(57)【要約】  本発明は、以下の式の化合物【化１】2016539984.tif 000053 （式中、Ｒ１はＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、Ｒ２はＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）またはその薬学的に許容可能な塩、糖尿病を治療する方法、本発明の化合物を調製するための中間体および方法を提供する。【選択図】なし
2016539984.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2016539984.tif 000045
（式中、
Ｒ１は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）。
【請求項２】
前記化合物が、
【化２】
2016539984.tif 000046
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がＣＨ３である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、
【化３】
2016539984.tif 000047
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
前記化合物が、（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１０】
有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、それを必要とする哺乳動物における糖尿病を治療する方法。
【請求項１１】
療法に使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
２型糖尿病の治療に使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
以下の式の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化４】
2016539984.tif 000048
（式中、
Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ５は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）。
【請求項１４】
前記化合物が、
【化５】
2016539984.tif 000049
である、請求項１３に記載の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１５】
Ｒが、Ｃ１−４アルキル、フェニルおよびベンジルからなる群から選択される、請求項１３または１４に記載の中間体化合物。
【請求項１６】
Ｒが、メチルおよびエチルからなる群から選択される、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の中間体化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、
【化６】
2016539984.tif 000050
（式中、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルから選択される）
である、請求項１３に記載の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１８】
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸またはその薬学的に許容可能な塩を調製する方法であって、
以下の式の中間体化合物
【化７】
2016539984.tif 000051
（式中、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択される）
を脱エステル化して、以下の式の化合物
【化８】
2016539984.tif 000052
またはその薬学的に許容可能な塩を得ることを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
本発明は、トリアゾロ−ピリジン化合物またはその薬学的に許容可能な塩、ならびに療法における化合物の使用に関する。本発明のトリアゾロ−ピリジン化合物はＧＰＲ−４０の活性化因子である。
【０００２】
遊離脂肪酸受容体１（ＦＦＡ１またはＦＦＡＲ１）としても知られているＧＰＲ−４０は、主に齧歯動物膵臓ベータ細胞、インスリノーマ細胞株およびヒト膵島において高レベルで発現すると報告されている。インスリン分泌のグルコース調整はＧＰＲ−４０を活性化する重要な特徴である。ＧＰＲ−４０活性化をもたらす化合物は、ＩＩ型糖尿病（Ｔ２Ｄ）を有する患者におけるインスリン分泌の刺激と関連する。ＧＰＲ−４０活性化因子である化合物はＧＰＲ−４０媒介性状態の治療における使用のために望ましい。
【０００３】
国際公開第２００４／０４１２６６号は、カチオンを放出できる芳香環および基を有する化合物を含むＧＰＲ−４０受容体機能調節因子を開示している。
【０００４】
本発明は、以下の式Ｉａの化合物：
【化１】
2016539984.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００５】
本発明の化合物は、アスタリスク（＊）で上記の構造に識別されるキラル炭素を有する。好ましい化合物は、慣例によりＳ構造として知られている以下の式Ｉに示される構造を有する。
【０００６】
本発明は、以下の式Ｉｂの化合物：
【化２】
2016539984.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００７】
本発明は、以下の式Ｉの化合物：
【化３】
2016539984.tif 000005
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。              
【０００８】
一実施形態において、式Ｉの化合物は無水結晶形Ｉである。
【０００９】
一実施形態において、式Ｉの化合物は無水結晶形ＩＩである。
【００１０】
一実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキルおよびＣＮからなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨである。別の実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＯ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される。
【００１１】
別の実施形態において、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３はＣ３アルキルである。Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＯ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３である。別の実施形態において、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３はＨである。別の実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３はＯ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、およびＯ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨからなる群から選択される。
【００１２】
本発明はまた、上記の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、上記の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、任意に１種以上の治療剤と組み合わせて１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。さらなる治療剤としては、例えば、メトホルミンおよび／またはジャヌビア（Ｊａｎｕｖｉａ）が挙げられる。本発明の一実施形態において、さらなる治療剤はメトホルミンである。本発明の一実施形態において、さらなる治療剤はジャヌビアである。
【００１４】
本発明はまた、上記の式Ｉａの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、上記の式Ｉａの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、任意に１種以上の治療剤と組み合わせて１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。さらなる治療剤としては、例えば、メトホルミンおよび／またはジャヌビアが挙げられる。本発明の一実施形態において、さらなる治療剤はメトホルミンである。本発明の一実施形態において、さらなる治療剤はジャヌビアである。
【００１６】
本発明は、ＧＰＲ−４０活性によって調節される状態を治療する方法を提供する。本発明はまた、哺乳動物における糖尿病を治療する方法を提供する。方法は、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む。方法は、有効量の式Ｉａの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む。より好ましくは、本発明は、治療を必要とする哺乳動物における２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。
【００１７】
より具体的には、本発明は、有効量の式Ｉａの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を哺乳動物に投与することを含む治療を必要とする哺乳動物における２型糖尿病を治療する方法を提供する。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００１８】
本発明は、療法における使用のための上記の式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１９】
本発明は、療法における使用のための上記の式Ｉａによる化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２０】
さらに別の形態において、本発明は、糖尿病の治療における使用のための式Ｉによる上記の化合物、その薬学的に許容可能な塩または医薬組成物を提供する。さらに別の形態において、本発明は、糖尿病の治療における使用のための式Ｉａによる上記の化合物、その薬学的に許容可能な塩または医薬組成物を提供する。別の実施形態において、式Ｉによる上記の化合物またはその薬学的に許容可能な塩は２型糖尿病の治療のためである。別の実施形態において、医薬組成物は２型糖尿病の治療のためである。
【００２１】
本発明は、糖尿病の治療のための医薬の製造における式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。好ましくは、医薬は２型糖尿病の治療のためである。
【００２２】
本発明は、糖尿病の治療のための医薬の製造における式Ｉａによる化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。好ましくは、医薬は２型糖尿病の治療のためである。
【００２３】
さらに別の形態において、本発明は、式ＩＩａの中間体化合物
【化４】
2016539984.tif 000006
（式中、
Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ５は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２４】
さらに別の形態において、本発明は、式ＩＩｂの中間体化合物
【化５】
2016539984.tif 000007
（式中、
Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ５は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２５】
さらに別の形態において、本発明は、式ＩＩの中間体化合物
【化６】
2016539984.tif 000008
（式中、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択される）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２６】
好ましいＲ基は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−２ハロアルキル、フェニルおよびＣ１−２アルキルフェニルからなる群から選択される。特に好ましいＲ基は、メチル、エチル、フェニルおよびベンジルからなる群から選択される。特に好ましいＲ基は、メチルおよびエチルからなる群から選択される。
【００２７】
