(57)【要約】本発明は、概して、電界紡糸ファイバの分野に関する。具体的には、本発明は、コアシースファイバおよび関連電界紡糸方法に関する。本発明のファイバは、水難溶性薬剤および／またはタンパク質を含む。また、本発明は、電界紡糸システムを使用してコアシースファイバを生産する方法に関する。本電界紡糸システムは、治療用タンパク質および難溶性薬剤を含む、種々の治療薬を装填されたコアシースマイクロファイバを提供することができる。本発明はまた、異なる種類のポリマーがシース溶液およびコア溶液中に存在する、電界紡糸システムを使用してコアシースファイバを生産する方法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に非晶質の状態で準安定性の第１の薬剤を含む、コアであって、前記薬剤は、水に難溶性である、コアと、
第１のポリマーを含む、シースであって、前記シースは、前記コアを包囲する、シースと、
を備える、コアシースファイバを備える、
構造。
【請求項２】
前記コアは、第２のポリマーを含む、請求項１に記載の構造。
【請求項３】
前記薬剤の重量パーセントは、前記第２のポリマーに対して少なくとも８０％である、請求項２に記載の構造。
【請求項４】
前記構造は、摂取可能なカプセルである、請求項１に記載の構造。
【請求項５】
前記構造は、摂取可能な錠剤である、請求項１に記載の構造。
【請求項６】
前記薬剤の結晶化度は、５％またはそれを下回る、請求項３に記載の構造。
【請求項７】
前記コアは、結晶状態で第２の薬剤を含む、請求項１に記載の構造。
【請求項８】
前記シースは、結晶状態で第２の薬剤を含む、請求項１に記載の構造。
【請求項９】
前記ファイバは、最大２０ミクロンの断面直径によって特徴付けられる、請求項１に記載の構造。
【請求項１０】
第１のポリマーと、実質的に非晶質の状態で準安定性の第１の薬剤とを含む、コアであって、前記薬剤は、水に難溶性である、コアと、
第２のポリマーを含む、シースであって、前記シースは、前記コアを包囲する、シースと、
を備える、コアシースファイバを備え、
前記薬剤の重量パーセントは、前記第１のポリマーに対して少なくとも８０％であり、前記薬剤の結晶化度は、５％またはそれを下回り、前記ファイバの断面直径は、最大２０ミクロンである、
摂取可能な構造。
【請求項１１】
前記コアは、結晶状態で第２の薬剤を含む、請求項１０に記載の構造。
【請求項１２】
前記シースは、結晶状態で第２の薬剤を含む、請求項１０に記載の構造。
【請求項１３】
コアシースファイバを形成する方法であって、前記方法は、
少なくとも非変性担体中のタンパク質の部分懸濁液を含む、コア溶液を提供するステップと、
ポリマーを含む、シース溶液を提供するステップと、
非晶質コアシースファイバを生産するように、前記コア溶液および前記シース溶液を同時に電界紡糸するステップであって、前記コアシースファイバは、シースによって少なくとも部分的に包囲されるコアを備える、ステップと、
を含む、方法。
【請求項１４】
前記タンパク質は、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ−１８）を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記コア溶液は、アルブミン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、多糖、およびポリビニルピロリジンから成る群から選択される、賦形剤を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記賦形剤は、グルコース、スクロース、トレハロース、およびデキストランから成る群から選択される、多糖である、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（政府支援のステートメント）
本発明は、アメリカ国立標準技術研究所（ＮＩＳＴ）によって付与された７０ＮＡＮＢ  １１Ｈ００４のもとでの政府支援によってなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
（関連出願の引用）
本願は、“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｉｎｎｉｎｇ，”と題され、２０１３年３月１５日に出願された、米国仮特許出願第６１／８５２，２３３号に対する優先権を主張するものであり、さらに、“Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｉｎｎｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉ−Ｌａｙｅｒｅｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．”と題され、２０１３年２月４日に出願された、米国特許出願第１３／７５８，１７３号に対する優先権を主張するものである。上記出願のそれぞれの全体の開示は、あらゆる目的のために、参照により本明細書中に援用される。
【０００３】
本発明は、概して、電界紡糸ファイバの分野に関する。具体的には、本発明は、電界紡糸システムを使用してコアシースファイバを生産する方法に関する。本電界紡糸システムは、治療用タンパク質および難溶性薬剤を含む、種々の治療薬を装填されたコアシースマイクロファイバを提供することができる。本発明はまた、異なる種類のポリマーがシース溶液およびコア溶液中に存在する、電界紡糸システムを使用してコアシースファイバを生産する方法にも関する。
【背景技術】
【０００４】
薬剤装填コアシースファイバが、患者の体内の治療薬の局所的送達を含む、いくつかの医療用途のために提案されている。コアシースファイバは、比較的低いレベルのバースト放出で数時間、数日、または数週間にわたって持続させることができる、比較的一定の薬剤放出、ならびにＳｈａｒｍａで説明される方法に従って薬剤放出動態を調節する能力を含む、他の薬剤送達手段と比べていくつかの利点を有する。コアシースファイバはまた、モノファイバに調合することが困難であるか、または可能ではない、薬剤、ポリマー、賦形剤、および他の材料の調合も可能にする。埋め込まれた電界紡糸コアシースファイバはまた、埋込部位からの不要な移動の可能性が比較的低い、治療剤の高度に局所的な放出も提供する。
【０００５】
