(57)【要約】  本発明は、竹の骨長の成長促進に関する新規な使用に関する。更に詳しくは、竹を有効成分として含む骨成長促進用の薬学的組成物、食品組成物及び動物飼料用組成物に関する。また、本発明は、必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含む、骨成長を促進する方法に関する。本発明の組成物は竹を有効成分として含むので、成長板及び長骨の成長促進に効果的であり、成長期の乳幼児及び小児、青少年の成長及び骨格形成の促進に効果的である。さらに本発明の組成物は単独で、或いは成長ホルモン治療と併行して身長の成長治療に効果的である。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
竹を有効成分として含むことを特徴とする骨成長促進用薬学的組成物。
【請求項２】
竹を有効成分として含むことを特徴とする骨成長促進用食品組成物。
【請求項３】
竹を有効成分として含むことを特徴とする骨成長促進用の動物飼料用組成物。
【請求項４】
前記竹は、ハチク（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｎｉｇｒａ  ｖａｒ  ｈｅｎｏｎｉｓ）、マダケ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ）、花眉竹（Ｂａｍｂｕｓａ  ｔｕｌｄｏｉｄｅｓ）、及び竹変（Ｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓ  ｂｅｅｃｈｅｙａｎｕｓ  ｖａｒ  ｐｕｂｅｓｃｅｕｓ）からなる群より選ばれた１つ以上のものである請求項１から３のいずれかに記載の骨成長促進用組成物。
【請求項５】
前記竹は、竹の葉、津液、筍、根、及び幹の粗皮を除去した中間層からなる群より選ばれた１つ以上のものである請求項１から３のいずれかに記載の骨成長促進用組成物。
【請求項６】
前記竹は、竹抽出物である請求項１から３のいずれかに記載の骨成長促進用組成物。
【請求項７】
前記竹抽出物は、水、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、ジエチルエーテル、ベンゼン及び亜臨界または超臨界流体からなる群より選ばれた１つ以上の溶媒による抽出物である請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
骨成長促進用の竹。
【請求項９】
骨成長を促進する方法において、
必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１３年１１月４日付で出願した韓国特許出願第１０−２０１３−０１３３１９４号に基いた優先権及びその利益を主張し、これを全ての目的として本明細書に援用する。
本発明は、竹の骨長の成長促進効果に関し、更に詳しくは、竹を有効成分として含む骨成長促進用の薬学的組成物、食品組成物及び動物飼料用組成物に関する。また本発明は、必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含む、骨成長を促進する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、体型の西欧化及び平均身長の上昇により、背の成長因子に対する関心が高まっている。成長を広義の概念で定義すると、身長の増加だけでなく、身体の各器官の大きさと機能の増大を含むと言えるが、これを狭義の概念で定義すると、身長の増加を意味すると言える。このような身長の増加は栄養と成長ホルモンなどの多くの要因による軟骨組織の合成、骨格の長さの成長及び骨格組織の広範囲な増殖を含む骨格の代謝によって行われる。骨組織は特殊に分化された形態の結合組織であって、間葉細胞、軟骨細胞、造骨細胞、破骨細胞、骨髄細胞などいろいろな種類の細胞から構成された結合組織である。破骨細胞による骨吸収の量と造骨細胞による骨形成の量との間にはバランスが維持されているが、成長期には造骨細胞による骨形成能力が最高値になって骨形成の量が骨吸収の量を相当上回るので、骨の成長が行われる。
【０００３】
成長板（ｇｒｏｗｔｈ  ｐｌａｔｅ）は、長骨の両端に位置している水平にパターン化された構造を持つ軟骨細胞集団であって、骨幹端（ｍｅｔａｐｈｙｓｉｓ）と骨端（ｅｐｉｐｈｙｓｉｓ）との間に位置している。成長板内の軟骨細胞（ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ）の増殖、肥大（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ）、細胞外マトリックス（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ）分泌、血管と骨前駆細胞の侵入とこれによる骨化（ｏｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）過程を経て、結局、軟骨が骨に変化する軟骨内骨化（ｅｎｄｏｃｈｏｎｄｒａｌ  ｏｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）過程を経ながら、成長板の骨幹端部に新しい骨が持続的に形成され、これにより長骨の長さが長くなる。成長板は、成長ホルモン、インスリン様成長因子（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、ＩＧＦ）、甲状腺ホルモン、性ホルモン、グルココルチコイドなどのホルモンと、種々のサイトカインによって調節され、結局、思春期後に骨化されて隣接した骨と融合される（非特許文献１参照）。
