(57)【要約】本発明は、腫瘍のがん細胞含有部位におけるエフェクターＴ細胞の蓄積を増加させるための方法であって、それを必要とする被験体に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害剤を投与するステップを含む方法を記載するものである。腫瘍におけるＴ細胞排除を阻害する方法であって、患者に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与するステップを含み、該ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、該腫瘍中に含有されるがん細胞に混じった該Ｔ細胞の近接性または頻度が増加する、方法。
2016527303.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍におけるＴ細胞排除を阻害する方法であって、患者に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与するステップを含み、該ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、該腫瘍中に含有されるがん細胞に混じった該Ｔ細胞の近接性または頻度が増加する、方法。
【請求項２】
前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、前記腫瘍中に含有されるがん細胞に混じったＴ細胞の近接性および頻度の両方が増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記近接性が、がん細胞と最も近いＴ細胞との間の平均距離によって決定され、該近接性が２分の１、３分の１、４分の１、または５分の１に低下する、請求項１または２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記がん細胞に混じった前記Ｔ細胞の頻度が少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも３００％増加する、請求項１または２のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞がＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｔ細胞がＣＤ３＋エフェクターＴ細胞である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
宿主の免疫応答に対する前記がん細胞の感受性を増加させる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記腫瘍における免疫抑制を低下させる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｔ細胞がアポトーシスを引き起こす、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記腫瘍内でのがん細胞認識が増加する、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
がん細胞成長が阻害される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
がん細胞が除去される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍塊が減少する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記腫瘍がＦＡＰ＋間質細胞を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記腫瘍が免疫療法に対して抵抗性である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記腫瘍が、腺癌、肉腫、皮膚がん、黒色腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮がん、卵巣がん、前立腺がん、肺がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、肝臓がん、頭頸部がん、食道がん、膵がん、膵管腺癌（ＰＤＡ）、腎がん、胃がん、多発性骨髄腫または大脳のがんである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤がＣＸＣＬ１２アンタゴニストである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＸＣＬ１２アンタゴニストが抗ＣＸＣＬ１２抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＸＣＬ１２アンタゴニストが、
ａ．ＲＮＡオリゴヌクレオチドＮＯＸ−Ａ１２、および
ｂ．タンニン酸
から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤がＣＸＣＲ４アンタゴニストである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストが抗ＣＸＣＲ４抗体である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストが、
（ａ）ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、
（ｂ）ＬＹ２５１０９２４、
（ｃ）１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］（ＡＭＤ３１００；プレリキサホル）、
（ｄ）Ｎ，Ｎ−ジプロピル−Ｎ−［４−（｛［（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンジル］［（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル］アミノ］メチル）ベンジル］−Ｎ−メチルブタン−１，４−ジアミントリ（２Ｒ，３Ｒ）−タートレート（ＫＲＨ−３９５５）、
（ｅ）（［５−（４−メチル−１−ピペラジニル）−２−（｛メチル［（８Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ−８−キノリニル］アミノ｝メチル）イミダゾ［１，２−α］ピリジン−３−イル］メタノール）（ＧＳＫ８１２３９７）、または
（ｆ）Ｎ−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ’−（５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−８−イル）ブタン−１，４−ジアミン（ＡＭＤ１１０７０）
から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
チェックポイントアンタゴニストを投与するステップも含む、請求項１７から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記チェックポイントアンタゴニストが前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と相乗的である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記チェックポイントアンタゴニストがＰＤ−１シグナル伝達阻害剤である、請求項２３または２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤がＰＤ−１アンタゴニストである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＰＤ−１アンタゴニストが抗ＰＤ−１抗体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤がＰＤＬ−１アンタゴニストである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＰＤＬ−１アンタゴニストが抗ＰＤＬ−１抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記チェックポイントアンタゴニストがＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、またはＬＡＧ３アンタゴニストである、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項３１】
Ｔ細胞補助受容体アゴニストを投与するステップも含む、請求項１７から２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記Ｔ細胞補助受容体アゴニストが抗Ｔ細胞補助受容体抗体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗Ｔ細胞補助受容体抗体が抗４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体または抗ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）抗体である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ｔ細胞補助受容体アゴニストが前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と相乗的である、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
他の抗がん療法を施すステップも含む、請求項１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗がん療法が、化学療法剤、放射線療法、がん療法、免疫療法、またはがんワクチンから選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫療法が、養子Ｔ細胞療法、または腫瘍細胞を認識するようにＴリンパ球を誘導するよう設計されたがんワクチン調製物から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記がんワクチンが、前記がん細胞上で発現される１種または複数種の腫瘍抗原を認識する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記腫瘍抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＧＡＧＥ−Ｉ、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−Ｉ、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１／ＣＴ７、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｉ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−ＩおよびＸＡＧＥ、メラニン形成細胞分化抗原、ｐ５３、ｒａｓ、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＰＭＳＡ、ＰＳＡ、チロシナーゼ、メランＡ、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、ｇｐ７５、アルファ−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、ベータカテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−２、および３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲアルファ融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、ＮＡ−８８、ＳＰ１７、およびＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、（ＭＡＲＴ−Ｉ）、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、アルファ−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３  （ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３  （ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼１７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合性タンパク質＼シクロフィリンＣ−関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、チロシナーゼ関連タンパク質、ＴＲＰ−１、またはＴＲＰ−２、またはメソテリンから選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗がん療法が、アスピリン（asprin）、スリンダク、クルクミン、ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）；トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）などのエチレンイミン／メチルメラミン、トリエチレン、チオホスホラミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などのトリアジンを含めたアルキル化剤；葉酸類似体、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、５−フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、２，２’−ジフルオロデオキシシチジン、プリン類似体、例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２’−デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン、および２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ）を含めた代謝拮抗薬；抗有糸分裂薬、例えば、パクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、およびビノレルビンを含めたビンカアルカロイド、タキソテレ、エストラムスチン、ならびにリン酸エストラムスチンを含めた天然物；エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニポシド；抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、およびアクチノマイシン；酵素、例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ、サイトカイン、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータおよびＧＭ−ＣＳＦ、抗血管新生因子、例えば、アンジオスタチンおよびエンドスタチン、ＦＧＦまたはＶＥＧＦの阻害剤、例えば、可溶性ＶＧＦ／ＶＥＧＦ受容体を含めた血管新生因子の受容体の可溶性の形態、白金配位錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン、アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン、置換尿素、例えば、ヒドロキシウレア、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）およびプロカルバジンを含めたメチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制薬、例えば、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）およびアミノグルテチミド；副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、例えば、プレドニゾンおよび等価物、デキサメタゾンならびにアミノグルテチミド；プロゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロール；エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール等価物；抗エストロゲン薬、例えば、タモキシフェン；プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン／等価物を含めたアンドロゲン；抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロリド；非ステロイド性抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミドを含めたホルモンおよびアンタゴニスト；キナーゼ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、メチル化阻害剤、プロテアソーム阻害剤、モノクローナル抗体、酸化剤、抗酸化剤、テロメラーゼ阻害剤、ＢＨ３模倣物、ユビキチンリガーゼ阻害剤、ｓｔａｔ阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧｌｅｅｖａｃまたはＧｌｉｖａｃとして販売されている）および現在Ｔａｒｖｅｃａとして販売されているエルロチニブ（ＥＧＦ受容体阻害剤）；ならびに抗ウイルス薬、例えば、リン酸オセルタミビル、アンホテリシンＢ、およびパリビズマブから選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と前記抗がん療法とを同時に投与する、請求項３５から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と前記抗がん療法とを別々に投与する、請求項３５から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と前記抗がん療法とを逐次的に投与する、請求項３５から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記患者がヒトである、請求項１から４３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍の療法に関する。具体的には、本発明は、免疫抑制を低下させるまたは予防すること、ならびにＣＤ３＋Ｔ細胞、好ましくはＣＤ３＋エフェクターＴ細胞の腫瘍からの排除および死滅および抗腫瘍Ｔ細胞活性の抑制を克服するためにがん性腫瘍微小環境におけるＴ細胞の動員および蓄積を増加させることに関する。
【背景技術】
【０００２】
序論
がんの免疫療法は、ＣＴＬＡ−４に対するブロッキングモノクローナル抗体およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１受容体／リガンド対に対するブロッキングモノクローナル抗体によりＴ細胞の免疫チェックポイントを克服し、それにより、がん患者における顕著な結果を導くことに焦点を当てることによって最近の進歩を成しとげた（１〜６）。しかし、多くの患者は、これらの免疫チェックポイントアンタゴニストに応答しなかったが、その理由は分かっていない。例えば、米国におけるがんに関連した死亡の最も一般的な原因の第４位である膵管腺癌（ＰＤＡ）の患者では、α−ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体（７）またはα−ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（５）に対する目的とする応答はなかった。
【０００３】
がんは、米国における死亡の主な原因の第２位であり、これを超えるのは心疾患のみである。がんの診断および処置の最近の進歩にもかかわらず、がんが初期に発見されれば外科手術および放射線治療が治癒的なものになり得るが、転移性疾患に対する現行の薬物療法は大部分が待機的なものであり、長期間の治癒がもたらされることはめったにない。新しい化学療法が市場に入っていてさえも、抵抗性腫瘍の処置において、単独療法で、または現存する薬剤と組み合わせて第１選択療法として、ならびに第２選択療法および第３選択療法として有効な新しい薬物が引き続き必要とされている。
【０００４】
がん細胞は、定義によれば不均一性である。例えば、単一の組織型または細胞型の中で、複数の変異性「機構」によりがんの発生がもたらされ得る。そのように、異なる個体に由来する同じ型の腫瘍から取得したがん細胞の間で、および単一の個体の腫瘍の異なる領域に由来するがん細胞の間でさえも、不均一性が頻繁に存在する。いくつかのがんに関連して頻繁に観察される変異性「機構」は、ある組織型と別の組織型の間で異なり得る（例えば、結腸がんを導く頻繁に観察される変異性「機構」は、白血病を導く頻繁に観察される「機構」とは異なり得る）。したがって、多くの場合、特定のがんが特定の化学療法剤に応答するかどうかを予測することは難しい（Cancer Medicine、第５版、Bastら編、B. C. Decker Inc.、Hamilton、Ontario）。
【０００５】
がんの処置における最近の試みは、極めて重要なシグナル伝達経路を特異的に阻害する標的化治療薬または処置に焦点を当てたものである。しかし、薬物抵抗性およびがんの進行が常に発生する。したがって、がんを処置するための新しい化合物および方法が必要である。本発明は、これらの必要性に対処する。
【０００６】
ＣＸＣＬ１２は、ヒトＰＤＡに局在化するケモカインである。しかし、ＣＸＣＬ１２とがんを関連づけるまちまちな報告が存在する。ＣＸＣＬ１２、またはその受容体であるＣＸＣＲ４との拮抗により、血液脳関門を渡るＴ細胞輸送が増加し、ウエストナイルウイルス疾患からの生存率が改善されることが示唆されており（McCandlessら）、また、ＣＸＣＬ１２の阻害により卵巣腫瘍におけるＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞の減少が導かれるので、抗ＣＸＣＬ１２療法が卵巣がんの処置に有用であることが推測されている（Righiら、Cancer Res. ２０１１年８月１５日；７１巻（１６号）：５５２２〜３４頁）。しかし、ＣＸＣＬ１２に関する技術は不確実であり、いくつかの報告では、ＣＸＣＬ１２の発現により、Ｂ１６腫瘍細胞株を用いて確立した腫瘍における免疫制御が損なわれることが示されているが（２０；Righiら；Vianelloら、JImmunol. ２００６年３月１日；１７６巻（５号）：２９０２〜１４頁）、他の試験では、ＣＸＣＬ１２の発現により免疫制御が増強されることが示されている（Nomuraら、Int J Cancer. ２００１年３月１日；９１巻（５号）：５９７〜６０６頁；Fushimiら、Cancer Res. ２００６年４月１日；６６巻（７号）：３５１３〜２２頁；Williamsら、Mol Cancer. ２０１０年９月１７日；９巻：２５０頁；およびDannussi-Joannopoulosら、Blood. ２００２年９月１日；１００巻（５号）：１５５１〜８頁）。したがって、がんの発生においてＣＸＣＬ１２が何らかの役割を有するかどうかは明らかになっていない。
