(57)【要約】  本発明は、Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−ｙＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、リジン残基のｙ−アミノ基は本願に開示されるキレート剤に結合している、の構造を有する組成物を使用した、腫瘍画像化のためのキットおよび当該キットを調製するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコヘプトナート、グリシン緩衝液、およびＨｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤であり、前記キレート剤は
【化１】
2016510342.tif 000007
である、の構造を有する化合物を含む凍結乾燥組成物を含むキット。
【請求項２】
キットが４℃で保存される、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
キットが−２０℃で保存される、請求項１に記載のキット。
【請求項４】
キットが２０μｇ〜２５０μｇの化合物を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項５】
キットが５０〜５００μｇのグルコヘプトナートを含む、請求項１に記載のキット。
【請求項６】
６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８９Ｚｒまたは９９ｍＴｃをさらに含む、請求項１に記載のキット。
【請求項７】
腫瘍画像化のためのキットを調製する方法であって、
（ａ）容器内において、グルコヘプトナート、グリシン緩衝液およびＨｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）（配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤であり、前記キレート剤は
【化２】
2016510342.tif 000008
である、の構造を有する化合物を組み合わせること、
（ｂ）  （ａ）の組み合わせを凍結すること、
（ｃ）  凍結した組み合わせを凍結乾燥すること、
（ｄ）  容器に滅菌窒素ガスを導入すること、
（ｅ）  容器に封をすること、
を含む、前記方法。
【請求項８】
容器を４℃で保管する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
容器を−２０℃で保管する、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）の組み合わせが、２０μｇ〜２５０μｇの化合物を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
容器が５０〜５００μｇのグルコヘプトナートを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤であり、前記キレート剤は、
【化３】
2016510342.tif 000009
である、の構造を有する化合物を含み、ここで前記化合物は基材に固定されているキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
緒言
本出願は、２０１３年２月１５日付の米国仮出願第61/765,312号の優先権の利益を主張し、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって与えられた契約番号CA 109231の下、政府の援助を受けてなされたものである。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
２０１１年に米国で実施された、およそ１６０万の乳房生検のうち、約２８８，１３０が乳癌（ＢＣ）と診断された（２３０，４８０の浸潤性（invasive）、および５７，６５０の非浸潤性（in situ））(DeSantis, et al. (2011) CA Cancer J. Clin. 61:409-418; Elter, et al. (2011) Med. Phys. 2007, 34(11):4164-4172)、しかし、これらの生検の１３０万よりも多くが良性と診断された。これらの癌を診断することは重要であるが、このプロセスにおいて実施される、多数の良性の生検は、有意な患者の病的状態および潜在的に無駄な医療費をもたらす。ＢＣを検出するために画像化様式における継続的な進歩が存在し、これは、デジタルマンモグラフィ、ＭＲＩ、ＣＴ、ＵＳ，Ｆ−１８−ＦＤＧおよびＴｃ−９９ｍセスタミビを含むが、これらの様式は全て特異性が限られ、全て多くの偽陽性および偽陰性の検査を生み出し続けている（Uematsu, et al. (2002) Breast Cancer 9:62-68; Berg, et al. (2004) Radiology 233:830-849; Ruibal, et al. (2008) Med. Clin. 130(9):332-333; Yang & Tse (2004) AJR Am. J. Roentgenol. 182:101-110; Elmore, et al. (2005) JAMA 293:1245-1256; Ghai, et al. (2005) AJR Am. J. Roentgenol. 185:481-487; Chagpar, et al. (2006) Ann. Surg. 243:257-264; Xu, et al. (2011) Nucl. Med. Comm. 32:980-988; Xue, et al. (2012) Eur. J. Surg. Oncol. 38(5):375-381）。コストを考えると、不要な良性の生検は、重大な医療負担を表している。悪性腫瘍を検出しながらも、不要な良性の生検の数を減少させる革新的なアプローチへの切迫した需要が存在する。
【０００４】
