ１遺伝子及び／またはｌｐｘＬ２遺伝子のポリペプチド産物の活性を低下させるか、またはなくすよう遺伝子改変されている、請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記宿主細胞は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原の発現を増加させるよう遺伝子改変されている、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物において抗体応答を誘発する方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照  本出願は、２０１３年８月２日に出願された米国仮特許出願第６１／８６１，６６２号の優先権の利益を主張するものであり、この出願の開示全体を参照によって本明細書に組み込んだものとする。  
【０００２】
連邦政府資金による研究の記載  本発明は、米国国立衛生研究所の国立アレルギー感染症研究所によって授与された助成金第Ｒ０１  ＡＩ  ０９９１２５−０１号に基づく政府の支援によってなされた。米国政府は、本発明に対して一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
緒言  Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、ヒトの上気道に定着するグラム陰性菌であり、最も注目すべきは世界中の散発的及び周期的な髄膜炎及び敗血症の集団発生に関与することである。感染及び罹患率は、２歳未満の小児が最も高い。その他のグラム陰性菌と同様に、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、一般に細胞膜、ペプチドグリカン層、莢膜多糖とともに細菌細胞壁を構成する外膜及び外部環境に突き出した線毛がある。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの被包性株が、小児及び若年成人における細菌性髄膜炎及び敗血症の主要な原因である。侵襲的なＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ感染症の流行が、さまざまな株にわたって、特に、さまざまな血清型または血清亜型の遺伝学的に異なるＢ群株にわたって免疫を付与することができる有効なワクチンの探求に向かわせてきた。  
【０００４】
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ、当該技術分野においてリポタンパク質２０８６（Ｆｌｅｔｃｈｅｒら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２：２０８８〜２１００）、ゲノム由来Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原（ＧＮＡ）１８７０（Ｍａｓｉｇｎａｎｉら（２００３年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：７８９〜９９）または「７４１」とも呼ばれる）は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ菌において発現される表面に露出したリポタンパク質である。ｆＨｂｐは、ヒト補体Ｈ因子（ｆＨ）と結合し、それにより補体の活性化がダウンレギュレートされる。ｆＨの細菌表面との結合は、病原体が免疫のないヒト血清または血液中で生き延び、生来の宿主防御を回避する重要な機構である。最近、ヒトＨ因子遺伝子クラスターにおける遺伝的多様性が髄膜炎菌性疾患の発症しやすさに影響を及ぼすことがわかった（Ｄａｖｉｌａ  Ｓら（２０１０年）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｇ．６４０）。ｆＨのｆＨｂｐとの結合は、ヒトｆＨに特有であり、なぜＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓがあくまでヒトの病原体であるかのゆえんであろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
有効な殺菌抗体応答を誘発することができるｆＨｂｐポリペプチドに対する需要が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの株の少なくとも１つに対して殺菌性がある抗体を誘発させることができる、バリアント３  ｆＨｂｐ由来の天然に生じないＨ因子結合タンパク質及びそのようなタンパク質の使用の方法が提供される。  
【０００７】
ある特定の実施形態において、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐ由来の天然に生じないＨ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）が開示される。非天然のｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含んでもよく、この場合、２２３位の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づく。天然に生じないｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）に対してｆＨｂｐ  ＩＤ７９よりも低い親和性を有してもよい。  
【０００８】
ある特定の実施形態において、ヒスチジンは、アルギニンによって置換されてもよい。  
【０００９】
ある特定の場合において、バリアント３  ｆＨｂｐは、モジュール群Ｖ  ｆＨｂｐであってもよい。他の場合には、バリアント３  ｆＨｂｐは、モジュール群ＩＩ  ｆＨｂｐであってもよい。  
【００１０】
例となる天然に生じないｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。  
【００１１】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ２８のアミノ酸配列を含んでもよい。  
【００１２】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ６７のアミノ酸配列を含んでもよい。  
【００１３】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ１７５のアミノ酸配列を含んでもよい。  
【００１４】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ７９のアミノ酸配列を含んでもよい。  
【００１５】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ４５のアミノ酸配列を含んでもよい。  
【００１６】
別の実施形態において、免疫原性組成物が提供される。本免疫原性組成物は、ａ）本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐ及びｂ）薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。  
【００１７】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じないｆＨｂｐを発現するＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株から調製されたベシクル調製物の表面に発現してもよい。  
【００１８】
ある特定の場合において、天然に生じないｆＨｂｐは、免疫原性組成物中に単離ポリペプチドとして存在してもよい。  
【００１９】
典型的な場合において、薬学的に許容される賦形剤は、アジュバントを含んでもよい。  
【００２０】
ある特定の場合において、本免疫原性組成物は、付加的なＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原をさらに含んでもよい。  
【００２１】
哺乳動物においてＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する抗体応答を誘発する方法が提供される。本方法は、本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐまたは本明細書中で提供される免疫原性組成物を哺乳動物に投与することを含んでもよい。  
【００２２】
ある特定の場合において、この投与することは、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対して殺菌性がある抗体の産生をもたらす。  
【００２３】
本明細書中で提供される天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸も開示される。天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸を含む組換え発現ベクターも本明細書中で提供される。例となる実施形態は、天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸または天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸を含む組換え発現ベクターを含む遺伝子改変宿主細胞を含む。  
【００２４】
別の免疫原性組成物が本明細書中で開示される。この免疫原性組成物は、ａ）本開示による天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸により遺伝子改変された遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞であって、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐが前記遺伝子改変宿主細胞によって産生されるよう遺伝子改変された遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞から得られ、コードされた天然に生じないｆＨｂｐを含む、ベシクル；及びｂ）薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。  
【００２５】
ある特定の場合において、ベシクルは、天然の外膜ベシクルであってもよい。  
【００２６】
ある特定の場合において、宿主細胞は、ｌｐｘＬ１遺伝子及び／またはｌｐｘＬ２遺伝子のポリペプチド産物の活性を低下させるか、またはなくすよう遺伝子改変されてもよい。  
【００２７】
例となる実施形態において、宿主細胞は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原の発現を増加させるよう遺伝子改変されている。  
【００２８】
哺乳動物においてＮｅｉｓｓｅｒｉａに対する抗体応答を誘発する方法が提供される。本方法は、哺乳動物に免疫原性組成物を投与することを含んでもよく、この免疫原性組成物は、ａ）本開示による天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸により遺伝子改変されている遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞であって、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐが前記遺伝子改変宿主細胞によって産生されるよう遺伝子改変されている遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞から得られ、コードされた天然に生じないｆＨｂｐを含む、ベシクル；及びｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】組換えｆＨｂｐ  ＩＤ７９野生型及び変異体の大きさ及び純度を示すＳＤＳポリアクリルアミドゲルである。レーン１はＢｅｎｃｈｍａｒｋ  Ｌａｄｄｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり；レーン２はｆＨｂｐ  ＩＤ７９野生型であり；レーン３はｆＨｂｐ  ＩＤ７９  Ｈ２２３Ｒ変異体であり；レーン４はｆＨｂｐ  ＩＤ７９  Ｈ２２３Ａ変異体である。それぞれ組換えｆＨｂｐを２μｇゲルに入れた。なお、アミノ酸の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づく。詳細に関しては実施例１を参照。
【図２】ＥＬＩＳＡによるヒトＨ因子のｆＨｂｐ  ＩＤ７９変異体Ｈ２２３Ａ及びＨ２２３Ｒとの結合。パネルＡは、ヒトＨ因子の結合を示す。ｆＨｂｐ  ＩＤ７９野生型（ＷＴ）は円の記号；ｆＨｂｐ  ＩＤ７９  Ｈ２２３Ａ変異体は三角の記号；ｆＨｂｐ  ＩＤ７９  Ｈ２２３Ｒ変異体はアスタリスクの記号である。パネルＢは、対照ｍＡｂであるＪＡＲ１１の結合を示す。なお、アミノ酸の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づく。詳細に関しては実施例２を参照。
【図３】ＥＬＩＳＡによるヒトＨ因子のｆＨｂｐ  ＩＤ２２変異体Ｔ２２１Ａ及びＨ２２３Ａとの結合。パネルＡは、ヒトＨ因子の結合を示す。ｆＨｂｐ  ＩＤ２２野生型（ＷＴ）は円の記号；ｆＨｂｐ  ＩＤ２２  Ｔ２２１Ａ変異体はアスタリスクの記号；ｆＨｂｐ  ＩＤ２２  Ｈ２２３Ａ変異体は三角の記号である。パネルＢは、対照ｍＡｂであるＪＡＲ１３の結合を示す。なお、Ｔ２２１及びＨ２２３の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づく。詳細に関しては実施例３を参照。
【図４】成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１、ｆＨｂｐ  ＩＤ２２、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９及びｆＨｂｐ  ＩＤ２８のアミノ酸配列のアライメントである。Ｈ２２３を矢印で示してある。
【図５−１】成熟ｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列のアライメントである。Ｈ２２３を矢印で示してある。
【図５−２】成熟ｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列のアライメントである。Ｈ２２３を矢印で示してある。
【図５−３】成熟ｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列のアライメントである。Ｈ２２３を矢印で示してある。
【図５−４】成熟ｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列のアライメントである。Ｈ２２３を矢印で示してある。
【図５−５】成熟ｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列のアライメントである。Ｈ２２３を矢印で示してある。
【図６】ｆＨｂｐモジュール群Ｉ〜ＩＸの略図である。
【図７】ｆＨｂｐ  ＩＤ７９ワクチンに対するマウスの殺菌反応を示すグラフである。ｆＨｂｐ  ＩＤ７９野生型（ＷＴ）及びｆＨｂｐ  ＩＤ７９  Ｈ２２３Ｒ変異体を試験した。ｆＨｂｐワクチンに関して、それぞれの記号は、個々の血清サンプルの力価を表わし、アルミニウム（アラム）対照群に関しては、それぞれの記号は、３つの血清サンプルのプールの力価を表わす。水平な線は、各群の幾何平均力価を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明及び本発明の特定の例となる実施形態を示す前に、本発明は、記載されている特定の実施形態に限定されるものではなく、したがって、当然、変化してもよいことが理解されるべきである。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるため、本明細書中で使用される術語は、特定の実施形態を記述するためのものに過ぎず、限定する意図はないことも理解されるべきである。  
【００３１】
値の範囲が示される場合、文脈が明らかに別のことを規定しない限り、その範囲の上限値と下限値の間にある、下限値の単位の１／１０までの間の各値及びその指定された範囲中の他の指定された任意の値または間の値が本発明内に包含されることが理解される。これらのより狭い範囲の上限値及び下限値は、独立してより狭い範囲に含まれてもよく、これも本発明の範囲内に包含され、指定された範囲の任意の具体的に除外された限界の対象となる。指定された範囲が限界の一方または両方を含む場合、そうした含まれる限界のいずれか両方を除外した範囲も本発明に含まれる。  
【００３２】
簡略化にするために個別の実施形態に関連して記載されている本発明のある特定の特徴はまた、組み合わせて１つの実施形態として提供されてもよいことを認識されたい。反対に、簡潔にするために１つの実施形態に関連して記載されている本発明のさまざまな特徴はまた、単独または任意の適した下位の組み合わせで提供されてもよい。参照アミノ酸配列に対するアミノ酸置換を含むアミノ酸改変に関係する実施形態のすべての組み合わせが、特に本発明に包含され、そのような組み合わせが、所望の特徴を有するポリペプチド、例えば、ヒトｆＨに対して天然に生じるｆＨｂｐの親和性よりも低い親和性を有する天然に生じないｆＨｂｐポリペプチドを含む限り、それぞれ及びすべての組み合わせが個々に、明確に開示されたかのように本明細書中で開示される。さらに、そのようなアミノ酸改変を記述する実施形態で列挙されるそのようなアミノ酸改変（アミノ酸置換を含む）のすべての下位の組み合わせも、特に本発明に包含され、そのようなアミノ酸改変のそれぞれ及びすべてのそのような下位の組み合わせが個々に明確に本明細書中で開示されたかのように本明細書中で開示される。  
【００３３】
別に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中で言及されるすべての刊行物は、刊行物を引用した関連する方法及び／または材料を開示し、記載するために参照によって本明細書に組み込まれる。  
【００３４】
本明細書中及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、文脈が明らかに別のことを規定しない限り、単数形「１つの（ａ）、（ａｎ）」及び「その、前記（ｔｈｅ）」は、複数の指示対象を含むことに注意すべきである。したがって、例えば、「１つの抗原（ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）」の言及には、複数のそのような抗原が含まれ、「前記タンパク質（ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」の言及には１つまたは複数のタンパク質の言及が含まれるなどである。  
【００３５】
本明細書中で述べられる公報は、単に本出願の出願日前のそれらの開示に関して提供されているに過ぎない。先の発明を理由に本発明がそのような公報に先行する権利がないことを認めると解釈されるべきではない。さらに、提供された公報の日付は、実際の公開日と異なる場合もあり、独立して確認を必要とする場合もある。  
【００３６】
詳細な説明  上述のとおり、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの株の少なくとも１つに対して殺菌性がある抗体を誘発することができる、バリアント３  ｆＨｂｐ由来の天然に生じないＨ因子結合タンパク質及びそのようなタンパク質の使用の方法が提供される。  
【００３７】
定義  文献においてＧＮＡ１８７０、ＧＮＡ１８７０、ＯＲＦ２０８６、ＬＰ２０８６（リポタンパク質２０８６）及び「７４１」としても知られている「Ｈ因子結合タンパク質」（ｆＨｂｐ）はＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓポリペプチドのクラスを指す。ｆＨｂｐはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株の表面に発現するリポタンパク質として自然界に見られる。ｆＨｂｐは、アミノ酸配列多様性及び免疫学的交差反応性（Ｍａｓｉｇｎａｎｉら（２００３年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：７８９〜９９）に基づいて３つのｆＨｂｐバリアント群に細分されている（いくつかの報告（Ｍａｓｉｇｎａｎｉら（２００３年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：７８９〜９９）ではバリアント１（ｖ．１）、バリアント２（ｖ．２）及びバリアント３（ｖ．３）並びに他の報告（例えば、Ｆｌｅｔｃｈｅｒら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２：２０８８〜２１００を参照）ではファミリーＡ及びＢとも呼ばれる）。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに見られるそれぞれ固有のｆＨｂｐには、ｎｅｉｓｓｅｒｉａ．ｏｒｇまたはｐｕｂｍｌｓｔ．ｏｒｇ／ｎｅｉｓｓｅｒｉａ／ｆＨｂｐ／のウェブサイトによりｆＨｂｐペプチドＩＤも付けられている。バリアント２（ｖ．２）ｆＨｂｐタンパク質（８０４７株、ｆＨｂｐ  ＩＤ７７由来）及びバリアント３（ｖ．３）ｆＨＢＰ（Ｍ１２３９株、ｆＨｂｐ  ＩＤ２８由来）の長さが、それぞれ、ＭＣ５８（ｆＨｂｐ  ＩＤ１）の長さと−１及び＋７アミノ酸残基だけ異なるため、ｖ．２及びｖ．３  ｆＨｂｐタンパク質に関する残基を指すために使用される番号付けはこれらのタンパク質の実際のアミノ酸配列に基づく番号付けとは異なる。  
【００３８】