本発明は、新しいがん処置の改善および開発の継続的必要性に対処する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｄ．  Ｌｅａｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１巻、１７３４〜１７３６頁（１９９６年）
【非特許文献２】Ｈ．  Ｄｏｎｇら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ８巻、７９３〜８００頁（２００２年）
【非特許文献３】Ｆ．  Ｓ．  Ｈｏｄｉら、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６３巻，９  ７１１〜２３頁（２０１０年）
【非特許文献４】Ｏ．  Ｈａｍｉｄら、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６９巻、１３４〜１２  ４４  （２０１３年）
【非特許文献５】Ｊ．  Ｒ．  Ｂｒａｈｍｅｒら、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  １５  ３６６巻、２４５５〜６５頁（２０１２年）
【非特許文献６】Ｊ．  Ｄ．  Ｗｏｌｃｈｏｋら、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６９巻、１２２〜３３頁（２０１３年）
【非特許文献７】Ｒ．  Ｅ．  Ｒｏｙａｌら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３３巻、８２８〜３３頁（２０１０年）
【非特許文献８】Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第５版、Ｂａｓｔら編、Ｂ．  Ｃ．  Ｄｅｃｋｅｒ  Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｏｎｔａｒｉｏ
【非特許文献９】Ｒｉｇｈｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１１年８月１５日；７１巻（１６号）：５５２２〜３４頁
【非特許文献１０】Ｍ．  Ｃ．  Ｐｏｚｎａｎｓｋｙら、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ６巻、５４３〜８  （２０００年）
【非特許文献１１】Ｖｉａｎｅｌｌｏら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００６年３月１日；１７６巻（５号）：２９０２〜１４頁
【非特許文献１２】Ｎｏｍｕｒａら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２００１年３月１日；９１巻（５号）：５９７〜６０６頁
【非特許文献１３】Ｆｕｓｈｉｍｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００６年４月１日；６６巻（７号）：３５１３〜２２頁
【非特許文献１４】Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１０年９月１７日；９巻：２５０頁
【非特許文献１５】Ｄａｎｎｕｓｓｉ−Ｊｏａｎｎｏｐｏｕｌｏｓら、Ｂｌｏｏｄ．  ２００２年９月１日；１００巻（５号）：１５５１〜８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この概要は、下の発明の詳細な説明においてさらに記載されている概念の選択を簡易化した形態で導入するために提示される。この概要は、特許請求された主題の重要な特徴または本質的な特徴を同定するものでもなく、特許請求された主題の範囲を決定することの補助として使用されるものでもない。
【０００９】
本発明は、腫瘍におけるＴ細胞排除を阻害する方法であって、患者に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与するステップを含み、該ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、該腫瘍中に含有されるがん細胞に混じった該Ｔ細胞の近接性または頻度が増加する、方法に関する。
【００１０】
好ましい実施形態では、本発明の方法により、腫瘍中に含有されるがん細胞に混じったＴ細胞の近接性と頻度の両方が増加する。さらに好ましい実施形態では、がん細胞に混じったＴ細胞の近接性が少なくとも２倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が２分の１に減少する）、３倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が３分の１に減少する）、４倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が４分の１に減少する）または５倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が５分の１に減少する）。さらに好ましい実施形態では、がん細胞に混じったＴ細胞の頻度が少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％増加する。さらに好ましい実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ３＋エフェクターＴ細胞である。
【００１１】
さらに好ましい実施形態では、当該方法により、宿主の免疫応答に対するがん細胞の感受性が増加するまたは腫瘍における免疫抑制が低下する。免疫抑制は、Ｔ細胞アポトーシスまたはＴ細胞アポトーシスを引き起こし得るＴ細胞上のＣＸＣＲ４のライゲーションによって引き起こされ得る。さらに好ましい実施形態では、Ｔ細胞を免疫抑制から救済することにより、Ｔ細胞によるがん細胞のアポトーシスを引き起こすことが可能になる。
【００１２】
なおさらに好ましい実施形態では、当該方法は、前記腫瘍内でのがん細胞認識を増加させる。なおさらに好ましい実施形態では、当該方法は、がん細胞成長を阻害する。なおさらに好ましい実施形態では、当該方法は、がん細胞を除去する。なおさらに好ましい実施形態では、当該方法は、腫瘍塊を減少させる。なおさらに好ましい実施形態では、前記腫瘍塊は、ｐ５３＋がん細胞から構成される。
【００１３】
さらに好ましい実施形態では、前記腫瘍はＦＡＰ＋間質細胞を含む。さらに好ましい実施形態では、前記腫瘍は免疫療法に対して抵抗性である。
【００１４】
好ましい実施形態では、前記腫瘍は、腺癌、肉腫、皮膚がん、黒色腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮がん、卵巣がん、前立腺がん、肺がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、肝臓がん、頭頸部がん、食道がん、膵がん、膵管腺癌（ＰＤＡ）、腎がん、胃がん、多発性骨髄腫または大脳のがんである。
【００１５】
好ましい実施形態では、前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤はＣＸＣＬ１２アンタゴニストである。さらに好ましい実施形態では、ＣＸＣＬ１２アンタゴニストは抗ＣＸＣＬ１２抗体である。抗ＣＸＣＬ１２抗体の一例としては、抗ＳＤＦ−１抗体が挙げられるがこれに限定されない。このようなＣＸＣＬ１２アンタゴニストの一例は、ＲＮＡオリゴヌクレオチドＮＯＸ−Ａ１２またはタンニン酸またはＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用をブロックする任意の他の化学物質であり得るがこれに限定されない。
【００１６】
他の好ましい実施形態では、前記ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤はＣＸＣＲ４アンタゴニストである。さらに好ましい実施形態では、前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストは抗ＣＸＣＲ４抗体である。
【００１７】
さらに好ましい実施形態では、前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＬＹ２５１０９２４、１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］（ＡＭＤ３１００；プレリキサホル）、Ｎ，Ｎ−ジプロピル−Ｎ−［４−（｛［（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンジル］［（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル］アミノ］メチル）ベンジル］−Ｎ−メチルブタン−１，４−ジアミントリ（２Ｒ，３Ｒ）−タートレート（ＫＲＨ−３９５５）、（［５−（４−メチル−１−ピペラジニル）−２−（｛メチル［（８Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ−８−キノリニル］アミノ｝メチル）イミダゾ［１，２−α］ピリジン−３−イル］メタノール）（ＧＳＫ８１２３９７）、またはＮ−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ’−（５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−８−イル）ブタン−１，４−ジアミン（ＡＭＤ１１０７０）である。
【００１８】
さらに好ましい実施形態では、当該方法はまた、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤を投与することを含む。さらに好ましい実施形態では、前記ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤はＰＤ−１アンタゴニストである。さらに好ましい実施形態では、前記ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。さらに好ましい実施形態では、前記ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤はＰＤＬ−１アンタゴニストである。さらに好ましい実施形態では、前記ＰＤＬ−１アンタゴニストは、抗ＰＤＬ−１抗体である。したがって、好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤と、好ましくは、例えば抗ＰＤ−１抗体を含めたＰＤ−１アンタゴニスト、または例えば抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含めたＰＤ−Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて投与する。
【００１９】
さらなる実施形態では、当該方法は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを投与するステップも含む。さらなる実施形態では、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは抗ＣＴＬＡ−４抗体である。したがって、好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体を含めたＣＴＬＡ−４アンタゴニストと組み合わせて投与する。
【００２０】
さらなる実施形態では、当該方法は、ＴＩＭ−３アンタゴニストを投与するステップも含む。さらに別の実施形態では、ＴＩＭ−３アンタゴニストは抗ＴＩＭ−３抗体である。したがって、好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、例えば、抗ＴＩＭ−３抗体を含めたＴＩＭ−３アンタゴニストと組み合わせて投与する。
【００２１】
さらなる実施形態では、当該方法は、ＬＡＧ３アンタゴニストを投与するステップも含む。さらに別の実施形態では、ＬＡＧ３アンタゴニストは抗ＬＡＧ３抗体である。したがって、好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、例えば、抗ＬＡＧ３抗体を含めたＬＡＧ３アンタゴニストと組み合わせて投与する。
【００２２】
さらなる実施形態では、当該方法は、チェックポイントアンタゴニストを投与するステップも含む。したがって、好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、例えば、チェックポイントタンパク質を対象とする抗体を含めたチェックポイントアンタゴニストと組み合わせて投与する。
【００２３】
他の好ましい実施形態では、当該方法は、Ｔ細胞補助受容体に対するアゴニストを投与するステップも含む。そのようなＴ細胞補助受容体に対するアゴニストの例としては、これだけに限らないが、Ｔ細胞補助受容体に対するアゴニスト抗体が挙げられる。そのようなＴ細胞補助受容体の例としては、これだけに限定されないが、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）が挙げられる。したがって、好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、Ｔ細胞補助受容体に対するアゴニスト、好ましくはＴ細胞補助受容体に対するアゴニスト抗体、なおより好ましくは、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）またはＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）に対するアゴニスト抗体と組み合わせて投与する。
【００２４】
他の好ましい実施形態では、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤、ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＰＤ−１抗体、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、抗ＣＴＬＡ−４抗体、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、抗ＴＩＭ−３抗体、ＬＡＧ３アンタゴニスト、抗ＬＡＧ３抗体、Ｔ細胞補助受容体アゴニスト、Ｔ細胞補助受容体アゴニスト抗体、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）に対するアゴニスト抗体、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）に対するアゴニスト抗体および／またはチェックポイントアンタゴニストは、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と相乗作用する。
【００２５】
他の好ましい実施形態では、当該方法は他の抗がん療法を施すステップも含む。これらの実施形態では、他の抗がん療法としては、これだけに限定されないが、化学療法剤、放射線療法、がん療法、免疫療法、またはがんワクチンが挙げられる。そのような免疫療法の例としては、これだけに限定されないが、養子Ｔ細胞療法、または腫瘍細胞を認識するようにＴリンパ球を誘導するよう設計されたがんワクチン調製物が挙げられる。
【００２６】
他の好ましい実施形態では、前記がんワクチンは、前記がん細胞上で発現される１種または複数種の腫瘍抗原を認識する。このような腫瘍抗原の例としては、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＧＡＧＥ−Ｉ、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−Ｉ、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１／ＣＴ７、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｉ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−ＩおよびＸＡＧＥ、メラニン形成細胞分化抗原、ｐ５３、ｒａｓ、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＰＭＳＡ、ＰＳＡ、チロシナーゼ、メランＡ、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、ｇｐ７５、アルファ−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、ベータカテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−２、および３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲアルファ融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、ＮＡ−８８、ＳＰ１７、およびＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、（ＭＡＲＴ−Ｉ）、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、アルファ−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３  （ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３  （ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼１７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合性タンパク質＼シクロフィリンＣ−関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、チロシナーゼ関連タンパク質、ＴＲＰ−１、またはＴＲＰ−２が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２７】
他の好ましい実施形態では、前記抗がん療法は、アスピリン（aspirin）、スリンダク、クルクミン、ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）；トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）などのエチレンイミン／メチルメラミン、トリエチレン、チオホスホラミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などのトリアジンを含めたアルキル化剤；葉酸類似体、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、５−フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、２，２’−ジフルオロデオキシシチジン、プリン類似体、例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２’−デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン、および２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ）を含めた代謝拮抗薬；抗有糸分裂薬、例えば、パクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、およびビノレルビンを含めたビンカアルカロイド、タキソテレ、エストラムスチン、ならびにリン酸エストラムスチンを含めた天然物；エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニポシド；抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、およびアクチノマイシン；酵素、例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ、サイトカイン、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータおよびＧＭ−ＣＳＦ、抗血管新生因子、例えば、アンジオスタチンおよびエンドスタチン、ＦＧＦまたはＶＥＧＦの阻害剤、例えば、可溶性ＶＧＦ／ＶＥＧＦ受容体を含めた血管新生因子の受容体の可溶性の形態、白金配位錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン、アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン、置換尿素、例えば、ヒドロキシウレア、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）およびプロカルバジンを含めたメチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制薬、例えば、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）およびアミノグルテチミド；副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、例えば、プレドニゾンおよび等価物、デキサメタゾンならびにアミノグルテチミド；プロゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロール；エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール等価物；抗エストロゲン薬、例えば、タモキシフェン；プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン／等価物を含めたアンドロゲン；抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロ��ド；非ステロイド性抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミドを含めたホルモンおよびアンタゴニスト；キナーゼ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、メチル化阻害剤、プロテアソーム阻害剤、モノクローナル抗体、酸化剤、抗酸化剤、テロメラーゼ阻害剤、ＢＨ３模倣物、ユビキチンリガーゼ阻害剤、ｓｔａｔ阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧｌｅｅｖａｃまたはＧｌｉｖａｃとして販売されている）および現在Ｔａｒｖｅｃａとして販売されているエルロチニブ（ＥＧＦ受容体阻害剤）；ＰＩ−３キナーゼデルタを含め、ＰＩ−３キナーゼの阻害剤；ならびに抗ウイルス薬、例えば、リン酸オセルタミビル、アンホテリシンＢ、およびパリビズマブを含むがこれらに限定されない。
【００２８】
他の好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤とＰＤ−１シグナル伝達阻害剤および／または抗がん療法を同時に、別々に、または逐次的に投与する。
【００２９】
