(57)【要約】【解決手段】本発明はにきび菌に対する抗菌活性に優れたクロリンｅ６を活性成分として含む医薬組成物または化粧品組成物に関するもである。【選択図】図１
2016525540.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロリンｅ６を活性成分として含む、にきび治療及び予防用薬剤組成物。
【請求項２】
液剤、エマルション剤、懸濁剤、軟膏剤、及び貼付剤の中で選択された皮膚外用剤に剤形化されたことを特徴とする、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
クロリンｅ６は太陽光または蛍光灯によって活性化して活性酸素種を発生させる光敏感剤であることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
光力学治療法（ＰｈｏｔｏＤｙｎａｍｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ）によってにきびを治療及び予防することを特徴とする、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
クロリンｅ６を活性成分として含む、にきび予防及び改善用化粧料組成物。
【請求項６】
化粧水、ローション、及びクリームの中で選択された剤形であることを特徴とする、請求項５に記載の化粧料組成物。
【請求項７】
クロリンｅ６は太陽光または蛍光灯によって活性化して活性酸素種を発生させる光敏感剤であることを特徴とする、請求項５に記載の化粧料組成物。
【請求項８】
光力学治療法（ＰｈｏｔｏＤｙｎａｍｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ）によってにきびを予防及び改善することを特徴とする、請求項７に記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はにきび菌に対する抗菌活性に優れたクロリンｅ６を活性成分として含む医薬組成物または化粧品組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は外部環境から人体を保護するのに重要な役目を担う。皮膚には多様な菌が常在し、これにより多くの皮膚疾患が発生する。その中で、最も代表的な疾患としてにきびを挙げることができる。にきび（ａｃｎｅ）はギリシャ語‘ａｋｍｅ’から出た単語で、‘点’を意味する。にきびは一般的なにきびまたは青年期に現れる青年期型にきびの形態として主に発生したが、空気汚染、薬物濫用などのため、近年にはお年に構わずに発生し、にきびが発生する年齢層が非常に広くなっている実情である。にきびは、毛嚢側に付いている皮脂腺という脂腺からの皮脂の分泌が多くなり、同時に毛穴入口の角質が増加して排出入口が詰まり、毛穴内に溜まった皮脂及び不純物が排出できなくて段々大きくなり、硬い塊が落ち着くとかバクテリアが集まって炎症に発展することになるものがにきびである。
【０００３】
にきびの発生は、一般的に皮脂の生成増加、皮膚常在細菌の毛嚢増殖及び遺伝的素質などの主要因子が複合的に作用して発生する。これに関与する代表的なにきび菌としては、プロピオニバクテリウムアクネ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅ；Ｐ．ａｃｎｅ）がある。にきびの病変は卵胞壁の破裂有無によって化膿と非化膿に分けられる。にきびの種類は、化膿性にきびで、軽い面皰が現れて毛嚢が角化する第１段階、丘疹が現れる第２段階、ノング膿疱性にきびが生じて炎症が深くなる第３段階、嚢胞が生ずる第４段階、及び最も深刻に結節が生じ、瘢痕が残る第５段階に区別することもある。非化膿性にきびは開放性面皰と閉鎖性面皰に特定付けられる。
【０００４】
Ｐ．ａｃｎｅは低分子量のペプチッドを生産する。これは多形核白血球（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ；ＰＭＮＫ）を化学的に誘引して炎症を引き起こし、Ｐ．ｃｎｅが生産する多様な炎症性連結因子によって兔疫細胞を刺激してインターロイキン（ＩＬ）−８、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）を生産して皮膚内炎症反応を深化させるものとして知られている。このような機序によって発生したにきびを治療するために、経口抗生剤とレチノイドの服用などの方法が普遍的に用いられている。特に、細菌感染によって生成する炎症性にきびの場合、抗生剤処理によって症状を緩和させることができるが、副作用を引き起こすことができる。