(57)【要約】本発明は、発泡剤としてのアルブミンおよびフィブリノゲン沈殿物質および必要に応じて凝固誘導剤を含む薬学的止血液状フォーム基剤調製物（ここで、発泡剤としてのアルブミンは、天然の形態で存在する）；一過性の止血液状フォームを生成するための方法；一過性の止血液状フォーム；およびそのフォームを生成するためのキットを開示する。一局面において、上記アルブミンは、発泡剤として、前記調製物中に２〜４０％、好ましくは、５〜２５％ｗ／ｖ、より好ましくは、１０〜２０％、特に、約１５％で存在する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
発泡剤としてのアルブミンおよびフィブリノゲン沈殿物質および必要に応じて凝固誘導剤を含む、薬学的止血液状フォーム基剤調製物であって、ここで、発泡剤としてのアルブミンは、天然の形態で存在する、薬学的止血液状フォーム基剤調製物。
【請求項２】
アルブミンが、発泡剤として、前記調製物中に２〜４０％、好ましくは、５〜２５％ｗ／ｖ、より好ましくは、１０〜２０％、特に、約１５％で存在する、請求項１に記載の薬学的調製物。
【請求項３】
前記フィブリノゲン沈殿物質が、好ましくは、トロンビン、ヘビ毒プロテアーゼまたはトロンビン前駆体からなる群より選択される、フィブリノゲン切断物質である、請求項１または２に記載の薬学的調製物。
【請求項４】
発泡剤としてのアルブミンが、架橋されていない形態で存在する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬学的調製物。
【請求項５】
前記調製物が、界面活性剤を本質的に含まない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬学的調製物。
【請求項６】
前記フィブリノゲン沈殿物質が、好ましくは、０．１ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌ、より好ましくは、１ＩＵ／ｍｌ〜８０００ＩＵ／ｍｌ、特に、１００〜５０００ＩＵ／ｍｌの濃度で存在するトロンビンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬学的調製物。
【請求項７】
薬学的止血液状フォームを調製するための方法であって、ここで、請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬学的止血液状フォーム基剤調製物が、薬学的止血液状フォームが得られるように発泡ガスと接触される、方法。
【請求項８】
前記発泡ガスが、空気、Ｎ２、Ｏ２、Ｎ２Ｏ、ＣＯ２、プロパン、ブタン、ジメチルエーテルまたは部分的にフッ化された炭化水素（ＨＦＣ）、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＣ１３４ａ）または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ２２７ｅａ）からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記発泡ガスが、加圧下で提供される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記薬学的止血液状フォーム基剤調製物が、第１の容器内に提供され、前記発泡ガスが、第２の容器内に提供され、ここで、前記第１の容器および前記第２の容器は、前記薬学的止血液状フォーム基剤調製物が前記発泡ガスと混合されることによりフォームが得られるように接続され、好ましくは、前記第１の容器および前記第２の容器は、混合デバイス、特に、フィルター材、多孔質ディスクデバイス、３次元格子またはマトリックス材からなる群より選択される混合デバイスによって接続される、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬学的止血液状フォーム基剤調製物および前記発泡ガスが、容器内に提供され、前記フォームが、前記薬学的止血液状フォーム基剤調製物を前記発泡ガスと混合することによって得られる、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬学的止血液状フォーム基剤調製物および発泡ガス、好ましくは、空気、Ｎ２、Ｏ２、Ｎ２Ｏ、ＣＯ２または部分的にフッ化された炭化水素（ＨＦＣ）、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＣ１３４ａ）または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ２２７ｅａ）からなる群より選択される発泡ガスを備える、組み合わせ製品、好ましくは、すぐに使用できる組み合わせ製品。
【請求項１３】
好ましくは、止血剤として使用するため、特に、創傷を処置するための、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の方法によって入手可能な一過性の薬学的止血液状フォーム。
【請求項１４】
請求項１３に記載の一過性の薬学的止血液状フォームを生成するためのキットであって、前記キットは、
（ａ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の薬学的止血液状フォーム基剤調製物を含む第１の容器、および
（ｂ）発泡ガスを含む第２の容器
を備える、キット。
【請求項１５】
前記発泡ガスが、空気、Ｎ２、Ｏ２、Ｎ２Ｏ、ＣＯ２、プロパン、ブタン、ジメチルエーテルまたは部分的にフッ化された炭化水素（ＨＦＣ）、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＣ１３４ａ）または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ２２７ｅａ）からなる群より選択される、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記第１の容器および前記第２の容器が、混合デバイス、特に、フィルター材、多孔質ディスクデバイス、３次元格子またはマトリックス材からなる群より選択される混合デバイスによって接続可能である、請求項１４または１５に記載のキット。
【請求項１７】
前記容器が、注射器の容器である、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１８】