【０００４】
一方、今までの成長を促進させるための方法としては、成長ホルモン製剤の投与法、イリザロフ手術及び健康補助食品の服用法などが使われてきた。特に過去病的な状態の成長不振に使われた成長ホルモン療法が、近来に身長の伸びに対する関心が高まるにつれ、正常身長の成長期の子供及び青少年にも適用されている。しかし、上記成長ホルモン製剤の投与法は成長ホルモンが不足している人には優れた効果を奏するが、ホルモン分泌が正常な大多数の人々には末端肥大症、抗成長ホルモン抗体養成、全身アレルギー反応、甲状腺機能低下症などの様々な副作用をもたらすという問題点があるだけでなく、成長ホルモン療法の期間と費用が過度であり、発癌及び他の成長因子との撹乱を起こすなどの問題点が発見されている。また、イリザロフ手術は足の骨を切断して伸ばす手術であって患者の苦痛及び費用の面で一般人に適用するには多くの無理があり、成長促進用の健康補助食品は科学的に検証されていない場合が殆どである。
よって、成長促進において、その効能が科学的に検証され、かつ安全な食品素材の開発が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】シン・チュンホ、２００６、ホルモンの成長板調節、大韓小児内分泌学会誌、ｖｏｌ  １１，１１７−１２２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者らは、副作用がなく、骨成長を効果的に促進する活性を有する食品素材を開発しようとする研究の中、竹を投与した実験動物で成長板促進及び長骨の長さの増加効果を確認して本発明を完成した。
したがって、本発明の目的は、竹を有効成分として含む骨成長促進用の薬学的組成物、食品組成物及び／または動物飼料用組成物を提供することである。
本発明の他の目的は、必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含む、骨成長を促進する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の目的を果たすために、本発明は、竹を有効成分として含む骨成長促進用薬学的組成物を提供する。
上記の目的を果たすために、本発明は、竹を有効成分として含む骨成長促進用食品組成物を提供する。
上記の目的を果たすために、本発明は、竹を有効成分として含む骨成長促進用の動物飼料用組成物を提供する。
上記の他の目的を果たすために、本発明は、必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含む、骨成長を促進する方法を提供する。
【０００８】
竹（Ｂａｍｂｏｏ）とは、単子葉植物、イネ目イネ科タケ亜科に属する多年生植物の総称である。竹はイネ科植物で、世界に約２８０余種が知られており、韓国には約７０種の竹が自生または栽培されている。竹の種としては、ハチク（淡竹）、マダケ（真竹）、モウソウチク（孟宗竹）、クロチク（烏竹）、斑竹、チシマザサ、海蔵竹、コウライザサ、スズタケ、山竹、ヤダケ（矢竹）など１１種の代表的な品種があり、これらの中で、主な栽培品種はマダケ（真竹）、ハチク（淡竹）、モウソウチク（孟宗竹）である。
【０００９】
本発明の竹は公知の竹の種であれば、これに限定されないが、好ましくは、本発明の竹はハチク（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｎｉｇｒａ  ｖａｒ．  ｈｅｎｏｎｉｓ）、マダケ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ  Ｓｉｅｂ．  ｅｔ  Ｚｕｃｃ．）、花眉竹（Ｂａｍｂｕｓａ  ｔｕｌｄｏｉｄｅｓ）、及び竹変（Ｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓ  ｂｅｅｃｈｅｙａｎｕｓ  ｖａｒ  ｐｕｂｅｓｃｅｕｓ）からなる群より選ばれた１つ以上であることができ、更に好ましくは、ハチク（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｎｉｇｒａ  ｖａｒ．  ｈｅｎｏｎｉｓ）、またはマダケ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ  Ｓｉｅｂ．  ｅｔ  Ｚｕｃｃ．）であることができる。
【００１０】
