(57)【要約】本明細書で提供される本発明は、とりわけ、非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）の発現および細胞内局在化を使用して、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体または個体の亜集団であって、抗がん治療から利益を得る個体または個体の亜集団を選択するための方法、加えて個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルを使用して、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体の処置に指針を与える方法についても開示する。
2016519083.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とする個体における多発性骨髄腫を処置するための方法であって、
ａ．前記個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびアンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）の発現を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの両方の発現は、前記個体が多発性骨髄腫を有さないことを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡを発現し、かつＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現が欠如することは、前記個体が多発性骨髄腫を有することを示すことと、
ｂ．前記個体の前記形質細胞が、前記ＳｎｃｍｔＲＮＡだけを発現し、前記ＡＳｎｃｍｔＲＮＡを発現しない場合は、前記個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することと
を含む、方法。
【請求項２】
処置を必要とする個体における多発性骨髄腫を処置するための方法であって、前記個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することを含み、処置の前に、前記個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）を発現し、アンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）を発現しないことが決定されている、方法。
【請求項３】
予防を必要とする個体における多発性骨髄腫の再発を予防するための方法であって、
ａ．前記個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することであって、前記ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞質内局在化は、前記個体が寛解していることを示す、ことと、
ｂ．前記ＳｎｃｍｔＲＮＡが、前記形質細胞の細胞質に局在化している場合は、前記個体を、１種または複数の維持抗がん治療薬で処置することと
を含む、方法。
【請求項４】
予防を必要とする個体における多発性骨髄腫の再発を予防するための方法であって、前記個体を、１種または複数の維持抗がん治療薬で処置することを含み、処置の前に、前記個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の、細胞内の細胞質内局在化を呈示することが決定されている、方法。
【請求項５】
その個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法であって、
ａ．前記個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することであって、前記ＳｎｃｍｔＲＮＡの（ｉ）核における局在化または（ｉｉ）細胞質内および核における局在化は、前記個体が再発していることを示す、ことと、
ｂ．前記ＳｎｃｍｔＲＮＡが、前記形質細胞の（ｉ）核または（ｉｉ）細胞質および核に局在化している場合は、前記個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することと
を含む、方法。
【請求項６】
その個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法であって、前記個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することを含み、処置の前に、前記個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の（ｉ）細胞内の核における局在化または（ｉｉ）細胞内の細胞質内および核における局在化を呈示することが決定されている、方法。
【請求項７】
多発性骨髄腫を有しているかまたはこれを発症していることが疑われる個体における、抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答の可能性を評価する方法であって、前記個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することを含み、前記ＳｎｃｍｔＲＮＡの前記細胞内の細胞質内局在化は、前記抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答を示す、方法。
【請求項８】
前記抗がん治療薬が、
ａ．逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または
ｂ．逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ
を含むヒト非コードミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドは前記ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗がん治療薬が、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチナム、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、ギリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキセート、Ａｒｉｓａ（登録商標）、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゼローダ、ＣＰＴ−１１、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ（例えば、ＰＥＧ  ＩＮＴＲＯＮ−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソーマルダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール、パシリタキセル、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロネート、ビアキシン、ブスルファン、プレドニゾン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））、スリンダク、およびエトポシドを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記多発性骨髄腫が、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、およびビンクリスチンの１種または複数での処置後に再発した、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗がん治療が、患者の処置におけるサルベージ療法の一部として投与され、前記多発性骨髄腫が、他の薬物に対して難治性となっている、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
１種または複数のさらなる治療を投与することをさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記１種または複数のさらなる治療が、同種幹細胞移植療法を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記１種または複数のさらなる治療が、自己幹細胞移植療法を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄が、前記罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子（本明細書で開示されるＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかなど）に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）の有効量で処置される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
個体における多発性骨髄腫を診断するための方法であって、前記個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびアンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）の発現を測定することを含み、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの両方の発現は、前記個体が多発性骨髄腫を有さないことを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡを発現し、かつＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現を欠如することは、前記個体が多発性骨髄腫を有することを示す、方法。
【請求項１７】
多発性骨髄腫は寛解していると診断された個体が、再発するのかどうかを決定するための方法であって、前記個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することを含み、
ａ．前記ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞質内局在化は、前記個体が寛解していることを示し、
ｂ．前記ＳｎｃｍｔＲＮＡの核における局在化または細胞質内および核における局在化は、前記個体が再発することを示す、方法。
【請求項１８】
前記ＡＳｎｃｍｔＲＮＡが、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む、請求項１、２、または１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＡＳｎｃｍｔＲＮＡが、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＳｎｃｍｔＲＮＡが、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＳｎｃｍｔＲＮＡが、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現が、ＲＴ−ＰＣＲもしくは別のＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、またはＳＡＧＥにより測定される、請求項１、２、または１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現が、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により測定される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現が、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの前記細胞内局在化が、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される、請求項３から７、または１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
多発性骨髄腫を診断するためのキットであって、
ａ．（ｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｉｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドであって、前記ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる、オリゴヌクレオチド、
ｂ．標識の検出のためのコンジュゲート抗体試薬、
ｃ．ハイブリダイゼーション緩衝液および洗浄緩衝液、ならびに／または
ｄ．（ｉ）多発性骨髄腫を有すると診断された個体から単離されるか、もしくは多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陽性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド、および（ｉｉ）多発性骨髄腫を有さない個体から単離されるか、もしくは正常に増殖する細胞系から単離される、陰性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド
の１種または複数を含むキット。
【請求項２７】
多発性骨髄腫は寛解していると診断された個体が、再発するのかどうかを決定するためのキットであって、
ａ．（ｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｉｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドであって、前記ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる、オリゴヌクレオチド、
ｂ．標識の検出のためのコンジュゲート抗体試薬、
ｃ．ハイブリダイゼーション緩衝液および洗浄緩衝液、
ｄ．（ｉ）多発性骨髄腫が再発したと診断されている個体から単離されるか、またはセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の、細胞内の核における局在化または細胞内の細胞質内および核における局在化を呈示する、多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陽性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド、および（ｉｉ）多発性骨髄腫が再発していない個体から単離されるか、またはＳｎｃｍｔＲＮＡの、細胞内の細胞質内における局在化を呈示する多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陰性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド
の１種または複数を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／７８５，２６９号および２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９０，０７２号に基づく優先権を主張し、その各開示は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、多発性骨髄腫を有すると診断されたかまたはこれを有すると考えられる個体の骨髄から単離された形質細胞内で発現した、非コードミトコンドリアＲＮＡの発現および細胞内局在化に部分的に基づいて、多発性骨髄腫を検出および処置するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
多発性骨髄腫とは、病理学的骨折をもたらす、複数の腫瘍塊を形成する、骨髄腫細胞による骨および骨髄の浸潤を特徴とする、新生物性疾患である。状態は通例、進行性であり、致死性である。症状は、貧血、腎損傷、および血中の高グロブリンレベル、ならびに細菌感染に対する感受性の増大を含む。多発性骨髄腫において観察される、異常な免疫グロブリン産生の障害は、正常なＢリンパ球の、抗体分泌細胞への成熟を抑制する、単球またはマクロファージの存在に起因しうる。平均余命は、診断時における疾患の程度および処置に対する応答と関連する。応答患者の中央値による平均余命は、２年間である。高レベルの血清中または尿中の骨髄腫タンパク質、骨病変、高カルシウム血症、汎血球減少症、および腎不全は、望ましくない徴候である。
【０００４】
多発性骨髄腫は依然として不治であるが、近年における新規の治療の開発により、奏効率は劇的に増大し、生存も延長されている。この複雑な疾患についての我々の理解が大きく進歩しているにも関わらず、大部分の処置施設では、年齢およびパフォーマンスステータスの同様の範疇内の患者に対して、標準的な寛解誘導療法が施されている。自己幹細胞移植を伴う高用量の化学療法は、依然として若年の患者に対する標準治療である。
【０００５】
意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）および多発性骨髄腫は、単クローン性ガンマグロブリン血症の最も高頻度の形態である。意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症は、７５歳を超える集団の発生率が最大１０％である、最も一般的な形質細胞増殖症である。意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症および多発性骨髄腫の分子的基礎は、それほどよく理解されておらず、２つの障害を鑑別することは容易ではない。骨髄形質細胞増多の量、尿中または血清中の単クローン性免疫グロブリンの濃度、および骨病変の存在など、臨床基準の組合せに基づく分類システムを使用する、多発性骨髄腫または意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症の診断は、症例の３分の２において同一である。とりわけ、多発性骨髄腫の早期において、鑑別診断は、ある程度の不確実性を伴う。
【０００６】
さらに、多発性骨髄腫の診断では、主治医は、関節リウマチおよび結合組織障害など、形質細胞反応が生じうる他の障害、または患者が骨転移と関連した溶骨性病変を有しうる転移性癌も除外しなければならない。したがって、多発性骨髄腫は、潜伏期が長いと考えられ、臨床特徴も、悪性腫瘍の発症から多くの年数の後に認識されていることを踏まえると、疾患についてスクリーニングし、多発性骨髄腫についての鑑別診断を施すのに新たな分子的診断法が必要とされている。したがって、多発性骨髄腫の、顕著に異なり、予後診断的に関与性の臨床的亜群を鑑別診断し、同定するための新たな、そして正確な方法が必要とされている。
【０００７】
このような新たな方法に向けた探索を錯綜させているのは、多発性骨髄腫細胞には、複数の現行の化学療法に対するそれらの耐性の一因となり、したがって、大半の患者にとって、最終的に致死性の転帰の一因となる、抗アポトーシス性のシグナル伝達機構が付与されているという事実である。中間期における蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）およびＤＮＡフローサイトメトリーによる異数性が、症例の＞９０％において観察されているが、この典型的に低増殖性の腫瘍において、細胞遺伝学的異常が有用なのは、症例の約３０％に限られ、複雑であることが典型的であり、平均で７つの異なる染色体を伴う。したがって、遺伝学的異常と臨床転帰との間の相関を確立することは、困難となっている。
【０００８】
