(57)【要約】哺乳類対象における幹細胞の腫瘍形成能の抑制方法であって、有効量の脂肪酸誘導体を投与することを含む方法、および哺乳類対象の幹細胞の腫瘍形成能を抑制する方法であって、該幹細胞を有効量の脂肪酸誘導体に接触させることを含む、方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2016521678.tif 000014
［式中、
L、MおよびNは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ（低級）アルキル、低級アルカノイルオキシまたはオキソであり、ここで、５員環は少なくとも１つの二重結合を有していてもよく；
Aは、-CH3、または-CH2OH、-COCH2OH、-COOHまたはそれらの官能性誘導体であり；
Bは、単結合、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-C≡C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH-、-C≡C-CH2-または-CH2-C≡C-であり；
Ｚは、
【化２】
2016521678.tif 000015
または単結合であり、
ここでR4およびR5は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはヒドロキシ（低級）アルキルであり、R4およびR5が同時にヒドロキシおよび低級アルコキシであることはなく；
Z1およびZ2は、酸素、窒素または硫黄であり; 
R6およびR7は、置換されてよい低級アルキルであり、共に連結して低級アルキレンを形成してもよく；
R1は、非置換であるか、またはハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アリールまたは複素環基により置換された、二価の飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基であり、該脂肪族炭化水素中の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよく；
Raは、非置換であるか、またはハロゲン、オキソ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、シクロ（低級）アルキル、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリール、アリールオキシ、複素環基または複素環オキシ基によって置換された、飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基；低級アルコキシ；低級アルカノイルオキシ；シクロ（低級）アルキル；シクロ（低級）アルキルオキシ；アリール；アリールオキシ；複素環基；複素環オキシ基であり、該脂肪族炭化水素の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよい。］
で表される脂肪酸誘導体の、哺乳類対象の幹細胞の腫瘍形成能の抑制方法における使用であって、該幹細胞に、該脂肪酸誘導体を有効量接触させることを含む、使用。
【請求項２】
ZがC=Oである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
Bが-CH2-CH2-である、請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
Lがヒドロキシまたはオキソであり、
Mが水素またはヒドロキシであり、
Nが水素であり、
Bが-CH2-CH2-であり、
ZがC=Oである、
請求項１〜３のいずれか記載の使用。
【請求項５】
該脂肪酸誘導体が、(-)-7-[(2R,4aR,5R,7aR)-2-(1,1-ジフルオロペンチル)-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル]ヘプタン酸、(+)-イソプロピル (Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-ジヒドロキシ-2-(3-オキソデシル)シクロペンチル]ヘプタ-5-エノアート、その互変異性体またはその官能性誘導体である、請求項１〜４のいずれか記載の使用。
【請求項６】
該脂肪酸誘導体が、試験管内または生体外で幹細胞と接触する、請求項１〜５のいずれか記載の使用。
【請求項７】
幹細胞の腫瘍形成能を抑制するための医薬組成物の製造のための、請求項１〜５のいずれか記載の脂肪酸誘導体の使用。
【請求項８】
該幹細胞が胚性または人工多能性幹細胞である、請求項１〜７のいずれか記載の使用。
【請求項９】
該腫瘍形成能がテラトーマ形成である、請求項１〜８のいずれか記載の使用。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか記載の脂肪酸誘導体を含む、幹細胞培養用の補助剤。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか記載の脂肪酸誘導体を含む、幹細胞培養用培地。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１３年６月１３日に出願の米国仮特許出願第61/834,541号および２０１３年１０月３日出願の米国仮特許出願第61/886,257号の優先権を主張し、それらの全体はここで参照することにより本明細書に組み入れられる。
【０００２】
本発明は、有効量の脂肪酸誘導体を用いた、哺乳類対象における幹細胞の腫瘍形成能の抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヒト胚性幹細胞 (HESC)は、その細胞独自性(cellular identity)を維持しながら増殖する能力である自己複製；および固有胚(embryo proper)を含む全ての細胞種に分化できる能力である多能性の２つの特有の性質を有する。これらの形質により、HESCは、将来的な再生医療への有用性が見込まれているが、同じ形質によってまた、HESCは腫瘍形成性ともなっており、結果としてその臨床的な可能性を達成することの障害となっている。したがって、HESCは、その特徴的な特性によって、有用にも危険にもなっていることから、「諸刃の剣」と表現されるのが適当である。
【０００４】
ヒト人工多能性幹細胞(HiPSC)の発見は、主に次の２つの理由により、多能性幹細胞研究の分野を改革した: HiPSCは、細胞のリプログラミングの認知を変え、体細胞の可塑性が、それまで考えられていたよりもはるかに優れていることを示し；HESC由来の細胞の、非適合性の患者への移植時に起こると考えられる免疫拒絶に対する好ましい解決方法を提供し、それにより、患者特異的な細胞療法についての新しい刺激的な手法を提供した。重要なことに、HiPSCはまた、HESEの使用に対して起こっていた倫理的な反対に対しても解決をもたらす可能性があり、これは、多数の国で大いに議論の余地があるテーマである。
【０００５】
免疫原性および倫理的な障害を克服する目覚ましい飛躍をなしているにもかかわらず、HiPSCの臨床への橋渡しは、HESCと同じように、実質的に腫瘍形成性であるという問題に直面している。自己複製能および多能性という基本的な性質がHESCと共通しているため、HiPSCは、もう一つの「諸刃の剣」であるという性質も共有していると考えられている (NATURE REVIEWS, CANCER VOLUME 11, APRIL 2011, 268-277)。
【０００６】