本発明の竹は、竹を構成する部位であれば特に制限されないが、好ましくは、竹の葉、津液、筍、根及び幹の粗皮を除去した中間層からなる群より選ばれた１つ以上のものであることができ、更に好ましくは、竹の幹の粗皮を除去した中間層であることができる。上記竹の幹の粗皮を除去した中間層は、竹茹（Ｂａｍｂｕｓａｅ  Ｃａｕｌｉｓ  ｉｎ  Ｔａｅｎｉａｍ）、青竹茹、竹皮、淡竹皮茹などとも呼ばれ、本発明の明細書において上記用語を混用して指称することができる。
【００１１】
本発明の竹は、そのまま又は動物に投与可能な形態に加工されて使用されることができ、これに制限されないが、例えば、粉末、懸濁液、抽出物などであることができ、好ましくは竹抽出物であることができる。
上記竹抽出物は公知の天然物の抽出方法によって抽出することができ、好ましくは、水、炭素数１〜６の有機溶媒及び亜臨界または超臨界流体からなる群より選ばれた１つ以上の溶媒で抽出することができ、上記炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール（ａｌｃｏｈｏｌ）、アセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）、エーテル（ｅｔｈｅｒ）、ベンゼン（ｂｅｎｚｅｎｅ）、クロロホルム（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）、エチルアセテート（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、メチレンクロリド（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヘキサン（ｈｅｘａｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）、ジエチルエーテル（ｄｉｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｅｒ）及び石油エーテル（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ  ｅｔｈｅｒ）からなる群より選ばれたものであることができる。好ましくは、水または炭素数１〜６のアルコールを使用して抽出することができる。
【００１２】
上記竹抽出物は、抽出効率を増大させるために前処理過程を含むことができ、例えば、竹を粉砕機で粉砕して使用することができる。本発明の抽出物の抽出温度は特に制限されず、例えば０℃乃至１５０℃であることができ、好ましくは８０℃乃至１２０℃であることができる。本発明の抽出物の抽出時間は抽出温度によって特に制限されず、例えば１時間乃至１０日間であることができ、好ましくは０．５時間乃至６時間であることができ、好ましくは１時間乃至３時間の間に抽出することができる。
【００１３】
本発明の抽出物は、公知の天然物の抽出法で抽出することができる。例えば、冷浸抽出、熱水抽出、超音波抽出、還流冷却抽出、加熱抽出法で抽出することができ、好ましくは熱水抽出または還流冷却抽出法で抽出することができ、１回乃至１０回、好ましくは２回乃至７回で繰り返し抽出することができる。
【００１４】
本発明の抽出物は、濾過して液状で使用することができ、好ましくは噴霧乾燥または凍結乾燥の乾燥工程によって固形化して使用することができる。更に好ましくは、噴霧乾燥または凍結乾燥の前にデキストリンを混合して乾燥することができる。
本発明の最も好ましい実施形態は竹茹抽出物である。上記竹茹抽出物は、これに制限されないが、好ましくはハチク、マダケ、花眉竹、竹変などの竹の甘皮から抽出された液体を意味する。また上記竹茹抽出物は、これに制限されないが、最も好ましくは水を溶媒で用いて熱水抽出法によって製造することができる。
【００１５】
上記熱水抽出の時、竹と水の比率は特に限定されないが、竹に水を３倍〜２０倍（重量基準）で添加することができる。好ましくは、抽出効率を増加させるために竹に対して水を８倍〜１５倍（重量基準）で添加することができる。
本発明の一実施例では、本発明の竹抽出物は、竹を２０〜４０ｍｅｓｈの大きさに粉砕した後、飲用水を竹粉に１０倍で添加し、１００℃で２時間を熱水抽出する。上記熱水抽出液を１時間放置して、不純物がある下澄液１０％を除いた上澄液を回収して凍結乾燥することで竹抽出物を製造した。
本発明の上記「骨成長」とは、骨の組織の大きさ、太さ、密度、長さ及び機能の増大を含み、好ましくは骨の長さの成長を意味する。
本発明の組成物は竹を有効成分として含んで骨の長さの成長及び成長板の軟骨組織の増殖促進に効果的である。
【００１６】
これは本発明の明細書の実施例によく示されている。
本発明の一実施例では、ラット（ｒａｔ）に１０日間竹茹を投与した後、脛骨（ｔｉｂｉａ）の長さ変化を観察した。その結果、成長ホルモン投与群とほぼ同じ水準に脛骨の長さが長くなったことが確認された。
本発明のまた他の一実施例では、ラットに１０日間竹茹を投与した後、成長板組織の変化を観察した。その結果、成長板の増殖部（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｚｏｎｅ）及び肥大部（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ  ｚｏｎｅ）の長さが成長ホルモン投与群とほぼ同じ水準に増加することが確認された。
【００１７】
