(57)【要約】本発明は、安定なリナクロチド組成物に、および該安定なリナクロチド組成物を提供することにより、胃腸障害を処置する必要のある患者における胃腸障害を処置する方法に関する。本発明は、いくつかの実施形態において、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定なリナクロチド組成物に関する。例えば、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含むリナクロチド組成物が提供される。
2016521249.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含むリナクロチド組成物。
【請求項２】
式（Ｉ）の構造：
【化６５】
2016521249.tif 000070
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
リナクロチドの重量と比較して最大で５重量％までの濃度で式（Ｉ）のペプチドを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
リナクロチドの重量と比較して最大で３重量％までの濃度で式（Ｉ）のペプチドを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
リナクロチドの重量と比較して最大で２重量％までの濃度で式（Ｉ）のペプチドを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
リナクロチドの重量と比較して最大で１重量％までの濃度で式（Ｉ）のペプチドを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物と、約１４５μｇまたは約２９０μｇのリナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、Ｃａ２＋またはその塩、ロイシン、および式（Ｉ）の構造：
【化６６】
2016521249.tif 000071
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む経口医薬剤形とを含むリナクロチド組成物。
【請求項８】
式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約２ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約１ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約０．７５ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約０．５ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１２】
前記二価金属カチオンがＣａ２＋またはその塩であり、前記立体障害第一級アミンがロイシンであり、前記リナクロチド組成物が、約５７〜６３：２８〜３２：１のモル比の二価金属カチオン：立体障害第一級アミン：リナクロチドを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記Ｃａ２＋またはその塩、およびロイシンが、約５７〜６３：２８〜３２：１のＣａ２＋：ロイシン：リナクロチドのモル比で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１４】
前記Ｃａ２＋またはその塩、およびロイシンが、約５７〜６３：２８〜３２：１のＣａ２＋：ロイシン：リナクロチドのモル比で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
前記Ｃａ２＋またはその塩、およびロイシンが、約５７〜６３：２８〜３２：１のＣａ２＋：ロイシン：リナクロチドのモル比で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
前記Ｃａ２＋またはその塩、およびロイシンが、約５７〜６３：２８〜３２：１のＣａ２＋：ロイシン：リナクロチドのモル比で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記経口医薬剤形が、
【化６７】
2016521249.tif 000072
の構造を有する酸化生成物を、前記剤形の総重量に対して約０．０５重量％〜約５重量％の量でさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１８】
前記酸化生成物が、前記剤形の総重量に対して約０．０５％〜約２％の量で前記剤形中に存在する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記酸化生成物が、前記剤形の総重量に対して約０．０５％〜約１％の量で前記剤形中に存在する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記Ｃａ２＋またはその塩、およびロイシンが、約５７〜６３：２８〜３２：１のＣａ２＋：ロイシン：リナクロチドのモル比で前記経口医薬剤形中に存在し、前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が、ｄ−メグルミンおよびヒスチジンからなる群から選択され、式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約１ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項２１】
式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約０．７５ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
式（Ｉ）のペプチドが、前記剤形の総重量に対して約０．００１〜約０．５ｗｔ．％の量で前記経口医薬剤形中に存在する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が、アミノ酸またはその誘導体である、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が、ロイシン、グリシン、アスパルテーム、ｄ−メグルミン、ヒスチジン、アスパラギン、プロリン、またはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が、ｄ−メグルミン、ヒスチジン、またはこれらの混合物である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物がｄ−メグルミンである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物がヒスチジンである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が、５：１〜１：１のホルムアルデヒドスカベンジャー化合物とリナクロチドとのモル比で前記リナクロチド組成物中に存在する、請求項２４から２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が、３：１〜１：１のホルムアルデヒドスカベンジャー化合物とリナクロチドとのモル比で前記リナクロチド組成物中に存在する、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
便秘型過敏性腸症候群および慢性特発性便秘症から選択される胃腸障害を処置する方法であって、その必要のある患者に、請求項１から２２、２４から２７、および２９のいずれかに記載のリナクロチド組成物を提供するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、胃腸障害を処置するためのリナクロチド、組成物、および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
米国特許第７，３０４，０３６号および米国特許第７，３７１，７２７号は、胃腸障害の処置のために、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）受容体のアゴニストとして作用するペプチドを開示している。開示される特定のペプチドの１つは、以下のアミノ酸配列からなるリナクロチドである：
【化１】
2016521249.tif 000003
’０３６号および’７２７号の特許はまた、リナクロチドおよび関連するペプチドを調製するための方法も開示している。これらの特許の内容は、参照により、それらの全体が本明細書中に援用される。
【０００３】
様々な供給源からリナクロチド組成物に入り込みうるホルムアルデヒドに対して改善された安定性を有する改善されたリナクロチド組成物の必要性が残されている。
【０００４】
本発明は、このような改善されたリナクロチド組成物、および胃腸障害を処置する必要のある患者にリナクロチド組成物を提供することによって、胃腸障害を処置する方法を提供しようとするものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第７，３０４，０３６号明細書
【特許文献２】米国特許第７，３７１，７２７号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、いくつかの実施形態において、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（Ｉ）の構造：
【化２】
2016521249.tif 000004
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（Ｉ）の構造：
【化３】
2016521249.tif 000005
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＩＶ）の構造：
【化４】
2016521249.tif 000006
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ならびにホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、ならびに式（ＶＩ）のペプチドおよび式（ＶＩＩ）のペプチドのうちの一方または両方を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（Ｉ）の構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、ならびに式（ＶＩ）のペプチドおよび式（ＶＩＩ）のペプチドのうちの一方または両方を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、および式（ＶＩＩＩ）の以下の構造：
【化５】
2016521249.tif 000007
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（Ｉ）の構造を有するペプチド、ならびに式（ＩＩＩ）のペプチドおよび式（ＩＶ）のペプチドのうちの一方または両方を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（Ｉ）の構造：
【化６】
2016521249.tif 000008
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および式（ＩＩ）の構造：
【化７】
2016521249.tif 000009
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む安定なリナクロチド組成物に関する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明は、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、アミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒ（ここで、ペプチドの少なくとも１つのカルボキシル基は、ＲがＣ１〜６アルキルである式（−ＣＯＯＲ）を有するアルキルエステルである）を含むペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定な組成物に関する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、式（Ｉ）の構造：
【化８】
2016521249.tif 000010
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定なリナクロチド組成物が提供される。
【００１７】
いくつかの実施形態において、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、式（ＩＩ）の構造：
【化９】
2016521249.tif 000011
を有するペプチド（例えば、ホルムアルデヒドイミン生成物、例えば、ホルムアルデヒドイミン生成物）またはその薬学的に許容され得る塩、および１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定なリナクロチド組成物が提供される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、リナクロチド、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（Ｉ）の構造：
【化１０】
2016521249.tif 000012
を有する第１のペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および式（ＩＩ）の構造：
【化１１】
2016521249.tif 000013
を有する第２のペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む安定なリナクロチド組成物が提供される。
【００１９】
いくつかの実施形態において、リナクロチド、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（Ｉ）の構造を有する第１のペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、ならびに（ｉ）式（ＩＩＩ）の構造を有するペプチドおよび（ｉｉ）式（ＩＶ）の構造を有するペプチドのうちの一方または両方を含む安定なリナクロチド組成物が提供される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドのＮ末端でイミダゾリジノン５員環を形成するようにＣｙｓ２のアミン基に架橋されたＮ末端Ｃｙｓ１のα−アミン基におけるメチレンの付加によって修飾されたアミノ酸配列  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒを含むリナクロチドペプチド（「Ｃｙｓ１−ＩＭＤ」）を含み、「Ｃｙｓ１−ＩＭＤ」は、そのＮ末端アミン基で修飾されたリナクロチドイミダゾリジノン誘導体を指す。いくつかの実施形態において、イミン修飾は、酸触媒の存在下でホルムアルデヒド媒介反応によって生成することができる。
【００２１】
いくつかの実施形態において、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、式（ＩＩＩ）の構造：
【化１２】
2016521249.tif 000014
（式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜６アルキルであり、少なくとも１つのＲ’は、Ｃ１〜６アルキルである）を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定な組成物が提供される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、式（ＩＶ）の構造：
