(57)【要約】  本発明は、新規テルフェニル化合物、並びに高血圧及び/又は線維症の予防的処置及び/又は治療的処置におけるその使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式:
【化１】
2016532632.tif 000006
の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩。
【請求項２】
化合物が、式:
【化２】
2016532632.tif 000007
の化合物である、請求項1に記載の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩。
【請求項３】
請求項1又は2に記載の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩と、医薬として許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項４】
請求項1又は2に記載の化合物若しくはその立体異性体若しくは医薬として許容される塩、又は請求項3に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象の高血圧又は高血圧前症の治療的処置方法。
【請求項５】
請求項1又は2に記載の化合物若しくはその立体異性体若しくは医薬として許容される塩、又は請求項3に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象の線維症の予防的処置方法。
【請求項６】
請求項1又は2に記載の化合物若しくはその立体異性体若しくは医薬として許容される塩、又は請求項3に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象の線維症の治療的処置方法。
【請求項７】
請求項1又は2に記載の化合物若しくはその立体異性体若しくは医薬として許容される塩、又は請求項3に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象の高血圧及び線維症の治療的処置方法。
【請求項８】
請求項1又は2に記載の化合物若しくはその立体異性体若しくは医薬として許容される塩、又は請求項3に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象の高血圧前症及び線維症の処置方法。
【請求項９】
線維症が心筋線維症又は腎線維症である、請求項5〜8のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１０】
線維症が心筋線維症及び腎線維症である、請求項5〜8のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１１】
高血圧又は高血圧前症の治療的処置薬を製造するための請求項1又は2に記載の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩の使用。
【請求項１２】
線維症の予防的処置薬を製造するための請求項1又は2に記載の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩の使用。
【請求項１３】
線維症の治療的処置薬を製造するための請求項1又は2に記載の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩の使用。
【請求項１４】
高血圧及び線維症又は高血圧前症及び線維症の治療的処置薬を製造するための請求項1又は2に記載の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、並びに心血管疾患の予防的処置及び/又は治療的処置における、特に、高血圧前症、高血圧及び/又は線維症症状の処置におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
本発明は、主として、心血管疾患の予防的処置及び/又は治療的処置のために開発されたものであり、以下に本願について記載する。しかし、本発明がこの特定の使用分野に限定されないことは理解されよう。
【背景技術】
【０００３】
本明細書全体にわたる従来技術のいかなる論述も、そのような従来技術が広く知られていること、又はその分野での共通の一般知識の一部を形成していることを了解しているものと決して考えないものとする。
【０００４】
高血圧(高い血圧)には全世界の成人人口の26%が罹患しており、欧米諸国での発病率は30〜33%である。高血圧の世界的な発病率は、インド及び中国が西洋化した結果、2025年までに29%に達するものと予想される。現在の研究によれば、高血圧患者の20%未満しか推奨される患者の血圧(BP)目標が達成されておらず、しかも、これらの目標を達成するために、75%を超える患者において複数の抗高血圧薬による治療が必要とされていることが示されている。高血圧前症(わずかに高い血圧)は、米国では成人の31%が罹患しており、処置しなければ高血圧を発症する可能性がある。
【０００５】
現在利用可能なすべての治療法に以下のような副作用がある。
・アンギオテンシン変換酵素阻害薬(ACEI)-咳、血管神経性浮腫、高カリウム血症、
・アンギオテンシン受容体遮断薬(ARB)-血管神経性浮腫、高カリウム血症、
・カルシウムチャネル遮断薬(CCB)-紅潮、脚/足首の浮腫、便秘、
・チアシド系利尿薬-初発糖尿病、痛風、低ナトリウム血症、
