(57)【要約】  毛髪保持促進物質および酵素（ペプチダーゼまたはリパーゼ）を含み、そして、ヒトの頭皮に適用すると剥脱活性を有する、製剤または製剤のペアが提供される。物質および酵素は、酵素の活性を維持するｐＨを有する水性担体中に存在する。対象の頭皮上の毛髪保持を促進するプロセスが提供され、毛髪保持促進物質は、頭皮の剥脱後またはそれに呼応して、酵素とともに、頭皮に局所的に投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
毛髪保持を促進するための製剤であって、
前記製剤は：
毛髪保持促進物質；
ペプチダーゼ、リパーゼまたはそれらの組み合わせから選択される、１つまたは複数の酵素；および
水性担体、を含む、
製剤。
【請求項２】
請求項１の製剤であって、
前記の毛髪保持促進物質は、紅参の抽出物である、
製剤。
【請求項３】
請求項１の製剤であって、
前記の毛髪保持促進物質は、ヘスペリジンまたはグルコシルヘスペリジンである、
製剤。
【請求項４】
請求項１の製剤であって、
前記の毛髪保持促進物質は、ジヒドロ−テストステロン阻害剤である、
製剤。
【請求項５】
請求項１の製剤であって、
前記の１つまたは複数の酵素は、ペプチダーゼを含む、
製剤。
【請求項６】
請求項５の製剤であって、
前記ペプチダーゼは、トリプシンまたは卵孵化タンパク質である、
製剤。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項の製剤であって、
前記の１つまたは複数の酵素は、コリオリシンである卵孵化タンパク質を含む、
製剤。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか一項の製剤であって、
前記の１つまたは複数の酵素は、ゾナーゼである卵孵化タンパク質を含む、
製剤。
【請求項９】
請求項１から６のいずれか一項の製剤であって、
レクチンタンパク質またはロイコレクチンタンパク質をさらに含む、
製剤。
【請求項１０】
請求項１から６のいずれか一項の製剤であって、
前記の毛髪保持促進物質でもなく前記の１つまたは複数の酵素でもない抗酸化剤をさらに含む、
製剤。
【請求項１１】
請求項１から６のいずれか一項の製剤であって、
前記の毛髪保持促進物質でもなく前記の１つまたは複数の酵素でもない殺生物剤をさらに含む、
製剤。
【請求項１２】
請求項１から６のいずれか一項の製剤であって、
前記水性担体は、ｐＨ４〜８である、
製剤。
【請求項１３】
請求項１の製剤であって、
前記の毛髪保持促進物質でもなく前記の１つまたは複数の酵素でもない抗炎症剤をさらに含む、
製剤。
【請求項１４】
請求項１３の製剤であって、
抗炎症剤は、非ステロイド性抗炎症薬である、
製剤。
【請求項１５】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進するプロセスであって、
前記プロセスは：
剥脱を促進する酵素；および
前記酵素でない毛髪保持促進物質を、
前記対象の前記頭皮に局所的に投与するステップを含む、
プロセス。
【請求項１６】
請求項１５のプロセスであって、
前記の毛髪保持促進物質を投与するステップの前に、前記酵素を投与するステップが生じる、
プロセス。
【請求項１７】
請求項１５のプロセスであって、
前記酵素および前記の毛髪保持促進物質は、同時に投与される、
プロセス。
【請求項１８】
請求項１５から１７のいずれかのプロセスであって、
前記酵素および前記の毛髪保持促進物質は、１週間に少なくとも３回、少なくとも１ヶ月の間、投与される、
プロセス。
【請求項１９】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進するためのキットであって、
前記キットは：
ペプチダーゼ、リパーゼ、またはそれらの組み合わせから選択される１つまたは複数の剥脱酵素を含む、第一の製剤；
前記の第一とは別であり、前記の１つまたは複数の酵素ではない毛髪保持促進物質を含む、第二の製剤；および
前記の第一および第二の製剤を、対象の前記頭皮に投与するための説明書、
を含む、パッケージングを含む、
キット。
【請求項２０】
請求項１９のキットであって、
前記の第二の製剤は、疎水性相を含む、
キット。
【請求項２１】
請求項１９または２０のキットであって、
前記の第二の製剤は、水中油または油中水エマルションである、
キット。
【請求項２２】
請求項１９または２０のキットであって、
前記の第一および第二の製剤の少なくとも１つは、ポンプスプレーを備える容器中にある、
キット。
【請求項２３】
請求項１９から２０のいずれか一項のキットであって、
前記の第一の製剤は、滅菌容器中にある、
キット。
【請求項２４】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進するためのキットであって、
前記キットは：
（ａ）水性担体中の、ペプチダーゼ、リパーゼ、またはそれらの組み合わせから選択される１つまたは複数の剥脱酵素；および（ｂ）毛髪保持促進物質、を含む製剤；および
対象の前記頭皮に、前記製剤を投与するための説明書、
を含む、パッケージングを含む、
キット。
【請求項２５】
請求項２４のキットであって、
前記製剤は、水溶液または懸濁液である、
キット。
【請求項２６】
請求項２４のキットであって、
前記製剤は、エマルションである、
キット。
【請求項２７】
請求項２４から２６のいずれか一項のキットであって、
前記製剤は、ポンプスプレーを備える容器中にある、
キット。
【請求項２８】
請求項２４から２６のいずれか一項のキットであって、
前記製剤は、滅菌容器中にある、
キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願］
本出願は、２０１３年１２月１３日に出願された米国仮出願第６１／９１５，９８８号の優先権の利益を主張するものであり、その内容は、参照により本明細書に援用される。
