(57)【要約】本発明は一種のクロロゲン酸粉末注射剤を提供する。これは下記の重量比を有する原料から製造される。クロロゲン酸１−１２０、担体１−３２０、抗酸化剤１−８。本発明はさらに、当該粉末注射剤の製造方法を提供する。本発明のクロロゲン酸粉末注射剤は、安定性及び再溶解性ともに良好であり、臨床では安全に使用できる。
2016528261.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重量比でクロロゲン酸を１−１２０部、担体を１−３２０部、抗酸化剤を１−８部含有することを特徴とするクロロゲン酸粉末注射剤。
【請求項２】
担体がスクロース、マンニトール、グルコース、ラクトース、トレハロース、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン20、ソルビトール、PEG1000、グリセリン、グリシン及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる一種又は2種以上の混合物であり、抗酸化剤が亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、L-システイン塩酸塩及びビタミンCからなる群から選ばれる一種又は2種以上の混合物であることを特徴とする、請求項１に記載の粉末注射剤。
【請求項３】
担体がマンニトールであり、抗酸化剤が亜硫酸水素ナトリウムであることを特徴とする、請求項２に記載の粉末注射剤。
【請求項４】
クロロゲン酸の純度が98％以上であることを特徴とする、請求項１に記載の粉末注射剤。
【請求項５】
重量比でクロロゲン酸を３０部、亜硫酸水素ナトリウムを２部、マンニトールを８０部含有することを特徴とする、請求項４に記載の粉末注射剤。
【請求項６】
下記の工程a及び工程bを有する請求項５に記載の粉末注射剤の製造方法。
〔工程a. クロロゲン酸、亜硫酸水素ナトリウム及びマンニトールを秤量する。
工程b. 注射用水を取り、これに亜硫酸水素ナトリウム、クロロゲン酸及びマンニトールを順次に入れ、撹拌して十分に溶解させる。pHを2〜4に制御し、注射用水の温度が45〜50℃の条件下で0.03％活性炭を加え、30分間撹拌した後に濾過して活性炭を除去する。さらに親水性0.22μmメンブランフィルターを用いて濾液が透明になるまでに精密濾過し、無菌下で充填する。凍結乾燥し、製品を得る。〕
【請求項７】
凍結乾燥の工程では二次昇温法を採用し、-38℃で3時間予備凍結し、復水器の温度は-60℃であり、-45℃〜-23℃における昇温時間は12時間で、-23℃〜-28℃における昇温時間は6.5時間であり、初期真空度及び最終真空度はそれぞれ400〜450mbar及び180〜200mbarで、最低真空度は180 mbarであり、昇華乾燥の時間は24時間であり、30℃の条件で3時間再乾燥することを特徴とする、請求項６に記載の粉末注射剤の製造方法。
【請求項８】
工程bではリン酸緩衝液を用いてpH値を3〜3.5に調整することを特徴とする、請求項６に記載の粉末注射剤の製造方法。
【請求項９】
包装材料が褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークであることを特徴とする、請求項６に記載の粉末注射剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロロゲン酸粉末注射剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロロゲン酸はポリフェノール化合物である。これは酸、アルカリ、光暴露及び高温の条件下で不安定であることが実験により明らかになった。周氏、01thof MR及びGonthir MPらの文献によると、クロロゲン酸は不安定なポリフェノール化合物であり、消化器系の細菌類による影響を受け易いため、経口投与での生物利用度は低い。血管を経由して投与する方法が好まれる。従って、本薬物の適切な剤型は注射剤である。クロロゲン酸は水溶液中では不安定のため、液体剤形の採用は不適切である。
【発明の内容】
【０００３】
