(57)【要約】本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害するピラゾリルグアニジン化合物、及びピラゾリルグアニジン化合物を治療剤として使用して、免疫疾患、炎症性病態、又は癌などの医学的障害を治療する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2016539983.tif 000042
（式中、
Ａ１は
【化２】
2016539983.tif 000043
であり；
Ａ２は、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びＣ１〜Ｃ３ハロアルキルからなる群から独立に選択される１、２、又は３つの置換基により置換されているフェニルであり；
Ｒ１は、各出現で独立に、クロロ、フルオロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメチル、又はシアノを表し；
Ｒ２は、水素、クロロ、フルオロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、又はトリフルオロメチルであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、又は−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）であり；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；且つ
ｎは、１又は２である）
により表される化合物（全ての立体異性体、幾何異性体、及び互変異性体を含む）；又はその薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物。
【請求項２】
式Ｉにより表される化合物、又はその立体異性体、幾何異性体若しくは互変異性体；あるいはその薬学的に許容できる塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎが１である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がフルオロである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がメタ−フルオロである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がクロロである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１がメタ−クロロである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が水素である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２がクロロである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２がパラ−クロロである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がフルオロである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２がパラ−フルオロである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３が、メチル又はエチルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ４がトリフルオロメチルである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ５が水素である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ５がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ５が、メチル又はエチルである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ５がＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ａ１が
【化３】
2016539983.tif 000044
である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ａ２が、クロロ、フルオロ、及びＣ１〜Ｃ３ハロアルキルからなる群から独立に選択される１、２、又は３つの置換基により置換されているフェニルである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ａ２が、クロロ、フルオロ、及びトリフルオロメチルからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ａ２が、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ａ２が３−クロロ−５−フルオロフェニルである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
式Ｉ−Ａ：
【化４】
2016539983.tif 000045
（式中、
Ｒ１は、クロロ又はフルオロであり；
Ｒ２は、水素、クロロ、又はフルオロであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４は、トリフルオロメチルであり；
Ｒ５は、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；且つ
Ａ２は、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである）
により表される化合物（全ての立体異性体、幾何異性体、及び互変異性体を含む）又はその薬学的に許容できる塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ１及びＲ２がフルオロである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ１がメタ−フルオロであり、Ｒ２がパラ−フルオロである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ１及びＲ２がクロロである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ１がオルト−クロロであり、Ｒ２がパラ−クロロである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ１がクロロであり、Ｒ２が水素である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１がメタ−クロロである、請求項２５又は３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ３が、メチル又はエチルである、請求項２５〜３１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ５が水素である、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ５がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ５が、メチル又はエチルである、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
Ａ２が、３−クロロ−５−フルオロフェニルである、請求項２５〜３５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
表１〜４のいずれか１つに列記された化合物又はその薬学的に許容できる塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３８】
【化５】
2016539983.tif 000046
により表される化合物又はその薬学的に許容できる塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３９】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載の化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項４０】
免疫疾患、炎症性疾患、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、癌、及び細菌感染からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、前記疾患の症状を改善するために、その必要のある患者に、治療上有効な量の請求項１〜３８のいずれか一項に記載の化合物を投与することを特徴とする方法。
【請求項４１】
前記疾患が、関節リウマチ、乾癬、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、セリアックスプルー、特発性血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、喘息、ブドウ膜炎、又は表皮過形成である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記疾患が、クローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患が、軟骨炎症、骨分解、関節炎、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少関節型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性反応性関節炎、若年性レター症候群、ＳＥＡ症候群、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリテマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型関節リウマチ、全身型関節リウマチ、強直性脊椎炎、腸炎性関節炎、反応性関節炎、レター症候群、皮膚筋炎、乾癬性関節炎、血管炎、ミオリティス、多発性筋炎、皮膚筋炎、変形性関節症、結節性多発動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛、サルコイドーシス、硬化症、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化、スティル病、慢性閉塞性肺疾患、ギランバレー病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、又は自己免疫性肝炎である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記患者がヒトである、請求項４０〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害する方法であって、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の化合物に曝露して、前記Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害することを特徴とする方法。
【請求項４６】
前記Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼが、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼである、請求項４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１３年１２月１０日に出願された米国仮特許出願第６１／９１４，０８８号明細書の利益及び優先権を主張し、その内容を引用により本明細書に組み込む。
【０００２】
本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ）の阻害剤及びその治療用途に提供する。とりわけ、本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害するピラゾリルグアニジン化合物、及び治療剤としてピラゾリルグアニジン化合物を使用していくつかの病状を治療する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
多細胞生物は、細胞数の精密な制御を行っている。細胞増殖と細胞死の間のバランスが、この恒常性を達成する。細胞死は、壊死又はアポトーシスとして知られる自殺形態の細胞死により、ほぼ全ての種類の脊椎動物細胞に起こる。アポトーシスは、一般的な、遺伝的にプログラムされた死のメカニズムと連結する種々の細胞外及び細胞内シグナルにより誘発される。
【０００４】
多細胞生物はアポトーシスを利用して、損傷を受けた又は不必要な細胞に、生物のために自身を破壊するように指示する。したがって、アポトーシスプロセスの制御は、正常な発生のために重要であり、例えば、指及び足指の胎児期の発生には、アポトーシスによる、相互に連結している過剰な組織の制御された除去が必要であり、脳内の神経シナプスの形成でも同じである。同様に、制御されたアポトーシスは、月経開始時の子宮の内層（子宮内膜）の剥がれ落ちを担っている。アポトーシスは、組織の形造り及び正常な細胞維持に重要な役割を有する一方で、生物の健康を脅かす細胞及び侵入者（例えば、ウイルス）に対する主要な防御の一成分でもある。
【０００５】
驚くことではないが、多くの疾患は、アポトーシス性細胞死の調節不全と関連している。実験モデルは、異常なアポトーシス制御と種々の腫瘍性疾患、自己免疫疾患、及びウイルス性疾患の病原性との間の因果関係を証明した。例えば、細胞媒介の免疫応答において、エフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球「ＣＴＬ」）は、ウイルスに感染した細胞がアポトーシスを起こすように誘導して、感染細胞を破壊する。生物は、その後に、エフェクター細胞がもはや必要でなくなると、アポトーシスプロセスに頼ってエフェクター細胞を破壊する。自己免疫は、ＣＴＬが、互いの中で、及び自身の中ですらアポトーシスを誘導することにより、通常防がれている。このプロセスの欠損は、紅斑性狼蒼及び関節リウマチなどの種々の免疫疾患に関連する。
【０００６】
多細胞生物もアポトーシスを利用して、損傷した核酸（例えば、ＤＮＡ）を有する細胞が、癌性になる前に自身を破壊するように指示する。いくつかの発癌性のウイルスは、正常なアポトーシス性プロセスを中止するように、感染した（形質転換した）細胞をリプログラミングすることにより、この防護策に打ち勝つ。例えば、いくつかのヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）は、ｐ５３アポトーシスプロモーターを不活性化させるタンパク質（Ｅ６）を産生することにより、形質転換した細胞のアポトーシス性除去を抑制することにより、子宮頸癌を起こすことに関与してきた。同様に、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）は、単球増加症及びバーキットリンパ腫の原因因子であるが、異常な細胞の正常なアポトーシス性除去を妨げるタンパク質を産生するように感染細胞をリプログラミングし、それにより癌細胞が増殖し、生物全体に広がる。
【０００７】
さらに他のウイルスは、細胞のアポトーシス機構を、癌の発生を直接もたらさずに、破壊的に操作する。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した個体における免疫系の破壊は、感染したＣＤ４＋Ｔ細胞（約１００，０００のうち１）が、感染していない姉妹細胞にアポトーシスを受けるように指示することにより進行すると考えられる。
【０００８】
