(57)【要約】  本発明は、化合物（例えば、本明細書において説明されるものなど）、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ、溶媒和物、および水和物に関する。本発明は、本発明の化合物を含む組成物、ならびにＡβ、ＰＡＭＰＳ、およびＤＡＭＰＳをモジュレートするモジュレート化合物または組成物を投与することによって有益に処置される疾患および状態を処置する方法におけるそのような化合物および組成物の使用も提供する。
2016516053.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トール様レセプターのリガンド結合部位を含む、単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）またはその断片。
【請求項２】
リガンド結合部位が、トール様レセプター２（ＴＬＲ２）、トール様レセプター４（ＴＬＲ４）、トール様レセプター５（ＴＬＲ５）、またはトール様レセプター６（ＴＬＲ６）から選択される、請求項１に記載の単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）。
【請求項３】
リガンド結合部位が、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）および／または病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合する、請求項１または２に記載の単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）。
【請求項４】
疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）が、Ａβ４０、Ａβ４２、タウ、およびシヌクレインのうちの１つまたは複数である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）。
【請求項５】
可溶性トール様レセプターが、ｓＴＬＲ２−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ４−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ５−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ６−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ２−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−ＦＬＡＧ、またはｓＴＬＲ６−ＦＬＡＧである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）。
【請求項６】
（ｉ）トール様レセプターのリガンド結合部位を含むｓＴＬＲポリペプチドと（ｉｉ）Ｆｃポリペプチドとを含む、単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項７】
ｓＴＬＲポリペプチドとＦｃポリペプチドとが、ペプチド結合基によって接続されている、請求項６に記載の単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項８】
ｓＴＬＲポリペプチドのＣ−末端がＦｃポリペプチドのＮ−末端に接続されている、請求項６または７に記載の単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項９】
リガンド結合部位が、トール様レセプター２（ＴＬＲ２）、トール様レセプター４（ＴＬＲ４）、トール様レセプター５（ＴＬＲ５）、またはトール様レセプター６（ＴＬＲ６）から選択される、請求項６〜８のいずれか一項に記載の単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項１０】
リガンド結合部位が、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）および／または病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合する、請求項６〜９のいずれか一項に記載の単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項１１】
疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）が、Ａβ４０、Ａβ４２、タウ、およびシヌクレインのうちの１つまたは複数である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項１２】
ｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質が、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ６−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、またはｓＴＬＲ６−Ｆｃ−ＦＬＡＧである、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項１３】
対象における神経変性タンパク質症の疾患または障害を処置する方法であって、対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法。
【請求項１４】
疾患または障害が、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、シヌクレイン病、またはタウオパチーである、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
ｓＴＬＲが、末梢にまたは直接的に脳にデリバリーされる、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるＡβプラーク沈着をモジュレートする方法であって、対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法。
【請求項１７】
対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるプラーク関連グリア活性化をモジュレートする方法であって、対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法。
【請求項１８】
対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるＡβ、タウ、および／またはシヌクレインの毒性を阻止する方法であって、対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法。
【請求項１９】
対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるＡβおよび／またはＤＡＭＰＳの有害効果をモジュレートする方法であって、対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法。
【請求項２０】
リガンド結合部位が、トール様レセプター２（ＴＬＲ２）、トール様レセプター４（ＴＬＲ４）、トール様レセプター５（ＴＬＲ５）、またはトール様レセプター６（ＴＬＲ６）から選択される、請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
リガンド結合部位が、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）に結合する、請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）が、Ａβ４０、Ａβ４２、タウ、およびシヌクレインのうちの１つまたは複数である、請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ポリペプチドが、単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）またはｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ポリペプチドが、ｓＴＬＲ２−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ４−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ５−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ６−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ２−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ６−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ６−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、またはｓＴＬＲ６−Ｆｃ−ＦＬＡＧのうちの１つまたは複数である、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
トール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドが、ベクターから発現される、請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルスベクターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
炎症を低減する、請求項１３〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１〜５に記載の可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）または請求項６〜１２に記載の融合タンパク質のｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項２９】
請求項１〜５に記載の可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）または請求項６〜１２に記載の融合タンパク質のｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を含むベクター。
【請求項３０】
アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルスベクターである、請求項２９に記載のベクター。
【請求項３１】
請求項１〜５に記載の単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）を含む可溶性ポリペプチドまたは請求項６〜１２に記載のｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質または請求項１〜５に記載の可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）もしくは請求項６〜１２に記載のｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質を含む核酸配列を含むベクターと、注入にとって好適な薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項３２】
追加の治療剤をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦支援の研究の下で為された発明に対する権利の声明
この研究は、一部、米国国立衛生研究所の国立老化研究所助成金Ｒ０１  ＡＧ１８４５４による支援を受けている。政府は、本発明においてある特定の権利を有する。
【０００２】
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づいて、２０１３年３月１５日に「Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ」の表題において出願された米国仮特許出願第６１／８０２，１８４号に対する優先権および恩典を主張するものである。前述の特許出願の内容全体は、この参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００３】
トール様レセプター（ＴＬＲ）は、外因性病原体関連分子パターンおよび内因性危険関連分子パターン（ＰＡＭＰおよびＤＡＭＰ）を認識する内因性パターン認識レセプターである。ＴＬＲは、神経変性タンパク質症、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）およびパーキンソン病（ＰＤ）など、において上方調節され、過度の炎症性シグナリングを生じ得る。
【０００４】
ＡＤ、ＰＤ、および関連する神経変性疾患に対する効果的な治療は、まだ対処できていない大きな医学的必要性を残している。免疫治療アプローチは、主に、ＡＤのための効果（ｅｆｆｅｃｔ）疾患修飾性治療薬（ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を開発するための努力に集中したままである。Ａβ産生を標的とするセクレターゼ阻害剤とは対照的に、抗Ａβ免疫療法は、既存の沈着物を浄化するため、毒性Ａβ凝集体を除毒するため、またはその両方のため、の潜在能力を有しており、したがって、既存の病理を有する患者において免疫療法を試験するためのより良好な理論的根拠が存在する。さらに、タウおよびα−シヌクレインを標的とすることが可能であり得る特定の免疫療法が関心を持たれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、新規の化合物（例えば、本明細書において説明されるもの）、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、および水和物に関する。本発明は、本発明の化合物を含む組成物、ならびに疾患および状態を弱める化合物を投与することによって有益に処置される疾患および状態を処置する方法におけるそのような化合物および組成物の使用も提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様において、本発明は、可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）またはトール様レセプターのリガンド結合部位を含むその断片；（ｉ）トール様レセプターのリガンド結合部位を含むｓＴＬＲポリペプチドおよび（ｉｉ）Ｆｃポリペプチド、を含むｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質；それらのヘテロ二量体など；またはｓＴＬＲの組合せ；あるいはそれらの薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグ、または溶媒和物、である、単離されたおよび／または精製された化合物を提供する。本明細書において説明されるｓＴＬＲおよびｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトおよびマウスのｓＴＬＲおよびｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質を含む。
【０００７】
一態様において、本発明は、単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）またはトール様レセプターのリガンド結合部位を含むその断片を提供する。
【０００８】
別の態様において、当該単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）は、リガンド結合部位が、トール様レセプター２（ＴＬＲ２）、トール様レセプター４（ＴＬＲ４）、トール様レセプター５（ＴＬＲ５）、またはトール様レセプター６（ＴＬＲ６）から選択されるものである。
【０００９】
別の態様において、当該単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）は、リガンド結合部位が、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）および／または病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合するものである。
【００１０】
別の態様において、当該単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）は、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）が、Ａβ４０、Ａβ４２、タウ、およびシヌクレインのうちの１つまたは複数であるものである。
【００１１】
別の態様において、当該単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）は、当該可溶性トール様レセプターが、ｓＴＬＲ２−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ４−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ５−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ６−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ２−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−ＦＬＡＧ、またはｓＴＬＲ６−ＦＬＡＧであるものである。
【００１２】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、（ｉ）トール様レセプターのリガンド結合部位を含むｓＴＬＲポリペプチドおよび（ｉｉ）Ｆｃポリペプチド、を含むものである。
【００１３】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、ｓＴＬＲポリペプチドとＦｃポリペプチドとがペプチド結合基によって接続されているものである。
【００１４】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、ｓＴＬＲポリペプチドのＣ末端がＦｃポリペプチドのＮ末端に接続されているものである。
【００１５】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、リガンド結合部位が、トール様レセプター２（ＴＬＲ２）、トール様レセプター４（ＴＬＲ４）、トール様レセプター５（ＴＬＲ５）、またはトール様レセプター６（ＴＬＲ６）から選択されるものである。
