(57)【要約】  本発明は、天然タンパク質からなるタンパク質単離物を製造することを目的として、油料種子ミールから、好ましくは常温圧搾で得られた油料種子ミールから、油よりもタンパク質を選択的に抽出することに関する。さらに具体的には、本発明は、最小限のせん断条件下で油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための方法について記述する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して重力による固液抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法。
【請求項２】
前記油料種子ミールが常温圧搾で得られた油料種子ミールである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記重力による固液抽出が、前記固形分を機械的にかきまぜないかまたはほとんどかきまぜない抽出を含む、請求項１または２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記重力による固液抽出が浸出及び／または浸漬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記油料種子ミールを、吹付け浸出、浸漬浸出、固形分分散または正圧浸出または再循環浸出または多段階浸出あるいはそれらの組合せによって水溶液で抽出する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記浸出が再循環浸出である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抽出が、塩水溶液、好ましくはイオン強度が０．１０〜０．８の範囲である塩水溶液を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出が５〜６５℃の範囲の温度で行われる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、請求項９に記載の中間油料種子タンパク質水溶液。
【請求項１１】
油料種子ミールから油よりもタンパク質を選択的に抽出するための重力による固液抽出の使用。
【請求項１２】
前記重力による固液抽出が浸出及び／または浸漬を含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
請求項９または１０に記載の中間油料種子タンパク質水溶液を濃縮し沈殿させることを含む、油料種子タンパク質単離物を得るための方法。
【請求項１４】
乾燥させることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、天然タンパク質からなるタンパク質単離物を作るのに適した中間タンパク質水溶液を製造することを目的として、油料種子ミールから（好ましくは常温圧搾で得られる油料種子ミールから）油よりもタンパク質を選択的に抽出することに関する。
【０００２】
［発明の背景］
油料種子（例えば、ヒマワリ、菜種／キャノーラ、カラシ種子、トウモロコシ種子、亜麻仁）および大豆は一般に、食用油だけでなくタンパク質の優れた供給源でもある。キャノーラは、例えば、世界における最大の油料種子作物の１つであり、３番目にもっとも豊富な食用油源と考えられている。
【０００３】
伝統的には、比較的含油率の高い物質（乾燥物質で３５％より多いもの。菜種はおよそ４０％）の場合、機械による圧搾と溶媒抽出との組合せが油の効率的抽出に用いられる［Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９（１９９６）４０２−４２０］。油を抽出した後、圧搾された物質を熱処理して溶媒を除去すると、油およびタンパク質の含有量がそれぞれ１〜５％および４０〜５０％のケークが得られる。ケークは比較的高いタンパク質含有量を有するが、存在するタンパク質の質は、油の抽出時に用いられた過酷な条件（すなわち、高温、溶媒）のため著しく低下している。こうした過酷な条件のためタンパク質の変性が起こり、その結果として精製タンパク質の機能特性に悪影響が及び［Ｋｈａｔｔａｂ  ｅｔ  ａｌ，ＬＷＴ−Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４２（２００９）１１１９−１１２４］、その価値が低下することになる。こうした油の抽出条件は、タンパク質の品質にとって好ましくないという認識は、常温圧搾（ｃｏｌｄ  ｐｒｅｓｓｉｎｇ）技術を向上させる要因の１つである。常温圧搾時に、溶媒を使用せず、油をマイルドな条件下で圧搾すると、より品質の良い油および高品質の油料種子圧搾ミールが得られる。
【０００４】
こうしたミールは、含油率が比較的高く（典型的には、乾燥物質基準で＞８％（例えば、＞１０％））、機能性を保持した優れたタンパク質の供給源である。こうしたタンパク質は、例えば水抽出によってミールから容易に抽出できる［Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９（１９９６）４０２−４２０，Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒａｎｓ  ＩＣｈｅｍＥ，Ｐａｒｔ  Ｃ，７６（１９９８）２２４−２３０およびＬａｗｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４６（１９８１）９１２−９１６］。このタイプのプロセスの最大の問題の一つは、抽出時にタンパク質と油が同時に抽出されることである［Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒａｎｓ  ＩＣｈｅｍＥ，Ｐａｒｔ  Ｃ，７６（１９９８）２２４−２３０］。この場合、かなりの量の油を含む抽出物が得られ、その油は、大抵の場合、一部が安定したエマルションとして存在するので、それを除去するのは非常に難しくなる。
【０００５】
本発明は、タンパク質を多く含み実質的に油脂を含まない抽出物が、穏やかなタンパク質抽出法を用いた選択的タンパク質抽出によって製造できることを示すことにより、この問題に取り組んでいる。後でさらに詳細に説明するとおり、穏やかな抽出法は、抽出時にほとんどせん断力を発生しない抽出方法であり、それは、実質的に油脂を抽出することなくタンパク質を選択的に抽出するのに大切なことである。
【０００６】
本発明の方法は、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールからタンパク質を抽出するのに特に有用である。
【０００７】
米国特許出願公開第２０１２／０２５２０６５号明細書は、タンパク質単離物およびタンパク質加水分解濃縮物を油料種子ミールから作るための水性プロセスを記載している。油料種子ミールは水性溶媒と混ぜ合わされてスラリーが形成される。図４Ａによれば、使用される混合時間は１時間であり、結果として中間タンパク質タンパク質水溶液中の油脂とタンパク質との比率が望ましいものではなくなる。
【０００８】
米国特許第６，００５，０７６号明細書は、複数のステップを含む、タンパク質単離物製造方法を記載している。タンパク質抽出は、油料種子ミールと塩溶液とを混合し、７６ｒｐｍで混合／撹拌することにより実施される。その明細書によると、タンパク質抽出は、ある特定の油脂をキャノーラミール中に可溶化する更なる作用があり、結果として油脂が水性相中に存在することになる。残りのステップの１つが、水性相からの油脂の除去である。
【０００９】
Ｋｌｏｃｋｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９７，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ，４５，３８６７−３８７０，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｆａｔｔｅｄ  ｃａｎｏｌａ  ｍｅａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ）は、１８０〜２００ｒｐｍで６０分間撹拌を実施することにより、市販のヘキサン脱脂キャノーラミールからタンパク質を抽出することについて記載している。
【００１０】
国際公開第９５／２７４０６号パンフレットは、脱脂（脂肪を含まない）大豆系物質を水中に懸濁し、その懸濁液に対して酵素処理を行うことにより、大豆系低カロリー製品（ｄｉｅｔｅｔｉｃ  ｓｏｙ  ｂａｓｅｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ）を製造する方法を記載している。
【００１１】
英国特許第２４６１０９３号明細書は、極性溶媒（ヘキサンなど）の使用およびエタノールの使用を含む、油を生じる野菜物質からの植物性タンパク質濃縮物の製造方法を記載している。
【００１２】
英国特許第１５０２９５９号明細書は、有機溶媒を使用して、脱油した油性種子物質を処理して、タンパク質濃縮物および抽出溶液を作り出す方法を記載している。
【００１３】
Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ（１９９８，Ｔｒａｎｓ  ｉＣｈｅｍＥ，ｖｏｌ  ７６，ｐａｒｔ  Ｃ，Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｉｌ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｒｏｍ  ｓｏｙｂｅａｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｄｅｓｉｇｎ）は、大豆粉からの油およびタンパク質の水抽出を研究している。タンパク質および油の抽出収率が、密接に関係していることが示されていた。図１０は、大豆粉からの油およびタンパク質の抽出に対する撹拌速度の影響を示している。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】タンパク質および油の抽出収率との関係で示した油脂とタンパク質との比率。（Ａ）含油率が乾燥重量基準（ＤＷＢ）で１％であり、タンパク質含有量がＤＷＢで３８％であり、乾燥物質（ＤＭ）が９２％である脱脂菜種ケーク；（Ｂ）含油率がＤＷＢで２．６％であり、タンパク質含有量がＤＷＢで３６．２％であり、ＤＭが８９．２％である脱脂菜種ケーク［Ｓｈａｈｉｄｉ  Ｆ，Ｃａｎｏｌａ  ａｎｄ  Ｒａｐｅｓｅｅｄ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９０  Ｖａｎ  Ｎｏｓｔｒａｎｄ  Ｒｅｉｎｈｏｌｄ，ＩＳＢＮ  ０−４４２−００２９５−５］；（Ｃ）含油率がＤＷＢで５％であり、タンパク質含有量がＤＷＢで３８％であり、ＤＭが９２％である脱脂菜種ケーク；（Ｄ）含油率がＤＷＢで５％であり、タンパク質含有量がＤＷＢで３８％であり、ＤＭが９２％である常温圧搾で得られた菜種ケーク。太い実線：油の抽出収率５％；破線：油の抽出収率１０％；点線：油の抽出収率２０％；細い実線：油の抽出収率５０％；灰色線：油の抽出収率８０％。挿入図：油脂とタンパク質との比率の値が低い領域を拡大したもの。油脂とタンパク質との比率は式（３）を用いて計算した（実験の部を参照）。
【図２】撹拌容器中にある間の油脂とタンパク質との比率（実施例３も参照）
【図３】抽出カラムの略図
【００１５】
［発明の概要］
実施形態の１つにおいて、本発明は、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して重力による固液抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための方法を提供する。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を提供する。そのような中間油料種子タンパク質水溶液は、例えば、上述の方法によって得られる。
【００１７】
さらに別の実施形態では、本発明は、油料種子ミールから油よりもタンパク質を選択的に抽出するための、最小限のせん断条件（例えば、重力による固液抽出）の使用を提供する。
【００１８】
本発明はまた、中間油料種子タンパク質水溶液を（標準的方法を使用して）濃縮し沈殿させることを含む、油料種子タンパク質単離物を得るための方法も提供する。
【００１９】
［発明の詳細な説明］
本発明は、タンパク質を多く含み実質的に油脂を含まない抽出物を、穏やかな抽出法を用いてタンパク質を選択的に抽出することにより、圧搾油料種子ミールから製造できることを示す。穏やかな抽出法は、抽出時にほとんどせん断力を発生しない抽出方法であり、そうしたことは、実質的に油脂を抽出することなくタンパク質を選択的に抽出するのに重要である。
【００２０】
油料種子タンパク質単離物は、多段階方法によって製造される。一般に、そのような油料種子からタンパク質単離物を製造するための方法は、以下のものを含む：
−  油料種子を得るステップ、
−  油料種子をスクリーニングし、洗浄し、任意選択的にその外皮を取るステップ、
−  外皮が取られた油料種子から少なくとも部分的に油を（溶媒または常温）抽出して、油脂製品および少なくとも部分的に脱脂された油料種子ミールを生じさせるステップ、
−  前記油脂製品を前記部分的に脱脂された油料種子ミールから分離するステップ、
−  前記部分的に脱脂された油料種子ミールを抽出して、前記部分的に脱脂された油料種子ミール中のタンパク質を可溶化させる（これにより、典型的には前記部分的に脱脂された油料種子ミール中の残りの油脂（の一部）も可溶化される）ステップ、
−  タンパク質水溶液を残りの油料種子ミールから分離して、中間タンパク質水溶液を得るステップ（上に略述されているように、そのような溶液は、典型的には同時抽出された（ｃｏ−ｅｘｔｒａｃｔｅｄ）油脂を含み、その結果、油脂とタンパク質との比率は、製造方法全体のこの段階では、典型的には、０．５％よりかなり大きい）、
−  得られた中間タンパク質水溶液に対して、色素除去ステップ及び／または油脂除去ステップ（これらのステップの順序は逆にすることができる）などのステップを実施するステップ、
−  得られたタンパク質溶液を濃縮してタンパク質濃度を増大させるステップ、
−  さらなる油脂除去ステップを行うステップ、
−  濃縮タンパク質溶液を乾燥させて油料種子タンパク質単離物を得るステップ（あるいはまた、因子（温度、ｐＨ、イオン強度、塩濃度及び／または溶媒を含む）を変えることにより溶液中のタンパク質を沈殿させ、タンパク質沈殿物を沈降させ、沈殿したタンパク質を残りの水性相から分離し、さらにタンパク質を乾燥させて油料種子タンパク質単離物を得るステップ）。
【００２１】
菜種の場合、典型的には希釈によってタンパク質を沈殿させる。例えば、冷水で希釈して全成分の溶解度を下げるか、または希釈によってイオン強度を最小限まで低下させて、比較的高いイオン強度で可溶性であるそうした成分の溶解度を下げる。
【００２２】
あるいはまた、濃縮タンパク質を洗浄し、直接（すなわち、沈殿させないで）乾燥させる。
【００２３】
使用する抽出条件に応じて、また使用する原料物質（すなわち，特定の油料種子ミール）に応じて、すべてのステップを実施する必要があるわけではなく、ステップの幾つかが異なる順序で実施されることがある。さらに、すべてのステップを一度に同じ施設で実施する必要もない。典型的には、油は１つの施設（油製造業者）で油料種子から抽出され、油料種子ミール／ケークからのタンパク質抽出は別の施設で行われる。
【００２４】
混乱を避けるために述べるが、本発明は、中間タンパク質水溶液（あるいは、タンパク質抽出ストリームまたはタンパク質抽出物。これらの用語は、本明細書では同義語的に使用される）、すなわち、（部分的に脱脂された）油料種子ミールの水抽出の後に直接生じる生成物であるタンパク質溶液を得るための方法に関する。穏やかな抽出のタイプに応じて、またその穏やかな抽出がバッチ式または連続式で行われるかそうでないかに応じて、中間タンパク質水溶液を得る前に固液抽出を実施する必要があるであろう。言い換えれば、中間タンパク質水溶液とは、（部分的に脱脂された）油料種子ミールからの可溶性タンパク質を含む、抽出によって直接得られるタンパク質溶液である。中間タンパク質水溶液は、濃縮、沈殿及び／または乾燥をまだ実施していないタンパク質フラクションである。言い換えれば、中間タンパク質水溶液は、抽出ステップの最後に固体／液体混合物中に存在する液相である。誤解を招かないために述べるが、中間タンパク質水溶液は、脱脂、脱油または脱クリームのステップの結果生じるタンパク質溶液（例えば、遠心分離の後に得られる抽出物など）ではない。本明細書に記載する中間タンパク質水溶液は、先行技術のタンパク質抽出法で作られるスラリーとは異なる。「スラリー」という用語は、一般的には、水性溶媒と徹底的に混合して（または撹拌して）、溶解タンパク質を含む液体、およびその液体中にタンパク質、油および任意選択的に繊維性および栄養阻害性化合物（ａｎｔｉ−ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）を含む懸濁液を形成させた、油料種子ミールを表す。
【００２５】
中間タンパク質溶液中に油脂が存在すると、安定したエマルションとして一部が存在するタンパク質抽出物になるので望ましいことではない。さらに、油脂が存在すると、タンパク質および油脂／エマルションを更に分離する間に、タンパク質生成物が失われることになり得る。中間タンパク質溶液中に油脂が（高レベルで）存在すると、最終生成物（タンパク質単離物）中の油脂分が比較的高くなり、それも望ましいことではない。本発明は、タンパク質を多く含み実質的に油脂を含まない抽出物を、穏やかなタンパク質抽出法を用いた選択的タンパク質抽出によって製造できることを示すことにより、こうした問題に取り組んでいる。
【００２６】
本発明は、最小限のせん断条件下で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出（好ましくは重力による固液抽出）を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質とが少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法（ａｑｅｏｕｓ  ｍｅｔｈｏｄ）を提供する。
【００２７】
言い換えれば、本発明は、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールからタンパク質を（油よりも）選択的に抽出するための方法であって、前記ミールに対して最小限のせん断条件下で水抽出（好ましくは重力による固液抽出）を行うことを含む、タンパク質を（油よりも）選択的に抽出するための方法を提供する。好ましくは、本発明は、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を得るために、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールからタンパク質を（油よりも）選択的に抽出するための方法であって、前記ミールに対して最小限のせん断条件下で水抽出（好ましくは重力による固液抽出）を行うことを含む、タンパク質を（油よりも）選択的に抽出するための方法を提供する。
【００２８】
本発明の方法は、どんな油料種子または大豆ミールに対しても実施できる。油料種子ミールの例には、菜種、亜麻、リノラ（ｌｉｎｏｌａ）、ヒマワリまたはカラシの種子のミールがある。本明細書に説明されている本発明は、さらに詳細には、菜種ミールに関する。菜種は、セイヨウアブラナ、油料種子セイヨウアブラナ、ラパ（ｒａｐａ）、ラピ（ｒａｐｐｉ）、菜種およびキャノーラとしても知られている。好ましい実施形態では、本発明は、油料菜種ミール（ｏｉｌ  ｒａｐｅｓｅｅｄ  ｍｅａｌ）から、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料菜種ミールに対して最小限のせん断条件下で水抽出（好ましくは重力による固液抽出）を行うステップと、得られた中間菜種タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。
