(57)【要約】本開示は、抱合体構造およびこれらの抱合体を生成するために使用される化合物構造を提供する。修飾アミノ酸を通して連結される薬物−ポリペプチドまたは検出可能な標識−ポリペプチド抱合体を生成する方法も提供する。本抱合体の生成に使用される修飾アミノ酸の構造が開示される。【選択図】図１
2016500058.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抱合体であって、
式：
【化１】
2016500058.tif 000056
の少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含み、式中、
Ｘが、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ、またはＣＨ２であり、
Ｙ１およびＹ２が各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、
ｎが、１または２であり、
Ｒ２が、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ４が、任意であり、そして存在する場合、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ５が、任意であり、そして存在する場合、水素またはヒドロキシルであり、
Ｒ６が、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗ１およびＷ２のうちの一方が、ポリペプチドであり、もう一方が、薬物または検出可能な標識であり、
点線が、任意の結合を表し、
前記Ｒ４−炭素と前記Ｒ５−炭素との間の点線が、２重結合である場合、ｎが、１であり、Ｒ４およびＲ５が存在せず、
ｎが２である場合、前記Ｒ４−炭素と前記Ｒ５−炭素との間の点線が、２重結合ではなく、Ｒ５が存在しない、抱合体。
【請求項２】
Ｙ１が、Ｎである、請求項１に記載の抱合体。
【請求項３】
Ｙ２が、Ｏである、請求項１に記載の抱合体。
【請求項４】
Ｒ２が、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである、請求項１に記載の抱合体。
【請求項５】
Ｒ２が、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである、請求項１に記載の抱合体。
【請求項６】
前記Ｒ４−炭素と前記Ｒ５−炭素との間の点線が、２重結合であり、ｎが、１であり、Ｒ４およびＲ５が、存在しない、請求項１に記載の抱合体。
【請求項７】
前記Ｒ４−炭素と前記Ｒ５−炭素との間の点線が、２重結合でなく、ｎが、１であり、Ｒ５が、ヒドロキシルである、請求項１に記載の抱合体。
【請求項８】
ｎが、２であり、前記Ｒ４−炭素と前記Ｒ５−炭素との間の点線が、２重結合ではなく、Ｒ５が、存在しない、請求項１に記載の抱合体。
【請求項９】
ＸとＹ１との間の点線が、前記修飾アミノ酸残基が式：
【化２】
2016500058.tif 000057
を有するような結合である、請求項１に記載の抱合体。
【請求項１０】
ＸとＹ１との間の点線が、前記修飾アミノ酸残基が式：
【化３】
2016500058.tif 000058
を有するような結合ではない、請求項１に記載の抱合体。
【請求項１１】
前記検出可能な標識が、フルオロフォアを含む、請求項１に記載の抱合体。
【請求項１２】
Ｗ１が、前記薬物または前記検出可能な標識であり、Ｗ２が、前記ポリペプチドである、請求項１に記載の抱合体。
【請求項１３】
Ｗ１が、前記ポリペプチドであり、Ｗ２が、前記薬物または前記検出可能な標識である、請求項１に記載の抱合体。
【請求項１４】
式：
【化４】
2016500058.tif 000059
の化合物であって、式中、
Ｒ２が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３が、ヒドロキシル、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ７が、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ９が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗが、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される、化合物。
【請求項１５】
Ｒ２が、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２が、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が、置換されたアルキルまたは置換されたアリールである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ３が、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミノアシル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから各々独立して選択される１つ以上の基で置換される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ３が、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ３が、−Ｒ９Ｗである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ７が、水素である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ７が、ハロゲンである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ７が、アルキルまたは置換されたアルキルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物が、
４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（化合物１０）、
３−（２−メルカプトエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（化合物Ａ４）、
３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（化合物２３０）、
ペルフルオロフェニル３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノエート（化合物２４０）、および
Ｎ−「カーゴ（ｃａｒｇｏ）」−３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド（化合物２５０）からなる群から選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２５】
式：
【化５】
2016500058.tif 000060
の化合物であって、式中、
Ｒ２が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ７が、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ８が、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ９が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗが、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される、化合物。
【請求項２６】
Ｒ２が、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ２が、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ７が、水素である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ７が、ハロゲンである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ７が、アルキルまたは置換されたアルキルである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ８が、−Ｒ９Ｗである、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
抱合体であって、
式：
【化６】
2016500058.tif 000061
の１つ以上の化合物を含み、式中、
Ｘ１およびＸ２が各々、独立して、ＮおよびＣＨから選択され、
Ｙ１およびＹ３が各々、独立して、ＮおよびＳから選択され、
Ｙ２およびＹ４が各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、
Ｒ２およびＲ１０が各々、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３およびＲ１１が各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２が各々、独立して、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される、抱合体。
【請求項３３】
Ｙ１およびＹ３が、Ｎである、請求項３２に記載の抱合体。
【請求項３４】
Ｒ２およびＲ１０が各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アリール、および置換されたアリールから選択される、請求項３２に記載の抱合体。
【請求項３５】
Ｒ２およびＲ１０が各々、独立して、メチル、ｔ−ブチル、およびアリールから選択される、請求項３２に記載の抱合体。
【請求項３６】
Ｙ２およびＹ４が、Ｏである、請求項３２に記載の抱合体。
【請求項３７】
Ｗ１ａおよびＷ１ｂが各々、独立して、前記薬物および前記検出可能な標識から選択され、Ｗ２が、前記ポリペプチドである、請求項３２に記載の抱合体。
【請求項３８】
抱合体を生成する方法であって、
反応混合物に、
請求項１４に記載の化合物と、
反応基を含む第２の化合物と、を混合することであって、
前記混合が、抱合体を形成するために前記化合物と前記第２の化合物の前記反応基との間の反応を促進するのに好適な反応条件下にある、混合することと、
前記抱合体を前記反応混合物から単離することと、を含む、方法。
【請求項３９】
Ｒ３が、−Ｒ９Ｗであり、Ｗが、前記薬物または前記検出可能な標識であり、前記第２の化合物が、前記ポリペプチドである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ３が、−Ｒ９Ｗであり、Ｗが、前記ポリペプチドであり、前記第２の化合物が、前記薬物または前記検出可能な標識である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記反応基が、反応性アルデヒド基または反応性ケトン基を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記反応混合物が、水を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記反応混合物が、７のｐＨを有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記反応条件が、３７℃の温度である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１に記載の抱合体と、
薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項４６】
抱合体を対象に送達する方法であって、
前記対象に有効量の請求項１に記載の抱合体を投与することを含む、方法。
【請求項４７】
対象における状態を治療する方法であって、
請求項１に記載の抱合体を含む治療有効量の薬学的組成物を、前記状態を有する前記対象に投与することを含み、前記投与が、前記対象における前記状態を治療するのに有効である、方法。
【請求項４８】
式：
【化７】
2016500058.tif 000062
の化合物を含む抱合体であって、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ３およびＲ１１が各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリル、ならびに−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ７およびＲ１２が各々、独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ９が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ１３が、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、および−Ｒ１４Ｗから選択され、
Ｒ１４が、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗが、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される、抱合体。
【請求項４９】
Ｘが、Ｎである、請求項４８に記載の抱合体。
【請求項５０】
Ｘが、ＣＨである、請求項４８に記載の抱合体。
【請求項５１】
Ｒ３およびＲ１１が各々、独立して、メチルおよびフェニルから選択される、請求項４８に記載の抱合体。
【請求項５２】
Ｒ１３が、Ｈまたは置換されたアルキルである、請求項４８に記載の抱合体。
【発明の詳細な説明】
【概要】
【０００１】
タンパク質−小分子治療用抱合体の分野は、非常に進歩し、将来さらに提供されることが見込まれるいくつかの臨床的に有益な薬物を提供する。タンパク質抱合体治療薬は、例えば、副作用があまり生じない特異性、機能の多重性、および比較的低い標的外活性により、いくつかの利点を提供し得る。タンパク質の化学修飾は、タンパク質により強力な、安定した、または多峰性を付与することによりこれらの利点を広げる可能性がある。
【０００２】
タンパク質に対する翻訳後修飾を引き起こし、操作するために、いくつかの標準的な化学転換が一般的に使用される。ある特定のアミノ酸の側鎖を選択的に修飾することができる方法がいくつかある。例えば、カルボン酸側鎖（アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩）は、水溶性カルボジイミド試薬により初期活性およびそれに続くアミンとの反応の標的とされ得る。同様に、リシンは、活性化エステルまたはイソチオシアネートの使用を通して標的とされ、システインチオールは、マレイミドおよびα−ハロ−カルボニルにより標的とされ得る。
【０００３】
化学的に変更されたタンパク質の治療薬または試薬の作製に対する大きな障害の１つは、生物学的に活性な均質形態のタンパク質の生成である。薬物または検出可能な標識のポリペプチドへの抱合は、制御が難しく、結合された薬物分子の数および化学抱合の位置が異なる抱合体の不均一な混合物をもたらす。場合によっては、ポリペプチド上の化学結合の正確かつ選択的な形成を指向するために、合成有機化学のツールを使用して、抱合の部位および／またはポリペプチドに抱合される薬物もしくは検出可能な標識を制御することが望ましい場合がある。
【発明の概要】
【０００４】
本開示は、抱合体構造およびこれらの抱合体を生成するために使用される化合物構造を提供する。本開示は、そのような抱合体の生成方法ならびにその使用方法も包含する。
【０００５】
本開示の実施形態は、式：
【化１】
2016500058.tif 000003
の少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含む抱合体を含み、式中、
Ｘは、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ、またはＣＨ２であり、
Ｙ１およびＹ２は各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、
ｎは、１または２であり、
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ４は、任意であり、そして存在する場合、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ５は、任意であり、そして存在する場合、水素またはヒドロキシルであり、
Ｒ６は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗ１およびＷ２のうちの一方は、ポリペプチドであり、もう一方は、薬物または検出可能な標識であり、
点線は、任意の結合を表し、
Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線が、２重結合である場合、ｎは、１であり、Ｒ４およびＲ５は存在せず、
ｎが２である場合、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、２重結合ではなく、Ｒ５は存在しない。
【０００６】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｙ１は、Ｎである。
【０００７】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｙ２は、Ｏである。
【０００８】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。
【０００９】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【００１０】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、２重結合であり、ｎは、１であり、Ｒ４およびＲ５は存在しない。
【００１１】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、２重結合ではなく、ｎは、１であり、Ｒ５は、ヒドロキシルである。
【００１２】
抱合体のいくつかの実施形態では、ｎは、２であり、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、２重結合ではなく、Ｒ５は存在しない。
【００１３】
抱合体のいくつかの実施形態では、ＸとＹ１との間の点線は、修飾アミノ酸残基が式：
【化２】
2016500058.tif 000004
を有するような結合である。
【００１４】
抱合体のいくつかの実施形態では、ＸとＹ１との間の点線は、修飾アミノ酸残基が式：
【化３】
2016500058.tif 000005
を有するような結合ではない。
【００１５】
抱合体のいくつかの実施形態では、検出可能な標識は、フルオロフォアを含む。
【００１６】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｗ１は、薬物または検出可能な標識であり、Ｗ２は、ポリペプチドである。
【００１７】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｗ１は、ポリペプチドであり、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識である。
【００１８】
本開示の実施形態は、式：
【化４】
2016500058.tif 000006
の化合物を含み、式中、
Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３は、ヒドロキシル、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【００１９】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。
【００２０】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【００２１】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、置換されたアリールである。
【００２２】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから各々独立して選択される１つ以上の基で置換される。
【００２３】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。
【００２４】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗである。
【００２５】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ７は、水素である。
【００２６】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ７は、ハロゲンである。
【００２７】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ７は、アルキルまたは置換されたアルキルである。
【００２８】
化合物のいくつかの実施形態では、化合物は、４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（化合物１０）、３−（２−メルカプトエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（化合物Ａ４）、３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（化合物２３０）、ペルフルオロフェニル３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノエート（化合物２４０）、またはＮ−「カーゴ（ｃａｒｇｏ）」−３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド（化合物２５０）である。
【００２９】
本開示の実施形態は、式：
【化５】
2016500058.tif 000007
の化合物を含み、式中、
Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ８は、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【００３０】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。
【００３１】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【００３２】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ７は、水素である。
【００３３】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ７は、ハロゲンである。
【００３４】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ７は、アルキルまたは置換されたアルキルである。
【００３５】
化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ８は、−Ｒ９Ｗである。
【００３６】
本開示の実施形態は、式：
【化６】
2016500058.tif 000008
の１つ以上の化合物を含む抱合体を含み、式中、
Ｘ１およびＸ２は各々、独立して、ＮおよびＣＨから選択され、
Ｙ１およびＹ３は各々、独立して、ＮおよびＳから選択され、
Ｙ２およびＹ４は各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、
Ｒ２およびＲ１０は各々、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３およびＲ１１は各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２は各々、独立して、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【００３７】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｙ１およびＹ３は、Ｎである。
【００３８】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ２およびＲ１０は、各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アリール、および置換されたアリールから選択される。
【００３９】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ２およびＲ１０は各々、独立して、メチル、ｔ−ブチル、およびアリールから選択される。
【００４０】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｙ２およびＹ４は、Ｏである。
【００４１】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｗ１ａおよびＷ１ｂは各々、独立して、薬物および検出可能な標識から選択され、Ｗ２は、ポリペプチドである。
【００４２】
本開示の実施形態は、抱合体を生成する方法を含む。本方法は、反応混合物に、請求項１４に記載の化合物と、反応基を含む第２の化合物とを混合することを含み、混合は、抱合体を形成するために、化合物と第２の化合物の反応基との間の反応を促進するのに好適な反応条件下にある。本方法は、抱合体を反応混合物から単離することも含む。
【００４３】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗであり、Ｗは、薬物または検出可能な標識であり、第２の化合物は、ポリペプチドである。
【００４４】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗであり、Ｗは、ポリペプチドであり、第２の化合物は、薬物または検出可能な標識である。
【００４５】
本方法のいくつかの実施形態では、反応基は、反応性アルデヒド基または反応性ケトン基を含む。
【００４６】
本方法のいくつかの実施形態では、反応混合物は、水を含む。
【００４７】
本方法のいくつかの実施形態では、反応混合物は、７のｐＨを有する。
【００４８】
本方法のいくつかの実施形態では、反応条件は、３７℃の温度である。
【００４９】
本開示の実施形態は、本明細書に記載される抱合体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を含む。
【００５０】
本開示の実施形態は、抱合体を対象に送達する方法を含む。本方法は、対象に有効量の本明細書に記載される抱合体を投与することを含む。
【００５１】
本開示の実施形態は、対象における状態を治療する方法を含む。本方法は、本明細書に記載される抱合体を含む治療有効量の薬学的組成物を、その状態を有する対象に投与することを含み、投与は、対象における本状態を治療するのに有効である。
【００５２】
本開示の実施形態は、式：
【化７】
2016500058.tif 000009
の化合物を含む抱合体を含み、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ３およびＲ１１は各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリル、ならびに−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ７およびＲ１２は各々、独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ１３は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、および−Ｒ１４Ｗから選択され、
Ｒ１４は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【００５３】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｘは、Ｎである。いくつかの実施形態では、Ｘは、ＣＨである。
【００５４】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ３およびＲ１１は各々、独立して、メチルおよびフェニルから選択される。
【００５５】
抱合体のいくつかの実施形態では、Ｒ１３は、Ｈまたは置換されたアルキルである。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】本開示の実施形態によるポリペプチド抱合体の概略図を示す。図１Ａは、環状カップリング部分を含むポリペプチド抱合体を生成するための反応スキームを示す。図１Ｂは、非環状カップリング部分を含むポリペプチド抱合体を生成するための反応スキームを示す。
【図２】官能化化合物の、本開示の実施形態によるアルデヒド坦持ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基を含むペプチドへの反応性を示す。図２Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １３ｍｅｒおよび化合物８０）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１、２、４、および５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図２Ｂは、官能化化合物と反応するアルデヒドタグ付き抗体の概略図である。
【図３】官能化化合物の、本開示の実施形態による２つの異なるｐＨのアルデヒド坦持ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基を含むペプチドへの反応性を示す。図３Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １３ｍｅｒおよび開始材料カップリング化合物（ＳＭ））、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（ｐＨ７．４およびｐＨ４．６で、２および２４時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図３Ｂは、ＳＭの、ペプチドを含む６ｍｅｒ  ｆＧｌｙへの２重付加を示す。図３Ｃは、官能化化合物と反応するアルデヒドタグ付き抗体の概略図である。
【図４】は、本開示の実施形態によるアルデヒドタグ付き抗体への抱合を示す。図４Ａは、化合物Ｃまたは化合物Ｄのいずれかで実行された抱合を示す概略図を示す。図４Ｂは、開始材料と生成物形成の比率が液体クロマトグラフィー多重反応監視質量分析（ＬＣ−ＭＲＭ−ＭＳ）により分析されたことを示す。化合物Ｄを使用した開始材料の消滅は、矢印によって強調される。化合物Ｃは、同じ反応条件下で抗体と顕著に反応しなかった。
【図５】検出可能標識の、本開示の実施形態による抗体への抱合を示す。図５Ａは、官能化検出可能標識を合成するための反応スキームを示す。図５Ｂは、官能化検出可能標識の抗体への抱合反応の概略図を示す。図５Ｃは、反応の結果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの画像を示す。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、標識された重鎖を軽鎖から分離するために使用された。検出可能な標識の抱合は、蛍光撮像により決定された。
【図６】抗体検出可能な標識抱合体の安定性を示す。３７℃で８日後、血漿および血清において抱合体の消滅はない。
【図７】本開示の実施形態によるアルデヒドタグ付き抗体（Ａ）の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）トレースを示す（図７、上部パネル）。アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）を、２．５％のＤＭＡを含む３７℃、ｐＨ７のＰＢＳ中のＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシンと反応させた。２４時間後、疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）により反応混合物を分析した（図７、下部パネル）。モノ抱合体（Ｂ）およびジ抱合体（Ｄ）の両方のタンパク質抱合体を観察した。
【図８Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ａ４）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（３および１５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図８Ｂは、抱合反応からの生成物Ｉ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。図８Ｃは、抱合反応からの生成物Ｉ３のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。図８Ｄは、抱合反応からの生成物１４のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図９Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｃ３）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（４および１６時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図９Ｂおよび９Ｃは、抱合反応からの生成物Ｃ４のＬＣ−ＭＳ／ＭＳの分析である。
【図１０Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｄ１）、続いて反応混合物を含む、経時的な一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１０Ｂおよび１０Ｃは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。図１０Ｄは、抱合反応からの単一付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図１１Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｇ１）、続いて反応混合物を含む、０．５、５、および１０時間での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１１Ｂは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図１２Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｈ１）、続いて反応混合物を含む、１、５．５、および１０時間での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１２Ｂは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図１３Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびジメドン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１．５、１１．５、および４８時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１３Ｂは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図１４Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびメルドラム酸）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（２および１４時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１４Ｂは、抱合反応からの単一付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図１５Ａ】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびバルビツール酸）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（２、６．５、および１０時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１５Ｂ〜１５Ｄは、抱合反応からの単一付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
【図１６】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびテトロン酸）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（２．５および１４．５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
【図１７】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１．５および１３．５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
【図１８】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび２（５Ｈ）−フラノン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１．５、６、および１０時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
【図１９】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび（フェニルスルホニル）アセトニトリル）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（０．５および１２．５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
【図２０】開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびニトロメチルフェニルスルホン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１および１３時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
【図２１】ＰｚがＣ末端アルデヒドタグ付き抗体の軽鎖と反応しないことを示すＭＳデータを示す（上部パネル）。図２１（下部パネル）は、主な生成物が抗体の重鎖への２重付加であることを示す。
【図２２】５．５時間後のチオＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシンおよびアルデヒドタグ付き抗体の反応の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）トレースを示す。
【図２３】チオＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシンと抱合したＩｇＧのＬＣ−ＭＳ分析を示す。定義
【００５７】
以下の用語は、特に記載のない限り、以下の意味を有する。任意の未定義の用語はそれらの分野において認識される意味を有する。
【００５８】
「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子、および１〜６個の炭素原子、または１〜５個、または１〜４個、または１〜３個の炭素原子等を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。本用語は、例として、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、およびネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）等の直鎖状および分枝状ヒドロカルビル基を含む。
【００５９】
用語「置換されたアルキル」は、アルキル鎖中の１個以上の炭素原子が−Ｏ−、−Ｎ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ここで、ｎは、０〜２）、−ＮＲ−（ここで、Ｒは、水素またはアルキルである）等のヘテロ原子で任意に置き換えられ、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、および−ＮＲａＲｂからなる群から選択される１〜５つの置換基を有する、本明細書において定義されるアルキル基を指し、Ｒ’およびＲ”は、同一または異なってよく、水素、任意に置換されたアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、および複素環式から選択される。