【００１６】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、リガンド結合部位が、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）および／または病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合しているものである。
【００１７】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）がＡβ４０、Ａβ４２、タウ、およびシヌクレインのうちの１つまたは複数であるものである。
【００１８】
別の態様において、当該単離されたｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質は、ｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質が、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ６−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、またはｓＴＬＲ６−Ｆｃ−ＦＬＡＧであるものである。
【００１９】
別の態様は、対象における神経変性タンパク質症の疾患または障害を処置する方法であって、当該対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む、方法である。
【００２０】
別の態様において、当該方法は、当該疾患または障害が、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、シヌクレイン病、またはタウオパチーであるものである。
【００２１】
別の態様において、当該方法は、ｓＴＬＲが、末梢にまたは直接的に脳にデリバリーされるものである。
【００２２】
別の態様は、対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるＡβプラーク沈着をモジュレートする方法であって、当該対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドを含むポリペプチドを含むポリペプチドの有効量を投与することを含む方法である。
【００２３】
別の態様は、対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるプラーク関連グリア活性化をモジュレートする方法であって、当該対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドを含むポリペプチドの有効量を投与することを含む方法である。
【００２４】
別の態様は、対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるＡβ、タウ、および／またはシヌクレインの毒性を遮断する方法であって、当該対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法である。
【００２５】
別の態様は、対象（例えば、そのような処置を必要としているとして同定された対象）におけるＡβおよび／またはＤＡＭＰＳの有害効果をモジュレートする方法であって、当該対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドの有効量を投与することを含む方法である。
【００２６】
別の態様において、当該方法は、リガンド結合部位が、トール様レセプター２（ＴＬＲ２）、トール様レセプター４（ＴＬＲ４）、トール様レセプター５（ＴＬＲ５）、またはトール様レセプター６（ＴＬＲ６）から選択されるものである。
【００２７】
別の態様において、当該方法は、リガンド結合部位が疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）に結合するものである。
【００２８】
別の態様において、当該方法は、疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）が、Ａβ４０、Ａβ４２、タウ、およびシヌクレインのうちの１つまたは複数であるものである。
【００２９】
別の態様において、当該方法は、ポリペプチドが、単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）またはｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質であるものである。
【００３０】
別の態様において、当該方法は、ポリペプチドが、ｓＴＬＲ２−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ４−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ５−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ６−ＴＡＰ、ｓＴＬＲ２−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ６−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ６−Ｆｃ−Ｖ５、ｓＴＬＲ２−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ４−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、ｓＴＬＲ５−Ｆｃ−ＦＬＡＧ、またはｓＴＬＲ６−Ｆｃ−ＦＬＡＧのうちの１つまたは複数であるものである。
【００３１】
別の態様において、当該方法は、トール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を含む可溶性ポリペプチドがベクターから発現されるものである。
【００３２】
別の態様において、当該方法は、当該ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルスベクターであるものである。
【００３３】
別の態様において、当該方法は、当該方法により炎症が低減されるものである。
【００３４】
別の態様は、本明細書における可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）または本明細書におけるｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子である。
【００３５】
別の態様は、本明細書における可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）または本明細書におけるｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を含むベクターである。
【００３６】
別の態様において、当該ベクターは、当該ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルスベクターであるものである。
【００３７】
別の態様は、本明細書における単離された可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）を含む可溶性ポリペプチドまたは本明細書におけるｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質または本明細書における可溶性トール様レセプター（ｓＴＬＲ）もしくは本明細書におけるｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質を含む核酸配列を含むベクターと、注入にとって好適な薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物である。
【００３８】
別の態様において、当該組成物は、追加の治療剤をさらに含むものである。
【００３９】
別の態様において、本発明は、本明細書において説明される式のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物を、薬学的に許容される担体または希釈剤と一緒に含む、医薬組成物を提供する。他の実施形態において、当該医薬組成物は、注入（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）による投与、経口投与、直腸投与、または経皮投与にとって好適である。他の実施形態において、当該薬学的に許容される担体は、注入（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）による投与、経口投与、直腸投与、または経皮投与にとって好適である。他の実施形態において、当該組成物は、吸入法用ではない。他の実施形態において、当該薬学的に許容される担体は、吸入法用ではない。
【００４０】
本発明は、本明細書において同定される疾患または状態を処置するための医薬の製造のための、本明細書における式のいずれかの化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグ、もしくは溶媒和物の使用も提供する。
【００４１】
本発明は、本明細書において同定される疾患または状態を処置するために対象へ投与するための、本明細書における式のいずれかの化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグ、もしくは溶媒和物の使用も提供する。
【００４２】
別の態様において、本発明は、対象（例えば、そのような処置を必要とするとして同定された対象）における炎症性、神経変性、または免疫調節性の疾患または障害を処置する方法であって、当該対象に本明細書における式のいずれかの化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグ、もしくは溶媒和物、の有効量を投与することを含む方法を提供する。
【００４３】
別の態様において、本発明は、対象（例えば、そのような処置を必要とするとして同定された対象）における疾患または障害を処置する方法であって、当該対象に本明細書における式のいずれかの化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグ、もしくは溶媒和物、あるいはそれらの組成物、の有効量を投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態において、当該疾患または障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、シヌクレイン病、またはタウオパチー（例えば、急性、慢性など）からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、当該疾患または障害は、免疫調節剤（例えば、本明細書の任意の化合物または組成物）によって有益に処置されるものである。
【００４４】
別の態様において、本発明は、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）において、対象において、または細胞において免疫活性をモジュレートする方法を提供する。本明細書における式のいずれかの化合物またはその組成物を細胞および／または対象に接触させること（組み合わせること、導入すること、投与すること）を含む方法。
【００４５】
本発明の別の態様は、対象において、神経変性疾患または神経疾患、例えば、アルツハイマー病（「ＡＤ」）、パーキンソン病（「ＰＤ」）、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）、多発性硬化症（「ＭＳ」）、脳卒中もしくは前頭側頭型認知症、あるいは、全身性炎症状態を示す疾患または障害、例えば、敗血症、骨関節炎、慢性関節リウマチ、または炎症性腸疾患など、を予防または処置する方法であって、当該対象にトール様レセプター（ＴＬＲ）のリガンド結合部位を有する可溶性ポリペプチドの有効量を投与することよってそのような疾患または障害を予防または処置する方法を提供する。ある特定の実施形態において、予防または処置の程度は、処置または予防される適応症に対して、疾患または障害を示す適切な対照集団、マーカーレベル、表現型特性化などを参照することにより評価される。
【００４６】
本発明は、本明細書における式のいずれかの化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、立体異性体、プロドラッグ、もしくは溶媒和物の単離、構造決定、および生物学的決定のための方法も提供する。当該方法は、本明細書における実施例において具体的に列挙されるものなど、本明細書において説明されるような工程または作業の１つまたは組合せを本質的に含む。
【００４７】
本発明は、以下の非限定的な例を参照しながらおよび以下の図を参照しながら、下記にさらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、可溶性ＴＬＲの活性を評価する研究方法の概略図である。図１Ａは、可溶性ＴＬＲコンストラクトの構築および検証を表す概略図である。図１Ｂは、新生児期Ｐｏ  ＴｇＣＲＮＤ８マウスにおけるｒＡＡＶコンストラクトの注入および組織の分析を表す概略図である。
【図２】図２Ａ〜２Ｄは、可溶性ＴＬＲコンストラクトの構築および検証を表す。図２Ａは、ＴＬＲにおける異なるドメインの概略図である。典型的なＴＬＲおよびそのドメインの概略図（左上のパネル）。異なるＴＬＲ（２、４、５、および６）およびそれらのヘテロ二量体が、それらの古典的なリガンドと共に示されている（右上のパネル）。可溶性ＴＬＲは、市販の全長マウスＴＬＲから、ＰＣＲクローニングによって、選択されたＴＬＲの膜内および細胞質ドメインを除去することにより構築した（下パネル）。図２Ｂは、ｐＴＲ２プラスミドにおける代表的なマウスｓＴＬＲ−ＴＡＰ（左パネル）およびｓＴＬＲ−Ｆｃ−Ｖ５（右パネル）コンストラクトを表す。矢印によって境されるエリアは、ＴＡＰタグにおけるクローニングされた上流であり、可溶性非シグナリングレセプターとして発現した。原寸に比例しているわけではない。ＬＲＲはロイシン反復ドメインであり；ＰＣＣはポリシスチン（ｐｏｌｙｃｉｓｔｉｎｅ）ドメインであり；ＴＩＲはトール／ＩＬ１β１レセプターである。図２Ｃは、ｐＴＲ２プラスミドにおける代表的なヒトｓＴＬＲ−ＦＬＡＧ（左パネル）およびｓＴＬＲ−Ｆｃ−ＦＬＡＧ（右パネル）コンストラクトを表す。原寸に比例しているわけではない。ＬＲＲはロイシン反復ドメインであり；ＰＣＣはポリシスチンドメインであり；ＴＩＲはトール／ＩＬ１β１レセプターである。図２Ｄは、マウスｓＴＬＲ４および５で一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の代表的な抗ＦＬＡｇウエスタンブロットの画像である。マウスｓＴＬＲ４および５をＴＡＰタグＢによってタグ付けした。マウスｓＴＬＲ４および５はＦｃ−Ｖ５でタグ付けした。ＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）は、ネガティブ対照である。
【図３】図３は、本明細書において記載されるコンストラクトのヌクレオチド配列を表す。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、ｓＴＬＲがアルツハイマー病のマウスの脳のＡβプラーク病理を減じたことを示す。新生児期Ｐ０日目のＣＲＮＤ８マウス脳へのｓＴＬＲ４および５のｒＡＡＶ２／１媒介デリバリーは、５ヶ月齢におけるＡβ沈着の顕著な減少を示している。総プラーク量、チオフラビンＳコア化プラークの総数、およびギ酸抽出された不溶性Ａβのレベルはいずれも、ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５発現マウスにおいて、対照と比較して減少した。プラーク量の定量化（Ａｐｅｒｉｏピクセルカウントプログラム）およびチオフラビンＳポジティブプラーク（ｎ＝１群あたり６〜８）は、ホルマリン固定パラフィンで包埋した脳片において行った。
【図５】図５は、ＡＰＰ過剰発現ＴｇＣＲＮＤ８マウスでのプラーク負荷に対するｓＴＬＲ４および５の効果を表す。ｓＴＬＲ４および５の両方は、５ヶ月齢のＣＲＮＤ８マウスの前脳および海馬におけるアミロイドプラーク負荷を効果的に減少させた。プラークは、３３．１．１抗体（Ｔ  Ｇｏｌｄｅ）で染色し、ジアミノベンジジンを使用して可視化した（上パネル）。プラーク量は、Ｓｃａｎｓｃｏｐｅ（Ａｐｅｒｉｏ）においてピクセルカウントプログラムを使用してカウントした（下パネル）。
【図６】図６は、ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５を発現するＲＮＤ８マウス脳におけるミクログリア活性化の分析を表す。Ｉｂａ１免疫反応性（ミクログリアに対するマーカー）は、ｓＴＬＲ４発現ＣＲＮＤ８マウスにおいてプラーク関連ミクログリアの減少を示した（上パネル）。ｃｄ１１ｂ抗体によるイムノブロット法は、ｓＴＬＲ４−ＣＲＮＤ８マウスにおいてグリア活性化の減少を示したが、その一方で、ｓＴＬＲ５−ＣＲＮＤ８マウスにおけるｃｄ１１ｂレベルは、対照のＣＲＮＤ８マウスと比べてあまり変わらなかった（下パネル）。プラークはアスタリスでマークされている。＊ｐ＜０．０５、ｎ＝４／群。
【図７】図７は、ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５を発現するＣＲＮＤ８マウス脳におけるアストロサイト活性化の分析を示す。ＧＦＡＰ免疫反応性（アストロサイトに対するマーカー）は、ｓＴＬＲ４を発現するＣＲＮＤ８マウスの海馬（ＤＧ、歯状回）におけるプラーク関連アストロサイトの減少を示す（上パネル）。個々のプラーク関連アストロサイト増加を示すより高い倍率のパネルも示されている。ＧＦＡＰ抗体によるイムノブロット法は、ｓＴＬＲ４−ＣＲＮＤ８マウスに存在するアストロサイトの減少を示したが、その一方で、ｓＴＬＲ５−ＣＲＮＤ８マウスにおけるＧＦＡＰレベルは、対照ＣＲＮＤ８マウスと比べてあまり変わらなかった（下パネル）。プラークはアスタリスでマークされている。＊ｐ＜０．０５、ｎ＝４／群。
【図８】図８は、５ヶ月齢のＣＲＮＤ８マウスにおける可溶性および不溶性Ａβレベルに対するｓＴＬＲの効果を表すグラフである。生化学的Ａβ４２およびＡβ４０負荷に対するｓＴＬＲ２、４、および５の効果の定量化は、ＲＩＰＡ、２％のＳＤＳ、および７０％のギ酸で逐次抽出された脳におけるサンドイッチ末端特異的ＡβＥＬＩＳＡによって評価した。可溶性分画はＳＤＳ可溶性Ａβを示し、不溶性分画はギ酸抽出可能なＡβを示す。ＲＩＰＡ可溶性分画におけるＡβは、通常、ＳＤＳ可溶性分画の１％未満を占める。ｎ＝５／群；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、二元配置分散分析法（Ｔｗｏ  ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）。
【図９】図９は、ｓＴＬＲ４またはｓＴＬＲ５の発現がＡＰＰまたはＣＴＦレベルに影響しなかったことを示すウエスタンブロット分析を表す。ｓＴＬＲ４−ＣＲＮＤ８およびｓＴＬＲ５−ＣＲＮＤ８のＲＩＰＡ可溶性脳抽出物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分離し、８２Ｅ１（ＩＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ＣＴＦβの場合）またはＣＴ２０（Ｔ  Ｇｏｌｄｅ、ＡＰＰの場合）により調べた。目的の個々のタンパク質のバンド強度を、内部対照のβ−アクチンに対して正規化した。ｎ＝６／群、ｔ検定。
