(57)【要約】本発明は、ポリペプチドまたはその一部を含む魚の孵化液から得た、または得ることができる医薬もしくは化粧品組成物、ならびに、特に動物における皮膚障害または状態の治療もしくは予防のために、皮膚の保湿および／または皮膚の角質層の角質除去のための、皮膚への様々な医学的および化粧適用における前記組成物の使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚の孵化液から医薬または化粧品組成物を調製する方法であって、
ａ）魚卵を最小体積の水中に懸濁させるステップと、
ｂ）好ましくは、孵化が前記胚の８０％超について６時間以内に完了するように、前記卵の同期した迅速な孵化を誘発するステップと、
ｃ）場合によって前記孵化した卵を濾過して、孵化液を得るステップと、
ｄ）ｂ）またはｃ）の前記孵化液を濾過して組成物を得るステップであって、前記孵化液を濾過する前記ステップが、
（ｉ）少なくとも５μｍの孔サイズを有するフィルターを用いて前記孵化液をろ過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）からの前記ろ液をイオン交換クロマトグラフィーにかけるステップとを少なくとも含み、
（１）前記ろ液をイオン交換カラム上、好ましくは、ＤＥＡＥ（ジエチルアミノエチル）カラム上にロードし、
（２）前記カラムを好適な緩衝液、好ましくはｐＨ７〜９の緩衝洗浄液で洗浄し、
（３）ロイコレクチンポリペプチドを前記カラムから、第１溶出緩衝液または溶媒を用いて溶出させ、好ましくは、前記第１溶出緩衝液は、５０〜１００ｍＭの濃度の塩をさらに含む前記緩衝洗浄液を含み、
（４）前記残存ポリペプチドを前記カラムから、第２溶出緩衝液または溶媒を用いて溶出させ、好ましくは、前記第２溶出緩衝液は５００ｍＭ〜２Ｍの濃度で塩を含む前記緩衝洗浄液を含み、
（５）ステップ（４）からの前記溶出液を集めることを含み、
ｅ）ステップ（５）からの前記溶出液中の前記水を薬剤的または美容上許容される緩衝液と交換するステップと、
ｆ）ステップ（ｅ）から得られた前記溶液を、０．１５〜０．３０μｍの孔サイズを有するフィルターを用いてろ過し、かつ前記濾液を集めるステップと、
ｇ）前記医薬または化粧品組成物をステップ（ｆ）からの前記濾液から調製するステップと
を少なくとも含む、方法。
【請求項２】
０．３０〜０．６０μｍの孔サイズを有するフィルターを使用してステップ（ｉ）からの前記ろ液を濾過し、前記ろ液を集めるさらなるステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ａ）ステップ（ｉ）における前記フィルターの前記孔サイズが５〜１５μｍであり、好ましくは前記孔サイズが７μｍであり、
ｂ）請求項２に記載の前記フィルターの前記孔サイズが０．３５〜０．５５μｍであり、好ましくは前記孔サイズが０．４５μｍであり、および／または、
ｃ）ステップ（ｆ）における前記フィルターの前記孔サイズが０．２２μｍである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
４．ステップ（ｅ）がダイアフィルトレーションを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記卵が、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｏｍｏｒｐｈａ、Ｅｌｏｐｏｍｏｒｐｈａ、Ｃｌｕｐｅｏｍｏｒｐｈａ、Ｏｓｔａｒｉｏｐｈｙｓｉ、Ｐｒｏｔａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉ、Ｓｔｅｎｏｐｔｅｒｙｇｉｉ、Ｃｙｃｌｏｓｑｕａｍａｔａ、Ｓｃｏｐｅｌｏｍｏｒｐｈａ、Ｌａｍｐｒｉｄｉｏｍｏｒｐｈａ、Ｐｏｌｙｍｙｘｉｏｍｏｒｐｈａ、ＰａｒａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉおよびＡｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉからなるリストから選択される任意の上目の魚から選択される魚由来である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記魚が、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｈｉｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｅｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｌｂｕｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｎｏｔａｃａｎｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｎｇｕｉｌｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｃｃｏｐｈａｒｙｎｇｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｌｕｐｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｎｏｒｙｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｈａｒａｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｙｍｎｏｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｒｇｅｎｔｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｓｍｅｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｅｌｅｏｐｏｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｏｍｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｕｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｙｃｔｏｐｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌａｍｐｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｏｌｙｍｉｘｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｅｒｃｏｐｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂａｔｒａｃｈｏｉｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌｏｐｈｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｐｈｉｄｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｕｇｉｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｈｅｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｌｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｅｔｏｍｉｍｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｅｐｈａｎｏｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｚｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｂｉｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｓｔｅｒｏｓｔｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｇｎａｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｂｒａｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｔｅｔｒａｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｃｏｒｐａｅｎｉｆｏｒｍｅｓ  ＰｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｆｏｒｍｅｓからなるリストから選択されるいずれかの目由来のものである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記魚が、Ｓａｌｍｏｎｉｄａｅ、Ｃｙｐｒｉｎｉｄａｅ、Ｃｉｃｈｌｉｄａｅ、Ｐａｎｇａｓｉｉｄａｅ、Ｓｃｉａｅｎｉｄａｅ、Ｓｅｒｒａｎｉｄａｅ、Ｃａｒａｎｇｉｄａｅ、Ｓｐａｒｉｄａｅ、Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｃｉｄａｅ、Ｍｏｒｏｎｉｄａｅ、Ｍｕｇｉｌｉｄａｅ、Ｌａｔｉｄａｅ、ＥｌｅｏｔｒｉｄａｅおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｄａｅからなるリストから選択される科由来である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記魚が、ソウギョ（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ  ｉｄｅｌｌａ）、ハクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｍｏｌｉｔｒｉｘ）、キャトラ（Ｃａｔｌａ  ｃａｔｌａ）、コイ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ  ｃａｒｐｉｏ）、コクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ）、ヨーロッパブナ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ  ｃａｒａｓｓｉｕｓ）、ティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）、バサ（Ｐａｎｇａｓ  ｃａｔｆｉｓｈ）（Ｐａｎｇａｓｉｕｓ  ｐａｎｇａｓｉｕｓ）、ロフ（Ｌａｂｅｏ  ｒｏｈｉｔａ）、タイセイヨウサケ（Ｓａｌｍｏ  ｓａｌａｒ）、フウセイ（Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｃｒｏｃｅａ）、ヒトミハタ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ  ｔａｕｖｉｎａ）、マス（Ｓａｌｍｏ  ｔｒｕｔｔａ  ｔｒｕｔｔａ）、ブリ（Ｓｅｒｉｏｌａ  ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ）、ゴウシュウマダイ（Ｓｐａｒｕｓ  ａｕｒａｔａ）、スズキ（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ヨーロピアンシーバス（Ｄｉｃｅｎｔｒａｒｃｈｕｓ  ｌａｂｒａｘ）、ヒラダイ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｒｙｓ  ａｕｒａｔｕｓ）、ボラ（Ｍｕｇｉｌ  ｃｅｐｈａｌｕｓ）、バラマンディ（Ｌａｔｅｓ  ｃａｌｃａｒｉｆｅｒ）、マーブルゴビー（Ｏｘｙｅｌｅｏｔｒｉｓ  ｍａｒｍｏｒａｔａ）、モザンビークティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｍｏｓｓａｍｂｉｃｕｓ）、ウミマス（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｍｙｋｉｓｓ）、ギンサケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｋｉｓｕｔｃｈ）、マスノスケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｔｓｈａｗｙｔｓｃｈａ）、カラフトマス（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｇｏｒｂｕｓｃｈａ）、シロサケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｋｅｔａ）、ベニザケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｎｅｒｋａ）、シベリアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｂａｅｒｉｉ）およびロシアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉｉ）からなるリストから選択される種である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
孵化が、前記胚の９５％超について２時間以内に完了する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項で定義される方法から得た、または得ることができる、医薬または化粧品組成物。
【請求項１１】
治療法で使用するための請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
（ｉ）動物の皮膚の角質除去および／もしくは保湿、ならびに／または（ｉｉ）動物における毛穴のサイズを小さくするための美容的または非美容的方法であって、請求項１０で定義される組成物を前記動物に投与する、方法。
【請求項１３】
動物の皮膚の角質除去および／または保湿に使用される請求項１０で定義される組成物。
【請求項１４】
動物の皮膚の状態または障害を治療または予防する美容的または非美容的方法であって、前記皮膚が異常に乾燥し、前記皮膚の前記角質層が異常に肥厚しているか、または前記皮膚が色素異常症にかかっており、請求項１０で定義される組成物を前記動物に投与する、方法。
【請求項１５】
前記皮膚が異常に乾燥し、前記皮膚の前記角質層が異常に肥厚しているかまたは前記皮膚が色素異常症にかかっている、動物の皮膚の状態または障害を治療または予防する美容的または非美容的方法で使用するための請求項１０で定義される組成物。
【請求項１６】
治療または予防される前記皮膚状態または障害が、湿疹、接触性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬または挫創である、請求項１４または１５に記載の方法または組成物。
【請求項１７】
治療または予防される前記皮膚状態または障害が、炎症性および／または非炎症性皮膚病変、好ましくは丘疹、膿疱、ブラックヘッドおよび／またはホワイトヘッドを含む、請求項１４または１５に記載の方法または組成物。
【請求項１８】
治療または予防される前記皮膚状態または障害が、たこ、魚の目、いぼまたは肝斑を含む、請求項１４または１５に記載の方法または組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、製品、材料またはデバイス上にコート、含浸または化学的に結合される、請求項１０〜１８のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２０】
請求項１０で定義される組成物でコート、含浸または化学的に結合された製品、材料またはデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚の孵化液から誘導できるポリペプチドおよび／またはポリペプチドの部分を含む組成物の製造方法、および皮膚への様々な適用におけるその使用に関する。特に、前記ポリペプチドおよび／またはポリペプチドの部分を含む組成物は、医学上および美容上の様々な皮膚障害または状態の治療において有用である。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は身体のより脆弱な器官の１つである。生死に関わることは滅多にないが、皮膚障害または状態は不快であり得、慢性障害を引き起こす可能性がある。加えて、皮膚はとてもよく見えやすいので、皮膚障害または状態は精神的ストレスに至る可能性がある。したがって、皮膚状態および障害の有効な治療が継続して必要とされる。
【０００３】
皮膚は、個人の体重の約１２〜１６パーセントを占める身体の最大の器官を形成する。皮膚は、バリヤとして、そして外界と我々の身体内の管理された環境との間の調節効果を与えるものとしての両方で、多くのきわめて重要な役割を果たす。
【０００４】
皮膚は、３層、すなわち、表皮、真皮および皮下組織から構成される。表皮は皮膚の最上の上皮層である。表皮は物理的バリヤとして作用し、身体からの水分が失われるのを防止し、身体内に物質および生物が侵入するのを防止する。その厚さは、身体の部位によって異なる。
【０００５】
表皮は重層扁平上皮から構成され、すなわち、表皮は扁平細胞の層から構成される。皮膚、毛髪および爪は角質化しており、つまり、ケラチンと呼ばれるタンパク質からできた、死んで硬化した疎水性表面を有する。表皮は、特に表皮の中間層（透明層）中に、ケラチノサイトと結合した細胞外脂質が含まれるために不浸透性になる。（例えば、食道、口咽頭腔（ｏｒａｌ  ｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｖｉｔｙ）、生殖器、およびその他の）粘膜は、大部分は角質化されておらず、湿っている。表皮は３つの主な種類の細胞、すなわち、ケラチノサイト（皮膚細胞）、メラノサイト（色素産生細胞）およびランゲルハンス細胞（免疫細胞）を有する。メルケル細胞は第４の、あまり広く知られていない表皮細胞である。
【０００６】
ケラチノサイトは、それらが外側へ移動するにつれ、ケラチンを蓄積しつつ成熟し、文化する。それらは最終的に落下またははがれ落ちる。それらは４または５の異なる層を形成し、これは、最も浅いものから最も深いものへ向かって、（ｉ）核のない、死んで乾燥した硬い細胞を有する角質層（Ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）、（ｉｉ）好塩基性顆粒を含み、薄い透明層により角質層から外側へ分離されている細胞を有する顆粒層（Ｓｔｒａｔｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ）、（ｉｉｉ）細胞が上へ移動するにつれて次第に扁平になる有棘層（棘層、棘状または有棘細胞層）、および（ｉｖ）円柱状の（長い）再生細胞を有する基底層（Ｓｔｒａｔｕｍ  ｂａｓａｌｅ）である。
【０００７】
表皮のすぐ下には基底膜があり、これは表皮と真皮との間にある特殊構造である。
【０００８】
真皮は、皮膚の線維性結合組織または支持層である。主な繊維はコラーゲン繊維およびエラスチンであり、これらは混交している。
【０００９】
皮下組織は、真皮および表皮のすぐ下の脂肪層である。それは、皮下組織、真皮（ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｓ）または組織層とも呼ばれる。皮下組織は主に、脂肪細胞（含脂肪細胞）、神経および血管から構成される。
【００１０】
新しい上皮細胞は、皮膚の下層である顆粒層で形成される。時間と共に、細胞は皮膚の表面に移動し、より酸性になる。３０日の行程の間に、細胞は死に、ケラチンで飽和される。ケラチンおよび関連する脂質は、外部要素から皮膚を保護するので重要である。
