(57)【要約】  本開示は、概して、抗ウイルス化合物に関し、より具体的には、C型肝炎ウイルス(HCV)によりコードされるNS5A タンパク質の機能を阻害できる化合物の組み合わせ、かかる組み合せを含む組成物およびNS5A タンパク質の機能を阻害するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
NS5A標的化化合物およびNS5A相乗化剤を含む組み合わせであって、投与されると該NS5A標的化化合物のみに対して抵抗性を与える変異を含む変異体に対する相乗的抗HCV活性をもたらすものであり、該NS5A相乗化剤は、式(I):
【化１】
2016525114.tif 000024
[式中、
R1'およびR1'は、アルコキシアルキル、アルキル、シクロアルキルおよびピラニルから独立して選択され、該シクロアルキルおよび該ピラニルは、所望により、アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルから独立して選択される1、2または3つの置換基により置換されていてもよく；および
R2およびR2'は、同一または異なるアルキル基である]
の化合物またはその医薬的に許容される塩である、組み合わせ。
【請求項２】
式(I)の化合物が、
【化２】
2016525114.tif 000025
【化３】
2016525114.tif 000026
から選択される式(I)の化合物、あるいはその医薬的に許容される塩である、請求項1に記載の組み合わせ。
【請求項３】
請求項1に記載の組み合わせ、および１以上の医薬的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項４】
抗HCV活性を有する1または2つの別の化合物をさらに含む、請求項3に記載の組成物。
【請求項５】
別の化合物のうちの少なくとも1つが、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項4に記載の組成物。
【請求項６】
インターフェロンが、インターフェロンα2B、ペグ化インターフェロンα、ペグ化インターフェロンλ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα2Aまたはリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項5に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１つの別の化合物が、HCV感染症の治療のために、HCVプロテアーゼ、HCVポリメラーゼ、HCVヘリカーゼ、HCV NS4Bタンパク質、HCVエントリー、HCVアセンブリ、HCVイグレス、HCV NS5Aタンパク質またはIMPDHから選択される標的の機能を阻害するのに有効である、請求項4に記載の組成物。
【請求項８】
治療上有効な量の請求項1に記載の組み合わせ、またはそれらの医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるHCV感染症を治療する方法。
【請求項９】
抗HCV活性を有する1または2つの別の化合物を、該組み合わせまたはそれらの医薬的に許容される塩より前、後または同時に投与することをさらに特徴とする、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
別の化合物のうちの少なくとも1つが、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
インターフェロンが、インターフェロンα 2B、ペグ化インターフェロンα、ペグ化インターフェロンλ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα2Aまたはリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つの別の化合物が、HCV感染症の治療のために、HCVプロテアーゼ、HCVポリメラーゼ、HCVヘリカーゼ、HCV NS4Bタンパク質、HCVエントリー、HCVアセンブリ、HCVイグレス、HCV NS5Aタンパク質またはIMPDHから選択される標的の機能を阻害するのに有効である、請求項9に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
この出願は、2013年7月17日に提出された米国仮出願番号第61/847,388号の恩恵を享受するものであり、その全ては出典明示により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、概して抗ウイルス性化合物に関するものであり、より具体的には、C型肝炎ウイルス(HCV)によりコードされるNS5Aタンパク質の機能を阻害し得る化合物の組み合わせ、該組み合わせを含む組成物、およびNS5Aタンパク質の機能を阻害する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
HCVは主要なヒト病原体であり、世界中で推定1億7千万人が感染しており-これはヒト免疫不全ウイルス1型による感染数のおよそ5倍である。これらHCV感染者のかなりの割合が、肝硬変および肝細胞癌を含む重篤な進行性肝疾患を発症する。
【０００４】
過去10年にわたって、慢性HCVを治療するための標準治療はペグ化インターフェロンおよびリバビリンの組み合わせを用いてきた。該治療は、6つの主要なHCV遺伝子型に対する持続性ウイルス陰性化(sustained viral response)(SVR)の達成において最高の成功率ではなく(特に、遺伝子型1に対して成功率が低い)、また、多くの副作用を引き起こす。HCV NS3/4Aプロテアーゼ(PIs)を標的とする最近認可された薬物(ビクトレリス(登録商標)およびインシベック(登録商標))をペグ化インターフェロンおよびリバビリンとともに投与すると、SVRを経験する患者の割合およびSVRを達成するのに必要な治療期間において、大きな改善がもたらされる。しかしながら、プロテアーゼ阻害剤耐性に対抗し、全てのHCV遺伝子型にわたって効力を改善し、かつ抗ウイルス療法をインターフェロンフリー療法という最終目標に向かって前進させるためにさらなる療法を開発することが、明確かつ早急に必要とされている。
【０００５】
HCVは約9500ヌクレオチド長のプラス鎖RNAウイルスであり、約3000のアミノ酸である単一の大きなポリタンパク質をコードする単一のオープンリーディングフレーム(ORF)を有する。感染細胞において、このポリタンパク質は、細胞プロテアーゼおよびウイルスプロテアーゼにより複数の部位で切断され、構造タンパク質および非構造(NS)タンパク質を生じる。HCVの場合、成熟非構造タンパク質(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、およびNS5B)の生成は、２つのウイルスプロテアーゼによりもたらされる。１つめのものは、メタロプロテアーゼであって、NS2-NS3接合部を切断すると考えられており；２つめは、NS3のN-末端領域内に含まれるセリンプロテアーゼ(本明細書においてNS3プロテアーゼとも称される)であり、NS3の下流、すなわちNS3-NS4A切断部位においてはシスで、残りのNS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B部位についてはトランスでの両方における以降の切断の全てを仲介する。該NS4Aタンパク質は、NS3プロテアーゼの補助因子である。NS3-NS4A複合体の形成は、適切なプロテアーゼ活性のために必要である。該NS3タンパク質は、ヌクレオシドトリホスファターゼおよびRNAヘリカーゼ活性も示す。NS5Aは、ウイルスRNA複製およびビリオンアセンブリに必要とされる多機能タンパク質である。NS5B(本明細書においてHCVポリメラーゼとも称される)は、RNAウイルス合成に関与するRNA-依存性RNAポリメラーゼである。
【０００６】
HCVゲノム全体にわたって、ヌクレオチドおよびコードされたアミノ酸配列内に、プルーフリーディング能が欠如しているコード化RNA依存性RNAポリメラーゼの高いエラー率に起因して、かなりの多様性が見いだされる。HCVの遺伝的多様性の臨床的意義は、単独療法による治療中に起こる変異傾向であり、そのため全遺伝子型(pan-genotype)対象であって独立したメカニズムを介して作用するHCV阻害剤を用いる組み合わせ療法が望まれている。