・ベータ(β)遮断薬-初発糖尿病、運動不能、徐脈、糖尿病患者における低血糖の隠蔽、並びに、
・アルドステロン拮抗薬-女性化乳房、月経過多、高カリウム血症。
【０００６】
併用療法を使用する必要性から患者は副作用を経験し、結果として、患者のBP目標が達成されないという可能性が増大する。
【０００７】
高血圧及び高血圧前症は、心臓、腎臓及び血管損傷の発症における主要因子であって、その結果、正常な機能組織が瘢痕組織又は線維症に置き換わる。現在の一部の抗高血圧薬、すなわちACE阻害薬、ARBレニン阻害薬及びアルドステロン拮抗薬は、線維症による機能組織の置き換えの進行を遅延させることができるが、いずれも既に存在する線維症を反転させ、正常な組織構造を回復させることは示していない。したがって、BPを有意に低下させ、それによって、単剤療法を用いて多くの患者でBP目標を達成し、且つ/又は既に存在する線維症を反転させ、且つ/又は正常な組織構造を回復させる薬剤が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、従来技術の欠点の少なくとも1つを解消若しくは改善すること、又は有用な代案を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
驚いたことに、本発明者らは、ある特定の新規テルフェニル化合物が血圧低下作用及び/又は抗線維化作用を有することを見出した。これらの作用は、静脈内投与及び/又は経口投与試験において確認することができる。
【００１０】
一態様によれば、本発明は、式:
【００１１】
【化１】
2016532632.tif 000002
の化合物又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩を提供する。
【００１２】
一実施形態において、化合物は、
【００１３】
【化２】
2016532632.tif 000003
又はその立体異性体若しくは医薬として許容される塩である。
【００１４】
別の態様によれば、本発明は、本発明の化合物と医薬として許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１５】
別の態様によれば、本発明は、本発明による化合物を対象に投与することを含む、対象の高血圧又は高血圧前症の治療的処置方法に関する。
【００１６】
別の態様によれば、本発明は、本発明による化合物を対象に投与することを含む、対象の線維症の治療的処置方法に関する。
【００１７】
別の態様によれば、本発明は、本発明による化合物を対象に投与することを含む、対象の線維症の予防的処置方法に関する。
【００１８】
別の態様によれば、本発明は、本発明による化合物を対象に投与することを含む、対象の高血圧及び線維症の治療的処置方法に関する。
【００１９】
別の態様によれば、本発明は、本発明による化合物を対象に投与することを含む、対象の高血圧前症及び線維症の治療的処置方法に関する。
【００２０】
一実施形態において、線維症は心筋線維症又は腎線維症である。
【００２１】
別の実施形態において、線維症は心筋線維症及び腎線維症である。
【００２２】
別の態様によれば、本発明は、高血圧又は高血圧前症の治療的処置で使用するための本発明の化合物に関する。
【００２３】
別の態様によれば、本発明は、線維症の治療的処置で使用するための本発明の化合物に関する。
【００２４】
別の態様によれば、本発明は、線維症の予防的処置で使用するための本発明の化合物に関する。
【００２５】
別の態様によれば、本発明は、高血圧及び線維症の治療的処置で使用するための本発明の化合物に関する。
【００２６】
別の態様によれば、本発明は、高血圧前症及び線維症の治療的処置で使用するための本発明の化合物に関する。
【００２７】
別の態様によれば、本発明は、高血圧又は高血圧前症の治療的処置薬を製造するための本発明の化合物の使用に関する。
【００２８】
別の態様によれば、本発明は、線維症の治療的処置薬を製造するための本発明の化合物の使用に関する。
【００２９】
別の態様によれば、本発明は、線維症の予防的処置薬を製造するための本発明の化合物の使用に関する。
【００３０】
別の態様によれば、本発明は、高血圧及び線維症の治療的処置薬を製造するための本発明の化合物の使用に関する。
【００３１】
別の態様によれば、本発明は、高血圧前症及び線維症の治療的処置薬を製造するための本発明の化合物の使用に関する。
【００３２】
文脈上明白に他の意味に解釈すべき場合を除いて、本明細書及び特許請求の範囲を通じて、「含む(comprise)」、「含んでいる(comprising)」などの用語は、排他的意味又は厳密な意味とは反対の包括的な意味、すなわち、「包含しているが、限定するものではない」の意味と解釈するものとする。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】VB0004の合成を示す図である。
【図２】ジエチルカルバモイルメチルホスホネートの合成を示す図である。
【図３】Roche社製のxCELLIgenceにおいて、A10血管平滑筋細胞とインキュベートした際、負性インピーダンス応答が62.5μM、125μM及び250μM濃度の化合物VB0004で確認された図である。
【図４】10、100及び500pmol/kg/分のVB0004を用いて経口投与により4週間処置した後の2.2%塩分食のSHRにおける収縮期血圧(systolic blood pressure)を示す図である。
