(57)【要約】【解決手段】  液体状試料中の細胞を分類する装置が提供される。装置は、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を有する。導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有し、長手方向仕切りは、導管内の長手方向の第二流体流路と流体連通した長手方向の第一流体流路を画定する。当該装置の使用方法、並びに当該装置を含むシステム及びキットも提供される。装置、システム、及び方法は、診断上の分析を含む種々の適用例に使用可能である。
2016514965.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体状試料中の細胞を分類する装置であって、
液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備えており、
前記導管は、該導管の一の内面から対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有し、
前記長手方向仕切りは、前記導管の内部で長手方向の第一流体流路を、長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する
ことを特徴とする装置。
【請求項２】
前記導管は、前記長手方向仕切りと前記導管の前記対向する内面との間に間隙を有することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記間隙の高さが１μｍから５０μｍまでの範囲であることを特徴とする請求項２に記載の装置。
【請求項４】
前記第一流体流路の幅が前記導管の長さ方向に沿って減少することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項５】
前記第二流体流路の幅が前記導管の長さ方向に沿って増加することを特徴とする請求項４に記載の装置。
【請求項６】
前記導管は前記第一流体流路の上流端と流体連通した入口を有することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項７】
前記導管は前記第一流体流路の下流端と流体連通した第一出口を有することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項８】
前記導管は前記第二流体流路の下流端と流体連通した第二出口を有することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項９】
前記導管の前記内面は前記第一流体流路に延びる一つ以上の突起を有することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１０】
液体試料中の細胞を分類する多重装置であって、
液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備えており、
前記導管は、夫々が該導管の一の内面から対向する内面に向かって延びる二つ以上の長手方向仕切りを有し、
前記長手方向仕切りは、前記導管の内部で互いに流体連通した三つ以上の長手方向の流体流路を画定する
ことを特徴とする多重装置。
【請求項１１】
前記導管は、第一の長手方向仕切りと前記導管の前記対向する内面との間の第一の間隙、及び、第二の長手方向仕切りと前記導管の前記対向する内面との間の第二の間隙を有することを特徴とする請求項１０に記載の多重装置。
【請求項１２】
前記第一の間隙の高さは前記第二の間隙の高さよりも大きいことを特徴とする請求項１１に記載の多重装置。
【請求項１３】
前記導管は第一流体流路の上流端と流体連通した入り口を有することを特徴とする請求項１０に記載の多重装置。
【請求項１４】
前記導管は、夫々が異なる流体流路の下流端と流体連通した一つ以上の別個の流体出口を有することを特徴とする請求項１３に記載の多重装置。
【請求項１５】
液体状試料中の細胞を分類する方法であって、
一の内面から対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りであって内部で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する長手方向仕切りを有するマイクロ流体の導管に、複数の細胞を含む液体状試料を流す
ことを有することを特徴とする方法。
【請求項１６】
前記第一流体流路の下流端と流体連通した第一出口から第一の細胞群を収集することを更に有することを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第二流体流路の下流端と流体連通した第二出口から第二の細胞群を収集することを更に有することを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記導管内を通過する細胞を定量化することを更に有することを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記導管内を通過する細胞を特性解析することを更に有することを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
一の内面から対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りであって内部で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する長手方向仕切りを有し、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える装置と、
緩衝液と
を含むことを特徴とするキット。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
細胞の特性解析は、疾病の診断及びモニタリング並びに薬の開発のための細胞生物学において使用される。フローサイトメトリー及び磁気ビーズを用いたカラム選別法等の従来の細胞解析方法が研究室及び臨床現場の双方で用いられてきたが、より良い装置及び方法が望ましい場合がある。例えば、従来の方法では細胞の外因性標識付けを含む事前準備が求められる。斯かる標識付けは追加されたインキュベーション時間、追加コスト、試料の損失、並びに細胞の生理及び機能の改変につながる。また、従来の手法は可搬性を得るには不適である。可搬性は、ある一定の臨床状態においては望ましいことがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００２】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１１／００８１６７４号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）は最初の固形腫瘍から脱離して血流に流入した細胞である。ＣＴＣは乳癌の転移の進行に重要な役割を果たしていると信じられている。そのためＣＴＣの存在、特に患者の一定体積の血中あたりの個数が患者の予後の判断及び疾病の進行のモニタリングのための手段となる。臨床研究によると、治療開始前に７．５ｍＬの全血液成分中に５個を超えるＣＴＣが含まれる乳癌患者は、同体積の血中のＣＴＣの個数がそれ以下又は０である患者と比較して、無増悪生存期間が短く、全生存が不良である。臨床上又は予後上のＣＴＣの重要性は乳癌の転移について立証され続けるが、ＣＴＣ自体についてはほとんど知られていない。ＣＴＣは非常に希少である（末梢血７．５ｍＬ中に１から１０個）ため、その単離及び分類は極端に難しい。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
液体状試料中の細胞を分類する装置が提供される。該装置は、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える。該導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有し、該長手方向仕切りは前記導管中で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する。該装置の使用方法、並びに該装置を含むシステム及びキットも提供される。該装置、システム、及び方法は、診断上の分析を含む種々の適用例に使用可能である。
【０００５】
本開示の態様には、液体状試料中の細胞を分類する装置が含まれる。該装置は、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える。該導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有し、該長手方向仕切りは前記導管中で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する。
【０００６】
幾つかの実施形態においては、前記導管は、前記長手方向仕切りと前記導管の前記対向する内面との間に間隙を有する。
【０００７】
幾つかの実施形態においては、前記間隙の高さは１μｍから５０μｍまでの範囲である。
【０００８】
幾つかの実施形態においては、前記第一流体流路の幅が前記導管の長さ方向に沿って減少する。
【０００９】
幾つかの実施形態においては、前記第二流体流路の幅が前記導管の長さ方向に沿って増加する。
【００１０】
幾つかの実施形態においては、前記導管は前記第一流体流路の上流端と流体連通した入口を有する。
【００１１】
幾つかの実施形態においては、前記導管は前記第一流体流路の下流端と流体連通した第一出口を有する。
【００１２】
幾つかの実施形態においては、前記導管は前記第二流体流路の下流端と流体連通した第二出口を有する。
【００１３】
幾つかの実施形態においては、前記導管の前記内面は前記第一流体流路に延びる一つ以上の突起を有する。
【００１４】