【０００７】
HCVウイルス複製を選択的に阻害し、かつHCV-感染患者の治療に有用である化合物が望ましい。特に、NS5Aタンパク質の機能を効果的に阻害する化合物が望ましい。HCV複製におけるNS5Aタンパク質の機能および重要な役割は、例えば、以下の文献:非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；C. Riceらの特許文献１に記載されている。
【０００８】
HCV NS5A阻害剤(例えば、BMS-790052(2011年7月13日に出願された特許文献２))と組み合わされた場合に、HCVレプリコン活性の相乗的阻害を示す化合物を同定する方法が記載されている。簡単に説明すると、各化合物は、いくつかのNS5A抵抗性変異体に対して個別に試験した場合、本質的に不活性であるか、または殆ど活性がなく、NS5A標的化化合物と組み合わせて試験した場合に相乗的阻害活性を有するのみである。該相乗的な化合物は、固定濃度のHCV NS5A阻害剤(例えば、BMS-790052)の存在下における試験化合物のタイトレーションを用いて同定された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】WO2006093867
【特許文献２】PCT/US2011/043785
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】S. L. Tan, et al., Virology, 284:1-12 (2001)
【非特許文献２】K.-J. Park, et al., J.  Biol. Chem., 30711-30718 (2003)
【非特許文献３】T. L. Tellinghuisen, et al., Nature, 435, 374 (2005)
【非特許文献４】R. A. Love, et al., J. Virol, 83, 4395 (2009)
【非特許文献５】N. Appel, et al., J. Biol. Chem., 281, 9833 (2006)
【非特許文献６】L. Huang, J. Biol. Chem., 280, 36417 (2005)
【非特許文献７】M. Gao, et al, Nature (2010)
【発明を実施するための形態】
【００１１】
第1の態様において、本発明は、NS5A標的化化合物およびNS5A相乗化剤を含む組み合わせを提供するものであって、該組み合わせは、投与されると該NS5A標的化化合物のみに対して抵抗性を与える変異を含む変異体に対する相乗的抗HCV活性をもたらし、ここで該NS5A相乗化剤は、式(I):
【化１】
2016525114.tif 000002
［式中、
R1'およびR1'は、アルコキシアルキル、アルキル、シクロアルキルおよびピラニルから独立して選択され、該シクロアルキルおよび該ピラニルは、所望により、アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルから独立して選択される1、2または3つの置換基で置換されていてもよく；
R2およびR2'は、同一または異なるアルキル基である］
の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１２】
第1の態様の第1の実施態様において、本発明は、前記組合せ、および１以上の医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第2の実施形態において、前記組成物は、抗HCV活性を有する1または2つの別の化合物を含む。第3実施形態において、少なくとも１つの別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第4の実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンα 2B、ペグ化インターフェロンα、ペグ化インターフェロンλ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα 2Aおよびリンパ芽様インターフェロンτから選択される。第5の実施形態において、前記組成物は、抗HCV活性を有する1または2つの別の化合物を含み、ここで少なくとも１つの別の化合物が、HCV感染の治療のために、HCV プロテアーゼ、HCV ポリメラーゼ、HCV ヘリカーゼ、HCV NS4B タンパク質、HCVエントリー、HCVアセンブリ、HCVイグレス、HCV NS5A タンパク質およびIMPDHから選択される標的の機能を阻害するのに有効である。
【００１３】
第2の態様において、本発明は、治療上有効な量の前記組合せ、またはその医薬的に許容される塩の組合せを、患者に投与することを特徴とする、患者におけるHCV感染の治療方法を提供する。第2の態様の第1の実施形態において、本方法は、抗HCV活性を有する1または2個の別の化合物を、該組み合わせまたはそれらの医薬的に許容される塩より前、後または同時に投与することをさらに特徴とする、方法を提供する。第2の実施形態において、少なくとも１つの別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第3の実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンα 2B、ペグ化インターフェロンα、ペグ化インターフェロンλ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα2Aおよびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。第4の実施形態において、少なくとも１つの別の化合物が、HCV感染症の治療のために、HCVプロテアーゼ、HCVポリメラーゼ、HCVヘリカーゼ、HCV NS4Bタンパク質、HCVエントリー、HCVアセンブリ、HCVイグレス、HCV NS5Aタンパク質およびIMPDHから選択される標的の機能を阻害するのに有効である。
【００１４】
別の態様において、本発明は、NS5A標的化化合物およびNS5A相乗化剤を含む組み合わせを提供するものであって、投与されると該NS5A標的化化合物のみに対して抵抗性を与える変異を含む変異体に対する相乗的抗HCV活性をもたらし、ここで該NS5A相乗化剤は、式(II):
【化２】
2016525114.tif 000003
[式中、
R1'およびR1'は、アルキルおよびシクロアルキルから独立して選択され、該シクロアルキルは、所望により、アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルから独立して選択される1、2または3つの置換基で置換されていてもよい]
の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１５】
本発明の他の態様は、本明細書に記載の実施態様の適切な組み合わせを含み得る。
【００１６】
さらに他の態様および実施態様は、本明細書の記載中に見いだされ得る。
【００１７】
本明細書における本発明の記載は、化学結合の法則および原理と一致して解釈されるべきである。場合によっては、任意の所与の位置に置換基を配置するために、水素原子を除去することが必要な場合もあり得る。
【００１８】
場合によって、任意の特定の基における炭素原子の数は、該基の表記の前に記載される。例えば、用語「C2-6アルケニル」は、2〜6個の炭素原子を含むアルケニル基を示す。これらの表記がされている場合、それらを本明細書に含まれる全ての他の定義に優先する。
【００１９】
本発明により包含される化合物は、医薬品として使用するために適切に安定であることが理解されるべきである。
【００２０】
分子中の特定の位置でのあらゆる置換基または変数の定義は、該分子中の他の部分におけるその定義から独立していることを意図する。
【００２１】
本明細書に記載の全ての特許、特許出願、および参考文献は、引用によりその全体が本明細書に援用される。一貫性に欠ける場合、本出願の開示(定義を含む)を優先する。
【００２２】