薬剤を含む小分子を装填されたコアシースファイバを製造する方法が説明されており、Ｐａｌａｓｉｓ  ＩＩおよびＰｈａｍで議論されている。しかしながら、コアシースファイバに治療薬の重要なカテゴリ、すなわち、タンパク質およびペプチドを装填するための拡張可能な工業的方法は説明されていない。これは、部分的に、工業規模ファイバ生産のために経済的に実行可能である様式で、タンパク質と連動すること（すなわち、ファイバに組み込む間および後にそれらの活性および安定性を維持すること）と関連付けられる技術的課題によるものである。必要とされるものは、タンパク質が物理的および化学的に安定したままであり、貯蔵中および患者への送達後の両方でその活性を保持する、タンパク質装填コアシースファイバを生産するための方法である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一側面では、本発明は、水溶液中のタンパク質を含むコア溶液とともに、生体再吸収性ポリマーを含むシース溶液を電界紡糸することによって、タンパク質含有電界紡糸コアシースファイバを形成する高スループット方法に関する。一実施形態では、本方法は、生体再吸収性ポリマーシースによって包囲されるタンパク質を含む、コアを有するファイバを生産する。一実施形態では、コア溶液は、多糖（例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、またはデキストラン）、タンパク質（例えば、アルブミン）、または合成水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、およびポリビニルピロリジン）等の賦形剤を含む。一実施形態では、タンパク質は、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ−１８）を含む（但し、それに限定されない）増殖因子である。
【０００７】
別の側面では、本発明は、少なくとも非変性担体中のタンパク質の部分懸濁液を含む、コア溶液とともに、合成生体再吸収性ポリマーを含むシース溶液を電界紡糸することによって、タンパク質含有電界紡糸コアシースファイバを形成する方法に関する。一実施形態では、本方法は、タンパク質を含むコアと、コアを包囲する生体再吸収性ポリマーシースとを有する、ファイバを形成する。一実施形態では、シースの組成は、コアの組成とは異なる。
【０００８】
別の側面では、本発明は、シースによって包囲されるタンパク質含有コアを伴う電界紡糸  コアシースファイバを患者に投与することによって、患者を治療する方法に関する。一実施形態では、シースの組成は、コアの組成とは異なる。一実施形態では、本方法は、患者の関節の中へコアシースファイバを配置するステップを含む。別の実施形態では、コア内に含有されるタンパク質は、ＦＧＦ−１８を含むが、それに限定されない増殖因子である。
【０００９】
さらに別の側面では、本発明は、約２０ミクロン未満の直径を伴う電界紡糸ファイバに関し、ファイバは、タンパク質を含有する内側半径方向部分と、タンパク質用の結合剤を含む外側半径方向部分とを含む。一実施形態では、結合剤は、随意に、外側半径方向部分の外面と関連付けられる。
【００１０】
さらに別の側面では、本発明は、約２０ミクロン未満の直径を伴う電界紡糸ファイバに関し、ファイバは、タンパク質およびヒドロゲルを含む、内側半径方向部分と、タンパク質を含まない、外側半径方向部分とを備える。タンパク質は、随意に、ヒドロゲル内に少なくとも部分的に懸濁される。
【００１１】
さらに別の側面では、本発明は、非晶質または準安定状態で１つまたはそれを上回る治療薬を含む、電界紡糸ファイバに関する。ある実施形態では、治療薬は、コアの中に位置し、ファイバは、治療薬の安定性を向上させる、１つまたはそれを上回るポリマーを含み、また、患者に投与されたときに薬剤の溶解を向上させる賦形剤を含んでもよい。
【００１２】
さらに別の側面では、本発明は、最大２０ミクロンの直径を伴う電界紡糸ファイバを提供するステップであって、ファイバは、外側半径方向部分、ならびにヒドロゲルを含む内側半径方向部分を備える、ステップと、飽和水性タンパク質溶液を提供するステップと、内側半径方向部分がタンパク質を吸収するように、タンパク質溶液にファイバを漬浸するステップとを含む、ファイバを形成する方法に関する。種々の実施形態では、タンパク質溶液は、過飽和であり、ファイバの外側半径方向部分は、ヒドロゲルを含まない。
【００１３】
さらに別の側面では、本発明はまた、異なる種類のポリマーがシース溶液およびコア溶液中に存在する、コアシーススリット表面電界紡糸システムを使用して、コアシースファイバを生産する方法にも関する。一実施形態では、シース溶液は、純ポリマーを含有する。一実施形態では、コア溶液は、難溶性薬剤を含有する。一実施形態では、コアシーススリット表面電界紡糸システムによって生産されるコアシースファイバは、コア溶液に含まれる難溶性薬剤の可溶性を増進する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
本発明の上記およびさらなる利点は、添付の図面と併せて以下の説明を参照することによって、より深く理解され得る。
【００１５】
【図１】図１は、（Ａ）トリフルオロエタノール中のＨＰＭＣを使用したスリット表面、および（Ｂ）コアシースを使用したスリット表面からの電界紡糸ジェット形成を、トリフルオロエタノール中のＨＰＭＣおよびトリフルオロエタノール中のＰＶＰと比較する。
【図２】図２は、ＰＶＰ／ＨＰＭＣ／ＩＴＺの電界紡糸ファイバ中の結晶性ＩＴＺと関連付けられる融解ピークの欠如を図示する、走査熱量測定サーモグラムを描写する。
【図３】図３は、コアシースＨＰＭＣ：ＩＴＺ−ＰＶＰファイバメッシュの溶解プロファイルを示す。
【図４】図４は、本発明のファイバメッシュ実施形態の溶解プロファイルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、電界紡糸ポリマーファイバ、そのようなファイバを作製する方法、そのようなファイバから作製されるインプラント、およびそのようなファイバを使用して患者を治療する方法に関する。本発明のファイバは、種々の薬剤（例えば、薬剤装填ファイバ）、賦形剤、および／または結合剤を装填されることが可能である。本発明の方法は、多数の医療用途の特定の要件に合わせられることが可能なタンパク質および薬剤放出プロファイルとともに、驚異的に高いタンパク質および難溶性薬剤装填速度で小型ファイバの製造をもたらす。本発明の種々の側面および実施形態が上記で説明されているが、それらは、限定よりもむしろ例証として提示されていることを理解されたい。本発明の範疇および範囲は、以下の請求項およびそれらの均等物の範囲内に入る全ての修正および変形例を網羅することを目的としている。