本発明のまた他の実施例では、ラットに１０日間竹茹を投与した後、軟骨組織で活性化された軟骨細胞数の変化をＢｒｄＵ染色（ＢｒｄＵ  ｓｔａｉｎｉｎｇ）で確認した。その結果、ＢｒｄＵ陽性細胞（ＢｒｄＵ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ）の比率が増加されたことが確認され、これにより、竹茹投与群で軟骨細胞の増殖が促進されることを確認した。
本発明のまた他の実施例では、ラットに１０日間竹茹を投与した後、血清中のオステオカルシン（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ）濃度を測定した。その結果、竹茹投与群で血清中のオステオカルシン濃度が増加されたことを確認し、これにより、竹茹抽出物が骨形成及び骨芽細胞活性を増加させることを確認した。
【００１８】
したがって、本発明は、竹を有効成分として含む骨成長促進用薬学的組成物を提供する。
本発明による薬学的組成物は、本発明の竹を単独で含有するか、または１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を更に含有することができる。上記の「薬学的に許容される」とは、生理学的に許容され、ヒトに投与された時に活性成分の作用を阻害せず、通常的に胃腸障害、めまいのようなアレルギー反応またはこれと類似した反応を起こさない非毒性の組成物である。
【００１９】
薬学的に許容される担体としては、例えば、経口投与用担体または非経口投与用担体を更に含むことができる。経口投与用担体はラクトース、澱粉、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸などを含むことができる。更に、ペプチド製剤に対する経口投与用で使用される多様な薬物伝達物質を含むことができる。また、非経口投与用担体は、水、適合したオイル、食塩水、水性グルコース及びグリコールなどを含むことができ、安定化剤及び保存剤を更に含むことができる。適合した安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適合した保存剤としては、ベンザルコニウムクロリド、メチル−またはプロピルパラベン及びクロロブタノールがある。
本発明の薬学的組成物は、上記成分以外に潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁化剤などを更に含むことができる。その他の薬学的に許容される担体及び製剤は次の文献に記載されているものを参考することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １９ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９９５）。
【００２０】
本発明の組成物は、ヒトを含め、哺乳動物にいずれの方法でも投与することができる。例えば、経口または非経口的に投与することができる。非経口的投与の方法としては、これに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下または直腸内の投与であることができる。
【００２１】
本発明の薬学的組成物は、上述のような投与経路によって経口投与用または非経口投与用製剤に剤形化することができる。
経口投与用製剤の場合に、本発明の組成物は、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液などに、当業界で公知された方法を用いて剤形化することができる。例えば、経口用製剤は、活性成分を固体賦形剤と配合した後、これを粉砕し、適合した補助剤を添加して顆粒混合物に加工することで錠剤または糖衣錠剤を得ることができる。適合した賦形剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール及びマルチトールなどを含む糖類と、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉及びジャガイモ澱粉などを含む澱粉類、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなどのような充填剤を含むことができる。また、場合によって、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはナトリウムアルギネートなどを崩壊剤として添加することができる。さらに本発明の薬学的組成物は、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤などを更に含むことができる。
【００２２】
非経口投与用製剤の場合は、注射剤、クリーム剤、ローション剤、外用軟膏剤、オイル剤、保湿剤、ゲル剤、エアロゾル及び鼻腔吸入剤の形態に、当業界に公知された方法で剤形化することができる。これらの剤形は、全ての製薬化学に一般的に公知された処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９９５）に記載されている。
【００２３】