本明細書で用いられる通り、以下の用語は指定の意味を有する。
本明細書において用いる単数形「a」、「an」および「the」は、他に明確に指示されない限り、複数の言及も含む。
【００２３】
特に指定のない限り、本発明の全てのアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクリル基は、それらの各々の定義に記載の通り置換されていてよい。例えば、アリールアルキル基のアリール部分は、用語「アリール」の定義に記載された通りに置換されていてよい。
【００２４】
本明細書で用いる用語「NS5A相乗化剤」は、単独ではHCV野生型に対してNS5A標的化化合物より弱い活性を示すが、NS5A標的化化合物と組み合わされた場合に、NS5A標的化化合物単独の効力よりも3倍以上大きいEC50効力を示す分子を言う。
【００２５】
本明細書で用いる用語「相乗的抗HCV活性」は、NS5A標的化化合物単独の効力よりも3倍以上大きいEC50効力を言う。
【００２６】
本明細書で用いる用語「NS5A標的化化合物」は、NS5Aタンパク質に、最も一般的にはNS5Aの最初の100残基内に(これに限定するもものではないが)、少なくとも1つの抵抗性置換が存在するHCV複製を阻害する分子を言う。
【００２７】
本明細書で用いる用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子基に結合したアルキル基を言う。
【００２８】
本明細書で用いる用語「アルコキシアルキル」は、1、2、または3つのアルコキシ基で置換されたアルキル基を言う。
【００２９】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、1から7個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素由来の基を言う。
【００３０】
本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、3から7員の単環式飽和炭素環式環を言う。
【００３１】
本明細書で用いる用語「ハロ」は、Cl、Br、F、またはIを言う。
【００３２】
本明細書で用いる用語「ハロアルキル」は、1、2、3、または4個のハロゲン原子で置換されたアルキル基を言う。
【００３３】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシ」は、-OHを言う。
【００３４】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシアルキル」は、1、2、または3つのヒドロキシ基で置換されたアルキル基を言う。
【００３５】
本発明の化合物には不斉中心が存在する。これら中心は、キラル炭素原子の周囲の置換基の配置によって、記号「R」または「S」により示される。本発明は、NS5Aを阻害する能力を有する全ての立体化学的な異性体、またはその混合物を包含することが理解されるべきである。化合物の個々の立体異性体は、キラル中心を有する市販の出発物質から合成的に製造することができるか、あるいは、エナンチオマーの生成物の混合物を製造した後、ジアステレオマーの混合物への変換に続く分離もしくは再結晶化、クロマトグラフ技法、またはキラルクロマトグラフィーカラムでのエナンチオマーの直接分離などといった分離を行うことによって製造することができる。特定の立体化学の出発化合物は、市販であるか、あるいは当業者に公知の方法により製造および分割され得る。
【００３６】
本発明のある特定の化合物も、異なる安定した立体構造形態で存在していてもよく、それは分離可能であり得る。非対称単結合について制限された回転に起因するねじれ非対称(Torsional asymmetry)(例えば、立体障害または環の歪みが原因である)により、異なる配座異性体の分離が可能になり得る。本発明は、これら化合物の各配座異性体およびその混合物を含む。
【００３７】
本発明の化合物は、互変異性体としても存在する；従って、本発明は、全ての互変異性体もまた包含する。
【００３８】
該用語「本発明の化合物」および同等の表現は、本発明の組み合わせを構成する化合物ならびにその医薬的に許容されるエナンチオマー、ジアステレオマーおよび塩を包含することを意味する。同様に、中間体についての言及は、内容的に許される限りそれらの塩を包含することを意味する。
【００３９】
本発明は、本発明の化合物に出現する原子の全ての同位体を含むことを意図する。同位体には、原子番号が同一であるが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、限定されることなく、水素の同位体にはジュウテリウムおよびトリチウムが含まれる。炭素の同位体としては13Cおよび14Cが挙げられる。同位体で標識された本発明の化合物は一般に、当業者に公知の通常の技法によるか、または本明細書に記載されたものと類似した方法によって、他で用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体-標識試薬を用いて、製造することができる。そのような化合物は、例えば、生物活性の決定における標準物質および試薬として、様々な使用可能性を有しうる。安定な同位体の場合、そのような化合物は、生物学的、薬理学的、または薬物動態学的特性を都合よく修飾する能力を有しうる。
【００４０】
本発明の化合物は、医薬的に許容される塩として存在し得る。本明細書で用いる用語「医薬的に許容される塩」は、本発明の化合物の塩または双性イオン形態を意味し、それは水または油-溶性または分散性であり、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに患者の組織に接触して用いるのに適していて、それらの使用目的に有効である。該塩は化合物の最終的な単離および精製の間に製造することができるか、あるいは別途、適切な窒素原子を適切な酸と反応させることにより製造することができる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩(camphorate)、カンファースルホン酸塩；ジグルコン酸塩(digluconate)、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩(palmoate)、ペクチン酸塩(pectinate)、過硫酸塩、3-フェニルプロプリオン酸塩(phenylproprionate)、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、炭酸水素塩、パラ-トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。医薬的に許容される付加塩の形成に用いることができる酸の例としては、無機酸(例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸)および有機酸(例えば、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸)が挙げられる。
【００４１】
塩基付加塩は、カルボキシ基を、適切な塩基(例えば、金属カチオンのヒドロキシド、カーボネートもしくはビカーボネート)と反応させるか、あるいはアンモニア、または有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンと反応させることにより、化合物の最終的な単離および精製の間に製造され得る。医薬的に許容される塩のカチオンとしては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびに無毒性のアミンカチオン(例えば、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、N,N-ジメチルアニリン、N-メチルピペリジン、N-メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、N,N-ジベンジルフェネチルアミン、およびN,N'-ジベンジルエチレンジアミン)が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンとしては、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンが挙げられる。
