(57)【要約】  ジアミノフェノチアジニウム化合物、特にメチレンブルーの精製方法について、説明する。この方法は、合成されたあるいは市販のジアミノフェノチアジニウム化合物を還元して還元された当該化合物のコンプレックスを生成する、簡便で効果的な精製を提供する。それから、これは、元の化合物より直接的な方法で、例えば、酸化してジアミノフェノチアジニウム化合物に戻す前に再結晶化することによって、精製することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジアミノフェノチアジニウム化合物を還元剤と接触させて、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを生成する工程（i）と、
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを精製する工程（ii）と、
精製されプロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを酸化剤と接触させて、前記ジアミノフェノチアジニウム化合物に戻す工程（iii）とを含み、
それによって前記ジアミノフェノチアジニウム化合物を精製する、
ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製方法。
【請求項２】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物を提供するために後工程で精製および酸化されるプロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスが、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである、請求項１の方法。
【請求項３】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物が式Vの化合物である、請求項１または請求項２の方法。
【化１】
2016528237.tif 000012
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６アルケニルから選ばれる。なお、アルキル基およびアルケニル基はそれぞれ、ヒドロキシ、ハロゲン、またはアルコキシで置換されていてもよい。
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ独立に、水素、ニトロ、ハロゲン、ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６アルケニルから選ばれる。
Ｘは、アニオン性の対イオンである。
【請求項４】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物が、メチレンブルー、メチレングリーン、アズールＡ、アズールＢ、およびアズールＣからなる群より選ばれた、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項５】
メチレンブルーを還元剤と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスを生成する工程（i）と、
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスを精製する工程（ii）と、
精製され安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーを酸化剤と接触させて、メチレンブルーを生成する工程（iii）とを含み、
それによって前記メチレンブルーを精製する、
メチレンブルーの精製方法。
【請求項６】
前記還元剤が金属を含まない還元剤である、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項７】
前記還元剤が、アスコルビン酸、亜ジチオン酸ナトリウム、水素、ギ酸、シュウ酸、ジチオスレイトール、ナトリウムアマルガム、水素化ホウ素ナトリウム、ヒドラジン、亜リン酸エステル、次亜リン酸塩、および亜リン酸からなる群より選ばれた、請求項６の方法。
【請求項８】
前記還元剤がアスコルビン酸である、請求項７の方法。
【請求項９】
前記アスコルビン酸がＬ−アスコルビン酸である、請求項８の方法。
【請求項１０】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーは、酸性ｐＨで前記還元剤と接触させる、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項１１】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーは、ｐＨ３未満で前記還元剤と接触させる、請求項１０の方法。
【請求項１２】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーは、ｐＨ１未満で前記還元剤と接触させる、請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記還元剤が一塩基または二塩基の無機酸から選ばれた酸で酸性化された溶液である、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項１４】
前記酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸、フッ酸、臭化水素酸、および過塩素酸からなる群より選ばれた、請求項１３の方法。
【請求項１５】
前記無機酸が塩酸または硫酸である、請求項１４の方法。
【請求項１６】
前記還元剤との接触は有機溶媒中で行う、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項１７】
前記有機溶媒がＣ１−Ｃ８のアルコールである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスまたは安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスの精製は、クロマトグラフィ、イオン交換、ろ過、洗浄、および再結晶化からなる群より選ばれた方法による、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項１９】
前記精製は再結晶化による、請求項１８の方法。
【請求項２０】
前記再結晶化は、水、アルコール、およびエーテルからなる群より選ばれた溶媒から行う、請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記酸化剤が金属を含まない酸化剤である、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項２２】
前記酸化剤が、酸素、オゾン、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、過酸化水素、硝酸、硝酸塩化合物、リン酸、ペルオキソ二硫酸、過硫酸、硫酸、亜硫酸、亜塩素酸塩、塩素酸塩、過塩素酸塩、および他の類似のハロゲン含有化合物、次亜塩素酸塩、および他の次亜ハロゲン酸塩化合物、過マンガン酸塩、亜酸化窒素、およびキノンからなる群より選ばれた、請求項２１の方法。
【請求項２３】
前記酸化剤が酸素およびキノンからなる群より選ばれた、請求項２２の方法。
【請求項２４】
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスが塩または他のイオンコンプレックスである、請求項５の方法。
【請求項２５】
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーがロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである、請求項２４の方法。
【請求項２６】
工程（i）より前に、前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーを酸性溶液から再結晶化する工程をさらに含む、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項２７】
工程（iii）より後に、精製された前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーを酸性溶液から再結晶化する工程をさらに含む、前記請求項のうちいずれか１項の方法。
【請求項２８】
プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックス。
【請求項２９】
前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスが、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである、請求項２８のコンプレックス。
【請求項３０】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスが、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである、請求項２８のコンプレックス。
【請求項３１】
ジアミノフェノチアジニウム化合物をアスコルビン酸と接触させて、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスを生成する方法により製造された、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックス。
【請求項３２】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスが、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスである、請求項３１のコンプレックス。
【請求項３３】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスが、メチレンブルーをアスコルビン酸と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスを生成する方法により製造された、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである、請求項３１のコンプレックス。
【請求項３４】
ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製における、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスの使用。
【請求項３５】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスが、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである、請求項３４の使用。
【請求項３６】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスが、メチレンブルーの精製に使用される安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスである、請求項３４の使用。
【請求項３７】
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスが、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルー塩である、請求項３１の使用。
【請求項３８】
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスが、請求項３０の安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである、請求項３７の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製、およびこの精製方法を通じて生成された新規なジアミノフェノチアジニウム化合物に関する。本発明は特に、これに限定されるものではないが、新規な中間コンプレックスを用いたメチレンブルーおよび近縁関連化合物の精製に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここで、背景技術に関するいずれの文献も、オーストラリアまたは他国においてそのような技術が一般的な知識であることを認めるものとして解釈されるものではない。
【０００３】
ジアミノフェノチアジニウム染料は、よく知られている。特に、医療用の染料または解毒剤であり、「メチレンブルー」として知られるメチルチオニニウムクロライド（３,７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン−５−イリウムクロライド）は、比較的近年、その歴史的な用途以外の医学的用途にもその利用が広がってきている。この染料に対する他の一般的な名称には、テトラメチルチオニンクロライド、Ｃ．Ｉ．ソルベントブルー、スイスブルー、Ｃ．Ｉ．ベーシックブルー８、アニリンバイオレット、およびウロレンブルー等がある。これは、以下の構造（式I）を有するが、当業者であれば、ある種の共鳴構造および互変異性の形態の存在を認識するであろう。
【化１】
2016528237.tif 000002
【０００４】
メチレンブルーは、歴史的に長く、種々の用途に用いられている。工業的な用途としては、着色剤、酸化還元指示薬、染料、光電子像における免疫学的または微生物学的な染料、環境金属捕捉剤、皮染料、および防腐剤としての用途等があった。
【０００５】
臨床分野において、それには２つの主な確立された用途がある。第１に、メトヘモグロビン血症の解毒剤、時としてシアン化物および一酸化炭素の中毒の解毒剤としての用途、第２に、例えばバレット食道における細胞成形異常の検査、内視鏡ポリープ切除、卵管開存、および瘻検出等の広く種々の臨床に用いられる色彩診断剤または色素内視鏡剤として用途である。
【０００６】
１８９１年、Paul Ehrlichは、メチレンブルーがマラリア治療薬であることを見出した。近年、その用途は、タウオパシー（または神経変性疾患）、ウィルス感染、および躁うつ病の治療、リンパ節およびリンパドレナージュのトレーシングを含む範囲に広がるであろうことが提唱されてきた。歯科医術において、その用途には、歯の微小クラックの発見および慢性歯周病治療用の光線力学的染料が含まれる。メチレンブルーは、天然と合成の骨の識別のために骨セメントに添加される。それはまた、骨セメントの硬化速度を効果的に増加させる促進剤として使用されてきた。人以外の用途でも、水族館の魚の「鰭腐敗病」から農場の犬のキツネ用の毒餌の偶発的な摂取によって引き起こされるメトヘモグロビン血症の治療まで広範囲に使用できる。
【０００７】
最初のメチレンブルーの合成は、１８７７年にドイツで開発され（ドイツ特許第１８８６号明細書（Badische Anilin und Soda Fabrik））、それ以来、いくつかの他の方法論が開示または特許化されてきた。いずれの方法論においても、一般的な手法では、鉄、マンガン、銅、クロム（クロム酸塩として）、アルミニウム、および亜鉛の塩（または金属自身）を含むある種の金属触媒が用いられ、触媒からの金属イオン汚染の可能性が残っている。さらに、金属汚染は、合成プロセスで使用される金属設備から生じる可能性もある。
【０００８】
金属残渣に加えて、メチレンブルーはそれ自身が、製造中の３つの他の化学構造的に類似の有機物質の生成または転換という化学的性質を有している。これらは、メチレンブルーの工業的用途への影響は小さく、また同様の細胞学的染色目的に使用されるかもしれないが、臨床用途において、これらは望まれない含有物として考慮され得、特に、米国薬局方（ＵＳＰ）および英国／ヨーロッパ薬局方（ＢＰ／ＥＰ）では汚染物として挙げられている。
【０００９】
これらの有機汚染物は「アズール」と総称され、メチレンブルーの環構造の３位および５位にある２つのジメチルアミノ基の脱メチル化によって生じる。これらは具体的には、アズールＢ（式II）として知られるトリメチル誘導体、アズールＡ（式III）として知られるジメチル誘導体、およびアズールＣ（式IV）として知られるモノメチル誘導体である。
【化２】
2016528237.tif 000003
【００１０】
アズールのメチレンブルーに対する化学構造的類似のために、これらの「汚染物」は、標準的な手法による混合物からの分離または除去が難しい。また、メチレンブルーの合成中のその発生を低減することも難しいとされてきた。にもかかわらず、合成プロセスにおけるアズールの除去または低減のために、最終メチレンブルー生成物自身の再結晶化等の多くの手法による再精製を含む多くの試みがなされてきた。Marshall and Lewis（１９７５年）は、四塩化炭素を用いた高ｐＨ９.５での溶媒抽出およびそれに続く再結晶化による市販のメチレンブルーおよびアズールＢの精製について開示している。彼らはまた、低温度低ｐＨでの結晶化による金属イオン除去について開示している。Lohr et al（１９７５年）は、カラムイオンクロマトグラフィを用いた精製方法について開示しているが、この方法は工業スケールでは実用的ではない。
