(57)【要約】Ｂ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能な、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体「６Ｈ３」、その抗原結合フラグメント、誘導体、およびヒト化変異体と、癌および他の疾患の診断および治療におけるそのような分子の使用と、を開示する。好ましい実施形態では、分子は、腫瘍増殖を遅延もしくは予防するために、腫瘍媒介抑制を阻害するために、腫瘍を排除するために、ならびに／または腫瘍関連マクロファージ（「ＴＡＭ」）の活性を枯渇もしくはブロックしてその活性の改変および／もしくはＴＡＭ媒介免疫抑制の減少を行うために、使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の抗原結合フラグメントを含む分子であって、前記分子が、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合し、かつ前記抗原結合フラグメントが、
（１）抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域であって、配列番号１８〜２３のいずれかのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、
（２）抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域であって、配列番号２４〜２９のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
を含む、分子。
【請求項２】
前記分子が、
（Ｉ）細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか、
（ＩＩ）内因性濃度で生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか、
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合してＢ７−Ｈ４とその細胞レセプターとの間の結合をモジュレートするか、
（ＩＶ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージによる免疫抑制を阻害するか、
（Ｖ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージの活性をモジュレートするか、
（ＶＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍媒介抑制を阻害するか、または
（ＶＩＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍特異的細胞溶解を引き起こす、
請求項１に記載の分子。
【請求項３】
前記分子が、
（１）アミノ酸配列配列番号１９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２４を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（２）アミノ酸配列配列番号１９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２６を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（３）アミノ酸配列配列番号１９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２８を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（４）アミノ酸配列配列番号１９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（５）アミノ酸配列配列番号２０を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２６を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（６）アミノ酸配列配列番号２０を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２８を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（７）アミノ酸配列配列番号２０を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（８）アミノ酸配列配列番号２２を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２４を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（９）アミノ酸配列配列番号２２を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２６を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（１０）アミノ酸配列配列番号２２を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２８を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（１１）アミノ酸配列配列番号２２を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（１２）アミノ酸配列配列番号２３を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２６を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
（１３）アミノ酸配列配列番号２３を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２８を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、または
（１４）アミノ酸配列配列番号２３を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列配列番号２９を含む抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域、
を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の分子。
【請求項４】
前記分子が、検出可能に標識されるか、またはコンジュゲートされた毒素、薬剤、レセプター、酵素、レセプターリガンドを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の分子。
【請求項５】
前記分子が、前記細胞内に内在化可能であり、かつ前記細胞の死滅を媒介可能である、請求項２〜４のいずれか一項に記載の分子。
【請求項６】
前記生細胞が、腫瘍細胞、病原体感染細胞、またはマクロファージである、請求項２〜５のいずれか一項に記載の分子。
【請求項７】
前記分子が抗体であり、かつ前記抗体が、
（Ｉ）モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、もしくはヒト化抗体、または
（ｉｉ）二重特異的抗体、三重特異的抗体、もしくは多重特異的抗体、
である、請求項１に記載の分子。
【請求項８】
前記分子がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の分子。
【請求項９】
前記分子がＡＤＣＣ活性を有し、かつ直接的な腫瘍死滅活性もしくはＴＡＭ死滅活性が可能であり、かつ／またはＴＡＭ媒介抑制もしくは腫瘍媒介抑制を阻害可能である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の分子。
【請求項１０】
前記分子が、Ｂ７−Ｈ４および同一細胞上の異なる分子に結合可能な二重特異的抗体、三重特異的抗体、または多重特異的抗体である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の分子。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の治療上有効量または予防上有効量の分子と、生理学的に許容可能な担体または賦形剤と、を含む、癌または感染性疾患を治療するための医薬組成物であって、前記分子が、Ｂ７−Ｈ４媒介抑制をアンタゴナイズして免疫反応をアップモジュレートする、医薬組成物。
【請求項１２】
癌もしくは感染性疾患の症状を呈する被験体において癌もしくは感染性疾患を治療するための、または前記症状が現れる前の被験体において癌もしくは感染性疾患を予防するための、請求項１１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１３】
慢性ウイルス性疾患を治療するための前記組成物であり、かつ前記使用が前記慢性ウイルス性疾患の治療である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
被験体において疾患の存在を診断するための細胞学的アッセイにおける使用であり、前記細胞学的アッセイが、前記分子に結合する能力に関して前記被験体の細胞をアッセイすることを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の分子の使用。
【請求項１５】
前記疾患が癌またはＴ細胞の数もしくは健康に影響を及ぼす疾患である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
抗癌剤で腫瘍を治療すべく被験体の適合性を決定するための使用であり、前記使用が、前記腫瘍のマイクロ環境内の腫瘍関連マクロファージの有効濃度または実際の濃度を決定することを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の分子の使用。
【請求項１７】
前記抗癌剤の用量または前記抗癌剤を用いた前記治療が、前記腫瘍関連マクロファージの決定された有効濃度または実際の濃度に基づいて設定または調整される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
Ｂ７−Ｈ４発現腫瘍関連マクロファージの有効濃度の上昇を呈すると同定された患者おいて癌を治療する際の、請求項１１に記載の治療上有効量の医薬組成物の使用。
【請求項１９】
前記腫瘍または前記癌の前記治療が、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、または手術を追加的に含む、請求項１２、１６、または１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
抗体６Ｈ３の抗原結合フラグメントを含む分子であって、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する、分子。
【請求項２１】
前記分子が、
（Ｉ）細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか、
（ＩＩ）内因性濃度で生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか、
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合してＢ７−Ｈ４とその細胞レセプターとの間の結合をモジュレートするか、
（ＩＶ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージによる免疫抑制を阻害するか、
（Ｖ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージの活性をモジュレートするか、
（ＶＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍媒介抑制を阻害するか、または
（ＶＩＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍特異的細胞溶解を引き起こす、
請求項２０に記載の分子。
【請求項２２】
前記分子が、検出可能に標識されるか、またはコンジュゲートされた毒素、薬剤、レセプター、酵素、レセプターリガンドを含む、請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の分子。
【請求項２３】
前記分子が、前記細胞内に内在化可能であり、かつ前記細胞の死滅を媒介可能である、請求項２１〜２２のいずれか一項に記載の分子。
【請求項２４】
前記生細胞が、腫瘍細胞、病原体感染細胞、またはマクロファージである、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の分子。
【請求項２５】
前記分子が抗体であり、かつ前記抗体が、
（Ｉ）モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、もしくはヒト化抗体、または
（ｉｉ）二重特異的抗体、三重特異的抗体、もしくは多重特異的抗体、
である、請求項２０に記載の分子。
【請求項２６】
前記分子がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の分子。
【請求項２７】
前記分子がＡＤＣＣ活性を有し、かつ直接的な腫瘍死滅活性もしくはＴＡＭ死滅活性が可能であり、かつ／またはＴＡＭ媒介抑制もしくは腫瘍媒介抑制を阻害可能である、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の分子。
【請求項２８】
前記分子が、Ｂ７−Ｈ４および同一細胞上の異なる分子に結合可能な二重特異的抗体、三重特異的抗体、または多重特異的抗体である、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の分子。
【請求項２９】
請求項２０〜２８のいずれか一項に記載の治療上有効量または予防上有効量の分子と、生理学的に許容可能な担体または賦形剤と、を含む、癌または感染性疾患を治療するための医薬組成物であって、前記分子が、Ｂ７−Ｈ４媒介抑制をアンタゴナイズして免疫反応をアップモジュレートする、医薬組成物。
【請求項３０】
癌もしくは感染性疾患の症状を呈する被験体において癌もしくは感染性疾患を治療するための、または前記症状が現れる前の被験体において癌もしくは感染性疾患を予防するための、請求項２９に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３１】
慢性ウイルス性疾患を治療するための前記組成物であり、かつ前記使用が前記慢性ウイルス性疾患の治療である、請求項２９に記載の医薬組成物または請求項３４に記載のその使用。
【請求項３２】
被験体において疾患の存在を診断するための細胞学的アッセイにおける使用であり、前記細胞学的アッセイが、前記分子に結合する能力に関して前記被験体の細胞をアッセイすることを含む、請求項２０〜２８のいずれか一項に記載の分子の使用。
【請求項３３】
前記疾患が癌またはＴ細胞の数もしくは健康に影響を及ぼす疾患である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
抗癌剤で腫瘍を治療すべく被験体の適合性を決定するための使用であり、前記使用が、前記腫瘍中の腫瘍関連マクロファージの有効濃度または実際の濃度を決定することを含む、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の分子の使用。
【請求項３５】
前記抗癌剤の用量または前記抗癌剤を用いた前記治療が、前記腫瘍関連マクロファージの決定された有効濃度または実際の濃度に基づいて設定または調整される、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
Ｂ７−Ｈ４発現腫瘍関連マクロファージの有効濃度の上昇を呈すると同定された患者おいて癌を治療する際の、請求項２９に記載の治療上有効量の医薬組成物の使用。
【請求項３７】
前記腫瘍または前記癌の前記治療が、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、または手術を追加的に含む、請求項３０、３４、または３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３８】
マウス抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の抗原結合フラグメントを含む分子であって、前記分子が、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合し、かつ前記抗原結合フラグメントが、
（１）抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のマウスの軽鎖可変領域であって、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、および
（２）抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のマウスの重鎖可変領域であって、配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
を含む、分子。
【請求項３９】
前記使用が、腫瘍細胞の表面上のＢ７−Ｈ４のレベルを免疫組織化学により決定することと、腫瘍細胞上のＢ７−Ｈ４のレベルが同一組織からの非腫瘍細胞と比較して上昇していれば前記被験体が治療に適していると判定することと、を含む、抗癌剤で腫瘍を治療すべく被験体の適合性を決定するための請求項１〜１０または３８のいずれか一項に記載の分子の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年１２月１９日出願の米国特許出願第６１／７３９，２７２号、２０１２年１２月１９日出願の米国特許出願第６１／７３９，２８７号、および２０１２年１２月１９日出願の米国特許出願第６１／７３９，３５３号（それらは、それぞれ、その全体が参照により組み込まれる）に基づく特典および優先権を主張する。
【０００２】
配列リストの参照
本出願は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２１およびそれ以降に準拠した１つ以上の配列リストを含む。これらの配列リストは、紙媒体およびコンピューター可読媒体の両方で開示されており、紙およびコンピューター可読の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体「６Ｈ３」、ならびにそのキメラ変異体およびヒト化変異体、ならびにそれらの抗原結合フラグメント、ならびにＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能なそれらの誘導体を含めて、抗Ｂ７−Ｈ４結合分子と、癌および他の疾患の診断および治療におけるそのような分子の使用と、に関する。本発明は、特定的には、腫瘍増殖を遅延もしくは予防するための、腫瘍媒介抑制を阻害するための、腫瘍を排除するための、ならびに／または腫瘍関連マクロファージ（「ＴＡＭ」）の活性を枯渇もしくはブロックしてその活性の改変および／もしくはＴＡＭ媒介免疫抑制の減少を行うための、そのような分子の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ａ．細胞媒介免疫反応
ヒトおよび他の哺乳動物の免疫系は、感染および疾患からの保護を提供する役割を担っている。そのような保護は、体液性免疫反応および細胞媒介免疫反応の両方によりで提供される。体液性応答は、外来標的（抗原）の認識および中和が可能な抗体および他の生体分子の産生をもたらす。これとは対照的に、細胞媒介免疫反応は、Ｔ細胞によりマクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、および抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を活性化すること、ならびに抗原の認識に反応して種々のサイトカインを放出することに関与する（Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８）。
【０００５】
抗原に対する免疫反応を最適に媒介するＴ細胞の能力は、２つの個別のシグナリング相互作用を必要とする（Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ｃｏ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４：６６６−６７５、Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９）。第１に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に配置された抗原は、抗原特異的ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞に提示されなければならない。そのような提示により、提示された抗原に特異的な免疫反応を開始するようにＴ細胞を誘導するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を介してシグナルが送達される。第２に、ＡＰＣと個別のＴ細胞表面分子との間の相互作用により媒介される一連の共刺激シグナルが、最初にＴ細胞の活性化および増殖をトリガーし、最終的にその阻害をトリガーする。したがって、第１のシグナルは、免疫反応に特異性を付与し、一方、第２のシグナルは、反応の性質、強度、および持続時間を決定するように機能する。
【０００６】
免疫系は、共刺激リガンドおよび共刺激レセプターにより厳密に制御される。これらの分子は、Ｔ細胞活性化のための第２のシグナルを提供し、自己への免疫を制限しつつ感染に対する免疫反応を最大化するように正および負のシグナルのバランスのとれたネットワークを提供する（Ｗａｎｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｒｃｈ  ７，２０１１）“ＶＩＳＴＡ，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１００６１９：１−１６、Ｌｅｐｅｎｉｅｓ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｐａｒａｓｉｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，”Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ＆  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：２７９−２８８）。とくに重要なのは、ＡＰＣのＢ７．１（ＣＤ８０）およびＢ７．２（ＣＤ８６）リガンドとＴリンパ球のＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４レセプターとの間の結合である（Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６、Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８、Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１）。ＣＤ２８へのＢ７．１またはＢ７．２の結合は、Ｔ細胞活性化を刺激し、ＣＴＬＡ４へのＢ７．１またはＢ７．２の結合は、そのような活性化を阻害する（Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８、Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１、Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８）。ＣＤ２８は、Ｔ細胞の表面上に構成的に発現され（Ｇｒｏｓｓ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ２８  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３８０−３８８）、一方、ＣＴＬＡ４発現は、Ｔ細胞活性化後、急速にアップレギュレートされる（Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）“Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  Ｏ��  ＣＴＬＡ４  Ａｎｄ  Ｆｏｃａｌ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｏｗａｒｄｓ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｆ  ＴＣＲ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：５３５−５４３）。ＣＴＬＡ４は、より高い親和性のレセプターであるので（Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６）、最初に、結合によりＴ細胞増殖が開始され（ＣＤ２８を介する）、次いで、もはや増殖が必要でない場合、それが阻害されることにより（ＣＴＬＡ４の新生発現を介する）、作用が弱められる。
【０００７】
ＣＤ２８レセプターのリガンドに関するさらなる研究により、一群の関連するＢ７分子（「Ｂ７スーパーファミリー」）の同定および特徴付けが行われた（Ｃｏｙｌｅ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｔｈｅ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｂ７  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：  Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  Ｉｎ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｓｉｇｎａｌｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（３）：２０３−２０９、Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６、Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８、Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，”Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７、Ｌｏｋｅ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：２０８−２１４、Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９、Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂ７ｓ：Ｐｌａｙｉｎｇ  ａ  Ｐｉｖｏｔａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３０（３）：２５１−２６０、Ａｇａｒｗａｌ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｒｇａｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３：３６６−３７２、Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）“ＣＤ２８／Ｂ７  Ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３−２５８、Ｗａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｃｏ−Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｆａｍｉｌｙ  Ｉｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．６：７５９−７６６）。このファミリーには、少なくとも次の８つのメンバーが存在する。すなわち、Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、誘導コスティミュレーターリガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ、Ｂ７−Ｈ２）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１）、プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣ）、Ｂ７−Ｈ３（Ｂ７−ＲＰ２）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘおよびＢ７Ｓ１としても参照される；Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１、Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２、Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３）、およびＢ７−Ｈ６（Ｂｒａｎｄｔ，Ｃ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  Ｂ７−Ｈ６  ｉｓ  ａ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＮＫｐ３０  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ”，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０６（７）：１４９５−５０３）。
【０００８】
Ｂ７−ＣＤ２８ファミリー分子の可溶性形態はまた、リウマチ性疾患の進行に関与する。関節リウマチ（ＲＡ）患者では可溶性ＰＤ−１が検出可能であり、かつ可溶性ＰＤ−１のレベルが滑液中のＴＮＦ−α濃度に相関することが、研究により示された。可溶性Ｂ７−Ｈ４（ｓＨ４）は、潜在的バイオマーカーとして卵巣癌患者で検出されており、また６８名のＲＡ患者および２４名の健常志願者の研究の結果から、可溶性Ｂ７−Ｈ４が血液中に存在するのは、健常者ではわずか１３％にすぎないのに対して、ＲＡ患者では６５％であることが示唆された（Ｓｉｍｏｎ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｉｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ−Ｂｏｕｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｎｄ  Ａ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｆｏｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６（３）：１５７０−１５７５、Ａｚｕｍａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｄｅｃｏｙ  Ｂ７−Ｈ４  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｂｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄａｔａ，”ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ．，６（１０）：ｅ１０００１６６）。可溶性Ｂ７−Ｈ４のレベルは、健常者（＜５ｎｇ／ｍｌ）と比較してＲＡ患者（９６．１ｎｇ／ｍｌ）で有意に高かった。
【０００９】
ネズミモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ研究から、ｓＨ４の過剰発現およびＢ７−Ｈ４の欠失は両方とも、炎症を引き起こしたことが示唆される（Ａｚｕｍａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｄｅｃｏｙ  Ｂ７−Ｈ４  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｂｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄａｔａ，”ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ．６（１０）：ｅ１０００１６６）。マウスの症状は、より早期に現れ、対照よりも重篤であった。また、可溶性Ｂ７−Ｈ４の炎症作用は、好中球に依存性することが示された。Ｂ７−Ｈ４による通常のシグナリングを模倣するタンパク質を用いることにより、マウスにおいて疾患発生が予防された。
【００１０】
Ｂ．Ｂ７−Ｈ４
ヒトＢ７−Ｈ４タンパク質をコードするｃＤＮＡは、胎盤ｃＤＮＡから同定およびクローニングされた（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８４９−８６１、Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２）。Ｂ７−Ｈ４は、米国特許第７，９３１，８９６号明細書、同第７，８７５，７０２号明細書、同第７，８４７，０８１号明細書、同第７，６２２，５６５号明細書で、米国特許出願公開第２０１１／００８５９７０号明細書、同第２０１１／００２０３２５号明細書、同第２０１０／０２５６０００号明細書、同第２０１０／０２４０５８５号明細書、同第２０１０／０２２７３４３号明細書、同第２０１０／０２２７３３５号明細書、同第２０１０／０１５８９３６号明細書、同第２０１０／００９２５２４号明細書、同第２０１０／００２８４５０号明細書、同第２００９／０２７５６３３号明細書、同第２００９／０２１５０８４号明細書、同第２００９／０１７６３１７号明細書、同第２００９／０１４２３４２号明細書、同第２００９／０１１８１７５号明細書、同第２００９／００８７４１６号明細書、同第２００９／００４８１２２号明細書、同第２００９／００２２７４７号明細書、同第２００９／００１８３１５号明細書、同第２００８／０２０６２３５号明細書、同第２００８／０１６００３６号明細書、同第２００８／０１７７０３９号明細書、同第２００８／００５０３７０号明細書、同第２００７／０２１８０３２号明細書、同第２００７／０１８４４７３号明細書、同第２００７／０１７２５０４号明細書、同第２００７／０１６０５７８号明細書、同第２００７／０１２２３７８号明細書、同第２００７／００３６７８３号明細書、同第２００６／０００３４５２号明細書で、欧州特許出願公開第２１２４９９８号明細書および同第２１０９４５５号明細書で、ならびにＰＣＴ国際公開第２０１１／０２６１３２Ａ２号パンフレット、同第２０１１／０２６１２２Ａ２号パンフレット、同第２０１１／００５５６６Ａ２号パンフレット、同第２０１０／１４４２９５Ａ１号パンフレット、同第２０１０／１０２１７７Ａ１号パンフレット、同第２０１０／１０２１６７Ａ１号パンフレット、同第２００９／１１１３１５Ａ２号パンフレット、同第２００９／０７３５３３Ａ２号パンフレット、同第２００８／０９２１５３Ａ２号パンフレット、同第２００８／０８３２３９Ａ２号パンフレット、同第２００８／０８３２２８Ａ２号パンフレット、同第２００７／１２４３６１Ａ２号パンフレット、同第２００７／１２２３６９Ａ２号パンフレット、同第２００７／１０９２５４Ａ２号パンフレット、同第２００７／０８７３４１Ａ２号パンフレット、同第２００７／０８２１５４Ａ２号パンフレット、同第２００７／０６７６８２Ａ２号パンフレット、同第２００���／０６７６８１Ａ２号パンフレット、同第２００７／０４１６９４Ａ２号パンフレット、同第２００６／１３８６７０Ａ２号パンフレット、同第２００６／１３３３９６Ａ２号パンフレット、同第２００６／１２１９９１Ａ２号パンフレット、同第２００６／０６６２２９Ａ２号パンフレット、および同第２００６／００７５３９Ａ１号パンフレットで考察されている。
【００１１】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、米国特許第７，８８８，４７７号明細書、同第７，７３７，２５５号明細書、同第７，６１９，０６８号明細書、同第６，９６２，９８０号明細書に、および米国特許出願公開第２００８０１９９４６１号明細書に開示されている。国際公開第２０１３／０２５７７９号パンフレットは、とくに関連がある。
【００１２】
ヒトＢ７−Ｈ４タンパク質は、２８２アミノ酸残基を有し、アミノ末端細胞外ドメインと、大きい疎水性膜貫通ドメインと、非常に短い細胞内ドメイン（わずか２アミノ酸残基からなる）と、を含むものとして分類されてきた。他のＢ７ファミリーメンバーと同様に、Ｂ７−Ｈ４は、その細胞外ドメインに１対のＩｇ様領域を有する。Ｂ７−Ｈ４タンパク質は、Ｉ型膜貫通タンパク質の全構造を有する。このタンパク質は、他のＢ７ファミリーメンバーと最小（約２５％）の相同性を有する（Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２）。
【００１３】
ヒトＢ７−Ｈ４ｃＤＮＡ配列は、ネズミＢ７−Ｈ４ホモログを同定するために使用されてきた。ネズミおよびヒトのオルソログ間の同一性レベル（約８７％）から、Ｂ７−Ｈ４は、進化的にきわめて保存されていることが示唆される（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１、Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：  Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２）。この大きな相同性は、Ｂ７−Ｈ４レセプターへの結合に関与すると考えられるタンパク質のＩｇＶドメインでは９１％に増加する（Ｓｔａｍｐｅｒ，Ｃ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７−１／ＣＴＬＡ−４  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４１０：６０８−６１１、Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂａｓｉｓ  Ｆｏｒ  Ｃｏ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ＣＴＬＡ−４／Ｂ７−２  Ｃｏｍｐｌｅｘ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４１０：６０４−６０８）。
【００１４】
他のＢ７メンバーとは対照的に、Ｂ７−Ｈ４ｍＲＮＡは、広範に発現される。その発現は、脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胎盤、前立腺、骨格筋、皮膚、小腸、脾臓、胃、精巣、胸腺、胸腺、および子宮で見いだされてきた（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８４９−８６１、Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２、Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３、Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３）。
【００１５】
Ｂ７−Ｈ４ｍＲＮＡの広範にわたる発現にもかかわらず、正常細胞の表面上のＢ７−Ｈ４タンパク質の存在は、限られているように思われる（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１、Ｃｈｏｉ，Ｉ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｂ７−Ｈ４，Ａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：４６５０−４６５４）。新たに単離されたヒトＴ細胞、Ｂ細胞、単球、および樹状細胞は、それらの細胞表面上にＢ７−Ｈ４を発現しないが（ＦＡＣＳ解析を介して決定される）、その発現は、リポ多糖（ＬＰＳ）、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）、γインターフェロン（ＩＦＮ−γ）、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）、またはイオノマイシンによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激後、そのような細胞上に誘導可能である（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１）。Ｂ７−Ｈ４発現のそのような広い分布が見いだされたことから、Ｂ７−Ｈ４の機能は、他の阻害Ｂ７分子のものとはかなり異なることが示唆される（Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２を参照されたい）。
【００１６】
この知見およびＢ７−Ｈ４の細胞外ドメインが他のＢ７ファミリーメンバーとわずか約２５％のアミノ酸相同性を有するにすぎないという観測と一致して、Ｂ７−Ｈ４は、公知のＢ７ファミリーレセプター（すなわち、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１、またはＣＤ２８）に結合しない。Ｂ７−Ｈ４特異的レセプターを同定する努力の結果、そのようなレセプターは、活性化Ｔ細胞上に発現されることが明らかになった（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１）。Ｂ７−Ｈ４融合タンパク質がＴ細胞上のその推定レセプターに結合すると、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン（ＩＬ−２およびＩＬ−１０）産生が有意に阻害されることが見いだされ、かつそのような阻害は、ＣＤ２８共刺激により非可逆であることが見いだされた（Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２、Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３）。Ｂ７−Ｈ４は、Ｇ０／Ｇ１期でＴ細胞の細胞周期進行を停止させることが見いだされたことから（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８４９−８６１）、このタンパク質は、アポトーシスを誘導することによるのではなく、細胞周期を停止させることにより、その阻害作用を媒介することが示唆される。
【００１７】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで脾臓細胞によるＩＬ−２産生のレベルを大幅に増加させ、かつｉｎ  ｖｉｖｏでより強い免疫反応を引き起こすことが見いだされている（Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３、Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２、Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３）。
【００１８】
Ｂ７−Ｈ４の不在は、好中球前駆体の増殖の直接レギュレーションを介してリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）感染抵抗性をもたらすことが実証されている（Ｚｈｕ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｂ７−Ｈ４  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｉｃｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｂｌｏｏｄ  １１３：１７５９−１７６９、Ｗｅｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｔｉｓｓｕｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７ｘ  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  Ｆｒｏｍ  ＣＤ４  Ｔ  Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．２０８（８）：１６８３−１６９４）。したがって、Ｂ７−Ｈ４は、免疫とくに自己免疫および感染抵抗性で一定の役割を果たすことが示唆されてきた。したがって、アゴニスト抗Ｂ７−Ｈ４抗体およびＢ７−Ｈ４の可溶性タンパク質アゴニストは、炎症性障害の治療に供することが提案されてきた（米国特許第７，９３１，８９６号明細書、米国特許出願公開第２００７／０１２２３７８号明細書、同第２００８／０１６００３６号明細書、同第２００９／０１４２３４２号明細書、および同第２０１１／００２０３２５号明細書、欧州特許出願公開第２１２４９９８号明細書、ＰＣＴ国際公開第２００６／１３３３９６号パンフレット、同第２００７／０４１６９４号パンフレット、同第２００８／０８３２２８号パンフレット、同第２００９／１１１３１５号パンフレット、同第２０１０／１４４２９５号パンフレット、同第２０１１／００５５６６号パンフレット、同第２０１１／０２６１２２号パンフレット、および同第２０１１／０２６１３２号パンフレット）。
【００１９】