【化１３】
2016521249.tif 000015
（式中、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルである）を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定な組成物が提供される。
【００２３】
いくつかの実施形態において、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、式（Ｖ）の構造：
【化１４】
2016521249.tif 000016
（式中、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルである）を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む安定な組成物が提供される。
【００２４】
本発明の別の態様は、胃腸障害を処置するための方法であって、胃腸障害と診断された患者にリナクロチド組成物を提供するステップを含む、方法を提供する。
【００２５】
本発明の１またはそれより多くの実施形態の詳細は、添付の説明に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、Ｔ８４細胞ｃ−ＧＭＰアッセイにおける、本発明の例示的なペプチドの用量応答を示す。
【００２７】
【図２】図２は、ＲＰ−ＨＰＬＣによる例示的なペプチドの分析の例を示し、図中、「Ｃｙｓ１−ＩＭＤ」は、そのＮ末端アミン基で修飾されたリナクロチドイミダゾリジノン誘導体を指す。
【００２８】
【図３】図３は、競合放射性リガンド結合アッセイにおける、Ｔ８４細胞上の細胞表面ＧＣ−Ｃ受容体に対する本発明のリナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤの特異的結合を示す。
【００２９】
【図４】図４は、Ｔ８４細胞のｃ−ＧＭＰアッセイにおける、本発明の例示的ペプチドの用量応答を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
図面は、例として提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００３１】
詳細な説明
グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）は、胃および腸の上皮細胞の先端面に位置する膜貫通型受容体である。該受容体は、細胞外リガンド結合ドメイン、１回膜貫通領域、およびＣ末端グアニリルシクラーゼドメインを有する。リガンドがＧＣ−Ｃの細胞外ドメインに結合すると、細胞内触媒ドメインが、ＧＴＰからのｃＧＭＰの生成を触媒する。Ｉｎ  ｖｉｖｏでは、この細胞内ｃＧＭＰの増加により、腸管腔への塩化物および炭酸水素塩の分泌増加、管腔ｐＨの上昇、管腔のナトリウム吸収の低下、流体分泌の増加、ならびに腸通過の促進をもたらす事象のカスケードが開始される。ｃＧＭＰは、上皮から粘膜および管腔内へと双方向に分泌される。本発明のペプチドおよび組成物は、腸内の流体と電解質との平衡の調節因子である腸ＧＣ−Ｃ受容体に結合する。
【００３２】
ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物
リナクロチド組成物の安定性は、リナクロチド組成物中に適切な／適切な量の１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含有させることによって驚くほど高い程度まで増大させることができることが見い出された。
【００３３】
いずれの理論によっても束縛されることを望まないが、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、ホルムアルデヒドがリナクロチドと反応するより低い能力／アビリティーを有する様式でホルムアルデヒドと反応することによってリナクロチド安定性を増大させると考えられる。この点において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、リナクロチド組成物に入るか、またはリナクロチドと近接するホルムアルデヒドの少なくとも一部と反応または相互作用することなどによって、組成物中でのリナクロチドのホルムアルデヒドへの曝露を低減する任意の化合物であり得る。このようなホルムアルデヒドは、様々な供給源からリナクロチド組成物に入り込むことができ、別の状況ではリナクロチドおよび薬剤製品の安定性に有害な効果を有する。
【００３４】
いくつかの好適な実施形態において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、ホルムアルデヒドと反応性である（例えば、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物とホルムアルデヒドとの間で１またはそれより多くの可逆性または非可逆性の結合（好ましくはいくつかの実施形態において、１またはそれより多くの非可逆性の共有結合）を形成する）窒素中心を含む。例えば、いくつかの好適な実施形態において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、ホルムアルデヒドと反応性であって、ホルムアルデヒドと引き続いて結合することができるシッフ塩基イミンを形成する１またはそれより多くの窒素原子／中心を含む。いくつかの好適な実施形態において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、ホルムアルデヒドと反応性であって、１またはそれより多くの５〜８員環式の環を形成する１またはそれより多くの窒素中心を含む。この点において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、好ましくは、１またはそれより多くのアミン基またはアミド基を含む。例えば、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、アミノ酸、アミノ糖、アルファアミン化合物、またはこれらのコンジュゲートもしくは誘導体、またはこれらの混合物であり得る。いくつかの好適な実施形態において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、２またはそれより多くのアミンおよび／またはアミドを含む。
【００３５】
複数のアミン結合部位を含むホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、実施例５で実証されるように、リナクロチドに対して驚くほど高い安定化効果を実現することも、いくつかの実施形態において意外にも見い出された。例えば、いくつかの好適なホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、１またはそれより多くの（例えば、２またはそれより多くの）第一級アミンを含む。これらとして、例えば、グリシン、アラニン、セリン、トレオニン、システイン、バリン、ロイシン（lecuine）、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、リシン、オルニチン、シトルリン、タウリンピロリシン（taurine  pyrrolysine）、またはこれらのコンジュゲートもしくは混合物が挙げられる。
【００３６】
いくつかの特に好適な実施形態において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、１またはそれより多くの第二級アミン（これは、ホルムアルデヒドとより高い反応性を有し、したがってリナクロチド薬剤製品に対してより高い安定化効果を有することがいくつかの実施形態において判明した）を含む。いくつかの特に好適なホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、２またはそれより多くの第二級アミンを含む。これらとして、例えば、メグルミン（megulmine）、ヒスチジン、アスパルテーム、プロリン、トリプトファン、シトルリン、ピロリシン、またはこれらのコンジュゲートもしくは混合物が挙げられる。
【００３７】
他の好適なホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、１またはそれより多くの（例えば、２またはそれより多くの）第一級アミンおよび１またはそれより多くの（例えば、２またはそれより多くの）第二級アミンを含む。これらとしては、例えば、アルギニン、シトルリン、ピロリシン、またはこれらのコンジュゲートもしくは混合物が挙げられる。
【００３８】
さらに、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、１またはそれより多くのアミド基を含むことができる。例えば、スカベンジャー化合物は、アスパラギン、グルタミン、シトルリン、またはこれらのコンジュゲートもしくは混合物であり得る。
【００３９】
ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、任意の適切な形態でリナクロチド組成物中に導入することができる。例えば、スカベンジャーは、凍結乾燥させることができる。あるいは、または追加的に、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、リナクロチド組成物中に導入される前に、ビーズ上に適用する（例えば、噴霧する）ことができる。これらのビーズは、任意の適切な材料、例えば、セルロース、ガラス、糖、またはこれらの組合せもしくは混合物などで作製することができる。
【００４０】
いくつかの実施形態において、使用されるホルムアルデヒドスカベンジャー化合物が非晶形である場合、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、リナクロチドに対してより高い安定化効果を有し得ることが意外にも判明した（実施例５を参照）。したがって、いくつかの特に好適な実施形態において、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、非晶質である。
【００４１】
最後に、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物は、任意の適切な量でリナクロチド組成物中に存在し得る。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、約１０：１〜約１：１、好ましくは約７：１〜約１：１、さらにより好ましくは約５：１〜約１：１、またはさらには約３：１〜約１：１の比のスカベンジャー対ロイシンを含む。
【００４２】
リナクロチド組成物中の例示的なペプチド：
リナクロチド組成物は、本明細書に記載されるペプチドのうちの１またはそれより多くをさらに含むことができる。
【００４３】
様々な実施形態において、リナクロチド組成物は、修飾されているペプチドを含み、ここで、ペプチドのアミノ酸残基の少なくとも１つのカルボキシル基が修飾されてアルキルエステルになっている。この修飾は、例えば、カルボン酸を脱水剤の存在下でアルコールと処理することによって生成することができ、脱水剤は、限定されないが、硫酸などの強酸を含みうる。カルボキシル基からアルキルエステルを生成する他の方法も、当業者において容易に知られており、本明細書に組み込まれている。
【００４４】
本明細書において使用される場合、カルボキシル基は、式：（−ＣＯＯＨ）を有する。
【００４５】
本明細書において使用される場合、用語「アルキル」は、飽和した直鎖状または分枝鎖状の一価の炭化水素基を指す。
【００４６】
本明細書において使用される場合、基は、その基がアミノ酸配列の最後に存在する場合、末端基または末端である。
【００４７】
本明細書において使用される場合、ペプチドのアミン基は、式：
【化１５】
2016521249.tif 000017
を有し、式中、Ｒ２は、ペプチドの残部である。
【００４８】
本明細書において使用される場合、ペプチドのイミン基は、式：
【化１６】
2016521249.tif 000018
を有し、式中、Ｒ２は、ペプチドの残部である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、ペプチド配列中のグルタメートアミノ酸の側鎖のカルボン酸は、修飾されてアルキルエステルになっている。
【００５０】
さらなる実施形態において、ペプチド配列中のグルタメートアミノ酸の側鎖のカルボン酸は、修飾されてエチルエステルになっている。
【００５１】
他の実施形態において、ペプチド配列中のチロシンアミノ酸のＣ末端カルボン酸は、修飾されてアルキルエステルになっている。
【００５２】
さらなる実施形態において、ペプチド配列のチロシンアミノ酸のＣ末端カルボン酸は、修飾されてエチルエステルになっている。
【００５３】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、ペプチドは、アミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒを含み、ペプチドの少なくとも１つのカルボキシル基は、ＲがＣ１〜６アルキルである式（−ＣＯＯＲ）を有するアルキルエステルである。
【００５４】
数個の実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化１７】
2016521249.tif 000019
のアミノ酸構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜６アルキルであり、少なくとも１つのＲ’は、Ｃ１〜６アルキルである。
【００５５】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化１８】
2016521249.tif 000020
のアミノ酸構造を有するペプチドを含み、式中、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルである（「Ｇｌｕ３−アルキルエステル」）。
【００５６】
他の実施形態において、Ｒは、Ｃ１〜４アルキルである。
【００５７】
さらなる実施形態において、Ｒは、メチル、エチル、またはプロピルである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、（「Ｇｌｕ３−エチルエステル」）：
【化１９】
2016521249.tif 000021
のアミノ酸構造を有するペプチドを含む。
【００５９】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２０】
2016521249.tif 000022
のアミノ酸構造を有するペプチドを含む。
【００６０】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２１】
2016521249.tif 000023
のアミノ酸構造を有するペプチドを含む。
【００６１】
いくつかの実施形態において、Ｇｌｕ３−アルキルエステルまたは薬学的に許容され得る塩のＣ末端チロシンは存在しない。
【００６２】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２２】
2016521249.tif 000024
のアミノ酸構造を有するペプチドを含み、式中、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルである。
【００６３】
他の実施形態において、Ｒは、Ｃ１〜４アルキルである。
【００６４】
さらなる実施形態において、Ｒは、メチル、エチル、またはプロピルである。
【００６５】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、（「Ｔｙｒ１４−エチルエステル」）：
【化２３】
2016521249.tif 000025