本発明の組成物の総有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ）で患者に投与することができ、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）により投与することができる。
本発明の薬学的組成物は、疾患の程度によって有効成分の含量を変えることができる。好ましくは、本発明の薬学的組成物の好ましい全体用量は、１日間当り、患者体重１ｋｇ当たり約０．０１μｇ乃至１０，０００ｍｇ、最も好ましくは０．１μｇ乃至５００ｍｇであることができる。しかし、上記薬学的組成物の用量は製剤化方法、投与経路及び治療回数だけではなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌及び排泄率など、多様な要因を考慮して患者に対する有効投与量が決定されるので、このような点を考慮したとき、当分野における通常の知識を有する者であれば、本発明の組成物の適切な有効投与量を決定することができるはずである。
本発明による薬学的組成物は本発明の効果を奏する限り、その剤形、投与経路及び投与方法は特に制限されない。
【００２４】
本発明は、竹を有効成分として含む骨成長促進用食品組成物を提供する。
本発明の食品組成物は、機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｆｏｏｄ）、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、健康食品（ｈｅａｌｔｈ  ｆｏｏｄ）及び食品添加剤（ｆｏｏｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）などの全ての形態を含む。上記類型の食品組成物は当業界において公知された通常的な方法によりいろいろな形態で製造することができる。
【００２５】
例えば、健康食品としては、本発明の竹をお茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用するようにするか、顆粒化、カプセル化及び粉末化して摂取することができる。また、本発明の竹を骨成長の促進効果があると知られている公知の物質または活性成分と共に混合して組成物の形態で製造することができる。例えば、本発明の食品組成物は、竹または竹抽出物成分の以外に微量のミネラル、ビタミン、脂質、糖類及び公知の成長促進活性を有する成分などを更に含むことができる。上記ミネラルとしては、カルシウム、鉄など成長期に必要な栄養成分を含有することができ、ビタミンとしては、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６などを含有することができる。脂質としては、アルコキシグリセロールまたはレシチンなどを含有することができ、糖類としては、フラクトオリゴ糖などを含有することができる。
【００２６】
また、機能性食品としては、飲み物（アルコール性飲み物を含み）、果実及びその加工食品（例：フルーツ缶詰め、瓶詰め、ジャム、マーマレードなど）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージコンビーフなど）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲッティ、マカロニなど）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：みそ、醤油、ソースなど）などに本発明の竹を添加して製造することができる。
また、本発明の竹を食品添加剤の形態で使用するためには、粉末または濃縮液の形態に製造して使用することができる。
【００２７】
本発明の食品組成物中の竹の好ましい含量は、食品組成物の総重量に対して食品の全体重量を基準で０．０１〜９０％、好ましくは０．１〜５０％の比率で含有されることができる。
【００２８】
本発明は、竹を有効成分として含む骨成長促進用の動物飼料用組成物を提供する。
本発明による飼料用組成物は発酵飼料、配合飼料、ペレット及びサイレージ（ｓｉｌａｇｅ）などの形態で製造することができる。上記発酵飼料は、本発明の竹を含み、更にさまざまな微生物菌または酵素を添加することで有機物を発酵させて製造することができる。上記配合飼料は多くの種類の一般飼料と本発明の竹を混合して製造することができる。ペレット形態の飼料は上記発酵飼料または配合飼料をペレット機で剤形化して製造することができる。サイレージは青刈り飼料と本発明の竹を混合して乳酸菌で発酵させることで製造することができる。
【００２９】
本発明は、必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含む、骨成長を促進する方法に関する。
上記の「有効投与量」は、本発明による骨成長の促進に効果的な竹の量を意味する。上記説明のように、本発明の竹は、そのまま又は動物に投与可能な形態に加工して使用することができる。また、本発明の竹は、粉末、懸濁液、抽出物の形態を有することができるが、これに限定されず、好ましくは竹抽出物である。