脂肪酸誘導体は、ヒトまたは他の哺乳類の組織または器官に含まれており、広範な生理学的活性を示す、有機カルボン酸分類群のメンバーである。天然に存在する脂肪酸誘導体のいくつかは、一般的に式（Ａ）に示すプロスタン酸骨格を有する：
【化１】
2016521678.tif 000002
【０００７】
一方、いくつかのプロスタグランジン（ＰＧ）合成類似体は、修飾された骨格を持っている。天然ＰＧ類は５員環部分の構造によって、ＰＧＡ類、ＰＧＢ類、ＰＧＣ類、ＰＧＤ類、ＰＧＥ類、ＰＧＦ類、ＰＧＧ類、ＰＧＨ類、ＰＧＩ類およびＰＧＪ類に分類され、さらに炭素鎖部分の不飽和結合の数と位置によって、次の3つのタイプに分類される。
下付1：13,14−不飽和−15−OH
下付2：5,6−および13,14−ジ不飽和−15−OH
下付3：5,6−、13,14−および17,18−トリ不飽和−15−OH。
【０００８】
さらに、ＰＧＦ類は9位のヒドロキシ基の配置によってαタイプ（ヒドロキシ基がα配置である）およびβタイプ（ヒドロキシ基がβ配置である）に分類される。
【０００９】
ＰＧ類は、種々の薬理学的および生理学的活性、例えば、血管拡張、炎症の誘導、血小板凝集、子宮筋刺激、腸管筋刺激、抗潰瘍効果などを有することが知られている。
【００１０】
プロスタン酸骨格の15位にオキソ基を持つプロストン類（１５−ケト型）および13および14位間に単結合を、15位にオキソ基を持つプロストン類（13，14−ジヒドロ−15−ケト型）は、天然ＰＧ類の代謝中に酵素の作用によって自然に生成する物質として知られる脂肪酸誘導体であり、いくらかの治療上の効果を有する。
【００１１】
米国特許出願公開第2009-0209643号明細書（Ueno et al.）は、特定のプロスタグランジン化合物が、幹細胞の増殖および/または分化の調節に有用であることを記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許出願公開第2009-0209643号明細書
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】NATURE REVIEWS, CANCER VOLUME 11, APRIL 2011, 268-277
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、哺乳類対象における幹細胞の腫瘍形成能の抑制方法であって、それを必要としている対象に、有効量の式（Ｉ）：
【化２】
2016521678.tif 000003
［式中、
L、MおよびNは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ（低級）アルキル、低級アルカノイルオキシまたはオキソであり、ここで、該５員環は少なくとも１つの二重結合を有してもよく；
Aは、-CH3、または-CH2OH、-COCH2OH、-COOHまたはそれらの官能性誘導体であり；
Bは、単結合、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-C≡C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH-、-C≡C-CH2-または-CH2-C≡C-であり；
Zは、
【化３】
2016521678.tif 000004
または単結合であり；
ここでR4およびR5は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはヒドロキシ（低級）アルキルであり、R4およびR5が同時にヒドロキシおよび低級アルコキシであることはなく；
Z1およびZ2は、酸素、窒素または硫黄であり; 
R6およびR7は、置換されてよい低級アルキルであり、共に連結して低級アルキレンを形成してよく；
R1は、非置換であるか、またはハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アリールまたは複素環基により置換された、二価の飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基であり、該脂肪族炭化水素中の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよく；そして
Raは、非置換であるか、またはハロゲン、オキソ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、シクロ（低級）アルキル、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリール、アリールオキシ、複素環基または複素環オキシ基によって置換された、飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基；低級アルコキシ；低級アルカノイルオキシ；シクロ（低級）アルキル；シクロ（低級）アルキルオキシ；アリール；アリールオキシ；複素環基；複素環オキシ基であり、該脂肪族炭化水素の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよい。］
で表される脂肪酸誘導体を投与することを含む、方法に関する。
【００１５】
本発明はさらに、哺乳類対象の幹細胞の腫瘍形成能を抑制する方法であって、該幹細胞を、有効量の脂肪酸誘導体に接触させることを含む、方法に関する。
【００１６】
本発明はさらに、幹細胞、例えば胚性幹細胞の培養用の補助剤または培地であって、該脂肪酸誘導体を含む、補助剤または培地に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書中で用いる脂肪酸誘導体の命名は、上記式（Ａ）に示したプロスタン酸の番号付けシステムに基づく。
【００１８】
式（Ａ）は、C-20脂肪酸誘導体の基本骨格を示すが、本発明は同じ炭素原子数を持つものに限定されない。
【００１９】
式（Ａ）において、脂肪酸誘導体の基本骨格を構成する炭素原子の番号は、カルボン酸から始まり（1と番号付け）、５員環に向かって2〜7をα鎖上の炭素原子に、8〜12を５員環の炭素原子に、13〜20をω鎖上の炭素原子に付している。炭素原子数がα鎖上で減少する場合、2位から順次番号を抹消し；α鎖上で炭素原子数が増加する場合、2位にカルボキシ基（C-1）に代わる各置換基を有する置換化合物として化合物を命名する。同様に、ω鎖上で炭素原子数が減少する場合、20位から番号を順次抹消し；ω鎖上で炭素原子数が増加する場合、21位以降の炭素原子は20位の置換基として命名する。化合物の立体配置は、特にことわりのない限り、上記式（Ａ）と同じである。
【００２０】
一般に、ＰＧＤ、ＰＧＥおよびＰＧＦはそれぞれ、9位および／または11位にヒドロキシ基を有する脂肪酸誘導体を表すが、本明細書中では、9位および／または11位にヒドロキシ基以外の置換基を有するものも含む。かかる化合物は9-デオキシ-9-置換-脂肪酸誘導体または11-デオキシ-11-置換-脂肪酸誘導体と称する。ヒドロキシ基の代わりに水素を有する脂肪酸誘導体は、単に9-または11-デオキシ-脂肪酸誘導体と命名する。
【００２１】
上述のように、脂肪酸誘導体の命名はプロスタン酸骨格に基づいている。化合物が天然ＰＧと類似の部分的構造を有する場合には、「ＰＧ」の略語を利用することがある。したがって、α鎖の炭素原子が2個延長された脂肪酸誘導体、すなわち、α鎖の炭素原子数が9である脂肪酸誘導体は、2-デカルボキシ-2-（2-カルボキシエチル）-ＰＧ化合物と命名する。同様に、α鎖の炭素原子数が11である脂肪酸誘導体は、2-デカルボキシ-2-（4-カルボキシブチル）-ＰＧ化合物と命名する。また、ω鎖の炭素原子が2個延長された脂肪酸誘導体、すなわち、ω鎖の炭素原子数が10である脂肪酸誘導体は、20-エチル-ＰＧ化合物と命名する。なお、これらの化合物はIUPAC命名法に基づいて命名することも可能である。
