(57)【要約】トリアゾール部分を有する半合成ラパマイシン類似体又はその薬学的に許容される塩又はそのプロドラッグは、広域性細胞増殖抑制剤及びｍＴＯＲ阻害剤であり、種々の癌又は腎臓、肝臓、胸部、頭頸部、肺、前立腺等の器官の腫瘍、並びに冠動脈、末梢動脈、及び脳の動脈の再狭窄、並びに免疫及び自己免疫疾患の治療に有用である。また、真菌増殖、再狭窄、移植後組織拒絶、並びに免疫及び自己免疫疾患を阻害する組成物、並びに哺乳動物の癌、真菌増殖、再狭窄（restenosois）、移植後組織拒絶、及び免疫及び自己免疫疾患を阻害する方法が開示されている。そのようなトリアゾール部分を含有するラパマイシン類似体の１つの特定の好ましい応用は、薬物の効力、その半減期、組織分布特性、並びに経口経路及び静注経路による生物学的利用能を含むその薬物動態学的特性が、臨床転帰に不可欠である、腎癌、肺癌、結腸癌、及び乳癌の治療である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩又はプロドラッグ。
【化１】
2016500112.tif 000031
式１
（式中、Ａは、
ａ）水素、アルキル及び置換アルキル、アルケニル及び置換アルケニル、アルキニル及び置換アルキニル、シクロアルキル及び置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル及び置換ヘテロシクロアルキルであり、前記置換基が、ヒドロキシル、スルホニル、カルボニル、アミノ、シアノ、ハロゲン、アルコキシ、アリール、及びへテロアリールを含むもの、及び
ｂ）アリール及び置換アリール、へテロアリール及び置換へテロアリールであり、前記置換基が、ヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、カルボニル、シアノ、ニトロ、スルホニル、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルを含むものからなる群から選択される。）
【請求項２】
前記化合物が、以下のものからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【化２】
2016500112.tif 000032
【請求項３】
式ＩＩの化合物又はその薬学的に許容される塩又はプロドラッグ。
【化３】
2016500112.tif 000033
式２
（式中、Ｂは、
ａ）水素、アルキル及び置換アルキル、アルケニル及び置換アルケニル、アルキニル及び置換アルキニル、シクロアルキル及び置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル及び置換ヘテロシクロアルキルであり、各置換基が、独立して、ヒドロキシル、スルホニル、カルボニル、アミノ、シアノ、ハロゲン、アルコキシ、アリール、又はへテロアリールであるもの、及び
ｂ）アリール及び置換アリール、へテロアリール及び置換へテロアリールであり、各置換基が、ヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、カルボニル、シアノ、ニトロ、スルホニル、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキルであるものからなる群から選択される。）
【請求項４】
前記化合物が、以下のものからなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【化４】
2016500112.tif 000034
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物及び医薬賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項６】
前記製剤が、経口、経鼻、静脈内、経皮、非経口、皮下、筋肉内、眼内、及び腹膜径路からなる群から選択される径路による哺乳動物への投与に好適である、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項６に記載の医薬製剤。
【請求項８】
癌を治療するための方法であって、請求項１〜４のいずれか一項に記載の治療上有効量の化合物を、その必要がある対象体に投与することを含む方法。
【請求項９】
前記癌が、脳腫瘍及び神経血管腫瘍、頭頸部癌、乳癌、肺癌、中皮腫、リンパ癌、胃癌、腎臓癌、腎癌、肝臓癌及び肝硬変、卵巣癌、卵巣子宮内膜症、精巣癌、皮膚癌、黒色腫、神経及び全ての内分泌癌、脾臓癌、膵臓癌、ホジキン癌、リンパ腫、白血病等の血液増殖障害、並びに制御されない細胞増殖に起因するあらゆる癌障害からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
対象体の免疫媒介性疾患を治療又は予防するための方法であって、請求項１〜４のいずれか一項に記載の治療上有効量の化合物を、その必要がある前記対象体に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記免疫媒介性疾患が、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸、四肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸、又は膵島細胞の移植による耐性；骨髄移植によりもたらされる移植片対宿主疾患からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫媒介性疾患が、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、又は糸球体腎炎である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫媒介性疾患が、骨髄移植によりもたらされる移植片対宿主疾患である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
癌又は免疫媒介性疾患を治療するための薬剤を生産するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
前記癌が、脳腫瘍及び神経血管腫瘍、頭頸部癌、乳癌、肺癌、中皮腫、リンパ癌、胃癌、腎臓癌、腎癌、肝臓癌及び肝硬変、卵巣癌、卵巣子宮内膜症、精巣癌、皮膚癌、黒色腫、神経及び全ての内分泌癌、脾臓癌、膵臓癌、ホジキン癌、リンパ腫、白血病等の血液増殖障害、並びに制御されない細胞増殖に起因するあらゆる癌障害からなる群から選択され、前記免疫媒介性疾患が、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸、四肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸、又は膵島細胞の移植による耐性；骨髄移植によりもたらされる移植片対宿主疾患からなる群から選択される、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
化合物シクロスポリン（シクロスポリンＡ）は、臓器移植及び免疫修飾の分野に導入されて以来、幅広く使用されており、移植手術の成功率を著しく向上をさせている。最近、強力な免疫調節活性を有する幾つかのクラスの大環状化合物が発見された。１９８６年６月１１日に公開されたＯｋｕｈａｒａらの欧州特許出願第１８４，１６２号（特許文献１）には、Ｓ．ツクバエンシス（Ｓ．ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）の株から単離された２３員大環状ラクトンである免疫抑制剤ＦＫ−５０６を含む、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）から単離された幾つかの大環状化合物が開示されている。
【背景技術】
【０００２】
ＦＲ−９００５２０及びＦＲ−９００５２３等の他の関連天然産物は、Ｃ−２１のアルキル置換基がＦＫ−５０６と異なっており、Ｓ．ストレプトミセス・ハイグロスコピカス・ヤクシムナエンシス（Ｓ．ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ  ｙａｋｕｓｈｉｍｎａｅｎｓｉｓ）から単離されたものである。別の類似体であるＦＲ−９００５２５は、Ｓ．ツクバエンシスにより産生されるものであり、ピペコリン酸部分がプロリン基に置換されている点でＦＫ−５０６と異なる。シクロスポリン及びＦＫ−５０６に伴う腎毒性等の副作用は受け入れ難いものであり、局所的には有効だが、全身性では効果がない免疫抑制剤（immunosupressive agent）を含む、効力及び安全性が向上した免疫抑制剤化合物が引き続き研究されている（米国特許第５，４５７，１１１号（特許文献２））。
【０００３】
ラパマイシンは、下記に示されているように、ストレプトミセス・ハイグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）により産生される大環状トリエン抗生物質であり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する抗真菌活性を有することが見出されている（米国特許第３，９２９，９９２号（特許文献３）及び米国特許第３，９９３，７４９号（特許文献４））。
【０００４】
ラパマイシンは、単独で（米国特許第４，８８５，１７１号（特許文献５））又はピシバニール（米国特許第４，４０１，６５３号（特許文献６））との併用で、抗腫瘍活性を有することが示されている。１９７７年には、ラパマイシンは、実験的アレルギー性脳脊髄炎モデル、多発性硬化症のモデル、アジュバント関節炎モデル、関節リウマチのモデルにおいて、免疫抑制剤として有効なことも示されており、ＩｇＧ−Ｅ様抗体の形成を効果的に阻害することが示された。
【０００５】
また、１９８９年には、ラパマイシンの免疫抑制性効果が、組織不適合性げっ歯動物において移植臓器の生存期間を延長する能力があることが、ＦＡＳＥＢに開示されている。ラパマイシンのこれら及び他の生物学的効果は、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１９９２年、６巻３９〜８７頁（非特許文献１）に概説されている。ラパマイシンのモノエステル及びジエステル誘導体（３１及び４２位でエステル化）は、抗真菌剤（米国特許第４，３１６，８８５号（特許文献７））として、及びラパマイシン水溶性プロドラッグ（米国特許第４，６５０，８０３号（特許文献８））として有用であることが示されている。
【０００６】
ラパマイシンのモノエステル及びジエステル誘導体（３１及び４２位でのエステル化）は、抗真菌剤（米国特許第４，３１６，８８５号（特許文献７））として、及びラパマイシン水溶性プロドラッグ（米国特許第４，６５０，８０３号（特許文献８））として有用であることが示されている。
【０００７】
ラパマイシンには、多数の化学的修飾が試みられている。それらには、以下の調製が含まれる：ラパマイシンのモノエステル及びジエステル誘導体（国際公開第９２／０５１７９号（特許文献９））、ラパマイシンの２７−オキシム（欧州特許第４６７６０６号（特許文献１０））、ラパマイシンの４２−オキソ類似体（米国特許第５，０２３，２６２号（特許文献１１））、二環式ラパマイシン（米国特許第５，１２０，７２５号（特許文献１２））、ラパマイシン二量体（米国特許第５，１２０，７２７号（特許文献１３））、ラパマイシンのシリルエーテル（米国特許第５，１２０，８４２号（特許文献１４））、並びにアリールスルホナート及びスルファマート（米国特許第５，１７７，２０３号（特許文献１５））。最近、天然鏡像異性体型のラパマイシンが合成されている（Ｋ．Ｃ．Ｎｉｃｏｌａｏｕら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９９３年、１１５巻、４４１９〜４４２０頁（非特許文献２）：Ｓ．Ｌ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９３年、１１５巻、７９０６〜７９０７頁（非特許文献３）；Ｓ．Ｊ．Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９９３年、１１５巻、９３４５〜９３４６頁（非特許文献４））。ラパマイシン類似体の１つの最近の例は、テトラゾール含有ラパマイシン類似体である（米国特許第６，０１５，８１５号（特許文献１６））である。上記類似体は、テトラゾール複素環を使用してヒドロキシル基を置換することにより得られる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】欧州特許出願第１８４，１６２号
【特許文献２】米国特許第５，４５７，１１１号
【特許文献３】米国特許第３，９２９，９９２号
【特許文献４】米国特許第３，９９３，７４９号
【特許文献５】米国特許第４，８８５，１７１号
【特許文献６】米国特許第４，４０１，６５３号
【特許文献７】米国特許第４，３１６，８８５号
【特許文献８】米国特許第４，６５０，８０３号
【特許文献９】国際公開第９２／０５１７９号
【特許文献１０】欧州特許第４６７６０６号
【特許文献１１】米国特許第５，０２３，２６２号
【特許文献１２】米国特許第５，１２０，７２５号
【特許文献１３】米国特許第５，１２０，７２７号
【特許文献１４】米国特許第５，１２０，８４２号
【特許文献１５】米国特許第５，１７７，２０３号
【特許文献１６】米国特許第６，０１５，８１５号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ．、１９９２年、６巻３９〜８７頁
【非特許文献２】Ｋ．Ｃ．Ｎｉｃｏｌａｏｕら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９９３年、１１５巻、４４１９〜４４２０頁
【非特許文献３】Ｓ．Ｌ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ．．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９３年、１１５巻、７９０６〜７９０７頁
【非特許文献４】Ｓ．Ｊ．Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９３年、１１５巻、９３４５〜９３４６頁
【非特許文献５】Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの１４巻
【非特許文献６】Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年
【非特許文献７】Ｐｒｅｓｃｏｔｔ編、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７６年）、３３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
