(57)【要約】  本発明は、とりわけ、アテローム性動脈硬化症または心血管疾患（ＣＶＤ）および例えば急性心筋梗塞を含むその合併症を診断、予測、予防、および／または処置するための、脂質／脂質の濃度比の決定に関わる方法および使用に関する。本方法は、患者からの非高比重リポタンパク質試料の脂質濃度および得られた脂質／脂質の濃度比を分析するステップと、それらを対照と比較するステップとを含む。
2016511407.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するのに使用するためのデータを取得する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップ
を含む、方法。
【請求項２】
対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
を含む、方法。
【請求項３】
対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、
を含む、方法。
【請求項４】
対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ
を含む、方法。
【請求項５】
コンピュータが実行する方法である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
（ｅ）少なくとも１つのプロセッサにより、非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、または非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度を反映する情報を得るステップ、
（ｆ）少なくとも１つのプロセッサにより、非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、または非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度を決定するステップ、および
（ｇ）ユーザーが読み取り可能なフォーマットで、非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、または非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度を出力するステップ
をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
（ｈ）少なくとも１つのプロセッサにより、対照と非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比との間、対照と非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比との間、対照と非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比との間、または対照と非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度との間のパーセント差を決定するステップ、および
（ｉ）ユーザーが読み取り可能なフォーマットで、ステップ（ｈ）の決定において得られたパーセント差を出力するステップ
をさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
対象が、出力ステップにおいて得られたパーセント差に基づいて、アテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、またはそれらを罹患しているかどうかを決定するステップをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
決定ステップの後に、決定ステップにおいて得られたセラミド／ＴＡＧの濃度比、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、またはセラミド／ＣＥの濃度比に基づいて、前記対象において既に行われた処置を変更する、補足する、またはそれと同じ処置を維持するステップをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
決定ステップの後に、決定ステップにおいて得られたセラミド／ＴＡＧの濃度比、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、またはセラミド／ＣＥの濃度比に基づいて、前記対象を処置するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）セラミド／ＴＡＧの濃度比が、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、
（ｂ）ＣＥ／ＴＡＧの濃度比が、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、
（ｃ）ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比が、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、
（ｄ）セラミド／ＣＥの濃度比が、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される、請求項１から１０までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
脂質／脂質の濃度比の決定が、アッセイを使用して行われる、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記処置が、脂質修飾処置である、請求項３、４、９または１０に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）セラミド／ＴＡＧの濃度比が、
Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、または
ＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）
から選択され、
（ｂ）ＣＥ／ＴＡＧの濃度比が、
ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、
ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、または
ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）
から選択され、
（ｃ）ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比が、
ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、
ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）、（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、または
ＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択され、または
（ｄ）セラミド／ＣＥの濃度比が、
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、または
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０
から選択される、請求項１から１３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記脂質／脂質の濃度比の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、もしくは少なくとも８つ、またはそれらの組合せを決定するステップを含む、請求項１から１４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）前記ＣＶＤが、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、卒中および／またはＣＶＤ死を特徴とするか、および／もしくは
（ｂ）前記ＣＶＤが、アテローム性動脈硬化症誘発性であるか、ならびに／または、
（ｃ）前記対象が、アテローム性動脈硬化症を有するか、もしくは
（ｄ）前記対象が、アテローム性動脈硬化症を有していない、請求項１から１５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
（ａ）前記方法が、前記対象に由来する試料中の、総コレステロール、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）および／またはアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（アポＣ−ＩＩＩ）の血清中レベルを決定するステップをさらに含むか、および／または
（ｂ）対象が、総コレステロール、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（アポＣ−ＩＩＩ）、もしくはアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）の１つまたは複数が上昇している血清中レベル、またはＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）が低下している血清中レベルを有していない、請求項１から１６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、
（ａ）スタチン、別の脂質低下薬、および／または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターにより処置されているか、もしくは処置されていた、または
（ｂ）スタチン治療、別の脂質低下薬による治療、および／または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターによる治療をまだ受けていない、請求項１から１７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
非ＨＤＬ試料が、ＬＤＬ試料、超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）試料、もしくは中比重リポタンパク質（ＩＤＬ）試料、またはそれらの組合せである、請求項１から１８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
非ＨＤＬ試料がＬＤＬ試料である、請求項１から１９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
脂質／脂質の濃度比が、質量分析法、核磁気共鳴分光法、蛍光分光法または二面偏波式干渉法、ＨＰＬＣ、ＵＨＰＬＣもしくはＵＰＬＣなどの高性能分離法、ＥＬＩＳＡなどの免疫アッセイ、および／または分析種に特異的に結合することができる結合部位によるアッセイを使用することにより決定される、請求項１から２０までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）前記患者がＣＶＤを発症するリスクの決定、
（ｂ）前記患者における、ＣＶＤの初期徴候の決定、
（ｃ）患者におけるアテローム性動脈硬化症の発生の決定または予測、および／または
（ｄ）心筋梗塞（ＭＩ）、狭心症、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）および卒中の予測ならびに／または診断を含む、ＣＶＤおよび／またはＣＶＤ合併症の予測または診断、あるいは死亡の予測、
のための、請求項１から２１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置または予防に使用するための、請求項１から４まで、１１または１４のいずれか１項に記載の脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物であって、前記対象に由来する試料中の前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合、著しく異ならないよう薬物が投与され、さらにスタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターである、薬物。
【請求項２４】
請求項１から４まで、１１または１４のいずれか１項に記載の脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物の治療有効用量を投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法であって、前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合、著しく異ならないよう薬物が投与され、さらに薬物がスタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターである、方法。
【請求項２５】
請求項１から４まで、１１または１４のいずれか１項目による脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物の治療有効用量を対象に投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法であって、前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合、著しく異ならないよう薬物が投与され、さらに前記薬物がスタチン；スタチン以外のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ナイアシン（ニコチン酸）、コレステロール吸収阻害剤、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）、胆汁酸隔離剤、フィブラート、フィトステロール、およびＰＣＳＫ９阻害剤から選択される別の脂質低下薬；または低分子、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および天然もしくは修飾脂質から選択される脂質／脂質の濃度比のモジュレーターである、方法。
【請求項２６】
対象に治療有効用量の薬物を投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法であって、前記薬物が、スタチン；スタチン以外のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ナイアシン（ニコチン酸）、コレステロール吸収阻害剤、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）、胆汁酸隔離剤、フィブラート、フィトステロール、およびＰＣＳＫ９阻害剤から選択される別の脂質低下薬；または低分子、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および天然もしくは修飾脂質から選択される脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであり、これらの薬物を投与する前に、対象が、対照と比べると、セラミド／ＴＡＧ濃度の比の低下、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比の低下、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比の低下、またはセラミド／ＣＥの濃度比の低下に基づいて、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症に罹患しているか、あるいはそれらを発症するリスクが増加していると特定された、方法。
【請求項２７】
対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するため、または請求項１から２６までもしくは以下の請求項のいずれか１項に記載の方法を実施するためのキットであって、
（ａ）請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質から選択される１つまたは複数の脂質標準品、ならびに／または対照較正線、ならびに／またはポジティブおよび／もしくはネガティブ対照、
を含む、キット。
【請求項２８】
（ｂ）請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質、またはタンパク質である、１つまたは複数の対照マーカー、
（ｃ）内部および／または外部標準、
（ｄ）請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる薬剤、
（ｅ）前記方法を行うための試薬、
の１つまたは複数をさらに含む、請求項２７のキット。
【請求項２９】
請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる薬剤が、抗体である、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するための、請求項２７から２９までのいずれかにおいて定義されているキットの使用であって、対象に由来する試料中の脂質／脂質の濃度比が、質量分析法を使用することにより決定されてもよい、使用。
【請求項３１】
対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するため、または請求項１から３０までのいずれか１項による方法もしくは使用を実施するためのキットであって、
（ａ）酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされている、請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる抗体、または酵素もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされている、請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つを含み、
（ｂ）前記酵素に特異的な基質、
（ｃ）（ａ）の抗体のいずれかに結合することができる二次抗体でコーティングされたアッセイプレート、
（ｄ）標準品および／または標準較正線、
（ｅ）ストップ溶液、および
（ｆ）１つまたは複数の緩衝液および／または試薬
の１つまたは複数を含んでもよい、
キット。
【請求項３２】
酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされている抗体が、請求項１４に記載の脂質／脂質の濃度比にある脂質のいずれか１つに結合することができ、かつ／または酵素もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされている脂質が、請求項１４に記載の脂質／脂質の濃度比にある脂質のいずれか１つである、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するための方法であって、
（ａ）対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するために、