さらに好ましい実施形態では、患者はヒトである。他の好ましい実施形態では、「患者」または「処置に適した被験体」は、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ科の動物（例えば、マウス）、イヌ科の動物（例えば、イヌ）、ネコ科の動物（例えば、ネコ）、ウマ科の動物（例えば、ウマ）、霊長類、真猿類（例えば、サルまたは類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトなどの哺乳動物であってよい。他の実施形態では、非ヒト哺乳動物、特に、ヒトにおける治療有効性を実証するためのモデルとして慣習的に使用される哺乳動物（例えば、ネズミ科の動物、霊長類、ブタ、イヌ科の動物、またはウサギ）を使用することができる。
【００３０】
本発明の複数の実施形態では、Ｔ細胞の蓄積を増加させることが、腫瘍の成長速度および免疫回避を低下させるために有効である。本発明者らは、腫瘍のがん細胞含有部位にＣＤ３＋Ｔ細胞が動員されることにより、腫瘍の免疫学的調節の結果として腫瘍の成長の妨害が引き起こされることを観察した。
【００３１】
別の態様では、がんを処置するための方法であって、それを必要とする被験体に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害剤を投与するステップを含む方法が提供される。好ましい一実施形態では、がんは膵腫瘍である。別の一実施形態では、膵腫瘍は膵管腺癌（ＰＤＡ）である。
【００３２】
別の態様では、腫瘍のがん細胞に対するＴ細胞の近接性を増加させるための、ＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害剤、例えばプレリキサホルの使用が提供される。がん細胞に対するＴ細胞の近接性を増加させる１つの機構は、腫瘍内のがん細胞を被覆し、それにより今度はＴ細胞上のＣＸＣＲ４と相互作用するＦＡＰ＋間質細胞由来のＣＸＣＬ１２に対するＴ細胞の感受性を低下させることによるものである。第２の機構は、個体においてＦＡＰ＋間質細胞で構成されるがん性腫瘍における免疫抑制を低下させることによるものである。
【００３３】
別の態様では、腫瘍を処置するための、ＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害剤の使用が提供される。一実施形態では、腫瘍は膵腫瘍であり、さらに別の実施形態では、腫瘍は膵管腺癌（ＰＤＡ）である。別の態様では、本発明は、個体にＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与することによってＦＡＰ＋間質細胞を含有するがん性腫瘍組織へのＴ細胞の浸潤を促進する方法を提供する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤はプレリキサホルである。
【００３４】
別の好ましい実施形態では、本発明は、腫瘍、好ましくはＦＡＰ＋間質細胞で構成される腫瘍における免疫抑制を低下させるための医薬品の製造におけるＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の使用を提供する。ＦＡＰ＋間質細胞はＣＸＣＬ１２を発現し、それにより、腫瘍内のがん細胞がＣＸＣＬ１２で被覆される。次いで、この被覆により、ＣＸＣＲ４発現Ｔ細胞のアポトーシスが引き起こされることによるＣＸＣＲ４発現Ｔ細胞の排除が媒介される。この反応は、Ｔ細胞がほぼ排他的に腫瘍の間質領域に存在し、がん細胞の付近またはその中には存在しないことの原因である。したがって、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の使用により、がん内でのＴ細胞の排除が減少し（例えば、腫瘍内のがん細胞に対するＴ細胞の近接性が増加し）、それにより、最終的ながん細胞死が導かれる。
【００３５】
実施形態は例として示されており、同様の参照が同様の要素を示す下記の添付の図面の図に限定されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、超音波によって測定した、ＫＰＣマウスを抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ｎ＝６）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（ｎ＝６）または対照抗体（ｎ＝４）を用いて処置した後のＰＤＡ体積の増加（平均値±ＳＥＭ）を示す。
【００３７】
【図２】図２は、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した、種々のドナー由来の脾性ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−ガンマ分泌の、異なる型の膵臓由来細胞による誘導を示す。＊Ｐ＜０．０５、７  ＊＊＊Ｐ＜０．００１；（左）および（中央）、ｎ≧８；（右）マン・ホイットニー検定、ｎ＝４。
【００３８】
【図３】図３は、ジフテリア毒素（ＤＴｘ）またはＰＢＳ（ＰＢＳ、ｎ＝５；ＤＴｘ、ｎ＝７）を与えた、ＰＤＡを有するＤＴＲ  ＢＡＣトランスジェニックマウスから６日目に切除した腫瘍におけるＦａｐ  ｍＲＮＡのｑＲＴ−ＰＣＲを示す。
【００３９】
【図４】図４は、（左）ＤＴＲ  ＢＡＣ導入遺伝子を有するまたは有さない、ＤＴｘまたはＰＢＳで処置したマウス（ＰＢＳ、ｎ＝６；ＤＴｘ、ｎ＝８；非ＢＡＣ  ＤＴＲトランスジェニックｎ＝４ヘのＤＴｘ）における腫瘍体積および（右）ＤＴｘまたはＰＢＳを用いた処置の前および処置中に対照ＩｇＧまたはＣＤ４枯渇抗体およびＣＤ８枯渇抗体を投与した（αａＣＤ４／８＋ＰＢＳ、ｎ＝３；α−ＣＤ４／８＋ＤＴｘ、ｎ＝５；アイソタイプＩｇＧ＋ＤＴｘ、ｎ＝５）、ＰＤＡを有するＢＡＣ  ＤＴＲトランスジェニックマウスにおける腫瘍体積を示す。
【００４０】
【図５】図５は、ＤＴｘまたはＰＢＳを用いた処置中に抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−Ｌ１を投与した（ＤＴｘ、ｎ＝１３、これは、この試験の過程全体を通して蓄積した全てのＤＴｘで処置したマウスを表す；抗ＣＴＬＡ−４＋ＤＴｘ、ｎ＝６；抗ＰＤ−Ｌ１＋ＤＴｘ、ｎ＝４）、ＰＤＡを有するＢＡＣ  ＤＴＲトランスジェニックマウスにおける腫瘍体積を示す。
【００４１】
【図６】図６は、個々のマウスにおける腫瘍体積の変化を実証する「ウォーターホール」プロットを示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【００４２】
【図７】図７は、３つの腫瘍から（平均）のＦＡＣＳで精製した細胞のｑＲＴ−ＰＣＲ測定値を示す。Ｃｘｃｌ１２  ｍＲＮＡは、ＦＡＰ＋細胞により、ＣＤ１１ｂ＋細胞またはＰＤＡ／ＰａｎＩＮ細胞（ＣＤ１１ｂ−／ＣＤ４５−／ＦＡＰ−）よりも高度に発現される。
【００４３】
【図８】図８の（左）は、ＰＢＳまたはＡＭＤ３１００を含有する持続注入浸透圧ポンプの埋め込み後の、ＰＤＡを有するマウスにおいて測定された腫瘍体積を示す。一部は対照ＩｇＧまたはＣＤ４枯渇抗体およびＣＤ８枯渇抗体を用いて前処置した（ＰＢＳ、ｎ＝５、ＡＭＤ３１００＋アイソタイプＩｇＧ、ｎ＝６、ＡＭＤ３１００＋抗ＣＤ４／８、ｎ＝４）。（右）は、ＡＭＤ３１００（高用量）を含有する持続注入浸透圧ポンプを埋め込み、対照ＩｇＧ、または抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−Ｌ１（高ＡＭＤ３１００＋アイソタイプＩｇＧ（ｎ＝６）、高ＡＭＤ３１００＋抗ＣＴＬＡ−４（ｎ＝４）、高ＡＭＤ３１００＋抗ＰＤ−Ｌ１（ｎ＝７））も与えた、ＰＤＡを有するマウスにおいて測定された腫瘍体積を示すグラフである。
【００４４】
【図９】図９は、図８からの個々のマウスにおける腫瘍体積の変化を実証しているウォーターフォールプロットを示す。
【００４５】
【図１０】（Ａ）抗ＰＤ−Ｌ１、（Ｂ）ＡＭＤ３１００または（Ｃ）ＡＭＤ３１００と抗ＰＤ−Ｌ１の両方を用いて２４時間にわたって処置したマウスに由来し、がん細胞を実証するためにｐ５３に対する抗体を用いて、Ｔ細胞を実証するために抗ＣＤ３イプシロンを用いて染色したマウス膵腫瘍切片の共焦点顕微鏡写真。抗ＰＤ−Ｌ１を用いて処置した後でさえ、ｐ５３＋がん細胞を含有する腫瘍領域からのＴ細胞の排除が存在する。この排除はＡＭＤ３１００によって克服され、また、抗ＰＤ−Ｌ１との組合せにより、がん細胞の喪失が引き起こされる。パネルＤは、それぞれＰＢＳ、抗ＰＤ−Ｌ１、ＡＭＤ３１００、およびＡＭＤ３１００＋抗ＰＤ−Ｌ１を用いて２４時間にわたって処置したマウスから取得した腫瘍内の各がん細胞から最も近いＴ細胞までの距離を示すヒストグラムである。
【００４６】
【図１１】図１１は、ＰＢＳまたはＡＭＤ３１００および抗ＰＤ−Ｌ１を用いて６日間処置したマウスに由来し、がん細胞を実証するためにｐ５３に対する抗体を用いて染色したマウス膵腫瘍切片の共焦点顕微鏡写真を示す（Ｄ）。切片はまた、細胞周期中の細胞を同定するためにＫｉ６７抗体を用いて（Ｅ）、ならびに膵臓の上皮細胞および炎症細胞を同定するためにＣＫ１９抗体およびＣＤ４５抗体を用いて（Ｆ）染色した。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
発明の詳細な説明
Ａ．定義
別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、ペプチド化学、細胞培養およびファージディスプレイ、核酸化学および生化学の技術分野などの当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。分子生物学的方法、遺伝学的方法および生化学的方法について標準の技法を使用し（Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、第３版、２００１年、Cold Spring Harbor Laboratory Press、ColdSpring Harbor、NY；Ausubelら、Short Protocols in Molecular Biology（１９９９年）、第４版、John Wiley & Sons, Inc.を参照されたい）、それらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００４８】
本明細書で使用される場合、腫瘍における「Ｔ細胞排除」とは、がん性腫瘍微小環境においてエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞サブセットの動員および蓄積が妨げられる、当技術分野で公知の腫瘍の逃避機構と定義される。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」または「ＣＤ３＋Ｔ細胞」とは、細胞表面マーカーＣＤ３を発現するリンパ球系列細胞と定義され、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞を含む。「エフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞」とは、Ｔ細胞サイトカインを放出することによって他の免疫細胞の活性を補助する、または直接細胞傷害機能を有する成熟Ｔ細胞集団の群と定義される。そのような細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞が挙げられる。
【００５０】
本発明では、「ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤」とは、ＣＸＣＲ４の、リガンドであるＣ−Ｘ−Ｃモチーフリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）による活性化を阻害するまたは妨げ、それにより、がん性腫瘍内の細胞におけるＣＸＣＲ４シグナル伝達を遮断または阻害する医薬化合物または分子などの外因性因子である。
【００５１】
適切なＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、走化性または遊離の細胞内Ｃａ２＋の増加などの標準のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４ライゲーションアッセイを使用して同定することができる。例えば、細胞表面上のＣＸＣＲ４をＣＸＣＬ１２に曝露した場合に遊離の細胞内Ｃａ２＋の急速な一過性の増加がないことにより、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤が存在することが示され得る。
【００５２】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の好ましい例は、これだけに限定されないが、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび／またはＣＸＣＬ１２アンタゴニストが挙げられる。
【００５３】
本発明では、「ＣＸＣＲ４アンタゴニスト」とは、ＣＸＣＲ４に結合するまたはそれと相互作用することによってＣＸＣＲ４シグナル伝達を阻害して、ＣＸＣＬ１２によるＣＸＣＲ４の結合および／または活性化を予防または阻害し、それにより、ＣＸＣＲ４シグナル伝達を阻害する分子と定義される。ＣＸＣＲ４アンタゴニストの好ましい例としては、これだけに限定されないが、抗ＣＸＣＲ４抗体が挙げられ、その例は当技術分野で周知である。例えば、好ましい抗ＣＸＣＲ４抗体として、これだけに限定されないが、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８が挙げられる（Kuhneら（２０１３年）Clin Cancer Res １９巻（２号）３５７〜３６６頁）。
【００５４】
さらに、ＣＸＣＲ４アンタゴニストとして、ＬＹ２５１０９２４（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）などのペプチド、または、１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］（ＡＭＤ３１００；プレリキサホル）、Ｎ，Ｎ−ジプロピル−Ｎ−［４−（｛［（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンジル］［（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル］アミノ］メチル）ベンジル］−Ｎ−メチルブタン−１，４−ジアミントリ（２Ｒ，３Ｒ）−タートレート（ＫＲＨ−３９５５）、（［５−（４−メチル−１−ピペラジニル）−２−（｛メチル［（８Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ−８−キノリニル］アミノ｝メチル）イミダゾ［１，２−α］ピリジン−３−イル］メタノール）（ＧＳＫ８１２３９７；Jenkinsonら、Antimicrob. Agents Chemother. ２０１０年、５４巻（２号）：８１７頁）、およびＮ’−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ’−（５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−８−イル）ブタン−１，４−ジアミン（ＡＭＤ１１０７０；Moyleら Clin. Infect. Dis. ４８巻：７９８〜８０５頁））などの低分子有機化合物が挙げられる。
【００５５】
本発明では、「ＣＸＣＬ１２アンタゴニスト」は、ＣＸＣＬ１２に結合すること、またはＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合し、かつ／もしくはそれを活性化することを阻害し、それによりＣＸＣＲ４シグナル伝達を阻害することによってＣＸＣＲ４シグナル伝達を阻害する分子と定義される。ＣＸＣＬ１２は、例えば、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を発現するがん性腫瘍内の間質細胞によって産生され得る。ＣＸＣＬ１２アンタゴニストの好ましい例としては、これだけに限定されないが、当技術分野で周知の抗ＣＸＣＬ１２抗体が挙げられる。そのような抗ＣＸＣＬ１２抗体の例としては、これだけに限定されないが、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓからの抗ＣＸＣＬ１２抗体（ＭＡＢ３１０）またはＳＤＦ−１抗体が挙げられる。ＣＸＣＬ１２アンタゴニストの他の例としては、これだけに限定されないが、ＮＯＸ−Ａ１２が挙げられる。
【００５６】
他の適切なＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＣＸＣＬ１２アンタゴニストとしては、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アビマー、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、テトラネクチン（ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ）、ＤＡＲＰｉｎ、ｍＴＣＲ、操作された（engineered）クニッツ型インヒビター、核酸アプタマーおよびＳｐｉｅｇｅｌｍｅｒなどの非抗体特異的結合分子、ペプチドアプタマーならびに環状ペプチドおよび二環式ペプチドが挙げられる（Ruigrokら Biochem. J.（２０１１年）４３６巻、１〜１３頁；Gebauerら Curr Opin Chem Biol.（２００９年）（３巻）：２４５〜５５頁）。ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＣＸＣＬ１２アンタゴニストとして使用するために適した特異的な結合分子は標準の技法を使用して生成することができる。
【００５７】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達は、ホスホイノシチド３キナーゼの活性化によって媒介される。他の適切なＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤としては、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、例えば、ＰＩ３Ｋのｐ１１０デルタアイソフォームまたはｐ１１０ガンマアイソフォームの阻害剤が挙げられる。
【００５８】
適切なＰＩ３Ｋ阻害剤としては、５−フルオロ−３−フェニル−２−（［Ｓ）］−１−［９Ｈ−プリン−６−イルアミノ］−プロピル）−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（ＣＡＬ−１０１）；酢酸（１Ｓ，４Ｅ，１０Ｒ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ）−［４−ジアリルアミノメチレン−６−ヒドロキシ−１−メトキシメチル−１０，１３−ジメチル−３，７，１７−トリオキソ−１，３，４，７，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−２−オキサ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１１−イルエステル（ＰＸ−８６６）、および（Ｓ）−３−（１−（（９Ｈ−プリン−６−イル）アミノ）エチル）−８−クロロ−２−フェニルイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（ＩＰＩ−１４５）が挙げられる。
【００５９】
他の適切なＰＩ３キナーゼ阻害剤は当技術分野で周知である。
【００６０】
本発明では、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を指す。そのように、抗体という用語は、全抗体分子だけでなく、抗体断片ならびに抗体および抗体断片のバリアント（誘導体を含む）も包含する。本出願において「抗体」という用語で記載されている分子の例としては、これだけに限定されないが、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、ジスルフィド連結したＦｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｖ、および、ＶＬドメインまたはＶＨドメインのいずれかを含むあるいはそれからなる断片が挙げられる。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体のＶＨドメインに連結した抗体のＶＬドメインを含むポリペプチドを指す。
【００６１】
本発明の抗体としては、これだけに限定されないが、モノクローナル抗体、多特異性抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合性断片が挙げられる。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＣ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであってよい。
【００６２】
本発明では、「ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤」とは、がん性腫瘍内の細胞において、ＰＤ−１の、そのリガンドであるＰＤ−Ｌ１による活性化を阻害するまたは妨げ、それにより、ＰＤ−１シグナル伝達を遮断または阻害する医薬化合物または分子などの外因性因子である。ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤は、広範にはＰＤ−１によるＴ細胞活性化の負の調節を妨げる任意の分子と定義される。
【００６３】
ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤の好ましい例としては、これだけに限定されないが、ＰＤ−１アンタゴニストおよび／またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニストが挙げられる。
【００６４】
本発明では、「ＰＤ−１アンタゴニスト」とは、ＰＤ−１に結合するかまたはそれと相互作用してＰＤ−Ｌ１によるＰＤ−１の結合および／または活性化を妨げるかまたは阻害し、それにより、ＰＤ−１シグナル伝達を阻害し、かつ／またはＴ細胞活性化を増強することによってＰＤ−１シグナル伝達を阻害する分子と定義される。ＰＤ−１アンタゴニストの好ましい例としては、これだけに限定されないが、当技術分野で周知の抗ＰＤ−１抗体が挙げられる。Topalianら、NEJM ２０１２年を参照されたい。
【００６５】
本発明では、「ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト」とは、ＰＤ−Ｌ１に結合するかまたはＰＤ−Ｌ１がＰＤ−１に結合し、かつ／またはそれを活性化することを阻害し、それにより、ＰＤ−１シグナル伝達を阻害し、かつ／またはＴ細胞活性化を増強することによってＰＤ−１シグナル伝達を阻害する分子と定義される。ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストの好ましい例としては、これだけに限定されないが、当技術分野で周知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体が挙げられる。Brahmerら、NEJM ２０１２年を参照されたい。
【００６６】
