(57)【要約】  本発明は、ランチビオティックである新規抗生物質化合物、その調製プロセス、その医薬的に許容される塩、ランチビオティックを含有する医薬組成物、および抗菌剤としてのその使用に関する。ランチビオティックと称される化合物、例えば、本発明の化合物は、抗生物質化合物の総括的な分類に属するペプチドであり、さらに、概して、ランチオニンおよび／または３−メチルランチオニンといったアミノ酸の存在によって特徴づけられる。新規ランチビオティック化合物は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．および他の菌によって引き起こされる細菌感染に対して活性である。
2016501232.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）の化合物であって、
【化１】
2016501232.tif 000010
〔式中、Ｘは、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＩｌｅから選択される脂肪族アミノ酸を表し；Ｙは、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓから選択される芳香族アミノを表し；ｎは、１または２であり、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨまたはＮＲ３Ｒ４を表し、Ｒ３およびＲ４は、独立して、
・水素または
・１〜２０個の炭素原子を有するアルキル；
・２〜２０個の炭素原子を有するアルケニル；
・２〜２０個の炭素原子を有するアルキニル；
・ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換され、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換されている、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル；
・ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換され、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換されている、フェニル基；
・ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって、場合によりフェニル環上で置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１〜２個の置換基によって場合により置換されている、ベンジル基；
・ハロ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換された、ナフチル基；
・式−（ＣＨ２）ｐＯＲ５の基
（式中、ｐは、２〜８の整数を表し、Ｒ５は、
○水素または
○（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは
○ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル；
○ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、フェニル基を表す）；
・式−（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７の基
（式中、ｑは、２〜８の整数を表し、Ｒ６およびＲ７は、独立して、
●水素または
●−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは
●ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル；
●ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換され、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換されている、フェニル基；
●ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合によりフェニル環上で置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、ベンジル基を表し、
●Ｒ６とＲ７が合わさって、−（ＣＨ２）３、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２、−（ＣＨ２）２−Ｓ−（ＣＨ２）２を表すか、または
●Ｒ６とＲ７が、隣接する窒素原子と合わさって、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ピリジル、ベンジルおよび置換ベンジルから選択される置換基で４位が置換されていてもよい、ピペラジン部分を形成し、ここで、フェニル部分は、クロロ、ブロモ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基を有する）
を表し、
但し、ｎ＝２の場合、Ｘは、Ｖａｌとして選択されることはなく、Ｙは、Ｔｒｐとして選択されることはない、式（Ｉ）の化合物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２がＯＨとして選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２がＮＲ３Ｒ４として選択され、Ｒ３およびＲ４は、独立して、
・１〜１２個の炭素原子を有するアルキル；
・３〜１０個の炭素原子を有するアルケニル；
・（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、５〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル
・ハロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、フェニル基；
・ハロ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合によりフェニル環上で置換されている、ベンジル基、
・ハロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、ナフチル基、
・式−（ＣＨ２）ｐＯＲ５の基
（式中、ｐは、２〜８の整数を表し、Ｒ５は、
○水素または
○（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは
○ハロ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、５〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル、
○ハロ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、フェニル基を表す）
・式−（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７の基
（式中、ｑは、２〜８の整数を表し、Ｒ６およびＲ７は、独立して、
●水素または
●−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは
●ハロ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜４個の炭素原子を有する低級アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜４個の炭素を有する低級アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル、
●ハロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、フェニル基、
●ハロ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合によりフェニル環上で置換されている、ベンジル基を表し、
●Ｒ６とＲ７が合わさって、−（ＣＨ２）３、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２、−（ＣＨ２）２−Ｓ−（ＣＨ２）２を表すか、または
●Ｒ６とＲ７が、隣接する窒素原子と合わさって、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ピリジル、ベンジルおよび置換ベンジルから選択される置換基で４位が置換されていてもよい、ピペラジン部分を形成し、ここで、フェニル部分は、クロロ、ブロモ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基を有する）
を表す、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−８５７）、請求項２に記載の式（１）の化合物。
【請求項５】
ＸがＶａｌであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−１３０）、請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−１１４）、請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−４３８）、請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
−ＮＲ３Ｒ４が、以下の式
−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２；−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２
−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２；−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ３
−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｎ（ＣＨ３）２；−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２
−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２；−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２
−ＮＨ−（ＣＨ２）５Ｎ（ＣＨ３）；−ＮＨ（ＣＨ２）６Ｎ（ＣＨ３）２
−ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨＣＨ３；−Ｎ［（ＣＨ２）２ＮＨ２］２
−Ｎ［（ＣＨ２）３ＮＨ２］２；−Ｎ［（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２］２
−Ｎ［（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２］２；−Ｎ［（ＣＨ２）４ＮＨ２］２
【化２】
2016501232.tif 000011
を有する、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
前記ＮＲ３Ｒ４が、以下
【表１】
2016501232.tif 000012
2016501232.tif 000013
2016501232.tif 000014
から選択される、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＮＲ３Ｒ４であり、Ｒ３（またはＲ４）がＨであり、Ｒ４（またはＲ３）が、ｑ＝２である（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ６およびＲ７がＨである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１１】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＮＲ３Ｒ４であり、Ｒ３（またはＲ４）がＨであり、Ｒ４（またはＲ３）が、ｑ＝２である（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ６およびＲ７がＨである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスであって、
−炭素、窒素および無機塩の同化可能な供給源を含有する水性栄養培地中、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９または式（Ｉ）のランチビオティックを産生する能力を維持しているこれらの改変体または変異体から選択されるＡｃｌｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ  ｓｐ．の少なくとも１つを好気性条件で培養することと、
−全培養ブロス、または分離した菌糸体または濾過した発酵ブロスから、得られる式（Ｉ）のランチビオティックを単離することと、
−単離された式（Ｉ）のランチビオティックを精製することとを含むことを特徴とする、プロセス。
【請求項１３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９から選択されるＡｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ｓｐ．株が前培養される、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
式（Ｉ）の抗生物質の単離が、発酵ブロスを濾過することと、水不混和性溶媒を用いた抽出、非溶媒を加えるか、または溶液のｐＨを変えることによる沈殿、吸収クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、逆相分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子排除クロマトグラフィー、含まれる前記技術の２つ以上の組み合わせから選択される技術に少なくとも従って、濾過した発酵ブロスから抗生物質を回収することによって行われる、請求項１２および１３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１５】
式（Ｉ）の抗生物質の単離が、発酵ブロスの上清から菌糸体を分離することによって、および菌糸体を水混和性溶媒で抽出することによって、使用した菌糸体を除去した後、未精製抗生物質を含む水混和性溶液を得て、溶媒を用いた抽出、非溶媒を加えるか、または溶液のｐＨを変えることによる沈殿、吸収クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、逆相分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子排除クロマトグラフィー、含まれる前記技術の２つ以上の組み合わせの少なくとも１つから選択される技術によって、別個に処理するか、または、濾過したブロスを含む保存液中で処理し、ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１２、ＮＡＩ−４３８から選択される抗生物質を回収することによって行われる、請求項１２および１３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１６】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−８５７）、請求項１２に記載の式（Ｉ）の抗生物質を調製するためのプロセス。
【請求項１７】
ＸがＶａｌであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−１３０）、請求項１２に記載の式（Ｉ）の抗生物質を調製するためのプロセス。
【請求項１８】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−１１４）、請求項１２に記載の式（Ｉ）の抗生物質を調製するためのプロセス。
【請求項１９】
ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである（ＮＡＩ−４３８）、請求項１２に記載の式（Ｉ）の抗生物質を調製するためのプロセス。
【請求項２０】
縮合剤存在下、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の少なくとも式（Ｉ）の出発化合物と、Ｒ３およびＲ４が請求項１に定義したとおりである一般式ＨＮＲ３Ｒ４の少なくとも選択されたアミンとの縮合反応を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の式（Ｉ）の抗生物質を調製するためのプロセス。
【請求項２１】
前記ＮＲ３Ｒ４が、以下の式
−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２；−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２
−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２；−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ３
−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｎ（ＣＨ３）２；−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２
−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２；−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２
−ＮＨ−（ＣＨ２）５Ｎ（ＣＨ３）；−ＮＨ（ＣＨ２）６Ｎ（ＣＨ３）２
−ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨＣＨ３；−Ｎ［（ＣＨ２）２ＮＨ２］２
−Ｎ［（ＣＨ２）３ＮＨ２］２；−Ｎ［（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２］２
−Ｎ［（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２］２；−Ｎ［（ＣＨ２）４ＮＨ２］２
【化３】
2016501232.tif 000015
から選択される、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項２２】
前記ＮＲ３Ｒ４が、
【表２】
2016501232.tif 000016
2016501232.tif 000017
2016501232.tif 000018
から選択される、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項２３】
前記縮合反応が、少なくとも縮合剤と、有機アミド、グリコールおよびポリオールのエーテル、ホスホラミド誘導体、スルホキシドジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ヘキサメチルホスホロアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、Ｎ−メチルピロリドン、およびこれらの混合物から選択される少なくとも溶媒存在下で行われる、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２４】
