(57)【要約】  本発明は、癌を処置するのに用いるための、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートであって、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で投与されるコンジュゲートに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置するのに用いるための、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートであって、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される前記コンジュゲート。
【請求項２】
前記細胞結合剤はＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメインに結合する、請求項１に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項３】
前記細胞結合剤は、ＭＵＣ１糖タンパク質上のＣＡ６グリコトープを認識し、結合する、請求項１または２に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項４】
前記細胞結合剤は、抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項５】
前記抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１つまたはそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項４に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項６】
前記抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントは、配列番号１の配列のＣＤＲ１−Ｈ、配列番号２の配列のＣＤＲ２−Ｈ、配列番号３の配列のＣＤＲ３−Ｈ、配列番号４の配列のＣＤＲ１−Ｌ、配列番号５の配列のＣＤＲ２−Ｌ、および配列番号６の配列のＣＤＲ３−Ｌを含む、請求項５に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項７】
前記抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントは、配列番号７の配列の重鎖可変領域、またはそれと少なくとも８５％同一である配列を含む、請求項５または６に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項８】
前記抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントは、配列番号８の配列の軽鎖可変領域、またはそれと少なくとも８５％同一である配列を含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項９】
エピトープ結合性フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ、およびＶＨＨからなる群から選択される、請求項４〜８のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１０】
前記細胞結合剤は、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖、またはそれらと少なくとも８５％同一である配列を含むモノクローナル抗体である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの細胞毒性剤は、メイタンシノイド、小型薬物、トメイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、プロドラッグ、タキソイド、ＣＣ−１０６５、およびＣＣ−１０６５類似体からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの細胞毒性剤は式（Ｉ）
【化１】
2016525560.tif 000038
のメイタンシンＤＭ１である、請求項１１に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの細胞毒性剤は式（ＩＩ）
【化２】
2016525560.tif 000039
のメイタンシンＤＭ４である、請求項１１に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１４】
細胞結合剤は、切断可能または切断不可能なリンカーによって、少なくとも１つの細胞毒性剤に共有結合で連結している、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１５】
前記リンカーは、Ｎ−スクシンイミジルピリジルジチオブチレート（ＳＰＤＢ）、４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）−２−スルホ−酪酸（スルホ−ＳＰＤＢ）、およびスクシンイミジル（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）からなる群から選択される、請求項１４に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１６】
前記リンカーはＮ−スクシンイミジルピリジルジチオブチレート（ＳＰＤＢ）であり、前記細胞毒性剤はＤＭ４である、請求項１４に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１７】
前記リンカーは４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）−２−スルホ−酪酸（スルホ−ＳＰＤＢ）であり、前記細胞毒性剤はＤＭ４である、請求項１４に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１８】
３から４までの範囲の薬物対抗体比（ＤＡＲ）によって特徴付けられ、ＤＡＲは細胞毒性剤濃度（ＣＤ）の細胞結合剤濃度（ＣＡ）に対する比から算出され；
ＤＡＲ＝ｃＤ／ｃＡ
ここで、
ｃＤ＝［（εＡ２８０×Ａ２５２）−（εＡ２５２×Ａ２８０）］／［（εＤ２５２×εＡ２８０）−（εＡ２５２×εＤ２８０）］
ｃＡ＝［Ａ２８０−（ｃＤ×εＤ２８０）］／εＡ２８０
であり、
εＤ２５２およびεＤ２８０はそれぞれ、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍでの細胞毒性剤のモル吸光係数であり、
εＡ２５２およびεＡ２８０はそれぞれ、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍでの細胞結合剤のモル吸光係数であり、
Ａ２５２およびＡ２８０はそれぞれ、古典的な分光光度計装置を用いて測定した、２５２ｎｍ（Ａ２５２）および２８０ｎｍ（Ａ２８０）でのコンジュゲートに対する吸光度である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項１９】
１５０ｍｇ／ｍ２から２４０ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２０】
１９０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２１】
コンジュゲートの投与は３週間ごとに新たなサイクルとして反復される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２２】
サイクルの中央数は２である、請求項２１に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２３】
静脈内投与される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２４】
１ｍＬ／分の速度で３０分間投与され、次いで過敏反応の非存在下で最大速度２ｍＬ／分に増大される、請求項２３に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２５】
癌は固形腫瘍である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２６】
癌はＣＡ６陽性腫瘍である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２７】
癌は乳癌および卵巣癌からなる群から選択される、請求項２５または２６に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２８】
癌は乳癌である、請求項２７に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項２９】
乳癌はトリプルネガティブ乳癌であり、エストロゲン、プロゲステロン、またはＨＥＲ２に対する受容体が陽性ではない、請求項２８に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項３０】
処置される患者が、オキサリプラチン−、シスプラチン−、カルボプラチン−、および／またはパクリタキセル−、ドセタキセル−ベースのレジメンで以前に処置されている、請求項１〜２９のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項３１】
角膜炎予防または治療用眼組成物と併用される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のその使用のためのコンジュゲート。
【請求項３２】
乳癌および卵巣癌からなる群から選択される癌を処置するのに用いるための、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲート。
【請求項３３】
患者における癌を処置するための方法であって、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートを、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量でそれを必要とする患者に投与することを含む前記方法。
【請求項３４】
製造品であって、
ａ）包装材料；
ｂ）（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲート；および
ｃ）少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で前記コンジュゲートを投与することを指示する、前記包装材料内に含まれているラベルまたは添付文書
を含む前記製造品。
【請求項３５】
製造品であって、
ａ）包装材料；
ｂ）（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲート；および
ｃ）乳癌および卵巣癌からなる群から選択される癌を処置するのに前記コンジュゲートを投与することを指示する、前記包装材料内に含まれているラベルまたは添付文書
を含む前記製造品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌を処置するのに用いるための、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートであって、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で投与されるコンジュゲートに関する。
【背景技術】
【０００２】
周囲の非癌性の細胞および組織を害せずに標的の癌細胞を特異的に破壊する、抗癌治療薬剤を開発しようとする試みは多く存在する。このような治療薬剤には、ヒト患者における癌の処置を大いに改善する潜在性がある。
【０００３】
有望な一取組みは、モノクローナル抗体などの細胞結合剤を、細胞毒性薬と連結することであった。細胞結合剤の選択に応じて、これら細胞毒性コンジュゲートを、このような細胞の表面上に発現される分子の発現プロファイルに基づいて、特定のタイプの癌細胞だけを認識し、結合するようにデザインすることができる。
【０００４】
特許文献１は、ヒトの漿液の卵巣癌腫によって発現される抗原であるＣＡ６と反応する、マウスモノクローナル抗体ＤＳ６を記載している。このマウスモノクローナル抗体ＤＳ６はしたがって、癌細胞を標的化することができる。
【０００５】
ＣＡ６抗原は、特許文献２において、癌細胞によって発現される、ＭＵＣ１ムチン受容体上のシアログリコトープとしてより具体的に特徴付けられた。この特許は、抗体、特に、ＭＵＣ１ムチン受容体のこのＣＡ６シアログリコトープを認識することができるヒト化ｈＤＳ６抗体などのヒト化抗体も提供した。
【０００６】
メトトレキセート、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、およびクロラムブシルなどの細胞毒性薬は、様々なマウスモノクローナル抗体に連結している、細胞毒性コンジュゲートにおいて用いられている。いくつかの場合では、薬物分子は、抗体分子に、血清アルブミンなどの中間の担体分子を介して連結していた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際特許出願第ＷＯ０２／１６４０１号
【特許文献２】米国特許第７，８３４，１５５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特定のタイプの癌細胞を特異的に認識する細胞毒性コンジュゲートの開発は、癌を有する患者を処置するのに用いる方法を持続的に改善する上で重要である。
【０００９】
この目的で、本発明は、抗体などの細胞結合剤、および癌細胞の表面上に発現された分子／受容体を特異的に標的化する細胞毒性剤を含むコンジュゲートの開発を目指すものである。
【００１０】
より具体的には、本発明は、癌性細胞によって発現されるＭｕｃ１ムチン受容体のＣＡ６シアログリコトープを認識し、細胞毒性剤の状況においてＣＡ６グリコトープを発現する細胞の成長を阻害するのに用いることができる抗体、好ましくはヒト化抗体を含むコンジュゲートを目指すものである。これらのコンジュゲートの一つがＳＡＲ５６６６５８である。
【００１１】
ＳＡＲ５６６６５８は、細胞毒性のメイタンシノイドＤＭ４にコンジュゲートしている腫瘍関連シアログリコトープＣＡ６に対するヒト化モノクローナル抗体（ｈｕＤＳ６）からなるイムノコンジュゲートである。
【００１２】
より詳しくは、本発明は、癌に罹患している患者、特にＣＡ６陽性の癌、特に乳癌または卵巣癌に罹患している患者の処置を可能にする認容性の良好な抗癌処置を得るために、適切な用量の投与およびレジメンを決定することが必要であった、Ｍｕｃ１ムチン受容体のＣＡ６シアログリコトープを認識する細胞毒性コンジュゲートを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、よって、癌を処置するのに用いるための、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートであって、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で投与されるコンジュゲートに関する。
【００１４】
本発明は、乳癌および卵巣癌からなる群から選択される癌を処置するのに用いるための、（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートにも関する。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態において、細胞結合剤はヒト化抗ＣＡ６抗体であり、細胞毒性剤はメイタンシノイドである。
【００１６】
さらなる実施形態において、細胞結合剤は、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化抗ＣＡ６抗体ｈｕＤＳ６であり、細胞毒性剤は、ＤＭ１またはＤＭ４などのメイタンシノイド化合物である。
【００１７】
特定の実施形態において、本発明の文脈において用いるコンジュゲートは、以下の式（ＸＸＩ）の化合物ＳＡＲ５６６６５８である。
【化１】
2016525560.tif 000002
【００１８】
本発明は：
ａ）包装材料；
ｂ）（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲート；より詳しくは式（ＸＸＩ）の化合物ＳＡＲ５６６６５８、および
ｃ）少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で前記コンジュゲートを投与することを指示する、前記包装材料内に含まれているラベルまたは添付文書
を含む製造品にも関する。
【００１９】
本発明は：
ａ）包装材料；
ｂ）（ｉ）ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲート；より詳しくは式（ＸＸＩ）の化合物ＳＡＲ５６６６５８、および
ｃ）前記コンジュゲートを、乳癌および卵巣癌からなる群から選択される癌を処置するために投与することを指示する、前記包装材料内に含まれているラベルまたは添付文書
を含む製造品にも関する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本発明の文脈において、「ＭＵＣ１糖タンパク質」という用語は、ヒトにおけるＭＵＣ１遺伝子によってコードされるムチンを指す。ＭＵＣ１は、その細胞外ドメインの広範なＯ結合型グリコシル化を有する糖タンパク質である。ＭＵＣ１は１２０〜２２５ｋＤａのコアタンパク質塊を有し、これがグリコシル化で２５０〜５００ｋＤａに増大する。これが細胞の表面を超えて２００〜５００ｎｍ伸長する。タンパク質は、膜貫通ドメインによって、多くの上皮の尖端表面に繋留されている。膜貫通ドメインを超えて、大型の細胞外ドメインを放出するための切断部位を含むＳＥＡドメインがある。細胞外ドメインは、アミノ酸２０個の可変数タンデム反復（ＶＮＴＲ）ドメインを含み、反復の数は、異なる個体で２０から１２０まで変動する。これらの反復は、セリン、スレオニン、およびプロリン残基に富み、そのため重いＯ−グリコシル化が可能になる。
【００２１】
本発明の文脈において、「ＣＡ６グリコトープ」または「ＣＡ６シアログリコトープ」という用語は、Ｋｅａｒｓｅら（２０００年）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．、８８巻、８６６〜８７２頁によってシアル酸依存的である炭水化物エピトープを保有すると同定された、ＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメイン上に存在する腫瘍関連抗原を指す。
【００２２】
本明細書で用いる「基準の配列と少なくとも８５％同一の」配列は、その全長上に、基準の配列の全長と、８５％、またはそれ以上、特に９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列である。
【００２３】
「配列同一性」のパーセント値は、比較ウインドウにわたって最適にアラインされている２つの配列を比較することによって決定してもよく、この場合、比較ウインドウにおけるポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適のアラインメントに対する基準配列（付加もしくは欠失を含まない）に比べて付加または欠失（すなわちギャップ）を含んでいてもよい。パーセント値は、両配列において同一のアミノ酸残基が生じる位置の数を決定してマッチする位置の数を得、マッチする位置の数を比較のウインドウにおける位置の合計数によって除し、結果に１００を乗じて配列同一性のパーセント値を得ることにより算出する。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８巻、４４３頁のアルゴリズムを用いて、包括的なペアワイズアラインメントによって行う。配列同一性のパーセント値は、例えば、Ｎｅｅｄｌｅプログラムを用いて、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリクス、および以下の、ギャップ開始＝１０、ギャップ伸長＝０．５のパラメータで容易に決定することができる。
【００２４】
本発明の文脈において、「保存的なアミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の化学的性質（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖基を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。一般的に、保存的なアミノ酸置換は、タンパク質の機能的な性質を実質的に変更するものではない。同様の化学的性質を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例には、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが含まれる。保存的なアミノ酸置換の群には：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン−トリプトファン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタメート−アスパルテート、およびアスパラギン−グルタミンがある。
【００２５】
本明細書で用いる「対象」という用語は、齧歯動物、ネコ、イヌ、および霊長動物などの哺乳動物を意味する。特に、本発明による対象はヒトである。
【００２６】
本明細書で用いる「コンジュゲート」、「イムノコンジュゲート」、「抗体−薬物コンジュゲート」、または「ＡＤＣ」は、同じ意味を有し、交換可能である。
【００２７】
本出願を通して、「含む」という用語は、具体的に言及する特徴、および場合による、付加的な、不特定の特徴も、全て包含すると理解されたい。本明細書で用いる「含む」という用語の使用も、具体的に言及する特徴の他に特徴が存在しない（すなわち、「からなる」）実施形態を開示するものである。
【００２８】
細胞結合剤
本明細書で用いる「細胞結合剤」という用語は、細胞表面上のヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質を特異的に認識し、結合する薬剤を指す。特定の実施形態において、細胞結合剤は、本明細書上記の「定義」のセクションにおいて定義したＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメインに結合し、より詳しくは特異的に結合する。別の実施形態において、細胞結合剤は、本明細書上記の「定義」のセクションにおいて定義したＭＵＣ１糖タンパク質上のＣＡ６グリコトープを認識し、結合する。
【００２９】
一実施形態において、細胞結合剤は、ヒトＭＵＣ１糖タンパク質、特にＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメイン、より詳しくはＭＵＣ１糖タンパク質上のＣＡ６グリコトープを特異的に認識し、そのためコンジュゲートは標的化の様式において作用できるようになり、非特異性の結合に起因する副作用は殆どない。
【００３０】