のアミノ酸構造を有するペプチドを含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２４】
2016521249.tif 000026
のアミノ酸構造を有するペプチドを含む。
【００６７】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２５】
2016521249.tif 000027
のアミノ酸構造を有するペプチドを含む。
【００６８】
さらに、リナクロチド組成物は、修飾されているペプチドを含み得、ここで、ペプチドのアミノ酸残基の少なくとも１つのアミン基が修飾されてイミンになっている。この修飾は、例えば、アミン基を、酸触媒の存在下でアルデヒドまたはケトンなどのカルボニルで処理することによって生成することができる。アミン基からイミンを生成する他の方法も、当業者に容易に知られ、本明細書に組み込まれている。
【００６９】
いくつかの実施形態において、イミン修飾は、酸触媒の存在下でホルムアルデヒド媒介反応によって生成することができる。
【００７０】
さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドの別のアミン基に架橋されたイミン炭素を有するペプチドを含む。
【００７１】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、Ｎ末端アミノ酸のα−アミン基において修飾されてイミンになっているペプチドであって、イミン炭素が、ペプチドの第２のアミノ酸残基のアミン基と架橋されており、５員環を形成している、ペプチドを含む。
【００７２】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、アミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒを有するペプチドであって、ペプチドのＮ末端でイミダゾリジノン５員環を形成するようにＣｙｓ２のアミン基に架橋されたＮ末端Ｃｙｓ１のα−アミン基におけるメチレンの付加で修飾され得る、ペプチド（「Ｃｙｓ１−ＩＭＤ」）を含む。
【００７３】
数個の実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、ここで、アミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒを含み、ペプチドの少なくとも１つのアミン基が、式
【化２６】
2016521249.tif 000028
を有するイミンであり、式中、Ｒ２は、ペプチドの残部である。
【００７４】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドを含むペプチドまたは薬学的に許容され得る塩を含み、ここで、ペプチドのＮ末端アミン基が、式
【化２７】
2016521249.tif 000029
を有するイミンであり、式中、Ｒ２は、ペプチドの残部である。
【００７５】
さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２８】
2016521249.tif 000030
のアミノ酸構造を含むペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００７６】
数個の実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化２９】
2016521249.tif 000031
のアミノ酸構造を含むペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態において、Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩のＣ末端チロシンは、存在しない。いくつかの実施形態において、Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、ペプチドの少なくとも１つのカルボキシル基が、ＲがＣ１〜６アルキルである式（−ＣＯＯＲ）を有するアルキルエステルである、１またはそれより多くのペプチド修飾をさらに含む。
【００７８】
数個の実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、ここで、該ペプチドがアミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒからなり、ペプチドの少なくとも１つのカルボキシル基が、ＲがＣ１〜６アルキルである式（−ＣＯＯＲ）を有するアルキルエステルである。
【００７９】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（Ｉ）の構造：
【化３０】
2016521249.tif 000032
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００８０】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、およびホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＩＶ）の構造：
【化３１】
2016521249.tif 000033
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ならびにホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、ならびに式（ＶＩ）のペプチドおよび式（ＶＩＩ）のペプチドのうちの一方または両方を含む。
【００８２】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（Ｉ）の構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、ならびに式（ＶＩ）のペプチドおよび式（ＶＩＩ）のペプチドのうちの一方または両方を含む。
【００８３】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、式（ＶＩＩＩ）の以下の構造：
【化３２】
2016521249.tif 000034
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００８４】
数個の実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化３３】
2016521249.tif 000035
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜６アルキルであり、少なくとも１つのＲ’は、Ｃ１〜６アルキルである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化３４】
2016521249.tif 000036
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、式中、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルである。さらなる実施形態において、Ｃ末端チロシンは、存在しない。
【００８６】
他の実施形態において、Ｒは、Ｃ１〜４アルキルである。
【００８７】
さらなる実施形態において、Ｒは、メチル、エチル、またはプロピルである。
【００８８】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化３５】
2016521249.tif 000037
のアミノ酸構造を有するペプチドからなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００８９】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化３６】
2016521249.tif 000038
のアミノ酸構造を有するペプチドからなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化３７】
2016521249.tif 000039
のアミノ酸構造を有するペプチドからなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００９１】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドが
【化３８】
2016521249.tif 000040
のアミノ酸構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、式中、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルである。
【００９２】
他の実施形態において、Ｒは、Ｃ１〜４アルキルである。
【００９３】
さらなる実施形態において、Ｒは、メチル、エチル、またはプロピルである。
【００９４】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化３９】
2016521249.tif 000041
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化４０】
2016521249.tif 000042
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００９６】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化４１】
2016521249.tif 000043
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００９７】
数個の実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、該ペプチドはアミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒからなり、ペプチドの少なくとも１つのアミン基は、式
【化４２】
2016521249.tif 000044
を有するイミンであり、式中、Ｒ２は、ペプチドの残部である。
【００９８】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化４３】
2016521249.tif 000045
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、式（ＩＶ）の構造：
【化４４】
2016521249.tif 000046
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、式（ＩＩＩ）の構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および式（ＩＶ）の構造を有するペプチドのうちの一方または両方を含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、式（ＩＩＩ）の構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および式（ＩＶ）の構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドのＮ末端アミン基が、式
【化４５】
2016521249.tif 000047
を有するイミンであり、式中、Ｒ２は、ペプチドの残部であるペプチドからなるペプチドまたは薬学的に許容され得る塩を含む。
【０１０３】
さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化４６】
2016521249.tif 000048
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、
【化４７】
2016521249.tif 000049
のアミノ酸構造からなるペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩のＣ末端チロシンが存在しない、Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドまたは薬学的に許容され得る塩を含む。いくつかの実施形態において、Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、ペプチドの少なくとも１つのカルボキシル基が、ＲがＣ１〜６アルキルである式（−ＣＯＯＲ）を有するアルキルエステルである、１またはそれより多くのペプチド修飾をさらに含む。
【０１０６】
ペプチドの生成
本明細書中に記載のペプチドまたは前駆体ペプチドは、細菌（例えば、大腸菌または枯草菌）、昆虫細胞系（例えば、ショウジョウバエＳｆ９細胞系）、酵母細胞系（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｃｉａｅ、Ｓ．ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、もしくは糸状菌発現系、または動物細胞発現系（例えば、哺乳類細胞発現系）が挙げられるがこれらに限定されない任意の既知のタンパク質発現系において、組換えなどの任意の適切な様式で生成することができる。本発明のペプチドまたは前駆体ペプチドはまた、化学合成されてもよい。
【０１０７】
ペプチドまたはバリアントペプチドが組換え（例えば、大腸菌）によって生成される場合、ペプチドをコードする核酸分子は、細胞からの成熟ペプチドの分泌を可能にするリーダー配列をコードすることもできる。そのため、ペプチドをコードする配列は、例えば、天然に存在する細菌性ＳＴペプチドの、プレ配列およびプロ配列を含むことができる。分泌された成熟ペプチドは、培養培地から精製することができる。
【０１０８】
本明細書に記載されるペプチドをコードする配列は、核酸分子を細菌細胞に送達してその中に維持することができるベクターに挿入することができる。ＤＮＡ分子は、自律複製ベクター（適切なベクターとしては、例えば、ｐＧＥＭ３ＺおよびｐｃＤＮＡ３、ならびにその誘導体が挙げられる）に挿入されてもよい。ベクター核酸は、細菌ＤＮＡ、またはバクテリオファージλもしくはＭ１３およびその誘導体等のバクテリオファージＤＮＡであってもよい。本明細書に記載される核酸を含有するベクターの構築の後に、細菌等の宿主細胞の形質転換が行われてもよい。好適な細菌宿主としては、大腸菌、枯草菌、シュードモナス、およびサルモネラが挙げられるがこれらに限定されない。コード核酸分子に加えて、遺伝構築物もまた、プロモーター配列および制御配列等の発現を可能にするエレメントを含む。発現ベクターは、転写開始を制御する転写調節配列、例えば、プロモーター配列、エンハンサー配列、オペレーター配列、およびリプレッサー配列等を含有してもよい。様々な転写調節配列が当業者に周知である。発現ベクターはまた、翻訳調節配列（例えば、非翻訳５’配列、非翻訳３’配列、または内部リボソーム進入部位）を含むこともできる。ベクターは、自律複製することが可能であるか、またはペプチド生成中の安定性を確保するために宿主ＤＮＡに組み込むことができる。
【０１０９】
本明細書に記載されるペプチドを含むタンパク質コード配列は、精製を容易にするために、ペプチド親和性タグ、例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、プロテインＡ、ＦＬＡＧタグ、ヘキサ−ヒスチジン、ｍｙｃタグまたはインフルエンザＨＡタグ等をコードする核酸に融合することもできる。親和性タグまたはレポーター融合は、翻訳融合物が生成されるように、目的のペプチドのリーディングフレームを、親和性タグをコードする遺伝子のリーディングフレームに連結する。融合遺伝子の発現により、目的のペプチドおよび親和性タグの両方を含む単一のペプチドの翻訳がもたらされる。親和性タグが利用されるある場合において、プロテアーゼ認識部位をコードするＤＮＡ配列が、親和性タグのリーディングフレームと目的のペプチドのリーディングフレームとの間に融合される。