前記縮合反応が、０℃〜５０℃の範囲の温度で行われる、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２５】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項２６】
医薬的に許容される担体を含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
経口、局所または非経口で投与可能なことを特徴とする、請求項２５または２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
カプセル、錠剤、水性の液体溶液または懸濁物、油性の溶液または懸濁物、疎水性または親水性の基剤、例えば、軟膏、クリーム、ローション、塗布剤または粉末の形態であることを特徴とする、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
細菌感染の治療に使用するための請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物およびその許容される塩。
【請求項３０】
前記細菌感染が、腸球菌、連鎖球菌、ブドウ球菌によって引き起こされる、請求項２６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３１】
前記細菌感染が、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．によって引き起こされる、請求項２６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３２】
投薬範囲が、体重１ｋｇあたり、１〜４０ｍｇの活性成分を含む、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３３】
炭素、窒素および無機塩の同化可能な供給源存在下、浸漬型の好気性条件で培養されたとき、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９、または請求項１の式（Ｉ）の抗生物質を産生する能力を維持しているこれらの改変体または変異体から選択されるＡｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ｓｐ．株の生物学的に純粋な培養物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式（１）を有する新規ランチビオティック化合物、その調製プロセス、その医薬的に許容される塩、ランチビオティックを含有する医薬組成物、および抗菌剤としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ランチビオティックと称される化合物は、抗生物質化合物の総括的な定義に属するペプチドであり、ランチオニンおよび／または３−メチルランチオニンといったアミノ酸の存在を特徴とする。従って、ランチビオティックという用語は、これらの化合物の構造的な特徴を定義するものであり、必ずしも、共通のあり得る薬理活性を定義するものではない。実際に、ランチビオティックの中には、抗菌活性を有するものもあるが、他のものは、全体的に抗菌活性を欠いている。抗菌活性を有するランチビオティックの中で特に関連するのは、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）に対して活性なランチビオティックであり、医薬においてかなり興味深い場合がある。今までに記載された、抗菌活性を有するすべての寄託されたランチビオティックは、ペプチドグリカン生成の鍵となる中間体の隔離によって細胞壁の生合成を妨害することによってその作用を発揮する。
【０００３】
抗菌性ランチビオティックは、その構造に基づいて、大きく２つの群に分けることができる。Ａ型ランチビオティックは、典型的には、細長い両親媒性ペプチドであり、一方、Ｂ型ランチビオティックは、密集しており、球状である。ニシンは、Ａ型ランチビオティックの典型的な代表例であり、一方、アクタガルジンおよびメルサシジンは、副分類であるＢ型ランチビオティックに属する。驚くべきことに、ニシン型およびメルサシジン型のランチビオティックは、形状および一次構造は異なるのに、両方とも、膜結合ペプチドグリカン前駆体脂質ＩＩと相互作用する。さらに、抗菌活性スペクトルは、一般的に、グラム陽性菌に制限されるが、副分類ＡおよびＢの個々のメンバーは、その効能が非常に異なる。全体として、ランチビオティックにおける標的結合性の増加および／または抗菌活性の向上に関与する構造的要素は、あまり理解されていない。
【０００４】
従来、ランチビオティックは、ほとんどがＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ目（低Ｇ−Ｃグラム陽性菌）から単離されており、相対的に、多様な他の抗菌剤を産生する能力が最も良いことが知られているＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓに由来するものはほとんど記載されていない。アクタガルジンおよび最近記載された１０７８９１（国際公開番号第ＷＯ２００５／０１４６２８号）は、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓによって産生される代表的なランチビオティックである。
【０００５】
これらのランチビオティックは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、連鎖球菌および腸球菌に対して活性である。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、生命を脅かす感染を引き起こす場合があり、ＭＲＳＡは、すべてのペニシリンおよびセファロスポリンや、複数の他の抗生物質に耐性であるため、特に臨床的に重要である。それに加え、患者から患者に簡単に伝播し、医療施設にとって重要な影響を有する感染のアウトブレイクを引き起こす。バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）は、治療の困難性を高める重篤なヒト感染（例えば、心内膜炎、髄膜炎および敗血症）に関与する重要な院内感染病原体として出現してきている。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＭｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓは、重要なヒト病原体であると認識されている。これらは、呼吸器感染、特に、子供の中耳炎および高齢者の下気道感染の主な原因である。Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、近年、呼吸器に最も一般的な病原体として受け入れられている。
【０００６】
天然に生じる抗生物質の改変体および／または誘導体が長らく望まれており、医薬として有用であろう。これらは、化学合成または天然産物の改変によって製造することができるが、天然に生じる抗生物質のほとんどの構造的改変は、抗菌活性を失わせてしまうか、またはひどく損なってしまう傾向がある。この傾向は、構造と活性の関係（ＳＡＲ）があまりよく定義されておらず、抗生物質と標的の相互作用についての分子的な詳細が存在しないランチビオティックの分野では特に当てはまる。さらに、抗菌効能に関与すると思われる他の因子は、厚いペプチドグリカン層を通過した後の標的に対する化合物の拡散速度、細菌細胞を保護する外部表面に存在する極性で電荷を有し、疎水性の部分との可能な相互作用である。ランチビオティックの改質の結果を予測できないものにするさらなる要素は、同様の作用機序を有する無関係な化合物の存在であり、ある副分類に対するＳＡＲ研究から得られた結論を他の副分類に適用することを妨げている。
【発明の概要】
【０００７】
本明細書の開示は、新規ランチビオティック化合物、その調製プロセス、および抗菌治療が必要な状態を治療するための使用を含め、治療における使用を包含する。本開示のこれらの態様および他の態様を本明細書に記載する。
【０００８】
本開示は、ランチビオティックである一般式（Ｉ）を有する新規抗生物質化合物、その調製プロセス、それを含有する医薬組成物、その医薬的に許容される塩、および抗菌剤としてのその使用を包含する。
【０００９】
本開示は、一般式（Ｉ）の微生物由来のランチビオティック物質、その医薬的に許容される塩、医薬組成物および抗菌剤としてのその使用を包含する。
【００１０】
本開示は、本明細書で以下、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に寄託番号ＤＳＭ  ２４０６９で２０１０年９月２９日に寄託）として特定する、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＩＤ１０５８５７、または本明細書で以下、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に寄託番号ＤＳＭ  ２４０５８で２０１０年９月２９日に寄託）として特定する、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＩＤ１０６１３０、または本明細書で以下、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に寄託番号ＤＳＭ  ２４０６０で２０１０年９月２９日に寄託）として特定する、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．  １Ｄ１  １４６２３、または本明細書で以下、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に寄託番号ＤＳＭ  ２４０５６で２０１０年９月２９日に寄託）として特定する、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＩＤ９９４３８、または一般式（Ｉ）のものに属するランチビオティックを産生する能力をまだ維持しているそれぞれの改変体または変異体のいずれかを培養し、菌糸体および／または発酵ブロスから本開示のランチビオティックを回収し、クロマトグラフィー手段によって純粋な物質を単離することを含む、式（Ｉ）のランチビオティック誘導体を調製するためのプロセスを包含する。本開示は、上のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．の異なる株の培養から直接的に得られるランチビオティックの化学反応による改質を含む、式（Ｉ）のランチビオティック誘導体を調製するためのプロセスも包含する。
【００１１】
本発明に包含される開示によれば、式（Ｉ）の化合物は、以下の一般式
【００１２】
【化１】
2016501232.tif 000003
【００１３】
を有し、式中、Ｘは、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＩｌｅから選択されるアミノ酸を表し；Ｙは、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓから選択されるアミノ酸を表し；ｎは、１または２であり、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨまたはＮＲ３Ｒ４を表し、Ｒ３およびＲ４は、独立して、
・水素または
・１〜２０個の炭素原子を有するアルキル；
・２〜２０個の炭素原子を有するアルケニル；
・２〜２０個の炭素原子を有するアルキニル；
・ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換され、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換されている、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル；
・ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換され、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換されている、フェニル基；
・ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって、場合によりフェニル環上で置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１〜２個の置換基によって場合により置換されている、ベンジル基；
・ハロ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換された、ナフチル基；
・式−（ＣＨ２）ｐＯＲ５の基
（式中、ｐは、２〜８の整数を表し、Ｒ５は、
○水素または
○（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは
○ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル；
○ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、フェニル基を表す）；
・式−（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７の基
（式中、ｑは、２〜８の整数を表し、Ｒ６およびＲ７は、独立して、
●水素または
●−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは
●ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル；
●ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合により置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換され、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換されている、フェニル基；
●ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル、フェニル−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから独立して選択される１個または２個の置換基によって場合によりフェニル環上で置換され、ここで、フェニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ４）のフェニル部分、アルコキシ、フェノキシ、フェノキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基のフェノキシ部分は、それぞれ、ハロ、シアノ、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、１〜３個のハロゲン原子によって場合により置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基によって場合により置換されている、ベンジル基を表し、
●Ｒ６とＲ７が合わさって、−（ＣＨ２）３、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２、−（ＣＨ２）２−Ｓ−（ＣＨ２）２を表すか、または
●Ｒ６とＲ７が、隣接する窒素原子と合わさって、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ピリジル、ベンジルおよび置換ベンジルから選択される置換基で４位が置換されていてもよい、ピペラジン部分を形成し、ここで、フェニル部分は、クロロ、ブロモ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシから選択される１個または２個の置換基を有する）
を表し、
但し、ｎ＝２の場合、Ｘは、Ｖａｌとして選択されることはなく、Ｙは、Ｔｒｐとして選択されることはない。
【００１４】
特定の実施形態において、ここで恣意的にＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡｌ−１１４およびＮＡＩ−４３８と名付けた式（Ｉ）のランチビオティック化合物を特徴とする。
【００１５】
一実施形態において、「抗生物質ＮＡＩ−８５７」、「ランチビオティックＮＡＩ−８５７」、または単純に「ＮＡＩ−８５７」という用語は、別段の定めがない限り、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである一般式（Ｉ）の新規ランチビオティック化合物を指す。
【００１６】
一実施形態において、「抗生物質ＮＡＩ−１３０」、「ランチビオティックＮＡＩ−１３０」、または単純に「ＮＡＩ−１３０」という用語は、別段の定めがない限り、ＸがＶａｌであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである一般式（Ｉ）の新規ランチビオティック化合物を指す。
【００１７】
一実施形態において、「抗生物質ＮＡＩ−１１４」、「ランチビオティックＮＡＩ−１１４」、または単純に「ＮＡＩ−１１４」という用語は、別段の定めがない限り、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである一般式（Ｉ）の新規ランチビオティック化合物を指す。
【００１８】
一実施形態において、「抗生物質ＮＡＩ−４３８」、「ランチビオティックＮＡＩ−４３８」、または単純に「ＮＡＩ−４３８」という用語は、別段の定めがない限り、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである一般式（Ｉ）の新規ランチビオティック化合物を指す。
【００１９】
一般的に、ランチビオティックは、その保存的で複雑な構造で知られており、本開示のランチビオティックは、従来技術の制限を克服する。実際に、本開示は、化学的および機能的な類似性に基づいて、ポリペプチド鎖中の特定の保存アミノ酸が置換され、交換されている新規ランチビオティックを包含する。一実施形態において、置換および／または交換は、前もって決められる。別の実施形態において、置換および／または交換は、得られるランチビオティックの望ましい用途および／または機能に基づき、特定の位置で使用するのに最も適切なアミノ酸を特定するための実験的試験を用いて決定される。
【００２０】
「（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、例えば、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、１−メチルプロピルまたは１，１−ジメチルエチルを表す。「（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル」という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル、シクロオクチルから選択されるシクロアルキル基を表す。「（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシ鎖、例えば、限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、１−メチルエトキシ、ブトキシ、１−メチルプロポキシおよび１，１−ジメチルエトキシを表す。
