(57)【要約】  本出願は、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を患者に投与することによって、固形腫瘍を有する患者（ここで患者はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇した高い血清濃度を有する）の生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法、ならびに、係る療法に由来するこれらの患者における延命効果を予測する方法に関する。
2016528288.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形腫瘍を有する患者において生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法であって、前記患者がＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇した血清濃度を有し、前記患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含み、前記投与が患者の生存期間または無増悪生存期間を延長させる前記方法。
【請求項２】
前記方法が、前記投与前に、Ｃ反応性タンパク質の上昇した血清濃度を有する患者を選択することを更に含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）固形腫瘍を有する患者集団に関するＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のベースライン血清濃度の中央値以上であるＣＲＰの血清濃度を有する固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）前記患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む固形腫瘍を治療する方法。
【請求項４】
（ａ）約１０μｇ／ｍＬ以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有する前記固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）前記患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む固形腫瘍を治療する方法。
【請求項５】
前記投与が、前記患者の生存期間を延長する請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記投与が、前記患者の無増悪生存期間を延長する請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＲＰの血清濃度が、約１３μｇ／ｍＬ以上である請求項１〜６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項８】
前記患者が１または２の改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）を有していて、前記患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含む、治療を必要としている患者の固形腫瘍を治療する方法。
【請求項９】
（ａ）１または２の改良版グラスゴー予後スコアの固形腫瘍を有する患者を選択すること；
（ｂ）前記患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む固形腫瘍を治療する方法。
【請求項１０】
前記投与が、患者の生存期間を延長する請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与が、前記患者の無増悪生存期間を延長する請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記固形腫瘍が、前立腺癌、腎癌、肝癌、大腸癌、直腸癌、腎癌、結腸直腸癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、グリア芽細胞腫、カポジ肉腫、黒色腫、食道癌、胃食道癌、子宮頸癌、肝細胞癌、子宮内膜癌、尿路上皮癌、または卵巣癌である請求項１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１３】
前記固形腫瘍が、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、大腸癌、または肺癌である請求項１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１４】
前記固形腫瘍が、膵臓癌である請求項１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１５】
前記固形腫瘍が、子宮内膜癌である請求項１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１６】
前記固形腫瘍が、非小細胞性肺癌である請求項１〜１１のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１７】
前記方法が、前記患者に対してＪＡＫ阻害剤を投与することを含む請求項１〜１６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が、前記患者に対してＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含む請求項１〜１６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項１９】
前記ＪＡＫ阻害剤が、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩である請求項１〜１８のいずれか一つに記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、遊離塩基を基準にして約１５ｍｇ〜約２５ｍｇ ＢＩＤのルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を前記患者に対して投与することを含む請求項１〜１９のいずれか一つに記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、前記患者に対して１種以上の追加の化学療法剤を投与することを更に含む請求項１〜２０のいずれか一つに記載の方法。
【請求項２２】
前記１種以上の化学療法剤が、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ１阻害剤、プラチナ類似化合物、タキサン、及びアントラサイクリン、ＥＧＦＲ阻害剤、及びそれらの組み合わせから選択される請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記１種以上の追加の化学療法剤が、カペシタビン、ゲムシタビン、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子）、ドセタキセル、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、イリノテカン、トポテカン、パクリタキセル、ロイコボリン、ドキソルビシン、及びそれらの組み合わせから選択される請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記１種以上の追加の化学療法剤が、カペシタビンである請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
固形腫瘍を有する患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の有効性を予測する方法であって、前記患者の前記Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を、前記固形腫瘍を有する患者集団のＣＲＰのベースライン血清濃度と比較することを含み、ここで前記ベースライン血清濃度以上の前記患者における前記血清ＣＲＰ濃度が、前記ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の前記患者に対する有効性を表す、前記方法。
【請求項２６】
前記方法が、前記比較の前に、ＣＲＰアッセイを使用して、前記患者のＣＲＰの血清濃度を測定することを更に含む請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法が、前記患者のために、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を処方することを更に含む請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記有効性が、前記患者の全生存期間の改善である請求項２５〜２７のいずれか一つに記載の方法。
【請求項２９】
前記有効性が、前記患者の無増悪生存期間の改善である請求項２５〜２７のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３０】
（ａ）１または２の改良版グラスゴー予後スコアの固形腫瘍を有する患者を選択すること；
（ｂ）その患者にルキソリチニブの阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与すること
を含み、ここで前記治療が前記患者の生存期間または無増悪生存期間の延長をもたらす、固形腫瘍を治療する方法。
【請求項３１】
前記方法が、１種以上の追加の化学療法剤を前記患者に対して投与することを更に含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記１種以上の化学療法剤が、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ１阻害剤、プラチナ類似化合物、タキサン、及びアントラサイクリン、ＥＧＦＲ阻害剤、及びそれらの組み合わせから選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記１種以上の追加の化学療法剤が、カペシタビン、ゲムシタビン、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子）、ドセタキセル、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、イリノテカン、トポテカン、パクリタキセル、ロイコボリン、ドキソルビシン、及びそれらの組み合わせから選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記１種以上の追加の化学療法剤が、カペシタビンである請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記固形腫瘍が、前立腺癌、腎癌、肝癌、大腸癌、直腸癌、腎癌、結腸直腸癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、グリア芽細胞腫、カポジ肉腫、黒色腫、食道癌、胃食道癌、子宮頸癌、肝細胞癌、子宮内膜癌、尿路上皮癌、または卵巣癌である請求項３０〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３６】
前記固形腫瘍が、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、大腸癌、または肺癌である請求項３０〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３７】
前記固形腫瘍が、膵臓癌である請求項３０〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３８】
前記固形腫瘍が、子宮内膜癌である請求項３０〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項３９】
前記固形腫瘍が、非小細胞性肺癌である請求項３０〜３４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４０】
ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を使用する治療の膵臓癌患者に対する有効性を予測する方法であって、前記患者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を、前記固形腫瘍を有する患者集団のＣＲＰのベースライン血清濃度と比較することを含み、ここで前記ベースライン血清濃度以上の前記患者における前記血清ＣＲＰ濃度が、ルキソリチニブの阻害剤またはその薬学的に許容される塩を使用する治療の前記患者に対する有効性を表す、前記方法。
【請求項４１】
前記本方法が、追加の化学療法剤の治療有効量を前記患者に対して投与することを更に含む請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記１種以上の化学療法剤が、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ１阻害剤、プラチナ類似化合物、タキサン、及びアントラサイクリン、ＥＧＦＲ阻害剤、及びそれらの組み合わせから選択される請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記１種以上の追加の化学療法剤が、カペシタビン、ゲムシタビン、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射可能な懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子）、ドセタキセル、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、イリノテカン、トポテカン、パクリタキセル、ロイコボリン、ドキソルビシン、及びそれらの組み合わせから選択される請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記１種以上の追加の化学療法剤が、カペシタビンである請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記有効性が、前記患者の生存期間の改善である請求項４０〜４４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４６】
前記有効性が、前記患者の無増悪生存期間の改善である請求項４０〜４４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４７】
前記患者が１または２の改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）を有していて、前記患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含む、治療を必要としている患者のびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を治療する方法。
【請求項４８】
前記ＪＡＫ阻害剤が、選択的なＪＡＫ１阻害剤である請求項１〜４７のいずれか一つに記載の方法。
【請求項４９】
前記選択的ＪＡＫ１阻害剤が：
３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロパンニトリル；
３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロパンニトリル；
４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル；
４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル；
｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド；
［３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］−１−（１−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペリジン−４−イル）アゼチジン−３−イル］アセトニトリル；
［ｔｒａｎｓ−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］−３−（４−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル）シクロブチル］アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４｛［４−［（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４−｛［４−｛［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４−｛［４−｛［（２Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］ブタンニトリル；
５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド；
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド；
５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド；
｛１−（ｃｉｓ−４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（ｃｉｓ−４−｛［４−［（エチルアミノ基）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（ｃｉｓ−４−｛［４−（１ヒドロキシ１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（ｃｉｓ−４−｛［４−｛［（３Ｒ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（ｃｉｓ−４−｛［４−｛［（３Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４−｛［４−（｛［（１Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛ｔｒａｎｓ−３−（４−｛［４−（２−ヒドロキシエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）アセトニトリル；及び
４−［３−（シアノメチル）−３−（３’，５’−ジメチル−１Ｈ，１’Ｈ−４，４’−ビピラゾール−１−イル）アゼチジン−１−イル］−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド；
または前記化合物のいずれかの薬学的に許容される塩から選択される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記選択的ＪＡＫ１阻害剤が、（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）アセトニトリルまたはその薬学的に許容される塩である請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記選択的ＪＡＫ１阻害剤が、４−［３−（シアノメチル）−３−（３’，５’−ジメチル−１Ｈ，１’Ｈ−４，４’−ビピラゾール−１−イル）アゼチジン−１−イル］−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミドまたはその薬学的に許容される塩である請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
前記選択的ＪＡＫ１阻害剤が、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝）アセトニトリルまたはその薬学的に許容される塩である請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