結果として、多発性骨髄腫の腫瘍細胞内の、個別の遺伝子発現が信頼できないことを踏まえると、その測定が、個体が多発性骨髄腫を有し、抗がん治療から利益を得る可能性が高いことを予測しうるだけでなく、また、多発性骨髄腫に関する抗がん治療の成功の後で、現在のところ寛解している個体または個体の亜集団が、再発を患う可能性が高いのかどうかを決定するのにも有用なバイオマーカーが必要とされている。このようなマーカーであれば、多発性骨髄腫を患うか、またはこれを有すると考えられる個体の処置に関与する医療従事者に指針を与えるための一助となろう。結果として、この種のマーカーであれば、診断目的で有用なだけでなく、また、処置を開始した後および寛解を確立した後の予後診断を追跡するのにも有用であろう。
【０００９】
本発明は、このようなバイオマーカーを提供し、骨髄から単離された形質細胞内の、非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）の発現および細胞内局在化を使用して、抗多発性骨髄腫治療から利益を得る個体または個体の亜集団を選択し、加えて寛解している個体であって、再発する可能性が高い個体、または寛解の後で再発した個体も同定する。
【００１０】
本明細書を通して、多様な特許、特許出願、および他の種類の刊行物（例えば、雑誌論文）について言及する。本明細書で引用される全ての特許、特許出願、および刊行物の開示は、参照によりそれらの全体において、全ての目的で本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本明細書で提供される本発明は、とりわけ、非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）の発現および細胞内局在化を使用して、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体または個体の亜集団であって、抗がん治療から利益を得る個体または個体の亜集団を選択するための方法、加えて個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルを使用して、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体の処置に指針を与える方法についても開示する。
【００１２】
したがって、一態様では、本明細書では、処置を必要とする個体における多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびアンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）の発現を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの両方の発現は、個体が多発性骨髄腫を有さないことを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡを発現し、かつＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現が欠如することは、個体が多発性骨髄腫を有することを示すことと、個体の形質細胞が、ＳｎｃｍｔＲＮＡだけを発現し、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡを発現しない場合は、個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することとを含む、方法が提供される。別の態様では、本明細書では、処置を必要とする個体における多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することを含み、処置の前に、個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）を発現し、アンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）を発現しないことが決定されている、方法が提供される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、（ａ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｂ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒト非コードミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドを含み、オリゴヌクレオチドはミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチナム、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、ギリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキセート、Ａｒｉｓａ（登録商標）、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゼローダ、ＣＰＴ−１１、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ（例えば、ＰＥＧ  ＩＮＴＲＯＮ−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソーマルダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール（doxetaxol）、パシリタキセル（pacilitaxel）、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロネート（palmitronate）、ビアキシン、ブスルファン、プレドニゾン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソ��ビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（estrainustine  sodium  phosphate）（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））、スリンダク、およびエトポシドを含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、およびビンクリスチンの１種または複数での処置後に再発している。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、前記抗がん治療は、患者の処置におけるサルベージ療法の一部として投与され、多発性骨髄腫は、他の薬物に対して難治性となっている。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、方法は、１種または複数のさらなる治療を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、１種または複数のさらなる治療は、同種幹細胞移植療法を含む。いくつかの実施形態では、１種または複数のさらなる治療は、自己幹細胞移植療法を含む。いくつかの実施形態では、自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄は、罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチドの有効量で処置される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、ＲＴ−ＰＣＲもしくは別のＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、またはＳＡＧＥにより測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションに��り測定される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化は、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。
【００１３】
他の態様では、本明細書では、予防を必要とする個体における多発性骨髄腫の再発を予防するための方法であって：（ａ）個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞質内局在化は、個体が寛解していることを示すことと：（ｂ）ＳｎｃｍｔＲＮＡが、形質細胞の細胞質に局在化している場合は、個体を、１種または複数の維持抗がん治療薬で処置することとを含む、方法が提供される。別の態様では、本明細書では、予防を必要とする個体における多発性骨髄腫の再発を予防するための方法であって、個体を、１種または複数の維持抗がん治療薬で処置することを含み、処置の前に、個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の、細胞内の細胞質内局在化を呈示することが決定されている、方法が提供される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、（ａ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｂ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒト非コードミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドを含み、オリゴヌクレオチドはミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチナム、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、ギリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキセート、Ａｒｉｓａ（登録商標）、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゼローダ、ＣＰＴ−１１、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ（例えば、ＰＥＧ  ＩＮＴＲＯＮ−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソーマルダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール、パシリタキセル、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロネート、ビアキシン、ブスルファン、プレドニゾン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））、スリンダク、およびエトポシドを含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、ボルテゾミブ（Ｖｅ���ｃａｄｅ（登録商標））、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、およびビンクリスチンの１種または複数での処置後に再発している。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、前記抗がん治療は、患者の処置におけるサルベージ療法の一部として投与され、多発性骨髄腫は、他の薬物に対して難治性となっている。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、方法は、１種または複数のさらなる治療を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、１種または複数のさらなる治療は、同種幹細胞移植療法を含む。いくつかの実施形態では、１種または複数のさらなる治療は、自己幹細胞移植療法を含む。いくつかの実施形態では、自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄は、罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチドの有効量で処置される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、ＲＴ−ＰＣＲもしくは別のＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、またはＳＡＧＥにより測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化は、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。
【００１４】
さらに他の態様では、本明細書では、処置を必要とする個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法であって、（ａ）個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡの（ｉ）核における局在化または（ｉｉ）細胞質内および核における局在化は、個体が再発していることを示すことと、（ｂ）ＳｎｃｍｔＲＮＡが、形質細胞の（ｉ）核または（ｉｉ）細胞質および核に局在化している場合は、個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することとを含む、方法が提供される。別の態様では、本明細書では、処置を必要とする個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することを含み、処置前に、個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の（ｉ）細胞内の核における局在化または（ｉｉ）細胞内の細胞質内および核における局在化を呈示することが決定されている、方法が提供される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、（ａ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｂ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒト非コードミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドを含み、オリゴヌクレオチドはミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチナム、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、ギリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキセート、Ａｒｉｓａ（登録商標）、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゼローダ、ＣＰＴ−１１、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ（例えば、ＰＥＧ  ＩＮＴＲＯＮ−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソーマルダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール、パシリタキセル、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロネート、ビアキシン、ブスルファン、プレドニゾン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｍｃｙｔ（登録商標）���、スリンダク、およびエトポシドを含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、およびビンクリスチンの１種または複数での処置後に再発している。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、前記抗がん治療は、患者の処置におけるサルベージ療法の一部として投与され、多発性骨髄腫は、他の薬物に対して難治性となっている。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、方法は、１種または複数のさらなる治療を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、１種または複数のさらなる治療は、同種幹細胞移植療法を含む。いくつかの実施形態では、１種または複数のさらなる治療は、自己幹細胞移植療法を含む。いくつかの実施形態では、自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄は、罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチドの有効量で処置される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、ＲＴ−ＰＣＲもしくは別のＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、またはＳＡＧＥにより測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化は、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダ���ゼーションにより測定される。
【００１５】
他の態様では、本明細書では、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体における、抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答の可能性を評価する方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することを含み、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内の細胞質内局在化は、抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答を示す、方法が提供される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡが、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化は、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。
【００１６】
別の態様では、本明細書では、個体における多発性骨髄腫を診断するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびアンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）の発現を測定することを含み、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの両方の発現は、個体が多発性骨髄腫を有さないことを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡを発現し、かつＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現を欠如することは、個体が多発性骨髄腫を有することを示す、方法が提供される。他の態様では、本明細書では、多発性骨髄腫は寛解していると診断された個体が、再発するのかどうかを決定するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することを含み、（ａ）ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞質内における局在化は、個体が寛解していることを示し、（ｂ）ＳｎｃｍｔＲＮＡの核における局在化または細胞質内および核における局在化は、個体が再発することを示す、方法が提供される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、ＲＴ−ＰＣＲもしくは別のＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、またはＳＡＧＥにより測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により測定される。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。本明細書で提供される実施形態のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化が、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより測定される。