本開示の態様には、液体試料中の細胞を分類する多重装置が含まれる。該多重装置は、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える。該導管は、夫々が導管の一の内面から導管の対向する内面に向かって延びる二つ以上の長手方向仕切りを有し、該長手方向仕切りは導管内の互いに流体連通した三つ以上の流体流路を画定する。
【００１５】
幾つかの実施形態においては、前記導管は、第一の長手方向仕切りと前記導管の前記対向する内面との間の第一の間隙と、第二の長手方向仕切りと前記導管の前記対向する内面との間の第二の間隙とを有する。
【００１６】
幾つかの実施形態においては、前記第一の間隙の高さは前記第二の間隙の高さよりも大きい。
【００１７】
幾つかの実施形態においては、前記導管は第一流体流路の上流端と流体連通した入り口を有する。
【００１８】
幾つかの実施形態においては、前記導管は、夫々が異なる流体流路の下流端と流体連通した一つ以上の別個の流体出口を有する。
【００１９】
本開示の態様には、液体状試料中の細胞を分類する方法が含まれる。該方法は、一の内面から対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りであって内部で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する長手方向仕切りを有し、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管に、複数の細胞を含む液体状試料を流すことを有する。
【００２０】
幾つかの実施形態においては、前記方法は、前記第一流体流路の下流端と流体連通した第一出口から第一の細胞群を収集することを更に有する。
【００２１】
幾つかの実施形態においては、前記方法は、前記第二流体流路の下流端と流体連通した第二出口から第二の細胞群を収集することを更に有する。
【００２２】
幾つかの実施形態においては、前記方法は、前記導管内を通過する細胞を定量化することを更に有する。
【００２３】
幾つかの実施形態においては、前記方法は、前記導管内を通過する細胞を特性解析することを更に有する。
【００２４】
本開示の態様には、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える装置を含むキットが含まれる。該導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有し、該長手方向仕切りは、導管内で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する。該キットは更に緩衝液を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】（ａ）は本開示の実施形態に係る堰装置の概略図である（縮尺率は正確ではない）。（左）堰、間隙の高さ、及び基本動作の断面図である。白血球（ＷＢＣ）は変形して堰の下を通過することができるが、ＭＣＦ−７細胞は通過できない。流れ方向は図に垂直である（○に×の記号）。（右）堰装置の上面図である。矢印は流れ方向を表す。（ｂ）は稼働中の堰装置(Ｈ×Ｗ×Ｌが３３μｍ×３００μｍ×３０００μｍ、間隙の高さ＝９．０μｍ、流量１μｍ／分)を示す画像である。画像は１秒間隔で撮影された。流路上の周期的な制限構造が細胞を堰へと導く。しかし、ＭＣＦ−７細胞だけが堰に沿って流れる一方、ＷＢＣは堰の下を通過し流路の反対方向に進入する。
【図２】本開示の実施形態に係る装置の概略断面図である。
【図３】本開示の実施形態に係る２個の分離堰と３個のマイクロ流路とを有する装置の概略図である。
【図４】（ａ）は１個の堰を有する直線状の流路を示す図である。（ｂ）はテーパ状の流路を有する装置の図である。（ｃ）は交互に並んだ流路の縮小部と拡大部とを有する装置の図である。（ｄ）は２個の堰を有する装置の図である。（ｅ）は本開示の実施形態に係る２個の堰を有し、循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）用流路に血球をフィルタに導き流線を撹乱する楔を有する装置の図である。
【図５】（ａ）は本開示の実施形態に係る夫々のマイクロ流路における細胞群の純度を上げるための延長流路を有する装置を示す図である。（ｂ）は本開示の実施形態に係る蛇行状の導管を有する延長された装置を示す図である。
【図６】（ａ）は蛇行状の導管を有する延長された装置の実施形態を示す図である。（ｂ）は長さ方向にテーパがついた第一流路を有する蛇行状の導管を有する延長された装置の実施形態を示す図である。
【図７】本開示の実施形態に係るポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）ベースの装置の画像である。
【図８】本開示の実施形態に係る稼働中の装置の時間経過を撮影した画像である。
【図９】本開示の実施形態に係る装置の製造の工程流れ図の例である。
【図１０】（ａ）は本開示の実施形態に係る熱硬化性ポリエステル（ＴＰＥ）から成る装置の画像である。（ｂ）は本開示の実施形態に係るＮｏｒｌａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ（ＮＯＡ）から成る装置の画像である。
【図１１】（上）本開示の実施形態に係る直列に配置された２個の堰を有する装置の概略図であり、（下）は該装置の拡大図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
液体状試料中の細胞を分類する装置が提供される。該装置は、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える。該導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有し、該長手方向仕切りは前記導管中で長手方向の第一流体流路を長手方向の第二流体流路と流体連通させて画定する。また、該装置の使用方法並びに装置を含むシステム及びキットが提供される。該装置、システム、及び使用方法は、診断上の分析を含む様々な異なる適用例において使用可能である。
【００２７】
発明を詳細に説明する前に、本開示の態様は記述された特定の実施形態に限定されず、当然それ自体変わってもよいことが理解されるべきである。また、本開示の実施形態の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ定義されるため、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を記述することを目的とするにすぎず、限定を意図するものではない。
【００２８】
数値範囲が与えられた場合、その範囲及び他に言及された範囲の上限及び下限の間にある各数値（別段明示されていない限りは下限の単位の十分の一刻みで）、又はその言及された範囲内にある数値は、本開示の範囲に含まれる。これらのより狭い範囲の上限及び下限は、言及された範囲から明確に除かれた境界に従って、そのより狭い範囲に独立して含まれてもよく、また本開示の実施形態の範囲に含まれる。言及された範囲が１つ又は両方の境界を含む場合、それら含まれる境界の一つ又は両方を除いた範囲も本開示の実施形態の範囲に含まれる。
【００２９】
他で定義されない限り、本明細書中で使用される技術用語及び科学用語は本発明の属する分野の当業者により一般に理解される意味と同じである。本明細書に記述された方法及び物に類似するか又は均等ないずれの方法及び物は、本開示の実施形態の実施又は試験に用いられることができる。本明細書では、説明のための代表的な方法及び物が記述される。
【００３０】
本明細書中で引用されたすべての発行物および特許は、参照によって本明細書に組み入れられる。この際、各発行物又は特許は参照によって明確かつ個別的に組み入れられることが示され、且つ引用された発行物に関わる方法及び／又は物を開示し記述するために参照によって本明細書に組み入れられるものとされる。いずれの発行物の引用も、本願出願日以前のものを開示するためにされ、先行発明によって本発明が斯かる発行物より日付が先にある権利を自認するものと解釈されるべきではない。更に、与えられた発行物の発行日が、独立して確認する必要がある実際の発行日と異なっていることもあり得る。
【００３１】
別段明示されない限り、本明細書中及び添付の特許請求の範囲で用いられる単数形”a”，”an”，”the”は複数形も含んで指し示す。尚、更に、特許請求の範囲は、いずれの選択的追加要素も排除するように記述することができる。そのため、この宣言は、請求項の要素の詳述と結びついた「のみ」「だけ」（”solely”，”only”）等の排除的な用語の使用、又は「否定的な」限定の使用のための事前の根拠となることを意図している。
【００３２】
当業者が本開示を読めば明らかなように、本明細書中で記述及び描写される個別の実施形態夫々は、本発明の範囲及び趣旨を逸脱しない限りにおいて容易に分離可能又は他の幾つかの実施形態のうちのいずれかのものの特徴と組み合わせ可能な別個の構成部を有する。詳述された方法のいずれも、詳述された事象の順序、又は理論的に可能な他のいずれの順序でも実行可能である。
【００３３】
本開示の実施形態の種々の態様を更に記述するにあたって、液体状試料中の粒子を検出する装置の実施形態が最初に記述される。斯かる記述に続いて、液体状試料中の粒子を検出する方法、その後に装置を含むシステムの実施形態の記述が与えられる。最後に、装置、方法、及びシステムが使用可能な種々の適用例についての考察が与えられる。
【００３４】
（装置）
（導管）
ある幾つかの実施形態においては、本開示の装置は液体状試料を流すように構成された導管を備える。導管の実施形態、及び装置の他の態様は以下に詳述される。ある幾つかの実施形態においては、導管は液体状試料を流すように構成されている。ある幾つかの実施形態においては、導管は、導管の内面から導管の反対側の内面へと延びる長手方向仕切りを有し、該長手方向仕切りは、長手方向の第二流体流路と流体連通した長手方向の第一流体流路を導管内で画定する。