【００６０】
「アルキレン」は、直鎖状または分枝状のいずれかであり、任意に、−Ｏ−、−ＮＲ１０−、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−等から選択される１つ以上の基で中断される、好ましくは１〜６個、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する二価の脂肪族ヒドロカルビル基を指す。本用語は、例として、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）等を含む。
【００６１】
「置換されたアルキレン」は、以下の「置換された」の定義において炭素に関して記載される置換基で置き換えられる１〜３個の水素を有するアルキレン基を指す。
【００６２】
用語「アルカン」は、本明細書において定義されるように、アルキル基およびアルキレン基を指す。
【００６３】
用語「アルキルアミノアルキル」、「アルキルアミノアルケニル」、および「アルキルアミノアルキニル」は、Ｒ’が本明細書に定義されるアルキル基であり、Ｒ”が本明細書において定義されるアルキレン基、アルケニレン基、またはアルキニレン基である、基Ｒ’ＮＨＲ”−を指す。
【００６４】
用語「アルカリール」または「アラルキル」は、アルキレン、置換されたアルキレン、およびアリールが本明細書において定義される、基−アルキレン−アリールおよび−置換されたアルキレン−アリールを指す。
【００６５】
「アルコキシ」は、基−Ｏ−アルキルを指し、アルキルは、本明細書において定義される通りである。アルコキシは、例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ等を含む。用語「アルコキシ」は、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、およびアルキニルが本明細書において定義される通りである、基アルケニル−Ｏ−、シクロアルキル−Ｏ−、シクロアルケニル−Ｏ−、およびアルキニル−Ｏ−も指す。
【００６６】
用語「置換されたアルコキシ」は、置換されたアルキル、置換されたアルケニル、置換されたシクロアルキル、置換されたシクロアルケニル、および置換されたアルキニルが本明細書において定義される通りである、基置換されたアルキル−Ｏ−、置換されたアルケニル−Ｏ−、置換されたシクロアルキル−Ｏ−、置換されたシクロアルケニル−Ｏ−、および置換されたアルキニル−Ｏ−を指す。
【００６７】
用語「アルコキシアミノ」は、基−ＮＨ−アルコキシを指し、アルコキシは、本明細書において定義される。
【００６８】
用語「ハロアルコキシ」は、基アルキル−Ｏ−を指し、アルキル基上の１つ以上の水素原子は、ハロ基で置換されており、例として、トリフルオロメトキシ等の基を含む。
【００６９】
用語「ハロアルキル」は、上述の置換されたアルキル基を指し、アルキル基上の１つ以上の水素原子は、ハロ基で置換されている。そのような基の例としては、限定されないが、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロエチル等のフルオロアルキル基が挙げられる。
【００７０】
用語「アルキルアルコキシ」は、基−アルキレン−Ｏ−アルキル、アルキレン−Ｏ−置換されたアルキル、置換されたアルキレン−Ｏ−アルキル、および置換されたアルキレン−Ｏ−置換されたアルキルを指し、アルキル、置換されたアルキル、アルキレン、および置換されたアルキレンは、本明細書において定義される通りである。
【００７１】
用語「アルキルチオアルコキシ」は、基−アルキレン−Ｓ−アルキル、アルキレン−Ｓ−置換されたアルキル、置換されたアルキレン−Ｓ−アルキル、および置換されたアルキレン−Ｓ−置換されたアルキルを指し、アルキル、置換されたアルキル、アルキレン、および置換されたアルキレンは、本明細書において定義される通りである。
【００７２】
「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つ、好ましくは１〜２つの２重結合不飽和の部位を有する直鎖状または分枝状ヒドロカルビル基を指す。本用語は、例として、ビ−ビニル、アリル、およびブタ−３−エン−１−イルを含む。本用語内には、シスおよびトランス異性体またはこれらの異性体の混合物が含まれる。
【００７３】
用語「置換されたアルケニル」は、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される、１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、本明細書に定義されるアルケニル基を指す。
【００７４】
「アルキニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つ、好ましくは１〜２の３重結合不飽和の部位を有する直鎖状または分枝状の一価のヒドロカルビル基を指す。そのようなアルキニル基の例としては、アセチルエニル（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。
【００７５】
用語「置換されたアルキニル」は、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される、１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、本明細書に定義されるアルキニル基を指す。
【００７６】
「アルキニルオキシ」は、基−Ｏ−アルキニルを指し、アルキニルは、本明細書において定義される通りである。アルキニルオキシは、例として、エチニルオキシ、プロピニルオキシ等を含む。
【００７７】
「アシル」は、基Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたアルキニル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたシクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたシクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換されたアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、置換されたヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−、および置換されたヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−を指し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。例えば、アシルは、「アセチル」基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−を含む。
【００７８】
「アシルアミノ」は、基−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたアルキル、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたシクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたシクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたアルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換されたヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）複素環式、および−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換された複素環式を指し、式中、Ｒ２０は、水素またはアルキルであり、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【００７９】
「アミノカルボニル」または用語「アミノアシル」は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２を指し、式中、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式からなる群から選択され、Ｒ２１およびＲ２２は、任意に、結合される窒素と共に一緒に結合され、複素環式または置換された複素環基を形成し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【００８０】
「アミノカルボニルアミノ」は、基−ＮＲ２１Ｃ（Ｏ）ＮＲ２２Ｒ２３を指し、式中、Ｒ２１、Ｒ２２、およびＲ２３は、独立して、水素、アルキル、アリール、もしくはシクロアルキルから選択されるか、または２つのＲ基は、結合され、ヘテロシクリル基を形成する。
【００８１】
用語「アルコキシカルボニルアミノ」は、基−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲを指し、式中、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、アルキル、置換されたアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルは、本明細書において定義される通りである。
【００８２】
用語「アシルオキシ」は、基アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換されたアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換されたシクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、およびヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−を指し、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルは、本明細書において定義される通りである。
【００８３】
「アミノスルホニル」は、基−ＳＯ２ＮＲ２１Ｒ２２を指し、式中、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、置換された複素環式からなる群から選択され、Ｒ２１およびＲ２２は、任意に、結合される窒素と共に一緒に結合され、複素環式または置換された複素環基を形成し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【００８４】
「スルホニルアミノ」は、基−ＮＲ２１ＳＯ２Ｒ２２を指し、式中、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式からなる群から選択され、Ｒ２１およびＲ２２は、任意に、結合される原子と共に一緒に結合され、複素式または置換された複素環基を形成し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【００８５】
「アリール」または「Ａｒ」は、単環（フェニル基に存在する等の）、または縮合環が芳香族であっても、そうでなくてもよいが、但し、結合点が芳香環の原子を通してであることを条件とする複数の縮合環（そのような芳香環系の例としては、ナフチル、アンスリル、およびインダニルを含む）を有する環系を有する、６〜１８個の炭素原子の一価の芳香族炭素環状基を指す。本用語は、例として、フェニルおよびナフチルを含む。アリール置換基の定義に制約されない限り、そのようなアリール基は、任意に、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたシクロアルケニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、およびトリハロメチルから選択される、１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基で置換され得る。
【００８６】
「アリールオキシ」は、基−Ｏ−アリールを指し、アリールは、本明細書において定義される通りであり、例として、フェノキシ、ナフトキシ等を含み、本明細書にも定義される任意に置換されたアリール基を含む。
【００８７】
「アミノ」は、基−ＮＨ２を指す。
【００８８】
用語「置換されたアミノ」は、基−ＮＲＲを指し、式中、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルからなる群から選択されるが、但し、少なくとも１つのＲが水素ではないことを条件とする。
【００８９】
用語「アジド」は、基−Ｎ３を指す。
【００９０】
「カルボキシル」、「カルボキシ」、または「カルボキシレート」は、−ＣＯ２Ｈまたはその塩を指す。
【００９１】
「カルボキシルエステル」もしくは「カルボキシエステル」または用語「カルボキシアルキル」もしくは「カルボキシルアルキル」は、基−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたシクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環式、および−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換された複素環式を指し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【００９２】
「（カルボキシルエステル）オキシ」または「カーボネート」は、基−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたシクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたシクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換されたヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環式、および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換された複素環式を指し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【００９３】
「シアノ」または「ニトリル」は、基−ＣＮを指す。
【００９４】
「シクロアルキル」は、縮合、架橋、およびスピロ環系を含む単環式環または多環式環を有する３〜１０個の炭素原子の環状アルキル基を指す。好適なシクロアルキル基の例としては、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等が挙げられる。そのようなシクロアルキル基は、例としてシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等の単環構造、またはアダマンタニル等の多環構造が挙げられる。
【００９５】
用語「置換されたシクロアルキル」は、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される、１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有するシクロアルキル基を指す。
【００９６】
「シクロアルケニル」は、単環または多環を有し、かつ少なくとも１つの２重結合、好ましくは１〜２つの２重結合を有する３〜１０個の炭素原子の非芳香族環状アルキル基を指す。
【００９７】
用語「置換されたシクロアルケニル」は、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される、１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有するシクロアルケニル基を指す。
【００９８】
「シクロアルキニル」は、単環または多環を有し、かつ少なくとも１つの３重結合を有する５〜１０個の炭素原子の非芳香族シクロアルキル基を指す。
【００９９】
「シクロアルコキシ」は、−Ｏ−シクロアルキルを指す。
【０１００】
「シクロアルケニルオキシ」は、−Ｏ−シクロアルケニルを指す。
【０１０１】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを指す。
【０１０２】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、基−ＯＨを指す。
【０１０３】
「ヘテロアリール」は、１〜１０個の炭素原子、ならびに環内の酸素、窒素、および硫黄からなる群から選択される１〜１０個のヘテロ原子等の１〜１５個の炭素原子の芳香族基を指す。そのようなヘテロアリール基は、環系（例えば、インドリジニル、キノリニル、ベンゾフラン、ベンズイミダゾリル、またはベンゾチエニル等の基などで）内に単環（ピリジニル、イミダゾリル、またはフリル等）または複数の縮合環を有することができ、環系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、環系内の少なくとも１つの環は芳香族であるが、但し、結合点は、芳香環の原子を通してである。ある特定の実施形態では、ヘテロアリール基の窒素および／硫黄環原子（複数可）は、Ｎ−酸化物（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル、またはスルホニル部分を提供するために、任意に酸化される。本用語は、例として、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、およびフラニルを含む。ヘテロアリール置換基の定義に制約されない限り、そのようなヘテロアリール基は、任意に、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたシクロアルケニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、およびトリハロメチルから選択される、１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基で置換され得る。
【０１０４】
用語「ヘテロアラルキル」は、基−アルキレン−ヘテロアリールを指し、アルキレンおよびヘテロアリールは、本明細書において定義される。本用語は、例として、ピリジルメチル、ピリジルエチル、インドリルメチル等を含む。
【０１０５】
「ヘテロアリールオキシ」は、−Ｏ−ヘテロアリールを指す。
【０１０６】
「複素環」、「複素環式」、「ヘテロシクロアルキル」、および「ヘテロシクリル」は、縮合、架橋、およびスピロ環系を含む単環または複数の縮合環を有し、１〜１０個のヘテロ原子を含む３〜２０個の環原子を有する飽和または不飽和基を指す。これらの環原子は、窒素、硫黄、または酸素からなる群から選択され、縮合環系において、環のうちの１つ以上は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであってよいが、但し、結合点は、非芳香環を通してであることを条件とする。ある特定の実施形態では、複素環式基の窒素および／硫黄環原子（複数可）は、Ｎ−酸化物、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−部分を提供するために、任意に酸化される。
【０１０７】
複素環およびヘテロアリールの例としては、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナンスリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルフォリニルとも称される）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
複素環式置換基の定義に制約されない限り、そのような複素環式基は、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、および縮合複素環から選択される、１〜５つ、または１〜３つの置換基で任意に置換され得る。
【０１０９】
「ヘテロシクリルオキシ」は、基−Ｏ−ヘテロシクリルを指す。
【０１１０】
用語「ヘテロシクリルチオ」は、基複素環式−Ｓ−を指す。
【０１１１】
用語「ヘテロサイクレン（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｎｅ）」は、本明細書において定義されるように、複素環から形成されるジラジカル基を指す。
【０１１２】
用語「ヒドロキシアミノ」は、基−ＮＨＯＨを指す。
【０１１３】
「ニトロ」は、基−ＮＯ２を指す。
【０１１４】
「オキソ」は、原子（＝Ｏ）を指す。
【０１１５】
「スルホニル」は、基ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−置換されたアルキル、ＳＯ２−アルケニル、ＳＯ２−置換されたアルケニル、ＳＯ２−シクロアルキル、ＳＯ２−置換されたシルコアルキル（ｃｙｌｃｏアルキル）、ＳＯ２−シクロアルケニル、ＳＯ２−置換されたシルコアルケニル（ｃｙｌｃｏアルケニル）、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−置換されたアリール、ＳＯ２−ヘテロアリール、ＳＯ２−置換されたヘテロアリール、ＳＯ２−複素環式、およびＳＯ２−置換された複素環式を指し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。スルホニルは、例として、メチル−ＳＯ２−、フェニル−ＳＯ２−、および４−メチルフェニル−ＳＯ２−を含む。
【０１１６】
「スルホニルオキシ」は、基−ＯＳＯ２−アルキル、ＯＳＯ２−置換されたアルキル、ＯＳＯ２−アルケニル、ＯＳＯ２−置換されたアルケニル、ＯＳＯ２−シクロアルキル、ＯＳＯ２−置換されたシルコアルキル（ｃｙｌｃｏａｌｋｙｌ）、ＯＳＯ２−シクロアルケニル、ＯＳＯ２−置換されたシルコアルケニル（ｃｙｌｃｏａｌｋｅｎｙｌ）、ＯＳＯ２−アリール、ＯＳＯ２−置換されたアリール、ＯＳＯ２−ヘテロアリール、ＯＳＯ２−置換されたヘテロアリール、ＯＳＯ２−複素環式、およびＯＳＯ２置換された複素環式を指し、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、複素環式、および置換された複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【０１１７】
用語「アミノカルボニルオキシ」は、基−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲを指し、式中、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環式であり、アルキル、置換されたアルキル、アリール、ヘテロアリール、および複素環式は、本明細書において定義される通りである。
【０１１８】
「チオール」は、基−ＳＨを指す。
【０１１９】
「チオキソ」または用語「チオケト」は、原子（＝Ｓ）を指す。
【０１２０】
「アルキルチオ」または用語「チオアルコキシ」は、基−Ｓ−アルキルを指し、アルキルは、本明細書において定義される通りである。ある特定の実施形態では、硫黄は、−Ｓ（Ｏ）−に酸化され得る。スルホキシドは、１つ以上の立体異性体として存在し得る。
【０１２１】
用語「置換されたチオアルコキシ」は、基−Ｓ−置換されたアルキルを指す。
【０１２２】
用語「チオアリールオキシ」は、基アリール−Ｓ−を指し、アリール基は、本明細書において定義される通りであり、同様に本明細書において定義される任意に置換されたアリール基を含む。
【０１２３】
用語「チオヘテロアリールオキシ」は、基ヘテロアリール−Ｓ−を指し、式中、ヘテロアリール基は、本明細書において定義される通りであり、同様に本明細書において定義される任意に置換されたアリール基を含む。
【０１２４】
用語「チオヘテロシクロオキシ」は、基ヘテロシクリル−Ｓ−を指し、式中、ヘテロシクリル基は、本明細書において定義される通りであり、同様に本明細書において定義される任意に置換されたヘテロシクリル基を含む。
【０１２５】
本明細書における開示に加えて、用語「置換された」は、特定の基またはラジカルを修飾するために使用される場合、特定の基またはラジカルの１つ以上の水素原子が各々、互いに独立して、以下に定義されるように、同一または異なる置換基で置き換えられることも意味し得る。
【０１２６】
本明細書の個々の用語に関して開示される基に加えて、特定の基またはラジカルにおける飽和炭素原子上の１つ以上の水素と置き換わる置換基（単一炭素上の任意の２個の水素が＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２、または＝Ｓで置き換えられ得る）は、特に指定されない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＳＯ２ＯＲ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳＯ２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、式中、Ｒ６０は、任意に置換されたアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、各Ｒ７０は、独立して、水素またはＲ６０であり、各Ｒ８０は、独立して、Ｒ７０であるか、あるいは２つのＲ８０’は、それらが結合される窒素原子と共に、Ｎが−ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキル置換を有し得るＯ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１〜４個の同一または異なる追加のヘテロ原子を任意に含み得る、５、６、または７員ヘテロシクロアルキルを形成し、各Ｍ＋は、正味単一性電荷を有する対イオンである。各Ｍ＋は、独立して、例えば、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋等のアルカリイオン、＋Ｎ（Ｒ６０）４等のアンモニウムイオン、または［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５、または［Ｂａ２＋］０．５（「添字０．５は、そのような二価のアルカリ土類イオンの対イオンのうちの一方が本発明の化合物のイオン化形態であり、もう一方がクロリド等の典型的な対イオンであり得るか、または本明細書に開示される２つのイオン化化合物がそのような二価のアルカリ土類イオンの対イオンとして機能することができるか、あるいは本発明の２重イオン化化合物がそのような二価のアルカリ土類イオンの対イオンとして機能することができることを意味する）等のアルカリ土類イオンであってよい。具体的な例として、−ＮＲ８０Ｒ８０は、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピぺラジニル、４Ｎ−メチル−ピペラジン−１−イル、およびＮ−モルホリニルを含むことが意図される。
【０１２７】
本明細書における開示に加えて、「置換された」アルケン基、アルキン基、アリール基、およびヘテロアリール基における不飽和炭素原子上の水素の置換基は、特に指定されない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３−２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２−Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２−Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、式中、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０、およびＭ＋は、前に定義される通りであるが、但し、置換されたアルケンまたはアルキンの場合、置換基は、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、または−Ｓ−Ｍ＋ではないことを条件とする。
【０１２８】
本明細書の個々の用語に関して開示される基に加えて、「置換された」ヘテロアルキル基およびシクロヘテロアルキル基における窒素原子上の水素の置換基は、特に指定されない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、式中、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０、およびＭ＋は、前に定義される通りである。
【０１２９】
本明細書の開示に加えて、ある特定の実施形態では、置換される基は、１、２、３、もしくは４つの置換基、１、２、もしくは３つの置換基、１もしくは２つの置換基、または１つの置換基を有する。
【０１３０】
上記に定義される全ての置換された基において、置換基をそれら自体に対してさらなる置換基で定義することによって達せられるポリマー（例えば、置換されたアリール基でさらに置換される、置換されたアリール基でそれ自体置換される置換基として置換されたアリール基を有する置換されたアリール等）は、本明細書に含まれることが意図されないことを理解する。そのような場合において、そのような置換の最大数は３つである。例えば、本明細書において具体的に想定される置換されたアリール基の一連の置換は、置換されたアリール−（置換されたアリール）−置換されたアリールに限定される。
【０１３１】
特に記載されない限り、本明細書において明示的に定義されない置換基の命名法は、官能基の末端部分、続いて結合点に向かう隣接する官能基を命名することにより達せられる。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」は、基（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−を指す。
【０１３２】
１つ以上の置換基を含む本明細書に開示される基のいずれかに関して、勿論、そのような基が立体的に実現不可能なおよび／もしくは合成的に実行不可能であるいずれの置換または置換パターンを含まないことを理解する。加えて、対象化合物は、これらの化合物の置換から生じる全ての立体化学異性体を含む。
【０１３３】
用語「薬学的に許容される塩」は、哺乳類等の患者への投与が許容される塩（所与の投薬量レジメンに許容可能な哺乳類安全性を有する対イオンを有する塩）を意味する。そのような塩は、薬学的に許容される無機塩基または有機塩基、および薬学的に許容される無機酸または有機酸に由来し得る。「薬学的に許容される塩」は、化合物の薬学的に許容される塩を指し、その塩は、当該技術分野において周知の様々な有機および無機対イオンに由来し、単に例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム等、および分子が塩基官能基を含む場合には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩等の有機酸もしくは無機酸の塩等を含む。
【０１３４】
用語「その塩」は、酸のプロトンが金属カチオンまたは有機カチオン等のカチオンによって置き換えられる場合に形成される化合物を意味する。適用可能な場合、塩は、薬学的に許容される塩であるが、これは、患者に投与することが意図されない中間体化合物の塩には要求されない。例として、本化合物の塩は、化合物が塩のアニオン成分として無機酸または有機酸の抱合体塩基を伴う、無機酸または有機酸によってプロトン化され、カチオンを形成するものを含む。
【０１３５】
「溶媒和」は、溶媒分子の、溶質の分子またはイオンとの組合せによって形成される複合体を指す。溶媒は、有機化合物、無機化合物、またはその両方の混合物であってよい。溶媒のいくつかの例としては、メタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、および水が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒が水である場合、形成される溶媒和は、水和物である。
【０１３６】
「立体異性体（Ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒ）」および「立体異性体（ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ）」は、同じ原子結合性を有するが、空間において異なる原子配列を有する化合物を指す。立体異性体は、シス−トランス異性体、ＥおよびＺ異性体、鏡像異性体、ならびにジアステレオマーを含む。
【０１３７】
「互変異性体」は、エノール−ケトおよびイミン−エナミン互変異性体等の原子の電子結合および／もしくはプロトンの位置においてのみ異なる分子の代替形態、またはピラゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、トリアゾール、およびテトラゾール等の−Ｎ＝Ｃ（Ｈ）−ＮＨ−環原子配列を含むヘテロアリール基の互変異性形態を指す。当業者は、他の互変異性環原子配列が可能であることを認識するだろう。
【０１３８】
用語「またはその塩もしくは溶媒和もしくは立体異性体」は、対象化合物の立体異性体の薬学的に許容される塩の溶媒和等の、塩、溶媒和、および立体異性体の全ての順列を含むことが意図されることを理解するだろう。
【０１３９】
「薬学的有効量」および「治療有効量」は、特定の障害もしくは疾患、またはその症状の１つ以上を治療する、および／またはその疾患もしくは障害の発生を防止するのに有効な化合物の量を指す。腫瘍原性増殖障害に関して、薬学的または治療有効量は、特に、腫瘍を縮小させる、または腫瘍の成長速度を減少させるのに十分な量を含む。
【０１４０】
「患者」は、ヒトおよび非ヒト対象、特に哺乳類対象を指す。
【０１４１】
本明細書で使用される、用語「治療する」または「治療」は、（ａ）対象の予防的治療等の疾患または医療状態の発生を防止する、（ｂ）患者における疾患もしくは医療状態の排除または退縮をもたらす等の、疾患または医療状態を寛解させる、（ｃ）例えば、患者における疾患もしくは医療状態の発達を遅延させる、または停止させることにより、疾患または医療状態を抑制する、あるいは（ｄ）患者における疾患もしくは医療状態の症状を緩和させることを含む、哺乳類（特に、ヒト）等の患者における疾患もしくは医療状態を治療する、またはその治療を意味する。
【０１４２】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指すように本明細書において互換的に使用される。特に記載されない限り、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、遺伝的にコードされた、および非コードアミノ酸、化学的もしくは生化学的に修飾された、または誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾ペプチド骨格を有するポリぺプチドを含み得る。本用語は、異種アミノ酸配列を有する融合タンパク質、異種および相同リーダー配列を有する融合、少なくとも１つのＮ末端メチオニン残基（例えば、組換え細菌性宿主細胞における生成を容易にするため）を含むタンパク質、免疫学的にタグ付けされたタンパク質等を含むが、これらに限定されない融合タンパク質を含む。
【０１４３】
「天然アミノ酸配列」または「親アミノ酸配列」は、修飾アミノ酸残基を含むように修飾される前に、ポリペプチドのアミノ酸配列を指すように、本明細書において互換的に使用される。
【０１４４】
用語「アミノ酸類似体」、「天然ではないアミノ酸」等は、互換的に使用され得、構造および／または全体的な形状において、天然に存在するタンパク質（例えば、ＡｌａまたはＡ、ＣｙｓまたはＣ、ＡｓｐまたはＤ、ＧｌｕまたはＥ、ＰｈｅまたはＦ、ＧｌｙまたはＧ、ＨｉｓまたはＨ、ＩｌｅまたはＩ、ＬｙｓまたはＫ、ＬｅｕまたはＬ、ＭｅｔまたはＭ、ＡｓｎまたはＮ、ＰｒｏまたはＰ、ＧｌｎまたはＱ、ＡｒｇまたはＲ、ＳｅｒまたはＳ、ＴｈｒまたはＴ、ＶａｌまたはＶ、ＴｒｐまたはＷ、ＴｙｒまたはＹ）に一般的に見られる１つ以上のアミノ酸に類似するアミノ酸様化合物を含む。アミノ酸類似体は、修飾された側鎖または骨格を伴う天然のアミノ酸も含む。アミノ酸は、Ｌ形態よりもＤ形態で天然に存在するアミノ酸も含む。場合によっては、アミノ酸類似体は、１つ以上の天然のアミノ酸の骨格構造および／または側鎖構造を共有し、相違は分子における１つ以上の修飾された基である。そのような修飾は、関連原子（Ｓ等）の原子（Ｎ等）での置換、基（メチルもしくはヒドロキシル等）または原子（ＣｌもしくはＢｒ等）の付加、基の欠失、共有結合（２重結合を単結合に等）の置換、またはこれらの組み合わせを含み得るが、これらに限定されない。例えば、アミノ酸類似体は、α−ヒドロキシ酸およびα−アミノ酸等を含み得る。
【０１４５】
用語「抗体」は、広い意味において使用され、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、および多選択性抗体（例えば、２重特異性抗体）、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）等を含む。抗体は、標的抗原を結合することが可能である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、抗体の１つ以上の可変領域によって形成される相補決定領域（ＣＤＲ）により認識される、エピトープとも呼ばれる１つ以上の結合部位を有し得る。
【０１４６】
用語「天然抗体」は、抗体の重鎖および軽鎖が作製され、多細胞生物の免疫系によって対合された抗体を指す。脾臓、リンパ節、骨髄、および血清は、天然抗体を生成する組織の例である。例えば、抗原で免疫化された最初の動物から単離された細胞を生成する抗体によって生成された抗体は、天然抗体である。
【０１４７】
用語「ヒト化抗体」または「ヒト化免疫グロブリン」は、ヒト抗体からの対応して位置付けされたアミノ酸で置換された１つ以上のアミノ酸（例えば、フレームワーク領域、定常領域、またはＣＤＲの）を含む非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体を指す。一般に、ヒト化抗体は、同じ抗体の非ヒト化型と比較して、ヒト宿主において減少した免疫応答を生成する。抗体は、例えば、ＣＤＲグラフト化（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号）、張り合わせもしくは再表面化（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号、同第ＥＰ５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）、Ｒｏｇｕｓｋａ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４））、および鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む、当該技術分野において既知の様々な技術を使用してヒト化され得る。ある特定の実施形態では、フレームワーク置換は、特定の位置の珍しいフレームワーク残基を特定するための抗原結合および配列比較に重要なフレームワーク残基を特定するために、ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用をモデル化することにより特定される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）を参照）。本発明において使用するのに想定される抗体をヒト化するためのさらなる方法は、米国特許第５，７５０，０７８号、同第５，５０２，１６７号、同第５，７０５，１５４号、同第５，７７０，４０３号、同第５，６９８，４１７号、同第５，６９３，４９３号、同第５，５５８，８６４号、同第４，９３５，４９６号、および同第４，８１６，５６７号ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９８／４５３３１号および同第ＷＯ９８／４５３３２号に記載される。特定の実施形態では、対象ウサギ抗体は、米国特許公開第ＵＳ２００４００８６９７９号および同第ＵＳ２００５００３３０３１号に記載される方法によりヒト化され得る。したがって、上述の抗体は、当該技術分野において周知
である方法を使用してヒト化され得る。
【０１４８】
用語「キメラ抗体」は、軽鎖および重鎖遺伝子が典型的には遺伝子操作により異なる種に属する抗体可変および定常領域遺伝子から構築された抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変セグメントは、γ１およびγ３等のヒト定常セグメントに結合され得る。治療用キメラ抗体の例は、他の哺乳類種からのドメインが使用され得るが、マウス抗体からの可変もしくは抗原結合ドメインおよびヒト抗体からの定常もしくはエフェクタードメインから構成されるハイブリッドタンパク質である。
【０１４９】
ポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質のアミノ酸配列に関して使用される「遺伝的にコード可能」とは、転写および／または翻訳が細胞または無細胞インビトロ転写／翻訳系において生じ得る、アミノ酸配列が、アミノ酸配列をコードする核酸の転写および翻訳により生成することが可能であるアミノ酸残基から構成されることを意味する。
【０１５０】
用語「制御配列」は、特定の発現系、例えば、哺乳類細胞、細菌細胞、無細胞合成等における作動可能に連結されるコード配列の発現を容易にするＤＮＡ配列を指す。原核生物系に好適な制御配列は、例えば、プロモーター、任意にオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞系は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用し得る。
【０１５１】
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に配置される場合、「作動可能に連結」される。例えば、プレ配列または分泌リーダーに関するＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与する前タンパク質として発現される場合、ポリペプチドに関するＤＮＡに作動可能に連結される、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結される、またはリボソーム結合部位は、翻訳の開始を容易にするように位置付けられる場合、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されるＤＮＡ配列が近接し、分泌リーダーの場合、近接し、リーディングフレームにあることを意味する。連結は、ライゲーションにより、または増幅反応を通して達成される。合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーは、従来の慣用により連結配列に使用され得る。
【０１５２】
本明細書で使用される、用語「発現カセット」は、核酸内に挿入され得る（例えば、関心の構築物内へのライゲーションに適合する制限部位の使用により、または関心の構築物もしくは宿主細胞ゲノム内への相同組換えにより）核酸、通常ＤＮＡのセグメントを指す。一般に、核酸セグメントは、関心のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、カセットおよび制限部位は、転写および翻訳に関して、カセットの適切なリーディングフィレームへの挿入を容易にするように設計される。発現カセットは、宿主細胞において関心のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を容易にする要素も含み得る。これらの要素は、プロモーター、最小プロモーター、エンハンサー、応答要素、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列等を含み得るが、これらに限定されない。
【０１５３】
本明細書で使用される、用語「単離された」は、化合物が天然に存在する環境とは異なる環境にある関心の化合物を説明することが意図される。「単離された」は、関心の化合物に関して実質的に富化される、および／または関心の化合物が部分的もしくは実質的に精製される試料内の化合物を含むことが意図される。
【０１５４】
本明細書で使用される、用語「実質的に精製された」は、その天然環境から取り除かれ、天然に関連する他の成分を少なくとも６０％含まない、少なくとも７５％含まない、少なくとも８０％含まない、少なくとも８５％含まない、少なくとも９０％含まない、少なくとも９５％含まない、少なくとも９８％含まない、または９８％超含まない化合物を指す。
【０１５５】
用語「生理学的状態」は、生存細胞に適合するそれらの条件、例えば、生存細胞に適合する温度、ｐＨ、塩分等の主に水性条件を包含することが意図される。
【０１５６】
「反応パートナー」とは、反応生成物を生成するために、別の反応パートナーと特異的に反応する分子または分子部分を意味する。例示的な反応パートナーは、スルファターゼモチーフのシステインもしくはセリンおよびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を含み、これは、モチーフ内のシステインまたはセリンの代わりにホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）を含む変換されたアルデヒドタグの反応生成物を形成するように反応する。他の例示的な反応パートナーは、変換されたアルデヒドタグのｆＧｌｙ残基のアルデヒドおよび「アルデヒド反応性反応パートナー」を含み、これは、アルデヒド反応性基および関心の部分を含み、修飾されたｆＧｌｙ残基を通して修飾されたポリペプチドに抱合される関心の部分を有する修飾されたアルデヒドタグ付きポリペプチドの反応生成物を形成するように反応する。
【０１５７】
「Ｎ末端」は、非Ｎ末端アミノ酸残基のアミノ基が通常ポリペプチドの共有結合骨格の一部を形成する、遊離アミノ基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を指す。
【０１５８】
「Ｃ末端」は、非Ｃ末端アミノ酸残基のカルボキシル基が通常ポリペプチドの共有結合骨格の一部を形成する、遊離カルボキシル基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を指す。
【０１５９】
ポリペプチドまたはポリペプチドのアミノ酸配列に関して使用される、「内部部位」とは、Ｎ末端またはＣ末端ではないポリペプチドの領域を意味する。
【０１６０】
本発明をさらに説明する前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されず、そのため、勿論、変動し得ることを理解するべきである。本明細書に使用される用語は、単に特定の実施形態を説明する目的のためであり、本発明の範囲は付属の特許請求の範囲によってのみ制限されるため、制限することが意図されないことも理解するべきである。
【０１６１】
値の範囲が提供される場合、文脈において明確に指示がない限り下限値の単位の１０分の１まで、その範囲の上限値と下限値の間の各中間の値、およびその示された範囲のいずれかの他の示されたまたは中間の値は、本発明の範囲内に包含されることを理解する。これらのより狭い範囲の上限値および下限値は、より狭い範囲に独立して含まれてよく、これらも本発明の範囲内に包含され、示された範囲内でいずれかの明確に除外された境界値（ｌｉｍｉｔ）に従う。示された範囲が境界値の一方または両方を含む場合、含まれる境界値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
【０１６２】
明確化のため別個の実施形態の文脈において記載される本発明のある特定の特徴が単一の実施形態において組み合わせでも提供され得ることを理解する。逆に、簡潔化のため単一の実施形態の文脈において記載される本発明の様々な特徴が別個に、または任意の好適な下位の組み合わせでも提供され得る。本発明に関する実施形態の全ての組み合わせは、そのような組み合わせが、例えば、安定した化合物である化合物である（すなわち、生物学的活性のために作製され、単離され、特徴付けられ、試験され得る化合物）主題を包含する範囲内で各組み合わせおよび全ての組み合わせが個々にかつ明示的に開示されているかのように、本発明により具体的に含まれ、本明細書において開示される。加えて、様々な実施形態およびその要素（例えば、そのような変形を記載する実施形態において列記される化学基の要素）の全ての下位の組み合わせはまた、各そのような下位の組み合わせおよび全てのそのような下位の組み合わせが本明細書において個々にかつ明示的に開示されているかのように、本本発明により具体的に包含され、本明細書において開示される。
【０１６３】
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されている意味と同一の意味を有する。本明細書において記載されるものと類似するまたは等価な任意の方法および材料も本発明の実践または試験に使用されてよいが、好ましい方法および材料がここに記載される。本明細書に記載される全ての刊行物は、刊行物が関連するものとして引用される方法および／または材料を開示し、記載するために参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６４】
本明細書および付属の特許請求の範囲において使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈において明確に指示がない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。特許請求の範囲はいずれかの任意の要素を除外するように起案されてよいことにさらに留意されたい。そのため、この記載は特許請求の範囲の要素の記述（ｒｅｃｉｔａｔｉｏｎ）に関連した「単に（ｓｏｌｅｌｙ）」および「のみ（ｏｎｌｙ）」などの排他的な用語の使用、または「否定的な」限定の使用のための先行記述としての役割を果たすことを意図する。
【０１６５】
明確化のため別個の実施形態の文脈において記載される本発明のある特定の特徴が単一の実施形態において組み合わせでも提供され得ることを理解する。逆に、簡潔化のため単一の実施形態の文脈において記載される本発明の様々な特徴が別個に、または任意の好適な下位の組み合わせでも提供され得る。
【０１６６】
本明細書において論じられる刊行物は、単に、本出願の出願日前のそれらの開示のために提供される。本発明が先行発明を理由としてそのような刊行物に先行しないことを認めるものと解釈されるべきではない。さらに、提供された刊行物の日付は、独立して確認を必要とし得る実際の刊行日と異なっている場合がある。
【発明を実施するための形態】
【０１６７】
本開示は、抱合体（例えば、ポリペプチド抱合体）、抱合体を生成するための化合物、ならびにその作製および使用方法を提供する。各々の実施形態は、以下のセクションにおいてより詳細に記載される。
抱合体
【０１６８】
本開示は、抱合体を提供する。「抱合体」とは、第２の部分と安定して会合する第１の部分を意味する。「安定して会合する」とは、ある部分が標準的な条件下で別の部分または構造に結合されることを意味する。ある特定の実施形態では、第１および第２の部分は、１つ以上の共有結合を通して互いに結合される。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、抱合体は、ポリペプチド抱合体であり、これは、第２の部分に抱合されるポリペプチドを含む。以下により詳細に記載されるように、これらに限定されないが、ポリペプチドに抱合される部分は、検出可能な標識、薬物、水溶性ポリマー、またはポリペプチドの膜もしくは表面への不動化のための部分等の様々な部分のいずれかであってよい。関心の部分は、ポリペプチドの任意の所望の部位でポリペプチドに抱合され得る。よって、本開示は、例えば、ポリペプチドのＣ末端の、またはその付近の部位で抱合される部分を有する修飾されたポリペプチドを提供する。他の例としては、ポリペプチドのＮ末端の、またはその付近の位置で抱合される部分を有する修飾されたポリペプチドが挙げられる。例は、ポリペプチドのＣ末端とＮ末端との間の位置で抱合される部分（例えば、ポリペプチドの内部部分）を有する修飾されたポリペプチドも含む。修飾されたポリペプチドが２つ以上の部分に抱合される、上記の組み合わせも可能である。
【０１７０】
本開示の実施形態は、ポリペプチドが２つの部分、３つの部分、４つの部分、５つの部分、６つの部分、７つの部分、８つの部分、９つの部分、または１０以上の部分等の、１つ以上の部分に抱合される抱合体を含む。本部分は、ポリペプチドの１つ以上の部位でポリペプチドに抱合され得る。例えば、１つ以上の部分は、ポリペプチドの単一アミノ酸残基に抱合され得る。いくつかの場合では、１つの部分がポリペプチドのアミノ酸残基に抱合される。他の実施形態では、２つの部分は、ポリペプチドの同じアミノ酸残基に抱合され得る。他の実施形態では、第１の部分はポリペプチドの第１のアミノ酸残基に抱合され、第２の部分はポリペプチドの第２のアミノ酸残基に抱合される。例えば、ポリペプチドが第１のアミノ酸残基の第１の部分に抱合され、第２のアミノ酸残基の他の２つの部分に抱合される、上記の組み合わせも可能である。これに限定されないが、ポリペプチドが第１のアミノ酸残基の第１および第２の部分に抱合され、第２のアミノ酸残基の第３および第４の部分に抱合される等の、他の組み合わせも可能である。
【０１７１】
１つ以上の部分に抱合される１つ以上のアミノ酸残基は、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、またはこれらの組み合わせであってよい。例えば、抱合体は、ポリペプチドの天然に存在するアミノ酸残基に抱合される部分を含み得る。他の場合では、抱合体は、ポリペプチドの天然に存在しないアミノ酸残基に抱合される部分を含み得る。１つ以上の部分は、上述の単一の天然または非天然のアミノ酸残基のポリペプチドに抱合され得る。ポリペプチドにおける１つ以上の天然または非天然アミノ酸残基は、本明細書に記載される部分または複数の部分に抱合され得る。例えば、ポリペプチドにおける２つ（以上）のアミノ酸残基（例えば、天然または非天然のアミノ酸残基）は各々、ポリペプチドの複数の部分が修飾されるように、１つまたは２つの部分に抱合され得る。
【０１７２】
本明細書において１つ以上の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、ポリペプチド等）に抱合されるポリペプチドに関して記載されるが、本開示の実施形態は、ある部分（例えば、薬物または検出可能な標識）が１つ以上の他の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、ポリペプチド等）に抱合される抱合体も含む。例えば、薬物は、１つ以上の他の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、ポリペプチド等）に抱合され得るか、または他の実施形態では、検出可能な標識は、１つ以上の他の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、ポリペプチド等）に抱合され得る。よって、例えば、本開示の実施形態は、これらに限定されないが、以下を含む：ポリペプチドと薬物の抱合体、ポリペプチドと検出可能な標識の抱合体、２つ以上のポリぺプチドの抱合体、２つ以上の薬物の抱合体、２つ以上の検出可能な標識の抱合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｏｆ  ｍｏｒｅ  ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ｌａｂｅｌｓ）、薬物と検出可能な標識の抱合体、ポリペプチドと薬物と検出可能な標識の抱合体、ポリペプチドと２つ以上の薬物の抱合体、ポリペプチドと２つ以上の検出可能な標識の抱合体、薬物と２つ以上のポリぺプチドの抱合体、検出可能な標識と２つ以上のポリぺプチドの抱合体等。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドと関心の部分は、カップリング部分を通して抱合される。例えば、ポリペプチドと関心の部分は各々、カップリング部分に結合され（例えば、共有結合される）、よって、ポリペプチドと関心の部分を一緒に間接的に結合する。いくつかの場合では、カップリング部分は、ピラザリノン（ｐｙｒａｚａｌｉｎｏｎｅ）（Ｐｚ）化合物またはピラザリノン化合物の誘導体を含む。例えば、ピラザリノンカップリン部分を通してある部分をポリペプチドにカップリングするための一般スキームは、以下の一般反応スキームに示される。
【化８】
2016500058.tif 000010
【０１７４】
上の反応スキームにおいて、Ｒは、ポリペプチドに抱合される関心の部分であってよい。本明細書に記載される部分は、これらに限定されないが、検出可能な標識、薬物、水溶性ポリマー、またはポリペプチドの基質の膜もしくは表面への不動化のための部分等の様々な部分のいずれかであってよい。Ｒ’は、これらに限定されないが、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリル等の任意の所望の置換基であってよい。ポリペプチドとピラザリノンカップリング部分との間の結合は、以下により詳細に記載されるように、単結合または２重結合であってよい。以下により詳細に記載される抱合体および化合物において示されるように、他のカップリング部分も可能である。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抱合体は、式：
【化９】
2016500058.tif 000011
の少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含み、式中、
Ｘは、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ、またはＣＨ２であり、
Ｙ１およびＹ２は各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、
ｎは、１または２であり、
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ４は、任意であり、そして存在する場合、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ５は、任意であり、そして存在する場合、水素またはヒドロキシルであり、
Ｒ６は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗ１およびＷ２のうちの一方は、ポリペプチドであり、もう一方は、薬物または検出可能な標識であり、
点線は、任意の結合を表し、
Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線が、２重結合である場合、ｎは、１であり、Ｒ４およびＲ５は存在せず、
ｎが２である場合、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、２重結合ではなく、Ｒ５は存在しない。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ、またはＣＨ２である。ある特定の実施形態では、Ｘは、ＮまたはＮＨである。ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｘは、ＣＨまたはＣＨ２である。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、Ｙ１およびＹ２は各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ２は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ２は、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｙ２は、Ｓである。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｎであり、Ｙ２は、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｎであり、Ｘは、Ｎである。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、ｎは、１または２である。ある特定の実施形態では、ｎは、１である。これらの実施形態では、ポリペプチドは、単一部分に抱合され得る。例えば、Ｗ２がポリペプチドであり、Ｗ１が抱合部分であり、ｎが１である実施形態では、ポリペプチドは、１つの部分に抱合される。例えば、上述のように、Ｗ１は、薬物または検出可能な標識であってよく、よって、ポリペプチドは、ポリペプチドのアミノ酸残基の１つの薬物部分または１つの検出可能な標識に抱合され得る。ある特定の実施形態では、Ｗ１は、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、ｎは、２である。いくつかの実施形態では、抱合体は、ポリペプチドの単一アミノ酸残基の２つの部分に抱合されるポリペプチドを含み得る。例えば、Ｗ２がポリペプチドであり、Ｗ１が抱合部分であり、ｎが２である実施形態では、ポリペプチドは、単一アミノ酸残基の２つの部分に抱合される。例えば、上述のように、Ｗ１は、薬物または検出可能な標識であってよく、よって、ポリペプチドは、単一のアミノ酸残基の２つの薬物部分または２つの検出可能な標識に抱合され得る。他の実施形態では、Ｗ１は、ポリペプチドであってよく、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識であってよい。これらの実施形態では、ｎが２である場合、薬物または検出可能な標識は、２つのポリペプチドに抱合され得る。ある特定の実施形態では、Ｗ１および／またはＷ２は、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。例えば、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ１−Ｃ１０置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換されたアルキル）等のアルキルまたは置換されたアルキルであってよい。いくつかの場合では、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル等である。ある場合では、Ｒ２は、メチルまたはｔ−ブチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、アリール、または置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アリールまたは置換されたアリールである。例えば、場合によっては、Ｒ３は、フェニルまたは置換されたフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、Ｒ４が存在する。Ｒ４が存在する実施形態では、Ｒ４は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され得る。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ等のハロゲンである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｃｌである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｂｒである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、Ｉである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、アルキルアルコキシまたは置換されたアルキルアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、Ｒ５が存在する。Ｒ５が存在する実施形態では、Ｒ５は、水素またはヒドロキシルであってよい。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ５は、ヒドロキシルである。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ５の両方が存在する。例えば、いくつかの実施形態では、ｎは、１であり、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、不在である（すなわち、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の結合は単結合であり、２重結合ではない）。これらの実施形態では、Ｒ４およびＲ５の両方が存在する。例えば、Ｒ５は、ヒドロキシルであってよく、Ｒ４は、上述の通りである。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、Ｒ４は存在しない。ある特定の実施形態では、Ｒ５は存在しない。例えば、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線が２重結合である場合、Ｒ４およびＲ５は存在しない。これらの実施形態では、ｎは、１である。他の実施形態では、Ｒ４またはＲ５のうちの１つが不在であってよい。例えば、いくつかの実施形態では、ｎは、２であり、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の点線は、不在であってよい（すなわち、Ｒ４−炭素とＲ５−炭素との間の結合は単結合であり、２重結合ではない）。これらの実施形態では、Ｒ５は存在せず、Ｒ４は存在する。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、Ｒ６は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ６は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、Ｗ１およびＷ２のうちの一方は、ポリペプチドであり、もう一方は、薬物または検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗ１は、薬物または検出可能な標識であり、Ｗ２は、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗ１は、ポリペプチドであり、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識である。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、ＸとＹ１との間の点線は、修飾アミノ酸残基が式：
【化１０】
2016500058.tif 000012
を有するような結合である。
【０１９１】
これらの実施形態では、要素Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｗ１、Ｗ２、Ｘ、Ｙ１、Ｙ２、およびｎは、上述の通りである。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、ＸとＹ１との間の点線は、修飾アミノ酸残基が式：
【化１１】
2016500058.tif 000013
を有するような結合ではない。
【０１９３】
これらの実施形態では、要素Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｗ１、Ｗ２、Ｘ、Ｙ１、Ｙ２、およびｎは、上述の通りである。
【０１９４】
上述のように、抱合体のある特定の実施形態では、ｎは、２である。これらの実施形態では、抱合体は、３つの部分間に抱合を含み得る。例えば、抱合体の実施形態は、式：
【化１２】
2016500058.tif 000014
の１つ以上の化合物を有する抱合体を含み得、式中、
Ｘ１およびＸ２は各々、独立して、ＮおよびＣＨから選択され、
Ｙ１およびＹ３は各々、独立して、ＮおよびＳから選択され、
Ｙ２およびＹ４は各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択され、
Ｒ２およびＲ１０は各々、独立して、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３およびＲ１１は各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２は各々、独立して、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、Ｘ１およびＸ２は各々、独立して、ＮおよびＣＨから選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、ＣＨである。ある特定の実施形態では、Ｘ２は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｘ２は、ＣＨである。ある特定の実施形態では、Ｘ１およびＸ２は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｘ１およびＸ２は、ＣＨである。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、Ｎであり、Ｘ２は、ＣＨである。ある特定の実施形態では、Ｘ１は、ＣＨであり、Ｘ２は、Ｎである。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、Ｙ１およびＹ３は各々、独立して、ＮおよびＳから選択される。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ３は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ３は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ１およびＹ３は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ１およびＹ３は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｎであり、Ｙ３は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ１は、Ｓであり、Ｙ３は、Ｎである。
【０１９７】
ある特定の実施形態では、Ｙ２およびＹ４は各々、独立して、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される。ある特定の実施形態では、Ｙ２は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ２は、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｙ２は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ４は、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｙ４は、Ｏである。ある特定の実施形態では、Ｙ４は、Ｓである。ある特定の実施形態では、Ｙ２およびＹ４は、Ｏである。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。例えば、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ１−Ｃ１０置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換されたアルキル）等のアルキルまたは置換されたアルキルであってよい。いくつかの場合では、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル等である。ある場合では、Ｒ２は、メチルまたはｔ−ブチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、アリール、または置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【０２００】
ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。例えば、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ１−Ｃ１０置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換されたアルキル）等のアルキルまたは置換されたアルキルであってよい。いくつかの場合では、Ｒ１０は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル等である。ある場合では、Ｒ１０は、メチルまたはｔ−ブチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、メチル、ｔ−ブチル、アリール、または置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アリールまたは置換されたアリールである。例えば、場合によっては、Ｒ３は、フェニルまたは置換されたフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アリールまたは置換されたアリールである。例えば、場合によっては、Ｒ１１は、フェニルまたは置換されたフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２は各々、独立して、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗ１ａは、薬物または検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗ１ａは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗ１ｂは、薬物または検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗ１ｂは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗ２は、ポリペプチドである。例えば、Ｗ２は、ポリペプチドであってよく、Ｗ１ａおよびＷ１ｂは各々、薬物または検出可能な標識であってよい。これらの実施形態では、２つの部分は、ポリペプチドの単一アミノ酸残基に抱合され得る。例えば、Ｗ２は、ポリペプチドであってよく、Ｗ１ａおよびＷ１ｂは各々、薬物であってよい。他の場合では、Ｗ２ポリペプチドであってよく、Ｗ１ａおよびＷ１ｂは、検出可能な標識であってよい。他の場合では、Ｗ２は、ポリペプチドであってよく、Ｗ１ａおよびＷ１ｂのうちの一方は、薬物であり、もう一方は、検出可能な標識である。
【０２０５】
抱合部分の他の組み合わせが可能である。例えば、いくつかの場合では、Ｗ１ａは、ポリペプチドであってよく、Ｗ１ｂは、薬物または検出可能な標識であってよく、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識であってよい。他の場合では、Ｗ１ａは、薬物または検出可能な標識であってよく、Ｗ１ｂは、ポリペプチドであってよく、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識であってよい。他の場合では、Ｗ１ａは、ポリペプチドであってよく、Ｗ１ｂは、ポリペプチドであってよく、Ｗ２は、薬物または検出可能な標識であってよい。他の場合では、Ｗ１ａは、ポリペプチドであってよく、Ｗ１ｂは、薬物または検出可能な標識であってよく、Ｗ２は、ポリペプチドであってよい。他の場合では、Ｗ１ａは、薬物または検出可能な標識であってよく、Ｗ１ｂは、ポリペプチドであってよく、Ｗ２は、ポリペプチドであってよい。他の場合では、Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２は各々、ポリペプチドである。他の場合では、Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２は各々、独立して、薬物および検出可能な標識から選択される。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、Ｗ１ａ、Ｗ１ｂ、およびＷ２のうちの１つ以上は、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。
抱合体を生成するのに有用な化合物
【０２０７】
本開示は、本明細書に記載される抱合体を生成するのに有用な化合物を提供する。ある特定の実施形態では、本化合物は、ポリペプチドおよび第２の部分の抱合に有用なカップリング部分であってよい。例えば、本化合物は、ポリペプチドに結合され、また第２の部分にも結合されてよく、よって、ポリペプチドと第２の部分を一緒に間接的に結合する。
【０２０８】
ある特定の場合では、化合物は、ピラザリノンまたはピラザリノン誘導体であってよい。本化合物の実施形態は、式：
【化１３】
2016500058.tif 000015
の化合物を含み、式中、
Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ３は、ヒドロキシル、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。例えば、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ１−Ｃ１０置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換されたアルキル）等のアルキルまたは置換されたアルキルであってよい。いくつかの場合では、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル等である。ある場合では、Ｒ２は、メチルまたはｔ−ブチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、アリール、または置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ｎ−プロピルまたは置換されたｎ−プロピルである。例えば、Ｒ２は、これらに限定されないが、ヒドロキシル、アミノ、ハロ、シアノ等の１つ以上の基で置換されたｎ−プロピルまたはｎ−プロピルであってよい。場合によっては、Ｒ２は、シアノ基で置換されたｎ−プロピルであってよい。場合によっては、Ｒ２は、２つのシアノ基で置換されたｎ−プロピルであってよい。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヒドロキシル、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヒドロキシルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アリールまたは置換されたアリールである。例えば、場合によっては、Ｒ３は、フェニルまたは置換されたフェニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物である。ある特定の実施形態では、Ｗは、検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。Ｒ９は、以下により詳細に記載される。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、化合物の第２の部分へのカップリングを容易にするために１つ以上の基で置換される。例えば、Ｒ３は、１つ以上の反応基で置換され得る。いくつかの場合では、反応基（複数可）は、化合物の第２の部分へのカップリングを容易にするために、第２の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチド）上の対応する反応パートナーと反応するように構成され得る。例えば、ある特定の実施形態では、Ｒ３は、各々が独立してアルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミノアシル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される１つ以上の基で置換される。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｃｌである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｂｒである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｉである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルアルコキシまたは置換されたアルキルアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２１６】
場合によっては、Ｒ２は、置換されたＣ１−６アルキルまたは置換されたＣ１−３アルキル等の置換されたアルキルであってよい。場合によっては、Ｒ２は、置換されたエチル基である。置換されたアルキル基は、本明細書に定義される置換基のいずれかによって置換され得る。例えば、置換されたアルキル基は、チオール基またはアシルアミノ基によって置換され得る。
【０２１７】
場合によっては、化合物は、上述の式の化合物であってよく、式中、Ｒ２は、チオール基によって置換される置換されたエチル基であり、Ｒ３は、アルキル基（Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−３アルキル等）であり、Ｒ７は、水素である。これらの実施形態では、化合物は、３−（２−メルカプトエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（化合物Ａ４）であってよい。
【０２１８】