【図５】Roche社製xCELLIgenceにおいて、ウシ大動脈内皮細胞とインキュベートした際、負性インピーダンス応答が62.5μM、125μM及び250μM濃度の化合物VB0004で確認された図である。
【図６】10及び20pmol/kg/分のVB0004を用いて静脈内注射により4週間処置した後の2.2%塩分食のSHRにおける収縮期血圧を示す図である。
【図７】対照動物の平均収縮期血圧と比較した、10〜2,500pmol/kg/分の範囲の様々な用量のVB0004を用いて経口的に4週間処置した後の平均収縮期血圧(mean systolic blood pressure)の低下を示す図である。
【図８】8週までの様々な期間において、対照と比較した、2,500pmol/kg/分のVB0004を用いて経口的に処置した2.2%塩分食のSHRにおける平均収縮期血圧(mean systolic blood pressure)の低下を示す図である。
【図９】2.2%塩分食の18週齢SHRにおいて10〜500pmol/kg/分の用量のVB0004を用いて経口的に4週間処置した後の心臓の線維症(斜線棒)が、2.2%塩分食のSHRにおける14週間及び18週間の対照での線維症(白色棒)と比べて減少していることを示す図である。18週間の対照に対して、*p<0.005、**p<0.0005、14週間の対照に対して、#p<0.05。
【図１０】2.2%塩分食の18週齢SHRにおいて10〜500pmol/kg/分の用量のVB0004を用いて経口的に4週間処置した後の腎臓の線維症(斜線棒)が、2.2%塩分食のSHRにおける14週間及び18週間の対照での線維症(白色棒)と比べて減少していることを示す図である。18週間の対照に対して、*p<0.005、**p<0.0005、14週間の対照に対して、#p<0.05、##p<0.005、###p<0.0005。
【図１１】対照ラットと、500pmol/kg/分のVB0004で4週間処置したラットの心臓の顕微鏡写真である。上のパネルは、線維組織がマッソントリクローム染色法で灰色に見える対照心臓の切片を示している(矢印を参照)。下のパネルは、VB0004で処置した動物の切片には線維組織が実質的に存在しないことを示している。
【図１２】対照ラットと、500pmol/kg/分のVB0004で4週間処置したラットの腎臓の顕微鏡写真である。上のパネルは、線維組織がマッソントリクローム染色法で灰色に見える対照腎臓の切片を示している(矢印を参照)。下のパネルは、VB0004で処置した動物の切片には線維組織が実質的に存在しないことを示している。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明は、実験動物モデルでの静脈内投与及び／又は経口投与試験において血圧低下作用及び抗線維症作用を示す特定の新規テルフェニル化合物に関する。抗線維症活性に関し、本発明の化合物は、線維症の予防、確定された線維症の進行の遅延、及び/又は確定された線維症の程度の軽減(反転)において有効である。これらは、本発明の化合物で処置することができる状態の範囲及び重症度に関する重要な知見である。
【００３５】
本発明の化合物は、式:
【００３６】
【化３】
2016532632.tif 000004
で表される。
【００３７】
以下の化合物
【００３８】
【化４】
2016532632.tif 000005
は、限定するものではないが、本発明の化合物の具体的な例である。
【００３９】
該化合物は、以下の名前:2'-[3-ヒドロキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]プロパンアミドによって表すこともできる。
【００４０】
本発明の化合物は、特定の幾何学的形態又は立体異性的形態で存在し得る。本発明では、こうした化合物のすべて、例えば、シス異性体及びトランス異性体、(R)-エナンチオマー及び(S)-エナンチオマー、ジアステレオマー、(d)-異性体、(l)-異性体、それらのラセミ混合物、並びに本発明の範囲内にあるようなそれらの他の混合物を予期している。そのようなすべての異性体、並びにそれらの混合物は本発明に含まれるものとする。
【００４１】
例えば、本発明の化合物の特定のエナンチオマーを所望する場合、不斉合成によって、又はキラル補助基で誘導体化することによって調製することができ、この場合、得られたジアステレオマー混合物を単離し、補助基を切断して純粋な所望のエナンチオマーを得る。或いは、ジアステレオマー塩は、適切な光学活性な酸又は塩基を用いて形成させることができ、続いて、当技術分野で周知の分別晶出又はクロマトグラフィーの手段によって、こうして形成されたジアステレオマーを分離し、その後、純粋なエナンチオマーを回収することができる。
【００４２】
一般に、本発明の化合物は、容易に入手できる出発物質、試薬及び従来の合成手順を使用し、例えば、下記に述べたような一般的な反応スキームで示した方法によって、又はそれらの変更によって調製することができる。これらの反応においては、それ自体は公知であるが本明細書では言及されていない改変体を使用することもできる。
【００４３】
本発明はまた、本化合物の医薬として許容される塩も予期している。「医薬として許容される塩」という用語は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を包含しており、遊離塩基又は酸の生物学的効果及び特性を保持し、生物学的に又は他の場合において不適当でない塩を意味する。医薬として許容される塩は、無機又は有機の酸又は塩基を用いて形成され、化合物の最終的な単離及び精製時にin situで調製することができるか、或いは、その遊離塩基又は酸の形態の精製化合物を適切な有機又は無機の酸又は塩基と別々に反応させ、そのようにして形成された塩を単離することによって調製することができる。
