(57)【要約】本発明は、化合物Ａの微粒子を水性懸濁液の状態で含む点眼用製剤およびその製造方法に関する。より詳細には本発明は、化合物Ａの微粒子を、界面活性剤およびホウ酸を含有する水性溶媒中に懸濁させることによって得ることができる局所的に点眼される点眼用水性懸濁液に関する。本発明はまた、その点眼用製剤の製造方法およびその使用方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）０．１〜５．０％（ｗ／ｖ）の微粉化した化合物Ａの水性懸濁液、
（ｂ）界面活性剤、
（ｃ）約０．０５〜約２．０％（ｗ／ｖ）のホウ酸、および
（ｄ）ｐＨを約６．０〜約７．０に保つ緩衝剤
を含む点眼用製剤。
【請求項２】
化合物Ａの前記懸濁液が、約２５μｍ未満の微粒子を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記微粒子が約１０μｍ未満である、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
前記微粒子が約３〜約７μｍの間である、請求項２に記載の製剤。
【請求項５】
化合物Ａが、約０．５〜約５．０％（ｗ／ｖ）の間で前記点眼用製剤中に存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
化合物Ａが、約１．０〜約４．０％（ｗ／ｖ）の間で前記点眼用製剤中に存在する、請求項５に記載の製剤。
【請求項７】
化合物Ａが、約２．０〜約３．５％（ｗ／ｖ）の間で前記点眼用製剤中に存在する、請求項５に記載の製剤。
【請求項８】
化合物Ａが、約３．０％（ｗ／ｖ）で前記点眼用製剤中に存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
前記界面活性剤が、ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、ポリソルベート４０、ポリソルベート２０、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポロキサマー、チロキサポール、およびひまし油ＰＯＥ３５から選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項１０】
前記界面活性剤が、約０．０１〜約０．５％（ｗ／ｖ）の間で前記点眼用製剤中に存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１１】
前記界面活性剤が、約０．０１〜約０．１％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
前記界面活性剤が、約０．０１〜約０．００５％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１４】
前記ホウ酸が、約０．５〜約１．０％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１５】
前記ホウ酸が、約０．８％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１６】
前記製剤が、保存料を約０．００５〜約０．０５％（ｗ／ｖ）の間でさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１７】
前記保存料が塩化ベンザルコニウムである、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
前記塩化ベンザルコニウムが、前記点眼用製剤中に約０．００５〜約０．０２％（ｗ／ｖ）の間で存在する、請求項１７に記載の製剤。
【請求項１９】
前記点眼用製剤中に存在する前記塩化ベンザルコニウムが、約０．０１％（ｗ／ｖ）である、請求項１７に記載の製剤。
【請求項２０】
前記緩衝剤が、薬学的に許容できるリン酸緩衝液である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２１】
前記リン酸緩衝液が、約１０ｍＭで存在する、請求項２０に記載の製剤。
【請求項２２】
前記リン酸緩衝液が、約０．１〜０．１２％の間で存在する第一リン酸ナトリウムである、請求項２０に記載の製剤。
【請求項２３】
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒプロメロース、ポリビニルアルコール、ポビドン、カルボマー、ヒアルロン酸およびその塩類、硫酸コンドロイチンおよびその塩類、天然ガム、ならびに他の薬学的に許容できるポリマーから選択される懸濁化剤をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２４】
前記懸濁化剤が、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）またはヒプロメロースから選択される、請求項２３に記載の製剤。
【請求項２５】
前記ｐＨが、約６．５±０．１である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２６】
エデト酸二ナトリウムをさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２７】
前記エデト酸二ナトリウムが、０．０１〜０．０８％（ｗ／ｖ）の間で存在する、請求項２６に記載の製剤。
【請求項２８】
前記エデト酸二ナトリウムが、約０．０３％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項２６に記載の製剤。
【請求項２９】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．４〜５．０
懸濁化剤                      ０．５〜１．５
ホウ酸                        ０．０５〜２．０
保存料                        ０．０１〜０．０５
界面活性剤                    ０．０１〜０．１
リン酸緩衝剤                  ０．０５〜０．５
ＮａＣｌ                      ＴＢＤ（２７０〜３３０ｍＯｓｍのための適量）
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．０〜７．０±０．１
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３０】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．００５〜０．１５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０１５〜０．０６
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３１】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０１５
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３２】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．００５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３３】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３４】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３５】
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０６
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３６】
第二の治療用点眼薬をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３７】
前記第二の点眼薬が、プロスタグランジン類似体、β遮断薬、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アドレナリンアゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、アデノシンＡ３アンタゴニスト、アデノシンＡ２Ａアゴニスト、イオンチャンネル調節剤、およびこれらの組合せを含む群から選択される、請求項３５に記載の製剤。
【請求項３８】
前記第二の点眼薬がプロスタグランジン類似体である、請求項３６に記載の製剤。
【請求項３９】
前記プロスタグランジン類似体がラタノプロストである、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４０】
前記ラタノプロストが、約１〜２００μｇ／ｍＬの間で存在する、請求項３９に記載の製剤。
【請求項４１】
前記ラタノプロストが、約５０μｇ／ｍＬで存在する、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４２】
被験者の罹患した眼に請求項１に記載の点眼用製剤の有効量を局所的に点眼するステップを含む、眼圧を降下させる方法。
【請求項４３】
前記点眼用製剤が、前記被験者の前記罹患した眼に約３０〜約５０μＬの滴量で投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記点眼用製剤が、１日１回または２回、約１〜約２滴で投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記被験者が、正常眼圧緑内障、ＯＨＴ、またはＰＯＡＧを有する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
