(57)【要約】  本出願は、結腸および大腸がんの有効な治療のための療法を記述する。本発明は、結腸および大腸がん（こうしたがんが薬剤耐性である場合も）の治療のためであり、それによりがん薬剤耐性を克服することを可能にする、ＢＴＫ阻害剤およびフルオロウラシルの併用を含む医薬品キットに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
小分子ＢＴＫ阻害剤（不可逆的ＢＴＫ阻害剤など）およびフルオロウラシルを同時に含む治療効果量の併用療法の投与によってがん患者を治療する方法であって、前記ＢＴＫ阻害剤が、補助療法ではない方法。
【請求項２】
前記フルオロウラシル用量、前記ＢＴＫ阻害剤用量または両方が、対応する単剤療法のために用いられる用量よりも少ない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記不可逆的ＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３を含む群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記イブルチニブの用量が、一投与当り１から６０ｍｐｋの範囲、例えば５から５０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０から５０ｍｇ／Ｋｇ、具体的には１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記イブルチニブの有効量が、２５ｍｇ／日から８４０ｍｇ／日の範囲、例えば５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、５２５、５４０、５５０、５７５および６００ｍｇ／日である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記フルオロウラシルの量が、一投与当り１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲、例えば１５から５０ｍｇ／Ｋｇ、具体的には１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記フルオロウラシルの用量の有効量が、４００ｍｇ／ｍ2から６００ｍｇ／ｍ2の範囲である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記がんが、ｐ５３不完全または欠損である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬剤耐性が、フルオロウラシルに対してである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１２】
前記薬剤耐性が、ＢＴＫ阻害剤に対してである、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記がんが、上皮がん、例えば大腸がん、肝細胞がん（肝臓がん）、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、膀胱がん、頭頸部がんまたは肺がんなどからなる群から選択される、例えば膵臓がんまたは大腸がんである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記がんが、転移性がんである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記がんが、白血病、例えばＡＬＬ、ＣＬＬ、ＣＭＬまたはＡＭＬである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
フルオロウラシル耐性がん患者を治療する方法であって、前記患者をフルオロウラシルでの治療に対して感作するために、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤（不可逆的ＢＴＫ阻害剤など）を投与するステップを含む方法。
【請求項１８】
同時投与のためにＢＴＫ阻害剤（不可逆的ＢＴＫ阻害剤など）およびフルオロウラシルを含む併用療法であって、前記ＢＴＫ阻害剤が、補助療法ではなく、がんの治療、例えば白血病または本明細書に述べるような上皮性起源のがんなどの、固形腫瘍の治療において使用するための併用療法。
【請求項１９】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項１８に記載の併用療法。
【請求項２０】
がんの治療、例えば白血病または固形腫瘍、例えば本明細書に述べるような上皮性起源のがんの治療のために、同時投与用の併用療法の製造においてＢＴＫ阻害剤（例えば不可逆的ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３、具体的にはイブルチニブ）およびフルオロウラシルを含む使用。
【請求項２１】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
フルオロウラシル療法などの、化学療法に対してがんを感作するための薬物の製造におけるＢＴＫ阻害剤、例えば不可逆的ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤耐性がん、例えば結腸および大腸がんの効果的治療のための新規の療法、ならびにがん患者における薬剤耐性を最小化するための療法を記述する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスは、ＤＮＡ開裂の活性化に繋がる生化学的事象の誘導性のカスケードによって引き起こされる真核細胞死の一般的な形態である。ほとんどの化学療法剤は、アポトーシスを誘導することによってそれらの抗がん活性を作用させる。アポトーシスに対して耐性の細胞は、したがって有効な抗がん療法を限定する主要因である。
【０００３】
多くのがんは、化学療法の多くの形態の失敗における主要因である、化学療法薬に対する耐性を発生する。薬剤耐性は、種々の血液がんならびに乳がん、卵巣がん、肺がん、および下部胃腸管がんを含めた、固形腫瘍を有する患者に影響する。
【０００４】
細胞質性チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーである、ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、Ｂ系統リンパ系細胞の生存、活性化、増殖、および分化を調節する複数のシグナル伝達経路に密接に関わる。臨床においていくつかのＢＴＫ阻害剤がある。現在承認されている唯一の分子は、イブルチニブ（特許文献１に開示されている１−（３−（４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン）である。イブルチニブは現在、少なくとも１種の先行の療法を受けた患者においてマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を治療するために用いられている。すなわちイブルチニブは、がんが再発する危険を低下させるために一次治療後に与えられる追加的な治療である、がん補助療法と考えられ得る。一次治療は、例えば化学療法、放射線療法、外科手術またはそれらの併用であってよい。
【０００５】
イブルチニブのための治療計画は、許容できない毒性または疾患進行まで経口で１日に４回摂取される１４０ｍｇカプセルである。
【０００６】
特許文献２は、６５〜６８ｋＤａの分子量を有する、ＢＴＫタンパク質の新規のアイソフォームの識別および単離を記述している。ｐ６５ＢＴＫとしても識別される、新規のＢＴＫタンパク質は、Ｂ細胞において識別されたＢＴＫよりも短く、かつそのｍＲＮＡは、異なる第一エキソンを有する。
【０００７】
ＢＴＫ阻害剤、例えば不可逆的ＢＴＫ阻害剤で治療されたがんがＢＴＫ阻害剤に対して耐性になる可能性があることが、現在明らかになりつつある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００８／０３９２１８号
【特許文献２】国際公開第２００８／１１０６２４号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、ＢＴＫ阻害剤が補助療法ではない、小分子ＢＴＫ阻害剤（不可逆的ＢＴＫ阻害剤など）およびフルオロウラシルを同時に含む治療的有効量の併用療法によってがん患者が効果的に治療され得ることを見出した。
【００１０】
驚いたことに本発明者は、イブルチニブなどの、小分子ＢＴＫ阻害剤の特にフルオロウラシルとの併用は、それが、ＢＴＫ阻害剤が他の化学療法、薬剤と併用して用いられた場合に利用可能ではない可能性がある、相乗的結果を提供するので、例えば一実施形態においてＢＴＫ阻害剤の用量、フルオロウラシルの用量または両方の薬剤の用量を、がん細胞を殺すことなどの、有効な抗がん活性を維持しながら、単剤療法と比較して減少することができ、有益であることを立証した。
【００１１】
本発明は、がんの治療において使用するための医薬品キットにさらに関する。具体的には、医薬品キットは、薬剤感受性がんおよび薬剤耐性がんの両方の治療における、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用用である。
【００１２】
用量の減少は、望ましくない副作用を減少しかつしたがって療法に対する寛容性を増加するので、患者にとって重要である。ＢＴＫ阻害剤に関連した有害事象には、血小板減少、下痢、好中球減少、貧血、疲労、筋骨格系の、疼痛、末梢性浮腫、上気道感染症、嘔気、挫傷、呼吸困難、便秘、発疹、上腹部痛、嘔吐および食欲減退が含まれる。
【００１３】
したがって一実施形態において用いられるＢＴＫ阻害剤用量は、単剤療法のための用量（イブルチニブについては現在１日当たり５４０ｍｇ）より少なく、例えば単剤療法において用いられる用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％である。
【００１４】
一実施形態においてイブルチニブの用量は、一投与当り１から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲、例えば５から５０ｍｇ／ｋｇ、例えば１０から５０ｍｇ／Ｋｇ、具体的には１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである。
【００１５】