【００１７】
さらに他の態様では、本明細書では、多発性骨髄腫を診断するためのキットであって、（ａ）（ｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｉｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドであって、ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる、オリゴヌクレオチド、（ｂ）標識の検出のためのコンジュゲート抗体試薬、（ｃ）ハイブリダイゼーション緩衝液および洗浄緩衝液、ならびに／または（ｄ）（ｉ）多発性骨髄腫を有すると診断された個体から単離されるか、もしくは多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陽性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド、および（ｉｉ）多発性骨髄腫を有さない個体から単離されるか、もしくは正常に増殖する細胞系から単離される、陰性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライドの１種または複数を含むキットが提供される。
【００１８】
さらに別の態様では、本明細書では、多発性骨髄腫は寛解していると診断された個体が、再発するのかどうかを決定するためのキットであって、；（ａ）（ｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｉｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドであって、ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる、オリゴヌクレオチド、；（ｂ）標識の検出のためのコンジュゲート抗体試薬、；（ｃ）ハイブリダイゼーション緩衝液および洗浄緩衝液、；（ｄ）（ｉ）多発性骨髄腫が再発したと診断されている個体から単離されるか、またはセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の、細胞内の核における局在化または細胞内の細胞質内および核における局在化を呈示する、多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陽性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド、および（ｉｉ）多発性骨髄腫が再発していない個体から単離されるか、またはＳｎｃｍｔＲＮＡの、細胞内の細胞質内における局在化を呈示する多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陰性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライドの１種または複数を含むキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、健常ドナーの骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す（上パネル）。下パネルは、ＤＡＰＩ（核染色）で染色された同じ細胞を示す。
【００２０】
【図２Ａ】図２は、任意の抗がん治療を投与する前に、多発性骨髄腫を有すると診断された個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、細胞質内だけに局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する（図２Ａ〜Ｃ）。
【図２Ｂ】図２は、任意の抗がん治療を投与する前に、多発性骨髄腫を有すると診断された個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、細胞質内だけに局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する（図２Ａ〜Ｃ）。
【図２Ｃ】図２は、任意の抗がん治療を投与する前に、多発性骨髄腫を有すると診断された個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、細胞質内だけに局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する（図２Ａ〜Ｃ）。
【００２１】
【図３Ａ】図３は、多発性骨髄腫を有すると診断され、その後、抗がん治療の後で再発した個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。さらに、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、主に核内（図３Ｃ〜Ｄ）または細胞質内および核内（図３Ａ〜ＢおよびＥ）に局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する。
【図３Ｂ】図３は、多発性骨髄腫を有すると診断され、その後、抗がん治療の後で再発した個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。さらに、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、主に核内（図３Ｃ〜Ｄ）または細胞質内および核内（図３Ａ〜ＢおよびＥ）に局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する。
【図３Ｃ】図３は、多発性骨髄腫を有すると診断され、その後、抗がん治療の後で再発した個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。さらに、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、主に核内（図３Ｃ〜Ｄ）または細胞質内および核内（図３Ａ〜ＢおよびＥ）に局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する。
【図３Ｄ】図３は、多発性骨髄腫を有すると診断され、その後、抗がん治療の後で再発した個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。さらに、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、主に核内（図３Ｃ〜Ｄ）または細胞質内および核内（図３Ａ〜ＢおよびＥ）に局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する。
【図３Ｅ】図３は、多発性骨髄腫を有すると診断され、その後、抗がん治療の後で再発した個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。骨髄腫細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するそれらの陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如により同定される（上パネル）。さらに、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、主に核内（図３Ｃ〜Ｄ）または細胞質内および核内（図３Ａ〜ＢおよびＥ）に局在化している。１８Ｓ  ｒＲＮＡは、陽性対照として用いられる。下パネルは、同じ細胞の位相画像に対応する。
【００２２】
【図４】図４は、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）を有する個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルを表す。これらの細胞は、ＳｎｃｍｔＲＮＡの発現および局在化を示し、個体が多発性骨髄腫を有するが、再発前であると診断されたことと符合する（細胞質内局在化）。ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは存在しない。下パネルは、ＤＡＰＩ（核染色で染色された）同じ細胞を示す。
【００２３】
【図５】図５は、非処置のＮＳＯ２細胞、対照のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ−Ｃ）で処置されたＮＳＯ２細胞、または治療用アンチセンスオリゴヌクレオチドであるＡＳＯ−１５６０Ｓで処置された細胞を注射されたマウスの生存を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、とりわけ、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを有すると考えられる個体を診断および処置するための方法を提供する。本発明者らは、多発性骨髄腫を有すると診断されたかまたはこれを有すると考えられる個体の骨髄から単離された形質細胞内の、非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）の特定の分子種の細胞内局在化および発現が、疾患状態自体の存在と関連し、かつ、現在のところ多発性骨髄腫に関して寛解している個体が、再発を患うのか、現在のところ再発を患いつつあるのかを示すことを観察した。したがって、個体を、これらのｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化について評価することは、個体または個体の亜集団を適切な処置について選択し、初期治療の成功の後で、個体が寛解したら、再発の可能性を決定するのに有用である。この評価はまた、多発性骨髄腫を有すると診断されたかまたはこれを有することが疑われる個体を処置するための方法の構成要素としても有用である。
【００２５】
Ｉ．一般的な技術
本発明の実施は、特に他の指定がない限り、当業者周知の、従来の分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、および免疫学の技術を採用すると予想される。このような技術は、例えば、Molecular  Cloning：A  Laboratory  Manual、第２版（Sambrookら、１９８９年）およびMolecular  Cloning：A  Laboratory  Manual、第３版（SambrookおよびRussel、２００１年）、（本明細書では合わせて、「Sambrook」と称する）；Current  Protocols  in  Molecular  Biology（F.M.  Ausubelら編、１９８７年、２００１年までの付録を含む）；PCR：The  Polymerase  Chain  Reaction、（Mullisら編、１９９４年）；HarlowおよびLane（１９８８年）Antibodies,  A  Laboratory  Manual、Cold  Spring  Harbor  Publications、New  York；HarlowおよびLane（１９９９年）Using  Antibodies：A  Laboratory  Manual、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、Cold  Spring  Harbor、NY（本明細書では合わせて、「HarlowおよびLane」と称する）、Beaucageら編、Current  Protocols  in  Nucleic  Acid  Chemistry、John  Wiley  &  Sons,  Inc.、New  York、２０００年）、Handbook  of  Experimental  Immunology、第４版（D.  M.  WeirおよびC.  C.  Blackwell編、Blackwell  Science  Inc.、１９８７年）；およびGene  Transfer  Vectors  for  Mammalian  Cells（J.  M.  MillerおよびM.  P.  Calos編、１９８７年）などの文献で詳細に説明されている。他の有用な参考文献としては、HarrisonのPrinciples  of  Internal  Medicine（McGraw  Hill；J.  Isseleacherら編）、DuboisのLupus  Erythematosus（第５版；D.J.  WallaceおよびB.H.  Hahn編）が挙げられる。
【００２６】
ＩＩ．定義
単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、本明細書で使用される場合、特に他の指定がない限り、複数形の対象物を含む。
【００２７】
本明細書で説明した本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「を含む」、態様および実施形態「からなる」、ならびに態様および実施形態「から本質的になる」ことを含むと理解される。
【００２８】
「個体」は、脊椎動物、哺乳動物、またはヒトであってもよい。哺乳動物としては、これらに限定されないが、家畜、競技用動物、ペット、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。個体としてはまた、これらに限定されないが、イヌおよびネコなどのコンパニオンアニマルも挙げられる。一態様において、個体は、ヒトである。
【００２９】
「健康管理の専門家」としては、本明細書で使用される場合、これらに限定されないが、医者、看護師、医師のアシスタント、実験技術者、科学研究者、それらに採用された事務員、または診断の決定、診断、診断の補助に関与する、もしくは個体の処置経過に影響を与えるあらゆる人を挙げることができる。
【００３０】
「有効量」または「治療有効量」とは、単回投与として、または一連の投与の一部として個体へと投与される、オリゴヌクレオチドまたは他の抗がん治療など、治療用化合物の量であって、所望の治療効果をもたらすのに有効な量を指す。
【００３１】
本明細書全体で示された最大の数値限定それぞれが、それより小さい各数値限定が本明細書で明記されているかのように、そのようなより小さい数値限定を含むことが意図される。本明細書全体で示された最小の数値限定それぞれが、それより高い各数値限定が本明細書で明記されているかのように、そのようなより高い数値限定を含むと予想される。本明細書全体で示された数値範囲それぞれが、それより狭い各数値範囲が全て本明細書で明記されているかのように、そのようなより広い数値範囲内に当てはまるそのようなより狭い数値範囲を含むと予想される。
【００３２】
ＩＩＩ．ｎｃｍｔＲＮＡを、多発性骨髄腫の診断のためのバイオマーカーとして使用するための方法
骨髄から単離された形質細胞内の、非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）の発現レベルおよび細胞内局在化を使用して、個体が多発性骨髄腫を患いつつあるのかどうか、多発性骨髄腫に関して寛解している個体が、１種または複数の抗がん治療による処置の成功の後で、再発を患う可能性が高いのかどうか、および／または個体が現在のところ多発性骨髄腫の再発を患いつつあるのかどうかを決定することができる。本明細書で記載される方法のいずれも、医療従事者が、任意の個体に関して、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルおよび細胞内局在化に基づき、多発性骨髄腫に最も適する処置選択肢の中から選択することにより、処置計画の一助とするか、または処置決定を下すのに使用することができる。同様に、本明細書で記載される方法のいずれも、抗がん（抗多発性骨髄腫など）治療から利益を得る個体または個体の亜集団の診断の一助とするために使用されうる。
【００３３】
Ａ．ヒトキメラ非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）
ヒト細胞は、多数の固有のキメラミトコンドリアＲＮＡ分子を発現する。これらの分子は、非コード（すなわち、これらは、タンパク質の翻訳のための鋳型として用いられないことが公知である）分子であり、１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ遺伝子の逆位反復配列に、５’末端で共有結合で連結された、転写された１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ遺伝子を含む。キメラミトコンドリアＲＮＡ分子は、２つの形態：センス形態およびアンチセンス形態で見出される。
【００３４】
センスキメラ非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）分子は、環状ミトコンドリアゲノムの「Ｈ鎖」から転写された、１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ遺伝子に対応する。このＲＮＡ分子の５’末端には、ミトコンドリアゲノムの「Ｌ鎖」から転写された、１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ遺伝子の逆位反復配列に対応するヌクレオチド配列が、共有結合で連結される。ＳｎｃｍｔＲＮＡにおける逆位反復配列のサイズは、約２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、もしくは８００ヌクレオチドまたはそれより多くから、約１００〜２００、１５０〜２５０、２００〜３００、２５０〜３５０、４００〜５００、４５０〜５５０、５００〜６００、５５０〜６５０、６００〜７００、６５０〜７５０、または７００〜８００ヌクレオチドまたはそれより多くの範囲まで、これらの値の間の全ての数値を含め様々であってもよい。一実施形態において、ＳｎｃｍｔＲＮＡにおける逆位反復配列は、ミトコンドリアゲノムの１６Ｓ遺伝子のＬ鎖から転写されたＲＮＡの８１５ヌクレオチドの断片に対応する。別の実施形態において、ＳｎｃｍｔＲＮＡにおける逆位反復配列は、ミトコンドリアゲノムの１６Ｓ遺伝子のＬ鎖から転写されたＲＮＡの７５４ヌクレオチドの断片に対応する。さらなる別の実施形態において、ＳｎｃｍｔＲＮＡにおける逆位反復配列は、ミトコンドリアゲノムの１６Ｓ遺伝子のＬ鎖から転写されたＲＮＡの６９４ヌクレオチドの断片に対応する。別の実施形態において、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３に対応する。
【００３５】
アンチセンスキメラ非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）分子は、環状ミトコンドリアゲノムの「Ｌ鎖」から転写された、１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ遺伝子に対応する。このＲＮＡ分子の５’末端には、ミトコンドリアゲノムの「Ｈ鎖」から転写された、１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ遺伝子の逆位反復配列に対応するヌクレオチド配列が、共有結合で連結される。ＡＳｎｃｍｔＲＮＡにおける逆位反復配列のサイズは、約２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００ヌクレオチドまたはそれより多くから、約１００〜２００、１５０〜２５０、２００〜３００、２５０〜３５０、４００〜５００、４５０〜５５０、５００〜６００、５５０〜６５０、６００〜７００、６５０〜７５０、または７００〜８００またはそれより多くの範囲まで、これらの値の間の全ての数値を含め様々であってもよい。別の実施形態において、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に対応する。