【００１７】
本明細書で使用されるような「および／または」という語句は、そのように結合された要素、すなわち、いくつかの場合では接合的に存在し、他の場合では離接的に存在する要素の「いずれか一方または両方」を意味すると理解されるべきである。随意に、それとは反対に明確に指示されない限り、特異的に識別されるこれらの要素に関係付けられようと無関係であろうと、「および／または」という節によって特異的に識別される要素以外の他の要素が存在し得る。したがって、非限定的実施例として、「Ａおよび／またはＢ」という言及は、「備える」等の制約のない用語と併せて使用されるとき、一実施形態では、ＢがないＡ（随意に、Ｂ以外の要素を含む）、別の実施形態では、ＡがないＢ（随意に、Ａ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態では、ＡおよびＢの両方（随意に、他の要素を含む）等を指すことができる。
【００１８】
本明細書で使用されるような「タンパク質」という用語は、限定ではないが、リン酸化、アセチル化、Ｎ−またはＣ−グリコシル化、ジスルフィド結合、脂質部分、低分子量（例えば、メチル、アセチル等）基、ユビキチン化ＳＵＭＯ化の添加等を含む、共有または非共有結合による機能的または信号伝達部分の添加、カルバミル化、脱イミノ化、脱アミノ化、脱炭酸化等による残基の変換、タンパク質分解を含む共有結合の開裂、ラセミ化、および同等物を含む、全ての種類の翻訳後修飾を伴う、または伴わない、天然または合成起源の単一アミノ酸を含む、全てのサイズおよび程度の翻訳後修飾のペプチド、２つまたはそれを上回る残基を含有するオリゴペプチド、タンパク質、タンパク質サブユニットおよびマルチサブユニット、またはマルチタンパク質複合体を含有することを目的としている。
【００１９】
「薬剤」および「治療薬」という用語は、本発明を参照して使用および説明されるタンパク質を含む、所望および期待生物学的効果を生じるために使用される、小分子、生物製剤、および他の活性成分を含むために、同義的に使用される。「閾値濃度」および同等物という用語は、治療効果または副作用等のある生物学的効果が観察される、組織、血清、血漿等の中の濃度を表すために本明細書で使用される。したがって、「治療閾値濃度」または類似用語が、５０％有効量、投与推奨、または患者の組織中の他の有効濃度を指すために使用されてもよい。同様に、「ファイバ」という用語は、均質ファイバおよびＰａｌａｓｉｓ  ＩＩらで説明されるようなコアシースファイバ等の電界紡糸薬剤装填ファイバ、ならびに糸、ロープ、管、およびパッチ等の高次構造に組み立てられ得る、現在知られている他の薬剤装填ファイバを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、本発明によると、難溶性に満たない水溶性、または約３３ｍｇ／ｍｌ未満、好ましくは約１０ｍｇ／ｍｌ未満、より好ましくは約１ｍｇ／ｍｌ未満の可溶性を意味するものとする、「難溶性」であると言われる。
【００２０】
本明細書で使用されるように、「本質的に〜から成る」という用語は、本明細書で別様に定義されない限り、機能に寄与する他の材料を除外することを意味する。それでもなお、そのような他の材料が、集合的または個別に、微量で存在し得る。
【００２１】
本明細書で使用されるように、「約」、「実質的に」、または「およそ」という用語は、（例えば、重量で、または体積で）＋または−１０％、いくつかの実施形態では、＋または−５％を意味する。本明細書の全体を通して「一実施例」、「実施例」、「一実施形態」、または「実施形態」という言及は、実施例と関連して説明される特定の特徴、構造、または特性が、本技術の少なくとも１つの実施例に含まれることを意味する。したがって、本明細書の全体を通した種々の場所での「一実施例では」、「実施例では」、「一実施形態」、または「実施形態」という語句の発生は、必ずしも全て同一の実施例を指しているわけではない。さらに、特定の特徴、構造、ルーチン、ステップ、または特性は、本技術の１つまたはそれを上回る実施例において、任意の好適な様式で組み合わせられてもよい。本明細書で提供される見出しは、便宜上のためにすぎず、請求された技術の範囲または意味を限定または解釈することを目的としていない。
（コアシース電界紡糸）
【００２２】
電界紡糸は、多くの天然および合成材料の小径ファイバの生産のための多用途技術である。これは、バイオポリマー（ＤＮＡ、ゼラチン）、液晶ポリマー（ポリアラミド）、織物繊維ポリマー（ナイロン）、および導電性ポリマー（ポリアニリン）等を含む（Ｊ．  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ３６（２）：  １６９  （１９９７）、Ｊ．  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７２（１）：  １５６  （２００５）、Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７（３）：  ２１６  （１９９６）、Ｐｏｌｙｍｅｒ  ４３（３）：  ７７５  （２００２）、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ８３（２０）：  ４２４４  （２００３））。電界紡糸は、液体貯留部からポリマー溶液の液体ジェットを抽出するために高電界を利用する。ノズルと基板との間の十分な距離が、溶媒を完全に蒸発させるために必要とされる。高電荷液体ジェットは、電荷反発による屈曲および伸張効果を受け、ますます細くなる。この屈曲および鞭打中に、揮発性溶媒が徹底的に蒸発させられ、固化ファイバが伝導性基板上で収集される。電界紡糸の利点は、ａ）マイクロメートルからナノメートル寸法のファイバ直径、ｂ）種々のファイバ組成、およびｃ）複数のファイバの空間的整合を制御する能力を含む。
【００２３】
本明細書は、電界紡糸およびコアシースファイバの形成に焦点を合わせているが、上記で説明される方法はまた、当業者によって本発明の範囲内であると理解されるであろう、均質（すなわち、非コアシース）タンパク質装填ファイバの電界紡糸にも適合する。同様に、本発明の一側面は、タンパク質装填電界紡糸コアシースファイバ、ならびにそれらの使用および製造方法に関するが、当業者であれば、本明細書での開示、具体的には、ヒドロゲルを含むコアシースファイバ、およびそれらを装填する方法、ならびに結合剤を含むコアシースファイバに関する開示が、非タンパク質薬剤または生物活性剤を装填されたファイバに適用可能であることを理解するであろう。