【００４４】
本発明において使用される場合の「線維症」という用語としては、限定するものではないが、心筋線維症及び/又は腎線維症が挙げられる。
【００４５】
確定された線維症の処置に加えて、本発明の化合物は、線維症を発症するリスクのある対象において予防的に使用することができる。線維症を発症するリスクカテゴリーの対象の例としては、高血圧、糖尿病、心筋炎、虚血性心疾患、コン症候群、クロム親和細胞腫、遺伝的素因、高塩分食を有しているもの、及び/又は癌化学療法において使用されている薬物(例えば、ダウノルビシン)が投与されているものである。本発明において使用される場合の「予防的」という用語は、リスク群における線維症の発症を予防又は遅延させるために使用される処置を特に包含するものとする。予防的処置を受けることができる対象は、既に心エコー検査法で初期心不全の徴候を有していてもよい。
【００４６】
本発明において使用される場合の「高血圧」という用語は、収縮期の約139mmHg及び/又は拡張期の約89mmHgを超える成人血圧を意味する。
【００４７】
本発明において使用される場合の「高血圧前症」という用語は、収縮期の範囲が約120〜139mmHg及び/又は拡張期の範囲が約80〜89mmHgの成人血圧を意味する。
【００４８】
本発明はまた、許容される医薬賦形剤と共に本発明の化合物を含む医薬組成物も予期している。本発明において使用される場合の「医薬として許容される賦形剤」という用語は、組成物の医薬として許容される任意の不活性成分を意味する。当技術分野で知られているように、賦形剤としては、希釈剤、緩衝剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、抗酸化剤/保存剤、pH調整剤などが挙げられる。賦形剤は、最終剤形の所望する物理的な態様、例えば、速やかに分散され、容易に呑み込める、所望の硬度及び破砕性を有する錠剤の取得などに基づいて選択される。その摂取後の組成物からの活性物質の所望する放出速度もまた、賦形剤の選択において役割を果たす。医薬組成物としては、任意のタイプの剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、液体製剤、遅延又は持続放出剤、貼付剤、嗅剤、鼻内噴霧剤などを挙げることができる。予期される医薬組成物の物理的剤形及び含量は、医薬製剤分野の当業者によって製剤化することができ、また、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, 1995; British Pharmacopoeia 2000、並びに類似の製剤テキスト及びマニュアルに記載されている、既に十分に確立された原理及び組成に基づく従来の調製である。
【００４９】
例えば、化合物又は組成物が経口投与される場合、それらは錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤又はシロップ剤として製剤化することができる、或いは、非経口投与については、それらは、注射剤(静注投与、筋肉内投与、又は皮下投与用)、点滴輸液製剤又は坐剤として製剤化することができる。眼の粘膜経路による適用については、それらは点眼薬又は眼軟膏剤として製剤化することができる。これらの製剤は従来の手段によって調製することができ、所望により、活性成分は、任意の従来の添加物、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤、可溶化剤、懸濁補助剤、乳化剤又はコーティング剤などと混合することができる。
【００５０】
本発明の化合物(複数可)をヒト及び動物に医薬品として投与する場合、それ自体を投与することもできるし、又は、例えば、0.1〜99.5%(より好ましくは0.5〜90%)の活性成分を、医薬として許容される担体と組み合わせて含有する医薬組成物として投与することができる。
【００５１】
また、使用するべき化合物の用量及び投与の頻度は、所望の応答が得られるように、処置している医師によって容易に決定され得る。
【００５２】
用量は、患者の症候、年齢及び体重、処置又は予防しようとする障害の特性及び重症度、投与経路及び薬物の剤形に応じて変わるが、一般に、0.0001mg〜200mgの本発明の化合物の1日用量が成人ヒト患者にとっての適切な有効量であってよく、また、それは単回投与又は分割投与で投与することができる。
【００５３】
主題の方法によって処置される「患者」又は「対象」は、ヒト又はヒト以外の対象のいずれかを意味し得る。
【００５４】
処置方法に関する主題の化合物の「有効量」とは、所望の投与計画の一部として適用される場合に、特定の障害を処置又は予防するために臨床的に許容される基準に従って効果を提供する、調合における治療薬の量を意味する。
【００５５】
ここで、特定的であるが限定するものではない、特定の組成物及び使用方法を記載している例を参照して、本発明をより詳細に記載する。しかし、特定の手順、組成物及び方法の詳細な説明は、単に本発明を例示する目的で含まれていることを理解されたい。決して、上述した発明概念の広範な説明に対する限定として理解すべてきではない。
【実施例】
【００５６】
実施例1
化合物の合成
合成の概要