【００１１】
疾患、損傷、環境因子、年齢、ホルモンレベル、薬物、外部から適用もしくは摂取された物質、遺伝子疾患または様々な他の因子は、不規則性または異常をもたらす皮膚の機能異常に至る可能性がある。これらの不規則性または異常の一部は純粋に美容上の性質のもの、例えば、乾燥肌、しわもしくは色素沈着の変更であり得るか、またはさらに重篤で、疼痛もしくは不快症状に至るもの、例えば湿疹および乾癬である可能性がある。
【００１２】
乾燥肌は、最も一般的な皮膚の状態または異常の１つである。乾燥肌にかかりやすい個体もあるが、この状態は、年齢、性別、または皮膚の種類に関係なく誰でもかかる可能性がある。
【００１３】
乾燥肌は、皮膚の外層（透明層を有する角質層）が水分を失った場合に起こる。この層が十分潤うと、皮膚を通した水分損失を最小限に抑え、刺激物、アレルゲン、および細菌を遮断するのに役立つ。しかしながら、角質層が乾燥すると、その保護機能が低下する。これによってさらに多くの水分が失われ、皮膚は環境因子の影響を受けやすくなる。
【００１４】
通常の条件下で、角質層は１０％〜３０％の水分量を有する。この水分は皮膚に、その柔らかく、なめらかで、柔軟なテクスチャーを付与する。水分は、大気、皮膚の下層、および汗に由来する。皮膚腺により産生される油および皮膚細胞によって産生される脂肪性物質は、天然の保湿剤として作用し、角質層が水を閉じ込めるのを可能にする。
【００１５】
身体は蒸発により皮膚の表面から絶えず水分を失っている。通常の条件下では、損失速度は遅く、水分は適切に補給される。乾燥肌に特有の兆候および症状は、水分損失が水分補給を上回り、角質層の水分が１０％より低くなった場合に生じる。
【００１６】
乾燥肌を改善または解消する保湿剤が非常に望ましい。当該技術分野で多くの保湿剤が公知であるが、有効であるが穏やかな天然製品が依然として必要とされている。
【００１７】
もう１つ別の一般的な皮膚の異常または状態は、過剰量の皮膚の角質層である。これは、角質層がはがれおちないこと、または角質層中の過度のケラチン堆積に起因する可能性がある。前者は、皮膚のびらんの天然の過程が不均一になる場合に起こる可能性があり、これにより皮膚が乾燥し、荒れる。良性の過剰増殖性障害としては、表皮剥離性角質増殖症（すなわちかさついた皮膚）および毛包角化症が挙げられる。一般的な良性の過剰増殖性状態の１つは、瘢痕の周辺肥大および／またはケロイド形成である。他の過剰増殖性状態は、魚の目、たこ、角化性いぼ（特に、尋常性いぼ（ｖｅｒｕｃａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ））、魚鱗癬および掌蹠角化症である。
【００１８】
現在の治療は、角質除去または極端な場合は手術を含む。過角化症は、通常、角質層を軟化させ、肥厚した皮膚を除去することによって治療する。
【００１９】
角質除去（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｏｎ）は、損傷した表皮細胞を除去するため、例えば色素異常症、例えば肝斑を示す表皮から表皮細胞を除去するためにも使用できる。
【００２０】
角質除去は、皮膚の外層を除去して、下にあるより新しい皮膚細胞を露出させる。角質除去は、物理的手段（すなわち皮膚の剥離）または化学的手段によって達成することができる。化学的エクスフォリアン（ｅｘｆｏｌｉａｎｔ）としては、サリチル酸、グリコール酸、果物酵素、クエン酸またはリンゴ酸を含むスクラブが挙げられ、高濃度で皮膚科医が塗布してもよいし、または低濃度の処方箋のいらない製品で塗布してもよい。化学的角質除去は、アルファヒドロキシ酸（ＡＨＡ）もしくはベータヒドロキシ酸（ＢＨＡ）、または細胞間結合点で細胞をまとめる接着剤様物質をほぐすように作用する酵素を含む製品の使用をともなってもよい。この種類の角質除去は、挫創を治療する人々に推奨される。
【００２１】
角質除去に対する最大の不利益は、それを達成するために使用される製品および方法の一部が高額なことある。角質除去は、当初若干皮膚の発赤に至る。ケミカルピーリングの終わり付近で、皮膚は霜がかかったようになり、皮膚表面の色が明るい白色から灰色になる。したがって、皮膚によりやさしいさらに有効な方法が望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
したがって、皮膚の保湿のため、および／または皮膚の角質層の角質除去のために好適な治療が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
魚の孵化液中で見いだされるあるポリペプチドおよびペプチド（例えばポリペプチドの部分）は、驚くべきことに、著しく有効な保湿剤およびエクスフォリアンであることが判明した。卵生脊椎生物、例えば魚、両生類、鳥類および爬虫類からの胚の孵化は、典型的には孵化酵素として知られる様々な酵素によって促進され、これらは卵殻のタンパク質様部分を部分的または完全に分解することができる。全ての脊椎動物の卵母細胞は、卵黄エンベロープ、卵殻または絨毛膜（本明細書中では交換可能に使用される）として知られる特徴的な細胞外エンベロープを有し、これらは、様々なポリペプチドの架橋によって構成される。様々な特異性を有するプロテアーゼは、絨毛膜に作用して、卵殻を柔軟化、浸食および／または破壊（すなわち分解）させて、胚の放出を促進する。したがって、孵化過程の間に卵から放出される流体および／または胚がその中で孵化する流体（すなわち孵化液）は、多数のポリペプチドおよびポリペプチドの部分、すなわち分解生成物を含む。
【００２４】
本発明者らは、魚の孵化酵素、および卵殻の分解から生じる卵殻ポリペプチド（特に、前記卵殻ポリペプチドの一部または断片）の特定の組成物が、皮膚の保湿および／または皮膚の角質層の角質除去のために特に好適であることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製した孵化液組成物の１％を含むゲル（ゲルＢ）で４週間、１日２回治療した後、未治療の皮膚と比較して毛穴直径における（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
【図２】図２は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製した孵化液組成物の１％を含むゲル（ゲルＢ）で４週間、１日２回治療した後、未治療の皮膚と比較して、炎症性被布病変における（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
【図３】図３は、非炎症性被布病変の数の（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
【図４】図４は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化液組成物の３％およびグリコール酸の３％溶液を含むゲル（活性ゲル）の剥離効果を比較する棒グラフ（Ａ）を示す。低いスコアは鱗状の特性が少ないこと、すなわち角質除去の増加を意味する。（Ｂ）は、ｔ０および５分後に活性ゲルで治療した試験部位の写真を示す。
【図５】図５は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化液組成物の３％を含むゲル（ゲルＢ）で３週間、１日２回治療した後に、未治療の皮膚と比較して、皮膚水和における（Ａ）平均増加および（Ｂ）相対的増加を表す棒グラフを示す。
【図６】図６は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化組成物の３％を含むゲルで３週間、１日２回治療した後に、未治療の皮膚と比較して、湿疹または挫創の重篤度の（Ａ）平均視覚的評価および（Ｂ）相対的視覚評価を表す棒グラフを示す。
【図７】図７は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化組成物の３％を含むゲルで３週間、１日２回治療した後に、未治療の皮膚と比較して、炎症および非炎症皮膚病変の数における（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
胚の孵化は、少なくとも部分的に、いわゆる孵化酵素によって達成または促進される。例えば、魚のコリオリシンは、典型的には、孵化液で見いだされるメタロプロテアーゼである。コリオリシンは概して２つの形態、すなわち、高絨毛溶解酵素（ｃｈｏｒｉｏｌｙｔｉｃ  ｅｎｚｙｍｅ）（コリオリシンＨ、ＨＣＥ）および低絨毛溶解酵素（コリオリシンＬ、ＬＣＥ）で見いだされ、これらは一部の構造および触媒特性で類似し、アスタシン科に属するが、著しく異なる基質選択を有する。他の触媒活性を有する孵化酵素、例えばセリンプロテアーゼも特定され、特徴づけられている。
【００２７】
理論によって拘束されることを望まないが、実施例は、孵化酵素の組み合わせ、メタロプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼの両方、ならびにサケ科孵化液由来の卵殻タンパク質の一部を含む組成物が、皮膚の保湿が可能である、および／または皮膚の角質層の角質除去用であることを示す。
【００２８】
他の魚由来の孵化液は、サケ科由来の孵化液中で見いだされるポリペプチドと機能的に等価なポリペプチドを含む。
【００２９】
本明細書中で定義される組成物における孵化酵素およびポリペプチド分解産物（例えば卵殻ポリペプチドおよび前記ポリペプチドの部分）の組み合わせは、皮膚の真皮および表皮中に存在する異なる種類のタンパク質を相互作用し得ると考えられる。ポリペプチドおよびポリペプチドの部分の独自の組み合わせは、相乗作用する可能性があり、これらの相互作用は、様々な皮膚障害または状態の治療における組成物の効果に寄与し得ると考えられる。
【００３０】
したがって、最も広義には、本発明は、本明細書中で後述する方法によって魚の孵化液から誘導できる組成物を提供するとみなすことができる。前記組成物は、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼおよび１以上の卵殻ポリペプチドおよび／または前記ポリペプチドの部分を含む。特に、組成物は、本明細書中で後述するような皮膚の保湿および／または角質除去による、様々な皮膚の異常、障害または状態の治療または治療法で使用するためのものである。換言すれば、本明細書中で記載される組成物は、乾燥肌、角質層が望ましいよりも厚くなっている皮膚、例えば過角化症の皮膚、または表皮において望ましくない色素沈着、例えば肝斑，加齢による染み、日焼けによるしみもしくは褐斑がある皮膚などの状態または障害の治療あるいは治療法において使用するためのものである。特に好ましい態様において、本発明は、正常であるが、乾燥肌もしくは肥厚した皮膚（例えば、たこ、魚の目もしくは角化性いぼ）の美容的処置または肝斑などの色素異常症の美容的処置または処置法で使用するための、本明細書中で後述するように孵化液から誘導できる組成物を提供するとみなすことができる。別の好ましい態様において、本発明は、疼痛の原因となる挫創、湿疹、乾癬またはいぼなどの皮膚障害または状態の治療的処置または治療的処置法で使用するための、本明細書中で記載するような孵化液から誘導できる組成物を提供することであるとみなすことができる。上述の組成物は、本明細書中では、「孵化液抽出物」とも呼ぶ。孵化酵素および卵殻ポリペプチドおよびペプチドに加えて、前記抽出物は天然の非タンパク質性物質を含んでもよい。
【００３１】
以下の開示から、魚の孵化液から誘導することができる組成物は、本明細書中で記載するように、１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤を含む医薬または化粧品組成物として提供することができることは明らかであろう。
【００３２】
したがって、１つの態様において、本発明は、魚の孵化液から本明細書中で記載されるような医薬または化粧品組成物を調製する方法を提供し、この方法は、少なくとも：
ａ）魚卵を最小体積（例えば卵の体積以下に等しい）の水中に懸濁させるステップ；
ｂ）前記卵の同期した急速な孵化を、好ましくは孵化が８０％を超える胚について６時間以内で完了するように誘導するステップ；
ｃ）場合によって、孵化した卵をろ過して、孵化液を得るステップ；および
ｄ）ｂ）またはｃ）の孵化液をろ過して、組成物を得るステップを含み、ここで、孵化液をろ過するステップは、少なくとも：
（ｉ）少なくとも５μｍ、好ましくは５〜１５μｍの孔サイズ、そして特に好ましくは７μｍの孔サイズを有するフィルターを使用して孵化液をろ過し、そしてろ液を集めるステップ；
（ｉｉ）場合によって、ステップ（ｉ）からの濾液を、０．３０〜０．６０μｍの孔サイズ、好ましくは０．３５〜０．５５μｍ、特に好ましくは、０．４０〜０．５０μｍ、最も好ましくは、０．４５μｍの孔サイズを有するフィルターを用いて濾過し、そしてろ液を集めるステップ；
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）または（ｉｉ）からの濾液を：
（１）ろ液をＤＥＡＥ（ジエチルアミノエチル）カラムなどのイオン交換カラム上にロードし；
（２）カラムを好適な緩衝液、例えば２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．５を含むｐＨ７〜９の緩衝洗浄液で洗浄し；
（３）第１溶出緩衝液または溶媒（例えばステップ（４）の第２溶出緩衝液よりも低いイオン強度を有する）、例えば５０ｍＭのＮａＣｌなど、塩を例えば５０〜１００ｍＭの濃度でさらに含む緩衝洗浄液を用いてカラム（特にロイコレクチンポリペプチド）からポリペプチドを溶出させ；
（４）残存するポリペプチドをカラムから、第２溶出緩衝液または溶媒（例えばステップ（３）の第１溶出緩衝液よりも高いイオン強度を有する）、例えば１ＭのＮａＣｌなど、例えば５００ｍＭ〜２Ｍの濃度で第１溶出緩衝液よりも高い塩濃度を含む緩衝洗浄液を用いて溶出させ；
（５）ステップ（４）からの溶出液を集める
ことを含むイオン交換クロマトグラフィーにかけるステップ
を含む；
ｅ）ステップ（５）からの溶出液中の水を薬剤的に（または美容上）許容される緩衝液と交換するステップ；
ｆ）ステップ（ｅ）から得られた溶液を、０．１５〜０．３０μｍの孔サイズ、好ましくは０．２２μｍの孔サイズを有するフィルターを用いてろ過し、そしてろ液を集め；そして
ｇ）ステップ（ｆ）からの濾液から前記医薬または化粧品組成物を調製するステップ
を含む。
【００３３】
本明細書中で記載するように、「孵化液」は、孵化の過程の間に卵から放出される流体であり、粗形態、希釈形態または濾過形態であり得る。粗孵化液は、非希釈、非処理液を指す。希釈孵化液とは、孵化の間または孵化後に、例えば水中で孵化が起こる場合に、他の流体と混合されていてもよい孵化液を指す。
【００３４】
本発明はまた、本明細書中に記載される方法によって得られるかまたは得ることができる医薬または化粧品組成物も提供する。
【００３５】
ろ液をイオン交換クロマトグラフィーにかけるステップは、本発明の組成物中のポリペプチド（以下で定義するようなその部分を包含する）が、精製前（すなわち、イオン交換クロマトグラフィー前）の孵化液抽出物中に存在する他のポリペプチドのうちの少なくとも１つと比較して多く含まれているろ液を生じる任意の好適な方法を用いて実施することができる。例えば、イオン交換クロマトグラフィーの結果、孵化液中の孵化酵素および卵殻ポリペプチが、孵化液中に存在する少なくとも１つの他のポリペプチド、好ましくはこの精製ステップ前の孵化液抽出物中に存在するすべての他のポリペプチドに対して少なくとも５％富化されている最終溶出液（すなわち、第２の溶出緩衝液を用いて得られる溶出液）を得ることができる。他のポリペプチドは、本明細書中で定義される本発明の方法で使用するための組成物中のポリペプチド（すなわち、孵化酵素または卵殻ポリペプチドまたはその部分）の構造および／または機能定義内に含まれないポリペプチドとして定義することができる。本発明の医薬または化粧品組成物（すなわち、本明細書中で記載される方法によって得られるかまたは得ることができる）は、以下でさらに定義されるロイコレクチンポリペプチドを含まない。好ましくは、ポリペプチドはこのステップにより、少なくとも１０、２０、３０、４０または５０％富化される。特に好ましくは、精製前の孵化液抽出物中に存在する少なくとも１つの他のポリペプチド、たとえばロイコレクチンに対して５０超または６０％超の純度、例えば７０、８０または９０％超、好ましくは９５超または９９％超の程度の純度までポリペプチドを精製する。したがって、溶出液は、イオン交換クロマトグラフィーの前の孵化液中に存在するごく微量の、例えば０．１％、０．０１％、０．００１％、０．０００１％または０．００００１％ｗ／ｗ未満の他のポリペプチド、例えばロイコレクチンを含んでもよい。
【００３６】
イオン交換クロマトグラフィーは当該技術分野で周知であり、好適なイオン交換カラムは市販されている。例示的実施形態において、イオン交換カラムはＤＥＡＥ（ジエチルアミノエチル）カラム、すなわち、ＤＥＡＥとカップリングした、例えばセルロース、シリカ、セファロースなどの不活性マトリックスのカラムである。しかしながら、他のイオン交換カラムが上述の方法での使用に好適な場合がある。
【００３７】
イオン交換カラム上に濾過した孵化液をロードするステップは、本発明の組成物中のポリペプチドと結合できるように準備または活性化されたイオン交換カラムに孵化液をかけることを含む。イオン交換カラムの準備または活性化は、典型的にはカラムを、例えば以下で定義するような洗浄緩衝液などの緩衝液で洗浄することを含む。この予洗ステップの結果、ポリペプチドがカラムに結合するのを可能にするｐＨなどの最適条件下にあるイオン交換カラムを得る。したがって、ローディングステップは、本発明の組成物のポリペプチドをイオン交換カラムに結合させるステップとしてみなすことができる。
【００３８】
イオン交換カラム上に濾過した孵化液をロードするステップの後、そして標準的プロトコルにしたがって、カラムを好適な緩衝液で洗浄して、カラムに結合しない孵化液中に存在する望ましくない成分を除去することができる。洗浄は、ある体積の洗浄緩衝液をカラムに適用することを含み、典型的にはカラムに適用される洗浄緩衝液の体積は、少なくともイオン交換カラムの体積と等しく、そしてさらに多くてもよく、例えばカラムの体積の少なくとも１．５、２、３、４または５倍であってもよい。いくつかの実施形態においては、洗浄ステップは、２、３、４、５回またはそれ以上繰り返してもよい。任意の好適な洗浄緩衝液を本発明の方法で利用してもよい。好適な洗浄緩衝液は、関心対象のポリペプチドとイオン交換カラムとの間の相互作用を著しく妨害しないもの、例えば、本発明の組成物のポリペプチドの１０％未満、例えば５、４、３、２もしくは１％未満が各洗浄ステップによりイオン交換カラムから除去されるものである。好ましい実施形態において、洗浄緩衝液は、１０〜１００ｍＭ、好ましくは１０〜５０ｍＭ、例えば２０〜３０ｍＭの範囲内であり、ｐＨが６〜１０、好ましくは７〜９の範囲内、例えば８．５であるＴｒｉｓ−ＨＣｌの溶液である。洗浄ステップからの流出物（ｆｌｏｗｔｈｒｏｕｇｈ）を、例えばさらなる洗浄ステップが必要であるか否かを判定する（例えば、精製前の孵化液中に存在する望ましくない構成要素であるポリペプチド、多糖、塩などの存在について試験する）ために集めてもよい、および／または廃棄してもよい。
【００３９】