（タンパク質装填ファイバ）
【００２４】
一側面では、本発明は、ポリマー溶液がシース溶液中に存在するが、コア溶液中に存在しない、電界紡糸システムを使用して、治療用タンパク質を装填されるコアシースファイバを生産する方法に関する。別の側面では、本発明は、同一のポリマーがシース溶液およびコア溶液の両方の中に存在する、電界紡糸システムを使用して、治療用タンパク質を装填されるコアシースファイバを生産する方法に関する。一側面では、本発明は、タンパク質装填ファイバ、そのようなファイバを作製する方法、そのようなファイバから作製されるインプラント、およびそのようなファイバを使用して患者を治療する方法に関する。本開示は、多数の医療用途の特定の要件に合わせられ得る、高タンパク質装填速度および薬剤放出プロファイルを伴う小型ファイバを製造するための方法を提供する。加えて、本開示は、薬剤送達特性を最適化するため、および患者へのインプラントの適切な送達可能性ならびに後続のインプラント可動性を促進するために、本発明のファイバを使用する、種々のインプラント構成を提供する。
【００２５】
好ましい実施形態では、本発明のファイバは、別個のコアおよびシース溶液が同時にテイラーコーン形成の複数の部位に共局在化される、高スループットコアシース電界紡糸プロセス（Ｐｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．）を使用して製造される。本発明の方法は、同軸針、または均質ファイバが所望される場合は、ＮａｎｏｓｐｉｄｅｒＴＭ（Ｅｌｍａｒｃｏ  Ｓ．Ｒ．Ｏ．，  Ｌｉｂｅｒｅｃ，  Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）等の単一針またはデバイスを含む、他の電界紡糸方法に適合する。本明細書で使用されるように、「テイラーコーン」とは、そこから荷電粒子のジェットが閾値電圧を上回って発散する、電界紡糸、エレクトロスプレー、および流体力学スプレープロセス中に生成される円錐ジェットのおよそ円錐形の部分を指す。少量の導電性液体が電界に暴露されるとき、液体の形状は、表面張力のみによって引き起こされる形状から変形する。電圧が増加すると、電界の効果がより顕著になり、電界からの力が液体の表面張力に接近するにつれて、凸状側面および丸みを帯びた先端を伴う円錐の形成をもたらす。閾値電圧に達すると、円錐のわずかに丸みを帯びた先端が反転し、円錐ジェットと呼ばれる液体のジェットを放出する。これは、イオンが気相に移送されるエレクトロスプレープロセスの開始を表す。概して、安定した円錐ジェットを達成するために、閾値よりわずかに高い電圧が使用されなければならないことが分かっている。
【００２６】
以下で詳細に説明されるように、任意のタンパク質を本発明のファイバに組み込むことができる。好ましい実施形態では、タンパク質は、抗体またはその活性部分（例えば、Ｆａｂ断片）、増殖因子、ホルモン、受容体作動薬または拮抗薬、ＲＧＤペプチド、細菌毒素またはウイルス毒素等の治療用タンパク質である。一実施例では、タンパク質は、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ−１８）を含むが、それに限定されない、増殖因子である。
【００２７】
タンパク質装填ファイバは、限定ではないが、単一のコアシースファイバ、複数の緩いコアシースファイバ、または糸、ロープ、あるいはメッシュ等の構造に配列された複数のグループ化コアシースファイバを含む、任意の数のファイバを備える、インプラントに形成することができる。これらの構造は、Ｐａｌａｓｉｓ  ＩＩらでさらに詳細に説明されている。例示的実施形態では、ＦＧＦ−１８を装填されたファイバは、例えば、Ｐａｌａｓｉｓ  Ｉらで説明されるように、関節に埋め込むために好適であるインプラントに組み込まれる。一実施形態では、インプラントは、（Ｐａｌａｓｉｓ  Ｉらで説明されるように）軟骨が損傷されている関節の関節内空間の中に配置される。ＦＧＦ−１８装填ファイバ、およびそのようなファイバを備えるインプラントは、有利なことには、より広範または全身性の送達に伴って起こる悪影響を回避しながら、損傷軟骨へのＦＧＦ−１８の局所的送達を可能にする。
（コア溶液）
【００２８】
タンパク質装填ファイバが生産される場合、コア溶液は、好ましくは、コアシースファイバのコアに組み込まれる治療用タンパク質を含有する。いくつかの実施形態では、コアは、治療用タンパク質の溶液を含む、水溶液を備える。限定ではないが、１００ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、３００ｍｇ／ｍｌ、４００ｍｇ／ｍｌ、５００ｍｇ／ｍｌ、および１ｇ／ｍｌのタンパク質を含む、任意の好適なタンパク質濃度が使用されてもよい。好適なタンパク質濃度は、カプセル化されるタンパク質および所望される所望の放出プロファイルに応じて、変動するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、結果として生じるファイバがタンパク質を最大限に装填されるように、溶液内で飽和または近飽和濃度においてタンパク質を提供することができる。
【００２９】
より一般的に、コア溶液は、所望のタンパク質装填コアの構造、および延長線上で考えると、その放出動態に合わせることができる。例示的なコア溶液調合およびそれらの結果として生じたコア構造が、表１に記載される。
コア溶液調合および結果として生じるタンパク質装填コア構造
【表１】
2016513720.tif 000002
【００３０】
いくつかの実施形態では、コア溶液は、シクロヘキサンまたはグリセロール等の非溶媒流体担体中のタンパク質懸濁液を含む。概して、再構成中にタンパク質を変性させないか、または別様にタンパク質のアンフォールディングを助長しない、任意の非極性非変性担体が、本発明によるタンパク質懸濁液で使用するために好適である。低分子量ポリオールもまた、使用されてもよい。コア溶液はまた、結果として生じたファイバの埋込後にコア溶液中および／または体内のタンパク質の可溶性、安定性、および／または可用性を維持する、および／または向上させるように、１つまたはそれを上回る賦形剤を含有することもできる。
【００３１】