創薬のための最近のアプローチは、病気の起源および病気を制御する生物医学の経路を分子レベルで理解することに重点を置いている。以前の研究は、（血管作動性腸管および下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチドのために組み合わされた）ＶＰＡＣ１受容体が、ＢＣ細胞上に高密度で過剰発現していることを実証した（Reubi, et al. (2000) Cancer Res. 60(11):3105-3112）。ＶＰＡＣ１受容体は細胞増殖、細胞分化、ならびにＢＣ細胞の生存に関与するＧタンパク質をコードする。ストローマ、正常細胞、および良性のしこりにおいては、ほんのわずかなＶＰＡＣ１受容体が発現する(Reubi, et al. (2000) supra; Zia, et al. (1996) Cancer Res. 56(15):3486-89; Leyton, et al. (1999) Breast Canc. Res. Treat. 56(2):177-186; Moody & Gozes I (2007) Curr. Pharm. Des. 13(11):1099-1104; Valdehita, et al. (2010) Peptides 31(11):2035-2045; Valdehita, et al. (2012) Mol. Cell Endocrinol. 348(1):241-246)。
【０００５】
ＶＰＡＣ１受容体に対して高い親和性を有する放射性標識された生体分子が開発され、前臨床設定において分析されている（Chakder & Rattan (1993) J. Pharm. Expt. Therapeut. 266:392-399; Thakur, et al. (2000) J. Nucl. Med. 41:107-110; Pallela, et al. (1999) J. Nucl. Med. 40(2):352-360; Kolan, et al. (1997) J. Label. Comp. Radiopharmaceut. 40:455-457; Thakur, et al. (2004) J. Nucl. Med. 45:1381-1389; Zhang, et al. (2007) Reg. Peptides 144:91-100; Thakur (2009) Semin. Nucl. Med. 39:236-246; Thakur, et al. (2010) J. Nucl. Med. 51:106-111; Zhang, et al. (2008) J. Nucl. Med. 49:112-121; US 6,855,308）。ＶＰＡＣ１受容体に対するそれらの高い親和性に基づいて、Ｔｃ９９ｍ（ｔ１／２−６時間、γ−１４０ｋｅＶ）で放射性標識することにより修飾されたペプチド構成物が生成され、受容体親和性（Ｋｄ）、受容体特異性、in vivo安定性および組織分布が評価された(Thakur, et al. (2000) supra; Pallela, et al. (1999) supra; Kolan, et al. (1997) supra; Thakur, et al. (2004) supra; Zhang, et al. (2007) supra; Thakur (2009) supra; Thakur, et al. (2010) supra; Zhang, et al. (2008) supra)。さらに、キレート剤としてＮ２Ｓ２での陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）のために、Ｃｕ−６４（ｔ１／２−１２．８時間）を放出するβ＋（１９％、６５６ｋｅＶ）でペプチドを標識した。Ｋｄ値、Ｔ４７ＤヒトＢＣを保有する無胸腺ヌードマウスにおける組織分布研究、受容体阻害研究、受容体親和性、およびin vivo安定性を調べた(Thakur, et al.(2004) supra; Zhang, et al. (2007) supra; Thakur (2009) supra; Thakur, et al. (2010) supra; Zhang, et al. (2008) supra)。生成された化合物のうち、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５は、無胸腺ヌードマウスにおいて全ての異種移植したヒトＢＣを画像化しただけではなく、この化合物は、ＭＭＴＶｎｅｕマウス（ｎ＝９）において、全て（ｎ＝８）の自然発生的に増殖したＢＣ（可視５、不可視１、および転移２）病変の位置の特定もした（Thakur, et al. (2010) supra）。さらにＣｕ−６４−ＴＰ３８０５ＰＥＴ画像は、無視できるほどのＶＰＡＣ１受容体の発現を有していた２つの病変に対して正常であった。８つの悪性病変は細胞学によって確認され、ＲＴ−ＰＣＲによって判断されたように、ＶＰＡＣ１受容体を発現した（Thakur, et al. (2010) supra）。この分析に基づいて、この化合物は、乳癌の診断において有用である。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、腫瘍画像化のためのキットを提供する。一態様において、この発明のキットは、グルコヘプトナート、グリシン緩衝液、およびＨｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤であり、前記キレート剤は
【化１】
2016510342.tif 000002
である、
の構造を有する化合物を含む凍結乾燥組成物で構成される。
いくつかの態様において、キットは４℃で保存される。他の態様において、キットは−２０℃で保存される。さらなる態様において、キットは、２０〜２５０μｇの当該化合物、５０〜５００μｇのグルコヘプトナート、および任意に６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８９Ｚｒまたは９９ｍＴｃを含む。当該キットを調製するための方法もまた提供される。
【０００７】
他の態様において、本発明のキットは、Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤である、の構造を有する化合物で構成され、ここで前記化合物は基材に固定されている。
【０００８】
本発明の詳細な説明
Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５が、ヒト乳癌患者における原発腫瘍を画像化することができることが今示された。分析された２０の腫瘍のうち、全ての病原が悪性であった。加えて、全身陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）／コンピューター制御断層撮影（ＣＴ）画像化において、４つはセンチネンタルリンパ節（１人の患者において２つ、他の２人の患者において１つずつ）に関与し、明確に線引きされた。この研究において、注目すべき他の２つの観察がなされた。第１は、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５の取り込みが速い、すなわち、注射後１５分であった。したがって、６８分の半寿命であり、発生器により生成されるＧａ−６８も用いることができる。Ｇａ−６８の陽電子放出は、Ｃｕ−６４のそれよりも４倍以上大きい８８％である。これは、画像品質を損なうこと、また、被験者への放射線負荷をかなり低下させる、１５０ＭＢｑ未満（〜４ｍＣｉ）のＧａ−６８８の投与を可能にする。いずれの場合においても、画像は、患者の空腹または血糖レベルの監視を必要とせず、注射後１５分で得ることができる。
【０００９】
第２に、注射後１５分での陽電子放出マンモグラフィ（ＰＥＭ）の取り込み値は、画像化後５時間まで変化しないことが観察された。これは、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５を、その化学的性質や調製手順を変更することなく、治療剤として使用することができることを示す。銅−６７は２．４４日の半減期のβ−（１００％）放出体であり、治療的に重要な放射性核種として考えられている（Knogler, et al. (2007) Clin. Cancer Res. 13:603-611）。
【００１０】
したがって、本発明は、腫瘍画像化のためのキットおよびかかるキットを調製するための方法を提供する。この発明にしたがって、腫瘍画像化、特に乳癌腫瘍画像化のためのキットは、グルコヘプトナート、グリシン緩衝液、およびＨｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤であり、前記キレート剤は、
【化２】
2016510342.tif 000003
である、
の構造を有する画像化化合物の混合物から構成される組成物を含む。
【００１１】
代替えとして、本発明における使用に適した他のキレート剤は、直鎖状、環状および分枝状のポリアミノポリカルボン酸およびそれらのリンオキシ等価物、例えば、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ジエチレン−トリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）；１，４，７，１０−テトラアゾシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）；１，４，７，１０−テトラアゾ−シクロドデカン−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−三酢酸（ＤＯ３Ａ）；１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−三酢酸（ＯＴＴＡ）；ｔｒａｎｓ（１，２）−シクロヘキサノジエチレン−トリアミン−五酢酸（ＣＤＴＰＡ）；１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカントリア酢酸（ＤＯＸＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）；および１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン四酢酸（ＴＥＴＡ）を含む。
【００１２】
グルコヘプトナートおよびグリシン緩衝液は、それぞれ商業的供給源から入手し、さらに精製することなく使用することができる。いくつかの態様において、キットは、ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、例えば２０および１００μｇの間のＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏをさらに含む。他の態様において、キットは、２５および５００μｇの間のＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、または５０および２００μｇの間のＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含む。特定の態様において、キットは１００μｇのＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含む。同様に、いくつかの態様において、キットは１０および５００μｇの間のグルコヘプトナート、５０および５００μｇの間のグルコヘプトナート、またはより特に、１００μｇグルコヘプトナートを含む。グリシン緩衝液は従来の方法を用いて調製することができ、好ましくは、５〜９、より好ましくは６〜９、または最も好ましくは７〜９の範囲のｐＨを有する。
【００１３】
画像化合物は、従来の化学合成方法を用いて、本明細書に記載されるように調製することができる。いくつかの態様において、キットは、５および５００μｇの間の画像化化合物を含有する。他の態様において、キットは、１０および１００μｇの間の画像化化合物を含有する。特定の態様において、キットは２０および２５０μｇの画像化化合物を含有する。
【００１４】
望ましくは、キットの組成物の成分は滅菌であり、無菌条件下で組み合わされ、容器（例えば、セプタムで封がされた（septum-sealed）バイアル）に提供される。
【００１５】
特定の態様において、キットは放射性核種、例えば、陽電子放出核種を含む。一態様において、放射性核種は６４Ｃｕである。他の態様において、放射性核種は６８Ｇａである。他の態様において、放射性核種は８９Ｚｒまたは９９ｍＴｃである。
【００１６】