【０１１０】
細菌以外の当業者に周知のタンパク質発現系において、本明細書に記載されるペプチドおよびバリアントの未成熟型および成熟型を生成するのに好適な遺伝子構築物および方法を使用して、生物系においてペプチドを生成することもできる。
【０１１１】
他の実施形態において、通常は翻訳機構によって組み込まれないアミノ酸を含有する上述のペプチド（例えば、β−カルボキシル化されたＡｓｐ、γ−カルボキシル化されたＧｌｕ、Ａｓｕ、ＡａｄおよびＡｐｍ）は、ｔＲＮＡ修飾方法による組換えによって生成されてもよい。非天然および／または任意のアミノ酸の組み込みを可能にするように、アンチコドン、アミノ酸付着部位、および／またはアクセプターステムを修飾することが挙げられるがこれらに限定されない、ｔＲＮＡを修飾するための方法が当該技術分野で知られている（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．（２００８）３７２：４８０−４８５；Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．（２００９）１６：３２３−３６；Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００７）４：２３９−４４；Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００６）７：７７５−８２；Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００５）３６：２２７−２３８；Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００５）３６：２７０−２７８；Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（２００４）７３：１４７−１７６；Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２００４）３２：６２００−６２１１；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００３）１００：６３５３−６３５７；Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．（２００４）３３：４２２−４３０）。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、ペプチドは化学的に生成されてもよい。ペプチドは、従来のＢＯＣ保護またはＦＭＯＣ保護を用いた液相合成および固相合成を含む多数の異なる方法によって合成することができる。例えば、ペプチドは、連続的なアミノ酸結合を用いて、２−クロロトリチルまたはＷａｎｇ樹脂上で合成することができる。以下の保護基を使用することができる：フルオレニルメチルオキシカルボニルまたはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（α−アミノ基、Ｎ末端）；トリチルまたはｔｅｒｔ−ブチル（Ｃｙｓのチオール基）；ｔｅｒｔ−ブチル（存在する場合、グルタミン酸のγ−カルボキシルおよびスレオニンのヒドロキシル基）；ならびにトリチル（存在する場合、アスパラギン側鎖のβ−アミド（β−ａｍｉｄ）官能基およびチロシンのフェノール基）。結合は、第三級アミンの存在下でＤＩＣおよびＨＯＢｔを用いて達成することができ、ペプチドを脱保護し、カクテルＫ（トリフルオロ酢酸８１重量％、フェノール５重量％、チオアニソール５重量％、１，２−エタンジチオール２．５重量％、水３重量％、硫化ジメチル２重量％、ヨウ化アンモニウム１．５重量％）を使用して固相支持体から切断することができる。トリフルオロ酢酸および他の揮発物を除去した後、有機溶媒を用いてペプチドを沈殿させることができる。Ｃｙｓ残基間のジスルフィド結合は、ジメチルスルホキシド（Ｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：６６５７−６２）を使用して、または空気酸化ストラテジーを使用して形成することができる。得られたペプチドは、逆相クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥することができる。
【０１１３】
これらのペプチドは、塩基またはその薬学的に許容され得る塩のいずれかの形態で、作製、単離、または使用することができる。塩の例として、ペプチドの酢酸塩、塩化物、硫酸塩、およびリン酸塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドまたは薬学的に許容され得る塩、ならびに
ｉ．ペプチドが
【化４８】
2016521249.tif 000050
のアミノ酸構造を含むペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩
ｉｉ．ペプチドが
【化４９】
2016521249.tif 000051
のアミノ酸構造を含むペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩、および
ｉｉｉ．ペプチドがアミノ酸配列Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒを含み、ペプチドの少なくとも１つのカルボキシル基が、ＲがＣ１〜６アルキルである式（−ＣＯＯＲ）を有するアルキルエステルである、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩
から選択される２またはそれより多くのペプチドを含む。
【０１１５】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドまたはその薬学的に許容され得る塩、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、およびペプチドが式（Ｉ）のアミノ酸構造：
【化５０】
2016521249.tif 000052
を含むペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で８重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で７重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で６重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で５重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で４重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で３重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で２重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で１重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で０．７５重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して最大で０．５重量％までの式（Ｉ）のペプチドを含有する。
【０１１６】
いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物と、リナクロチドおよび式（Ｉ）のペプチドを含む経口医薬剤形とを含有し、式（Ｉ）のペプチドは、剤形の総重量に対して約０．００１〜約２ｗｔ．％の量で経口医薬剤形中に存在する。
【０１１７】
いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物と、リナクロチドおよび式（Ｉ）のペプチドを含む経口医薬剤形とを含有し、式（Ｉ）のペプチドは、剤形の総重量に対して約０．００１〜約１ｗｔ．％の量で経口医薬剤形中に存在する。
【０１１８】
いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物と、リナクロチドおよび式（Ｉ）のペプチドを含む経口医薬剤形とを含有し、式（Ｉ）のペプチドは、剤形の総重量に対して約０．００１〜約０．７５ｗｔ．％の量で経口医薬剤形中に存在する。
【０１１９】
いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物と、リナクロチドおよび式（Ｉ）のペプチドを含む経口医薬剤形とを含有し、式（Ｉ）のペプチドは、剤形の総重量に対して約０．００１〜約０．５ｗｔ．％の量で経口医薬剤形中に存在する。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、リナクロチドのイミダゾリジノン誘導体は、最大でリナクロチド組成物の約１５重量％まで、最大でリナクロチド組成物の約１０重量％、最大でリナクロチド組成物の約７重量％、または最大でリナクロチド組成物の約５重量％までを構成する。他の例示的な実施形態では、リナクロチドのイミダゾリジノン誘導体は、リナクロチド組成物の約０．０１重量％〜約１５重量％、リナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約１０重量％、リナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約７重量％、またはリナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約５重量％を構成する。
【０１２１】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、およびペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、このペプチドは：
【化５１】
2016521249.tif 000053
のアミノ酸構造を含み、ここで、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、リナクロチドの重量と比較して、最大で１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、または９０重量％までを構成する。
【０１２２】
さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、およびペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、このペプチドは：
【化５２】
2016521249.tif 000054
のアミノ酸構造を含み、ここで、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、リナクロチドの重量と比較して、最大で９重量％、８重量％、７重量％、６重量％、５重量％、４重量％、３重量％、２重量％、または１重量％までを構成する。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、Ｔｙｒ１４−エチルエステルペプチドは、リナクロチド組成物の最大で約１５重量％まで、リナクロチド組成物の最大で約１０重量％まで、リナクロチド組成物の最大で約７重量％まで、またはリナクロチド組成物の最大で約５重量％までを構成する。他の例示的な実施形態において、Tyr14-エチルエステルは、リナクロチド組成物の約０．０１重量％〜約１５重量％、リナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約１０重量％、リナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約７重量％、またはリナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約５重量％を構成する。
【０１２４】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチドおよびペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、このペプチドは、以下のアミノ酸構造を含む：
【化５３】
2016521249.tif 000055
、ここで、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、リナクロチドの重量と比較して、最大で１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、または９０重量％までを構成する。
【０１２５】
さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、およびペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を含み、このペプチドは：
【化５４】
2016521249.tif 000056
のアミノ酸構造を含み、ここで、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩は、リナクロチドの重量と比較して、最大で９重量％、８重量％、７重量％、６重量％、５重量％、４重量％、３重量％、２重量％、または１重量％までを構成する。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、Ｇｌｕ３−エチルエステルペプチドは、最大でリナクロチド組成物の約１５重量％まで、最大でリナクロチド組成物の約１０重量％まで、最大でリナクロチド組成物の約７重量％まで、または最大でリナクロチド組成物の約５重量％までを構成する。他の例示的な実施形態では、Ｇｌｕ３−エチルエステルは、リナクロチド組成物の約０．０１重量％〜約１５重量％、リナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約１０重量％、リナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約７重量％、またはリナクロチド組成物の約０．０５重量％〜約５重量％を構成する。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドが
【化５５】
2016521249.tif 000057
のアミノ酸構造からなるペプチドまたは薬学的に許容され得る塩を含む。
【０１２８】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、ペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩から本質的になり、このペプチドは：
【化５６】
2016521249.tif 000058
のアミノ酸構造を含む。
【０１２９】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、ならびに式（ＶＩ）の構造を有するペプチドおよび式（ＶＩＩ）の構造を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩のうちの１またはそれより多くからなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％まで、またはさらには最大で０．０１重量％までの総合計量の式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）のペプチドを含有する。
【０１３０】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＩＸ）の構造：
【化５７】
2016521249.tif 000059