一実施形態においてイブルチニブの用量は、２５ｍｇ／日から８４０ｍｇ／日の範囲、例えば５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、５２５、５４０、５５０、５７５および６００ｍｇ／日である。
【００１６】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤の用いられる用量は、それに関連する減少した副作用を有する。
【００１７】
より低用量のＢＴＫ阻害剤をより提供する物は、がん細胞がＢＴＫ阻害剤に対して耐性になる傾向がより低い結果になり得る。したがって、薬剤耐性の発生は、より低用量のＢＴＫ阻害剤、例えば、単剤療法用量の１５から５０％など、単剤療法用量の１０から９０％を用いることによって回避可能で有り得る。したがって一実施形態において本開示の、減少した用量のＢＴＫ阻害剤との併用を用いることによって、がん細胞のＢＴＫ阻害剤に対する薬剤耐性の発生を減少または最小化する方法が提供される。
【００１８】
理論データによって拘泥されることを望むものではないが、具体的にはｐ５３欠損細胞株において用いられるＢＴＫ阻害剤用量が増加するにつれて細胞がそれに対して耐性である傾向が増加することを示唆し得る（例えば図３Ｂを参照）。
【００１９】
５ＦＵの別名でも知られる、フルオロウラシルは、白血球数を減少させかつ患者を日和見感染により感染しやすくする。一実施形態において用いられる用量は、単剤療法のために用いられる用量より少ない。用量が８００ｍｇ／日を超えない、例えば１から５日間で５００ｍｇ／平方メートルＩＶ、または週に４５０〜６００ｍｇ／平方メートルＩＶ、または２００〜４００ｍｇ／平方メートルＩＶ連続注入の種々の単剤療法プロトコールが存在する。実施されたｉｎ  ｖｉｖｏでの調査において（経口胃管栄養法として与えられた）１キロ当たり６０ｍｇまで少ない本発明の用量は、ＢＴＫ阻害剤との相乗的効果を示した。
【００２０】
一実施形態においてフルオロウラシルの用量は、一投与当り１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲、例えば１５から５０ｍｇ／Ｋｇ、具体的には１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである。
【００２１】
一実施形態においてフルオロウラシルの用量は、例えば用量が１日当たり８００ｍｇを超えない、１日当たり４００ｍｇ／ｍ2から６００ｍｇ／ｍ2の範囲である。
【００２２】
５ＦＵ用量を減少させる能力は、枯渇した白血球の量を減少させる場合がありそれによって感染と戦う患者の能力を増加させるので特に有益である。
【００２３】
５ＦＵでの治療は、相当な量の患者間のばらつきを示す。本発明者によって生成されたデータは、本開示の併用療法で患者間のばらつきが減少することを有利に示唆する。
【００２４】
一実施形態においてがんは、薬剤耐性がん、例えば化学療法耐性がんである。一実施形態において薬剤耐性は、ＢＴＫ阻害剤である。
【００２５】
一実施形態においてがんは、膵臓がんまたは大腸がんなど、固形腫瘍、例えば上皮由来がん、大腸がん、肝細胞がん（肝臓がん）、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、膀胱がん、頭頸部がんまたは肺がんである。
【００２６】
一実施形態においてがんは、転移性がんである。
【００２７】
一実施形態においてがんは、ｐ５３欠損がんである。
【００２８】
一実施形態においてがんは、白血病、例えばＡＬＬ、ＣＬＬ、ＣＭＬ、マントル細胞リンパ腫またはＡＭＬである。
【００２９】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤は、不可逆的ＢＴＫ阻害剤である。一実施形態においてＢＴＫ阻害剤は、イブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４、ＬＦＭ−Ａ１３およびＰＬＳ−１２３を含む群から選択され、例えばイブルチニブである。
【００３０】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤は、ＬＦＭ−Ａ１３ではない。
【００３１】
一態様において患者を感作してフルオロウラシルで治療するために、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤（不可逆的ＢＴＫ阻害剤など）を投与することを含むフルオロウラシル耐性のがん患者を治療する方法が提供される。
【００３２】
ＢＴＫ阻害剤が補助療法ではなく、例えば白血病または本明細書に述べるような上皮性起源のがんなど、固形腫瘍がんなどの、がんの治療において使用するためである、同時投与のためにＢＴＫ阻害剤（不可逆的ＢＴＫ阻害剤など）およびフルオロウラシルを含む併用療法も提供される。一実施形態においてがんは、薬剤耐性である。一実施形態においてがんは、ｐ５３欠損である。
【００３３】
さらなる態様において使用が提供される。
【００３４】
ＢＴＫ阻害剤を含む使用は、不可逆的ＢＴＫ阻害剤である。一実施形態においてＢＴＫは、本明細書に述べるような上皮性起源のがんなどのがんの治療、例えば白血病または固形腫瘍のための、同時投与用の併用療法の製造における本明細書に開示される化合物、例えばイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３、具体的にはイブルチニブ）およびフルオロウラシルである。一実施形態においてがんは、薬剤耐性である。一実施形態においてがんは、ｐ５３ヌルである。
【００３５】
さらなる態様においてフルオロウラシル療法などの、化学療法に対してがんを感作するための薬物の製造における、ＢＴＫ阻害剤、例えば不可逆的ＢＴＫ阻害剤例えばイブルチニブの使用が提供される。一態様において本発明者らは、驚いたことに結腸がんおよび大腸がんに対してイブルチニブおよびフルオロウラシルを投与した場合、前記がんが治療されることを見出した。
【００３６】
したがって、一態様において本発明は、例えば、結腸および大腸がんの治療において使用するための、医薬品キットに関する。
【００３７】
具体的には本発明は、薬剤感受性および薬剤耐性両方の、結腸および大腸がんの治療における、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用のための医薬品キットに関する。
【００３８】
本発明は、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの投与を含む、耐性の結腸および大腸がんの治療のための方法にさらに関する。
【００３９】
本発明の発明を実施するための形態にさらに記載されるように、本発明の医薬品キットは、薬剤感受性および薬剤耐性両方の、結腸および大腸がんの治療に特異的であることの利点を有する。
【００４０】
本発明の特徴および利点は、以下に報告される発明を実施するための形態から、例示的および非限定的な目的のために示される実施例から、および添付された図１〜１０から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１ａ】図１は、実施例１に記載のような増殖曲線（短期アッセイ）において詳細に例示されるような異なる濃度のイブルチニブの５ＦＵに耐性の３種の結腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０およびＤＬＤ−１）および感受性のＨＣＴ１１６細胞株の増殖への影響を示す。図１ａは、増加する濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）の存在中で、７２時間増殖させたＨＣＴ１１６細胞の投与反応曲線であり、５０００細胞／ウェルを３重に播種して細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  （Ｐｒｏｍｅｇａ）の使用によって２４時間毎に評価した。
【図１ｂ】増加する濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）の存在中で、７２時間増殖させたＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞の投与反応曲線であり、５０００細胞／ウェルを３重に播種して細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  （Ｐｒｏｍｅｇａ）の使用により２４時間毎に評価した。
【図１ｃ】増加する濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）の存在中で、７２時間増殖させたＤＬＤ−１細胞の投与反応曲線であり、５０００細胞／ウェルを３重に播種して細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  （Ｐｒｏｍｅｇａ）の使用により２４時間毎に評価した。
【図１ｄ】増加する濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）の存在中で、７２時間増殖させたＳＷ４８０細胞の投与反応曲線であり、５０００細胞／ウェルを３重に播種して細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  （Ｐｒｏｍｅｇａ）の使用により２４時間毎に評価した。
【図２】実施例２に記載のコロニーアッセイ実験（長期アッセイ）において例示されるような異なる濃度のイブルチニブ（０から２０μＭ）のクローニング効率ならびに５ＦＵに耐性である３種の結腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０およびＤＬＤ−１）および感受性のＨＣＴ１１６細胞株の長期増殖への影響を示す。細胞は、低密度（１０００細胞／各細胞株）で播種して０から２０μＭの範囲の濃度のイブルチニブの存在中で１０〜１２日間増殖させた。培地を３日間毎に交換して処置の最後にクリスタルバイオレット染色によってコロニーを視覚化した。
【図３】実施例３に記載のような異なる濃度のイブルチニブ（０から２０μＭ）およびイブルチニブ（０から２０μＭ）＋５ＦＵ（２００μＭ）のＨＣＴ１１６およびＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ結腸がん細胞株の生存度への影響を示す。ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯおよびＨＣＴ１１６細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで異なる濃度のイブルチニブ（０から２０μＭ）±５ＦＵ（２００μＭ）の存在中で７２時間増殖させてそれらの生存度をインキュベーションの最後にカルセインアッセイを用いて評価した。