一実施形態において、ＲはＣ１−４アルキルであり、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＣＨ３であり、Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキルおよびＣＮからなる群から選択される。一実施形態において、Ｒは、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４ハロアルキルからなる群から選択され、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＣＨ３であり、Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキルおよびＣＮからなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキルからなる群から選択され、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨである。別の実施形態において、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−２ハロアルキル、フェニルおよびＣ１−２アルキルフェニルからなる群から選択され、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６は、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−２ハロアルキル、フェニルおよびＣ１−２アルキルフェニルからなる群から選択され、Ｒ４はＣＨ３であり、Ｒ５はＣＨ３であり、Ｒ６はＣ３アルキルである。別の実施形態において、ＲはＣ１−４アルキルからなる群から選択され、Ｒ４はＣＨ３であり、Ｒ５はＣＨ３であり、Ｒ６はＨである。別の実施形態において、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−２ハロアルキル、フェニルおよびＣ１−２アルキルフェニルからなる群から選択され、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＣＨ３であり、Ｒ６は、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３およびＯ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨからなる群から選択される。
【００２８】
本発明はまた、式Ｉについて上記の（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸を調製するプロセスを提供する。そのプロセスは、式ＩＩによる中間体化合物を脱保護または脱エステル化して、式１の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を調製することを含む。
【００２９】
本発明はまた、式Ｉａとしての上記の化合物を調製するプロセスを提供する。そのプロセスは、式ＩＩａによる中間体化合物を脱保護または脱エステル化して、式Ｉａの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を調製することを含む。
【００３０】
当業者は、過度の実験をせずに脱保護反応を実施することを容易に理解し、それを実施できる。カルボン酸および保護されたカルボン酸に加えて、カルボン酸に容易に変換され得る他の官能基が、カルボン酸または保護された酸の代わりに使用されてもよいことは当業者によって認識されるであろう。このような官能基、調製およびこれらの基のカルボン酸への変換は、Ｌａｒｏｃｋ．Ｒ．Ｃによる「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ」、Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ、１９９９ならびに「Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ」  Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．およびＭａｒｃｈ，Ｊ．、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、６ｔｈ  Ｅｄ．  ２００７に見出され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸、形態ＩＩは、（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸についての代表的なＸＲＤパターンのスペクトログラムである。ＸＲＤスペクトログラムは実施例１に記載されるように得られる。
【図２】（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸、形態Ｉは、（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸についての代表的なＸＲＤパターンのスペクトログラムである。ＸＲＤスペクトログラムは実施例１に記載されるように得られる。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明の化合物は薬学的に許容可能な塩として提供され得る。「薬学的に許容可能な塩」とは、臨床的および／または獣医学的使用に許容可能であると考えられる本発明の化合物の塩を指す。薬学的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は当該分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ．６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照のこと。
【００３３】
「薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤」という用語は、担体、希釈剤および賦形剤が、組成物の他の成分と薬学的に適合することを意味する。
【００３４】
個々の異性体、鏡像異性体またはジアステレオマーは、キラルクロマトグラフィーなどの方法によって式ＩまたはＩａまたはＩｂの化合物の合成における任意の簡便な点で分離され得る。さらに、以下のスキームおよび調製例に記載される中間体は、多くの窒素、ヒドロキシおよび酸保護基、例えばエステルを含有する。可変保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に応じて各出現において同じであっても、異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、（Ｔ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｗｕｔｓ、ｅｄｓ．、２ｄ  ｅｄ．１９９１）を参照のこと。
【００３５】
本明細書に使用される略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｖｏｌ．１７、Ｎｏ．１、１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義される：「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＤＩＢＡＬ−Ｈ」は水素化ジイソブチルアルミニウムを指し、「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し、「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し、「ＥＣ５０」は最大反応の半分における有効濃度を指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＥｔＯＨ」はエチルアルコールまたはエタノールを指し、「Ｆ１２」はＨａｍ’ｓ  Ｆ１２培地を指し、「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し、「ＨＥＫ」はヒト胚腎臓を指し、「ＩＣ５０」は薬剤にとって可能な最大阻害反応の５０％を生じるその薬剤の濃度を指し、「ｉ．ｐ．」は腹腔内注射を指し、「ＭＣＰＢＡ」はｍ−クロロ過安息香酸を指し、「ＰＰＡＲ」はペルオキシソーム増殖因子活性化受容体を指し、「ＰＰＲＥ」はペルオキシソーム増殖因子反応エレメントを指し、「ＰＰｈ３」はリン酸トリフェニルを指し、「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＴＫ」はチミジンキナーゼを指し、「ＴＡＫ８７５」は、ファシリグラム（ｆａｓｉｇｌｉｆａｍ）として知られている、Ｔａｋｅｄａ化合物、（３−［４−（２−メチル−ベンジルオキシ）−フェニル］−ヘキシ−４−イン酸）を指し、「ＸＲＤ」は粉末Ｘ線回折を指す。
【００３６】
本明細書に使用されるアルキルという用語は、エチルもしくはｎ−プロピルなどの直鎖アルキルまたはイソプロピルもしくはｔｅｒｔ−ブチルなどの分枝鎖アルキルである。Ｃ１−４ハロアルキルという用語は、アルキル鎖の炭素に結合した１、２、３またはそれ以上のハロ基を有するアルキル基を指す。２つ以上のハロゲンが存在する場合、ハロゲンは同じ炭素に結合することを必要としない。この用語はまた、アルキル基の全ての水素原子がハロゲンと置換されているペルハロ（ｐｅｒｈａｌｏ）アルキルを含む。
【００３７】
以下の調製例およびスキームにおいて、他に示されない限り、全ての置換基は以前に定義される通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に利用可能である。その他は、既知の構造的に類似の化合物の合成と同様の有機および複素環化学の標準的な技術ならびに任意の新規手順を含む以下の調製例および実施例に記載される手順によって作製され得る。
【００３８】
【化７】
2016539984.tif 000009
式Ｉｂの生成物はスキームＩに図示される反応に従って調製され得る。スキーム１は、式Ｉｂの化合物を生じる、ハロゲン、６−置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル中間体の反応を示す。６−置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イルのカルボキシレートは、ＤＣＭなどの極性非プロトン性溶媒中の−７８℃の温度にて過剰なＤＩＢＡＬ−Ｈなどの還元剤を使用した標準的な還元条件下でヒドロキシに還元されて、スキーム１、工程１の生成物を得ることができる。当業者は、カルボン酸メチルをスキーム１のヒドロキシ化合物生成物に還元するために同様に使用され得る水素化ホウ素ナトリウムおよび水素化アルミニウムリチウムなどの他の還元剤が存在することを理解するであろう。工程１のヒドロキシ生成物はＳＯＣｌ２またはＰＯＣｌ３などの塩素化剤を使用して塩素などのハロゲンに変換されて工程２の生成物を得ることができる。あるいは、ヒドロキシは、約−４０℃の温度にてＤＣＭなどの極性非プロトン性溶媒中のＰＢｒ３などの臭素化剤を使用して臭素で置換されて、工程２の生成物を得ることができる。工程２の生成物は、ＤＭＦまたはアセトニトリルなどの極性非プロトン性溶媒中の炭酸セシウムまたは炭酸カリウムなどの無機塩基を使用して一般的なアルキル化条件下で置換フェノールでアルキル化されて、工程３の生成物を得ることができる。工程３のハロゲン生成物は、工程４の副工程１において、Ｓｕｚｕｋｉ−Ｍｉｙａｕｒａクロスカップリング条件下で適切なボロン酸と結合され得る。当業者は、このようなクロスカップリング反応を促進するのに有用な様々な条件が存在することを認識するであろう。したがって、適切なパラジウム試薬としては、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、トリシクロヘキシルホスフィンとのトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィンまたは酢酸パラジウム（ＩＩ）が挙げられる。適切な塩基としては、炭酸セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは三塩基性リン酸カリウム一水和物が挙げられ、１，４−ジオキサンまたはトルエンおよびＥｔＯＨなどの非極性溶媒を使用して、工程４の化合物を得、それを、室温にてまたは加熱しながらＮａＯＨ、ＬｉＯＨまたはカリウムトリメチルシラノート（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｏｔｅ）を使用して塩基性条件下で工程４の副工程２において脱保護して式Ｉｂの化合物を得ることができる。「ＰＧ」はエステルなどの酸のために開発された保護基である。このような保護基は当該分野において周知であり、理解されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓを参照のこと。工程４、副工程１のフェノール生成物は、アセトニトリルなどの極性非プロトン性溶媒中の炭酸セシウムなどの無機塩基を使用して当該分野において周知の条件下でさらにアルキル化されて、脱保護後、式Ｉｂの化合物を得ることができる。
【００３９】
【化８】
2016539984.tif 000010
あるいは、スキーム２において、スキーム１の工程２の生成物はスキーム１の工程４の副工程１に記載されるようにＳｕｚｕｋｉ−Ｍｉｙａｕｒａクロスカップリング条件下で結合されて、スキーム２の工程１の生成物を得ることができる。次いでスキーム２の工程１の生成物は、スキーム１の工程３に記載されるようにスキーム２の工程２のフェノール試薬と反応されて、スキーム２の工程２の生成物を得ることができる。スキーム２の工程２の生成物は、スキーム１の工程４の副工程２に記載されるように脱保護されて、式Ｉｂの生成物を得ることができる。
【００４０】
任意選択の工程において、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容可能な塩は、標準的な条件下で適切な溶媒中での適切な薬学的に許容可能な塩基との式（Ｉ）の適切な酸の反応によって形成され得る。さらに、このような塩の形成はエステルの加水分解と同時に発生し得る。このような塩の形成は当該分野において周知であり、理解されている。
【００４１】
以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示し、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を表す。反対に示されない限り、本明細書に例示される化合物は、Ａｃｃｅｌｒｙｓ  Ｄｒａｗ  ４．１、ＩＵＰＡＣＮＡＭＥ  ＡＣＤＬＡＢＳを使用して命名され、番号付けされる。
【００４２】
調製例１
メチル６−アミノピリジン−３−カルボキシレート
【化９】
2016539984.tif 000011
メタノール（３０ｍＬ）中の６−アミノピリジン３−カルボン酸（３０ｇ、２１７．１ｍｍｏｌ）の溶液にＨ２ＳＯ４（０℃にて３０ｍＬ）を加え、反応混合物を８０℃で１６時間加熱する。反応混合物を蒸発させ、残渣をＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）で中和し、沈殿した固体を濾過し、乾燥させて淡黄色の固体（２４ｇ、７２％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４３】