【図１０】図１０は、ＴＬＲ−ＳＥＡＰアッセイに対する凝集したＡβの効果を表すグラフである。Ａβの異なる形態がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２遺伝子またはＴＬＲ５遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＬＰＳはリポ多糖であり、ｍｏｎｏはモノマー性であり、ａｇｇは凝集したものである。
【図１１】図１１は、ＴＬＲ２−ＳＥＡＰアッセイに対するＡβの効果を表すグラフである。Ａβの異なる形態がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＦＳＬ−１は合成ジアセチル化リポタンパク質であり、ｍｏｎｏはモノマー性であり、ａｇｇは凝集したものである。
【図１２】図１２は、ＴＬＲ４−ＳＥＡＰアッセイにおける凝集したアミロイドの効果を表すグラフである。「異種」アミロイドの様々な種がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＬＰＳはリポ多糖であり、ａｇｇは凝集したものであり、４０はＡβ４０であり、４２はＡβ４２である。
【図１３】図１３は、ＴＬＲ４−ＳＥＡＰアッセイにおけるα−シヌクレイン（ａ−ｓｙｎ）の効果を表すグラフである。凝集したシヌクレインおよびモノマー性シヌクレインの異なる形態がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＬＰＳはリポ多糖であり、ｆｉｂはフィブリル状のものである。
【図１４】図１４は、ＴＬＲ４−ＳＥＡＰアッセイにおけるモノマー性α−シヌクレイン（ａ−ｓｙｎ）の効果を表すグラフである。モノマー性シヌクレインの様々な断片がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。下パネルに示されるように、数値は、改変されたシヌクレインのアミノ酸を示している。例えば、１〜８９は、アミノ酸８９〜１４０のＣ末端欠失を示し、その一方で、Δ６８〜９４は、６８から９４までの内部アミノ酸の欠失を示している。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＬＰＳはリポ多糖であり；４０ａｇｇは凝集したＡβ４０である。
【図１５】図１５は、ＴＬＲ５−ＳＥＡＰアッセイにおけるα−シヌクレイン（ａ−ｓｙｎ）の効果を表すグラフである。モノマー性および凝集したシヌクレインの様々な断片がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ５遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＦＬＡ−ＳＴはフラジェリンであり、ｍｏｎｏはモノマー性であり、ｆｉｂはフィブリル状のもの（凝集したもの）である。
【図１６】図１６は、ＴＬＲ２−ＳＥＡＰアッセイにおけるα−シヌクレイン（ａ−ｓｙｎ）の効果を表すグラフである。モノマー性および凝集したシヌクレインの様々な断片がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＦＬＡ−ＳＴはフラジェリンであり、ｆｉｂはフィブリル状のもの（凝集したもの）である。
【図１７】図１７は、ＴＬＲ４−ＳＥＡＰアッセイにおけるタウの効果を表すグラフである。モノマー性およびフィブリル状の野生型（Ｔａｕ４０）ならびに疾患関連突然変異体タウ（Ｔａｕ４０  ＰＬ）がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＬＰＳはリポ多糖であり、ｆｉｂはフィブリル状のもの（凝集したもの）である。
【図１８】図１８は、ＴＬＲ５−ＳＥＡＰアッセイにおけるシヌクレインの効果を表すグラフである。モノマー性および凝集したタウの様々な断片がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ５遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＦＬＡ−ＳＴはフラジェリンであり、ｆｉｂはフィブリル状のもの（凝集したもの）である。
【図１９】図１９は、ＴＬＲ２−ＳＥＡＰアッセイにおけるタウの効果を表すグラフである。モノマー性およびフィブリル状の野生型（Ｔａｕ４０）ならびに疾患関連突然変異体タウ（Ｔａｕ４０  ＰＬ）がインビトロにおいてＴＬＲリガンドとして機能するかどうかを試験するために、ヒトＴＬＲ２遺伝子およびＮＦ−κＢ誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ細胞を使用した。製造元のプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従ってアッセイを実施した。ＴＬＲ結合および細胞内シグナリングを、ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅを使用してＯＤ６５０ｎｍにおいてモニターした。ＦＳＬ−１は合成ジアセチル化リポタンパク質であり、ｆｉｂはフィブリル状のもの（凝集したもの）である。
【図２０】図２０は、脳室にＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）を注入し、次いで６ヶ月間老化させた新生児期ＣＲＮＤ８マウスは、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５処置ＣＲＮＤ８マウスにおいて海馬および大脳皮質部分の両方で、Ａβ脳プラーク負荷において衝撃的な低下を示したことを示す。
【図２１】図２１は、脳室にＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）を注入し、次いで６ヶ月間老化させた新生児期ＣＲＮＤ８マウスは、海馬および大脳皮質部分の両方に、チオフラビンＳ染色（チオフラビンＳは、プラークのβプリーツシートおよび神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）を標識する）において顕著な減少が見られたことを示す。
【図２２】図２２は、脳室にＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）を注入し、次いで６ヶ月間老化させた新生児期ＣＲＮＤ８マウスにおいて観察したときに、Ａβの可溶性形態（ＲＩＰＡまたはＳＤＳを使用して抽出した）への影響とは対照的に、Ａβプラーク沈着物（ギ酸（ＦＡ）を使用して抽出した）の予防および／または崩壊に対するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５効果の選択性を示す（ｎ＝８マウス／群；一元配置分散分析法（１−ｗａｙ  Ａｎｏｖａ）、＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図２３】図２３は、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）のどちらかを発現するトランスジェニックＣＲＮＤ８マウスの生存が、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の発現によって１５０日の研究にわたってポジティブに影響を受けたことを示す。
【図２４】図２４は、９ヶ月齢のトランスジェニックＣＲＮＤ８マウスにおいて、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の３ヶ月の所要期間における海馬発現（対照としてｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰを使用）により実施されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５処置計画が、結果としてＡβプラークレベルの減少を生じたことを示し、これは、そのようなｓＴＬＲ５ＦｃＶ５処置の治療効果を示している（ｎ＝５マウス／群；一元配置分散分析法、＊ｐ＜０．０５）。
【図２５】図２５Ａおよび２５Ｂは、ｒＡＡＶ２／１指示体細胞性脳遺伝子導入によるマウス脳でのヒトｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の過剰発現が、抗Ｖ５抗体による免疫沈降法によって確認されたことを示す。以下の領域を含むｓＴＬＲ５ＦｃＶ５分子が図２５Ａに示されている：（ａ）内因性ヒトＴＬＲ５分泌シグナル、領域（ｂ）ヒトＴＬＲ５エクトドメイン、領域（ｃ）ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインおよび領域（ｄ）Ｖ５分子タグ（領域は原寸に比例しているわけではなく、数値はポリペプチドの長さを示す（＃アミノ酸））。免疫沈降法（Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉａｔｉｏｎ）を使用して、脳室にｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰのどちらかを注入し、次いで６ヶ月間老化させた新生児期ＣＲＮＤ８マウスにおけるヒトｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の発現レベルを調べた。図２５Ｂに示されているように、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５タンパク質の存在を、Ｖ５免疫沈降法（ＩＰ）アッセイを使用して、逐次抽出したＲＩＰＡ可溶物および洗浄剤（２％のＳＤＳ）可溶性分画において試験した（かかる実験において、「ビーズ」レーンはｍｏｃｋ−ＩＰアッセイを示し；「Ｍ」レーンは分子量基準を示し（上から下にｋＤａにおいて、２５０、１５０、１００、７５、５０、３７）；１〜３レーンは、ｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を注入した脳溶解物であり、４〜７レーンは、ｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰを注入したマウス脳溶解物であり；ＰｏｓＣｔ＝Ｖ５  ＩＰアッセイの効率を試験するためのポジティブ対照レーンであり；「４Ｂ１」レーンはｓＴＬＲ４ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質であり、ならびに「５Ｄ６」レーンはｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質であった）。図２５Ｂにおける矢印は、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５タンパク質の予想分子量に対応しており、これは、ＲＩＰＡ抽出レーン１〜３ならびにポジティブ対照レーン（ｓＴＬＲ４ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質を含む「４Ｂ１」レーンおよびｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質を含む「５Ｄ６」レーン）において最も顕著に観察された。
【図２６】図２６Ａおよび２６Ｂは、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５がインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）において可溶性Ａβとの複合体を形成したことを示す。図２６Ａにおいて、新生児期にｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰを注入された６ヶ月齢のマウスから得られたＴＢＳ抽出可溶性脳溶解物を、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズに結合した２種の異なる抗Ａβ抗体：アミノ酸１７〜２４に対応する４Ｇ８（Ｃｏｖａｎｃｅ）およびアミノ酸１〜１６に対応するＡｂ５（Ｔ．Ｇｏｌｄｅ）、と一緒にインキュベートした。結合後、次いで免疫複合体をプルダウンし、ＳＤＳ  ＰＡＧＥにおいて分離し、抗Ｖ５タグ抗体を使用してｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の存在について試験した。一方、ｍｏｃｋプルダウンアッセイは、ネガティブ対照としての役割を果たし、分子量決定を支援するために、精製したｓＴＬＲ５ＦｃＶ５タンパク質のレーンを左側にロードした。各レーンにおける総入力は、抗アクチン抗体を使用して評価した（図２６Ａ、下側パネル）。図２６Ｂにおいて、精製したｓＴＬＲ５ＦｃＶ５も精製したｓＴＬＲ４ＦｃＶ５も抗Ａβ抗体の４Ｇ８またはＡｂ５によってそれらだけで認識されなかったことを示すために、二元Ｌｉ−Ｃｏｒイムノブロットを使用した（レーン１は分子量マーカーを示し、レーン２はｓＴＬＲ４ＦｃＶ５の結果を示し、レーン３はｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の結果を示す）。
【図２７】図２７は、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を発現する安定なＣＨＯ細胞株の媒質中のｓＴＬＲ５ＦｃＶ５が、１２時間の時間経過において、凝集したＡβ４２と一緒にインキュベートした場合、Ａβ４２に結合したことを示す。媒質中のＡβのＥＬＩＳＡ分析は、対照ＣＨＯ細胞媒質と比較して、比例的により多くの量のＡβがｓＴＬＲ５ＦｃＶ５媒質中に隔離されたままであることを示した。
【図２８】図２８は、モノマー性Ａβと比較した場合の、凝集したＡβに対するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５効果の選択性を示す。具体的には、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５およびｓＴＬＲ４ＦｃＶ５は、モノマー性Ａβと比較した場合に、凝集したＡβに対してより効率的に結合することが観察された（凝集したＡβまたはモノマー性Ａβに対する結合を評価するために、精製されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５、ｓＴＬＲ４ＦｃＶ５、およびＦｃＶ５タンパク質を、直接ＥＬＩＳＡアッセイにおいて用いた。検出は、ＨＲＰコンジュゲート抗Ｆｃ抗体を使用して実施した。一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．０１）。
【図２９】図２９は、Ａβに対する固定されたリガンドとしてＣＨＯ細胞媒質由来の固定されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を使用して調べた場合の、ＣＨＯ細胞媒質中に存在する可溶性ＣＨＯ細胞発現ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の、Ａβに結合する能力を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、疾患または障害を処置するための化合物、組成物、およびそのような化合物を使用する方法を特徴とする。一実施形態において、当該化合物は、病理疾患関連ＤＡＭＰＳによって誘発される神経毒性を弱めることができ、ならびにそのような有害なＤＡＭＰを効率的に除去することができる、新規の免疫調節剤として有用である。一実施形態において、当該化合物は、神経変性タンパク質症におけるアミロイドおよび他のタンパク質様凝集体を標的とする生物学的治療薬として有用である。
【００５０】
本発明は、少なくとも一部において、本明細書における化合物の発見および神経変性疾患機序をモジュレートするための新規の化合物としてのそれらの使用に基づいている。
【００５１】
定義
用語「改善」および「処置」は、互換的に使用され、治療的処置および予防的処置の両方を包含する。両方の用語は、疾患（例えば、本明細書において説明される疾患または障害など）の発生もしくは進行を減少、抑制、低下、縮小、阻止、または安定化することを意味する。
【００５２】
「疾患」は、細胞、組織、器官、または有機体の正常な機能を損なうかまたは妨げる、任意の状態または障害を意味する。
【００５３】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、文脈において明確に指定されない限り、単数形の用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、複数形照応を包含する。例えば、用語「ある細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」は、その混合物を含む複数の細胞を包含する。
【００５４】
用語「投与」または「投与すること」は、本発明の化合物を、それらの意図する機能を実行するために対象に導入する経路を包含する。使用することができる投与の経路の例としては、注入（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）、経口、吸入、直腸、および経皮が挙げられる。医薬調製物は、各投与経路にとって好適な形態によって与えられ得る。例えば、これらの調製物は、注入、吸入、目薬、軟膏、座剤などによる錠剤またはカプセルの形態において、注入、点滴、または吸入による投与において、ローションまたは軟膏による局所投与において、ならびに坐剤による直腸投与において投与される。好ましいのは経口投与である。当該注入は、ボーラスであり得、または連続点滴であり得る。投与の経路に応じて、本発明の化合物は、選択された材料でコーティングされるかまたはその中に配置することによって、意図された機能を実行する当該化合物の能力に対して有害に影響し得る自然条件から当該化合物を保護することができる。本発明の化合物は、単独で、または上記において記載されるような別の薬剤もしくは薬学的に許容される担体のどちらかまたはその両方との併用において投与することができる。本発明の化合物は、他の薬剤の投与の前に、他の薬剤と同時に、または他の薬剤の投与後に、投与することができる。さらに、本発明の化合物は、インビボにおいてその活性な代謝物質またはより活性な代謝物質に転化されるプロドラッグの形態において投与することもできる。
【００５５】
用語「薬剤」は、小分子化合物、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはそれらの断片もしくは類似物、あるいは他の生物学的に活性な分子を意味する。
【００５６】
用語「キラル」は、鏡像対と重ね合わせできない特性を有する分子を意味し、その一方で、用語「アキラル」は、それらの鏡像対と重ね合わせできる分子を意味する。
【００５７】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法に基づく意味を有し得、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得；「本質的に〜からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」も同様に、米国特許法に基づく意味を有し、ならびに当該用語は、オープンエンド式であり、列挙されたもの以外の存在によって列挙されたものの基本的特徴もしくは新規の特徴が変えられることがない限り、列挙されたもの以外の存在を許容するが、ただし、先行技術の実施形態を除く。