前記患者に対して１種以上の非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）を投与することを更に含む請求項１〜４７のいずれか一つに記載の方法。
【請求項５４】
前記ＮＳＡＩＤが、アスピリン、ジフルニサール、サルサラート、イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、オキサプロジン、インドメタシン（Ｉｎｄｏｍｅｔｈｉｃｉｎ）、トルメチン、スリンダク、エトドラク、ケトドラク（ｋｅｔｏｄｏｌａｃ）、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アセトアミノフェンから選択される請求項５３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１３年８月２０日に出願された米国仮出願第６１／８６７，９８２号の優先権の利益を主張し、前記仮出願の全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を患者に投与することによって、固形腫瘍患者（ここで患者はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇した高い血清濃度を有する）の生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法、ならびに、係る療法に由来するこれらの患者における延命効果を予測する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）は、サイトカイン及び増殖因子がそれらの受容体へ結合した後のシグナル伝達において重要な役割を果す。異常または過剰なサイトカインシグナル伝達を介する、または経路調節異常を引き起こす細胞内メカニズムを介するＪＡＫの異常活性化は、悪性細胞増殖の増加及び生存期間の延長と関連があると考えられてきた。
炎症性サイトカインが腫瘍の成長及び生存に影響を与え得る複数のメカニズムが存在する。サイトカインは、腫瘍細胞内及び腫瘍細胞間ならびにそれらの周囲の間質環境と腫瘍細胞との間でのオートクリン連絡及びパラクリン連絡を制御する重要な分子である。いくつかの条件下では、内在性サイトカインは腫瘍に対する宿主反応を組織化することができ、そのサイトカインネットワークは腫瘍成長、進行及び宿主免疫抑制にも寄与する。更に、炎症性サイトカインは、癌と関連のある異化状態及び悪液質の重要なメディエーターであることが示されてきており、したがって、炎症性サイトカインは、このメカニズムならびに腫瘍細胞に関する直接効果を介して癌患者の経過に影響を与えることができる。Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、血清中で測定することができるタンパク質であり、全身性炎症性反応の主要な指標であり、サイトカイン、特にＩＬ−６の上昇したレベルと関連がある。上昇したＣＲＰは、広範な腫瘍における従来の療法に対する予後不良及び低反応性と関連があった（非特許文献１）。この不良な予後因子を有する癌患者の治療を改善する医学的なニーズが存在する。本発明は、このニーズ及び他のニーズに関する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３９（２０１３）５３４−５４０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本出願は、特に、固形腫瘍患者において生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法を提供し、ここでその患者はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇した血清濃度を有し、その方法は、その患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含み、ここでその投与により患者の生存期間または無増悪生存期間が延長する。
【０００６】
また、本出願は、固形腫瘍患者において生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法も提供し、ここでその患者は１または２の改良版グラスゴー予後スコア（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｅ）（ｍＧＰＳ）を有し、その方法は、その患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含み、ここでその投与により患者の生存期間または無増悪生存期間が延長する。
【０００７】
更に、本出願は、その方法を必要としている患者における固形腫瘍を治療する方法も提供し、ここでその患者は１または２の改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）を有し、その方法は、その患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含む。更に、本出願は：
（ａ）固形腫瘍を有する患者集団に関するＣＲＰのベースライン血清濃度の中央値以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有する固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法を提供する。
【０００８】
また、本出願は：
（ａ）約１０μｇ／ｍＬ以上のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有する固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法を提供する。
【０００９】
更に、本出願は：
（ａ）１または２の改良版グラスゴー予後スコアの固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法を提供する。
【００１０】
また、本出願は、固形腫瘍を有する患者に対する、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の有効性を予測する方法も提供し、その方法は、その患者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を、固形腫瘍患者集団のＣＲＰベースライン血清濃度と比較することを含み、ここで、ベースライン血清濃度以上の患者の血清ＣＲＰ濃度は、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の患者に対する有効性を表す。
【００１１】
更に、本出願は、本明細書記載の実施形態によって説明される方法のいずれかで記載される使用のために、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤も提供する。
【００１２】
本出願は、本明細書記載の実施形態によって説明される方法のいずれかで使用する薬剤を調製するための、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬ以下であった患者に関する全生存期間のカプランマイヤー解析を示す（１群及び２群に関する日数に対する生存分布関数）。
【図２】ベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬ超であった患者に関する全生存期間のカプランマイヤー解析を示す（１群及び２群に関する日数に対する生存分布関数）。
【図３】ベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬ以下であった患者に関する無増悪生存期間のカプランマイヤー解析を示す（１群及び２群に関する日数に対する生存分布関数）。
【図４】ベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬ超であった患者に関する無増悪生存期間のカプランマイヤー解析を示す（１群及び２群に関する日数に対する生存分布関数）。
【図５】（Ａ)〜（Ｃ）：ベースラインｍＧＰＳによる全生存期間に関するカプランマイヤー曲線を示す（Ａ，ｍＧＰＳ＝０；Ｂ，ｍＧＰＳ＝１；及びＣ，ｍＧＰＳ＝２）、（ｙ軸は生存分布関数であり；ｙ軸は生存日数である）。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
詳細な説明
本出願は、固形腫瘍患者において生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法を提供し、ここでその患者はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇した血清濃度を有し、その方法は、その患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含み、ここでその投与は患者の生存期間または無増悪生存期間を延長させる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、その方法は、投与前にＣ反応性タンパク質の上昇した血清濃度を有する患者を選択することを更に含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、固形腫瘍を有する患者集団に関するＣＲＰのベースライン血清濃度の中央値以上の血清濃度である（すなわち、ＣＲＰアッセイによって測定した場合）。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、約１０μｇ／ｍＬ以上のそれである。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、正常値の上限の２倍以上のそれである。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、正常値の上限の２．５倍以上のそれである。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、正常値の上限の３倍以上のそれである。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、正常値の上限の３．５倍以上のそれである。
【００２２】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの上昇した血清濃度は、正常値の上限の４倍以上のそれである。
【００２３】
更に、本出願は：
（ａ）固形腫瘍を有する患者集団に関するＣＲＰのベースライン血清濃度の中央値以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有する固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法を提供する。
【００２４】
また、本出願は：
（ａ）約１０μｇ／ｍＬ以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有する固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法も提供する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、その投与により患者の生存期間が延長する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、その投与により患者の無増悪生存期間が延長する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの血清濃度は、約１３μｇ／ｍＬ以上である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ＣＲＰの血清濃度は、約１０μｇ／ｍＬ以上である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本出願は：
（ａ）１または２の改良版グラスゴー予後スコアの固形腫瘍を有する患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法を提供する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、その投与により患者の生存期間が延長する。
【００３１】
いくつかの実施形態では、その投与により患者の無増悪生存期間が延長する。
【００３２】
改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）は、ＭｃＭｉｌｌｉａｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，３９（５）：５３４−５４０（２０１３）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる（詳しくは表１のスコアであり、以下に複製してある）。
【表１】
2016528288.tif 000003
血清ＣＲＰ濃度は、標準的な市販のアッセイまたはＲｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ（ＲＢＭ）アッセイを使用して測定することができる。ＣＲＰのための市販の臨床アッセイとしては、Ｑｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）試験またはＬａｂｃｏｒｐ  ｃ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈｉｇｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ試験が挙げられるが、それらに限定されない。ＲＢＭアッセイとしては、ＲＢＭ多重化Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）市販アッセイ（Ｍｙｒｉａｄ  ＲＢＭ）が挙げられるが、それらに限定されない。市販の臨床アッセイは相関され得る。例えば、ＲＢＭアッセイにおける１０μｇ／ｍＬの血清濃度は、臨床アッセイにおける約１０μｇ／ｍＬと相関していると考えられる。
【００３３】
ＣＲＰ試験は、５１０Ｋプロセス下でＦＤＡによって承認されており、利用可能な試験のほとんどは、個々の試験の、ならびに試験が行われる分析プラットフォームの分析検証のための確立基準を有する既承認試験（ｐｒｅｄｉｃａｔｅ  ｔｅｓｔ）に基づく５１０Ｋと実質的に等価な試験を利用した。従来のＣＲＰアッセイは、感染、組織損傷、及び炎症性障害を評価するために使用される一般的な指標である。これらのアッセイは、炎症性疾患の診断、療法及びモニタリングのための情報を提供する（ＦＤＡ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ−Ｒｅｖｉｅｗ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ），Ｈｉｇｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｃ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ｈｓＣＲＰ）及びＣａｒｄｉａｃ  Ｃ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ｃＣＲＰ）Ａｓｓａｙｓ，ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｍｅｄｉｃａｌｄｅｖｉｃｅｓ／ｄｅｖｉｃｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｇｕｉｄａｎｃｅ／ｇｕｉｄａｎｃｅｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｕｃｍ０７７１６７．ｈｔｍ。２０１１年９月１７日にアクセスした）。ＣＲＰは、サイトカインによって誘導される「急性期」タンパク質の１つであり、その血中濃度は、感染症及び非感染性炎症過程に対する一般的で非特異的な応答中に上昇する（Ｐｅｐｙｓ  ａｎｄ  Ｈｉｒｓｃｈｆｉｅｌｄ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３  １１１：１８０５−１８１２）。ＣＲＰは、急性期応答の他の実験室パラメーター、例えば血漿粘度及び赤血球沈降速度に比べてより更に正確に進行中の炎症及び／または組織損傷を反映する。重要なことに、急性期ＣＲＰ値は、日内変動を示さず、摂食に影響されない。肝不全はＣＲＰ産生を損なうが、他のいかなる併発病理及び薬物も、急性期刺激を提供する根底にある病理に影響を与えない場合、ほとんどＣＲＰ値を低下させない。したがって、ＣＲＰ濃度は、炎症に関する非常に有用な非特異的な生化学的マーカーである（Ｐｅｐｙｓ  ａｎｄ  Ｈｉｒｓｃｈｆｉｅｌｄ  ２００３）。従来のＣＲＰアッセイでは、検査値は１０ｍｇ／Ｌを超えるレベルで臨床的に有意であると典型的には考えられる（ＦＤＡ  ＣＲＰ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ）。
【００３４】
ｍＧＰＳの一部としてＣＲＰを使用して癌と関連のある炎症を評価することは、医学文献（ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ  ２０１３；３９：５３４−５４０）では十分に確立されており、従来のＣＲＰアッセイの承認された標識化及び意図される使用の範囲内である。ｍＧＰＳ  ０をｍＧＰＳ  １及び２から区別する分離値は、臨床的に有意であると一般的に認められる値と同じである。ｍＧＰＳの一部分としてＣＲＰを使用しての適格性の決定は、すべての試験対象に関して単一のＦＤＡ認可アッセイシステムを使用して中央検査室で実行される。
【００３５】
本明細書で使用する場合、用語「ＪＡＫ阻害剤」は、少なくともＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２を阻害する化合物を意味することを意図している。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１阻害剤である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ヤーヌスキナーゼファミリー（すなわち、ＪＡＫ３またはＴＹＫ２）の他のメンバーを阻害することもできる。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は選択的である。「選択的」とは、その化合物が、少なくとも１つの他のＪＡＫ（例えばＪＡＫ２、ＪＡＫ３及び／またはＴＹＫ２）と比較して、それぞれ、より大きな親和性または効力で、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２を結合するかまたは阻害することを意味している。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２に比べて、ＪＡＫ１及びＪＡＫ２に関して選択的である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２に比べて、ＪＡＫ１の選択的阻害剤である。選択性は、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約５００倍または少なくとも約１０００倍であり得る。選択性は、当該技術分野でルーチンの方法で測定することができる。いくつかの実施形態では、選択性は各酵素のＫｍで検査することができる。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２に関する化合物の選択性は、細胞ＡＴＰ濃度で測定することができる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本方法は患者にＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２阻害剤を投与することを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、本方法は患者にＪＡＫ１阻害剤を投与することを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本方法は患者にＪＡＫ２阻害剤を投与することを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本方法は患者にＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブリン酸塩である。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、選択的ＪＡＫ１阻害剤である。本明細書で使用する場合、「選択的ＪＡＫ１阻害剤」は、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２に比べて、ＪＡＫ１に選択的であるＪＡＫ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、化合物またはそれらの塩は、ＪＡＫ２に比べて、ＪＡＫ１について約１０倍より選択的である。いくつかの実施形態では、化合物またはそれらの塩は、１ｍＭのＡＴＰにおけるＩＣ５０を測定することによって計算した場合、ＪＡＫ２に比べて、ＪＡＫ１に関して約１０倍、約１５倍、または約２０倍より選択的である（例えば、実施例Ａを参照されたい）。