【００４２】
治療で用いるために、治療上有効な量の組み合わせの各化合物ならびにその医薬的に許容される塩を、未加工の化学薬品(raw chemical)として投与することができる場合、活性成分を医薬組成物として存在させることができる。従って、本発明は、治療上有効な量の、組み合わせを構成する化合物またはその医薬的に許容される塩ならびに1つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物をさらに提供する。本明細書で用いる用語「治療上有効な量」は、有意義な患者利益(例えば、ウイルス量の持続的減少)を示すのに十分である各活性成分の総量を言う。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、該用語は成分単独の量を言う。組み合わせに適用する場合、該用語は、組み合わせて、連続して、あるいは同時に投与されるかどうかにかかわらず、治療効果をもたらす活性成分を合わせた量を言う。該組み合わせに関する化合物およびその医薬的に許容される塩は上記の通りである。該担体、希釈剤、または賦形剤は、製剤の他の成分に適合し、そのレシピエントに有害でないという意味で許容可能でなくてはならない。本発明の別の態様によると、組み合わせの化合物またはその医薬的に許容される塩を、1つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、医薬製剤の製造方法もまた提供する。本明細書で用いる用語「医薬的に許容される」は、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに患者の組織に接触させて用いるのに適していて、その使用目的に有効である、化合物、物質、組成物、および/または剤形を言う。
【００４３】
医薬製剤は、単位用量あたりに所定の量の活性成分を含む単位剤形であってもよい。本発明の化合物が1日あたり約0.01から約250ミリグラム/キログラム(「mg/kg」)体重、好ましくは1日あたり約0.05から約100 mg/kg体重である投与量濃度が、HCV介在疾患の予防および治療に対する単独療法においては典型的である。通常、本発明の医薬組成物は、1日あたり約1から約5回の投与か、あるいは持続投与される。そのような投与は、長期治療または救急治療として用いられ得る。担体材料と組み合わせて単一剤形を製造し得る活性成分の量は、治療する症状、症状の重篤性、投与回数、投与経路、用いた化合物の排出速度、治療期間、ならびに患者の年齢、性別、体重、および状態によって変わり得る。好ましい単位用量製剤は、活性成分の、本明細書において上記した１日量もしくはそれ以下、またはその適当な画分を含むものである。通常、化合物の至適用量よりかなり少ない少用量で治療を開始する。その後、該条件下での最適な効果に達するまで用量を少しずつ増加させる。一般に、いずれの有害または有毒な副作用も引き起こさずに抗ウイルス効果が通常得られる濃度レベルで、該化合物を投与することが最も望ましい。
【００４４】
本発明の組成物が、本発明の化合物と1つ以上の別の治療薬もしくは予防薬を組み合わせて含む場合、該化合物と別の薬物の両方とも、通常、単独療法レジメンにおいて標準的に投与される用量の約10から150％、より好ましくは約10から80％の用量濃度で存在する。
【００４５】
医薬製剤は、いずれの適当な経路、例えば、経口(頬側または舌下を含む)、直腸、経鼻、局所的(頬側、舌下、または経皮を含む)、膣、または非経口(皮下、皮内、筋肉内、関節内、滑液嚢内(intrasynovial)、胸骨内、髄腔内、病巣内、静脈内、または皮内注射もしくは注入を含む)経路による投与に適応しうる。そのような製剤は、薬学の分野において公知のいずれの方法よっても(例えば、活性成分と担体もしくは賦形剤を会合させることにより)、製造されうる。経口投与または注射による投与が好ましい。
【００４６】
経口投与に適応した医薬製剤は、カプセル剤もしくは錠剤；粉末剤または顆粒剤；水性または非水性液体中の液剤または懸濁剤；食用フォーム剤またはホイップ剤；あるいは水中油液体エマルジョン剤または油中水エマルジョン剤といった、別々のユニットであってもよい。
【００４７】
例えば、経口投与用に、錠剤またはカプセル剤の形態において、活性薬物成分を、経口で無毒の医薬的に許容される不活性担体(例えば、エタノール、グリセロール、水など)と合わせることができる。粉末剤は、化合物を適切な微粒子サイズに細かく粉末化し、同様に粉末化された食用炭水化物(例えばデンプンまたはマンニトール)などの医薬担体と混合することにより製造される。着香剤、保存剤、分散剤、および着色剤もまた存在し得る。
【００４８】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を製造し、成型ゼラチンシース(gelatin sheath)に詰めることにより製造される。充填工程の前に、流動化剤および滑沢剤(例えばコロイド状シリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、または固体のポリエチレングリコール)を該粉末混合物に加えることができる。カプセル剤が摂取される際の薬剤のアベイラビリティを高めるために、崩壊剤または可溶化剤(例えば、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウム)を加えることもできる。
【００４９】
さらに、所望される場合もしくは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤を混合物に加えることもできる。適切な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然糖(例えばグルコースまたはβ-ラクトース)、コーンシロップ、天然および合成ガム(例えばアカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム)、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。これらの剤形に用いられる滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。これらの剤形に用いられる滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられるが、これに限定はしない。錠剤は、例えば、粉末混合物を製造し、顆粒化もしくは充填し、滑沢剤および崩壊剤を加え、そして錠剤に圧縮することにより製剤化される。粉末混合物は、適切に粉末化された化合物と、上記の希釈剤または塩基、ならびに所望により、結合剤(例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート(aliginate)、ゼラチン(gelating)、またはポリビニルピロリドン)、溶解遅延剤(例えばパラフィン)、吸収促進剤(例えば第四級塩)および/または吸収剤(例えばベントナイト、カオリン、またはリン酸水素カルシウム)とを混合することにより製造される。結合剤(例えばシロップ、デンプン糊、アカシア粘液(acadia mucilage)、またはセルロース系物質もしくはポリマー系物質の溶液)で湿らせて、ふるいに押し通すことにより、粉末混合物を顆粒化することができる。顆粒化の別法として、該粉末混合物を錠剤機に通して、不完全に成型されたスラグを得た後、顆粒に粉砕することができる。該顆粒を、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、または鉱物油の添加により滑らかにして、錠剤成形型への接着を防ぐことができる。次いで、滑らかにした混合物を錠剤へと圧縮する。また、本発明の化合物を、自由流動性不活性担体と合わせて、顆粒化工程または成形工程(slugging step)を経ずに直接、錠剤へと圧縮することができる。シェラックのシールコート(sealing coat)、糖もしくはポリマー材のコーティング、およびワックスの艶出しコーティングから成る、澄明もしくは不透明な保護コーティングを施すことができる。これらのコーティングに染料を加えて、異なる単位用量を区別することができる。
【００５０】