【図４】実施例３に記載のような２０μＭのイブルチニブの２００μＭの５ＦＵとの併用の薬剤感受性結腸がん細胞（ＨＣＴ１１６）、薬剤感受性結腸がん細胞過剰発現ｐ６５ＢＴＫ（ＨＣＴ１１６ｐ６５ＢＴＫ）および薬剤耐性結腸がん細胞（ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ）への影響を示す。３種の細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで２０μＭのイブルチニブ＋２００μＭの５ＦＵの存在中で７２時間増殖させてそれらの生存度をインキュベーションの最後にカルセインアッセイを用いて評価した。
【図５ａ】図５は、イブルチニブの低用量の５ＦＵとの併用の薬剤感受性結腸がん細胞（ＨＣＴ１１６）への影響を示す。図５ａは、実施例４に記載のような２００μＭの５ＦＵ、２０μＭのイブルチニブ、２００μＭの５ＦＵ＋２０μＭのイブルチニブの存在中のインキュベーションの７２時間で撮影されたＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞の代表的な写真を示す。
【図５ｂ】１０μＭの５ＦＵ、２０μＭのイブルチニブ、１０μＭの５ＦＵ＋２０μＭのイブルチニブの存在中のインキュベーションの７２時間で撮影されたＨＣＴ１１６細胞の代表的な写真として示すように２００μＭの５ＦＵ、１０μＭの５ＦＵ、２０μＭのイブルチニブ、１０μＭの５ＦＵ＋２０μＭのイブルチニブの存在中のインキュベーションの７２時間で撮影されたＨＣＴ１１６細胞の代表的な写真を示す。より適切な比較のために、（薬剤感受性細胞に）最大限有効な濃度の２００μＭの５ＦＵを用いた処置を、実施例４に記載のような１０μＭの５ＦＵ＋２０μＭのイブルチニブの併用と共に横に並べて示す。
【図５ｃ】ＨＣＴ１１６の投与反応曲線を示す。細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで異なる低濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）およびイブルチニブ（０から１０μＭ）＋低用量の５ＦＵ（１０μＭ）の存在中で７２時間増殖させて、インキュベーションの最後にクリスタルバイオレット染色法を用いて生存度を評価した。１００％は、実施例４に記載のような異なる低濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）＋低用量の５ＦＵ（１０μＭ）のＨＣＴ１１６結腸がん細胞株の生存度への影響（ｆｆｅｃｔ）を有する処置を開始する前の、０日目における生存細胞の割合を表す。
【図６】実施例５に記載のように、いかなる薬剤も無くまたはイブルチニブ２０μＭ、５ＦＵ  ２００μＭ、イブルチニブ２０μＭ＋５ＦＵ  ２００μＭ、オキサリプラチン２０μＭ、イブルチニブ２０μＭ＋オキサリプラチン２０μＭの存在中で７２時間処置した薬剤耐性のＳＷ４８０結腸がん細胞を示す。生存度を、カルセインアッセイを用いてインキュベーションの最後に評価した。
【図７】実施例５に記載のようなイブルチニブとＥＧＦＲ（セツキシマブ、パニツムマブ）およびＶＥＧＦ（ベバシズマブ）の阻害のための３種の異なる抗腫瘍「標的」薬物とのＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯおよびＨＣＴ１１６細胞株への短期および長期の併用処置の結果を示す。上：ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯおよびＨＣＴ１１６細胞株を、１０μｇ／ｍｌのセツキシマブ、７５μｇ／ｍｌのパニツムマブ、２５μｇ／ｍｌのベバシズマブ±イブルチニブ２０μＭの存在中でｉｎ  ｖｉｔｒｏで７２時間増殖してそれらの生存度を併用処置後７２時間でトリパンブルー染色によって評価した。下：細胞を、低密度（１０００細胞／各細胞株）で播種して１０μｇ／ｍｌのセツキシマブ、７５μｇ／ｍｌのパニツムマブ、２５μｇ／ｍｌのベバシズマブ±イブルチニブ２０μＭの存在中で１０〜１２日間増殖させた。培地は３日間毎に交換して処置の最後にクリスタルバイオレット染色によってコロニーを視覚化した。
【図８】実施例５において描写されるようなイブルチニブとセツキシマブ、またはパニツムマブまたはベバシズマブ（ＥＧＦＲの阻害のための「標的」薬物）の併用処置の２種の異なる薬剤耐性の結腸がん細胞株（ＨＴ２９およびＳＷ４８０）の細胞生存度への影響を示す。細胞を、未処置のままあるいは２５μｇ／ｍｌのベバシズマブもしくは１０μｇ／ｍｌのセツキシマブもしくは７５μｇ／ｍｌのパニツムマブを単独でまたは２０ｍＭのイブルチニブと併用して処置した。生細胞の割合を、ＭＴＴアッセイにより処置の７２時間後に評価した。
【図９ａ】図９は、５ＦＵ、イブルチニブ低用量（２５ｍｐｋ）およびそれらの併用での治療時のＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ異種移植片の増殖の反応速度論および体積を示す。図９ａは、実施例６に記載のような対照（ビヒクル）と比較した、イブルチニブ（２５ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）およびイブルチニブ（２５ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）で処置後のＣＤ１マウスに異種移植したＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞由来の腫瘍の増殖曲線を示す（ｎ＝マウス８匹／群）。
【図９ｂ】ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞を異種移植したマウスのイブルチニブ（２５ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、イブルチニブ（２５ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、およびビヒクル単独（対照）を用いた処置の最後に測定した腫瘍体積の範囲を示す（ｎ＝マウス８匹／群）。図９ｂの箱ひげ図グラフにおいて、太線は値の中心値を示し、箱は第１および第３の四分位数を示す。実施例６に記載のように各群の最大値および最小値も報告される。
【図１０ａ】図１０は、５ＦＵ、イブルチニブ高用量（５０ｍｐｋ）およびそれらの併用での処置時のＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ異種移植片の増殖の反応速度論および体積を示す。図１０ａは、実施例６に記載のような対照（ビヒクル）と比較した、イブルチニブ（５０ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）およびイブルチニブ（５０ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）で処置後のＣＤ１マウスに異種移植したＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞由来の腫瘍の増殖曲線を示す（ｎ＝マウス８匹／群）。
【図１０ｂ】ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞を異種移植片したマウスのイブルチニブ（５０ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、イブルチニブ（５０ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、およびビヒクル単独（対照）を用いた処置の最後に測定した腫瘍体積の範囲を示す（ｎ＝マウス８匹／群）。図１０ｂの箱ひげ図グラフにおいて、太線は値の中心値を示し、箱は第１および第３の四分位数を示す。実施例６に記載のように各群の最大値および最小値も報告される。
【図１１ａ】図１１は、異なる処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織の壊死部分の増殖指数および割合である。図１１ａは、ビヒクル単独（対照）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、イブルチニブ２５ｍｐｋ、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）＋イブルチニブ２５ｍｐｋでの処置の最後に（ａｔ  ｔｈｅ  ｅｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｔ  ｔｈｅ  ｅｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）マウスから摘出された腫瘍性組織の、Ｋｉ６７−陽性細胞の割合として評価された増殖指数を示す。データは、平均±ＳＥＭとして表わされる。
【図１１ｂ】ビヒクル単独（対照）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、イブルチニブ５０ｍｐｋ、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）＋イブルチニブ２５ｍｐｋでの処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織の、Ｋｉ６７陽性細胞の割合として評価された、増殖指数を示す。データは、平均±ＳＥＭとして表わされる。
【図１１ｃ】ビヒクル単独（対照）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）、イブルチニブ２５ｍｐｋ、イブルチニブ５０ｍｐｋ、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）＋イブルチニブ２５ｍｐｋ、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）＋イブルチニブ５０ｍｐｋでの処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織において測定された壊死部分の割合を示す。データは、実施例６に記載のように平均±ＳＥＭとして表わされる。