調製例２
エチル（１Ｅ）−Ｎ−（２，４，６−トリメチルフェニル）スルホニルオキシエタンイミデート
【化１０】
2016539984.tif 000012
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のエチル（１Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシエタンイミデート（８．４ｇ、８１．５ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１２ｍＬ、８６．２４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間撹拌する。２，４，６−トリメチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（２０ｇ、８１．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物を水（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、白色固体（１５ｇ、６４％）として標題化合物を得る。粗物質をさらに精製せずに使用する。
【００４４】
代替調製例２
ＤＭＦ（２．５Ｌ）中のエチル（１Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシエタンイミデート（２５０ｇ、２．４２ｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（４９０．６ｇ、４．８５ｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間撹拌する。反応混合物を１０℃〜１５℃に冷却し、２，４，６−トリメチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（５２９．５ｇ、２．４２ｍｏｌ）を３０分にわたって少しずつ加え、混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物を水（３．５Ｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×４Ｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を水（４×３Ｌ）、ブライン溶液（３Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、オフホワイトの固体（４３５ｇ、６３％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２８５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４５】
調製例３
アミノ２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート
【化１１】
2016539984.tif 000013
１，４ジオキサン（２５ｍＬ）中のエチル（１Ｅ）−Ｎ−（２，４，６−トリメチルフェニル）スルホニルオキシエタンイミデート（１４ｇ、４９．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてＨＣｌＯ４（７．０ｍＬ、水中７０％）を加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。粗物質をさらに精製せずに使用する（１０ｇ、理論的収量）。
【００４６】
調製例４
メチル１，６−ジアミノピリジン−１−イウム−３−カルボキシレート；２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート
【化１２】
2016539984.tif 000014
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中のアミノ２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート（１０ｇ、４５．７１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、メチル６−アミノピリジン−３−カルボキシレート（５．５５ｇ、５６．５６ｍｍｏｌ）を加える。１０分後、トリエチルアミン（１９．１１ｍＬ、１３７．１３ｍｍｏｌ）を滴下して加え、反応混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物を０℃に冷却し、ジエチルエーテルを加える。沈殿した固体を濾過し、真空下で乾燥させて、白色固体（６．８ｇ、４１％）として標題化合物を得る。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ８．９５（ｂｓ，２Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）６．８９（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｓ，６Ｈ），２．１６（ｓ，１Ｈ）。
【００４７】
代替調製例４
ＤＣＭ（８．５Ｌ）中のアミノ２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート（６１８ｇ、２．８７ｍｏｌ）の撹拌溶液に、１０℃〜１５℃にてメチル６−アミノピリジン−３−カルボキシレート（４３７．３ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物を０℃に冷却し、２０分間撹拌し、固体の沈殿物を濾過し、ジエチルエーテル（２Ｌ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、オフホワイトの固体（４９５ｇ、４７％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４８】
調製例５
メチル２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキシレート
【化１３】
2016539984.tif 000015
アセトニトリル（１５０ｍＬ）中の臭化銅（１３．９ｇ、６２．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温にてｔｅｒｔ−ブチル亜硝酸塩（６．４ｇ、６２．４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６０℃で加熱する。メチル２−アミノ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキシレート（８．０ｇ、４１．６ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、反応混合物を同じ温度で１時間加熱する。反応混合物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器）（４０ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラム）により精製し、ヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃで溶出して、オフホワイトの固体（５．１ｇ、４８％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ３６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４９】
調製例６
２−（４−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボン酸メチルエステル
【化１４】
2016539984.tif 000016
メタノール（１００ｍＬ）中のメチル１，６−ジアミノピリジン−１−イウム−３−カルボキシレート；２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート（８ｇ、２１．６８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、０℃にて４−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−ベンズアルデヒド（３．２５ｇ、２１．６８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．７７ｍＬ、６５．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて４８時間撹拌する。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を水（２×１００ｍＬ）、飽和塩化アンモニウム溶液（５０ｍＬ）、ブライン溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ４０ｇのｒｅｄｉｓｅｐ  Ｒｆカラム）により精製し、ヘキサン中の４０〜６０％のＥｔＯＡｃで溶出して、淡黄色の固体（１．２ｇ、１８％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５０】
調製例７
２−［４−（３−メタンスルホニル−プロポキシ）−２，６−ジメチル−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボン酸メチルエステル
【化１５】
2016539984.tif 000017
アセトニトリル（５ｍＬ）中の２−（４−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボン酸メチルエステル（０．２ｇ、０．６７３ｍｍｏｌ）の溶液に、トルエン−４−スルホン酸３−メタンスルホニル−プロピルエステル（０．１９６ｇ、０．６７３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．２７８ｇ、２．０１９ｍｍｏｌ）を室温にて加え、反応混合物を１００℃で１６時間加熱する。反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を、水（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器  ２４ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラム）により精製し、ヘキサン中の４０〜６０％のＥｔＯＡｃで溶出して、淡黄色の固体（１９８ｍｇ、７０％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４１８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５１】
調製例８
（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メタノール
【化１６】
2016539984.tif 000018
ＤＣＭ中のメチル２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキシレート（３．０ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃にてＤＩＢＡＬ−Ｈ（３当量）を滴下して加え、反応混合物を室温に加温し、１時間撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させる。粗物質をｎ−ペンタンで粉砕して黄色の固体（１．５ｇ、５７．６％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５２】
以下の化合物を本質的に調製例８の方法によって調製する。
【００５３】
【表１】
2016539984.tif 000019
【００５４】
調製例１０
２−ブロモ−６−（クロロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化１７】
2016539984.tif 000020
（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メタノール（１．５ｇ、６．５ｍｍｏｌ）および塩化チオニル（１０ｍＬ）の混合物を室温にて１時間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固する。残渣をトルエン（２×２０ｍＬ）と同時蒸発させて、黄色の固体（１．５ｇ、粗製物）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５５】
代替調製例１０
ＳＯＣｌ２（５０ｍＬ）を、０℃にて（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）−メタノール（２．９ｇ、１２．６９ｍｍｏｌ）に加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌する。反応混合物を０℃に冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、黄色の固体（２．８ｇ、粗製物）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５６】
調製例１１
メチル２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキシレート
【化１８】
2016539984.tif 000021