VB0004の調製に使用した合成経路を図1に示す。簡単に説明すると、5-フェニルサルチルアルデヒド(10)は、5-ブロモサルチルアルデヒドとフェニルボロン酸の間のスズキクロスカップリング反応によって調製した。次いで、(N-フェニルトリフルイミドとマイクロ波照射を使用して)このフェノールを対応するアリールトリフレート(11)に変換し、これを3-(ベンジルオキシ)フェニルボロン酸との別のスズキ反応に供し、テルフェニルアルデヒド(12)を形成させた。アルデヒド(12)とホスホネート(F)の間のホーナー-ウォッズワース-エモンズ反応によってα,β-不飽和アミド(13)が得られ、続いてこれを還元してVB0004を形成させた。
【００５７】
ジエチルカルバモイルメチルホスホネート(F)は、2-クロロアセトアミドとトリエチルホスファイトの間のArbuzov反応により生成した(図2に示したように調製した)。
【００５８】
2-ヒドロキシ-5-フェニルベンズアルデヒド(10)の合成
アルゴン雰囲気下、周囲温度で2時間、5-ブロモサリチルアルデヒド(2.49g、12.4mmol)、フェニルボロン酸(1.51g、12.4mmol)、酢酸パラジウム(II)(14mg、0.5mol%)及び炭酸カリウム(5.14g、37.2mmol)を脱気水(75mL)中で撹拌した。この反応は、TLC(1:1のジクロロメタン/ペンタン)によってモニターした。水(75mL)を添加し、反応混合物を10%のHClで酸性化し(pH6)、次いで、酢酸エチルで抽出した(3回)。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで、乾燥濃縮した。粗製物質は、1:1のジクロロメタン/ペンタンで溶離させるシリカショートカラムを通過させ、次いで、酢酸エチル/ペンタンから再結晶化させ、2-ヒドロキシ-5-フェニルベンズアルデヒド(1.89g、77%)を濃い黄色の結晶体として得た(所望の場合、再結晶化の代わりに、ペンタンで摩砕することができる);mp 100〜101℃。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.99 (s, 1H); 9.97 (s, 1H); 7.78-7.73 (m, 2H); 7.56-7.52 (m, 2H); 7.47-7.41 (m, 2H); 7.37-7.32 (m, 1H); 7.09-7.04 (m, 1H).  13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 196.9, 161.2, 139.6, 136.0, 133.6, 132.1, 129.2, 127.6, 126.8, 121.0, 118.4.  EIMS: m/z 198 [M]+.  HRMS C13H10O2の計算値198.0675, 実測値198.0677。
【００５９】
3-ホルミルビフェニル-4-イル-トリフルオロメタンスルホネート(11)の合成
2-ヒドロキシ-5-フェニルベンズアルデヒド(100mg、0.50mmol)、N-フェニルトリフルイミド(180.0mg、0.51mmol)及び炭酸カリウム(209mg、1.51mmol)を密封チューブに入れた無水THF中で撹拌し、マイクロ波照射を使用し、6分間120℃で加熱した。溶媒を減圧下で除去した。水とジクロロメタンを添加し、層を分離させた。水層をさらにジクロロメタンで抽出した(2回)。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し(1回)、次いで、乾燥濃縮した。1:1のジクロロメタン/ペンタンで溶離するラジアルクロマトグラフィーによって精製し、3-ホルミルビフェニル-4-イル-トリフルオロメタンスルホネート(143mg、86%)を無色透明の油状物として得た。1H NMR (200MHz, CDCl3) δ 10.32 (s, 1H); 8.17 (d, 1H, J=2.4Hz); 7.89 (dd,1H, J=8.6, 2.5Hz); 7.63-7.36 (m, 6H). 13C NMR (125MHz, CDCL3) δ 186.5, 149.1, 142.3, 138.0, 134.1, 129.2, 129.1, 128.8, 128.6, 127.2, 122.9, 118.7 (q, JCF-=320.9Hz). 19F NMR (188MHz, CDCl3) δ -73.2. EIMS: m/z 330 [M]+. HRMS C14H9F3O2Sの計算値330.0168, 実測値330.0163。
【００６０】
2'-[3-ベンジルオキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]カルバルデヒド(12)の合成