【００４４】
いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１阻害剤は、表Ａの化合物であるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である。表Ａの化合物は、選択的ＪＡＫ１阻害剤（ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２に比べて選択的）である。１ｍＭのＡＴＰでアッセイＡの方法によって得られたＩＣ５０を表Ａに示す。
【表２−１】
2016528288.tif 000004
【表２−２】
2016528288.tif 000005
【表２−３】
2016528288.tif 000006
【表２−４】
2016528288.tif 000007
【表２−５】
2016528288.tif 000008
【表２−６】
2016528288.tif 000009
【表２−７】
2016528288.tif 000010
【表２−８】
2016528288.tif 000011
【表２−９】
2016528288.tif 000012
【表２−１０】
2016528288.tif 000013
【表２−１１】
2016528288.tif 000014
【表２−１２】
2016528288.tif 000015
＋  平均＜１０ｎＭ（アッセイ条件については実施例Ａを参照されたい）
＋＋  平均≦１００ｎＭ（アッセイ条件については実施例Ａを参照されたい）
＋＋＋  平均≦３００ｎＭ（アッセイ条件については実施例Ａを参照されたい）
ａ  エナンチオマー１に関するデータ
ｂ  エナンチオマー２に関するデータ
【００４５】
いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１阻害剤は、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。
【００４６】
いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１阻害剤は、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルアジピン酸塩である。
【００４７】
いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１阻害剤は、４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミドまたはその薬学的に許容される塩である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１阻害剤は、（Ｒ）−３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロパンニトリル、（Ｒ）−３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロパンニトリル、（Ｒ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｒ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、または（Ｒ）−４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］ブタンニトリル、（Ｓ）−３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロパンニトリル、（Ｓ）−３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロパンニトリル、（Ｓ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｓ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｓ）−４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］ブタンニトリル；及び前記化合物のいずれかの薬学的に許容される塩から選択される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、表１の化合物は、２０１０年５月２１日に出願された米国特許公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日に出願された米国特許公開第２０１１／００５９９５１号、２０１１年３月９日に出願された米国特許公開第２０１１／０２２４１９０号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日に出願された米国特許公開第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日に出願された米国特許公開第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日に出願された第２０１４／０００５１６６号に記載されている合成手順によって調製され、前記米国特許公開のそれぞれはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００５０】
いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１阻害剤は２０１０年５月２１日に出願された米国特許公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日に出願された米国特許公開第２０１１／００５９９５１号、２０１１年３月９日に出願された米国特許公開第２０１１／０２２４１９０号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日に出願された米国特許公開第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日に出願された米国特許公開第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日に出願された米国特許公開第２０１４／０００５１６６号の化合物から選択され、前記米国特許公開のそれぞれはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本方法は、遊離塩基を基準にして約１５ｍｇ〜約２５ｍｇ  ＢＩＤのルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、遊離塩基を基準にして約１０ｍｇ〜約２５ｍｇ  ＢＩＤのルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、遊離塩基を基準にして約１５ｍｇ〜約２５ｍｇ  ＱＤのルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、遊離塩基を基準にして約１０ｍｇ〜約２５ｍｇ  ＱＤのルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ＵＳ ７，５９８，２５７、ＵＳ ７，８３４，０２２、ＵＳ ２００９／０２３３９０３、ＵＳ ２０１０／０２９８３５５、ＵＳ ２０１１／０２０７７５４、ＵＳ ２０１０−０２９８３３４、ＵＳ ２０１１−００５９９５１、ＵＳ ２０１１−０２２４１９０、ＵＳ ２０１２−０１４９６８１、ＵＳ ２０１２−０１４９６８２、ＵＳ ２０１３−００１８０３４、ＵＳ ２０１３−００４５９６３、２０１３年５月１７日に出願された米国特許出願第１３／８９６，８０２号、２０１２年１１月１日に出願された米国特許出願第６１／７２１，３０８号、または２０１３年５月１７日に出願された米国特許出願第６１／８２４，６８３号で開示された化合物であり、前記米国特許のそれぞれはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００５３】
本出願は、更に、固形腫瘍を有する患者に対する、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の有効性を予測する方法を提供し、その方法は、その患者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を、固形腫瘍を有する患者集団のＣＲＰのベースライン血清濃度と比較することを含み、ここで、ベースライン血清濃度以上の患者の血清ＣＲＰ濃度は、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の患者に対する有効性を表す。
【００５４】
本出願は、ルキソリチニブまたはその薬学的に許容される塩を使用する治療の膵臓癌患者に対する有効性を予測する方法を提供し、その方法は、その患者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を、固形腫瘍を有する患者集団のＣＲＰのベースライン血清濃度と比較することを含み、ここで、ベースライン血清濃度以上の患者の血清ＣＲＰ濃度は、ルキソリチニブの阻害剤またはその薬学的に許容される塩を使用する治療の患者に対する有効性を表す。いくつかの実施形態では、本方法は、前記比較の前に、ＣＲＰアッセイを使用して、患者のＣＲＰの血清濃度を測定することを更に含む。
【００５５】
いくつかの実施形態では、その予測する方法は、前記比較の前に、ＣＲＰアッセイを使用して、患者のＣＲＰの血清濃度を測定することを更に含む。
【００５６】
いくつかの実施形態では、その予測する方法は、前記患者のために、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を処方（または投与）することを更に含む。
【００５７】
いくつかの実施形態では、その有効性は患者の生存期間の改善である。
【００５８】
いくつかの実施形態では、その有効性は患者の無増悪生存期間の改善である。
【００５９】
本明細書で使用する場合、無増悪生存期間とは、疾患と共に患者は生活するが悪化しない、固形腫瘍の治療中及び治療後の延べ時間を指す。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本出願は：
（ａ）約１０μｇ／ｍＬ以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有する固形腫瘍患者を選択すること；
（ｂ）その患者にルキソリチニブの阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法を提供し；ここでその治療は生存期間または無増悪生存期間の延長を患者にもたらす。
【００６１】
また、本出願は：
（ａ）１または２の改良版グラスゴー予後スコアの固形腫瘍を有する患者を選択すること；
（ｂ）その患者にルキソリチニブの阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与すること
を含む、固形腫瘍を治療する方法も提供し；ここでその治療は生存期間または無増悪生存期間の延長を患者にもたらす。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本方法のそれぞれで言及された固形腫瘍とは、前立腺癌、腎癌、肝癌、大腸癌、直腸癌、腎癌、結腸直腸癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌（例えば、転移性肺癌、中皮腫、または非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ））、頭頸部癌、甲状腺癌、グリア芽細胞腫、カポジ肉腫、キャッスルマンリンパ腫、黒色腫、食道癌、胃食道癌、子宮頸癌、肝細胞癌、子宮内膜癌、尿路上皮癌（例えば、膀胱尿管の癌及び腎盂の癌、例えば移行上皮癌（ＴＣＣ）、または卵巣癌である。
【００６３】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍としては、偽キナーゼドメイン（例えば、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）において少なくとも１つの突然変異を有するような突然変異ＪＡＫ２の発現によって特徴づけられる固形腫瘍が更に挙げられる。
【００６４】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は膵臓癌、前立腺癌、大腸癌、胃癌または肺癌である。
【００６５】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は膵臓癌である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、再発性または治療抵抗性の膵臓腺癌である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、転移性膵臓腺癌である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、進行性膵臓腺癌である。
【００６９】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、再発性または治療抵抗性の転移性膵臓腺癌である。
【００７０】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、再発性または治療抵抗性の進行性膵臓腺癌である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は前立腺癌である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は大腸癌である。
【００７３】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は胃癌である。
【００７４】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は肺癌である。
【００７５】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は子宮内膜癌である。
【００７６】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は非小細胞性肺癌である。
【００７７】
別の態様では、本出願は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を有する患者において生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法を提供し、ここでその患者はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇した血清濃度を有し、その方法は、その患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含み、ここでその投与は患者の生存期間または無増悪生存期間を延長させる。
【００７８】
また、本出願は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を有する患者において生存期間または無増悪生存期間を延長させる方法も提供し、ここでその患者は１または２の改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）を有し、その方法は、その患者に対してＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含み、ここでその投与は患者の生存期間または無増悪生存期間を延長させる。
【００７９】
更に、本出願は、治療を必要としている患者におけるびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を治療する方法を提供し、ここでその患者は１または２の改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）を有し、その方法は、その患者に対してヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を投与することを含む。
【００８０】
更に、本出願は：
（ａ）固形腫瘍を有する患者集団に関するＣＲＰのベースライン血清濃度の中央値以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有するリンパ腫患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を治療する方法を提供する。
【００８１】
また、本出願は：
（ａ）約１０μｇ／ｍＬ以上であるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を有するリンパ腫患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を治療する方法も提供する。
【００８２】
更に、本出願は：
（ａ）１または２の改良版グラスゴー予後スコアのリンパ腫を有する患者を選択すること；
（ｂ）その患者にＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤の治療有効量を投与すること
を含む、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を治療する方法を提供する。
【００８３】
また、本出願は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫を有する患者に対する、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の有効性を予測する方法も提供し、その方法は、その患者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を、リンパ腫を有する患者集団のＣＲＰのベースライン血清濃度と比較することを含み、ここで、ベースライン血清濃度以上の患者の血清ＣＲＰ濃度は、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を使用する治療の患者に対する有効性を示す。
【００８４】