１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）中のメチル１，６−ジアミノピリジン−１−イウム−３−カルボキシレート；２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート（６．０ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）の溶液に、２，６−ジメチルベンズアルデヒド（１．７２ｇ、１３．００ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を９０℃で２時間加熱する。反応混合物を室温に冷却し、１ＮのＫＯＨ溶液（１５ｍＬ）を加え、混合物を室温にて一晩撹拌する。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を水（１００ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗物質を、ヘキサン中の１２％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）により精製して、黄色の液体（０．３５ｇ、１６％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５７】
代替調製例１１
メタノール（５Ｌ）中のメチル１，６−ジアミノピリジン−１−イウム−３−カルボキシレート；２，４，６−トリメチルベンゼンスルホネート（４００ｇ、１．０９ｍｏｌ）の溶液に、１５℃〜２０℃にて２，６−ジメチルベンズアルデヒド（１４６ｇ、１．０９ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３３０．５ｇ、３．２７ｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌する。反応混合物を室温に加温し、１８時間撹拌する。溶媒を５０℃にて蒸留により除去する。粗残渣をＥｔＯＡｃ（３Ｌ）および水（４Ｌ）に溶解し、１０分間撹拌する。混合物を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×３Ｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を水（２×５Ｌ）およびブライン溶液（３Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、茶色の粘性のある塊を得る。粗物質を、ヘキサン中の３０〜５０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の固体（１２５ｇ、４０％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５８】
調製例１２
［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メタノール
【化１９】
2016539984.tif 000022
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のメチル２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキシレート（０．３５ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤｉＢＡＬ−Ｈ（トルエン中の１Ｍ溶液、４．９８ｍＬ、４．９８ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下して加える。反応混合物を室温に加温し、２時間撹拌する。反応をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（４×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗物質を、ヘキサン中の５０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）により精製する。生成物を濃縮して透明の液体（０．１８ｇ、５７％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５９】
調製例１３
６−（クロロメチル）−２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化２０】
2016539984.tif 000023
ＳＯＣｌ２（２．０ｍＬ）中の［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メタノール（０．１７ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液を室温にて２時間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固して、トルエンと同時蒸留して、黄色の固体（０．１９８ｇ、１００％粗製物）として標題化合物を得、それをさらに精製せずに使用する。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６０】
調製例１４
６−（ブロモメチル）−２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン
【化２１】
2016539984.tif 000024
ＤＣＭ（２．９６Ｌ）中の（２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メタノール（１４８ｇ、０．５８４ｍｏｌ）の溶液に、−４０℃にてＰＢｒ３（２３７．３ｇ、０．８７７ｍｏｌ）を加える。反応混合物を温度に加温し、次いで室温にてさらに２時間撹拌する。反応を０℃に冷却し、氷冷水（１．５Ｌ）でクエンチし、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて、ｐＨを約７．５〜８に調整する。混合物をＤＣＭ（２Ｌ）で希釈し、水層を分離し、ＤＣＭ（３Ｌ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、水（２×３Ｌ）およびブライン溶液（３Ｌ）で洗浄し、有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、標題化合物（１４０ｇ、７６％）を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ３１６／３１８  ７９Ｂｒ／８１Ｂｒ（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６１】
代替調製例１４
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メタノール（０．２ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＢｒ３（０．１１ｍＬ、１．１８ｍｍｏｌ）を−４０℃にて加え、反応混合物を室温にて２時間撹拌する。反応混合物を０℃に冷却し、氷冷水（５ｍＬ）でクエンチし、１０％の炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加え、混合物をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、標題化合物（０．１７ｇ、粗製物）を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ７９Ｂｒ／８１Ｂｒ  ３１６／３１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６２】
以下の化合物を本質的に代替調製例１４の方法によって調製する。
【００６３】
【表２】
2016539984.tif 000025
【００６４】
調製例１６
エチル（３Ｓ）−３−［４−［（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート
【化２２】
2016539984.tif 000026
ＤＭＦ中の（Ｓ）−エチル３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキシ−４−イノエート（１．４ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、炭酸セシウム（５．９ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）および２−ブロモ−６−（クロロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（１．５ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて２時間撹拌する。反応混合物を氷冷水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物をブライン（２×３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮する。粗物質を、ヘキサン中の２５％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器  １０ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラム）により精製して、黄色の粘性のある油（１．４ｇ、５４％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６５】
代替調製例１６
アセトニトリル（５０ｍＬ）中の２−ブロモ−６−クロロメチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（２．８ｇ、１１．３９ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−エチル３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキシ−４−イノエート（２．６ｇ、１１．３５９ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１１．１０ｇ、３４．０７ｍｍｏｌ）の混合物を室温にて一晩撹拌する。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器  ４０ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラム）により精製し、ヘキサン中の４２％のＥｔＯＡｃ中で溶出して、茶色の液体（４ｇ、８０％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６６】
（Ｓ）−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステルと共に出発物質として６−ブロモメチル−２−［４−（３−メタンスルホニル−プロポキシ）−２，６−ジメチル−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジンを使用して以下の化合物を本質的に代替調製例１６の方法によって調製する。
【００６７】
【表３】
2016539984.tif 000027
【００６８】
調製例１８
（Ｓ）−３−（４−｛２−［４−（３−メタンスルホニル−プロポキシ）−２−メチル−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ｝−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２３】
2016539984.tif 000028
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート（０．５ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシ−２−メチルベンゼンボロン酸（０．２０６ｇ、１．３５ｍ  ｍＬ）の撹拌溶液に、２Ｍの炭酸カリウム（１．６９ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ）の溶液を加える。混合物を２０分間窒素でパージし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０．０３９ｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃にて４時間マイクロ波放射により照射する。反応混合物を、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗浄する。濾液を冷水（２×２０ｍＬ）およびブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させる。残渣を、ヘキサン中の１５％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）により精製して、黄色のシロップ（０．３ｇ、５６．６％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
調製例１９
（Ｓ）−３−（４−｛２−［４−（３−メタンスルホニル−プロポキシ）−２−メチル−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ｝−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２４】
2016539984.tif 000029
アセトニトリル（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−３−（４−｛２−［４−（３−メタンスルホニル−プロポキシ）−２−メチル−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ｝−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．３ｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）およびトルエン−４−スルホン酸３−メタンスルホニル−プロピルエステル（０．１８ｇ、０．６３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温にて炭酸カリウム（０．２６ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を９０℃にて一晩加熱する。反応混合物を、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗浄し、濾液を蒸発乾固する。残渣をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に溶解し、水（２×３０ｍＬ）、ブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させる。粗化合物をシリカゲル（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器）により精製し、ヘキサン中の５０％のＥｔＯＡｃで溶出して、黄色の固体（０．１２ｇ、３２．３％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５９０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７０】