本発明の技術方案は、クロロゲン酸粉末注射剤の提供である。本発明のもう一つの技術方案は、当該クロロゲン酸粉末注射剤の製造方法の提供である。
【０００４】
本発明が提供するクロロゲン酸粉末注射剤は下記の原料から下記の重量比で製造される。
クロロゲン酸1-120、担体1-320及び抗酸化剤1-8
【０００５】
前記の担体は、スクロース、マンニトール、グルコース、ラクトース、トレハロース、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン20、ソルビトール、PEG1000、グリセリン、グリシン及び1,2-プロパンジオールから選ばれる一種または二種以上の混合物である。また、前記の抗酸化剤は、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、L-システイン塩酸塩及びビタミンCから選ばれる一種または二種以上の混合物である。
【０００６】
前記の担体は、マンニトールである。また、前記の抗酸化剤は亜硫酸水素ナトリウムである。
【０００７】
前記のクロロゲン酸の純度は98％以上である。
【０００８】
本発明が提供するクロロゲン酸粉末注射剤は、下記の原料から下記の重量比で製造される。
クロロゲン酸1-120、亜硫酸水素ナトリウム1-8及びマンニトール1-320
【０００９】
さらに好ましくは下記の原料から下記の重量比で調製される。
クロロゲン酸30、亜硫酸水素ナトリウム2及びマンニトール80
【００１０】
本発明は、さらに、前記の粉末注射剤の製造法を提供する。この方法は以下の工程を含む。
a. クロロゲン酸、亜硫酸水素ナトリウム及びマンニトールを秤量する。
b. 注射用水を取り、これに亜硫酸水素ナトリウム、クロロゲン酸及びマンニトールを順次加え、撹拌して十分に溶解させる。pHを2〜4に調整し、注射用水の温度が45〜50℃の条件下で0.03％活性炭を加え、30分間撹拌した後、濾過して活性炭を除去する。さらに親水性の0.22μmメンブランフィルターを用いて濾液が透明になるまで精密濾過し、無菌下で充填する。次に凍結乾燥し、製品を得る。
【００１１】
前記の凍結乾燥を含む工程では二次昇温法を採用する。-38℃で3時間予備凍結し、復水器の温度は-60℃である。-45℃〜-23℃における昇温時間は12時間であり、-23℃〜-28℃における昇温時間は6.5時間である。初期真空度及び最終真空度はそれぞれ400〜450mbar及び180〜200mbarである。最低真空度は180 mbarである。昇華乾燥の時間は24時間である。再乾燥は30℃で3時間行う。
【００１２】
前記の工程bで示すpHの調整については、リン酸緩衝液を用いてpH値を3〜3.5に調整する。
【００１３】
前記粉末注射剤の包装材料について、注射瓶は褐色低ホウ素/ケイ素のガラス管である。また、コークは医薬用ブチルゴムである。
【００１４】
本発明の粉末注射剤は次の特徴を有する。１．クロロゲン酸は不安定なポリフェノール化合物であり、消化器系の細菌類による影響を受け易い。そのため、注射剤の剤形を採用することにより薬物治療の生物利用度を高め、薬効の発現を速くする。また、クロロゲン酸は水溶液中で不安定のため、凍結乾燥した粉末注射剤にすることによりクロロゲン酸の水中での分解を防ぐ。２．薬効は迅速に発現する。注射剤は人体組織に直接に注入されるため、吸収が速く、また薬効が迅速に発現する。特に静脈注射の場合は、吸収という過程がなく、薬物が直接に血管に入る。注射剤はすべての剤形の中で薬効発現が最も速い。３．投与量は精確である。また、薬効は確実である。注射剤は胃腸を経由しないため、胃腸等による影響を受けない。そのため、投与量は正確である。また、確実な効果が得られる。４．経口投与ができない患者に適用できる。本発明のクロロゲン酸粉末注射剤は安定性が良好である。また、再溶解性も良好である。臨床では安全に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１はクロロゲン酸のpH-分解反応速度の曲線を示す。
【００１６】
【図２】図２はクロロゲン酸粉末注射剤の製造工程フロー図を示す。
【００１７】
【図３】図３は注射用クロロゲン酸の吸湿平衡曲線図を示す。