【００２２】
置換化合物を含む、上記脂肪酸誘導体の類似体または誘導体の例としては、α鎖の末端のカルボキシ基がエステル化された脂肪酸誘導体；α鎖が延長された脂肪酸誘導体、それらの生理学的に許容される塩；2位と3位の間に二重結合を有するか、または5位と6位の間に三重結合を有する脂肪酸誘導体；3、5、6、16、17、18、19および／または20位の炭素原子上に置換基を有する脂肪酸誘導体；9位および／または11位にヒドロキシ基の代わりに低級アルキルまたはヒドロキシ（低級）アルキル基を有する脂肪酸誘導体が挙げられる。
【００２３】
本発明において、3、17、18および／または19位の炭素原子上の好ましい置換基としては、1〜4個の炭素原子を有するアルキル、特にメチルおよびエチルが挙げられる。16位の炭素原子上の好ましい置換基としては、低級アルキル、例えばメチルおよびエチル、ヒドロキシ、ハロゲン原子、例えば塩素およびフッ素、およびアリールオキシ、例えばトリフルオロメチルフェノキシが挙げられる。17位の炭素原子上の好ましい置換基としては、低級アルキル、例えばメチルおよびエチル、ヒドロキシ、ハロゲン原子、例えば塩素およびフッ素、およびアリールオキシ、例えばトリフルオロメチルフェノキシが挙げられる。20位の炭素原子上の好ましい置換基としては、飽和または不飽和の低級アルキル、例えばC1-4アルキル、低級アルコキシ、例えばC1-4アルコキシ、および低級アルコキシアルキル、例えばC1-4アルコキシ-C1-4アルキルが挙げられる。5位の炭素原子上の好ましい置換基としては、ハロゲン原子、例えば塩素およびフッ素が挙げられる。6位の炭素原子上の好ましい置換基としては、カルボニル基を形成するオキソ基が挙げられる。9位および11位の炭素原子上にヒドロキシ、低級アルキルまたはヒドロキシ（低級）アルキル置換基を有するＰＧ類の立体配置は、α、βまたはそれらの混合であり得る。
【００２４】
さらに、上記の類似体または誘導体は、天然のＰＧ類よりもω鎖が短く、その切断型ω鎖の末端にアルコキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、フェノキシおよびフェニル基のような置換基を有していてよい。
【００２５】
本発明で用いられる脂肪酸誘導体は、式（Ｉ）：
【化４】
2016521678.tif 000005
［式中、
L、MおよびNは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ（低級）アルキル、低級アルカノイルオキシまたはオキソであり、ここで、該５員環は少なくとも１つの二重結合を有してもよく；
Aは、-CH3、または-CH2OH、-COCH2OH、-COOHまたはそれらの官能性誘導体であり；
Bは、単結合、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-C≡C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH-、-C≡C-CH2-または-CH2-C≡C-であり；
Zは、
【化５】
2016521678.tif 000006
または単結合であり、
ここでR4およびR5は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはヒドロキシ（低級）アルキルであり、R4およびR5が同時にヒドロキシおよび低級アルコキシであることはなく；
Z1およびZ2は酸素、窒素または硫黄であり；
R6およびR7は、置換されてよい低級アルキルであり、共に連結して低級アルキレンを形成してよく；
R1は、非置換であるか、またはハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アリールまたは複素環基により置換された、二価の飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基であり、該脂肪族炭化水素中の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよく；そして
Raは、非置換であるか、またはハロゲン、オキソ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、シクロ（低級）アルキル、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリール、アリールオキシ、複素環基または複素環オキシ基によって置換された、飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基；低級アルコキシ；低級アルカノイルオキシ；シクロ（低級）アルキル；シクロ（低級）アルキルオキシ；アリール；アリールオキシ；複素環基；複素環オキシ基であり、該脂肪族炭化水素の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよい。］
により表される。
【００２６】
本発明に用いられる好ましい化合物は、式（II）：
【化６】
2016521678.tif 000007
［式中、
LおよびMは、水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ（低級）アルキル、低級アルカノイルオキシまたはオキソであり、ここで、該５員環は１つ以上の二重結合を有してもよく；
Aは、-CH3、または-CH2OH、-COCH2OH、-COOHまたはそれらの官能性誘導体であり；
Bは、単結合、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-C≡C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH-、-C≡C-CH2-または-CH2-C≡C-であり；
Zは、
【化７】
2016521678.tif 000008
または単結合であり、
ここでR4およびR5は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはヒドロキシ（低級）アルキルであり、R4およびR5が同時にヒドロキシおよび低級アルコキシであることはなく；
Z1およびZ2は酸素、窒素または硫黄であり；
R6およびR7は、置換されてよい低級アルキルであり、共に連結して低級アルキレンを形成してよく；
X1およびX2は、水素、低級アルキル、またはハロゲンであり；
R1は、非置換であるか、またはハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アリールまたは複素環基により置換された、二価の飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基であり、該脂肪族炭化水素中の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよく；
R2は、単結合または低級アルキレンであり；
R3は、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、シクロ（低級）アルキル、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリール、アリールオキシ、複素環基または複素環オキシ基であり、該脂肪族炭化水素の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄によって置換されてよい。］