Ｂ７−Ｈ４のｉｎ  ｖｉｖｏ有意性は、多数の腫瘍組織、たとえば、ヒト卵巣癌（Ｃｈｏｉ，Ｉ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｂ７−Ｈ４，Ａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：４６５０−４６５４、Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３（４）：８７１−８８１、Ｂｉｇｎｏｔｔｉ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｐｓｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｔｅｒｍ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  Ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｓｅｒｏｕｓ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｆｏｒ  Ｅａｒｌｙ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１０３：４０５−４１６、Ｔｒｉｎｇｌｅｒ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｔｕｍｏｒｓ，”Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１００：４４−５２、Ｓｉｍｏｎ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−ｈ４  Ｉｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ−Ｂｏｕｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｎｄ  Ａ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｆｏｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：１５７０−１５７５、Ｓａｌｃｅｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ７−Ｈ４  Ｉｓ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ａｎｄ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，”Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．３０６：１２８−１４１）、非小細胞肺癌（Ｓｕｎ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ３  Ａｎｄ  Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ５３：１４３−１５１）、乳管癌および小葉乳癌（Ｓａｌｃｅｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ７−Ｈ４  Ｉｓ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ａｎｄ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，”Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．３０６：１２８−１４１、Ｔｒｉｎｇｌｅｒ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｂ７−Ｈ４  Ｉｓ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｉｎ  Ｄｕｃｔａｌ  Ａｎｄ  Ｌｏｂｕｌａｒ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：１８４２−１８４８）、ならびに腎細胞癌（Ｋｒａｍｂｅｃｋ，Ａ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０３：１０３９１−１０３９６）に見いだされる高レベルのＢ７−Ｈ４発現によりさらに実証される。腫瘍細胞上のＢ７−Ｈ４の発現は、腫瘍侵攻性を含めて、有害な臨床的および病理学的特徴と相関することが明らかにされている（Ｋｒａｍｂｅｃｋ，Ａ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）１０３（２）：１０３９１−１０３９６）。
【００２０】
Ｃ．腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）
炎症と癌との間の関連は、腫瘍部位への多数の白血球細胞の浸潤が認められた一世紀以上前の観測に遡る（Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｂａｃｋ  Ｔｏ  Ｖｉｒｃｈｏｗ？，”Ｌａｎｃｅｔ  ３５７：５３９−５４５、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４２０：８６０−８６７）。現在では、いくつかの研究により、炎症と癌とを関連付ける２つの主要な経路、すなわち、内因性経路および外因性経路が同定されている（Ａｌｌａｖｅｎａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ．１８：３−１０、Ｃｏｌｏｔｔａ，Ｆ．（２００９）“Ｃａｎｃｅｒ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｈａｌｌｍａｒｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ：Ｌｉｎｋｓ  ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，”Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３０（７）：１０７３−１０８１、Ｐｏｒｔａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ｌｉｎｋｉｎｇ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２１４：７６１−７７７）。内因性経路は、炎症および発癌をもたらす遺伝子改変を含み、一方、外因性経路は、癌発生に関連付けられる組織内の慢性炎症をトリガーする微生物／ウイルス感染または自己免疫疾患により特徴付けられる。両方の経路は、炎症性メディエーター（たとえば、ＮＦ−κＢ、ＳＴＡＴ３、およびＨＩＦ−１）のきわめて重要な転写因子を活性化し、炎症で重要な役割を果たす白血球の動員をもたらす（Ｓｏｌｉｎａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  （ＴＡＭ）  Ａｓ  Ｍａｊｏｒ  Ｐｌａｙｅｒｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８６（５）：１０６５−１０７３）。
【００２１】
ＴＡＭは、炎症と癌との間の関連付けを提供する。マクロファージは、活性化血中単球に由来する免疫系細胞である。それは、病原体により誘導される炎症反応、または病原体、死細胞、細胞デブリ、および細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の種々の成分を除去（すなわち貪食）するように作用することにより組織損傷に関与するものとして、主に認識されている。マクロファージは、腫瘍マイクロ環境中の重要な成分を構成し、かつ腫瘍塊の５０％までを占めることが見いだされている。
【００２２】
貪食の媒介に加えて、マクロファージは、血管形成促進性増殖因子およびマトリックスリモデリングプロテアーゼを分泌するので、腫瘍の発生および増殖に必要とされる血管基盤の発生（すなわち血管形成）に一定の役割を果たす（Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．（２００９）“Ｔｒｏｐｈｉｃ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２５９−２７０）。したがって、腫瘍内のマクロファージの存在は、腫瘍の増殖を支援するように思われる。いくつかの研究は、腫瘍内の腫瘍関連マクロファージの存在が生存の陰性予後因子であることを示す証拠を提供する（Ｆａｒｉｎｈａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｓｈｏｗｓ  Ｔｈａｔ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ（ＬＡＭ）  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｓ  Ａｎ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ  Ｏｆ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｉｎ  Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  （ＦＬ），”Ｂｌｏｏｄ  １０６：２１６９−２１７４、Ｄａｖｅ，Ｓ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｉｎ  Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｆｅａｔｕｒｅｓ  Ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ−Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５１：２１５９−２１６９、Ｓｏｌｉｎａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ（ＴＡＭ）  Ａｓ  Ｍａｊｏｒ  Ｐｌａｙｅｒｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８６（５）：１０６５−１０７３）。
初発腫瘍は、拡張性腫瘍細胞への酸素および栄養の送達を可能にすべくそれ自体の血管系を生成する必要がある。したがって、腫瘍の進行は、腫瘍マイクロ環境内に腫瘍細胞と非悪性細胞との間の協調的シグナリングを必要とする（Ｋａｌｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ｔｕｍｏｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ＴＲＡＩＬ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＩＬ−１β−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｎａｉｌ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ，”ＰＬｏｓ  ＯＮＥ  ５（７）：ｅ１１７００  １−１３）。ＴＡＭ、さらには好中球、線維芽細胞、および他の細胞が、腫瘍細胞と協同して、腫瘍内の血管形成を促進することは、現在では広く認められている（Ｎｕｃｅｒａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ａｎｄ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｊｕｒｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．ｄｏｉ：１０．１３８７／ｉｊｄｂ．１０３２２７ｓｎ、Ｚａｍａｒｒｏｎ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｄｕａｌ  Ｒｏｌｅｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆａｃｔｏｒｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．７（５）：６５１−６５８、Ｌｉｕ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｒｅｃｒｕｉｔ  ＣＣＲ６＋  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｍｏｔｅ  Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖｉａ  Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＣＣＬ２０  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｍｉｃｅ，”ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．６（４）：ｅ１９４９５、Ｒｉｇｏ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｍａｙ  Ｐｒｏｍｏｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｖｉａ  Ａ  ＧＭ−ＣＳＦ／ＨＢ−ＥＧＦ  Ｐａｒａｃｒｉｎｅ  Ｌｏｏｐ  Ｔｈａｔ  Ｉｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｂｙ  ＣＸＣＬ１２，”Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ  ９（２７３）：１−１３、Ｌｉｎ，Ｊ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｓｕｐｒａｇｌｏｔｔｉｃ  Ｌａｒｙｎｇｅａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３０（４）：２８０−２８６、Ｖｅｒｇａｔｉ，Ｍ．（２０１１）“Ｔｈｅ  Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，”Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１：１８２４１３）。
Ｂ７−Ｈ４は、卵巣腫瘍に存在するものを含めて、ＴＡＭ内で過剰発現されることが示されている（Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３（４）：８７１−８８１、Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｂ７−Ｈ４，  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，Ａｎｄ  Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（１８）：８９００−８９０５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許第７，９３１，８９６号明細書
【特許文献２】米国特許第７，８７５，７０２号明細書
【特許文献３】米国特許第７，８４７，０８１号明細書
【特許文献４】米国特許第７，６２２，５６５号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１１／００８５９７０号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２０１１／００２０３２５号明細書
【特許文献７】米国特許出願公開第２０１０／０２５６０００号明細書
【特許文献８】米国特許出願公開第２０１０／０２４０５８５号明細書
【特許文献９】米国特許出願公開第２０１０／０２２７３４３号明細書
【特許文献１０】米国特許出願公開第２０１０／０２２７３３５号明細書
【特許文献１１】米国特許出願公開第２０１０／０１５８９３６号明細書
【特許文献１２】米国特許出願公開第２０１０／００９２５２４号明細書
【特許文献１３】米国特許出願公開第２０１０／００２８４５０号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００９／０２７５６３３号明細書
【特許文献１５】米国特許出願公開第２００９／０２１５０８４号明細書
【特許文献１６】米国特許出願公開第２００９／０１７６３１７号明細書
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００９／０１４２３４２号明細書
【特許文献１８】米国特許出願公開第２００９／０１１８１７５号明細書
【特許文献１９】米国特許出願公開第２００９／００８７４１６号明細書
【特許文献２０】米国特許出願公開第２００９／００４８１２２号明細書
【特許文献２１】米国特許出願公開第２００９／００２２７４７号明細書
【特許文献２２】米国特許出願公開第２００９／００１８３１５号明細書
【特許文献２３】米国特許出願公開第２００８／０２０６２３５号明細書
【特許文献２４】米国特許出願公開第２００８／０１６００３６号明細書
【特許文献２５】米国特許出願公開第２００８／０１７７０３９号明細書
【特許文献２６】米国特許出願公開第２００８／００５０３７０号明細書
【特許文献２７】米国特許出願公開第２００７／０２１８０３２号明細書
【特許文献２８】米国特許出願公開第２００７／０１８４４７３号明細書
【特許文献２９】米国特許出願公開第２００７／０１７２５０４号明細書
【特許文献３０】米国特許出願公開第２００７／０１６０５７８号明細書
【特許文献３１】米国特許出願公開第２００７／０１２２３７８号明細書
【特許文献３２】米国特許出願公開第２００７／００３６７８３号明細書
【特許文献３３】米国特許出願公開第２００６／０００３４５２号明細書
【特許文献３４】欧州特許出願公開第２１２４９９８号明細書
【特許文献３５】欧州特許出願公開第２１０９４５５号明細書
【特許文献３６】国際公開第２０１１／０２６１３２号
【特許文献３７】国際公開第２０１１／０２６１２２号
【特許文献３８】国際公開第２０１１／００５５６６号
【特許文献３９】国際公開第２０１０／１４４２９５号
【特許文献４０】国際公開第２０１０／１０２１７７号
【特許文献４１】国際公開第２０１０／１０２１６７号
【特許文献４２】国際公開第２００９／１１１３１５号
【特許文献４３】国際公開第２００９／０７３５３３号
【特許文献４４】国際公開第２００８／０９２１５３号
【特許文献４５】国際公開第２００８／０８３２３９号
【特許文献４６】国際公開第２００８／０８３２２８号
【特許文献４７】国際公開第２００７／１２４３６１号
【特許文献４８】国際公開第２００７／１２２３６９号
【特許文献４９】国際公開第２００７／１０９２５４号
【特許文献５０】国際公開第２００７／０８７３４１号
【特許文献５１】国際公開第２００７／０８２１５４号
【特許文献５２】国際公開第２００７／０６７６８２号
【特許文献５３】国際公開第２００７／０６７６８１号
【特許文献５４】国際公開第２００７／０４１６９４号
【特許文献５５】国際公開第２００６／１３８６７０号
【特許文献５６】国際公開第２００６／１３３３９６号
【特許文献５７】国際公開第２００６／１２１９９１号
【特許文献５８】国際公開第２００６／０６６２２９号
【特許文献５９】国際公開第２００６／００７５３９号
【特許文献６０】米国特許第７，８８８，４７７号明細書
【特許文献６１】米国特許第７，７３７，２５５号明細書
【特許文献６２】米国特許第７，６１９，０６８号明細書
【特許文献６３】米国特許第６，９６２，９８０号明細書
【特許文献６４】米国特許出願公開第２００８／０１９９４６１号明細書
【特許文献６５】国際公開第２０１３／０２５７７９号
【特許文献６６】欧州特許出願公開第２１２４９９８号明細書
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８
【非特許文献２】Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ｃｏ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４：６６６−６７５
【非特許文献３】Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９
【非特許文献４】Ｗａｎｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｒｃｈ  ７，２０１１）“ＶＩＳＴＡ，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１００６１９：１−１６
【非特許文献５】Ｌｅｐｅｎｉｅｓ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｐａｒａｓｉｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，”Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ＆  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：２７９−２８８
【非特許文献６】Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６
【非特許文献７】Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１
【非特許文献８】Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８
【非特許文献９】Ｇｒｏｓｓ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ２８  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３８０−３８８
【非特許文献１０】Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）“Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  Ｏｆ  ＣＴＬＡ４  Ａｎｄ  Ｆｏｃａｌ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｏｗａｒｄｓ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｆ  ＴＣＲ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：５３５−５４３
【非特許文献１１】Ｃｏｙｌｅ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｔｈｅ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｂ７  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：  Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  Ｉｎ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｓｉｇｎａｌｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（３）：２０３−２０９
【非特許文献１２】Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，”Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７
【非特許文献１３】Ｌｏｋｅ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：２０８−２１４
【非特許文献１４】Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂ７ｓ：Ｐｌａｙｉｎｇ  ａ  Ｐｉｖｏｔａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３０（３）：２５１−２６０
【非特許文献１５】Ａｇａｒｗａｌ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｒｇａｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３：３６６−３７２
【非特許文献１６】Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）“ＣＤ２８／Ｂ７  Ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３−２５８
【非特許文献１７】Ｗａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｃｏ−Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｆａｍｉｌｙ  Ｉｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．６：７５９−７６６
【非特許文献１８】Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１
【非特許文献１９】Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２
【非特許文献２０】Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３
【非特許文献２１】Ｂｒａｎｄｔ，Ｃ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  Ｂ７−Ｈ６  ｉｓ  ａ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＮＫｐ３０  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ”，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０６（７）：１４９５−５０３
【非特許文献２２】Ａｚｕｍａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｄｅｃｏｙ  Ｂ７−Ｈ４  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｂｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄａｔａ，”ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ．，６（１０）：ｅ１０００１６６
【非特許文献２３】Ｓｔａｍｐｅｒ，Ｃ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７−１／ＣＴＬＡ−４  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４１０：６０８−６１１
【非特許文献２４】Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂａｓｉｓ  Ｆｏｒ  Ｃｏ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ＣＴＬＡ−４／Ｂ７−２  Ｃｏｍｐｌｅｘ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４１０：６０４−６０８
【非特許文献２５】Ｃｈｏｉ，Ｉ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｂ７−Ｈ４，Ａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：４６５０−４６５４
【非特許文献２６】Ｚｈｕ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｂ７−Ｈ４  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｉｃｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｂｌｏｏｄ  １１３：１７５９−１７６９
【非特許文献２７】Ｗｅｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｔｉｓｓｕｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７ｘ  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  Ｆｒｏｍ  ＣＤ４  Ｔ  Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．２０８（８）：１６８３−１６９４
【非特許文献２８】Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３（４）：８７１−８８１
【非特許文献２９】Ｂｉｇｎｏｔｔｉ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｐｓｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｔｅｒｍ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  Ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｓｅｒｏｕｓ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｆｏｒ  Ｅａｒｌｙ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１０３：４０５−４１６
【非特許文献３０】Ｔｒｉｎｇｌｅｒ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｔｕｍｏｒｓ，”Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１００：４４−５２
【非特許文献３１】Ｓｉｍｏｎ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−ｈ４  Ｉｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ−Ｂｏｕｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｎｄ  Ａ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｆｏｒ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：１５７０−１５７５
【非特許文献３２】Ｓａｌｃｅｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ７−Ｈ４  Ｉｓ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ａｎｄ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，”Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．３０６：１２８−１４１
【非特許文献３３】Ｓｕｎ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ３  Ａｎｄ  Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ５３：１４３−１５１
【非特許文献３４】Ｔｒｉｎｇｌｅｒ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ｂ７−Ｈ４  Ｉｓ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｉｎ  Ｄｕｃｔａｌ  Ａｎｄ  Ｌｏｂｕｌａｒ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：１８４２−１８４８
【非特許文献３５】Ｋｒａｍｂｅｃｋ，Ａ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０３：１０３９１−１０３９６
【非特許文献３６】Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｂａｃｋ  Ｔｏ  Ｖｉｒｃｈｏｗ？，”Ｌａｎｃｅｔ  ３５７：５３９−５４５
【非特許文献３７】Ｃｏｕｓｓｅｎｓ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４２０：８６０−８６７
【非特許文献３８】Ａｌｌａｖｅｎａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ．１８：３−１０
【非特許文献３９】Ｃｏｌｏｔｔａ，Ｆ．（２００９）“Ｃａｎｃｅｒ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｈａｌｌｍａｒｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ：Ｌｉｎｋｓ  ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，”Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３０（７）：１０７３−１０８１
【非特許文献４０】Ｐｏｒｔａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ｌｉｎｋｉｎｇ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，”Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２１４：７６１−７７７
【非特許文献４１】Ｓｏｌｉｎａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）“Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  （ＴＡＭ）  Ａｓ  Ｍａｊｏｒ  Ｐｌａｙｅｒｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８６（５）：１０６５−１０７３
【非特許文献４２】Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．（２００９）“Ｔｒｏｐｈｉｃ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２５９−２７０
【非特許文献４３】Ｆａｒｉｎｈａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）“Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｓｈｏｗｓ  Ｔｈａｔ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ（ＬＡＭ）  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｓ  Ａｎ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ  Ｏｆ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｉｎ  Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  （ＦＬ），”Ｂｌｏｏｄ  １０６：２１６９−２１７４
【非特許文献４４】Ｄａｖｅ，Ｓ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）“Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｉｎ  Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｆｅａｔｕｒｅｓ  Ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ−Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５１：２１５９−２１６９、
【非特許文献４５】Ｋａｌｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ｔｕｍｏｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ＴＲＡＩＬ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＩＬ−１β−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｎａｉｌ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ，”ＰＬｏｓ  ＯＮＥ  ５（７）：ｅ１１７００  １−１３
【非特許文献４６】Ｎｕｃｅｒａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ａｎｄ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｊｕｒｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．ｄｏｉ：１０．１３８７／ｉｊｄｂ．１０３２２７ｓｎ、
【非特許文献４７】Ｚａｍａｒｒｏｎ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｄｕａｌ  Ｒｏｌｅｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆａｃｔｏｒｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．７（５）：６５１−６５８
【非特許文献４８】Ｌｉｕ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｒｅｃｒｕｉｔ  ＣＣＲ６＋  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｍｏｔｅ  Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖｉａ  Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＣＣＬ２０  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｍｉｃｅ，”ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．６（４）：ｅ１９４９５
【非特許文献４９】Ｒｉｇｏ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｍａｙ  Ｐｒｏｍｏｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｖｉａ  Ａ  ＧＭ−ＣＳＦ／ＨＢ−ＥＧＦ  Ｐａｒａｃｒｉｎｅ  Ｌｏｏｐ  Ｔｈａｔ  Ｉｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｂｙ  ＣＸＣＬ１２，”Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ  ９（２７３）：１−１３
【非特許文献５０】Ｌｉｎ，Ｊ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｓｕｐｒａｇｌｏｔｔｉｃ  Ｌａｒｙｎｇｅａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３０（４）：２８０−２８６
【非特許文献５１】Ｖｅｒｇａｔｉ，Ｍ．（２０１１）“Ｔｈｅ  Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，”Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１：１８２４１３
【非特許文献５２】Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｂ７−Ｈ４，  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，Ａｎｄ  Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（１８）：８９００−８９０５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
炎症および癌の治療のこれまでのすべての進歩を考慮しても、癌を治療するための増強された免疫療法を提供可能な改良された組成物の必要性が残っている。したがって、癌ならびに他の疾患および病態を治療するための組成物およびその使用を提供する。
【００２６】
本発明の目的は、癌または細菌もしくはウイルス感染を治療すべく表面Ｂ７−Ｈ４内在化を誘導してＢ７−Ｈ４媒介免疫回避を抑制するための組成物および方法を提供することである。
【００２７】
本発明の他の目的は、癌を治療すべくＢ７−Ｈ４ｍＡｂ−ペイロード薬剤コンジュゲートによりＢ７−Ｈ４陽性腫瘍を標的とするための組成物および方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体「６Ｈ３」、ならびにそのキメラ変異体およびヒト化変異体、ならびにそれらの抗原結合フラグメント、ならびにＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能なそれらの誘導体を含めて、Ｂ７−Ｈ４結合分子と、癌および他の疾患の診断および治療におけるそのような分子の使用と、を開示する。腫瘍増殖を遅延もしくは予防するための、腫瘍媒介抑制を阻害するための、腫瘍を排除するための、ならびに／またはＢ７−Ｈ４発現細胞（限定されるものではないが、腫瘍関連マクロファージ（「ＴＡＭ」）を含む）の活性を枯渇もしくはブロックするための、そのような分子の使用。Ｂ７−Ｈ４の活性を低減またはブロックすることにより、ＴＡＭ活性の改変および／またはＴＡＭ媒介免疫抑制の減少を行いうることもまた、開示する。
【００２９】
たとえば、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の抗原結合フラグメントを含む分子が提供される。いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４結合分子は、生細胞の表面上に配置されたＢ７−Ｈ４に結合可能であり、かつ／またはＢ７−Ｈ４結合分子は、可溶性Ｂ７−Ｈ４もしくは内因性濃度で発現されたＢ７−Ｈ４に結合可能である。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４結合分子は、可溶性Ｂ７−Ｈ４または膜結合Ｂ７−Ｈ４の活性を実質的にブロック可能である。
【００３０】
抗体６Ｈ３の抗原結合フラグメントを含む分子であって、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する分子、を開示する。
（Ｉ）細胞（とくに生細胞）の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか、
（ＩＩ）内因性濃度で細胞（とくに生細胞）の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合してＢ７−Ｈ４とその細胞レセプターとの間の結合をモジュレートするか、
（ＩＶ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージによる免疫抑制を阻害するか、
（Ｖ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージの活性をモジュレートするか、
（ＶＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍媒介抑制を阻害するか、
（ＶＩＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍特異的細胞溶解を引き起こすか、
またはそれらの任意の組合せが可能な分子を提供する。
【００３１】
また、ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体「６Ｈ３」のヒト化変異体、およびその抗原結合フラグメント、およびＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能なそれらの誘導体と、癌および他の疾患の診断および治療におけるそのような分子の使用と、を提供する。また、腫瘍増殖を遅延もしくは予防するための、腫瘍媒介抑制を阻害するための、腫瘍を排除するための、ならびに／または腫瘍関連マクロファージ（「ＴＡＭ」）の活性を枯渇もしくはブロックしてその活性の改変および／もしくはＴＡＭ媒介免疫抑制の減少を行うための、そのような分子の使用を提供する。
【００３２】
たとえば、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の抗原結合フラグメントを含む分子であって、抗原結合フラグメントが、
（１）抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域であって、配列番号１８〜２３のいずれかのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、
（２）抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域であって、配列番号２４〜２９のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
を含む、分子を提供する。
【００３３】
特定の実施形態では、ヒトＢ７−Ｈ４結合分子は、生細胞の表面上に配置されたＢ７−Ｈ４に結合可能であり、かつ／またはＢ７−Ｈ４結合分子は、可溶性Ｂ７−Ｈ４もしくは内因性濃度で発現されたＢ７−Ｈ４に結合可能であり、特定的には、Ｂ７−Ｈ４結合分子は、可溶性Ｂ７−Ｈ４または膜結合Ｂ７−Ｈ４の活性を実質的にブロック可能である。
【００３４】
したがって、抗体６Ｈ３のヒト化変異体の抗原結合フラグメントを含む分子であって、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する分子、を提供する。たとえば、
（Ｉ）細胞（とくに生細胞）の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか、
（ＩＩ）内因性濃度で細胞（とくに生細胞）の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するか
（ＩＩＩ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合してＢ７−Ｈ４とその細胞レセプターとの間の結合をモジュレートするか、
（ＩＶ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージによる免疫抑制を阻害するか、
（Ｖ）生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍関連マクロファージの活性をモジュレートするか、
（ＶＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍媒介抑制を阻害するか、