「異種の」または「キメラの」という用語は、さまざまなソースまたは原種配列由来の構造によって定義される２つの構成要素を指す。例えば、「異種の」がキメラポリペプチドとの関連で使用される場合、このキメラポリペプチドは、異なる系統学的分類の異なるポリペプチドに由来してもよい、機能可能に連結されたアミノ酸配列を含んでもよい（例えば、α原種のアミノ酸配列由来の第１の構成要素及びβ原種のアミノ酸配列由来の第２の構成要素）。それぞれが異なる原種由来である２つ以上の限定されたセグメントを含むキメラポリペプチドは、天然に生じるものでもよく、または人工の（天然に生じない）ものでもよい。天然に生じるキメラに関するさらなる詳細についてはＢｅｅｒｎｉｎｋ  ＰＴ、Ｇｒａｎｏｆｆ  ＤＭ（２００９年）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １５５：２８７３〜８３を参照。天然に生じないキメラは、「人工キメラ」を指し、自然界には見られない異種の構成要素をもつｆＨｂｐを包含する。  
【００３９】
「異種」または「キメラ」ポリペプチドはまた、それぞれが異なるｆＨｂｐ（例えば、バリアント１、２または３）由来の２つ以上の異なる構成要素を含んでもよい。この構成要素は、ｆＨｂｐポリペプチドの長さ方向に沿った任意の位置で機能可能なように連結されてもよい。  
【００４０】
上記の任意のキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと関連した「異種の」は、異なる遺伝子（例えば、ｆＨＢＰ  ｖ．１ポリペプチドをコードする核酸由来の第１の構成要素及びｆＨＢＰ  ｖ．２ポリペプチドをコードする核酸由来の第２の構成要素）または異なる原種のアミノ酸配列（αもしくはβ）由来であってもよい機能可能に連結された核酸配列を含んでもよい。  
【００４１】
その他の例となる「異種」核酸としては、コード配列を含む核酸が調節エレメント（例えば、プロモーター）と機能可能に連結された発現コンストラクトが挙げられる。その調節エレメントは、コード配列の遺伝的起源と異なる遺伝的起源のものである（例えば、プロモーター、コード配列またはその両方に対する遺伝的起源が異なる場合もある対象の宿主細胞で発現させるため）。例えば、ｆＨｂｐポリペプチドまたはそのドメインをコードするポリヌクレオチドと機能可能に連結されたＴ７プロモーターは、異種核酸と言われることになる。  
【００４２】
組換え細胞に関連した「異種の」とは、核酸であって、それが存在する宿主細胞とは遺伝的起源が異なる核酸（またはポリペプチドなどの遺伝子産物）の存在を指す場合がある。例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａのある株のアミノ酸または核酸配列は、別の株のＮｅｉｓｓｅｒｉａ宿主とは異種である。  
【００４３】
アミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列（例えば、ｆＨｂｐバリアント３、例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９「由来の」アミノ酸配列）と関連した「由来の」は、参照ポリペプチドまたは核酸（例えば、天然に生じるｆＨｂｐタンパク質またはコード核酸）の配列ベースの配列を有するポリペプチドまたは核酸を示すことが意図され、ソースまたは前記タンパク質もしくは核酸が作られた方法に関して限定する意図はない。アミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列が「由来」してもよい参照ポリペプチド及び参照ポリヌクレオチドの非限定例としては、天然に生じるｆＨｂｐ、例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９及び天然に生じないｆＨｂｐが挙げられる。細菌の株と関連した「由来の」は、株が親株のインビボまたはインビトロ継代培養により得られた且つ／あるいは親株の改変によって得られた組換え細胞であることを示すことが意図される。  
【００４４】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸側鎖の化学的及び物理的特性（例えば、電荷、大きさ、疎水性／親水性）を共有する別のアミノ酸残基による相互のアミノ酸残基の置換を指す。「保存的置換」とは、アミノ酸残基の以下のグループ内における置換を含むことが意図される：ｇｌｙ、ａｌａ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ、ａｒｇ；及びｐｈｅ、ｔｙｒ。そのような置換についての指標は、対象のエピトープを提示するポリペプチドのアミノ酸配列のアライメントから引き出すことができる。  
【００４５】
「防御免疫」という用語は、哺乳動物に投与されるワクチンまたは免疫化スケジュールが、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患を予防する、その発症を遅らせるまたはその重症度を軽減させるか、あるいは疾患の症状を減らすか、または完全に解消する免疫応答を引き起こすことを意味する。防御免疫は、殺菌抗体の産生と同時に起る場合がある。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する殺菌抗体の産生は、ヒトにおけるワクチンの保護効果を予測するものと当該技術分野において受け入れられている（Ｇｏｌｄｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（１９６９年）Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １２９：１３０７；Ｂｏｒｒｏｗら（２００１年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．  ６９：１５６８）。  
【００４６】
「Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの株によって引き起こされる疾患」という語句は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓにヒトが感染した状態で存在するあらゆる臨床症状または臨床症状の組み合わせを包含する。これらの症状は、以下のものを含むが、これらに限定されるものではない：Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの病原性株による上気道（例えば、上咽頭及び扁桃腺の粘膜）での定着、粘膜及び粘膜下血管床への細菌の侵入、敗血症、敗血症性ショック、炎症、出血性皮膚病変、線維素溶解及び血液凝固の活性化、腎不全、肺不全及び心不全などの臓器不全、副腎大量出血及び筋梗塞、毛細血管漏出、浮腫、末梢性肢虚血、呼吸促迫症候群、心膜炎及び髄膜炎。  
【００４７】
抗原（例えば、ポリペプチド抗原）と関連した「特異的に抗体と結合する」または「特異的に〜と免疫反応性」という語句は、他の分子の不均質な集団も含む可能性があるサンプル中の抗原の存在に基づく及び／またはそれを立証する結合反応を指す。したがって、指定した条件下において、特定の抗体（複数可）は、サンプル中の特定の抗原（複数可）と結合するが、サンプル中に存在する他の分子とは相当量で結合しない。抗原のエピトープ（例えば、ポリペプチドのエピトープ）と関連した「特異的に抗体と結合する」または「特異的に〜と免疫反応性」は、他のエピトープの不均質な集団並びに抗原の不均質な集団も含む可能性がある抗原（例えば、
ポリペプチド）中のエピトープの存在に基づいて及び／またはそれを立証する結合反応を指す。したがって、指定した条件下において、特定の抗体（複数可）は、抗原の特定のエピトープと結合するが、抗原及び／またはサンプル中に存在する他のエピトープとは相当量で結合しない。  
【００４８】
「免疫応答を誘発するのに十分な量で」という語句は、特定の抗原調製物の投与の前後で測定された免疫応答の指標の間に検出可能な差があることを意味する。免疫応答の指標としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない：酵素結合免疫測定（ＥＬＩＳＡ）、殺菌アッセイ、フローサイトメトリー、免疫沈降、オークタロニー免疫拡散；例えば、スポット、ウエスタンブロットまたは抗原アレイの結合検出アッセイ；細胞毒性アッセイなどのアッセイによって検出される抗体の力価または特異性。  
【００４９】
「表面抗原」とは、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの表面構造（例えば、外膜、莢膜、線毛など）に存在する抗原である。  
【００５０】
「単離された」とは、目的とする分子であって、その分子が天然に生じる可能性のある環境とは異なる環境にある目的とする分子を指す。「単離された」は、サンプル内にある化合物／ポリペプチドを含み、そのサンプルは、目的とする化合物／ポリペプチドが実質的に濃縮されている且つ／またはサンプル中で目的とする化合物／ポリペプチドが部分的または実質的に精製されていることが意図される。  
【００５１】
「濃縮される」とは、サンプルが（例えば、科学者または臨床医によって）非自然的に操作され、その結果、目的とする化合物が、生物学的サンプルなどの開始サンプル（例えば、化合物が天然に生じているか、もしくは投与後にその化合物が存在しているサンプル）またはその化合物（例えば、細菌ポリペプチド、抗体、ポリペプチド及び同種のものとして）がつくられた開始サンプル中の化合物の濃度よりも高い濃度（例えば、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも６４倍高いまたはそれ以上）で存在することを意味する。  
【００５２】
ターゲット遺伝子と関連した「ノックアウト」とは、例えば、ターゲット遺伝子の発現が検出できないか、またはわずかである且つ／あるいは遺伝子産物が機能しないか、または大きくは機能しないようターゲット遺伝子の働きを低減させる遺伝子の配列の変更を指す。例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）合成に関与する遺伝子の「ノックアウト」は、遺伝子の働きが実質的に低減され、その結果、その遺伝子の発現が検出できないか、もしくはわずかなレベルでしか存在しない且つ／またはその遺伝子産物の生物学的活性（例えば、酵素活性）が改変の前と比較して著しく低下しているか、もしくは検出できないことを示す。「ノックアウト」は、条件付きノックアウトを包含し、この場合、例えば、予め定めた一連の条件（例えば、温度、モル浸透圧濃度、ターゲット遺伝子の変更を促進する物質への曝露、など）への曝露時にターゲット遺伝子の変更が生じてもよい。ターゲット遺伝子の「ノックイン」とは、ターゲット遺伝子によってもたらされる機能を高める遺伝子の遺伝学的変更を指す。  
【００５３】
天然に生じないＦＨＢＰポリペプチド  本開示によって意図されるさらなるｆＨｂｐを記述する前に、天然に生じるｆＨｂｐのいくつかを記載することは役に立つ。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに見られる天然に生じる特有のｆＨｂｐは、ｎｅｉｓｓｅｒｉａ．ｏｒｇ及びｐｕｂｍｌｓｔ．ｏｒｇ／ｎｅｉｓｓｅｒｉａ／ｆＨｂｐのウェブサイトにより、それぞれｆＨｂｐペプチドＩＤが付けられている。このｆＨｂｐの命名の規則が本開示全体にわたって適用されることになる。  
【００５４】
都合上及び明確にするために、未変性のｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸配列（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ  ＭＣ５８株のｖ．１  ｆＨｂｐ）が、天然に生じる並びに本明細書に記載のキメラのｆＨｂｐ及び／またはｆＨｂｐの変異体を包含する天然に生じないｆＨｂｐのすべてのアミノ酸配列のアミノ酸位置を示す参照配列として選択されている。ｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸配列を以下に提示する：  ｆＨｂｐ  ＩＤ１（ｖ．１）ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＦＱＴＥＱＩＱＤＳＥＨＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＮＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰＤＧＫＲＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号：１）。  
【００５５】
ｆＨｂｐのアミノ酸残基の位置を言及する際に、本明細書中で使用される位置番号は、ｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸残基番号に対応する。  
【００５６】
さまざまなｆＨｂｐのアライメント及びｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸残基に対応する各ｆＨｂｐのアミノ酸残基に関しては図４を参照。図４及び配列番号：１に示されるとおり、位置番号１は、ｆＨｂｐ  ＩＤ１に示される最初のアミノ酸残基を指し、システインである。本明細書中で言及されるｆＨｂｐは、Ｎ末端に付加的なリーダー配列を含む場合もある。例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ１は、Ｎ末端にＶＮＲＴＡＦＣＣＬＳＬＴＴＡＬＩＬＴＡ（配列番号：２）のリーダー配列を有する場合もある。ただし、どのｆＨｂｐアミノ酸位置番号１も、アライメントのｆＨｂｐ  ＩＤ１に関して上で示されたアミノ酸位置１のシステインに対応する位置と本明細書中では定義され、リーダー配列が存在する場合、このアミノ酸は、リーダー配列の後の１番目の残基である。  
【００５７】
図４は、バリアント１、２及び３  ｆＨｂｐのｆＨｂｐ配列のアライメントを示している。なお、ｆＨｂｐ  ＩＤ２８（バリアント３）またはｆＨｂｐ  ＩＤ７９（バリアント３）のアミノ酸位置２３０は、ｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸位置２２３に対応する。ｖ．２  ｆＨｂｐに関して（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ２２）、そのアミノ酸位置は２２２である。Ｈ２２３を矢印で示してある。このアライメントは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＣｌｕｓｔａｌＷを使用して実行された。アミノ酸の一致はアスタリスクで表わされており、高い類似性はコロンで表わされており、低い類似性はピリオドで表わされており、類似性なしは何も書かれていないスペースで表わされている。  
【００５８】
本開示は、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐ（ｖ．３  ｆＨｂｐ）由来の天然に生じないｆＨｂｐ、これを含む組成物並びに天然に生じないｆＨｂｐ及び組成物の使用の方法を提供する。ある特定の実施形態において、天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含み、２２３位の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づき、天然に生じないｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）に対して天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐよりも低い親和性を有する。  
【００５９】
ｆＨｂｐ  ＩＤ７９またはｆＨｂｐ  ＩＤ２８の配列に関して、本明細書に記載の天然に生じないｆＨｂｐにおいて置換されているヒスチジンは、２３０位に対応する。具体的には、変異したヒスチジンは、ｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列の配列ＴＹＨＬＡ内のＨである。  
【００６０】
ヒトＨ因子（「ヒトｆＨ」）とは、本明細書中で使用される場合、下に示すとおりのアミノ酸配列（配列番号：３）含むタンパク質及び天然に生じるそのヒト対立遺伝子バリアントを指す。  
【００６１】
ヒトＨ因子（ｆＨ）ＭＲＬＬＡＫＩＩＣＬＭＬＷＡＩＣＶＡＥＤＣＮＥＬＰＰＲＲＮＴＥＩＬＴＧＳＷＳＤＱＴＹＰＥＧＴＱＡＩＹＫＣＲＰＧＹＲＳＬＧＮＶＩＭＶＣＲＫＧＥＷＶＡＬＮＰＬＲＫＣＱＫＲＰＣＧＨＰＧＤＴＰＦＧＴＦＴＬＴＧＧＮＶＦＥＹＧＶＫＡＶＹＴＣＮＥＧＹＱＬＬＧＥＩＮＹＲＥＣＤＴＤＧＷＴＮＤＩＰＩＣＥＶＶＫＣＬＰＶＴＡＰＥＮＧＫＩＶＳＳＡＭＥＰＤＲＥＹＨＦＧＱＡＶＲＦＶＣＮＳＧＹＫＩＥＧＤＥＥＭＨＣＳＤＤＧＦＷＳＫＥＫＰＫＣＶＥＩＳＣＫＳＰＤＶＩＮＧＳＰＩＳＱＫＩＩＹＫＥＮＥＲＦＱＹＫＣＮＭＧＹＥＹＳＥＲＧＤＡＶＣＴＥＳＧＷＲＰＬＰＳＣＥＥＫＳＣＤＮＰＹＩＰＮＧＤＹＳＰＬＲＩＫＨＲＴＧＤＥＩＴＹＱＣＲＮＧＦＹＰＡＴＲＧＮＴＡＫＣＴＳＴＧＷＩＰＡＰＲＣＴＬＫＰＣＤＹＰＤＩＫＨＧＧＬＹＨＥＮＭＲＲＰＹＦＰＶＡＶＧＫＹＹＳＹＹＣＤＥＨＦＥＴＰＳＧＳＹＷＤＨＩＨＣＴＱＤＧＷＳＰＡＶＰＣＬＲＫＣＹＦＰＹＬＥＮＧＹＮＱＮＨＧＲＫＦＶＱＧＫＳＩＤＶＡＣＨＰＧＹＡＬＰＫＡＱＴＴＶＴＣＭＥＮＧＷＳＰＴＰＲＣＩＲＶＫＴＣＳＫＳＳＩＤＩＥＮＧＦＩＳＥＳＱＹＴＹＡＬＫＥＫＡＫＹＱＣＫＬＧＹＶＴＡＤＧＥＴＳＧＳＩＲＣＧＫＤＧＷＳＡＱＰＴＣＩＫＳＣＤＩＰＶＦＭＮＡＲＴＫＮＤＦＴＷＦＫＬＮＤＴＬＤＹＥＣＨＤＧＹＥＳＮＴＧＳＴＴＧＳＩＶＣＧＹＮＧＷＳＤＬＰＩＣＹＥＲＥＣＥＬＰＫＩＤＶＨＬＶＰＤＲＫＫＤＱＹＫＶＧＥＶＬＫＦＳＣＫＰＧＦＴＩＶＧＰＮＳＶＱＣＹＨＦＧＬＳＰＤＬＰＩＣＫＥＱＶＱＳＣＧＰＰＰＥＬＬＮＧＮＶＫＥＫＴＫＥＥＹＧＨＳＥＶＶＥＹＹＣＮＰＲＦＬＭＫＧＰＮＫＩＱＣＶＤＧＥＷＴＴＬＰＶＣＩＶＥＥＳＴＣＧＤＩＰＥＬＥＨＧＷＡＱＬＳＳＰＰＹＹＹＧＤＳＶＥＦＮＣＳＥＳＦＴＭＩＧＨＲＳＩＴＣＩＨＧＶＷＴＱＬＰＱＣＶＡＩＤＫＬＫＫＣＫＳＳＮＬＩＩＬＥＥＨＬＫＮＫＫＥＦＤＨＮＳＮＩＲＹＲＣＲＧＫＥＧＷＩＨＴＶＣＩＮＧＲＷＤＰＥＶＮＣＳＭＡＱＩＱＬＣＰＰＰＰＱＩＰＮＳＨＮＭＴＴＴＬＮＹＲＤＧＥＫＶＳＶＬＣＱＥＮＹＬＩＱＥＧＥＥＩＴＣＫＤＧＲＷＱＳＩＰＬＣＶＥＫＩＰＣＳＱＰＰＱＩＥＨＧＴＩＮＳＳＲＳＳＱＥＳＹＡＨＧＴＫＬＳＹＴＣＥＧＧＦＲＩＳＥＥＮＥＴＴＣＹＭＧＫＷＳＳＰＰＱＣＥＧＬＰＣＫＳＰＰＥＩＳＨＧＶＶＡＨＭＳＤＳＹＱＹＧＥＥＶＴＹＫＣＦＥＧＦＧＩＤＧＰＡＩＡＫＣＬＧＥＫＷＳＨＰＰＳＣＩＫＴＤＣＬＳＬＰＳＦＥＮＡＩＰＭＧＥＫＫＤＶＹＫＡＧＥＱＶＴＹＴＣＡＴＹＹＫＭＤＧＡＳＮＶＴＣＩＮＳＲＷＴＧＲＰＴＣＲＤＴＳＣＶＮＰＰＴＶＱＮＡＹＩＶＳＲＱＭＳＫＹＰＳＧＥＲＶＲＹＱＣＲＳＰＹＥＭＦＧＤＥＥＶＭＣＬＮＧＮＷＴＥＰＰＱＣＫＤＳＴＧＫＣＧＰＰＰＰＩＤＮＧＤＩＴＳＦＰＬＳＶＹＡＰＡＳＳＶＥＹＱＣＱＮＬＹＱＬＥＧＮＫＲＩＴＣＲＮＧＱＷＳＥＰＰＫＣＬＨＰＣＶＩＳＲＥＩＭＥＮＹＮＩＡＬＲＷＴＡＫＱＫＬＹＳＲＴＧＥＳＶＥＦＶＣＫＲＧＹＲＬＳＳＲＳＨＴＬＲＴＴＣＷＤＧＫＬＥＹＰＴＣＡＫＲ  天然に生じるｆＨｂｐは、ｆＨと複合体を形成する可能性が高く、結合したｆＨは、宿主の免疫系からのｆＨｂｐの１つまたは複数のエピトープを隠すことができる。それゆえに、ｆＨと複合体を形成した且つ／または結合したｆＨｂｐは、そのように複合体を形成していない���Ｈｂｐほど有効な免疫源ではない可能性もある。反対に、ｆＨに対する親和性が比較的低いｆＨｂｐは、免疫源として（例えば、ワクチン組成物として）投与されると、免疫された宿主の免疫系に対してエピトープを提示することができるが、ｆＨに対する親和性が高いｆＨｂｐはしない。本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対して親和性が低く、殺菌抗体を誘発にする且つ／またはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する防御免疫をもたらすのに有用である。天然に生じないｆＨｂｐは、自然界では見つかっておらず、ヒトによって作製されている且つ／またはヒトによって意図的に改変されている。天然に生じない対象のｆＨｂｐは、化学合成または組換え法により作製することができる。天然に生じないｆＨｂｐは、それが由来した天然に生じるｆＨｂｐと比較して変異を含む。そのように、本開示の天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じないｆＨｂｐのアミノ酸配列を含む。  
【００６２】
本明細書中で使用さ
れる場合、「低い親和性」、「より低い親和性」または「低いｆＨバインダー」とは、ヒトｆＨに対してｖ．３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９）の結合親和性よりも低い結合親和性を有するｆＨｂｐを指す。  
【００６３】
本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐとヒトｆＨの結合親和性は、ヒトｆＨに対する野生型ｖ．３  ｆＨｂｐの結合親和性の８５％以下である。例えば、一部の実施形態において、ヒトｆＨに対する対象の天然に生じないｆＨｂｐの結合親和性は、ヒトｆＨに対する野生型ｆＨｂｐの結合親和性の約８５％から約７５％、約７５％から約６５％、約６５％から約５５％、約５５％から約４５％、約４５％から約３５％、約３５％から約２５％、約２５％から約１５％、約１５％から約１０％、約１０％から約５％、約５％から約２％、約２％から約１％もしくは約１％から約０．１％または０．１％未満である。例として、一部の実施形態において、対象の天然に生じないｆＨｂｐのヒトｆＨに対する結合親和性は、ヒトｆＨに対するｖ．３  ｆＨｂｐの結合親和性の約８５％から約７５％、約７５％から約６５％、約６５％から約５５％、約５５％から約４５％、約４５％から約３５％、約３５％から約２５％、約２５％から約１５％、約１５％から約１０％、約１０％から約５％、約５％から約２％、約２％から約１％もしくは約１％から約０．１％または０．１％未満である。  
【００６４】
結合親和性は、解離定数（ＫＤ）に換算して示すことができる。対象の天然に生じないｆＨｂｐとヒトｆＨは、野生型ｆＨｂｐ（ｖ．３  ｆＨｂｐなど、例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９またはｆＨｂｐ  ＩＤ２８）とヒトｆＨの解離定数（ＫＤ；Ｍ）よりも少なくとも約８０％超、少なくとも約１００％超、少なくとも約１２０％超、少なくとも約１４０％超、少なくとも約１６０％超、少なくとも約２００％超、またはそれ以上であるＫＤを有してもよい。対象の天然に生じないｆＨｂｐのＫＤはまた、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９の約２×（２倍）、約３×、約５×、約１０×、約１５×、約２０×、最大約５０×以上のＫＤと示されてもよい。例えば、対象の天然に生じないｆＨｂｐとヒトｆＨは、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９とヒトｆＨのＫＤの１１０％または約１５×のＫＤを有してもよい。  