3-ホルミルビフェニル-4-イル-トリフルオロメタンスルホネート(153mg、0.463mmol)、3-ベンジルオキシフェニルボロン酸(116mg、0.51mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(13mg、2.5mol%)及び無水リン酸カリウム(147mg、0.695mmol)をアルゴン雰囲気下でSchlenkフラスコに置いた。脱気した1,4-ジオキサン(2mL)を添加し、混合物にアルゴンをパージした。完全な変換が確認されるまで(GCMSによってモニターした)、反応混合物を85℃で加熱した。一般に、一晩の反応時間が必要であった。反応混合物をベンゼン(4mL)で希釈し、30%の水性過酸化水素(10mL)で処理した。生成物をジエチルエーテルで抽出し(3回)、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで、乾燥し、濃縮した。1:1のジクロロメタン/ペンタンで溶離するラジアルクロマトグラフィーによって精製し、2'-[3-ベンジルオキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]カルバルデヒド(122mg、72%)を無色透明の粘性油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.02 (s, 1H); 8.24 (dd, 1H, J=2.1, 0.3 Hz); 7.86 (dd, 1H, J=8.0, 2.1 Hz); 7.68-7.64 (m, 2H); 7.56-7.30 (m, 10H); 7.08-7.02 (m, 2H); 7.01-6.97 (m, 1H); 5.11 (s, 2H).  13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ192.6, 159.0, 144.8, 141.0, 139.7, 139.1, 136.9, 134.2, 132.2, 131.4, 129.8, 129.2, 128.9, 128.4, 128.2, 127.8, 127.3, 126.1, 123.2, 116.9, 114.9, 70.4.  EIMS: m/z 364 [M]+.  HRMS C26H20O2の計算値364.1458, 実測値364.1450。
【００６１】
2'-[3-ベンジルオキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]アクリルアミド(13)の合成
2'-[3-ベンジルオキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]カルバルデヒド(201mg、0.552mmol)及びジエチル(カルバモイルメチル)ホスホネート(108mg、0.55mmol)を無水THF(7mL)中に溶解し、粉末水酸化カリウム(62mg、1.10mmol)を含むTHF(2mL)の激しく撹拌した懸濁液にゆっくりと添加した。この反応は、TLC(1:1のジクロロメタン/ペンタン)によるモニタリングを行いながら、アルゴン雰囲気下で1時間、周囲温度で撹拌した。THFを減圧下で除去し、残留物を水中に取り、ジクロロメタンで抽出した(3回)。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し(1回)、次いで、乾燥させ、濃縮した。酢酸エチル/ペンタンからの再結晶化により、2'-[3-ベンジルオキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]アクリルアミド(137mg、61%)が薄い黄色の結晶体として得られた。mp 175〜176℃。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ7.95 (d, 1H, J=2.0 Hz); 7.78-7.22 (m, 3H); 7.55-7.31 (m, 12H); 7.17-7.07 (m, 2H); 6.99 (m, 1H); 6.92 (m, 1H); 6.79 (d, J=15.8 Hz, 1H); 5.16 (s, 2H).  13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ166.5, 158.3, 140.8, 140.7, 139.8, 139.4, 137.5, 137.0, 133.2, 130.9, 129.5, 129.1, 128.5, 127.9, 127.8, 127.8, 127.6, 126.8, 124.5, 123.8, 122.2, 115.9, 114.0, 69.4.  EIMS: m/z 405 [M]+.  HRMS C28H23NO2の計算値405.1723, 実測値405.1714。
【００６２】
2'-[3-ヒドロキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]プロパンアミド(VB0004)の合成
2'-[3-ベンジルオキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]アクリルアミド(740mg、1.82mmol)及び10%パラジウム炭素触媒(100mg)を水素雰囲気下で20時間、周囲温度で撹拌した。触媒は、ガラス繊維濾紙による濾過、続いてセライトによる濾過によって除去し、次いで、濃縮した。1:1のジクロロメタン/ペンタンで溶離するラジアルクロマトグラフィーによって、続いて酢酸エチル/ペンタンからの再結晶化によって精製し、2'-[3-ヒドロキシ-(1,1':4',1''-テルフェニル)]プロパンアミド(224mg、39%)を無色の結晶体として得た。mp 167.2〜168.9℃。1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ9.52 (s, 1H); 7.77-7.15 (m, 10H); 6.87-6.65 (m, 4H); 2.84 (m, 2H); 2.31 (m, 2H).  13C NMR (50 MHz, DMSO-d6) δ173.4, 157.1, 142.1, 140.6, 140.0, 139.1, 139.1, 130.2, 129.2, 128.9, 127.4, 127.2, 126.6, 124.1, 119.6, 115.8, 114.0, 36.2, 28.2.  EIMS: m/z 317 [M]+.  HRMS C21H19NO2の計算値317.1410, 実測値317.1411。