【００２９】
使用される油料種子ミールは天然に存在するタンパク質を含みうるか、または遺伝子改変された油料種子、すなわち少なくとも１種のタンパク質が遺伝子改変された油料種子を含みうる。
【００３０】
油料種子ミール（あるいは油料種子ケーク。これらの用語は本明細書では同義語として使用される）は、種子から油を除去した結果として生じる任意のミール（またはケーク）であってよい。油料種子ミールは、様々なレベルの残りの油を含みうる。例えば、油料種子ミールは、ヘキサン抽出の結果として得られるものであり、典型的には乾燥重量基準（ＤＷＢ）で１〜５％の間の油を含む。あるいはまた、油料種子ミールは、常温圧搾法（ｃｏｌｄ  ｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）で得られるものであり、典型的にはＤＷＢで１０〜２５％を含むか、あるいは典型的には乾燥物質基準で少なくとも８％の油を含む。好ましい実施形態では、油料種子ミールは含油率が少なくとも８％または少なくとも１０％であり、それゆえに本発明は、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％（または１０％）（好ましくは、８〜２５％または１０〜２５％ＤＷＢの範囲にある）である油料種子ミールから、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、含油率が少なくとも８％である油料種子ミールに対して、最小限のせん断条件下で水抽出（好ましくは重力による固液抽出）を行うステップと、得られた中間油料種子タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。さらにより好ましい実施形態では、前記油料種子ミールは、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％（または少なくとも１０％）である油料菜種ミールであり、それゆえに本発明は、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％（または１０％）である油料菜種ミールから、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間菜種タンパク質水溶液を製造するための方法であって、前記油料菜種ミールに対して最小限のせん断条件下で水抽出（好ましくは重力による固液抽出）を行うステップと、得られた中間菜種タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、中間菜種タンパク質水溶液を製造するための方法も提供する。
【００３１】
含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％または少なくとも１０％である油料種子ミールの例は、常温圧搾で得られる油料種子ミールである。本発明はまた、常温圧搾で得られた油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、前記常温圧搾で得られた油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法も提供する。さらにより好ましい実施形態では、前記常温圧搾で得られた油料種子ミールは常温圧搾で得られた油料菜種ミールであり、それゆえに本発明は、常温圧搾で得られた油料菜種ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、前記常温圧搾で得られた油料菜種ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法も提供する。使用する油料種子ミールを作る元になる種は、殻を取ることができるか、あるいは外皮を取るステップを実施することができる（すなわち、殻を油料種子から取り除く）。
【００３２】
中間タンパク質水溶液中の油脂とタンパク質との比率は、本明細書の実験の部に記載されているようにして容易に計算できる。実験の部には、先行技術に記載されている中間タンパク質水溶液中の油脂とタンパク質との比率の理論計算値も示してある。先行技術の抽出法は、非常に選択的であるとは言えない。すなわち、先行技術の抽出法は、タンパク質抽出時に油脂を同時に抽出する。それゆえに、先行技術の中間タンパク質水溶液中の油脂とタンパク質との比率は１：１２よりもかなり低いと考えられる（一般に、先行技術の中間タンパク質水溶液は、油脂とタンパク質との比率がおよそ１：３である。本明細書に記載の実験の部も参照）。本発明は、油料種子ミールから選択的にタンパク質を抽出するための水性方法を提供し、それゆえに、より好ましい中間タンパク質水溶液中の油脂とタンパク質との比率を達成することができる。本発明は、中間タンパク質水溶液を得るための水性方法に関する。好ましくは、本発明は、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を得るための水性方法に関する。「油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２」という語句は、タンパク質の量が１２以上である比率と解釈すべきである。より好ましくは、前記油脂とタンパク質との比率は、少なくとも１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９または１：２０である。タンパク質の量が２０より大きいより好ましい油脂とタンパク質との比率も本明細書に含まれる。したがって本発明は、（好ましくは常温圧搾で得られた）油料種子ミール（好ましくは菜種ミール）から、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２、より好ましくは少なくとも１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９または１：２０である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法に関する。
【００３３】
本明細書で使用される「油料種子ミールに対して水抽出を行う」という語句は、一般的には、水溶液を油料種子ミールと接触させるステップを表す。これは、例えば、油料種子ミールを内側に保持するのに使用される有孔支持体を備えた容器（例えば、カラム）に油料種子ミールを充填することにより行われ、結果として、油料種子ミールの固定層が出来上がる。その後、固定層を通るように水溶液を送り込み、それによって固相と液相の両方を接触させ、最小限のせん断条件下での抽出プロセスを開始させる。あるいはまた、油料種子ミールと水溶液を同時に管またはカラムに加える。その結果、油料種子ミールが水溶液中に取り込まれ、ミールが分けられて（かなり均一な）粒子になる。さらに別の方法では、水溶液を管またはカラムに入れ、油料種子ミールをそれに加える。この場合も、油料種子ミールが取り込まれ、ミールが分けられて（かなり均一な）粒子になる。
【００３４】
「最小限のせん断条件下での抽出」という用語は、本明細書では、どのように抽出を行うべきかを表すのに使用される。好ましくは、油料種子ミールの抽出は、油料種子ミールに対する物理的力が穏やか／マイルドであるようにして実施される。Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ［Ｔｒａｎｓ  ＩＣｈｅｍＥ，Ｐａｒｔ  Ｃ，７６（１９９８）２２４−２３０およびＬａｗｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４６（１９８１）９１２−９１６］が述べているように、タンパク質抽出の際の最大の問題の一つは、タンパク質と油が同時に抽出されてしまうことである。このため、かなりの量の油を含む望ましくない抽出物となり、油は大抵の場合、安定したエマルションとして存在するので、それを除去するのは極めて難しくなる。さらに、油脂の存在により、全体的なタンパク質収率が下がるか、あるいは油脂分のかなり多いタンパク質生成物が生じることになりうる。これらはすべて望ましくない結果である。本発明は、最小限のせん断条件を用いることにより（油脂よりも）タンパク質を選択的に抽出できることを示す。そのような最小限のせん断条件は、例えば、低いｒｐｍで操作される撹拌容器中で抽出を実施することにより達成できる。油料種子ミールからのタンパク質抽出の分野では、（大規模な）撹拌容器内での３０〜１２０分間の撹拌が通常用いられる。実験室規模での油料種子ミールからのタンパク質抽出は、典型的には、機械的攪拌を用いて行われる。規模の大きさとは関係なく、油料種子ミール／ケークからの先行技術のタンパク質抽出は、比較的高せん断の条件下で行われるので、その結果、油脂は、油料種子ミールからタンパク質と一緒に抽出される。
【００３５】