上記で参照した成分に加えて、キットは、放射線防護剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤または充填剤などの追加の成分を任意でさらに含んでもよい。用語「放射線防護剤」とは、水の放射線分解から生じる含酸素遊離基のような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元プロセスなどの分解反応を阻害する化合物を意味する。用語「抗菌保存剤」とは、細菌、酵母またはカビなどの潜在的に有害な微生物の増殖を阻害する剤を意味する。抗菌保存剤はまた、用量に応じて、ある程度の殺菌作用を示してもよい。本発明の抗菌保存剤（単数または複数）の主な役割は、再構成後の画像化組成物、すなわち画像化生成物自体における、かかる微生物のいずれの増殖も阻害することである。しかし、抗菌保存剤は、再構成の前に、本発明のキットの１または２以上の成分における潜在的に有害な微生物の増殖を阻害するために任意に用いてもよい。適した抗菌保存剤は、パラベン（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチルパラベン、またはこれらの混合物）；ベンジルアルコール；フェノール；クレゾール；およびセトリミドを含む。用語「充填剤」とは、製造および凍結乾燥の間において、材料の取扱いを容易にすることができる増量剤を意味する。適した充填剤は、塩化ナトリウムなどの無機塩、およびスクロース、マルトース、マンニトールまたはトレハロースなどの水溶性の糖類または糖アルコールを含む。
【００１７】
本発明の代替の態様において、キットは、例えば、ペトリ皿、試験ウェル、マイクロタイタープレート、試験管、試料パッド、テストストリップ、ビーズなどの基材に接着、付着、または固定した、本明細書において記載した画像化化合物を含有する。天然、合成、または合成的に修飾された、天然に存在する材料を基材として使用することができ、これらに限定されないが、紙、セルロース、ならびに酢酸セルロースおよびニトロセルロースなどのセルロース誘導体などのセルロース材料；ガラス繊維；布、天然に存在する（例えば、綿）、および合成（例えば、ナイロン）の両方；シリカゲル、アガロース、デキストラン、およびゼラチンなどの多孔質ゲル；多孔性繊維マトリックス；SEPHADEXブランドの架橋デキストラン鎖などの澱粉ベースの材料；セラミック材料；ポリ塩化ビニルおよびポリ塩化ビニル-シリカの組み合わせのフィルム；ポリスチレン、ポリメチルアクリレート、ポリアクリルアミド、ポリプロピレン、ラテックス、ポリテトラフルオロエチレン、ポリアクリロニトリル、ポリカーボネート、ガラスまたは類似の材料から構成されるビーズ；および同様のものを含む。他の有用な基材は、磁性または常磁性の粒子である。
【００１８】
インスタントキットの基材は、単純な化学反応により、例えば、従来のジスルフィド、チオエーテルまたはチオール-マレイミドリンケージを介して、またはＣ末端カルボン酸を通じたアミドリンケージを介して、画像化化合物に結合することができる、化学的に活性な基を含むように誘導体化することができる。
【００１９】
基材は、検出可能なシグナルの生成を妨げるべきではなく、分析される生体試料、例えば血液、血漿、尿、痰、膣液、吸引組織試料などと相性が良いべきである。基材は、合理的な固有の強度を有するべきであり、または強度は補助支持を用いて提供され得る。
【００２０】
基材の特定の寸法は、関与する試験試料のサイズ、分析プロトコル、シグナルの検出および測定のための手段などに依存する利便性の問題となる。
【００２１】
本発明のキットは、画像化剤を含有する組成物を再構成すること、放射性核種で画像化化合物を放射性標識すること、組成物を対象に投与すること、および結果を解釈することの１または２以上のための指示書をさらに含むことができる。さらに、キットは、癌を有する組織および有さない組織の標識の写真の例を含むことができる。
【００２２】
本発明のキットは、例えば、本明細書において例示されるように、容器内において、グルコヘプトナート、グリシン緩衝液、および画像化化合物を組み合わせ；試薬の組み合わせを凍結し；凍結した組み合わせを凍結乾燥し、容器に滅菌窒素ガスを導入し、容器に封をし、容器を４℃以下の温度で保存することにより、調製することができる。一態様において、容器を４℃で保存する。他の態様において、容器を−２０℃で保存する。
【００２３】
本発明を、以下の実施例においてさらに説明するが、これらは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
【００２４】
例１：材料および方法
ＴＰ３８０５合成およびキット調製。簡単に説明すると、ＡＢＩ  ３４１Ａペプチド合成剤を用いて、Ｗａｎｇ樹脂（Applied Biosystems, Foster City, CA）上に、Ｃ末端ジアミノジチオール（Ｎ２Ｓ２）キレート剤を有するＰＡＣＡＰアナログを合成した（Thakur (2009) supra; Thakur, et al. (2010) supra; Zhang, et al. (2008) supra; Anderson, et al. (2001) J. Nucl. Med. 42(2):213-221; Lewis, et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. 98(3):1206-1211）。まずＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）をペプチドのＣ末端に、次いで４−アミノ酪酸（γ−Ａｂａ）を導入した。そして２７アミノ酸長のＰＡＣＡＰ配列を、ｔ−Ｂｏｃで保護されたＨｉｓ（Ｔｒｔ）誘導体である最終的なヒスチジル残基との標準的なＦｍｏｃカップリングによって構築した。キャップングｔ−Ｂｏｃ機能は、Ｃ末端リジンのγアミノ基に実行される後続の脱保護およびカップリングサイクルの間に、Ｎ末端アミノ基が保護されたままであることを確実にするために必要であった。そして、Ｃ末端のｉｖＤｄｅ基は、２％ヒドラジンで選択的に除去され、ジ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−ジアミノプロピオン酸、およびＳ−ベンゾイルチオグリコール酸の連続添加が続く。結果として得られる保護されたジアミンジチオール（ＮＳ−ベンゾイル）２−含有ＰＡＣＡＰペプチドを、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水：フェノール：チオアニソール／エタン（８２．５：５：５：５：２．５）を用いて樹脂から切断し、ジエチルエーテルで沈殿させた。
