(57)【要約】改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、完全長又は野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在する１つ又は複数の酸性のＣ末端アミノ酸を欠いており、かつＮ末端又はＮ末端付近のアミノ酸配列Ｃ‐Ｓ‐Ｃを保持しつつ１つ又は複数のＮ末端アミノ酸をもさらに欠いていてもよい。改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、対象者の炎症を軽減又は緩和するための方法及び組成物において有用となりうる。炎症は、消化管の疾患、例えば慢性胃炎又は炎症性腸疾患などであって例えばクローン病若しくは潰瘍性大腸炎など、又は呼吸器系の疾患、例えば喘息、気腫、慢性気管支炎及び慢性閉塞性肺疾患などに関連するものであってよい。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
完全長若しくは野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在するＮ末端及びＣ末端のうち少なくともいずれか一方の１つ又は複数のアミノ酸を欠いている改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体。
【請求項２】
完全長若しくは野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在する複数のＣ末端アミノ酸をさらに欠いており、前記複数のＣ末端アミノ酸は１つ又は複数の酸性アミノ酸を含む、請求項１に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体。
【請求項３】
Ｎ末端又はＮ末端付近にアミノ酸配列Ｃ‐Ｘ‐Ｃを含む、請求項１又は請求項２に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体。
【請求項４】
配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号５に記されたアミノ酸配列、又はそれらと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１、請求項２又は請求項３に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体。
【請求項５】
対象者に投与されると炎症の予防、軽減及び緩和のうち少なくともいずれかを行うことができる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質。
【請求項６】
治療上有効な量の、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体を、薬学的に許容される賦形剤の担体希釈剤と共に含む医薬組成物。
【請求項７】
少なくとも１つの追加の作用薬をさらに含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
対象者の炎症を軽減又は緩和するための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより炎症を軽減又は緩和するステップを含む方法。
【請求項１０】
前記炎症は、対象者における疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに、関連しているか又は続発するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは基準療法に対して抵抗性である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記基準療法は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの基準作用薬の投与を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも当初は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体は基準療法とともに補助的に投与される、請求項１１又は請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも当初は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体は、総用量よりも少なく投与される少なくとも１つの基準作用薬とともに補助的に投与される、請求項１１又は請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
対象者の炎症を予防するための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより炎症を予防するステップを含む方法。
【請求項１６】
前記炎症は、対象者における疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに、関連しているか又は続発するものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは、免疫学的な疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかである、請求項１０〜１４及び請求項１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫学的な疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは、アジソン病、強直性脊椎炎、セリアック病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、クローン病、脱髄性ニューロパチー、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン‐バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、インスリン依存型糖尿病（１型）、若年性関節炎、川崎症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋梗塞後症候群、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、特発性肺線維症、ライター症候群、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、潰瘍性大腸炎、血管炎、白斑、及びウェゲナー肉芽腫症からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記疾患は消化管の疾患である、請求項１０〜１４及び請求項１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記疾患は慢性胃炎又は炎症性腸疾患である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記炎症性腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記疾患は呼吸器系の疾患である、請求項１０〜１４及び請求項１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患は、喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
対象者の炎症性腸疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより炎症性腸疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うステップを含む方法。
【請求項２５】
前記炎症性腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
対象者の呼吸器系の疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより呼吸器系の疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うステップを含む方法。
【請求項２７】
前記呼吸器系の疾患は、喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
少なくとも１つの追加の作用薬を対象者に投与するステップをさらに含む、請求項９〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象者は哺乳動物である、請求項９〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象者はヒトである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体をコードする単離核酸。
【請求項３３】
請求項３２に記載の単離核酸を含む遺伝子構築物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の遺伝子構築物を含む宿主細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改変型抗炎症性タンパク質及び炎症を治療するための該タンパク質の使用に関する。より詳しくは、本発明は、炎症の軽減、緩和及び／又は予防を行うための改変型の鉤虫タンパク質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、知覚された傷害又は脅威に応答して免疫系によって仕掛けられる非特異性の反応である。炎症は先天性の防御的な応答であり、より正確に条件を合わせて行われる免疫系の適応的な応答とは区別される。炎症は、発現はより緩徐であるが局所的傷害を引き起こしている場合のある病原体のような有害物をより正確に標的とする、免疫系の適応的な応答と、協調的に働くことができる。
【０００３】
感染に関連している一方、炎症は、多くの種類の傷害、例えば物理的な外傷、熱傷（例えば放射線、熱又は腐食性材料によるもの）、化学性刺激物又は微粒子性刺激物、細菌性又はウイルス性の病原体、及び局所酸素欠乏（虚血）などに応答して生じる。炎症は自己免疫性疾患及びアレルギー反応にも関連している。炎症は、発赤、熱感、腫脹、及び疼痛の古典的症状を含み、炎症を起こした器官又は組織の機能低下を伴う場合がある。
【０００４】
炎症を治療するための数多くの方法が知られているが、それらはいずれも、特に広範囲にわたる効力に関しては限界がある。よって、様々な原因に関連した炎症の軽減、緩和及び／又は予防を行うための新たな方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、炎症及び／又は炎症に関連した疾患又は状態の、治療及び／又は予防を行うための方法及び組成物に関する。
広くは、本発明は、炎症及び／又は炎症に関連した疾患又は状態、例えば喘息及び／又は炎症性腸疾患などの、軽減、緩和及び／又は予防を行うために、１つ以上の改変型タンパク質であって、鉤虫、例えば限定するものではないがイヌ鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から誘導可能又は入手可能なタンパク質を、使用することに関する。
【０００６】
１つの態様では、本発明は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質であって、完全長又は野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在するＮ末端及び／又はＣ末端の１つ以上のアミノ酸を欠いている、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質を提供する。
【０００７】
適切には、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、Ｎ末端又はＮ末端付近にアミノ酸配列Ｃ‐Ｘ‐Ｃを有する。
適切には、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、対象者に投与されると炎症の予防、軽減及び／又は緩和を行うことができる。
【０００８】
１つの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、配列番号１に記されたアミノ酸配列、又は該配列に少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。
１つの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、配列番号２に記されたアミノ酸配列、又は該配列に少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。
【０００９】
１つの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、配列番号４に記されたアミノ酸配列、又は該配列に少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。
１つの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、配列番号５に記されたアミノ酸配列、又は該配列に少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
この態様はさらに、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のフラグメント、バリアント及び誘導体も提供する。
別の態様では、本発明は、対象者の炎症を軽減又は緩和する方法であって、治療上有効な量の、最初に述べた態様の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（そのフラグメント、バリアント及び誘導体を含む）を対象者に投与することにより炎症を軽減又は緩和するステップを含む方法を提供する。
【００１１】
１つの実施形態では、この態様は、少なくとも１つの追加の作用薬を対象者に投与するステップをさらに含む。
適切には、上記の実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、炎症は、対象者における疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれか、特に免疫学的な疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに、関連しているか又は続発するものである。
【００１３】
ある実施形態では、疾患は消化管又は呼吸器系の疾患である。
別の実施形態では、疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは基準療法に対して抵抗性である。
【００１４】
適切には、上記の実施形態によれば、基準療法は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの基準作用薬の投与を含む。
【００１５】
さらに別の態様では、本発明は、対象者の炎症を予防する方法であって、治療上有効な量の、最初に述べた態様の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（そのフラグメント、バリアント及び誘導体を含む）を対象者に投与することにより炎症を予防するステップを含む方法を提供する。