非ウイルス性の手段により起こるいくつかの癌も、アポトーシスによる破壊を逃れる機構を開発している。メラノーマ細胞は、例えば、Ａｐａｆ−１をコードする遺伝子の発現を阻害することにより、アポトーシスを回避する。他の癌細胞、特に肺及び結腸癌細胞は、異常な細胞のＣＴＬ媒介性除去の開始を阻害する可溶性デコイ分子を高レベルで分泌する。アポトーシス機構の不完全な制御も、種々の変性病態及び血管疾患に関与してきた。
【０００９】
アポトーシスプロセス及びその細胞機構の制御された調節は、多細胞生物の生存にとって重要である。典型的には、アポトーシスを受けるように指示された細胞中に起こる生化学的変化は、秩序だって進行する。しかし、上記に示された通り、アポトーシスの欠陥のある制御は、生物に重篤な有害作用を起こし得る。
【００１０】
これらのプロセスの不完全な制御を特徴とする疾患及び病態（例えば、ウイルス感染症、過増殖性の自己免疫疾患、慢性炎症性病態、及び癌）を患っている対象のアポトーシスプロセスを制御する、改善された組成物及び方法が必要とされている。本発明は、これらの必要性に対処し、他の関連する利点を与える。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ）を阻害するピラゾリルグアニジン化合物、ピラゾリルグアニジン化合物を含む医薬組成物、並びにそのような化合物及び医薬組成物を使用していくつかの病状を治療する方法を提供する。したがって、本発明の一態様は、式Ｉ：
【化１】
2016539983.tif 000002
（式中、変数は詳細な説明に定義される通りである）
により表される化合物のファミリー（全ての立体異性体、幾何異性体、及び互変異性体を含む）；又は前記のいずれかの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物を提供する。変数Ａ１は、多様に置換されているピラゾリル基であり、化合物が、ピラゾリルの炭素原子に結合したハロアルキル基に加え、ハロアルキル基を有する炭素原子の隣位の炭素原子に結合したアルキル基を有する場合、大幅に増加した化合物の血液血漿濃度を示す本明細書に表される実験結果により表される通りなど、ピラゾリル上の置換パターンが化合物の性質に著しく影響し得ることが発見された。
【００１２】
本発明の別の態様は、式Ｉ−Ａ：
【化２】
2016539983.tif 000003
（式中、変数は、詳細な説明に定義される通りである）
により表される化合物のファミリー（全ての立体異性体、幾何異性体、及び互変異性体を含む）；又はその薬学的に許容できる塩を提供する。
【００１３】
前記の化合物は、本明細書に記載される化合物及び薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物中に存在してよい。
【００１４】
本発明の別の態様は、医学的障害に苦しむ対象を治療する方法を提供する。方法は、疾患の症状を改善するために、対象に、治療上有効な量の本明細書に記載される１種以上のピラゾリルグアニジン化合物、例えば、式Ｉ又はＩ−Ａの化合物を投与することを含む。数多くの障害が、本明細書に記載されるピラゾリルグアニジン化合物を使用して治療できる。例えば、本明細書に記載される化合物を使用して、免疫性疾患又は炎症性疾患、例えば、関節リウマチ、乾癬、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、セリアックスプルー、特発性血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、喘息、表皮過形成、及び本明細書に記載される他の医学的障害などを治療できる。本明細書に記載される化合物を使用して、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、癌、又は細菌感染も治療できる。
【００１５】
本発明の別の態様は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ、例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害する方法を提供する。方法は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを、式Ｉ又はＩ−Ａの化合物などの本明細書に記載される化合物に曝露させて、前記Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ）を阻害するピラゾリルグアニジン化合物、ピラゾリルグアニジン化合物を含む医薬組成物、並びにピラゾリルグアニジン化合物及び医薬組成物の療法における使用方法を提供する。
【００１７】
本発明の典型的な組成物及び方法が、以下の項でより詳細に説明される：Ｉ．Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の調節剤；ＩＩ．ピラゾリルグアニジン化合物；ＩＩＩ．ピラゾリルグアニジン化合物の治療用途、並びにＩＶ．医薬組成物、製剤、並びに典型的な投与経路及び投薬上考慮すべき事項。ある特定の項で説明される本発明の態様は、どの特定の項にも限定されないものとする。
【００１８】
本発明の実施は、特記されない限り、有機化学、薬理学、分子生物学（組換え技法を含む）、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法を利用し、それらは、当技術分野の技量内にある。そのような技法は、そのそれぞれが引用により全体として組み込まれている“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｂ．Ｍ．Ｔｒｏｓｔ  ＆  Ｉ．Ｆｌｅｍｉｎｇ，ｅｄｓ．，１９９１−１９９２）；“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ”Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ＆  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；“Ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ”（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｕｐｄａｔｅｓ）；“ＰＣＲ：ｔｈｅ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ”（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；及び“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）などの文献に完全に説明されている。
【００１９】
本発明の理解を助けるため、いくつかの用語及び句が以下に定義される。
【００２０】
本明細書では、用語「グアニジン」は、薬学的に許容できる塩形態を含む、以下のコア構造を有する化合物を指す。
【化３】
2016539983.tif 000004
【００２１】
用語「アルキル」は、本明細書においてそれぞれＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、及びＣ１〜Ｃ６アルキルと称される１〜１２、１〜１０、又は１〜６つの炭素原子の直鎖又は分岐鎖基などの飽和の直鎖又は分岐鎖の炭化水素を指す。典型的なアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどがあるが、これらに限定されない。
【００２２】
用語「アルキレン」は、アルキル基の二端基を指す。典型的なアルキレン基には、−ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２−がある。
【００２３】
用語「ハロアルキル」は、少なくとも１つのハロゲンにより置換されているアルキル基を指す。例えば、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３など。
【００２４】
用語「シクロアルキル」は、本明細書において、例えば、「Ｃ４−８シクロアルキル」と称される、３〜１２、３〜８、４〜８、又は４〜６つの炭素の、シクロアルカンから誘導された一価の飽和の環式、二環式、又は架橋環式（例えば、アダマンチル）炭化水素基を指す。典型的なシクロアルキル基には、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロブチル、及びシクロプロピルがある。
【００２５】
用語オルト、メタ、及びパラは当技術分野で認識されており、それぞれ１，２−、１，３−、及び１，４−二置換ベンゼンを指す。例えば、名称１，２−ジメチルベンゼンとオルト−ジメチルベンゼンは同義である。
【００２６】
用語「アルコキシル」および「アルコキシ」は当技術分野で認識されており、酸素基が結合している、先に定義されたアルキル基を指す。代表的なアルコキシル基には、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどがある。
【００２７】
記号
【化４】
2016539983.tif 000005
は結合点を示す。
【００２８】
本開示の化合物は、１つ以上のキラル中心及び／又は二重結合を含むことがあり、したがって、幾何異性体、エナンチオマー、又はジアステレオマーなどの立体異性体として存在し得る。本明細書での用語「立体異性体」は、全ての幾何異性体、エナンチオマー、又はジアステレオマーからなる。これらの化合物は、立体異性を生じさせる炭素原子の周囲の置換基の配置に応じて、記号「Ｒ」又は「Ｓ」により明示できる。立体異性体にはエナンチオマー及びジアステレオマーがある。エナンチオマー又はジアステレオマーの混合物は、命名法において「（±）」と称され得るが、当業者は、構造がキラル中心を暗に示し得ることを認識するだろう。他に示されない限り、具体的な化合物の一般的な化学構造及び図解表示は、全ての立体異性体を包含する。
【００２９】
本発明の化合物の個々の立体異性体は、不斉中心又は立体異性を生じさせる中心を含む市販の出発物質から合成により調製することも、ラセミ混合物の調製とそれに続く当業者に周知である分割方法により調製することもできる。これらの分割方法は、（１）エナンチオマーの混合物のキラル補助剤への結合、生じたジアステレオマーの混合物の、再結晶化若しくはクロマトグラフィーによる分離、及び光学的に純粋な生成物の補助剤からの遊離、（２）光学活性な分割剤を利用する塩形成、又は（３）光学エナンチオマーの混合物のキラルクロマトグラフィーカラムでの直接分離により例示される。立体異性混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩錯体としての化合物の結晶化、又はキラル溶媒中での化合物の結晶化などの周知の方法によっても、その成分の立体異性体に分割できる。立体異性体は、立体異性体的に純粋な中間体、試薬、及び触媒から、周知の不斉合成法によっても得られる。
【００３０】
幾何異性体も、本発明の化合物に存在し得る。本発明は、炭素−炭素二重結合の周囲の置換基の配置又は炭素環式環の周囲の置換基の配置から生じる種々の幾何異性体及びその混合物を包含する。炭素−炭素二重結合の周囲の置換基は、「Ｚ」又は「Ｅ」配置にあると称されるが、ここで、用語「Ｚ」及び「Ｅ」はＩＵＰＡＣ基準に従って使用される。特記されない限り、二重結合を描写する構造は、「Ｅ」と「Ｚ」の両異性体を包含する。
【００３１】
本明細書に記載される特定の化合物は、単一の互変異性体としても、互変異性体の混合物としても存在し得る。例えば、少なくとも１つのグアニジン窒素原子に結合している水素原子を有する特定のグアニジン化合物は、単一の互変異性体としても、互変異性体の混合物としても存在し得る。例えば、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３位置で結合している置換基に応じて、グアニジン化合物は、Ａ、Ｂ、又はＣにより表される単一の互変異性体としても、Ａ、Ｂ、及びＣの２つ以上の混合物としても存在し得る。
【化５】
2016539983.tif 000006
【００３２】
同様に、ピラゾール環窒素原子に結合した水素原子を有する特定のグアニジン化合物は、単一の互変異性体（Ｄ又はＥ）としても、互変異性体ＤとＥの混合物としても存在し得る。
【化６】
2016539983.tif 000007
【００３３】
本明細書に開示される化合物は、水、エタノールなどの薬学的に許容できる溶媒と溶媒和された形態並びに溶媒和されていない形態で存在し得るが、本発明が溶媒和された形態と溶媒和されていない形態の両方を包含することが意図される。
【００３４】
本発明は、先に列挙された化合物と同一であるが、１つ以上の原子が、天然に通常みられる原子質量又は質量数と異なる原子質量又は質量数を有する原子に置き換わっている、同位体標識された本発明の化合物を包含する。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌがある。
【００３５】
特定の同位体標識された開示された化合物（例えば、３Ｈ及び１４Ｃで標識されたもの）は、化合物及び／又は基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム化した（すなわち３Ｈ）及び炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、調製の容易さ及び検出可能性のために特に好ましい。さらに、重水素（すなわち２Ｈ）などの重い同位体による置換は、高い代謝安定性（例えば、増加したインビボ半減期又は減少した用量の要件）から生じる特定の治療上の利点を与え得るので、いくつかの場合に好ましくなり得る。同位体標識された本発明の化合物は、例えば、本明細書の実施例に開示された手順と類似の手順に従って、同位体標識されていない試薬を同位体標識された試薬に替えることにより、一般的に調製できる。
【００３６】
用語「ＩＣ５０」は当技術分野で認識されており、その標的の５０％阻害のために要する化合物の濃度を指す。
【００３７】
用語「ＥＣ５０」は当技術分野で認識されており、その最大効果の５０％が観察される化合物の濃度を指す。
【００３８】
用語「対象」及び「患者」は、本発明の方法により治療すべき生物を指す。そのような生物には、好ましくは、哺乳動物（例えば、ネズミ科の動物、サル、ウマ科の動物、ウシ属の動物、ブタ、イヌ科の動物、ネコ科の動物など）があるが、これらに限定されず、最も好ましくはヒトがある。本発明の状況において、用語「対象」及び「患者」は、一般に、アポトーシスプロセスの調節不全を特徴とする病態に関して治療（例えば、本発明の化合物及び任意選択で１種以上の他の薬剤の投与）を受けるか、又は受けた個体を指す。
【００３９】
本明細書では、用語「有効量」は、有益な又は所望の結果をもたらすのに充分な化合物の量を指す。有効量は、１つ以上の投与、塗布、又は用量で投与でき、特定の製剤又は投与経路に限定されないものとする。本明細書では、用語「治療すること」は、あらゆる効果、例えば、病態、疾患、障害などの改善をもたらす軽減、減少、調節、改善、若しくは解消、又はその症状の改善を含む。
【００４０】
句「病的に増殖又は成長している細胞」は、正常な成長の通常の制限により支配されていない動物の増殖している細胞の局所的な集団を指す。
【００４１】
本明細書では、用語「活性化されていない標的細胞」は、Ｇｏ期にあるか、刺激が加えられていない細胞を指す。
【００４２】
本明細書では、用語「活性化された標的リンパ球様細胞」は、適切な刺激により初回刺激が与えられてシグナル伝達カスケードを起こしたリンパ球様細胞か、或いはＧｏ期にないリンパ球様細胞を指す。活性化されたリンパ球様細胞は、増殖し、活性化誘導細胞死を起こし、１種以上の細胞毒、サイトカイン、又は細胞型（例えば、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）に特徴的な他の関連する膜結合タンパク質を産生し得る。それらは、また、表面に特定の抗原を示すあらゆる標的細胞を認識し、結合して、その後に、そのエフェクター分子を放出することが可能である。
【００４３】
本明細書では、用語「活性化された癌細胞」は、適切な刺激により初回刺激が与えられて、シグナル伝達を起こした癌細胞を指す。活性化された癌細胞は、Ｇｏ期にあることも、ないこともある。
【００４４】