【図１２ａ】図１２は、５ＦＵ、イブルチニブ低用量（２５ｍｐｋ）およびそれらの併用での処置時のＨＣＴ１１６異種移植片の増殖の反応速度論および増殖指数を示す。図１２ａは、対照（ビヒクル）と比較した、イブルチニブ（２５ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）およびイブルチニブ（２５ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）で処置後のＣＤ１マウスに異種移植したＨＣＴ１１６由来の腫瘍の増殖曲線を示す（ｎ＝マウス８匹／群）。
【図１２ｂ】Ｋｉ６７陽性細胞の割合として評価された、処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織の増殖指数が示される。データは、実施例６に記載のように平均±ＳＥＭとして表わされる。
【図１３ａ】図１３は、５ＦＵ、イブルチニブ高用量（５０ｍｐｋ）およびそれらの併用での処置時のＨＣＴ１１６異種移植片の増殖の反応速度論および増殖指数である。図１３ａは、対照（ビヒクル）と比較した、イブルチニブ（５０ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）およびイブルチニブ（５０ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）で処置後のＣＤ１マウスに異種移植したＨＣＴ１１６由来の腫瘍の増殖曲線を示す（ｎ＝マウス８匹／群）。
【図１３ｂ】Ｋｉ６７陽性細胞の割合として評価された処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織の増殖指数を示す。データは、実施例６に記載のように平均±ＳＥＭとして表わされる。
【図１４ａ】図１４は、実施例７に記載されている実験において例示されるような結腸以外の腫瘍由来の薬剤耐性の上皮がん細胞へのイブルチニブおよび５ＦＵの併用処置の影響である。図１４ａは、ＢＴ５４９乳がん細胞を未処置のままあるいは２００μＭの５ＦＵもしくは１０μＭのイブルチニブまたは２種の併用で処置した。生細胞の割合を、ＭＴＴアッセイによって処置の７２時間後に評価した。
【図１４ｂ】Ｃａｐａｎ−１すい臓がん細胞を未処置のままあるいは２００μＭの５ＦＵもしくは１０μＭのイブルチニブまたは２種の併用で処置した。生細胞の割合を、ＭＴＴアッセイによって処置の７２時間後に評価した。
【図１４ｃ】ＢＴＭＫＮ−４５胃がん細胞を未処置のままあるいは５０μＭの５ＦＵもしくは１０μＭのイブルチニブまたは２種の併用で処置した。生細胞の割合を、ＭＴＴアッセイによって処置の７２時間後に評価した。
【図１５】５ＦＵ薬剤耐性、ｐ５３−ヌル（ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０およびＨＴ−２９）および感受性、ｐ５３野生型（ＨＣＴ１１６、ＲＫＯ）結腸がん細胞株の細胞生存度への異なる濃度のイブルチニブの影響である。実施例３に記載されている実験において例示されるように細胞を、０から３０μＭの範囲の濃度のイブルチニブの存在中で７２時間増殖させて実験の最後にカルセインアッセイによって生存度を評価した。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本明細書において用いられるようながん患者は、がんを有することが診断されたまたは疑われた患者である。
【００４３】
本明細書において用いられるような併用療法は、同一の治療計画においてＢＴＫ阻害剤および化学療法剤フルオロウラシルが用いられる療法である。
【００４４】
本明細書において用いられるような小分子ＢＴＫ阻害剤は、一般には５００ダルトン以下の分子量を有し、ＢＴＫタンパク質を阻害する、例えばそれを不可逆的に阻害する化学的に合成された分子を指す。本明細書において用いられるような小分子のＢＴＫ阻害剤は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子ではない。
【００４５】
現在臨床における小分子ＢＴＫ阻害剤の例には、イブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３が含まれる。
【００４６】
本発明において、本明細書において用いられるようなイブルチニブまたはイブル（ｉｂｒｕ）によるものは、式
【化１】
2016523858.tif 000002
の化合物でありＣＡＳ識別番号：９３６５６３−９６−１、および化学ｌＵＰＡＣ名：１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］ピペリジン−１−イル］プロパ−２−エン−１−オンを有する。
【００４７】
イブルチニブは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の治療のために前臨床試験において用いられており、かつアポトーシスを促進、増殖を阻害、および微小環境によって提供される生存刺激にＣＬＬ細胞が応答することを妨げることが証明されている。イブルチニブは、最近ＦＤＡからマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）の治療のために迅速承認が与えられた。イブルチニブは、Ｂｔｋ上のシステイン残基と共有結合を形成する酵素ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）の選択的かつ不可逆的阻害剤である。
【００４８】
前臨床および臨床研究は、イブルチニブでの処置が、安全な毒物学的プロファイルを有しかつしたがって疲労、食欲不振、嘔気または嘔吐などの化学療法の有害な副作用を通常経験するがん患者に恩恵を提供することを示唆する。
【００４９】
本明細書において用いられるようなＨＭ−７１２２４は、例えば参照により本書に組み込まれる国際公開第２０１１／１６２５１５号において記述されているような、構造
【化２】
2016523858.tif 000003
を指す。
【００５０】
本明細書において用いられるようなＯｎｏ−４０４９は、次の化合物、６−アミノ−９−［（３Ｒ）−１−（２−ブチノイル）−３−ピロリジニル］−７−（４−フェノキシフェニル）−７，９−ジヒドロ−８Ｈ−プリン−８−オンを指す。
【００５１】
化合物ＳＮＳ−０６２は、米国出願公開第２０１２／０１５７４４２号において開示されている。
【００５２】
他のＢＴＫ阻害剤は、表１に示される構造を有する。
【表１】
2016523858.tif 000004
【００５３】
本発明において、フルオロウラシルまたは５−ＦＵによるものは、チミジル酸シンターゼの不可逆的阻害を通して作用する、がんの治療において用いられる目的の代謝拮抗剤が意図される。５−ＦＵは、細胞のＤＮＡを合成する能力を阻害することによって細胞周期停止およびアポトーシスを誘導する。５−ＦＵは、次のｌＵＰＡＣ名、５−フルオロ−１Ｈ，３Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン、およびＣＡＳ番号、５１−２１−８を有する。
【００５４】
本明細書において用いられるような同時に投与されるとは、患者においてＢＴＫ阻害剤およびフルオロウラシルの両方の薬理学的効果が同時に存在する場合を指す。したがってＢＴＫ阻害剤は、最初に、同時にあるいはフルオロウラシルの投与の前または後に短時間で投与してよい。
【００５５】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤は、投与されるフルオロウラシル投薬の前の期間に単剤療法として投与される。一実施形態においてＢＴＫ阻害剤の投与は、フルオロウラシル処置の時期中継続されるかまたはフルオロウラシル処置の開始の少し前に中止される。
【００５６】
本文脈において用いられる少し前は、患者においてＢＴＫ阻害剤の薬理学的効果がまだ存在している期間、例えば、２時間から２日間など、１時間から１週間である。
【００５７】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤およびフルオロウラシルは、互いの０．５、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３時間以内など、互いの５分から１日以内に投与される。
【００５８】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤の投与は、本明細書に開示される併用療法での処置後に継続される。一実施形態において本実施形態において用いられるＢＴＫ阻害剤の用量は、１日当たり５４０ｍｇ未満である。
【００５９】
化合物が第一選択治療に続く別々の計画において投与されるがん補助療法は、本出願の意味の範囲において併用治療ではない。
【００６０】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤は、経口投与される。
【００６１】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤は、静脈内に投与される。
【００６２】
一実施形態においてフルオロウラシルは、非経口的に、例えば静脈内に投与される。
【００６３】
一実施形態においてフルオロウラシルは、経口投与される。
【００６４】
一実施形態においてフルオロウラシルは、坐剤として投与される。
【００６５】
一実施形態においてフルオロウラシルは、局所的に投与され、これは具体的には大腸がんに有効で有り得る。
【００６６】
一実施形態においてＢＴＫ阻害剤およびフルオロウラシルは、固体または液体処方として、例えば錠剤またはカプセルとして、同時に処方される。
【００６７】
ｐ５３、細胞性腫瘍抗原ｐ５３、リンタンパク質ｐ５３、または腫瘍抑制因子ｐ５３の別名でも知られる、腫瘍タンパク質ｐ５３は、ヒトにおいてＴＰ５３遺伝子によってコードされるタンパク質である。ｐ５３タンパク質は、それが細胞周期を調節する、多細胞の組織において非常に重要でありかつ、このようにして、がんを防止する、腫瘍抑制因子として機能する。したがって、ｐ５３は、ゲノム突然変異を防止することにより安定性を維持するその役割のために「ゲノムの守護者」とされている。したがってＴＰ５３は、腫瘍抑制因子遺伝子として分類される。
【００６８】
本明細書において用いられるようなＰ５３欠損がんは、健康な細胞と比較するとｐ５３活性が減少したまたはｐ５３活性が無いがんを指す。
【００６９】