【００１８】
【図４】図４は凍結乾燥曲線（温度―時間曲線）を示す。
【具体的な実施方法】
【００１９】
試験例１  本発明のクロロゲン酸粉末注射剤の賦形剤の検討
【００２０】
クロロゲン酸原薬の溶解性について検討した結果、試料はメタノール及びエタノールには容易に溶解し、アセトンには溶解し、酢酸エチルには極めて微量に溶解すること及び水における溶解度は約2%であることが分かった。
吸湿性について検討した結果、クロロゲン酸はやや吸湿性を有することが分かった。
原料の安定性について検討した結果、クロロゲン酸は光と熱には敏感であることが分かった。
クロロゲン酸はポリフェノール化合物であるため、酸化し易い。このため、その製剤研究においては抗酸化剤の添加について検討すべきである。また、水における溶解度は約2%であるため、調製する溶液の濃度は2％以内とすべきである。クロロゲン酸は吸湿性があるため、製剤研究及び製造工程において湿度の制御を行う必要がある。クロロゲン酸は光に敏感のため、薬品と直接に接触する包装材料としては、遮光性のものを選択すべきである。クロロゲン酸は熱に敏感のため、製造工程において温度制御を行う必要がある。
【００２１】
１．抗酸化剤の検討
クロロゲン酸はポリフェノールの構造を有し、酸化して容易に分解される。製造段階及び保管段階におけるクロロゲン酸の酸化を防ぐため、製剤処方において抗酸化剤の添加について検討する必要がある。注射剤に汎用される抗酸化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、L-システイン塩酸塩及びビタミンC等が挙げられる。それらの用量は通常0.1〜0.2％である。前記の抗酸化剤を用いてスクリニング試験を行った。
【００２２】
２．pH調整剤の検討
クロロゲン酸の分子構造にはエステル結合があるため、pHによる加水分解の速度への影響が重要とされる。従って、リン酸緩衝液を用いてクロロゲン酸のpH値を1.5〜6.2に調整し、クロロゲン酸の分解速度係数ｋを測定した。各pHにおけるlgkを用いてpHに対するグラフを作成し、pH-分解反応速度の曲線を得た。それにより安定なpHm値を確定した。その結果を図１に示す。クロロゲン酸の分解は一次動態学に従って計算し、その結果を表１と２及び図１に示す。
【００２３】
表１  各pHの緩衝液中におけるクロロゲン酸の各時点での濃度(μg/ml)
2016528261.tif 000003
【００２４】
表２  線形回帰の結果及び各pHにおける反応速度の係数及びlgk
2016528261.tif 000004
【００２５】
以上の実験結果から分かるように、pH値の増加に伴ってk値は一旦低下した後に上昇した。一方、クロロゲン酸の含量はそれと逆のパターンを示した。pH-分解反応速度の曲線から分かるように、pH値が2〜4の範囲内であればクロロゲン酸の水溶液は比較的安定である。pH値が3の時に最も安定であった。従って、注射用クロロゲン酸配合液のpHは2〜4とすべきである。
クロロゲン酸を30mg/本の製剤規格に模擬した。臨床に用いる高濃度溶液(0.03%)のpH値は約3.5である。凍結乾燥前のクロロゲン酸配合液の濃度は1.5%である。予備試験でpH値は約3.0と測定された。従って、pHはいずれもクロロゲン酸が安定となる範囲内にあった。そのため、賦形剤のスクリニングの際にはpH調整剤を添加しなかった。
【００２６】
３.  凍結乾燥用の担体の検討
担体は主に凍結乾燥注射剤に用いられる。その効果としては、凍結乾燥後の固形物では結晶や色が均一になり、原液と同等の体積を保ち、陥没や萎縮はなく、再分散性はよいことがある。汎用の担体としてはマンニトール、ラクトース及びグリシン等がある。マンニトール、ラクトース及びグリシンを用いて異なる分量で処方のスクリニングを行った。
【００２７】
４.  処方のスクリニング及び最適化
4.1  抗酸化剤のスクリニング及び最適化
クロロゲン酸の溶液に0.1％の抗酸化剤：亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、L-システイン塩酸塩及びビタミンCを加え、加熱して沸騰させ、HPLC法でクロロゲン酸含量の変化を調べ、最適な抗酸化剤及びその用量を検討した。その結果を表３に示す。