【００５８】
本明細書において使用される場合、「アミロイド関連疾患または障害」は、アルツハイマー病（ＡＤ）およびパーキンソン病（ＰＤ）を包含する。
【００５９】
本発明の例示的タンパク質症としては、ＡＤ、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）、多発性硬化症（「ＭＳ」）、脳卒中および前頭側頭型認知症が挙げられる。
【００６０】
本発明のｓＴＬＲの投与により予防および／または処置が想到される疾患または障害としては、ＡＤ、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）、多発性硬化症（「ＭＳ」）、脳卒中および前頭側頭型認知症、ならびに全身性炎症状態を示す疾患または障害、例えば、敗血症、骨関節炎、慢性関節リウマチ、または炎症性腸疾患など、が挙げられる。
【００６１】
用語「ジアステレオマー」は、２つ以上の不斉中心を有しかつ分子がお互いに鏡像にない立体異性体を意味する。
【００６２】
用語「エナンチオマー」は、お互いに重ね合わせできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を意味する。２つのエナンチオマーの等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と呼ばれる。
【００６３】
キラル中心の命名法に関して、用語「ｄ」および「ｌ」立体配置は、ＩＵＰＡＣ勧告によって定義される通りである。用語の使用に関して、ジアステレオマー、ラセミ体、エピマーおよびエナンチオマーは、調製物の立体化学について記載するそれらの通常の文脈において使用される。
【００６４】
用語「有効量」は、必要な投薬量および期間において、所望の結果を達成するために有効な量、例えば、本明細書において説明される疾患または障害を処置するのに十分な量を包含する。本発明の化合物の有効量は、対象の疾患の状態、年齢、および体重、ならびに細胞または対象において所望の反応を誘発する、本発明の化合物の能力などの要因によって変わり得る。投薬計画は、最適な治療応答を提供するように調整することができる。有効量は、本発明の化合物の任意の毒性または有害効果（例えば、副作用）よりも治療有益効果の方が上回る量でもある。
【００６５】
化合物の治療有効量（すなわち、有効投薬量）は、体重に対して約０．００５μｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。他の実施形態において、治療有効濃度は、約１．０ｎＭ〜約１μＭの範囲であり得る。当業者は、ある特定の要因が、対象を効果的に処置するために必要な投薬量に影響を及ぼし得ることを理解するであろうし、そのような要因としては、これらに限定されるわけではないが、疾患もしくは障害の重症度、以前の処置、全般的健康および／または対象の年齢、ならびに他の疾患の存在が挙げられる。さらに、化合物の治療有効量による対象の処置は、単回の処置を含み得、あるいは、好ましくは一連の処置を含み得る。１つの例において、対象は、約１〜１０週間、２〜１０週間、約１〜８週間、または約４、５、もしくは６週間、１日１回、体重に対して約０．００５μｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇの範囲の化合物によって処置される。処置のために使用される化合物の有効投薬量は、特定の処置の過程において増加または減少される場合があることも理解されるであろう。
【００６６】
用語「との組合せにおいて」は、本発明の化合物を追加の医薬品、例えば、破骨細胞関連疾患または障害を処置または予防するために病院において使用される第二の化合物など、と一緒に提供する投与の全ての形態を意味することが意図され、この場合、当該２つは、同時に、または任意の順序において逐次投与される。
【００６７】
用語「化合物」は、本明細書において使用される場合、その任意の塩、プロドラッグ、溶媒和物、または水和物も包含することが意図される。
【００６８】
用語「水和物」は、非共有結合的分子間力によって結合された化学量論的または非化学量論的量の水をさらに含んだ本発明の化合物またはその塩を意味する。
【００６９】
本発明の化合物の塩は、酸と当該化合物の塩基性基、例えば、アミノ官能基など、との間において、または塩基と当該化合物の酸性基、例えば、カルボキシル官能基など、との間において形成される。別の実施形態により、当該化合物は、薬学的に許容される酸付加塩である。
【００７０】
用語「単離された」、「精製された」、「純粋な」または「生物学的に純粋な」は、その天然状態もしくは自然な状態、例えば、化合物または材料が自然に生じる有機体中におけるその状態、において見出される場合に通常伴われる成分（例えば、タンパク質、核酸、炭水化物、および他の細胞物質）を実質的にまたは本質的に含まない物質を意味する。純度および均質性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法または高性能液体クロマトグラフィなどの分析化学技術を使用して決定される。ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、少なくとも５０％の純度、６０％の純度、７５％の純度、８０％の純度、８５％の純度、少なくとも９０％の純度、または少なくとも９５％の純度（例えば、重量ベースにおいて）である。ある特定の例において、当該化合物は、少なくとも９８％の純度、９９％の純度、９９．５％の純度、９９．８％の純度、または９９．９％の純度である。
【００７１】
用語「モジュレートする（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」は、例えば、所望の最終結果、例えば治療結果、が達成されるような、例えば対象（例えば、動物、ヒト）において、本発明の化合物への曝露に反応して標的の活性を阻害する化合物の能力の増加または減少を意味する。
【００７２】
用語「得ること（ｏｂｔａｉｎｉｎｇ）」は、本明細書において説明される標的をモジュレートすること（アゴナイズすること、アンタゴナイズすること）が可能な「化合物を得ること」においては、当該化合物を購入すること、合成すること、または他の方法で獲得することを包含する。
【００７３】
用語「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、本明細書において記載されるような障害を患い得る有機体か、さもなければ本発明の化合物の投与から恩恵を受け得る有機体、例えば、ヒトおよび非ヒト動物など、を包含する。好ましいヒトとしては、本明細書において記載されるように、上記において論じられるような疾患または障害を患っているかまたは患う傾向にあるヒト患者が挙げられる。本発明の「非ヒト動物」なる用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物、例えば、齧歯動物、例えば、マウスなど、ならびに非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長動物、例えば、羊、犬、牛、鶏、両生類、爬虫類、魚など、を包含する。「処置を必要としていると同定された対象」は、例えば、医療または獣医療専門家によって、本明細書において記載される疾患、障害または状態を患っているかまたは患いやすいとして診断された対象を含む。
【００７４】
用語「薬学的に許容される」は、本明細書において使用される場合、妥当な医学的判断の範囲内において、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴うことなく、ヒトおよび他の哺乳動物の組織との接触における使用にとって好適であり、合理的なベネフィット／リスク比に見合う成分を意味する。「薬学的に許容される塩」は、レシピエントへの投与において本発明の化合物を直接的または間接的のどちらかで提供することができる、任意の非毒性の塩を意味する。「薬学的に許容される対イオン」は、レシピエントへの投与において塩から放出される場合に非毒性である、塩のイオン性部分である。
【００７５】
薬学的に許容される塩を形成するために一般的に用いられる酸としては、無機酸、例えば、二硫化水素、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、およびリン酸など、ならびに有機酸、例えば、パラ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、二酒石酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、ギ酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、乳酸、シュウ酸、パラ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、および酢酸、ならびに関連する無機酸および有機酸が挙げられる。したがって、そのような薬学的に許容される塩としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、モノリン酸水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリル酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩、および他の塩が挙げられる。一実施形態において、薬学的に許容される酸付加塩は、塩酸および臭化水素酸などの鉱酸によって形成されるもの、とりわけ、マレイン酸などの有機酸によって形成されるものを含む。
【００７６】
本明細書において使用される場合、用語「水和物」は、化学量論的または非化学量論的量の、非共有結合的分子間力によって結合した水をさらに含む化合物を意味する。
【００７７】
本明細書において使用される場合、用語「溶媒和物」は、化学量論的または非化学量論的量の、非共有結合的分子間力によって結合した溶媒、例えば、水、アセトン、エタノール、メタノール、ジクロロメタン、２−プロパノールなど、をさらに含む化合物を意味する。
【００７８】
本明細書において使用される場合、特に明記されない限り、用語「プロドラッグ」は、生物学的条件下において（インビトロまたはインビボにおいて）加水分解、酸化、またはそれ以外で反応することによって本発明の化合物を提供することができる、化合物の誘導体を意味する。プロドラッグは、生物学的条件下でのそのような反応においてのみ活性になり得るか、またはそれらの未反応形態において活性を有し得る。本発明において想到されるプロドラッグの例としては、これらに限定されるわけではないが、生物加水分解性部分、例えば、アミド、エステル、カルバメート、カーボネート、およびホスフェート類似物を含む、本明細書において開示される式のいずれか１つの化合物の類似物または誘導体が挙げられる。プロドラッグは、典型的には、周知の方法、例えば、Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed)によって記載される方法など、を使用して調製することができ；Goodman and Gilman's, The Pharmacological basis of Therapeutics, 8th ed., McGraw-Hill, Int.Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs"も参照されたい。
【００７９】
本明細書において使用される場合、特に明記されない限り、用語「生物加水分解性部分」は、以下：１）当該化合物の生物活性を壊さず、ならびに、摂取、作用の持続、または作用の開始などのインビボでの有利な特性をその化合物に与える；または、２）それ自体は生物学的に不活性だが、インビボにおいて生物学的に活性な化合物へと転化される、のいずれかである官能基（例えば、アミド、エステル、カルバメート、カーボネート、またはホスフェートなど）類似物を意味する。
【００８０】
プロドラッグ塩は、酸とプロドラッグの塩基性基、例えば、アミノ官能基など、との間において、または塩基とプロドラッグの酸性基、例えば、カルボキシル官能基など、との間において形成される化合物である。一実施形態において、プロドラッグ塩は、薬学的に許容される塩である。
【００８１】
特に好ましいプロドラッグおよびプロドラッグ塩は、本発明の化合物が哺乳動物に投与される場合に、（例えば、経口投与された化合物が血液中により容易に吸収されるようにすることによって）そのような化合物のバイオアベイラビリティを高めるもの、または生物学的コンパートメント（例えば、脳または中枢神経系）への親化合物のデリバリーを親種に比べて高めるものである。好ましいプロドラッグとしては、水溶解性または腸膜を通過する能動輸送を高める基が、本明細書において記載される式の構造に追加された誘導体が挙げられる。例えば、Alexander, J. et al. Journal of Medicinal Chemistry 1988, 31, 318-322;Bundgaard, H. Design of Prodrugs;Elsevier:Amsterdam, 1985;pp 1-92;Bundgaard, H.;Nielsen, N. M. Journal of Medicinal Chemistry 1987, 30, 451-454;Bundgaard, H. A Textbook of Drug Design and Development; Harwood Academic Publ.: Switzerland, 1991;pp 113-191;Digenis, G. A. et al. Handbook of Experimental Pharmacology 1975, 28, 86-112;Friis, G. J.;Bundgaard, H. A Textbook of Drug Design and Development;2 ed.;Overseas Publ.:Amsterdam, 1996;pp 351-385;Pitman, I. H. Medicinal Research Reviews 1981, 1, 189-214を参照されたい。
【００８２】
本発明の化合物は、例えば、重水素置換の結果または他の結果として、非対称炭素原子を含有し得る。そのため、本発明の化合物は、個々のエナンチオマーとしてまたは２種のエナンチオマーの混合物のどちらかとして存在し得る。したがって、本発明の化合物は、両方のラセミ混合物と、別の可能な立体異性体を実質的に含まない個々のそれぞれの立体異性体とを含むであろう。用語「他の立体異性体を実質的に含まない」は、本明細書において使用される場合、２５％未満の他の立体異性体、好ましくは１０％未満の他の立体異性体、より好ましくは５％未満の他の立体異性体、最も好ましくは２％未満の他の立体異性体、または「Ｘ」％未満の他の立体異性体（この場合、Ｘは、限界値を含む０〜１００の数である）が存在することを意味する。所与の化合物の個々のエナンチオマーを得る方法または合成する方法は、当技術分野において周知であり、最終化合物または出発材料もしくは中間体に対して実行可能として適用することができる。
【００８３】
用語「安定な化合物」は、本明細書において使用される場合、それらの製造を可能にする十分な安定性を有し、本明細書において詳述される目的（例えば、治療製品への製剤化、治療化合物の製造において使用するための中間体、単離可能もしくは貯蔵可能な中間体化合物、治療剤に反応する疾患もしくは状態の処置）にとって有用である十分な期間において化合物の完全性を維持する化合物を意味する。
【００８４】
本明細書において使用される場合、用語「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を含む、直鎖状もしくは分岐鎖状の炭化水素基を意味する。用語「低級アルキル」は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル鎖を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびｎ−ペンチルが挙げられる。
【００８５】
「立体異性体」は、エナンチオマーおよびジアステレオマーの両方を意味する。
【００８６】
「ｔｅｒｔ」、「ｔ」および「ｔ−」はそれぞれ第三級を意味する。
【００８７】
「ＵＳ」はアメリカ合衆国を意味する。
【００８８】
本明細書全体を通して、可変部は、一般的に言及され得るか（例えば、「各Ｒ」）、または具体的に言及され得る（例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３など）。特に明記されない限り、可変部が一般的に言及される場合、それは、その特定の可変部の全ての特定の実施形態を含むことを意図する。
【００８９】
本明細書における可変部の任意の定義での化学基の一覧の列挙は、任意の単一の基または一覧された基の組合せとしてその可変部の定義を含む。本明細書における可変部に対する実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態または任意の他の実施形態もしくはその一部との組合せとしてその実施形態を含む。本明細書における実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態または任意の他の実施形態もしくはその一部との組合せとしてその実施形態を含む。
【００９０】
本明細書の化合物は、ラセミ混合物の形態であっても、特定のエナンチオマーが富化されていても、またはジアステレオマーが富化されていてもよい。特定の立体異性体について説明され得るが、全てのそのような光学的に活性な形態および混合物が想到される。
【００９１】
例示的合成
上記に示された特定のアプローチおよび化合物は、限定を意図するものではない。本明細書のスキームにおける化学構造は、同じ可変部の名前（すなわち、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３など）によって同定されるか否かにかかわらず、本明細書の化合物の式での対応する位置の化学基の定義（部分、原子など）と同等に本明細書によって定義される可変部を表す。別の化合物の合成での使用のための化合物構造の化学基の適切さは、当業者の知識の範囲内である。本明細書の化合物およびその合成前駆体を合成する追加の方法は、本明細書のスキームに明確には示されていない経路内の方法を含めて、当技術分野の通常の技量の化学者の手段の範囲内である。反応条件を最適化する方法および、必要であれば、競合する副産物を最小限に抑える方法は、当技術分野において公知である。本明細書に引用される合成参考文献に加え、反応スキームおよびプロトコルは、市販されている構造検索可能なデータベースソフトウェア、例えば、ＳｃｉＦｉｎｄｅｒ（登録商標）（ＣＡＳ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）、ＳＴＮ（登録商標）（ＣＡＳ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）、ＣｒｏｓｓＦｉｒｅ  Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ（登録商標）（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  ＭＤＬ）、またはＧｏｏｇｌｅ（登録商標）などのインターネット検索エンジンまたは米国特許商標庁テキストデータベースなどのキーワードデータベースの使用により、当業者によって決定され得る。