【００１１】
近年、２００５年に、Storey et al（国際公開第２００６／０３２８７９号）は、制御されたｐＨおよび温度条件下の段階的プロセスにおいて、触媒としていくつかの金属イオン（クロム酸塩（IV）、銅（II）硫酸塩、および鉄（II）酸化物を含む）を用いる新規なメチレンブルーおよび誘導体の製造と精製の方法を開示している。この方法では、続いて、ジクロロメタン、１,２−ジクロロエタン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエーテル、クロロベンゼン、石油エーテル、ベンゼン、トルエン、および酢酸メチル等の有機溶媒を用いた洗浄／溶媒抽出を行う。この方法の最終段階は主に、ジメチルジチオカルバメート（ＤＴ）、硫化物、塩化ナトリウム等の塩化物塩、炭酸ナトリウム等の炭酸塩の添加、それに続く、再度の有機溶媒洗浄とＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）の添加、それに続く再度の有機溶媒洗浄と、ジクロロメタンまたはテトラヒドラフラン等の有機溶媒の存在下、低ｐＨでの再結晶化と洗浄を含む。
【００１２】
さらに、同グループ（国際公開第２００８／００７０７４号）は、Ｎ１０位のアシル誘導体化（または飽和脂肪族誘導体を含むいくつかの他の有機誘導体）、精製（活性炭等の作用剤を用いた）、および酸化による元のメチレンブルーへの転換によるメチレンブルーの精製を開示している。この文献はまた、同一方法によるメチレンブルー前駆体のアシル化と精製の概念を含んでいる。
【００１３】
いくつかの同様の文献の著者は、金属および有機残渣の除去は、アズールとメチレンブルーとの間の相違を増加させて金属残渣除去を容易にする、製造後のさらなるメチレンブルーの誘導体化によって可能となるであろうと主張してきた。１９５９年に、Buc et al （米国特許第２,９０９,５２０号明細書）は、アシル化されたロイコメチレンブルー、特にベンゾイルロイコメチレンブルーの製造方法について開示している。
【００１４】
１９６６年に、Gensler et alは、Ｎ−ベンゾイルロイコメチレンブルーのメチレンブルーへの簡便な酸化再転換を開示している。実際、自己転換に必要なことは、酸素の存在だけである。
【００１５】
Feraud et al（国際公開第２００８／００６９７９号）はメチレンブルーおよび他の類似化合物の工業的な精製方を開示しており、この方法では、ジアミノフェノチアジニウム化合物のＮ１０位におけるＮ−Ｃ結合生成反応によるメチレンブルーの大きな有機誘導体の生成によって、アズールと金属の双方のレベルが低減されると述べられている。
【００１６】
このメチレンブルーのコンプレックス多段誘導体化（または関連誘導体）は、Ｎ位の還元で始まり、ある種の誘導体を選択肢としたときに結果的に生じるアミンを用いた反応に続く。彼らはまた、誘導有機材料の金属を捕捉する支持体を通したろ過による金属イオンレベルの低減、適切な溶媒からの結晶化、および他の公知方法を含む有機誘導体コンプレックスの精製のための標準的な方法および／または概念を開示している。彼らは、この誘導体中のアズールのレベルを低減するために、溶媒洗浄または再結晶化を用いている。ここでも、最終プロセスは、キノン、硝酸、過塩素酸、ヨウ素、塩酸、硫酸、過酸化水素、またはＵＶ光、好ましくは２,３ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）を用いたメチレンブルーへの再転換または酸化である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
要約すれば、そのような歴史的な合成アプローチを考慮したとき、メチレンブルーサンプル中の金属および／または有機不純物のレベルは予期されないものではなく、これらの潜在的残渣が使用にあまり影響のない多くの工業的および細胞学的な目的に使用される工業製品では容認されるかもしれない。しかしながら、近年、薬学的な目的に使用されるメチレンブルーではこれらの不純物に対してより低いレベルが要求されてきており、効率的で簡便で費用効果的な精製方法において不純物を除去することが必要となってきている。
【００１８】
本発明の１つの目的は、上記の１つまたはそれ以上の欠点を克服または改善する、あるいは、少なくとも有用な代替のまたはより簡便な方法論を提供する精製方法および中間物を提供することである。
【００１９】
本発明の他の好ましい目的は、以下の説明から明らかとなろう。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明の第１の態様によれば、
ジアミノフェノチアジニウム化合物を還元剤と接触させて、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを生成する工程（i）と、
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを精製する工程（ii）と、
精製されプロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを酸化剤と接触させて、前記ジアミノフェノチアジニウム化合物に戻す工程（iii）とを含み、
それによって前記ジアミノフェノチアジニウム化合物を精製する、
ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製方法が提供される。
【００２１】
前記ジアミノフェノチアジニウム化合物は、メチレンブルー、アズールＡ、アズールＢ、およびアズールＣからなる群より選ばれることができる。
【００２２】
一実施形態において、還元剤との接触により、後工程で精製および酸化されてジアミノフェノチアジニウム化合物に戻される、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを生成することができる。
【００２３】
第１の態様の好ましい一実施形態において、
メチレンブルーを還元剤と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスを生成する工程（i）と、
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスを精製する工程（ii）と、
精製され安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーを酸化剤と接触させて、メチレンブルーを生成する工程（iii）とを含み、
それによって前記メチレンブルーを精製する、
メチレンブルーの精製方法が提供される。
【００２４】
第１の態様およびその好ましい実施形態における還元剤は、金属を含まない還元剤である。
【００２５】
一実施形態において、第１の態様およびその好ましい実施形態における還元剤は、アスコルビン酸、亜ジチオン酸ナトリウム、水素、ギ酸、シュウ酸、ジチオスレイトール、ナトリウムアマルガム、水素化ホウ素ナトリウム、ヒドラジン、亜リン酸エステル、次亜リン酸塩、および亜リン酸からなる群より選ばれる。
【００２６】
好適には、第１の態様およびその好ましい実施形態における還元剤は、アスコルビン酸である。好ましくは、Ｌ−アスコルビン酸である。
【００２７】
好ましくは、前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーは、酸性ｐＨで前記還元剤と接触させる。より好ましくは、前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーは、ｐＨ３未満で前記還元剤と接触させる。さらにより好ましくは、前記ジアミノフェノチアジニウム化合物または前記メチレンブルーは、ｐＨ１未満で前記還元剤と接触させる。
【００２８】
好ましくは、前記還元剤は一塩基または二塩基の無機酸から選ばれた酸で酸性化された溶液である。
【００２９】
好適には、前記酸は、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸、フッ酸、臭化水素酸、および過塩素酸からなる群より選ばれる。
【００３０】
一実施形態において、前記無機酸は塩酸または硫酸である。
【００３１】
好適には、前記無機酸は塩酸である。
【００３２】