好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、それが、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体）であるかＣＸＣＬ１２アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＬ１２抗体）であるかにかかわらず、本発明のＰＤ−１シグナル伝達阻害剤との相乗活性を有する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４であり、例えば抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体などの本発明のＰＤ−１シグナル伝達阻害剤との相乗活性を有する。
【００６７】
本発明では、「ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト」とは、ＣＴＬＡ−４に結合するか、または、ＣＴＬＡ−４が、抗原提示細胞上に存在することが当技術分野で公知のＢ７分子に結合し、かつ／またはそれを活性化することを阻害し、それにより、Ｂ７分子と共刺激分子ＣＤ２８との相互作用を妨げ、Ｔ細胞機能を阻害することによってＣＴＬＡ−４シグナル伝達を阻害する分子と定義される。ＣＴＬＡ−４アンタゴニストの好ましい実施形態としては、これだけに限定されないが、抗ＣＴＬＡ−４抗体が挙げられる。
【００６８】
好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、それが、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体）であるかＣＸＣＬ１２アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＬ１２抗体）であるかにかかわらず、本発明のＣＴＬＡ−４アンタゴニストとの相乗活性を有する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４であり、例えば抗ＣＴＬＡ−４抗体などの本発明のＣＴＬＡ−４アンタゴニストとの相乗活性を有する。
【００６９】
本発明では、「ＬＡＧ３アンタゴニスト」とは、ＬＡＧ３に結合するか、または、ＬＡＧ３が、抗原提示細胞上に存在することが当技術分野で公知のＭＨＣ分子および任意の他の分子に結合し、かつ／またはそれを活性化することを阻害し、それにより、ＬＡＧ３相互作用を妨げ、かつＴ細胞機能を促進することによってＬＡＧ３シグナル伝達を阻害する分子と定義される。ＬＡＧ３アンタゴニストの好ましい実施形態としては、これだけに限定されないが、抗ＬＡＧ３抗体が挙げられる。
【００７０】
好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、それが、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体）であるかＣＸＣＬ１２アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＬ１２抗体）であるかにかかわらず、本発明のＬＡＧ３アンタゴニストとの相乗活性を有する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４であり、例えば抗ＬＡＧ３抗体などの本発明のＬＡＧ３アンタゴニストとの相乗活性を有する。
【００７１】
本発明では、「ＴＩＭ−３アンタゴニスト」とは、ガレクチン−９がライゲーションすると、例えばＴ細胞死を引き起こすＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔｈ１特異的細胞表面タンパク質であるＴＩＭ−３を阻害する分子と定義される。ＴＩＭ−３アンタゴニストの好ましい実施形態としては、これだけに限定されないが、そのリガンドとの相互作用を遮断する抗ＴＩＭ−３抗体が挙げられる。
【００７２】
好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、それが、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体）であるかＣＸＣＬ１２アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＬ１２抗体）であるかにかかわらず、本発明のＴＩＭ−３アンタゴニストとの相乗活性を有する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４であり、例えば抗ＴＩＭ−３抗体などの本発明のＴＩＭ−３アンタゴニストとの相乗活性を有する。
【００７３】
本発明では、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、およびＬＡＧ３アンタゴニストはＴ細胞チェックポイントアンタゴニストである。チェックポイントアンタゴニストの他の例は当技術分野で周知である。任意のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を用いてＣＸＣＲ４を遮断することにより、Ｔ細胞チェックポイントアンタゴニストの抗がん作用が明らかになる。
【００７４】
好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、それが、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体）であるかＣＸＣＬ１２アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＬ１２抗体）であるかにかかわらず、本発明のチェックポイントアンタゴニストとの相乗活性を有する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４であり、本発明のチェックポイントアンタゴニストおよび当技術分野で公知のチェックポイントアンタゴニストとの相乗活性を有する。
【００７５】
本発明では、「Ｔ細胞補助受容体」とは、Ｔ細胞受容体と会合するペプチド−ＭＨＣ複合体とは別個の抗原提示細胞上のリガンドに結合する細胞表面受容体である。Ｔ細胞補助受容体のライゲーションにより、活性化されたＴリンパ球のシグナル伝達に関与する細胞の内部の細胞内シグナル伝達タンパク質（例えば、ＮＦｋａｐｐａＢおよびＰＩ３キナーゼ）が動員されることによってＴ細胞の抗原特異的活性化が増強される。Ｔ細胞補助受容体アンタゴニストの好ましい実施形態としては、これだけに限定されないが、例えば、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）を対象とする抗体などの抗Ｔ細胞補助受容体抗体が挙げられる。
【００７６】
好ましい実施形態では、本発明のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、それが、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＲ４抗体）であるかＣＸＣＬ１２アンタゴニスト（例えば、抗ＣＸＣＬ１２抗体）であるかにかかわらず、本発明のＴ細胞補助受容体アンタゴニストとの相乗活性を有する。好ましい実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４であり、例えば、抗Ｔ細胞補助受容体抗体、例えば、抗４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体または抗ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）抗体などの本発明のＴ細胞補助受容体アンタゴニストとの相乗活性を有する。
【００７７】
本発明では、「腫瘍」とは、悪性のがん細胞の異常な増殖によって生じる、被験体において組織の塊を集合的に形成している不均一な細胞の集団と定義される。一部の好ましい実施形態では、腫瘍は、ｐ５３＋（遺伝子ＩＤ；２１９１、参照配列ＮＰ＿００４４５１．２  ＧＩ：１６９３３５４０）がん細胞を含み得る。したがって、「腫瘍」は、正常なまたは「非がん性」細胞と「がん」または「がん性」細胞の両方を含有する。腫瘍は、一般には、ｐ５３＋および／もしくはＦＡＰ＋間質細胞ならびに／または炎症性／免疫細胞を含むまたはそれを伴う。がん細胞は、多くの場合、細胞外マトリックス（例えば、コラーゲン）、免疫細胞およびＦＡＰ＋線維芽細胞の細胞（fibroblastic cell）を含有する間質領域によって分離された「巣」内に一緒に群をなす。
【００７８】
がん性腫瘍内のＦＡＰ＋間質細胞の存在は、蛍光顕微鏡法および免疫組織学などのタンパク質に基づく方法またはＲＴ−ＰＣＲなどの核酸に基づく方法を含めた常套的な技法を使用して同定することができる。KramanらScience. ３３０巻、８２７〜３０頁（２０１０年）。
【００７９】
本発明では、「近接性」とは、ＣＤ３＋Ｔ細胞、なおより好ましくはエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞と腫瘍内のがん細胞との間の距離と定義される。例えば、「近接性」を測定する１つのやり方は、ＰＤＡ腫瘍などの腫瘍の切片（cross-section）を作り、次いで、抗ｐ５３（ｐ５３遺伝子座における異型接合性が失われているがん細胞がｐ５３＋である）および抗ＣＤ３イプシロン（Ｔ細胞が＋である）などのがん検出抗体を用いて腫瘍を染色することである。次いで、切片をＡＲＩＯＬスキャニングに供す。次いで、計器により画像を評価し、各ｐ５３＋細胞と、最も近いＣＤ３＋細胞との距離を算出する。次いで、ヒストグラムを構築することができる。がん細胞に混じったＴ細胞の近接性の増加は、少なくとも２倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が２分の１に減少する）、３倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が３分の１に減少する）、４倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が４分の１に減少する）または５倍に増加する（がん細胞と最も近いＴ細胞との間の距離が５分の１に減少する）ことが好ましい。
【００８０】
エフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞ががん性腫瘍細胞と極めて近接して存在する場合、エフェクター応答が結果として起こる。そうでなければ腫瘍の逃避機構を可能にする免疫障壁が存在する。
【００８１】
本発明では、「頻度」とは、腫瘍微小環境内のがん細胞の中に見いだされるＴ細胞、なおより好ましくはエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞の定量的増加と定義される。がん細胞に混じったＴ細胞の頻度の増加は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも３００％増加することが好ましい。
【００８２】
腫瘍の例としては、これだけに限定されないが、肉腫、皮膚がん、黒色腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮がん、卵巣がん、前立腺がん、肺がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、肝臓がん、頭頸部がん、食道がん、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｓ  ｃａｎｃｅｒ）、腎がん、胃がん、多発性骨髄腫および大脳のがんが挙げられる。腫瘍の好ましい実施形態は腺癌である。一部の実施形態では、がんは、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、例えば、膵管腺癌であり得る。
【００８３】
Ｂ．腫瘍におけるＴ細胞排除
腫瘍における「Ｔ細胞排除」は、腫瘍微小環境内のがん細胞の中にエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞サブセットが動員され、蓄積することが妨げられる当技術分野で公知の腫瘍の逃避機構と定義される。腫瘍の逃避機構としては、これだけに限定されないが、（１）腫瘍における免疫監視の不全を含めた腫瘍微小環境内の免疫障壁、（２）非機能性抗原提示細胞、ならびに（３）機能障害性ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、および過剰数のＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞が挙げられる。腫瘍における免疫監視の不全を再現するためにヒトＰＤＡのモデルが開発された。この不全は、腫瘍のＰＤＡ細胞を含有する領域からのＴ細胞の排除およびおそらくＴ細胞死として顕在化し、それによるＣＸＣＬ１２の産生が伴う、ＦＡＰ＋間質細胞によって媒介される局所的な免疫抑制に起因する。本明細書に開示されている通り、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ受容体４（ＣＸＣＲ４）が腫瘍微小環境内の免疫抑制プロセスを媒介することが見いだされた。さらに、驚いたことに、ＣＸＣＬ１２受容体であるＣＸＣＲ４を阻害することにより、腫瘍のがん細胞含有領域内のエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞の蓄積が促進され、また、がん細胞が排除されることにより腫瘍の成長が阻害されることが見いだされた。
【００８４】
先行技術では、ＣＸＣＬ１２の発現は、腫瘍の成長の免疫制御の減退と促進のどちらにも関連する。免疫制御の減退を実証している技術（Righiら）では、この結果はＣＸＣＬ１２の発現により腫瘍にＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞が動員されることに起因することが示されている。驚いたことに、ＣＸＣＬ１２の発現により、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞を含めた全てのＴ細胞が排除されることが観察された。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の使用により、この排除がなくなり、腫瘍部位において、ＰＤＡ細胞の除去に関与するＦｏｘＰ３＋細胞ならびに他のＣＤ３＋Ｔ細胞サブセットの増加が観察された。
【００８５】
さらに、がん細胞を被覆しているＣＸＣＬ１２と浸潤性Ｔ細胞上のＣＸＣＲ４との相互作用により、Ｔ細胞のアポトーシスが引き起こされる。これががん細胞の付近からのＴ細胞排除の１つの機構であり得る。
【００８６】
したがって、本発明は、被験体における腫瘍のがん細胞含有領域にＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞を含めたＣＤ３＋Ｔ細胞サブセットを動員するための方法、ならびに腫瘍の成長の免疫学的制御を回復させることによって腫瘍を処置するための方法を提供する。このように、本発明により、Ｔ細胞排除の問題が克服され、がん細胞にエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞サブセットを、がん細胞を除去するそれらの内在性機能を行うために蓄積および動員させることが可能になる。
【００８７】
したがって、それを必要とする被験体に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害剤を投与するステップを含む本明細書に記載の方法により、腫瘍のがん細胞を含有する部位におけるエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞の蓄積の動員が増加する。
【００８８】
本発明の有効性は、ＦＡＰ＋間質細胞によりＣＸＣＲ４リガンドであるＣＸＣＬ１２が分泌されるという観察結果に基づく。例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などの本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与することにより、ＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害がもたらされ、観察される免疫抑制の低下およびＴ細胞排除の消失が導かれる。結果として、ＦＡＰ＋細胞の産物であるＣＸＣＬ１２に応答したＣＸＣＲ４によるシグナル伝達が克服されることに起因して、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞が腫瘍のがん細胞含有部位に動員され、がん細胞を除去することが可能になる。
【００８９】
例えば、本発明の好ましい一実施形態では、ＣＤ３＋Ｔ細胞を腫瘍のがん細胞含有部位に動員し、がん性腫瘍細胞の免疫学的調節を回復させるために使用することができるＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の例は、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４である。このがん性腫瘍の免疫学的監視の回復は、Ｔ細胞排除が消失し、がん性細胞の除去が導かれることに起因する。
【００９０】
好ましい一例では、記載されている発明により、ＰＤＡなどのがん性腫瘍細胞へのＴ細胞の蓄積および動員が増加して、腫瘍の成長が低下し、腫瘍の逃避機構が克服される。例えば、大多数の固形腫瘍と同様に、ＰＤＡ腫瘍は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を発現する間質細胞を含有する。ＦＡＰ＋間質細胞はＰＤＡ腫瘍と他の腫瘍のどちらにも見いだされ、また、ＣＸＣＲ４に結合するケモカインであるＣＸＣＬ１２を分泌することが公知である。腫瘍の逃避戦略の１つは、がん細胞をＣＸＣＬ１２と結合させ、がん細胞の中にエフェクターＴ細胞が蓄積するのを排除することによって腫瘍の局所的な免疫調節を抑制する。例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などのＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の存在下では、腫瘍の免疫調節は回復する。
【００９１】
具体的には、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などのＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の存在下にある場合、ＰＤＡ細胞などのがん性細胞にＣＤ３＋Ｔ細胞が動員されて蓄積し、これらのＴ細胞により腫瘍の免疫学的調節が回復する。さらに、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、腫瘍のがん細胞含有部位へのＴ細胞の蓄積が増加する。また、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、個体においてＦＡＰ＋間質細胞で構成されるがん性腫瘍における免疫抑制も低下する。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の別の機能としては、がん細胞の中へのエフェクターＴ細胞の浸潤が挙げられる。そのようなＣＤ３＋Ｔ細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞が挙げられる。
【００９２】
結果として、本発明は、ＰＤＡを有する被験体などのがんを有する被験体を、それを必要とする被験体に薬学的有効量のＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害剤を投与することによって処置する方法を提供する。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の製造および薬物適用により、免疫抑制を低下させること、がん細胞の中へのエフェクターＴ細胞の浸潤を増加させること、腫瘍の免疫学的調節を回復させること、エフェクターＴ細胞のがん細胞に対する感受性を増加させること、および、好ましくはＦＡＰ＋間質細胞で構成される腫瘍内のがん細胞を有効に減少させ、除去することが可能になる。
【００９３】
本発明は、がんを有する個体における腫瘍免疫抑制を低下または消滅させるための、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の使用に関する。本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、被験体におけるがん細胞に対する免疫応答、特に細胞媒介性免疫応答の効果を増加させるために使用することができる。
【００９４】
本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤により、例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞サブセットが排除されることによるがん性腫瘍の免疫応答を抑制する能力が低下し、したがって、被験体における腫瘍に対する免疫応答がより有効になる。これにはヒト患者のがん性腫瘍に対する有益な治療効果があり得る。
【００９５】
本記載では、それを必要とする個体におけるがん免疫療法の方法であって、個体に本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、例えば、個体におけるがんに対する宿主免疫応答の効果を増加させることによってがんを処置するために有効な量で投与するステップを含む方法が提供される。
【００９６】
本明細書では、個体におけるがん性腫瘍における免疫抑制を低下させ、かつ／または個体におけるがん性腫瘍に対する免疫応答、好ましくは細胞媒介性免疫応答の効果を増加させる方法であって、個体に本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与するステップを含む方法も提供される。
【００９７】
本明細書では、個体におけるがん性腫瘍の宿主の免疫応答に対する感受性を増加させる方法であって、個体に本発明に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与するステップを含む方法も提供される。
【００９８】
本明細書では、がん性腫瘍のがん細胞を含有する部位へのＴ細胞の蓄積および動員、好ましくはエフェクターＣＤ３＋Ｔ細胞の蓄積を増加させるための方法であって、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などの、本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与するステップを含む方法も提供される。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、腫瘍内のがん含有部位へのＴ細胞の蓄積および動員を増加させるために使用することができる。本発明は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の医薬品の製造における使用または腫瘍内のがん含有部位へのＴ細胞の蓄積を増加させることにおける使用にも関する。
【００９９】
本発明者らは、処置前には、大多数のＴ細胞が腫瘍の間質領域において見いだされることを観察した。このＴ細胞の分布が、がん細胞に対して免疫応答して腫瘍の成長を制御することができないことに少なくとも部分的に関与すると考えられている。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与することにより、腫瘍のがん細胞領域へのエフェクターＴ細胞の蓄積が増加する。