これら修飾化合物の幾つかは、免疫抑制活性、特にステントコーティングに使用した際に血管平滑筋の遊走及び増殖を抑制する抗再狭窄活性を示すが、腎細胞癌、乳癌、頭頸部癌等の広範な癌に対する抗力が増強されている可能性があり、親油性がより良好であり、血中又は局所組織中での半減期が長く、又は酸化力に耐性であり、製剤時により安定している可能性があるラパマイシン類似体が依然として必要とされている。こうした目標を達成する１つの方法は、既知及び既存の修飾ラパマイシン類似体又は誘導体と比較して、より良好な親油性、より良好な安定性、より良好な生物学的利用能、より良好な組織及び細胞取込み、より良好な効力を付与することができるラパマイシンの側鎖に、トリアゾール部分を導入することによる。また、修飾ラパマイシンの効力は、様々な癌に対するより良好な効力及び毒性低減の可能性を示すことができる。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、本発明の目的は、ラパマイシン分子の３１Ｃ位及び／又は４２Ｃ位のいずれか又は両方に結合された所望のトリアゾール部分を有する新規の半合成ラパマイシン類似体を提供することである。
【００１２】
１つの態様によると、本発明は、下記に示されている構造式により表わされる化合物に関する。
【００１３】
１つの態様によると、本発明は、下記に示されている構造式により表わされる化合物に関する。
【００１４】
更に別の態様によると、本発明の化合物は、ラパマイシンの４２Ｃ位及び３１Ｃ位の両方に２つのそのような置換を含んでいてもよい。
【００１５】
本発明のトリアゾール部分は、様々な反応スキームにより導入することができ、典型的なものが、下記に示されている。
【００１６】
【化１】
2016500112.tif 000002
【００１７】
式中Ａ’は、以下の構造の１つである。
【００１８】
【化２】
2016500112.tif 000003
【００１９】
【化３】
2016500112.tif 000004
【００２０】
本発明の別の目的は、発酵により得られる出発物質から、そのような化合物を調製するために合成プロセス、並びにそのような合成プロセスに有用な化学中間体を提供することである。
【００２１】
本発明の更なる目的は、上記化合物の少なくとも１つを有効成分として含有する医薬組成物を提供することである。
【００２２】
本発明の更なる別の目的は、再狭窄、移植後組織拒絶、免疫及び自己免疫機能不全、真菌増殖、及び癌を含む様々な疾患状態を治療するための方法を提供することである。
【００２３】
加えて、本発明の化合物は、薬学的に許容される媒体と共に製剤化することにより、経口錠剤、経口固形剤若しくは経口液剤、経口即時放出若しくは徐放剤形、静脈内注射剤形、非経口剤形、クリーム、又は液剤として使用することができる。
【００２４】
また、本発明の範囲内には、各々が、本発明の化合物及び薬学的に許容される賦形剤を含む、その活性成分を即時放出又は徐放するための医薬組成物が含まれる。
【００２５】
また、本発明は、各々が本発明の化合物を含む医療デバイスに更に関する。上記医療デバイスの例には、冠状動脈又は末梢動脈用、食道用、泌尿器用、卵巣用、又は神経血管用の薬物溶出ステントが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】腎細胞癌腫瘍細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図２】腎細胞癌腫瘍細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図３】肺癌Ａ５４９細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図４】肺癌Ａ５４９細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図５】肺癌Ａ５４９細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図６】黒色腫ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図７】黒色腫ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図８】黒色腫ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞阻害研究のグラフを示す図である。
【図９】表皮癌Ａ４３１腫瘍細胞モデルのグラフを示す図である。
【図１０】表皮癌Ａ４３１腫瘍細胞モデルのグラフを示す図である。
【図１１】表皮癌Ａ４３１腫瘍細胞モデルのグラフを示す図である。
【図１２】神経膠芽腫Ｕ８７ＭＧ腫瘍モデル研究のグラフを示す図である。
【図１３】神経膠芽腫Ｕ８７ＭＧ腫瘍モデル研究のグラフを示す図である。
【図１４】神経膠芽腫Ｕ８７ＭＧ腫瘍モデル研究のグラフを示す図である。
【図１５】ヒト結腸直腸腫瘍ＨＣＴ１１６モデル研究のグラフを示す図である。
【図１６】ヒト結腸直腸腫瘍ＨＣＴ１１６モデル研究のグラフを示す図である。
【図１７】ヒト結腸直腸腫瘍ＨＣＴ１１６モデル研究のグラフを示す図である。
【図１８】乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍モデルのグラフを示す図である。
【図１９】乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍モデルのグラフを示す図である。
【図２０】乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍モデルのグラフを示す図である。
【図２１】乳癌ＭＣＦ−７腫瘍モデルのグラフを示す図である。
【図２２】乳癌ＭＣＦ−７腫瘍モデルのグラフを示す図である。
【図２３】乳癌ＭＣＦ−７腫瘍モデルのグラフを示す図である。
【図２４】前立腺癌ＰＣ−３腫瘍研究のグラフを示す図である。
【図２５】前立腺癌ＰＣ−３腫瘍研究のグラフを示す図である。
【図２６】前立腺癌ＰＣ−３腫瘍研究のグラフを示す図である。
【図２７】ＨＣＴ１１６の治療における本発明のラパマイシン類似体の効力を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
用語の定義
用語「プロドラッグ」は、本明細書中に使用される場合、例えば、血中での加水分解により、ｉｎ  ｖｉｖｏで迅速に上記式の親化合物に変換される化合物を指す。詳細な考察は、以下の文献に提供されている：Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの第１４巻（非特許文献５）及びＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年（非特許文献６）。両文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２８】
用語「薬学的に許容されるプロドラッグ」は、本明細書で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、及びアレルギー応答を起こさずに、ヒト及び下等哺乳動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、合理的な利益／リスク比のバランスが取れており、使用目的に有効であり、並びに可能な場合は、本発明の化合物の双性イオン形態である本発明の化合物のプロドラッグを指す。本発明の特に好ましい薬学的に許容されるプロドラッグは、本発明の化合物のＣ−３１ヒドロキシル基のプロドラッグエステルである。
【００２９】
用語「プロドラッグエステル」は、本明細書で使用される場合、生理学的条件下で加水分解される幾つかのエステル形成基のいずれかを指す。プロドラッグエステル基の例には、以下のものが含まれる：アセチル、エタノイル、ピバロイル、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、フタリジル、メトキシメチル、及びインダニル等、並びに天然及び非天然アミノ酸を本発明の化合物のＣ−３１ヒドロキシル基に結合させることから派生するエステル基。
【００３０】
用語「異性体」は、本明細書で使用される場合、同一の化学式を有するが、異なる構造的又は光学的配置を有する化合物を指す。
【００３１】
用語「エピマー」は、本明細書で使用される場合、同一の化学式を有するが、特定の位置で異なる光学的配置を有する化合物を指す。ラパマイシンの場合、４２−エピラパマイシンは、発酵プロセスにより得られるラパマイシンに対して、反対の旋光度を有する化合物を指す。
【００３２】
用語「１５−異性体」は、本明細書で使用される場合、発酵プロセスから得られる通常のラパマイシンが６員環を有するのとは対照的に、１５位に７員環を有するラパマイシンの類似体を指す。この種の変換は、「互変異性化」と呼ばれる。また、「１５−異性体」は、本明細書で使用される場合、ラパマイシンの１５−互変異性体と呼ばれる場合がある。
【００３３】
化合物の調製
本発明の化合物及びプロセスは、本発明の化合物を調製することができる方法を示す以下の合成スキームを参照することにより、更によく理解されるだろう。
【００３４】
本発明の化合物は、様々な合成径路により調製することができる。４２−及び／又は３１−ヒドロキシル位置でのラパマイシンの一般的な結合反応のほとんどは、上述のラパマイシン特許に見出される。それら文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３５】
実施例
ラパマイシン誘導体の合成。親ラパマイシン構造は、下記に示されている通りである。
【００３６】
【化４】
2016500112.tif 000005
【００３７】
本発明のラパマイシン類似体のシリーズＡの合成スキームは、下記に示されている通りである。
【００３８】
【化５】
2016500112.tif 000006
【００３９】
同様に合成された本発明の更なるラパマイシン類似体は、下記に示されている通りである。
【００４０】
【化６】
2016500112.tif 000007
【００４１】
実施例１：化合物Ａ１の合成
ラパマイシン（３ｇ、３．２ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（３．２ｇ、９．６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（９０ｍＬ）撹拌溶液に、ＮａＩ（１．５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）及び３−ブロモプロパ−１−イン（１．２ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０時間撹拌した。反応が完了したら、３００ｍＬの水を加え、酢酸エチル（２００ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中５０％から１００％の酢酸エチル）で精製して、化合物Ａ１を薄緑色の油状物として得た（２．１ｇ、６８％）。
ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  ９５０（Ｍ−１）−。
【００４２】
実施例２：化合物Ａ３の合成
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び１−アジド−アドマンタン（Admantane）（１００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で一晩撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中２５％から５０％の酢酸エチル）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ３を白色固形物として得た（２６ｍｇ、１０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７１（ｓ、１Ｈ）、６．７４（ｍ、１Ｈ）、６．３９〜６．０２（ｍ、５Ｈ）、５．６２〜５．３６（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１２８（Ｍ−１）−。
【００４３】
実施例３：化合物Ａ４の合成
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び４−アジド安息香酸（１００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で３時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中５％から１０％のメタノール）で精製して、白色固形物を得、それを調製用ＨＰＬＣで更に精製して、化合物Ａ４を白色固形物として得た（２９ｍｇ、１２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２７（ｍ、１Ｈ）、７．９０（ｍ、ＩＨ）、７．７３（ｍ、１Ｈ）、７．５６（ｍ、１Ｈ）、６．７４（ｍ、１Ｈ）、６．５５〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．６０〜５．３６（ｍ、５Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１１４（Ｍ−１）−。
【００４４】
実施例４：化合物Ａ５の合成
中間体２の調製
【００４５】
【化７】
2016500112.tif 000008
【００４６】
ＮａＮ３（２．０ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）撹拌懸濁液に、Ｔｆ２Ｏ（７．３ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）を、０℃にてゆっくりと注射器で加えた。この混合物を、この温度で更に２時間撹拌した。不溶性固形物を、ろ過して除去した。０℃にて、ろ過液を、化合物１（２．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（１６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）、及びＥｔ３Ｎ（３．６ｍｌ、２５．８ｍｍｏｌ）の混合物に滴加した。反応混合物を、室温で６時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、褐色固形物を得、それをシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％から５０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体２を白色固形物として得た（１．１ｇ、４８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．９３（ｓ、１Ｈ）、７．６３（ｍ、２Ｈ）、７．０３（ｍ、２Ｈ）、２．０２（ｓ、３Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １７７（Ｍ＋１）＋。

【００４７】
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡｌ（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＮ−（４−アジド−フェニル）アセトアミド、中間体２（１００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で４時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％から１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ５を白色固形物として得た（５６ｍｇ、２５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００Ｈｚ、ＣＤＣ１３）δ８．１３（ｍ、１Ｈ）、７．７３（ｍ、４Ｈ）、６．７４（ｍ、１Ｈ）、６．４９〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．６５〜５．３７（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１２７（Ｍ−ｌ）−。