により表される。
【００２７】
上記式において、R1およびRaについての定義における用語「不飽和」は、主鎖および／または側鎖の炭素原子間に孤立して、分離してまたは連続して存在する、少なくとも１つまたはそれ以上の二重結合および／または三重結合を含むことを意図している。通常の命名法に従って、２つの連続した位置の間の不飽和結合は、２つの位置のうちの小さい数字を表示することによって表され、２つの遠位の間の不飽和結合は、その両方の位置を表示することにより表される。
【００２８】
用語「低級または中級の脂肪族炭化水素」は、１〜１４個の炭素原子（側鎖においては、１〜３個の炭素原子が好ましい）、好ましくは１〜１０個、特に１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味する。
【００２９】
用語「ハロゲン原子」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を包含する。
【００３０】
用語「低級」は、本明細書を通して、特にことわりのない限り、１〜６個の炭素原子を有する基を含むことを意図する。
【００３１】
用語「低級アルキル」は、1〜6個の炭素原子を含有する、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルが挙げられる。
【００３２】
用語「低級アルキレン」は、1〜6個の炭素原子を含有する、直鎖または分枝鎖の、二価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ブチレン、イソブチレン、t-ブチレン、ペンチレンおよびヘキシレンが挙げられる。
【００３３】
用語「低級アルコキシ」は、低級アルキル-O-の基を意味し、ここで低級アルキルは上で定義するとおりである。
【００３４】
用語「ヒドロキシ（低級）アルキル」は、少なくとも１つのヒドロキシ基により置換されている、上に定義する低級アルキルを意味し、例えばヒドロキシメチル、1-ヒドロキシエチル、2-ヒドロキシエチルおよび1-メチル-1-ヒドロキシエチルである。
【００３５】
用語「低級アルカノイルオキシ」は、式RCO-O-により表される基を意味し、ここでRCO-は、上に定義する低級アルキル基の酸化により形成されるアシル基、例えばアセチルである。
【００３６】
用語「シクロ（低級）アルキル」は、上に定義する低級アルキル基の環状化によって形成される、３個以上の炭素原子を含有する環式基を意味し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。
【００３７】
用語「シクロ（低級）アルキルオキシ」は、シクロ（低級）アルキル-O-の基を意味し、ここでシクロ（低級）アルキルは上に定義するとおりである。
【００３８】
用語「アリール」は、非置換または置換芳香族炭化水素環（好ましくは単環式の基）を含み、例えば、フェニル、トリル、キシリルが挙げられる。置換基の例は、ハロゲン原子およびハロ（低級）アルキルであり、ここでハロゲン原子および低級アルキルは上に定義するとおりである。
【００３９】
用語「アリールオキシ」は、式ArO-により表される基を意味し、ここでArは上に定義するアリールである。
【００４０】
用語「複素環基」は、置換されてよい炭素原子、および、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選択される1種または2種のヘテロ原子を1〜4個、好ましくは1〜3個有する、5〜14員、好ましくは5〜10員の環である、単環式〜三環式の、好ましくは単環式の複素環基を含んでいてよい。複素環基の例としては、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、フラザニル、ピラニル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジル、ピラジニル、２−ピロリニル、ピロリジニル、２−イミダゾリニル、イミダゾリジニル、２−ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジノ、ピペラジニル、モルホリノ、インドリル、ベンゾチエニル、キノリル、イソキノリル、プリニル、キナゾリニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナントリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイミダゾリニル、ベンゾチアゾリル、フェノチアジニルが挙げられる。この場合、置換基の例としては、ハロゲン、およびハロゲン置換低級アルキル基が挙げられ、ここでハロゲン原子および低級アルキル基は上記のとおりである。
【００４１】
用語「複素環オキシ基」は、式HcO-により表される基を意味し、ここでHcは上記の複素環基である。
【００４２】
Aの用語「官能性誘導体」は、塩（好ましくは医薬的に許容される塩）、エーテル、エステルおよびアミドを含む。
【００４３】
適切な「医薬的に許容される塩」は、慣用される非毒性塩、例えば、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩）、アンモニウム塩のような、無機塩基との塩；または、例えばアミン塩（例えばメチルアミン塩、ジメチルアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、ベンジルアミン塩、ピペリジン塩、エチレンジアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、トリス（ヒドロキシメチルアミノ）エタン塩、モノメチル−モノエタノールアミン塩、プロカイン塩およびカフェイン塩）、塩基性アミノ酸塩（例えばアルギニン塩およびリジン塩）、テトラアルキルアンモニウム塩などのような、有機塩基との塩を含む。これらの塩類は、例えば対応する酸および塩基から常套の反応によって、または塩交換によって調製し得る。
【００４４】
エーテルの例としては、アルキルエーテル、例えば、メチルエーテル、エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、ブチルエーテル、イソブチルエーテル、t-ブチルエーテル、ペンチルエーテルおよび1-シクロプロピルエチルエーテルのような低級アルキルエーテル；およびオクチルエーテル、ジエチルヘキシルエーテル、ラウリルエーテルおよびセチルエーテルのような中級または高級アルキルエーテル；オレイルエーテルおよびリノレニルエーテルのような不飽和エーテル；ビニルエーテル、アリルエーテルのような低級アルケニルエーテル；エチニルエーテルおよびプロピニルエーテルのような低級アルキニルエーテル；ヒドロキシエチルエーテルおよびヒドロキシイソプロピルエーテルのようなヒドロキシ（低級）アルキルエーテル；メトキシメチルエーテルおよび1-メトキシエチルエーテルのような低級アルコキシ（低級）アルキルエーテル；フェニルエーテル、トシルエーテル、t-ブチルフェニルエーテル、サリチルエーテル、3,4-ジメトキシフェニルエーテルおよびベンズアミドフェニルエーテルのような、置換されてよいアリールエーテル；ならびにベンジルエーテル、トリチルエーテルおよびベンズヒドリルエーテルのようなアリール（低級）アルキルエーテルが挙げられる。
【００４５】