（ｂ）対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するために、
（ｃ）対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するために、または
（ｄ）対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するために、請求項２７から２９まで、３１および３２のいずれか１項のキットを使用するステップを含む、方法。
【請求項３４】
対象に由来する試料中の脂質／脂質の濃度比が、質量分析法を使用することにより決定される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
対象がアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、あるいは罹患しているかを決定する方法であって、
（ａ）請求項１から４まで、１１または１４に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体を使用する、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比のセラミド／ＴＡＧの濃度比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
（ｂ）請求項１から４まで、１１または１４に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体を使用する、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
（ｃ）請求項１から４まで、１１または１４に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体を使用する、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、または
（ｄ）請求項１から４まで、１１または１４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体を使用する、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中のセラミド／ＣＥの濃度比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ
を含む、方法。
【請求項３６】
請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体の治療有効用量を投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法。
【請求項３７】
対象が、急性心筋梗塞などの１つまたは複数のＣＶＤ合併症を発症するリスクがあるか、またはそれを罹患しており、かつ／または心筋死のリスクがある、請求項１から３６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
対象が、心血管疾患を罹患している、請求項１から３７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
ａ）対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクまたは罹患するリスクを予測するステップ、または
ｂ）対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予防または処置するステップ
において使用するための、請求項１から４まで、１１または１４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体。
【請求項４０】
対象におけるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置に使用するための、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであって、
ａ）請求項１から３９までのいずれか１項に記載の方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかを適用すると、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定されるか、
ｂ）請求項１から３９までのいずれか１項に記載の方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかにより、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定されたか、
ｃ）請求項１から３９までのいずれか１項に記載の方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかを適用すると、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定されるか、および／または
ｄ）請求項１から３９までのいずれか１項に記載の方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかにより、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定された、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【請求項４１】
脂質低下薬が、スタチン以外のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤；ナイアシン（ニコチン酸）；コレステロール吸収阻害剤；コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）；胆汁酸隔離剤；フィブラート；フィトステロール；またはＰＣＳＫ９阻害剤から選択される、請求項１８から２２まで、２５もしくは２６のいずれか１項に記載の方法、請求項２３に記載の薬物、または請求項４０に記載のスタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【請求項４２】
それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法であって、対象にスタチン；スタチン以外のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ナイアシン（ニコチン酸）、コレステロール吸収阻害剤、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）、胆汁酸隔離剤、フィブラート、フィトステロール、およびＰＣＳＫ９阻害剤から選択される別の脂質低下薬；または低分子、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および天然もしくは修飾脂質から選択される脂質／脂質の濃度比のモジュレーターの治療有効用量を投与するステップを含み、
ａ）請求項２から２２まで、または３３から３５までのいずれか１項の方法により、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定されるか、
ｂ）請求項２から２２まで、または３３から３５までのいずれか１項の方法により、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定されたか、
ｃ）請求項２から２２まで、または３３から３５までのいずれか１項の方法により、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定されるか、かつ／または
ｄ）請求項２から２２まで、または３３から３５までのいずれか１項の方法により、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定された、方法。
【請求項４３】
コレステロール吸収阻害剤が、エゼチミブまたはＳＣＨ−４８４６１から選択され、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤が、アナセトラピブ、エバセトラピブおよびダルセトラピブから選択され、胆汁酸隔離剤が、コレセベラム、コレスチルアミン、およびコレスチポールから選択され、フィブラートが、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、およびベザフィブラートから選択され、ＰＣＳＫ９阻害剤が、ＰＣＳＫ９特異的抗体、ｓｉＲＮＡ、およびペプチド模倣薬から選択される、請求項２５、２６、４１または４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、フルバスタチンＸＬ、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチンからなる群から選択される、請求項１８、２５、２６または４１または４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
脂質／脂質の濃度比のモジュレーターが、低分子、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および天然もしくは修飾脂質、好ましくは請求項１から４までまたは７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質から選択される、請求項１８から２２まで、２５、２６、４１もしくは４２のいずれか１項に記載の方法、請求項２３に記載の薬物、または請求項４０に記載のスタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【請求項４６】
対照が、健常な個体、健常な個体の一般集団、いかなる主要なＣＶＤ合併症のない状態にあるＣＡＤ患者、またはいかなる主要なＣＶＤ合併症のない状態にあるＣＡＤ患者の群に由来する、請求項２から２２まで、２４、２５、２６、３３から３５まで、４１または４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
対照が非ＨＤＬ試料である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
非ＨＤＬ試料中が、ＬＤＬ試料、超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）試料、または中比重リポタンパク質（ＩＤＬ）試料、またはそれらの組合せである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
非ＨＤＬ試料がＬＤＬ試料である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
予防または処置されるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤの１つまたは複数の合併症が、心筋梗塞（ＭＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、狭心症、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、および卒中から選択される、請求項１から４９までのいずれか１項に記載の、方法、薬物、使用、キット、抗体、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【請求項５１】
予防されるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤの１つまたは複数の合併症が死亡である、請求項１から５０までのいずれか１項に記載の、方法、薬物、使用、キット、抗体、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アテローム性動脈硬化症または心血管疾患（ＣＶＤ）および例えば急性心筋梗塞もしくは心筋死を含むその合併症を診断、予測、予防、および／または処置するための、脂質／脂質の濃度比の決定に関わる方法および使用に関する。本方法は、生物学的試料の脂質濃度および得られた脂質／脂質の濃度比を分析するステップと、それらを対照と比較するステップとを含む。詳細には、本発明は、血漿／血清の総コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、またはそれらの比を含む標準脂質検査と比べて優れたＣＶＤマーカーである新規脂質バイオマーカーの特定に関する。この新規なバイオマーカーは、脂質分子種、またはセラミドおよびセラミド誘導体と一緒になったトリアシルグリセリド（グルコシル／ガラクトシルセラミド、ＧＭ３ガングリオシド）、コレステリルエステルもしくはリゾリン脂質の脂質クラスの合計濃度から導かれた比である。
【背景技術】
【０００２】
世界的に、心血管疾患（ＣＶＤ）は、死亡率および罹患率の主要な原因の１つであり、有病率は増加し続けている。ＣＶＤは、心臓、心臓弁、血液、および身体の血管構造に影響を及ぼす様々な状態を分類するために使用される。これらの状態の１つが、冠動脈疾患（ＣＡＤ）である。ＣＡＤの発症における中心的な様相は、様々な脂質を含有する複合分子形成体であるアテローム斑をもたらす恐れのある、血管壁における脂質物質の蓄積である。この主な脂質源は、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子であり、これらは動脈壁に容易に浸透して閉じ込められ、そこでこれらはその滞留を強化する修飾（例えば、酸化または凝集）を受ける。一般にアテローム生成抑制性であるとみなされている高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子は、コレステロール逆輸送と呼ばれる過程で、血管壁からＬＤＬ由来脂質を除去することができる。さらに、ＨＤＬ粒子は、有益な抗炎症、抗アポトーシスおよび抗酸化特性を有する。
【０００３】
血液中で総コレステロールまたは低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）濃度が高いことは、ＣＶＤのリスクの予測になるということが一般に認められている。血漿または血清の総コレステロール、ＬＤＬ−ＣまたはＨＤＬ−Ｃ濃度は、ＣＶＤ／ＣＡＤリスクを予測するための判断基準として使用されてきた。大規模集団の検討に基づいて、コレステロールの標準測定値は、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）または心筋死などのＣＡＤリスクおよびＣＡＤのエンドポイントと関連することは明白である。したがって、コレステロール濃度、とりわけＬＤＬ−Ｃの低下（主にスタチン処置による）が主な治療戦略であり続けており、この戦略は、集団レベルではうまく出現量を低下させてきた。
しかし、ＬＤＬ−Ｃは、いくつかの理由のため、診断的／治療的目的に対する最適な標的ではない場合がある。第１に、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）患者の半分は、推奨される正常範囲内のＬＤＬ−コレステロールレベルを有していることが観察されている。第２に、スタチン処置患者において、ＬＤＬ−Ｃは低下しているにもかかわらず、依然として、ＣＶＤ／ＣＡＤを発症する相当な（約６５％）残存リスクがあることに留意することが重要である。したがって、ＬＤＬ−Ｃを凌駕する追加的な診断的／治療的標的が必要とされている。
【０００４】
残存リスクの一部は、ＨＤＬ−Ｃレベルが低いことに起因する。ＨＤＬ粒子上の主な表面タンパク質であるアポリポタンパク質Ａ１のレベル、およびこれらの粒子中におけるコレステロールの量であるＨＤＬ−Ｃは互いに相関しており、陰性のリスク因子として個別に考えられている。したがって、標準脂質検査の結果から容易に算出される総コレステロール／ＨＤＬコレステロールの比は、ＣＶＤリスクアセスメントにおける十分に確立されている別のマーカーである。例えば、ナイアシン、フィブラート、またはＣＥＴＰ−阻害剤を使用することによりＨＤＬ−Ｃレベルを向上することは、ＬＤＬの低下と組み合わせた別の治療的手法である。総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、およびＨＤＬ−Ｃの他に、いくつかの非脂質リスク因子（年齢、血圧、糖尿病、喫煙、および肥満指数）が、心血管イベントに対する個体のリスクを評価／計算するためのリスクアセスメントに使用されている。最もよく知られているリスクスコアであるフラミンガムスコアは、心血管イベントを有するという個体の１０年のリスクを評価するものであり、総コレステロールおよびＨＤＬ−Ｃ、年齢、性別、血圧、喫煙状況、および脂質低下投薬治療の使用を含めた因子から算出される。しかし、これらのリスクスコアは、集団レベルでは有用となり得るが、心血管イベントに対する個人のリスクをそれほど正確に明らかにするものではない。
【０００５】
スタチンは、心血管合併症のリスクが高いヒトのコレステロール低下薬のファミリーである。スタチンは、幅広く使用されている。例えば、米国では、ほぼ２０００万人のスタチン処置患者がいる。さらに米国だけでも概ね５０００万人の患者がスタチン処置からの恩恵を受けていると計算されている。しかし、スタチン処置にも関わらず、ＣＶＤ患者は、深刻なＣＶＤ合併症を発症するかなりのリスクを有する。ＡＭＩおよび死亡などのＣＶＤ関連性の深刻な合併症に対する予防的手段を早期に開始することを目標とすることは大きな利益があり、ＣＶＤ罹患患者における死亡率および罹患率を低減する大きな機会を実現すると思われる。ＣＶＤおよびＣＶＤ合併症を発症するリスクのある個体の正確な特定が必須である。個体の大きな集団は中間リスクを有するものとして分類されるが、伝統的なリスクアセスメントは、リスクが高い患者の大きな集団を認識することには成功せず、患者の管理を不確かなものにしている。したがって、ハイリスクＣＶＤのリスクアセスメントの精度をさらに高めるための、さらなる戦略が切望されている。
【０００６】
ＬＤＬとＨＤＬはいずれも極めて不均質なクラスの粒子であり、いずれもサイズ、密度、電荷、およびその分子組成が異なるサブクラスにさらに分類することができる。これらの特性は、リポタンパク質のアテローム生成的またはアテローム生成抑制的な能力、すなわち動脈壁に浸透して閉じ込められる能力、または抗酸化および抗炎症特性を発揮する能力ならびに動脈壁からコレステロールを除去する能力に直接影響を及ぼすことが示唆される。しかし、粒子のサブクラスとアテローム生成促進性／アテローム生成抑制的な能力との関連はそれほどよく理解されていない。例えば、より小さなＬＤＬ粒子は、より大きなＬＤＬ粒子よりもアテローム生成的であることが示唆されているが、矛盾する証拠もある。
【０００７】