【００６５】
上述のとおり、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、ｖ．３  ｆＨｂｐ由来のものである。バリアント群３（ｖ．３）と分類されるｆＨｂｐについては、Ｍａｓｉｇｎａｎｉら（２００３年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：７８９〜９９及びＰａｊｏｎ  Ｒら（２０１０年）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２８：２１２２〜９に記載されている。既知のｖ．３  ｆＨｂｐ及びＧｅｎＢａｎｋ受託番号の一覧がＢｅｅｒｎｉｎｋ  Ｐ．Ｔ．及びＧｒａｎｏｆｆ  Ｄ．  Ｍ．（２００９年）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．  ２００９年９月；１５５（Ｐｔ  ９）：２８７３〜８３に提供されている。表１は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ元株、莢膜群及び対応するモジュール群、ペプチドＩＤ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を含む例となるｖ．３  ｆＨｂｐの一覧を示している。
【表１】
2016527278.tif 000003
2016527278.tif 000004
【００６６】
天然に生じるｖ．３  ｆＨｂｐの一部の例のアミノ酸配列を以下に示す。ｖ．３  ｆＨｂｐはリーダー配列を含むが、以下に示す配列は、このリーダー配列を含んでおらず、代わりに上で示したｆＨｂｐ  ＩＤ１配列を基準にして１位に対応するシステイン残基で始まる。  
【００６７】
ｆＨｂｐ  ＩＤ２８ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＴＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＬＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：４）  ｆＨｂｐ  ＩＤ４６ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＧＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：５）  ｆＨｂｐ  ＩＤ７６ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＩＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：６）  ｆＨｂｐ  ＩＤ２９ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＧＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＴＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＴＩＤＦＴＮＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：７）  ｆＨｂｐ  ＩＤ９９ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：８）  ｆＨｂｐ  ＩＤ３０ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＤＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＴＩＤＦＴＮＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＬＮＶＤＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：９）  ｆＨｂｐ  ＩＤ６４ＣＳＳＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＴＩＤＦＴＮＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＬＮＶＤＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１０）  ｆＨｂｐ  ＩＤ４５ＣＳＳＧＳＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１１）  ｆＨｂｐ  ＩＤ４７ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＳＩＡＧＫＱ（配列番号：１２）  ｆＨｂｐ  ＩＤ７９ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＴＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩ���ＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１３）  ｆＨｂｐ  ＩＤ８４ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＤＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＳＩＡＧＫＱ（配列番号：１４）  ｆＨｂｐ  ＩＤ５９ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＴＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＳＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１５）  ｆＨｂｐ  ＩＤ８２ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＶＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＥＬＡＴＡＥＬＫＡＤ
ＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１６）  ｆＨｂｐ  ＩＤ３１ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＴＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１７）  ｆＨｂｐ  ＩＤ８５ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＴＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１８）  ｆＨｂｐ  ＩＤ７０ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：１９）  ｆＨｂｐ  ＩＤ７２ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＴＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：２０）  ｆＨｂｐ  ＩＤ６７ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＲＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬ���ＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＧＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：２１）  ｆＨｂｐ  ＩＤ１７５ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＲＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＤＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：２２）  上述のとおり、本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じるｖ．３  ｆＨｂｐ由来のものであってもよい。例となるｖ．３  ｆＨｂｐは、上に挙げられている。天然に生じるｆＨｂｐは、異なる原種（α及び／またはβ）由来の可変セグメントを有する。可変セグメントのために、分子構築は、モジュール式であることが示され、ｆＨｂｐバリアントは、それぞれαまたはβ型と呼ばれる２つの遺伝系統のうちの１つに由来する５つの可変セグメント（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）のさまざまな組み合わせに従ってモジュール群に細分類することができる（Ｐａｊｏｎ  Ｒら（２０１０年）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２８：２１２２〜９；Ｂｅｅｒｎｉｎｋ  ＰＴ、Ｇｒａｎｏｆｆ  ＤＭ（２００９年）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １５５：２８７３〜８３）。ＩからＶＩと呼ばれる６つのモジュール群は、既知のすべてのｆＨｂｐバリアントの９５％超を占める（Ｐａｊｏｎ  Ｒら（２０１０年）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２８：２１２２〜９）。  
【００６８】
ｆＨｂｐモジュール構造の略図を図６に示す。２４２の特有のアミノ酸バリアントの系統学的分析から導き出された９つのｆＨｂｐモジュール群の概略図が示されている。それぞれのＭａｓｉｇｎａｎｉバリアント群の呼称及びそれぞれのｆＨｂｐモジュール群内に見られる特有の配列の数が示されている。α系統由来の可変セグメントを灰色で示し、β系統由来の可変セグメントを白で示す。  
【００６９】
ある特定の実施形態において、ｖ．３  ｆＨｂｐは、モジュール群ＩＩ  ｆＨｂｐであってもよい。群ＩＩ  ｆＨｂｐは、完全にβ型セグメントからなる（ｆＨｂｐ可変セグメント：Ａβ、Ｂβ、Ｃβ、Ｄβ及びＥβ）。例となるモジュール群ＩＩ  ｆＨｂｐを表１に示す。  
【００７０】
ある特定の実施形態において、ｖ．３  ｆＨｂｐはモジュール群Ｖ  ｆＨｂｐであってもよい。モジュール群Ｖ  ｆＨｂｐは、α及びβセグメントの天然のキメラから成り、以下の示した原種のｆＨｂｐ可変セグメントを有する：Ａβ、Ｂβ、Ｃβ、Ｄα及びＥβ。例となるモジュール群Ｖ  ｆＨｂｐを表１に示す。  
【００７１】
ある特定の実施形態において、ｖ．３  ｆＨｂｐはモジュール群ＶＩＩＩ  ｆＨｂｐであってもよい。モジュール群ＶＩＩＩ  ｆＨｂｐはα及びβセグメントから成り、以下の示した原種のｆＨｂｐ可変セグメントを有する：Ａβ、Ｂα、Ｃβ、Ｄβ及びＥβ。例となるモジュール群ＶＩＩＩ  ｆＨｂｐを表１に示す。  
【００７２】
ある特定の実施形態において、ｖ．３  ｆＨｂｐはモジュール群ＩＸ  ｆＨｂｐであってもよい。モジュール群ＩＸ  ｆＨｂｐは、α及びβセグメントから成り、以下の示した原種のｆＨｂｐ可変セグメントを有する：Ａβ、Ｂα、Ｃβ、Ｄα及びＥβ。例となるモジュール群ＩＸ  ｆＨｂｐを表１に示す。  
【００７３】
ある特定の実施形態において、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含む天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有してもよい。ある特定の場合において、同一性は、セグメント（例えば、モジュール構築において定義されるとおりの可変セグメント）内、２つ以上可変セグメント中または完全長型成熟タンパク質中にあってもよい。  
【００７４】
対象の天然に生じないｆＨｂｐは、バリアント３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ７９）と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。ある特定の場合において、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、１アミノ酸（ａａ）から２５アミノ酸だけｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列と異なってもよく、例えば、１ａａ、２ａａ、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１３ａａ、１５ａａ、１８ａａ、２０ａａ、２２ａａ、２４ａａまたは２５ａａだけｖ．３  ｆＨｂｐのアミノ酸配列と異なる。したがって、例えば、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、対象のｆＨｂｐが由来するｖ．３  ｆＨｂｐと比較して１個まで、２個まで、３個まで、４個まで、６個まで、８個まで、１０個まで、１２個まで、１４個まで、１６個まで、１８個まで、最大２５個までまたはそれ以上の改変（例えば、置換、欠失もしくは挿入）を有してもよい。１つまたは複数のアミノ酸の変更により、変更されていないｆＨｂｐと比較してヒトｆＨに対するｆＨｂｐの親和性を低下させることができる。  
【００７５】
一部の実施形態において、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニンによるヒスチジンの置換を含む。上述のとおり、ｖ．３  ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ  ＩＤ４６、ｆＨｂｐ  ＩＤ２８、ｆＨｂｐ  ＩＤ７６、ｆＨｂｐ  ＩＤ２９、ｆＨｂｐ  ＩＤ９９、ｆＨｂｐ  ＩＤ３０、ｆＨｂｐ  ＩＤ６４、ｆＨｂｐ  ＩＤ４５、ｆＨｂｐ  ＩＤ４７、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９、ｆＨｂｐ  ＩＤ８４、ｆＨｂｐ  ＩＤ５９、ｆＨｂｐ  ＩＤ８２、ｆＨｂｐ  ＩＤ３１、ｆＨｂｐ  ＩＤ８５、ｆＨｂｐ  ＩＤ７０、ｆＨｂｐ  ＩＤ７２、ｆＨｂｐ  ＩＤ６７またはｆＨｂｐ  ＩＤ１７５であってもよい。  
【００７６】
例となるｖ．３  ｆＨｂｐのアライメントを図５に示す。Ｈ２２３の位置も示してある。参照配列、ｆＨｂｐ  ＩＤ１もこのアライメントに含まれる。特に、ｆＨｂｐ  ＩＤ１は、２２３位にヒスチジンがない。このアライメントは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＣｌｕｓｔａｌＷを使用して実行された。アミノ酸の一致はアスタリスクで表わされており、高い類似性はコロンで表わされており、低い類似性はピリオドで表わされており、類似性なしは何も書かれていないスペースで表わされている。  
【００７７】
本明細書中に示されるとおり、ｖ．３  ｆＨｂｐ由来でＨ２２３Ｒ置換を含むｆＨｂｐは、天然に生じるｖ．３  ｆＨｂｐと比較してヒトｆＨとの結合が低減された。したがって、アルギニン置換と比較して保存的なアミノ酸置換を含む非天然のｆＨｂｐも天然に生じるｖ．３  ｆＨｂｐと比較してヒトｆＨとの結合が低減されることが予測される。したがって、本開示は、アルギニン（Ｒ）と比較して保存的なアミノ酸置換を企図し、例えば、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｋも企図される。さらに、ｆＨｂｐとのｆＨの結合に対して立体障害をもたらすアミノ酸置換も企図される。例となるアミノ酸置換としては、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンなどの大きい疎水性側鎖を有するアミノ酸による置換が挙げられる。したがって、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｆ、Ｈ２２３Ｙ及びＨ２２３Ｗも企図される。  
【００７８】
一般に、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、２２３位にアラニンによるヒスチジンの置換を含まない。  
【００７９】
対象の天然に生じないｆＨｂｐの特徴の１つは、宿主（例えば、マウスまたはヒトなどの哺乳動物）に投与されると、対象のｆＨｂｐが、由来元のｖ．３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９、４６、２８、６７、１７５または５９）によって誘発される殺菌反応と同等レベル度またはそれ以上の殺菌反応を誘発することができることである。殺菌反応の程度を測定するための方法は、当該技術分野において知られている。ある特定の場合において、対象のｆＨｂｐにより免疫されたマウスの幾何平均殺菌力価は、バリアント３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９）により免疫されたマウスの幾何平均殺菌力価の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、
少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約２００％または２００％を超える。ある場合には、対象のｆＨｂｐにより免疫されたマウス幾何平均殺菌力価は、バリアント３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９）により免疫された対照マウスの幾何平均殺菌力価よりも少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍以上高い。対象のｆＨｂｐは、バリアント３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９）によって誘発される殺菌反応よりも著しく低い殺菌反応を誘発するものを除外することができる。  
【００８０】
多くの場合、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、１つまたは複数のＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌活性を有する抗体が結合する立体構造エピトープを保持し、提示する。したがって、そのようなｆＨｂｐ変異体は、ｆＨに対する天然に生じるｖ．３  ｆＨｂｐの結合親和性と比較してｆＨとの結合が低減されると同時に、天然に生じるｖ．３  ｆＨｂｐに見られるエピトープを保持していてもよい。変異体ｆＨｂｐが殺菌抗体を誘発するようｆＨｂｐの立体構造に対する影響が最小限であるか、または影響がない変異体は適したワクチン候補と考えられる。変異体がｆＨｂｐの立体構造に対して影響があるか否かは、ＪＡＲ３１、ＪＡＲ３３またはＪＡＲ１１抗体の結合を含むさまざまな方法で確認することができる。したがって、本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐは、ＪＡＲ３１、ＪＡＲ３３またはＪＡＲ１１抗体と結合してもよい。  
【００８１】
本開示のｆＨｂｐは、以下にさらに詳細に記載される付加的な特徴を有してもよい。  
【００８２】
キメラｆＨｂｐ  本開示の天然に生じないｆＨｂｐは、キメラｆＨｂｐであってもよい。本開示のキメラｆＨｂｐは、Ｃ末端ドメイン（ｆＨｂｐＣ）がｖ．３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９）由来であってもよいが、バリアント群１または２（ｖ．１もしくはｖ．２  ｆＨｂｐ）由来のｆＨｂｐのＮ末端ドメイン（ｆＨｂｐＮ）を有すると示されてもよく、天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含む。  
【００８３】
ある特定の実施形態において、本開示の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、バリアント群１のｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ１）のｆＨｂｐＮドメイン及びｖ．３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ２８）由来のｆＨｂｐＣドメインを有してもよく、天然に生じないキメラｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含む。  
【００８４】
ある特定の実施形態において、本開示の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、バリアント群１  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ１）由来のｆＨｂｐＮドメイン及びｖ．３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９）由来のｆＨｂｐＣドメインを有してもよく、天然に生じないｆＨｂｐは、天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含む。ある特定の場合において、ｆＨｂｐＮドメインは、天然に生じるｖ．１  ｆＨｂｐの４１位のアルギニンの置換を有してもよい。ある特定の場合において、置換は、Ｒ４１Ｓであってもよい。  
【００８５】
「ｆＨｂｐＮ」とは、およそ残基８位で始まり、およそ残基１３６位で終わる連続的なアミノ酸配列を指す。「ｆＨｂｐＣ」とは、およそ残基１４１位で始まり、およそ残基２５５位で終わる連続的なアミノ酸配列を指す。ｆＨｂｐＮとｆＨｂｐＣの間の介在配列は、２つのドメインの間のリンカーである。  
【００８６】