比較的低いｒｐｍ値を（撹拌容器中で）使用することにより、油料種子ミールからのタンパク質の選択的抽出がすでに行われている。油料種子ミールからのタンパク質の抽出を非機械的混合条件下で行うとき、別の言い方をすれば、油料種子ミールの固形分が機械的ストレスにさらされないとき、より印象的（かつ驚くような）、そしていっそう工業と結びついた結果が得られる。実施形態の１つにおいて、本発明は、最小限のせん断条件下で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、最小限のせん断条件下での前記抽出が非機械的混合条件下での抽出を含む、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。油料種子ミールからのタンパク質抽出に関連して、機械的混合条件とは、油料種子ミールの固形分ならびに抽出水溶液を絶えず撹拌させるという条件である。結果として、固形分はかきまぜ／撹拌の力によって破壊される。本発明は、油料種子ミールの固形分を機械的ストレスにさらさなければ、タンパク質を油料種子ミールから選択的に抽出できることを示している。したがって本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間油料種子タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための方法であって、最小限のせん断条件下での前記抽出が、（油料種子ミールの）固形分を機械的にかきまぜないかまたはほとんどかきまぜない抽出を含む、中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための方法を提供する。「ほとんど機械的にかきまぜない」という用語は、抽出時に機械装置によって生じる固形分のある種の動きが、固形分の破壊につながらないか、ほとんどつながらない限り許されることを明確にするために使用される。例えば、低せん断ポンプ（ペリスタポンプまたはモノポンプあるいは当業者に知られている類似の低せん断ポンプ）の使用が、固形分の破壊を引き起こさないか、またはほとんど引き起こさない装置の例である。穏やかな抽出法を用いてタンパク質を油料種子ミールから抽出することにより、固形分が破壊されず、したがって破壊される固形分から油が放出されないので、選択的タンパク質抽出が行われると、現在考えられているが、こうした考えに束縛されることはない。
【００３６】
好ましい実施形態では、「最小限のせん断条件下での抽出」という語句は、重力による固液抽出、すなわち固形分（および液体）が基本的に重力によって動くだけの抽出、別の言い方をすれば、固形分が基本的に垂直方向にのみに動くような抽出を含む。重力による固液抽出では、抽出時にかきまぜ及び／または撹拌を使用しない。「重力による固液抽出」の好ましい実施形態は、以下のものである。
−  重力によるマスフロー固液抽出、または
−  重力による並流固液抽出、または
−  重力による並流マスフロー固液抽出、または
−  重力による対向流固液抽出、または
−  対向流によるマスフロー固液抽出。
並流固液抽出の間、固形分と液体は同じ方向に動き、対向流固液抽出の間、固形分と液体は反対方向に動く（この場合、固形分のみが重力によって動く）。
【００３７】
重力による固液抽出は、重力による固液抽出「のみを基本的に」表すと理解すべきである。すなわち、抽出プロセスの非常に小さな部分が重力によらないステップを含むということを除外しない。
【００３８】
重力による固液抽出は、当業者が容易に求めることのできる好適な直径を有するカラムまたは管で実施できる。カラムまたは管の長さが、液体と固形分との接触が行えるほど十分に長く（すなわち、結果として、固形分と液体の接触時間が十分に長い）、固形分からタンパク質を選択的に抽出できる場合、抽出プロセス全体を１つのステップで実施できるであろう。その場合、固形分および液体をカラムまたは管に同時に加えるか、あるいは液体を最初に加え、固形分をいくぶん後に加える。あるいは、１つのステップで十分なタンパク質を抽出するには短すぎるカラムまたは管を使用し（すなわち、固形分と液体との間の接触時間が不十分）、同じかまたは異なるカラムまたは管中で再循環させて接触時間を増やす。この場合、固形分および液体をカラムまたは管に同時に加えるか、あるいは液体を最初に加え、固形分をいくぶん後に加える。固形分がカラムまたは管の下部に沈降した後、カラムまたは管の内容物を低せん断ポンプ（ペリスタポンプまたはモノポンプまたは当業者に知られている類似の低せん断ポンプなど）によって取り除き、同じかまたは別のカラムまたは管の上部に移す。カラムまたは管の長さおよび直径に応じて、このプロセスを繰り返して、固形分と液体との間の十分な接触時間が得られるようにする。カラムまたは管の下部に固形分が沈降する間に、固形分は液体と接触し、タンパク質が浸出及び／または浸漬によって抽出される。さらに別の代替の方法では、１つのステップで十分にタンパク質を抽出するには短すぎるカラムまたは管を使用し（すなわち、固形分と液体との間の接触時間が不十分）、開放できる下部を有するカラムまたは管を、別のカラムまたは管の上に設けて、固形分が再び液体と接触して沈降できるようにすることにより、接触時間を増やす。上に略述したように、重力による固液抽出は、重力による固液抽出「のみを基本的に」表すと理解すべきである。すなわち、抽出プロセスの非常に小さな部分が重力によらないステップを含むということは除外されない。説明したプロセスから、重力によらないステップの一例は、低せん断ポンプを用いてカラムまたは管の上部に固体−液体を注入するというものであることが明らかである。好ましい実施形態では、本発明は、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して重力による固液抽出を行うステップと、前記油料種子ミールを低せん断装置（好ましくは低せん断ポンプ）にかけるステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質の比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。
【００３９】
タンパク質を油料種子ミールから抽出するため、また固形分の破壊を避けるため、浸出及び／または浸漬などの技法（それらに限定されない）を用いて油料種子ミールを水溶液と接触させる。それゆえに本発明はまた、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、最小限のせん断条件下での前記抽出が浸出及び／または浸漬を含む、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法も提供する。好ましい実施形態では、前記油料種子は菜種である。したがって本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料菜種ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料菜種ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間菜種タンパク質水溶液を製造するための方法であって、最小限のせん断条件下での前記抽出が浸出及び／または浸漬を含む、中間菜種タンパク質水溶液を製造するための方法を提供する。さらに別の好ましい実施形態では、油料菜種ミールは含油率が乾燥物質基準で少なくとも１０％であり、本発明は、最小限のせん断条件で（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも１０％である油料菜種ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料菜種ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、最小限のせん断条件下での前記抽出が浸出及び／または浸漬を含む、中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。好ましくは、前記油料菜種ミールは、常温圧搾で得られた油料種子ミールである。浸漬および浸出は、様々な技術分野、とりわけ種子からの油の抽出の分野で使用されるよく知られている技法である。浸出抽出では、溶媒を、例えば、油料種子フレークまたはケークの層の上に散布する。その場合、それは層を通って下に浸透し、支えられているある種の濾過装置（多孔板またはメッシュスクリーンなど）を通って層の下部から出て行く。浸出プロセス（連続抽出プロセスとしても知られている）は、抽出物質が連続して濡れるという原理に基づいている。ここでは、溶媒ストリームが抽出物質を通過し、それと（それを抽出する）易流動性溶媒との間で中断されることなく交換が行われる。溶媒が定常的に流れるように維持することにより、局部的に飽和状態にある溶媒が流れて行き、飽和状態にない溶媒で置き換えられるようにされる。このプロセスでは、抽出物質内を抽出剤が自由に流れる必要がある。浸漬タイプの抽出では、前もって水性相で満たされた容器中に油料種子ミールを分散させる。油料種子ミールが液体と接触するにつれて、それは膨潤し沈むことになる。沈む過程の間に、水分を含んだ（ｈｙｄｒａｔｅｄ）油料種子が新しいかなりの量の液体と接触し、可溶性成分が抽出されることになる。容器の下部で、水分を含んだ油料種子ミールが、コンベヤシステムによって容器の外に運搬され、一方で、タンパク質を多く含む液体は、例えば、オーバーフローシステムによって出て行く。
【００４０】
上で述べたように、浸出及び／または浸漬の使用は、油抽出の分野でよく知られていた。このほど、驚くべきことに、こうした技法が、（部分的に脱脂された）油料種子ミールからタンパク質を（油脂と比べて）選択的に抽出するのに非常に役立つことが本発明によって示される。好ましいタイプの浸出及び／または浸漬は、吹付け浸出（ｓｐｒａｙｅｄ  ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ）、浸漬浸出、固形分分散浸出（ｓｏｌｉｄｓ  ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ）、正圧浸出（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ）またはそれらの組合せである。さらに別の好ましいタイプの浸出は、再循環浸出または多段階浸出である。それゆえに本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、油料種子ミールを、吹付け浸出、浸漬浸出、固形分分散または正圧浸出または再循環浸出または多段階浸出あるいはそれらの組合せによって水溶液で抽出する、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。好ましい実施形態では、前記種子は菜種であり、本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料菜種ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間菜種タンパク質水溶液を回収する任意選択ステップとを含む、油料菜種ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、油料菜種ミールを、吹付け浸出、浸漬浸出、固形分分散または正圧浸出または再循環浸出または多段階浸出あるいはそれらの組合せによって水溶液で抽出する、中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。より好ましくは、前記油料種子ミールは含油率が乾燥物質基準で少なくとも１０％であり、本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が少なくとも１０％である油料菜種ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間菜種タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料菜種ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、油料菜種ミールを、吹付け浸出、浸漬浸出、固形分分散または正圧浸出または再循環浸出または多段階浸出あるいはそれらの組合せによって水溶液で抽出する、中間菜種タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。さらにより好ましくは、前記油料種子ミールは、常温圧搾で得られた油料種子ミールである。油料種子ミールは、殻が取り除かれるかまたは外皮が取られた油料種子から得ることができる。