活性化剤は、標的細胞との相互作用と同時に、シグナル伝達カスケードをもたらす刺激である。活性化刺激の例には、小分子、放射エネルギー、及び細胞活性化細胞表面受容体に結合する分子があるが、これらに限定されない。活性化刺激により誘発される応答は、とりわけ、細胞内Ｃａ２＋、スーパーオキシド、若しくはヒドロキシルラジカルレベルの変化；キナーゼ若しくはホスファターゼのような酵素の活性；又は細胞のエネルギー状態により特徴づけることができる。癌細胞では、活性化剤は、形質転換癌遺伝子を含む。
【００４５】
本明細書では、用語「細胞死のプロセスの調節不全」は、壊死かアポトーシスにより細胞死を受ける細胞の能力（例えば、素因）のあらゆる異常を指す。細胞死の調節不全は、例えば、免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症、シェーグレン症候群など）、慢性炎症性病態（例えば、乾癬、喘息、及びクローン病）、過剰増殖性疾患（例えば、腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫など）、ウイルス感染（例えば、ヘルペス、乳頭腫、ＨＩＶ）、並びに変形性関節症及びアテローム性動脈硬化などの他の病態を含む種々の病態に関連するか、それらにより誘発される。
【００４６】
調節不全がウイルス感染により誘発されるか、又はそれと関連する場合、調節不全が起こるか、又は観察される時点で、ウイルス感染が検出可能なことも、検出可能でないこともある点に留意されたい。すなわち、ウイルス誘発性の調節不全は、ウイルス感染の症状の消失の後ですら起こり得る。
【００４７】
本明細書での「過剰増殖性疾患」は、動物の増殖している細胞の局所集団が、正常な成長の通常の制限により支配されていない病態を指す。過剰増殖性疾患の例には、腫瘍、新生物、リンパ腫などがある。新生物は、浸潤又は転移を起こさない場合には良性であると言われ、それらのいずれかを起こす場合悪性であると言われる。転移性の細胞又は組織は、細胞が周囲の体構造に侵入し、破壊できることを意味する。過形成は、構造又は機能の著しい変更なしに組織又は器官内の細胞数増加を伴う細胞増殖の一形態である。異形成は、ある種類の完全に分化した細胞が別の種類の分化した細胞に替わる、制御された細胞成長の一形態である。異形成は、上皮又は結合組織細胞で起こり得る。典型的な異形成は、幾分無秩序な異形成上皮を伴う。
【００４８】
活性化されたリンパ球様細胞の病理学的な成長は、免疫疾患又は慢性炎症性病態をもたらすことが多い。本明細書では、用語「免疫疾患」は、生物が、生物自体の分子、細胞、又は組織を認識する抗体又は免疫細胞を産生するあらゆる病態を指す。免疫疾患の非限定的な例には、自己免疫疾患、免疫性溶血性貧血、免疫性肝炎、ベルガー病又はＩｇＡ腎症、セリアックスプルー、慢性疲労症候群、クローン病、皮膚筋炎、線維筋痛症、移植片対宿主病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、扁平苔癬、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、リウマチ熱、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎、白斑、結核などがある。
【００４９】
本明細書では、用語「慢性炎症性病態」は、生物の免疫細胞が活性化されている病態を指す。そのような病態は、病的な後遺症を伴う持続性炎症反応を特徴とする。この状態は、単核細胞の浸潤、線維芽細胞及び小血管の増殖、結合組織の増加、並びに組織破壊を特徴とする。慢性炎症性疾患の例には、クローン病、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、多発性硬化症、及び喘息があるが、これらに限定されない。関節リウマチ及び全身性エリテマトーデスなどの免疫疾患も慢性炎症性状態をもたらし得る。
【００５０】
本明細書では、用語「共投与」は、少なくとも２種の薬剤（例えば、本発明の化合物）又は療法の対象への投与を指す。いくつかの実施形態において、２種以上の薬剤／療法の共投与は同時である。他の実施形態において、第一の薬剤／療法は、第二の薬剤／療法の前に投与される。当業者は、使用される種々の薬剤／療法の製剤及び／又は投与経路が様々になり得ることを理解する。共投与の適切な用量は、当業者により容易に決定できる。いくつかの実施形態において、薬剤／療法が共投与される場合、それぞれの薬剤／療法は、それらの単独での投与に適切であるよりも低い用量で投与される。そのため、共投与は、薬剤／療法の共投与が、公知の潜在的に有害な（例えば、毒性のある）薬剤の必要な用量を低下させる実施形態において、特に望ましい。
【００５１】
本明細書では、用語「医薬組成物」は、活性薬剤と、組成物をインビボ又はエクスビボでの診断又は治療的な用途に特に好適にする不活性又は活性な担体との組み合わせを指す。
【００５２】
本明細書では、用語「薬学的に許容できる担体」は、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルション（例えば、油／水又は水／油エマルションなど）、及び様々な種類の湿潤剤などの標準的な薬学的担体のいずれも指す。組成物は、安定剤及び保存剤も含み得る。担体、安定剤、及び補助剤の例には、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ［１９７５］を参照されたい。
【００５３】
本明細書では、用語「薬学的に許容できる塩」は、対象への投与と同時に、本発明の化合物又はその活性代謝物若しくは残基を提供できる、本発明の化合物の薬学的に許容できる塩（例えば、酸又は塩基）を指す。当業者に公知である通り、本発明の化合物の「塩」は、無機又は有機の酸及び塩基から誘導できる。酸の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などがあるが、これらに限定されない。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容できないが、本発明の化合物及びその薬学的に許容できる酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に利用できる。
【００５４】
塩基の例には、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、水酸化物、アンモニア、及び式ＮＷ４＋の化合物（式中、ＷはＣ１−４アルキルである）などがあるが、これらに限定されない。
【００５５】
塩の例には、以下があるが、これらに限定されない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、ウンデカン酸塩など。塩の他の例には、Ｎａ＋、ＮＨ４＋、及びＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１−４アルキル基である）などの好適なカチオンと合わさった本発明の化合物のアニオンがある。
【００５６】
治療用途には、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容できることが企図される。しかし、薬学的に許容できない酸及び塩基の塩も、例えば、薬学的に許容できる化合物の調製又は精製に使用され得る。
【００５７】
本明細書では、用語「調節する」は、細胞成長、増殖、アポトーシスなどを含むがこれらに限定されない細胞機能の状況に影響を与える（例えば、促進する、又は妨げる）化合物（例えば、本発明の化合物）の活性を指す。
【００５８】
句「ＴＦＡ−ｄを含むＣＤＣｌ３」は、ＣＦ３ＣＯ２Ｄを含むＣＤＣｌ３の溶液を指す。
【００５９】
説明全体で、組成物が具体的な成分を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、若しくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、又はプロセス及び方法が、具体的な工程を有する、含む、若しくは含むと記載される場合、さらに、詳述された成分から基本的になる、又はそれからなる本発明の組成物があり、詳述された加工工程から基本的になる、又はそれからなる本発明によるプロセス及び方法があることが企図される。
【００６０】
一般的に、パーセンテージを明示する組成は、特記されない限り、重量基準である。さらに、変数が定義を伴わない場合、変数の先の定義が優先する。
【００６１】
Ｉ．Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の調節剤
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の化合物への細胞の曝露により、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性）を制御する。いくつかの実施形態において、化合物は、ＡＴＰ合成及びＡＴＰ加水分解を阻害する。化合物の効果は、細胞変化の何らかの数を検出することにより測定できる。例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性及び／又は細胞死は、本明細書及び当技術分野に記載される通りに、アッセイできる。いくつかの実施形態において、細胞株は、密度依存性制約なしに指数増殖を達成するのに適切な細胞培養条件（例えば、気体（ＣＯ２）、温度、及び培地）下で、適切な期間維持される。細胞数及び／又は生存度は、トリパンブルー排除／血球計算法又はアラマーブルー若しくはＭＴＴ色素変換アッセイなど標準的な技法を利用して測定される。或いは、アポトーシス又は壊死の異常に関連した遺伝子又は遺伝子産物の発現に関して、細胞を分析できる。
【００６２】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物の細胞への曝露は、アポトーシスを誘導する。特定の他の実施形態において、本発明は、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼとの相互作用によりアポトーシス又は細胞増殖の停止を誘導する。さらに他の実施形態において、本発明の化合物は、対象に投与された場合、細胞のＲＯＳレベル（例えば、Ｏ２−）の初期の増加を起こす。
【００６３】
ＩＩ．ピラゾリルグアニジン化合物
本発明の一態様は、式Ｉ：
【化７】
2016539983.tif 000008
（式中、
Ａ１は
【化８】
2016539983.tif 000009
であり；
Ａ２は、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びＣ１〜Ｃ３ハロアルキルからなる群から独立に選択される１、２、又は３つの置換基により置換されているフェニルであり；
Ｒ１は、各出現で独立に、クロロ、フルオロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメチル、又はシアノを表し；
Ｒ２は、水素、クロロ、フルオロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、又はトリフルオロメチルであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；且つ
ｎは、１又は２である）
により表される化合物のファミリー（全ての立体異性体、幾何異性体、及び互変異性体を含む）；又は前記のいずれかの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物を提供する。
【００６４】
上記式Ｉ中の変数の定義は、多くの化学基を包含する。本願は、例えば、ｉ）変数の定義が、上述の化学基から選択される単一の化学基である、ｉｉ）定義が、上述のものから選択された２つ以上の化学基の集合である、及びｉｉｉ）化合物が、（ｉ）又は（ｉｉ）により定義される変数の組み合わせにより定義される、例えば、Ｒ１およびＲ２がフルオロであり、Ｒ５が水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルである場合などの実施形態を企図する。
【００６５】
上述の通り、化合物が、ピラゾリルの炭素原子に結合したハロアルキル基に加え、ハロアルキル基を有する炭素原子の隣位の炭素原子に結合したアルキル基を有する場合、大幅に増加した化合物の血液血漿濃度を示す本明細書に表される実験結果により表される通りなど、ピラゾリル上の置換パターンが化合物の性質に著しく影響し得ることが発見された。したがって、本明細書のピラゾリルグアニジン化合物、例えば、式Ｉの化合物は、ハロアルキル基を有する炭素原子の隣位のピラゾリルの炭素原子に結合したアルキル基を欠く（例えば、Ｒ３が水素である場合）対応する化合物よりも、対象（例えば、マウス又はラット）に経口投与した場合、より高い（例えば、少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、又は３倍高い）Ｃｍａｘ及び／又はＡＵＣを有する物性によりさらに特性化できる。
【００６６】
特定の実施形態において、化合物は、式Ｉの化合物、又はその立体異性体、幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩である。
【００６７】
特定の実施形態において、Ｒ１は、クロロ又はフルオロである。特定の実施形態において、Ｒ１は、フルオロ、例えば、メタ−フルオロである。他の実施形態において、Ｒ１は、クロロ、例えば、オルト−クロロ又はメタ−クロロである。
【００６８】
特定の実施形態において、Ｒ２は、水素、クロロ、又はフルオロである。特定の実施形態において、Ｒ２は水素である。特定の実施形態において、Ｒ２は、クロロ又はフルオロである。特定の実施形態において、Ｒ２は、フルオロ、例えば、パラ−フルオロである。他の実施形態において、Ｒ２は、クロロ、例えば、パラ−クロロである。
【００６９】
特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はフルオロであり、例えば、Ｒ１はメタ−フルオロであり、Ｒ２はパラ−フルオロである。他の実施形態において、Ｒ１はクロロであり、Ｒ２はクロロであり、例えば、Ｒ１はオルト−クロロであり、Ｒ２はパラ−クロロである。さらに他の実施形態において、Ｒ１はクロロ（例えば、メタ−クロロ）であり、Ｒ２は水素である。
【００７０】
特定の実施形態において、Ｒ３は、メチル又はエチルなどのＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【００７１】
特定の実施形態において、Ｒ４は、トリフルオロメチルである。
【００７２】
特定の実施形態において、Ｒ５は、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ５は、メチル又はエチルなどのＣ１〜Ｃ６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ５は水素である。
【００７３】
特定の実施形態において、Ａ１は、
【化９】
2016539983.tif 000010
で表されるものである。
【００７４】
特定の実施形態において、Ａ２は、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ３ハロアルキルからなる群から独立に選択される１、２、又は３つの置換基により置換されているフェニルである。特定の実施形態において、Ａ２は、クロロ、フルオロ、及びＣ１〜Ｃ３ハロアルキルからなる群から独立に選択される１、２、又は３つの置換基により置換されているフェニルである。特定の実施形態において、Ａ２は、クロロ、フルオロ、及びＣ１〜Ｃ３ハロアルキルからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである。特定の実施形態において、Ａ２は、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである。特定の実施形態において、Ａ２は、３−クロロ−５−フルオロフェニルである。
【００７５】
特定の実施形態において、ｎは１である。特定の他の実施形態において、ｎは２である。
【００７６】