ヒト血漿または血清は、ＬＤＬおよびＨＤＬの他に、他のトリグリセリドに富む粒子を含有している。これらには、超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）および中比重リポタンパク質（ＩＤＬ）が含まれる。ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＩＤＬ粒子を含有している総血漿／血清は、まとめて非ＨＤＬ画分と呼ばれる。この非ＨＤＬ画分は、単に、ＨＤＬ画分を除く、総血漿／血清の画分である。非ＨＤＬ画分のリポタンパク質は、共通の起源を有しており、機能的および組成的に関連していると考えられている。肝臓中で合成されるＶＬＤＬは、リパーゼおよび脂質交換タンパク質により、心血管内で処理されて、ＬＤＬへとさらに処理される、中間生成物であるＩＤＬが形成する。ＬＤＬは、非ＨＤＬ画分、次いでＶＬＤＬ（その質量は、ＬＤＬのほぼ３分の１である）の主要構成物質である一方、ＩＤＬは、少量種として存在している。実際には、ＬＤＬ−Ｃは、直接測定されないが、総コレステロール含有量からＨＤＬ−Ｃおよび（２．２により除算した）トリグリセリド含有量を減算することによる、式（例えば、フリードワルドの式）を使用して算出されることが多い。
【０００８】
様々なリポタンパク質のサブクラスは、その脂質組成が著しく異なる場合がある。その結果、標準コレステロール検査から同じ結果を有する２人のヒトは、リポタンパク質粒子の量およびサイズが実質的に異なる場合がある（図１）。したがって、コレステロール含有量の代わりに、粒子数が、ＣＶＤを発症するリスクをより良く反映することが示唆される。アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）は、各粒子上のアポＢ分子の１つとして存在している、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＩＤＬ粒子（非ＨＤＬ画分）の主要な表面タンパク質である。したがって、アポＢレベルは、試料中に存在しているアテローム生成的リポタンパク質粒子の量を直接反映する一方、粒子の量および心血管リスクは、粒子サイズ（および、コレステロール含有量）が変動する場合、所与のＬＤＬ−Ｃ濃度に応じて実質的に変動する可能性がある。試料の分布、サイズおよび粒子数は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法により容易に入手できる。すべてではないが、一部の研究により、ＬＤＬ粒子（ＬＤＬ−Ｐ）またはアポＢの量が、ＬＤＬ−ＣよりもＣＶＤリスクに密接に関連しているということが見出されている。しかし、最近の研究により、ＬＤＬ−Ｐと小粒子および大粒子の分布のどちらも、総／ＨＤＬコレステロール比を計算することにより得られるＣＶＤリスクアセスメントを改善しないことが実証された（Ｐａｒｉｓｈら、２０１２年）。
【０００９】
ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、および粒子数を決定する他のパラメータの主な欠点は、それらが、粒子の質を必ずしも反映しないという点にある。コレステロールは、明らかにＣＶＤに関連しているが、中心的な役割を有しているという評判があるにもかかわらず、コレステロールが実効的なリスク分子であるという説得力のある証拠は存在していないように思われる。コレステロールの役割を支持する中心的な議論の１つは、スタチンの使用に関連するリスク低下、すなわちコレステロール低下薬の服用により、ＣＶＤのリスクが低減するということに起因している。しかしこれは、スタチンは、コレステロールの他にいくつかの他の分子のレベルも低下させることが知られているので、大雑把な過度な単純化である。コレステロールは、すべてのリポタンパク質粒子に必須で存在しているので、ＬＤＬ粒子により運ばれる他の危険分子に関連する間接的な測定に過ぎない可能性がある。さらに、分子の視点から見ると、コレステロールは、機能的に異なる形態で、すなわち遊離コレステロールとして、または様々な脂肪酸とエステル化されたものとして、リポタンパク質粒子中に存在している。したがって、これらの特定の粒子中の総コレステロール（遊離体およびエステル体）を決定するＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃ検査は、該粒子の質および機能をそれほど正確に反映しないことがある。これらの特性は、より優れた診断的または予後的価値を有する可能性がある生物活性タンパク質または脂質分子の存在などの、総コレステロール以外の因子により決定される可能性が高い。リポタンパク質の質は、例えば、ＬＤＬ粒子が酸化されるか凝集する傾向を測定する生化学的方法により伝統的に検討されている。これらの方法は、時間がかかり、慣例的手順の臨床使用には適していない。したがって、リポタンパク質の質を測定することができ、かつ慣例的手順の臨床使用に適した、ロバストな方法が必要とされている。したがって、どの分子がリポタンパク質の機能、および危険なまたは致死性にさえなる心血管イベントに直接関連するかを特定することが極めて重要である。
【００１０】
特定のリポタンパク質クラスにしばしば存在するタンパク質構成物質とは対照的に、基本的にあらゆるリポタンパク質（サブ）クラスにおいて、任意の所与の脂質分子が（様々な量ではあるが）見出される可能性がある。リポタンパク質粒子は、構造タンパク質、およびホスホノ脂質およびスフィンゴ脂質を含めた極性脂質の層により取り囲まれた、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）およびコレステリルエステル（ＣＥ）などの疎水性脂質が豊富にある中性コアからなる。リポタンパク質表面にある少量の脂質構成成分には、それらの血漿中レベルの向上が糖尿病およびアテローム性動脈硬化症を含めた代謝性疾患にリンクしている、極めて強力な生物活性セラミド（Ｃｅｒ、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ）、ＧＭ３ガングリオシド、およびリゾリン脂質が含まれる。同様に、血漿中のＴＡＧレベルの向上は、心血管リスクと関係していると考えられている。循環中では、ＴＡＧの大部分は、ＶＬＤＬおよびＩＤＬ粒子中で主に輸送されており、ＬＤＬ画分中のこうした脂質の役割については知られていない。
【００１１】
リポタンパク質の（サブ）クラスは、様々な機能的役割を有するので、特定の脂質分子が関連している粒子により評価することは当を得ている。したがって、有害な粒子と有益な粒子との間の脂質の分布は、その循環レベルを変化させることなく影響を受ける可能性があり、総血漿／血清から測定した場合、ある種の粒子において関連脂質分子が豊富であることがマスキングされる可能性がある。一例として、コレステロールは、時として、それぞれＨＤＬ画分またはＬＤＬ画分であるかに応じて「善玉」または「悪玉」と呼ばれる。しかし、上記の通り、ＬＤＬ−Ｃは、ＣＶＤの診断および治療目的に対する最適なバイオマーカーではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよびその合併症、またはリスクの指標となる新規なバイオマーカーであって、したがって、血漿／血清の総コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、またはそれらの比を含めた、標準脂質検査の代替となるか、またはそれより優れたバイオマーカーが当業界で必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明はとりわけ、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のＣＶＤの合併症を罹患しているか、またはアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のＣＶＤの合併症を発症するリスクのある対象を特定するための、新規なバイオマーカー、および関連する診断方法、および使用を提供する。こうした方法および使用は、こうした対象に由来する、対象の血漿または血清のＬＤＬ画分などの非ＨＤＬ試料から特定の脂質／脂質の濃度比をモニタリングするステップ、およびこうした比を対照における比と比較するステップを含む。
【００１４】
したがって、本発明の第１の態様では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するための方法であって、前記方法が、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップを含む方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）から選択される。
【００１５】
本発明のこうした態様の別の実施形態では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するための方法であって、前記方法が、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップを含む方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
【００１６】
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するための方法であって、前記方法が、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップを含む方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、およびＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
【００１７】
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するための方法であって、前記方法が、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップを含む方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比は、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される。
好ましい実施形態では、その増加が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比は、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、およびＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０から選択される。
【００１８】
本発明の別の態様では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するのに使用するためのデータを取得する方法であって、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、方法が提供される。
好ましい実施形態では、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）から選択される。
【００１９】
本発明のこうした態様の別の態様では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するのに使用するためのデータを取得する方法であって、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、方法が提供される。
【００２０】
好ましい実施形態では、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するのに使用するためのデータを取得する方法であって、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、方法が提供される。
【００２１】
好ましい実施形態では、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、およびＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定するのに使用するためのデータを取得する方法であって、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップを含む、方法が提供される。
【００２２】
好ましい実施形態では、セラミド／ＣＥの濃度比は、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、セラミド／ＣＥの濃度比は、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、およびＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０から選択される。
本発明の別の態様では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
【００２３】
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）から選択される。
本発明のこうした態様の別の実施形態では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、方法が提供される。
【００２４】
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
【００２５】
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、およびＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
【００２６】
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比は、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される。
好ましい実施形態によれば、その増加が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比は、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、およびＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０から選択される。
【００２７】
別の好ましい実施形態では、本発明による対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法は、決定ステップの後に、決定ステップにおいて得られたセラミド／ＴＡＧの濃度比、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、またはセラミド／ＣＥの濃度比に基づいて、前記対象において既に行われた処置を変更する、補足する、またはそれと同じ処置を維持するステップをさらに含んでもよい。
本発明の別の態様では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、方法が提供される。
【００２８】
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）から選択される。
本発明のこうした態様の別の実施形態では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、方法が提供される。
【００２９】
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択される。
特に好ましい実施形態によれば、その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、およびＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択される。
【００３０】
本発明のこうした態様のさらに別の実施形態では、対象において、前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップを含む、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法であって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、方法が提供される。
好ましい実施形態では、その低下が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比は、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される。
好ましい実施形態によれば、その増加が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比は、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、およびＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０から選択される。
【００３１】
別の好ましい実施形態では、対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法は、決定ステップの後に、決定ステップにおいて得られたセラミド／ＴＡＧの濃度比、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、またはセラミド／ＣＥの濃度比に基づいて、前記対象を処置するステップをさらに含んでもよい。
【００３２】
本発明のすべての態様および実施形態によれば、提供される方法は、コンピュータで実行することができる。
好ましい実施形態では、本発明のコンピュータが実行する方法のいずれも、（ｉ）少なくとも１つのプロセッサにより、非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、または非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度を反映する情報を得るステップ、（ｉｉ）少なくとも１つのプロセッサにより、非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、または非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度を決定するステップ、および（ｉｉｉ）ユーザーが読み取り可能なフォーマットで、非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比、非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比、または非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度を出力するステップをさらに含んでもよい。
【００３３】
本発明のコンピュータが実行する方法の好ましい別の実施形態では、本方法は追加的に、（ｉｖ）少なくとも１つのプロセッサにより、対照と非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比との間、対照と非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比との間、対照と非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比との間、または対照と非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度との間のパーセント差を決定するステップ、および（ｖ）ユーザーが読み取り可能なフォーマットで、ステップ（ｉｖ）の決定において得られたパーセント差を出力するステップをさらに含むことができる。