【００４１】
好適な装置は、例えば、Ｐｅｒｒｙ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒ’ｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（さらに具体的には、「Ｌｅａｃｈｉｎｇ」という表題の章）に記載されており、そうした装置としては、バッチ式パーコレーター（ｂａｔｃｈ  ｐｅｒｃｏｌａｔｏｒｓ）、圧力下でのバッチ式パーコレーター（拡散器としても知られる）、移動層パーコレーター（例えば、バケットエレベーターパーコレーター、水平ベルトコンベヤ、またはケネディー抽出器）、Ｐａｃｈｕａタンク、ボノトー抽出、Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ全面浸漬抽出器（Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ  ｔｏｔａｌ−ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ  ｅｘｔｒａｃｔｏｒ）およびスクリューコンベヤ抽出器があるが、これらに限定されない。
【００４２】
タンパク質の可溶化に使用される水抽出は、好ましくは塩溶液の存在下で行われる。あらゆる種類の様々な塩溶液を使用できるが、好ましくは、塩は塩化ナトリウムである。別の好適な塩は塩化カリウムである。かなりの量のタンパク質の可溶化が行われるようにするために、好ましくは、塩溶液は、少なくとも約０．１０、より好ましくは少なくとも約０．１５のイオン強度を有する。塩溶液のイオン強度が増大するにつれて、原料物質中のタンパク質の可溶化の度合いは最初に増大し、最大値に到達する。その後イオン強度が増大しても、可溶化されるタンパク質の総量は増大しない。最大のタンパク質可溶化を引き起こす食品用塩溶液のイオン強度は、関係する塩および選択されたタンパク質源によって異なる。
【００４３】
誤解を避けるために述べるが、本明細書で使用される「水抽出」または「水溶液」という用語は、有機溶媒（メタノール、プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフランまたはヘキサンなど）を含まない抽出または溶液を表す。というのは、こうした溶媒は、タンパク質抽出物中の残留物として人間が摂取するのに望ましくないものだからである。それゆえに、本明細書で述べる中間タンパク質水溶液は、変性タンパク質を含まないか、ほとんど含まない。
【００４４】
好ましい実施形態の１つでは、本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法であって、前記水抽出が、塩水溶液、好ましくは少なくとも０．１０のイオン強度を有する塩水溶液、より好ましくは少なくとも０．１５のイオン強度を有する塩水溶液を含む、中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法を提供する。好ましい範囲のものは、０．１０〜０．８の範囲のイオン強度を有する塩水溶液、より好ましくは、０．１５〜０．８の範囲のイオン強度を有する塩水溶液である。
【００４５】
油料種子ミールと水溶液との好適な比率は、当業者によって容易に求められ、典型的には１：５〜１：１２の範囲である。
【００４６】
可溶化は、好ましくは高温で、好ましくは５℃より上で、一般には最大約６５℃で行われる。正しい上限は、抽出される特定のタンパク質の変性温度によって決まるであろうし、当業者が容易に決定して調整することができる。菜種の場合、上限はおよそ６５℃である。さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための方法であって、前記水抽出が、５℃より高い温度、一般的には６５℃未満の温度で行われる、中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための方法を提供する。好適な温度範囲は５〜６５℃である。
【００４７】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が乾燥物質基準で少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための方法であって、前記水抽出が、塩水溶液、好ましくはイオン強度が０．１０〜０．８０（より好ましくは０．１５〜０．８）である塩水溶液を含み、かつ前記水抽出が５〜６５℃の範囲の温度で行われる、中間油料種子タンパク質水溶液を製造するための方法を提供する。
【００４８】
最大のタンパク質収率を得るための最適なｐＨ値は、タンパク質の原料物質によって異なり（例えば、溶媒処理されたか、または常温圧搾で得られたか、外皮が取られているか、また外皮が取られていないか）、典型的には、ｐＨ５．０より上で、ｐＨ８．０より下である。約６．０〜７．０のｐＨ値が、抽出された菜種タンパク質にとって好ましい。塩溶液のｐＨは、抽出ステップ用に、任意の使いやすい酸またはアルカリによって約５〜８．０の範囲内の任意の望ましい値に調節することができる。
【００４９】
最適な抽出時間は、使用する実験環境によって異なり、当業者が容易に求めることができる。好適な抽出時間は、例えば、およそ５〜１０分間またはそれ以上の範囲でありうる。
【００５０】
水抽出は、好ましくは連続プロセスで行われ、処理量が大規模なものとなるようにされる。しかし、バッチ抽出または半連続抽出も好適である。半連続抽出の例には、複数カラムが使用され、それらが順繰りに充填され、抽出され、空にされるような抽出がある。
【００５１】
「得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択」のステップが必要かどうかは、使用される穏やかな／マイルドな抽出法によって異なる。撹拌容器（低いｒｐｍ値で操作される）を使用する場合、中間タンパク質水溶液を得るためには、固液分離が必要である。任意の固液分離技法を使用でき（真空濾過の使用など）、その後、遠心分離及び／または濾過によって残っているミールが取り除かれる。
【００５２】
固定された孔底を有するカラムでの浸出抽出を（実施例２の場合のように）使用する場合、油料種子ミールは抽出容器内に保持されるが、抽出液は、一般的には油料種子ミール層を通って流れる。連続方式では、複数の油料種子ミール固定層が使用される。こうした固定層は一方向に移動するが、液体流は切り替わって、液相と固相（油料種子ミール固定層）の並流接触または対交流接触が実現される。所与の時間、層を液体にさらし、抽出の最後に、使用済みの層を含む容器が開かれ、洗浄され、新鮮な油料種子ミールが充填される。その間に、液体流は絶えず抽出装置をでてゆき、それは事実上、浮遊固形分を含まない。油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２であるこの液体は、回収容器に運ばれる前に任意選択で澄ませることができるが、一般的にはそれは回収されない。カラムまたは管を使用する場合、上述のどの固液分離技法でも使用できる。再循環浸出の場合、支えられているある種の濾過装置（例えば、多孔板またはメッシュスクリーン）を備えた最終的なカラムまたは管を使用することもでき、液体は濾過装置を通ってカラムまたは管から出て行くことができる。
【００５３】
本発明の方法は、好ましくは大規模に実施される（少なくとも１〜１０ｋｇ（菜種ミール）／時以上で行われる方法など）。好ましくは、本発明の方法は、少なくとも１０ｋｇ（油料種子ミール）／時で行われる。
【００５４】
さらに別の実施形態では、本発明は、油脂とタンパク質の比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を提供する。「中間タンパク質水溶液」という語句（またはタンパク質抽出ストリーム。これらの用語は本明細書では同義語的に使用される）は上に定義したとおりである。「中間油料種子タンパク質水溶液」という語句は、油料種子（ミール）から得られる中間タンパク質水溶液を表す。好ましくは、油料種子は菜種油であり、それゆえに本発明は、好ましくは油脂とタンパク質との比率が０．５％以下である中間菜種油料種子タンパク質水溶液を提供する。「油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２」という語句については上で説明してある。「油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２」という語句は、タンパク質の量が１２以上である比率と解釈すべきである。より好ましくは、前記油脂とタンパク質との比率は、少なくとも１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９または１：２０である。タンパク質の量が２０より多いより好ましい油脂とタンパク質との比率も本明細書に含まれる。したがって本発明は、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９または１：２０である、中間（菜種）油料種子タンパク質水溶液も提供する。