止血剤、特に、創傷を処置するための止血剤を製造するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬学的調製物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、薬学的止血フォーム製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
フォームは、一般に、空気などのガスがいくらかの時間にわたって安定した形態で液体中に細かく分散している材料を表すと理解されている。その液体は、気泡の間に薄膜の形態で見られる。そのようなガス分散物の安定化の要素は、液相の表面張力である。その表面張力は、崩壊に対して薄膜を安定化させるのを助ける表面活性剤が流体相に存在することによって影響され得る。各個別の気泡の気層の間が通じていないので、これらのフォームは、一般に、閉鎖気孔フォームと呼ばれる。その液膜が、他の手段によって、例えば、液相を粘弾性固体に変形させる化学反応によって安定化される場合、流体架橋（ｆｌｕｉｄ  ｂｒｉｄｇｅ）が、制御された様式で、例えば、蒸発または他のプロセスによって除去される開口気孔フォームの形成が可能である。液膜から粘弾性固体材料への変形は、急速な崩壊に対してフォームを効果的に安定化させるためにも役立つ。
【０００３】
本発明の目的は、見えにくい組織の空隙に安全に注射することができ、近置する必要なく有効である、改善された止血フォームを提供することである。さらに、そのようなフォーム止血剤は、過剰な腫脹に起因する、圧力に敏感な器官または組織の閉塞または圧迫のリスクを示さないことが重要である。そのようなフォームは、具体的には、神経／脊椎手術、腹腔鏡下手術および心臓血管手術に適用可能であるはずである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の要旨
したがって、本発明は、発泡剤としてのアルブミンおよびフィブリノゲン沈殿物質および必要に応じて凝固誘導剤を含む薬学的止血液状フォーム基剤調製物を提供し、ここで、発泡剤としてのアルブミンは、天然の形態で存在する。
【０００５】
本発明の別の態様は、薬学的止血液状フォームを調製するための方法であり、ここで、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物は、薬学的止血液状フォームが得られるように発泡ガスと接触される。
【０００６】
本発明の別の態様は、好ましくは、止血剤として使用するため、特に、創傷を処置するための、本発明に係る方法によって入手可能な一過性の薬学的止血液状フォームである。
【０００７】
本発明の別の態様は、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物および発泡ガスを備える、組み合わせ製品、好ましくは、すぐに使用できる組み合わせ製品である。
【０００８】
本発明の別の態様は、本発明に係る一過性の薬学的止血液状フォームを生成するためのキットであり、そのキットは、
（ａ）本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物を含む第１の容器、および
（ｂ）発泡ガスを含む第２の容器
を備える。
【０００９】
本発明の別の態様は、止血剤、特に、創傷を処置するための止血剤を製造するための、本発明に係る薬学的調製物の使用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、皮膚の構造（Ａ）、作製された皮膚病変の様子（Ｂ）および本発明に係る流動性止血フォームの適用（Ｃ）を示している。
【図２】図２は、出血スケールスコアの程度を示している（出血スコア：０  出血なし−血液で飽和した生成物１  滲出−生成物から血液が出ているが、血液の液滴はない２  非常に軽度−血液の液滴が生成物上にある３  軽度−血液の液滴が流れ落ちる４  中程度−少量の血液が流れ落ちる５  重度−大量の血液が流れ落ちる）。
【図３】図３は、ブタ皮膚モデルにおいて、トロンビン５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％を含む本発明に係る生成物が適用された０分後（Ａ）、２分後（Ｂ）、洗浄後（Ｃ）および適用の５分後（Ｄ）を示している。
【図４】図４は、ブタ皮膚モデルにおいて、トロンビン２５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％を含む本発明に係る生成物が適用された０分後（Ａ）、２分後（Ｂ）、洗浄後（Ｃ）および適用の５分後（Ｄ）を示している。
【図５】図５は、肝臓擦過創モデルにおいて、トロンビン５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％を含む本発明に係る生成物が適用された０分後（Ａ）、２分後（Ｂ）、洗浄後（Ｃ）および適用の１０分後（Ｄ）を示している。
【図６】図６は、肝臓擦過創モデルにおいて、トロンビン２５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％を含む本発明に係る生成物が適用された０分後（Ａ）、２分後（Ｂ）、洗浄後（Ｃ）および適用の１０分後（Ｄ）を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明は、発泡剤としてのアルブミンおよびフィブリノゲン沈殿物質および必要に応じて凝固誘導剤を含む、薬学的止血液状フォーム基剤調製物を提供し、ここで、発泡剤としてのアルブミンは、天然の形態で存在する。本発明に係るフォーム基剤を用いると、見えにくい組織の空隙に安全に注射することができ、近置する必要なく有効である、改善された止血フォームが提供される。本発明に係るフォームを用いると、過剰な腫脹または閉塞のリスクはもたらされない。さらに、本発明に係るフォームは、具体的には、神経／脊椎手術、腹腔鏡下手術および心臓血管手術に適している。
【００１２】
アルブミンが、その天然の形態でフォーム基剤に存在すること、すなわち、アルブミンが、適切に折り畳まれ、十分に効力があり、機能的であることが、本発明にとって重要である。したがって、本発明に係るフォーム基剤は、変性アルブミンを本質的に含まない。「本質的に含まない」とは、この点において、変性アルブミンの量が、５％以下、好ましくは、２％以下、特に、１％以下であるべきであることを意味する。変性アルブミンの量の測定は、当業者が利用可能な方法、例えば、円偏光二色性の未変性ゲル電気泳動によって容易に行うことができる。