【００１６】
１つの実施形態では、この態様は、少なくとも１つの追加の作用薬を対象者に投与するステップをさらに含む。
適切には、この実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１７】
さらになお別の態様では、本発明は、対象者の炎症性腸疾患の予防及び／又は治療を行うための方法であって、治療上有効な量の、最初に述べた態様の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（そのフラグメント、バリアント及び誘導体を含む）を対象者に投与することにより炎症性腸疾患の予防及び／又は治療を行うステップを含む方法を提供する。
【００１８】
１つの実施形態では、この態様は、少なくとも１つの追加の作用薬を対象者に投与するステップをさらに含む。
適切には、この実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１９】
さらなる態様では、本発明は、対象者の呼吸器系の疾患の予防及び／又は治療を行うための方法であって、治療上有効な量の、最初に述べた態様の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（そのフラグメント、バリアント及び誘導体を含む）を対象者に投与することにより呼吸器系の疾患の予防及び／又は治療を行うステップを含む方法を提供する。
【００２０】
適切には、呼吸器系の疾患は、喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。好ましくは、呼吸器系の疾患は喘息である。
１つの実施形態では、この態様は、少なくとも１つの追加の作用薬を対象者に投与するステップをさらに含む。
【００２１】
適切には、上記の実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２２】
好ましくは、対象者は哺乳動物である。
より好ましくは、対象者はヒトである。
本発明のさらなる態様は、治療上有効な量の、最初に述べた態様の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（そのフラグメント、バリアント及び誘導体を含む）を、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と共に含む医薬組成物を提供する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は少なくとも１つの追加の作用薬をさらに含むことができる。
少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択されうる。
【００２４】
適切には、医薬組成物は、炎症の予防又は治療を行うためのもの、及び／又は、炎症に関連した疾患又は状態の予防又は治療のためのものである。
本発明の一層さらなる態様は、最初に述べた態様の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（そのフラグメント、バリアント及び誘導体を含む）をコードする単離核酸を提供する。
【００２５】
本発明のさらになお別の態様は、前述の態様の単離核酸を含む遺伝子構築物を提供する。
本発明のまた別の態様は、前述の態様の遺伝子構築物を含む宿主細胞を提供する。
【００２６】
本明細書全体にわたって、文脈がそうでないことを必要としないかぎり、単語「〜を含む」及び「〜を含み」は、明示された整数又は整数群を含むが任意の他の整数又は整数群を排除するものではないことを意味することが理解されよう。
【００２７】
本明細書中で使用されるように、不定冠詞「１つの」は１個の実体を指す場合もあれば複数の実体（例えばタンパク質）を指す場合もあり、単一の実体に限定されるものと解釈又は理解されてはならない。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｎ末端部分及びＣ末端部分）のアミノ酸配列（配列番号１）並びにヌクレオチド配列（配列番号３）。ベクター由来のアミノ酸配列及びヌクレオチド配列は太字で表されており、制限酵素切断部位に由来するアミノ酸配列及びヌクレオチド配列には二重下線が付されている。配列番号３のヌクレオチオド配列には単下線が付されている。
【図２】（ｉ）改変型Ａｃ‐ＡＩＰ‐２（Ｃ末端部分、配列番号２）；（ｉｉ）改変型Ａｃ‐ＡＩＰ‐２Ｑ４８（Ｃ末端部分、Ｎ‐グリカン突然変異体、配列番号４）；（ｉｉｉ）改変型Ａｃ‐ＡＴＰ‐２（Ｎ末端部分及びＣ末端部分、配列番号１）；並びに（ｉｖ）改変型Ａｃ‐ＡＩＰ‐２（Ｎ末端部分及びＣ末端部分、Ｎ‐グリカン突然変異体、配列番号５）のアミノ酸配列。ベクター由来のアミノ酸配列は太字で表されており、制限酵素切断部位に由来するアミノ酸配列には二重下線が付されている。Ａｃ‐ＡＩＰ‐２のアミノ酸配列（すなわち配列番号１、２、４及び５）には単下線が付されている。
【図３】精製された組換えの天然型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２及び改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（配列番号１）はＴＮＢＳで誘発される体重減少を防ぐ。
【図４】精製された組換えの天然型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２及び改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（配列番号１）はＴＮＢＳで誘発される結腸の病変を防ぐ。
【図５】鉤虫の組換えＡｃ‐ＡＩＰ‐２は、マウスにおいてＯＶＡで誘発される気道過敏性、肺の炎症、粘液産生及びコラーゲン沈着を抑制する。（Ａ）実験手順の概略を表す図。（Ｂ）肺の切片は、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）又はマッソントリクロームで染色された。（Ｃ）メタコリンの用量増加に応答したレジスタンス及びコンプライアンスを測定する侵襲的プレチスモグラフィによって評価された肺機能。（Ｄ）気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中の好酸球（Ｅ）及びリンパ球（Ｌ）の頻度は、フローサイトメトリーによって評価された。（Ｅ）肺におけるインターロイキン‐５（ＩＬ‐５）、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１３及びＩＬ‐１７Ａの濃度。（Ｆ）ＯＶＡ特異的な血清中免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅ及びＩｇＧ２ａのレベル。結果は、５回の独立した実験の平均を表す。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１。
【図６】ＡＩＰ‐２は主にＣＤ１０３＋樹状細胞（ＤＣ）によって捕捉され、ＯＶＡで誘発された炎症の抑制にとって重要なＣＣＲ９＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を誘導することを示す図。（Ａ〜Ｃ）マウスを、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）（ＡＦ）‐６４７で標識されたＡｃ‐ＡＩＰ‐２又はＰＢＳを用いて５日間処置した。（Ａ）腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）におけるＡＩＰ‐２‐ＡＦ‐６４７＋細胞の頻度。（Ｂ）ＭＬＮにおけるＡＩＰ‐２を捕捉したＣＤ１１ｃ＋細胞のフローサイトメトリー解析。（Ｃ）ＡＩＰ‐２又はビヒクルで処置されたマウスにおけるＭＬＮのＤＣ亜集団の増加。（Ｄ、Ｅ）マウスを、ＡＩＰ‐２又はビヒクルで５日間毎日処置した。表示された組織を収集し、抗ＣＤ４ｍＡｂ、抗ＣＤ２５ｍＡｂ、抗Ｆｏｘｐ３ｍＡｂ及び抗ＣＣＲ９ｍＡｂで染色し、フローサイトメトリーにより解析した。（Ｄ）ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の中のＦｏｘｐ３＋細胞の頻度。（Ｅ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ集団の中のＣＣＲ９を発現する細胞の頻度。（Ｆ）ジフテリア毒素（ＤＴ）又はＰＢＳで処理したＤＥＲＥＧマウスを用いた実験手順の概略を表す図。（Ｇ）フローサイトメトリーによる気管支肺胞洗浄液の細胞解析。（Ｈ）肺におけるインターロイキン（ＩＬ）‐５及びＩＬ‐１３の濃度。（Ｉ）血清中のＯＶＡ特異的な免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅ及びＩｇＧ２ａのレベル。結果は、３回の独立した実験の平均を表す。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１。
【図７】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２で誘導された腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）由来の調節性Ｔ細胞は、ＯＶＡで誘発された肺の炎症からの保護のために重要である。（Ａ）ＭＬＮ切除の実験手法の概略を表す図。（Ｂ、Ｃ）表示された組織を収集し、抗ＣＤ４ｍＡｂ、抗ＣＤ２５ｍＡｂ、抗Ｆｏｘｐ３ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ‐４ｍＡｂ及び抗ＣＣＲ９ｍＡｂで染色し、フローサイトメトリーによって解析した。（Ｄ）ＭＬＮを切除したマウスを感作させ、ＡＩＰ‐２で処置するか又は未処置とし、ＯＶＡで攻撃することを概略的に表す図。（Ｅ）侵襲的プレチスモグラフィによって評価したレジスタンス及びコンプライアンス。（Ｆ）気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中の好酸球（Ｅ）及びリンパ球（Ｌ）の頻度。（Ｇ）肺におけるインターロイキン（ＩＬ）‐５及びＩＬ‐１３の濃度。（Ｈ）ＯＶＡ特異的な血清中免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅ及びＩｇＧ２ａのレベル。（Ｉ）ＭＬＮ移植（ｔｘ）の実験手順の概略を表す図。（Ｊ）メタコリンの用量増加に応答したレジスタンス及びコンプライアンス。（Ｋ）ＢＡＬＦの解析。（Ｌ）肺におけるＩＬ‐５及びＩＬ‐１３の濃度。結果は、２回の独立した実験の平均を表す。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１。ｎ．ｄ．検出せず。
【図８】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２の治療的又は予防的な粘膜送達はマウスにおけるアレルギー性炎症を防ぎ、かつヒトにおけるイエダニ（ｈｏｕｓｅ  ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ）特異的なＴ細胞の増殖をｅｘ  ｖｉｖｏで抑制する。（Ａ）実験的なネズミ科動物の喘息における予防的（ｐ）又は治療的（ｔｈ）な手法としてのＡＩＰ‐２の鼻腔内投与について概略的に表す図。（Ｂ）気管支肺胞洗浄液の解析。（Ｃ）肺におけるインターロイキン（ＩＬ）‐５及びＩＬ‐１３の濃度。（Ｄ）ＯＶＡ特異的な血清中免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅ及びＩｇＧ２ａのレベル。（ｅ）イエダニ（ＨＤＭ）に感作された患者由来の全血を調製し、ＣＦＳＥで染色した。細胞をＡＩＰ‐２又はビヒクルの存在下でＨＤＭ抽出物とともに５日間インキュベートした。細胞をヒト抗ＣＤ３及び抗ＣＤ４を用いて染色し、フローサイトメトリーによってＣＦＳＥ希釈倍数について解析した。結果は、３回の独立した実験の平均を表す。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１。
【図９】イヌ鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）の排泄／分泌（ＥＳ）タンパク質はＯＶＡで誘発される気道過敏性、肺の炎症、粘液産生及びコラーゲン沈着を抑制する。（Ａ）肺の切片を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）又は過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）で染色した。（Ｂ）気管支肺胞洗浄細胞の解析。（Ｃ）肺におけるインターロイキン（ＩＬ）‐５、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１３及びＩＬ‐１７Ａの濃度。（Ｄ）ＯＶＡ特異的な血清中免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅ及びＩｇＧ２ａのレベル。結果は、２回の独立した実験の平均を表す。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１。
【図１０】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２の変性（ｄＡＩＰ‐２）によりＯＶＡ誘発性の気道炎症が回復する。（Ａ）メタコリンの用量増加に応答したレジスタンス及びコンプライアンスを測定する侵襲的プレチスモグラフィによって評価した肺機能。（Ｂ）気管支肺胞洗浄液中の好酸球（Ｅ）及びリンパ球（Ｌ）の頻度は、フローサイトメトリーによって評価した。（Ｃ）肺におけるインターロイキン５（ＩＬ‐５）、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１３及びＩＬ‐１７Ａの濃度。結果は、２回の独立した実験の平均を表す。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１。
【図１１】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２の腹腔内投与は注射部位における細胞浸潤を誘発しない。ＡＩＰ‐２又はＰＢＳで処置し、ＯＶＡ又はＰＢＳで攻撃したマウスの腹膜内における分類別細胞数。（Ｅ）好酸球、（Ｌ）リンパ球、（Ｎ）好中球、（Ｍ）マクロファージ。結果は、２回の独立した実験の平均を表す。
【図１２】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２はワクチン接種（アジュバントワクチン）で誘発されるＴｈ１タイプの炎症を防がない。（Ａ）腹腔内ＡＩＰ‐２で処置したマウスにおける完全フロイントアジュバントに含めたＯＶＡの足蹠投与を概略的に表す図。（Ｂ）膝窩リンパ節（ＰＬＮ）の細胞充実度。（Ｃ）抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８又はＯＶＡを用いたＰＬＮ細胞の４８時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの再刺激。データは、上清中に収集しＦＡＣＳアレイにより解析したＩＦＮ‐γ、ＴＮＦ‐α及びインターロイキン（ＩＬ）‐６の濃度を示している。結果は、２回の独立した実験の平均を表す。
【図１３】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２により誘導される保護にはＴｏｌｌ様受容体の活性化は必要とされない。（Ａ）ＷＴ又はＭｙＤ８８−／−Ｔｒｉｆ−／−のマウスであって、ＡＩＰ‐２で処置したか又は処置せず、かつＯＶＡ又はＰＢＳで攻撃したマウスの気管支肺胞洗浄液の解析。（Ｂ）肺におけるインターロイキン（ＩＬ）‐５及びＩＬ‐１３の濃度。結果は、２回の独立した実験の平均を表す。＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１。