【００２１】
別の実施形態によれば、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＮＲ３Ｒ４であり、Ｒ３（またはＲ４）がＨであり、Ｒ４（またはＲ３）が、ｑ＝２である（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ６およびＲ７がＨである場合、この化合物は、ＮＡＩ−１１４誘導体と呼ばれる。
【００２２】
さらに別の実施形態によれば、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＮＲ３Ｒ４であり、Ｒ３（またはＲ４）がＨであり、Ｒ４（またはＲ３）が、ｑ＝２である（ＣＨ２）ｑＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ６およびＲ７がＨである場合、この化合物は、ＮＡＩ−８５７誘導体と呼ばれる。
【００２３】
別の好ましい実施形態において、本開示は、Ｘが、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＩｌｅから選択されるアミノ酸を表し；Ｙが、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓから選択されるアミノ酸を表し；ｎは、１または２であり、Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＮＲ３Ｒ４から選択され、−ＮＲ３Ｒ４基が、以下の式：
−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２；−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２
−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２；−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ３
−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｎ（ＣＨ３）２；−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２
−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ３Ｈ７）２；−ＮＨ−（ＣＨ２）３Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２
−ＮＨ−（ＣＨ２）５Ｎ（ＣＨ３）；−ＮＨ（ＣＨ２）６Ｎ（ＣＨ３）２
−ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨＣＨ３；−Ｎ［（ＣＨ２）２ＮＨ２］２
−Ｎ［（ＣＨ２）３ＮＨ２］２；−Ｎ［（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２］２
−Ｎ［（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２］２；−Ｎ［（ＣＨ２）４ＮＨ２］２
【００２４】
【化２】
2016501232.tif 000004
【００２５】
を有する一般式（Ｉ）の新規化合物を包含する。
【００２６】
本開示は、Ｘが、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ＶａｌまたはＩｌｅから選択され；Ｙが、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、ＴｙｒまたはＴｒｐから選択され；ｎが、１または２であり、Ｒ１およびＲ２が、ＯＨまたはＮＲ３Ｒ４を表し、Ｒ３およびＲ４が、上に定義されるとおりである、一般式（Ｉ）を有する新規化合物を調製するためのプロセスも包含する。
【００２７】
一実施形態において、Ｒ１およびＲ２がＮＲ３Ｒ４を表す一般式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１およびＲ２がＯＨとして選択される式（Ｉ）の対応する化合物と、式ＨＮＲ３Ｒ４（Ｒ３およびＲ４が上に定義したとおりである）の選択されるアミンとを反応させることによって得ることができ、調製することができる。
【００２８】
一実施形態において、反応は、縮合剤存在下（すなわち、溶媒存在下）で行われる。縮合反応に有用な好ましい不活性有機非プロトン性溶媒は、一連の反応を望ましくないように妨害せず、出発物質（例えば、ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８としてすでに示したものから選択される化合物）を少なくとも部分的に可溶化することができる溶媒である。溶媒は、有機アミド、グリコールおよびポリオールのエーテル、ホスホラミド誘導体、スルホキシドから選択することができる。好ましくは、溶媒は、限定されないが、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ヘキサメチルホスホロアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、Ｎ−１５メチルピロリドン、およびこれらの混合物から選択される。好ましくは、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）が使用される。本開示の縮合剤は、特にペプチド合成において、有機化合物中のアミド結合を作成するのに適切なものである。縮合剤の代表例は、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）を含まないか、またはヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）存在下のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ν，Ν，Ν’，Ν’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７オキサベンゾトリアゾール−１−イル）ウラニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、ベンゾトリアゾリル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、ベンゾトリアゾリルオキシ−トリス−（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）および（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニルまたはヘテロ環ホスホロアジデート、例えば、ジフェニルホスホロアジデート、ジモルホリル−ホスホロアジデートである。好ましい縮合剤は、ＰｙＢＯＰである。縮合剤は、一般的に、わずかにモル過剰で、例えば、２．２〜５モル過剰で使用される。好ましくは、縮合剤のモル過剰は、例えば、ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８から選択される出発物質のランチビオティック化合物のモル量の約２．５倍である。一実施形態によれば、アミンは、出発化合物に対し、わずかにモル過剰で用いられる。一般的に、３〜１０倍のモル過剰の選択されたアミンを使用するが、４〜５倍のモル過剰が好ましい。一実施形態において、アミンＨＮＲ３Ｒ４を対応する塩（例えば、塩酸塩）として反応させる場合、化合物（例えば、ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８として示されるものから選択されるもの）と反応するアミンＨＮＲ３Ｒ４の遊離塩基を得るための少なくともモル割合で、適切な塩基を加えることが必要である。この場合に、過剰量の塩基が一般的に好ましい。アミンＨＮＲ３Ｒ４に対して少なくとも等モル量、好ましくは、約２．２倍モル過剰の反応混合物に対し、塩を生成する塩基を加えることが簡便である。前記塩を生成する塩基の例としては、限定されないが、三級有機脂肪族アミンまたは脂環式アミン、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン���ＴＥＡ）、Ｎ−メチルピロリジンまたはヘテロ環塩基、例えば、ピコリンなど、アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）の炭酸水素酸塩および炭酸塩が挙げられる。反応温度は、特定の出発物質および反応条件に依存してかなり変わるだろう。一般的に、約０℃〜約５０℃の温度で、一実施形態において、好ましくは、室温でアミド化反応を行うことが好ましい。また、反応時間は、他の反応パラメータに依存して、かなり変動する。一般的に、縮合は、約２〜４時間で終了する。一実施形態において、縮合は、２時間未満で終了する。一実施形態において、縮合は、４時間より長くかかって終了する。アミンＨＮＲ３Ｒ４が、さらに一級アミノ基を含む場合、必要な場合、望ましい生成物を得るために、当該技術分野で知られているように保護されてもよい。本開示のプロセス中に適用される条件に耐性があり、ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡ１−１１４またはＮＡＩ−４３８コア部分から選択される化合物の安定性に影響を与えない条件下で簡単に除去され得る、アミンの残りの部分の任意の典型的な保護基をここで利用することができる。一実施形態において、アミノ官能基の適切な保護基は、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ、Ｎ．Ｙ．、１９８１に記載される群から選択することができる。一実施形態において、この場合に、アミノ部分をアシル化することによって作られるこれらの保護基が好ましい。記載される本発明のプロセスで使用される保護基は、ペプチド合成で一般的に使用されるものである。次いで、望ましい最終生成物を得るために脱保護工程が必要である。一般的に、この一連の反応は、当該技術分野で既知のＨＰＬＣによって監視される。このアッセイの結果に基づいて、一連の反応を評価し、いつ反応を停止し、例えば、さらなる一般的な分離操作および精製（例えば、カラムクロマトグラフィー）と組み合わせた、非溶媒を加えることによる沈殿、溶媒を用いた抽出を含め、それ自体が既知の技術に従って、反応塊の処理をいつ開始するかを決定することができるだろう。
【００２９】
本発明に包含されるのは、表１にまとめたように調製可能な一連の化合物である。
【００３０】
【表１】
2016501232.tif 000005
【００３１】
2016501232.tif 000006
【００３２】
一実施形態において、化合物は、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎ＝２、Ｒ１またはＲ２が−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であることを特徴とする。本明細書の開示は、ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎ＝１、Ｒ１またはＲ２が−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２である化合物も包含する。
【００３３】
一般式（Ｉ）の化合物は、酸官能基および／または塩基官能基を有し、既知の手順に従って、適切な塩基または酸と塩を形成することができ、内部塩の形態で存在していてもよい。一実施形態において、ランチビオティックは、酸形態または内部塩の形態で得られる場合、塩基との対応する非毒性の医薬的に許容される塩に変換されてもよい。適切な塩としては、アルカリおよびアルカリ土類の金属塩、典型的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩、およびアンモニウム塩および置換アンモニウム塩が挙げられる。代表的で非限定的な置換アンモニウム塩としては、一級、二級または三級の（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアンモニウムおよびヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルアンモニウム塩が挙げられ、本開示の実施形態によれば、ベンザチン、プロカイン、ヒドラバミンおよび同様の水不溶性の非毒性の医薬的に許容される塩が挙げられる。別の好ましい種類の本開示の化合物の塩は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニンまたはリジン）、またはアミノ糖（例えば、グルコサミンなど）との塩基性付加塩によって表される。
【００３４】
アルカリ金属およびアルカリ土類金属の塩は、金属塩を調製するために一般的に用いられる通常の手順に従って調製される。一例として、本開示のランチビオティックを、酸形態または内部塩形態で、最低限の量の適切な溶媒、典型的には、低級アルカノール、または低級アルカノールと水の混合物に溶解し、得られた溶液に化学量論量の適切に選択された塩基を徐々に加え、得られた塩が、非溶媒の添加によって沈殿する。アルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩が生成し、次いで、これを濾過または溶媒の蒸発によって回収する。
【００３５】
または、これらの塩を、凍結乾燥によって、実質的に無水の形態で調製することができる。この場合、所望の塩を含有する水溶液が、本開示の化合物を、これらの間に含まれるｐＨを得るような量の適切に選択されたアルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩または水酸化物を用いて鹸化することから得られ、任意の不溶解物から濾過し、凍結乾燥させる。
【００３６】
適切な溶媒中、適切に選択されたアミンを、化合物の溶液に加え、次いで、溶媒および過剰量のアミン試薬を蒸発させることによって、または、濃縮溶液を凍結乾燥させることによって、有機アンモニウム塩を上の手順に従って調製することができる。
【００３７】
本発明に包含される化合物の酸との付加塩も調製することができる。本開示の化合物の代表的で適切な酸付加塩としては、有機酸および無機酸の両方、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パモ酸、粘液酸、グルタミン酸、カンファー酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、経皮酸などの酸を用いて標準的な反応によって作られる塩が挙げられる。上述の化合物の酸との付加塩は、塩基との塩を調製するために使用されるのと実質的に同様の様式で、しかし、塩基の代わりに試薬として適切に選択された酸を用い、調製することができる。
【００３８】
当該技術分野で知られているように、医薬的に許容される酸または医薬的に許容されない酸との塩形成は、簡便な精製技術として使用されてもよい。生成および単離の後、式（Ｉ）の化合物の塩形態は、対応する非塩または医薬的に許容される塩のいずれかに変換することができる。ある場合には、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩は、水および親水性溶媒にもっと可溶性であり、化学安定性が高まっている。上述の化合物の水または親水性溶媒中での良好な溶解度および安定性は、一般的に、医薬を投与するための適切な医薬組成物の調製について、当該技術分野で理解される。しかし、式（Ｉ）の化合物とその塩の特性の類似性という観点で、式（Ｉ）の非塩化合物の生体活性を取り扱うとき、本出願で言及されることは、その医薬的に許容される塩にも適用され、その逆も成り立つ。
【００３９】
本発明に包含される化合物は、経口、局所または非経口で投与することができ、好ましい投与経路は、行われる治療に依存する。投与経路に依存して、これらの化合物を種々の投薬形態に配合することができる。経口投与のための調製物は、カプセル、錠剤、液体溶液または懸濁物の形態であってもよい。当該技術分野で知られるように、カプセルおよび錠剤は、活性成分に加え、従来の賦形剤、例えば、希釈剤（例えば、ラクトース、リン酸カルシウム、ソルビトールなど）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、アカシア）、香味剤および許容される崩壊剤および湿潤剤を含有していてもよい。一般的に水性または油性の溶液または懸濁物の形態の液体調製物は、従来の添加剤、例えば、懸濁剤を含有していてもよい。局所使用のために、本開示の式（Ｉ）の化合物は、鼻および喉の粘膜または気管支組織を通して吸収するために適切な形態で調製されてもよく、簡便には、液体スプレーまたは吸入剤、薬用キャンディーまたは喉塗布剤の形態をしていてもよい。眼用医薬のために、調製物は、液体または半液体の形態で存在していてもよい。局所用途は、軟膏、クリーム、ローション、塗布剤または粉末として、疎水性または親水性の基剤に配合してもよい。直腸投与のために、本開示の式（Ｉ）の化合物を、従来の賦形剤、例えば、ココアバター、ワックス、鯨蝋またはポリエチレングリコールおよびこれらの誘導体と混合した坐剤の形態で投与する。注射のための組成物は、油性または水性の賦形剤中の懸濁物、溶液、またはエマルションのような形態をしていてもよく、配合剤、例えば、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤を含有していてもよい。または、活性成分は、適切な賦形剤（例えば、滅菌水）を用いて送達時に再構築するために粉末形態であってもよい。投与すべき有効成分の量は、種々の因子、例えば、治療される被検体の大きさおよび状態、投与経路および投与頻度、および関与する病原体によって変わる。
【００４０】
本発明に包含される化合物は、一般的に、体重１ｋｇあたり、約１〜４０ｍｇの活性成分を含む投薬量で有効である。特定の化合物、感染および患者の特徴に依存して、効果的な投薬量を１日に１回投与で投与してもよく、または１日に２〜４回の投与に分けて投与してもよい。特に望ましい組成物は、単位あたり約３０〜約５００ｍｇを含有する投薬単位の形態で調製される組成物である。
【００４１】
本発明に包含される化合物を、別の抗菌剤または第２の症状または異なる状態の原因を治療することを意図する薬剤である他の薬物と組み合わせて使用することもできる。例えば、本開示の化合物と組み合わせて使用可能な抗菌剤としては、限定されないが、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシド、グリコペプチド、リファマイシン、リポペプチド、アミノグリコシドが挙げられる。従って、本開示の化合物と他の承認される薬物との組成物も、本開示の範囲に入る。
【００４２】
その塩、製剤および組成物を含む、本発明に包含される式（Ｉ）の新規化合物は、一般的に使用される抗生物質に耐性を有する菌を含め、グラム陽性好気性菌およびグラム陽性嫌気性菌、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．によって引き起こされる感染性疾患の予防および治療のために、ヒトまたは動物の医薬に用いられる抗菌性調製物の活性成分として効果的に使用することができる。
【００４３】
本発明に包含される化合物（すなわち、特に、ランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡ１−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８、およびこれらの誘導体）は、有利には、感染性疾患において、グラム陽性好気性菌およびグラム陽性嫌気性菌、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．に対する抗菌剤として使用される。