【００２５】
粗ペプチドを、ＶＹＤＡＣ  Ｃ４カラム（５μｍ、１０ｍｍ×２５０ｍｍ）上での逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Waters, Milford, MA）によって均質になるまで精製した。アナログキレート剤構成物の質量を、エレクトロスプレー質量分析によって確認した。一般的な合成スキームに従って、American Peptide Company, Sunnyvale, CA によって、ＴＰ３８０５を調製、精製、および特徴づけた。
【００２６】
ラミナーフローフード内でキットを無菌的に調整した。１０ｍｌガラスバイアル、ゴムキャップおよびアルミシールキャップを含む、全ての試薬を滅菌した。全ての試薬は分析グレードであり、Fisher Scientific, Inc.（Fair Lawn, NJ）から入手し、さらに精製することなく使用した。添加した試薬は、１００μｇグルコノペプトン（５０ｍｇ／ｍｌ、Ｈ２０）を含有するＳｎＣｌ２・２Ｈ２０（１０ｍｇ／ｍｌ、０．０５ＭのＨＣｌ）、２０μｇのＴＰ３８０５（１０ｍｇ／ｍｌ、および０．１Ｍの酢酸Ｎａ緩衝液，ｐＨ−５）および２００μｌの０．２Ｍグリシン緩衝液ｐＨ−９であった。バイアルをアセトン／ドライアイス浴中に置くことによって、混合物を急速に凍結した。そしてバイアルを４時間凍結乾燥させた（Genevac SF50; Genevac, Berkshire, England）。凍結乾燥の後、滅菌Ｎ２ガスをチャンバ内に導入し、バイアルに封をし、ラベルを付し、使用するまで４℃で保存した。キットの安定性は、ＨＰＬＣで、およびＣｕ−６４で標識される能力によって確認した。
【００２７】
Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５の調製。調製の日に、キットバイアルを取り出し、室温にした。必要な品質のＣｕ−６４溶液（Washington University, St. Louis, MO）をバイアルに添加し（通常＜２０μｌの０．１ＭのＨＣｌにおいて６ｍＣｉ）、次いで２００μｌの滅菌水を添加した。そして、バイアルを５０℃で９０分間インキュベートした。そして、２ｍｌ滅菌０．９％ＮａＣｌの添加により、溶液を希釈した。
【００２８】
反応混合物を、逆マイクロボンドカラム（Varian, Inc.）で、０．１％水性ＴＦＡ中の１０％アセトニトリルから、０．１％水性ＴＦＡ中の９０％アセトニトリルへの直線、２８分間の勾配で溶出して、ＨＰＬＣで分析した。９５％以上の標識効率をキット安定性のための基準として考えた。これは、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５の比活性が４４．４ＧＢｑ（１．２Ｃｉ）／μｍｏｌであることとする。
【００２９】
滅菌試験。バイアルから、滅菌シリンジに採取し、キャリブレーションイオンチャンバCRC-15R（Capintec Inc., Ramsey, NJ）において患者の注射のために必要な活性を測定した。およそ１００μｌの溶液を１０ｍｌトリプシン大豆ブロス（ＴＳＢ）へ添加し、７日間、加湿した５％ＣＯ２インキュベーターにおいて３７℃でインキュベートした。濁度または微生物の増殖を検出するために、試験管を７日間毎日観察した。
【００３０】
患者インクルージョン、線量および画像化。１８歳以上、新たに診断された、組織学的に証明されたＢＣの、白色人種、ヒスパニック系、アフリカ系アメリカ人またはアジア人の非妊娠女性を参加させた。この画像化手順の２〜６週間前に、画像誘導経皮的生検を行った。各患者は、インフォームドコンセントフォームに署名をした。この実行可能性の研究のために、生物統計学者は、６人の患者をＰＥＴで、１３人をＰＥＭで研究することを決定した。この決定は、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５が８０％の病変を検出し、ＢＣを診断するためのこの剤の使用に結論を下す８７％の能力があるとの仮定に基づいている。
【００３１】
各患者は、Ｆ−１８−ＦＤＧ注射の前に６時間絶食した。Ｆ−１８−ＦＤＧ注射の前に、血糖値をモニターした。血糖値が２５０ｍｇ／ＤＬよりも低い患者を参加させた。そして各患者は、３７０ＭＢｑ（１０ｍＣｉ）のＦ−１８−ＦＤＧを留置静脈カテーテルを通して受け、１時間後、ＰＥＴまたはＰＥＭスキャンを受けた。仰臥位での２分間の就床時間でＢｉｏｇｒａｐｈ−６  ＰＥＴ／ＣＴスキャナ（Siemens, Inc. Knoxville, TN）を使用してＰＥＴ／ＣＴ画像を得た。
【００３２】
Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５画像化のために、患者は絶食しておらず、血糖値も判断していない。２人の患者は、１１１±１０％ＭＢｑ（３±１０％ｍＣｉ）のＣｕ−６４−ＴＰ３８０５を受け、２人の患者は、１２７．５±１０％ＭＢｑ（３．５ｍＣｉ±１０％ＭＢｑ）を受け、残りの２人の患者は１４８±１０％ＭＢｑ（４±１０％ｍＣｉ）を受け、ここで、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５は、Ｆ−１８−ＦＤＧスキャンの後２〜３０日静脈内注射された。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５全身スキャンのために、就床時間は４分であり、注射から２時間後および４時間後において画像を得た。
【００３３】
ＰＥＴ画像化のために、各患者は１４８±１０％ＭＢｑ（４±１０％ｍＣｉ）Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５を静脈内に留置静脈カテーテルを通して受けた。ＭＬＯおよびＣＣ位置において両方の乳房に関して１つのビュー毎に１０分間で画像を得た。注射から、１５分後、１時間後、２時間後および４時間〜５時間後にデータを収集した。ＰＥＴ／ＣＴおよびＰＥＭ患者のそれぞれについて、注射前、および注射後４時間まで３０分毎にバイタルサインをモニターした。注射の終了時に、シリンジおよび管を５ｍｌの０．９％ＮａＣｌで流し、そして、残りの放射活性を測定した。ＰＥＭ研究の過程の間、患者は望んだ場合に、飲食が許された。