【００３５】
ある幾つかの実施形態においては、導管の直径は０．１μｍから１０００μｍまで、例えば１０μｍから５００μｍまでを含む１μｍから７５０μｍである。例えば、導管の直径は５００μｍであってもよい。円形の断面の直径について記述したが、ここで記述した寸法は正方形又は長方形の断面を有する導管についても、例えば正方形又は長方形の断面の幅及び／又は高さについて当てはまる。幾つかの事例では、導管の断面積は１ｍｍ2 以下、又は０．７５ｍｍ2、又は０．５ｍｍ2以下、又は０．２５ｍｍ2以下、又は０．１ｍｍ2以下である。例えば、導管の断面積は０．２５ｍｍ2以下であってもよい。導管の長さは一般的には導管の直径よりも長い（例えば、導管は細長い導管である）。幾つかの事例では、導管の長さは１から１０００ｍｍ、又は１から７５０ｍｍ、又は１から５００ｍｍ、又は１から２５０ｍｍ、又は１から１００ｍｍ、又は１から５０ｍｍであり、例えば１から２５ｍｍ、又は１から１０ｍｍ、又は１から５ｍｍである。ある幾つかの事例では、導管の長さの直径に対する比率は、１０００：１であり、例えば７５０：１であって、５００：１、又は２５０：１、又は１００：１、又は７５：１、又は５０：１、又は２５：１、又は１０：１も含まれる。
【００３６】
導管の寸法が上述されたが、導管の寸法は分類される細胞の大きさと形状とによって望ましいように変わってもよい。断面の輪郭は円形でも、正方形でも、長方形でもよい。ある幾つかの実施形態においては、導管の断面の輪郭は長方形である。しかし、幾つかの適用例に対しては、他の導管の形状を使用することが望まれることがある。
【００３７】
ある幾つかの実施形態においては、導管は内部に１枚以上の長手方向仕切りを有する。「仕切り」又は「堰」とは、導管の第一の内面から第二の内面に向かって延びる壁を意味する。幾つかの事例では、導管の第一の内面は第二の内面の反対側である。例えば、第一及び第二の内面は、導管の対向する内面であってもよい。ある幾つかの事例では、導管の第一及び第二の内面は平面である。斯かる実施形態においては、導管の第一及び第二の内面は互いに略平行であってもよい。
【００３８】
仕切りは、第一の内面から第二の内面に至る途中まで延びていてもよい。例えば、仕切りは導管の第一の内面から延びているが、導管の内部を完全に横断して導管の第二の内面に接するまで完全に延びていなくてもよい。斯かる場合、導管は仕切りと第二の内面との間に間隙を有していてもよい。例えば、導管は仕切りの上面と導管の対向する第二の内面との間に間隙を有していてもよい。「間隙」とは、液体及び／又は細胞が流れられる空隙を意味する。幾つかの事例では、仕切りと導管の第二の内面との間の間隙は、仕切りの全長にわたって、仕切りが導管の第二の内面に接触しないように延びている。
【００３９】
ある幾つかの実施形態においては、間隙の高さは１μｍから５０μｍまでの範囲であり、例えば１μｍから４０μｍまでであって、１μｍから３０μｍまで、又は１μｍから２５μｍまで、又は１から２０μｍまで、又は１μｍから１５μｍまで、又は１μｍから１０μｍまで、又は１μｍから５μｍまでの範囲を含む。幾つかの事例では、間隙の高さは１０μｍである。幾つかの事例では、間隙の高さは１０μｍ以下であって、例えば９μｍ、又は８μｍ、又は７μｍ、又は６μｍ、又は５μｍ、又は４μｍ、３μｍ、又は２μｍもしくはそれ未満である。ある幾つかの事例では、間隙の高さは９５μｍである。ある幾つかの事例では、間隙の高さは３．７５μｍである。
【００４０】
ある幾つかの実施形態においては、長手方向仕切りは導管の略全長にわたって延びていれば、導管に沿ったいずれの位置にあってもよい（例えば、導管に沿った流体流路に略平行であってもよい）。ある幾つかの実施形態においては、仕切りは導管内で２本以上の流体流路を画定する。例えば、導管の実施形態は１枚の長手方向仕切りを含んでいてもよく、長手方向仕切りは導管内で第一流体流路及び第二流体流路を画定していてもよい。第一及び第二流体流路は、上述の仕切りと導管の内面との間の間隙を介して互いに流体連通し合える。すなわち、仕切りは導管内の隣合う流体流路の間に配置され得る。例えば、仕切りは両側の導管の流体流路に挟まれてもよい。
【００４１】
ある幾つかの実施形態においては、装置は導管内に２枚以上の仕切りを有する。例えば、夫々の仕切りの長さは導管の長さより短く、該仕切りは、導管内を流れる流体が仕切りに連続的に接するように導管内に直列に配列されていてもよい。幾つかの実施形態においては、流体流路の仕切り間の部分は仕切りに対して略平行であってもよい。幾つかの実施形態においては、流体流路の仕切り間の部分は最初の流体流路から分離されていてもよい。例えば、第二流体流路の仕切り間の部分の一部は、その長手軸が第一流体流路の長手軸に対して角度（例えば０．５度から９０度までの角度）がついていてもよい。例えば、図１１を参照。幾つかの実施形態においては、各仕切りの長さは導管の長さと略同じであってもよく、該仕切りは導管内に並列に配列されていてもよい。幾つかの実施形態においては、導管は複数の仕切りを有しており導管内に並列な仕切りが直列に配列されていてもよい。幾つかの事例では、導管は２枚以上の仕切り、例えば３枚以上、又は４枚以上、又は５枚以上、又は６枚以上、又は７枚以上、又は８枚以上、又は９枚以上、又は１０枚以上の仕切りを有していてもよい。導管内の複数の仕切りは同じであってもよく（例えば、仕切りの間隙の高さはすべて同じであってもよい）、又は異なっていてもよい（例えば、仕切りの間隙の高さは夫々異なっていてもよい）。仕切りの高さがそれぞれ異なる実施形態においては、装置を流れる試料から異なる細胞群を分離することができる。例えば、導管は一続きの仕切りを有していてもよく、該仕切りは流体流路に沿って次第に間隙の高さが大きくなるようになっていてもよい。例えば、第一の仕切りの間隙の高さは第二の仕切りの間隙の高さよりも小さく、第二の仕切りの間隙の高さは第三の仕切り（存在するならば）の間隙の高さよりも小さく、第三の仕切りの間隙の高さは第四の仕切り（存在するならば）の間隙の高さよりも小さく、以下同様である。
【００４２】
一続きの仕切りを有する装置の実施形態を図１１に示している。図１１（上）は、直列に配列された２枚の仕切りを有する装置の概略図である。装置は、第一流体流路の上流端と流体連通した流体入口（１１００）と、第一流体流路の下流端と流体連通した第一流体出口（１１０１）と、第二流体流路の下流端と流体連通した第二流体出口（１１０２）とを有する。図１１（下）は、装置の拡大図である。装置は、第一流体流路と第二流体流路との間にある第一仕切り（１１０３）と、流体中の細胞を仕切りに向けて導く第一流体流路中の突起（１１０４）とを有する。第一の細胞群は第一流体流路（１１０５）の出口から集められ、第二の細胞群は第二流体流路（１１０６）の出口から集められ得る。
【００４３】
例えば、幾つかの事例では、導管は並列に配列された２枚の仕切りを有し、該仕切りが導管を３本の流体流路に分割する。異なる細胞群が３本の流体流路夫々に保持されるように、各仕切りに対応する間隙は互いに異なっていてもよい。例えば、循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）の単離のために、各々の流体流路は優先的に白血球、赤血球、及びＣＴＣを夫々保持してもよい。図３は、２枚の異なる仕切りを有する導管、例えば第一仕切りと第二仕切りとを有する導管であって、第一仕切りの間隙の高さは第二仕切りの間隙の高さよりも大きい導管を有する装置の実施形態の図である。
【００４４】
図４（ａ）は単一の仕切りを有する導管の概略図である。図４（ａ）に示されているような実施形態は、２個の細胞群を分離するために用いられ得る。例えば、ＣＴＣと赤血球とを含む試料からＣＴＣが単離され得る。図２は、単一の仕切りを有する導管を有する装置の概略断面図である。図４（ｂ）及び図４（ｃ）は、入口側の流路を狭窄し、細胞を仕切りと相互作用させることにより、第一の細胞群（例えば、赤血球）を除去するように設計された装置の図である。図４（ｂ）では導管はテーパが付いている。例えば、導管の上流端では１００ミクロンであり、下流端では５０ミクロンである。図４（ｃ）では、導管はより微細な寸法（例えば、導管の幅）の交互に並んだ部分を有する。例えば、導管は、導管を流れる細胞を仕切りの方へと向ける一続きの突起を有する。図４（ｄ）及び図４（ｅ）は、ＣＴＣ、白血球、及び赤血球の分離を図示した２枚の仕切りを有する装置の図である。図４（ｄ）及び図４（ｅ）に示された仕切りの間隙の高さは異なる。図４（ｅ）は、細胞を仕切りへと向けるための導管の最初の流体流路中の突起を含む。図４に示された装置においては、矢印は細胞群が装置内を流れる方向を表す。異なる細胞群を分類するためには、任意の数の仕切りが導管内に備えられていてよい。また、装置の長さは、図５（ａ）、図５（ｂ）に示されるように、任意の所望の長さまで増大され得る。図５（ａ）は、伸長された直線状の導管を有する装置の図である。図５（ａ）に示された装置は、第一流体流路の上流端と流体連通した流体入口（５０）と、第一流体流路の下流端と流体連通した第一流体出口（５１）と、第二流体流路の下流端と流体連通した第二流体出口（５２）とを有する。幾つかの事例では、より長い導管が夫々の流体流路における細胞群の純度の向上を可能にする。図５（ｂ）は、蛇行状の導管を有する延長された装置の実施形態を示す図である。図５（ｂ）に示された装置は、第一流体流路の上流端と流体連通した流体入口（５３）と、第一流体流路の下流端と流体連通した第一流体出口（５４）と、第二流体流路の下流端と流体連通した第二流体出口（５５）とを有する。
【００４５】