ロイコレクチンポリペプチドをイオン交換カラムから溶出するステップ（「第１」溶出ステップ）は任意の好適な手段によって実施することができ、典型的には、溶媒または溶液をカラムにかけて、少なくともロイコレクチンポリペプチドおよびイオン交換カラム、すなわち第１溶出溶液（例えば緩衝液）または溶媒間の相互作用を妨害することを含む。しかしながら、第１溶出溶媒または溶液は、関心対象のポリペプチドおよびイオン交換カラム間の相互作用を妨害するために充分でない、例えば、本発明の組成物のポリペプチドの合計の１０％未満、例えば５、４、３、２または１％未満が、ロイコレクチンポリペプチドを溶出させる溶出ステップによってイオン交換カラムから除去される。典型的には、カラムにかけられる第１溶出緩衝液または溶媒の体積は、イオン交換カラムの体積に少なくとも等しく、そしてさらに多くてもよく、カラムの体積の、例えば少なくとも１．５、２、３、４または５倍であってもよい。いくつかの実施形態においては、「第１」溶出ステップ（すなわち、第１溶出溶液または溶媒を使用）を、例えば２、３、４、５回またはそれ以上繰り返してもよい。ロイコレクチンポリペプチドを含む溶出液（「第１」溶出ステップからの流出物）を各溶出ステップから集めてもよい。代替的または付加的に、ロイコレクチンポリペプチドを含む溶出液を捨てる。好適な第１溶出緩衝液または溶媒は、ロイコレクチンポリペプチドおよびイオン交換カラム間の相互作用を妨害するものであり、例えば、カラムに結合したロイコレクチンポリペプチドの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５、８０、８５、９０、９５または９９％がカラムから溶出ステップによって溶出される。
【００４０】
好ましい実施形態において、第１溶出緩衝液は、ロイコレクチンポリペプチドおよびイオン交換カラム、例えば塩間の相互作用を妨害して、低イオン強度（第２溶出緩衝液に対して）を提供できる物質も含む洗浄緩衝液と同じである。塩は、１０〜５００ｍＭ、好ましくは２０〜４００ｍＭ、３０〜３００ｍＭ、４０〜２００ｍＭまたは５０〜１００ｍＭの範囲内で存在し得、例えば５０ｍＭのＮａＣｌである。従って、いくつかの実施形態においては、溶出緩衝液は、１０〜１００ｍＭ、好ましくは１０〜５０ｍＭ、例えば２０〜３０ｍＭの範囲内のＴｒｉｓ−ＨＣｌの溶液であり、６〜１０、好ましくは７〜９の範囲内、例えば８．５のｐＨを有し、さらに上記範囲内の塩、例えばＮａＣｌ、ＫＣｌなども含む溶液である。
【００４１】
本発明の組成物のポリペプチドをイオン交換カラムから溶出するステップ（「第２」または「最終」溶出ステップ）は、任意の好適な手段によって実施することができ、そして典型的には、溶媒または溶液をカラムにかけて、心対象のポリペプチドおよびイオン交換カラム間の相互作用を妨害することを含む。典型的には、カラムにかけられた溶出緩衝液または溶媒の体積は、イオン交換カラムの体積と少なくとも等しく、さらに多くてもよく、例えばカラムの体積の少なくとも１．５、２、３、４または５倍であってよい。いくつかの実施形態においては、「第２」溶出ステップ（すなわち、第２溶出溶液または溶媒を使用するステップ）を、例えば２、３、４、５回またはそれ以上繰り返してもよい。溶出液を各溶出ステップから集めてもよく、そして溶出液中の水を交換するステップの前に１以上の溶出液を組み合わせてもよい。好適な溶出緩衝液または溶媒は、本発明の組成物のポリペプチドおよびイオン交換カラム間の相互作用を妨害するものであり、例えば、カラムに結合した本発明の組成物のポリペプチドの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５、８０、８５、９０、９５または９９％がカラムから各「第２」溶出ステップによって溶出される。
【００４２】
好ましい実施形態において、第２溶出緩衝液は、関心対象のポリペプチドとイオン交換カラム、例えば塩との間の相互作用を妨害して、第１溶出緩衝液よりも高いイオン強度を提供することができる物質を含む洗浄緩衝液と同じである。塩は、５００〜２０００ｍＭ、好ましくは６００〜１８００ｍＭ、７００〜１７００ｍＭ、８００〜１５００ｍＭまたは９００〜１２００ｍＭの範囲で存在してもよく、例えば約１０００ｍＭのＮａＣｌであり得る。したがって、いくつかの実施形態においては、溶出緩衝液は、１０〜１００ｍＭ、好ましくは１０〜５０ｍＭ、例えば２０〜３０ｍＭの範囲のＴｒｉｓ−ＨＣｌの溶液であって、ｐＨは６〜１０、好ましくは７〜９の範囲内、例えば８．５であり、さらに前記範囲内の塩、例えばＮａＣｌ、ＫＣｌなども含む溶液である。
【００４３】
ろ液中の水を交換するステップは、当該技術分野で公知の任意の好適な方法、例えばダイアフィルトレーションまたは透析を用いて実施することができる。特に好ましい実施形態において、このステップは、１２ｋＤａ未満、好ましくは１０ｋＤａ以下、例えば９、８、７、６、５、４、３ｋＤａ以下の排除サイズのフィルターを使用するダイアフィルトレーションを用いて実施される。
【００４４】
ダイアフィルトレーションは、限外ろ過膜を、例えば塩または他の不必要もしくは望ましくない微小溶質（ｍｉｃｒｏ  ｓｏｌｕｔｅ）溶液から除去するため、または溶液の溶媒、例えば緩衝液を交換する方法として使用する。より大きな分子は残余分（フィルターを通過しない物質）中に保持しつつ、小分子は溶液から分離される。微小溶質および溶媒、例えば水は、概して膜を通して容易に洗浄される。典型的には、約３体積のダイアフィルトレーション溶媒（例えばリン酸塩緩衝生理食塩水）は微小溶質の９５％を除去する。したがって、上記ろ液、すなわちステップ（５）からの溶出液（ｅｌｕｌａｔｅ）をまずダイアフィルトレーションによって処理し、この結果、溶液（孵化液の可溶性不純物／不必要なフラクションを含む）の一部は膜を通過するので、残余分が濃縮される。残余分を次いで薬剤的に許容される緩衝液、例えば０．５ｍＭのリン酸ナトリウムおよび１ｍＭの塩化ナトリウム、リン酸塩緩衝生理食塩水などで希釈する。希釈された残余分を必要ならば繰り返しダイアフィルトレーションに供してもよい。典型的には、ステップ（ｆ）の前に、ステップ（ｆ）からの濾液が２５０００〜４５０００ｍＵ／Ｌ、好ましくは２５０００〜３５０００ｍＵ／Ｌ、そしてもっとも好ましくは約３００００ｍＵ／Ｌの酵素活性を有するように、残余分を希釈する。ろ液の酵素活性は、ろ液がＸａ因子発色性基質（ＣＨ3ＯＣＯ−Ｄ−ＣＨＡ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ−ＡｃＯＨ、Ｓｉｇｍａ  ａｌｄｒｉｃｈ製品番号：Ｆ３３０１−２５ＭＧ）を切断する能力によって測定することができる。ダイアフィルトレーションのステップの前に、孵化液は、９０〜１，３００，０００ｍＵ／Ｌの範囲の酵素活性を含み得る。１単位（１Ｕ）は、１分あたり１μｍｏｌの基質の変換を触媒するために必要な酵素の量として定義することができる。
【００４５】
Ｘａ因子発色性基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、孵化液中に存在するセリンプロテアーゼ酵素によって切断して、４０５ｎｍの波長で分光硬度分析を使用して都合よく測定することができる黄色生成物を得る。典型的なアッセイは、前記方法のステップ（ｄ）または（ｅ）から得ることができる１００μｌの孵化液を、１０μｌのＸａ因子発色性基質（ｍｉｌｌｉ−ｑまたは蒸留水中１０ｍｇ／ｍｌ）、７０μｌの０．２Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ８．５および５２０μｌのｄＨ2Ｏを含む６００μｌの基質溶液に添加することを含む。好都合には、吸光度における変化は、５〜２０分（または低酵素活性を有するサンプルについては１時間まで）、典型的には、１０分間測定してもよい。結果に適切な因数、例えば１０（１０分アッセイについて）をかけて、サンプル１ｍｌあたりの酵素活性を得る。他の適切かつ等価な基質を使用して、孵化液の活性を決定することができる。
【００４６】
上述のように、いくつかの実施形態においては、卵孵化のステップを同期させて、精製のために、得られる孵化液の量、特に、孵化液中の所望のポリペプチドまたはその部分の量を最大にすることが有利である可能性がある。同期させた孵化は、当該技術分野で公知の任意の好適な方法によって達成することができる。例えば、ある卵は、フォトマニピュレーションを使用して、例えば卵を光（孵化を抑制する）から光のない状態へ移して、同期させることができる。卵の温度、例えばその中で卵が孵化する溶液の温度の操作、孵化環境の脱酸素化、例えばその中で卵が孵化する溶液の脱酸素化（Ｏｐｐｅｎ−Ｂｅｒｎｔｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９０，  Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，  ８６，  ｐｐ．  ４１７−４３０）、孵化環境中の二酸化炭素の量を増加させること、および電気を用いた卵の刺激も、同期した孵化を引き起こすために使用できる。いくつかの実施形態において、同期した孵化は、胚発生および孵化に影響を及ぼす、すなわち刺激することができるフェロモン、例えばペプチドフェロモンを用いて達しすることができる。上述のように、卵を卵の体積以下であってもよい最小体積の水中に懸濁させてもよく、例えば卵１ｍｌにつき１、０．７５、０．５、０．２５ｍｌ、例えば０．５〜１ｍｌの懸濁液を使用してもよい。いくつかの実施形態においては、その後の精製ステップを促進するため、例えば孵化液の粘度を減少させるために、孵化液を希釈することが有利である可能性がある。したがって、方法は、孵化液を希釈するさらなるステップを含んでもよい。好ましくは、ろ液を少なくとも０．１、０．２、０．５、０．７５、１．０、１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、５０、１００、１０００、５０００または１００００倍希釈してもよい。
【００４７】
好ましい実施形態において、前記卵の同期化した急速な孵化とは、孵化が６時間以内で８０％を超える胚について完了するようなものである。特に好ましい実施形態において、孵化は５、４、３または２時間以内、例えば０．５〜６時間、１〜５時間、１．５〜４時間、２〜３時間、例えば１〜２時間以内で完了する。さらに、いくつかの実施形態においては、孵化は上記期間以内で、８５％、９０％、または９５％を超える胚、例えば９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％を超える胚について完了する。
【００４８】
上述の医薬または化粧品組成物の調製法の結果、ソース材料または単離手順で使用される汚染構成要素、例えば粗孵化液中に含まれるポリペプチドまたはポリペプチドの部分以外の構成要素を実質的に含まない富化調製物が得られる。他の汚染構成要素には、ロイコレクチンポリペプチドが含まれる。好ましい実施形態において、組成物を３０、４０、５０または６０％、例えば７０、８０もしくは９０％を超える純度まで富化させてもよく、出発孵化液と比較した関心対象のポリペプチドおよびポリペプチドの部分のｗ／ｗ（乾燥重量）として評価する場合の純度、すなわち、９０％純度は、調製方法の過程での出発材料（汚染構成要素）が９０％なくなることを意味する。しかしながら、さらに低い純度、例えば出発材料の４０、５０、６０、７０、８０または９０％超を保持する組成物を使用してもよい。しかしながら、さらに低い純度の組成物でも、ロイコレクチンペプチドを含まない、すなわち０．０００５％［ｗ／ｗ］未満、好ましくは０．０００１、０．００００５または０．００００１％［ｗ／ｗ］未満である。
【００４９】
ステップ（ｆ）からのろ液はそれ自体、医薬または化粧品組成物を形成することができるが、場合によって、上記方法から得られるかまたは得ることができる生成物（ステップ（ｆ）のろ液）をステップ（ｇ）で適切な濃度に希釈（または濃縮）して、医薬または化粧品組成物を製造することができる、および／または、方法においてその使用前に、本発明を使用する。したがって、方法は、組成物を希釈（または濃縮）するさらなるステップを含んでもよい。好ましくは、ろ液を、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、５０、１００、１０００、５０００または１００００倍希釈（または濃縮）してもよい。特に好ましくは、最終組成物は、０．５〜１０％、例えば０．５〜５％、好ましくは、０．５〜３％（例えば１または３％）のステップ（ｆ）のろ液を含む。特に好ましい実施形態において、上記方法のステップ（ｅ）からの溶液を希釈または濃縮して、上記方法によって測定して１００００〜１０００００ｍＵ／Ｌの酵素活性を有する溶液を得る。好ましくは、溶液、したがってステップ（ｆ）からのろ液は、２００００〜９００００、２５０００〜８００００、２５０００〜６００００、２５０００〜５００００、２５０００〜４５０００または２５０００〜３５０００ｍＵ／Ｌの活性を含む。最も好ましくは、溶液は約３００００ｍＵ／Ｌの活性を含む。
【００５０】
場合によって、１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤を前記方法から得られるかまたは得ることができる組成物に添加することができる。したがって、ステップ（ｆ）からのろ液から医薬または化粧品組成物を調製するステップ（ｇ）は、１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤を組成物に添加するか、または組成物と１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤とを組み合わせるステップを含む。代替または追加の調製法ステップは、溶媒、例えばｐＨ、イオン濃度などを変更または修飾することを含む。
【００５１】
他の薬剤的に許容される構成要素または成分を、前記方法から、例えばステップ（ｇ）の間に得られるかまたは得ることができる組成物に添加することができる。１以上の他の構成要素は、活性構成要素、すなわち皮膚に対して影響を及ぼす構成要素、好ましくは、皮膚の状態または障害、例えば本明細書中で記載される状態または障害の治療においても有用な構成要素であり得る。したがって、代替的または付加的に、方法は、ステップ（ｇ）において、１以上の薬剤的に許容される活性構成要素を組成物に添加するか、または１以上の薬剤的に許容される活性構成要素と組み合わせるさらなるステップを含んでもよい。薬剤的に許容される活性構成要素は、以下でさらに詳細に記載されるような、ミネラル、ビタミン、酵素、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、抗酸化剤、多糖、サンスクリーンフィルターとして好適な物質、化学的エクスフォリアン、抽出物およびそれらの混合物を含み得る。
【００５２】
上記方法から得られるかまたは得ることができる医薬または化粧品組成物は、本明細書中のどこかほかの場所で記載するような、本発明の方法での使用に好適である。
【００５３】
本発明の医薬または化粧品組成物は、様々な皮膚状態または障害の治療で特に有用な孵化酵素および卵殻ポリペプチドまたはポリペプチドの一部の組み合わせを含む。
【００５４】
特に、本発明の組成物は、メタロプロテアーゼ活性を有する孵化酵素、セリンプロテアーゼ活性を有する孵化酵素および１以上の卵殻ポリペプチドまたはその一部を含み、好ましくは、前記部分は、孵化の間に孵化酵素によって重合および架橋した卵殻または絨毛膜のタンパク質分解的切断によって生じる部分と構造的に等しい。ポリペプチドは、本明細書中で、関心対象のポリペプチドと呼ばれる。
【００５５】
本発明の組成物中に存在し得る例示的メタロプロテアーゼの配列を配列番号１で提示する。
【００５６】
本発明の組成物中に存在し得る例示的セリンプロテアーゼは、以下の特性を有する２８ｋＤａ付近の分子量を有するポリペプチドとして定義することができる：
ａ）クロモザイムＸを切断する；
ｂ）ベンズアミジンにより阻害される；
ｃ）アルギニンとのペプチド結合を切断する；
ｄ）８Ｍの尿素、塩のモル濃度、蒸留水および有機溶媒、好ましくはジオキサンまたはプロパノールの存在下で活性のままである；そして
ｅ）室温で５０日間、溶液中で酵素活性を保持する。好ましくは、セリンプロテアーゼは：
ａ）魚、例えばサケの卵を最小体積の水中に懸濁させるステップ；
ｂ）同期した急速な孵化の前記卵を誘発するステップ；
ｃ）孵化した卵を濾過して、孵化液を得るステップ；
ｄ）固体尿素を前記孵化液に添加して、卵殻フラグメントを解離させ、前記流体を低速遠心分離に付すステップ；
ｅ）遠心分離上清をゲルろ過に付すことによって前記セリンプロテアーゼをさらに精製するステップ；および
ｆ）ベンズアミジン修飾Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６Ｂ（登録商標）カラム上でのアフィニティークロマトグラフィーによって前記セリンプロテアーゼをさらに精製するステップであって、濃縮塩洗浄を実施し、続いて濃縮塩溶液中、ジオキサンで溶出することによって前記アフィニティークロマトグラフィーを実施して、クロマトグラフィーマトリックスまたは巨大分子構造に結合したセリンプロテアーゼ活性を有するポリペプチドを抽出するステップ
を含む方法によって精製形態で得ることができる。
【００５７】
卵殻ポリペプチドは、架橋して絨毛膜を形成する構造タンパク質である。卵殻ポリペプチドおよびその一部は、卵殻の分解により孵化液中に存在する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物中で見いだされる卵殻ポリペプチドは、好ましくは、酸性または非常に酸性であり、例えば３〜５．５、好ましくは３．５〜５．２のｐＩを有する。
【００５８】
卵殻ポリペプチドは、孵化液中で様々な形態で、特に完全長ポリペプチドの一部またはフラグメントの形態で出現する。完全長卵殻ポリペプチドは孵化液中に存在する部分を含むので、完全長卵殻ポリペプチドおよびその一部はどちらも、本発明で有用であると考えられる。さらに、卵殻ポリペプチドおよびそれらの一部の様々なイソ型が孵化液中で特定されている。
【００５９】
我々は、本発明の組成物中に存在し得る３つの卵殻ポリペプチド例を本明細書中で開示する。孵化液中で見いだされるある卵殻ポリペプチドの配列は、質量分析によって決定され、配列番号２〜４で提示される。これらの配列は、それぞれ配列番号８、６および７で提示される完全長卵殻ポリペプチド由来のポリペプチドの一部またはフラグメントを表す。したがって、配列番号２〜４は本明細書中で定義されるような卵殻ポリペプチドの一部として定義することができる。
【００６０】
上述のように、各卵殻ポリペプチドまたはその一部はさまざまなイソ型で存在し得る。
【００６１】
したがって、上述の方法によって得られるかまたは得ることができる医薬または化粧品組成物の構成要素は、次のように定義することができる：
（ｉ）配列番号１に記載するアミノ酸配列または前記配列と少なくとも７０％同一である配列を含むメタロプロテアーゼ；
（ｉｉ）上述の方法により得ることができるセリンプロテアーゼ；および
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号２に記載するアミノ酸配列もしくは前記配列と少なくとも７０％同一である配列を含む卵殻ポリペプチド；
（ｂ）配列番号３に記載するアミノ酸配列もしくは前記配列と少なくとも７０％同一である配列を含む卵殻ポリペプチド；および
（ｃ）配列番号４に記載するアミノ酸配列もしくは前記配列と少なくとも７０％同一である配列を含む卵殻ポリペプチド
のいずれか１以上から選択される卵殻ポリペプチド；または
（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）で定義されるポリペプチドのいずれかの部分であって、本明細書中で後述するような長さを有する部分；
ならびに１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤。（前記少なくとも７０％配列同一性は、好ましくは、少なくとも８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９％の同一性である。）
【００６２】