【００１３】
本発明において使用される「天然の形態」には、前処理（例えば、中程度の熱による前処理）または脂肪酸もしくは脂質を除去するための処理（例えば、炭素フィルターによる濾過）を経たアルブミンが含まれる。
【００１４】
好ましくは、アルブミンは、発泡剤として、本薬学的調製物中に２〜４０％、好ましくは、５〜２５％ｗ／ｖ、より好ましくは、１０〜２０％、特に、約１５％で存在する。
【００１５】
好ましくは、使用されるアルブミンは、薬学的に許容され得るアルブミン、特に、ヒト血漿由来のヒトアルブミンまたは組換えヒトタンパク質である。ある特定の使用について（これは、規制ガイドラインに関して適切である場合）、動物アルブミン、例えば、血漿もしくは組換えのウシアルブミン、またはブタ、ヤギ、ヒツジなど由来のアルブミン（組換えまたは血漿）もまた使用してもよい。
【００１６】
好ましいフィブリノゲン沈殿物質は、好ましくは、トロンビン、ヘビ毒プロテアーゼまたはトロンビン前駆体からなる群より選択されるフィブリノゲン切断物質である。最も好ましいフィブリノゲン切断物質は、フィブリノゲンをフィブリンに変換する際に作用するトロンビンであり、そのフィブリンは、集合して、封鎖性止血フィブリン網になる。
【００１７】
他の好ましいフィブリノゲン沈殿物質は、フィブリノゲン結合ペプチド、好ましくは、ＧＰＲＰ含有ペプチドからなる群より選択される。そのようなペプチドの例は、ＷＯ２００８／０６５３８８Ａ２に開示されている。それらのペプチドは、改変アルブミンに結合され得る。改変アルブミンを含むそのようなペプチド構築物は、本発明に係るフィブリノゲン結合物質として使用され得るが；しかしながら、そのような改変アルブミンは、本発明に係る発泡剤と見なされず、ゆえに、本発明に係る調製物の発泡剤成分と考えられないだろう。
【００１８】
この理由は、発泡剤としてのアルブミンが、架橋されていない形態でフォーム基剤に存在することが特に好ましいということである。ゆえに、そのようなアルブミン発泡剤は、残留量の架橋剤も含まないし、アルブミン部分の間に（そのような架橋剤由来の）架橋部分も含まない。
【００１９】
さらに、フォーム基剤は、創傷に適用される一過性のフォームをもたらすべきである。ゆえに、任意の種類の化学的安定剤（例えば、任意の反応性物質、例えば、架橋剤）を省略することが好ましい。本発明に係る薬学的調製物への界面活性剤の添加を省略することが、特に好ましい。したがって、その調製物は、好ましくは、界面活性剤を本質的に含まない。「本質的に含まない」とは、ここでは、０．５％（ｖ／ｖ）以下、好ましくは、０．１％以下、特に、０．０５％以下である界面活性剤の濃度を意味する。
【００２０】
本発明に係る好ましいフィブリノゲン沈殿物質は、トロンビンである。トロンビンは、好ましくは、０．１ＩＵ／ｍｌ〜１００００ＩＵ／ｍｌ、より好ましくは、１ＩＵ／ｍｌ〜８０００ＩＵ／ｍｌ、特に、１００〜５０００ＩＵ／ｍｌの濃度で存在する。
【００２１】
本フォームを止血剤としてより有効かつ有用にさえするために、「活性物質」を、好ましくは溶液として（であるが固体も可能である）、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物に加えることもまた好ましい。そのような活性物質を、溶液ではなくフォーム製剤で提供する利点としては、血液と活性物質との接触を高めるために表面積が大きいこと、および活性物質が、完璧なレベルではないにせよ、創傷から流れ出る傾向にある溶液と比べて長い時間にわたって、出血している組織と接触するという事実が挙げられる。
【００２２】
これらの活性物質は、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物の止血活性を高める際の作用様式によって分類され得る。
【００２３】
凝固因子：これらは、代表的には、凝固カスケードに見られる酵素であり、患者の凝固カスケードを増強することによって作用する。単独でまたは組み合わせて使用され得る凝固因子の例は、ＦＶＩＩ、ＦＶＩＩＩ、ＦＩＸ、ＦＸ、ＦＸＩＩＩ、それらの活性化された形態（例えば、第ＶＩＩａ因子）またはＦＥＩＢＡである。
【００２４】
ビタミンＫ（Ｋ１およびＫ３）は、血小板凝集すなわち血液凝固に関与するいくつかのタンパク質の活性の制御を助けるので、それらもまた、フォーム製剤に加えられる凝固剤と見なされ得る。ビタミンＫは、第Ｘ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩ因子およびプロトロンビン（血餅形成を促進するすべてのタンパク質）の活性化を助け得る。
【００２５】
血小板活性化因子：血小板の活性化は、止血を達成する際に必須の工程であり、ゆえに、血小板活性化因子の添加は、そのようなフォーム製剤の止血効力を増強する強力な方法であり得る。コラーゲンは、血小板活性化因子として知られており、トロンボキサンＡ２またはアラキドン酸（トロンボキサンＡ２の前駆体）、ＡＤＰ（アデノシン二リン酸）および他の多くの物質も同様である。好ましい実施形態において、コラーゲンが、本発明の組成物に加えられ、特に、固体の形態の好ましいコラーゲンが存在する。
【００２６】
凝固誘導物質は、血液凝固（血栓形成）、すなわち、血液が血塊を形成するプロセスを誘導する作用物質である。そのような作用物質の例は、天然に凝固を誘導する作用物質（例えば、組織因子、活性化血小板、第ＩＩａ因子（トロンビン）、第Ｖａ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩＩＩａ因子）；または抗出血剤（例えば、ゼオライト（ｚｅｏｌｉｔｈｅ）、無水硫酸アルミニウム、カリウムミョウバン、二酸化チタン、（ミクロフィブリル）コラーゲン、キトサンなど）であり；コラーゲンおよび（（水）可溶性および不溶性）キトサンが、特に好ましい凝固誘導物質である。キトサンなどの凝固誘導物質は、凝固をさらに誘導するためおよび本発明に係る調製物の止血特性を支持するために、加えられ得る。好ましい実施形態において、キトサンは、固体の形態でまたは溶液として、本発明の組成物中に存在する。
【００２７】
血管収縮薬（ｖａｓｏｃｏｎｔｒｉｃｔｏｒ）：血管収縮薬は、血管の管腔の直径を一過性に狭くする分子であり、したがって、それらは、主に、適用されたフォームの近くにおいて、血液の流量を一時的に低下させることによって止血において有用である。