使用中に、液体状試料は導管内を通過させられてもよい（例えば、導管内を流れる）。幾つかの事例では、液体状試料は１個以上の細胞群を含む。例えば、液体状試料は、第一の細胞群と第二の細胞群とを含んでいてもよい。第一及び第二の細胞群は、細胞の一つ以上の特性の点で、互いに異なっていてもよい。例えば、細胞群は、平均の細胞の大きさ（例えば直径）の点で異なっていてもよい。「平均」とは算術平均を意味する。幾つかの事例では、細胞群は、細胞の変形能の点で異なっていてもよい。液体状試料が導管内を流れるにつれて、第二の細胞群中の細胞が第一流体流路と第二流体流路との間の仕切りを横切り、第二流体流路に進入し保持され得るのに対して、第一の細胞群中の細胞は第一流体流路中に保持され得る。例えば、第一の細胞群中の細胞は、仕切りの間隙の高さより大きい平均直径を有している場合もあり、第二の細胞群中の細胞は間隙の高さより小さい平均直径を有している場合もあり、又は第一の細胞群中の細胞は第一及び第二流体流路間の間隙を通り抜けるのに必要な程度には変形できない場合もあり、又は第二の細胞群中の細胞は第一及び第二流体流路間の間隙を通り抜けるのに十分な程度変形可能である場合もあり、これらの一つ以上の組み合わせもあり得る。
【００４６】
ある幾つかの実施形態においては、導管は、導管の長さ方向に沿って幅が減少する第一流体流路を有する。幾つかの事例では、導管は、導管の長さ方向に沿って幅が増加する第二流体流路を有する。つまり、幾つかの事例では、導管の全体的な直径（又は寸法）は導管の長さ方向に沿って略同じであってもよい。図６（ａ）は、蛇行状の導管を有する延長された装置の実施形態を示す図である。図６（ａ）に示された装置は、第一流体流路の上流端と流体連通した流体入口（６０）と、第一流体流路の下流端と流体連通した第一流体出口（６１）と、第二流体流路の下流端と流体連通した第二流体出口（６２）とを有する。図６（ｂ）は、蛇行状の導管を有する延長された装置であって、第一流体流路の幅はその長さ方向に沿って減少し、第二流体流路の幅はその長さ方向に沿って増加する装置を示す図である。図６（ｂ）に示された装置は第一流体流路の上流端と流体連通した流体入口（６３）と、第一流体流路の下流端と流体連通した第一流体出口（６４）と、第二流体流路の下流端と流体連通した第二流体出口（６５）とを有する。例えば、第二流体流路の幅は、導管の直線区間毎に約２００μｍ増加してもよい。同様に、第一流体流路の幅は、導管の直線区間毎に約２００μｍ減少してもよい。
【００４７】
ある幾つかの実施形態においては、導管はその上流端に入口を有している。ある幾つかの実施形態においては、導管はその上流端に単一の入口を有する。「上流」とは、流体流の源流に近い方の位置を意味する。「下流」とは、流体流の源流から遠い方の位置を意味する。幾つかの事例では、導管は、第一流体流路の上流端と流体連通した入口を有する。液体状試料は、該入口を介して導管に導入されてもよく、試料が導管内を流れるにつれて、細胞が上述のような一つ以上の物理的特性に基いて分類され得る。
【００４８】
ある幾つかの実施形態においては、導管は、少なくとも一つの、幾つかの事例では複数の、流体出口を導管の下流端に有する。幾つかの事例では、導管は第一流体流路の下流端と流体連通した第一出口を有する。幾つかの事例では、導管は第二流体流路の下流端と流体連通した第二出口を有する。つまり、第一流体流路に保持された第一の細胞群の細胞は第一出口で収集され、仕切りを横切って第二流体流路に保持された第二の細胞群の細胞（例えば、仕切りと導管の第二の内面との間の間隙を通過した細胞）は第一の細胞群とは別に第二出口で収集され得る。
【００４９】
ある幾つかの実施形態においては、導管は第一流体流路に向かって延びる一つ以上の突起を有する内面を有する。該突起は、第一流体流路の内面から長手方向仕切りに向かって延びていてもよい。ある幾つかの実施形態においては、突起は第一の内面（例えば、仕切りが延びる起端となっている面）及びそれに対向する上述の第二の内面とは別の面から延びている。例えば、突起は仕切りの側面に対向する導管の内面から延びていてもよい。換言すると、導管は第三の内面（例えば、上述の第一及び第二の内面とは異なる面）を有していてもよく、その場合、第三の内面は第一及び第二の内面と接続されて仕切りの側面に対向している。突起は、第三の内面から対向する仕切りの側面に向かって延びていてもよい。ある幾つかの実施形態においては、第三の内面（及びその上の突起）は第一流体流路の一部である。幾つかの事例では、第三の内面は第一及び第二の内面に対して略垂直である（例えば、第一及び第二の内面が略平行である場合）。
【００５０】
突起は、第一流体流路中の液体の流れ（及びその中の細胞）を長手方向仕切りに向けるように構成されていてもよい。幾つかの事例では、液体の流れを仕切りに向けることにより、液体状試料中の異なる細胞群を分類可能にする。ある幾つかの実施形態においては、突起は導管の内面から長手方向仕切りまで完全には延びておらず、そのため導管中の細胞の流れはほとんど遮られることがない（例えば、第一流体流路中に保持された細胞の流れはほとんど遮られない）。例えば、突起とそれに対向する仕切りの側面との間に間隙があってもよく、その場合、該間隙は液体及び細胞が第一流体流路中を流れることができるために十分隔たっている。導管は、１個以上の突起を有していてもよい。突起は、例えば２個以上の突起、又は３個以上の突起、又は４個以上の突起であり、例えば５個以上であって、１０個以上、２０個以上、２５個以上、３０個以上、３５個以上、４０個以上、４５個以上、５０個以上、７５個以上、又は１００個以上の突起も含む。突起は、各突起間の距離が略等しくなるように一定の間隔で導管に沿って配置されていてもよい。他の幾つかの事例では、突起は隣り合う突起間の距離が異なるようにして導管に沿って配置されていてもよい。
【００５１】
ある幾つかの実施形態においては、突起の厚さ（例えば、導管の内面から、該内面から導管に向かって延びた突起の側部まで計測された厚さ）は、突起の長さ方向に沿って変化してもよい。幾つかの事例では、突起の厚さは突起の長さ方向の少なくとも一部に沿って増加してもよい。例えば、突起は第二端よりも薄い第一端を有してもよく、例えば突起又は突起の一部は、楔形状であってもよい。幾つかの事例では、突起又は突起の一部は楔形状であって、楔の薄い方の端が突起の上流端に、楔の厚い方の端が突起の下流端になるように配置されている。斯かる実施形態においては、導管内を流れる液体及び／又は細胞は、最初に突起の薄い方の端に接触し、厚さが増大する突起を過ぎて流れるにつれて、仕切りの方へと向けられる。２個以上の突起を有する実施形態においては、各突起の形状及び寸法は同じであってもよい。他の実施形態においては、突起の形状及び／又は寸法は異なっていてもよい。
【００５２】
ある幾つかの実施形態においては、突起の長さ（例えば、導管の長さ方向に沿った寸法）は、１０μｍ以上であり、例えば、１５μｍ以上、又は２０μｍ以上、又は２５μｍ以上、又は３０μｍ以上、又は３５μｍ以上、又は４０μｍ以上、又は４５μｍ以上、又は５０μｍ以上、又は６０μｍ以上、又は７０μｍ以上、又は８０μｍ以上、又は９０μｍ以上、又は１００μｍ以上、又は１２５μｍ以上、又は１５０μｍ以上、又は１７５μｍ以上、又は２００μｍ以上、又は２５０μｍ以上、又は３００μｍ以上、又は３５０μｍ以上、又は４００μｍ以上、又は４５０μｍ以上、又は５００μｍ以上である。幾つかの事例では、突起の長さは２００μｍである。ある幾つかの実施形態においては、突起の厚さ（例えば、突起が延びている起点となる導管の内面から、導管の内部に向かって延びる突起の反対側まで）は１μｍから５００μｍまでの範囲であり、例えば５μｍから４００μｍ、又は１０μｍから３００μｍ、又は５０μｍから３００μｍ、又は５０μｍから２００μｍ、又は５０μｍから１５０μｍの範囲である。幾つかの事例では、突起の厚さは１００μｍである。ある幾つかの実施形態においては、突起の幅（例えば、導管の第一の内面と第二の内面との間の突起の寸法）は、導管の第一の内面と第二の内面との間の距離に等しい。
【００５３】
ある幾つかの実施形態においては、導管は基板内に形成されている。例えば、導管は基板上の流路として形成されていてもよい。装置によって実行される特定の動作における条件との一致性に基いて、適切な基板材料が一般的に選択される。斯かる条件には、種々のｐＨ、温度、イオン濃度、溶媒耐性、及び電界の印加が含まれる。ある幾つかの事例では、基板材料は、装置によって解析が行われる成分に対して不活性である。例えば、基板材料は、装置によって解析が行われる試料中の試薬、液体、及び／又は粒子とほとんど反応しないように選ばれてもよい。適切な基板材料には、ガラス、石英、セラミクス、及びシリコン、半導体（ＩｎＡｓ、ＧａＡｓ等）等が含まれるが、これらには限定されない。また、例えばポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、熱硬化性ポリエステル（ＴＰＥ）、Ｎｏｒｌａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ（ＮＯＡ、例えばＮＯＡ  ８１）、等（但しこれらには限定されない）のプラスチックであるポリマー基板も含まれる。ＮＯＡ  ８１はメルカプトエステルポリマーである。幾つかの事例では、ＮＯＡは紫外光（例えば、３２０ｎｍから３８０ｎｍ、一例としては３６５ｎｍの波長の紫外光）等の光に暴露されて重合させられる。
【００５４】