【００４８】
実施例５：化合物Ａ６の合成
【００４９】
【化８】
2016500112.tif 000009
【００５０】
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＴＭＳ−Ｎ３（１００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６ｍＬ）溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（４０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で３時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中２５％のＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物Ａ２（１８９ｍｇ、８２％）を白色固形物として得、それを、０℃にてＴＢＡＥのＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に溶解し、室温で７時間撹拌した。その後、反応混合物を、ＥｔＯＡｃと水に分配した。水相を、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中５％から１０％のメタノール）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ６を白色固形物として得た（３８ｍｇ、２４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７５〜７．５５（ｍ、１Ｈ）、６．７６（ｍ、１Ｈ）、６．４９〜６．０８（ｍ、５Ｈ）、５．５３〜５．３５（ｍ、３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０１２（Ｍ−１＋１８）−。
【００５１】
実施例６：化合物Ａ７の合成
中間体５及び６の調製：
【００５２】
【化９】
2016500112.tif 000010
【００５３】
３（５ｇ、４１ｍｍｏｌ）の１００ｍＬ水溶液に、ＮａＮ３（５ｇ、８３ｍｍｏｌ）を加えて、一晩環流した。その後、反応混合物を室温に冷却した後、１００ｍＬのＤＣＭを加えた。分離した有機相を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。この溶液に、０度にて、Ｅｔ３Ｎ（５．０５ｇ、５０ｍｍｏｌ）及びＴｓＣｌ（９．５５ｇ、５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。１００ｍＬの水を添加した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。ろ過し、減圧下で濃縮して、粗製生成物を得た。カラムクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中１０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体５を無色油状物として得た（５．７ｇ、５８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００Ｈｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８１（ｄ、２Ｈ）、７．３９（ｄ、２Ｈ）、４．１４（ｍ、２Ｈ）、３．４８（ｍ、２Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  ２４２（Ｍ＋１）＋。
【００５４】
中間体５（１ｇ、４．１ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（２．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）の３０ｍＬ無水ＤＭＦ溶液に、モルホリン（０．７１ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。その後、それを室温で一晩撹拌した。反応混合物を、５０ｍＬのＥｔＯＡｃと６０ｍＬの水に分配した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。ろ過し、減圧下で濃縮して、粗製生成物を得た。カラムクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中５０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体６を無色油状物として得た（０．４ｇ、７２％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １５７（Ｍ＋ｌ）＋。
【００５５】
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び４−（２−アジド−エチル）モルホリン、中間体６（１００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ２化で加えた。この溶液を、室温で３時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ７を白色固形物として得た（４５ｍｇ、２０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８９（ｍ、１Ｈ）、６．７２（ｍ、１Ｈ）、６．４４〜６．０５（ｍ、５Ｈ）、５．６０〜５．３７（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１０７（Ｍ−ｌ）−。
【００５６】
実施例７：化合物Ａ９の合成
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び２−アジドエタノール（１００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で一晩撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中５％から１０％のメタノール）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ９を白色固形物として得た（２６ｍｇ、１１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０３〜７．７８（ｍ、１Ｈ）、６．７０（ｍ、１Ｈ）、６．４６〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．６１〜５．３９（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０３８（Ｍ−ｌ）−。
【００５７】
実施例８：化合物Ａ１０の合成
中間体８の調製
【００５８】
【化１０】
2016500112.tif 000011
【００５９】
化合物７（１．３ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の４０％ＨＢｒ（１０ｍＬ）溶液を、室温で１時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中５０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体８を白色固形物として得た（０．７ｇ、３１％）。
ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １８３（Ｍ＋１）＋。
【００６０】
中間体９の調製
中間体８（０．７ｇ、３．９ｍｍｏｌ）及びＮａＮ３（１．１３ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１６ｍＬ）溶液を、８０度で２日間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中５０％から１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体９を白色固形物として得た（０．２５ｇ、４５％）。
ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １４６（Ｍ＋１）＋。
【００６１】
化合物Ａ１０の調製
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び２−（アジドメチル）２−メチルプロパン−１，３−ジオール中間体９（１００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６ｍＬ）溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（４０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で６時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中５％から１０％のメタノール）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ１０を白色固形物として得た（１５ｍｇ、７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７６（ｍ、１Ｈ）、６．６９（ｍ、１Ｈ）、６．５５〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．６３〜５．３３（ｍ、５Ｈ）、ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０９６（Ｍ−ｌ）−。
【００６２】
実施例９：化合物Ａ１２の合成
中間体１１の調製
【００６３】
【化１１】
2016500112.tif 000012
【００６４】
化合物１０（１ｇ、７．８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中混合物に、ＬｉＯＨ（０．９ｇ、３９ｍｍｏｌ）の１０ｍＬ水溶液を加えた。その結果生じた溶液を室温で３時間撹拌した。混合物を２Ｎ  ＨＣｌでＰＨ４に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×２）で抽出した。一緒にした有機層を減圧下で濃縮して、中間体１１を無色油状物として得た（０．７ｇ、９１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２．３４（ｓ、２Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １０２（Ｍ＋ｌ）＋。
【００６５】
化合物Ａ１２の調製
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び２−アジド酢酸中間体１１（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６ｍｌ）溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（４０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で２時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中５％から２０％のメタノール）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ１２を白色固形物として得た（１５ｍｇ、７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８９（ｍ、１Ｈ）、６．７２（ｍ、１Ｈ）、６．４９〜６．０８（ｍ、５Ｈ）、５．６０〜５．３５（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０５２（Ｍ−ｌ）−。
【００６６】
実施例１０：化合物Ａ１３の合成
中間体１３の調製
【００６７】
【化１２】
2016500112.tif 000013
【００６８】
ＮａＮ３（２．０ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）撹拌懸濁液に、Ｔｆ２Ｏ（７．３ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）を、０度にて注射器で加えた。この混合物を、この温度で更に２時間撹拌した。不溶性固形物を、ろ過して除去した。０度にて、ろ過液を、化合物１２（２．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（ｌ６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）、及びＥｔ３Ｎ（３．６ｍＬ、２５．８ｍｍｏｌ）の混合物に滴加した。反応混合物を、室温で６時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、褐色固形物を得、それをシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％から５０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、褐色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、中間体１３を褐色固形物として得た（０．４％、１７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．９４（ｍ、４Ｈ）、３．１９（ｍ、４Ｈ）、２．６０（ｍ、４Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  ２１８（Ｍ＋１）＋。
【００６９】
化合物Ａ１３の調製
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びｌ−（４−アジド−フェニル）−４−メチルピペラジン中間体１３（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６ｍＬ）溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（１００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（４０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で３時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中５％から２０％のメタノール）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ１３を白色固形物として得た（３３ｍｇ、１４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１１（ｍ、１Ｈ）、７．７１（ｍ、２Ｈ）、７．０６（ｍ、２Ｈ）、６．７０（ｍ、１Ｈ）、６．４５〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．６６〜５．３６（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  Ｉ１６８（Ｍ−ｌ）−。