【００２８】
表３  抗酸化剤によるクロロゲン酸の安定性への影響
2016528261.tif 000005
【００２９】
本試験で用いた抗酸化剤である亜硫酸水素ナトリウム、L-システイン塩酸塩及びビタミンCの場合では、いずれもクロロゲン酸の安定性が改善されたが、メタ重亜硫酸ナトリウムの場合では、安定性は改善されなかった。しかし、L-システイン塩酸塩及びビタミンCの添加によりクロロゲン酸溶液の色が濃くなった。一方、亜硫酸水素ナトリウムの添加ではクロロゲン酸溶液の色は影響されなかった。報告によれば、亜硫酸水素ナトリウムの抗酸化剤作用のメカニズムとしては、その標準電位(E0)が高いため、薬物の代わりに先に酸化され、破壊されるとされる。現在、亜硫酸水素ナトリウムを抗酸化剤として用いる注射剤はエタンシラート注射液、ノバルギン注射液及びリン酸デキサメタゾンナトリウム注射液等がある。その用量はいずれも0.1〜0.2%の範囲内である。亜硫酸水素ナトリウムは抗酸化剤として汎用され、人体での安全性は高い。また、クロロゲン酸と同様にこれは還元性物質であるため、相互反応が起きることはない。互換性は良好である。（パイロット製品を用いた影響要因に関する試験でも良好な互換性が証明された。）従って、0.1％亜硫酸水素ナトリウムを本品の抗酸化剤として選択した。
【００３０】
4.2  担体のスクリニング及び最適化
異なる分量のマンニトール、ラクトース及びグリシンを担体として用い、外観、再溶解性（0.9％NaCl注射液を2ml加えて観察する）及び透明度を評価項目としてスクリニングを行い、最適な担体及びその用量について検討した。その結果を表４に示す。
【００３１】
表４  担体及びその用量の凍結乾燥製剤に及ぼす影響
2016528261.tif 000006
注釈：“＋＋＋＋”は、速やかに溶解することを表す。
“＋＋＋”は、比較的速やかに溶解するが、初めに塊が見られることを表す。
“＋＋”は、溶解速度がやや遅く、また、初めに塊が見られることを表す。
【００３２】
結果から分かるように、4% マンニトールを担体として用いた場合に得られた製品の成型度、再溶解性及び透明度は良好であった。マンニトールは凍結乾燥粉末注射剤の担体として汎用され、人体での安定性がよく、また化学的性質が安定である。クロロゲン酸との相互反応は起きにくいため、両者の互換性は良好であることが推測される。（パイロット製品を用いた影響要因に関する試験でも証明された。）従って、4% マンニトールを本品の担体として選択した。
【００３３】
５.  処方の確定
上記の処方スクリニング及び最適化試験の結果により、1000Unitを製剤単位(30mg/本)とした処方を以下のように確定した。
2016528261.tif 000007
凍結乾燥を経て計1000本を製造する。
【００３４】
６.  賦形剤の互換性試験
クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料を取り、それぞれ高温（60℃）、高湿度（相対湿度92.5％）及び光暴露（照度4500lx±500lx）の試験を行った。測定項目は性状、乾燥減量、類縁物質及び含量とした。
【００３５】
6.1  高温試験
クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料を取り、60℃の恒温箱の中に放置し、それぞれ0、5及び10日後にサンプリングして測定を行った。その結果を表５に示す。
表５  高温(60℃)試験の結果
2016528261.tif 000008
その結果、高温で5日間及び10日間放置した場合は第0日と比べ、クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料は性状、乾燥減量、類縁物質及びクロロゲン酸含量について、その変化はほぼ同様であった。高温（60℃）において賦形剤のクロロゲン酸との互換性は良好であることが確認された。
【００３６】
6.2  高湿度試験
クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料を取り、それぞれ相対湿度92.5％（KNO3の飽和溶液）の乾燥器の中に放置し、25℃の恒温箱において観察した。それぞれ0、5及び10日後にサンプリングして測定を行った。その結果を表６に示す。
表６  高湿度（相対湿度92.5%）の条件における試験の結果
2016528261.tif 000009
その結果、高湿度の条件下で5及び10日間放置した場合は第0日と比べ、クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料は性状、乾燥減量、類縁物質及びクロロゲン酸含量について、その変化はほぼ同様であった。高湿度の条件において賦形剤のクロロゲン酸との互換性は良好であることが確認された。
【００３７】
6.3  光暴露試験
クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料を取り、室温において照射強度が4500lx±500lxの光照射箱の中で光暴露試験を行った。それぞれ0、5及び10日後にサンプリングして測定を行った。その結果を表７に示す。
表７  光暴露（強度4500lx±500lx）試験の結果
2016528261.tif 000010
その結果、強い光で5及び10日間照射した場合は第0日と比べ、クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料は性状、乾燥減量、類縁物質及びクロロゲン酸含量について、その変化はほぼ同様であった。強い光による照射において賦形剤のクロロゲン酸との互換性は良好であることが確認された。
【００３８】
クロロゲン酸試料及びクロロゲン酸に賦形剤を添加した試料を用いた高温、高湿度及び光暴露試験の結果から、賦形剤のクロロゲン酸との互換性は良好であることが分かった。
【００３９】
試験例２  本発明のクロロゲン酸粉末注射剤の製造工程に関する研究
凍結乾燥粉末注射剤の特徴及びクロロゲン酸原薬の理化学性質に基づき、注射用クロロゲン酸の製造工程の設計と研究を行った。
【００４０】
1.  製造工程の設計
注射用クロロゲン酸の製造工程として、溶液配合→除菌濾過→無菌充填→凍結乾燥→包装のように設計した。製造工程のフロー図は図２に示す。
【００４１】
２.  工程研究
2.1  溶液配合の工程に関する研究
(1)溶解工程の研究
原料配合の順序として、先に抗酸化剤である亜硫酸水素ナトリウムを投入し、注射用水で溶解させた後にクロロゲン酸を加えて溶解させる。最後に担体であるマンニトールを加えて撹拌し、溶解させる。
クロロゲン酸の水における溶解度は約2%である。配合した溶液における濃度（約1.5％）は溶解度より低いため、常温下で十分に溶解できると思われる。配合液における濃度において完全に溶解できることが確認された。
【００４２】
(2)活性炭による吸着工程の研究
活性炭は注射液の調製に汎用される吸着剤である。その顆粒の内部には微小な孔が多数あるため、かなり大きな活性表面を有し、薬物溶液の色素、不純物及び発熱性物質に対して吸着作用がある。活性炭の用量は一般的に0.01〜0.5%である。例えば、メトロニダゾール注射液には一般的に0.05〜0.08%、ノルフロキサシン注射液には0.02〜0.04%、また、マンニトール注射液には0.2〜0.5%である。製剤の安全性を確保するために、活性炭で薬物液中の色素、不純物及び発熱性物質を吸着するが、加える活性炭の量が多ければ多いほどその吸着作用が大きい。クロロゲン酸のロスも大きくなる。そのため、活性炭の用量についてスクリニングを行った。その結果を表８に示す。
表８  活性炭の用量に関するスクリニング
2016528261.tif 000011
以上の結果より、活性炭の用量が多い程クロロゲン酸の含量は低下した。吸着作用に影響を及ぼさないことを前提に活性炭の用量は低いほうがよい。総合的に考慮した結果、活性炭の用量を0.03％、吸着時間を30分間、注射用水の温度を45〜50℃とする条件を選択した。小規模及び中規模の試験で得られた製品について細菌内毒素の検査を行い、当該プロセスにより発熱性物質は効率よく除去されたことが確認された。
【００４３】
(3)初期濾過の工程