【００９２】
本明細書において記載される化合物を作製する方法は、本明細書の化合物の合成を最終的に可能にするために、本明細書において具体的に記載される工程の前または後のどちらかに、好適な保護基を追加または除去する工程を追加的に含んでもよい。加えて、所望の化合物を与えるために、様々な合成工程を代替の配列または順序において実施することができる。適用可能な化合物の合成において有用な合成化学変換および保護基の方法論（保護および脱保護）は、当技術分野において公知であり、例えば、Larock R, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989);Greene TW et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley and Sons (1999);Fieser L et al., Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994);およびPaquette L, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)ならびにこれらの後続の版に記載されるものが挙げられる。
【００９３】
本発明によって想定される置換基および可変部の組合せは、結果として安定な化合物の形成を生じるもののみである。
【００９４】
トール様レセプター（ＴＬＲ）
トール様レセプター（ＴＬＲ）は、先天性免疫の主要なポジティブエフェクターであり、ＰＡＭＰ（病原体関連分子パターン）結合によって開始される坑微生物炎症反応の発症の中核を為す。典型的なＴＬＲは、ロイシンリッチ（ＬＲＲ）リガンド結合エクトドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナリングＴＩＲドメインを有する（図１を参照のこと）。様々なＤＡＭＰおよびＰＡＭＰとエクトドメインとが結合することにより、細胞内ＴＩＲドメインへのアダプタータンパク質の結合が生じ、それにより、炎症仲介物質の転写が活性化される。アダプタータンパク質であるＭｙＤ８８、ＭＡＬ／ＴＲＡＰ、ＴＲＩＦ、ＳＡＲＭ、およびＴＲＡＭは、炎症誘発性転写因子（例えば、ＮＦ−κＢ、ＩＲＦ）を活性化する一連のタンパク質キナーゼを活性化することによって、ＴＩＲドメインからのシグナルを伝達する。全てのＴＬＲは、中枢神経系（ＣＮＳ）において構成的に発現し、それらは、神経保護および神経毒性を付与することが報告されているが、神経変性タンパク質症におけるＴＬＲの研究は比較的限られている。先天性免疫におけるそれらの役割と一致して、ＴＬＲは脳におけるミクログリアおよびアストロサイトにおいて発現するが、それらはニューロンにおいても発現し得る。
【００９５】
細胞外レセプターとして機能するＴＬＲ１、２、４、５、６、および１０を有する１０のヒトＴＬＲが存在する。これらのＴＬＲは、主に、細胞表面上において見出され、細胞外リガンドによって活性化される。ＴＬＲ３、７、８、および９は、主にエンドソームおよびＥＲにおいて発現し、それらの細胞小器官のルーメンに結合するリガンドによって活性化されるため、ルーメンレセプターとして機能する。ＴＬＲは、非共有結合性ホモ二量体を形成し、いくらかはヘテロ二量体を形成し得る。概して、ＴＬＲリガンドは、３つのクラス：脂質および脂質化（ｌａｐｉｄａｔｅｄ）されたペプチド（ＴＬＲ４ならびにヘテロ二量体ＴＬＲ２／１およびＴＬＲ２／６に結合する）、タンパク質（ＴＬＲ５）、および核酸（ＴＬＲ３、７、８、９）、に含まれる。ＴＬＲは、外因性病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識するだけでなく、内因性疾患関連分子パターン（ＤＡＭＰ）も認識する。重大なことに、最近の証拠は、Ａβおよびα−シヌクレイン凝集体を含むミスフォールドしたアミロイド様タンパク質が、選択されたＴＬＲに結合し活性化することができるＤＡＭＰを代表することを示している。インビトロでの研究は、Ａβ凝集体がＴＬＲ２、４およびＣＤ３６−ＴＬＲ２−ＴＬＲ６の三分子複合体に結合して活性化することができることを示している。他のアミロイドおよびα−シヌクレイン凝集体も、ＴＬＲ２、および４、１８、６５のリガンドおよび活性化因子として影響される。ＴＬＲは、Ａβ沈着を調節することも示されている。ＴＬＲ４およびＴＬＲ９アゴニストの投与は、ＡＰＰトランスジェニックマウスの脳のＡβ負荷を減少させるが、その一方で、ＡＰＰマウスにおいてＴＬＲ２またはＴＬＲ４をノックダウンすることは、Ａβプラーク病理を悪化させる。
【００９６】
ＴＬＲコレセプターまたはＭｙｄ８８のようなアダプタータンパク質の活性化も、Ａβ凝集体誘発炎症および沈着を調節するようである。ＴＬＲ４およびＴＬＲ２は、Ａβ誘発ニューロン損傷を悪化させ、Ｍｙｄ８８シグナリングの無効化は、Ａβ誘発神経毒性から細胞をレスキューするが、このことは、Ａβ凝集体誘発ＴＬＲの結合が細胞生存率に有害であり得ることを示している。これらのデータの全てが、Ａβ凝集体および他のＤＡＭＰがいくつかのＴＬＲ増加炎症を活性化し、その結果Ａβを減少させるという実態を表しているが、Ｍｙｄ８８ＫＯの研究の１つは、Ｍｙｄ８８の欠損が逆説的にＡβ沈着を減少させることを示しているが、その一方で、ｍｙｄ８８ハプロ不全（ｈａｐｌｏｉｎｓｕｆｆｃｉｅｎｃｙ）が有益でもあることも報告されている。興味深いことに、ＴＬＲ２および４変異体も、ＡＤリスクの中国人口に関連している。
【００９７】
可溶性ＴＬＲの発生は、多くの先天性免疫レセプターにとって自然発生的現象であり、それにより、リガンド結合ドメインのエクトドメインシェディングが、インタクトレセプターのシグナリングを完全に遮断するデコイレセプターを生じる。全てのＴＬＲが自然発生的可溶性形態を有することが知られているわけではないが、ＴＬＲ２、４、５、および６は有する。ＴＬＲの全てにおける構造的類似性を仮定する場合、遺伝子操作されたＴＬＲが利用できない先験的理由は無い。本明細書において記載されるように、デコイレセプターは、膜貫通ドメインおよび天然全長ＴＬＲ（ｆｌＴＬＲ）のＴＩＲドメインを除去すること、ならびにこれらをｓＴＬＲとして発現させること（図１を参照されたい、矢印によって囲まれた領域）によって発生した。例えば、可溶性免疫デコイレセプターは、サイトカインおよびケモカインならびにそれらのそれぞれのレセプター相互作用に対して、重要なネガティブ調節機序を提供する。そのようなデコイレセプターは、本質的に、リガンドに結合および／またはそれを隔離することができ、リガンド結合後に補体および他の先天性免疫系成分によって循環から除去することができる。複数のｓＴＬＲが、ＴＬＲシグナリングを効果的に遮断することができた（表１）。特定の理論に束縛されるわけではないが、天然可溶性ＴＬＲ（ｓＴＬＲ）は、膜結合ＴＬＲの過剰なトリガリングおよびその後の先天性免疫系の過剰活性化を防ぐと考えられる（表１）。そのような機序は、病原性リガンドおよびストレスタンパク質に対して急性宿主炎症反応の直接的減弱を提供する可能性を有する。
【００９８】
【表１】
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【００９９】
そのような内因性デコイレセプターによるＴＬＲ誘発炎症のネガティブ標的化は、本明細書において記載されるように、アルツハイマー病のマウスモデルにおいて、バイスタンダーの毒性（すなわち、インフラマソーム誘発無菌性炎症）を最小限に抑えつつ、先天性免疫シグナリングの有益効果（すなわち、活性化されたグリアによるＡβ除去）を利用する可能性を有する。幅広く利用可能なＴＬＲ阻害剤またはアンタゴニストの使用と比較して（表２）、このアプローチは、先天性免疫活性化の有益な成分の利用を可能にする（すなわち、過剰なサイトカインの活性化および他の有害因子を減らしつつ、ＤＡＭＰに結合し除去する）。ＴＬＲ阻害剤の使用は、ＤＡＭＰの蓄積に対する細胞の防御の最前線（すなわち、先天性免疫系）を停止することによる予想外の有害効果を有し得ることがあり得る。有利なことに、ｓＴＬＲは、Ａβ、シヌクレイン、およびタウを標的化することができるために、より広い生物活性を有する。完全なヒト型はよく忍容されるであろうし、非免疫原性であろう。
【０１００】
【表２】
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【０１０１】
したがって、ＴＬＲ阻害剤またはアンタゴニストに対する代替手段としてのｓＴＬＲの使用は、有害なＤＡＭＰを認識し除去する身体の生得の防御力との相乗作用を与え得る。さらに、様々なｓＴＬＲは、それらのＣ末端において免疫グロブリン（ＩｇＧ）によってタグ付けされるように設計されている。この目的は、１）溶解性を高め、インビボでの分子の半減期を延ばすため、２）ＴＬＲが、ＦｃＲ媒介性機序などの細胞機序によってより効果的に取り込まれるため、ならびに３）迅速で効率的な精製およびインビトロでの検出を可能にするため、といったように多種多様である。ＡＤに対する複数の抗Ａβ抗体（受動的免疫療法）は試験中である。
【０１０２】
組成物
本発明は、本明細書の化合物または前記化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、溶媒和物、もしくは水和物の有効量と、許容される担体とを含む組成物も提供する。好ましくは、本発明の組成物は、薬学的使用のために製剤化され（「医薬組成物」）、この場合、当該担体は、薬学的に許容される担体である。当該担体は、当該製剤の他の成分に適合するという意味において、ならびに薬学的に許容される担体の場合、医薬において使用される量ではそれらのレシピエントにとって有毒ではないという意味において、「許容される（ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」である。
【０１０３】
本発明の医薬組成物において使用することができる薬学的に許容される担体、補助剤、および媒体としては、これらに限定されるわけではないが、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンなど、緩衝剤物質、例えば、リン酸、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムなど、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が挙げられる。
【０１０４】
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、膣内または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）投与に好適な組成物を含む。ある特定の実施形態において、本明細書の式の化合物は、経皮投与される（例えば、経皮パッチまたはイオン導入技術を用いて）。他の製剤は、便宜的に、単位投与量の形態、例えば、錠剤、徐放性カプセル剤、およびリポソーム中などで提示され、そして薬学の分野において周知の任意の方法によって調製され得る。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA (17th ed. 1985)を参照されたい。
【０１０５】
そのような調製方法は、投与されるべき分子と、１種または複数の副成分を構成する担体などの成分とを会合させる工程を含む。一般的に、当該組成物は、液体担体、リポソームもしくは細かく分割された固体担体またはその両方と、有効成分とを一様におよび緊密に会合させ、必要であれば、次いでその生成物を成形することによって調製される。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、当該化合物は、経口投与される。経口投与に好適な本発明の組成物は、カプセル剤、サシェ剤、または錠剤（それぞれが、所定量の有効成分を含む）；散剤または顆粒剤；液剤または水性液体もしくは非水性液体中の懸濁剤；水中油液体乳剤；油中水液体乳剤；リポソーム中に充填されるもの；などの分割された単位として、あるいはボーラスなどとして提示され得る。軟ゼラチンカプセル剤は、そのような懸濁剤を収容するために有用であり、化合物の吸収速度を有益に高め得る。
【０１０７】
経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。典型的には、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も加えられる。カプセル剤形態での経口投与の場合、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁剤が経口投与される場合、有効成分は、乳化剤および懸濁化剤と組み合わされる。所望の場合、ある特定の甘味料および／または風味料および／または着色料が加えられ得る。
【０１０８】
経口投与に好適な組成物としては、風味付けされた基剤（通常は、スクロースおよびアカシアもしくはトラガカント）中に成分を含むロゼンジ剤；ならびにゼラチンおよびグリセリンあるいはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中に有効成分を含むパステル剤が挙げられる。
【０１０９】
非経口投与に好適な組成物としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、および製剤を意図されるレシピエントの血液と等浸透圧にする溶質を含み得る水性および非水性の無菌注射液剤；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性の無菌懸濁剤が挙げられる。当該製剤は、単位用量または複数回用量のコンテナ、例えば、密封アンプルおよびバイアル瓶中において提示され得、ならびに注入のために使用の直前に無菌液体担体、例えば、水を加えることのみを必要とするフリーズドライされた（凍結乾燥された）状態において保存され得る。即時注射液剤および懸濁剤は、無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。
【０１１０】
そのような注射液剤は、例えば、無菌の注射可能な水性または油性懸濁剤の形態であり得る。この懸濁剤は、好適な分散化剤または湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０、ｓｏｌｕｔｏｌなど）および懸濁化剤を使用する当技術分野において公知の技術により製剤化され得る。無菌の注射可能な調製物は、例えば、１，３−ブタンジオール中の液剤などの無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中における無菌の注射可能な液剤または懸濁剤でもあり得る。許容される媒体および溶媒の中でも特に採用され得るのは、、マンニトール、水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液および生理食塩液である。さらに、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒体として慣用的に用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドなどの任意の無刺激性の不揮発性油を用いることができる。脂肪酸、例えば、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体など、は、注射可能物の調製において有用であり、特にそのポリオキシエチル化された形態の、天然由来の薬学的に許容される油、例えば、オリーブ油またはヒマシ油など、も有用である。これらの油性液剤または懸濁剤は、長鎖アルコールの希釈剤または分散剤も含み得る。
【０１１１】
本発明の医薬組成物は、直腸投与のための坐剤の形態において投与され得る。当該組成物は、本発明の化合物を、室温では固体であるが直腸の温度では液体となり、その結果、直腸内で融解し有効成分を放出する、好適な非刺激性の賦形剤と混合することによって、調製され得る。そのような材料としては、これらに限定されるわけではないが、カカオ脂、蜜ロウおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１１２】
本発明の医薬組成物は、経鼻用のエアゾール剤または吸入剤によって投与してもよい。そのような組成物は、医薬製剤の分野において周知の技術により調製され、ならびに、ベンジルアルコールもしくは他の好適な保存料、バイオアベイラビリティを高める吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または当技術分野において公知の他の可溶化剤もしくは分散化剤を用いて、生理食塩水中の液剤として調製され得る。例えば、Ａｌｅｘｚａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された、Rabinowitz JD and Zaffaroni AC、米国特許第６，８０３，０３１号を参照されたい。
【０１１３】
所望の処置が、局所的塗布により容易にアクセス可能な領域または器官に関係する場合、本発明の医薬組成物の局所投与は、特に有用である。皮膚への局部的な局所塗布の場合、当該医薬組成物は、担体中に懸濁または溶解された有効成分を含む好適な軟膏により製剤化されるべきである。本発明の化合物の局所投与のための担体としては、これらに限定されるわけではないが、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、および水が挙げられる。あるいは、当該医薬組成物は、担体中に懸濁または溶解された活性化合物を含む好適なローションまたはクリームにより製剤化することができる。好適な担体としては、これらに限定されるわけではないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。本発明の医薬組成物は、直腸坐剤製剤によって、または好適な浣腸剤製剤において、下部消化管に局所的に適用することもできる。局所経皮パッチおよびイオン導入投与も本発明に含まれる。
【０１１４】
目的の部位に投与するために、主題の治療薬の適用は局部的であってもよい。注射、カテーテル、トロカール、放射体、プルロニックゲル、ステント、薬物徐放性ポリマー、または内部へのアクセスを提供する他のデバイスの使用など、様々な技術が、主題の組成物を目的の部位に提供するために使用することができる。脳ポンプは、本発明の治療薬のデリバリーの例示的様式として明確に想到される。
【０１１５】