ポリマー基板を有する実施形態においては、基板材料は、意図される用途に応じて、硬質、半硬質、又は非硬質で、不透明、半透明、又は透明であってもよい。例えば、光学的又は視覚的な検出を可能にするために、光学的又は視覚的な検出要素を有する装置が、光学的に透明な材料を含む基板と共に使用されてもよい。その代わりに、光学的に透明なガラス又は石英でできた窓が、例えば斯かる種類の検出のために基板に組み込まれていてもよい。本明細書中で使用されるように、「光学的に透明」とは、１８０ｎｍから１５００ｎｍまで、例えば２５０ｎｍから８００ｎｍまでを含む２２０ｎｍから８００ｎｍまでの波長の光が、低透過損失で透過できる材料を意味する。斯かる光透過性ポリマー材料は低い結晶性により特徴付けられる。斯かるポリマー材料には、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリメチルペンテン、フルオロカーボンポリマー、ポリアクリレート（ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）等のポリメタクリレートを含む）等が含まれるが、これらには限定されない。これらのポリマー材料は、直線状又は枝分かれした骨格を有していてもよく、架橋されていても架橋されていなくてもよい。ポリマー材料の例には、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリスチレン、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）等が含まれる。ある幾つかの実施形態においては、基板はポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）を含む。
【００５５】
以下で詳述するように、基板には追加的に、特定の解析のために必要とされる種々の液体要素を導入するためのアクセスポート及び／又は貯液槽が、斯かる種々の液体を除去するための出口とともに、設けられていても良い。
【００５６】
ある幾つかの実施形態においては、導管は基板内に形成されている。例えば、基板は、基板又は基板の一部を通過する（例えば、基板の中心部を通過する）導管を有するように構成されていてもよい。幾つかの事例では、導管は基板の一部を除去することにより（例えば、基板に対して削孔、穿孔、打抜き、除心を行なうことにより）形成される。他の事例では、基板は、基板上から取り去られたときに基板（又は上述のように基板の一部）に導管状の跡を残す鋳型を使用して形成される。ある幾つかの事例では、導管が基板自身の中に形成される場合、被覆（以下で詳述される）は不要であってもよい。
【００５７】
（被覆）
ある幾つかの実施形態においては、装置は、導管及び貯液槽を形成するために基板中の流路を覆って液漏れがないように密閉するために基板上に重畳される被覆を有する。該被覆も、特定の解析のために必要とされる種々の液体要素を導入するためのアクセスポート及び／又は貯液槽と、斯かる種々の液体を除去するための出口とを有する。
【００５８】
例えば、熱接着、接着剤、又は例えば石英、ガラス、ポリマー基板等の特定の基板の場合の２成分間の自然接着を含む様々な手段で、被覆は基板に取り付けられ得る。幾つかの事例では、被覆はエラストマー材料を含んでいてもよい。例えば、エラストマーの被覆は、なめらかな平面状の基層を有する取り外し可能な密閉部を形成してもよい。斯かる方法で基板と被覆との間に密閉部を形成することにより、基板及び被覆を洗浄再利用可能にするようにカバーを基板から取り外すことが可能となる。その代わりに、被覆が基板に接着され、恒久接着部を形成してもよい。基板と被覆との間に恒久接着部を形成することにより、より高い液圧を用いても基板を被覆で密閉することができる。被覆を基板に固定するために、例えばプラズマ曝露によって、エラストマーの表面を活性化することを含む接着方法が用いられてもよく、それによりエラストマーの被覆は基板に接触して置かれたときに接着する。ある幾つかの事例では、被覆及び基板は（直流又は交流で生成される）酸素プラズマにより酸化されて、導管の親水性が向上し、基板の密閉が強化される。
【００５９】
被覆は、ポリイソプレン、ポリブタジエン、ポリクロロプレン、ポリイソブチレン、ポリ（スチレン−ブタジエン−スチレン）、ポリウレタン、及びシリコン等のエラストマーから作られていてもよいが、これらには限定されない。クロロシラン若しくはメチルシラン、エチルシラン及びフェニルシラン、並びにポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、又は脂肪族ウレタンジアクリレート等の材料を組み込んだポリマーが使用されてもよい。幾つかの事例では、ポリイソプレン、ポリブタジエン、ポリクロロプレン、ポリイソブチレン、ポリ（スチレン−ブタジエン−スチレン）、ポリウレタン類、及びシリコンポリマー等の材料から被覆は作られている。又は、ポリ（ビス（フルオロアルコキシ）ホスファゼン）（ＰＮＦ、Ｅｙｐｅｌ−Ｆ）、ポリ（カルボラン−シロキサン類）（Ｄｅｘｓｉｌ）、ポリ（アクリロニトリル−ブタジエン）（ニトリルゴム）、ポリ（１−ブテン）、ポリ（クロロトリフルオロエチレン−フッ化ビニリデン）共重合体（Ｋｅｌ−Ｆ）、ポリ（エチルビニルエーテル）、ポリ（フッ化ビニリデン）、ポリ（フッ化ビニリデン−ヘキサフルオロプロピレン）重合体（Ｖｉｔｏｎ）、並びに、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、及びポリテトラフルオロエチレン（Ｔｅｆｌｏｎ）というエラストマー成分から作られている。
【００６０】
ある幾つかの実施形態においては、被覆の厚さは、０．１μｍから１０ｃｍまでの範囲であり、例えば１μｍから５ｃｍまでであって、１０μｍから２ｃｍまで又は１００μｍから１０ｍｍも含まれる。幾つかの事例では、被覆の厚さは１ｍｍから５ｍｍであり、例えば３ｍｍである。
【００６１】
（貯液槽）
ある幾つかの実施形態においては、装置は１個以上の貯液槽、例えば１個以上の液体貯液槽を有する。該貯液槽は、液体を貯蔵し、且つ／又は該液体を導管へ若しくは導管から向けるように構成されている。例えば、装置は、２個の貯液槽、例えば第一貯液槽及び第二貯液槽を有していてもよい。第一貯液槽は、導管の端、例えば導管の上流端と流体連通していてもよい。第一貯液槽は、液体（例えば、試料液体）を貯蔵し、該液体を導管の上流端に向けるように構成されていてもよい。第二貯液槽は、導管の他端、例えば導管の下流端と流体連通していてもよい。第二貯液槽は、導管の下流端から出る液体を貯蔵するように構成されていてもよい。追加の貯液槽が設けられてもよい。例えば、導管の下流端に２個以上の流体出口を有する実施形態においては、各々の貯液槽が別個の流体出口に設けられてもよい。
【００６２】
ある幾つかの実施形態においては、上述のように導管は基板内に形成されている。例えば、導管は基板内の流路として形成されている。上述のように、基板に被覆を適用する結果として、密閉された導管が形成され得る。同様に、基板に被覆を適用する結果として、導管と流体連通した２個以上の密閉された貯液槽が形成され得る。各貯液槽は、液体、例えば１個以上の細胞を含む液体状試料を貯蔵するように適合させられている。ある幾つかの事例では、貯液槽は、１μＬ以上、例えば５μＬ以上（１０μＬ以上、又は２５μＬ以上、又は５０μＬ以上、又は７５μＬ以上、又は１００μＬ以上、又は２５０μＬ以上、又は５００μＬ以上、又は７５０μＬ以上、又は１ｍＬ以上を含む）の液体を貯蔵するように構成されている。
【００６３】
ある幾つかの事例では、貯液槽は吸込口を有する。液体状試料は、該吸込口を介して貯液槽に導入され得る。ある幾つかの事例では、貯液槽は吐出口を有する。液体は、該吐出口を介して貯液槽から送出され得る。吸込口及び吐出口の適切な大きさの範囲は広くとることが可能であり、当業者は、解析される液体又は細胞の特性に応じた望ましい大きさを経験的に決定することができる。幾つかの事例では、貯液槽はフィルタを有する。例えば、導管の上流に配置された貯液槽は、大きな粒子で導管が詰まるのを防ぐように構成されたフィルタを有していてもよい。他の事例では、装置はフィルタを有していなくてもよい。例えば、詰まる恐れが比較的少ないほど導管の大きさが大きくてもよい。
【００６４】
（検出器）
ある幾つかの実施形態においては、装置は検出器を有する。該検出器は、導管を通過する、又は既に通過した細胞を検出するように構成されていてもよい。例えば、検出器は、導管の第一流体流路内を流れる第一の細胞群を検出するように構成されていてもよい。幾つかの事例では、検出器は、導管の第二流体流路を流れる第二の細胞群を検出するように構成されていてもよい。ある幾つかの実施形態においては、検出器は細胞を定量化するように構成されている。検出器は、カメラ、相補型金属酸化物半導体（ＣＭＯＳ）、電荷結合素子（ＣＣＤ）、増強型電荷結合素子（ＩＣＣＤ）、蛍光検出器、これらの組み合わせ、等を有していてもよい。
【００６５】
（方法）
本開示の態様には、液体状試料中の細胞を分類する方法も含まれる。該方法は、複数の細胞を含む液体状試料をマイクロ流体の導管内に通過させることを含む。上述のように、導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有する。該長手方向仕切りは、導管内で、長手方向の第二流体流路と流体連通した長手方向の第一流体流路を画定する。
【００６６】
方法の実施形態は、試料中に細胞群が存在するか否かを判定すること、例えば、試料中に１個以上の細胞群が存在するか存在しないかを判定することにつながる。方法のある幾つかの実施形態においては、試料中に１個以上の細胞群が存在することは、定性的又は定量的のいずれで判定されてもよい。定性的な判定には、試料中の細胞群の存在に関して単純なｙｅｓ／ｎｏ式の結果がユーザに与えられる判定が含まれる。定量的な判定には、試料中の細胞量についての大まかな尺度、例えば、低、中、高の結果がユーザに与えられる半定量的な判定と、細胞量の厳密な測定値がユーザに与えられる微細な目盛で表した結果とがある。
【００６７】
本主題のマイクロ流体装置を用いて分析され得る試料は多岐にわたり、簡単な試料と複雑な試料との両方を含む。簡単な試料には、着目された細胞が含まれ、１個以上の着目外の分子的存在物は含まれていてもいなくてもよい。ここで、斯かる着目外の分子的存在物の数は少なくてもよい。例えば、１０個以下、５個以下等。簡単な試料には、何らかの手法、例えば試料中からの潜在的に干渉する分子的存在物の除去により処理された生物学的な、又は他の試料が含まれる。「複雑な試料」とは、着目された細胞が含まれているか又は含まれておらず、多種の異なるタンパク質、細胞、及び／又はその他の分子も含まれている試料を意味する。幾つかの事例では、本主題の分類方法において分析される複雑な試料は、１０個以上、例えば２０個以上（１００個以上、例えば１０００個以上、１００００個以上（例えば、１５０００個、２００００個、又は２５０００個以上）を含む）の、分子的構造又は物理的性質（大きさ、変形能、形状等）が異なる別個の分子的存在物が含まれる試料である。