Ｈ２２３Ｒ、Ｈ２２３Ｗ、Ｈ２２３Ｆ、Ｈ２２３ＹまたはＨ２２３Ｋ置換を含むよう改変されてもよい例となるキメラｆＨｂｐは、任意の既知の人工キメラであってもよく、例えば、Ｂｅｅｒｎｉｎｋら（２００８年）Ｉｎｆｅｃ．  Ｉｍｍｕｎ．  ７６：２５６８〜２５７５及びＷＯ２００９／１１４４８５に示されるものなどであり、この開示を参照によって本明細書中に組み込んだものとする。置換を含むキメラは、対応するキメラｆＨｂｐに見られるものなどの殺菌反応を誘発するために重要なエピトープは変わらず保持しながら、対応するキメラｆＨｂｐと比較してヒトｆＨに対する親和性が低下していてもよい。改変されたキメラに保持されてもよいｆＨｂｐエピトープは、例えば、ＷＯ２００９／１１４４８５に示されるものなどの対応するキメラｆＨｂｐに見られるものを含み、この開示を参照によって本明細書中に組み込んだものとする。例えば、改変されたキメラｆＨｂｐは、バリアント１  ｆＨｂｐを含む株（例えば、ｍＡｂ  ＪＡＲ４及び／またはＪＡＲ５によって定義されるものなどのＮ末端ドメインのエピトープ）並びに／あるいはバリアント２及び／または３  ｆＨｂｐを含む株（例えば、ｍＡｂ  ＪＡＲ１０、ＪＡＲ１１、ＪＡＲ１３及び／またはＪＡＲ３６によって定義されるエピトープ）に対して殺菌抗体応答を誘発するために重要なエピトープを含んでいてもよい。  
【００８７】
例となるキメラを以下に示す。  
【００８８】
キメラ１／７９ｃｓｓｇｇｇｇｖａａｄｉｇａｇｌａｄａｌｔａｐｌｄｈｋｄｋｇｌｑｓｌｔｌｄｑｓｖｒｋｎｅｋｌｋｌａａｑｇａｅｋｔｙｇｎｇｄｓｌｎｔｇｋｌｋｎｄｋｖｓｒｆｄｆｉｒｑｉｅｖｄｇｑｌｉｔｌｅｓｇｅｆｑｖｙｋｑｓｈｓａｌｔａｆｑｔｅｑｉｑｄｓｅｈｓｇｋｍｖａｋｒｑｆｒｉｇｄｉａＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹ［Ｈ］ＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：２３）。小文字はｆＨｂｐ  ＩＤ１由来のアミノ酸配列に該当し、大文字はｆＨｂｐ  ＩＤ７９由来のアミノ酸に該当する。ｆＨｂｐ  ＩＤ７９のＨ２２３に対応する位置は大括弧で括ってある。したがって、本開示の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、Ｈ２２３Ｒ、Ｈ２２３Ｗ、Ｈ２２３Ｆ、Ｈ２２３ＹまたはＨ２２３ＫとなるＨ２２３の置換を有するキメラ１／７９の配列を含んでもよい。  
【００８９】
キメラ１（Ｒ４１Ｓ）／７９ｃｓｓｇｇｇｇｖａａｄｉｇａｇｌａｄａｌｔａｐｌｄｈｋｄｋｇｌｑｓｌｔｌｄｑｓｖｓｋｎｅｋｌｋｌａａｑｇａｅｋｔｙｇｎｇｄｓｌｎｔｇｋｌｋｎｄｋｖｓｒｆｄｆｉｒｑｉｅｖｄｇｑｌｉｔｌｅｓｇｅｆｑｖｙｋｑｓｈｓａｌｔａｆｑｔｅｑｉｑｄｓｅｈｓｇｋｍｖａｋｒｑｆｒｉｇｄｉａＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹ［Ｈ］ＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号：２４）。小文字はｆＨｂｐ  ＩＤ１由来のアミノ酸配列に該当し、大文字はｆＨｂｐ  ＩＤ７９由来のアミノ酸に該当する。４１位は、セリンによるＲの置換を含む。ｆＨｂｐ  ＩＤ７９のＨ２２３に対応する位置は大括弧で括ってある。したがって、本開示の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、Ｈ２２３Ｒ、Ｈ２２３Ｗ、Ｈ２２３Ｆ、Ｈ２２３ＹまたはＨ２２３ＫとなるＨ２２３の置換を有するキメラ１（Ｒ４１Ｓ）／７９の配列を含んでもよい。  
【００９０】
一般に、対象の天然に生じないｆＨｂｐは、２２３位にアラニンによるヒスチジンの置換を含まない。  
【００９１】
対象の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、バリアント３  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ７９）と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。同一性は、ｖ．３  ｆＨｂｐ由来の対象のキメラｆＨｂｐの領域及びｖ．３  ｆＨｂｐの対応する領域内にあってもよい。例えば、ｆＨｂｐ  Ｃドメインがｖ．３  ｆＨｂｐ由来であるキメラタンパク質において、同一性は、ｆＨｂｐ  Ｃドメインにあってもよい。  
【００９２】
対象の天然に生じないキメラｆＨｂｐの特徴の１つは、宿主（例えば、マウスまたはヒトなどの哺乳動物）に投与されると、対象のｆＨｂｐが、キメラが由来するバリアント群ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ１及びｆＨｂｐ  ＩＤ７９）によって誘発される殺菌反応と同等程度またはそれ以上の殺菌反応を誘発することができることである。  
【００９３】
殺菌反応の程度を測定するための方法は、当該技術分野において知られている。ある特定の場合において、対象のキメラｆＨｂｐにより免疫されたマウスの幾何平均殺菌力価は、ｆＨｂｐ  ＩＤ１またはｆＨｂｐ  ＩＤ７９により免疫されたマウスの幾何平均殺菌力価の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約２００％または２００％を超える。ある場合には、対象のｆＨｂｐにより免疫されたマウスの幾何平均殺菌力価は、ｆＨｂｐ  ＩＤ１またはｆＨｂｐ  ＩＤ７９により免疫された対照マウスの幾何平均殺菌力価よりも少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍または１０倍以上高い。  
【００９４】
対象のｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ  ＩＤ１またはｆＨｂｐ  ＩＤ７９によって誘発される殺菌反応よりも著しく低い殺菌反応を誘発するものを除外することができる。  
【００９５】
多くの場合、対象の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、１つまたは複数のＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌活性を有する殺菌抗体が結合する立体構造エピトープを保持し、提示する。したがって、そのようなｆＨｂｐ変異体は、ｆＨに対する天然に生じるｆＨｂｐの結合親和性と比較してｆＨとの結合が低減されると同時に、天然に生じるｆＨｂｐに見られるエピトープを保持していてもよい。キメラｆＨｂｐが殺菌抗体を誘発するようｆＨｂｐの立体構造に対する影響が最小限であるか、または影響がない本開示の天然に生じないキメラｆＨｂｐは、適したワクチン候補と考えられる。バリアントがｆＨｂｐの立体構造に対して影響があるか否かは、ＪＡＲ４、ＪＡＲ５、ＪＡＲ３１、ＪＡＲ３３またはＪＡＲ１１などの抗体の結合を含むさまざまな方法で確認することができる。  
【００９６】
本開示のｆＨｂｐは、以下にさらに詳細に記載される付加的な特徴を有してもよい。  
【００９７】
複合物  本開示の対象のｆＨｂｐは、ポリペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端に（例えば、対象のｆＨｂｐとは異種のアミノ酸配列を有する）ポリペプチド及び／または担体分子などの１つまたは複数の付加的なエレメントを含んでもよい。付加的な異種のアミノ酸配列は、例えば、細菌の宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）における発現の結果としてＮ末端メチオニンもしくはその誘導体（例えば、ピログルタメート）を得る且つ／またはＮ末端もしくはＣ末端に融合パートナーを有するキメラポリペプチドを得るために融合されてもよい。目的とする融合パートナーとしては、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｈｉｓ６−タグ及び同種のもの並びにその他のタンパク質、特に、リポタンパク質のリーダーペプチドが挙げられる。融合パートナーは、対象のｆＨｂｐの単離、精製、検出、免疫原性を促進する際などに付加的な特徴をもたらすことがある。  
【００９８】
対象のｆＨｂｐと連結されてもよいその他のエレメントとしては、担体分子（例えば、担体タンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ））が挙げら
れる。付加的なエレメントは、リンカー、例えば、柔軟なリンカーによってペプチドと連結されてもよい。担体は、免疫応答を直接または間接的に改変する分子である免疫調節物質を包含する。免疫調節物質の特定のクラスは、免疫応答を刺激するかまたは免疫応答の刺激を促進するものを含む。例としては、破傷風トキソイドを含むトキシンまたはその誘導体などの抗原及び抗原担体が挙げられる。投与を容易にするその他の担体分子及び／またはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する予防接種をされるか、もしくは治療されるべき対象における免疫原性を高めるためのその他の担体分子も企図される。担体分子はまた、目的とする細胞または組織への送達を促進することができる。付加的な部分はまた、ワクチンにおける免疫原性または構成要素との複合体の形成を促進してもよい。担体分子は、膜表面におけるエピトープの提示を容易にする足場タンパク質として働いてもよい（例えば、ベシクルワクチン）。  
【００９９】
一例において、対象のｆＨｂｐは、Ｎ末端及び／またはＣ末端に脂肪酸（例えば、脂肪族カルボン酸基）を含むよう改変される。脂肪酸は、柔軟なリンカーを介してｆＨｂｐと共有結合していてもよい。対象のｆＨｂｐの末端（例えば、Ｎ末端側、例えば、Ｎ末端）を改変するために使用されてもよい脂肪酸の例はラウリン酸である。ラウリン酸は、別の分子と共有結合すると、ラウロイル基と呼ばれる（例えば、ラウロイルスルファート）。ラウリン酸は、１０個のメチレン基を含む１２個の炭素原子を含み、式ＣＨ３−（ＣＨ２）１０−ＣＯＯＨである。対象のペプチドと連結されてもよいその他の脂肪酸としては、カプリル酸（１０Ｃ）、ミリスチン酸（１４Ｃ）及びパルミチン酸（１６Ｃ）が挙げられる。詳細に関しては、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ  ＭＡら（１９９５年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２：４０２１〜４０２５を参照。対象のｆＨｂｐを細菌の外膜に固定する役割を果たすことができる任意の疎水性部分は、本明細書中においては本開示のｆＨｂｐのＮ末端側及び／またはＣ末端側（例えば、Ｎ末端において）との結合が企図されると考えられ、この疎水性部分は、任意に本明細書に記載されるリンカー、例えば、柔軟なリンカーによりペプチドと結合していてもよい。例えば、Ｌｏｗｅｌｌ  ＧＨ  ら（１９８８年）Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １６７：６５８〜６３に記載の疎水性ペンタペプチドＦＬＬＡＶ（配列番号：２５）。  
【０１００】
上述のとおり、脂肪酸並びに上記のその他の付加的なエレメントがｆＨｂｐと連結される方法の１つは、リンカー（例えば、ラウロイル−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）を介してである。本開示のｆＨｂｐを改変する際に使用するのに適したリンカーとしては、「柔軟なリンカー」が挙げられる。適切なリンカーは、容易に選択することができ、１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）から２０アミノ酸、２アミノ酸から１５アミノ酸、３アミノ酸から１２アミノ酸、４アミノ酸から１０アミノ酸など、５アミノ酸から９アミノ酸、６アミノ酸から８アミノ酸または７アミノ酸から８アミノ酸などのさまざまな長さのうちの適切な長さの任意のものであってもよく、１、２、３、４、５、６もしくは７アミノ酸であってもよい。  
【０１０１】
柔軟なリンカーの例としては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、式中のｎが、少なくとも１の整数である（ＧＳ）ｎ、ＧＳＧＧＳｎ及びＧＧＧＳｎを含む）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー及び当該技術分野において既知のその他の柔軟なリンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン−セリンポリマーは対象となるものである。その理由は、これらのアミノ酸は両方とも相対的に組織化されていないため、構成要素間でニュートラルな鎖として働くことが可能であるからである。グリシンはアラニンよりも著しくラマチャンドラン（またはφ−ψ）空間に近づき、それより長い側鎖をもつ残基より大きく制限されないため、グリシンポリマーは特に対象となるものである（Ｓｃｈｅｒａｇａ、Ｒｅｖ．  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．  １１１７３〜１４２（１９９２年）を参照）。例となる柔軟なリンカーとしては、ＧＧＳＧ（配列番号：２６）、ＧＧＳＧＧ（配列番号：２）、ＧＳＧＳＧ（配列番号：２８）、ＧＳＧＧＧ（配列番号：２９）、ＧＧＧＳＧ（配列番号：３０）、ＧＳＳＳＧ（配列番号：３１）及び同種のものが挙げられるが、それらに限定されるものではない。上記の任意のエレメントと結合したｆＨｂｐの設計は、リンカーが柔軟なリンカー並びに柔軟性が劣る構造を与える１つまたは複数の部分を含んでもよいよう、全体または部分的に柔軟なリンカーを含んでもよいことを当業者は理解するであろう。  
【０１０２】
未変性のｆＨｂｐは、一般に脂質部分が共有結合され得るＮ末端システインを含む。このシステイン残基は、天然に生じるタンパク質では一般に脂質付加されており、本明細書中で開示の対象のｆＨｂｐにおいても脂質付加される場合がある。したがって、本明細書に記載のアミノ酸配列において、この位置の「システイン」または「Ｃ」の言及は、特に、無修飾のシステイン並びに（例えば、翻訳後修飾により）脂質付加されたシステインの両方の言及を含む。したがって、対象のｆＨｂｐは、脂質付加されていても、または脂質付加されていなくてもよい。インビトロ（例えば、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら（２００１年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５５：１３５〜４８を参照）またはインビボにおける脂質付加されたタンパク質の産生方法は当該技術分野において知られている。例えば、以前は脂質付加されたｆＨｂｐが、界面活性剤抽出によってＥ．ｃｏｌｉタンパク質の膜部分から精製されている（Ｆｌｅｔｃｈｅｒら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７２：２０８８〜１００）。この方法は、脂質付加されたｆＨｂｐの産生に適している場合もある。脂質付加されたタンパク質は、可溶性タンパク質よりも免疫原性が高い場合があるため、対象とされてもよい（例えば、Ｆｌｅｔｃｈｅｒら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７２：２０８８〜１００を参照）。  
【０１０３】
異種ｆＨｂｐをコードするヌクレオチド配列は、対象の宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、ヒト（ＤＮＡベースのワクチンの場合）、及び同種のもの）における発現を促進するためにコドン使用頻度を最適化するよう改変されてもよいことが理解されるであろう。コドン最適化配列を生成するための方法は当該技術分野において知られている。  
【０１０４】
ｆＨｂｐをコードする核酸  本開示は、対象のｆＨｂｐをコードする核酸を提供する。対象の核酸は、一部の実施形態において組換え発現コンストラクトとして存在することになる。対象の核酸を含む遺伝子改変宿主細胞も提供される。  
【０１０５】
本開示のｆＨｂｐポリペプチド及びコード核酸は、任意の適切なＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株由来のものであってもよい。当該技術分野において知られているとおり、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株は、さまざまな表面抗原と相互に作用するポリクローナル抗体（Ｆｒａｓｃｈ，  Ｃ．  Ｅ．及びＣｈａｐｍａｎ、１９７３年、Ｊ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．  １２７：１４９〜１５４）またはモノクローナル抗体による反応に基づいて血清群（莢膜群）、血清型（ＰｏｒＢ表現型）及び亜型（ＰｏｒＡ表現型）に分けられる。莢膜の分類は、従来、免疫学的に検出可能な莢膜多糖の多様性に基づいてきたが、構造的に異なる莢膜多糖の生合成に関与する特定の酵素をコードする遺伝子のＰＣＲに置き換えられつつある。（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、２９−Ｅ及びＷ−１３５を含む）約１２の莢膜群が知られている。莢膜群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ及びＷ−１３５の株がほぼすべての髄膜炎菌性疾患の原因となる。血清型判定は、従来、モノクローナル抗体が決定するポリンＢ（ＰｏｒＢ）と呼ばれる外膜タンパク質の抗原性の差に基づくものであった。約２１の血清型を決定する抗体が現在知られている（Ｓａｃｃｈｉら、１９９８年、Ｃｌｉｎ．  Ｄｉａｇ．  Ｌａｂ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５：３４８）。血清亜型判定は、抗体が決定するポリンＡ（ＰｏｒＡ）と呼ばれる外膜タンパク質に関する抗原多様性に基づくものであった。血清型判定及び血清亜型判定の両方とも、それぞれｍＡｂの反応性と関連づけられるＰｏｒＢ及びＰｏｒＡの可変領域をコードする遺伝子の特定のためのＰＣＲ及び／またはＤＮＡ配列決定に置き換えられつつある（例えば、Ｓａｃｃｈｉ，  Ｌｅｍｏｓら、上記；Ｕｒｗｉｎら、１９９８年、Ｅｐｉｄｅｍ．  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔ．  １２０：２５７）。  
【０１０６】
任意の莢膜群のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株が使用されてもよいが、莢膜群ＢのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株がｆＨｂｐ及びそのドメインをコードする核酸が由来するソースであってもよい。  
【０１０７】
本明細書中で意図される対象のｆＨｂｐの構築に使用するためのｆＨｂｐポリペプチドをコードする核酸は当該技術分野において知られている。さまざまなｆＨｂｐ及びそれらの配列がｎｅｉｓｓｅｒｉａ．ｏｒｇ及びｐｕｂｍｌｓｔ．ｏｒｇ／ｎｅｉｓｓｅｒｉａ／ｆＨｂｐのウェブサイトで入手できる。ｆＨｂｐポリペプチドの例は、例えば、米国特許出願第６１／１７４，４２４号、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０９／３６５７７号、ＷＯ２００４／０４８４０４；Ｍａｓｉｇｎａｎｉら（２００３年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：７８９〜７９９；Ｆｌｅｔｃｈｅｒら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２：２０８８〜２１００；Ｗｅｌｓｃｈら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４年  １７２：５６０６〜５６１５；及びＷＯ９９／５７２８０にも記載されている。ｆＨｂｐバリアントに関する核酸（及びアミノ酸）配列もＧｅｎＢａｎｋで提供されている。  
【０１０８】
本明細書中で開示の対象のｆＨｂｐへの使用が企図される関連性のあるアミノ酸配列を特定するために、未成熟ｆＨｂｐは約１９残基のリーダー配列を含むことに留意すべきである。さらに、アミノ酸配列が提供された場合、当業者は、そのようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし、それを発現させることができる核の配列を容易に想起することができる。  
【０１０９】
本明細書中で提供される特定のアミノ酸配列及び核酸配列に加えて、本開示は、アミノ酸及び核酸のそのような例と配列が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である配列を有するポリペプチド及び核酸も企図する。２つ以上のポリヌクレオチド配列または２つ以上のアミノ酸配列と関連した「同一の」またはパーセントの「同一性」という用語は、比較され、指定された領域、例えば、ＶＥまたは少なくとも約４０、４５、５０、５５、６０、６５以上のアミノ酸もしくはヌクレオチド長の指定された領域にわたって最大一致するようアライメントされた場合に、同じであるか、または特定のパーセンテージ（例えば、特定の領域にわたって少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％同一）の同じアミノ酸残基またはヌクレオチドを有し、参照アミノ酸またはヌクレオチド配列の全長まで可能である（例えば、完全長型ｆＨｂｐ）２つの以上の配列または部分配列を指す。本開示は、特に天然に生じる多型と合成的に生成されるアミノ酸配列及びそれらをコードする核酸の両方を企図する。  
【０１１０】
配列比較について、一般に１つの配列は、試験配列が比較される参照配列（例えば、天然に生じるｆＨｂｐポリペプチド配列またはそのセグメント）の役割を果たす。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列がコンピュータプログラムに入力され、必要に応じて配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。配列比較アルゴリズムは、その後、指定されたプログラムパラメータに基づいて参照配列と比較した試験