本発明は、概して、毛髪保持を促進するための製剤に関し、具体的には、毛包健康促進剤のより効率的な使用を提供するための、製剤およびその使用のためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
非常に多くの植物抽出物および医薬品が、毛髪の毛包健康全体を促進して、毛包休眠期間中にさえも毛髪保持を促進するものとして特定されている。残念ながら、そのような製品の使用者の一部は、そのような従来の製品によって得られる結果に不満である。製剤がインビトロおよび制御された臨床試験の下で良い結果を達成する場合でさえ不満が生じ得る。
【０００３】
毛髪保持の生化学を理解するため、および、毛髪保持を促進する化合物を開発するために、かなりの研究努力が費やされてきた。残念ながら、概して毛髪の毛包内に、具体的には毛包の基底細胞へ、局所的に投与される化合物を輸送して標的細胞と接触させるためのデリバリーシステムの開発において、見合った進展がされていない。
【０００４】
毛髪の毛包の解剖学的構造は、突き出た毛幹の周りに狭窄を形成する死んでいるおよび死にかけている真皮細胞を有する角質層の最外層を含む。皮脂性分泌物もまた毛幹を覆い、局所的な毛髪保持剤が毛包に到達するために通らなければならない道を、物理的にブロックして疎水性にさせる。エマルションを用いて毛包基底細胞へ活性剤を投与する従来技術の試みは、このタイプのビヒクルの頭皮への適用での使用者の不快感のせいで成功が限られている。加えて、エマルションは、活性剤の局所的な送達カイネティクスを変えることが知られている（Ｓ．Ｙ．Ｅ．Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．「Ｐｈａｓｅ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｎｄ  ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｆｒｏｍ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ」；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，６６（１９９０）７９−８５）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、毛髪保持促進剤を、毛髪の毛包へ、より効率的に送達するための、剥脱性の毛髪保持促進製剤に関する必要性が存在する。また、水溶液または懸濁液であるそのような製剤に関する必要性も存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
毛髪保持促進物質および酵素（ペプチダーゼまたはリパーゼ）を含む製剤が提供され、ここで酵素は、ヒト頭皮を剥脱する活性がある。物質および酵素は、酵素の活性を維持するｐＨを有する水性担体中に存在する。
【０００７】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進する目的のために対象の頭皮を酵素的に剥脱するためのプロセスが提供される。毛髪保持促進物質は、頭皮の剥脱後またはそれに呼応して、対象の頭皮へ局所的に投与される。また、第一の剥脱段階および第二の毛髪保持促進段階を有するプロセスを行なうためのキットも提供され、ここで、２つの製剤は別々にパッケージされ；あるいは、キットは、剥脱酵素および毛髪保持促進物質の両方を含む、組み合わせ製剤を含んでよい。また、キットは、所望の毛髪保持を達成するための構成要素の使用に関する説明書を含む。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明は、毛髪保持を促進するのに有用性がある。頭皮の剥脱が毛髪保持促進物質の投与に先行しても、または、２つのステップが、例えば、剥脱剤および毛髪保持促進物質の両方を含む製剤で投与することによって一緒に行われても、いずれにせよ、剥脱を伴わずに毛髪保持促進物質を投与するのと比較して、毛髪保持の促進の増強が達成される。
特定の理論に拘束されることを意図せずに、機械的表皮剥脱または化学的ピーリングと関連する剥脱は、頭皮に炎症を生じさせ、それは本発明の剥脱と関連する利益の多くを打ち消すと考えられる。化学的ピーリングの剥脱は、グリコール酸およびレチノイン酸を例示的に含む化合物の使用と関連することが最も多い。その代わりに、本発明は、毛髪保持促進物質が毛髪繊維の周辺を乳頭へ浸透するのを可能にする酵素的な頭皮剥脱剤に依存している。剥脱と関連する炎症の制限は、毛髪保持促進物質の有効性を促進すると考えられる。
本明細書において値の範囲が与えられる場合は、その範囲は、その範囲の末端値だけではなく、その範囲内の個々の中間値および中間範囲も含むことを意図することが理解される。例として、１〜４の例示範囲は、１〜４だけではなく、１、２、３、４、１〜２、１〜３、２〜４、および３〜４も含むことを意図する。
【０００９】
本発明によれば、ヒト角質層に対する剥脱効果を有する活性酵素が提供される。活性酵素は、保管の間、酵素の活性を維持する水性担体中に存在する。ペプチダーゼ酵素、リパーゼ酵素およびそれらの組み合わせは、本発明の製剤における活性酵素であり、例示的に、トリプシン、ブロメライン、パパイン、卵透明帯（ｅｇｇ  ｚｏｎａ）の天然の分解において活性のタンパク質（本明細書において同義的に卵孵化活性タンパク質と呼ぶ）、およびそれらの組み合わせを含む。本明細書において有効な特定の卵孵化活性タンパク質は、魚腹子タンパク質、例えば、ゾナーゼ（セリンプロテアーゼ）およびコリオリシン（亜鉛プロテアーゼ）を含む。存在する活性タンパク質の量は、水性担体ｐＨ、酵素選択性、酵素活性、担体粘度、および酵素半減期を例示的に含む因子に依存することが理解されよう。
【００１０】