【０１００】
本明細書で言及される腫瘍療法は、腫瘍の成長の速度を低下させ、腫瘍の成長を減速させるが必ずしも消失させるわけではない療法を含む。
【０１０１】
腫瘍の成長の速度の低下は、例えば、腫瘍の成長の速度が少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％またはそれ超低下することであってよい。例えば、成長の速度は、１日、２日、３日、４日、５日、６日または７日にわたって、または１週間またはそれ超のより長い期間にわたって測定することができる。
【０１０２】
一部の実施形態では、本発明により、腫瘍の成長の停止、または腫瘍サイズの縮小もしくは腫瘍の除去がもたらされ得る。
【０１０３】
被験体における腫瘍内のがん細胞は、被験体における正常な体細胞とは免疫学的に別個であり得る（例えば、腫瘍は免疫原性であり得る、あるいは、免疫原性ではなくとも、体細胞とは異なる免疫学的決定基（複数可）を提示し得る）。例えば、がん細胞は、被験体において、がん細胞によって発現される１種または複数種の抗原に対する全身免疫応答を惹起することが可能であり得る。免疫応答を惹起する抗原は腫瘍抗原であり得る、または正常細胞に共有され得る。
【０１０４】
複数の実施形態では、腫瘍は、異なる抗原決定基を提示するが、被験体の免疫系から隠れ、腫瘍逃避特性を示す。例えば、腫瘍は、免疫細胞を排除し、したがって、その免疫学的視感度（immunological visibility）および感受性を低下させ、かつ／または免疫系が腫瘍を攻撃するように作用するのを妨げ得る。
【０１０５】
被験体において、がん性腫瘍内のがん細胞に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞が存在し得る。
【０１０６】
複数の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞はがん性腫瘍には存在しない、またはがん細胞によって発現される抗原による活性化に必要である決定的な距離内にある、腫瘍のがん細胞を含有する領域には存在しない。一部の実施形態では、がん細胞は被験体における正常な体細胞によっては発現されない１種または複数種の抗原（すなわち腫瘍抗原）を発現し得る。腫瘍抗原は、当技術分野で公知であり、被験体において免疫応答を惹起し得る。具体的には、腫瘍抗原は、被験体において、がん細胞に対するＴ細胞媒介性免疫応答を惹起し得る、すなわち、腫瘍抗原は被験体におけるＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識され得る。
【０１０７】
がん性腫瘍内のがん細胞によって発現される腫瘍抗原としては、例えば、がん・生殖系列遺伝子によりコードされるがん・精巣（ＣＴ）抗原、例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＧＡＧＥ−Ｉ、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−Ｉ、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１／ＣＴ７、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｉ、ＬＡＧＥ−Ｉ、ＳＳＸ−Ｉ、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−ＩおよびＸＡＧＥならびにその免疫原性断片などが挙げられる（Simpsonら、Nature Rev（２００５年）５巻、６１５〜６２５頁、Gureら、Clin Cancer Res（２００５年）１１巻、８０５５〜８０６２頁；Velazquezら、Cancer Immun（２００７年）７巻、１１頁；Andradeら、Cancer Immun（２００８年）８巻、２頁；Tinguelyら、Cancer Science（２００８年）；Napoletanoら、Am J of Obstet Gyn（２００８年）１９８巻、９９  ｅ９１〜９７頁）。
【０１０８】
発現され得る他の腫瘍抗原としては、例えば、過剰発現されたまたは変異したタンパク質および分化抗原、特にメラニン形成細胞分化抗原、例えば、ｐ５３、ｒａｓ、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＰＭＳＡ、ＰＳＡ、チロシナーゼ、メランＡ、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、ｇｐ７５、アルファ−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、ベータカテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−２、および３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ（isomeras）、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、ＮＡ−８８、ＳＰ１７、およびＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、（ＭＡＲＴ−Ｉ）、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、アルファ−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼１７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合性タンパク質＼シクロフィリンＣ−関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、およびＴＰＳ、ならびにＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、およびメソテリンなどのチロシナーゼ関連タンパク質が挙げられる。
【０１０９】
発現され得る他の腫瘍抗原としては、「ストレスを受けた」がん細胞により使用される非ＡＵＧ翻訳開始機構によって生成するアウトオブフレームペプチド−ＭＨＣ複合体が挙げられる（MalarkannanらImmunity １９９９年）。
【０１１０】
発現され得る他の腫瘍抗原は当技術分野で周知である（例えば、ＷＯ００／２０５８１；Cancer Vaccines and Immunotherapy（２０００年）、Stern、BeverleyおよびCarroll編、CambridgeUniversity Press、Cambridgeを参照されたい）。これらの腫瘍抗原の配列は公共のデータベースから容易に入手可能であるが、ＷＯ１９９２／０２０３５６Ａ１、ＷＯ１９９４／００５３０４Ａ１、ＷＯ１９９４／０２３０３１Ａ１、ＷＯ１９９５／０２０９７４Ａ１、ＷＯ１９９５／０２３８７４Ａ１および ＷＯ１９９６／０２６２１４Ａ１においても見出される。
【０１１１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の処置に適するがん性腫瘍は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の不在下では免疫療法に対して抵抗性であり得る。例えば、がん性腫瘍内のがん細胞はＰＤ−Ｌ１を発現し得る。ＰＤ−Ｌ１の発現はがん細胞において自発性であり得る、またはＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害の結果として起こり得る。ＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害により、Ｔ細胞が腫瘍のがん領域に浸潤し、ＩＦＮ−ガンマを分泌することが可能になり、それにより上皮がん細胞を含めた上皮細胞によるＰＤ−Ｌ１の発現が誘導される。
【０１１２】
上記の処置に適する被験体は、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ科の動物（例えば、マウス）、イヌ科の動物（例えば、イヌ）、ネコ科の動物（例えば、ネコ）、ウマ科の動物（例えば、ウマ）、霊長類、真猿類（例えば、サルまたは類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトなどの哺乳動物であり得る。
【０１１３】
一部の実施形態では、被験体はヒトである。他の実施形態では、非ヒト哺乳動物、特にヒトにおける治療有効性を実証するためにモデルとして慣習的に使用される哺乳動物（例えばネズミ科の動物、霊長類、ブタ、イヌ科の動物、またはウサギ）を使用することができる。
【０１１４】
一部の実施形態では、被験体は、最初のがん処置後に微小残存病変（ＭＲＤ）を有し得る。
【０１１５】
がんを有する被験体は、当技術分野で公知の臨床的な基準に従ってがんの診断を下すのに十分である同定可能な徴候、症状、または検査所見を少なくとも１つ示し得る。そのような臨床的な基準の例は、Harrison’s Principles of Internal Medicine、第１５版、Fauci ASら編、McGraw-Hill、New York、２００１年などの医学の教本に見いだすことができる。いくつかの場合には、被験体におけるがんの診断は、被験体から得た体液または組織の試料中の特定の細胞型（例えば、がん細胞）の同定を含み得る。
【０１１６】
がん性腫瘍におけるＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害により、がん性腫瘍のがん細胞を含有する領域へのＴ細胞の蓄積が増加し得る。
【０１１７】
好ましいＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、ＣＸＣ１２媒介性ＣＸＣＲ４シグナル伝達活性を、同じ条件下のＡＭＤ３１００（プレリキサホル）と同じまたはそれよりも大きな程度まで低下または消滅させることができる。例えば、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤には、ＡＭＤ３１００の効力と同等またはそれよりも大きな効力があり得る（例えば、約６５０ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０；Frickerら Biochem Pharmacol ７２巻（５号）５８８〜５９６頁）。他の好ましい実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、ＡＭＤ３１００と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％または３００％強力である。
【０１１８】
Ｃ．製剤
ＣＸＣＲ４によるＣＸＣＬ１２への結合を有効に遮断するために適したＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の血清中濃度は、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に対する阻害剤の親和性から容易に決定することができる。
【０１１９】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、従来の化学療法剤、放射線療法またはがん免疫療法などの他の抗がん療法と一緒に投与することができる。例えば、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を抗がん化合物と一緒に投与する。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と抗がん化合物は別々の化合物または分子であってもよく、共有結合または非共有結合により連結して単一の化合物、分子、粒子または複合体になっていてもよい。
【０１２０】
抗がん化合物は、がん細胞に対する活性を有する任意の抗がん薬または医薬であってよい。本明細書に開示されているＣＸＣＲ４との組合せに使用するために適した抗がん化合物としては、アスピリン、スリンダク、クルクミン、ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）；トリエチレンメラミン（thriethylenemelamine）（ＴＥＭ）などのエチレンイミン（thylenimine）／メチルメラミン、トリエチレン、チオホスホラミド（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などのトリアジンを含めたアルキル化剤；葉酸類似体、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、５−フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、２，２’−ジフルオロデオキシシチジン、プリン類似体、例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２’−デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ｅｒｙｔｈｒｏｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ）（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン、および２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ）を含めた代謝拮抗薬；抗有糸分裂薬、例えば、パクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、およびビノレルビンを含めたビンカアルカロイド、タキソテレ、エストラムスチン、ならびにリン酸エストラムスチンを含めた天然産物；エピポドフィロトキシン（epipodophylotoxin）、例えば、エトポシドおよびテニポシド；抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ（actimomycin D）、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、およびアクチノマイシン；酵素、例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ、サイトカイン、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータおよびＧＭ−ＣＳＦ、抗血管新生因子、例えば、アンジオスタチンおよびエンドスタチン、ＦＧＦまたはＶＥＧＦの阻害剤、例えば、可溶性ＶＧＦ／ＶＥＧＦ受容体を含めた血管新生因子の受容体の可溶性の形態、白金配位錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン、アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン、置換尿素、例えば、ヒドロキシウレア、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）およびプロカルバジンを含めたメチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制薬、例えば、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）およびアミノグルテチミド；副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、例えば、プレドニゾンおよび等価物、デキサメタゾンならびにアミノグルテチミド；プロゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロール；エストロゲン、例えば、ジ��チルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール等価物；抗エストロゲン薬、例えば、タモキシフェン；プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン／等価物を含めたアンドロゲン；抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロリド；非ステロイド性抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミドを含めたホルモンおよびアンタゴニスト；キナーゼ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、メチル化阻害剤、プロテアソーム阻害剤、モノクローナル抗体、酸化剤、抗酸化剤、テロメラーゼ阻害剤、ＢＨ３模倣物、ユビキチンリガーゼ阻害剤、ｓｔａｔ阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧｌｅｅｖａｃまたはＧｌｉｖａｃとして販売されている）および現在Ｔａｒｖｅｃａとして販売されているエルロチニブ（ＥＧＦ受容体阻害剤）；ならびに抗ウイルス薬、例えば、リン酸オセルタミビル、アンホテリシンＢ、およびパリビズマブを挙げることができる。
【０１２１】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と抗がん化合物は単独で投与することも可能であるが、化合物が同じまたは別々の医薬組成物（例えば、製剤）中に存在することが好ましい。
【０１２２】
医薬組成物は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤および／または抗がん化合物に加えて、１種または複数種の薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、安定剤、防腐剤、滑沢剤、または当業者に周知の他の材料を含んでよい。適切な材料は、滅菌され、発熱物質を含まず、適切な等張性および安定性を有する。例としては、滅菌食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）、水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、またはこれらの組合せが挙げられる。そのような材料は、無毒性であるべきであり、また、活性化合物の有効性に干渉しないものであるべきである。担体または他の材料の厳密な性質は、以下で考察している通り、ボーラス、注入、注射または任意の他の適切な経路によるものであり得る投与経路に依存する。適切な材料は、滅菌され、発熱物質を含まず、適切な等張性および安定性を有する。例としては、滅菌食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）、水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、またはこれらの組合せが挙げられる。組成物は、例えば湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの補助物質をさらに含有してよい。
【０１２３】
適切な担体、賦形剤などは、標準の医薬のテキスト、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences、第１８版、Mack Publishing Company、Easton、Pa.、１９９０年に見いだすことができる。
【０１２４】
「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、良好な医学的判断の範囲内に入り、被験体（例えば、ヒト）の組織との接触に使用するために適し、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症を伴わない、妥当な損益比に見合う化合物、材料、組成物、および／または剤形に関する。担体、賦形剤などはそれぞれ、製剤の他の成分と適合するという意味でも「許容される」ものでなければならない。
【０１２５】
一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の一方または両方を、投与前に再構成するための凍結乾燥した形態で提供することができる。例えば、凍結乾燥した試薬を被験体に投与する前に滅菌水中に再構成すること、および、食塩水と混合することができる。
【０１２６】
製剤は、単位剤形で都合よくもたらすことができ、薬学の技術分野で周知の任意の方法によって調製することができる。そのような方法は、活性化合物を１種または複数種の副成分を構成する担体と合わせるステップを含む。一般に、製剤は、活性化合物と液体担体または微細化した固体担体またはその両方と均一かつ密接に合わせ、次いで、必要であれば生成物を成形することによって調製される。
【０１２７】
製剤は、液体、液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、錠剤、ロゼンジ、顆粒剤、散剤、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、アンプル剤、坐剤、膣坐薬、軟膏剤、ゲル剤、ペースト剤、クリーム剤、噴霧剤、ミスト、フォーム（foam）、ローション剤、油、巨丸剤（bolus）、舐剤、またはエアゾール剤の形態であってよい。
【０１２８】
任意選択で、他の治療的または予防的な薬剤を医薬組成物または製剤に含めることができる。
【０１２９】
本明細書に記載の腫瘍における免疫抑制を低下させることは、がんを処置するための免疫療法において有用であり得る。
【０１３０】
処置は、ヒトに対するものか動物（例えば、獣医的な適用）に対するものかにかかわらず、いくつかの所望の治療効果、例えば、状態の進行の阻害または遅延が実現される任意の処置および療法であってよく、進行の速度の低下、進行の速度の休止、状態の好転、状態の治癒もしくは寛解（部分的なものであるか完全なものであるかにかかわらず）、状態の１つもしくは複数の症状および／もしくは徴候の予防、遅延、軽減もしくは停止、または被験体もしくは患者の生存が処置の不在下で予測されるものよりも延長されることを含む。
【０１３１】
予防的措置（すなわち、予防法）としての処置も包含される。例えば、がんが発症または再発症しやすいまたはそのリスクがある被験体を本明細書に記載の通り処置することができる。そのような処置により、被験体におけるがんの発症または再発症が予防され得るまたは遅延し得る。
【０１３２】
具体的には、処置は、完全ながんの寛解を含めたがんの成長の阻害、および／またはがん転移の阻害を含み得る。がんの成長とは、一般に、がんがより発達した形態に変化したことを示すいくつもの指標の任意の１つを指す。したがって、がんの成長の阻害を測定するための指標としては、がん細胞の生存の減少、腫瘍体積または形態の低下（例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、超音波検査、または他の画像診断方法を使用して決定される）、腫瘍の成長の遅延、腫瘍脈管構造の破壊、遅延型過敏症皮膚試験の成績の改善、細胞溶解性Ｔ−リンパ球の活性の増加、および腫瘍特異的抗原のレベルの低下が挙げられる。被験体におけるがん性腫瘍の免疫抑制を低下させることにより、被験体の、がんの成長、具体的には被験体にすでに存在するがんの成長に抵抗し、かつ／または被験体におけるがんが成長する傾向を減少させる能力が改善され得る。