配列（複数可）に関する配列同一性パーセントを算出する。  
【０１１１】
配列同一性パーセントを求めるのに適したアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３〜４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９〜３４０２に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公的に利用することができる。さらなる例となるアルゴリズムとしては、ＣｌｕｓｔａｌＷが挙げられる（Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｄら（１９９４年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２２：４６７３〜４６８０）。  
【０１１２】
同一でない一部の残基位置は、保存的なアミノ酸置換によって異なる。保存的なアミノ酸置換とは、類似した側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸のグループはグリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンであり、脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸のグループはセリン及びトレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸のグループはアスパラギン及びグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸のグループはフェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンであり、酸性側鎖を有するアミノ酸のグループはアスパラギン酸及びグルタミン酸であり、塩基性側鎖を有するアミノ酸のグループはリジン、アルギニン及びヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のグループはシステイン及びメチオニンである。  
【０１１３】
２つの核酸の間の配列同一性はまた、ストリンジェントな条件下における２つの分子の互いのハイブリダイゼーションに関して示すことができる。ハイブリダイゼーション条件は当該技術分野において標準的な方法に従って選択される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨークを参照）。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例は、５０℃以上及び０．１×ＳＳＣ（１５ｍＭの塩化ナトリウム／１．５ｍＭのクエン酸ナトリウム）におけるハイブリダイゼーションである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、５０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％のデキストラン硫酸及び２０ｍｇ／ｍｌの変性した断片化サケ精子ＤＮＡの溶液中で４２℃において一晩インキュベーションし、続いて約６５℃の０．１×ＳＳＣ中でフィルターを洗浄することである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、少なくとも上の典型的な条件と同程度にストリンジェントであるハイブリダイゼーション条件であり、この場合、条件は、上の特定のストリンジェントな条件と比べて少なくとも約８０％ストリンジェント、一般に少なくとも９０％ストリンジェントである場合、少なくともストリンジェントと見なされる。  
【０１１４】
産生の方法  本開示のｆＨｂｐは、組換え法及び非組換え法（例えば、化学合成）を含む任意の適した方法によって産生することができる。対象のｆＨｂｐが組換え技術を使用して産生される場合、この方法は、任意の適切なコンストラクト及び任意の適切な宿主細胞を伴ってもよく、この宿主細胞は、原核生物または真核生物の細胞、一般には、細菌もしくは酵母菌宿主細胞、より一般には、細菌細胞であってもよい。遺伝物質を宿主細胞へ導入するための方法としては、例えば、形質転換、エレクトロポレーション、コンジュゲーション、リン酸カルシウム法及び同種のものが挙げられる。転写のための方法は、導入されたｆＨｂｐコード核酸を安定して発現させるよう選択されてもよい。ｆＨｂｐコード核酸は遺伝性エピソームエレメント（例えば、プラスミド）として提供されてもよく、またはゲノム的に組み込まれてもよい。  
【０１１５】
ｆＨｂｐコード核酸を転写するための適切なベクターは、構成がさまざまであってもよい。組込みベクターは、条件的に複製または自殺プラスミド、バクテリオファージ、及び同種のものであってもよい。コンストラクトとしては、例えば、プロモーター、選択遺伝子マーカー（例えば、抗生物質（例えば、カナマイシン、エリスロマイシン、クロラムフェニコールまたはゲンタマイシン）に対する耐性を付与する遺伝子）、複製開始点（宿主細胞、例えば、細菌の宿主細胞における複製を促進するため）、及び同種のものを含むさまざまなエレメントを挙げることができる。ベクターの選択は、増殖が望まれる細胞の種類及び増殖の目的などのさまざまな要因によって左右されることになる。ある特定のベクターは、大量の所望のＤＮＡ配列を増幅及び作製するのに有用である。その他のベクターは、培養下の細胞における発現に適している。さらに他のベクターは、動物全体の細胞における転写及び発現に適している。適切なベクターの選択は十分当該技術分野の技術範囲内である。多くのそのようなベクターが商業的に入手可能である。  
【０１１６】
一例において、ベクターは、薬剤耐性選択マーカー及びさまざまな宿主細胞において（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉとＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの両方において）自律複製をもたらすエレメントを含むエピソームプラスミドベースの発現ベクターである。そのような「シャトルベクター」の一例は、プラスミドｐＦＰ１０（Ｐａｇｏｔｔｏら（２０００年）Ｇｅｎｅ  ２４４：１３〜１９）である。  
【０１１７】
コンストラクトは、例えば、一般に、ベクターの切断された制限酵素部位へのＤＮＡリガーゼによる連結によって対象のポリヌクレオチドをコンストラクトの主鎖に挿入することによって作製することができる。あるいは、所望のヌクレオチド配列が相同組換えまたは部位特異的な組換えによって挿入されてもよい。一般に、相同組換えは、ベクターと相同の領域を所望のヌクレオチド配列の隣接部のベクターに連結することによって達成され、部位特異的な組換えは、部位特異的な組換えを促進する配列（例えば、ｃｒｅ−ｌｏｘ、ａｔｔ部位など）の使用により達成することができる。そのような配列を含む核酸は、例えば、オリゴヌクレオチドのライゲーションによってまたは相同の領域と所望のヌクレオチド配列の部分との両方を含むプライマーを使用したポリメラーゼ連鎖反応によって付加することができる。  
【０１１８】
ベクターは、宿主細胞における染色体外維持をもたらすことができるか、または宿主細胞ゲノムへの組込みをもたらすことができる。ベクターについては、例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、（１９９９年）Ｆ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓなどの当業者に周知の多数の刊行物に詳しく記載されている。ベクターは、対象のｆＨｂｐをコードする核酸を発現させてもよく、対象の核酸を増幅させてもよく、またはその両方であってもよい。  
【０１１９】
使用されてもよいベクターの例としては、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ由来のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９／１８、ｐＵＣ１１８、１１９及びＭ１３ｍｐシリーズのベクターなどのプラスミドベクターが使用されてもよい。ｐＥＴ２１も使用されてもよい発現ベクターである。バクテリオファージベクターとしては、λｇｔ１０、λｇｔ１１、λｇｔ１８−２３、λＺＡＰ／Ｒ及びＥＭＢＬシリーズのバクテリオファージベクターを挙げることができる。利用されてもよいさらなるベクターとしては、ｐＪＢ８、ｐＣＶ１０３、ｐＣＶ１０７、ｐＣＶ１０８、ｐＴＭ、ｐＭＣＳ、ｐＮＮＬ、ｐＨＳＧ２７４、ＣＯＳ２０２、ＣＯＳ２０３、ｐＷＥ１５、ｐＷＥ１６及びｃｈａｒｏｍｉｄ９シリーズのベクターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。  
【０１２０】
対象のｆＨｂｐの発現のために、発現カセットが利用されてもよい。したがって、本開示は、対象の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。本発現ベクターは、転写及び翻訳制御配列を提供し、誘導可能な発現または構成的な発現をもたらしてもよく、この場合、コード領域は転写開始領域並びに転写及び翻訳停止領域の転写制御下において機能可能に連結される。これらの制御領域は、対象のｆＨｂｐが由来するｆＨｂｐに固有のものであってもよく、または外来のソース由来であってもよい。一般に、転写及び翻訳制御配列としては、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終結配列、翻訳開始及び終結配列及びエンハンサーまたはアクチベーター配列を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。プロモーターは、構成型または誘導型のいずれかであってもよく、強力な構成型プロモーター（例えば、Ｔ７及び同種のもの）であってもよい。  
【０１２１】
発現ベクターは、一般に対象のタンパク質をコードする核酸配列の挿入を実現するためにプロモーター配列の側に位置する都合のよい制限部位を有する。ベクターを含む細胞の選択を容易にするために発現宿主において有効な選択マーカーが存在してもよい。さらに、発現コンストラクトは、付加的なエレメントを含んでもよい。例えば、発現ベクターは１つまたは２つの複製系を有してもよく、それにより、発現ベクターが発現のための生物、例えば、哺乳動物または昆虫細胞並びにクローニング及び増幅のための原核生物の宿主中に保持される。さらに発現コンストラクトは、形質転換された宿主細胞の選択を可能にするために選択マーカー遺伝子を含んでもよい。選択遺伝子は、当該技術分野において周知であり、使用される宿主細胞によって異なる。  
【０１２２】
本開示のｆＨｂｐは、検出可能な標識、例えば、放射性標識、蛍光標識、ビオチン標識、免疫学的に検出可能な標識（例えば、ＨＡタグ、ポリヒスチジンタグ）及び同種のものなどの付加的なエレメントを含んでもよいことに留意すべきである。ｆＨｂｐの付加的なエレメントは、さまざまな方法（例えば、アフィニティーキャプチャーなど）により単離（例えば、ビオチンタグ、免疫学的に検出可能なタグ）を容易にすることができる。対象のｆＨｂｐは、任意に共有結合または非共有結合により支持体に固定されてもよい。  
【０１２３】
ｆＨｂｐの単離及び精製は、当該技術分野において既知の方法に従って達成することができる。例えば、ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐを発現するよう遺伝子改変された細胞のライセートまたは合成反応混合物からイムノアフィニティ精製によって単離することができる。イムノアフィニティ精製は、一般にサンプルを抗ｆＨｂｐ抗体（例えば、ＪＡＲ５  ＭＡｂもしくは当該技術分野において既知のその他の適切なＪＡＲ  ＭＡｂなどの抗ｆＨｂｐ  ｍＡｂ）と接触させ、非特異的に結合した材料を除去するために洗浄し、特異的に結合したｆＨｂｐを溶出することを含む。単離ｆＨｂｐは、透析及びタンパク質精製に通常利用されるその他の方法によってさらに精製されてもよい。一例において、ｆＨｂｐは、金属キレートクロマトグラフィー法を使用して単離されてもよい。  
【０１２４】
宿主細胞  多くの適切な宿主細胞のいずれかをｆＨｂｐの産生に使用することができる。一般に、本明細書に記載のｆＨｂｐは、原核生物または真核生物、一般的には細菌、より一般的にはＥ．ｃｏｌｉもしくはＮｅｉｓｓｅｒｉａ（例えば、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）において従来の技術に従って発現させられてもよい。したがって、本開示は、対象のｆＨｂｐをコードする核酸を含む遺伝子改変宿主細胞をさらに提供する。対象のｆＨｂｐの産生（大規模産生を含む）のための宿主細胞は、さまざまな入手可能な宿主細胞のいずれかから選択されてもよい。発現のための宿主細胞の例としては、細菌（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ株）、酵母菌（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
、Ｐｉｃｈｉａ菌種及び同種のもの）などの原核生物または真核生物の単細胞生物のものが挙げられ、昆虫、脊椎動物、特に、哺乳動物、（例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ及び同種のもの）などのもとは高等生物由来の宿主細胞を挙げることもできる。一般に、細菌宿主細胞及び酵母菌が、対象のｆＨｂｐ産生に対して特に対象となる。  
【０１２５】
対象のｆＨｂｐは、実質的に純粋または実質的に単離された形態（すなわち、その他のＮｅｉｓｓｅｒｉａもしくは宿主細胞のポリペプチドを実質的に含まない）または実質的に単離された形態で調製されてもよい。対象のｆＨｂｐは、存在する可能性のある他の成分（例えば、その他のポリペプチドまたはその他の宿主細胞の成分）と比較してポリペプチドが濃縮された組成物中に存在してもよい。ポリペプチドがその他の発現ポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在するよう、精製された対象のｆＨｂｐが提供されてもよく、例えば、組成物の９０％未満、一般に６０％未満、より一般に５０％未満がその他の発現ポリペプチドで構成されている。  
【０１２６】
ベシクル産生のための宿主細胞  対象のｆＨｂｐが膜ベシクル（下でさらに詳細に述べるとおり）中にもたらされるべき場合、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞は対象のｆＨｂｐを発現するよう遺伝子改変される。さまざまなＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌種の株のいずれかが対象のｆＨｂｐを産生するよう改変されてもよく、これは任意に、ＰｏｒＡなどの対象の他の抗原を産生するまたは産生することができるよう改変されてもよく、本明細書中で開示の方法で使用されてもよい。  
【０１２７】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ株の遺伝子改変及び所望のポリペプチドの発現をもたらすための方法及びベクターは当該技術分野において知られている。ベクター及び方法の例については、ＷＯ０２／０９７４６及びＯ’Ｄｗｙｅｒら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２：６５１１〜８０に見出すことができる。強力なプロモーター、特に、強力な構成型プロモーターが特に対象となる。プロモーターの例としては、ＰｏｒＡ、ＰｏｒＢ、ｌｂｐＢ、ｔｂｐＢ、ｐ１１０、ｈｐｕＡＢ、ｌｇｔＦ、ｏｐａ、ｐ１１０、ｌｓｔ、ｈｐｕＡＢ及びｒｍｐのプロモーターが挙げられる。ある特定の実施形態において、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ株は、本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐの産生を十分に高いレベルにするために組換え技術によって改変される。そのように改変された株は、一般に、天然に生じないｆＨｂｐを発現するよう遺伝子改変されていない親細胞におけるｆＨｂｐ産生を１．５、２、２，５  ３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６，５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０倍以上超える天然に生じないｆＨｂｐの発現レベルをもたらすよう作製される。ある特定の実施形態において、親細胞は、内因性ｆＨｂｐをノックアウトし、天然に生じないｆＨｂｐを過剰発現するよう遺伝子改変されてもよい。  
【０１２８】
病原性のＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌種または病原性のＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌種由来の株、特に、ヒトに対して病原性のあるまたはヒトに対して病原性があるかもしくは片利共生の株由来の株が特に、膜ベシクル産生に使用するための対象となる。Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌの菌種の例としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎ．ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎ．ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎ．ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｅａ、Ｎ．ｃｉｎｅｒｅａ、Ｎ．ｍｕｃｏｓａ、Ｎ．ｓｕｂｆｌａｖａ、Ｎ．ｓｉｃｃａ、Ｎ．ｅｌｏｎｇａｔａ及び同種のものが挙げられる。  
【０１２９】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株は、対象のｆＨｂｐを発現させるための遺伝子改変のため及びベシクル産生に使用するために特に対象となる。ベシクル産生に使用される株は、望まれ得る多くの異なる特徴により選択されてもよい。例えば、株は、以下のものに準じて選択されてもよい：所望のＰｏｒＡ型（上記のような「血清亜型」）、莢膜群、血清型など；低下した莢膜多糖産生及び同種のもの。例えば、産生株は、任意の所望のＰｏｒＡポリペプチドを産生することができ、１つまたは複数のＰｏｒＡポリペプチド（天然にまたは遺伝子改変によるかのいずれか）を発現してもよい。株の例としては、Ｐ１．７，１６；Ｐ１．１９，１５；Ｐ１．７，１；Ｐ１．５，２；Ｐ１．２２ａ，１４；Ｐ１．１４；Ｐ１．５，１０；Ｐ１．７，４；Ｐ１．１２，１３の血清亜型を与えるＰｏｒＡポリペプチド；並びに血清亜型判定に使用される従来の血清学的試薬との反応性を保持していてもよく、または保持していなくてもよいそのようなＰｏｒＡポリペプチドのバリアントを産生する株が挙げられる。ＰｏｒＡ可変領域（ＶＲ）分類（例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌら（２００４年）Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １０：６７４〜６７８；Ｓａｃｃｈｉ  ＣＴら（１９９８年）Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：８４５〜５５；Ｓａｃｃｈｉら（２０００年）Ｊ．  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １８２：１１６９〜１１７６を参照）に従って特徴づけられるＰｏｒＡポリペプチドも対象となる。相当な数の異なるＶＲタイプが確認されており、これを、ＶＲ１及びＶＲ２ファミリー「プロトタイプ」に分類することができる。この術語体系及びそれの従前の分類方式との関係を示すウェブによりアクセス可能なデータベースは、ｎｅｉｓｓｅｒｉａ．ｏｒｇ／ｎｍ／ｔｙｐｉｎｇ／Ｐｏｒａで見つけられる。ある特定のＰｏｒＡ  ＶＲ１及びＶＲ２型のアライメントについては、Ｒｕｓｓｅｌｌら（２００４年）Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １０：６７４〜６７８に提供されている。  
【０１３０】
あるいはまたはさらに、産生株は莢膜欠損株であってもよい。莢膜欠損株は、ワクチンが投与される対象において（例えば、宿主細胞表面のシアル酸と交差反応する抗体の産生が原因の）重大な自己抗体応答を誘発するリスクを低減したベシクルベースのワクチンを提供することができる。「莢膜欠損」または「莢膜多糖の欠乏」とは、本明細書中で使用される場合、天然に生じる株の莢膜多糖のレベルよりも低い、または株が遺伝子改変されている場合は、莢膜欠損株が由来する親株より細菌表面の莢膜多糖の量が少ないことを指す。莢膜欠損株としては、少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％以上、表面莢膜多糖産生が低下した株が挙げられ、さらに細菌の表面に莢膜多糖が（例えば、抗莢膜多糖抗体を使用した全細胞酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）によって）検出できない株が挙げられる。  
【０１３１】
莢膜欠損株としては、天然に生じるか、または組換えで生じた遺伝子改変による莢膜欠損の株が挙げられる。天然に生じる莢膜欠損株（例えば、Ｄｏｌａｎ−Ｌｉｖｅｎｇｏｏｄら（２００３年）Ｊ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．  １８７：１６１６〜２８を参照）並びに莢膜欠損株を特定及び／または生成する方法（例えば、Ｆｉｓｓｅｈａら（２００５年）Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｉｍｍｕｎ．  ７３：４０７０〜４０８０；Ｓｔｅｐｈｅｎｓら（１９９１年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ５９：４０９７〜１０２；Ｆｒｏｓｃｈら（１９９０年）Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４：１２１５〜１２１８を参照）は当該技術分野において知られている。  