被験者の罹患した眼に請求項１に記載の点眼用製剤の有効量を点眼するステップを含む、網膜神経節細胞障害を治療する方法。
【請求項４７】
前記点眼用製剤が、前記被験者の前記罹患した眼に約３０〜約５０μＬの滴量で投与される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記点眼用製剤が、１日１回または２回、１〜２滴で投与される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
被験者の眼に請求項１に記載の点眼用製剤の有効量を点眼するステップを含む、網膜神経節細胞障害を予防する方法。
【請求項５０】
前記点眼用製剤が、前記被験者の前記罹患した眼に約３０〜約５０μＬの滴量で投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記点眼用製剤が、１日１回または２回、１〜２滴で投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
第二の点眼薬を投与することをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項５３】
前記第二の点眼薬が、プロスタグランジン類似体、β遮断薬、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、Ａ３アンタゴニスト、Ａ２Ａアゴニスト、イオンチャンネル調節剤、およびこれらの組合せを含む群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記第二の点眼薬がプロスタグランジン類似体である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記プロスタグランジン類似体がラタノプロストである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１に記載の局所的に点眼可能な点眼用製剤を含むキットまたはパッケージ化された製剤。
【請求項５７】
（ａ）化合物Ａを微粉化して約５０μｍ未満の粒径にするステップ、
（ｂ）化合物Ａの前記粒子を、界面活性剤および緩衝剤と共に水性懸濁液中に懸濁させるステップ、
（ｃ）ステップ（ｂ）からの生成物を約４０℃で約２４〜約９６時間熟成するステップ、および
（ｅ）ホウ酸を約０．０５〜約２．０％（ｗ／ｖ）加えるステップ
を含む、請求項１に記載の点眼用製剤の調製方法。
【請求項５８】
ステップ（ａ）〜（ｃ）が、前記点眼用製剤の最終体積の約２０％未満の体積で行われる、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ステップ（ｃ）の前記熟成生成物を濃縮スラリーとして濾過することをさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記微粉砕された化合物Ａが、最高４０ｋＧｒａｙ（ｋＧｙ）までのγ線照射によって滅菌される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
前記熟成のステップが、約４０℃において約４８〜約９６時間行われる、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
前記水性懸濁液のｐＨを約６．０〜約７．０の間に、または更なる実施形態では約６．５
±０．１のｐＨに調整することをさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６３】
前記方法が無菌条件下で行われる、請求項５７に記載の方法。
【請求項６４】
第二の点眼薬を加えることをさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６５】
前記第二の点眼薬が、プロスタグランジン類似体、β遮断薬、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、Ａ３アンタゴニスト、Ａ２Ａアゴニスト、イオンチャンネル調節剤、およびこれらの組合せを含む群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第二の点眼薬がプロスタグランジン類似体である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記プロスタグランジン類似体がラタノプロストである、請求項６６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性懸濁液の状態で化合物Ａ
【０００２】
【化１】
2016513706.tif 000002
（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−（シクロペンチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチル硝酸塩の微粒子を含む点眼用製剤、およびその製造方法に関する。より具体的には本発明は、約６．０〜７．０の間のｐＨで界面活性剤およびホウ酸を含有する水性溶媒中に化合物Ａの微粒子を懸濁させることによって得ることができる局所的に点眼される点眼用水性懸濁液、およびこの製剤を使用して眼圧を降下させる、または網膜神経節細胞を保護する方法に関する。
関連出願
本願は、２０１３年３月１５日出願の米国仮特許出願第６１／７９３，２７３号明細書に対する優先権を主張する。本明細書全体を通して引用される任意の特許、特許出願、および参考文献の内容は、それらの全体が参照により本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００３】
米国特許出願公開第２０１０−０２７９９７０Ａ１号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）は、緑内障を有するヒトの被験者においてアデノシンＡ１受容体アゴニストを使用して眼圧を臨床的に著しく降下させることを開示している。
【０００４】
米国特許出願公開第２０１１−０１２３６２２Ａ１号明細書（これもまたその全体があたかも個々に示されているように参照により本明細書中に援用される）は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．１５２〜２．４２
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．３
クエン酸一水和物              ０．１５〜０．３
グリシン                      ０〜０．１０
ＮａＣｌ                      ＴＢＤ（適量、２７０〜３００ｍＯｓｍ）
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整    ｐＨ  ５．１±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む化合物Ａの製剤について記載している。
【０００５】
しかしながら時間が経つと、例えば２５℃においてこれらの製剤の化学的安定性に何らかの変動が生じる場合があり、米国特許出願公開第２０１１−０１２３６２２Ａ１号明細書に記載されている製剤の幾つかでは或る条件下で粒径の成長が起こる場合がある。さらに、数か月から数年の長い貯蔵の後、懸濁された薬剤粒子が製剤の底に沈降し、それらを振ることで再懸濁させて均一な懸濁液を再形成することが困難になる場合がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、（ｉ）高い化学的安定性と、（ｉｉ）長い貯蔵期間にわたって限定された粒径の成長と、（ｉｉｉ）貯蔵の後に、その医薬品有効成分（ＡＰＩ）の粒子のより迅速かつ効率的な再懸濁とを伴う新規な点眼用製剤の開発の必要性が存在する。これに加えて、化合物Ａを送達するためのさらなる点眼用製剤およびその点眼用製剤の製造方法の開発の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、少なくとも部分的には、ホウ酸を含有する化合物Ａの製剤が化学的安定性を向上させ、かつ貯蔵の間の粒子の成長を低減させるという発見に基づく。これに加えて、それらの改良された製剤は、より低い界面活性剤濃度およびリン酸緩衝液によって可能にされる６．０〜７．０のｐＨを有し、これは改良された再懸濁特性を有する凝結懸濁液をもたらす。このｐＨ範囲のため、製剤はまた、患者によってより良く受け入れられ、かつ他の点眼薬（例えばラタノプロスト）との適合性の改善を示し、それによって共製剤を容易にする。
【０００８】
本発明の第一の態様において、
（ａ）０．１〜５．０％（ｗ／ｖ）の微粉化した化合物Ａの水性懸濁液、
（ｂ）界面活性剤、
（ｃ）約０．０５〜約２．０％（ｗ／ｖ）のホウ酸、および
（ｄ）ｐＨを約６．０〜７．０に保つ緩衝剤
を含む点眼用製剤を提供する。
【０００９】
一実施形態では化合物Ａの懸濁液は、約２５μｍ未満のＸ９０を有する微粒子を含む。別の実施形態では微粒子は、約１０μｍ未満のＸ９０を有する。さらなる実施形態では微粒子は、約３〜７μｍの間のＸ９０を有する。
【００１０】
一実施形態では化合物Ａは、約０．５〜約５．０％（ｗ／ｖ）の間で点眼用製剤中に存在する。別の実施形態では化合物Ａは、約１．０〜約４．０％（ｗ／ｖ）で点眼用製剤中に存在する。さらなる実施形態では化合物Ａは、約２．０〜約３．５％（ｗ／ｖ）で点眼用製剤中に存在する。
【００１１】
一実施形態では界面活性剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、ポリソルベート４０、ポリソルベート２０、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポロキサマー、チロキサポール、およびひまし油ＰＯＥ３５から選択される。一実施形態では界面活性剤はポリソルベート８０である。
【００１２】