上記の「投与対象」は、動物、好ましくは哺乳動物（ヒトを含む哺乳動物）であり、動物の細胞、組織、器官も含まれる。このような対象は治療が必要な患者を含むことができる。
【発明の効果】
【００３０】
本発明の竹を有効成分として含む組成物は成長板及び長骨の成長促進に効果があるので、成長期の幼小児及び青少年の成長及び骨格形成の促進に効果的である。その上に、本発明の組成物は単独で、または成長ホルモン治療と併行して身長の成長治療に効果的である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】投与群別に１０日間ラットの体重変化推移を示した図式である。
【図２】投与群別にラット脛骨のＭｉｃｒｏ−ＣＴ撮影結果を示したものである。
【図３】投与群別にラット脛骨のＸ−ｒａｙ撮影結果を示したものである。
【図４】投与群別にラット脛骨の全長（ｔｏｔａｌ  ｔｉｂｉａ  ｌｅｎｇｔｈ）を示したものである。
【図５】各投与群別にラットの成長板における増殖部及び肥大部の位置及び相対的長さを示したものである（赤色矢印：増殖部、緑色矢印：肥大部、コントロール：生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）投与群、ＧＨ：成長ホルモン投与群、竹茹：竹茹抽出物投与群）。
【図６】各投与群の成長板領域の中で増殖部の長さを示した図式である。
【図７】各投与群の成長板領域の中で肥大部の長さを示した図式である。
【図８】各投与群の軟骨組織をＢｒｄＵ染色（ｓｔａｉｎｉｎｇ）した結果をイメージで示したものである。
【図９】各投与群の軟骨組織におけるＢｒｄＵ陽性細胞（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ）の比率を示したものである。
【図１０】各投与群における血清中のオステオカルシン濃度を測定した結果を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下、本発明を詳細に説明する。
但し、下記の実施例は本発明を例示するだけであり、本発明の内容が下記の実施例のみに限定されるものではない。
【００３３】
＜実施例１＞
竹（竹茹）抽出物の製造
ハチクの粗皮を除去して掻き出した中間層（竹茹）をドンヤン産業製薬社（大韓民国忠溝北道報恩郡報恩邑風趣里１８番地）から購入し、２０〜４０ｍｅｓｈの大きさに粉砕した後、飲用水を竹粉に１０倍で添加し、１００℃で２時間熱水抽出した。上記熱水抽出液を１時間放置して不純物がある下澄液１０％を除いた上澄液を回収し、竹抽出物を得た。これを凍結乾燥（−５０℃で３時間凍結した後に乾燥）することで竹抽出物の粉末を製造した。
【００３４】
＜実験例１＞
動物モデルを用いた竹抽出物の骨成長促進効果の調査
＜１−１＞竹抽出物の投与
３週齢のＭａｌｅ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔを購入して３日間安定化させた。飼育環境は２４±２℃、明暗周期は１２時間の間隔を維持し、飼料は抗生剤が添加されていない一般の固形飼料を使った。コントロール群には生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）を注入し、竹茹抽出物（上記＜実施例１＞で製造した竹茹抽出物の粉末を水に溶かして投薬する）を１日１回経口投与した。陽性（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）群にはＥｕｔｒｏｐｉｎ注（ＬＧ生命科学社製）を２０μｇ／ｋｇの用量で１日１回皮下注射した。本発明の竹茹投与方法は、陽性（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）群を除いた全てのラット群に口腔内投与し、全てのラットに１日１回投与した。各群の構成は以下のとおりである。
−  コントロール投与群：正常（Ｎｏｒｍａｌ）  生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）  １ｍｌ
−  陽性（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）コントロール群：成長ホルモン（ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ）、２０μｇ／ｋｇ
−  竹茹投与群：２００ｍｇ／ｋｇ
１０日間の飼料の摂取と竹茹抽出物の投与が終わった後、剖検して、以下の内容を確認した。
【００３５】
＜１−２＞実験動物の体重変化
上記実験例＜１−１＞の各群の食餌投与前の体重と１０日間の食餌投与後の体重を測定した。測定は週２回実施された。測定された値は統計処理して平均値と標準偏差を計算した。
図１に示すように、１０日間観察した結果、コントロール群、実験群、成長ホルモン投与群の全てにおいて体重の差は殆どないことが確認された。これはラットの体重が竹茹投薬の効果と相関関係があまりないということを示す。
【００３６】
＜１−３＞骨の異常増殖及び骨粗鬆症（Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）毒性評価