【０１３３】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、本明細書に記載の通り治療有効量で投与することができる。
【０１３４】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、妥当な損益比に見合ういくつかの所望の治療効果を生じさせるために有効な、活性化合物、または活性化合物を含む組合せ、材料、組成物もしくは剤形の量に関する。
【０１３５】
活性化合物の適切な投薬量は患者によって変動し得ることが理解されよう。最適な投薬量の決定には、一般に、治療的利益のレベルと投与のあらゆるリスクまたは有害な副作用とのバランスを取ることが伴う。選択される投薬レベルは、これだけに限定されないが、投与経路、投与時間、活性化合物の排泄の速度、併用される他の薬物、化合物、および／または材料、ならびに患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康、および以前の病歴を含めた種々の因子に依存する。一般に、投薬量は、療法の部位において実質的に有害（harmful）または有害な（deleterious）副作用を引き起こさない活性化合物の濃度が実現されるが、活性化合物の量および投与経路は最終的には医師の自由裁量による。
【０１３６】
一般に、活性化合物の適切な用量は、１日当たり被験体の体重キログラム当たり約１００μｇ〜約２５０ｍｇの範囲内である。活性化合物が塩、エステル、プロドラッグなどである場合には投与される量を親化合物に基づいて算出し、したがって、使用される実際の重量は比例して増加する。
【０１３７】
例えば、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などの本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、血清中濃度を、ＣＸＣＲ４によるＣＸＣＬ１２への結合の＞９０％阻害がもたらされるレベルに維持するために十分な量で連続して静脈内注入することによって投与することができる（例えば、Hendrixら J Acquir Immune Defic Syndr. ２００４年１０月１日；３７巻（２号）：１２５３〜６２頁を参照されたい）。本明細書に記載の他のＣＸＣＲ４シグナル阻害剤は同様にこれと同じように使用することができる。
【０１３８】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける投与は、１回用量で、継続的にまたは断続的に（例えば、適切な間隔で分割した用量で）行うことができる。投与の最も有効な手段および投薬量（dosage of administration）を決定する方法は当業者には周知であり、療法に使用される製剤、療法の目的、処置される標的細胞、および処置される被験体により変動する。医師により選択される用量レベルおよびパターンで単回投与または多数回投与を行うことができる。
【０１３９】
抗がん化合物およびＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の投与は同時であってもよく、別々または逐次的であってもよい。「同時」投与とは、抗がん化合物とＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を被験体に単一用量で同じ投与経路によって投与することを意味する。
【０１４０】
「別々」の投与とは、抗がん化合物とＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を被験体に同時に２つの異なる投与経路によって投与することを意味する。これは、例えば、一方の薬剤を注入によってまたは非経口的に投与し、注入または非経口投与の過程中他方の薬剤を経口的に与える場合に生じ得る。
【０１４１】
「逐次的」とは、抗がん化合物とＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、第２の薬剤を投与する時点で最初に投与された薬剤の活性が被験体において存在し持続しているという条件で、異なる丁度よい（in time）時点で投与することを意味する。例えば、最初に抗がん化合物を投与し、したがって腫瘍抗原に対する免疫応答を生じさせ、次にＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与し、したがって、腫瘍の部位における免疫抑制を低下させることができ、その逆でもよい。逐次的投薬を行い、したがって、２種の薬剤のうち２番目の薬剤を最初の薬剤の４８時間以内、好ましくは２４時間以内、例えば１２時間以内、６時間以内、４時間以内、２時間以内または１時間以内に投与することが好ましい。
【０１４２】
複数回用量のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与することができ、例えば、抗がん化合物を投与した後に２回用量、３回用量、４回用量、５回用量または５回超の用量を投与することができる。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤の投与は抗がん化合物を投与した後長期間にわたって継続することができる。例えば、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を用いた処置は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月または少なくとも２ヶ月にわたって継続することができる。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を用いた処置は、完全な腫瘍拒絶を実現するために必要である限り継続することができる。
【０１４３】
複数回用量の抗がん化合物を投与することができ、例えば、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与した後に２回用量、３回用量、４回用量、５回用量または５回超の用量を投与することができる。抗がん化合物の投与は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を投与した後に長期間にわたって継続することができる。例えば、抗がん化合物を用いた処置は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月または少なくとも２ヶ月にわたって継続することができる。抗がん化合物を用いた処置は、完全な腫瘍拒絶を実現するために必要である限り継続することができる。
【０１４４】
活性化合物または活性化合物を含む医薬組成物は、全身性／末梢性であるか所望の作用の部位におけるものであるかにかかわらず、これだけに限定されないが、経口（例えば、摂取による）；および非経口、例えば、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、静脈内注射、動脈内注射、心臓内注射、髄腔内（intrathecal）注射、脊髄内注射、嚢内注射、被膜下注射、眼窩内注射、腹腔内注射、気管内注射、表皮下注射、関節内注射、くも膜下注射、および胸骨内注射を含めた注射によって；例えば皮下または筋肉内へのデポ剤の埋め込みを含めた任意の都合のよい投与経路によって被験体に投与することができる。通常、投与は静脈内経路によるものであるが、腹腔内経路、皮下経路、経皮経路、経口経路、鼻経路、筋肉内経路または他の都合のよい経路などの他の経路も排除されない。
【０１４５】
活性化合物を含む医薬組成物は、意図された投与経路に適した適切な投薬単位製剤に製剤化することができる。
【０１４６】
経口投与（例えば、摂取による）に適した製剤は、それぞれが所定量の活性化合物を含有するカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの別個の単位として、散剤もしくは顆粒剤として、水性液体もしくは非水性液体の液剤もしくは懸濁剤として、または水中油液体エマルションもしくは油中水液体エマルションとして、ボーラスとして、舐剤として、またはペースト剤として提供することができる。
【０１４７】
錠剤は、従来の手段、例えば、圧縮または成形により、任意選択で１種または複数種の副成分と一緒に作製することができる。圧縮錠剤は、適切な機械で活性化合物を圧縮して散剤または顆粒剤などの易流動性の形態にし、任意選択で１種または複数種の結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、ソルビトール、トラガント、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤または希釈剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）；崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）；表面活性剤または分散剤または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）；および防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ‐ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）と混合することによって調製することができる。成形錠剤は、適切な機械において、粉末化した化合物を不活性な液体希釈剤で湿らせた混合物を成形することによって作製することができる。錠剤は、任意選択でコーティングすることまたは切り目を付けることができ、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを、所望の放出プロファイルがもたらされるように割合を変動させて使用して、その中の活性化合物の遅延放出または制御放出がもたらされるように製剤化することができる。錠剤は、任意選択で、胃以外の腸の部分での放出がもたらされるように腸溶コーティングして提供することができる。
【０１４８】
非経口投与（例えば、皮膚注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射および皮内注射を含めた注射による）に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、防腐剤、安定剤、静菌剤、および製剤に意図されたレシピエントの血液との等張性を与える溶質を含有し得る水性および非水性の等張性の発熱物質を含まない滅菌注射液剤、ならびに、懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁剤、ならびに化合物が血液成分または１つまたは複数の器官にターゲティングされるように設計されたリポソームまたは他の微粒子系が挙げられる。そのような製剤に使用するための適切な等張性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、または乳酸リンゲル注射液が挙げられる。一般には、液剤中の活性化合物の濃度は約１ｎｇ／ｍｌから約１０μｇ／ｍｌまで、例えば、約１０ｎｇ／ｍｌから約１μｇ／ｍｌまでである。製剤は、単位用量または複数回用量の密封容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供することができ、使用する直前に滅菌液体担体、例えば注射用水を添加することのみが必要なフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保管することができる。即時の注射剤および懸濁剤は、滅菌粉末、滅菌顆粒、および滅菌錠剤から調製することができる。製剤は、活性化合物が血液成分または１つまたは複数の器官にターゲティングされるように設計されたリポソームまたは他の微粒子系の形態であってよい。
【０１４９】
抗がん化合物および／またはＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を含む組成物は、後で希釈する濃縮物の形態で調製することもでき、投与できる状態にある分割用量の形態であってもよい。あるいは、ヒト被験体または動物被験体に投与する前に混合するための試薬をキット内で別々に提供することができる。
【０１５０】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、単独で、または他の処置と組み合わせて、個々の状況に応じて同時にまたは逐次的に投与することができる。例えば、本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤は、１種または複数種の追加の活性化合物と組み合わせて投与することができる。
【０１５１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を使用した被験体の処置は、１種または複数種の免疫療法薬を被験体に投与するステップをさらに含み得る。
【０１５２】
免疫療法薬により、免疫系、特にＴ細胞による、がん細胞によって発現される抗原の認識を介したがん細胞の標的化が容易になり得るまたは増強され得る。
【０１５３】
適切な薬剤としては、養子Ｔ細胞療法、および腫瘍細胞に特異的な抗原またはエピトープが局在する領域を認識するＴリンパ球（Ｔ細胞）を誘導するよう設計されたがんワクチン調製物が挙げられる。
【０１５４】
がんワクチンは、被験体における内在性免疫応答を刺激するまたは惹起する、または、１種または複数種の腫瘍抗原に対する被験体における内在性免疫応答を刺激するまたは惹起する薬剤、細胞に基づく薬剤、分子、または免疫原である。適切ながんワクチンは当技術分野で公知であり、任意の都合のよい技法によって作製することができる。
【０１５５】
免疫応答を生じさせるための腫瘍抗原の使用は当技術分野において十分に確立されている（例えば、Kakimi K,ら、Int J Cancer. 2011年2月3日; Kawada J, Int J Cancer. 2011年3月16日; Gnjatic S,ら、Clin Cancer Res. 2009年3月15日;15巻(6号):2130〜9頁; Yuan J,ら、Proc Natl Acad Sci U S A. 2008年12月23日;105巻(51号):20410〜5頁; SharmaP,ら、J Immunother. 2008年11月〜12月;31巻(9号):849〜57頁; Wada H,ら、Int J Cancer. 2008年11月15日;123巻(10号):2362〜9頁;Diefenbach CS,ら、Clin Cancer Res. 2008年5月1日;14巻(9号):2740〜8頁; Bender A,ら、Cancer Immun. 2007年10月19日;7巻:16頁; Odunsi K,ら、ProcNatl Acad Sci U S A. 2007年7月31日;104巻(31号):12837〜42頁; Valmori D,ら、ProcNatl Acad Sci U S A. 2007年5月22日;104巻(21号):8947〜52頁; Uenaka A,ら、CancerImmun. 2007年4月19日;7巻:9頁; Kawabata R,ら、Int J Cancer. 2007年5月15日;120巻(10号):2178〜84頁; JaegerE,ら、Proc Natl Acad Sci U S A. 2006年9月26日;103巻(39号):14453〜8頁; Davis ID Proc Natl Acad Sci U S A. 2005年7月5日;102巻(27号):9734頁; Chen Q, Proc Natl Acad Sci U S A.2004年6月22日;101巻(25号):9363〜8頁; Jaeger E, Proc Natl Acad Sci U S A. 2000年10月24日;97巻(22号):12198〜203頁; Carrasco J,ら、J Immunol. 2008年3月1日;180巻(5号):3585〜93; vanBaren N,ら、J Clin Oncol. 2005年12月10日;23巻(35号):9008〜21頁; KruitWH,ら、Int J Cancer. 2005年11月20日;117巻(4号):596〜604頁; MarchandM,ら、Eur J Cancer. 2003年1月;39巻(1号):70〜7頁; Marchand Mら、IntJ Cancer. 1999年1月18日;80巻(2号):219〜30頁; Atanackovic D,ら、Proc Natl Acad Sci U S A. 2008年2月5日;105巻(5号):1650〜5頁を参照されたい）。
【０１５６】
被験体由来のがん細胞を分析してがん細胞によって発現される腫瘍抗原を同定することができる。例えば、本明細書に記載の方法は、被験体から得た試料中の１つまたは複数のがん細胞が表面に表す腫瘍抗原を同定するステップを含み得る。次いで、同定された腫瘍抗原の１種または複数種のエピトープを含むがんワクチンを、該抗原を発現しているがん細胞を有する被験体に投与することができる。ワクチンにより、被験体における、同定された腫瘍抗原を発現しているがん細胞に対する免疫応答、好ましくはＴ細胞媒介性免疫応答が誘導され得るまたは増加し得る。
【０１５７】
がんワクチンは、本明細書に記載の通りＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を被験体に投与する前に、それと同時に、またはその後に投与することができる。
【０１５８】
養子Ｔ細胞療法は、腫瘍特異的Ｔ細胞を被験体に投与することを含む。Ｔ細胞は被験体から予め単離し、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖させたものであることが好ましい。適切な養子Ｔ細胞療法は当技術分野で周知である（J. Clin Invest. ２００７年６月１日；１１７巻（６号）：１４６６〜１４７６頁）。例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞（キメラ抗原受容体）を使用する養子Ｔ細胞療法は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と組み合わせて使用すると著しく改善される。ＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍内のがん細胞の殺滅活性を媒介するために、それらに対する近接性が得られるよう腫瘍内に移動しなければならない。本発明、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などをＣＡＲ  Ｔ細胞と組み合わせて使用することにより、この型の免疫療法が改善され得る。
【０１５９】
一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を使用した個体の処置は、がん性腫瘍を処置するために１種または複数種の腫瘍療法を施すステップをさらに含み得る。そのような療法としては、例えば、腫瘍医薬、放射線および外科手技が挙げられる。
【０１６０】
腫瘍医薬とは、がんを処置する目的で被験体に投与される薬剤である。腫瘍を処置するために適した医薬は当技術分野で周知である。
【０１６１】
本明細書に開示されているＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤と組み合わせて使用するために適した医薬としては、アスピリン、スリンダク、クルクミン、ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）；トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）などのエチレンイミン／メチルメラミン、トリエチレン、チオホスホラミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などのトリアジンを含めたアルキル化剤；葉酸類似体、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、５−フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、２，２’−ジフルオロデオキシシチジン、プリン類似体、例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２’−デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン、および２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ）を含めた代謝拮抗薬；抗有糸分裂薬、例えば、パクリタキセル、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、およびビノレルビンを含めたビンカアルカロイド、タキソテレ、エストラムスチン、ならびにリン酸エストラムスチンを含めた天然物；エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニポシド；抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、およびアクチノマイシン；酵素、例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ、サイトカイン、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータおよびＧＭ−ＣＳＦ、抗血管新生因子、例えば、アンジオスタチンおよびエンドスタチン、ＦＧＦまたはＶＥＧＦの阻害剤、例えば、可溶性ＶＧＦ／ＶＥＧＦ受容体を含めた血管新生因子の受容体の可溶性の形態、白金配位錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン、アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン、置換尿素、例えば、ヒドロキシウレア、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）およびプロカルバジンを含めたメチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制薬、例えば、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）およびアミノグルテチミド；副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、例えば、プレドニゾンおよび等価物、デキサメタゾンならびにアミノグルテチミド；プロゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロール；エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール等価物；抗エストロゲン薬、例えば、タモキシフェン；プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン／等価物を含めたアンドロゲン；抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロリド；非ステロイド性抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミドを含めたホルモンおよびアンタゴニスト；キナーゼ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、メチル化阻害剤、プロテアソーム阻害剤、モノクローナル抗体、酸化剤、抗酸化剤、テロメラーゼ阻害剤、ＢＨ３模倣物、ユビキチンリガーゼ阻害剤、ｓｔａｔ阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧｌｅｅｖａｃまたはＧｌｉｖａｃとして販売されている）および現在Ｔａｒｖｅｃａとして販売されているエルロチニブ（ＥＧＦ受容体阻害剤）；ならびに抗ウイルス薬、例えば、リン酸オセルタミビル、アンホテリシンＢ、およびパリビズマブを挙げることができる。