したがって、さらなる別の実施形態によれば、本発明の化合物は、植込み可能な医療デバイス、例えば、プロテーゼ、人工弁、血管グラフト、ステント、またはカテーテルなど、をコーティングするための組成物に組み入れることができる。好適なコーティング剤およびコーティングされた植込み可能なデバイスの一般的な調製は、当技術分野において公知であり、ならびに米国特許第６，０９９，５６２号；同第５，８８６，０２６号および同第５，３０４，１２１号に例示されている。当該コーティングは、典型的には、生体適合性ポリマー性材料、例えば、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレンビニルアセテート、およびそれらの混合物など、である。当該コーティングは、当該組成物に制御放出特性を付与するために、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質、またはそれらの組合せの好適なトップコートによって適宜さらに覆われていてもよい。侵襲性デバイスのためのコーティングは、次の用語が本明細書において使用される場合の、薬学的に許容される担体、補助剤、または媒体の定義の範囲内に含まれるべきである。
【０１１６】
別の実施形態によれば、本発明は、植込み可能な医療デバイスをコーティングする方法であって、前記デバイスに上記において記載したコーティング組成物を接触させる工程を含む方法を提供する。デバイスのコーティングが哺乳動物への移植の前に行われるであろうことは、当業者にとって明らかである。
【０１１７】
別の実施形態によれば、本発明は、植込み可能な薬物放出デバイスに含浸させる方法であって、前記薬物放出デバイスに本発明の化合物または組成物を接触させる工程を含む方法を提供する。植込み可能な薬剤放出デバイスとしては、これらに限定されるわけではないが、生体分解性ポリマーカプセルまたは弾丸状物（ｂｕｌｌｅｔ）、非分解性で拡散性のポリマーカプセル、および生体分解性ポリマーウェハが挙げられる。
【０１１８】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明の化合物または本発明の化合物を含む組成物でコーティングされた植込み可能な医療デバイスであって、前記化合物が治療的に活性であるようにコーティングされたデバイスを提供する。
【０１１９】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明の化合物または本発明の化合物を含む組成物で含浸されるかまたはそれを含む、植込み可能な薬物放出デバイスであって、前記化合物が前記デバイスから放出されかつ治療的に活性であるように含浸されるかまたはそれを含むデバイスを提供する。
【０１２０】
患者から摘出されることにより器官または組織にアクセス可能であり、そのような器官または組織が本発明の組成物を含む媒体に浸され得る場合、本発明の組成物は、当該器官上に塗られ得るか、または本発明の組成物は、任意の他の便宜的な方法において塗布され得る。
【０１２１】
別の実施形態において、本発明の組成物は、第二の治療剤をさらに含む。第二の治療剤は、本明細書の式のいずれかの化合物と同じ作用機序を有する化合物と共に投与される場合に有利な特性を有することが知られているか、または有利な特性が実証される、任意の化合物または治療剤から選択され得る。
【０１２２】
好ましくは、当該第二の治療剤は、神経変性、炎症、免疫調節、または神経炎症（例えば、急性、慢性など）から選択される疾患または状態の処置または予防において有用な薬剤である。
【０１２３】
別の実施形態において、本発明は、本発明の化合物および１種または複数の任意の上述の第二の治療剤の別々の投薬形態を提供し、この場合、当該化合物と第二の治療剤は互いに関連付けられている。用語「互いに関連付けられている」は、本明細書において使用される場合、別々の投薬形態が一緒にパッケージされること、または、そうでなければ、別々の投薬形態が一緒に販売され、投与される（連続してまたは同時に、互いが２４時間未満内に）ことが意図されることが容易に明らかであるように互いに取り付けられていること、を意味する。
【０１２４】
本発明の医薬組成物において、本発明の化合物は有効量において存在する。本明細書において使用される場合、用語「有効量」は、適切な投薬計画において投与される場合に、処置される障害の重症度、持続期間または進行を減少または改善するために、処置される障害の進展を防ぐために、処置される障害の退後を引き起こすために、または別の治療法の予防効果または治療効果を強化もしくは向上するために、十分な量を意味する。
【０１２５】
動物およびヒトに対する投薬量の相互関係（体表面の平方メートルあたりのミリグラムに基づいて）は、Freireich et al., (1966) Cancer Chemother.Rep 50:219に記載されている。体の表面積は、患者の身長および体重からおおよそ決定することができる。例えば、Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y., 1970, 537を参照されたい。
【０１２６】
一実施形態において、本発明の化合物の有効量は、対象に応じて変わり得る。処置は、化合物の最適用量未満である、より少ない投薬量において開始することができる。その後、当該投薬量は、その状況下において最適な効果が達成されるまで、少しずつ増加され得る。便宜上、総１日投薬量は分割してもよく、所望であれば１日の間に数回に分けて投与してもよい。本発明の化合物の治療有効量および予防有効量は、１日あたり約０．００５μｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇまたは１日あたり体重のキログラムあたり０．００１ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ／日）〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日において変わることが予想される。
【０１２７】
有効用量も、当業者により認識されるように、処置される疾患、疾患の重症度、投与の経路、患者の性別、年齢、および一般的な健康状態、賦形剤の使用法、他の薬剤の使用などの他の治療処置との併用の可能性、ならびに処置する医師の判断に依存して変わるであろう。例えば、有効用量を選択するためのガイダンスは、本明細書における式のいずれかの化合物のための処方情報を参照することにより決定することができる。
【０１２８】
第二の治療剤を含む医薬組成物の場合、当該第二の治療剤の有効量は、その薬剤のみを使用する単独治療計画において標準的に使用される投薬量の約２０％から１００％の間である。好ましくは、有効量は、標準的な単独治療の用量の約７０％から１００％の間である。これらの第二の治療剤の標準的な単独治療の投薬量は、当技術分野において周知である。例えば、Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn.(2000);PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif.(2000)を参照されたく、なお、これらの参考文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【０１２９】
上記において言及した第二の治療剤のいくつかは、本発明の化合物と相乗作用的に作用することが予想される。相乗作用が生じる場合、それにより、当該第二の治療剤および／または本発明の化合物の有効投薬量を、単独治療において必要とされる有効投薬量より減らすことが可能となる。このことは、本発明の化合物の第二の治療剤のどちらかによる毒性のある副作用を最小限に抑えること、有効性における相乗作用的向上、投与もしくは使用の容易さの向上、および／または化合物の調製もしくは製剤化の全費用の低減、という利点を有する。
【０１３０】
処置方法
別の実施形態において、本発明は、細胞のアミロイド様タンパク質凝集、ＤＡＭＰＳ、またはＰＡＭＰＳの活性を直接的または間接的にモジュレートする方法であって、細胞を本明細書の１つまたは複数の化合物に接触させることを含む方法を提供する。
【０１３１】
別の実施形態によれば、本発明は、本明細書の式のいずれかの化合物によって有益に処置される疾患を患っているかまたは患いやすい患者を処置する方法であって、前記患者に本発明の化合物または組成物の有効量を投与する工程を含む方法を提供する。そのような疾患は、当技術分野において周知であり、ならびに本明細書においても開示される。
【０１３２】
本明細書において説明される方法は、患者が特定の言明された処置を必要とするとして同定される方法も含む。そのような処置を必要とする患者を同定することは、患者または健康管理の専門家の判断の内であり、ならびにそれは、主観的（例えば、意見）または客観的（例えば、検査または診断方法により測定可能）であり得る。他の方法において、対象は、そのような処置の好適性に対する関連するマーカーまたはインジケーターに対する評価によって、そのような処置を必要とするとして事前選別されるかまたは同定される。
【０１３３】
別の実施形態において、上記の処置方法のいずれもが、前記患者に１つまたは複数の第二の治療剤を共投与するさらなる工程を含む。第二の治療剤の選択は、本明細書の式のいずれかの化合物との共投与にとって有用であることが知られている任意の第二の治療剤から為され得る。第二の治療剤の選択は、処置される特定の疾患または状態によっても変わる。本発明の方法において用いられ得る第二の治療剤の例は、本発明の化合物と第二の治療剤とを含む組合せ組成物において使用するための、上記において説明したものである。
【０１３４】
本明細書において使用される場合、用語「共投与された」は、第二の治療剤が、単一の投薬形態（例えば、本発明の化合物と上記において記載したような第二の治療剤とを含む本発明の組成物など）の一部として、または別々の複数の投薬形態として、本発明の化合物と一緒に投与され得ることを意味する。あるいは、当該追加の薬剤は、本発明の化合物の投与の前に、投与と連続して、または投与の後に投与してもよい。そのような併用療法処置において、本発明の化合物および第二の治療剤の両方は、慣習的な方法によって投与される。患者への、本発明の化合物と第二の治療剤の両方を含む本発明の組成物の投与は、処置の過程の間の別の時点において前記患者に対して同じ治療剤、任意の他の第二の治療剤、または本発明の任意の化合物を別々に投与することを妨げるものではない。
【０１３５】
これらの第二の治療剤の有効量は、当業者にとって周知であり、ならびに投薬のためのガイダンスは、本明細書において参照される特許および公開された特許出願、ならびにWells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn.(2000);PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif.(2000)、および他の医学教科書に見出され得る。しかしながら、第二の治療剤の最適な有効量の範囲を決定することは、十分に当業者の範囲内である。
【０１３６】
さらなる別の態様において、本発明は、上記において説明した疾患、障害、または症状の患者の処置または予防のための、単一の組成物としてまたは別々の投薬形態としてのいずれかにおいて、医薬の製造での、本明細書において説明した化合物（例えば、ｓＴＬＲ、ｓＴＬＲ−Ｆｃ融合タンパク質など）単独の、または上述の第二の治療剤の１種または複数と一緒の使用を提供する。本発明の別の態様は、本明細書において説明される疾患、障害、または症状の患者の処置または予防において使用するための、本明細書において説明される化合物である。
【０１３７】
神経変性タンパク質症の疾患または障害の処置のための本発明の組成物の投与は、他の成分と組み合わせて、当該疾患の改善、減少、または安定化において有効であるｓＴＬＲの有効量の発現を結果として生じる、任意の好適な手段によって為され得る。例えば、アミロイド（Ａβ４０、Ａβ４２）、タウ、および／またはシヌクレイン、プラーク形成を含むプラーク形成を減少させる量。治療的ｓＴＬＲ発現ベクターまたはｓＴＬＲポリペプチドは、任意の好適な担体物質中に任意の適切な量において含有され得、概して、組成物の総重量の１〜９５重量％の量において存在する。当該組成物は、非経口（例えば、静脈内、動脈内）投与経路にとって好適な投薬形態において提供され得る。当該医薬組成物は、従来の薬務に従って製剤化することができる（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000およびEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New Yorkを参照されたい）。
【０１３８】
所望の場合、本発明の治療組成物（例えば、ｓＴＬＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むウイルス発現ベクター）は、炎症を減少させるために有用な、またはさもなければ、神経変性タンパク質症の疾患もしくは障害に対して治療的である、他の薬剤と一緒に提供される。
【０１３９】
ポリヌクレオチド療法
治療的使用の場合、本明細書において開示されるｓＴＬＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むウイルス発現ベクターは、全身的に投与することができ、例えば、生理食塩水などの薬学的に許容される緩衝液中において製剤化することができる。投与の好ましい経路としては、例えば、静脈内、動脈内、髄液中、脳室内、または神経変性タンパク質症の疾患もしくは障害を処置するために患者において連続した持続的レベルの発現を提供する任意の他の注入部位が挙げられる。
【０１４０】
本発明は、細胞、組織、または器官においてｓＴＬＲを遺伝子組換え発現させるための方法を提供する。所望の場合、ｓＴＬＲポリペプチドを誘導的または構成的に発現するために、ウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベクター）が使用される。ｓＴＬＲタンパク質、その変異体または断片をコードするポリヌクレオチドを特徴とするポリヌクレオチド療法（例えば、ＡＡＶ発現ベクター、例えば、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−９ベクターなど）は、神経変性タンパク質症の疾患または障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病）を処置するための１つの治療アプローチである。そのようなｓＴＬＲ発現核酸分子は、神経変性タンパク質症の疾患または障害を有する対象の細胞（例えば、ニューロン、内皮細胞、アストロサイト、グリア）にデリバリーされ得る。ｓＴＬＲタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ｓＴＬＲの治療有効レベルを生じることができるようにそれらを取り込むことができる形態において、対象の細胞にデリバリーされなければならない。好ましくは、ｓＴＬＲポリペプチドの持続的発現は、１週間、２週間、３週間よりも長く、または１、３、６、もしくは１２ヶ月よりも長く、有効レベルに維持される。所望の場合、ｓＴＬＲの発現は、神経変性タンパク質症の疾患または障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病）を処置する任意の標準的な方法と組み合わされる。
【０１４１】
形質導入ウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）ベクターは、とりわけそれらの感染の効率の高さならびに安定な統合および発現により、体細胞遺伝子療法に使用することができる（例えば、Cayouette et al., Human Gene Therapy 8:423-430, 1997; Kido et al., Current Eye Research 15:833-844, 1996; Bloomer et al., Journal of Virology 71:6641-6649, 1997; Naldini et al., Science 272:263-267, 1996;およびMiyoshi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:10319, 1997を参照されたい）。例えば、ｓＴＬＲポリペプチド、その変異体または断片をコードするポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクター中にクローニングすることができ、発現は、その内在性プロモーターから、レトロウイルスの長い末端反復から、または目的の標的細胞タイプ（例えば、ニューロン、内皮細胞）に特異的なプロモーターからドライブされ得る。
【０１４２】
他の実施形態において、以下のベクターのいずれも使用することができる：アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター。より詳細には、本発明の方法において有用なベクターとしては、ワクシニアウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、またはヘルペスウイルス、例えば、エプスタインバーウィルスなど、が挙げられる（例えば、Miller, Human Gene Therapy 15-14, 1990; Friedman, Science 244:1275-1281, 1989; Eglitis et al., BioTechniques 6:608-614, 1988; Tolstoshev et al., Current Opinion in Biotechnology 1:55-61, 1990; Sharp, The Lancet 337:1277-1278, 1991; Cornetta et al., Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36:311-322, 1987; Anderson, Science 226:401-409, 1984; Moen, Blood Cells 17:407-416, 1991; Miller et al., Biotechnology 7:980-990, 1989; Le Gal La Salle et al., Science 259:988-990, 1993;およびJohnson, Chest 107:77S-83S, 1995のベクターも参照されたい）。レトロウイルスベクターは、特に良好に開発され、臨床状況において使用されている（Rosenberg et al., N. Engl. J. Med 323:370, 1990; Anderson et al., 米国特許第５，３９９，３４６号）。一実施形態において、アデノ随伴ウイルスベクター（例えば、セロタイプ２、９）は、静脈内に、髄液中に、または脳内への外科的注入によって、ポリヌクレオチドを投与するために使用される。
【０１４３】