場合によっては、Ｒ３は、置換されたＣ１−６アルキルまたは置換されたＣ１−３アルキル等の置換されたアルキルであってよい。場合によっては、Ｒ３は、置換されたメチルまたは置換されたエチル基である。置換されたアルキル基は、本明細書に定義される置換基のいずれかによって置換され得る。例えば、Ｒ３は、置換されたメチル基であってよい。場合によっては、メチル基は、カルボキシルまたはアミノアシルで置換される。場合によっては、メチル基は、アミノアシル基で置換される。加えて、本明細書に記載されるように、本開示の化合物は、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドに抱合され得る。例えば、上記の式に記載されるように、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗであってよく、式中、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチド（例えば、「カーゴ」）である。場合によっては、「カーゴ」は、アミド結合を通して本明細書に記載される化合物に抱合され得る。例えば、「カーゴ」を、アミド結合を通して化合物に抱合し、以下の式：
【化１４】
2016500058.tif 000016
の化合物を得ることができる。
【０２１９】
場合によっては、Ｒ３が、置換されたアルキル基である場合、置換されたアルキル基は、リンカー部分によって置換され得る。リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。さらに、リンカー基の最後のエチレンオキシド基は、例えば、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、ヒドロキシル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、または置換されたヘテロシクリル等の、本明細書に定義される１つ以上の官能基によってさらに置換され得る。場合によっては、リンカー基の最後のエチレンオキシド基は、ペルフルオロフェニル保護されたカルボキシル基等の、カルボキシル基または保護されたカルボキシル基によってさらに置換され得る。
【０２２０】
例えば、上記の式の特定の化合物は、３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（化合物２３０）およびペルフルオロフェニル３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノエート（化合物２４０）を含むが、これらに限定されない。
【０２２１】
加えて、本明細書に記載されるように、本開示の化合物は、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドに抱合され得る。例えば、上記の式に記載されるように、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗであってよく、式中、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチド（例えば、「カーゴ」）である。場合によっては、「カーゴ」は、アミド結合を通して本明細書に記載される化合物に抱合され得る。例えば、「カーゴ」は、アミド結合の形成を通して、本明細書に記載される化合物２４０に抱合され得、Ｎ−「カーゴ」−３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド（化合物２５０）をもたらす。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、化合物は、ピラザリノン誘導体であってよい。本化合物の実施形態は、式：
【化１５】
2016500058.tif 000017
の化合物を含み、式中、
Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ１０は、アルキル、置換されたアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。例えば、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ１−Ｃ１０置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換されたアルキル）等のアルキルまたは置換されたアルキルであってよい。いくつかの場合では、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル等である。ある場合では、Ｒ２は、メチルまたはｔ−ブチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、アリール、または置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｃｌである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｂｒである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｉである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルアルコキシまたは置換されたアルキルアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルキル、置換されたアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、ヒドロキシルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アミドまたは置換されたアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、Ｒ１０は、−Ｒ９Ｗである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物である。ある特定の実施形態では、Ｗは、検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。Ｒ９は、以下により詳細に記載される。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２２９】
上記の式の化合物の例としては、Ｒ２がメチルであり、Ｒ７が水素であり、Ｒ１０がヒドロキシルである化合物が挙げられる。例えば、化合物は、４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（化合物１０）であってよい。
【０２３０】
上記の式の化合物の別の例としては、Ｒ１０が、アミノまたは置換されたアミノである化合物を含む。それらの実施形態では、化合物は、式：
【化１６】
2016500058.tif 000018
の化合物等のピラザリノン誘導体であってよく、式中、
Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ８は、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、アルキル、置換されたアルキル、アリール、または置換されたアリールである。例えば、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ１−Ｃ１０置換されたアルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換されたアルキル）等のアルキルまたは置換されたアルキルであってよい。いくつかの場合では、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル等である。ある場合では、Ｒ２は、メチルまたはｔ−ブチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、アリール、または置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、メチル、ｔ−ブチル、またはアリールである。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｃｌである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｂｒである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｉである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルアルコキシまたは置換されたアルキルアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、および−Ｒ９Ｗから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アミドまたは置換されたアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ８は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、Ｒ８は、−Ｒ９Ｗである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物である。ある特定の実施形態では、Ｗは、検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。Ｒ９は、以下により詳細に記載される。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
さらなる化合物
【０２３７】
ある特定の場合では、化合物は、ビス−ピラザリノンまたはビス−ピラザリノン誘導体であってよい。本化合物の実施形態は、式：
【化１７】
2016500058.tif 000019
の化合物を含み、式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり、
Ｒ３およびＲ１１は各々、独立して、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリル、ならびに−Ｒ９Ｗから選択され、
Ｒ７およびＲ１２は各々、独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択され、
Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｒ１３は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、および−Ｒ１４Ｗから選択され、
Ｒ１４は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択され、
Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、Ｘは、ＮまたはＣＨである。ある特定の実施形態では、Ｘは、Ｎである。ある特定の実施形態では、Ｘは、ＣＨである。
【０２３９】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリル、ならびに−Ｒ９Ｗから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルまたは置換されたアルキルである。例えば、Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルを含むＣ１−６アルキル等のアルキルであってよい。場合によっては、Ｒ３は、メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、またはアシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、アリールまたは置換されたアリールである。例えば、Ｒ３は、フェニル等のアリールであってよい。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ３は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、−Ｒ９Ｗである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物である。ある特定の実施形態では、Ｗは、検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。Ｒ９は、以下により詳細に記載される。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、Ｒ３は、化合物の第２の部分へのカップリングを容易にするために１つ以上の基で置換される。例えば、Ｒ３は、１つ以上の反応基で置換され得る。いくつかの場合では、反応基（複数可）は、化合物の第２の部分へのカップリングを容易にするために、第２の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチド）上の対応する反応パートナーと反応するように構成され得る。例えば、ある特定の実施形態では、Ｒ３は、各々が独立してアルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される１つ以上の基で置換される。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリル、ならびに−Ｒ９Ｗから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキルまたは置換されたアルキルである。例えば、Ｒ１１は、Ｃ１−３アルキルを含むＣ１−６アルキル等のアルキルであってよい。場合によっては、Ｒ１１は、メチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、またはアシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、アリールまたは置換されたアリールである。例えば、Ｒ１１は、フェニル等のアリールであってよい。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２４３】
ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、−Ｒ９Ｗである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物である。ある特定の実施形態では、Ｗは、検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。Ｒ９は、以下により詳細に記載される。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、化合物の第２の部分へのカップリングを容易にするために１つ以上の基で置換される。例えば、Ｒ１１は、１つ以上の反応基で置換され得る。いくつかの場合では、反応基（複数可）は、化合物の第２の部分へのカップリングを容易にするために、第２の部分（例えば、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチド）上の対応する反応パートナーと反応するように構成され得る。例えば、ある特定の実施形態では、Ｒ１１は、各々が独立してアルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アミド、置換されたアミド、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される１つ以上の基で置換される。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）である。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｃｌである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｂｒである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、Ｉである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アルキルアルコキシまたは置換されたアルキルアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ７は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルキルアルコキシ、置換されたアルキルアルコキシ、アシル、カルボキシル、およびカルボキシルエステルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）である。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、Ｆである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃｌである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、Ｂｒである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、Ｉである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、シアノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、アルキルアルコキシまたは置換されたアルキルアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ１２は、アシル、カルボキシル、またはカルボキシルエステルである。
【０２４７】
ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ９は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２４８】
ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、および−Ｒ１４Ｗから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、水素である。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アシル、カルボキシル、カルボキシルエステル、またはアシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。
【０２４９】
ある特定の実施形態では、Ｒ１３は、−Ｒ１４Ｗである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、およびポリペプチドから選択される。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物である。ある特定の実施形態では、Ｗは、検出可能な標識である。ある特定の実施形態では、Ｗは、ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｗは、薬物、検出可能な標識、またはポリペプチドが化合物に抱合されるリンカー部分を含み得る。例えば、リンカー部分は、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシド等の１つ以上のモノマー単位を含み得る。そのような単位の数は変動し得、そのような単位の数は、２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４であり、例えばいくつかの実施形態は２単位を含む。Ｒ１４は、以下により詳細に記載される。
【０２５０】
ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アミノ、置換されたアミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換されたアルキルアミド、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロシクリル、および置換されたヘテロシクリルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アルキルまたは置換されたアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アルケニルまたは置換されたアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アルキニルまたは置換されたアルキニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アルコキシまたは置換されたアルコキシである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アミノまたは置換されたアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、カルボキシル、カルボキシルエステル、またはアシルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アルキルアミドまたは置換されたアルキルアミドである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、アリールまたは置換されたアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、ヘテロアリールまたは置換されたヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、シクロアルキルまたは置換されたシクロアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１４は、ヘテロシクリルまたは置換されたヘテロシクリルである。
【０２５１】
ある特定の実施形態では、ＸがＣＨである場合、Ｒ１３は、Ｈである。ある特定の実施形態では、ＸがＣＨである場合、Ｒ１３は、アルキルまたは置換されたアルキルである。例えば、Ｒ１３は、Ｃ１−８アルキルもしくはＣ１−８置換されたアルキル、またはＣ１−６アルキルもしくはＣ１−６置換されたアルキル、またはＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４置換されたアルキル等のＣ１−１０アルキルまたはＣ１−１０置換されたアルキルであってよい。例えば、いくつかの場合では、置換されたアルキルは、アシルアミノ基またはアミノアシル基で置換され得る。
標的ポリペプチド
【０２５２】
多種多様なポリペプチドのいずれかが上述の第２の部分に抱合されるように修飾され得る。修飾に好適なポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列、天然に存在するポリペプチドの断片、ならびに天然に生じないポリペプチドおよびその断片を有する両方のタンパク質を含む。
【０２５３】
以下は、本明細書に記載されるポリペプチド抱合体を生成するために本明細書に記載される化合物および方法を使用する修飾に関心のものであるポリペプチドのクラスおよび種類の例である。
治療用ポリペプチド
【０２５４】
ある特定の実施形態では、抱合体を生成する方法は、ある部分への結合が、例えば、血清半減期の増加、有害免疫応答の減少、追加もしくは代替の生物学的活性または機能性等のうちの１つ以上、あるいは他の利益、または有害な副作用の減少を提供することができるそれらのポリペプチド等、治療用の利益を提供し得るポリペプチドの修飾に適用される。治療用ポリペプチドがワクチンの抗原である場合、修飾は、ポリペプチドの免疫原性を強化するために提供され得る。
【０２５５】
治療用タンパク質のクラスの例としては、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、ホルモン、抗体、および抗原であるものが挙げられる。さらなる例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：エリトロポイエチン（ＥＰＯ、例えば、天然ＥＰＯもしくは合成ＥＰＯ（例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１９１２９１号を参照）、これらに限定されないが、例えば、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、ＥＰＲＥＸ（登録商標）、またはＥＰＯＧＥＮ（登録商標）（エポエチン−α）、ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標）（ダルベポエチン−α）、ＮＥＯＲＥＣＯＲＭＯＮ（登録商標）、ＥＰＯＧＩＮ（登録商標）（エポエチン−β）等）；成長ホルモン（例えば、成長ホルモン、例えば、ＧＥＮＯＴＲＯＰＩＮ（登録商標）、ＮＵＴＲＯＰＩＮ（登録商標）、ＮＯＲＤＩＴＲＯＰＩＮ（登録商標）、ＳＡＩＺＥＮ（登録商標）、ＳＥＲＯＳＴＩＭ（登録商標）、ＨＵＭＡＴＲＯＰＥ（登録商標）等）；ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）；ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）；インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ω、ＩＦＮ−τ、コンセンサスインターフェロン等）；インスリン（例えば、ノボリン、ヒューマリン、ヒューマログ、ランタス、ウルトラレンテ等）、インスリン様増殖因子（例えば、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）；血液因子（例えば、第Ｘ因子、組織プラスミノゲン活性化因子（ＴＰＡ）等、これらに限定されないが、例えば、ＡＣＴＩＶＡＳＥ（登録商標）（アルテプラーゼ）組織プラスミノゲン活性化因子、ＮＯＶＯＳＥＶＥＮ（登録商標）（組換えヒトＶＩＩａ因子）、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子（例えば、ＫＯＧＥＮＡＴＥ（登録商標））、第ＩＸ因子、β−グロビン、ヘモグロビン等）；コロニー刺激因子（例えば、顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ、例えば、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標）（フィルグラスチム））、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（ペグフィルグラスチム）、顆粒球−単核細胞コロニー刺激因子、巨核細胞コロニー刺激因子等）、トランスフォーミング成長因子（例えば、ＴＧＦ−β，ＴＧＦ−α）；インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２（例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））、ＩＬ−３、ＩＬ−４、
ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１２等）；成長因子（例えば、表皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ、例えば、ＲＥＧＲＡＮＥＸ（登録商標）（ベクラペルミン））、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ、例えば、ＦＩＢＬＡＳＴ（登録商標）（トラフェルミン）等のａＦＧＦ、ｂＦＧＦ）、グリア細胞系由来成長因子（ＧＤＮＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、幹細胞因子（例えば、ＳＴＥＭＧＥＮ（登録商標）（アンセスチム））、ケラチノサイト成長因子、肝細胞増殖因子等）；可溶性受容体（例えば、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト）、可溶性ＶＥＧＦ受容体、可溶性インターロイキン受容体、可溶性γ／δ  Ｔ細胞受容体等のＴＮＦ−α−結合可溶性受容体）；酵素（例えば、α−グルコシダーゼ、ＣＥＲＡＺＹＭＥ（登録商標）（イミグルセラーゼ（ｉｍｉｇｌｕｃａｒａｓｅ）、β−グルコセレブロシダーゼ、ＣＥＲＥＤＡＳＥ（登録商標）（アルグルセラーゼ（ａｌｇｌｕｃｅｒａｓｅ））；酵素活性剤（例えば、組織プラスミノゲン活性化因子）；ケモカイン（例えば、ＩＰ−１０、Ｍｉｇ、Ｇｒｏα／ＩＬ−８、発現され、分泌される、調節された正常Ｔ細胞（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ａｎｄ  ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）（ＲＡＮＴＥＳ）、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＰＦ−４等）、脈管由来物質（例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；抗血管由来物質（例えば、可溶性ＶＥＧＦ受容体）；タンパク質ワクチン；ブラジキニン、コレシストキニン、ガスティン（ｇａｓｔｉｎ）、セクレチン、オキシトシン、ゴナドトロピン放出ホルモン、β−エンドルフィン、エンケファリン、サブスタンスＰ、ソマトスタチン、ガラニン、成長ホルモン放出ホルモン、ボンベシン、ワルファリン、ダイノルフィン、ニューロテンシン、モチリン、サイロトロピン、ニューロペプチドＹ、黄体形成ホルモン、カルシトニン、インスリン、グル力ゴン、バゾプレッシン、アンギオテンシンＩＩ、サイロトロピン放出ホルモン、血管作動性小腸ペプチド、睡眠ペプチド等の神経活性ペプチド；血栓溶解薬、心房性ナトリウム利尿ペプチド、骨形成タンパク質、トロンボポチエン、レラキシン、グリア原線維酸性タンパク質、卵胞刺激ホルモン、ヒトα−１抗トリプシン、白血病阻害因子、ト
ランスフォーミング増殖因子、組織因子、インスリン様増殖因子、黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、マクロファージ活性化因子、腫瘍壊死因子、好中球走化性因子、神経成長因子、メタロプロテイナーゼの組織阻害物質等の他のタンパク質；血管活性腸管ペプチド、アンジオゲニン、アンジオトロピン、線維素；ヒルジン；白血病阻害因子；ＩＬ−１受容体拮抗物質（例えば、Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（アナキンラ））等。上記の治療用タンパク質の天然形態も本開示の標的ポリペプチドとして関心のものであることが容易に理解されるだろう。
【０２５６】
さらなる例としては、抗体、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗原結合断片（例えば、Ｆ（ａｂ）´、Ｆａｂ、Ｆｖ）、単鎖抗体等（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ）；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）；ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）；ＨＵＭＩＲＡ（商標）（アダリムマブ）；ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）（オマリズマブ）；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）（トシツモマブ）；ＲＡＰＴＩＶＡ（商標）（エファリズマブ）；ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）（セツキシマブ）等）が挙げられる。場合によっては、抗体は、腫瘍抗原、免疫細胞抗原（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８等）、微生物の抗原、特に病原微生物（例えば、細菌性、ウイルス性、真菌性、または寄生虫性抗原）に特異的に結合する抗体を含む。
【０２５７】
場合によっては、本明細書に記載される方法、抱合体、および化合物は、治療用タンパク質の高グリコシル化形態に見られるようなグリコシル化の天然または操作された部位の部分（例えば、水溶性ポリマー）を提供するために適用され得る。
【０２５８】
修飾された標的ポリペプチドの生物学的活性は、当該技術分野において既知の方法によりアッセイされ得る。対応する親タンパク質の少なくとも１つの所望の薬理学的活性を保持する修飾されたポリペプチドが関心のものである。
免疫原性組成物
【０２５９】
本明細書に開示される方法、抱合体、および化合物は、免疫原性組成物（例えば、治療用ワクチン）の成分の生成における用途も見出す。例えば、本化合物は、ポリペプチド抗原の血清半減期を増加させる部分の結合を容易にするように使用することができ、これは、ポリペプチドの免疫原性を増加させるか、または非アミノ酸抗原をポリペプチド担体に連結する。この点において、本化合物は、対象における免疫応答を顕在化するための対象への投与に関心のものである、微生物抗原（例えば、細菌由来の、ウイルス性、真菌性、または寄生虫性抗原）、腫瘍抗原、および他の抗原の修飾を容易にするように使用され得る。研究ツールとして有用であり得る抗体の顕在化に有用である抗原の修飾も関心のものである。
【０２６０】
本明細書に開示される化合物を使用する修飾に関する関心のポリペプチドのさらなる例としては、アッセイにおいて検出または機能性監視に関心があるもの（例えば、研究ツール、薬物スクリーニングアッセイ等）が挙げられる。この種類のポリペプチドの例としては、受容体（例えば、Ｇタンパク質結合受容体（ＧＰＣＲ、オーファンＧＰＣＲを含む））、受容体リガンド（自然に存在する、および合成を含む）、タンパク質チャネル（例えば、イオンチャネル（例えば、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、ナトリウムチャネル等）、および他のポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、例えば、ポリペプチドが膜に存在する一方で、そのような修飾が達成される場合、膜貫通型ポリペプチド）等の細胞表面関連ポリペプチドの修飾が関心のものである。生理学的条件下のポリペプチドを修飾する方法は、以下にさらに記載される。
ポリペプチドの生成方法
【０２６１】
一般に、本明細書に記載されるポリペプチドは、発現の目的により、従来の方法により、原核生物または真核生物において発現され得る。よって、本発明は、ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞、例えば、遺伝的に修飾された宿主細胞をさらに提供する。
【０２６２】
本明細書に記載される抱合体を形成するのに好適な未抱合または修飾されたポリペプチドを生成するための宿主細胞（大規模な生成を含む）は、様々な利用可能な宿主細胞のいずれかから選択され得る。宿主細胞の例としては、細菌（例えば、大腸菌株（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、バシラス亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）（例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））等）、酵母、または真菌（例えば、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａ）、ピキア亜種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．）等）等の原核または真核単細胞生物のものが挙げられ、他のそのような宿主細胞が使用され得る。昆虫、哺乳類を含む脊椎動物（例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ等）等の高等生物に元は由来する宿主細胞の例は、発現宿主細胞として使用することができる。
【０２６３】
好適な哺乳類細胞系は、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）Ｎｏ．ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣＮｏｓ．ＣＲＬ９６１８およびＣＲＬ９０９６）、ＣＨＯ  ＤＧ４４細胞（Ｕｒｌａｕｂ（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：４０５）、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＣＬＩ．３）、ヒト胚性腎（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞等を含むが、これらに限定されない。
【０２６４】
関心の特定の発現系は、細菌性、酵母、昆虫細胞、および哺乳類類細胞由来発現系を含む。
【０２６５】
発現されたポリペプチドは、当該技術分野において既知の任意の適切な手段により回収され得る。さらに、任意の従来のタンパク質精製手順が採用され得、好適なタンパク質精製方法は、Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｄｅｕｔｈｓｅｒ  ｅｄ．）（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０）に記載される。例えば、可溶化物は、所望のポリペプチドを発現する発現ベクターを含む細胞から調製され、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、親和性クロマトグラフィー等を使用して精製され得る。
ポリペプチドの修飾方法
【０２６６】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、最初にポリペプチドを修飾することなく関心の部分に抱合され得る。例えば、ポリペプチドは、関心の部分（例えば、本明細書に記載されるピラザリノンまたはピラザリノン誘導体等のカップリング部分を含む部分）への抱合に好適な１つ以上の反応基を含み得る。他の実施形態では、ポリペプチドは、関心の部分への抱合前に修飾され得る。ポリペプチドの修飾は、関心の部分への抱合に好適な１つ以上の反応基を含む修飾されたポリペプチドを生成し得る。
【０２６７】
いくつかの場合では、ポリペプチドは、関心の部分（例えば、本明細書に記載されるピラザリノンまたはピラザリノン誘導体等のカップリング部分を含む部分）への抱合に好適な１つ以上の反応基を提供するために、１つ以上のアミノ酸残基で修飾され得る。例えば、ポリペプチド内に導入されたカルボニルは、アミノオキシおよびヒドラジド坦持化合物等のα−求核剤と選択的に反応し得る。強化された動態、部位選択性、および抱合安定性を有するタンパク質上のカルボニル官能基に選択的な化学的性質は、改善された生物抱合体（ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）をもたらし、本明細書に開示される新しい生成物および治療標的へのアクセスを提供し得る。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、アルデヒドタグを含むように修飾され得る。「アルデヒドタグ」または「ａｌｄ−タグ」とは、２−ホルミルグリシン残基（本明細書において「ｆＧｌｙ」と称される）を含むようにホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用により変換されることが可能である、または変換されたスルファターゼモチーフに由来するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を意味する。ＦＧＥによって生成されたｆＧｌｙ残基は、文献において「ホルミルグリシン」と称されることが多い。つまり、用語「アルデヒドタグ」は、本明細書において、「未変換」スルファターゼモチーフ（すなわち、配列：Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲを有するスルファターゼモチーフ等の、システインまたはセリン残基がＦＧＥによってｆＧｌｙに変換されていないが、変換されることが可能であるスルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列、ならびに「変換された」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリン残基がＦＧＥの作用によってｆＧｌｙに変換されたスルファターゼモチーフ、例えば、Ｌ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ）を含むアミノ酸配列を指すように使用される。スルファターゼモチーフ上のホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用の文脈において使用される「変換」とは、スルファターゼモチーフにおけるシステインまたはセリン残基のホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基への（例えば、ＣｙｓからｆＧｌｙへ、またはＳｅｒからｆＧｌｙへの）生化学的修飾を指す。部位特異的タンパク質修飾におけるアルデヒドタグのさらなる態様およびその使用は、米国特許第Ｕ．Ｓ．７，９８５，７８３号に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２６９】