別の実施形態において、本発明の細胞結合剤はまた、ヒトＭＵＣ１糖タンパク質、特にＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメイン、より詳しくはＭＵＣ１糖タンパク質上のＣＡ６グリコトープを特異的に認識し、そのためコンジュゲートは、コンジュゲートの細胞毒性剤部分が細胞に対して作用できるのに十分な期間、および／またはコンジュゲートが細胞によって内部移行するのに十分な期間、標的細胞と接触する。
【００３１】
本発明のコンジュゲートの、治療剤としての有効性は、ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質、特にＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメイン、より詳しくはＭＵＣ１糖タンパク質上のＣＡ６グリコトープに結合する好適な細胞結合剤を注意深く選択することに依存する。細胞結合剤は、細胞結合剤がヒトＭＵＣ１糖タンパク質に、特にＭＵＣ１糖タンパク質の細胞外ドメインに、より詳しくはＭＵＣ１糖タンパク質上のＣＡ６グリコトープに結合するのであれば、現在知られているあらゆる種類のものでも、または知られるようになったものでもよく、ペプチドおよび非ペプチドが含まれる。一般的に、これらは抗体（特にモノクローナル抗体）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、栄養素輸送分子（例えば、トランスフェリン）、またはあらゆる他の細胞結合性分子物質であってよい。
【００３２】
用いることができる細胞結合剤のより具体的な例として：
−  ポリクローナル抗体；
−  モノクローナル抗体；
−  抗体のエピトープ結合性フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖ
が含まれる。
【００３３】
好適な細胞結合剤の選択は、標的化しようとする特定の細胞集団に依存する選択の問題であるが、一般的に、好適なものが入手可能であり、または調製することができるのであるならば、抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントが好ましく、モノクローナル抗体がより好ましい。
【００３４】
「抗体」は、２本の重鎖が相互にジスルフィド結合によって連結し、各重鎖が軽鎖に対してジスルフィド結合によって連結している、天然の、または慣例的な抗体であってよい。ラムダ（λ）およびカッパ（κ）の２タイプの軽鎖が存在する。５つの主な重鎖のクラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥが存在し、これらは抗体分子の機能的活性を決定する。各鎖は、別個の配列のドメインを含む。軽鎖は、可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）の２ドメインまたは領域を含む。重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）および３つの定常ドメイン（集合的にＣＨと呼ぶ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）の４ドメインを含む。軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）の可変ドメインは、抗原に対する結合の認識および特異性を決定する。軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ）の定常領域ドメインは、抗体鎖の会合、分泌、経胎盤の移動性、補体結合、およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）に対する結合などの、重要な生物学的性質を付与する。Ｆｖフラグメントは、免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端部分であり、１本の軽鎖および１本の重鎖の可変部分からなる。抗体の特異性は、抗体の結合性の部位と抗原性決定基との間の構造的な相補性にある。抗体の結合性の部位は、主に高頻度可変性の、または相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基から作り上げられている。時折、非高頻度可変性の、またはフレームワーク領域（ＦＲ）からの残基がドメイン構造全体に、ゆえに結合部位に影響を及ぼす。
【００３５】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、天然の免疫グロブリン結合部位の自然のＦｖ領域の結合親和性および特異性を一緒に定義するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖および重鎖は、それぞれＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌ、およびＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈと呼ぶ各々３つのＣＤＲを有する。したがって、慣例的な抗体の抗原結合部位は、重鎖および軽鎖の各々Ｖ領域からＣＤＲのセットを含む、６つのＣＤＲを含む。
【００３６】
「フレームワーク領域」（ＦＲ）は、ＣＤＲ間に挿入されるアミノ酸配列、すなわち、単一の種における異なる免疫グロブリン間に比較的保存されている免疫グロブリンの軽鎖および重鎖の可変領域のこれらの部分を指す。免疫グロブリンの軽鎖および重鎖は、それぞれＦＲ１−Ｌ、ＦＲ２−Ｌ、ＦＲ３−Ｌ、ＦＲ４−Ｌ、およびＦＲ１−Ｈ、ＦＲ２−Ｈ、ＦＲ３−Ｈ、ＦＲ４−Ｈと呼ぶ、各々４つのＦＲを有する。
【００３７】
本明細書で用いる「ヒトフレームワーク領域」は、天然に存在するヒト抗体のフレームワーク領域と実質的に同一である（約８５％、またはそれ以上、特に９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）フレームワーク領域である。
【００３８】
本発明の文脈において、免疫グロブリン軽鎖または重鎖におけるＣＤＲ／ＦＲの定義は、ＩＭＧＴ定義に基づいて決定しなければならない（Ｌｅｆｒａｎｃら（２００３年）Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７巻（１）、５５〜７７頁；ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）。
【００３９】
本明細書で用いる「抗体」という用語は、慣例的な抗体およびそのフラグメント、ならびに単一ドメイン抗体およびそのフラグメント、特に単一ドメイン抗体の可変重鎖、ならびにキメラの、ヒト化の、二重特異的な、または多特異的な抗体を意味する。
【００４０】
本明細書で用いる抗体または免疫グロブリンは「単一ドメイン抗体」も含み、「単一ドメイン抗体」は、より最近記載されており、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体である。単一ドメイン抗体の例には、重鎖抗体、軽鎖を天然に欠く抗体、慣例的な四本鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された単一ドメイン抗体が含まれる。単一ドメイン抗体は、それだけには限定されないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含むあらゆる種に由来してもよい。単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られている、天然に存在する単一ドメイン抗体であってよい。特に、ラクダ科の種、例えば、ラクダ、ヒトコブラクダ、ラマ、アルパカ、およびグアナコは、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体を生成する。ラクダ科の動物の重鎖抗体もＣＨ１ドメインを欠く。
【００４１】
軽鎖を欠くこれらの単一ドメイン抗体の可変重鎖は、当技術分野において「ＶＨＨ」または「ナノボディ」として知られている。慣例的なＶＨドメイン同様、ＶＨＨは４つのＦＲおよび３つのＣＤＲを含む。ナノボディは、慣例的な抗体を凌ぐ利点を有し：これらはＩｇＧ分子よりも約１０倍小型であり、その結果適切にフォールディングされた機能的なナノボディは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現によって生成することができ、高収率を実現する。さらに、ナノボディは、非常に安定であり、プロテアーゼの作用に抵抗性である。ナノボディの性質および生成は、ＨａｒｍｓｅｎおよびＤｅ  Ｈａａｒｄ（ＨａｒｍｓｅｎおよびＤｅ  Ｈａａｒｄ（２００７年）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、７７巻、１３〜２２頁）によって概説されている。
【００４２】
本明細書で用いる「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」という用語は、特異的な抗原に対して向けられている単一のアミノ酸組成の抗体分子を指し、あらゆる特定の方法による抗体の生成を必要としないと解釈されたい。モノクローナル抗体は、Ｂ細胞またはハイブリドーマの単一のクローンによって生成することができるが、組換えでもよく、すなわちタンパク質工学によって生成することもできる。
【００４３】
「キメラ抗体」という用語は、その最も広範な意味において、１つの抗体からの１つまたはそれ以上の領域（複数可）、および１つまたはそれ以上の他の抗体（複数可）からの１つまたはそれ以上の領域を含む、操作された抗体を指す。特に、キメラ抗体は、別の抗体、特にヒト抗体のＣＨドメインおよびＣＬドメインと会合している、非ヒト動物に由来する抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。非ヒト動物として、マウス、ラット、ハムスター、ウサギなどのあらゆる動物を用いることができる。キメラ抗体はまた、少なくとも２つの異なる抗原に対して特異性を有する多特異的抗体も意味し得る。一実施形態において、キメラ抗体は、マウス起源の可変ドメイン、およびヒト起源の定常ドメインを有する。
【００４４】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒトにおける免疫応答を回避し、または最小にするために、最初は完全にまたは部分的に非ヒト起源であり、特に、重鎖および軽鎖のフレームワーク領域における、ある種のアミノ酸を置き換えるように修飾されている抗体を指す。ヒト化抗体の定常ドメインは、殆どの場合、ヒトＣＨおよびＣＬドメインである。一実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト起源の定常ドメインを有する。
【００４５】
（従来の）抗体の「フラグメント」は、インタクトな抗体の部分、特に、インタクトな抗体の抗原結合性領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、抗体フラグメントから形成された、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ、二重特異性、および他特異的抗体が含まれる。慣例的な抗体のフラグメントは、重鎖抗体またはＶＨＨなどの単一ドメイン抗体であってもよい。
【００４６】
「Ｆａｂ」という用語は、分子量約５００００Ｄａおよび抗原結合性活性を有する抗体フラグメントを意味し、ＩｇＧをプロテアーゼ、パパインで処理することによって得られるフラグメントの中で、Ｈ鎖のＮ末端側の約半分およびＬ鎖全体が、ジスルフィド結合を介して一緒に結合している。
【００４７】
「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、分子量約１０００００Ｄａおよび抗原結合性活性を有する抗体フラグメントを意味し、ＩｇＧをプロテアーゼ、ペプシンで処理することによって得られるフラグメントの中で、ヒンジ領域のジスルフィド結合によって結合しているＦａｂよりもわずかに大型である。
【００４８】
「Ｆａｂ」という用語は、分子量約５００００Ｄａおよび抗原結合性活性を有する抗体フラグメントを指し、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することにより得られる。
【００４９】
単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドは、共有結合で連結しているＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体であり、ペプチドをコードするリンカーによって連結している遺伝子をコードするＶＨおよびＶＬを含む遺伝子融合から、通常発現される。本発明のヒトｓｃＦｖフラグメントは、好適な立体配置において、特に、遺伝子組み換え技術を用いることにより保持されるＣＤＲを含む。二価および多価の抗体フラグメントは、一価のｓｃＦｖの会合によって自発的に形成することができるか、または一価のｓｃＦｖを、二価のｓｃ（Ｆｖ）２などのペプチドリンカーによってカップリングすることにより産生することができるかのいずれかである。
【００５０】
「ｄｓＦｖ」は、ジスルフィド結合によって安定化されているＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。
【００５１】
「（ｄｓＦｖ）２」は、ペプチドリンカーによってカップリングされている２つのｄｓＦｖを意味する。
【００５２】
「二重特異性抗体」または「ＢｓＡｂ」という用語は、単一の分子内で２つの抗体の抗原結合性部位を組み合わせる抗体を意味する。よって、ＢｓＡｂは、２つの異なる抗原を同時に結合することができる。遺伝子操作を、増大性の頻度で用いて、ＥＰ  ２  ０５０  ７６４  Ａ１などに記載されている、所望のセットの結合の性質およびエフェクター機能を有する抗体または抗体誘導体をデザインし、修飾し、生成する。
【００５３】
「多特異的抗体」という用語は、単一分子内で２つまたはそれ以上の抗体の抗原結合性部位を組み合わせる抗体を意味する。
【００５４】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合性部位を有する小型の抗体フラグメントを指し、これらのフラグメントは、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続されている重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）に含む。非常に短いため同じ鎖上の２つのドメイン間に対形成させることができないリンカーを用いることにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインとの対形成を強いられ、２つの抗原結合性部位を作り出す。
【００５５】
特定の実施形態において、エピトープ結合性フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ、およびＶＨＨからなる群から選択される。
【００５６】
特定の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、ＳＹＮＭＨ（配列番号１）、ＹＩＹＰＧＮＧＡＴＮＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）、ＧＤＳＶＰＦＡＹ（配列番号３）、ＳＡＨＳＳＶＳＦＭＨ（配列番号４）、ＳＴＳＳＬＡＳ（配列番号５）およびＱＱＲＳＳＦＰＬＴ（配列番号６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１つまたはそれ以上のＣＤＲ（複数可）を含む、抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを含む。
【００５７】
さらなる実施形態において、本発明のコンジュゲートは、配列番号１の配列のＣＤＲ１−Ｈ、配列番号２の配列のＣＤＲ２−Ｈ、および配列番号３の配列のＣＤＲ３−Ｈを含む、抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを含むことができる。
【００５８】
さらなる実施形態において、本発明のコンジュゲートは、配列番号４の配列のＣＤＲ１−Ｌ、配列番号５の配列のＣＤＲ２−Ｌ、および配列番号６の配列のＣＤＲ３−Ｌを含む、抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを含むことができる。
【００５９】
さらなる実施形態において、本発明のコンジュゲートは、配列番号１の配列のＣＤＲ１−Ｈ、配列番号２の配列のＣＤＲ２−Ｈ、配列番号３の配列のＣＤＲ３−Ｈ、配列番号４の配列のＣＤＲ１−Ｌ、配列番号５の配列のＣＤＲ２−Ｌ、および配列番号６の配列のＣＤＲ３−Ｌを含む、抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを含むことができる。
【００６０】
ＱＡＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰ  ＧＮＧＡＴＮＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＰＳＳＳＴＡＹＭＱＩＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＤＳＶＰＦＡＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号７）の配列の重鎖可変領域、またはそれと少なくとも８５％、より詳しくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、抗体またはエピトープ結合性フラグメントを含むコンジュゲートも提供し、但し、好ましくは前記配列は配列番号１、配列番号２、および配列番号３の配列を含んでいる。
【００６１】
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＭＳＡＳＰＧＥＲＶＴＩＴＣＳＡＨＳＳＶＳＦＭＨＷＦＱＱＫＰＧＴＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＳＬＡＳ  ＧＶＰＡＲＦＧＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号８）の配列の軽鎖可変領域、またはそれと少なくとも８５％、より詳しくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、抗体またはエピトープ結合性フラグメントを含むコンジュゲートをさらに提供し、但し、好ましくは前記配列は配列番号４、配列番号５、および配列番号６の配列を含んでいる。
【００６２】
ＱＡＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＫＱＴＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＮＧＡＴＮＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＰＳＳＳＴＡＹＭＱＩＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＤＳＶＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）の配列の重鎖、またはそれと少なくとも８５％、より詳しくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、抗体またはエピトープ結合性フラグメントを含むコンジュゲートをさらに提供し、但し、好ましくは前記配列は配列番号１、配列番号２、および配列番号３の配列を含んでいる。
【００６３】
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＭＳＡＳＰＧＥＲＶＴＩＴＣＳＡＨＳＳＶＳＦＭＨＷＦＱＱＫＰＧＴＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＳＬＡＳＧＶＰＡＲＦＧＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）の配列の軽鎖、またはそれと少なくとも８５％、より詳しくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、抗体またはエピトープ結合性フラグメントを含むコンジュゲートをさらに提供し、但し、好ましくは前記配列は配列番号４、配列番号５、および配列番号６の配列を含んでいる。
【００６４】
別の実施形態において、配列番号７に対応するアミノ酸配列を有する、ヒト化またはリサーフェシングされている重鎖可変領域を有する、ヒト化抗ＭＵＣ１抗体およびそのエピトープ結合性フラグメントを提供する。
【００６５】
同様に、配列番号８に対応するアミノ酸配列を有する、ヒト化またはリサーフェシングされている軽鎖可変領域を有する、ヒト化抗ＭＵＣ１抗体およびそのエピトープ結合性フラグメントを提供する。
【００６６】
本明細書で用いる「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むキメラ抗体を指す。
【００６７】
本明細書で用いる「キメラ抗体」は、定常領域またはその部分が、変更され、置き換えられ、または交換され、その結果、可変領域が異なる種の定常領域に連結し、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体である。「キメラ抗体」はまた、可変領域またはその部分が、変更され、置き換えられ、または交換され、その結果、定常領域が異なる種の定常領域に連結し、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体を指す。
【００６８】
ヒト化の目的は、ヒト中に導入するために、マウス抗体などの異種起源の抗体の免疫原性を低減する一方、完全な抗原の結合親和性および抗体の特異性を維持することである。ヒト化抗体、または他の哺乳動物による非拒絶反応に適応される抗体は、リサーフェシングおよびＣＤＲグラフティングなどのいくつかの技術を用いて生成することができる。本明細書で用いるリサーフェシング技術は、分子モデリング、統計学的分析、および変異誘発の組合せを用いて、抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を、標的宿主の知られている抗体の表面に似せるように変更するものである。
【００６９】
抗体をリサーフェシングするための戦略および方法、ならびに異なる宿主内で抗体の免疫原性を低減するための他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号に開示されている。簡潔に述べると、特定の一方法では、（１）抗体の重鎖および軽鎖可変領域のプールの位置のアラインメントを、１セットの重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面が曝露される位置をもたらすように産生し、全ての可変領域に対するアラインメント位置は、少なくとも約９８％同一であり；（２）１セットの重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面が曝露するアミノ酸残基を、齧歯動物の抗体（またはそのフラグメント）に対して定義し；（３）齧歯動物の表面が曝露するアミノ酸残基のセットに最も緊密に同一である、１セットの重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面が曝露するアミノ酸残基を同定し；（４）齧歯動物の抗体の相補性決定領域のあらゆる残基のあらゆる原子の５Å以内にあるアミノ酸残基以外は、工程（２）において定義した、重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面が曝露するアミノ酸残基のセットを、工程（３）において同定した、重鎖および軽鎖可変領域フレームワーク表面が曝露するアミノ酸残基のセットで置換し；（５）結合特異性を有するヒト化齧歯動物抗体を生成する。 
