(57)【要約】特定の実施形態では、原発性疾患の反応性を改善する、及び／または耐性疾患を克服する目的で、本開示は、抗ＷＴ−１／ＨＬＡ抗体、すなわち、ＨＬＡが制限されて、癌細胞の表面上に提示されるウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ−１）のペプチドに特異的に結合する抗体と共に、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤を必要としている対象に、それを提供することを含む、ＷＴ−１−依存性癌の増殖を治療または阻害するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、及び
（Ａ）表１〜１４及び図７〜１０に示されるアミノ酸配列を含む、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖（ＨＣ）可変領域と、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含む、抗体、または
（Ｂ）表１〜１２からの第１及び第２のアミノ酸配列を含む、ＶＨ及びＶＬを含む、抗体、または
（Ｃ）表１〜１２からのアミノ酸配列を含む、ｓｃＦｖを含む、抗体、
を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、及びスニチニブからなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ポナチニブ、もしくはダサチニブ、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
イマチニブの前記薬学的に許容される塩は、メシル酸イマチニブである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ポナチニブの前記薬学的に許容される塩は、ポナチニブ塩酸塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＷＴ−１陽性癌の増殖を治療または阻害するために使用される、チロシンキナーゼ阻害剤、及び抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
ＷＴ−１陽性癌の前記増殖を治療または阻害するための方法であって、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤、及び治療有効量の抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの投与を必要としている対象に、それを行うことを含む、前記方法。
【請求項８】
前記ＷＴ−１陽性癌は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、消化管間質腫瘍、卵巣癌、前立腺癌、軟部組織肉腫、及び悪性神経膠腫からなる群より選択される、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項９】
前記チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、及びスニチニブからなる群より選択される、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１０】
前記チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ポナチニブ、もしくはダサチニブ、またはその薬学的に許容される塩である、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１１】
イマチニブの前記薬学的に許容される塩は、メシル酸イマチニブである、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１２】
ポナチニブの前記薬学的に許容される塩は、ポナチニブ塩酸塩である、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１３】
前記抗ＷＴ−１抗体は、
（Ａ）表１〜１４及び図７〜１０に示されるアミノ酸配列を含む、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖（ＨＣ）可変領域と、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含む、抗体、または
（Ｂ）表１〜１２からの第１及び第２のアミノ酸配列を含む、ＶＨ及びＶＬを含む、抗体、または
（Ｃ）表１〜１２からのアミノ酸配列を含む、ｓｃＦｖを含む、抗体、
からなる群から選択される、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１４】
前記抗ＷＴ−１抗体は、ヒト可変領域フレームワーク領域を含む、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１５】
前記抗ＷＴ−１抗体は、完全ヒトである、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１６】
前記抗ＷＴ−１抗体、またはその抗原結合部分は、ＨＬＡが制限されて、ＷＴ−１ペプチドに特異的に結合する、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１７】
前記抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、１×１０−８Ｍまたはそれ以下のＫＤでＷＴ−１／ＨＬＡに結合する、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１８】
前記抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−８ＭのＫＤでＷＴ−１／ＨＬＡに結合する、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項１９】
前記抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、ＷＴ−１陽性細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項２０】
前記抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、インビボでＷＴ−１陽性細胞の成長を阻害する、請求項６または７に記載の使用または方法。
【請求項２１】
前記抗体の前記抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項６または７に記載の使用または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、「Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｌｉｋｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ＷＴ１  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」と題する、２０１２年４月２日出願の同一出願人によるＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３１８９２号、及び２０１３年３月１５日出願の「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」と題する、同一出願人による米国仮出願第６１／７９８，５６３号（代理人整理番号３３１４．０３０Ｐ）の主題と関連した主題を含み、それぞれの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
２０１３年３月１５日出願の米国仮特許出願第６１／７９４，１６８号、及び２０１３年９月２０日出願の米国仮特許出願第６１／８８０，５８５号の３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下の利益は、本明細書によって主張され、両方の優先権書類の開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
連邦支援の研究に基づいた権利に関する声明
本発明は、米国国立衛生研究所からの助成金ＮＩＨ  Ｒ０１  ＣＡ  ５５３４９及びＰ０１  ＣＡ  ２３７６６の下で米国政府の支援によりなされた。政府は、本発明におけるある特定の権利を有する。
【０００４】
配列表
本願は、２０１４年３月１４日に作成された配列表を含み、ＡＳＣＩＩ形式のファイルは、４８３１９＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔで示され、１８２，２２６バイトである。ファイル全体は、参照により本願に組み込まれる。
【０００５】
本発明は、概して、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）のようなＷＴ−１−陽性疾患のための治療に関する。より具体的には、本発明は、ウィルムス腫瘍遺伝子タンパク質（ＷＴ−１）に対する、腫瘍成長の阻害、ならびにチロシンキナーゼ阻害剤治療薬及び抗体を用いた組み合わせ治療に関する。
【背景技術】
【０００６】
今日まで、ＣＭＬのような癌の治療は、タンパク質チロシンキナーゼを標的とする治療薬に依存してきた。チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）は、数例を挙げると、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標））、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブを含む。チロシンキナーゼ阻害剤は、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）（骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）または骨髄性（ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）とも称される）白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、卵巣癌、前立腺癌、軟部組織肉腫、悪性神経膠腫、腎細胞癌、肝細胞癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、乳癌、肺癌などの治療において、現在第一選択の治療である。しかしながら、一部のＴＫＩ、例えばイマチニブ及びスニチニブの臨床的有効性は、稀な患者特有の薬物に対する不耐性、または治療が難しい疾患の発症によって制限される。
【０００７】
チロシンキナーゼタンパク質を標的とする小分子治療法に加えて、ワクチンおよび腫瘍特異的抗体を使用した免疫学的アプローチに基づく白血病の治療が開発されている。例えば、ウィルムス腫瘍遺伝子タンパク質（ＷＴ−１）は、ＣＭＬを含むほとんどの白血病および幅広い種類の癌のための免疫療法に対する魅力的な標的になっている。ＷＴ−１は、胚発生中に中胚葉性組織中に通常発現される、ジンクフィンガー転写因子である。正常な成人組織中、ＷＴ−１発現は、ＣＤ３４＋造血幹細胞中、低いレベルに制限されるが、多系統白血病及び幅広い種類の固形腫瘍において過剰発現される（１〜２）。より最近では、ＷＴ−１発現は、微小残存病変のマーカーであることが報告されている。形態学的寛解期の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者における転写レベルの増加は、明らかな臨床的再発の予測してきた（３、４）。さらに、ＷＴ−１に対する抗体は、造血器悪性腫瘍及び固形腫瘍患者において検出され、ＷＴ−１が高度に免疫原性の抗原であることを示す（７）。
【０００８】
ほとんどの場合、臨床的に承認された治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、細胞表面タンパク質の構造を認識する。しかしながら、ＷＴ−１は核タンパク質であり、したがって古典的な抗体療法が利用できない。近年まで、ＷＴ−１を標的とする免疫療法は、細胞学的アプローチに限定され、ＭＨＣクラスＩ分子によって細胞表面上に提示されるペプチドを認識する、ＷＴ−１特異的細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を生成することだけを目的とした。
【０００９】
ＣＴＬ応答の誘導のために、細胞内タンパク質は通常、プロテアソームまたはエンド／リソソームによって分解され、得られたペプチド断片は、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に結合する。これらのペプチド−ＭＨＣ複合体は、細胞表面において提示され、それらは、ペプチド−ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）相互作用を介して、Ｔ細胞認識のための標的を提供する（８、９）。ＷＴ−１タンパク質由来のペプチドのワクチン接種は、ＨＬＡが制限された細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞を誘導し、それは、腫瘍細胞を消滅させることが可能である。