本明細書で使用されるように、「賦形剤」は、活性成分（例えば、治療用タンパク質、薬剤等）の送達のための媒介物としての機能を果たす、不活性物質である。一般に、電界紡糸中および後の表面へのタンパク質の吸着を低減させるように、タンパク質の酸化を防止するように、特定のｐＨまたは緊張度を維持するように、または別様にタンパク質を安定させるように、賦形剤を添加することができる。賦形剤は、可溶性、全身暴露、増加した有効性および／または薬剤吸収を促進すること、ならびに期待保存期間にわたって変性を防止すること等の生体外安定性に役立つことを含む、他の薬物動態学的考察等の種々の治療増進目的を提供する（Ｔｏｄａｙ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔ  ａｔ  Ｗｏｒｋ  １０  （１）：  ３０−３６）。適切な賦形剤の選択は、投与経路、投薬形態、および活性成分の種類等の種々の要因に依存する。賦形剤はまた、コア溶液の特性（例えば、粘度）が電界紡糸プロセスのために最適化されていることを確実にするように添加することもできる。一実施形態では、粘度調節賦形剤は、多糖、タンパク質、または生体再吸収性ポリマーである。本発明とともに使用するために考慮される多糖賦形剤の実施例は、限定ではないが、グルコース、スクロース、トレハロース、およびデキストランを含む。本発明とともに使用するために考慮されるタンパク質賦形剤の実施例は、（限定ではないが）アルブミンを含む。例示的な合成ポリマー賦形剤は、（限定ではないが）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、およびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）を含む。種々の賦形剤は、電界紡糸プロセス中に、およびタンパク質がポリマーファイバに組み込まれた後に、タンパク質の安定性を助長するために有用であり得る。賦形剤の実施例は、Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｒｅｃｅｎｔ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ-ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｈｏｉｃｅ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ．”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  ｖｏｌ．  ６，  ｉｓｓｕｅ  １１，  ｐｐ．  １２１９−１２３０  （２００９）によって要約され、表２に記載される。
例示的な賦形剤
【表２−１】
2016513720.tif 000003
【表２−２】
2016513720.tif 000004
【００３２】
多糖およびタンパク質賦形剤は、コアシースファイバ中のタンパク質の安定化のために特に有益に有利である。いずれの理論にも拘束されることを所望することなく、これらの分子は、カプセル化タンパク質の大部分から水を引き出す、タンパク質表面の優先的水和を助長し、そのような分子は、凝集を助長し得る均質なタンパク質間相互作用も減少させることが考えられる。
（シース溶液）
【００３３】
シース溶液は、好ましくは、結果として生じるコアシースファイバのシースに組み込まれる生体再吸収性ポリマーを含む。本発明のコアシース溶液において有用である生体再吸収性材料の実施例は、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリグリコール酸、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（ＤＬ−乳酸）等のポリエステル、ポリ（ラクチド−コ−ε−カプロラクトン）、ポリ（グリコリド−コ−ε−カプロラクトン）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を伴う共重合体等のそれらの共重合体、ポリ（セバシン酸グリセロール）等の分岐ポリエステル、ポリ（フマル酸プロピレン）、ポリジオキサノン等のポリ（エーテルエステル）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（セバシン酸無水物）等のポリ無水物、ポリ（トリメチルカーボネート）および関連共重合体等のポリカーボネート、生物学的に導出される場合もあり、されない場合もある、３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸、および関連共重合体等のポリヒドロキシアルカン酸塩、ポリホスファゼン、ポリ（Ｌ−リシン）、ポリ（グルタミン酸）、および関連共重合体等のポリ（アミノ酸）を含む。他の実施形態では、シースは、生体安定性（すなわち、非生体吸収性）ポリマーを含む。
【００３４】
一実施形態では、シース溶液は、コアからのその放出後にタンパク質局在化を増進するように、コラーゲンまたはヘパリン等の賦形剤を含む。代替として、賦形剤は、化学的手段または物理的吸着等の後処理ステップによってシースに添加することができる。一実施形態では、シースポリマーは、例えば、シースポリマーの架橋結合を含んで、電界紡糸後に処理される。
【００３５】
他の実施形態では、本発明の電界紡糸コアシースファイバは、ヒドロゲル（例えば、ＰＥＧ、ポリアクリルアミド、ｘ連鎖性ＰＶＡ、ｘ連鎖性ＰＶＰ等）を含むコアと、ヒドロゲルが欠けているシースとを含む。そのようなファイバのコアにタンパク質等の活性剤を装填するために、脱水コアを伴うファイバは、水性タンパク質溶液に少なくとも部分的に漬浸される。溶液がシースにわたってヒドロゲルコアの中へ拡散または透析すると、タンパク質もシースにわたって拡散する。本明細書で使用されるように、「吸収」とは、限定ではないが、拡散または透析を含む、任意の受動機構による、コアの中へのタンパク質の移動を指す。タンパク質がヒドロゲルコアに吸収された後、ファイバは、随意に、乾燥させられ、水を蒸発させるが、特定の形態でタンパク質を残す。
（結合剤）
【００３６】