【００３４】
本発明のコンピュータが実行する方法の特に好ましい実施形態では、本方法は追加的に、対象が、出力ステップにおいて得られたパーセント差に基づいて、アテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、またはそれらを罹患しているかどうかを決定するステップをさらに含む。
コンピュータが実行する方法の好ましい実施形態では、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、セラミド／ＣＥの濃度比は、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される。
【００３５】
コンピュータが実行する方法の特に好ましい実施形態によれば、セラミド／ＴＡＧの濃度比は、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）から選択され、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、およびＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択され、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比は、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、およびＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）から選択され、セラミド／ＣＥの濃度比は、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、およびＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０から選択される。
【００３６】
同様に、本発明のすべての態様および実施形態によれば、個々の態様または実施形態に関して言及された脂質／脂質の濃度比の少なくとも２つを決定することが可能であり、かつ利点があり得る。同様に、個々の態様または実施形態に関して言及された脂質／脂質の濃度比の少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、または少なくとも８つを決定することが好ましい。
本発明によれば、ＣＶＤは、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、卒中および／またはＣＶＤ死を特徴とする疾患である。ＣＶＤは、アテローム性動脈硬化症誘発性であってもよく、そうでなくてもよい。
その非ＨＤＬ試料が、本発明の方法および使用と関連して分析される対象は、アテローム性動脈硬化症を有する対象とすることができる。あるいは、アテローム性動脈硬化症を有していない対象の試料も同様に、本発明の方法および使用に従って分析されてもよい。
【００３７】
本発明の方法および使用が、前記対象に由来する試料中の、総コレステロール、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）および／またはアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（アポＣ−ＩＩＩ）の血清中レベルを決定するステップをさらに含むことが有用であり、かつ利点さえあり得ることが理解されよう。さらに、本発明の方法または使用の好ましい実施形態によれば、対象は、好ましくは、総コレステロール、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（アポＣ−ＩＩＩ）、もしくはアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）の少なくとも１つまたは複数が上昇している血清中レベル、またはＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）が低下している血清中レベルを有していない対象である。
【００３８】
本発明の方法または使用のいずれかによれば、対象は、スタチン、別の脂質低下薬、および／または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターにより処置中か、またはこれまでに処置されている。あるいは、対象は、スタチン治療、別の脂質低下薬による治療、および／または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターによる治療をまだ受けていない対象も含んでもよい。
本発明に従って分析しようとする非ＨＤＬ試料は、ＨＤＬ粒子が実質的に低下しているか、本質的に含まないか、または完全に含まない（すなわち血漿または血清からＨＤＬを除く）血漿または血清試料とするのが有利な場合がある。分析しようとする非ＨＤＬ試料がＬＤＬ試料である実施形態も好ましい。しかし、適切な別の実施形態では、非ＨＤＬ試料はまた、超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）試料であってもよい。非ＨＤＬ試料はさらに、中比重リポタンパク質（ＩＤＬ）試料であるのが有利な場合がある。さらに別の実施形態では、非ＨＤＬ試料は、ＬＤＬ試料およびＶＬＤＬ試料の組合せとするのが有利な場合がある。ＬＤＬ試料とＩＤＬ試料との組合せ、またはＶＬＤＬ試料とＩＤＬ試料との組合せが、同様に好適である。本発明の非ＨＤＬ試料として、ＬＤＬ試料、ＶＬＤＬ試料およびＩＤＬ試料の組合せも好ましい。
【００３９】
本発明の一態様では、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置または予防に使用するための、本発明による脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物が提供される。一実施形態では、本薬物は、前記対象に由来する試料中の前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合に著しく違いのないように投与される。好ましい実施形態では、薬物はスタチンである。しかし、薬物は、別の脂質低下薬であるのも有利となり得る。あるいは、前記薬物として好適なものはやはり、脂質／脂質の濃度比、具体的には、本明細書において記載および／または特許請求されている脂質／脂質の濃度比のモジュレーターである。
【００４０】
したがって、別の態様では、本発明は、本明細書において記載および／または特許請求されている脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物の治療有効用量を投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法を提供する。やはり、本薬物は、前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合に著しく違いのないように好適に投与される。本薬物は、好ましくはスタチンであるが、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターの使用も同様に考えられる。
【００４１】
さらに別の態様では、本発明は、対象に治療有効用量の薬物を投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法であって、薬物が、スタチン；スタチン以外のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ナイアシン（ニコチン酸）、コレステロール吸収阻害剤、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）、胆汁酸隔離剤、フィブラート、フィトステロール、およびＰＣＳＫ９阻害剤から選択される別の脂質低下薬；または低分子、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および天然もしくは修飾脂質から選択される脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであり、該薬物を投与する前に、対象が、対照と比べると、セラミド／ＴＡＧ濃度の比の低下、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比の低下、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比の低下、またはセラミド／ＣＥの濃度比の低下に基づいて、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症に罹患しているか、またはそれらを発症するリスクが増加していると特定された、方法を提供する。
【００４２】
本発明の別の態様では、対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するため、あるいは本発明による方法または使用のいずれかを行うためのキットであって、（ａ）表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質から選択される１つまたは複数の脂質標準品および／または対照較正線、ならびに／またはポジティブおよび／もしくはネガティブ対照を含む、キットが提供される。本発明のこうした態様のキットは、１つまたは複数の以下の構成成分、すなわち（ｂ）脂質（単数または複数）、例えば表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質、またはタンパク質などの１つまたは複数の対照マーカー、（ｃ）内部および／または外部標準品、（ｄ）表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる抗体でもよい薬剤、および（ｅ）前記方法または使用を行うための試薬をさらに含んでもよい。
本発明の別の態様は、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するための本発明のキットの使用であって、対象に由来する試料中の脂質／脂質の濃度比が、質量分析法を使用することにより決定されてもよい、使用に関する。
【００４３】
本発明の別の態様では、対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するため、あるいは本発明による方法または使用のいずれかを実施するためのキットであって、（ａ）酵素もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされている、表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる抗体（単数または複数）、または酵素もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされている、表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つを含む、キットが提供される。本発明のこうした態様によるキットは、１つまたは複数の以下の構成成分、すなわち（ｂ）前記酵素に特異的な基質、（ｃ）（ａ）の抗体のいずれかに結合することができる二次抗体でコーティングされたアッセイプレート、（ｄ）標準品および／または標準較正線、（ｅ）ストップ溶液、および（ｆ）必要な緩衝液および／またはアッセイを実施するために必要な試薬をさらに含んでもよい。
【００４４】
さらなる実施形態では、本発明のキットは、上の実施形態の（ａ）において抗体上の検出可能な標識に特異的なタンパク質にコンジュゲートされている酵素、例えば、ストレプトアビジンにコンジュゲートされているアルカリホスファターゼを含む。
本発明のこうした態様の好ましい実施形態では、上の実施形態のキットは、項目１または請求項１、特に項目７または請求項１４などの本明細書において一覧表示されている項目または特許請求の範囲に言及されている脂質／脂質の濃度比にある脂質のいずれか１つに結合することができる酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされている抗体を含み、かつ／または酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされている脂質が、項目１または請求項１、特に項目７または請求項１４などの本明細書において一覧表示されている項目または特許請求項の範囲に言及されている脂質／脂質の濃度比にある脂質のいずれか１つである。
本発明のキットはすべて、本明細書で定義されているアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測、診断または検出するために、それを使用するための指示書が添付されていてもよい。
【００４５】
別の態様では、本発明は、ａ）アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するかまたはそれを罹患する対象のリスクを予測するため、あるいはｂ）対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予防または処置するのに使用するための、表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体に関する。ａ）アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するかまたはそれを罹患する対象のリスクの予測、あるいはｂ）こうした抗体が使用されるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤの予防または処置の対応する方法、およびこうした抗体の対応する使用が、同様に、本発明のこうした態様の実施形態である。
【００４６】
一態様では、本発明は、対象におけるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置に使用するための、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであって、本明細書において記載および／または特許請求されている方法、薬物、キット、使用または抗体のいずれかを適用すると、前記対象がアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定される、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターに関する。
この態様のさらなる実施形態では、本発明は、対象におけるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置に使用するための、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであって、本明細書において記載および／または特許請求されている方法、薬物、キット、使用または抗体のいずれかにより、前記対象がアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定された、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターに関する。
【００４７】
この態様のさらなる実施形態では、本発明は、対象におけるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置に使用するための、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであって、前記対象が、本明細書において記載および／または特許請求されている方法、薬物、キット、使用または抗体のいずれかにより、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定される、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターに関する。
【００４８】
この態様のさらなる実施形態では、本発明は、対象におけるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置に使用するための、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであって、本明細書において記載および／または特許請求されている方法、薬物、キット、使用または抗体のいずれかにより、前記対象がアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定された、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターに関する。
【００４９】
前記スタチン、前記他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比の前記モジュレーターの対応する使用と同様に、対象において、前記スタチン、前記他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比の前記モジュレーターの治療有効量を投与することによる、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置の相当する方法も同様に、本発明のこうした態様により考えられる。
【００５０】
本発明の文脈において、脂質濃度または脂質／脂質の濃度比の決定は、アッセイを使用して通常行われる。好ましくは、こうしたアッセイは、質量分析法、核磁気共鳴分光法、蛍光分光法または二面偏波式干渉法、ＨＰＬＣ、ＵＨＰＬＣもしくはＵＰＬＣなどの高性能分離法、ＥＬＩＳＡなどの免疫アッセイ、および／または分析種に特異的に結合することができる結合部位によるアッセイであるか、これらを含む。特に好ましいのは、質量分析法の使用である。
【００５１】
本発明の文脈では、ＣＶＤには、内皮機能不全、冠動脈疾患、狭心症、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、うっ血性心不全、高血圧症、脳血管疾患、卒中、一過性脳虚血発作、深部静脈血栓、末梢動脈疾患、心筋症、不整脈、大動脈弁狭窄症、および動脈瘤が含まれる。こうした疾患は、アテローム性動脈硬化症を伴うことが多い。本発明の好ましい実施形態では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症に関連する心血管疾患である。さらなる実施形態では、ＣＶＤ合併症は、以下に限定されないが、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃａｔｉｏｎ）（ＭＩ）、狭心症、一過性虚血発作（ＴＩＡ）、卒中および死亡を含む。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】粒子サイズとコレステロール含有量との間の関係を示す図である。平均粒子サイズに応じて、粒子数が顕著に異なり得ることを実証している、同一のＬＤＬ−Ｃ濃度を有する状況にある、粒子組成の２つの例である。
【図２】標準脂質検査は、健常な対照から顕著な割合のＣＶＤ患者を特定することに成功していないことを示すグラフである。Ａ．この標準脂質検査は、ボルケーノプロット（ｖｏｌｃａｎｏ  ｐｌｏｔ）の下のボックス領域（ｂｏｘ）（点線）において強調されており、この場合、ＣＶＤ患者（「症例（ｃａｓｅ）」）と対照との間の平均割合変化を、統計的有意性（ｐ値）に対してプロットしている。各記号は、血清またはＬＤＬ画分のいずれかの測定された分析種（脂質または脂質／脂質比）を表す。Ｂ．「症例」（四角形）および対照（円）の臨床測定濃度（ｇ／ｌまたはｍｍｏｌ／ｌ）の描写。