精密濾過の効果を確保するため、薬物溶液に活性炭を加え30分間吸着させた後に濾紙で初期濾過を行って活性炭を除去する。初期濾過後の溶液は透明であることが確認された。
【００４４】
2.2  精密濾過の工程に関する研究
クロロゲン酸は熱に敏感である。その薬効活性を十分に確保するため、精密濾過の工程により最終製品の除菌及び不純物の除去を行う。精密濾過には通常0.22μmメンブランフィルターを使用する。本品は水溶液のため、親水性の0.22μmメンブランフィルターを用いて精密濾過の工程について検討した。精密濾過の過程においてメンブランフィルターの完全性を指標にメンブランフィルターの実用性を検討し、精密濾過した後のメンブランフィルターのクロロゲン酸に対する吸着率を指標にメンブランフィルターのクロロゲン酸に対する吸着性を検討し、また、精密濾過した後の薬物溶液の無菌検査、透明度、色及び可視的な異物の有無を指標に精密濾過工程の実行性を検討した。
【００４５】
(1)メンブランフィルターの完全性についての検討
親水性の0.22μmメンブランフィルター（上海亜東核級樹脂有限公司）を用いて精密濾過した後の発泡点試験を行った。その結果、メンブランフィルターが受ける発泡点圧力は、濾過前には0.40Mpaで、濾過後には0.41Mpaであった。メンブランフィルターの完全性は精密濾過の前後ではいずれも良好であった。従って、当該メンブランフィルターは注射用クロロゲン酸の除菌及び不純物の除去に適用できると確認された。
【００４６】
(2)メンブランフィルターのクロロゲン酸に対する吸着性についての検討
親水性の0.22μmメンブランフィルター（上海亜東核級樹脂有限公司）を用いてクロロゲン酸に対する吸着性について検討した。その結果を表９に示す。
表９  吸着性に関する検討の結果
2016528261.tif 000012
この結果より、親水性の0.22μmメンブランフィルター（上海亜東核級樹脂有限公司）のクロロゲン酸に対する吸着性は小さく、当該メンブランフィルターによるクロロゲン酸の大きなロスはないことが分かった。
【００４７】
(3)精密濾過後の濾液の品質項目についての検討
表１０  精密濾過後の濾液の品質試験の結果
2016528261.tif 000013
検討の結果、親水性の0.22μmメンブランフィルター（上海亜東核級樹脂有限公司）を用いた精密濾過により薬物溶液中の細菌や異物を有効に除去でき、またクロロゲン酸のロスは小さいことが分かった。
【００４８】
2.3  凍結乾燥の工程に関する研究
クロロゲン酸は熱に敏感なため、凍結乾燥の工程を経て製造する。クロロゲン酸は低温において比較的安定である。従って、薬物溶液中の含量が高くなく、また粘度が低くければ凍結乾燥で成型し易い。そのため、通常の凍結乾燥の条件を用いて凍結乾燥の工程について検討を行った。予備凍結の温度を-38℃、予備凍結の時間を3時間、復水器の温度を-60℃、昇華乾燥の時間を24時間と設定した。
表１１  凍結乾燥工程の予備試験の結果
2016528261.tif 000014
凍結乾燥の予備試験の結果から、当該条件において凍結乾燥した試料の外観、再溶解性及び乾燥減量等はいずれも良好であることが分かった。従って、本品の予備凍結の温度を-38℃、予備凍結の時間を3時間、復水器の温度を-60℃、初期真空度を400〜450mbar、最終真空度を180〜200mbar、最低真空度を180mbar、昇華乾燥の時間を24時間とした。
【００４９】
表１２  ７ロットの製品についての工程研究における凍結乾燥工程の係数
2016528261.tif 000015
【００５０】
2.4  凍結乾燥した製品の吸湿性曲線に関する研究
注射用クロロゲン酸の凍結乾燥粉末を３つ分に採り、それぞれ約0.5gずつを秤量瓶に入れ、精密に秤量した後に相対湿度57.7％（25℃）の乾燥器の中に放置した。一定の時間が経過した後に秤量し、増量百分率の平均値を計算し、吸湿性曲線を作成した。その結果を表１３及び図３に示す。
表１３  注射用クロロゲン酸の増量百分率
2016528261.tif 000016
図から分かるように、注射用クロロゲン酸を相対湿度57.7％の環境に放置した場合は、その重量は4時間までに著しく増加し、その後は緩やかになった。従って、凍結乾燥の終了後に速やかに密栓すべきである。