【０１３２】
莢膜多糖の産生を低下させるＮｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞の改変は、莢膜合成に関与する１つまたは複数の遺伝子の改変を含んでもよく、この場合、この改変により、例えば、改変前の親細胞と比較して莢膜多糖のレベルが低減される。そのような遺伝子改変としては、株を莢膜欠損にする１つまたは複数の莢膜生合成遺伝子のヌクレオチド及び／またはアミノ酸配列の変更を挙げることができる（例えば、１つまたは複数の莢膜生合成遺伝子における１つまたは複数の挿入、欠失、置換などによる）。莢膜欠損株は、１つまたは複数の莢膜遺伝子が欠如しているか、または機能しなくてもよい。  
【０１３３】
シアル酸生合成が不完全な株が特に対象となる。そのような株は、ヒトシアル酸抗原と交差反応する抗シアル酸抗体を誘発するリスクが低減されたベシクルを産生することができ、製造の安全性をさらに改善することができる。シアル酸生合成に欠陥がある株（天然に生じた改変または人工的な改変のいずれかによる）には、シアル酸生合成経路の多くの異なる遺伝子のいずれかに欠陥がある場合がある。Ｎ−アセチルグルコサミン−６−ホスファート  ２−エピメラーゼ遺伝子（ｓｙｎＸ  ＡＡＦ４０５３７．１またはｓｉａＡ  ＡＡＡ２０４７５として知られる）によってコードされる遺伝子産物に欠陥がある株が特に対象となり、この遺伝子が不活化されている株が特に対象である。例えば、一実施形態では、莢膜欠損株は、機能的なｓｙｎＸ遺伝子産物の産生を阻害することによって作製される（例えば、Ｓｗａｒｔｌｅｙら（１９９４年）Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  １７６：１５３０〜４を参照）。  
【０１３４】
莢膜欠損株は、例えば、莢膜多糖のレベルが低い株を選択するための殺菌性の抗莢膜抗体の使用によって非組換え技術を使用して天然に生じる株から作製されてもよい。  
【０１３５】
本開示が２つ以上の株の使用を含む場合（例えば、対象のｆＨｂｐをもたらす異なる株からのベシクルを含む抗原性組成物を生成するため）、株は、例えば、使用される対象のｆＨｂｐ、ＰｏｒＡなどが異なるベシクルを得るために１つまたは複数の株の特徴が異なるよう選択されてもよい。  
【０１３６】
ベシクルの調製  本開示によって企図される抗原性組成物は、一般に対象のｆＨｂｐを発現するＮｅｉｓｓｅｒｉａ細胞から調製されるベシクルを含む。本明細書中で言及されるとおり、「ベシクル」は、外膜ベシクル並びに微小胞（泡状突起とも呼ばれる）を包含することが意図される。  
【０１３７】
本抗原性組成物は、対象のｆＨｂｐを発現するよう遺伝子改変されたＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ菌種の培養株の外膜から調製される外膜ベシクル（ＯＭＶ）を含んでもよい。ＯＭＶは、ブロスまたは固形培養培地で増殖させられたＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから得られてもよく、好ましくは、（例えば、ろ過によってまたは細胞をペレット状にする低速遠心分離もしくは同種のものによって）細菌細胞を培養培地から分離し、（例えば、界面活性剤の添加、浸透圧ショック、超音波処理、キャビテーション、均質化もしくは同種のものによって）細胞を溶解させ、（例えば、ろ過によってあるいは外膜及び／もしくは外膜ベシクルの示差的沈殿または凝集によって、あるいは外膜分子を特異的に認識するリガンドを使用したアフィニティー分離法によってあるいは外膜及び／もしくは外膜ベシクルをペレット状にする高速遠心分離または同種のものによって）細胞質分子から外膜部分を分離することにより得られてもよく、外膜部分は、ＯＭＶを生成するために使用されてもよい。  
【０１３８】
本抗原性組成物は、対象のｆＨｂｐを含む微小胞（ＭＶ）（または「泡状突起」）を含んでもよく、この場合、ＭＶまたは泡状突起は、対象のｆＨｂｐを発現するよう遺伝子改変されたＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株の培養の間に放出される。例えば、ＭＶは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの株をブロス培養培地で培養し、（例えば、ろ過によってまたは小さな泡状突起ではなく細胞のみをペレット状にする低速遠心分離または同種のものによって）ブロス培養培地から全細胞を分離し、その後、（例えば、ＭＶのろ過、示差的沈殿もしくは凝集によって、または泡状突起をペレット状にする高速遠心分離あるいは同種のものによって）細胞を含まない培養培地中に存在するＭＶを回収することにより得られてもよい。ＭＶの産生に使用するための株は、一般に培養で産生される泡状突起の量に基づいて選択することができる（例えば、細菌は、本明細書に記載される方法の単離及び投与に適した泡状突起を産生させるために妥当な数に培養されてもよい）。高レベルの泡状突起を産生する例となる株については、ＰＣＴ公報番号第ＷＯ０１／３４６４２号に記載されている。泡状突起の
産生に加えて、ＭＶ産生に使用するための株はまた、ＮｓｐＡ産生に基づいて選択されてもよく、この場合、より高レベルのＮｓｐＡを産生する株が特に対象とされてもよい（さまざまなＮｓｐＡ産生レベルを有するＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株の例としては、例えば、Ｍｏｅら（１９９９年  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｉｍｍｕｎ．  ６７：５６６４）を参照）。泡状突起の産生に使用するためのその他の対象の株としては、不活化したＧＮＡ３３遺伝子を有する株が挙げられ、この遺伝子は、細胞分離、膜構築及びビルレンスに必要とされるリポタンパク質をコードする（例えば、Ａｄｕ−Ｂｏｂｉｅら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．７２：１９１４〜１９１９を参照）。  
【０１３９】
本開示の抗原性組成物は、１つの株または２、３、４、５つ以上の株からのベシクルを含んでもよく、この株は、互いに同種または異種であってもよく、一般には異種であってもよい。例えば、株は、ＰｏｒＡ及び／または対象のｆＨｂｐが由来するｆＨｂｐに関して同種または異種であってもよい。ベシクルは、２つ以上の対象のｆＨｂｐ（例えば、１、２、３つ以上の対象のｆＨｂｐ）を発現する株から調製されてもよく、このｆＨｂｐは異なるバリアント（ｖ．１、ｖ．２もしくはｖ．３）またはサブバリアント（例えば、ｖ．１、ｖ．２もしくはｖ．３のサブバリアント）のｆＨｂｐアミノ酸配列から構成されてもよい。  
【０１４０】
本抗原性組成物は、同じかまたは異なる対象のｆＨｂｐをもたらすＯＭＶとＭＶの混合物を含んでもよく、この場合、対象のｆＨｂｐは、ｆＨｂｐバリアント及び／またはサブバリアントのさまざまな組み合わせのエピトープを任意に提示してもよく、ＯＭＶ及び／またはＭＶは、同じかまたは異なる株由来であってもよい。異なる株由来のベシクルは、混合物として投与されてもよく、または連続的に投与されてもよい。  
【０１４１】
所望の場合（例えば、ベシクルを産生するために使用される株がエンドトキシンまたは特に高レベルのエンドトキシンと関連している場合）、ベシクルは、エンドトキシンを低減するため、例えば、投与後の毒性を低減するために任意に処理される。下で述べるとおり、最も望ましい訳ではないが、エンドトキシンの低減は、適切な界面活性剤（例えば、０．１〜１０％、好ましくは０．５〜２％の濃度のＢＲＩＪ−９６、デオキシコール酸ナトリウム、ナトリウムラウロイルサルコシナート、Ｅｍｐｉｇｅｎ  ＢＢ、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ＴＷＥＥＮ２０（ソルビタンモノラウレートポリオキシエチレン）、ＴＷＥＥＮ８０及びＳＤＳ）を用いた抽出によって達成することができる。界面活性剤抽出が使用される場合、デオキシコール酸塩以外の界面活性剤を使用するのが好ましい。  
【０１４２】
抗原性組成物のベシクルは、界面活性剤を用いずに、例えば、デオキシコール酸塩を使用せずに調製されてもよい。界面活性剤処理はエンドトキシン活性を除去するのに有用であるが、ベシクル産生中の抽出によって、未変性のｆＨｂｐリポタンパク質及び／または（脂質付加されたｆＨｂｐを含む）対象のｆＨｂｐを激減させる場合もある。したがって、界面活性剤を必要としない技術を使用してエンドトキシン活性を低下させることが特に望ましい場合もある。１つのアプローチでは、ヒトへの使用に先立って最終調製物からエンドトキシンを除去する必要性を避けるために、エンドトキシン（リポ多糖、ＬＰＳ）の産生が比較的少ない株が使用される。例えば、ベシクルは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ変異体から調製されてもよく、その中のリポオリゴ糖またはワクチンに望ましくない可能性もあるその他の抗原（例えば、Ｒｍｐ）が低減または除去される。  
【０１４３】
ベシクルは、リピドＡの毒性活性を低下させるか、または検出できなくする遺伝子改変を含むＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株から調製されてもよい。例えば、そのような株は、リピドＡ生合成に関して遺伝子改変されていてもよい（Ｓｔｅｅｇｈｓら（１９９９年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６７：４９８８〜９３；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｅｙら（２００１年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６９：５９８１〜９０；Ｓｔｅｅｇｈｓら（２００４年）Ｊ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｓ  １０：１１３〜９；Ｆｉｓｓｈａら（２００５年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７３：４０７０）。本免疫原性組成物は、それぞれｌｐｘＬ１もしくはｌｐｘＬ２によりコードされる酵素のダウンレギュレーション及び／または不活化などＬＰＳの変更によって毒性が除かれてもよい。ｌｐｘＬ１変異体で行われるペンタアシル化リピドＡの産生は、ｌｐｘＬ１によりコードされる酵素がＧｌｃＮ  ＩＩの２’位にあるＮ結合型３−ＯＨ  Ｃ１４にＣ１２を付加することを示す。ｌｐｘＬ２変異体に見られる主なリピドＡ種は、テトラアシル化されており、これは、ｌｐｘＬ２によりコードされる酵素が他のＣ１２を、すなわちＧｌｃＮ  Ｉの２位にあるＮ結合型３−ＯＨ  Ｃ１４に付加することを示す。これらの遺伝子の発現を低減させる（もしくは発現させない）（またはこれらの遺伝子産物の活性を低下させるかもしくはなくす）変異により、リピドＡの毒性活性が変更される（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｅｙら（２００１年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６９：５９８１〜９０）。テトラアシル化リピドＡ（ｌｐｘＬ２変異体）及びペンタアシル化リピドＡ（ｌｐｘＬ１変異体）は野生型のリピドＡよりも毒性が低い。リピドＡ  ４’−キナーゼコード遺伝子（ｌｐｘＫ）の変異もリピドＡの毒性活性を低下させる。ベシクル（例えば、ＭＶまたはＯＭＶ）の産生に使用するために特に対象となるものは、機能的なｌｐｘＬ１コードタンパク質を低減するか、または検出不可能にするよう遺伝子改変されたＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株であり、例えば、このＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌（例えば、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株）は、ｌｐｘＬ１遺伝子の遺伝子産物の活性を低下させるか、またはなくすよう遺伝子改変されている。例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌は、ｌｐｘＬ１遺伝子ノックアウトをもつよう遺伝子改変されてもよく、例えば、ｌｐｘＬ１遺伝子が破壊されている。例えば、米国特許出願公開第２００９／００３５３２８号を参照。Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌は、ｌｐｘＬ２遺伝子の遺伝子産物の活性を低下させるか、またはなくすよう遺伝子改変されてもよい。Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌は、ｌｐｘＬ１遺伝子及びｌｐｘＬ２遺伝子の遺伝子産物の活性を低下させるか、またはなくすよう遺伝子改変されてもよい。そのようなベシクルは、対象のｆＨｂｐの免疫原性を保持しながらも、ＬＰＳ産生に関して野生型Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株と比較して毒性が低減される。  
【０１４４】
ＬＰＳ毒性活性はまた、ポリミキシンＢ耐性に関与する遺伝子／座に変異を導入することによって変更されてもよい（そのような耐性は、アミノアラビノースのリピドＡの４’ホスファートへの付加と相互に関連していた）。これらの遺伝子／座は、ＵＤＰ−グルコースデヒドロゲナーゼをコードするｐｍｒＥまたはアミノアラビノースの合成及び転写に関与するであろう多くの腸内細菌科に一般的な抗菌ペプチド耐性遺伝子の領域であってもよいであろう。この領域に存在する遺伝子ｐｍｒＦは、ドリコールホスファートマノシルトランスフェラーゼをコードする（Ｇｕｎｎ  Ｊ．  Ｓ．、Ｋｈｅｎｇ，  Ｂ．  Ｌ．、Ｋｒｕｅｇｅｒ  Ｊ．、Ｋｉｍ  Ｋ．、Ｇｕｏ  Ｌ．、Ｈａｃｋｅｔｔ  Ｍ．、Ｍｉｌｌｅｒ  Ｓ．  Ｉ．  １９９８年  Ｍｏｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ２７：１１７１〜１１８２）。  
【０１４５】
リン酸リレー二成分制御系（例えば、ＰｈｏＰ構成的表現型、ＰｈｏＰｃ）であるＰｈｏＰ−ＰｈｏＱ制御系に関する変異または（ＰｈｏＰ−ＰｈｏＱ制御系を活性化する）Ｍｇ＋＋が少ない環境もしくは培養条件は、アミノアラビノースを４’−ホスファートに付加させ、ミリスタートを２−ヒドロキシミリスタートで置き換える（ミリスタートのヒドロキシル化）。この改変されたリピドＡは、ヒト内皮細胞によるＥ−セレクチン発現及びヒト単球からのＴＮＦ分泌を刺激する能力が低下している。  
【０１４６】
ポリミキシンＢ耐性株は、ＬＰＳ毒性が低減されていることが示されているため使用に適している（例えば、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｅｙら（１９９４年）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｎｔｈ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、Ｔｈｅ  Ｇｕｉｌｄｈａｌｌ、ウィンチェスター、イギリスを参照）。あるいは、ＬＰＳ毒性活性を低下させるために、ポリミキシンＢの結合活性を模倣した合成ペプチドが抗原性組成物に添加されてもよい（例えば、Ｒｕｓｔｉｃｉら（１９９３年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：３６１〜３６５；Ｐｏｒｒｏら（１９９８年）Ｐｒｏｇ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｓ．３９７：３１５〜２５を参照）。  
【０１４７】
エンドトキシンはまた、培養条件の選択により低減されてもよい。例えば、培地１リットルあたり０．１ｍｇ〜１００ｍｇのアミノアラビノースを含む増殖培地で株を培養すると、脂質毒性が低減される（例えば、ＷＯ０２／０９７６４６を参照）。  
【０１４８】
組成物及び製剤  「組成物」、「抗原組成物」、「抗原性組成物」または「免疫原性組成物」は、便宜上、本明細書中で開示のとおりの天然に生じない対象のｆＨｂｐを含む組成物を一般的に言及するために本明細書中で使用され、この対象のｆＨｂｐは、免疫原性をさらに向上させるために任意に結合されてもよい。ヒトの抗体、例えば、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する抗体、例えば、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する殺菌抗体を誘発するために有用な組成物が本開示によって特に企図される。  
【０１４９】
抗原性組成物は、免疫学的に有効な量の対象の天然に生じないｆＨｂｐを含み、必要に応じて、その他の適合した成分をさらに含んでもよい。本開示の組成物は、上記のとおりの１つまたは複数の天然に生じないｆＨｂｐを含んでもよい。  
【０１５０】
本開示が企図する免疫原性組成物としては、  ａ）上に示した天然に生じないｆＨｂｐ；及び  ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含み、  このｆＨｂｐは組換えタンパク質として及び／またはベシクルベースの組成物（例えば、ＯＭＶ）として提供されてもよい組成物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。  
【０１５１】
本組成物は、ポリンＡ、ポリンＢ、ＮｓｐＡ、ピリンまたはその他のＮｅｉｓｓｅｒｉａのタンパク質などの付加的な対象の抗原を含んでもよい。さらに、本発明の抗原組成物は、ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／２４５７８号、同第ＷＯ９９／３６５４４号、同第ＷＯ９９／５７２８０号、同第ＷＯ００／２２４３０号及び同第ＷＯ００／６６７９１号に例示されるものなどの付加的なＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原並びにそのようなタンパク質の抗原性フラグメントを含んでもよい。  
【０１５２】
本組成物は、２つ以上の型のｆＨｂｐを含んでもよく、その場合、それぞれのｆＨｂｐがｆＨｂｐバリアント及び／またはサブバリアントのさまざまな組み合わせのエピトープを提示してもよい。例えば、本組成物は、上記の天然に生じないｆＨｂｐ並びに天然に生じるｖ．１及び／またはｖ．２ｆＨｂｐを含んでもよい。別の例において、本組成物は、上記の天然に生じないｆＨｂｐ並びに変異ｖ．１及び／またはｖ．２  ｆＨｂｐを含んでもよく、特に、この場合、変異ｆＨｂｐは、天然に生じる対応するｆＨｂｐと比較してヒトｆＨとの結合が低減されている。ｖ．１及びｖ．２  ｆＨｂｐのそのような変異体については、ＵＳ２０１１／０２５６１８０に記載されており、これを参照によって本明細書に組み込んだものとする。ｖ．１及び／またはｖ．２  ｆＨｂｐアミノ酸配列は、本開示の天然に生じないｆＨｂｐのアミノ酸配列と本発明の組成物中の個別の要素としてまたは融合ポリペプチド内で組み合わされてもよい。  
【０１５３】
ある特定の場合において、本組成物は、上記の天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸により遺伝子改変されたＮｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞であって、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐが前記遺伝子改変
宿主細胞によって生産されるよう遺伝子改変されたＮｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞から得られ、コードされた天然に生じないｆＨｂｐを含むベシクル及び薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。  
【０１５４】
宿主細胞は、ポリンＡ、ポリンＢ、ＮｓｐＡ、ピリンまたはその他のＮｅｉｓｓｅｒｉａのタンパク質などの付加的な対象の抗原を発現するようさらに改変されてもよい。さらに、本発明の抗原組成物は、ＰＣＴ公報第ＷＯ９９／２４５７８号、同第ＷＯ９９／３６５４４号、同第ＷＯ９９／５７２８０号、同第ＷＯ００／２２４３０号及び同第ＷＯ００／６６７９１号に例示されるものなどの付加的なＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原並びにそのようなタンパク質の抗原性フラグメントを含んでもよい。  
【０１５５】
「免疫学的に有効な量」とは、単回投与か、または一連の同じかもしくは異なる抗原性組成物の一部としてかのいずれかでその量を個体に投与することが、例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、具体的には、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、より具体的にはＢ、ＣもしくはＹ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによる感染の症状または感染によって引き起される疾患の治療もしくは予防に有効な抗体応答を誘発するために効果的であることを意味する。この量は、治療対象の個体の健康及び身体的状態、年齢、個体の免疫系の抗体産生能力、所望の保護の程度、ワクチンの製剤、治療担当臨床医の医学的状況の診断並びにその他の関連する要素に応じて変化する。この量は定型化した試験により確認することができる比較的広い範囲内にあることが予測される。  
【０１５６】