【図３】統計的有意性（ｐ値）に対してプロットした、症例と対照との間の計算したＬＤＬ脂質／脂質比の平均割合変化を表すボルケーノプロットを示すグラフである。各記号は、計算された脂質／脂質比を表す。ボックス領域は、統計的な有意差がないか（下のボックス領域）、または検討群間に大きな有意差がある（上のボックス領域）、分析種または脂質比を強調している。正の％差の値（ｘ軸）を有する分析種は、対照に比べて、ＣＶＤ症例の「増加」である。負の％差の値（ｘ軸）を有する分析種は、対照に比べて、ＣＶＤ症例の「低下」である。
【図４】ＣＶＤ患者（症例：四角形）と健常な対照（対照；円）との間に差があるバイオマーカーの比の例を示す図である。
【図５】総血漿（Ａ）、およびＬＤＬ画分（Ｂ）、および総血漿から測定したＬＤＬコレステロール（Ｃ）におけるＣｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／総ＴＡＧ比に関する、ＲＯＣ曲線および曲線下面積（ＡＵＣ）を示す図である。
【図６】本発明の一部の実施形態による、システムの概略を示す図である。特に、この図は、開示されているシステムおよび方法による、コンピュータシステム１０６の実行に使用することができる、様々なハードウェア、ソフトウェアおよび他のリソースを例示している。示されている実施形態では、コンピュータシステム１０６は、オペレーティングシステムの制御下、またはそれと共に、ランダムアクセスメモリオペレーティングに接続した１つまたは複数のプロセッサ１１０を含むことができる。実施形態におけるプロセッサ１１０は、サーバー、クラスター、または別のコンピュータもしくはハードウェアリソースの１つまたは複数に含まれ得るか、あるいはクラウドベースのリソースを使用して実行することができる。このオペレーティングシステムは、例えば、Ｌｉｎｕｘ（登録商標）オペレーティングシステム、Ｕｎｉｘ（登録商標）オペレーティングシステム、または他のオープンソースもしくは所有権のあるオペレーティングシステム、またはプラットフォームの流通品とすることができる。プロセッサ１１０は、命令プログラム、他のデータにアクセスするかまたはこれらを格納するためのハードドライブまたはドライブアレイに格納されているデータベースなど、データストア１１２と通信してもよい。  プロセッサ１１０は、ネットワークインターフェース１０８を介してさらに通信されていてもよく、このインターフェースは、ひいては、インターネットまたは他の公共もしくは個人のネットワークなどの１つまたは複数のネットワーク１０４を介して通信してもよく、こうして、クライアント１０２または他の装置もしくはサービスからクエリまたは他のリクエストを、受け取ることができる。さらに、プロセッサ１１０は、情報、命令、ワークフロークエリーの部分ワークフロー、または他のデータを１つまたは複数のネットワーク１０４を介して、ユーザーに送信するためのネットワークインターフェース１０８を利用することができる。ネットワークインターフェース１０４は、１つまたは複数のサーバーを含んでもよく、またはそれに通信接続していてもよい。クライアント１０２は、例えば、インターネットに接続したパーソナルコンピュータであってもよい。  プロセッサ１１０は、一般に、本明細書において開示されている方法を実行するための制御理論および制御オペレーションを実施するよう、プログラム化または構成されていてもよい。プロセッサ１１０はさらに、コプロセッサ１１４に通信接続（すなわち、コミュニケーションチャンネルによって接続されている）されていてもよい。コプロセッサ１１４は、本明細書において開示されている方法を実施するよう構成されている、専用ハードウェアおよび／またはファームウエアコンポーネントとすることができる。したがって、本明細書において開示されている方法は、プロセッサ１１０および／またはコプロセッサ１１４によって実施することができる。  コンピュータシステム１０６、関連ネットワーク接続、および他のハードウェア、ソフトウェア、およびサービスリソースからなる他の構成も考えられる。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本発明は、粒子の質の変化によるものが最も可能性が高いために、ＣＶＤを有する患者の非ＨＤＬ粒子において、ある種の（非タンパク質）分子が低下し、ある種の分子が増加するという知見に基づいている。これらの分子から導かれた脂質比は、予想外なことに、ＣＶＤの優れたバイオマーカーであった。本発明によれば、（コレステロールに無関係の）生物活性セラミド、およびセラミドのグルコシル化／ガラクトシル化／ガングリオシド誘導体、およびエステル化コレステロール（総コレステロールではない）が、ＣＶＤ患者のＬＤＬ粒子において、より低い濃度で存在していた。本発明者らは、ＬＤＬ粒子中のこれらの分子のレベルが低いことが有害となり得ること、およびＣＶＤの発症に関連し得ることを示す証拠を提供する。これらのマーカーまたは標準マーカーが、総血漿／血清から測定される場合、上記の変化はマスキングされる可能性があり、したがって、好ましくはＬＤＬ画分を含む血漿／血清試料の非ＨＤＬ画分から、前記比が決定されることが、本発明の重要な態様である。
【００５４】
心血管疾患は、極めて不均質な疾患である。したがって、診断測定を個体レベルで機能させるには、個体の変動を正規化すべきである。ＴＡＧ分子は、ＣＶＤ患者のＬＤＬ粒子中でより高い濃度で発現することが特定された。本発明は、セラミド、セラミド誘導体、エステル化コレステロール、およびリゾリン脂質分子のレベルが、ＴＡＧ分子のレベルと組み合わせて使用され、濃度比を算出することができることを提供する。この比は、ＣＶＤ患者と対照とを分離する診断力を改善する。したがって、この比の変化は、ＣＶＤを有するかまたは発症する個体のリスクに反映する。
【００５５】
ＣＥ／ＴＡＧ比と、ＬＤＬとＨＤＬの両方の構造および組成との関連性が、ＣＶＤに関して示唆されている（Ｄｅｃｋｅｌｂａｕｍら）。しかし、この比の低下は、有害であると示唆されている、低比重ＬＤＬ粒子タイプの出現率の向上を示すと解釈されることが多かった。さらに、最近の研究により、ＬＤＬの粒子サイズに基づくＣＶＤリスクアセスメントは、伝統的な総／ＨＤＬコレステロール比をベースとするリスクアセスメントから改善されない（Ｐａｒｉｓｈら、２０１２年）ことが実証された。本発明によれば、特定のＣＥおよびＴＡＧ分子、およびそれらの比（ＬＤＬサイズではい）は、ＣＶＤのリスク増加の一因となる。
【００５６】
本発明による方法は、ＣＶＤを特定かつ予測するために使用することができる、特異的かつ感度の高い検査を提供する。さらに、本発明は、従来的なＣＶＤおよびアテローム性動脈硬化症向けマーカーが陰性である場合、ＣＶＤおよびアテローム性動脈硬化症の診断に使用することができる。本発明は、患者がＣＶＤ合併症を発症するリスクが高いかどうかを評価するために、スタチン処置に関して、患者に使用するのが有利な場合がある。
一般に、本発明は、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を検出する方法であって、対象の検査試料（血漿または血清試料）に由来する非ＨＤＬ画分、例えばＬＤＬ画分からマーカーのレベルを測定するステップ、該マーカーのレベルの比を計算するステップ、および非ＨＤＬをベースとするマーカーの比が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症に相関するかどうかを決定するステップを含む、方法を提供する。
【００５７】
リピドミクスの高い感度と特異性の両方のために、どれほど少量の試料でさえも分析することができる。対象の試料から、さらにまた対照試料から、本発明の方法による脂質バイオマーカー（すなわち、本明細書で記載および／または特許請求されている脂質／脂質の濃度比）に関する情報を収集するステップは、様々な化学的および高分解能分析技法により行うことができる。特に適した分析技法には、以下に限定されないが、質量分析法および核磁気共鳴分光法が含まれる。実際に、個々の脂質または脂質クラスを分割することができ、かつそれらの構造的情報を提供することができる、任意の高分解能技法を使用して、対象の試料さらにまた対照の試料から本発明による脂質マーカーを決定することができる。したがって、本発明の方法のために、脂質濃度または脂質／脂質の濃度比が、好ましくは質量分析法により決定される。しかし、この点に関すると、核磁気共鳴分光法、蛍光分光法または二面偏波式干渉法、ＨＰＬＣまたはＵＰＬＣなどの高性能分離法、ＥＬＩＳＡなどの免疫アッセイ、および／または脂質分析種に特異的に結合することができる結合部位の使用も有用である。
【００５８】
本発明では、血漿／血清試料の非ＨＤＬ画分（例えば、ＬＤＬ画分）から決定される新規な脂質バイオマーカーが特定された。驚くべきことに、セラミドまたはセラミド誘導体（グルコシル化／ガラクトシル化／ガングリオシド）、コレステリルエステル、リゾリン脂質分子種、またはこれらの分子種の任意のものの合計と、トリグリセリド（ＴＡＧ）分子種またはＴＡＧ分子種の合計との比は、ＬＤＬ画分などの非ＨＤＬ画分から測定した場合、既存のかつ従来的に使用されているバイオマーカーと比べて、ＣＶＤのバイオマーカーとして優れた性能を示した。
本発明に関係して、総血漿のＬＤＬ画分中の脂質の比を決定した。ＬＤＬは、機能的に関連しているアテローム生成的非ＨＤＬリポタンパク質のクラス（ＶＬＤＬ、ＩＤＬおよびＬＤＬ）の主なクラスであるので、本発明の比は、ＬＤＬ画分以外の非ＨＤＬ画分から測定した場合、ＣＶＤリスクアセスメントに使用することもできると想定される。したがって、本発明による診断方法は、ＬＤＬ画分以外の、血漿または血清試料の非ＨＤＬ画分から前記比を測定するために使用することもできる。
【００５９】
定義：
本明細書で使用する場合、「ＣＶＤ」は、冠血管疾患／心血管疾患であり、当業界におけるその一般的な意味は、心臓、心臓弁、血液、および身体の血管構造に影響を及ぼす状態を分類するものである。「ＣＡＤ」は冠動脈疾患であり、「ＡＭＩ」は急性心筋梗塞であり、「ＡＣＳ」は、急性冠症候群であり、「ＣＡＣ」は、冠動脈石灰化であり、「ＲＣＴ」は、コレステロール逆輸送であり、「ＬＤＬ」は、低比重リポタンパク質であり、「ＨＤＬ」は、高比重リポタンパク質であり、「ＬＤＬ−Ｃ」は、低比重リポタンパク質コレステロールであり、「ＨＤＬ−Ｃ」は、高比重リポタンパク質コレステロールであり、「アポＡ」は、アポリポタンパク質Ａであり、「アポＢ」は、アポリポタンパク質Ｂであり、「アポＣ」は、アポリポタンパク質Ｃであり、「ＭＳ」は質量分析法であり、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーであり、「ＵＰＬＣ」は、超高速液体クロマトグラフィーである。
【００６０】
本明細書で使用する場合、「セラミド」とは、グルコシルセラミド、ガラクトシルセラミド、およびガングリオシド（オリゴ糖に連結したセラミド）を含めた、セラミドをベースとする任意の分子を指す。
本明細書で使用する場合、「対象」には、非限定的にヒトを含むが、やはり非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ、およびげっ歯類を含めたすべての哺乳動物が含まれる。本発明による特に好ましい対象は、ヒト対象であることが理解されよう。
「試料」とは、対象または群または対象の集団から得られた、生物学的試料として定義される。
【００６１】
「非ＨＤＬ試料」は、血清もしくは血漿試料、または血清もしくは血漿から得られた試料、例えば本明細書に記載されている通りに得られたリポタンパク質含有画分であり、この画分はＨＤＬ粒子が実質的に低下しているか、本質的に含まないか、または完全に含まない。ＨＤＬ粒子が「実質的に低下している」とは、試料中のリポタンパク質の７０％（ｗ／ｗ）未満、好ましくは８０％（ｗ／ｗ）未満、より好ましくは９０％未満がＨＤＬであることを意味する。ＨＤＬ粒子が「本質的に含まない」とは、試料中のリポタンパク質の９５％（ｗ／ｗ）未満、好ましくは９８％（ｗ／ｗ）未満がＨＤＬであることを意味する。ＨＤＬ粒子が「完全に含まない」とは、試料中のリポタンパク質の９９％（ｗ／ｗ）未満、好ましくは９９．５％（ｗ／ｗ）未満がＨＤＬであることを意味する。したがって、本発明による非ＨＤＬ試料は、上で説明した通り、本明細書に記載されている方法により、ＨＤＬ粒子がそこから除去されて、ＨＤＬ粒子が実質的に低下しているか、本質的に含まないか、または完全に含まないようにする（すなわち、血漿または血清からＨＤＬを除く）、血清または血漿あることが有利である。しかし、血清または血漿から得られた、分析しようとする非ＨＤＬ試料がＬＤＬ試料である実施形態も好ましい。血清または血漿から得られた、ＶＬＤＬ試料もしくはＩＤＬ試料、またはＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＩＤＬ試料の組合せとすることも有利となり得る。これらのすべての非ＨＤＬ試料は、当業界公知の方法および／または本明細書に記載されている方法により、血清または血漿から、それぞれ、非ＨＤＬ画分、ＬＤＬ画分、ＶＬＤＬ画分、またはＩＤＬ画分を調製することにより得ることができる。さらに、血清または血漿を得るために、患者の血液試料を採取するステップは、通常の臨床実作業の一部である。この血液試料は、患者において、例えばコレステロールレベルを測定することと関連して、採取することができる。採取した血液試料は、当業者に周知の技法により調製することができ、血清または血漿は上記の技法により分離することができる。静脈血液試料は、ニードルおよびＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｐｌａｓｔｉｃ  ＴｕｂｅｓまたはＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｐｌｕｓ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｔｕｂｅｓ（ＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＳＳＴ（商標）Ｔｕｂｅｓは、血清分離用のスプレーコーティングされたシリカおよびポリマーゲルを含有する）を使用して患者から採取することができる。血清は、室温で１０分間、１３００ＲＣＦで遠心分離することにより分離して、プラスチック製の小管に−８０℃で保管することができる。
【００６２】
「非ＨＤＬ画分」は、ＨＤＬを除く、総血漿／血清の画分として定義される。非ＨＤＬ画分は、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよび／またはＩＤＬ、またはそれらの組合せを含むことができ、ＬＤＬが、通常、主要構成物質である。非ＨＤＬ画分は、ＨＤＬ含有画分とは機能的に異なる。非ＨＤＬ画分は、遠心分離および／または沈殿、例えば、Ｓｔａｈｌｍａｎらにおいて記載されている臭化カリウム溶液を使用する逐次的な分画微量超遠心分離によるもの、またはＢｕｒｓｔｅｉｎらにおいて記載されている通りに沈殿させることによるものを含めた、当業界公知の任意の技法を使用して調製することができる。あるいは、非ＨＤＬ画分は、例えばＷｉｅｓｎｅｒらに記載されているファストパフォーマンス液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）により、または例えばＤａｌｌｉｎｇａ−Ｔｈｉｅらに記載されているゲルろ過法により調製することができる。
【００６３】
「ＬＤＬ画分」は、ＬＤＬを含み、ＨＤＬを除く、総血漿／血清の画分として定義される。ＬＤＬ画分は、ＬＤＬの他に、ＶＬＤＬおよび／またはＩＤＬを含むことができ、ＬＤＬが通常、主要構成物質である。ＬＤＬ画分は、ＨＤＬ含有画分とは機能的に異なる。ＬＤＬ画分は、超遠心分離および／または沈殿、例えば、Ｓｔａｈｌｍａｎらに記載されている臭化カリウム溶液を使用する逐次的な分画微量超遠心分離によるもの、またはＢｕｒｓｔｅｉｎらに記載されている通り沈殿させることによるものなどを含めた、当業界公知の任意の技法を使用して調製することができる。
【００６４】
「ＶＬＤＬ画分」は、ＶＬＤＬを含み、ＨＤＬを除く、総血漿／血清の画分として定義される。ＶＬＤＬ画分は、ＶＬＤＬの他に、ＬＤＬおよび／またはＩＤＬを含むことができ、ＶＬＤＬが通常、主要構成物質である。ＶＬＤＬ画分は、ＨＤＬ含有画分とは機能的に異なる。ＶＬＤＬ画分は、超遠心分離および／または沈殿、例えば、Ｓｔａｈｌｍａｎらに記載されている臭化カリウム溶液を使用する逐次的な分画微量超遠心分離によるもの、またはＢｕｒｓｔｅｉｎらに記載されている通り沈殿させることによるものなどを含めた、当業界公知の任意の技法を使用して調製することができる。
【００６５】
「ＩＤＬ画分」は、ＩＤＬを含み、ＨＤＬを除く、総血漿／血清の画分として定義される。ＩＤＬ画分は、ＩＤＬの他に、ＬＤＬおよび／またはＶＬＤＬを含むことができ、ＩＤＬが通常、主要構成物質である。ＩＤＬ画分は、ＨＤＬ含有画分とは機能的に異なる。ＩＤＬ画分は、超遠心分離および／または沈殿、例えば、Ｓｔａｈｌｍａｎらに記載されている臭化カリウム溶液を使用する逐次的な分画微量超遠心分離によるもの、またはＢｕｒｓｔｅｉｎらに記載されている通り沈殿させることによるものなどを含めた、当業界公知の任意の技法を使用して調製することができる。
【００６６】
「ＨＤＬ含有画分」は、ＨＤＬ粒子を含む、総血漿／血清の画分として定義される。ＨＤＬ含有画分は、通常、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＩＤＬ粒子を除く。ＨＤＬ含有画分は、非ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬおよびＩＤＬ画分とは機能的に異なる。
本発明による「非ＨＤＬ試料」は、総血漿／血清の「非ＨＤＬ画分」に由来する物質を含むことになる、好ましくは本質的にこれからなる、より好ましくこれからなる、またはこれに相当することになろう。
同様に、本発明による「ＬＤＬ試料」、「ＶＬＤＬ試料」、または「ＩＤＬ試料」は、総血漿／血清の「非ＨＤＬ画分」の、それぞれ「ＬＤＬ画分」、「ＶＬＤＬ画分」、または「ＩＤＬ画分」に由来する物質を含むことになる、好ましくは本質的にこれからなる、より好ましくこれからなる、またはこれに相当することになろう。
用語「対照」とは、本明細書で使用する場合、対照試料とすることができる。あるいは、対照は、対照値とすることもできる。対照が対照値である場合、対照は、本発明の方法を開始する前に既に決定、計算または外挿されていてもよいことが理解されよう。あるいは、対照値は、本発明の方法に従って、前記脂質／脂質の濃度比の決定後に決定、計算または外挿されてもよい。したがって、本発明による適切な対照値は、文献から採用されたものであってもよいことが理解されよう。
【００６７】