【００５１】
2.5  凍結乾燥した製品の温度-時間凍結乾燥曲線
凍結乾燥曲線は凍結乾燥の過程における試料温度、隔離板の温度、復水器の温度、箱の真空度の経時的変化を示す。これは凍結乾燥機の性能を示すだけではなく、実際の製造においても指導的な役割を果たす。図４を参照のこと。
【００５２】
３.  工程の確立
前述の工程研究の結果に基づき、注射用クロロゲン酸の製造工程を次のように確立した。製剤処方に従い、１ロット125本で工程の検証を実施する。注射水を取り、順次に亜硫酸水素ナトリウム、クロロゲン酸及びマンニトールを加える。撹拌し十分に溶解させ、pHを2〜4の範囲内に調整する。0.03％注射用活性炭を加え、30分間撹拌した後に濾過し、活性炭を除去する。その後0.22μmメンブランフィルターで濾液が透明になるまでに精密濾過する。無菌下で充填し、所定の凍結乾燥工程係数の条件で凍結乾燥し、密栓する。
【００５３】
４.  薬品と直接接触する包装材料の初期検討
クロロゲン酸は光に敏感であるため、薬品と直接に接触する材料として遮光性のものを選択すべきである。包装材料に関する初期検討では、注射瓶には褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管を、またコークには医薬用ブチルゴムを採用した。
【００５４】
５.  影響する要因の検討
注射用クロロゲン酸をそれぞれ60℃の恒温培養箱、相対湿度92.5％、温度25℃のインキュベーター及び照度が4500lx±500lxの照射器の中に放置し、5及び10日後に取り出し、製剤の外観性状、溶液の色、pH値、不溶性微粒子、可視的異物、透明度、類縁物質及び表示量、並びに薬品と直接に接触する包装材料である褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶並びに医薬用ブチルゴムのコークの内表面及び外表面の性状を観測し、第0日の製剤と比較した。その結果を以下に示す。
表１４  注射用クロロゲン酸の高温、高湿及び光暴露条件での考察結果
2016528261.tif 000017
高温で10日間の試験結果を第0日と比べると、注射用クロロゲン酸の性状については、ほぼ白色の粉末から極薄い黄色の粉末に変化した。pH値はほとんど変化しなかった。可視的異物についてはほとんど変化しなかった。類縁物質であるカフェイン酸の含量は21.7％、その他の類縁物質は47.47％それぞれ増加した。クロロゲン酸の含量は0.26％低下した。褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークの外観については、いずれも変化はなかった。従って、高温は、褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークで包装された注射用クロロゲン酸の安定性にはある程度の影響を及ぼしていると思われた。その程度は賦形剤の互換性試験（内包装なし）における賦形剤を添加したクロロゲン酸の場合とほぼ同様であった。
高い湿度における10日間の試験結果を第0日と比べると、注射用クロロゲン酸の性状はほとんど変化しなかった。pH値、はほとんど変化しなかった。可視的異物についてはほとんど変化しなかった。類縁物質の含量はほとんど変化しなかった。クロロゲン酸の含量はほとんど変化しなかった。褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークの外観については、いずれも変化はなかった。従って、高い湿度は褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークで包装された注射用クロロゲン酸の安定性にはほとんど影響を及ぼさないと思われた。