【図１４】Ａｃ‐ＡＩＰ‐２処置は腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）における樹状細胞の選択的な増加を誘導する。（Ａ〜Ｃ）マウスを、ＡＩＰ‐２又はビヒクルを用いて５日間毎日処置した。（Ａ）ＭＬＮ細胞を表面マーカーで染色し、ＡＩＰ‐２‐Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７の発現について解析した。（Ｂ）表示された組織を収集して計数した。（Ｃ）ＭＬＮ細胞を表示された表面マーカーで染色し、フローサイトメトリーによって解析した。（Ｄ）Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７にコンジュゲートされたＡＩＰ‐２又はＰＢＳを用いて処置したマウスのＭＬＮを表面マーカー及び活性化マーカーで染色し、フローサイトメトリーによって解析した。結果は、３回の独立した実験の平均を表す。＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
配列の簡単な説明
配列番号１：図１及び２の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｎ末端部分及びＣ末端部分）（Ａｃ‐ＡＩＰ‐２ＮＴ）のアミノ酸配列。アミノ酸配列に単下線が付されている。
【００３０】
配列番号２：図２の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｃ末端部分）（Ａｃ‐ＡＩＰ‐２ＷＴ）のアミノ酸配列。アミノ酸配列に単下線が付されている。
配列番号３：図１の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｎ末端部分及びＣ末端部分）のヌクレオチド配列。ヌクレオチド配列に単下線が付されている。
【００３１】
配列番号４：図２の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｃ末端部分、Ｎ‐グリカン突然変異体）（Ａｃ‐ＡＩＰ‐２Ｑ４８）のアミノ酸配列。アミノ酸配列に単下線が付されている。
配列番号５：図２の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｎ末端部分及びＣ末端部分、Ｎ‐グリカン突然変異体）（Ａｃ‐ＡＩＰ‐２ＮＴＱ４８）のアミノ酸配列。アミノ酸配列に単下線が付されている。
【００３２】
発明の詳細な説明
本発明は、炎症及び／又は炎症性の疾患又は状態、例えば喘息及び／又は炎症性腸疾患などの、軽減、緩和及び／又は予防を行うための方法に関する。
【００３３】
本発明は、少なくとも部分的には、１つ以上のタンパク質であって、鉤虫、例えば限定するものではないがイヌ鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から誘導可能又は入手可能なタンパク質が、対象者の、炎症及び／又は炎症性の疾患又は状態、例えば喘息及び／又は炎症性腸疾患などの、軽減、緩和及び／又は予防を行うために有用となりうるという、予期せぬ発見に基づいている。これらの抗炎症特性は、これらの鉤虫タンパク質の特定の改変型にも及ぶことが示されている。
【００３４】
特定の態様では、本発明は、炎症及び／又は炎症性の疾患又は状態、例えば喘息及び／又は炎症性腸疾患などの、軽減、緩和及び／又は予防を行うための、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質又は該改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のフラグメント、バリアント若しくは誘導体に関する。適切には、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在する複数のＣ末端アミノ酸の欠失又は不在を含む。
【００３５】
本発明に関しては、「単離（された）」によって意味されるのは、その天然の状態から取り出されたか又は他の方法の人為操作に供された物質である。単離された物質は、その天然の状態においては該物質に通常伴っている構成要素を実質的に含まないか若しくは本質的に含まない場合もあれば、その天然の状態においては該物質に通常伴っている構成要素と一緒に人工的な状態にあるように操作される場合もある。単離された物質には、天然型及び組換え型の物質が含まれる。用語「単離（された）」はさらに、「富化（された）」、「精製（された）」及び／又は「合成（の）」などの用語も包含する。合成には組換え合成及び化学的合成が含まれる。
【００３６】
「Ａｃ‐ＴＭＰ‐２」によって意味されるのは、イヌ鉤虫由来の排泄／分泌タンパク質である組織メタロプロテアーゼ阻害物質２である。Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ‐Ｐｒｏｔ：＃Ｂ１Ｑ１４３）は２４４アミノ酸のポリペプチドである。Ａｃ‐ＴＭＰ‐２又はＴＭＰ‐２は、本明細書中では抗炎症性タンパク質‐２（Ａｃ‐ＡＩＰ‐２、又はＡＩＰ‐２）とも呼ばれうる。
【００３７】
本明細書中で使用されるように、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２におけるような「改変型（の）」は、単離されたポリペプチド又はタンパク質であって、野生型又は天然型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質と比較して、Ｎ末端及び／又はＣ末端の１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、付加及び／又は欠失（これらに限定はされない）を含むものについて述べている。適切には、１つ又は複数のＣ末端アミノ酸が、抗炎症活性をほとんど減じることなく、欠けているか、存在しないか、又は欠失している場合がある。非限定的な例によれば、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、野生型又は完全長のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在する１つ又は複数の酸性のＣ末端アミノ酸を欠いている場合がある。１つ以上の酸性の残基には、１つ又は複数のグルタミン酸（Ｇｌｕ又はＥ）残基、及び／又はアスパラギン酸（Ａｓｐ又はＤ）残基が含まれうる。例えば、短縮型のポリペプチド又はタンパク質は、完全長又は野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在する、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９５個又はそれ以上のＣ末端アミノ酸、好ましくは例えば酸性の残基を、欠いている場合がある。
【００３８】
適切には、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、ネトリンドメインであって該ネトリンドメインのＣ末端の一部又は全ての残基が欠失しているネトリンドメインを含む。配列番号４及び５を参照すると、そのような改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質の一例はアミノ酸配列ＤＥＲＤ（配列番号６）を終端とするが、これに限定はされない。
【００３９】
さらなる実施形態又は代替実施形態では、１つ以上のＮ末端アミノ酸が欠けているか、欠失しているか又は存在しない場合がある。いくつかの実施形態では、Ｎ末端アミノ酸は、欠失させることが可能であるか、又は異種のシグナルペプチドのアミノ酸配列に置き換えることの可能な、シグナルペプチドのアミノ酸である。本明細書中に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれ以上のＮ末端アミノ酸を欠いている場合がある。
【００４０】
適切には、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、Ｎ末端又はＮ末端付近にアミノ酸配列Ｃ‐Ｘ‐Ｃを含む。配列番号１、配列番号２、配列番号４及び配列番号５に記されたアミノ酸配列において、この配列はＣ‐Ｓ‐Ｃである。この点に関して「Ｎ末端又はＮ末端付近」とは、Ｎ末端であるか、又はＮ末端から約１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０アミノ酸以内であることを意味している。
【００４１】
いかなる特定の理論によっても束縛されるのは望まないが、Ｎ末端又はＮ末端付近のＣ‐Ｘ‐Ｃモチーフが保持されてＭＭＰ活性部位クレフトへの挿入とその後の触媒活性の阻害が可能である限り、Ｃ末端アミノ酸が野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２から、単独で、又はいくつかのＮ末端アミノ酸と一緒に、欠失されうることが提唱されている。
【００４２】
非限定的な例を挙げれば、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２は、配列番号１、配列番号２、配列番号４及び配列番号５の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２などの短縮型のポリペプチド又はタンパク質であってよい。
【００４３】
改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質及び完全長又は野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、組織メタロプロテアーゼ阻害物質と呼ばれる場合もあるが、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質が必ずしもこの特定の生物学的活性を有していないことは理解されるべきである。更に、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質がこの生物学的活性を有していても、それは該タンパク質の抗炎症特性にとって必ずしも不可欠又は必要ということではない。
【００４４】
本明細書において、改変型ポリペプチド又はタンパク質は、限定するものではないが、架橋、フラグメント化、変性、ジスルフィドの還元、又は様々な補欠分子団の添着（例えばＰＥＧ化）により、変化させてもよいことがさらに企図される。
【００４５】
本明細書中で使用されるように、「フラグメント」は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質の部分、ドメイン、領域又は部分配列であって、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（配列番号１、配列番号２、配列番号４又は配列番号５に記されたものなど）のうち６、１０、１２、１５、２０、３０、４０、５０  ６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０個又は２２０個以下の連続したアミノ酸を含むものについて述べている。
【００４６】
好ましくは、フラグメントは「生物学的に活性なフラグメント」である。いくつかの実施形態では、生物学的に活性なフラグメントは、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（配列番号１、配列番号２、配列番号４又は配列番号５に記されたものなど）の抗炎症活性の１０％以上、好ましくは２５％以上、より好ましくは５０％以上、さらにより好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％以上を有している。そのような活性は、そのような活性を同定するのに一般に有用であると当業者が認識可能な、標準的な試験方法及びバイオアッセイを使用して評価されうる。
【００４７】
（タンパク質の）「ドメイン」によって意味されるのは、タンパク質の一部であって、共通の構造的、生理化学的及び機能的な特徴を共有するもの、例えば疎水性、極性、球状、螺旋形、若しくはネトリン様（ＮＴＲ）のドメイン、又は特性を共有するもの、例えばタンパク結合ドメイン、レセプター結合ドメイン、コファクター結合ドメインなどである。
【００４８】
さらに企図されるのは、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のバリアントであってその改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のアミノ酸配列中又はそのフラグメント中に１つ以上のアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失を含むものである。
【００４９】
典型的には、タンパク質に関して、「バリアント」タンパク質は、異なるアミノ酸に置き換わっている１つ以上のアミノ酸を有する。いくつかのアミノ酸は、そのタンパク質の活性の性質を変化させることなく概ね類似の特性を備えた他のアミノ酸に変更可能であること（すなわち保存的置換）は、当分野において良く理解されている。
【００５０】
この点に関しては、特定の翻訳後修飾、例えば酵母及び動物細胞を含む真核生物の発現宿主によって生じるものなどを、該翻訳後修飾がヒトのタンパク質とは同一でないために患者において免疫原性の反応を引き起こす可能性のあるグリコシル化パターンを生じるかもしれないので防止又は阻害するために、１つ以上のアミノ酸が変更されてもよい。本発明によって企図される特定のバリアントの非限定的な例は、グリコシル化部位であるアミノ酸が欠失しているか又は別のアミノ酸に置き換えられている、非グリコシル化バリアントである。例えば、Ｎ‐結合型グリコシル化部位を、非グリコシル化アミノ酸に、例えばグルタミン（Ｇｌｎ又はＱ）残基などに、突然変異させてもよい。例えば、酵母Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）は免疫原性である高マンノース型のグリカンを生じることが多い。前記に照らして、配列番号４及び５の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２におけるＮからＱへの突然変異は、真核生物の発現系におけるＮ‐結合型グリコシル化される部位を取り除くために実施されている。
【００５１】
改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント）などの参照配列の１つ以上のアミノ酸残基はさらに、該改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質又はそのフラグメントの生物学的活性をほとんど変更することなく、修飾されるか若しくは欠失させられること、又は追加の配列が付加されることも可能である、ということも認識されるであろう。そのような活性は、そのような活性を同定するのに一般に有用であると当業者が認識可能な、標準的な試験方法及びバイオアッセイを使用して評価されうる。
【００５２】
例を挙げると、Ａｃ‐ＴＭＰ‐２のＮ末端の天然型シグナルペプチドは、例えば、組換え発現されるＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質の発現培地中への分泌を目的とするために、選ばれた発現系に特異的なシグナル配列、例えば酵母特異的なシグナル配列などに、全体又は一部が置き換えられてもよい。