変数定義の全ての組み合わせが包含される。例えば、特定の実施形態において、Ｒ１は、クロロ又はフルオロであり；Ｒ２は、水素、クロロ、又はフルオロであり；Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル又はエチル）であり；Ｒ４はトリフルオロメチルであり；Ａ２は、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである（例えば、Ａ２は、３−クロロ−５−フルオロフェニルである）。特定の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はフルオロであり、例えば、Ｒ１はメタ−フルオロであり、Ｒ２はパラ−フルオロである。他の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１はクロロであり、Ｒ２はクロロであり、例えば、Ｒ１はオルト−クロロであり、Ｒ２はパラ−クロロである。さらに他の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１は、クロロ（例えば、メタ−クロロ）であり、Ｒ２は水素である。特定の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１は、クロロ又はフルオロであり；Ｒ２は、水素、クロロ、又はフルオロであり；Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル又はエチル）であり；Ｒ４はトリフルオロメチルであり；Ａ２は、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルであり（例えば、Ａ２は、３−クロロ−５−フルオロフェニルである）；Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル又はエチル）である。特定の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はフルオロであり、例えば、Ｒ１はメタ−フルオロであり、Ｒ２はパラ−フルオロである。他の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１はクロロであり、Ｒ２はクロロであり、例えば、Ｒ１はオルト−クロロであり、Ｒ２はパラ−クロロである。さらに他の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１は、クロロ（例えば、メタ−クロロ）であり、Ｒ２は水素である。特定の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１は、クロロ又はフルオロであり；Ｒ２は、水素、クロロ、又はフルオロであり；Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル又はエチル）であり；Ｒ４はトリフルオロメチルであり；Ａ２は、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルであり（例えば、Ａ２は、３−クロロ−５−フルオロフェニルである）；Ｒ５は水素である。特定の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はフルオロであり、例えば、Ｒ１はメタ−フルオロであり、Ｒ２はパラ−フルオロである。他の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１はクロロであり、Ｒ２はクロロであり、例えば、Ｒ１はオルト−クロロであり、Ｒ２はパラ−クロロである。さらに他の実施形態において、ｎは１であり、Ｒ１は、クロロ（例えば、メタ−クロロ）であり、Ｒ２は水素である。
【００７７】
本発明の別の態様は、式Ｉ−Ａ：
【化１０】
2016539983.tif 000011
（式中、
Ｒ１は、クロロ又はフルオロであり；
Ｒ２は、水素、クロロ、又はフルオロであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４は、トリフルオロメチルであり；
Ｒ５は、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；且つ
Ａ２は、クロロ及びフルオロからなる群から独立に選択される１又は２つの置換基により置換されているフェニルである）
で示される化合物（全ての立体異性体、幾何異性体、及び互変異性体を含む）；又はその薬学的に許容できる塩を提供する。
【００７８】
上記式Ｉ−Ａ中の変数の定義は、多数の化学基を包含する。本願は、例えば、ｉ）変数の定義が、上述の化学基から選択される単一の化学基である、ｉｉ）定義が、上述のものから選択される２つ以上の化学基の集合である、及びｉｉｉ）化合物が、（ｉ）又は（ｉｉ）により定義される変数の組み合わせにより定義される、例えば、Ｒ１及びＲ２がフルオロであり、且つ、Ｒ５が、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルである場合などの実施形態を企図する。
【００７９】
特定の実施形態において、Ｒ１及びＲ２はフルオロである。特定の他の実施形態において、Ｒ１はメタ−フルオロであり、Ｒ２はパラ−フルオロである。特定の実施形態において、Ｒ１及びＲ２はクロロである。特定の実施形態において、Ｒ１はオルト−クロロであり、Ｒ２はパラ−クロロである。特定の実施形態において、Ｒ１はクロロであり、Ｒ２は水素である。特定の実施形態において、Ｒ１はメタ−クロロである。
【００８０】
特定の実施形態において、Ｒ３は、メチル又はエチルである。特定の実施形態において、Ｒ５は水素である。特定の実施形態において、Ｒ５はＣ１〜Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ５は、メチル又はエチルである。
【００８１】
特定の実施形態において、Ａ２は３−クロロ−５−フルオロフェニルである。
【００８２】
特定の実施形態において、化合物は、以下の表１〜４のいずれか１つに列記された化合物の１つ、又はその薬学的に許容できる塩である。特定の他の実施形態において、化合物は、以下の表１に列記された化合物の１つ、又はその薬学的に許容できる塩である。前記化合物を薬学的に許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を製造できることが理解される。
【００８３】
【表１】
2016539983.tif 000012
【００８４】
【表２】
2016539983.tif 000013
【００８５】
【表３】
2016539983.tif 000014
【００８６】
【表４】
2016539983.tif 000015
【００８７】
【表５】
2016539983.tif 000016
【００８８】
前記化合物を薬学的に許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を製造できることが理解される。
【００８９】
本明細書に記載される化合物を調製する典型的な方法が実施例に与えられる。本明細書に記載される種々の化合物を製造するさらなる典型的な手順は、以下のスキーム１Ａおよび１Ｂに説明される。合成スキームは、本発明の範囲又は趣旨を限定するのではなく、本発明を説明する目的で提供される。出発物質は、商業的供給源から得ることも、文献に記載されている手順に基づいて調製することもできる。
【００９０】
スキーム１−Ａの合成経路は、任意選択で置換されているベンゾイルクロリドを、チオシアン酸カリウムと、有機溶媒中で反応させて、アシルイソチオシアネート中間体を形成することを含む。このアシルイソチオシアネート中間体をアミンで処理すると、アシルチオウレアが形成し、それを、濾過又は抽出により単離する。アシルチオウレアを、第二のアミンと、１−エチル−２’，２’−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）などのカップリング剤を使用してカップリングして、所望のピラゾリル含有アシル−グアニジン生成物を形成する。いずれかのアミン化合物が、スキーム１に説明される条件下で反応を受け得るさらなる官能基を含む場合には、保護及び脱保護のための標準的な保護基戦略を利用できる。例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．；Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１を参照されたい。
【００９１】
【化１１】
2016539983.tif 000017
より具体的な合成経路がスキーム１−Ｂに与えられるが、それは、エステル１（例えば、Ｒ４はＣＦ３である）及びプロピオニトリル（Ｒ３はＣＨ３である）などのニトリルからのエノラート塩２の形成を含む。次いで、エノラート塩２は、ヒドラジン（Ｒ５が水素である式（Ｉ−Ａ）化合物の場合）又はアルキル若しくはシクロアルキル−置換ヒドラジンと反応して、ピラゾール３を形成し、次に、チオシアン酸カリウム及び置換されているベンゾイルクロリド４により処理されて、チオウレア５を形成する。チオウレアは、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩などの試薬及びアニリン６と反応して、所望のピラゾリルグアニジン化合物を形成する。
【００９２】
【化１２】
2016539983.tif 000018
ＩＩＩ．ピラゾリルグアニジン化合物の治療用途
式Ｉ又はＩ−Ａのグアニジン化合物などの本明細書に記載されるグアニジン化合物が、いくつかの病態の１つ以上、例えば、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の調節不全を特徴とする疾患、細胞又は組織中の壊死及び／又はアポトーシスプロセスの調節不全を特徴とする疾患、並びに異常な細胞成長及び／又は過剰増殖を特徴とする疾患を患っている患者に治療効果を与えることが企図される。本明細書に記載される化合物を使用して、本明細書の他の場所に記載されている細胞死に関連する種々の調節不全疾患を治療することもできる。さらに、本明細書に記載される化合物を使用して、ＡＴＰ合成を阻害できる。
【００９３】
したがって、本発明の一態様は、医学的障害を患っている対象を治療する方法を提供する。方法は、障害の症状を改善するために、治療上有効な量の、１種以上の本明細書に記載されるピラゾリルグアニジン化合物、例えば、上記ＩＩ項に記載された式Ｉ又はＩ−Ａの化合物を対象に投与することを含む。
【００９４】
本明細書に記載されるグアニジン化合物を使用して、多数の医学的障害を治療できる。例えば、本明細書に記載される化合物を使用して、細胞又は組織中の壊死及び／若しくはアポトーシスプロセスの調節不全を特徴とする医学的障害、異常な細胞成長及び／若しくは過剰増殖を特徴とする疾患など、又は狼瘡、関節リウマチ、乾癬、移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、癌、及び細菌感染を治療できる。特定の実施形態において、癌は、固形腫瘍、白血病、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、精巣腫瘍、皮膚癌、直腸癌、甲状腺癌、腎臓癌、子宮癌、食道（ｅｓｐｏｐｈａｇｕｓ）癌、肝臓癌、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、又は網膜芽細胞腫である。
【００９５】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、冒された細胞又は組織中のＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ複合体（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ複合体）の活性を調節する（例えば、阻害する又は促進する）ことにより、化合物が治療効果を与えると考えられている。いくつかの実施形態において、本発明の組成物を使用して、免疫／慢性炎症性疾患（例えば、乾癬、自己免疫疾患、臓器−移植片拒絶、及び表皮過形成）が治療される。さらなる実施形態において、本発明の組成物が狭窄療法と共に使用されて、損なわれた（例えば、閉塞した）血管が治療される。
【００９６】
特定の実施形態において、グアニジン化合物を含む組成物は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼに向けられる所望の効果を最大にする条件下（例えば、時機、投与量、他の薬剤との共投与、投与様式、対象の選択、標的化薬剤の使用など）で投与される。
【００９７】
特定の実施形態において、医学的障害は免疫疾患である。特定の他の実施形態において、医学的障害は炎症性疾患である。特定の他の実施形態において、医学的障害は自己免疫疾患である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、関節リウマチ、乾癬、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、セリアックスプルー、特発性血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、喘息、ブドウ膜炎、又は表皮過形成である。
【００９８】
特定の実施形態において、疾患は、クローン病又は潰瘍性大腸炎である。
【００９９】
特定の他の実施形態において、医学的障害は、軟骨炎症、骨分解、関節炎、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少関節型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性反応性関節炎、若年性レター（Ｒｅｔｅｒ’ｓ）症候群、ＳＥＡ症候群、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリテマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型関節リウマチ、全身型関節リウマチ、強直性脊椎炎、腸炎性関節炎、反応性関節炎、レター症候群、皮膚筋炎、乾癬性関節炎、血管炎、ミオリティス（ｍｙｏｌｉｔｉｓ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｌｉｔｉｓ）、変形性関節症、結節性多発動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ  ｎｏｄｏｓｓａ）、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛、サルコイドーシス、硬化症、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化、スティル病、慢性閉塞性肺疾患、ギランバレー病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、又は自己免疫性肝炎である。特定の実施形態において、乾癬は、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬、膿疱性乾癬、又は乾癬性紅皮症である。
【０１００】
特定の他の実施形態において、医学的障害は、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、移植片対宿主病、狼瘡、関節リウマチ、又は乾癬である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、又は癌である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、移植片対宿主病、骨髄腫、又はリンパ腫である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、心血管疾患又は癌である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、クローン病、炎症性腸疾患、又は多発性硬化症である。特定の他の実施形態において、医学的障害は移植片対宿主病である。さらなる実施形態において、医学的障害は細菌感染である。特定の実施形態において、患者（又は対象）はヒトである。