調製例２０
（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２５】
2016539984.tif 000030
１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート（１．０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシフェニルボロン酸（０．３７ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．９１ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素で１０分間パージする。Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０．１４ｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃にて１２時間加熱する。反応混合物を室温に冷却し、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で洗浄する。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固する。粗物質を、１５〜２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２４ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラムを使用したｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）により精製して、標題化合物（０．７５ｇ、７３．５２％）を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４５６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７１】
調製例２１
（Ｓ）−３−（４−｛２−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ｝−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２６】
2016539984.tif 000031
アセトニトリル（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．２５０ｇ、０．５８５ｍｍｏｌ）および１−ブロモ−２−メトキシ−エタン（０．２２ｍＬ、２．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温にて炭酸セシウム（０．３８１ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて一晩撹拌する。反応混合物を、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄し、濾液を濃縮乾固する。残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解し、水（２×３０ｍＬ）、ブライン溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させる。粗化合物をシリカゲル（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器）により精製し、ヘキサン中の１７〜１９％のＥｔＯＡｃで溶出して、白色の半固体（０．１９０ｇ、６４％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７２】
調製例２２
（Ｓ）−３−（４−｛２−［４−（３−ヒドロキシ−３−メチル−ブトキシ）−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ｝−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２７】
2016539984.tif 000032
アセトニトリル（２０ｍＬ）中の（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．２ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、４−ブロモ−２−メチル−ブタン−２−オール（０．１４ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（０．４１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて２時間撹拌する。反応混合物を濾過し、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器  ２４ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラム）により精製し、ヘキサン中の１５〜２０％のＥｔＯＡｃで溶出して、標題化合物（０．２３ｇ、１００％）を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７３】
調製例２３
（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−ジフルオロメトキシ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２８】
2016539984.tif 000033
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．２５ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃にてクロロジフルオロ酢酸ナトリウム（０．１４２ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（０．３５４ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８０℃にて４時間加熱する。反応混合物を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲル（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ精製器  ４０ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラム）により精製し、ヘキサン中の４５％のＥｔＯＡｃで溶出して、無色の半固体（０．１５ｇ、５５．５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５０６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７４】
調製例２４
（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−シアノ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化２９】
2016539984.tif 000034
ジオキサン（１１５ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート（０．２５ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）および４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンゾニトリル（０．１４ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．１５ｇ、１．１３４ｍｍｏｌ）を加える。混合物をアルゴンで３０分間パージし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３２ｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃にて５時間加熱する。反応混合物を室温に冷却し、珪藻土を通して濾過する。濾液を減圧下で蒸発させ、濃縮乾固する。粗物質を、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）により精製して、茶色の液体（０．１７０ｇ、６８．７５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４６４（Ｍ＋Ｈ）。
【００７５】
調製例２５
（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル
【化３０】
2016539984.tif 000035
トルエン（１６ｍＬ）およびＥｔＯＨ（４ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［（２−ブロモ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル）メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート（０．３ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）および４−イソプロピル−フェニルボロン酸（０．２４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２ＭのＫ２ＣＯ３（０．６ｍＬ、１．３４ｍｍｏｌ）を加える。混合物をアルゴンで３０分間パージする。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０７７ｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃にて一晩加熱する。反応混合物を室温に冷却し、珪藻土で濾過する。濾液を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固する。粗物質を、４５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２４ｇのｒｅｄｉｓｅｐカラムを使用したｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ）により精製して、茶色の液体（０．２２ｇ、６８．７５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７６】
調製例２６
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート
【化３１】
2016539984.tif 000036
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の（Ｓ）−エチル３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキシ−４−イノエート（国際公開第０５／０８６６６１号）（０．２ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．８４ｇ、２．５９ｍｍｏｌ）および６−（クロロメチル）−２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（０．１８７ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物を氷冷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を水（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質を、ヘキサン中の１３％のＥｔＯＡｃで溶出するｃｏｍｂｉｆｌａｓｈシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、無色の液体（０．２２５ｇ、５５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７７】
代替調製例２６
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の（Ｓ）−エチル３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキシ−４−イノエート（１４．６９ｇ、６３．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、１０℃〜１５℃にてＣｓ２ＣＯ３（６１．８２ｇ、１８９．７５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌する。６−（ブロモメチル）−２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン（２０ｇ、６３．２５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて１６時間撹拌する。反応混合物を冷水（４００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（４×６００ｍＬ）、ブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させる。粗生成物を、ヘキサン中の３０〜５０％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の固体（１７ｇ、５７％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例】