【００５３】
用語「バリアント」には、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のペプチドミメティック及びオーソログが含まれる。「ペプチドミメティック」によって意味されるのは、天然型の親ペプチドの生物学的作用を模倣するか又は該作用に拮抗することが可能な、非ペプチド性の構造要素を含有する分子である。ペプチドミメティックの例には、ペプチドの主鎖が１つ以上のベンゾジアゼピン分子に置換されているペプチド性化合物（例えば、ジェームズ（Ｊａｍｅｓ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１９９３年、第２６０巻、ｐ．１９３７−４２を参照）及び「レトロインベルソ型（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）」ペプチド（例えば米国特許第４，５２２，７５２号明細書を参照）が挙げられる。該用語はさらに、天然に存在するアミノ酸以外の構成部分であって、タンパク質の機能にあまり不利な妨げを為すことなく該タンパク質中の特定のアミノ酸の代用物として立体配座上かつ機能上の役割を果たす構成部分も指す。アミノ酸ミメティックの例にはＤ‐アミノ酸が挙げられる。１つ以上のＤ‐アミノ酸で置換されたタンパク質は、良く知られたペプチド合成手法を使用して作製されうる。さらなる置換物には、官能基を備えたバリアント側鎖を有するアミノ酸類似体、例えば、β‐シアノアラニン、カナバニン、ジェンコール酸、ノルロイシン、３‐ホスホセリン、ホモセリン、ジヒドロキシフェニルアラニン、５‐ヒドロキシトリプトファン、１‐メチルヒスチジン、及び３‐メチルヒスチジンなどが挙げられる。
【００５４】
改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質の「オーソログ」によって意味されるのは、他の腸管寄生蠕虫（すなわち鉤虫、鞭虫及び回虫）、例えばヒトの鉤虫、例を挙げるとアメリカ鉤虫、十二指腸鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）及びセイロン鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）など、並びにブタの鞭虫、例を挙げるとブタ鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｓｕｉｓ）及びヒト鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ）に由来する改変型のＴＭＰオーソログである。
【００５５】
１つの実施形態では、タンパク質のバリアント又はオーソログは、配列番号１、配列番号２、配列番号４又は配列番号５などの参照アミノ酸配列と、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％若しくは８５％、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を共有する。
【００５６】
好ましくは、配列同一性は、配列番号１、配列番号２、配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含む参照配列のうち少なくとも６０％にわたって、より好ましくは少なくとも７５％にわたって、より好ましくは少なくとも９０％にわたって、より好ましくは少なくとも９５％、９８％又は実質的に全長にわたって、測定される。
【００５７】
配列同一性（％）を決定するためには、アミノ酸及び／又はヌクレオチドの配列の最適なアライメントが、アルゴリズム（インテリジェネティクス（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）によるＧｅｎｅｗｏｒｋｓプログラム；ウィスコンシン・ジェネティクス・ソフトウェア・パッケージ・リリース（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ）７．０のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、米国ウィスコンシン州のジェネティクス・コンピュータ・グループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ））のコンピュータによる遂行によって、又は検査及び選択された様々な方法のうち任意のものによって生成された最良のアライメント（すなわち比較ウィンドウ上の最も高い相同性（％）をもたらすもの）によって、実行されうる。例えばアルツシュール（Ａｌｔｓｃｈｕｌ）ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．）、１９９７年、第２５巻、ｐ．３３８９−４０２に開示されているようなＢＬＡＳＴファミリーのプログラムが照会されてもよい。
【００５８】
配列解析の詳細な議論については、オースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら編「カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ）」、１９９５−１９９９年、米国ニューヨークのジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．））のユニット１９．３に見出すことが可能である。
【００５９】
バリアントタンパク質は当業者に既知の様々な標準的突然変異誘発手法によって生産可能である。突然変異は、単一の遺伝子、遺伝子のブロック又は染色体全体のヌクレオチド配列の改変と、その後の１つ以上の突然変異タンパク質の産生とを伴うことができる。単一の遺伝子における変化は、ＤＮＡ塩基配列内の単一のヌクレオチド塩基の除去、付加又は置換を伴う点突然変異の結果であってもよいし、多数のヌクレオチドの挿入又は欠失を伴う変化の結果であってもよい。
【００６０】
突然変異は化学的又は物理的な突然変異原への曝露に続いて生じる。そのような突然変異誘発要因には、電離放射線、紫外線並びに多種多様な化学的作用薬、例えばアルキル化薬及び多環式芳香族炭化水素などが含まれ、これらは全て、直接的又は間接的に（一般には何らかの代謝性の生体内変化に続いて）核酸と相互作用することができる。そのような環境要因によって誘発されたＤＮＡ損傷は、その損傷を受けたＤＮＡが複製又は修復されるときに塩基配列の改変を、よって突然変異をもたらす場合があり、この突然変異はその後タンパク質レベルで反映される可能性がある。突然変異は、特定の標的設定型の方法の使用により部位指定されることも可能である。
【００６１】
１つ以上の突然変異を含む改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２の生産に役立つ突然変異誘発手法には、限定するものではないが、ランダム突然変異誘発（例えば、既知のＤＮＡフラグメントの挿入を介した遺伝子の不活性化に基づく挿入突然変異誘発、化学的突然変異誘発、放射線突然変異誘発、エラープローンＰＣＲ（キャドウェル（Ｃａｄｗｅｌｌ）及びジョイス（Ｊｏｙｃｅ）、ＰＣＲ・メソッズ・アンド・アプリケーションズ（ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｐｐｌ．）、１９９２年、第２巻、ｐ．２８−３３））、及び部位特異的突然変異誘発（例えば、所望の突然変異のＤＮＡ塩基配列をコードする特異的オリゴヌクレオチドプライマー配列を使用）が挙げられる。部位特異的突然変異誘発のさらなる方法は、米国特許第５，２２０，００７号；同第５，２８４，７６０号：同第５，３５４，６７０号；同第５，３６６，８７８号；同第５，３８９，５１４号；同第５，６３５，３７７号：及び同第５，７８９，１６６号明細書に開示されている。
【００６２】
さらに提供されるのは、そのフラグメント及びバリアントを含めた改変型タンパク質の「誘導体」である。そのような誘導体には、化学修飾されたタンパク質（例えばアミノ酸側鎖の修飾）、化学的に架橋されたタンパク質、アビジン、ビオチン及びその他の結合性部分、エピトープタグ及び／又は融合パートナー（例えばＦＬＡＧ、ヘマグルチニン、ｍｙｃタグ、ＧＳＴ又はＭＢＰ、ヘキサヒスチジン融合パートナー）の付加物、標識（例えば放射性標識、蛍光標識）並びに酵素（例えばＨＲＰ、アルカリホスファターゼ）を含むように修飾されたタンパク質が挙げられるがこれらに限定はされない。
【００６３】
改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（フラグメント、バリアント及び誘導体を含む）は、当業者に既知の任意の適切な手法によって調製可能である。
１つの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（フラグメント、バリアント及び誘導体を含む）は化学合成によって生産される。化学合成技法は当分野において良く知られているが、当業者は適切な方法論の実例についてコリガン（Ｃｏｌｉｇａｎ）ら編「カレント・プロトコールズ・イン・プロテイン・サイエンス（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ）」、１９９５−２００１年、米国ニューヨークのジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ）の第１８章を参照してもよい。
【００６４】
別の実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（フラグメント、バリアント及び誘導体を含む）は組換えタンパク質として調製される。
組換えタンパク質の生産については当分野で良く知られているが、当業者は例えばサムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、「モレキュラー・クローニング．ラボラトリー・マニュアル（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ．  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、１９８９年、コールド・スプリング・ハーバー・プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ））、特に第１６部及び第１７部；オースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら編「カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ）」、１９９５−１９９９年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ）、特に第１０章及び第１６章；並びにコリガン（Ｃｏｌｉｇａｎ）ら編「カレント・プロトコールズ・イン・プロテイン・サイエンス（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ）」、１９９５−１９９９年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．）、特に第１、５及び６章、に記載されているような標準的プロトコールを参照してもよい。
【００６５】
従って、別の態様では、本発明は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（例えば配列番号１、配列番号２、配列番号４若しくは配列番号５に記されたものなど）又は該改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のフラグメント、バリアント若しくは誘導体をコードする単離核酸を提供する。
【００６６】
本明細書中で使用されるような用語「核酸」は、一本鎖又は二本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡを指す。ＤＮＡにはゲノムＤＮＡ及びｃＤＮＡが含まれる。ＲＮＡには、ｍＲＮＡ、ＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｃＲＮＡ及び自己触媒ＲＮＡが含まれる。核酸はＤＮＡ‐ＲＮＡハイブリッドであってもよい。核酸は、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ又はＵ塩基を含むヌクレオチドを典型的には含んでいるヌクレオチド配列を含む。しかしながら、ヌクレオチド配列は、その他の塩基、例えば、これらに限定するものではないがイノシン、メチルシトシン、メチルイノシン、メチルアデノシン及び／又はチオウリジンを含みうる。
【００６７】
従って、特定の実施形態では、単離核酸はｃＤＮＡである。
さらなる実施形態では、単離核酸はコドンが最適化された核酸である。
本発明はさらに、前述の態様の単離核酸を含む遺伝子構築物を提供する。
【００６８】
本発明はさらに、前述の態様の遺伝子構築物を含む宿主細胞を提供する。
適切には、遺伝子構築物は、単離核酸の発現を促進する１つ以上の追加のヌクレオチド配列を含む。そのような追加のヌクレオチド配列には、調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化配列、スプライス供与／受容配列、選択マーカー（例えば抗生物質耐性に関するもの）、シグナルペプチド、複製開始点又はその他のヌクレオチド配列であって原核生物及び／又は真核生物の宿主細胞における形質転換、増殖、選択及び発現を助ける配列が含まれうる。組換えタンパク質の発現に関しては、適当な遺伝子構築物及び宿主細胞がある程度は相互依存的になることは当業者には理解されるであろう。原核生物及び／又は真核生物の宿主細胞への遺伝子構築物の導入、タンパク質を発現する細胞の増殖及び選択については、当分野において良く知られている。
【００６９】
発現のための適切な宿主細胞は原核生物であっても真核生物であってもよい。例えば、適切な宿主細胞は、哺乳動物の細胞（例えばＨｅＬａ、ＨＥＫ２９３Ｔ、Ｊｕｒｋａｔ細胞）、酵母細胞（例えばサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、バキュロウイルス発現系とともに使用されるか否かに関わらず昆虫細胞（例えばＳｆ９、イラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ））、若しくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの細菌細胞、又はワクシニアウイルス宿主であってよい。
【００７０】
１つの態様では、本発明は、対象者の炎症を軽減又は緩和する方法であって、治療上有効な量の、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質又は該改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質のフラグメント、バリアント若しくは誘導体を対象者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００７１】
別の態様では、本発明は、対象者の炎症を予防する方法であって、治療上有効な量の、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体を対象者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００７２】