【００４４】
本開示は、ヒトまたは動物の身体の特定の治療方法または予防方法に使用するための医薬を製造するための化合物またはその組成物の使用も包含する。
【００４５】
一実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、例えば、動物の餌に添加される。これは、好ましくは、有効な量の活性化合物を含有する適切な餌用の予備混合物を調製し、この予備混合物を完全な食料に組み込むことによって達成される。または、活性成分を含有する中間濃縮物または餌用補助物質を餌にブレンドしてもよい。
【００４６】
このような餌用予備混合物および完全な食料を調製し、投与する様式は、例えば、「Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ」、Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｄｍａｎおよびＣＯ．、Ｓ．Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９６９または「Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ  ＦｅｅｄｓおよびＦｅｅｄｉｎｇ」  ０およびＢ  ｂｏｏｋｓ、Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ、Ｏｒｅ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９７７のような参考書籍に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ｍ／ｚ  １０８６に２個プロトン化されたイオンを示す抗生物質ＮＡＩ−８５７の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図２】ｍ／ｚ  １０８６に２個プロトン化されたイオンを示す抗生物質ＮＡＩ−８５７の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図３】アセトニトリル：ＴＦＡ０．１％＝１：１に溶解した抗生物質ＮＡＩ−８５７のＵＶスペクトルを表す図
【図４】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ４００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−８５７の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す図
【図５】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−８５７のＨＳＱＣスペクトルを表す図
【図６】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−８５７のＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトルを表す図
【図７】ｍ／ｚ  １０７８．５に２個プロトン化されたイオンを示す抗生物質ＮＡＩ−１３０の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図８】ｍ／ｚ  １０７８．５に２個プロトン化されたイオンを示す抗生物質ＮＡＩ−１３０の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図９】アセトニトリル：ＴＦＡ０．１％＝１：１に溶解した抗生物質ＮＡＩ−１３０のＵＶスペクトルを表す図
【図１０】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−１３０の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す図
【図１１】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−１３０のＨＳＱＣスペクトルを表す図
【図１２】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−１３０のＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトルを表す図
【図１３】ｍ／ｚ  １１０４に２個プロトン化されたイオンを示す抗生物質ＮＡＩ−１１４の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図１４】ｍ／ｚ  １１０４に２個プロトン化されたイオンを示す抗生物質ＮＡＩ−１１４の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図１５】アセトニトリル：ＴＦＡ０．１％＝１：１に溶解した抗生物質ＮＡＩ−１１４のＵＶスペクトルを表す図
【図１６】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−１１４の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す図
【図１７】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−１１４のＨＳＱＣスペクトルを表す図
【図１８】Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００分光計で、２５℃、アセトニトリル−ｄ３：Ｄ２０混合物中で記録したＮＡＩ−１１４のＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトルを表す図
【図１９】ｍ／ｚ  １０９３に２個プロトン化されたイオンを示すＮＡＩ−４３８の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図２０】ｍ／ｚ  １０９３に２個プロトン化されたイオンを示すＮＡＩ−４３８の質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図２１】アセトニトリル：ＴＦＡ０．１％＝１：１に溶解した抗生物質ＮＡＩ−４３８のＵＶスペクトルを表す図
【図２２】ｍ／ｚ  １１２８に２個プロトン化されたイオンを示すエチレンジアミンとのＮＡＩ−８５７ジアミドの質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図２３】ｍ／ｚ  １１２８に２個プロトン化されたイオンを示すエチレンジアミンとのＮＡＩ−８５７ジアミドの質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図２４】ｍ／ｚ  １１４６に２個プロトン化されたイオンを示すエチレンジアミンとのＮＡＩ−１１４ジアミドの質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図
【図２５】ｍ／ｚ  １１４６に２個プロトン化されたイオンを示すエチレンジアミンとのＮＡＩ−１１４ジアミドの質量スペクトル（フルスキャンの低解像度スペクトル）を表す図  （株および発酵）  本発明には、  −炭素、窒素および無機塩の同化可能な供給源を含有する水性栄養培地中、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９または式（Ｉ）のランチビオティックを産生する能力を維持しているこれらの改変体または変異体から選択されるＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ  ｓｐ．の少なくとも１つを好気性条件で培養することと、  −全培養ブロス、または分離した菌糸体または濾過した発酵ブロスから、得られる式（Ｉ）のランチビオティックを単離することと、  −単離された式（Ｉ）のランチビオティックを精製することとを含む、式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスが包含される。
【００４８】
一実施形態において、ランチビオティックＮＡＩ−８５７の産生は、これを産生することができるＳｔｒｅｐｌｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．株（すなわち、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９、またはランチビオティックＮＡＩ−８５７を産生する能力を維持しているその改変体または変異体）を培養し、全培養ブロスおよび／または分離された菌糸体および／または濾過した発酵ブロスから、得られたランチビオティックを単離し、クロマトグラフィー手段によって、単離されたランチビオティックを精製することによって達成される。
【００４９】
一実施形態において、ランチビオティックＮＡＩ−１３０の産生は、これを産生することができるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．株（すなわち、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、またはランチビオティックＮＡＩ−１３０を産生する能力を維持しているその改変体または変異体）を培養し、全培養ブロスおよび／または分離された菌糸体および／または濾過した発酵ブロスから、得られたランチビオティックを単離し、クロマトグラフィー手段によって、単離されたランチビオティックを精製することによって達成される。
【００５０】
一実施形態において、ランチビオティックＮＡＩ−１１４の産生は、これを産生することができるＳｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．株（すなわち、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０、またはランチビオティックＮＡＩ−１１４を産生する能力を維持しているその改変体または変異体）を培養し、全培養ブロスおよび／または分離された菌糸体および／または濾過した発酵ブロスから、得られたランチビオティックを単離し、クロマトグラフィー手段によって、単離されたランチビオティックを精製することによって達成される。
【００５１】
一実施形態において、ランチビオティックＮＡＩ−４３８の産生は、これを産生することができるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．株（すなわち、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６、またはランチビオティックＮＡＩ−４３８を産生する能力を維持しているその改変体または変異体）を培養し、全培養ブロスおよび／または分離された菌糸体および／または濾過した発酵ブロスから、得られたランチビオティックを単離し、クロマトグラフィー手段によって、単離されたランチビオティックを精製することによって達成される。
【００５２】
ある好ましい実施形態によれば、ランチビオティックＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）の産生は、炭素、窒素および無機塩の容易に消化可能な供給源または使用可能な供給源を含む水性栄養培地中、好気性条件下で行われる。発酵分野で一般的に使用される多くの栄養培地を使用してもよいが、好ましい炭素源は、デンプン、デキストリン、グルコース、マルトース、グリセロールなどである。好ましい窒素源は、大豆ミール、ペプトン、肉抽出物、加水分解カゼイン、トリプトン、コーンスティープリカー、綿実油かす、酵母抽出物などである。
【００５３】
ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、クロリド、カーボネート、サルフェート、ホスフェート、硝酸などのイオンを与えることができる可溶性塩を特定の培地に組み込んでもよい。
【００５４】
好ましい実施形態において、抗生物質ＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）を産生する株を、発酵管または振とうフラスコ中で前培養し、次いで、培養物を使用し、その後のかなりの量の物質産生のための発酵のための瓶反応器に播種する。前培養物のために用いられる培地は、もっと大きな発酵に用いられる培地と同じであってもよいが、他の培地を使用することもできる。
【００５５】
ある好ましい態様によれば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９（またはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｈｉｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６）株を、Ｓ１プレートで成長させる（詳細な情報は、実験章の実施例１に記載される）。この培地で、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９株は、明灰色から白色の気中菌糸体を含む灰色のコロニーを生成する。培地を熟成すると、明褐色の顔料を培地に放出する。
【００５６】
Ｓ１プレートで、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８株は、白色の気中菌糸体を有する褐色コロニーを生成する。暗褐色顔料を培地に放出する。
【００５７】
Ｓ１プレートで、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０株は、白っぽい気中菌糸体の塊を有する明橙色から明桃色のコロニーを生成する。
【００５８】
Ｓ１プレートで、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６株は、白みがかったクリーム色のコロニーを生成し、同じ色の気中菌糸体を伴う。
【００５９】
抗生物質ＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）を産生するＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９（またはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６）株を成長させる温度は、２６〜３５℃、好ましくは、２８〜３２℃である。発酵中、抗生物質ＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）の産生は、感受性の高い微生物でのバイオアッセイおよび／またはＨＰＬＣ分析によって監視することができる。抗生物質ＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）の最大産生は、一般的に、発酵７２時間後から１９２時間までに起こる。
【００６０】
従って、抗生物質ＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９（またはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８、Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｈｉｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６）または抗生物質ＮＡＩ−８５７（またはＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８）を産生することができるこれらの改変体または変異体を培養することによって産生され、培養ブロスおよび／または菌糸体の中に見出される。
【００６１】
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｖｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９  １６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９株の１６  ｒＲＮＡ遺伝子（１６Ｓ  ｒＤＮＡ）の部分的な配列、すなわち、６４４ヌクレオチドは、配列番号１で報告される。この配列を、公共のデータベースに寄託されている配列と比較し、種々のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列に関連することがわかる。
【００６２】
他の微生物を用いた場合、抗生物質ＮＡＩ−８５７を産生する株の特徴は、改変を受ける。例えば、この株の人工改変体および変異体は、種々の既知の突然変異原、例えば、紫外線および化学物質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンおよびその他多くの物質を用いた処理によって得ることができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９株のすべての天然物および人工の改変体および変異体は、抗生物質ＮＡＩ−８５７を産生することができる。
【００６３】
配列番号１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子）
１  ＡＴＧＧＣＴＣＡＧＧ  ＡＣＧＡＡＣＧＣＴＧ  ＧＣＧＧＣＧＴＧＣＴ  ＴＡＡＣＡＣＡＴＧＣ  ＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧ
５１  ＡＴＧＡＡＣＣ  ＡＣＴ  ＴＣＧＧＴＧＧＧＧＡ  ＴＴＡＧＴＧＧＣＧＡ  ＡＣＧＧＧＴＧＡＧＴ  ＡＡＣＡＣＧＴＧＧＧ
１０１  ＣＡＡＴＣＴＧＣＣＣ  ＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧ  ＧＡＣＡＡＧＣＣＣＴ  ＧＧＡＡＡＣＧＧＧＧ  ＴＣＴＡＡＴＡＣＣＧ
１５１  ＧＡＴＡＣＡＡＣＣＡ  ＣＴＡＧＧＧＧＣＡＴ  ＣＣＣＴＣＧＧＴＧＧ  ＴＧＧＡＡＡＧＣＴＣ  ＣＧＧＣＧＧＴＧＣＡ
２０１  ＧＧＡＴＧＡＧＣＣＣ  ＧＣＧＧＣＣＴＡＴＣ  ＡＧＣＴＴＧＴＴＧＧ  ＴＧＡＧＧＴＡＡＣＧ  ＧＣＴＣＡＣＣＡＡＧ
２５１  ＧＣＧＡＣＧＡＣＧＧ  ＧＴＡＧＣＣＧＧＣＣ  ＴＧＡＧＡＧＧＧＣＧ  ＡＣＣＧＧＣＣＡＣＡ  ＣＴＧＧＧＡＣＴＧＡ
３０１  ＧＡＣＡＣＧＧＣＣＣ  ＡＧＡＣＴＣＣＴＡＣ  ＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣ  ＡＧＴＧＧＧＧＡＡＴ  ＡＴＴＧＣＡＣＡＡＴ
３５１  ＧＧＧＣＧＡＡＡＧＣ  ＣＴＧＡＴＧＣＡＧＣ  ＧＡＣＧＣＣＧＣＧＴ  ＧＡＧＧＧＡＴＧＡＣ  ＧＧＣＣＴＴＣＧＧＧ
４０１  ＴＴＧＴＡＡＡＣＣＴ  ＣＴＴＴＣＡＧＣＡＧ  ＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧ  ＡＡＡＧＴＧＡＣＧＧ  ＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡ
４５１  ＡＧＡＡＧＣＧＣＣＧ  ＧＣＴＡＡＣＴＡＣＧ  ＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣ  ＣＧＣＧＧＴＡＡＴＡ  ＣＧＴＡＧＧＧＣＧＣ
５０１  ＡＡＧＣＧＴＴＧＴＣ  ＣＧＧＡＡＴＴＡＴＴ  ＧＧＧＣＧＴＡＡＡＧ  ＡＧＣＴＣＧＴＡＧＧ  ＣＧＧＣＴＴＧＴＣＧ
５５１  ＣＧＴＣＧＧＴＴＧＴ  ＧＡＡＡＧＣＣＣＧＧ  ＧＧＣＴＴＡＡＣＣＣ  ＣＧＧＧＴＣＴＧＣＡ  ＧＴＣＧＡＴＡＣＧＧ