【００２８】
別の態様によると、本発明は、薬学的止血液状フォームを調製するための方法に関し、ここで、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物は、薬学的止血液状フォームが得られるように発泡ガスと接触される。
【００２９】
好ましくは、発泡ガスは、空気、Ｎ２、Ｏ２、Ｎ２Ｏ、ＣＯ２、プロパン、ブタン、ジメチルエーテルまたは部分的にフッ化された炭化水素（ＨＦＣ）、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＣ１３４ａ）または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ２２７ｅａ）からなる群より選択される。発泡ガスは、好ましくは、１〜３０％（ｗ／ｖ）、特に、５〜１５％（ｗ／ｖ）の量で使用される。
【００３０】
発泡ガスは、加圧下で提供され得る。例えば、その加圧されたガスは、ノズルによって薬学的止血液状フォーム基剤調製物に導入され得る。例えば、加圧ガスを含むガスシリンダーから直接、発泡ガスをフォーム基剤に導入することが可能である。
【００３１】
したがって、上記フォームは、好ましくは、圧力をかけることによって薬学的止血液状フォーム基剤調製物を発泡ガスと接触させることによって生成される。その圧力は、例えば、加圧された発泡ガス容器によってか、または本フォーム基剤のユーザー、例えば、外科医もしくは外科医の助手（の手）によって物理的な力をかけることによるものであると意味され得る。
【００３２】
発泡ガスの混合は、適切なエアロゾル含有容器内の加圧下でも行われ得、ここで、空気、Ｎ２、ＣＯ２、ブタンおよびプロパンなどのようなガスではない、Ｒ１３４ａ、Ｒ２２７ｅａ、ＤＭＥなどのような噴射剤などの発泡ガスが、液体の状態で存在し、このようにして、フィブリノゲン沈殿物質の液状製剤に可溶化されるおよび／またはそれに分散される；
上記方法の好ましい実施形態において、薬学的止血液状フォーム基剤調製物は、第１の容器内に提供され、発泡ガスは、第２の容器内に提供される。次いで、第１の容器および第２の容器は、薬学的止血液状フォーム基剤調製物が発泡ガスと混合されることによりフォームが得られるように接続される。好ましくは、第１の容器および第２の容器は、混合デバイス、特に、フィルター材、多孔質ディスクデバイス、３次元格子またはマトリックス材からなる群より選択される混合デバイスと接続される。そのような混合デバイス（およびそれに適した容器）の好ましい例は、例えば、ＷＯ２００７／０８４９１９Ａ１、ＷＯ２００９／１２０４３２Ａ２またはＷＯ２００９／１２０４３３Ａ２に開示されている。
【００３３】
さらに好ましい実施形態において、混合は、特定の容器またはエアロゾル缶を使用して行われ得る。上記製剤の全成分が、溶液で耐圧容器に加えられ、次いでそれが、何らかのバルブアセンブリを用いて閉じられる。次いで、バルブ自体または第２のポートを通じて、噴射剤ガスまたは液化ガス（Ｒ１３４ａの場合のように）が加えられる。噴射剤は、液状製剤に完全に溶解するか、部分的に溶解するか、または噴射剤は、容器内で別個の層を形成する。いずれの場合でも、バルブを通じて生成物を吐出すると、ガスは膨張するか、または液化ガスは、液状製剤から蒸発し、それにより、放出時にフォームを形成する。
【００３４】
上記方法の別の好ましい実施形態によると、薬学的止血液状フォーム基剤調製物および発泡ガスは、１つの容器内に提供され、薬学的止血液状フォーム基剤調製物を発泡ガスと混合することによって、フォームが得られる。
【００３５】
本発明の別の態様は、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物および発泡ガス、好ましくは、空気、Ｎ２、Ｏ２、Ｎ２Ｏ、ＣＯ２、プロパン、ブタン、ジメチルエーテルまたは部分的にフッ化された炭化水素（ＨＦＣ）、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＣ１３４ａ）または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ２２７ｅａ）からなる群より選択される発泡ガスを備える、組み合わせ製品、好ましくは、すぐに使用できる組み合わせ製品に関する。そのような組み合わせ製品を用いると、フォームを容易に生成することができる（例えば、組み合わせ製品の（共通の）容器内でフォーム基剤を発泡ガスと混合する（特に、噴出する）ことによって）。これにより、手術の場所において、１つの容器（例えば、バイアルまたは注射器）から直ちにフォームを生成することが可能になるだろう。
【００３６】
別の態様によると、本発明は、好ましくは、止血剤として使用するため、特に、創傷を処置するための、本発明に係る方法によって入手可能な一過性の薬学的止血液状フォームに関する。
【００３７】
本発明に係るフォームは、安定ではなく、例えば創傷への投与の直後に分解する。ゆえに、本発明に係る「一過性」は、フォームが、化学的に安定化されていないこと、いかなる反応性物質も本質的に含まないこと（例えば、架橋剤を含まないこと）、および止血が達成された直後、すなわち、止血を達成するのに必要な時間の約５倍、例えば、約１０分までに分解することという意味を有する。
【００３８】
別の態様によると、本発明は、本発明に係る一過性の薬学的止血液状フォームを生成するためのキットに関し、そのキットは、
（ａ）本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物を含む第１の容器、および
（ｂ）発泡ガスを含む第２の容器
を備える。
【００３９】
発泡ガスは、好ましくは、空気、Ｎ２、Ｏ２、Ｎ２Ｏ、ＣＯ２、プロパン、ブタン、ジメチルエーテルまたは部分的にフッ化された炭化水素（ＨＦＣ）、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＣ１３４ａ）または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ２２７ｅａ）からなる群より選択される。
【００４０】
好ましい実施形態において、第１の容器および第２の容器は、混合デバイス、特に、フィルター材、多孔質ディスクデバイス、３次元格子またはマトリックス材からなる群より選択される混合デバイスによって接続可能である。さらに好ましい実施形態において、混合デバイスを使用せずに本発明の組成物を生成することも可能である。