本明細書で使用する「対照」、すなわち対照値または対照試料は、通常、対象の群または対象の集団の代表である。この文脈では、「代表」とは、本発明の文脈において比較が行われる、前記対照値により反映される脂質／脂質の濃度が、前記群または集団の対象に由来する対応する個々の試料中の前記脂質／脂質の濃度比の平均濃度値に相当することを意味する。同様に、対照試料の場合、「代表」とは、本発明の文脈において比較が行われる、前記対照試料における脂質／脂質濃度が、前記群または集団の対象に由来する対応する個々の試料中の前記脂質／脂質の濃度比の平均濃度に相当することを意味する。好ましくは、前記対照試料中の脂質／脂質の濃度比のすべての濃度は、前記群または集団の対象に由来する対応する個々の試料中の前記脂質／脂質の濃度比の平均濃度に相当する。こうした値を有する個体は、本発明の目的では、「健常な個体」とみなすことができる。好ましい実施形態では、本発明の意味において、対象の群に由来する対照試料または対象の集団に由来する対照試料は、前記群もしくは集団の対象から直接得られたかまたは採用した試料の等量を混合することにより、あるいは等量の画分、構成物質、またはそれらの反応生成物（例えば、酵素反応生成物または沈殿物）を混合することにより得られる。
【００６８】
本発明の文脈では、対照試料は、健常な個体、健常な個体の一般集団、いかなる主要なＣＶＤ合併症のない状態にあるＣＡＤ患者、またはいかなる主要なＣＶＤ合併症のない状態にあるＣＡＤ患者の群に由来することができる。
本発明の文脈において、同じ対象に由来する、または別の（異なる）対象に由来する対照試料を言う場合、該対照試料が、前記対象から直接得られたことを意味することができる。しかし、代替として、上記の対照試料は、前記対象から直接得られるかまたは採取された試料の、遠心分離、分画、酵素的消化、沈殿などの物理的または化学的処理の結果として得られたものであることも意味することができる。同じことが、本明細書における、対象の群または対象の集団に由来する対照試料のいずれかを言うことに当てはまる。
【００６９】
対照試料は、同一または本質的に同一の方法で同じタイプの生物学的組織または源から得られた場合、対象の試料と特に好適に比較することができる。例えば、対象の試料が、本明細書で定義されている非ＨＤＬ試料、ＬＤＬ試料、ＶＬＤＬ試料またはＩＤＬ試料である場合、対応する対照試料は、同様に、それぞれ、非ＨＤＬ試料、ＬＤＬ試料、ＶＬＤＬ試料またはＩＤＬ試料となろう。こうした対応する対照試料は、対象の群または集団に由来する、それぞれ非ＨＤＬ試料、ＬＤＬ試料、ＶＬＤＬ試料またはＩＤＬ試料を混合することにより得られる、非ＨＤＬ試料、ＬＤＬ試料、ＶＬＤＬ試料またはＩＤＬ試料を含むことが理解されよう。
【００７０】
本発明のための有用な対照値は、好ましくは、本明細書に記載されている適切な対照試料のいずれか１つであり、または本明細書に記載されている適切な対照試料のいずれか１つを使用して得られるものであることが理解されよう。
用語「脂質」は、本明細書で使用する場合、疎水性または両親媒性低分子として定義される。
本発明のためには、脂質は、以下の命名法に従って命名される。Ｃｅｒはセラミドであり、Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒは、グルコシルおよびガラクトシルセラミドであり、ＧＭはモノシアロガングリオシドであり、ＧＭ３は、モノシアロジヘキソシルガングリオシドであり、ＣＥはコレステリルエステルであり、ＬＰＥはリゾホスファチジルエタノールアミンであり、ＴＡＧはトリアシルグリセロールである。
【００７１】
命名Ｘ：Ｙは、該分子の脂肪酸部分の総炭素原子数がＸ、および該分子の脂肪酸部分の二重結合の総数がＹであることを示す。
命名Ａ／Ｂ／Ｃは、ＴＡＧ分子に関すると、該分子のグリセロール骨格に結合している、脂肪酸部位がＡ、ＢおよびＣのタイプであることを示す。
命名（ｄＥ／Ｆ）（例えば、Ｃｅｒ（ｄ１８：０／２０：０））は、Ｃｅｒ、ＧｌｃＣｅｒおよびＧＭの分子の場合、アミド連結した脂肪酸部位Ｆを有する長鎖塩基のタイプＥを示す。
ＧＭの分子の場合、その後の数（例えば、ＧＭ２およびＧＭ３）は、炭水化物配列を特徴づける。
【００７２】
本発明の文脈では、「セラミド」は、セラミド脂質のファミリーの脂質のいずれか１つを指し、セラミド脂質には、セラミドのグルコシル化（Ｇｌｃ）誘導体、ガラクトシル化（Ｇａｌ）誘導体およびガングリオシド誘導体（ＧＭ３など）が含まれ、これらは、それぞれのグルコシルまたはガラクトシルシンターゼにより、またはＧＭ３の場合、ベータ−ガラクトシダーゼおよびガングリオシドＧＭ３シンターゼによりセラミドから修飾されたものであり、
用語「ＴＡＧブルート（ｂｒｕｔｔｏ）種」は、脂肪酸の１種または複数の考えられる組合せからなるＴＡＧ分子の化学種として定義される（例えば、表７を参照されたい）。
「セラミド／ＴＡＧの濃度比」は、少なくとも１つのセラミド分子の濃度と、少なくとも１つのＴＡＧ分子の濃度との比、すなわちセラミドの濃度をＴＡＧの濃度により除算したものとして定義される。あるいは、少なくとも１つのセラミド分子の濃度と、任意のＴＡＧブルート種の濃度との比であり、またはすべてのセラミド分子の合計の濃度とすべてのＴＡＧ分子の合計の濃度との比である。
「ＣＥ／ＴＡＧの濃度比」は、少なくとも１つのＣＥ分子の濃度と、少なくとも１つのＴＡＧ分子の濃度との比、すなわちＣＥの濃度をＴＡＧの濃度により除算したものとして定義される。あるいは、少なくとも１つのＣＥ分子の濃度と、任意のＴＡＧブルート種の濃度との比であり、またはすべてのＣＥ分子の合計の濃度とすべてのＴＡＧ分子の合計の濃度との比である。
「ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比」は、少なくとも１つのＬＰＥ分子の濃度と、少なくとも１つのＴＡＧ分子の濃度との比、すなわちＬＰＥの濃度をＴＡＧの濃度により除算したものとして定義される。あるいは、少なくとも１つのＬＰＥ分子の濃度と、任意のＴＡＧブルート種の濃度との比であり、またはすべてのＬＰＥ分子の合計の濃度とすべてのＴＡＧ分子の合計の濃度との比である。
【００７３】
「セラミド／ＣＥの濃度比」は、少なくとも１つのセラミド分子の濃度と、少なくとも１つのＣＥ分子の濃度との比、すなわちセラミドの濃度をＣＥの濃度により除算したものとして定義される。あるいは、すべてのセラミド分子の合計の濃度と、すべてのＣＥ分子の合計の濃度との比である。
【００７４】
「比の低下」は、対象の試料と対照の間の脂質／脂質の濃度比における値の負のパーセント差（差％）として定義され、ここで対象の試料と対照の間の特定の脂質／脂質の濃度比に関する負のパーセント差が、脂質／脂質比が対照と比較して対象においてより小さい数値を有することの指標となる。例えば、−５０％という具体的な比に関する差％は、具体的な比の値が、対照と比べると、対象において５０％低いことを意味する。
【００７５】
以下の計算が、表６からの平均濃度値に基づく計算例である。
脂質比：ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）
対照中の濃度：
ＣＥ１６：０  ３０８．７ｐｍｏｌ／μｇ
ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）２０．３ｐｍｏｌ／μｇ
対照中の脂質比：３０８．７ｐｍｏｌ／μｇ／２０．３ｐｍｏｌ／μｇ＝１５．２
症例における濃度：
ＣＥ１６：０  ２９８．４ｐｍｏｌ／μｇ
ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）２９．２ｐｍｏｌ／μｇ
症例における脂質比：２９８．４ｐｍｏｌ／μｇ／２９．２ｐｍｏｌ／μｇ＝１０．２
症例と対照との間のパーセント差：
（症例比−対照比）／症例比＝差％
（１０．２−１５．２）／１０．２＝−０．４９→×１００％→−４９％
症例における比は、対照と比べて５０％低い。
【００７６】
本発明の文脈における比の低下は、少なくとも−１０％、好ましくは少なくとも−２０％、−３０％または−４０％、より好ましくは少なくとも−５０％、またはやはり−６０％、−７０％、−８０％または−９０％、および特に好ましい実施形態では、少なくとも−１００％だけでなく、少なくとも−１２０％、少なくとも−１４０％、少なくとも−１６０％、少なくとも−１８０％または少なくとも−２００％の、対象と対照との間の脂質／脂質比の差％に相当する。
「比の向上」は、対象と対照との間の脂質／脂質比の値の正のパーセント差（差％）として定義され、ここで対象の試料と対照との間の特定の脂質／脂質比に関する正のパーセント差が、対照と比較すると、脂質／脂質比が対象においてより大きな数値を有することの指標となる。例えば、５０％の具体的な比に関する差％は、具体的な比の値が、対照と比べると、対象において５０％高いことを意味する。
本発明の文脈における比の向上は、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、３０％または４０％、より好ましくは少なくとも５０％、またはやはり６０％、７０％、８０％または９０％、および特に好ましい実施形態では、少なくとも１００％ばかりでなく、少なくとも１２０％、少なくとも１４０％、少なくとも１６０％、少なくとも１８０％または少なくとも２００％の、対象と対照との間の脂質／脂質比の差％に相当する。
用語「著しく異なる」とは、対象と対照との間の脂質／脂質比の比較により、両値間に正または負の方向のどちらかに、１５％より大きい差異が現れることを意味する。したがって、用語「著しく異ならない」とは、対象と対照との間の脂質／脂質比の比較により、両値間に正または負の方向のどちらかに、１５％未満の差異（すなわち、有意差がない）しか現れないことを意味する。
【００７７】
本発明の文脈における用語「コンピュータが実行する方法」とは、その目的を達成するために機械または装置を利用する方法を意味する。
【００７８】
用語「プロセッサ」とは、命令を理解して実施することができるデバイスを意味する。具体的には、プロセッサは、入力データを受信するため、および適切な出力データを提供するための理論回路を使用する。プロセッサは、ネットワークを介して、互いに通信することができる。
用語「処置の有効性」とは、そのために行われる治療目的を達成するための処置の能力の意味をとる。
本明細書において記載および／または特許請求されている本発明の態様および実施形態すべての文脈において、「スタチン」は、以下に限定されないが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、フルバスタチンＸＬ、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチンからなる群から選択することができる。
本発明による「モジュレーター」は、低分子（＜１５００ダルトンの分子量、好ましくは＜８００ダルトンの分子量）、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または天然もしくは修飾脂質、好ましくは表１から４に記載の脂質／脂質の濃度比にあるいずれか１つの脂質とすることができる。
【００７９】
本発明による「脂質低下薬」は、好ましくは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ナイアシン（ニコチン酸）、コレステロール吸収阻害剤、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、胆汁酸隔離剤、フィブラート、フィトステロール、またはＰＣＳＫ９阻害剤である。
本発明のためには、「コレステロール吸収阻害剤」は、好ましくはエゼチミブまたはＳＣＨ−４８４６１であり、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤は、好ましくはエバセトラピブ、アナセトラピブ、またはダルセトラピブであり、胆汁酸隔離剤は、好ましくはコレセベラム、コレスチルアミン、またはコレスチポールであり、フィブラートは、好ましくはフェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、またはベザフィブラートであり、ＰＣＳＫ９阻害剤は、ＰＣＳＫ９特異的抗体、ｓｉＲＮＡ、およびペプチド模倣薬から選択される。
【００８０】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、ジスルフィド結合により相互結合している少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖、またはそれらの一部に結合している抗原を含む、糖タンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶHとして略す）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶLとして略す）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣLからなる。ＶHおよびＶL領域は、より保存された領域により散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超過変性の領域、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるものにさらに小分類することができる。ＶHおよびＶLの各々は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配列している、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。重鎖および軽鎖可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）を含めた、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００８１】
本発明の抗体には、モノクローナルおよびポリクローナル抗体、完全抗体、抗体断片、および前記脂質に特異的な結合を示す、抗体サブ断片が含まれる。したがって、適切な「抗体」は、任意のクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、二重または多重の抗原もしくはエピトープ特異性を有するキメラ抗体またはハイブリッド抗体、あるいは断片、例えば、ハイブリッド断片を含めたＦ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどの完全免疫グロブリンとすることができ、さらに、任意の免疫グロブリン、または特定の抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のようにふるまう任意の天然、合成、もしくは遺伝子組換えタンパク質を含む。用語「抗体」は、抗体（例えば、短鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片およびｄＡｂ断片）の抗原結合断片、および完全抗体を包含する。例えば、Ｆａｂ分子は、遺伝子的に形質転換された大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような宿主中で発現するおよび組み立てることができる。したがって、先祖抗体を生成する対象に等しいかまたはそれを超える潜在的多様性を有するＦａｂ’の集団を発現するために、ラムダベクター系が使用可能である。Huse WD, et al., Science 1989, 246:1275-81を参照されたい。こうしたＦａｂ’は、「抗体」の定義に含まれる。抗体断片またはサブ断片を含めて、所与の分子が、抗体のようにふるまう、および特定の抗原に特異的に結合する能力は、当業界公知の結合アッセイにより、例えば、結合パートナーとして対象となる抗原を使用することにより決定することができる。
【００８２】
本発明による脂質に対する抗体は、当業者に周知の方法により調製することができる。例えば、マウスは、アジュバントを含む脂質により免役される。血清抗体力価を求めるため、１週間おきに検査採血を行いながら、２週間の間隔で３回免疫投与されたマウスから、プールとして脾臓細胞を摘出する。脾臓細胞は、融合実験に直ちに使用するか、または将来の融合に使用するために液体窒素中で保存する、３つの一定分量として調製する。
次に、融合実験は、Stewart & Fuller, J. Immunol. Methods 1989, 123:45-53の手順に従って実施した。成長したハイブリッドを含むウェルからの上澄み液を前記脂質によりコーティングした９６ウェルのＥＬＩＳＡ用プレート上に、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）の分泌型について、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によりスクリーニングする。ＥＬＩＳＡの陽性培養物を、限界希釈によりクローニングすると、通常、２段階クローニング実験の後に、単一コロニーから定着したハイブリドーマになる。
【００８３】
本発明のためには、「酵素」は、ＥＬＩＳＡにおいて検出するのに適した酵素である。こうした酵素は、当業者に公知である。こうした酵素は、例えばアセチルコリンエステラーゼ、ホースラディッシュオキシダーゼ、またはアルカリホスファターゼとすることができる。
【００８４】
同様に、本明細書に記載されている意味では、「検出可能な標識」は、ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ（酵素免疫アッセイ）、またはＲＩＡ（放射免疫アッセイ）において検出するのに適したものである。やはり、当業者は、例えば、ビオチンまたは他のハプテンとすることができる、適切な検出可能な標識に精通していよう。あるいは、検出可能な標識は、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、ローダミン、フィコエリスリン（ＰＥ）、ＡＰＣ、Ｃｙ−３、Ｃｙ−５、Ｃｙ−７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ、ＤｙＬｉｇｈｔ  Ｆｌｕｏｒ、ＡＴＴＯ  Ｄｙｅ、もしくは任意の適切な蛍光標識などの蛍光標識、またはそれらの変化体とすることができる。ビオチンが検出可能な標識の場合、酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされているストレプトアビジンが、その検出のために使用することができる。検出可能な標識はまた、125Ｉ、131Ｉまたは32Ｐなどの放射性同位体とすることもできる。
用語「本発明の」、「本発明による（ｉｎ  ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）」、または「本発明による（ａｃｃｏｒｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）」とは、本明細書で使用する場合、本明細書において記載および／または特許請求されている本発明の態様および実施形態すべてを指すことが意図される。
【００８５】
本明細書で使用する場合、用語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」と「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」の両方を包含するものとして解釈されるものとし、どちらの意味も、具体的に意図されているものであり、したがって、本発明による、個々に開示されている実施形態である。
【実施例】
【００８６】
（例１）
材料および方法
血清試料はＨｅａｌｔｈ２０００  Ｓｕｒｖｅｙから取得し、これには、徹底した健康検査および参加者の面接が含まれた。冠動脈症状（狭心症または心筋梗塞）を有する患者、および健常な対象が含まれた。