【００７０】
抗体は、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェシング（ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ（１９９１年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２８巻（４／５）、４８９〜４９８頁；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら（１９９４年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７巻（６）、８０５〜８１４頁；Ｒｏｇｕｓｋａら（１９９４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．、９１巻、９６９〜９７３頁）、ならびにチェインシャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む多様な他の技術を用いてヒト化することができる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含む、当技術分野では知られている多様な方法により作成することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号、第５，５４５，８０６号、および第５，８１４，３１８号；ならびに国際特許出願ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１も参照されたい。
【００７１】
このようなヒト化抗体の一実施形態は、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖、またはこれらのエピトープ結合性フラグメント、またはこれらと少なくとも８５％、より詳しくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である配列を含む、ヒト化ｈｕＤＳ６抗体であり、但し、好ましくは前記配列は配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６の配列を含む。
【００７２】
細胞毒性剤
本明細書で用いる「細胞毒性剤」という用語は、細胞の機能もしくは成長を低減もしくは阻止し、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。したがって、本発明のコンジュゲートにおいて用いる細胞毒性剤は、細胞の死滅をもたらし、または細胞死を誘発し、またはいくつかの様式で細胞の生存性を低減するあらゆる化合物であってよい。細胞毒性剤の例には、メイタンシノイドおよびメイタンシノイド類似体、プロドラッグ、トメイマイシン誘導体、トキソイド、レプトマイシン誘導体、以下に定義するＣＣ−１０６５およびＣＣ−１０６５類似体が含まれる。
【００７３】
コンジュゲートを形成させるために本発明において用いることができる細胞毒性剤の中に、メイタンシノイドおよびメイタンシノイド類似体がある。適切なメイタンシノイドの例に、メイタンシノールおよびメイタンシノール類似体が含まれる。メイタンシノイドは、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に極めて毒性である薬物である。
【００７４】
適切なメイタンシノール類似体の例には、修飾された芳香環を有するもの、および他の位置に修飾を有するものが含まれる。このような適切なメイタンシノイドは、米国特許第４，４２４，２１９号；第４，２５６，７４６号；第４，２９４，７５７号；第４，３０７，０１６号；第４，３１３，９４６号；第４，３１５，９２９号；第４，３３１，５９８号；第４，３６１，６５０号；第４，３６２，６６３号；第４，３６４，８６６号；第４，４５０，２５４号；第４，３２２，３４８号；第４，３７１，５３３号；第６，３３３，４１０号；第５，４７５，０９２号；第５，５８５，４９９号；および第５，８４６，５４５号に開示されている。
【００７５】
修飾された芳香環を有するメイタンシノールの適切な類似体の具体的な例には：
（１）アンサミトシンＰ２のＬＡＨ還元によって調製される、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，２５６，７４６号）；
（２）ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）もしくはアクチノミセス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）を用いた脱メチル化、またはＬＡＨを用いた脱塩素反応によって調製される、Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，３６１，６５０号および第４，３０７，０１６号）；ならびに
（３）塩化アシルを用いたアシル化によって調製される、Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）
が含まれる。
【００７６】
他の位置に修飾を有するメイタンシノールの適切な類似体の具体的な例には：
（１）メイタンシノールのＨ２ＳまたはＰ２Ｓ５との反応によって調製される、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）；
（２）Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４，３３１，５９８号）；
（３）ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）から調製される、Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４，４５０，２５４号）；
（４）ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）によるメイタンシノールの変換によって調製される、Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４，３６４，８６６号）；
（５）トレウィアヌディフローラ（Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｉｆｌｏｒａ）から単離される、Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４，３１３，９４６号および第４，３１５，９２９号）；
（６）ストレプトミセスによるメイタンシノールの脱メチル化によって調製される、Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４，３６２，６６３号および第４，３２２，３４８号）；ならびに
（７）メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製される、４，５−デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）
が含まれる。
【００７７】
特定の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、細胞毒性剤として、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシンと正式に呼ばれる、チオール含有メイタンシノイドＤＭ１を利用する。ＤＭ１は、以下の構造式（Ｉ）によって表される：
【化２】
2016525560.tif 000003
【００７８】
別の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、細胞毒性剤として、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシンと正式に呼ばれる、チオール含有メイタンシノイドＤＭ４を利用する。ＤＭ４は、以下の構造式（ＩＩ）によって表される：
【化３】
2016525560.tif 000004
【００７９】
本発明のさらなる実施形態において、硫黄原子を有する炭素原子上にモノまたはジ−アルキル置換を保有する、チオールおよびジスルフィド含有メイタンシノイドを含む、他のメイタンシンを用いてもよい。これらには、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに、障害されたスルフヒドリル基を有するアシル基を有するアシル化アミノ酸側鎖を有するメイタンシノイドが含まれ、チオール官能性を有するアシル基の炭素原子は置換基を１つまたは２つ有し、前記置換基は、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基を有し、さらに置換基の１つはＨであってよく、アシル基は、カルボニル官能性と硫黄原子との間に少なくとも炭素原子３個の直鎖の鎖長を有する。
【００８０】
このような付加的なメイタンシノイドには、式（ＩＩＩ）によって表される化合物が含まれ：
【化４】
2016525560.tif 000005
式中：
Ｙ’は、
（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ）ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
ここで、
Ｒ１およびＲ２は各々独立に、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えて、Ｒ２はＨであってよく；
Ａ、Ｂ、Ｄは、炭素原子３〜１０個を有するシクロアルキルまたはシクロアルケニル、単純な、または置換されているアリールまたは複素環芳香族またはヘテロシクロアルキル基であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは各々独立に、０、または１から５までの整数であり、但し、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔの少なくとも２つはどの時点においてもゼロではなく；
Ｚは、Ｈ、ＳＲ、または−ＣＯＲであり、式中、Ｒは、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、または単純な、もしくは置換されているアリールもしくは複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基である。
【００８１】
式（ＩＩＩ）の好ましい実施形態には、式（ＩＩＩ）の化合物が含まれ、式中：
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、ＺはＨであり；Ｒ１およびＲ２はメチルであり、ＺはＨであり；
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｚは−ＳＣＨ３であり；
Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｚは−ＳＣＨ３である。
【００８２】
このような付加的なメイタンシンには、式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、または（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）によって表される化合物も含まれ：
【化５】
2016525560.tif 000006
式中：
Ｙは（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
ここで：
Ｒ１およびＲ２は各々独立に、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えてＲ２はＨであってよく；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍおよびｎは各々独立に、１から５までの整数であり、加えてｎは０であってよく；
Ｚは、Ｈ、ＳＲ、−ＣＯＲであり、式中、Ｒは、炭素原子１から１０個を有する直鎖状もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する環状アルキルもしくはアルケニル、または単純な、もしくは置換されているアリールもしくは複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
Ｍａｙは、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに側鎖を有するメイタンシノイドを表す。
【００８３】
式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、および（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）の特定の実施形態には、式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、および（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）の化合物が含まれ、式中：
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、ＺはＨであり；
Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、ＺはＨであり；
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、Ｚは−ＳＣＨ３であり；
Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、Ｚは−ＳＣＨ３である。
【００８４】
一実施形態において、細胞毒性剤は式（ＩＶ−Ｌ）によって表される。
【００８５】
このようなさらなるメイタンシンは、式（Ｖ）によって表される化合物も含み：
【化６】
2016525560.tif 000007
式中：
Ｙは（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
ここで：
Ｒ１およびＲ２は各々独立に、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニルまたは複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えてＲ２はＨであってよく；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍおよびｎは各々独立に、１から５までの整数であり、加えてｎは０であってよく；
ＺはＨ、ＳＲ、または−ＣＯＲであり、Ｒは、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、または単純な、もしくは置換されているアリールもしくは複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基である。
【００８６】
式（Ｖ）の特定の実施形態は、式（Ｖ）の化合物を含み、式中：
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、ＺはＨであり；
Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは１であり、ｎは０であり、ＺはＨであり；
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、Ｚは−ＳＣＨ３であり；
Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは１であり、ｎは０であり、Ｚは−ＳＣＨ３である。
【００８７】
このようなさらなるメイタンシンは、式（ＶＩ−Ｌ）、（ＶＩ−Ｄ）、または（ＶＩ−Ｄ，Ｌ）によって表される化合物をさらに含み：
【化７】
2016525560.tif 000008
式中：
Ｙ２は（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺ２を表し、
ここで：
Ｒ１およびＲ２は各々独立に、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えてＲ２はＨであってよく；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍおよびｎは各々独立に、１から５までの整数であり、加えてｎは０であってよく；
Ｚ２はＳＲまたはＣＯＲであり、Ｒは、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、または単純な、もしくは置換されているアリール、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
Ｍａｙはメイタンシノイドである。
【００８８】
このようなさらなるメイタンシンは、式（ＶＩＩ）によって表される化合物も含み：
【化８】
2016525560.tif 000009
式中、
Ｙ２’は、
（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ）ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺ２を表し、
ここで、
Ｒ１およびＲ２は各々独立に、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えてＲ２はＨであってよく；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立に、炭素原子３から１０個を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、単純な、もしくは置換されているアリール、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ０、Ｒ１１、およびＲ１２は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは各々独立に、０、または１から５までの整数であり、但し、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔの少なくとも２つはどの時点においても０ではなく； 
Ｚ２はＳＲまたは−ＣＯＲであり、式中、Ｒは、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、または単純な、もしくは置換されているアリール、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基である。
【００８９】
式（ＶＩＩ）の特定の実施形態には、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨである、式（ＶＩＩ）の化合物が含まれる。
【００９０】
上記に言及したメイタンシノイドは、上記「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤に、特に、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化抗体ｈｕＤＳ６にコンジュゲートしていてよく、細胞結合剤、特に、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体は、メイタンシノイドのＣ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに見出されるアシル化されているアミノ酸鎖のアシル基上に存在するチオールまたはジスルフィド官能性を用いてメイタンシノイドに連結しており、アシル化されているアミノ酸側鎖のアシル基は、１つまたは２つの置換基を有する炭素原子上に位置するチオールまたはジスルフィド官能性を有し、前記置換基は、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えて置換基の１つはＨであってよく、アシル基は、カルボニル官能性と硫黄原子との間に少なくとも炭素原子３個の直鎖の鎖長を有する。
【００９１】
本発明の一実施形態において、コンジュゲートは、式（ＶＩＩＩ）のメイタンシノイドにコンジュゲートしている、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤、特に配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体を含むものであり：
【化９】
2016525560.tif 000010
式中：
Ｙ１’は、
（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ）ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２Ｓ−を表し、
ここで、
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立に、炭素原子３〜１０個を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、単純な、もしくは置換されているアリール、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは各々独立に、０、または１から５までの整数であり、但し、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔの少なくとも２つはどの時点においても０ではない。
【００９２】
特に、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、またはＲ１およびＲ２はメチルである。
【００９３】
本発明のさらなる実施形態において、コンジュゲートは、式（ＩＸ−Ｌ）、（ＩＸ−Ｄ）、または（ＩＸ−Ｄ，Ｌ）のメイタンシノイドにコンジュゲートしている、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤を含むもの、特に、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体である：
【化１０】
2016525560.tif 000011
式中：
Ｙ１は（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２Ｓ−を表し、
ここで、