【００７０】
実施例１１：化合物Ａ１４の合成
４０−Ｏ−（プロパ−２−イニルオキシ）ラパマイシンＡ１（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び１−（アジド−メチル）−４−フルオロベンゼン（１００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加えた。この溶液を、室温で３時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％から１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ１４を白色固形物として得た（３２ｍｇ、１４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．５８（ｍ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、２Ｈ）、７．０６（ｍ、２Ｈ）、６．７５（ｍ、１Ｈ）、６．５０〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．６０〜５．３６（ｍ、５Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−＝１１０２（Ｍ−１）。
【００７１】
実施例１２：化合物Ａ１５の合成
【００７２】
【化１３】
2016500112.tif 000014
【００７３】
中間体１５の調製
化合物１４（３ｇ、４８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５ｇ、５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、０度にて、ＤＭＡＰ（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ（４．４ｇ、１６ｍｍｏｌ）を滴加し、室温で一晩撹拌した。その後、１００ｍＬの水を加え、ＤＣＭ（８０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体１５を無色油状物として得た（１．７ｇ、１２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６３（ｍ、４Ｈ）、７．３６（ｍ、６Ｈ）、３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｍ、２Ｈ）、１．０４（ｓ、９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  ３０１（Ｍ＋１）＋。
【００７４】
中間体１６の調製
中間体１５（１．７ｇ、５．７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．５ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液に、０度にてＴｆ２Ｏ（１．７ｇ、６ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。その後、５０ｍＬの水を加え、ＤＣＭ（４０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中１０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体１６を無色油状物として得た（１．５ｇ、６３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６３（ｍ、４Ｈ）、７．３６（ｍ、６Ｈ）、４．５８（ｍ、２Ｈ）、３．９５（ｍ、２Ｈ）、１．０４（ｓ、９Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  ４３３（Ｍ＋ｌ）＋。
【００７５】
中間体１７の調製
ラパマイシン（４００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２７８ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）のトルエン（３０ｍＬ）溶液に、中間体１６（０．９３ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を室温で加え、８０度で２時間撹拌した。その後、５０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、０．５Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３、及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中２５％から４０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体１７を白色固形物として得た（２８０ｍｇ、５３％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１４９（Ｍ−ｌ）−。
【００７６】
化合物Ａ１５の調製
中間体１７（２８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、２ｍＬのＨＦのピリジン溶液を０度にて加え、室温で４時間撹拌した。その後、２０ｍＬの水を加え、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機層を、０．５Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３、及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濃縮した後、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中３０％から１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、白色固形物を得、それを更に調製用ＨＰＬＣで精製して、化合物Ａ１５を白色固形物として得た（３４ｍｇ、１５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．４０〜６．００（ｍ、５Ｈ）、５．５３〜５．２５（ｍ、４Ｈ）、４．８３（ｓ、１Ｈ）、４．１３（ｍ、１Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  ９５７（Ｍ−ｌ）−。
【００７７】
本発明のシリーズＢのラパマイシン誘導体の合成
Ｂシリーズのラパマイシン誘導体を、以下の反応スキームに従って調製した。
【００７８】
【化１４】
2016500112.tif 000015
【００７９】
上記に示されているスキームの式中、Ｒ及びＢ’は、Ｂシリーズのラパマイシン誘導体の幾つかの例では、以下の構造を有する。
【００８０】
【化１５】
2016500112.tif 000016
【００８１】
実施例１３：化合物Ｂ１の合成
【００８２】
【化１６】
2016500112.tif 000017
【００８３】
ラパマイシン（５ｇ、５．５ｍｍｏｌ）及び２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（３．４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１５０ｍＬ）溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．５５ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、４０℃にて、ＮａＮ３（３．６ｇ、５５ｍｍｏｌ）を加え、ＤＭＳＯ（６０ｍＬ）を加えた。混合物を、４０℃で５時間撹拌した。混合物に水を加えて反応停止させ、ＤＣＭ（２００ｍＬ×２）で抽出し、一緒にした抽出物を、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて乾燥した。粗製生成物を、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中２５％のＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物Ｂを白色固形物として得た（１．５ｇ、３０％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  ９３７（Ｍ−Ｈ）−。
【００８４】
実施例１４：化合物Ｂ２の合成
【００８５】
【化１７】
2016500112.tif 000018
【００８６】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＳＭ１（２７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ２を黄色固形物として得た（３３．２ｍｇ、２１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＯＤＣｌ３）δ７．８３（ｍ、１Ｈ）、６．３７〜６．０１（ｍ、４Ｈ）、５．４０〜５．３１（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  ９９３（Ｍ−Ｈ）−。
【００８７】
実施例１５：化合物Ｂ３の合成
【００８８】
【化１８】
2016500112.tif 000019
【００８９】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＳＭ１（４０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ３を白色固形物として得た（２０．７ｍｇ、１３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．５５（ｓ、１Ｈ）、７．８９（ｍ、１Ｈ）、６．３９〜６．０２（ｍ、４Ｈ）、５．４６〜４．８３（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０２０（Ｍ−Ｈ）−。
【００９０】
実施例１６：化合物Ｂ４の合成
【００９１】
【化１９】
2016500112.tif 000020
【００９２】
ｌ（２ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、ＳＭｌ（２ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）を、０℃にて１時間にわたって滴加した。混合物を濃縮し、残渣を、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から２％のメタノール）で精製して、中間体２を黄色油状物として得た（０．９ｇ、５４％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １００（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９３】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び中間体２（４８ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ４を白色固形物として得た（１７．１ｍｇ、１１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４０（ｓ、１Ｈ）、６．３９〜６．０２（ｍ、４Ｈ）、５．３７〜４．９４（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０３６（Ｍ−Ｈ）−。
【００９４】
実施例１７：化合物Ｂ５の合成
【００９５】
【化２０】
2016500112.tif 000021
【００９６】
１（２ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５．２ｇ、３８ｍｍｏｌ）及びＳＭ１（２．２ｇ、１９ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。室温で４時間撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から３％のメタノール）で精製し、中間体２を黄色油状物として得た（１．２ｇ、４４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．６５（ｍ、４Ｈ）、３．４９（ｍ、２Ｈ）、２．７５（ｍ、４Ｈ）、２．２２（ｍ、１Ｈ）。
【００９７】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び中間体２（６９ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ５を白色固形物として得た（２６．７ｍｇ、１１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９２（ｓ、１Ｈ）、６．３９〜５．９９（ｍ、４Ｈ）、５．４５〜４．８４（ｍ、４Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０８０（Ｍ−Ｈ）−。
【００９８】
実施例１８：化合物Ｂ６の合成
【００９９】
【化２１】
2016500112.tif 000022
【０１００】
１（０．５ｇ、５．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．６ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）及びＳＭ１（０．６９ｇ、５．８ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。室温で４時間撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中３％のメタノール）で精製し、２を黄色油状物として得た（０．３ｇ、４２％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０１】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び２（６０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ６を白色固形物として得た（２５．８ｍｇ、１５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８１（ｓ、１Ｈ）、６．４０〜６．０２（ｍ、４Ｈ）、５．４５〜４．８１（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０６２（Ｍ−Ｈ）−。