【００４１】
好ましくは、上記キットは、容器が注射器の容器である形態で提供される。
【００４２】
本発明の組成物を生成するためにエアロゾル缶を使用することもまた好ましい。
【００４３】
別の態様によると、本発明は、止血剤、特に、創傷を処置するための止血剤を製造するための、本発明に係る薬学的調製物の使用に関する。
【００４４】
水溶液でのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む本発明に係るフォーム基剤調製物は、いくつかの異なる方向に膨張され得る。安定な細孔性のフォームは、５〜２５％アルブミン（ｗ／ｖ流体相）という好ましい濃度で本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物を使用して生成され得る。その水溶液は、生理食塩水（０．９％（ｗ／ｖ）、リン酸緩衝食塩水、好ましくは、最大１０％（ｗ／ｖ流体相）の塩化ナトリウムを含む溶液、好ましくは、最大４０ｍＭの濃度でＣａＣｌ２を含む溶液であり得る。最大２．５％（ｗ／ｖ流体相）の濃度でスクロースを含む調製物を使用することもまた好ましい。別の実施形態において、コラーゲン（例えば、固体の形態のコラーゲン）および／または可溶性もしくは不溶性のキトサンを使用することが好ましい。本発明の好ましい組成物は、トロンビン、アルブミンおよびコラーゲンおよび／または可溶性（不溶性）キトサンを含む。
【００４５】
実施例の項では、例えば、溶液を空気と代表的には１：５の比（１ｍｌの流体＋４ｍｌの空気）で混合することによって、これらの調製物からフォームを生成した。他の流体とガスとの比もまた可能であり、その比の限界は、各個別の調製剤および意図される用途およびフォームのコンシステンシーに対して容易に確立され得る。したがって、１：１０〜１０：１（空気：流体）の範囲の比が、本発明の範囲内に十分入る。混合は、例えば、１つの５ｍｌのオス型ルアー注射器（例えば、Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｉｎｊｅｋｔ）を１ｍｌのそれぞれの溶液で満たし、別のそのような注射器を４ｍｌの空気で満たすことによって達成され得る。これらの２つの注射器を、メス型−メス型ルアーコネクター用の手段によって接続した。容積全体が細孔性のフォームで満たされるまで（代表的には、合計２０回通過）、注射器の内容物を前後に繰り返し移動させることによって、この系を泡立たせた。メス型−メス型ルアーが、ＷＯ２００７／０８４９１９Ａ１に係る多孔質ポリプロピレンディスクを備えている場合、発泡は改善される。
【００４６】
他の好ましい混合方法は、以下である：
・インラインフォームディスペンサー：ＷＯ２００７／０８４９１９Ａ１（例えば、図３４）に係る２つの多孔質ポリプロピレンディスクを有するメス型−オス型ルアーコネクターで連結されたＴｉｓｓｅｅｌ  Ｓｐｒａｙヘッドからなるガス駆動のフォームセットを使用すること。１バール超の気圧によってアセンブリを通じて空気を流し、次いで、２つの混合ディスクを通じて、本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物をその空気流中に吐出することにより、機械的に混合する必要なく安定したＨＳＡフォームが得られた。
【００４７】
・本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物を圧力安定性の容器内に導入し、その圧力安定性の容器内の溶液にＮ２Ｏを加え、その溶液をＮ２Ｏ加圧容器内で振盪し、次いで、アプリケーターを通じてその溶液を大気圧に解放すること。同じデバイスにおけるおよび同じ方法を使用するホイップクリームの形成に類似しているこのプロセスにおいて、フォームを形成した。しかしながら、このフォームは、空気と機械的に混合することによって生成されたフォームほど安定でなかった。
【００４８】
・トロンビンを含むフォーム基剤が、Ｒ１３４ａまたはプロパン／ブタンとも接触され得、それにより、放出時に、本発明に係る安定した一過性のフォームが形成される。凝固誘導剤（例えば、上で述べたようなコラーゲンおよび／または可溶性（不溶性）キトサン）を加えてもよい。
【００４９】
水溶液中にＨＳＡを含む本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物に基づいて、最大２５００ＩＵ／ｍｌの濃度でトロンビンを含む製剤を作製し、実施例の項において試験した。
【００５０】
本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物の意図される用途は、例えば、従来の局所止血剤の適用が困難であり実際的でない組織表面上または腔における外科手術上のまたは緊急時の出血の処置に特に適している（一過性の）止血フォームを提供することである。本発明に係るフォームは、出血部位への近置の必要なく止血を達成することを目的としており、それにより、本発明は、組織に圧力をほとんどまたはまったくかけることができない神経学的な適応症における使用に適する。また、手術野の視界全体を得ることが困難であるので（腔、腹腔鏡下手術におけるびまん性出血など）、または迅速に止血を行うことが患者の生存にとって重要である場合、上記のことにより、出血の正確な位置が視覚的に特定できない出血状態において本発明に係るフォームの適用が可能になる。止血は、出血面を機械的に封鎖し、それゆえ血流が妨害されている毛細血管内で血液凝固カスケードを活性化させることによって、または本発明に係るフォーム製剤内に送達される薬剤を使用して、化学的、生化学的もしくは物理的な手段によって血液凝固を活性化することによって、達成され得る。フォーム製剤の主要な作用様式が、封鎖による場合、他の封鎖の適応症もまた、これらの製剤によって対処され得る。
【００５１】
本発明に係るフォーム製剤は、出血面と、止血を達成する手段としていくつかの地形（ｇｅｏｇｒａｐｈｙ）において頻繁に使用される単体のトロンビン製品との長期にわたる接触を達成する手段としてもとらえられ得る。
【実施例】
【００５２】
実施例１：
１．要約
本発明に係る「流動性フォーム」の形態である２つの異なる止血剤（本発明に係る薬学的止血液状フォーム基剤調製物）を、ヘパリン処理されていないブタおよびヘパリン処理されたブタの中間層（ｐａｒｔｉａｌ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）皮膚病変および肝臓擦過創モデルにおいて試験した。