いくつかの実施形態では、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫は、活性化されたＢ細胞様（ＡＢＣ）びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＡＢＣ−ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態では、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫は、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＧＣＢ−ＤＬＢＣＬ）である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、本方法のいずれもが、１種以上の追加の化学療法剤を投与することを含むことができる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、１種以上の化学療法剤は、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ１阻害剤、プラチナの類似化合物、タキサン、アントラサイクリン、ＥＧＦＲ阻害剤、及びそれらの組み合わせから選択される。
【００８７】
いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤としてはカペシタビン、ゲムシタビン、及びフルオロウラシル（５−ＦＵ）が挙げられる。
【００８８】
いくつかの実施形態では、タキサンとしては、パクリタキセル、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射可能な懸濁液用のパクリタキセル−タンパク質結合粒子）、及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル）が挙げられる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、プラチナ類似化合物としては、オキサリプラチン、シスプラチン、及びカルボプラチンが挙げられる。
【００９０】
いくつかの実施形態では、トポイソメラーゼ１阻害剤としては、イリノテカン及びトポテカンが挙げられる。
【００９１】
いくつかの実施形態では、アントラサイクリンとしては、ドキソルビシンまたはドキソルビシンのリポソーム処方物が挙げられる。
【００９２】
いくつかの実施形態では、１種以上の化学療法剤は、１種以上の追加の化学療法剤から選択され、カペシタビン、ゲムシタビン、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射可能な懸濁液用のパクリタキセル−タンパク質結合粒子）、ドセタキセル、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、イリノテカン、トポテカン、パクリタキセル、ロイコボリン、ドキソルビシン、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（５−ＦＵ、ロイコボリン、イリノテカン及びオキサリプラチン）である。
【００９３】
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＦＯＬＦＯＸ（フォリン酸（ロイコボリン）、５−ＦＵ、及びオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）である。
【００９４】
いくつかの実施形態では、１種以上の追加の化学療法剤はカペシタビンである。
【００９５】
いくつかの実施形態では、１種以上の追加の化学療法剤はカペシタビン及びオキサロプラチンである。
【００９６】
いくつかの実施形態では、１種以上の追加の化学療法剤はフルオロウラシル（５−ＦＵ）である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、１種以上の追加の化学療法剤は、ゲムシタビン及びＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射可能な懸濁液用のパクリタキセル−タンパク質結合粒子）である。
【００９８】
ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤としては、その阻害剤の薬学的に許容される塩を挙げることができる。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」とは、化合物の誘導体を指しており、その親化合物は、既存の酸部分または塩基部分をその塩の形態へと変換することによって、修飾される。薬学的に許容される塩の例としては、アミンのような塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩；カルボン酸のような酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、それらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩としては、例えば非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の非毒性塩が挙げられる。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学法によって、塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般的に、係る塩は、これらの化合物の遊離の酸または塩基の形態を、化学量論的な量の適当な塩基または酸と、水中または有機溶媒中、または前記二つの混合物中で反応させることによって調製することができる；一般的には、非水性の媒体、例えばエーテル、酢酸エチル、アルコール（例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、もしくはブタノール）またはアセトニトリル（ＡＣＮ）が好ましい。適当な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）で認められ、前記文献のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９９】
本明細書で使用する場合、互換可能に使用される用語「個体」または「患者」は、任意の動物、例えば哺乳類、好ましくはマウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類を指しており、最も好ましくはヒトを指している。
【０１００】
本明細書で使用する場合、「治療有効量」というフレーズは、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって探求されている組織、システム、動物、個体またはヒトでの生物学的応答または薬物応答を誘発する活性化合物または医薬品の量を指しており、その応答としては以下の一つ以上が挙げられる：すなわち、
（１）疾患の予防；例えば、疾患、状態または障害の発症を促し得るが、まだその疾患の病理または総体的症状を経験または示していない個人において、疾患、状態または障害を予防すること；
（２）疾患の阻害；例えば、疾患、状態または障害の病理または総体的症状を経験または示している個体において、疾患、状態または障害を阻害すること（すなわち、病理及び／または総体的症状の更なる進行を阻止すること）、及び
（３）疾患の寛解；例えば、疾患、状態または障害の病理または総体的症状を経験または示している個体において、疾患、状態または障害を寛解すること（すなわち、病理及び／または総体的症状を後退させること）。
【０１０１】
医薬処方物及び剤形
医薬として使用する場合、ＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤は、医薬組成物の形態で投与することができる。これらの組成物は、製薬業で公知の方法で調製することができ、局所的または全身的な治療が要求されるか否かにしたがって、また治療される領域にしたがって、様々な経路で投与することができる。投与は、局所（例えば経皮、上皮、経眼及び経粘膜、例えば鼻腔内、経膣及び直腸送達）、肺（例えば、散剤またはエアロゾルの吸入またはガス注入によって、例えば噴霧器によって；気管内または鼻腔内）、経口または非経口であってよい。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、または注射もしくは注入；または頭蓋内、例えばくも膜下腔内もしくは脳室内投与が挙げられる。非経口投与は、単回ボーラス投与の形態であることができ、または例えば連続注入ポンプによるものであってもよい。局所投与のための医薬組成物及び医薬処方物としては、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液剤及び散剤が挙げられる。従来の医薬用担体、水性、粉末または油性の基剤、増粘剤などが必要または望ましい場合もある。被覆されたサック及びグローブなども有用であり得る。
【０１０２】
また、本方法は、１種以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて、活性成分として、１種以上のＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤を含有する医薬組成物を利用することもできる。本発明の組成物の作製では、その活性成分は、典型的には、賦形剤と混合されるか、賦形剤によって希釈されるか、または例えばカプセル、サシェ、紙、または他の容器の形態の前記担体内に封入される。賦形剤が、希釈剤として役立つ場合、それは、固体、半固体、または液体の物質であることができ、活性成分のためのビヒクル、担体または媒質として機能する。したがって、本組成物は、錠剤、丸剤、粉末剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、エマルジョン、溶液剤、シロップ剤、エアゾール剤（固体としてまたは液体媒質中）、例えば活性化合物を１０重量％まで含む軟膏剤、軟質ならびに硬質のゼラチンカプセル剤、坐剤、滅菌注射可能な溶液剤、及び滅菌包装された粉末剤の形態であり得る。
【０１０３】
処方物の調製では、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に粉砕して適当な粒径とすることができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合、２００メッシュ未満の粒径まで粉砕することができる。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、処方物において実質的に均一な分散を提供するために粉砕することによって、例えば約４０メッシュに調整することができる。
【０１０４】
適当な賦形剤のいくつかの例としては、乳糖、ブドウ糖、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが挙げられる。本処方物は、更に：潤滑剤、例えば滑石、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱油；湿潤剤；乳化剤及び懸濁化剤；保存剤、例えばメチル−及びプロピルヒドロキシ−ベンゾエート；甘味剤；及び香味剤を包含することができる。本発明の組成物は、当該技術分野で公知の手順を使用することによって、患者に投与後に、活性成分が、迅速放出、持続放出、または遅延放出されるように処方することができる。
【０１０５】
本組成物は、単位投与剤形で処方することができ、各投与量は、約５〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、より通常は約１００〜約５００ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、または約２５ｍｇの活性成分を含有する。「単位投与剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳類のための単位投与量として適当な物理的に分離した単位を指し、各単位は、適当な医薬用賦形剤と組み合わせて、所望の治療効果をもたらすように計算された、予め決定された量の活性物質を含有している。
【０１０６】
その活性化合物は、広い投与量範囲にわたって効果的であることができ、一般的には、薬学的に有効な量で投与される。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、通常は、医師によって、関連の状況、例えば治療すべき状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、各患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重症度などにしたがって決定されることが理解されるだろう。
【０１０７】
錠剤のような固体組成物を製造するために、主な活性成分を医薬用賦形剤と混合して、本発明化合物の均一混合物を含有する固体の予備処方組成物を作る。この予備処方組成物が均質である場合、組成物を、同等の効果を有する錠剤、丸剤及びカプセル剤といった単位投与剤形に容易に分割できるように、活性成分を、典型的には、組成物全体に均一に分散させる。次いで、この固体の予備処方組成物は、例えば約０．１〜約１０００ｍｇの活性成分を含む、上記のタイプの単位投与剤形へと分割される。
【０１０８】
錠剤または丸剤は、持続性作用の利点をもたらす投与形態を提供するために、コーティングされるか、さもなければ調合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部の投薬成分及び外部の投薬成分（後者は前者を覆うエンベロープの形態である）を含むことができる。２つの投薬成分は、胃での崩壊に耐えるのに役立ち、且つ内部の成分を損なわずに十二指腸に通過させるかまたは放出を遅延させるのに役立つ腸溶層によって分けることができる。そのような腸溶層及びコーティングのために様々な材料を使用することができ、そのような材料としては、いくつかの高分子酸、及び高分子酸と、例えばシェラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースといった材料との混合物が挙げられる。
【０１０９】
経口または注入による投与のために化合物及び組成物を組み込むことができる液体の形態としては、水溶液、好ましくは風味付けされたシロップ、水性または油性の懸濁液、及び食用油、例えば綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、または落花生油を有する風味付けされたエマルジョン、ならびにエリキシル及び類似の薬学的ビヒクルが挙げられる。
【０１１０】
吸入またはガス注入のための組成物としては、薬学的に許容される水性または有機溶媒、またはそれらの混合物中の溶液及び懸濁液、ならびに粉末が挙げられる。液体または固体組成物は上記のような適当な薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、経口または経鼻呼吸経路により局所または全身作用のために投与される。組成物は不活性ガスの使用によって噴霧することができる。噴霧される溶液は噴霧装置から直接吸ってもよいし、または噴霧装置を、顔用マスクテントもしくは間欠的陽圧呼吸機器に取り付けることができる。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、処方物を適当な方法で送達する装置から経口または経鼻的に投与することができる。
【０１１１】
患者に投与される化合物または組成物の量は、投与されるもの、投与目的、例えば予防または治療、患者の状態、投与方法などに依存して変動する。治療用途では、組成物は、疾患に既に罹患している患者に対して、その疾患及びその合併症の症状を治癒させるか少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で投与することができる。有効用量は、治療される疾患の状態、ならびに例えば、疾患の重症度、患者の年齢、体重及び全身状態などの因子に依存して担当医師の判断により変動する。
【０１１２】
患者に投与される組成物は、上記の医薬組成物の形態であり得る。これら組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌することができるか、または無菌ろ過してもよい。水溶液はそのまま使用するためにパッケージにすることができるか、または凍結乾燥することができ、その凍結乾燥された調製物は無菌水性担体と投与前に混合される。化合物調製物のｐＨは、典型的には３〜１１であり、より好ましくは５〜９であり、最も好ましくは７〜８である。特定の上記賦形剤、担体、または安定剤の使用により、医薬塩が形成されることが理解されるであろう。
【０１１３】
本発明化合物の治療投与量は、例えば、治療が行われる特定の用途、化合物の投与方法、患者の健康及び状態、そして処方医師の判断にしたがって変動し得る。医薬組成物における本発明化合物の割合または濃度は、いくつかの因子によって、例えば投与量、化学的性質（例えば疎水性）、及び投与経路によって変動し得る。例えば、本発明の化合物は、非経口投与のための化合物を約０．１〜約１０％ｗ／ｖ含有する生理的緩衝水溶液で提供することができる。いくつかの典型的な用量範囲は、約１μｇ／ｋｇ体重／日〜約１ｇ／ｋｇ体重／日である。いくつかの実施形態では、用量範囲は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である。投与量は、おそらく、疾患または障害のタイプ及び進行の程度、特定の患者の全体的な健康状態、選択された化合物の相対的な生物学的有効性、賦形剤の処方、及びその投与経路といった可変条件に依存する可能性がある。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から得られる用量応答曲線から外挿することができる。
【０１１４】
本発明の組成物は、１種以上の追加の医薬品、例えば化学療法剤、ステロイド、抗炎症化合物、または免疫抑制剤を更に包含することができ、その例は上記の通りである。
【０１１５】
併用療法
１種以上の追加の医薬品、例えば化学療法剤、抗炎症剤、ステロイド、免疫抑制剤、ならびにＢｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦ及びＦＡＫキナーゼ阻害剤、例えばその全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２００６／０５６３９９に記載のもの、または他の薬剤を、本明細書記載の方法で使用するために本明細書記載の剤形と組み合わせて使用することができる。その１種以上の追加の医薬品は、患者に対して同時にまたは逐次的に投与することができる。
【０１１６】
化学療法剤の例としては、プロテオソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）、サリドマイド、レナリミド、及びＤＮＡ−傷害剤、例えばメルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、エトポシド、カルムスチンなどが挙げられる。
【０１１７】
ステロイドの例としては、コルチコステロイド、例えばデキサメタゾンまたはプレドニゾンが挙げられる。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、１種以上の剤形を、１種以上の非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤは、アスピリン、ジフルニサール、サルサラート、イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、オキサプロジン、インドメタシン（Ｉｎｄｏｍｅｔｈｉｃｉｎ）、トルメチン、スリンダク、エトドラク、ケトドラク（ｋｅｔｏｄｏｌａｃ）、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、アセトアミノフェン、セレコキシブ、及びそれらの組み合わせから選択される。
【０１１９】
Ｂｃｒ−Ａｂｌ阻害剤の例としては、米国特許第５，５２１，１８４号、ＷＯ０４／００５２８１、及び米国特許出願第６０／５７８，４９１号に開示されている属及び種の化合物及びその薬学的に許容される塩が挙げられ、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２０】
適当なＦｌｔ−３阻害剤の例としては、ＷＯ０３／０３７３４７、ＷＯ０３／０９９７７１、及びＷＯ０４／０４６１２０で開示されている化合物及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられ、それらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２１】