（ＶＩＩ）腫瘍生細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合して腫瘍特異的細胞溶解を引き起こすか、
またはそれらの任意の組合せが可能な分子を提供する。
【００３５】
また、そのような分子が、検出可能に標識されているか、またはコンジュゲートされた毒素、薬剤、レセプター、酵素、レセプターリガンドを含む、そのような分子の実施形態を開示する。いくつかの実施形態では、開示された分子は、細胞内への内在化および細胞死の媒介が可能である。
【００３６】
生細胞は、腫瘍細胞、病原体感染細胞、またはマクロファージでありうる。
【００３７】
分子は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントでありうる。
【００３８】
分子は、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体でありうる。分子は、ＡＤＣＣ活性を有することが可能であり、直接腫瘍死滅活性を有することが可能であり、ＡＤＣ活性を有することが可能であり、かつ／またはＴＡＭ媒介抑制および／もしくは腫瘍媒介抑制を阻害することが可能である。
【００３９】
分子は、二重特異的抗体、三重特異的抗体、多重特異的抗体、たとえば、Ｂ７−Ｈ４と同一細胞上の異なる分子とに結合可能な抗体でありうる。
【００４０】
開示されたＢ７−Ｈ４結合分子を含む医薬組成物と、癌または感染性疾患を治療するためのその使用と、を開示する。医薬組成物は、治療上有効量または予防上有効量の１種以上のＢ７−Ｈ４結合分子であって、Ｂ７−Ｈ４媒介抑制をアンタゴナイズして免疫反応をアップモジュレートする分子と、生理学的に許容可能な担体または賦形剤と、を含むことが可能である。
【００４１】
医薬組成物は、癌もしくは感染性疾患の症状を呈する被験体において癌もしくは感染性疾患（とくに慢性ウイルス感染）を治療するために、または症状が現れる前の被験体において癌または感染性疾患を予防するために、使用可能である。したがって、予防的使用をも提供する。
【００４２】
また、治療上有効量または予防上有効量の１種以上のＢ７−Ｈ４結合分子であって、Ｂ７−Ｈ４媒介抑制を増強して免疫反応をダウンモジュレートする分子と、生理学的に許容可能な担体または賦形剤と、を含む医薬組成物をも開示する。
【００４３】
医薬組成物は、炎症を治療するために使用可能である（特定的には、自己免疫疾患、移植片対宿主疾患、宿主対移植片疾患、または移植拒絶反応であり、使用は、自己免疫疾患、移植片対宿主疾患、宿主対移植片疾患、または移植拒絶反応の治療である）。
【００４４】
開示された分子は、被験体において疾患（とくに、癌またはＴ細胞の数もしくは健康に影響を及ぼす疾患）の存在を診断するために、細胞学的アッセイで使用可能である。特定の実施形態では、細胞学的アッセイは、分子に結合する能力に関して被験体の細胞をアッセイすることを含む。
【００４５】
開示された分子は、抗癌剤による腫瘍の治療に対する被験体の適合性を決定するのに使用可能である。この使用は、腫瘍内の腫瘍関連マクロファージの有効濃度もしくは実際の濃度および／または腫瘍細胞上でのＢ７−Ｈ４発現のレベルを決定することを含む。特定の実施形態では、抗癌剤の用量または抗癌剤による治療は、腫瘍関連マクロファージの決定された有効濃度または実際の濃度に基づいて、設定または調整される。
【００４６】
治療上有効量の開示された医薬組成物は、患者において癌を治療するために使用可能である。いくつかの実施形態では、患者は、腫瘍細胞上での高レベルのＢ７−Ｈ４発現および／またはＢ７−Ｈ４発現腫瘍関連マクロファージの有効濃度の上昇を呈するものとして同定される。
【００４７】
治療上有効量の開示された医薬組成物はまた、被験体において、免疫刺激反応の刺激、増強、もしくは増加、または免疫阻害反応の低減、遅延、もしくは予防、またはそれらの組合せのために、使用可能である。いくつかの実施形態では、被験体は、癌もしくは腫瘍を有しているかもしくは発生する可能性があり、または感染を有しているかもしくは発生する可能性がある。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、癌細胞または感染細胞に対する免疫刺激反応の刺激、増強、または増加に有効である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、腫瘍または癌の治療は、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、または手術を追加的に含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、開示されたＢ７−Ｈ４結合分子の１つ以上は、腫瘍細胞、病原体感染細胞、またはマクロファージに接触する。
【００５０】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４結合分子は、Ｂ７−Ｈ４とその細胞レセプターとの間の結合をモジュレートする。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１Ａ】図１Ａ−１Ｂ。ネズミ抗体６Ｈ３の軽鎖（図１Ａ）および重鎖（図１Ｂ）の可変ドメインのＣｏｌｌｉｅｒ  Ｐｅｒｌｅｓ  ２Ｄ表現を示す図である。鎖の３つのＣＤＲループは、図の頂部に示されている。
【図１Ｂ】図１Ａ−１Ｂ。ネズミ抗体６Ｈ３の軽鎖（図１Ａ）および重鎖（図１Ｂ）の可変ドメインのＣｏｌｌｉｅｒ  Ｐｅｒｌｅｓ  ２Ｄ表現を示す図である。鎖の３つのＣＤＲループは、図の頂部に示されている。
【図２Ａ−２Ｂ】チミジン取込み（図２Ａ）およびＩＬ−１７発現（図２Ｂ）により測定されるＴ細胞活性化のＢ７−Ｈ４Ｉｇ媒介抑制をブロックする抗体６Ｈ３の能力を抗体濃度（μｇ／ｍｌ）の関数として示す線グラフである。
【図３Ａ−３Ｂ】図３Ａ−３Ｄ。抗体６Ｈ３が卵巣癌患者のＴＡＭの存在下で卵巣癌患者のＴ細胞反応（ＩＬ−１７またはＩＮＦ−γを産生する機能性ＣＤ４およびＣＤ８細胞）を増強可能であったことを示す散布図である（図３Ａ：ＣＤ４、アイソタイプ対照、図３Ｂ：ＣＤ８、アイソタイプ対照、図３Ｃ：ＣＤ４、抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３、図３Ｄ：ＣＤ８、抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３）。
【図３Ｃ−３Ｄ】図３Ａ−３Ｄ。抗体６Ｈ３が卵巣癌患者のＴＡＭの存在下で卵巣癌患者のＴ細胞反応（ＩＬ−１７またはＩＮＦ−γを産生する機能性ＣＤ４およびＣＤ８細胞）を増強可能であったことを示す散布図である（図３Ａ：ＣＤ４、アイソタイプ対照、図３Ｂ：ＣＤ８、アイソタイプ対照、図３Ｃ：ＣＤ４、抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３、図３Ｄ：ＣＤ８、抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３）。
【図４Ａ−４Ｉ】卵巣癌患者の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）によるＢ７−Ｈ４（図４Ｈ）および他の抗原（ＣＤ１１ｂ（図４Ａ）、ＣＤ１４（図４Ｂ）、ＣＤ１２３（図４Ｃ）、ＣＤ８６（図４Ｄ）、ＣＤ８０（図４Ｅ）、ＨＬＡ−ＤＲ（図４Ｆ）、Ｂ７−Ｈ１（図４Ｇ）、およびＢ７−ＤＣ（図４Ｉ））の発現と、そのような細胞によるＢ７−Ｈ４発現を検出する抗体６Ｈ３の能力と、を示す散布図である。
【図５】Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体６Ｈ３の結合動態を抗体濃度（ｎＭ）の関数として示す結合曲線である。
【図６】他の抗Ｂ７−Ｈ４抗体（すなわち、抗体Ｈ７４、２Ｄ１、２Ｈ９、２Ｅ１１、および８Ｅ１１）と比較して抗体６Ｈ３のヒトＨ７−Ｈ４結合動態を抗体濃度（ｌｏｇ［ｍＡｂ］、ｎｇ／ｍｌ）の関数として示す結合曲線である。
【図７】Ｂ７−Ｈ４のＩｇＣ領域に結合する抗体６Ｈ３の能力を抗体濃度（ｎＭ）の関数として示す結合曲線である（変異体１：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１４９、変異体２：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５４、変異体３：配列番号１の残基ＩｇＶ２９〜１５８、変異体４：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ４、変異体５：配列番号１のＩｇＣ残基１５４〜２５９、変異体６：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ１−配列番号７）。
【図８Ａ−８Ｂ】図８Ａ−８Ｃ。抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体２Ｈ９（図８Ａ）、２Ｄ１（図８Ｂ）、およびＨ７４（図８Ｃ）により認識されるＢ７−Ｈ４の領域を抗体濃度（ｎＭ）の関数として示す結合曲線である（変異体１：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１４９、変異体２：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５４、変異体３：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５８、変異体４：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ４、変異体５：配列番号１のＩｇＣ残基１５４〜２５９、変異体６：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ１−配列番号７）。
【図８Ｃ】図８Ａ−８Ｃ。抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体２Ｈ９（図８Ａ）、２Ｄ１（図８Ｂ）、およびＨ７４（図８Ｃ）により認識されるＢ７−Ｈ４の領域を抗体濃度（ｎＭ）の関数として示す結合曲線である（変異体１：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１４９、変異体２：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５４、変異体３：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５８、変異体４：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ４、変異体５：配列番号１のＩｇＣ残基１５４〜２５９、変異体６：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ１−配列番号７）。
【図９】Ｔ細胞活性化（３Ｈ−チミジン取込み（ΔＣＰＭ）により測定される増殖）のＢ７−Ｈ４Ｉｇ媒介抑制をブロックする抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３、２Ｈ９、および２Ｄ１の能力を抗体濃度（μｇ／ｍｌ）の関数として比較する線グラフである。
【図１０Ａ−１０Ｂ】図１０Ａ−１０Ｆ。ＩＦＮγ感作単球媒介抑制を逆転する抗体（単球なし対照、パリビズマブ、２Ｈ９、２Ｄ１、６Ｈ３、抗Ｂ７−Ｈ１、抗ＰＤ１）の能力を示す棒グラフである。ＩＬ−２（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ａ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｂ）、ＴＮＦ−α（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ｃ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｄ）、またはＩＬ−８（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ｅ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｆ）に対して、Ｔ細胞を染色した。
【図１０Ｃ−１０Ｄ】図１０Ａ−１０Ｆ。ＩＦＮγ感作単球媒介抑制を逆転する抗体（単球なし対照、パリビズマブ、２Ｈ９、２Ｄ１、６Ｈ３、抗Ｂ７−Ｈ１、抗ＰＤ１）の能力を示す棒グラフである。ＩＬ−２（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ａ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｂ）、ＴＮＦ−α（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ｃ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｄ）、またはＩＬ−８（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ｅ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｆ）に対して、Ｔ細胞を染色した。
【図１０Ｅ−１０Ｆ】図１０Ａ−１０Ｆ。ＩＦＮγ感作単球媒介抑制を逆転する抗体（単球なし対照、パリビズマブ、２Ｈ９、２Ｄ１、６Ｈ３、抗Ｂ７−Ｈ１、抗ＰＤ１）の能力を示す棒グラフである。ＩＬ−２（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ａ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｂ）、ＴＮＦ−α（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ｃ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｄ）、またはＩＬ−８（ＣＤ４＋Ｔ細胞、図１０Ｅ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、図１０Ｆ）に対して、Ｔ細胞を染色した。
【図１１Ａ−１１Ｂ】Ｂ７−Ｈ４トランスフェクト細胞系およびＢ７−Ｈ４陽性乳癌細胞系ＳＫ−ＢＲ−３の両方の表面上に発現されたＢ７−Ｈ４の抗体６Ｈ３誘導ロバスト内在化を明らかにする。図１１Ａは、ＣｙｐＨｅｒ標識抗体６Ｈ３と共にインキュベートした０、１、および３時間後の２９３Ｔ  Ｂ７−Ｈ４トランスフェクタントのＣｙｐＨｅｒ５Ｂ蛍光のフローサイトメトリー測定の結果を示す一連のヒストグラムである。図１１Ｂは、Ｂ７−Ｈ４表面染色およびＣｙｐｅｒＨｅｒ蛍光を経時的に示す線グラフである。
【図１２Ａ−１２Ｂ】ＣｙｐＨｅｒ標識６Ｈ３と共にインキュベートしている間のＢ７−Ｈ４陽性ヒト乳癌細胞系ＳＫ−ＢＲ３細胞上のＢ７−Ｈ４表面染色およびＣｙｐＨｅｒ蛍光を対照と比較して経時的に示すヒストグラムである。
【図１３Ａ−１３Ｃ】組織学的試料のＢ７−Ｈ４陽性腫瘍細胞を検出する抗体６Ｈ３の能力を示す顕微鏡写真である。図１３Ａおよび１３Ｂは、６Ｈ３染色唾液腺組織の画像であり、図１３Ｃは、卵巣の２つの異なるただし関連する漿液性嚢胞性病変を示している。
【図１４】４℃で３０分間処理した後の、ＥＧ７（Ｂ７−Ｈ４陰性細胞）、ＥＧ７．ＩＧ７（Ｂ７−Ｈ４低発現細胞）、およびＥＧ７．ＩＶＢ３（Ｂ７−Ｈ４高発現細胞）における、キメラ２Ｅ１１（−●−）、キメラ２Ｈ９（−■−）、キメラ２Ｄ１（−▲−）、およびキメラ６Ｈ３（−▼−）の内在化を示す線グラフである。
【図１５】４℃で３０分間処理した後の、ＥＧ７（Ｂ７−Ｈ４陰性細胞）、ＥＧ７．ＩＧ７（Ｂ７−Ｈ４低発現細胞）、およびＥＧ７．ＩＶＢ３（Ｂ７−Ｈ４高発現細胞）における、キメラ６Ｈ３（−●−）、ヒト化変異体２（−▲−）、ヒト化変異体６（−▲−）、ヒト化変異体７（−▲−）、ヒト化変異体９（−▲−）、ヒト化変異体１２（−▲−）、およびヒト化変異体１４（−▲−）の内在化を示す線グラフである。
【図１６】内在化に有利な条件下での抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化をＢ７−Ｈ４の細胞表面発現の関数として示す線グラフである。
【図１７】内在化に有利でない条件下での抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化をＢ７−Ｈ４の細胞表面発現の関数としての示す線グラフである。
【図１８Ａ−１８Ｂ】Ｅ．Ｇ７ｏｖａ／ｈＢ７−Ｈ４細胞（図１８Ａ）およびＣＴ２６／ｈＢ７−Ｈ４細胞（図１８Ｂ）における、抗Ｂ７−Ｈ４抗体（ｘ軸に沿って左から右へ）、すなわち、ヒトキメラ６Ｈ３、ヒト化６Ｈ３Ｖ２、ヒト化６Ｈ３Ｖ６、ヒト化６Ｈ３Ｖ７、ヒト化６Ｈ３Ｖ９、ヒト化６Ｈ３Ｖ１２、ヒト化６Ｈ３Ｖ１４、６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）、６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）、陰性対照（抗ＰＤ−１抗体）、および無処理の内在化を示す棒グラフである。
【図１９Ａ−１９Ｃ】抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するように設計されたアッセイにより、３つの異なるエフェクター細胞：標的細胞比、すなわち、５００，０００：２５，０００（図１９Ａ）、５００，０００：１０，０００（図１９Ｂ）、および５００，０００：５，０００（図１９Ｃ）で、４つの異なる健常末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）ドナー（１１７、１１９、１２１、１２２）のエフェクター細胞によるＥＧ７．Ｂ７Ｈ４標的細胞の％特異的溶解をキメラ６Ｈ３抗体濃度（ｌｏｇ（ｎｇ／ｍｌ））の関数として示す線グラフである。
【図２０】抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するように設計されたアッセイにより、６Ｈ３の１４種の異なるヒト化変異体に対して、３つの異なるドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（１１４、１２１、１２２）のエフェクター細胞によるＥＧ７．Ｂ７Ｈ４標的細胞の％特異的溶解を示す棒グラフである（１０ｎｇ／ｍｌの抗体濃度、１：２０の標的細胞：エフェクター細胞の比）。
【図２１Ａ−２１Ｄ】抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するように設計されたアッセイにより、４つの異なるドナー、すなわち、ドナー１１８（図２１Ａ）、ドナー１１７（図２１Ｂ）、ドナー１２１（図２１Ｃ）、またはドナー１２２（図２１Ｄ）の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をエフェクター細胞として組み合わせて、漸増濃度の変異体１１または変異体１４のヒト化６Ｈ３抗体（ｌｏｇ［ｎｇ／ｍＬ抗体］）による標的細胞の％特異的溶解を示す棒グラフである。
【図２２Ａ−２２Ｂ】抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するように設計されたアッセイにより、３つの異なるエフェクター細胞：標的細胞比（２０：１、５０：１、１００：１）で、対照ＩｇＧ１または６つの異なる濃度のキメラ６Ｈ３抗体（２０００ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ、１２５ｎｇ／ｍｌ、３１．３ｎｇ／ｍｌ、７．８１ｎｇ／ｍｌ、１．９５ｎｇ／ｍｌ）の１つの存在下で、１１７（図２２Ａ）または１２０（図２２Ｂ）ドナー細胞によるＳＫ−ＢＲ−３細胞の％全溶解を示す棒グラフである。
【図２３Ａ−２３Ｂ】抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するように設計されたアッセイにより、３つの異なるエフェクター細胞：標的細胞比（２０：１、５０：１、１００：１）で、対照ＩｇＧ１または６つの異なる濃度のキメラ６Ｈ３抗体（２０００ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ、１２５ｎｇ／ｍｌ、３１．３ｎｇ／ｍｌ、７．８１ｎｇ／ｍｌ、１．９５ｎｇ／ｍｌ）の１つの存在下で、１１７（図２３Ａ）または１２０（図２３Ｂ）ドナー細胞によるＳＫ−ＢＲ−３細胞の％特異的溶解を示す棒グラフである。
【図２４Ａ−２４Ｂ】対照、キメラ６Ｈ３抗体、およびＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）抗体を利用した補体依存性細胞傷害アッセイの結果を示す棒グラフである。図２４Ａは、対照、１：２補体希釈、および１：５補体希釈で、種々の抗体および抗体濃度に対するＲＦＵ（相対蛍光単位−ブランク補正）を示している。各補体希釈に対して、棒のクラスターは、左から右へ、配合緩衝液、５０μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１（陰性対照）、５μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１（陰性対照）、０．５μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１（陰性対照）、５０μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、５μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、０．５μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、５０μｇ／ｍＬ  ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、５μｇ／ｍＬ  ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、０．５μｇ／ｍＬ  ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を表す。図２４Ｂは、対照、１：２補体希釈、および１：５補体希釈で、種々の抗体および抗体濃度に対する特異的溶解を示している。各補体希釈に対して、棒のクラスターは、左から右へ、５０μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、５μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、０．５μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、５０μｇ／ｍＬ  ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、５μｇ／ｍＬ  ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、０．５μｇ／ｍＬ  ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を表す。
【図２５】ＣＴＬ媒介溶解アッセイにより、さまざまなエフェクター細胞：標的細胞比で、Ａｇ＋標的細胞（ＣＴＬ不在下での平均を基準にした％）の生存を示す棒グラフである。
【図２６】ＣＴＬ媒介溶解アッセイにより、対照ＩｇＧまたはキメラ６Ｈ３抗体の存在下で、さまざまなエフェクター細胞：標的細胞比で、ＥＧ７．Ｂ７Ｈ４＋ＯＶＡ標的細胞の％特異的溶解を示す棒グラフである。各エフェクター細胞：標的細胞比に対して、棒のクラスターは、左から右へ、１μｇ／ｍＬ対照ＩｇＧ、１０μｇ／ｍＬ対照ＩｇＧ、１μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３、および１０μｇ／ｍＬキメラ６Ｈ３を表す。
【図２７Ａ−２７Ｂ】図２７Ａは、ルイス肺癌（ＬＣＣ）腫瘍マウスモデルを利用した第１の実験で、経時的に（腫瘍接種後の日数で）腫瘍体積（ｍｍ３）を示す線グラフである。この場合、腫瘍を有するマウスは、配合緩衝液対照（−◆−）、６Ｈ３．ｍ１（−■−）、または６Ｈ３．ｍ２ａ（−▲−）で処理された。図２７Ｂは、ルイス肺癌（ＬＣＣ）腫瘍マウスモデルで、経時的に（腫瘍接種後の日数で）マウスの生存％を示すカプラン・マイヤー曲線である。この場合、マウスは、配合緩衝液対照（−●−）、６Ｈ３．ｍ１（−■−）、または６Ｈ３．ｍ２ａ（−▲−）で処理された。
【図２８Ａ−２８Ｂ】図２８Ａは、ルイス肺癌（ＬＣＣ）腫瘍マウスモデルを利用した第２の実験で、経時的に（腫瘍接種後の日数で）腫瘍体積（ｍｍ３）を示す線グラフである。この場合、腫瘍を有するマウスは、配合緩衝液対照（−◆−）、６Ｈ３．ｍ１（−■−）、または６Ｈ３．ｍ２ａ（−▲−）で処理された。図２８Ｂは、ルイス肺癌（ＬＣＣ）腫瘍マウスモデルで、経時的に（腫瘍接種後の日数で）マウスの生存％を示すカプラン・マイヤー曲線である。この場合、マウスは、配合緩衝液対照（−●−）、６Ｈ３．ｍ１（−■−）、または６Ｈ３．ｍ２ａ（−▲−）で処理された。
【図２９Ａ−２９Ｂ】図２９Ａは、処理の不在下で、腫瘍細胞の静脈内接種後、経時的に（日数で）、ＣＴ２６．Ｂ７Ｈ４肺癌モデルでの腫瘍の増殖速度（腫瘍数）を示すドットプロットである。図２９Ｂは、腫瘍細胞の静脈内接種後かつ配合緩衝液（ＦＢ）、１０日目に開始した１０ｍｇ／ｋｇ  ６Ｈ３．ｍ２ａ（１０ｍｇ／ｋｇ−１０）、１ｍｇ／ｋｇ、１０日目に開始した６Ｈ３．ｍ２ａ（１ｍｇ／ｋｇ−１０）、１０ｍｇ／ｋｇ、１４日目に開始した６Ｈ３．ｍ２ａ（１０ｍｇ／ｋｇ−１４）、または１４日目に開始した１ｍｇ／ｋｇ  ６Ｈ３．ｍ２ａ（１ｍｇ／ｋｇ−１４）による処理後、経時的に（日数で）、ＣＴ２６．Ｂ７Ｈ４肺癌モデルでの腫瘍数を示すドットプロットである。
【図３０】配合緩衝液または１００ｍｇ／ｋｇの６Ｈ３．ｍ１もしくは６Ｈ３．ｍ２を毎週１回で４回投与した後、２４日目におけるマウスの血中グルコース（ｍｇ／ｄｌ）を示すドットプロットである。
【図３１】１００ｍｇ／ｋｇの６Ｈ３．ｍ１または６Ｈ３．ｍ２の毎週１回投与の４回目の後、６Ｈ３．ｍ１または６Ｈ３．ｍ２のピーク（Ｃｍａｘ）およびトラフ（Ｃｍｉｎ）で、マウスの血清中の抗体レベル（ｍｇ／ｍｌ）を示すドットプロットである。
【図３２Ａ−３２Ｂ】６Ｈ３．ｍ１（３２Ａ）または６Ｈ３．ｍ２（３２Ｂ）に対して血清中抗体濃度（ｌｏｇ［抗体］（ｐｇ／ｍｌ））の関数として相対蛍光単位（ＲＦＵ）を示す線グラフである。
【図３３】Ｂ７−Ｈ４の細胞外ドメインに結合するヒトキメラ６Ｈ３および１４種のヒト化変異体を測定するＥＬＩＳＡアッセイの結果（抗体濃度（Ｌｏｇ１０（ｎＭ））の関数としてＯＤ４５０）を示す結合曲線である。
【図３４Ａ】図３４Ａ−３４Ｂ。Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇに結合するキメラ６Ｈ３およびヒト化変異体Ｖ１−Ｖ７（図３４Ａ）およびＶ８−Ｖ１４（図３４Ｂ）を測定する競合ＥＬＩＳＡアッセイの生の結果（抗体濃度（（ｎｇ／ｍｌ）ｌｏｇ）の関数として４５０ｎｍの吸光度）を示す結合曲線である。
【図３４Ｂ】図３４Ａ−３４Ｂ。Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇに結合するキメラ６Ｈ３およびヒト化変異体Ｖ１−Ｖ７（図３４Ａ）およびＶ８−Ｖ１４（図３４Ｂ）を測定する競合ＥＬＩＳＡアッセイの生の結果（抗体濃度（（ｎｇ／ｍｌ）ｌｏｇ）の関数として４５０ｎｍの吸光度）を示す結合曲線である。
【図３５Ａ−３５Ｂ】Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞に結合するキメラ６Ｈ３、ヒト化変異体Ｖ２、Ｖ６、Ｖ７、Ｖ９、Ｖ１２、Ｖ１４、および陰性対照抗ＰＤ−１抗体（図３４Ａのみ）を測定する競合ＥＬＩＳＡアッセイの生（図３５Ａ）およびバックグラウンド除去（図３５Ｂ）の結果（抗体濃度（（ｎｇ／ｍｌ）ｌｏｇ）の関数として４５０ｎｍの吸光度）を示す結合曲線である。
【図３６】Ｂ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３トランスフェクタントに結合する６Ｈ３のヒト化変異体の抗体結合（抗体濃度（ｎＭ）の関数として平均蛍光強度（ＭＦＩ））を示す結合曲線である。
【図３７】マウスＢ７−Ｈ４−ｍＩｇ融合タンパク質に結合する抗体キメラ６Ｈ３および６Ｈ３のヒト化変異体を測定するＥＬＩＳＡアッセイの結果（抗体濃度（ｌｏｇ１０（ｎＭ））の関数としてＯＤ４５０）を示す結合曲線である。
【図３８Ａ−３８Ｄ】さまざまな濃度（０、１．１１μ／ｇ／ｍｌ、３．３３μ／ｇ／ｍｌ、または１０μ／ｇ／ｍｌ）のキメラ６Ｈ３（「親」）または６Ｈ３のヒト化変異体と組み合わせて、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ融合タンパク質で処理された細胞に対して、ＩＬ−１７の分泌（図３８Ａ）、ＩＦＮγの分泌（図３８Ｂ）、増殖（［３Ｈ］チミジン取込み）（図３８Ｃ）、およびＩＬ−１０の分泌（図３８Ｄ）を示す線グラフである。＊は、対照Ｉｇを用いた。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
多くの腫瘍組織たとえばヒト卵巣癌で高レベルのＢ７−Ｈ４発現が見いだされることから、免疫抑制の媒介におけるＢ７−Ｈ４の重要な役割が示唆される。また、Ｂ７−Ｈ４を発現するＴＡＭは、腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞免疫を抑制することが見いだされている（Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３（４）：８７１−８８１）。ＴＡＭでのＢ７−Ｈ４発現の強度は、腫瘍内のＴｒｅｇ細胞数と有意に相関する。さらに、ＴＡＭ上に発現されるＢ７−Ｈ４は、患者の転帰不良に関連付けられる（Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３（４）：８７１−８８１）。また、これまでに発表されたデータからも、ＴＡＭは、腫瘍内へのＴｒｅｇ細胞輸送およびＴＡＭ自体を含めて抗原提示細胞（ＡＰＣ）上でのＴｒｅｇ細胞誘導Ｂ７−Ｈ４発現を媒介するケモカインＣＣＬ２２を自発的に産生することが示された（Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｅｄｇｅ：Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７−Ｈ４  Ｏｎ  ＡＰＣｓ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  ＩＬ−１０：Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍｏｄｅ  Ｆｏｒ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７（１）：４０−４４）。まとめると、そのような知見から、Ｂ７−Ｈ４を発現する腫瘍細胞およびＴＡＭは、腫瘍が免疫系による検出を回避（「免疫回避」）できるようにする腫瘍マイクロ環境内での免疫抑制に対して非常に重要な役割を果たすことが示唆される。Ｂ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能なまたはその天然レセプターとの相互作用を防止可能な開示された分子は、Ｂ７−Ｈ４をブロックしたり、その表面発現をモジュレートしたり、Ｂ７−Ｈ４媒介シグナル伝達をモジュレートしたり、またはＴＡＭを枯渇させたりすることにより、癌に対する有効な免疫療法としての戦略を提供する。
【００５３】
Ｂ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能な分子と、さらには癌および他の疾患の診断および治療におけるそのような分子の使用と、を提供する。また、腫瘍増殖を遅延もしくは予防するための、腫瘍媒介抑制を阻害するための、腫瘍を排除するための、ならびに／または腫瘍関連マクロファージ（「ＴＡＭ」）の活性を枯渇もしくはブロックしてその活性の改変および／もしくはＴＡＭ媒介免疫抑制の減少を行うための、この分子の使用をも提供する。
【００５４】
特定的には、そのような分子とくにｈＩｇＧ１抗体またはｈＩｇＧ４抗体であるそのような分子は、Ｂ７−Ｈ４発現細胞、腫瘍、またはＴＡＭを標的とするために、ならびにＢ７−Ｈ４とそのレセプターとの間の相互作用のモジュレーション、Ｂ７−Ｈ４レベルのモジュレーション、負のシグナリングの減衰、および／またはＢ７−Ｈ４陽性細胞の枯渇を含めて、種々の機能活性をスクリーニングするために、使用可能である。組換えＤＮＡ技術を用いて、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合活性をほとんどもしくはまったく有していないＦｃドメインを形成する定常領域、増強された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、または増強された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を含むように、そのような分子を工学操作することが可能である。そのような組換え分子をモジュレート分子として使用して、腫瘍上またはＴＡＭ上のＢ７−Ｈ４と、腫瘍マイクロ環境内のＴ細胞上または他の細胞上の阻害レセプターと、の相互作用を減少または防止することにより、Ｂ７−Ｈ４チェックポイント（「破壊」）／抑制シグナリングからＴ細胞または他の機能細胞を放出させることが可能である。これとは対照的に、機能Ｆｃドメインを形成する定常領域を含むように、したがって、Ｂ７−Ｈ４を発現する腫瘍細胞またはＴＡＭの枯渇を引き起こすＡＤＣＣまたはＣＤＣを誘導しうるように、そのような分子を工学操作することが可能である。この場合、抑制細胞の表面からのＢ７−Ｈ４モジュレーションやＢ７−Ｈ４発現細胞の直接死滅などの他の活性に加えて、チェックポイント遮断からＴ細胞または他の機能細胞を放出しうる可能性がある。ＡＤＣＣ活性を有する抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４発現腫瘍細胞の枯渇とＴＡＭ媒介免疫抑制の阻害とを同時に行うのに、とくに有用でありうる。
【００５５】
特定の態様では、本開示は、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，  Ｖａ．）に記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２２８、２３４、２３５、および３３１からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの修飾（たとえば、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失）を含む、Ｆｃ変異体を提供する。
【００５６】
一態様では、修飾は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２２８Ｐ、２３４Ｆ、２３５Ｅ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの置換である。
【００５７】
他の特定の態様では、本開示は、Ｆｃ領域が、ＩｇＧ４Ｆｃ領域であり、かつＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２２８および２３５からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの修飾を含む、Ｆｃ変異体を提供する。さらに他の特定の態様では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４Ｆｃ領域であり、かつ天然に存在しないアミノ酸が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２２８Ｐ、２３５Ｅ、および２３５Ｙからなる群から選択される。
【００５８】
他の特定の態様では、本開示は、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２３９、３３０、および３３２からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む、Ｆｃ変異体を提供する。一態様では、修飾は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２３９Ｄ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの置換である。米国特許第７，３１７，０９１号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【００５９】
特定の態様では、本開示は、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む、Ｆｃ変異体を提供する。一態様では、修飾は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの置換である。米国特許第７，０８３，７８４号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【００６０】
特定の態様では、本開示は、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに位置４２８に天然に存在しないアミノ酸を含む、Ｆｃ変異体を提供する。一態様では、４２８位の修飾は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに４２８Ｔ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、および４２８Ｓからなる群から選択される。米国特許第７，６７０，６００号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。他の態様では、Ｆｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに位置４３４に天然に存在しないアミノ酸をさらに含みうる。一態様では、４３４位の修飾は、に記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに４３４Ａ、４３４Ｓ、およびＫａｂａｔ４３４Ｆからなる群から選択される。他の態様では、本開示は、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスにより番号付けしたときに位置４２８および４３４に天然に存在しないアミノ酸を含む、Ｆｃ変異体を提供する。特定の態様では、Ｆｃ領域は、４２８Ｌ、４３４Ｓを含む。
米国特許第８，０８８，３７６号明細書を参照されたい。
【００６１】
ヒトＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は、（配列番号１）：
【化１】
2016509582.tif 000002
である。
【００６２】
ネズミＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は、（配列番号２）：
【化２】
2016509582.tif 000003
である。
【００６３】
本明細書で用いられる場合、分子は、結合がコグネイト抗原への抗体の特異性および親和性を呈する場合、第２の分子に「免疫特異的に結合」可能であると言われる。抗体は、結合が免疫グロブリン分子の抗原認識部位を含む場合、抗原（特定的には抗原Ｂ７−Ｈ４）の標的領域またはコンフォメーション（「エピトープ」）に「免疫特異的に結合」可能であると言われる。特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は、たとえば、免疫アッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ、または当技術分野で公知の他のアッセイにより決定したときに、他の抗原が、抗原認識部位により認識されるいくらかの配列またはコンフォメーションの類似性を有する場合、より低い親和性で他の抗原に結合しうるが、完全に無関係な抗原には結合しない。しかしながら、好ましくは、抗体（およびその抗原結合フラグメント）は、他の抗原と交差反応しないであろう。抗体はまた、抗原認識部位を含まない分子の他の領域／ドメイン内、たとえばＦｃ領域内の結合ドメインにより、免疫特異的でない形で、他の分子に、たとえばＦｃＲレセプターに結合しうる。分子は、結合がコグネイト結合リガンドへのレセプターの特異性および親和性を呈する場合、第２の分子に「物理特異的に結合」すると言われている。Ｂ７−Ｈ４分子（たとえば、Ｂ７−Ｈ４タンパク質または融合分子など）は、結合がＢ７−Ｈ４レセプター認識部位を含む場合、レセプターまたはＢ７−Ｈ４の標的領域またはコンフォメーション（「エピトープ」）に「物理特異的に結合」可能であると言われる。分子は、２つ以上の他の分子に物理特異的に結合可能であることもありうる。
【００６４】
開示された分子は、限定されるものではないがＴＡＭを含めて腫瘍内に存在するＢ７−Ｈ４発現細胞の濃度を「枯渇」（すなわち、部分的または完全に減少）させたり、Ｂ７−Ｈ４発現細胞の活性をブロックしたりする能力を有しうる。そのような枯渇は、腫瘍内に存在する（もしくは腫瘍に動員される）マクロファージの絶対数に関連しうるか、または活性マクロファージの濃度（すなわち、血管形成促進作用もしくは腫瘍形成促進作用を媒介する能力を有する腫瘍内にあるもしくは腫瘍に動員されるマクロファージの濃度）に関連しうる。好ましくは、そのような枯渇は、測定可能な免疫系活性（たとえば、マクロファージ数、血管形成能、血管新生、マクロファージ生存能など）の少なくとも１０％の変化、より好ましくはそのような活性の少なくとも５０％の変化、またはそのような活性の少なくとも２倍、５倍、１０倍、さらにより好ましくは少なくとも１００倍の変化を提供するであろう。
【００６５】
本明細書で用いられる場合、「モジュレート」という用語は、作用または結果を改変する能力を意味する。たとえば、Ｂ７−Ｈ４とそのコグネイトレセプターとの間の結合をモジュレート可能なおよび／またはＢ７−Ｈ４−コグネイトレセプター結合の結果として起こるシグナル伝達をモジュレート可能な、ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３、またはそのキメラ変異体もしくはヒト化変異体、またはヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するそれらの各抗原結合フラグメント、またはＢ７−Ｈ４もしくはそのコグネイトレセプターに物理特異的に結合する分子、を含むポリペプチドを提供する。そのようなモジュレーションは、部分的でありうるか（すなわち、Ｂ７−Ｈ４の活性を減衰させるが消失させない）、またはそのような活性を完全に消失させうる（たとえば、シグナル伝達を媒介するＢ７−Ｈ４の能力を中和しうる）。モジュレーションは、抗体の結合後のレセプターの内在化または標的細胞上のレセプターの発現の低減を含みうる。さらなる実施形態では、そのようなモジュレーションは、Ｂ７−Ｈ４とそのコグネイトレセプターとの間の相互作用を増強または他の形でアゴナイズして、Ｂ７−Ｈ４−コグネイトレセプター結合またはシグナル伝達を促進しうる。またさらなる実施形態では、そのようなモジュレーションは、Ｂ７−Ｈ４とそのコグネイトレセプターとの間の相互作用の性質を改変して、誘発されるシグナル伝達の性質を改変するようにしうる。たとえば、分子は、Ｂ７−Ｈ４に結合することにより、他のレセプターに結合するそのような分子の能力を改変し、それにより、その全活性を改変しうる。好ましくは、そのようなモジュレーションは、測定可能な免疫系活性の少なくとも１０％の変化、より好ましくはそのような活性の少なくとも５０％の変化、またはそのような活性の少なくとも２倍、５倍、１０倍、さらにより好ましくは少なくとも１００倍の変化を提供するであろう。したがって、そのようなモジュレーションは、コグネイトレセプターに結合するＢ７−Ｈ４（たとえば、腫瘍細胞上のもの）の能力を減衰または完全消失させることにより、Ｂ７−Ｈ４により媒介される免疫反応の阻害を低減（または防止）することが可能である。したがって、癌、感染性疾患、および免疫反応の増強が望まれる他の疾患の治療をも開示する。他の選択肢として、Ｂ７−Ｈ４結合分子は、腫瘍の増殖、発生、生存能、活性などに直接影響を及ぼしうる腫瘍特異的Ｂ７−Ｈ４に対してモジュレート活性を発揮することが可能である。
【００６６】
結合作用または呈示作用との関連で用いられる「実質的」という用語は、観測された作用が生理学的または治療的に妥当であるとみなされることが意図される。したがって、たとえば、ブロックの程度が生理学的または治療的に妥当である場合（たとえば、そのような程度が、６０％超の完全性、７０％超の完全性、７５％超の完全性、８０％超の完全性、８５％超の完全性、９０％超の完全性、９５％超の完全性、または９７％超の完全性である場合）、分子は、可溶性Ｂ７−Ｈ４または膜結合Ｂ７−Ｈ４の活性を実質的にブロック可能である。同様に、免疫特異性および特性が、６０％超の同一性、７０％超の同一性、７５％超の同一性、８０％超の同一性、８５％超の同一性、９０％超の同一性、９５％超の同一性、または９７％超の同一性である場合、分子は、他の分子と実質的に同一の免疫特異性および／または特性を有すると言われる。
【００６７】
本明細書で用いられる場合、Ｂ７−Ｈ４により媒介される「共刺激」シグナルは、陽性共刺激シグナル（たとえば、活性の増強を引き起こすシグナル）および陰性共刺激シグナル（たとえば、活性の阻害を引き起こすシグナル）を包含する。
【００６８】
本明細書で用いられる場合、「抗体」という用語は、「可変領域」抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子とみなされることが意図される。「可変領域」という用語は、免疫グロブリンのそのようなドメインと、より広く抗体に共有されるドメイン（たとえば、抗体Ｆｃドメイン）と、を区別することが意図される。可変領域は、残基が抗原結合に関与する「超可変領域」を含む。超可変領域は、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（すなわち、典型的には、軽鎖可変ドメイン中の残基約２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基約２７〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、および／または「超可変ループ」からの残基（すなわち、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」の残基は、本明細書に定義される超可変領域の残基以外の可変ドメインの残基である。抗体という用語は、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体（たとえば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０、Ｎｕｔｔａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｕｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：２５３、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５、国際公開第９４／０４６７８号パンフレットおよび同第９４／２５５９１号パンフレット、米国特許第６，００５，０７９号明細書を参照されたい）、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）（たとえば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、イントラボディー、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（たとえば、抗体に対する抗Ｉｄ抗体および抗抗Ｉｄ抗体を含む）を含む。特定的には、そのような抗体は、任意のタイプ（たとえば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子を含む。