いくつかの実施形態では、本発明のポリマーファイバはさらに、ファイバ上に装填されたタンパク質に結合する、付着する、または別様にそれを提示することが可能である、結合剤を含むことができる。ポリマーファイバ中の結合剤の存在は、タンパク質活性および／または安定性を向上させることができる。好適な結合剤は、可逆的または非可逆的にタンパク質に結合する、受容体分子、補因子、共リガンド、抗体、核酸、コラーゲン、ヘパリン、または他の小分子を含む。一実施形態では、結合剤は、タンパク質を結合し、好ましくは、シースの外面等のファイバの外面と関連付けられたままである。一実施形態では、結合剤は、ｉ）タンパク質がファイバの中に装填されるとき、ｉｉ）タンパク質がファイバの中に装填された後であるが、タンパク質が溶出される前に、またはｉｉｉ）タンパク質が溶出された後に、タンパク質に結合される。一実施形態では、結合剤は、シース内で濃縮される。別の実施形態では、結合剤は、コア中で濃縮される。さらに別の実施形態では、結合剤は、コアおよびシースの全体を通して分布している。なおも他の実施形態では、結合剤は、ファイバの外面と関連付けられ、例えば、表面をコーティングし、共有または非共有手段によって化学的に結合され、または外面あるいはその付近で単純に濃縮される。結合剤は、電界紡糸に先立ってコアまたはシースポリマー溶液のいずれかに添加することができ、あるいは例えば粉末コーティングによって、電界紡糸後にファイバの表面に適用することができる。いくつかの実施形態では、結合剤は、シースポリマー溶液およびコアポリマー溶液のうちの１つまたはそれを上回る溶液中のポリマーに共有または非共有結合される。
（難溶性薬剤の可溶性を向上させる）
【００３７】
一側面では、本発明は、異なるタイプのポリマーがコアおよびシース溶液中に存在する、電界紡糸システムを使用して、コアシースファイバを生産する方法に関する。この電界紡糸システムは、電界紡糸に先立ってコアおよび／またはシース溶液に組み込まれる難溶性薬剤の可溶性を増進する、コアシースマイクロファイバまたはナノファイバの非晶質分散を提供する。
【００３８】
本発明のコアシーススリット表面電界紡糸システムは、他の電界紡糸方法では達成することができない、小さいファイバ直径（マイクロおよびナノメートル）を伴うポリマー、急速な溶媒蒸発、およびコアの完全カプセル化を提供する。一側面では、コアシーススリット表面電界紡糸システムは、難溶性薬剤の向上した可溶性を伴う調合を提供する。一実施形態では、向上した可溶性は、シースおよびコア溶液に種々の異なるポリマーを含む能力によるものである。加えて、医薬品賦形剤をファイバに直接組み込む能力は、従来の紡糸技法と比較して調合空間をさらに拡張する。また、スリット表面システムは、電界紡糸ノズルからコレクタまでの変則的に長い距離（１または数十センチメートルよりもむしろ１メートル）を提供し、それによって、ファイバとして収集することに先立って、増加した溶媒蒸発を可能にする。
【００３９】
コアシース電界紡糸システムは、既存の電界紡糸システムと比較して、いくつかの利点を含む。例えば、Ｙｕら（Ｓｏｌｉｄ  ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ  ｃｏｒｅ−ｓｈｅａｔｈ  ｎａｎｏｆｉｂｅｒｓ，  ２０１１）は、コアとしてＤＭＡｃ：エタノール（４：６、ｖ：ｖ）の混合溶媒中の１０％（ｗ／ｖ）ＰＶＰおよび２％（ｗ／ｖ）と、シースとして水：エタノール（２：８、ｖ：ｖ）の混合溶媒中の１０％（ｗ／ｖ）ＰＶＰ、０．５％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、および０．２％（ｗ／ｖ）スクラロースとから成る、コアシース電界紡糸システムを提供する。Ｙｕらのシステムと異なり、本発明のコアシーススリット表面電界紡糸システムは、シース溶液中の異なるポリマー（例えば、ＰＶＰ）とともに、コア溶液中の種々のポリマー（例えば、ＨＰＭＣ）を利用することが可能である。加えて、コアシーススリット表面電界紡糸システムは、シース溶液中の純ポリマーを利用することができる。これは、満足できる電界紡糸を達成するように、シース溶液にＳＤＳおよびスクラロース等の付加的な成分を含まなければならない既存のシステムと比べて、有意な利点を表す。本発明のコアシースファイバ内に組み込まれる薬剤の可溶性および安定性は、本発明のナノファイバ内に（上記で議論されるような）賦形剤を含む能力によってさらに増進される。
【００４０】
本発明のファイバの一側面は、達成される高薬剤装填である。ある実施形態では、薬剤装填速度は、本発明のファイバのコアの少なくとも８０重量％である。また、他のファイバ製造プロセスと異なり、本発明のシステムおよび方法は、そのような薬剤が結晶状態で別様に安定しているにもかかわらず、実質的に非晶質の状態で１つまたはそれを上回る薬剤を含む、ファイバを形成するために使用されてもよい。したがって、ある実施形態では、本発明のファイバは、準安定状態で薬剤を含み、たとえそれらの最も安定した状態が、ファイバが使用される環境条件では結晶形態であったとしても、そのような薬剤が実質的に非晶質の状態で存在することを意味する。本明細書で使用されるように、「実質的に非晶質」とは、薬剤がわずか１０％結晶性、好ましくは、わずか５％結晶性であることを意味する。準安定形態で存在する薬剤を用いてファイバを形成する能力は、本発明の高スループット電界紡糸プロセスに起因する。つまり、難（水）溶性の結晶性薬剤は、本発明の電界紡糸プロセスでコア供給として使用するための有機溶媒を使用して溶解させられる。別個のポリマー溶液（ある実施形態では薬剤を含まない）が、シース供給として使用される。電界紡糸中の溶媒の急速な蒸発は、薬剤の結晶化を防止し、したがって、実質的に非晶質の形態で存在する薬剤の高装填速度によって特徴付けられる、コアを伴うコアシースファイバ構造をもたらす。他の実施形態では、コアは、随意に、実質的に非晶質または結晶性である、他の薬剤を含む。さらに他の実施形態では、シースは、結晶状態である薬剤を含む。
【００４１】
コアが、準安定性で実質的に非晶質の形態で存在する薬剤の高装填速度によって特徴付けられる、本発明のコアシースファイバは、独特の性質を有する。例えば、多くの薬剤の結晶形態が水難溶性である一方で、非晶質形態は、有意により水溶性であり得る。したがって、本発明のファイバは、許容速度の薬剤放出および吸収によって特徴付けられる、確実な薬剤送達および生物学的利用能のために、カプセル、錠剤、または他の摂取可能な形態に組み込まれてもよい。対照的に、胃腸管の通過中に十分に放出および／または吸収されるように、結晶性薬剤形態が調合されることは困難であり得る。
（難溶性薬剤）
【００４２】