好ましくは、第１の態様およびその好ましい実施形態における前記還元剤との接触は有機溶媒中で行う。好適には、前記有機溶媒はＣ１−Ｃ８のアルコールまたはＣ１−Ｃ４のアルコールである。好ましくは、前記アルコールはメタノールまたはエタノールである。
【００３３】
プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックス（一実施形態において、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックス）または安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスの精製は、好ましくは再結晶化による。
【００３４】
一実施形態において、前記再結晶化は、水、アルコール、およびエーテルからなる群より選ばれた溶媒から行う。
【００３５】
再結晶溶媒の少なくとも１つがアルコールであるとき、それは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、およびｉｓｏ−プロパノールを含むＣ１−Ｃ１０アルコールからなる群より選ばれることができる。
【００３６】
再結晶溶媒の少なくとも１つがエーテルであるとき、それは、テトラヒドラフランまたはジエチルエーテルであることができる。
【００３７】
好適には、第１の態様およびその好ましい実施形態における前記酸化剤は金属を含まない酸化剤である。
【００３８】
第１の態様およびその好ましい実施形態における好ましい酸化剤は、酸素、オゾン、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、過酸化水素、硝酸、硝酸塩化合物、リン酸、ペルオキソ二硫酸、過硫酸、硫酸、亜硫酸、亜塩素酸塩、塩素酸塩、過塩素酸塩、および他の類似のハロゲン含有化合物、次亜塩素酸塩、および他の次亜ハロゲン酸塩化合物、過マンガン酸塩、亜酸化窒素、およびキノンからなる群より選ばれることができる。
【００３９】
一実施形態において、第１の態様およびその好ましい実施形態における好ましい酸化剤は、酸素およびキノンからなる群より選ばれる。
【００４０】
第１の態様およびその好ましい実施形態における酸化剤は、好ましくは２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、または、より好ましくは、ｐ−ベンゾキノンである。
【００４１】
安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスは、塩または他のイオンコンプレックスであることができる。
【００４２】
一実施形態において、安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーは、ロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスであることができる。
【００４３】
本発明の第２の態様によれば、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスが提供される。
【００４４】
第２の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【００４５】
一実施形態において、プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである。
【００４６】
本発明の第３の態様は、ジアミノフェノチアジニウム化合物をアスコルビン酸と接触させて、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスを生成する方法により製造された、第２の態様のプロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【００４７】
第３の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスは、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【００４８】
第３の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスは、メチレンブルーをアスコルビン酸と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスを生成する方法により製造された、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【００４９】
第３の態様の方法における種々の条件は、第１の態様で述べたのと同様とすることができる。
【００５０】
本発明の第４の態様によれば、ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製における、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスの使用が提供される。
【００５１】
一実施形態において、プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである。
【００５２】
第４の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化された前記ジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、メチレンブルーの精製に使用される安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスである。
【００５３】
一実施形態において、安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスは、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルー塩である。
【００５４】
一実施形態において、安定化されプロトン化された前記ロイコメチレンブルーコンプレックスは、第２の態様の安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【００５５】
上記の個々の態様において、本発明の種々の特徴と実施形態は、必要な変更を加えた他の態様への適宜適用について言及した。したがって、一態様で規定される特徴は、他の態様で規定される特徴と適宜組み合わせることができる。
【発明の効果】
【００５６】
さらに、本発明の特徴と利点は、以下の詳細説明から明らかとなろう。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
本発明は、少なくとも部分的には、合成されたまたは市販のサンプルを還元して、還元され安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックス（これは塩または他のイオンコンプレックスであり得る）を生成し、次いで例えば再結晶化によって精製し、次いでメチレンブルーに酸化して戻すことによって、メチレンブルーが簡便かつ効果的に精製できるという驚くべき所見を根拠としている。アズールタイプの不純物と金属汚染物の双方を除去するための精製方法としてのメチレンブルー自身の結晶化は、製薬グレード材料に近いレベルに到達することに効果的でないことが示されてきた。したがって、還元されたロイコメチレンブルーにはアズールに近い類似構造が依然として残っているにもかかわらず、その再結晶化がアズールと金属汚染物の双方からロイコメチレンブルーを分離する効果的な手段であることは特筆すべきことである。続く簡便な酸化工程によって、高度に精製されたメチレンブルーが提供される。
【００５８】
特に明記しない限り、ここで使用されるすべての技術的科学的用語は、当業者による一般的理解と同様の意味を有している。
【００５９】
ここで使用される用語「ロイコメチレンブルー」（「ＬＭＢ」とも言う。）は、公知のＮ−１０プロトン化され還元された形態のメチレンブルーを示し、これはまたＮ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’,−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３,７−ジアミンとも言い、化学式がＣ１６Ｈ１９Ｎ３Ｓであり、ＣＡＳ番号が６１３−１１−６であり、以下の構造で示される。
【化３】
2016528237.tif 000004
【００６０】