【００６９】
本明細書で用いられる場合、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、抗体の「可変領域」抗原認識部位を含みかつ抗原に免疫特異的に結合する能力を呈する、抗体の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と任意選択でフレームワーク残基とを含有する、抗体の１つ以上の部分を意味する。そのようなフラグメントは、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖（ＳｃＦｖ）、およびそれらの突然変異体、天然に存在する変異体、抗体の「可変領域」抗原認識部位と異種タンパク質（たとえば、毒素、異なる抗原に対する抗原認識部位、酵素、レセプター、レセプターリガンドなど）とを含む融合タンパク質を含む。本明細書で用いられる場合、「フラグメント」という用語は、少なくとも５連続アミノ酸残基、少なくとも１０連続アミノ酸残基、少なくとも１５連続アミノ酸残基、少なくとも２０連続アミノ酸残基、少なくとも２５連続アミノ酸残基、少なくとも４０連続アミノ酸残基、少なくとも５０連続アミノ酸残基、少なくとも６０隣接アミノ残基、少なくとも７０連続アミノ酸残基、少なくとも８０連続アミノ酸残基、少なくとも９０連続アミノ酸残基、少なくとも１００連続アミノ酸残基、少なくとも１２５連続アミノ酸残基、少なくとも１５０連続アミノ酸残基、少なくとも１７５連続アミノ酸残基、少なくとも２００連続アミノ酸残基、または少なくとも２５０連続アミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを意味する。
【００７０】
開示された抗体および抗原結合フラグメントのいずれかの「誘導体」の生成および使用をも開示する。「誘導体」という用語は、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するが、抗体６Ｈ３と比較して１、２、３、４、５、またはそれ以上のアミノ酸の置換、付加、欠失、または修飾を含むことによりアミノ酸配列がネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３と異なる、抗体またはその抗原結合フラグメントを意味する。好ましくは、そのような誘導体は、抗体６Ｈ３と実質的に同一の免疫特異性および／もしくは特性または同一の免疫特異性および特性を有するであろう。そのような誘導体のアミノ酸の置換または付加は、天然に存在する（すなわち、ＤＮＡにコードされている）または天然に存在しないアミノ酸残基を含みうる。「誘導体」という用語は、たとえば、抗体６Ｈ３のキメラ変異体またはヒト化変異体、さらにはたとえば、増強または障害されたエフェクター特性または結合特性を呈する変異体Ｆｃ領域を有する抗体などが形成されるように改変されたＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４の領域を有する変異体を包含する。「誘導体」という用語は、アミノ酸修飾が施されていないもの、たとえば、グリコシル化（たとえば、改変されたマンノース、２−Ｎ−アセチルグルコサミン、ガラクトース、フコース、グルコース、シアル酸、５−Ｎ−アセチルノイラミン酸、５−グリコルノイラミン酸などの含分を有するもの）、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合などが可能なアミノ酸を追加的に包含する。いくつかの実施形態では、改変された炭水化物修飾は、次のもの、すなわち、抗体の可溶化、細胞レベル下での抗体の輸送および分泌の促進、抗体集合の促進、コンフォメーションの完全性、および抗体媒介エフェクター機能の１つ以上をモジュレートする。特定の実施形態では、改変された炭水化物修飾は、炭水化物修飾が欠如している抗体と比較して抗体媒介エフェクター機能を増強する。改変抗体媒介エフェクター機能をもたらす炭水化物修飾は、当技術分野で周知である（たとえば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｌａｃｋ  Ｏｆ  Ｆｕｃｏｓｅ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｃｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３−２６７４０、Ｄａｖｉｅｓ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  ＧｎＴＩＩＩ  Ｉｎ  Ａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ＣＨＯ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｇｌｙｃｏｆｏｒｍｓ  Ｌｅａｄｓ  Ｔｏ  Ａｎ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  Ｉｎ  ＡＤＣＣ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒ  ＦＣ  Ｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ，”Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７４（４）：２８８−２９４を参照されたい）。炭水化物含分を改変する方法は、当業者に公知であり、たとえば、Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）“Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  ＶＨ  Ｒｅｓｉｄｕｅ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ａｌｐｈａ（１−−−−６）Ｄｅｘｔｒａｎ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｉｔｓ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉｇｅｎ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８（３）：１０９９−１１０９、Ｔａｏ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｕｓｅ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ．Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎｄ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｙ  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３（８）：２５９５−２６０１、Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ，Ｅ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）“Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｏｆ  Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｏｎ  Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＣＤ３  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０（８）：８４７−５３、Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，”Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：４１４−２１、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“Ｌａｃｋ  Ｏｆ  Ｆｕｃｏｓｅ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｃｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：  ２６７３３−２６７４０を参照されたい。
【００７１】
「キメラ抗体」とは、抗体のさまざまな部分が、異なる免疫グロブリン分子に由来する分子、たとえば、非ヒト抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリンの定常領域とを有する抗体などのことである。キメラ抗体の産生方法は、当技術分野で公知である。たとえば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２、Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、ならびに米国特許第６，３１１，４１５号明細書、同第５，８０７，７１５号明細書、同第４，８１６，５６７号明細書、および同第４，８１６，３９７号明細書を参照されたい。非ヒト種からの１つ以上のＣＤＲとヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域とを含むキメラ抗体は、たとえば、ＣＤＲ移植（欧州特許第２３９，４００号明細書、国際公開第９１／０９９６７号パンフレット、ならびに米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書、および同第５，５８５，０８９号明細書）、ベニヤリングまたはリサーフェイシング（欧州特許第５９２，１０６号明細書、同第５１９，５９６号明細書、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５、およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９）、およびチェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）を含めて、当技術分野で公知のさまざまな技術を用いて産生可能である。
【００７２】
本明細書に開示された抗体は、「ヒト化抗体」を含む（たとえば、欧州特許第２３９，４００号明細書、同第５９２，１０６号明細書、および同第５１９，５９６号明細書、国際公開第９１／０９９６７号パンフレットおよび同第９３／１７１０５号パンフレット、米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書、同第５，５６５，３３２号明細書、同第５，５８５，０８９号明細書、同第５，７６６，８８６号明細書、および同第６，４０７，２１３号明細書、ならびにＰａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９  ４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ  ９１：９６９  ９７３、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：３５３−３６０、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９：８９５−９０４、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５  （２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ  １５０：４０９−１０、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−９７３、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９、およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６を参照されたい）。本明細書で用いられる場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒトフレームワーク領域と非ヒト（通常は、マウスまたはラット）免疫グロブリンからの１つ以上のＣＤＲとを含む免疫グロブリンを意味する。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。定常領域は、存在する必要はないが、存在する場合、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一である。すなわち、少なくとも約８５〜９９％、好ましくは約９５％以上の同一性である。したがって、ヒト化免疫グロブリンのすべて部分は、おそらくＣＤＲを除いて、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応部分と実質的に同一である。ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖免疫グロブリンとヒト化重鎖免疫グロブリンとを含む抗体である。たとえば、ヒト化抗体は、典型的なキメラ抗体を包含しないであろう。なぜなら、キメラ抗体の全可変領域は、たとえば、非ヒトであるからである。ドナー抗体は、「ヒト化」のプロセスにより「ヒト化」されたと言われる。なぜなら、得られるヒト化抗体は、ＣＤＲを提供するドナー抗体と同一の抗原に結合すると予想されるからである。ほとんどの場合��ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長動物などの非ヒト種（ドナー抗体）からの超可変領域の残基と置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基と置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含みうる。これらの修飾は、抗体性能をさらに精密化するために行われる。一般的には、ヒト化抗体に含まれるであろう少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインは実質的にすべて、超可変領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、かつＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、アミノ酸残基の置換、欠失、または付加（すなわち、突然変異）の導入により改変された、ＦｃγＲＩＩＢポリペプチドに免疫特異的に結合するヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。
【００７３】
とくに好ましい実施形態では、抗体および抗原結合フラグメントは、腫瘍またはＴＡＭに結合することにより細胞を枯渇させるかまたはその活性をモジュレートする能力に関して選択される。
【００７４】
ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト誘導体、キメラ誘導体、またはヒト化誘導体は、ヒトにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ使用にとくに好適であるが、ネズミ抗体または他の種の抗体は、多くの用途（たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ検出アッセイ、急性ｉｎ  ｖｉｖｏ使用など）に有利に使用可能である。そのようなヒト抗体またはヒト化抗体は、１つ以上の非ヒトＣＤＲにアミノ酸残基の置換、欠失、または付加を含みうる。ヒト化抗体誘導体は、非誘導体ヒト化抗体と比較した場合、実質的に同一の結合、より強い結合、またはより弱い結合を有しうる。特定の実施形態では、ＣＤＲの１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基は、置換、欠失、または付加される（すなわち、突然変異される）。完全ヒト抗体は、ヒト被験体の治療処置にとくに望ましい。
【００７５】
そのようなヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いてファージディスプレイ方法をはじめとする当技術分野で公知のさまざまな方法により作製可能である（米国特許第４，４４４，８８７号明細書および同第４，７１６，１１１号明細書、ならびに国際公開第９８／４６６４５号パンフレット、同第９８／５０４３３号パンフレット、同第９８／２４８９３号パンフレット、同第９８／１６６５４号パンフレット、同第９６／３４０９６号パンフレット、同第９６／３３７３５号パンフレット、および同第９１／１０７４１号パンフレットを参照されたい）。機能性内因性免疫グロブリンを発現可能でないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現可能であるトランスジェニックマウスを用いて、ヒト抗体を産生することが可能である。たとえば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、マウス胚性幹細胞にランダムにまたは相同的組換えにより導入可能である。他の選択肢として、ヒト重鎖およびヒト軽鎖の遺伝子に加えて、ヒト可変領域、ヒト定常領域、およびヒト多様性領域をマウス胚性幹細胞内に導入することが可能である。マウス重鎖およびマウス軽鎖の免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入により、個別にまたは同時に非機能性にすることが可能である。特定的には、ＪＨ領域のホモ接合欠失は、内因性抗体産生を防止する。修飾胚性幹細胞を拡大培養し、胚盤胞内にマイクロインジェクトすると、キメラマウスが生産される。次いで、キメラマウスの育種を行って、ヒト抗体を発現するホモ接合子孫を生産する。選択された抗原、たとえば、ポリペプチドの全部または一部を用いて、従来の方法により、トランスジェニックマウスを免疫する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて、免疫トランスジェニックマウスから取得可能である（たとえば、米国特許第５，９１６，７７１号明細書を参照されたい）。トランスジェニックマウスが保有するヒト免疫グロブリントランスジーンは、Ｂ細胞分化時に再構成され、続いて、クラススイッチおよび体細胞突然変異を起こす。したがって、そのような技術を用いて、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ（１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、たとえば、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、同第９６／３４０９６号パンフレット、および同第９６／３３７３５号パンフレット、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号明細書、同第５，６２５，１２６号明細書、同第５，６３３，４２５号明細書、同第５，５６９，８２５号明細書、同第５，６６１，０１６号明細書、同第５，５４５，８０６号明細書、同第５，８１４，３１８号明細書、および同第５，９３９，５９８号明細書（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。��れに加えて、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）やＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）などの会社は、以上に記載したのと類似した技術を用いて、選択された抗原に対するヒト抗体を提供するように、業務提携が可能である。
【００７６】
いくつかの実施形態では、開示された抗体は、単一特異性である。とくに興味深いのは、ヒトＢ７−Ｈ４に対する特異性に加えて、異なる免疫系標的に対する特異性を呈する、そのような抗体の二重特異的誘導体、そのような抗体の三重特異的誘導体、またはより大きい多重特異性の誘導体抗体である。たとえば、そのような抗体は、ヒトＢ７−Ｈ４と、抗体が特定の細胞型または組織を標的とするのに重要な抗原（たとえば、治療される腫瘍の癌抗原に関連付けられる抗原）と、の両方に結合可能である。他の実施形態では、そのような多重特異的抗体は、他の選択肢の免疫モジュレート経路に関与する分子（レセプターまたはリガンド）、たとえば、Ｂ７−Ｈ１、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、４−１−ＢＢ、ＬＩＧＨＴ、またはＬＡＧ３に結合することにより、１つの分子で、免疫モジュレート作用を増強したり、多重作用機序を組み合わせたり、たとえば、リガンドをブロックしたり、免疫細胞を活性化させたり、腫瘍を直接標的としたりする。たとえば、Ｂ７−Ｈ１もまた、腫瘍上およびＴＡＭ上で発現され、Ｂ７−Ｈ１とＢ７−Ｈ４の両方を標的とする二重特異的抗体は、ＴＡＭ媒介免疫抑制の阻害の増強、さらには腫瘍媒介Ｂ７−Ｈ１＋およびＢ７−Ｈ４＋免疫抑制の阻害の増強を提供するであろう。さらに、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ４の両方を標的とする二重特異的抗体は、ＴＡＭ媒介免疫抑制を阻害したり、腫瘍媒介免疫抑制を阻害したり（Ｂ７−Ｈ４およびＰＤ−１の両方の経路を介して）、消耗したＴ細胞を再賦活してエフェクターＣＴＬ認識を増強したり、ＰＤ−１：Ｂ７−Ｈ４「架橋」を介してエフェクターＣＴＬを腫瘍に再方向付け／標的化したりとするであろう。さらに、多重特異的抗体は、サイトカイン（たとえば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−４  ＴＧＦ−β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＦＮｇ、Ｆｌｔ３、ＢＬｙｓ）やケモカイン（たとえば、ＣＣＬ２１）などのエフェクター分子に結合可能であり、これは、急性および慢性の両方の免疫反応をモジュレートするのにとくに適している。同様に、Ｂ７−Ｈ４に結合可能な内在化抗体または毒素コンジュゲート抗体は、Ｂ７−Ｈ４を発現する腫瘍細胞の細胞内取込みおよび誘導死滅を媒介するために利用可能である。
【００７７】
マクロファージは、ＨＩＶ感染（Ｃａｒｔｅｒ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｆ  ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２：４２５−４４３、Ｎｏｕｒｓａｄｅｇｈｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ：Ｔｈｅ  Ｃａｓｅ  Ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｉｎ  ＡＩＤＳ，”Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．６：７９４−８０４）の初期段階に有意に寄与することが示されている。したがって、Ｂ７−Ｈ４と、ＣＤ１４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＴＬＲ２などのマクロファージ特異的マーカーと、に結合する開示された抗体またはその抗原結合フラグメント（とくに、毒素にコンジュゲートされた場合）は、ＨＩＶ感染を予防するために使用可能である。
【００７８】
好ましいヒトアクセプターフレームワーク配列をコードするＤＮＡ配列としては、ヒト生殖系列ＶＨセグメントＶＨ１−１８およびＪＨ６ならびにヒト生殖系列ＶＬセグメントＶＫ−Ａ２６およびＪＫ４からのＦＲセグメントが挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、ＣＤＲの１つ以上は、慣例的な組換えＤＮＡ技術を用いてフレームワーク領域内に挿入される。フレームワーク領域は、天然に存在するフレームワーク領域またはコンセンサスフレームワーク領域、好ましくはヒトフレームワーク領域でありうる（たとえば、ヒトフレームワーク領域のリストに関しては、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９を参照されたい）。
【００７９】
ヒト抗体誘導体、ヒト化抗体誘導体、またはキメラ抗体誘導体に含まれうる少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインは実質的にすべて、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、かつフレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。好ましくは、そのような抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む。そのような抗体の定常ドメインは、抗体の提案された機能、特定的には、必要とされうるエフェクター機能に関して、選択可能である。いくつかの実施形態では、そのような抗体の定常ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、もしくはＩｇＭドメインであるか、またはそれらを含みうる。特定の実施形態では、ヒト化抗体誘導体が治療的使用を目的とする場合かつ抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性や補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性などの抗体エフェクター機能が必要とされる場合、ヒトＩｇＧ定常ドメイン、とくにＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのものが使用される。他の選択肢の実施形態では、抗体が治療を目的とする場合かつ抗体エフェクター機能が必要とされない場合、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプが使用される。抗体エフェクター機能を改変する１つ以上のアミノ酸修飾を含むＦｃ定常ドメイン、たとえば、米国特許出願公開第２００５／００３７０００号明細書および同第２００５／００６４５１４号明細書に開示されるもの。
【００８０】
いくつかの実施形態では、開示された分子は、抗体軽鎖とさらには抗体重鎖の少なくとも可変ドメインとの両方を含有する。他の実施形態では、そのような分子は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４の領域の１つ以上（とくに、ＣＨ１およびヒンジの領域、またはＣＨ１、ヒンジ、およびＣＨ２の領域、またはＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３の領域）をさらに含みうる。抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含めて任意のクラスの免疫グロブリンから、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含めて任意のアイソタイプから、選択可能である。いくつかの実施形態では、定常ドメインは、所望により、抗体が細胞傷害活性を呈する補体結合定常ドメインであり、かつクラスは、典型的にはＩｇＧ１である。他の実施形態では、そのような細胞傷害活性が望ましくない場合、定常ドメインは、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のクラスでありうる。抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプからの配列を含みうるとともに、所望のエフェクター機能を最適化するように特定の定常ドメインを選択することは、当技術分野の通常の技術の範囲内である。
【００８１】
ヒト化抗体のフレームワーク領域およびＣＤＲ領域は、親配列に正確に一致する必要はない。たとえば、少なくとも１つの残基の置換、挿入、または欠失により、ドナーＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークを突然変異誘発して、その部位のＣＤＲ残基またはフレームワーク残基がコンセンサスまたはドナー抗体のいずれにも対応しないようにすることが可能である。しかしながら、そのような突然変異は、好ましくは、広範囲ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より多くの場合９０％、最も好ましくは９５％超は、親のフレームワーク領域（ＦＲ）およびＣＤＲ配列のものに一致する。ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（欧州特許第２３９，４００号明細書、国際公開第９１／０９９６７号パンフレット、ならびに米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書、および同第５，５８５，０８９号明細書）、ベニヤリングまたはリサーフェイシング（欧州特許第５９２，１０６号明細書および同第５１９，５９６号明細書、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５  ８１４、およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９  ９７３）、チェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）、およびたとえば、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、同第５，７６６，８８６号明細書、同第５，５８５，０８９号明細書、国際公開第９３１７１０５／〜号パンフレット、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９：８９５−９０４、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ  １５０：４０９−１０、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−７３、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３、およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６に開示される技術を含めて、当技術分野で公知のさまざまな技術を用いて産生可能であるが、これらに限定されるものではない。多くの場合、フレームワーク領域のフレームワーク残基は、抗原結合を改変、好ましくは改良すべく、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換されるであろう。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法により、たとえば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定すべくＣＤＲ残基およびフレームワーク残基の相互作用をモデリングしたり、特定の位置で異常なフレームワーク残基を同定すべく配列比較を行ったりすることにより、同定される。（たとえば、Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許出願公開第２００４／００４９０１４号明細書および同第２００３／０２２９２０８号明細書、米国特許第６，３５０，８６１号明細書、同第６，１８０，３７０号明細書、同第５，６９３，７６２号明細書、同第５，６９３，７６１号明細書、同第５，５８５，０８９号明細書、および同第５，５３０，１０１号明細書、ならびにＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３を参照されたい）。
【００８２】
Ｂ７−Ｈ４結合分子は、ポリペプチドの生成に有用な当技術分野で公知の任意の方法により、たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成、組換えＤＮＡ産生などにより、生成可能である。好ましくは、ヒト化抗体は、組換えＤＮＡ技術により生成される。抗体は、組換え免疫グロブリン発現技術を用いて生成可能である。ヒト化抗体を含めて、免疫グロブリン分子の組換え産生は、米国特許第４，８１６，３９７号明細書（Ｂｏｓｓら）、米国特許第６，３３１，４１５号明細書および同第４，８１６，５６７号明細書（両方ともＣａｂｉｌｌｙら）、英国特許第２，１８８，６３８号明細書（Ｗｉｎｔｅｒら）および同第２，２０９，７５７号明細書に記載されている。ヒト化免疫グロブリンを含めて、免疫グロブリンの組換え発現の技術はまた、Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１８５  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９１）およびＢｏｒｒｅｂａｃｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ（１９９２）に見いだされうる。組換え抗体の生成、設計、および発現に関する追加情報は、Ｍａｙｆｏｒｔｈ，Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ（１９９３）に見いだされうる。
【００８３】
組換えキメラ抗体を生成する例示的プロセスは、次のこと、すなわち、ａ）従来の分子生物学的方法を用いて、抗Ｂ７−Ｈ４抗体のＣＤＲ領域および可変領域がヒト免疫グロブリンに由来するＦｃ領域に融合された抗体重鎖をコードおよび発現する発現ベクターを構築することにより、キメラ抗体重鎖を発現するためのベクターを生成することと、ｂ）従来の分子生物学的方法を用いて、ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４モノクローナル抗体の抗体軽鎖をコードおよび発現する発現ベクターを構築することにより、キメラ抗体軽鎖を発現するためのベクターを生成することと、ｃ）従来の分子生物学的方法を用いて、発現ベクターを宿主細胞に移入することにより、キメラ抗体を発現するためのトランスフェクト宿主細胞を生成することと、ｄ）従来の細胞培養技術を用いて、キメラ抗体を生成するようにトランスフェクト細胞を培養することと、を含みうる。
【００８４】
組換えヒト化抗体を生成する例示的プロセスは、次のこと、すなわち、ａ）従来の分子生物学的方法を用いて、ＣＤＲと、ドナー抗体結合特異性を維持するのに必要とされる可変領域フレームワークの最小部分と、が、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体に由来し、かつ抗体の残りの部分が、ヒト免疫グロブリンに由来する、抗ヒトＢ７−Ｈ４重鎖をコードおよび発現する発現ベクターを構築することにより、ヒト化抗体重鎖を発現するためのベクターを生成することと、ｂ）従来の分子生物学的方法を用いて、ＣＤＲと、ドナー抗体結合特異性を維持するのに必要とされる可変領域フレームワークの最小部分と、が、ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４モノクローナル抗体６Ｈ３などの非ヒト免疫グロブリンに由来し、かつ抗体の残りの部分が、ヒト免疫グロブリンに由来する、抗体軽鎖をコードおよび発現する発現ベクターを構築することにより、ヒト化抗体軽鎖を発現するためのベクターを生成することと、ｃ）従来の分子生物学的方法を用いて、発現ベクターを宿主細胞に移入することにより、ヒト化抗体を発現するためのトランスフェクト宿主細胞を生成することと、ｄ）従来の細胞培養技術を用いて、ヒト化抗体を生成するようにトランスフェクト細胞を培養することと、を含みうる。
【００８５】
いずれの例示的方法に関しても、重鎖および軽鎖のコード配列が好ましくは同一である点を除いて異なる選択可能マーカーを含有しうるそのような発現ベクターを用いて、宿主細胞を共トランスフェクトすることが可能である。この手順は、重鎖および軽鎖のポリペプチドの等発現を提供する。他の選択肢として、重鎖および軽鎖のポリペプチドの両方をコードする単一ベクターを使用することが可能である。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡまたはその両方を含みうる。組換え抗体を発現するために用いられる宿主細胞は、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）などの細菌細胞またはより好ましくは真核細胞（たとえば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはＨＥＫ−２９３細胞）のいずれかでありうる。発現ベクターの選択は、宿主細胞の選択に依存し、選択された宿主細胞内で所望の発現および調節特性を有するように選択可能である。使用可能な他の細胞系としては、ＣＨＯ−Ｋ１、ＮＳＯ、およびＰＥＲ．Ｃ６（Ｃｒｕｃｅｌｌ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８６】
開示された抗体はいずれも、当業者に周知の技術を用いて抗イディオタイプ抗体を生成すべく使用可能である（たとえば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ，Ｎ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，”ＦＡＳＥＢ  Ｊ．７：４３７−４４４、およびＮｉｓｉｎｏｆｆ，Ａ．（１９９１）“Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。
【００８７】
誘導体抗体または抗体フラグメントは、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含めて、当業者に公知の技術を用いて、化学修飾により修飾可能であるが、これらに限定されるものではない。一実施形態では、抗体誘導体は、親抗体と類似したまたは同一の機能を有するであろう。他の実施形態では、抗体誘導体は、親抗体と比較して改変された活性を呈するであろう。たとえば、誘導体抗体（またはそのフラグメント）は、親抗体よりも密にそのエピトープに結合しうるか、またはタンパク質分解に対してより耐性でありうる。
【００８８】
誘導体化抗体中の置換、付加、または欠失は、抗体のＦｃ領域に存在可能であり、それにより、１つ以上のＦｃγＲへの抗体の結合親和性を改変するように機能可能である。抗体を修飾して１つ以上のＦｃγＲへの結合を改変する方法は、当技術分野で公知であり、たとえば、国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット、同第０４／０２９０９２号パンフレット、同第０４／０２８５６４号パンフレット、同第９９／５８５７２号パンフレット、同第９９／５１６４２号パンフレット、同第９８／２３２８９号パンフレット、同第８９／０７１４２号パンフレット、同第８８／０７０８９号パンフレット、ならびに米国特許第５，８４３，５９７号明細書および同第５，６４２，８２１号明細書を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域が欠失されたものであるか（たとえば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）２など）、あるいは分子が低減されたＦｃレセプター（ＦｃＲ）結合活性を示すようにもしくはまったく示さないように、または増強された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性もしくは補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を呈するように、修飾されたものである。いくつかの実施形態では、抗体は、活性化ＦｃγＲ、たとえば、ＦｃγＲＩＩＩＡへの改変された親和性を有する。好ましくは、そのような修飾はまた、改変されたＦｃ媒介エフェクター機能を有する。Ｆｃ媒介エフェクター機能に影響を及ぼす修飾は、当技術分野で周知である（米国特許第６，１９４，５５１号明細書および国際公開第００／４２０７２号パンフレットを参照されたい）。特定の一実施形態では、Ｆｃ領域の修飾は、改変された抗体媒介エフェクター機能、他のＦｃレセプター（たとえば、Ｆｃ活性化レセプター）への改変された結合、改変された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、改変されたＣ１ｑ結合活性、改変された補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）、食細胞活性、またはそれらの任意の組合せを有する抗体をもたらす。
【００８９】
誘導体化抗体は、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて、親抗体の半減期（たとえば血清中半減期）を改変すべく使用可能である。好ましくは、そのような改変は、１５日間超、好ましくは２０日間超、２５日間超、３０日間超、３５日間超、４０日間超、４５日間超、２ヶ月間超、３ヶ月間超、４ヶ月間超、または５ヶ月間超の半減期をもたらすであろう。哺乳動物、好ましくはヒトにおけるヒト化抗体またはそのフラグメントの半減期の増加は、哺乳動物における前記抗体または抗体フラグメントのより高い血清中力価をもたらすので、前記抗体または抗体フラグメントの投与の頻度を低減し、かつ／または投与される前記抗体または抗体フラグメントの濃度を低減する。ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加した抗体またはそのフラグメントは、当業者に公知の技術により生成可能である。たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加した抗体またはそのフラグメントは、ＦｃドメインとＦｃＲｎレセプターとの間の相互作用に関与するものとして同定されたアミノ酸残基を修飾（たとえば、置換、欠失、または付加）することにより生成可能である。ヒト化抗体は、生物学的半減期が増加するように工学操作可能である（たとえば、米国特許第６，２７７，３７５号明細書を参照されたい）。たとえば、ヒト化抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期または血清中半減期が増加するようにＦｃヒンジドメインで工学操作可能である。
【００９０】
前記抗体または抗体フラグメントを高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマー分子に装着することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加した抗体またはそのフラグメントを生成することが可能である。ＰＥＧは、多官能性リンカーを用いてまたは用いずに、前記抗体または抗体フラグメントのＮ末端またはＣ末端へのＰＥＧの部位特異的コンジュゲーションを介するか、リシン残基上に存在するε−アミノ基を介するかのいずれかにより、前記抗体または抗体フラグメントに装着可能である。生物学的活性の最小限の損失をもたらす線状または分岐状のポリマー誘導体化が使用されるであろう。コンジュゲーションの程度は、抗体へのＰＥＧ分子の適正なコンジュゲーションを確保すべく、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析により綿密にモニターされるであろう。未反応ＰＥＧは、たとえば、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーにより、抗体−ＰＥＧコンジュゲートから分離可能である。
【００９１】
免疫原性反応を実質的に伴うことなく哺乳動物循環系に注入可能な組成物を提供するために、Ｄａｖｉｓら（米国特許第４，１７９，３３７号明細書を参照されたい）により記載された方法およびカップリング剤により、抗体を修飾することも可能である。
【００９２】
ヒト化抗体のフレームワーク残基を修飾することが可能である。フレームワーク領域の残基は、抗原結合を改変、好ましくは改良すべく、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換可能である。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法により、たとえば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定すべくＣＤＲ残基およびフレームワーク残基の相互作用をモデリングしたり、特定の位置で異常なフレームワーク残基を同定すべく配列比較を行ったりすることにより、同定される。（たとえば、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７を参照されたい）。
【００９３】
開示されたＢ７−Ｈ４結合分子は、異種分子（すなわち、関連しない分子）に組換えにより融合可能であるか、または化学的にコンジュゲート可能である（共有結合または非共有結合によるコンジュゲーションの両方を含む）。融合は、必ずしも直接である必要はなく、リンカー配列を介して行いうる。
【００９４】