上記実験例＜１−１＞で１０日間の投与が完了した後、本発明による竹抽出物を摂取させた実験群及びコントロール群で、骨の過剰成長または骨粗鬆症の有無をＭｉｃｒｏ−ＣＴ方法で評価した。
左脛骨の骨密度と関わっている小柱骨（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｂｏｎｅ）の体積及び幅をＭｉｃｒｏ−ＣＴ検査で確認した。ラットを致死させて左脛骨を抽出した状態で、Ｍｉｃｒｏ−ＣＴを用いて小柱骨の体積及び幅を測定した。Ｍｉｃｒｏ−ＣＴシステムはＳＫＹＳＣＡＮ  １１７２  Ｍｉｃｒｏ−ＣＴ機器を使用し、Ｘ−ｒａｙ  ｓｏｕｒｃｅは５０ｋＶ、２００ｍＡにした。ソースとディテクターが固定されており、その間を物体が回転することで投影データが得られる。映像は０．８μｍ〜２５μｍピクセルの大きさを有する。Ｍｉｃｒｏ−ＣＴで左脛骨部の首部に全体的ＦＯＶ（ｆｉｅｌｄ  ｏｆ  ｖｉｅｗ）スキャンし、制限された領域（ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＲＯＩ））の部分をＦＯＶスキャンして正確な比率を把握した（Ｃｈｕｎｅｔ  ａｌ  ２００４）。該ＦＯＶ領域を再構成して骨梁の比率と幅を求めた。２Ｄ映像の左大腿骨の長方形の内部にある骨梁の体積比（ＢＶ／ＴＶ、％）と幅（Ｔｂ．Ｔｈ、ｍｍ）を計算するためにＦｕｚｚｙ  ｄｉｓｔａｎｃｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍ（ＦＤＴ）アルゴリズムを適用した（Ｉｎ  Ｋｏｎ  Ｃｈｕｎ  １．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｌｌｏｕｓ  ｂｏｎｅｓ：ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｒａｔ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｓｔｕｄｉｅｓ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｍｅａｓ．  ２７（２００６）６９５−７０２）。
Ｍｉｃｒｏ−ＣＴにより調べてみた骨体積の百分率（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｂｏｎｅ  ｖｏｌｕｍｅ）、骨梁間隙（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）、骨梁幅（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ）などは、主に骨粗鬆症の有無及び骨異常を評価する指標として使われる。図２及び表１に示すように、各群間の差が殆どないことから、実験期間中、この生薬が骨の異常増殖または骨粗鬆症毒性などに影響を及ぼさないことが分かる。
【００３７】
【表１】
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【００３８】
＜１−４＞実験動物の脛骨の長さ変化測定
上記実験例＜１−１＞で１０日間の投与が完了した後、本発明による竹抽出物を摂取させた実験群及びコントロール群の左右脛骨（向こう脛）を摘出し、骨組織に付着している筋肉、脂肪、靭帯などを全部除去して７０％アルコールに保管し、Ｘ−ｒａｙ撮影機器（ＯＭ−ＦＯＲＴＥ−１０１２１、ＤＫメディカルシステム社製）を用いた。Ｘ−ｒａｙ  ｓｏｕｒｃｅは５０ｋＶ、２００ｍＡにした。脛骨のＸ−ｒａｙ撮影により脛骨の長さ（ｔｉｂｉａ  ｌｅｎｇｔｈ）を測定した。
図３及び図４に示すように、コントロール群に比べて成長ホルモンを投与した群の脛骨の全長が増加し、竹茹を投与した群においてもコントロール群に比べて脛骨の全長が増加する効果を示した。
【００３９】
＜１−５＞実験動物の成長板の軟骨組織の変化測定
成長板領域（Ｇｒｏｗｔｈ  ｐｌａｔｅ  ｚｏｎｅ）の長さは、剖検後に軟骨組織を固定してＨ＆Ｅ染色法で染色して顕微鏡で測定した。各領域の長さを１サンプル当たり５回ずつ測定して平均を出した値を代表値として使用して有意性を評価する。
図５乃至図７に示すように、コントロール群に比べて成長ホルモンを投与した群の増殖部及び肥大部の長さが増加し、竹茹投与群の場合も増殖部の長さがコントロール群に比べて有意に増加し、肥大部の長さは成長ホルモン投与群とほぼ同じ程度の長さ増加を示した。
【００４０】
＜１−６＞軟骨細胞（ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ）の増殖効果
軟骨細胞増殖の程度を測定するために、ラット脛骨の軟骨組織を用い、該部位の成長板にあるＳ期（Ｓ  ｐｈａｓｅ）の増殖性細胞（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ）にｂｒｄＵ染色法を適用した。Ｓｉｇｍａ社製の５−Ｂｒｏｍｏ−２´−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（製品番号：Ｂ９２８５）を水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）０．１Ｍに３０ｍｇ／ｋｇの量で溶かして実験終了１時間前に腹腔投与した。