Ｒ１およびＲ２は各々独立に、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり、加えてＲ２はＨであってよく；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々独立に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、炭素原子１から１０個を有する直鎖状アルキルもしくはアルケニル、炭素原子３から１０個を有する分枝鎖もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されているフェニル、または複素環芳香族もしくはヘテロシクロアルキル基であり；
ｌ、ｍおよびｎは各々独立に、１から５までの整数であり、加えてｎは０であってよく；
Ｍａｙは、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに側鎖を有するメイタンシノールを表す。
【００９４】
式（ＩＸ−Ｌ）、（ＩＸ−Ｄ）、および（ＩＸ−Ｄ，Ｌ）の特定の実施形態は、式（ＩＸ−Ｌ）、（ＩＸ−Ｄ）、および（ＩＸ−Ｄ，Ｌ）の化合物を含み、式中：
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、またはＲ１およびＲ２はメチルであり、
Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０であり、
Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０である。
【００９５】
より詳しくは、細胞毒性剤は式（ＩＸ−Ｌ）によって表される。
【００９６】
本発明のさらなる実施形態において、コンジュゲートは、式（Ｘ）のメイタンシノイドにコンジュゲートしている、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤、特に、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体を含むものである：
【化１１】
2016525560.tif 000012
式中、置換基は、上記の式（ＩＸ）に対して定義した通りである。
【００９７】
さらなる実施形態において、上記に記載した化合物において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０である。
【００９８】
さらなる実施形態において、上記に記載した化合物において、Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々Ｈであり、ｌおよびｍは各々１であり、ｎは０である。
【００９９】
さらに、Ｌ−アミノアシル立体異性体が好ましい。
【０１００】
２００４年５月２０日出願の、米国特許出願第１０／８４９，１３６号において教示されるメイタンシノイドを各々、本発明のコンジュゲートにおける細胞結合剤として用いることもできる。
【０１０１】
メイタンシノイド薬物との、上記「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤のコンジュゲート、特に抗体のコンジュゲートを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの多様な不要な細胞系の増殖を抑制するその能力に対して評価することができる。例えば、ヒト類表皮癌系統Ａ−４３１、ヒト小細胞肺癌細胞系ＳＷ２、ヒト乳癌系統ＳＫＢＲ３、およびバーキットリンパ腫細胞系Ｎａｍａｌｗａなどの細胞系を、これらの化合物の細胞毒性の評価に、容易に用いることができる。評価しようとする細胞を、化合物に２４時間曝露し、細胞の生存している分画を、既知の方法による直接アッセイにおいて測定することができる。次いで、ＩＣ５０値を、アッセイの結果から算出することができる。
【０１０２】
本発明によるコンジュゲートにおいて用いる細胞毒性剤は、タキサンまたはその誘導体であってもよい。
【０１０３】
タキサンは、細胞毒性の天然生成物であるパクリタキセル（タキソール）、および半合成の誘導体であるドセタキセル（タキソテール）を含む化合物のファミリーであり、２つの化合物は癌の処置において広く用いられている。タキサンは、チューブリンの脱重合を阻害し、細胞死をもたらす、紡錘体毒である。ドセタキセルおよびパクリタキセルは癌の処置において有用な薬剤である一方、正常細胞に対する非特異的な毒性のため、これらの抗腫瘍活性は限られている。
【０１０４】
コンジュゲートの調製において用いるための特定のタキサンは、式（ＸＩ）のタキサンである：
【化１２】
2016525560.tif 000013
【０１０５】
本発明の細胞毒性コンジュゲートにおいて用いることができるタキサンを合成するための方法は、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体など、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤にタキサンをコンジュゲートするための方法とともに、米国特許第５，４１６，０６４号、第５，４７５，０９２号、第６，３４０，７０１号、第６，３７２，７３８号、および第６，４３６，９３１号、ならびに米国出願第１０／０２４，２９０号、第１０／１４４，０４２号、第１０／２０７，８１４号、第１０／２１０，１１２号、および第１０／３６９，５６３号に詳しく記載されている。
【０１０６】
本発明による細胞毒性剤はトメイマイシン誘導体でもよい。トメイマイシン誘導体は、ＤＮＡの副溝においてグアニンのＮ２に共有結合することによりその生物学的性質を発揮する、知られているクラスの化合物である、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である。ＰＢＤには、アントラマイシン、ネオトラマイシン、およびＤＣ−８１などの数々の副溝バインダーが含まれる。
【０１０７】
高度な細胞毒性を保持し、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤に効率的に連結することができる、新規なトメイマイシン誘導体は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０００１４２号に記載されている。細胞結合剤−トメイマイシン誘導体複合体は、トメイマイシン誘導体を不要な細胞に対してのみ標的化の様式において適用する、完全な尺度の細胞毒性作用を許し、したがって非標的化の健常細胞に対する損傷による副作用を回避する。
【０１０８】
本発明による細胞毒性剤は、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体など、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤に、連結基により連結している、１つまたはそれ以上のトメイマイシン誘導体を含むことができる。連結基は、慣例的な方法によってトメイマイシン誘導体に共有結合している化学的部分の一部である。特定の実施形態において、化学的部分は、ジスルフィド結合によりトメイマイシン誘導体に共有結合していてよい。
【０１０９】
本発明において有用なトメイマイシン誘導体は、以下に示す式（ＸＩＩ）を有し：
【化１３】
2016525560.tif 000014
式中、
【化１４】
2016525560.tif 000015
は、場合による単結合を表し；
【化１５】
2016525560.tif 000016
は、単結合または二重結合のいずれかを表し；
但し、
【化１６】
2016525560.tif 000017
が単結合を表す場合、ＵおよびＵ’は同じ、または異なり、独立にＨを表し、ＷおよびＷ’は同じ、または異なり、ＯＨ、−ＯＲなどのエーテル、−ＯＣＯＲなどのエステル（例えば、アセテート）、−ＯＣＯＯＲなどのカーボネート、−ＯＣＯＮＲＲ’などのカーバメート、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環状カーバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’などの尿素、−ＯＣＳＮＨＲなどのチオカーバメート、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環状チオカーバメート、−ＳＨ、−ＳＲなどのスルフィド、−ＳＯＲなどのスルホキシド、−ＳＯＯＲなどのスルホン、−ＳＯ３−などのスルホネート、−ＮＲＳＯＯＲなどのスルホンアミド、−ＮＲＲ’などのアミン、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような場合による環状アミン、−ＮＲＯＲ’などのヒドロキシルアミン誘導体、−ＮＲＣＯＲ’などのアミド、−Ｎ３などのアジド、シアノ、ハロ、トリアルキルもしくはトリアリールホスホニウム、アミノ酸誘導体基からなる群から独立に選択される。好ましくは、ＷおよびＷ’は同じ、または異なり、ＯＨ、Ｏｍｅ、Ｏｅｔ、ＮＨＣＯＮＨ２、ＳＭｅであり；
【化１７】
2016525560.tif 000018
が二重結合を表す場合、ＵおよびＵ’は非存在であり、ＷおよびＷ’はＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は同じ、もしくは異なり、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール、Ｈｅｔ、Ｓ（Ｏ）ｑＲの１つもしくはそれ以上によって場合により置換されている、ハロゲンもしくはアルキルから独立に選択され、またはＲ１およびＲ２ならびにＲ１’およびＲ２’は一緒に二重結合含有基＝Ｂおよび＝Ｂ’をそれぞれ形成する。
【０１１０】
一実施形態において、Ｒ１およびＲ２ならびにＲ１’およびＲ２’は一緒に二重結合含有基＝Ｂおよび＝Ｂ’をそれぞれ形成する。
【０１１１】
ＢおよびＢ’は同じ、または異なり、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール、Ｈｅｔ、Ｓ（Ｏ）ｑＲ、またはＢの１つまたはそれ以上によって場合により置換されているアルケニルから独立に選択され、Ｂ’は酸素原子を表す。
【０１１２】
一実施形態において、Ｂ＝Ｂ’である。
【０１１３】
さらなる実施形態において、Ｂ＝Ｂ’＝  ＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３であり、
ＸおよびＸ’は同じ、または異なり、−Ｏ−、−ＮＲ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）ｑ−の１つまたはそれ以上から独立に選択される。
【０１１４】
一実施形態において、Ｘ＝Ｘ’である。
【０１１５】
さらなる実施形態において、Ｘ＝Ｘ’＝Ｏである。
【０１１６】
ＡおよびＡ’は同じ、または異なり、酸素、窒素、または硫黄原子を場合により含むアルキルまたはアルケニルから独立に選択され、各々、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、Ｓ（Ｏ）ｑＲ、アリール、Ｈｅｔ、アルキル、アルケニルの１つまたはそれ以上により場合により置換されている。
一実施形態において、Ａ＝Ａ’である。
【０１１７】
さらなる実施形態において、Ａ＝Ａ’＝直鎖非置換アルキルである。
【０１１８】
ＹおよびＹ’は同じ、または異なり、Ｈ、ＯＲから独立に選択され；
一実施形態において、Ｙ＝Ｙ’である。
【０１１９】
さらなる実施形態において、Ｙ＝Ｙ’＝Ｏアルキル、より好ましくはＯメチルである。
【０１２０】
Ｔは、−ＮＲ−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｑ−、または４から１０員のアリール、シクロアルキル、複素環、またはヘテロアリールであり、各々、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、Ｓ（Ｏ）ｑＲ、および／もしくはリンカー（複数可）の１つもしくはそれ以上により場合により置換されており、または場合によりＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、Ｓ（Ｏ）ｑＲ、および／もしくはリンカー（複数可）の１つもしくはそれ以上によって場合により置換されている分枝鎖アルキル、またはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、Ｓ（Ｏ）ｑＲ、および／もしくはリンカー（複数可）の１つまたはそれ以上によって置換されている直鎖状アルキルである。
【０１２１】
一実施形態において、Ｔは、１つまたはそれ以上のリンカー（複数可）によって場合により置換されている、４から１０員のアリールまたはヘテロアリール、より好ましくは、フェニルまたはピリジルである。
【０１２２】
前記リンカーは連結基を含んでいる。適切な連結基は当技術分野ではよく知られており、チオール、スルフィド、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、およびエステラーゼに不安定な基が含まれる。ジスルフィド基およびチオエーテル基が好ましい。
【０１２３】
連結基が、チオール、スルフィド（もしくはいわゆるチオエーテル−Ｓ−）、またはジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）含有基である場合、チオール、スルフィド、またはジスルフィド基を保有する側鎖は、直鎖または分枝鎖、芳香族または複素環であってよい。当業者であれば、適切な側鎖を容易に同定することができる。
【０１２４】
一実施形態において、前記リンカーは式−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）Ｐ−Ｓ−Ｚ’のものであり、
式中、
Ｇは、単結合もしくは二重結合、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲ−であり；
Ｄは、単結合、または−Ｅ−、−Ｅ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｃ−Ｓ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−Ｆ−であり；
ここで、ＥおよびＦは、同じ、または異なり、直鎖状または分枝鎖の−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−アルキル−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロ環式（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロ環式（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−ヘテロ環式−アルキル−、−アルキル−ヘテロ環式−、−アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から独立に選択され；
ここで、ｉおよびｊは、同一または異なり、整数であり、０、１から２０００から独立に選択され；
Ｚは、直鎖状または分枝鎖の−アルキル−であり；
ｐは、０または１であり；
Ｚ’は、Ｈ、ＣＯＲなどのチオール保護基、Ｒ２０、またはＳＲ２０を表し、ここで、Ｒ２０は、Ｈ、メチル、アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環を表し、但し、Ｚ’がＨである場合、前記化合物は、ＰＢＤ部分の１つのイミン結合−ＮＨ＝上のチオール基−ＳＨの付加に起因する分子内環化によって形成される対応する化合物と平衡である。
ｎ、ｎ’は等しく、または異なり、０または１である。
ｑは０、１、または２である。
ＲおよびＲ’は等しく、または異なり、Ｈ、アルキル、アリールから独立に選択され、各々はＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、Ｓ（Ｏ）ｑＲ、アリール、Ｈｅｔによって場合により置換されている；
あるいはこれらの薬学的に許容される塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物もしくはこれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造である。
【０１２５】
幾何異性体および立体異性体を有する一般式（ＸＩＩ）の化合物も本発明の一部である。
【０１２６】
式（ＸＩＩ）のトメイマイシン誘導体のＮ−１０、Ｃ−１１二重結合は、水、アルコール、チオール、第一級または第二級アミン、尿素、および他の求核試薬の存在下で、対応するイミン付加体に、可逆的に容易に変換されることが知られている。このプロセスは可逆的であり、非プロトン性有機溶媒中、真空中、または高温で、脱水剤の存在下、対応するトメイマイシン誘導体を容易に再生することができる（Ｔｏｚｕｋａ（１９８３年）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３６巻、２７６頁）。
【０１２７】
よって、一般式（ＸＩＩＩ）のトメイマイシン誘導体の可逆的な誘導体も、本発明において用いることができ：
【化１８】
2016525560.tif 000019
式中、Ａ、Ｘ、Ｙ、ｎ、Ｔ、Ａ’、Ｘ’、Ｙ’、ｎ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、式（ＸＩＩ）において定義した通りであり、ＷおよびＷ’は、同じ、または異なり、ＯＨ、−ＯＲなどのエーテル、−ＯＣＯＲなどのエステル（例えば、アセテート）、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲなどのカーボネート、−ＯＣＯＮＲＲ’などのカーバメート、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環状カーバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’などの尿素、−ＯＣＳＮＨＲなどのチオカーバメート、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環状チオカーバメート、−ＳＨ、−ＳＲなどのスルフィド、−ＳＯＲなどのスルホキシド、−ＳＯＯＲなどのスルホン、−ＳＯ３−などのスルホネート、−ＮＲＳＯＯＲなどのスルホンアミド、−ＮＲＲ’などのアミン、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような場合による環状アミン、−ＮＲＯＲ’などのヒドロキシルアミン誘導体、−ＮＲＣＯＲなどのアミド、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−Ｎ３などのアジド、シアノ、ハロ、トリアルキル、もしくはトリアリールホスホニウム、アミノ酸由来の基からなる群から選択される。ＷおよびＷ’が同じ、または異なり、ＯＨ、Ｏｍｅ、Ｏｅｔ、ＮＨＣＯＮＨ２、ＳＭｅであるのが好ましい。
【０１２８】
式（ＸＩＩＩ）の化合物は、よって、溶媒が水である場合の水を含む溶媒和化合物と考えてもよく；これらの溶媒和化合物は特に有用であり得る。
【０１２９】
さらなる実施形態において、本発明のトメイマイシン誘導体は、以下からなる群から選択される：
８，８’−［１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−メトキシ−１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［１，５−ペンタンジイルビス（オキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［１，４−ブタンジイルビス（オキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［３−メチル−１，５−ペンタンジイルビス（オキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［２，６−ピリジンジイルビス（オキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピルオキシ）−２，６−ピリジンジイルビス−（メチレンオキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−（３−アミノプロピルオキシ）−１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−（Ｎ−メチル−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル）−１，３−ベンゼンジイルビス−（メチレンオキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−｛５−［３−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイルアミノ）プロピルオキシ］−１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）｝−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−アセチルチオメチル−１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−メチレン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
【０１３０】
ビス−｛２−［（Ｓ）−２−メチレン−７−メトキシ−５−オキソ−１，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
８，８’−［３−（２−アセチルチオエチル）−１，５−ペンタンジイルビス（オキシ）］−ビス［（Ｓ）−２−メチレン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−（Ｎ−４−メルカプト−４，４−ジメチルブタノイル）アミノ−１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）］−ビス［７−メトキシ−２−メチレン−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−（Ｎ−４−メチルジチオ−４，４−ジメチルブタノイル）−アミノ−１，３−ベンゼンジイルビス（メチレンオキシ）］−ビス［７−メトキシ−２−メチレン−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−（Ｎ−メチル−Ｎ−（２−メルカプト−２，２−ジメチルエチル）アミノ−１，３−ベンゼンジイル（メチレンオキシ）］−ビス［７−メトキシ−２−メチレン−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［５−（Ｎ−メチル−Ｎ−（２−メチルジチオ−２，２−ジメチルエチル）アミノ−１，３−ベンゼンジイル（メチレンオキシ）］−ビス［７−メトキシ−２−メチレン−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（２−（４−メルカプト−４−メチル）−ペンタンアミド−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（１−（２−（４−メチル−４−メチルジスルファニル）−ペンタンアミド−エトキシ）−ベンゼン−３，５−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（３−（４−メチル−４−メチルジスルファニル）−ペンタンアミド−プロポキシ）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