【００５５】
好ましい実施形態では、中間油料種子タンパク質水溶液は、最小限のせん断条件下（好ましくは重力による固液抽出）で、含油率が少なくとも８％である油料種子ミールに対して水抽出を行うステップと、得られた中間タンパク質水溶液を回収する任意選択のステップとを含む、油料種子ミールから油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間タンパク質水溶液を製造するための水性方法によって得られる。上に説明した定義及び／または上述の好ましい実施形態のいずれも、本発明のこの部分（すなわち、中間油料種子タンパク質水溶液の生成物）に同様に当てはまる。
【００５６】
本明細書で記載している中間油料種子タンパク質水溶液は、その後に、油料種子タンパク質単離物を得るための方法で使用できる。すなわち、本発明は、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を濃縮し沈殿させることを含む、油料種子タンパク質単離物を得るための方法を提供する。
【００５７】
「油料種子タンパク質単離物」という用語は、本明細書では、タンパク質を油料種子ミールから抽出し、得られた中間油料種子タンパク質水溶液を濃縮し、濃縮タンパク質溶液からタンパク質を沈殿させ、さらに任意選択的に、沈殿した濃縮タンパク質を乾燥させることにより得られるタンパク質生成物を表すのに用いられる。
【００５８】
濃縮ステップを実施して、中間油料種子タンパク質水溶液中のタンパク質濃度を増大させる。濃縮ステップは、一般的には、タンパク質溶液のイオン強度を実質的に一定に保った状態で実施する。最終的なタンパク質溶液は、例えば、少なくとも約５０ｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも約２００ｇ／Ｌ、さらにより好ましくは少なくとも約２５０ｇ／Ｌである。
【００５９】
濃縮ステップは、連続操作と調和した任意の便利な仕方で行うことができ、それには、膜を使用した限外濾過などの任意の便利な選択性膜技法の使用がある。使用される膜は、中空繊維膜または渦巻き膜などであり、好適な分画分子量（約３０００〜約５０，０００ダルトンなど）を有し、いろいろと異なる膜材料および構造が考慮に入れられる。またタンパク質水溶液が膜を通過するにつれてタンパク質水溶液の濃縮を所望の程度まで行えるような大きさにされる。
【００６０】
濃縮ステップは、任意の都合の良い温度（一般には、約２０℃〜約６０℃）で、所望の濃縮を行える時間の間、行うことができる。使用する温度および他の条件は、ある程度、濃縮に用いる使用する膜装置および溶液の所望のタンパク質濃度によって異なる。
【００６１】
よく知られているように、限外濾過および類似の選択性膜技法では、低分子量の化学種が膜を通過できるようにされるが、高分子量の化学種の通過を阻む。低分子量の化学種には、食品用塩のイオン種だけでなく、原料物質から抽出される低分子量の物質（炭水化物、色素および栄養阻害性因子など）、ならびに低分子量のタンパク質形態も含まれる。膜の分画分子量は、いろいろな膜物質および構造を考慮して、通常は、不純物が通過するようにしつつ、溶液中にかなりの割合のタンパク質が残るように選ぶ。
【００６２】
濃縮を行って、タンパク質含有量が少なくとも約２００ｇ／Ｌ、好ましくは少なくとも約２５０ｇ／Ｌである濃縮タンパク質水溶液を得る場合、濃縮ステップで使用する温度に応じて、濃縮タンパク質溶液を、約２０℃〜約６０℃、好ましくは約２５℃〜約３５℃の温度に温めて、濃縮タンパク質溶液の粘度を低下させて、その後の希釈ステップおよびタンパク質沈殿形成を促進することができる。濃縮タンパク質溶液は、ある温度より高くまで加熱すべきではない。その温度とは、濃縮タンパク質溶液の温度ゆえに、冷水に入れて希釈したときに沈殿が形成されないような温度である。
【００６３】
あるいは、濃縮物質を洗浄し、沈殿ステップを行わずに直接乾燥させる。
【００６４】
濃縮ステップから生じる濃縮タンパク質溶液の沈殿は、濃縮タンパク質溶液を、所望の希釈の度合いを達成するのに必要な量の冷水と混合することにより希釈によって得られる。沈殿物および対応する上澄みから得たいタンパク質の割合に応じて、希釈の度合いを変えることができる。希釈レベルが高くなるにつれ、一般に、水性相（上澄み）中に残るキャノーラタンパク質の割合が大きくなる。沈殿物中のタンパク質の割合を最大にしたい場合、濃縮タンパク質溶液の希釈は、約１５倍未満、より好ましくは約１０倍以下にする。
【００６５】
タンパク質沈殿物は、沈降容器内に沈降させて、合体したタンパク質沈殿物相を形成せることができる。この手順は、所望の量の沈殿物が沈降容器の下部に蓄積するまで継続され、蓄積したら、その蓄積した沈殿物を沈降容器から取り出す。沈降容器の沈殿物を取り出す前に、タンパク質沈殿物を遠心分離にかけてその塊の液体含有量を少なくすることができる。遠心分離により、タンパク質沈殿物の含水量を約７０重量％〜約９５重量％から、一般的に全質量の約５０重量％〜約８０重量％にまで下げることができる。このようにタンパク質沈殿物の含水量を減らすと、タンパク質沈殿物に閉じ込められている塩の含有量も低下し、それゆえに乾燥させる単離物の塩含有量も低下する。あるいは、沈降ステップは、連続的に遠心分離を行いながら実施することができる。回収したタンパク質沈殿物は、湿った形態で使用することもできれば、任意の便利な技法（噴霧乾燥、凍結乾燥またはドラム真空乾燥（ｖａｃｕｕｍ  ｄｒｕｍ  ｄｒｙｉｎｇ）など）で乾燥させて乾燥形態にすることもできる。したがって本発明はまた、油脂とタンパク質との比率が少なくとも１：１２である中間油料種子タンパク質水溶液を濃縮し沈殿させるステップを含み、乾燥ステップをさらに含む、油料種子タンパク質単離物を得るための方法も提供する。乾燥タンパク質沈殿物は、少なくとも約９０重量％の高タンパク質含有量を有し、時には、約１００重量％を超えるタンパク質があり（ケルダールのＮ×６．２５で計算）、実質的に変性していない。タンパク質沈殿ステップでの上澄みを処理して、それからさらにタンパク質を回収することができる。そのような手順は、上澄みの初期濃縮を含みうる。そのような濃縮は、任意の便利な選択性膜技法を使用して行うが、そうした技法には、低分子量の化学種（タンパク質の原料物質から抽出される塩および他の非タンパク質低分子量物質を含む）が膜を通過するようにさせ、それと同時にキャノーラタンパク質を溶液中に保持する、好適な分画分子量を有する膜を使用した限外濾過などがある。分画分子量が約３０００〜約１０，０００であり、種々の膜材料および構造を考慮した限外濾過膜を使用できる。濃縮は、好ましくは、連続的にオーバーフローする上澄みに対して連続的に行われるが、所望される場合には、オーバーフローする上澄みの回収した量に対してバッチ手順を使用してもよい。そのような連続操作では、膜は、上澄みが膜を通過する際に上澄みの濃縮が所望の程度まで行われるような大きさにされる。
【００６６】
このように上澄みを濃縮すると、タンパク質単離物を回収するために乾燥させる必要のある液体量も減少し、それゆえに乾燥に必要なエネルギーも減少する。上澄みは一般に、乾燥させる前に、タンパク質濃度が約１００〜約４００ｇ／Ｌ、好ましくは約２００〜約３００ｇ／Ｌになるまで濃縮する。
【００６７】
濃縮された上澄みは何らかの都合の良い仕方（噴霧乾燥、凍結乾燥またはドラム真空乾燥による仕方など）で乾燥させて乾燥形態にして、タンパク質含有量が少なくとも約９０重量％、好ましくは少なくとも約１００重量％（Ｎ×６．２５）である更なるキャノーラタンパク質単離物（実質的に変性していない）を得ることができる。あるいは、濃縮された上澄みは、湿ったタンパク質沈殿物および得られた乾燥混合物と混合して、タンパク質含有量が少なくとも約９０重量％、好ましくは少なくとも約１００重量％（Ｎ×６．２５）である更なるキャノーラタンパク質単離物（これは、実質的に変性されていない）を得ることができる。濃縮された上澄みの一部のみを、タンパク質沈殿物の一部のみおよび得られた乾燥混合物と混合する別の代替手順では、濃縮された上澄みの残りを乾燥させることができ、タンパク質沈殿物の残りのどれでも乾燥させることができる。さらに、乾燥させたタンパク質沈殿物および乾燥させた上澄みは、上で説明したように、任意の所望の相対的割合で乾燥混合物させることもできる。
【００６８】
さらに別の実施形態では、本発明は、油料種子ミールから（油脂／油よりも）タンパク質を選択的に抽出するための最小限のせん断条件（好ましくは重力による固液抽出）の使用を提供する。好ましくは、前記最小限のせん断条件は、浸出及び／または浸漬を含む。上述の定義及び／または上述の好ましい実施形態のいずれも、発明のこの部分（すなわち、タンパク質抽出における最小限のせん断条件の使用）に同様に当てはまる。
【００６９】
ここで本発明を以下の非限定例を用いて示す。
【００７０】
［実験の部］
物質および方法
タンパク質含有量
タンパク質含有量は、ＡＯＡＣ公式方法９９１．２０  ミルク中の窒素（合計）（ＡＯＡＣ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ９９１．２０  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ（Ｔｏｔａｌ）ｉｎ  Ｍｉｌｋ）にしたがってケルダール法で求めた。換算係数の６．２５を用いてタンパク質の量（％（ｗ／ｗ））を求めた。
【００７１】
［含水量］
含水量は、Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｄｅｘ，ｅｄｉｔｉｏｎ  ７，Ｇｅｎｅｒａｌ  ｔｅｓｔｓ  ａｎｄ  ａｓｓａｙｓ，Ａｐｐｅｎｄｉｘ  ＩＩ，ｐａｇｅｓ  １１３３−１１３４にしたがって求めた。