上述のように、いくつかの実施形態においては、配列番号２〜４で提示されるものよりも長い配列が組成物中に存在していてもよい。したがって、前記リスト中、配列番号２〜４はそれぞれ配列番号５〜７と置換することができ、配列番号２は別法として配列番号８と置換することができる。
【００６３】
上述のように、本明細書中で記載される医薬または化粧品組成物は、機能的ロイコレクチンポリペプチドまたはその機能的部分を含まない。ロイコレクチンポリペプチドは、配列番号９〜１２のいずれか１つで記載されるアミノ酸配列もしくは前記配列と少なくも５０％同一である配列、または前記配列のいずれかの一部分を含むポリペプチドとして定義することができる。
【００６４】
機能的ロイコレクチンポリペプチドは、亜鉛依存性エンドペプチダーゼであるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の皮膚線維芽細胞からの放出を阻害できるポリペプチドである。したがって、前記定義のロイコレクチンポリペプチドの構造定義に含まれるポリペプチドは、インビトロ細胞培養におけるＭＭＰの放出を阻害するポリペプチドの能力によって定義される、機能的ロイコレクチン、例えば配列番号９〜１２のいずれか１つの活性の５０、４０、３０、２０、１０、または５％未満を有する場合、非機能的ロイコレクチンポリペプチドとみなすことができる。別の方法で表現すると、機能的ロイコレクチンポリペプチドは、インビトロ細胞培養においてＭＭＰの放出を阻害するポリペプチドの能力によって定義される、機能的ロイコレクチン、例えば配列番号９〜１２のいずれか１つの活性の少なくとも５０、７０、または９０％を有しなければならない。
【００６５】
本明細書中で定義される組成物中の本明細書中で定義されるポリペプチドまたはその一部の合計濃度は様々であり得る。しかしながら、好ましい実施形態において、ポリペプチドまたはポリペプチド群の各々の種類の割合は、全ての組成物について一貫している、すなわち、合計ポリペプチド濃度に無関係である。特に好ましい実施形態において、全組成物中の全ポリペプチドのパーセンテージで表した、組成物中の本明細書中で前記定義のポリペプチドの割合は、次のように定義することができる：
（ｉ）約０．０５〜約０．２０％［ｗ／ｗ］のメタロプロテアーゼ、好ましくは約０．１００％〜約０．１２５％、例えば約０．１０８％〜約０．１１２％のメタロプロテアーゼ；
（ｉｉ）約０．１５％〜約０．４０％［ｗ／ｗ］のセリンプロテアーゼ、好ましくは約０．２５５％〜約０．３１０％、例えば約０．２７５％〜約０．２９０％のセリンプロテアーゼ；および
（ｉｉｉ）約９９．４０％〜約９９．８０％［ｗ／ｗ］の全卵殻ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの一部、好ましくは約９９．５７５％〜約９９．６４５％、例えば約９９．５９８％〜約９９．６１７％の全卵殻ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの一部。
【００６６】
本明細書中で用いられる場合、前記全卵殻ポリペプチドまたはその一部は、アセトンの４倍の体積を有する本明細書中で前記定義の卵殻ポリペプチドおよび卵殻と関連するポリペプチドの沈殿によって得ることができる他の強酸性卵殻タンパク質の両方を含み、３〜５．５のｐＩを有する。
【００６７】
したがって、本発明の組成物中のいずれか１つの卵殻ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの一部の割合は、組成物中の全ポリペプチドの約０〜９９．８０％［ｗ／ｗ］、例えば１〜９５％、２〜９０％、３〜８５％、４〜８０％、５〜７５％、１０〜７０％、１５〜６５％、２０〜５５％、２５〜５０％または３０〜４０％であり得、ここで、組成物中の卵殻ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの一部の全割合は、組成物中の全ポリペプチドの９９．８０％を超えない。好ましくは、組成物中の卵殻ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの一部の全割合は、組成物中の全ポリペプチドの９９．６１７％を超えない。
【００６８】
本明細書中の医薬組成物への言及は、化粧品組成を包含すると解釈することができる。
【００６９】
「ポリペプチド」は、本明細書中で用いられる場合、好ましくは、５０、１００、１５０、２００もしくは２５０を超える残基および／または５００、４００、３００、２００もしくは１００以下の残基またはそれから選択される範囲の残基を有する分子である。本明細書中で用いられる場合、「部分」は、好ましくは、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０またはそれ以上の、それが由来する配列のアミノ酸を含む。前記部分は、配列の中心またはＮ末端もしくはＣ末端部分から得ることができる。好ましくは、前記部分は、Ｎ末端から、例えばポリペプチドの最初の５０、１００または１５０残基から得られる。あるいは、Ｃ末端から、例えばポリペプチドの最後の５０、１００または１５０残基から得られる部分も好ましい。
【００７０】
好ましくは、本明細書中で定義されるポリペプチド配列は、比較される配列（配列番号１〜１２）と少なくとも５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一である。
【００７１】
配列同一性は、可変パムファクター（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｐａｍｆａｃｔｏｒ）、および１２．０に設定されたギャップ生成ペナルティーおよび４．０に設定されたギャップ伸長ペナルティー、並びに２つのアミノ酸のウインドウを備えたＦＡＳＴＡ  ｐｅｐ−ｃｍｐを用いるＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴタンパク質配列データバンクを使用することによって決定することができる。好ましくは、前記比較は、配列の完全長にわたっておこなわれるが、例えば２００、１００または５０未満の連続アミノ酸など、さらに小さなウインドウについておこなってもよい。
【００７２】
好ましくは、そのような配列同一性関連ポリペプチドは上述の配列番号で記載されるポリペプチドと機能的に等価である。そのような機能的に等価なポリペプチドは、後述するような誘導体の形態をとってもよい。
【００７３】
さらに、「部分」は、本明細書中で記載される場合、機能的に等価であってもよい。好ましくは、これらの部分は、本明細書中で記載される（匹敵する領域に対する）同一性条件を満たす。
【００７４】
本明細書中で記載するように、「機能的等価性」を達成するためには、ポリペプチドは、親分子（すなわち、配列同一性によって関連づけられる分子）と比較して、酵素活性および／または薬剤的または美容上の機能の発揮において若干有効性の低下を示す可能性があるが、好ましくは、同等に効果的であるか、またはより効果的である。したがって、機能的等価性は、本明細書中で後述する皮膚の障害または状態の治療で有効なポリペプチドに関する。これは、例えば、実施例で記載するインビボ分析を実施することによって、定性的または定量的な方法で関連するポリペプチドに対する誘導体（すなわち、配列が関連する）ポリペプチドの効果を比較することによって試験することができる。定量的結果が可能な場合、誘導体は、親ポリペプチドの少なくとも３０、５０、７０または９０％の有効性である。代替的または付加的に、好適なポリペプチドまたはペプチド基質、例えばＸ因子、例えばメタロプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼ基質を切断する孵化酵素の能力の分析によって、インビトロ試験を実施することができる。
【００７５】
特に好ましいい機能的に等価な変異体は、天然の生物学的変化（例えば種内の対立遺伝子多型または地理的変異あるいは異なる属、例えば魚）である。
【００７６】
したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物を得ることができる好適な魚、特に魚卵（すなわち、本発明の組成物中に含まれるポリペプチドを得ることができる出発材料）としては、条鰭綱の３つの下綱のうちの１つである真骨区下綱のいずれかの魚が挙げられる。したがって、魚は、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｏｍｏｒｐｈａ、Ｅｌｏｐｏｍｏｒｐｈａ、Ｃｌｕｐｅｏｍｏｒｐｈａ、Ｏｓｔａｒｉｏｐｈｙｓｉ、Ｐｒｏｔａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉ、Ｓｔｅｎｏｐｔｅｒｙｇｉｉ、Ｃｙｃｌｏｓｑｕａｍａｔａ、Ｓｃｏｐｅｌｏｍｏｒｐｈａ、Ｌａｍｐｒｉｄｉｏｍｏｒｐｈａ、Ｐｏｌｙｍｙｘｉｏｍｏｒｐｈａ、ＰａｒａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉおよびＡｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉからなるリストから選択されるいずれかの上目の魚から選択することができる。
【００７７】
いくつかの実施形態において、魚は、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｈｉｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｅｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｌｂｕｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｎｏｔａｃａｎｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｎｇｕｉｌｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｃｃｏｐｈａｒｙｎｇｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｌｕｐｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｎｏｒｙｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｈａｒａｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｙｍｎｏｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｒｇｅｎｔｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｓｍｅｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｅｌｅｏｐｏｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｏｍｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｕｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｙｃｔｏｐｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌａｍｐｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｏｌｙｍｉｘｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｅｒｃｏｐｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂａｔｒａｃｈｏｉｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌｏｐｈｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｐｈｉｄｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｕｇｉｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｈｅｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｌｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｅｔｏｍｉｍｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｅｐｈａｎｏｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｚｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｂｉｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｓｔｅｒｏｓｔｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｇｎａｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｂｒａｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｔｅｔｒａｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｃｏｒｐａｅｎｉｆｏｒｍｅｓ  ＰｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｆｏｒｍｅｓからなるリストから選択されるいずれかの目の魚から選択することができる。
【００７８】
好ましい実施形態において、魚は、Ｓａｌｍｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｕｇｉｌｉｆｏｒｍｅｓ  ａｎｄ  Ａｃｉｐｅｎｓｅｒｉｆｏｒｍｅｓからなるリストから選択されるいずれかの目の魚から選択することができる。
【００７９】
特に好ましい実施形態において、魚は、Ｓａｌｍｏｎｉｄａｅ、Ｃｙｐｒｉｎｉｄａｅ、Ｃｉｃｈｌｉｄａｅ、Ｐａｎｇａｓｉｉｄａｅ、Ｓｃｉａｅｎｉｄａｅ、Ｓｅｒｒａｎｉｄａｅ、Ｃａｒａｎｇｉｄａｅ、Ｓｐａｒｉｄａｅ、Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｃｉｄａｅ、Ｍｏｒｏｎｉｄａｅ、Ｍｕｇｉｌｉｄａｅ、Ｌａｔｉｄａｅ、Ｅｌｅｏｔｒｉｄａｅ  ａｎｄ  Ａｃｉｐｅｎｓｅｒｉｄａｅからなるリストから選択されるいずれかの科の魚から選択することができる。
【００８０】
したがって、いくつかの実施形態において、魚は、ボニータンフィッシュ（ｂｏｎｙ−ｔｏｎｇｕｅｄ  ｆｉｓｈ）、エールワイフ（ｍｏｏｎｅｙｅ）、ウスメバル（ｇｏｌｄｅｙｅ）、カライワシ、ターポン、ソトイワシ、トカゲギス、トゲウナギ、ウナギ（ｔｒｕｅ  ｅｅｌ）、ガルパー、フウセンウナギ、ニシン、カタクチイワシ、サバヒー、バルブ、コイ、ダニオ、キンギョ、ドジョウ、ミノウ、ラスボラ、カラシン、ペンシルフィッシュ、ホウネンエソ、ピラニア、テトラフィッシュ、デンキウナギ、ナイフフィッシュ、ナマズ、デメニギス、セキトリイワシ、サケ、マス、キタカワマス、スメルト、ガラクシアス（ｇａｌａｘｉｉｄ）、シャチブリ（ｊｅｌｌｙｎｏｓｅ  ｆｉｓｈ）、ヨコエソ（ｂｒｉｓｔｌｅｍｏｕｔｈ）、イボダイ（ｍａｒｉｎｅ  ｈａｔｃｈｅｔ  ｆｉｓｈ）、テナガミズテング（Ｂｏｍｂａｙ  ｄｕｃｋ  ｆｉｓｈ）、ミズウオ、ハダカイワシ（ｌａｎｔｅｒｎｆｉｓｈ）、リュウグウノツカイ、アカマンボウ、フリソデウオ、ギンメダイ、ドウクツギョ、サケスズキ、アンコウ（ｔｏａｄｆｉｓｈ）、エンゼルフィッシュ、タラ、カクレウオ、シルバーアロワナ、ボラ、トウゴロウイワシ、キュウセン、トビウオ、クジラウオ、胎生魚、キリフィッシュ、カブトウオ、ファンゴトゥース（ｆａｎｇｔｏｏｔｈ）、パインコーンフィッシュ（ｐｉｎｅｃｏｎｅｆｉｓｈ）、マトウダイ、ウバウオ、トゲウオ、ヨウジウオ、タツノオトシゴ、タウナギ、カワハギ、フグ、ヒラメ、カサゴ、カジカ、キノボリウオ、バス、シクリッド、ハゼ、グーラミ、サバ、パーチ、クロホシマンジュウダイ、ホワイティングまたはベラであってよい。
【００８１】
特に好ましい実施形態において、魚は、ソウギョ（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ  ｉｄｅｌｌａ）、ハクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｍｏｌｉｔｒｉｘ）、キャトラ（Ｃａｔｌａ  ｃａｔｌａ）、コイ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ  ｃａｒｐｉｏ）、コクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ）、ヨーロッパブナ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ  ｃａｒａｓｓｉｕｓ）、ティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）、バサ（Ｐａｎｇａｓ  ｃａｔｆｉｓｈ）（Ｐａｎｇａｓｉｕｓ  ｐａｎｇａｓｉｕｓ）、ロフ（Ｌａｂｅｏ  ｒｏｈｉｔａ）、タイセイヨウサケ（Ｓａｌｍｏ  ｓａｌａｒ）、フウセイ（Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｃｒｏｃｅａ）、ヒトミハタ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ  ｔａｕｖｉｎａ）、マス（Ｓａｌｍｏ  ｔｒｕｔｔａ  ｔｒｕｔｔａ）、ブリ（Ｓｅｒｉｏｌａ  ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ）、ゴウシュウマダイ（Ｓｐａｒｕｓ  ａｕｒａｔａ）、スズキ（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ヨーロピアンシーバス（Ｄｉｃｅｎｔｒａｒｃｈｕｓ  ｌａｂｒａｘ）、ヒラダイ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｒｙｓ  ａｕｒａｔｕｓ）、ボラ（Ｍｕｇｉｌ  ｃｅｐｈａｌｕｓ）、バラマンディ（Ｌａｔｅｓ  ｃａｌｃａｒｉｆｅｒ）、マーブルゴビー（Ｏｘｙｅｌｅｏｔｒｉｓ  ｍａｒｍｏｒａｔａ）、モザンビークティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｍｏｓｓａｍｂｉｃｕｓ）、ウミマス（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｍｙｋｉｓｓ）、ギンサケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｋｉｓｕｔｃｈ）、マスノスケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｔｓｈａｗｙｔｓｃｈａ）、カラフトマス（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｇｏｒｂｕｓｃｈａ）、シロサケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｋｅｔａ）、ベニザケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｎｅｒｋａ）、シベリアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｂａｅｒｉｉ）およびロシアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉｉ）から選択される任意の種であってよい。