【０１６２】
さらに、Ｌａｇ−３のような他のＴ細胞チェックポイントアンタゴニスト、またはＩＤＯ１／ＩＤＯ２（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）の阻害剤も本発明と組み合わせて使用することができる。これらの酵素により、腫瘍微小環境においてトリプトファンが異化され、それによりＴ細胞機能が損なわれる。例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などのＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤をＴ細胞チェックポイントアンタゴニストと組み合わせて使用することにより、腫瘍内のがん細胞殺滅を相乗的に増加させることができる。
【０１６３】
ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤に関する種々の実施形態が上で開示されている。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤および任意選択で上に開示されている１種または複数種の他の薬剤に関する本発明の態様および実施形態は、化合物または薬剤を別々に（逐次的もしくは同時に）または組み合わせて（共製剤化または混合して）投与することに関する開示を含む。各態様または実施形態について、本明細書には、さらに、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤および任意選択で１種または複数種の他の薬剤を互いと共製剤化または混合した状態で含む組成物が開示されており、さらに、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を含有するキットまたは単位用量が開示されている。任意選択で、そのような組成物、キットまたは用量は、１種または複数種の担体を薬剤との混合物の状態で含むまたは個体に投与する前に処方するように一緒に包装されている。
【０１６４】
本明細書では免疫抑制が、がん性腫瘍の微小環境からのＴ細胞の排除に起因することが示されている。本明細書に記載のＡＭＤ３１００などのＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を使用したＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害により、この排除が克服され、腫瘍内のがん細胞がＴ細胞に曝露される。本発明の他の態様では、処置方法は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、がんを処置するための、がんワクチンなどの上記の通りの免疫療法薬または養子Ｔ細胞療法と組み合わせて投与するステップを含み得る。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤および免疫療法薬は、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤の不在下で投与することができる。
【０１６５】
適切なＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤、免疫療法薬および処置方法は、必要な変更を加えて上に記載されている。
【０１６６】
ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤とＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤との組合せに関する種々の実施形態も上で開示されている。上に開示されているＰＤ−１シグナル伝達阻害剤、および、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤、および任意選択で１種または複数種の他の薬剤の組合せに関する本発明の態様および実施形態は、化合物または薬剤を別々に（逐次的または同時に）または組み合わせて（共製剤化または混合して）投与することに関する開示を含む。各態様または実施形態に関して、本明細書には、さらに、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤およびＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤および任意選択で１種または複数種の他の薬剤を互いと共製剤化してまたは混合物の状態で含む組成物が開示されており、さらに、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤およびＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、一緒に包装されているが、混合物ではない状態で含有するキットまたは単位用量が開示されている。任意選択で、そのような組成物、キットまたは用量は、さらに１種または複数種の担体を、薬剤の一方または両方との混合物の状態で、または被験体に投与する前に処方するように一緒に包装された状態で含む。
【０１６７】
本明細書では免疫抑制ががん性腫瘍の微小環境からのＴ細胞の排除および／または死滅に起因することが示されている。本明細書に記載の、例えば、ＡＭＤ３１００、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＡＭＤ１１０７０、またはＬＹ２５１０９２４などのＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を使用したＣＸＣＲ４シグナル伝達の阻害により、この排除が克服され、腫瘍内のがん細胞がＴ細胞に曝露される。本発明の他の態様では、処置方法は、ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤を、がんを処置するための、がんワクチンなどの上記の通りの免疫療法薬または養子Ｔ細胞療法と組み合わせて投与するステップを含み得る。ＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤および免疫療法薬は、ＰＤ−１シグナル伝達阻害剤の不在下で投与することができる。
【０１６８】
適切なＣＸＣＲ４シグナル伝達阻害剤、免疫療法薬および処置方法は、必要な変更を加えて上に記載されている。
【０１６９】
本発明の種々の別の態様および実施形態は、本開示を考慮して、当業者には明らかである。
【０１７０】
本発明の他の態様および実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を用いて上で記載されている態様および実施形態を「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という用語で置き換えたもの、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を用いて上で記載されている態様および実施形態を「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語で置き換えたものを提供する。
【０１７１】
「および／または」とは、本明細書で使用される場合、他のものを伴うまたは伴わない明記されている２つの特徴または成分のそれぞれの具体的な開示とみなされるべきである。例えば、「Ａおよび／またはＢ」とは、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、ならびに（ｉｉｉ）ＡおよびＢの、それぞれが個別に詳述されているのと同様に具体的な開示とみなされるべきである。
【０１７２】
本出願には、文脈により別段の必要性がない限り、上記のあらゆる態様および実施形態の互いとの全ての組合せが開示されていることが理解されるべきである。同様に、本出願には、文脈により別段の必要性がない限り、好ましく、かつ／または任意選択の特徴の単独でまたは他の態様のいずれかとの全ての組合せが開示されている。
【０１７３】
上記の実施形態の改変、別の実施形態およびその改変は、本開示を読めば当業者には明らかになり、したがって、これらは本発明の範囲内に入る。
【０１７４】
本明細書において言及されている全ての文書および配列データベースエントリーは、あらゆる目的についてその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７５】
以下の実施例を参照して本発明を以下にさらに説明する。
【実施例】
【０１７６】
方法
マウス
実験は全て施設のガイドラインに従って実施し、ＵＫ  Ｈｏｍｅ  Ｏｆｆｉｃｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｎｉｍａｌ  ｅｔｈｉｃｓ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ＣＲＵＫおよびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅによる認可を受けた。マウスを１２時間明／１２時間暗のサイクルで飼育し、食事および水を自由に摂らせた。ＬＳＬ−ＫｒａｓＧ１２Ｄ／＋；ＬＳＬ１０  Ｔｐ５３Ｒ１７２Ｈ／＋；Ｐｄｘ−１−Ｃｒｅ（ＫＰＣ）およびＦＡＰ−ＤＴＲ  ＢＡＣトランスジェニックマウスの作製については以前に記載されている（８、１０）。これらの系統を交雑してＫＰＣＤ（Ｋｒａｓ；ｐ５３；Ｃｒｅ；ＤＴＲ）マウスを作製した。ＫＰＣマウスおよびＫＰＣＤマウスを、６０日齢から腹部触診によって腫瘍に関してスクリーニングした。腫瘍を高分解能超音波（Ｖｅｖｏ  ２１００、ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ）によって検証した。腫瘍の平均直径が５〜８ｍｍ（体積およそ２００ｍｍ３に対応する）のマウスを２回の追跡腫瘍サイズ測定（３日目および６日目）を伴う６日間の処置試験に組み入れた。可能であれば、腫瘍を多数の角度で評価し、体積を平均した。ＫＰＣ（−／＋ＤＴＲ  Ｔｇ）マウスを４８時間ごとにＰＢＳ中２５ｎｇ／ｇのＤＴｘ（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、α−ＰＤ１（１０Ｆ．９Ｇ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）１６０μｇ、α−ＣＴＬＡ−４（９Ｈ１０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）１００μｇ、またはアイソタイプ対照抗体を用い、腹腔内注射によって処置した。ＡＭＤ３１００（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を浸透圧ポンプ（０日目に挿入した）によって３０ｍｇ／ｍｌまたは９０ｍｇ／ｍｌ（高用量）で投与した。Ｔ細胞枯渇試験のために、マウスにα−ＣＤ４（ＧＫ１．５、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）およびα−ＣＤ８α（５３−６．７、Ｂｉｏｌｏｅｇｅｎｄ）のそれぞれ、またはそれぞれのアイソタイプ対照抗体３００μｇを処置開始前の３回の連続した２４日間、ならびに処置の過程中２日目および５日目に腹腔内注射した。
【０１７７】
皮下ＬＬ２／ＯＶＡ腫瘍モデル：
Ｃ５７ＢＬ／６をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＵＫから購入し、Ｒａｇ２−／−マウスを地元施設で繁殖させた。１％熱失活マウス血清を含むＲＰＭＩ中ＬＬ２／ＯＶＡ細胞２×１０５個を皮下注射した。カリパスを使用して腫瘍サイズを測定し、それにより長寸法（Ｌ）と短寸法（Ｓ）を測定し、方程式：体積＝（Ｌ×Ｓ２）／２を使用して腫瘍体積を算出した。ＡＭＤ３１００（３０ｍｇ／ｍｌ）による処置を、腫瘍が少なくとも６２ｍｍ３に達した１２日目に、ＡＬＺＥＴ浸透圧ポンプ（１００７Ｄまたは２００２、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を皮下に挿入することにより開始した。
【０１７８】
細胞株
ニワトリオボアルブミン（ＬＬ２／ＯＶＡ）を発現するルイス肺癌細胞株ＬＬ２の作製がKramanら、２０１０年において報告された。膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）細胞株Ｋ８４８４およびＴＢ３２９６４はＫＰＣマウスにおいて生じた腫瘍から導出された。これらを、１０％ＦＣＳを補充したＤＭＥＭ中で培養した。
【０１７９】
ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ
腫瘍全体の単一細胞懸濁液をα−ＣＤ３−ＰＥ（クローン  １７Ａ２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色して、αＰＥ磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用したＴ細胞のＭＡＣＳ枯渇を可能にした。ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ  ＣＤ８α＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を製造者の指示に従って使用してＣＤ８＋Ｔ細胞を脾臓全体から単離した。純度をフローサイトメトリーによって確認した。１２時間ＩＦＮ−γ放出ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて、製造者の指示に従って（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＫＰＣマウス、ＫＣマウスおよびＰＣマウス由来のＣＤ８＋Ｔ細胞の倍加希釈物を一定数の刺激細胞（stimulator cell）（ＫＰＣ腫瘍を有するマウスから新しく単離した腫瘍細胞；ＫＰＣマウスから樹立した腫瘍細胞株；および前腫瘍を有するＫＰＣマウスから新しく単離したＰａｎＩＮ細胞）を用いて攻撃した。ＡＩＤ  ＥＬＩＳｐｏｔプレートリーダーｖ３．５（Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ）を使用してプレートを読み取った。ＩＦＮ−γを分泌するＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を用量反応曲線から算出した。
【０１８０】
免疫蛍光法（ＩＦ）
５μｍの凍結させた組織切片を室温で１０分にわたって４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中に固定した。スライドを１０％ロバ血清（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）／０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中に１時間ブロッキングした．一次抗体を４℃で一晩インキュベートした。洗浄後、スライドを適切な二次抗体と一緒に室温で１時間インキュベートし、ＤＡＰＩ対比染色した。その後、スライドを０．３Ｍのグリシン中で１０分インキュベートして自己蛍光を低下させ、Ｈｙｄｒｏｍｏｕｎｔ水性封入剤（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に封入した。Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５タンデム共焦点顕微鏡で画像を取得した。ｐ５３およびＴｒｅｇ染色を分析するためにスライドをスキャンし、自動ＡＲＩＯＬ  ＸＴ  ｓｙｓｔｅｍを使用して分析した。
【０１８１】
免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＣａｍｂｒｉｄｇｅＡｄｄｅｎｂｒｏｏｋｅ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ組織バンクからの保存用パラフィン切片をｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ｎａｔｉｏｎａｌ  ｐｏｌｉｃｉｅｓに従って使用した。
【０１８２】
ＦＡＰ、１  ｐ５３、ＣＸＣＬ１２およびＣＤ３の免疫組織化学的評価を実施した。３μｍのホルマリン固定パラフィン包埋組織切片を脱パラフィン処理し、エタノールシリーズ中で再水和処理し、０．０１Ｍのクエン酸緩衝液（ｐＨ６）／プロテイナーゼＫ中で抗原回復を行い、３％Ｈ２Ｏ２を用いて内在性ペルオキシダーゼをクエンチした。切片を１％正常ロバ血清およびＡｖｉｄｉｎ／Ｂｉｏｔｉｎ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）でブロッキングし、一次抗体またはウサギ／ヒツジ免疫グロブリン（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）、ビオチン化二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ）、およびＶｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）と一緒に引き続いてインキュベートした。免疫陽性の細胞を液体ＤＡＢ−基質−クロモゲンシステム（ＤＡＫＯ）によって可視化した。
【０１８３】
ＢｏｎｄＭａｘ  Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ（Ｖｉｓｉｏｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｐ５３染色およびＣＤ３染色を行った。簡単に述べると、Ｂｏｎｄ  Ｃｉｔｒａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ中、１００℃で抗原回復を実施し、その後、一次抗体と一緒に室温で１５分インキュベートし、一次抗体後（ｐｏｓｔｐｒｉｍａｒｙ）ステップを８分行い、ポリマー（Ｂｏｎｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ；Ｖｉｓｉｏｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と一緒に８分インキュベートし、ジアミノベンジジン（Ｖｉｓｉｏｎ  Ｂｉｏ−ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて比色定量発色を行った。スライドをヘマトキシリンで対比染色し、ＡＲＩＯＬ  ＸＴ  ｓｙｓｔｅｍで画像処理した。
【０１８４】
ＩＦおよびＩＨＣ用の抗体
【表１】
2016527303.tif 000003
【０１８５】
フローサイトメトリー
単一細胞懸濁液を調製するために、組織を細かく切って、ＲＰＭＩ中、３ｍｇ／ｍｌのＤｉｓｐａｓｅ  ＩＩ（Ｒｏｃｈｅ）、１ｍｇ／ｍｌのＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅ（Ｓｉｇｍａ）、１ｍｇ／ｍｌのＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）に入れ、３７℃、ピペットを使用して１５分ごとに機械的に破壊しながら１時間インキュベートした。消化後、ＥＤＴＡを添加して５分にわたって１０ｍＭの最終的な１濃度にし、細胞懸濁液を、７０μｍの細胞濾過器を通過させた。抗体Ｆｃ受容体結合を１％Ｆｃブロッキング抗体（クローン２．４Ｇ２、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）中、氷上で４５分ブロッキングした。ＦＡＰ染色のために、細胞を１０μｇ／ｍｌのヒツジ抗ＦＡＰ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはヒツジＩｇＧ対照と一緒に氷上で３０分インキュベートした。その後、細胞を洗浄し、再度ブロッキングし、あらゆる直接コンジュゲートした一次抗体と共に、ＰＥとコンジュゲートしたロバ抗ヒツジＩｇＧ二次抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と一緒に３０分インキュベートした。生存能力を分析するために、細胞を７ＡＡＤ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）に再懸濁させた。ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でデータを収集し、Ｆｌｏｗｊｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して解析した。ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａセルソーターを使用して細胞選別を行った。
【表２】
2016527303.tif 000004
【０１８６】
ＲＮＡ解析
ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で安定化した腫瘍全体試料から、ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ（ＱＩＡＧＥＮ）に従い、均質化のためにＱＩＡＧＥＮの組織溶解剤を使用してＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ  ２μｇを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍのｈｉｇｈ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ  ｔｏ  ｃＤＮＡ  ｋｉｔを用いて逆転写し、その後、７９００ＨＴ  ｑＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｆａｐα；Ｍｍ００４８４２５４＿ｍ１、Ｔｂｐ：Ｍｍ００４４６９７１＿ｍ１）でＴａｑｍａｎプライマーを使用してリアルタイムＰＣＲを行った。Ｔｂｐ内在性対照に関してデルタＣｔを算出し、対照群のＴｂｐの平均誘導に対してさらに正規化した。選別された細胞集団のＲＮＡ解析のために、フローサイトメトリー分析についてと同様に腫瘍を解離させ、２％ＦＣＳ／２ｍＭのＥＤＴＡ／ＰＢＳ中、４℃で染色した。赤血球溶解後、生存細胞をＢＤ  Ｉｎｆｌｕｘ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって以下の画分に選別した：ＦＡＰ＋；骨髄性細胞についてＣＤ１１ｂ＋；およびＰａｎＩＮ／ＰＤＡ細胞についてＣＤ４５−ＦＡＰ−ＣＤ３１−。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて凍結細胞ペレットから全ＲＮＡを抽出し、ＡＢＩ  ７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でＴａｑＭａｎ  ＲＮＡ−ｔｏ−Ｃｔ  １−  Ｓｔｅｐ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてＲＴ−ＰＣＲを実施した。以下のＴａｑｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した：Ｔｂｐ  Ｍｍ００４４６９７３＿ｍ  １  １；Ｃｘｃｌ１２  Ｍｍ００４４５５５３＿ｍ１；Ｃｘｃｒ４  Ｍｍ０１２９２１２３＿ｍ１。データをＴｂｐに対して正規化した。