【００７８】
実施例１
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸
【化３２】
2016539984.tif 000037
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート（０．２２ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、５ＮのＮａＯＨ（０．３ｍＬ）を加え、反応混合物を８０℃にてマイクロ波機器において３０分間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固し、水で希釈し、６ＮのＨＣｌ溶液でｐＨを約３に酸性化する。沈殿した固体を濾過し、ｎ−ペンタンで洗浄し、乾燥させて、白色の固体（０．１５５ｇ、７５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７９】
代替調製、実施例１
エタノール（１６０ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イノエート（１６ｇ、３４．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、５ＮのＮａＯＨ水溶液（２．７３ｇ、１６ｍＬの水中に６８．４４ｍｍｏｌ）を室温にて滴下して加え、反応混合物を１６時間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固し、残渣を水（３００ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（２×２００ｍＬ）で洗浄し、有機抽出物を捨てる。水層を１０℃〜１５℃に冷却し、飽和クエン酸溶液でｐＨを約５に酸性化し、ＤＣＭ（２×３００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を水（２×５００ｍＬ）、ブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、オフホワイトの固体（１４ｇ、９３％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８０】
実施例１の代替調製のように調製した他のバッチからの生成物を、代替調製の実施例１のＤＣＭ（５Ｌ）からの生成物と混合し、４０℃に加温して透明の溶液を得る。次いで溶媒を蒸発させて、オフホワイトの固体を得る。捕捉されるＤＣＭの可能性が懸念されるので、ＥｔＯＡｃ（７．５Ｌ）を充填し、得られた混合物を６５℃に加温して透明の溶液（約３０分）を得る。溶媒を蒸発させ、得られた固体を５０℃にて真空下で乾燥させて、オフホワイトの固体として所望の生成物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８１】
形態ＩＩ種晶、実施例１
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸の飽和エタノール溶液を、０．２２μｍのナイロンシリンジフィルターを通して無菌容器内に濾過する。２５℃でのゆっくりとした溶媒蒸発により、実施例１の形態ＩＩ種晶を得る。
【００８２】
結晶形態ＩＩ（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸は、混合物を１０分間８０℃にて撹拌しながら、（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸（５８０ｍｇ、１３２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１．２ｍＬ）に溶解することによって無水結晶形態ＩＩとして調製できる。溶液を濾過し、形態ＩＩの種が導入される時点で７０℃に冷却する。次いで混合物を一晩撹拌しながら周囲温度でゆっくり冷却する。得られた固体塊をヘプタン（６００μＬ）の添加によりほぐし、固体を真空濾過により回収し、６０℃にて真空下で乾燥させて、結晶性の標題生成物（４３８ｍｇ、７５．５％）を得る。
【００８３】
粉末Ｘ線回折、実施例１、形態ＩＩ
結晶性固体のＸＲＤパターンを、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ粉末Ｘ線回折装置上で得る。試料を、２θでの４〜４０°で、２θでのステップサイズ０．００８７°および走査速度０．５秒／ステップを用い、ならびに０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定散乱防止および９．５ｍｍの検出器スリットを用いて走査する。乾燥粉末を石英試料ホルダに詰めて、スライドガラスを用いて滑面を得る。結晶学技術分野において周知なのは、任意の所定の結晶形態に関して、回折ピークの相対強度が、結晶形態および晶癖などの要因から生じる優先配向に起因して異なる可能性があることである。優先配向の効果が存在する場所では、ピーク強度が変化するが、多形体の特徴的ピーク位置は変化しない。例えば、米国薬局方３５−国民医薬品集３０章＜９４１＞粉末Ｘ線回折法（ＸＲＰＤ）による結晶性および部分的結晶性固体の特徴解析、公定、２０１２年１２月１日〜２０１３年５月１日を参照されたい。さらに、任意の所定の結晶形態に関して、ピーク角度位置が若干変化する場合があるということも結晶学技術分野では周知である。例えば、試料を解析する温度もしくは湿度の変動、試料変位、または内部標準の存在もしくは非存在に起因して、ピーク位置はシフト可能である。本件では、２θでの±０．２のピーク位置変動は、記載される結晶形の明白な同定を妨げることなく、これらの潜在的変動を考慮にいれることにする。結晶形態の確認は、区別可能な（°２θ単位での）ピーク、典型的にはより顕著なピークの任意の特有の組み合わせに基づいてなされ得る。周囲温度および相対湿度で得られる結晶形態回折パターンを、８．８５および２６．７７°２θでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整する。
【００８４】
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸形態ＩＩの調製した試料は、ＣｕＫａ放射線を使用してＸＲＤパターンによって、以下の表４に記載される回折ピーク（２θ値）を有すると特徴付けられる。具体的には、パターンは、０．２°の回折角の許容度で５．８２、１０．７８、１９．６５、２１．３１および２４．３３からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて１７．５５におけるピークを含む。
【００８５】
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸、形態ＩＩの粉末Ｘ線回折ピーク
【表４】
2016539984.tif 000038
【００８６】
結晶形態Ｉ、実施例１
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸（０．１０２ｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を８０℃にてイソプロピルアセテート（２ｍＬ）に溶解する。加熱を停止し、試料を室温にさせて、結晶形態を得る。ヘプタン（３ｍＬ）を１ｍＬの増分で加えて、濁ったゴム状の溶液を得る。試料を撹拌し、９０℃にて１時間加熱して、複屈折ブレード／プレートの明るい白色固体を得、それを真空濾過し、１０分間真空下で乾燥させる。
【００８７】
代替形態Ｉの結晶、実施例１
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸（４４ｇ、０．１０ｍｏｌ）をエタノール（１．１Ｌ）中に懸濁し、６０℃にて撹拌して、透明な溶液を得る。温度を７０℃に上昇させ、水をゆっくり加え（６３８ｍＬ）、混合物をこの温度にて３０分間撹拌し、次いで１時間３０分の間撹拌しながら５℃に冷却する。混合物を約１０分間５５℃で加熱し、１５℃に冷却する。混合物を１５℃にて１４時間撹拌する。白色の結晶を真空下で濾過し、風乾させて標題化合物（２４．１ｇ、５５％）を得、それをさらに４０℃にて真空下で乾燥させる。
【００８８】
粉末Ｘ線回折、実施例１、形態ＩＩ
結晶性固体のＸＲＤパターンを、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ粉末Ｘ線回折装置上で得る。試料を、２θでの４〜４０°で、２θでのステップサイズ０．００８７°および走査速度０．５秒／ステップを用い、ならびに０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定散乱防止および９．５ｍｍの検出器スリットを用いて走査する。乾燥粉末を石英試料ホルダに詰めて、スライドガラスを用いて滑面を得る。結晶学技術分野において周知なのは、任意の所定の結晶形態に関して、回折ピークの相対強度が、結晶形態および晶癖などの要因から生じる優先配向に起因して異なる可能性があることである。優先配向の効果が存在する場所では、ピーク強度が変化するが、多形体の特徴的ピーク位置は変化しない。例えば、米国薬局方３５−国民医薬品集３０章＜９４１＞粉末Ｘ線回折法（ＸＲＰＤ）による結晶性および部分的結晶性固体の特徴解析、公定、２０１２年１２月１日〜２０１３年５月１日を参照されたい。さらに、任意の所定の結晶形態に関して、ピーク角度位置が若干変化する場合があるということも結晶学技術分野では周知である。例えば、試料を解析する温度もしくは湿度の変動、試料変位、または内部標準の存在もしくは非存在に起因して、ピーク位置はシフト可能である。本件では、２θでの±０．２のピーク位置変動は、記載される結晶形の明白な同定を妨げることなく、これらの潜在的変動を考慮にいれることにする。結晶形態の確認は、区別可能な（°２θ単位での）ピーク、典型的にはより顕著なピークの任意の特有の組み合わせに基づいてなされ得る。周囲温度および相対湿度で得られる結晶形態回折パターンを、８．８５および２６．７７°２θでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整する。
【００８９】
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸形態Ｉの調製した試料は、ＣｕＫａ放射線を使用してＸＲＤパターンによって、以下の表５に記載される回折ピーク（２θ値）を有すると特徴付けられる。具体的には、パターンは、０．２°の回折角の許容度で４．９２、１３．３３、１８．４４、２０．２７および２３．３６からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて１７．７０におけるピークを含む。
【００９０】
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸形態Ｉの粉末Ｘ線回折ピーク
【００９１】
【表５】
2016539984.tif 000039
【００９２】
以下の化合物を本質的に代替調製実施例１について記載されているように調製する。反応物を室温にて２〜４時間撹拌する。生成物は、飽和クエン酸で酸性化したとき、またはＤＣＭで抽出したときに沈殿物として回収でき、濾過し、濃縮乾固する。
【００９３】
【表６】
2016539984.tif 000040
【００９４】
実施例６
（３Ｓ）−３−［４−［［２−［２，６−ジメチル−４−［３−（メチルスルホニル）プロポキシ］フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸
【化３３】
2016539984.tif 000041
ＥｔＯＨ（５ｍＬ）中の（Ｓ）−３−（４−｛２−［４−（３−メタンスルホニル−プロポキシ）−２，６−ジメチル−フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ｝−フェニル）−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．１４５ｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温にて５ＮのＮａＯＨ溶液（０．１４ｍＬ、０．７１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃にて３０分間加熱する。反応混合物を蒸発させ、残渣を水（５ｍＬ）に溶解し、エーテル（２×５ｍＬ）で洗浄し、０℃にてクエン酸水溶液（ｐＨ約６）で酸性化する。沈殿した固体を濾過し、乾燥させて、オフホワイトの固体（０．０７５ｇ、５５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９５】
実施例７
（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−シアノ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸
【化３４】
2016539984.tif 000042
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−シアノ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．１３０ｇ、０．２７９５ｍｍｏｌ）の溶液に、カリウムトリメチルシラノエート（０．１４３ｇ、１．１１８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて２時間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固し、残渣をｎ−ペンタンで洗浄し、水（５ｍＬ）に再溶解し、飽和クエン酸溶液（ｐＨ約５）で酸性にする。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、乾燥させてオフホワイトの固体（０．１１３ｇ、５６．５％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９６】
実施例８