ｆＧｌｙを含むためのポリペプチドの変換は、細胞に基づく（インビボ）または無細胞方法（インビトロ）により達成され得る。同様に、抱合に好適なポリペプチドを生成するためのポリペプチドの修飾（例えば、抱合に好適な反応基を含むポリペプチドを生成するための修飾）は、細胞に基づく（インビボ）または無細胞方法（インビトロ）によって達成され得る。
【０２７０】
あるいは、単離された未修飾のポリペプチドは、好適な酵素を欠く宿主細胞における組換え生成後、または合成生成により単離され得る。次いで、単離されたポリペプチドを、ｆＧｌｙを含むようにポリペプチドの所望の修飾を提供する条件下で、好適な酵素と接触させることができる。当該技術分野において既知の方法（例えば、熱の使用、ｐＨの調節、カオトロピック剤（例えば、尿素等）、有機溶媒（例えば、炭化水素：オクタン、ベンゼン、クロロホルム）等）によりポリペプチドをほどき、変性タンパク質を好適な酵素と接触させることができる。次いで、好適な条件下で修飾されたポリペプチドを再度折り畳むことができる。
【０２７１】
いくつかの場合では、ｆＧｌｙ残基を含む修飾されたポリペプチドは、ｆＧｌｙを、本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載されるピラザリノンまたはピラザリノン誘導体等のカップリング部分を含む化合物）と反応させることにより、関心の部分に抱合され得る。例えば、ｆＧｌｙ含有ポリペプチドを、生成源（例えば、組換え宿主細胞生成物、合成生成物）から単離し、薬物または他の部分のポリペプチドへの抱合を提供するのに好適な条件下で、反応パートナー含有薬物または他の部分（例えば、検出可能な標識）と接触させることができる。例えば、反応パートナー含有薬物または他の部分は、反応部分（例えば、本明細書に記載されるピラザリノンまたはピラザリノン誘導体）を含み得る。ピラザリノン含有薬物または他の部分をポリペプチドと反応させ、本明細書に記載されるポリペプチド抱合体を生成することができる。例えば、図１は、本発明の実施形態によるポリペプチド抱合体の概略図を示す。図１Ａは、環状カップリング部分を含むポリペプチド抱合体を生成するための反応スキームを示す。図１Ａにおいて、ｆＧｌｙを含むポリペプチドを環状カップリング部分（例えば、ピラザリノンまたはピラザリノン誘導体）と反応させ、環状カップリング部分を含むポリペプチド抱合体を生成する。図１Ｂは、非環状カップリング部分を含むポリペプチド抱合体を生成するための反応スキームを示す。図１Ｂにおいて、ｆＧｌｙを含むポリペプチドを非環状カップリング部分と反応させ、非環状カップリング部分を含むポリペプチド抱合体を生成する。
【０２７２】
いくつかの場合では、ｆＧｌｙ残基を含む修飾されたポリペプチドは、ｆＧｌｙを、これらに限定されないが、以下の化合物：
【化１８】
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（４−ヒドロキシ−６−メチル−２Ｈ−ピラン−２−オン）のうちの１つ等の化合物と反応させることにより関心の部分に抱合され得る。
ポリペプチド抱合体
【０２７３】
ポリペプチドは、多種多様な部分の結合を提供するために抱合を受けることができる。関心の部分の例としては、薬物、検出可能な標識、小分子、水溶性ポリマー、ペプチド等（本明細書において「ペイロード」または「カーゴ」とも称される）を含むが、これらに限定されない。よって、本開示は、上述のポリペプチド抱合体を提供する。
【０２７４】
関心の部分は、ポリペプチドの残基との反応のための反応パートナーの成分として提供される。ある特定の実施形態では、ポリペプチドの抱合方法は、ポリペプチドに好適な反応条件に適合する。例えば、反応条件は、水を含む反応混合物を含み得る。いくつかの場合では、反応混合物は、４〜１１のｐＨ、または５〜１０のｐＨ、または６〜９のｐＨ、または６〜８のｐＨ等のポリペプチドに適合するｐＨを有し得る。ある特定の場合では、反応混合物は、７のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、反応条件は、ポリペプチドに適合する温度で実施される。例えば、反応条件は、２５℃〜４０℃、または３０℃〜４０℃、または３５℃〜４０℃等の２０℃〜４５℃の温度であってよい。いくつかの場合では、反応条件は、室温（例えば、２５℃）である。場合によっては、反応条件は、３７℃の温度である。
【０２７５】
本開示に提供されるように、当業者は、本明細書に想定されるポリペプチドへの抱合のための反応パートナーを提供するために、様々な部分のいずれかを容易に適応させることができる。当業者は、ｐＨおよび立体障害（すなわち、関心の反応パートナーとの反応に対する修飾アミノ酸残基のアクセス容易性）等の要因が重要なものであることを理解する。最適な抱合条件を提供するための反応条件の変更は、十分に当業者の範囲内であり、当該技術分野において日常である。抱合が生存細胞内、またはその上に存在するポリペプチドを用いて行われる場合、その条件は、生理学的に適合性があるように選択される。例えば、ｐＨは、反応を生じさせるのに十分な時間の間、一時的に下げることができるが、細胞によって忍容される期間内である（例えば、約３０分〜１時間）。細胞表面上のポリペプチドの修飾を行うための生理学的条件は、細胞表面アジドを坦持する細胞の修飾におけるケトン−アジド反応に使用されるものに類似し得る（例えば、米国特許第Ｕ．Ｓ．６，５７０，０４０号を参照）。
【０２７６】
ある特定の実施形態では、本開示は、ポリペプチドが抗体であるポリペプチド抱合体を提供する。そのため、実施形態は、関心の部分に抱合される抗体を含み、関心の部分に抱合される抗体は、「抗体抱合体」と称される。Ｉｇポリペプチドは、一般に、少なくともＩｇ重鎖定常領域またはＩｇ軽鎖定常領域を含み、Ｉｇ可変領域（例えば、ＶＬ領域および／ＶＨ領域）をさらに含み得る。Ｉｇ重鎖定常領域は、任意の重鎖アイソタイプのＩｇ定常領域、天然に存在しないＩｇ重鎖定常領域（コンセンサスＩｇ重鎖定常領域を含む）を含む。関心の部分がＩｇ定常領域の溶媒アクセス可能ループ領域内またはそれに隣接して存在する場合、Ｉｇ定常領域は、関心の部分に抱合されるように修飾され得る。
【０２７７】
いくつかの場合では、本開示の抗体抱合体は、１）関心の１つ以上の部分に抱合されるＩｇ重鎖定常領域、および関心の１つ以上の部分に抱合されるＩｇ軽鎖定常領域、２）関心の１つ以上の部分に抱合されるＩｇ重鎖定常領域、および関心の部分に抱合されないＩｇ軽鎖定常領域、または３）関心の部分に抱合されないＩｇ重鎖定常領域、および関心の１つ以上の部分に抱合されるＩｇ軽鎖定常領域を含み得る。対象抗体抱合体は、可変ＶＨおよび／またはＶＬドメインも含み得る。上述ように、関心の１つ以上の部分は、単一のアミノ酸残基のＩｇ重鎖定常領域またはＩｇ軽鎖定常領域に抱合されるか（例えば、単一のアミノ酸残基に抱合される１つまたは２つの関心の部分）、または２つ以上の異なるアミノ酸残基のＩｇ重鎖定常領域および／またはＩｇ軽鎖定常領域に抱合され得る。
【０２７８】
本開示の抗体抱合体は、抱合された部分として、本明細書に記載される様々な化合物のいずれか、例えば、薬物（例えば、ペプチド薬物、小分子薬物等）、水溶性ポリマー、検出可能な標識、合成ペプチド等を含み得る。
【０２７９】
抗体抱合体は、上述の様々な抗原結合特異性のいずれかを有し得、例えば、癌細胞上に存在する抗原、自己免疫細胞上に存在する抗原、病原微生物上に存在する抗原、ウイルス感染細胞（例えば、ヒト免疫不全ウイルス感染細胞）上に存在する抗原、例えば、ＣＤ４またはｇｐ１２０、病変細胞上に存在する抗原等を含む。例えば、抗原が細胞の表面上に存在する場合、抗体抱合体は、上述される抗原に結合することができる。本開示の抗体抱合体は、好適な結合親和性、例えば、５×１０−６Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−７Ｍ〜５×１０−７Ｍ、５×１０−７Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−８Ｍ〜５×１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍ〜１０−９Ｍ、または１０−９Ｍを超える結合親和性で抗原に結合することができる。
【０２８０】
非限定的な例としては、対象抗体抱合体は、癌細胞（例えば、腫瘤特異的抗原、癌細胞上に過剰発現される抗原等）上に存在する抗原に結合することができ、抱合された部分は、細胞毒性化合物（例えば、細胞毒性小分子、細胞毒性合成ペプチド等）であってよい。例えば、抱合された部分が細胞毒性化合物（例えば、細胞毒性小分子、細胞毒性合成ペプチド等）である場合、対象抗体抱合体は、ＣＤ１９に特異的であってよい。別の例として、抱合された部分が細胞毒性化合物（例えば、細胞毒性小分子、細胞毒性合成ペプチド等）であってよい場合、対象抗体抱合体は、ＣＤ２２に特異的であってよい。
【０２８１】
さらなる非限定的な例としては、対象抗体抱合体は、ウイルスで感染された細胞上に存在する抗原に結合することができ（例えば、抗原がウイルスによってコードされる場合、抗原がウイルスによって感染される細胞型上に発現される場合等）、抱合された部分は、ウイルス融合阻害剤であってよい。例えば、対象抗体抱合体は、ＣＤ４に結合することができ、抱合された部分は、ウイルス融合阻害剤であってよい。別の例として、対象抗体抱合体は、ｇｐ１２０に結合することができ、抱合された部分は、ウイルス融合阻害剤であってよい。
【０２８２】
本開示の実施形態は、ポリペプチドが担体タンパク質であるポリペプチド抱合体も含む。例えば、担体タンパク質は、薬物含有足場を提供するために、薬物に共有結合的かつ部位特異的に結合され得る。担体タンパク質は、薬物（例えば、ペプチド、小分子薬物等）、検出可能な標識等の関心の共有結合的に結合された分子に部位特異的に抱合され得る。ある特定の実施形態では、薬物−足場抱合体は、薬物の強化された血清半減期を提供し得る。
【０２８３】
一般に、「担体タンパク質」は、生物学的に不活性であり、本明細書に開示される修飾に影響を受けやすく、生理学的環境において、担体タンパク質の修飾アミノ酸残基を通して（例えば、アルデヒドタグ付けされた担体タンパク質の変換されたスルファターゼモチーフ内のオキシムまたはヒドラゾン結合を通して）担体タンパク質に抱合される関心の部分の溶媒アクセス可能な提示を提供し得るタンパク質である。「生物学的に不活性」は、ヒト対象に投与された場合等の、適切な対象に投与された場合、担体タンパク質が臨床的に有意なまたは検出可能な生物学的活性を呈さないことを意味する。よって、担体タンパク質は、例えば、それらが、例えば、低免疫原性のものである、有意なまたは検出可能な標的特性を呈さない（例えば、特定の受容体への結合において有意なまたは検出可能な活性を呈さない）、およびアルデヒドタグ付け担体タンパク質に抱合される部分（例えば、薬物または検出可能な標識）の活性と干渉し得る生物学的活性をほとんど、または全く呈さないという点で、生物学的に不活性である。「低免疫原性」とは、担体タンパク質が、哺乳類の対象、例えば、ヒト対象等の対象への投与時に、検出可能な免疫応答をほとんど、または全く顕在化しないことを意味する。担体タンパク質は、モノマーまたはマルチマー（例えばダイマー）形態で提供され得る。
【０２８４】
折り畳まれた場合、修飾の影響を受けやすい（よって、関心の部分に抱合される）複数の異なる溶媒アクセス可能部位を提供する３次元構造を有する担体タンパク質は、関心のものである。一般に、関心の担体タンパク質は、抱合された部分または関心の部分の活性および生物学的利用能を提供するように十分に空間的に分離される様式で、抱合された関心の部分の溶媒アクセス可能表面上への提示を提供するような大きさおよび３次元折り畳み構造のものであるものである。担体タンパク質は、担体タンパク質に抱合される部分（例えば、薬物または検出可能な標識）を含むが、これらに限定されない様々な要因により選択され得る。
【０２８５】
したがって、多種多様なポリペプチドのいずれかが、本開示の担体タンパク質抱合体に使用するための担体タンパク質としての使用に好適であり得る。そのような担体タンパク質は、天然に存在するアミノ酸配列、天然に存在するポリペプチドの断片、ならびに天然に生じないポリペプチドおよびその断片を有するものを含み得る。
【０２８６】
担体タンパク質の例としては、アルブミンおよびその断片（例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン等）、トランスフェリンおよびその断片（例えば、ヒトトランスフェリン）、ならびに哺乳類Ｆｃ受容体、特にヒトＦｃ受容体（例えば、哺乳類抗体、例えば、ヒト抗体等の抗体の修飾されたＦｃ断片（例えば、ＩｇＧ））への減少した結合を有するＦｃ断片が挙げられるが、これらに限定されない。減少したＦｃ受容体結合を有する修飾されたＦｃ断片の例は、減少したＦｃ受容体結合を提供する点変異を含むハーセプチン（トラスツズマブ）およびリツキサン（リツキシマブ）のＦｃ断片によって例示される（例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０００），６，４４３−４４６を参照）。あるいは、または加えて、Ｆｃ断片のアイソタイプは、所望されるＦｃ受容体結合のレベルにより選択され得る（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３からではなくＩｇＧ４アイソタイプヒト重鎖定常領域のＦｃ断片の使用）（例えば、Ｆｒｉｄｍａｎ  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １９９１  Ｓｅｐ；５（１２）：２６８４−９０）を参照。一般に、担体タンパク質は、少なくとも約４ｋＤａ（例えば、長さが約５０アミノ酸残基）、通常、少なくとも約２５ｋＤａであってよく、大きさがより大きくてよい（例えば、トランスフェリンは９０ｋＤａの分子量を有するが、Ｆｃ断片は３０ｋＤａ〜５０ｋＤａの分子量を有し得る）。
【０２８７】
本明細書に記載される抱合体は、蛍光またはエピトープ標識を使用する可視化（例えば、本明細書に記載される化合物および抱合体への抱合のために反応基を備える金粒子を使用する電子顕微鏡検査）、タンパク質不動化（例えば、タンパク質マイクロアレイ生成）、タンパク質動態および局在化の研究および用途、ならびにタンパク質の関心の部分との抱合（例えば、親タンパク質の半減期（例えば、ポリ（エチレングリコール）を改善する部分）、標的部分（例えば、作用部位への送達を強化するため）、および生物学的に活性な部分（例えば、治療用部分）を含むが、これらに限定されない様々な用途に使用され得る。
【０２８８】
ポリペプチド抱合体は、多種多様な機能または特徴のうちの１つ以上を提供する部分または複数の部分に抱合されるポリペプチドを含み得る。一般に、部分の例としては、以下を含むが、これらに限定されない：検出可能な標識（例えば、蛍光標識）、光活性化動的部分（例えば、アゾベンゼン媒介細孔閉鎖、アゾベンゼン媒介構造変化、フォトディケージング（ｐｈｏｔｏｄｅｃａｇｉｎｇ）認識モチーフ）、水溶性ポリマー（例えば、ペグ化）、精製用タグ（例えば、親和性クロマトグラフィーにより単離を容易にするため（例えば、ＦＬＡＧエピトープの結合）、膜局在化ドメイン（例えば、脂質またはグリコホスファチジルリノシトール（ＧＰＩ）型アンカー）、不動化用タグ（例えば、選択的結合を含む、ポリペプチドの表面への結合を容易にするため）、薬物（例えば、薬物の抗体への結合を通して薬物標的を容易にするためのような）、標的送達部分（例えば、標的受容体への結合用リガンド（例えば、ウイルス結合、リポソーム上に存在する標的タンパク質の結合等を容易にするため））等。
【０２８９】
特定の非限定的な例が以下に提供される。
ポリペプチドに抱合するための薬物
【０２９０】
いくつかの薬物のうちのいずれかが使用に好適であるか、またはポリペプチドに抱合するための反応パートナーとしての使用に好適であることが付与されるように修飾され得る。薬物の例としては、小分子薬物およびペプチド薬物が挙げられる。よって、本開示は、薬物−ポリペプチド抱合体を提供する。
【０２９１】
本明細書で使用される、「小分子薬物」は、化合物、例えば、関心の薬学的活性を呈し、一般に、８００Ｄａ以下または２０００Ｄａ以下の分子量であるが、最大５ｋＤａの分子を包含し、１０ｋＤａであってよい有機化合物を指す。小無機分子は炭素原子を含まない分子を指すが、小有機分子は少なくとも１個の炭素原子を含む化合物を指す。
【０２９２】
本明細書で使用される「ペプチド薬物」は、ポリマー化合物を含むアミノ酸を指し、天然に存在する、および天然に存在しないペプチド、オリゴペプチド、環状ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質、ならびにペプチド摸倣物を包含することが意図される。ペプチド薬物は、化学合成によって得られるか、または遺伝的にコードされた供給源（例えば、組換え供給源）から生成され得る。ペプチド薬物は、分子量に幅があり、分子量が２００Ｄａ〜１０ｋＤａ以上であってよい。
【０２９３】
いくつかの場合では、薬物は、癌化学療法薬である。例えば、ポリペプチドが腫瘍細胞に特異性を有する抗体（またはその断片）である場合、抗体は、後に癌化学療法薬に抱合され得る修飾アミノ酸を含むように、本明細書に記載されるように修飾され得る。癌化学療法薬は、癌細胞の増殖を低減する非ペプチド（即ち、非タンパク質性）化合物を含み、細胞毒性薬剤および細胞増殖抑制性剤を包含する。化学療法薬の非限定的な例としては、アルキル化剤、ニトロソ尿素、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、およびステロイドホルモンが挙げられる。ペプチド化合物も使用することができる。
【０２９４】
好適な癌化学療法薬は、ドラスタチンならびにその活性類似体および誘導体、ならびにアウリスタチンならびにその活性類似体および誘導体を含む。例えば、国際特許出願第ＷＯ９６／３３２１２号、同第ＷＯ９６／１４８５６号、および米国特許第Ｕ．Ｓ．６，３２３，３１５号を参照。例えば、ドラスタチン１０またはアウリスタチンＰＥは、本開示の抗体−薬物抱合体に含まれ得る。好適な癌化学療法薬は、マイタンシノイドならびにその活性類似体および誘導体（例えば、欧州特許第ＥＰ１３９１２１３号、およびＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３を参照）、ならびにデュオカルマイシンならびにその活性類似体および誘導体（例えば、合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ  １−ＴＭ１を含む）も含む。
【０２９５】
細胞増殖を低減するように作用する薬剤は、当該技術分野において既知であり、広く使用されている。そのような薬剤は、これらに限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イフォスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスルアミン、ブスルファン、ダカルバジン、およびテモゾロミドを含む、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、およびトリアゼン等のアルキル化剤を含む。
【０２９６】
代謝拮抗薬は、これらに限定されないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（ＦｕｄＲ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、ペントスタチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキサート、１０−プロパギル−５，８−ジデアザ葉酸（ｄｉｄｅａｚａｆｏｌａｔｅ）（ＰＤＤＦ，ＣＢ３７１７）、５，８−ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボリン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、およびゲムシタビンを含む、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む。
【０２９７】
好適な天然生成物およびそれらの誘導体（例えば、ビンカアルカロイド、抗癌抗生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン）は、Ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン；ブレキナル；アルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン等；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシド、テニポシド等；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、塩酸ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン）、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびモルホリノ誘導体等；フェノキシゾンビスシクロペプチド、例えば、ダクチノマイシン；塩基性グリコペプチド、例えば、ブレオマイシン；アントラキノングリコシド、例えば、プリカマイシン（ミトラマイシン）；アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン；アジリノピロロインドールジオン、例えば、マイトマイシン；大環状免疫抑制剤、例えば、サイクロスポリン、ＦＫ−５０６（タクロリムス、プログラフ）、ラパマイシン等を含むが、これらに限定されない。
【０２９８】
他の抗増殖性細胞毒性薬剤は、ナベルビン、ＣＰＴ−１１、アナストロゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イホスファミド、およびドロロキサフィンである。
【０２９９】
抗増殖性活性を有する微小管作用剤も使用に好適であり、これらに限定されないが、アロコルヒチン（ＮＳＣ  ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ  ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ  ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ  ３３４１０）、ドルスタチン（ｄｏｌｓｔａｔｉｎ）１０（ＮＳＣ  ３７６１２８）、マイタンシン（ＮＳＣ  １５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ  ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、Ｔａｘｏｌ（登録商標）誘導体、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、チオコルヒチン（ＮＳＣ  ３６１７９２）、トリチルシステリン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、天然および合成エポチロン（エポチロン（ｅｏｐｔｈｉｌｏｎｅ）Ａ、エポチロンＢ、ディスコデルモリドを含むが、これらに限定されない）、エストラムスチン、ノコダゾール等を含むが、これらに限定されない。
【０３００】
使用に好適であるホルモン調節因子およびステロイド（合成類似体を含む）は、副腎皮質ステロイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン等；エストロゲンおよびプレゲスチン（ｐｒｅｇｅｓｔｉｎｓ）、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、エストラジオール、クロミフェン、タモキシフェン等；および副腎皮質抑制剤、例えば、アミノグルテチミド；１７α−エチニルエストラジオール；ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド（ドロゲニル）、トレミフェン（フェアストン）、およびＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）を含むが、これらに限定されない。エストロゲンは、増殖および分化を刺激し、したがって、エストロゲン受容体に結合する化合物は、この活性を遮断するために使用される。副腎皮質ホルモンは、Ｔ細胞増殖を阻害することができる。
【０３０１】
他の好適な化学療法薬は、金属錯体、例えば、シスプラチン（シス−ＤＤＰ）、カルボプラチン等；尿素、例えば、ヒドロキシ尿素；およびヒドラジン、例えば、Ｎ−メチルヒドラジン；エピドフィロトキシン（ｅｐｉｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；ロイコボリン；テガフール等を含む。他の関心の抗増殖剤は、免疫抑制剤、例えば、マイコフェノール酸、サリドマイド、デソキシスペルグアリン（ｄｅｓｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、アザスポリン（ａｚａｓｐｏｒｉｎｅ）、レフルノミド、ミゾリビン（ｍｉｚｏｒｉｂｉｎｅ）、アザスピラン（ａｚａｓｐｉｒａｎｅ）（ＳＫＦ  １０５６８５）；イレッサ（登録商標）（ＺＤ  １８３９，４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）等を含む。
【０３０２】
タキサンは使用に好適である。「タキサン」は、パクリタキセル、ならびに任意の活性タキサン誘導体またはプロドラッグを含む。「パクリタキセル」（本明細書において、例えば、ドセタキセル、ＴＡＸＯＬ（商標）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）（ドセタキセルの製剤）、パクリタキセルの１０−デスアセチル類似体、およびパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾイル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル類似体等の類似体、製剤、および誘導体を含むように理解されるべきである）は、当業者に既知の技術を利用して容易に調製されるか（国際特許出願第ＷＯ９４／０７８８２号、同第ＷＯ９４／０７８８１号、同第ＷＯ９４／０７８８０号、同第ＷＯ９４／０７８７６号、同第ＷＯ９３／２３５５５号、同第ＷＯ９３／１００７６号、米国特許第５，２９４，６３７号、同第５，２８３，２５３号、同第５，２７９，９４９号、同第５，２７４，１３７号、同第５，２０２，４４８号、同第５，２００，５３４号、同第５，２２９，５２９号、および欧州特許第ＥＰ５９０，２６７号も参照）、または例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．（太平洋イチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）からのＴ７４０２、または紅豆杉（Ｔａｘｕｓ  ｙａｎｎａｎｅｎｓｉｓ）からのＴ−１９１２）を含む、様々な商業的供給源から得ることができる。
【０３０３】
パクリタキセルは、パクリタキセルの通常化学的に利用可能な形態だでけでなく、類似体および誘導体（例えば、上述のＴａｘｏｔｅｒｅ（商標）ドセタキセル）ならびにパクリタキセル抱合体（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ、パクリタキセル−デキストラン、またはパクリタキセル−キシロース）も指すように理解されるべきである。
【０３０４】
親水性誘導体および疎水性誘導体の両方を含む、様々な既知の誘導体も用語「タキサン」内に含まれる。タキサン誘導体は、国際特許出願第ＷＯ９９／１８１１３号に記載されるガラクトースおよびマンノース誘導体、国際特許出願第ＷＯ９９／１４２０９号に記載されるピペラジノおよび他の誘導体、国際特許出願第ＷＯ９９／０９０２１号、同第ＷＯ９８／２２４５１号、および米国特許第５，８６９，６８０号に記載されるタキサン誘導体、国際特許出願第ＷＯ９８／２８２８８号に記載される６−チオ誘導体、米国特許第５，８２１，２６３号に記載されるスルフェンアミド誘導体、ならびに；米国特許第５，４１５，８６９号に記載されるタキソール誘導体を含むが、これらに限定されない。これらに限定されないが、国際特許出願第ＷＯ９８／５８９２７号、同第ＷＯ９８／１３０５９号、および米国特許第５，８２４，７０１号に記載されるものを含む、パクリタキセルのプロドラッグをさらに含む。
【０３０５】
使用に好適な生物学的応答修飾物質は、（１）チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）活性の阻害剤、（２）セリン／スレオニンキナーゼ活性の阻害剤、（３）腫瘍抗原に特異的に結合する抗体等の腫瘍関連抗原拮抗薬、（４）アポトーシス受容体作動薬、（５）インターロイキン−２、（６）ＩＦＮ−α、（７）ＩＦＮ−γ、（８）コロニー刺激因子、および（９）血管新生の阻害剤を含むが、これらに限定されない。
反応パートナーを含むように薬物を修飾するための方法
【０３０６】
ポリペプチドに抱合される薬物は、ポリペプチドと反応するための反応パートナーを組み込むように修飾され得る。薬物がペプチド薬物である場合、反応部分（例えば、アミノオキシまたはヒドラジドは、Ｎ末端領域、Ｎ末端、Ｃ末端領域、Ｃ末端、またはペプチド内部の位置に位置付けられ得る。例えば、方法の例としては、アミノオキシ基を有するペプチド薬物の合成を伴う。この例において、ペプチドはＢｏｃ保護前駆体から合成される。ペプチドのアミノ基は、カルボン酸基およびオキシ−Ｎ−Ｂｏｃ基を含む化合物と反応することができる。例として、ペプチドのアミノ基は、３−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）プロパン酸と反応する。カルボン酸基およびオキシ−Ｎ−保護基を含む化合物の他の変形は、アルキレンリンカーにおける炭素およびアルキレンリンカー上の置換基の数が異なることを含み得る。ペプチドのアミノ基とカルボン酸基およびオキシ−Ｎ−保護基を含む化合物との間の反応は、標準的なペプチドカップリング化学的性質を通して生じる。使用することができるペプチドカップリング試薬の例としては、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ジ−ｐ−トルオイルカルボジイミド、ＢＤＰ（１−ベンゾトリアゾールジエチルホスフェート１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニルエチル）カルボジイミド）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩）、シアヌル酸フッ化物、塩化シアヌル、ＴＦＦＨ（テトラメチルフロロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスホ硫酸）、ＤＰＰＡ（ジフェニルホスホリルアジド）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＴＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩）、ＴＳＴＵ（Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩）、ＨＡＴＵ（Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１−Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５，６］−ピリジン−１−イルメチレン］−  −Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフル
オロリン酸塩Ｎ−酸化物）、ＢＯＰ−Ｃｌ（ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド）、ＰｙＢＯＰ（（１−Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムテトラフルオロリン酸塩）、ＢｒＯＰ（ブロモトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＤＥＰＢＴ（３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン）、ＰｙＢｒＯＰ（ブロモトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）が挙げられるが、これらに限定されない。非限定的な例として、ＨＯＢｔおよびＤＩＣは、ペプチドカップリング試薬として使用することができる。
【０３０７】
アミノ−オキシ官能基を曝露するための脱保護は、Ｎ保護基を含むペプチド上で行われる。例えば、Ｎ−オキシスクシンイミド基の脱保護は、環状アミド基の標準的な脱保護条件により生じる。脱保護条件は、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，１９９９，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＨａｒｒｉｓｏｎらに見出すことができる。ある特定の脱保護条件は、ヒドラジン試薬、アミノ試薬、または水素化ホウ素ナトリウムを含む。Ｂｏｃ保護基の脱保護は、ＴＦＡにより生じ得る。脱保護のための他の試薬は、ヒドラジン、メチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、水素化ホウ素ナトリウム、およびメチルアミンを含むが、これらに限定されない。生成物および中間体は、ＨＰＬＣ精製等の従来の手段により精製することができる。
【０３０８】
当業者は、ｐＨおよび立体障害（すなわち、関心の反応パートナーとの反応に対するアミノ酸残基のアクセス容易性）等の要因が重要なものであることを理解する。好適な抱合条件を提供するための反応条件の変更は、十分に当業者の範囲内であり、当該技術分野において日常である。抱合が生存細胞内、またはその上に存在するポリペプチドを用いて行われる場合、その条件は、生理学的に適合性があるように選択される。例えば、ｐＨは、反応を生じさせるのに十分な時間の間、一時的に下げることができるが、細胞によって忍容される期間内である（例えば、約３０分〜１時間）。細胞表面上のポリペプチドの修飾を行うための生理学的条件は、細胞表面アジドを坦持する細胞の修飾におけるケトン−アジド反応に使用されるものに類似し得る（例えば、米国特許第Ｕ．Ｓ．６，５７０，０４０号を参照）。
【０３０９】
本明細書に開示される化合物または抱合体との反応パートナーとして機能するα−求核基を含む、または含むように修飾される小分子化合物は、本開示のポリペプチド−薬物抱合体における薬物としての使用も想定する。一般方法は、関心の化合物の合成に有用な化学合成スキームおよび条件の分野において既知である（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００１、またはＶｏｇｅｌ，Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｌｏｎｇｍａｎ，１９７８を参照）。
ペプチド薬物
【０３１０】
いくつかの場合において、抱合体は、共有結合連結されたペプチドを含む。好適なペプチドは、細胞毒性ペプチド、血管新生ペプチド、抗血管新生ペプチド、Ｂ細胞を活性化するペプチド、Ｔ細胞を活性化するペプチド、抗ウイルス性ペプチド、ウイルス融合を阻害するペプチド、１つ以上のリンパ球集団の生成を増加させるペプチド、抗菌性ペプチド、成長因子、成長ホルモン放出因子、血管作用性ペプチド、抗炎症性ペプチド、グルコース代謝を調節するペプチド、抗血栓性ペプチド、抗侵害受容性ペプチド、血管拡張ペプチド、血小板凝集阻害剤、鎮痛剤等を含むが、これらに限定されない。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、ポリペプチドのアミノ酸残基または修飾アミノ酸残基と反応する基を含むように化学的に合成され得る。好適な合成ペプチドは、５個のアミノ酸〜１００個のアミノ酸、または１００個のアミノ酸より長い長さを有し、例えば、好適なペプチドは、５個のアミノ酸（ａａ）〜１０ａａ、１０ａａ〜１５ａａ、１５ａａ〜２０ａａ、２０ａａ〜２５ａａ、２５ａａ〜３０ａａ、３０ａａ〜４０ａａ、４０ａａ〜５０ａａ、５０ａａ〜６０ａａ、６０ａａ〜７０ａａ、７０ａａ〜８０ａａ、８０ａａ〜９０ａａ、または９０ａａ〜１００ａａの長さを有する。
【０３１２】
ある特定の実施形態では、ペプチドは、α−求核剤含有部分（例えば、アミノオキシまたはヒドラジド部分）を含むように修飾され得、例えば、ｆＧｌｙ含有ポリペプチドと反応させ、ポリペプチドおよびペプチドが、それぞれ、ヒドラゾンまたはオキシム結合によって連結される抱合体を得ることができる。合成ペプチドがポリペプチドのアミノ酸残基または修飾アミノ酸残基と反応する反応基を含むようにペプチドを合成する方法の例は、上述される。
【０３１３】
好適なペプチドは、抗菌性ペプチドのｈＬＦ−１１（ラクトフェリンの１１−アミノ酸Ｎ末端断片）；グラニュリシン、抗菌性ペプチド；プレクタシン（Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ）（ＮＺ２１１４；ＳＡＲ  ２１５５００）、抗菌性ペプチド；（Ｆｕｚｅｏｎ）（エンフビルチド）、ＴＲＩ−１２４９（Ｔ−１２４９、例えば、Ｍａｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５：ｅ９８３０を参照）、ＴＲＩ−２６３５（Ｔ−２６３５、例えば、Ｅｇｇｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２６９４１を参照）、Ｔ６５１およびＴＲＩ−１１４４等のウイルス融合阻害剤；ＰＭＸ−５３、ＪＰＥ−１３７５、およびＪＳＭ−７７１７等のＣ５ａ受容体阻害剤；ＰＯＴ−４、ヒト補体因子Ｃ３阻害剤；Ｐａｎｃｒｅａｔｅ（ＩＮＧＡＰ誘導体配列、ＨＩＰ−ヒト膵島（ｐｒｏｉｓｌｅｔ）タンパク質）；ソマトスタチン；ＤＥＢＩＯ  ８６０９（Ｓａｎｖａｒ）、オクトレオチド、オクトレオチド（Ｃ２Ｌ）、オクトレオチドＱＬＴ、オクトレオチドＬＡＲ、Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ、ＳｏｍａＬＡＲ、Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ（ランレオチド）等のソマトスタチン類似体、例えば、Ｄｅｇｈｅｎｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  １４：２９を参照；ＴＨ９５０７（テサモレリン、成長ホルモン放出因子）；ＰＯＬ７０８０（プロテグリン類似体、抗菌性ペプチド）；レラキシン；ウロテンシン、ソーバジン等の副腎皮質刺激ホルモン放出因子作動薬；ＤｉａＰｅｐ２７７等の熱ショックタンパク質誘導体；ヒト免疫不全ウイルス侵入阻害剤；ＡＺＸ１００等の熱ショックタンパク質−２０摸倣物；ＴＰ５０８（Ｃｈｒｙｓａｌｉｎ）等のトロンビン受容体活性化ペプチド；ウロコルチン−２等のウロコルチン２摸倣物（例えば、ＣＲＦ２作動薬）；ザダキシン（Ｚａｄａｘｉｎ）（チマルファシン、サイモシン−α１）等の免疫活性剤、例えば、Ｓｊｏｇｒｅｎ（２００４）Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９：Ｓ６９を参照；ＨＣＶ３等のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）侵入阻害剤Ｅ２ペプチド；ＨＡＮＰ（Ｓｕｎ  ４９３６、カルペリチド）等の心房性ナトリウム利尿ペプチド；アネキシンペプチド；ｈＢＤ２−４等のディフェンシン（抗菌性ペプチド）；ｈＢＤ−３等のディフェンシン（抗菌性ペプチド）；ＰＭＸ−３０
０６３等のディフェンシン（抗菌性ペプチド）；ヒスタチン−３、ヒスタチン−５、ヒスタチン−６、およびヒスタチン−９等のヒスタチン（抗菌性ペプチド）；ＰＡＣ−１１３等のヒスタチン（抗菌性ペプチド）；ＭＸ−５９４ＡＮ（オムニガニン、ＣＬＳ００１）等のインドリシジン（抗菌性ペプチド）；オムニガード（ＭＢＩ−２２６、ＣＰＩ−２２６）等のインドリシジン（抗菌性ペプチド）；昆虫セクロピン等の抗菌性ペプチド；ラクトフェリン（タラクトフェリン）等の抗菌性ペプチド；Ｐ６０．４（ＯＰ−１４５）等のＬＬ−３７／カテリシジン誘導体（抗菌性ペプチド）；ペキシガナン（ＭＳＩ−７８、スポネックス（Ｓｕｐｏｎｅｘ））等のマガイニン（抗菌性ペプチド）；ＩＢ−３６７（イセガナン）等のプロテグリン（抗菌性ペプチド）；アガン（ａｇａｎ）ペプチド；ナトレコール（Ｎａｔｒｅｃｏｒ）、またはノラタク（Ｎｏｒａｔａｋ）（ネシリチド）、またはウラリチド（ｕｌａｒｉｔｉｄｅ）等のβ−ナトリウム利尿ペプチド；ビバラルジン（ｂｉｖａｌａｒｕｄｉｎ）（アンジオマックス（Ａｎｇｉｏｍａｘ））、トロンビン阻害剤；Ｃペプチド誘導体；ミアカルシン（フォーチカル（Ｆｏｒｔｉｃａｌ））等のカルシトニン；エンケファリン誘導体；ヘマタイド等の赤血球産生刺激ペプチド；ダネガプチド（ＺＰ１６０９）等のギャップ結合調節因子；ガストリン放出ペプチド；グレリン；グルカゴン様ペプチド；ＺＰ１８４６またはＺＰ１８４８等のグルカゴン様ペプチド２類似物；ＧＭＤＰ等のグルコサミニルムラミルジペプチド；オリタバシン等のグリコペプチド系抗生物質；ダルババシン等のテイコプラニン誘導体；ゾラデックス（ルポン（Ｌｕｐｏｎ））またはトリプトレリン等のゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）；ＰＭ０２７３４（Ｉｒｖａｌｅｃ）等のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤デプシペプチド；エプチフィバド等のインテグリン；Ｈｕｍｕｌｏｇ等のインスリン類似体；ＰＭ０２７３４等のカハラリド（ｋａｈａｌａｌｉｄｅ）デプシペプチド；Ｋａｌｂｉｔｏｒ（エカランチド）等のカリクレイン阻害剤；テラバンシン等の抗生物質；キュビシンまたはＭＸ−２４０１等のリポペプチド；ゴセレリン等の黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）；トレイスタル（Ｔｒｅｉｓｔａｒ）（パモ酸トリプトレリン）等のＬＨＲＨ合成デカペプチ