一実施形態では点眼用製剤中に存在する界面活性剤は、約０．０１〜約０．５％（ｗ／
ｖ）の間である。別の実施形態では界面活性剤は、約０．０１〜約０．１％（ｗ／ｖ）で存在する。別の実施形態では界面活性剤は、約０．０１〜約０．０５％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００１３】
別の実施形態では点眼用製剤はさらに、塩化ナトリウムなどのオスモル濃度調整剤（ｏｓｍｏｌａｒｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）を含む。一実施形態ではオスモル濃度調整剤は、約０．１％〜０．５％（ｗ／ｖ）で存在する。一実施形態ではオスモル濃度調整剤は、約０．４％で存在する。
【００１４】
別の実施形態では点眼用製剤中に存在するホウ酸は、約０．５〜１．０％（ｗ／ｖ）である。一実施形態では点眼用製剤中に存在するホウ酸は、約０．８％（ｗ／ｖ）である。
別の実施形態では製剤は、保存料を約０．００５〜約０．０５％（ｗ／ｖ）の間でさらに含む。一実施形態では保存料は、約０．００５〜約０．０２％（ｗ／ｖ）の間で点眼用製剤中に存在する塩化ベンザルコニウムである。さらなる実施形態では塩化ベンザルコニウムは、約０．０１％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００１５】
一実施形態では点眼用製剤はさらに、第二の眼圧（ＩＯＰ）降下剤を含む。
一実施形態では第二のＩＯＰ降下剤は、プロスタグランジン類似体、β遮断薬、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アドレナリンアゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、アデノシンＡ３アンタゴニスト、アデノシンＡ１またはＡ２Ａアゴニスト、イオンチャンネル調節剤、およびこれらの組合せを含む群から選択される。
【００１６】
一実施形態では第二のＩＯＰ降下剤は、プロスタグランジン類似体である。
一実施形態では第二のＩＯＰ降下剤は、ラタノプロストである。
一実施形態ではラタノプロストは、約１〜２００μｇ／ｍＬの間で存在する。
【００１７】
一実施形態ではラタノプロストは、約５０μｇ／ｍＬで存在する。
別の実施形態では緩衝剤は、薬学的に許容できるリン酸緩衝液である。一実施形態ではリン酸緩衝液は、約１０ｍＭで存在する。別の実施形態ではリン酸緩衝液は、約０．１〜約０．２％（ｗ／ｖ）で存在する第一リン酸ナトリウムである。
【００１８】
別の実施形態では点眼用製剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒプロメロース、ポリビニルアルコール、ポビドン、カルボマー、ヒアルロン酸およびその塩類、硫酸コンドロイチンおよびその塩類、天然ガム、ならびに他の薬学的に許容できるポリマーから選択される懸濁化剤をさらに含む。一実施形態では懸濁化剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）である。別の実施形態ではカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）は、約０．０７％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００１９】
さらなる実施形態では製剤のｐＨは、約６．５±０．１である。
さらなる実施形態では製剤はさらに、エデト酸二ナトリウムを含む。一実施形態ではエデト酸二ナトリウムは、約０．０１〜約０．１％（ｗ／ｖ）の間で存在する。別の実施形態ではエデト酸二ナトリウムは、約０．０１５〜約０．０６％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００２０】
一実施形態では製剤はグリシンを含まない。
一実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．４〜５．０
懸濁化剤                      ０．５〜１．５
ホウ酸                        ０．０５〜２．０
保存料                        ０．００５〜０．０５
界面活性剤                    ０．０１〜０．１
リン酸緩衝剤                  ０．０５〜０．５
ＮａＣｌ                      ＴＢＤ（２７０〜３３０ｍＯｓｍのための適量）
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．０〜７．０±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２１】
別の実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．００５〜０．０２
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０１５〜０．０６
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２２】
一実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０１５
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２３】
一実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．００５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２４】
一実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２５】
一実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２６】
一実施形態では点眼用製剤は、
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０６
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
を含む。
【００２７】
一実施形態では製剤はさらに、第二の点眼薬を含む。第二の点眼薬は、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、プロスタミド、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アドレナリンアゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、アデノシンＡ１アゴニスト、アデノシンＡ３アンタゴニスト、アデノシンＡ２Ａアゴニスト、およびこれらの組合せを含む群から選択される。
【００２８】
別の実施形態ではこの第二の薬剤は、ラタノプロスト、トラボプロスト、ウノプロストン、およびビマトプロストから選択されるプロスタグランジン類似体である。
一実施形態ではプロスタグランジン類似体はラタノプロストである。
【００２９】
さらなる態様において本発明は、上記で定義した点眼用製剤の有効量を、それを必要とする被験体の罹患した眼に点眼するステップを含む、眼圧を降下させる方法を提供する。
一実施形態では罹患した眼のＩＯＰが少なくとも１０％降下する。別の実施形態では罹患した眼のＩＯＰが、少なくとも１０％〜２０％降下する。さらなる実施形態では罹患した眼のＩＯＰが、２０％以上降下する。一実施形態では罹患した眼のＩＯＰは、３時間超の間、少なくとも１０％降下し、別の実施形態では罹患した眼のＩＯＰは、３時間超の間、少なくとも１０％〜２０％降下し、さらなる実施形態では罹患した眼のＩＯＰは、３時間超の間、２０％以上降下し、また別の実施形態では罹患した眼のＩＯＰは、少なくとも６時間の間、少なくとも１０％降下する。一実施形態では罹患した眼のＩＯＰは、少なくとも１２時間の間、少なくとも２０％降下する。一実施形態では罹患した眼のＩＯＰは、約１２〜約２４時間の間、少なくとも２０％降下する。
【００３０】
一実施形態では点眼用製剤は、被験者の罹患した眼に約３０〜約５０μＬの滴量で投与される。
別の実施形態では点眼用製剤は、１日１回または２回、１〜２滴で投与される。
【００３１】
別の実施形態では被験者は、正常眼圧緑内障、ＯＨＴ、またはＰＯＡＧを有する。
さらなる態様において本発明は、上記で定義した点眼用製剤の有効量を、それを必要とする被験体の罹患した眼に点眼するステップを含む、網膜神経節細胞障害を治療する方法を提供する。
【００３２】
一実施形態では点眼用製剤は、被験者の罹患した眼に約３０〜約５０μＬの滴量で投与される。
別の実施形態では点眼用製剤は、１日１回または２回、１〜２滴で投与される。さらなる態様において本発明は、上記で定義した点眼用製剤の有効量を、被験体の眼に点眼するステップを含む、網膜神経節細胞障害を予防する方法を提供する。
【００３３】
一実施形態では点眼用製剤は、被験者の罹患した眼に約３０〜約５０μＬの滴量で投与される。
別の実施形態では点眼用製剤は、１日１回または２回、１〜２滴で投与される。
【００３４】
関連した実施形態では上記で定義した方法はさらに、第二の点眼薬の事前、同時、または連続する点眼を含む。一実施形態では第二の点眼薬は、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、プロスタミド、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アドレナリンアゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、アデノシンＡ１アゴニスト、アデノシンＡ３アンタゴニスト、アデノシンＡ２Ａアゴニスト、およびこれらの組合せを含む群から選択される。
【００３５】