（３Ｓ）−３−［４−［［２−（４−ジフルオロメトキシ）フェニル］−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸
【化３５】
2016539984.tif 000043
ＴＨＦ（８ｍＬ）および水（２ｍＬ）中の（Ｓ）−３−｛４−［２−（４−ジフルオロメトキシ−フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イルメトキシ］−フェニル｝−ヘキシ−４−イン酸エチルエステル（０．１５ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、３ＮのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（０．１ｍＬ、０．８９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて４８時間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固し、残渣をｎ−ペンタンで洗浄し、水（５ｍＬ）に再溶解し、飽和クエン酸溶液（ｐＨ約５）で酸性にする。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、乾燥させてオフホワイトの固体（０．８３ｇ、５９．２％）として標題化合物を得る。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ４７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９７】
ＧＰＲ−４０：情報
最近、Ｎａｇａｓｕｍｉによって報告されたインスリンＩＩプロモーターの制御下でヒトＧＰＲ−４０遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスを使用した研究の結果は、ＧＰＲ−４０が、インビボで、特にインスリン耐性の齧歯動物モデルにおいてＧＤＩＳおよび血漿グルコース値の調節において重要な役割を果たすことをさらに支持している。Ｎａｇａｓｕｍｉ  Ｋら、Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＧＰＲ−４０  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  β−ｃｅｌｌｓ  ａｕｇｍｅｎｔｓ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｉｃｅ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５８：１０６７−１０７６、２００９。Ｂｒｉｓｃｏｅ  ＣＰら、Ｔｈｅ  ｏｒｐｈａｎ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＧＰＲ−４０  ｉｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｅｄｉｕｍ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ  ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７８：１１３０３−１１３１１、２００３も参照のこと。これらの見解は、新規ＧＰＲ−４０調節化合物の開発が、Ｔ２Ｄの治療における使用のために特に望まれ得ることをさらに支持している。
【００９８】
アッセイ
カルシウム流出一次アッセイ
これらのアッセイは、リガンドがＧＰＲ−４０に結合し、活性化するときに生じる細胞内カルシウム濃度の増加を測定することによって化合物をスクリーニングするために使用し、これによりＧＰＲ−４０アゴニストの効力および有効性が実証される。３７℃および５％のＣＯ２にて、３：１の比で１０％のＦＢＳと８００μｇ／ｍｌのジェネティシンを追加したＦ１２培地を有するダルベッコ改変イーグル培地中に維持したヒトＧＰＲ−４０  ｃＤＮＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を研究のために利用する。アッセイ緩衝液（１×ＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩類溶液）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）中でＢＳＡを含まない０．１％の脂肪酸の存在下または不在下でＣａｌｃｉｕｍ  ４Ｄｙｅアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してアゴニストアッセイを実施する。蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）を使用して受容体活性化を細胞内カルシウムの増加として測定する。ベースラインに対する蛍光の最大変化を使用してアゴニスト反応を決定する。濃度対相対蛍光単位（ＲＦＵ）をプロットすることによってＥｘｃｅｌ  Ｆｉｔソフトウェア（バージョン４；ＩＤＢＳ）を使用して化合物のＥＣ５０値を計算する。有効性パーセントを、天然リガンド、リノール酸と比較して化合物によって示される最大反応に基づいて計算する。実施例１の試験化合物は、このアッセイにおいて試験したとき、１１９ｎＭのＥＣ５０（±２７．４、ｎ＝７）および７６％の有効性（±０．８、ｎ＝５）を有する。これらの結果は、ＧＰＲ−４０アゴニストとして実施例１の所望の効力および有効性をさらに実証する。（平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝標準誤差。）
【００９９】
本明細書に例示される化合物を本質的に上記のように試験し、カルシウム流出一次アッセイについて５００ｎＭ未満のＥＣ５０値および３５％超の有効性を示す。例示した化合物についてのこれらの結果は、ＧＰＲ−４０アゴニストについて所望の効力および有効性を実証する。
【０１００】
選択的アッセイ
ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）α、δおよびγ機能アッセイ
ＧＰＲ−４０はＰＰＡＲγに対するリガンドによって活性化することが知られているので、例示した化合物をＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδおよびＰＰＡＲγレポーターアッセイにおいて試験して、例示した化合物の選択性を決定する。アフリカミドリザルの腎組織に由来するＣＶ１細胞を、Ｆｕｇｅｎｅを使用して種々の受容体およびレポータープラスミドでトランスフェクトする。ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδアッセイについて、アデノウイルスの主要後期プロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流でクローニングした酵母転写タンパク質Ｇａｌ４反応エレメントの５つのタンデムコピーを含有するレポータープラスミドを、Ｇａｌ４  ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）およびＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲδリガンド結合ドメインのいずれかを含有するハイブリッドタンパク質を構成的に発現するシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）駆動プラスミドで一緒にトランスフェクトする。ＰＰＡＲγアッセイについて、両方、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって駆動されるＰＰＡＲγおよびＲＸＲαをコードするプラスミドを、ＴＫプロモーターおよび受容体反応エレメント（２×ＰＰＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡを含有するプラスミドで一緒にトランスフェクトする。細胞を、５％の活性炭処理した（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ＦＢＳおよび個々のアッセイについて特定のプラスミドを有するＤＭＥＭ培地入りのＴ２２５ｃｍ２細胞培養フラスコ中でトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、５％の活性炭処理したＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地入りの不透明な９６ウェルディッシュ（１５，０００細胞／ウェル）に播種し、４時間インキュベートし、半対数希釈率（ｈａｌｆ  ｌｏｇ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ）で０．１７ｎＭ〜１０μＭの試験化合物または参照化合物に曝露する。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解し、蛍光による受容体活性化の測定としてルシフェラーゼ活性を決定する。データを４パラメーターフィットロジスティックモデルに適合してＥＣ５０値を決定する。最大刺激パーセントを、１０μＭの適切なＰＰＡＲアゴニスト参照化合物で得た最大刺激に対して決定する。２０％未満の有効性を陰性とみなす。特定のＰＰＡＲ共トランスフェクション（ＣＴＦ）／上記の機能的アッセイにおいて最大１０μＭで試験したとき、ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδの機能的活性化は実施例１の化合物で検出されない。ＰＰＡＲγＣＴＦアッセイにおける実施例１の化合物についてのＥＣ５０は２．６μＭである。実施例１の化合物によるこのアッセイにおける有効性％は１７％であるので、化合物はＰＰＡＲγ活性について陰性であるとみなす。したがって、このアッセイは、実施例１の化合物がＰＰＡＲアゴニスト活性を所望のように回避することを支持する。
【０１０１】
ＧＰＲ−４０に対するインビトロ結合親和性
カスタム調製した放射性標識（５ｎＭ［３Ｈ］（ＴＡＫ−８７５））およびヒトＧＰＲ−４０（ｈＧＰＲ−４０）構築物を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞から調製した膜を用いて高速洗浄濾過を使用する放射性リガンド競合結合アッセイを実施して、例示した化合物についての平衡解離定数（Ｋｉ）を決定する。競合曲線を、化合物の濃度に対する特異的阻害パーセントとしてプロットし、様々な勾配で４パラメーター非線形回帰フィットを使用して分析する。チェン−プルソフの式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（Ｄ／Ｋｄ））（式中、ＩＣ５０は結合の５０％阻害を生じる化合物の濃度であり、Ｄはアッセイに使用される放射性リガンドの濃度であり、Ｋｄは飽和結合分析実験から決定される受容体および放射性リガンドについての平衡解離定数である（［３Ｈ］ＴＡＫ−８７５についてのＫｄ＝６．２））を使用してＫｉ値を計算する。Ｃｈｅｎｇ，Ｙ．およびＰｒｕｓｏｆｆ，Ｗ．Ｈ．（１９７３）  「Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  （Ｋｉ）  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｈｉｃｈ  ｃａｕｓｅｓ  ５０  ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  （ＩＣ５０）  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｒｅａｃｔｉｏｎ」、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２２（２３）：３０９９−３１０８を参照のこと。実施例１について、Ｋｉ＝１４．９ｎＭ±３．５、ｎ＝４。（平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝標準誤差）。これらのデータは、実施例１の化合物がヒトＧＰＲ−４０に対するリガンドであることを実証する。
【０１０２】
競合結合キネティクス−受容体滞留時間の決定
Ｍｏｔｕｌｓｋｙ，Ｈ．Ｊ．およびＬ．Ｃ．Ｍａｈａｎ（１９８４）、「Ｔｈｅ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｌａｗ  ｏｆ  ｍａｓｓ  ａｃｔｉｏｎ」  Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ  ２５（１）：１−９に記載される方法を使用して未標識化合物の会合および解離速度を定量する。ヒトＧＰＲ−４０膜を、１×Ｋｉ、３×Ｋｉまたは１０×Ｋｉの未標識の例示した化合物の非存在下または存在下で種々の時点にて６〜８ｎＭ［３Ｈ］のＧＰＲ−４０アゴニスト標準（ＴＡＫ−８７５）とインキュベートする。ガラス繊維フィルター上での高速洗浄濾過を使用して、結合した放射性リガンドおよび遊離放射性リガンドの分離を実施し、液体シンチレーションカウンタで計数する。Ｗｉｎｄｏｗｓ用のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６、バージョン６．０３、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡにおいてデータを競合結合モデルのキネティクスに適合することによって速度を計算する。実施例１は、３０．２分（±３．２、ｎ＝３）であるＧＰＲ−４０滞留時間、τを示し、このことは、このＧＰＲ−４０リガンドがインビボ反応に関連する受容体上で滞留時間を有することを示唆している。（平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝標準誤差。）
【０１０３】
ベータ−アレスチン動員を決定するために１％のＦＢＳを用いたヒトおよびマウスベータ−アレスチンアゴニストアッセイ：