一実施形態では、そのような異種分子は、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００アミノ酸を有するポリペプチドである。そのような異種分子は、代替的に、酵素、ホルモン、細胞表面レセプター、薬剤部分、例えば、マクロファージ特異的標的化試薬（たとえば、細胞内カルボキシルエステラーゼｈＣＥ１（Ｎｅｅｄｈａｍ，Ｌ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）“Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｔｏ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  Ａｎｄ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｅｓｔｅｒａｓｅ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｏｔｉｆ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．ＤＯＩ：１０．１１２４／ｊｐｅｔ．１１１．１８３６４０）、キチンおよびキトサン（Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ，Ｒ．Ａ．（２０１０）“Ｃｈｉｔｉｎｓ  Ａｎｄ  Ｃｈｉｔｏｓａｎｓ  Ａｓ  Ｉｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔｓ  Ａｎｄ  Ｎｏｎ−Ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ，”Ｍａｒ  Ｄｒｕｇｓ  ８（２）：２９２−３１２）、ガラクトシル化低密度リポタンパク質（Ｗｕ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（００９）“Ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｅｄ  ＬＤＬ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｔｏ  Ｄｅｌｉｖｅｒ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｔｏ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｈａｎｃｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｐｈａｒｍ．６（５）：１５０６−１５１７）、Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（ｆＭＬＦ）マクロファージ特異的化学誘引剤（Ｗａｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  Ｓｉｚｅ  Ａｎｄ  Ｃｏｐｙ  Ｎｕｍｂｅｒ  Ｆｏｒ  ＰＥＧ−Ｆｍｌｆ  （Ｎ−Ｆｏｒｍｙｌ−Ｍｅｔｈｉｏｎｙｌ−Ｌｅｕｃｙｌ−Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ  Ｕｐｔａｋｅ  Ｂｙ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１９（１）：２８−３８）、マレイル化またはマンノシル化タンパク質、たとえば、マレイル化アルブミン（Ａｎａｔｅｌｌｉ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  Ｂｙ  Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，”Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．  ３（６）：６５４−６６４、Ｂａｎｓａｌ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）“ＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  Ｉ−Ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｌｅｙｌａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２（８）：４４３０−４４３７）、また、Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｏ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８４：１８３−２０９も参照されたい）、毒素（たとえば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素（すなわち、ＰＥ−４０）、ジフテリア毒素、リシン、ゲロニン、またはアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質）、タンパク質（たとえば、腫瘍壊死因子、インターフェロン（たとえば、α−インターフェロン、β−インターフェロン）神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、またはアポトーシス剤（たとえば、腫瘍壊死因子−α、腫瘍壊死因子−β））、生物学的反応修飾剤（たとえば、リンホカイン（たとえば、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」））、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、またはマクロファージコロニー刺激因子（「Ｍ−ＣＳＦ」）、または増殖因子（たとえば、成長ホルモン（「ＧＨ」））など）、サイトトキシン（たとえば、細胞静止剤または殺細胞剤、たとえば、パクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１つのデヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらのアナログまたはホモログ）、抗代謝剤（たとえば、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（たとえば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン、ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（たとえば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（たとえば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、または抗有糸分裂剤（たとえば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）でありうる。
【００９５】
他の実施形態では、米国特許第４，６７６，９８０号明細書にＳｅｇａｌにより記載されるように、分子を第２の抗体にコンジュゲートして、抗体ヘテロコンジュゲートを形成する。そのようなヘテロコンジュゲート抗体は、ハプテン（たとえば、フルオレセインなど）に、または細胞マーカー（たとえば、４−１−ＢＢ、Ｂ７−Ｈ１、ＰＤ−１、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＴＬＡ４、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ−３、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＴＬＲ２、ＬＩＧＨＴなど）に、またはサイトカイン（たとえば、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＴＧＦ−β、ＩＦＮｇ、Ｆｌｔ３、ＢＬｙｓ）もしくはケモカイン（たとえば、ＣＣＬ２１）などに追加的に結合可能である。
【００９６】
融合タンパク質のＦｃ部分は、アイソタイプもしくはサブクラスが異なることが可能であり、キメラもしくはハイブリッドであることが可能であり、かつ／またはたとえば、エフェクター機能の改良、半減期、組織到達可能性の制御、安定性などの生物物理学的特性の拡張、および産生効率の向上（および低コスト）のために修飾可能である。開示された融合タンパク質の構築に有用な多くの修飾、およびそれらの作製方法は、当技術分野で公知であり、たとえば、Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  ＶＣＡＭ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ＩｇＧ２／Ｇ４  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｂｌｏｃｋ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（６）：４４１−４５２、Ｓｗａｎｎ，Ｐ．Ｇ．（２００８）“Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４９３−４９９（２００８）、およびＰｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．（２００８）“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４６０−４７０を参照されたい。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、天然のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ハイブリッド、たとえば、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４のＦｃ定常領域からなるキメラである。Ｆｃ領域への修飾は、Ｆｃγレセプターおよび補体への結合を防止するように修飾されたＩｇＧ４、１つ以上のＦｃγレセプターへの結合を改良するように修飾されたＩｇＧ１、エフェクター機能を最小限に抑えるように修飾されたＩｇＧ１（アミノ酸変化）、改変された／改変されていないグリカンを有するＩｇＧ１（典型的には、発現宿主の変化による）、およびＦｃＲｎへのｐＨ依存的結合が改変されたＩｇＧ１を含むが、これらに限定されるものではない。Ｆｃ領域は、全ヒンジ領域または全ヒンジ領域よりも小さい領域を含みうる。
【００９７】
非ホジキンリンパ腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症に対してリツキシマブ（ＣＤ２０に対するキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体）で治療された患者の治療転帰は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対して個別の内因性親和性を有するＦｃγレセプターの対立遺伝子変異体の個体発現と相関した。特定的には、低親和性活性化ＦｃレセプターＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）の高親和性対立遺伝子を有する患者は、高い反応率を示し、非ホジキンリンパ腫の場合、無進行生存が改良された。したがって、開示された抗体およびフラグメントのＦｃドメインは、低親和性阻害ＦｃレセプターＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を低減しかつ低親和性活性化ＦｃレセプターＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）への結合を野生型レベルに維持するかまたは増強する１つ以上のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含有しうる。
【００９８】
他の実施形態は、半減期を増加させる、ＦｃγＲへの結合が低減されたＩｇＧ２−４ハイブリッドおよびＩｇＧ４突然変異体を含む。代表的なＩｇＧ２−４ハイブリッドおよびＩｇＧ４突然変異体は、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）“Ａ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ａｂｏｌｉｓｈｅｓ  Ｔｈｅ  Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  Ｏｆ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ（Ｉｇｇ４）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５−１０８、Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  ＶＣＡＭ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ＩｇＧ２／Ｇ４  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｂｌｏｃｋ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（６）：４４１−４５２、および米国特許第６，９８２，３２３号明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ドメインが修飾され、たとえば、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）には、セリン２４１がプロリンに置き換えられたＩｇＧ１およびＩｇＧ２の変異体が記載されている。
【００９９】
好ましい実施形態では、そのような分子のＦｃドメインは、ＣＤ１６Ａへの結合を増強するアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含有する。ＣＤ１６Ａへの結合を増加させ、かつＣＤ３２Ｂへの結合を低減する、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインの多数の置換が、当技術分野で公知であり、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）“Ｆｃ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｏ  Ｋｉｌｌ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｖｉａ  Ｌｏｗ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｆｃｇａｍｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７（１８）：８８８２−８８９０に記載されている。ＣＤ３２Ｂへの結合が低減され、かつ／またはＣＤ１６Ａへの結合が増加された、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインの例示的変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、またはＰ２９６Ｌの置換を含有する。これらのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン内に任意の組合せで存在可能である。一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、およびＹ３００Ｌの置換を含有する。他の実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、およびＰ２９６Ｌの置換を含有する。他の実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン変異体は、Ｎ２９７Ｑ置換を含有する。なぜなら、この突然変異は、ＦｃＲ結合を消失させるからである。
【０１００】
抗体に治療用部分をコンジュゲートするための技術は、周知であり、たとえば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．２４３−５６，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ  ＣＯＮＴＲＯＬＬＥＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８７，ｐｐ．６２３−５３，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ’８４：  ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＡＮＤ  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．４７５−５０６）、“Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＦＯＲ  ＣＡＮＣＥＲ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．３０３−１６，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）“Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照されたい。
【０１０１】
開示された分子はいずれも、精製を容易にするためにペプチドなどのマーカー配列に融合可能である。好ましい実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサヒスチジンペプチド、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマグルチニン「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９８４）“Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  Ｉｎ  Ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ，”Ｃｅｌｌ，３７：７６７−７７８）、および「フラグ」タグ（Ｋｎａｐｐｉｋ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）“Ａｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｔａｇ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎ  Ｔｈｅ  ＦＬＡＧ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，”Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７（４）：７５４−７６１）である。
【０１０２】
開示されたＢ７−Ｈ４結合分子は、診断剤もしくは治療剤または血清中半減期を増加させることが望まれる他の分子にコンジュゲート可能である。たとえば、臨床試験手順の一部として、疾患、障害、または感染の発生または進行をモニターすることにより、たとえば、所与の治療レジメンの有効性を決定するために、または特定の療法に反応しやすい患者（たとえば、高レベルの浸潤ＴＡＭを有する者、特定的には、高レベルのＢ７−Ｈ４を発現する者）を選択するために、抗体を診断的に（ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで）使用することが可能である。
【０１０３】
特定的には、ヒトにおけるほとんどの癌は、腫瘍の生存、増殖、および進行に必要とされる一群の支持構造（間質）が絡み合った癌細胞で構成される固形腫瘍として増殖する。腫瘍間質中の主要成分は、マクロファージを含めて、線維芽細胞、血管新生細胞、および免疫細胞である。そのような腫瘍関連マクロファージは、腫瘍間質の最も重要な成分の１つであるだけでなく、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）特異的Ｔ細胞免疫の開始および維持にきわめて重要な抗原提示細胞（ＡＰＣ）をも含む。
【０１０４】
腫瘍環境マクロファージは、腫瘍内に存在しかつ固形腫瘍内のＡＰＣの主要なサブ集団である樹状細胞（ＤＣ）などの他のＡＰＣよりも数が顕著に多い（Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．２０３（４）：８７１−８８１）。Ｂ７−Ｈ４＋である腫瘍環境マクロファージは、Ｔ細胞活性化を有意に抑制する。Ｂ７−Ｈ４−マクロファージは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−１０およびＩＬ−６によりＢ７−Ｈ４＋マクロファージに変換されうる（Ｋｒｙｃｚｅｋ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｅｄｇｅ：Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７−Ｈ４  Ｏｎ  ＡＰＣｓ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  ＩＬ−１０：Ｎｏｖｅｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍｏｄｅ  Ｆｏｒ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７（１）：４０−４４）。卵巣腫瘍環境には高レベルのＩＬ−１０およびＩＬ−６が見いだされるので、Ｂ７−Ｈ４発現を誘導するそのようなサイトカインの能力は、侵攻性腫瘍に見られるＴ細胞活性化の抑制の増加に関連すると考えられる。重要なこととして、そのような抑制活性は、Ｂ７−Ｈ４発現をブロックするように作用する２つの樹状細胞分化サイトカインであるＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−４により低減可能である。そのような抑制活性はまた、開示された組成物でＢ７−Ｈ４活性をブロックすることにより低減可能である。
【０１０５】
表現型および腫瘍免疫で樹状細胞が果たす役割は、研究されてきたが、そのような研究では、癌患者の腫瘍環境内でＢ７−Ｈ４＋およびＢ７−Ｈ４−のマクロファージが果たす役割は、解明されてこなかった。開示されたＢ７−Ｈ４結合分子は、Ｂ７−Ｈ４＋およびＢ７−Ｈ４−のマクロファージが果たす役割を解明するのに使用されるとともに、患者において腫瘍の臨床予後を評価するための手段として使用される（すなわち、全マクロファージに対するＢ７−Ｈ４＋マクロファージの割合は、腫瘍侵攻性および癌重症度と相関する）。そのような評価は、腫瘍Ｂ７−Ｈ１発現および陽性腫瘍Ｂ７−Ｈ４発現が、独立して、癌による死亡に関連付けられるので、全マクロファージに対するＢ７−Ｈ１＋マクロファージの割合の決定と併用すると、とくに有用である（Ｋｒａｍｂｅｃｋ，Ａ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“Ｂ７−Ｈ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）１０３（２）：１０３９１−１０３９６）。
【０１０６】
検出は、抗体やその抗原結合フラグメントなどの分子を検出可能な物質に結合させることにより、容易に行いうる。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性材料、陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンを含むが挙げられる。検出可能な物質は、当技術分野で公知の技術を用いて、抗体に直接的にまたは介在物（たとえば、当技術分野で公知のリンカーなど）を介して間接的に結合またはコンジュゲートすることが可能である。たとえば、診断剤として使用するために抗体にコンジュゲートすることが可能な金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号明細書を参照されたい。そのような診断および検出は、検出可能な物質に抗体を結合することにより達成可能であり、検出可能な物質としては、種々の酵素、限定されるものではないが、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼをはじめとする酵素、補欠分子族複合体、たとえば、限定されるものではないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン、蛍光材料、たとえば、限定されるものではないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリン、発光材料、たとえば、限定されるものではないが、ルミノール、生物発光材料、たとえば、限定されるものではないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリン、放射性材料、たとえば、限定されるものではないが、ビスマス（２１３Ｂｉ）、炭素（１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、亜鉛（６５Ｚｎ）、種々の陽電子放出断層撮影を用いる陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１０７】
開示された分子は、固体担体に装着可能であり、これは標的抗原、または抗体もしくは抗原結合フラグメントへの結合を介して担体に固定された標的抗原に結合可能な他の分子、の免疫アッセイまたは精製にとくに有用である。そのような固体担体としては、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリビニルクロリド、またはポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１０８】
任意のそのような抗体、融合タンパク質、またはフラグメントをコードする核酸分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、さらにはそのような核酸分子の移送または複製が可能なベクター分子（たとえばプラスミド）をも開示する。核酸は、一本鎖のもの、二本鎖のもの、一本鎖部分と二本鎖部分の両方を含有するものでありうる。
【０１０９】
Ａ．ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３およびそのＣＤＲ
開示されたネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３は、ヒト細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４の活性をモジュレートする能力を有する（とくに、そのようなＢ７−Ｈ４が内因性濃度で発現された場合）。「内因性濃度」という用語は、分子が細胞（この細胞は、正常細胞、癌細胞、または感染細胞である）により天然で（すなわち、発現ベクターまたは組換えプロモーターの不在下で）発現されるレベルを意味する。
【０１１０】
一実施形態では、そのようなモジュレーションは、Ｂ７−Ｈ４（好ましくは、内因的に発現および配置されたもの）へのそのような抗体の結合により引き起こされるであろう。代替実施形態では、そのようなモジュレーションは、内因的に発現および配置されたＢ７−Ｈ４の結合を増強さもなければ促進することを含むであろう。
【０１１１】
ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３をコードするＤＮＡの配列を決定した。軽鎖および重鎖の可変ドメインのアミノ酸配列およびコードポリヌクレオチド配列は、以下に示されるとおりある。ＣＤＲ配列は、ボールド体かつ下線付きで示されている。
抗ヒトＢ７−Ｈ４クローン６Ｈ３の軽鎖可変領域：
【化３】
2016509582.tif 000004
軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド：
【化４】
2016509582.tif 000005
重鎖可変領域：
【化５】
2016509582.tif 000006
軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド：
【化６】
2016509582.tif 000007
【０１１２】
ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋの基準を用いて、軽鎖ＣＤＲ１は、クラス４カノニカル構造を有すると結論付けられ、軽鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１は、クラス１カノニカル構造を有すると結論付けられ、重鎖ＣＤＲ２は、クラス２カノニカル構造を有すると結論付けられた（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）。Ｃｏｌｌｉｅｒ  ｄｅ  Ｐｅｒｌｅｓは、可変ドメインの２Ｄ表現であり、可変ドメイン内のβストランドおよびループのアミノ酸位置に関する情報を提供する（Ｒｕｉｚ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）“ＩＭＧＴ  Ｇｅｎｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｏｌｌｉｅｒｓ  ｄｅ  Ｐｅｒｌｅｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｋｎｏｗｎ  ３Ｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５３（１０−１１）：８５７−８８３）。ネズミ６Ｈ３抗体の軽鎖および重鎖の可変領域のＣｏｌｌｉｅｒ  ｄｅ  Ｐｅｒｌｅｓは、それぞれ、図１Ａおよび図１Ｂに示されている。鎖の３つのＣＤＲループは、図の頂部に示されている。可変軽鎖領域または可変重鎖領域には、遊離のＣｙｓ残基もＮ結合グリコシル化部位も存在しない。
【０１１３】
Ｂ．抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体
ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の開示されたヒト化変異体およびその抗原結合誘導体は、典型的には、免疫特異的または物理特異的Ｂ７−Ｈ４結合分子を含み、ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３と実質的に同一または同一の結合特性を有しうる。たとえば、それらは、ヒト細胞の表面上に配置されたヒトＢ７−Ｈ４の活性をモジュレートする能力を有する（とくに、そのようなＢ７−Ｈ４が内因性濃度で発現された場合）。
【０１１４】
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の多数の好ましい軽鎖および重鎖のヒト化誘導体を調製した。ＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１アクセプターフレームワークに由来する、好ましいヒト化変異体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下に示される（ＣＤＲは下線付きで示される）。
１．ＶＬ１ＡＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１（ヒト化１）：
【化７】
2016509582.tif 000008
２．ＶＬ１ＢＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１（ヒト化２）：
【化８】
2016509582.tif 000009
３．ＶＬ１ＣＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１（ヒト化３）：
【化９】
2016509582.tif 000010
【０１１５】
ＣＡＡ８５５９０アクセプターフレームワークに由来する、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の好ましいヒト化変異体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下に示される（ＣＤＲは下線付きで示される）。
１．ＶＬ２ＡＣＡＡ８５５９０（ヒト化１）：
【化１０】
2016509582.tif 000011
２．ＶＬ２ＢＣＡＡ８５５９０（ヒト化２）：
【化１１】
2016509582.tif 000012
３．ＶＬ２ＣＣＡＡ８５５９０（ヒト化３）：
【化１２】
2016509582.tif 000013
【０１１６】
ＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１アクセプターフレームワークに由来する、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の好ましいヒト化変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下に示される（ＣＤＲは下線付きで示される）。
１．ＶＨ１ＡＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１（ヒト化１）：
【化１３】
2016509582.tif 000014
２．ＶＨ１ＢＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１（ヒト化２）：
【化１４】
2016509582.tif 000015
３．ＶＨ１ＣＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１（ヒト化３）：
【化１５】
2016509582.tif 000016
【０１１７】
ＡＢＦ８３２５９アクセプターフレームワークに由来する、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の好ましいヒト化変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下に示される（ＣＤＲは下線付きで示される）。
１．ＶＨ２ＡＡＢＦ８３２５９（ヒト化１）：
【化１６】
2016509582.tif 000017
２．ＶＨ２ＢＡＢＦ８３２５９（ヒト化２）：
【化１７】
2016509582.tif 000018
３．ＶＨ２ＣＡＢＦ８３２５９（ヒト化３）：
【化１８】
2016509582.tif 000019
【０１１８】
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の開示されたヒト化変異体の３６通りの組合せのいずれかを含む抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。特定的には、そのような抗体は、表１に示されるヒト化変異体の組合せを含む。
【０１１９】
【表１】
2016509582.tif 000020
【０１２０】
【表２】
2016509582.tif 000021
【０１２１】
【表３】
2016509582.tif 000022
【０１２２】
抗体またはそのフラグメントは、以上のクローンのいずれかにより産生される抗体の可変重鎖および／または可変軽鎖のアミノ酸配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性でありかつヒトＢ７−Ｈ４への免疫特異的結合を呈する、可変重鎖および／または可変軽鎖のアミノ酸配列を含みうる。抗体またはそのフラグメントは、以上の列挙したクローンのＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性でありかつＢ７−Ｈ４への免疫特異的結合を呈する、ＣＤＲを含みうる。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントの決定は、ＢＬＡＳＴタンパク質比較により決定可能である。
【０１２３】
分子は、１、２、または３個の軽鎖ＣＤＲおよび１、２、または３個の重鎖ＣＤＲ（最も好ましくは、３個の軽鎖ＣＤＲおよび３個の重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子（たとえば、抗体、ダイアボディー、融合タンパク質など）でありうる。ただし、軽鎖ＣＤＲは、
（１）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１またはそのヒト化変異体、
（２）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ２またはそのヒト化変異体、
（３）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ３またはそのヒト化変異体、
（４）マウス抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１および軽鎖ＣＤＲ２、またはそのヒト化変異体、
（５）マウス抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１および軽鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
（６）マウス抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、あるいは
（７）マウス抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
を含む。
【０１２４】
分子は、１、２、または３個の軽鎖ＣＤＲおよび１、２、または３個の重鎖ＣＤＲ（最も好ましくは、３個の軽鎖ＣＤＲおよび３個の重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子でありうる。ただし、重鎖ＣＤＲは、
（１）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１またはそのヒト化変異体、
（２）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ２またはそのヒト化変異体、
（３）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ３またはそのヒト化変異体、
（４）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１および重鎖ＣＤＲ２、またはそのヒト化変異体、
（５）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１および重鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
（６）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、あるいは
（７）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
を含む。
【０１２５】
分子は、１、２、または３個の軽鎖ＣＤＲおよび１、２、または３個の重鎖ＣＤＲ（最も好ましくは、３個の軽鎖ＣＤＲおよび３個の重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子でありうる。ただし、軽鎖ＣＤＲは、
（１）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１またはそのヒト化変異体、
（２）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ２またはそのヒト化変異体、
（３）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ３またはそのヒト化変異体、
（４）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１および軽鎖ＣＤＲ２、またはそのヒト化変異体、
（５）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１および軽鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
（６）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、あるいは
（７）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
を含み、かつ、重鎖ＣＤＲは、
（１）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１またはそのヒト化変異体、
（２）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ２またはそのヒト化変異体、
（３）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ３またはそのヒト化変異体、
（４）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１および重鎖ＣＤＲ２、またはそのヒト化変異体、
（５）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１および重鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
（６）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、あるいは
（７）ネズミ抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３、またはそのヒト化変異体、
を含む。
【０１２６】
たとえば、抗体は、ネズミ６ＨのＣＤＲを有しうるか、またはそのキメラ抗体、または抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のＣＤＲに対応するＣＤＲを有するヒト化変異体である。
【０１２７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の１、２、３、４、５個、より好ましくは６個すべての  ＣＤＲを含み、かつ抗体６Ｈ３と同一の、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する能力を呈するであろう。
【０１２８】
Ｃ．治療的および予防的な使用
典型的には、開示された抗体は、レシピエント被験体においてＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。本明細書で用いられる場合、「被験体」は、好ましくは、哺乳動物、たとえば、非霊長動物（たとえば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長動物（たとえば、サルおよびヒト）であり、最も好ましくは、ヒトである。好ましい実施形態では、抗体は、ヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、そのような分子は、レシピエントヒトにおいてまたはヒト組織において（ｉｎ  ｓｉｔｕもしくはｅｘ  ｖｉｖｏで）Ｂ７−Ｈ４発現腫瘍細胞またはＴＡＭを枯渇させることが可能であるか、またはそのような細胞の活性のモジュレートすることが可能である。Ｂ７−Ｈ４陽性腫瘍細胞もしくはＴＡＭの枯渇またはＢ７−Ｈ４レベルの有益な低減は、開示された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または他の腫瘍特異的もしくはＴＡＭ特異的マーカーを用いて腫瘍組織のＩＨＣにより、あるいはＰＣＲ、ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、または当業者に公知の異なる他の方法を用いてＢ７−Ｈ４ｍＲＮＡレベルの低減により、モニター可能である。抗Ｂ７−Ｈ４抗体を用いた治療が奏効する可能性のある患者は、腫瘍上またはＴＡＭ上のいずれかで標的Ｂ７−Ｈ４タンパク質を発現するであろう。また、これは、腫瘍サンプルのＩＨＣ、ＦＡＣ、ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、または当業者に公知の異なる他の方法により、評価可能である。
【０１３０】
本明細書で用いられる場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「治療的使用（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ）」という用語は、Ｂ７−Ｈ４とそのレセプターとの相互作用によりまたは細胞の表面上でのＢ７−Ｈ４の発現もしくは表面上に配置されたその存在により悪化した疾患または障害の１つ以上の症状の排除、低減、または改善を意味する。本明細書で用いられる場合、「治療上有効量」とは、そのような症状の臨床的に妥当な排除、低減、または改善を媒介するのに十分な治療剤の量を意味する。作用は、その大きさがレシピエント被験体の健康または予後に影響を及ぼすのに十分な場合、臨床的に妥当である。治療上有効量とは、疾患の発症を遅延または最小限に抑えるのに、たとえば、癌の拡大を遅延または最小限に抑えるのに十分な治療剤の量を意味しうる。治療上有効量とはまた、疾患の治療または管理において治療効果を提供する治療剤の量を意味しうる。さらに、治療剤に関して治療上有効量とは、疾患の治療または管理において治療効果を提供する、たとえば、疾患を治療または管理するのに十分な程度に治療用抗体の治療有効性を増強するのに十分である、治療剤単独の量または他の療法と組み合わせたときの量を意味する。
【０１３１】
本明細書で用いられる場合、「予防剤」という用語は、障害または疾患のなんらかの症状が検出される前に障害または疾患を予防するのに使用可能な作用剤を意味する。「予防上有効」量とは、そのような保護を媒介するのに十分な予防剤の量である。予防上有効量はまた、疾患の予防において予防効果を提供する予防剤の量を意味しうる。さらに、予防剤に関して予防上有効量とは、疾患の予防において予防効果を提供する、予防剤単独の量または他の作用剤と組み合わせたときの量を意味する。
【０１３２】
１．免疫系のアップモジュレーターの使用
好ましい実施形態では、開示されたＢ７−Ｈ４結合分子は、Ｂ７−Ｈ４に結合してＢ７−Ｈ４とそのレセプターとの間の結合を「実質的」に撹乱（すなわち、障害、防止、または減衰）する（たとえば、Ｂ７−Ｈ４およびそのレセプターの結合部位に近接する破壊的な１つ以上の部位に、またはコンフォメーションが結合により破壊されることにより、レセプターに結合する能力が損なわれる領域に、結合することによるなど）。以上で考察したように、Ｂ７−Ｈ４とそのレセプターとの間の相互作用は、Ｔ細胞の増殖を阻害し、多数のサイトカインの産生を含む炎症を低減する（Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２、Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３）。したがって、好ましい実施形態では、そのような分子を被験体に投与すると、レセプターに結合する通常のＢ７−Ｈ４がアンタゴナイズされて被験体の免疫反応がアップモジュレートされる。
【０１３３】