近年、テトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）などはＰ．ａｃｎｅｓの増殖抑制及び炎症反応の減少に用いられる抗生剤であるが、抗生剤耐性の発生によって持続的な使用が難しく、肝毒性がひどいものとして知られている。また、副腎皮質ホルモン剤（ステロイド）またはエストロゲンの使用は副作用を考慮して減少する趨勢にあり、一番多く使われるビタミンＡ誘導体（ｉｓｏｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）は皮脂抑制効果、毛嚢の角化及び閉鎖毛穴を正常化させ、毛嚢内のにきび菌及び炎症を抑制する効果が認められるが、口唇乾燥などの頻繁な副作用と奇形誘発の致命的な副作用も持っている。
【０００５】
したがって、このような問題点を克服するための研究として、皮膚に対する刺激が比較的少なく、人体に無害な天然物質を用いた食品や化粧品の防腐剤の開発及び医薬分野の抗菌剤開発などに対する研究が活発に行われている。そして、近年には外科的治療法、つまり面皰の押出し、化学的剥皮、物理的剥皮、レーザー剥皮、ヘリウム−ネオンレーザー療法、光線療法などの局所的治療法などが開発されて用いられている。近年には、にきびなどの簡単な皮膚科的治療に光力学治療（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ、ＰＤＴ）が行われている趨勢である。
【０００６】
光力学治療は多様な光敏感剤と光が細菌のＤＮＡ損傷をもたらし、細菌の細胞膜移動系統と酵素の非活性及び細胞成分の弱化による細胞膜損傷を引き起こして細菌の非活性に影響を及ぼすものとして知られている。さらに、光力学治療は、病原性微生物に由来した感染疾患の治療に対して抗菌スペクトルが広く、抗生剤耐性菌株を効果的に不活性化させ、突然変異の可能性が低く、光耐性細菌がないといういくつかの有利な特徴を持っている。したがって、光力学治療が感染性疾患の治療に実用的な代案となることができることを力強く裏付けている。
【０００７】
一方、クロリンｅ６は悪性腫瘍の光力学治療（ＰＤＴ；ＰｈｏｔｏＤｙｎａｍｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ）に用いられる光敏感剤としてよく知られている。クロリンｅ６は、腫瘍治療に使われる他の光敏感剤に比べ、悪性細胞に対する高選択性を持つとともに正常細胞には毒性を現さないものとして知られている。このように、クロリンｅ６は抗癌剤として有効であることが多くの文献［大韓民国特許登録第８０８，６３０号、同第８４１，９５９号］に報告されている［大韓民国特許登録第８０８，６３０号、同第８４１，９５９号］。しかし、現在まで何の文献にもクロリンｅ６がにきび菌に対する抗菌活性が優秀であることを報告したものない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、にきび治療、予防または改善のための薬剤組成物または化粧料組成物を提供することをその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題解決のために、本発明は、クロリンｅ６を活性成分として含むにきび治療及び予防用薬剤組成物を提供する。
【００１０】
また、本発明は、クロリンｅ６を活性成分として含むにきび予防及び改善用化粧料組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
大部分の市販のにきび治療剤は、ベンゾイルペルオキシド、テトラサイクリン、エリスロマイシン、クリンダマイシンのような合成された抗生剤で、副作用及び安全性に問題があるが、クロリンｅ６は天然物で、人体適合性に優れた効果がある。
【００１２】
また、クロリンｅ６は、抗菌、抗炎症、抗酸化などの活性を持つので、各種の皮膚疾患の治療、予防、改善のための活性成分として有用であり、特にきびに対して卓越した効能を持つ。
【００１３】
また、クロリンｅ６は、太陽光、 蛍光灯によって活性化する光敏感剤なので、クロリンｅ６を皮膚に塗布し、自然光を照射すれば、皮脂腺とにきび原因菌を破壊することによってにきび治療、予防、改善の効果を現す。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】クロリンｅ６のグラム陽性にきび菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）に対する抗菌効能を示したグラフである。
【００１５】
【図２】クロリンｅ６のグラム陽性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）に対する抗菌効能を示したグラフである。
【００１６】