剖検後、軟骨組織を固定してパラフィン包埋組織（ｐａｒａｆｆｉｎ  ｅｍｂｅｄｄｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ）を作り、ＢｒｄＵ染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、９３−３９４３）の方法により染色を行った。ＢｒｄＵ陽性細胞はセルカウンター（ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｅｒ）を用いてカウントした。
その結果、図８及び図９に示すように、コントロール群に比べて成長ホルモン群（ＧＨで表記）と、竹茹投与群のいずれもＢｒｄＵ陽性細胞の比率が増加した。これは竹茹投与群において軟骨細胞の増殖効果があるということを示す。
【００４１】
＜１−７＞骨芽細胞活性因子の血清オステオカルシンの測定
ラットの血液を投薬が終わった後に心臓から採取して凝固させて、血清（ｓｅｒｕｍ）を分離してサンプルを作り、Ｒａｔ  Ｏｓｔｅｃａｌｃｉｎ／Ｂｏｎｅ  Ｇｌａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ．  ＯＴ／ＢＧＰ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｃｕｓａｂｉｏ、製品番号：ＣＳＢ−Ｅ０５１２９ｒ）を使用して血清中の総オステオカルシンのレベルを測定した。
その結果、図１０に示すように、成長ホルモン投与群及び竹茹抽出物投与群のいずれも血清中のオステオカルシンのレベルがコントロール群に比べて有意に増加することが確認された。オステオカルシンは骨芽細胞で形成された後、骨基質中に沈着され、新たに形成されるオステオカルシンの一部は血液内に放出されるので、血中濃度を測定すれば骨形成程度が分かり、血清中のオステオカルシン濃度は骨芽細胞の活性を反映するとみられている。本発明の竹茹抽出物が血清中のオステオカルシン濃度を有意に増加させることから、骨形成及び骨芽細胞活性が増加するものとみられる。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
以上のように、本発明は、竹の骨長の成長促進効果に関し、更に詳しくは、竹を有効成分として含む骨成長促進用の薬学的組成物、食品組成物及び動物飼料用組成物に関する。また、本発明は、必要投与対象に有効投与量の竹を投与する段階を含む、骨成長を促進する方法に関する。
本発明の竹を有効成分として含む組成物は成長板及び長骨の成長促進効果があるので、成長期の幼小児及び青少年の成長及び骨格形成の促進に効果的であるだけでなく、本発明の組成物は単独で、または成長ホルモン治療と併行して身長の成長治療に効果的であり、産業上の利用可能性が大きい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成28年6月23日(2016.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
竹を有効成分として含むことを特徴とする骨成長促進用薬学的組成物。
【請求項２】
竹を有効成分として含むことを特徴とする骨成長促進用食品組成物。
【請求項３】
竹を有効成分として含むことを特徴とする骨成長促進用の動物飼料用組成物。
【請求項４】
前記竹は、ハチク（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｎｉｇｒａ ｖａｒ ｈｅｎｏｎｉｓ）、マダケ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ）、花眉竹（Ｂａｍｂｕｓａ ｔｕｌｄｏｉｄｅｓ）、及び竹変（Ｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓ ｂｅｅｃｈｅｙａｎｕｓ ｖａｒ ｐｕｂｅｓｃｅｕｓ）からなる群より選ばれた１つ以上のものである請求項１から３のいずれかに記載の骨成長促進用組成物。
【請求項５】
前記竹は、竹の葉、津液、筍、根、及び幹の粗皮を除去した中間層からなる群より選ばれた１つ以上のものである請求項１から３のいずれかに記載の骨成長促進用組成物。
【請求項６】
前記竹は、竹抽出物である請求項１から３のいずれかに記載の骨成長促進用組成物。
【請求項７】
前記竹抽出物は、水、炭素数１〜６のアルコール、アセトン、エーテル、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロリド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、ジエチルエーテル、ベンゼン及び亜臨界または超臨界流体からなる群より選ばれた１つ以上の溶媒による抽出物である請求項６に記載の組成物。
【国際調査報告】
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