非ウイルス的アプローチも、神経変性タンパク質症の疾患または障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病）の処置または予防を必要とする患者の細胞への治療薬の導入のために用いることができる。例えば、核酸分子は、リポフェクション（Feigner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84:7413, 1987; Ono et al., Neuroscience Letters 17:259, 1990; Brigham et al., Am. J. Med. Sci. 298:278, 1989; Staubinger et al., Methods in Enzymology 101:512, 1983）、アシアロオロソムコイド−ポリリシンコンジュゲート（Wu et al., Journal of Biological Chemistry 263:14621, 1988; Wu et al., Journal of Biological Chemistry 264:16985, 1989）の存在下において核酸を投与することによって、または手術条件下でのマイクロインジェクション（Wolff et al., Science 247:1465, 1990）によって、細胞中に導入することができる。一実施形態において、当該核酸は、リポソームおよびプロタミンと組み合わせて投与される。
【０１４４】
遺伝子導入は、インビトロでのトランスフェクションを伴う非ウイルス的手段を使用しても達成することができる。そのような方法としては、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、およびプロトプラスト融合の使用が挙げられる。リポソームも、細胞へのＤＮＡのデリバリーにとって潜在的に有益であり得る。患者の罹患組織への正常遺伝子の移植は、正常核酸をエクスビボにおいて培養可能な細胞タイプ（例えば、自己もしくは異種初代細胞またはそれらの後代細胞）に移し、その後、当該細胞（またはその子孫細胞）を標的組織へ注入するかまたはカニューレによりデリバリーすることによって達成することもできる。
【０１４５】
ポリヌクレオチド療法において使用するためのｃＤＮＡ発現は、任意の好適なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、またはメタロチオネインプロモーター）から指示され得、ならびに任意の適切な哺乳動物調節エレメントによって調節され得る。例えば、所望の場合、核酸の発現を指示するために、特定の細胞タイプ（例えば、内皮細胞、ニューロン、アストロサイト、グリア）における遺伝子発現を優先的に指示することが知られているエンハンサーを使用することができる。使用されるエンハンサーは、これらに限定されるわけではないが、組織特異的または細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものを含み得る。あるいは、治療コンストラクトとしてゲノムクローンが使用される場合、調節は、同種調節配列によって、または所望の場合には、上記において記載したプロモーターまたは調節エレメントのいずれかを含む、異種源由来の調節配列によって、媒介され得る。
【０１４６】
本発明に含まれる別の治療アプローチは、潜在的もしくは実際の疾患罹患組織の部位への、当該ポリペプチドが治療効果を有する器官への直接的な、または全身的な（例えば、任意の従来の組換えタンパク質投与技術によって）、遺伝子組換え治療剤、例えば、遺伝子組換えｓＴＬＲ変異体またはその断片など、の投与を伴う。投与されるタンパク質の投薬量は、個々の患者のサイズおよび健康状態を含むいくつかの因子に依存する。任意の特定の対象に対して、特定の投薬計画は、個体のニーズおよび当該組成物の投与を管理または統括する人の専門的判断に従って経時的に調整されるべきである。
【０１４７】
ｓＴＬＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むウイルス発現ベクターを含む医薬組成物は、注入（静脈内、動脈内、脊髄内、心室内など）、点滴、あるいは従来の非毒性の薬学的に許容される担体および補助剤を含有する投薬形態、製剤、または好適なデリバリーデバイスもしくはインプラントにおいての植込み、によって投与され得る。一実施形態において、本発明の治療組成物は、浸透圧ポンプによって提供される。そのような組成物の製剤化および調製は、医薬製剤の分野の当業者にとって周知である。製剤化は、Remington:The Science and Practice of Pharmacy（上記を参照のこと）に見出すことができる。
【０１４８】
非経口使用のための組成物は、単位投薬形態において（例えば、単回用量のアンプルにおいて）、または好適な保存料が加えられ得る複数回用量を含むバイアル瓶において、提供され得る。当該組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、注入デバイスもしくは植込みのためのデリバリーデバイスの形態であり得るか、または、使用前に水または別の好適な媒体によって再構成される乾燥粉末として提示され得る。活性なｓＴＬＲポリヌクレオチド治療薬は別として、当該組成物は、好適な非経口的に許容される担体および／または賦形剤を含み得る。活性ｓＴＬＲポリヌクレオチド治療薬は、制御放出のために、浸透圧ポンプ、微小球体、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどの中に組み込まれ得る。さらに、当該組成物は、懸濁化剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、および／または分散化剤を含み得る。
【０１４９】
上記に示されたように、本発明による医薬組成物は、無菌注入にとって好適な形態であり得る。そのような組成物を調製するために、好適な活性ｓＴＬＲポリヌクレオチド治療薬は、非経口的に許容される液体媒体に溶解または懸濁される。許容される媒体および溶媒の中でも特に採用され得るのは、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウム、または適切な緩衝液の添加によって好適なｐＨに調整された水、１，３−ブタンジオール、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、ならびに生理食塩液およびデキストロース溶液である。水性製剤は、１種または複数の保存料（例えば、メチル、エチル、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート）も含有し得る。化合物のうちの１つがせいぜい控えめにまたはわずかに水に可溶性である場合、溶解促進剤または可溶化剤を加えることができ、または溶媒は、１０〜６０ｗ／ｗ％のプロピレングリコールなどを含んでいてもよい。
【０１５０】
一実施形態において、本発明の治療組成物（例えば、ｓＴＬＲポリペプチド、ｓＴＬＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター、またはそのような薬剤を含む細胞）は、カニューレにより局所的に提供される。
【０１５１】
キット
本発明は、対象における疾患または障害（例えば、本明細書において説明される障害）を処置するために使用されるキットも提供する。ある特定の実施形態において、当該疾患または障害は、治療剤（例えば、本明細書における任意の化合物または組成物）で有益に処置されるものである。これらのキットは、（ａ）本明細書における化合物またはその塩、水和物、プロドラッグ、もしくは溶媒和物を含み、コンテナ中に収容されている、医薬組成物と、（ｂ）対象における疾患または障害（例えば、本明細書において説明される障害）を処置するための医薬組成物を使用する方法を記載する取扱説明書とを含む。
【０１５２】
当該コンテナは、前記医薬組成物を保管することが可能な、任意の容器または他の密封されたもしくは密封可能な器具であり得る。その例としては、ボトル、アンプル瓶、区分されたまたは多室型ホルダーボトル（それぞれの区分または室は、前記組成物の単回用量を含む）、区分された金属箔の包装（各区分は、前記組成物の単回用量を含む）、または前記組成物の単回用量をディスペンスするディスペンサーが挙げられる。当該コンテナは、薬学的に許容される材料で作られた当技術分野で公知の任意の慣用的な形状または形態であり得、例えば、紙製もしくは厚紙製の箱、ガラスもしくはプラスチック製のボトルまたはジャー、再密封可能なバッグ（例えば、異なるコンテナに配置するために錠剤の「補充品」を保管するため）、または治療計画に従って包装の外に押し出すために個々の用量を有するブリスター包装であり得る。採用されるコンテナは、関連する正確な投薬形態に依存し得、例えば、慣習的な厚紙製の箱は、液体懸濁剤を保管するためには一般には使用されない。単回投薬形態を市販するために、２つ以上のコンテナを単一包装において一緒に使用できるようにすることは実現可能である。例えば、錠剤はボトルに収容することができ、これが箱中に収容される。一実施形態において、当該コンテナはブリスター包装である。
【０１５３】
本発明のキットは、当該医薬組成物の単位用量を投与するためまたは計り取るためのデバイスも含んでいてもよい。そのようなデバイスは、前記組成物が吸入可能な組成物の場合は吸入器；前記組成物が注入可能な組成物の場合は注射器および針；前記組成物が経口用液体組成物の場合は注射器、スプーン、ポンプ、または容積目盛付が有無の容器；あるいは、キット中に存在する組成物の投薬製剤に適した任意の他の測定またはデリバリーデバイスを含み得る。
【０１５４】
ある特定の実施形態において、本発明のキットは、コンテナの別々の容器中に、第二の治療剤、例えば、本発明の化合物との共投与のための使用のために上記に一覧されるものの１つなど、を含む医薬組成物を含み得る。
【０１５５】
以下の実施例は、実例として提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【０１５６】
ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５は、アルツハイマー病マウスモデルにおけるアミロイドプラークを減少させた。
可溶性ＴＬＲの活性を評価するために、可溶性ＴＬＲコンストラクトの構築および検証、新生児期Ｐｏ  ＴｇＣＲＮＤ８マウスへのｒＡＡＶコンストラクトの注入、ならびに組織の分析、を含む研究を設計した。細胞外ＴＬＲ２、４、５、および６は、天然由来の可溶性形態を有するとして記載されているので、それらを研究のために選択した。特に、フラジェリンがＴＬＲ５に対するタンパク質ＰＡＭＰであるため、ＴＬＲ５を選択した。特定の理論に束縛されるわけではないが、ＴＬＲ５は、順序付けられたタンパク質ＤＡＭＰ、例えば、Ａβアミロイドなど、も認識するかもしれない。興味深いことに、Ｎ−またはＣ−末端を欠損するフラジェリンタンパク質は、フィラメントの安定性の減少したポリマーを形成し、とりわけ、Ｎ−末端１〜１５残基は容易にβシートフィブリルを形成し、β−アミロイドおよびプリオンペプチドに類似している（Hakalehto、2004）。
【０１５７】
マウスのｓＴＬＲ２、４、５、および６を、ｐＡＧ３ベクターおよびｐＡＡＶ２ベクターにおいてクローニングし発現させた（図２Ａ）。これらのベクターは両方とも、Ｃ末端にＴＡＰタグ（Ｓｔｒｅｐ／ＦＬＡＧタンデムアフィニティー精製  Gloeckner,2007）を含有する。これらも、Ｖ５タグが隣接するマウスＩｇＧ  Ｆｃ配列の上流において再クローニングした（表３；図２Ｂ）。対応するヒト配列を、ｐＡＧ３およびｐＡＡＶ２ベクターにおいてクローニングし、Ｃ末端ＦＬＡＧ配列またはヒトＩｇＧ  ＦｃおよびＦＬＡＧ配列の融合物を隣接させた（図２Ｃ）。予測されるサイズを表４に記載する。ヒトおよびマウスＴＬＲは、ドメイン構成全体およびサイズに関しては保存されるが、同一ではなく、アミノ酸レベルでの配列同一性は、ＴＬＲ２（７１％）、ＴＬＲ４（６７％）、ＴＬＲ５（７３％）、およびＴＬＲ６（７４％）である。一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を発現するマウスｓＴＬＲ−ＴＡＰを示す代表的なイムノブロット法を示す（図２Ｄ）。全てのコンストラクト（表４において言及した）の個々のＤＮＡ配列は、図３において提供される。
【０１５８】
【表３】
2016516053.tif 000005
ヌクレオチド配列については図３を参照されたい。
【０１５９】
新生児期Ｐ０日のＡＰＰ  ＣＲＮＤ８マウスの脳に形質導入するために、ｓＴＬＲ２、４、５、および６をコードする遺伝子組換えＡＡＶ２／１ベクターを使用した。マウスを５ヶ月齢まで発育させ、脳を採取して、アミロイド負荷およびグリオーシスを評価した。ｓＴＬＲ４および５の発現は、Ａβ沈着の劇的な抑制（図４、図５）と、さらにプラーク関連ミクログリア（図６）およびアストロサイト（図７）における減少を示した。総プラーク量ならびにチオフラビンＳコア化プラークの総数の両方は、対照と比較して、ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５を発現するマウスにおいて減少した（図４）。ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５の発現の両方は、生化学的不溶性Ａβのレベルを引き下げた（図８）。その一方で、ｓＴＬＲ２は、プラーク量または生化学的Ａβのレベルを有意には変えなかった（図８）。これらのｓＴＬＲのいずれも、ＡＰＰまたはＣＴＦレベルにおいて有意な変化を生じなかった（図９）。重要な研究結果は、Ｉｂａ−１（図６）およびＧＦＡＰ（図７）免疫組織化学ならびにｃｄ１１ｂ（図６）およびＧＦＡＰ（図７）イムブロット法によって評価した場合、ｓＴＬＲ４およびｓＴＬＲ５発現も、グリオーシス全体の減少を引き起こす、ということであった。
【０１６０】
毒性ＤＡＭＰ、例えば、凝集したＡβ４０、Ａβ４２、α−シヌクレイン、またはタウなど、が、ヒトＴＬＲのリガンドとして機能するかどうか、ならびにｈＴＬＲを活性化することができるかどうかを試験した。ヒトＴＬＲ遺伝子（ＴＬＲ４／ＭＤ−２またはＴＬＲ５）およびＮＦ−κＢ−誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定して同時発現するＨＥＫ２９３細胞において、これらのＤＡＭＰがＴＬＲ活性化に対して示差的効果を有することが観察された。確立したプロトコルに従って、Ａβ４２、Ａβ４０（１ｍｇ／ｍｌ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ）をインビトロにおいて凝集させた。凝集したＡβ４０（しかし、凝集したＡβ４２は活性化しなかった）は、用量依存的にヒトＴＬＲ５に結合して活性化させ、その一方で、ＴＬＲ４媒介性シグナリングは、凝集したＡβ４２および凝集したＡβ４０の両方によって活性化された（図１０）。どちらのＴＬＲも、モノマー性Ａβ４２またはモノマー性Ａβ４０の存在下では、いかなる活性化も示さなかった。非凝集性ＡβコンストラクトであるＡβ１〜２２（「２２ｍｏｎｏ」）は、ＴＬＲ４も５も活性化できなかった。ＴＬＲ２活性化は、見かけ上用量依存活性化なしで、試験されたＡβ４０または４２の最も高い濃度においてのみ非常に適度なレベルまで達成され、これは、ＡβがＴＬＲ２シグナリングを誘発しないことを示唆している（図１１）。これは、マウスの脳でのｓＴＬＲ２過剰発現の効果に対するインビボでの観察結果によく一致している（図８）。他のアミロイド形成的タンパク質／ペプチドから形成された異種アミロイドも試験したが、そのいくつかは、マウスまたはヒトにおいては見出されない。これらのタンパク質は：ｓｕｐ３５〜７（酵母中のプリオン様タンパク質であるＳｕｐ３５由来）、プリオンタンパク質断片１０６〜１２６のＴｏｘ  ＣＳ２５（Ｃ末端においてＴヘルパートキソイドペプチドに結合したバチルスコールドショックタンパク質）、ＭＳＰ２（マラリア原虫メロゾイト表面タンパク質２）、ＡＶＳ１２Ｔｏｘ（Ｃ末端においてトキソイドペプチドにタグ付けされたアデノウイルス２型シャフト１２アミノ酸ペプチド）、およびＴｏｘＡＶＳ２５（Ｎ末端においてトキソイドペプチドにタグ付けされたアデノウイルス２型シャフト２５アミノ酸ペプチド）であった。試験されたこれらの様々な異種アミロイドのうち、ＴｏｘＡＶＳ１２、ＡＶＳ１２Ｔｏｘ、およびＭＳＰ２は、有意なＴＬＲ４活性化を示した（図１２）。
【０１６１】
確立されたプロトコルに従って、シヌクレイン（５ｍｇ／ｍｌ）をインビトロにおいて凝集させた。凝集したシヌクレインならびにモノマー性シヌクレインは、用量依存的にヒトＴＬＲ４を劇的に活性化し、試験した最も高い濃度においてＴＬＲ２をより少ない程度まで活性化した（図１３、１６）。シヌクレインは、試験した最も高い濃度においてのみ、ＴＬＲ５シグナリングを弱く活性化した（図１５）。非常に興味深い観察結果は、モノマー性シヌクレインが、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、およびＴＬＲ５シグナリングを誘発することもできることであった（図１３、１５）。モノマー性シヌクレインのどの配列が実際にＴＬＲ４シグナリングを誘発することができるかを試験するために、内部およびＮ−／Ｃ−末端欠失に対応する様々なペプチドを使用した（図１４）。アミノ酸１０２〜１４０の配列欠失では、ＴＬＲ４シグナリングは完全に無効化されたが、その一方で、アミノ酸１〜１１０を含むシヌクレインは、ＴＬＲ４シグナリングにとって十分であった。このことは、１０２〜１１０の間のアミノ酸が、シヌクレイン媒介性ＴＬＲ４活性化にとって重要であることを示している。
【０１６２】
確立されたプロトコルに従って（Giasson、2003）、野生型タウＴ４０および疾患関連突然変異体タウＰ３０１Ｌ（「Ｔａｕ４０ＰＬ」）を、ヘパリンの存在下においてフィブリル化した。モノマー性野生型Ｔ４０とそれ自体によるヘパリンのどちらも、ヒトＴＬＲ４またはヒトＴＬＲ５シグナリングを活性化しなかった（図１７〜１９）。凝集した野生型Ｔ４０、凝集したＴ４０ＰＬ、ならびにモノマー性Ｔ４０ＰＬは、ＴＬＲ４の活性化およびシグナリングを生じることができたが（図１７）、その一方で、試験したこれらのタウ種のいずれも、ＴＬＲ５もＴＬＲ６も活性化しなかった。要するに、これらの実験は、異なる神経変性疾患に関連しているこれらのタンパク質／ペプチドが、ＴＬＲシグナリングに対して非常に特有の異なる効果を有していたことを示しており、特有の病理的タンパク質症性封入体を標的とする特異的な疾患修飾性ツールとしてそれらの使用を正当化する。
【０１６３】
ｓＴＬＲの発現が、マウスの一次神経膠培養物において、Ａβおよびシヌクレイン誘発毒性を阻止できるか否かについても調べた。これらの研究において、マウスの神経膠培養物を、ｓＴＬＲ２、４、または５をコードするｒＡＡＶ２／１によって形質導入し、７日後に、当該培養物を、凝集したＡβ４２（１０μＭ）または凝集したシヌクレイン（１μＭ）に２４時間曝露させた。これらの研究において、ＰＩ／カルセイン細胞生存率アッセイ（データは示していない）によって評価した場合、ｓＴＬＲ４および５は両方とも、Ａβ誘発毒性を完全に阻止した。ｓＴＬＲ２も、Ａβ誘発神経毒性を阻止することができたが、程度は低かった。これらのｓＴＬＲが、α−シヌクレイン誘発神経性細胞死を阻止することができるか否かについても試験した。ｓＴＬＲ２および４は、α−シヌクレイン誘発細胞死を逆転させることができたが、ｓＴＬＲ５はできず（データは示していない）、このことは、インビトロでのＴＬＲ活性化アッセイからの観察結果を支持していた（図１４〜１６）。
【０１６４】
当該結果は、１）ｓＴＬＲ４および５は、インビボにおいてＡβプラーク沈着をモジュレートしたが、ｓＴＬＲ２および６はしなかったこと、２）ｓＴＬＲ４および５は、プラーク関連グリアの活性化をモジュレートすること、３）ｓＴＬＲ２、４、および５は、一次ニューロン培養物におけるＡβ毒性を阻止したこと、４）ｓＴＬＲ２および４は一次ニューロン培養物におけるシヌクレイン毒性を阻止したがｓＴＬＲ５はしなかったこと、ならびに５）ヒト全長ＴＬＲ２、４、および５は、Ａβ、タウ、およびシヌクレインによって示差的に活性化されたこと、を示した。