エステルの例としては、脂肪族エステル、例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、t-ブチルエステル、ペンチルエステルおよび1-シクロプロピルエチルエステルのような低級アルキルエステル；ビニルエステルおよびアリルエステルのような低級アルケニルエステル；エチニルエステルおよびプロピニルエステルのような低級アルキニルエステル；ヒドロキシエチルエステルのようなヒドロキシ（低級）アルキルエステル；メトキシメチルエステルおよび1-メトキシエチルエステルのような低級アルコキシ（低級）アルキルエステル；および、例えばフェニルエステル、トリルエステル、t-ブチルフェニルエステル、サリチルエステル、3,4-ジメトキシフェニルエステルおよびベンズアミドフェニルエステルのような、置換されてよいアリールエステル；およびベンジルエステル、トリチルエステルおよびベンズヒドリルエステルのようなアリール（低級）アルキルエステルが挙げられる。
【００４６】
Aのアミドは、式-CONR'R''で表される基を意味し、ここで、R'およびR''はそれぞれ水素、低級アルキル、アリール、アルキルもしくはアリールスルホニル、低級アルケニルおよび低級アルキニルであり、例えば、メチルアミド、エチルアミド、ジメチルアミドおよびジエチルアミドのような低級アルキルアミド；アニリドおよびトルイジドのようなアリールアミド；および、メチルスルホニルアミド、エチルスルホニルアミドおよびトリルスルホニルアミドのようなアルキルもしくはアリールスルホニルアミドが挙げられる。
【００４７】
好ましいLおよびMの例としては、水素、ヒドロキシおよびオキソが挙げられ、特に、LとMがともにヒドロキシであるか、またはLがオキソでMが水素またはヒドロキシである。
【００４８】
好ましいAの例は、-COOH、その医薬的に許容される塩、エステルまたはアミドである。
【００４９】
好ましいX1およびX2の例は、両方が水素またはハロゲン原子であり、ハロゲン原子である場合は、より好ましくはフッ素原子であり、16,16-ジフルオロ型と称される。
【００５０】
好ましいR1は、1〜10個の炭素原子、好ましくは6〜10個の炭素原子を含有する炭化水素残基である。さらに、脂肪族炭化水素中の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよい。
【００５１】
R1の例には、例えば、以下の基が含まれる：
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH-、
-CH2-C≡C-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-、
-CH2-CH=CH-CH2-O-CH2-、
-CH2-C≡C-CH2-O-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH-、
-CH2-C≡C-CH2-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH-、
-CH2-C≡C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-および
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2-。
【００５２】
好ましいRaは、1〜10個の炭素原子、より好ましくは1〜8個の炭素原子を含有する炭化水素である。Raは1個の炭素原子を有する1または2個の側鎖を有し得る。さらに、脂肪族炭化水素の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄によって置換されてよい。
【００５３】
本発明の態様において、式（Ｉ）および式（II）の代表的な化合物の例としては、
Raがハロゲンにより置換されており、および／またはZがC=Oである式（Ｉ）の化合物；
X1およびX2の１つがハロゲンにより置換されており、および／またはZがC=Oである式（II）の化合物；
Lが=Oまたは-OHであり、MがHまたはOHであり、AがCOOHまたはその官能性誘導体であり、Bが-CH2-CH2-であり、ZがC=Oであり、X1がハロゲン（例えば、X１がCl、Br、IまたはFである）または水素であり、X2がハロゲン（例えば、X2がCl、Br、IまたはFである）または水素であり、R１が、飽和または不飽和の、二価の直鎖C6脂肪族炭化水素残基であり、R2が単結合であり、そして、R3が直鎖または分枝鎖の、酸素、窒素または硫黄によって置換されてよい、低級アルキル（例えば、C４〜６アルキル）である、式（II）の化合物；
Lが=Oであり、MがOHであり、AがCOOHまたはその官能性誘導体であり、Bが-CH2-CH2-であり、ZがC=Oであり、X１がハロゲン（例えば、X１がCl、Br、IまたはFである）または水素であり、X2がハロゲン（例えば、X2がCl、Br、IまたはFである）または水素であり、R１が飽和または不飽和の、二価の直鎖C6脂肪族炭化水素残基であり、R2が単結合であり、そして、R3が直鎖または分枝鎖の、酸素、窒素または硫黄により置換されてよい低級アルキルである、式（II）の化合物；
Lが=Oであり、MがOHであり、AがCOOHまたはその官能性誘導体であり、Bが-CH2-CH2-であり、ZがC=Oであり、X１およびX2がハロゲン原子（例えば、X１およびX2が、Cl、Br、IまたはFである）であり、R１が、飽和または不飽和の二価の直鎖C6脂肪族炭化水素残基であり、R２が単結合であり、そして、R３が直鎖または分枝鎖の低級アルキル（例えば、C4アルキルまたはC5アルキル）である、式（II）の化合物；
Lが=Oであり、MがOHであり、AがCOOHまたはその官能性誘導体であり、Bが-CH2-CH2-であり、ZがC=Oであり、X1およびX2がフッ素原子であり、R1が、飽和または不飽和の、二価の直鎖C6脂肪族炭化水素残基であり、R2が単結合であり、そして、R3が直鎖または分枝鎖の低級アルキル（例えば、C4アルキルまたはC5アルキル）である、式（II）の化合物；および、
Lが=Oであり、MがHまたはOHであり、AがCOOHまたはその官能性誘導体であり、Bが-CH2-CH2-であり、ZがC=Oであり、X1およびX2がハロゲン原子（例えば、X１およびX2がCl、Br、IまたはFである）であり、R１が飽和または不飽和の、二価の直鎖C6脂肪族炭化水素残基であり、R2が単結合であり、R3が-CH2-CH2-CH2-CH3または-CH2-CH（CH3）-CH2-CH3である、式（II）の化合物
が挙げられる。
【００５４】
さらなる態様において、本発明で用いる代表的な化合物としては、
(-)-7-[(2R,4aR,5R,7aR)-2-(1,1-ジフルオロペンチル)-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル]ヘプタン酸（ルビプロストン）、
(-)-7-{(2R,4aR,5R,7aR)-2-[(3S)-1,1-ジフルオロ-3-メチルペンチル]-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル}ヘプタン酸（コビプロストン）、
(+)-イソプロピル (Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-ジヒドロキシ-2-(3-オキソデシル)シクロペンチル]ヘプタ-5-エノアート（イソプロピルウノプロストン）、
(-)-7-[(1R,2R)-2-(4,4-ジフルオロ-3-オキソオクチル)-5-オキソシクロペンチル]ヘプタン酸、
(E)-7-[(1R,2R)-2-(4,4-ジフルオロ-3-オキソオクチル)-5-オキソシクロペンチル]ヘプタ-2-エン酸、
その互変異性体およびその官能性誘導体が挙げられる。
【００５５】