【００１０】
癌治療のための他のアプローチは、モノクローナル抗体療法を用いて癌抗原を標的とする。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）療法は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び直接的細胞阻害を含む複数の機構による強力な抗腫瘍効果、または標的分子を過剰発現させる腫瘍細胞に対するアポトーシス誘導効果を発揮することが示されている。
例えば、ＴＫＩの毒性及び他の有害な副作用を防ぐために、原発性疾患の反応性を改善する、耐性疾患を克服する、及び／または個々の治療薬の有効量を低下させる補助療法アプローチが存在した場合、多大な利益が存在するであろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｍｕｎｄｌｏｓ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｗｉｌｍｓ’  ｔｕｍｏｒ  ｇｅｎｅ  ＷＴ−１  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９３；１１９：１３２９−４１．
【非特許文献２】Ｋｅｉｌｈｏｌｚ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｗｉｌｍｓ’  ｔｕｍｏｒ  ｇｅｎｅ  １  （ＷＴ−１）ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００５；１９：１３１８−１３２３．
【非特許文献３】Ｉｎｏｕｅ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．ＷＴ−１  ａｓ  ａ  ｎｅｗ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ａ  ｎｅｗ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ  １９９４；８４（９）：３０７１−３０７９．
【非特許文献４】Ｏｇａｗａ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｏｆ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ＷＴ−１  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｅｌａｐｓｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｔｙｐｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ  ２００３；１０１（５）：１６９８−１７０４．
【非特許文献５】Ｇａｉｇｅｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．ＷＴ−１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｒｕｍ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００１；７（ｓｕｐｐｌ  ３）：７６１−７６５．
【非特許文献６】Ｏｋａ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．ＷＴ−１  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；７：６４９−６６５．
【非特許文献７】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｆｉｎｉｎｇ  ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｆｒｏｍ  ＷＴ−１  ａｎｔｉｇｅｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６；５５（７）：８５０−８６０．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本開示は、異なる分子標的に向けられる治療薬の組み合わせに基づく、ＷＴ−１陽性疾患の治療のための方法を提供する。アプローチは、Ｂｃｒ−Ａｂｌに向けられるものなどのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）（イマチニブ及びダサチニブ）、並びに例えば、エルロチニブ及びゲフィチニブなど、ＥＧＦＲなどの他の分子標的に向けられるＴＫＩを用いた従来の治療と、ＨＬＡが制限されて、ＷＴ−１癌タンパク質のペプチドを認識し、それに結合する抗体の投与に基づく免疫療法アプローチとを組み合わせる。
【００１３】
本発明は、個々に投与されるいずれかと比較して、ＴＫＩ及び抗ＷＴ−１抗体を組み合わせる治療計画が、腫瘍成長の初期の阻害及び抗腫瘍反応の改善をもたらすという予想外の観測結果に基づく。いくつかの実施形態では、ＴＫＩと抗ＷＴ−１抗体との同時投与は、上記に確認された状態の治療において現在利用されているものよりも少量のＴＫＩの使用を可能にすると同時に、ＴＫＩの治療効果を維持し、さらに腫瘍進行までの期間、全生存率を改善し、ＴＫＩ関連の副作用を減少させる。
【００１４】
したがって、一態様では、本発明は、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤、及び治療有効量の単離した抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分、すなわち、ＭＨＣ抗原に結合したＷＴ−１ペプチドに特異的に結合する抗体を投与することによって、対象におけるＷＴ−１陽性癌の成長を治療または阻害するための方法に関する。チロシンキナーゼ阻害剤は、Ｂｃｒ−Ａｂｌ（イマチニブ、ダサチニブ及びニロチニブ）、ＥＧＦＲ（エルロチニブ及びゲフィチニブ）、ＶＥＧＦＲ−１（パゾパニブ及びソラフェニブ）などの分子標的に向けられてもよい。
【００１５】
一態様では、ＷＴ−１陽性癌は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）／骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫、卵巣癌、消化管癌、乳癌、前立腺癌及びグリア芽腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、ならびに固形腫瘍を含むその他からなる群より選択される。
【００１６】
一態様では、チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、及びスニチニブからなる群より選択される。一実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、もしくはダサチニブ、またはその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、イマチニブの薬学的に許容される塩は、メシル酸イマチニブである。
【００１７】
別の態様では、本発明は、ＴＫＩ及び単離した抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分を用いた組み合わせ／補助療法に関する。ＴＫＩとの組み合わせ療法で使用するための抗ＷＴ−１抗体の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１８】
以下の表１〜１４及び図７〜１０に示されるアミノ酸配列を含む、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖（ＨＣ）可変領域と、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含む、抗ＷＴ−１抗体。
【００１９】
別の態様では、ＷＴ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の表１〜１４及び図７〜１０に示される第１及び第２のアミノ酸配列を含む、ＶＨ及びＶＬを含む。さらに別の態様では、ＷＴ−１抗体は、以下の表１〜１４及び図７〜１０に示されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む。
【００２０】
開示された方法は、完全ヒト型であるＷＴ−１抗体を採用し、抗体は、ヒト可変領域フレームワーク領域及びヒト定常領域を含む。ＷＴ−１抗体は、ＫＤが１×１０−８Ｍ未満であり、ＨＬＡが制限されて、ＷＴ−１ペプチドに特異的に結合し、一実施形態では、ＫＤは、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−８Ｍの範囲内である。ＷＴ−１抗体は、ＷＴ−１陽性細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】１μＭ、５μＭ、または１０μＭのイマチニブが、芽球発症のにおけるＣＭＬ由来の白血病細胞株である新鮮ＢＶ１７３細胞（ＨＬＡ−Ａ０２０１＋、フィラデルフィア染色体陽性）に対する、種々のエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）のヒトエフェクター細胞の抗原依存性細胞傷害に影響を及ぼさないことを示す。エフェクター：標的比は、高いＥ：Ｔ比におけるＥＳＫＭのＡＤＣＣの依存を説明するために異なった。
【図２】１３、２０、２７、３４、及び４０日の間隔で、腫瘍成長に対する、抗ＷＴ−１／ＨＬＡ−Ａ抗体、指定されたＥＳＫＭ、イマチニブあり及びなしの効果を示す。
【図３】腫瘍を有するマウスへの１週間に２回の１００μｇの抗ＷＴ−１／ＨＬＡ−Ａ抗体の投与あり（右下パネル）及び（左下パネル）なしで、５０ｍｇ／ｋｇのイマチニブの連日投与の５週間後のＢＶ１７３異種移植ＮＳＧマウスのルシフェリン画像を示す。対照動物は、イマチニブも抗体も投与されていない（左上）。
【図４】ＢＶ１７３に対する種々のエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）におけるヒトエフェクター細胞のＡＤＣＣに対する、１μＭ、５μＭ、または１０μＭのＥＳＫＭ及びダサチニブの投与の効果を示す。
【図５】４週間の治療にわたる、ＮＳＧマウスにおけるＢＶ１７３腫瘍成長に対する、ダサチニブを単独で、または抗ＷＴ−１抗体と組み合わせて用いた治療の効果を示す。
【図６】ダサチニブを単独で、または抗ＷＴ−１抗体と組み合わせて用いた対照治療を伴う、５週間の療法後のＢＶ１７３異種移植ＮＳＧマウスのルシフェリン画像を示す。
【図７】図７〜１０は、本開示の組み合わせ療法に有用な抗ＷＴ−１抗体のいくつかの実施形態のＣＤＲに対する、コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を示す。
【図８】図７〜１０は、本開示の組み合わせ療法に有用な抗ＷＴ−１抗体のいくつかの実施形態のＣＤＲに対する、コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を示す。
【図９】図７〜１０は、本開示の組み合わせ療法に有用な抗ＷＴ−１抗体のいくつかの実施形態のＣＤＲに対する、コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を示す。
【図１０】図７〜１０は、本開示の組み合わせ療法に有用な抗ＷＴ−１抗体のいくつかの実施形態のＣＤＲに対する、コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を示す。
【図１１】チロシンキナーゼ阻害剤、イマチニブ及びダサチニブ、並びに抗ＷＴ−１／ＨＬＡ０２０１抗体（ＥＳＫＭ）を用いた、６日目の療法開始後のＢＶ１７３Ｒの成長を示す。◇  対照；□  ＥＳＫＭのみ；Δ  イマチニブのみ；Ｘ  イマチニブ及びＥＳＫＭ；＞ｌ＜  ダサチニブのみ；Ｏ  ダサチニブ及びＥＳＫＭ。
【図１２】ＥＳＫＭ及びポナチニブで治療されたＮＳＧマウスにおけるＢＶ１７３Ｒの成長を示す。□  対照；Δ  ＥＳＫＭのみ；Ｘ  ポナチニブのみ；＞ｌ＜  ポナチニブ及びＥＳＫＭ。
【図１３】５週間の療法後のＢＶ１７３異種移植ＮＳＧマウスのルシフェリン画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本明細書に列挙される全ての出版物、特許、及び他の参考文献は、それらの全体が参照により本開示に組み込まれる。参照により組み込まれる主題は、別段の明示的な指示がない限り、任意の請求項を限定するものの代替と解釈されるべきではない。
【００２３】