【００７２】
［油脂含有量］
油脂含有量は、ＡＯＣＳ  ６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｅ  １−６２の方法にしたがって求めた。
【００７３】
［タンパク質抽出収率］
タンパク質抽出収率の定義は以下のとおりである。
【数１】
2016512702.tif 000003
【００７４】
［油脂抽出収率］
油脂抽出収率の定義は以下のとおりである。
【数２】
2016512702.tif 000004
【００７５】
［油脂とタンパク質との比率］
油脂とタンパク質との比率の定義は以下のとおりである。
【数３】
2016512702.tif 000005
上式において、ＲＣは菜種ケークの量を表し、ＤＭは菜種ケーク乾燥物質含有量であり、ｘタンパク質，ＤＷＢは乾燥物質の割合としての菜種ケークのタンパク質含有量であり、Ｙタンパク質，抽出はタンパク質抽出収率であり、ｘ油脂，ＤＷＢは乾燥物質の割合としての菜種ケークの脂肪分であり、さらにＹ油脂，抽出は油脂抽出収率である。
【００７６】
あるいは、油脂とタンパク質との比率の定義は次のとおりである。
油脂：タンパク質≧油脂が１部／タンパク質がｘ部：
【数４】
2016512702.tif 000006
【００７７】
［抽出後の油脂とタンパク質との比率：圧搾および溶媒処理で脱脂された菜種ケーク対常温圧搾で得られた菜種ケーク］
図１は、タンパク質抽出収率との関係で示した油脂とタンパク質との比率を示しており、溶媒処理された脱脂菜種ケーク（％ＤＷＢでの含油率：図１Ａは１％、図１Ｂは２．６％、および図１Ｃは５％）、および常温圧搾で得られたケーク（図１Ｄ）に関するものである。常温圧搾で得られたケークを用いて、本発明で示した実施例を行った。溶媒抽出された脱脂菜種ケークの典型的な含油率は、乾燥重量基準（ＤＷＢ）で１〜５％の範囲であり、普通はおよそ３％ＤＷＢである［Ｓｈａｈｉｄｉ  Ｆ，Ｃａｎｏｌａ  ａｎｄ  Ｒａｐｅｓｅｅｄ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９０  Ｖａｎ  Ｎｏｓｔｒａｎｄ  Ｒｅｉｎｈｏｌｄ，ＩＳＢＮ  ０−４４２−００２９５５およびＲｏｚｅｎｓｚａｉｎ  ｅｔ  ａｌ、国際公開第２０１２／１３５９５５Ａ１号パンフレット］。それに対して、常温圧搾で得られた菜種ケークは、含油率がＤＷＢで１０〜２５％の範囲である［Ｒｏｚｅｎｓｚａｉｎ  ｅｔ  ａｌ、国際公開第２０１２／１３５９５５Ａ１号パンフレット］。
【００７８】
我々の研究で使用された外皮が取られ常温圧搾で得られた菜種ケークは、油およびタンパク質の含有量がそれぞれおよそ１７％および３８％である。
【００７９】
［図１Ａ］
理論的には、０．３％〜０．５％の範囲の油脂とタンパク質との比率（式４で計算した場合、１：３３３〜１：２００）は、含油率がＤＷＢで１％である溶媒処理された脱脂菜種ケークを用いて達成できることが、図１Ａから分かる。しかし、この比較的低い値は、油抽出収率が５〜１０％の範囲に入り、タンパク質抽出収率が０．５〜０．７０の範囲にある場合にのみ、達成されると思われる。しかし、こうした状況はとてもありそうにない。なぜなら、溶媒処理した脱脂ミールからのタンパク質水抽出収率は、非変性条件下では０．３０〜０．５０の範囲であると報告されており、［Ｋｌｏｃｋｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４５（１９９７）３８６７−３８７０］、撹拌容器システムでの油抽出収率が、１０％より低いことはありそうにないからである。したがって、含油率がＤＷＢで１％である溶媒処理された脱脂ミールを用いて得られた油脂とタンパク質との比率は、０．５％より大きい可能性がかなり高く、１％より大きい可能性が非常に高い（図１Ａ）。
【００８０】
［図１Ｂおよび１Ｃ］
２．６％および５％を使用した場合、前述のタンパク質抽出収率および油抽出収率の制限を考慮すると、油脂とタンパク質との比率は、それぞれ３％（図１Ｂ）、および４％（図１Ｃ）より大きくなると予想される。
【００８１】
［図１Ｄ］
常温圧搾ミールの場合、油脂とタンパク質との比率は、５％より高いことが予想される（図１Ｄ）。浸出／穏やかな抽出を使用した場合、０．４％より低い油脂とタンパク質との比率が実現可能であることをデータは示している（表２を参照）。
【００８２】
［実施例１（先行技術）］
この例では、従来の先行技術の水抽出プロセスの結果を説明する。外皮が取られ常温圧搾で得られた菜種ケーク６００グラムを、塩化ナトリウムを含まないかまたは塩化ナトリウムを２％（ｗ／ｗ）の濃度で含む水溶液３０００グラムに加えた。溶液を１５０ＲＰＭでかきまぜて懸濁液を作った。抽出は１５℃または５０℃のいずれかで行った。６０分間混合した。その後、懸濁液は、４℃で３０分間、遠心分離で分別した。遠心分離の結果、液体がなくなったケークが、水性抽出物および抽出油脂から分離された。１５０〜２５０μｍのふるいを用いて水性抽出物および油脂をふるい分けで分離した。表１は、タンパク質含有量と油脂含有量で示した抽出物の組成、ならびに油脂およびタンパク質の抽出収率を示す。タンパク質および油脂の抽出収率は、物質および方法の部で説明したようにして求めた。
【００８３】
【表１】
2016512702.tif 000007
【００８４】
当業者は、％で表される油脂とタンパク質との比率から、［１：Ｘ］で表される油脂とタンパク質との比率を非常にうまく計算することができる。例えば、油脂／タンパク質（％）が３４．１０である場合、これは０．３４１の油脂が存在し、１のタンパク質が存在することを意味する。０．３４１の油脂の値を０．３４１で割って１にする必要があり、タンパク質の値についても同じこと、すなわち、１を０．３４１で割る必要がある。結果としてタンパク質の値は２．９３になる。
【００８５】
この実験から、（ａ）一定の混合速度および撹拌機タイプでは、油脂抽出収率は実質的に温度および塩濃度の影響を受けず、また（ｂ）所与の抽出温度では、油脂とタンパク質との比率は、抽出塩濃度が増大するにつれて減少すると結論づけることができる。この減少は、所与の抽出温度においてタンパク質抽出収率（塩濃度に応じて増大する）が増大することからある程度説明される。
【００８６】
［実施例２（本発明のプロセス）］
この実施例は、本発明のプロセスを例示したものである。
外皮が取られ常温圧搾で得られた菜種ケーク１２ｋｇを、内径が５６ｃｍのジャケット付ステンレス鋼カラムに詰め込んだ。カラムの下部および上部のアダプターに、５μｍのフリットを配置した。別個に、２％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム溶液１５０Ｌを調製した。この溶液を５０℃の温度に設定し、その後、外皮が取られ常温圧搾で得られた菜種ケークを含んでいるカラムを通るように送り込んだ。塩水溶液を送り込む前に、カラムの温度を５０℃の温度に調節した。液体を２時間の間、再循環させた。その後、澄んだ液体をタンパク質および油脂について分析した。表２は、様々な量の外皮が取られ常温圧搾で得られた菜種ケークを用いて得られた結果（塩水溶液を再循環させた場合およびさせなかった場合）を示す。２０ｇを用いた実験を、内径が５ｃｍのジャケット付カラムで行い、１ｋｇを用いた実験をジャケット付ザイツ濾過器で行った。
【００８７】
【表２】
2016512702.tif 000008
【００８８】
【表３】
2016512702.tif 000009
【００８９】
これらのデータから、機械的混合下での抽出と比べて（実施例１を参照）、最低限のせん断の（機械混合しない）抽出では、比較的低い油脂抽出収率で、同等か、それよりさらに高いタンパク質抽出収率がもたらされると結論することができる。結果として、穏やかな抽出により、油脂／タンパク質比率が０．５％以下である抽出物が得られる。言い換えれば（表３）、実施例３で使用された穏やかな抽出のタイプの場合、油脂とタンパク質の比率［１：Ｘ］は少なくとも１：２００になる。
【００９０】
［実施例３（先行技術）］
この例は、従来の先行技術（撹拌容器）の水抽出プロセスの結果を説明している。
【００９１】
［構成］
撹拌容器の構成は、４Ｌの容積を有する二重壁容器からなる。容器の内径は１４．５ｃｍであり、これは、容器を満たした時の液体の高さに等しかった。バッフルは取り付けなかった。実際の撹拌機速度（ＲＰＭ）を示すデジタル画面を有するエンジン搭載の上部ヘッド撹拌機を使用して、かきまぜを制御した。かきまぜ羽根は、液体の高さの中程（下部から７ｃｍ）に位置付けた。使用した速度は１００ｒｐｍであった。水浴を用いて温度を制御した。使用した溶媒は脱塩水であり、主として３０ｍＭリン酸（カリウム）緩衝液を含んでいた。ｐＨは手作業で測定し、必要に応じて、４Ｍ  ＨＣｌおよび４Ｍ  ＮａＯＨで設定し適応させた。水性溶媒を容器に加え、正しい温度および緩衝液強度（ｂｕｆｆｅｒ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ）に状態調整した後、菜種ケーク物質を容器に移した。
【００９２】
［分析］
タンパク質含有量は、ケルダール法に基づいて求めたが、その際に乗算係数（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）の６．２５を用いてタンパク質の量（％（ｗ／ｗ））を求めた。乾燥重量は、赤外線天秤（ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｂａｌａｎｃｅ）か、または１０５℃のオーブンでの夜通しの保温によって、恒量なるまで乾燥させて求めた。試料中の油脂含有量は、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）分析によって求めた。
【００９３】
［結果］
表４では、時間が経過した場合の、またいろいろな温度でのタンパク質と油脂との比率を見ることができる。それらの結果を図２にも示す。すべての場合に、油脂−タンパク質比率が１１より低く、抽出から１時間を過ぎると、比率はすべて８．２より低く、平均は５．７であることが示されている。