低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子は、Ｓｔａｈｌｍａｎらに記載されている臭化カリウム溶液を使用する逐次的な分画微量超遠心分離により、冠動脈疾患の患者１９名（非脂質をベースとする診断）の血清試料、および１０名の健常な対照から分画した。ＬＤＬ粒子は、比重ｄ＝１．０６３の一画分に集めた。リポタンパク質の単離には、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｏｐｔｉｍａ  ＭＡＸ−ＸＰ超遠心分離器およびＴＬＡ−１２０．２ローターを使用した。
【００８７】
ＬＤＬ試料の総タンパク質含有量は、脂質抽出の前に、Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡ（商標）タンパク質アッセイキットを用いて決定した。脂質抽出、そのあとのＬＤＬ試料の定量的分子リピドミクス分析種をもたらす、確立されている／妥当性が承認されているプラットフォームをＤｅｃｋｅｌｂａｕｍらに既に記載されている通り実施した。得られた脂質データは、試料のタンパク質濃度に正規化した。
セラミド（Ｃｅｒ）の定量に関しては、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、コレステリルエステル（ＣＥ）およびリゾリン脂質、脂質は、Ｊｕｎｇらにおいて記載されている通り、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｍｉｃｒｏｌａｂ  Ｓｔａｒロボットで実施する、修正Ｆｏｌｃｈ脂質抽出を使用して抽出した。試料に、既知量の非内因性の合成内部標準品を混ぜた。脂質抽出後、試料は、クロロホルム：メタノール（１：２、ｖ／ｖ）中に再構成し、合成外部標準品を該抽出物に抽出後に混ぜた。ＭＳ分析前に、この抽出物を−２０℃に保管した。
ガングリオシドは、わずかな修正を加えた、Ｆｏｎｇおよび共同研究者（２００９年）に従って抽出した。試料に、既知量の非内因性の合成内部標準を混ぜた。脂質抽出後、試料は、クロロホルム：メタノール（１：２、ｖ／ｖ）中に再構成し、ＭＳ分析前に、この抽出物を−２０℃に保管した。
【００８８】
ショットガンリピドミクスでは、脂質抽出物は、Ｓｔａｈｌｍａｎおよび共同研究者（２００８年）に従って、ロボット型ナノフローイオン源（ｒｏｂｏｔｉｃ  ｎａｎｏｆｌｏｗ  ｉｏｎ  ｓｏｕｒｃｅ）（ＮａｎｏＭａｔｅ  ＨＤ、Ａｄｖｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を装備したハイブリッド三連四重極／線形イオントラップ型質量分析計（ＱＴＲＡＰ、ＡＢＳｃｉｅｘ）を用いて分析した。脂質分子は、Ｅｋｒｏｏｓら（２００２年、２００３年）に従い、多重プレカーサーイオンスキャニング（ＭＰＩＳ）に基づいた方法を使用する、ポジティブモードとネガティブモードの両方で分析した。トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）は、プレカーサーイオンスキャニング（ＰＩＳ）およびニュートラルロススキャニング（ＮＬ）に基づく方法を使用して分析した。脂質分子種を特定し、Ｅｊｓｉｎｇら（２００６年）に記載されている半絶対量または絶対量で定量した。
スフィンゴ脂質は、Ｓｕｌｌａｒｄｓら（２００７年）による記載に基づいて、ネガティブイオンモードでの多重反応モニタリング（ＭＲＭ）に基づく方法を使用して、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）システム（ＣＴＣ  ＨＴＣ  ＰＡＬ  オートサンプラーおよびＲｈｅｏｓ  Ａｌｌｅｇｒｏポンプ）を装備したハイブリッド三連四重極／線形イオントラップ型質量分析計（ＱＴＲＡＰ）で分析した。
【００８９】
質量分析法により検出されたピークの質量およびカウント数は、対応する脂質名および濃度のリストに変換した。モニターした各脂質クラスの動的定量範囲、例えば定量限界を決定するために、較正線を作成した。内因性脂質種を定量するために、内部標準を使用した。この方法の定量限界を決定するために、較正線を使用した。
【００９０】
各プラットフォームに関すると、実際の脂質ピークからバックグラウンドのノイズを分離するため、厳密なカットオフを適用した。各試料を照合し、許容基準を満足する場合だけ、許容した。検出されたピークの質量およびカウント数は、対応する脂質名のリストに変換した。脂質は、その濃度を正すため、個々の内部標準および試料体積に正規化した。
データはほぼ対数正規であるので、独立スチューデントｔ検定を対数に変換した脂質濃度に実施した。脂質／脂質比の場合、ｔ検定を適用し、ほぼ対数正規である、対数に変換した比にした。対数に変換した脂質濃度および脂質／脂質比に適合させた、ロジスティック回帰モデルから、ＲＯＣ曲線、オッズ比（ＯＲ）および関連する記述統計のすべてを導いた。使用した方法の正規性仮定は、シャピロ−ウィルク検定により検定した。すべての分析種は、ＳＡＳ９．３ソフトウェアを使用して実施した。群の平均値間の報告した差異は、元の尺度から計算した。
【００９１】
（例２）
結果
標準脂質パラメータは、個体の血漿／血清試料から慣例的手順で測定し、個体のＣＶＤのリスクを評価する。Ｈｅａｌｔｈ２０００  Ｓｕｒｖｅｙの一部として、標準脂質パラメータを含めた、全健康検査を行い、一般集団の総合的な健康状態を得た。一般に、アポリポタンパク質Ｂ、総コレステロール（総Ｃ）、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、およびトリグリセリドの高いレベル、一方では、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の低いレベルが、リスク因子としてみなされる。合計とＨＤＬコレステロールとの比の向上も使用して、ＣＶＤのリスクを評価する。しかし、先に議論した通り、これらのパラメータは、ＣＶＤ患者の大きな集団を特定することには成功しない。本発明者らは、ＣＶＤであると確認した患者の標準脂質検査からの結果と対照の個体の結果を比較した。図２Ａに示されている通り、症例と対照との間に、標準脂質検査のいずれも有意差はなかった。これらの現在使用されているＣＶＤマーカーのすべてが、ボルケーノプロットの下（点線）のボックス領域中で観察され（図２Ａ）、これらのマーカーが、症例と対照との間に差異がなかったことを意味する。上記のことは、実験室検査に基づく、ＣＶＤ患者の分離において、現在の方法の性能は乏しいことを実証している。標準検査の濃度は、図２Ｂに例示されている。実際、このコホートのＣＶＤ患者は、対照よりも有益な脂質結果を有しており、このことは、アポリポタンパク質Ｂ、総ＣおよびＬＤＬ−Ｃがより低いことを示している。注目すべきことに、これらの参加者の中にスタチンユーザーが存在しないので、ＬＤＬ−Ｃがより低いことは、脂質低下投薬治療によって説明することができない。
【００９２】
慣例的手順で測定した標準脂質検査は、特定のＨＤＬ−ＣおよびＬＤＬ−Ｃ検査を含む、総血漿／血清のレベルで測定している。特定の脂質の機能は、関係するリポタンパク質粒子に応じて異なり得るので、本発明者らは、さらなる分析のために、試料のＬＤＬ画分を単離することにした。これらの画分は、その脂質含有量について包括的に分析した。この脂質データは、いくつかの脂質クラス、およびこの脂質クラスの分子脂質濃度を合計することにより得られた脂質クラスの濃度からの脂質分子（すなわち、特定された脂質クラスおよび脂肪酸部位）の濃度からなる。
【００９３】
臨床使用では、脂質濃度を、総試料体積に対して正規化し、この濃度単位を例えば、ｍｍｏｌ／ｌまたはｍｇ／ｄｌとして示す。ＬＤＬ画分は、サイズ、密度、および電荷を含むそれらの物理特性、および脂質分子のそれらの量が異なる、粒子の不均質な集団からなる。上記のことは、所与の脂質濃度では、粒子数は、個体間で実質的に変動する恐れがあり、このことは、リスク見積もりにおける著しい偏りをもたらし得ることを意味する（図１を参照されたい）。ＣＶＤリスクの情報を与えるマーカーと示唆される試料中の粒子数の差異を一様にするため、本発明者らは、試料の総タンパク質濃度に対して、脂質データを正規化した。
【００９４】
脂質分子種の濃度、および／または脂質クラスの総濃度（上記の通り導かれた）を使用して、これらの脂質データから、症例と対照との間の各比の統計的有意性と一緒に、いくつかの脂質比を計算した。個々の脂質の濃度と個別の脂質／脂質比を一緒にすると、症例を対照から分離する予測値が著しく改善される。図３では、分子脂質および脂質クラスの濃度、ならびに算出した脂質／脂質比を、ボルケーノプロットとして表している。このプロットは、色調強度により、ＣＶＤ症例と対照との間の各分析種（円）の差異、およびそれらの統計的有意性を例示している。下のボックス領域（点線）における円は、ＣＶＤ患者と対照との間に差が無い分析種を表している。定量した脂質および計算した比の大部分、および標準脂質検査は、下のボックス領域に収まった（図３）。一方、いくつかの脂質比は、群間にかなり有意な差（ｐ＜０．００１）があり（図３、上のボックス領域）、ＣＶＤ症例と対照とを分離した。Ｘ軸に沿った円の位置は、対照と比べて、ＣＶＤ患者におけるこの分析種のレベルが低下または向上したことを示す。表１は、有意性が高い（ｐ＜０．００１）脂質比をまとめている。各脂質比について、パーセント差（差％）、およびそれらのＰ値と一緒にした９５％信頼区間（９５％ＣＩ）を有する標準偏差あたりのオッズ比（ＳＤあたりのＯＲ）を表している。これらの比に使用した脂質分子の濃度は、表６に表されている。
【００９５】
表１の特定された比の大部分は、セラミド（Ｃｅｒ）、セラミド誘導体（Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ／ＧＭ３ガングリオシド）またはコレステリルエステル（ＣＥ）脂質とトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）脂質とからなる。さらに、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）脂質とＴＡＧ脂質との比は、ＣＶＤ患者と対照との間で有意な差があった。重要なことに、脂質分子種からなる比、および脂質クラスの合計により、２つの群を有意に分離することができる。したがって、これらの比は、現在使用されている従来の脂質検査と比べて、優れたＣＶＤバイオマーカーとして働く。
本発明は、ＣＶＤバイオマーカーとしての、非ＨＤＬ画分中のセラミド、セラミド誘導体またはコレステロールエステルとトリグリセリドとの比の使用に関する。前記トリグリセリド分子種は、表７による脂肪酸の１つまたは複数の可能な組合せからなり得る、分子の合計（例えばＴＡＧ合計５２：２）として表される。前記バイオマーカーは、前記脂質分子および／または脂質クラスの合計の濃度からなり得る。バイオマーカー比の一部の例は、図４に表されている。
本発明の重要な態様は、前記脂質比が、ＬＤＬ画分などの非ＨＤＬ画分から決定され、このＬＤＬ画分は、総血液／血漿／血清に由来する同じ脂質比と比べると、ＣＶＤ患者および対照の優れた区別が生じる（図５、表５）ことである。ＬＤＬ画分（図５Ａ）および総血漿（図５Ａ）における、Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／総ＴＡＧ比に関するＲＯＣ曲線および曲線下面積（ＡＵＣ）の値が示されている。比較のために、ＬＤＬコレステロール（図５Ｃ）に関するＲＯＣ曲線を示している。血漿／ＬＤＬ脂質比のさらなるＡＵＣ値が、表５に一覧表示されている。このことは、特定の画分から脂質比を決定するのに、総血液／血漿試料の代わりに、本発明による診断的な改善があることを実証している。
【００９６】
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【００９７】
【表５】
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【００９８】
【表６】
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【００９９】
【表７】
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【０１００】
本発明のさらなる実施形態
上記を鑑みると、本発明は、以下の段落の数字を付けた項目に説明されている実施形態も包含することが理解されよう。
【０１０１】
１．  対象がアテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患（ＣＶＤ）および／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがあるか、または罹患しているかを決定する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比べた場合の前記試料中の比の低下が、前記対象のアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の罹患、あるいはそれらの発症リスクの増加の指標となる、ステップ
を含む、方法。
【０１０２】
２．  対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置の有効性を評価する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記処置の有効性の指標となる、ステップ
を含む、方法。
【０１０３】
３．  対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の適切な処置を選択する方法であって、
（ａ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ、
（ｂ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＣＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ、
（ｃ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ、または
（ｄ）前記対象に由来する非ＨＤＬ試料中のセラミド／ＣＥの濃度比を決定するステップであって、対照と比較した場合の前記試料中の比の低下が、前記対象が処置、または既に行われた処置の変更もしくは補足を必要とする指標となる、ステップ
を含む、方法。
【０１０４】
４．  （ａ）その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比が、表１に記載のセラミド／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、
（ｂ）その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比が、表２に記載のＣＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、
（ｃ）その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比が、表３に記載のＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比のいずれかから選択され、または
（ｄ）その低下が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比が、表４に記載のセラミド／ＣＥの濃度比のいずれかから選択される、項目１から３までのいずれか１項目に記載の方法。
５．  脂質／脂質の濃度比の決定が、アッセイを使用して行われる、項目１から４までのいずれか１項目に記載の方法。
６．  前記処置が、脂質修飾処置である、項目２または３に記載の方法。
【０１０５】
７．  （ａ）その低下が対照と比較される、セラミド／ＴＡＧの濃度比が、
Ｇｌｃ／ＧａｌＣｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、または
ＧＭ３−ｄ１８：１／２４：０／ＴＡＧ合計５４：２（１８：０／１８：１／１８：１）
から選択され、
（ｂ）その低下が対照と比較される、ＣＥ／ＴＡＧの濃度比が、
ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、
ＣＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、または
ＣＥ２２：６／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）
から選択され、
（ｃ）その低下が対照と比較される、ＬＰＥ／ＴＡＧの濃度比が、
ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：１（１６：０／１６：０／１８：１）、
ＬＰＥ１８：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）、または
ＬＰＥ１６：０／ＴＡＧ合計５０：２（１４：０／１８：１／１８：１）（１６：０／１６：０／１８：２）（１６：０／１６：１／１８：１）
から選択され、または
（ｄ）その増加が対照と比較される、セラミド／ＣＥの濃度比が、
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／１８：０）／ＣＥ２２：０、
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２０：０）／ＣＥ２２：０、または
Ｃｅｒ（ｄ１８：１／２２：０）／ＣＥ２２：０
から選択される、項目１から６までのいずれか１項目に記載の方法。
【０１０６】
８．  前記脂質／脂質の濃度比の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、もしくは少なくとも８つ、またはそれらの組合せを決定するステップを含む、項目１から７までのいずれか１項目に記載の方法。
【０１０７】
９．  （ａ）前記ＣＶＤが、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、卒中および／またはＣＶＤ死を特徴とするか、および／もしくは
（ｂ）前記ＣＶＤが、アテローム性動脈硬化症誘発性であるか、ならびに／または
（ｃ）前記対象が、アテローム性動脈硬化症を有するか、もしくは
（ｄ）前記対象が、アテローム性動脈硬化症を有していない、項目１から８までのいずれか１項目に記載の方法。
【０１０８】
１０．  （ａ）本方法が、前記対象に由来する試料中の、総コレステロール、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）および／またはアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（アポＣ−ＩＩＩ）の血清中レベルを決定するステップをさらに含むか、および／または
（ｂ）対象が、総コレステロール、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（アポＣ−ＩＩＩ）、もしくはアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）の１つまたは複数が上昇している血清中レベル、またはＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）が低下している血清中レベルを有していない、項目１から９までのいずれか１項目に記載の方法。
【０１０９】
１１．  前記対象が、