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で、３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％まで、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（ＩＸ）のペプチドを含有する。
【０１３１】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（Ｘ）の構造：
【化５８】
2016521249.tif 000060
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％まで、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（Ｘ）のペプチドを含有する。
【０１３２】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＸＩ）の構造：
【化５９】
2016521249.tif 000061
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（ＸＩ）のペプチドを含有する。
【０１３３】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＸＩＩ）の構造：
【化６０】
2016521249.tif 000062
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（ＸＩＩ）のペプチドを含有する。
【０１３４】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＸＩＩＩ）の構造：
【化６１】
2016521249.tif 000063
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（ＸＩＩＩ）のペプチドを含有する。
【０１３５】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＸＩＶ）の構造：
【化６２】
2016521249.tif 000064
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（ＸＩＶ）のペプチドを含有する。
【０１３６】
他の実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド、立体障害第一級アミン、二価金属カチオン、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物、および式（ＸＶ）の構造：
【化６３】
2016521249.tif 000065
を有するペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩からなり、リナクロチド組成物は、リナクロチドの重量と比較して、最大で３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．４重量％、０．３重量％、０．２重量％、０．１重量％、０．０７５重量％、０．０５重量％、またはさらには最大で０．０１重量％までの式（ＸＶ）のペプチドを含有する。
【０１３７】
処置の方法
様々な実施形態において、胃腸障害と診断された患者は、本明細書に記載されるリナクロチド組成物を提供され、胃腸障害は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）（便秘型ＩＢＳなど）、便秘（慢性特発性便秘症など）、機能的な胃腸障害、胃食道逆流症、機能的な胸やけ、消化不良、内臓痛、胃不全麻痺、慢性腸偽性閉塞症、結腸偽性閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、および炎症性腸疾患からなる群から選択される。
【０１３８】
さらなる実施形態において、胃腸障害は、便秘である。便秘は、術後イレウスに起因し、またはオピエート使用によって引き起こされる、慢性特発性便秘症、特発性便秘症であり得る。便秘を定義する臨床的に認められた基準として、便通の頻度、糞便の粘稠度、および便通の容易さが挙げられる。便秘の１つの共通の定義は、１週間当たり３回未満の便通である。他の定義として、異常に硬い糞便、または過剰なふんばり（straning）を必要とする排便が挙げられる（Schiller、２００１年、Aliment  Pharmacol  Ther、１５巻：７４９〜７６３頁）。便秘は、特発性のもの（機能的な便秘もしくは遅通過性便秘）、または神経性障害、代謝性障害、もしくは内分泌障害を含めた他の原因に続発するものであり得る。これらの障害としては、糖尿病、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、低カルシウム血症、多発性硬化症、パーキンソン病、脊髄病変、神経線維腫症、自律性ニューロパシー、シャーガス病、ヒルシュスプルング病、および嚢胞性線維症が挙げられる。便秘はまた、手術の結果（術後イレウス）であり得、または薬物、例えば、鎮痛剤（オピオイドのような）、抗高血圧薬、抗痙攣薬、抗うつ剤、鎮痙剤、および抗精神病薬などの使用に起因し得る。
【０１３９】
他の実施形態において、胃腸障害は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）である。過敏性腸症候群は、便秘型過敏性腸症候群（ｃ−ＩＢＳ）、下痢型過敏性腸症候群（ｄ−ＩＢＳ）、または２つの過敏性腸症候群が交代して起こること（ａ−ＩＢＳ）であり得る。
【０１４０】
他の実施形態において、胃腸障害は、消化不良である。
【０１４１】
他の実施形態において、胃腸障害は、胃不全麻痺である。胃不全麻痺は、特発性の胃不全麻痺、糖尿病の胃不全麻痺、または手術後の胃不全麻痺から選択され得る。
【０１４２】
さらに他の実施形態において、胃腸障害は、慢性腸偽閉塞である。
【０１４３】
他の実施形態において、胃腸障害は、クローン病である。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、胃腸障害は、潰瘍性大腸炎である。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、胃腸障害は、炎症性腸疾患である。
【０１４６】
さらに別の実施形態において、本発明は、胃腸障害を処置するための方法であって、ＩＢＳ−ＣまたはＣＣと診断された患者に本明細書に記載されるリナクロチド組成物を提供することを含む、方法を特徴とする。
【０１４７】
リナクロチドは、物理的な胃腸管閉塞であると知られても疑われてもいない患者にのみ投与されるべきであることがいくつかの実施形態において見い出された。この点において、ＧＩ障害と診断された患者にリナクロチド組成物を投与または提供する前に、患者は、処置を開始する前に物理的な胃腸管閉塞を示唆する症状について評価される。
【０１４８】
さらに、いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ＧＩ障害と診断され、現在のところ下痢ではなく、頻繁に下痢を経験しているわけでもない患者に提供される。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、本方法は、患者にリナクロチド組成物を投与または提供した後に、下痢、鼓腸、腹痛、腹部膨満、便意切迫感、消化不良、胃食道逆流症、上腹部痛、嘔吐；ウイルス性胃腸炎；肉離れ；眩暈；副鼻腔うっ血、便失禁、脱水、および／または頭痛について患者をモニタリングすること、ならびに必要に応じて、初期投与量に対してこれらの有害反応の１つまたはそれより多くを経験している患者に投与されるリナクロチド用量を減少させることを含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、本方法は、患者にリナクロチド組成物を投与または提供した後に、リナクロチドを用いた継続処置の必要性を定期的に評価することを含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、本方法は、患者にリナクロチド組成物を投与または提供した後に、リナクロチド組成物を受けている患者が重度の、または耐えられない下痢を経験していることを決定し、リナクロチド用量を低減するかまたは処置を中断することを含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、本方法は、ＩＢＳ−ＣまたはＣＣを有する患者を診断すること、患者にリナクロチド組成物を投与または提供すること、および腸症状の改善は、処置の第１週以内に起こるはずであるが、腹部症状の改善は、より長時間かかりうることを患者に助言することを含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、本方法は、リナクロチド組成物を用いた継続処置の必要性を定期的に評価するステップを含む。
【０１５４】
この点において、ＩＢＳ−Ｃを管理するための２９０ｍｇを含む経口剤形の効力を、成人患者における２つの二重盲検でプラセボを対照とする、無作為化された多施設試験で確立した。合計で試験１において８００人の患者および試験２において８０４人の患者（全体的な平均年齢４３．９歳［レンジは１８歳〜８７歳であり、年齢６５歳以上が５．３％］、女性９０．１％、白人７７．４％、黒人１８．８％、ラテンアメリカ系１２．０％）が、１日１回、ＬＩＮＺＥＳＳ  ２９０ｍｃｇまたはプラセボを用いた処置を受け、効力について評価された。すべての患者は、ＩＢＳのローマＩＩ基準を満たし、２週間のベースライン期間中に１週間当たりに、０〜１０ポイントの数値評価尺度で３以上の平均腹痛スコア、３未満の完全な自発便通（ＣＳＢＭ；ＣＳＢＭは、完全な排泄の感覚を伴った自発便通［ＳＢＭ］であり、ＳＢＭは、緩下剤を使用せずに起こる便通である）、および５以下のＳＢＭを報告するように要求された。試験設計は、最初の１２週間にわたって同一であり、その後、試験１が４週間の無作為化退薬（ＲＷ）期間を含み、試験２が追加の１４週間（合計２６週間）の二重盲検処置を継続した点でのみ異なった。
【０１５５】
リナクロチドの経口剤形の効力を、レスポンダーおよびベースラインからの変化のエンドポイントを使用して評価した。エンドポイントの結果は、患者が毎日提供した情報に基づいた。腹痛レスポンダーは、処置期間の１２週間のうち６週間以上にわたる所与の週においてベースラインからの平均腹痛の低減が３０％以上であった患者であった。ＣＳＢＭレスポンダーは、処置期間の１２週間のうち６週間以上にわたる所与の週においてベースラインから１以上のＣＳＢＭの増加を有した患者であった。合わせたレスポンダーであるために、患者は、処置期間の１２週間のうち６週間以上にわたる同じ週において腹痛およびＣＳＢＭの両方の毎週のレスポンダー基準を満たさなければならなかった。効力結果を表２に示す。両試験において、リナクロチド２９０ｍｃｇの経口剤形に対するレスポンダーであった患者の比率は、プラセボより統計的に有意に高かった。
【０１５６】
ベースラインからの変化のエンドポイントについて、２つの試験にわたってリナクロチド２９０ｍｃｇの経口剤形を投与された患者は、腹痛、腹部不快感、および膨満を含めた腹部症状；ならびに排便回数（ＣＳＢＭおよびＳＢＭ）および粘稠度（すなわち、便の硬度）を含めた腸機能、ならびにふんばりにおいて、プラセボを投与されている患者と比較して統計的に有意に（ｐ＜０．０００１）大きい改善を有した。プラセボ患者が４２％であるのに対して、患者では６７パーセントが、彼らが最初の用量を服用して２４時間以内にＳＢＭを有した（ｐ＜０．０００１）。
【０１５７】
１２週間の処置にわたってベースラインと比較して症状改善の漸増レベルの応答基準（すなわち、腹痛の０％超、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、および６０％以上の減少、ならびに１週間当たりの０超、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、および６以上のＣＳＢＭの増加）を満たした患者の比率を分析した。各レベルにおいて、プラセボ患者と比較して、統計的に有意に大きい比率の、リナクロチド２９０ｍｃｇの経口剤形で処置された患者が、応答判定基準を満たした。さらに、リナクロチド２９０ｍｃｇの経口剤形は、プラセボからの統計的に有意な分離を実証し、これは、処置期間の第１週で存在し、２６週間にわたって持続した（処置期間のすべての時点でｐ＜０．００１）。ＣＳＢＭ頻度の改善についての同様の結果が、２６週間の処置期間にわたって実証された。ＣＳＢＭ頻度に対する最大の効果は、１週目までに起こったが、腹痛に対する効果は、最初の６〜８週間にわたって増大し続けた。リナクロチド２９０ｍｃｇの経口剤形を用いた処置を中断した場合の試験２における４週間のＲＷ期間中、腸症状は、ベースラインと比較してリバウンド悪化の証拠を伴うことなく第１週以内にベースラインに向けて戻り、腹部症状も、リバウンドの証拠を伴うことなくベースラインに向けて戻った。
【０１５８】
ＣＣを管理するためのリナクロチド２９０ｍｃｇを含む経口剤形の効力を、成人患者における２つの二重盲検でプラセボを対照とした、無作為化された多施設試験で確立した。合計で試験３において６４２人の患者および試験４において６３０人の患者（全体的な平均年齢４７．８歳［１８歳〜８５歳の範囲で年齢６５歳以上が１２．１％］、女性８８．９％、白人７６．２％、黒人２１．５％、ラテンアメリカ系１０．０％）が、１日１回、リナクロチド１４５ｍｃｇもしくは２９０ｍｃｇの経口剤形またはプラセボを用いた処置を受け、効力について評価された。すべての患者は、ＣＣのローマＩＩ基準を満たし、２週間のベースライン期間中に１週間当たりの３未満のＣＳＢＭおよび６以下のＳＢＭを報告するように要求された。患者は、彼らがＩＢＳの基準を満たした場合、除外された。試験設計は、試験３が１２週間の処置期間後に４週間のＲＷ期間を有した点においてのみ異なった。
【０１５９】
リナクロチド１４５ｍｃｇまたは２９０ｍｃｇの経口剤形の効力を、レスポンダーおよびベースラインからの変化のエンドポイントを使用して評価した。エンドポイントの結果は、患者が毎日提供した情報に基づいた。ＣＳＢＭレスポンダーは、ＩＢＳ−Ｃ試験において定義されたものより、ＣＣ試験において異なって定義された。ＣＣ試験におけるＣＳＢＭレスポンダーは、処置期間の１２週間のうち９週間以上にわたる所与の週において３以上のＣＳＢＭおよびベースラインから１以上のＣＳＢＭの増加を有した患者であった。両試験において、ＣＳＢＭレスポンダーである患者の比率は、ＬＩＮＺＥＳＳの各用量（１４５ｍｃｇおよび２９０ｍｃｇ）でプラセボより統計的に有意に大きかった。
【０１６０】
ベースラインからの変化のエンドポイントについて、２つの試験にわたってリナクロチドの経口剤形のいずれかの用量を受けた患者は、腹部不快感、膨満、排便回数（ＣＳＢＭおよびＳＢＭ）および便の粘稠度（すなわち、便の硬度）、およびふんばりにおいて、プラセボを受けている患者と比較して統計的に有意に（ｐ＜０．０００１）大きい改善を有した。プラセボ患者が３９％であるのに対して、リナクロチドが１４５ｍｃｇおよび２９０ｍｃｇの患者ではそれぞれ６７パーセントおよび５７％が、彼らが最初の用量を服用して２４時間以内にＳＢＭを有した（プラセボに対して両用量についてｐ＜０．０００１）。
【０１６１】
１２週間の処置にわたってベースラインと比較して排便回数の漸増レベルの応答基準（すなわち、１週間当たりの０超、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、および６以上のＣＳＢＭの増加）を満たした患者の比率を分析した。各レベルにおいて、プラセボ患者と比較して統計的に有意に大きい比率の、リナクロチドの経口剤形のいずれかの用量で処置された患者が、応答判定基準を満たした。
【０１６２】
ＣＳＢＭおよびＳＢＭ頻度について、ＬＩＮＺＥＳＳ（１４５ｍｃｇおよび２９０ｍｃｇ）の各用量は、プラセボからの統計的に有意な分離を実証し、これは、処置期間の第１週で存在し、１２週間にわたって持続した（すべての時点で、各用量対プラセボについてｐ＜０．００１）。ＬＩＮＺＥＳＳ処置を中断した場合、試験３における４週間のＲＷ期間中、ＣＳＢＭおよびＳＢＭを含めた腸機能は、リバウンド悪化の証拠を伴うことなく第１週以内にベースラインに戻った（図３を参照）。