経口液剤(例えば液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤)は、所定の分量が所定の量の化合物を含むように単位用量形態で製造され得る。シロップ剤は、適切に風味付けされた水溶液中に化合物を溶解させることにより製造でき、一方、エリキシル剤は無毒のビヒクルを用いることにより製造され得る。可溶化剤および乳化剤(例えばエトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテル)、保存剤、香味添加剤(例えばペパーミント油あるいは天然甘味剤、またはサッカリンもしくは他の人工甘味剤など)を加えることもできる。
【００５１】
必要に応じて、経口投与のための単位用量製剤をマイクロカプセル化することができる。該製剤はまた、例えば、ポリマー、ワックスなどの中に粒子状物質をコーティングまたは組み込むことによって、放出を遅延もしくは持続するように製造され得る。
【００５２】
式(I)の化合物、およびその医薬的に許容される塩はまた、リポソームデリバリーシステム(例えば、小型の単層ベシクル、大型の単層ベシクル、および多重層ベシクル)の形態で投与することもできる。リポソームは、様々なリン脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンから形成することができる。
【００５３】
該組み合わせの化合物およびその医薬的に許容される塩はまた、化合物分子が結合した個々の担体としてモノクローナル抗体を用いることによって送達されうる。また、該化合物を、標的化可能な薬物担体としての可溶性ポリマーと結合させてもよい。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパリトイル(palitoyl)残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンを挙げることができる。さらに、該化合物は、薬物の制御放出を達成するのに有用な生分解性ポリマーの類、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン(polepsilon caprolactone)、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋もしくは両親媒性ブロック共重合体に結合していてよい。
【００５４】
経皮投与に適した医薬製剤は、長期間、レシピエントの表皮と密接な接触を維持することを目的とした、個別のパッチであってもよい。例えば、Pharmaceutical Research 1986, 3(6), 318に一般的に記載されるように、該活性成分はイオントフォレーシスによってパッチから送達されうる。
【００５５】
局所投与に適した医薬製剤は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、粉末剤、液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアロゾル剤、または油剤として製剤化されうる。
【００５６】
眼または他の外部組織、例えば口および皮膚の治療において、該製剤は好ましくは、局所用軟膏剤もしくはクリーム剤として塗布される。軟膏剤に製剤化する場合、該活性成分はパラフィン系(paraffinic)かまたは水-混和性のいずれかの軟膏基剤とともに用いられうる。別法として、該活性成分は水中油型クリーム基剤もしくは油中水型基剤を用いてクリーム剤に製剤化されうる。
【００５７】
眼への局所投与に適した医薬製剤としては、該活性成分が適切な担体(とりわけ水性溶媒)に溶解または懸濁されている点眼剤が挙げられる。
【００５８】
口への局所投与に適した医薬製剤としては、ドロップ剤(lozenge)、トローチ剤(pastille)、および口腔洗浄剤(mouth wash)が挙げられる。
【００５９】
直腸投与に適した医薬製剤は、坐薬または浣腸剤であってよい。
【００６０】
担体が固体である、経鼻投与に適した医薬製剤としては、例えば20〜500ミクロンの粒子サイズを有する粗粉末(course powder)が挙げられ、それは、嗅ぎ薬を摂取する方法、すなわち、鼻に近づけられた粉末剤の容器から鼻腔を介して急速吸入することにより、投与される。鼻腔用スプレーまたは点鼻薬として投与するための、担体が液体である適切な製剤としては、活性成分の水性または油性液剤が挙げられる。
【００６１】
吸入による投与に適した医薬製剤としては、微粒子粉末または微粒子ミストが挙げられ、それは様々なタイプの定量加圧エアロゾル、ネブライザー、または吸入器を用いて発生されうる。
【００６２】
膣内投与に適した医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤であってよい。
【００６３】
非経口投与に適した医薬製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤(bacteriostat)、および製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする塩(soute)を含みうる水性および非水性の無菌注射液剤；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含みうる水性および非水性の無菌懸濁剤が挙げられる。該製剤は、単回投与もしくは多回投与(multi-dose)用容器、例えば、密閉アンプルおよびバイアルに入っていてよく、使用の直前に無菌の液体担体(例えば注射用の水)の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保存してもよい。即時調製(Extemporaneous)注射液剤および懸濁剤は、無菌粉末剤、顆粒剤、および錠剤から調製されうる。
【００６４】
具体的に上述した成分に加えて、該製剤は、当該製剤のタイプを考慮して当分野で通常のその他の剤を含んでもよい(例えば経口投与に適した製剤は香味剤を含んでもよい)ことが理解されるべきである。
【００６５】
該用語「患者」には、ヒトおよび他の哺乳動物の両方が含まれる。
【００６６】
該用語「治療」は:(i)疾患、障害、および/または症状に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない患者において、疾患、障害、または症状の発症を予防すること；(ii)疾患、障害、または症状の抑制、すなわち、その進行を抑止すること；ならびに(iii)疾患、障害、または症状を軽減すること、すなわち、疾患、障害、および/または症状の退行をもたらすことを言う。
【００６７】
本発明の化合物はまた、シクロスポリン、例えばシクロスポリンAとともに投与することができる。シクロスポリンAは、臨床試験においてHCVに対して活性であることが示されている(Hepatology 2003, 38, 1282；Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, 313, 42；J. Gastroenterol. 2003, 38, 567)。
【００６８】
以下の表Aに、本発明の化合物とともに投与することができる化合物のいくつかの実例を記載する。本発明の化合物は、併用療法において、一緒にまたは別個に、あるいは該化合物を組成物中に混合することによって、他の抗HCV活性化合物とともに投与することができる。
表A
【表１】
2016525114.tif 000004
【表２】
2016525114.tif 000005
【表３】
2016525114.tif 000006
【表４】
2016525114.tif 000007
【表５】
2016525114.tif 000008
【表６】
2016525114.tif 000009
【表７】
2016525114.tif 000010
【００６９】
本発明の化合物は、実験用試薬として用いてもよい。化合物は、HCV疾患メカニズムの知識をさらに高めるための、ウイルス複製アッセイの設計、動物アッセイ系の検証および構造生物学研究に対する研究ツールの提供において有益でありうる。さらに、本発明の化合物は、例えば競合阻害により、他の抗ウイルス性化合物の結合部位の確立または決定に有用である。
【００７０】