【０１０１】
先に示された通り、本明細書に記載されるグアニジン化合物は、細菌感染の治療に使用できる。種々の細菌が、グアニジン化合物に影響を受けやすいことが企図される。代表的な細菌には、ブドウ球菌種（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）；腸球菌種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｅ．フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）及びＥ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）；レンサ球菌種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及びＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；大腸菌種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、腸管毒素原性、腸管病原性、腸管侵入性、腸管出血性、及び腸管凝集性Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）株を含むＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）；ヘモフィルス属菌種（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｈ．インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）；並びにモラクセラ属菌種（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｍ．カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）がある。他の例には、マイコバクテリウム属菌種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビアン−イントラセルラーレ（Ｍ．ａｖｉａｎ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．アフリカナム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、Ｍ．ゲナベンス（Ｍ．ｇｅｎａｖｅｎｓｅ）、Ｍ．レプラエ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．ゼノピ（Ｍ．ｘｅｎｏｐｉ）、Ｍ．シミアエ（Ｍ．ｓｉｍｉａｅ）、Ｍ．スクロフラセウム（Ｍ．ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、Ｍ．マルモエンセ（Ｍ．ｍａｌｍｏｅｎｓｅ）、Ｍ．セラタム（Ｍ．ｃｅｌａｔｕｍ）、Ｍ．アブセサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、Ｍ．ケロネー（Ｍ．ｃｈｅｌｏｎａｅ）、Ｍ．ツルガイ（Ｍ．ｓｚｕｌｇａｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｍ．ヘモフィルム（Ｍ．ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｍ）、Ｍ．フォルツニ（Ｍ．ｆｏｒｔｕｎｉ）、及びＭ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）；コリネバクテリウム属菌種（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．ジフテリエ（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；ビブリオ属菌種（Ｖｉｂｒｉｏ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｖ．コレラエ（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ）；カンピロバクター属菌種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．ジェニュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）；ヘリコバクター属菌種（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｈ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）；シュードモナス属菌種、例えば、Ｐ．アエルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）；レジオネラ属菌種（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｌ．ニューモフィラ（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）；トレポネーマ属菌種（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｔ．パリズム（Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ）；ボレリア属菌種（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｂ．ブルグドルフェリ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）；リ��テリア属菌種（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｌ．モノサイトゲネス（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；バシラス属菌種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｂ．セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）；ボルダテラ属菌種（Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｂ．ペルツシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）；クロストリジウム属菌種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、Ｃ．テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、及びＣ．ボツリヌム（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）；ナイセリア属菌種（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｎ．メニンジチディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、及びＮ．ゴノローエ（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）；クラミジア属菌種（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．シタッチ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）、Ｃ．ニューモニエ（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びＣ．トラコマチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）；リケッチア属菌種（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｒ．リケッチ（Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）及びＲ．プロワツェキイ（Ｒ．ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）；シゲラ属菌種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．ソンネイ（Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ）；サルモネラ属菌種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．ティフィムリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）；エルシニア属菌種（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｙ．エンテロコリチカ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）及びＹ．シュードツベルクロシス（Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；クレブシエラ属菌種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｋ．ニューモニエ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；マイコプラズマ属菌種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｍ．ニューモニエ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；並びにトリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）がある。特定の実施形態において、本明細書に記載されるグアニジン化合物を使用して、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、Ｅ．フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｅ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｓ．ニューモニア（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、及びＰ．アエルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）からなる群から選択される細菌感染を患っている対象が治療される。特定の実施形態において、本明細書に記載されるグアニジン化合物を使用して、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）感染を患っている対象が治療される。
【０１０２】
本明細書に記載される化合物の抗菌活性は、米国臨床検査標準委員会、Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ；Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．ＮＣＣＬＳ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ１００−Ｓ１４｛ＩＳＢＮ  １−５６２３８−５１６−Ｘ｝にさらに記載される微量液体希釈最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイなどの当技術分野に公知である標準的なアッセイを利用して評価できる。このアッセイを利用して、溶液中の可視的な細菌成長を防ぐのに必要な化合物の最低濃度を決定できる。一般に、試験すべき薬物はウェルに連続希釈され、液体細菌培養物のアリコートが加えられる。この混合物は適切な条件下でインキュベートされ、次いで、細菌の成長に関して試験される。抗生物質活性が低い、又は無い化合物（高いＭＩＣ）は化合物の高濃度で成長を可能にし、抗生物質活性が高い化合物は、より低い濃度でのみ細菌成長を可能にする（低いＭＩＣ）。
【０１０３】
アッセイは、選択された細菌の株に適切な保存細菌培養条件を利用する。永久保存培養コレクションからの保存培養物は、凍結懸濁液として−７０℃で保存できる。培養物を、ドライアイス／エタノール中で急速凍結する前に、１０％スキムミルク（ＢＤ）に懸濁し、次いで−７０℃のフリーザーに置くことができる。培養物を、５％ヒツジ血液を含むトリプチックソイ寒天上で、室温で（２０℃）で維持でき、各培養物を凍結形態から戻してもう一度ＭＩＣ試験の前に移すことができる。試験前日に新しいプレートは接種され、一晩インキュベートされ、純度及び正体を確認するためにチェックされる。
【０１０４】
保存培養から戻した培養物の正体及び純度を確認して、汚染の可能性を除外できる。株の正体は、標準的な微生物学的方法により確認できる（例えば、Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ｛ＩＳＢＮ  １−５５５８１−２５５−４｝参照）。一般に、培養物は、純度、期待されるコロニーモルホロジー、及び溶血パターンの可視化のために適切な寒天プレート上で画線される。グラム染色も利用できる。ＭｉｃｒｏＳｃａｎ  ＷａｌｋＡｗａｙ  ４０  ＳＩ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ，Ｗｅｓｔ  Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して正体が確認される。この装置は、自動インキュベーター、リーダー、及びコンピューターを利用して、確認目的のために、各生物により行われる生化学反応を評価する。ＭｉｃｒｏＳｃａｎ  ＷａｌｋＡｗａｙを利用して、予備的なＭＩＣを決定することもできるが、それは以下に記載される方法を利用して確認できる。
【０１０５】
凍結保存培養物を、微量液体希釈最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）試験を実施するための、生物の最初の供給源として使用できる。保存培養は、使用前に、その標準的な成長培地で、少なくとも１成長周期（１８〜２４時間）過ごされる。ほとんどの細菌は、適切な肉汁培地の１０ｍＬアリコート中で、直接寒天プレートから直接調製できる。細菌培養物は、０．５番のマクファーランド濁度標準液の不透明度に調整される（波長６００ｎｍに設定されたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌａｍｂｄａ  ＥＺ１５０  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓでの０．２８〜０．３３の光学濃度値）。次いで、調整された培養物は成長培地中で４００倍に希釈され（０．２５ｍＬ接種物＋１００ｍＬブロス）、およそ５×１０５コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬの出発懸濁剤が製造される。ほとんどの細菌株は、カチオン調整ミューラーヒントンブロス（ＣＡＭＨＢ）で試験できる。
【０１０６】
試験化合物（「薬物」）は、ＤＭＳＯなどのアッセイに好適な溶媒中で可溶化される。薬物ストック溶液は、試験の日に調製できる。微量液体希釈ストックプレートは、２つの希釈系列、６４から０．０６μｇ薬物／ｍＬ及び０．２５から０．０００２５μｇ薬物／ｍＬで調製できる。高い濃度系列では、２００μＬのストック溶液（２ｍｇ／ｍＬ）が、９６ウェルマイクロタイタープレートの二連の列に加えられる。これは、希釈系列の第一のウェルとして使用される。段階２倍減少希釈液が、残り１１ウェルのうち１０ウェルで、ＢｉｏＭｅｋ  ＦＸロボット（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を使用して作られるが、ウェルはそれぞれ１００μＬの適切な溶媒／希釈剤を含む。列１２は溶媒／希釈剤のみを含み、対照として機能する。低濃度系列の第一のウェルでは、２００μＬの８μｇ／ｍＬストックが９６ウェルプレートの二連の列に加えられる。２倍段階希釈液が、上述の通り作成される。