【００３４】
画像解析。全ての画像を有資格者の核医学医師２人および有資格者の乳房画像化医師が読み取った。画像分析は、核医学の仲間によって行われた。ＰＥＴ／ＣＴの６人の患者について、原発腫瘍部および転移性リンパ節に関して標準化取込値（ＳＵＶ）を計算し、それぞれの放射性トレーサーについて比較した。ＳＵＶと比較して、比較適用バラメーターであるため、５０％等高線幾何学的方法を用いて、代謝腫瘍体積を計算した。
【００３５】
ＰＥＭスキャンの１３人の患者については、ＰＥＭ取込値（ＰＵＶ）および代謝腫瘍体積を比較のために計算した。各放射性トレーサーでＰＥＭ取込値／背景強度（ＰＵＶ／ＢＧＶ）比も計算して、評価のために比較した。
【００３６】
例２：結果
Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５、放射化学的純度および滅菌状態。全てのＣｕ−６４−ＴＰ３８０５調製物に関して、放射化学的純度をＨＰＬＣによって判断し、９７±２％が平均であった。さらなる放射化学精製は行わなかった。調製物の比活性は、平均４４．４ＧＢｑ（１．２Ｃｉ）／μｍｏｌであった。全ての調製物は滅菌であった。シリンジおよび静脈ラインに残存する全放射能は、５．５ＭＢｑ（１５０μＣｉ）未満であった。
【００３７】
患者集団。全ての患者は、彼らが同意した連続した順序で採用した。いずれの患者も、ＢＣのためのいずれの形態の治療も受けていなかった。６人のＰＥＴ／ＣＴ患者の平均年齢は、４８．７±６．２歳（４２〜５９歳の範囲）であった。１３人のＰＥＭ患者の平均年齢は、５４±１４．２歳（２６〜８０歳の範囲）であった。合計１９人の患者のうち、数分以内のいずれかの薬なしで解決されるフラッシング感を２人の患者が経験した。患者の人口統計学的データを表１に、各患者に関する臨床結果を表２に示す。
【表１】
2016510342.tif 000004
【表２】
2016510342.tif 000005
【００３８】
画像解析。全身ＰＥＴ／ＣＴ群において、全ての６人の患者は、組織学的に証明された浸潤性乳管癌（ＩＤＣ）を有していた。これらのうち５人がＥＲ＋であり、１人がＥＲ−であり、５人がＰＲ＋であり、１人がＰＲ−であり、２人がＨＥＲ２＋であり、４人がＨＥＲ２−であった。彼らが受けたＣｕ−６４−ＴＰ３８０５の量に関係なく、これらの患者のそれぞれに関して画質は優れていた。これらの患者の中で、合計で１０の病変がＦ−１８−ＦＤＧおよびＣｕ−６４−ＴＰ３８０５の両方によって検出された。これらの１０の病変のうち、６つが原発であり（各患者に１つの病変）、４つがリンパ節に関与していた（１人の患者に１つの病変、および他の２人に１つずつ）。
【００３９】
１３人の患者のＰＥＭ群において、１０人の患者が、組織学的に証明されたＩＤＣを有し、２人が浸潤性小葉癌（ＩＬｏＣ）を有し、１人が浸潤性乳頭癌（ＩＰａＣ）を有していた。これらのうち、１３人全てがＥＲ＋であり、誰もＥＲ−ではなかった。８人の患者がＰＲ＋病変を有し、５人がＰＲ−を有していた。これらのうち２人がＨＥＲ２＋であり、７人がＨＥＲ２−であり、４人に関しては、ＨＥＲ２状態は判断されなかった。ＩＬｏＣを有する１人の患者が、２つの別個の病変を有していた（表１）。
【００４０】
表２に示すように、Ｆ−１８−ＦＤＧスキャンによって判断した、これらの６人の患者の原発腫瘍体積は、１１３ｍｍ３〜６０８４ｍｍ３の範囲であった。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５スキャンによって判断した、対応する腫瘍体積範囲は、１１３ｍｍ３〜５３２３ｍｍ３の範囲であった。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５腫瘍体積は、Ｆ−１８−ＦＤＧのそれの９０．６±１６．１％であった。４つの節に関するＦ−１８ＦＤＧリンパ節体積は、２８ｍｍ３〜５０９ｍｍ３であり、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５のそれは、２８ｍｍ３〜４０２ｍｍ３であった。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５によって判断された節体積は、Ｆ−１８−ＦＤＧスキャンによって見出されたそれの８６．２±９．２％であった。
【００４１】
全ての６つの原発病変および４つの悪性リンパ節はＣｕ−６４−ＴＰ３８０５によって一義的に検出された。６つの原発病変についてのＦ−１８−ＦＤＧ  ＳＵＶ（最大）値は、１．７５〜１２．８の範囲であり、悪性リンパ節については１．８から１１．０であった。対応するＣｕ−６４−ＴＰ３８０５値は、原発病変について１．９から１１．８であり、リンパ節については２．４〜４．９であった。原発病変についてのＣｕ−６４−ＴＰ３８０５  ＳＵＶ（最大）値は、Ｆ１８−ＦＤＧ  ＳＵＶ（最大）のそれの９２±２６．４％であった。悪性リンパ節についてのＣｕ−６４−ＴＰ３８０５  ＳＵＶ（最大）値は、Ｆ−１８−ＦＤＧについてのそれらの８９．８±２７％であった。
【００４２】
全身画像はＣｕ−６４−ＴＰ３８０５の肝臓取込を明らかにした。これは定量化しなかった。この取込の正確な性質は不明であるが、前臨床データは、肝臓取込は２５．４±１．７４％であり、そのうち活性の６０％近くがＴＰ３８０５と同じ分子量を有することを示した。前臨床データは、活性の７．５％が注射後２４時間以内の糞便中に排出されたことも示した（Thakur, et al. (2010) supra）。
【００４３】
１３人のＰＥＭ患者について、１４の原発病変（１人の患者において２つ）が存在し、これらは全てＣｕ−６４−ＴＰ３８０５によって一義的に線引きされた。Ｆ−１８−ＦＤＧスキャンによって判断された腫瘍体積は、１４１ｍｍ３〜３８１８ｍｍ３の範囲であった。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５から計算された腫瘍体積の範囲は９８ｍｍ３〜６９１２ｍｍ３であった。これはＦ−１８−ＦＤＧ値の１１３±３７％であった。
【００４４】