ド作動薬類似体；エリガード等のＬＨＲＨ；Ｍ２タンパク質チャネルペプチド阻害剤、メトレレプチン；ブレメラノチド／ＰＴ−１４１等のメラノコルチン受容体作動薬ペプチド；メラノコルチン；メパクト（ミファムルチド）等のムラミルトリペプチド；ＭＢＰ  ８２９８（ジルコチド）等のミエリン塩基性タンパク質ペプチド；ジコノチド（Ｐｒｉａｌｔ）等のＮ型電位開口型カルシウムチャネル遮断薬；副甲状腺ホルモンペプチド；７６８９７４等の上皮小体類似体；ＵＧＰ２８１等のペプチドホルモン類似体；ＰＤＣ３１等のプロスタグランジンＦ２−α受容体阻害剤；ＰＰＬ−１００等のプロテアーゼ阻害剤；サーファクシン；ＣＶＸ−０４５またはＡＢＴ  ５１０等のトロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）模倣物；血管活性腸管ペプチド；バゾプレッシン；ＲＧ７０８９等のＹ２Ｒ作動薬ペプチド；オビネペプチド（ｏｂｉｎｅｐｅｐｔｉｄｅ）、およびＴＭ３０３３９を含むが、これらに限定されない。
検出可能な標識
【０３１４】
本開示の抱合体、化合物、および方法は、検出可能な標識をポリペプチドに抱合するために使用することができる。検出可能な標識の例としては、蛍光分子（例えば、自己蛍光分子、試薬に接触すると蛍光を発する分子等）、放射性標識（例えば、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１２Ｂ、９０Ｙ、１８６Ｒｈ等）、ビオチン（例えば、ビオチンとアビジンの反応を通して検出するための）、蛍光タグ、撮像試薬等が挙げられるが、これらに限定されない。検出可能な標識は、抗体結合、例えば、検出可能に標識された抗体との結合、または結合した抗体のサンドイッチ型のアッセイを通した検出によって検出することが可能なペプチドまたはポリペプチドも含む。検出可能な標識のさらなる例としては、色素標識（例えば、発色団、フルオロフォア、例えば、これらに限定されないが、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）蛍光色素（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）３５０、４０５、４３０、４８８、５３２、５４６、５５５、５６８、５９４、５９５、６１０、６３３、６３５、６４７、６６０、６８０、７００、７５０、７９０等）等）、生物物理学的なプローブ（スピン標識、核磁気共鳴（ＮＭＲ）プローブ）、フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型標識（例えば、ＦＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー、フルオロフォア／消光剤対の少なくとも１つのメンバーを含む）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）型標識（例えば、ＢＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、免疫検出可能タグ（例えば、ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ（６）等）、局在化タグ（例えば、組織または分子細胞レベルのタグ付けされたポリペプチドの会合を特定するため（例えば、組織型、または特定の細胞膜との会合）等が挙げられるが、これらに限定されない。
標的部位に送達するための部分の結合
【０３１５】
本開示の実施形態は、これらに限定されないが、標的部位（例えば、細胞）に送達するため、および薬学的活性を提供することができる、または他の分子の送達のために標的として機能することができる薬物（例えば、小分子薬物）、毒素、または他の分子等の１つ以上の部分に抱合されるポリペプチドも含む。
【０３１６】
結合パートナー（例えば、リガンド、受容体のリガンド結合部分、リガンドの受容体結合部分等）一対のうちの１つを含む抱合体も想定される。例えば、抱合体は、ウイルス性受容体として機能し、ウイルス性エンベロープタンパク質またはウイルス性カプシドタンパク質との結合時に、修飾されたポリペプチドが発現される細胞表面上にウイルスを結合するのを容易にするポリペプチドを含み得る。あるいは、抱合体は、修飾されたポリペプチドを発現する宿主細胞の検出および／または分離を容易にするために、抗体（例えば、モノクローナル抗体）によって特異的に結合される抗原を含み得る。
標的分子の支持体への結合
【０３１７】
本方法は、ポリペプチドの固体基材への結合を容易にするための（例えば、アッセイを容易にするための）部分、または簡単な分離を容易にするための部分（例えば、磁気ビーズに結合された抗体によって認識されるハプテン）へのポリペプチドの抱合を提供し得る。いくつかの実施形態では、本方法は、定義された配向でタンパク質のアレイ（例えば、チップ）への結合を提供するように使用される。例えば、選択された部位で（例えば、Ｎ末端またはその付近で）修飾されたポリペプチドが生成され、本方法、抱合体、および化合物が修飾されたポリペプチドに部分を送達するために使用される。この部分は、次いで、ポリペプチドを支持体（例えば、高処理アッセイにおけるマイクロチップとして使用するのに好適な支持体等の、固体または半固体支持体）に固定するための結合部位として使用され得る。
水溶性ポリマー
【０３１８】
いくつかの場合では、抱合体は、共有結合連結された水溶性ポリマーを含む。特に関心の部分は、水溶性ポリマーである。「水溶性ポリマー」は、水に可溶性であり、通常、実質的に非免疫原性であり、通常、１，０００ダルトン超の原子分子量を有するポリマーを指す。本明細書に記載される方法、抱合体、および化合物は、１つ以上の水溶性ポリマーをポリペプチドに結合するために使用され得る。水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）の、薬学的に活性な（例えば治療用）ポリペプチド等のポリペプチドへの結合は、そのような修飾がタンパク質分解の安定性を増加し、かつ／または腎クリアランスを減少させる結果として血清半減期を増加させるため治療指数が増加する可能性があるため望ましい場合がある。加えて、１つ以上のポリマーの結合（例えば、ペグ化）は、タンパク質医薬品の免疫原性を減少させることができる。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーは、６０，０００Ｄａ超等の、５，０００Ｄａ超、１０，０００Ｄａ超、２０，０００〜５００，０００Ｄａ超、４０，０００Ｄａ〜３００，０００Ｄａ超、５０，０００Ｄａ〜７０，０００Ｄａ超の有効水力学的分子量を有する。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーは、１０ｋＤａ〜２０ｋＤａ、２０ｋＤａ〜２５ｋＤａ、２５ｋＤａ〜３０ｋＤａ、３０ｋＤａ〜５０ｋＤａ、または５０ｋＤａ〜１００ｋＤａの有効な流体力学的分子量を有する。「有効な流体学的分子量」とは、水性に基づくサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により決定される、有効な、水で溶媒和されたポリマー鎖の大きさを意味する。水溶性ポリマーがエチレンオキシド反復単位等のポリアルキレンオキシド反復単位を有するポリマー鎖を含む場合、各鎖は、２００Ｄａ〜８０，０００Ｄａ、または１，５００Ｄａ〜４２，０００Ｄａの原子分子量を有し得、２，０００〜２０，０００Ｄａを含む。特に言及されない限り、分子量は、原子分子量を指すことが意図される。直鎖状、分枝状、および末端が帯電した水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）が使用され得る。
【０３２０】
ポリペプチドに結合される部分として有用なポリマーは、広範な分子量およびポリマーサブ単位を有し得る。これらのサブ単位は、生物学的ポリマー、合成ポリマー、またはこれらに組み合わせを含み得る。そのような水溶性ポリマーの例としては、デキストランおよびデキストラン誘導体（硫酸デキストラン、Ｐ−アミノ架橋デキストリン、およびカルボキシメチルデキストリンを含む）、セルロースおよびセルロース誘導体（メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースを含む）、デンプンおよびデキストリン、ならびにデンプンの誘導体およびヒドロイルアクト（ｈｙｄｒｏｙｌａｃｔｅｓ）、ポリアルキエン（ｐｏｌｙａｌｋｌｙｅｎｅ）グリコールおよびその誘導体（ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマーを含み、該ホモポリマーおよびコポリマーは、非置換されるか、または一端がアルキル基で置換される）、ヘパリンおよびヘパリンの断片、ポリビニルアルコールおよびポリビニルエチルエーテル、ポリビニルピロリドン、アスパルタミド、ならびにデキストランおよびデキストラン誘導体、デキストリンおよびデキストリン誘導体を含むポリオキシエチル化ポリオールが挙げられる。具体的に挙げた水溶性ポリマーの様々な誘導体も想定されることが理解されよう。
【０３２１】
上述のような水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール「ＰＥＧ」等のポリアルキレンオキシド系のポリマーを含む（例えば、“Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）、および“Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｅｄｓ．，ＡＣＳ（１９９７）、ならびに国際特許出願第ＷＯ９０／１３５４０号、同第ＷＯ９２／００７４８号、同第ＷＯ９２／１６５５５号、同第ＷＯ９４／０４１９３号、同第ＷＯ９４／１４７５８号、同第ＷＯ９４／１７０３９号、同第ＷＯ９４／１８２４７号、同第ＷＯ９４／２８９３７号、同第ＷＯ９５／１１９２４号、同第ＷＯ９６／０００８０号、同第ＷＯ９６／２３７９４号、同第ＷＯ９８／０７７１３号、同第ＷＯ９８／４１５６２号、同第ＷＯ９８／４８８３７号、同第ＷＯ９９／３０７２７号、同第ＷＯ９９／３２１３４号、同第ＷＯ９９／３３４８３号、同第ＷＯ９９／５３９５１号、同第ＷＯ０１／２６６９２号、同第ＷＯ９５／１３３１２号、同第ＷＯ９６／２１４６９号、同第ＷＯ９７／０３１０６号、同第ＷＯ９９／４５９６４号、および米国特許第４，１７９，３３７号、同第５，０７５，０４６号、同第５，０８９，２６１号、同第５，１００，９９２号、同第５，１３４，１９２号、同第５，１６６，３０９号、同第５，１７１，２６４号、同第５，２１３，８９１号、同第５，２１９，５６４号、同第５，２７５，８３８号、同第５，２８１，６９８号、同第５，２９８，６４３号、同第５，３１２，８０８号、同第５，３２１，０９５号、同第５，３２４，８４４号、同第５，３４９，００１号、同第５，３５２，７５６号、同第５，４０５，８７７号、同第５，４５５，０２７号、同第５，４４６，０９０号、同第５，４７０，８２９号、同第５，４７８，８０５号、同第５，５６７，４２２号、同第５，６０５，９７６号、同第５，６１２，４６０号、同第５，６１４，５４９号、同第５，６１８，５２８号、同第５，６７２，６６２号、同第５，６３７，７４９号、
同第５，６４３，５７５号、同第５，６５０，３８８号、同第５，６８１，５６７号、同第５，６８６，１１０号、同第５，７３０，９９０号、同第５，７３９，２０８号、同第５，７５６，５９３号、同第５，８０８，０９６号、同第５，８２４，７７８号、同第５，８２４，７８４号、同第５，８４０，９００号、同第５，８７４，５００号、同第５，８８０，１３１号、同第５，９００，４６１号、同第５，９０２，５８８号、同第５，９１９，４４２号、同第５，９１９，４５５号、同第５，９３２，４６２号、同第５，９６５，１１９号、同第５，９６５，５６６号、同第５，９８５，２６３号、同第５，９９０，２３７号、同第６，０１１，０４２号、同第６，０１３，２８３号、同第６，０７７，９３９号、同第６，１１３，９０６号、同第６，１２７，３５５号、同第６，１７７，０８７号、同第６，１８０，０９５号、同第６，１９４，５８０号、同第６，２１４，９６６号を参照）。
【０３２２】
関心のポリマーの例としては、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−のエチレンオキシド反復単位を含むポリアルキレンオキシドおよびポリアミドアルキレンオキシドを含む、ポリアルキレンオキシド、ポリアミドアルキレンオキシド、またはこれらの誘導体を含むものが挙げられる。関心のポリマーのさらなる例としては、１，０００ダルトン超の分子量を有する式−［Ｃ（Ｏ）−Ｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｙ−ＮＨ］ｎ−または−［ＮＨ−Ｙ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−Ｃ（Ｏ）］ｎ−のポリアミドが挙げられ、式中、ＸおよびＹは、同一または異なってよく、分枝状または直鎖状であってよい二価のラジカルであり、ｎは、２〜５０等の２〜１００の別個の整数であり、ＸおよびＹのいずれかまたはその両方は、直鎖状または分枝状であってよい、生体適合性の、実質的に非抗原性の水溶性反復単位を含む。水溶性反復単位のさならる例としては、式−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−または−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）−のエチレンオキシドを含む。そのような水溶性反復単位の数は、大幅に変動し得、そのような単位の数は、２〜５００、２〜４００、２〜３００、２〜２００、２〜１００、例えば、２〜５０である。実施形態の例は、ＸおよびＹのうちの１つまたは両方が−（（ＣＨ２）ｎ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ２−（ＣＨ２）−または−（（ＣＨ２）ｎ１−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ２−（ＣＨ２）ｎ−１−）から選択されるものであり、式中、ｎ１は、１〜６、１〜５、１〜４、または１〜３であり、ｎ２は、２〜５０、２〜２５、２〜１５、２〜１０、２〜８、または２〜５である。実施形態のさらなる例は、Ｘが−（ＣＨ２−ＣＨ２）−であり、Ｙが−（ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２）−、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）３−ＣＨ２）−であるものである。
【０３２３】
ポリマーは、１つ以上のスペーサーまたはリンカーを含み得る。スペーサーまたはリンカーの例としては、水溶性ポリマー、ジアミノ、および／または二塩基酸単位に採用される１つ以上の反復単位、天然もしくは非天然のアミノ酸またはその誘導体を含む直鎖状もしくは分枝状部分、ならびに例えば、最大１８個の炭素原子、さらには追加のポリマー鎖を含み得るアルキル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、アルコキシ等を含む脂肪族部分が挙げられる。
【０３２４】
ポリマー部分、またはポリマー部分の１つ以上のスペーサーもしくはリンカーは、存在する場合には生体内安定性または生分解性であるポリマー鎖またはポリマー単位を含み得る。例えば、反復連結を有するポリマーは、結合の不安定さに応じて、生理学的条件で様々な安定度を有する。そのような結合を有するポリマーは、低分子量類似体の既知の加水分解速度に基づき、生理学的条件でのポリマーの相対的な加水分解速度に応じて、例えば、安定性が低い方から高い方へ、例えば、ポリウレタン（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞ポリオルトエステル（−Ｏ−Ｃ（（ＯＲ）（Ｒ’））−Ｏ−）＞ポリアミド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）に分類することができる。同様に、水溶性ポリマーを標的分子に結合させる連結系は生体内安定性または生分解性であってよく、例えば、安定性が低い方から高い方へ、カーボネート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞エステル（−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞ウレタン（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）＞オルトエステル（−Ｏ−Ｃ（（ＯＲ）（Ｒ’））−Ｏ−）＞アミド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）であってよい。一般に、硫酸基の不安定さにより、硫酸化多糖類の使用を避けるのが望ましい場合がある。加えて、ポリカーボネートおよびポリエステルの使用もあまり望ましくない場合がある。これらの結合は例として提供されるものであり、本明細書に開示される修飾されたアルデヒドタグ付きポリペプチドに有用な水溶性ポリマーのポリマー鎖または連結系に採用可能な結合の種類を制限するものではない。
製剤
【０３２５】
本開示の抱合体（抗体抱合体を含む）は、様々な異なる方法で製剤化することができる。一般に、抱合体がポリペプチド−薬物抱合体である場合、抱合体は、ポリペプチドに抱合される薬物、治療される状態、および使用される投与経路に適合する様式で製剤化される。
【０３２６】
抱合体（例えば、ポリペプチド−薬物抱合体）は、任意の好適な形態、例えば、薬学的に許容される塩の形態で提供され得、任意の好適な投与経路、例えば、経口、局所、または非経口投与用に製剤化され得る。抱合体が液体注射可能物（それらが静脈内または組織内に直接投与されるそれらの実施形態等において）として提供される場合、抱合体は、すぐに使用できる投薬形態として、または薬学的に許容可能な担体および賦形剤から構成される再構築可能な貯蔵安定性粉末もしくは液体として提供され得る。
【０３２７】
抱合体を製剤化する方法は、当該技術分野において利用可能なものから採用される。例えば、抱合体は、治療有効量の抱合体および薬学的に許容される担体（例えば、生理食塩水）を含む薬学的組成物において提供され得る。薬学的組成物は、任意に、他の添加剤（例えば、緩衝液、安定化剤、保存剤等）を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、ヒトへの投与に好適であるもの等、哺乳類への投与に好適である。
治療方法
【０３２８】
本開示のポリペプチド−薬物抱合体は、親薬物（すなわち、ポリペプチドに抱合する前の薬物）の投与による治療が可能である対象における状態または疾患の治療に用途を見出す。「治療」とは、宿主に影響を及ぼす状態に関連する症状の少なくとも寛解が達成されることを意味し、寛解は、広い意味で、少なくとも、パラメータ、例えば、治療される状態に関連する症状の程度の低下を指すように使用される。そのため、治療は、宿主がもはやその状態または少なくとも状態を特徴付ける症状を患わないように、病理学的状態または少なくともそれに関連する症状が完全に阻害される（例えば、起こるのを防止する）、または停止する（例えば、終了する）状況も含む。よって、治療は、（ｉ）防止、つまり、臨床的症状を発達させない（例えば、有害な状態への疾患の進行を防止する）ことを含む臨床的症状の発達のリスクを低減する、（ｉｉ）阻害、つまり、臨床症状の発達またはさらなる発達を停止させる（例えば、活動性疾患を緩和する、または完全に阻害する）、および／または（ｉｉｉ）軽減、つまり、臨床的症状を後退させることを含む。
【０３２９】
癌の文脈において、用語「治療」は、固形癌の成長の低減、癌細胞の複製の阻害、全体的な腫瘍負荷の低減、および癌に関連する１つ以上の症状の寛解のうちのいずれか、またはこれらの全てを含む。
【０３３０】
治療される対象は、治療を必要とするものであってよく、治療される宿主は、親薬物を使用して治療可能なものである。したがって、様々な対象が本明細書に開示されるポリペプチド−薬物抱合体を使用して治療可能であってよい。一般に、そのような対象は、「哺乳類」であり、関心とするものはヒトである。他の対象は、家庭内ペット（例えばイヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ等）、ゲッ齒類（例えば、疾患の動物モデルにあるような、例えば、マウス、モルモット、ラット）、ならびに非ヒト霊長類（例えば、チンパンジーおよびサル）を含み得る。
【０３３１】
投与されるポリペプチド−薬物抱合体の量は、最初は親薬物の用量および／または投薬レジメンのガイダンスに基づき決定され得る。一般に、ポリペプチド−薬物抱合体は、結合された薬物の標的送達および／または血清半減期の強化を提供することができ、よって、投薬レジメンにおける用量の減少または投与の減少のうちの少なくとも１つを提供する。よって、ポリペプチド−薬物抱合体は、本開示のポリペプチド−薬物抱合体に抱合される前の親薬物に対する投薬レジメンにおける用量の減少および／または投与の減少を提供することができる。
【０３３２】
さらに、上述のように、ポリペプチド−薬物抱合体は、制御された化学量論の薬物送達を提供することができるため、ポリペプチド−薬物抱合体の投薬量は、ポリペプチド−薬物抱合体当たりで提供される薬物分子の数に基づき計算され得る。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、多用量のポリペプチド−薬物抱合体が投与される。ポリペプチド−薬物抱合体の投与頻度は、様々な要因、例えば、症状の重症度、対象の状態等のいずれかにより変動し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ポリペプチド−薬物抱合体は、１ヶ月に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に３回、２週間に１回（ｑｏｗ）、１週間に１回（ｑｗ）、１週間に２回（ｂｉｗ）、１週間に３回（ｔｉｗ）、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、２日に１回（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与される。
癌の治療方法
【０３３４】
本開示は、癌を有する個人に癌化学療法薬を送達するための方法を提供する。本方法は、癌、肉腫、白血病、およびリンパ腫を含む、多種多様の癌を治療するのに有用である。
【０３３５】
対象方法を使用して治療することができる癌は、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌（皮膚癌の形態）、扁平上皮細胞癌（様々な組織）、移行上皮癌を含む膀胱癌（膀胱の悪性新生物）、気管支癌、結腸癌、大腸直腸癌、胃癌、肺癌（肺の小細胞癌および非小細胞癌を含む）、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、腎細胞癌、腺管上皮内癌または胆管癌、絨毛腫瘍、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、頚部癌、子宮癌、精巣癌、骨肉腫、上皮性癌、および鼻咽頭癌等を含むが、これらに限定されない。
【０３３６】
対象方法を使用して治療することができる肉腫は、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、骨原性肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ肉腫、リンパ管内皮腫肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、および他の軟組織肉腫を含むが、これらに限定されない。
【０３３７】
対象方法を使用して治療することができる他の固形腫瘍は、膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣芽細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽腫を含むが、これらに限定されない。
【０３３８】
対象方法を使用して治療することができる白血病は、ａ）慢性骨髄増殖性症候群（多分化能造血幹細胞の腫瘍性障害、ｂ）急性骨髄性白血病（多分化能造血幹細胞の腫瘍性転化または制限された系統潜在性の造血細胞、ｃ）Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ前リンパ性白血病、および有毛細胞白血病を含む、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ、免疫学的に未成熟および機能不全の小リンパ球のクローン性増殖）、ならびにｄ）急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽細胞の蓄積を特徴とする）を含むが、これらに限定されない。対象方法を使用して治療することができるリンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンＢ細胞リンパ腫等を含むが、これらに限定されない。
実施例
【０３３９】
以下の例は、どのように本発明を作製し、使用するかの完全な開示および説明を当業者に提供するために記載され、発明者が何を彼らの発明と見なすか範囲を制限するものではなく、以下の実験が行われた全てのまたは唯一の実験であることを表すものではない。使用される数値（例えば量、温度等）に対する正確さを確保する試みがなされたが、ある程度の実験誤差および偏差が考慮されるべきである。特に記載されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は、大気圧または大気圧付近である。標準的な略語、例えば、ｂｐは塩基対（複数可）、ｋｂはキロ塩基（複数可）、ｐｌはピコリットル（複数可）、ｓまたはｓｅｃは秒（複数可）、ｍｉｎは分（複数可）、ｈまたはｈｒは時間（複数可）、ａａはアミノ酸（複数可）、ｋｂはキロ塩基（複数可）、ｂｐは塩基対（複数可）、ｎｔはヌクレオチド（複数可）、ｉ．ｍ．は筋肉内（に）、ｉ．ｐ．は腹腔内（に）、ｓ．ｃ．は皮下（に）が使用され得る。
一般合成手順
【０３４０】
開示される化合物の合成に有用な一般に知られる化学合成スキームおよび条件を提供する多くの一般的な参照が利用可能である（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００１；またはＶｏｇｅｌ，Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｌｏｎｇｍａｎ，１９７８を参照）。
【０３４１】
本明細書に記載される化合物は、ＨＰＬＣ、分取薄層クロマトグラフィー、フラッシュカラムクロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーを含む、当該技術分野において既知の任意の精製プロトコルにより精製することができる。正相および逆相ならびにイオン樹脂を含む、任意の好適な固定相を使用することができる。ある特定の実施形態では、開示される化合物は、シリカゲルおよび／またはアルミナクロマトグラフィーを介して精製される。例えば、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ｌ．Ｒ．Ｓｎｙｄｅｒ  ａｎｄ  Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９７９、およびＴｈｉｎ  Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｅｄ  Ｅ．Ｓｔａｈｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６９を参照。
【０３４２】
対象化合物を調製するためのプロセスのいずれかの間、関心の分子のいずれか上の感受性基または反応基を保護する必要がある、および／または保護することが望ましい場合がある。これは、Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９７３、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９９、“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”；Ｖｏｌｕｍｅ  ３（ｅｄｉｔｏｒｓ：Ｅ．Ｇｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８１、“Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ”，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１５／ｌ，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ  １９７４、Ｈ．−Ｄ．Ｊａｋｕｂｋｅ  ａｎｄ  Ｈ．Ｊｅｓｃｈｅｉｔ，“Ａｍｉｎｏｓａｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ”，Ｖｅｒｌａｇ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ  Ｂｅａｃｈ，ａｎｄ  Ｂａｓｅｌ  １９８２、および／またはＪｏｃｈｅｎ  Ｌｅｈｍａｎｎ，“Ｃｈｅｍｉｅ  ｄｅｒ  Ｋｏｈｌｅｎｈｙｄｒａｔｅ：Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｅ”，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ  １９７４等の標準的な研究に記載される従来の保護基の手段により達成することができる。保護基は、当該技術分野に既知の方法を使用する簡便な後続の段階で除去することができる。
【０３４３】
対象化合物は、市販の開始材料および／または従来の合成方法によって調製された開始材料を使用して、様々な異なる合成経路を介して合成することができる。本明細書に開示される化合物を合成するために使用することができる合成経路の様々な例は、以下のスキームにおいて説明される。
３−メチルピラザリノン化合物の合成
【０３４４】
下のスキーム１に図示するように３−メチルピラザリノン化合物を合成した。
【化１９】
2016500058.tif 000021
【０３４５】
化合物２０（ペルフルオロフェニル４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート（Ｐｚ−ＰＦＰ））は、以下のように、化合物１０から合成された。２ｍＬの酢酸エチル中の４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（４２９ｍｇ，１．９７ｍｍｏｌ）および１２ｍＬのＤＭＦの溶液に、１ｍＬの酢酸エチル中のペンタフルオロフェノール（７２５ｍｇ，３．９４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。この溶液に、１ｍＬのＥｔＯＡｃ中の４０５ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ）のＤＣＣを添加した。溶液を０℃で１時間攪拌し、その後、４時間かけて室温に温めた。粗反応混合物を、ＰＴＦＥシリンジフィルタを通して濾過し、１０ｇのＢｉｏｔａｇｅシリカゲル標本上に装填し、これを、１０％〜１００％のＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ勾配を使用してクロマトグラフ処理し、無色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１５２．４（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ），−１５８．１（ｔ，Ｊ＝２３．２Ｈｚ），−１６２．４（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，１８．８Ｈｚ）。Ｃ１７Ｈ９Ｆ５Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：３８５．０６；実測値３８５．１．
【０３４６】
化合物３０（３−（４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー−酸）は、以下のように、化合物２０から合成された。４ｍＬのバイアルに０．５ｍｇ（１．３６μｍｏｌ）のＰｚ−ＰＦＰを充填し、これに、ＤＭＡ中の１ｍｇ（１．２４μｍｏｌ）のＨ２Ｎ−リンカー−ＣＯ２Ｈの２００μＬ溶液を添加し、続いて、０．２１ｍｇ（２．４８μｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３を１６μＬに溶解した。この溶液を一晩攪拌した。１Ｍ  ＨＣｌを用いて反応をｐＨ３に酸性化し、ＤＣＭを使用して３回抽出した。次いで、混合有機を鹹水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。粗反応混合物の精製は、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ（カラムの種類、カラムの大きさ、勾配）を使用して２回に分けて行われた。
【０３４７】
化合物５０（３−（４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー−アミド−カーゴ）は、以下のように、化合物３０から合成された。４ｍＬのバイアルに２．０μｍｏｌ（１当量の３−（４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−ｙｌ）ベンズアミド）−リンカー酸を充填し、これに、２当量のＤＩＰＥＡおよび２．０μｍｏｌのＨＡＴＵ、続いて、２００μのＤＭＡ中の２．０μｍｏｌのＨ２Ｎ−カーゴを添加した。溶液を３時間攪拌し、次いで、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
３−（Ｔｅｒｔ−ブチル）ピラザリノン化合物の合成
【０３４８】
下のスキーム２に図示するように３−（Ｔｅｒｔ−ブチル）ピラザリノン化合物を合成した。
【化２０】
2016500058.tif 000022
【０３４９】
化合物８０（４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸）は、以下のように、化合物６０および７０から合成された。４０ｍＬのバイアルに、４００ｍｇの４−ヒドラジン安息香酸塩酸塩（２．１３ｍｍｏｌ，１当量）、続いて、５ｍＬの酢酸および３８０μＬ（２．１３ｍｍｏｌ）のエチル４，４−ジメチル−３−オキソペンタノエートを充填し、還流に加熱した。反応を１６時間攪拌し、次いで、室温に冷却し、これにより黄色の結晶が形成された。結晶を濾過により回収し、冷酢酸で洗浄し、一晩振蘯させた（ｐｕｍｐｅｄ  ｏｎ）。
【０３５０】
化合物９０（ペルフルオロフェニル４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート）は、以下のように、化合物８０から合成された。２ｍＬの酢酸エチル中の４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（１．９７ｍｍｏｌ）および１２ｍＬのＤＭＦの溶液に、１ｍＬの酢酸エチル中のペンタフルオロフェノール（３．９４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。この溶液に、１ｍＬのＥｔＯＡｃ中の４０５ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ）のＤＣＣを添加した。溶液を０℃で１時間攪拌し、その後、４時間かけて室温に温めた。粗反応混合物を、ＰＴＦＥシリンジフィルタを通して濾過し、１０ｇのＢｉｏｔａｇｅシリカゲル標本上に装填し、これを、１０％〜１００％のＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ勾配を使用してクロマトグラフ処理し、無色の固体を得た。
【０３５１】
化合物１００（４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー酸）は、以下のように、化合物９０から合成された。４ｍＬのバイアルにペルフルオロフェニル４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート（２μｍｏｌ）を充填し、これに、２００μＬのＤＭＡ中の１ｍｇ（２μｍｏｌ）のＨ２Ｎ−リンカー−ＣＯ２Ｈの溶液を添加し、続いて、０．２１ｍｇ（３μｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３を１６μＬに溶解した。この溶液を一晩攪拌した。１Ｍ  ＨＣｌを用いて反応をｐＨ３に酸性化し、ＤＣＭで３回抽出した。次いで、混合有機を鹹水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。粗反応混合物の精製は、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ（カラムの種類、カラムの大きさ、勾配）を使用して２回に分けて行われた。
【０３５２】
化合物１２０（４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー−アミド−カーゴ）は、以下のように、化合物１００から合成された。４ｍＬのバイアルに、２．０μｍｏｌ（１当量）の４−（３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー酸を充填し、これに、２当量のＤＩＰＥＡおよび２．０μｍｏｌ（１当量）のＨＡＴＵ、続いて、２００μＬのＤＭＡ中の２．０μｍｏｌのＨ２Ｎ−カーゴを添加した。溶液を３時間攪拌し、次いで、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
３，４−ジメチルピラザリノン化合物の合成
【０３５３】
下のスキーム３に図示するように３，４−ジメチルピラザリノン化合物を合成した。
【化２１】
2016500058.tif 000023
【０３５４】
化合物１４０（４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸）は、以下のように、化合物６０および１３０から合成された。４０ｍＬのバイアルに、４００ｍｇの４−ヒドラジン安息香酸塩酸塩（２．１３ｍｍｏｌ，１当量）、続いて、５ｍＬの酢酸および２．１３ｍｍｏｌのエチル２−メチル−３−オキソブタノエートを充填し、還流に加熱した。反応を１６時間攪拌し、次いで、室温に冷却し、これによりピンク色の結晶が形成された。結晶を濾過により回収し、冷酢酸で洗浄し、一晩振蘯させた（ｐｕｍｐｅｄ  ｏｎ）。
【０３５５】
化合物１５０（ペルフルオロフェニル４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート）は、以下のように、化合物１４０から合成された。２ｍＬの酢酸エチル中の４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（１．９７ｍｍｏｌ）および１２ｍＬのＤＭＦの溶液に、１ｍＬの酢酸エチル中のペンタフルオロフェノール（３．９４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。この溶液に、１ｍＬのＥｔＯＡｃ中の４０５ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ）のＤＣＣを添加した。溶液を０℃で１時間攪拌し、その後、４時間かけて室温に温めた。粗反応混合物を、ＰＴＦＥシリンジフィルタを通して濾過し、１０ｇのＢｉｏｔａｇｅシリカゲル標本上に装填し、これを、１０％〜１００％のＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ勾配を使用してクロマトグラフ処理し、無色の固体を得た。
【０３５６】