【００３６】
キメラミトコンドリアＲＮＡ分子に関するさらなる情報は、その開示が参照によりその全体として本明細書に組み入れられる米国特許第８，３１８，６８６号に見出すことができる。
【００３７】
Ｂ．ｎｃｍｔＲＮＡの検出
本明細書で開示されるＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子は、骨髄から単離された形質細胞内のｎｃｍｔＲＮＡ分子の発現レベルおよび細胞内局在化を評価することにより、多発性骨髄腫を有すると診断された個体が再発する可能性を決定し、かつ／または多発性骨髄腫を有すると診断された個体が、抗がん治療の後で再発しているのかどうか決定するのに、多発性骨髄腫を診断するためのバイオマーカーとして使用することができる。
【００３８】
ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現の評価は、転写されたＲＮＡのレベルにおける評価である。遺伝子転写物のＲＮＡ発現レベルの評価は、日常的であり、当技術分野で周知である。例えば、生体試料（骨髄または骨髄から単離された形質細胞など）からのＲＮＡ発現レベルを評価するための１つの柔軟かつ高感度な定量的方法は、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）または他の任意の同等な定量的ＰＣＲベースの方法を介する。ＲＮＡ発現を評価するためのさらなる方法は、ノーザンブロット法、マイクロアレイ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、遺伝子発現の連鎖解析（ＳＡＧＥ：ｓｅｒｉａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）、ドットブロット、キメラＲＮＡおよびアンチセンスキメラＲＮＡのためのオリゴヌクレオチドアレイ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける転写媒介型増幅（ＴＭＡ）によるＲＮＡの増幅、またはリボヌクレアーゼ保護アッセイを含むがこれらに限定されない。
【００３９】
一実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化を、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）により決定する。ＦＩＳＨ解析のための骨髄試料は、当技術分野で公知の任意の方法により得ることができる。得られたら、骨髄試料を、ｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルおよび細胞内局在化を測定する前に、パラフィン包埋して固定することもでき、新鮮な状態で固定することもでき、凍結させて固定することもできる。ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは、当技術分野で周知の方法に従い実施することができる。例えば、形質細胞内のＳｎｃｍｔＲＮＡの配列（例えば、配列番号１、配列番号２、または配列番号３）またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの配列（例えば、配列番号４、配列番号５、または配列番号６）の１種または複数へとターゲティングされた、１種または複数の標識されたプローブを含むハイブリダイゼーション溶液を、ハイブリダイゼーション条件下で細胞と接触させる。次いで、ハイブリダイゼーションシグナルを、健常ボランティアまたは多発性骨髄腫を有する個体のそれぞれから単離された、正常形質細胞または対照形質細胞に由来する、所定のハイブリダイゼーションパターンと比較する。ＦＩＳＨを実施するための、標識されたプローブは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または合成核酸であることが可能であり、当技術分野で公知の任意の方法により調製することができる。合成核酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて転写されたリボプローブまたはＰＣＲ断片を含む。一実施形態では、相補的な合成オリゴヌクレオチドを使用することができる。加えて、合成核酸ベースのプローブは、オリゴヌクレオチドのリン酸骨格、糖部分、および／またはヌクレオ塩基に対する１種または複数の変化（本明細書で記載される変化のいずれかなど）であって、ヌクレアーゼ切断による分解などの分解に対する耐性を増大させる変化を有しうる。相補的なオリゴヌクレオチドプローブは、少なくとも約１０ヌクレオチド（約１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ヌクレオチドのいずれかなど）の長さである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドプローブは、約１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５、または４５〜５０オリゴヌクレオチドの間の長さでありうる。他の実施形態では、６０、７０、８０、９０、または１００ヌクレオチドまたはこれを超える長さなど、長いオリゴヌクレオチドプローブを使用することができる。いくつかの実施形態では、プローブは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および／または配列番号６に列挙される配列と、少なくとも９０％（少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％など）同一である。
【００４０】
ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにおける使用のためのオリゴヌクレオチドプローブは、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡによるハイブリダイゼーションを検出するように標識する。プローブは、当技術分野で公知の任意の方法により、検出可能なマーカーで標識することができる。プローブを標識づけするための方法は、ランダムプライミング、末端標識づけ、ＰＣＲ、およびニック翻訳を含む。酵素的標識づけは、核酸ポリメラーゼ、３つの非標識ヌクレオチド、および直接標識されているか、標識を接合させるためのリンカーアームを含有するか、またはハプテンもしくは標識された結合性分子（二次抗体など）が結合しうる他の分子へと接合させた、第４のヌクレオチドの存在下でなされる。適切な直接的標識は、３２Ｐ、３３Ｐ、３Ｈ、および３５Ｓなどの放射性標識、および蛍光マーカーなどの非放射性標識を含む。ＦＩＳＨにおける使用のための蛍光標識は、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−（（７−アミノ−４−メチルクマリン−３−アセチル）アミノ）ヘキサン酸、５（および６）−カルボキシ−Ｘ−ローダミン、Ｃｙａｎｉｎｅ  ２（Ｃｙ２）色素、Ｃｙａｎｉｎｅ  ３（Ｃｙ３）色素、Ｃｙａｎｉｎｅ  ３．５（Ｃｙ３．５）色素、Ｃｙａｎｉｎｅ  ５（Ｃｙ５）色素、Ｃｙａｎｉｎｅ  ５．５（Ｃｙ５．５）色素、Ｃｙａｎｉｎｅ  ７（Ｃｙ７）色素、Ｃｙａｎｉｎｅ  ９（Ｃｙ９）色素（Ｃｙａｎｉｎｅ色素２、３、３．５、５、および５．５は、ＮＨＳエステルとして、Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、Ｉｌｌ．から市販されている）またはＡｌｅｘａ  ４８８、Ａｌｅｘａ  ５３２、Ａｌｅｘａ  ５５６、Ａｌｅｘａ  ５９０などを含むＡｌｅｘａ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）を含む。
【００４１】
Ｃ．多発性骨髄腫を診断するための方法
本明細書では、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを有することが疑われる個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルおよび細胞内局在化に基づき、多発性骨髄腫を診断するための方法が提供される。多発性骨髄腫を有することが疑われる個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現は、形質細胞が、正常に増殖しつつあることを示す。さらに、骨髄試料が、増殖しない形質細胞を含有する場合、ｎｃｍｔＲＮＡ発現の評価は、ＳｎｃｍｔＲＮＡもＡＳｎｃｍｔＲＮＡも発現していないことを示すであろう。しかし、ｎｃｍｔＲＮＡレベルの測定が、ＳｎｃｍｔＲＮＡの発現およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物の下方調節または非存在を示す場合、個体は、多発性骨髄腫を有する。
【００４２】
したがって、一態様では、本明細書では、個体における多発性骨髄腫を診断するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびアンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）の発現を測定することを含み、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの両方の発現は、個体が多発性骨髄腫を有さないことを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡを発現し、かつＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現を欠如することは、個体が多発性骨髄腫を有することを示す、方法が提供される。ｎｃｍｔＲＮＡの発現は、当技術分野で公知の任意の技法（ＲＴ−ＰＣＲまたは別の非定量的ＰＣＲ、半定量的ＰＣＲ、もしくは定量的ＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）など）またはＳＡＧＥなどであるが、これらに限定されない）を使用して評価することができる。
【００４３】
ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子でありうる。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡでありうる。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。
【００４４】
Ｄ．多発性骨髄腫を有すると診断された個体が再発するのかどうかを決定するための方法
多発性骨髄腫の天然の進行は、処置後の再発を伴う。新たな「維持」療法（例えば、レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）による維持療法）は、初期処置の後における寛解の持続期間を延長するのに有効であるが、いずれも、再発を完全に予防するのには有効でない。個体の状態、使用された既往の処置モダリティー、および寛解の持続期間に応じて、再発した疾患のための選択肢は、元の治療剤による再処置、他の薬剤（メルファラン、シクロホスファミド、サリドマイド、もしくはデキサメタゾン、またはプロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（careilzomib）（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標））、ポマリドマイド（Ｐｏｍａｌｙｓｔ（登録商標））、またはさらなる自己幹細胞移植の使用を含む。したがって、多発性骨髄腫を有すると診断された個体であって、初期処置の後で現在のところ寛解している個体が再発する可能性を予測または決定する能力があれば、疾患のモニタリングおよび処置において医療従事者の一助となる価値が大きいであろう。
【００４５】
多発性骨髄腫を有すると診断された個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルおよび細胞内局在化を使用して、個体は、寛解しているのか、再発する可能性が高いのか、再発を患っているのかを決定することができる。本明細書で記載される通り、ｎｃｍｔＲＮＡレベルの測定が、ＳｎｃｍｔＲＮＡの発現およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物の下方調節または非存在を示す場合、個体は、多発性骨髄腫を有する。さらに、形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化は、個体が再発を患うのか、既に再発を患っているのかを示す。ＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物が、形質細胞の核に局在化しているか、もしくは細胞内局在化において主に核に局在化しているか、または形質細胞の核および細胞質の両方に局在化している場合、個体は再発を患うか、または現在のところ再発している。しかし、ＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物の、細胞内の細胞質内だけの局在化は、個体が寛解していることを示す。
【００４６】
したがって、本明細書では、多発性骨髄腫は寛解していると診断された個体が、再発するのかどうかを決定するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することを含み、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞質内における局在化は、個体が寛解していることを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡの核における局在化または細胞質内および核における局在化は、個体が再発することを示す、方法が提供される。ｎｃｍｔＲＮＡの発現および／または細胞内局在化は、当技術分野で公知の任意の技法（ＲＴ−ＰＣＲまたは別の非定量的ＰＣＲ、半定量的ＰＣＲ、もしくは定量的ＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）など）またはＳＡＧＥなどであるが、これらに限定されない）を使用して評価することができる。
【００４７】
ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子でありうる。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡでありうる。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。
【００４８】
Ｅ．抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答の可能性を評価するための方法
多発性骨髄腫を有すると診断された個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現レベルおよび細胞内局在化を使用して、個体が、抗多発性骨髄腫治療（本明細書で開示される、多発性骨髄腫に関する治療または処置のいずれかなど）に応答する可能性を決定することができる。本明細書の前出で記載した通り、ｎｃｍｔＲＮＡレベルの測定が、ＳｎｃｍｔＲＮＡの発現およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物の下方調節または非存在を示す場合、個体は、多発性骨髄腫を有する。さらに、形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化は、個体が抗多発性骨髄腫治療に応答するのかどうかを示す。ＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物が、形質細胞の細胞質だけに局在化している場合、個体は、抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答を呈示する可能性が高かろう。したがって、多発性骨髄腫を有すると診断された個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡ転写物の細胞質内局在化は、１種または複数の抗がん治療薬（本明細書で記載される抗がん治療薬のいずれかなど）への応答に関して、優れた予後診断を示す。
【００４９】
したがって、本明細書では、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体における、抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答の可能性を評価する方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することを含み、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内の細胞質内局在化は、抗多発性骨髄腫治療に対する有益な応答を示す、方法が提供される。ｎｃｍｔＲＮＡの発現および／または細胞内局在化は、当技術分野で公知の任意の技法（ＲＴ−ＰＣＲまたは別の非定量的ＰＣＲ、半定量的ＰＣＲ、もしくは定量的ＰＣＲベースの方法、ノーザンブロット、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）など）またはＳＡＧＥなどであるが、これらに限定されない）を使用して評価することができる。
【００５０】
ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含むヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子でありうる。いくつかの実施形態では、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡでありうる。いくつかの実施形態では、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される１種または複数のヌクレオチド配列を含む。
【００５１】
Ｆ．固定媒体またはデータ保存媒体
多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体における、多発性骨髄腫の診断、多発性骨髄腫を有すると診断された個体が再発することの決定、または抗がん治療に対する有益な応答の可能性の評価は、固定媒体もしくはデータ保存媒体上に記録し、かつ／または保存媒体を読み取るためのシステムを介してアクセス可能とすることにより、医療従事者へと提供することができる。例えば、データ保存媒体を読み取るためのシステムは、それらの全てが従来の二方向システムバスにより相互接続された、中央演算処置装置（「ＣＰＵ」）、例えば、ＲＡＭ（ランダムアクセスメモリ）または「コア」メモリ、大容量保存メモリ（１種または複数のディスクドライブまたはＣＤ−ＲＯＭドライブなど）でありうる、作業メモリ、１種または複数のディスプレイデバイス（例えば、陰極線管（「ＣＲＴ」）ディスプレイ、発光ダイオード（「ＬＥＤ」）ディスプレイ、液晶ディスプレイ（「ＬＣＤ」）、電子発光ディスプレイ、真空蛍光ディスプレイ、電界放出ディスプレイ（「ＦＥＤ」）、プラズマディスプレイ、プロジェクションパネルなど）、１種または複数の使用者入力デバイス（例えば、キーボード、マイクロフォン、マウス、タッチスクリーンなど）、１種または複数の入力回線、および１種または複数の出力回線を含む、コンピュータを含みうる。システムは、単体のコンピュータの場合もあり、他のシステム（例えば、コンピュータ、ホスト、サーバーなど）へとネットワーク接続されている（例えば、ローカルエリアネットワーク、ワイドエリアネットワーク、イントラネット、エクストラネット、またはインターネットを介する）場合もある。システムはまた、家庭用電気製品および家庭用電気器具などの、さらなるコンピュータ制御デバイスも含みうる。