本発明の実施において、免疫学における多くの従来の技術が使用され、それらは当業者の技術の範囲内である。これらの技術は、例えば、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９１年及び定期的更新））；Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（Ｍｅｌｖｙｎ  Ｌｉｔｔｌｅ，ｅｄ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００９年））により詳細に記載される。製造業者の説明書及び投与量情報を含む、当業者に広く知られ当業者によって信頼されている、標準的なプロトコルを含む、これらの参考文献及び他の参考文献の内容は、参照により本開示の一部として組み込まれる。以下の略語が本願全体を通して使用される。
【００２４】
Ａｂ：抗体
【００２５】
ＡＤＣＣ：抗体依存性細胞傷害
【００２６】
ＡＬＬ：急性リンパ性白血病
【００２７】
ＡＭＬ：急性骨髄性白血病
【００２８】
ＣＤＣ：補体依存性細胞傷害
【００２９】
ＣＭＣ：補体媒介性細胞傷害
【００３０】
ＣＤＲ：相補性決定領域（以下のＨＶＲも参照されたい）
【００３１】
ＣＬ：軽鎖の定常ドメイン
【００３２】
ＣＨ１：重鎖の第１の定常ドメイン
【００３３】
ＣＨ１，２，３：重鎖の第１、第２、及び第３の定常ドメイン
【００３４】
ＣＨ２，３：重鎖の第２及び第３の定常ドメイン
【００３５】
ＣＨＯ：チャイニーズハムスター卵巣
【００３６】
ＣＭＬ：慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病及び慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病とも称される
【００３７】
ＣＴＬ：細胞傷害性Ｔ細胞
【００３８】
Ｅ：Ｔ比：エフェクター：標的比
【００３９】
Ｆａｂ：抗体結合断片
【００４０】
ＦＡＣＳ：蛍光活性化細胞分類
【００４１】
ＦＢＳ：ウシ胎仔血清
【００４２】
ＦＲ：フレームワーク領域
【００４３】
ＨＣ：重鎖
【００４４】
ＨＬＡ：ヒト白血球抗原
【００４５】
ＨＶＲ−Ｈ：超可変領域重鎖（ＣＤＲを参照されたい）
【００４６】
ＨＶＲ−Ｌ：超可変領域軽鎖（ＣＤＲを参照されたい）
【００４７】
Ｉｇ：免疫グロブリン
【００４８】
ＫＤ：解離定数
【００４９】
ｋｏｆｆ：解離速度
【００５０】
ｋｏｎ：会合速度
【００５１】
ＭＨＣ：主要組織適合性複合体
【００５２】
ＭＭ：多発性骨髄腫
【００５３】
ｓｃＦｖ：一本鎖可変断片
【００５４】
ＴＫＩ：チロシンキナーゼ阻害剤
【００５５】
ＶＨ：可変重鎖は、重鎖超可変領域及び重鎖可変フレームワーク領域を含む
【００５６】
ＶＬ：可変軽鎖は、軽鎖超可変領域及び軽鎖可変フレームワーク領域を含む
【００５７】
ＷＴ−１：ウィルムス腫瘍タンパク質１
【００５８】
以下に続く記載において、本明細書で使用される用語は、当業者に既知であるようなそれらの用語の意味と一致して解釈されることを目的とする。本明細書で以下に提供される定義は、定義される用語を限定するのではなく、明確にするよう意図される。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「投与すること」及び「投与」は、対象の身体への活性成分の適用を指す。
【００６０】
「抗体」及び「複数の抗体」は、それらの用語が当該技術分野において既知であるように、免疫系の抗原結合タンパク質を指す。用語「抗体」は、本明細書で言及されるように、抗原結合領域、及び「抗原結合部分」もしくは「抗原結合領域」が保持されるその任意の断片、またはその一本鎖、例えば、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を有する、全、完全長抗体を含む。自然発生「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続される、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む、糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略される）及び重鎖定常（ＣＨ）領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略される）及び軽鎖定常ＣＬ領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が組み入れられている、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配列される、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）、及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を仲介し得る。
【００６１】
本明細書で使用される場合、抗体の用語「抗原結合部分」または「抗原結合領域」は、抗原に結合し、抗体に対する抗原特異性を与える、抗体の領域または部分；抗原結合タンパク質の断片を指し、例えば、抗体は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を含む（例えば、ペプチド／ＨＬＡ複合体）。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。抗体の用語「抗体断片」内に包含される抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂ断片を含む、二価断片である、Ｆ（ａｂ）２断片；ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【００６２】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨが別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組み換え方法を使用して、それらが、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価分子を形成する、単一タンパク質鎖として作製されることを可能にする、合成リンカーによって、結合され得る。これらは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として既知であり、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３を参照されたい。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を使用して得られ、断片は、無傷抗体と同様の方法で実用性に関してスクリーニングされる。
【００６３】
「単離された抗体」は、その自然環境の要素から識別並びに分離及び／または回収されている抗体、並びに当業者に既知の組み換え技術を使用して、またはペプチド合成技術を使用して、一般的に生成される抗体である、「合成抗体」または「組み換え抗体」を包含するよう意図される。
【００６４】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、例えば、研究者または臨床医によって求められている、組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的反応を引き起こす、化合物または治療薬の量を意味する。
【００６５】
用語「治療有効量」は、そのような治療有効量を投与されていない対応する対象と比較して、疾病、疾患、もしくは副作用の改善された治療、治癒、予防、もしくは改善、または疾病もしくは疾患の進行速度の低下をもたらす、任意の量を意味する。用語はまた、正常な生理的機能を強化するのに有効な量もその範囲内に含む。
【００６６】
本発明は、チロシンキナーゼ阻害剤及び抗ＷＴ−１抗体の同時投与による、ＷＴ−１陽性疾患のための改善された治療方法を提供する。
【００６７】
チロシンキナーゼ阻害剤
チロシンキナーゼ阻害剤、ならびに投与経路及び適切な用量の検討事項は、ある特定の癌の治療に対して、当該技術分野においてよく知られている。これらの小分子薬物は、シグナル形質導入に関与する、チロシンキナーゼ酵素と呼ばれるタンパク質のクラスのいくつかのメンバーを標的とする。これらの酵素は、いくつかの癌において過剰に活動し、制御されない成長をもたらす。
【００６８】
開示された方法での使用に好適なチロシンキナーゼ阻害剤としては、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、及びバフェチニブイマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、及びバフェチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、及びスニチニブが挙げられる。以下の表は、いくつかのＴＫＩ、それらの分子標的、及びＦＤＡが承認した適応症のリストを提供する。
【表１６−１】
2016519075.tif 000002
【表１６−２】
2016519075.tif 000003
【００６９】
メシル酸イマチニブ（グリベック（登録商標）として販売されている）は、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ、消化管のまれな癌）、ならびに他の間葉腫瘍、Ｐｈ＋ＣＭＬ、ある特定の他の種類の白血病、隆起性皮膚線維肉腫、骨髄異形成／骨髄増殖症候群、及び全身性肥満細胞症を治療することが承認されている。イマチニブは概して、例えば、ＣＭＬの治療に使用されるＢｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤の第１世代とみなされる。グリベック（登録商標）処方情報［２０１３年：Ｎｏｖａｒｔｉｓ］（その全体が参照により組み込まれる）は、イマチニブ投与の推奨及び関連データを列挙する。
【００７０】
ダサチニブ（スプリセル（登録商標）として販売されている）は、ＣＭＬまたは急性リンパ性白血病の患者の一部を治療することが承認されている。薬物は、いくつかのチロシンキナーゼ酵素の小分子阻害剤である。スプリセル（登録商標）処方情報［Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ］（その全体が参照により組み込まれる）は、ダサチニブ投与の推奨及び関連データを列挙する。
【００７１】
ニロチニブ（タシグナ（登録商標）として販売されている）は、ＣＭＬ患者の一部を治療することが承認されている。薬物は、別の小分子チロシンキナーゼ阻害剤である。タシグナ（登録商標）処方情報［Ｎｏｖａｒｔｉｓ］（その全体が参照により組み込まれる）は、ニロチニブ投与の推奨及び関連データを列挙する。
【００７２】
ボスチニブ（ＢＯＳＵＬＩＦ（登録商標）として販売されている）もまた、ＣＭＬ患者の一部を治療することが承認されており、小分子チロシンキナーゼ阻害剤の別の例である。ＢＯＳＵＬＩＦ（登録商標）処方情報［Ｐｆｉｚｅｒ］（その全体が参照により組み込まれる）は、ボスチニブ投与の推奨及び関連データを列挙する。
【００７３】
ポナチニブ（ＩＣＬＵＳＩＧ（商標）として販売されている）は、ＣＭＬ及びフィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈ＋  ＡＬＬ）の治療に対する、ＦＤＡが承認した経口薬候補である。ポナチニブは多標的ＴＫＩであるが、ポナチニブに対する主な標的は、ＣＭＬ及びＰｈ＋  ＡＬＬの顕著な特徴である異常なチロシンキナーゼである、ＢＣＲ−ＡＢＬである。
【００７４】
本明細書に列挙される治療薬のそれぞれに関する処方情報全体は、参照により本明細書に組み込まれる。チロシンキナーゼ阻害剤の用量及び／または有害な副作用に関するさらなる情報は、Ｇ．Ｄ．Ｄｅｍｅｔｒｉ，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｔｕｍｏｒｓ；Ｗａｒｎａｕｌｔ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ；Ｓｉｖｅｎｄｒａｎ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ：ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ；Ｃａｂｅｚoｎ−Ｇｕｔｉeｒｒｅｚ  Ｌ．ＡＬＫ−ｍｕｔａｔｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ：ａ  ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｂａｒｎｉ，Ｓ．Ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ａｎｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒ；Ｄａｓａｎｕ，ＣＡ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅで見ることができる（以下の参照番号６９〜７４を参照されたい）。