化合物１６０（４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー酸）は、以下のように、化合物１５０から合成された。４ｍＬのバイアルに、ペルフルオロフェニル４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート（２μｍｏｌ）を充填し、これに、２００μＬのＤＭＡ中の２μｍｏｌのＨ２Ｎ−リンカー−ＣＯ２Ｈの溶液を添加し、続いて、０．２１ｍｇの（３μｍｏｌ）ＮａＨＣＯ３を１６μＬに溶解した。この溶液を一晩攪拌した。１Ｍ  ＨＣｌを用いて反応をｐＨ３に酸性化し、ＤＣＭで３回抽出した。次いで、混合有機を鹹水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。粗反応混合物の精製は、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ（カラムの種類、カラムの大きさ、勾配）を使用して２つの部分で行われた。
【０３５７】
化合物１８０（４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンズアミド）−リンカー−アミド−カーゴ）は、以下のように、化合物１６０から合成した。４ｍＬのバイアルに、２．０μｍｏｌ（１当量）の４−（３，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−ｙｌ）ベンズアミド）−リンカー酸を充填し、これに、２当量のＤＩＰＥＡ、および１００μＬのＤＭＡ中の２．０μｍｏｌ（１当量）のＨＡＴＵ、続いて、２００μＬのＤＭＡ中の２．０μｍｏｌのＨ２Ｎ−カーゴを添加した。溶液を３時間攪拌し、次いで、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
３−メチルピラザリノン化合物の合成
【０３５８】
３−メチルピラザリノン化合物は、下の一般反応スキーム４に図示されるように合成された。
【化２２】
2016500058.tif 000024
【０３５９】
一般反応スキーム４は、以下により詳細に説明される反応により行われた。
【化２３】
2016500058.tif 000025
【０３６０】
ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−（２−オキソエトキシ）エトキシ）プロパノエート：オーブン乾燥された２０ｍＬのバイアルに、１．６７ｍｍｏｌ（７０７ｍｇ）のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンを充填し、３．３４ｍｍｏｌ（２７０μＬ）のピリジン、続いて、２ｍＬのＤＣＭを添加し、均質になるまで超音波処理した。この溶液に３ｍＬのＤＣＭに溶解された１．３９ｍｍｏｌのｔｅｒｔ−ブチル３−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）プロパノエートを添加し、３時間攪拌し、その後、５ｍＬのＤＣＭ、５ｍＬの１０％水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、および５ｍＬの飽和水性ＮａＨＣＯ３を添加した。この溶液を５分間攪拌し、次いで、１×５ｍＬの飽和水性ＮａＨＣＯ３、続いて、１×５ｍＬの鹹水で抽出した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、回転蒸発により濃縮し、１０〜１００％酢酸エチル：ヘキサン勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、９０％の収率で２９１．４ｍｇの所望の生成物を得た。
【化２４】
2016500058.tif 000026
【０３６１】
ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチリデン）ヒドラジンカルボキレート：１ｍＬのトルエン中のｔｅｒｔ−ブチル３−（２−（２−オキソエトキシ）エトキシ）プロパノエート（０．６５９ｍｍｏｌ，１５３ｍｇ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルカルバジド酸塩（０．６５９ｍｍｏｌ）を添加した。均質になるまでこの溶液を加熱し、４８時間維持した。反応混合物を濃縮し、粗原料を後続のステップに進行させた。
【化２５】
2016500058.tif 000027
【０３６２】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）ヒドラジンカルボキシレート：メタノール（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチリデン）ヒドラジンカルボキレート（０．６５９ｍｍｏｌ）および酢酸（０．６５９ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬのＭｅＯＨ中の０．７２５ｍｍｏｌのＮａＢＨ３ＣＮを添加し、一晩攪拌した。次いで、反応を１ｍＬの飽和水性ＮａＨＣＯ３でクエンチし、３×５ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機物（ｏｇａｎｉｃｓ）を混合し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、１０％〜１００％の酢酸エチル：ヘキサンを使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、所望の生成物を得た。
【化２６】
2016500058.tif 000028
【０３６３】
３−（２−（２−ヒドラジニルエトキシ）エトキシ）プロパン酸：９５：５  ＴＦＡ：水の溶液を、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）ヒドラジンカルボキシレートを充填した４ｍＬのバイアルに添加した。反応を４５分間維持し、次いで、真空下で濃縮した。この材料は後続のステップに粗原料として使用された。
【化２７】
2016500058.tif 000029
【０３６４】
３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパン酸：４０ｍＬのバイアルに、３−（２−（２−ヒドラジニルエトキシ）エトキシ）プロパン酸、続いて、５ｍＬの酢酸、およびエチル４，４−ジメチル−３−オキソペンタノエートを充填し、還流に加熱した。反応を１６時間攪拌し、次いで、室温に冷却した。溶液を真空下で濃縮し、１０〜１００％勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、所望の生成物を得た。
【化２８】
2016500058.tif 000030
【０３６５】
ペルフルオロフェニル３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノエート：１０ｍＬの酢酸エチル中の３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（２ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬの酢酸エチル中のペンタフルオロフェノール（４ｍｍｏｌ）を添加し、０℃に冷却した。この溶液に、１ｍＬのＥｔＯＡｃ中の（２ｍｍｏｌ）のＤＣＣを添加した。溶液を０℃で１時間攪拌し、その後、４時間かけて室温に温めた。粗反応混合物をＰＴＦＥシリンジフィルタを通して濾過し、１０ｇのＢｉｏｔａｇｅシリカゲル標本（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，ＮＣ）上に装填し、これを、１０％〜１００％のＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ勾配を使用してクロマトグラフ処理し、無色の固体を得た。
【化２９】
2016500058.tif 000031
【０３６６】
Ｎ−「カーゴ」−３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド：４ｍＬのバイアルにペルフルオロフェニル３−（２−（２−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノエートを充填し、これに、ＤＭＡ中のＨ２Ｎ−カーゴの５００μＬの溶液を添加し、続いて、２当量のＮａＨＣＯ３を５０μＬに溶解し、４時間攪拌した。粗反応物を１０〜１００％酢酸エチル：ヘキサン勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物を得た。
実施例１：
【０３６７】
下のスキーム５に従い蛍光検出可能な標識およびピラザリノンカップリング部分を含む抱合体を生成するために、実験を行った。
【化３０】
2016500058.tif 000032
【０３６８】
４ｍＬのバイアルに０．５ｍｇ（１．３６μｍｏｌ）のＰｚ−ＰＦＰを充填し、これに、ＤＭＡ中の１ｍｇ（１．２４μｍｏｌ）の２００μＬの溶液を添加し、続いて、０．２１ｍｇ（２．４８μｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３を１６μＬに溶解した。この溶液を３日間攪拌した。粗反応混合物の精製を、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０，４．６ｍｍ×５０ｍｍ，６０％  ＡｃＣＮ：４０％  Ｈ２０〜１００％  ＡｃＣＮ）を使用して２回に分けて行い、０．８ｍｇの紫色のフィルムを得た。Ｃ１７Ｈ９Ｆ５Ｎ２Ｏ３［Ｍ−Ｈ］−のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１００５．３２；実測値１００５．１。
実施例２：
結合試薬によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０３６９】
以下の試薬を混合し、１、２、４、および５時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
ＭｉｌｌｉＱ水中の１０μＬの１０ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ、
１×ＤＰＢＳ、ｐＨ７．４（８０μＬ）または１００ｍＭのＫＯＡｃ、ｐＨ４．６（８０μＬ）のいずれか、および
１：３のＭｅＣＮ：ＭｉｌｌｉＱ水（１０μＬ）中の５０ｍＭのＰｚ。
【０３７０】
抱合反応の結果を図２Ａに示す。図２Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １３ｍｅｒおよび化合物８０）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１、２、４、および５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。１３分でのピークは、官能化化合物のポリペプチドへの単一付加を示す。図２Ｂは、官能化化合物と反応するアルデヒドタグ付き抗体の概略図である。図２Ｂに示されるように、単一の官能化化合物は、アルデヒドタグ付き抗体の各ｆＧｌｙ残基に抱合される。
実施例３：
化学量論的変化
【０３７１】
以下の試薬を混合し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣによる２１５ｎｍでの生成物形成を監視するために、２時間および２４時間でアリコートを採取した：
ＭｉｌｌｉＱ水（８μＬ）中の１０ｍＭのＨ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ、
１×ＤＰＢＳ（６２μＬ）、および
ＭｉｌｌｉＱ水（２μＬ）中の２０ｍＭのＰｚ−ＣＯ２Ｈ
【０３７２】
抱合反応の結果を図３Ａに示す。図３Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １３ｍｅｒおよび開始材料カップリング化合物（ＳＭ））、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（ｐＨ７．４およびｐＨ４．６で、２および２４時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。約１４分での２つのピークは、化合物ＳＭのポリペプチドへの２重付加を示す。図３Ｂは、上記と同じ反応条件を使用したカップリング化合物（ＳＭ）のｆＧｌｙ  ６ｍｅｒペプチドへの抱合を示す。得られた抱合は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより監視され、２重付加生成物は、反応からの唯一の生成物と特定された。図３Ｃは、化合物ＳＭと反応するアルデヒドタグ付き抗体の概略図である。図３Ｃに示されるように、２つの化合物は、アルデヒドタグ付き抗体の各ｆＧｌｙ残基に抱合される。
実施例４：
結合試薬によるＣ末端的にアルデヒドタグ付けされた抗ＨＥＲ２抗体の抱合
【０３７３】
１ｍＬのエッペンドルフチューブに、２０μＬの１×ＤＰＢＳ緩衝液中の６．８μＭの抗ＨＥＲ２の溶液を、２０μＬの１×ＤＰＢＳ中０．５％のＭｅＣＮ中の０．６８ｍＭのＰｚの溶液に添加した。この溶液を１６時間３７℃で維持し、次いで、還元し、アルキル化し、トリプシンで消化させた。液体クロマトグラフィー多重反応監視質量分析（ＬＣ−ＭＲＭ−ＭＳ）により生成物形成を分析した。
【０３７４】
結果を図４に示す。図４Ａは、化合物Ｃまたは化合物Ｄのいずれかで実行された抱合を示す概略図である。図４Ｂは、開始材料と生成物形成の比率が液体クロマトグラフィー多重反応監視質量分析（ＬＣ−ＭＲＭ−ＭＳ）により分析されたことを示す。化合物Ｄを使用した開始材料の消滅は、矢印によって強調される。化合物Ｃは、同じ反応条件下で抗体と顕著に反応しなかった。
実施例５：
結合試薬による修飾された−ＡＦ５９４のＣ末端的にアルデヒドタグ付けされたＨＥＲ２への抱合
【０３７５】
以下のＰｚ−ＡＦ５９４当量：１、２、５、１０、１００、または２００のＰｚ−ＡＦ５９４を、１．３５μＭの抗ＨＥＲ２に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、試料を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで電気泳動的に分離した。ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ  ＬＡＳ  ４０００を使用してＡＦ５９４蛍光を検出し、クマシー染色を使用して総タンパク質を検出した。
【０３７６】
図５Ａは、官能化検出可能標識を合成するための反応スキームを示す。図５Ｂは、官能化検出可能標識の抗体への抱合反応の概略図を示す。結果を図５Ｃに示す。図５Ｃは、反応の結果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの画像を示す。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、標識された重鎖を軽鎖から分離するために使用された。検出可能な標識の抱合は、蛍光撮像により決定された。
実施例６：
抗体−検出可能な標識抱合体の安定性
【０３７７】
Ｐｚ−ＡＦ５９４（１５１当量）を、３７℃で１６時間、６．６μＭの抗ＨＥＲ２と反応させた。未反応Ｐｚ−ＡＦ５９４は、サイズ排除クロマトグラフィーによって反応混合物から除去された。得られた抗体−フルオロフォア抱合体を、血漿または血清（ヒトおよびマウスの両方）のいずれかにおいて、４℃または３７℃で８日間インキュベートした。抱合体を分析するためにＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用した。抱合体の存在は、０．５秒の曝露または２秒の曝露のいずれかの蛍光撮像によって決定された。いずれの場合も遊離染色は観察されず、抱合体は分解されなかった（図６を参照）。
実施例７：
Ｐｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシン
【０３７８】
下のスキーム６に従いマイタンシンおよびピラザリノン（Ｐｚ）カップリング部分を含む抱合体を生成するために、実験を行った。
【化３１】
2016500058.tif 000033
【０３７９】
化合物２７０（アミノ−２ＰＥＧ−マイタンシン）は、以下のように、化合物２６０から合成された。１００μＬのＭＡ中の２８．２μｍｏｌの化合物２６０（Ｆｍｏｃ−Ｎ−２ＰＥＧ−マイタンシン）の溶液に、５６４μｍｏｌのピペリジンを添加し、２時間攪拌した。粗反応物を１％のＭｅＣＮ：水（１０カラム容量）、続いて、５０％のＭｅＣＮ：水（１０カラム容量）の段階勾配を使用して、フラッシュクロマトグラフィー（Ｃ１８）により精製し、２２％収率の生成化合物２７０を得た。ＬＣ３９Ｈ５７ＣｌＮ４Ｏ１２［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：８０９．３；実測値８０９．３。
【０３８０】
化合物２８０（Ｐｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシン）は、以下のように、化合物２７０から合成された。オーブン乾燥させた１ｍＬのバイアルに、１２０μＬの水中の６．０６μｍｏｌの化合物２７０、続いて、６．０６μμｍｏｌのＰｚ−ＰＦＰ（化合物２０、８０μＬの水中のペルフルオロフェニル４−（３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート）、および２１μＬの水中の１５．４μｍｏｌのＮａＨＣＯ３を充填した。反応物を４時間攪拌し、次いで、逆相ＨＰＬＣにより精製し、０．９ｍｇの化合物２８０を得た。Ｃ５０Ｈ６５ＣｌＮ６Ｏ１４［Ｍ＋Ｎａ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１０３１．４；実測値１０３１．５。
【０３８１】
アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）を、２．５％のＤＭＡを含む３７℃、ｐＨ７のＰＢＳ中のＰｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシンと反応させた。２４時間後、疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）により反応混合物を分析した（図７、下部パネル）。モノ抱合体（Ｂ）およびジコンジュゲート（Ｄ）の両方のタンパク質抱合体が観察された。図７は、アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）トレースも示す（図７、上部パネル）。
実施例８：
一般合成経路
【０３８２】
本開示のピラザリノン−カーゴ（Ｐｚ−カーゴ）構築物は、以下の一般合成経路により合成された。例えば、β−ケトエステルは、カルボン酸誘導体から合成され、所望のＰｚ−カーゴ構築物は、得られたβ−ケトエステルからその後合成された。一般合成経路の例は、スキーム７に示される。
【化３２】
2016500058.tif 000034
2016500058.tif 000035
求核捕捉−ピラザリノンカップリング部分
【０３８３】
求核捕捉−ピラザリノンカップリング部分は、下の実施例９〜１４に示される反応スキームにより合成された。求核捕捉−ピラザイノン（ｐｙｒａｚａｉｎｏｎｅ）カップリング部分は、下の実施例９〜１４により詳細に示されるように、チオＰｚ、ニトロ−Ｐｚ、アミノ−Ｐｚ、フェノール−Ｐｚ、アルコール−Ｐｚ、およびフラン−Ｐｚカップリング部分を含んだ。
実施例９：
チオＰｚカップリング部分
【０３８４】
下のスキーム８に従い、チオＰｚ求核捕捉カップリング部分を合成した。
【化３３】
2016500058.tif 000036
【０３８５】
３−（トリチルチオ）プロプラン酸（ｐｒｏｐｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（Ａ１）−乾燥チューブを装備した１００ｍＬの２つ首丸底フラスコにトリチルクロリド（１．９２７ｇ，６．９ｍｍｏｌ）および６ｍＬの無水トルエンを充填した。３−チオプロピオン酸（７２０ｕＬ，８．３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した後、不均質の混合物を１６時間攪拌し、白色の沈殿物を生成した。濾過により沈殿物を回収し、冷トルエンで洗浄し、真空下で乾燥させ、１．８７５ｇの所望の生成物を生成した。さらに精製することなく、生成物を使用した。
【０３８６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）１２．２４（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｍ，１５Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．１７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）。
【０３８７】
エチル３−オキソ−５−（トリチルチオ）ペンタノエート（Ａ２）−３−（トリチルチオ）プロプラン酸（ｐｒｏｐｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（２８７ｍｇ，０．８２４ｍｍｏｌ）、メルドラム酸（１１８．７ｍｇ，０．８２４ｍｍｏｌ）、および１．６ｍＬの無水ＤＣＭ中の４−ジメチルアミノピリジンの溶液を０℃に冷却した。この溶液に、無水ＤＣＭ中の０．７ｍＬのＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１００ｍｇ，０．８１９ｍｍｏｌを添加した。反応物を０℃で３０分間維持し、次いで、室温に温め、５時間維持した。次いで、反応物を１０ｍＬのＤＣＭで希釈し、分液漏斗に移した。有機相を３×１０ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）、３×１０ｍＬの鹹水で洗浄した。次いで、有機相を回収し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。次いで、得られた油状物を１０ｍＬの無水エタノールに溶解し、１６時間還流した。粗反応物を減圧下で蒸発させ、１０ｇのＢｉｏｔａｇｅシリカゲル標本上に装填し、３３％〜１００％ヘキサン：ＤＣＭ勾配を使用してクロマトグラフ処理し、１７４．１ｍｇの所望の生成物を生成した。
【０３８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）７．４３（ａｐｐ  ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，６Ｈ），７．３１（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），７．２２（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｓ，２Ｈ），２．４５（ｍ，４Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ２６Ｈ２６Ｏ３Ｓ［Ｍ＋Ｎａ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：４４１；実測値４４１。
【０３８９】
１−メチル−３−（２−（トリチルチオ）（ｔｒｔｉｙｌｔｈｉｏ）エチル）−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（Ａ３）−メチルヒドラジン（１０．８μＬ，０．２０５ｍｍｏｌ）、エチル３−オキソ−５−（トリチルチオ）ペンタノエート（８５．６ｍｇ，０．２０５ｍｍｏｌ）および１ｍＬの無水エタノールを、５０℃で１６時間加熱した。５０〜１００％ヘキサン：酢酸エチル勾配を使用して粗反応物をクロマトグラフ処理し、６４％の収率で５２．３ｍｇの所望の生成物を生成した。
【０３９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）７．４４（ａｐｐ  ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ），７．３１（ｍ，６Ｈ），７．２４（ｍ，３Ｈ），３．２６（ｓ，２Ｈ），２．９７（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ  ２Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。
【０３９１】
３−（２−メルカプトエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（Ａ４）−４ｍＬのＤＣＭ中の１−メチル−３−（２−（トリチルチオ）（ｔｒｔｉｙｌｔｈｉｏ）エチル）−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（４６．３ｍｇ，０．１１６ｍｍｏｌ）の溶液に、０．１ｍＬの水、０．１ｍＬのトリイソプロピルシラン、および０．８ｍＬのトリフルオロ酢酸を添加した。反応物を１時間攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。０〜１０％のメタノール：ＤＣＭを使用して粗混合物をクロマトグラフ処理し、２０．２ｍｇの所望の生成物を生成した。
【０３９２】
Ｃ６Ｈ１０Ｎ２ＯＳ［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１５９；実測値１５９。
【０３９３】
化合物Ａ８（チオ−Ｐｚ−２ＰＥＧ−マイタンシン）は、下のスキーム９に従い、化合物Ａ２および化合物２７０（アミノ−２ＰＥＧ−マイタンシン）から合成された。
【化３４】
2016500058.tif 000037
2016500058.tif 000038
【０３９４】
エチル２−（５−オキソ−３−（２−（トリチルチオ）エチル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（Ａ５）−エチル３−オキソ−５−（トリチルチオ）ペンタノエート（Ａ２）（４９９ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）、エチル２−ヒドラジニルアセテート（１９１ｍｇ，１．２３ｍｍｏｌ）、１０ｍＬのエタノール中のトリエチルアミン（１７μＬ，０．１２４ｍｍｏｌ）の溶液を、５０℃で２時間維持した。粗反応物を真空下で濃縮し、３３〜６０％ヘキサン：酢酸エチル勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、３２０．６ｍｇの所望の生成物を生成した。
【０３９５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）７．４４（ａｐｐ  ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ），７．３１（ｍ，６Ｈ），７．２４（ｍ，３Ｈ），４．４０（ｓ，２Ｈ），４．２１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０３（ｓ，２Ｈ），２．４４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ  ２Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。
【０３９６】
２−（５−オキソ−３−（２−（トリチルチオ）エチル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸（Ａ６）−１ｍＬの２：３：１ＴＨＦ：ＭｅＯＨ：水中のエチル２−（５−オキソ−３−（２−（トリチルチオ）エチル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（Ａ５）（９７．８ｍｇ，０．２０７ｍｍｏｌ）の溶液に、１０．７ｍｇの水酸化リチウムを添加した。反応物を２時間維持し、次いで、４０ｍＬの水と４０ｍＬのエチルエーテルとの間に分配した。水相をｐＨ２に酸性化し、３×６０ｍＬのＤＣＭで洗浄した。有機相を混合し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮し、６５．５ｍｇの所望の生成物を得、これは、さらに精製することなく使用された。
【０３９７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）７．３３（ｍ，１２Ｈ），７．２５（ｍ，３Ｈ），５．０１（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ  ２Ｈ）。
【０３９８】
Ｔｒｔ−チオＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシン（Ａ７）−アミノ−２ＰＥＧ−マイタンシン（２７０）（１８．５ｍｇ、０．０２２９ｍｍｏｌ）、２−（５−オキソ−３−（２−（トリチルチオ）エチル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸（Ａ６）（６．８ｍｇ，０．０１５３ｍｍｏｌ）、１００μＬのＤＭＦ中の２，４，６−トリメチルピリジン（０．０１５３ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、６．８ｍｇのＣＯＭＵ（（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウム）を添加した。反応物を０℃で３０分間維持し、次いで、３０分かけて室温に温めた。得られた反応混合物を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、次いで、分液漏斗に移した。有機相を、３×１０ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌ、３×１０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３、および３×１０ｍＬの鹹水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗反応物を、５〜１２％のメタノール：ＤＣＭ勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、８．８ｍｇの所望の生成物を得た。
【０３９９】
Ｃ６５Ｈ７９ＣｌＮ６Ｏ１４Ｓ［Ｍ＋Ｎａ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１２５７．５；実測値１２５７．５。
【０４００】
チオ−Ｐｚ−２ＰＥＧ−マイタンシン（Ａ８）−Ｔｒｔ−チオＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシン（Ａ７）（８．８ｍｇ）を、４００μＬのＤＣＭに溶解し、０℃に冷却した。この溶液に１０μＬのトリイソプロピルシラン、１０μＬの水、および８０μＬのトリフルオロ酢酸を添加した。反応物を０℃で１時間維持した。５〜６７％のＭｅＣＮ：水勾配を使用して、粗反応物を逆相クロマトグラフィーにより精製し、４ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４０１】
Ｃ４６Ｈ６５ＣｌＮ６Ｏ１４Ｓ［Ｍ−Ｈ］−のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９９１．４；実測値９９１．１。
実施例１０：
ニトロ−Ｐｚカップリング部分
【０４０２】
下のスキーム１０に従い、ニトロ−Ｐｚ求核捕捉カップリング部分を合成した。
【化３５】
2016500058.tif 000039
【０４０３】
Ｔｅｒｔ−ブチル４−ニトロブタノエート（Ｂ１）−５０ｍＬのニトロメタン中のｔｅｒｔ−ブチルアクリレート（４．４ｍＬ，３０ｍｍｏｌ）の溶液を−２０℃に冷却した。この溶液に、０．６ｍＬの１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（ＴＭＧ）を添加し、−２０℃で３時間攪拌した。反応物を１７５ｍＬのＤＣＭで希釈し、分液漏斗に移し、５×１００ｍＬの鹹水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を真空蒸留（１９０ｍｔｏｒｒ，６５℃）で精製し、１．２７ｇの所望の生成物を得た。
【０４０４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．８４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２９（ｔｔ，Ｊ＝６．８，６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【０４０５】
４−ニトロブタン酸（Ｂ２）−２ｍＬのＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル４−ニトロブタノエート（Ｂ１）の溶液に、１ｍＬのトリフルオロ酢酸を添加し、３時間攪拌した。トルエン（４ｍＬ）を反応混合物に添加し、次いで、これを真空下で濃縮した。これを２回繰り返した。
【０４０６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．５２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３３（ｔｔ，Ｊ＝６．８，６．８Ｈｚ，２Ｈ）。
【０４０７】
メチル６−ニトロ−３−オキソヘキサノエート（Ｂ３）−４−ニトロブタン酸（２３３ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）（Ｂ２）、２２５μＬの塩化オキサリル、および５ｍＬのトルエンの溶液を、８０℃で１９時間加熱し、次いで、真空下で濃縮した。粗反応混合物を３×５ｍＬのトルエンと共沸させた。得られた油状物を１．６ｍＬの無水ＤＣＭに溶解し、２０分かけてメルドラム酸（１９９ｍｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（３２３ｍｇ）の０℃の溶液に滴下して添加した。添加時、溶液を室温に温め、９０分間維持した。反応混合物を６０ｍＬのＤＣＭで希釈し、３×４０ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌおよび２×４０ｍＬの鹹水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。次いで、得られた油状物を１０ｍＬのメタノールに溶解し、６５℃で１６時間加熱した。次いで、反応混合物を真空下で濃縮し、３３〜１００％のヘキサン：酢酸エチル勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、１８９ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４０８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．４６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．４９（ｓ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３２（ｔｔ，Ｊ＝６．８，６．８Ｈｚ，２Ｈ）。
【０４０９】
１−メチル−３−（３−ニトロプロピル）−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（Ｂ４）−１８９ｍｇのメチル６−ニトロ−３−オキソヘキサノエート（Ｂ３）および３ｍＬのエタノール中の５７．８μＬのメチルヒドラジンの溶液を、５０℃で５時間攪拌した。反応物を真空下で濃縮し、０〜１００％の酢酸エチル：アセトニトリル勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、９１ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．５４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），２．５４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｔｔ，Ｊ＝６．８，６．８Ｈｚ，２Ｈ）。Ｃ７Ｈ１１Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１８６；実測値１８６。
実施例１１：
アミノ−Ｐｚカップリング部分
【０４１１】
下のスキーム１１に従い、アミノ−Ｐｚ求核捕捉カップリング部分を合成した。
【化３６】
2016500058.tif 000040
【０４１２】
エチル５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−オキソペンタノエート（Ｃ１）−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノプロプリオン酸（ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）（４８０ｍｇ，２．５４ｍｍｏｌ）、メルドラム酸（２．５４ｍｍｏｌ）、５ｍＬの無水ＤＣＭ中の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２．７９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、２ｍＬの無水ＤＣＭ中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．７９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で３時間維持し、４０ｍＬのＤＣＭで希釈し、分液漏斗に移した。有機相を、２×１５ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌ、２×１５ｍＬの鹹水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。次いで、粗反応物を７ｍＬのエタノールに溶解し、８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を真空下で濃縮し、次いで、０〜９０％の酢酸エチル：ヘキサン勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、２８７．５ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４１３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．９９（ｂｓ，１Ｈ），４．２２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），３．３９（ａｐｐ  ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），２．７９（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４１４】
Ｔｅｒｔ−ブチル（２−（１−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）カルバメート（Ｃ２）−２８７．５ｍｇのエチル５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−オキソペンタノエート（Ｃ１）および１ｍＬのエタノール中の５８．３μＬのメチルヒドラジンの溶液を、６５℃で５時間加熱した。反応物を真空下で濃縮し、０〜１５％のメタノール：ＤＣＭ勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、２２３．８ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４１５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．８９（ｂｓ，１Ｈ），３．４４（ａｐｐ  ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｓ，２Ｈ），２．５７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。Ｃ１１Ｈ１９Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２４２；実測値２４２。
【０４１６】
３−（２−アミノエチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン塩化水素（Ｃ３）−１ｍＬのメタノール中の７７．７ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル（２−（１−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）カルバメート（Ｃ２）の溶液に、０．８ｍＬの３ＭメタノールＨＣｌを添加した。反応物を１８時間維持し、その後、反応物を真空下で濃縮し、そのＨＣｌ塩として７３．５ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４１７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ３−ＭｅＯＤ）３．７７（ｓ，３Ｈ），３．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．１０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）。Ｃ６Ｈ１１Ｎ３Ｏ［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１４２；実測値１４２。