【００５３】
本発明に係る流動性フォームを、５００ＩＵ／ｍｌおよび２５００ＩＵ／ｍｌという２つの異なる開始トロンビン濃度で調製した。両方の製剤において、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の２５％溶液を発泡剤として使用した。
【００５４】
すべての製剤の止血の有効性を、最初に、ヘパリン処理されていない動物のブタ中間層皮膚病変において試験した。２×３ｍｍの直径および１ｍｍの厚さを有する病変を、デルマトームを使用して、臀部から始めて背部まで続けて作製した。このタイプの病変では、びまん性で弱い出血だけがもたらされた。病変を作製した１分後に、試験されるサンプルを適用し、適用の２分後にその生成物の洗浄を行った。生成物の近置は無かった。
【００５５】
試験されたすべての製剤が、上記のブタ皮膚モデルにおいて満足な止血有効性を示した。全体的な認識は、より高い濃度のトロンビン（２５００ＩＵ／ｍｌ）を含む製剤が、より低いトロンビン濃度を含む製剤よりもわずかに良好だったことだった。
【００５６】
第２のモデル−ブタ肝臓擦過創モデルでは、ブタをなおもヘパリン処理しなかったとき、それらの生成物の止血性能に認知できる差は無かった。
【００５７】
インビボ試験の最後に、より高いトロンビン濃度を含む製剤を、ヘパリン処理されたブタの肝臓擦過創モデルにおいて試験したところ、この条件では、それらのサンプルは、出血を停止させることができなかった。
【００５８】
ヘパリン処理された動物における強い出血の場合、提案された製剤がそのような条件下で有効でなかったので、流動性フォーム止血剤は、さらなる最適化を必要とする。
【００５９】
２．実験の範囲
生体適合性かつ十分に生体吸収性である止血性の付着性フォーム製剤が、止血の次世代製品に対する魅力的な選択肢の１つとして、本発明によって提供される。
【００６０】
そのフォームは、見えにくい組織の空隙に安全に注入されるべきであり、近置の必要なく効果的であるべきである。フォーム止血剤のさらなる重要な要件は、過剰な腫脹または閉塞のリスクが無いことである。
【００６１】
そのような流動性止血フォームの主要な用途は、神経／脊椎手術、腹腔鏡下手術および心臓血管手術を含む。
【００６２】
トロンビンと混合されるヒト血清アルブミンに基づいた本発明に係る流動性フォームの系を設計した。ＨＳＡの濃縮溶液は、空気と１：３で混合されるとき、特別な混合ユニットによって接続された２本の注射器を使用して調製され得る安定なフォームを長時間（１０分間）にわたってもたらすことが見出された。そのようなフォームは、Ｆｌｏｓｅａｌ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｍａｔｒｉｘにおいて使用される同じ適用チップを通じてさらに適用され得る。
【００６３】
これらの実験の目的は、本発明に係る選択された流動性フォーム製剤の止血有効性を試験することだった。それらの製剤を、ヘパリン処理されていないブタにおける２つの異なるモデルの中程度の出血において試験した。第１のモデルでは、それらの製剤は、中間層皮膚病変において試験され、第２のモデルでは、肝臓擦過創病変において試験された。それらのサンプルの有効性を定性的にだけ評価した。
【００６４】
３．材料
３．１  使用した原材料
材料                                                    供給業者      ロット番号
トロンビンＳＤ  ＴＩＭ５  ５００ＩＵ／ｍｌ  ＵＳ５ｍｌ  Ｂａｘｔｅｒ  ＶＮＦ４Ｋ００１Ａ  。
【００６５】
３．２  溶液
ＨＳＡ２５％
塩化カルシウム溶液  ４０ｍＭ  ５ｍｌ
ＣａＣｌ２  ４０ｍＭにおけるトロンビン溶液５００ＩＵ／ｍｌ
ＣａＣｌ２  ４０ｍＭにおけるトロンビン溶液２５００ＩＵ／ｍｌ
塩化ナトリウム溶液０．９％  。
【００６６】
３．３  装置／使い捨てのもの
装置／使い捨てのもの                                  供給業者
注射器  ５ｍｌ  単一ルアーロック                      ＢＢｒａｕｎ
ルアーロックとルアーロックとの迅速充填コネクター      Ｂａｘａ
混合デバイス「Ｍｉｘ−Ｆ」                            Ｂａｘｔｅｒ
ＦｌｏＳｅａｌアプリケーター  大チップ  ６．３５ｍｍ  Ｂａｘｔｅｒ
擦過創デバイス，ｄ＝１８ｍｍ                          Ｄｒｅｍｅｌ
タイマー                                              Ｈｕｇｅｒ  。
【００６７】
４．方法
４．１  サンプル調製
４．１．１  トロンビン５００ＩＵ／ＭＬ＋ＨＳＡ２５％＋４ＭＬ空気
ＣａＣｌ２  ４０ｍＭにおけるトロンビン５００ＩＵ／ｍｌ＋４ｍｌ空気：
トロンビン５００ＩＵ／ｍｌのｌｙｏバイアルを、５ｍｌの塩化カルシウム溶液４０ｍＭに溶解した。０．５ｍｌのそのトロンビン溶液および４ｍｌの空気を、各々５ｍｌ注射器に吸い上げた。次いで、それらの注射器をキャップで閉じ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【００６８】
ＨＳＡ２５％：
０．５ｍｌのヒトアルブミン血清２５％を、各々５ｍｌ注射器に吸い上げた。それらの注射器をキャップで閉じ、さらに使用するまで＋４℃で保存した。
【００６９】
４．１．２  トロンビン２５００ＩＵ／ＭＬ＋ＨＳＡ２５％＋４ＭＬ空気
ＣａＣｌ２  ４０ｍＭにおけるトロンビン２５００ＩＵ／ｍｌ＋４ｍｌ空気：
トロンビン５００ＩＵ／ｍｌのｌｙｏバイアルを、各々、１ｍｌの塩化カルシウム溶液４０ｍＭに溶解した。０．５ｍｌのそのトロンビン溶液および４ｍｌの空気を、各々５ｍｌ注射器に吸い上げた。次いで、それらの注射器をキャップで閉じ、さらに使用するまで−２０℃で保存した。
【００７０】
ＨＳＡ２５％：
０．５ｍｌのヒトアルブミン血清２５％を、各々５ｍｌ注射器に吸い上げた。それらの注射器をキャップで閉じ、さらに使用するまで＋４℃で保存した。
【００７１】
４．２  サンプル再構成
４．２．１  トロンビン５００ＩＵ／ＭＬ＋ＨＳＡ２５％：
ＣａＣｌ２  ４０ｍＭにおける０．５ｍｌのトロンビン５００ＩＵ／ｍｌ
＋
０．５ｍｌ  ＨＳＡ２５％