上記の式（Ｉ）および（II）において、環並びにαおよび／またはω鎖の立体配置は、天然のＰＧ類の立体配置と同じであっても異なっていてもよい。しかしながら、本発明は、天然タイプの立体配置を有する化合物および非天然タイプの立体配置の化合物の混合物も含む。
【００５６】
本発明において、13位と14位の間がジヒドロであり、15位がケト（=O）である脂肪酸誘導体は、11位のヒドロキシと15位のケトの間にヘミアセタールが形成されることにより、ケト-ヘミアセタール平衡の状態にあってよい。
【００５７】
例えば、X1およびX2の両方がハロゲン原子、特にフッ素原子である場合は、その化合物は互変異性体として二環式化合物を含むことが確認されている。
【００５８】
上記のような互変異性体が存在する場合、両互変異性体の比率は、分子の残りの構造または存在する置換基の種類により変動する。場合により、一方の異性体が他方と比較して優勢に存在することもある。しかしながら、本発明は両方の異性体を含むと解するべきである。
【００５９】
さらに、本発明に用いる脂肪酸誘導体は、二環式化合物およびその類似体または誘導体を含む。
【００６０】
二環式化合物は、式（III）により表される：
【化８】
2016521678.tif 000009
［式中、
Aは、-CH3、または-CH2OH、-COCH2OH、-COOHまたはそれらの官能性誘導体であり；
X1'およびX2'は、水素、低級アルキルまたはハロゲンであり；
Yは、
【化９】
2016521678.tif 000010
であり、
ここで、R4'およびR5'は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはヒドロキシ（低級）アルキルであり、R4'およびR5'が同時にヒドロキシおよび低級アルコキシであることはなく、
R1は、非置換であるか、またはハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アリールまたは複素環基により置換された、二価の飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基であり、該脂肪族炭化水素中の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄により置換されてよく；
R2'は、非置換であるか、またはハロゲン、オキソ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、シクロ（低級）アルキル、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリール、アリールオキシ、複素環基または複素環オキシ基により置換された、飽和または不飽和の低級または中級の脂肪族炭化水素残基；低級アルコキシ；低級アルカノイルオキシ；シクロ（低級）アルキル；シクロ（低級）アルキルオキシ；アリール；アリールオキシ；複素環基；複素環オキシ基であり、該脂肪族炭化水素の少なくとも１つの炭素原子は、酸素、窒素または硫黄によって置換されていてよく；
R3'は、水素、低級アルキル、シクロ（低級）アルキル、アリールまたは複素環基である］。
【００６１】
さらに、本発明に用いる化合物は、異性体の存在の有無にかかわらずケト型に基づく式または名称により表し得るが、かかる構造または名称はヘミアセタール型の化合物を除外することを意図するものではないことに留意するべきである。
【００６２】
本発明においては、いずれかの異性体、例えば、個々の互変異性体、それらの混合物、または光学異性体、それらの混合物、ラセミ混合物、および他の立体異性体を、同じ目的に用いることが可能である。
【００６３】
本発明に用いるいくつかの化合物は、米国特許第5,073,569号、第5,166,174号、第5,221,763号、第5,212,324号、第5,739,161号および第6,242,485号明細書に開示されている方法により調製し得る（これらの引用文献は引用により本明細書に組み込まれる）。
【００６４】
哺乳類対象は、ヒトを含む、任意の哺乳類対象であってよい。該化合物は、全身または局所的に適用してよい。化合物は、通常、経口投与、鼻腔内投与、吸入投与、静脈内投与（点滴を含む）、皮下注入、眼局所投与、直腸内投与、膣内投与、経皮投与などによって投与されてよい。
【００６５】
用量は、動物の種、年齢、体重、処置する症状、所望の治療効果、投与経路、処置期間などによって変わり得る。満足な効果は、１日に１〜４回の全身投与、または１日あたり、0.00001〜500mg/kg、より好ましくは0.0001〜l00mg/kgの量での連続投与によって得ることができる。
【００６６】
該化合物は、好ましくは、慣用的な投与に適した医薬組成物に製剤されてよい。該組成物は、経口投与、鼻腔内投与、眼局所投与、吸入投与、注射または灌流に適した医薬組成物に製剤されてよく、同様に、外用剤、坐剤または膣坐剤であってもよい。
【００６７】
本発明の組成物はさらに、生理学的に許容される添加剤を含んでよい。かかる添加剤としては、賦形剤、希釈剤、注入剤、溶解剤、滑剤、アジュバント、結合剤、崩壊剤、被覆剤、カプセル化剤、軟膏基剤、坐剤基剤、エアロゾル化剤、乳化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化薬、保存剤、抗酸化剤、矯正剤、香味剤、着色剤、機能性材料、例えばシクロデキストリン、および、生分解性ポリマー、安定剤のような、本発明の化合物とともに用いる成分が挙げられる。かかる添加剤は、当該技術分野でよく知られているものであり、一般的な薬学の参考文献に記載されているものから選択されてよい。
【００６８】
本発明の組成物中の、上記化合物の量は、組成物の処方によって変わり得るものであり、一般的に、0.000001〜10.0%、より好ましくは0.00001〜5.0%、最も好ましくは0.0001〜1%であってよい。
【００６９】
経口投与用の固体組成物の例としては、錠剤、トローチ剤、舌下錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤などが挙げられる。かかる固体組成物は、１種以上の有効成分を、少なくとも１種の不活性な希釈剤と混合することによって調製し得る。該組成物は、かかる不活性な希釈剤以外の添加剤、例えば、滑剤、崩壊剤および安定剤をさらに含んでよい。錠剤および丸剤は、必要であれば、腸溶性フィルムまたは胃腸溶性フィルムによって被覆されてよい。それらは、２つ以上の層で被覆されていてもよい。それらはまた、持続性放出物質に吸着しているか、またはマイクロカプセル化されていてよい。さらに、該組成物は、容易に分解される物質、例えばゼラチンによってカプセル化されていてよい。それらはさらに、適切な溶媒、例えば脂肪酸またはそのモノ、ジもしくはトリグリセリドに溶解して、軟カプセル剤となっていてよい。舌下錠剤は、即効性が必要な場合に用いてよい。
【００７０】
経口投与用の液体組成物の例としては、乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤などが挙げられる。該組成物はさらに、慣用される不活性希釈剤、例えば精製水またはエチルアルコールを含んでよい。該組成物は、アジュバント、例えば湿潤剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤、香料および保存剤といったような、該不活性希釈剤以外の添加剤を含んでいてよい。
【００７１】
本発明の組成物は、スプレー用組成物の形態であってよく、該組成物は、１以上の有効成分を含み、公知の方法により調製されてよい。
【００７２】