【００７５】
抗ＷＴ−１抗体
ウィルムス腫瘍遺伝子タンパク質（ＷＴ−１）は、ほとんどの白血病及び幅広い種類の癌のための免疫療法に対する魅力的な標的である。ＷＴ−１は、胚発生中に中胚葉性組織中に通常発現される、ジンクフィンガー転写因子である。正常な成人組織中、ＷＴ−１発現は、ＣＤ３４＋造血幹細胞中、低いレベルに制限されるが、多系統白血病及び幅広い種類の固形腫瘍において過剰発現される（１〜２）。より最近では、ＷＴ−１発現は、微小残存病変のマーカーであることが報告されている。形態学的寛解期の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者における転写レベルの増加は、明らかな臨床的再発の予測してきた（３、４）。さらに、ＷＴ−１に対する抗体は、造血器悪性腫瘍及び固形腫瘍患者において検出され、ＷＴ−１が高度に免疫原性の抗原であることを示す（７）。
【００７６】
ほとんどの場合、臨床的に承認された治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（例えば、トラスツズマブ）は、細胞表面タンパク質の構造を認識する。しかしながら、ＷＴ−１は核タンパク質であり、したがって古典的な抗体療法が利用できない。近年まで、ＷＴ−１を標的とする免疫療法は、細胞学的アプローチに限定され、ＭＨＣクラスＩ分子によって細胞表面上に提示されるペプチドを認識する、ＷＴ−１特異的細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を生成することだけを目的とした。
【００７７】
ＣＴＬ応答の誘導のために、細胞内タンパク質は通常、プロテアソームまたはエンド／リソソームによって分解され、得られたペプチド断片は、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に結合する。これらのペプチド−ＭＨＣ複合体は、細胞表面において提示され、それらは、ペプチド−ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）相互作用を介して、Ｔ細胞認識のための標的を提供する（８、９）。ＷＴ−１タンパク質由来のペプチドのワクチン接種は、ＨＬＡが制限された細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞を誘導し、それは、腫瘍細胞を消滅させることが可能である。
【００７８】
小分子チロシンキナーゼ阻害剤と抗ＷＴ−１抗体の同時投与が、小分子治療法の有効性を強化することができることが、ここで決定された。
【００７９】
特許請求の範囲に記載された方法及び組成物の範囲内で癌の組み合わせ療法で使用され得る抗ＷＴ−１抗体としては、ＨＬＡが制限されて、ＷＴ−１ペプチドに特異的に結合する抗ＷＴ−１抗体が挙げられるがこれらに限定されず、さらに、以下の特徴のうちの少なくとも１つを示す：（ａ）約１×１０−１１Ｍ〜１×１０−８ＭのＫＤでＷＴ−１／ＨＬＡに結合する；（ｂ）ＷＴ−１発現細胞に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する；または（ｃ）インビボでＷＴ−１陽性細胞の成長を阻害する。いくつかの実施形態では、ＴＫＩ投与で対になる抗ＷＴ−１抗体は、表１〜１４に列挙され、図７〜１０に示される、１つ以上のアミノ酸配列（ｓｃＦｖ、ＶＨ及びＶＬ領域またはＣＤＲ）を含むものである。
【表１−１】
2016519075.tif 000004
【表１−２】
2016519075.tif 000005
【表１−３】
2016519075.tif 000006
【表２−１】
2016519075.tif 000007
【表２−２】
2016519075.tif 000008
【表２−３】
2016519075.tif 000009
【表２−４】
2016519075.tif 000010
【表３−１】
2016519075.tif 000011
【表３−２】
2016519075.tif 000012
【表３−３】
2016519075.tif 000013
【表３−４】
2016519075.tif 000014
【表４−１】
2016519075.tif 000015
【表４−２】
2016519075.tif 000016
【表４−３】
2016519075.tif 000017
【表４−４】
2016519075.tif 000018
【表５−１】
2016519075.tif 000019
【表５−２】
2016519075.tif 000020
【表５−３】
2016519075.tif 000021
【表５−４】
2016519075.tif 000022
【表６−１】
2016519075.tif 000023
【表６−２】
2016519075.tif 000024
【表６−３】
2016519075.tif 000025
【表６−４】
2016519075.tif 000026
【表７−１】
2016519075.tif 000027
【表７−２】
2016519075.tif 000028
【表７−３】
2016519075.tif 000029
【表７−４】
2016519075.tif 000030
【表８−１】
2016519075.tif 000031
【表８−２】
2016519075.tif 000032
【表８−３】
2016519075.tif 000033
【表８−４】
2016519075.tif 000034
【表９−１】
2016519075.tif 000035
【表９−２】
2016519075.tif 000036
【表９−３】
2016519075.tif 000037
【表９−４】
2016519075.tif 000038
【表１０−１】
2016519075.tif 000039
【表１０−２】
2016519075.tif 000040
【表１０−３】
2016519075.tif 000041
【表１１−１】
2016519075.tif 000042
【表１１−２】
2016519075.tif 000043
【表１１−３】
2016519075.tif 000044
【表１２−１】
2016519075.tif 000045
【表１２−２】
2016519075.tif 000046
【表１２−３】
2016519075.tif 000047
【００８０】
表１〜１４中の配列において、太字のテキストは、超可変重鎖及び軽鎖配列間のリンカー配列を示す。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本発明の方法で使用される抗ＷＴ−１抗体はさらに、例えば、表１３（重鎖）、１４（軽鎖）、及び１５（定常領域）に示されるような、軽鎖及び重鎖超可変領域及び定常領域を含むものを包含してもよい。同様に、開示された方法の実施で使用するのに好適な他のＷＴ−１抗体のＣＤＲは、図７〜１０に示される。
【表１３−１】
2016519075.tif 000048
【表１３−２】
2016519075.tif 000049
【表１４−１】
2016519075.tif 000050
【表１４−２】
2016519075.tif 000051
【表１４−３】
2016519075.tif 000052
【表１４−４】
2016519075.tif 000053
【表１５−１】
2016519075.tif 000054
【表１５−２】
2016519075.tif 000055
【００８２】
いくつかの実施形態では、抗ＷＴ−１抗体は、抗体の特性を改変するために（例えば、抗原結合親和性、Ｆｃ受容体結合、抗体炭水化物、例えば、グリコシル化、フコシル化など、システイン残基数、エフェクター細胞機能、エフェクター細胞機能、補体機能、または共役部位の導入のうちの１つ以上を増加または減少させるために）、定常領域／フレームワーク領域が、例えばアミノ酸置換によって変化させられるものである。
【００８３】
一実施形態では、抗体は、抗ＷＴ−１／Ａ２抗体であり、表９に示されるヒトＩｇＧ１定常領域及びＦｃドメインを含む。一実施形態では、抗ＷＴ−１／Ａ２抗体は、表９に記載される配列を有する、ヒトκ配列またはヒトλ配列を含む。本発明の抗体のいくつかの相補性決定領域（ＣＤＲ）に対するアミノ酸配列は、表１〜１４及び図７〜１０に示される。
【００８４】
ＩｇＧ  Ｆｃのグリコシル化（特に、フコシル化）変異体は、米国特許第８，０２５，８７９号、同第８，０８０，４１５号、及び同第８，０８４，０２２号に記載される宿主発現細胞及び方法を使用して生成され得、それらの内容は、参照により組み込まれる。簡潔に、本明細書に開示される抗体の重鎖または軽鎖をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、ＲＮＡ単離精製及び任意にサイズに基づく単離の標準的な技術を採用することによって得られる。次いで、ｃＤＮＡライブラリ構築、ファージライブラリ構築、及びスクリーニング、または特定の関連プライマーを使用したＲＴ−ＰＣＲなどの当該技術分野において既知の技術を使用して、重鎖または軽鎖をコードするｍＲＮＡに対応するｃＤＮＡが生成及び単離される。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡ配列は、特定の望ましいｃＤＮＡを生成するために、既知のインビトロＤＮＡ操作技術を使用して全体的または部分的に作製されるものであってもよい。次いで、ｃＤＮＡ配列は、遺伝子と共にリーディングフレーム中にプロモーターを含有するベクター中に位置付けられ、低フコース修飾宿主細胞と適合し得る。
【００８５】
本開示のいくつかの実施形態の一態様によると、癌の治療を必要としている対象に、それを行う方法が提供される。これらの実施形態に従った方法は、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤及び治療有効量の抗ＷＴ−１抗体を対象に投与することによって達成される。
【００８６】
本明細書で使用される場合、用語「治療すること」は、状態の進行を無効にすること、実質的に阻害すること、遅らせること、もしくは止めること、状態の臨床的もしくは審美的症状を実質的に改善すること、または状態の臨床的もしくは審美的症状の発現を実質的に予防することを含み、かつ例えば、対象における腫瘍の大きさを減少させること、対象における寛解状態をもたらすこと、予測される生存確率を増加させること、平均余命を延ばすこと、及び疾病進行までの予測される時間を延ばすことを含む。
【００８７】
以下の実施例の節に記載されるように、イマチニブ及びダサチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤及び抗ＷＴ−１抗体は、一緒に投与されたとき、有益な相加効果を有することが驚くべきことに認められた。重要なことに、ダサチニブ及び抗ＷＴ−１抗体の組み合わせを投与されたいくつかの動物は、それらの疾病が治癒したように思われたが、一方でいずれかを単独で投与された動物はそうではなかった。
【００８８】
ＴＫＩのための好適な投与経路としては、例えば、筋肉内、皮下、及び髄内注射、ならびに髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、または眼内注射を含む、経口、直腸、経粘膜、特に経鼻、腸内、または非経口送達が挙げられ得る。あるいは、例えば、患者の組織領域中への医薬組成物の直接注射を介して、全身よりも局所に医薬組成物を投与してもよい。
【００８９】
経口投与は、チロシンキナーゼ阻害剤に対する例示的な投与である。チロシンキナーゼ阻害剤及び抗ＷＴ−１抗体の投与は、同じ経路を介する必要はなく、同時に実施される必要もないことを理解されたい。
【００９０】
ＷＴ−１（または抗ＷＴ−１）抗体は、それらが結合する抗原の本質が異なる。特異性は、ＨＬＡ抗原型によって決定される。例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１は、全ての白色人種の３９〜４６％において発現され、したがって、ＨＬＡ−Ａ２と併せて、ＷＴ−１ペプチドに対する特異性を有する抗体は、白色人種集団で使用するための抗体の好適な選択を表す。ＨＬＡ−Ａ２４と併せて、癌細胞の表面上に提示されるＷＴ−１ペプチドに対する特異性を有する抗ＷＴ−１抗体は、ＨＬＡ−Ａ２４標的が特に発現されるネイティブアメリカン及びアジア人集団での使用により適切であり得る。したがって、ＷＴ−１抗体の選択は、投与される対象のＨＬＡ型によって決まり得る。
【００９１】
他の実施形態では、抗ＷＴ−１／ＨＬＡ抗体は、タンパク質安定性、抗体結合、発現レベルを改善するように、または治療薬の共役のための部位を導入するように設計される、１つ以上のフレームワーク領域アミノ酸置換を含んでもよい。次いで、これらのｓｃＦｖは、当業者に既知の方法に従って組み換えヒトモノクローナルＩｇｓを生成するために使用される。
【００９２】
白血病細胞の増殖を減少させるための方法もまた含まれ、白血病細胞を本発明のＷＴ−１抗体と接触させることを含む。関連した態様では、本発明の抗体は、白血病の予防または治療のために使用され得る。治療用抗体の投与は、当該技術分野において既知である。