対象者の炎症を軽減する場合のように、「軽減（する）」によって意味されるのは、炎症に関連した症状、様相、若しくは特徴（例えば発赤、熱感、腫脹、及び／又は疼痛）を、又は対象者が炎症に関連した症状、様相、若しくは特徴を経験する時間の長さを、弱めるか又は短縮させることである。そのような軽減は、対象者に有益となるように絶対的なものである必要はない。対象者の炎症を緩和する場合のように、「緩和（する）」によって意味されるのは、炎症に関連した症状、様相、又は特徴（例えば発赤、熱感、腫脹、及び／又は疼痛）の重症度又は重篤度の軽減である。そのような緩和は、対象者に有益となるように絶対的なものである必要はない。対象者の炎症の軽減及び／又は緩和は、定性的及び定量的いずれの方法及び基準も含む、当業者に既知の任意の方法又は基準を使用して決定可能である。
【００７３】
対象者の炎症の軽減又は緩和とは対象者の炎症を治療する方法である、ということは理解されるべきである。本明細書中で使用されるように、「治療する」（又は「治療」）は、炎症の兆候又は症状を該兆候又は症状が生じ始めた後に改善する治療的介入を指す。用語「改善する」は、炎症に関しては、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、当業者に既知の任意の方法又は基準を使用して決定可能である。
【００７４】
本明細書中で使用されるように、「予防する」（又は「予防」）は、炎症の症状、様相又は特徴を予防又は軽減するように該症状、様相又は特徴の発症に先立って開始される一連の行動（例えば治療上有効な量の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体を投与すること）を指す。そのような予防は、対象者に有益となるように絶対的なものである必要はない、ということは理解されるべきである。「予防的な」治療とは、炎症の兆候を示していないか、又は初期の兆候のみを示す対象者に、炎症の症状、様相、又は特徴を生じるリスクを減少させる目的で施用される治療である。
【００７５】
本明細書中で使用されるように、「炎症」とは様々な種類の傷害又は感染に対する良く知られた局所的な応答であって、発赤、熱感、腫脹、及び疼痛を特徴とし、さらには機能不全又は運動性低下を含んでいる場合の多い、応答を指す。炎症は、感染を阻止して初期病巣からの感染の広がりを予防するための初期の防御機構に相当する。炎症における主要な事象には、血流を増加させる毛細血管の拡張、微小血管系構造の変化、血液循環からの血漿並びにタンパク質及び白血球の逸脱の発生、並びに、白血球の毛細血管からの遊出及び傷害又は感染の部位における蓄積、が挙げられる。
【００７６】
炎症は多くの場合、対象者の疾患、障害及び／又は状態、例えば免疫学的な疾患、障害及び／又は状態（例えば自己免疫性の疾患、障害及び／又は状態など）並びにアレルギー反応に、関連しているか、又は続発する。典型的な免疫学的な疾患、障害及び／又は状態には、限定するものではないが、アジソン病、強直性脊椎炎、セリアック病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、クローン病、脱髄性ニューロパチー、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン‐バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、インスリン依存型糖尿病（１型）、若年性関節炎、川崎症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋梗塞後症候群、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、特発性肺線維症、ライター症候群、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、潰瘍性大腸炎、血管炎、白斑、及びウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【００７７】
当業者には理解されるように、消化管の疾患（例えば慢性胃炎又は炎症性腸疾患、例えばクローン病若しくは潰瘍性大腸炎など）並びに呼吸器系の疾患（例えば喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））は炎症性要素を有しており、よって開示された方法を使用する治療に特に適している。
【００７８】
従って、１つの態様では、本発明は、対象者の炎症性腸疾患の予防及び／又は治療を行うための方法であって、治療上有効な量の、本明細書中に先述された改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質を対象者に投与することにより炎症性腸疾患の予防及び／又は治療を行うステップを含む方法にある。
【００７９】
１つの実施形態では、炎症性腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である。
関連する態様では、本発明は、対象者の呼吸器系の疾患の予防及び／又は治療を行うための方法であって、治療上有効な量の、本明細書中に先述された改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質を対象者に投与することにより呼吸器系の疾患の予防及び／又は治療を行うステップを含む方法にある。
【００８０】
特定の実施形態では、呼吸器系の疾患は、喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。特定の好ましい実施形態では、呼吸器系の疾患は喘息である。
【００８１】
同様に当業者には理解されるように、対象者の疾患、障害及び／又は状態に関連しているか又は続発する炎症は、該疾患、障害及び／又は状態が、基準療法、例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）、抗生物質、並びにこれらの組み合わせを含む基準療法に抵抗性であるときに生じることが多い。「抵抗性である」によって、治療、特に第一選択治療に対する抵抗性が意図される。
【００８２】
用語「対象者」にはヒト対象者及び動物対象の両方が含まれる。例えば、対象者への投与とは、ヒト対象者又は動物対象への投与を含むことができる。好ましくは、対象者はヒトである。しかしながら、本発明による治療的用途は、哺乳動物、例えば飼育動物及びコンパニオンアニマル、馬のような興行用動物、家畜、並びに実験動物などにも適用可能となりうる。
【００８３】
「投与」によって意図されるのは、組成物（例えば改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体を含む医薬組成物）の、選ばれた経路による対象者への導入である。
【００８４】
用語「治療上有効な量」とは、特定の作用薬を用いた治療を受けている対象者において所望の効果を達成するのに十分な、その作用薬の量について述べている。例えばこれは、炎症の軽減、緩和及び／又は予防を行うのに必要な、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）を含む組成物の量であってよい。いくつかの実施形態では、「治療上有効な量」は、炎症の症状を軽減又は除去するのに十分である。他の実施形態では、「治療上有効な量」は、所望の生物学的効果を達成するのに十分な量、例えば、炎症に関連した発赤、熱感、腫脹及び／又は疼痛を減少させるのに有効な量である。
【００８５】
理想的には、作用薬の治療上有効な量とは、対象者において実質的な細胞傷害効果を引き起こさずに所望の結果を導くのに十分な量である。炎症の軽減、緩和及び／又は予防を行うのに有用な、作用薬、例えば改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）の有効な量は、治療を受けている対象者、任意の関連する疾患、障害及び／又は状態の種類及び重症度、並びに治療用組成物の投与の方式に依存することになろう。
【００８６】
治療上有効な量の、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）を含む組成物は、一連の治療の間に、単回投薬で投与されてもよいし、又は数回の投薬で、例えば毎日、投与されてもよい。しかしながら、投与の頻度は、施用される調製物、治療を受けている対象者、炎症の重症度、及び治療法又は組成物の適用方式に依存する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体は、融合パートナーのアミノ酸配列をさらに含むことができる。融合パートナーのアミノ酸配列は、組換えタンパク質のＮ末端及び／又はＣ末端において発現されるように遺伝子構築物によってコードされると好都合である。融合パートナーには、ポリヒスチジン（例えばＨｉｓ６）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオン‐Ｓ‐トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、並びにＦＬＡＧ、ＨＡ及びｍｙｃタグのようなエピトープタグが含まれる。融合パートナーは、親和性樹脂（例えば金属イオン、マルトース、グルタチオン樹脂）又はエピトープタグの場合は抗体により、組換え発現されたタンパク質の同定及び精製を容易にする。
【００８８】
ある実施形態では、炎症を治療又は予防する方法、及び／又は医薬組成物は、対象者への投与に適した１つ以上の追加の作用薬を含むことができる。炎症の軽減、緩和及び／又は予防を行うための（かつ／又は炎症に関連した疾患、障害及び／又は状態の治療若しくは予防のための）当業者に知られているような１つ以上の追加の作用薬の様々な組み合わせが、治療上有効な量の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）に加えて、投与を必要とする対象者に投与されうる。すなわち、炎症の治療及び／又は予防のために伝統的に使用される１つ以上の追加の作用薬が、治療上有効な量の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）に加えて対象者に投与されうる。
【００８９】
例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡｌＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）特に抗サイトカイン／サイトカインレセプター抗体、抗生物質、並びにこれらの組み合わせが、炎症の軽減、緩和及び／又は予防を行うためのある実施形態において、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）とともに投与されることが可能である。
【００９０】
ある実施形態では、１つ以上の追加の作用薬は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）に対する節約的効果（ｃｏｎｓｅｒｖｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）を提供する。さらなる実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）が１つ以上の追加の作用薬に対する節約的効果を提供する。さらに別の実施形態では、１つ以上の追加の作用薬は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）の作用に対し補完的な効果を提供し、好ましくは炎症に関連した１つ以上の症状の頻度又は重症度を排除又は軽減する（かつ／又は前記症状を予防する）。
【００９１】
当業者には良く知られているように、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＡ）とも呼ばれる非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、鎮痛作用、解熱作用及び抗炎症作用を備えた薬物であり、サリチラート（例えばアスピリン）並びにプロピオン酸誘導体（例えばイブプロフェン及びナプロキセン）が挙げられる。
【００９２】
アミノサリチラートは炎症性腸疾患（特に潰瘍性大腸炎）の治療における使用について当分野で良く知られており、例えば、バルサラジド、メサラジン、オルサラジン、及びスルファサラジンが挙げられる。
【００９３】
当業者には良く知られているように、コルチコステロイドは、副腎により産生されるホルモンであるコルチゾールに非常によく似た薬物である。典型的なコルチコステロイドには、限定するものではないが、コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、及びメチルプレドニゾロンが挙げられる。
【００９４】
免疫抑制薬は、ある種の疾患又は状態に関連した炎症の治療における使用について当分野で良く知られており、例えば、薬物シクロスポリン、アザチオプリン及びミコフェノラートが挙げられる。
【００９５】
当業者には良く知られているように、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬（例えばＴＮＦα阻害薬、ＩＬ‐５阻害薬、ＩＬ‐１３阻害薬、ＩＬ‐１７阻害薬、及びＩＬ‐６Ｒ阻害薬）には、限定するものではないが、小分子阻害剤及び抗体が挙げられる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）と１つ以上の追加の作用薬との組み合わせは、炎症の治療及び／又は予防において相乗効果を生む。従って、本発明はさらに、作用薬の治療有効性を、そのような作用薬が使用される何らかの状態（例えば炎症並びに任意の関連する疾患、障害及び／又は状態）の治療の際に増強する方法も含んでいる。
【００９７】
１つの実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）は、１つ以上の追加の作用薬の投与に先立って投与される。別の実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）は、１つ以上の追加の作用薬の投与の後に投与される。なお別の実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）は、１つ以上の追加の作用薬の投与と同時に投与される。さらに別の実施形態では、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）の投与及び１つ以上の追加の作用薬の投与（逐次又は同時）は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）又は１つ以上の追加の作用薬のいずれか一方を他方の不在下で投与することによる軽減又は緩和よりも大きな、炎症の軽減又は緩和をもたらす。
【００９８】
改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）及び１つ以上の追加の作用薬は、当業者には良く知られているように、治療用組成物と併用するために利用可能な任意の従来の方法／経路によって投与可能である。そのような方法には、限定するものではないが、米国特許第６，０９０，７９０号明細書に記載されているような特異的組織部位への極微針注射による投与、米国特許第６，０５４，１２２号明細書に記載されているような炎症の部位に施用される局所用クリーム剤、ローション剤若しくは密封ドレッシング材、又は国際公開第９９／４７０７０号に記載されているような、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）を放出する移植材料が含まれる。
【００９９】