ここで使用される用語「コンプレックス（complex）」および「コンプレックス化された」は通常、イオンまたは電気的中性分子と化学結合したロイコメチレンブルーを示す。このコンプレックスは、塩であってもよい。特定の理論に束縛されるものではないが、好ましい実施形態において、このコンプレックスは、アスコルビン酸と結合した、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーであり、これは安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスとも言う。安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスの特性は、ｐＨおよびイオン強度を含む、還元工程において塩形成に影響を与えるプロセス条件に影響を受けるかもしれない。
【００６１】
ここで使用される用語「再結晶化（recrystallisation）」、「再結晶化すること（recrystallising）」、「結晶化（crystallisation）」、および「結晶化すること（crystallising）」は、メチレンブルー等の物質、特に本発明の方法の還元工程を通じて生成されるロイコメチレンブルーコンプレックスの溶解とそれに続く溶液からの結晶化の方法を示す。
【００６２】
ここでは、用語「ジアミノフェノチアジニウム化合物」およびジアミノフェノチアジニウム化合物の好ましい実施形態である「メチレンブルー」は、精製方法の成分としてほとんど同じ意味で使用されるかもしれない。
【００６３】
本発明の第１の態様によれば、
ジアミノフェノチアジニウム化合物を還元剤と接触させて、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを生成する工程（i）と、
プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを精製する工程（ii）と、
精製されプロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを酸化剤と接触させて、ジアミノフェノチアジニウム化合物に戻す工程（iii）とを含み、
それによってジアミノフェノチアジニウム化合物を精製する、
ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製方法が提供される。
【００６４】
ジアミノフェノチアジニウム化合物は、メチレンブルー、アズールＡ、アズールＢ、およびアズールＣからなる群より選ばれることができる。
【００６５】
一実施形態において、還元剤との接触により、後工程で精製および酸化されてジアミノフェノチアジニウム化合物に戻される、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスを生成することができる。これは、この化合物がメチレンブルーであるときの場合であり、還元剤との接触でＮ−１０窒素のプロトン化が可能な置換基を有するジアミノフェノチアジニウム化合物である場合もある。
【００６６】
精製されたジアミノフェノチアジニウム化合物と望ましい最終化合物であるそれとが異なっているかもしれないことが認識されるであろう。例えば、アズールＢ等のジアミノフェノチアジニウム化合物を精製し、これをメチル化によってメチレンブルーに転換していったん精製を完了することが望ましいかもしれない。したがって、第１の態様では、続く工程（iii）、工程（i）と（ii）の間、または工程（ii）と（iii）の間のいずれかにおける異なるジアミノフェノチアジニウム化合物の間の転換が明白に考慮される。
【００６７】
したがって、一実施形態において、この方法はさらに、ジアミノフェノチアジニウム化合物を第２の関連ジアミノフェノチアジニウム化合物に転換する工程を含むことができる。
【００６８】
一実施形態において、第１の態様のジアミノフェノチアジニウム化合物は、以下の式Vの化合物である。
【化４】
2016528237.tif 000005
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６アルケニルから選ばれる。なお、アルキル基およびアルケニル基はそれぞれ、ヒドロキシ、ハロゲン、またはアルコキシで置換されていてもよい。
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ独立に、水素、ニトロ、ハロゲン、ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６アルケニルから選ばれる。
Ｘは、アニオン性の対イオンである。
【００６９】
一実施形態において、アルキル基またはアルケニル基は、置換される場合、塩素、フッ素、臭素、またはヨウ素で置換される。
【００７０】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ独立に、メチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピルおよびｉｓｏ−プロピルを含む）、ブチル（ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルを含む）、ペンチル、ｉｓｏ−アミル、およびヘキシルから選ばれる。
【００７１】
好ましくは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ独立に、水素、ニトロ、ハロアルキル、およびＣ１−Ｃ４アルキルから選ばれる。
【００７２】
好ましくは、Ｘは、ハロゲン化物アニオン、または、硫酸、硝酸、塩酸、およびリン酸等の無機酸の共役塩基からなる群より選ばれる。
【００７３】
式Vに包含される構造はまた、いくつかの関連共鳴構造および互変異性の形態で表され得ることは、当業者によって認識および理解されるであろう。例えば、二重結合は、硫黄に隣接せず、環に連結している窒素の１つに表されるかもしれない。かかる例において、正電荷は、硫黄原子ではなく、二重結合された窒素原子上に存在するであろう。すべてのそのような共鳴および互変異性の構造は明白に式Vの構造に包含されるとみなされる。
【００７４】
第１の態様の好ましい一実施形態において、
メチレンブルーを還元剤と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスを生成する工程（i）と、
安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスを再結晶によって精製する工程（ii）と、
精製され安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーを酸化剤と接触させて、メチレンブルーを生成する工程（iii）とを含み、
それによってメチレンブルーを精製する、
メチレンブルーの精製方法が提供される。
【００７５】
第１の態様およびその好ましい実施形態における還元剤は、金属を含まない還元剤である。
【００７６】
メチレンブルーをＬＭＢに還元するに充分な還元力を有する当該技術における公知の任意の還元剤が好適であろう。
【００７７】
一実施形態において、還元剤は、アスコルビン酸、亜ジチオン酸ナトリウム、水素、ギ酸、シュウ酸、ジチオスレイトール、ナトリウムアマルガム、水素化ホウ素ナトリウム、ヒドラジン、亜リン酸エステル、次亜リン酸塩、および亜リン酸からなる群より選ばれる。好適には、アスコルビン酸はＬ−アスコルビン酸である。
【００７８】
還元剤はアスコルビン酸であることが非常に好ましく、Ｌ−アスコルビン酸であることが最も好ましい。これは、Ｌ−アスコルビン酸を用いたメチレンブルーの還元は、プロトン化されたＬＭＢアスコルビン酸塩コンプレックスを形成し、これは特に安定で、簡便な再結晶化による精製を可能とすると考えられるためである。
【００７９】
好ましくは、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、酸性ｐＨで還元剤と接触させる。より好ましくは、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、ｐＨ３未満で還元剤と接触させる。さらにより好ましくは、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、ｐＨ１未満で還元剤と接触させる。
【００８０】
還元されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、塩であってもよい。還元剤がアスコルビン酸であり、ジアミノフェノチアジニウム化合物がメチレンブルーであるとき、還元されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【００８１】