【００８２】
いくつかの実施形態において、医薬または化粧品組成物は、１種より多い魚から、特に１種より多い魚卵から、すなわち前記定義のいずれか１以上の魚由来の魚卵からの孵化液から得られるかまたは得ることができる。例えば、２種以上の魚卵から得られる孵化液を本明細書中で記載される方法で使用して、本発明の医薬または化粧品組成物を得ることができる。したがって、本発明の方法は、例えばろ過前またはろ過後に、１以上の生物の孵化した卵から集められた孵化液を組み合わせるステップを含んでもよい。
【００８３】
「薬剤的に許容される」、「生理学的に許容される」または「美容上許容される」によって、治療および／または化粧用途ならびに組成物に好適でなければならない成分を意味する。成分はまた、組成物中の他の成分と適合性でなければならず、同様に受容者にとって生理学的に許容されなければならない。
【００８４】
投与のための活性成分、すなわち上述の方法によって得ることができる組成物のポリペプチド構成要素は、医薬または化粧品組成物での使用のために適切に修飾することができる。例えば、本発明にしたがって使用される組成物は、例えば、塩あるいは非電解質、酢酸塩、ＳＤＳ、ＥＤＴＡ、クエン酸塩もしくは酢酸塩緩衝液、マンニトール、グリシン、ＨＳＡまたはポリソルベートなどの適切な添加剤の使用によって、分解に対して安定化させることができる。
【００８５】
本明細書中で記載される方法によって得られるかまたは得ることができるポリペプチド構成要素は、治療または化粧用の組成物中に単独活性成分として存在してもよいし、または例えば治療または美容効果（上述の通り）を増強するか、または組成物を消費者にとってより魅力的にするために、他の成分、特に他の活性成分と組み合わせてもよい。
【００８６】
本明細書中で記載される組成物は、例えば上述の天然源の１つから前記組成物を調製した後に、不純物も含む可能性がある。本明細書中で記載する組成物において、魚の孵化液から誘導できる様々なポリペプチドまたはポリペプチドの部分（すなわち、全ポリペプチド構成要素）は、上記方法にしたがって調製される組成物の０．００１〜５０％ｗ／ｗの範囲（または組成物がステップ（ｇ）で希釈される場合は１０〜１００倍低い）で（組み合わせで）存在し得る。好ましくは、魚の孵化液から誘導できる前記ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組成物の０．０００５〜１０％ｗ／ｗの範囲（または１０〜４０％まで）、例えば上記方法に従って調製される組成物の０．００１〜５％、０．００１〜３％、０．００１〜２％、０．００１〜１％、０．００１〜０．５％、０．００１〜０．１５％ｗ／ｗ（例えば最終ステップで希釈される場合は０．０５〜０．５％ｗ／ｗまたは０．０００５〜０．００５％ｗ／ｗ）で（組み合わせで）存在する。したがって、魚の孵化液から誘導できる個々のポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組成物の１×１０-5〜１０％ｗ／ｗの範囲で存在し得る。いくつかの実施形態においては、魚の孵化液から誘導できる前記個々のポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、ステップ（ｇ）でさらに希釈されない場合は組成物の１×１０-5〜５％ｗ／ｗの範囲、例えば医薬または化粧品組成物の１×１０-5〜４％、１×１０-5〜３％、１×１０-5〜２％、１×１０-5〜１％、１×１０-4〜０．５％、１×１０-4〜０．１５％、１×１０-4〜０．１％または１×１０-4〜０．０１％ｗ／ｗで存在してもよく、あるいはステップ（ｇ）で希釈される場合は、例えば１０〜２００、例えば３０〜１００倍減少してもよい。
【００８７】
組成物中の魚の孵化液から誘導できるポリペプチドまたはポリペプチドの部分の割合は、組成物中の他の溶質、すなわち、例えば水などの溶媒を除いたものに対して定義することができる。したがって、前記ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組み合わせで、組成物の乾燥質量の１〜１００％ｗ／ｗの範囲で存在してもよい。いくつかの実施形態においては、ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組み合わせで、組成物の乾燥質量の１〜９０％ｗ／ｗの範囲で、例えば組成物の乾燥質量の５〜８０％、１０〜７５％、２０〜７０％、３０〜６５％ｗ／ｗ、例えば約６８または６９％ｗ／ｗで存在し得る。したがって、個々のポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組成物の乾燥質量の０．００１〜８０％ｗ／ｗの範囲、例えば組成物の乾燥質量の０．０００１〜７５％、０．００１〜７０％、０．０１〜６０％ｗ／ｗ、０．０５〜５０％ｗ／ｗで存在してもよい。本明細書中で記載するように、組成物は、ステップ（ｇ）で本発明に従って使用するために希釈してもよい。
【００８８】
本発明のさらなる態様において、本明細書中で記載するような組成物は治療で使用されるものである。
【００８９】
上述のように、本発明の組成物中のポリペプチドまたは前記ポリペプチドの部分は、皮膚の保湿および／または角質除去による皮膚異常、障害または状態の治療において治療特性を示す。
【００９０】
治療される好ましい皮膚異常、状態または障害は、乾燥肌、角質層が望ましいよりも厚くなっている皮膚、例えば過角化症状態、または表皮に望ましくない色素沈着がある皮膚、例えば肝斑、加齢によるしみ、日焼けによるしみ、または褐斑である。処置は美容的であってもよく、例えば正常であるが、乾燥肌または肥厚した皮膚（例えば、たこ、魚の目もしくは角化性いぼ）の治療または肝斑などの色素異常症の治療であってもよく、あるいは、例えば疼痛をもたらす挫創、湿疹、乾癬またはいぼを治療するための治療的なものであってもよい。
【００９１】
本明細書中で用いられる場合、「障害」とは、例えば、感染または後天的もしくは先天的遺伝子欠陥から生じ得る、正常な生物と比べて症候性または無症候性生物における根本的病理学的障害を指す。「異常」または「状態」は、正常で最適な皮膚に対して皮膚における不規則性または欠陥であるが、病理学的障害の結果ではないものを指す。欠陥／不規則性は、むしろ、年齢、損傷、環境因子、ホルモンレベル、薬物、外部から適用または摂取された物質、遺伝子疾患または不規則性をもたらす皮膚の異常な機能に至る様々な他の因子によって生じ得る。
【００９２】
障害、異常または状態は、単に美容的もしくは医療を必要とする非美容的、またはそれらの組み合わせであってよい。
【００９３】
本明細書中で用いられる場合、「美容的」とは、疾患または障害を治癒、治療または予防しないが、そのかわりに皮膚の外観、例えば皮膚の色、きめまたは水分量を修正または改善するためのスキンケア製品としての役割を果たす処置を指す。
【００９４】
本明細書中で記載するような医療で用いられる「非美容的」（または医療的）成分は、障害の１以上の症状、例えば疼痛または不快症状を治癒、緩和、治療または予防する役割を果たす。
【００９５】
本明細書中で記載する治療の基本は、本明細書中で開示される孵化酵素および卵殻ポリペプチドの皮膚の保湿および剥離効果である。これらの効果は、本明細書中で記載する実施例で示されている。
【００９６】
したがって、孵化酵素および卵殻ポリペプチドを含む組成物の保湿および／または角質除去特性に基づく治療が想定される。
【００９７】
したがって、本発明は、動物の皮膚を剥離および保湿する美容的または非美容的方法であって、本明細書中で上述した化粧または医薬組成物を前記動物に投与する方法を提供する。
【００９８】
したがって、上記に鑑みて、本発明は、動物の皮膚を剥離および／または保湿する美容的または非美容的方法を提供し、この場合、化粧または医薬組成物を前記動物に投与し、前記組成物が本明細書中で記載される方法によって得られるかまたは得ることができる。
【００９９】
本明細書中で記載するように、「剥離する」とは、皮膚においては、表皮の角質層の鱗屑または落屑と見なされる上皮表面の表面細胞を除去することを指す。「保湿」とは、本明細書中で用いられる場合、皮膚からの水分の損失を防止する保湿剤ならびに皮膚に塗布された場合、水を引きつけ、保持する保湿剤（湿潤剤）および皮膚軟化剤（不良な落屑を改善する）を対象とする。
【０１００】
言い換えれば、本発明は、動物の皮膚の剥離および／または保湿で使用するための本明細書中で記載するような化粧または医薬組成物を提供する（組成物は、別法として、その目的のための医薬を調製するために使用してもよい。）
【０１０１】
上述のように、そのような剥離および／または保湿特性は、様々な皮膚異常、障害または状態を治療または予防するために有利である。
【０１０２】
好ましい態様において、治療または予防される皮膚の異常、状態または障害は乾燥肌である。これは、保湿および／または角質除去によって治療することができる。
【０１０３】
「乾燥肌」は、本明細書中で用いられる場合、多くの場合、小じわのパターン、鱗屑、および
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によって特徴づけられる、水分または皮脂が欠乏した表皮を指す。乾燥肌は、皮膚状態自体（例えば年齢、熱／寒さ／乾燥によるダメージによる）として起こり得るか、または日焼けによる損傷、湿疹、接触性皮膚炎、乾癬もしくは魚鱗癬（皮膚の顕著な剥離を引き起こす遺伝性疾患）などの皮膚障害もしくは状態の症状であり得る。
【０１０４】
さらなる好ましい態様において、治療または予防される異常、状態または障害は、皮膚の肥厚した角質層である。これは、保湿および／または角質除去によって治療することができる。
【０１０５】
皮膚のそのような肥厚した角質層は、皮膚上の部分またはいぼを繰り返しこすることにより皮膚の肥厚した上層から構成される保護パッドであるたこまたは魚の目などの状態で起こり得る。そのような方法はまた、その病態で角質化を含む挫創を治療または防止するために使用してもよい。皮膚の肥厚した角質層は、状態自体であり得るか、または皮膚状態または障害の症状であり得る。
【０１０６】
さらなる好ましい態様において、治療または予防される異常、状態または障害は、皮膚の色素異常症または異常である。これは角質除去によって治療することができる。
【０１０７】
皮膚の色素異常症または異常は、年齢、ホルモンの変化、遺伝要因、疾患または日焼けによるかもしくは他のダメージの結果として起こり得る。色素沈着の変化は、メラノサイトの局所的過剰もしくはメラノサイト活性の増加、またはその両者から起こり得る。色素異常症としては、肝斑、日焼けもしくは加齢によるしみ（日焼黒子）およびそばかすなどの他のシミが挙げられる。
【０１０８】
言い換えれば、本発明はしたがって、動物の皮膚の状態または障害を治療または予防する美容的または非美容的方法であって、前記皮膚が異常に乾燥しているか、皮膚の角質層が異常に肥厚しているか、または皮膚が色素異常を有し、本明細書中で前述した化粧または医薬組成物を前記動物に投与する方法を提供する。前記状態または障害は、好ましくは、本明細書中で前述の通りである。
【０１０９】
本明細書中で用いられる場合、「異常」は正常な皮膚、すなわち健常で潤いがあり、定常な色素を有し、老化していない皮膚に対して判定される。
【０１１０】
さらに別の言い方をすれば、本発明は、動物の皮膚の状態または障害を治療または予防する美容的または非美容的方法で使用するための本明細書中で記載するような化粧または医薬組成物であって、前記皮膚は異常に乾燥しているか、皮膚の角質等が異常に肥厚しているか、または皮膚が色素異常を有している、化粧または医薬組成物を提供する。（あるいは、化合物または組成物は、その目的のための医薬を調製するために用いることができる。）
【０１１１】
本発明の組成物は、毛穴のサイズを減少させるために特に有用であることが判明した。この態様では、挫創は一つには、死んだ皮膚細胞が毛穴の中に蓄積する場合に起こる（皮脂管（ｓｅｂａｃｅｏｕｓ  ｃａｎａｌ）の過角質化（ｈｙｐｅｒ−ｋｅｒａｔｉｎｉｚａｔｉｏｎ））。本発明の組成物は、毛穴内部の皮膚細胞の脱落を正常化し、油および細菌とともに皮膚病変、例えば丘疹および膿疱などの炎症病変ならびにブラックヘッドおよびホワイトヘッドなどの非炎症病変を生じる可能性がある閉塞を防止するのに役立つことが判明した。したがって、本明細書中で定義される組成物を、毛穴のサイズを減少させる美容的または非美容的方法で用いることができる。
【０１１２】
別の見方では、本発明の組成物は、挫創、例えば丘疹、膿疱、ブラックヘッドおよび／またはホワイトヘッドなどの炎症性および／または非炎症性皮膚病変を治療または予防する美容的または非美容的方法で使用することができる。（あるいは、化合物または組成物は、その目的のための医薬を調製すうために用いることができる。）
【０１１３】
好ましい態様において、医学的および／または化粧用途は、皮膚に局所投与することによって達成される。
【０１１４】
したがって、特に好ましい態様において、本明細書中で定義される化粧または医薬組成物は、皮膚が異常に乾燥しているか、皮膚の角質層が異常に肥厚しているか、または色素沈着欠陥が存在する障害、例えば、たこ、魚の目、いぼ、湿疹、接触性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬、挫創および肝斑を治療するために用いることができる。
【０１１５】
さらなる特に好ましい態様において、本明細書中で定義される化粧または医薬組成物は、皮膚が異常に乾燥している障害を治療するために使用できる。
【０１１６】
本明細書中で用いられる場合、「軽減」とは、皮膚が前記状態または障害にかかっておらず、前記治療を受けていない前記個体の身体の異なる部分または前記治療を受けていない対応する正常な個体において存在する症状または効果と比較して、前記状態または障害の１以上の症状または効果、例えば乾燥もしくは飛行した皮膚の存在もしくは程度、色素沈着、
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または疼痛などの程度もしくは面積を好ましくは正常なレベルまで減少、軽減または除去することを指す。
【０１１７】
「予防する」とは、完全な予防、あるいは症状または効果の程度または発症の時期の減少または軽減（例えば遅延）を指す。例えば、乾燥、肥厚または異常に色素沈着した皮膚を典型とする状態は、そのような状態が出現する前に、本発明の組成物を定期的に塗布することによって予防することができる。
【０１１８】
本発明による治療または予防法は、有利には、障害もしくは状態の治療もしくは予防において、および／または保湿もしくは角質除去を達成するために有効な１以上の活性成分の投与と組み合わせてもよい。したがって、本発明の化粧または医薬組成物は、１以上のそのような活性成分をさらに含んでもよい。
【０１１９】
本発明のさらに別の態様にしたがって、我々は、本明細書中で定義するような化粧または医薬組成物および、場合によって１以上のさらなる活性成分を、ヒトまたは動物療法で、好ましくは本明細書中で記載するような、同時、個別または連続使用のための複合製剤として提供する。
【０１２０】
本発明の組成物は、通常の方法で１以上の生理学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤を用いて、容易に入手可能な成分を用いる当該技術分野で周囲の技術にしたがって処方することができる。
【０１２１】
本明細書中で記載する組成物は、通常の方法で、生理学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤と、容易に入手可能な成分を用いる当該技術分野で周知の技術にしたがって処方することができる。組成物は、例えば、ｐＨ３．５〜１１、好ましくはｐＨ５．５〜９にて、水性、グリセリン系、アルコール（２０％まで）系、アクリレート系油／水エマルジョン、キサンタンガム系油／水エマルジョンまたは水／油エマルジョンとして提供できる。
【０１２２】
したがって、組成物は、場合によって、複合製剤として他の活性物質一緒に、１以上の通常の担体、希釈剤および／または賦形剤とともに組み入れて、例えば錠剤、ピル、粉末剤、ロゼンジ、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液（注射剤または注入液として）、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中）、軟膏、ソフトおよびハードゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射液、滅菌包装粉末剤などの通常のガレヌス製剤を製造することができる。生分解性ポリマー（例えば、ポリエステル、ポリ無水物、ポリ乳酸、またはポリグリコール酸）も固体インプラントのために使用することができる。組成物は、凍結乾燥、過冷却またはパーマザイムの使用によって安定化させてもよい。そのような組成物は、本発明の組成物を形成する（すなわち、ステップ（ｇ）にしたがって調製される）。
【０１２３】
好適な賦形剤、担体または希釈剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、乳糖カルシウム、コーンスターチ、アグリネート（ａｇｌｉｎａｔｅ）、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、水、水／エタノール、水／グリコール、水／ポリエチレン、グリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ミネラルオイルもしくは硬質脂肪（ｈａｒｄ  ｆａｔ）などの脂肪性物質またはそれらの好適な混合物である。徐放性製剤を得るための薬剤、例えばカルボキシポリメチレン、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、またはポリ酢酸ビニルも使用してもよい。
【０１２４】
組成物は、潤滑剤、湿潤剤、乳化剤、増粘剤、造粒剤、崩壊剤、結合剤、浸透活性剤（ｏｓｍｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、懸濁剤、保存剤、甘味剤、香味添加剤、吸着促進剤（例えば表面浸透剤、例えば胆汁酸塩、レシチン、界面活性剤、脂肪酸、キレート剤）、褐色化剤、有機溶媒、抗酸化剤、安定化剤、皮膚軟化剤、シリコーン、アルファ−ヒドロキシ酸、粘滑剤、消泡剤、保湿剤、ビタミン、芳香剤、イオン性または非イオン性増粘剤、界面活性剤、フィラー、イオン性または非イオン性増粘剤、金属イオン封鎖剤、ポリマー、プロペラント、アルカリ化または酸性化剤、乳白剤、着色剤および脂肪族化合物などをさらに含んでもよい。これらの構成要素のいくつかをさらに詳細に後述する。
【０１２５】
化粧または医薬組成物中の他の活性成分または構成要素は、ミネラル、ビタミン、酵素、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、多糖、サンスクリーンフィルターとして好適な物質、化学的エクスフォリアン、抽出物、皮膚コンディショニング剤、抗酸化剤およびそれらの混合物のいずれか１以上から選択することができる。
【０１２６】
本発明の組成物中に含まれ得るさらなるタンパク質の例としては、コラーゲンおよび／またはその誘導体（例えば前記定義のその部分）、細胞成長を促進できるタンパク質またはペプチド、グリコプロテイン１、グリコプロテイン２およびラミニンが挙げられる。
【０１２７】
本発明の組成物は、限定されるものではないが、果物酵素（例えばブロメライン）、スーパーオキシドジスムターゼペルオキシダーゼ、ヒアルロニダーゼおよびムコポリサッカリダーゼ（ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄａｓｅ）のいずれか１以上を含む酵素で提供することができる。