【０１０７】
娘９６ウェルプレートを、上述のストックプレートからＢｉｏＭｅｋ  ＦＸロボットを使用してスポッティングして（３．２μＬ／ウェル）、直ちに使用しても、使用まで−７０℃で凍結してもよい。ＢｉｏＭｅｋ  ＦＸロボットを使用して、解凍したプレートに好気性生物を接種できる（１００μＬ体積）。接種されたプレートは積み重ねて置かれ、空のプレートで覆われる。次いで、これらのプレートは、ＣＬＳＩガイドライン（米国臨床検査標準委員会、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｓｉｘｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＮＣＣＬＳ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ７−Ａ６｛ＩＳＢＮ  １−５６２３８−４８６−４｝）に従って、周囲雰囲気中で１６から２４時間インキュベートされる。
【０１０８】
接種及びインキュベーション後に、細菌成長の程度を、暗くした部屋で、Ｔｅｓｔ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｍｉｒｒｏｒ（Ｄｙｎｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ２２０  １６）を使用して、１つの照明がマイクロブロストレイの上部を直接通って照らしている状態で目視により評価できる。ＭＩＣは、試験の条件下で、肉眼で見える成長を防ぐ薬物の最低濃度である。
【０１０９】
さらに、あらゆる１種以上の本明細書に記載されるピラゾルイルグアニジン化合物を使用して、対象のＦ１Ｆ０−ＡＴＰヒドロラーゼ関連疾患（例えば、心筋梗塞、心室肥大、冠動脈疾患、非Ｑ波心筋梗塞、鬱血性心不全、心律動異常、不安定狭心症、慢性不安定狭心症、プリンツメタル狭心症、高血圧、間欠性跛行、末梢動脈閉塞性疾患、血栓塞栓症脳卒中の血栓性又は血栓塞栓性症状、静脈血栓症、動脈血栓症、脳血栓症、肺動脈塞栓症、脳塞栓症、栓友病、播種性血管内凝固症候群、再狭窄、心房細動、脳室拡大、アテローム動脈硬化性血管疾患、動脈硬化プラーク破裂、動脈硬化プラーク形成、移植片アテローム性動脈硬化、血管再構築アテローム性動脈硬化、癌、手術、炎症、全身性感染症、人工表面、介入性心臓病学、不動、医薬品、妊娠及び胎児消失、並びに網膜症、腎障害、及び神経障害を含む糖尿病性合併症）を治療できる。
【０１１０】
併用療法
さらに、本明細書に記載されるグアニジン化合物を、Ｂｚ−４２３（米国特許第７，１４４，８８０号明細書及び同第７，１２５，８６６号明細書、米国特許出願第１１／５８６，０９７号明細書、同第１１／５８５，４９２号明細書、同第１１／４４５，０１０号明細書、同第１１／３２４，４１９号明細書、同第１１／１７６，７１９号明細書、同第１１／１１０，２２８号明細書、同第１０／９３５，３３３号明細書、同第１０／８８６，４５０号明細書、同第１０／７９５，５３５号明細書、同第１０／６３４，１１４号明細書、同第１０／４２７，２１１号明細書、同第１０／２１７，８７８号明細書、及び同第０９／７６７，２８３号明細書、並びに米国仮特許出願第６０／８７８，５１９号明細書、同第６０／８１２，２７０号明細書、同第６０／８０２，３９４号明細書、同第６０／７３２，０４５号明細書、同第６０／７３０，７１１号明細書、同第６０／７０４，１０２号明細書、同第６０／６８６，３４８号明細書、同第６０／６４１，０４０号明細書、同第６０／６０７，５９９号明細書、及び同第６０／５６５，７８８号明細書に記載されるベンゾジアゼピン化合物）、カリウムチャネル開口薬、カルシウムチャネル遮断剤、ナトリウム水素交換輸送体阻害剤、抗不整脈剤、抗アテローム性動脈硬化剤、抗凝固剤、抗血栓剤、血栓溶解促進剤、フィブリノーゲン拮抗剤、利尿剤、降圧剤、ＡＴＰアーゼ阻害剤、鉱質コルチコイド受容体拮抗剤、ホスポジエステラーゼ（ｐｈｏｓｐｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ）阻害剤、抗糖尿病剤、抗炎症剤、酸化防止剤、血管新生調節因子、抗骨粗鬆症剤、ホルモン補充療法、ホルモン受容体調節因子、経口避妊薬、抗肥満剤、抗うつ剤、抗不安剤、抗精神病剤、抗増殖剤、抗腫瘍剤、抗潰瘍及び胃食道逆流症剤、成長ホルモン剤及び／又は成長ホルモン分泌促進因子、甲状腺ミメティクス、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、コレステロール／脂質降下剤、及び脂質プロファイル療法、虚血プレコンディショニング及び／又は心筋気絶を模倣する薬剤、抗アテローム性動脈硬化剤、抗凝固剤、抗血栓剤、降圧剤、抗糖尿病剤、ＡＣＥ阻害剤、ＡＴ−１受容体拮抗剤、ＥＴ受容体拮抗剤、デュアルＥＴ／ＡＩＩ受容体拮抗剤、バソペプシダーゼ（ｖａｓｏｐｅｐｓｉｄａｓｅ）阻害剤から選択される降圧剤、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａブロッカー、Ｐ２Ｙ１及びＰ２Ｙ１２拮抗剤、トロンボキサン受容体拮抗剤、又はアスピリンから選択される抗血小板剤などの少なくとも１種の他の治療剤と組み合わせて、薬学的に許容できる担体又は希釈剤と共に、医薬組成物中で使用できる。
【０１１１】
ＩＶ．医薬組成物、製剤、並びに典型的な投与経路及び投薬上考慮すべき事項
種々の企図される医薬品及び医薬組成物の典型的な実施形態が以下に提供される。
【０１１２】
Ａ．医薬品の調製
本発明の化合物は、細胞死の調節不全、異常な細胞成長、及び過剰増殖に関連する病態など種々の病態を治療する医薬品の調製に有用である。当業者は、多くの具体的な実施形態を含む本明細書に記載される化合物の１種以上が、標準的な医薬製造手順を適用することにより調製されることを認識するだろう。そのような医薬品は、医薬分野に周知である送達方法を利用して対象に送達することができる。
【０１１３】
Ｂ．典型的な医薬組成物及び製剤
本発明のいくつかの実施形態において、組成物は単独で投与されるが、いくつかの他の実施形態において、組成物は、好ましくは、先に議論された少なくとも１種の有効成分／薬剤を固体担体と共に含むか、或いは、１種以上の薬学的に許容できる担体及び任意選択で他の治療剤（例えば、本明細書の上記ＩＩＩ項に記載されたもの）と共に含む医薬製剤中に存在する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、対象にとって有害でないという意味で「許容できる」ものでなくてはならない。
【０１１４】
企図される製剤には、経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、頬側、及び舌下含む）、膣内、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内含む）、及び肺投与に好適なものがある。いくつかの実施形態において、製剤は、単位剤形で呈されるのが簡便であり、調剤分野に公知である任意の方法により調製できる。そのような方法には、有効成分を、１種以上の副成分を構成する担体と合わせる工程がある。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体若しくは微粉砕された固体担体又は両方と、均一且つ完全に合わせ（例えば、混合）、次いで、必要な場合、生成物を付形することにより調製される。
【０１１５】
経口投与に好適な本発明の製剤は、それぞれが、好ましくは所定量の有効成分を含むカプセル、カシェ剤、又は錠剤などの個別単位として；散剤若しくは顆粒剤として；水性若しくは非水性液体中の液剤若しくは懸濁剤として；又は水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルションとして、呈され得る。他の実施形態において、有効成分は、ボーラス、舐剤、又はペースト剤などとして呈される。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、錠剤は少なくとも１種の有効成分を含み、任意選択で１種以上の補助剤／担体は、それぞれの薬剤を圧縮又は成形して作られる。いくつかの実施形態において、打錠剤は、任意選択で、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）界面活性剤又は分散剤と混合された粉末又は顆粒などの自由流動形態の有効成分を、好適な機械中で圧縮して調製される。湿製錠は、好適な機械中で、不活性な液体希釈剤により湿らされた粉末化合物（例えば、有効成分）の混合物を成形して作られる。錠剤は、任意選択で、被膜しても溝を付けてもよく、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の比率で利用してその中の有効成分の緩徐又は制御放出を与えて、所望の放出プロファイルを与えるように製剤できる。錠剤は、任意選択で、胃以外の腸の部分で放出する腸溶性コーティングを備え得る。
【０１１７】
口への局所投与に好適な製剤には、スクロース及びアラビアゴム又はトラガカントなどの風味が付いた基剤中に有効成分を含むロゼンジ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアラビアゴムなどの不活性な基剤中に有効成分を含む香錠；並びに好適な液体担体中に有効成分を含む洗口液がある。
【０１１８】
本発明による局所投与の医薬組成物は、任意選択で、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤、又は油剤として製剤される。代替実施形態において、局所製剤は、パッチ又は包帯若しくは有効成分及び任意選択で１種以上の賦形剤若しくは希釈剤を含浸させたばんそうこうなどの外傷用手当材料を含む。いくつかの実施形態において、局所製剤は、皮膚又は他の患部を通る活性薬剤の吸収又は浸透を促進する化合物を含む。そのような皮膚の浸透促進剤の例には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及び関連する類似化合物がある。
【０１１９】
望まれる場合、クリーム基剤の水相は、例えば、少なくとも約３０％ｗ／ｗの多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びポリエチレングリコール並びにこれらの混合物など、２つ以上のヒドロキシル基を含むアルコールを含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本発明の油相乳剤は、公知の成分から、公知の方法で構成される。この相は、典型的には、唯一の乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）（或いは、乳化剤（ｅｍｕｌｇｅｎｔ）としても知られる）を含むが、いくつかの実施形態において、この相が、少なくとも１種の乳化剤と、脂肪若しくは油又は脂肪と油の両方との混合物をさらに含むことも望ましい。
【０１２１】
好ましくは、親水性乳化剤が、安定剤として作用するために、親油性乳化剤と共に含まれる。いくつかの実施形態において、脂肪と油の両方が含まれることも好ましい。まとめると、安定剤があってもなくても乳化剤はいわゆる乳化蝋を構成し、蝋は、油及び／又は脂肪と共に、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化性軟膏基剤を構成する。
【０１２２】
本発明の製剤での使用に好適な乳化剤及び乳化安定剤には、ツイン６０、スパン８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアラート、及びラウリル硫酸ナトリウムがある。
【０１２３】
医薬乳剤製剤に使われそうなほとんどの油への活性化合物／薬剤の溶解度は非常に低いので、製剤用の好適な油及び脂肪の選択は、所望の性質（例えば、化粧性）を達成することに基づく。そのため、クリーム剤は、好ましくは、チューブ又は他の容器からの漏れを避けるために好適な粘稠性を有する、べとつかず、他を汚さず、水で落ちる製品でなくてはならない。直鎖若しくは分岐鎖の、一塩基性若しくは二塩基性アルキルエステル、例えば、ジイソアジパート、ステアリン酸イソセチル、ココナツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシルなど、又はＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして知られる分岐鎖エステルのブレンドが使用できるが、後者３つが好ましいエステルである。これらは、要求される性質に応じて、単独でも、組み合わせても使用できる。或いは、白色パラフィン及び／若しくは液体パラフィンなどの高融点脂質又は他の鉱油も使用できる。
【０１２４】
眼への局所投与に好適な製剤には、有効成分が好適な担体、特に薬剤用の水性溶媒中に溶解又は懸濁している点眼剤もある。
【０１２５】
直腸投与用の製剤は、例えば、ココアバター又はサリチラートを含む好適な基剤を有する坐剤として呈され得る。
【０１２６】
膣内投与に好適な製剤は、薬剤に加えて、適切であることが当技術分野に公知である担体を含むペッサリー、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、又はスプレー製剤として呈され得る。
【０１２７】
担体が固体である鼻腔内投与に好適な製剤には、例えば、約２０から約５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗い粉末があり、かぎ薬を嗅ぐように、すなわち、鼻の近くに保持された散剤の容器から鼻孔を通る迅速な吸入（例えば、強制）により投与される。担体が投与用の液体である他の好適な製剤には、鼻腔内スプレー、滴剤、ネブライザーによるエアゾール剤があるが、これらに限定されず、薬剤の水性又は油性溶液を含む。
【０１２８】
非経口投与に好適な製剤には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を、意図される受容者の血液と等張性にする溶質を含み得る水性及び非水性の等張性滅菌注射液；並びに懸濁化剤及び増粘剤、及びリポソーム又は化合物を血液成分又は１つ以上の器官に標的化するように設計された他の微小粒子系を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁剤がある。いくつかの実施形態において、製剤は、単位用量又は多用量密封容器、例えば、アンプル及びバイアル中に呈され／製剤され、使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを要する凍結乾燥された（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保存できる。処方箋に応じた注射液及び懸濁液は、先に記載された種類の滅菌散剤、顆粒剤、及び錠剤から調製できる。
【０１２９】
好ましい単位用量製剤は、本明細書で先に列挙された通り、薬剤の１日量、若しくは単位、１日副投与量、又はその適切な部分を含むものである。
【０１３０】
先に詳細に言及された成分に加え、本発明の製剤が、検討する製剤の種類を考慮して当技術分野に従来ある他の薬剤を含み得ること、例えば、経口投与に好適なものが、甘味剤、増粘剤、及び着香剤などのさらなる作用物質を含み得ることを理解されたい。本発明の薬剤、組成物、及び方法が他の好適な組成物及び療法と組み合わせられ得ることも意図される。さらに他の製剤は、任意選択で、食品添加物（好適な甘味剤、着香剤、着色剤など）、植物栄養素（例えば、亜麻仁油）、無機質（例えば、Ｃａ、Ｆｅ、Ｋなど）、ビタミン類、及び他の許容できる組成物（例えば、共役リノール酸（ｌｉｎｏｅｌｉｃ  ａｃｉｄ））、増量剤、及び安定剤などを含む。
【０１３１】
Ｃ．典型的な投与経路及び投薬上考慮すべき事項