【０１６３】
いくつかの好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、最大で２５℃（７７°Ｆ）までで貯蔵され、可動域は、１５℃から３０℃（５９°Ｆから８６°Ｆ）の間で許容され得る［ＵＳＰ制御室温を参照］。いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、低湿度環境で貯蔵される。
【０１６４】
本明細書において、別段の指定のない限り、語句「からなる」は、リナクロチド組成物または組成物の単一成分に言及して使用する場合、この語句によって定義されるリナクロチド組成物または単一成分は、指定されたもの以外の成分を含有しないが、本発明と無関係である追加の成分および／または列挙されるステップもしくは成分に通常付随する不純物を含有し得ることを意味する。
【０１６５】
投与量および賦形剤
リナクロチド組成物は、任意の適切な治療投与量のリナクロチドを含有する任意の適切な経口医薬剤形（例えば、カプセル剤）であり得る。いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、ＩＢＳ−ｃ（便秘を伴うＩＢＳ）の処置などのために、空の胃に対して１日１回経口服用される２９０ｍｃｇを含むカプセル剤／錠剤を含む。いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、慢性特発性便秘症を処置するために、空の胃に対して１日１回経口服用される１４５ｍｃｇまたは２９０ｍｃｇを含むカプセル剤／錠剤を含む。
【０１６６】
リナクロチド組成物は、追加の成分または賦形剤を含むことができる。ある特定の実施形態において、投与単位の１またはそれより多くの治療剤が徐放性または制御放出製剤（extended  or  control  release  formulation）中に存在してもよく、追加の治療剤は、徐放性製剤中に存在しなくてもよい。例えば、本明細書に記載されるペプチドまたはアゴニストは、制御放出製剤または徐放性製剤中に存在しても存在しなくてもよい別の薬剤とともに同じ投与単位で制御放出製剤または持続放出製剤中に存在することができる。したがって、ある特定の実施形態において、本明細書に記載される薬剤の１またはそれより多くの即時放出、および１またはそれより多くの他の薬剤の制御放出をもたらすことが望ましい場合がある。
【０１６７】
リナクロチド組成物は、任意の薬学的に忍容され得る担体または媒体、例えば、溶媒、分散剤、コーティング剤、吸収促進剤、制御放出剤、および１またはそれより多くの不活性賦形剤（デンプン、ポリオール、顆粒化剤、微結晶性セルロース（例えば、セルフィア、Ｃｅｌｐｈｅｒｅビーズ（登録商標））、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを含む）などを含み得る。所望の場合、開示された組成物の錠剤の剤形は、標準的な水性技術または非水性技術によってコーティングされ得る。
【０１６８】
薬学的に許容され得る担体および薬学的に許容され得る不活性担体ならびに上述のさらなる成分として使用するための賦形剤の例として、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、抗菌剤、およびコーティング剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、用語「結合剤」は、本発明の実施において使用され得る任意の薬学的に許容され得る結合剤を指す。薬学的に許容され得る結合剤の例として、デンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、およびα化デンプン（例えば、Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｌｔｄ．から販売されているＳＴＡＲＣＨ  １５００（登録商標）およびＳＴＡＲＣＨ  １５００  ＬＭ（登録商標）、ならびに他のデンプン）、マルトデキストリン、ゼラチン、天然ガムおよび合成ガム（アカシアガム、粉末化トラガカントガム、グァーガム等）、セルロースおよびその誘導体（例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、微結晶性セルロース（例えば、ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｒｃｕｓ  Ｈｏｏｋ，ＰＡ，ＵＳＡから販売されているＡＶＩＣＥＬ（商標）（例えば、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０１（商標）、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０３（商標）およびＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０５（商標）等））、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン（例えば、ポリビニルピロリドンＫ３０）ならびにこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７０】
本明細書で使用される場合、用語「充填剤」は、本発明の実施において使用され得る任意の薬学的に許容され得る充填剤を指す。薬学的に許容され得る充填剤の例として、タルク、炭酸カルシウム（例えば、顆粒または粉末）、二塩基性リン酸カルシウム、三塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム（例えば、顆粒または粉末）、微結晶性セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ１０１またはＣｅｌｐｈｅｒｅ  ＣＰ−３０５）、粉末化セルロース、デキストレート（dextrate）、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン（例えば、Ｓｔａｒｃｈ  １５００）、α化デンプン、ラクトース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルト、ラフィノース、マルチトール、メレジトース、スタキオース、ラクチトール、パラチニット、キシリトール、ミオイノシトール、およびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７１】
ペプチドをコーティングするために特に使用され得る薬学的に許容され得る充填剤の例として、タルク、微結晶性セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ１０１またはＣｅｌｐｈｅｒｅ  ＣＰ−３０５）、粉末化セルロース、デキストレート、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、α化デンプン、ラクトース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルト、二塩基性リン酸カルシウム、ラフィノース、マルチトール、メレジトース、スタキオース、ラクチトール、パラチニット、キシリトール、マンニトール、ミオイノシトール、およびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７２】
本明細書で使用される場合、用語「添加剤」は、任意の薬学的に許容され得る添加剤を指す。薬学的に許容され得る添加剤として、崩壊剤、分散添加剤、滑沢剤、流動促進剤、抗酸化剤、コーティング添加剤、希釈剤、界面活性剤、矯味矯臭添加剤、湿潤剤、吸収促進添加剤、制御放出添加剤、固化防止添加剤、抗微生物剤（例えば、保存剤）、着色剤、乾燥剤、可塑剤、および色素が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書で使用される場合、用語「賦形剤」は、任意の薬学的に許容され得る添加剤、充填剤、結合剤、または薬剤である。
【０１７３】
リナクロチド組成物はまた、他の治療成分、固化防止剤、保存剤、甘味剤、着色剤、矯味矯臭剤、乾燥剤、可塑剤、色素、流動促進剤、接着防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（湿潤剤）、抗酸化剤、膜コーティング剤等も必要に応じて含むことができる。いずれのそのような必要に応じた成分も、製剤の安定性を保証するために、本明細書に記載される化合物と適合性でなければならない。組成物は、必要に応じて、例えば、ラクトース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、スクロース、マルトース、ラフィノース、マルチトール、メレジトース、スタキオース、ラクチトール、パラチニット、デンプン、キシリトール、マンニトール、ミオイノシトール等、およびその水和物、ならびにアミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、およびベタイン、ならびにペプチドおよびタンパク質、例えば卵白が挙げられる他の添加剤を含有してもよい。
【０１７４】
リナクロチド組成物は、例えば、種々のさらなる溶媒、分散剤、コーティング剤、吸収促進添加剤、制御放出添加剤、および１またはそれより多くの不活性添加剤（例えば、デンプン、ポリオール、顆粒化添加剤、微結晶性セルロース、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊添加剤等を含む）等を含むことができる。所望の場合、開示される組成物の錠剤の剤形が、標準的な水性技術または非水性技術によってコーティングされてもよい。組成物はまた、例えば、固化防止添加剤、保存剤、甘味添加剤、着色剤、矯味矯臭剤、乾燥剤、可塑剤、色素等も含むことができる。
【０１７５】
適切な崩壊剤として、例えば、寒天、炭酸カルシウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、他のデンプン、α化デンプン、クレイ、他のアルギン、他のセルロース、ガム、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１７６】
適切な滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油、軽鉱物油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、水素添加植物油（例えば、落花生油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびダイズ油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、シロイドシリカゲル（ＡＥＲＯＳＩＬ  ２００、Ｗ．Ｒ．Ｇｒａｃｅ  Ｃｏ．、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ  ＵＳＡ）、合成シリカの凝集エアロゾル（Ｅｖｏｎｉｋ  Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｃｏ．、Ｐｌａｎｏ，ＴＸ  ＵＳＡ）、発熱性二酸化ケイ素（ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ、Ｃａｂｏｔ  Ｃｏ．、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ  ＵＳＡ）、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【０１７７】
適切な流動促進剤としては、例えば、ロイシン、コロイド状二酸化ケイ素、三ケイ酸マグネシウム、粉末化セルロース、デンプン、タルク、およびリン酸三カルシウムが挙げられる。
【０１７８】
適切な固化防止添加剤として、例えば、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、二酸化ケイ素、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１７９】
例えば、ペプチド組成物のための保存剤として使用され得る適切な抗菌添加剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブチルパラベン、塩化セチルピリジニウム、クレゾール、クロロブタノール、デヒドロ酢酸、エチルパラベン、メチルパラベン、フェノール、フェニルエチルアルコール、フェノキシエタノール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、ソルビン酸カリウム、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、ソルビン酸、チメロサール（thimersol）、チモ（thymo）、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１８０】
適切な抗酸化剤としては、例えば、ＢＨＡ（ブチル化ヒドロキシアニソール）、ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン）、ビタミンＥ、没食子酸プロピル、アスコルビン酸およびその塩またはエステル、トコフェロールおよびそのエステル、α−リポ酸およびβ−カロテンが挙げられる。
【０１８１】
適切なコーティング添加剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ゼラチン、医薬品用グレーズ、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルアセテートフタレート、シェラック、スクロース、二酸化チタン、カルナウバろう、微結晶ろう、およびそれらの混合物が挙げられる。適切な保護コーティング剤として、Ａｑｕａｃｏａｔ（例えば、Ａｑｕａｃｏａｔ  Ｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｑｕａｅｏｕｓ  Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ、１５重量％、ＦＭＣ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ、ＥＣＤ−３０）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｅ  ＰＯ  ＰＥ−ＥＬ、Ｒｏｅｈｍ  Ｐｈａｒｍａ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ）、およびＯｐａｄｒｙ（例えば、Ｏｐａｄｒｙ  ＡＭＢ分散液、２０重量％、Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）が挙げられる。
【０１８２】
特定の実施形態において、ペプチド組成物に適切な添加剤は、スクロース、タルク、ステアリン酸マグネシウム、クロスポビドン、またはＢＨＡのうちの１またはそれより多くを含む。
【０１８３】