【００９４】
【表４】
2016512702.tif 000010
【００９５】
［実施例４：先行技術の例］
［実験の構成］
菜種ケークと抽出溶媒（プロセス水）を混合すると、タンパク質溶解度が増大する。抽出において変わるものは、抽出温度、ｐＨ、添加剤および混合技法である。そうしたパラメータを表５に示す。
【００９６】
【表５】
2016512702.tif 000011
【００９７】
［分析］
タンパク質含有量は、ケルダール法（フローインジェクション分析）で求めた。窒素含有量をタンパク質含有量に変換するのに用いた計算係数（ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）は６．２５であった。
【００９８】
乾燥物質の分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＨＧ５３ハロゲン湿度計を用いて行った（使い捨てのガラス繊維フィルター上の２ｇの試料、１０５℃）。油脂は、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）分析によって求めた。
【００９９】
［実験１］
実験１では、小さなプロペラ型撹拌羽根を有するオーバーヘッド撹拌機を用いて（６０ｋｇの）菜種ケークを水性相中に混ぜた。用いた撹拌機速度は非常に速かった（９５０ｒｐｍ）。
【０１００】
［実験２］
低い混合せん断力（遅い撹拌機速度であるため）および高温（抽出物中での微生物増殖を防ぐため）では、タンパク質と油脂との比率は十分には改善されなかった。ただし、抽出物中の油脂レベルは前の実験の場合よりも低かった。
【０１０１】
表６は、実施例４の全データを要約している。
【０１０２】
【表６】
2016512702.tif 000012
【０１０３】
［実施例５：本発明による実施例（穏やかな抽出）］
［分析］
試料は、試料の遠心分離（１０分間、４０００ｇ）で調製した。上澄み中の乾燥物質、油脂およびタンパク質の分析。タンパク質含有量は、ケルダール法に基づいて求めたが、その際に乗算係数６．２５を用いてタンパク質の量（％（ｗ／ｗ））を求めた。乾燥重量は、赤外線天秤か、または１０５℃のオーブンでの夜通しの保温によって、恒量なるまで乾燥させて求めた。試料中の油脂含有量は、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）分析を用いて求めた。
【０１０４】
［実験の構成］
油脂およびタンパク質の抽出に対するゆれ（ｃｏｎｖｅｙａｎｃｅ）の影響の試験。２Ｌの容量測定シリンダー（ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ  ｃｙｌｉｎｄｅｒ）（内径１０ｃｍ、高さ３５ｃｍ）を、液体および菜種ケーク用の容器として使用した。ふるいで分けられた２００ｇの菜種ケークを、室温で１８００ｇの２％ＮａＣｌ溶液と一緒に使用した。
【０１０５】
２つの構成を使用した。
低い頻度での混合：３０分ごとにシリンダー１８０°回転させ、元に戻す（合計時間：１５０分間）
高い頻度での混合：５分ごとにシリンダーを１８０°回転させ、元に戻す（合計時間：１５０分間）
【０１０６】
この実施例は、機械的混合及び／または撹拌を含んでいない。
【０１０７】
【表７】
2016512702.tif 000013
【０１０８】
［実施例６：本発明による実施例（穏やかな抽出、向流）］
［方法］
カスケードまたは多段抽出器（ｃａｓｃａｄｅ  ｏｒ  ｍｕｌｔｉｓｔａｇｅ  ｅｘｔｒａｃｔｏｒ）の原理は、システムでの穏やかな（温度範囲１０〜６０℃、ｐＨ６〜７）向流抽出であり、それにより、菜種粒子が完全にばらばらなるのに十分な落下高さが確保され、菜種タンパク質の可溶化が最大になるようにされる。これは、基本的には、高い円筒形状の容器の上部に菜種ケークを投入し、抽出液を容器の下部から供給することが関係する。菜種ケーク粒子は水分を含み（ｈｙｄｒａｔｅ）、シリンダーの中を通って沈降する際に、ばらばらになる。水分のない（ｄｅｐｌｅｔｅｄ）粒子は容器の下部に沈殿し、そこから、濃縮固体フラクションがペリスタポンプによって運びさられる。飽和液は、オーバーフローメカニズムにより容器の上部から回収されることになる。
【０１０９】
［図３の抽出カラムの概略図の説明］
管の下部へ沈降する固形分は、細いアダプターで回収され、水を含んだ固形分の層が形成されうる。層の高さは、固形分取り出しポンプを作動させた時と固体除去流から求められる。ケイ素管および固形分除去ポンプ１（Ｐ１）によって、固体フラクション（「固形分１」と呼ぶ）が第２管の上部に移される。また管２（段階２）では、固形分が沈殿し、管２の下部で濃縮される。別のペリスタポンプ（Ｐ２）およびケイ素管によって、水分のなくなった固形分（「固形分２」と呼ぶ）をシステムから除去する。
【０１１０】
抽出溶媒は２％ＮａＣｌ溶液であった。これが、ペリスタポンプ（Ｐ３）によって２番目の管の下部近くにある入口に供給される。このポンプの流量によってＮａＣｌ溶液の流入量が決まる。操作する前に、管に２％ＮａＣｌ溶液が満たされる。管の容積はおよそ９Ｌである。段階２の抽出物（「抽出物１」と呼ぶ）は、管１の上部のオーバーフロー構造によって管から取り出す。隔壁を使用して、固形分が抽出流に入り込むのを制限する。抽出物１は小さい方の管で回収されるが、この管は、緩衝貯蔵槽としては働いて、（抽出物１の取り出しが、管２からの抽出流より速い場合）管１に空気が入り込むのを防ぎ、さらに（貯蔵槽がいっぱいになった後（容積はおよそ１Ｌ）、管２からの抽出流が抽出物１の取り出しより速い場合）管２のオーバーフローを防ぐ。抽出物１は、４番目のペリスタポンプ（Ｐ４）によって管２中に運ばれる。このポンプの流量は、実験の間に調整されて、貯蔵槽が部分的に満たされるようにする。
【０１１１】
抽出物１は、管２の下部の注入口に供給する。管２には、オーバーフローシステムも装備されていた。管２からの抽出物は生成物の流れとして回収され、「抽出物２」と呼ばれる。
【０１１２】
［物質］
ＮａＣｌ（ＧＥＦ塩バッチＵ−０９１４３、ＳｕｐｒａＳｅｌ微細塩（ｆｉｎｅ  ｓａｌｔ））
菜種ケーク：Ｔｅｕｔｏｂｕｒｇｅｒ  Ｏｅｈｌｍｕｅｈｌｅ（ＴＯ）、バッチＰ０７１４１０
ＤＩＶＯＳ  １１７，７５０９０２１、ロット番号  ＲＳＡ０９０１４
Ｇｒｏｎｆａ  ２００  Ｉ容器（０４１９８）
Ｒｅｋｏふるいボウル（ｓｉｅｖｅ  ｂｏｗ）（ＺＢＭ０３０４／００１／Ｗ）
天秤：
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＰＲ８００２（Ｆ−ＢＢ−１３３）
Ｏｈａｕｓ  ＤＡ（Ｆ−ＢＢ−１７４）
Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＴＥ１２０００（Ｆ−ＢＢ−１９７およびＤ−ＢＬ−０８０）
温度制御：
Ｊｕｌａｂｏ  Ｆ１２（Ｆ−ＢＷ−１４５）およびＦ２５（Ｄ−ＢＷ−１２９）水浴
Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘ  ＢＵ（Ｔ−ＢＷ−０８）
熱交換器
ポンプ：
Ｗａｔｓｏｎ  Ｍａｒｌｏｗポンプ５２０Ｕ（Ｄ−ＳＰ−０４５）および５２０Ｓ（Ｄ−ＳＰ−０５４）
Ｗａｔｓｏｎ  Ｍａｒｌｏｗポンプ６０３Ｕ（Ｉ−ＳＰ−０４４）および６０３Ｓ（Ｉ−ＳＰ−００２）
Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘポンプ  ７
Ｗａｔｓｏｎ  Ｍａｒｌｏｗポンプ  ５０１Ｕ（Ｉ−ＡＥ−０４１）
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏハロゲン湿度計ＨＧ６３（Ｆ−ＢＬ−０１４）
ふるい（Ｓｅｉｖｅ）：１．４ｍｍ
遠心分離機  Ｈａｒｒｉｅｒ  １８／８０（Ｆ−ＣＦ−０６４）
Ｒｅｔｃｈ  Ｖｉｂｒａホッパー（Ｆ−ＯＡ−０２３）
【０１１３】
［実験］
システムの生産性を試験するために、ＮａＣｌ溶液の流量をおよそ３０Ｌ／ｈｒに増大させた。抽出物の固体の含有量を維持するために、菜種の投入量を５００ｇ／ｈｒに増大させた。固形分除去ポンプＰ１およびＰ２は、実験の開始時に作動させたが、流量は、層が形成されるように調整した。層の大きさは、管の容積のおよそ５０％であった。この層の大きさで、ポンプＰ１およびＰ２の流量を、層の大きさが安定するまで増大させた（およそ６Ｌ／ｈｒ）。
【０１１４】
菜種ケークは、左の管の上部から手作業で供給した。菜種ケークの粒径分布は非常に幅が広いため（μの範囲から数ｍｍまで）、菜種ケークは使用する前に１．４ｍｍのふるいにかけた。
【０１１５】
菜種ケークの投入は、時間をかけて徐々に投入されるようにするため、振動ホッパーの助けを得て手作業で行った。貯蔵槽には、１０分ごとに一定量の菜種ケークを満たした。振動の頻度は、１０分間隔でその量が投入されるように調整した。菜種ケークの特性のため、投入は、５〜１０分間よりも正確には調整できなかった。
【０１１６】
［分析］
タンパク質の含有量は、ケルダール法（フローインジェクション分析）で求めた。窒素含有量をタンパク質含有量に変換するのに用いた計算係数は６．２５であった。
【０１１７】
乾燥物質の分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＨＧ５３ハロゲン湿度計を用いて行った（使い捨てのガラス繊維フィルター上の２ｇの試料、１０５℃）。油脂は、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）分析によって求めた。
【０１１８】
［結果］
【０１１９】
【表８】
2016512702.tif 000014
【図１】
2016512702.tif 000015
【図２】
2016512702.tif 000016
【図３】
2016512702.tif 000017
【国際調査報告】
2016512702.tif 000018
2016512702.tif 000019
2016512702.tif 000020