免疫系のアップモジュレーションは、癌および慢性感染症の治療にとくに望ましいので、本明細書に開示された組成物は、そのような障害の治療に使用可能である。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＩＶ感染すると過剰発現される（Ｃａｒｔｅｒ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｆ  ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２：４２５−４４３、Ｎｏｕｒｓａｄｅｇｈｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ：Ｔｈｅ  Ｃａｓｅ  Ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｉｎ  ＡＩＤＳ，”Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．６：７９４−８０４）。したがって、開示された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ治療のための治療剤として特定の用途を有する。本明細書で用いられる場合、「癌」という用語は、細胞の異常無制限増殖から生じる新生物または腫瘍を意味する。本明細書で用いられる場合、癌は、明示的に、白血病およびリンパ腫を含む。この用語は、遠位部位に転移する能力を有しかつ非癌細胞のものと異なる表現型形質（たとえば、軟寒天などの三次元基材中でのコロニーの形成または三次元基底膜もしくは細胞外マトリックス調製物中での管状網状構造またはクモの巣状マトリックスの形成）を呈する細胞が関与する疾患を意味する。非癌細胞は、軟寒天中でコロニーを形成せず、三次元基底膜または細胞外マトリックス調製物中で際立った球状構造を形成しない。
【０１３４】
Ｂ７−Ｈ４の発現は、エフェクター細胞レベルで抗腫瘍免疫とくにＴ細胞反応をダウンレギュレートする機構を呈すると考えられる。したがって、Ｂ７−Ｈ４媒介シグナル伝達、特定的には、とくに腫瘍マイクロ環境中で癌細胞または腫瘍関連マクロファージの表面上に発現されるＢ７−Ｈ４をブロックすることにより、抗腫瘍免疫反応を増加させ、かつ癌の症状の１つ以上を低減することが可能である。無細胞Ｂ７−Ｈ４発現の増加により特徴付けられる癌を含めて、癌を治療する方法は、典型的には、Ｂ７−Ｈ４媒介シグナル伝達、腫瘍関連マクロファージ依存性Ｂ７−Ｈ４媒介シグナル伝達、または腫瘍依存性Ｂ７−Ｈ４媒介シグナル伝達を低減するのに有効な量で、膜貫通Ｂ７−Ｈ４またはそのレセプターのアンタゴニストまたはそれらの組合せを、必要とされる被験体に投与することを含む。
【０１３５】
癌の治療に使用するための、Ｂ７−Ｈ４媒介シグナリングの好適なアンタゴニストは、本明細書に開示された抗体を含めて、以上で考察されている。癌を治療する方法は、膜貫通Ｂ７−Ｈ４に結合して膜貫通Ｂ７−Ｈ４媒介免疫抑制を防止、低減、ブロック、または阻害する抗体を被験体に投与することを含む。好ましい実施形態では、抗体は、Ｂ７−Ｈ４のＩｇＣドメインに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｂ７−Ｈ４内在化を引き起こすことにより、細胞表面上の膜貫通Ｂ７−Ｈ４の利用可能性を低減させ、膜貫通Ｂ７−Ｈ４媒介免疫抑制を減少させる。内在化されたＢ７−Ｈ４は、酸性リソソーム区画内に方向付けられ、そこで分解されるので、もはや免疫抑制シグナル伝達を効果的に媒介できなくなると考えられる。そのような方法はまた、Ｂ７−Ｈ４媒介免疫抑制により感染に対する生体の免疫反応を回避する細菌感染、ウイルス感染、および他の感染を治療するために使用可能である。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、抗体は、活性剤にコンジュゲートされる。活性剤は、たとえば、化学療法薬剤などの細胞傷害剤または放射性同位体でありうる。膜貫通Ｂ７−Ｈ４に結合すると、抗体およびその細胞傷害ペイロードは、標的細胞により内在化されうる。このようにして、抗体−薬剤コンジュゲートは、標的細胞の選択的破壊を行うことが可能である。好適な薬剤コンジュゲート、さらには抗体−薬剤コンジュゲートを作製する方法ならびに免疫障害および癌の治療に使用する方法は、当技術分野で公知である。たとえば、抗ＣＤ７０−薬剤コンジュゲートが記載されている米国特許出願公開第２０１２／０２８８５１２号明細書（その全体が参照により明示的に組み込まれる）を参照されたい。
【０１３７】
標的細胞は、Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞、たとえば、限定されるものではないが、トランスフォームされてない場合には典型的にはＢ７−Ｈ４を発現しないトランスフォーム細胞、または対照細胞と比較して増加した発現により特徴付けられる細胞を含む。好ましい標的細胞としては、癌細胞および腫瘍関連マクロファージが挙げられる。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍部位への組成物の局在化が増強され、かつＢ７−Ｈ４を発現する非標的細胞に対する毒性が低減されるように、腫瘍または腫瘍マイクロ環境に直接投与される。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ＩｇＣドメインに結合する抗体は、ＩｇＶドメインに結合する抗体と組み合わされて共投与される。
【０１３９】
Ｂ７−Ｈ４特異的活性剤は、単独で、または従来の癌療法、たとえば、化学療法、放射線療法、手術と組み合わせて、投与することが可能である。
【０１４０】
開示された方法および組成物により治療または予防することが可能な癌および関連障害としては、次のもの、すなわち、白血病、たとえば、限定されるものではないが、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、たとえば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病性の白血病および骨髄異形成症候群、慢性白血病、たとえば、限定されるものではないが、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、真性赤血球増多症、リンパ腫、たとえば、限定されるものではないが、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、たとえば、限定されるものではないが、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌性骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞白血病、孤立性形質細胞腫、および髄外性形質細胞腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、意義不明単クローン性γグロブリン血症、良性単クローン性γグロブリン血症、重鎖病、骨および結合組織の肉腫、たとえば、限定されるものではないが、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫瘍、骨線維肉腫、脊索腫、骨膜肉腫、軟部組織肉腫、血管肉腫、線維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、神経鞘腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、脳腫瘍、たとえば、限定されるものではないが、神経膠腫、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、乏突起膠腫、グリア腫瘍、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、松果体細胞腫、松果体芽腫、原発性脳リンパ腫、乳癌、たとえば、限定されるものではないが、腺癌、小葉（小細胞）癌、管内癌、髄様乳癌、粘液性乳癌、管状乳癌、乳頭癌、パジェット病、および炎症性乳癌、副腎癌、たとえば、限定されるものではないが、褐色細胞腫および副腎皮質癌、甲状腺癌、たとえば、限定されるものではないが、乳頭様甲状腺癌または濾胞性甲状腺癌、髄様甲状腺癌、および組織非形成性甲状腺癌、膵臓癌、たとえば、限定されるものではないが、インスリノーマ、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、ビポーマ、ソマトスタチン分泌腫瘍、およびカルチノイド腫瘍または島細胞腫瘍、下垂体癌、たとえば、限定されるものではないが、クッシング病、プロラクチン分泌腫瘍、先端巨大症、および尿崩症、眼癌、たとえば、限定されるものではないが、眼黒色腫、たとえば、虹彩黒色腫、脈絡膜黒色腫、および毛様体黒色腫、および網膜芽細胞腫、腟癌、たとえば、限定されるものではないが、扁平上皮細胞癌、腺癌、および黒色腫、外陰癌、たとえば、限定されるものではないが、扁平上皮細胞癌、黒色腫、腺癌、基底細胞癌、肉腫、およびパジェット病、頸癌、たとえば、限定されるものではないが、扁平上皮細胞癌、および腺癌、子宮癌、たとえば、限定されるものではないが、子宮内膜癌および子宮肉腫、卵巣癌、たとえば、限定されるものではないが、卵巣上皮癌、境界腫瘍、生殖細胞腫瘍、および間質腫瘍、食道癌、たとえば、限定されるものではないが、扁平上皮癌、腺癌、腺様嚢胞癌、粘液性類表皮癌、腺扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、形質細胞腫、疣状癌、および燕麦細胞（小細胞）癌腫、胃癌、たとえば、限定されるものではないが、腺癌、肉芽腫性軟性（ポリポイド）、潰瘍性、表在拡大型、瀰漫拡大型、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫、および癌��腫、結腸癌、直腸癌、肝臓癌、たとえば、限定されるものではないが、肝細胞癌および肝芽腫、胆嚢癌、たとえば、限定されるものではないが、腺癌、胆管癌、たとえば、限定されるものではないが、乳頭状、結節性、瀰漫性、肺癌、たとえば、限定されるものではないが、非小細胞肺癌、扁平上皮細胞癌（類表皮癌）、腺癌、大細胞癌、および小細胞肺癌、精巣癌、たとえば、限定されるものではないが、胚腫瘍、精上皮腫、未分化、伝統品（典型的）、精母細胞、非精巣上皮腫、胚性癌腫、奇形腫癌腫、絨毛癌（卵黄嚢腫瘍）、前立腺癌、たとえば、限定されるものではないが、腺癌、平滑筋肉腫、および横紋筋肉腫、腎臓癌、腔癌、たとえば、限定されるものではないが、扁平上皮細胞癌、基底癌、唾液腺癌、たとえば、限定されるものではないが、腺癌、粘液性類表皮癌、および腺様嚢胞癌、咽頭癌、たとえば、限定されるものではないが、扁平上皮細胞癌、および疣状癌、皮膚癌、たとえば、限定されるものではないが、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌および黒色腫、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、黒子悪性黒色腫、末端黒子型黒色腫、腎臓癌、たとえば、限定されるものではないが、腎細胞癌、腺癌、副腎腫、線維肉腫、移行細胞癌（腎盂および／または尿管）、ウィルムス腫瘍、膀胱癌、たとえば、限定されるものではないが、移行上皮癌、扁平上皮細胞癌、腺癌、癌肉腫が挙げられるが、これらに限定されるものではない。それに加えて、癌は、粘液肉腫、骨原性肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、滑膜腫、血管芽細胞腫、上皮癌、嚢胞腺癌、気管支原性癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、および乳頭状腺癌を含む。（そのような障害のレビューに関しては、Ｆｉｓｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ，Ｖｉｋｉｎｇ  Ｐｅｎｇｕｉｎ，Ｐｅｎｇｕｉｎ  Ｂｏｏｋｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，Ｉｎｃ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａを参照されたい）。
【０１４１】
したがって、開示された方法および組成物はまた、さまざまな癌（特定的には、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、甲状腺癌、および子宮癌）、または他の異常増殖性疾患、たとえば、限定されるものではないが、次のもの、すなわち、癌腫、たとえば、膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、頸癌、甲状腺癌、および皮膚癌、たとえば、扁平上皮細胞癌、リンパ系列の造血系腫瘍、たとえば、白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、骨髄系列の造血系腫瘍、たとえば、急性および慢性の骨髄性白血病および前骨髄球性白血病、間葉系由来の腫瘍、たとえば、線維肉腫および横紋筋肉腫、他の腫瘍、たとえば、黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、神経芽腫、および神経膠腫、中枢および末梢の神経系の腫瘍、たとえば、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、および神経鞘腫、間葉系由来の腫瘍、たとえば、線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫、および他の腫瘍、たとえば、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞癌、および奇形癌腫の治療または予防に有用である。アポトーシスの異常により引き起こされる癌もまた、本明細書に開示された方法および組成物により治療されるであろうと想定される。そのような癌は、濾胞性リンパ腫、ｐ５３突然変異癌、乳房、前立腺、および卵巣のホルモン依存性腫瘍、ならびに前癌病変、たとえば、家族性腺腫性ポリポーシスおよび骨髄異形成症候群を含みうるが、それらに限定されるものではない。特定の実施形態では、悪性腫瘍または異常増殖変化（たとえば、化生および異形成）、または過増殖障害は、卵巣、膀胱、乳房、結腸、肺、皮膚、膵臓、または子宮において、開示された方法および組成物により、治療または予防される。他の特定の実施形態では、肉腫、黒色腫、または白血病は、提供された方法および組成物により治療または予防される。
【０１４２】
癌細胞は、その発生時に一群の特徴的な機能能力を取得するが、機序はさまざまである。そのような能力は、アポトーシスの回避、増殖シグナルの自給自足、抗増殖シグナルへの非感受性、組織への浸潤／転移、無限展開能、および血管形成の持続を含む。「癌細胞」という用語は、前悪性および悪性の両方の癌細胞を包含するものとみなされる。いくつかの実施形態では、癌は、局在状態が維持されている良性腫瘍を意味する。他の実施形態では、癌は、近接生体構造に浸潤して破壊し離れた部位に拡大する悪性腫瘍を意味する。さらに他の実施形態では、癌は、特異的癌抗原（たとえば、全癌抗原（ＫＳ１／４）、卵巣癌抗原（ＣＡ１２５）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＨＥＲ２／ｎｅｕなど）に関連付けられる。
【０１４３】
以上で考察した腫瘍への用途と同様に、抗体および抗原結合フラグメントは、毒素もしくは自己抗原または病原体に対する免疫反応を刺激するために、単独で使用可能であるか、あるいは、アジュバントとしてワクチンまたは抗微生物剤と組み合わせて使用可能である（たとえば、ウイルス、たとえば、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ワクシニアウイルス、狂犬病ウイルス、細菌、たとえば、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌、淋菌、肺炎桿菌、プロテウス菌、セラチア菌、シュードモナス菌、レジオネラ菌、コリネバクテリウム菌、サルモネラ菌、ビブリオ菌、クロストリジウム菌、桿菌、パスツレラ菌、レプトスピラ菌、ボルデテラ菌、とくに、コレラ、破傷風、ボツリヌス中毒、炭疽、疫病、およびライム病に関連付けられるそのような病原体、または菌類もしくは寄生生物の病原体、たとえば、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）（アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガタス（ｊｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ属（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ムコル（ｍｕｃｏｒ）、アブシディア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリクス属（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）（シェンキイ（ｓｃｈｅｎｋｉｉ））、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）（デルマティティディス（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ））、パラコクシジオイデス属（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）（ブラジリエンシス（ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ））、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）（イミティス（ｉｍｍｉｔｉｓ））、およびヒストプラスマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）（カプスラタム（ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ））、エントアメーバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ属（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）の種、ジアルジア・ランブリア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）の種、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・マイクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセス（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルーズ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉ）など、スポロトリクス属（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、パラコクシジオイデス属（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）、ヒストプラスマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、エントアメーバ属（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ）、ヒストリティカ���（ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム属（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ）、ネグレリア属（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ）、アカントアメーバ属（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスチス属（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ）、プラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、バベシア属（Ｂａｂｅｓｉａ）、またはトリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）など）。したがって、抗体および抗原結合フラグメントは、感染性疾患の治療に使用可能である。
【０１４４】
上述したように、開示された抗体および抗原結合フラグメントのとくに好ましい使用は、免疫抑制活性をモジュレートすべく、腫瘍細胞またはＴＡＭに結合すること、好ましくは実質的にブロックすることである。さらに、そのような抗体は、腫瘍マイクロ環境内でＢ７−Ｈ４発現腫瘍細胞もしくはＴＡＭを枯渇させるべく、または末梢血中のＴＡＭの濃度を枯渇させるべく、使用可能である。一実施形態では、そのようなモジュレーションまたは枯渇は、通常のＢ７−Ｈ４機能を障害または撹乱すべく、部位に結合する抗Ｂ７−Ｈ４抗体を用いて達成される。そのような撹乱の結果として、ＴＡＭ活性が減少（モジュレート）し、かつ／または腫瘍内のマクロファージの実際の濃度または有効な（機能性）濃度が枯渇する。他の選択肢として、そのようなモジュレーションまたは枯渇は、腫瘍細胞またはＴＡＭへの結合が腫瘍細胞またはマクロファージの死滅をもたらすように、毒素にコンジュゲートされた抗Ｂ７−Ｈ４抗体を用いて達成される。好ましくは、いずれの実施形態でも、抗体のＦｃ領域の配列は、欠失されるか（たとえば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）２など）、または分子が低減されたＦｃレセプター（ＦｃＲ）結合活性を示すようにもしくはまったく示さないように、または増強された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性もしくは補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を呈するように、修飾される。Ｆｃ領域が低減されたＦｃレセプター結合活性を示すかまたはまったく示さない抗体は、好ましくは、腫瘍上またはＴＡＭ上のＢ７−Ｈ４が腫瘍マイクロ環境内でＴ細胞上の阻害レセプターと相互作用するのを防止するブロッカーとして機能するであろう。一方、ＡＤＣＣまたはＣＤＣの増強された誘導を呈するＦｃ領域を有する抗体の使用は、好ましくは、Ｂ７−Ｈ４を発現する腫瘍細胞またはＴＡＭの枯渇を引き起こすべく使用されるであろう。
【０１４５】
２．免疫系のダウンモジュレーターの使用
抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗イディオタイプペプチドもしくは抗体（Ｗａｌｌｍａｎｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）“Ａｎｔｉ−Ｉｄｓ  ｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ：Ｔｉｍｅｌｉｎｅｓｓ  ｏｆ  ａ  Ｃｌａｓｓｉｃ  Ｃｏｎｃｅｐｔ，”Ｗｏｒｌｄ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｏｒｇａｎｉｚ．Ｊ．３（６）：１９５−２０１、Ｎａｒｄｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）“Ａｎｔｉｉｄｉｏｔｙｐｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ａｎｔｉ−ＧｐＩＩＩａ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  Ｔｏ  Ｔｈｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ  Ｉｎ  ＨＩＶ−１−ＩＴＰ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ，”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１（１２）：２０９３−２１００）、またはＢ７−Ｈ４のミメティック（Ｚａｎｇ，Ｙ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｙ  ＴＣＲ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ａ  Ｃｏｍｍｏｎ  ＣＤＲ３  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｍｏｔｉｆ  Ｉｎ  Ｍｙｅｌｉｎ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５（９）：１０７３−１０８０、Ｌｏｉａｒｒｏ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ａｐｒ  ８）“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．２０１０：６７４３６３）を産生すべく利用可能である。そのような分子は、Ｂ７−Ｈ４のサロゲートとして機能し、Ｂ７−Ｈ４レセプター活性をアゴナイズまたは増強するので、被験体へのそれらの投与は、Ｂ７−Ｈ４結合を模倣または促進するにより、そのような被験体の免疫系をダウンモジュレートする。したがって、そのような分子は、炎症および自己免疫疾患の治療に使用可能である。
【０１４６】
免疫系のダウンモジュレーションは、炎症および自己免疫疾患、移植拒絶に対する反応、移植片対宿主疾患または宿主対移植片疾患の治療に望ましい。開示された抗体の投与により治療しうる自己免疫障害の例としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発性神経症、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、クレスト症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ神経症、若年性関節炎、扁平苔癬、紅斑性狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、１型または免疫媒介型糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、全身性紅斑性狼瘡、紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性結腸炎、ブドウ膜炎、疱疹状皮膚炎血管炎などの血管炎、白斑症、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１４７】
開示された方法に従って予防、治療、または管理しうる炎症性障害の例としては、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー性障害、敗血症性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、および慢性ウイルスまたは細菌感染から生じる慢性炎症が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１４８】
したがって、開示された抗体および抗原結合フラグメントは、炎症および自己免疫疾患、移植拒絶に対する反応、移植片対宿主疾患および宿主対移植片疾患の治療に使用可能である。
【０１４９】
Ｄ．投与方法
種々の送達システムが公知であり、開示された治療用または予防用組成物を投与するために使用可能である。たとえば、リポソーム内への取込み、マイクロ粒子、マイクロカプセル、抗体または融合タンパク質を発現可能な組換え細胞、レセプター媒介エンドサイトーシス（たとえば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照されたい）、レトロウイルスベクターまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などがある。
【０１５０】
免疫グロブリン分子（たとえば、抗体、ダイアボディー、融合タンパク質など）を投与する方法としては、非経口投与（たとえば、真皮内で、筋肉内、腹腔内、静脈内、および皮下）、硬膜外投与、および粘膜投与（たとえば、鼻腔内および経口経路）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、抗体は、筋肉内、静脈内、または皮下に投与される。組成物は、たとえば、注入またはボーラス注射剤により、上皮または粘膜皮膚の内層（たとえば、口腔粘膜、直腸粘膜、腸粘膜など）を介する吸収により、投与可能であり、他の生物学的活性剤一緒に投与可能である。投与は、全身的または局所的でありうる。それに加えて、たとえば、インヘラーまたはネブライザーと、エーロゾル化剤を含む製剤と、を使用することにより、肺内投与もまた、利用可能である。たとえば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、同第５，９８５，２０明細書、同第５，９８５，３０９号明細書、同第５，９３４，２７２号明細書、同第５，８７４，０６４号明細書、同第５，８５５，９１３号明細書、同第５，２９０，５４０号明細書、および同第４，８８０，０７８号明細書、ならびに国際公開第９２／１９２４４号パンフレット、同第９７／３２５７２号パンフレット、同第９７／４４０１３号パンフレット、同第９８／３１３４６号パンフレット、および同第９９／６６９０３号パンフレットを参照されたい。特定の実施形態では、治療を必要とする領域に医薬組成物を局所投与することが望ましいこともありうる。これは、たとえば、局所注入により、注射により、またはインプラントを利用して、達成可能であるが、これらに限定されるものではなく、また、前記インプラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン状の物質、たとえば、シラスティック膜などの膜または繊維である。好ましくは、抗体を投与する場合、抗体または融合タンパク質が吸収されない材料を使用するように注意すべきである。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、ヒト化抗体またはキメラ抗体は、抗体を標的化送達すべくリポソーム内に製剤化される。リポソームは、水性相をカプセル化する同心状に秩序化されたリン脂質二重層で構成されるベシクルである。リポソームは、典型的には、種々のタイプの脂質、リン脂質、および／または界面活性剤を含む。リポソームの成分は、生体膜の脂質構成と同様に二重層構成で配置される。リポソームは、生体適合性、低免疫原性、および低毒性でもあることから、とくに好ましい送達媒体である。リポソームの調製方法は、当技術分野で公知であり、たとえば、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８、Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０−４、米国特許第４，４８５，０４５号明細書および同第４，５４４，５４５号明細書を参照されたい。
【０１５２】
米国特許第５，０１３，５５６号明細書に開示されるように、血清中半減期を増加させた（すなわち、循環時間を長くした）リポソームを調製する方法をも提供する。開示された方法で使用される好ましいリポソームは、循環から急速に排除されない。すなわち、単核食細胞系（ＭＰＳ）に取り込まれない。
【０１５３】
開示された分子はまた、免疫リポソームとして製剤化することが可能である。免疫リポソームとは、抗体またはそのフラグメントが共有結合または非共有結合でリポソーム表面に結合されたリポソーム組成物を意味する。抗体をリポソーム表面に結合させる化学は、当技術分野で公知であり、たとえば、米国特許第６，７８７，１５３号明細書、Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｓｔｅａｌｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｂｏｃａ  Ｒｏｔａｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，２３３−４４、Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１２３９：１３３−１４４を参照されたい。
【０１５４】
開示された分子は、抗体の量を表示してアンプルやサシェなどの密閉容器内にパッケージ化されうる。一実施形態では、抗体は、乾いた滅菌凍結乾燥粉末としてまたは無水濃縮物として密閉容器内に供給され、そしてたとえば、水または生理食塩水を用いて、被験体に投与するのに適した濃度に再構成されうる。好ましくは、抗体は、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、または少なくとも７５ｍｇの単位投与量で、乾いた無菌凍結乾燥粉末として密閉容器内に供給される。凍結乾燥抗体は、その元封容器内に２〜８℃で貯蔵されるべきであり、かつ抗体は、再構成後、１２時間以内、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与されるべきである。代替実施形態では、抗体は、抗体の量および濃度を表示して密閉容器内に液体形態で供給される。好ましくは、液体形態の抗体は、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌの抗体濃度で、密閉容器内に供給される。
【０１５５】
また、製剤で利用される正確な用量は、投与経路および病態の重篤度に依存し、実施者の判断および各患者の状況に基づいて決定されるべきである。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデルの試験系から誘導される用量−反応曲線から推定可能である。抗体に関して、患者に投与される投与量は、患者の体重基準で、典型的には０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者に投与される投与量は、患者の体重基準で、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２  ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１  ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇである。一般的には、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫反応に起因して、他の種からの抗体よりも人体内で長い半減期を有する。したがって、多くの場合、より低投与量のヒト抗体かつより低頻度の投与が可能である。さらに、抗体またはそのフラグメントの投与量および投与頻度は、たとえば脂質化などの修飾により、抗体の取込みおよび組織浸透を低減または増強することが可能である。
【０１５６】
さらに他の実施形態では、組成物は、制御放出系または持続放出系で送達可能である。当業者に公知の任意の技術を用いて、１つ以上の抗体を含む持続放出製剤を作製することが可能である。たとえば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書、ＰＣＴ国際公開第９１／０５５４８号パンフレット、同第９６／２０６９８号パンフレット、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２  ３９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４、またＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９  ７６０を参照されたい。一実施形態では、制御放出系でポンプを使用することが可能である（Ｌａｎｇｅｒ，  ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７、およびＳａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照されたい）。他の実施形態では、抗体の制御放出を達成するために、高分子材料を使用することが可能である（たとえば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたい。また、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５）、米国特許第５，６７９，３７��号明細書、同第５，９１６，５９７号明細書、同第５，９１２，０１５号明細書、同第５，９８９，４６３号明細書、同第５，１２８，３２６号明細書、ＰＣＴ国際公開第９９／１５１５４号パンフレット、および同第９９／２０２５３号パンフレットも参照されたい）。持続放出製剤で使用されるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリアンヒドリド、ポリ（Ｎ−ビニル、ピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、およびポリオルトエステルを含むが挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらに他の実施形態では、治療標的（たとえば肺）に近接して制御放出系を配置すれば、全身用量のごく一部が必要となるにすぎない（たとえば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８  （１９８４）を参照されたい）。他の実施形態では、Ｄｕｎｎら（米国特許第５，９４５，１５５号明細書を参照されたい）に従って、制御放出インプラントとして有用な高分子組成物が使用される。この特定の方法は、ポリマー系からの生体活性材料のｉｎ  ｓｉｔｕ制御放出の治療効果に基づく。留置は、一般的には、治療処置を必要とする患者の体内の任意の位置で行うことが可能である。他の実施形態では、非高分子持続送達系が使用され、その場合、被験体の身体内で非高分子インプラントが薬剤送達系として使用される。体内に留置した後、インプラントの有機溶媒は、組成物から周囲の組織液中に散逸、分散、または浸出するであろう。そして、非高分子材料は、徐々に凝結または沈殿して固体のマイクロ多孔性マトリックスを形成するであろう（米国特許第５，８８８，５３３号明細書を参照されたい）。制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）のレビューで考察されている。当業者に公知の任意の技術を用いて、１つ以上の治療剤を含む持続放出製剤を作製することが可能である。たとえば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書、国際公開第９１／０５５４８号パンフレットおよび同第９６／２０６９８号パンフレット、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３  ８５４、およびＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照されたい。
【０１５７】
特定の実施形態では、治療用または予防用組成物が、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む場合、適切な核酸発現ベクターの一部としてそれを構築し、それが細胞内にくるように投与することすることにより、たとえば、レトロウイルスベクターを用いて（米国特許第４，９８０，２８６号明細書を参照されたい）、または直接注入により、またはマイクロ粒子衝突を用いて（たとえば、遺伝子銃、Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは細胞表面レセプターもしくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に進入することが知られているホメオボックス様ペプチドに結合させてそれを投与するなどにより（たとえば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８を参照されたい）、核酸をｉｎ  ｖｉｖｏで投与して、そのコードされた抗体の発現を促進することが可能である。他の選択肢として、相同組換えによる発現のために、核酸を細胞内に導入して、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことが可能である。
【０１５８】
治療上有効量または予防上有効量の抗体による被験体の治療は、単回治療を含みうるか、好ましくは一連の治療を含みうる。
【０１５９】
Ｅ．組合せ療法
本明細書に開示された分子はまた、癌、自己免疫疾患、感染性疾患、または中毒を治療または予防するために、当業者に公知の１つ以上の他の療法、たとえば、限定されるものではないが、現在の標準的および実験的な化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、または手術と組み合わせて、投与することが可能である。いくつかの実施形態では、分子は、治療上有効量または予防上有効量の１つ以上の作用剤、治療用抗体、または癌、自己免疫疾患、感染性疾患、もしくは中毒を治療／予防するための当業者に公知の他の作用剤と組み合わせて投与される。そのような作用剤は、たとえば、開示された生物学的反応修飾剤、サイトトキシン、抗代謝剤、アルキル化剤、抗生物質、または免疫療法剤、さらには抗有糸分裂剤のいずれかを含む（たとえば、ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）（ＩＭＣ−Ｃ２２５としても知られる）（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）、ＥＧＦＲに対するキメラ化モノクローナル抗体、転移性乳癌の患者の治療のためのヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であるＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，ＣＡ）、血栓形成の予防のための血小板上の抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａレセプターであるＲＥＯＰＲＯ（登録商標）（アブシキシマブ）（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、急性腎臓アロ移植拒絶の予防のための免疫抑制性ヒト化抗ＣＤ２５モノクローナル抗体であるＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標）（ダクリズマブ）（Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。他の例は、ヒト化抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ヒト化抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２であるＣＤＰ８６０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ，ＵＫ）、ＣＤ４と融合した抗ＨＩＶｇｐ１２０抗体であるＰＲＯ５４２（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ／Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ）、抗ＣＤ１４抗体であるＣ１４（ＩＣＯＳ  Ｐｈａｒｍ）、ヒト化抗ＶＥＧＦＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ネズミ抗ＣＡ１２５抗体であるＯＶＡＲＥＸ（商標）（Ａｌｔａｒｅｘ）、ネズミ抗−１７−ＩＡ細胞表面抗原ＩｇＧ２ａ抗体であるＰＡＮＯＲＥＸ（商標）（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ／Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、キメラ抗ＥＧＦＲＩｇＧ抗体であるＩＭＣ−Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ヒト化抗αＶβ３インテグリン抗体であるＶＩＴＡＸＩＮ（商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ヒト化抗ＣＤ５２ＩｇＧ１抗体であるＣａｍｐａｔｈ１Ｈ／ＬＤＰ−０３（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ）、ヒト化抗ＣＤ３３ＩｇＧ抗体であるＳｍａｒｔ  Ｍ１９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ／Ｋａｎｅｂｏ）、キメラ抗ＣＤ２０ＩｇＧ１抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ（商標）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｒｏｃｈｅ／Ｚｅｔｔｙａｋｕ）、ヒト化抗ＣＤ２２ＩｇＧ抗体であるＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（商標）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ヒト化抗ＨＬＡ抗体であるＳｍａｒｔＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ）であり、ＯＮＣＯＬＹＭ（商標）（Ｌｙｍ−１）は、放射性標識ネズミ抗ＨＬＡＤＲ抗体であり（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ）、抗ＣＤ１１��は、ヒト化ＩｇＧ１抗体であり（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ／Ｘｏｍａ）、ＩＣＭ３（商標）は、ヒト化抗ＩＣＡＭ３抗体であり（ＩＣＯＳ  Ｐｈａｒｍ）、ＩＤＥＣ−１１４（商標）は、霊長動物化抗ＣＤ８０抗体であり（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）は、放射性標識ネズミ抗ＣＤ２０抗体であり（ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）、ＩＤＥＣ−１３１（商標）は、ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体であり（ＩＤＥＣ／Ｅｉｓａｉ）、ＩＤＥＣ−１５１（商標）は、霊長動物化抗ＣＤ４抗体であり（ＩＤＥＣ）、ＩＤＥＣ−１５２（商標）は、霊長動物化抗ＣＤ２３抗体であり（ＩＤＥＣ／Ｓｅｉｋａｇａｋｕ）、ＳＭＡＲＴ抗ＣＤ３は、ヒト化抗ＣＤ３ＩｇＧであり（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ）、５Ｇ１．１（商標）は、ヒト化抗補体因子５（Ｃ５）抗体であり（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍ）、ＩＤＥＣ−１５１（商標）は、霊長動物化抗ＣＤ４ＩｇＧ１抗体であり（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ）、ＭＤＸ−ＣＤ４（商標）は、ヒト抗ＣＤ４ＩｇＧ抗体であり（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｅｉｓａｉ／Ｇｅｎｍａｂ）、ＣＤＰ５７１（商標）は、ヒト化抗ＴＮＦ−αＩｇＧ４抗体であり（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、ＬＤＰ−０２（商標）は、ヒト化抗α４β７抗体であり（ＬｅｕｋｏＳｉｔｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＯｒｔｈｏＣｌｏｎｅ  ＯＫＴ４Ａ（商標）は、ヒト化抗ＣＤ４ＩｇＧ抗体であり（Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＡＮＴＯＶＡ（商標）は、ヒト化抗ＣＤ４０ＬＩｇＧ抗体であり（Ｂｉｏｇｅｎ）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（商標）は、ヒト化抗ＶＬＡ−４ＩｇＧ抗体であり（Ｅｌａｎ）、ＭＤＸ−３３（商標）は、ヒト抗ＣＤ６４（ＦｃγＲ）抗体であり（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｃｅｎｔｅｏｎ）、ｒｈｕＭａｂ−Ｅ２５（商標）は、ヒト化抗ＩｇＥＩｇＧ１抗体であり（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｒｖａｒｔｉｓ／Ｔａｎｏｘ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＤＥＣ−１５２（商標）は、霊長動物化抗ＣＤ２３抗体であり（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ）、ＡＢＸ−ＣＢＬ（商標）は、ネズミ抗ＣＤ−１４７ＩｇＭ抗体であり（Ａｂｇｅｎｉｘ）、ＢＴＩ−３２２（商標）は、ラット抗ＣＤ２  ＩｇＧ抗体であり（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／Ｂｉｏ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ／ＯＫＴ３（商標）は、ネズミ抗ＣＤ３ＩｇＧ２ａ抗体であり（ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＳＩＭＵＬＥＣＴ（商標）は、キメラ抗ＣＤ２５ＩｇＧ１抗体であり（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍ）、ＬＤＰ−０１（商標）は、ヒト化抗β２インテグリンＩｇＧ抗体であり（ＬｅｕｋｏＳｉｔｅ）、抗ＬＦＡ−１（商標）は、ネズミ抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２であり（Ｐａｓｔｅｕｒ−Ｍｅｒｉｅｕｘ／Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）、ＣＡＴ−１５２（商標）は、ヒト抗ＴＧＦ−β２抗体であり（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｂ  Ｔｅｃｈ）、およびＣｏｒｓｅｖｉｎ  Ｍ（商標）は、キメラ抗因子ＶＩＩ抗体である（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）など。）。他の実施形態では、開示された分子は、免疫モジュレート作用を増強するために、他の選択肢の免疫モジュレート経路（たとえば、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、４−１−ＢＢ、Ｂ７−Ｈ１、ＰＤ−１、ＬＩＧＨＴ、またはＬＡＧ３）を撹乱もしくは増強する分子、またはサイトカイン（たとえば、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＧＦβ、ＩＦＮｇ、Ｆｌｔ３、ＢＬｙｓ）やケモカイン（たとえば、ＣＣＬ２１）などのエフェクター分子の活性をモジュレートする分子と組み合わせて投与される。さらに他の実施形態では、開示された分子は、より広い免疫反応を達成するために、免疫反応の異なる段階または側面を活性化する分子と組み合わせて投与される。たとえば、抗Ｂ７−Ｈ４分子を用いて腫瘍媒介免疫抑制またはＴＡＭ媒介免疫抑制をブロックすることは、よりロバストな免疫反応を達成するために、Ｔ細胞の活性化または感作を増強する分子と組み合わせることが可能である。