本発明の化合物はまた、物質のウイルス汚染を処理もしくは防止するのに用いてもよく、それにより、そのような物質(例えば血液、組織、手術器具および手術着、実験器具および実験着、ならびに採血または輸血の器具および材料)と接触する、実験もしくは医療の関係者または患者のウイルス感染の危険性を低下させうる。
【００７１】
本発明は、合成プロセスまたは代謝プロセス［ヒトもしくは動物体内(in vivo)で生じるもの、またはin vitroで生じるプロセスを含む］により作られる、式(I)で示される化合物を包含することを意図する。
【００７２】
特に以下の例示スキームおよび実施例中のものを含む本出願で使用される略語は、当業者には周知である。使用される略語のいくつかは以下の通りである:RTまたはrtは室温または保持時間(文脈によって決定される)；ret t は保持時間；minまたはminsは分；TFAはトリフルオロ酢酸；minまたはminsは分；ACNまたはMeCNはアセトニトリル；DCMはジクロロメタン；DIEAまたはDiPEAまたはDIPEAはジイソプロピルエチルアミン；HATUはO-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩；hまたはhrまたはhrsは時間；MeOHはメタノール；dppfはジフェニルホスフィノフェロセン；EtOAcは酢酸エチル；OAcはアセテート；DMSOはジメチルスルホキシド；TBTUは2-(1H-ベンゾトリアゾール-1−イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボーレート；Meはメチル；およびDMFはN,N−ジメチルホルムアミド。
【００７３】
本開示は特定の実施態様に関連して記載されるが、それはその発明の範囲を制限することを意図するものではない。一方、本開示は、全ての代替形態、改変形態、および同等形態を、特許請求の範囲内に含み得るものとして包含する。従って、特定の実施態様を含む以下の実施例は、本発明の1つの実例を説明し、該実施例は特定の実施態様の例示目的であり、そしてその方法および概念的態様の最も有用で且つ容易に理解される記載であると考えられるものを提供するために提示するものであると解される。
【実施例】
【００７４】
出発物質は、商業的供給源から得ることができるか、または当業者には公知の十分に確立された文献の方法によって製造することができる。最終工程のための酸前駆体を、2013年7月2日に提出された米国特許仮出願番号第13/933495号に記述した方法に従って製造できる。
【００７５】
LC/MS 条件1
カラム = Ascentis Express C18, 2.1 X 50 mm, 2.7 um
溶媒 A = CH3CN (2%) + 10 mM NH4COOH/H2O (98%)
溶媒 B = CH3CN (98%) + 10 mM NH4COOH/H2O (2%)
開始%B = 0；終了時%B = 100
グラジンエント時間=1.4分；停止時間 = 4分
停止時間 = 4分
流速 = 1 mL/分；波長 = 220 nm
LC/MS 条件2
カラム = Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm
溶媒 A = ACN (5%) + H2O (95%)(10 mM NH4OAcを含む)
溶媒 B = ACN (95%) + H2O (5%)(10 mM NH4OAcを含む) 
開始%B = 0；終了時%B = 100
グラジンエント時間 = 3分
流速 = 1 mL/分
波長 = 220 nm
温度 = 50℃
【００７６】
LC/MS 条件3
カラム：Waters Phenomenex C18, 2.0 x 30 mm, 3 μm 粒子
移動相 A：10% MeOH:90% 水 :0.1%TFA 
移動相 B：90% MeOH:10% 水 :0.1%TFA
グラジエント：0%B、3分かけて0〜100%B、次いで100％Bで1分間保持
流速：0.8mL/分
検出：220 nm
温度：40℃
LC/MS 条件4
カラム：Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm 粒子 
移動相 A：5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む)
移動相 B：95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む)
グラジエント：0%B、3分かけて0〜100%B、次いで100% Bで0.5分保持
流速：1 mL/分 
検出：220 nmでUV
温度：50℃ 
【００７７】
実施例B-1
【化３】
2016525114.tif 000011
実施例B-1 工程a
【化４】
2016525114.tif 000012
4-ブロモベンゼン-1,2-ジアミン(2.5 g, 13.37 mmol)/DCM(30 mL)の溶液に、(S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(3.09 g, 13.37 mmol)、DIPEA(2.334 mL，13.37 mmol)およびHATU(5.08 g, 13.37 mmol)を加えた。該反応混合溶液を、室温にて18時間撹拌した。該反応混合溶液を、水で希釈して、DCMで抽出した。有機相を、塩水で洗浄して、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製物質を、40 g Redisep Silica column, 溶離液としてCHCl3/MeOHを用いるISCOにより精製して、(S)-tert−ブチル(1-((2-アミノ-4-ブロモフェニル)アミノ)-3,3-ジメチル-1-オキソブタン-2−イル)カルバメート(1.82 g)を黄色の固体として得た。LC (条件1)：Rt = 2.13分. LC/MS：[M+H2O]+ C17H27BrN2O4として計算：計算値；402.12；実測値402.2. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2.50 ppm, 400 MHz)：δ 9.35 - 9.21 (m, 1 H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 6.91 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 6.80 - 6.60 (m, 1 H), 5.25 - 5.01 (m, 2 H), 4.07 - 3.89 (m, 1 H), 1.52 - 1.34 (m, 9 H), 1.02 - 0.86 (m, 9 H).
【００７８】
実施例B-1, 工程b
【化５】
2016525114.tif 000013
酢酸(15 mL)を、(S)-tert−ブチル(1-((2-アミノ-4-ブロモフェニル)アミノ)-3,3-ジメチル-1-オキソブタン-2−イル)カルバメート(1.8 g, 4.50 mmol)に加えて、該反応混合液を、終夜65℃に加熱した。揮発性成分を、真空除去して、残留物を、無水CH２Cl２(2 x 15 mL)と共に共蒸留した。有機相を、飽和NaHCO３溶液、塩水で洗い、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、(S)-tert−ブチル(1-(6-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール−2−イル)-2,2-ジメチル プロピル)カルバメート(1.68 g)を、黄色の固体として得た。LC(条件1)：Rt = 2.19分. LC/MS：[M+H]+ C17H25BrN3O2として計算：計算値；381.11；実測値382.2.  1H NMR (DMSO-d6, δ = 2.50 ppm, 300 MHz)：δ 12.46 - 12.27 (m, 1 H), 7.82 - 7.65 (m, 1 H), 7.59 - 7.41 (m, 1 H), 7.29 (dt, J = 1.9, 8.5 Hz, 1 H), 7.12 - 6.90 (m, 1 H), 4.64 (d, J = 9.8 Hz, 1 H), 1.44 - 1.27 (m, 9 H), 0.88 (br. s., 9 H).