投与計画は、単一用量スケジュールであってもよく、または異なる時間に投与される抗原性組成物の単位剤形を用いた複数用量スケジュール（例えば、追加免疫用量を含む）であってもよい。「単位剤形」という用語は、本明細書中で使用される場合、ヒト及び動物対象に対する単位用量として適した物理的に個別の単位を指し、それぞれの単位が所望の効果をもたらすのに十分な量の所定量の本開示の抗原性組成物を含み、この組成物は、薬学的に許容される賦形剤（例えば、薬学的に許容される希釈剤、担体またはビヒクル）を伴って提供される。本抗原性組成物は、その他の免疫調節剤と併せて投与されてもよい。  
【０１５７】
抗原性組成物は、滅菌水溶液、多くの場合、生理食塩水などの溶液であってもよい薬学的に許容される賦形剤中に提供されてもよく、または粉末形態で提供されてもよい。そのような賦形剤は、必要に応じて実質的に不活性であってもよい。  
【０１５８】
一部の実施形態において、対象の免疫原性組成物は、ベシクル中に存在する対象のｆＨｂｐを含む。一部の実施形態において、対象の免疫原性組成物は、ＭＶ中に存在する対象のｆＨｂｐを含む。一部の実施形態において、対象の免疫原性組成物は、ＯＭＶ中に存在する対象のｆＨｂｐを含む。一部の実施形態において、対象の免疫原性組成物は、対象のｆＨｂｐを含むＭＶ及びＯＭＶの混合物を含む。ＭＶ及びＯＭＶなどのベシクルについては、上に記載してある。  
【０１５９】
本抗原性組成物は、アジュバントをさら含んでもよい。ヒトに使用できる既知の適したアジュバントの例としては、アラム、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖのスクアレン、０．５％ｗ／ｖのＴＷＥＥＮ８０（商標）、０．５％ｗ／ｖのＳｐａｎ８５）、（シトシンがメチル化されていない）ＣｐＧ含有核酸、ＱＳ２１、ＭＰＬ、３ＤＭＰＬ、Ａｑｕｉｌｌａからの抽出物、ＩＳＣＯＭＳ、ＬＴ／ＣＴ変異体、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、Ｑｕｉｌ  Ａ、インターロイキン及び同種のものが挙げられるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。実験動物に対しては、フロイントのもの、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６３７、ノル−ＭＤＰとも呼ばれる）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ、ＭＴＰ−ＰＥとも呼ばれる）並びに２％のスクアレン／ＴＷＥＥＮ８０エマルションに細菌から抽出された３つの成分であるモノホスホリルリピドＡ、トレハロースジミコラート及び細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を含むＲＩＢＩを使用することができる。アジュバントの有効性は、免疫原性抗原またはその抗原エピトープに対する抗体の量を測定することによって確認することができる。  
【０１６０】
本組成物の有効性を向上させるためのさらなる例となるアジュバントとしては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない：（１）水中油型エマルション製剤（ムラミルペプチド（以下参照）もしくは細菌細胞壁成分などのその他の特定の免疫賦活剤を含むかまたは含まない）、例えば（ａ）ＭＦ５９（商標）（ＷＯ９０／１４８３７；Ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｓｉｇｎの１０章：ｔｈｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｐｏｗｅｌｌ  ＆  Ｎｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５年）：５％のスクアレン、０．５％のＴＷＥＥＮ８０、及び０．５％のＳｐａｎ８５（任意にＭＴＰ−ＰＥを含む）を含み、マイクロフルダイザーを使用してサブミクロン粒子に製剤化されている、（ｂ）ＳＡＦ：１０％のスクアラン、０．４％のＴＷＥＥＮ８０、５％のプルロニックブロックポリマーＬ１２１及びｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロンエマルションにマイクロ流体化されているか、またはそれより大きな粒径のエマルションを形成するようボルテックスされているかのいずれか、並びに（ｃ）ＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（ＲＩＢＩ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、ハミルトン、モンタナ州）：２％のスクアレン、０．２％のＴＷＥＥＮ８０並びに１つまたは複数のモノホスホリリピッドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））などの細菌細胞壁成分を含む；（２）サポニンアジュバント、例えば、ＱＳ２１またはＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ウースター、マサチューセッツ州）が使用されてもよく、またはそれらから形成された追加の界面活性剤がなくてもよいＩＳＣＯＭ（免疫賦活性複合体）などの粒子であってもよく、例えば、ＷＯ００／０７６２１；（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；（４）サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（ＷＯ９９／４４６３６）など）、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など；（５）モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）、例えば、ＧＢ−２２３０２２１、ＥＰ−Ａ−０６８９４５４、任意に、肺炎球菌とともに使用される場合は、実質的にアラムの不在下、例えば、ＷＯ００／５６３５８；（６）３ｄＭＰＬの、例えば、ＱＳ２１及び／または水中油型エマルションとの組み合わせ、例えば、ＥＰ−Ａ−０８３５３１８、ＥＰ−Ａ−０７３５８９８、ＥＰ−Ａ−０７６１２３１；（７）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド（Ｋｒｉｅｇ  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０００年、１９、６１８〜６２２；Ｋｒｉｅｇ  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ２００１年  ３：１５〜２４；Ｒｏｍａｎら、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ、１９９７年、３、８４９〜８５４；Ｗｅｉｎｅｒら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、１９９７年、９４、１０８３３〜１０８３７；Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８年、１６０、８１０〜８７６；Ｃｈｕら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ、１９９７年、１８６、１６２３〜１６３１；Ｌｉｐｆｏｒｄら、Ｅａｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９７年、２７、２３４０〜２３４４；Ｍｏｌｄｏｖｅａｍｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９８８年、１６、１２１６〜１２２４、Ｋｒｉｅｇら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９５年、３７４、５４６〜５４９；Ｋｌｉｎｍａｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、１９９６年、９３、２８７９〜２８８３；Ｂａｌｌａｓら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９６年、１５７、１８４０〜１８４５；Ｃｏｗｄｅｒｙら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９６年、１５６、４５７０〜４５７５；Ｈａｌｐｅｒｎら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９６年、１６７、７２〜７８；Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９８８年、７９、８６６〜８７３；Ｓｔａｃｅｙら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６年、１５７、２１１６〜２１２２；Ｍｅｓｓｉｎａら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９１年、１４７、１７５９〜１７６４；Ｙｉら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９６年、１５７、４９１８〜４９２５；Ｙｉら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９６年、１５７、５３９４〜５４０２；Ｙｉら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８年、１６０、４７５５〜４７６１；及びＹｉら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８年、１６０、５８９８〜５９０６；国際公開第ＷＯ９６／０２５５５号、同第ＷＯ９８／１６２４７号、同第ＷＯ９８／１８８１０号、同第ＷＯ９８／４０１００号、同第ＷＯ９８／５５４９５号、同第ＷＯ９８／３７９１９号及び同第ＷＯ９８／５２５８１号、すなわち、シトシンがメチル化されていない少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含む；（８）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル、例えば、ＷＯ９９／５２５４９；（９）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１２０７）またはオクトキシノールなどの少なくとも１つの追加の非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５２）；（１０）サポニン及び免疫賦活性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（ＷＯ００／６２８００）；（１１）免疫賦活物質及び金属塩の粒子、例えば、ＷＯ００／２３１０５；（１２）サポニン及び水中油型エマルション、例えば、ＷＯ９９／１１２４１；（１３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（任意に、＋ステロール）、例えば、ＷＯ９８／５７６５９；（１４）本組成物の効力を向上させる免疫賦活剤として働くその他の物質。ムラミルペプチドとしては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−２５  アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ノル−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタルニニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）などが挙げられる。ヒトへの投与に適したアジュバントが特に対象となる。  
【０１６１】
本抗原組成物は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、カーボネート及び同種のものなどのその他の成分を含んでもよい。本組成物は、生理的条件に近づけるためにｐＨ調整緩衝剤、毒性調整剤及び同種のもの、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム及び同種のものなどの薬学的に許容される補助物質を必要に応じて含んでもよい。  
【０１６２】
製剤中の対象のｆＨｂｐの濃度は、大きく変化する場合があり（例えば、重量で約０．１％未満、一般には少なくとも約２％以上２０％程度から５０％以上）、一般に流体体積、粘度並びに選択される特定の投与様式及び患者の必要性による患者に基づく要因に基づいて選択されることになる。  
【０１６３】
対象のｆＨｂｐ含有製剤は、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤
、ゲル剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、エアロゾル剤または同種のものの形態で提供されてもよい。経口投与は、消化から組成物を保護する必要がある場合があることが認識されている。これは、一般に組成物を酸加水分解及び酵素的加水分解に対する抵抗力を持たせるようにする薬剤と結合させることによって、または適宜抵抗力がある担体中に組成物を詰めることによって達成される。消化から保護するための手段は当該技術分野において周知である。  
【０１６４】
ｆＨｂｐ含有製剤はまた、投与後のｆＨｂｐの血清半減期を長くするよう提供されてもよい。例えば、単離したｆＨｂｐが注射用に製剤化される場合、ｆＨｂｐは、コロイドとして調製されるリポソーム製剤または血清半減期を延長するためのその他の従来の技術で提供されてもよい。リポソームを調製するために、例えば、Ｓｚｏｋａら、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ９：４６７（１９８０年）、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号及び同第４，８３７，０２８号に記載されているようなさまざまな方法が利用できる。調製物はまた、制御放出または徐放性の形態で提供されてもよい。  
【０１６５】
免疫化  本開示は、哺乳動物宿主において少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ株に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。本方法は、概して有効量の対象の免疫原性組成物を、それを必要とする個体に投与することを含む。本開示は、薬剤（例えば、免疫原性組成物もしくはワクチンとして）または診断薬として使用するための本発明の天然に生じないＨ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）も提供する。本開示は、哺乳動物のＮｅｉｓｓｅｒｉａ（例えば、髄膜炎菌性）感染を予防するための薬剤の製造への本発明の核酸またはタンパク質の使用をさらに提供する。  
【０１６６】
ｆＨｂｐ含有抗原性組成物は、一般に、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ疾患になるリスクのあるヒト対象に、疾患の発症及びその合併症を予防または少なくとも部分的に阻止するために投与される。これを達成するのに適切な量は、「治療効果のある用量」と定義される。治療的使用に有効な量は、例えば、抗原性組成物、投与の様式、患者の体重及び健康の全般的状態並びに処方医師の判断によって決まることになる。抗原性組成物の単回または複数用量は、患者が必要とし、許容する投与量及び回数並びに投与経路に応じて投与されてもよい。  
【０１６７】
ｆＨｂｐ含有抗原性組成物は、一般に、宿主における免疫応答、特に、体液性免疫応答、例えば、殺菌抗体応答を誘発するのに有効な量で投与される。上述のとおり、免疫化のための量は変化することになり、一般に患者７０ｋｇあたり約１μｇから１００μｇ、通常５μｇから５０μｇ／７０ｋｇに及んでもよい。経口、経鼻または局所投与経路においては実質的にさらに高い投与量（例えば、１０ｍｇから１００ｍｇ以上）が適切な場合もある。異なるｆＨｂｐを含む同じ抗原性組成物の追加免疫化を最初の投与に続いて行ってもよい。ワクチン接種は、一般に少なくとも１回の追加免疫、より一般には２回の追加免疫を含む。  
【０１６８】
一般に、免疫化は、錠剤、固体、粉末化、液体、エアロゾルの形態で、賦形剤が添加されているか、またはされていない組成物を経口的、経鼻的、鼻咽頭的、非経口的、経腸的、経胃的、局所的、経皮的、皮下的、筋肉内に、局部投与または全身投与することなどの任意の適切な経路による投与によって達成することができる。非経口的に投与できる組成物を調製するための実際の方法は、当業者には知られているか、または明白であり、さらに詳細についてはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、ペンシルベニア州（１９８０年）のような刊行物に記載されている。  
【０１６９】
抗ｆＨｂｐ免疫応答は、既知の方法によって評価することができる（例えば、最初の免疫化の前後に個体から血清を得て、個体の免疫状態の変化を証明することによる。例えば、免疫沈降アッセイまたはＥＬＩＳＡまたは殺菌アッセイまたはウエスタンブロットまたはフローサイトメトリーアッセイあるいは同種のもの）。  
【０１７０】
本抗原性組成物は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対して免疫学的に無感作のヒト対象に投与されてもよい。特定の実施形態において、対象は約５歳以下、好ましくは、約２歳以下のヒト小児であり、本抗原性組成物は任意の１つまたは複数の以下の時点で投与される：生後２週間、１ヶ月、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１ヶ月または１歳または１５、１８もしくは２１ヶ月、または２、３、４もしくは５歳。  
【０１７１】
疾患症状の最初の兆候に先立ってあるいは感染もしくは疾患への曝露の可能性または実際の曝露（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａによる曝露もしくは感染による）の最初の兆候の時点で免疫化を開始することが一般に望ましい場合もある。  
【０１７２】
スクリーニングの方法  一例において、ワクチン組成物中の対象のｆＨｂｐの効力を評価する方法は、（ａ）本開示のｆＨｂｐを含む組成物により宿主動物（例えば、げっ歯類、例えば、マウスなどの非ヒト哺乳動物宿主動物）を免疫すること；及び（ｂ）宿主の殺菌抗体の程度を測定することを含む。対象の方法はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌に対する、対象のｆＨｂｐを含むワクチン投与を受けた宿主動物の感受性を評価することを含んでもよい。  
【０１７３】
別の例において、本方法は、対象のｆＨｂｐによって誘発される抗体を作製及び特定することを含んでもよい。本方法は、ｆＨｂｐと結合親和性を有する宿主動物から抗体を単離すること、細菌細胞を単離された抗体と接触させること及び細菌細胞との抗体の結合を評価することを含む。追加のステップは、ｆＨｂｐに対するヒトＨ因子との抗体の競合的結合を評価すること；抗体が細菌性病原体にかかった動物に投与されたときの細菌性病原体に対する殺菌活性を評価することを含んでもよい。一部の実施形態において、抗体は、抗体集団中にあり、本方法は、細菌細胞と結合する抗体集団の１つまたは複数の抗体を単離することをさらに含んでもよい。特徴の態様は、細菌細胞に対して殺菌性がある単離抗体であり、これは、例えば、ヒト血液中の細菌の生存率を低下させることができる補体介在性殺菌活性及び／またはオプソニン活性を含んでもよい。  
【０１７４】
特に対象の細菌性病原体は、血清群Ｂ型Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、血清群Ｃ型Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、血清群Ｘ型Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、血清群Ｙ型Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、血清群Ｗ−１３５型Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ及び同種のものなどの種々の莢膜群の任意またはすべてのバリアント群のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓである。  
【０１７５】
ｆＨｂｐに対する応答を評価する方法  本開示は、ｆＨｂｐが個体において殺菌反応を誘発する可能性を判定するための方法及び免疫原性組成物に含めることの適性に関してバリアントｆＨｂｐを評価する方法を提供する。  
【０１７６】
ｆＨｂｐが殺菌反応を誘発する可能性の判定  本開示は、本開示の天然に生じないｆＨｂｐ（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａワクチン中に存在するｆＨｂｐ）が、個体において少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌反応を誘発する可能性を判定する方法を提供する。本方法は、概してｆＨｂｐにより免疫された個体から得られた血清中に存在する抗体の、ｆＨとｆＨｂｐとの結合を阻害する能力を判定することを含む。ｆＨがｆＨｂｐと結合するのは阻害するが殺菌反応は生じない対照抗体によるｆＨｂｐに対するｆＨの阻害の程度よりも少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％高い、少なくとも約２倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍を超える程度で抗体がｆＨとｆＨｂｐとの結合を阻害することは、ｆＨｂｐが少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌反応を誘発する可能性が高いことを示す。  
【０１７７】