本発明は、有効量のＢＴＫ阻害剤および有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用のための医薬品キットであって、前記ＢＴＫ阻害剤が、本明細書に述べるＢＴＫ阻害剤からなる群、例えばイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４、ＬＦＭ−Ａ１３およびＰＬＳ−１２３から選択される医薬品キットにも関する。ＢＴＫ阻害剤は、好ましくはイブルチニブである。
【００７０】
本発明による医薬品キットは、がんが、白血病または固形腫瘍である、前記がんの治療において有効である。
【００７１】
固形腫瘍は、大腸がん、肝臓がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、膀胱がん、頭頸部がん、または肺がんからなる群から選択され得る。固形腫瘍は、好ましくは結腸または大腸がんである。
【００７２】
したがって一態様において本発明は、結腸および大腸がんの治療において、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用のための医薬品キットに関する。
【００７３】
発明者は、驚いたことにイブルチニブおよびフルオロウラシルの同時または逐次投与による結腸または大腸がんの治療が、成分のいずれかの個別の投与と比較して相乗的な抗腫瘍効果をもたらすことを見出した。驚くべき相乗的な抗腫瘍効果は、化学療法薬に対して耐性を発生するこれらのがんである、薬剤耐性の結腸および大腸がんにおいても見られた。本発明による医薬品キットは、腫瘍細胞発達および適応の多くの機序に起因するがん薬剤耐性の克服を可能にする。
【００７４】
本発明のさらに驚くべき利点は、発明者がイブルチニブおよびフルオロウラシルの同時または逐次投与による結腸または大腸がんの治療において、同じがんの治療において用いられる化学療法薬の量と比較すると、より小さいまたはより少ない量の化学療法薬を用いてよくかつ効果的であることを見出したという事実に関する。化学療法薬、フルオロウラシルの量は、５％から８０％の範囲、好ましくは１０％から６０％、より好ましくは２０％から４０％、さらにより好ましくは２５％から３５％の範囲で減少してよい。
【００７５】
さらなる実施形態において本発明は、がんの治療における、有効量のＢＴＫ阻害剤および有効量のフルオロウラシルの使用に関する。好ましい態様において、ＢＴＫ阻害剤は、イブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４、ＬＦＭ−Ａ１３およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択される。さらに好ましい態様において前記がんは、薬剤感受性または薬剤耐性でありかつ白血病または固形腫瘍であり、好ましくは大腸がん、肝臓がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、膀胱がん、頭頸部がん、または肺がんからなる群から選択される。
【００７６】
本発明は、薬剤耐性の結腸および大腸がんの治療における、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用のための医薬品キットにさらに関する。
【００７７】
第２の実施形態において本発明の医薬品キットは、驚いたことにイブルチニブおよびフルオロウラシルの相乗的な抗腫瘍効果を示すだけでなく、より少ない量のフルオロウラシルの使用、したがってより少ない有効量の化学療法薬（ｃｈｅｍｏｔｈｅｕｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇ）の使用も可能にし、したがってこれらの薬剤が有する望ましくなくかつ多くの場合有害な副作用を回避する方法で薬剤耐性がん細胞の治療を可能にする。
【００７８】
本発明のさらなる態様は、イブルチニブが薬学的に許容可能な塩の形態である、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用のための医薬品キットである。
【００７９】
さらなる態様において、本発明は、有効量のイブルチニブおよび有効量の５−フルオロウラシルが、経口形態、非経口形態および直腸の形態から選択される医薬品の形態として処方される、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルを含む医薬品キットを提供する。
【００８０】
投与の方法／経路に応じて、剤形はいくつかの型であってよい。これらには、液体、固体、および半固体剤形の多くの種類が含まれる。一般的な剤形には、丸薬、錠剤、またはカプセル、ドリンクまたはシロップ剤が含まれる。薬剤送達のための投与経路（ＲＯＡ）は、物質の剤形に依存する。
【００８１】
異なる医学的状態は投与の異なる経路を必要とし得るので、単一の特定の薬剤のために種々の剤形が存在してよい。
【００８２】
投与の経路は、吸入、口腔（経口）、舌下、経鼻、座薬および非経口であってよい。
【００８３】
いっそうのさらなる態様において、本発明は、医薬品の形態が、経口形態、好ましくは錠剤である、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルを含む医薬品キットを提供する。
【００８４】
さらには、本発明は、医薬品の形態が、少なくとも１種の医薬品の許容可能な賦形剤を含む、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの同時、逐次および別々の使用のための医薬品キットに関する。賦形剤は、剤形を生成する場合に原薬の好都合かつ正確な調剤を可能にするため、強力な活性成分を含有する処方を嵩増しするために一般的に使用される（多くの場合「増量剤」、「充填剤」、または「希釈剤」と呼ばれる）、活性成分と共に処方される薬理学的に不活性な物質である。それらは、薬剤吸収または溶解性の促進、あるいは他の薬物動態学的考慮事項などの、種々の治療増強目的も果たし得る。
【００８５】
適切な賦形剤の選択も、投与経路および剤形、ならびに活性成分および他の因子に依存する。
【００８６】
好ましい実施形態において、本発明は、有効量のイブルチニブが、１ｍｇ／日から２０００ｍｇ／日の範囲であり（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ、調査識別名：ＮＣＴ０１８０４６８６、ＮＣＴ０１５８９３０２、ＮＣＴ０１８５５７５０、ＮＣＴ０１７４４６９１、ＮＣＴ０１１０５２４７、ＮＣＴ００８４９６５４から推論）かつ有効量のフルオロウラシルが、１００から２５００ｍｇ／ｍ2、好ましくは２００から１５００ｍｇ／ｍ2、または４００ｍｇ／ｍ2から６００ｍｇ／ｍ2の範囲（医療専門家のための結腸がん治療に関するＮＣＩのページ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ａｏｖ／ｃａｎｃｅｒｔｏｐｉｃｓ／Ｄｄａ／１ｒｅａｔｍｅｎｔ／ｃｏｌｏｎ／ＨｅａｌｔｈＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ／ｐａｇｅ８から推論）である、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルを含む医薬品キットを提供する。
【００８７】
より好ましい実施形態において本発明は、有効量のイブルチニブが、１０ｍｇ／日から１６８０ｍｇ／日の範囲である、医薬品キットを提供する。
【００８８】
より好ましい実施形態において本発明は、有効量のイブルチニブが、１０ｍｇ／日から１１００ｍｇ／日の範囲である医薬品キットを提供する。
【００８９】
より好ましい実施形態において本発明は、有効量のイブルチニブが、２０ｍｇ／日から９５０ｍｇ／日の範囲である医薬品キットを提供する。
【００９０】
いっそうのより好ましい実施形態において、本発明は、有効量のイブルチニブが、２５ｍｇ／日から８４０ｍｇ／日の範囲である、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルを含む医薬品キットを提供する。
【００９１】
好ましい実施形態において本発明は、有効量のフルオロウラシルが、４５０ｍｇ／ｍ2から５５０ｍｇ／ｍ2の範囲である医薬品キットを提供する。
【００９２】
いっそうの好ましい実施形態において本発明は、有効量のフルオロウラシルが、より少ない、好ましくは１５０ｍｇ／ｍ2から４００ｍｇ／ｍ2の範囲である医薬品キットを提供する。
【００９３】
本発明のさらなる態様において医薬品キットは、有効量のイブルチニブを含む少なくとも１つの容器および有効量のフルオロウラシルを含む少なくとも１つの容器、ならびに使用説明書を含む。
【００９４】
本発明のいっそうのさらなる態様は、結腸および大腸がんの治療における、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの使用を提供する。
【００９５】
本発明による使用は、結腸および大腸がんが、薬剤耐性である、結腸および大腸がんの治療を有利に可能にする。
【００９６】
驚いたことに発明者は、イブルチニブで見られる効果が、オキサリプラチンに対しては再現されないことを見出した。実施例５に記載されかつ図６に示されるように、例えばオキサリプラチンまたはイブルチニブとオキサリプラチンとの併用での、処置の最後の耐性がん細胞生存度の評価は、イブルチニブ単独のみが、５ＦＵのみに対する耐性を回復できたことを示す。耐性の戻りは、オキサリプラチンまたはオキサリプラチンおよびイブルチニブでは得られなかった。
【００９７】
本発明は、有効量のイブルチニブおよび有効量のフルオロウラシルの投与を含む、結腸および大腸がんの治療、または結腸および大腸がんの再発を遅らせるための方法にさらに関する。本発明による方法は、結腸および大腸がんが、薬剤耐性である、結腸および大腸がんの治療を有利に可能にする。
【００９８】
第１の実施形態において本発明による結腸または大腸がんの治療の方法は、最初に患者に有効量のイブルチニブおよび逐次的に有効量のフルオロウラシルを投与することを提供する。本発明に従って有効量のイブルチニブおよびフルオロウラシルは、前述の通り投与の経路に応じて液体、固体、および半固体剤形で提供してよい。
【００９９】
単位剤形におけるイブルチニブおよびフルオロウラシルの量は、本発明の方法において患者に用いられる投与量によって決定される。
【０１００】
第２の実施形態において方法は、結腸または大腸がん患者に有効量のイブルチニブおよびフルオロウラシルを同時に投与することを含む。
【０１０１】