【００６８】
ある幾つかの実施形態においては、着目された試料は、尿、血液、リンパ液、血漿、唾液、精液、前立腺液、乳頭吸引液、涙液、汗、大便、口腔粘膜採取物、髄液、羊水、胃腸液、生検組織、細胞溶解産物試料等の生物学的試料である（但しこれらには限定されない）。該試料は、生物学的試料で有り得るか、又はヒト、動物、植物、菌類、酵母、細菌、組織培養、ウィルス培養、又は従来の手法を用いてそれらを組み合わせたものに由来する生物学的試料から抽出され得る。ある幾つかの実施形態においては、試料は、液体中に細胞が溶解した液体状試料である。該液体は、水、生理食塩水、緩衝液（但しこれらには限定されない）等の水性液であってもよい。
【００６９】
ある幾つかの事例では、試料は全血液成分試料である。幾つかの事例では、赤血球（ＲＢＣ）の平均の大きさは着目された細胞（例えば、転移性癌細胞）より小さく、赤血球は間隙を通過して第二流体流路に進入する。幾つかの事例では、液体流からＲＢＣ及び白血球（ＷＢＣ）を除去するために異なる流れパターンが用いられてもよい。幾つかの事例では、ＲＢＣは単離前又は単離後に溶解されてもよい。幾つかの事例では、試料を装置に流す前に、試料がウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で処理されてもよい。これにより、装置が詰まる虞が減少する。
【００７０】
幾つかの事例では、方法は、液体状試料中に細胞が存在していることを判定するために細胞を分類することを含む。着目された細胞の分類は、平均の大きさ及び／又は変形能等の細胞の物理的特性に基づいて行われる（例えば蛍光を利用した検出技術ではなく）ため、幾つかの実施形態においては、細胞は導管内を通過する前に標識付けされない。幾つかの事例では、方法は更に、導管内を通過する細胞数の定量化を含む。例えば、着目された細胞の数が、当該着目された細胞が導管内を通過するにつれて計数される。幾つかの事例では、着目外の細胞は、着目された細胞の定量化に顕著には含まれない。
【００７１】
ある幾つかの実施形態においては、方法は、細胞が導管内を通過するにつれて細胞の特性解析を行うことを含む。細胞についての種々の特性が装置により解析される。例えば、細胞の特性解析には、細胞の平均直径等の、細胞の平均の大きさの決定を含む。幾つかの事例では、細胞の特性解析には、細胞形状の決定が含まれる。
【００７２】
幾つかの事例では、細胞の特性解析には、導管内を通過する細胞の種類の決定が含まれる。例えば、着目された細胞の変形能等の物理的特性が決定されてもよい。斯かる実施形態においては、方法には、第一の細胞群が他の細胞群（例えば、第二の細胞群）より変形し易いか又はし難いかの判定が含まれてもよい。
【００７３】
ある幾つかの事例では、分類され特性解析される細胞は、適当な液体媒体、例えば液体状試料中で適切な濃度に保留される。液体状試料には、任意の適当な液体媒体（水性又は非水性のいずれか）が含まれてもよい。例えば水、生理食塩水、緩衝液、有機溶媒、細胞培養液、動物若しくはヒトの体液、粒子及び／若しくは生物学的分子を含む溶液、細胞質、細胞抽出物、細胞懸濁液、標識付けされた粒子若しくは生物学的分子の溶液、リポソームを含む溶液、被包物質、又はミセリ等（但しこれらには限定されない）の液体媒体が使用されてもよい。
【００７４】
装置内に液体状試料の流れを作り出すために、種々の駆動メカニズムが用いられてもよい。例えば、電気泳動、電気運動力若しくは電気浸透力、又は圧力勾配が用いられてもよい。幾つかの事例では、方法には、装置内の液体の流れを作り出すために、液体に圧力を加えることが含まれる。他の実施形態においては、装置内の液体の流れを作り出すために装置内の液体をポンプ駆動することが含まれる。装置に液体状試料を送り込むときの流量は、細胞が装置を流れるにつれて装置が細胞を分類するために十分な時間を与えるように選ばれてもよい。例えば、流量は０．１μＬ／分以上であってもよく、例えば０．５μＬ／分以上、又は１μＬ／分以上、又は５μＬ／分以上、又は１０μＬ／分以上、又は２５μＬ／分以上、又は５０μＬ／分以上、又は７５μＬ／分以上、又は１００μＬ／分以上、又は１５０μＬ／分以上、又は２００μＬ／分以上である。幾つかの事例では、流量は５０μＬ／分である。幾つかの事例では、流量は１００μＬ／分である。ある幾つかの実施形態においては、方法は、７．５ｍＬの試料中の１から１０個の着目された細胞（例えば、循環性腫瘍細胞、ＣＴＣ）を検出できる検出感度を有する。
【００７５】
幾つかの実施形態においては、方法には試料中の細胞群のユニプレックス（ｕｎｉｐｌｅｘ）解析が含まれる。「ユニプレックス解析」とは、試料中の１個の細胞群の存在性を検出するために試料が解析されることを意味する。例えば、試料は着目された細胞と着目外の他の分子的存在物との混合物を含んでもよい。幾つかの事例では、方法には、試料混合物中の着目された細胞の存在性を判定するための試料のユニプレックス解析が含まれる。
【００７６】
ある幾つかの実施形態には、試料中の２個以上の細胞群のマルチプレックス（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ、多重）解析が含まれる。「マルチプレックス解析」とは、試料中の２つ以上の別個の細胞（当該２個以上の細胞群は互いに異なる）の存在性が判定されることを意味する。例えば、細胞には大きさ及び／又は変形能等の物理的特性の違いがあってもよい。幾つかの事例では、細胞群の個数は２より大きく、例えば３以上、４以上、５以上等、１０以上まで、例えば２０以上である（５０以上の別個の細胞群を含む）。ある幾つかの実施形態においては、方法には、２個から１００個までの別個の細胞群、例えば２個から５０個までの別個の細胞群（２個から１０個までの別個の細胞群を含む）のマルチプレックス解析が含まれる。
【００７７】
本開示の方法にはまた、本明細書中で記述された装置の製作方法が含まれる。導管は、種々の方法により形成され得る。幾つかの実施形態においては、導管は基板上にエッチングされ、その後に被覆（例えば、本明細書中で記述されたエラストマー被覆）で密閉される。他の実施形態においては、導管は被覆（例えば、本明細書中で記述されたエラストマー被覆）に鋳型成形され、その後に基板上に被せられる。他の実施形態においては、基板は鋳型を使用して所望の形状に形成されてもよい。例えば、基板の前駆体溶液が鋳型に注がれてもよい。基板の前駆体溶液には、外部の刺激に曝露された場合に所望の形状を保持する基板の前駆体成分が含まれていてもよい。例えば、基板の前駆体溶液には、紫外光等の光に露光されると重合する基板の前駆体モノマーが含まれていてもよい。鋳型は導管を残して取り除かれてもよく、それにより該導管は所望の形状及び構成に保持される。
【００７８】
装置の製造は、任意の数の微細加工技術を用いて行われてもよい。例えば、ガラス、石英、又はシリコンの基板の加工にリソグラフィ技術が、例えば半導体製造産業における既知の方法で用いられてもよい。基板表面内又は表面上に微小寸法の要素を画定するために、フォトリソグラフィにおけるマスキング、プラズマエッチング又はウェットエッチング、及びその他の半導体プロセス技術が用いられてもよい。その代わりに、レーザ削孔、微細ミリング加工等の微細機械加工方法が用いられてもよい。同様に、ポリマー樹脂に対しては、射出成形技術又はスタンプ成形方法等（但しこれらには限定されない）の製造技術が用いられてもよい。幾つかの事例では、例えば微小寸法の基板の大型シートを製造する回転スタンプ、又は微小加工された鋳型で基板が重合されるポリマー微小鋳造技術を用いて多数の基板が製造されてもよい。
【００７９】
本発明を製作する方法例が与えられた。但し、本発明はこれらの方法のうちの一つ又はそれ以外により製作されることには限定されない。むしろ、本方法の改変を含む、本装置を製作する他の適当な方法も考えられる。一つの方法は、貯液槽及び導管を平面基板にエッチングする一連のフォトリソグラフィ工程を伴っている。斯かる方法は、単一チップ上に多数の装置を作るために用いられ、これによって並列化による効率上昇が得られる。他の方法は、後に基板に接触させるエラストマー被覆に導管及び貯液槽を作成することを伴う。
【００８０】
主題の装置の製造方法の例を図９に示す。例えば、熱硬化性ポリエステル（ＴＰＥ）を使用した装置の製造方法を図９（上）に示す。ここで、ＴＰＥを使用した装置を形成するためにＰＤＭＳの種型が使用される。当該ＴＰＥ製装置における流体入口を作成するために、管が与えられてもよい。幾つかの事例では、当該管は、熱可塑性ポリマー（例えば、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ））等のプラスチック製である。ＴＰＥを鋳型に流し込んだ後、ＴＰＥを重合させるために一定時間（例えば、７０秒）紫外光（例えば、波長３６４ｎｍの光）に露光され、且つ／又は一定時間（例えば、５分）熱（例えば、６５℃）に曝されてもよい。当該ＴＰＥ製装置は鋳型から取り除かれてプラズマ（例えば、Ｏ2 プラズマ）で処理されてもよい。例えばガラス製スライド式のもの等の被覆が導管を形成するためにＴＰＥに被せられてもよい。幾つかの事例では、流体入口及び／又は流体出口を作成するために、管が導管に挿入されてもよい。Ｎｏｒｌａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ（ＮＯＡ）を使用した装置の製造方法が図９（下）に示されている。ここで、ＮＯＡを使用した装置を形成するために、ＰＤＭＳの鋳型が使用される。当該装置に流体入口を作成するために、管が与えられてもよい。幾つかの事例では、当該管は、熱可塑性ポリマー（例えば、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ））等のプラスチック製である。ＮＯＡを鋳型に流し込んだ後、ＮＯＡを重合させるために、第一の側で一定時間（例えば、２秒）紫外光（例えば、波長３６４ｎｍの光）に露光し、第二の側で一定時間（例えば、１秒）紫外光に露光されてもよい。当該装置は鋳型から取り除かれてもよく、例えばガラス製スライド式のもの等の被覆が導管を形成するためにＮＯＡに被せられてもよい。幾つかの事例では、被覆はＮＯＡへの接着がよくなるようにＮＯＡでコーティングされていてもよい。幾つかの事例では、流体入口及び／又は流体出口を設けるために、管が導管に挿入されてもよい。