【０１０２】
実施例１９：化合物Ｂ７の合成
【０１０３】
【化２２】
2016500112.tif 000023
【０１０４】
１（０．５ｇ、５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びＳＭ１（０．６ｇ、５ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。室温で４時間撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中３％のメタノール）で精製し、中間体２を黄色油状物として得た（０．５ｇ、７２％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  １３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０５】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び２（６０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ７を白色固形物として得た（１２ｍｇ、７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３９（ｓ、１Ｈ）、７．７６（ｓ、１Ｈ）、６．３７〜６．０１（ｍ、４Ｈ）、５．４１〜４．７８（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０７５（Ｍ−Ｈ）−。
【０１０６】
実施例２０：化合物Ｂ９の合成
【０１０７】
【化２３】
2016500112.tif 000024
【０１０８】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＳＭ１（５０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ９を白色固形物として得た（３７．１ｍｇ、２２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．３７〜７．８９（ｍ、５Ｈ）、６．３９〜６．０１（ｍ、４Ｈ）、５．４２〜４．９９（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０４０（Ｍ−Ｈ）−。
【０１０９】
実施例２１：化合物Ｂ１１の合成
【０１１０】
【化２４】
2016500112.tif 000025
【０１１１】
ＳＭ１（２．１ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジオキサン（２０ｍＬ）溶液に、エチニルトリメチルシラン（２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（１９１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（７３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加え、その後Ｅｔ３Ｎ（１０ｇ、１００ｍｍｏｌ）を滴加した。１００℃で一晩撹拌した後、混合物を、水で反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。一緒にした有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗中間体１を得た。
【０１１２】
粗中間体１を、ＴＢＡＦのＴＨＦ（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）溶液に溶解し、室温で２時間処理し、その後水で反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。一緒にした有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗中間体２を得、それをカラムクロマトグラフィーで精製して、２を黄色固形物として得た（０．９ｇ、５８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９６（ｄ、２Ｈ）、７．６２（ｄ、２Ｈ）、４．４８（ｓ、１Ｈ）、３．８７（ｓ、３Ｈ）。
【０１１３】
２（０．５ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ（０．３１２ｇ、１２．５２ｍｍｏｌ）の水溶液（１０ｍＬ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、ＨＣｌ溶液（２Ｎ）で反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して所望の中間体３を黄色固形物として得た（０．３５ｇ、７７％）。
【０１１４】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び中間体３（７０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（６ｍＬ／３ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物を、約ｐＨ３〜４に調整し、ろ過した。ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中１．５％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ１１を白色固形物として得た（１５．５ｍｇ、９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１９（ｍ、３Ｈ）、７．９８（ｄ、２Ｈ）、６．７７〜６．１１（ｍ、４Ｈ）、５．４９〜４．５１（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０８３（Ｍ−Ｈ）−。
【０１１５】
実施例２２：化合物Ｂ１２の合成
【０１１６】
【化２５】
2016500112.tif 000026
【０１１７】
ＳＭ１（４ｇ、２３ｍｍｏｌ）のプロパン−２−オール（２０ｍＬ）溶液に、ＮａＯＨ（２．８ｇ、６９ｍｍｏｌ）の水溶液及び３−ブロモプロパ−１−イン（２．４ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。７０℃で４時間撹拌した後、混合物をろ過し、濃縮した。ろ過ケーキを水で洗浄し、乾燥して、中間体１を黄色固形物として得た（２ｇ、３７％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋  ２３４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０１１８】
中間体１（１ｇ、４．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍＬ）溶液に、シュウ酸ジクロライド（１．１ｇ、８．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液を０℃にて滴加した。室温で一晩撹拌した後、混合物を、水で反応停止させ、ＤＣＭ（３０ｍＬ×３）で抽出した。一緒にした有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中０から１０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、所望の中間体２を黄色固形物として得た（０．３５ｇ、７７％）。
中間体２（０．３５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、アンモニア水（５ｍＬ）に加え、混合物を室温で１時間撹拌し、水を添加することにより反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。一緒にした有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、石油エーテル中０から５０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、中間体３を黄色固形物として得た（２段階で、０．２ｇ、２０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、２Ｈ）、７．１４（ｄ、２Ｈ）、４．９０（ｄ、２Ｈ）、３．６３（ｍ、１Ｈ）。
【０１１９】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び中間体３（１０１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（６ｍＬ／３ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶出剤は、ジクロロメタン中０〜２．５％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ１２を白色固形物として得た（１３．４ｍｇ、７．３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８８（ｍ、３Ｈ）、７．１２（ｍ、２Ｈ）、６．３９〜６．０１（ｍ、４Ｈ）、５．４２〜４．６３（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１４８（Ｍ−Ｈ）−。
【０１２０】
実施例２３：化合物Ｂ１３の合成
【０１２１】
【化２６】
2016500112.tif 000027
【０１２２】
ＳＭ１（２．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジオキサン（２０ｍＬ）溶液に、エチニルトリメチルシラン（２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（１９１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（７３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をＮ２下で加え、その後Ｅｔ３Ｎ（１０ｇ、１００ｍｍｏｌ）を滴加した。１００℃で一晩撹拌した後、混合物を、水を加えることにより反応停止させ、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。一緒にした有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗中間体１を得た。
【０１２３】
粗中間体１を、ＴＢＡＦのＴＨＦ（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）溶液で処理し、室温で２時間撹拌し、その後水で反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。一緒にした有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗中間体２を得、それをカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体２を黄色固形物として得た（１．５ｇ、８４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８２（ｄ、２Ｈ）、７．６８（ｄ、２Ｈ）、７．４６（ｓ、２Ｈ）、４．４５（ｓ、１Ｈ）。
【０１２４】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び中間体２（８７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（６ｍＬ／３ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で一晩撹拌した後、混合物をろ過した。ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶出剤は、ジクロロメタン中０から１．５％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ１３を白色固形物として得た（４８．７ｍｇ、２７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２１（ｍ、１Ｈ）、７．９３（ｍ、４Ｈ）、６．３７〜６．００（ｍ、４Ｈ）、５．４４〜５．３０（ｍ、５Ｈ）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １１１８（Ｍ−Ｈ）−。
【０１２５】
実施例２４：化合物Ｂ１４の合成
【０１２６】
【化２７】
2016500112.tif 000028
【０１２７】
ＳＭ１（２．３ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、ＮａＯＨ（１．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）の水溶液を加え、その後、３−ブロモプロパ−１−イン（２．４ｇ、２０ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。室温で４時間撹拌した後、混合物をＨＣｌ溶液（２Ｎ）で反応停止させ、ｐＨを３〜４に調整し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×５）で抽出した。一緒にした有機物を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中０から３％のメタノール）で精製して、中間体１を無色結晶として得た（１．２ｇ、４０％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １５４（Ｍ−Ｈ）−。
【０１２８】
化合物Ｂｌ（１５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び中間体１（７３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／２ｍＬ）溶液に、ビタミンＣナトリウム塩（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、その後ＣｕＳＯ４（５１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（５１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。一晩撹拌した後、混合物をろ過し、ろ過液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液は、ジクロロメタン中２％のメタノール）で精製して、化合物Ｂ１４を白色固形物として得た（１２．６ｍｇ、７．２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１７（ｍ、１Ｈ）、６．３９〜５．９９（ｍ、４Ｈ）、５．５６〜４．８７（ｍ、４Ｈ）：ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ−  １０９０（Ｍ−Ｈ）−。