【図３】クロリンｅ６のグラム陰性大膓菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）に対する抗菌効能を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明はクロリンｅ６を活性成分として含むにきび治療、予防または改善を目的とする薬剤組成物または化粧料組成物に関するものである。
【００１８】
本発明の組成物が活性成分として含むクロリンｅ６はクロロフィル（ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ）抽出物から分離精製された天然物であり、大韓民国特許登録第１，１８０，６９５号にはクロロフィル抽出物から高純度のクロリンｅ６を分離精製する方法が開示されてもいる。
【００１９】
１．薬剤組成物の製造
【００２０】
本発明の薬剤組成物は、活性成分として、クロリンｅ６に、薬剤製造分野で通常に使用する適切な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含ませ、液剤、懸濁剤、軟膏剤、貼付剤、スプレー剤などの外用剤に剤形化して使うことができる。本発明の組成物に含むことができる担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、カルシウムフォスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、未晶質セルロース、ポリビニールピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油を挙げることができる。薬剤に製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使って調製される。
【００２１】
本発明の薬剤組成物は経皮投与することができ、薬剤組成物の好適な投与量は患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間によって違うが、当業者によって適宜選択できる。しかし、好適な効果のため、本発明の組成物は、１日０．０００１〜１ｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１〜２００ｍｇ／ｋｇ投与することが良い。投与は、一日に一度投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。前記投与量は何の面でも本発明の範囲を限定するものではない。
【００２２】
２．化粧料組成物の製造
【００２３】
本発明の化粧料組成物は、水性、水性−アルコール性またはオイル性溶液、水中油または油中水または多重エマルション、水性またはオイル性ゲル、液体、ペースト性または固体無水生成物、小球体を使った水性相でのオイル分散物の形態であることができ、より好ましくはイオン性及び／又は非イオン性形態の脂質小胞体の形態であることができる。
【００２４】
本発明の化粧料組成物はある程度流体であることができ、白色または有色クリーム、軟膏、ミルクローション、漿液（ｓｅｒｕｍ）、エッセンス、ペーストまたはムースの見掛けを持つことができる。これは選択的にエアロゾル形態で皮膚に適用でき、固体形態、例えばスティック形態であることもできる。これは皮膚用ケア製品及び／又はメーキャップ製品として使われることもできる。
【００２５】
公知の方式のように、本発明による化粧料組成物はまた化粧分野で通常的な補助剤、例えば親水性または親脂性ゲル化剤、親水性または親脂性活性剤、保存剤、抗酸化剤、溶媒、芳香剤、充填剤、遮断剤、顔料、吸臭剤及び染料を含むことができる。これらの多様な補助剤の量は当該分野で通常に使われる量で、例えば化粧料組成物総重量に対して０．０００１〜１０重量％の範囲である。その性質によって、このような補助剤は、脂肪相、水性相、脂質小胞体及び／又はナノ粒子に導入されることができる。何の場合でも補助剤及びその割合は本発明による化粧料組成物の好適な性質に悪影響を及ぼさないように選択されるであろう。
【００２６】
このような本発明を下記の実施例に基づいてより詳細に説明するが、本発明がこれに限定されるものではない。
【００２７】
［実施例］クロリンｅ６の効能実験
【００２８】
実施例１．にきび菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ、ＫＣＴＣ３３１４）に対する抗菌力
【００２９】