【００９３】
治療の医薬組成物及び方法
ＷＴ−１抗体は、腫瘍または病的状態の進行を予防、阻害、または低減するのに十分な量で、腫瘍またはＷＴ−１関連の病的状態を患う患者に、治療処置のために投与され得る。進行は、例えば、腫瘍または病的状態の成長、侵襲性、転移、及び／または再発を含む。この使用に有効な量は、疾病の重症度及び患者自身の免疫系の一般的状態によって決まる。投薬計画もまた、病状及び患者の状態によって変化し、典型的には、単回ボーラス投与または持続注入から１日当たり複数回の投与（例えば、４〜６時間毎）に及ぶか、または治療している医師及び患者の状態によって示されるように変化する。
【００９４】
本発明のＷＴ−１抗体によって治療可能な医学的状態の識別は、十分に当業者の能力及び知識の範囲内である。例えば、臨床的に有意な白血病を患っているか、あるいは臨床的に有意な症状を発症するリスクがあるヒト個人は、本ＷＴ−１抗体の投与に好適である。当該技術に熟達した臨床医は、例えば、臨床試験、健康診断、及び病歴／家族歴の使用によって、個人が本ＷＴ−１抗体の投与を用いた治療の候補者であるかを容易に決定することができる。
【００９５】
ＷＴ−１発現を特徴とする病的状態の限定されない例としては、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）／骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＡＭＬ）、及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）が挙げられる。加えて、一般的に固形腫瘍、ならびに具体的には中皮腫、卵巣癌、消化管癌、乳癌、前立腺癌、及びグリア芽腫と関連する腫瘍が、ＷＴ−１抗体を使用した治療に適している。
【００９６】
本発明のＷＴ−１抗体を投与するために、かつ任意に抗腫瘍薬及び／または他の受容体のアンタゴニストと同時投与するために、任意の好適な方法または経路が使用され得る。投与経路としては、例えば、経口、静脈内、腹腔内、皮下、または筋肉内投与が挙げられる。しかしながら、本発明が任意の特定の方法または投与経路に限定されないことが強調されるべきである。
【００９７】
本発明のＷＴ−１抗体が、薬学的に許容される担体をさらに含む組成物の形態で投与されることが理解される。好適な薬学的に許容される担体としては、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノールなど、ならびにこれらの組み合わせのうちの１つ以上が挙げられる。薬学的に許容される担体はさらに、湿潤剤もしくは乳化剤、防腐剤、または緩衝剤などの少量の補助物質を含んでもよく、それらは、結合タンパク質の保存可能期間または有効性を強化する。注射の組成物は、当該技術分野においてよく知られているように、哺乳動物への投与後に活性成分の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化されてもよい。
【００９８】
本発明の他の態様は、診断的及び予後的適用のための、ＷＴ−１関連疾患の治療のための抗体及びそれらをコードする核酸の使用、ならびに細胞及び組織中のＷＴ−１の検出のための研究ツールの使用を含むがこれらに限定されない。開示された抗体及び核酸を含む医薬組成物は、本発明によって包含される。ベクターを用いた免疫療法による抗体に基づいた治療のための本発明の核酸を含むベクターもまた、本発明によって考慮される。ベクターは、抗体の発現及び分泌を可能にする発現ベクター、ならびにキメラ抗原受容体などの抗原結合タンパク質の細胞表面発現に向けられるベクターを含む。
【００９９】
上記を考慮して考えられる実施形態は、以下の番号付けされた実施形態を含むがこれらに限定されない。
【０１００】
１．チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、及び
（Ａ）表１〜１４及び図７〜１０に示されるアミノ酸配列を含む、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖（ＨＣ）可変領域と、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含む、抗体、または
（Ｂ）表１〜１２からの第１及び第２のアミノ酸配列を含む、ＶＨ及びＶＬを含む、抗体、または
（Ｃ）表１〜１２からのアミノ酸配列を含む、ｓｃＦｖを含む、抗体、
を含む、医薬組成物。
【０１０１】
２．チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、及びスニチニブからなる群より選択される、実施形態１の医薬組成物。
【０１０２】
３．チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ポナチニブ、もしくはダサチニブ、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態１の医薬組成物。
【０１０３】
４．イマチニブの薬学的に許容される塩は、メシル酸イマチニブである、実施形態１の医薬組成物。
【０１０４】
５．ポナチニブの薬学的に許容される塩は、ポナチニブ塩酸塩である、実施形態１の医薬組成物。
【０１０５】
６．ＷＴ−１陽性癌の増殖を治療または阻害するための方法であって、方法は、治療有効量のチロシンキナーゼ阻害剤、及び治療有効量の抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの投与を必要としている対象に、それを行うことを含む、方法。
【０１０６】
７．前記ＷＴ−１陽性癌は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ならびに骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、消化管間質腫瘍、卵巣癌、前立腺癌、軟部組織肉腫、及び悪性神経膠腫からなる群より選択される、実施形態６に記載の方法。
【０１０７】
８．チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、及びスニチニブからなる群より選択される、実施形態６に記載の方法。
【０１０８】
９．チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ポナチニブ、もしくはダサチニブ、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態６に記載の方法。
【０１０９】
１０．イマチニブの薬学的に許容される塩は、メシル酸イマチニブである、実施形態６に記載の方法。
【０１１０】
１１．ポナチニブの薬学的に許容される塩は、ポナチニブ塩酸塩である、実施形態６に記載の方法。
【０１１１】
１２．前記抗ＷＴ−１抗体は、
（Ａ）表１〜１４及び図７〜１０に示されるアミノ酸配列を含む、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、及びＨＣ−ＣＤＲ３を含む、重鎖（ＨＣ）可変領域と、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、及びＬＣ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含む、抗体、または
（Ｂ）表１〜１２からの第１及び第２のアミノ酸配列を含む、ＶＨ及びＶＬを含む、抗体、または
（Ｃ）表１〜１２からのアミノ酸配列を含む、ｓｃＦｖを含む、抗体、
からなる群より選択される、実施形態６に記載の方法。
【０１１２】
１３．抗ＷＴ−１抗体は、ヒト可変領域フレームワーク領域を含む、実施形態６に記載の方法。
【０１１３】
１４．抗ＷＴ−１抗体は、完全ヒトである、実施形態６に記載の方法。
【０１１４】
１５．抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、ＨＬＡが制限されてＷＴ−１ペプチドに特異的に結合する、実施形態６に記載の方法。
【０１１５】
１６．抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、１×１０−８Ｍまたはそれ以下のＫＤでＷＴ−１／ＨＬＡに結合する、実施形態６に記載の方法。
【０１１６】
１７．抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−８ＭのＫＤでＷＴ−１／ＨＬＡに結合する、実施形態６に記載の方法。
【０１１７】
１８．抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、ＷＴ−１陽性細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、実施形態６に記載の方法。
【０１１８】
１９．抗ＷＴ−１抗体またはその抗原結合部分は、インビボでＷＴ−１陽性細胞の成長を阻害する、実施形態６に記載の方法。
【０１１９】
２０．前述の抗体の抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、実施形態６に記載の方法。
【０１２０】
ここで、本発明の方法が、代表的な実施形態に関してより詳細に記載される。
【実施例】
【０１２１】
実施例１
材料及び方法
細胞試料、細胞株、及び抗体。スローン−ケタリング記念がんセンター内の治験審査委員会がプロトコルを承認した後、ＨＬＡ型健康ドナー及び患者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離によって得た。全ての細胞をスローン−ケタリング記念がんセンターの細胞免疫部によるＨＬＡ型であった。白血病細胞株、ＢＶ１７３（ＷＴ−１＋、Ａ０２０１＋）は、Ｄｒ．Ｈ．Ｊ．Ｓｔａｕｓｓ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｌｏｎｄｏｎ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ））の厚意で提供された。３７℃／５％ＣＯ２で、５％ＦＣＳ、ペニシリン、ストレプトマイシン、２ミリモル／Ｌのグルタミン、及び２−メルカプトエタノールが補充されたＲＰＭＩ  １６４０中で細胞株を培養した。
【０１２２】
動物。ＮＯＤ／ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）として既知の６〜８週齢の雄のＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃ  ｓｃｉｄ  ＩＬ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入したか、またはＭＳＫＣＣ動物繁殖生産施設から得た。
【０１２３】
ルシフェラーゼ／ＧＦＰ陽性細胞の形質導入及び選択。ｌｕｃ／ＧＦＰをコードしているプラスミドを含有するレンチウイルスベクターを用いて、高レベルのＧＦＰ−ルシフェラーゼ融合タンパク質を発現させるために、ＢＶ１７３細胞を操作した（３９）。単細胞クローニングを使用して、高レベルのＧＦＰ発現を示す細胞のみをフローサイトメトリー分析によって選択し、動物研究のために維持及び使用した。
【０１２４】
実施例２
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）
ＡＤＣＣは、ヒトにおける治療用ｍＡｂの主要なエフェクター機構のうちの１つであると考えられる。したがって、有効性の評価は、芽球発症におけるＣＭＬ由来のＢＶ１７３細胞株に対するＡＤＣＣを測定するインビトロ実験から開始する。新鮮ＢＶ１７３細胞をＡＤＣＣ標的細胞のために使用した。６時間にわたって異なるエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で、標的細胞及び新鮮ＰＢＭＣと共に７５０ｎｇ／ｍＬで、ＷＴ−１抗体またはそのアイソタイプ対照ヒトＩｇＧ１をインキュベートした。イマチニブを０、１、５、及び１０μＭの濃度で添加した。上清を採取し、標準的なクロム５１遊離アッセイによって、細胞傷害性を測定した。
【０１２５】
ヒトＰＢＭＣの存在下で、ＷＴ−１抗体は、腫瘍細胞、白血病細胞株ＢＶ１７３上でＨＬＡ−Ａ０２０１分子によって自然に提示されたＲＭＦエピトープに対する、用量依存性ＰＢＭＣ  ＡＤＣＣを介在した。重要なことには、ＷＴ−１抗体は、種々の用量のイマチニブの存在下で、ＡＤＣＣを介在することが可能であった。複数の健康ドナーからのエフェクター細胞としてＰＢＭＣを使用して、７５０ｎｇ／ｍＬのＷＴ−１抗体において死滅が常に観察された。これらの結果は、イマチニブは、ＷＴ−１抗体がインビトロでＲＭＦ及びＨＬＡ−Ａ０２０１複合体を自然に発現させる細胞に対する特定のＡＤＣＣを媒介する能力に影響を及ぼさないことを証明した（図１）。
【０１２６】
実施例３