この点に関しては、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）と、任意選択で１つ以上の追加の作用薬とを含む組成物は、該組成物を適切に含浸、コーティング又はその他の方法で含む、生体材料、生体高分子、ハイドロキシアパタイト若しくはその誘導体のような無機質材料、外科用移植材料、人工器官、創傷ドレッシング材、圧迫包帯、包帯などと関連付けられて、又はこれらの構成成分として、投与されうる。
【０１００】
適切には、組成物は、適当な薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む。
好ましくは、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤は、哺乳動物への、より好ましくはヒトへの投与に適している。
【０１０１】
「薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤」によって意味されるのは、全身投与で安全に使用されうる固体又は液体の増量剤、希釈剤又はカプセル封入物質である。特定の投与経路に応じて、当分野で良く知られた様々な担体が使用されうる。これらの担体は、糖質、デンプン、セルロース及びその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油、多価アルコール、アルギン酸、リン酸緩衝液、乳化剤、等張生理食塩水並びに塩であって例えば塩酸塩、臭化物及び硫酸塩を含む鉱酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩及びマロン酸塩のような有機酸、並びに発熱性物質除去水、を含む群から選択されうる。
【０１０２】
薬学的に許容される担体、希釈剤及び賦形剤について述べている有用な参照文献は、「レミングトンの薬剤科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」（１９９１年、米国ニュージャージー州のマック・パブリシング・カンパニー（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．））である。
【０１０３】
任意の安全な投与経路が、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）と、任意選択で１つ以上の追加の作用薬とを含む組成物を対象者に提供するために使用されうる。例えば、経口、直腸内、腸管外（非経口）、舌下、口腔内、静脈内、関節内、筋肉内、皮内、皮下、吸入、鼻腔内、眼内、腹腔内、脳室内、経皮などが使用されうる。
【０１０４】
剤形には、錠剤、分散液、懸濁液、注射剤、溶液、シロップ剤、トローチ、カプセル剤、坐剤、エアロゾル、経皮用貼付剤などが挙げられる。これらの剤形はさらに、注射用若しくは移植用の制御放出デバイスであってこの目的のために特別に設計されたデバイス、又は他の形態の移植材料であってこの様式で付加的に作用するように改変されたものも含みうる。改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）、及び任意選択で１つ以上の追加の作用薬の制御放出は、前記のものを、例えば、アクリル樹脂、ろう、高級脂肪族アルコール、ポリ乳酸及びポリグリコール酸などの疎水性ポリマー、並びにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのある種のセルロース誘導体でコーティングすることにより、達成されうる。加えて、制御放出は、その他のポリマーマトリクス、リポソーム及び／又はミクロスフェアを使用することにより影響される場合もある。
【０１０５】
上記組成物は、投薬調合物に適合した方式で、かつ薬学的に有効／治療上有効であるような量で、投与されうる。対象者に投与される用量は、本発明に関しては、適正な時間にわたって対象者において有益な応答（例えば炎症の軽減）を達成するのに十分であるべきである。投与されるべき改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質（又はそのフラグメント、バリアント若しくは誘導体）の量は、治療を受ける対象者の年齢、性別、体重及び一般的健康状態、当分野の通常の技術を有する治療者の判断に応じて変化するであろう要因を含め、治療を受ける対象者によって変化しうる。
【０１０６】
本明細書に記載されるような組成物はさらに、ウイルスベクター（例えば、ワクシニア、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルス及びサイトメガロウイルスに由来するベクターなどの発現ベクターを含みうる。この関連で、米国特許第５，９２９，０４０号及び同第５，９６２，４２７号明細書に記された方法などによる遺伝子療法も適用可能である。
【０１０７】
本発明が容易に理解され、かつ実用的に具体化されうるように、以降の非限定的な実施例が提供される。
実施例
実施例１
組換え改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２はＩＢＤを抑制する（ＴＮＢＳモデル）
動物及びＴＮＢＳ誘発性大腸炎
６週齢の雄のスイスＣ５７Ｂｌ／６マウス（体重２０〜２５ｇ、オーストラリア連邦西オーストラリア州パースのアニマル・リソース・センター（Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅ））を、実験に使用する前に７日間順化させた。マウスはオーストラリア連邦の動物の権利及び規則（ａｎｉｍａｌ  ｒｉｇｈｔｓ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）の基準に従って飼育された。マウスに関する手技はすべて、ジェームズ・クック大学動物倫理委員会（Ｊａｍｅｓ  Ｃｏｏｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認された。
【０１０８】
大腸炎を、ノイラート（Ｎｅｕｒａｔｈ）ら（ザ・ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．）、１９９５年、第１８２巻、ｐ．１２８１−９０）が述べたようにＴＮＢＳを腸管腔内注入することにより誘発した。簡潔に述べると、マウスを、飲料水を自由摂取として２４時間断食させた。このマウスをケタミン（５０μｇ／ｋｇ）及びキシラジン（５μｇ／ｋｇ）の混合物によってｉ．ｐ．で麻酔した。次に、２．５ｍｇ  ＴＮＢＳの４５％エタノール溶液１００μＬを、３．２ｃｍ長の軟性カテーテルを通して直腸内注入した。ＴＮＢＳの注入後、マウスを、ＴＮＢＳ溶液の漏出を防ぐために上下逆で４５°の体勢に１分間保持し、その後ケージに戻して飼料及び水を自由摂取させた。
【０１０９】
実験プロトコール
０日目、マウスに、２０μｇの天然型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２、Ｔｒｕｎｃ‐Ａｃ‐ＴＭＦ‐２（配列番号１）又はＰＢＳ模擬注射剤を用いた単回の腹腔内注射を行った。５時間後、マウスに、穏やかな麻酔下で４５％エタノール中２．５ｍｇのＴＮＢＳを直腸内注入した。０日目から３日目まで、マウスを体重減少について毎日モニタリングした。３日目にマウスを安楽死させ、炎症の評価（結腸の長さ、壁肥厚、浮腫、及び潰瘍）のために結腸を収集した。
【０１１０】
結果
改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２は図１に示されている。本発明に至るまでの作業において、Ｃ末端アミノ酸配列ＧＬＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＮＳＡＶＤをＮ末端配列ＥＡＥＡＥＦと共に野生型Ａｃ‐ＴＭＰ２から欠失させた。これらの欠失については、ＴＩＭＰがＭＭＰ活性部位クレフトへの挿入とその後の触媒活性の阻害を可能にするためにＮ末端のＣ‐Ｘ‐Ｃモチーフを必要とするようであるという本発明者らの見解に照らして研究された。天然型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２及び改変型（すなわち短縮型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ））Ａｃ‐ＴＭＰ‐２はいずれも、模擬注射がなされたＴＮＢＳ群と比較した時、マウスの各群の平均としてプロットされた絶対的体重減少（図３Ａ）及び体重減少率（％）（図３Ｂ）として示されたように体重減少からマウスを有意に保護した。
【０１１１】
Ｔｒｕｎｃ‐Ａｃ‐ＴＭＰ‐２を、結腸長さ（図４Ａ）及び微視的スコア（図４Ｂ）についてさらに評価した。いずれの尺度についても、天然型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２及び短縮型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２は腸の病変の有意な軽減を示した（図４）。Ｔｒｕｎｃ‐Ａｃ‐ＴＭＰ‐２のこの保護効果はさらに、図４Ｃにおける、ナイーブなマウス（Ａ）、ＴＮＢＳ（Ｂ）、天然型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｃ）及びＴｒｕｎｃ‐Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（Ｄ）で処置されたマウス由来の結腸においても、極めて明白である。
【０１１２】
したがって、Ｔｒｕｎｃ‐Ａｃ‐ＴＭＰ‐２は、ＩＢＤのマウスモデルにおいて天然型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２と比べて同様の保護的特性を実証している。
実施例２
組換え改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２（ＡＩＰ‐２）は喘息を抑制する
材料及び方法
マウス．  ３〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ．ＡＲＣマウスをアニマル・リソース・センター（オーストラリア連邦、パース）から購入し、オーストラリア連邦の動物の権利及び規則の基準に従ってＳＰＦ条件下で飼育した。ウォルター・アンド・イライザ・ホール研究所（Ｗａｌｔｅｒ  ａｎｄ  Ｅｌｉｚａ  Ｈａｌｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（オーストラリア連邦、メルボルン）のＬ．スコフィールド（Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ）を介してＳ．アキラ（日本国の大阪大学）より提供いただいたＭｙＤ８８‐ＴＲＩＦＦ  ＫＯマウス、及びＤＥＲＥＧマウス（２５）を、オーストラリア連邦クイーンズランド州ケアンズのジェームズ・クック大学（ＪＣＵ）の動物設備で繁殖させた。実験プロトコールはすべてＪＣＵ動物倫理委員会によって承認された。
【０１１３】
試薬．  イヌ鉤虫（Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ）の成体鉤虫を以前に記述されたようにして培養した（１６）。上清（ＡｃＥＳ）を収集し、Ｅｎｄｏｔｒａｐ（登録商標）Ｂｌｕｅ（ハイグロス（Ｈｙｇｌｏｓ））を製造業者の指示書に従って用いるか又はＴｒｉｔｏｎＸ‐１１４（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を若干の変更を伴って使用するか（１６）の２つの方法のうち一方を使用してエンドトキシンを除去した。組換えＡｃ‐ＡＩＰ‐２を、他所に記述された方法（３１）を用いて酵母ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）において分泌タンパク質として発現させた。Ａｃ‐ＡＩＰ‐２の成熟配列（アミノ酸１７〜２４４）をコードするｃＤＮＡを、ＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩの制限酵素切断部位を使用してｐＰＩＣＺαＡ（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））にインフレームでクローニングした。組換えプラスミドをＳａｃＩ消化によって線形化し、製造業者の指示書（インビトロジェン）に従ったエレクトロポレーションによってＰ．パストリスＸ‐３３株の形質転換に用いた。形質転換体を、ｚｅｏｃｉｎ（商標）を含有する酵母エキス・ペプトン・デキストロース・プレート上で選択し、ウェスタンブロットによって組換えタンパク質の発現について評価した。ウェスタン法で陽性のクローンを振盪機フラスコの中で生育させ、組換えの６×Ｈｉｓタグ付きＡｃ‐ＡＩＰ‐２の発現を製造業者の指示書（インビトロジェン）のとおりにメタノールで誘発した。組換え融合タンパク質をニッケルアフィニティカラムで精製し、Ａｃ‐ＡＩＰ‐２を含有する溶出液をＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ遠心濃縮器を使用して濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）にバッファー交換した。ＡｃＥＳ及びＡｃ‐ＡＩＰ‐２におけるリポ多糖類含量は、リムルスアメボサイトライセート（Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  、ＬＡＬ）アッセイ（ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ））を使用して測定したところ５ｎｇ／ｍｇ未満であった。ＡＩＰ‐２を、以前に記述されたようにして（１６）トリプシン消化（１μｇ／ｍｌ）（シグマ）及び加熱変性によって変性させた。ＡＩＰ‐２を、タンパク質標識キットを使用して製造業者の指示書（ライフ・テクノロジーズ）に従ってＡｌｅｘ  Ｆｌｕｏｒ６４７で標識した。イエダニ抽出物は  から購入した。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１９、Ｂ２２０、１２０Ｇ８、ＴＣＲ、Ｆｏｘｐ‐３、ＣＣＲ９、ＣＤ１０３、ＣＴＬＡ‐４、Ｆ４／８０、Ｓｉｇｌｅｃ‐Ｆ、Ｇｒ‐１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｂ、ＩＡ／ＩＥ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、及びＩＬ‐１７Ａに対するモノクローナル抗体は、イーバイオサイエンシズ（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＢＤバイオサイエンシズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）から購入した。
【０１１４】
ＡｃＥＳ又はＡＩＰ‐２での処置及びアレルギー喘息の誘導．  感作は、０日目及び７日目の、２ｍｇの水酸化アルミニウム（アラム（Ａｌｕｍ））（ピアス）に含めた２０μｇのエンドトキシン非含有ＯＶＡ（ハイグロス）の２回のｉ．ｐ．注射によって実施した。１２〜１６日目に、マウスをＰＢＳ（オーストラリア連邦のライフ・テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））中１ｍｇ／ｋｇのＡｃＥＳ又はＡＩＰ‐２で処置した。１４〜１８日目、マウスを、超音波ネブライザ（（アレルサーチ（Ａｌｌｅｒｓｅａｒｃｈ）のＶｅｎｔａｌａｉｒ  Ｍａｘ）を使用して１日１回のＯＶＡ（０．２％）（シグマ）又はＰＢＳのいずれかのエアロゾルに２０分間曝露した。２０日目、マウスを肺機能及びアレルギー性気道疾患の特質について解析した。
【０１１５】