【００５２】
入力ハードウェアは、入力回線によりコンピュータへとカップリングすることができ、様々な様式で実装することができる。本発明の、マシンで読み取り可能なデータは、電話回線または専用データ回線により接続された１種または複数のモデムの使用を介して入力することができる。代替的に、またはさらに、入力ハードウェアは、ＣＤ−ＲＯＭドライブまたはディスクドライブも含みうる。ディスプレイ端子と共に、キーボードもまた、入力デバイスとして使用することができる。
【００５３】
出力ハードウェアも、出力回線によりコンピュータへとカップリングすることができ、従来のデバイスにより同様に実装することができる。例を目的として述べると、出力ハードウェアは、ＱＵＡＮＴＡなどのプログラムを使用して、本発明の活性部位についてのグラフ表示をディスプレイするための、ディスプレイデバイスを含みうる。出力ハードウェアはまた、ハードコピーの出力をもたらすようなプリンター、または後日の使用のためにシステムの出力を保存するディスクドライブも含みうるであろう。
【００５４】
本発明において有用な、マシンで読み取り可能な保存デバイスは、磁気デバイス、電気デバイス、光学デバイス、およびこれらの組合せを含むがこれらに限定されない。このようなデータ保存デバイスの例は、ハードディスクデバイス、ＣＤデバイス、ディジタルビデオディスクデバイス、フロッピー（登録商標）ディスクデバイス、リムーバブルハードディスクデバイス、磁気−光学ディスクデバイス、磁気テープデバイス、フラッシュメモリデバイス、バブルメモリデバイス、ホログラフィー保存デバイス、および他の任意の大容量保存用周辺デバイスを含むがこれらに限定されない。これらの保存デバイスは、データの保存を可能とするのに必要なハードウェア（例えば、ドライブ、コントローラー、電源など）、加えて必要な任意の媒体（例えば、ディスク、フラッシュカードなど）を含むことを理解されたい。
【００５５】
当業者は、データを通信または保存する、多発性骨髄腫を有するかまたはこれを発症することが疑われる個体における、多発性骨髄腫の診断、多発性骨髄腫を有すると診断された個体が再発することの決定、または抗がん治療に対する有益な応答の可能性の評価を、医療従事者と通信するための、他の任意の方法または技法もまた想定されうることを察知するであろう。
【００５６】
ＩＶ．多発性骨髄腫を処置するための方法
ｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化を、多発性骨髄腫を診断するために使用し、加えて多発性骨髄腫の再発を患う可能性が高い個体、または再発した個体を同定するために使用するための、本明細書で開示される方法も、多発性骨髄腫の処置および／または予防のための方法と共に、さらに使用することができる。
【００５７】
したがって、本発明は、下記で詳細に記載される、多発性骨髄腫と関連する症状または状態（身体障害、機能障害）を阻害するための方法を対象とする。状態の全ての影響が完全に予防または逆転されること自体が要請されるわけではないが、本明細書で開示される方法の効果は、患者のための著明な治療的利益へと拡張される可能性が高い。治療的利益自体は必ずしも、状態に関する完全な予防または治癒ではなく、多発性骨髄腫から生じる症状を軽減または予防すること、このような症状の発症を軽減または予防すること（定量的または定性的に）、このような症状の重症度もしくはその生理学的影響を軽減すること、および／または多発性骨髄腫の症状を経た後における個体の回復を増強することを含む結果を包摂しうる。
【００５８】
具体的に、本発明の治療は、個体へと投与されると、多発性骨髄腫と関連する症状もしくは状態の１種もしくは複数を処置もしくは予防する場合もあり、かつ／またはこの障害と関連した状態の症状を軽減もしくは緩和する場合もある。個体を多発性骨髄腫から生じる影響または症状から防御すること自体、障害の発症および／または障害の影響の重症度を予防または軽減すること、ならびに障害の影響が生じつつあるかまたは生じ始めている患者を処置することの両方を含む。有益な効果は、当業者および／または患者を処置しつつある熟練の主治医が容易に評価することができる。本発明の方法で処置された患者などの患者を、本発明の方法で処置されていない患者と比較して査定するのに使用される、少なくとも１つの臨床スコアまたは生物学的スコア、値、または尺度による重症度または発症に、肯定的な差違または有益な差違がみられることが好ましい。
【００５９】
方法は、アジュバント状況下で実施することもできる。「アジュバント状況」とは、個体が、多発性骨髄腫の既往歴を有しており、一般に（必ずしもそうではないが）、手術（手術反応など）、放射線療法、および化学療法を含むがこれらに限定されない、治療に対して応答性であった臨床状況を指す。しかし、増殖性疾患（多発性骨髄腫など）のそれらの既往歴のために、これらの個体は、疾患発症の危険性があると考えられる。「アジュバント状況」における処置または投与とは、後続の処置モードを指す。危険性の程度（すなわち、アジュバント状況にある個体が、「危険性が大きい」または「危険性が小さい」と考えられる場合の）は、複数の因子、最も通例では、最初に処置されたときの疾患の程度に依存する。
【００６０】
本明細書で提供される方法はまた、「ネオアジュバント状況」においても実施することができる、すなわち、方法は、一次／根治療法の前に実行することができる。いくつかの実施形態では、個体は既に処置されている。いくつかの実施形態では、個体はまだ処置されていない。いくつかの実施形態では、処置は、第一選択治療である。
【００６１】
Ａ．抗がん治療
本明細書では、本明細書で開示される診断法のいずれかに従い、多発性骨髄腫を有すると診断された個体を処置するための方法が提供される。さらに、本発明はまた、本明細書で開示される方法のいずれかに従い、多発性骨髄腫を有すると診断されたかまたはこれを有すると考えられる個体の骨髄から単離された形質細胞内の、ｎｃｍｔＲＮＡの発現および／または細胞内局在化により決定される、多発性骨髄腫の再発を予防するか、または再発を患っている個体を処置するための方法も提供する。
【００６２】
１．ｎｃｍｔＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチド
いくつかの態様では、本明細書で記載される方法のいずれかにおける使用のための抗がん治療は、本明細書で開示されるオリゴヌクレオチドのいずれかなど、センスまたはアンチセンスのキメラ非コードミトコンドリアＲＮＡ（ｎｃｍｔＲＮＡ）分子に相補的なオリゴヌクレオチドの、本明細書で開示される任意の方法に従い、多発性骨髄腫を有すると診断された個体への、本明細書で開示される方法のいずれかにより決定される、多発性骨髄腫の再発を予防するか、または再発した個体を処置するための、投与である。
【００６３】
一態様において、本明細書で説明された方法のいずれかで使用するためのオリゴヌクレオチドは、本明細書で開示されたＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子に相補的であってもよい。理論にとらわれずにいえば、相補的オリゴヌクレオチドは、ｎｃｍｔＲＮＡに結合して、それらの細胞機能に干渉すると考えられる。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドが、ｎｃｍｔＲＮＡとハイブリダイズして安定な二重鎖を形成できる程度に十分な相補性を有する配列を含む場合、そのオリゴヌクレオチド配列は、本明細書で述べられているようにｎｃｍｔＲＮＡの一部に「相補的」である。ハイブリダイズする能力は、オリゴヌクレオチドの相補性の程度および長さの両方に依存する。一般に、ハイブリダイズするオリゴヌクレオチドが長いほど、それがｎｃｍｔＲＮＡに対して含有しうる塩基のミスマッチが多くなるが、なおも安定な二重鎖を形成しうる。いくつかの態様では、本明細書で開示される方法に従い、抗がん治療として使用されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも８塩基対（少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、もしくは５０、またはこれを超える塩基対など）の長さである。当業者であれば、ハイブリダイズした複合体の融点を決定する標準的手順の使用により、許容できる程度のミスマッチを確認することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子に、少なくとも８５％（少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％など）相補的である。いくつかの実施形態では、相補的なオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６の１種または複数によりコードされるｎｃｍｔＲＮＡに相補的である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号７〜１９６の１種または複数を含む。
【００６４】
ａ．オリゴヌクレオチドの改変
ＲＮＡとＤＮＡとの自然発生のヌクレオシド間連結は、３’−５’ホスホジエステル連結である。本明細書で開示される方法のいずれかに従い、多発性骨髄腫を処置するために使用されるオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、１種または複数の改変された、すなわち、非自然発生のヌクレオシド間連結を有しうる。治療学的観点では、例えば細胞内取込の強化、標的核酸への親和性の強化、およびヌクレアーゼの存在下における安定性の増加などの所望の特性のために、天然に存在するヌクレオシド間連結を有するオリゴヌクレオチドよりも、改変されたヌクレオシド間連結がしばしば選択される。
【００６５】
改変されたヌクレオシド間連結を有するオリゴヌクレオチド（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）は、リン原子を保持するヌクレオシド間連結、加えてリン原子を有さないヌクレオシド間連結を含む。代表的なリン含有ヌクレオシド間連結としては、これらに限定されないが、リン酸ジエステル、リン酸トリエステル、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、およびホスホロチオエートが挙げられる。リン含有およびリン非含有連結の調製方法は周知である。
【００６６】
一実施形態では、本明細書で開示されるＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子へとターゲティングされたオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）は、１種または複数の改変されたヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態では、改変されたヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。他の実施形態では、オリゴヌクレオチド化合物の各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートによるヌクレオシド間連結である。
【００６７】
当技術分野で公知のように、ヌクレオシドは、塩基−糖の組合せである。ヌクレオシドの塩基部分は通常、複素環塩基である。このような複素環塩基の２つの最も一般的なクラスは、プリンとピリミジンである。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合で連結されたリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドの場合、リン酸基は、糖の２’、３’または５’ヒドロキシル成分のいずれかに連結することができる。オリゴヌクレオチドを形成する際、リン酸基は、隣接するヌクレオシドと互いに共有結合で連結して、直鎖状の高分子化合物を形成する。順に、この直鎖状高分子構造のそれぞれの末端がさらに繋がって、環状の構造を形成することができるが、開環した直鎖状の構造が一般的に好ましい。オリゴヌクレオチド構造内において、一般的に、リン酸基がオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間骨格を形成するとみなされる。ＲＮＡおよびＤＮＡの通常の連結または骨格は、３’と５’のホスホジエステル連結である。
【００６８】
本発明の方法において有用なオリゴヌクレオチドの例（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）としては、具体的には、これらに限定されないが、改変された骨格または非天然のヌクレオシド間連結を含有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。本明細書で定義されるように、改変された骨格を有するオリゴヌクレオチドとしては、骨格中にリン原子を保持するもの、および骨格中にリン原子を有さないものが挙げられる。本明細書の目的に関して、さらに当技術分野においてしばしば言及されるように、それらのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有さない改変されたオリゴヌクレオチドはまた、オリゴヌクレオシドとみなすこともできる。
【００６９】
一部の実施形態において、改変されたオリゴヌクレオチド骨格としては、例えば、通常の３’−５’連結を有する、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、リン酸トリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルのホスホン酸エステル、例えば３’−アルキレンホスホン酸エステル、５’−アルキレンホスホン酸エステルおよびキラルホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、ホスホロアミデート、例えば３’−アミノホスホロアミデートおよびアミノアルキルホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルホスホン酸エステル、チオノアルキルホスホ−トリエステル、セレノホスフェートおよびボラノホスフェート、これらの２’−５’連結された類似体、および１つまたは複数のヌクレオチド間連結が３’と３’、５’と５’または２’と２’の連結である逆の極性を有するものが挙げられる。逆転した極性を有するオリゴヌクレオチドは、最も３’側のヌクレオチド間連結において単一の３’と３’の連結を含んでおり、すなわち脱塩基であり得る単一の逆転したヌクレオシド残基（その核酸塩基は、存在しないかまたはその場所にヒドロキシル基を有する）が採用される可能性もある。また様々な塩、混成の塩および遊離酸の形態が含まれていてもよい。リン原子を含まないオリゴヌクレオチド骨格は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間連結、混成のヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間連結、または１種または複数の短鎖ヘテロ原子または複素環式のヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらは、モルホリノ連結（部分的にヌクレオシドの糖部分から形成された）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；リボアセチル骨格；アルケンを含有する骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホネートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格を有するもの；ならびに混成のＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２要素部分を有する他のものを含む。
【００７０】
他の実施形態において、糖およびヌクレオシド間連結の両方、すなわちヌクレオチド単位の骨格は、新規の基で置き換えられている。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。このようなオリゴマー化合物の１つであるオリゴヌクレオチド模倣物は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と称される。ＰＮＡ化合物において、オリゴヌクレオチドの糖骨格は、アミドを含有する骨格、具体的にはアミノエチルグリシン骨格で置き換えられている。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接的または間接的に結合する。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許としては、これらに限定されないが、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，５３９，０８２号；５，７１４，３３１号；および５，７１９，２６２号が挙げられる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Nielsenら、Science、１９９１年、２５４巻：１４９７〜１５００頁に見出すことができる。
【００７１】
上記のリン含有およびリン非含有連結の作製を教示する代表的な米国特許としては、これらに限定されないが、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，５４１，３０６号；５，５５０，１１１号；５，５６３，２５３号；５，５７１，７９９号；５，５８７，３６１号；５，１９４，５９９号；５，５６５，５５５号；５，５２７，８９９号；５，７２１，２１８号；５，６７２，６９７号および５，６２５，０５０号、５，５９６，０８６号；５，６０２，２４０号；５，６１０，２８９号；５，６０２，２４０号；５，６０８，０４６号；５，６１０，２８９号；５，６１８，７０４号；５，６２３，０７０号；５，６６３，３１２号；５，６３３，３６０号；５，６７７，４３７号；５，７９２，６０８号；５，６４６，２６９号および５，６７７，４３９号が挙げられる。
【００７２】
本明細書で開示される方法のいずれかと共に抗がん治療として使用される、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡに相補的な改変オリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）はまた、１種または複数の置換された糖部分も含有しうる。例えば、フラノシル糖環は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる米国特許第７，３９９，８４５号で説明されているように、置換基での置換、二環式核酸（bicyclic  nucleic  acid）「ＢＮＡ」を形成するための架橋形成、およびＳまたはＮ（Ｒ）などのヘテロ原子での４’−Ｏの置換などの多数の方法で改変することができる。ＢＮＡの他の例は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる公開された国際特許出願ＷＯ２００７／１４６５１１号で説明されている。
【００７３】