実施例１２：
フェノール−Ｐｚカップリング部分
【０４１８】
下のスキーム１２に従い、フェノール−Ｐｚ求核捕捉カップリング部分を合成した。
【化３７】
2016500058.tif 000041
【０４１９】
３−（２−ヒドロキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オンＤ１）−メチルヒドラジン（１６５μＬ，３．１５ｍｍｏｌ）および４ｍＬのエタノール中の４−ヒドロキシクマリン（１７０ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）を、７０℃で４８時間加熱した。室温に冷却した後、２００μＬの酢酸を添加し、混合物を真空下で濃縮した。０〜１００％のＤＣＭ：酢酸勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフにより粗反応物を精製し、１２０ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４２０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１０．０１（ｓ，１Ｈ）７．３５（ａｐｐ  ｔｄ，Ｊ＝８．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ａｐｐ  ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ａｐｐ  ｄｄ，Ｊ＝８．２，０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ａｐｐ  ｔｄ，Ｊ＝８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）。Ｃ１０Ｈ１０Ｎ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１９１；実測値１９１。
実施例１３：
アルコール−Ｐｚカップリング部分
【０４２１】
下のスキーム１３に従い、アルコール−Ｐｚ求核捕捉カップリング部分を合成した。
【化３８】
2016500058.tif 000042
【０４２２】
３−（ヒドロキシメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン（Ｅ１）−メチルヒドラジン（１．１６ｍｍｏｌ）およびテトロン酸（１．１６ｍｍｏｌ，１１５．５ｍｇ）の溶液を、１ｍＬのエタノール中で７５℃に２０時間加熱した。室温に冷却した際に結晶が形成された。結晶を回収し、冷エタノールで洗浄し、乾燥させ、４５．５ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４２３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．８３（ｓ，２Ｈ），４．５８（ｓ，１Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ）。Ｃ５Ｈ８Ｎ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１２９；実測値１２９。
実施例１４：
フラン−Ｐｚカップリング部分
【０４２４】
下のスキーム１４に従い、フラン−Ｐｚ求核捕捉カップリング部分を合成した。
【化３９】
2016500058.tif 000043
【０４２５】
エチル４−（３−（フラン−３−イル）−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゾエート（Ｆ１）−エチル３−（フラン−３−イル）−３−オキソプロパノエート（１．４６ｍｍｏｌ）および４−ヒドラジノ安息香酸塩化水素の溶液を、５．５ｍＬのエタノール中で２０時間還流した。室温に冷却後、反応混合物を真空下で濃縮し、３〜６０％の酢酸エチル：ヘキサン勾配を使用してシリカゲルクロマトグラフィーを介して精製し、１２２．４ｍｇの生成物を得た。
【０４２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）８．１０（ｍ，４Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝２．０，０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ１６Ｈ１４Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２９９；実測値２９９。
求電子捕捉−ピラザリノンカップリング部分
【０４２７】
求電子捕捉−ピラザリノンカップリング部分は、下の実施例１５および１６に示される反応スキームにより合成された。求電子捕捉ピラザイノン（ｐｙｒａｚａｉｎｏｎｅ）カップリング部分は、下の実施例１５〜１６により詳細に示されるように、ＥｔＯ２Ｃ−ＰｚおよびＭｅＯ２Ｃ−ＣＨ２−Ｐｚカップリング部分を含んだ。
実施例１５：
ＥｔＯ２Ｃ−Ｐｚカップリング部分
【０４２８】
下のスキーム１５に従い、エチルエステル−ピラザリノン（ＥｔＯ２Ｃ−Ｐｚ）求電子捕捉カップリング部分を合成した。
【化４０】
2016500058.tif 000044
【０４２９】
エチル１−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（Ｇ１）−１６５μＬのメチルヒドラジン、６６０ｍｇのナトリウムジエチルオキサロ酢酸、１７９μＬの酢酸、および６ｍＬのエタノールの溶液を、５０℃で２０時間加熱した。反応物を室温に冷却し、真空下で濃縮し、３％のメタノール：ＤＣＭを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１２０ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４３０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）５．９７（ｓ，１Ｈ），４．３４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ７Ｈ１０Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１７１；実測値１７１。
実施例１６：
ＭｅＯ２Ｃ−ＣＨ２−Ｐｚカップリング部分
【０４３１】
下のスキーム１６に従い、酢酸メチル−ピラザリノン（ＭｅＯ２Ｃ−ＣＨ２−Ｐｚ）求電子捕捉カップリング部分を合成した。
【化４１】
2016500058.tif 000045
【０４３２】
メチル２−（１−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アセテート（Ｈ１）−３３８μＬのジメチルヒドラジン、１２ｍＬのエタノール中の１．１２ｇのジメチル−１，３−アセトンジカルボキシレートの溶液を、５０℃で２０時間加熱した。反応物を室温に冷却し、真空下で濃縮し、５％のメタノール：ＤＣＭを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、７９６ｍｇの所望の生成物を得た。
【０４３３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）３．７７（ｓ，３Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ）。Ｃ７Ｈ１０Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１７１；実測値１７１。
ピラザリノンカップリング部分のｆＧｌｙ含有ペプチドへの抱合
【０４３４】
ｆＧｌｙ含有ペプチドを、本開示の実施形態に従う上述のピラザリノンカップリング部分に抱合するために、実験を行った。
実施例１７：
チオＰｚカップリング部分によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４３５】
以下の試薬を混合し、３および１５時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳ、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ化合物Ａ４、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４３６】
生成物（Ｉ２、Ｉ３、およびＩ４）を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を使用して４０００  ＱＴＲＡＰにより分析した。前駆体および生成物イオンは、所望の生成物の形成を示した。
【０４３７】
抱合反応の結果を図８Ａ〜８Ｄに示す。図８Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ａ４）、続いて、反応混合物を含む、異なる時間点（３および１５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図８Ｂは、抱合反応からの生成物Ｉ２のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。図８Ｃは、抱合反応からの生成物１３のＬＣ−Ｉ３ＭＳ／ＭＳ分析である。図８Ｄは、抱合反応からの生成物１４のＬＣ−Ｉ４ＭＳ／ＭＳ分析である。
実施例１８：
アミノ−Ｐｚカップリング部分によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４３８】
以下の試薬を混合し、４および１６時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳ、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ化合物Ｃ３、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４３９】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。両生成物は、２重付加生成物Ｃ４であると特定され、親イオンが存在することに加え［Ｍ＋Ｈ］＋、主なイオンは、［Ｍ＋３］／３＋であった。
【０４４０】
Ｃ６８Ｈ１０７Ｎ２１Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１５０６．８；実測値１５０６．８；Ｃ６８Ｈ１０７Ｎ２１Ｏ１８［Ｍ＋３］／３＋の計算値：５０２．９；実測値５０３．０。
【０４４１】
抱合反応の結果を図９Ａ〜９Ｃに示す。図９Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｃ３）、続いて、反応混合物を含む、異なる時間点（４および１６時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図９Ｂおよび９Ｃは、抱合反応からの生成物Ｃ４のＬＣ−ＭＳ／ＭＳの分析である。
実施例１９：
フェノールＰｚカップリング部分によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４４２】
以下の試薬を混合し、経時的にアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ化合物Ｄ１、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４４３】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。生成物は、２重付加生成物および単一付加生成物であると特定された。親イオンが存在することに加え［Ｍ＋Ｈ］＋、２重付加の主なイオンは、［Ｍ＋２］／２＋であり、一方、親イオンが存在することに加え［Ｍ＋Ｈ］＋、単一付加の主なイオンは、［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］／２＋であった。
【０４４４】
抱合反応の結果を図１０Ａ〜１０Ｄに示す。図１０Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｄ１）、続いて反応混合物を含む、経時的な一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１０Ｂおよび１０Ｃは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。図１０Ｄは、抱合反応からの単一付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
２重付加生成物
【０４４５】
Ｃ７６Ｈ１０５Ｎ１９Ｏ２０［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１６０４．８；実測値１６０５．７；Ｃ７６Ｈ１０５Ｎ１９Ｏ２０［Ｍ＋２］／２＋の計算値：８０２．９；実測値８０２．９。
単一付加生成物
【０４４６】
Ｃ６６Ｈ９５Ｎ１７Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１４１４．７；実測値１４１４．４；Ｃ６６Ｈ９５Ｎ１７Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］／２＋の計算値：７１８．９；実測値７１８．９。
実施例２０：
ＥｔＯ２Ｃ−Ｐｚカップリング部分によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４４７】
以下の試薬を混合し、０．５、５、および１０時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳ、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ化合物Ｇ１、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４４８】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。主な生成物は、２重付加生成物であると特定された。２重付加の主なイオンは、親イオンであった。
【０４４９】
Ｃ７０Ｈ１０５Ｎ１９Ｏ２２［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１５６４．８；実測値１５６４．７。
【０４５０】
抱合反応の結果を図１１Ａおよび１１Ｂに示す。図１１Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｇ１）、続いて反応混合物を含む、０．５、５、および１０時間での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１１Ｂは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
実施例２１：
ＭｅＯ２Ｃ−ＣＨ２−Ｐｚカップリング部分によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４５１】
以下の試薬を混合し、１、５．５、および１０時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳ、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ化合物Ｈ１、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４５２】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。主な生成物は、２重付加生成物であると特定された。２重付加の主なイオンは、親イオンであった。
【０４５３】
Ｃ７０Ｈ１０５Ｎ１９Ｏ２２［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１５６４．８；実測値１５６４．７。
【０４５４】
抱合反応の結果を図１２Ａ〜１２Ｂに示す。図１２Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび化合物Ｈ１）、続いて反応混合物を含む、１、５．５、および１０時間での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１２Ｂは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
求核試薬のｆＧｌｙ含有ペプチドへの抱合
【０４５５】
ｆＧｌｙ含有ペプチドの、以下の実施例により詳細に記載される様々な求核試薬への抱合のために、対象実験を行った。
実施例２２：
ジメドンによるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４５６】
以下の試薬を混合し、１．５、１１．５、および４８時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳ、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭジメドン、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４５７】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。主な生成物は、２重付加生成物であると特定された。
【０４５８】
Ｃ７２Ｈ１０９Ｎ１５Ｏ２０［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１５０４．８；実測値１５０４．７。
【０４５９】
抱合反応の結果を図１３Ａおよび１３Ｂに示す。図１３Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびジメドン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１．５、１１．５、および４８時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１３Ｂは、抱合反応からの２重付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
実施例２３：
メルドラム酸によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４６０】
以下の試薬を混合し、２および１４時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭメルドラム酸、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４６１】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。主な生成物は、単一付加生成物であると特定された。
【０４６２】
Ｃ６２Ｈ９３Ｎ１５Ｏ２０［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１３６８．７；実測値１３６８．５。
【０４６３】
抱合反応の結果を図１４Ａおよび１４Ｂに示す。図１４Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびメルドラム酸）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（２および１４時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１４Ｂは、抱合反応からの単一付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
実施例２４：
バルビツール酸によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４６４】
以下の試薬を混合し、２、６．５、および１０時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭバルビツール酸、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４６５】
生成物を、ＨＰＬＣを介して単離し、ＥＳＩ−ＭＳにより分析した。全ての生成物は、単一付加生成物であると特定された。
【０４６６】
Ｃ６２Ｈ９３Ｎ１５Ｏ２０［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１３５２．７；実測値１３５２．５。
【０４６７】
抱合反応の結果を図１５Ａ〜１５Ｄに示す。図１５Ａは、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびバルビツール酸）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（２、６．５、および１０時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。図１５Ｂ〜１５Ｄは、抱合反応からの単一付加生成物のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析である。
実施例２５：
テトロン酸によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４６８】
テトロン酸は、下のスキーム１７に従い、ケト−エノール互変異性化を受ける。
【化４２】
2016500058.tif 000046
【０４６９】
以下の試薬を混合し、２．５および１４．５時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭテトロン酸、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４７０】
テトロン酸によるｆＧｌｙ含有ペプチドの抱合は、観察されなかった。反応の結果を図１６に示す。図１６は、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびテトロン酸）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（２．５および１４．５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
実施例２６：
ピロン誘導体によるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４７１】
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンは、下のスキーム１８に従い、ケト−エノール互変異性化を受ける。
【化４３】
2016500058.tif 000047
【０４７２】
以下の試薬を混合し、１．５および１３．５時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ  ４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４７３】
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンによるｆＧｌｙ含有ペプチドの抱合は、観察されなかった。反応の結果を図１７に示す。図１７は、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１．５および１３．５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
実施例２７：
フラノンによるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４７４】
以下の試薬を混合し、１．５、６、および１０時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ  ２（５Ｈ）−フラノン、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４７５】
２（５Ｈ）−フラノンによるｆＧｌｙ含有ペプチドの抱合は観察されなかった。反応の結果を図１８に示す。図１８は、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび２（５Ｈ）−フラノン）続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１．５、６、および１０時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
実施例２８：
（フェニルスルホニル）アセトニトリルによるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４７６】
以下の試薬を混合し、０．５および１２．５時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭ（フェニルスルホニル）アセトニトリル、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４７７】
（フェニルスルホニル）アセトニトリル（ＰｈＳＯ２−ＣＨ２−ＣＮ）によるｆＧｌｙ含有ペプチドの抱合は、観察されなかった。反応の結果を図１９に示す。図１９は、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよび（フェニルスルホニル）アセトニトリル）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（０．５および１２．５時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
実施例２９：
ニトロメチルフェニルスルホンによるＦＧｌｙ含有ペプチドの抱合
【０４７８】
以下の試薬を混合し、１および１３時間でのアリコートを採取し、Ｃ１８  ＲＰ  ＨＰＬＣにより２１５ｎｍでの生成物形成に関して反応を監視した：
７０μＬのＭｉｌｌｉＱ水、
１０μＬの１０×ＤＰＢＳまたは１０μＬの５００ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ８．５）、
１０μＬのＤＭＡ中の５０ｍＭニトロメチルフェニルスルホン、
１０μＬの１ｍＭ  Ｈ２Ｎ−ＧＰＳＶＦＰＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ−ＯＨ。
【０４７９】
ニトロメチルフェニルスルホン（ＰｈＳＯ２−ＣＨ２−ＮＯ２）によるｆＧｌｙ含有ペプチドの抱合は、観察されなかった。反応の結果を図２０に示す。図２０は、開始材料（ｆＧｌｙ  １２ｍｅｒおよびニトロメチルフェニルスルホン）、続いて反応混合物を含む、異なる時間点（１および１３時間）での一連のＲＰ  ＨＰＬＣトレースを示す。
ピラザリノン結合試薬のアルデヒドタグ付き抗体への抱合
【０４８０】
アルデヒドタグ付き抗体を、本開示の実施形態による上述のピラザリノン結合試薬に抱合するために、実験を行った。
実施例３０：
Ｐｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシンによるアルデヒドタグ付き抗体の抱合
【０４８１】
上の実施例７に従いＰｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシンを合成した。
【０４８２】
アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）を、２．５％のＤＭＡを含む３７℃、ｐＨ７のＰＢＳ中のＰｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシンと反応させた。２４時間後、疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）により反応混合物を分析した（図７、下部パネル）。モノ抱合体（Ｂ）およびジ抱合体（Ｄ）の両方のタンパク質抱合体が観察された。図７は、アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）トレースも示す（図７、上部パネル）。
Ｐｚ−修飾されたｍＡｂのＭＳ特徴付け
【０４８３】
抱合された抗体を、３７℃で３０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元させた。４０００  ＱＴＲＡＰに従い７０℃で還元試料をＰＬＲＰ  ＨＰＬＣカラム上で分離した。ＭＳ１スペクトルを取得し、Ｂｉｏａｎａｌｙｌｓｔソフトウェアを使用して解析（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｅｄ）した。抗体の軽鎖は修飾を示さないが、重鎖は、主な生成物が２つのＰｚ−Ｐｈ−２ＰＥＧ−マイタンシン部分の付加に相当することが示された（図２１）。
実施例３１：
チオＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシンによるアルデヒドタグ付き抗体の抱合
【０４８４】
上の実施例９に従いチオＰｚ−２ＰＥＧ−マイタンシンを合成した。
【０４８５】
アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）を、２．５％のＤＭＡを含む３７℃、ｐＨ７のＰＢＳ中のチオ−Ｐｚ−−２ＰＥＧ−マイタンシンと反応させた。５．５時間後、疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）により反応混合物を分析した（図２２）。モノ−抱合体（ＢおよびＣ）タンパク質抱合体のみが観察された。図２２は、アルデヒドタグ付き抗体（Ａ）、薬物抗体比（ＤＡＲ）が１のタンパク質（Ｂ）、およびＤＡＲが２のタンパク質（Ｃ）の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）のトレースを示す。
【０４８６】
抱合された抗体を、３７℃で３０分間、５０ｍＭのＤＴＴで還元させた。４０００  ＱＴＲＡＰに従い７０℃で還元試料をＰＬＲＰ  ＨＰＬＣカラム上で分離した。ＭＳ１スペクトルを取得し、Ｂｉｏａｎａｌｙｌｓｔソフトウェアを使用して解析した。抗体の軽鎖は修飾を示さないが、重鎖は抱合された生成物を示した（図２３）。
追加のピラザリノンカップリング部分
【０４８７】
追加のピラザリノン系カップリング部分は、以下の実施例に記載されるように合成することができる。
実施例３２：
Ｎ−ビス−ピラザリノンカップリング部分
【０４８８】
スキーム１９に従い、Ｎ−ビス−ピラザリノン（Ｎ−ビス−Ｐｚ）カップリング部分を合成した。
【化４４】
2016500058.tif 000048
【０４８９】
Ｇｒａｈａｍ，ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＣＳ，１９５４，７６，３９９３−３９９５に記載される手順の修飾を使用して、還流で３日間、２０ｍＬのｎ−ブタノール中のフェニル−３−アミノ−５−ピラゾロン（２０ｇ）、γ−アミノ酪酸（２５ｇ）を加熱することにより、４−（ビス（５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ブタン酸を調製した。沈殿物を回収し、酢酸で酸性化し、熱エタノールから再結晶化し、５ｇの所望の生成物（ＡＡ）を得た。カーゴ坦持Ｎ−ビス−ピラゾロン（ＢＢ）を以下のように合成した。４ｍＬのバイアルに、２．０μｍｏｌの化合物ＢＢ、２当量のＨ２Ｎ−カーゴ、２当量のＤＩＰＥＡ、および２００μＬのＤＭＡ中の１当量のＨＡＴＵを充填した。溶液を１時間攪拌し、次いで、逆相クロマトグラフィーにより精製した。
実施例３３：
Ｃ−ビス−ピラザリノンカップリング部分
【０４９０】
Ｃ−ビス−ピラザリノン（Ｃ−ビス−Ｐｚ）カップリング部分は、スキーム２０〜２２に従い合成することができる。
【化４５】
2016500058.tif 000049
【０４９１】
ジメチル４−（６−アジドヘキシル）−３，５−ジオキソヘプタンジオエート（ＣＣ）−３００ｍＬの丸底フラスコに、１０ｍｍｏｌの４−（６−クロロヘキシル）−３，５−ジオキソピメリン酸ジメチルエステル（Ｒｅｉｈｍ，ｅｔ．ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００８，６，３０７９−３０８４）、２５ｍｍｏｌのナトリウムアジド、および５０ｍＬのＤＭＦを充填した。反応物を１６時間攪拌し、次いで、水（２００ｍＬ）でクエンチした。反応物をＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）で３回抽出した。次いで、混合有機物を水（１５０ｍＬ）で２回、そして鹹水（２００ｍＬ）で１回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。フラッシュクロマトグラフィーにより粗反応混合物を精製し、所望の生成物（ＣＣ）を得た。
【０４９２】
（３Ｅ，５Ｅ）−ジメチル４−（６−アジドヘキシル）−３，５−ビス（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−メチルヒドラゾノ）ヘプタンジオエート（ＤＤ）−２０ｍＬのバイアルに、１０ｍｍｏｌの化合物ＣＣ，Ｎ，Ｎ−Ｂｏｃ−１−メチルヒドラジン（２５ｍｍｏｌ）、および１０ｍＬのエタノールを充填した。反応物を５０℃で１２時間攪拌し、真空下で濃縮し、さらに精製することなく使用した。
【化４６】
2016500058.tif 000050
【０４９３】
３，３´−（７−アジドヘプタン−１，１−ジイル）ビス（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン）（ＥＥ）−２０ｍＬのバイアルに、５ｍｍｏｌの化合物ＤＤおよび１０ｍＬのエタノール中のＴＦＡの１０％溶液を充填した。反応物を室温で１時間攪拌し、次いで、５０℃で４時間加熱した。室温に冷却後、反応物を真空下で濃縮し、３×５ｍＬのトルエンで共沸した。フラッシュクロマトグラフィーにより粗反応混合物を精製し、所望の生成物（ＥＥ）を得た。
【０４９４】
３，３´−（７−アミノヘプタン−１，１−ジイル）ビス（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５（４Ｈ）−オン）（ＦＦ）−２０ｍＬのバイアルに、５ｍｍｏｌの化合物ＥＥ、８ｍｍｏｌのトリフェニルホスフィン、３０当量の水、および５ｍＬのＤＣＭを充填した。反応物を１２時間攪拌し、真空下で濃縮し、０〜１００％の水：ＭｅＣＮ勾配を使用して逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物（ＦＦ）を得た。
【化４７】
2016500058.tif 000051
【０４９５】
Ｃ−ビス−Ｐｚ−カーゴ（ＧＧ）−４ｍＬのバイアルに、２．０μｍｏｌの化合物ＦＦ、１当量のＨＯ２Ｃ−カーゴ、２当量のＤＩＰＥＡ、および２００μＬのＤＭＡ中の１当量のＨＡＴＵを充填した。溶液を１時間攪拌し、次いで、０〜１００％の水：ＭｅＣＮ勾配を使用して逆相クロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物（ＧＧ）を得た。
実施例３４：
Ｐｚ−ＣＨ２−Ｐｚ’差次的ペイロード
【０４９６】
スキーム２３および２４に従い、２つの異なる部分に抱合されたビス−ピラザリノン（Ｐｚ−ＣＨ２−Ｐｚ’）カップリング部分を合成した。
【化４８】
2016500058.tif 000052
【０４９７】
化合物ＨＨ−２ｍｍｏｌの化合物ジメチル３，５−ジオキソヘプタンジオエート（Ｒｅｉｈｍ，ｅｔ．ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００８，６，３０７９−３０８４）を、１ｍＬのエタノール中の１ｍｍｏｌの保護アルキルヒドラジンと２時間混合することにより、化合物ＨＨを合成した。反応物を真空下で濃縮し、さらに精製することなく使用した。
【０４９８】
化合物ＩＩ−２０ｍＬのバイアルに、０．５ｍｍｏｌの化合物ＨＨ、０．５ｍｍｏｌの保護アルキルヒドラジン、および５ｍＬのエタノールを充填した。反応物を２時間攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。粗反応物をさらに精製することなく使用した。
【化４９】
2016500058.tif 000053
【０４９９】
化合物ＪＪ−４ｍＬのバイアルに、０．１ｍｍｏｌの化合物ＩＩおよび１ｍＬのＤＣＭを充填した。この溶液に、１００μＬの水、１００μＬのトリイソプロピルシラン、８００μＬのトリフルオロ酢酸を添加し、反応物を１時間室温で攪拌した。０〜１００％の水：ＭｅＣＮ勾配を使用して逆相フラッシュクロマトグラフィーにより粗反応物を精製し、所望の生成物（ＪＪ）を得た。
実施例３５：
マロノニトリル−Ｐｚ
【０５００】
スキーム２５に従い、マロノニトリル−Ｐｚカップリング部分を合成した。
【化５０】
2016500058.tif 000054
実施例３６：
α−置換−ピラザリノン
【０５０１】
スキーム２６に従い、α−置換−Ｐｚカップリング部分を合成した。
【化５１】
2016500058.tif 000055
【０５０２】
エチル２−（４−フルオロ−３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（ＫＫ）−エチル２−フルオロアセトアセテート（１．２３ｍｍｏｌ）、エチル２−ヒドラジニルアセテート（１．２３ｍｍｏｌ）、１０ｍＬのエタノール中のトリエチルアミン（１７μＬ、０．１２４ｍｍｏｌ）の溶液を、２時間５０℃に維持した。粗反応物を真空下で濃縮し、３３〜６０％ヘキサン：酢酸エチル勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、所望の生成物（ＫＫ）を得た。
【０５０３】
２−（４−フルオロ−３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸（ＬＬ）−水酸化リチウム（１０．７ｍｇ）を、１ｍＬの２：３：１ＴＨＦ：ＭｅＯＨ：水中の化合物ＫＫ（０．２０７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を２時間維持し、次いで、４０ｍＬの水と４０ｍＬのエチルエーテルとの間に分配する。水相をｐＨ２に酸性化し、３×６０ｍＬのＤＣＭで洗浄する。有機相を混合し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮し、所望の生成物（ＬＬ）を得、これは、さらに精製することなく使用された。
【０５０４】
フルオロ−Ｐｚ−カーゴ（ＭＭ）−ＣＯＭＵ（６．８ｍｇ）を、０℃のＨ２Ｎ−２ＰＥＧ−Ｍａｙ（化合物２７０）（１８．５ｍｇ，０．０２２９ｍｍｏｌ）、２−（４−フルオロ−３−メチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸（ＬＬ）（０．０１５３ｍｍｏｌ）、１００μＬのＤＭＦ中の２，４，６−トリメチルピリジン（０．０１５３  ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を３０分間０℃に維持し、次いで、３０分かけて室温に温める。得られた反応混合物を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、次いで、分液漏斗に移す。有機相を、３×１０ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌ、３×１０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３、および３×１０ｍＬの鹹水で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮する。粗反応物を、５〜１２％のメタノール：ＤＣＭ勾配を使用してシリカゲル上でクロマトグラフ処理し、所望の生成物を得る。
【０５０５】
本発明は、その特定の実施形態に関して説明されてきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更がなされ、等価物が置換され得ることを当業者は理解するべきである。加えて、多くの修正が行われ、特定の状況、材料、問題の組成物、プロセス、プロセスの工程または複数の工程を本発明の目的、趣旨、および範囲に適応させることができる。全てのそのような修正は、付属の特許請求の範囲の範囲内であるものとする。
【図１】
2016500058.tif 000063
【図２】
2016500058.tif 000064
【図３Ａ】
2016500058.tif 000065
【図３Ｂ】
2016500058.tif 000066
【図３Ｃ】
2016500058.tif 000067
【図４Ａ】
2016500058.tif 000068
【図４Ｂ】
2016500058.tif 000069
【図５Ａ】
2016500058.tif 000070
【図５Ｂ】
2016500058.tif 000071
【図６】
2016500058.tif 000072
【図７】
2016500058.tif 000073
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【国際調査報告】
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