幾つかの実施形態では第二の薬剤は、ラタノプロスト、トラボプロスト、ウノプロストン、およびビマトプロストから選択されるプロスタグランジン類似体である。一実施形態ではプロスタグランジン類似体はラタノプロストである。
【００３６】
さらなる態様において、
（ａ）化合物Ａを微粉化して約５０μｍ未満の粒径にするステップ、
（ｂ）化合物Ａの粒子を、界面活性剤および緩衝剤と共に水性懸濁液中に約６．０〜約７．０のｐＨで懸濁させるステップ、
（ｃ）ステップ（ｂ）の生成物を約４０℃で約２４〜約９６時間熟成する（ｃｕｒｅ）ステップ、および
（ｄ）ホウ酸の溶液を約０．０５〜約２．０％（ｗ／ｖ）加えて、上記点眼用製剤の調製
に適した組成物を得るステップ
を含む上記点眼用製剤の調製に適した組成物の調製方法が提供される。
【００３７】
一実施形態ではステップ（ａ）〜（ｃ）は、点眼用製剤の最終体積よりも少ない体積で行われる。一実施形態ではステップ（ａ）〜（ｃ）は、製剤の最終体積の約２０％未満の体積で（かつ最終医薬品添加剤濃度の約５Ｘで）行われる。一実施形態ではステップ（ａ）〜（ｃ）は、製剤の最終体積の約５０％〜約８５％の体積で（かつ最終医薬品添加剤濃度のそれぞれ約２Ｘ〜１．１７６Ｘで）行われる。一実施形態ではステップ（ａ）〜（ｃ）は、製剤の最終体積の約７５％の体積で（かつ最終医薬品添加剤濃度の約１．３Ｘで）行われる。
【００３８】
一実施形態ではこの方法はさらに、ステップ（ｃ）の熟成生成物をステップ（ｄ）の前に濾過して濃縮スラリーにするステップを含む。例えば、０．２２μｍフィルターを使用して、ステップ（ｄ）でホウ酸溶液を添加するのに先立ってステップ（ｃ）で懸濁粒子のかなりの部分を失わずに熟成溶液の体積を減少させることができる。ステップ（ｃ）の終わりでの体積の減少は、熟成の間に形成されて懸濁溶液中に溶解する不純物の量を減らし、こうして最終製剤の純度を増すことになる。
【００３９】
一実施形態ではその得られた組成物は滅菌される。別の実施形態ではその得られた組成物は、最高４０ｋＧｒａｙ（ｋＧｙ）までのγ線照射によって、または高圧蒸気処理によって滅菌される。
【００４０】
別の実施形態ではその方法は、無菌条件下で行われる。
別の実施形態ではその得られた組成物を希釈し、ｐＨを調整して上記点眼用製剤を作り出す。
【００４１】
一実施形態では熟成のステップは、約４０℃において約４８〜約９６時間行われる。
別の実施形態ではその方法は、その水性懸濁液を約６．５±０．１のｐＨに調整するさらなるステップを含む。
【００４２】
一実施形態では懸濁液中の化合物Ａの最終濃度は、約１〜約５０ｍｇ／ｍＬの間に調整され、または別の実施形態では懸濁液中の化合物Ａの最終濃度は、約３〜約３０ｍｇ／ｍＬの間にある。例えば一実施形態では製剤は、化合物Ａを約０．１〜約３．０％（ｗ／ｖ）含む。一実施形態では製剤は、化合物Ａを約０．５〜約１．５％（ｗ／ｖ）含む。一実施形態では製剤は、化合物Ａを約３．０％（ｗ／ｖ）含む。
【００４３】
さらなる実施形態では点眼用製剤の調製方法は、第二の点眼薬を加えることを含む。一実施形態では第二の点眼薬は、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、プロスタミド、炭酸脱水酵素阻害薬、ｒｈｏキナーゼ阻害薬、α２アドレナリンアゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、アデノシンＡ１アゴニスト、アデノシンＡ３アンタゴニスト、アデノシンＡ２Ａアゴニスト、およびこれらの組合せを含む群から選択される。
【００４４】
一実施形態ではこの第二の薬剤は、ラタノプロスト、トラボプロスト、ウノプロストン、およびビマトプロストから選択されるプロスタグランジン類似体である。
一実施形態ではプロスタグランジン類似体はラタノプロストである。
【００４５】
関連した態様において、化合物Ａの微粒子の水性懸濁液を含むパッケージ化された局所的に点眼可能な点眼用製剤が提供される。一実施形態ではパッケージ化された点眼用製剤は、５℃において少なくとも２年間、また２５℃において少なくとも６ヶ月間安定である。一実施形態ではパッケージ化された点眼用製剤は、５℃において約１２〜１８ヶ月間、
また２５℃において３〜６ヶ月間安定である。一実施形態ではパッケージ化された点眼用製剤は、５℃において少なくとも１２ヶ月間、また２５℃において３ヶ月間安定である。
【００４６】
一実施形態ではパッケージ化された製剤は、第二の点眼薬をさらに含む。一実施形態ではパッケージ化された製剤は、ラタノプロストをさらに含む。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
前述の概要は、本発明の幾つかの実施例の特徴および技術的利点を概括的に述べている。以下の本発明の詳細な説明においてさらなる技術的利点を述べることにする。本発明の特質と考えられる新規な特徴は、幾つかの添付図および実施例に関連して考察した場合、本発明の詳細な説明からより良く理解されるであろう。しかしながら本明細書中で提供される図および実施例は、本発明の例示を補助すること、または本発明の理解の進展を促進することを意図しており、本発明の範囲を限定するものであることを意図しない。
【００４８】
別段の定義がなされない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。
定義
用語「約」または「およそ」は一般には、所与の値または範囲の２０％以内、より好ましくは１０％以内、最も好ましくはさらに５％以内を意味する。あるいは特に生体系においては用語「約」は、所与の値のおよそ対数（すなわち１桁）以内、好ましくは２倍以内を意味する。
【００４９】
本発明の記述に関連する（特に後述の特許請求の範囲に関連する）用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」、ならびに類似の指示対象の使用は、本明細書中で別段の指示がない限り、または文脈によって明確に否定されない限り単数および複数の両方を包含するものと解釈されたい。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、別段の注記がない限り非限定的な用語（すなわち「含むがそれには限定されない」ことを意味する）と解釈されたい。本明細書中の値の範囲の列挙は、その範囲に含まれるそれぞれ別々の値に個々に言及する簡便な方法としての機能を果たすことを意図するに過ぎず、それぞれ別々の値は、あたかもそれが個々に本明細書中に引用されているかのように本明細書中に組み込まれる。
【００５０】
用語「界面活性剤」とは、液体の表面張力を引き下げるか、２種類の液体間、または液体と固体の間の界面張力を引き下げる可溶性化合物を指す。表面張力は液体の表面に作用する力であり、表面積をできるだけ小さくし、液体中での固体の分散を容易にする傾向がある。
【００５１】
本明細書中で使用される用語「局所的な点眼」とは、被験者の外角膜表面に液体、ゲル、軟膏として点眼することを意味する。
用語「被験者」とは、ヒトの被験者または動物の被験体（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、テンジクネズミ、マウス、およびラット）を意味する。
【００５２】
本明細書中で使用される用語「有効量」とは、被験者の（ｉ）高ＩＯＰの治療または予防、（ｉｉ）ＩＯＰの降下、（ｉｉｉ）網膜神経節細胞障害の治療または予防、および（ｉｖ）網膜神経節細胞障害の軽減のうちの少なくとも一つに対して有効な点眼用製剤の量を指す。
【００５３】
本明細書中で使用される用語「治療する」とは、被験者の疾患の少なくとも一つの症状を取り除く、低減する、または緩和することを意味する。例えば、用語「治療する」とは、高眼圧を降下または緩和すること、かつ／または網膜神経節細胞のさらなる障害または損失を低減または予防することを意味することができる。例えば治療は、障害の症状の一つまたは幾つかの減少、または障害の完全な根治であることができる。
【００５４】
用語「保護する」または「予防する」は、発病（すなわち疾患の臨床的徴候に先立つ期間）を遅らせるために、かつ／または被験者（例えば疾患を発症する危険性のある被験者）が疾患を発症または悪化する可能性を減らすために本明細書中で区別なく使用される。例えば本発明の製剤は、高眼圧を予防するために使用することができ、かつ／あるいは網膜神経節細胞障害および／または網膜神経節細胞損失を予防するための神経保護組成物として使用することができる。
【００５５】
本発明で使用することができる「微粒子」の粒径は、好ましくは局所用製剤において眼科的に許容されるほぼ最大粒径である約５０μｍ以下である。粒径は、約１〜約５０μｍの間、例えば５０μｍ未満、４０μｍ未満、３０μｍ未満、２５μｍ未満、２０μｍ未満、または１０μｍ未満であることができるが、１μｍ未満の粒径もまた許容可能であることが理解される。粒径は、Ｘ９０値と定義され、これは積算篩下分布（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｕｎｄｅｒｓｉｚｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）の９０％に相当する粒径を指す。本発明では化合物Ａの粒子のＸ９０は、約２５μｍ未満である。米国薬局方＜４２９＞「粒径の光回折測定（Ｌｉｇｈｔ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅ）」（ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｏｎｌｉｎｅ．ｃｏｍ／ｄｏｃ．ｍｖｃ／ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ−ＵＳＰ−４２９−ｍｄａｓｈ−ｌｉｇｈｔ−ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ−ｍｅａ０００１で入手できる）に基づく粒子の測定方法を本出願人らは採用した。