【００７９】
実施例B-1 工程c
【化６】
2016525114.tif 000014
(S)-tert−ブチル(1-(6-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール−2−イル)-2,2-ジメチルプロピル)カルバメート(1.57 g, 4.11 mmol)/ジオキサン(25 mL)の溶液に、ビス(ピナコラト)ジボロン(1.564 g, 6.16 mmol)および酢酸カリウム(1.209 g, 12.32 mmol)を加えた。該反応混合溶液を、アルゴンで10分間パージして、次いでPdCl2(dppf)(0.150 g, 0.205 mmol)を上記反応混合溶液に加えて、再度アルゴンで5分間パージした。反応混合溶液を、90℃に終夜加熱した。反応混合溶液を、水(15 ml)で希釈して、EtOAc(2 x 25 ml)で抽出した。有機相を合わせて、塩水で洗い、Na2SO4で乾燥して、真空で濃縮した。粗製物質を、40 g Redisep column, 溶離液としてヘキサン/酢酸エチルを用いるISCOにより精製して、(S)-tert−ブチル (2,2-ジメチル-1-(6-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2−イル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール−2−イル)プロピル)カルバメート(1.35 g)を黄色の固体として得た。LC (条件1)：Rt = 2.21分. LC/MS：Anal. Calcd. for [M+H]+ C23H37BN3O4 ：430.29；実測値430.4. 1H NMR (CD3OD, δ = 3.34 ppm, 400 MHz)：δ 7.98 (s, 1 H), 7.65 (dd, J = 1.0, 8.5 Hz, 1 H), 7.53(d, J = 8.5 Hz, 1 H), 4.73 (br. s., 1 H), 1.37 (s, 12 H), 1.24 (m, 9 H), 1.01 (s, 9 H).  
【００８０】
実施例B-1 工程d
【化７】
2016525114.tif 000015
ジオキサン(10 mL)中の(S)-tert−ブチル(2,2-ジメチル-1-(6-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2−イル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール−2−イル)プロピル)カルバメート(1.114 g, 2.59 mmol)および4,16-ジブロモ[2,2]パラシクロファン(0.38g, 1.038 mmol)の溶液に、Cs2CO3(0.845 g, 2.59 mmol)/水(2 mL)を加えて、10分間脱気した。PdCl2(dppf)(0.038 g, 0.052 mmol)を、上記反応混合溶液に加えて、再度5分間脱気した。該反応混合溶液を、90℃に12時間加熱した。次いで、反応混合溶液を、濾過して、実施例B-1 工程dを得て、これをさらなる精製をせずに次工程に用いた。LC(条件1)：Rt = 2.54分. LC/MS：[M+H]+ C50H63N6O4について計算：計算値；811.49；実測値811.6. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2.50 ppm, 300 MHz)：δ 12.36 (br. s., 2 H), 7.85 - 7.52 (m, 4 H), 7.32 (d, J = 7.9 Hz, 2 H), 7.05 (br. s., 2 H), 6.89 - 6.67 (m, 4 H), 6.54 (br. s., 2 H), 4.72 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 3.57 - 3.44 (m, 2 H), 3.07 (br. s., 2 H), 2.83 (br. s., 2 H), 2.65 (br. s., 2 H), 1.36 (s, 18 H), 1.08 - 0.91 (m, 18 H).
【００８１】
実施例B-1 工程e
【化８】
2016525114.tif 000016
HCl/ジオキサン(4 mL，24.00 mmol)を、実施例B-1 工程d(0.1 g, 0.102 mmol)に加えて、該反応混合溶液を、RTで2時間撹拌させた。反応の完了を、LCMSによりモニターした。揮発性成分を、真空にて除去して、残留物を、ジエチルエーテルで洗浄して、乾燥させて、実施例B-1 工程e(0.07 g)を黄色の固体として得た。LC(条件1)：Rt = 2.54分. LC/MS：[M+H]+ C40H47N6について計算：計算値：611.39；実測値611.4. 1H NMR (CD3OD, δ = 3.34 ppm, 400 MHz)：δ 7.90 (d, J = 13.1 Hz, 2 H), 7.83 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 6.84 (d, J = 6.5 Hz, 2 H), 6.78 (s, 2 H), 6.70 - 6.65 (m, 2 H), 4.54 (d, J = 1.0 Hz, 2 H), 3.54 - 3.46 (m, 2 H), 3.18 - 3.10 (m, 2 H), 2.98 - 2.86 (m, 2 H), 2.71 (br. s., 2 H), 1.25 - 1.22 (m, 18 H).
【００８２】
実施例B-1 工程e(0.04 g, 0.053 mmol)/DMF(5 mL)の溶液に、4,4-ジフルオロシクロヘキサンカルボン酸(0.017 g, 0.106 mmol)、DIPEA(0.055 mL，0.317 mmol)およびHATU(0.030 g, 0.079 mmol)を加えた。2時間室温にて撹拌した後に、揮発性成分を、真空除去して、残留物を、DCM(10 mL)に溶解して、NH4Cl飽和溶液、10% NaHCO３溶液、塩水で洗浄して、Na2SO4で乾燥して、真空で濃縮した。粗製物質を、逆相HPLC精製により精製して、実施例B-1を白色固体として得た。LC(条件1)：Rt = 2.37分. LC/MS：Anal. Calcd. for [M+H]+ C54H63F4N6O2：903.49；実測値903.4. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2.50 ppm, 400 MHz)：δ 12.53 - 12.32 (m, 2 H), 8.41 - 8.21 (m, 2 H), 7.84 - 7.50 (m, 4 H), 7.43 - 7.24 (m, 2 H), 6.90 - 6.67 (m, 4 H), 6.60 - 6.44 (m, 2 H), 5.14 - 4.97 (m, 2 H), 3.44 (br. s., 2 H), 3.08 (br. s., 2 H), 2.93 - 2.77 (m, 2 H), 2.73 - 2.56 (m, 4 H), 2.20 - 1.98 (m, 3 H), 1.96 - 1.49 (m, 13 H), 1.02 (s, 18 H).