６０１  ＧＣＡＧＧＣＴＡＧＡ  ＧＴＣＧＧＴＡＡＧＧ  ＧＧＡＧＡＴＣＧＧＡ  ＡＴＴＣＣＴＧＧＴＧ  ＴＡＡＣ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８  １６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８株の１６  ｒＲＮＡ遺伝子（１６Ｓ  ｒＤＮＡ）の部分的な配列、すなわち、１３４２ヌクレオチドは、配列番号２で報告される。この配列を、公共のデータベースに寄託されている配列と比較し、種々のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列に関連することがわかる。
【００６４】
他の微生物を用いた場合、抗生物質ＮＡＩ−１３０を産生する株の特徴は、改変を受ける。例えば、この株の人工改変体および変異体は、種々の既知の突然変異原、例えば、紫外線および化学物質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンおよびその他多くの物質を用いた処理によって得ることができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８株のすべての天然物および人工の改変体および変異体は、抗生物質質ＮＡＩ−１３０を産生することができる。
【００６５】
配列番号２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子）
１  ＡＴＣＡＴＧＧＣＴＣ  ＡＧＧＡＣＧＡＡＣＧ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＧＴ  ＧＣＴＴＡＡＣＡＣＡ  ＴＧＣＡＡＧＴＣＧＡ
５１  ＡＣＧＡＴＧＡＡＣＣ  ＡＣＴＴＣＧＧＴＧＧ  ＧＧＡＴＴＡＧＴＧＧ  ＣＧＡＡＣＧＧＧＴＧ  ＡＧＴＡＡＣＡＣＧＴ
１０１  ＧＧＧＣＡＡＴＣＴＧ  ＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣ  ＴＧＧＧＡＣＡＡＧＣ  ＣＣＴＧＧＡＡＡＣＧ  ＧＧＧＴＣＴＡＡＴＡ
１５１  ＣＣＧＧＡＴＡＣＡＡ  ＣＣＡＣＴＧＡＣＣＧ  ＣＡＴＧＧＴＣＧＧＧ  ＴＧＧＴＧＧＡＡＡＧ  ＣＴＣＣＧＧＣＧＧＴ
２０１  ＧＣＡＧＧＡＴＧＡＧ  ＣＣＣＧＣＧＧＣＣＴ  ＡＴＣＡＧＣＴＴＧＴ  ＴＧＧＴＧＡＧＧＴＡ  ＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣ
２５１  ＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡ  ＣＧＧＧＴＡＧＣＣＧ  ＧＣＣＴＧＡＧＡＧＧ  ＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣ  ＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣ
３０１  ＴＧＡＧＡＣＡＣＧＧ  ＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣ  ＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣ  ＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧ  ＡＡＴＡＴＴＧＣＡＣ
３５１  ＡＡＴＧＧＧＣＧＣＡ  ＡＧＣＣＴＧＡＴＧＣ  ＡＧＣＧＡＣＧＣＣＧ  ＣＧＴＧＡＧＧＧＡＴ  ＧＡＣＧＧＣＣＴＴＣ
４０１  ＧＧＧＴＴＧＴＡＡＡ  ＣＣＴＣＴＴＴＣＡＧ  ＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡ  ＧＣＧＡＡＡＧＴＧＡ  ＣＧＧＴＡＣＣＴＧＣ
４５１  ＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧ  ＣＣＧＧＣＴＡＡＣＴ  ＡＣＧＴＧＣＣＡＧＣ  ＡＧＣＣＧＣＧＧＴＡ  ＡＴＡＣＧＴＡＧＧＧ
５０１  ＣＧＣＡＡＧＣＧＴＴ  ＧＴＣＣＧＧＡＡＴＴ  ＡＴＴＧＧＧＣＧＴＡ  ＡＡＧＡＧＣＴＣＧＴ  ＡＧＧＣＧＧＣＴＴＧ
５５１  ＴＣＧＣＧＴＣＧＧＴ  ＴＧＴＧＡＡＡＧＣＣ  ＣＧＧＧＧＣＴＴＡＡ  ＣＣＣＣＧＧＧＴＣＴ  ＧＣＡＧＴＣＧＡＴＡ
６０１  ＣＧＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＡＧＡＧＴＴＣＧＧＴ  ＡＧＧＧＧＡＧＡＴＣ  ＧＧＡＡＴＴＣＣＴＧ  ＧＴＧＴＡＧＣＧＧＴ
６５１  ＧＡＡＡＴＧＣＧＣＡ  ＧＡＴＡＴＣＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＣＡＣＣＧＧ  ＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣ  ＧＧＡＴＣＴＣＴＧＧ
７０１  ＧＣＣＧＡＴＡＣＴＧ  ＡＣＧＣＴＧＡＧＧＡ  ＧＣＧＡＡＡＧＣＧＴ  ＧＧＧＧＡＧＣＧＡＡ  ＣＡＧＧＡＴＴＡＧＡ
７５１  ＴＡＣＣＣＴＧＧＴＡ  ＧＴＣＣＡＣＧＣＣＧ  ＴＡＡＡＣＧＧＴＧＧ  ＧＣＡＣＴＡＧＧＴＧ  ＴＧＧＧＣＧＡＣＡＴ
８０１  ＴＣＣＡＣＧＴＣＧＴ  ＣＣＧＴＧＣＣＧＣＡ  ＧＣＴＡＡＣＧＣＡＴ  ＴＡＡＧＴＧＣＣＣＣ  ＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧ
８５１  ＴＡＣＧＧＣＣＧＣＡ  ＡＧＧＣＴＡＡＡＡＣ  ＴＣＡＡＡＧＧＡＡＴ  ＴＧＡＣＧＧＧＧＧＣ  ＣＣＧＣＡＣＡＡＧＣ
９０１  ＧＧＣＧＧＡＧＣＡＴ  ＧＴＧＧＣＴＴＡＡＴ  ＴＣＧＡＣＧＣＡＡＣ  ＧＣＧＡＡＧＡＡＣＣ  ＴＴＡＣＣＡＡＧＧＣ
９５１  ＴＴＧＡＣＡＴＡＣＡ  ＣＣＧＧＡＡＡＣＧＴ  ＣＴＧＧＡＧＡＣＡＧ  ＧＣＧＣＣＣＣＣＴＴ  ＧＴＧＧＴＣＧＧＴＧ
１００１  ＴＡＣＡＧＧＴＧＧＴ  ＧＣＡＴＧＧＣＴＧＴ  ＣＧＴＣＡＧＣＴＣＧ  ＴＧＴＣＧＴＧＡＧＡ  ＴＧＴＴＧＧＧＴＴＡ
１０５１  ＡＧＴＣＣＣＧＣＡＡ  ＣＧＡＧＣＧＣＡＡＣ  ＣＣＴＴＧＴＣＣＣＧ  ＴＧＴＴＧＣＣＡＧＣ  ＡＧＧＣＣＣＴＴＧＴ
１１０１  ＧＧＴＧＣＴＧＧＧＧ  ＡＣＴＣＡＣＧＧＧＡ  ＧＡＣＣＧＣＣＧＧＧ  ＧＴＣＡＡＣＴＣＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＴＧＧ
１１５１  ＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣ  ＡＡＧＴＣＡＴＣＡＴ  ＧＣＣＣＣＴＴＡＴＧ  ＴＣＴＴＧＧＧＣＴＧ  ＣＡＣＡＣＧＴＧＣＴ
１２０１  ＡＣＡＡＴＧＧＣＣＧ  ＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧ  ＣＴＧＣＧＡＴＡＣＣ  ＧＣＧＡＧＧＴＧＧＡ  ＧＣＧＡＡＴＣＴＣＡ
１２５１  ＡＡＡＡＧＣＣＧＧＴ  ＣＴＣＡＧＴＴＣＧＧ  ＡＴＴＧＧＧＧＴＣＴ  ＧＣＡＡＣＴＣＧＡＣ  ＣＣＣＡＴＧＡＡＧＴ
１３０１  ＣＧＧＡＧＴＣＧＣＴ  ＡＧＴＡＡＴＣＧＣＡ  ＧＡＴＣＡＧＣＡＴＴ  ＧＣＴＧＣＧＧＴＧＡ  ＡＴ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｍｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０  １６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列）
Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０株の１６  ｒＲＮＡ遺伝子（１６Ｓ  ｒＤＮＡ）の部分的な配列、すなわち、１４２５ヌクレオチドは、配列番号３で報告される。この配列を、公共のデータベースに寄託されている配列と比較し、種々のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列に関連することがわかる。
【００６６】
他の微生物を用いた場合、抗生物質ＮＡＩ−１１４を産生する株の特徴は、改変を受ける。例えば、この株の人工改変体および変異体は、種々の既知の突然変異原、例えば、紫外線および化学物質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンおよびその他多くの物質を用いた処理によって得ることができる。Ｓｔｒｅｐｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０株のすべての天然物および人工の改変体および変異体は、抗生物質質ＮＡＩ−１１４を産生することができる。
【００６７】
配列番号３（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列）
１  ＣＧＧＣＧＴＧＣＴＴ  ＡＡＣＡＣＡＴＧＣＡ  ＡＧＴＣＧＡＧＣＧＧ  ＡＡＡＧＧＣＣＣＴＴ  ＣＧＧＧＧＴＡＣＴＣ
５１  ＧＡＧＣＧＧＣＧＡＡ  ＣＧＧＧＴＧＡＧＴＡ  ＡＣＡＣＧＴＧＡＧＴ  ＡＡＣＣＴＧＣＣＣＣ  ＴＧＡＣＴＣＴＧＧＧ
１０１  ＡＴＡＡＧＣＣＣＧＧ  ＧＡＡＡＣＴＧＧＧＴ  ＣＴＡＡＴＡＣＣＧＧ  ＡＴＡＣＧＡＣＣＡＣ  ＴＴＣＣＣＧＣＡＴＧ
１５１  ＧＧＡＴＧＧＴＧＧＴ  ＧＧＡＡＡＧＴＴＴＴ  ＴＣＧＧＴＣＧＧＧＧ  ＡＴＧＧＧＣＴＣＧＣ  ＧＧＣＣＴＡＴＣＡＧ
２０１  ＣＴＴＧＴＴＧＧＴＧ  ＧＧＧＴＡＧＴＧＧＣ  ＣＴＡＣＣＡＡＧＧＣ  ＧＡＣＧＡＣＧＧＧＴ  ＡＧＣＣＧＧＣＣＴＧ
２５１  ＡＧＡＧＧＧＣＧＡＣ  ＣＧＧＣＣＡＣＡＣＴ  ＧＧＧＡＣＴＧＡＧＡ  ＣＡＣＧＧＣＣＣＡＧ  ＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧ
３０１  ＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ  ＴＧＧＧＧＡＡＴＡＴ  ＴＧＣＧＣＡＡＴＧＧ  ＧＣＧＡＡＡＧＣＣＴ  ＧＡＣＧＣＡＧＣＧＡ
３５１  ＣＧＣＣＧＣＧＴＧＧ  ＧＧＧＡＴＧＡＣＧＧ  ＣＣＴＴＣＧＧＧＴＴ  ＧＴＡＡＡＣＣＴＣＴ  ＴＴＣＡＧＣＡＧＧＧ
４０１  ＡＣＧＡＡＧＴＴＧＡ  ＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣ  ＧＣＣＧＧＣＴＡＡＣ  ＴＡＣＧＴＧＣＣＡＧ
４５１  ＣＡＧＣＣＧＣＧＧＴ  ＡＡＴＡＣＧＴＡＧＧ  ＧＣＧＣＡＡＧＣＧＴ  ＴＧＴＣＣＧＧＡＡＴ  ＴＡＴＴＧＧＧＣＧＴ
５０１  ＡＡＡＧＡＧＣＴＣＧ  ＴＡＧＧＴＧＧＣＴＴ  ＧＴＣＧＣＧＴＣＧＧ  ＧＴＧＴＧＡＡＡＧＣ  ＴＴＧＧＧＧＣＴＴＡ
５５１  ＡＣＴＣＣＡＧＧＴＣ  ＴＧＣＡＴＴＣＧＡＴ  ＡＣＧＧＧＣＴＧＧＣ  ＴＡＧＡＧＧＴＡＧＧ  ＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡ
６０１  ＣＧＧＡＡＴＴＣＣＴ  ＧＧＴＧＴＡＧＣＧＧ  ＴＧＡＡＡＴＧＣＧＣ  ＡＧＡＴＡＴＣＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＣＡＣＣＧ
６５１  ＧＴＧＧＣＧＡＡＧＧ  ＣＧＧＴＴＣＴＣＴＧ  ＧＧＣＣＴＴＡＣＣＴ  ＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧ  ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＧ
７０１  ＴＧＧＧＧＡＧＣＧＡ  ＡＣＡＧＧＡＴＴＡＧ  ＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴ  ＡＧＴＣＣＡＣＧＣＴ  ＧＴＡＡＡＣＧＴＴＧ
７５１  ＧＧＣＧＣＴＡＧＧＴ  ＧＴＧＧＧＧＡＣＣＴ  ＴＣＣＡＣＧＧＴＴＴ  ＣＣＧＣＧＣＣＧＴＡ  ＧＣＴＡＡＣＧＣＡＴ
８０１  ＴＡＡＧＣＧＣＣＣＣ  ＧＣＣＴＧＧＧＧＡＧ  ＴＡＣＧＧＣＣＧＣＡ  ＡＧＧＣＴＡＡＡＡＣ  ＴＣＡＡＡＧＧＡＡＴ
８５１  ＴＧＡＣＧＧＧＧＧＣ  ＣＣＧＣＡＣＡＡＧＣ  ＧＧＣＧＧＡＧＣＡＴ  ＧＴＴＧＣＴＴＡＡＴ  ＴＣＧＡＣＧＣＡＡＣ
９０１  ＧＣＧＡＡＧＡＡＣＣ  ＴＴＡＣＣＡＡＧＧＣ  ＴＴＧＡＣＡＴＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＡＡＧＣＴ  ＴＣＡＧＡＧＡＴＧＧ
９５１  ＡＧＣＣＣＴＣＴＴＣ  ＧＧＡＣＴＧＧＧＴＧ  ＡＣＡＧＧＴＧＧＴＧ  ＣＡＴＧＧＣＴＧＴＣ  ＧＴＣＡＧＣＴＣＧＴ
１００１  ＧＴＣＧＴＧＡＧＡＴ  ＧＴＴＧＧＧＴＴＡＡ  ＧＴＣＣＣＧＣＡＡＣ  ＧＡＧＣＧＣＡＡＣＣ  ＣＴＴＧＴＴＣＣＡＴ
１０５１  ＧＴＴＧＣＣＡＧＣＡ  ＣＧＣＣＣＣＴＴＴＧ  ＧＧＧＧＴＧＧＴＧＧ  ＧＧＡＣＴＣＡＴＧＧ  ＧＡＧＡＣＴＧＣＣＧ
１１０１  ＧＧＧＴＣＡＡＣＴＣ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＴ  ＧＧＧＧＡＴＧＡＣＧ  ＴＣＡＡＧＴＣＡＴＣ  ＡＴＧＣＣＣＣＴＴＡ
１１５１  ＴＧＴＣＴＴＧＧＧＣ  ＴＧＣＡＡＡＣＡＴＧ  ＣＴＡＣＡＡＴＧＧＣ  ＣＧＧＴＡＣＡＧＡＧ  ＧＧＴＴＧＣＧＡＴＡ
１２０１  ＣＣＧＴＧＡＧＧＴＧ  ＧＡＧＣＧＡＡＴＣＣ  ＣＴＡＡＡＡＧＣＣＧ  ＧＴＣＴＣＡＧＴＴＣ  ＧＧＡＴＴＧＧＧＧＴ
１２５１  ＣＴＧＣＡＡＣＴＣＧ  ＡＣＣＣＣＡＴＧＡＡ  ＧＴＣＧＧＡＧＴＣＧ  ＣＴＡＧＴＡＡＴＣＧ  ＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡ
１３０１  ＡＣＧＣＴＧＣＧＧＴ  ＧＡＡＴＡＣＧＴＴＣ  ＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧ  ＴＡＣＡＣＡＣＣＧＣ  ＣＣＧＴＣＡＣＧＴＣ
１３５１  ＡＣＧＡＡＡＧＴＣＧ  ＧＣＡＡＣＡＣＣＣＧ  ＡＡＧＣＣＣＧＴＧＧ  ＣＣＣＡＡＣＣＡＧＣ  ＴＴＧＣＴＧＧＧＧＧ
１４０１  ＧＡＧＣＧＧＴＣＧＡ  ＡＧＧＴＧＧＧＧＣＴ  ＧＧＣＧＡ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６  １６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６株の１６  ｒＲＮＡ遺伝子（１６Ｓ  ｒＤＮＡ）の部分的な配列、すなわち、１４４８ヌクレオチドは、配列番号４で報告される。この配列を、公共のデータベースに寄託されている配列と比較し、種々のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列に関連することがわかる。
【００６８】
他の微生物を用いた場合、抗生物質ＮＡＩ−４３８を産生する株の特徴は、改変を受ける。例えば、この株の人工改変体および変異体は、種々の既知の突然変異原、例えば、紫外線および化学物質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンおよびその他多くの物質を用いた処理によって得ることができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６株のすべての天然物および人工の改変体および変異体は、抗生物質質ＮＡＩ−４３８を産生することができる。
【００６９】
配列番号４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子）
１  ＧＡＣＧＡＡＣＧＣＴ  ＧＧＣＧＧＣＧＴＧＣ  ＴＴＡＡＣＡＣＡＴＧ  ＣＡＡＧＴＣＧＡＡＣ  ＧＡＴＧＡＡＧＣＣＣ
５１  ＴＴＴＣＧＧＧＧＧＴ  ＧＧＡＴＴＡＧＴＧＧ  ＣＧＡＡＣＧＧＧＴＧ  ＡＧＴＡ  ＡＣ  ＡＣＧＴ  ＧＧＧＣ  ＡＡＴＣＴＧ
１０１  ＣＣＣＴＧＣＡＣＴＴ  ＣＧＧＧＡＣＡＡＧＣ  ＣＣＴＧＧＡＡＡＣＧ  ＧＧＧＴＣＴＡＡＴＡ  ＣＣＧＧＡＴＡＣＡＡ
１５１  ＣＴＣＣＣＴＴＧＧＧ  ＣＡＴＣＣＴＴＧＧＧ  ＧＧＴＧＧＡＡ  ＡＧＣ  ＴＴＣＧＧＣＧＧＴＧ  ＣＡＧＧＡＴＧＡＧＣ
２０１  ＣＣＧＣＧＧＣＣＴＡ  ＴＣＡＧＣＴＴＧＴＴ  ＧＧＴＧＧＧＧＴＧＡ  ＴＧＧＣＣＴＡＣＣＡ  ＡＧＧＣＧＡＣＧＡＣ
２５１  ＧＧＧＴＡＧＣＣＧＧ  ＣＣＴＧＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＣＣＧＧＣＣＡ  ＣＡＣＴＧＧＧＡＣＴ  ＧＡＧＡＣＡＣＧＧＣ
３０１  ＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴ  ＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡ  Ｇ  ＣＡＧＴＧＧＧＧ  Ａ  ＡＴＡＴＴＧＣＡＣＡ  ＡＴＧＧＧＣＧＡＡＡ
３５１  ＧＣＣＴＧＡＴＧＣＡ  ＧＣＧＡＣＧＣＣＧＣ  ＧＴＧＡＧＧＧＡＴＧ  ＡＣＧＧＣＣＴＴＣＧ  ＧＧＴＴＧＴＡＡＡＣ
４０１  ＣＴＣＴＴＴＣＡＧＣ  ＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧ  ＣＧＡＧＡＧＴＧＡＣ  ＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡ  ＧＡＡＧＡＡＧＣＡＣ
４５１  ＣＧＧＣＴＡＡＣＴＡ  ＣＧＴＧＣＣＡＧＣＡ  ＧＣＣＧＣＧＧＴＡＡ  ＴＡＣＧＴＡＧＧＧＴ  ＧＣＧＡＧＣＧＴＴＧ
５０１  ＴＣＣＧＧＡＡＴＴＡ  ＴＴＧＧＧＣＧＴＡＡ  ＡＧＡＧＣＴＣＧＴＡ  ＧＧＣＧＧＣＣＴＧＴ  ＣＡＣＧＴＣＧＧＡＴ
５５１  ＧＴＧＡＡＡＧＣＣＣ  ＧＧＧＧＣＴＴＡＡＣ  ＣＣＴＧＧＧＴＣＴＧ  ＣＡＴＴＣＧＡＴＡＣ  ＧＧＧＣＡＧＧＣＴＡ
６０１  ＧＡＧＴＴＣＧＧＴＡ  ＧＧＧＧＡＧＡＴＣＧ  ＧＡＡＴＴＣＣＴＧＧ  ＴＧＴＡＧＣＧＧＴＧ  ＡＡＡＴＧＣＧＣＡＧ
６５１  ＡＴＡＴＣＡＧＧＡＧ  ＧＡＡＣＡＣＣＧＧＴ  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＧＡＴＣＴＣＴＧＧＧ  ＣＣＧＡＴＡＣＴＧＡ
７０１  ＣＧＣＴＧＡＧＧＡＧ  ＣＧＡＡＡＧＣＡＴＧ  ＧＧＧＡＧＣＧＡＡＣ  ＡＧＧＡＴＴＡＧＡＴ  ＡＣＣＣＴＧＧＴＡＧ
７５１  ＴＣＣ  ＡＴＧＣＣＧＴ  Ａ  Ａ  ＡＣＧＴＴＧＧＧ  ＣＡＣＴＡＧＧＴＧＴ  ＧＧＧＣＧＡＣＡＴＴ  ＣＣ  ＡＣＧＴＴＧＴＣ
８０１  ＣＧＴＧＣＣＧＣＡＧ  ＣＴＡＡＣＧＣＡＴＴ  ＡＡＧＴＧＣＣＣＣＧ  ＣＣＴＧＧＧＧＡＧＴ  ＡＣＧＧＣＣＧＣＡＡ
８５１  ＧＧＣＴＡＡＡＡＣＴ  ＣＡ  ＡＡＧＧＡＡＴＴ  ＧＡＣＧＧＧＧＧＣＣ  ＣＧＣＡＣＡＡＧＣＧ  ＧＣＧＧＡＧＣＡＴＧ
９０１  ＴＧＧＣＴＴＡＡＴＴ  ＣＧＡＣＧＣＡＡＣＧ  ＣＧＡＡＧＡＡＣＣＴ  ＴＡＣＣＡＡＧＧＣＴ  ＴＧＡＣＡＴＡＣＡＣ
９５１  ＣＡＧＡＡＡＧＣＴＧ  ＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡ  ＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧ  ＴＧＧＴＴＧＧＴＧＴ  ＡＣＡＧＧＴＧＧＴＧ
１００１  ＣＡＴＧＧＣＴＧＴＣ  ＧＴＣＡＧＣＴＣＧＴ  ＧＴＣＧＴＧＡＧＡＴ  ＧＴＴＧＧＧＴＴＡＡ  ＧＴＣＣＣＧＣＡＡＣ
１０５１  ＧＡＧＣＧＣＡＡＣＣ  ＣＴＴＡＴＣＣＴＧＴ  ＧＴＴＧＣＣＡＧＣＡ  ＡＣＴＣＴＴＣＧＧＡ  ＧＧＴＴＧＧＧＧＡＣ