【０１８７】
ＲＮＡ−ｓｅｑおよびコンピュータによる方法
ＲＮＡ抽出および配列決定を、以前に記載されている通り実施した（Robertsら）。この調査で生成した短い読み取りＲＮＡ−ｓｅｑデータを、Ｔ−ヘルパー細胞ＲＮＡ−ｓｅｑデータ（Weiら、２０１１年）（ＧＥＯ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＧＳＥ２０８９８）、ならびにＦＡＰ＋細胞およびＭＥＦについてのＲＮＡ−ｓｅｑデータ（Robertsら、ＧＥＯ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＧＳＥ３９４３８）と一緒に、Ｂｏｗｔｉｅ２（LangmeadおよびSalzberg、２０１２年）を使用してマッピングし、マウスｍｍ９参照ゲノムに対してアラインメントした。その後、Ｔｏｐｈａｔ２を使用し、コマンドラインスイッチ「−−ＧＴＦ（ｇｔｆｆｉｌｅ）−−ｂ２−ｖｅｒｙ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ−−ｂ２−Ｄ  ５００  −−ｂ２−Ｒ  ５００  −−  ｓｏｌｅｘａ１．３−ｑｕａｌｓ」を使用してジャンクションリードをマッピングした。発現レベルを算出するために、Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ２（Trapnellら、２０１０年）を使用してｆｒａｇｍｅｎｔ  ｐｅｒ  ｋｉｌｏｂａｓｅ  ｍｉｌｌｉｏｎ  ｖａｌｕｅｓ（ＦＰＫＭ）（「−−ｏｕｔｐｕｔ−ｄｉｒ  ＄ｏｕｔｐａｔｈ  −−ＧＴＦ  ＄ｇｔｆｆｉｌｅ  −  ｐ  ８  −−ｍｕｌｔｉ−ｒｅａｄ−ｃｏｒｒｅｃｔ  −−ｆｒａｇ−ｂｉａｓ−ｃｏｒｒｅｃｔ」）を算出し、ｈｔｓｅｑ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ０．５．３ｐ４を使用してｋｉｌｏｂａｓｅ  ｍｉｌｌｉｏｎ（ＲＰＫＭ）（「−−ｑｕｉｅｔ  −−ｓｔｒａｎｄｅｄ＝ｎｏ  −ａ  ３０．」）値を算出した。この調査で生成したＲＮＡ−ｓｅｑデータは、ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｍｎｉｂｕｓ（ＧＥＯ）に寄託され、ＧＥＯ受託番号（ＧＳＥ４２６０５）を使用してアクセスすることができる。Ｒ  ｖ２．１５．０でｐｒｃｏｍｐおよび予測関数を使用して主成分分析（ＰＣＡ）を実施した。
【０１８８】
統計解析
Ｍａｃ  ＯＳ  Ｘ用のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．０ｂを使用して統計解析を行った。多重比較のために、ボンフェローニの事後検定を伴うＡＮＯＶＡを適用した。他の全ての場合では、図の説明文において特に指定のない限り、スチューデントのｔ検定を使用して有意性を決定した。データは平均−／＋ＳＥＭとして示されている。並べ替えに基づくペアワイズ検定を使用して成長曲線の統計比較を実施した。
【０１８９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
このアッセイでは、がん細胞の付近からのＴ細胞排除の機構を試験する。このアッセイにより、薬物および腫瘍を潜在的な有効性についてスクリーニングすることも可能になる。このｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４相互作用に干渉し得る他の薬物（抗ＣＸＣＬ１２、抗ＣＸＣＲ４、他のＣＸＣＲ４を対象とする小分子）をスクリーニングするためにも使用することができる。
【０１９０】
新鮮な特発性（autochthonous）マウス膵腫瘍（Hingoraniら、cancer cell、２００５年のマウスＫＰＣモデル）の３００μｍのビブラトーム切片が、抗ＣＤ３およびＩＬ−２を用いて数日間ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて活性化させた（これにより、通常、炎症組織／腫瘍に浸潤するエフェクターＴ細胞と同様のＴ細胞集団が生じる）標識したマウス脾性Ｔ細胞に覆われる。次いで、腫瘍組織＋標識したＴ細胞を３７℃で最大１２０分培養し、その後、浸潤していないＴ細胞を洗い流す。次いで、ビブラトーム切片を染色（がん細胞を同定するｐ５３）および共焦点顕微鏡法によるＳＨＧ（コラーゲン／間質領域を可視化する）のために固定する。
【０１９１】
対照培養培地では、Ｔ細胞は間質領域に局在化し、がん細胞を含有する領域には存在しない。これは本発明者らが１２月の（Ｄｅｃ）  ＰＮＡＳ紙に発表したＴ細胞の分布である。ＡＭＤ３１００の存在下で培養することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるものと同様に、Ｔ細胞が間質領域とがん細胞領域の両方において見いだされるようになる。ビブラトーム切片を、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９技術によってＣＸＣＲ４を欠失させたＴ細胞と一緒に培養することにより、がん細胞の中にもＴ細胞の蓄積が導かれる。また、汎用カスパーゼ阻害剤であるＺ−ＶＡＤの存在下で培養することにより、がん細胞の中にＴ細胞の蓄積が導かれる。
【０１９２】
（実施例１）
ＦＡＰ＋細胞は免疫抑制に関与する
膜タンパク質ＦＡＰを発現することによって同定される間葉系腫瘍間質細胞により、移植腫瘍モデルにおける免疫抑制が媒介されることが最近示された（８）。ＦＡＰ＋間質細胞はヒトＰＤＡに存在するので（９）、発明者らは、マウスＦＡＰ＋間質細胞のこの免疫抑制性活性が、このがんの免疫療法に対する抵抗性に関与するかどうかを調査した。本試験では、発明者らは、ＰＤＡの特発性ＫＰＣ（ＬＳＬ−ＫｒａｓＧ１２Ｄ／＋；ＬＳＬ−Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈ／＋；Ｐｄｘ−１−Ｃｒｅ）モデル（１０）により、全身抗ＰＤＡ免疫が存在するにもかかわらずヒトＰＤＡのチェックポイントアンタゴニストに対する抵抗性が再現されることが実証される。この免疫監視の不全はＦＡＰ＋間質細胞によって媒介される局所的な免疫抑制に起因する。
【０１９３】
ＫＰＣモデルでは、Ｔｒｐ５３Ｒ１７２ＨおよびＫｒａｓＧ１２ＤのＣｒｅ媒介性発現が膵臓にターゲティングされ、Ｔｒｐ５３の異型接合性の欠失（ＬＯＨ）（１０）を含めたヒトＰＤＡの多くの側面を再現する浸潤性かつ転移性癌の発達が引き起こされる。適切なサイズの腫瘍を有するＫＰＣマウスでは一貫した腫瘍の成長が実証され、これにより、実験的介入のロバストな分析が可能になる。
【０１９４】
発明者らは、α−ＣＴＬＡ−４およびα−ＰＤ−Ｌ１を用いた免疫チェックポイントの遮断により腫瘍の免疫制御が促進されるかどうかを調査した。ＰＤＡを有するマウスにα−ＣＴＬＡ−４抗体またはα−ＰＤ−Ｌ１抗体を６日間にわたって投与することにより、対照ＩｇＧを受けたマウスにおける腫瘍体積のおよそ８０％の増加を減少させなかった（図１）。ＰＤＡを有するヒトと同様に、これらの抗体には腫瘍の成長の速度に対する効果はなかった。発明者らは、これが、ＰＤＡに対する免疫応答が存在しないことによって説明できるかどうかを決定した。ＰＤＡを有するマウスおよび腫瘍を有さないマウス由来の脾性ＣＤ８＋Ｔ細胞を腫瘍細胞で刺激され、抗原性刺激を報告する、インターフェロン（ＩＦＮ）−γを分泌するＣＤ８＋Ｔ細胞をＥＬＩＳｐｏｔアッセイにおいて検出した。腫瘍細胞が誘導するＥＬＩＳｐｏｔは、腫瘍を有するマウス由来のＣＤ８＋Ｔ細胞の中の方が腫瘍を有さないマウス由来のものよりも多かった（図２左）。ＩＦＮ−γを分泌するＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度は、刺激する腫瘍細胞がＴ細胞ドナー由来である場合または別のＰＤＡを有するマウス由来である場合に同じであった（図２中央）。樹立ＰＤＡ細胞株も刺激性であったが、ＫｒａｓＧ１２Ｄのみを発現する、前悪性の膵臓上皮内新形成（ＰａｎＩＮ）を有するＫＣ（ＬＳＬ−ＫｒａｓＧ１２Ｄ／＋；Ｐｄｘ−１−Ｃｒｅ）マウスの膵臓、またはがんを発症する前の若年ＫＰＣマウスに由来する解離された細胞は刺激性ではなかった（図２右）。したがって、ＰＤＡを有するマウスは、異なるＰＤＡ腫瘍由来のがん細胞により共有される抗原に対する自発性適応免疫応答を有し、α−ＣＴＬＡ−４およびα−ＰＤ−Ｌ１の効力のないことにより、追加の免疫抑制機構の指標を提供する。
【０１９５】
ＫＰＣマウスからＰＤＡを切除し、単一細胞を酵素による消化によって調製し、ＣＤ１１ｂ＋（ｎ＝４）、ＣＤ３ε＋（ｎ＝１）、ＦＡＰ＋（ｎ＝３）およびＰａｎＩＮ／ＰＤＡ（ＣＤ１１ｂ−／ＣＤ３−／ＦＡＰ−）（ｎ＝４）をＦＡＣＳによって単離した。選別された集団におけるＣｘｃｒ４  ｍＲＮＡおよびＴｂｐ  ｍＲＮＡをｑＲＴ−ＰＣＲによって測定した。
【０１９６】
免疫蛍光共焦点顕微鏡法により、ＦＡＰ＋間質細胞がＰａｎＩＮおよびサイトケラチン−１９（ＣＫ１９）＋ＰＤＡ病変とＣＫ１９−ＰＤＡ病変の両方に存在することが観察された。ＰａｎＩＮ内のＦＡＰ＋細胞はＣＤ３４を発現するがα−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）はめったに発現せず、一方、ＰＤＡ細胞に混じったＦＡＰ＋細胞はＣＤ３４−かつαＳＭＡ＋であることが見いだされた。
【０１９７】
ＦＡＰ＋細胞は全てＰＤＧＦＲα＋かつＣＤ４５−であり、これにより、それらの起源が間葉系であることが確認された。ＰＤＡ腫瘍の酵素により分散させた単一細胞懸濁液中のＣＤ４５−／ＦＡＰ＋間質細胞をＦＡＣＳによって数え上げた。分散させた腫瘍細胞に混じったＣＤ４５−／ＦＡＰ＋間質細胞の頻度は３．７％（９５％ＣＩ、１．１〜６．３％；ｎ＝８）であった。αＳＭＡ＋線維芽細胞の９２％がＦＡＰを発現したこと（９５％ＣＩ、８７．５〜９７．１％；ｎ＝５）により、これらが癌に関連する線維芽細胞（ＣＡＦ）であることが示唆され、これは、ＦＡＣＳで精製したＦＡＰ＋細胞のＲＮＡ−Ｓｅｑ解析のＲＰＫＭを示すヒートマップによって実証された通り、ＣＡＦの「炎症遺伝子シグネチャー」を示すＣＤ３４＋ＦＡＰ＋細胞およびＣＤ３４−ＦＡＰ＋細胞のトランスクリプトームによって確証された（１１）。
【０１９８】
３つの正常組織由来のＦＡＰ細胞でもこのシグネチャーが示され、それらのトランスクリプトームの主成分分析によって一緒にクラスター化され、これにより、ＦＡＰで間質細胞の系列が同定され得ることが示唆された。ＰＤＡに関連するＦＡＰ＋／ＣＤ３４−細胞は他のＦＡＰ＋サブセットとは別個であり得る。
【０１９９】
腫瘍ＦＡＰ＋細胞により細胞外マトリックスタンパク質をコードする遺伝子が発現されることにより、ＰＤＡの線維形成におけるそれらの役割が立証され、一方では、それらによるデコリンの発現が低いことが、このプロテオグリカンはがんの成長を抑制することが報告されているので、関連性がある可能性がある。
【０２００】
本発明者らは、ＫＰＣ株に、ＦＡＰ＋である細胞においてヒトジフテリア毒素受容体（ＤＴＲ）の発現を選択的に駆動する改変Ｆａｐ遺伝子を含有する細菌人工染色体（ＢＡＣ）導入遺伝子を導入した。ＰＤＡを有するＢＡＣトランスジェニックマウスにジフテリア毒素（ＤＴｘ）を投与することにより、腫瘍ＦＡＰ＋細胞の含有量をおよそ５５％枯渇させた（図３）。ＦＡＰ＋細胞を枯渇させることによりＰＤＡの成長が遅延したが（図４左）、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した場合には遅延せず（図４右）、これにより、観察された効果がＴ細胞依存性であることが示された。
【０２０１】
ＦＡＰ＋細胞の枯渇とα−ＣＴＬＡ−４またはα−ＰＤ−Ｌ１の投与とを組み合わせことにより、腫瘍の成長がさらに減弱し（図５および６）、ＦＡＰ＋細胞が、マウスＰＤＡのこれらのチェックポイントアンタゴニストに対する抵抗性に寄与することが示された。
【０２０２】
種々のドナー由来の精製された脾性ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−ｇ分泌のＫ８４８４  ＰＤＡ細胞株による誘導をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。１ＤＴｘ＋α−ＰＤ−Ｌ１、ｎ＝２；前腫瘍ＫＰＣ、ｎ＝４；他の全ての群は、ｎ≧６。ＤＴｘで処置したマウスおよびα−ＰＤ−Ｌ１で処置したマウスの脾臓由来のＩＦＮ−γを分泌するＣＤ８＋Ｔ細胞の増加が存在しないことにより、がん特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミングの増強により免疫制御が実現されなかったことが示される。
【０２０３】
（実施例２）
ＦＡＰ＋細胞の活性はＣＸＣＬ１２によって媒介される
ＦＡＰ＋細胞の枯渇を伴う療法は、正常組織におけるそれらの重要な役割（１２）によって妨げられ、また、それらの免疫抑制の原因となる処置標的を同定しなければならない。本発明者らは、免疫蛍光共焦点顕微鏡法から、同様にＦＡＰ＋細胞および他の癌に関連するヒトＰＤＡの特性である、がん細胞の付近ではＣＤ３＋Ｔ細胞が不足しているがＣＤ１１ｂ＋骨髄単球細胞は不足していないことに注目した（１４、１５）。
【０２０４】
このＴ細胞輸送問題により、共焦点免疫蛍光顕微鏡法によってヒトＰＤＡ（１３）およびマウスＰＤＡのどちらにおいてもがん細胞に局在化することが観察されるケモカイン、ＣＸＣＬ１２への注意が向けられた。
【０２０５】
本発明者らは、ＣＡＦに関して以前報告された（１６）のと同じく、ＣＸＣＬ１２の供給源を腫瘍ＦＡＰ＋細胞であると同定した（図７）。
【０２０６】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスからＬＬ２／ＯＶＡ腫瘍を切除し、単一細胞懸濁液を酵素による消化によって調製し、ＦＡＰ、ＣＤ４５、ＣＤ３１、およびＴｈｙ１．１（ＬＬ２／ＯＶＡ細胞用）に対する抗体を用いて染色し、ＦＡＣＳによって単離した。選別された集団におけるＣｘｃｌ１２  ｍＲＮＡおよびＴｂｐ  ｍＲＮＡをｑＲＴ  ＰＣＲによって測定した。皮下ルイス肺癌（ＬＬ２）モデルにおけるＦＡＰ＋細胞は、ＣＸＣＬ１２の腫瘍性供給源であることが見いだされた。
【０２０７】
ＫＰＣマウスからＰＤＡを切除し、酵素による消化によって単一細胞を調製し、ＣＤ１１ｂ＋（ｎ＝４）、ＣＤ３ε＋（ｎ＝１）、ＦＡＰ＋（ｎ＝３）およびＰａｎＩＮ／ＰＤＡ（ＣＤ１１ｂ−／ＣＤ３−／ＦＡＰ−）（ｎ＝４）をＦＡＣＳによって単離した。選別された集団におけるＣｘｃｒ４  ｍＲＮＡおよびＴｂｐ  ｍＲＮＡをｑＲＴＰＣＲによって測定した。ＣＸＣＬ１２受容体であるＣＸＣＲ４のがん細胞による発現は低いことが見いだされたので、ＣＸＣＲ４によりケモカインの取り込みが媒介される可能性は低い。本発明者らは、がん細胞によりＨＭＧＢ１が過剰発現され、分泌され、ケモカインとヘテロ複合体を形成するという仮説を立てている（１７）。
【０２０８】
腫瘍免疫抑制におけるＣＸＣＬ１２の役割を評価するために、発明者らは、特異的なＣＸＣＲ４阻害剤であるＡＭＤ３１００（１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］）（１８）を、ＰＤＡを有するマウスに、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞に対する枯渇抗体の存在下または不在下で投与した。ＡＭＤ３１００により、腫瘍の成長がＴ細胞依存性に遅延した（図８左）。
【０２０９】
ＰＢＳまたはＡＭＤ３１００（３０ｍｇ／ｍｌ）を含有する継続送達浸透圧ポンプを、樹立した皮下ＬＬ２／ＯＶＡ腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスおよびＲａｇ２−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスに埋め込み、腫瘍体積を超音波によって測定した（全群についてｎ＝５）。ＡＭＤ３１００により、皮下免疫原性ＬＬ２腫瘍のＴ細胞依存性制御が誘導されることが観察された。
【０２１０】
発明者らは、ＰＤＡの成長がほぼ完全に停止される高用量のＡＭＤ３１００を投与した。
【０２１１】
発明者らは、ＰＤＡの成長がほぼ完全に停止される高用量のＡＭＤ３１００を投与し、かつ、それと免疫チェックポイントアンタゴニストを組み合わせて投与した（図８右、図９）。α−ＰＤ−Ｌ１との組合せにより、ＰＤＡ体積の有意な１５％の低下が４８時間までにもたらされ、６日間維持された。マウス７匹のうち６匹（マウスＭＨ１６３０６以外の全て）で６日目までに腫瘍サイズが−１日目における腫瘍サイズと比較して縮小した（図９）。腫瘍サイズが２００ｍｍ３に達する場合にのみマウスを処置するプロトコール（ＣＲＩにおける標準の手法）を用いたＰＤＡ腫瘍の体積の低下は、以前にはＫＰＣモデルで観察されていなかった。
【０２１２】
対照的に、α−ＣＴＬＡ−４によりＡＭＤ３１００の抗腫瘍効果は増強されなかった。
【０２１３】
ＡＭＤ３１００によりがん細胞の中へのＴ細胞の浸潤が増強されるかどうかを決定するために、発明者らは、マウスを、ＰＢＳ、ＡＭＤ３１００、α−ＰＤ−Ｌ１またはＡＭＤ３１００とα−ＰＤ−Ｌ１との両方を用いて２４時間にわたって処置した。α−ＰＤ−Ｌ１単独による効果はなかったが、ＡＭＤ３１００によりＴ細胞の蓄積が増加し、α−ＰＤ−Ｌ１とＡＭＤ３１００との組合せによりこの効果が増幅し、また、ｐ５３＋ＬＯＨ細胞の頻度が低下した。
【０２１４】
それぞれＰＢＳ、α−ＰＤ−Ｌ１、高ＡＭＤ３１００、高ＡＭＤ３１００＋α−ＰＤ−Ｌ１を用いた処置（群当たりｎ＝３）を開始した２４時間後にマウスから１２のＫＰＣ腫瘍を取得し、ｐ５３およびＣＤ３について共焦点顕微鏡法によって評価した。ＡＭＤ３１００およびα−ＰＤ−Ｌ１によりＰＤＡのがん細胞を含有する領域へのＣＤ３＋Ｔ細胞の蓄積が誘導されることが観察された（図１０を参照されたい）。
【０２１５】
それぞれＰＢＳおよび高ＡＭＤ３１００＋α−ＰＤ−Ｌ１を用いた処置を開始した２４時間後にマウスからＫＰＣ腫瘍を取得し、ＦｏｘＰ３について免疫蛍光共焦点顕微鏡法によって評価した。ＡＭＤ３１００およびα−ＰＤ−Ｌ１を与えたマウスの腫瘍においてＦｏｘｐ３＋細胞が増加することが観察されたので、発明者らは、調節性Ｔ細胞は免疫抑制に関与しないと結論づけた。
【０２１６】
発明者らは、処置の６日後に腫瘍をｐ５３＋ＬＯＨがん細胞の存在について免疫蛍光共焦点顕微鏡法およびＡＲＩＯＬスキャニングを使用して調査した。ｐ５３＋ＬＯＨがん細胞は、ＰＢＳまたはα−ＰＤ−Ｌ１を受けたマウス由来の腫瘍では豊富であったが、ＡＭＤ３１００を単独でまたはα−ＰＤ−Ｌ１と一緒に受けたマウス由来の腫瘍では稀であった（図１１、パネルＤ参照）。免疫蛍光共焦点顕微鏡法を使用して、がん細胞の顕著な減少が、増殖しているＫｉ６７＋細胞において減少したことにより確認された（図１１、パネルＥ）。
【０２１７】
ＡＲＩＯＬスキャニングにより、ＡＭＤ３１００を単独でまたはα−ＰＤ−Ｌ１と一緒に用いて処置した後に残留する腫瘍が前悪性のＣＫ１９＋上皮細胞およびＣＤ４５＋炎症細胞で構成されることが見いだされた（図１１、パネルＦ）。ｐ５３＋ＬＯＨ  ＰＤＡの選択的な除去は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答ががん細胞に対して特異的であるという知見と一致する（図２右）。
【０２１８】
ＦＡＰ＋間質細胞を枯渇させることまたはそれらのケモカインであるＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用を阻害することにより免疫チェックポイントアンタゴニストの抗腫瘍活性が明らかになるので、これらの試験により、マウスＰＤＡにおける免疫抑制の階層が示される。Ｔ細胞のＣＸＣＲ４媒介性排除が、ＨＩＶ  ｇｐ１２０で起こるＴ細胞アポトーシス（１９）、またはＣＸＣＬ１２の化学的排除（ｃｈｅｍｏ−ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）効果（２０）を反映するかどうかは不明である。ＡＭＤ３１００とα−ＣＴＬＡ−４との間に相乗的な相互作用がないことが観察されたことは、ＣＸＣＲ４の阻害により、がん細胞の中へのＴ細胞の蓄積が非常に有効に促進されるので、α−ＣＴＬＡ−４による任意のＴ細胞プライミングの増強が不必要であること、またはこの特定のアッセイでは相乗作用が観察されなかったことを示し得る。これは、ＣＸＣＬ１２の供給源であるＦＡＰ＋細胞を、ＤＴｘを用いて部分的にのみ枯渇させることができる場合にα−ＣＴＬＡ−４が効果を示すことと一致する。ＡＭＤ３１００とα−ＰＤ−Ｌ１との注目すべき相乗的な相互作用により、マウスＰＤＡにおける主要な包括的な免疫抑制性プロセスが、エフェクターＴ細胞のがん細胞への接近性の制限であることが示される。Ｔ細胞は他の癌からも排除されるので（１４、１５）、これらの知見は腫瘍免疫療法に広範に関連する可能性がある。
【０２１９】
本試験では、本発明者らは、ＰＤＡの特発性ＫＰＣ（ＬＳＬ−ＫｒａｓＧ１２Ｄ／＋；ＬＳＬ−Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈ／＋；Ｐｄｘ−１−Ｃｒｅ）モデル（１０）で、全身抗ＰＤＡ免疫が存在するにもかかわらずヒトＰＤＡのチェックポイントアンタゴニストに対する抵抗性が再現されることを実証する。この免疫監視の不全は、腫瘍のＰＤＡ細胞を含有する領域からのＴ細胞の排除として顕在化し、ＣＸＣＬ１２の産生が伴う、ＦＡＰ＋間質細胞によって媒介される局所的な免疫抑制に起因する。ＣＸＣＬ１２受容体であるＣＸＣＲ４の阻害により、Ｔ細胞の浸潤が促進され、また、チェックポイントアンタゴニストであるα−ＰＤ−Ｌ１と相乗作用してがん退縮が引き起こされる。
【０２２０】
本出願において詳述されている知見により、ヒトＰＤＡおよびマウスＰＤＡにおける抗ＰＤ−Ｌ１の有効性の欠如の原因となるＰＤＡにおける包括的な免疫抑制プロセスと、それを治療的に反転させるための手段の両方が同定され、これにより、免疫抑制の低下においてＰＤ−１シグナル伝達の遮断とＣＸＣＲ４シグナル伝達の遮断の組み合わせが効果的であり得ることが示される。
【０２２１】
参考文献
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【図１】
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【図５】
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【図６】
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【図８】
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【図９】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図７】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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