【００８３】
以下の実施例を、実施例B-1の合成のために記述された方法を用いて、実施例B-1 工程eおよび適切な酸前駆体から製造した。得られる生成物を、分取HPLC(CH3CN/H2O/NH4OAc)により精製した。
【化９】
2016525114.tif 000017
【表８】
2016525114.tif 000018
【００８４】
実施例Y-1〜Y-5
【化１０】
2016525114.tif 000019
工程a:
ジオキサン(8 mL)中のボロネートY-1a (0.80 g, 1.93 mmol)、シクロファンY-1b(0.25 g, 0.683 mmol)の溶液に、Cs2CO3(0.70 g, 2.148 mmol)/水(2 mL)を加えて、該混合溶液を、10分間脱気して、PdCl2(dppf)(0.025 g, 0.034 mmol)を上記反応混合物に加えて、再度5分間脱気した。反応混合溶液を、90℃で18時間加熱して、周囲温度まで冷却して、EtOAcで希釈し、濾過して、乾燥させて、Y-1c(0.45g)を灰色の固体として得た。LC(条件3)：Rt = 2.79分. LC/MS：C48H58N6O4として計算：計算値；782.45；実測値783.61 [M+H]+.
【００８５】
工程b:
ビス-カルバメート Y-1cを、実施例1 工程eに記述された方法に従って、Y-1d(HCl塩)へと脱保護した。LC(条件3)：Rt = 2.79分. LC/MS：C38H42N6・4HClとして計算：計算値；582.78；実測値583.45 [M+H]+.
【００８６】
工程c:
DCM(1 mL)およびアセトニトリル(1 mL)中のY-1d(HCl塩)(30 mg, 0.041 mmol)および4,4-ジフルオロシクロヘキサンカルボン酸(18 mg, 0.110 mmol)の混合溶液に、DIPEA(0.1 mL，0.573 mmol)およびTBTU(30 mg, 0.093 mmol)を加えた。該反応混合溶液を、RTで45分間撹拌して、MeOH(1mL)で希釈して、濃縮して、分取HPLC(H2O/CH3CN/NH4OAc)により精製して、実施例Y-1を得た。実施例Y-2〜Y-5を、適切なカルボン酸前駆体から同様に製造した。この合成は当分野において報告されている。実施例Y-4の製造にて使用された酸前駆体は、互いにそのヒドロキシルおよびカルボキシル反応基のcisを含むラセミ体混合物であったことに注目されたい。
【００８７】
【化１１】
2016525114.tif 000020
【表９】
2016525114.tif 000021
【００８８】
(生物学的活性)
試験化合物のNS5A相乗的阻害効果は、様々な量のNS5A標的化化合物を用いて、目的の第2の化合物を滴定することにより、決定され得る。該NS5A標的化化合物および目的の第2の化合物は両者とも、HCV変異体に対して別々に試験した場合は本質的に不活性であるか、または活性が弱いが、しかしHCV変異体に対して組み合わせて試験した場合は、相乗的阻害効力(3倍以上の阻害)を取り戻すことが分かっている。一実施態様では、NS5A標的化化合物としての化合物 BMS-790052を、200nMの固定濃度で一定に保ったうえで、HCVの変異体での試験化合物の滴定を行うことができる。一実施態様では、該HCVの遺伝子型は、NS5Aタンパク質のアミノ酸の30番にグルタミンからグルタミン酸への変化を含む遺伝子型1aであり得る。該試験化合物は、上記の化合物または文献中に記載される他の化合物から選択され得る。当業者であれば、当分野で以前に記載された通りにHCVレプリコン細胞ベースのアッセイにおいて化合物を容易に試験することができ、特定の化合物の50％阻害のために有効な濃度(EC50)を容易に決定することができる。
【００８９】
実例として、下記に示される化合物P-55を、NS5Aタンパク質において30番目のグルタミンがグルタミン酸に変化した遺伝子型-1a変異体から成るHCVレプリコン細胞ベースのアッセイにおいて滴定することができる。BMS-790052単独の滴定ではEC50値〜200nMが得られ、一方でP-55単独の滴定ではEC50値 ＞200nMが得られる。200nMの固定量のBMS-790052の存在下におけるP-55の滴定では、P-55についてEC50値〜2 nMが得られ、このことは組み合わせによる相乗的阻害効果(＞100倍)を示している。同様に、200nMの固定量のP-55の存在下におけるBMS-790052の滴定では、BMS-790052についてEC50値〜2 nMが得られ、このことは組み合わせによる相互の相乗的阻害効果(〜100倍)を示している(2011年7月13日に出願されたPCT/US2011/043785), 表3)。さらなる化合物も同様の方法で試験することができ、相乗化剤活性の順位付けが決定された；遺伝子型1a Q→E変異体についてのこれらの順位付けを、選択された化合物について下表に示す。
【化１２】
2016525114.tif 000022
【００９０】
出願人共通のWO2012/009394に示されるとおり、該遺伝子型は、遺伝子型1a変異体に限定されず、全てのHCVの遺伝子型の変異体(限定はされないが、1b、2a、3a、4a、5a、6aのHCV変異体を含む)を包含し得ることが理解される。また、該相乗効果はBMS-790052またはP-55の組み合わせに限定されず、単独ではHCV変異体に対する効力が低下しているか効力が無いNS5A標的化化合物の他の組み合わせから得られ得ることも理解される。
【表１０】
2016525114.tif 000023
【００９１】
本発明は前述の例示的な実施例に限定されず、そしてその本質的特性から逸脱することなく他の特定の形態において具体化することができることが当業者には明白であろう。従って該実施例は、あらゆる点で、制限するものではなく例示的なものとしてみなされ、そして、前述の実施例に対してよりはむしろ特許請求の範囲を参照すべきであり、従って、特許請求の範囲と同等の意味および範囲内となる全ての変更を包含すると意図することが望ましい。
【国際調査報告】
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