本明細書において用いられるペプチダーゼは、２つのアミノ酸をポリペプチド鎖において一緒に連結するペプチド結合の加水分解を触媒する酵素として定義される。本明細書において、用語「ペプチダーゼ」は、「プロテアーゼ」および「プロテイナーゼ」と同義語として用いられる。
【００１１】
魚腹子タンパク質単離物は、例えば、ゾナーゼ、ロイコレクチン、コリオリシン、またはそれらの組み合わせを含み、米国特許第６，３４６，２４５号、４欄１５行目〜５欄８行目；Ｕ．Ｓ．２００９／０２７４７７０Ａ１［０３２１］〜［０３２６］およびＵ．Ｓ．２０１１／０２８０８８２［０１５７］〜［０１９４］に詳述される特性；そのようなタンパク質を含む粗抽出物；およびそれらの組み合わせを有する。タンパク質単離物に関する魚腹子の例示的な供給源は、チョウザメ、サケ、ホワイトフィッシュ、シロマス、タラ、カラフトシシャモ、およびカワメンタイ由来の魚卵を含む。本明細書において有効な卵タンパク質の他の供給源は、オタマジャクシおよびサンショウウオのもののような両生類卵嚢；爬虫類卵嚢、および鳥類卵嚢を含むことが理解されよう。典型的に、上記に挙げたタンパク質の少なくとも１つを含む卵−または特殊的には魚腹子タンパク質−単離物は、抽出物の０．００００１〜１０％が活性タンパク質であり、本発明の製剤の０．１〜１０総重量％を構成する。単に一例を挙げれば、所定の活性タンパク質は、製剤の１×１０−８〜１×１０−５総重量％を構成し得る（すなわち、抽出物の０．００００１〜１０％がタンパク質であり、抽出物は、製剤の０．１総重量％である）。本発明の化粧品中に存在するタンパク質の量は、他の成分との混和性を例示的に含む因子に依存することが理解されよう。
【００１２】
水性担体中の活性酵素は、特定の本発明の実施態様において、最初の処置ステップとして、すぐに頭皮へ適用される。酵素は、毛髪の毛包中およびその周辺で、非炎症性の剥脱を生じさせる。他の本発明の実施態様では、活性酵素は、毛髪保持促進物質も含む単一製剤の一部である。
【００１３】
活性酵素の典型的な負荷は、１リットルあたり０．０００００１〜１，０００酵素単位（Ｕ）の範囲であり、ここで酵素単位は、１分あたり変換される１マイクロモルの基質に相当する。Ｕを決定する目的のために、角質層の標的タンパク質（単数または複数）を表すオリゴペプチド基質を用いて、インビトロアッセイを行なうことができる。一部の実施態様では、オリゴペプチドは発色性であり、酵素によるその切断は、検出可能な色変化を生じる。ペプチダーゼの酵素活性を修正するために水性担体ｐＨが容易に調整されることが理解されるが、典型的な水性担体ｐＨ値は、本明細書において有効な多くのペプチダーゼ酵素に関して６〜８の範囲である。このｐＨ範囲でのペプチダーゼ活性の例示は、ゾナーゼおよびトリプシンである。
【００１４】
一部の実施態様では、本発明の製剤は、水性担体中に組み合わされた毛髪保持促進物質およびペプチダーゼ酵素を含む。活性酵素および毛髪保持促進物質の両方を含む本発明の製剤は、単一製剤のみ適用が必要とされるので、使用者のコンプライアンスを促進することが理解されよう。一部の実施態様では、製剤（または、別々の製剤が用いられる場合は両方の製剤）は、リーブインスプレー溶液として好適に適用され得て、それもまた、使用者のコンプライアンスを促進する。
【００１５】
本発明が、剥脱性の酵素的ステップおよび別個の毛髪保持促進物質のステップとして実施されるか、または、両方の活性成分を含む単一製剤を用いることによりこれらの２つのステップが１つに組み合わされるどうかにかかわらず、頭皮への適用は、典型的に、１週間に１回、１週間あたり２〜６日、毎日１回、または、実に毎日２回または３回のレジームで生じる。２つの成分が別々のステップで適用される場合、１回目のタイミングおよび頻度は、２回目のタイミングおよび頻度とは異なってよいことが理解されよう。例として、酵素の１つまたは複数の適用により剥脱が作用する際、剥脱ステップが繰り返される前に、複数用量の毛髪保持促進物質を適用してよい（例えば、複数日数の間、１日あたり１回）。それは、酵素的剥脱剤の単に臨時的な維持の適用を行なうのに十分であり得る。
【００１６】
本明細書において用いられる毛髪保持促進物質は、毛髪保持を促進する物質として定義され、精製された有機化合物、１つまたは複数のそのような化合物を含む天然抽出物、または合成の化合物である。物質は、例えば、プロスタグランジン−Ｄ２の阻害剤またはジヒドロ−テストステロンの阻害剤であってよい。ポリフェノールを含むものを含む多くの天然抽出物は、毛髪保持を促進するのに効果的であることが示されていることが理解されよう。本明細書において有効な具体的な毛髪保持促進物質は、ミノキシジル、紅参抽出物、ヘスペリジン抽出物、グリーンピース新芽抽出物、商品名ＳｙｍＰｅｐｔｉｄｅ（商標）として売られる合成オリゴペプチド、およびそれらの組み合わせを例示的に含む。毛髪保持促進物質は、本発明の製剤において、典型的に０．００１〜１総重量％用いられるが、例えば、抽出物が相対的に低濃度の活性剤を含む場合は、１０総重量％までであってよいことが理解されよう。本発明の製剤は、水ベースの溶液として、または酵素のための水性担体相を含むエマルションとして、容易に製剤化される。一部の毛髪保持促進物質は脂溶性であり、一方で他は親水性であることが理解されよう。脂溶性の毛髪保持促進物質は、毛髪保持促進物質の溶解または懸濁に適切な溶媒を用いて、二相製剤として容易に製剤化される。溶媒は、例示的に、皮膚適合性のアルコール類、ケトン類、エステル類、アルデヒド類、エーテル類、アルカン類、アルケン類、アルキル化スルホキシド類；前述のいずれかの環状物；前述のいずれかのフッ素化アナログ；およびそれらの組み合わせを含む。特定の毛髪保持促進物質（単一の化合物または抽出物のいずれか）のための具体的な溶媒は、例示的に、水、エタノール、イソプロパノル、アセトン、グリコール類、アルコキシル化グリコール類、ジエチルエーテル、ペンタン、ヘキサン、ジメチルスルホキシド、およびそれらの組み合わせを含む。一部の実施態様では、脂溶性の毛髪保持促進物質は、水中油または油中水エマルションの油相中に存在する。