【０１２８】
ペプチドは、限定されるものではないが、Ｄ，Ｌ−カルノシン、Ｄ−カルノシン、Ｌ−カルノシン、セリンおよびマトリキシル（Ｍａｔｒｉｘｙｌ）（ペンタペチド（ｐｅｎｔａｐｅｔｉｄｅ）誘導体）の１以上から選択することができる。
【０１２９】
アミノ酸は、これらに限定されるものではないが、Ｌ−アラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−システイン、Ｌ−シスチン、グリシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、およびＬ−バリンならびに、表１で定義されるような天然に存在しないアミノ酸を含むそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【表１】
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【０１３０】
抗酸化剤として特に好ましいアミノ酸は、グリシン、リジン、アルギニン、システイン、シスチン、ヒスチジン、チロシンおよびトリプトファンのいずれか１以上から選択することができる。
【０１３１】
本発明の組成物は、脂肪、油、ワックスなどを含む１以上の脂質を含み得る。好適な極性油は、例えば、レシチンおよび脂肪酸トリグリセリド、すなわち８〜２４，特に、１２〜１８炭素原子の鎖長を有する飽和および／または不飽和、分枝および／または非分枝アルカンカルボン酸のトリグリセロールエステルの群から選択されるものである。脂肪酸トリグリセリドは、例えば有利には、合成、半合成および天然油の群、例えば、オリーブ油、ヒマワリ油、ダイズ油、ピーナッツ油、ナタネ油、アーモンド油、ヤシ油、ココナッツ油、ヒマシ油、小麦胚芽油、ブドウ種子油、アザミ油、ツキミソウ油、マカダミアナッツ油などから選択することができる。
【０１３２】
代替的または付加的に、油は、揮発性油、不揮発性油またはその混合物から選択することができる。不揮発性油としては、以下の定義の少なくとも１つを満たす油が挙げられる：（ａ）油は、２５℃および１気圧で０．２ｍｍＨｇ以下の蒸気圧を示す；（ｂ）油は１気圧で少なくとも３００℃の沸点を有する。揮発性油は、前記定義のような「不揮発性」でない材料を含む。
【０１３３】
不揮発性油は、不揮発性シリコーン油、不揮発性炭化水素油およびそれらの混合物から選択することができる。好適な不揮発性シリコーン油には線状ポリメチルシロキサンが含まれ、好ましくは、不揮発性シリコーン油は高分子量ジメチコーンである。市販の線状ポリメチルシロキサンの例としては、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから得られるＤＣ２００流体２０Ｃｓｔ、ＤＣ２００流体１００Ｃｓｔ、ＤＣ２００流体３５０Ｃｓｔが挙げられる。
【０１３４】
好適な不揮発性炭化水素油としては、ジグリセリンもしくはトリグリセリンの分枝エステルまたはエステルまたは１，２，３，４ブタントリオールまたはエリスリトール、ジエリスリトールもしくはトリエリスリトールが挙げられる。好ましくは、不揮発性炭化水素油は、トリエチルヘキサン酸エリスリチル（日清オイリオからＳａｌａｃｏｓ  Ｅ−３８として入手可能）およびポリグリセリル−２トリイソステアレート（日清オイリオからＣｏｓｍｏｌ  ４３Ｖとして入手可能）、炭酸ジエチルヘキシル（ＤｅｇｕｓｓａからＴｅｇｏｓｏｆｔ  ＤＥＣとして入手可能）、ジカプリルエーテル（Ｃｏｇｎｉｓ  ＡＧからＣｅｔｉｏｌ  ＯＥとして入手可能）、炭酸ジカプリル（Ｃｏｇｎｉｓ  ＡＧからＣｅｔｉｏｌ  ＣＣとして入手可能）、イソノナン酸イソノニル（ＳｅｐｐｉｃからＬａｎｏｌ  ９９として提供）、ネオペンタン酸トリデシル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ  ＰｔｏｄｕｃｔｓからＣｅｒａｐｈｙｌ  ５５として提供）、またはそれらの混合物を含む。
【０１３５】
揮発性油は、揮発性シリコーン油（官能化および非官能化の両方）、揮発性炭化水素油およびそれらの混合物から選択することができる。本発明で有用な不揮発性油は、飽和もしくは不飽和であり得るか、直鎖もしくは分枝鎖または環状構造を有し得るか、あるいはこれらの特徴のいずれか１以上を有し得る。
【０１３６】
揮発性炭化水素油の例としては、ポリデカン、例えばイソドデカンおよびイソデカン（例えば、Ｐｒｅｓｐｅｒｓｅ  Ｉｎｃ．から入手可能なＰｅｒメチル−９９Ａ）ならびにＣ７−Ｃ１５イソパラフィン（例えば、Ｅｘｘｏｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから入手可能なＩｓｏｐａｒ  Ｓｅｒｉｅｓ）が挙げられる。
【０１３７】
揮発性シリコーン油は、シクロペンタシロキサン、シクロヘキサシロキサンまたはそれらの混合物から選択することができる。市販の揮発性環状シリコーン油の例としては、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．からのＤＣ  ２４４、ＤＣ  ２４５、ＤＣ  ３４４、およびＤＣ  ３４５；Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＭａｔｅｒｉａｌｓからのＳＦ−１２０４およびＳＦ−１２０２  Ｓｉｌｉｃｏｎｅ  Ｆｌｕｉｄｓ；Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｃｏ．からのＧＥ  ７２０７および７１５８）；ならびに、ＳＷＳ  Ｓｉｌｉｃｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．からのＳＷＳ−０３３１４が挙げられる。
【０１３８】
直鎖揮発性シリコーン油は、直鎖ポリメチルシロキサンであり得る。市販の直鎖ポリメチルシロキサンの一例には、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．からのＤＣ  ２００  流体，  ５Ｃｓｔが含まれる。
【０１３９】
本発明の組成物は、限定されるものではないが、アニオン性多糖（例えば、アルギン酸、ペクチン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、アラビアガム、カラヤガム、トラガカントガム、カルボキシメチル−キチン、セルロースガム、グリコサミノグリカン）、カチオン性多糖（例えば、キトサン、アセチル化キトサン、カチオン性グアーガム、カチオン性ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ））、ノニオン性多糖（例えば、デンプン、デキストリン、グアーガム、セルロースエーテル、例えばヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロースおよびニトロセルロース）、両性多糖（例えば、カルボキシメチルキトサン、Ｎ−ヒドロキシ−ジカルボキシエチル−キトサン、修飾ジャガイモデンプン）ならびに疎水性多糖（例えば、セチルヒドロキシエチルセルロース、ポリｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ２４）のいずれか１以上から選択される１以上の多糖をさらに含んでもよい。
【０１４０】
組成物は、サンスクリーンフィルター、例えば有機サンスクリーンとして好適な物質、例えば桂皮酸誘導体をさらに含み得る。有機サンスクリーン活性剤は、親水性有機サンスクリーン、疎水性有機サンスクリーン、またはその混合物から選択することができる。サンスクリーンの好適な例は、ｔｈｅ  ＣＴＦＡ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  ７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ｖｏｌｕｍｅ  ２，  ｐｐ．１６７２，  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗｅｎｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｃ  Ｅｗｅｎ  （Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，  Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，  ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．  １９９７）で見出すことができる。
【０１４１】
有機サンスクリーンは、アルキルβ，β−ジフェニルアクリレート誘導体、α−シアノβ，β−ジフェニルアクリレート誘導体、アントラニレート誘導体、ベンゾフェノン誘導体、カンファー誘導体、ジベンゾイルメタン誘導体、ｐ−アミノ安息香酸誘導体、サリチル酸誘導体、トイアジン誘導体、またはその混合物から選択することができる。例えば、疎水性有機サンスクリーンは、４−（１，１−ジメチルエチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタン；４−イソプロピルジベンゾイルメタン；４−（１，１−ジメチルエチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタン、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート、またはそれらの混合物から選択することができる。
【０１４２】
ブチルメトキシジベンゾイルメタンまたはＡｖｏｂｅｎｚｏｎｅとしても知られる市販の４−（１，１−ジメチルエチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタンの一例には、Ｇｉｖａｕｄａｎ  Ｒｏｕｒｅ  Ｓ．  Ａ．からのＰａｒｓｏｌ  ＴＭ  １７８９およびＭｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，  Ｉｎｃ．からのＥｕｓｏｌｅｘ  ＴＭ  ９０２０が含まれる。イソプロピルジベンゾイルメタンとしても知られる市販の４−イソプロピルジベンゾイルメタンの一例には、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，  Ｉｎｃ．からのＥｕｓｏｌｅｘ  ＴＭ  ８０２０が含まれる。Ｏｃｔｏｃｒｙｌｅｎｅとしても知られる市販の２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレートの例としては、ＢＡＳＦから得られるＵｖｉｎｕｌ  Ｎ５３９  ＳＧ；およびＲｏｎａ／Ｍｅｒｃｋから得られるＥｕｓｏｌｅｘ  ＯＣＲが挙げられる。
【０１４３】
いくつかの実施形態においては、親水性有機サンスクリーンは２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸であってよい。ＰＢＳＡとしても知られる市販の２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸の一例とには、Ｒｏｎａ／Ｍｅｒｃｋから得られるＥｕｓｏｌｅｘ  ２３２が含まれる。
【０１４４】
桂皮酸誘導体サンスクリーンの好適な例は、ｔｈｅ  ＣＴＦＡ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  ７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ｖｏｌｕｍｅ  ２，  ｐｐ．１６７２，  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗｅｎｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｃ  Ｅｗｅｎ  （Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，  Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，  ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．  １９９７）で見出すことができる。桂皮酸誘導体は、２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート、ジエタノールアミンメトキシシンナメート、２−エトキシエチル−ｐ−メトキシシンナメート、またはそれらの混合物から選択することができる。例えば、桂皮酸誘導体は２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメートであり得る。
【０１４５】
組成物は、限定されるものではないが、アルファヒドロキシ酸（ＡＨＡ）、ベータヒドロキシ酸（ＢＨＡ）またはポリ−ヒドロキシ酸、例えばサリチル酸、グリコール酸、クエン酸およびリンゴ酸のいずれか１以上から選択される化学的エクスフォリアンを含んでもよい。
【０１４６】
組成物中に組み入れてもよい抽出物としては、限定されるものではないが、フェノール化合物、例えば、フラボノイド（例えば、グリコシルルチン、フェルラ酸、コーヒー酸）、フルフリリデングルシトール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ノルジヒドログアイアレティック樹脂酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ｒｅｓｉｎ  ａｃｉｄ）、ノルジヒドログアイアレティック酸（ｎｏｒｄｉ−ｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、トリヒドロキシブチロフェノンおよびそれらの誘導体を含み得る植物抽出物が挙げられる。本発明の組成物で使用するための特定の植物抽出物としては、アロエ抽出物、朝鮮人参抽出物およびトクサ抽出物が挙げられる。
【０１４７】
朝鮮人参抽出物は、親水性溶媒（特に、水、エタノール、グリコール、またはそれらの任意の混合物）でオタネニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）の根を抽出することによって得ることができる。抽出物は、サポニン、ステロール、炭水化物、ペクチン、ビタミン、ミネラルおよび脂質を含む。
【０１４８】
トクサ抽出物は、親水性溶媒（例えば、水、エタノール、グリコール、またはそれらの任意の混合物）でＥｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅの草本全体を抽出することによって得ることができる。抽出物は、シリケート、フラビノイド（ｆｌａｖｉｎｏｉｄ）、サポノシド、コーヒー酸およびフェルラ酸を含む。
【０１４９】
組成物は皮膚コンディショニング剤をさらに含んでもよい。皮膚コンディショニング剤は、湿潤剤、エクスフォリアン、皮膚軟化剤またはその混合物から選択することができる。湿潤剤としては、多価アルコール、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、ヒドロキシプロピルソルビトール、ヘキシレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２，６−ヘキサントリオール、エトキシル化グリセリン、プロポキシル化グリセリンまたはその混合物が挙げられる。
【０１５０】
本発明の組成物中に提供され得る抗酸化剤の例としては、限定されるものではないが、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、カロテノイド、ペプチド、チオール、スルホキシイミン化合物、キレート剤、不飽和脂肪酸、フェノール化合物、植物抽出物、スチルベン、尿酸、マンノース、クロロゲン酸、イミダゾール（例えばウロカニン酸）、フルフリリデンソルビトール、ユビキノン、ユビキノール、プラストキノン、フィトステロールおよびそれらの誘導体（例えば塩、エステル、エーテル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび／または脂質誘導体）が挙げられ、そのいくつかは上述されている。
【０１５１】
ビタミンは、限定されるものではないが、ビタミンＡおよびそれらの誘導体（例えばレチノイドまたはレチノールまたはそれらの誘導体、例えばパルミチン酸レチニルまたはプロピオン酸レチニル）、ビオチン、葉酸、パントテン酸カルシウム、ニコチンアミド、ピリドキシンＨＣｌ、ピリドキサルＨＣｌ、リボフラビン、チアミンＨＣｌ、チミジン、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ３（例えばナイアシンアミド）、ビタミンＢ５（例えばパンテノール）、ビタミンＣおよびそれらの誘導体（例えば、パルミチン酸アスコルビル、Ｍｇリン酸アスコルビル、酢酸アスコルビル）、トコフェロールおよび誘導体（例えば酢酸ビタミンＥ）のいずれか１以上から選択することができる。
【０１５２】
ミネラルは、限定されるものではないが、モリブデン酸塩（例えば（ＮＨ4）ＯＭｏ7Ｏ24）アルミニウム（例えばＡｌＣｌ3）、カルシウム（例えばＣａＣｌ2）、コバルト（例えばＣｏＣｌ2）、クロム（例えばＣｒＫ（ＳＯ4））、銅（例えばＣｕＳＯ4）、鉄（例えばＦｅ（ＮＯ3）3、ＦｅＳＯ4）、カリウム（例えばＫＣｌ）、マグネシウム（例えばＭｇＣｌ2）、マンガン（例えばＭｎＣＩ2、ＭｎＳＯ4）、リン酸塩（例えばＮａ2ＨＰＯ4、ＮａＨ2ＰＯ4）、炭酸塩（例えばＮａＨＣＯ3）、ケイ酸塩（例えばＮａ2ＳｉＯ3）、ナトリウム（例えばＮａＣｌ）、バナジウム酸塩（例えばＮＨ4ＶＯ3）、ニッケル（例えばＮｉＣｌ2）、スズ（例えばＳｎＣｌ2）、亜鉛（例えば、ＺｎＯ、ＺｎＳＯ4）、セレン（例えばセレノメチオニン、エブセレン、Ｈ2ＳｅＯ3、Ｎａ2ＳｅＯ3）、硫酸塩および硝酸塩のいずれか１以上の塩から選択することができる。
【０１５３】
カロテノイドは、限定されるものではないが、カロテン、例えばα−カロテン、β−カロテン、ψ−リコピン、フィトエンなどおよびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１５４】
チオールは、限定されるものではないが、アウロチオグルコース、プロピルチオウラシル、チオレドキシン、リポ酸、グルタチオン、システイン、シスチン、シスタミンならびにそれらのグリコシル、Ｎ−アセチル、メチル、エチル、プロピル、アミル、ブチルおよびラウリル、パルミトイル、オレイル、γ−リノレイル、コレステリルおよびグリセリルエステルおよびそれらの塩、チオジプロピオン酸ジラウリル、チオジプロピオン酸ジステアリル、チオジプロピオン酸およびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１５５】
スルホキシイミン化合物は、限定されるものではないが、ホモシステインスルホキシイミン、ブチオニンスルホン、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタチオニンスルホキシイミンのいずれか１以上から選択することができ、これらは、非常に低用量（例えばｐｍｏｌ〜μｍｏｌ／ｋｇ）で提供されるように組成物中に含めることができる。
【０１５６】
キレート剤は、限定されるものではないが、アポフェリチン、デスフェラール（ｄｅｓｆｅｒｒａｌ）、ラクトフェリン、α−ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、α−ヒドロキシ酸（例えばクエン酸、乳酸、リンゴ酸）、フミン酸、胆汁酸、胆汁抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１５７】