【００６３】
ジエチルカルバモイルメチルホスホネート(F)の合成
2-クロロアセトアミド(5.01g、53.6mmol)及びトリエチルホスファイト(9.19mL、53.6mmol)を3.5時間、o-キシレン(14mL)中で加熱還流した。溶媒を減圧下で除去し、濃い茶色のタール状残留物を得た。残留物をジクロロメタンに取り、シリカショートカラムを通して濾過した。濾液を濃縮し、固体を酢酸エチル/ペンタンから再結晶化し、ジエチルカルバモイルメチルホスホネート(3.42g、33%)を明るい茶色の結晶体として得た。1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ7.35 (br s, 1H); 7.02 (br s, 1H); 4.02 (dq, 4H, J=7.1 Hz, 3JPH=1.1 Hz); 2.80 (d, 2H, 2JPH =21.4 Hz); 1.23 (t, 6H, J=7.0 Hz).  13C NMR (50 MHz, DMSO-d6) δ166.0 (d, 2JCP=5.1 Hz); 61.5 (d, 2JCP=6.0 Hz); 34.5 (d, 1JCP=131.6 Hz); 16.2 (d, 3JCP=6.0 Hz).  31P NMR (81 MHz, DMSO-d6) 23.8.  ESIMS: m/z 218 [M+Na]+.  HRMS C6H14NO4Pの計算値195.0655, 実測値195.0653。
【００６４】
実施例2
インビトロでのスクリーニング
xCELLigence SPシステム(Roche)を使用して、VB0004でA10胚期血管平滑筋細胞(ATCC、CRL-1476)を処置した後の細胞インピーダンス(細胞指標)の変化を測定した。このインビトロアッセイは、下記の実施例3に記載の動物モデルにおいて得られた血圧データと相関しており、そのため、多数の化合物のより迅速なスクリーニングに使用することができる。このインビトロ細胞系の実験システムにおいて、負性インピーダンスプロファイルはラットにおける血圧低下と相関している。インピーダンスの低下は血管拡張と関連しており、インピーダンスの増加は血管収縮と関連している(Stallaert W, Dorn JF, van der Westhuizen E, Audet M & Bouvier M. Impedance responses revealβ-adrenergic signaling pluridensitometry and allow classification of ligands with distinct signalling profiles PLoS ONE 2012; 7(1):e29420, doi:10.1371/journal.pone.0029420)。
【００６５】
簡単に説明すると、細胞培養培地50μl(37℃の10%ウシ胎児血清を補充したDMEM低グルコース)をE-Plate 96(Roche)の各ウェルに加え、各ウェルのバックグラウンドインピーダンスを測定した。次いで、50μlのA-10細胞懸濁液(10,000細胞/ウェル)をE-Plate 96の適切なウェルに添加した。細胞指標は、細胞培養インキュベータ内のRTCA SPステーション内で、E-Plate 96の各ウェルについてモニターした。5%CO2及び95%湿度で16〜20時間、一晩インキュベーションした後、100μlのVB0004溶液(VB0004はDMSO中で調製し、0.25%の最終DMSO濃度まで細胞培養培地で希釈した)をE-Plate 96の適切なウェルに加え、化合物処置後直ちに、細胞指標値を3時間、20秒毎に測定した。細胞指標値は、ビヒクル処置した細胞の細胞指標を減算することによりベースライン補正を行い、化合物添加直前の時点における細胞指標で除算することにより正規化した。時間の関数としてのベースラインに正規化した細胞指標は、RocheのRTCAソフトウェアを使用してプロットされる。
【００６６】
化合物は、血管平滑筋細胞と相互作用し、これらの細胞を弛緩させて血管拡張及び血圧の低下をもたらすことによって血圧低下を達成することができる。これらは、直接血管拡張薬と呼ばれる。62.5μM、125μM及び250μM濃度のVB0004で処置したA10血管平滑筋細胞について観察された負性インピーダンス応答(図3)は、VB0004が直接血管拡張薬であることを示す。これらの結果は、10、100及び500pmol/kg/分のVB0004を用いて経口的に4週間処置した後の2.2%塩分食のSHRにおける平均収縮期血圧とよく相関している(図4及び下記参照)。
【００６７】
また、xCELLigence SPシステム(Roche)を使用して、試験化合物でウシ大動脈内皮細胞(European Collection of Cell Cultures)で処置した後の細胞インピーダンス(細胞指標)の変化も測定した。使用した方法は、10%の代わりに15%のウシ胎児血清を補充した細胞培養培地を用いる以外、上述のA10胚期血管平滑筋細胞に関するものと同様である。
【００６８】