【０１３１】
８，８’−［（４−（４−（４−メチル−４−メチルジスルファニル）−ペンタンアミド−ブトキシ）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（３−［４−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイル）−ピペラジン−１−イル］−プロピル）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（１−（３−［４−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイル）−ピペラジン−１−イル］−プロピル）−ベンゼン−３，５−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（２−｛２−［２−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（１−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ベンゼン−３，５−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（１−（２−｛２−［２−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ベンゼン−３，５−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイルアンニノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
【０１３２】
８，８’−［（１−（２−［メチル−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ）−ベンゼン−３，５−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（３−［メチル−（４−メチル−４−メチルジスルファニル−ペンタノイル）−アミノ］−プロピル）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（４−（３−［メチル−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−プロピル）−ピリジン−２，６−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
８，８’−［（１−（４−メチル−４−メチルジスルファニル）−ペンタンアミド）−ベンゼン−３，５−ジメチル）−ジオキシ］−ビス［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］
ならびに対応するメルカプト誘導体、またはこれらの薬学的に許容される塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物の多形結晶構造、またはこれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマー。
【０１３３】
特定の化合物は、式（ＸＩＶ）または（ＸＶ）の化合物であり：
【化１９】
2016525560.tif 000020
式中、Ｘ、Ｘ’、Ａ、Ａ’、Ｙ、Ｙ’、Ｔ、ｎ、ｎ’は、式（ＸＩＩ）において定義した通りである。
【０１３４】
式（ＸＩＩ）の化合物は、当業者にはよく知られている数々の方法において調製することができる。化合物は、例えば、以下に記載する方法、または当業者によって理解されるそれらに対する変形を適用もしくは適応することにより合成することができる。好適な修飾および置換は、当業者には容易に明らかであり、よく知られており、または化学文献から容易に入手できる。特に、このような方法は、Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９９年において見出すことができる。
【０１３５】
本発明において用いることができるトメイマイシン誘導体を合成するための方法は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０００１４２号に記載されている。本発明の化合物は、多様な合成経路によって調製することができる。試薬および出発材料は市販されており、または当業者にはよく知られている技術によって容易に合成される（例えば、ＷＯ００／１２５０８、ＷＯ００／１２５０７、ＷＯ２００５／０４０１７０、ＷＯ２００５／０８５２６０、ＦＲ１５１６７４３、Ｍｏｒｉら（１９８６年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、４２巻、３７９３〜３８０６頁を参照されたい）。
【０１３６】
本発明による細胞毒性剤は、レプトマイシン誘導体であってもよい。
【０１３７】
本発明によると、「レプトマイシン誘導体」は、Ｋａｌｅｓｓｅら（２００２年）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、８巻、９８１〜１００３頁において定義されるレプトマイシンファミリーのメンバーを指し、レプトマイシン、例えば、レプトマイシンＡおよびレプトマイシンＢ、カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎｓ）、ラトジャドン（ｒａｔｊａｄｏｎｅ）、例えばラトジャドンＡおよびラトジャドンＢ、アンギノマイシン（ａｎｇｕｉｎｏｍｙｃｉｎ）、例えばアンギノマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、カスガマイシン、レプトルスタチン（ｌｅｐｔｏｌｓｔａｔｉｎ）、レプトフラニン（ｌｅｐｔｏｆｕｒａｎｉｎ）、例えばレプトフラニンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄを含む。レプトマイシンＡおよびＢの誘導体が好ましい。
【０１３８】
より具体的には、レプトマイシン誘導体は式（ＸＶＩ）のものであってよく：
【化２０】
2016525560.tif 000021
式中、
ＲａおよびＲａ’は、Ｈまたは−Ａｌｋであり；好ましくはＲａは−Ａｌｋであり、好ましくはメチルであり、Ｒａ’はＨであり；
Ｒ１７は、ＯＲ、ＣＮ、ＮＲＲ’により場合により置換されているアルキル、パーフルオロアルキルであり；好ましくはＲ１７はアルキルであり、より好ましくはメチルまたはエチルであり；
Ｒ９は、ＯＲ、ＣＮ、ＮＲＲ’により場合により置換されているアルキル、パーフルオロアルキルであり；好ましくはＲ９はアルキルであり、より好ましくはメチルであり；
Ｘは、−Ｏ−または−ＮＲ−であり；好ましくは、Ｘは−ＮＲ−であり；
Ｙは、−Ｕ−、−ＮＲ−Ｕ−、−Ｏ−Ｕ−、−ＮＲ−ＣＯ−Ｕ−、−Ｕ−ＮＲ−ＣＯ−、−Ｕ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｕ−であり；
好ましくは、Ｘが−Ｏ−である場合、Ｙは−Ｕ−、−ＮＲ−Ｕ−、−Ｕ−ＮＲ−ＣＯ−であり；
式中、Ｕは、直鎖または分枝鎖の−Ａｌｋ−、−Ａｌｋ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−Ａｌｋ−、−Ａｌｋ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−Ａｌｋ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−シクロアルキル−、−複素環−、−シクロアルキル−Ａｌｋ−、−Ａｌｋ−シクロアルキル−、−複素環−Ａｌｋ−、−Ａｌｋ−複素環−から選択され；
ここで、ｍは１から２０００から選択される整数であり；
好ましくは、Ｕは、直鎖状または分枝鎖の−Ａｌｋ−であり、
Ｚは−Ａｌｋ−であり；
ｎは、０または１であり；好ましくはｎは０であり；
Ｔは、Ｈ、Ａｃなどのチオール保護基、Ｒ１、またはＳＲ１を表し、式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、Ａｌｋ、シクロアルキル、場合により置換されているアリールもしくは複素環を表し、またはＴは、
【化２１】
2016525560.tif 000022
を表し、
ここで、
Ｒａ、Ｒａ’、Ｒ１７、Ｒ９、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｎは、上記に定義した通りであり；
好ましくは、ＴはＨまたはＳＲ１であり、式中、Ｒ１はＡｌｋ、より好ましくはメチルを表し；
ＲおよびＲ’は同一、または異なり、Ｈまたはアルキルであり；
Ａｌｋは、直鎖状または分枝鎖のアルキルを表し；好ましくはＡｌｋは（−（ＣＨ２−ｑ（ＣＨ３）ｑ）ｐ−を表し、式中、ｐは１から１０までの整数を表し、ｑは０から２までの整数を表し；好ましくは、Ａｌｋは−（ＣＨ２）−または−Ｃ（ＣＨ３）２−を表し
、あるいはこれらの薬学的に許容される塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物の多形結晶構造、またはこれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーである。
【０１３９】
特定の化合物は、以下から選択することができる：
（２Ｅ，１０Ｅ，１２Ｅ，１６Ｚ，１８Ｅ）−（Ｒ）−６−ヒドロキシ−３，５，７，９，１１，１５，１７−ヘプタメチル−１９−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−８−オキソ−ノナデカ−２，１０，１２，１６，１８−ペンタエン酸の（２−メチルスルファニル−エチル）−アミド
（２Ｅ，１０Ｅ，１２Ｅ，１６Ｚ，１８Ｅ）−（Ｒ）−６−ヒドロキシ−３，５，７，９，１１，１５，１７−ヘプタメチル−１９−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−８−オキソ−ノナデカ−２，１０，１２，１６，１８−ペンタエン酸］のｂｉｓ−［（２−メルカプトエチル）−アミド
（２Ｅ，１０Ｅ，１２Ｅ，１６Ｚ，１８Ｅ）−（Ｒ）−６−ヒドロキシ−３，５，７，９，１１，１５，１７−ヘプタメチル−１９−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−８−オキソ−ノナデカ−２，１０，１２，１６，１８−ペンタエン酸の（２−メルカプト−エチル）−アミド
（２Ｅ，１０Ｅ，１２Ｅ，１６Ｚ，１８Ｅ）−（Ｒ）−６−ヒドロキシ−３，５，７，９，１１，１５，１７−ヘプタメチル−１９−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−８−オキソ−ノナデカ−２，１０，１２，１６，１８−ペンタエン酸の（２−メチルジスルファニル−エチル）−アミド
（２Ｅ，１０Ｅ，１２Ｅ，１６Ｚ，１８Ｅ）−（Ｒ）−６−ヒドロキシ−３，５，７，９，１１，１５，１７−ヘプタメチル−１９−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−８−オキソ−ノナデカ−２，１０，１２，１６，１８−ペンタエン酸の（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミド
（２Ｅ，１０Ｅ，１２Ｅ，１６Ｚ，１８Ｅ）−（Ｒ）−６−ヒドロキシ−３，５，７，９，１１，１５，１７−ヘプタメチル−１９−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−６−オキソ−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−８−オキソ−ノナデカ−２，１０，１２，１６，１８−ペンタエン酸の（２−メルカプト−２−メチル−プロピル）−アミドあるいはこれらの薬学的に許容される塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物の多形結晶構造、またはこれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマー。
【０１４０】
誘導体を、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤に連結するために、誘導体は、誘導体を細胞結合剤に、ジスルフィド結合、スルフィド（または本明細書でチオエーテルと呼ぶ）結合、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、およびエステラーゼに不安定な基などの連結によって連結するための部分（連結基）を含まなければならない。誘導体は、レプトマイシン誘導体を細胞結合剤に、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、およびエステラーゼに不安定な基などによって連結するのに必要な部分を含むように調製される。水溶液中の溶解性をさらに増強するために、連結基はポリエチレングリコールのスペーサーを含むことができる。一実施形態において、標的化される細胞の還元性の環境によりスルフィドまたはジスルフィドの切断、および細胞毒性における関連する増大を有する誘導体の放出をもたらすという理由で、スルフィドまたはジスルフィド連結が用いられる。
【０１４１】
本発明の化合物は、多様な合成経路によって調製してもよい。試薬および出発材料は市販されており、または当業者にはよく知られている技術によって容易に合成される。本発明の細胞毒性コンジュゲートにおいて用いることができるレプトマイシン誘導体を合成するための方法は、前記レプトマイシン誘導体を抗体などの細胞結合剤にコンジュゲートするための方法と一緒に、欧州特許出願第０６２９０９４８．６号に詳しく記載されている。
【０１４２】
本発明による細胞毒性コンジュゲートにおいて用いる細胞毒性剤は、ＣＣ−１０６５またはその誘導体であってもよい。
【０１４３】
ＣＣ−１０６５は、ストレプトミセスゼレンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｚｅｌｅｎｓｉｓ）の培養ブロスから単離される強力な抗腫瘍抗生物質である。ＣＣ−１０６５は、ドキソルビシン、メトトレキセート、およびビンクリスチンなどの一般的に用いられる抗癌薬よりもｉｎ  ｖｉｔｒｏで約１０００倍強力である（Ｂｈｕｙａｎら（１９８２年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４２巻、３５３２〜３５３７頁）。ＣＣ−１０６５およびその類似体は、米国特許第６，３７２，７３８号、第６，３４０，７０１号、第５，８４６，５４５号、および第５，５８５，４９９号に記載されている。
【０１４４】
ＣＣ−１０６５の細胞毒性効力は、そのアルキル化活性、ならびにそのＤＮＡ結合活性もしくはＤＮＡ挿入活性に相関している。これら２つの活性は、分子の別々の部分にある。よって、アルキル化活性は、シクロプロパピロロインドール（ＣＰＩ）サブユニットに含まれ、ＤＮＡ結合活性は２つのピロロインドールサブユニットにある。
【０１４５】
ＣＣ−１０６５には細胞毒性剤としてある種の魅力的な特徴があるが、治療使用における限界がある。ＣＣ−１０６５をマウスに投与すると肝毒性の遅れを引き起こし、単回静脈用量１２．５μｇ／ｋｇの後、５０日目に死亡がもたらされた（Ｒｅｙｎｏｌｄｓら（１９８６年）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、ＸＸＩＸ、３１９〜３３４頁）。これが毒性の遅れを引き起こさない類似体を開発する努力に拍車をかけ、ＣＣ−１０６５をモデルとするより単純な類似体の合成が記載されている（Ｗａｒｐｅｈｏｓｋｉら（１９８８年）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３１巻、５９０〜６０３頁）。
【０１４６】
別の一連の類似体において、ＣＰＩ部分は、シクロプロパベンズインドール（ＣＢＩ）部分によって置き換えられた（Ｂｏｇｅｒら（１９９０年）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、５５巻、５８２３〜５８３３頁；Ｂｏｇｅｒら（１９９１年）ＢｉｏＯｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１巻、１１５〜１２０頁）。これらの化合物は、マウスにおける毒性の遅れを引き起こさずに、親薬物のｉｎ  ｖｉｔｒｏの高い効力を維持する。ＣＣ−１０６５同様、これらの化合物は、ＤＮＡの副溝に共有結合の形で結合して細胞死を引き起こすアルキル化剤である。しかし、最も有望な類似体であるＡｄｏｚｅｌｅｓｉｎおよびＣａｒｚｅｌｅｓｉｎの臨床評価は期待外れの結果をまねいた（Ｆｏｓｔｅｒら（１９９６年）Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ、１３巻、３２１〜３２６頁；Ｗｏｌｆｆら（１９９６年）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２巻、１７１７〜１７２３頁）。これらの薬物は全身毒性が高いため、芳しくない治療効果を表す。
【０１４７】
ＣＣ−１０６５類似体の治療効能は、腫瘍部位への標的化送達によってｉｎ  ｖｉｖｏの分布を変更することにより大幅に改善することができ、結果として非標的組織に対する毒性がより低くなり、よって全身毒性が低くなる。この目標を達成するために、腫瘍細胞を特異的に標的化する細胞結合剤とのＣＣ−１０６５の類似体および誘導体のコンジュゲートが記載されている（米国特許第５，４７５，０９２号；第５，５８５，４９９号；第５，８４６，５４５号）。これらのコンジュゲートは典型的に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで高い標的特異的細胞毒性を表し、マウスにおけるヒト腫瘍異種移植モデルにおいて並外れた抗腫瘍活性を表す（Ｃｈａｒｉら（１９９５年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５５巻、４０７９〜４０８４頁）。
【０１４８】
近年、水性媒体中の溶解性が増強された、ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグが記載されている（欧州特許出願第０６２９０３７９．４号）。これらのプロドラッグでは、分子のアルキル化部分のフェノール基が、酸性水溶液中で保存される時に薬物を安定にし、非保護の類似体に比べて薬物に水溶性の増大を付与する官能基で保護されている。保護基は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、生理学的ｐＨで容易に切断されて対応する活性な薬物を生じる。ＥＰ第０６２９０３７９．４号に記載されているプロドラッグでは、生理学的ｐＨで電荷を保有するスルホン酸含有フェニルカーバメートとして、フェノール置換基が保護され、よって水溶性が増強される。水溶性をさらに増強するために、場合によるポリエチレングリコールスペーサーをリンカー中に、インドリルサブユニットと、ジスルフィド基などの切断可能な連結との間に導入することができる。このスペーサーを導入しても、薬物の効力は変わらない。
【０１４９】
本発明の細胞毒性コンジュゲートにおいて用いることができるＣＣ−１０６５類似体を合成するための方法は、類似体を抗体などの細胞結合剤にコンジュゲートするための方法とともに、ＥＰ  ０６２９０３７９．４、ならびに米国特許第５，４７５，０９２号、第５，８４６，５４５号、第５，５８５，４９９号、第６，５３４，６６０号、および第６，５８６，６１８号、ならびに米国出願第１０／１１６，０５３号および第１０／２６５，４５２号に詳しく記載されている。
【０１５０】
メトトレキセート、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、カリケアマイシン、チューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）およびチューブリシン類似体、デュオカルミシンおよびデュオカルミシン類似体、ドラスタチンおよびドラスタチン類似体などの薬物も、本発明のコンジュゲートを調製するのに適する。薬物分子は、血清アルブミンなどの中間担体分子を介して抗体分子に連結することもできる。米国特許第６，６３０，５７９号などに記載されている、ドキソルビシンおよびダウノルビシン化合物も、有用な細胞毒性剤であり得る。
【０１５１】
本発明の特定の実施形態において、少なくとも１つの細胞毒性剤は、式（Ｉ）のメイタンシンＤＭ１である。本発明の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの細胞毒性剤は、式（ＩＩ）のメイタンシンＤＭ４である。
【０１５２】
これらの細胞毒性剤は、本明細書に開示する、細胞結合剤、抗体、抗体のエピトープ結合性フラグメントにコンジュゲートしている。
【０１５３】
リンカー
本明細書で用いる「リンカー」は、共有結合、またはポリペプチドを薬物部分に共有結合で付着させる原子の鎖を含む化学的部分を意味する。
【０１５４】
コンジュゲートはｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法によって調製してもよい。薬物またはプロドラッグを細胞結合剤に、特に抗体に連結するために、連結基が用いられる。適切な連結基は当技術分野ではよく知られており、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、およびエステラーゼに不安定な基が含まれる。
【０１５５】
上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤の、特に本発明の抗体の、上記の「細胞毒性剤」のセクションにおいて定義した細胞毒性剤とのコンジュゲーションは、それだけには限定されないが、Ｎ−スクシンイミジルピリジルジチオブチレート（ＳＰＤＢ）、ブタン酸４−［（５−ニトロ−２−ピリジニル）ジチオ］−２，５−ジオキソ−１−ピロリジニルエステル（ニトロ−ＳＰＤＢ）、４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）−２−スルホ−酪酸（スルホ−ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス−（ｐ−アジドベンゾイル）−ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を含む、多様な二官能性タンパク質カップリング剤を用いて行うことができる。
【０１５６】
特定の実施形態において、前記リンカーは、Ｎ−スクシンイミジルピリジルジチオブチレート（ＳＰＤＢ）、４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）−２−スルホ酪酸（スルホ−ＳＰＤＢ）、およびスクシンイミジル（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）からなる群から選択される。
【０１５７】
本発明のコンジュゲートの細胞結合剤は、切断可能または切断不可能なリンカーによって、少なくとも１つの細胞毒性剤に共有結合で連結していてもよい。
【０１５８】