にきび菌は毛穴の周りや毛嚢の漏斗部に主に棲息する菌で、皮脂を主栄養源として使用して皮脂の主成分であるトリグリセリドを分解することにより、脂肪酸とグリセロールに分解される。よって、この時に生成した遊離脂肪酸が皮膚にひどい刺激を与え、毛嚢壁や毛穴の周り細胞に炎症を引き起こすことになる。光がない暗条件で試料２００μＭを処理したとき、試料を処理しない対照群に比べ、クロリンｅ６は細菌成長が約５０％抑制され、５０％程度のにきび菌だけが成長することができた。一方、５−ＡＬＡの場合における濃度では細菌成長が約15％程度抑制され、約８５％の細菌だけが成長したことを確認することができた。にきび菌にハロゲンランプで３，０００Ｌｕｘの光を１時間照射した場合、１．５６２μＭのクロリンｅ６で細菌成長が約４５％抑制され、５５％程度のにきび菌だけが成長することができた。同一の光条件で、５−ＡＬＡは２００μＭの濃度でも細菌成長が約１０％程度だけ抑制されることを確認することができた。３０，０００Ｌｕｘの光を１時間照射した場合、１．５６２μＭの濃度のクロリンｅ６によっては細菌成長が約５５％抑制され、約４５％の細菌だけが成長したことを確認した。しかし、同一の光条件で、５−ＡＬＡは、２００μＭの濃度でも細菌成長が約２５％程度だけ抑制されることを確認した（図１）。
【００３０】
光条件である３，０００Ｌｕｘは快晴の日昼に窓側の光の明るさを、３０，０００Ｌｕｘは３時と５時の間の室外条件を示す。
【００３１】
実施例２．黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）に対する抗菌力
【００３２】
黄色ブドウ球菌は敗血症、内臓感染、皮膚感染及び関節感染に係わる菌で、汚染した手、目及び正常皮膚などに由来して炎症を引き起こすとか食中毒を起こすことができる。これに関連し、黄色ブドウ球菌は近年抗生剤耐性菌の出現によって制御が難しくなった菌として知られている。図２にはクロリンｅ６と５−ＡＬＡの黄色ブドウ球菌に対する抗菌効能の測定結果を示した。光がない暗条件で試料１００μＭの濃度であるとき、対照群に比べ、クロリンｅ６は黄色ブドウ球菌の成長を約３５％程度抑制し、同一濃度で５−ＡＬＡは細菌成長を約１０％程度抑制した。３，０００Ｌｕｘの光を１時間照射した場合、クロリンｅ６は１２．５μＭの濃度で細菌成長が約４５％抑制され、約５５％程度だけの細菌が成長することができた。一方、５−ＡＬＡは２００μＭの濃度で細菌成長が約２０％抑制されることを確認した。３０，０００Ｌｕｘの光を１時間照射した場合、３．１２５μＭの濃度のクロリンｅ６処理では細菌成長が約４０％程度抑制され、約６０％程度の細菌だけが成長することができた。一方、同一の光条件で５−ＡＬＡは２００μＭの濃度で細菌成長が約１０％抑制されることを確認することができた。
【００３３】
実施例３．大膓菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）に対する抗菌力
【００３４】
図３は大膓菌に対するクロリンｅ６の抗菌力効能を示したものである。大膓菌は腸内では病原性を現さないことが一般的であるが、腸外の部位に入れば、膀胱炎、腎盂炎、腹膜炎及び敗血症などを引き起こし、腸内でも特定の抗原型大膓菌は伝染性下痢を引き起こす場合がある。
【００３５】
光がない暗条件では、試料８００μＭの濃度で、クロリンｅ６は、対照群に比べ、細菌成長が約４０％抑制されたことを確認することができたが、同一の５−ＡＬＡは何の濃度でも細菌成長抑制の効能を現さなかった。３，０００Ｌｕｘの光条件で、８００μＭのクロリンｅ６処理では、細菌成長が約３５％抑制されたことを確認することができたが、同一の光条件で、５−ＡＬＡは何の濃度でも細菌成長抑制の効能を現さなかった。３０，０００Ｌｕｘの光条件では、８００μＭのクロリンｅ６を１時間処理した場合、細菌成長が約２０％抑制されることを確認することができ、同一の光条件で、５−ＡＬＡは大膓菌に対して何の抗菌効能を現さなかった。
【００３６】
実施例４．クロリンｅ６による皮脂腺細胞内脂肪の蓄積量変化測定
【００３７】
人の皮脂腺細胞株（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｓｅｂｏｃｙｔｅｓ）であるＳＺ９５細胞はＣＯ2培養器（３７℃、５％ＣＯ2）で１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ ＲＢＬ Ｃｏ．）が添加された培地（ｓｅｂｏｃｙｔｅ ｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ；Ｂｉｏｃｈｒｏｍ Ａｇ Ｃｏ． Ｇｅｒｍａｎｙ）で培養した。
【００３８】
ＳＺ９５細胞をチャンバースライドに分株して培養した後、テストステロンで刺激を与えた後、クロリンｅ６を濃度別に処理して培養した。培養終了後、Ｏｉｌ ｒｅｄ染色を実施し、ハリスヘマトキシリン（Ｈａｒｒｉｓ ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）を染色し、光学顕微鏡でＳＺ９５細胞内脂肪蓄積（Ｌｉｐｉｄ ｄｒｏｐｌｅｔ）を観察した。