【０１２９】
本発明のラパマイシン類似体の酵素活性
ｍＴＯＲは、細胞成長、増殖、運動性、生存、及びタンパク質合成を含む複数の細胞応答を制御することが示されているセリン／トレオニンプロテインキナーゼである。ｍＴＯＲキナーゼ活性は、幾つかの上流シグナル伝達経路により調節されており、その調節異常は、幾つかの形態の癌に対する関与が示唆されている。ここでは、本発明者らは、テルビウム標識抗リン酸化４Ｅ−ＢＰ１抗体を使用して、ｍＴＯＲによるＧＦＰ標識基質のリン酸化を検出する。このＴＲ−ＰＲＥＴ基づくアッセイを使用して、ｍＴＯＲの阻害剤をｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングすることができる。
【０１３０】
物質：アッセイ緩衝液成分：１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５、ＧＩＢＣＯ社、カタログ番号１５６３０：１Ｍ  ＭｇＣｌ２、Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｍ１０２８：０．５Ｍ  ＥＤＴＡ、ＧＩＢＣＯ社、カタログ番号１５５７５：ＤＴＩ、Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号４３８１９：ＥＧＴＡ、Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｅ３８８９；Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００、Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｔ８７８７：ＢＳＡ、ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ社、カタログ番号１２６５７５。
【０１３１】
酵素、基質、及び検出試薬：ｍＴＯＲ：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号ＰＶ４７５３；ＧＦＰ−４Ｅ−ＢＰ１：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号ＰＶ４７５９；ＦＫＢＰ１２：ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社、カタログ番号１０２６８−Ｈ０８Ｅ；ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ａ２６２０９；Ｔｂ−抗−ｐ４Ｅ−ＢＰ１：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号ＰＶ４７５５；ＴＲ−ＦＲＦＴ希釈緩衝液、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号ＰＶ３５７４。
【０１３２】
プレート：化合物調製プレート：３８４ウエル、Ｃｏｒｎｉｎｇ社、カタログ番号３６５７；アッセイプレート：黒色低容積３８４ウエルマイクロタイタープレート（Ｃｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ社、カタログ番号７８４０７６）。
【０１３３】
手順：化合物用量勾配溶液調製：
化合物を、マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製３６７４）にて１００％ＤＭＳＯを用いて、１００ｕＭ〜１．７ｎＭの範囲の１１の異なる濃度（１００μＭ、３３μＭ、１１μＭ、３．７μＭ、１．２μＭ、４１１ｎＭ、１３７ｎＭ、４６ｎＭ、１５ｎＭ、５ｎＭ、１．７ｎＭ）に３倍連続希釈した。その後、１００％ＤＭＳＯで希釈した化合物を、ｄｄＨ２Ｏで１０倍希釈した。したがって、化合物は１０％ＤＭＳＯ中にあった。
【０１３４】
本発明のラパマイシン誘導体のｍＴＯＲ阻害能力を測定するための典型的なアッセイプロトコールは、以下のとおりである。
アッセイプロトコール：
１０％ＤＭＳＯ溶液中の０．５μｌ希釈化合物を、黒色低容積３８４ウエルマイクロタイタ−プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ社、フリッケンハウゼン、ドイツ、カタログ番号７８４０７６）にピペットで移した。
アッセイ緩衝水溶液［５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ  ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．０ｍＭ  ジチオスレイトール、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０１％（容積／容積）Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００（Ｓｉｇｍａ社）、０．０１％（重量／容積）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］中の２μｌ  ｍＴＯＲ溶液を（ｍＴＯＲ、０．３１２５ｎｇ／μｌ＝＞５μｌアッセイ容積中の終濃度は０．１２５ｎｇ／μｌである）、アッセイプレートに添加し、化合物−酵素混合物を、２２℃で１５分間インキュベートして、キナーゼ反応の開始前に試験化合物を酵素に予め結合させた。
【０１３５】
アッセイ緩衝液中のＡＴＰ（ＡＴＰ、２００μＭ＝＞５μｌアッセイ容積中の終濃度は、１０μＭである）及び基質（０．８μＭ＝＞５μｌアッセイ容積中の終濃度は、０．４μＭである）の２．５μｌ溶液を付加することにより、キナーゼ反応を開始させ、その結果生じた混合物を２２℃で１８分間インキュベートした。
【０１３６】
ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液中の３０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ＥＤＴＡ、３０ｍＭ＝＞１０μｌアッセイ容積中の終濃度は、１５ｍＭである）及び４ｎＭのＴｂキレート化標識抗４Ｅ−ＢＰ１［ｐＴ４６］リン酸化型特異的抗体［Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号ＰＶ４７５５］（Ｔｂ標識抗体、４ｎＭ＝＞１０μｌアッセイ容積中の終濃度は、２ｎＭである）の５ｕｌを添加することにより、反応を停止させた。その結果生じた混合物を、２２℃で１時間インキュベートして、リン酸化基質及びＴｂキレート化標識抗体の複合体を形成させた。
【０１３７】
リン酸化基質の量は、Ｔｂキレート化合物からＧＦＰへの共鳴エネルギー移動を測定することにより評価した。したがって、３４０ｎｍで励起させた後の４９５ｎｍ及び５２０ｎｍの蛍光発光を、ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４マルチラベルリーダ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社）で測定した。５２０ｎｍ及び４９５ｎｍにおける発光の比率を、リン酸化基質量の尺度として得た。データを正規化し（阻害剤なしの酵素反応＝０％阻害、他のアッセイ成分は全て存在するが酵素が存在しない場合＝１００％阻害）、ＩＣ５０値を、ＩＤＢＳ  ＸＬｆｉｔソフトウェア（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．社、英国）を使用して、４パラメータフィッティング（数式（１））で計算した。
Ｙ＝最低値＋（最高値−最低値）／（１＋１０＾（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×ヒル傾き））    数式（１）
【０１３８】
この数式では、Ｙは、正規化された阻害％値だった。Ｘは、試験化合物濃度のｌｏｇ値だった。ＩＣ５０は、最大阻害の半分が達成された際の化合物濃度だった。
【０１３９】
本発明のラパマイシン類似体／誘導体のｍＴＯＲ阻害効果の試験結果は、下記に示されている。
【０１４０】
【表１】
2016500112.tif 000029
【０１４１】
腫瘍細胞阻害研究：
細胞増殖アッセイ
様々な化合物の細胞活性に対する効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ＡＴＰ化学発光検出キットにより、細胞生存率を定量的に決定するためのホモジニアス検出法によって、培養中の生細胞数を決定することにより定量化した。ＡＴＰは、生細胞の代謝の指標である。ホモジニアス検出ステップでは、細胞を洗浄せずに又は培地を除去せずに、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を血清含有培養細胞中に直接添加する。試薬を９６ウエル又は３８４ウエルプレートに添加及び混合した後、装置が１０分以内に定量化することができる細胞の数は、各ウエルで１５個の細胞と少ない。
【０１４２】
試薬の調製
様々な細胞タイプを、１％のペニシリン−ストレプトマイシン二重抗生物質及び以下の適切な添加剤を加えた１０％ＦＢＳ含有培地を使用して培養した：結腸直腸癌細胞ＨＣＴ１１６、乳癌細胞ＭＣＦ−７及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１  黒色腫細胞ＳＫ−ＭＥＬ−２８、Ａ５４９、及び上皮性扁平上皮癌細胞Ａ４３１を培養する場合は、ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ社、アイテム番号１１９９５０７３）：Ｕ８７／ＭＧ及び腎臓癌７８６−Ｏを培養する場合は、ＲＰＭ１−１６４０培地（２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１．５ｇ／ｌ、炭酸水素ナトリウム、４．５ｇ／ｌ、グルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウムを含有する（Ｇｉｂｃｏ社、アイテム番号７２４００−１２０）：前立腺癌細胞系ＰＣ−３を培養する場合は、Ｆ−１２Ｋ混合培地（Ｇｉｂｃｏ社、アイテム番号２１１２７）。
【０１４３】
装置
Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社製の多重標識マイクロプレートリーダＥｎｖｉｓｏｎ１４
細胞培養条件
９つの細胞系は全て、プレートのウエルで培養し、９回の継代後の細胞密度は、３０００細胞／ウエルだった。
【０１４４】
培養培地の調製及び細胞培養条件
化合物を調製し、細胞を馴化させる。翌日：アッセイしようとする各化学化合物を、１００％ＤＭＳＯで希釈して１０ｍＭ原液にして、その後１００％ＤＭＳＯで更に希釈して２ｍＭにし、その後、無血清細胞培地を使用して連続５倍希釈し、最終の１０個の異なる希釈濃度点（２０００、４００、８０、１６、３．２、０．６４、０．１２８、０．０２５６、０．００５１２、０．００１０２μＭ）を得た。加えて、０．５％ＤＭＳＯ（化合物無し）を最大対照とし、１０μＭラパマイシンを最小対照とした。各希釈化合物の０．５μＬ溶液を、細胞培養プレートの１００μＬに添加する。最終化合物濃度は、１０値点である（１０、２、０．４、０．０８、０．０１６、０．００３２、０．０００６４、０．０００１２８、０．００００２５６、.０００００５１２μＭ）。その後、細胞を３７℃のインキュベータで７２時間インキュベートした。各化合物の阻害を決定する実験の信頼性を保証するために、各化合物濃度勾配に使用される２組は、２回繰り返されるだろう（表１）。各化合物の決定は２回繰り返した。
【０１４５】
プレート測定
細胞培養の７２時間後に、５０ｕｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏを、プレートの各ウエルに添加し、振とう器で５分間振とうし、その後室温で１０分間振とうした。細胞の数を、マクロプレートリーダで分析した。
【０１４６】
データ分析：
細胞生存率を、多重標識マイクロプレートリーダでの測定により得た。細胞生存率％に対する各希釈物の効果を、以下の式を使用して計算した：細胞阻害％＝１００−１００×（シグナル−対照低値）／（対照高値−対照低値。式中、シグナル、低対照低値、対照高値は、それぞれ試験化合物、最低値、及び最大値である。
【０１４７】
細胞阻害における各試験化合物のＩＣ５０を、式２（下記）により得る:
Ｙ＝最低値＋（最高値−最低値）／（１−（（ＩＣ５０／Ｘ）＊ヒル傾き））。式中、Ｘ及びｙは、既知の値であり、ＩＣ５０、ヒル傾き、最高値、及び最低値は、分析ソフトウェアにより生成される４つのパラメータである。Ｙは阻害％であり、Ｘは、試験化合物濃度であり、ＩＣ５０は、細胞の５０％阻害に必要な化合物の濃度である。ヒル傾きは、カーブフィッティングの傾きであり、通常は約１である。
【０１４８】
実験データは全て、ＩＤＢＳ  ＸＬＦｉｔ５（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．社、英国）で分析した。
【０１４９】
実験結果及び結論
各試験化合物の効力は全て、試験した癌細胞モデルの各々について、以下のグラフの１つに示されている。グラフの曲線が低いほど、各化合物はより強力である。グラフの各々に示されているデータから、シリーズＢ化合物は全て、試験した癌細胞に対して様々なレベルの高い効力を示したことは明らかである。Ｂシリーズ化合物の幾つかは、非常に強力であり、ｎＭ濃度範囲の効力レベルに達していた。
腎細胞癌腫瘍細胞阻害研究:
腎細胞癌腫瘍細胞阻害研究：図１及び図２
肺癌Ａ５４９細胞阻害研究：図３、図４、及び図５
黒色腫ＳＫ−ＭＦＬ−２８細胞阻害研究：図６、図７、及び図８
表皮癌Ａ４３１腫瘍細胞モデル：図９、図１０、図１１
神経膠芽腫Ｕ８７／ＭＧ腫瘍モデル研究：図１２、図１３、及び図１４
ヒト結腸直腸腫瘍ＨＣＴ１１６モデル研究：図１５、図１６、及び図１７
乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍モデル：図ｌ８、図ｌ９、及び図２０
乳癌ＭＣＦ−７腫瘍モデル：図２１、図２２、及び図２３
前立腺癌ＰＣ−３腫瘍研究：図２４、図２５、及び図２６
【０１５０】
ヒト結腸腫瘍（ＨＣＴ１１６）モデルにおけるラパマイシン誘導体の効力研究
目的：目的は、経口的に（ｐ．ｏ．）投与したＡ１５（陽性対照）及びＢシリーズの候補化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ治療効力を、皮下ＨＣＴ−ｌ１６ヒト結腸癌モデルにおける腫瘍成長の遅延又は排除について前臨床的に評価することである。
【０１５１】
動物：Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス、雌、６〜８週齢、体重は約１８〜２０ｇ。研究には合計７０匹が必要とされるだろう。マウスは、Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．社から購入することになるだろう。
【０１５２】
腫瘍接種：各マウスの右側腹に、０．１ｍｌ  ＰＢＳ中のＨＣＴ−１１６腫瘍細胞（３×１０６）を皮下接種して腫瘍を成長させることになるだろう。腫瘍サイズが約１５０ｍｍ３に達したら、治療を開始することになるだろう。試験物質投与及び各群の動物数は、以下の実験計画表に示されている。
群及び治療
【０１５３】
【表２】
2016500112.tif 000030
【０１５４】