気道過敏性．  動的肺レジスタンス及びコンプライアンスの侵襲的測定を、以前に記述されようにして（３２）、Ｆｌｅｘｉｖｅｎｔ（商標）（ＳＣＩＲＥＱ（登録商標）製、エムカ・テクノロジーズ（Ｅｍｋａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を使用して最後のエアロゾル攻撃の２日後に実施した。簡潔に述べると、マウスを麻酔し（５０ｍｇ／ｋｇのケタミン及び５ｍｇ／ｋｇのキシラジン）、気管切開し、直ちに１８Ｇのカテーテルを挿管した後に機械的人工換気を行った。呼吸頻度は０．２ｍｌの一回換気量で呼吸１５０回／分に設定し、２ｍｌのＨ２Ｏの陽性呼気終圧を適用した。漸増濃度のメタコリン（０〜５０ｍｇ／ｍｌ）を、ネブライザヘッドによって生成されるエアロゾル粒度が２．５〜４．０μｍであるネブライザエアロゾルシステム（Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）、エアロゲン（Ａｅｒｏｇｅｎ））によって、エアロゾル送達の各パフ（一吹き）が１０ミリ秒持続する、１０秒当たり２０パフの速度で投与した。ベースラインのレジスタンスはメタコリンの次の用量を投与する前に回復させた。
【０１１６】
ＢＡＬＦ細胞の解析．  マウスを尾部大静脈の切断により出血させ、カニューレを気管に挿入した。肺を、１ｍｌの加温したＰＢＳを用いて３回洗浄した。分類別ＢＡＬＦ細胞計数については、細胞を、抗Ｓｉｇｌｅｃ‐ｆ  ｍＡｂ、抗Ｇｒ１  ｍＡｂ、抗ＣＤ３  ｍＡｂ及び抗ＣＤ１９  ｍＡｂ（ＢＤバイオサイエンシズ）で染色し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメーター及びＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）ソフトウェアを用いたフローサイトメトリーによって解析した。好酸球はＳｉｇｌｅｃ‐Ｆ＋ＣＤ３−ＣＤ１９−として、好中球はＧｒ‐１ｈｉｇｈＣＤ３−ＣＤ１９−として、リンパ球はＣＤ３＋ＣＤ１９＋として、肺胞マクロファージは大型の自家蛍光細胞として定義した。
【０１１７】
血清中抗体の測定．  血清中のＯＶＡ特異的なＩｇＧ２ａ及びＩｇＥをＥＬＩＳＡによって測定した。抗原でコーティングしたＭａｘｉｓｏｒｐ（商標）プレート（ヌンク（Ｎｕｎｃ））を、血清の連続希釈物及びビオチン化した抗ＩｇＧ２ａ又は抗ＩｇＥ  ｍＡｂ（ＢＤ）とともにインキュベートした。ＨＲＰ結合ストレプトアビジン（ＢＤバイオサイエンシズ）及びＴＭＢ（ＫＰＬ）を検出に使用した。
【０１１８】
サイトカインアッセイ．  肺の試料を、カルシウム及びマグネシウムを含まないハンクス平衡塩類溶液及びホスファターゼ・プロテアーゼ阻害剤カクテル（ロッシュ（Ｒｏｃｈｅ））中で均質化した。ＩＬ‐５、ＩＬ‐１３、ＩＬ‐１７Ａ及びＩＦＮ‐  の多重解析は、ＦＡＣＳアレイ（ＢＤバイオサイエンシズ）を用いたサイトカインビーズアレイ（ＣＢＡ）で実施した。
【０１１９】
組織の処理過程．  気管、肺、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、末梢リンパ節（上腕、鼠径、及び膝窩）又は脾臓を、２％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、４００ＵのタイプＩコラゲナーゼ及び１ｍｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅＩ（ライフ・テクノロジーズ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中でミルテニー（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）のＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）を使用して処理し、３７℃で１５分間インキュベートした。細胞を７０μｍのセルストレーナで処理した。赤血球をＡＣＫ溶解バッファーを用いて溶解させた。ｓｉＬＰが、以前に記述されたようにして（３３）、５％のＦＣＳ、５ｍＭのＥＤＴＡ、及び２ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）を含有するＲＰＭＩの中で消化した後に得られた。簡潔に述べると、パイエル板を取り出し、組織断片を撹拌下で３０分間インキュベートした。腸上皮リンパ球を濾別して廃棄し、残りを５％のＦＣＳ、４００ＵのタイプＩコラゲナーゼ及び１ｍｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅＩを含有するＲＰＭＩ中でさらに３７℃で３０分間インキュベートした。小腸固有層の細胞を濾別してフローサイトメトリーのために染色した。
【０１２０】
腸の外科手術．  ３週齢のＢＡＬＢ／ｃ．ＡＲＣマウスをケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、以前に記述されたようにして（２６）小腸及び大腸のＭＬＮを取り出した。ＭＬＮ切除（ＭＬＮｒｘ）の実験については、腸を、ＭＬＮを除去した後で腹部に戻した。ＭＬＮ移植（ＭＬＮｔｘ）の実験については、ＭＬＮをＡＩＰ‐２又はＰＢＳで処置したドナーから単離した。宿主の小腸及び大腸のＭＬＮを除去し、この領域にドナーのＭＬＮを移植した。マウスを、次の実験の前に６週間回復させた。
【０１２１】
統計解析．  プレチスモグラフィ測定値についてマウス群間の差異のレベルを決定するために、反復測定の分散分析を使用した。すべての対についての比較を、対応のない両側スチューデントｔ検定によって実施した。有意水準はＰ値０．０５に設定した。
【０１２２】
結果及び考察
免疫疫学的な観察から、アレルギーに対する蠕虫感染の保護効果が浮かび上がってきている（１〜３）。エチオピア農村部のほぼ１３，０００人の人々を含めた１つのそのような研究から、喘鳴のリスクが、鉤虫であるアメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）の感染によって独立に軽減されるがウイルス曝露とは無関係であることが見出された（４）。より最近では、アメリカ鉤虫又はブタの鞭虫であるブタ鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｓｕｉｓ）を用いた実験的感染の効力が、炎症性腸疾患（５〜７）、多発性硬化症（８）、喘息（９）及び鼻炎（２）について臨床試験で評価されている。本発明者らは最近、実験的な低量の鉤虫感染をグルテンの微量攻撃（ｍｉｃｒｏｃｈａｌｌｅｎｇｅ）と結び付けてセリアック病罹患者のグルテン寛容性を劇的に改善する、非盲検臨床試験を完了した（１０）。グルテンに対する寛容性の改善は、ＩＦＮ‐γを産生する腸上皮細胞の頻度の減少及び腸内のＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の頻度の増加と合致していた。慢性的な炎症状態の治療における多大な関心がワームによるプロバイオティック療法に寄せられてきた（１１）一方で、生きた病原体を用いる実験的ヒト感染の影響（１２）、及び治療手段としてのその潜在的な拡張可能性を中心に懸念が広がっている。保護作用のあるワーム分子を同定すれば、この問題を回避し、かつ免疫系の調節異常に起因する一連の障害を治療するための蠕虫由来の生物製剤の開発を促進することも可能ではなかろうか。ワーム由来の免疫変調分子はほとんど特徴解析されておらず、またマウスの炎症性疾患に対する保護が実証されたものはさらに少ない（１３、１４）。本発明者らは以前、鉤虫の排泄／分泌生成物（ＡｃＥＳ）が化学的に誘発されたマウスの大腸炎を変調すること、及び保護作用のある構成部分はタンパク質であることを示した（１５、１６）。本明細書中では、本発明者らは、ＡｃＥＳが実験的喘息に対する保護を示すこと、及びこの保護は恐らく、少なくとも部分的には、本発明者らがＡＩＰ‐２と名付けたタンパク質の分泌に起因することを示す。本発明者らは、組換えＡＩＰ‐２が腸間膜のＣＤ１０３＋樹状細胞の増加を引き起こす結果として、粘膜にホーミングするＴｒｅｇの生成をもたらすことを示す。さらに、本発明者らは、ＡＩＰ‐２が腸間膜のリンパ組織に対する調節促進性の（ｐｒｏ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ）インプリントをもたらして、アレルギー喘息からの長期にわたる特異的保護を促進することを示す。
【０１２３】
ＡｃＥＳによりもたらされる保護は、化学的に誘発された大腸炎を代表とする、Ｔｈ１／１７が介在する疾患のモデルにおいて報告されているが（１５、１６）、アレルギー性の気道疾患のような主としてＴｈ２が介在する炎症のモデルでは報告されていない。ここで、本発明者らは、マウスをＯＶＡ／アラムで感作させ、腹腔内（ｉ．ｐ）のＡｃＥＳ又はビヒクル（ＰＢＳ）で処置した。ビヒクルで処置したマウスと比較して、肺の気管支周囲及び血管周囲への細胞浸潤並びに粘液分泌過多は、ＡｃＥＳで処置されたマウスにおいて有意に減少した（図９ａ、ｂ）。共に肺のＴｈ２サイトカインであるＩＬ‐５及びＩＬ‐１３、並びに炎症誘発性サイトカインであるＩＬ‐６及びＩＬ‐１７Ａは、ＡｃＥＳ処置の後に減少した（図９ｃ）。ＩＦＮ‐γのレベルは検出できなかった（データは示さない）。ＯＶＡ特異的なＩｇＥ及びＩｇＧ２ａの血清中の力価は、ビヒクル対照と比較して、ＡｃＥＳで処置されたマウスにおいて有意に減少した（図９ｄ）。ＡｃＥＳのプロテオミクス解析（１７）から、２つの組織マトリックスメタロプロテアーゼ阻害物質（ＴＩＭＰ）様タンパク質、Ａｃ‐ＴＭＰ‐１及びＴＭＰ‐２の、豊富な発現が明らかとなった（１８、１９）。Ａｃ‐ＴＭＰ‐２については明白なメタロプロテアーゼ阻害特性が存在しない状態であり（２０）、その提唱された機能をめぐる混乱を避けるために、本発明者らはこれを、本明細書中に記述されたその抗炎症特性に基づいてイヌ鉤虫の抗炎症性タンパク質（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）‐２（Ａｃ‐ＡＩＰ‐２、又はＡＩＰ‐２）に名称変更した。
【０１２４】
組換えＡＩＰ‐２が実験的喘息からの保護をなしうるかどうかを判断するために、マウスをＯＶＡ／アラムで感作させ、ＡＩＰ‐２、熱／プロテアーゼで変性させたＡＩＰ‐２（ｄＡＩＰ‐２）、又はビヒクルで処置し、エアロゾル化されたＯＶＡ又はＰＢＳで攻撃した（図５ａ、１０）。ＡＩＰ‐２で処置されたマウスは、肺の気管支周囲及び血管周囲の細胞浸潤、粘液分泌過多並びにコラーゲン沈着の有意な減少を示した（図５ｂ）。肺のレジスタンス及びコンプライアンスはＡＩＰ‐２処置によって有意に改善し（図５ｃ）、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）分類別細胞計数は、これらのマウスにおける好酸球及びリンパ球の浸潤の有意な減少を示した（図５ｄ）。ｄＡＩＰ‐２で処置されたマウスは気道炎症から保護されず（図１０ａ、ｂ）、サイトカインのレベルは、ビヒクル群及びｄＡＩＰ‐２対照群と比較してＡＩＰ‐２処置群において有意に低かった（図５ｅ、１０ｃ）。同様に、ＯＶＡ特異的なＩｇＥ及びＩｇＧ２ａの血清中の力価は、ＡＩＰ‐２で処置されたマウスにおいて対照よりも有意に低かった（図５ｆ）。ＡｃＥＳの注射（ｉ．ｐ．）は腹腔好酸球増多をもたらす（１６）。ＡＩＰ‐２が同様の効果を引き起こさず、気道への細胞浸潤が無いことを説明していると思われることを検証するために、ＡＩＰ‐２で処置したマウスから腹腔洗浄液を収集したところ、対照と同数の好酸球、リンパ球、好中球及びマクロファージを含有することが見出された（図１１）。ＡＩＰ‐２が全般的な免疫抑制能を有していないことを検証するために、マウスをＡＩＰ‐２又はビヒクルで処置し、次いで完全フロイントアジュバント中のＯＶＡを足蹠に注射した。膝窩リンパ節を収集し、細胞を計数してｉｎ  ｖｉｔｒｏにてＯＶＡで再刺激した（図１２ａ）。細胞充実度並びにＩＦＮ‐γ、ＩＬ‐６、及びＴＮＦ‐αのレベルは、ＡＩＰ‐２で処置されたマウス及びビヒクル対照のマウスいずれにおいても同様であった（図１２ｂ、ｃ）。
【０１２５】
ＡＩＰ‐２を介した保護を統制する細胞機構の理解を試みるため、本発明者らはまずＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達が関与するかどうかを確認しようと考えた。この目的のために、Ｂ６．ＭｙＤ８８−／−／Ｔｒｉｆ−／−マウスをＯＶＡに感作させ、その後野生型（ＷＴ）のマウスとともにＡＩＰ‐２又はビヒクルで処置した。ＢＡＬＦ分類別細胞計数並びに肺のＩＬ‐５及びＩＬ‐１３濃度は、攻撃に先立ってＡＩＰ‐２又はビヒクルで処置されたＷＴ及びＢ６．ＭｙＤ８８−／−／Ｔｒｉｆ−／−マウスの間で有意には異なっていなかった（図１３）。
【０１２６】
ＡＩＰ‐２のその細胞標的をさらに調査するために、本発明者らは、治療の対象となる特定の組織を同定しようと努めた。ナイーブなマウスに、ＡＩＰ‐２又はビヒクルを５日間毎日注射した。多数の組織を収集及び解析したところ、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）細胞が、上腕、膝窩及び鼠径リンパ節、脾臓、パイエル板、小腸の上皮細胞及び固有層との相対比較において有意に増加したことが明らかとなった（図１４ａ）。ＡＩＰ‐２と関連して気道疾患の抑制を仲介したＭＬＮ中の細胞集団を同定するために、ＡＩＰ‐２をＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７で標識して上記のようにして注射した。ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（ＤＣ）及びＣＤ１９＋Ｂ細胞の頻度は両方とも処置によって有意に増大したが（図１４ｂ）、ＣＤ１１ｃ＋細胞がＡＩＰ‐２を捕捉する主要な集団であった（図６ａ、１４ｃ）。さらなる解析から、大多数のＡＩＰ‐２＋ＣＤ１１ｃ＋細胞はＣＤ１０３を共発現し（図６ｂ）、かつこの集団はＡＩＰ‐２処置の後に選択的に増加すること（図６ｃ）が実証された。解析されたすべてのＤＣ亜集団におけるＣＤ８０及びＣＤ８６の発現に差異はなかったが、ＡＩＰ‐２の投与はＭＨＣＩＩの発現の有意な減少を引き起こし（図１４ｃ）、これは異なる鉤虫ＴＩＭＰ様タンパク質に関する初期の報告と一致する知見である（２１）。
【０１２７】
ＭＬＮのＣＤ１０３＋ＤＣ及び寄生性蠕虫はいずれも、寛容性を誘導かつ維持するその能力について注目されている（２２〜２４）。したがって、本発明者らは、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）集団に対するＡＩＰ‐２治療の影響について調べた。本発明者らは、治療の際の気道及び腸粘膜のＴｒｅｇについて、Ｔｒｅｇが腸ホーミングレセプターＣＣＲ９を発現していた場合に（図６ｅ）、ビヒクルと比較して２倍の増加を観察した（図６ｄ）。気道炎症に対してＡＩＰ‐２によって誘導される保護におけるＴｒｅｇの役割を評価するために、本発明者らはＢ６．Ｆｏｘｐ３ＤＴＲ（ＤＥＲＥＧ）マウスを利用した。ＤＥＲＥＧマウスは、ｆｏｘｐ３遺伝子座の制御下にジフテリア毒素（ＤＴ）レセプター増強型の緑色蛍光タンパク質融合タンパク質を発現し、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの選択的かつ効率的な枯渇が可能となっている（２５）。ＤＥＲＥＧマウスをＯＶＡに感作させ、ＤＴに曝露し又は曝露させず、ＡＩＰ‐２又はビヒクルで処置し、エアロゾル化されたＯＶＡ又はＰＢＳで攻撃した（図６ｆ）。ＤＴで処理されなかったＤＥＲＥＧマウスにおいてはＡＩＰ‐２処置に対する同様の応答が観察されたが、Ｔｒｅｇを特異的に欠失させると、好酸球増多及び気道へのリンパ球浸潤（図６ｇ）、肺におけるＩＬ‐５及びＩＬ‐１３の産生（図６ｈ）、並びにＯＶＡ特異的な血清中ＩｇＥ及びＩｇＧ２ａの産生（図６ｉ）に対するこれらのマウスにおける保護は完全に無効化された。