例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル中のカプセル化、受容体依存性エンドサイトーシスなど、種々の送達系が公知であり、本発明の治療剤（例えば、上述の典型的な化合物）を投与するのに利用できる。送達の方法には、動脈内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、及び経口経路があるが、これらに限定されない。具体的な実施形態において、本発明の医薬組成物を、治療を必要とする部分に局所投与することが望ましくなり得る。それは、例えば、非限定的に、手術中の局所注入、注射、又はカテーテルにより達成され得る。
【０１３２】
特定された薬剤は、標的細胞の病理学的な成長及び関連する病態をおこしやすい、又はそのリスクがある対象又は個体に投与できる。薬剤が、マウス、ラット、又はヒトの患者など対象に投与される場合、薬剤は薬学的に許容できる担体に加えられ、対象に、局所又は全身投与できる。有益に治療できる患者を特定するために、組織試料が患者から取り除かれ、薬剤に対する感受性に関して、細胞が試験される。
【０１３３】
治療量は経験的に決定され、治療されている病状、治療されている対象、並びに薬剤の効能及び毒性に応じて変動する。動物に送達される場合、方法は、薬剤の効能をさらに確認するのに有用である。動物モデルの一例は、ＭＬＲ／ＭｐＪ−ｌｐｒ／ｌｐｒ（「ＭＬＲ−ｌｐｒ」）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅから入手可能）である。ＭＬＲ−ｌｐｒマウスは、全身性自己免疫疾患を起こす。或いは、例えば、ヌードマウスに、約１０５から約１０９の過増殖性の癌細胞又は本明細書に定義される標的細胞を皮下接種して腫瘍成長を誘発することにより、他の動物モデルを発生させることができる。腫瘍が確立されると、本明細書に記載される化合物が、例えば、腫瘍周辺に皮下注射により投与される。腫瘍サイズの低下を決定するための腫瘍測定が、ノギスを使用して、２方向で、週に２回行われる。他の動物モデルも、必要に応じて利用できる。上述の疾患及び障害のためのそのような動物モデルは、当技術分野に周知である。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、インビボ投与は、１つの投与量で、連続的又は間欠的に、治療のクールを通して実施される。最も効果的な投与の手段及び用量を決定する方法は、当業者に周知であり、療法に使用される組成物、療法の目的、治療される標的細胞、及び治療される対象により様々である。投与量レベル及びパターンが治療する医師により選択されて、単回又は反復投与が実施される。
【０１３５】
薬剤を投与する好適な用量製剤及び方法は、当業者により容易に決定される。好ましくは、化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇで、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇで、さらにより好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇで投与される。本明細書に記載される化合物が別の薬剤（例えば、感作剤として）と共投与される場合、有効量は、薬剤が単独で使用される場合より低くなり得る。
【０１３６】
医薬組成物は、経口的に、鼻腔内に、非経口的に、又は吸入療法により投与でき、錠剤、ロゼンジ剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、アンプル剤、坐剤、又はエアゾール形態の形態をとり得る。それらは、水性又は非水性希釈剤中の有効成分の懸濁剤、液剤、及び乳剤、シロップ剤、顆粒剤、又は散剤の形態もとり得る。本発明の薬剤の他に、医薬組成物は、他の薬学的に活性な化合物又は本発明の複数の化合物も含み得る。
【０１３７】
より詳細には、本明細書で有効成分とも称される本発明の薬剤は、経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、エアゾール、頬側、及び舌下を含むがこれらに限定されない）、膣内、親の（ｐａｒｅｎｔａｌ）（皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内を含むがこれらに限定されない）、及び肺を含むがこれらに限定されないあらゆる好適な経路により、療法のために投与できる。好ましい経路は、受容者の病態及び年齢、並びに治療される疾患により変わることも認識される。
【０１３８】
理想的には、薬剤は、疾患部位で活性化合物のピーク濃度を達成するように投与されなければならない。これは、例えば、任意選択で食塩水中にある薬剤の静脈注射によっても、例えば、有効成分を含む錠剤、カプセル、又はシロップ剤として経口投与によっても達成できる。
【０１３９】
薬剤の望ましい血液レベルは、疾患組織内に治療量の有効成分を与える連続注入により維持できる。各個別の治療用化合物又は薬物が単独で使用される場合に必要とされ得るよりも低い各成分の全体用量を要する治療的な組み合わせを与え、それにより有害作用を減少させる、効力のある組み合わせの使用が企図される。
【０１４０】
Ｄ．典型的な共投与経路及び投薬上考慮すべき事項
本発明は、本明細書に記載される化合物と１種以上の追加の活性薬剤との共投与を含む方法も含む。実際に、本発明の化合物を共投与することにより従来技術の療法及び／又は医薬組成物を強化させる方法を提供することは、本発明のさらなる態様である。共投与手順において、薬剤は、同時にも、連続的にも投与できる。一実施形態において、本明細書に記載される化合物は、他の活性薬剤の前に投与される。医薬製剤及び投与の様式は、上述のもののいずれでもよい。さらに、２種以上の共投与される化学薬剤、生物学的薬剤、又は放射線は、それぞれ、異なる様式又は異なる製剤を利用して投与してよい。
【０１４１】
共投与すべき薬剤又は複数の薬剤は、治療されている病態の種類による。例えば、治療される病態が癌である場合、追加の薬剤は、化学療法剤又は放射線であり得る。治療される病態が免疫疾患である場合、追加の薬剤は免疫抑制剤又は抗炎症剤であり得る。治療される病態が慢性炎症である場合、追加の薬剤は、抗炎症剤であり得る。抗癌剤、免疫抑制剤、抗炎症剤などの共投与すべき追加の薬剤は、現在臨床使用されているものを含むがそれに限定されない当技術分野の周知の薬剤のいずれでもよい。放射線治療の適切な種類及び線量の決定も、当技術分野の技量内にあるか、比較的容易に決定できる。
【０１４２】
異常なアポトーシスと関連する種々の病態の治療は、一般的に以下の２つの主な因子により制限されている：（１）薬剤耐性の発生及び（２）公知の治療剤の毒性。特定の癌において、例えば、化学剤及び放射線療法への耐性が、アポトーシスの阻害と関連することが示されている。いくつかの治療剤は、非特異的リンパ球毒性、腎及び骨髄毒性を含む有害な副作用を有する。
【０１４３】
本明細書に記載される方法は、これらの問題の両方に対処する。薬剤耐性は、治療効果を得るのに要する用量が増加する場合であるが、本明細書に記載される化合物を公知の薬剤と共投与することにより克服される。本明細書に記載される化合物は、標的細胞を公知の薬剤に感作する（逆も同様）ので、治療効果を得るのに必要なこれらの薬剤は少なくなる。
【０１４４】
請求項記載の化合物の感作機能は、公知の治療剤の毒性作用に関連する問題にも対処する。公知の薬剤に毒性がある場合、全ての場合で投与される用量を制限することが望ましく、薬剤耐性により必要な用量が増えた場合特に望ましい。請求項記載の化合物が公知の薬剤と共投与される場合、それらは必要とされる用量を減少させ、それは、また、有害作用を減少させる。
【実施例】
【０１４５】
全般的に説明されている本発明は、以下の実施例を参照してより容易に理解されるだろうが、実施例は、本発明の特定の態様及び実施形態の説明の目的のみに含められており、本発明を限定しないものとする。種々の化合物を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により特性化した。利用したＨＰＬＣ方法は、以下の通りである：方法Ａ１条件は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ−１８カラム、４．６×５０ｍｍ、１．８ミクロン、２８℃、２．０ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５％から９５％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）への５分勾配、次いで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中９５％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）で１．５分間であった；方法Ａ２条件は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ−１８カラム、４．６×１５０ｍｍ、３．５ミクロン、２６℃、２．０ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中５０％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）で５分、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中５０％から９５％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）への５分勾配、次いで、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中９５％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）で５分間であった；方法Ａ４条件は、Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳカラム、３．０×５０ｍｍ、２．２ミクロン、４０℃、１．０ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中５％から１００％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）への４．２分勾配、次いで１００％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）で１分間であった；方法Ａ５条件は、Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳカラム、３．０×５０ｍｍ、２．２ミクロン、４０℃、１．０ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中５％から１００％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）への２．２分勾配、次いで１００％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）で１分間であった；方法Ａ６条件は、Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳカラム、３．０×５０ｍｍ、２．２ミクロン、４０℃、１．０ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中５％から８０％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）への５．３分勾配、次いで、Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）中８０％ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）で１．７分間であった；方法Ａ７条件は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘｔカラム、３．０×５０ｍｍ、２．６ミクロン、４０℃、１．５ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５０％から１００％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）への２．８分勾配、次いで１００％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で１分間であった；方法Ａ８条件は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘｔカラム、３．０×５０ｍｍ、２．６ミクロン、４０℃、１．５ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中の１０％から１００％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）への２分勾配、次いで１００％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で０．６分間であった；及び方法Ａ９条件は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘｔカラム、３．０×５０ｍｍ、２．６ミクロン、４０℃、１．５ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中３０％から１００％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）への２．５分勾配、次いで１００％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で１分間であった。句「ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）」は当技術分野で認識されており、０．０５％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルを指す。句「ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）」は当技術分野で認識されており、０．１％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルを指す。句「Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）」は当技術分野で認識されており、０．１％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸を含む水を指す。句「Ｈ２Ｏ（０．０５％ＴＦＡ）」は当技術分野で認識されており、０．０５％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸を含む水を指す。
【０１４６】
実施例１−ピラゾリルグアニジン化合物の調製
ピラゾリルグアニジン化合物を製造する典型的で一般的な合成手順を、具体的なピラゾリルグアニジン化合物、Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）−３，４−ジフルオロベンズアミドを製造する典型的な合成手順と共に、以下に説明する。
【０１４７】
パートＩ：ピラゾリルグアンジン（Ｇｕａｎｄｉｎｅ）化合物を製造する一般的な方法
【化１３】
2016539983.tif 000019
第一の工程で、必要な酸クロリドを、有機溶媒中でチオシアン酸カリウムと合わせ、この混合物を周囲温度で約３０から２４０分間撹拌する。第一のアミンを加え（ニート又は有機溶媒溶液のいずれかで）、反応が完了又はほぼ完了するまで撹拌を続ける（典型的には３０分から１８時間）。生じたチオウレアは、有機層の濃縮により得ることができるが、より一般的には、水を反応混合物に加えて沈殿させ、濾過により回収する。
【０１４８】