経鼻製剤の例は、１種以上の有効成分を含む水性または油性の液剤、懸濁剤または乳剤であってよい。吸入による有効成分の投与のために、本発明の組成物は、エアロゾルを提供し得る懸濁剤、液剤または乳剤の形態か、または乾燥粉末吸入に好適な粉末の形態であってもよい。吸入投与のための組成物は、慣用される噴霧剤をさらに含んでいてよい。
【００７３】
非経口投与のための本発明の注射用組成物の例としては、滅菌した水性もしくは非水性液剤、懸濁剤および乳剤が挙げられる。水性液剤または懸濁剤のための希釈剤としては、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水およびリンゲル液などが含まれ得る。
【００７４】
液剤および懸濁剤のための非水性希釈剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、エタノールなどのアルコールおよびポリソルベートが挙げられる。組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤などの添加剤をさらに含んでもよい。それらは、例えば細菌保留フィルターを通した濾過、滅菌剤の配合、またはガスもしくは放射性同位体照射滅菌によって滅菌してよい。注射用組成物は、滅菌粉末組成物として提供し、使用前に注射用の滅菌溶媒に溶解させてもよい。
【００７５】
本発明の外用剤には、皮膚科学および耳鼻咽喉科学の分野において用いられるあらゆる外用製剤が含まれ、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤およびスプレー剤などが挙げられる。
【００７６】
本発明の他の形態は坐剤または腟坐剤であり、これらは慣用的な基剤、例えば体温で軟化するカカオバターに有効成分を混合することによって調製することができ、吸収性を向上させるために適切な軟化温度を有する非イオン性界面活性剤を用いてもよい。
【００７７】
本発明によれば、本発明の脂肪酸誘導体は、それを必要とする対象への投与を含む、哺乳類対象における、幹細胞の腫瘍形成能の抑制に有用である。
【００７８】
本発明の他の態様は、哺乳類対象の幹細胞の腫瘍形成能の抑制方法であって、外来性または内在性の幹細胞を有効量の脂肪酸誘導体に接触させることを含む、方法を含む。
【００７９】
該方法は、培養細胞、例えば試験管内または生体外の培養細胞に用いてもよい。例えば、幹細胞または前駆細胞は、試験管内で、培養培地中で培養してよく、該接触工程は、１種以上の脂肪酸誘導体を培養培地に、十分な量、例えば1 X 10-12〜1 X 10-3 mol/lで添加することにより行ってよい。したがって、一態様において、本発明の提供する１種以上の脂肪酸誘導体は、幹細胞（例えば胚性幹細胞）を試験管内で培養するための補助剤または培地として用いてよい。本発明の提供する補助剤は、さらに、LIF、BMP-4、GDF6および/またはbFGFを含んでいてよい。該補助剤は、本発明の提供する脂肪酸誘導体、LIF、BMP-4、GDF6およびbFGFを、それぞれ、該補助剤を培養培地に添加した際に、培養培地中の本発明の提供する脂肪酸誘導体、LIF、BMP-4、GDF6およびbFGFの含有量がそれぞれ、(該脂肪酸については)0.01nM〜100μMまたは0.1μM〜10μMであり、(LIF、BMP-4、GDF6およびbFGFについては)0.1ng/ml〜300ng/mlになるように含んでいてよい。例えば、該補助剤を、幹細胞培養用の培地に、100倍希釈して添加する場合、該補助剤は、本発明の提供する脂肪酸誘導体を、1nM〜10mMまたは10μM〜1000μM、LIFを0.1μg/ml〜30μg/ml、BMP-4を0.1μg/ml〜30μg/ml、GDF6を0.1μg/ml〜30μg/mlおよび/またはbFGFを0.1μg/ml〜30μg/ml含んでいてよい。該補助剤は、１種以上の本発明の提供する脂肪酸誘導体（例えば((-)-7-[(2R,4aR,5R,7aR)-2-(1,1-ジフルオロペンチル)-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル]ヘプタン酸)、((+)-イソプロピル (Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-ジヒドロキシ-2-(3-オキソデシル)シクロペンチル]ヘプタ-5-エノアート))を、LIFおよび/またはBMP-4とともに水溶液（例えば、生理食塩水、PBSなど）に溶解させることにより製造し得る。
【００８０】
本発明の提供する１種以上の脂肪酸誘導体は、幹細胞（例えば胚性幹細胞）の培養用に用いる培地中に含まれていてよい。例えば、本発明の提供する脂肪酸誘導体0.01nM〜100μMまたは0.1μM〜10μMが、幹細胞培養用に用いる培地に含まれていてよい。
【００８１】
幹細胞の培養には、幹細胞（例えば胚性幹細胞）の培養用であることが知られている任意の培地を用いてよく、本発明の提供する１種以上の脂肪酸誘導体は該培地中に溶解される。幹細胞の培養に用いることが知られている培地の例としては、ESGRO完全血清不含有クローングレード培地 (ESGRO complete serum free clonal grade medium)；イスコフ改変ダルベッコ培地 (IMDM/Ham’s F-12)；N2B27培地；DMEM；非必須アミノ酸、200mM L-グルタミンおよびKnockOut Serum ReplacementTM (KSR, Invitrogen)を補充したDMEM-F12；KnockOut DMEM (Invitrogen)およびKnockOut DM/F12 (Invitrogen)が挙げられるが、これらに限定されるものではない。該培地はさらに、LIF、BMP-4、GDF6および/またはbFGFが補充されていてよい。LIF、BMP-4、GDF6およびbFGFの含有量は、それぞれ、0.1ng/ml〜300ng/ml、1ng/ml〜200ng/ml、10ng/mlまたは200ng/mlであってよい。本発明の提供する脂肪酸誘導体を含む幹細胞培養用培地は、本発明の提供する脂肪酸誘導体を、幹細胞の培養に用いることが知られている培地に溶解させることによって調製し得る。例えば、0.01nM〜100μMの本発明の提供する脂肪酸誘導体を含む幹細胞培養用培地は、(-)-7-[(2R,4aR,5R,7aR)-2-(1,1-ジフルオロペンチル)-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル]ヘプタン酸または(+)-イソプロピル (Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-ジヒドロキシ-2-(3-オキソデシル)シクロペンチル]ヘプタ-5-エノアートを、10ng/mlのLIF、10ng/mlのBMP-4および200ng/mlのGDF6を補充したN2B27培地に溶解させることによって調製し得る (Qi-Long Ying, et al., Cell, Vol. 115, 281-292, Oct. 31, 2003参照)。
【００８２】
幹細胞を培養する目的は、該幹細胞が分化することなく、該幹細胞を成長、増殖または維持することであってよい。
【００８３】