ＰＥＭ画像化において、腫瘍の取込値は、ＰＥＭ取込値（ＰＵＶ）のＰＥＭバックグラウンド値に対する比率として判断した。Ｆ−１８−ＦＤＧについてのこれらの比率は、２．６〜１１．６の範囲であり、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５についてのこれらは、２．７〜１１．８である。これはＦ−１８−ＦＤＧ値の９７．７±２４．５％である。
【００４５】
これらのデータは、ＢＣの患者の臨床応用のためのＣｕ−６４−ＴＰ３８０５プローブの有用性を確立した。ＰＥＭ画像化において観察されたＣｕ−６４−ＴＰ３８０５腫瘍取込は急速であった。１５分のＰＥＭ画像から計算されたＰＵＶ値は、注射から４時間〜５時間後における最後の画像と比較して一定に保たれた。設計によって、１９人（６人＋１３人）全てによって受け入れられたＣｕ−６４−ＴＰ３８０５は、１０７．３ＭＢｑ〜１６２．８ＭＢｑであった。Ｃｕ−６４の陽電子放出は、Ｆ−１８−ＦＤＧについての９７％と比較して、たった１９％であることを考慮すると、効果的なＣｕ−６４−ＴＰ３８０５線量は、２１ＭＢｑ〜３３ＭＢｑの範囲であり、Ｆ−１８−ＦＤＧのそれの１０分の１よりも少ない。この少量のトレーサーにもかかわらず、ＰＥＴ／ＣＴ画像およびＰＥＭ画像の両方に関して、Ｃｕ６４−ＴＰ３８０５画質は優れていた。悪性リンパ節（ｎ＝４）を含む、全ての悪性病変（ｎ＝２０）は、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５によって明確に線引きされた。
【００４６】
Ｆ−１８−ＦＤＧの使用は、定性的および定量的なＣｕ−６４−ＴＰ３８０５の有用性の直接的な比較を提供した。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５はＶＰＡＣ１受容体を標的とするので、ＳＵＶまたはＰＵＶは、これらのＢＣ病変のホルモン状態とは無関係であった。
【００４７】
化学的および放射毒性。Ｃｕ−６４は急速にβ＋放射性核種を出す。これはＰＥＴ画像化のためにヒトに使用される（Anderson, et al. (2001) supra; Lewis, et al. (2001) supra; Pfeifer, et al. (2012) J. Nucl. Med. 53(8):1207-1215）。Ｃｕ−６４は１２．８時間のｔ１／２を有し、これは国中に送り出すために十分に長いが、画像化の後に患者に過度の放射線量を送達するほどは長くない。ＣＵ−６４は、小さなサイクロトロンで大量生産され、その化学的性質はよく知られている。本明細書におけるＰＥＧ研究において、１３人の患者は３．８７±０．２％ｍＣｉを受け、全身に２．５２ｍＳｖ、肝臓（標的臓器）に３６．５ｍＳｖの推定線量を受けた。以下の表３は、１９７０年以来、ヒトに用いられた他の乳癌（ＢＣ）画像化剤、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５、ＡＣＲＩＮ研究（ACRIN 6682, Phase II Trial 2012）およびＧａ−６７のデータを示す。データは、Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５の放射毒性が十分に確立されたラジオトレーサーおよびＡＣＲＩＮ−促進Ｃｕ−６４−ＡＴＳＭによって誘発されるよりも小さいことを示す。
【表３】
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【００４８】
本明細書において用いられたＣＵ−６４線量の＞６倍である金属イオンは、毒性がないことが実証されている（Lewis, et al. (2008) supra）。さらに、減衰Ｃｕ６４−ＴＰ３８０５の１，０００×線量（体重に対して調整）を受けたウサギにおけるデータは、上昇したｃ−ＡＭＰ、改変された血液化学または肝臓酵素における変更を示さなかった。Ｃｕ−６４−ＴＰ３８０５を受けた１９人の患者のいずれにおいても、毒性は観察されなかった。
【００４９】
例３：凍結乾燥キットの調製
試薬。脱酸素および滅菌Ｈ２Ｏを、４００ｍｌ−脱イオン化Ｈ２Ｏを５００ｍｌビーカーに入れ、０．２−ミクロンろ過した窒素で５分間フラッシュすることにより調製した。水を続けて清潔な滅菌５００ｍｌガラスボトルに移し、封をして、オートクレーブにかけた。水を室温まで冷却し、４℃で保存した。
【００５０】
（６４Ｃｕの希釈のために使用される）脱酸素０．１ＮのＨＣｌを、９０ｍｌの脱酸素Ｈ２Ｏを、１０ｍｌの１ＮのＨＣｌと混合し、６０分間０．２ミクロンろ過した窒素で混合物をフラッシュすることによって調製した。
【００５１】
（体積を埋めるためにトレース標識のために使用される）脱酸素０．９％ＮａＣｌを、１００ｍｌ脱酸素Ｈ２Ｏを９００ｍｇＮａＣｌと混合し、溶液を０．２ミクロンろ過した窒素で６０分間フラッシュすることにより調製した。
【００５２】
ＮａＯＨ（１．０Ｎ）を、９ｍｌ脱酸素Ｈ２Ｏを１ｍｌの１０ＮのＮａＯＨと混合することにより調製した。
【００５３】
酢酸緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ４．６）を、２５．５ｍｌの０．２Ｍ酢酸溶液（１００ｍｌ脱酸素Ｈ２Ｏ中１．１５５ｍｌ）を２．４５ｍｌの０．２Ｍ酢酸ナトリウム溶液（１００ｍｌの脱酸素Ｈ２Ｏ中２．７２ｇのＣ２Ｈ３Ｏ２Ｎａ・３Ｈ２Ｏ）と混合し、脱酸素Ｈ２Ｏを使用して混合物を合計１００ｍｌに希釈し、０．２ミクロンろ過した窒素で６０分間フラッシュすることにより調製した。
【００５４】
スズＩＩ塩化物・２Ｈ２Ｏ（９８％）はＡＣＳグレードであり、グリシン（９８．５＋％）はＡＣＳグレードであり、グルコン酸（ナトリウム塩、９９％）はＡＣＳグレードであった。
【００５５】
すべてのガラス製品は、洗浄し、脱イオン水ですすぎ、オーブンで１００℃で２時間焼成し、続けてオートクレーブで滅菌した。グリシン（１．５０１４グラム）を１００ｍｌデオキシ水に添加し、混合して溶解した。グリシン溶液を１５０ｍｌガラスビーカーに移し、１ＮのＮａＯＨ（〜１．５ｍｌ）でｐＨを９．０に調整し、０．２ＭのｐＨ９．０グリシン緩衝液を作った。グリシン緩衝液を０．２ミクロンろ過した窒素で２０分間フラッシュし、０．２ミクロンフィルターでろ過した。２００μｌアリコートをバイアルに移した。