適当なＲＡＦ阻害剤の例としては、ＷＯ００／０９４９５及びＷＯ０５／０２８４４４で開示されている化合物及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられ、その両方の全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２２】
適当なＦＡＫ阻害剤の例としては、ＷＯ０４／０８０９８０、ＷＯ０４／０５６７８６、ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０１／０６４６５５、ＷＯ００／０５３５９５、及びＷＯ０１／０１４４０２で開示されている化合物及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられ、それらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本発明の剤形の１種以上は、他のキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブと組み合わせて、特にイマチニブまたは他のキナーゼ阻害剤に耐性の患者を治療するために、使用することができる。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、１種以上の本発明の剤形は、固形腫瘍の治療において化学療法剤と組み合わせて使用することができ、その毒性作用を憎悪させることなく化学療法剤単独に対する応答と比較して治療応答を改善することができる。追加の医薬品の例としては、メルファラン、メルファラン＋プレドニゾン［ＭＰ］、ドキソルビシン、デキサメタゾン、及びＶｅｌｃａｄｅ（ボルテゾミブ）が挙げられるが、それらに限定されない。治療で使用される更なる追加の薬剤としては、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦ、ｍＴｏｒ、ＥＧＦＲ、ＰＩ３Ｋ−デルタ、及びＦＡＫキナーゼ阻害剤が挙げられる。相加効果または相乗効果は、本発明の剤形と追加の薬剤との組み合わせの望ましい結果である。その薬剤はＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤と単一もしくは連続の剤形にて組み合わせることができるか、またはその薬剤は別々の剤形として同時もしくは逐次に投与することができる。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、コルチコステロイド、例えばデキサメタゾンは本発明の剤形で組み合わせて患者に投与され、ここでデキサメタゾンは連続的ではなく間欠的に投与される。
【０１２６】
いくつかの更なる実施形態では、１種以上のＪＡＫ阻害剤またはＩＬ−６シグナル伝達阻害剤と他の治療剤との組み合わせは、骨髄移植または幹細胞移植の前、最中及び／または後に患者に対して投与することができる。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、フルオシノロンアセトニド（Ｒｅｔｉｓｅｒｔ（登録商標））またはリメキソロン（ＡＬ−２１７８、Ｖｅｘｏｌ、Ａｌｃｏｎ）である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤はシクロスポリン（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））である。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、コルチコステロイドである。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドは、トリアムシノロン、デキサメタゾン、フルオシノロン、コルチゾン、プレドニゾロン、またはフルメトロン（ｆｌｕｍｅｔｈｏｌｏｎｅ）である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、Ｄｅｈｙｄｒｅｘ（商標）（Ｈｏｌｌｅｓ  Ｌａｂｓ）、Ｃｉｖａｍｉｄｅ（Ｏｐｋｏ）、ヒアルロン酸ナトリウム（Ｖｉｓｍｅｄ，Ｌａｎｔｉｂｉｏ／ＴＲＢ  Ｃｈｅｍｅｄｉａ）、シクロスポリン（ＳＴ−６０３，Ｓｉｒｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＡＲＧ１０１（Ｔ）（テストステロン、Ａｒｇｅｎｔｉｓ）、ＡＧＲ１０１２（Ｐ）（Ａｒｇｅｎｔｉｓ）、エカベトナトリウム（Ｓｅｎｊｕ−Ｉｓｔａ）、ゲファルナート（Ｓａｎｔｅｎ）、１５−（ｓ）−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５（Ｓ）−ＨＥＴＥ）、セビレミン（ｃｅｖｉｌｅｍｉｎｅ）、ドキシサイクリン（ＡＬＴＹ−０５０１，Ａｌａｃｒｉｔｙ）、ミノサイクリン、ｉＤｅｓｔｒｉｎ（商標）（ＮＰ５０３０１，Ｎａｓｃｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シクロスポリンＡ（Ｎｏｖａ２２００７，Ｎｏｖａｇａｌｉ）、オキシテトラサイクリン（デュラマイシン、ＭＯＬＩ１９０１，Ｌａｎｔｉｂｉｏ）、ＣＦ１０１（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−［６−［（３−ヨードフェニル）メチルアミノ］プリン−９−イル］−Ｎ−メチル−オキソラン−２−カルバミル、Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ（Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ボクロスポリン（ＬＸ２１２またはＬＸ２１４，Ｌｕｘ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＲＧ１０３（Ａｇｅｎｔｉｓ）、ＲＸ−１００４５（合成レゾルビン類似化合物、Ｒｅｓｏｌｖｙｘ）、ＤＹＮ１５（Ｄｙａｎｍｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、リボグリタゾン（ＤＥ０１１、Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｏ）、ＴＢ４（ＲｅｇｅｎｅＲｘ）、ＯＰＨ−０１（Ｏｐｈｔａｌｍｉｓ  Ｍｏｎａｃｏ）、ＰＣＳ１０１（Ｐｅｒｉｃｏｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ＲＥＶ１−３１（Ｅｖｏｌｕｔｅｃ）、Ｌａｃｒｉｔｉｎ（Ｓｅｎｊｕ）、レバミピド（Ｏｔｓｕｋａ−Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＯＴ−５５１（Ｏｔｈｅｒａ）、ＰＡＩ−２（ペンシルベニア大学及びテンプル大学）、ピロカルピン、タクロリムス、ピメクロリムス（ＡＭＳ９８１，Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ロテプレドノールエタボネート、リタキシマブ、ジカホゾールテトラナトリウム（ＩＮＳ３６５，Ｉｎｓｐｉｒｅ）、ＫＬＳ−０６１１（Ｋｉｓｓｅｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、デヒドロエピアンドロステロン、アナキンラ、エファリズマブ、ミコフェノール酸ナトリウム、エタナーセプト（Ｅｍｂｒｅｌ（登録商標））、ヒドロキシクロロキン、ＮＧＸ２６７（ＴｏｒｒｅｙＰｉｎｅｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、アクテムラ、ゲムシタビン、オキサリプラチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、またはサリドマイドから選択される。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗血管新生剤、コリン作用アゴニスト、ＴＲＰ−１受容体調節因子、カルシウムチャネル遮断剤、ムチン分泌促進剤、ＭＵＣ１刺激剤、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、Ｐ２Ｙ２受容体作用剤、ムスカリン様受容体作用剤、ｍＴＯＲ阻害剤、別のＪＡＫ阻害剤、Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤、Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤、ＲＡＦキナーゼ阻害剤、及びＦＡＫキナーゼ阻害剤、例えばその全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００６／０５６３９９に記載されているものである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、テトラサイクリン誘導体（例えばミノサイクリンまたはドキシクリン（ｄｏｘｙｃｌｉｎｅ））である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＦＫＢＰ１２と結合する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、アルキル化剤またはＤＮＡ架橋剤；代謝拮抗剤／脱メチル化剤（例えば５−フルオロウラシル（ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、カペシタビンまたはアザシチジン）；抗ホルモン療法剤（例えばホルモンレセプター拮抗剤、ＳＥＲＭまたはアロマターゼ阻害剤）；有糸分裂阻害剤（例えばビンクリスチンまたはパクリタキセル）；トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤（例えばミトキサントロン及びイリノテカン）；アポトーシス誘発因子（例えばＡＢＴ−７３７）；核酸療法剤（例えばアンチセンスまたはＲＮＡｉ）；核内レセプターリガンド（例えばアゴニスト及び／または拮抗剤：全トランス型レチン酸またはベキサロテン）；エピジェネティック標的剤、例えばヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えばボリノスタット）、低メチル化剤（例えばデシタビン）；タンパク質安定性の調節剤、例えばＨｓｐ９０阻害剤、ユビキチン及び／またはユビキチン様共役もしくは脱共役分子；またはＥＧＦＲ阻害剤（エルロチニブ）である。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤としては、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、麻酔剤、抗炎症剤、例えばステロイド及び非ステロイド抗炎症剤、抗アレルギー剤が挙げられる。適当な薬剤の例としては、アミノ配糖体、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、ストレプトマイシン、ネチルマイシン、及びカナマイシン；フルオロキノロン、例えばシプロフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、ロメフロキサシン、レボフロキサシン、及びエノキサシン；ナフチリジン；スルホンアミド；ポリミキシン；クロラムフェニコール；ネオマイシン；パラモマイシン；コリスチメタート；バシトラシン；バンコマイシン；テトラサイクリン；リファンピン及びその誘導体（「リファンピン」）；シクロセリン；β−ラクタム；セファロスポリン；アンホテリシン；フルコナゾール；フルシトシン；ナタマイシン；ミコナゾール；ケトコナゾール；コルチコステロイド；ジクロフェナク；フルルビプロフェン；ケトロラック；スプロフェン；クロモリン；ロドキサミド；レボカバスチン；ナファゾリン；アンタゾリン；フェニラミン；またはアザライド抗生物質が挙げられる。
【０１３４】
明確にするために別々の実施形態の文脈で説明される本発明の特定の特徴は、（あたかも明細書の実施形態が、複数の従属請求項として記載されているかのように）単一の実施形態の組み合わせによっても提供され得る、ことが更に認められる。
【０１３５】
実施例
実施例１
ベースライン中央値を超えるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルを有する膵臓患者における延命効果
本試験は、この患者集団に関してカペシタビン／ルキソリチニブ併用の安全性を確認するためにデザインされた安全性を検討する非盲検試験（１〜２つのコホートから成る）、続いて２つの治療群による無作為抽出二重盲検試験から成っていた。すべての対象は、試験薬剤に加えて、カペシタビン療法を受けた。安全性導入期では、試験薬剤は非盲検のルキソリチニブリン酸塩であり；無作為化試験のためには、盲検化された試験薬剤はルキソリチニブリン酸塩またはそのプラセボであった。
【０１３６】
対象の治療は、２１日のサイクルを繰り返すことから成っていた。カペシタビンは各サイクルの最初の１４日間自己投与され、そして試験薬剤はすべてのサイクルの間、自己投与された。治療サイクルは、レジメンが忍容性である限りにおいて継続し、対象は中止基準を満たさなかった。疾患憎悪の場合、カペシタビン療法を中止し；対象には試験薬剤の投与を継続した。試験薬剤による治療を中止した対象は、その後の治療レジメン及び生存を追跡した。
【０１３７】
試験デザイン
当業者によって行われた試験のパラメーターは後述する。
【０１３８】
安全性導入（ｓａｆｅｔｙ  ｒｕｎ−ｉｎ）：
コホート１：９人の対象を、カペシタビン２０００ｍｇ／ｍ２／日（１０００ｍｇ／ｍ２ＢＩＤとして）＋遊離塩基を基準としてルキソリチニブリン酸塩１５ｍｇ  ＢＩＤが投与されるように登録する。コホート１の３人以上の対象が治療の第１サイクル（２１日）内でＤＬＴを経験する場合、第２コホートが登録される。
【０１３９】
コホート２：９人の追加の対象は、カペシタビン２０００ｍｇ／ｍ２／日（１０００ｍｇ／ｍ２ＢＩＤとして）＋遊離塩基を基準としてルキソリチニブリン酸塩１０ｍｇ  ＢＩＤを投与する。
【０１４０】
発生する毒性がカペシタビンと明らかに関係がある場合には、より低用量のルキソリチニブよりも、または、より低用量のルキソリチニブに加えて、より低用量のカペシタビンが考慮される。
【０１４１】
したがって、本試験の無作為化部分のために選択される用量は、その用量で試験される対象の少なくとも３分の２が２１日以内に用量を減少させる必要のない、忍容性の用量である。３を超えるＤＬＴがコホート１及びコホート２で生じた場合、本研究の無作為化部分は登録されない。
【０１４２】
本試験の無作為化部分：
１２０人の対象を、２つの治療群へと１：１に無作為化した：
群１：カペシタビン＋試験薬剤（ルキソリチニブリン酸塩）
群２：カペシタビン＋試験薬剤（プラセボ）
対象、研究者及び実施責任組織は、治療割り付けに対して盲検化される。
試験薬剤の開始用量は、安全性導入期中に選択された用量である。
【０１４３】
併用療法、投与量及び投与法：
カペシタビン（非盲検の市販品として）を、各サイクルの最初の１４日間、１日２回（ＢＩＤ）経口で自己投与する。試験薬剤（ルキソリチニブまたはプラセボ）は、全２１日間のサイクル中、１日２回（ＢＩＤ）経口で自己投与する。安全性導入中の試験薬剤は、本試験の無作為化部分で使用され、各対象において、安全性の検査室的評価に基づいて、治療の経過中に、試験薬剤またはカペシタビンの用量を減少させてもよい。安定な安全性パラメーターを有する対象は、定義済みアルゴリズムにしたがって、個別に、試験薬剤の用量を増加させる条件を満たし得る。
【０１４４】
参加期間：試験対象の参加は平均して４〜８ヵ月であると予想される。
【０１４５】
試験集団：再発性または治療抵抗性の転移性膵臓腺癌を有する対象。
【０１４６】
選択基準：
・転移性膵臓癌の診断；対象は、組織学的に確認される測定可能なまたは評価可能な疾患を有していなければならない
・６０以上のカルノフスキーパフォーマンスステータス
・対象は、転移性膵臓癌のための第１選択薬ゲムシタビン治療に失敗していなければならない：
代わりの化学療法剤は、対象がゲムシタビンの投与に忍容性がないかまたは不適格であるイベントにおいて、第１選択療法としての許容可能な代替である
・過去の化学療法の完了から２週間以上経過し、対象は回復していなければならないか、またはあらゆる関連毒性から新たな安定したベースライン状態でなければならない
【０１４７】
除外基準
・転移性疾患のための２つ以上の過去の化学療法レジメン（アジュバント療法は含まない）
・ＣＮＳ転移の証拠（＞３ヵ月の間安定でない場合）または管理できない発作の既往歴
・第二選択の治療として行われている継続中の放射線治療または過去の放射線治療
・皮膚の基底細胞癌または扁平上皮癌以外の他の活性な悪性腫瘍
・食物を嚥下できない、または経口薬剤の投与を妨げる上部消化管のあらゆる状態
・腸閉塞症の最近（≦３ヵ月）の既往歴
・フルオロピリミジンに対する過去の激しい反応、既知のＤＰＤ欠乏、または他の既知の５−ＦＵに対する感受性
・不十分な腎臓、肝臓及び骨髄の機能：
・ＡＮＣ＜１５００／ｍｍ３
・血小板＜７５，０００／ｍｍ３
・ＡＳＴ／ＡＬＴ＞２．５ Ｘ ＵＬＮ；または肝転移が認められる場合 ＞５ Ｘ ＵＬＮ
・総ビリルビン＞１．５ Ｘ ＵＬＮ
・クレアチニンクリアランス＜５０ｃｃ／分
【０１４８】
対象の計画数：
本試験の安全性導入部分で約９〜１８人の対象、続いて本試験の無作為化部分で１２０人の対象２つの治療群のそれぞれで１：１。
【０１４９】
試験スケジュール／手順：
各サイクルの１日目で、身体検査及び臨床検査を含めるために検査訪問を行う。更に、検査通院を、サイクル１及びサイクル２の間に毎週行い、そしてすべてのその後のサイクル中の中間（約１０日目）で１回行う。腫瘍サイズの再評価（典型的にはコンピュータ断層による）は、試験参加期間中、６週毎に行う。患者による医療効果評価を、いくつかの検査訪問で収集する。各試験サイクルの１日目は、カペシタビンの１４日コースの開始である。カペシタビンが中止される場合、試験サイクルは２１日の反復スケジュールを追跡し続ける。すべての試験治療の中止後、評価を中断し、生存及びその後の抗癌療法について追跡する。
試験施設の計画数：約５０
評価される試験期間：２０ヵ月
統計法：生存データを、９５のイベント後にカプランマイヤー法によって分析する。ハザード比及びその９５％信頼区間は、対数順位検定及びその分散に基づいて決定される。真のハザード比が０．６である場合、１群あたり対象６０人のサンプルサイズにおいて、１群と２群との間の生存期間の差を検出する検出力は８８％である。これは、０．１の片側アルファ、対象群における４ヵ月の期待される生存期間、８ヵ月の登録、及び最後の対象から８ヵ月の追跡を仮定している。死亡の目標数の半分が得られた時に、無益性に関して予め計画された中間解析を行う。
【０１５０】
無作為化試験の結果
ベースラインＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルを、群１及び群２において、治療前に各患者について測定した。血清ＣＲＰ濃度は、ＲＭＢ（ＲＢＭ多重化Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標））市販アッセイ（Ｍｙｒｉａｄ  ＲＢＭ）によって測定した。子会社はＭｙｒｉａｄ  ＲＢＭである。ＣＲＰを測定するためのいくつもの公知の市販の臨床アッセイが存在する。Ｍｙｒｉａｄ  ＲＢＭ  ＣＲＰアッセイは、市販の試薬（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及び臨床Ｑｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｓ  ＣＲＰアッセイを使用するＬｕｍｉｎｅｘ  ＣＲＰアッセイと相関があることが分かった。ベースラインＣＲＰレベルは、患者毎に計算した。患者は、２つのグループを含んでいた。グループ１は、無作為化し、試験薬剤を投与したすべての患者を包含していた。グループ２は、スクリーニングに合格し、無作為化されたが、試験薬剤を投与されなかった患者の小さなサブセットである。グループ１では、ＣＲＰレベルは、試験薬剤の初回投与前に採取された最後に検査されたＣＲＰレベルであった。グループ２では、ＣＲＰの最後の利用可能な値は、利用可能な場合には、例えばスクリーニング手順から採取した。すべての患者に関するベースラインＣＲＰレベルと一緒に、当業者に公知の通常の統計法を使用して、中央値を計算した。患者集団に関するベースラインＣＲＰの中央値は１３μｇ／ｍＬであった。