【００８１】
（システム）
本開示の態様には、液体状試料中の細胞を分類するシステムが含まれる。本明細書中で記述されるように、当該システムは、液体状試料中の細胞を分類する装置を含む。上述のように、当該装置は、液体状試料を流すように構成されたマイクロ流体の導管を備える。導管は、導管の内面から導管の対向する内面に向かって延びる長手方向仕切りを有する。長手方向仕切りは、導管内で第二流体流路と流体連通した第一流体流路を画定する。
【００８２】
本開示のシステムは更に、マイクロ流体送出システム又はナノ流体送出システム等の流体送出システムを有していてもよい。マイクロ流体送出システムには、任意の一時点での生物学的溶液の全体積が１０００マイクロリットル以下のシステムが含まれ得る。ナノ流体送出システムには、任意の一時点での生物学的溶液の全体積が１０００ナノリットル以下のシステムが含まれ得る。流体送出システムは、装置の中に流体の流れを作り出すように構成された１個以上のポンプを有していてもよい。
【００８３】
本開示のシステムの態様は、主題のマイクロ流体細胞分類装置を１個以上有する集積「チップ」も提供する。幾つかの実施形態においては、当該チップは複数個の当該装置、例えば２個以上の装置、又は４個以上の装置、又は６個以上、若しくは８個以上、若しくは１０個以上の装置を含む。２個以上の装置が直列（例えば、第一の装置が第二の装置の上流に配置されている）若しくは並列（例えば、第一及び第二の装置が並列に配列されている）に配列されていてもよく、又はそれらの組み合わせであってもよい。
【００８４】
ある幾つかの実施形態においては、装置の上流に、濾過システム、希釈化システム、及び流体媒体の駆動力を調整するシステムのうちの１個以上を有していてもよい。当該システムは、多重分析又は異成分混合物の解析等の更なる解析を行う適用例のための光学検出装置を有していてもよい。例えば、上述のように、細胞の大きさ及び種類と共に、種々の細胞の蛍光が検出されてもよい。
【００８５】
（効用）
主題の装置、システム、及び方法は、試料中の１個以上の細胞群の存在若しくは不在、及び／又は定量化を決定する種々の異なる適用例に使用される。ある幾つかの実施形態においては、当該方法は、試料中の細胞の検出に向けられる。例えば、当該方法は、生物学的試料中の１個以上の細胞の迅速な臨床目的の検出に使用されてもよい。例えば、患者の疾病状態の診断、患者の疾病状態の継続中の管理又は治療等において用いられてもよい。また、本主題の装置、システム、及び方法は、着目された細胞を他の成分から分類するための試料における細胞を検出するためのプロトコルに使用可能である。
【００８６】
ある幾つかの実施形態においては、主題の装置、システム、及び方法は、細胞の検出に使用可能である。幾つかの事例では、主題の装置、システム、及び方法は特定の細胞の存在又は非存在の検出のために用いられ得る。また、血液、血漿、リンパ液、又は例えば、尿、血液、リンパ液、血漿、唾液、精液、前立腺液、乳頭吸引液、涙液、汗、大便、口腔粘膜採取物、髄液、羊水、胃腸液、生検組織、細胞溶解産物試料（但しこれらには限定されない）等のその他の体液若しくは抽出物における特定の細胞の濃度の増減を検出するために用いられ得る。１個以上の別個の細胞群が検出され得る。例えば、１個以上の別個の細胞群が検出され得て、それらの細胞群は、細胞の平均の大きさ、変形能等の一つ以上の物理的特性により互いに異なる。
【００８７】
ある種の細胞の存在性若しくは非存在性、又はある種の細胞の濃度の顕著な変化は、疾病リスクの診断、個人における疾病の存在、又は個人における疾病に対するテーラーメード治療に用いられ得る。例えば、特定の細胞の存在性は、個人に施される投薬治療又は投薬治療計画の選択に影響することがある。潜在的な投薬治療を評価するにあたって、特定の細胞の存在性及び／又は存在量は、生存又は不可逆罹患率等の自然な代用エンドポイントとして用いられ得る。ある治療が特定の細胞の存在性及び／又は存在量を変えた場合、それは健康改善に直接結びつき、細胞の存在性及び／又は存在量は、特定の治療又は投薬治療計画の臨床的効果を評価する代用エンドポイントとして働き得る。よって、個人において検出された特定の細胞又は細胞集団に基づく個人化された診断及び治療が、本主題の装置、システム、又は方法により可能になる。更に、本主題の装置及びシステムの高い感度により、疾病に関連する細胞の早期の検出が可能になる。感度、拡張性、及び使用の簡単さとあいまって、単一のチップで複数の細胞を検出できる能力により、本開示の装置、システム、及び方法は、可搬であり且つ、治療場所又は患者の近くでの分子診断法に使用可能である。
【００８８】
ある幾つかの実施形態においては、本主題の装置、システム、及び方法は、疾病又は疾病状態のために細胞を検出するために使用可能である。幾つかの事例では、疾病は、癌、腫瘍、乳頭腫、肉腫、癌腫（但しこれらには限定されない）等の細胞の異常増殖による疾病である。例えば、本主題の装置、システム、及び方法は、癌、腫瘍、乳頭腫、肉腫、癌腫の細胞の異常増殖による疾病等の疾病の存在の検出に使用可能である。幾つかの事例では、本主題の装置、システム、及び方法は、癌、腫瘍、乳頭腫、肉腫、癌腫の細胞の異常増殖による疾病等の疾病に関連する１個以上の細胞群の存在の検出に使用可能である。
【００８９】
例えば、本主題の装置、システム、及び方法は、患者の急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）細胞の検出及び／又は定量化に用いられてもよい。ＡＰＬの早急な診断により、患者に対する治療プロトコルの早期の運営が可能になる。例えば、本主題の装置及び方法の分析時間は、１５分以下、例えば、１０分以下、又は７分以下、又は５分以下、又は３分以下、又は２分以下、又は１分以下であり得る。本主題の装置、システム、及び方法は、患者における循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）の単離及びスクリーニングに使用可能である。幾つかの事例では、患者におけるＣＴＣレベルの定量化により、患者の転移の進行を評価及び追跡することができる。本主題の装置、システム、及び方法は、特定の表面バイオマーカのためにＣＴＣをスクリーニングするために用いられてもよく、それにより患者における特定のＣＴＣの特性解析が可能になる。
【００９０】
本主題の装置、システム、及び方法は、以下の（但しこれらには限定されない）診断上の分析に使用可能である。すなわち、上述のような、試料中の細胞の検出及び／又は定量化、無症候性の患者のために試料が一定の時間間隔で検査されるスクリーニング分析、着目された細胞の存在性又は存在量が見込まれる疾病経過を予想するために用いられる予後分析、様々な投薬治療に対する患者の反応が予想され得る階層化分析、投薬治療の有効性がモニタリングされる有効性分析等である。
【００９１】
本主題の装置、システム、及び方法はまた、妥当性検証分析においても使用可能である。例えば、潜在的な疾病バイオマーカが様々な人にまたがって疾病の存在性又は非存在性を示す信頼できる指標であることを検証又は確認するために、妥当性検証分析が用いられてもよい。本主題の装置、システム、及び方法の短い分析時間により、最小時間で複数の試料をスクリーニングする処理能力の向上が可能となる。
【００９２】
幾つかの事例では、本主題の装置、システム、及び方法は、実施するための試験室の設置を必要とすることなく使用され得る。同等の解析研究のための試験設備と比較して、本主題の装置及びシステムは、可搬で手持ち可能なシステムにおいて同等の解析感度を提供する。幾つかの事例では、重さ及び稼働コストは、典型的な据付型の試験設備より小さい。本主題のシステム及び装置は、単一の装置に統合されていてもよく、それにより、着目された粒子の検出及び分類を含む分析の全ステップが単一の装置で実行されてもよい。また、本主題のシステム及び装置は、医療の専門的な訓練を受けていない人物により行われる、試料中の１個以上の粒子を検出するための処方箋の不要な家庭での検査のために家庭に設置されて使用され得る。本主題のシステム及び装置は、早急な診断のために例えば病床の脇等の臨床現場で使用されてもよく、又はコスト若しくはその他の理由で据付型の研究試験設備が提供されない所で使用されてもよい。
【００９３】
（キット）
本主題の態様にはまた、本明細書中で詳述されたような装置を有するキットが含まれる。幾つかの事例では、当該キットには装置を包含するための梱包容器が含まれる。ある幾つかの実施形態においては、当該梱包容器は例えば、水蒸気耐性容器で、選択的には気密及び／又は真空密封されている密閉梱包容器であってもよい。ある幾つかの事例では、梱包容器は無菌梱包容器であって、梱包容器で梱包された装置を無菌環境に維持するように構成されている。「無菌」とは、微生物（菌類、細菌、ウィルス、胞子等）が実質的に無いことを意味する。当該キットには更に、緩衝液も含まれる。例えば、キットには、試料用緩衝液、洗浄用緩衝液等の緩衝液が含まれていてもよい。当該キットには更に、検出可能な標識（例えば、蛍光性標識、測色標識、化学発光標識、多色試薬、酵素結合試薬、アビジン−ストレプトアビジンに関連する検出試薬、放射性標識、金粒子、磁気標識等）等（但しこれらには限定されない）の追加的な試薬が含まれていてもよい。