不飽和脂肪酸は、限定されるものではないが、γ−リノレン酸、リノール酸、オレイン酸およびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１５８】
スチルベンおよびそれらの誘導体としては、例えば、スチルベン酸化物およびトランス−スチルベン酸化物が挙げられる。
【０１５９】
様々なさらなる任意の活性成分を本発明の組成物中に組み入れることができる。これらのさらなる成分の非限定的例としては、さらなるスキンケア活性剤、たとえば、ファルネソール、ビサボロール、フィタントリオール、尿素、グアニジン（例えばアミノグアニジン）；ヘキサミニジン（ｈｅｘａｍｉｎｉｄｉｎｅ）化合物、塩またはそれらの誘導体；糖アミン；セルフタンニング剤（例えばデヒドロキシアセトン）；構造化剤（ｓｔｒｕｃｔｕｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）；親水性ゲル化剤；抗挫創薬（レゾルシノールサリチル酸など）；皮膚スムージングおよびヒーリング剤、例えばアラントインなど；ならびにエッセンシャルオイル、芳香剤、皮膚感覚惹起剤（ｓｅｎｓａｔｅ）、乳白剤、芳香族化合物（例えばクローブ油、メントール、カンファー、ユーカリ油、およびオイゲノール）などの美的目的に好適な薬剤が挙げられる。本明細書中で記載する組成物は、当該技術分野で周知の技術を用いて身体に投与後に活性成分の即時放出、持続放出または遅延放出を提供するように処方することができる。
【０１６０】
組成物は、特定の細胞または組織を標的とする送達を可能にする適切な投与形態、例えば、エマルジョンとして、または活性成分が吸収、吸着、取り込みまたは結合され得るリポソーム、ニオソーム、ミクロスフィア、ナノ粒子中などであってよい。これは、製品を不溶性形態に効果的に変えることができる。これらの粒状形態は、安定性（例えば分解）および送達の両問題を克服することができる。
【０１６１】
溶液、懸濁液、ゲルおよびエマルジョンの使用が好ましく、例えば活性成分を水、ガス、水性液体、油、ゲル、エマルジョン、水中油もしくは油中水エマルジョン、分散液またはそれらの混合物中に担持させてもよい。
【０１６２】
乳化剤は、ノニオン性乳化剤、アニオン性乳化剤、カチオン性乳化剤、双性イオン性乳化剤、両性乳化剤またはその混合物から選択することができる。乳化剤は当該技術分野で公知である。例えば、ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ，  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ，  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （１９８６），  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ａｌｌｕｒｅｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎを参照のこと。
【０１６３】
美容上または薬剤的に許容される担体がシリコーン中水エマルジョンである場合、乳化剤は、好ましくは、ポリオキシアルキレンコポリマー、ポリグリセリルコポリマーまたはその混合物から選択される。シリコーンポリエーテルとしても知られるポリオキシアルキレンコポリマーは、米国特許第４，２６８，４９９号で詳細に記載されている。市販のポリオキシアルキレンコポリマーの一例には、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．からのＤＣ５２２５ＣまたはＤＣ２−５１８５Ｃ（シクロペンタシロキサンとのブレンドとして入手可能なＰＥＧ／ＰＰＧ−１８／１８ジメチコーン）；および信越化学工業株式会社からのＫＦ６０１７またはＫＦ６０２８（ＰＥＧ−９ジメチコーン）が含まれる。市販のポリグリセリル乳化剤の例としては、信越化学工業株式会社からの  ＫＦ６１００およびＫＦ６１０４が挙げられる。
【０１６４】
組成物は好ましくは、局所（すなわち、皮膚への）投与用である。
【０１６５】
局所組成物としては、ゲル、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、スプレー、ローション、軟膏（ｓａｌｖｅ）、スティック、セッケン、粉末剤、フィルム、エアロゾル、滴剤、フォーム、溶液、エマルジョン、懸濁液、分散液、例えば非イオン性ベシクル分散液、ミルクおよび当該技術分野で通常の任意の他の化粧または医薬形態が挙げられる。
【０１６６】
軟膏、ゲルおよびクリームは、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性基剤で処方することができる。ローションは、水性または油性基剤で処方することができ、一般に、１以上の乳化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤または着色剤も含む。粉末剤は、任意の好適な粉末基剤を利用して形成することができる。滴剤および溶液は、１以上の分散剤、可溶化剤または懸濁剤も含む水性または非水性基剤で処方することができる。エアロゾルスプレーは、好適なプロペラントを使用して加圧パックから都合よく送達される。
【０１６７】
いくつかの実施形態においては、本明細書中で記載する組成物は、ポリペプチドまたは組成物を塗布、含浸または化学的に結合させた製品、デバイスまたは材料を介して皮膚に局所投与することができる。このために、包帯、膏薬（例えば接着パッチ）、ガーゼ、サージカルテープ、綿棒または他の吸収材料、例えばパフ、フリース、もしくはスポンジ、または支持マトリックスを、本明細書中で記載する組成物でコーティング、含浸または化学的に結合させてもよい。例えば、当該技術分野で、例えば、参照により本明細書中に組み込まれる、米国特許出願第２００８／００３８３００号、米国特許出願第２００９／００４３２３６号、国際公開第２００５／０６７４９９号および国際公開第２００９／０８５３０２号で充分に記載されている皮膚パッチを用いて多くの組成物を皮膚に適用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書中で記載される組成物を含む材料は、例えば治療される対象が着用することができるデバイスの形態であってよい。例えば、本明細書中で記載するような組成物は、おむつ、手袋、靴下などの全部または一部を形成する材料または支持マトリックスに塗布、含浸または化学的に結合させることができる。
【０１６８】
したがって、本発明のさらなる態様は、本明細書中で記載する組成物でコーティング、含浸または化学的に結合させる製品、材料またはデバイスを提供することを含む。本発明はまた、本明細書中で記載する使用のためのそのような製品、材料またはデバイスにも及ぶ。好ましくは、前記製品は、包帯、膏薬（例えば接着パッチ）、ガーゼ、サージカルテープもしくは綿棒であるか、または前記デバイスはおむつ、手袋もしくは靴下である。
【０１６９】
化粧または医薬組成物は、容器、パック、またはディスペンサー中に投与用の使用説明書とともに含めることができる。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、組成物は、経口または非経口投与に適した形態で提供することができる。別の医薬形態には、したがって、活性構成要素を場合によって１以上の通常の不活性担体および／または希釈剤とともに、例えばコーンスターチ、ラクトース、スクロース、微結晶性セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水／エタノール、水／グリセロール、水／ソルビトール、水／ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロースまたは脂肪性物質、例えば硬質脂肪またはそれらの好適な混合物とともに含む素錠またはコート錠、カプセル、懸濁液および溶液が含まれる。
【０１７１】
本明細書中で記載される組成物中の活性成分の濃度は、組成物源（すなわち、上述の方法の出発物質）、投与様式、治療過程、患者の年齢および体重、美容上または治療上の適応症、治療される身体または身体部分に左右される可能性があり、選択にしたがって変更または調節され得る。しかしながら一般的には、ろ過ステップ（ｆ）の本発明にしたがって調製される組成物をステップ（ｇ）で０．００１、０．００５、０．０１または０．１〜５０％、例えば０．００５〜４０％、例えば０．１〜２５％、例えば０．１または０．５〜５、例えば１〜５％（ｗ／ｗまたはｖ／ｖ）に希釈して、投与用、特に局所投与用の最終製剤、例えばステップ（ｆ）後の組成物の１％または３％溶液を提供する。
【０１７２】
さらなる構成要素、例えば本明細書中で記載される追加の保湿剤が上記方法によって作成される組成物に添加される場合、さらなる構成要素は、０．０００１、０．０００５、０．００１または０．０１〜５０％、例えば０．０００５〜４０％、例えば０．０１〜２５％、例えば０．１または０．５〜５、例えば１〜５％（投与、特に局所投与用の最終製剤のｗ／ｗ）の量で存在し得る。組成物の有効な単回投与量は、局所適用した場合、治療される哺乳動物に応じて、単回用量として摂取して、０．０００１〜１００ｍｇ／ｃｍ2／日（組成物中の全タンパク質）、例えば０．１〜１００ｍｇ／ｃｍ2／日、好ましくは０．０００１〜１０ｍｇ／ｃｍ2／日、例えば０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ2／日の範囲内にあり得る。
【０１７３】
投与は、例えば、経口、腸、経皮、口腔、直腸もしくは局所投与または吸入による投与をはじめとするによるものであってよい。好ましい投与形態は、経口的に、または最も好ましくは、局所的に投与される。上記からわかるように、経口投与は活性成分が消化されやすい場合、限界がある。そのような問題を克服するために、成分を前述のように安定化させてもよい。
【０１７４】
好ましくは、液体溶液、クリームまたは懸濁液は、局所投与のために用いられる。
【０１７５】
組成物を適用または投与することができる動物は、哺乳動物に限定される。好ましくは、哺乳動物は霊長類、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ、ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ）および実験動物である。好ましい哺乳動物としては、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ネコ、イヌ、サル、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジおよびウマが挙げられる。特に好ましくは、組成物はヒトに適用、または投与される。
【０１７６】
以下の実施例は、例示のためだけに提示し、ここで参照される図面は次のとおりである。
［図面の簡単な説明］
［図１］図１は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製した孵化液組成物の１％を含むゲル（ゲルＢ）で４週間、１日２回治療した後、未治療の皮膚と比較して毛穴直径における（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
［図２］図２は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製した孵化液組成物の１％を含むゲル（ゲルＢ）で４週間、１日２回治療した後、未治療の皮膚と比較して、炎症性被布病変における（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
［図３］図３は、非炎症性被布病変の数の（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
［図４］図４は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化液組成物の３％およびグリコール酸の３％溶液を含むゲル（活性ゲル）の剥離効果を比較する棒グラフ（Ａ）を示す。低いスコアは鱗状の特性が少ないこと、すなわち角質除去の増加を意味する。（Ｂ）は、ｔ０および５分後に活性ゲルで治療した試験部位の写真を示す。
［図５］図５は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化液組成物の３％を含むゲル（ゲルＢ）で３週間、１日２回治療した後に、未治療の皮膚と比較して、皮膚水和における（Ａ）平均増加および（Ｂ）相対的増加を表す棒グラフを示す。
［図６］図６は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化組成物の３％を含むゲルで３週間、１日２回治療した後に、未治療の皮膚と比較して、湿疹または挫創の重篤度の（Ａ）平均視覚的評価および（Ｂ）相対的視覚評価を表す棒グラフを示す。
［図７］図７は、本発明の方法のステップ（ｆ）で調製される孵化組成物の３％を含むゲルで３週間、１日２回治療した後に、未治療の皮膚と比較して、炎症および非炎症皮膚病変の数における（Ａ）平均減少および（Ｂ）相対的減少を表す棒グラフを示す。
【実施例】
【０１７７】
実施例１：組成物の調製
組成物をサケ孵化液から調製した。孵化液のタンパク質濃度を改善するために、サケ卵を孵化前に最小体積の水に移した。高度に同期した孵化は、高温（室温）によって、または脱酸素化によって誘導することができ（Ｏｐｐｅｎ−Ｂｅｒｎｔｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９０，  Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，  ８６，  ｐｐ．  ４１７−４３０）、これによって粗ポリペプチドおよびポリペプチドの部分の少量の高度に濃縮された調製物を得る。孵化は９５％を超える胚について２時間以内に完了しなければならない。
【０１７８】
７μｍの孔サイズを有する標準的フィルターを用いて孵化液をろ過して、その後のろ過ステップでフィルターを詰まらせる可能性のある物質を除去した。このろ液（処理した孵化液）は、解凍してさらなるタンパク質生成のために用いられるまで、著しく分解することなく数年間凍結することができる。この事実は、孵化液組成物の調製用出発物質の製造を大幅に簡単にする。
【０１７９】
処理した孵化液をジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）イオン交換カラム上に製造業者の指示にしたがってロードし、２０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ溶液（ｐＨ８．５０）で洗浄した。流出物を捨てた。ロイコレクチンタンパク質をカラムから、５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む洗浄液で溶出させた。溶出液を他の用途のために集めた。関心対象のポリペプチド（すなわち、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼおよび卵殻ポリペプチド）をカラムから、１Ｍ  ＮａＣｌを含む洗浄液で溶出させた。溶出液を集め、次いで８ｋＤａのフィルター排除サイズでダイアフィルトレーションに供して、孵化液の水を緩衝液と交換した。この場合、緩衝液はリン酸塩緩衝生理食塩水であったが、他の緩衝液も等しく好適である。例えば、０．５ｍＭのリン酸塩および１ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液またはミリモル濃度のＴｒｉｓ（例えば１０ｍＭ）を中性付近または弱アルカリ性（ｐＨ７．５〜８．５）のｐＨで含み、５ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液が好適である。ダイアフィルトレーションステップからの残余分を集め、緩衝液の添加によって希釈した。
【０１８０】
最後に、ろ液を、０．２２μｍの孔サイズを有するフィルターを通してろ過し、最終ろ液を集めた。このろ液は、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼならびに粗孵化液で見いだされる卵殻ポリペプチドおよびポリペプチドの部分の高度に富化された溶液であって、孵化液由来のロイコレクチンポリペプチドを含まないかまたはごくわずかしか含まない。
【０１８１】
実施例２：毛穴サイズに対する組成物のインビボ効果
孵化液組成物を実施例１で記載するようにして調製した。組成物を１％のゲル［ｖ／ｖ］（単位体積のゲルあたりの組成物の合計体積）として調製し、活性構成要素を含まない対照ゲル、すなわち孵化液組成物（図１中のゲルＢ）と比較した。ゲルは、防腐剤（０．８％）、ジグリセリン（３．００％）およびキサンタンガム（０．８％）を水中に含んでいた。
【０１８２】
二重盲検プラセボ対照臨床試験を２３女性ボランティア対象に対して実施した。２３人の対照は２２．４〜５８．７歳（３９．３±１３．６歳）の年齢であった。
【０１８３】
試験は、顔面分割様式（ｓｐｌｉｔ−ｆａｃｅ  ｄｅｓｉｇｎ）を使用した。塗布部位は、顔面の右または左半分であった。活性ゲルを無作為に試験部位に配置した（右／左）。
【０１８４】
毛穴サイズ分析を法令線の上の頬の部分の毛穴に関して実施した。
【０１８５】
活性ゲルを対象が自宅で４週間にわたって１日２回塗布した。ゲルを通常の量で顔の半分に塗布し、反対側の半分は未治療のままで放置した（無作為に配置）。
【０１８６】
毛穴サイズを視覚化するために、酸化亜鉛含有クリーム（Ｐｅｎａｔｅｎ（登録商標））を、クリームが毛穴に取り込まれるように測定部分に塗布した。余剰をティッシュで慎重に除去した。マイクロ画像を、ＤスコープＩＩアタッチメント（４０倍の倍率を有するレンズ）を用いてＣａｎｏｎ  ＰｏｗｅｒＳｈｏｔ  Ｇ９デジタルカメラによって撮影し、ＦｏｔｏＦｉｎｄｅｒ（登録商標）２００７メディスコープソフトウェアによって記録した。Ｄ−Ｓｃｏｐｅはプリズムリフレクターリングおよび表示画面のバランスのとれた照明を保証する一体型ＬＥＤランプを有する。試験部位につき１枚の画像を撮影した。実験完了後、ソフトウェアＩｍａｇｅＪを使用して、試験部位につき３つの選択された毛穴のサイズ（直径）を測定した。同じ毛穴をｔ０およびｔ１で測定した。
【０１８７】
毛穴サイズ分析用の画像を第１ゲル塗布開始前（ｔ０）および治療の４週間後（ｔ１）に撮影した。すべての評価は、２１．５℃（±１℃）および５０％（±５％）相対湿度の調温調湿室中で実施した。時間ｔ１の時点での評価を最後の製品治療後１０〜２０時間でおこなった。
【０１８８】
ｔ０での試験部位間の差の評価のために、オリジナルデータを分析した。治療後（ｔ１）の試験部位間の差の評価のために、ｔ０および未治療状況に対するデータを分析した。二重関連データ（ｄｏｕｂｌｅ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｄａｔａ）（ｔ０および未治療状況に対するデータ）は次のようにして算出した：（ｔ１での治療状況／ｔ０での治療状況）／（ｔ１での未治療状況／ｔ０での未治療状況）。これらのデータは、未治療状況（対照）の変化およびそれらが異なる治療を受ける前の試験部位（対照試験部位を含む）間の差の変化を考慮したパラメータにおける変化を反映する。
【０１８９】
結果
ｔ０状況は均一であった。ｔ０評価後に活性ゲルで治療される試験部位は、未治療のまま放置される試験部位とは毛穴サイズが有意に異ならなかった（ｐ＝０．３８１１）。ｔ０で、毛穴サイズは平均で、未治療試験部位については０．６０（±０．１９）ｍｍであり、活性ゲルで治療した試験部位については０．６５（±０．２２）ｍｍであった。
【０１９０】
未治療試験部位の毛穴サイズは、試験期間内で均一であった（ｐ＝０．５０８４）。ｔ０および未治療ｔ１に対するデータに関して、活性ゲル（すなわち、１％のステップ（ｆ）の孵化液組成物を含む）で治療した皮膚は、４週間毎日治療した後に未治療状況と比べて毛穴サイズにおいて約２２％の統計的に有意な減少を示した（ｐ＝０．０００５）（図１）。有害な皮膚反応は記録されなかった。