【０１５１】
生存データは、Ｃｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定を使用して、全生存期間のカプランマイヤー解析によって、説明のように統計学的に分析した。表１及び図１はベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬ以下であった患者に関する結果を示しており、表２及び図２はベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬを超えていた患者に関する結果を示している。打ち切られた対象は、フォローアップが不能だったか、または臨床データの締切日前に記録された死亡が無かった患者であった。
【０１５２】
更に、無増悪生存期間を、Ｃｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定を使用して、無増悪生存期間のカプランマイヤー解析によって、同様に分析した。表３及び図３はベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬ以下であった患者に関する結果を示しており、表４及び図４はベースラインＣＲＰが１３μｇ／ｍＬを超えていた患者に関する結果を示している。
【表３】
2016528288.tif 000016
［１］ハザード比及び９５％ＣＩは、同順位（ｔｉｅ）のために使用されるＥｆｒｏｎ法と共にＣｏｘ回帰モデルを使用して推定した。
［２］時間の中央値及び９５％ＣＩは、Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ及びＣｒｏｗｌｅｙを使用して推定した。
［３］片側ｐ値は、Ｃｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定に基づいて計算した。
【表４】
2016528288.tif 000017
［１］ハザード比及び９５％ＣＩは、同順位（ｔｉｅ）のために使用されるＥｆｒｏｎ法と共にＣｏｘ回帰モデルを使用して推定した。
［２］時間の中央値及び９５％ＣＩは、Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ及びＣｒｏｗｌｅｙを使用して推定した。
［３］片側ｐ値は、Ｃｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定に基づいて計算した。
【表５】
2016528288.tif 000018
［１］無増悪生存期間は、ＲＥＣＩＳＴ １．１によって、死亡または進行性疾患の初回発生と定義した。
［２］ハザード比及び９５％ＣＩは、同順位（ｔｉｅ）のために使用されるＥｆｒｏｎ法と共にＣｏｘ回帰モデルを使用して推定した。
［３］時間の中央値及び９５％ＣＩは、Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ及びＣｒｏｗｌｅｙを使用して推定した。
［４］両側ｐ値は、Ｃｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定に基づいて計算した。
【表６】
2016528288.tif 000019
［１］無増悪生存期間は、ＲＥＣＩＳＴ １．１によって、死亡または進行性疾患の初回発生と定義した。
［２］ハザード比及び９５％ＣＩは、同順位（ｔｉｅ）のために使用されるＥｆｒｏｎ法と共にＣｏｘ回帰モデルを使用して推定した。
［３］時間の中央値及び９５％ＣＩは、Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ及びＣｒｏｗｌｅｙを使用して推定した。
［４］両側ｐ値は、Ｃｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定に基づいて計算した。
【０１５３】
表５は、ＣＲＰ＞１３ｍｇ／Ｌサブグループ内におけるＣｏｘ回帰分析の結果を示している。回帰モデルは、よくデータにフィットしていて（ｐ＝０．０２２）、モデルにおけるベースライン特性を説明しており、ルキソリチニブに有利な観察されたＨＲはほとんど維持される（ＨＲ ０．５０、９５％ＣＩ：０．２６−０．９６；ｐ＝０．０３７）。
【表７】
2016528288.tif 000020
１）ハザード比及び９５％ＣＩは、同順位（ｔｉｅ）のために使用されるＥｆｒｏｎ法と共にＣｏｘ回帰モデルを使用して推定した。
２）両側ｐ値はＣｏｘ比例ハザードモデルのスコア検定に基づいて計算した。
【０１５４】
表６は、上記サブグループのすべてを包含するＣｏｘ回帰分析の結果を示しているが、ルキソリチニブが不相応な有効性を提供するという仮説に基づいて事前指定された３つのサブグループに関しては正式な相互作用検定も一緒に行った。これらの３つのサブグループでは、試験母集団中央値を超えるＣＲＰ（＞１３ｍｇ／Ｌ）のみが、０．０３２の両側Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正ｐ値を有する規定因子として現れる。
【表８】
2016528288.tif 000021
１）同順位を処理するＥｆｒｏｎ法を使用するスコア試験に基づいている。
２）検定する３つの仮説を想定している。
【０１５５】
無増悪生存期間
すべての無作為化患者を包含する治療意図分析では、無増悪生存期間（ＰＦＳ）に関するＨＲは０．７５（ＣＩ：０．５２、１．１、ｐ＝０．１４）であった。ＣＲＰ＞１３ｍｇ／Ｌを有する患者におけるＰＦＳの評価は、０．６２（９５％ＣＩ：０．３５−１．１、ｐ＝０．１０）のＨＲを示した。３、６及び９ヵ月の無増悪生存期間の確率は、ルキソリチニブ群で３５％、２１％及び１１％であり、プラセボ群で１３％、５％、及び０％であった。ＣＲＰ＜１３ｍｇ／Ｌを有する患者におけるＰＦＳの評価は、０．８２（９５％ＣＩ：０．４７−１．４１、ｐ＝０．４７）のハザード比を示した。３、６及び９ヵ月のＰＦＳの確率は、ルキソリチニブ群で３９％、２５％及び１０％であり、プラセボ群で３８％、１４％、及び４％であった。
【０１５６】
改良版グラスゴー予後スコア（ｍＧＰＳ）
事前に指定されたサブグループ分析では、カットオフとして全試験母集団のＣＲＰの中央値（１３ｍｇ／Ｌ）を使用したが；事後の分析では、ｍＧＰＳと一致している１０ｍｇ／Ｌのカットオフと、臨床的に意味がある上昇に関する一般的に認められている基準を使用して行った（ＭｃＭｉｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００７；ＦＤＡ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｏｎ  ＣＲＰ  Ａｓｓａｙｓ）。ＣＲＰ＞１０ｍｇ／Ｌを有する患者（Ｎ＝７０）では、ルキソリチニブに有利なＨＲは０．６０（９５％ＣＩ：０．３５１−１．０２８、両側ｐ＝０．０６）であり、ＣＲＰ≦１０ｍｇ／Ｌを有する患者（Ｎ＝５１）では、そのＨＲは０．９１（９５％ＣＩ：０．４６−１．７４、ｐ＝０．７７）であった。
【０１５７】
ｍＧＰＳに基づくＯＳのカプランマイヤー解析では、ｍＧＰＳを増加させることで、ＯＳにおけるルキソリチニブとプラセボ群との間に意味のある分離が存在した。０のｍＧＰＳを有する患者（Ｎ＝５１）では、そのＨＲは０．９１（９５％ＣＩ：０．４６−１．７４、ｐ＝０．７７）であった。１のｍＧＰＳを有する患者（Ｎ＝３４）では、そのＨＲは０．７１（９５％ＣＩ：０．３２−１．５４、ｐ＝０．３９）であった。２のｍＧＰＳを有する患者（Ｎ＝３６）では、そのＨＲは０．４９（９５％ＣＩ：０．２３−１．０７、ｐ＝０．０６）であった。全３群に関するカプランマイヤー曲線は図５に示してある。
【０１５８】
客観的奏効率
少なくとも１つのベースライン後の腫瘍評価を有する患者に関して固形腫瘍の治療効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１、標的病変の一次元指標の合計）によって評価された全身腫瘍組織量変化のウォーターフォールプロットから、ルキソリチニブで治療された患者は、療法に対する最善の応答として腫瘍の収縮または安定化を示す可能性が高いことが分かった。ＣＲＰ＞１３ｍｇ／Ｌを有するプラセボ投与の患者は、ベースライン後のスキャンを受けるほど十分に長くほとんどが生存せず（Ｎ＝１１）、ほんの少数の患者のみが、応答し、または疾患が安定化した（３６．４％）のに対して、ルキソリチニブを投与したＣＲＰ＞１３ｍｇ／Ｌを有する患者の大部分はベースライン後の評価を受け（Ｎ＝１９）、その大多数は疾患の安定化を示した（６８．４％）。
【０１５９】
実施例Ｊ１．（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）アセトニトリル
【化１】
2016528288.tif 000022
工程１．ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−２，２−ジメチル−４−ビニル−１，３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート
テトラヒドロフラン（１４０ｍＬ）中メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（５．６３ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の懸濁液に対して、ヘキサン（７．３５ｍＬ、１８．４ｍｍｏｌ）中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウムを加えた。その濃い赤色溶液を０℃で１時間撹拌した。次いで、テトラヒドロフラン（７．３ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｒ）−４−ホルミル−２，２−ジメチル−１，３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート（Ａｌｄｒｉｃｈ製、３．０１ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）溶液を、０℃で滴加した。その赤色溶液を室温まで温め、そして１２時間撹拌した。ヘキサンを、その反応混合物に４：１（ｖ／ｖ）の比で加えた。その懸濁液をセライトでろ過し、そのろ液を濃縮した。得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％酢酸エチルで溶出）で精製して、無色の油状物として化合物（１．９２ｇ、６４％）を得た。
【０１６０】
工程２．ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−１−（ヒドロキシメチル）プロプ−２−エン−１−イル］カルバメート
メタノール（８３ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−２，２−ジメチル−４−ビニル−１，３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート（１．９０ｇ、８．３６ｍｍｏｌ）溶液に対して、０℃で、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．８０ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を一晩ゆっくり室温に温めた。その反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、濃縮し、次いで酢酸エチルで希釈した。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（２回）及び塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、無色の油状物として所望の生成物（１．１８７ｇ、７６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．８１ （１Ｈ，ｍ），５．２５（２Ｈ，ｍ），４．９０（１Ｈ，ｍ），４．２５（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．６７（２Ｈ，ｍ），１．４５（９Ｈ，ｓ）ｐｐｍ．
【０１６１】
工程３．ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−１−（｛［１−（ヒドロキシメチル）プロプ−２−エン−１−イル］オキシ｝メチル）プロプ−２−エン−１−イル］カルバメート
フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−１−（ヒドロキシメチル）プロプ−２−エン−１−イル］カルバメート（０．４０１ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５９ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−（１Ｓ，２Ｓ）−シクロヘキサン−１，２−ジイルビス［２−（ジフェニルホスフィノ）−１−ナフトアミド］（１５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、及び４−ジメチルアミノピリジン（７８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を入れた。その反応混合物を３回Ｎ２でパージし、次いで塩化メチレン（２１．３ｍＬ）及びＴＨＦ（１３０μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）中１．０Ｍトリエチルボランを順次加えた。１０分間撹拌した後、２−ビニルオキシラン（０．１５０ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を一晩撹拌した。その反応をジクロロメタン及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そして濃縮した。その粗残留物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）で精製し、所望の生成物（０．２７１ｇ、４９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．８５（１Ｈ，ｍ），５．６７（１Ｈ，ｍ），５．８４〜５．１７（４Ｈ，ｍ），４．８３（１Ｈ，ｍ），４．３０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．８３（１Ｈ，ｍ），３．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５及び６．９Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｍ），３．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５及び６．９Ｈｚ），１．４５（９Ｈ，ｓ）ｐｐｍ．
【０１６２】
工程４．２−（｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタ−３−エン−１−イル｝オキシ）ブタ−３−エン−１−イルアセテート
塩化メチレン（１０ｍＬ）中ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−１−（｛［１−（ヒドロキシメチル）プロプ−２−エン−１−イル］オキシ｝メチル）プロプ−２−エン−１−イル］カルバメート（２６８ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）の混合物に対して、トリエチルアミン（４３５μＬ、３．１２ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を０℃に冷却し、そして塩化アセチル（１５０μＬ、２．１ｍｍｏｌ）を滴加した。その反応を室温で２時間撹拌し、次いで水で急冷した。その有機層を濃縮し、そして得られた残留物をシリカゲルで精製して（２０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）、所望の生成物（０．２６ｇ、８５％）を得た。Ｃ１０Ｈ１８ＮＯ３（Ｍ−１００＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２００．１；測定値：２００．１。
【０１６３】
工程５．｛（５Ｓ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝メチルアセテート
５００ｍＬの２口丸底フラスコに、ベンジリデン（ジクロロ）（１，３−ジメシチルイミダゾリジン−２−イド−２−イル）（トリシクロヘキシルホスホラニル）ルテニウム（３８ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を加えた。窒素で３回パージした後、ジクロロメタン（無水、８ｍＬ）を加え、続いて２−（｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタ−３−エン−１−イル｝オキシ）ブタ−３−エン−１−イルアセテート（２６５ｍｇ、０．８８５ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温で１５時間撹拌した。その混合物を真空中で濃縮した。その残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサンそしてヘキサン中２５％ＥｔＯＡｃで溶出）で精製して、所望の生成物を茶色の油状物（０．２０５ｇ、８５％）として得た。Ｃ９Ｈ１４ＮＯ５（Ｍ＋Ｈ−Ｂｕ＋Ｈ）+について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２１６．１；測定値：２１６．１。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．９４（０．１７Ｈ，ｍ），５．８４（０．８３Ｈ，ｍ），５．６９（１Ｈ，ｍ），４．８９（０．１３Ｈ，ｍ），４．７０（０．８３Ｈ，ｍ），４．２５（１Ｈ，ｍ），４．０５（４Ｈ，ｍ），３．５６（０．１３Ｈ，ｍ），３．３８（０．８７Ｈ，ｍ），２．０４（２．４９Ｈ，ｓ），２．０３（０．５１Ｈ，ｍ），１．３８（９Ｈ，ｓ）ｐｐｍ（生成物はトランス−及びシス−異性体の約５：１の混合物であった）．
【０１６４】
工程６．［（５Ｓ）−５−アミノ−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］メチルアセテート
塩化メチレン（５．２ｍＬ）中｛（５Ｓ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝メチルアセテート（２０５ｍｇ、０．７５６ｍｍｏｌ）溶液に対して、ジオキサン（１．５ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）中４．０Ｍの塩化水素を加えた。その反応溶液を室温で６時間撹拌した。その溶媒を減圧下で除去して白色個体として所望の生成物を得た。Ｃ８Ｈ１４ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１７２．１；測定値：１７２．１。
【０１６５】
工程７．｛（５Ｓ）−５−［（６−ニトロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イル）アミノ］−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝メチルアセテート
イソプロピルアルコール（１．７ｍＬ）中の７−クロロ−６−ニトロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン（１５６ｍｇ、０．７２７ｍｍｏｌ）、［（５Ｓ）−５−アミノ−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］メチルアセテート（１２９ｍｇ、０．７５４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で２時間加熱した。その反応混合物を、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（０．２１ｇ、８３％）を得た。Ｃ１５Ｈ１６Ｎ３Ｏ５Ｓ（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３５０．１；測定値：３５０．０。