【０１６０】
特定の実施形態では、開示された分子の１つ以上は、癌の治療に有用な１つ以上の他の治療剤と同時に、哺乳動物（好ましくはヒト）に投与される。「同時」という用語は、正確に同一の時間に予防剤または治療剤を投与することに限定されるものではなく、２つの作用剤が一緒に作用して、それらが他の形で投与された場合よりも利点の増加を提供できるような時間間隔で２つの作用剤が哺乳動物に逐次的に投与されることを意味する。たとえば、各予防剤または治療剤（たとえば、化学療法、放射線療法、ホルモン療法法、または生物学的療法）は、同時にまたは異なる時間点で任意の順序で逐次的に、投与可能であるが、同時に投与されない場合、それらは、所望の治療効果もしくは予防効果が提供されるように時間的に十分に近接して、または治療効果を提供することが示されたレジメンで、投与されるべきである。各治療剤は、任意の適切な形態で、かつ任意の好適な経路により、個別に投与可能である。種々の実施形態では、予防剤または治療剤は、１時間未満の間隔で、約１時間の間隔で、約１時間〜約２時間の間隔で、約２時間〜約３時間の間隔で、約３時間〜約４時間の間隔で、約４時間〜約５時間の間隔で、約５時間〜約６時間の間隔で、約６時間〜約７時間の間隔で、約７時間〜約８時間の間隔で、約８時間〜約９時間の間隔で、約９時間〜約１０時間の間隔で、約１０時間〜約１１時間の間隔で、約１１時間〜約１２時間の間隔で、２４時間以下の間隔で、または４８時間以下の間隔で、投与される。好ましい実施形態では、２つ以上成分は、同一の患者診察内で投与される。
【０１６１】
他の実施形態では、開示された予防剤または治療剤は、約２〜４日間の間隔で、約４〜６日間の間隔で、約１週間の間隔で、約１〜２週間の間隔で、または２週間超の間隔で、投与される。好ましい実施形態では、予防剤または治療剤は、両方の作用剤が依然として活性であるかまたは薬力学的効果が存在する時間枠内で投与される。当業者であれば、投与された作用剤の半減期を決定することにより、そのような時間枠を決定できるであろう。
【０１６２】
特定の実施形態では、開示された予防剤または治療剤は、被験体にサイクリックに投与される。サイクル療法は、一定期間にわたり第１の作用剤を投与することと、続いて、一定期間にわたり第２の作用剤および／または第３の作用剤を投与することと、この逐次投与を繰り返すことと、を含む。サイクル療法は、１つ以上の療法に対する耐性の発生を低減したり、療法の１つの副作用を低減したり、および／または治療の有効性を改良したりすることが可能である。
【０１６３】
特定の実施形態では、開示された予防剤または治療剤は、約３週間未満、２週間に約１回、１０日に約１回、または毎週約１回の周期で、投与される。１サイクルは、各サイクル約９０分間にわたり、各サイクル約１時間にわたり、各サイクル約４５分間にわたり、注入により治療剤または予防剤を投与することを含む。各サイクルは、少なくとも１週間の休止、少なくとも２週間の休止、少なくとも３週間の休止を含みうる。投与されるサイクル数は、約１〜約１２サイクル、より典型的には約２〜約１０サイクル、より典型的には約２〜約８サイクルである。
【０１６４】
さらに他の実施形態では、治療剤および予防剤、長い休止期間をとらずに持続注入または頻繁な投与のいずれかにより、規則的投与レジメンで投与される。そのような規則的投与は、休止期間をとらずに一定間隔で投与することを含みうる。典型的には、治療剤とくに細胞傷害剤は、より低用量で使用される。そのような投与レジメンは、長期間にわたり比較的低用量で毎日１回慢性投与することを含む。好ましい実施形態では、より低用量を用いることにより、毒性副作用を最小限に抑えて休止期間を排除することが可能である。特定の実施形態では、治療剤および予防剤は、約２４時間から、約２日間まで、約１週間まで、約２週間まで、約３週間まで、約１ヶ月間まで、約２ヶ月間まで、約３ヶ月間まで、約４ヶ月間まで、約５ヶ月間まで、約６ヶ月間までにわたり、慢性低用量でまたは持続注入により、送達される。熟練医師であれば、そのような用量レジメンのスケジュールを最適化することが可能である。
【０１６５】
他の実施形態では、一連の治療は、哺乳動物に同時に施される。すなわち、個別用量の治療剤は、個別に、ただし、開示された分子が１種または複数種の他の作用剤と一緒に機能できるような時間間隔で、投与される。たとえば、１つの成分は、２週間に１回または３週間に１回投与可能な他の成分と組み合わせて、１週間に１回投与可能である。言い換えれば、治療剤が同時にまたは同一の患者診察内で投与されなくても、治療剤の投与レジメンは、同時に実施される。
【０１６６】
他の予防剤および／または治療剤と組み合わせて使用される場合、開示された分子ならびに予防剤および／または追加の治療剤は、相加的に、より好ましくは相乗的に作用可能である。たとえば、いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、同一の医薬組成物中の１つ以上の追加の治療剤と同時に投与される。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、個別の医薬組成物中の１つ以上の他の治療剤と同時に投与される。さらに他の実施形態では、開示された分子の１つ以上は、他の予防剤または治療剤の投与の前にまたはそれに続いて投与される。組合せ療法または併用療法の２つ以上の作用剤は、同一または異なる投与経路により、たとえば、経口経路または非経口経路により投与可能である。特定の実施形態では、開示された分子が、限定されるものではないが毒性を含めて有害な副作用を生じる可能性のある第２の予防剤または治療剤と同時に投与される場合、第２の予防剤または治療剤は、有利には、有害な副作用が引き起こされる閾値を下回る用量で投与可能である。
【０１６７】
本明細書に提供される投与量および投与頻度は、治療上有効および予防上有効という用語に包含される。投与量および頻度はさらに、典型的には、投与される特定の治療剤または予防剤、重症度および癌のタイプ、投与経路、さらには患者の年齢、体重、反応、および既往症に依存して、各患者に特異的な因子によって異なるであろう。当業者であれば、たとえば、文献に報告されているおよびＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（５６ｔｈ  ｅｄ．，２００２）で推奨されている投与量に従って、そのような因子を考慮することにより、好適なレジメンを選択することが可能である。
【０１６８】
Ｆ．医薬組成物
開示された分子の１つ以上を含む組成物を提供する。組成物は、医薬組成物の製造に有用なバルク薬剤組成物（たとえば、不純なまたは非無菌の組成物）、およびユニット製剤の調製に使用可能な医薬組成物（すなわち、被験体または患者への投与に好適な組成物）を含みうる。そのような組成物は、典型的には、予防上有効量または治療上有効量の本明細書に開示された予防剤および／または治療剤、あるいはそれらの作用剤と薬学的に許容可能な担体との組合せを含む。好ましくは、組成物は、予防上有効量または治療上有効量の開示されたヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントの１つ以上と薬学的に許容可能な担体とを含む。
【０１６９】
特定の実施形態では、「薬学的に許容可能」という用語は、連邦政府もしくは州政府の監督官庁により認可されているか、または米国薬局方、もしくは動物で、より特定的にはヒトで使用するための他の一般に公認されていた薬局方に列挙されていることを意味する。「担体」という用語は、治療剤と一緒に投与される希釈剤、アジュバント（たとえば、フロイントアジュバント（完全および不完全）、賦形剤、または媒体を意味する。そのような医薬担体は、滅菌された水や油のような液体、たとえば、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などのような石油起源、動物起源、植物起源、または合成起源のものでありうる。医薬組成物を静脈内投与する場合、水は好ましい担体である。生理食塩溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた、とくに注射用溶液剤の液体担体として利用可能である。好適な医薬賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、穀粉、チョーク、シリカゲル、ナトリウムステアレート、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含む。組成物は、所望により、副次量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤をも含有しうる。これらの組成物は、溶液剤、サスペンジョン剤、エマルジョン剤、タブレット剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、持続放出製剤などの形態をとることが可能である。
【０１７０】
一般的には、組成物の成分は、個別に、またはユニット製剤で混合一体化されて、たとえば、活性剤の量を表示してアンプルやサシェなどの密閉容器内に乾いた凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、供給される。組成物が注入により投与される場合、無菌医薬グレードの水または生理食塩水を含有する注入ボトルを用いて分配可能である。組成物が注射投与される場合、投与前に成分を混合できるように、注射用無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することが可能である。
【０１７１】
組成物は、中性形または塩形として製剤化することが可能である。薬学的に許容可能な塩としては、塩酸、リン、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されるようなアニオンで形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導されるような陽イオンで形成されるものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７２】
Ｇ．キット
開示されたヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントが充填された１つ以上の容器を含む医薬パックおよびキットをも提供する。そのほかに、医薬パックまたはキットには、疾患の治療に有用な１つ以上の他の予防剤または治療剤もまた含まれうる。医薬パックまたはキットは、医薬組成物の１つ以上の成分が充填された１つ以上の容器を含みうる。任意選択で、そのような容器に関連付けられるのは、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する政府機関により指定された形態の注意書きでありうる。この注意書きは、ヒトに投与するための製造、使用、または販売が監督官庁により認可されたことを反映したものである。
【０１７３】
開示されたヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントの１つ以上を含むキットは、開示された方法の１つ以上で使用するためのものでありうる。たとえば、癌の治療に使用するためのキットは、１つ以上の容器内に癌の治療に有用な１つ以上の他の予防剤または治療剤を含みうる。他の実施形態では、キットは、１つ以上の追加の抗体、たとえば、癌に関連付けられる１つ以上の癌抗原に結合する細胞傷害性抗体を含む。特定の実施形態では、他の予防剤または治療剤は、化学療法剤である。他の実施形態では、予防剤または治療剤は、生物学的治療剤またはホルモン治療剤である。
【０１７４】
Ｈ．診断方法
開示された抗Ｂ７−Ｈ４結合分子は、診断目的で、たとえば、Ｂ７−Ｈ４発現に関連付けられる疾患、障害、もしくは感染を検出、診断、もしくはモニターするために、または好適な患者集団もしくはプロファイルの決定もしくは同定を決定もしくは支援するために、使用可能である。疾患、障害、または感染、とくに自己免疫疾患の検出または診断は、（ａ）抗原に免疫特異的に結合する１つ以上の抗体（またはそのフラグメント）を用いて、被験体の細胞、血清、血漿、血液、または組織サンプルで、Ｂ７−Ｈ４またはその誘導体の発現をアッセイすることと、（ｂ）抗原のレベルを対照レベル、たとえば、正常組織サンプルのレベルと比較することにより、抗原の対照レベルと比較してアッセイされた抗原のレベルの増加または減少を、疾患、障害、または感染の指標とすることと、を含みうる。そのような抗体およびフラグメントは、好ましくは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの免疫アッセイで利用される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｓｉｔｕ組織サンプルの細胞でまたはｉｎ  ｖｉｖｏでＩＨＣ解析に使用される。たとえば、Ｂ７−Ｈ４は、正常組織により発現されないが、癌細胞によりとくに発現されるので（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，  Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１、Ｃｈｏｉ，Ｉ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｂ７−Ｈ４，Ａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：４６５０−４６５４）、そのような抗体またはフラグメントに結合する細胞により細胞上のその存在が検出されれば、癌細胞の指標となり、癌細胞が診断されることになる。したがって、被験体において癌の存在を診断するための細胞学的アッセイを提供される。
【０１７６】
ＨＩＶ感染するとＢ７−Ｈ４が過剰発現されるので、（Ｃａｒｔｅｒ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｆ  ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２：４２５−４４３、Ｎｏｕｒｓａｄｅｇｈｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）“ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ：Ｔｈｅ  Ｃａｓｅ  Ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｉｎ  ＡＩＤＳ，”Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．  ６：７９４−８０４）、そのような細胞上のＢ７−Ｈ４の発現（開示された抗体および抗原結合フラグメントにより検出される）をヒトにおいてＨＩＶの診断に使用可能である。
【０１７７】
したがって、抗体およびフラグメントは、ヒトにおいて疾患、障害、または感染の検出および診断に使用可能である。一実施形態では、そのような診断は、ａ）有効量のそのような標識抗体または抗原結合フラグメントを被験体に投与することと（たとえば、非経口的に、皮下に、または腹腔内に）、ｂ）Ｂ７−Ｈ４が発現された被験体の部位に標識分子を優先的に濃縮させるべく（非結合標識分子をバックグラウンドレベルに排除すべく）、投与後、ある時間間隔で待機することと、ｃ）バックグラウンドレベルを決定することと、ｄ）被験体において標識抗体を検出することにより、バックグラウンドレベルを上回った標識抗体の局所検出を、被験体が疾患、障害、または感染を有することの指標とすることと、を含む。この実施形態によれば、当業者に公知のイメージングシステムを用いてｉｎ  ｖｉｖｏで検出可能なイメージング部分を用いて抗体を標識することが可能である。バックグラウンドレベルは、検出された標識分子の量と特定のシステムであらかじめ決められた標準値とを比較することを含む種々の方法により決定可能である。
【０１７８】
当技術分野では、被験体のサイズおよび使用されるイメージングシステムが、診断画像を生成するのに必要とされるイメージング部分の量を決定することは、理解されよう。ｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍イメージングについては、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，”（Ｃｈａｐｔｅｒ  １３  ｉｎ  ＴＵＭＯＲ  ＩＭＡＧＩＮＧ：ＴＨＥ  ＲＡＤＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＣＡＮＣＥＲ，Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ  ａｎｄ  Ｂ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ，  ｅｄｓ．，  Ｍａｓｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｉｎｃ．（１９８２）に記載されている。
【０１７９】
使用した標識のタイプおよび投与形態を含めて、いくつかの変数に依存して、被験体において標識分子を部位に優先的に濃縮させるべく、かつ非結合標識分子をバックグラウンドレベルに排除すべく、投与後の時間間隔は、６〜４８時間、６〜２４時間、または６〜１２時間である。他の実施形態では、投与後の時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間である。
【０１８０】
一実施形態では、疾患、障害、または感染のモニタリングは、たとえば、初期診断後１ヶ月間、初期診断後６ヶ月間、初期診断後１年間、疾患、障害、または感染を診断する方法を繰り返すことにより実施される。
【０１８１】
標識分子の存在は、ｉｎ  ｖｉｖｏ走査のための当技術分野で公知の方法を用いて、被験体において検出することが可能である。これらの方法は、使用される標識のタイプに依存する。当業者であれば、特定の標識を検出するのに適した方法を決定することができるであろう。診断方法で使用可能な方法およびデバイスとしては、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、全身スキャン、たとえば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、および超音波検査が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１８２】
特定の実施形態では、分子は、放射性同位体を用いて標識され、放射線応答外科用装置を用いて患者において検出される（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号明細書）。他の実施形態では、分子は、蛍光化合物を用いて標識され、患者において蛍光応答走査装置を用いて検出される。他の実施形態では、分子は、陽電子放出金属を用いて標識され、患者において陽電子放出断層撮影を用いて検出される。さらに他の実施形態では、分子は、常磁性標識を用いて標識され、患者において磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）を用いて、検出される。
【０１８３】
当業者であれば、通常の実験の域を出ることなく、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの等価形態がわかるであろう。またはそれらを確認することができるであろう。そのような等価形態は、以下の特許請求の範囲内に包含されるものとする。
【実施例】
【０１８４】
実施例１
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の特徴付け
材料および方法
ナイーブＴ（ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋）細胞を最初にＤＯ１１．１０マウスから分離し、組換えＴＧＦ−β（１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−２３（４ｎｇ／ｍＬ）、抗ＩＬ−４（１μｇ／ｍＬ）、抗ＩＦＮ−γ（１μｇ／ｍＬ）、および抗ＩＬ−２（１μｇ／ｍＬ）と、ＯＶＡ特異的刺激のためのＯＶＡ３２３−３３９パルスＡＰＣ（ＡＰＣ／ＯＶＡ）と、の存在下で、Ｔｈ１７細胞に分極化させた。種々の用量のネズミＢ７−Ｈ４Ｉｇまたは対照ＩｇＧを培養物に直接添加し、５μｇ／ｍＬの６Ｈ３の存在下で３日間培養した。増殖評価のために、採取の２４時間前に１μｃｉの［３Ｈ］チミジンを添加した。Ｔ細胞増殖をチミジン取込みにより評価した（図２Ａ）。コンディショニングされた培養上清をＩＬ−１７産生に関し解析した（図２Ｂ）。
【０１８５】
結果
多くの独立した手法を用いて、抗体６Ｈ３がヒトＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合可能であることを確証した。そのような１つ手法では、Ｔｈ１７（またＴｈ１）分化のＢ７−Ｈ４Ｉｇ媒介阻害をブロックする抗体の能力を評価した。したがって、対照ＩｇまたはネズミＢ７−Ｈ４．Ｉｇの存在下、Ｔｈ１７分極化条件下で、８〜９週齢のＮＯＤマウスの脾細胞を抗ＣＤ３／ＣＤ２８と共に３日間培養した。培養物中でＢ７−Ｈ４．Ｉｇの作用を中和する抗体６Ｈ３（１０ｍｇ／ｍｌ）の能力を評価した。この実験の結果、チミジンの取込みの減少により示されるように（図２Ａ）、さらにはＩＬ−１７の発現の低減により示されるように（図２Ｂ）、Ｂ７−Ｈ４Ｉｇの投与により増殖が阻害されたことが示される。この阻害は、抗体６Ｈ３の投与（または共投与）により逆転される。フローサイトメトリーを用いてＩＬ−１７の産生を評価した。
【０１８６】
第２の手法では、卵巣癌ＴＡＭ共インキュベーション後、細胞によるＣＴＬ反応を増強する抗体の能力をアロＴ細胞アッセイで評価した。図３Ａ〜３Ｄは、抗体６Ｈ３がそのようなＣＴＬ反応の増強を媒介可能であったことを示している（表２）。
【０１８７】
【表４】
2016509582.tif 000023
【０１８８】
第３の手法では、卵巣癌患者腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）によるＢ７−Ｈ４の発現を検出する能力に関して抗体６Ｈ３を試験した。図４Ａ〜４Ｉに示されるように、抗体６Ｈ３は、そのような細胞上のＢ７−Ｈ４を検出した。
【０１８９】
Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体６Ｈ３の結合動態を調べるために、全長ヒトＢ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３細胞を用いて、ＲＰＭＩ完全培地（１０％ＦＢＳ）中、さまざまな濃度の抗体（０、０．０１ｎｇ、０．０３ｎｇ、０．１ｎｇ、０．３ｎｇ、１ｎｇ、１０ｎｇ、３０ｎｇ、１００ｎｇ、３００ｎｇ、１０００ｎｇ、３０００ｎｇ、１００００ｎｇ、または３００００ｎｇ）の存在下で、インキュベートした（２００μｌウェル中、１×１０５、４℃で２０分間）。インキュベート後、二次抗体（抗ヒトＩｇＰＥ、抗マウスＩｇＡＰＣ、抗ハムスターＩｇＰＥ、または抗ラットＩｇＰＥ）を用いてＦＡＣＳ染色プレートを用いて、結合を解析した（ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）。解析結果を表３に示す。
【０１９０】
【表５】
2016509582.tif 000024
【０１９１】
結果を図５にグラフで示す。
【０１９２】
図６は、他の抗Ｂ７−Ｈ４抗体（すなわち、抗体Ｈ７４、２Ｄ１、２Ｈ９、２Ｅ１１、および８Ｅ１１）と比較して、抗体６Ｈ３のヒトＨ７−Ｈ４結合の動態を示している。Ｂ７−Ｈ４Ｉｇをマイクロタイタープレート上にコーティングし、洗浄し、ブロックし、そして再洗浄した。さまざまな濃度の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を結合させた。クローンＨ７４、６Ｈ３、および８Ｅ１１では精製タンパク質を使用した。ハイブリドーマ２Ｄ１、２Ｈ９、および２Ｅ１１からの調整培地を使用した。インキュベーション後、プレートを洗浄した。ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いて結合抗Ｂ７−Ｈ４を検出した。
【０１９３】
実施例２
抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３はＢ７−Ｈ４ＩｇＣ領域を認識する
材料および方法
Ｂ７−Ｈ４細胞外ドメインのさまざまなセグメントからなる、ＰＢＳ中に希釈された１００μｌの１μｇ／ｍｌヒトＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質を４℃で一晩かけて平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ９０１７）上に固定した。Ｂ７−Ｈ４融合タンパク質は、変異体１：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１４９、変異体２：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５４、変異体３：配列番号１のＩｇＶ残基２９〜１５８、変異体４：ＥＣＤ−ｈＩｇＧ４、変異体５：配列番号１のＩｇＣ残基１５４〜２５９、変異体６：ＥＣＤｈＩｇＧ１配列番号７を含む）。プレートをＰＢＳ＋０．１％ＰＳ−２０で２回洗浄し、そして室温で１時間かけて２００μｌ／ウェルＰＢＳ１０％ＦＢＳでブロックした。ＰＢＳ１０％ＦＢＳ中に希釈されたマウス抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体２Ｈ９、２Ｄ１、２Ｅ１１、６Ｈ３、８Ｅ１１、またはＨ７４の希釈液をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、１００μｌの１μｇ／ｍｌ抗マウスＩｇＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ）を各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキュベートした。プレートを６回洗浄し、１００μｌのＴＭＢ培地（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）を各ウェルに５〜１５分間添加した。１００μｌの停止液（０．１Ｍ硫酸）を各ウェルに添加した。プレートをＡｂｓｏｒｂａｎｃｅ  ４５０ｎｍ  ｂｙ  ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０４  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
【０１９４】
結果
Ｂ７−Ｈ４の細胞外ドメインは、ＩｇＶ様ドメイン（配列番号１の残基Ｉｌｅ４８〜Ｐｈｅ１５０）およびＩｇＣ様ドメインを含有する（配列番号１の残基Ｖａｌ１５７〜Ｇｌｙ２３６）（Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）“Ｂ７−Ｈ４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１）。ＩｇＶ様ドメインは、ＣＤ２８に対する完全結合部位を含有し、ＩｇＣ様ドメインは、ＣＴＬＡ４への親和性の増加に関与すると考えられている（Ｉｎｏｂｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ  Ｓｐｌｉｃｅｄ  Ｆｏｒｍ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  Ｏｆ  Ｂ７，”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００（１）：４４３−４４９）。
【０１９５】
抗体６Ｈ３により認識されたＢ７−Ｈ４ドメインを決定するために、定義された欠失を有するＢ７−Ｈ４変異体の存在下で抗体をインキュベートし、結合度を測定した。この研究の結果から、抗体６Ｈ３は、配列番号１の残基２９〜１４９を含有するＢ７−Ｈ４変異体（変異体１）、配列番号１の残基２９〜１５４を含有するＢ７−Ｈ４変異体（変異体２）、配列番号１の残基２９〜１５８を含有するＢ７−Ｈ４変異体（変異体３）には結合しなかったが、Ｂ７−Ｈ４細胞外ドメイン（ＥＣＤ）−ｈＩｇＧ４を含有するＢ７−Ｈ４変異体（変異体４）、配列番号１の残基１５４〜２５９を含有するＢ７−Ｈ４変異体（変異体５）、Ｂ７−Ｈ４ＥＣＤｈＩｇＧ１−ＫＲＲＳＫＱＱＳを含有するＢ７−Ｈ４変異体（変異体６、ＫＲＲＳＫＱＱＳは配列番号７である）には結合したことが示唆された（図７）。したがって、抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３は、Ｂ７−Ｈ４ＩｇＣ領域を認識する。
【０１９６】
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体２Ｈ９、２Ｄ１、およびＨ７４を用いた解析も行った。抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂ２Ｈ９および２Ｄ１の軽鎖および重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、以下のとおりであり（ＣＤＲには下線が付されている）、抗体Ｈ７４は、市販の抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））である。
抗ヒトＢ７−Ｈ４クローン２Ｈ９
軽鎖可変領域：
【化１９】
2016509582.tif 000025
重鎖可変領域：
【化２０】
2016509582.tif 000026
抗ヒトＢ７−Ｈ４クローン２Ｄ１
軽鎖可変領域：
【化２１】
2016509582.tif 000027
重鎖可変領域：
【化２２】
2016509582.tif 000028
【０１９７】
この解析の結果は、図８Ａ〜８Ｃに示され、表４にまとめられている。
【０１９８】
【表６】
2016509582.tif 000029
【０１９９】
ウェスタン解析を用いて結果を確認した。
【０２００】
実施例３
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３は、他の抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体と比較して予想外の特性を有する
材料および方法
ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋）をＤＯ１１．１０マウスから分離し、増加濃度のヒトＢ７−Ｈ４Ｉｇ＋１０μｇ／ｍＬ抗Ｂ７−Ｈ４Ａｂの存在下でＯＶＡ３２３−３３９ペプチドで３日間パルスされたＢａｌｂ／Ｃマウスから採取された照射抗原提示細胞（ＡＰＣ）と共に培養した。チミジン取込み解析前の最後の２４時間で［３Ｈ］−チミジンを培養物に添加した。
【０２０１】
結果
抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｔ細胞活性化のＢ７−Ｈ４Ｉｇ媒介抑制をブロックする。抗体６Ｈ３の示差性を実証するために、漸増濃度のヒトＢ７−Ｈ４Ｉｇ＋１０ｍｇ／ｍＬの抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂ２Ｅ１１および２Ｈ９の存在下で、照射ＯＶＡ特異的抗原提示細胞（ＡＰＣ）と共に、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞（ＤＯ１１．１０マウスから分離された）を培養した。抗Ｂ７−Ｈ４抗体２Ｈ９の軽鎖および重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号８〜９である。抗Ｂ７−Ｈ４抗体２Ｅ１１の軽鎖および重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、以下のとおりである（ＣＤＲには下線が付されている）。
抗ヒトＢ７−Ｈ４クローン２Ｅ１１
軽鎖可変領域
【化２３】
2016509582.tif 000030
重鎖可変領域：
【化２４】
2016509582.tif 000031
【０２０２】
図９に示されるように、抗体６Ｈ３は、Ｔ細胞活性化のＢ７−Ｈ４Ｉｇ媒介抑制の最大のブロックを提供することが判明した。
【０２０３】
単球媒介抑制を逆転する抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体の能力を比較し、Ｔ細胞により産生されたサイトカインを測定した。抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗Ｂ７−Ｈ１抗体、抗ＰＤ−１抗体、または陰性対照抗体と共に、健常ドナーからのＩＦＮ−γ感作単球をインキュベートした。自己Ｔ細胞を抗ＣＤ３抗体で活性化し、前処理された単球と共に抗体の存在下でマクロファージ１個あたりＴ細胞１０個の比で共インキュベートした。Ｔ細胞を採取し、ＣＤ４およびＣＤ８に対して染色し、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−８に対して細胞内染色した。図１０Ａ〜１０Ｆは、この実験の結果を示している。抗体６Ｈ３は、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−８の最大発現を引き起こすことが判明した。陰性対照抗体の存在下で感作単球をインキュベートすると、有意な単球抑制を生じた。単球の不在下では、Ｔ細胞活性の抑制は存在しない。
【０２０４】
実施例４
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３はＢ７−Ｈ４の細胞表面内在化を誘導する
材料および方法
細胞の表面上に発現されたＢ７−Ｈ４（すなわち、膜結合Ｂ７−Ｈ４）の内在化を誘導する抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の能力を実証するために、抗体６Ｈ３および対照抗体をＣｙｐＨｅｒ５Ｅ  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（内在化されると酸性リソソーム区画で最大の蛍光を発するｐＨ感受性シアニン染料）で標識した。ヒトＢ７−Ｈ４を発現する安定ＨＥＫ２９３Ｔ細胞系（２９３Ｔ．ｈＢ７−Ｈ４）と共に、またはＢ７−Ｈ４陽性乳癌腫瘍細胞系ＳＫ−ＢＲ−３（ＡＴＣＣ）の細胞と共に、ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ標識６Ｈ３抗体を種々の時間インキュベートした。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ装置を用いてフローサイトメトリーにより決定されたＣｙｐＨｅｒ５Ｅ蛍光の増加として、抗体内在化を測定した。
【０２０５】
結果
この研究の結果は、図１１Ａ〜１１Ｂおよび図１２Ａ〜１２Ｂに示されており、Ｂ７−Ｈ４トランスフェクト細胞系およびＢ７−Ｈ４陽性乳癌細胞系ＳＫ−ＢＲ−３の両方の表面上に発現されたＢ７−Ｈ４の抗体６Ｈ３誘導ロバスト内在化を明らかにする。そのような内在化は、両方の細胞系の表面Ｂ７−Ｈ４レベルを減少させた。抗体６Ｈ３を用いれば、Ｂ７−Ｈ４陽性腫瘍、腫瘍細胞、または腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を標的として、それらのそれぞれのＢ７−Ｈ４表面レベルを低減させ、腫瘍またはＴＡＭのＢ７−Ｈ４媒介免疫抑制を阻害することが可能であることが、結果から確認される。抗体６Ｈ３のコンジュゲート（たとえば、薬剤トキシンコンジュゲートなど）を利用すれば、Ｂ７−Ｈ４陽性腫瘍、腫瘍細胞、および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を選択的に標的として死滅させることが可能であることが、結果からさらに確認される。図１２Ａ〜１２Ｂは、ＣｙｐＨｅｒ標識６Ｈ３と共にインキュベートしている間のＢ７−Ｈ４陽性ヒト乳癌細胞系ＳＫ−ＢＲ３細胞上のＢ７−Ｈ４表面染色およびＣｙｐＨｅｒ蛍光を対照と比較して経時的に示すヒストグラムである。
【０２０６】
実施例５
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３はＩＨＣによりＢ７−Ｈ４陽性細胞を染色可能である
材料および方法
クローン６Ｈ３を用いてＩＨＣによりヒト組織試料でのＢ７−Ｈ４発現を評価し、アルカリ性ペルオキシダーゼおよびＤＡＢを用いて検出し、スライドを病理学者により解読した。また、医学的診断で広く使用される染色であるヘマトキシリン−エオシン染色（Ｈ＋Ｅ）を用いて、同一の試料からのスライドを染色した。
【０２０７】
結果
Ｂ７−Ｈ４陽性細胞を検出する抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の能力を実証するために、抗体を標識して組織の存在下でインキュベートした。図１３Ａ〜１３Ｃは、組織を（Ｈ＋Ｅ）で染色したときに正常に見えた試料のＢ７−Ｈ４陽性腫瘍細胞を検出する抗体の能力を示している。図１３Ａおよび１３Ｂは、Ｈ＋Ｅ染色で正常に見えた６Ｈ３染色唾液腺組織の画像である。Ｂ７−Ｈ４は、腺管上皮細胞により最も強く発現されるように思われる（両方の画像の右上に最もよく見られた）。腺房細胞による発現は、ほとんど存在しない（右下）。図１３Ｃは、卵巣の２つの異なるただし関連する漿液性嚢胞性病変を示している。左側パネルは、良性（漿液性嚢胞腺腫）であり、右側パネルは、悪性漿液性嚢胞腺癌である。両方のパネルで、上皮は、Ｂ７−Ｈ４を発現するが、悪性のものは、良性腫瘍よりも強く、管腔内表面上では発現が亢進されるように思われる。そのような強度の増加は、Ｂ７−Ｈ４の過剰発現を反映するものと考えられている。
【０２０８】
実施例６
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化
相同性モデル抗体３Ｄ構造を生成することと、構造モデリングに基づいて親抗体のプロファイルを形成することと、を含むプロセスを用いて、ネズミ抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３をヒト化した。一群のヒト化重鎖およびヒト化軽鎖の可変領域配列を生成した。それらはそれぞれ、親抗体配列の特異的領域と、ヒトフレームワーク配列の大部分と、を組み合わせたものであった。合計で６つのヒト化重鎖配列および６つのヒト化軽鎖配列を生成した。
【０２０９】
Ｇｅｎｅｉｏｕｓを用いて、ネズミ抗体６Ｈ３の可変ドメインと、ヒト生殖系列データベースおよび再構成フレームワーク配列データベースと、比較する配列アライメントを発生させた。フレームワーク全体にわたる全配列同一性、界面位置のマッチング、類似クラスＣＤＲカノニカル位置、および除去しなければならないと思われるＮ−グリコシル化部位の存在に基づいて、好ましいアクセプターフレームワークを同定した。
【０２１０】
Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏでネズミ抗体６Ｈ３の可変軽鎖および可変重鎖の構造モデルを発生させた。ＣＤＲを用いておよび用いずに６Ｈ３の軽鎖および重鎖の可変ドメイン配列によるＰＤＢデータベースの検索を行って、テンプレート構造を同定した。ＭＯＤＥＬＬＥＲ（Ｓａｌｉ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  Ｂｙ  Ｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｓｐａｔｉａｌ  Ｒｅｓｔｒａｉｎｔｓ，”Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２３４（３）：７７９−８１５）を用いて、テンプレートへの６Ｈ３配列のアライメントおよび相同性に基づく構造のモデリングを実施した。
【０２１１】
親抗体配列のさまざまな領域とヒトフレームワークのさまざまな領域とを組み合わせたいくつかのハイブリッド配列を３Ｄモデルにより系統的に解析し、ＣＤＲの定義された構造に及ぼす影響が最も少ないと予測されたハイブリッド配列を同定した（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｆａｍｉｌｉｅｓ  Ｉｎ  Ｌｏｏｐｓ  Ｏｆ  Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２６３（５）：８００−８１５）。ＣＤＲループから５Ａ以内、バーニアゾーン中、ＶＨ／ＶＬ鎖間界面、またはＣＤＲカノニカルクラス決定位置に存在する、ヒトフレームワークからのアミノ酸を含有するハイブリッド配列には、とくに注目した。なぜなら、これらのハイブリッド配列は、得られるヒト化抗体の機能に有害な影響を及ぼす可能性がより高いと思われるからである。
【０２１２】
ＣＤＲ解析および構造モデリングに基づいて、親抗体のプロファイルを作製した。配列および相同性比較に基づいて、ヒトアクセプターフレームワークを同定した。親抗体配列の部分とヒトフレームワーク配列とを融合した多数のハイブリッド配列を作製することにより、ヒト化抗体を設計した。３Ｄモデルを用いて、これらのヒト化配列を目視でおよびコンピューターモデリングにより、系統的に解析し、抗原結合を維持する可能性が最も高いと思われる配列を分離した。その目的は、元の抗体特異性を維持しながら最終ヒト化抗体中のヒト配列の量を最大化することであった。
【０２１３】
ネズミ６Ｈ３抗体可変ドメインとヒト生殖系列データベースとを比較する配列アライメントを発生させた。全配列同一性、マッチング界面位置、および類似クラスＣＤＲカノニカル位置に基づいて、生殖系列ファミリーＩＧＫＶ２−３０＊０２を軽鎖用の可能なアクセプターフレームワークとして同定された。ＦＲ４およびＪセグメントにわたりＪセグメント遺伝子を親配列と比較し、ＩＧＫＪ４＊０１を軽鎖用として選択した。親可変軽鎖を非冗長データベースにアライメントした後、再構成ヒトκ軽鎖（ＣＡＡ８５５９０）を第２の可能なアクセプターフレームワークとして同定した。これらのアクセプターフレームワークへの親（６Ｈ３）可変軽鎖のアライメントは、表５に示され、同一でない残基は、下線付き示されている。
【０２１４】
【表７】
2016509582.tif 000032
【０２１５】
ネズミ抗体６Ｈ３の重鎖は、生殖系列ＩＧＨＶ１−４６＊０３に最も類似していることが判明した。ＦＲ４およびＪセグメントにわたりＪセグメント遺伝子をネズミ６Ｈ３重鎖配列と比較し、ＩＧＨＪ４＊０１を重鎖用として選択した。親ＶＬを非冗長データベースにアライメントした後、再構成ヒトκ軽鎖（ＡＢＦ８３２５９）を第２の可能なアクセプターフレームワークとして同定した。これらのアクセプターフレームワークへのネズミ可変重鎖のアライメントは、表６に示されている。
【０２１６】
【表８】
2016509582.tif 000033
【０２１７】