本発明の組成物はまた、Ｌ−ヒスチジン、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）、ポロキサマー（Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）およびポロキサマー１８８等）、アスコルビン酸、グルタチオン、透過促進剤（例えば、脂質、コール酸ナトリウム、アシルカルニチン、サリチレート、混合胆汁酸塩、脂肪酸ミセル、キレーター、脂肪酸、界面活性剤、中鎖グリセリド）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、ダイズトリプシン阻害剤、有機酸）、ｐＨ低下剤および生物学的利用能を促進するのに有効な吸収促進剤（米国特許第６０８６９１８号および同第５９１２０１４号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない）、咀嚼錠用の材料（デキストロース、フルクトース、ラクトース一水和物、ラクトースおよびアスパルテーム、ラクトースおよびセルロース、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、微結晶性セルロースおよびグァーガム、結晶ソルビトール等）；非経口剤（マンニトールおよびポビドン等）；可塑剤（セバシン酸ジブチル、コーティング用可塑剤、ポリビニルアセテートフタレート等）；粉末滑沢剤（ベヘン酸グリセリル等）；軟ゼラチンカプセル剤（ソルビトール特別溶液（sorbitol  special  solution）等）；コーティング用球体（砂糖球等）；球形化剤（ベヘン酸グリセリルおよび微結晶性セルロース等）；懸濁／ゲル化剤（カラゲナン、ゲランガム、マンニトール、微結晶性セルロース、ポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、キサンタンガム等）；甘味剤（アスパルテーム、アスパルテームおよびラクトース、デキストロース、フルクトース、蜂蜜、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、糖蜜、結晶ソルビトール、ソルビトール特別溶液、スクロース等）；湿式造粒剤（炭酸カルシウム、無水ラクトース、ラクトース一水和物、マルトデキストリン、マンニトール、微結晶性セルロース、ポビドン、デンプン等）、カラメル、カルボキシメチルセルロースナトリウム、チェリークリーム香料およびチェリー香料、無水クエン酸、クエン酸、粉砂糖、Ｄ＆Ｃ赤色３３号、Ｄ＆Ｃ黄色１０号アルミニウムレーキ、エデト酸二ナトリウム、１５％エチルアルコール、ＦＤ＆Ｃ黄色６号アルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ青色１号アルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ青色１号、ＦＤ＆Ｃ青色２号アルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ緑色３号、ＦＤ＆Ｃ赤色４０号、ＦＤ＆Ｃ黄色６号アルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ黄色６号、ＦＤ＆Ｃ黄色１０号、パルミトステアリン酸グリセロール、モノステアリン酸グリセリル、インジゴカルミン、レシチン、マンニトール、メチルパラベンおよびプロピルパラベン、グリチルリチン酸モノアンモニウム、天然オレンジ香料および人工オレンジ香料、医薬品用グレーズ、ポロキサマー１８８、ポリデキストロース、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリビドン（polyvidone）、α化コーンスターチ、α化デンプン、赤色酸化鉄、サッカリンナトリウム、カルボキシメチルエーテルナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、イチゴ香料、合成黒色酸化鉄、合成赤色酸化鉄、二酸化チタン、および白蝋が挙げられるがこれらに限定されない、他の賦形剤、薬剤、およびそのカテゴリーを含むことができる。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、明細書に記載されるペプチドと、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｋ＋、Ｎａ＋、もしくはＡｌ３＋、それらの組み合わせ、および／または立体障害一級アミンから選択される１またはそれより多くの薬剤とを含む医薬組成物が提供される。さらなる実施形態において、薬剤は、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、もしくはＺｎ２＋、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、二価金属カチオンは、限定されないが、酢酸マグネシウム、塩化マグネシウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸カルシウム、塩化カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、酢酸亜鉛、塩化亜鉛、リン酸亜鉛、硫酸亜鉛、酢酸マンガン、塩化マンガン、リン酸マンガン、硫酸マンガン、酢酸カリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸カリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、酢酸アルミニウム、塩化アルミニウム、リン酸アルミニウム、または硫酸アルミニウムとして提供される。さらなる実施形態において、カチオンは、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、酢酸亜鉛、塩化マンガン、塩化カリウム、塩化ナトリウム、または塩化アルミニウムとして提供される。他の実施形態において、カチオンは、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、または酢酸亜鉛として提供される。
【０１８５】
別の実施形態において、薬剤は、立体障害第一級アミンである。さらなる一実施形態において、立体障害第一級アミンは、アミノ酸である。なおさらなる一実施形態において、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。なおさらなる一実施形態において、天然に存在するアミノ酸は、ヒスチジン、フェニルアラニン、アラニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、チロシン、スレオニン、イソロイシン、トリプトファン、グリシン、およびバリンからなる群から選択され、なおさらに、天然に存在するアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン、アラニン、またはメチオニンである。なおさらなる実施形態において、天然に存在するアミノ酸は、ロイシンである。別の実施形態において、立体障害第一級アミンは、天然に存在しないアミノ酸（例えば、１−アミノシクロヘキサンカルボン酸）である。さらなる実施形態において、立体障害第一級アミンは、シクロヘキシルアミン、２−メチルブチルアミンまたはキトサンである。別の実施形態において、１またはそれより多くの立体障害第一級アミンが組成物中で使用され得る。
【０１８６】
場合によっては、立体障害第一級アミンは、式
【化６４】
2016521249.tif 000066
を有し、
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルエーテル、Ｃ１−Ｃ６アルキルチオエーテル、Ｃ１−Ｃ６アルキルカルボン酸、Ｃ１−Ｃ６アルキルカルボキシルアミドおよびアルキルアリールから独立して選択され、いずれの基もハロゲンまたはアミノで単置換または多置換され得るが、但し、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの２つ以下がＨである。別の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つ以下がＨである。
【０１８７】
他の実施形態において、薬学的に許容され得る担体と、ペプチドと、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｋ＋、Ｎａ＋、もしくはＡｌ３＋、またはそれらの混合物から選択されるカチオンと、立体障害第一級アミンとを含む医薬組成物が提供される。一実施形態において、カチオンは、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、もしくはＺｎ２＋、またはそれらの混合物である。さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、薬学的に許容され得る結合剤ならびに／または、薬学的に許容され得る流動促進剤、滑沢剤、もしくは流動促進剤および滑沢剤の両方として作用する添加剤、ならびに／または抗酸化剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、担体に適用される。いくつかの実施形態において、担体は、充填剤である。
【０１８８】
いくつかの場合には、担体に適用される水溶液中のカチオン：立体障害第一級アミン：ペプチドのモル比は、５〜１００：５〜５０：１である。いくつかの場合には、カチオン：立体障害第一級アミンのモル比は、２：１に等しくてもよく、またはそれより大きくてもよい（例えば、５：１〜２：１）。したがって、いくつかの場合には、担体に適用されるカチオン：立体障害第一級アミン：ペプチドのモル比は、１００：５０：１、１００：３０：１、８０：４０：１、８０：３０：１、８０：２０：１、６０：３０：１、６０：２０：１、５０：３０：１、５０：２０：１、４０：２０：１、２０：２０：１、１０：１０：１、１０：５：１、または５：１０：１である。いくつかの好ましい実施形態では、二価金属カチオン：立体障害第一級アミン：リナクロチドのモル比は、約５７〜６３：２８〜３２：１である。結合剤（例えば、メチルセルロース）が、担体に適用されるＧＣ−Ｃアゴニストペプチド溶液中に存在する場合、それは、０．５重量％〜２．５重量％（例えば、０．７重量％〜１．７重量％、または０．７重量％〜１重量％、または１．５重量％、または０．７重量％）で存在し得る。
【０１８９】
さらなる実施形態において、リナクロチド組成物は、薬学的に許容され得る結合剤もしくは添加剤、ならびに／または薬学的に許容され得る流動促進剤、滑沢剤、もしくは流動促進剤および滑沢剤の両方として作用する添加剤、ならびに／または抗酸化剤をさらに含む。
【０１９０】
本発明による適切な医薬組成物は、一般に、意図される用途に依存して幅広い最終濃度を与えるように、許容され得る薬学的希釈剤または賦形剤、例えば、無菌水溶液等とともに、ある量の活性化合物（複数可）を含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９５）によって例示されるような調製技術は、一般に、当該技術分野において周知である。
【０１９１】
本明細書において使用される場合、別段の指定のない限り、語句「から本質的になる」は、リナクロチド組成物または組成物の単一成分に言及して使用する場合、この語句によって定義される組成物または単一成分は、指定されたもの以外の医薬有効成分を含有しないが、任意の追加の不活性な成分もしくは賦形剤、またはホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含有し得ることを意味する。
【０１９２】
用語「リナクロチド組成物」は、本明細書において、別段の指定のない限り、リナクロチド、本明細書に記載されるとおりのリナクロチドを安定化、貯蔵、および送達するのに必要な賦形剤（例えば、約５７〜６３：２８〜３２：１の二価金属カチオン：アミノ酸：リナクロチドのモル比での二価金属カチオンおよびアミノ酸）、ならびに必要に応じて任意の適切なコンフィギュレーションまたはコンホメーションでの１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む組成物を意味するように使用される。例えば、いくつかの実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド（１４５μｇまたは２９０μｇなどの任意の所望の投与量で）、本明細書に記載されるとおりのリナクロチドを安定化、貯蔵、および送達するのに必要な賦形剤（例えば、約５７〜６３：２８〜３２：１の二価金属カチオン：アミノ酸：リナクロチドのモル比での二価金属カチオンおよびアミノ酸）、ならびに１またはそれより多くのホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む経口医薬剤形（例えば、カプセル剤または錠剤）を含む。他の好適な実施形態において、リナクロチド組成物は、リナクロチド（１４５μｇまたは２９０μｇなどの任意の所望の投与量で）、本明細書に記載されるもののようなリナクロチドを安定化、貯蔵、および送達するのに必要な賦形剤（例えば、約５７〜６３：２８〜３２：１の二価金属カチオン：アミノ酸：リナクロチドのモル比での二価金属カチオンおよびアミノ酸）、ならびに経口剤形の外側（例えば、しかし同じボトル、キャニスター、または容器内）にある１またはそれより多くの別個のホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含む経口医薬剤形（例えば、カプセル剤または錠剤）を含む。
【０１９３】
本発明は、その特定の例示的な実施形態を参照して説明されてきた。しかしながら、当業者には、上述の例示的な実施形態の形態以外の特定の形態において本発明を具現化することが可能であることが容易に明らかであろう。これは、本発明の主旨から逸脱することなく行われ得る。例示的な実施形態は、例示であるに過ぎず、決して限定的に解釈されるべきではない。本発明の範囲は、前述の説明によってではなく、むしろ添付の特許請求の範囲およびその等価物によって定義される。
【実施例】
【０１９４】
本明細書に記載されるとおりのＧＣ−Ｃアゴニストペプチドまたはその薬学的に許容され得る塩を、固相化学合成および天然の折り畳み（空気酸化）により、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）によって調製した。いくつかの場合において、これらのペプチドを、本明細書に記載するとおりに、合成後に修飾した。
【０１９５】
Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドを、２００ｍｌのＥｔＯＨ中でリナクロチド４．６ｇ（３．０ｍｍｏｌ）を混合することによって合成した。３７％（１．１２ｍｌ／５当量）のホルムアルデヒドをこの混合物に添加した。この反応混合物を水浴（４５□C）中で一晩インキュベートした。翌日、回転蒸発によって溶媒を除去した。ペプチドを、逆相クロマトグラフィーによってさらに精製した。
【０１９６】
Ｇｌｕ３−エチルエステルペプチドを、２０ｍｍｏｌ  Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｗａｎｇ樹脂上で合成した。アミノ酸のために使用した保護基は、ＴｙｒおよびＴｈｒについてｔ−ブチル基、ＡｓｎおよびＣｙｓについてＴｒｔ基である。ペプチド鎖を、Ｆｍｏｃ保護基の除去および保護されたアミノ酸の結合の繰り返しによって、この樹脂上にアセンブルした。ＤＩＣおよびＨＯＢｔを結合試薬として使用し、ＮＭＭをこの反応の塩基として使用した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを脱Ｆｍｏｃ試薬として使用した。最後のＦｍｏｃ保護基を除去した後、樹脂をカクテルＫで３時間処理して、樹脂からペプチドを切り離し、側鎖保護基を除去した。溶出したペプチドを冷エーテル中に沈殿させ、乾燥させた。乾燥したペプチドを、１対１０の比（ｇ／ｖ）でＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９５：３：２ｖ／ｖ）の混合物中に溶解させた。この混合物を室温で１時間撹拌した。単離ペプチドも冷エーテル中に沈殿させ、濾過によって収集し、高真空下で乾燥させた。
【０１９７】