光暴露10日間の試験結果を第0日と比べると、注射用クロロゲン酸の性状はほとんど変化しなかった。pH値はほとんど変化しなかった。可視的異物についてはほとんど変化しなかった。類縁物質であるカフェイン酸の含量は16.96％、その他の類縁物質は42.19％それぞれ増加した。10日間の結果を第0日と比べ、クロロゲン酸の含量は0.38％低下した。褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークの外観については、いずれも変化はなかった。従って、強い光は褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークで包装された注射用クロロゲン酸の安定性にはある程度の影響を及ぼしていると思われた。しかし、その程度は賦形剤の互換性試験（内包装なし）における賦形剤を添加したクロロゲン酸の場合より小さかった。
以上の結果により、高温及び光暴露は注射用クロロゲン酸の安定性にある程度の影響を及ぼすが、高い湿度は注射用クロロゲン酸の安定性にはほとんど影響を及ぼさないことが分かった。従って、褐色低ホウ素/ケイ素ガラス管の注射瓶及び医薬用ブチルゴムのコークで包装された注射用クロロゲン酸は冷暗所で保存すべきである。
【００５５】
６.  注射用クロロゲン酸の互換的安定性に関する研究
注射用クロロゲン酸を臨床で用いる最高濃度（0.03%）に模擬し、0.9%塩化ナトリウム注射液、5%グルコース注射液及び注射用水でそれぞれ試料溶液を調製した。0、2、4及び6時間後にそれぞれサンプリングし、各試料溶液の色、pH値、透明度、不溶性微粒子、可視的異物、類縁物質及び表示含量等の項目について測定を行った。その結果を表１５に示す。
表１５  注射用クロロゲン酸の互換的安定性試験の結果
2016528261.tif 000018
試験結果により、注射用クロロゲン酸を臨床で汎用される0.9%塩化ナトリウム注射液、5%グルコース注射液及び注射用水でそれぞれ臨床で用いる最高濃度での溶液に調製した場合には、その含量は6時間以内にはそれほど変化せず、溶液は無色透明であった。不溶性微粒子及び可視的異物はいずれも規格を満たしていた。類縁物質については著しい変化はなかったことが分かった。従って、注射用クロロゲン酸は臨床で汎用されている注射用溶媒との互換的安定性は良好であることが確認された。クロロゲン酸の品質及び投薬の安全性を確保するため、臨床では調製後の溶液は6時間以内に使用することが推奨される。
【００５６】
まとめとして、注射用クロロゲン酸の製剤の合理的な処方を確立するため、発明者は抗酸化剤、最適なpH値、活性炭の用量及びその吸着方法、凍結乾燥に用いる担体についてスクリニング試験を実施した。その結果、亜硫酸水素ナトリウムを抗酸化剤とし、調製におけるクロロゲン酸溶液のpHを2〜4に制御することにより製剤を安定させた。0.03％活性炭を用い、45℃〜50℃で30分間撹拌した後に濾過した際のクロロゲン酸のロスは約5％であったが、発熱性物質（内毒素）検査では合格となった。4％マンニトールを製剤の担体とし、得られた凍結乾燥製剤の成型は良好で、再溶解性も良好であった。処方及び工程の合理性は確認された。製品を７ロット製造し、それらについて全数検査した結果、７ロットの製品は全項目において合格となった。処方及び工程の合理性が十分に確認された。また、製品に影響する要因について検討した結果、注射用クロロゲン酸は冷暗所で保存すべきであることが示唆された。製品の品質及び安定性に関する試験では、処方及び工程の合理性がさらに確認された。製品の互換的安定性試験を実施し、注射用クロロゲン酸の臨床で汎用される注射溶媒における6時間の互換的安定性は良好であった。調製された溶液は6時間以内に使用することが推奨される。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明の注射用クロロゲン酸粉末製剤は、安定性及び再溶解性ともに良好であり、臨床では安全に使用できる。その臨床への適用及び工業化が期待される。
【図１】
2016528261.tif 000019
【図２】
2016528261.tif 000020
【図３】
2016528261.tif 000021
【図４】
2016528261.tif 000022
【国際調査報告】
2016528261.tif 000023
2016528261.tif 000024
2016528261.tif 000025
2016528261.tif 000026