↓＋「Ｍｉｘ−Ｆ」
噴出１０×（２０回通過）
↓
６．３５ｃｍのアプリケーターチップを用いて適用  。
【００７２】
４．２．２  トロンビン２５００ＩＵ／ＭＬ＋ＨＳＡ２５％：
ＣａＣｌ２  ４０ｍＭにおける０．５ｍｌのトロンビン２５００ＩＵ／ｍｌ
＋
０．５ｍｌのＨＳＡ２５％
↓＋「Ｍｉｘ−Ｆ」
噴出１０×（２０回通過）
↓
６．３５ｃｍのアプリケーターチップを用いて適用  。
【００７３】
４．３  外科手技および出血評価
最初に、すべてのフォーム製剤を、ヘパリン処理されていない動物のブタ皮膚病変および肝臓擦過創モデルにおいて試験した。より高いトロンビン濃度（２５００ＵＩ／ｍｌ）を含む製剤からの１つのサンプルだけ、ヘパリン処理されたブタの肝臓擦過創モデルにおいて試験した。
【００７４】
４．３．１  １ｍｍの中間層ブタ皮膚病変
約２×３ｍｍの直径および１ｍｍの厚さを有する病変を、デルマトームを用いて、ヘパリン処理されていないブタの臀部から始めて背中まで続けて作製した。病変を作製した後、皮膚欠損の正確なサイズを計測した。病変を作製した１分後に、生成物を適用した。適用する前に、病変からの過剰量の血液をガーゼで拭き取り（吸い取り）、図１（Ｂ）および（Ｃ）に例証されているように、生成物を病変上に均一に広げた。このタイプの病変では、びまん性で弱い出血だけがもたらされた。試験されたサンプルは、近置せずに適用した。適用の２および５分後に生成物の洗浄を行った。
【００７５】
４．３．２  ブタ肝臓擦過創モデル
このモデルでは、中程度のグレードのサンドペーパーが取り付けられたハンドドリルのドレメル（ｄｒｅｍｅｌ）を使用して、肝臓擦過創を作製した。この洗練されたモデルでは、標準化された１．８ｃｍの直径、約１ｍｍの深さの病変を使用することによって、ばらつきを減少させる。平らな丸い回転擦過創ツールを用いて、円形の出血創傷（直径１．８ｃｍ）を、ブタの肝葉表面上に作製した。適用する前に、病変からの過剰量の血液をガーゼで拭き取り（吸い取り）、次の生成物を病変上に均一に広げた。生成物の近置は無かった。２、３、５および１０分後に止血有効性を評価した。過剰量の生成物を、適用の５分後にＲｉｎｇｅｒ液で洗浄した。
【００７６】
４．３．３  出血の評価
両方のモデル（皮膚および肝臓）において作製した病変からの出血を、図２に提示されるスケールに従って定性的に（主観的に）評価した。生成物を調製し、作製した病変上に適用した。生成物が適用された後に近置は無かった。過剰量の生成物を、２０ｍｌの注射器内のＲｉｎｇｅｒ液で洗浄した。出血の程度を、３０秒後、次いで、およそ１、２、５および１０分後に評価した。血液で飽和したが活発な出血をもたらさなかった生成物を０とスコア付けした。同じ食塩水溶液を使用して、適用の５分後に過剰量の生成物を病変から洗浄した。
出血スコア：
０  出血なし−血液で飽和した生成物
１  滲出−生成物から血液が出ているが、血液の液滴が出ているわけではない
２  非常に軽度−血液の液滴が生成物上にある
３  軽度−血液の液滴が流れ落ちる
４  中程度−少量の血液が流れ落ちる
５  重度−大量の血液が流れ落ちる  。
【００７７】
５．結果
試験された各生成物は、本発明に係る（一過性の）流動性フォームの形態だった。
【００７８】
５．１  トロンビン５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％；ブタ皮膚モデル
結果を図３に示す。フォームを調製し、出血病変に適用した。時間が経過するにつれて、おそらく液体の重力（フォーム基剤への液体の排出）に起因した液体の滲出が観察された。過剰量の生成物は、Ｒｉｎｇｅｒ液で洗浄することができた。生成物を３回の適用において試験し、最終スコアは、止血の成功である「０」だった。
【００７９】
５．２．トロンビン２５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％；ブタ皮膚モデル
結果を図４に示す。フォームを調製し、出血病変に適用した。過剰量の生成物は、Ｒｉｎｇｅｒ液で洗浄することができた。生成物を３回の適用において試験し、最終スコアは、止血の成功である「０」だった。
【００８０】
５．３  トロンビン５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％；肝臓擦過創モデル
結果を図５に示す。２つのサンプルを試験し、最終スコアは、止血の成功である「０」だった。
【００８１】
５．４  トロンビン２５００ＩＵ／ｍｌ＋ＨＳＡ２５％；肝臓擦過創モデル
結果を図６に示す。２つのサンプルを試験し、最終スコアは、止血の成功である「０」だった。
【００８２】
６．考察
本発明に係る液状フォームを得るために、特別な混合ユニットによって接続された２本の注射器を使用して空気と１：３で混合した。そのようなフォームは、１０分間にわたって安定であると観察され、Ｆｌｏｓｅａｌ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｍａｔｒｉｘにおいて使用されるのと同じ適用チップによってさらに適用され得る。  
【００８３】
これらの実験の目的は、これらのフォーム製剤の止血有効性を試験することだった。それらの製剤を、ヘパリン処理されていないブタにおける２つの異なるモデルの中程度の出血において試験した。第１のモデルでは、それらの製剤は、中間層皮膚病変において試験され、第２のモデルでは、肝臓擦過創病変において試験された。それらのサンプルの有効性を定性的にだけ評価した。
【００８４】
本発明に係る流動性フォームを、５００ＩＵ／ｍｌおよび２５００ＩＵ／ｍｌという２つの異なる開始トロンビン濃度で調製した。両方の製剤において、ＨＳＡの２５％溶液を発泡剤として使用した。
【００８５】
すべての製剤の止血有効性を、最初に、ヘパリン処理されていない動物のブタ中間層皮膚病変において試験した。２×３ｍｍの直径および１ｍｍの厚さを有する病変を、デルマトームを使用して、臀部から始めて背部まで続けて作製した。このタイプの病変では、びまん性で弱い出血だけがもたらされた。病変を作製した１分後に、試験されるサンプルを適用し、適用の２分後にその生成物の洗浄を行った。生成物の近置は無かった。
【００８６】
試験されたすべての製剤が、上記のブタ皮膚モデルにおいて満足な止血有効性を示した。全体的な認識は、より高い濃度のトロンビン（２５００ＩＵ／ｍｌ）を含む製剤が、より低いトロンビン濃度を含む製剤よりもわずかに良好だったことだった。