本明細書で開示される、多発性骨髄腫を処置するための方法における使用のためのオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）は、任意選択で、改変された糖部分を有する１種または複数のヌクレオチドを含有しうる。糖改変は、アンチセンス化合物に、ヌクレアーゼへの安定性、結合親和性または他の有益な生物学的特性のいくつかを付与する可能性がある。ヌクレオシドのフラノシル糖環は、これらに限定されないが、特に２’位における置換基の付加；二環式核酸（ＢＮＡ）を形成するための２つの非ジェミナルな環原子の架橋形成；および４’位における環酸素に対する−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−または−Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）などの原子または基の置換などの多数の方法で改変してもよい。改変された糖としては、これらに限定されないが、置換された糖、特に、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ２（２’−ＯＭｅ）または２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３（２’−Ｏ−メトキシエチルまたは２’−ＭＯＥ）置換基を有する２’−置換糖；および４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋を有する改変された二環式糖（ＢＮＡ）（式中ｎ＝１またはｎ＝２である）が挙げられる。改変された糖の調製方法は当業者に周知である。
【００７４】
ある特定の実施形態において、２’−改変されたヌクレオシドは、二環式の糖成分を有する。ある特定のこのような実施形態において、二環式の糖成分は、アルファ立体配置のＤ糖である。ある特定のこのような実施形態において、二環式の糖成分は、ベータ立体配置のＤ糖である。ある特定のこのような実施形態において、二環式の糖成分は、アルファ立体配置のＬ糖である。ある特定のこのような実施形態において、二環式の糖成分は、ベータ立体配置のＬ糖である。
【００７５】
他の実施形態において、二環式の糖成分は、２’−炭素原子と４’−炭素原子との間に架橋基を含む。ある特定のこのような実施形態において、架橋基は、１つ以上の連結された二端遊離基を含む。ある特定の実施形態において、二環式の糖成分は、１から４つの連結された二端遊離基を含む。ある特定の実施形態において、二環式の糖成分は、２または３つの連結された二端遊離基を含む。ある特定の実施形態において、二環式の糖成分は、２つの連結された二端遊離基を含む。ある特定の実施形態において、連結された二端遊離基は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１）−、−Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｃ（Ｒ１）−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲ１）−、−Ｓｉ（Ｒ１）（Ｒ２）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−および−Ｃ（＝Ｓ）−から選択され；式中、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換されたＣ５〜Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換されたヘテロ環式ラジカル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換されたＣ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、置換されたオキシ（−Ｏ−）、アミノ、置換されたアミノ、アジド、カルボキシル、置換されたカルボキシル、アシル、置換されたアシル、ＣＮ、チオール、置換されたチオール、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｈ）、置換されたスルホニル、スルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｈ）または置換されたスルホキシルであり；各置換基は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２〜Ｃ１２アルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルコキシ、置換されたＣ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換されたＣ１〜Ｃ１２アミノアルコキシまたは保護基である。
【００７６】
また、本明細書で開示された方法のいずれかで使用するためのオリゴヌクレオチド（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）は、核酸塩基（当技術分野においては、しばしば単に「塩基」と称される）の改変または置換を含んでいてもよい。核酸塩基の改変または置換は、天然に存在するかまたは合成の未改変の核酸塩基から構造的に識別可能であるが、なお機能的に置き換え可能である。天然および改変された核酸塩基は両方とも、水素結合に参加することができる。このような核酸塩基の改変は、オリゴヌクレオチド化合物に、ヌクレアーゼへの安定性、結合親和性または他の有益な生物学的特性のいくつかを付与する可能性がある。改変された核酸塩基は、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）などの合成および天然の核酸塩基を含む。５−メチルシトシン置換などのある特定の核酸塩基置換は、標的核酸（例えばｎｃｍｔＲＮＡ）に対するオリゴヌクレオチド化合物（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物）の結合親和性を増加させるのに特に有用である。
【００７７】
追加の未改変の核酸塩基としては、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシルおよびシトシンおよびピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、ならびに３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンが挙げられる。
【００７８】
複素環式の塩基成分としてはまた、プリンまたはピリミジン塩基が、他の複素環、例えば７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジンおよび２−ピリドンで置き換えられている成分も挙げることができる。アンチセンス化合物の結合親和性を増加させるのに特に有用な核酸塩基としては、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、例えば２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンなどが挙げられる。
【００７９】
「未改変」または「天然」の核酸塩基は、本明細書で使用される場合、プリン塩基であるアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、およびピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）を含む。
【００８０】
改変された核酸塩基としては、他の合成および天然核酸塩基、例えば５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシルおよびシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、ならびに３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンなどが挙げられる。さらなる改変された核酸塩基としては、三環式ピリミジン、例えばフェノキサジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンズオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾチアジン−２（３Ｈ）−オン）など、Ｏ−クランプ、例えば置換されたフェノキサジンシチジン（例えば９−（２−アミノエトキシ）−Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンズオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−２−オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ−ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−オン）などが挙げられる。また改変された核酸塩基としては、プリンまたはピリミジン塩基が、他の複素環、例えば７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジンおよび２−ピリドンで置き換えられたものも挙げられる。さらなる核酸塩基としては、米国特許第３，６８７，８０８号で開示されたもの、The  Concise  Encyclopedia  Of  Polymer  Science  And  Engineering、８５８〜８５９頁、Kroschwitz,  J.  I.編、John  Wiley  &  Sons、１９９０年で開示されたもの、Englischら、Angewandte  Chemie、国際版、１９９１年、３０巻、６１３号によって開示されたもの、ならびにSanghvi,  Y.  S.、１５章、Antisense  Research  and  Applications、２８９〜３０２頁、Crooke,  S.  T.およびLebleu,  B.編、CRC  Press、１９９３年によって開示されたものが挙げられる。
【００８１】
ある特定の上述した改変された核酸塩基、加えて他の改変された核酸塩基の調製を教示する代表的な米国特許としては、これらに限定されないが、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，４５９，２５５号；５，４８４，９０８号；５，５０２，１７７号；５，５２５，７１１号；５，５５２，５４０号；５，５８７，４６９号；５，５９４，１２１号、５，５９６，０９１号；５，６１４，６１７号；５，６４５，９８５号；５，８３０，６５３号；５，７６３，５８８号；６，００５，０９６号；および５，６８１，９４１号が挙げられる。
【００８２】
ｂ．リボザイム
本発明の別の実施形態では、リボザイムを使用して、本明細書で記載されるｎｃｍｔＲＮＡ分子に干渉して、多発性骨髄腫と関連する増殖性細胞において、細胞死を誘導することができる。リボザイムの配列は、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ（例えば、配列番号４、配列番号５、配列番号６）またはＳｎｃｍｔＲＮＡ（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３）の配列に従い、転写物の特異的な領域を切断するようにデザインすることができる。リボザイムは、特異的なＲＮＡ切断を触媒することができる酵素的なＲＮＡ分子である（Rossi,  Curr.  Biology  ４巻：４６９〜４７１頁、１９９４年）。リボザイム作用のメカニズムは、相補的な標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異的なハイブリダイゼーション、それに続くエンドヌクレアーゼによる切断を含む。リボザイム分子の組成は、ＲＮＡに相補的な１つまたは複数の配列を含むはずであり、さらに、ＲＮＡ切断に関与する周知の触媒性の配列を含むはずであり、これは、その開示が参照によりその全体として本明細書に組み入れられる米国特許第５，０９３，２４６号で説明されている。そのようなものとして、本発明の範囲内で、ハンマーヘッド型リボザイム分子を、本明細書で開示されたＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のエンドヌクレアーゼによる切断を特異的かつ効率的に触媒するように加工することができる。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および産生は当技術分野で周知であり、説明されている（Haseloffら、Gene、８２巻：４３〜５２頁、１９８９年）。また本発明のリボザイムは、ＲＮＡエンドリボヌクレアーゼを含む場合もある（Zaugら、Science、２２４巻：５７４〜５７８頁、１９８４年）。
【００８３】
ｃ．ＲＮＡ干渉
別の態様では、本明細書で開示される方法のいずれかにおける多発性骨髄腫を処置するための、本明細書で開示されるＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子の機能に対する干渉は、ＲＮＡ干渉またはＲＮＡサイレンシングにより達成することができる。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、哺乳動物細胞における遺伝子サイレンシングのための新規で有望なアプローチとして出現したものである（Elbashirら、Nature  ４１１巻：４９４〜４９８頁、２００１年；McManusら、Nature  Rev.  Genet.  ３巻：７３７〜７４７頁、２００２年）。約８から４０（例えば約１０から３６、１４から３２、１８〜２８、もしくは２２〜２４）の塩基対（ｂｐ）の、または少なくとも約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０ｂｐの長さの合成された二本鎖ＲＮＡ分子は、それらの相補的標的ＲＮＡに特異的にハイブリダイズして、ＲＮＡの分解を引き起こす。短鎖干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡにより、数種の異なる遺伝子がうまくサイレンシングされてきた（Luら、Curr.  Opin.  Mol.  Ther.  ５巻：２２５〜２３４頁、２００３年；Wacheckら、Oligonucleotides  １３巻：３９３〜４００頁、２００３年）。それゆえに、本明細書で開示されたＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子に標的化された合成二本鎖ＲＮＡは、これらの転写物を分解して、腫瘍細胞の死を誘導するのに使用することができる。当業者は、ｓｉＲＮＡの配列は、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のあらゆる領域に相補的でなければならない（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および／または配列番号６のいずれかに相補的である）ことを理解しているものと予想される。
【００８４】
ｄ．遺伝子治療
一実施形態において、センスおよび／またはアンチセンスキメラ非コードミトコンドリアＲＮＡ分子に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチド（例えば本明細書で開示されたオリゴヌクレオチドのいずれか）を個体に送達するのに、組換えベクターを使用してもよい。これは、全身への送達と体の特定の領域（例えば骨髄）に限局される送達の両方を含み得る。センスもしくはアンチセンスのキメラｎｃｍｔＲＮＡ分子に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチドの組換え産生を可能とする能力があり、かつ／またはセンスもしくはアンチセンスのキメラｎｃｍｔＲＮＡ分子に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチドを、宿主細胞へと送達しうる任意のベクター。ベクターは、ＲＮＡまたはＤＮＡのいずれか、原核性または真核性のいずれかであってもよく、典型的にはウイルスまたはプラスミドである。ベクターは、ＤＮＡワクチンの一部であってもよいし、または当業者公知の宿主細胞中で発現させるために異種遺伝子を送達する他のあらゆる方法の一部として使用されてもよい。組換えベクターは、好適な宿主細胞に形質転換されると複製が可能になる。ウイルスベクターは、多様な非分裂ヒト細胞に感染し、副作用を起こすことなく広くワクチンで使用されてきた。ウイルスベクター（例えば、これらに限定されないが、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えばＡＡＶ−１、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−３、ＡＡＶ−４、ＡＡＶ−５、ＡＡＶ−６など、またはそれらを含むハイブリッドＡＡＶベクターなど）は、センスまたはアンチセンスキメラｎｃｍｔＲＮＡ分子に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドを、多発性骨髄腫がん細胞（例えば形質細胞；例えば、その開示が参照により本明細書に組み入れられる米国公開特許公報２００４／０２２４３８９号を参照）に送達するための本発明の方法で使用するためのベクターの例である。
【００８５】
２．他の抗がん治療
いくつかの態様において、本明細書で説明される処置方法のいずれかは、個体に１種または複数の追加の抗がん治療を施すことを含んでいてもよい。様々なクラスの抗がん剤を使用できる。非限定的な例としては、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アントラサイクリン、植物性アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ポドフィロトキシン、抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖｅｃ（登録商標）））、ホルモン処置、可溶性受容体および他の抗腫瘍薬が挙げられる。
【００８６】
またトポイソメラーゼ阻害剤は、使用できる別のクラスの抗がん剤でもある。トポイソメラーゼは、ＤＮＡのトポロジーを維持する必須の酵素である。Ｉ型またはＩＩ型トポイソメラーゼの阻害は、適正なＤＮＡのスーパーコイル形成を乱すことによりＤＮＡの転写と複製の両方に干渉する。いくつかのＩ型トポイソメラーゼ阻害剤としては、カンプトテシン：イリノテカンおよびトポテカンが挙げられる。ＩＩ型阻害剤の例としては、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、およびテニポシドが挙げられる。これらは、アメリカミヤオソウ（Podophyllum  peltatum）の根に天然に存在するアルカロイドであるエピポドフィロトキシンの半合成誘導体である。
【００８７】
抗腫瘍薬としては、免疫抑制剤であるダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イフォスファミドが挙げられる。抗腫瘍性化合物は、一般的に、細胞のＤＮＡを化学的に改変することにより作用する。
【００８８】
アルキル化剤は、細胞中に存在する条件下で多くの求核性官能基をアルキル化することができる。シスプラチンおよびカルボプラチン、ならびにオキサリプラチンが、アルキル化剤である。これらは、生物学的に重要な分子中のアミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、およびリン酸基と共有結合を形成することにより細胞の機能を損なわせる。
【００８９】
ビンカアルカロイドは、チューブリン上の特異的な部位に結合して、チューブリンの微小管への集合（細胞周期のＭ期）を阻害する。ビンカアルカロイドとしては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびビンデシンが挙げられる。
【００９０】
代謝拮抗物質は、プリン（アザチオプリン、メルカプトプリン）またはピリミジンに類似しており、細胞周期の「Ｓ」期中にこれらの物質がＤＮＡに取り入れられないようにし、正常な発生および分裂を止める。また代謝拮抗物質もＲＮＡ合成に影響を与える。
【００９１】
植物性アルカロイドおよびテルペノイドは、植物から得られ、微小管の機能を妨害することによって細胞分裂をブロックする。微小管は細胞分裂にとって不可欠であることから、微小管がないと細胞分裂を起こすことができない。主な例は、ビンカアルカロイドおよびタキサンである。
【００９２】