【００１７】
さらに他の本発明の実施態様では、酵素および毛髪保持促進物質を組み合わせた製剤中に、または、２つの製剤の実施態様（活性酵素を含む１つの製剤および毛髪保持促進物質を含む他の製剤）の片方または両方の部分に、抗炎症剤が含まれる。本明細書において有効な抗炎症剤は、例示的に、ステロイド性抗炎症剤；非ステロイド性抗炎症剤；ウコン、オレガノ、ニンニク、緑茶、ブルーベリー、ニーム、ホーリーバジル油、甘草、アシュワガンダ、ラズベリーの葉、セイヨウオトギリソウ、カモミール、および生姜のような植物の抽出物；オメガ脂肪酸；α−リノレン酸；およびそれらの組み合わせを含む。
【００１８】
さらに他の本発明の実施態様では、酵素および毛髪保持促進製剤の混合物中に、または、２つの製剤の実施態様の片方または両方の部分に、抗酸化剤が含まれ得る。本明細書において有効な抗酸化は、例示的に、αリポ酸、β−グルカン、コエンザイムＱ１０、ブドウ種子抽出物、オート麦抽出物、カモミール（ｃｈａｍｏｌｉｍｅ）、緑茶、大豆ステロール、スーパーオキシドジスムターゼ、ビタミンＣ（例えば、アスコルビルパルミテート、アスコルビルパルミテートマグネシウム、またはアスコルビン酸２−グルコン酸の形態）、およびビタミンＥ（例えば、αトコフェロールまたはトコトリエノール）、およびそれらの組み合わせを含む。多くの抗炎症剤は、抗酸化特性を有することが理解されよう。そのような抗炎症剤を含む本発明の製剤は、別個の抗酸化化合物を含んでもよい。
【００１９】
本発明のさらに他の実施態様では、合成の化合物が本質的に存在しない製剤またはその単一成分が提供される。さらに他の実施態様では、有機認証の製剤またはその単一部分が提供される。
【００２０】
特定の実施態様では、リーブイン頭皮スプレーまたはウォッシュとしての使用に適した水溶液中に毛髪保持促進物質およびペプチダーゼ酵素の両方を含む、単一の、混合された製剤が提供される。水性担体が蒸発すると、頭皮と接触して物質および活性酵素が残る。
【００２１】
ペプチダーゼまたはリパーゼ酵素活性を維持するために、製剤化のプロセスは、酵素（単数または複数）を含む任意の構成相を、その相への酵素の導入の前にｐＨ５〜８に緩衝するステップを含む。緩衝するステップは当分野において一般に行なわれ、水溶液またはエマルションの水相を所望のｐＨに平衡化するために、酸、塩基、酸塩、またはそれらの組み合わせの添加を含む。ｐＨ測定は日常的であることが理解されよう。ｐＨは、定量滴定を介して、またはＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ  ＭＡ，ＵＳＡ）から市販されるもののような電位電極を用いて定量的に測定され得て、または、リトマス紙キットを用いて定性的に測定される。
【００２２】
一部の本発明の実施態様では、殺生物剤が存在する。殺生物剤は、特に製品が多重使用パッケージングにパッケージされて環境または使用者による継続的な微生物播種に曝される場合に、製品の製剤化中またはその使用中に導入される微生物の増殖を阻害することにより、製品品質を維持するのを助ける。本発明の製剤は、場合により、広範囲の殺生物剤および／または殺生物剤の組み合わせを含んでよい。広範囲の殺生物剤は、本明細書において、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、および健康なヒト対象と関連する菌類に対する活性を有するものとして定義される。本明細書において有効な殺生物剤は、例示的に、安息香酸、パラベン類、サリチル酸、石炭酸、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸アルキル、ｐ−クロロメタクレゾール、ヘキサクロロフェン、塩化ベンザルコニウム、塩化クロルヘキシジン、トリクロロカルバニリド、フェノキシエタノール、アシルザルコシン類、グルタチオン、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、アスコルビン酸グルコシド、アスコルベート、必須植物油、ミュータシンタンパク質、およびそれらの組み合わせを含む。本発明の特定の実施態様では、天然由来の殺生物剤、すなわち、天然に見られる、または天然起源から抽出される殺生物剤のみ存在する。天然由来の殺生物剤は、例示的に、発酵濾液、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ、および、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃのもの；ビサボロール；ユーカリプトール；チモール；イノシトール；サポニン類；および、スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、羊蹄（ｙａｎｇｔｉ）（Ｒｕｍｅｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、苦参（ｋｕｓｈｅｎ）（Ｓｏｐｈｏｒａ  ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、河骨、野生のオレガノ、オレンジ、セージ、ｍａｎｉｆｏｉｌ、一般的なアオイ科植物、センキュウ（ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ）（Ｃｎｉｄｉｉ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｍａｋｉｎｏ）、センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｍａｋｉｎｏ）、ビサボロール、タイム、アンゼリカ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、オレンジピール、カバノキ、スギナ、ヘチマ、マロニエ、雪の下（Ｓａｘｉｆｒａｇｅ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、アルニカ、ユリ、ヨモギ、シャクヤク、アロエ、クチナシ、および、Ｍ．