【００８７】
第２のモデル−ブタをなおもヘパリン処理しなかった場合のブタ肝臓擦過創モデルでは、それらの生成物の止血性能に認知できる差は無かった。
【００８８】
実施例２：
少なくとも５ｍｌの容積を有する注射器において、１部の２５％ＨＳＡ溶液を、５００ＩＵ／ｍｌのトロンビンおよび５％ＨＳＡを含む１部のトロンビン溶液と混合することによって、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、トロンビンおよび空気に基づく止血フォームを調製した。第３の成分は、８０ｖｏｌ％の空気だった；その空気は、同じサイズの第２の注射器内に存在した。多孔質焼結ポリプロピレンディスクが取り付けられたコネクター（「Ｍｉｘ  Ｆ」と呼ばれる）を通じて両方の注射器の内容物を前後に少なくとも２０回繰り返し急速に移動させることによって、上記フォームを調製した。これにより、優れた止血特性を有する安定した白色の一過性フォームが生成された。
【００８９】
実施例３：
実施例２におけるように調製されたフォームを、軽度から中程度の出血を示す１，５〜２×ＡＣＴまでヘパリン処理されたブタの肝臓擦過創に適用した。適用後の最初の５分間において、破綻出血は観察されなかった。５分後、残っているフォームを滅菌食塩水で洗浄した。力学的に安定しているが柔軟で（ｃｏｍｐｌｉａｎｔ）薄く創傷を覆っている安定したフォーム血餅が形成された。
【００９０】
実施例４：
実施例２に提示された製剤を超えるさらなるフォーム安定化が、以下のとおり達成され得る：さらに５％（ｗ／ｖ）のポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を含むＨＳＡ２５％−トロンビン（５％ＨＳＡ，５００ＩＵ／ｍｌ）１：１混合物。０．５ｇのＰＶＰを、２５％ＨＳＡとトロンビン５００ＩＵ／ｍｌとの１０ｍｌ混合物に溶解した。この溶液から１ｍｌを５ｍｌの注射器に吸い上げ、多孔質焼結ポリプロピレンディスクが取り付けられたコネクター（「Ｍｉｘ  Ｆ」と呼ばれる）を通じて、両方の注射器の内容物を前後に少なくとも２０回繰り返し急速に移動させることによって、第２の５ｍｌ注射器内の４ｍｌの空気と混合した。最終的な製剤は、１２．５％ＨＳＡ、２５０ＩＵ／ｍｌトロンビンおよび５％ＰＶＰを含む。
【００９１】
実施例５：
実施例２および４に従って生成されたフォームを、５ｍｌのヒト血漿を含むペトリ皿上に置き、そのフォームの直径を２０分間にわたってモニターするとき（フォーム安定性アッセイ）、実施例３に従って生成されたフォームの有意に遅い広がりが観察されたことから、そのフォームが、より安定だった。
【００９２】
実施例６：
キトサン０．５％フォーム：キトサンの１％溶液から、０．５ｍｌを、実施例２の１ｍｌの２５％ＨＳＡおよびトロンビン溶液に加えた。５ｍｌの注射器内の溶液を、Ｍｉｘ  Ｆコネクターを通じて、第２の５ｍｌ注射器内の４ｍｌの空気と混合することにより、安定したフォームが得られた。実施例５に記載されたようなフォーム安定性試験に供したとき、実施例６に従って生成されたフォームの有意に遅い広がりが観察されたことから、そのフォームが、より安定だった。
【００９３】
実施例７：
エアロゾルスプレー缶におけるキトサン０．５％フォーム：キトサンの１％溶液から、０．５ｍｌを、実施例２の１ｍｌの２５％ＨＳＡおよびトロンビン溶液に加えた。この１０ｍｌの溶液を５０ｍｌのエアロゾル缶に充填し、バルブアセンブリを取り付けた。そのバルブアセンブリを通じて、２ｇのＲ１３４ａをそのエアロゾル缶に充填した。その液体を吐出すると、注射器において手作業で生成されたフォームと同じ特徴を有する安定したフォームが形成された。
【００９４】
実施例８：
実施例７に係るエアロゾルスプレー缶を使用して、トロンビン含有液状フォームを、ブタ動物モデルにおける胸膜の擦過創病変上に吐出した。そのフォームを垂直の胸膜の壁に出すのは容易であり、止血が達成されるまでその場に留まった。必要であれば、接触時間を延長するために、その生成物を再適用することができる。
【００９５】
実施例９：
固体コラーゲン粉末を含むフォーム製剤：３４ｍｇの架橋コラーゲンを、１ｍｌの２５％ＨＳＡおよび１ｍｌのトロンビン１５００ＩＵ／ｍｌ溶液と混合した。この懸濁液に、１５０μｌの１％キトサン溶液を加え、両方の注射器の内容物を前後に少なくとも２０回、２本の１０ｍｌのＢ．Ｂｒａｕｎ注射器間に繰り返し急速に移動させることによって、混合した。空気の量を４ｍｌに設定した。両方の注射器の内容物を前後に少なくとも２０回繰り返し急速に移動させる同じプロセスによって、フォームを再度生成した。実施例３に記載されたブタ動物モデルにおいて、より良好な有効性を示す安定した白色の一過性のフォームが生成された。
【００９６】
実施例１０：
コラーゲン（１００ｍｇ）フォーム：１．５ｍｌの２５ｗｔ％ＨＳＡを、１００ｍｇの機械練りコラーゲンペーストおよび１ｍｌの空気とともに噴出させることによって、混合した。フォーム様構造を得るために、そのフォーム内の空気の量は、３ｍｌという総量まで徐々に（各回１ｍｌ）増加させた。この製剤の調製は、１０ｍｌの注射器を使用して行われた。
【図３Ａ】
2016501255.tif 000002
【図３Ｂ】
2016501255.tif 000003
【図３Ｃ】
2016501255.tif 000004
【図３Ｄ】
2016501255.tif 000005
【図４Ａ】
2016501255.tif 000006
【図４Ｂ】
2016501255.tif 000007
【図４Ｃ】
2016501255.tif 000008
【図４Ｄ】
2016501255.tif 000009
【図５Ａ】
2016501255.tif 000010
【図５Ｂ】
2016501255.tif 000011
【図５Ｃ】
2016501255.tif 000012
【図５Ｄ】
2016501255.tif 000013
【図６Ａ】
2016501255.tif 000014
【図６Ｂ】
2016501255.tif 000015
【図６Ｃ】
2016501255.tif 000016
【図６Ｄ】
2016501255.tif 000017
【図１】
2016501255.tif 000018
【図２】
2016501255.tif 000019
【国際調査報告】
2016501255.tif 000020
2016501255.tif 000021
2016501255.tif 000022