ポドフィロトキシンは、消化を助けることが報告されている植物由来化合物であり、加えて２種の他の細胞増殖抑制薬、エトポシドおよびテニポシドを産生するのに使用される。これらは、細胞がＧ１期（ＤＮＡ複製開始）およびＤＮＡの複製（Ｓ期）に入らないようにする。
【００９３】
タキサンは、分類群として、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む。パクリタキセルは、元はと言えばタキソールとして公知の天然産物であり、タイヘイヨウイチイの木の樹皮から初めて得られた。ドセタキセルは、パクリタキセルの半合成類似体である。タキサンは、微小管の安定性を強化し、細胞分裂後期中の染色体分離を防ぐ。
【００９４】
いくつかの態様において、抗がん治療薬は、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチナム、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、ギリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキセート、Ａｒｉｓａ（登録商標）、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゼローダ、ＣＰＴ−１１、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ（例えば、ＰＥＧイントロン−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソーマルダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール、パシリタキセル、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロネート、ビアキシン、ブスルファン、プレドニゾン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））、スリンダク、またはエトポシドから選択することができる。
【００９５】
他の実施形態において、抗がん治療薬は、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、またはビンクリスチンから選択することができる。
【００９６】
３．幹細胞移植およびエクスビボでの自己造血幹細胞の処置
他の態様において、本明細書で説明される処置方法のいずれかは、自己または同種幹細胞移植療法のどちらを含んでいてもよい。近年、自己造血幹細胞移植を伴う高用量の化学療法が、６５歳未満の多発性骨髄腫患者に好ましい処置となっている。治癒しないとしても、この手順は実際に全生存を延長させて完全な寛解をもたらす。幹細胞移植の前に、これらの患者は最初のクールの導入化学療法を受ける。今日使用されている最も一般的な導入レジメンは、サリドマイド−デキサメタゾン、ボルテゾミブベースのレジメン、およびレナリドマイド−デキサメタゾンである（KyleおよびRajkumar、２００８年、Blood、１１１巻（６号）：２９６２〜７２頁）。自己末梢血幹細胞移植は、５０％もの多発性骨髄腫患者に有用である。低い死亡率にもかかわらず、このような移植療法が有する問題としては、腫瘍を根絶できないこと、および移植に使用される幹細胞集団から骨髄腫細胞およびそれらの前駆体を取り出すことが難しいことが挙げられる。自己幹細胞移植は、心臓、肺、腎臓、または肝臓の実質的な機能不全を有さない６５歳未満の個体のために使用されることが典型的である。
【００９７】
同種移植（健常者の幹細胞の、罹患した個体への移植）が、多発性骨髄腫を処置するための別の治療選択肢であるが、１００日後における死亡率が２５〜３０％であり、治癒をもたらさないので、それほど高頻度に使用されるわけではない。それらの年齢およびヒト白血球抗原（ＨＬＡ）がマッチする兄弟姉妹のドナーの希少性のために、多発性骨髄腫を有する患者で同種骨髄移植に適格な患者は、５〜１０％に過ぎない。また、再発した骨髄腫を処置するための同種移植の使用も、いまだ臨床利益が限定された処置戦略であるにとどまっている。この状況におけるその使用について査定する大半の研究は、長期にわたる無病生存が１０〜２０％であり、かなりの比率の患者が再発に至ることを裏付けている。
【００９８】
本明細書で開示される方法のいずれかに従い、多発性骨髄腫に関する処置として組み入れられた場合、自己幹細胞移植はまた、罹患した個体への移植の前に、罹患した個体へと移植される造血幹細胞および／または骨髄を、本明細書で開示される抗がん治療薬のいずれかで処置するステップも含みうる。一実施形態では、自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄は、罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子（本明細書で開示されるＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかなど）に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）の有効量で処置することができる。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的である。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号７〜１９６の１種または複数を含む。
【００９９】
骨髄または血液学的幹細胞の自家移植は、血液がんの他の形態（例えば、これらに限定されないが、白血病およびリンパ腫など）を処置するのにも使用できることが示されている。したがって、いくつかの態様において、血液がんのための処置として含まれる場合、罹患した個体に移植しようとする造血幹細胞および／または骨髄を、罹患した個体に移植する前に本明細書で開示された抗がん治療薬のいずれかで処置するステップを含む、自己幹細胞移植を行う方法がここに提供される。一実施形態において、血液がんを有する個体における自己幹細胞移植で使用するための造血幹細胞および／または骨髄は、罹患した個体に移植する前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子（例えば本明細書で開示されたＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれか）に十分に相補的であり安定な二重鎖を形成することができる１種または複数のオリゴヌクレオチド（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）の有効量で処置することもできる。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的である。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号７〜１９６の１種または複数を含む。
【０１００】
４．医薬組成物
本明細書で開示される抗がん治療（オリゴヌクレオチドベースの治療など）のいずれも、医薬組成物の形態で投与することができる。これらの化合物は、経口経路、直腸内経路、経皮経路、皮下経路、静脈内経路、筋内経路、および鼻腔内経路を含む様々な経路により投与することができる。これらの化合物は、注射用組成物および経口組成物のいずれとしても有効である。このような組成物は、医薬技術分野において周知の様式で調製され、少なくとも１種の活性化合物を含む。経口組成物として援用する場合は、本明細書で開示されるオリゴヌクレオチドおよび別の活性化合物を、胃内の酸による消化から、薬学的に許容される保護剤で保護する。
【０１０１】
また本発明は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または担体と共に、活性成分として１種または複数の本明細書で開示された抗がん治療を含有する医薬組成物も含む。本発明の組成物を作製する際、活性成分は通常、賦形剤または担体と混合されるか、賦形剤または担体で希釈されるか、またはカプセル、小容器、ペーパーもしくは他の容器の形態であり得るこのような賦形剤または担体内に封入される。賦形剤または担体は、希釈剤として機能する場合、固体、半固体、または液体材料であってもよく、これは活性成分のためのビヒクル、担体または媒体として作用する。したがって、本組成物は、錠剤、丸剤、粉末剤、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル（固体として、または液状媒体中）、例えば最大１０重量％の活性化合物を含有する軟膏、ソフトおよびハードゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射用溶液、ならびに滅菌されパッケージ化された粉末剤の形態であってもよい。
【０１０２】
製剤の調製において、活性な凍結乾燥した化合物を粉砕して、他の成分と組み合わせる前に適切な粒度をもたらすことが必要な場合がある。活性化合物が実質的に不溶性である場合、活性化合物は一般に、２００メッシュ未満の粒度に粉砕される。活性化合物が実質的に水溶性である場合、その粒度は通常、製剤中で実質的に一様の分布、例えば約４０メッシュがもたらされるように粉砕することによって調整される。
【０１０３】
好適な賦形剤または担体のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ剤、およびメチルセルロースが挙げられる。製剤は、加えて、潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油；湿潤剤；乳化剤および懸濁化剤；保存剤、例えばヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピル；甘味剤；ならびに矯味矯臭剤を含んでいてもよい。当技術分野で公知の手順を採用して患者に投与した後に活性成分の急速放出、持続放出または遅延放出がもたらされるように、本発明の組成物を製剤化してもよい。
【０１０４】
本組成物は、単位剤形で製剤化されてもよく、各投薬量は、約５ｍｇから約１００ｍｇまたはそれより多く、例えば約１ｍｇから約５ｍｇ、１ｍｇから約１０ｍｇ、約１ｍｇから約２０ｍｇ、約１ｍｇから約３０ｍｇ、約１ｍｇから約４０ｍｇ、約１ｍｇから約５０ｍｇ、約１ｍｇから約６０ｍｇ、約１ｍｇから約７０ｍｇ、約１ｍｇから約８０ｍｇ、または約１ｍｇから約９０ｍｇのいずれかの範囲、加えてこれらの値の間のあらゆる範囲の活性成分を含有する。用語「単位剤形」は、個体当たり一単位の投薬として好適な物理的に別々の単位を指し、各単位は、好適な医薬賦形剤または担体と共に所望の治療作用が生じるように計算された予め決められた量の活性材料を含有する。
【０１０５】
本明細書で開示された抗がん治療（例えばオリゴヌクレオチドベースの薬剤）は、広範な投薬量範囲にわたり効果的であり、一般的に治療有効量で投与される。しかしながら、実際に投与される抗がん治療の量は、処置しようとする状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および応答、患者の症状の重症度、ならびに同種のものなどの関連する状況を考慮して、医師によって決定されることが理解されると予想される。
【０１０６】
錠剤などの固体組成物を調製するためには、主要な活性成分である抗がん治療を医薬賦形剤または担体と混合して、本発明の化合物の均一な混合物を含有する固体予備配合組成物を形成する。これらの予備配合組成物が均一であると述べられる場合、それは、錠剤、丸剤およびカプセルなどの等しく有効な単位剤形に組成物を容易にさらに分割できるように、活性成分が組成物全体に均一に分散されていることを意味する。
【０１０７】
作用の持続という利点をもたらし、抗がん療法（例えばオリゴヌクレオチド）を胃での酸加水分解から保護する剤形が提供されるように、本発明の錠剤または丸剤はコーティングされてもよいし、またはそれ以外の方法で作製されてもよい。例えば、錠剤または丸剤は、内部の投薬成分と外部の投薬成分とを含んでいてもよく、後者は、前者を覆うエンベロープの形態である。これら２つの要素は、胃での崩壊に耐えて、内部の要素を無傷のまま十二指腸に通過させたり、または放出を遅延させたりする働きをする腸溶性層で隔てられていてもよい。このような腸溶性層またはコーティングには様々な材料を使用することができ、このような材料としては、多数の高分子酸（polymeric  acids）、ならびにセラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料との高分子酸混合物が挙げられる。
【０１０８】
経口または注射での投与のために本発明の新規の組成物を取り入れることができる液体の形態としては、水溶液、好適にはフレーバーを付けたシロップ剤、水性または油性懸濁液、およびトウモロコシ油、綿実油、ゴマ油、ヤシ油、または落花生油などの食用油を用いたフレーバーを付けた乳剤、加えてエリキシル剤および類似の医薬用ビヒクルが挙げられる。
【０１０９】
吸入法または通気法用の組成物は、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒、またはそれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、本明細書で説明されているような好適な薬学的に許容される賦形剤を含有していてもよい。本組成物は、局所または全身性作用のための経口または経鼻の呼吸経路によって投与できる。薬学的に許容される溶媒中の組成物は、不活性ガスの使用により霧状にすることができる。霧状になった溶液を噴霧デバイスから直接吸入させてもよいし、または噴霧デバイスを、フェイスマスクのテント、または間欠的陽圧呼吸器に取り付けてもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物はまた、適切な方式で製剤を送達するデバイスから経口または経鼻的に投与されてもよい。
【０１１０】
Ｂ．多発性骨髄腫を処置するための方法
本明細書では、処置を必要とする個体における多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびアンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）の発現を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの両方の発現は、個体が多発性骨髄腫を有さないことを示し、ＳｎｃｍｔＲＮＡを発現し、かつ、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現を欠如することは、個体が多発性骨髄腫を有することを示すことと、個体の形質細胞が、ＳｎｃｍｔＲＮＡだけを発現し、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡを発現しない場合は、個体を、１種または複数の抗がん治療薬（本明細書で開示される抗がん治療薬のいずれかなど）の有効量で処置することとを含む、方法が提供される。
【０１１１】
本明細書ではまた、処置を必要とする個体における多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体を、１種または複数の抗がん治療薬の有効量で処置することを含み、処置の前に、個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）を発現し、アンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）を発現しないことが決定されている、方法も提供される。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒト非コードミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）を含み、オリゴヌクレオチドはミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる。いくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはリボザイムである。さらに他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、本明細書で開示される改変のいずれかなど、リン酸骨格連結、糖、または塩基への１種または複数の改変を含有する。
【０１１３】
別の実施形態では、抗がん治療薬は、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、またはビンクリスチン、または本明細書で開示される、多発性骨髄腫を処置するための、他の任意の化合物から選択することができる。
【０１１４】
さらなる実施形態では、個体を、本明細書で開示されるＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）と、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、またはビンクリスチン、または本明細書で開示される、多発性骨髄腫を処置するための、他の任意の化合物から選択される抗がん治療薬との組合せで処置する。さらに別の実施形態では、個体を、自己幹細胞移植療法または同種幹細胞移植療法の幹細胞移植療法で処置する。
【０１１５】
非限定的な例として述べると、本発明に従う処置は、単回投与、あるいは２４、１２、８、６、４、もしくは２時間ごと、またはこれらの任意の組合せによる分割投与を使用する、処置を開始した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０日後のうちの少なくとも１つ、または代替的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０週間後のうちの少なくとも１つ、あるいはこれらの任意の組合せにおいて、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇなど、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量の、本発明の化合物の毎日の投与として施すことができる。
【０１１６】
別の実施形態では、方法は、１種または複数のさらなる治療を投与することをさらに含む。これらのさらなる治療は、限定なしに述べると、同種幹細胞移植療法または自己幹細胞移植療法を含みうる。さらなる治療が自己幹細胞移植療法を含む実施形態では、方法は、自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄を、罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子（本明細書で開示されるＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかなど）に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）の有効量で処置するステップをさらに含みうる。
【０１１７】
Ｃ．多発性骨髄腫の再発を予防するための方法
他の態様では、本明細書では、初期処置に応答し、寛解している個体における、多発性骨髄腫の再発を予防するための方法が提供される。多数の無作為化研究が、少なくとも、初期処置の成功の後における奏効率および無増悪生存（ＰＦＳ）に関して、新規の薬剤による維持療法からの利益を示している（Harousseau、２００９年、Hematol.  Rep.、１巻（２号））。
【０１１８】
したがって、本明細書では、予防を必要とする個体における多発性骨髄腫の再発を予防するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞質内局在化は、個体が寛解していることを示すことと、ＳｎｃｍｔＲＮＡが、形質細胞の細胞質に局在化している場合は、個体を、１種または複数の維持抗がん治療薬の有効量で処置することとを含む、方法が提供される。
【０１１９】