Ｍ．Ｃｏｗａｎ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１２（４）Ｏｃｔ．１９９９，ｐ．５６４−５８２に詳述のもののような植物の天然抽出物；またはそれらの組み合わせを含む。そのような抽出物は、多くの場合、Ｃ１−Ｃ８アルコール、多価アルコール類、水、および水性アルコール類のような親水性有機溶媒を用いて、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１２（４）Ｏｃｔ．１９９９，ｐａｇｅｓ  ５７３−５７４に詳述の手順により得られる。特定の実施態様では、スイカズラ、フロレチン（リンゴから得られる）、および／またはガランギン（例えば、Ａｌｐｉｎｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍまたはＨｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ  ａｕｒｅｏｎｉｔｅｎｓ由来）が、天然由来殺生物剤として、それぞれ単独でまたは組み合わせて用いられる。殺生物剤の特性に加えて、天然抽出物は、多くの場合、本発明の��剤またはその相に芳香を添えることが理解されよう。特定の実施態様では、殺生物剤は、製剤（単数または複数）中に０．１〜５総重量％存在してよい。５総重量％を超える殺生物剤の量は要望どおりに含まれ得ることが理解されよう。ある場合には、遷移金属イオンを含有させて微生物の酵素活性を低減させることがさらに理解されよう。
【００２３】
本発明のさらに他の実施態様では、剥脱性酵素を含む製剤は、滅菌形態で提供され得る。滅菌は、酵素を変性または分解しない任意の標準的な手段により達成され得る。熱または放射線は可能であり得るが、より典型的には、サイズ排除滅菌（すなわち、濾過）を用いて、酵素を含む溶液から、または最終製剤自体から、汚染細菌（ある場合にはウイルス）が取り除かれる。浮遊微生物または対象と関連する微生物は解放されたパッケージに侵入する傾向があるので、単回使用のパッケージが、殺菌した製剤の無菌状態を維持するのに最も適していることが理解されよう。
【００２４】
一部の実施態様では、製剤（単数または複数）は、ポンプアトマイザーを備える容器内にパッケージされる。他の実施態様では、容器は、加圧スプレー缶、スクイーズボトルまたはスクイーズチューブ、アプリケーター付きボトル（別個または付属）、単回使用バイアル、または任意の他の適切に構成された容器である。容器は、プラスチック、ガラス、または金属の形態であってよい。
【００２５】
本発明の１パートおよび２パートのバージョンを、それぞれ表１および表２に例示的な形態で示す。
【００２６】
【表１】
2016539987.tif 000002
【表２】
2016539987.tif 000003
【００２７】
活性酵素は熱および機械的撹拌への曝露により分解する傾向があるので、酵素を含む製剤が調製される様式は、酵素活性を維持するのに重要であることが知られている。例えば、製剤プロセスの後期に酵素を添加することができ、または、酵素が存在する場合にこれらのエネルギー源を最小限化することができ、または両方することができる。
【００２８】
一部の実施態様では、本発明の製剤は、エマルションの形態である。特定の理論に拘束されることを意図せずに、エマルションは、毛髪の毛包を取り囲む皮脂腺からの分泌物のせいで脂溶性になりやすい毛髪の皮質を濡らすのに良好に適している。
【００２９】
水中油エマルションの少数相成分は、例示的に、油類、ワックス類、エステル類、エーテル類、バター類、グリセリド類、またはそれらの組み合わせを含む。水中油エマルションの多数相成分は、水の他に：水性塩、保湿剤、および上記に詳述の様々な水溶性物質を含み得る。そのような系のための乳化剤は、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤から選択され得て、レシチン、リポソーム、およびオレオソームも含む。粘度調整剤、エマルション安定剤、芳香剤などを含む、他の非本質的な添加剤は、容易に提供される。特定の実施態様では、水中油エマルションは、５〜８のｐＨ値を有する。特定の実施態様の場合、水中油エマルションは、６〜７、例えば、６．５〜６．８のｐＨ値を有する。油中水エマルションの水性区分中に酵素を含むことは、保管分解に対して酵素を安定化するのに役立つことが理解されよう。
【００３０】
油中水エマルションまたはシリコーン中水エマルションは、少数および多数相成分の相対的な量が変化し、好ましくは、乳化剤としてのシリコーン誘導体および非イオン性界面活性剤に依存する。粘度調整剤および／またはエマルション安定剤は、例示的に、水溶性の塩類、ガム類、ワックス類、およびそれらの組み合わせを含む。特定の実施態様では、内側相はｐＨ４〜８である。様々なビタミン類、例えば、ビタミンＢ複合体、ビタミンＥ、ビタミンＫ、アスコルビン酸誘導体、例えば、アスコルビン酸グルコシド、Ｅ−Ｏ−アルキルアスコルビン酸、およびアスコルビン酸ホスフェートが、前述のエマルション相の片方または両方に容易に提供され、または別個の第三の相として提供されることが理解されよう。抗−酸化剤および／または上述の抗−炎症性成分に追加してビタミン（単数または複数）が存在してよい。
【００３１】
本発明のエマルション製剤は、予め混合した上記に詳述の相を組み合わせることにより容易に形成され、あるいは、全てのそのような成分は、統合された混合物として当該分野に慣習的に順々に混合され、−活性酵素を含む製剤である限り、混合プロセス中に酵素を余熱またはせん断に曝さないように（酵素がそれに感受性である場合）、注意がなされる。
【００３２】