革新的薬剤製品の開発で遭遇する主要な課題のうちの１つは、最も新たに識別された薬剤候補の難溶性である。従来の医薬品剤形の使用は、ヒト体内で十分な薬剤溶解を可能にせず、したがって、作用部位で非常に低い薬剤濃度（例えば、不良な生物学的利用能）につながる。その結果として、それらの標的部位と相互作用する理想的な化学構造を提供する薬剤化合物でさえも、多くの場合、生体内で満足いくように機能できない。一側面では、本発明は、難溶性薬剤の溶解／可溶性を向上させる。これは、理論上、経口で服用されたときにその生物学的利用能を向上させるであろう。
【００４３】
一実施形態では、本発明のコアシーススリット表面電界紡糸システムは、難溶性薬剤イトラコナゾール（ＩＴＺ）をカプセル化するために使用される。ＩＴＺおよび他の難溶性薬剤の電界紡糸は、それらの可溶性を有意に増進し、それによって、患者に投与されたときに、それらの生物学的利用能を増加させる。一実施形態では、これらの電界紡糸ファイバは、ゼラチンカプセル、錠剤、および同等物等の固体経口投薬形態に後処理する（例えば、凍結粉砕する、ハンマー粉砕する、成形する、圧縮する等）ことができる。
（ポリマー選択）
【００４４】
難溶性薬剤の可溶性を向上させるコアシース電界紡糸材料の開発は、シースポリマー溶液、および良好な電界紡糸可能性を呈する、それらの特定の重量％濃度（すなわち、形態安定性の非凝固テイラーコーン）を識別することを必要とした。任意の理論に拘束されることを所望するわけではないが、シース溶液は、電界紡糸可能性を判定することにおいて主要な要因である。有利な電界紡糸可能性を呈するシース溶液は、コア中の一連の材料／調合物の電界紡糸を促進する。一実施形態では、ポリマー選択は、体内の適切な場所（例えば、消化器系、循環系、呼吸器系、神経系、リンパ系等）で医薬品が可溶化して放出することに役立つ、ポリマーに制約される。そのようなポリマーは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリ（ビニルピロリドン−コ−酢酸ビニル）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、酢酸コハク酸ＨＰＭＣ、フタル酸ＨＰＭＣ、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ、炭水化物、およびポリエステルを含むが、必ずしもそれらに限定されない。
【００４５】
本発明のコアシーススリット表面電界紡糸システムは、従来の電界紡糸システムを使用して達成することができない、コアシースファイバ調合を生成することが可能な電界紡糸性質を伴うシース調合を識別するために使用された。以前に議論されたように、Ｙｕらのシステム等のシステムは、コアおよびシース溶液の両方の中で同一の濃度（例えば、１０％ｗ／ｖＰＶＰ）にて同一のポリマーを利用する。また、有利な電界紡糸可能性を達成するために、モノファイバ電界紡糸システムのシース溶液は、ＳＤＳおよびスクラロースと混合させられなければならない。これは、シース溶液中の異なるポリマー（例えば、ＰＶＰ）を用いて、コア溶液中の種々のポリマー（例えば、ＨＰＭＣ、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ(R)、およびＥｕｄｒａｇｉｔ(R)）を電界紡糸することができる、本コアシーススリット表面電界紡糸システムとは異なる。また、シース溶液のポリマー濃度を最適化することは、純ポリマーを含むシース溶液を使用して、良好な電界紡糸が達成されることを可能にする（例えば、ＳＤＳおよびスクラロースを添加する必要性を排除する）。
【００４６】
具体的には、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）中のポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）溶液のシース溶液が、良好な電界紡糸性質を呈するポリマー材料として識別された。ＰＶＰシース溶液は、スリット表面電界紡糸ノズルを使用して、トリフルオロエタノール中のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）のコア溶液と同時電界紡糸された。コアのみまたはモノファイバとして電界紡糸されたとき、ＨＰＭＣ溶液は、溶液凝固につながる溶媒蒸発によるものである可能性が高い、不良な噴出から明白であるように、うまく紡糸しなかった（図１Ａ）。しかしながら、シースとしてＰＶＰを用いて、ＨＰＭＣ溶液がコアシースシステム中のコアとして電界紡糸されたときに、良好な噴出およびファイバ収集が起こった（図１Ｂ）。収集されたファイバは、残留溶媒を除去するようにオーブンの中で乾燥させられた。示差走査熱量測定は、ファイバ中のＩＴＺが、結晶性ＩＴＺと関連付けられる融解ピークを有さなかったことを明らかにした（図２）。ＨＰＭＣ：ＩＴＺ−ＰＶＰファイバのメッシュの溶解試験が、模擬胃液で行われた。図３は、結晶性ＩＴＺに対する１時間以内の薬剤の急速かつ完全な溶解を実証する、ＨＰＭＣ：ＩＴＺ−ＰＶＰのコアシースファイバメッシュの溶解プロファイルを示す。このデータは、電界紡糸システムおよび結果として生じた材料がＩＴＺの可溶性を増進したことを実証する。
【００４７】
表３は、種々のコア材料を用いた電界紡糸を促進するＰＶＰシース溶液の能力をさらに例証する。これは、コアおよびシースの両方の中のいくつかの医薬成分（賦形剤および界面活性剤）の組み込み、ならびに異なるポリマー（例えば、ＨＰＭＣ、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ(R)、Ｅｕｄｒａｇｉｔ）とのＨＰＭＣコアの置換を含む。種々のＨＰＭＣコアポリマーはさらに、各ポリマーの割合に対してＩＴＺの種々の濃度を含んだ。一実施形態では、ＩＴＺは、シース溶液およびコア溶液の両方の中に存在する。表３で説明される材料系の電界紡糸は、図１で描写されるものと同様に起こり、各場合でファイバを収集することができた。
ＰＶＰシース溶液を用いて電界紡糸されたコア材料
【表３】
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【００４８】