【００５６】
本明細書中で使用される用語「滴量」とは、液滴に似た眼科的に許容できる液体の量を指す。一実施形態では一滴は、約５μＬ〜約２００μＬ、例えば約３０μＬ〜約８０μＬ、例えば約３０μＬ〜約５０μＬ、例えば約３５μＬに相当する液体の体積を指す。
【００５７】
化合物Ａの粒子の調製方法は、破壊法、例えばボールミル、ビーズミル、ジェットミル、およびハンマーミルを使用するもの、噴霧乾燥法、ビルドアップ法、例えば結晶化（例えば、超臨界溶液の急速膨張法、ＲＥＳＳ）、ＳＡＳ法（超臨界貧溶媒法）、およびＰＧＳＳ法（気体飽和溶液からの粒子）を含めた任意の標準的な微粉化技術を用いて行うことができる。
【００５８】
本発明の界面活性剤は、水性懸濁製剤中の微粉化したアデノシンＡ１受容体アゴニストの粒子を、その粒子表面を濡らしてそれらの水溶液との相溶性を調節することによって分散および解離させるための湿潤剤または分散剤として使用される。界面活性剤は、主として非イオン性である表面活性物質からなる群から選択され、限定されるものではないが、ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、ポリソルベート４０、ポリソルベート２０、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポロキサマー、チロキサポール、およびひまし油ＰＯＥ３５が含まれる。任意の類似の薬学的に許容できる表面活性物質が、局所点滴薬として眼に点眼した場合に刺激または不快を引き起こさない量で使用可能であり得ることを理解されたい。
【００５９】
本発明の保存料は、貯蔵時の点眼用製剤の保存のために使用され、反復投与点眼用製剤にとって必要である。好適な保存料には、塩化ベンザルコニウムなどの第四アンモニウム塩、セトリミド、クロロブタノール、ソルビン酸、ホウ酸、エデト酸二ナトリウム、および局所用点眼製品に使用した場合に安全かつ有効であることが知られている任意の他の保
存料が挙げられる。抗菌効果は、特に第四アンモニウム塩の場合、エデト酸二ナトリウムなどのキレート剤の添加によって高めることができる。
【００６０】
懸濁化剤は、粘度を増し、かつ懸濁液中での微粉化粒子の沈降速度を小さくするために、また最終使用者による均一な投薬を可能にするために使用される。懸濁化剤は、製造および封入方法での均一性を確実にするのに役立つ。懸濁化剤は、主として合成、半合成、または天然のポリマーであり、限定されるものではないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒプロメロースなどの可溶性セルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポビドン、カルボマー、ヒアルロン酸およびその塩類、硫酸コンドロイチンおよびその塩類、天然ガム、ならびに他の薬学的に許容できるポリマーが挙げられる。これらの懸濁化剤はまた、上記で言及したような幾つかの界面活性剤特性を与えることがあることに留意することが重要である。
【００６１】
緩衝剤は、貯蔵期限の間、ｐＨを最適な範囲に維持して化合物Ａの懸濁微粉化粒子の溶解度を低減させるために、したがってその化学的安定性を維持するために使用される。好適な緩衝剤は、眼を刺激しないまたは不快にしない１０ｍＭリン酸緩衝液である。
【００６２】
「視神経保護を与える方法（Ａ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）」という名称の２０１３年３月１５日出願の同時係属中の米国仮特許出願に記載されているように化合物Ａの製剤は、網膜神経節細胞に対して神経保護効果を有することが示されている。したがってこの点眼用製剤は、これらに限定されないが緑内障（例えば偽剥脱性および色素性緑内障ならびに閉塞隅角緑内障）、眼虚血症候群、網膜虚血（例えば網膜低酸素性虚血）、網膜静脈閉塞症、糖尿病網膜症、外傷（例えばプルチェル網膜症）、加齢黄斑変性、視力喪失形態の網膜剥離、ならびに液貯留および網膜浮腫をもたらす血液網膜関門（ＢＲＢ）の透水性の増大を生じる他の状態を含めた網膜神経障害および眼の神経変性状態の治療または予防に役立つ。
【００６３】
網膜神経節細胞の機能を測定するために使用することができる多くの方法が存在する。例えば網膜神経節細胞障害は、下記の手法を使用して測定することができる。
（ｉ）視野欠損の測定。視野欠損およびその進行は、正常眼圧力緑内障および高ＩＯＰ緑内障、視神経炎、および網膜神経節細胞障害を含めた緑内障の顕著な特徴である。視野欠損は、様々な視野測定技術を使用して測定することができる。視野欠損の測定値は、ＲＧＣ障害によって引き起こされる視力の早期変化の発見にきわめて有用であることができる。
【００６４】
（ｉｉ）網膜電図（ＥＲＧ）または網膜電図写真の測定値は、ＲＧＣの障害に関する情報を与える。網膜電図写真は、眼が幾つかの光源によって刺激された場合に網膜中の光受容細胞によって生じる電気的活動を測定する。その測定値は、眼（例えば角膜）および眼の近傍の皮膚の前面に置かれた電極によって捕えられ、網膜電図（ＥＲＧ）と呼ばれる画像記録が作成される。網膜電図写真は、網膜の幾つかの遺伝的および後天的な障害の診断、これらに限定されないが網膜色素変性などの状態による網膜神経節細胞障害の診断、動脈硬化症または糖尿病によって引き起こされる網膜剥離または機能変化の診断に役立つ。具体的にはＥＲＧの明順応性陰性反応（ｐｈｏｔｏｐｉｃ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＰｈＮＲ）は、損なわれていない機能するＲＧＣの存在を測定すると考えられており（ヴィスワナータン  Ｓ（Ｖｉｓｗａｎａｔｈａｎ  Ｓ）、フリッシュマン  ＬＪ（Ｆｒｉｓｈｍａｎ  ＬＪ）、ロブソン  ＪＧ（Ｒｏｂｓｏｎ  ＪＧ）ら著、「マカクの網膜電図の明順応性陰性反応：実験的緑内障による減少（Ｔｈｅ  ｐｈｏｔｏｐｉｃ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｃａｑｕｅ  ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍ：ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｇｒａｕｃｏｍａ）」、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サ
イエンス（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．）、１９９９年、第４０巻、ｐ．１１２４〜１１３６）、またこの信号は、患者の視野欠損が緑内障性視野欠損と相互に関係していることを示す（ヴィスワナータン  Ｓ（Ｖｉｓｗａｎａｔｈａｎ  Ｓ）、フリッシュマン  ＬＪ（Ｆｒｉｓｈｍａｎ  ＬＪ）、ロブソン  ＪＧ（Ｒｏｂｓｏｎ  ＪＧ）、ウォルターＪＷ（Ｗａｌｔｅｒ  ＪＷ）著、「原発性解放隅角緑内障におけるフラッシュ網膜電図の明順応性陰性反応（Ｔｈｅ  ｐｈｏｔｏｐｉｃ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｌａｓｈ  ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｏｐｅｎ  ａｎｇｌｅ  ｇｌａｕｃｏｍａ）」、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サイエンス（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．）、２００１年、第４２巻、ｐ．５１４〜５２２）。
【００６５】
（ｉｉｉ）ツァイ  ＪＣ（Ｔｓａｉ  ＪＣ）、チャン  ＨＷ（Ｃｈａｎｇ  ＨＷ）著、「高眼圧症患者の網膜神経線維層の厚さに及ぼすブリモニジン０．２％およびチモロール０．５％の影響の比較：プロスペクティブ非盲検試験（Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ  ０．２％  ａｎｄ  ｔｒｉｍｏｌｏｌ  ０．５％  ｏｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｆｉｂｅｒ  ｌａｙｅｒ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｒｔｅｎｓｉｖｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａ
ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ，ｕｎｍａｓｋｅｄ  ｓｔｕｄｙ）」、ジャーナル・オブ・オキュラー・ファーマコロジー・アンド・セラピューティクス（Ｊ  ＯｃｕｌＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ．）、２００５年、第２１巻、ｐ．４７５〜８２）に報告しているような光干渉断層撮影または走査レーザー旋光分析によって測定される網膜神経線維層の厚さ（ＲＮＦＬ）の測定値。
【００６６】
本発明の予防法を利用する候補になるであろう、ＲＧＣ障害を受けやすいまたはＲＧＣ障害の発症の危険性のある被験者は、緑内障（例えば、正常眼圧緑内障、偽剥脱性および色素性緑内障、ならびに閉塞隅角緑内障）の家族歴を有する被験者、視野欠損の家族歴を有する被験者、眼虚血症候群、網膜虚血（例えば網膜低酸素性虚血）、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、糖尿病網膜症、加齢黄斑変性、網膜剥離由来の視力喪失、ならびに液貯留および網膜浮腫をもたらす血液網膜関門（ＢＲＢ）の透水性の増大を生じる状態の家族歴を有する被験者、眼科手術を目前にした、または眼外傷を経験している被験者、眼疾患、すなわち緑内障（例えば、正常眼圧緑内障、偽剥脱性および色素性緑内障、ならびに閉塞隅角緑内障）、糖尿病、悪性腫瘍、感染症、眼虚血、眼の炎症、眼球圧迫、高眼圧、網膜神経節細胞への血液循環の障害、眼虚血症候群、網膜虚血（例えば網膜低酸素性虚血）、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、糖尿病網膜症、加齢黄斑変性、網膜剥離由来の視力喪失、液貯留および網膜浮腫をもたらす血液網膜関門（ＢＲＢ）の透水性の増大を生じる状態、またはこれらの合併症を含めた網膜神経節細胞障害の発症と関係のある疾患を有する被験者である。