Ｔｙｒ１４−エチルエステルペプチドを、フラグメント縮合法によって合成した。フラグメントＡ（Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＯＨ）を、Ｆｍｏｃ化学を使用して１５ｍｍｏｌのＣＴＳ樹脂上で調製した。このペプチド鎖も、Ｆｍｏｃ保護基の除去および保護されたアミノ酸の結合の繰り返しによって、樹脂上にアセンブルした。ＤＩＣおよびＨＯＢｔを結合試薬として使用し、ＮＭＭを塩基として使用した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを脱Ｆｍｏｃ試薬として使用した。最後のＦｍｏｃ保護基を除去した後、Ｂｏｃを結合させてＮ末端アミノ基を保護した。ペプチド樹脂を洗浄し、乾燥させ、１％  ＴＦＡ／ＤＣＭで処理して樹脂からペプチドを切り離した。フラグメントＢ（Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ−ＯＥｔ）を、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＴｙｒ−ＯＥｔ．ＨＣｌの結合から調製した。Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンでこのジペプチドを処理することによって除去した。
【０１９８】
Ｔｙｒ１４−エチルエステルペプチドを、ＤＭＦ中で２つのフラグメントを結合させることによって最後に合成した。ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＮＭＭを、この反応の結合試薬として使用した。保護基を、このペプチドをカクテルＫで２時間処理することによって除去した。このペプチドを冷エーテル中に沈殿させ、乾燥させた。乾燥したペプチドを、１対１０の比（ｇ／ｖ）でＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９５：３：２ｖ／ｖ）の混合物中に溶解させた。この混合物を室温で１時間撹拌した。単離ペプチドを冷エーテル中に再び沈殿させ、濾過によって収集し、高真空下で乾燥させた。
【０１９９】
実施例１：ＧＣ−Ｃ活性の分析のためのＴ８４細胞におけるｃＧＭＰの蓄積
ｃＧＭＰアッセイのために、４．５×１０５細胞／ｍＬのＴ８４細胞を、２４ウェル組織培養プレート中で一晩増殖させた。次の日に、Ｔ８４細胞を１ｍＬのＤＭＥＭ（ｐＨ７）で２回洗浄した。２回目の洗浄後、細胞を、ｐＨ７の緩衝液中、４５０μＬの１ｍＭイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）とともに、３７℃で１０分間インキュベートして、あらゆるホスホジエステラーゼ活性を阻害した。次いでペプチドを、ＤＭＥＭ緩衝液（ｐＨ７）中で１０倍濃度になるように希釈した。５０μＬのペプチド溶液を、Ｔ８４細胞で５００μＬの最終体積まで希釈し、各ペプチド濃度を１倍にした。このペプチドを１００ｎＭにおいて二つ組で試験した。
【０２００】
ｃＧＭＰの内因性レベルを決定するのにペプチド対照は使用しなかった。ペプチドを３７℃で３０分間インキュベートした。３０分後、上清を除去し、細胞を０．１Ｍ  ＨＣｌで溶解させた。細胞は、氷上で３０分間溶解させた。３０分後、溶解産物をピペットで取り出し、９６ウェルＨＰＬＣプレート中に入れ、１０，０００×Ｇで１０分間回転させ、あらゆる細胞残屑を除去した。先の回転物から上清を取り出し、新たな９６ウェルＨＰＬＣプレート中に入れた。
【０２０１】
ｃＧＭＰの濃度を、ＬＣ／ＭＳ条件を使用して各試料から決定し（下の表１）、標準曲線を計算した。ＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅで生成した濃度−応答曲線から計算した。
【表１】
2016521249.tif 000067
【０２０２】
実施例２：Ｔ８４細胞中のＧＣ−Ｃ受容体に対する例示的ペプチドの相対結合親和性
ヒト結腸上皮（Ｔ８４）細胞上の細胞表面ＧＣ−Ｃ受容体上の結合部位について、ペプチドが、既知のＧＣ−Ｃアゴニストであるブタ由来の熱安定性エンテロトキシン（ｐＳＴａ）と競合する競合結合アッセイを用いて、グアニル酸シクラーゼ−Ｃ受容体（ＧＣ−Ｃ）に対するリナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤの相対結合親和性を決定した。ｐＳＴａを１２５Ｉで放射標識し、その受容体結合の測定を可能にした。種々の濃度の各ペプチド（０．１〜３，０００ｎＭ）を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、２．０×１０５のＴ８４細胞、および１７０ｐＭ［１２５Ｉ］−ｐＳＴａ（２００，０００ｃｐｍ）を含有する０．２０ｍＬの反応混合物に加えることにより競合結合アッセイを行った。そのデータを使用して競合放射性リガンドの結合曲線を構築し、ＩＣ５０およびＫｉ値によって測定したリナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤの相対結合親和性を決定した。
【０２０３】
リナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤのどちらも、Ｔ８４細胞上の細胞表面ＧＣ−Ｃ受容体への［１２５Ｉ］−ｐＳＴａの特異的結合を競合的に阻害した。阻害定数（Ｋｉ）によって測定したそれらの相対結合親和性は次の通りであった：リナクロチドのＫｉ＝３．９±１．６ｎＭ、およびＣｙｓ１−ＩＭＤのＫｉ＝１．４±０．５ｎＭ（図３）。
【０２０４】
実施例３：例示的ペプチドによって誘導されたＴ８４細胞におけるｃＧＭＰの反応
Ｔ８４細胞におけるグアニル酸シクラーゼ−Ｃ受容体（ＧＣ−Ｃ）アゴニストの活性について、リナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤを次の通りに試験した。９６ウェルプレートの各ウェルにおいて、０．１８ｍＬのダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、１ｍＭ  ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）とともに約２００，０００個のＴ８４細胞／ウェルを最初に３７℃で１０分間インキュベートした。各ペプチドを０．１〜１０，０００ｎＭの範囲の最終濃度まで希釈し、Ｔ８４細胞を含有する９６ウェルプレートに０．０２ｍＬの各希釈液を２連で加え、ウェル当たりの最終体積を０．２０ｍＬとした。ペプチド反応物を３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、上清を除去して廃棄し、氷上で３０分間、０．１Ｍ冷塩酸（ＨＣｌ）を用いて細胞を溶解させた。遠心分離により細胞片を除去し、タンデム質量分析法とともに液体クロマトグラフィーを使用して、各溶解産物中のグアノシン３’，５’−環状一リン酸（サイクリックＧＭＰ）の濃度を決定した。そのデータを使用して用量反応曲線を構築し、各被験物質について半数効果濃度（ＥＣ５０）を計算した。
【０２０５】
リナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤは、細胞内ｃＧＭＰの増加によって測定したところ、Ｔ８４細胞におけるＧＣ−Ｃアゴニストの活性を示した（図４）。リナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤのＥＣ５０値は、それぞれ、３１５±１０５ｎＭおよび１７２±３２ｎＭであった。
【０２０６】
実施例４：例示的ペプチドの含有量および純度の測定
本発明のペプチドの含有量および純度は、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｖ  Ａ．０９．０３ソフトウェアまたはその等価物を用いたＡｇｉｌｅｎｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  １１００
ＬＣ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して、逆相勾配液体クロマトグラフィーによって決定され得る。ＹＭＣ  Ｐｒｏ（商標）Ｃ１８カラム（寸法：３．０×１５０ｍｍ、３．５ｕｍ、１２０Å：Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）またはその等価物を使用して４０℃に維持する。移動相Ａ（ＭＰＡ）は、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水からなり、移動相Ｂ（ＭＰＢ）は、９５％アセトニトリル：０．１％トリフルオロ酢酸を含む５％水からなる。ペプチドの溶出は、０％から４７％までのＭＰＢで２８分の勾配、続いて１００％のＭＰＢまでの４分間での傾斜、続いて１００％のＭＰＢで５分間保持してカラム洗浄することにより達成される。１分で０％のＭＰＢに戻し、続いて１００％のＭＰＡに１０分間保持することにより、カラムの再平衡化を行う。流量は、０．６ｍＬ／分であり、検出は、２２０ｎｍのＵＶにより達成される。
【０２０７】
分析のための試料を、例示的なペプチドのカプセル剤の内容物を０．１Ｎ  ＨＣｌに添加して、ペプチド２０μｇ／ｍＬの標的濃度を得ることによって調製する。１００μＬのこの溶液をカラムに注入する。
【０２０８】
Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチド
Ｃｙｓ１−ＩＭＤペプチドを、１００ｍＬ／分の流量で、６０分で１５〜４５％の緩衝液Ｂの直線勾配となるようにした０．１％  ＴＦＡ緩衝液を用いて２インチＷａｔｅｒｓ  Ｃ１８カラムを使用して精製した。約９５％の純度を有するプールした画分をＣ１８カラムにローディングした。ＴＥＡＰ緩衝液およびＡＡ緩衝液でカラムを平衡化した後、６０分で１５〜７５％の緩衝液Ｂの直線勾配となるようにしたＨＡＣ緩衝液を用いてペプチドを精製および溶出した。精製されたペプチドを含むプールした画分を凍結乾燥して乾燥させた。ＲＰ−ＨＰＬＣによるリナクロチドおよびＣｙｓ１−ＩＭＤ生成物の分析の例を、図２に示す。
【０２０９】
Ｇｌｕ３−エチルエステルペプチド
Ｇｌｕ３−エチルエステルペプチド（６．０ｇ）を、水中１２Ｌの０．０５Ｍ炭酸水素アンモニウム中に溶解させ、酸化プロセスをエルマン試験、ＭＳ、および分析用ＨＰＬＣによってモニタリングした。酸化プロセスは、完了するのにおよそ４８時間を要した。
【０２１０】
上記溶液を濾過し、２インチＣ１８カラムにローディングし、１００ｍＬ／分の流量で、６０分で１０〜４０％の緩衝液Ｂの直線勾配となるようにした０．０５Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液を使用することによって精製した。
【０２１１】
９５％超の純度を有するプールした画分を凍結乾燥して乾燥させた。ペプチドを乾燥させた後、このペプチドをアセトニトリル−水中に再溶解させ、酢酸を添加することによって約４〜５のｐＨに酸性化し、再凍結乾燥して乾燥させた。
【０２１２】
Ｔｙｒ１４−エチルエステルペプチド
Ｔｙｒ１４−エチルエステルペプチドを、単離ペプチド２．５ｇを５Ｌの０．０５Ｍ炭酸水素アンモニウム水溶液中に溶解させることによって精製し、酸化プロセスをエルマン試験、ＭＳ、および分析用ＨＰＬＣによってモニタリングした。この酸化プロセスは、完了するのにおよそ１６時間を要した。
上記溶液を濾過し、２インチポリマーカラムにローディングし、１００ｍＬ／分の流量で、６０分で１５〜４５％の緩衝液Ｂの直線勾配となるようにした０．０５Ｍ炭酸水素アンモニウム緩衝液を使用することによって精製した。ペプチドを含むプールした画分を、凍結乾燥して乾燥させた。ペプチドを乾燥させた後、このペプチドをアセトニトリル−水中に再溶解させ、酢酸を添加することによって４〜５のｐＨに酸性化し、再凍結乾燥して乾燥させた。
【０２１３】
調製した試料中のペプチド濃度を、同様に調製したペプチド外部標準に対して決定することにより、精製したペプチドの含有量を測定した。
【０２１４】
（実施例５）
リナクロチド組成物の安定性に対する、様々なホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含有させることの効果を次に評価した。
【０２１５】
６０ｃｃの四角いＨＰＤＥボトル（誘導シールとともに３３ｍｍのキャップを有する）に、（ｉ）６０：３０：１のＣａＣｌ２：ロイシン：リナクロチドのおおよそのモル比でリナクロチド１４５μｇまたは２９０μｇ、結合剤、塩化カルシウム、およびロイシンで被覆されたビーズを含有するカプセル剤、（ｉｉ）ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物無し（陰性対照）、または表３に開示したホルムアルデヒドスカベンジャー化合物の１つを含むキャニスターのいずれか、および（ｉｉｉ）必要に応じてシリカゲル乾燥剤３グラムを含有するキャニスターを入れた。
【０２１６】
さらに、リナクロチド組成物のいくつかは、ホルムアルデヒドストレッサー（特に、乾燥剤キャニスターの製造者（Ｓｕｄ  Ｃｈｅｍｉｅ）によって施された乾燥剤キャニスター上の粘着性のラベル）を含有した（いくつかのリナクロチド組成物におけるその存在は、「ラベルされたキャニスター」として表中に示されている）。ホルムアルデヒドストレッサーキャニスターに関して、キャニスターは、６０℃で、２４時間で約２７．５ｕｇのホルムアルデヒドを放出することが出願人らによって観察された。
【０２１７】
リナクロチド組成物を、４０℃、７５％の相対湿度の安定性チャンバー内に貯蔵した。次に、各リナクロチド組成物中のＣｙｓ１−ＩＭＤの量を、４、８、および１３週間の貯蔵後に、勾配溶出を使用する逆相ＨＰＬＣを介して、２２０ｎｍでＵＶ検出して決定した。定量化は、クロマトグラム面積のパーセントに基づいた。
【０２１８】
リナクロチドカプセル剤の試験試料を、フラスコ内にビーズ内容物を出し、希釈剤を添加し、３０分間振盪することによって調製する。分析では、６または８カプセル（それぞれ、２９０μｇおよび１４５μｇについて）を合わせたビーズ内容物を使用した。ＨＰＬＣによる分析試験方法の操作条件を表２に略述する。安定性アッセイの結果を表３に示す。
【表２】
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【表３】
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【０２１９】
表３に実証したように、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含有したリナクロチド組成物は、ホルムアルデヒドスカベンジャー化合物を含有しないもの（陰性対照）より、驚くほどおよび予想外に高い安定性を呈した。
【０２２０】
本開示において言及した全ての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許出願が参照によって援用されることが具体的にかつ個別に示されている場合と同じ程度に、参照によって本明細書に援用される。参照によって援用された特許または刊行物のいずれかにおける用語の意味が、本開示において使用される用語の意味と矛盾する場合、本開示における用語の意味が支配的であることが意図される。さらに、上記の議論は、本発明の例示的な実施形態を開示および説明しているに過ぎない。当業者は、そのような議論ならびに添付の図面および特許請求の範囲から、以下の特許請求の範囲に定義されるような本発明の主旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更、修正およびバリエーションが行われ得ることを容易に認識するであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年3月17日(2015.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2016521249000001.app
【国際調査報告】
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2016521249.tif 000078
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