還元されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスの精製は、当該技術において公知の技術範囲内、例えばシリカまたは改質シリカのカラムを通したまたはＨＰＬＣを用いたクロマトグラフィ、イオン交換技術、ろ過、洗浄、および再結晶化等によって行うことができる。ただし、非常に好ましい実施形態において、還元されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスの精製は再結晶化による。
【００８２】
再結晶化に加えて、特に金属イオンを除去するために、ろ過を行うことができる。これは金属結合フィルタ、例えば、シリカゲル、活性炭、中性、塩基性、または酸性のアルミナゲル、微細孔膜、金属捕捉基がグラフトされた樹脂、および金属捕捉基がグラフトされた繊維を含むろ過支持体を通したろ過によって効果的に行うことができるができる。金属イオンはまた、シリカ、珪藻土、または他の金属の結合または除去の目的のために製造された市販の物質等の任意の公知の金属結合吸収剤の中またはその上を通過させることで、除去することができる。
【００８３】
一実施形態において、再結晶化は、水、アルコール、およびエーテルからなる群より選ばれた溶媒から行う。ＬＭＢコンプレックスの再結晶化のために、すべての３つの溶媒種が種々の割合で使用されること好ましいかもしれない。一実施形態において、すべての３つの溶媒種が再結晶化に使用されるとき、それらは体積基準で、水：アルコール：エーテルが１：２−４：６−１０、好ましくはおおよそ１：３：８の割合で使用することができる。
【００８４】
再結晶溶媒の少なくとも１つがアルコールであるとき、それは、Ｃ１−Ｃ１０アルコール、または、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、およびｉｓｏ−プロパノールを含むＣ１−Ｃ４アルコールからなる群より選ばれることができる。
【００８５】
再結晶溶媒の少なくとも１つがエーテルであるとき、それは、テトラヒドラフランまたはジエチルエーテルであることができる。
【００８６】
安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスは、塩または他のイオンコンプレックスであることができる。
【００８７】
一実施形態において、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーは、ロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスであることができる。
【００８８】
好ましくは、ジアミノフェノチアジニウム化合物またはメチレンブルーは、酸性ｐＨで還元剤と接触させる。酸性環境は、還元反応が有用な速度で進み、メチレンブルーのＬＭＢへの最適な転換を産むために必要である。より好ましくは、メチレンブルーは、ｐＨ３未満で還元剤と接触させる。さらにより好ましくは、メチレンブルーは、ｐＨ１未満で還元剤と接触させる。
【００８９】
酸性環境は、反応を阻害しない有機酸または無機酸等の種々の酸の添加によって実現することができる。好ましくは、還元溶液は、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸、フッ酸、臭化水素酸、および過塩素酸等の一塩基および二塩基の無機酸から選ばれた酸で酸性化された溶液である。より好ましくは、無機酸は塩酸または硫酸である。最も好ましくは、無機酸は塩酸である。
【００９０】
精製されたＬＭＢコンプレックスをメチレンブルーに戻すために使用される酸化剤は特に制限されず、広い範囲で公知の市販の酸化剤が使用に好適であろう。実際、いったん還元剤が除去されれば、空気との接触でもＬＭＢコンプレックスをメチレンブルーに酸化して戻すことができるであろう。
【００９１】
好適には、酸化剤は金属を含まない酸化剤である。
【００９２】
好ましい酸化剤は、酸素、オゾン、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、過酸化水素、硝酸、硝酸塩化合物、リン酸、ペルオキソ二硫酸、過硫酸、硫酸、亜硫酸、亜塩素酸塩、塩素酸塩、過塩素酸塩、および他の類似のハロゲン含有化合物、次亜塩素酸塩、および他の次亜ハロゲン酸塩化合物、過マンガン酸塩、亜酸化窒素、およびキノンからなる群より選ばれることができる。
【００９３】
一実施形態において、好ましい酸化剤は、酸素およびキノンからなる群より選ばれる。
【００９４】
好ましくは、酸化剤は、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、または、より好ましくは、ｐ−ベンゾキノンである。
【００９５】
さらに還元され安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスを精製するために、再結晶化工程に加えて、他の精製方法を行うことができる。特に、金属イオンを除去するために、ろ過を行うことができ、これは金属結合フィルタ、例えば、シリカゲル、活性炭、中性、塩基性、または酸性のアルミナゲル、微細孔膜、金属捕捉基がグラフトされた樹脂、および金属捕捉基がグラフトされた繊維を含むろ過材を通したろ過によって効果的に行うことができる。金属イオンはまた、シリカ、珪藻土、または他の金属の結合または除去の目的のために製造された市販の物質等の任意の公知の金属結合吸収剤の中またはその上を通過させることで、除去することができる。
【００９６】
好ましくは、本発明の精製方法において、１つまたはそれ以上の工程は制御された段階的温度条件下で行うことができる。反応はまた、好ましくは、不活性雰囲気下で行うことができる。この方法で使用される溶媒、酸、および試薬は好ましくは、脱気され、金属イオン含有量が非常に低いレベルである超高純度のものである。これらのすべての方法は、還元され安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックス、最終メチレンブルー生成物、および反応工程の生成物を含む中間物の安定化に有効である。特に、全反応中、１５〜３０℃、より好ましくは２０〜２５℃の制御された温度条件下で、還元され安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスを生成することは有効である。続いて、反応の液体体積は、３５〜４５℃、好ましくは約４０℃での真空蒸留で低減される。
【００９７】
さらに、還元され安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスの精製および乾燥は好ましくは、窒素雰囲気下、１５〜３０℃、好ましくは２０〜２５℃の制御された温度条件下で行われる。加えて、安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスをメチレンブルーに酸化して戻す工程は好ましくは、窒素雰囲気下、はじめに５〜２０℃、好ましくは１０〜１５℃、続いて１５〜３０℃、好ましくは２０〜２５℃の段階的温度条件下で行われる。
【００９８】
再結晶化によって生成されたメチレンブルーの最終精製は、任意で行うことができ、もし行うなら、はじめに５０〜７５℃、好ましくは６０〜６５℃、続いて５５〜６０℃の低い温度、続いて３０〜５０℃、好ましくは４０〜４５℃のより低い温度、最終的に０〜５℃の冷条件の制御された段階的温度条件下で行うことができる。上記の種々の工程の限定内の温度制御は、種々の不純物の生成を低減し、例えば、脱メチル化を低減し、また収率を最適化する。
【００９９】
一実施形態において、スタート材料のメチレンブルーははじめに、還元工程より前に精製工程を通すことができる。このことは市販のスタート材料の純度によっては望ましいであろう。酸性溶液からの再結晶化は好適であろう。
【０１００】
したがって、第１の態様の一実施形態によれば、
酸性溶液からメチレンブルーを再結晶化する工程（i）と、
再結晶化されたメチレンブルーを還元剤と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスを生成する工程（ii）と、
再結晶化によって安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスを精製する工程（iii）と、
精製され安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーを酸化剤と接触させて、精製されたメチレンブルーを生成する工程（iv）と、