【０１６６】
工程８．｛（５Ｓ）−５−［（６−アミノチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝メチルアセテート
メタノール（４．０ｍＬ）中の｛（５Ｓ）−５−［（６−ニトロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イル）アミノ］−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝メチルアセテート（２１０ｍｇ、０．６００ｍｍｏｌ）及び炭素（０．２１ｇ）上１０％パラジウムの混合物に、室温でＨ２のバルーン圧を２時間掛けた。その混合物をろ過し、そのろ液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中１５％メタノールで溶出）で精製して、所望の生成物（１４５ｍｇ、７５％）を得た。Ｃ１５Ｈ２０Ｎ３Ｏ３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３２２．１；測定値：３２２．０。
【０１６７】
工程９．（１Ｒ）−１−｛１−［（３Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝エタノール
ＴＨＦ（２ｍＬ）中の（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロパンアミド（１３１ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及びトリエチルオキソニウムテトラフルオロボレート（２６３ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。その溶媒は除去し、残留物を、エタノール（０．８５ｍＬ）中に溶解し、そしてエタノール（３．１ｍＬ）中｛（５Ｓ）−５−［（６−アミノチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝メチルアセテート（１４５ｍｇ、０．４５１ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。その混合物を８０℃で１時間撹拌した。その反応を室温に冷やし、水（１．０ｍＬ）で希釈した。水酸化リチウム（３２．４ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を２時間撹拌した。その反応混合物をメタノールで希釈し、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％水酸化アンモニウムを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）で精製して、所望の生成物を白色固体（９５ｍｇ、６３％）として得た。Ｃ１６Ｈ２０Ｎ３Ｏ３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３３４．１；測定値：３３４．０。
【０１６８】
工程１０：（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メチル４−メチルベンゼンスルホネート及び（（２Ｓ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メチル４−メチルベンゼンスルホネート
塩化メチレン（３．４ｍＬ）及びピリジン（０．１４６ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）中の（１Ｒ）−１−｛１−［（３Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝エタノール（１００ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）（前の工程）の溶液に対して、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（５７．２ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（１．８ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を０°Ｃで加えた。その混合物を一晩ゆっくり室温に温めた。その反応混合物を、濃縮し、メタノールで希釈し、そして分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％水酸化アンモニウムを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）で精製して、２つのピークを得た。分析ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、５μＭ；流量３ｍＬ／分；注入体積２μＬ；３分間２〜８０％のＢの勾配で（Ａ＝０．０２５％のＴＦＡを有する水、Ｂ＝アセトニトリル））：第一ピーク（４５．３ｍｇ、３１％）保持時間１．８１分、Ｃ２３Ｈ２６Ｎ３Ｏ５Ｓ２（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４８８．１；測定値：４８８．１。第２ピーク（８．５ｍｇ、５．８％）保持時間１．８８分、Ｃ２３Ｈ２６Ｎ３Ｏ５Ｓ２（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４８８．１；測定値：４８８．１。
【０１６９】
工程１１．（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）アセトニトリル
ジメチルスルホキシド（０．４ｍＬ）中の（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メチル４−メチルベンゼンスルホネート（前の工程の第一ピークから、２７ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）及びシアン化ナトリウム（４．５ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）の混合物を、５０℃で４時間撹拌した。冷却後、その混合物をメタノールで希釈し、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、３０ｍＬ／分の流速で、０．１％水酸化アンモニウムを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）で精製して、所望の生成物（１４．５ｍｇ、７６％）を得た。Ｃ１７Ｈ１９Ｎ４Ｏ２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３４３．１；測定値：３４３．０。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）δ９．５１（１Ｈ，ｓ），８．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），７．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），５．３１（１Ｈ，ｍ），５．２０（１Ｈ，ｍ），４．３１（１Ｈ，ｍ），４．２３（１Ｈ，ｍ），４．０２（１Ｈ，ｍ），２．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０及び４．５Ｈｚ），２．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０及び４．５Ｈｚ），２．６６（１Ｈ，ｍ），２．２６（１Ｈ，ｍ），２．０９（１Ｈ，ｍ），１．７３（１Ｈ，ｍ），１．６９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）ｐｐｍ．
【０１７０】
実施例Ｊ１ａ．（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）アセトニトリル水和物
【化２】
2016528288.tif 000023
実施例２５からの（（２Ｒ，５Ｓ）−５−｛２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｄ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−１−イル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）アセトニトリル（５２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（８ｍＬ）と水（４ｍＬ）の混合物から結晶化させた。捕集され得られた無色のプリズム結晶は、Ｘ線結晶構造解析に適していた。
【０１７１】
結晶データは：〜０．５２０ｘ０．１８０×０．１００ｍｍ、斜方晶、Ｐ２１２１２１、ａ＝６．９６２（３）Å、ｂ＝１１．５３１（４）Å、ｃ＝２０．７９９（７）Å、体積＝１６６９．６（１０）Å３、Ｚ＝４、Ｔ＝−１００．℃、分子量＝３５９．４２、密度＝１．４３０ｇ／ｃｍ３、μ（Ｍｏ）＝０．２２ｍｍ−１を示している。
【０１７２】
Ｂｒｕｋｅｒ ＳＭＡＲＴ ＡＰＥＸ−ＩＩ ＣＣＤシステム、ＭｏＫａｌｐｈａ放射線、標準の焦点管、アノード出力＝５０ｋＶ×４２ｍＡ、結晶からプレートまでの距離＝５．０ｃｍ、５１２×５１２ピクセル／フレーム、ビーム中心＝（２５６．１３，２５３．１４）、フレーム総数＝１１５１、振動／フレーム＝０．５０°、露出／フレーム＝１０．１秒／フレーム、ＳＡＩＮＴ統合、ｈｋｌ最小／最大＝（−９、９、−１５、１５、−２７、２７）、ｓｈｅｌｘへのデータ入力＝１７０２５、固有データ＝３９７５、２シータ範囲＝３．９２〜５５．７２°、２シータ５５．７２に対する完全性＝９９．８０％、Ｒ（ｉｎｔ−ｘｌ）＝０．０６８１、ＳＡＤＡＢＳ補正適用で行った。
【０１７３】
構造を、ＸＳ（Ｓｈｅｌｘｔｌ）を使用して解析し、ｓｈｅｌｘｔｌソフトウェアパッケージを使用して精密化した。Ｆ２に基づくフルマトリックス最小二乗による精密化。Ｉｎｔ．Ｔａｂ．Ｖｏｌ  Ｃ表４．２．６．８及び６．１．１．４からの散乱因子、データ数＝３９７５、制限数＝０、パラメータ数＝２３５、データ／パラメータ比＝１６．９１、Ｆ２の適合度＝１．０４、Ｒ指数［Ｉ＞４シグマ（Ｉ）］Ｒ１＝０．０５０５、ｗＲ２＝０．１２４２、Ｒ指数（全データ）Ｒ１＝０．０７６９、ｗＲ２＝０．１４０１、最大残差ピーク及びホール＝０．７２４及び−０．２７７ｅ／Å３、精密化フラックパラメータ＝−０．１２（１３）。ＣＨ水素原子のすべては、ライディングモデルを使用して精密化した。ＯＨ水素を差異マップから見出し、完全に精密化した。
【０１７４】
結果は、この非対称ユニットが、５０％の確率レベルになった熱楕円体で示される通り、１分子及び１水分子を含有することを示した。３つの立体中心のそれぞれにおける立体化学（上記の化合物の名称及び構造において示されている通り）が確認された。フラックパラメータは０．２８（２４）まで精密化され、このことは、正確な鏡像異性体設定を示唆している。
【０１７５】
実施例Ｊ２．４−［３−（シアノメチル）−３−（３'，５'−ジメチル−１Ｈ，１'Ｈ−４，４'−ビピラゾール−１−イル）アゼチジン−１−イル］−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
【化３】
2016528288.tif 000024
工程１：２，４，５−トリフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
アセトニトリル（５０ｍＬ）中２，４，５−トリフルオロ安息香酸（５．００ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）溶液に対して、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０μＬ）、続いて塩化オキサリル（３．６０ｍＬ、４２．６ｍｍｏｌ）を加えた。９０分後に、減圧下で揮発性物質を除去した。残留物をアセトニトリル（５０ｍＬ）と一緒に同時蒸発させた。次いで、残留物を塩化メチレン（５０ｍＬ）中に溶かした。この溶液を、トルエン（１００ｍＬ）中（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−アミン塩酸塩（５．５２ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）（Ｓｙｎｑｕｅｓｔ製、９８％ ｅｅ）と、０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１４２ｍＬ、７１．０ｍｍｏｌ）との氷冷された（氷浴）混合物に滴加した。添加後、氷浴を取り除き、反応を室温まで温めた。反応を一晩撹拌した。有機層を分離した。水層は、塩化メチレン（５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を、２０％塩水（７５ｍＬ）及び水（２×７５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、更なる精製無しに次の工程で直接使用された所望の生成物（６．４９ｇ、８４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９２−７．５０（ｍ，２Ｈ），４．７６（ｍ，１Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ１０Ｈ８Ｆ６ＮＯ（Ｍ＋１）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２７２．０；測定値：２７２．０。
【０１７６】
工程２：２，５−ジフルオロ−４−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
アセトニトリル（２５ｍＬ）中の２，４，５−トリフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド（６．３９ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−オル塩酸塩（３．１９ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８．８１ｍＬ、５８．９ｍｍｏｌ）の混合物を、８０℃で２時間撹拌した。その反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）で希釈し、そして１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）、１Ｎ ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）、２０％塩水（５０ｍＬ）及び水（７５ｍＬ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の生成物（７．５９ｇ、９１．８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３８（ｄｄ，Ｊ＝８．９，１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，６．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３８（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，７．５Ｈｚ，１Ｈ），５．７１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄｐ，Ｊ＝１５．３，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６２−４．４６（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．１５（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ１３Ｈ１４Ｆ５Ｎ２Ｏ２（Ｍ＋１）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３２５．１；測定値：３２５．１。
【０１７７】
工程３：２，５−ジフルオロ−４−（３−オキソアゼチジン−１−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
塩化メチレン（９３ｍＬ）中２，５−ジフルオロ−４−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド（７．５７ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）溶液に対して、室温で、ヨードベンゼンジアセテート（９．４０ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）及び２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジンイルオキシ遊離ラジカル（１．８２ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）（ＴＥＭＰＯ）を加えた。その反応混合物を室温で一晩撹拌した。その混合物を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、０．５Ｎ ＮａＨＣＯ３（２ｘ８０ｍＬ）、２０％塩水（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）で洗浄した。水層を酢酸エチル（７５ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。その残留物を、塩化メチレン中０％〜５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して粗生成物を得て、そしてＭＴＢＥ（５０ｍＬ）及びヘプタン（１００ｍＬ）から再結晶させて無色固体として所望の生成物（５．４４ｇ、７２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，６．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，４Ｈ），４．８６−４．６８（ｍ，１Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ１３Ｈ１２Ｆ５Ｎ２Ｏ２（Ｍ＋１）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３２３．１；測定値：３２３．０。
【０１７８】
工程４：４−［３−（シアノメチレン）アゼチジン−１−イル］−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