対象のｆＨｂｐによる免疫化によって誘発される抗体によるｆＨとｆＨｂｐとの結合の阻害の程度は、本明細書に記載されるとおりのアッセイまたはその他の任意の既知のアッセイを使用して測定することができる。例えば、ｆＨ及び／またはｆＨｂｐは検出可能な標識を含んでもよく、ｆＨ／ｆＨｂｐ結合の阻害は、ｆＨ／ｆＨｂｐ複合体に存在する標識化成分の量を検出すること並びに／あるいは遊離ｆＨ及び／または遊離ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨ／ｆＨｂｐ複合体中にないｆＨまたはｆＨｂｐ）に存在する標識の量を検出することによって評価することができる。  
【０１７８】
一例において、ｆＨｂｐに対するｆＨの結合を評価するためのアッセイは、支持体に固定されたｆＨｂｐ（例えば、マイクロタイタープレートのウェルに固定されたｆＨｂｐ）の使用を含む。固定濃度のヒトｆＨと試験抗体の希釈液（例えば、抗血清、例えば、抗体を誘発する投与量の免疫原性組成物を与えられたヒトまたは非ヒト試験動物（例えば、マウス）からの抗血清）の混合物がウェルに添加され、抗体を結合させるのに十分な時間、インキュベートされる。ウェルの洗浄後、結合したｆＨは、標識化成分あるいは第２の標識化抗体（例えば、ウサギ抗ヤギまたは抗ロバ抗血清）を含む特異的な抗ｆＨ抗血清（例えば、ヤギまたはロバ）により検出される。結合したｆＨの阻害パーセントは、添加されたヒトまたはマウス抗体の不在下で結合したｆＨの量によって算出することができる。  
【０１７９】
そのようなアッセイの別の変形において、試験抗血清の存在下または不在下における生きた細菌とのｆＨの結合は、フローサイトメトリーによって評価される。細菌細胞は、固定濃度のｆＨ（例えば、検出可能なように標識化されたｆＨ）及び抗体を含む試験血清のさまざまな希釈液とともにインキュベートされる。この細菌は洗浄され、（例えば、上記のとおり）結合したｆＨが検出される。  
【０１８０】
したがって、対象のｆＨｂｐにより免疫された個体の抗血清のｆＨ／ｆＨｂｐ結合を阻害する能力は抗血清の殺菌活性の直接的な評価の代わりとして役立つ。対象のｆＨｂｐが個体において殺菌反応を誘発する可能性を判定するための本開示の方法は、特定の免疫原性組成物が個体において殺菌反応を誘発する際に有効であったか否かに関する情報を臨床医またはその他の医療関係者に提供することができる。  
【０１８１】
免疫された個体は、ＥＬＩＳＡによる類似の血清ＩｇＧ  抗ｆＨｂｐ抗体価を有する場合がある。全体的により良好なｆＨ結合の阻害をもたらす抗血清は、より有効で、より質の高い抗ｆＨｂｐ抗体応答を示し、より高い保護をもたらす。したがって、例えば、２個体の抗Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗体応答を比較する場合（抗ｆＨｂｐ抗体により、すなわち、１：１０，０００の血清希釈が他の個体による１：３０００の希釈と比較して阻害する）、より高い阻害活性を有する個体はより高い保護をもたらすより質の高い抗ｆＨｂｐ抗体を有する。ｆＨ阻害アッセイは、したがって、一般にさらに時間がかかり、ｆＨ阻害よりも測定が難しい補体介在性殺菌力価アッセイの代わりになる。  
【０１８２】
対象の天然に生じないｆＨｂｐの評価  本開示は、本明細書中で開示の天然に生じないｆＨｂｐが個体において殺菌抗体応答を誘発する際に有効である可能性を評価または予測する方法を提供する。本方法は、概してｆＨｂｐバリアントに対して特異的な抗体の、ｆＨとｆＨｂｐとの結合を阻害する能力を評価することを含む。ｆＨｂｐバリアントにより免疫することによって誘発された抗体によるｆＨとｆＨｂｐとの結合の阻害の強さは、ｆＨｂｐバリアントに対して誘発された抗体の殺菌活性と正に相関する。高い血清希釈でｆＨとｆＨｂｐとの結合を阻害する抗体を誘発するｆＨｂｐバリアントは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａの１つまたは複数の株に対する保護を誘発するためのワクチンの適切な候補と考えられる。  
【０１８３】
例えば、本開示は、ヒトｆＨに対してｆ
Ｈｂｐ  ＩＤ７９よりも低い親和性を有する天然に生じないｆＨｂｐが、個体において少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌抗体を誘発する可能性を判定する方法を提供する。本方法は、概して非ヒト試験動物において天然に生じないｆＨｂｐに対して誘発された抗体の、ｆＨとｆＨｂｐとの結合を阻害する能力を判定することを含む。非ヒト試験動物においてｆＨｂｐ  ＩＤ７９に対して誘発された抗体によるｆＨｂｐに対するｆＨの阻害の程度よりも少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約２倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍より高い程度で天然に生じないｆＨｂｐに対して誘発された抗体がｆＨとｆＨｂｐとの結合を阻害することは、天然に生じないｆＨｂｐが少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌反応を誘発する可能性が高いことを示す。  
【０１８４】
適切な非ヒト試験動物としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ及び同種のものが挙げられる。ｆＨｂｐバリアントに対して誘発された抗体によるｆＨとｆＨｂｐとの結合の阻害の程度は、本明細書に記載されるとおりのアッセイまたはその他の任意の既知のアッセイを使用して測定することができる。抗体の殺菌活性は、本明細書に記載されるとおりのアッセイまたはその他の任意の既知のアッセイを使用して容易に測定される。  
【０１８５】
ヒトｆＨに対してｆＨｂｐ  ＩＤ７９よりも低い親和性を有する所与の天然に生じないｆＨｂｐが、個体において少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株に対して殺菌抗体を誘発する可能性を判定するための対象の方法は、例えば、ワクチン開発の過程において適切な免疫源を特定する（及び／または適していない免疫源を排除する）ために有用である。
【実施例】
【０１８６】
本明細書に記載されている例及び実施形態は説明のためのものに過ぎず、それを鑑みさまざまな改変または変更が当業者に示されることになるが、それらは本出願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範囲に含まれるべきであることが理解される。本明細書中で引用されたすべての刊行物、特許及び特許出願は、あらゆる目的のためにその全体を参照により本明細書に組み込んだものとする。  
【０１８７】
［実施例１］  変異ｆＨｂｐ  ＩＤ７９の作製  ヒトＨ因子との結合が低減されたｖ．３  ｆＨｂｐタンパク質の変異体を作製するために、Ｈ２２３Ａ及びＨ２２３Ｒ置換をｆＨｂｐ  ＩＤ７９に導入した。図１は、組換えＨ因子結合タンパク質ＩＤ７９野生型及び変異体の大きさ及び純度を示すＳＤＳポリアクリルアミドゲルを示している。ヒスチジンの番号付けは、図４に示したアライメントに示されているとおり、ｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸配列を基準にしたアミノ酸位置に基づく。２２３位のヒスチジンは、ｖ．３  ｆＨｂｐの２３０位のヒスチジンに対応する（図４及び５を参照）。２２３位のヒスチジンは、ｖ．２  ｆＨｂｐの２２２位のヒスチジンに対応する（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ２２；図４を参照）。レーン１はＢｅｎｃｈｍａｒｋ  Ｌａｄｄｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり；レーン２はＩＤ７９野生型であり；レーン３はＨ２２３Ｒ変異体であり；レーン４はＨ２２３Ａ変異体である。それぞれ組換えｆＨｂｐを２μｇゲルに入れた。４〜１２％のＮｕＰＡＧＥポリアクリルアミド／ビス−ＴＲＩＳゲルをＭＥＳランニングバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに使用した。ゲルをＳｉｍｐｌｙ  Ｂｌｕｅ  ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で着色した。  
【０１８８】
［実施例２］  ｆＨ結合が低減されたｖ．３  ｆＨｂｐ変異体の特定  ＥＬＩＳＡによるアッセイされるによるＩＤ７９変異体Ｈ２２３Ａ及びＨ２２３Ｒに対するヒトＨ因子の結合。結果を図２に示す。図２のパネルＡは、ヒトＨ因子の結合を示す。ｆＨｂｐ  ＩＤ７９野生型（ＷＴ）は円の記号；Ｈ２２３Ａ変異体は三角の記号；Ｈ２２３Ｒ変異体はアスタリスクの記号である。図２のパネルＢは、対照ｍＡｂであるＪＡＲ１１の結合を示す。  
【０１８９】
Ｈ２２３Ａ変異体は、結合がわずかに低減されていたのに対して、Ｈ２２３Ｒ変異体は、ヒトＨ因子との結合を検出できなかった（図２、パネルＡ）。対照抗ｆＨｂｐ  ｍＡｂであるＪＡＲ１１のＨ２２３Ａ及びＨ２２３Ｒ変異体タンパク質に対する結合は、野生型ｆＨｂｐ  ＩＤ７９と類似していた（図２、パネルＢ）。  
【０１９０】
精製された組換えｆＨｂｐ  ＩＤ７９野生型または変異タンパク質（ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌ）をマイクロタイタープレートのウェルに吸着させた。非特異的な結合はＰＢＳ／１％ＢＳＡによりブロックした。パネルＡのデータに関しては、精製されたヒトＨ因子の段階希釈液（０．００１２から２０μｇ／ｍｌ）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ヒツジ抗ヒトＨ因子（１：２０００希釈；パネルＡ）または抗ｆＨｂｐ  ｍＡｂ  ＪＡＲ１１（０．０００３２〜２５μｇ／ｍｌ；パネルＢ）をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。再び洗浄した後、ロバ抗ヒツジＩｇＧ（１：５０００；Ｓｉｇｍａ；パネルＡ）またはヤギ抗マウスＩｇＧ（１：５０００；Ｓｉｇｍａ、パネルＢ）を添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。再び洗浄した後、ホスファターゼ基質（ｐ−ニトロフェニルホスファート、１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ）を添加し、室温で３０分インキュベーションした後、４０５ｎｍにおいて吸光度を測定した。  
【０１９１】
［実施例３］  ｆＨ結合が低減されたｆＨｂｐ変異体  Ｔ２２１Ａ及びＨ２２３Ａ置換を個別にｆＨｂｐ  ＩＤ２２（バリアント群２）に導入した。Ｔ２２１及びＨ２２３の番号付けは、図４に示したアライメントに示されているとおり、ｆＨｂｐ  ＩＤ１のアミノ酸配列を基準にしたアミノ酸位置に基づく。Ｔ２２１は、ｖ．２  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ２２）の２２０位のアミノ酸に対応し、Ｈ２２３は、ｖ．２  ｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐ  ＩＤ２２）の２２２位のアミノ酸に対応する。  
【０１９２】
Ｔ２２１Ａ変異体は、ヒトＨ因子との結合が検出できないのに対して、Ｈ２２３Ａ変異体は、野生型ｆＨｂｐ  ＩＤ２２タンパク質と比較して結合がわずかに低減されただけであった（図３、パネルＡ）。対照抗ｆＨｂｐ  ｍＡｂであるＪＡＲ１３の結合は、野生型ｆＨｂｐ  ＩＤ２２タンパク質、Ｔ２２１Ａ変異体及びＨ２２３Ａ変異体に対して類似していた（図３、パネルＢ）。  
【０１９３】
ＩＤ２２変異体Ｔ２２１Ａ及びＨ２２３ＡとヒトＨ因子との結合をＥＬＩＳＡによってアッセイした。図３のパネルＡは、ヒトＨ因子の結合を示す。ｆＨｂｐ  ＩＤ２２野生型（ＷＴ）は円の記号；Ｔ２２１Ａ変異体はアスタリスクの記号；Ｈ２２３Ａ変異体は三角の記号である。図３のパネルＢは、対照ｍＡｂであるＪＡＲ１３の結合を示す。精製された組換えｆＨｂｐ  ＩＤ２２野生型または変異タンパク質（ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌ）をマイクロタイタープレートのウェルに吸着させた。非特異的な結合はＰＢＳ／１％ＢＳＡによりブロックした。パネルＡのデータに関しては、精製されたヒトＨ因子の段階希釈液（０．０００３２〜２５μｇ／ｍｌ）をウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ヒツジ抗ヒトＨ因子（１：２０００希釈；パネルＡ）または抗ｆＨｂｐ  ｍＡｂ  ＪＡＲ１３（０．０００３２〜２５μｇ／ｍｌ；パネルＢ）をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。再び洗浄した後、ロバ抗ヒツジＩｇＧ（１：５０００；Ｓｉｇｍａ；パネルＡ）またはヤギ抗マウスＩｇＧ（１：５０００；Ｓｉｇｍａ、パネルＢ）を添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。再び洗浄した後、ホスファターゼ基質（ｐ−ニトロフェニルホスファート、１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ）を添加し、室温で３０分インキュベーションした後、４０５ｎｍにおいて吸光度を測定した。  
【０１９４】
［実施例４］  殺菌反応  アジュバントとして水酸化アルミニウム（用量あたり６００μｇ；Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、Ｂｒｅｎｎｔａｇ  Ｂｉｏｓｅｃｔｏｒ）を含む１０μｇの組換えｆＨｂｐ  ＩＤ７９ワクチンにより野生型ＣＤ−１マウスを免疫した。６匹の動物の一群をアジュバント単独（アラム）で免疫し、動物８匹ずつの各群を組換えｆＨｂｐワクチンで免疫した。３用量のワクチンを３週間隔で投与し、３回目の用量の３週間後に血液を採取した。アジュバント対照群の血清プール（それぞれ３匹のマウスからの２つのプール）及びｆＨｂｐワクチン群の個々の血清を使用して血清殺菌アッセイを実施した。０．２５％のグルコース及び０．０２ｍＭのＣＭＰ−ＮＡＮＡ、補体源としてＩｇＧを除去したヒト血清を含むＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス中で増殖させた対数期の細菌を使用して殺菌アッセイを実施した。この力価は、６０分のインキュベーション後に未処置マウスの血清を含む陰性対照ウェルと比較して細菌の５０％が生存している血清の希釈の逆数と定義した。この結果を図７に示す。
【図１】
2016527278.tif 000005
【図２】
2016527278.tif 000006
【図３】
2016527278.tif 000007
【図４】
2016527278.tif 000008
【図５−１】
2016527278.tif 000009
【図５−２】
2016527278.tif 000010
【図５−３】
2016527278.tif 000011
【図５−４】
2016527278.tif 000012
【図５−５】
2016527278.tif 000013
【図６】
2016527278.tif 000014
【図７】
2016527278.tif 000015
【配列表】
2016527278000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月15日(2016.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然に生じるバリアント３  Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）由来の天然に生じないｆＨｂｐであって、前記非天然のｆＨｂｐは、  前記天然に生じるバリアント３  ｆＨｂｐの２２３位にアルギニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸によるヒスチジンの置換を含み、２２３位の番号付けは、成熟ｆＨｂｐ  ＩＤ１の番号付けに基づき、  前記天然に生じないｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）に対してｆＨｂｐ  ＩＤ７９よりも低い親和性を有する、前記天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項２】
前記ヒスチジンはアルギニンにより置換される、請求項１に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項３】
前記バリアント３  ｆＨｂｐは、モジュール群Ｖ  ｆＨｂｐである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項４】
前記バリアント３  ｆＨｂｐは、モジュール群ＩＩ  ｆＨｂｐである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項５】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、ｆＨｂｐ  ＩＤ７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項６】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ２８を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項７】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ６７またはｆＨｂｐ  ＩＤ１７５を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項８】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ７９を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項９】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、アミノ酸置換Ｈ２２３Ｒを含むｆＨｂｐ  ＩＤ４５を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ。
【請求項１０】
ａ）請求項１〜９のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐ；及び  ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む、免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、前記ｆＨｂｐを発現するＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株から調製されたベシクル調製物の表面に発現する、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記天然に生じないｆＨｂｐは、単離ポリペプチドとして存在する、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記薬学的に許容される賦形剤は、アジュバントを含む、請求項１１〜１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
付加的なＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原をさらに含む、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
哺乳動物において抗体応答を誘発するための、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記抗体は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する殺菌抗体である、請求項１５に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のｆＨｂｐをコードする核酸。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項１９】
請求項１７に記載の核酸または請求項１８に記載の組換え発現ベクターを含む、遺伝子改変宿主細胞。
【請求項２０】
ａ）請求項１〜９のいずれか一項に記載の天然に生じないｆＨｂｐをコードする核酸により遺伝子改変された遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞であって、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐが前記遺伝子改変宿主細胞によって産生されるよう遺伝子改変された遺伝子改変Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ宿主細胞から得られ、前記コードされた天然に生じないｆＨｂｐを含む、ベシクル；及び  ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む、免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記ベシクルは、天然の外膜ベシクルである、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記宿主細胞は、ｌｐｘＬ１遺伝子及び／またはｌｐｘＬ２遺伝子のポリペプチド産物の活性を低下させるか、またはなくすよう遺伝子改変されている、請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記宿主細胞は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原の発現を増加させるよう遺伝子改変されている、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
哺乳動物において抗体応答を誘発するための、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【国際調査報告】
2016527278.tif 000016
2016527278.tif 000017