ＨＬＡ−Ａ０２０１＋白血病細胞株ＢＶ１７３を注射したＮＳＧマウスを使用して、ＴＫＩとＥＳＫＭのインビボ有効性を評価した。ＥＳＫＭと組み合わせたイマチニブ及びダサチニブ療法に使用されたプロトコルは、尾静脈を介してマウス１匹当たり３×１０６個の細胞を注射すること、腫瘍生着を評価するための注射の６日後のルシフェリン画像、及び６日目の撮像直後の療法の開始で構成された。腫瘍成長を監視するために、ルシフェリン画像を週１回使用した。ＴＫＩは、１日１回腹腔内注射される（イマチニブに対して５０ｍｇ／ｋｇ及びダサチニブに対して２０〜４０ｍｇ／ｋｇ）。抗体は、週２回静脈内注射される。
【０１２７】
実施例４
ヒト白血病異種移植ＮＳＧモデルにおけるイマチニブ＋抗ＷＴ−１／ＨＬＡ抗体（ＥＳＫＭ）の治療効果。３百万個のＢＶ１７３ヒト白血病細胞を尾静脈によってＮＳＧマウスに静脈注射した。６日目、治療されることになっていた全てのマウスにおけるホタルルシフェラーゼイメージングによって腫瘍生着を確認し、次いで、マウスを異なる治療群（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）にランダムに分けた。６日目の撮像直後、週２回腹腔内（ＩＰ）注射によって投与される１００μｇの抗ＷＴ−１抗体ＥＳＫＭで、療法を開始した。イマチニブもまた、１日１回５０ｍｇ／ｋｇのＩＰ注射によって投与した。療法は、５週間継続した（マウス１匹当たり１０用量のＥＳＫＭ及び３４用量のイマチニブ）。グループＡ：療法なし；グループＢ：イマチニブ治療のみ；グループＣ：ＥＳＫ治療のみ；グループＤ：１日１回のイマチニブ及び週２回のＥＳＫの両方の組み合わせ。発光イメージングによって腫瘍成長を週１回評価し、臨床活性を１日１回評価した。
【０１２８】
５週間の療法後、蛍光ルシフェリン画像によって動物を撮像し、Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ（登録商標）ソフトウェアを使用して、蛍光性を定量化した。これは、マウス腫瘍組織量の定量化を可能にする。結果は、図３に示される。イマチニブのみ（１日１回５０ｍｇ／ｋｇ）を投与された動物は、イマチニブも抗ＷＴ−１抗体も投与されていない対照動物と比較して、腫瘍組織量が減少した。５週間にわたって週２回１００μｇの抗ＷＴ−１抗体を投与された動物は、対照マウス及びイマチニブで治療されたマウスよりもはるかに改善された。腫瘍細胞の最大の減少は、抗ＷＴ−１抗体及びイマチニブの組み合わせを投与された動物（グループＤ）において見られた。これらの動物もまた、それらの１週間前の撮像日から明らかなように、腫瘍の成長の減少を示した（図２）。
【０１２９】
実施例５
ヒト白血病異種移植ＮＳＧモデルにおけるダサチニブ＋抗ＷＴ−１／ＨＬＡ抗体（ＥＳＫＭ）の治療効果。３百万個のＢＶ１７３ヒト白血病細胞を尾静脈によってＮＳＧマウスに静脈注射した。６日目、治療されることになっていた全てのマウスにおけるホタルルシフェラーゼイメージングによって腫瘍生着を確認し、次いで、マウスを５つの異なる治療群（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥ）にランダムに分けた。６日目の撮像直後、週２回腹腔内（ＩＰ）注射によって投与される１００μｇの抗ＷＴ−１抗体ＥＳＫＭで、療法を開始した。ダサチニブもまた、１日１回４０ｍｇ／ｋｇのＩＰ注射によって投与した。ダサチニブは、水溶液中で溶性ではないため、５０μＬのＤＭＳＯに溶解して投与した。グループＡ：療法なし；グループＢ：ＤＭＳＯのみ（媒体対照）；グループＣ：ダサチニブ治療のみ；グループＤ：ＥＳＫ治療のみ；グループＥ：１日１回のダサチニブ及び週２回のＥＳＫの両方の組み合わせ。７日間の療法後、ダサチニブで治療されたマウスは、有意な体重減少で具合が悪いように見えた。用量を２０ｍｇ／ｋｇまで減少させた。マウスは、病弱であり続け、１匹が死に、療法の１１日目、毒性によりダサチニブを中止した。ＥＳＫ抗体を完全な４週間の治療サイクルにわたって投与し続けた。腫瘍成長を週１回の蛍光イメージングによって評価し続けた。
【０１３０】
４週間の療法後、動物を蛍光ルシフェリン画像によって撮像し、Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ（登録商標）ソフトウェアを使用して、蛍光性を定量化し、マウス腫瘍組織量を定量化した。結果は、図６に示される。ダサチニブのみを投与された動物は、最初、腫瘍のクリアランスを有したが、療法の４週目までに再発した。４週間にわたって週２回１００μｇの抗ＷＴ−１抗体を投与された動物は、対照マウスよりもはるかに改善されたが、それらは、ダサチニブのみのマウスと比較して腫瘍組織量が増加した。ダサチニブ及びＥＳＫの組み合わせを投与されたマウスのうち、１匹のマウスは、頭蓋内腫瘍再発を有し、３匹の他のマウスは、腫瘍がないままである。５匹目のマウスは、療法の８日目にダサチニブ毒性で死んだ。
【０１３１】
実施例６
ＢＶ１７３は、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋、ＷＴ１を発現させるヒトＰｈ＋ＡＬＬ細胞株であり、ルシフェラーゼでタグ付けされる。耐性Ｔ３１５Ｉ  Ｂｃｒ−ＡｂｌプラスミドでＢＶ１７３を形質導入することによって、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）耐性ＢＶ１７３−Ｒ細胞株を操作した。ヒトＰＢＭＣエフェクターを利用して、クロム遊離アッセイによって、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）をインビトロで評価した。生物発光画像法（ＢＬＩ）を用いて、ＮＯＤ／ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）マウスにおけるインビボの腫瘍成長を評価した。療法の終わりに、負のＢＬＩ信号を有するマウスにおける微小残存病変を評価するために、ＲＴ−ＰＣＲを使用した。１日１回のＩＰで投与される、最大で最大耐性量のイマチニブ、ダサチニブ、及びポナチニブを使用した。ＩＰで週２回１００μｇのＥＳＫＭを投与した。
【０１３２】
ＥＳＫＭは、インビトロでＢＶ１７３及びＢＶ１７３−Ｒ細胞株の両方に対するＡＤＣＣを介在した。ＢＶ１７３移植ヒト白血病異種移植モデルにおいて、ＥＳＫＭは、７８％対５２％の腫瘍成長の中央値の減少で、イマチニブよりも強力であった。イマチニブ及びＥＳＫＭ療法の組み合わせは、白血病成長の９４％の減少をもたらした。高用量のダサチニブ（１日１回、４０ｍｇ／ｋｇ）は、ＥＳＫＭよりも強力であったが、ダサチニブ毒性による両方の中止は、再発をもたらした。ダサチニブとＥＳＫＭ療法との組み合わせは、マウスの７５％における治癒をもたらし、療法の終了の３週間後、骨髄ＲＴ−ＰＣＲによって確定された。ダサチニブ、続いてＥＳＫＭを用いた強化療法で細胞が減少したマウスに対して、遅発性再発が認められたが、治癒は認められなかった。ＥＳＫＭは、インビボでＴ３１５Ｉ  ＢＶ１７３−Ｒ白血病に対して、イマチニブ及びダサチニブよりもはるかに優れていた。耐性Ｔ３１５Ｉ白血病に対する、ＥＳＫＭ及び第１または第２世代のＴＫＩの組み合わせ療法によって、治癒は達成されなかった。
【０１３３】
１０ｍｇ／ｋｇのポナチニブは、ＢＶ１７３−Ｒに対してＥＳＫＭのみよりも高い有効性を有したが、ＥＳＫＭ及びポナチニブの組み合わせで治療されたマウスは、優れた腫瘍減少を有した（図１３）。結論は、ＥＳＫＭが感受性及びＴ３１５Ｉ  Ｐｈ＋ＡＬＬに対して有効な治療用抗体であるということである。耐性Ｔ３１５Ｉ  Ｐｈ＋白血病成長は、イマチニブ及びダサチニブと比較してＥＳＫＭ療法によってより効果的に阻害され、ＥＳＫＭとの組み合わせ療法は、ポナチニブよりも優れている。
【０１３４】
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１３．Ｒｅｚｗａｎｉ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＰＲ１  ａｎｄ  ＷＴ−１  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ  ２００８；１１１（１）：２３６−２４２．
１４．Ｍａｓｌａｋ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎａｌｏｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ＷＴ−１  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１０；Ａｃｃｐｔ  Ｍｉｎｏｒ  ｒｅｖ．
１５．Ｋｒｕｇ  ＬＭ，ｅｔ  ａｌ．ＷＴ−１  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ＣＤ４  ａｎｄ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２０１０；ｉｎ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ．
１６．Ｍｏｒｒｉｓ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００６；２０：６１−６９．
１７．Ｈｏｕｇｈｔｏｎ  ＡＮ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ−ａ“ｃｏｎｓｔａｎｔ”ｔｈｒｅａｔ  ｔｏ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０００；６：３７３−３７４．
１８．Ｍｉｅｄｅｒｅｒ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅａｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｔｉｎｉｕｍ−２２５  ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ  ｉｎ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｌｐｈａ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ２００８；６０（１２）：１３７１−１３８２．
１９．Ｎｏｙ  Ｒ，Ｔ−ｃｅｌｌ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｎｏｖｅｌ  ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００５：５（３）：５２３−５３６．
２０．Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｒｅｃｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ＨＬＡ−Ａ１−ＭＡＧＥ−Ａ１  ｆｒｏｍ  ａ  ｎｏｎｉｍｍｕｎｉｚｅｄ  ｐｈａｇｅ−Ｆａｂ  ｌｉｂｒａｒｙ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｌｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２０００；９７：７９６９−７９７４．
２１．Ｈｅｌｄ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏｗａｒｄｓ  ｔｈｅ  ＮＹ−ＥＳＯ−１  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｙ  ｐｅｐｔｉｄｅ／ＭＨＣ−  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４：３４：２９１９−２９２９．
２２．Ｌｅｖ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｅｎｄｏｗｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｏｗａｒｄ  ｔｈｅ  ｗｉｄｅｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｔｕｍｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｓｕｂｕｎｉｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００２；６２：３１８４−３１９４．
２３．Ｋｌｅｃｈｅｖｓｋｙ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００８；６８（１５）：６３６０−６３６７．
２４．Ａｚｉｎｏｖｉｃ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｂｅｎｅｆｉｔ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＨＡＭＡ）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００６；５５（１２）：１４５１−８．
２５．Ｔｊａｎｄｒａ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＨＡＭＡ）ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９９０；６８（６）：３６７−７６．