化合物は血管内皮細胞と相互作用して物質、例えば、一酸化窒素及び内皮由来過分極因子の放出を引き起こし、次いで、それが血管平滑筋細胞に作用して血管拡張を引き起こし、血圧を低下させることができる。このような化合物は、間接血管拡張薬と呼ばれる。62.5μM、125μM及び250μM濃度のVB0004で処置したウシ大動脈内皮細胞について観察された負性インピーダンス応答(図5)は、VB0004が間接血管拡張薬でもあることを示す。
【００６９】
実施例3
インビボでのスクリーニング
経口試験
14週齢のSHR(2.2%塩分食;Glen Forrest Stockfeeders)を無作為に、ゼロ時間対照、飲用液中のVB0004処置(10、100、500、1,000及び2,500pmol/kg/分)又は対照飲用液(脱イオン蒸留水中5%エタノール)に割り当てた(各群n=5)。ゼロ時間対照群に割り当てられたラットに麻酔をかけ、それらの心臓と腎臓を回収した。一方、対照及びVB0004処置に割り当てられたラットは週に2回秤量し、それらの飲用液の摂取をモニターして、4、6又は8週間の試験期間にわたって一定の用量が維持されるように飲用液中のVB0004濃度を調整した。血圧は、テールカフ式(tail cuff)プレチスモグラフィーによって週に2回測定した(PowerLab, ADInstruments, Castle Hill, NSW, Australia)。4、6又は8週間後、ラットに麻酔をかけ、線維症定量のため、それらの心臓と腎臓を回収した。
【００７０】
静脈内投与
14週齢のSHR(2.2%塩分食;Glen Forrest Stockfeeders)を無作為に、ゼロ時間対照、VB0004輸液(10及び20pmol/kg/分)又はビヒクル(生理食塩水中20%DMSO、Baxter Healthcare, Sydney NSW Australia)輸液に割り当てた(各群n=5)。ラットに麻酔をかけ、ゼロ時間対照群に割り当てられたラットから心臓と腎臓を回収した。一方、VB0004輸液又はビヒクル輸液に割り当てられたラットには、VB0004又はビヒクルが入っているAlzet浸透圧ミニポンプ(Durect Corporation, Cupertino, CA, USA)に接続されているカニューレを腸骨静脈に挿入した。血圧は、テールカフ式(tail-cuff)プレチスモグラフィーによって週に2回測定した(PowerLab, ADInstruments, Castle Hill, NSW, Australia)。4週間後、ラットに再度麻酔をかけ、線維症定量のため、それらの心臓と腎臓を回収した。
【００７１】
線維症の定量
線維症を定量するため、厚さ3mm以下の組織切片を24時間10%緩衝ホルマリンで固着させ、処理し、パラフィンに包埋した。3ミクロンの横断切片は、マッソントリクローム染色法を使用して染色した。横断切片から倍率20倍で最低20種の無作為フィールド(それぞれ2レベルで5種)をデジタル化し、線維症の程度は、Image-Pro Plus V.5 (Media Cybernetics, Bethesda, MD, USA)を使用して、それぞれのデジタル画像のフィールド面積のパーセントとして決定し、次いで、それぞれのラットの組織に関する線維症のレベルを決定するために平均した。
【００７２】
結果
10、100及び500pmol/kg/分のVB0004で経口的に4週間処置した後の2.2%塩分食のSHRにおける平均収縮期血圧(mean systolic blood pressure)は、対照と比べ、血圧の低下を示した(図4)。
【００７３】
10及び20pmol/kg/分のVB0004の4週間の静脈内投与では、ビヒクル対照に比べ、SBPが20mmHg低下した(図6)。
【００７４】
10〜2,500pmol/kg/分のVB0004で経口的に4週間処置した2.2%塩分食のSHRにおける平均収縮期血圧は、対照と比べ、用量の増加とともに血圧の低下を示した(図7)。収縮期血圧は、平坦域に達することなく用量の増加とともに低下し続けるので、最高用量はまだ描かれていない。
【００７５】
2,500pmol/kg/分のVB0004で経口的に処置した2.2%塩分食のSHRにおける平均収縮期血圧は時間とともに低下し続け、この用量に関する最大の効果は8週間の治療後にまだ達成されていないことを示した(図8)。
【００７６】
2.2%塩分食の18週齢SHRにおける10〜500pmol/kg/分の用量のVB0004で4週間経口的に処置した後の心臓の線維症(斜線棒)は、2.2%塩分食のSHRにおける14週間及び18週間の対照での線維症(白色棒)と比べて減少した(図9)。
【００７７】
2.2%塩分食の18週齢SHRにおける10〜500pmol/kg/分の用量のVB0004で4週間経口的に処置した後の腎臓の線維症(斜線棒)は、2.2%塩分食のSHRにおける14週間及び18週間の対照での線維症(白色棒)と比べて減少した(図10)。
【００７８】
対照動物(2.2%塩分食の18週齢SHR)から得た心臓は、広範な線維組織(マッソントリクローム染色法において灰色に見える)を示したが、VB0004処置動物から得た心臓には、線維組織は実質的に存在しなかった(図11)。
【００７９】
対照動物(2.2%塩分食の18週齢SHR)から得た腎臓は、広範な線維組織(マッソントリクローム染色法において灰色に見える)を示したが、VB0004処置動物から得た腎臓には、線維組織は実質的に存在しなかった(図12)。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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