ヒト胚腎臓（ｈＥＫ２９３）−ｈＦＦＡＲ１細胞はＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（商標）から購入する。ｍＦＦＡＲ１を発現するヒト骨肉腫（Ｕ２ＯＳ）細胞はＤｉｓｃｏｖｅＲＸ（商標）により開発される。これらの細胞は、Ｐｒｏｌｉｎｋ（商標）（ＰＫ）標識ＧＰＲ−４０およびＥｎｚｙｍｅ  Ａｃｃｅｐｔｏｒ（商標）標識ベータ−アレスチン融合タンパク質を同時発現する。ＧＰＲ−４０の活性化がベータ−アレスチン動員を刺激する場合、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ  ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（商標）検出キットを使用して化学発光信号を生成するＢ−ｇａｌ酵素を形成する、ベータガラクトシダーゼ（Ｂ−ｇａｌ）酵素断片の相補性が強制される。細胞を、１％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を含有する培地入りの３８４ウェルプレート中で５，０００細胞／ウェルにて一晩インキュベートする。ＤＭＳＯ（２０の濃度を生成するために２×希釈）中で連続希釈した化合物を、１％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を含有する培地中で逓減希釈し、１００μＭの最終最高濃度で開始して細胞に加える。化合物の添加後、細胞を５％ＣＯ２インキュベータ中で３７℃にて９０分間インキュベートし、ＤｉｓｃｏｖｅＲＸ（商標）キット検出試薬を加える。室温にて１時間のインキュベーション後、化学発光信号の測定をＥｎｖｉｓｉｏｎ（商標）リーダーで確認する。データを４パラメーター−フィットロジスティックに適合してＥＣ５０値を決定し、活性％を、１μＭにて内部標準ＧＰＲ−４０アゴニストに対する最大反応に対して測定する。ｈＧＰＲ−４０  ｂ−アレスチンについて、実施例１は、１２８（±１０．９、ｎ＝４）の最大刺激％（ＦＡ）で４４．８ｎＭ（±１７．９、ｎ＝４）のＥＣ５０、ｍＧＰＲ−４０  ｂ−アレスチンについて、１５３（±５．６４、ｎ＝７）の最大刺激％（ＦＡ）で３．６３ｎＭ（±０．８１、ｎ＝７）のＥＣ５０を有する。（平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝標準誤差。）これらのデータは、実施例１の化合物がベータアレスチン経路を通して信号を送ることができることを示す。
【０１０４】
Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａ／ｆａラットにおける慢性経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）
１．０、３．０および１０ｍｇ／ｋｇにて経口投与した例示した化合物の１および２１日後、Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａ／ｆａラット、インスリン抵抗の齧歯動物においてＯＧＴＴを実施する。１ｍｇ／ｋｇにて標準的なＧＰＲ−４０アゴニストは陽性対照として役立つ。ＯＧＴＴを、グルコース投与後１０、２０、４０、６０および１２０分にてグルコースおよびインスリン濃度の決定のために採取した血液試料で化合物投与の１時間後に実施する。１および２１日目に、グルコース低下についてのＡＵＣは、試験した実施例１の化合物の全ての用量（１、３および１０ｍｇ／ｋｇ）および陽性対照について統計的に有意（ｐ＜０．０５）である。インスリンＡＵＣは、ＯＧＴＴの間、用量依存的上昇を実証するが、これらの値は統計的に有意ではない。体重および食糧消費は研究の間の任意の処置に起因して変化しない。１日目に実施例１の化合物を使用したグルコース低下についてのＥＤ９０は４．１ｍｇ／ｋｇであり、２１日目に５．０ｍｇ／ｋｇである。これらの見解は、ＧＰＲ−４０が実施例１の化合物による経口投与の２１日後に脱感作しないことを示唆している。
【０１０５】
インビボ有効性：腹腔内グルコース負荷試験（ＩＰＧＴＴ）
インビボで抗糖尿病効果、すなわち血漿グルコース濃度の低下を生じるＧＰＲ−４０を活性化する実施例１の化合物の能力を試験するために、腹腔内グルコース負荷試験（ｉｐＧＴＴ）研究を完了し、以下の表７に実施例１の化合物についてのデータを示す。
【０１０６】
オスのＢａｌｂ／ｃ（Ａｌｂｉｎｏマウス）マウス（８〜９週齢）を単一に収容し、通常の齧歯動物の食餌を与え、水を自由に取らせる。動物の体重を計り、体重により無作為化し、それらの毎日の体重を記録する。研究の前の夜に、動物を一晩絶食させる。午前中に、グルコース負荷試験（グルコース２ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の６０分前に実施例１の化合物またはビヒクルのみを動物に経口投与する。血中グルコース濃度を、グルコースチャレンジの０、３、７、１５、３０および６０分後に採取した尾の血液から決定する。ｔ＝０からｔ＝６０分の血中グルコース可動プロファイルを使用して、各処置についての曲線下面積（ＡＵＣ）を積分する。グルコースの低下のパーセントをビヒクル群のＡＵＣに対して化合物のＡＵＣデータから計算する。実施例１の化合物を０．１、０．３、１．０、３．０、１０または３０ｍｇ／ｋｇにて経口投与し、陽性対照（３−［４−（２−メチル−ベンジルオキシ）−フェニル］−ヘキシ−４−イン酸）を１０ｍｇ／ｋｇにて投与する。実施例１の化合物または陽性対照の濃度のどれも、ＧＴＴの間、３または７分の時点でグルコース濃度を有意に低下させなかった。グルコース濃度は１５分の時点にて３０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物、３０分の時点にて１．０、１０および３０ｍｇ／ｋｇ用量および陽性対照、６０分の時点にて３．０、１０および３０ｍｇ／ｋｇ用量と陽性対照で有意に低下した。グルコース低下についてＡＵＣに基づいて実施例１の化合物についてのＥＤ５０は７．６ｍｇ／ｋｇである。この研究からの結果は、実施例１によるＧＰＲ−４０の活性化がインビボでの抗糖尿病効果をもたらすことを実証する。
【０１０７】
ｉｐＧＴＴの間、ビヒクルと比較して種々の処置群についての血糖に対する効果、統計的有意性
【０１０８】
【表７】
2016539984.tif 000044
【０１０９】
本発明の例示した化合物は、錠剤、固体またはゲル充填カプセル、粉末、懸濁液または液剤などのＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．１９９０に見出されるものなどの当該分野において公知の許容されている実務に従って医薬組成物に容易に製剤化され得る。組成物はまた、１種以上の薬学的に許容可能な担体、賦形剤および希釈剤を含んでもよい。
【０１１０】
好ましい医薬組成物は経口投与のための錠剤またはカプセル剤として製剤化される。錠剤またはカプセル剤は、糖尿病、特に２型糖尿病を治療するのに有効な量で本発明の化合物を含んでもよい。
【０１１１】
医薬組成物は、糖尿病、より特には２型糖尿病を治療するのに有効な量で患者に投与される。患者を治療するのに有効な適切な量または用量は医療従事者によって決定され得る。
【図１】
2016539984.tif 000054
【図２】
2016539984.tif 000055
【手続補正書】
【提出日】平成28年6月14日(2016.6.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2016539984.tif 000056
（式中、
Ｒ１は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）。
【請求項２】
前記化合物が、
【化２】
2016539984.tif 000057
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がＣＨ３である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、
【化３】
2016539984.tif 000058
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
前記化合物が、（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１０】
以下の式の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化４】
2016539984.tif 000059
（式中、
Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ５は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）。
【請求項１１】
前記化合物が、
【化５】
2016539984.tif 000060
である、請求項１０に記載の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
前記化合物が、
【化６】
2016539984.tif 000061
（式中、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルから選択される）
である、請求項１０に記載の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
医薬組成物は、糖尿病、より特には２型糖尿病を治療するのに有効な量で患者に投与される。患者を治療するのに有効な適切な量または用量は医療従事者によって決定され得る。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  以下の式の化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化３６】
2016539984.tif 000062
（式中、
Ｒ１は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）。
［２］  前記化合物が、
【化３７】
2016539984.tif 000063
である、［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［３］  Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される、［１］または［２］に記載の化合物。
［４］  Ｒ１がＨである、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［５］  Ｒ２がＨである、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物。
［６］  Ｒ２がＣＨ３である、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物。
［７］  前記化合物が、
【化３８】
2016539984.tif 000064
である、［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［８］  前記化合物が、（３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸である、［７］に記載の化合物。
［９］  ［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤の少なくとも１つとを含む、医薬組成物。
［１０］  有効量の［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、それを必要とする哺乳動物における糖尿病を治療する方法。
［１１］  療法に使用するための、［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［１２］  ２型糖尿病の治療に使用するための、［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［１３］  以下の式の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化３９】
2016539984.tif 000065
（式中、
Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、−Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ５は、ＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（ＣＨ２）３ＳＯ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＣＮおよびＯＣＦ２からなる群から選択される）。
［１４］  前記化合物が、
【化４０】
2016539984.tif 000066
である、［１３］に記載の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［１５］  Ｒが、Ｃ１−４アルキル、フェニルおよびベンジルからなる群から選択される、［１３］または［１４］に記載の中間体化合物。
［１６］  Ｒが、メチルおよびエチルからなる群から選択される、［１３］〜［１５］のいずれかに記載の中間体化合物。
［１７］  前記化合物が、
【化４１】
2016539984.tif 000067
（式中、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルから選択される）
である、［１３］に記載の中間体化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［１８］  （３Ｓ）−３−［４−［［２−（２，６−ジメチルフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−６−イル］メトキシ］フェニル］ヘキシ−４−イン酸またはその薬学的に許容可能な塩を調製する方法であって、
以下の式の中間体化合物
【化４２】
2016539984.tif 000068
（式中、Ｒは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルおよびＣ１−５アルキルフェニルからなる群から選択される）
を脱エステル化して、以下の式の化合物
【化４３】
2016539984.tif 000069
またはその薬学的に許容可能な塩を得ることを含む、方法。
【国際調査報告】
2016539984.tif 000070
2016539984.tif 000071