酸性溶液から精製されたメチレンブルーを再結晶化する工程（v）とを含み、
それによってメチレンブルーを精製する、
メチレンブルーの精製方法が提供される。
【０１０１】
本実施形態における種々の成分と条件は、第１の態様に対して前述したように、適宜変更できる。
【０１０２】
好ましくは、本発明の精製方法において、１つまたはそれ以上の工程は窒素等の不活性雰囲気下で行うことができる。これは、中間物、特に、還元され安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックス、および反応工程の生成物の安定化に有効である。
【０１０３】
メチレンブルー、アズールＡ、Ｂ、およびＣ（および金属等の他の汚染物）のスタート混合物における、本発明の方法のメチレンブルーの安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスへの還元は、アズールからの簡便な分離を可能とする。これは、還元された形態では、ある種の方法によって、安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスとアズールとの間の化学的特性の相違が大きくなったからである。安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスの精製は、金属汚染物の簡便な除去を可能とする。
【０１０４】
上記の本方法は、金属イオンの存在を有意に低減するが、もしスタート材料の金属汚染物レベルが特に高い場合には、安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスはさらに任意の多くの公知の方法によって金属汚染物を除いて浄化することができ、精製された濃コンプレックスは簡便にメチレンブルーに戻される。
【０１０５】
公知の方法に対する本発明の方法の１つの利点は、安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスを合成し、次いで、主精製工程を実施するという簡便さであり、このことは、残留汚染に対して追加の合成と脱保護の工程がしばしば付加されるメチレンブルーコンプレックス有機誘導体の用意を必要としない精製を可能とする。
【０１０６】
本発明の方法は、任意の製造者の「原料」、例えばメチレンブルーに適用できる確かな信頼できる方法であり、この方法は、工業スケールに適用可能である、経済的に実施可能な方法で、要求されるように金属および有機汚染物を実質的に低減し、高化学的純度を提供する。本発明の方法を用いたときのたいていの金属の低減量は３倍より大きく、質量基準で、最終メチレンブルー生成物中のアズールＢのレベルは３％未満であり、好ましい実施形態における最終生成物中のアズールＢのレベルは２.５％未満である。追加の再結晶化工程は、アズールＢのレベルを２％未満に低減することができる。
【０１０７】
再結晶化と洗浄の工程を繰り返すことは、方法内において追加の工程として任意の特定金属吸収技術を導入した場合と同様に、さらなる汚染物量の低レベル化を可能とする。同様に、この段階で使用される水量の増加はまた、アズールレベルを実質的に低減することができる。
【０１０８】
本発明の方法において、任意の実用的な設備を使用することができる。追加の金属汚染が生じないことを確実にするために、好ましくは、ガラス、セラミック、またはプラスチックのライニング製の設備等の非金属の容器および設備が使用される。
【０１０９】
安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスの酸化の後に結果的に得られる精製されたメチレンブルー生成物は、上記したような、ろ過、再結晶化、または他の方法によってさらに精製することができる。本発明の一実施形態において、（i）水和が約２〜５であり、（ii）水に対する溶解性が約２％であり、（iii）金属レベルがヨーロッパ薬局方５.０で規定されるレベル以下であるメチレンブルー生成物が提供される。このメチレンブルー生成物はさらに、約５〜２５％の水分を含むことができる。
【０１１０】
本発明の第２の態様によれば、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムのアスコルビン酸塩コンプレックスが提供される。
【０１１１】
一実施形態において、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである。
【０１１２】
第２の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【０１１３】
安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスは、ここで述べた精製方法の使用に特に有利な特性を有することが分かっている。この安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスは、優れた安定性を示し、アズールからの驚くべき良好な相違を有する安定化されプロトン化されたＬＭＢコンプレックスであると考えられ、このことは１つの簡便な再結晶化工程で優れた精製を可能とする。したがって、合成後の工程または他の有機基を有するメチレンブルーの合成改質の必要がない。この安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスはまた、生成された後、サンプル内のさらなる不純物を与えることなく、続いて容易に除去される簡便な試薬を用いるだけでメチレンブルーに戻される。
【０１１４】
本発明の第３の態様は、ジアミノフェノチアジニウム化合物をアスコルビン酸と接触させて、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスを生成する方法により製造された、第２の態様のプロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【０１１５】
第３の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスは、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【０１１６】
第３の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムアスコルビン酸塩コンプレックスは、メチレンブルーをアスコルビン酸と接触させて、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスを生成する方法により製造された、第２の態様の安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【０１１７】
第３の態様の方法における種々の条件は、第１の態様で述べたのと同様とすることができる。
【０１１８】
本発明の第４の態様によれば、ジアミノフェノチアジニウム化合物の精製における、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスの使用が提供される。
【０１１９】
一実施形態において、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、Ｎ−１０プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスである。
【０１２０】
第４の態様の一実施形態において、プロトン化され安定化されたジアミノフェノチアジニウムコンプレックスは、メチレンブルーの精製に使用される安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスである。
【０１２１】
一実施形態において、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスは、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルー塩である。
【０１２２】
一実施形態において、安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスは、第２の態様の安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーアスコルビン酸塩コンプレックスである。
【０１２３】
ここで例示される実施形態はメチレンブルーの精製に関するものであるが、本発明の幅広い形態を述べたように、本発明の概念が他のジアミノフェノチアジニウム化合物にも拡張可能であることが認識されるであろう。