１１０１  ＴＣＡＣＧＧＧＡＧＡ  ＣＴＧＣＣＧＧＧＧＴ  ＣＡＡＣＴＣＧＧＡＧ  ＧＡＡＧＧＴＧＧＧＧ  ＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡ
１１５１  ＧＴＣＡＴＣＡＴＧＣ  ＣＣＣＴＴＡＴＧＴＣ  ＴＴＧＧＧＣＴＧＣＡ  ＣＡＣＧＴＧＣＴＡＣ  ＡＡＴＧＧＣＣＧＧＴ
１２０１  ＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴ  ＧＣＧＡＴＧＣＣＧＴ  ＧＡＧＧＴＧＧＡＧＣ  ＧＡＡＴＣＴＣＡＡＡ  ＡＡＧＣＣＧＧＴＣＴ
１２５１  ＣＡＧＴＴＣＧＧＡＴ  ＴＧＧＧＧＴＣＴＧＣ  ＡＡＣＴＣＧＡＣＣＣ  ＣＡＴＧＡＡＧＴＣＧ  ＧＡＧＴＣＧＣＴＡＧ
１３０１  ＴＡＡＴＣＧＣＡＧＡ  ＴＣＡＧＣＡＴＴＧＣ  ＴＧＣＧＧＴＧＡＡＴ  ＡＣＧＴＴＣＣＣＧＧ  ＧＣＣＴＴＧＴＡＣＡ
１３５１  ＣＡＣＣＧＣＣＣＧＴ  ＣＡＣＧＴＣＡＣＧＡ  ＡＡＧＴＣＧＧＴＡＡ  ＣＡＣＣＣＧＡＡＧＣ  ＣＧＧＴＧＧＣＣＣＡ
１４０１  ＡＣＣＣＣＴＣＧＴＧ  ＧＧＡＧＧＧＡＧＣＣ  ＧＴＣＧＡＡＧＧＴＧ  ＧＧＡＣＴＧＧＣＧＡ  ＴＴＧＧＧＡＣＧ
（式（Ｉ）のランチビオティックの抽出および精製）
好ましい化合物であるＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−４３８、ＮＡＭ１１４は、菌糸体および発酵ブロスの濾過した画分の両方に分布する。集めたブロスを処理し、発酵ブロスの上清から菌糸体を分離し、菌糸体を水混和性溶媒で抽出し、使用済の菌糸体を除去した後、ランチビオティックを含有する溶液を得る。次いで、この菌糸体抽出物を別個に処理するか、または上清画分のための本明細書で後に報告する手順に従って、上清を含む保存液中で処理する。水混和性溶媒が、菌糸体抽出物からランチビオティックを回収するための操作を妨害する場合、水混和性溶媒を蒸留によって除去するか、または、妨害しない濃度になるまで水で希釈する。
【００７０】
本明細書で使用する場合、「水混和性溶媒」という用語は、使用条件で、合理的な幅の濃度範囲で水と混和する溶媒を指す。本開示の化合物の抽出に使用可能な水混和性有機溶媒の例は、低級アルカノール、例えば、（Ｃ１−Ｃ３）アルカノール、例えば、メタノール、エタノールおよびプロパノール、フェニル（Ｃ１−Ｃ３）アルカノール、例えば、ベンジルアルコール；低級ケトン、例えば、（Ｃ１−Ｃ４）ケトン、例えば、アセトンおよびエチルメチルケトン；環状エーテル、例えば、ジオキサンおよびテトラヒドロフラン；グリコールおよびその部分的なエーテル化生成物、例えば、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびエチレングリコールモノメチルエーテル、低級アミド、例えば、ジメチルホルムアミドおよびジエチルホルムアミド；酢酸ジメチルスルホキシドおよびアセトニトリルである。
【００７１】
産生する微生物の発酵ブロスの上清からの化合物の回収は、溶媒を用いた抽出、非溶媒を添加するか、溶液のｐＨを変えることによる沈殿、分配クロマトグラフィー、逆相分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子排除クロマトグラフィーなどによって、または上述の２つ以上の技術の組み合わせを含む、それ自身が既知の技術に従って行われる。濾過した発酵ブロスから本開示の化合物を回収するための手順は、水不混和性有機溶媒を用い、ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−４３８またはＮＡＩ−１１４から選択される化合物の抽出、次いで、可能ならば沈殿剤を加えることによる、濃縮した抽出物からの沈殿を含む。
【００７２】
本明細書で使用する場合、「水不混和性溶媒」という用語は、使用条件で、合理的な幅の濃度範囲で水とわずかに混和するか、またはほとんど混和しない、意図した用途に適切な溶媒を指す。発酵ブロスから本開示の化合物の抽出に使用可能な水不混和性有機溶媒の例は、少なくとも４個の炭素原子を有し、直鎖、分枝鎖または環状であってもよいアルカノール、例えば、ｎ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、１−ヘキサノール、２−ヘキサノール、３−ヘキサノール、３，３−ジメチル−１−ブタノール、４−メチル−１−ペンタノール、３−メチル−１−ペンタノール、２，２−ジメチル−３−ペンタノール、２，４−ジメチル−３−ペンタノール、４，４−ジメチル２−ペンタノール、５−メチル−２−ヘキサノール、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、５メチル−１−ヘキサノール、２−エチル−１−ヘキサノール、２−メチル−３−ヘキサノール、１−オクタノール、２−オクタノール、シクロペンタノール、２−シクロペンチルエタノール、３−シクロペンチル−１−プロパノール、シクロヘキサノール、シクロヘプタノール、シクロオクタノール、２，３−ジメチル−シクロヘキサノール、４−エチルシクロヘキサノール、シクロオクチルメタノール、６−メチル−５−ヘプテン−２−オール、１−ノナノール、２−ノナノール、１−デカノール、２−デカノールおよび３−デカノール；少なくとも５個の炭素原子を有するケトン、例えば、メチルイソプロピルケトン、メチルイソブチルケトン、メチル−ｎ−アミルケトン、メチルイソアミルケトンおよびこれらの混合物である。
【００７３】
当該技術分野で知られるように、濾過した発酵ブロスからの産生物の抽出は、ｐＨを適切な値に調節することによって、および／またはランチビオティックとイオン対を生成し、抽出溶媒に可溶性の適切な有機塩を加えることによって向上するだろう。当該技術分野で知られるように、相分離は、水相に塩を加えることによって向上するだろう。
【００７４】
抽出後、かなりの量の水を含有する有機相を回収するとき、水を共沸により蒸留するのが簡便であろう。一般的に、これには、水と最低限の共沸混合物を生成することができる溶媒を加え、その後、必要な場合、沈殿剤を添加し、所望の生成物を沈殿させることを必要とする。水と最低限の共沸混合物を生成することができる有機溶媒の代表例は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ブチルエーテル、四塩化炭素、クロロホルム、シクロヘキサン、２，５−ジメチルフラン、ヘキサンおよびキシレンであり、好ましい溶媒は、ｎ−ブタノールである。沈殿剤の例は、石油エーテル、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルエーテル、例えば、エチルエーテル、プロピルエーテルおよびブチルエーテルおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルケトン、例えば、アセトンである。
【００７５】
ランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８を回収するための好ましい手順によれば、濾過した発酵ブロスを吸着マトリックスと接触させ、次いで、極性の水混和性溶媒またはその混合物を用いて溶出し、減圧下、油性残渣になるまで濃縮し、すでに述べた種類の沈殿剤を用いて沈殿させてもよい。
【００７６】
本開示の化合物の回収に簡便に使用可能な吸着マトリックスの例は、ポリスチレンまたは混合したポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（例えば、Ｍ１１２または８１１２、Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．；Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＸＡＤ２またはＸＡＤ４、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓｉ  Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ  ２０、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）、アクリル樹脂（例えば、ＸＡＤ７またはＸＡＤ８、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓ）、ポリアミド、例えば、ポリカプロラクタム、ナイロンおよび架橋したポリビニルピロリドン（例えば、ポリアミド−ＣＣ６、ポリアミド−８Ｃ６、ポリアミド−ＣＣ６．６、ポリアミド−ＣＣ  ６ＡＣおよびポリアミド−ＳＣ  ６ＡＣ、Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ  ＆  Ｃｏ．、ドイツ；ＰＡ  ４００，Ｍ．Ｗｏｅｌｍ  ＡＧ、ドイツ）；およびポリビニルピロリドン樹脂ＰＶＰＣＬ（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．、ＫＧ、ドイツ）および孔径が制御された架橋デキストラン（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ＬＨ−２０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ＡＢ）である。好ましくは、ポリスチレン樹脂が使用され、特に好ましくは、Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ  ２０樹脂である。ポリスチレン樹脂、ポリスチレンジビニルベンゼン樹脂、ポリアミド樹脂またはアクリル樹脂の場合に、好ましい溶出液は、水混和性溶媒またはその水性混合物である。水性混合物は、適切なｐＨ値でバッファーを含んでいてもよい。
【００７７】
ランチビオティックを単離し、生成するための連続的な手順は、ブロス上清および菌糸体から集められた抽出物について行われてもよい。例えば、濾過した発酵ブロスまたは上清中に含まれるランチビオティックの一部が、吸収性樹脂に吸収されることによって回収され、菌糸体中に含まれるランチビオティックの一部が、水混和性溶媒から抽出され、次いで、吸収性樹脂に吸収される場合、この２セットの吸収性樹脂それぞれから溶出した画分を、場合により濃縮した後に合わせ、次いで、単一の収穫物としてさらに処理する。または、別個の抽出段階に利用される２セットの吸収性樹脂が同じ種類であり、同じ機能特徴を有する場合、これらを一緒に集め、例えば、水混和性溶媒または水との混合物を用い、混合物に単一の溶出工程を行ってもよい。いずれかの場合に、この手順が、ランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８を回収するように調整されているか否かによらず、連続的な精製工程は、通常は、別個の抽出段階の組み合わせから得られる未精製材料の混合物について行われる。
【００７８】
未精製ランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８の精製は、それ自体が既知の任意の技術によって達成することができるが、好ましくは、クロマトグラフィー手順によって行うことができる。
【００７９】
これらのクロマトグラフィー手順の例は、回収工程に関連して報告される例であり、固定相（例えば、シリカゲル、アルミナ、活性化ケイ酸マグネシウムなど）でのクロマトグラフィー、または種々の官能基による誘導体化を有し、水混和性溶媒または上述の種類の水混和性溶媒の水性混合物で溶出する、シラン処理したシリカゲルに対する逆相クロマトグラフィーも含む。
【００８０】
例えば、固定相としてＲＰ−８またはＲＰ−１８と、溶出系としてＨＣＯＯＮＨ４バッファー（またはＴＦＡ０．１％）：ＣＨ３ＣＮ（またはＭｅＯＨ）の混合物とを用い、分取ＨＰＬＣまたは中圧または低圧の液体クロマトグラフィーを使用してもよい。精製工程から回収した活性画分を一緒に集め、減圧下で濃縮し、上述の種類の沈殿剤の添加によって沈殿させ、乾燥または凍結乾燥を１回または複数回繰り返す。この場合には、生成物は、残りの量のギ酸アンモニウムまたは他の緩衝化塩を含み、ランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８を固体相の抽出カラム、例えば、逆相樹脂カラム、例えば、ＳＰＥ  Ｓｕｐｅｒｃｌｅａｎ  ＬＣＰ１８  Ｓｕｐｅｌｃｏ（Ｂｅｌｌｅ  ｆｏｎｔｅ  ＰＡ、ＵＳＡ）に吸収させることによってこれらを除去し、次いで、蒸留水で洗浄し、適切な水性溶媒混合物（例えば、メタノール：水）で溶出させてもよい。次いで、溶出溶媒を除去することによってランチビオティックを回収する。
【００８１】
従って、精製されたランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４またはＮＡＩ−４３８の乾燥した調製物は、白灰色粉末として得られる。この技術で一般的であるように、製造工程、回収工程および精製工程を、感受性の高い微生物に対する阻害アッセイ、ＨＰＬＣまたは質量分光計と接続したＨＰＬＣを含め、種々の手順によって監視してもよい。
【００８２】
ＨＰＬＣ方法１：好ましい分析ＨＰＬＣ技術は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  ＲＰ  １８、５μ（１２５×４．６ｍｍ）カラムを取り付け、流速１ｍｌ／分、温度５０℃で溶出するＳｈｉｍａｄｚｕ製装置（ＬＣ  ２０１０Ａ−ＨＴ液体クロマトグラフィー、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）で行われる。
【００８３】
溶出は、以下の多段階プログラムを用いる。時間＝０（１０％  Ｂ相）；時間＝２０分（５０％  Ｂ相）；時間＝２１分（８０％  Ｂ相）；時間＝２５分（８０％  Ｂ相）；時間＝２６分（１０％  Ｂ相）；時間＝３５分（１０％  Ｂ相）。Ａ相は、トリフルオロ酢酸０．１％の水溶液（ｖ／ｖ）であり、Ｂ相は、アセトニトリルである。ＵＶ検出器は、２３０ｎｍおよび２７０ｎｍである。これらの分析ＨＰＬＣ条件において、ランチビオティックは、以下の保持時間を示す。ＮＡＩ−８５７  １４．８分、ＮＡＩ−１３０  １３．３分、ＮＡｌ−１１４  １６．７分、ＮＡＩ−４３８  １４．４分。
【００８４】
ＨＰＬＣ方法２：好ましい分析ＨＰＬＣ−ＭＳ技術は、Ａｓｃｅｎｔｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｓｕｐｅｌｃｏ  ＲＰ１８、２．７μ（５０×４．６ｍｍ）カラムを取り付け、流速１ｍｌ／分、温度４０℃で溶出するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズの液体クロマトグラフィーで行われる。溶出は、以下の多段階プログラムを用いる。時間＝０（５％  Ｂ相）；時間＝６分（９５％  Ｂ相）；時間＝７分（１００％  Ｂ相）；時間＝７．２分（５％  Ｂ相）；時間＝１０分（５％  Ｂ相）。Ａ相は、トリフルオロ酢酸０．０５％の水溶液（ｖ／ｖ）であり、Ｂ相は、トリフルオロ酢酸０．０５％のアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）である。ＵＶ検出器は、２２０ｎｍである。
【００８５】
カラムからの流出液を比率５０：５０に分け、片方の部分（５００μＬ／分）を発光ダイオードアレイ検出器に向かわせる。残りの５００μＬ／分をＢｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ３０００とイオン捕捉質量分光計のＥＳＩ界面に向かわせる。
【００８６】
質量分光分析を以下の条件で行う。サンプル投入口の条件：シースガス（Ｎ２）５０ｐｓｉ；乾燥ガス１０Ｌ／分；キャピラリー加熱部３６５℃；サンプル投入口の電圧設定：極性：陽性；キャピラリー電圧  −４０００Ｖ；エンドプレートオフセット  −５００Ｖ；スキャン条件：最大イオン時間２００ｍｓ；イオン時間５ｍｓ；フルマイクロスキャン  ３；セグメント：持続時間１０分、スキャン事象は陽性（１００〜２４００ｍ／ｚ）。これらの分析ＨＰＬＣ条件において、ランチビオティックは、以下の保持時間を示す。ＮＡＩ−８５７  ３．３分、ＮＡＩ−１３０  ３．５分、ＮＡＩ−１１４  ４．１分、ＮＡＩ−４３８  ３．５分。
【００８７】
（式（Ｉ）の抗生物質ＮＡＩ−８５７の物理化学的特徴）
（Ａ）質量分光法：Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  ｄｅｃａ装置にエレクトロスプレー源を取り付け、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ較正混合物を用いるＭＳ実験において、抗生物質ＮＡＩ−８５７は、１０８６ｍ／ｚに２個プロトン化されたイオンを与える。この２箇所帯電したイオンのＭＳ／ＭＳ分析を行い、観察された主なフラグメントは、１箇所帯電した１１１６、１３７３、１４５６、１７９１および２箇所帯電した１０２１ｍ／ｚである。エレクトロスプレー条件は、スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２２０℃；キャピラリー電圧：３Ｖ；インフュージョンモード１０μＬ／分である。トリフルオロ酢酸０．１％を含む０．２ｍｇ／ｍｌのメタノール／水  ８０／２０（ｖ／ｖ）溶液からスペクトルを記録し、図１および図２に報告している（フルスキャンの低解像度スペクトル）。
【００８８】
（Ｂ）ＨＰＬＣ分析中にＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ検出器ＳＰＤ−Ｍ  １０Ａ  ＶＰ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）を用い、ＴＦＡ０．１％−アセトニトリル（比率５０：５０）中で行われた抗生物質ＮＡＩ−８５７のＵＶスペクトルは、２２５ｎｍおよび２８０ｎｍに２つの最大を示す。ＵＶスペクトルを図３に報告している。
【００８９】
（Ｃ）１Ｈ−ＮＭＲおよび２Ｄ実験を、５０μＬのＨ２Ｏを添加した場合と添加しない場合に、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００型または４００型の分光計で、２５℃、ＣＤ３ＣＮ／Ｄ２Ｏ（１／１）混合物中で報告する。必要な場合、水抑制シーケンスを適用する。
【００９０】
抗生物質ＮＡＩ−８５７の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、以下のシグナル群を示す。［δ＝ｐｐｍ；多重度；（帰属）］：０．９０  ｔ（ＣＨ３），１．００  ｄ（ＣＨ３），１．０４  ｔ（ＣＨ３），１．１５  ｄ（ＣＨ３），１．２７  ｄ（ＣＨ３），１．３７  ｄ（ＣＨ３），１．８９  ｄ（ＣＨ３），１．２５−１．４７  ｍ（ＣＨ２），１．３５−１．６２  ｍ（ＣＨ２），１．９１−１．９８  ｍ（ＣＨ２），１．８７−２．４２  ｍ（ＣＨ２），２．９−３．７６（ペプチドのβ−ＣＨおよびＣＨ２），３．８３−５．１４（ペプチドのα−ＣＨおよびＣＨ２），５．５４−６．０７  ｓ（ＣＨ２），６．６８  ｑ（ＣＨ），６．８９−９．１５  ｓ，ｄおよびｍ（芳香族ＣＨおよびペプチドのＮＨ）。ＮＡＩ−８５７の１Η−ΝΜＲスペクトルが図４に報告されている。
【００９１】
ＮＡＩ−８５７は、以下の１３Ｃシグナル群を示す。［δ＝ｐｐｍ；（帰属）］：１０．１−２１．４（脂肪族ＣＨ３），２５．７−６７．０（脂肪族およびペプチドのシグナル），１０８−１５７（芳香族および二重結合のＣＨおよび四級炭素），１６５−１７４（ペプチドのカルボニル）。ＮＡＩ−８５７のＨＳＱＣおよびＨＭＢＣスペクトルが図５および図６に報告されている。
【００９２】