（ａ）スタチン、別の脂質低下薬、および／または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターにより処置されているか、もしくは処置されていた、または
（ｂ）スタチン治療、別の脂質低下薬による治療、および／または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターによる治療をまだ受けていない、項目１から１０までのいずれか１項目に記載の方法。
【０１１０】
１２．  非ＨＤＬ試料が、
ＬＤＬ試料、
超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）試料、または
中比重リポタンパク質（ＩＤＬ）試料、またはそれらの組合せ
である、項目１から１１までのいずれか１項目に記載の方法。
１３．  非ＨＤＬ試料がＬＤＬ試料である、項目１から１２までのいずれか１項目に記載の方法。
１４．  脂質／脂質の濃度比が、質量分析法、核磁気共鳴分光法、蛍光分光法または二面偏波式干渉法、ＨＰＬＣ、ＵＨＰＬＣもしくはＵＰＬＣなどの高性能分離法、ＥＬＩＳＡなどの免疫アッセイ、および／または分析種に特異的に結合することができる結合部位によるアッセイを使用することにより決定される、項目１から１３までのいずれか１項目に記載の方法。
【０１１１】
１５．  （ａ）前記患者がＣＶＤを発症するリスクの決定、
（ｂ）前記患者における、ＣＶＤの初期徴候の決定、
（ｃ）患者におけるアテローム性動脈硬化症の発生の決定または予測、および／または、
（ｄ）心筋梗塞（ＭＩ）、狭心症、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）および卒中の予測ならびに／または診断を含む、ＣＶＤおよび／またはＣＶＤ合併症の予測または診断、あるいは死亡の予測
のための、項目１から１４までのいずれか１項目に記載の方法。
１６．  アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の処置または予防に使用するための、項目１から４まで、または７のいずれか１項目に記載の脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物であって、前記対象に由来する試料中の前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合、著しく異ならないよう薬物が投与され、さらにスタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターである、薬物。
【０１１２】
１７．  項目１から４まで、または７のいずれか１項目による脂質／脂質の濃度比を調節することができる薬物の治療有効用量を投与するステップを含む、それを必要としている対象においてアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を処置または予防する方法であって、前記脂質／脂質の濃度比が、対照と比較した場合、著しく異ならないよう薬物が投与され、さらに薬物がスタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターである、方法。
【０１１３】
１８．  対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するため、あるいは項目１から１７までもしくは以下の項目のいずれか１項目による方法または使用を実施するためのキットであって、
（ａ）項目１から４まで、または７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質から選択される１つまたは複数の脂質標準品、ならびに／または対照較正線、ならびに／またはポジティブおよび／もしくはネガティブ対照を含み、
（ｂ）脂質（単数または複数）、例えば、項目１から４まで、または７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質などの１つまたは複数の対照マーカー、あるいはタンパク質、
（ｃ）内部および／または外部標準、
（ｄ）抗体でもあってもよい、項目１から４まで、または７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる薬剤、
（ｅ）前記方法または使用を行うための試薬
の１つまたは複数を含んでもよい、
キット。
【０１１４】
１９．  アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するための、項目１８において定義されている発明のキットの使用であって、対象に由来する試料中の脂質／脂質の濃度比が、質量分析法を使用することにより決定されてもよい、使用。
【０１１５】
２０．  対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予測または検出するため、あるいは項目１から１９までのいずれか１項目による方法または使用を実施するためのキットであって、
（ａ）酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされている、項目１から４まで、または７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに結合することができる抗体、または酵素もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされている、項目１から４まで、または７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つを含み、
（ｂ）前記酵素に特異的な基質、
（ｃ）（ａ）の抗体のいずれかに結合することができる二次抗体でコーティングされたアッセイプレート、
（ｄ）標準品および／または標準較正線、
（ｅ）ストップ溶液、および
（ｆ）必要な緩衝液および／またはアッセイを実施するために必要な試薬
の１つまたは複数を含んでもよい、
を含む、キット。
【０１１６】
２１．  酵素または検出可能な標識にコンジュゲートされている抗体が、項目７に記載の脂質／脂質の濃度比にある脂質のいずれか１つに結合することができ、かつ／または酵素もしくは検出可能な標識にコンジュゲートされている脂質が、項目７に記載の脂質／脂質の濃度比にある脂質のいずれか１つである、項目２０に記載のキット。
２２．  ａ）対象がアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクまたは罹患するリスクを予測するステップ、または
ｂ）対象において、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を予防または処置するステップ
において使用するための、項目１から４まで、または７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質のいずれか１つに対する抗体。
２３．  対象が、急性心筋梗塞などの１つまたは複数のＣＶＤ合併症を発症するリスクがあるか、またはそれを罹患しており、かつ／または心筋死のリスクがある、項目１から２２までのいずれか１項目に記載の方法、薬物、キット、使用、または抗体。
２４．  対象が、心血管疾患を罹患している、項目１から２３までのいずれか１項目に記載の方法、薬物、キット、使用、または抗体。
【０１１７】
２５．  対象におけるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症の予防もしくは処置に使用するための、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーターであって、
ａ）項目１から２４までのいずれか１項目の、方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかを適用すると、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定されるか、
ｂ）項目１から２４までのいずれか１項目の、方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかにより、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがある、またはそれに罹患していると特定されたか、
ｃ）項目１から２４までのいずれか１項目の、方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかを適用すると、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定されるか、および／または
ｄ）項目１から２４までのいずれか１項目の、方法、薬物、キット、使用、または抗体のいずれかにより、前記対象が、アテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤおよび／または１つもしくは複数のその合併症を発症するリスクがないか、またはそれに罹患していると特定された、スタチン、別の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１１８】
２６．  脂質低下薬が、スタチン以外のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤；ナイアシン（ニコチン酸）；コレステロール吸収阻害剤；コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）；胆汁酸隔離剤；フィブラート；フィトステロール；またはＰＣＳＫ９阻害剤から選択される、項目１１から１５まで、１７、２３もしくは２４のいずれか１項目に記載の方法、項目１６、２３もしくは２４のいずれか１項目に記載の薬物、または項目２５に記載のスタチン、他の脂質低下薬、もしくは脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１１９】
２７．  コレステロール吸収阻害剤が、エゼチミブおよびＳＣＨ−４８４６１から選択され、
コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤が、アナセトラピブ、エバセトラピブおよびダルセトラピブから選択され、
胆汁酸隔離剤が、コレセベラム、コレスチルアミン、およびコレスチポールから選択され、
フィブラートが、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、およびベザフィブラートから選択され、
ＰＣＳＫ９阻害剤が、ＰＣＳＫ９特異的抗体、ｓｉＲＮＡ、およびペプチド模倣薬から選択される、項目２６に記載の方法、薬物、または他の脂質低下薬物。
【０１２０】
２８．  スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、フルバスタチンＸＬ、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチンからなる群から選択される、項目１１から１５まで、１７、２３もしくは２４のいずれか１項目に記載の方法、項目１６、２３もしくは２４のいずれか１項目に記載の薬物、または項目２５に記載のスタチン、他の脂質低下薬、もしくは脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
２９．  脂質／脂質の濃度比のモジュレーターが、低分子、抗体、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および天然もしくは修飾脂質、好ましくは項目１から４までまたは７に記載の脂質／脂質の濃度比のいずれか１つにある脂質から選択される、項目１１から１５まで、１７、２３もしくは２４のいずれか１項目に記載の方法、項目１６、２３もしくは２４のいずれか１項目に記載の薬物、または項目２５に記載のスタチン、他の脂質低下薬、もしくは脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１２１】
３０．  対照が、健常な個体、
健常な個体の一般集団、
いかなる主要なＣＶＤ合併症のない状態にあるＣＡＤ患者、
いかなる主要なＣＶＤ合併症のない状態にあるＣＡＤ患者の群
に由来する、項目１から１５まで、１７、２３、２４および２６から２９までのいずれか１項目に記載の方法、項目１６、２３、２４および２６から２９までのいずれか１項目に記載の薬物、または項目２５から２９までのいずれか１項目に記載のスタチン、他の脂質低下薬、もしくは脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１２２】
３１．  対照が非ＨＤＬ試料である、項目３０に記載の方法、薬物、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
３２．  対照が、
ＬＤＬ試料、
超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）試料もしくは
中比重リポタンパク質（ＩＤＬ）試料、またはそれらの組合せ
である、項目３０または３１に記載の方法、薬物、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１２３】
３３．  対照が、
ＬＤＬ試料
である、項目３０または３１に記載の方法、薬物、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１２４】
３４．  予防または処置されるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤの１つまたは複数の合併症が、心筋梗塞（ＭＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、狭心症、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、および卒中から選択される、項目１から３３までのいずれか１項目に記載の、方法、薬物、使用、キット、抗体、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
３５．  予防されるアテローム性動脈硬化症もしくはＣＶＤの１つまたは複数の合併症が死亡である、項目１から３４までのいずれか１項目に記載の、方法、薬物、使用、キット、抗体、スタチン、他の脂質低下薬、または脂質／脂質の濃度比のモジュレーター。
【０１２５】
参照文献
1. Parish, S. et al. Lipids and lipoproteins and risk of different vascular events in the MRC/BHF Heart Protection Study. Circulation 125, 2469-78 (2012).
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3. Jung, H. R. et al. High throughput quantitative molecular lipidomics. Biochimica et biophysica acta 1811, 925-34 (2011).
4. Deckelbaum, R. J., Granot, E., Oschry, Y., Rose, L. & Eisenberg, S. Plasma triglyceride determines structure-composition in low and high density lipoproteins. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 4, 225-231 (1984).
5. Burstein, M., Scholnick, H. R., & Morfin, R. (1970). Rapid method for the isolation of lipoproteins from human serum by precipitation with polyanions, 11.
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9. Fong, B., et al., Liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry for quantitative analysis of gangliosides. Lipids, 2009. 44(9): p. 867-74.
10. Stahlman, M., et al., High-throughput shotgun lipidomics by quadrupole time-of-flight mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2009.
11. Ekroos, K., et al., Quantitative profiling of phospholipids by multiple precursor ion scanning on a hybrid quadrupole time-of-flight mass spectrometer. Anal Chem, 2002. 74(5): p. 941-9.
12. Ekroos, K., et al., Charting molecular composition of phosphatidylcholines by fatty acid scanning and ion trap MS3 fragmentation. J Lipid Res, 2003. 44(11): p. 2181-92.
13. Ejsing, C.S., et al., Automated identification and quantification of glycerophospholipid molecular species by multiple precursor ion scanning. Anal Chem, 2006. 78(17): p. 6202-14.
【０１２６】
当業者は、慣例的手順の範囲内の実験を使用して、実施例および全特許説明の本体の両方において、本明細書に記載されている具体的な実施形態の様々な等価物を認識したりまたは確認したりすることが可能であることが理解されるものとする。こうした等価物は、本発明の範囲内とみなされ、以下の特許請求の範囲または上で列挙した項目に包含されることが意図される。本明細書に引用されている特許、特許出願、および公開されている参照文献はすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
2016511407.tif 000019
【図５】
2016511407.tif 000020
【図６】
2016511407.tif 000021
【図２】
2016511407.tif 000022
【図３】
2016511407.tif 000023
【図４】
2016511407.tif 000024
【国際調査報告】
2016511407.tif 000025
2016511407.tif 000026
2016511407.tif 000027
2016511407.tif 000028
2016511407.tif 000029
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