【０１６５】
さらなる実験は、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５処理ＣＲＮＤ８マウスにおけるＡβ脳プラーク負荷における顕著な減少を同定した。図２０に示されているように、新生児期ＣＲＮＤ８マウスの脳室にＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）を注入し、次いで６ヶ月齢まで発育させた場合、海馬および大脳皮質におけるＡβプラークの後犠牲分析（ｐａｎ  Ａβ  ３３．１．１抗体で染色した）は、対照マウスと比較して、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を注入したマウスにおいてＡβプラークの劇的な減少を示した（ｎ＝８〜１０マウス／群）。ｐａｎ  Ａβ  ３３．１．１抗体で染色することによって確認した場合、Ａβプラークにおけるこの減少に一致して、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を投与したＣＲＮＤ８マウスにおいてチオフラビンＳで染色したＡβプラークの減少も観察された。図２１に示されているように、脳室にＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）を注入し、次いで６ヶ月間老化させた新生児期ＣＲＮＤ８マウスにおいて、チオフラビンＳ染色（チオフラビンＳは、プラークのβプリーツシートおよび神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）を標識する）における有意な減少が見られた。海馬および大脳皮質におけるＡβプラークの分析は（チオフラビンＳで染色した）、対照マウスと比較して、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を注入したマウスにおけるコア化Ａβプラークの減少を示した（ｎ＝８マウス／群）。したがって、局所的に投与されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５は、ＣＲＮＤ８マウスにおけるＡβプラークの蓄積に対して予防効果を有していた。
【０１６６】
Ａβの可溶性形態に対する任意の影響と比較したときの、Ａβプラーク沈着物の予防および／または崩壊に対するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５効果の選択性を、新生児期に脳室にＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）を注入して６ヶ月齢まで発育させたＣＲＮＤ８マウスにおいて調べた。図２２に示されているように、ギ酸（ＦＡ、アミロイドプラーク関連Ａβを表す）、ＲＩＰＡ（ラジオ−免疫沈降法アッセイ）緩衝液、またはＳＤＳでの逐次抽出後に前脳のＡβレベルを分析した場合（ＲＩＰＡおよびＳＤＳ両方の結果は、「可溶性」Ａβを表している）、ＦＡ−抽出Ａβ４２およびＡβ４０のレベルは両方とも大幅に減少したが、ＲＩＰＡ−およびＳＤＳ−抽出Ａβのレベルでは有意な変化は無かった（ｎ＝８マウス／群；一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１）。したがって、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５発現は、効果の高水準の選択性において、プラーク関連Ａβレベルの減少を引き起こした。
【実施例２】
【０１６７】
ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５は、アルツハイマー病モデルマウスにおいて延命効果を生じさせた。
ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を投与したマウスに対して観察されたＡβプラーク形成および崩壊における劇的な変化を考慮して、そのような変化も、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を投与したマウスに対する延命効果へと転換さたか否かを調べた。図２３に示されるように、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはＥＧＦＰ（対照）のどちらかを発現するトランスジェニックＣＲＮＤ８マウスにおいて生存を追跡した。最初の約７０日間にわたり両方の群において高い率（ｎ＝２０〜２５マウス／群のおよそ８０％以上）の生存が観察されたが、研究の後半において２つの群の間において劇的で継続的な相違が観察された（図２３）。したがって、より大きな割合のｓＴＬＲ５ＦｃＶ５発現マウスが、１５０日の研究の終了まで生存し、このことは、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５発現の延命効果を示している。
【実施例３】
【０１６８】
Ａβプラークに対するｓＴＬＲ５  ＦｃＶ５の治療影響がアルツハイマー病モデルマウスにおいて確認された。
非新生児期ＣＲＮＤ８マウスにおけるｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の海馬発現の影響を調べるために、９ヶ月齢のトランスジェニックＣＲＮＤ８マウスの海馬にｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰを注入し、３ヶ月後に分析した。図２４に示されているように、このｓＴＬＲ５ＦｃＶ５処置計画は、結果として、Ａβプラークレベルの低下を生じた。詳細には、９〜１２ヶ月齢のコホートの海馬でのギ酸抽出Ａβレベルの分析は、対照マウスと比較して、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５注入マウスにおけるＡβ４２の減少を示した。その一方で、ＲＩＰＡおよびＳＤＳ可溶性Ａβレベルにおいて変化はなかった（データは示されていない；ｎ＝５マウス／群、一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５）。したがって、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５は、９ヶ月齢のＣＲＮＤ８マウスに対して治療効果を有した（Ａβプラークレベルによって測定した場合）。
【実施例４】
【０１６９】
Ｖ５免疫沈降法により、ｒＡＡＶ２／１指示体細胞性脳遺伝子導入によりｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を投与したマウスにおけるｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の過剰発現を確認した。
抗Ｖ５抗体による免疫沈降法によって、ｒＡＡＶ２／１指示体細胞性脳遺伝子導入によるマウス脳におけるヒトｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の過剰発現が確認された。以下の領域：（ａ）内因性ヒトＴＬＲ５分泌シグナル、領域（ｂ）ヒトＴＬＲ５エクトドメイン、領域（ｃ）ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインおよび領域（ｄ）Ｖ５分子タグ（領域は原寸大ではなく、ならびに数値はポリペプチドの長さ（＃アミノ酸）を示している）、を含有するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５分子が図２５Ａに示されている。新生児期に脳室にｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰのどちらかを注入し６ヶ月齢まで発育させたＣＲＮＤ８マウスにおけるヒトｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の発現レベルを調べるために、免疫沈降法を使用した。図２５Ｂに示されているように、Ｖ５免疫沈降法（ＩＰ）アッセイを使用して、逐次抽出されたＲＩＰＡ可溶分画および洗浄剤（２％のＳＤＳ）可溶分画においてｓＴＬＲ５ＦｃＶ５タンパク質の存在を試験した（そのような実験において、「ビーズ」レーンはｍｏｃｋ  ＩＰアッセイを示し；「Ｍ」レーンは分子量基準を示し（上から下にｋＤａにおいて、２５０、１５０、１００、７５、５０、３７）；１〜３レーンは、ｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５注入脳溶解物であり、４〜７レーンは、ｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰを注入したマウス脳溶解物であり；ＰｏｓＣｔ＝Ｖ５ＩＰアッセイの効率を試験するためのポジティブ対照レーンであり；「４Ｂ１」レーンはｓＴＬＲ４ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質であり、ならびに「５Ｄ６」レーンはｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質であった）。図２５Ｂにおける矢印は、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５タンパク質の予想分子量に対応しており、これは、ＲＩＰＡ抽出レーン１〜３ならびにポジティブ対照レーン（ｓＴＬＲ４ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質を含む「４Ｂ１」レーンおよびｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−ＣＨＯクローン細胞株由来の媒質を含む「５Ｄ６」レーン）において最も顕著に観察された。したがって、免疫沈降法によって、ｒＡＡＶ２／１指示体細胞性脳遺伝子導入によるマウス脳におけるヒトｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の過剰発現が確認された。
【実施例５】
【０１７０】
ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５はインビボおよびインビトロにおいてＡβに結合した。
Ａβプラークレベルに対するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５発現の劇的な影響は、Ａβプラークに対するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の直接的効果を示していた。ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５が実際にＡβに結合し得るか否かを調べるために、一連の実験（図２６〜２９に示される）を実施した。最初のそのような実験において、新生児期にｒＡＡＶ２／１−ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５またはｒＡＡＶ２／１−ＧＦＰを注入した６ヶ月齢のマウスから得たＴＢＳ抽出可溶性脳溶解物を、セファロースビーズに結合させた２種の異なる抗Ａβ抗体：アミノ酸１７〜２４に対応する４Ｇ８（Ｃｏｖａｎｃｅ）およびアミノ酸１〜１６に対応するＡｂ５（Ｔ．Ｇｏｌｄｅ）、と一緒にインキュベートした。結合後、次いで免疫複合体をプルダウンし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分離し、抗Ｖ５タグ抗体を使用してｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の存在について試験した。そのような実験は、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５がインビボにおいて可溶性Ａβと複合体を形成することを実証した（図２６Ａ）。（一方で、ｍｏｃｋプルダウンアッセイは、ネガティブ対照としての役割を果たし、ならびに分子量決定を支援するために左側に精製されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５タンパク質のレーンを負荷した。各レーンの総入力は、抗アクチン抗体を使用して評価した（図２６Ａ、下側パネル））。さらなる対照として、精製されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５と精製されたｓＴＬＲ４ＦｃＶ５のどちらも、それ自身による抗Ａβ抗体４Ｇ８またはＡｂ５によって認識されないことを示すために二元Ｌｉ−Ｃｏｒイムノブロットを使用した（図２６Ｂ、レーン１は分子量マーカーを示しており、レーン２はｓＴＬＲ４ＦｃＶ５の結果を示しており、レーン３はｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の結果を示している）。したがって、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５は、インビボにおいてＡβに結合した。
【０１７１】
次いで、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−Ａβ結合の初期インビボ観察により、インビトロでのさらなる生化学的詳細について追求した。ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−Ａβ結合を検出するための初期インビトロ実験において、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を発現する安定なＣＨＯ細胞株を、凝集したＡβ４２と一緒に１２時間の時間経過においてインキュベートした（図２７）。媒質中のＡβのＥＬＩＳＡ分析は、対照のＣＨＯ細胞の媒質と比較して、比例的により多くの量のＡβがｓＴＬＲ５ＦｃＶ５媒質中に隔離されたままであることを示した。したがって、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５は、凝集したＡβ４２にインビトロにおいて結合した。
【０１７２】
インビトロでのｓＴＬＲ５ＦｃＶ５−Ａβ結合実験は、モノマー性Ａβと比較したときの、凝集したＡβの効果の選択性も実証しており、これは、上記において観察された、ＡβプラークおよびＡβの可溶性形態に対する示差的影響と一致していた。かかる実験において、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５およびｓＴＬＲ４ＦｃＶ５は、モノマー性Ａβと比較して、凝集したＡβに対してより効率的に結合することが観察された（図２８）。詳細には、直接的ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、精製されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５、ｓＴＬＲ４ＦｃＶ５、およびＦｃＶ５タンパク質を用いて、凝集したＡβまたはモノマー性Ａβに対する結合を評価した。検出は、ＨＲＰコンジュゲート抗Ｆｃ抗体を使用して実施した。一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．０１。
【０１７３】
最終的インビトロ実験において、Ａβに対する固定化されたリガンドとしてＣＨＯ細胞媒質由来の固定されたｓＴＬＲ５ＦｃＶ５を使用して、ＣＨＯ細胞媒質中に存在する可溶性ＣＨＯ細胞発現ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の、Ａβに結合する能力を調べた。図２９に示されているように、凝集したＡβ４２に対するｓＴＬＲ５ＦｃＶ５の結合をリアルタイムにおいて観察した。詳細には、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５、ｓＴＬＲ４ＦｃＶ５、ＦｃＶ５を発現する安定なＣＨＯ細胞株または市販の遺伝子組換えＩｇＧ１  Ｆｃ由来の媒質を、抗ヒトＦｃセンサー上に固定し、凝集したＡβ４２にセンサー固定リガンドを会合させた。ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５と共にインキュベートしたセンサーのみにおいて、結合したＡβ４２の存在が抗Ａβ１〜１６抗体Ａｂ５によって検出された（特に、図２９の「Ａｂ５による検出」期間のｓＴＬＲ５ＦｃＶ５媒質トレースを参照されたく；図２９において、「センサーへの負荷」期間の終了時での最も低いものから最も高いものまでのトレースの実体は：（１）最も低いもの＝ＣＨＯ  ＷＴ媒質；（２）緩衝液のみ；（３）ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５媒質；（４）ｓＴＬＲ４ＦｃＶ５媒質；（５）遺伝子組換えＦｃ；および（６）ＦｃＶ５媒質、である）。したがって、ｓＴＬＲ５ＦｃＶ５は、Ａβへの特異的リアルタイム結合を実証した。
【０１７４】
さらなる説明が無くても、当業者は、前述の説明および例示的実施例を用いて、本発明の化合物を作製および利用すること、ならびに特許請求される方法を実行することが可能であると思われる。前述の議論および実施例は、ある特定の好ましい実施形態の詳細な説明を提示しているに過ぎないことは理解されるべきである。本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更例および等価物を作製することができることは、当業者に明らかであろう。上記において議論または引用された全ての特許、雑誌論文、および他の文書は、参照により本明細書に組み入れられる。
【図１Ａ】
2016516053.tif 000006
【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ】
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【図３Ｉ】
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【図３Ｊ】
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【図３Ｋ】
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【図３Ｌ】
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【図３Ｍ】
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【図３Ｎ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年11月25日(2015.11.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2016516053000001.app
【国際調査報告】
2016516053.tif 000053
2016516053.tif 000054
2016516053.tif 000055
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