（Ｄ）ＨＰＬＣデータ：ＮＡＩ−８５７は、上述のようにＨＰＬＣ方法１を用いて分析したとき、１４．８分の保持時間を示す。ＮＡＩ−８５７は、上述のようにＨＰＬＣ方法２を用いて分析したとき、３．３分の保持時間を示す。
【００９３】
（式（Ｉ）の抗生物質ＮＡＩ−１３０の物理化学的特徴）
（Ａ）質量分光法：Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  ｄｅｃａ装置にエレクトロスプレー源を取り付け、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ較正混合物を用いるＭＳ実験において、抗生物質ＮＡＩ−１３０は、１０７９ｍ／ｚに２個プロトン化されたイオンを与える。この２箇所帯電したイオンのＭＳ／ＭＳ分析を行い、観察された主なフラグメントは、１箇所帯電した１１１６、１３７３、１４５６、１７９１および２箇所帯電した１０２１ｍ／ｚである。エレクトロスプレー条件は、スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２２０℃；キャピラリー電圧：３Ｖ；インフュージョンモード１０μＬ／分である。トリフルオロ酢酸０．１％を含む０．２ｍｇ／ｍｌのメタノール／水  ８０／２０（ｖ／ｖ）溶液からスペクトルを記録し、図７および図８に報告している（フルスキャンの低解像度スペクトル）。
【００９４】
（Ｂ）ＨＰＬＣ分析中にＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ検出器ＳＰＤ−Ｍ  １０Ａ  ＶＰ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）を用い、ＴＦＡ０．１％−アセトニトリル（比率５０：５０）中で行われた抗生物質ＮＡＩ−１３０のＵＶスペクトルは、２２５ｎｍおよび２８０ｎｍに２つの最大を示す。ＵＶスペクトルを図９に報告している。
【００９５】
（Ｃ）１Ｈ−ＮＭＲおよび２Ｄ実験を、５０μＬのＨ２Ｏを添加した場合と添加しない場合に、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００型または４００型の分光計で、２５℃、ＣＤ３ＣＮ／Ｄ２Ｏ（１／１）混合物中で報告する。必要な場合、水抑制シーケンスを適用する。
【００９６】
抗生物質ＮＡＩ−１３０の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、以下のシグナル群を示す。［δ＝ｐｐｍ；多重度；（帰属）］：０．９６  ｄ（ＣＨ３），１．００  ｄ（ＣＨ３），１．０４  ｔ（ＣＨ３），１．１３  ｄ（ＣＨ３），１．２４  ｄ（ＣＨ３），１．３３  ｄ（ＣＨ３），１．８９  ｄ（ＣＨ３），１．３３−１．６３  ｍ（ＣＨ２），１．９１−１．９８  ｍ（ＣＨ２），１．８７−２．３９  ｍ（ＣＨ２），２．９−３．７６（ペプチドのβ−ＣＨおよびＣＨ２），３．８−５．１（ペプチドのα−ＣＨおよびＣＨ２），５．４７−６．２６  ｓ（ＣＨ２），６．６８  ｑ（ＣＨ），６．８９−９．２１  ｓ，ｄおよびｍ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）。ＮＡＩ−１３０の１Η−ΝΜＲスペクトルが図１０に報告されている。
【００９７】
ＮＡＩ−１３０は、以下の１３Ｃシグナル群を示す。［δ＝ｐｐｍ；（帰属）］：１０．１−２１．４（脂肪族のＣＨ３），２５．７−６７．０（脂肪族およびペプチドのシグナル），１０６−１５７（芳香族および二重結合のＣＨおよび四級炭素），１６５−１７４（ペプチドのカルボニル）。ＮＡＩ−１３０のＨＳＱＣおよびＨＭＢＣスペクトルが図１１および図１２に報告されている。
【００９８】
（Ｄ）ＨＰＬＣデータ：ＮＡＩ−１３０は、上述のようにＨＰＬＣ方法１を用いて分析したとき、１３．３分の保持時間を示す。ＮＡＩ−１３０は、上述のようにＨＰＬＣ方法２を用いて分析したとき、３．５分の保持時間を示す。
【００９９】
（式（Ｉ）の抗生物質ＮＡＩ−１１４の物理化学的特徴）
（Ａ）質量分光法：Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  ｄｅｃａ装置にエレクトロスプレー源を取り付け、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ較正混合物を用いるＭＳ実験において、抗生物質ＮＡＩ−１１４は、１１０４ｍ／ｚに２個プロトン化されたイオンを与える。この２箇所帯電したイオンのＭＳ／ＭＳ分析を行い、観察された主なフラグメントは、１箇所帯電した１１３０、１３８７、１４７０、１８２８および２箇所帯電した１０３９ｍ／ｚである。エレクトロスプレー条件は、スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２２０℃；キャピラリー電圧：３Ｖ；インフュージョンモード１０μＬ／分である。トリフルオロ酢酸０．１％を含む０．２ｍｇ／ｍｌのメタノール／水  ８０／２０（ｖ／ｖ）溶液からスペクトルを記録し、図１３および図１４に報告している（フルスキャンの低解像度スペクトル）。
【０１００】
（Ｂ）ＨＰＬＣ分析中にＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ検出器ＳＰＤ−Ｍ  １０Ａ  ＶＰ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）を用い、ＴＦＡ０．１％−アセトニトリル（比率５０：５０）中で行われた抗生物質ＮＡ−１４のＵＶスペクトルは、２２５ｎｍおよび２８０ｎｍに２つの最大を示す。ＵＶスペクトルを図１５に報告している。
【０１０１】
（Ｃ）１Ｈ−ＮＭＲおよび２Ｄ実験を、５０μＬのＨ２Ｏを添加した場合と添加しない場合に、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ  ６００型または４００型の分光計で、２５℃、ＣＤ３ＣＮ／Ｄ２Ｏ（１／１）混合物中で報告する。必要な場合、水抑制シーケンスを適用する。
【０１０２】
抗生物質ＮＡＩ−１１４の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、以下のシグナル群を示す。［δ＝ｐｐｍ；多重度；（帰属）］：０．８３  ｔ（ＣＨ３），０．９３  ｄ（ＣＨ３），０．９９  ｔ（ＣＨ３），１．０７  ｄ（ＣＨ３），１．２１  ｄ（ＣＨ３），１．３１  ｄ（ＣＨ３），１．８５  ｄ（ＣＨ３），１．８−５．３（ペプチドのＣＨおよびＣＨ２），５．３４−６．２２  ｓ（ＣＨ２），６．６６  ｑ（ＣＨ），７．３  １  −１０．０９  ｓ，ｄおよびｍ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）。ＮＡＩ−１１４の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルが図１６に報告されている。
【０１０３】
ＮＡＩ−１１４は、以下の１３Ｃシグナル群を示す。［δ＝ｐｐｍ；（帰属）］：１０．６−２１．６（脂肪族のＣＨ３）、２４．７−６７．１（脂肪族およびペプチドのシグナル）、１０５−１３４（芳香族および二重結合のＣＨおよび四級炭素）、１６５−１７４（ペプチドのカルボニル）。ＮＡＩ−１１４のＨＳＱＣおよびＨＭＢＣスペクトルが図１７および図１８に報告されている。
【０１０４】
（Ｄ）ＨＰＬＣデータ：ＮＡＩ−１１４は、上述のようにＨＰＬＣ方法１を用いて分析したとき、１６．７分の保持時間を示す。ＮＡＩ−１１４は、上述のようにＨＰＬＣ方法２を用いて分析したとき、４．１分の保持時間を示す。
【０１０５】
（式（Ｉ）の抗生物質ＮＡＩ−４３８の物理化学的特徴）
（Ａ）質量分光法：Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  ｄｅｃａ装置にエレクトロスプレー源を取り付け、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ較正混合物を用いるＭＳ実験において、抗生物質ＮＡＩ−４３８は、１０９３ｍ／ｚに２個プロトン化されたイオンを与える。この２箇所帯電したイオンのＭＳ／ＭＳ分析を行い、観察された主なフラグメントは、１箇所帯電した１１３０、１３８７、１４７０、１８０６および２箇所帯電した１０３６ｍ／ｚである。エレクトロスプレー条件は、スプレー電圧：４．７ｋＶ；キャピラリー温度：２２０℃；キャピラリー電圧：３Ｖ；インフュージョンモード１０μＬ／分である。トリフルオロ酢酸０．１％を含む０．２ｍｇ／ｍｌのメタノール／水  ８０／２０（ｖ／ｖ）溶液からスペクトルを記録し、図１９および図２０に報告している（フルスキャンの低解像度スペクトル）。
【０１０６】
（Ｂ）ＨＰＬＣ分析中にＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ検出器ＳＰＤ−Ｍ  １０Ａ  ＶＰ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、日本）を用い、ＴＦＡ０．１％−アセトニトリル（比率５０：５０）中で行われた抗生物質ＮＡ−４３８のＵＶスペクトルは、２２５ｎｍおよび２８０ｎｍに２つの最大を示す。ＵＶスペクトルを図２１に報告している。
【０１０７】
（Ｄ）ＨＰＬＣデータ：ＮＡＩ−４３８は、上述のようにＨＰＬＣ方法１を用いて分析したとき、１４．４分の保持時間を示す。ＮＡＩ−４３８は、上述のようにＨＰＬＣ方法２を用いて分析したとき、３．５分の保持時間を示す。
【０１０８】
（抗生物質ＮＡＩ−８５７中の「耐酸性」アミノ酸の決定）
酸に弱いアミノ酸は、この手法で検出されない。適切な誘導体化の後、同様に誘導体化された標準的なアミノ酸の混合物と比較して、ＮＡＩ−８５７の加水分解物をＨＰＬＣ−ＭＳ分析によって調べた。抗生物質ＮＡＩ−８５７について、完全な酸による加水分解（ＨＣｌ  ６Ｎ、１６０℃、５分、マイクロ波）を行った。加水分解されたサンプルを４−［４−イソチオシアネート−フェニル］−アゾ−Ｎ，Ｎ−ジメチル  アニリンおよびトリエチルアミンの水：アセトニトリル  １：１溶液で処理した。反応混合物を６０℃で２時間攪拌し、石油エーテル：塩化メチレン  ８：２で抽出した。有機相を乾燥するまで蒸発させ、水：アセトニトリル  １：１（１ｍＬ）に再び溶解し、ＨＰＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０１０９】
同時にＤＡＤおよびＭＳを検出する液体クロマトグラフィーシステムで定性ＨＰＬＣ分析を行った。ＨＰＬＣ方法は、以下の条件を有していた。カラム：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｓｕｐｅｉｃｏ  ＲＰ１８、２．７μ（５０×４．６ｍｍ）カラム温度：４０℃  流速：１ｍＬ／分。Ａ相：トリフルオロ酢酸０．０５％の水溶液（ｖ／ｖ）  Ｂ相：トリフルオロ酢酸０．０５％のアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）
溶出プログラム
【０１１０】
【表２】
2016501232.tif 000007
【０１１１】
ＭＳ条件は以下のとおりであった。分光計：標準的なエレクトロスプレー源を取り付けたＢｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ３０００  ｐｌｕｓ：キャピラリー温度：３６５℃；キャピラリー電圧：−４ｋＶ；エンドプレートオフセット：−５００Ｖ；シースガス（Ｎ２）：５０ｐｓｉ。
【０１１２】
抗生物質ＮＡＩ−８５７の加水分解物について得られたＬＣ／ＭＳクロマトグラムにおいて、他の未同定ピークと共に、以下のアミノ酸が同定される。ランチオニン、メチルランチオニン、グリシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシンおよびロイシンまたはイソロイシン。
【０１１３】
（ＮＡＩ−８５７のＮ末端アミノ酸の同定）
５ｍｇのＮＡＩ−８５７を２００μＬのＤＭＦに溶解し、トリエチルアミン（５μＬ）およびフェニルイソチオシアネート（５μＬ）を加え、反応物を６０℃で１時間攪拌した。その後、ＨＰＬＣ−ＭＳは、反応が終了したことを示した。この溶液を、ヘキサン：ジクロロメタン  ８：２（３００μＬ×３回）で抽出し、乾燥するまで蒸発させ、トリフルオロ酢酸に溶解し、６０℃で１時間反応させた。ＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、この反応が終了したことを示し、Ｎ末端のＬｅｕ（またはＨｅ）アミノ酸残基が失われたことに対応するｍ／ｚ１０２９ａｍｕの２箇所帯電したピークを有していた。（ＮＭＲ分析は、２個のイソロイシン残基の存在を強調するが、ロイシンは検出されなかった。）
（ＮＡＩ−１３０のＮ末端アミノ酸の同定）
５ｍｇのＮＡＩ−１３０を２００μＬのＤＭＦに溶解した。トリエチルアミン（５μＬ）およびフェニルイソチオシアネート（５μＬ）を加え、反応物を６０℃で１時間攪拌した。その後、ＨＰＬＣ−ＭＳは、反応が終了したことを示した。この溶液を、ヘキサン：ジクロロメタン  ８：２（３００μＬ×３回）で抽出し、乾燥するまで蒸発させ、トリフルオロ酢酸（５００μＬ）に溶解し、６０℃で１時間反応させた。反応溶液をＨＰＬＣ−ＭＳによって直接分析し、Ｎ末端のＬｅｕ（またはＩｌｅ）アミノ酸が失われたことに対応する、切断されたペプチドに対応するｍ／ｚ１０２９ａｍｕの２箇所帯電したピークが検出された。
【０１１４】
以下の例は、実例を挙げる目的のためのみに提示され、いかなる様式にも本発明に包含される開示の保護範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【実施例】
【０１１５】
（実施例１：ＳＴＲＥＰＴＯＭＹＣＥＳ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９の発酵方法）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９をＳ１プレート上に２８℃で２〜３週間維持する。Ｓ１は、オートミール  ６０、寒天  １８、ＦｅＳＯ４×７Ｈ２Ｏ  ０．００１、ＭｎＣｌ２×４Ｈ２Ｏ  ０．００１、ＺｎＳＯ４×７Ｈ２Ｏ  ０．００１（すべてｇ／Ｌ）で構成され、オートミールを２０分間、１Ｌの蒸留水で茹で、これをチーズコルクを通して濾過し、残りの成分を加え、蒸留水で体積を１Ｌに調節し、１２１℃で２０分間滅菌する前にｐＨを７．２に調節することによって調製した。１つのプレートの微生物内容物を削り取り、デキストロース一水和物  ２０、酵母抽出物  ２、大豆ミール  ８、ＮａＣｌ  １および炭酸カルシウム  ４（すべてｇ／Ｌ）で構成される１００ｍｌの播種培地が入った５００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。培地を蒸留水で調製し、１２１℃で２０分間滅菌する前に、ｐＨを７．３に調節する。播種したフラスコを、２００ｒｐｍで操作するロータリーシェーカー上で、２８℃で成長させる。２〜３日後、この培養物の５％を、同じ培地を含む一連のフラスコに播種する。播種して７２時間後、５００ｍＬを、コーンスティープリカー  ３０、トウモロコシデキストリン  ２０、酵母抽出物  ５、グルコース一水和物  １０、炭酸カルシウム  ２、ＮａＣｌ  １（すべてｇ／Ｌ）で構成される産生培地１０Ｌが入った１９．５Ｌのバイオリアクターに移す。この培地は、脱イオン水で調製し、１２１℃で２５分間滅菌する前にｐＨを７に調節し、一方、グルコースは別個に滅菌し、冷却後に加える。発酵を、４００ｒｐｍで攪拌し、０．５ｖｖｍで通気しつつ、３０℃で行う。発酵中、必要な場合には硫酸を加えることによってｐＨを７．２未満に維持する。発酵９８時間後に、発酵物を収穫する。抗生物質ＮＡＩ−８５７の産生を、全培養ブロスを所定体積のメタノールで２回抽出し、１時間攪拌した後、すでに示したようにＨＰＬＣによって監視する。
【０１１６】
（実施例２：Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８の発酵方法）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８を、Ｓ１プレート（実施例１に記載したような構成で調製された）上に２８℃で２〜３週間維持する。１つのプレートの微生物内容物を削り取り、実施例１に記載したような構成で調製された播種培地１００ｍｌが入った５００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種したフラスコを、２００ｒｐｍで操作するロータリーシェーカー上で、２８℃で成長させる。３〜４日後、この培養物の５％を、同じ培地を含む一連のフラスコに播種する。播種して４８時間後、３００ｍＬを、実施例１に記載したような構成で調製された６Ｌの産生培地が入った１９．５Ｌのバイオリアクターに移す。発酵を、５００ｒｐｍで攪拌し、０．６ｖｖｍで通気しつつ、３０℃で行う。発酵中、必要な場合には硫酸を加えることによってｐＨを７．２未満に維持する。発酵９８時間後に、発酵物を収穫する。抗生物質ＮＡＩ−１３０の産生を、全培養ブロスを所定体積のメタノールで２回抽出し、１時間攪拌した後、すでに示したようにＨＰＬＣによって監視する。
【０１１７】
（実施例３：Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０の発酵方法）
Ｓｔｒｅｐｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６０を、Ｓ１プレート（実施例１に記載したような構成で調製された）上に２８℃で２〜３週間維持する。１つのプレートの微生物内容物を削り取り、播種培地（実施例１に記載したような構成で調製された）１５ｍｌが入った５０ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種したフラスコを、２００ｒｐｍで操作するロータリーシェーカー上で、２８℃で成長させる。３〜４日後、この培養物の５％を、１００ｍＬの同じ培地が入った５００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種して７２時間後、１２０ｍＬを、トウモロコシデンプン  ２０、グルコース  １０、酵母抽出物  ２、加水分解カゼイン  ４、肉抽出物  ４および炭酸カルシウム  ３（すべてｇ／Ｌ）で構成される２Ｌの産生培地が入った３Ｌのバイオリアクターに移す。培地を蒸留水で調製し、１２１℃で２５分間滅菌する前に、ｐＨを７．２に調節し、一方、グルコースを別個に滅菌し、冷却後に加える。発酵を、６００ｒｐｍで攪拌し、０．５ｖｖｍで通気しつつ、３０℃で行う。発酵中、必要な場合には硫酸を加えることによってｐＨを７．２未満に維持する。発酵９６時間後に、発酵物を収穫する。抗生物質ＮＡＩ−１１４の産生を、全培養ブロスを所定体積のメタノールで２回抽出し、１時間攪拌した後、すでに示したようにＨＰＬＣによって監視する。
【０１１８】
（実施例４：Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６の発酵方法）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５６を、Ｓ１プレート（実施例１に記載したような構成で調製された）上に２８℃で２〜３週間維持する。１つのプレートの微生物内容物を削り取り、播種培地（実施例１に記載したような構成で調製された）１５ｍｌが入った５０ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種したフラスコを、２００ｒｐｍで操作するロータリーシェーカー上で、２８℃で成長させる。２〜３日後、この培養物の５％を、１００ｍＬの同じ培地が入った５００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種して４８時間後、１００ｍＬを、グリセロール  ３０、大豆ミール  １５、ＮａＣｌ  ２、炭酸カルシウム  ５（すべてｇ／Ｌ）で構成される産生培地２Ｌが入った３Ｌのバイオリアクターに移す。培地を蒸留水で調製し、１２１℃で２５分間滅菌する前に、ｐＨを７．２に調節する。発酵を、６００ｒｐｍで攪拌し、０．５ｖｖｍで通気しつつ、３０℃で行う。