２６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔｕｒｅ  １９８８；３３２（６１６２）：３３２：３２３．
２７．Ｑｕｅｅｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９８９；８６（２４）：１００２９−３３．
２８．Ｇｅｒｄ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｐｅａｔｅｄ  Ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａ３３．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；６１，６８５１−６８５９．
２９．Ｃｈｅｅｖｅｒ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｐｒｉｏｒｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ：Ａ  ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｐｉｌｏｔ  ｐｒｏｊｅｃｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００９；１５（１７）：５３２３−５３３７．
３０．Ｄｒａｋｏｓ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｕａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＷＴ−１  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｉｎ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．Ａｐｐｌ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｍｏｒｐｈｏｌ  ２００５；１３（２）：１３２−１３７．
３１．Ａｓｅｍｉｓｓｅｎ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ＨＬＡ−Ａ＊０１−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｏｆ  ＷＴ−１．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００６；１２（２４）：７４７６−７４８２．
３２．Ｔｏｍｉｍａｔｓｕ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＦｃｅＲＩａ  ｂｙ  ａ  ｍｅｔｈｏｄ  ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ．Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００９；７３（７）：１４６５−１４６９．
３３．Ｌｉｄｉｊａ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｖｅｃｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ａｆｔｅｒ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．Ｇｅｎｅ  １９９７；１８７（１）：９−１８．
３４．Ｌｉｓａ  ＪＨ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｔａｃｔ  ＩｇＧ１  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９８；２７５（５）：８６１−８７２．
３５．Ｙａｓｍｉｎａ  ＮＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｂｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｏｆ  ｔａｎｅｚｕｍａｂ，ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ＮＧＦ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｕｓｉｎｇ  ａ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００８；１７（８）：１３２６−１３３５．
３６．Ｒｏｂｅｒｔｓ  ＷＫ，ｅｔ  ａｌ．Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＣＤ２０  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ  ２００２：９９（１０）：３７４８−３７５５．
３７．Ｃａｒｏｎ  ＰＣ，Ｃｌａｓｓ  Ｋ，Ｌａｉｒｄ  Ｗ，Ｃｏ  ＭＳ，Ｑｕｅｅｎ  Ｃ，Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ  ＤＡ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｄｉｍｅｒｉｃ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ＩｇＧ  ａｒｅ  ｍｏｒｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７６：１１９１−１１９５．１９９２．
３８．ＭｃＤｅｖｉｔｔ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ，ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  ｃａｒｂｏｎ  ｎａｎｏｔｕｂｅｓ．Ｊ．Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄ  ２２０７；４８（７））１１８０−１１８９．
３９．Ｘｕｅ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  Ｗｉｌｍｓ’  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ：ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔ’ｓ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃａｎ  ｅｌｉｍｉｎａｔｅ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｌａｓｔｓ  ｉｎ  ＮＯＤ／ＳＣＩＤ  ｍｉｃｅ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ２０１０；９５（１）：１２６−１３４．
４０．ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＭＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｕｍｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｔｏｍｉｃ  ｎａｎｏｇｅｎｅｒａｔｏｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００１；２９４（５５４６）：１５３７−１５４０．
４１．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ＰＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ａｃｔｉｎｉｕｍ−２２５  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００３；６３：５０８４−５０９０．
４２．Ｓｉｎｇｈ  Ｊａｇｇｉ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｌｐｈａ−ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ  ｗｉｔｈ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｐｌｏｓ  Ｏｎｅ  ２００７；２（３）：ｅ２６７．
４３．Ｙａｎ  Ｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｃ  ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１０；２８５：１９６３７−１９６４６．
４４．Ｒｏｓｓｉ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｔａｂｌｙ  ｔｅｔｈｅｒｅｄ  ｍｕｌｔｉ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｍａｄｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｄｏｃｋ  ａｎｄ  ｌｏｃｋ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００６；１０３：６８４１−６．
４５．Ｒｙｕｔａｒｏ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｉａｂｏｄｙ  ｂｙ  ｆｏｒｍａｔ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｔｏ  ｔａｎｄｅｍ  ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ（ｔａＦｖ）．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０１１；２８６：１８１２−１８１８．
４６．Ａｎｊａ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＣＤ１９  ×  ＣＤ３，ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒａｐｉｄ  ａｎｄ  ｈｉｇｈ  ｌｙｍｐｈｏｍａ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｂｙ  ｕｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｂｌｏｏｄ  ２０００；９５（６）：２０９８−２１０３．
４７．Ｗｅｉｎｅｒ  ＧＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３  ｘ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９４；１５２（５）：２３８５−２３９２．
４８．Ｄａｆｎｅ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｂｙ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００７；２８２：１２６５０−１２６６０．
４９．Ｌｉｕ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ，ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００８１１９５．
５０．Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ａ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００３；９：５８６６．
５１．Ｋａｖｉｔａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｎａｂｌｅｓ  ｈｕｍａｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＩＬ−１２ｐ７０  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃｏａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ  ｎａｔｌ  Ａｃａ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２（８）：２９１０−２９１５．
５２．Ｒａｐｈａｅｌ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｓ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０００；６：４４３−４４６．