図４は、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ（調合４）またはＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｅ１００（調合５）のいずれか一方とＨＰＭＣを置換することのメッシュからのＩＴＺ放出への影響を示す。Ｓｏｌｕｐｌｕｓを用いてＩＴＺを調合することにより、結晶性ＩＴＺに対して向上した溶解をもたらしたが、ＨＰＭＣを用いて調合されたときより有意に少なかったことが観察された。逆に、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｅ１００を用いてＩＴＺを調合することは、ＨＰＭＣを用いて調合したときと同様の結果を有した。このデータは、異なる溶解測定基準を達成することに関してコアシース電界紡糸の値を示す。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態が本明細書で説明および例証されているが、当業者であれば、機能を果たす、および／または結果および／または本明細書で説明される利点のうちの１つまたはそれを上回る利点を得るための種々の他の手段および／または構造を容易に想定し、そのような変形例および／または修正のそれぞれは、本発明の範囲内であると見なされる。より一般的には、当業者であれば、本明細書で説明される全てのパラメータ、寸法、材料、および構成が例示的であるように意図されており、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または構成は、本発明の教示が使用される、１つまたは複数の具体的用途に依存するであろうことを容易に理解するであろう。当業者であれば、日常的にすぎない実験を使用して、本明細書で説明される本発明の具体的実施形態の多くの均等物を認識するか、または解明することができるであろう。したがって、先述の実施形態は一例のみとして提示され、添付の請求項およびそれらの均等物の範囲内で、本発明が、具体的に説明および請求されるものとは別様に実践され得ることを理解されたい。本発明は、本明細書で説明される各個別特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法を対象とする。加えて、２つまたはそれを上回るそのような特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法の任意の組み合わせは、そのような特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法が相互に非一貫性でなければ本発明の範囲内に含まれる。
【００５０】
本明細書および請求項において本明細書で使用されるような「１つの」（ａおよびａｎ）という不定冠詞は、それとは反対に明確に指示されない限り、「少なくとも１つの」を意味すると理解されるべきである。
【００５１】
本明細書および請求項において本明細書で使用されるような「および／または」という語句は、そのように結合された要素、すなわち、いくつかの場合では接合的に存在し、他の場合では離接的に存在する要素の「いずれか一方または両方」を意味すると理解されるべきである。随意に、それとは反対に明確に指示されない限り、特異的に識別されるこれらの要素に関係付けられようと無関係であろうと、「および／または」という節によって特異的に識別される要素以外の他の要素が存在し得る。したがって、非限定的実施例として、「Ａおよび／またはＢ」という言及は、「備える」等の制約のない用語と併せて使用されるとき、一実施形態では、ＢがないＡ（随意に、Ｂ以外の要素を含む）、別の実施形態では、ＡがないＢ（随意に、Ａ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態では、ＡおよびＢの両方（随意に、他の要素を含む）等を指すことができる。
【００５２】
本明細書および請求項において本明細書で使用されるように、「または」は、上記で定義されるような「および／または」と同一の意味を有すると理解されるべきである。例えば、リストの中の項目を分離するときに、「または」あるいは「および／または」は、包含的、すなわち、いくつかの要素または要素のリスト、および随意に、付加的な記載されていない項目のうちの少なくとも１つを含むが、１つより多くも含むと解釈されるものとする。「〜のうちの１つのみ」または「〜のうちの正確に１つ」等の反対に明確に指示される唯一の用語、または請求項で使用されるときに「〜から成る」とは、いくつかの要素または要素のリストのうちの正確に１つの要素の包含を指すであろう。一般に、本明細書で使用されるような「または」という用語は、「いずれか一方」、「〜のうちの１つ」、「〜のうちの１つのみ」、または「〜のうちの正確に１つ」等の排他性の用語が先行するときに、排他的代替案（すなわち、「両方ではないが一方または他方」）を示すと解釈されるのみとする。「本質的に〜から成る」は、請求項で使用されるときに、特許法の分野で使用されるようなその通常の意味を有するものとする。
【００５３】
本明細書および請求項において本明細書で使用されるように、１つまたはそれを上回る要素のリストを参照した「少なくとも１つ」という語句は、要素のリストの中のいずれか１つまたはそれを上回る要素から選択されるが、要素のリスト内に具体的に記載されるありとあらゆる要素のうちの少なくとも１つを必ずしも含むわけではなく、要素のリストの中の要素のいかなる組み合わせも排除しない、少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきである。この定義はまた、随意に、特異的に識別されるこれらの要素に関係付けられようと無関係であろうと、「少なくとも１つ」という語句が指す要素のリスト内で特異的に識別される要素以外の要素が存在し得ることも可能にする。したがって、非限定的実施例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（あるいは同等に「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、あるいは同等に「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）とは、一実施形態では、Ｂが存在しない（随意に、Ｂ以外の要素を含む）、随意に１つより多くのＡを含む、少なくとも１つのＡ、別の実施形態では、Ａが存在しない（随意に、Ａ以外の要素を含む）、随意に１つより多くのＢを含む、少なくとも１つのＢ、さらに別の実施形態では、随意に１つより多くのＡを含む、少なくとも１つのＡ、および随意に１つより多くのＢを含む、少なくとも１つのＢ（随意に、他の要素を含む）等を指すことができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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