【０１２４】
本発明の説明のために以下の実施例を挙げるが、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０１２５】
この実施例では、市販のメチレンブルーを以下の工程にしたがって精製する。
全体的な製造プロセススキーム
【化５】
2016528237.tif 000006
工程１：スタート材料である市販のメチレンブルーの再結晶化
【０１２６】
この最初の再結晶化工程は任意であり、その適用は市販のスタート材料の純度によることは理解されよう。その適用は、スタート材料が有意水準の不純物を含むときに最上の結果を提供する。
【化６】
2016528237.tif 000007
【０１２７】
ガラスライニング製の密閉ジャケット付き反応器に、メチレンブルー（５.５ｋｇ、１.０ｅｑ．）と無菌精製水（５４ｋｇ）とを入れた。次いで、０.６ｋｇの３１％ＨＣｌ溶液を入れた。このバッチを６０〜６５℃の温度に調整し、溶解するまで撹拌した。次いで、このバッチを最低９時間以上０〜５℃に冷却した。この懸濁液を０〜５℃でろ過し、３.８ｋｇの冷水（０〜５℃）でろ塊を洗浄し、７.３ｋｇの冷アセトン（０〜５℃）でリンスした。このろ塊を窒素気流下で乾燥して、５.１６ｋｇの生成物を得た。
工程２：メチレンブルーのロイコメチレンブルーへの還元工程
【化７】
2016528237.tif 000008
【０１２８】
５０Ｌのガラスライニング製反応器に、工程１で得られた２.８ｋｇの精製されたメチレンブルーと１.３ｋｇのＬ−アスコルビン酸と３２.７ｋｇのメタノールとを入れ、このバッチに、Ｎ２下で撹拌しながら、１ｋｇの３１％塩酸を入れた。仕込み装置に対して０.５ｋｇのメタノールを用いたリンスを実施して、転換を完了した。このバッチを２０〜２５℃で最低１５分間撹拌した。ｐＨを確認し（下記１となるべきである。）、このバッチを最低１８時間撹拌した。ＩＰＣサンプルを取り、このバッチ内に残ったメチレンブルーは安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスに対して２％未満であった。次いで、真空下で外部温度を４０℃以下にしながら、このバッチを蒸留して、スタート材料のメチレンブルーに対して５.０〜５.５部（１４〜１５Ｌ）とした。撹拌しながら２.２ｋｇの水を添加し、次いで、バッチ温度を２０〜２５℃に調整した。攪拌下でバッチ温度を２０〜２５℃に維持しながら、１.５時間以上かけて１９.５ｋｇのＴＨＦを添加した。このバッチ（懸濁液）を最低１６時間以上、２０〜２５℃で撹拌した。この懸濁液を一定窒素気流下でろ過した。０.４ｋｇのメタノールと４.４ｋｇのＴＨＦ（１０％ＭｅＯＨ／ＴＨＦ）との混合物を用いてろ塊を洗浄し、２.５ｋｇのＴＨＦでリンスした。このろ塊を窒素気流下で乾燥して、１.８０５ｋｇの未精製の安定化されプロトン化されロイコメチレンブルーコンプレックスを得た。２回目の一連の操作を同様のスケールで実施し、１回目と２回目の操作で得られた生成物を再結晶化工程で使用した。
【０１２９】
５０Ｌのガラス反応器に３.３ｋｇの未精製の安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスと３.７ｋｇの脱気されたＳＰ水を入れ、この混合物を２０〜２５℃で１０〜１５分間撹拌した。次いで、８.８ｋｇの脱気されたメタノールを添加し、このバッチを２０〜２５℃で１０〜１５分間撹拌し、溶液を確認した。次いで、２６.１ｋｇの脱気されたＴＨＦを１.５時間以上かけて添加した。このバッチを２０〜２５℃で最低２４時間撹拌して、結晶化を完了した。この懸濁液を窒素雰囲気下でろ過した。０.６ｋｇのメタノールと５.９ｋｇのＴＨＦ（１０％ＭｅＯＨ／ＴＨＦ）との混合物を用いてろ塊を洗浄し、３.２ｋｇのＴＨＦでリンスした。このろ塊を窒素気流下で乾燥して、３.２ｋｇのライトブルーから白の精製され安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスの固形物を得た。
工程３：精製され安定化されプロトン化されたロイコメチレンブルーコンプレックスのメチレンブルーへの酸化
【化８】
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【０１３０】
５０Ｌのガラス反応器に、３.２ｋｇの精製されたロイコメチレンブルーと１６.１ｋｇのＳＰ水とを入れた。このバッチを１０〜１５℃に冷却した。１０〜１５℃の温度を維持しながら、このバッチにカーボイを用いて１ｋｇのｐ−ベンゾキノンと４.１ｋｇのアセトンとの溶液を添加した。カーボイを０.９ｋｇのアセトンでリンスし、転換を完了した。このバッチを１０〜１５℃で３５分間撹拌し、次いで、２０〜２５℃に温め、さらにこの温度で５時間撹拌した。このバッチからＨＰＬＣ用のサンプルを取って、反応完了を確認した（基本的に、ロイコメチレンブルーはほとんどまたは全く検出されなかった）。激しく撹拌しながら、混合物に２０.２ｋｇのアセトンを添加し、この懸濁液を２０〜２５℃で５時間撹拌した。この懸濁液を２０〜２５℃でろ過し、６.８ｋｇのアセトンでろ塊を洗浄した。このろ塊を窒素気流下で移送可能まで乾燥した。この固形物を５０Ｌの反応器に戻し、２５.３ｋｇのアセトンを添加し、温度を２０〜２５℃に調整し、このバッチを３時間撹拌した。この懸濁液を、２０〜２５℃でろ過し、７.８ｋｇのアセトンでろ塊を洗浄した。このろ塊を窒素気流下で移送可能まで乾燥した。
再結晶化
【０１３１】
５０Ｌの反応器に、上記のすべてのメチレンブルーと４３.１ｋｇのＳＰ水と３４.５ｋｇの塩酸溶液とを入れた。このバッチを６０〜６５℃に調整し、１０〜１５分間撹拌した。バッチ温度を５５〜６０℃に調整し、このバッチを第２の５０Ｌの反応器に入れ、この温度で最終清澄ろ過に供した。５５〜６０℃で３.４ｋｇのＨＣｌ溶液を用いてリンスし、ろ過を完了した。撹拌しながら、このバッチを４０〜４５℃に冷却し、反応器に１６.３ｋｇのアセトンを３０分間以上かけて入れた。次いで、このバッチを４０〜４５℃で２５分間撹拌した。撹拌しながら、このバッチを最低８時間以上かけて０〜５℃に冷却した。さらに、このバッチを０〜５℃で３時間撹拌した。この懸濁液を０〜５℃で冷ろ過し、２.１ｋｇの冷水（０〜５℃）でろ塊を洗浄し、１９０ｋｇの冷アセトン（０〜５℃）でリンスした。このろ塊を加熱窒素気流下で乾燥して、３.１ｋｇの精製されたメチレンブルーを得た。
【０１３２】
例示の方法において、本方法によって精製された３バッチシリーズのメチレンブルー生成物の純度のデータを表１にリストしたアズールに関連させた純度で示す。下記の表２は、本生成物をスタート材料である市販のメチレンブルーおよびヨーロッパ薬局方で規定される金属不純物レベルと比較するものである。
【表１】
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【表２】
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【０１３３】
すべての実施例において、金属不純物のレベルはヨーロッパ薬局方５.０により容認可能として規定されたレベルより有意に低く、いくつかの実施例では金属レベルは標準的な方法による検出限界に近いものであることが知見されよう。３つのアズール染料不純物の総レベルは質量でおよそ２.５％以下であった。
【０１３４】
上記の本発明の種々の実施形態の説明は、当業者に対する説明の目的のためのものである。それは網羅的であること、あるいは本発明を１つの開示された実施形態に限定することを意図するものではない。上記したように、上記教示の当業者にとって、本発明に対する多くの代替と変形は明らかであろう。したがって、いくつかの代替実施形態が具体的に検討され、他の実施形態が明らかとなったり、当業者によって比較的容易に開発されたりするであろう。したがって、この特許明細書は、ここで論じられた本発明のすべての代替、変更、および変形、並びに、上記の本発明の趣旨および範囲内の他の実施形態を包含することを意図する。
【０１３５】
以下の請求項および上記の本発明の説明において、文脈が明確に規定する場合、もしくは、言語表現あるいは必要な含意による場合を除いて、用語「含む（comprise, comprises）」、または「含んでいる（comprising）」を含むそのバリエーションは、包括的な意味で使用される。すなわち、述べられた態様の存在を明示するが、１つまたはそれ以上の本発明の実施形態におけるさらなる態様の存在または付加を排除しない。
【国際調査報告】
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