本発明によるさらなる実施形態において有効量のイブルチニブおよびフルオロウラシルは、別々に投与してよい。
【０１０２】
本明細書の文脈において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」と解釈される。
【０１０３】
ある種の要素を含む本発明の態様は、関連要素「からなる」または「から本質的になる」別の実施形態に拡大することも意図される。
【０１０４】
本明細書に述べる任意の実際的な実施形態またはそれらの組み合わせは、否定的な除外すなわち拒絶の根拠で有り得る。
【実施例】
【０１０５】
実施例１  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞増殖アッセイ
５ＦＵ処置に耐性である、３種の結腸がん細胞株、ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０およびＤＬＤ−１細胞、ならびに５ＦＵ処置に感受性である、ＨＣＴ１１６細胞株のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖を、０から１０μＭの範囲の異なる濃度のイブルチニブの存在中で、播種後最大７２時間増殖させてアッセイした。
【０１０６】
図１のグラフから分かるように、３種の短期アッセイは、１０μＭの濃度においてでさえも、イブルチニブが細胞の増殖する能力を変化させないことを示す。
【０１０７】
実施例２  ｉｎ  ｖｉｔｒｏコロニーアッセイ
ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０、ＤＬＤ−１細胞およびＨＣＴ１１６細胞株を、低密度で播種して０から２０μＭの範囲の異なる濃度のイブルチニブの存在中で１０〜１２日間増殖させた。
【０１０８】
図２に示すコロニー形成アッセイから分かるように、これらの長期アッセイは、長期においてでも、イブルチニブでの処置が、最大１μＭの濃度までクローン形成能力および増殖能力に影響しないことを示す。濃度１０μＭのイブルチニブは、クローン形成および増殖の両方に影響したことを示すコロニーの数およびサイズを減少させ、これは最終的には２０μＭの濃度において阻害される。
【０１０９】
実施例３  イブルチニブおよびフルオロウラシル処置の細胞生存度への影響
５ＦＵ薬剤耐性の、ｐ５３−ヌル（ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０およびＨＴ−２９）および感受性の、ｐ５３野生型（ＨＣＴ１１６、ＲＫＯ）と併用して用いられるイブルチニブの濃度を決定するために、結腸がん細胞株を、増加する濃度のイブルチニブの存在中で（０から３０μＭ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで７２時間増殖させてそれらの生存度をインキュベーションの最後にカルセインアッセイ（生存細胞においてのみ活性の、リソソームエステラーゼによる開裂時に蛍光性になる無蛍光染料）を用いて評価した。１００％は、処置開始前の、０日目における生存細胞の割合を表す。図１５に示すグラフから明らかなように、最大２０μＭのイブルチニブは、用量依存的方法において全ての細胞株における生存度を減少させ、最高濃度のイブルチニブは、５ＦＵ薬剤耐性の、ｐ５３−ヌル（ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ、ＳＷ４８０およびＨＴ−２９）に対して優先的に毒性である。
【０１１０】
ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯおよびＨＣＴ１１６細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで異なる濃度のイブルチニブ（０から２０μＭ）およびイブルチニブ（０から２０μＭ）＋５ＦＵ（２００μＭ）の存在中で７２時間増殖させてそれらの生存度をインキュベーションの最後にカルセインアッセイを用いて評価した。
【０１１１】
図３に報告したグラフから分かるように、２００μＭの５ＦＵおよびイブルチニブの同時投与は、濃度１００ｎＭから始まり、２０μＭにおける最大効果に達するまで、耐性ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞を５ＦＵの細胞毒性効果に対して再感作する。対照的に、ＨＣＴ１１６（感受性）の細胞培養中の５ＦＵへのイブルチニブの追加は、化学療法に対する反応への相加効果が無い。
【０１１２】
図４においてＨＣＴ１１６薬剤感受性細胞、ＨＣＴ１１６過剰発現ｐ６５ＢＴＫ（ｐ６５ＢＴＫをコードするプラスミドでのトランスフェクション後、ｐ６５  ＢＴＫは、ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ薬剤耐性の細胞の場合と同量である）およびＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ薬剤耐性細胞を、未処置のままあるいは２００μＭの５ＦＵ、２０μＭのイブルチニブまたは２種の併用で処置した。生存度を、カルセインアッセイによってインキュベーションの７２時間後に評価した。１００％は、薬剤での処置開始前の、０日目における生存細胞の割合を表す。ｐ６５ＢＴＫを過剰発現しているＨＣＴ１１６薬剤感受性細胞が、ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯと同様に、５ＦＵの細胞毒性効果に耐性になることおよび両方のケースにおける耐性が、２０μＭのイブルチニブの同時追加によって逆転されることが明確に示されており、５ＦＵ耐性を無効にすることは、イブルチニブによってｐ６５ＢＴＫをブロックするために必要であるという考えをさらに実証している。
【０１１３】
実施例４  イブルチニブおよびフルオロウラシルでの処置：より少量の化学療法薬で十分である
図５において薬剤耐性および感受性の結腸がん細胞における５ＦＵおよびイブルチニブの単独で効果のない濃度の相乗的効果が描写される。図５ａは、２００μＭの５ＦＵ、２０μＭのイブルチニブ、２００μＭの５ＦＵ＋２０μＭのイブルチニブの存在中のインキュベーションの７２時間目に撮影された薬剤耐性のＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞の代表的な写真を示し、最後の実験条件においてのみ少数の細胞がまだ生存しプレートに付着していることおよび細胞の大部分は死んでいることが明らかである。図５ｂは、無効な濃度の５ＦＵおよびイブルチニブの存在中でインキュベーションの７２時目に撮影された感受性ＨＣＴ１１６細胞の代表的な写真を示す。２種の薬剤（１０μＭの５ＦＵおよび２０μＭのイブルチニブ）が単独で用いられた場合は明らかな毒性は無く、一方で２種の薬剤を併用して用いた場合は（１０μＭの５ＦＵ＋２０μＭのイブルチニブ）全ての細胞が死んだので培養皿から離れた。比較のために示した、第４の写真は、ＨＣＴ１１６を２００μＭの最大効果濃度で処置した培養皿の写真である。図５ｃは、ＨＣＴ１１６細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで異なる低濃度のイブルチニブ（０から１０μＭ）およびイブルチニブ（０から１０μＭ）＋低用量の５ＦＵ（１０μＭ）の存在中で７２時間増殖して、それらの生存度をインキュベーションの最後にクリスタルバイオレット染色法を用いて評価した、用量反応曲線を示す。１００％は、薬剤での処置開始前の、０日目における生存細胞の割合を表す。１００％は、薬剤での処置開始前の、０日目における生存細胞の割合を表す。分かるように、０．１μＭまで低いイブルチニブ濃度は、低用量の５ＦＵと相乗作用を示して処置に対して反応する細胞の割合を増加させる。
【０１１４】
これらのデータは、単独で効果のない濃度の５ＦＵとイブルチニブとを併用することが、薬剤耐性の細胞を化学療法に対して感作するだけではなく感受性細胞を殺すために必要な５ＦＵの濃度を減少することもできることを明確に示す。
【０１１５】
実施例５  ＣＲＣ療法（オキサリプラチン、標的療法）のために一般的に使用される他の抗がん剤に対する反応へのイブルチニブの影響
図６において薬剤耐性のＳＷ４８０結腸がん細胞を、如何なる薬剤も無くまたはイブルチニブ２０μＭ、５ＦＵ  ２００μＭ、イブルチニブ２０μＭ＋５ＦＵ  ２００μＭの併用、オキサリプラチン２０μＭ、イブルチニブ２０μＭ＋オキサリプラチン２０μＭの併用の存在中で７２時間処置した。処置の最後にカルセインアッセイによって細胞生存度を評価した。１００％は、薬剤での処置開始前の、０日目における生存細胞の割合を表す。明らかなように、イブルチニブ追加は、５ＦＵに対する耐性のみ回復することができるがオキサリプラチンに対してはできない。
【０１１６】
図７においてＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯおよびＨＣＴ１１６細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させてイブルチニブならびにＥＧＦＲ（セツキシマブ、パニツムマブ）およびＶＥＧＦ（ベバシズマブ）を標的とする抗がん療法において現在用いられる３種の異なるモノクローナル抗体の併用処置を、短期（上パネル）および長期（下パネル）の両実験において受けさせた。
【０１１７】
図７の上部においてグラフは、２０μＭのイブルチニブとこれらの「標的」薬物との併用処置が、併用処置後７２時間のトリパンブルー染色によって評価されるように、ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞の耐性を回復させないことを示す。下のパネルに示されるように、併用処置への１０〜１２日間の連続的な暴露も、耐性細胞を標的療法に対して再感作しない。
【０１１８】
図８において薬剤耐性のＨＴ２９およびＳＷ４８０結腸がん細胞株を、未処置のままあるいは２５μｇ／ｍｌのベバシズマブもしくは１０μｇ／ｍｌのセツキシマブもしくは７５μｇ／ｍｌのパニツムマブを単独でまたは２０μＭのイブルチニブと併用して処置した。生細胞の割合を、ＭＴＴアッセイ（代謝的に活性な、生細胞においてのみ機能する、酵素によるテトラゾリウム塩の減少に基づいた比色アッセイ）によって処置の７２時間後に評価した。１００％は、薬剤での処置開始前の、０日目における生存細胞の割合を表す。グラフから明らかなようにイブルチニブの標的薬物との併用は、単一の処置と比較して生存細胞の数を減少せず、したがってイブルチニブは標的療法に対する結腸がん細胞の耐性を無効にしないことを示す。