【０１２８】
ＭＬＮは、レチナールデヒドデヒドロゲナーゼ２及びＣＤ１０３＋ＤＣと相互作用した際に（この時にＣＣＲ９を獲得することになる）ナイーブＴ細胞のＴｒｅｇへの変換を可能にする特異的性質を有する（２２、２６）。ＡＩＰ‐２によって生じた免疫応答の起原を明白に実証するために、ＭＬＮを外科的に切除し（ｒｘ）、マウスを６週間回復させ（２６）、その後ＡＩＰ‐２を用いて処置した（図７ａ）。ＷＴマウスとＭＬＮｒｘマウスとの間で末梢血中にＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の度数の大きな差は観察されなかった一方、ＴｒｅｇはＭＬＮｒｘマウスの気道及び腸粘膜において有意に減少した（図７ｂ）。小腸固有層における、ＣＣＲ９及びＣＴＬＡ‐４を発現するＴｒｅｇの有意な減少は、ＡＩＰ‐２が腸間膜を起源とするＴｒｅｇを新たに（ｄｅ  ｎｏｖｏ）誘導するという証拠を支持している（図７ｃ）。気道炎症からの保護における腸間膜の重大な役割を立証するために、ＭＬＮｒｘを実施したか又は未実施のマウスを、続いてＯＶＡに感作させ、ＡＩＰ‐２又はビヒクルで処置し、回復期間が終了したらＯＶＡ又はＰＢＳのエアロゾルで攻撃した（図７ｄ）。ＡＩＰ‐２で処置されたＭＬＮｒｘマウスは、気道過敏性、好酸球の気道浸潤、肺でのＩＬ‐５及びＩＬ‐１３の産生、並びにＯＶＡ特異的な血清中ＩｇＥ及びＩｇＧ２ａから保護されなかった（図７ｅ〜ｈ）。最後に、ＡＩＰ‐２がＭＬＮの微小環境を改変するかどうかを調べるために、マウスを前述のようなＡＩＰ‐２又はビヒクルにより処置し、ＭＬＮを外科的に摘出し、ナイーブなレシピエントに該宿主の腸間膜組織と置き換えて移植した（図７ｉ）。回復後、マウスをＯＶＡに感作させ、ＯＶＡ又はＰＢＳのエアロゾルで攻撃した。移植の９週間後、ＡＩＰ‐２で処置されたドナーからＭＬＮｔｘを受け取ったマウスは、気道過敏性、肺の好酸球増多、ＢＡＬＦのリンパ球浸潤、並びに肺でのＩＬ‐５及びＩＬ‐１３の産生から依然として保護されていた（図７ｊ〜ｌ）。
【０１２９】
ヒト生物製剤の投与は、典型的には腸管外経路によるが、より侵襲性の低い送達システムが望ましい（２７）。ＡＩＰ‐２が粘膜に直接送達された場合に気道炎症を予防することがあり得るかどうかを判断するために、本発明者らはこれを肺に鼻腔内ボーラス投与したところ（図８ａ）、ＡＩＰ‐２は肺への好酸球の動員及び肺におけるＴｈ２サイトカイン産生からの有意な保護（図８ｂ、ｃ）、並びにＯＶＡ特異的な血清中ＩｇＥ及びＩｇＧ２ａの力価の有意な低減（図８ｄ）をもたらした。さらに、ＯＶＡ誘発性の気道炎症が既に確立してしまってから該炎症をＡＩＰ‐２が抑制することがあり得るかどうかを判断するために、マウスに、最初のＯＶＡエアロゾル投与の２日後から始めて４日間にわたり毎日ＡＩＰ‐２を注射した（図８ａ）。エアロゾル攻撃の間のＡＩＰ‐２の治療的送達は、肺への好酸球の動員及び肺におけるＴｈ２サイトカイン産生、並びにＯＶＡ特異的な血清中ＩｇＥからの、有意な保護をもたらした（図８ｂ〜ｄ）。
【０１３０】
最後に、ＡＩＰ‐２がヒトの細胞に作用する免疫調節性を有するかどうかを判断するために、ＰＢＭＣを、臨床的にイエダニ（ＨＤＭ）アレルギーとされたヒト対象者から単離した。細胞をＣＦＳＥで標識し、ＡＩＰ‐２又はビヒクルの存在下、ＨＤＭ抽出物で５日間刺激した。ＰＢＭＣのＨＤＭ刺激は特異的な増殖応答をもたらしたが、これはＡＩＰ‐２の存在下では顕著に軽減された（図８ｅ）。
【０１３１】
まとめると、ＡＩＰ‐２は、ＭＬＮにおけるＣＤ１０３＋ＤＣによるＴｒｅｇの活性化及び増加を伴う新規な作用機構を介して、アレルギー性の気道炎症からの強力な保護を提供する。ＡＩＰ‐２で誘導されたＴｒｅｇは胸腺外で分化するようであり、したがって、肺又は腸における共生的な微生物コミュニティの組成への直接的な効果によって粘膜のＴｈ２炎症を制御するのかもしれない（２８、２９）。ＡＩＰ‐２の作用機構は、典型的にはＩＬ‐１０を産生するタイプ２マクロファージ、又は記憶Ｔ細胞の電位作動型カリウムチャネルの変調を介する、炎症を抑制する他の蠕虫組換えタンパク質の作用機構とは異なっている（１３、１４、３０）。本発明者らの知見は、全般的な免疫抑制を誘導することなく調節性の応答の生成を促進する、ＡＩＰ‐２の重要かつ長期的な効果を示している。ＡＩＰ‐２は、リンパ組織に対する長期的なインプリントを生じることによりエフェクターＴ細胞と調節性Ｔ細胞の応答のバランスをリセットするように見えるが、これは精製タンパク質についてはこれまで報告されていない現象である。本発明者らの研究は、実験的な蠕虫感染よりも受け入れやすくかつ調節が容易な治療手段である、蠕虫組換えタンパク質の治療的潜在力を浮き彫りにしている。この新規な部類の生物製剤は、先進国において驚くべき有病率に達した多種多様な炎症性疾患にとって魅力あるものである。
【０１３２】
本明細書全体にわたって意図されてきたのは、本発明をいかなる１つの実施形態にも具体的な特徴の集まりにも限定することなく、本発明の好ましい実施形態について述べることであった。したがって、本開示に照らせば、本発明の範囲から逸脱することなく、例示された特定の実施形態に様々な改変及び変更をなすことが可能であることは、当業者によって認識されよう。
【０１３３】
本明細書中で参照した全てのコンピュータプログラム、アルゴリズム、特許文献及び科学文献は参照により本願に組込まれる。
参考文献
【０１３４】
【表１−１】
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【０１３５】
【表１−２】
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【０１３６】
【表１−３】
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【０１３７】
【表１−４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年8月4日(2015.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
完全長若しくは野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在するＮ末端及びＣ末端のうち少なくともいずれか一方の１つ又は複数のアミノ酸を欠いている改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体であって、前記改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号５に記されたアミノ酸配列、又はそれらと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含み、前記改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体は、対象者に投与されると炎症の予防、軽減及び緩和のうち少なくともいずれかを行うことができる、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体。
【請求項２】
完全長若しくは野生型のＡｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質に通常は存在する複数のＣ末端アミノ酸を欠いており、前記複数のＣ末端アミノ酸は１つ又は複数の酸性アミノ酸を含む、請求項１に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体。
【請求項３】
Ｎ末端又はＮ末端付近にアミノ酸配列Ｃ‐Ｘ‐Ｃを含む、請求項１又は請求項２に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体。
【請求項４】
前記改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号５に記されたアミノ酸配列、又はそれらと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１、請求項２又は請求項３に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体。
【請求項５】
治療上有効な量の、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体を、薬学的に許容される賦形剤の担体希釈剤と共に含む医薬組成物。
【請求項６】
少なくとも１つの追加の作用薬をさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
対象者の炎症を軽減又は緩和するための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより炎症を軽減又は緩和するステップを含む方法。
【請求項９】
前記炎症は、対象者における疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに、関連しているか又は続発するものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは基準療法に対して抵抗性である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記基準療法は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの基準作用薬の投与を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも当初は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体は基準療法とともに補助的に投与される、請求項１０又は請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも当初は、改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体は、総用量よりも少なく投与される少なくとも１つの基準作用薬とともに補助的に投与される、請求項１０又は請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
対象者の炎症を予防するための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより炎症を予防するステップを含む方法。
【請求項１５】
前記炎症は、対象者における疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかに、関連しているか又は続発するものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは、免疫学的な疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかである、請求項９〜１３及び請求項１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫学的な疾患、障害及び状態のうち少なくともいずれかは、アジソン病、強直性脊椎炎、セリアック病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、クローン病、脱髄性ニューロパチー、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン‐バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、インスリン依存型糖尿病（１型）、若年性関節炎、川崎症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋梗塞後症候群、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、特発性肺線維症、ライター症候群、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、潰瘍性大腸炎、血管炎、白斑、及びウェゲナー肉芽腫症からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記疾患は消化管の疾患である、請求項９〜１３及び請求項１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記疾患は慢性胃炎又は炎症性腸疾患である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記炎症性腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記疾患は呼吸器系の疾患である、請求項９〜１３及び請求項１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記疾患は、喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
対象者の炎症性腸疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体、又は請求項５に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより炎症性腸疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うステップを含む方法。
【請求項２４】
前記炎症性腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
対象者の呼吸器系の疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うための方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体、又は請求項６に記載の医薬組成物を対象者に投与することにより呼吸器系の疾患の予防及び治療のうち少なくともいずれかを行うステップを含む方法。
【請求項２６】
前記呼吸器系の疾患は、喘息、気腫、慢性気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つの追加の作用薬を対象者に投与するステップをさらに含む、請求項８〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの追加の作用薬は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチラート、コルチコステロイド、免疫抑制薬、サイトカイン／サイトカインレセプター阻害薬、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象者は哺乳動物である、請求項８〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象者はヒトである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変型Ａｃ‐ＴＭＰ‐２タンパク質、又はそのフラグメント若しくは誘導体をコードする単離核酸。
【請求項３２】
請求項３１に記載の単離核酸を含む遺伝子構築物。
【請求項３３】
請求項３２に記載の遺伝子構築物を含む宿主細胞。
【国際調査報告】
2016532456.tif 000021
2016532456.tif 000022
2016532456.tif 000023