【００６７】
化合物名と化合物の構造の間に不一致が存在する場合、その化学構造が優先することになる。
この点眼用製剤は、ＩＯＰを下げるのに、かつ／または高ＩＯＰまたは網膜神経節細胞障害または喪失を経験している被験者の網膜神経節細胞障害または喪失を軽減させるのに、かつ／または正常ＩＯＰレベルを維持するのに、かつ／あるいはＩＯＰまたは網膜神経節細胞障害もしくは喪失の発症の危険性のある被験者の網膜神経節細胞障害または喪失を予防するのに十分な量で投与される。
【００６８】
したがって局所投与の場合、これらの製剤の１〜２滴が、熟練した臨床医の裁量に従って眼球の表面に１日１〜４回送達されることになる。
この点眼用製剤はまた、他の緑内障治療薬、例えばこれらに限定されないが、β遮断薬
、プロスタグランジン類似体、プロスタミド、炭酸脱水酵素阻害薬、α２アドレナリンアゴニスト、縮瞳薬、神経保護物質、アデノシンＡ１アゴニスト、アデノシンＡ３アンタゴニスト、アデノシンＡ２Ａアゴニスト、およびこれらの合剤と組み合わせて使用することができる。本明細書中で使用される「薬剤の併用」および類似の用語は、２種類の薬剤の併用、すなわち（１）アデノシン受容体Ａ１アゴニスト（例えば、式Ｉの化合物）および／またはアデノシン受容体Ａ１アゴニストの薬理学的に活性な代謝産物（例えばシクロペンジルアデノシン）、それらの塩、溶媒和化合物、およびラセミ化合物、および（２）プロスタグランジン類似体（例えばラタノプロスト）および／またはプロスタグランジン類似体の薬理学的に活性な代謝産物、それらの塩、溶媒和化合物、およびラセミ化合物を指す。薬理学的に活性な代謝産物には、不活性だが投与後に体内で薬理学的に活性な形態に転化するものが挙げられる。
【００６９】
併用投与には、単一製剤または単一剤形の形態での併用投与、併用の個々の薬剤の同時だが別々の投与、または併用の個々の薬剤の任意の適切な経路による連続的投与が挙げられる。併用の個々の薬剤の用量は、それら薬剤の一方を、併用されるもう一方の薬剤と比較してより頻繁に投与することが必要な場合もある。したがって適切な投薬を可能にするためにパッケージ化される医薬製品には、それら薬剤を組み合わせて含有する１種類または複数種類の剤形と、それら薬剤の組合せの一方を含有するが、組合せのもう一方の薬剤を含有しない１種類または複数種類の剤形とが入っていてもよい。
【００７０】
本明細書中で述べる方法で使用される薬剤の併用の最適用量は、既知の方法を使用してそれぞれの個体に対して経験的に決めることができ、これらに限定されないが、その疾患の進行の程度、その個体の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食習慣、投与の時間、およびその個体が使用している他の薬物療法を含めた様々な要因に左右されることになる。最適な用量は、当技術分野でよく知られている決まった試験および手順を使用して確立することができる。式Ｉの化合物の１日投与量は、１０μｇ〜約２０００μｇであることができる。
【００７１】
投与の頻度は、使用される製剤、治療または予防される特定の状態、および患者／被験者の病歴に応じて変えることができる。一般には有効な治療を施すのに十分な最少用量を使用することが好ましい。一般には患者を、治療または予防される状態に関してＩＯＰまたは網膜の障害を監視するのに適した定量法または試験法を使用して治療の有効性について監視することができ、これは通常の当業者にはよく知られている。
【００７２】
下記の省略形が本明細書中で使用され、指示された定義を有する。すなわち、ＩＯＰは眼圧であり、ＯＨＴは高眼圧症であり、ＰＯＡＧは原発性解放隅角緑内障であり、ＮａＣＭＣはカルボキシメチルセルロースナトリウムである。
【実施例】
【００７３】
下記の実施例により本発明をさらに例示するが、それらに限定されるものと解釈されるべきではない。
実施例１  −  化合物Ａの合成
下記のスキーム１は、化合物Ａの調製における反応スキームを示す。化合物ＡのＧＭＰ調製について詳細に述べる。
【００７４】
細目にわたる量は化合物Ａの約４０ｇの生産バッチに対して計算される。記載されている生産は一定比率で拡大することができる。
ステップ１：１Ｌのエタノールを反応器に装入し、急速撹拌した。反応器中のエタノールに０．３ｋｇの６−クロロアデノシンおよび０．２６７ｋｇのシクロペンチルアミンを加えた。反応器を加熱して２時間還流させ、次いで８℃まで冷却し、その条件下で１２時
間保った。結晶化した材料を母液から濾過して取り出し、その固体ケーキを０．３３Ｌのエタノールで洗浄してウエットケーキを生成させた。このウエットケーキを乾燥してＮ６−シクロペンチルアデノシン（０．２４９ｋｇ）を得た。
【００７５】
ステップ２：ジメトキシプロパンを使用して糖単位上の２’および３’ヒドロキシル基を保護した。反応器に３．７Ｌのアセトンを装入し、急速撹拌した。反応器中のアセトン（３．７Ｌ）に０．３８６ｋｇのジメトキシプロパンおよび０．１４８ｋｇのｐ−トルエンスルホン酸を加えた。反応器を４０℃に１．５時間加熱した。次いで真空下で４０℃で蒸留することによって溶媒を除去して乾燥粗製材料を調製した。得られた乾燥粗製材料に３．１Ｌの酢酸エチルを加えた。次いでこの溶液を６℃まで冷却し、滴下によって０．５Ｎ  ＮａＯＨ溶液をｐＨ８に達するまで加えた。これは、約１．５５ＬのＮａＯＨ溶液に等しかった。相分離が完了した後、有機相に０．７８Ｌの飽和塩化ナトリウム２０％溶液を加えた。０．７８Ｌの飽和塩化ナトリウム２０％溶液を再度加えた。これら２つの相を３０分間撹拌した。酢酸エチルベースであるこの有機相を分離し、０．１５７ｋｇの硫酸ナトリウムで乾燥し、１Ｌの酢酸エチルで洗浄した。この溶液を濾過し、真空下で５５℃で油になるまで蒸発させた。残った油に１．２Ｌのヘキサンおよび０．３Ｌの酢酸エチルを加えた。この反応混合物を５５℃まで３時間加熱し、次いでその溶液を５℃まで冷却し、この温度で１２時間保った。固体を濾過し、得られたケーキを０．６２５Ｌの酢酸エチル：ヘキサン（１：４）溶液で洗浄した。乾燥後、２’，３’−イソプロピリデン−Ｎ６−シクロペンチルアデノシンの固体１４０ｇを得た。
【００７６】
ステップ３：ステップ２で得た２’，３’−イソプロピリデン−Ｎ６−シクロペンチルアデノシンの５’位のニトロ化を硝酸無水酢酸混合物で行った。０．１２７Ｌのジクロロメタンを反応器に装入し、急速撹拌した。１４０ｇの２’，３’−イソプロピリデン−Ｎ６−シクロペンチルアデノシンを加え、その反応溶液を−２０℃まで冷却した。０．４２０Ｌの無水酢酸に溶かした０．１２７Ｌの６５％硝酸からなる０．５４７Ｌの溶液を、反応混合物を−１５℃未満に保つ速度で加えた。−２３℃〜−１８℃の間の温度範囲が、好ましい目標範囲であることが分かっている。温度を高めた場合、不純物が生じることが分かった。この酸混合物の添加は、約０．５時間要した。混合物を２０分間撹拌し、次いで０．３５Ｌの冷飽和重炭酸ナトリウム溶液に入れて反応を止めた。この冷飽和重炭酸ナトリウム水溶液に固体重炭酸ナトリウムを加えることによってｐＨを７に修正した。有機相を分離し、また水性相を０．４Ｌのジクロロメタンで抽出した。有機相を一緒にし、０．６Ｌの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。次いで下記のステップ４で使用するために２’，３’−イソプロピリデン−Ｎ６−シクロペンチルアデノシン−５’−硝酸塩を含有する有機相を分離した。
【００７７】
ステップ４：その不安定性のために、この保護された２’，３’−イソプロピリデン−Ｎ６−シクロペンチルアデノシン−５’−硝酸塩は、精製せず直接に加水分解された。ステップ３からの溶液を２０℃において真空下で油になるまで蒸発させた。この油を２℃未満まで冷却した。１．９５Ｌのトリフルオロ酢酸：水（３：１）溶液を加えた。反応混合物を０．５時間撹拌し、撹拌しながら室温まで温まるに任せた。その後、重炭酸ナトリウム溶液を調製し、１０℃未満まで冷却した。この重炭酸ナトリウム溶液を反応混合物に加えて反応を止めた。反応容器に酢酸エチルを加え、ｐＨを調整し、有機相を後処理し、硫酸ナトリウムで乾燥した。次いでこの得られた生成物溶液を、硫酸マグネシウムおよび材料ストリッパーで数回乾燥して粗製化合物Ａを形成した。
【００７８】
次いで粗製化合物Ａをエタノールから再結晶させた。この粗製化合物Ａ材料をエタノール中に溶解し、次いで半分の体積まで濃縮して３６時間結晶化させた。その後、この得られた生成物を濾過により単離して化合物Ａを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：Δ１．４９−１．５８（ｍ，４Ｈ），１．６６−１．
７２（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．９４（ｍ，２Ｈ），４．１２−４．１７（ｍ，１Ｈ），４．２８−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．４８（ｂｓ，１Ｈ），４．６５−４．８７（ｍ，３Ｈ），５．５（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．６３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７，７５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｂｓ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ）；ｍｓ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  ３８１．３５（Ｍ＋１）；分析値  Ｃ１５Ｈ２０Ｎ６Ｏ６に対する計算値：Ｃ，４７．３７；Ｈ，５．３０；Ｎ，２２．１０；実測値：Ｃ，４７．４９；Ｈ，５．１２，Ｎ，２１．９６．