上述の補助剤または培地を用いて、幹細胞（例えば胚性幹細胞）を、フィーダー細胞を用いて、または用いずに培養してよい。したがって、一態様において、幹細胞（例えば胚性幹細胞）の培養方法であって、培養容器に、本発明の提供する脂肪酸誘導体を含む上述の培地中で該幹細胞を播種することを含む、方法を提供する。幹細胞がフィーダー細胞を用いずに培養される場合、培養容器は、細胞外マトリクスで被覆されていてよい。該細胞外マトリクスの例としては、細胞が分泌する細胞外マトリクス成分 (Matrigel（登録商標）マトリクスなど)、細胞外に分泌され、細胞接着を亢進する他の成分、生体（人体を含む）由来コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ヒアルロン酸、およびこれらの蛋白質および多糖の人工合成物質（分解産物および断片を含む）、生体（人体を含む）由来の血清、血漿およびそこから分離または精製された産物が挙げられる。培養容器は、慣用的な方法によって、細胞外マトリクスで被覆されていてよい。
【００８４】
本発明によれば、該細胞は、本発明の化合物および１種以上の幹細胞調節剤と同時に接触させても、または連続的に接触させてもよい。
【００８５】
本発明はさらに、幹細胞の腫瘍形成能を抑制するために、該対象に１種以上の幹細胞調節剤を投与することを含んでいてよい。
【００８６】
本発明の方法は、幹細胞の生体外増殖および／または分化を刺激するのに用いてもよく、それにより、それを必要とする対象への移植または投与に適当な細胞集団を提供し得る。生体外の幹細胞増殖は、多数の疾患症状の処置に治療学的な有効性を示す。
【００８７】
幹細胞の連続的な方法もまた考慮されている。例えば、細胞を脂肪酸誘導体と、直接的または間接的に接触させることによって、幹細胞集団を生体外で増殖させてよい。
【００８８】
生体内および生体外の方法について、該幹細胞は、自家性、同種異系または異種性であってよい。
【００８９】
本明細書中で使用する「処置すること」または「処置」という語は、予防的および治療的な処置を含み、症状の予防、治療、軽減、症状の減弱化、進行の停止などの、あらゆる制御方法を含む。
【００９０】
本明細書中で使用する「腫瘍形成能（tumorigicity）」という語は、腫瘍を引き起こし、形成し、または発達させる能力、傾向または性質を含む。該腫瘍は、良性（非がん性）、潜在的悪性、前悪性 (前がん性)または悪性（がん性）であってよい。本明細書中の良性、潜在的悪性または前悪性の腫瘍の例としては、腺腫、ポリープおよびテラトーマが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００９１】
本明細書中で使用する「幹細胞」という語は、ヒト起源の幹細胞または非ヒト哺乳類起源の幹細胞を含み、１種以上の分化細胞に分化することのできる細胞を指す。該幹細胞は、特定の組織または器官、例えば、血液、神経、骨格筋、心筋、骨髄、皮膚、腸、骨、腎臓、肝臓、膵臓および胸腺等由来である、任意の細胞種への発生能を有する多能性幹細胞であっても、または数種の異なる終末分化細胞種に分化することができる多分化能幹細胞であってもよい。多能性幹細胞は、通常、起源が胚性の幹細胞であり、人工多能性幹細胞および多分化能幹細胞は、体細胞性の幹細胞、例えば間葉系幹細胞、骨髄幹細胞、脂肪由来幹細胞、造血幹細胞、上皮幹細胞、神経幹細胞および体細胞移入により産生される体細胞を含む。本発明によれば、幹細胞は、好ましくは、神経幹細胞、上皮幹細胞および間葉系幹細胞であってよい。
【００９２】
本明細書中で使用する「前駆細胞」という語は、特定の細胞系列になることが確定しており、一連の細胞分裂により、特定の限定された範囲の分化細胞を産生する細胞を指す。前駆細胞の例は、１種の細胞にのみ分化することができるが、それ自体は完全に成熟していないか、または完全に分化していない、筋芽細胞である。
【００９３】
胚性幹細胞 (ESC)および人工多能性幹細胞 (iPSC) は、多能性を維持しながら無限に複製でき、三胚葉全ての細胞種に分化できる性質を有する。ESCおよびiPSCのこれら２つの性質によって、これらの細胞は、組織工学および多くの異なる疾患についての細胞補充療法に潜在的に適当なものとなっている。しかし、ESCまたはiPSCの臨床的な適用における重大な障害は、テトラトーマ形成の危険性があることである。
【００９４】
本発明の脂肪酸誘導体は、幹細胞の腫瘍形成能の抑制に有用であるため、特に、胚性および人工多能性幹細胞の臨床適用について、高い効用が期待できる。
【００９５】
本発明の医薬組成物は、本発明の目的に反しないかぎり、単一の有効成分または２種以上の有効成分の組み合わせを含んでよい。
【００９６】
複数の有効成分の組み合わせにおいて、それぞれの含有量は、その治療効果および安全性を考慮して適宜増減させてよい。
【００９７】
本明細書中で使用する「組み合わせ」という語は、２種以上の有効成分が、単一の実体または投与の形態で、同時に、または別の実体で、同時にもしくは具体的な時間的制限がなく連続的に、両方が患者に投与されることを意味し、ここで、かかる投与は、体内で、好ましくは同時に、２種の成分の治療上有効なレベルをもたらす。
【００９８】
本発明は、以下の実施例で詳細に記述されるが、これは、本発明を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００９９】
実施例１
ESGRO COMPLETE TM C57/BL6マウス胚性幹細胞 (MES, Millipore # SF-CMTI-2)を、0.1%ゼラチンでコーティングしたT75培養フラスコ中で、ESGRO complete serum free clonal grade medium (Millipore # SF001-B)およびESGRO complete supplement (Millipore # SF012-250、選択的GSK3β阻害剤含有)を用いて増殖させた。細胞を1μMの化合物-1 ((-)-7-[(2R,4aR,5R,7aR)-2-(1,1-ジフルオロペンチル)-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル]ヘプタン酸)、化合物-2 ((+)-イソプロピル (Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-ジヒドロキシ-2-(3-オキソデシル)シクロペンチル]ヘプタ-5-エノアート)、またはビヒクル(0.1% DMSO)のいずれかを用いて、細胞が６０％コンフルエントになるまで、９６時間処理を行った。薬剤および培地は毎日交換を行った。細胞を新しく添加した薬剤の存在下で９６時間インキュベーションした後、マイコプラズマ試験を２４時間行った。したがって、細胞はビヒクルまたは化合物-1もしくは-2に合計１２０時間暴露された。該細胞を回収し、30%マトリゲルと混合した。該混合物を Fox Chase SCID-ベージュマウスに、１箇所あたり、細胞1 x 106個になるように注入した。注入の３週間後に、腫瘍を腎臓および精巣から回収した。腫瘍体積は、マウスから回収する前後に測定した。マウスからの腫瘍の回収後に、腫瘍重量の測定も行った。
【０１００】
腎臓および精巣において、腫瘍の体積および重量はともに、化合物1または化合物-2を用いた処置により低下した。この結果は、化合物-1および化合物-2が、マウスES細胞の腫瘍形成の可能性を大幅に低下させることを示唆している。
【表１】
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【表２】
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【０１０１】
【表３】
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【国際調査報告】
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