軽鎖では、２つのアクセプターフレームワークＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１およびＣＡＡ８５５９０のそれぞれで３つのヒト化鎖を作製することにより、６つのヒト化６Ｈ３軽鎖を形成した。各アクセプターフレームワークの第１のヒト化鎖（ＶＬ１Ａ、ＶＬ２Ａ）は、最もヒトに近いフレームワークを含有する（ヒト化軽鎖１）。各アクセプターフレームワークの第２のヒト化鎖（ＶＬ１Ｂ、ＶＬ２Ｂ）は、親配列の一部をヒトフレームワーク配列に融合して含有するので、元のＣＤＲコンフォメーションを維持するのに役立つはずである（ヒト化軽鎖２）。各アクセプターフレームワークの第３のヒト化鎖（ＶＬ１Ｃ、ＶＬ２Ｃ）は、より多くの親配列をヒトフレームワークに融合して含有するので、元の抗体特異性およびＣＤＲ構造を維持するのに役立つはずである（ヒト化軽鎖３）。これらの鎖のアミノ酸配列は、以下に示されるとおりである。
【０２１８】
ＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１アクセプターフレームワークから誘導された、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、（ＣＤＲは下線付きで示される）：
１．ＶＬ１ＡＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１（ヒト化１）：
【化２５】
2016509582.tif 000034
２．ＶＬ１ＢＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１（ヒト化２）：
【化２６】
2016509582.tif 000035
３．ＶＬ１ＣＩＧＫＶ２−３０＊０２ＩＧＫＪ４＊０１（ヒト化３）：
【化２７】
2016509582.tif 000036
【０２１９】
ＣＡＡ８５５９０アクセプターフレームワークから誘導された、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（ＣＤＲは下線付きで示される）：
１．ＶＬ２ＡＣＡＡ８５５９０（ヒト化１）：
【化２８】
2016509582.tif 000037
２．ＶＬ２ＢＣＡＡ８５５９０（ヒト化２）：
【化２９】
2016509582.tif 000038
３．ＶＬ２ＣＣＡＡ８５５９０（ヒト化３）：
【化３０】
2016509582.tif 000039
【０２２０】
重鎖では、以上に規定されたＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１およびＡＢＦ８３２５９アクセプターフレームワークのそれぞれで３つのヒト化鎖を作製した。軽鎖と同様に、各アクセプターフレームワーク（ＶＨ１Ａ、ＶＨ２Ａ）の第１のヒト化鎖は、最もヒトに近い配列を含有する（ヒト化１）。各アクセプターフレームワーク（ＶＨ１Ｂ、ＶＨ２Ｂ）の第２のヒト化鎖は、元のＣＤＲコンフォメーション（ヒト化２）を維持するのに役立つはずである。各アクセプターフレームワーク（ＶＨ１Ｃ、ＶＨ２Ｃ）の第３の鎖は、元の抗体特異性およびＣＤＲ構造を維持するのに役立つはずである（ヒト化３）。これらの鎖のアミノ酸配列は、以下に示されるとおりである。
【０２２１】
ＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１アクセプターフレームワークから誘導された、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（ＣＤＲは下線付きで示される）：
１．ＶＨ１ＡＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１（ヒト化１）：
【化３１】
2016509582.tif 000040
２．ＶＨ１ＢＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１（ヒト化２）：
【化３２】
2016509582.tif 000041
３．ＶＨ１ＣＩＧＨＶ１−４６＊０３ＩＧＨＪ４＊０１（ヒト化３）：
【化３３】
2016509582.tif 000042
【０２２２】
ＡＢＦ８３２５９アクセプターフレームワークから誘導された、抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のヒト化変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列（ＣＤＲは下線付きで示される）：
１．ＶＨ２ＡＡＢＦ８３２５９（ヒト化１）：
【化３４】
2016509582.tif 000043
２．ＶＨ２ＢＡＢＦ８３２５９（ヒト化２）：
【化３５】
2016509582.tif 000044
３．ＶＨ２ＣＡＢＦ８３２５９（ヒト化３）：
【化３６】
2016509582.tif 000045
【０２２３】
抗ヒトＢ７−Ｈ４抗体６Ｈ３の開示されたヒト化変異体の３６通りの組合せのいずれかを含む、本明細書に開示された抗体およびその抗原結合フラグメント。特定的には、そのような抗体は、表１に示される組合せを含む。構築された３６種のヒト化変異体のうち２０種のヒト化変異体は、ヒトＢ７−Ｈ４への結合特異性を維持した。Ｂ７−Ｈ４に結合するが、機能アッセイでさらに探究しなかった追加の６通りの重鎖および軽鎖の組合せは、Ｈ１Ａ  Ｌ１Ｃ（配列番号２４、配列番号２０）、Ｈ１Ａ  Ｌ２Ｃ（配列番号２４、配列番号２３）、Ｈ１Ｂ  Ｌ１Ｂ（配列番号２５、配列番号１９）、Ｈ１Ｂ  Ｌ１Ｃ（配列番号２５、配列番号２０）、Ｈ１Ｂ  Ｌ２Ｂ（配列番号２５、配列番号２２）およびＨ１Ｂ  Ｌ２Ｃ（配列番号２５、配列番号２３）である。
【０２２４】
実施例７
キメラ６Ｈ３抗体およびヒト化６Ｈ３抗体は細胞により内在化される
材料および方法
抗Ｂ７−Ｈ４抗体６Ｈ３のキメラ変異体およびヒト化変異体
以下の実施例のキメラ６Ｈ３（ヒトキメラ６Ｈ３、ｃ６Ｈ３、およびｈｃ６Ｈ３としても参照される）は、マウス軽鎖および重鎖の可変領域（配列番号３および５）と、ヒトＩｇＧ１重鎖およびヒトκ軽鎖からの定常領域と、を含むキメラ６Ｈ３抗体を意味する。表７の軽鎖可変領域および重鎖可変領域の組合せを有する６Ｈ３のヒト化変異体を調製した。以下の実施例では変異体１〜１４（Ｖ１〜Ｖ１４としても参照される）として参照される。
【０２２５】
【表９】
2016509582.tif 000046
【０２２６】
内在化アッセイ
ＥＧ７細胞
ＥＧ７（Ｂ７−Ｈ４陰性細胞）、ＥＧ７．ＩＧ７（Ｂ７−Ｈ４低発現細胞）、およびＥＧ７．ＩＶＢ３（Ｂ７−Ｈ４高発現細胞）内への内在化に関して、ｐＨ感受性発蛍光団ＣｙｐＨＥＲ−５で標識されたキメラ６Ｈ３変異体およびヒト化６Ｈ３変異体を試験した。
【０２２７】
次の条件：４℃、０．１％アジド、３０分間（「非」内在化に有利である）、４℃、３０分間、または３７℃、４時間（内在化に有利である）に従って細胞を処理し、フローサイトメトリーにより解析した。
【０２２８】
６２４ｍｅｌ／ｈＢ７−Ｈ４安定系
また、６２４ｍｅｌ／ｈＢ７−Ｈ４安定細胞系で、キメラ抗Ｂ７−Ｈ４抗体（ｃ２Ｅ１１、ｃ２Ｈ９、ｃ２Ｄ１、ｃ６Ｈ３）およびヒト変異体抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化を調べた。簡潔に述べると、細胞をＣｙｐＨｅｒ５標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体（１０μｇ／ｍｌ）で３０分間パルスし、１回洗浄して非結合プローブを除去し、そして４時間にわたり３７℃でインキュベートした。細胞表面Ｂ７−Ｈ４発現および抗体内在化をフローサイトメトリーにより測定した。
【０２２９】
ＣＴ２６／ｈＢ７−Ｈ４安定細胞系−クローンＥ４Ｆ２
また、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化をＣＴ２６／ｈＢ７−Ｈ４安定細胞系−クローンＥ４Ｆ２で調べた。簡潔に述べると、ＣｙｐＨｅｒ５標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体（２μｇ／ｍｌ）を用いて１００，０００細胞を３７℃で４時間標識した。０．１％アジ化ナトリウムを用いて細胞を氷上で３０分間前処理した。次いで、０．１％アジドを含有するＣｙｐＨｅｒ５標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体を用いてこれらの細胞を４℃で４時間標識をした。インキュベーション時間後、すべての細胞をペレット化して、Ｆｃブロッキング媒体中に再懸濁させ、細胞表面上のＢ７−Ｈ４レベルを測定すべくＰＥ標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体（Ｈ７４）で染色した。次いで、細胞を洗浄して、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ近赤外生体染色色素で染色した。
【０２３０】
マウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）ｍＡｂおよびマウス６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）ｍＡｂ
また、マウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）ｍＡｂおよびマウス６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）ｍＡｂの内在化を含めて、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化を、ＣＴ２６／ｈＢ７−Ｈ４およびＥ．Ｇ７ｏｖａ／ｈＢ７−Ｈ４安定細胞系で調べた。簡潔に述べると、培地中でＣｙｐＨｅｒ５標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体（２μｇ／ｍｌ）を用いて１００Ｋ細胞を３７℃で４時間標識した。標識前、１０μｇマウスＩｇＧを用いて細胞を１０分間Ｆｃレセプターブロックした。次いで、細胞をペレット化し、洗浄し、細胞表面上のＢ７−Ｈ４レベルを測定すべくＰＥ標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体（Ｈ７４）で染色した。最後に、細胞を洗浄し、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ（商標）近赤外生体染色色素で染色し、固定した。
【０２３１】
共焦点顕微鏡を用いた内在化研究
Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂキメラ６Ｈ３、キメラ２Ｅ１１、キメラ２Ｈ９、キメラ２Ｄ１、６Ｈ３ヒト化変異体Ｖ２、Ｖ６、Ｖ７、Ｖ９、Ｖ１２、およびＶ１４を、内在化されると酸性リソソーム区画で最大の蛍光を発するＣｙｐＨｅｒ５Ｅ  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（ｐＨ感受性シアニン染料）で標識した。１μｇ／ｍｌ  ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ標識６Ｈ３、２Ｅ１１、２Ｈ９、２Ｄ１、または６Ｈ３ヒト化変異体Ｖ２、Ｖ６、Ｖ７、Ｖ９、Ｖ１２、およびＶ１４を、種々の時間にわたり、２９３Ｔ．ｈＢ７−Ｈ４またはＢ７−Ｈ４陽性乳癌腫瘍細胞系ＳＫ−ＢＲ−３途にインキュベートし、共焦点蛍光顕微鏡（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｏｐｅｒｅｔｔａ）により内在化をモニターした（データは示されていない）。
【０２３２】
結果
キメラ６Ｈ３は、内在化に有利な染色プロトコル（３７℃、４ｈｒ）の間、ＥＧ７．ＩＧ７（Ｂ７−Ｈ４低発現細胞）およびＥＧ７．ＩＶＢ３（Ｂ７−Ｈ４高発現細胞）の両方で陰性対照を超えるレベルで内在化された。
【０２３３】
キメラ６Ｈ３は、内在化を防止するはずの条件下でさえも、細胞により内在化された。たとえば、キメラ６Ｈ３は、４℃、３０分間（内在化に有利でない条件）でＥＧ７．ＩＶＢ３（Ｂ７−Ｈ４高発現細胞）で陰性対照抗体を超えるレベルで内在化された。
【０２３４】
また、他のキメラ抗Ｂ７−Ｈ４抗体（ｃ２Ｅ１１、ｃ２Ｈ９、ｃ２Ｄ１）は、４℃で３０分間の処理後、ＥＧ７．ＩＧ７（Ｂ７−Ｈ４低発現細胞）および／またはＥＧ７．ＩＶＢ３（Ｂ７−Ｈ４高発現細胞）である程度の内在化を示したが、キメラ６Ｈ３は、最も強くに内在化された（図１４）。
【０２３５】
また、６つのヒト化変異体を細胞内在化アッセイで試験した。６つの変異体はすべて、内在化能を維持した。変異体９は、キメラ６Ｈ３および試験した他の変異体と比較して、内在化の増加を示した（図１５）。
【０２３６】
また、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化を６２４ｍｅｌ／ｈＢ７−Ｈ４安定細胞系で調べた。Ｂ７−Ｈ４の細胞表面発現レベルをフローサイトメトリーにより確証した。６２４ｍｅｌ細胞は、Ｂ７−Ｈ４を発現せず、クローンＢ７は、少量発現し、クローンＢ６は、最も多く発現する。６２４Ｍｅｌ．Ｂ７Ｈ４細胞（クローンＢ６）内へのＣｙｐＨｅｒ５標識キメラ抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂ（ｃ２Ｈ９、ｃ２Ｄ１  ｃ６Ｈ３）の内在化は、陰性対照抗体（抗ＰＤ−１抗体）よりも多かった。内在化の程度は、細胞表面ｈＢ７−Ｈ４発現のレベルと相関した。キメラ抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂのうち、ｃ６Ｈ３が最大の内在化を示した。６２４Ｍｅｌ．Ｂ７Ｈ４細胞（クローンＢ６）内へのＣｙｐＨｅｒ５標識ヒト変異体抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂ（Ｖ２、Ｖ６、Ｖ７、Ｖ９、Ｖ１２、およびＶ１４）の内在化は、ｃ６Ｈ３に類似していた。
【０２３７】
キメラ抗Ｂ７−Ｈ４抗体（ｃ２Ｈ９、ｃ２Ｄ１、ｃ６Ｈ３、およびある程度ｃ２Ｅ１１）は、内在化されたが、陰性対照抗体（抗ＰＤ−１抗体）は、内在化を示さなかった。同様に、標識ヒト変異体抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂ（Ｖ２、Ｖ６、Ｖ７、Ｖ９、Ｖ１２、およびＶ１４）は、内在化されたが、陰性対照抗体は、内在化を示さなかった。内在化の程度は、細胞表面ｈＢ７−Ｈ４発現（図１６）のレベルと相関した。インキュベーション時間後、細胞表面上で利用可能なＢ７−Ｈ４の量は、内在化抗体の量に反比例した。また、抗Ｂ７−Ｈ４抗体（ｃ２Ｈ９、ｃ２Ｄ１、ｃ６Ｈ３、および変異体Ｖ２、Ｖ６、Ｖ７、Ｖ９、Ｖ１２、およびＶ１４）は、４℃＋アジド条件下に内在化されたが、わずかに少ない程度であった（図１６および１７）。これら条件で内在化を大幅に阻害できなかった理由は、不明である。ＣＴ２６親細胞系は、これらの条件下で抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化を示さなかった。
【０２３８】
また、ＣＴ２６／ｈＢ７−Ｈ４およびＥ．Ｇ７ｏｖａ／ｈＢ７−Ｈ４安定細胞系で内在化アッセイを行って、マウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）および６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）ｍＡｂの内在化を６Ｈ３のキメラ６Ｈ３およびヒト化変異体と比較した。抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、両方の細胞系で内在化されたが、陰性対照（抗ＰＤ−１抗体）は、内在化を示さなかった（図１８Ａおよび１８Ｂ）。６Ｈ３．ｍ１および６Ｈ３．ｍ２ａは、同じように内在化する。ヒト化変異体７は、最も強く内在化したが、変異体２、９、および１２は、いくらか少なく内在化する。以上で観測されたように、インキュベーション時間後、細胞表面上で利用可能なＢ７−Ｈ４の量は、一般的には、内在化抗体の量に反比例した。
【０２３９】
共焦点顕微鏡を用いて、６Ｈ３の内在化を個別細胞内の点状蛍光により可視化した。内在化プロセスに一致して、蛍光シグナルは、５時間で形質膜近傍に蓄積したが、２４時間では大きい細胞質領域で蛍光ベシクルの蓄積をはっきり見ることが可能である。
【０２４０】
ＨＥＫ２９３．ｈＢ７Ｈ４細胞と共に５時間インキュベートした後、共焦点顕微鏡を用いて、ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ標識６Ｈ３は、４つのキメラＢ７−Ｈ４ｍＡｂ（２Ｅ１１、２Ｈ９、２Ｄ１、６Ｈ３）のうちで最も良好な内在化能力を示した。
【０２４１】
ＨＥＫ２９３．ｈＢ７Ｈ４細胞と共に５時間インキュベートした後、共焦点顕微鏡を用いて、ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ標識６Ｈ３ヒト化変異体Ｖ２、Ｖ６、およびＶ７は、６つのヒト化６Ｈ３変異体のうちで最も良好な内在化能力を示した。これとは対照的に、ＳＫ−ＢＲ−３細胞と共に５時間インキュベートした後、ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ標識６Ｈ３ヒト化変異体Ｖ６、Ｖ７、およびＶ１４は、６つのヒト化６Ｈ３変異体のうちで最も良好な内在化能力を示した。ヒト化６Ｈ３Ｖ６およびＶ７は、内在化を誘導するトップ２に入る最良の変異体である。
【０２４２】
実施例８
６Ｈ３のキメラ変異体およびヒト化変異体は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を誘導する
材料および方法
ＡＤＣＣアッセイ
エフェクター細胞による標的細胞溶解を媒介する６Ｈ３のキメラ６Ｈ３およびヒト化変異体の能力を試験すべく、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイを設計した。
【０２４３】
標的細胞としてＥＧ７．ｈＢ７−Ｈ４（クローンＩＶＢ３）細胞およびＳＫ−ＢＲ−３細胞を試験した。１１７、１１９、１２１、および１２２として参照される４つの異なる健常ドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をエフェクター細胞として試験した。
【０２４４】
４つの異なるエフェクター対標的比で調べた（たとえば、１００：１、５０：１、および２０：１のＥ：Ｔ比）。
【０２４５】
パイロット実験では、ＥＬ４誘導細胞がＰＢＭＣによる溶解に対してきわめて感受性であることが判明したので、アッセイでは、このバックグラウンドを最小限に抑えるように最適化した。ＥＧ７．ｈＢ７Ｈ４を利用したアッセイでの溶解のためのインキュベーション時間は、４時間であった。ＳＫ−ＢＲ−３細胞を利用したアッセイでの溶解のためのインキュベーション時間は、２０時間であった。
【０２４６】
生体染色により全溶解を測定した。特異的溶解＝１００×（［％死滅］抗Ｂ７−Ｈ４抗体処理−［％死滅］対照ＩｇＧ処理）÷（１００−［％死滅］対照ＩｇＧ処理）。
【０２４７】
結果
キメラ６Ｈ３およびＥＧ７．Ｂ７Ｈ４標的細胞を利用した初期アッセイでは、標的細胞の特異的溶解は、試験したすべての比で４つすべてのドナーで検出された。図１９Ａ〜１９Ｃは、３つの異なるエフェクター細胞：標的細胞比での結果を示している。ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＡＤＣＣ活性に最もよく反映されることから、２０：１を将来的アッセイのために選択した。
【０２４８】
最適化アッセイ条件を利用して、単一濃度（１０ｎｇ／ｍＬ）で６Ｈ３の１４種のヒト化変異体を比較した（図２０）。４つのエフェクター細胞ドナーのうち３つ（１１４、１２０、１２２）で、特異的溶解が実証された。変異体４、５、８、および１１は、最大のＡＤＣＣ活性を示した。試験した１４種の変異体のうち、変異体１１は、最大のＡＤＣＣ活性を呈したが、変異体１４は、最小のＡＤＣＣ活性を呈した。さまざまなドナー／エフェクター細胞との組合せで変異体１１および１４を用いた用量漸増実験により、抗体ＡＤＣＣ活性の相対差がドナー特異的であることが判明した（図２１Ａ〜２１Ｄ）。
【０２４９】
追加のＡＤＣＣアッセイでは、標的細胞としてＳＫ−ＢＲ−３細胞を使用する。ＳＫ−ＢＲ−３細胞は、以上に記載のアッセイで使用されたＥＧ７．Ｂ７Ｈ４細胞よりも良好なｉｎ  ｖｉｖｏ標的発現（膜貫通Ｂ７−Ｈ４）の模倣体であると考えられる。３つの異なるエフェクター細胞：標的細胞比で試験し（２０：１、５０：１、および１００：１）、２つの異なるエフェクター細胞ドナー（１１７および１２０）をキメラ６Ｈ３抗体の用量漸増で試験した。
【０２５０】
両方のＰＢＭＣドナー（１１７および１２０）で観測された全溶解（Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色陽性である標的細胞の％）は、大きかった。（図２２Ａ〜２２Ｂ）アッセイを２０時間行い、高いバックグラウンドにもかかわらず、両方のドナーは、抗体用量依存的に特異的溶解を呈した（図２３Ａ〜２３Ｂ）。両方のドナーで用量依存活性を観測するのに好ましいエフェクター：標的比は、５０：１であると決定された。
【０２５１】
実施例９
６Ｈ３は補体依存性細胞傷害を誘導しない
材料および方法
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する６Ｈ３抗体の能力を試験すべく、アッセイを設計した。標的としてＳＫ−ＢＲ−３細胞（ＡＴＣＣ）を利用した。６Ｈ３または対照タンパク質および代謝インジケーター色素ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の存在下で、標的細胞をニートなまたは希釈された正常ヒト血清補体（Ｑｕｉｄｅｌ）と混合した。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（ヒトＩｇＧ１抗体でもある）を陽性対照として使用し、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を陰性対照として使用した。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅの相対蛍光強度（生存細胞の数に比例する）を測定した。
【０２５２】
結果
ＳＫ−ＢＲ−３細胞は、補体耐性因子（たとえば、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９）を発現するので、きわめて多量の補体を利用した。ニート、１：２、および１：５希釈の補体を用いて、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）媒介死滅を観測した。試験したいずれの条件下でも、ＣＤＣ活性は、ｃ６Ｈ３で観測されなかった（図２４Ａ〜２４Ｂ）。
【０２５３】
実施例１０
６Ｈ３はＢ７−Ｈ４発現する細胞のＣＴＬ媒介溶解を増強する
材料および方法
ＣＴＬ媒介溶解アッセイでは、抗原性ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号３０）ペプチドでパルスされＩＬ−２が追加されたＡＰＣの存在下でｉｎ  ｖｉｔｒｏで感作されたＯＴ−１  ＴＣＲトランスジェニックＣＤ８Ｔ細胞を利用する。次いで、蛍光標識標的細胞を用いてさまざまなエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）でＣＴＬを共インキュベートする。
【０２５４】
ＥＧ７細胞系は、ＯＶＡ誘導ペプチドを提示しないので、ＥＧ７またはＥＧ７．ｈＢ７−Ｈ４細胞をペプチドでパルスし、スクシンイミジルエステルＣＦＳＥで標識した。抗原陰性（Ａｇ−）ＥＧ７細胞をＤＤＡＯで標識し、抗原陽性（Ａｇ＋）標的と１：１の比で混合した。
【０２５５】
４時間インキュベートした後、細胞をＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色で染色し、生存可能標的細胞を定量した。ＣＦＳＥ（Ａｇ＋）とＤＤＡＯ（Ａｇ−）標的との比の変化によりＣＴＬ媒介溶解を決定する。
【０２５６】
結果
Ｂ７−Ｈ４発現細胞のＣＴＬ媒介溶解に及ぼすキメラ６Ｈ３抗体のさまざまな濃度の影響をさまざまなエフェクター：標的細胞比で調べた。図２５に示されるように、Ａｇ−と比較してＡｇ＋標的の頻度は、Ｅ：Ｔ比の増加に伴って減少する。
【０２５７】
Ａｇ＋標的とＡｇ−標的との開始比により生存を調整することにより、特異的溶解を決定した。ヒトキメラ６Ｈ３抗体は、試験した両方の濃度でＥＧ７．Ｂ７−Ｈ４細胞の特異的溶解を増加させた（図２６）。さらに、キメラ６Ｈ３は、ＣＴＬの不在下で対照ＩｇＧと比較してＢ７−Ｈ４＋細胞の溶解を誘導した（図２６、最後の４つの棒）。
【０２５８】
実施例１１
６Ｈ３はルイス肺癌同系腫瘍モデルで腫瘍体積を低減し生存率を増加させる
材料および方法
ルイス肺癌（ＬＬＣ）細胞を２７Ｂｌ６マウスに接種した。腫瘍を有するマウス（１５０〜２５０ｍｍ３）を選択し、８日目に３つのグループ（９マウス／グループ）に分けた。マウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）ｍＡｂまたはマウス６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）ｍＡｂまたは配合緩衝液を用いて、マウスを１０ｍｇ／ｋｇで毎週２回処理した（合計５回の投与）。腫瘍サイズを毎週３回モニターした。
【０２５９】
結果
エフェクター機能の可能性があるまたはない癌モデルで抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂの有効性を評価すべく、実験を設計した。ルイス肺癌（ＬＬＣ）モデルを選択した。その理由は、部分的には、このモデルでＢ７−Ｈ４発現がｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍および腫瘍関連マクロファージで観測されたことにある。確立されたＬＬＣ細胞腫瘍を有するマウスをマウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）またはマウス６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）で処理し、腫瘍マウス経時的にモニターした。
【０２６０】
１８日目、配合緩衝液で処理されたマウスは、ＬＬＣ腫瘍の潰瘍化が観測され、その創傷は、腫瘍とほぼ同程度であった。６Ｈ３．ｍ１で処理されたマウスは、配合緩衝液処理グループに類似しているように思われた。６Ｈ３．２ｍａで処理されたマウスは、より小さい創傷を有し、閉鎖され始めていた。６Ｈ３．ｍ２ａは、腫瘍増殖を減速し、かつ生存期を増加させることが観測された間（ｐ＝０．０１５）（図２７Ａおよび２７Ｂ）。結果は、第２のアッセイで確認された（図２８Ａおよび２８Ｂ）。
【０２６１】
実施例１２
ＣＴ２６．Ｂ７Ｈ４同種同系ネズミ腫瘍モデル
材料および方法
０日目、尾静脈注射を介してマウスにＣＴ２６−Ｂ７Ｈ４（１Ｅ０５）を接種し、１０日目または１４日目、１０ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇのマウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）またはマウス６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）による処理を開始した。２４日目、マウスを安楽死させ、肺中の腫瘍結節の数およびサイズを記録した。すべての実験グループから肺を摘出し、定着液中に貯蔵した。実験計画およびスケジュールは、以下に示される。各グループあたり１２〜１３匹のマウスで毎週２回投与した。
【０２６２】
グループ１、配合緩衝液（１２匹のマウス）
【０２６３】
グループ２、６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ、１０日目に１０ｍｇ／ｋｇ（１２匹のマウス）
【０２６４】
グループ３、６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ、１０日目に１ｍｇ／ｋｇ（１２匹のマウス）
【０２６５】
グループ４、６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ、１４日目に１０ｍｇ／ｋｇ（１３匹のマウス）
【０２６６】
グループ５、６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ、１４日目に１ｍｇ／ｋｇ（１３匹のマウス）
【０２６７】
結果
ＣＴ２６−Ｂ７Ｈ４転移性肺腫瘍モデルで６Ｈ３抗体の有効性を試験した。処理の不在下での腫瘍の増殖速度を図２９Ａに経時的に示す。実験アッセイでは、０日目、尾静脈注射を介してマウスにＣＴ２６−Ｂ７Ｈ４（１Ｅ０５）を接種し、１０日目または１４日目、１０ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇのマウス６Ｈ３．ｍ１（マウスＩｇＧ１）またはマウス６Ｈ３．ｍ２ａ（マウスＩｇＧ２ａ）による処理を開始した。一般的には、配合緩衝液を与えたマウスが６％体重減少し、２４日目に病状を示したこと以外は、体重の有意な変化はなかった。転移腫瘍の数は、６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ処理で有意に減少された（ｐ＜０．００１）（図２９Ｂ）。
【０２６８】
実施例１３
毒性の評価
材料および方法
７〜９週齢、８匹／グループのＢＡＬＢ／ｃマウスを、毎週１回１ヶ月間（５回投与）、１００ｍｇ／ｋｇの投与量の６Ｈ３．ｍＩｇＧ１、６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ、または配合緩衝液で処理した。４回目の投与後、血中グルコースを試験した。
【０２６９】
ＰＫ（４回目の投与後のピークおよびトラフ）の初期評価のために、血清を採取した。Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ融合タンパク質を用いて抗体を血清から捕獲し、ビオチン抗マウスＩｇＧ１（６Ｈ３．ｍＩｇＧ１）またはＩｇＧ２ａ（６Ｈ３．ｍＩｇＧ２ａ）で検出し、ユウロピウム−ストレプトアビジンで検出した。
【０２７０】
病理組織診断のために次の器官を採取した。心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓（とくに糸球体）、腸（回腸、十二指腸、空腸、盲腸、結腸）、子宮、唾液腺、胆嚢、および膵臓（とくにランゲルハンス島に注目）。
【０２７１】
結果
免疫エフェクター機能の可能性があるものとないものとを対比して、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の毒性の予備評価を提供すべく、毒性学研究を行った。すべてのマウスが予定屠殺まで生き残った。血糖値は、影響を受けなかった（図３０）。試験品に関連付けられる毒性作用は、検出されなかった。４回目の投与後、ピークおよびトラフの抗体濃度を評価した。高い血清中濃度が確認され、ＣｍａｘとＣｍｉｎとの間に中程度の差が観測された（図３１および３２Ａ〜３２Ｂ）。
【０２７２】
試験品に関連付けられる顕微鏡的知見は、病理組織学的解析時には認められなかった。観測された顕微鏡的知見は、偶発的であり、マウスのこの株および年齢で一般に観測される性質であり、かつ／または配合緩衝液が投与された動物および６Ｈ３．ｍ１および６Ｈ３．ｍ２ａが投与された動物と類似の発生率および重症度である考えられるので、６Ｈ３．ｍ１および６Ｈ３．ｍ２ａの投与と無関係であると考えられた。腎臓糸球体または膵島では、グループ間の差は認められなかった。
【０２７３】
肺の一部および腸セクションの多くが、自己分解の証拠を示した。評価できないわずかな自己分解組織および評価に利用できないわずかな組織は、６Ｈ３．ｍ１および６Ｈ３．ｍ２ａの投与に関係する顕微鏡的変化の評価に影響を及ぼさないと考えられた。
【０２７４】
実施例１４
６Ｈ３のヒト化変異体の結合の特徴付け
材料および方法
ＰＢＳ中に希釈された１００μｌの１μｇ／ｍｌ  Ｂ７−Ｈ４ＥＣＤｈｉｓタグ付きタンパク質（Ｓｉｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を、平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ９０１７）上に４℃で一晩固定した。プレートをＰＢＳ＋０．１％ＰＳ−２０で２回洗浄し、そして室温で１時間かけて２００μｌ／ウェルＰＢＳ１０％ＦＢＳでブロックした。ＰＢＳ１０％ＦＢＳ中に希釈された１００μｌのキメラ６Ｈ３および１４種の選択された６Ｈ３ヒト化変異体を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、１００μｌの１μｇ／ｍｌ抗ヒトＩｇＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ）を各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキュベートした。プレートを６回洗浄し、１００μｌのＴＭＢ培地（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）を各ウェルに５〜１５分間添加した。１００μｌの停止液（０．１Ｍ硫酸）を各ウェルに添加した。プレートをＡｂｓｏｒｂａｎｃｅ  ４５０ｎｍ  ｂｙ  ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０４  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
【０２７５】
結果
ヒトキメラ６Ｈ３と比較してＢ７−Ｈ４細胞外ドメインへのヒト化変異体６Ｈ３抗体の結合を特徴付けるべく、ＥＬＩＳＡアッセイを設計した。
【０２７６】
結果は、図３３に示される。また、表８は、１４種の試験したヒト化変異体がヒトキメラ６Ｈ３と比較してヒトＢ７−Ｈ４への±２倍の親和性を維持することを示している。
【０２７７】
【表１０】
2016509582.tif 000047
【０２７８】
実施例１５
ヒト化６Ｈ３の競合結合の特徴付け
材料および方法
０．５ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍＬの範囲内で１４種のヒト化６Ｈ３抗体変異体の１２点３倍希釈系列を調製した。５ｎｇ／ｍｌでビオチン化マウス抗ヒトＢ７−Ｈ４６Ｈ３（軽鎖可変領域および重鎖可変領域それぞれに対して配列番号３および５）を含有するアッセイ希釈液中に希釈を行った。室温で１時間にわたりＢ７−Ｈ４−Ｉｇ被覆アッセイプレート（２００ｎｇ／ウェル）に抗体を結合させ、ストレプトアビジンＨＲＰで検出した。
【０２７９】
Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇは、以下の配列を有する融合タンパク質である。
【化３７】
2016509582.tif 000048
【０２８０】
結果
１４種のヒト化６Ｈ３抗体変異体（Ｖ１−Ｖ１４）で競合ＥＬＩＳＡアッセイを行った。競合結合の利点は、比較されるｍＡｂが標識されずに直接検出されることであり、したがって、標識や二次抗体への結合の差が相対親和性に影響を及ぼすおそれがない。
【０２８１】
表９ならびに図３４Ａおよび３４Ｂに示されるように、変異体Ｖ１およびＶ８は、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇへの結合親和性を顕著に低減した。他の変異体はすべて、抗体６Ｈ３のヒトキメラ形態の１．５倍以内のＥＣ５０値を有する。これらの知見は、変異体１および８が同様にＢ７−Ｈ４−Ｉｇへの乏しい結合親和性を示した非競合的結果と一致する。他の変異体はすべて、キメラ６Ｈ３の２倍以内である。
【０２８２】
【表１１】
2016509582.tif 000049
【０２８３】
実施例１６
ヒト化６Ｈ３の飽和結合の特徴付け
材料および方法
６Ｈ３のキメラ６Ｈ３  ｍＡｂおよびヒト化変異体を用いて、６２４ｍｅｌ／Ｂ７−Ｈ４細胞で飽和度結合実験を行った。簡潔に述べると、Ｂ７−Ｈ４内在化を阻害するために５０，０００細胞を０．１％アジドにより氷上で３０分間前処理し、次いで、ビオチン化抗Ｂ７−Ｈ４ｍＡｂで３０分間染色した。２００μｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍｌの範囲内でｍＡｂを１２点３倍希釈系列に希釈した。細胞をストレプトアビジンＰＥで１０分間染色し、洗浄し、固定し、フローサイトメトリーにより解析した。
【０２８４】
結果
図３５Ａ〜３５Ｂは、生データ（図３５Ａ）およびバックグラウンド除去データ（図３５Ｂ）の結合曲線である。バックグラウンド除去データは、抗ＰＤ−１抗体からの平均シグナル（２４５ＭＦＩ）をすべての他の点から引き算することにより生成された。引き算された値を用いて、ｋｄおよびＢｍａｘを決定した。抗体は、Ｋｄ値に基づいて２つのグループに分類されるように思われる（表１０）。
【０２８５】
【表１２】
2016509582.tif 000050
【０２８６】
実施例１７
内在化は結合およびＫｄ推定に影響を及ぼす
材料および方法
各染色に対して、２０万個のＨＥＫ２９３．ｈＢ７Ｈ４トランスフェクタンを１００μｌのフローサイトメトリー緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）中に再懸濁させた。キメラ６Ｈ３および１４種のヒト化変異体の段階希釈液０、０．１ｎｇ、０．３ｎｇ、１ｎｇ、３ｎｇ、１０ｎｇ、３０ｎｇ、１００ｎｇ、３００ｎｇ、１μｇ、３μｇ、および１０μｇを細胞に添加し、４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２ｍｌフローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄し、１００μｌフローサイトメトリー緩衝液中に再懸濁させた。１μｌの抗ｈＩｇＰＥ二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を添加し、細胞と共に１５分間インキュベートした。次いで、サンプルを洗浄し、１００μｌフローサイトメトリー緩衝液中に再懸濁させた。プレート方式でＢＤ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてフローサイトメトリーデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアにより解析した。次いで、染色データ（ＭＦＩ）をＰｒｉｓｍ５ソフトウェアに入力し、結合曲線を作成した。片側部位特異的結合アルゴリズムを用いた曲線当てはめにより、各変異体の個別のＫＤを計算する。
【０２８７】
結果
Ｂ７−Ｈ４を発現するＨＥＫ２９３トランスフェクタント細胞への６Ｈ３のヒト化変異体の結合動態を決定すべく、アッセイを設計した。結果を以下の表１１および図３６に示す。抗体の細胞内在化が細胞結合およびＫｄ推定に影響を及ぼすことが、結果から示唆される。
【０２８８】
【表１３】
2016509582.tif 000051
【０２８９】
実施例１８
６Ｈ３はマウスＢ７−Ｈ４に結合する
材料および方法
ＰＢＳ中に希釈された１００μｌの１μｇ／ｍｌ  Ｂ７−Ｈ４ＥＣＤｍＩｇＧ２ａＦｃ融合タンパク質を、平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ９０１７）上に４℃で一晩固定した。プレートをＰＢＳ＋０．１％ＰＳ−２０で２回洗浄し、そして室温で１時間かけて２００μｌ／ウェルＰＢＳ１０％ＦＢＳでブロックした。ＰＢＳ１０％ＦＢＳ中に希釈された１００μｌのキメラ６Ｈ３および１４種の選択された６Ｈ３ヒト化変異体を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、１００μｌの１μｇ／ｍｌ抗ヒトＩｇＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ）を各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキュベートした。プレートを６回洗浄し、１００μｌのＴＭＢ培地（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）を各ウェルに５〜１５分間添加した。１００μｌの停止液（０．１Ｍ硫酸）を各ウェルに添加した。プレートをＡｂｓｏｒｂａｎｃｅ  ４５０ｎｍ  ｂｙ  ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０４  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
【０２９０】
結果
マウスＢ７−Ｈ４−ｍＩｇ融合タンパク質への結合能力に基づいて６Ｈ３のヒト化変異体がマウスＢ７−Ｈ４に結合するかを決定すべく、ＥＬＩＳＡアッセイを設計した。結果を以下の表１２および図３７に示す。試験した１４種の変異体はすべて、ヒトキメラ６Ｈ３結合と比較してマウスＢ７−Ｈ４への±２倍の親和性を維持した。これらの結果から、細胞および／または動物がマウスＢ７−Ｈ４タンパク質を発現するネズミモデル系を用いて、６Ｈ３のヒト変異体の機能分析を行いうることが示唆される。
【０２９１】
【表１４】
2016509582.tif 000052
【０２９２】
実施例１９
６Ｈ３はＢ７−Ｈ４−Ｉｇの作用を逆転する
材料および方法
免疫化後８日目、マウスリンパ節（ＬＮ）をＰＬＰ１３９−１５１免疫ＳＪＬマウスから採取した。１０μｇ／ｍＬのＰＬＰ１３９−１５１および１０μｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４Ｉｇ（配列番号３１）または対照Ｉｇと、さまざまな濃度の６Ｈ３のヒト化変異体（１０、３．３３、１．１１、および０μｇ／ｍＬ）と、を用いて、ＬＮ  Ｔ細胞を刺激した。Ｔ細胞増殖評価のために培養の最後の４８時間の間、［３Ｈ］−チミジンを培養物中に添加した。ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、およびＩＬ−１０の産生に関して、調整培養培地を解析した。
【０２９３】
結果
Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇによる細胞の処理に及ぼす６Ｈ３のヒト化変異体の影響を試験すべく、アッセイを設計した。図３８Ａ〜３８Ｄは、アッセイの結果を示している。６Ｈ３またはヒト化変異体２、６、７、１１、１２、もしくは１４と共にＢ７−Ｈ４−Ｉｇ処理細胞をインキュベートすると、ＩＬ−１７（図３８Ａ）やＩＦＮγ（図３８Ｂ）などの炎症誘発性サイトカインの分泌が増加し、およびは、細胞増殖（［３Ｈ］−チミジン取込み）が増加し（図３８Ｃ）、かつＩＬ−１０（図３８Ｄ）などの抗炎症性サイトカインの分泌が低減する。これらの結果から、６Ｈ３およびヒト化変異体は、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ媒介免疫阻害反応を逆転することが示唆される。
【０２９４】
本明細書に挙げられた出版物および特許はすべて、あたかもそれぞれ個々の出版物または特許出願の全体が具体的かつ個別的に明示されて参照により組み込まれたのと同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。本発明をその特定の実施形態と関連させて説明してきたが、当然のことながら、さらなる変更が可能であり、本出願は、一般に本発明の原理に従った本発明の変形、使用、または調整を包含することが意図されており、また、本発明の関連する技術の範囲内の公知または慣用の規範に含まれかつ以上に示された本質的特徴に適用可能である本開示からの逸脱を包含する。
【図１Ａ】
2016509582.tif 000053
【図１Ｂ】
2016509582.tif 000054
【図２Ａ−２Ｂ】
2016509582.tif 000055
【図３Ａ−３Ｂ】
2016509582.tif 000056
【図３Ｃ−３Ｄ】
2016509582.tif 000057
【図４Ａ−４Ｂ】
2016509582.tif 000058
【図４Ｃ−４Ｄ】
2016509582.tif 000059
【図４Ｅ】
2016509582.tif 000060
【図４Ｆ】
2016509582.tif 000061
【図４Ｇ】
2016509582.tif 000062
【図４Ｈ】
2016509582.tif 000063
【図４Ｉ】
2016509582.tif 000064
【図５】
2016509582.tif 000065
【図６】
2016509582.tif 000066
【図７】
2016509582.tif 000067
【図８Ａ−８Ｂ】
2016509582.tif 000068
【図８Ｃ】
2016509582.tif 000069
【図９】
2016509582.tif 000070
【図１０Ａ−１０Ｂ】
2016509582.tif 000071
【図１０Ｃ−１０Ｄ】
2016509582.tif 000072
【図１０Ｅ−１０Ｆ】
2016509582.tif 000073
【図１１Ａ−１１Ｂ】
2016509582.tif 000074
【図１２Ａ−１２Ｂ】
2016509582.tif 000075
【図１３Ａ】
2016509582.tif 000076
【図１３Ｂ】
2016509582.tif 000077
【図１３Ｃ】
2016509582.tif 000078
【図１４】
2016509582.tif 000079
【図１５】
2016509582.tif 000080
【図１６】
2016509582.tif 000081
【図１７】
2016509582.tif 000082
【図１８Ａ−１８Ｂ】
2016509582.tif 000083
【図１９Ａ−１９Ｃ】
2016509582.tif 000084
【図２０】
2016509582.tif 000085
【図２１Ａ−２１Ｄ】
2016509582.tif 000086
【図２２Ａ−２２Ｂ】
2016509582.tif 000087
【図２３Ａ−２３Ｂ】
2016509582.tif 000088
【図２４Ａ−２４Ｂ】
2016509582.tif 000089
【図２５】
2016509582.tif 000090
【図２６】
2016509582.tif 000091
【図２７Ａ−２７Ｂ】
2016509582.tif 000092
【図２８Ａ−２８Ｂ】
2016509582.tif 000093
【図２９Ａ−２９Ｂ】
2016509582.tif 000094
【図３０】
2016509582.tif 000095
【図３１】
2016509582.tif 000096
【図３２Ａ】
2016509582.tif 000097
【図３２Ｂ】
2016509582.tif 000098
【図３３】
2016509582.tif 000099
【図３４Ａ】
2016509582.tif 000100
【図３４Ｂ】
2016509582.tif 000101
【図３５Ａ−３５Ｂ】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８Ａ−３８Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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