スキーム１：
【００７９】
【化２】
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実施例２  −  製剤の調製
本発明は、Ａ１アゴニストの微粒子の水性懸濁液を含む点眼用製剤を提供する。ＡＰＩ形態の化合物Ａを、ループミルに５０〜７０ｇ／時の間の速度および９０ｐｓｉのミル圧で供給した。この微粉砕工程は、３〜７μｍの間の粒径範囲を有し、約５μｍの平均粒径を有する微粒子を作り出した。５０μｍ未満の粒径は点眼用製剤において角膜または眼組織への過度の刺激なしに角膜に局所投与することができることが一般に認められている。化合物Ａが微粉砕されたら、その得られた微粒子をγ旋照射法によって滅菌した。粒子に
最高４０ｋＧｒａｙ（ｋＧｙ）まで照射して化合物Ａを滅菌した。
【００８０】
化合物Ａの懸濁バッチはカリフォルニアのニューポート・リサーチ（Ｎｅｗｐｏｒｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）において室温および大気圧で製造され、それらバッチは、体積が１０ｍＬ〜９００ｍＬ、また化合物Ａの濃度が０．１％〜３．０％の範囲にあった。大部分のバッチは、ステーター−ローターミキサー（高せん断ミキサー）を使用して、化合物Ａの凝集塊を微粉化された一次粒子まで適切に湿潤かつ分散させるのに十分なせん断を与えることによって生産された。使用された具体的なミキサーは、１０ｍＬバッチのための１０ｍｍジェネレータープローブおよび６０〜９００ｍＬバッチのための２０ｍｍジェネレータープローブを備えたオムニ・ミキサー・ホモジナイザー（ＯＭＮＩ  ＭＩＸＥＲ  ＨＯＭＯＧＥＮＩＺＥＲ）、モデル１７１０５であった。幾つかの１０〜２０ｍＬバッチを約２０〜３０分間の超音波処理によって調製した。これは顕微鏡検査によって決められる適切な分散に関して十分なものであることが分かった。
【００８１】
化合物Ａの点眼用懸濁製剤の１００ｍＬバッチの製造に要したステップは、以下の通りであった。
１．６０〜７０ｍＬの純水をガラスまたはステンレス鋼製ビーカー中で約７０℃まで加熱した。
【００８２】
２．ステップ１からの温められた純水にカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）をゆっくり加え、溶解するまで混合した。
３．この水とＮａＣＭＣの混合物を熱から外し、そのＮａＣＭＣ混合物を混合しながらポリソルベート８０、塩化ベンザルコニウム（好ましくは溶液の状態）、第一リン酸ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、および塩化ナトリウムを加える（任意の順序で）と同時に、この混合物を室温まで冷却した。混合物はすべての成分が溶解するまで混合された。
【００８３】
４．この混合物に純水を加えて体積を９０ｍＬに合わせた。
５．得られた混合物のｐＨを、水酸化ナトリウム（１〜１０％溶液）および／または塩酸（１〜１０％溶液）で６．５±０．１に調整した。
【００８４】
６．所望の濃度を達成する量の微粉化された化合物Ａの粉末を、ＯＭＮＩミキサーなどの高せん断ミキサーで約５〜２０分間混合した。また塩化ベンザルコニウムを微粉化された化合物Ａの分散後に加えることもできる。
【００８５】
７．１００ｍＬを作り出すために純水を加え、その得られた混合物を混合して均質性を確実にした。
８．次いでその得られた点眼用懸濁液を約４０℃で約９６時間熟成してＡ１結晶多形の状態の化合物Ａの懸濁粒子の転化を促進させ、そのより安定なＡ２結晶多形に転化した。化合物Ａの結晶多形の性質は、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１３／２３１６６号明細書中に記載されており、その内容はその全体が本明細書中に援用される。
【００８６】
９．この得られた熟成懸濁液に、最終製剤濃度を約０．８％（ｗ／ｖ）にすることになる濃度のホウ酸を無菌で加えた。
１０．次いでこの得られた無菌溶液を使用して安定性検討のために点眼容器に装入した。
実施例３  −  製剤１
上記の製剤調製の実施例に従って下記の製剤を調製し、ｐＨを水酸化ナトリウムで調整した。
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０１５
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
実施例４  −  製剤２
上記の製剤調製の実施例に従って下記の製剤を調製した。
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．００５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
実施例５  −  製剤３
上記の製剤調製の実施例に従って下記の製剤を調製した。
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
実施例６  −  製剤４
上記の製剤調製の実施例に従って下記の製剤を調製した。
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１５
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０３
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
純水                          適量、１００．００
実施例７  −  製剤５
上記の製剤調製の実施例に従って下記の製剤を調製した。
成分                          ｗ／ｖ％
微粉化した化合物Ａ            ０．５〜３．０
低粘度ＣＭＣナトリウム        ０．７０
ホウ酸                        ０．８
塩化ベンザルコニウム          ０．０１
ポリソルベート８０            ０．０５
リン酸緩衝液                  ０．１２
エデト酸二ナトリウム          ０．０６
ＮａＣｌ                      ０．４
ＮａＯＨ／ＨＣｌ（ｐＨ調整）  ｐＨ  ６．５±０．１
実施例８  −  製剤６
また、上記製剤の任意の一つに追加の点眼薬、例えばラタノプロストを加えることもできることを理解されたい。ラタノプロストは、眼圧を降下させることによって緑内障または高眼圧症の進行を抑えるための局所点眼薬として使用されている。これは、眼からの房水の流出を増加させる（ブドウ膜強膜流出管を通して）ことによって作用するプロスタグランジン類似体である。ラタノプロストはキサラタン（商標）として市販されており、解放隅角緑内障または高眼圧症を有する患者の高眼圧の降下にとって必要である。前臨床試験は、化合物Ａをラタノプロストと組み合わせて使用することにより正常眼圧のサルにおいて顕著なＩＯＰ降下が得られることを示している（米国特許出願公開第２０１１−０１７２１７７号明細書）。
【００８７】
ラタノプロストは、上記の熟成のステップの後、または他の製剤のステップの後に一般には無菌でその製剤に加えられる。例えばラタノプロストは、３．０％で化合物Ａと一緒に製剤３（上記実施例５）に加えて、約５０μｇ／ｍＬのラタノプロストの濃度を有する化合物Ａとの単位用量の合剤を調製することができる。安定性の検討が、製剤３としての化合物Ａの懸濁液とラタノプロストの合剤の安定性を調べるために行われた。安定性の検討について下記に述べる。
安定性試料の調製：
５０μｇ／ｍＬのラタノプロストを加えた化合物Ａの３％懸濁液の１０ｍＬの試料を安定性の検討に使用した。エタノールを使用してラタノプロストを化合物Ａの懸濁液中に分散させた。最終溶液のエタノールの目標は０．５％であり、したがって１０ｍＬの懸濁液の場合、ラタノプロストは５０μＬのエタノールに溶解された。
【００８８】
１０ｍＬの懸濁液の場合、０．５ｍｇのラタノプロストがスパイク（ｓｐｉｋｅ）用に必要であった。酢酸メチルに溶かした１０ｍｇ／ｍＬのラタノプロストを含有する市販溶液の試料５０μＬを採り、溶媒を真空下で除去した。残留物を５０μＬのエタノールに溶解した。
【００８９】
５ｍＬ自動ピペット（２×４．９７５ｍＬ）で採取した９．９５０ｍＬの懸濁液試料に、混合しながらこのエタノール溶液を加えた。
５００μＬのＴ０試料を採取した後、バルク溶液を２〜８℃、２５℃／６０ＲＨ、および４０℃／７５ＲＨに据え置かれた３個の容器に分けた。
【００９０】
懸濁液の総体積が１０ｍＬではなく８．５ｍＬであることに移動の際に気付いた。これはサンプリングに使用される５ｍＬ自動ピペットが懸濁液の測定に関して問題に遭遇することを示唆する。この場合の溶液は、懸濁液中のラタノプロストが８．５ｍＬの体積中０．５ｍｇ、すなわち５８．８μＬ／ｍＬであることになる。したがって分析の場合、アセトニトリルによる５０％希釈後の溶液中の理論上のラタノプロストは２９．４μｇ／ｍＬであった。
ラタノプロストの検量線：
ラタノプロスト検量線試料は、酢酸メチルに溶かしたラタノプロストの１０ｍｇ／ｍＬ
溶液の試料２５μＬを採取することによって調製した。溶媒除去の後、残留物を３００μＬのエタノール中に溶解させた。
【００９１】
このエタノール溶液から４５、６０、および７５μＬの３つの分割量を取り出した。溶媒除去の後、残留物を１ｍＬのアセトニトリル（０．５％のエタノールを含有した状態の）中に溶解させた。得られた濃度は、ラタノプロストが３７．５、５０、および６２．５μｇ／ｍＬであった。
【００９２】
分析の場合、これらの溶液を５０％の水に溶解して、それぞれ１ｍＬ当たりのラタノプロスト約１８．７５、２５、および３１．２５μｇを得た。