【０１９１】
実施例３：皮膚病変（挫創）に対する組成物のインビボ効果
【０１９２】
ステップ（ｆ）の孵化液組成物を含むゲルを実施例２で記載されているようにして調製した（図２中のゲルＢ）。
【０１９３】
二重盲検プラセボ対照臨床試験を２１人の資格要件を満たした女性ボランティア対象で実施した。対象は、１８．２〜３４．５歳（２６．３±５．０歳）の年齢であった。対象は、額、頬および／またはアゴにシミがあることで実験に参加する資格要件を満たしていた。
【０１９４】
試験は、顔面分割様式（ｓｐｌｉｔ−ｆａｃｅ  ｄｅｓｉｇｎ）を使用した。塗布部位は、額、頬およびアゴを含む顔面の右または左半分であった。活性ゲルを無作為に試験部位に配置した（右／左）。
【０１９５】
活性ゲルを対象が自宅で４週間にわたって１日２回塗布した。製品を通常の量で顔の半分に塗布し、反対側の半分は未治療のままで放置した（無作為に配置）。
【０１９６】
炎症（丘疹、膿疱）および非炎症（ブラックヘッド、ホワイトヘッド）病変の数を、第１ゲル適用開始前（ｔ０）および治療の４週間後（ｔ１）に両試験部位に関して視覚的に計数した。すべての評価は、調温調湿室（ｃｌｉｍａｔｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｏｏｍ）中、２１．５℃（±１℃）および５０％（±５％）の相対湿度にて実施した。時間ｔ１での評価は、最後の製品治療後１０〜２０時間で行った。
【０１９７】
病変カウントは、どの所与の対象についても両評価で同じ査定者が実施した。すべての病変カウントは、標準的照明条件下で実施した。カウントは額、頬およびアゴ上で（鼻の部分は除く）、ブラックヘッド（開放面疱）、ホワイトヘッド（閉鎖面疱）、丘疹および膿疱のそれぞれについて行った。
【０１９８】
結果
炎症病変カウント
ｔ０状況は均一でなかった。ベースライン評価後に活性ゲルで治療される試験部位は、未治療のまま放置される試験部位からの炎症病変の数において有意に異なっていた（ｐ＝０．０２１７）。ｔ０で、炎症病変の数は平均で、未治療試験部位について８．４（±７．４）であり、活性ゲルで治療した試験部位について７．０（±６．５）であった。未治療試験部位の炎症病変の数は試験期間内で均一であった（ｐ＝０．０８１５）。
【０１９９】
活性ゲルで治療された皮膚は、４週間毎日治療した後に、未治療状況と比べて炎症病変の数において統計的に有意な減少を示した（ｐ＝０．００８６）（図２）。有害な皮膚反応は記録されなかった。
【０２００】
非炎症病変カウント
ｔ０状況は均一であった。ベースライン評価後に活性ゲルで処理される試験部位は、未治療のまま放置される試験部位からの非炎症病変の数と有意に異ならなかった（ｐ＝０．８７５３）。ｔ０で、非炎症病変の数は、平均で、未治療試験部位について３．２（±５．３）であり、ゲルＢ治療試験部位については２．８（±３．２）であった。未治療試験部位の非炎症病変の数は、試験期間内で均一であった（ｐ＝０．９０５７）。
【０２０１】
活性ゲルで治療された皮膚は、４週間毎日治療後の未治療状況と比較して、非炎症病変の数において統計的に有意な減少を示した（ｐ＝０．０２１５）（図３）。有害な皮膚反応は記録されなかった。
【０２０２】
実施例４：角質除去に対する組成物のインビボ効果
３％のステップ（ｆ）の孵化液組成物を含むゲルを実施例２で記載するようにして調製した。
【０２０３】
二重盲検プラセボ対照臨床試験を、両方のふくらはぎに乾燥した鱗状の皮膚の目に見える兆候を有する３人の女性対象に関して実施した。３人の対象は、３８．４〜５７．８歳の年齢（平均４８．１±９．７歳）であった。
【０２０４】
試験を用いて、孵化液組成物を含むゲルの、グリコール酸（３％）と比較した角質除去に対する影響を分析した。ふくらはぎ上に試験部分は８つあり、すなわち、活性ゲルまたはグリコール酸での治療について各ふくらはぎ上に４つであった。試験部位への製品治療の配分は順序を変えた。４つの試験部位のうち、１つは未治療のまま放置し、他の３つは５分、１０分または１５分間製品で治療した。
【０２０５】
試験製品治療直後（ｔ０）、Ｄ−Ｓｑｕａｍｅ（登録商標）サンプルを各ふくらはぎから採取した（４つの試験部位の重複部分で）。活性ゲルおよびグリコール酸（３％）を技術者がふくらはぎの各試験部位上に１回塗布した。製品を皮膚に５分、１０分および１５分間作用させ、１つの試験部位は治療しなかった（「０分」）。次いで、４つの試験部位すべてを水ですすぎ、風乾した後、Ｄ−Ｓｑｕａｍｅ（登録商標）サンプルを４つの試験部位すべてから採取した。すべてのＤ−Ｓｑｕａｍｅ（登録商標）ディスクを黒色記録カードに写し、以下のスコアを使用して鱗状の特性の程度に関して視覚的に評価した：
スコア０：存在しない
スコア１：若干
スコア２：軽度
スコア３：重度
スコア４：極度
不快症状有害反応はなかった。
【０２０６】
結果
Ｄ−Ｓｑｕａｍｅｓ（登録商標）を使用する３人の対象に対する角質除去の評価は、５分、１０分または１５分の治療レジメン後のグリコール酸と比較して、活性ゲルについて平均で鱗状の特定におけるより高い減少が明らかになった（図４）。
【０２０７】
実施例５：皮膚水和に対する組成物のインビボ効果
ステップ（ｆ）の孵化液組成物の３％を含むゲルを実施例２で記載するようにして調製した。
【０２０８】
４人の対象に対して二重盲検プラセボ対照臨床試験を実施した。対象は、前腕に乾燥肌を有することによって実験に参加する資格を得た。４人の対象は、５６．３〜７０．９歳（平均で６４．３±６．３歳）の年齢の者であった。
【０２０９】
皮膚水和を分析するための試験部位は両前腕であった。前腕上に試験部位は４か所あり、すなわち前腕の各内側に２か所ずつであった。２つの部分を、孵化液組成物を含む活性ゲルで治療し、１つをグリセリン（対照）で治療し、４分の１を未治療のままで放置した。
【０２１０】
治療は対照が自宅で３週間の期間にわたって実施した。製品を約２ｍｇ／ｃｍ2の量で対応する前腕試験部位に塗布した（無作為化、１つの試験部位を未治療のままで放置し、もう一方は対照としてグリセリンで治療した）。
【０２１１】
第１製品塗布の開始前（ｔ０）および治療の３週間後（ｔ１）、前腕の皮膚水和（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５（登録商標）、１０回反復測定）を測定した。
【０２１２】
全ての測定を２１．５℃（±１℃）および５０％（±５％）相対湿度の調候室中で実施し、彼らの覆われていない試験部位をこれらの屋内機構条件に少なくとも３０分間適応させた。ｔ１時点の測定および治療を最後の製品治療後１０〜２０時間におこなった。
【０２１３】
結果
ステップ（ｆ）の孵化液組成物を含む活性ゲル（ゲルＢ）で治療した皮膚は、１日２回製品で３週間治療した後に、非治療状態と比べて４人の対象に関して皮膚水和において約２１％の平均増加を示した（図５）。
【０２１４】
実施例６：湿疹および挫創に対する組成物のインビボ効果
３％のステップ（ｆ）の孵化液組成物を含むゲルを実施例２で記載するようにして調製した。
【０２１５】
二重盲検プラセボ対照臨床試験を４人の対象、２人は湿疹について、２人は挫創について実施した。対象は、湿疹または挫創（専門家によるによって視覚的により評価）を有することによって実験に参加する資格を得た。湿疹または挫創の等級に関する活性の効果を選択された問題領域、すなわち、手もしくは腕（湿疹）または顔（挫創）で分析した。
【０２１６】
活性ゲルを、実務に反応する量の製品を用いて、３週間の期間にわたって自宅で１日２回、朝晩に対象が塗布した。
【０２１７】
第１製品塗布の開始直前（ｔ０）および３週間の治療後（ｔ１）に、湿疹または挫創の等級を客観的皮膚科学的ライフスコア（ｌｉｆｅ  ｓｃｏｒｉｎｇ）および主観的評価によって対象自身が視覚的に評価した。病変カウント（非炎症病変（ホワイトヘッドおよびブラックヘッド）ならびに炎症病変（丘疹および膿疱）の数および性質を皮膚科学的に評価した（顔面挫創を有する２人の対象についてのみ））。
【０２１８】
専門家による視覚的評価および客観的評価は、主観的評価を以下のスコアにしたがって実施した：
スコア０：存在しない
スコア１：若干
スコア２：軽度
スコア３：重度
スコア４：極度
【０２１９】
専門家による視覚的評価ならびに主観的評価（データは不掲載）は、活性ゲルでの３週間の治療レジメン後に２人の対象に関して平均で湿疹および座孫のグレードについて減少を示した（図６）。病変カウントから、活性ゲルでの３週間の治療レジメン後に２人の対象に関して平均で炎症および非炎症病変の数の減少が明らかになった（図７）。
【０２２０】
配列：
配列番号１：メタロプロテアーゼ−タイセイヨウサケ
ＭＤＨＲＰＴＬＳＬＬ  ＬＬＬＬＬＬＧＬＳＱ  ＡＳＧＮＥＦＨＤＥＰ  ＤＨＶＳＩＴＳＶＩＬ  ＫＳＮＮＧＴＮＥＬＬ  ＬＤＧＤＩＬＡＰＲＴ  ＲＮＡＭＫＣＦＳＳＱ  ＹＳＣＬＷＫＫＳＳＤ  ＧＬＶＹＶＰＹＩＬＳ  ＡＶＹＳＳＬＥＶＥＴ  ＩＥＴＡＭＫＹＦＱＧ  ＫＴＣＩＲＦＩＰＲＫ  ＴＱＴＡＹＬＤＩＱＳ  ＳＧＧＣＦＧＴＶＧＴ  ＶＧＤＲＱＴＬＳＬＡ  ＱＦＧＣＶＱＨＧＩＩ  ＱＨＥＬＬＨＡＬＧＦ  ＨＥＨＮＲＳＤＲＥ  ＱＹＩＲＩＮＷＱＹＩ  ＹＤＹＡＶＧＮＦＱＫ  ＥＤＴＮＮＬＨＴＡＹ  ＤＹＳＳＶＭＨＹＤＲ  ＴＡＹＴＮＤＹＧＫＥ  ＴＩＴＰＩＰＤＰＳＶ  ＡＩＧＱＲＬＧＭＳＤ  ＩＤＶＬＫＶＮＫＬＹ  ＱＣ
【０２２１】
配列番号２：卵殻ポリペプチドＩフラグメント−タイセイヨウサケ
ＴＶＴＶＱＣＴＫＤＧ  ＱＦＶＶＶＶＳＲＤＡ  ＴＬＰＮＬＥＬＤＳＩ  ＳＬＬＧＡＮＧＡＨＣ  ＴＰＶＧＴＴＳＡＦＡ  ＩＹＱＦＫＶＴＥＣＧ  ＴＶＶＴＥＥＰＤＴＩ  ＶＹＥＮＲＭＳＳＳＹ  ＶＶＧＩＧＰＦＧＤＩ  ＴＲＤＳＨＹＤＬＶＦ  ＱＣＲＹＴＧＴＳＶＥ  ＴＬＶＩＥＶＫ
【０２２２】
配列番号３：卵殻ポリペプチドＩＩフラグメント−サケ
ＡＶＴＶＱＣＴＫＤＧ  ＱＦＶＶＶＶＡＲＤＡ  ＴＬＰＳＬＥＬＤＳＩ  ＳＬＬＧＴＮＧＰＨＣ  ＨＡＩＧＴＴＳＶＦＡ  ＩＹＱＦＫＶＴＥＣＧ  ＴＶＭＴＥＥＴＤＴＩ  ＩＹＥＮＲＭＳＳＳＹ  ＱＶＧＶＧＰＦＧＳＩ  ＴＲＤＳＱＹＤＬＴＦ  ＱＣＲＹＫＧＳＴＩＶ  ＡＶＶＩＤＶＫＰＶＰ  ＰＰＮＰＤＩＡＰＧＰ  ＬＴＶＥＬＲＬＧＳＧ  ＴＣＬＴＫＧＣＮＥＥ  ＥＶＡＹＴＳＹＹＴＥ  ＡＤＹＰＶＴＫＶＬＲ  ＤＰＶＹＴＥＶＲＩＬ  ＡＲＴＤＰＮＩＶＬＴ  ＬＧＲＣＷＡＴＴＮＰ  ＮＰＬＳＬＰＱＷＤＬ  ＬＩＤＧＣＰＹＱＤＤ  ＲＹＬＴＴＰＩＮＶＧ  ＰＳＳＧＬＳＦＰＴＨ  ＹＲＲＦＶＬＫＭＦＴ  ＦＶＤＰＭＳＭＴＰＬ  Ｒ
【０２２３】
配列番号４：卵殻ポリペプチドＩＩＩフラグメント−サケ
ＡＥＣＲＥＮＭＶＨＶ  ＥＡＫＨＤＬＬＧＩＧ  ＱＬＩＱＬＥＤＬＴＬ  ＧＤＣＰＭＳＧＦＤＮ  ＩＮＱＶＬＩＦＥＳＰ  ＬＱＳＣＧＳＱＬＲＭ  ＴＴＮＳＬＩＹＩＦＴ  ＬＹＹＫＰＫＰＬＡＮ  ＴＰＬＩＲＴＮＤＡＭ  ＩＮＩＥＣＨＹＰＲＫ  ＨＮＶＳＳＬＡＬＩＰ  ＴＷＴＰＦＳＡＡＫＹ  ＡＥＥＬＬＹＦＳＭＲ  ＬＭＴＡＤＷＱＹＥＲ  ＡＧＮＭＹＶＬＧＤＭ  ＶＮＩＥＡＳＶＭＱＹ  ＦＨＶＰＬＲＩＦＶＤ  ＳＣＶＡＴＬＥＰＮＩ  ＮＡＮＰＲＹＡＦＩＥ  ＮＨＧＣＬＩＤＡＫＭ  ＴＧＳＨＳＱＦＭＰＲ  ＳＡＤＹＫＬＹＦＱＶ  ＥＡＦＲ
【０２２４】
配列番号５：完全長ｚｒ−タンパク質−タイセイヨウサケ
ＭＫＷＳＡＶＣＬＶＡ  ＶＡＴＬＧＷＬＣＤＡ  ＱＮＦＬＥＫＰＧＷＰ  ＰＩＱＴＰＰＳＷＰＰ  ＱＴＰＱＲＰＶＱＰＬ  ＰＱＲＰＡＱＰＦＬＱ  ＫＰＡＱＰＩＰＱＲＩ  ＰＹＴＥＤＤＴＫＱＴ  ＣＥＶＶＤＫＤＫＶＳ  ＣＧＬＳＧＩＴＡＡＱ  ＣＱＡＩＳＣＣＦＤＧ  ＲＭＣＦＹＧＫＴＶＴ  ＶＱＣＴＫＤＧＱＦＶ  ＶＶＶＳＲＤＡＴＬＰ  ＮＬＥＬＤＳＩＳＬＬ  ＧＡＮＧＡＨＣＴＰＶ  ＧＴＴＳＡＦＡＩＹＱ  ＦＫＶＴＥＣＧＴＶＶ  ＴＥＥＰＤＴＩＶＹＥ  ＮＲＭＳＳＳＹＶＶＧ  ＩＧＰＦＧＤＩＴＲＤ  ＳＨＹＤＬＶＦＱＣＲ  ＹＴＧＴＳＶＥＴＬＶ  ＩＥＶＫＴＹＰＮＰＮ  ＰＶＶＴＶＤＡＶＬＮ  ＶＥＬＲＬＡＮＧＲＣ  ＬＳＫＧＣＤＥＭＱＥ  ＡＹＴＳＹＹＴＶＡＤ  ＹＰＶＴＫＶＬＲＤＰ  ＶＹＡＥＶＲＩＬＧＭ  ＴＤＰＮＶＶＬＴＬＥ  ＱＣＷＡＴＩＤＰＴＧ  ＤＲＬＰＲＷＤＬＬＶ  ＮＧＣＰＹＱＤＤＲＹ  ＬＴＶＰＩＡＳＤＳＳ  ＹＩＰＰＧＥＦＬＳＨ  ＹＫＲＦＶＦＫＭＦＴ  ＦＶＤＰＴＳＭＶＰＬ  ＱＥＮＶＹＩＨＣＲＡ  ＴＶＣＨＡＬＡＧＳＣ  ＥＱＲＣＮＲＱＲＲＤ  ＬＳＡＱＧＱＫＫＴＫ  ＧＤＶＶＶＳＳＱＫＶ  ＩＭＩＤＰＳＬＹＡ
【０２２５】
配列番号６：完全長コリオジェニンＨ−タイヘイヨウサケ
ＭＫＷＳＡＶＣＬＶＡ  ＶＡＴＬＧＷＬＣＤＡ  ＱＩＹＬＥＫＰＧＷＰ  ＰＩＱＴＰＡＳＷＰＡ  ＱＰＰＥＫＰＶＱＰＰ  ＱＲＰＡＱＰＰＱＷＰ  ＡＱＰＰＱＷＰＡＱＰ  ＰＱＲＰＡＱＰＰＱＲ  ＰＡＱＴＱＱＷＰＧＱ  ＰＰＱＲＰＡＱＰＰＱ  ＷＰＡＱＰＰＱＲＰＡ  ＱＰＰＱＲＰＡＱＰＰ  ＱＲＰＡＱＰＰＰＲＰ  ＡＱＰＰＱＷＰＶＨＰ  ＰＱＷＰＶＱＰＧＴＰ  ＬＱＲＰＫＦＰＳＤＰ  ＧＳＫＱＳＣＤＶＤＳ  ＱＨＫＶＱＣＧＬＰＤ  ＩＴＡＡＨＣＤＡＩＮ  ＣＣＦＤＧＲＭＣＦＹ  ＧＫＡＶＴＶＱＣＴＫ  ＤＧＱＦＶＶＶＶＡＲ  ＤＡＴＬＰＳＬＥＬＤ  ＳＩＳＬＬＧＴＮＧＰ  ＨＣＨＡＩＧＴＴＳＶ  ＦＡＩＹＱＦＫＶＴＥ  ＣＧＴＶＭＴＥＥＴＤ  ＴＩＩＹＥＮＲＭＳＳ  ＳＹＱＶＧＶＧＰＦＧ  ＳＩＴＲＤＳＱＹＤＬＴＦＱＣＲＹＫＧＳＴ  ＩＶＡＶＶＩＤＶＫＰ  ＶＰＰＰＮＰＤＩＡＰ  ＧＰＬＴＶＥＬＲＬＧ  ＳＧＴＣＬＴＫＧＣＮ  ＥＥＥＶＡＹＴＳＹＹ  ＴＥＡＤＹＰＶＴＫＶ  ＬＲＤＰＶＹＴＥＶＲ  ＩＬＡＲＴＤＰＮＩＶ  ＬＴＬＧＲＣＷＡＴＴ  ＮＰＮＰＬＳＬＰＱＷ  ＤＬＬＩＤＧＣＰＹＱ  ＤＤＲＹＬＴＴＰＩＮ  ＶＧＰＳＳＧＬＳＦＰ  ＴＨＹＲＲＦＶＬＫＭ  ＦＴＦＶＤＰＭＳＭＴ  ＰＬＲＥＴＶＦＩＨＣ  ＮＴＡＶＣＬＰＳＨＧ  ＤＳＣＥＰＲＣＹＲＫ  ＲＲＤＩＰＡＡＶＱＫ  ＴＴＲＩＫＳＮＬＶＳ  ＳゲルＩＬＴＤＰＲ  ＥＬＴＮ
【０２２６】
配列番号７：完全長コリオジェニンＬ−タイヘイヨウサケ
ＭＡＭＫＷＳＶＶＣＬ  ＶＡＶＡＭＬＧＣＬＣ  ＶＡＱＩＷＰＰＳＩＫ  ＰＶＱＱＰＦＲＰＮＲ  ＰＰＰＱＱＰＱＱＰＰ  ＹＱＫＰＲＩＰＰＫＤ  ＱＴＱＡＫＱＫＦＥＴ  ＰＬＤＷＴＹＰＬＤＰ  ＫＰＥＰＫＩＩＧＧＳ  ＥＡＲＴＰＶＡＡＮＳ  ＶＲＡＥＣＲＥＮＭＶ  ＨＶＥＡＫＨＤＬＬＧ  ＩＧＱＬＩＱＬＥＤＬ  ＴＬＧＤＣＰＭＳＧＦ  ＤＮＩＮＱＶＬＩＦＥ  ＳＰＬＱＳＣＧＳＱＬ  ＲＭＴＴＮＳＬＩＹＩ  ＦＴＬＹＹＫＰＫＰＬ  ＡＮＴＰＬＩＲＴＮＤ  ＡＭＩＮＩＥＣＨＹＰ  ＲＫＨＮＶＳＳＬＡＬ  ＩＰＴＷＴＰＦＳＡＡ  ＫＹＡＥＥＬＬＹＦＳ  ＭＲＬＭＴＡＤＷＱＹ  ＥＲＡＧＮＭＹＶＬＧ  ＤＭＶＮＩＥＡＳＶＭ  ＱＹＦＨＶＰＬＲＩＦ  ＶＤＳＣＶＡＴＬＥＰ  ＮＩＮＡＮＰＲＹＡＦ  ＩＥＮＨＧＣＬＩＤＡ  ＫＭＴＧＳＨＳＱＦＭ  ＰＲＳＡＤＹＫＬＹＦ  ＱＶＥＡＦＲＦＱＳＱ  ＲＧＳＤＰＩＩＰＱＫ  ＴＫＩＰＦＱＰＡＡＤ  ＹＰＡＴＬＤＭＩＦＬ  ＴＣＨＬＫＡＴＴＩＡ  ＦＰＩＤＦＥＹＫＡＣ  ＳＦＩＮＴＷＲＥＡＧ  ＧＮＤＧＶＣＧＣＣＤ  ＳＴＣＳＮＲＫＧＲＤ  ＴＴＴＨＱＫＰＡＮＩ  ＷＥＧＤＶＱＬＧＰＩ  ＦＩＳＥＫＶＥＱ
【０２２７】
配列番号８：別のｚｒ−タンパク質−タイセイヨウサケ
ＫＷＳＹＱＬＰＱＫＬ  ＡＱＰＬＰＱＫＰＡＱ  ＰＬＰＱＷＰＶＱＰＬ  ＰＱＲＰＡＥＰＬＰＱ  ＲＰＡＱＰＬＰＱＷＰ  ＶＱＰＬＰＱＲＰＡＥ  ＰＬＰＱＲＰＡＱＰＬ  ＰＱＲＰＶＱＰＬＰＱ  ＲＰＡＱＰＦＬＱＫＰ  ＡＱＰＩＰＱＲＩＰＹ  ＴＫＤＤＴＫＱＴＣＥ  ＶＶＤＫＤＫＶＳＣＧ  ＬＳＧＩＴＡＡＱＣＱ  ＡＩＳＣＣＦＤＧＲＭ  ＣＦＹＧＫＴＶＴＦＱ  ＣＴＫＤＧＱＦＶＶＶ  ＶＳＲＤＡＴＬＰＮＬ  ＥＬＤＳＩＳＬＬＧＡ  ＮＧＡＨＣＴＰＶＧＴ  ＴＳＡＦＡＩＹＱＦＫ  ＶＴＥＣＧＴＶＶＴＥ  ＥＰＤＴＩＶＹＥＮＲ  ＭＳＳＳＹＶＶＧＩＧ  ＰＦＧＤＩＴＲＤＳＨ  ＹＤＬＶＦＱＣＲＹＴ  ＧＴＳＶＥＴＬＶＩＥ  ＶＫＴＹＰＮＰＮＰＶ  ＶＴＶＤＡＶＬＮＶＥ  ＬＲＬＡＮＧＲＣＬＳ  ＫＧＣＤＥＭＱＥＡＹ  ＴＳＹＹＴＶＡＤＹＰ  ＶＴＫＶＬＲＤＰＶＹ  ＡＥＶＲＩＬＧＭＴＤ  ＰＮＶＶＬＴＬＥＱＣ  ＷＡＴＴＤＰＴＧＤＲ  ＬＰＲＷＤＬＬＶＮＧ  ＣＰＹＱＤＤＲＹＬＴ  ＶＰＩＡＳＤＳＳＹＩ  ＰＰＧＥＦＬＳＨＹＫ  ＲＦＶＦＫＭＦＴＦＶ  ＤＰＴＳＭＶＰＬＱＥ  ＮＶＹＩＨＣＲＡＴＶ  ＣＨＡＬＡＧＳＣＥＱ  ＲＣＮＲＱＲＲＤＬＳ  ＡＱＧＱＫＫＴＫＧＤ  ＶＶＶＳＳＱＫＶＩＭ  ＩＤＰＳＬＹＡ
【０２２８】
配列番号９：サケ胚由来のロイコレクチンポリペプチド：
ＭＲＴＴＡＡＦＬＬＶＬＣＬＬＡＩＳＨＡＷＤＣＱＥＶＶＮＩＫＮＬＭＱＩＤＡＧＬＧＱＶＶＡＴＤＴＳＱＩＰＹＹＬＶＧＤＫＷＩＲＬＰＧＳＬＫＨＩＴＶＧＰＡＧＩＷＧＶＮＫＤＹＡＩＹＫＹＶＡＧＮＷＶＱＡＡＧＬＬＫＱＬＤＡＧＧＥＱＦＩＶＧＡＮＭＮＤＴＰＹＣＬＴＳＳＡＴＶＧＹＫＧＰＧＳＰＬＰＷＴＧＬＰＧＡＶＫＹＹＳＣＧＰＦＧＣＷＡＶＮＫＮＤＤＩＹＬＭＳＬＮＱＤＣＱＮＫＧＷＳＨＩＥＧＫＬＳＭＩＥＶＡＴＤＧＳＶＦＧＶＮＳＡＧＳＶＹＴＲＤＧＩＴＡＳＫＰＥＧＴＧＷＳＮＩＰＭＧＭＬＭＧＨＶＴＹＤＬＧＲＬＷＶＶＳＫＳＡＶＴＭＶＣＴＨ
【０２２９】
配列番号１０：サケ白血球由来のロイコレクチンポリペプチド：
ＳＩＰＹＹＬＶＧＤＫＷＩＲＬＰＧＳＬＫＨＩＴＶＧＰＡＧＩＷＧＶＮＫＤＹＡＩＹＫＹＶＡＧＮＷＶＱＡＡＧＬＰＫＱＬＤＡＧＧＥＱＦＩＶＧＡＮＭＤＤＴＰＹＣＬＴＳＳＡＴＶＧＹＫＧＰＧＳＰＬＰＷＴＧＬＰＧＡＶＫＹＹＳＣＧＰＦＧＣＷＡＶＮＫＮＤＤＩＹＬＭＳＬＮＱＤＣＱＮＮＧＷＳＨＩＥＧＫＬＳＭＩＥＶＡＴＤＧＳＶＦＧＶＮＳＡＧＳＶＹＴＲＤＧＩＴＡＳＫＰＥＧＴＧＷＳＮＩＰＭＣＭＬＭＧＨＶＴＹＤＬＧＲＬＷＶＶＳＫＳＡＶＴＭＶＣＴＨ
【０２３０】
配列番号１１：サケ由来のロイコレクチン−２ポリペプチド：
ＭＲＴＴＡＡＦＬＬＶＬＣＬＬＡＩＳＨＡＷＤＣＱＥＶＶＮＩＫＮＬＭＱＩＤＡＧＬＧＱＶＶＡＴＤＴＳＱＩＰＹＹＬＶＧＤＫＷＩＲＬＰＧＳＬＫＨＩＴＶＧＰＡＧＩＷＧＶＮＫＤＹＡＩＹＫＹＶＡＧＮＷＶＱＡＡＧＬＬＫＱＬＤＡＧＧＮＱＦＶＶＧＡＮＭＤＤＴＰＦＣＬＴＳＳＡＴＶＧＹＫＧＰＧＳＰＬＰＷＴＧＬＰＧＡＶＫＹＹＳＣＧＨＦＧＣＷＡＶＮＫＮＤＤＩＦＬＭＳＬＮＱＤＣＱＮＮＧＷＳＨＩＤＧＫＬＳＭＩＥＶＡＴＤＧＳＶＦＧＶＮＳＡＧＳＶＹＴＲＤＧＩＴＡＳＫＰＥＧＴＧＷＳＮＩＰＭＧＭＬＭＧＨＶＴＹＤＬＧＲＬＷＶＶＳＫＳＧＧＴＭＶＣＴＨ
【０２３１】
配列番号１２：サケ由来のロイコレクチン−３ポリペプチド：
ＭＧＴＴＡＡＦＬＬＶＬＣＬＬＡＩＳＨＡＷＤＣＱＥＶＶＮＩＫＮＬＭＱＩＤＡＧＬＧＱＶＶＡＴＤＴＳＱＩＰＹＹＬＶＧＤＫＷＩＲＬＰＧＳＬＫＨＩＴＶＧＰＡＧＩＷＧＶＮＫＤＹＡＩＹＫＹＶＡＧＮＷＶＱＡＡＧＬＬＫＱＬＤＡＧＧＥＱＦＩＶＧＡＮＭＮＤＴＰＹＣＬＴＳＳＡＴＶＧＹＫＧＰＧＳＰＬＰＷＴＧＬＰＧＡＶＫＹＹＳＣＧＰＦＧＣＷＡＶＮＫＮＤＤＩＹＬＭＳＬＮＱＤＣＱＮＫＧＷＳＨＩＥＧＫＬＳＭＩＥＶＡＴＤＧＳＶＦＧＶＮＳＡＧＳＶＹＴＲＤＧＩＴＡＳＫＰＥＧＴＧＷＳＮＩＰＭＧＭＬＭＧＨＶＴＹＤＬＧＲＬＷＶＶＹＫＳＡＶＴＭＶＣＴＨ
【受託番号】
【０２３２】
【配列フリーテキスト】
【０２３３】
【図１】
2016510312.tif 000006
【図２】
2016510312.tif 000007
【図３】
2016510312.tif 000008
【図５】
2016510312.tif 000009
【図６】
2016510312.tif 000010
【図７】
2016510312.tif 000011
【図４】
2016510312.tif 000012
【配列表】
2016510312000001.app
【国際調査報告】
2016510312.tif 000013
2016510312.tif 000014
2016510312.tif 000015