他の従来の塩基性製剤を、本明細書に詳述のように容易に調整して活性の剥脱性酵素が安定化されることが理解されよう。様々な従来の塩基性製剤は、Ｅ．Ｗ．Ｆｌｉｃｋ，「Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｔｏｉｌｅｔｒｙ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｖｏｌ．８；２００１，Ｎｏｙｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ（ＩＳＢＮ  ０−１８５５−１４５４−９）に提供される。
【００３３】
頭皮上の毛髪保持を刺激するプロセスもまた提供される。このプロセスは、対象の頭皮を酵素的に剥脱するステップを含む。実施において、液体製剤（溶液、エマルション、または懸濁液）が対象の頭皮および毛根へ適用される。これは、標的領域上に製剤を噴出する、または軽くたたくことにより、または、噴霧剤ベースの加圧エアロゾルスプレー缶または従来のアトマイザーノズルを備える手動スプレーポンプを用いてミストを形成し、ミストをその標的領域に向けることにより、行なうことができる。０．１〜５ミリリットルの液体は、毛髪およびその下にある頭皮上にミストを形成するのに十分であるが、毛髪保持効果を達成するのに必要な量は、酵素の濃度、毛髪保持促進活性剤の濃度、および製剤の粘度を含む因子に依存する。剥脱性酵素の適用および毛髪保持促進物質の適用は、別個のステップとして容易に行われる。あるいは、例えば、ペプチダーゼ酵素および毛髪保持促進物質の両方を含む単一製剤を用いて、それらを同時に適用することができる。２つの活性剤が別個の製剤を用いて適用される場合は、２つの製剤は類似してよく、または大きく異なってよいことが理解されよう。例えば、酵素は一般に、水溶液中に、または酵素を含む水相を有するエマルション中に製剤化される。対照的に、毛髪保持促進物質は、親水性または脂溶性のいずれかであってよく、したがって、酵素に用いられるものとは異なる製剤化のタイプを必要とし得る。
【００３４】
デュアル製剤を採用する一部の使用レジメンでは、第一の製剤（活性酵素を含む）を日常的に（例えば毎日）用いて、最初の数週間は、第二の（毛髪保持促進）製剤の規則的な適用（例えば毎日または１日に２回）と併せて；ある程度の剥脱が達成された後は、第一の製剤をより低頻度で（例えば、２日または３日ごとにのみ）適用し、一方で、第二の製剤の適用頻度は維持する。毛髪保持の改善は、典型的に２〜３ヶ月で見えてくる。
【００３５】
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照してさらに説明される。
【実施例】
【００３６】
［実施例１］
脱イオン水の水溶液において、頭皮活性化処置を形成するためのプロセスが５ステップで提供される。ステップＡでは、クエン酸、クエン酸ナトリウム、およびアスコルビン酸グルコシドを、その順番で主容器内の脱イオン水へ、次の成分を添加する前に各成分が混和されるまで水と混合しながら添加する。ステップＢでは、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）（２０％）を添加して、主容器内の第一の混合物のｐＨを６．５〜６．８に調節する。ステップＣでは、グルコシルヘスペリジンおよび紅参抽出物（４０重量％の水、６０重量％のブチレングリコールおよび０．２重量％のオタネニンジン根抽出物）を主容器へ添加して、全ての固形物が溶解して均一に混和するまで混合する。ステップＤでは、１，２−ヘキサンジオール、ペンチレングリコール、および、カプリル／カプリントリグリセリド溶媒中の褐藻類抽出物（抽出物は、１００グラムの溶媒和抽出物あたり：パルミチン酸２８．２ｍｇ、パルミトレイン酸１２．４ｍｇ、ステアリン酸６．８ｍｇ、オレイン酸１４．７ｍｇ、リノール酸−（オメガ６）７．２ｍｇ、リノレン酸９．７ｍｇ、オメガ３脂肪酸２６．３ｍｇ、コレステロール４７．２ｍｇ、カンペステロール４５．９ｍｇ、スチグマステロール５７．５ｍｇ、およびシトステロール１４２．８ｍｇを含む）が、別容器内で予め混合されてから主容器へ添加されて、混和するまで混合される。ステップＥでは、ロイコレクチン（単数または複数）または他のレクチン類、コリオリシン（単数または複数）、およびゾナーゼ（０．０００６８重量％のロイコレクチン含有量、０．０００３４重量％のゾナーゼ含有量、０．００００１３６重量％のコリオリシン含有量）を含む、サケ卵孵化酵素溶液が、主容器へ添加されて混和するまで混合され、最終製剤を形成する。表３は前述の成分をリスト化し、％は総重量％である。
【００３７】
【表３】
2016539987.tif 000004
【００３８】
［実施例２］
実施例１のプロセスを、溶液中にビタミンＢ３、Ｂ５、Ｂ６、ＣおよびＥを含むビタミン複合体を追加して繰り返す。追加されるビタミン複合体溶液の量は、最終総重量の２％であり、脱イオン水の量が対応して減少する。ビタミン類は、１００グラムのビタミン複合体溶液あたり、１０〜２００ミリグラムの変動量で、ビタミン複合体溶液中に存在する。
【００３９】
［実施例３］
排水トラップの収集により測定して１日あたり平均５２本の毛髪の日々の脱毛に悩む女性対象が、実施例１の製剤の使用を開始した（毎日、日常のシャンプーおよびコンディショナーの使用後に１ミリリットルの溶液を用いて頭にエアロゾルをミストし、その後に、ブロー乾燥の前に５分の休止時間を置く）。毎日使用を８週間した後、日々の脱毛は１日あたり平均４．６本の毛髪に減少した。
【００４０】
［実施例４］
実施例３の方法を実施例２の製剤を用いて繰り返すと、１日あたり平均３．４本の毛髪の日々の脱毛をもたらす。
【００４１】
［実施例５］
製剤からグルコシルヘスペリジンを省略するが、実施例１の方法を繰り返す。日々の脱毛の減少は、実施例３のものと一致することが示される。
【００４２】
［実施例６］