【００３９】
ＳＺ９５細胞を１００Φの皿に１×１０5ｃｅｌｌｓを分株し、４８時間培養した後、５日間ｓｅｂｏｃｙｔｅ ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍに試料を入れ、５日間培養した。培養した細胞を分離して収集した後、溶液緩衝液（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ；ＥＤＴＡ １０μＬ、１００ｍＭ ＳＰＢ溶液、ＰＭＳＦ １μＬ、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １０μＬ）及びソニケーションで細胞を溶解し、タンパク質を定量した。細胞溶解液にクロロホルム：メタノール（２：１）溶液を添加し、２，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して下層液を取った。遠心分離後に残った溶液に２次にクロロホルム：メタノール（２：１）溶液を添加し、前記と同様な方法で下層液を分離し、窒素ガスで濃縮して脂質を抽出した。
【００４０】
抽出した脂質（ｌｉｐｉｄ）にエタノール３００μＬを入れて溶かした後、Ｈ2ＳＯ4に５０μＬの細胞脂質を入れ、１０分間沸かした後、４℃で冷却させてケトン体（ｋｅｔｏｎ ｂｏｄｙ）を形成した。ホスホ−バニリン（Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｖａｎｉｌｌｉｎ）試薬６ｍＬに冷却させた試料を１００μＬずつ入れ、３７℃で１５分間処理し、５４０ｎｍの波長で吸光度を測定した。標準値は１〜５０ｍｇ／ｍＬにした。
【００４１】
ＳＺ９５細胞に対するクロリンｅ６の細胞毒性効果を調べた結果、１０ｕｇ／ｍＬ及び２５ｕｇ／ｍＬの濃度でそれぞれ処理し、５日間培養した後、ＭＴＴ法で細胞生存率を調査した。その結果、各処理濃度でのクロリンｅ６処理群は、ＳＺ９５細胞の生存率がそれぞれ対照群の１０１．３（±６．３）、１０２．１（±２．２）であり、クロリンｅ６処理群はＳＺ９５細胞の生存率に影響を及ぼさないことを確認した。また、クロリンｅ６による細胞死滅現象が起きるのかを調べるために形態学的変化を観察した結果、１０ｕｇ／ｍＬ及び２５ｕｇ／ｍＬ処理群でＳＺ９５細胞の密度及び形態が対照群と類似した。
【００４２】
ＳＺ９５細胞の脂質合成に及ぶ影響を調査するために、クロリンｅ６ １０ｕｇ／ｍＬ及び２５ｕｇ／ｍＬを５日間処理した後、総脂質の量を測定した。ＳＺ９５細胞は総脂質が２４．４（±０．３）ｍｇ／ｍＬ、２０．２（±０．２）ｍｇ／ｍＬで、対照群に比べて有意に減少した。
【００４３】
一方、Ｏｉｌ ｒｅｄ染色で細胞内脂肪小滴の変化を観察した結果、ＳＺ９５細胞は細胞質内に多数の脂肪小滴が観察され、典型的な皮脂腺細胞株の特徴を示した。毛嚢の角質化細胞株であるＨａＣａＴ細胞株では脂肪小滴が観察されなかった。しかし、クロリンｅ６処理群は正常ＳＺ９５細胞に比べて脂肪小滴がめっきり減少することを観察した。
【００４４】
実施例５．クロリンｅ６による皮脂腺細胞内コレステロール含量変化測定
【００４５】
抽出した脂質（ｌｉｐｉｄ）にエタノール３００μＬを入れて溶かした後、コレステロールキット（ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｋｉｔ）を用いて皮脂腺細胞内コレステロールを測定した。１ｍＬの酵素試液に１００μＬの試料を添加混合し、３７℃で５分間培養した後、５００ｎｍの波長で吸光度を測定した。標準液のコレステロールは３ｍＬの酵素試液に２０μＬの標準液を入れて３ｍｇ／ｍＬ値にした。
【００４６】
総コレステロール（ｍｇ／ｍｌ）＝（検体の吸光度／標準液の吸光度）×標準液濃度
【００４７】
クロリンｅ６の脂質のパターンに及ぶ影響を分析するためにコレステロールの変化を調査した結果、クロリンｅ６処理群１０ｕｇ／ｍＬ及び２５ｕｇ／ｍＬはそれぞれ０．７８（±０．０１）ｍｇ／ｍｌ、０．７３（±０．０２）ｍｇ／ｍｌであった。前記結果によれば、クロリンｅ６処理群は、対照群に比べ、コレステロールの含量が減少した。
【００４８】
実施例６．クロリンｅ６による皮脂腺細胞内トリグリセリド含量変化測定
【００４９】
抽出した脂質（ｌｉｐｉｄ）にエタノール３００μＬを入れて溶かした後、トリグリセリドキット（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ ｋｉｔ）を用いて皮脂腺細胞内トリグリセリドを測定した。１ｍＬの酵素試液に１００μＬの試料を添加混合し、３７℃で５分間培養した後、５４６ｎｍの波長で吸光度を測定した。標準液のトリグリセリドは、３ｍＬの酵素試液に２０μＬの標準液を入れて３ｍｇ／ｍＬ値にした。