【０１１９】
実施例６  イブルチニブおよびフルオロウラシルでのｉｎ  ｖｉｖｏの処置
１×１０6細胞（１００μＬの５０％のＰＢＳおよび５０％のマトリゲル溶液中）の、ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ細胞を、５から７週齢の雌ＣＤ−１ヌードマウス（ｎ＝マウス８匹／群）の左脇腹におよびＨＣＴ１１６を、右脇腹に皮下注射することにより腫瘍を確立した。ＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯ腫瘍が１００ｍｍ3の平均体積に達した時に（生着後８日目）、動物を無作為化してビヒクル、５ＦＵ［腹腔内（ｉ．ｐ．）注射による、６０ｍｇ／ｋｇ、週２回］、イブルチニブ［強制経口投与による、２５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）または５０ｍｐｋを１日１回週に５日間］またはそれらの併用を与えた。５ＦＵ処置を、生着後９日目に開始し、一方イブルチニブ処置を、生着後８日目に開始した。対照マウスは、他の群と同じスケジュールでビヒクル（０．９％のＮａＣｌ溶液）のｉ．ｐ．注射を受けさせた。腫瘍を、週に１回キャリパーで測定した。統計的有意性をクラスカル・ワリスノンパラメトリック検定（仮定できない正規分布）で決定し、その後に群間の多重対比較のためにＮｅｍｅｎｙｉ−Ｄａｍｉｃｏ−Ｗｏｌｆｅ−Ｄｕｎｎ検定を行った。全てのケースにおいて、Ｐ値＜０．０５は、有意とみなした。
【０１２０】
図９ａに報告されたグラフから分かるように、異種移植された薬剤耐性のＨＣＴ１１６ｐ５３ＫＯによって形成された腫瘍塊の平均体積は処置の２８日後に、未処置のマウス（ビヒクル）の群については≒９５５ｍｍ3、イブルチニブ（２５ｍｐｋ）単独で処置した群については≒７６０ｍｍ3、５ＦＵ単独で処置した群については≒５３０ｍｍ3およびイブルチニブと５ＦＵとの併用で処置した群については≒３１５ｍｍ3になる。図９ｂに例示されるように統計的分析は、腫瘍体積の減少が、５ＦＵ単独で処置したマウスの群を未処置の群に対して比較した場合は有意ではないが５ＦＵ＋イブルチニブで処置したマウスの群を未処置の群に対しておよびイブルチニブ単独で処置した群に対して比較した場合は有意になることを示す。
【０１２１】
図１０ａに報告したデータは、マウスに投与されたイブルチニブの用量（５０ｍｐｋ）を倍加することは、（５ＦＵ＋イブル２５ｍｐｋで処置した群と比較して）５ＦＵ＋イブルチニブの併用で処置したマウスの群の腫瘍の体積をさらには減少させないことを示す。しかしながら、高用量のイブルチニブでの処置は、それだけで抗腫瘍効果を有し、図１０ｂにおける統計的分析は、未処置の群と比較した場合、マウスにイブルチニブ５０ｍｐｋを投与して得られる腫瘍体積の減少は、５ＦＵ＋イブルチニブ５０ｍｐｋの併用または５ＦＵ＋イブルチニブ２５ｍｐｋの併用を投与して得られる物と同様に有意であることを示す。
【０１２２】
これらのデータは、イブルチニブおよびフルオロウラシルでの併用処置が、低用量のイブルチニブを化学療法と合わせて薬剤耐性の異種移植片を担持するマウスに投与した場合に腫瘍体積減少への相乗的効果を有することならびにより多い投与量のイブルチニブが、それだけで抗腫瘍効果を有することを示す。図１１に報告したグラフは、異なる処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織に行った分析の結果を示す。増殖指数を評価するために組織切片を、増殖性細胞のマーカーである、Ｋｉ６７に対する抗体で染色した。Ｋｉ６７陽性細胞の割合を、Ｋｉ６７染色、ヘマトキシリン−エオジン対比染色スライドのデジタル取得後にＳｃａｎｓｃｏｐｅ専用ソフトウェアによって定量化した（図１１ａおよびｂ）。専用ソフトウェアの別の機能を用いて同じスライド上の壊死部分の割合も計算した（図１１ｃ）。
【０１２３】
これらのデータは、低用量および高用量の両方で、イブルチニブ単独またはイブルチニブ＋５ＦＵの併用のいずれも腫瘍細胞の増殖に影響しないが一方で併用は壊死部分の拡大を有意に増加することを示す。
【０１２４】
図１２ａにおけるグラフは、ビヒクル単独、イブルチニブ（２５ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）およびイブルチニブ（２５ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）での処置の２８日後にＣＤ１マウスに異種移植したＨＣＴ１１６由来の腫瘍の増殖曲線を表す。処置の終わりまでに異種移植された薬剤感受性のＨＣＴ１１６細胞によって形成された腫瘍塊の平均体積は、未処置のマウス（ビヒクル）の群については≒４３５ｍｍ3、イブルチニブ（２５ｍｐｋ）単独で処置した群については≒３４７ｍｍ3、５ＦＵ単独で処置した群については≒２２６ｍｍ3およびイブルチニブと５ＦＵとの併用で処置した群については≒１７２ｍｍ3になる。腫瘍サイズの差は、ビヒクル処置群とイブルチニブ処置群との間でも５ＦＵ処置群と５ＦＵ＋イブルチニブ処置群との間でも統計的に有意ではない。腫瘍体積の減少は、実際には５ＦＵ±イブルチニブで処置したマウスの群を未処置（またはイブルチニブ処置）群に対して比較した場合にのみ有意である。
【０１２５】
図１２ｂのグラフにおいてプロットされたデータは、上記に示した処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織における増殖性細胞の割合を表し、５ＦＵ処置±イブルチニブは、ビヒクルまたはイブルチニブ単独のいずれかと比較して増殖性細胞の割合を有意に減少する。
【０１２６】
図１３ａにおけるグラフは、ビヒクル単独、イブルチニブ（５０ｍｐｋ）、５ＦＵ（６０ｍｐｋ）およびイブルチニブ（５０ｍｐｋ）＋５ＦＵ（６０ｍｐｋ）での処置の２８日後のＣＤ１マウスに異種移植したＨＣＴ１１６由来の腫瘍の増殖曲線を表す。処置の終わりまでに異種移植された薬剤感受性のＨＣＴ１１６細胞によって形成された腫瘍塊の平均体積は、未処置のマウス（ビヒクル）の群については≒４３５ｍｍ3、イブルチニブ（５０ｍｐｋ）単独で処置した群については≒３７２ｍｍ3、５ＦＵ単独で処置した群については≒２２６ｍｍ3およびイブルチニブと５ＦＵとの併用で処置した群については≒２２３ｍｍ3になる。腫瘍サイズの差は、ビヒクル処置群とイブルチニブ処置群との間でも５ＦＵ処置群と５ＦＵ＋イブルチニブ処置群との間でも統計的に有意ではない。腫瘍体積の減少は、実際には５ＦＵ±イブルチニブで処置したマウスの群を未処置（またはイブルチニブ処置）群に対して比較した場合にのみ有意である。
【０１２７】
図１３ｂのグラフにおいてプロットされたデータは、上記に示した処置の最後にマウスから摘出された腫瘍性組織における増殖性細胞の割合を表し、５ＦＵ処置±イブルチニブは、ビヒクルまたはイブルチニブ単独のいずれかと比較して増殖性細胞の割合を有意に減少する。
【０１２８】
全てまとめてこれらのデータは、５ＦＵの感受性異種移植片への増殖減少および抗増殖効果は、イブルチニブの追加とは独立に達成され、これは単独ではこれらの種類の腫瘍においては効果がないことを示す。
【０１２９】
実施例７  結腸以外の腫瘍由来の薬剤耐性の上皮がん細胞へのイブルチニブおよび５ＦＵの併用処置の影響
図１４ａにおいて薬剤耐性のＢＴ５４９乳がん細胞を、如何なる薬剤も無くまたはイブルチニブ１０μＭ、５ＦＵ  ２００Ｍ、イブルチニブ１０μＭ＋５ＦＵ  ２００μＭの併用の存在中で７２時間処置した。処置の最後にＭＴＴアッセイによって細胞生存度を評価した。明らかなように、イブルチニブ追加は、細胞を５ＦＵに対して感作することができた。図１４ｂにおいて薬剤耐性のＣａｐａｎ−１膵臓がん細胞を、如何なる薬剤も無くまたはイブルチニブ１０μＭ、５ＦＵ  ２００μＭ、イブルチニブ１０μＭ＋５ＦＵ  ２００μＭの併用の存在中で７２時間処置した。処置の最後にＭＴＴアッセイによって細胞生存度を評価した。明らかなように、イブルチニブ追加は、５ＦＵに対する耐性を回復することができた。図１４ｃにおいてＭＫＮ−１４５胃がん細胞を、如何なる薬剤も無くまたはイブルチニブ１０μＭ、５ＦＵ  ５０μＭ、イブルチニブ１０μＭ＋５ＦＵ  ５０μＭの併用の存在中で７２時間処置した。処置の最後にＭＴＴアッセイによって細胞生存度を評価した。明らかなように、イブルチニブ追加は、５ＦＵ単独と比較して細胞生存度をさらに減少することができた。
【０１３０】
上記説明および上記実施例から、記述されかつ本発明に従って得られる生成物によって達成される利点は明白である。
【図１ａ】
2016523858.tif 000005
【図１ｂ】
2016523858.tif 000006
【図１ｃ】
2016523858.tif 000007
【図１ｄ】
2016523858.tif 000008
【図４】
2016523858.tif 000009
【図６】
2016523858.tif 000010
【図１１ａ】
2016523858.tif 000011
【図１１ｂ】
2016523858.tif 000012
【図１１ｃ】
2016523858.tif 000013
【図１２ａ】
2016523858.tif 000014
【図１２ｂ】
2016523858.tif 000015
【図１３ａ】
2016523858.tif 000016
【図１３ｂ】
2016523858.tif 000017
【図２】
2016523858.tif 000018
【図３】
2016523858.tif 000019
【図５ａ】
2016523858.tif 000020
【図５ｂ】
2016523858.tif 000021
【図５ｃ】
2016523858.tif 000022
【図７】
2016523858.tif 000023
【図８】
2016523858.tif 000024
【図９ａ】
2016523858.tif 000025
【図９ｂ】
2016523858.tif 000026
【図１０ａ】
2016523858.tif 000027
【図１０ｂ】
2016523858.tif 000028
【図１４ａ】
2016523858.tif 000029
【図１４ｂ】
2016523858.tif 000030
【図１４ｃ】
2016523858.tif 000031
【図１５】
2016523858.tif 000032
【手続補正書】
【提出日】平成27年8月10日(2015.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択される小分子ＢＴＫ阻害剤と、