リンカーは、細胞における細胞毒性剤の放出を促進する「切断可能なリンカー」でもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼに感受性のリンカー、エステラーゼに不安定なリンカー、光に不安定なリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）を用いることができる。リンカーは、いくつかの場合において、良好な認容性をもたらし得る、「切断不可能なリンカー」（例えば、ＳＭＣＣリンカー）でもよい。
【０１５９】
あるいは、本発明の、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤を含む融合タンパク質、特に抗体、および細胞毒性ペプチドを、組換え技術またはペプチド合成によって作製してもよい。ＤＮＡの長さは、相互に隣接し、またはコンジュゲートの所望の性質を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されている、いずれかのコンジュゲートの２つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことができる。
【０１６０】
本発明の細胞結合剤、特に抗体は、ポリペプチドを、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照されたい）を活性な抗癌薬（例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい）に変換するプロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートすることにより、依存性酵素媒介性プロドラッグ治療（Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｔｈｅｒａｐｙ）において用いることもできる。ＡＤＥＰＴに有用なイムノコンジュゲートの酵素成分には、プロドラッグをより活性な、細胞毒性形態に変換するような方法でプロドラッグに作用することができるあらゆる酵素が含まれる。本発明の方法において有用である酵素には、それだけには限定されないが、ホスフェート含有プロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性のフルオロシトシンを抗癌薬である５−フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用である、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、ならびにカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ）などのプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチドプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用なＯ−ガラクトシラーゼおよびノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；Ｐ−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離の薬物に変換するのに有用なＰ−ラクタマーゼ；ならびに薬物のアミン窒素がそれぞれフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基で誘導体化されている薬物を遊離の薬物に変換するのに有用であるペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが含まれる。酵素は、本発明のポリペプチドに、上記に論じたヘテロ二官能性架橋試薬を用いるなどの当技術分野ではよく知られている技術によって、共有結合で結合することができる。
【０１６１】
特定の実施形態によると、本発明のコンジュゲートにおいて、細胞毒性剤は、メイタンシノイド、特にＤＭ１またはＤＭ４であってよい。
【０１６２】
このようなコンジュゲートにおいて、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤、特に抗体を、連結基によって前記少なくとも１つの細胞毒性剤にコンジュゲートする。特に、前記連結基は、ＳＰＤＢ、スルホ−ＳＰＤＢ、またはＳＭＣＣなどの切断不可能なリンカーである。
【０１６３】
特定の実施形態において、前記リンカーはＮ−スクシンイミジルピリジルジチオブチレート（ＳＰＤＢ）であり、前記細胞毒性剤はＤＭ４である。別の特定の実施形態において、前記リンカーは４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）−２−スルホ酪酸（スルホ−ＳＰＤＢ）であり、前記細胞毒性剤はＤＭ４である。
【０１６４】
より詳しくは、コンジュゲートは以下からなる群から選択することができる：
【０１６５】
ｉ）式（ＸＶＩＩＩ）の抗体−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲート
【化２２】
2016525560.tif 000023
【０１６６】
ｉｉ）式（ＸＩＸ）の抗体−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４コンジュゲート
【化２３】
2016525560.tif 000024
および、
【０１６７】
ｉｉｉ）式（ＸＸ）の抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲート
【化２４】
2016525560.tif 000025
【０１６８】
一般的に、コンジュゲートは、以下の工程を含むプロセスによって得ることができる：（ｉ）場合により緩衝化されている細胞結合剤（例えば、本発明による抗体）の水溶液を、リンカーおよび細胞毒性化合物の溶液と接触させる工程；
（ｉｉ）次いで、（ｉ）において形成したコンジュゲートを、未反応の細胞結合剤から場合により分離する工程。
【０１６９】
細胞結合剤の水溶液は、例えば、リン酸カリウム、アセテート、シトレート、またはＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（Ｈｅｐｅｓバッファー）などのバッファーで緩衝化することができる。バッファーは、細胞結合剤の性質に依存する。細胞毒性化合物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）などの有機極性溶媒中の溶液における。
【０１７０】
反応温度は通常、２０℃から４０℃の間に含まれる。反応時間は１時間から２４時間まで変動し得る。細胞結合剤と細胞毒性剤との間の反応は、屈折率測定法および／またはＵＶの検出器を有するサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によってモニタリングすることができる。コンジュゲートの収率が非常に低い場合は、反応時間を延長することができる。
【０１７１】
当業者であれば、工程（ｉｉ）の分離を行うために、数々の異なるクロマトグラフィー方法を用いることができ：コンジュゲートを、例えば、ＳＥＣ、吸着クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、ＩＥＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、アフィニティークロマトグラフィー、支持体混合（ｍｉｘｅｄ−ｓｕｐｐｏｒｔ）クロマトグラフィー、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などによって精製することができる。透析またはダイアフィルトレーションによる精製も用いることができる。
【０１７２】
本明細書で用いる「凝集物」という用語は、２つ以上の細胞結合剤の間に形成することができる会合を意味し、前記薬剤は修飾されており、またはコンジュゲーションによらない。凝集物は、溶液中高濃度の細胞結合剤、溶液のｐＨ、高せん断力、結合している二量体の数およびこれらの疎水性の性質、温度など、非常に多数のパラメータの影響下で形成することができ（ＷａｎｇおよびＧｏｓｈ（２００８年）Ｊ．Ｍｅｍｂｒ  Ｓｃｉ．、３１８巻、３１１〜３１６頁、およびそこで引用される参考文献を参照されたい）；これらのパラメータのいくつかの相対的な影響は明らかに確立されていないことに留意されたい。タンパク質および抗体の場合は、当業者であれば、Ｃｒｏｍｗｅｌｌら（２００６年）ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｎａｌ、８巻、Ｅ５７２〜Ｅ５７９頁を参照されよう。凝集物の含量は、ＳＥＣなど、当業者にはよく知られている技術で決定することができる（Ｗａｌｔｅｒら（１９９３年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２１２巻、４６９〜４８０頁を参照されたい）。
【０１７３】
工程（ｉ）または（ｉｉ）の後、コンジュゲート含有溶液を、クロマトグラフィー、限外濾過、および／またはダイアフィルトレーションのさらなる工程（ｉｉｉ）にかけることができる。
【０１７４】
コンジュゲートを、これらの工程の終わりに、水溶液中に回収する。
【０１７５】
細胞毒性剤がメイタンシノイドである本発明の実施形態において、メイタンシノイドを、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体など、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤に連結するために、メイタンシノイドは連結性部分を含むことができる。連結性部分は、完全に活性なメイタンシノイドを特定の部位で放出させる化学結合を含んでいる。適切な化学結合は当技術分野ではよく知られており、ジスルフィド結合、酸に不安定な結合、光に不安定な結合、ペプチダーゼに不安定な結合、およびエステラーゼに不安定な結合を含む。ジスルフィド結合が好ましい。
【０１７６】
連結性部分は反応性化学基も含む。一実施形態において、反応性化学基は、メイタンシノイドに、ジスルフィド結合連結性部分によって共有結合していてよい。
【０１７７】
特定の反応性化学基は、Ｎ−スクシンイミジルエステルおよびＮ−スルホスクシンイミジルエステルである。
【０１７８】
反応性化学基を含む、連結性部分を含む特定のメイタンシノイドは、連結性部分がジスルフィド結合を含み、化学的反応基がＮ−スクシンイミジルまたはＮ−スルホスクシンイミジルエステルを含む、メイタンシノールのＣ−３エステルおよびその類似体である。
【０１７９】
メイタンシノイド上の多くの位置が、連結性部分を化学的に連結するための位置として働くことができる。例えば、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されているＣ−１４位、ヒドロキシで修飾されているＣ−１５位、およびヒドロキシ基を有するＣ−２０位は全て有用であると予想される。しかし、Ｃ−３位が好ましく、メイタンシノールのＣ−３位が特に好ましい。
【０１８０】
連結性部分を有するメイタンシノールのエステルの合成を、ジスルフィド結合含有連結性部分に関して記載するが、当業者であれば、他の化学結合を有する連結性部分（上記に記載した通り）も、他のメイタンシノイド同様、本発明で用いることができることを理解されよう。他の化学結合の具体的な例には、酸に不安定な結合、光に不安定な結合、ペプチダーゼに不安定な結合、およびエステラーゼに不安定な結合が含まれる。米国特許第５，２０８，０２０号の開示は、このような結合を有するメイタンシノイドの生成を教示するものである。
【０１８１】
反応基を有するジスルフィド部分を有するメイタンシノイドおよびメイタンシノイド誘導体の合成は、米国特許第６，４４１，１６３号および第６，３３３，４１０号、ならびに米国出願第１０／１６１，６５１号に記載されている。
【０１８２】
ＤＭ１などの反応基含有メイタンシノイドは、上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した細胞結合剤と、特に、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体などの抗体と反応して細胞毒性コンジュゲートを生成する。これらのコンジュゲートを、ＨＰＬＣにより、またはゲルろ過により精製してもよい。
【０１８３】
このような細胞結合剤−メイタンシノイド、特に抗体−メイタンシノイドのコンジュゲートを生成するための、いくつかの優れたスキームは、米国特許第６，３３３，４１０号、ならびに米国出願第０９／８６７，５９８号、第１０／１６１，６５１号、および第１０／０２４，２９０号に提供されている。
【０１８４】
一般的に、抗体の水性バッファー中溶液を、反応基を有するジスルフィド部分を有する、１モル過剰のメイタンシノイドとインキュベートしてもよい。反応混合物を、過剰のアミン（例えば、エタノールアミン、タウリンなど）を加えることによりクエンチすることができる。メイタンシノイド−抗体コンジュゲートを、次いで、ゲルろ過によって精製してもよい。
【０１８５】
抗体分子１個あたりに結合しているメイタンシノイド分子の数は、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度の比を分光光度法で測定することによって決定することができる。抗体分子１個あたりメイタンシノイド分子平均１〜１０個が好ましい。
【０１８６】
メイタンシノイドを、米国出願第１０／０２４，２９０号に記載されている通り、ＰＥＧ連結基を用いて細胞結合剤に連結してもよい。これらのＰＥＧ連結基は、水および非水性溶媒の両方に溶け、１つまたはそれ以上の細胞毒性剤を細胞結合剤につなげるのに用いることができる。例示的なＰＥＧ連結基には、細胞毒性剤と細胞結合剤とに、一端で官能性スルフヒドリル基またはジスルフィド基、他端で活性エステルを介して、リンカーの反対の終端で結合するヘテロ二官能性ＰＥＧリンカーが含まれる。
【０１８７】
ＰＥＧ連結基を用いて細胞毒性コンジュゲートを合成する一般的な一例として、具体的な詳細は米国出願第１０／０２４，２９０号を再び参照されたい。合成は、反応性ＰＥＧ部分を有する１つまたはそれ以上の細胞毒性剤を細胞結合剤と反応させることで始まり、配列番号９の配列の重鎖および配列番号１０の配列の軽鎖を含むヒト化ｈｕＤＳ６抗体などの細胞結合剤のアミノ酸残基によって、各反応性ＰＥＧ部分の末端の活性エステルの置換が結果として生じて、ＰＥＧ連結基を介して細胞結合剤に共有結合している１つまたはそれ以上の細胞毒性剤を含む細胞毒性コンジュゲートが得られる。
【０１８８】
本発明のコンジュゲート分子は、あらゆる技術を用いて形成することができる。特に、本発明のトメイマイシン誘導体を、抗体、または上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した他の細胞結合剤に、酸に不安定なリンカーによって、または光に不安定なリンカーによって連結してもよい。誘導体は、適切な配列を有するペプチドと縮合し、引き続き細胞結合剤に連結してペプチダーゼに不安定なリンカーを生成することができる。コンジュゲートは、第一級ヒドロキシル基を含むように調製してもよく、これをスクシニル化し、細胞結合剤に連結して、細胞内エステラーゼによって切断して遊離の誘導体を遊離することができるコンジュゲートを生成することができる。好ましくは、誘導体を、遊離の、または保護されているチオール基を含むように合成し、次いで、１つまたはそれ以上のジスルフィドまたはチオール含有誘導体を各々、ジスルフィド結合またはチオエーテル連結により各々細胞結合剤に共有結合で連結する。
【０１８９】
多数のコンジュゲーションの方法が、米国特許第５，４１６，０６４号および第５，４７５，０９２号に教示されている。トメイマイシン誘導体を修飾して遊離のアミノ基を得、次いで、抗体または他の細胞結合剤に、酸に不安定なリンカーによって、または光に不安定なリンカーによって連結してもよい。遊離のアミノ基またはカルボキシル基を有するトメイマイシン誘導体を、ペプチドと縮合し、引き続き細胞結合剤に連結させてペプチダーゼに不安定なリンカーを生成してもよい。リンカー上に遊離のヒドロキシル基を有するトメイマイシン誘導体をスクシニル化し、細胞結合剤に連結して、細胞内エステラーゼによって切断されて遊離の薬物を遊離することができるコンジュゲートを生成してもよい。トメイマイシン誘導体を処理して遊離の、または保護されているチオール基を作り出し、次いで、ジスルフィド含有またはチオール含有のトメイマイシン二量体を、細胞結合剤に、ジスルフィド結合により連結するのが最も好ましい。
【０１９０】
一実施形態において、モノクローナル抗体−または細胞結合剤−トメイマイシン誘導体のコンジュゲートは、トメイマイシン誘導体を送達することができる、上記に論じた、ジスルフィド結合によりつながれているものである。このような細胞結合性コンジュゲートは、モノクローナル抗体をスクシンイミジルピリジル−ジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）で修飾するなど、知られている方法によって調製される（Ｃａｒｌｓｓｏｎら（１９７８年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１７３巻、７２３〜７３７頁）。結果として得られたチオピリジル基を、次いで、チオール含有トメイマイシン誘導体で処理することによって置き換えて、ジスルフィド連結したコンジュゲートを生成する。あるいは、アリールジチオ−トメイマイシン誘導体の場合は、細胞結合コンジュゲートの形成は、トメイマイシン誘導体のアリール−チオールを、抗体分子中にあらかじめ導入したスルフヒドリル基によって直接置き換えることによりもたらされる。ジスルフィド架橋によって連結したトメイマイシン誘導体の薬物を１から１０個含むコンジュゲートは、いずれかの方法によって容易に調製される。
【０１９１】
より詳しくは、２ｍＭ  ＥＤＴＡを含むｐＨ７．５の０．０５Ｍリン酸カリウムバッファー中濃度２．５ｍｇ／ｍｌのジチオ−ニトロピリジル修飾した抗体の溶液を、チオール含有トメイマイシン誘導体で処理する（１．３モル当量／ジチオピリジル基）。修飾した抗体からのチオ−ニトロピリジンの放出を、分光光度法により３２５ｎｍでモニタリングし、約１６時間で完了する。抗体−トメイマイシン誘導体コンジュゲートを精製し、未反応の薬物および他の低分子量の材料を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５またはＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ３００のカラムを通したゲルろ過によって除去する。抗体１分子あたりに結合しているトメイマイシン誘導体部分の数を、２３０ｎｍおよび２７５ｎｍの吸光度の比を測定することによって決定することができる。抗体１分子あたり平均１〜１０個のトメイマイシン誘導体分子を、この方法によりジスルフィド結合によって連結することができる。
【０１９２】
抗原発現性細胞に対する結合親和性に対するコンジュゲーションの効果は、Ｌｉｕら（１９９６年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、９３巻、８６１８〜８６２３頁によって以前に記載されている方法を用いて決定することができる。トメイマイシン誘導体およびその抗体コンジュゲートの細胞系に対する細胞毒性は、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒら（１９８５年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３５巻、３６４８〜３６５１頁に記載されている通り、細胞増殖曲線の逆外挿法により測定することができる。これらの化合物の接着細胞系に対する細胞毒性は、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒら（１９８６年）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１０２巻、１３１２〜１３１９頁に記載されている通り、クローン原性アッセイにより決定することができる。
【０１９３】
薬物対抗体比
一実施形態によると、本発明によるコンジュゲートは、ＤＡＲ  ＵＶにより測定して、１から１０までの、例えば２から５までの、特に３から４までの範囲の、より詳しくは３．５の「薬物対抗体比」（または「ＤＡＲ」）により特徴付けられる。これは一般的に、メイタンシノイド分子を含むコンジュゲートの場合である。
【０１９４】
このＤＡＲの数は、コンジュゲーションに用いる実験条件（例えば、細胞毒性剤／細胞結合剤の比、反応時間、溶媒の性質、およびあるとすれば共溶媒の性質）と一緒に、用いられる、細胞結合剤の、特に抗体の、ならびに薬物（すなわち、細胞毒性剤）の性質で変動し得る。よって、細胞結合剤と細胞毒性剤との間の接触により、異なる薬物対抗体比によって相互に異なるいくつかのコンジュゲート；場合によりネイキッドの細胞結合剤；場合により凝集物を含む混合物が導かれる。決定されるＤＡＲはゆえに平均値である。
【０１９５】
ＤＡＲを決定するのに用いることができる方法は、本明細書ではＤＡＲ  ＵＶと呼び、実質的に精製されたコンジュゲートの溶液の、λＤおよび２８０ｎｍでの吸光度の比を分光光度法で測定することにある。２８０ｎｍは、抗体濃度などのタンパク質濃度を測定するのに一般的に用いられる波長である。波長λＤは、薬物を抗体から識別させるために選択され、すなわち当業者であれば容易に分かる通り、λＤは薬物が高い吸光度を有する波長であり、λＤは、薬物および抗体の吸光度のピークが実質的に重なるのを回避するために、２８０ｎｍから十分に離れている。λＤは、メイタンシノイド分子の場合は２５２ｎｍであるように選択することができる。ＤＡＲを計算する方法はＡｎｔｏｎｙ  Ｓ．Ｄｉｍｉｔｒｏｖ（編）、ＬＬＣ、２００９年、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、５２５巻、４４５頁、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅに由来してもよい。
【０１９６】
λＤ（ＡλＤ）および２８０ｎｍ（Ａ２８０）でのコンジュゲートに対する吸光度は、古典的な分光光度計装置を用いて測定される（「ＤＡＲパラメータ」の計算を可能にする）。吸光度は以下の通り表すことができ：
ＡλＤ＝（ｃＤ×εＤλＤ）＋（ｃＡ×εＡλＤ）
Ａ２８０＝（ｃＤ×εＤ２８０）＋（ｃＡ×εＡ２８０）
ここで、
ｃＤおよびｃＡはそれぞれ、溶液中の薬物および抗体の濃度であり、
εＤλＤおよびεＤ２８０はそれぞれ、λＤおよび２８０ｎｍでの薬物のモル吸光係数であり、
εＡλＤおよびεＡ２８０はそれぞれ、λＤおよび２８０ｎｍでの抗体のモル吸光係数
である。
【０１９７】
２つの未知数を有するこれらの２つの等式の解は、以下の等式を導く：
ｃＤ＝［（εＡ２８０×ＡλＤ）−（εＡλＤ×Ａ２８０）］／［（εＤλＤ×εＡ２８０）−（εＡλＤ×εＤ２８０）］
ｃＡ＝［Ａ２８０−（ｃＤ×εＤ２８０）］／εＡ２８０
【０１９８】
ＤＡＲの平均を、次いで、薬物濃度の抗体濃度に対する比から計算する：ＤＡＲ＝ｃＤ／ｃＡ
【０１９９】
特定の実施形態において、λＤは２５２ｎｍである。
【０２００】