実施例１の製剤を用いて、臨床試験を行なった。以下を含む登録基準で対象を募集した：対象は年齢が２５〜５５才の女性であり；対象は標準的にシャンプーおよびコンディショナーを使用し；対象はコスメトロジストにより判定される評価に十分な毛髪の長さを有し；皮膚タイプＩ〜ＩＶであり（白色から、「常に日焼けしている」〜「日焼けしやすい」までの範囲内で太陽に対する皮膚反応による適度に茶色までの範囲）；対象は、ベースライン評価において、少なくとも２０本の毛髪が抜け落ち；対象は、調整段階および試験持続の間、通常のヘアシャンプーおよびコンディショナーを提供される物質と置き換えることに同意し；対象は、試験持続の間、与えられる頭皮処置を一日おきに１回適用することに同意し；対象は、太陽曝露から頭皮を保護することに同意し；対象は一般に健康良好であり；および、対象は信頼でき、プロトコルに概説される指示に従うことが可能である。
【００４３】
登録された対象は、２４週間の使用期間の間、試験物質を頭皮に一日おきに適用するように指示された。対象は、試験物質の使用および髪の洗浄／コンディショニングを、各訪問の朝は控えるように指示された。また対象は、いかなるシャンプー、コンディショナー、および頭皮処置（与えられた物質以外）も使用を控えるように指示されたが、通常の様式で毛髪のスタイリング（すなわちブロー乾燥、フラットアイロン、カーリングアイロン）を継続してよく、通常のスタイリング製品を使ってよいと言われた。
【００４４】
使用のおよそ４、８、１２、１６、２０、および２４週後、対象は、訪問の朝は試験物質の適用を控えて、洗髪せずに研究所に戻った。各訪問時に、以下に記載のように頭皮のＭＥＤＩＳＣＯＰＥ（登録商標）画像を取得した。
【００４５】
毛髪の視覚的採点を以下に記載のように行なった。コスメトロジストが、Ｆｒｅｅ＆Ｃｌｅａｒ（商標）シャンプーアンドコンディショナーで各対象の毛髪を洗浄および調整した。濡れた毛髪および乾燥した毛髪の収集を、以下に示すように行なった。
【００４６】
ＦｏｔｏＦｉｎｄｅｒ  ＭＥＤＩＳＣＯＰＥ（登録商標）（ＦｏｔｏＦｉｎｄｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）試験手順
ＭＥＤＩＳＣＯＰＥ（登録商標）は、高解像度のデジタル写真を、ソフトウェアアーカイビングシステムのダイレクトキャプチャー特性と組み合わせ、そうすることにより、写真ドキュメンテーションのプロセスを単純化する。メディスコープは、Ｃａｎｏｎ  Ｐｏｗｅｒｓｈｏｔ  Ｇ１０（１４．７  Ｍｅｇａ  Ｐｉｘｅｌ）を利用する。このカメラは、直ちにオンスクリーンで見ることのできる極めて優れた品質で写真を撮る。全般的なイメージングプロセスは、ソフトウェアにより完全に制御されている。オーバーレイ特性は、ベースラインイメージがライブプレビューイメージの上にオーバーレイされるのを可能にし、したがって、毎回の訪問時にほぼ正確に再配置することを確実にする。各訪問時に、頭皮（頭の頭頂部）の１つのデジタル画像を収集した。各訪問時に、各対象の毛髪が、修正したＶｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇ  Ｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）を用いてコスメトロジストにより評価された。コスメトロジストは、毛髪の太さ／量の評価と一致する１００ｍｍＶＡＳスケール上の位置を、スケール上のラベルされた垂直位に関して選択した。続いて、記録された印および線の左起点の間の距離をミリメートルで測定し、評価されるパラメータの範囲に関する数値スコアの評価を可能にした。
【００４７】
毛髪収集の手順
各訪問時に、毛髪は、Ｆｒｅｅ＆Ｃｌｅａｒ（商標）シャンプーアンドコンディショナーを用いて、研究所でコスメトロジストによりシャンプー／コンディショナーされた。対象は、掛け布（毛髪の色の濃い対象には白色、および、毛髪の色の薄い対象には黒色）を身に付けた。毛髪は、必要な場合は、コームまたはピックを用いてもつれをほぐした。毛髪を５つの部分に分けた。各部分を、歯が広いコームを用いて５つのストロークに関して根元から末端までとかした。掛け布の上またはシンク中に抜け落ちた毛髪を全て収集して数えた。それから毛髪をフィンガーブローで乾かした。毛髪が渇いた時点で、毛髪を５つの部分に分けた。各部分を、歯が広いコームを用いて５つのストロークに関して根元から末端までとかした。掛け布の上に落ちた毛髪を全て収集して数えた。
【００４８】
データ分析
各訪問時の、（湿潤および乾燥を合わせた）合計の毛髪数および毛髪の外観の臨床採点に関するスコアを、各対象および処置についてリスト化して、統計的に分析した。２つの因子（固定効果としての時間およびランダム効果としての対象）での分散分析の後にダネット検定を適用して、ベースラインおよび各処置後インターバル（４週、８週、１２週、１６週、２０週、および２４週）の間の違いを判定した。分散分析の残余が正規分布しない場合は（１％の閾値でのシャピロ・ウィルク検定）、この分析は順位で（ｏｎ  ｒａｎｋ）行なった。
【００４９】
ベースラインからの変化を、上述のパラメータに関して各処置後インターバルで計算した。分散分析の後にＴｕｋｅｙ多重比較ポストホック検定を適用して、試験製剤とプラセボコントロールとの間で、ベースラインからの変化における違いを判定した。
【００５０】
試験結果を表４および表５に示す。実施例１の製剤で処置された対象に関する値は、経時的に改善した。実施例１の製剤の耐性および低毒性を考慮すれば、永久の使用が期待される。
【００５１】
【表４】
2016539987.tif 000005
【００５２】
【表５】
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【００５３】
本明細書中で言及される任意の特許または刊行物は、あたかもそれぞれの個々の刊行物が参照により援用されることが具体的および個々に示されているのと同程度に、参照により本明細書中に援用される。
【手続補正書】
【提出日】平成28年8月9日(2016.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進する方法であって、