【００５６】
１ｍｌデオキシ水に５０ｍｇグルコヘプトンを添加した。溶液を０．２ミクロンろ過した窒素で５分間フラッシュした。４００μｌグリコヘプトン溶液に、４００μｌ０．０５Ｍ塩酸中の４ｍｇスズＩＩ塩化物・２Ｈ２Ｏを添加した。混合物を０．２ミクロンフィルターでろ過し、４０μｌアリコートを、グリシン緩衝液を含有するバイアルに移した。
【００５７】
１ｍｌ滅菌０．２ＭｐＨ４．６酢酸緩衝液に、５ｍｇペプチド（ＴＰ３８０５）を添加し、５ｍｇ／ｍｌの濃度にした。この溶液から、４μｌ（２０μｇ）ペプチド（ＴＰ３８０５）を、グリシン緩衝液、スズ塩化物および酢酸緩衝液を含有するバイアルに移した。
【００５８】
バイアル中の溶液をドライアイスで急速に凍結し、続けて凍結乾燥機で乾燥した（〜６から８時間）。最後に、凍結乾燥機のチャンバに窒素をフラッシュした。バイアルを取り出し、栓をし、−２０℃で保存した。
【００５９】
例４：ペプチドの放射性標識
無菌操作を用いて、２００μｌの滅菌、発熱物質を含まない、デオキシ水（防腐剤を含まない）を６４Ｃｕ溶液に注入した。溶液を混合し、ペプチドを含有するバイアルに移した。バイアルを振盪し、粉体の完全な溶解を確実にした。そして溶液を５０℃９０分間インキュベートし、続けて、使用前に室温に放置した。特定の態様において溶液は室温から９０℃の範囲の温度でインキュベートすることができる。
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年10月14日(2015.10.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコヘプトナート、緩衝液、および、Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤である、の構造を有する化合物、を含む凍結乾燥組成物を含むキット。
【請求項２】
キットが、４℃以下である、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
キレート剤が、
【化１】
2016510342.tif 000010
を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項４】
キットが、以下：
（ｉ）５０μｇ〜５００μｇのグルコヘプトナート、
（ｉｉ）緩衝液としてのグリシン緩衝液、
（ｉｉｉ）凍結乾燥組成物中のＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、
（ｉｖ）放射線防護剤、
（ｖ）抗菌保存剤、
（ｖｉ）ｐＨ調節剤、
（ｖｉｉ）基材に接着、付着、または固定した化合物、および、
（ｖｉｉｉ）２０μｇ〜２５０μｇの化合物
の少なくとも１つを含む、請求項１に記載のキット。
【請求項５】
凍結乾燥組成物とは別の放射性核種を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項６】
放射性核種が、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８９Ｚｒまたは９９ｍＴｃである、請求項５に記載のキット。
【請求項７】
（ａ）凍結乾燥組成物を再構成すること、
（ｂ）放射性核種で化合物を放射性標識すること、
（ｃ）組成物を対象に投与すること、および、
（ｄ）結果を解釈すること
の１または２以上のための指示書をさらに含む、請求項１に記載のキット。
【請求項８】
化合物で標識した組織の写真を含み、組織が癌を有するものおよび有さないものである、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
腫瘍画像化のためのキットを調製する方法であって、
（ａ）  容器内において、グルコヘプトナート、緩衝液、および、Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤である、の構造を有する化合物を組み合わせること、
（ｂ）  （ａ）の組み合わせを凍結すること、
（ｃ）  凍結した組み合わせを凍結乾燥すること、
（ｄ）  容器に滅菌窒素ガスを導入すること、および、
（ｅ）  容器に封をすること、
を含む、前記方法。
【請求項１０】
容器を４℃以下で保管することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
キレート剤が、
【化２】
2016510342.tif 000011
を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）の組み合わせが、以下：
（ｉ）５０μｇ〜５００μｇのグルコヘプトナート、
（ｉｉ）緩衝液としてのグリシン緩衝液、
（ｉｉｉ）ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、
（ｉｖ）放射線防護剤、
（ｖ）抗菌保存剤、
（ｖｉ）ｐＨ調節剤、
（ｖｉｉ）基材に接着、付着、または固定した化合物、および、
（ｖｉｉｉ）２０μｇ〜２５０μｇの化合物
の少なくとも１つを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
（ｆ）化合物とは別の放射性核種を提供することをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
配列番号１に記載の化合物を標識する方法であって、
（ａ）請求項１に記載のキットを提供すること、
（ｂ）溶液中、放射性核種を提供すること、
（ｃ）化合物に放射性核種を導入すること、
（ｄ）放射性核種および化合物を溶解のために振盪すること、および、
（ｅ）放射性核種および化合物を室温でインキュベートすること
を含む、前記方法。
【請求項１５】
Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−γＡｂａ−Ｌｙｓ（Ｒ）  （配列番号：１）、ここで、Ｒはリジン残基のγアミノ基に結合されたキレート剤である、の構造を有する化合物を含み、ここで前記化合物は基材に接着、付着、または固定されているキット。
【国際調査報告】
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