したがって、その特定の実施形態において、コンジュゲートは、３から４までの範囲、特に３．５の薬物対抗体比（ＤＡＲ）によって特徴付けられ、ＤＡＲは、細胞毒性剤濃度（ｃＤ）の細胞結合剤濃度（ｃＡ）に対する比から計算される；
ＤＡＲ＝ｃＤ／ｃＡ
ここで、
ｃＤ＝［（εＡ２８０×Ａ２５２）−（εＡ２５２×Ａ２８０）］／［（εＤ２５２×εＡ２８０）−（εＡ２５２×εＤ２８０）］
ｃＡ＝［Ａ２８０−（ＣＤ×εＤ２８０）］／εＡ２８０
であり、
εＤ２５２およびεＤ２８０はそれぞれ、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍでの細胞毒性剤のモル吸光係数であり、
εＡ２５２およびεＡ２８０はそれぞれ、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍでの細胞結合剤のモル吸光係数であり、
Ａ２５２およびＡ２８０はそれぞれ、古典的な分光光度計装置を用いて測定した、２５２ｎｍ（Ａ２５２）および２８０ｎｍ（Ａ２８０）でのコンジュゲートに対する吸光度である。
【０２０１】
処置
本発明者らは、癌、特に乳癌または卵巣癌、より詳しくは乳癌に罹患している患者に、少なくとも用量１２０ｍｇ／ｍ２のコンジュゲートＳＡＲ５６６６５８を投与した場合、少なくとも特定の応答を示すことを実証した。
【０２０２】
本発明は、よって、癌を処置するのに用いるための、（ｉ）本明細書上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義したヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）本明細書上記の「細胞毒性剤」のセクションにおいて定義した少なくとも１つの細胞毒性剤に連結しているコンジュゲートであって、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で投与されるコンジュゲートに関する。
【０２０３】
本発明はまた、癌の処置を意図する薬物を製造するための、（ｉ）本明細書上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した、ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）本明細書上記の「細胞毒性剤」のセクションにおいて定義した少なくとも１つの細胞毒性剤と連結しているコンジュゲートの使用に関し、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量で前記コンジュゲートが投与される。
【０２０４】
本発明はまた、（ｉ）本明細書上記の「細胞結合剤」のセクションにおいて定義した、ヒトムチン−１（ＭＵＣ１）糖タンパク質に結合する細胞結合剤を含み、（ｉｉ）本明細書上記の「細胞毒性剤」のセクションにおいて定義した少なくとも１つの細胞毒性剤と連結しているコンジュゲートを、少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量でそれを必要とする患者に投与することを含む、患者における癌を処置するための方法に関する。
【０２０５】
本発明の文脈において、本明細書で用いる「処置する」または「処置」という用語は、このような語を適用する障害もしくは状態、またはそのような障害もしくは状態の１つもしくはそれ以上の症状を、逆転し、軽減し、その進行を阻害し、または防止することを意味する。
【０２０６】
本明細書で用いる「癌を処置する」という用語は、腫瘍の悪性細胞の成長、および／または前記腫瘍からの転移の進行の阻害を意味する。このような処置により、腫瘍の成長の退行、すなわち測定可能な腫瘍のサイズの低減もまねくことができる。特定の実施形態において、このような処置は、腫瘍または転移の部分的な退行をまねく。別の特定の実施形態において、このような処置は、腫瘍または転移の完全な退行をまねく。
【０２０７】
本発明によると、「患者」または「それを必要とする患者」という用語は、悪性腫瘍に罹患している、または罹患する可能性のある、ヒトまたは非ヒトの哺乳動物を意図する。
【０２０８】
特定の実施形態において、処置しようとする患者は、他の抗癌処置で以前に処置されている。特に、処置しようとする患者は、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、および／またはパクリタキセル−ドセタキセルベースのレジメンで以前に処置されている。
【０２０９】
本発明のコンジュゲートの「治療有効量」は、あらゆる医学的処置に適用できる理にかなった損益比で、前記癌疾患を処置するのに十分な量のコンジュゲートを意味する。しかし、本発明のコンジュゲートの毎日使用の合計は、主治医が健全な医学的判断の範囲内で決定するものと理解されよう。あらゆる特定の患者に対する特定の治療有効用量レベルは、処置する障害および障害の重症度；使用する特定のコンジュゲートの活性；使用する特定の組成物、患者の年齢、体重、全身の健康、性別、および食事；使用する特定のコンジュゲートの投与時間、投与経路、および排泄速度；処置の持続時間；使用する特定のコンジュゲートと組み合わせて、または同時に用いる薬物；ならびに医学の技術分野においてよく知られている同様のファクターを含む多様なファクターに依存する。
【０２１０】
特定の実施形態において、患者に投与するコンジュゲートの前記治療有効量は、１２０ｍｇ／ｍ２から２４０ｍｇ／ｍ２までの範囲の、より詳しくは１５０ｍｇ／ｍ２から２４０ｍｇ／ｍ２までの範囲の用量、特に１９０ｍｇ／ｍ２の用量である。
【０２１１】
さらなる実施形態において、本発明のコンジュゲートは、処置しようとする患者に応じたプロトコール（年齢、体重、処置歴など）に従って反復投与され、プロトコールは熟練した医師が決定することができる。本発明の一態様において、本発明のコンジュゲートを、各投与間の間隔が３週間の間欠的なプログラムに従って患者に投与し、この間隔は投与に先立つ認容性に応じて１週間から２週間延長してもよい。したがって、特定の実施形態において、コンジュゲートの投与は、３週ごとに新たなサイクルとして反復される。
【０２１２】
さらなる実施形態において、周期の中央数は２である。
【０２１３】
本発明のコンジュゲートは、治療用組成物を形成するための、薬学的に許容される賦形剤、および場合により生分解性ポリマーなどの徐放マトリクスを含む、医薬組成物の形態において投与してもよい。
【０２１４】
「薬学上」または「薬学的に許容される」は、適宜、哺乳動物、特にヒトに投与した場合、有害な、アレルギー性の、または他の不都合な反応を生成しない分子実体および組成物を指す。薬学的に許容される担体または賦形剤は、非毒性の固体の、半流動性の、または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、またはあらゆるタイプの製剤補助剤を指す。
【０２１５】
本発明のコンジュゲートを含む医薬組成物の形態、および投与経路は、処置しようとする状態、疾患の重症度、患者の年齢、体重、および性別などに、当然依存する。
【０２１６】
本発明のコンジュゲートは、局所、経口、非経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下、または眼内投与などに調合することができる。特定の実施形態において、本発明のコンジュゲートは静脈内投与される。
【０２１７】
特に、本発明のコンジュゲートを含む医薬組成物は、注射することができる製剤に薬学的に許容されるビヒクルを含むことができる。これらは特に、等張の、無菌の、食塩水（リン酸一ナトリウムもしくは二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、もしくは塩化マグネシウムなど、またはこれらの塩の混合物）、または場合に応じて、無菌した水もしくは生理学的食塩水を加えると注射用溶液を構成することができる、乾燥した、特に凍結乾燥した組成物であってよい。
【０２１８】
医薬組成物を調製するために、有効量の本発明のコンジュゲートを、薬学的に許容される担体または水性媒体中に溶解または分散してもよい。
【０２１９】
注射用の使用に適する薬学形態には、無菌の水溶液または分散体、および無菌の注射用溶液または分散体を即席に調製するための無菌の粉末が含まれる。全ての場合において、形態は無菌でなければならず、容易な注射器使用可能性が存在する程度に流動性でなければならない。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対抗して保存しなければならない。
【０２２０】
担体は、例えば、水、エタノール、多価アルコール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにこれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であってよい。例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合には必要とされる粒子径を維持することによって、および界面活性剤、安定化剤、凍結保護剤または抗酸化剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。微生物の作用の防止は、抗菌剤および抗真菌剤によってもたらすことができる。多くの場合、例えば糖または塩化ナトリウムなどの等張剤を含むのが好ましい。
【０２２１】
無菌の注射用溶液は、必要とされる量の有効成分を、適宜、上記に列挙したいくつかの他の成分とともに好適な溶媒中に組み入れ、引き続きろ過滅菌することにより調製する。一般的に、分散体は、多様な無菌の有効成分を、基本的な分散媒体、および上記に列挙したものから必要とされる他の成分を含む無菌のビヒクル中に組み入れることにより調製される。無菌の注射用溶液を調製するための無菌粉末の場合は、好ましい調製方法は、有効成分プラス予め滅菌ろ過したその溶液からのあらゆるさらなる所望の成分の粉末を生じる、真空乾燥および凍結乾燥の技術である。
【０２２２】
調合時、溶液を、投薬製剤と適合する様式において、および治療上有効であるような量において投与する。製剤は、上記に記載した注射用溶液のタイプなど、多様な剤形において容易に投与されるが、薬物放出カプセルなども使用することができる。
【０２２３】
例えば、水溶液における非経口投与には、溶液を、必要であれば適切に緩衝化しなければならず、液体の希釈剤を、十分な食塩水またはグルコースで最初に等張にしなければならない。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内の投与に特に適する。この関連において、使用することができる無菌の水性媒体は、当業者には本開示に鑑みて知られている。例えば、１用量を、等張ＮａＣｌ溶液１ｍＬに溶解し、皮下注入液１０００ｍＬに加え、または注入に提唱される部位に注射することができる（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」１５版、１０３５〜１０３８頁および１５７０〜１５８０頁を参照されたい）。用量におけるいくつかの変形が、処置する対象の状態に応じて必ず生じる。投与を担う人間は、とにかく、個々の対象に好適な用量を決定する。
【０２２４】
特定の実施形態において、本発明のコンジュゲートを、１ｍＬ／分の速度で３０分間静脈内投与し、次いで、過敏反応の非存在下、最大速度２ｍＬ／分に増大するのが適切である。
【０２２５】
本発明に従って処置しようとする癌には、あらゆるタイプの悪性腫瘍、特に固形腫瘍、例えば、乳癌および卵巣癌が含まれる。
【０２２６】
一実施形態において、本発明に従って処置しようとする癌は、ＣＡ６陽性腫瘍である。さらなる実施形態において、処置しようとする癌は乳癌であり、より詳しくはエストロゲン、プロゲステロン、またはＨＥＲ２に対する受容体に陽性でない、トリプルネガティブ乳癌である。
【０２２７】
本発明のコンジュゲートは、角膜炎を防止またはコントロールするための薬物療法と、特に角膜炎を予防または治療する眼組成物と併用して投与してもよい。
【０２２８】
配列の簡単な説明
【表１】
2016525560.tif 000026
【図面の簡単な説明】
【０２２９】
【図１】用量上昇の判定を考慮に入れ、用量レベルおよび主要なイベントにより、処置した患者をまとめた図である。
【図２】実施例に表した処置の間に観察された最悪のグレードの眼毒性を示す図である（患者１人および１サイクルあたり）。
【図３】実施例のセクション２．６．３において測定したＤＬＣＯ低下（患者１人および１サイクルあたり）を示す図である。
【実施例】
【０２３０】
材料と方法
治験デザイン
本治験は、化合物ＳＡＲ５６６６５８を単一薬剤として３週間ごとに静脈内（ＩＶ）注入することにより、ＣＡ６陽性および治療抵抗性の固形腫瘍を有する成人患者に投与する、ＳＡＲ５６６６５８の最大耐量（ＭＴＤ）を決定するためのオープンラベルの用量漸増試験としてデザインされた。
【０２３１】
主要評価項目
ＳＡＲ５６６６５８の用量規定毒性（ＤＬＴ）および最大耐量（ＭＴＤ）を３週ごとにＩＶで決定するために、毒性を、米国立癌研究所有害事象共通用語基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）バージョン４．０３（ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖ．４．０３）に従ってグレード分けした。
【０２３２】
用量規定毒性を、試験処置の最初の３週間の間、ＳＡＲ５６６６５８化合物に無関係な場合を除くあらゆる以下のイベントと定義した：
血液毒性
−  グレード４の好中球減少症が連続７日以上、
−  発熱性好中球減少症または好中球減少性感染症、
−  グレード４の血小板減少症、またはグレード３の血小板減少症を有する輸血を必要とする出血。
非血液毒性
−  注入反応が２４時間以内に消散せず、ＩＭＰの全用量を投与することができない場合の、グレード４の注入反応またはグレード３の注入反応、
−  十分な制吐薬処置にもかかわらず４８時間以内にグレード≦１に消散しない、グレード４の嘔吐またはグレード３の悪心もしくは嘔吐、
−  あらゆる他のグレード３以上の非血液の臨床上の有害事象（ＡＥ）、
−  あらゆるグレード３以上の検査異常、
−  ベースラインまたはグレード≦１への回復の遅れによる、２週間を超える処置の遅れをもたらす、ＳＡＲ５６６６５８に関連するあらゆる毒性。
【０２３３】
用量漸増規則
ＳＡＲ５６６６５８の出発用量レベル（ＤＬ）は１０ｍｇ／ｍ２用量であった。
【０２３４】
加速性の用量漸増スキームを、第１サイクルの処置の間に観察された毒性に基づいて、最初の２つのＤＬである１０ｍｇ／ｍ２および２０ｍｇ／ｍ２に用いた：ＤＬ１つあたり患者１人、およびあらゆるグレード≧２のＳＡＲ５６６６５８関連のＡＥが報告されるまで２つのＤＬ間で１００％の用量漸増。患者がグレード≧２のＳＡＲ５６６６５８関連のＡＥを報告した場合、さらなる２人の患者を同じＤＬで処置し、用量漸増を古典的なスキームで進めなければならない。
【０２３５】
毒性の非存在下であっても、４０ｍｇ／ｍ２のＤＬから、用量漸増を古典的スキームで進めた（「３＋３」）。用量を２５％ずつ、１００％ではなく５０％まで増大し、ＣＡ６陽性の進行した固形腫瘍を有する患者各３〜６人の一連のコホートを、連続的に高用量のＳＡＲ５６６６５８で３週間ごとに処置した。現在の用量レベルで処置した少なくとも３人の患者を少なくとも３週間追跡し、以下に記載する用量漸増基準を満たすまで、高用量レベルでの登録は進行しないこともあった：
【０２３６】
【表２】
2016525560.tif 000027
【０２３７】
試験集団
標準的な治療が利用可能ではない、ＣＡ６陽性固形腫瘍を有する患者。
【０２３８】
免疫組織化学（ＩＨＣ）（すなわち、腫瘍細胞の３０％以上が中程度から強度の膜染色である）によって定義されるＣＡ６の陽性を、ごく最近入手できた腫瘍試料に対して中央検査室で評価した。
【０２３９】
ＳＡＲ５６６６５８
製剤：ＳＡＲ５６６６５８は、ガラスバイアル３０ｍＬに含まれる注入用溶液１２５ｍｇに対する２５ｍＬの抽出可能濃度として供給された。
【０２４０】
投与経路：ＳＡＲ５６６６５８をＩＶ注入により１ｍＬ／分の速度で３０分間投与し、次いで、過敏反応の非存在下で最大速度２ｍＬ／分に上昇させた。
【０２４１】
用量レジメン／期間：１日目にＳＡＲ５６６６５８を投与し、２１日ごとに反復した。これが処置の１サイクルを構成する。疾患が進行する、毒性が許容できない、または停止の意向があるまで、患者は処置を継続し得、その後最短３０日来所した。
【０２４２】
全患者に対して評価可能なサイクルが少なくとも２サイクルあるように、第１の治験のカットオフ日を、用量漸増段階において最終の患者を処置した６週間後（サイクル２の終わり）に計画した。第１の試験のカットオフ日は実際、用量漸増段階において最終の患者を処置した５週間後に行った。したがって、この最終の患者ではサイクル１しか含まれなかった。
【０２４３】
試験期間
最初の患者を処置した日：２０１０年９月１５日
最後の患者を処置した日：２０１３年６月１２日
【０２４４】
患者数
登録：４３人
処置：３４人
以下に対して評価可能：
−  安全性：３４人
−  ＤＬＴ：３４人
−  薬物動態：３３人
−  薬力学：３４人
−  効能：３３人
【０２４５】
結果
１．試験患者
１．１．患者の説明責任
２０１０年９月１５日から２０１３年６月１２日まで、米国２か所および欧州２か所（スペイン１か所およびフランス１か所）において患者４３人が、このフェーズＩ試験の漸増工程に登録し、３４人を処置した。
【０２４６】
１．２．試験の内訳
患者３４人から、２８人が試験処置を中断し、６人は未だに処置を受けている。ＳＡＲ５６６６５８処置集団中、処置を中断した最も一般的な理由は、表１に記載する通り「進行性疾患」であった。処置を中断した他の理由は、３人の患者で有害事象（ＡＥ）であった：１２０ｍｇ／ｍ２の＃８４０  ００２  ０１９（膵臓癌患者における肝機能試験の上昇）、１９０ｍｇ／ｍ２の＃８４０  ００２  ０２９（膵臓癌患者における非関連の肺塞栓症）、２４０ｍｇ／ｍ２の＃８４０  ００１  ０３７（関連の下痢および嘔吐）。
【０２４７】
【表３】
2016525560.tif 000028
【０２４８】
１．３．人口統計およびベースラインの特徴
ベースライン時に分かっていた患者の特徴データを表２に示す。
【０２４９】
患者の大多数は年齢３２歳から７７歳（患者１１人が６５歳以上）の女性（２３／３４、６８％）であり、ＥＣＯＧパフォーマンスステータスは良好であった（１００％がグレード０または１）。
【０２５０】
原発腫瘍の位置は多様であったが、最も頻度の高い腫瘍は卵巣癌であり（１３／３４、３８％）、次いで膵臓癌（１０／３４、２９％）、および乳癌（４／３４、１２％）であった。癌腫が最も頻度の高い組織学的タイプであり、主に腺癌（１３／３４、３８％）および上皮癌（１３／３４、３８％、全て卵巣癌）であった。
【０２５１】
関与した最も頻度の高い器官は：肝臓（１８／３４、５３％）、腹膜（１３／３４、３８％）、リンパ節（１３／３４、３８％）、および肺（１１／３４、３２％）であった。
【０２５２】
【表４】
2016525560.tif 000029
【０２５３】
表３に記載する通り、試験参加時に全患者をＣＡ６発現（ＩＨＣ）に対して評価した。２７人の患者（２７／３４、７９．４％）がＣＡ６陽性腫瘍を有し、陽性腫瘍細胞の少なくとも３０％が膜染色強度２＋および３＋であった。その殆どが改正３にこの閾値を実行する前に登録したため、７人の患者で染色細胞のパーセント値がこの閾値未満であった。
【０２５４】
【表５】
2016525560.tif 000030
【０２５５】
２．結果−安全性
２．１．用量および期間
患者３４人に合計１１４サイクルを投与した：表４に表す通り、用量レベル≦６０ｍｇ／ｍ２  １９サイクル、用量レベル９０ｍｇ／ｍ２  ７サイクル、用量レベル１２０ｍｇ／ｍ２  １７サイクル、用量レベル１５０ｍｇ／ｍ２  ２３サイクル、用量レベル１９０ｍｇ／ｍ２  １８サイクル、および用量レベル２４０ｍｇ／ｍ２  ３０サイクル。
【０２５６】
サイクルの全体の中央数は２であり、１から１４の範囲であった（１２０ｍｇ／ｍ２）。しかし、受けたサイクルの数は、殆どの患者が１または２サイクル後に疾患の進行のため中断した低用量に比べて、１２０ｍｇ／ｍ２以上の用量では高かった。
【０２５７】
数サイクルの遅れ（１８／１４４サイクル）が観察され、その殆どは１５０ｍｇ／ｍ２以上の用量で、予想されるＳＡＲ５６６６５８毒性である角膜炎のためであった。
【０２５８】
ＳＡＲ５６６６５８用量の低減は殆どなく（７／１１４サイクル）、そのうち５人は角膜炎のため２４０から１９０ｍｇ／ｍ２への低減であった（表４）。
【０２５９】
相対用量強度（ＲＤＩ）は、６／８人の患者でサイクルの遅れおよび／または用量の低減のため、２４０ｍｇ／ｍ２（０．７９）を除き、全用量レベルで１に近かった。
【０２６０】
【表６】
2016525560.tif 000031
【０２６１】
２．２．有害事象
治療下で発現したＡＥ（ＴＥＡＥ）を、ＳＡＲ５６６６５８の第１用量から最終用量の３０日後までの期間と定義した、処置中の期間の間に観察されたＡＥと定義した。
【０２６２】
患者３３人（３３／３４、９７．１％）に、試験処置との関係にかかわらず、少なくとも１つの臨床上のＴＥＡＥが全グレードあった（検査所見の異常はここでは報告しない）。１５０ｍｇ／ｍ２のＤＬから主に観察された眼の事象を除き、用量依存性のＡＥは観察されなかった。
【０２６３】
最も頻度の高い臨床上のＴＥＡＥ（少なくとも６人の患者における、試験処置との関係にかかわらず、全グレード）は以下の通りであった：
−  無力症／疲労（ＨＬＴ）（患者２８人、８２．３％、試験薬関連のイベントを有する患者１６人を含む）
−  食欲減退（患者１３人、３８．２％、試験薬関連のイベントを有する患者４人を含む）
−  角膜炎（患者１１人、３２．４％、全て試験薬関連のイベントと考えられる）
−  消化管および腹部の疼痛（ＨＬＴ）（患者１０人、２９．４％）
−  悪心（患者１０人、２９．４％、試験薬関連のイベントを有する患者６人を含む）
−  末梢神経障害（ＨＬＴ）（患者１０人、２９．４％、試験薬関連のイベントを有する患者５人を含む）。異常感覚／知覚異常および末梢神経障害の両方が同じサイクルにあった１人を含めて、３人の患者に異常感覚または知覚異常があったことに注意されたい。合計１２人の患者に、末梢神経障害のイベントがあった。
−  ドライアイ（患者８人、２３．５％、試験薬関連のイベントを有する患者５人を含む）
−  便秘、嘔吐、筋骨格および結合組織の疼痛（ＨＬＴ）（各イベント：患者８人、２３．５％）
−  下痢（患者７人、２０．６％）
−  不安、浮腫（ＨＬＴ）（各イベント：患者６人、１７．６％）
【０２６４】
角膜炎、ドライアイなどの眼のイベント、および末梢神経障害はＳＡＲ５６６６５８に予想されるイベントであり、ＤＭ４をローディングしたＡＤＣに起因するものとされる（セクション２．６．１を参照されたい）。
【０２６５】
試験処置に関連すると考えられる全体的なＴＥＡＥは、減少順に：無力症／疲労（患者１６人）、角膜炎（患者１１人）、悪心、嘔吐（患者各６人）、末梢神経障害または異常感覚／知覚異常（患者それぞれ５人および３人）、ドライアイ（患者５人）、食欲減退およびかすみ目（患者各４人）であった。
【０２６６】