同時にフルオロウラシルと、
を含む治療的有効量の併用療法の投与によってがん患者を治療する方法であって、
前記ＢＴＫ阻害剤が、補助療法ではなく、前記がんが、固形腫瘍であり、前記フルオロウラシルの用量が、１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲である方法。
【請求項２】
前記フルオロウラシル用量、前記ＢＴＫ阻害剤用量または両方が、対応する単剤療法のために用いられる用量より少ない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブまたはＣＣ−２９２である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記イブルチニブの用量が、一投与当り５から５０ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば１０から５０ｍｇ／Ｋｇ、具体的には１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記イブルチニブの有効量が、２５ｍｇ／日から８４０ｍｇ／日の範囲、例えば５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、５２５、５４０、５５０、５７５および６００ｍｇ／日である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記フルオロウラシルの量が、一投与当り１５から５０ｍｇ／Ｋｇの範囲、具体的には１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記フルオロウラシルの用量の有効量が、４００ｍｇ／ｍ２から６００ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記がんが、ｐ５３不完全または欠損である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記薬剤耐性が、フルオロウラシルに対してである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬剤耐性が、ＢＴＫ阻害剤に対してである、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記がんが、上皮がん、例えば大腸がん、肝細胞がん（肝臓がん）、前立腺がん、胃がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、膀胱がん、頭頸部がんまたは肺がんなどからなる群から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが、転移性がんである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
フルオロウラシル耐性がん患者を治療する方法であって、前記患者を１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲のフルオロウラシルでの治療に対して感作するために、１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択される治療的有効量のＢＴＫ阻害剤を投与するステップを含み、前記がんが、固形腫瘍である方法。
【請求項１５】
１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択されるＢＴＫ阻害剤ならびに１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲のフルオロウラシルを同時投与のために含む併用療法であって、前記ＢＴＫ阻害剤が、補助療法ではなく、本明細書に述べるような上皮性起源のがんなどの、固形腫瘍の治療において使用するための併用療法。
【請求項１６】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項１５に記載の併用療法。
【請求項１７】
上皮性起源のがんなどの、固形腫瘍の治療のための、同時投与用の併用療法の製造における１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択されるＢＴＫ阻害剤ならびに１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲のフルオロウラシルの使用。
【請求項１８】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
フルオロウラシル療法などの、化学療法に対してがんを感作するための薬物の製造におけるＢＴＫ阻害剤、例えば１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択される不可逆的ＢＴＫ阻害剤の使用であって、前記がんが、固形腫瘍であり、前記イブルチニブの用量が、１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、かつ前記フルオロウラシルの用量が、１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲である使用。
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月1日(2016.4.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
併用療法におけるがんの治療のための薬物の調製のための、１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択される小分子ＢＴＫ阻害剤と、
フルオロウラシルの使用であって、
前記ＢＴＫ阻害剤が、補助療法ではなく、前記がんが、固形腫瘍であり、前記フルオロウラシルの用量が、１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲であり、かつ前記フルオロウラシル用量、前記ＢＴＫ阻害剤用量または両方が、対応する単剤療法のために用いられる用量より少ない使用。
【請求項２】
前記ＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブまたはＣＣ−２９２である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記イブルチニブの用量が、一投与当り５から５０ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば１０から５０ｍｇ／Ｋｇ、具体的には１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記イブルチニブの有効量が、２５ｍｇ／日から８４０ｍｇ／日の範囲、例えば５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、５２５、５４０、５５０、５７５および６００ｍｇ／日である、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記フルオロウラシルの量が、一投与当り１５から５０ｍｇ／Ｋｇの範囲、具体的には１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８および４９ｍｇ／Ｋｇである、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記フルオロウラシルの用量の有効量が、４００ｍｇ／ｍ２から６００ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記がんが、ｐ５３不完全または欠損である、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記がんが、薬剤耐性である、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記薬剤耐性が、フルオロウラシルに対してである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記薬剤耐性が、ＢＴＫ阻害剤に対してである、請求項８または９に記載の使用。
【請求項１１】
前記がんが、上皮がん、例えば大腸がん、肝細胞がん（肝臓がん）、前立腺がん、胃がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、膀胱がん、頭頸部がんまたは肺がんなどからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記がんが、転移性がんである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲のフルオロウラシルでの、がんの治療のための薬物の調製のための、１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択される治療的有効量のＢＴＫ阻害剤の使用であって、前記がんが、固形腫瘍である使用。
【請求項１４】
１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択されるＢＴＫ阻害剤ならびに１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲のフルオロウラシルを同時投与のために含む併用療法であって、前記ＢＴＫ阻害剤が、補助療法ではなく、上皮性起源のがんなどの、固形腫瘍の治療のための薬物の調製において使用するためであり、
前記がんが、薬剤耐性である、併用療法。
【請求項１５】
上皮性起源のがんなどの、固形腫瘍の治療のための、同時投与用の併用療法の製造における１から６０ｍｇ／ｋｇの範囲のイブルチニブ、ＨＭ−７１２２４、ＢＧＢ−３１１１、ＣＧ−０３６８０６、ＣＣ−２９２、ＡＣＰ−１９６、ＧＤＣ−０８３４、ＯＮＯ−４０４９、ＲＮ−４８６、ＳＮＳ−０６２、ＴＡＳ−５５６７、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ＰＣＩ−４５２６１、ＨＣＩ−１６８４およびＰＬＳ−１２３からなる群から選択されるＢＴＫ阻害剤ならびに１０から６０ｍｇ／Ｋｇの範囲のフルオロウラシルの使用であって、
前記がんが、薬剤耐性である、使用。
【国際調査報告】
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