【０１１９】
発酵中、必要な場合には硫酸を加えることによってｐＨを７．２未満に維持する。発酵１２０時間後に、発酵物を収穫する。抗生物質ＮＡＩ−４３８の産生を、全培養ブロスを所定体積のメタノールで２回抽出し、１時間攪拌した後、すでに示したようにＨＰＬＣによって監視する。
【０１２０】
（実施例５：ＳＴＲＥＰＴＯＭＹＣＥＳ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９の代替的な発酵方法）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０６９をＢＴＴ−寒天プレート上に２８℃で２〜３週間維持する。ＢＴＴ−寒天は、グルコース  １０、酵母抽出物  １、肉抽出物  １、カジトン  １、寒天１８（すべてｇ／Ｌ）で構成される。培地を蒸留水で調製し、１２１℃で２０分間滅菌する前にｐＨを７．３に調節する。１つのプレートの微生物内容物を削り取り、１５ｍＬの播種培地（実施例１に記載したような構成で調製された）が入った５０ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種したフラスコを、２００ｒｐｍで操作するロータリーシェーカー上で、２８℃で成長させる。２〜３日後、この培養物の５％を、１００ｍＬの同じ培地が入った５００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種して７２時間後、１００ｍＬを、実施例４に記載したような構成で調製された２Ｌの産生培地が入った３Ｌのバイオリアクターに移す。発酵を、４００ｒｐｍで攪拌し、０．５ｖｖｍで通気しつつ、３０℃で行う。発酵中、必要な場合には硫酸を加えることによってｐＨを７．２未満に維持する。発酵１２０時間後に、発酵物を収穫する。抗生物質ＮＡＩ−８５７の産生を、全培養ブロスを所定体積のメタノールで２回抽出し、１時間攪拌した後、すでに示したようにＨＰＬＣによって監視する。
【０１２１】
（実施例６：ＳＴＲＥＰＴＯＭＹＣＥＳ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８の代替的な発酵方法）
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＤＳＭ  ２４０５８を、ＢＴＴ−寒天プレート（実施例５に記載したような構成で調製された）上に２８℃で２〜３週間維持する。１つのプレートの微生物内容物を削り取り、デキストロース一水和物  １０、トウモロコシデキストリン  ２４、酵母抽出物  ５、大豆ペプトン  ５（すべてｇ／Ｌ）で構成される播種培地１５ｍｌが入った５０ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。培地を蒸留水で調製し、１２１℃で２０分間滅菌する前にｐＨを７．２に調節する。３〜４日後、この培養物の５％を、１００ｍＬの同じ培地が入った５００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに播種する。播種して４８時間後、１２０ｍＬを、実施例３に記載したような構成で調製された産生培地２Ｌが入った３Ｌのバイオリアクターに移す。発酵を、５００ｒｐｍで攪拌し、０．６ｖｖｍで通気しつつ、３０℃で行う。発酵中、必要な場合には硫酸を加えることによってｐＨを７．２未満に維持する。発酵１２０時間後に、発酵物を収穫する。抗生物質ＮＡＩ−１３０の産生を、全培養ブロスを所定体積のメタノールで２回抽出し、１時間攪拌した後、すでに示したようにＨＰＬＣによって監視する。
【０１２２】
（実施例７：抗生物質ＮＡＩ−８５７（ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである式（Ｉ）の化合物）の回収および精製）
実施例１に記載した発酵ブロス（１０Ｌ）を２．５Ｌのメタノールに加え、ＡｃＯＨ（８０ｍＬ）を加えることによってｐＨを４．５に下げる。混合物を室温で１時間振とうし、濾紙で濾過する。抗生物質ＮＡＩ−８５７は、透明なブロス中に主に発見される。濾過したブロスを３．６Ｌまで濃縮し、次いで、３００ｍＬのＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０ポリスチレン系樹脂を加え、混合物を室温で３時間攪拌し、次いで、樹脂を回収し、１．２Ｌのメタノール：水  ３５：７５（ｖ／ｖ）で洗浄し、次いで、３Ｌのメタノール：水  ９：１（ｖ／ｖ）を用い、室温で一晩攪拌して溶出させる。抗生物質ＮＡＩ−８５７を含む溶出された画分を、ロータリーエバポレーターで少ない体積になるまで濃縮し、４℃で一晩維持する。生成した沈殿を濾過によって集め、３．４ｇの未精製抗生物質ＮＡＩ−８５７を得る。固体をアセトン（２０ｍＬ）に懸濁させ、室温で３０分攪拌し、濾過することによって、１．８ｇのＮＡＩ−８５７をベージュ色粉末として得る。
【０１２３】
抗生物質ＮＡＩ−８５７（１００ｍｇ）を、検出波長（２３０ｎｍ）でＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）を用いることによって、逆相ＣＩ８  ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｃｏｌｕｍｎ８６ｇ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）での中圧クロマトグラフィーによってさらに精製した。Ａ相は、５０ｍＭのギ酸アンモニウムバッファー（ｐＨ６．６）であり、Ｂ相は、アセトニトリルである。樹脂は、Ａ相：Ｂ相  ９：１（ｖ／ｖ）の混合物であらかじめ平衡状態にしておき、次いで、１０％から９０％の線形勾配を有するＢ相を用い、６０ｍＬ／分で１７分間溶出させる。抗生物質ＮＡＩ−８５７を含む画分を集め、減圧下で濃縮し、水から凍結乾燥させ、４５ｍｇの精製した抗生物質ＮＡＩ−８５７を得る。
【０１２４】
（実施例８：抗生物質ＮＡＩ−１３０（ＸがＶａｌであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである式（Ｉ）の化合物）の回収および精製）
実施例２に記載した発酵ブロス（２．２Ｌ）に、５５０ｍＬのメタノールを加え、ＡｃＯＨを加えることによってｐＨを３．８に下げた。混合物を室温で一晩振とうし、ブフナーで濾過した。濾過した溶液を少ない体積（１Ｌ）になるまで蒸発させ、５０ｍＬのＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０ポリスチレン系樹脂を加えた。次いで、懸濁物を室温で３時間攪拌した。Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０ポリスチレンを濾過によって回収し、メタノール：水  ３０：７０（ｖ／ｖ、２０ｍＬ×４回）で洗浄し、メタノール：水  ９：１（ｖ／ｖ、２００ｍＬ）でバッチごとに溶出させた。抗生物質ＮＡＩ−１３０を含む溶出された画分を、ロータリーエバポレーターによって少ない体積になるまで濃縮させた。濃縮した溶液を４℃で一晩維持した。生成した沈殿を濾過によって集め、３００ｍｇの未精製抗生物質を得た。検出波長（２３０ｎｍ）でＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）を用い、逆相Ｃ１８  ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）での中圧液体クロマトグラフィーによって固体を精製した。Ａ相は、５０ｍＭギ酸アンモニウムバッファー（ｐＨ６．６）であり、Ｂ相は、アセトニトリルである。樹脂は、Ａ相：Ｂ相  ９：１（ｖ／ｖ）の混合物であらかじめ平衡状態にしておき、次いで、１０％から９０％の線形勾配を有するＢ相を用い、６０ｍＬ／分で１７分間溶出させる。ＮＡＩ−１３０を含む画分を減圧下で少ない体積になるまで蒸発させ、凍結乾燥させ、１２０ｍｇのＮＡＩ−１３０を得る。
【０１２５】
（実施例９：抗生物質ＮＡＩ−１１４（ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである式（Ｉ）の化合物）の回収）
実施例３に記載した発酵ブロス（２Ｌ）に、メタノール（２Ｌ）を加え、混合物を室温で１時間振とうし、ブフナー漏斗で濾過して菌糸体を除去した。濾過した溶液を１Ｌになるまで濃縮し、次いで、１２０ｍＬのＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０ポリスチレン系樹脂を加えた。懸濁物を室温で１．５時間攪拌し、樹脂をブフナー漏斗で濾過によって回収した。次いで、樹脂を、１Ｌのメタノール：水  ３０：７０溶液を用い、室温で１時間洗浄した。樹脂をブフナー漏斗で濾過し、１Ｌのメタノール：水  ９：１溶液を注ぎ、室温で１時間攪拌した。濾過した溶液を減圧下で蒸発させ、未精製生成物ＮＡＩ−１１４を得て、これを中圧液体クロマトグラフィーによってさらに精製した。装置：Ｉｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ。Ａ相。ＴＦＡ  ０．１％  Ｂ相：ＭｅＣＮ。勾配：０−２０分（線形の１０−５０％のアセトニトリル）。ＮＡＩ−１１４を含む画分を、少ない体積になるまで減圧下で蒸発させ、凍結乾燥させ、６０ｍｇのＮＡＩ−１１４を得た。
【０１２６】
（実施例１０：抗生物質ＮＡＩ−４３８（ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが２であり、Ｒ１およびＲ２がＯＨである式（Ｉ）の化合物）の回収および精製）
実施例４に記載した発酵ブロスの一部（０．２Ｌ）に、５０ｍＬのメタノールを加え、混合物を室温で１時間振とうし、次いで、ブフナー漏斗で濾過して菌糸体を除去した。濾過した溶液を１００ｍＬになるまで濃縮し、次いで、２０ｍＬのＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０ポリスチレン系樹脂に加えた。懸濁物を室温で２時間攪拌し、樹脂をブフナー漏斗で濾過によって回収した。次いで、樹脂を、１００ｍＬのメタノール：水  ３０：７０溶液を用いて室温で１時間洗浄した。次いで、樹脂をブフナー漏斗で濾過し、１００ｍＬのメタノール：水  ９：１溶液に注ぎ、室温でさらに１時間攪拌した。濾過した溶液を減圧下で蒸発させ、未精製生成物ＮＡＩ−４３８を得て、これを中圧液体クロマトグラフィーによってさらに精製した。装置：Ｉｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ。Ａ相。ＴＦＡ  ０．１％  Ｂ相：ＭｅＣＮ。勾配：０−２０分（線形の１０−５０％のアセトニトリル）。ＮＡＩ−４３８を含む画分を、少ない体積になるまで減圧下で蒸発させ、凍結乾燥させ、４ｍｇのＮＡＩ−４３８を得た。
【０１２７】
（実施例１１：エチレンジアミンとのＮＡＩ−８５７ジアミドの合成（ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｙｒであり、ｎが１であり、Ｒ１またはＲ２が−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２である式（Ｉ）の化合物））
実施例７に記載するように調製した３０ｍｇのＮＡＩ−８５７を１．２ｍＬのＤＭＦに溶かし、この攪拌した溶液に４μＬのエチレンジアミンおよび８ｍｇのＰｙＢＯＰを加え、攪拌下、反応物を室温に２０分間維持し、その後、ＨＰＬＣ−ＭＳは、ジアミド誘導体に対応するｍ／ｚ１１２８ａｍｕの１つの主要な２箇所帯電したピークを示す。次いで、この反応混合物溶液を４．３ｇ逆相ＣＩ８  ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）に吸着させ、検出波長（２３０ｎｍ）でＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）によって精製する。樹脂は、Ａ相：Ｂ相  ９：１（ｖ／ｖ）の混合物であらかじめ平衡状態にしておき、次いで、５％から９０％の線形勾配を有するＢ相を用い、１８ｍＬ／分で１８分間溶出させる。Ａ相は、ＴＦＡ０．１％であり、Ｂ相は、アセトニトリルである。ジアミド誘導体を含む画分を集め、減圧下で濃縮し、水から凍結乾燥させ、１０ｍｇの精製したＮＡＩ−８５７−ジアミド誘導体を得る。ＭＳ分析は、ｍ／ｚ  １１２８に２個プロトン化されたイオンを示す。
【０１２８】
（実施例１２：エチレンジアミンとのＮＡＩ−１１４ジアミドの合成（ＸがＩｌｅであり、ＹがＴｒｐであり、ｎが２であり、Ｒ１またはＲ２が−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２である式（Ｉ）の化合物））
実施例９に記載するように調製した１０ｍｇのＮＡＩ−１１４を０．５ｍＬのＤＭＦに溶かし、この攪拌した溶液に、１μＬのエチレンジアミンおよび８．８ｍｇのＰｙＢＯＰを加え、攪拌下、反応物を室温に１時間維持し、その後、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、ジアミド誘導体に対応するｍ／ｚ  １１４６ａｍｕの１つの主要な２箇所帯電したピークを示す。次いで、反応混合物溶液を４．３ｇ逆相ＣＩ８  ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）に吸着させ、検出波長（２１４ｎｍ）でＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ、ネブラスカ、ＵＳＡ）によって精製する。樹脂は、Ａ相：Ｂ相  ９．５：０．５（ｖ／ｖ）の混合物であらかじめ平衡状態にしておき、次いで、５％から９０％の線形勾配を有するＢ相を用い、１８ｍＬ／分で１８分間溶出させる。Ａ相は、ＴＦＡ  ０．１％であり、Ｂ相は、アセトニトリルである。ジアミド誘導体を含む画分を集め、減圧下で濃縮し、水から凍結乾燥させ、２ｍｇの精製したＮＡＩ−１１４−ジアミド誘導体を得る。ＭＳ分析は、ｍ／ｚ  １１４６に２個プロトン化されたイオンを示す。
【０１２９】
（実施例１３：ＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、ＮＡＩ−４３８およびエチレンジアミンとのこれらの誘導体（ＮＡＩ−８５７誘導体、ＮＡＩ−１３０誘導体、ＮＡＩ−１１４誘導体、ＮＡＩ−４３８誘導体）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗菌活性）
Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅガイドライン（ＣＬＳＩ文書  Ｍ１００−Ｓ１６およびＭ２７−Ａ、ＮＣＣＬＳ、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ）に従うブロス微量希釈法を用い、グラム陽性菌およびグラム陰性菌について１〜５×１０５ＣＦＵ／ｍＬの接種源、およびＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓについて、１×１０４ＣＦＵ／ｍＬの接種源を用い、好気性菌についての最小阻害濃度（ＭＩＣ）を決定する。
【０１３０】
４８時間インキュベートしたＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを除き、すべての試験した株について３５℃で２０〜２４時間インキュベートした後、試験結果にスコアを付ける。
【０１３１】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、腸球菌、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉおよびＭｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔｈａｒｒａｌｉｓ株を、陽イオンを調整したＭｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ（ＣＡＭＨＢ）ブロス中で成長させ、連鎖球菌単離物は、Ｔｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔブロス中で、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓは、ＲＰＭＩ−１６４０中で成長させる。すべての培地が、Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、デトロイト、ＭＩ、ＵＳＡ製である。３０％のウシ血清の効果を同じ実験条件で決定する。嫌気性菌のＭＩＣは、ヘミン（５μｇ／ｍＬ）、ビタミンＫ１（１μｇ／ｍＬ）、溶解したウマ血液（５％）およびオキシアーゼ（１：２５  ｖ／ｖ）を追加したＢｒｕｃｅｌｌａブロス（ＢＢ）中、ブロス希釈方法によって決定する（ＣＬＳＩ文書Ｍ１１−Ａ６、ＮＣＣＬＳ、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ）。
【０１３２】
４８時間の寒天プレートからいくつかのコロニーをＯＤ６２５＝０．８になるようにＢＢに懸濁させることによって接種源を調製し、次いで、これを１：１０に希釈し、約１０３ＣＦＵ／ｍＬの最終懸濁物を得る。プレートを嫌気性雰囲気下（８０％  ＮＯ２、１０％  ＣＯ２および１０％  Ｈ２、ＧａｓＰａｋ  ＥＺ嫌気性菌容器システム、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、イタリア）、３７℃で４８時間インキュベートする。
【０１３３】
使用するすべての株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た臨床的な単離物または株である。試験結果を表２に報告する。
【０１３４】
化合物ＮＡＩ−８５７（実施例７に記載したように調製）、ＮＡＩ−１３０（実施例８に記載したように調製）、ＮＡＩ−１１４（実施例９に記載したように調製）、エチレンジアミンとのＮＡＩ−８５７ジアミド（実施例１に記載したように調製）、エチレンジアミンとのＮＡＩ−１１４ジアミド（実施例１２に記載したように調製）およびバンコマイシン（ＶＡ）をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍｇ／ｍＬのストック溶液を得て、その後、試験培地で希釈して作業溶液を得る。マイクロプレートは、常に、化合物の非特異的な付着を防ぐために、０．０２％のウシ血清アルブミンであらかじめコーティングしてある。
【０１３５】
表ＩＩ：好気性菌に対する、ランチビオティックＮＡＩ−８５７、ＮＡＩ−１３０、ＮＡＩ−１１４、エチレンジアミンとのＮＡＩ−８５７ジアミド、エチレンジアミンとのＮＡＩ−１１４ジアミドの抗菌活性
【０１３６】
【表３】
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【０１３７】
ＶＡ＝バンコマイシン、コード＝臨床的な単離物のための内部コード
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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