前記方法は：
対象を、毛髪保持を高める必要があると特定するステップ；
１週間に１回から毎日２回までの頻度で、少なくとも２ヶ月の間、アスコルビン酸グルコシド、１つまたは複数のグリコール類、および、魚卵孵化タンパク質の混合物を含む組成物を、前記対象の頭皮に適用するステップ（ここで、前記組成物中の他の化合物は殺生物剤でない）；および
各適用後に、前記組成物を放置して前記頭皮上で乾かすステップ、
を含み、
ここで、前記組成物は、前記対象の前記頭皮上の毛髪保持を促進するために効果的である、
方法。
【請求項２】
請求項１の方法であって、
前記組成物は、１，２−ヘキサンジオールおよびペンチレングリコールを含む水溶液である、
方法。
【請求項３】
請求項２の方法であって、
前記組成物は、褐藻類抽出物を含む、
方法。
【請求項４】
請求項３の方法であって、
前記組成物は、グルコシルヘスペリジンを含む、
方法。
【請求項５】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進する方法であって、
前記方法は：
対象を、毛髪保持を高める必要があると特定するステップ；
１週間に１回から毎日２回までの頻度で、少なくとも２ヶ月の間、魚卵孵化タンパク質の混合物を含む組成物を前記対象の頭皮に適用し、各適用後に前記組成物を放置して前記頭皮上で乾かすステップ、
を含み、
ここで、前記魚卵孵化タンパク質の総量は前記組成物の１０−８〜１総重量％を構成し、前記組成物は、前記対象の頭皮上の毛髪保持を高めるのに効果的である、
方法。
【請求項６】
請求項５の方法であって、
前記組成物は、グリコール類およびアスコルビン酸グルコシドを含む水性組成物である、
方法。
【請求項７】
請求項６の方法であって、
前記グリコール類は、ペンチレングリコールおよび１，２−ヘキサンジオールを含む、
方法。
【請求項８】
請求項６の方法であって、
前記組成物は、他の殺生物剤を含まない、
方法。
【請求項９】
請求項８の方法であって、
前記グリコール類は、ペンチレングリコールおよび１，２−ヘキサンジオールを含む、
方法。
【請求項１０】
請求項１の方法であって、
前記魚卵孵化タンパク質は、コリオリシンを含む、
方法。
【請求項１１】
請求項５の方法であって、
前記魚卵孵化タンパク質は、コリオリシンを含む、
方法。
【請求項１２】
請求項５の方法であって、
前記組成物は、グルコシルヘスペリジンを含む、
方法。
【請求項１３】
請求項１の方法であって、
前記組成物は、前記対象の頭皮に、毎日または一日おきに適用される、
方法。
【請求項１４】
請求項５の方法であって、
前記組成物は、前記対象の頭皮に、毎日または一日おきに適用される、
方法。
【請求項１５】
請求項１の方法であって、
前記組成物は、ポンプアトマイザーを備える容器から噴霧されることにより前記頭皮に適用される、
方法。
【請求項１６】
請求項５の方法であって、
前記組成物は、ポンプアトマイザーを備える容器から噴霧されることにより前記頭皮に適用される、
方法。
【請求項１７】
請求項１の方法であって、
前記組成物は、ミノキシジル、ポリフェノール、ジヒドロテストステロン阻害剤、またはグリーンピース新芽抽出物を含む、
方法。
【請求項１８】
請求項５の方法であって、
前記組成物は、ミノキシジル、ポリフェノール、ジヒドロテストステロン阻害剤、またはグリーンピース新芽抽出物を含む、
方法。
【請求項１９】
請求項５の方法であって、
前記組成物は、褐藻類抽出物を含む、
方法。
【請求項２０】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進する方法であって、
前記方法は：
対象を、毛髪保持を高める必要があると特定するステップ；
１週間に１回から毎日２回までの頻度で、少なくとも２ヶ月の間、ゾナーゼ、コリオリシン、および、１つまたは複数のグリコール類を含む組成物を、前記対象の頭皮に適用するステップ；および
各適用後に、前記組成物を放置して前記頭皮上で乾かすステップ、
を含み、
ここで、前記組成物は、前記対象の前記頭皮上の毛髪保持を促進するために効果的である、
方法。
【請求項２１】
請求項２０の方法であって、
前記組成物は、褐藻類抽出物を含む、
方法。
【請求項２２】
請求項２０の方法であって、
前記組成物は、水溶液であり、クエン酸、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸グルコシド、グルコシルヘスペリジン、紅参抽出物、１，２−ヘキサンジオール、ペンチレングリコール、および、褐藻類抽出物を含む、
方法。
【請求項２３】
対象の頭皮上の毛髪保持を促進する方法であって、
前記方法は：
対象を、毛髪保持を高める必要があると特定するステップ；
１週間に１回から毎日２回までの頻度で、少なくとも２ヶ月の間、以下から本質的になる組成物を、前記対象の頭皮に適用するステップ
水、
バッファー、
ｐＨ調整剤、
アスコルビン酸グルコシド、
グルコシルヘスペリジン、
紅参抽出物、
褐藻類抽出物、
グリコール類、および
孵化鮭卵由来の魚腹子タンパク質単離物；
および
各適用後に、前記組成物を放置して前記頭皮上で乾かすステップ、
を含み、
ここで、前記組成物は、前記対象の前記頭皮上の毛髪保持を促進するために効果的である、
方法。
【請求項２４】
請求項２３の方法であって、
前記魚腹子タンパク質単離物は、ゾナーゼ、ロイコレクチン、および、コリオリシンを含む、
方法。
【請求項２５】
請求項２３の方法であって、
前記バッファーは、クエン酸／シトレートバッファーであり、前記ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウムである、
方法。
【国際調査報告】
2016539987.tif 000007
2016539987.tif 000008
2016539987.tif 000009
2016539987.tif 000010