注：ｎ：動物数：投与容積：体重に基づいて投与容積を調節する。１０μＭ／ｇ）。治療スケジュールは、体重減少が＞１５％の場合、調節してもよい。
【０１５５】
群への帰属：治療開始前に、動物を全て計量し、腫瘍容積を測定することになるだろう。腫瘍容積は、任意の所定の治療の有効性に影響を及ぼす場合があるため、腫瘍容積に基づき、乱塊法を使用して、マウスを群に帰属させることになるだろう。これにより、全群は基線で比較可能であることが保障される。
【０１５６】
エンドポイント：主要エンドポイントは、腫瘍成長を遅延することができるか否か又はマウスを治癒することができるか否かを調べることである。腫瘍サイズは、週２回カリパスを使用して二次元的に測定することになるだろう。容積は、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２を使用して、ｍｍ３で表されることになるだろう。式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。その後、腫瘍サイズを、Ｔ−Ｃ値及びＴ／Ｃ値の両方の計算に使用する。Ｔ−Ｃは、治療群腫瘍が所定のサイズ（例えば、５００ｍｍ３）に達するのに必要な中央値時間（単位は日）としてのＴを用いて算出され、Ｃは、対照群腫瘍が同じサイズに達するための中央値時間（単位は日）である。Ｔ／Ｃ値（単位はパーセント）は、抗腫瘍有効性の指標である。Ｔ及びＣは、所与の日における、それぞれ治療群及び対照群の平均容積である。腫瘍組織は、研究の終了時に腫瘍重量及び写真を収集することになるだろう。
【０１５７】
終了：この研究は、対照群の平均腫瘍サイズが６００〜１０００ｍｍ３の容積に達した際に終了することになる。持続的な悪化状態にあることが観察される動物は、死亡する前に又は昏睡状態になる前に安楽死させることになるだろう。激しい苦痛及び／又は疼痛の明白な徴候を示す動物は、人道的に死亡させるべきである。以下の場合、動物を安楽死させることになるだろう。
【０１５８】
動物が、著しい体重減少を示した（衰弱した）場合。明白な体重減量は、＞２０％である。
【０１５９】
動物が、適切な食餌又は水を摂取できない場合。
【０１６０】
研究は、媒体治療群の平均腫瘍量が２０００ｍｍ３の値に達した際に、全群の全マウスを犠牲にした場合に終了することになるだろう。
【０１６１】
統計分析：２群間の比較には、独立試料ｔ検定を使用することになるだろう。３群以上の比較には、一元配置ＡＮＯＶＡを実施することになるだろう。有意なＦ統計値（治療分散対誤差分散の比）が得られた場合、ＡＮＯＶＡ後に、多重比較手順を適用することになるだろう。治療間の相乗効果の可能性は、ＬＳＤ又はダネットのＴ３で分析することになるだろう。データは全て、ＳＰＳＳ１７．０ソフトウェアを使用して分析することになるだろう。ｐ＜０．０５が、統計的に有意であるとみなされる。
【０１６２】
要約：以下の図に示されているように、２２日間の治療後、９ｍｇ／ｋｇ／日のＡ１５陽性対照化合物（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社のアフィニトール）は、ＳｕｂＱ  ＨＣＴ１１６耐性結腸癌異種移植モデルにおいて、腫瘍成長を有意に６３％阻害した（＊  ｐ＜０．０５）。この結果は、文献の報告と一致する。２２日間の治療後、Ｂ化合物は、腫瘍成長を、３、９、及び１８ｍｇ／ｋｇ／日で、それぞれ媒体対照と比較して４２％、５７％、及び６４％抑制した（＊＊、Ｐ＜０．０１）。明白な毒性は観察されなかった。これらのデータは、Ｂ化合物が、ｉｎ  ｖｉｖｏで非常に強力であり、結腸癌耐性を克服することができることを示す。
図２７。この図では、一番上の線（ひし形）は媒体であり；２番目の線は（三角形）は、３ｍｇ／ｋｇ用量のＢ７であり；３番目の線（紫色の十字）は、９ｇｍ／ｋｇ用量のＢ７を表わし；上から４番目の線（ピンク色四角０は、９ｍｇ／ｋｇ用量のアフィニトールを表わし；一番下の線（青色十字）は、１８ｍｇ／ｋｇ用量のＢ７を表わす。
【０１６３】
治療の方法
実施例で指定されているものを含むが、それらに限定されない本発明の化合物は、哺乳動物（特にヒト）において免疫調節活性及び抗腫瘍活性を有する。免疫抑制剤として、本発明の化合物は、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸、四肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸、及び膵島細胞等の臓器又は組織の移植による耐性等の免疫媒介性疾患；骨髄移植により引き起こされる疾患；関節リウマチ、全身性エリトマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、及び糸球体腎炎等の自己免疫疾患の治療及び予防に有用である。更なる使用には、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎等の免疫媒介性疾患の炎症性及び過剰増殖性皮膚疾患及び皮膚症状；更なる湿疹性皮膚炎は、脂漏性皮膚炎（seborrhoeis dermatitis）、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水泡症、じんま疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症（eosinophijia）、エリテマトーデス、ざ瘡及び円形脱毛症である；角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病関連ブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー、角膜白斑、及び眼天疱瘡等の種々の眼疾患（自己免疫及びその他）の治療及び予防が含まれる。加えて、喘息（例えば、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性前側、及び塵埃喘息）、特に慢性又は難治性喘息（例えば、遅発型喘息及び気道過敏症）、気管支炎、及びアレルギー性鼻炎等の状態を含む可逆的閉塞性気道疾患は、本発明の化合物の標的とされる。胃潰瘍、虚血性疾患により引き起こされる血管損傷、及び血栓症等の粘膜及び血管の炎症。更に、特に生物学的又は機械的に媒介される血管損傷後の内膜平滑筋細胞過形成、再狭窄、及び血管閉塞等の過剰増殖性血管疾患は、本発明の化合物により治療及び予防することができる。他の治療可能な状態には、以下のものが含まれる：セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、及び潰瘍性大腸炎等の、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、腸炎症／アレルギー；多発性筋炎、ギランバレー症候群、メニエール病、多発神経炎、多発性神経炎、単神経炎、及び神経根障害等の神経疾患；甲状腺機能亢進症及びバセドウ病等の内分泌疾患；赤芽球ろう、再生不良性貧血、低形成貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、及び赤血球形成不全等の血液疾患；骨粗しょう症等の骨疾患；サルコイドーシス、肺線維症、及び特発性間質性肺炎等の呼吸器疾患；皮膚筋炎、尋常性白斑症、尋常性魚鱗癬、光アレルギー性過敏症、及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫等の皮膚疾患；動脈硬化症、粥状動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発性動脈炎、及び心筋症等の循環器疾患；強皮症、ヴェグナー肉芽腫症、及びシェーグレン症候群等の膠原病；脂肪沈着症；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯根膜、歯槽骨、及び歯セメント質の病変等の歯周病；糸球体腎炎等のネフローゼ症候群；脱毛予防又は発毛の提供、並びに／又は発毛及び育毛の促進による、男性型脱毛症又は老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症及びセザリー症候群；アジソン病；例えば、保存、移植、又は虚血性疾患（例えば、血栓症及び心筋梗塞��で生じる臓器（心臓、肝臓、腎臓、及び消化管等）の虚血再潅流障害等の臓器傷害等の活性酸素媒介性疾患；薬物又は放射線により引き起こされる内毒素ショック、偽膜性大腸炎、及び大腸炎等の腸疾患；虚血性急性腎不全及び慢性腎機能不全等の腎疾患；肺酸素又は薬物（例えば、パラコルト及びブレオマイシン）により引き起こされる中毒症、肺癌、及び肺気腫等の肺疾患；白内障、シデローシス、網膜炎、色素性網膜炎、老人性黄斑変性、硝子体瘢痕、及び角膜アルカリ熱傷等の眼疾患；多形性紅斑、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎（linear IgA ballous dermatitis）及びセメント皮膚炎等の皮膚炎；並びに歯肉炎、歯根膜炎、敗血症、膵炎、環境汚染（例えば、大気汚染）により引き起こされる疾患、老化、発癌、カルシノーマの転移、及び高山病等の他の疾患；ヒスタミン又はロイコトリエン−Ｃ．ｓｕｂ．４放出により引き起こされる疾患；並びに、腸ベーチェット病、血管ベーチェット病、又は神経ベーチェット病、及び更に、口腔、皮膚、眼、外陰、関節、精巣上体、肺、及びまた、腎臓等に影響を及ぼすベーチェット病等。更に、本発明の化合物は、免疫原性疾患（例えば、自己免疫性肝炎（autoimmnune hepatitis）、原発性胆汁性肝硬変、及び硬化性胆管炎等の慢性自己免疫性肝臓疾患）、部分的肝臓切除、急性肝壊死（例えば、毒素、ウイルス性肝炎、ショック、又は酸素欠乏により引き起こされる壊死）、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ／非Ｂ型肝炎、肝硬変（アルコール性肝硬変等）、並びに劇症肝不全等の肝不全、遅発性肝不全、及び「ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ」型肝不全（慢性肝炎における急性肝不全）等の肝臓疾患の治療及び予防に有用であり得る。更に、化学療法効果の増強（augmention）、サイトメガロウイルス感染症、特にＨＣＭＶ感染症、抗炎症性活性；ネフローゼ、強皮症、肺線維症、動脈硬化症、うっ血性心不全、心室肥大、術後癒着及び瘢痕、卒中、心筋梗塞、並びに虚血及び再灌流に伴う傷害等の硬化性及び線維性疾患等の有用な活性のため、種々の疾患に有用である。
【０１６４】
加えて、本発明の化合物は、ＦＫ−５０６アンタゴニスト特性を有する。したがって、本発明の化合物は、免疫抑制又は免疫抑制が関与する障害の治療に使用することができる。免疫抑制が関与する障害の例には、ＡＩＤＳ、癌、真菌感染症、老年痴呆症、外傷（創傷治癒、外科手術、及びショックを含む）、慢性細菌感染症、及びある中枢神経系障害が含まれる。治療しょうとする免疫抑制は、免疫抑制性大環状化合物、例えば、ＦＫ−５０６又はラパマイシン等の、１２−（２−シクロヘキシル−１−メチルビニル）−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ４−アザトリシクロ［２２．３．１．０．ｓｕｐ．４．９］オクタコサ−１８−エンの誘導体の過量投与により引き起こされる場合がある。患者によるそのような薬剤の過剰服用は、処方された時間に薬物摂取を忘れたことを認識した場合によく起こり、重大な副作用に結び付く可能性がある。
【０１６５】
実施例で指定されているものを含むが、それらに限定されない本発明の化合物は、哺乳動物（特にヒト）において抗腫瘍活性を有する。.抗癌剤として、本発明の化合物は、脳腫瘍及び神経血管腫瘍、頭頸部癌、乳癌、肺癌、中皮腫、リンパ癌、胃癌、腎臓癌、腎癌、肝臓癌及び肝硬変、卵巣癌、卵巣子宮内膜症、精巣癌、皮膚癌、黒色腫、神経及び全ての内分泌癌、脾臓癌、膵臓癌；ホジキン癌、リンパ腫、白血病等の血液増殖障害；並びに制御されない細胞増殖に起因するあらゆる癌障害の治療に使用することができる。
【０１６６】
本発明の化合物は、オイドラギット、カルボキシルメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭ）、カルボキシプロピルセルロースナトリウム、効果的な医薬製剤を達成する任意の他の天然由来又は合成の賦形剤等の、一般的に知られている医薬賦形剤と混合することができる。本発明の化合物を含む製剤は、医学的必要性に応じて、即時放出製剤、又は徐放性製剤、又は部位注入デポー製剤（site injection depot formulation）として製作することができる。また、本発明の化合物は、ステント、バルーン、バルーン付きカテーテル、整形外科デバイス等の医療デバイスと組み合わせて、医療デバイスの効力を更に増強することができる。本発明の化合物は、局所注射製剤等の、医学的治療計画の主要な機能性成分であってもよく、又は医療デバイスのコーティング等の補助的機能であってもよく、又は低分子量賦形剤若しくはポリマー賦形剤と組み合わせて、医療デバイスのコーティング若しくは充填材として使用してもよい。
【０１６７】
バルーン血管形成又はステント留置後の再狭窄を治療するために使用される場合、本発明の化合物及び天然ラパマイシンは、ラパマイシン又はｍＴＯＲの哺乳類標的を阻害することにより、治療機能を示すと考えられる。それらは、ＦＫＢＰ受容体にも結合することができる。
【０１６８】
上記の又は他の治療に使用する場合、本発明の化合物の１つの治療上有効量は、純粋な形態、又はそのような形態が存在する場合は、薬学的に許容される塩、エステル、又はプロドラッグ形態で使用することができる。或いは、化合物は、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、目的の化合物を含有する医薬組成物として投与することができる。本発明の化合物の「治療上有効量」という語句は、任意の医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスク比で障害を治療するために十分な化合物の量を意味する。しかしながら、本発明の化合物及び組成物の合計１日使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医により決定されることになることが理解されるだろう。任意の特定の患者のための特定の治療上有効用量のレベルは、以下を含む様々な因子に依存するだろう：治療されている障害及び障害の重症度；使用される特定の化合物の活性；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、及び食事：使用される特定の化合物の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療期間；使用される特定の化合物と組み合わせて又は同時に使用される薬物；及び医学分野において周知の類似の要因。例えば、所望の治療効果を達成するのに必要とされるレベルよりも低いレベルの化合物の用量から出発し、所望の効果まで徐々に用量を増加させることは、十分に、当技術分野の一般的技術内である。
【０１６９】