ジエチルシアノメチルホスホネート（１．９５ｍＬ、１１．８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１２ｍＬ）で希釈されたＴＨＦ（１１．８ｍＬ、１１．８ｍｍｏｌ）中１．０Ｍカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの冷却された（氷浴）溶液に滴加した。氷浴を取り外し、反応を室温に温めて、９０分間撹拌した。その反応溶液を再び氷浴で冷却した。次いで、上記の調製溶液を、テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中２，５−ジフルオロ−４−（３−オキソアゼチジン−１−イル）−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド（４．００ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）の冷却された（氷浴）溶液に１２分間にわたって加えた。反応混合物を３０分間撹拌した。氷浴を取り外し、反応を室温で一晩撹拌し、次いで、２０％塩水（７５ｍＬ）及び酢酸エチル（７５ｍＬ）を加えることによって、急冷した。有機層を分離した。水層は酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。その残留物を、ヘキサン中酢酸エチル（０％〜３０％）を用いるシリカゲルカラムによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物（２．６ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５９−８．３７（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５９（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｍ，１Ｈ），４．９４−４．７５（ｍ，４Ｈ），４．７６（ｍ，１Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ１５Ｈ１３Ｆ５Ｎ３Ｏ（Ｍ＋１）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３４６．１；測定値：３４６．１。
【０１７９】
工程５：４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
アセトニトリル（２０．２ｍＬ）中の４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（１．００ｇ、５．１５ｍｍｏｌ）、４−［３−（シアノメチレン）アゼチジン−１−イル］−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド（１．７８ｇ、５．１５ｍｍｏｌ）、及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．３１ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）の混合物を、５０℃で一晩加熱した。冷却後、溶媒を減圧下で除去した。その残留物を、更に精製せずに次の工程で使用した。Ｃ２４Ｈ２８ＢＦ５Ｎ５Ｏ３（Ｍ＋１）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝５４０．２；測定値：５４０．１。
【０１８０】
工程６：４−［３−（シアノメチル）−３−（３’，５'−ジメチル−１Ｈ，１'Ｈ−４，４’−ビピラゾール−１−イル）アゼチジン−１−イル］−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）／水（５ｍＬ）中の４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾル−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド（３２９ｍｇ、０．６１０ｍｍｏｌ）、４−ブロモ−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール（２０６ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１０ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）、及び炭酸ナトリウム（３２０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素でパージし、そして１１０℃で１時間撹拌した。その反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水及び塩水で洗浄し、濃縮した。残留物を、シリカゲル（０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン、続いて１０％のメタノール／ジクロロメタンで溶出）でまず最初に精製し、次いで、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％水酸化アンモニウムを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）で精製して、所望の生成物（３０ｍｇ、９．７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．１７（１Ｈ，ｓ），８．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｓ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．３４（１Ｈ，ｍ），６．６１（１Ｈ，ｓ），４．７７（１Ｈ，ｍ），４．６２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），４．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），３．６４（２Ｈ，ｓ），２．２２（６Ｈ，ｓ），１．３１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）ｐｐｍ。Ｃ２３Ｈ２３Ｆ５Ｎ７Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝５０８．２；測定値：５０８．０。
【０１８１】
実施例Ａ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＪＡＫキナーゼアッセイ
本明細書の式Ｉの化合物を、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９９，２６９，９４−１０４に記載された以下のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにしたがって、ＪＡＫ標的の阻害活性について試験した。Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するヒトＪＡＫ１（ａ．ａ．８３７−１１４２）、ＪＡＫ２（ａ．ａ．８２８−１１３２）の触媒ドメインを、昆虫細胞中でバキュロウイルスを用いて発現させ、そして精製した。ＪＡＫ１及びＪＡＫ２の触媒活性を、ビオチン化ペプチドのリン酸化を測定することによって、アッセイした。そのリン酸化ペプチドは、均一系時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）によって検出した。化合物のＩＣ５０は、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、及び０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）のＢＳＡを有する５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）バッファー中に酵素、ＡＴＰ及び５００ｎＭのペプチドを含有する４０μＬの反応における各キナーゼについて測定した。１ｍＭのＩＣ５０測定では、反応におけるＡＴＰ濃度は１ｍＭであった。反応を室温で１時間実施し、次いで、アッセイバッファー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）中２０μＬの４５ｍＭのＥＤＴＡ、３００ｎＭのＳＡ−ＡＰＣ、６ｎＭのＥｕ−Ｐｙ２０で停止させた。ユーロピウム標識抗体に対する結合は、４０分間起こり、ＨＴＲＦシグナルを、Ｆｕｓｉｏｎプレート読み取り装置（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で読み取った。
【０１８２】
実施例Ｂ：細胞アッセイ
増殖のために、サイトカイン、つまりＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達に依存する癌細胞株を、ＲＰＭＩ  １６４０、１０％ＦＢＳ、及び１ｎＧ／ｍＬの適当なサイトカイン中で６０００細胞／ウェル（９６ウェルプレート型）で播種することができる。化合物を、ＤＭＳＯ／培地（最終濃度０．２％ＤＭＳＯ）中細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２にて７２時間インキュベートすることができる。細胞生存における化合物の効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、次いでＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）定量法を用いて評価する。化合物の潜在的なオフターゲット効果を、同じアッセイ計測値を有する非ＪＡＫ誘導細胞株を使用して並行して測定する。すべての実験を典型的には繰り返し行う。
【０１８３】
また、上記の細胞株は、ＪＡＫキナーゼまたは潜在的な下流基質、例えばＳＴＡＴタンパク質、Ａｋｔ、Ｓｈｐ２、またはＥｒｋのリン酸化に関する化合物の効果を調べるためにも使用することができる。これらの実験は、一晩のサイトカイン欠乏処理、続いて化合物との短時間のプレインキュベーション（２時間以下）、及び約１時間以下のサイトカイン刺激の後に行うことができる。次いで、タンパク質を細胞から抽出し、リン酸化タンパク質と総タンパク質とを区別し得る抗体を使用する、ウエスタンブロッティングまたはＥＬＩＳＡを包含する当業者に周知の技術によって分析する。これらの実験は、正常細胞または癌細胞を利用して、腫瘍細胞生存生物学（ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ）に関するまたは炎症性疾患のメディエーターに関する化合物の活性を調べることができる。例えば、後者に関して、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、またはＩＦＮなどのサイトカインを使用してＪＡＫ活性化を刺激して、ＳＴＡＴタンパク質（複数可）のリン酸化、及び、潜在的には、ＩＬ−１７などのタンパク質の転写プロフィール（アレイまたはｑＰＣＲ技術によって評価）または生成及び／もしくは分泌をもたらすことができる。これらのサイトカイン媒介効果を阻害する化合物の能力は、当業者に一般的な技術を使用して測定することができる。
【０１８４】
また、本明細書記載の化合物は、突然変異体ＪＡＫ、例えば、骨髄増殖性障害において見出されるＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ突然変異に対するそれらの効力及び活性を評価するために設計された細胞モデルで試験することもできる。これらの実験は、しばしば、血液学的系統のサイトカイン依存性細胞（例えばＢａＦ／３）を利用し、その中に野生型または突然変異体ＪＡＫキナーゼが異所的に発現される（Ｊａｍｅｓ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３４：１１４４−１１４８；Ｓｔａｅｒｋ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．ＪＢＣ  ２８０：４１８９３−４１８９９）。エンドポイントとしては、細胞生存、増殖、及びリン酸化ＪＡＫ、ＳＴＡＴ、Ａｋｔ、またはＥｒｋタンパク質に関する化合物の効果が挙げられる。
【０１８５】
本明細書記載の特定の化合物は、Ｔ細胞増殖を阻害するそれらの活性について評価することができる。係るアッセイは、第２のサイトカイン（すなわちＪＡＫ）主導型増殖アッセイ、及びまた、免疫抑制または免疫活性化阻害の単純なアッセイと考えることができる。以下は、係る実験をどのように行うことができるかに関する簡潔な概要である。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ分離法を使用してヒトの全血サンプルから調製し、Ｔ細胞（分画２０００）を、水簸によってＰＢＭＣから得ることができる。新たに単離されたヒトＴ細胞を、３７℃で２日間まで、２×１０６細胞／ｍｌの密度で、培地（１０％ウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ  １６４０）中に維持することができる。ＩＬ−２で刺激する細胞増殖分析のために、Ｔ細胞をまず、７２時間、１０μｇ／ｍＬの最終濃度のフィトヘマグルチン（ＰＨＡ）で処理した。ＰＢＳで一度洗浄後、６０００個の細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種し、１００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ−２（ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ  ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ；Ｒｅｈｏｖｏｔ，Ｉｓｒａｅｌ）存在下の培地中で異なる濃度の化合物で処理した。そのプレートを３７℃で７２時間インキュベートし、増殖指数を、製造者が提案したプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）にしたがってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ試薬を用いて評価する。
【０１８６】
実施例Ｃ：Ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍有効果
本明細書記載の化合物は、免疫不全のマウスにおけるヒト腫瘍異種移植片モデルで評価することができる。例えば、ＩＮＡ−６形質細胞腫細胞株の腫瘍形成変異体を使用して、ＳＣＩＤマウスの皮下に接種することができる（Ｂｕｒｇｅｒ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｊ．２：４２−５３，２００１）。次いで、腫瘍形成動物を、薬剤またはビヒクル処置群に無作為化することができ、異なる用量の化合物を、経口、腹腔内、または埋め込み型ポンプを用いる持続注入を包含する任意の数の通常の経路によって投与できる。腫瘍成長は、カリパスを使用して経時的に追跡する。更に、腫瘍サンプルを、上記（実施例Ｂ）解析処理の開始後、任意の時間に収集して、ＪＡＫ活性及び下流のシグナル伝達経路に関する化合物の効果を評価することができる。更に、化合物（１種または複数種）の選択性を、他の公知のキナーゼ（例えばＢｃｒ−Ａｂｌ）によって引き起こされる異種移植腫瘍モデル、例えばＫ５６２腫瘍モデルを使用して、評価することができる。
【０１８７】
実施例Ｄ：マウス皮膚接触遅延過敏性反応試験
本明細書記載の化合物はまた、Ｔ細胞により引き起こされるマウス遅延過敏性試験モデルにおいて（ＪＡＫ標的を阻害する）それらの効果についても試験することができる。マウス皮膚接触遅延型過敏性（ＤＴＨ）反応は、臨床的接触皮膚炎及び皮膚の他のＴリンパ球媒介性免疫障害の、例えば乾癬の有効なモデルであると考えられる（Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ．１９９８  Ｊａｎ；１９（１）：３７−４４）。マウスのＤＴＨは、乾癬、例えば免疫浸潤、炎症性サイトカインの付随的増加、及びケラチノサイト過剰増殖と複数の特徴を共有している。更に、臨床において乾癬を治療する場合に有効な薬剤の多くのクラスもまた、マウスにおけるＤＴＨ反応の効果的な阻害剤である（Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ．１９９３  Ｊａｎ；３８（１−２）：１１６−２１）。
【０１８８】
０及び１日目に、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、抗原２，４，ジニトロ−フルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）を用いてそれらの剃毛した腹部に対する局所適用で感作させた。５日目に、耳を、技術者用マイクロメーターを使用して厚さを測定する。この測定値を記録し、ベースラインとして使用する。次いで、動物の耳の両方を、０．２％の濃度で、総量２０μＬ（耳介内に１０μＬ及び耳介外に１０μＬ）のＤＮＦＢの局所適用により抗原投与した。抗原投与２４〜７２時間後に、耳を再び測定する。試験化合物による処置を、感作及び抗原投与段階（１日〜７日）を通じて、またはその前に、及び抗原投与段階（通常４日の午後〜７日）を通じて投与する。試験化合物（異なる濃度で）の処置を、全身的または局所的（耳に対する処置の局所適用）に投与する。試験化合物の有効性は、無処置の状況と比較した耳の腫大の減少により示される。２０％以上の減少をもたらす化合物を有効とみなした。いくかつの実験では、マウスは抗原投与されるが、感作されない（陰性対照）。
【０１８９】
試験化合物の阻害効果（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の活性化を阻害すること）は、免疫組織化学的分析により確認することができる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路（単数または複数）の活性化は、機能的転写因子の形成及び転座をもたらす。更に、免疫細胞の流入及びケラチノサイトの増殖の増加もまた、調べられ定量化され得る耳におけるユニークな発現プロファイルの変化を提供するはずである。ホルマリンで固定され、パラフィンを包埋した耳の断片（ＤＴＨモデルでの抗原投与段階後に収集した）を、リン酸化ＳＴＡＴ３（クローン５８Ｅ１２、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と特異的に相互作用する抗体を用いて免疫組織化学的に分析する。マウスの耳を、比較のために、ＤＴＨモデルにおいて、試験化合物、ビヒクル、もしくはデキサメタゾン（乾癬のための臨床的に効果のある処置）で処置するか、または、いかなる処置もしない。試験化合物及びデキサメタゾンは、定性的及び定量的の両方で同様な転写の変化をもたらすことができ、その試験化合物及びデキサメタゾンの両方は、浸潤細胞の数を減少させることができる。試験化合物の全身投与及び局所投与の両方は、阻害効果、すなわち浸潤細胞の数の減少及び転写変化の阻害をもたらすことができる。
【０１９０】
実施例Ｅ：Ｉｎ  ｖｉｖｏ抗炎症活性
本明細書記載の化合物は、単一または複合的な炎症性応答を再現するように設計されたげっ歯類動物または非げっ歯類動物において評価することができる。例えば、関節炎のげっ歯類動物モデルを用いて、予防的または治療的に投与された化合物の治療効果を評価することができる。これらのモデルとしては、マウスまたはラットのコラーゲン誘導関節炎、ラットのアジュバント誘導関節炎、及びコラーゲン抗体誘導関節炎が挙げられるが、それらに限定されない。多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜網膜炎、甲状腺炎、重症筋無力症、免疫グロブリンネフロパシー、心筋炎、気道感作（喘息）、狼瘡、または大腸炎が挙げられるが、それらに限定されない自己免疫疾患もまた、本明細書記載の化合物の治療効果を評価するために使用してもよい。これらのモデルは、研究機関において十分に確立されており、当業者には公知である（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ３．，Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ，Ｗｉｌｅｙ  Ｐｒｅｓｓ．；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｖｏｌ．２２５，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．，Ｗｉｎｙａｒｄ，Ｐ．Ｇ．ａｎｄ  Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ，Ｄ．Ａ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００３．）。
【０１９１】
学術誌または特許文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【国際調査報告】
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