標準液の調製を各時点について繰返し、良好な直線性および矛盾のないエリア数を得た。
【００９３】
下記の表１は、蛍光検出器による各濃度および各時点に対するエリア数のデータを示す（エリアは２回の注入の平均である）。
ラタノプロストのエリア数
【００９４】
【表１】
2016513706.tif 000004
ラタノプロスト酸の検量線：
また、ラタノプロスト酸の検量線を、酢酸エチル中に１０ｍｇ／ｍＬを含有する市販の溶液を使用して作成した。
【００９５】
ラタノプロスト標準液とは対照的に、これらの溶液は１００％アセトニトリル中で調製された。
注入された溶液は、５、２．５、および１．２５μｇ／ｍＬ溶液であった。
定量結果：
安定性試料を懸濁液のボルテックス混合および超音波処理によって調製し、続いてアセトニトリルによる５０％希釈液を調製した。遠心分離後、上清をＨＰＬＣ上に注入した。
【００９６】
定量結果を下記の表２に示す。ただし計算濃度は単位μｇ／ｍＬで示される（理論濃度は２９．４μｇ／ｍＬである）。
【００９７】
【表２】
2016513706.tif 000005
純度：
Ｔ０試料、２週試料、および２〜８℃の４週試料中にラタノプロスト酸は存在しなかった。４週の２５℃／６０および４０℃／７５試料については計算されたラタノプロスト酸の値は、それぞれ０．４および０．３μｇ／ｍＬであった。３ヶ月間で不純物はわずかに増加した。３ヶ月の２５℃／６０および４０℃／７５試料については計算されたラタノプロスト酸の値は、それぞれ０．６３および３．９２μｇ／ｍＬであった。３ヶ月の２〜８℃については不純物ピークは積分するには小さ過ぎた。３ヶ月間の４０℃／７５試料を別にすれば、すべての他の試料の値は、検量線濃度より下、したがってこの方法の検出レベルより下にあった。
【００９８】
特に２〜８℃と２５℃／６０の間のラタノプロストの定量結果はほとんど同一であったが、ＦＬＤおよびＵＶでの不純物ピークは、時間および温度と共に増加する。
４週試料が最高の不純物ピークを示し、２週試料およびＴ０が後に続く。２〜８℃試料は、最も少ない変化量であった。
実施例９  −  安定性の検討
製剤実施例５で調製した製剤を、安定性について５℃で６ヶ月の期間にわたって調べた。試料を、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、および１８ヶ月で採取し、液体クロマトグラフィにより分析した。安定性の結果を下記に要約する。
【００９９】
製剤実施例５  −  この製剤は化学的安定性を示し、５℃において１８か月後に顕著な粒径変化はなかった。
【０１００】
【表３】
2016513706.tif 000006
大規模製剤調製の実施例
総体積７．６Ｌの製剤を、５．７Ｌの製剤第一部分（下記表１参照）から１．５％化合物Ａの濃度で調製し、４０℃で７２時間撹拌しながら調製し、熟成してその懸濁し微粉化した医薬品有効成分（ＡＰＩ）をそのより安定な結晶多形に転化させた。続いてこれに、懸濁したＡＰＩ粒子を安定化させるホウ酸を含有する１．９Ｌの製剤第二部分（下記表２参照）を加えた。製剤を点眼瓶に詰めた後の懸濁液中の目標ＡＰＩ濃度を達成するように５％ＡＰＩ過多量が使用された。
５．７Ｌの製剤第一部分の調製のための指示：
製剤第一部分の成分を下記表１に列挙する。第一部分の成分濃度は、製剤第二部分と混ぜ合わせた後にのみ最終目標濃度が達成されるように調整されることに留意されたい。
【０１０１】
【表４】
2016513706.tif 000007
２５０ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨ溶液をｐＨ調整用に調製した。ポリソルベート８０を２００ｍＬの室温の注射用蒸留水（ＷＦＩ）中に溶解した。５０％塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）を約６００ｍＬの室温ＷＦＩ中に予め溶解した。風袋を量った配合用容器に２８００±１００ｇの７０℃ＷＦＩを加えた。撹拌しながらこの配合用容器中にカルボキシメチルセルロースナトリウムを撒き、そのＣＭＣの容器を約２００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加えた。得られた溶液を、その溶液が目で見て分かるほどに透明になるまで少なくとも３０分間撹拌した。２８００±１００ｇの室温ＷＦＩを加え、溶液温度が３５℃以下になるまで撹拌した。配合用容器に第一リン酸ナトリウムを加え、その第一リン酸ナトリウムの容器を約１００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加えた。この第一リン酸ナトリウムを、完全に溶解するまで撹拌した。エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）を配合用容器に加え、そのＥＤＴＡの容器を約１００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加えた。溶液を、ＥＤＴＡが完全に溶解するまで撹拌した。予め溶解させたポリソルベート８０を配合用容器に加え、その容器を約１００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加えた。得られた溶液を少なくとも３分間混合した。予め溶解させたＢＡＫを配合用容器に加え、そのＢＡＫの容器を約１００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加え、少なくとも３分間混合した。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を配合用容器に加え、そのＮａＣｌの容器を約２００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加えた。配合用容器を、ＮａＣｌが完全に溶解するまで混合した。配合用容器にＷＦＩを加えて８５５０±５０ｇの目標重量（最終ＷＦＩ適量（ＱＳ）の重量の約９５％）を達成した。ｐＨ試験のためにそのバルク溶液の５ｍＬ分割量を取り出した。必要に応じて６．５±０．１のｐＨが達成されるまで１Ｎ  ＮａＯＨの複数の１０ｍＬ分をバルク溶液に加えた。各ＮａＯＨ添加の間で最低限３分間混合した。９０００±５０ｇまで室温ＷＦＩを適量加えた。
【０１０２】
１０Ｌのステンレス鋼製の、撹拌用羽根車を備え、温度制御される滅菌した製剤容器に、１２０ｇ（５％過剰量を含めて７．６Ｌの１．５７５％化合物Ａの場合）のγ線滅菌した微粉化された化合物ＡのＡＰＩを無菌製造条件を使用して装入した。次に、４０００ｇの第一部分の溶液を湿潤されパージされた滅菌フィルターに通し、それを製剤容器に無菌で送り出した。その容器を２０００±５０ｒｐｍで２０分間撹拌して、第一部分の溶液中の微粉化されたＡＰＩを均一に懸濁させた。第一部分製剤の最終分割量１７８０ｇを滅菌濾過して製剤容器に入れ、懸濁していないＡＰＩを洗浄してバルク溶液にし、最終の風袋を差し引いた５７００ｇの重量を生成した。２０００±５０ｒｐｍで２０分間撹拌して懸濁液を均質化した後、撹拌速度を６００±５０ｒｐｍまで減じ、加熱器／再循環ポンプを４０℃に設定して溶液を４０±５℃まで加熱し始めた。懸濁液が目標温度に達したらすぐに、その懸濁液を７２時間撹拌した。
４．０Ｌの製剤第二部分の調製のための指示：
製剤第二部分の成分を下記表１に列挙する。第二部分の成分濃度は、製剤第一部分と混ぜ合わせた後にのみ最終目標濃度が達成されるように調整されることに留意されたい。
【０１０３】
【表５】
2016513706.tif 000008
２５００±１００ｇの７０℃ＷＦＩを、風袋を量った配合用容器に加える。撹拌しながら配合用容器中にカルボキシメチルセルロースナトリウムを撒き、そのＣＭＣの容器を約１００ｍＬのＷＦＩで３回洗い落し、配合用容器に加えた。溶液を、その溶液が目で見て分かるほどに透明になるまで少なくとも３０分間撹拌した。９００±１００ｇの室温ＷＦＩを加え、その溶液をＣＭＣが完全に溶解するまで撹拌した。配合用容器にホウ酸を加え、そのホウ酸の容器を１００ｍＬのＷＦＩで少なくとも３回洗い落し、そのすすぎ水を配合用容器に加えた。溶液が２５℃以下になったとき、４０ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨを加え、５分間撹拌してからｐＨを調べ、記録した。容器にＷＦＩを４０００±５０ｇの最終適量まで加え、最小限１５分間混合した。１０Ｌ製剤容器上の加熱器を止め（熟成期間後）、冷却水を循環させた。撹拌を約６００ｒｐｍで続けた。１９００ｇの製剤第二部分を、湿潤されパージされた滅菌フィルターを経由して無菌でゆっくり加えて、７６００ｇの最終適量製剤重量を得た（図１参照）。得られた溶液を、２０００±５０ｒｐｍで２０分間撹拌した。撹拌を続けながら、５．０〜５．６ｇ（目標５．３ｇ）の懸濁製剤を１０ｍＬのγ線滅菌されたＲｅｘａｍ点眼瓶に詰めた。瓶をぴったり合ったドロッパーチップおよびキャップで閉じた。
【０１０４】
本発明およびその実施形態を詳細に述べた。しかしながら本発明の範囲は、本明細書中で述べたいかなる工程、製品、主題組成物、化合物、手段、方法、および／またはステップの特定の実施形態にも限定されるものではない。開示された材料に対して本発明の趣旨
および／または本質的特質から逸脱することなく様々な修正形態、置換形態、および変形形態をなすことができる。したがって当技術分野の当業者は、後で本発明のそのような関係のある実施形態に従って、本明細書中で述べた実施形態と実質上同一の機能を果たす、または実質上同一の結果を達成する修正形態、置換形態、および／または変形形態を利用することができることを本開示から容易に理解されよう。したがって後述の特許請求の範囲は、本明細書中で開示された工程、製品、主題組成物、化合物、手段、方法、および／またはステップに対する修正形態、置換形態、および変形形態をその範囲内に包含することを意図している。
【国際調査報告】
2016513706.tif 000009