５３．Ｍｉｌｅｎｉｃ  ＥＤ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ：ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ  ｏｐｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔ．Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２００２；８：１７９４−１７６４．
５４．Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  ＡＪ．Ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｍＡｂｓ：ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００２：２（３）：３２３−３２９．
５５．Ｊｏｎｅｓ  ＫＬ＆Ｂｕｚｄａｒ  ＡＵ．Ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉ−Ｈｅｒ２  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．２００９：１０（１２）：１１７９−１１８７．
５６．Ｒｅｄｄｙ  ＭＭ，Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ  Ａ＆Ｓａｔｔｌｅｒ  Ｍ．ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＪＡＫ２  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｅｘｐｅｒ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  ｔａｒｇｅｔｓ  ２０１２：３：３１３−３２４．
５７．Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｋ＆Ｉｔｏ  Ｆ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ  ａｎｄ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．２０１１；３４（１２）１７７４−１７８０．
５８．Ｒｏｙｃｈｏｗｄｈｕｒｙ  Ｓ＆Ｔａｌｐａｚ  Ｍ．Ｍａｎａｇｉｎｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．２０１１；（６）：２７９−２９０．
５９．Ｋｏｎｎｉｇ  Ｒ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＭＨＣ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ａｎｄ  ｃｏ−ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＣＲ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２：１４（１）７５−８３．
６０．Ｓｅｒｇｅｅｖａ  Ａ，Ａｌａｔｒａｓｈ  Ｇ，Ｈｅ  Ｈ，Ｒｕｉｓａａｒｄ  Ｋ，Ｌｕ  Ｓ，Ｗｙｇａｎｔ  Ｊ，ＭｃＩｎｔｙｒｅ  ＢＷ，Ｍａ  Ｑ，Ｌｉ  Ｄ，Ｓｔ  Ｊｏｈｎ  Ｌ，Ｃｌｉｓｅ−Ｄｗｙｅｒ  Ｋ＆Ｍｏｌｌｄｒｅｍ  ＪＪ．Ａｎ  ａｎｔｉ−ＰＲ１／ＨＬＡ−Ａ２  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１１；１１７（１６）：４２６２−４２７２）．
６１．Ｔａｋｉｇａｗａ  Ｎ，Ｋｉｕｒａ  Ｋ＆Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｔ．Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ：Ａｎｙｔｈｉｎｇ  Ｎｅｗ？Ｃｕｒｒ  Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ  ２０１１；ＤＯＩ  １０．１００７／ｓ１１９１２−０１１−０１７２−１．
６２．Ｒａｊａ  Ｓ，Ｍｕｒｔｈｙ  ＳＣ＆Ｍａｓｏｎ  ＤＰ．Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｐｌｅｕｒａｌ  Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ．Ｃｕｒｒ  Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ  ２０１１；ＤＯＩ  １０．１００７／ｓ１１９１２−０１７７−９．
６３．Ｇｅｒｂｅｒ  ＪＭ，Ｑｉｎ  Ｌ，Ｋｏｗａｌｓｋｉ  Ｊ，Ｓｍｉｔｈ  Ｄ，Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＣＡ，Ｖａｌａ  ＭＳ，Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ  ＭＩ，Ｐｅｒｋｉｎｓ  Ｂ，Ｚａｈｕｒａｋ  Ｍ，Ｍａｔｓｕｉ  Ｗ，Ｇｏｃｋｅ  ＣＤ，Ｓｈａｒｋｉｓ  Ｓ，Ｌｅｖｉｔｓｋｙ  Ｈ＆Ｊｏｎｅｓ  ＲＪ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．２０１１；Ａｍ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ．８６：３１−３７．
６４．Ｒｅｚｗａｎｉ  Ｋ，Ｙｏｎｇ  ＡＳ，Ｓａｖａｎｉ  ＢＮ，Ｍｉｅｌｋｅ  Ｓ，Ｋｅｙｖａｎｆａｒ  Ｋ，Ｇｏｓｔｉｃｋ  Ｅ，Ｐｒｉｃｅ  ＤＡ，Ｄｏｕｅｋ  ＤＣ＆Ｂａｒｒｅｔｔ  ＡＪ．Ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  Ｗｉｌｍｓ  ｔｕｍｏｒ−１  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｆｔｅｒ  ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ｓｔｅｍ−ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ  ２００７：１１０（６）：１９２４−１９３２．
６５．Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ，Ｒｏｂｅｒｔｓ  Ａ，Ｗｉｌｔｏｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｖｅｃｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ａｆｔｅｒ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．Ｇｅｎｅ  １９９７；１８７（１）：９−１８．
６６．Ｃｈｅｎｇ  Ｌ，Ｘｉａｎｇ  ＪＹ，Ｙａｎ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ．ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００８１１９５．
６７．Ｌｉｎｄｍｏ  Ｔ，Ｂｏｖｅｎ  Ｅ，Ｃｕｔｔｉｔｔａ  Ｆ，Ｆｅｄｏｒｋｏ  Ｊ＆Ｂｕｎｎ  ＰＡ  Ｊｒ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ｌｉｎｅａｒ  ｅｘｔｒａｐｏｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｔ  ｉｎｆｉｎｉｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｃｅｓｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８４；７２（１）：７７−８９．
６８．Ｆｅｎｇ  Ｍ，Ｚｈａｎｇ  ＪＬ，Ａｎｖｅｒ  Ｍ，Ｈａｓｓａｎ  Ｒ＆Ｈｏ  Ｍ．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｃａｖｉｔｙ  ｏｆ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１１；２：１２３−１３１．
６９．Ｄｅｍｅｔｒｉ  ＧＤ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１１；３８  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ１０−９．
７０．Ｗａｒｎａｕｌｔ  Ｐ，Ｙａｓｒｉ  Ａ，Ｃｏｉｓｙ−Ｑｕｉｖｙ  Ｍ，Ｃｈｅｖe  Ｇ，Ｂｏｒｉeｓ  Ｃ，Ｆａｕｖｅｌ  Ｂ，Ｂｅｎｈｉｄａ  Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ｄ  Ｃｈｅｍ．２０１３  Ｆｅｂ  １４［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］．
７１．Ｓｉｖｅｎｄｒａｎ  Ｓ，Ｌｉｕ  Ｚ，Ｐｏｒｔａｓ  ＬＪ  Ｊｒ，Ｙｕ  Ｍ，Ｈａｈｎ  Ｎ，Ｓｏｎｐａｖｄｅ  Ｇ，Ｏｈ  ＷＫ，Ｇａｌｓｋｙ  ＭＤ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ：ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ．２０１２  Ｎｏｖ；３８（７）：９１９−２５．
７２．Ｃａｂｅｚoｎ−Ｇｕｔｉeｒｒｅｚ  Ｌ，Ｋｈｏｓｒａｖｉ−Ｓｈａｈｉ  Ｐ，Ｄｉａｚ  Ｍｕnｏｚ−ｄｅ−ｌａ−Ｅｓｐａｄａ  ＶＭ，Ｃａｒｒｉoｎ−Ｇａｌｉｎｄｏ  ＪＲ，Ｅｒａnａ−Ｔｏｍaｓ  Ｉ，Ｃａｓｔｒｏ−Ｏｔｅｒｏ  Ｍ．ＡＬＫ−ｍｕｔａｔｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ：ａ  ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｌｕｎｇ．２０１２  Ａｕｇ；１９０（４）：３８１−８．
７３．Ｂａｒｎｉ  Ｓ，Ｃａｂｉｄｄｕ  Ｍ，Ｇｕａｒｎｅｒｉ  Ｐ，Ｌｏｎａｔｉ  Ｖ，Ｐｅｔｒｅｌｌｉ  Ｆ．Ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ａｎｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２０１２；１７（５）：７１５−２４．
７４．Ｄａｓａｎｕ  ＣＡ，Ｐａｄｍａｎａｂｈａｎ  Ｐ，Ｃｌａｒｋ  ＢＡ  ３ｒｄ，Ｄｏ  Ｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ．２０１２  Ｍａｙ；１１（３）：４４５−５７．
７５．Ｎａｋａｔｓｕｋａ  Ｓ，Ｏｊｉ  Ｙ，Ｈｏｒｉｕｃｈｉ  Ｔ，Ｋａｎｄａ  Ｔ，Ｋｉｔａｇａｗａ  Ｍ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｔ，Ｋａｗａｎｏ  Ｋ，Ｋｕｗａｅ  Ｙ，Ｙａｍａｕｃｈｉ  Ａ，Ｏｋｕｍｕｒａ  Ｍ，Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｙ，Ｏｋａ  Ｙ，Ｋａｗａｓｅ  Ｉ，Ｓｕｇｉｙａｍａ  Ｈ，Ａｏｚａｓａ  Ｋ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＷＴ１  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ａ  ｖａｒｉｅｔｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．２００６；１９：８０４−８１４．
【図１】
2016519075.tif 000056
【図２】
2016519075.tif 000057
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2016519075.tif 000063
【図９】
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【図１０】
2016519075.tif 000065
【図１１】
2016519075.tif 000066
【図１２】
2016519075.tif 000067
【図１３】
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【配列表】
2016519075000001.app
【国際調査報告】
2016519075.tif 000069
2016519075.tif 000070
2016519075.tif 000071
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