ヒト又は下等哺乳動物に投与される本発明の化合物の合計１日用量は、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。経口投与のためのより好ましい用量は、約０．００１〜約３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。必要に応じて、有効１日用量は、複数の用量に分割して投与してもよく、したがって単一用量の組成物は、そのような量または１日用量を構成するその約分量を含有していてもよい。局所投与は、塗布部位に応じて、０．００１以上１０パーセントｍｇ／ｋｇ／日以下の範囲の用量を含んでいてもよい。再狭窄及び不安定プラークを治療するために局所投与する場合、用量は、約１マイクログラム／ｍｍステント〜約１００マイクログラム／ｍｍステントの範囲であってもよい。
【０１７０】
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、化合物及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含み、それらは、経口的に、直腸的に、非経口的に、大槽内に、膣内に、腹腔内に（intraperitonealry）、局所的に（散剤、軟膏剤、滴剤、又は経皮パッチ等により）、頬側に（bucally）に、又は経口若しくは鼻内噴霧で投与することができる。「薬学的に許容される担体」という語句は、無毒の固形、半固形、若しくは液体の充填材、希釈剤、カプセル化材料、又は任意のタイプの製剤補助剤を意味する。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、及び関節内注射及び点滴を含む投与方法を指す。
【０１７１】
非経口注射用の本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される無菌水性又は非水性溶液、分散液、懸濁液、又は乳濁液、並びに使用直前に無菌注射溶液又は分散液に再構成するための無菌粉末を含む。好適な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒、又は媒体の例には、以下のものが含まれる：水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、及びポリエチレングリコール等）、カルボキシメチルセルロース及びその好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、並びにオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステル。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング材料を使用することにより、分散液の場合は、必要とされる粒径を維持することにより、及び界面活性剤を使用することにより維持することができる。
【０１７２】
また、これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤等の助剤を含有していてもよい。微生物作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、及びフェノールソルビン酸等の包含により保証することができる。また、糖及び塩化ナトリウム等の等張剤を含むことが望ましい場合がある。注射可能な医薬品形態の長期間吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の、吸収を遅延させる作用剤の包含によりもたらされる場合がある。
【０１７３】
ある場合には、薬物の効果を延長させるために、皮下又は筋肉内注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。これは、不良な水溶解性を有する結晶性又は無定形性の物質の液体懸濁物を使用することにより達成することができる。したがって、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、次いで溶解速度は、結晶サイズ及び結晶形態に依存する場合がある。或いは、非経口投与される薬物形態の吸収遅延は、油性媒体に薬物を溶解又は懸濁することにより達成される。
【０１７４】
注射可能なデポー形態は、ポリアクチド（polyactide）−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に薬物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することにより製作される。薬物対ポリマーの比率及び使用される特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。また、デポー注射用製剤は、体内組織と適合するリポソーム又はマイクロエマルジョン中に薬物を捕捉することにより調製される。
【０１７５】
注射用製剤は、例えば、細菌保持性フィルターによるろ過により、又は使用直前に滅菌水又は他の無菌注射用媒体に溶解又は分散することができる、無菌固形組成物の形態の滅菌剤を組み込むことにより、滅菌することができる。
【０１７６】
経口投与用の固形剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び果粒剤が含まれる。そのような固形剤形では、活性化合物は、以下のもの等の少なくとも１つの不活性で薬学的に許容される賦形剤又は担体と混合される：クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム、及び／又はａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸等の充填剤又は増量剤、ｂ）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアラビアゴム等の結合剤、ｃ）グリセロール等の湿潤剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、じゃがいもデンプン又はタピオカデンプン、アルギン酸、あるケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム等の崩壊剤、ｅ）パラフィン等の溶解遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、ｇ）セチルアルコール及びグリセロールモノステアレート等の湿潤剤、ｈ）カオリン及びベントナイト粘土等の吸収剤、及びｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等の潤滑剤、及びそれらの混合物。また、カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、剤形は、緩衝剤を含んでいてもよい。
【０１７７】
また、類似タイプの固形組成物を、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコール等の賦形剤を使用して、軟ゼラチン入りカプセル、半固形ゼラチン入りカプセル、及び硬ゼラチン入りカプセル又は液体入りカプセル用の充填剤として使用してもよい。
【０１７８】
錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤、及び果粒剤の固形剤形は、腸溶コーティング及び医薬品製剤化技術において周知の他のコーティング等のコーティング及びシェルを用いて調製することができる。それらは、随意に乳白剤を含有していてもよく、また、それらが活性成分（複数可）のみを又は活性成分（複数可）を優先的に、腸管のある部分で、随意に遅延様式で放出する組成物であってもよい。使用することができる組成物を包埋する例には、ポリマー物質及びワックスが含まれる。
【０１７９】
また、活性化合物は、適切な場合、上記の賦形剤の１つ又は複数と共にマイクロカプセル化された形態であってもよい。
【０１８０】
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が含まれる。活性化合物に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物等の、水又は他の溶媒、可溶化剤、及び乳化剤を含有していてもよい。
【０１８１】
また、不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味料、及び芳香剤等の助剤を含んでいてもよい。
【０１８２】
懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、及びトラガント、及びそれらの混合物を含有していてもよい。
【０１８３】
局所性投与には、肺及び眼の表面を含む、皮膚又は粘膜への投与が含まれる。吸入用のものを含む局所投与用の組成物は、加圧されていてもよく又は加圧されていなくともよい乾燥粉末として調製されていてもよい。非加圧粉末組成物では、微粉化形態の活性成分を、例えば、直径が最大１００マイクロメートルのサイズを有する粒子を含むより大型の薬学的に許容される不活性担体と混合して使用することができる。好適な不活性担体には、ラクトース等の糖が含まれる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５重量パーセントは、０．０１〜１０マイクロメートルの範囲の有効粒径を有する。また、皮膚に局所使用するための組成物には、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、及びゲル剤が含まれる。
【０１８４】
或いは、組成物は、加圧されていてもよく、窒素等の圧縮ガス又は液化ガス推進剤を含有していてもよい。好ましくは、液化推進媒体及び実際のところ組成物全体は、いかなる実質的な程度にも、活性成分がそこに溶解しない。また、加圧された組成物は、界面活性剤を含有していてもよい。界面活性剤は、液体又は固体の非イオン性界面活性剤であってもよく、又は固体陰イオン性界面活性剤であってもよい。ナトリウム塩の形態の固体陰イオン性界面活性剤を使用することが好ましい。
【０１８５】
局所投与の更なる形態は、自己免疫疾患、アレルギー又は炎症状態、及び角膜移植等の眼の免疫媒介性状態の治療等、眼に関するものである。本発明の化合物は、化合物が、角膜及び眼の内部領域、例えば、前眼房、後眼房、硝子体、眼房水、硝子体液、角膜、虹彩／毛様体、レンズ、脈絡膜／網膜、及び強膜等に浸透することを可能にするのに十分な期間にわたって、化合物が眼表面との接触を維持するように、薬学的に許容される眼科用媒体で送達される。薬学的に許容される眼科用媒体は、例えば、軟膏、植物油、又はカプセル化材料であってもよい。
【０１８６】
直腸又は膣投与用の組成物は、好ましくは、室温で固体であるが、体温で液体であり、したがって直腸又は膣腔で融解し、活性化合物を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコール、又は坐剤ワックス等の好適な非刺激性賦形剤又は担体を、本発明の化合物と混合することにより調製することができる座剤又は停留浣腸である。
【０１８７】
また、本発明の化合物は、リポソームの形態で投与することができる。当技術分野で知られているように、リポソームは、一般的にリン脂質又は他の脂質物質に由来し、リポソームは、水性媒体に分散する単層又は多層水和液状結晶により形成される。リポソームを形成することが可能である任意の無毒で生理学上許容される代謝可能な脂質を使用することができる。リポソームの形態の本組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、及び賦形剤等を含有していてもよい。好ましい脂質は、リン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）であり、天然でも合成でもよい。リポソームを形成する方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ編、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７６年）、３３頁（非特許文献７）以下参照、を参照されたい。
【０１８８】
また、本発明の化合物は、１つ又は複数の免疫抑制剤と同時投与することができる。本発明の範囲内の免疫抑制剤には、以下のものが含まれる：ＩＭＵＲＡＮ．ＲＴＭ、アザチオプリンナトリウム、ブレキナルナトリウム、ＳＰＡＮＩＤＩＮ．ＲＴＭ、グスペリムストリヒドロクロリド（デオキシスパガリンとしても知られている）、ミゾリビン（ブレディニンとしても知られている）、ＣＥＬＬＣＥＰＴ．ＲＴＭ、ミコフェノール酸モフェチル、ＮＥＯＲＡＬ．ＲＴＭ、シルオスポリン（Cylosporin A）（異なる製剤のシクロスポリンＡとしてＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ．ＲＴＭ．という商標でも販売されている）、ＰＲＯＧＲＡＦ．ＲＴＭ、タクロリムス（ＦＫ−５０６としても知られている）、シロリムス及びＲＡＰＡＭＵＮＥ．ＲＴＭ．、レフルノミド（ＨＷＡ−１８６としても知られている）、プレドニゾロン及びその誘導体等のグルココルチコイド、オルソクローン（orthoclone）（ＯＫＴ３）及びゼナパックス．ＲＴＭ.．等の抗体療法、並びにサイモグロブリン等の抗胸腺細胞（antithymyocyte）グロブリン。
【０１８９】
ステント又は他の埋込み可能なデバイスからの薬物／複合薬の局所送達には、以下の利点がある：すなわち、ステントの足場作用による血管反動及びリモデリングの防止、新生内膜過形成又は再狭窄の複数成分の防止、並びに炎症及び血栓症の低減。また、このように薬物、作用剤、又は化合物をステント留置冠動脈に局所投与することは、更なる治療利益を有する場合がある。例えば、全身性投与ではなく、局所送達を使用して、薬物、作用剤、又は化合物のより高い組織濃度を達成することができる。加えて、全身性投与ではなく局所送達を使用して、より高い組織濃度を維持しつつ、全身毒性の低減を達成することができる。また、全身性投与ではなく、ステントからの局所送達を使用する場合、単一の手順が、より良好な患者コンプライアンスに十分であり得る。併用薬物、作用剤、又は化合物療法の更なる利益は、治療薬、作用剤、又は化合物の各々の用量を低減して、それによりそれらの毒性を制限しつつ、依然として再狭窄、炎症、及び血栓症の低減を達成することであり得る。したがって、局所的なステントに基づく療法は、抗再狭窄、抗炎症、抗血栓薬、作用剤、又は化合物の治癒比（効力／毒性）を向上させる手段である。
【０１９０】
上述の詳細な説明及びそれに伴う例は例示に過ぎず、本発明の範囲を限定するものとして解釈することはできないことが理解される。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲及びそれらの等価物によってのみ規定される。当業者であれば、開示された実施形態の種々の変更及び改変は明白であろう。限定ではないが、本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、製剤、及び／又は使用方法に関するものを含む、そのような変更及び改変は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱せずになすことができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【国際調査報告】
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