【００５０】
トリグリセリド（ｍｇ／ｍＬ）＝（検体の吸光度／標準液の吸光度）×標準液濃度
【００５１】
クロリンｅ６が生成しつつある脂質のパターンに及ぶ影響を分析するためにトリグリセリドの変化を調査した結果、クロリンｅ６処理群１０ｕｇ／ｍＬ、２５ｕｇ／ｍＬはそれぞれ０．６９（±０．０１）ｍｇ／ｍｌ、０．６２（±０．０１）ｍｇ／ｍｌで、対照群に比べて減少した。
【００５２】
［薬剤の製造］
【００５３】
薬剤１．エマルション剤の製造
【００５４】
クロリンｅ６０．５ｇ、ステアリルアルコール５ｇ、ボリソルベート−６０ ０．８ｇ、シクロメチコン４ｇ、ホホバ油２ｇ、メチルパラベン０．２ｇ、１，３−ブチレングリコール８ｇ、カルボマー０．１５ｇ、キサンタンガム０．０５ｇ、ポリアクリルアミド／Ｃ１３−１４イソパラフィン／ラウレス−７１．２ｇ、イミダゾリジニルウレア０．２ｇ、トリエタノールアミン０．１５ｇ、香料０．１ｇ、水適量を秤量した。前記組成成分の中で油相原料を油相補助タンクで７５℃に加熱して溶解した。前記組成成分の中で水相原料を乳化タンクで７５℃に加熱して溶解した。乳化タンクに油相原料を真空減圧下で注入し、乳化器（Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）３５００ｒｐｍ、ペダルミキサー（Ｐｅｄａｌ Ｍｉｘｅｒ）２５ｒｐｍ、７５℃温度の条件で５分間乳化した。真空脱泡してから冷却してエマルション製剤を得た。
【００５５】
薬剤２．貼付剤の製造
【００５６】
グリセリン１５ｇ、ポリアリル酸２ｇ、アクリレート共重合体２ｇ、水酸化アンモニウム０．４ｇ、ジソジウム−ＥＤＴＡ ０．０５ｇ、酒石酸０．２ｇを溶解タンクに入れ、室温で均質撹拌して粘性液を製造した。メチルパラベン０．２ｇ、エタノール１ｇ、グリチルリチン酸2カリウム０．１ｇ、香料０．０５ｇを室温で溶解して前記溶解タンクに注入した後、均質撹拌した。クロリンｅ６ ０．５ｇ、プロピレングリコール５ｇ、精製水を６０℃で溶解した後、前記溶解タンクに少量ずつ注入することで、貼付用ゲルを製造した。
【００５７】
前記製造された貼付用ゲルをアプリケーターキャップを持つ適切な被覆器でシリコン化したポリエステルフィルム上に被覆した後、ポリエチレンフィルムを積層した。そして、紙、低密度ポリエチレン、アルミニウムからなったパウチ積層フィルムに入れることで、貼付剤を製造した。
【００５８】
薬剤３．液剤の製造
【００５９】
クロリンｅ６ １００ｍｇ、異性化糖１０ｇ、マンニトール５ｇ、精製水適量を通常の液剤の製造方法に従って精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させ、レモン香を適量加えた後、前記成分を混合した後、精製水を加えて全体を１００ｍｌに調節した後、滅菌することで、液剤を製造した。
【００６０】
［化粧料の製造］
【００６１】
化粧料１．化粧水の製造
【００６２】
クロリンｅ６ ３０ｍｇ、ポリオキシエチレン硬化ひまし油５ｍｇ、グリシン３０ｍｇ、グリチルリチン酸2カリウム１ｍｇ、１，３−ブチレングリコール３０ｍｇ、ヒアルロン酸ナトリウム１ｍｇ、エタノール５０ｍｇ、硫酸化剤１ｍｇ、トリエタノールアミン１ｍｇ、ＥＤＴＡ １ｍｇ、精製水適量を混合することで、化粧水を製造した。
【００６３】
化粧料２．ローションの製造
【００６４】
クロリンｅ６ １５ｍｇ、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩１００ｍｇ、水溶性コラーゲン（１％水溶液）１００ｍｇ、クエン酸ナトリウム１０ｍｇ、クエン酸５ｍｇ、１，３−ブチレングリコール３００ｍｇ、精製水適量を混合することで、ローションを製造した。
【００６５】
化粧料３．クリームの製造
【００６６】
クロリンｅ６ １２ｍｇ、ポリエチレングリコールモノステアレート２００ｍｇ、自己乳化型グリセリンモノステアレート５００ｍｇ、セチルアルコール４００ｍｇ、スクアレン６００ｍｇ、トリ２−エチルヘキサングリセリル６００ｍｇ、スフィンゴ糖脂質１００ｍｇ、１，３−ブチレングリコール７００ｍｇ、精製水適量を混合することで、クリームを製造した。
【図１】
2016525540.tif 000003
【図２】
2016525540.tif 000004
【図３】
2016525540.tif 000005
【国際調査報告】
2016525540.tif 000006
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