１１人の患者（３２．３％）に少なくとも１つのグレード３〜４のＴＥＡＥがあった（試験処置との関係にかかわらず、試験異常を除く）：以下の各用量レベル：６０、９０、１２０、および１５０ｍｇ／ｍ２に１つ、１９０ｍｇ／ｍ２用量レベルに３つ（５０％）、ならびに２４０ｍｇ／ｍ２に４つ（５０％）。合計４人の患者に、試験処置に関連すると考えられる少なくとも１つのグレード３〜４の臨床上のＴＥＡＥがあった：角膜炎（２人、グレード３のかすみ目のあった患者１人を含む）、嘔吐および下痢（患者１人）、および以下のイベントを有する患者１人：ＦＥＶ１低下および駆出力低下（肺塞栓症および疾患の進行の場面における）。１つを除いて全てが２４０ｍｇ／ｍ２ＤＬで観察された。他の患者２人に試験処置に関連すると考えられるグレード３〜４の検査異常があった：１５０ｍｇ／ｍ２（患者１人）に好中球減少症および１２０ｍｇ／ｍ２（患者１人）にトランスアミナーゼの上昇。
【０２６７】
血液学的試験の異常（好中球減少症、貧血、および血小板減少症）を、試験処置時に収集した血液評価によって決定した（表５）。グレード３の好中球減少症が２つ、１５０および１９０ｍｇ／ｍ２のＤＬに観察され、１つがサイクルの遅れをまねいた。
【０２６８】
【表７】
2016525560.tif 000032
【０２６９】
膵臓癌患者５人に、重症の肝機能試験異常があり（グレード３のトランスアミナーゼＡＳＴまたはＡＬＴを有する患者２人、グレード３のアルカリホスファターゼ上昇を有する患者４人、グレード３のビリルビン上昇を有する患者３人）、いかなる明白な用量−関連性はなかった。グレード４は報告されなかった。
【０２７０】
様々な低用量の患者５人にグレード１のクレアチニン上昇があり、グレード２以上は報告されなかった。
【０２７１】
２．３．ＭＴＤおよび用量限定毒性の決定
合計３４人の患者を、９つの用量レベルにおいて試験の用量漸増部分において処置した：１０ｍｇ／ｍ２  １人、２０ｍｇ／ｍ２  １人、４０ｍｇ／ｍ２  ４人、６０ｍｇ／ｍ２  ５人、９０、１２０、および１５０ｍｇ／ｍ２のＤＬ各３人、１９０ｍｇ／ｍ２  ６人、および２４０ｍｇ／ｍ２  ８人。
【０２７２】
全患者が、安全性および用量規定毒性（ＤＬＴ）に評価可能であった。ＤＬＴ観察期間を、試験処置の第１のサイクルと定義した。ＤＬＴ、およびＤＬＴ判定基準を満たすがサイクル１の後（後続のサイクル）に観察された有害事象を、表６に表す。
【０２７３】
【表８】
2016525560.tif 000033
【０２７４】
図１は、処置した患者を、用量漸増の決定を考慮に入れて用量レベルおよび主要なイベントによってまとめたものである。
【０２７５】
プロトコールに従って、加速性の用量漸増スキームを２つの第１の用量レベル（ＤＬ）に用い、用量漸増スキームは第１サイクルの処置の間に観察された毒性に基づくものであった。１０ｍｇ／ｍ２（ＤＬ１）および２０ｍｇ／ｍ２（ＤＬ２）で処置した患者に、グレード２以上の関連する毒性、または肺機能試験（ＰＦＴ）における変化は存在せず、ＤＬ２に、次いでＤＬ３に用量漸増することができた。この４０ｍｇ／ｍ２のＤＬ３から、用量漸増は古典的なスキームで進行した（３＋３デザイン）。
【０２７６】
３人の患者を４０ｍｇ／ｍ２で処置した。ＤＬＴは観察されなかった。しかし、全患者がサイクル１の終わりに一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）の低下を経験し、３人が１週間後に反復試験で確認されたが、値は依然として正常範囲内であった。これらの低下は、ＮＣＩ−ＣＴＣ４．０３に従ってグレード０または１と解釈した。プロトコールで述べた通り、外部の呼吸器学者に相談した。その間に、試験委員会は、そのＤＬにさらなる患者を含める決定をした。この患者にＤＬＴはなかったが、サイクル１の終わりにＤＬＣＯの低下をやはり経験した。これら４人の患者についての専門家の論評および評価は以下の通りであった：「ベースライン値に比べて＞１５％のＤＬＣＯにおける低下は、肺毒性を評価するのに意味のある変化である。しかし、患者歴が主要因子である。特に、進行した悪性疾患、特に治療前に肺に潜在的に毒性であることが知られており、試験前１年以内に受けている進行した悪性疾患（「リコール」現象）が交絡因子である。加えて、依然として正常範囲にあれば、低下は著しい値ではなかった」。ＤＬＣＯ低下のこれらのイベントを、専門家は、ＤＬＴとみなさず、予想される範囲の変動内であるとみなし、用量漸増を行うことを推奨した。この決定は、試験委員会によってさらに保証された。
【０２７７】
進行することが決定してから、３人の患者を第４の用量レベル（６０ｍｇ／ｍ２）で処置した。ＤＬＴを経験した患者はいなかった。患者１人（８４０００２００８）がサイクル１の終わりに＞１５％のＤＬＣＯ低下を経験し、これは受動的無気肺を有する胸水の増悪の場面において生じた（疾患の進行）。その他の患者２人は＞１５％のＤＬＣＯ低下を経験しなかった。しかし、３人中２人の患者が、予想と異なる薬物動態（ＰＫ）プロファイルを有し：Ｃｍａｘは用量比例的に予想された通りであったが、ＡＵＣはより低かった。その結果、さらなる患者２人を登録させて、このＤＬのさらなるＰＫデータを得ることに決定した。これら最後の２人の患者（第４および第５）のＰＫパラメータ（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ、ＣＬ、およびＶｓｓ）は、６０ｍｇ／ｍ２用量レベルに予想されたものを反映した。Ｃｍａｘ、ＡＵＣ、ＣＬ、およびＶｓｓ値は、予想されたものを反映した。この同じ用量レベルの患者（５人中）２人の予想外のＰＫ結果は、現在説明のないままであり、患者間の変動に起因し得る。＞１５％のＤＬＴおよびＤＬＣＯの低下は、このＤＬ４で処置した（６０ｍｇ／ｍ２）さらなる２人の患者に観察されなかった。１人の患者は、疾患の進行の場面において、サイクル１に重症のＡＥ（ＳＡＥ）を経験した（非関連のグレード４の全身健康の悪化およびグレード３の高ビリルビン血症）。この患者は、第１の注入を受けた後２７日目に悪性疾患で死亡した。ＤＬ４の患者２人（６０ｍｇ／ｍ２）は、記録された疾患の進行の場面において観察される非関連のグレード３または４のＡＥを有し：１人の患者（上記に記載）は門脈血栓症、高ビリルビン血症、全身健康の悪化を経験し、１人の患者はトランスアミナーゼの上昇およびアルカリホスファターゼの上昇を有した。両患者とも転移性の膵臓癌を有した。試験委員会は、次の用量レベル（ＤＬ５  ９０ｍｇ／ｍ２）への漸増に同意した。
【０２７８】
３人の患者を以下の各用量レベルで処置した：第５ＤＬ（９０ｍｇ／ｍ２）、第６ＤＬ（１２０ｍｇ／ｍ２）、第７ＤＬ（１５０ｍｇ／ｍ２）、および第８ＤＬ（１９０ｍｇ／ｍ２）。ＤＬＴは報告されず、後続のＤＬでの用量漸増が認められた。９０ｍｇ／ｍ２では、患者１人（８４０００１０１５）が、サイクル１の終わりに＞１５％のＤＬＣＯ低下を経験し、これは肺リンパ管炎の悪化の場面において生じた（疾患の進行）。１２０ｍｇ／ｍ２では、患者１人（７２４００１０２２）が、サイクル１の終わりに＞１５％のＤＬＣＯ低下を経験し、これは、呼吸器学者の報告によると、ＰＦＴの結果におけるこの低下を説明し得る、患者の全身状態の悪化、腹水の増大、および呼吸筋の衰弱の場面において生じた。１５０ｍｇ／ｍ２では、患者１人（７２４００１０２６）が、サイクル１の終わりに、反復試験で確認されない、＞１５％のＤＬＣＯ低下を経験した。
【０２７９】
３人の患者を第９の用量レベル（２４０ｍｇ／ｍ２）で処置した。サイクル１の終わりにＤＬＴを経験した者はおらず、＞１５％のＤＬＣＯ低下は観察されなかった。しかし、第１の処置患者が、サイクル２の間にグレード３の角膜炎を発症した。このイベントは、ＤＬＴ観察期間外に生じたが、ＤＬＴ判断基準を満たしており、用量漸増決定プロセスの考慮に入れられた。サイクル２において生じ得るあらゆる重症の眼の有害事象を捉えるために、２４０ｍｇ／ｍ２で処置した第２および第３の患者がサイクル２を完了するのを待つ決定を下した。その間に、計画されたスクリーニングされた患者２人を、最も低いＤＬ１９０ｍｇ／ｍ２で処置した。これらの患者は、サイクル１の終わりに、いかなるＤＬＴまたはＤＬＣＯの＞１５％の低下を発症しなかった。ＤＬ２４０ｍｇ／ｍ２で処置した最後の２人の患者は、処置の第２サイクルの間にいかなる重症の眼毒性を発症しなかったと仮定して、ＤＬ２４０ｍｇ／ｍ２でさらに３人の患者を処置する決定を下した。これらのさらなる患者のうち１人は、サイクル１の終わりにＤＬＴ（グレード３の下痢）を経験した。２４０ｍｇ／ｍ２で処置した患者６人中、１／６の患者がサイクル１にＤＬＴ（Ｇｒ３の下痢）を経験し、１／３の患者がサイクル２にＧｒ３の角膜炎を経験し（当時、１人の患者はサイクル１を受けておらず、２人の患者はサイクル２の注入を受けたところであった）。ＤＬ２４０ｍｇ／ｍ２にさらなる２人の患者を登録させることによって慎重な取組みに従い、サイクル２が完了するまで安全性を追跡することを決定した。加えて、ＤＬＴ判断基準を満たさなかったサイクル１の悪心および嘔吐を経験した患者として、試験処置投与の前に予防的な制吐薬が推奨された。したがって２人のさらなる患者を２４０ｍｇ／ｍ２で処置した。サイクル１の終わりにＤＬＴおよびＤＬＣＯの＞１５％の低下は観察されなかった。しかし、第７および第８の患者が両方ともグレード２の角膜炎を発症した。加えて、この用量で処置した第６の患者が、サイクル２にグレード３の角膜炎を発症し、サイクル３の遅れおよび１９０ｍｇ／ｍ２への用量の低減となった。
【０２８０】
結論：
２４０ｍｇ／ｍ２の最高用量では、処置した８人の患者中１人が、サイクル１にＤＬＴ（対症的な矯正処置で回復したグレード３の下痢）を経験した。第２サイクルを投与した患者７人中、２人がグレード３の角膜炎（ＤＬＴ判断基準を満たす）を経験し、低減した用量でのサイクル３の投与の遅れとなった。加えて、他の４人の患者がサイクル２にグレード２の角膜炎を経験し、３人の患者におけるサイクル３の遅れとなった。ＤＬ２４０ｍｇ／ｍ２は実行可能ではないとみなし、最大投与用量（ＭＡＤ）と定義した。
【０２８１】
ＤＬ１９０ｍｇ／ｍ２で５人の患者を処置し；全員に少なくとも２サイクルを投与した。３人の患者がグレード２の角膜炎を発症し：患者２人はサイクル２（処置投与前にグレード２の角膜炎を有し、Ｃ１Ｄ１に臨床的に消散した患者１人を含む）、患者１人はサイクル１（患者がＣ１Ｄ１からドライアイを報告していたことが分かっていた）であった。角膜炎のイベントにより、これら３人の患者のうち１人がサイクル３の遅れとなった。ＤＬ１９０で処置した５人の患者のうち３人が角膜炎を経験したとしても、この眼毒性は、ＤＬ２４０に観察されたものに比べて重症度は低く、より管理しやすく、試験処置に対する影響はより低いと、調査者には思われた。加えて、これら３人の患者のうち２人には、眼科評価に影響し得る、予め存在する眼の異常があった。
【０２８２】
したがって、第６の患者を１９０ｍｇ／ｍ２で処置して、その用量での登録を完了した。この患者はいかなるＤＬＴも発症しなかった。
【０２８３】
ＤＬ１９０ｍｇ／ｍ２を推奨用量として選択した。
【０２８４】
２．４．重度有害事象
患者８人に、少なくとも１つの治療下で発現したＳＡＥがあり、全て試験処置に関連しないとみなされた。
【０２８５】
【表９】
2016525560.tif 000034
【０２８６】
２．５．死亡
処置患者３４人中、患者９人に死亡が記録された。調査者らによると、全患者が悪性疾患で死亡した。患者２人（＃００８および０３６）は最後の注入から３０日以内に、それぞれサイクル１の２７日目およびサイクル２の１８日目に死亡した。
【０２８７】
２．６．他の安全性対策：特定の安全性
２．６．１．眼毒性
眼の有害事象は、他のメイタンシノイドをローディングしたＡＤＣで観察された通り、１５０ｍｇ／ｍ２から主に報告された（表８および図２）。
【０２８８】
関連する眼の事象には以下が含まれた：ドライアイ、かすみ目、角膜炎、羞明、流涙増大、眼痛。合計１５人の患者に（４４．１％）、以下の重症度の少なくとも１つの関連する眼の事象があった：患者３人にグレード１、患者１０人にグレード２、および患者２人にグレード３。試験処置に関連しないと考えられる他の軽度から中等度の眼の事象は殆ど報告されなかった：眼の赤み、眼脂、およびウイルス性結膜炎。
【０２８９】
両側性角膜炎は、ＳＡＲ５６６６５８に観察される主な眼の事象の１つであった。この事象にはしばしば、軽度から中等度のドライアイ、かすみ目、または羞明などの症状が先行した。これらの予備症状は主にサイクル１に観察されたのに対し、角膜炎の診断は後に、第２または後続のサイクルの試験処置の間になされた。眼科学的な報告は通常、角膜の中央ゾーンを残して角膜に沈着物がある、表在性の角膜炎を記載するものであった。上皮の炎症（または間質の炎症）は、２４０ｍｇ／ｍ２の重症の２症例のみに報告された。局所処置を開始し、人工涙液およびコルチコステロイドが含まれた。今まで、症状の回復は、最初の重症度に応じて１から３週間以内に観察された。症状が、所与のサイクルの２１日目に依然として存在する場合、後続のサイクルを遅らせ、症状が消失したらすぐに、およびスリップランプで観察される病変が安定であれば、眼科医は処置を再開するようゴーサインを与える。
【０２９０】
ＮＣＩ  ＣＴＣ  ｖ４．０３にはグレード１の角膜炎は存在しないため、角膜炎は全て２とグレード付けた。しかし、グレード２のこの範疇の中に、関連の症状のある、および症状のない、表在性の角膜炎が存在する。角膜炎が、同じグレード２といくつかのサイクルを通して進行中に思えても、角膜炎は試験処置の投与を許すのに十分改善したが、それはグレードの変更に反映されない。実際、この分類ではグレード２の改善を捉えることはできない。
【０２９１】
２人の患者が、２４０ｍｇ／ｍ２のサイクル２の間、Ｇｒ３の眼毒性を経験した。このイベントは第２サイクルの８日目から１５日目の間に始まり、視力の低下、かすみ目、およびドライアイがあった。眼科医は、角膜の中央ゾーンを残して直線状の沈着物のある、Ｇｒ３の両側性角膜炎と記録した。人工液滴および局所コルチコステロイドが与えられた。サイクル２の終わりの来所時に（２１日目）、視力喪失および症状の部分的な回復が認められ、眼科医は角膜炎の改善を報告した（Ｇｒ３からＧｒ２へ）。サイクル３は両患者において２週間遅れ、低減した用量が投与された（１９０ｍｇ／ｍ２）。
【０２９２】
発生率、グレード、または試験処置に対する影響に関して、用量レベルをまたいで違いが観察された。最高の発生率、最悪のグレード、および試験処置に対する最高の影響が、試験した最高用量レベルに観察された（２４０ｍｇ／ｍ２）。出現のサイクルに関して違いは観察されなかった。
【０２９３】
今までに、関連する眼のＡＥは全て回復し、または速やかに管理可能であり、局所処置（人工液滴、およびコルチコステロイド）での処置の継続が可能となった。
【０２９４】
【表１０】
2016525560.tif 000035
【０２９５】
２．６．２．末梢神経障害
１２人（３５％）の患者に、試験処置の間、末梢神経障害（ＨＬＴ）または異常感覚／知覚異常（ＨＬＴ）のいずれかがあった。強度は全て軽度から中等度であり、これらのイベントのどれにも試験処置の遅れまたは中断となるものはなかった。全患者が、以下の化合物の１つまたは組合せを含む化学療法で以前に予め処置されていたことに留意されたい：オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、またはドセタキセル。加えて、２人の患者に試験参加時に末梢神経障害があった（０２１および０３５）。
【０２９６】
８人の患者では、神経学的イベントは試験処置に起因するものであった。
【０２９７】
末梢神経障害に関して、明らかな用量依存性は観察されなかった（異常感覚および知覚異常を含む）。
【０２９８】
【表１１】
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【０２９９】
２．６．３．肺毒性
プロトコールに従って、試験参加時および各サイクルの終わりに肺機能試験を行った。サイクル１の終わり（ＤＬＴ観察期間の終わり）に、ＰＦＴ結果を外部の呼吸器学者に送って、潜在的な肺毒性についてアドバイスを受けた。
【０３００】
今まで、サイクル１に観察されるＰＦＴ異常は肺毒性に起因するものではなかった（図３）。
【０３０１】
間質性肺炎が１件、１２０ｍｇ／ｍ２で処置した患者に観察された。転移性の卵巣癌（骨盤リンパ節および腹膜の併発）を有するこの患者（７２４００１０２１）は合計１４サイクル受けており、サイクル１２にグレード１の呼吸困難および咳嗽を有する肺性の症状を発症していた。同じサイクルの間に行った胸部ＣＴスキャンにより肺の異常が示された。加えて、ＰＦＴ試験によりＤＬＣＯにおけるおよそ１４％の低下が示された。したがって、試験処置は遅れ、ステロイドおよび抗生物質が処方された。患者は、呼吸困難および咳嗽が減少し、気分が良くなった。新たな胸部ＣＴスキャンにより以前の放射線学的所見が確認され、肺の病変は、放射線科医により、明らかに関連する疾患ではないが、試験処置に対する可能な関連性は排除できないと記載された。ＰＦＴは再び、ベースラインに比べて約１６％の、ＤＬＣＯの低下を示した。気管支肺胞洗浄液で気管支鏡検査法を行う決定が採られた。抗生物質およびステロイドを継続した。
【０３０２】
３月１２日、処置が遅れた２週間後、患者の気分は良くなり、咳嗽および呼吸困難は改善した。気管支肺胞洗浄後の微生物学的検査は陰性であり、腫瘍細胞は見出されず、細胞学的試験は好中球および好酸球の浸潤を示した。これらの所見のため、試験処置の相関を除外することができなかった。しかし、良好な全身状態、呼吸器症状の改善、および腫瘍に対して実現される利益を考慮すると、スポンサーと一致した調査者の決定は、ベースラインと比べて１０〜２０％内のＤＬＣＯの低減であるのにかかわらず、同じ用量で処置を継続することであった（プロトコールに従って）。サイクル１３およびサイクル１４を投与した。咳嗽および呼吸困難はサイクル１４の間に回復した。ＣＴスキャンは疾患の進行（リンパ節病変の増大）を示し、処置を中断した。ベースラインと比べたＤＬＣＯの低減はおよそ３５％であった。調査者は呼吸器症状を否定した。間質性肺炎は、最終の注入の４５日後に消散したと調査者は考えた。
【０３０３】
３．効能の結果
抗腫瘍の臨床活性が用量≧１２０ｍｇ／ｍ２から観察され、すなわち、放射線学的に評価できる病変、または長期の安定化、または腫瘍関連症状（疼痛など）の改善に対して、腫瘍サイズは低減した。
【０３０４】
腫瘍応答に対して評価可能な患者３３人中、１人がＰＲと確認され、１５人が安定な疾患であると報告された（表１０）。ＳＤおよびＰＲは、用量≧１２０ｍｇ／ｍ２で主に観察された。実際、これらの用量での応答に評価可能な患者１９人中、ＳＤ１３人（未確認のＰＲ２人および確認予定のＰＲ１人を含む）ならびにＰＲ１人が観察された。用量に関わらず腫瘍タイプによるこれらのＰＲ／ＳＤは以下の通りであることに留意されたい：
−  膵臓９人における短期間のＳＤ２人、
−  乳房４人におけるＰＲ１人および未確認のＰＲ（すなわちＳＤ）１人（２人の非応答性の患者をそれぞれ１０および４０ｍｇ／ｍ２で処置したことが分かっている）、
−  評価可能な卵巣癌１３人におけるＳＤ７人（未確認のＰＲ１人および確認予定のＰＲ１人を含む）。
【０３０５】
ＰＲは、１５０ｍｇ／ｍ２で処置した６３歳の乳癌患者（７２４００１０２６）に報告された。ＰＲはサイクル２に確認され、サイクル４および６に、５７％の標的病変における最大の低下が確認された。患者には、試験参加時に肝臓標的病変が２つ、および肺の非標的病変が多数あった。抗癌治療前、３つの主な系統の化学療法が含まれた：ペグ化ドキソルビシン−シクロホスファミド、次いでパクリタキセル、および治験薬（ＩＮＤ）５か月間、次いでゲムシタビンおよびＩＮＤ１か月間。この乳房腫瘍はトリプルネガティブであり、エストロゲン、プロゲステロン、またはＨＥＲ２に対する受容体に対して陽性ではない。アーカイブ腫瘍（試験参加１年前）に対するＩＨＣによるＣＡ６発現は、７０％が膜染色３＋を示した。患者に試験処置を合計８サイクル投与し、記録された肝臓疾患の進行（標的病変の増大および新規病変の発生）により中止した。
【０３０６】
ＳＤ１５人中、調査者は未確認ＰＲ２人および確認予定のＰＲ１人を報告した：
−  １２０ｍｇ／ｍ２の患者１人（＃７２４００１０２１）：卵巣癌、６５歳、以前の３系統の化学療法（パクリタキセル−カルボプラチン７か月間、トポテカン４か月間、およびペグ化ドキソルビシン１か月間）で予め処置されていた。患者には、試験参加時に腹膜およびリンパ節の併発があった。試験処置の間、標的病変の規則的な低減が観察され、最大はサイクル１０に観察され：ベースライン評価に比べて、サイクル８で２８．８％、サイクル１０で３６．６％、およびサイクル１２で２７．６％であった。標的病変に対する疾患の進行がサイクル１４に観察され、患者は試験処置を中断した。アーカイブ腫瘍（試験参加１２年前）に対するＩＨＣにしたがうＣＡ６の発現は、４０％膜染色３＋を示した。
−  １９０ｍｇ／ｍ２の患者１人（＃２５０００１０３１）：乳癌、４９歳、いくつかの以前の抗癌処置で（フルオロウラシル−エピルビシン−シクロホスファミド、カペシタビン、メトトレキセート−エンドキサン、ドセタキセル、ナベルビン、エリブリン、およびホルモン療法）予め処置されていた。患者には、試験参加時に肝臓、リンパ節、および骨の併発があった。サイクル２に標的病変の低減が観察され（５５％）、サイクル４に依然として存在したが（７１％）、サイクル４に癌性髄膜炎が診断され、処置を中断した。アーカイブ腫瘍（試験参加６年前）に対するＩＨＣにしたがうＣＡ６の発現は、５０％膜染色２＋を示した。
−  ２４０ｍｇ／ｍ２の患者１人（＃８４０００１０４１）：卵巣癌、６７歳、２０１０年１０月に診断され、次いで外科手術および補助的な化学療法（パクリタキセル−カルボプラチン）で処置された。リンパ節の再発が２０１３年１月に診断され、患者は治験に参加した。標的病変の低減がサイクル２に観察され（３５％）、サイクル４に確認された。加えて、腫瘍マーカーの３９．５から１１．３ＵＩ／Ｌへの低減（ＣＡ１２５）が報告された。ＩＨＣにしたがうＣＡ６の発現は１５％膜染色２＋、および３５％膜染色３＋を示した。
【０３０７】
加えて、調査者は、膀胱癌を有する５８歳の男性患者１人におけるサイクル１から観察される全身状態の改善を報告した。試験参加時、患者には、両側の肢の浮腫の一因となる、骨盤リンパ節の併発があった。ＣＴスキャンにより、サイクル１０まで安定化が示され、サイクル１０で新たな病変が観察され、患者は試験処置を中断した。
【０３０８】
【表１２】
2016525560.tif 000037
【０３０９】
４．薬物動態（ＰＫ）結果
−  ｔ１／２ｚがおよそ５日であるＳＡＲ５６６６５８の並行排出プロファイル
−  用量範囲１０から２４０ｍｇ／ｍ２にわたる用量比例性から大きな逸脱のない、ＳＡＲ５６６６５８への曝露（ＣｍａｘおよびＡＵＣ）の増大
−  ６０ｍｇ／ｍ２で処置した患者２人を除き、用量範囲２０から２４０ｍｇ／ｍ２にわたるクリアランスが０．５から０．９Ｌ／日の間の範囲であり、大まかに一定であった（ＣＬおよそ１．５〜２Ｌ／日）
−  全体的に、変動性の合計は低度から中等度である。
【図１】
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【図３】
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【図２】
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【配列表】
2016525560000001.app
【国際調査報告】
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2016525560.tif 000044
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