【００９４】
上記構成物に加えて、主題のキットには更に、主題の方法を実施するための指示が含まれていてもよい。斯かる指示は、主題のキット中に種々の形態で提供されてもよく、それらの一つ以上の形態はキット内に存在してよい。斯かる指示が提供され得る形態の一つとしては、最適な媒体又は基板上に印刷された情報、例えば情報が印刷された紙、梱包容器上又は梱包容器に挿入された印刷された情報等がある。他の手段としては、例えば情報が記録又は記憶されたＣＤ、ＤＶＤ、Ｂｌｕ−ｒａｙ（登録商標）、コンピュータ読み取り可能なメモリ等のコンピュータ読み取り可能な媒体がある。更に他の手段として、インターネットを介して遠隔な場所にある情報にアクセスするために使用されるＷｅｂ上のアドレスもあり得る。いずれの都合のよい手段がキットに存在してもよい。
【００９５】
上で提供された開示から認められるように、本発明の実施形態には幅広い適用例がある。したがって、本明細書中で与えられた例は説明目的で提供され、いずれの方法においても本発明を限定するように解釈されることを意図しない。当業者は、本質的に類似する結果を得るための変更又は修正が可能な重要でない種々のパラメータを容易に認識するであろう。よって、以下の実施例は、当業者に対して本発明を作成し使用する方法の完全な開示及び説明を提供するために与えられ、発明者が発明と認識しているものの範囲を限定することを意図せず、且つ以下の実施例が行われたすべて且つ唯一の実験を表すことも意図しない。使用された数字（例えば、量、温度等）に関して正確性を保証するための努力はなされたが、幾らかの実験上の誤差及び偏差が考慮されるべきである。別記されない限り、部分は重量による部分であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度で表され、圧力は大気圧又はその近傍である。
【００９６】
（実施例）
（実施例１）
低コストで早急且つ効率的で、標識が不要な転移癌患者の抹消血液からの循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）の単離及びスクリーニング方法の開発のために、実験が行われた。装置は、高いせん断力に細胞を晒すことなく大きさに基づいて対象のＣＴＣを単離した単一のマイクロ流体プラットフォームである。図７を参照。
【００９７】
（大きさに基づく癌細胞の単離）
図１（ａ）は、装置の概観を示す図である。該装置は、「堰」、例えば対向するガラス基板上に吊り下げられて流体の流れ方向に平行に延びる仕切り（又は壁とも参照される）によって横方向に二つに分割されたマイクロ流体流路を有する。ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）ベースの装置を作成するために、ソフトリソグラフィが用いられた。堰の間隙の高さ（例えば、壁と対向するガラス基板との間の距離）は、細胞の大きさの範囲及び変形能に基づいている。流体が装置内を流れるにつれて、細胞はそれらが堰の下を通過する能力に基づいて単離される。図１（ｂ）及び図８は、間隙の高さが９．０μｍの堰装置の稼働中に１秒間隔で撮影した画像である。該装置は、細胞を堰に向けるための流路上の周期的な制限構造（例えば、流路上の突起）を有する。流量は１から５０μＬ／分であった。ＭＣＦ−７細胞（例えば、乳癌細胞系の細胞）と白血球（ＷＢＣ、赤血球を溶血させることにより健康な提供者から単離された）との２：１の混合物がリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、１．５０×１０5 個細胞／ｍＬ）中に浮遊して堰装置内を流れた。図１（ｂ）に示されるように、白血球が堰の間隙を通過して流れを横切ってマイクロ流路の反対側に移動するのに対し、ＭＣＦ−７細胞は堰に対し平行に流れ、堰の間隙を横切ることはない。ＭＣＦ−７細胞は堰を横切ることも、又は堰の下に留まることも観察されない。堰の片側の下流にある収集貯液槽にはこの明確な結果が現れた。すなわち、ＭＣＦ−７細胞が１００％回収されることが示された。
【００９８】
上述して実証したように、本主題の堰装置は全血液成分中に入った転移性乳癌細胞の単離に使用され得る。本明細書中で記述された方法は、マイクロ流体流路に平行であって間接的な流体流と低いせん断圧力とを用いて癌細胞群を濃縮するように設計された堰を使用する。
【００９９】
上述のように、９．０μｍの間隙は白血球（平均の大きさが８から１５μｍ）が変形して第二流体流路まで堰の間隙を通過するのに十分である。ＭＣＦ−７細胞（平均の大きさが１５から２５μｍ）は堰の間隙を通過せず、よって最初の流体流路中に単離される。本主題の装置及び方法はまた、（同じ流れ条件且つ白血球との混合物で）Ｔ４７Ｄ、ＳＫＢＲ３、及びＺＲ−７５−１等（但しこれらには限定されない）のその他の乳癌細胞系の細胞にも使用されてもよい。同じ間隙の高さが用いられてもよい。様々な転移性癌細胞が異なる大きさ及び変形能を有していることがある場合、細胞の回収率を上げるために７から１０μｍまでの幅がある間隙の高さが用いられてもよい。流路の形状についても変更されてもよい。例えば、多くの白血球が堰の間隙を越えて移動する機会を増やし、単離された癌細胞の濃度を上昇させるように、流路を長くしてもよい。異なる細胞の種類に対しては、異なる間隙の高さが設けられてもよい。これにより、装置は単一のマイクロ流路内に異なる間隙の高さを有する複数の並列な堰を有していてもよい。
【０１００】
上述のように、ＰＤＭＳから成る装置が作成されて試験された。図１（ｂ）に示された装置と類似する装置も、共に生体適合性である熱硬化性ポリエステル（ＴＰＥ、４８０λPDMS。ここでλPDMSはＰＤＭＳの弾性係数である）及びＮｏｒｌａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ  ８１（ＮＯＡ  ８１、１３０λPDMS）から作成された。当該装置は、ＴＰＥ及びＮＯＡ  ８１を使用して標準的なリソグラフィ技術により製造された。図１０（ａ）は熱硬化性ポリエステル（ＴＰＥ）で作成された装置の画像を示しており、図１０（ｂ）はＮｏｒｌａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ（ＮＯＡ  ８１）で作成された装置の画像を示している。装置を作成するために使用された材料の特性が以下の表に示されている。
【０１０１】
【表１】
2016514965.tif 000003
【０１０２】
前述の発明が、理解を明確にする目的の図及び例を用いてある程度詳細に記述されたが、当業者にとって当発明の教示を鑑みて添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく一定の変更及び修正が可能であることは容易に明らかである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって限定されるため、本明細書中で使用される用語は特定の実施の形態を記述する目的のみに使用され、限定することを意図していないことが理解されるべきである。
【０１０３】
したがって、上述した記載は単に発明の原理のみを説明している。たとえ本細書中で明示的に記述又は示されていないものであっても、本発明の原理を具現化し且つ本発明の趣旨及び範囲に含まれる種々の構成を当業者が考案することができることが認められる。更に、本明細書中で言及されたすべての例及び暫定的な用語は主に、読者が発明の原理及び発明者により寄与された技術を進歩させるための概念を理解する助けとなることを意図されており、具体的に言及された例及び条件に限定することなく解釈されるべきである。また、発明の原理、態様、及び実施形態、並びにそれらの具体例に言及している本明細書中の記述は、それらの構造的又は機能的な均等物をも含むことを意図されている。また、斯かる均等物には既知の均等物と将来開発される均等物、すなわち構造にかかわらず同じ機能を生み出すいずれのものとを含むことが意図されている。したがって、本発明の範囲は本明細書で記述された例示的な実施形態に限定されることを意図されていない。むしろ、本発明の範囲及び趣旨は添付の特許請求の範囲によって具現化される。
【０１０４】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１５日に出願された米国特許仮出願番号６１／７９０７６２号明細書の出願日について優先権を主張している。その開示は参照によって本明細書に組み込まれている。
【図１】
2016514965.tif 000004
【図２】
2016514965.tif 000005
【図３】
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【図５（ａ）】
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【図５（ｂ）】
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【図６（ａ）】
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【図６（ｂ）】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０（ａ）】
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【図１０（ｂ）】
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【図１１】
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【図４】
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【国際調査報告】
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