チオウレア及び適切な第二のアミン（Ｒ１−ＮＨ２）を、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、又はジメチルホルムアミドなどの極性有機溶媒に周囲温度で溶解させて、混合物を形成する。この混合物に、１−エチル−２’，２’−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩を加え、反応混合物のアリコートのＨＰＬＣ分析により反応が完了したようになるまで、生じた混合物を撹拌する。典型的な反応時間は、３０分から１２時間の範囲であり、反応混合物を加熱して（例えば、およそ５０〜６０℃に）反応を加速できる。ＨＰＬＣ分析により反応が完了しているようであれば、反応混合物を有機溶媒（酢酸エチルなど）で希釈し、水で洗浄し、ブラインで洗浄し、有機層を適切な乾燥剤で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去する。必要な場合、所望の生成物をクロマトグラフィーにより精製できる。いくつかの場合で、抽出の後処理を省略して、粗製の反応混合物を直接シリカゲル上で濃縮し、生成物をクロマトグラフィーにより単離できる。
【０１４９】
アニリンを含む多くのアミンは、商業的供給源から容易に入手可能か、文献に記載される合成手順を利用して調製できる。Ｎ−置換ピラゾリル−アミンの調製のための必要なヒドラジンは、例えば、国際公開第２０１１／１４６５９４号及び国際公開第２０１１／１２４９３０号各パンフレットに記載されているものなどの文献方法に従って調製できる。アシルグアニジン化合物を調製する追加の手順は、例えば、国際公開第２００９／０３６１７５号、国際公開第２０１０／０３０８９１号、国際公開第２０１２／０７８８６７号、国際公開第２０１２／０７８８６９号、及び国際公開第２０１２／０７８８７４号各パンフレットに記載されている。
【０１５０】
パートＩＩ：ピラゾリルグアンジン化合物、Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）−３，４−ジフルオロベンズアミド（化合物１）を調製する典型的な合成手順
【化１４】
2016539983.tif 000020
工程Ａ：エノラート塩を調製する代表的な手順
【化１５】
2016539983.tif 000021
カリウム（Ｚ）−３−シアノ−１，１，１−トリブルオロブタ−２−エン−２−オラート
１Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのＴＨＦ溶液（１６４ｍＬ、１６４ｍｍｏｌ）に、エチル２，２，２−トリフルオロアセタート（１５．７ｍＬ、１５６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。プロピオニトリルを、反応混合物に、０℃で滴加した。生じた溶液を室温で一晩撹拌し、次いで真空下で濃縮した。生じた生成物をさらに精製せず使用した。
【０１５１】
工程Ｂ：ピラゾール形成の代表的な手順
【化１６】
2016539983.tif 000022
４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン
エタノール（２４０ｍＬ）中のカリウム（Ｚ）−３−シアノ−１，１，１−トリフルオロ−ブタ−２−エン−２−オラート（２９．５ｇ、１５６ｍｍｏｌ）に、酢酸（１１．２ｇ、１８７ｍｍｏｌ）を加え、それに続いてヒドラジン（１．０ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を１日７０℃に加熱し、次いで薄茶色スラッジに濃縮した。この残渣を酢酸エチルに再溶解させ、希炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、それに続いてブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、再濃縮し、最低量のジエチルエーテル（約７０ｍＬ）に溶解させ、ヘキサン（約２５０ｍＬ）でゆっくりと希釈した。この混合物を室温で一晩撹拌し、次いで濾過すると、標記化合物を茶色の固体として与えた。ＨＰＬＣ：保持時間２．４２分；（２５４ｎｍ）（２５〜９５％ＭｅＣＮ／水；２ｍＬ／分；０．１％ＴＦＡ；Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８  ２．５μｍ；４．６×１５０ｍｍ）。
【０１５２】
工程Ｃ：チオウレア形成の代表的手順
【化１７】
2016539983.tif 000023
３，４−ジフルオロ−Ｎ−（（４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）カルバモチオイル）ベンズアミド
３，４−ジフルオロベンゾイルクロリド（２ｇ、１１．３３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３０ｍＬ）に溶解させ、チオシアン酸カリウム（１．２１ｇ、１２．４６ｍｍｏｌ）を一度に加えた。沈殿物が形成した。混合物を室温で５０分間撹拌し、次いで、４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１．８７ｇ、１１．３３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を、さらに４５分間室温で撹拌した。水（９０ｍＬ）を加え、混合物を５分間撹拌し、次いで濾過し、パッドを水ですすぐと、黄褐色の固体を与え、真空中で乾燥させた。生じた固体をシリカゲルのクロマトグラフィーにかけると、標記化合物を薄い黄褐色の固体として与えた（３．８４ｇ）。
【０１５３】
工程Ｄ：置換アニリンをチオウレアにカップリングする代表的な手順
【化１８】
2016539983.tif 000024
Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）−３，４−ジフルオロベンズアミド
３，４−ジフルオロ−Ｎ−（（４−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）カルバモチオイル）ベンズアミド（１．９ｇ、５．２ｍｍｏｌ）と３−クロロ−５−フルオロアニリン（０．８４ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中で合わせ、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２時間５０℃に温め、次いで放冷した。冷却した反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で２回、次いでブラインで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。ヘキサン中５〜１５％酢酸エチルで溶離させるシリカゲルのクロマトグラフィーにより、黄色の油が与えられ、それを５０℃の真空オーブン中で乾燥させると、黄色の固体を与えた。この固体を、室温のジエチルエーテル（約２０ｍＬ）中で撹拌し、次いで濾過し、ヘキサン中２０％エーテルですすぐと、生成物を白色の固体として与えた（１ｇ、２．１ｍｍｏｌ）。ＨＰＬＣ（方法Ａ１）：保持時間は７．０１分であった；ＭＳ：計算値＝４７５．７８；観測地４７４．２１（ネガティブモード）。
【０１５４】
実施例２−１−エチル−４−メチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの調製
【化１９】
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カリウム（Ｚ）−３−シアノ−１，１，１−トリフルオロ−ブタ−２−エン−２−オラート（１ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）及びエチルヒドラジンシュウ酸塩（０．７９ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）を、エタノール（１８ｍＬ）中で懸濁させ、室温で７日間撹拌した。生じた混合物を濾過し、濾液をシリカゲル上に濃縮し、クロマトグラフィーにかけると、標記化合物（０．３８ｇ）を与えた。
【０１５５】
実施例３−追加のピラゾリルグアニジン化合物及び特性化データ
以下の表２の化合物を、上述の手順に基づいて調製した。出発物質は、商業的供給源から得ることも、市販の物質から容易に調製することもできる。さらに、典型的な化合物を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び／又は質量分析法（ＭＳ）により特性化した。他に示されない限り、表２中の質量スペクトルデータは、ポジティブイオンモードでエレクトロスプレーイオン化を利用して集めた。ＨＰＬＣ方法及び保持時間を、質量スペクトルデータと共に、以下の表２に与える。典型的な化合物の１Ｈ核磁気共鳴データを以下の表３に与える。記号「ＮＡ」は、データが利用できなかったことを示す。
【０１５６】
【表６】
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【０１５７】
【表７】
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【０１５８】
【表８】
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【０１５９】
【表９】
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【０１６０】
【表１０】
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【０１６１】
【表１１】
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【０１６２】
【表１２】
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【０１６３】
【表１３】
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【０１６４】
【表１４】
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【０１６５】
【表１５】
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【０１６６】
【表１６】
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【０１６７】
【表１７】
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【０１６８】
実施例４−Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼの阻害の分析
上記実施例に記載の典型的な化合物を、化合物がＡＴＰ合成を阻害する能力を測定することにより、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼに対する活性に関して試験した。さらに、ラモス細胞中での細胞傷害性に関して化合物を試験した。生物学的活性試験の結果を以下の表４に示す。ＡＴＰ合成におけるＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の阻害及びラモス細胞中の細胞傷害性を、Ｋ．Ｍ．Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００５．１２．４８５−４９６に記載の手順に従って測定した。
【０１６９】
【表１８】
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【０１７０】
【表１９】
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【０１７１】
実施例５−化合物の血液血漿レベルの分析
典型的な化合物を、動物（すなわちマウス又はラット）に経口投与し、次いで、設定された時点で血液試料を動物から採取し、血液試料中の試験化合物の量に関して分析した。実験手順及び結果を以下に説明する。
【０１７２】
パートＩ−実験手順
化合物調製
試験化合物を含む脂肪乳剤を、最初に、試験化合物を１：４のＬａｂｒａｆｉｌ  Ｍ１９４４：Ｓｏｌｕｔｏｌに溶解させ、次いで、水中０．５％カルボキシメチルセルロースを激しく撹拌しながら加えて調製し、５：２０：７５のＬａｂｒａｆｉｌ：Ｓｏｌｕｔｏｌ：０．５％ＣＭＣ水溶液の最終比率を得た。脂肪乳剤中の試験化合物の濃度は２ｍｇ／ｍＬであった。このアッセイで分析する試験化合物を以下の表５Ａ及び５Ｂに示す。
【０１７３】
投薬及び採血
動物（マウス又はラット）に、５ｍＬ／Ｋｇの投薬溶液を使用して、強制経口投与により投薬した。動物の背側中足静脈（マウス）又は頸静脈（ラット）から、投与後３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、及び２４時間に採血した。試験化合物１及びＢ−１をマウスに投与した。試験化合物Ａ−１及びＢ−２をラットに投与した。
【０１７４】
血液処理及び生体分析
分析物のストック溶液を６０％アセトニトリルの水溶液で希釈することにより、所望の連続濃度の使用溶液を得た。１０、２０、５０、１００、５００、１０００、５０００、及び１００００ｎｇ／ｍＬの使用溶液の５μＬアリコートを、５０μＬのブランク血漿に加えて、総体積５５μＬで１〜１０００ｎｇ／ｍＬ（１、２、５、１０、５０、１００、５００、１０００ｎｇ／ｍＬ）の較正標準を得た。
【０１７５】
３ｎｇ／ｍＬ（低１）、５ｎｇ／ｍＬ（低２）、５０ｎｇ／ｍＬ（中）、及び８００ｎｇ／ｍＬ（高）の４つの品質管理試料を、較正曲線に使用したものとは独立に調製した。これらのＱＣ試料を、較正標準と同様に、分析の日に調製した。
【０１７６】
５５μＬの標準、５５μＬのＱＣ試料、及び５５μＬの未知試料を、タンパク質の沈澱のために、それぞれ２００μＬのアセトニトリルに加えた。次いで、試料を、セ氏４度で３０秒間ボルテックスにかけた。セ氏４度での遠心分離（すなわち、１５０００ｒｐｍで５分間）の後、上清の２０μＬアリコートをＬＣ／ＭＳにより分析した。未知試料を標準と比べて、各試料の試験化合物濃度を得た。
【０１７７】
パートＩＩ−結果
アッセイの結果を、以下の表５Ａ及び５Ｂに与える。これらの結果は、試験動物において、Ｃ−メチル−ピラゾリル１が、１５９３ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを有したのに対して、参照化合物Ｂ−１が６０９ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを有したことを示す。また、結果は、試験動物において、Ｃ−メチル−ピラゾリルＡ−１が１４３５ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを有したのに対して、参照化合物Ｂ−２が５４１ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを有したことを示す。したがって、Ｃ−メチル−ピラゾリル化合物１及びＡ−１は、ピラゾリル基上の対応するＣ−メチルを欠く参照化合物Ｂ−１及びＢ−２よりも高いＣｍａｘを有した。同様に、ＡＵＣは、ピラゾリル基上の対応するＣ−メチルを欠く参照化合物Ｂ−１及びＢ−２よりも、Ｃ−メチル−ピラゾリル化合物１及びＡ−１では高かった。
【０１７８】
【表２０】
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【０１７９】
【表２１】
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【０１８０】
引用による組み込み
本明細書に言及された特許文書及び科学記事のそれぞれの開示全体は、全ての目的のため引用により組み込まれる。
【０１８１】
等価物
本発明は、その趣旨又は基本的な特徴から逸脱せずに、他の具体的な形態で具体化できる。したがって、前記実施形態は、あらゆる点で、本明細書に記載される本発明を限定するのではなく説明的であるとみなすべきである。そのため、本発明の範囲は、前記説明よりも、添付される特許請求の範囲により示され、請求項の同等性の意味及び範囲内にある変化は全て、本発明に包含されるものとする。
【国際調査報告】
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