本明細書ではまた、予防を必要とする個体における多発性骨髄腫の再発を予防するための方法であって、個体を、１種または複数の維持抗がん治療薬の有効量で処置することを含み、処置の前に、個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の、細胞内の細胞質内局在化を呈示することが決定されている、方法も提供される。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、維持抗がん治療薬は、本明細書で開示される、オリゴヌクレオチドベースの（アンチセンスベースのなど）治療および／または本明細書で開示される、多発性骨髄腫を処置するための他の任意の治療のいずれかを含む。
【０１２１】
他の実施形態では、１種または複数の維持抗がん治療を、毎週１回または隔週１回など、寛解の前に投与された元の処置より低頻度で投与する、「維持スケジュール」を使用することもできる。維持スケジュールは、一定期間にわたり、一般に１〜２年間にわたり、または患者が進行性疾患の徴候を示さずにあり続けており、著明な毒性を伴わずに処置を忍容している限りにおいて無期限にわたり持続することができる。
【０１２２】
Ｄ．再発した多発性骨髄腫を処置するための方法
さらに他の態様では、本明細書では、処置を必要とする個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法が提供される。「再発した多発性骨髄腫および／または難治性多発性骨髄腫」とは、薬物または治療に対して非応答性となっている多発性骨髄腫を指す。例えば、かつ、限定なしに述べると、再発した多発性骨髄腫および／または難治性多発性骨髄腫は、その最初の進行が、薬物または治療による処置の成功の後で、任意の処置の非存在下において生じる患者における多発性骨髄腫；処置の直後または処置から６０日以内に進行する患者における多発性骨髄腫；および処置を受けている間に進行する患者における多発性骨髄腫を含む。
【０１２３】
したがって、いくつかの態様では、本明細書では、処置を必要とする個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体の骨髄から単離された形質細胞内の、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の細胞内局在化を測定することであって、ＳｎｃｍｔＲＮＡの（ｉ）核における局在化または（ｉｉ）細胞質内および核における局在化は、個体が再発していることを示すことと、ＳｎｃｍｔＲＮＡが、形質細胞の（ｉ）核または（ｉｉ）細胞質および核に局在化している場合は、個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することとを含む、方法が提供される。
【０１２４】
本明細書の他の態様ではまた、処置を必要とする個体における、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法であって、個体を、１種または複数の抗がん治療薬で処置することを含み、処置の前に、個体の骨髄から単離された形質細胞は、センス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の（ｉ）細胞内の核における局在化または（ｉｉ）細胞内の細胞質内および核における局在化を呈示することが決定されている、方法も提供される。
【０１２５】
別の実施形態では、前記組成物の治療有効量は、患者の処置におけるサルベージ療法の一部として投与され、多発性骨髄腫は、多発性骨髄腫を処置するための他の薬物に対して、難治性となっている。いくつかの実施形態では、それに対して多発性骨髄腫が難治性である、多発性骨髄腫を処置するための薬物は、限定なしに述べると、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、およびビンクリスチンを含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、再発した多発性骨髄腫を処置するための抗がん治療薬は、逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒト非コードミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）を含み、オリゴヌクレオチドはミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができる。いくつかの実施形態では、抗がん治療薬は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはリボザイムである。さらに他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、本明細書で開示される改変のいずれかなど、リン酸骨格連結、糖、または塩基への１種または複数の改変を含有する。
【０１２７】
別の実施形態では、抗がん治療薬は、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、またはビンクリスチン、または本明細書で開示される、多発性骨髄腫を処置するための、他の任意の化合物から選択することができる。
【０１２８】
さらなる実施形態では、個体を、本明細書で開示されるＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）と、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン−アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン−アルファ、プレドニゾン、サリドマイド、またはビンクリスチン、または本明細書で開示される、多発性骨髄腫を処置するための、他の任意の化合物から選択される抗がん治療薬との組合せで処置する。さらに別の実施形態では、個体を、自己幹細胞移植療法または同種幹細胞移植療法の幹細胞移植療法で処置する。
【０１２９】
非限定的な例として述べると、本発明に従う処置は、単回投与、あるいは２４、１２、８、６、４、もしくは２時間ごと、またはこれらの任意の組合せによる分割投与を使用する、処置を開始した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０日後のうちの少なくとも１つ、または代替的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０週間後のうちの少なくとも１つ、あるいはこれらの任意の組合せにおいて、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇなど、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量の、本発明の化合物の毎日の投与として施すことができる。
【０１３０】
別の実施形態では、再発した多発性骨髄腫を処置するための方法は、１種または複数のさらなる治療を投与することをさらに含む。これらのさらなる治療は、限定なしに述べると、同種幹細胞移植療法または自己幹細胞移植療法を含みうる。さらなる治療が自己幹細胞移植療法を含む実施形態では、方法は、自己幹細胞移植における使用のための造血幹細胞および／または骨髄を、罹患した個体への移植の前に、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡまたはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子（本明細書で開示されるＡＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかなど）に、安定な二重鎖を形成するのに十分に相補的な、１種または複数のオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）の有効量で処置するステップをさらに含みうる。
【０１３１】
Ｖ．キット
他の態様では、本明細書では、多発性骨髄腫を有すると診断されたかまたはこれを有すると考えられる個体の骨髄から単離された形質細胞内の、１種または複数のＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子（本明細書で開示されるＳｎｃｍｔＲＮＡおよび／またはＡＳｎｃｍｔＲＮＡ分子のいずれかなど）の発現および細胞内局在化を検出するアッセイを実施するのに適するキットが提供される。
【０１３２】
一実施形態では、キットは、多発性骨髄腫を診断するためのキットである。このキットは、（ｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｉｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドであって、ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができるオリゴヌクレオチド；標識の検出のための、１種または複数のコンジュゲート抗体試薬；１種または複数のハイブリダイゼーション緩衝液および／もしくは洗浄緩衝液；ならびに／または（ｉ）多発性骨髄腫を有すると診断された個体から単離されるか、もしくは多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陽性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド、および（ｉｉ）多発性骨髄腫を有さない個体から単離されるか、もしくは正常に増殖する細胞系から単離される、陰性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライドの１種または複数を含みうる。
【０１３３】
別の実施形態では、キットは、多発性骨髄腫は寛解していると診断された個体が、再発するのかどうかを決定するためのキットである。このキットは、（ｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、アンチセンス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡ、または（ｉｉ）逆位反復配列を有するポリヌクレオチドの３’末端に、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡの５’末端で共有結合で連結された、センス１６ＳミトコンドリアリボゾームＲＮＡを含む、ヒトミトコンドリアキメラＲＮＡ分子に十分に相補的な１種または複数のオリゴヌクレオチドであって、ミトコンドリアキメラＲＮＡ分子とハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成することができるオリゴヌクレオチド；標識の検出のための、１種または複数のコンジュゲート抗体試薬；１種または複数のハイブリダイゼーション緩衝液および／もしくは洗浄緩衝液；ならびに／または（ｉ）多発性骨髄腫が再発したと診断されている個体から単離されるか、もしくはセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の、細胞内の核における局在化または細胞内の細胞質内および核における局在化を呈示する、多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陽性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライド、および（ｉｉ）多発性骨髄腫が再発していない個体から単離されるか、もしくはＳｎｃｍｔＲＮＡの、細胞内の細胞質内における局在化を呈示する多発性骨髄腫の細胞系から単離される、陰性対照としての、固定された形質細胞の１種または複数のスライドの１種または複数を含みうる。
【実施例】
【０１３４】
（実施例１）
健常個体から単離された形質細胞内の、ｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化の決定
本研究では、健常ボランティアの骨髄から単離された形質細胞内の、アンチセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＡＳｎｃｍｔＲＮＡ）およびセンス非コードミトコンドリアＲＮＡ（ＳｎｃｍｔＲＮＡ）の示差的発現を決定した。
【０１３５】
材料および方法
形質細胞の骨髄からの単離：形質細胞を得るために、局所麻酔下で、ニードルを胸骨へと挿入することにより、１〜２ｍｌの骨髄試料を患者から得た。少量の骨髄試料（１〜２ｍｌ）を摘出し、単核細胞を、ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ勾配下の遠心分離により分離した。細胞層を回収し、ＰＢＳ（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ９．０）で洗浄し、抗ＣＤ１３８抗体をロードされた磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）と共にインキュベートした。形質細胞（ＣＤ１３８陽性）を、磁気カラムで精製し、ＰＢＳ中に懸濁させた。１００〜２００μｌ中に２００〜５００個の間の細胞を含有する試料を、正に帯電させたスライド上でサイトスピンにかけた。
【０１３６】
ｎｃｍｔＲＮＡを検出する蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）：スライド上に固定された単離形質細胞を、１００μｌの０．２ＮのＨＣｌと共に、室温で５分間にわたりインキュベートした。酸を廃棄し、細胞を、ＰＢＳで２回にわたり洗浄した。次いで、細胞を、ＳｎｃｍｔＲＮＡに相補的な、０．５μＭのＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ  Ａｌｅｘａで標識されたプローブであるＰ１（５’  ＧＴＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＧＴＧＴＧＧＧ  ３’）を含有する、１００μｌのハイブリダイゼーション緩衝液（５０％のホルムアミド、１５０μｇ／ｍｌのニシン精子ＤＮＡ、４倍濃度のＳＳＣ、２ｍＭのＥＤＴＡ）と共にインキュベートした。別のスライドを、ＡＳｎｃｍｔＲＮＡに相補的な、０．０５μＭの５’Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄで標識された２つのプローブであるＰ２（５’  ＧＡＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＡＴＣＣＴＡＴＴ  ３’）およびＰ３（５’  ＡＣＣＧＴＧＣＡＡＡＧＧＴＡＧＣＡＴＡＡＴＣＡ  ３’）の各々とハイブリダイズさせた。第３のスライドを、１８Ｓ  ｒＲＮＡに相補的な、５’−Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄで標識されたプローブ（Ｐ４：５’  ＡＧＴＧＧＡＣＴＣＡＴＴＣＣＡＡＴＴＡＣＡ  ３’）に対応する陽性のハイブリダイゼーション対照とハイブリダイズさせた。最後に、細胞を、ＤＡＰＩ（１ｍｇ／ｍｌ）で染色し、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ−５１顕微鏡上で、蛍光顕微鏡法により解析した。
【０１３７】
結果
健常ドナーに由来する形質細胞（ＬＣおよびＮＦ）についての解析の結果を、図１に表す。正常細胞は、それらのＳｎｃｍｔＲＮＡプローブおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブの両方に対するハイブリダイゼーションシグナルにより同定する。さらに、ｎｃｍｔＲＮＡの両方の分子種の転写物は、細胞内の細胞質内局在化を表す。
【０１３８】
（実施例２）
多発性骨髄腫を有すると診断された個体から単離された形質細胞内のｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化の決定
本実施例では、形質細胞を、多発性骨髄腫を有すると既に診断されている個体の骨髄から得た。形質細胞は、任意の抗がん治療による処置の前に、個体から単離した。
【０１３９】
方法
形質細胞を、多発性骨髄腫を有すると陽性に診断された個体の骨髄から単離し、ＦＩＳＨを実施して、上記で記載した、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化を検出した。１８Ｓ  ｒＲＮＡサブユニットに対するプローブを、陽性対照として使用した。
【０１４０】
結果
結果を、図２に表す。形質細胞についてのＦＩＳＨ染色は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対する陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如を明らかにする。さらに、多発性骨髄腫を有すると診断された個体から単離された形質細胞に関して、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、形質細胞の細胞質内だけに局在化している（図２Ａ〜Ｃ）。ＳｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化についてのこのパターンは一般に、より好適な予後診断と関連した。
【０１４１】
（実施例３）
多発性骨髄腫を有すると診断された個体であって、処置の後で再発した個体から単離された形質細胞内のｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化の決定
本実施例では、形質細胞を、多発性骨髄腫を有すると既に診断されている個体の骨髄から得た。形質細胞は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））による処置後の個体であって、その後に症状の再発を患った個体から単離した。
【０１４２】
方法
形質細胞を、多発性骨髄腫を有すると陽性に診断された個体の骨髄から単離し、ＦＩＳＨを実施して、上記で記載した、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化を検出した。１８Ｓ  ｒＲＮＡサブユニットに対するプローブを、陽性対照として使用した。
【０１４３】
結果
結果を、図３に表す。形質細胞についてのＦＩＳＨ染色は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対する陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如を明らかにする。さらに、多発性骨髄腫を有すると診断された個体であって、ボルテゾミブで処置され、その後に多発性骨髄腫症状の再発を患っている個体から単離された形質細胞に関して、ＳｎｃｍｔＲＮＡは、主に形質細胞の核に局在化（図３Ｃ〜Ｄ）するか、または細胞質内および核の両方に局在化（図３Ａ〜ＢおよびＥ）した。１８Ｓ  ｒＲＮＡサブユニットに対するプローブを、陽性対照として使用した。
【０１４４】
（実施例４）
ＭＧＵＳを有する個体から単離された形質細胞内の、ｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化の決定
本実施例では、形質細胞を、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）を有すると既に診断されている個体の骨髄から得た。
【０１４５】
方法
形質細胞を、ＭＧＵＳを有する個体の骨髄から単離し、ＦＩＳＨを実施して、上記で記載した、ＳｎｃｍｔＲＮＡおよびＡＳｎｃｍｔＲＮＡの発現および細胞内局在化を検出した。１８Ｓ  ｒＲＮＡサブユニットに対するプローブを、陽性対照として使用した。
【０１４６】
結果
結果を、図４に表す。形質細胞についてのＦＩＳＨ染色は、ＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対する陽性のハイブリダイゼーション、およびＡＳｎｃｍｔＲＮＡプローブに対するハイブリダイゼーションシグナルの欠如を明らかにする。ＳｎｃｍｔＲＮＡは、形質細胞の細胞質内だけに局在化していることが著明であり、多発性骨髄腫を有すると診断されているが、再発の前である個体の形質細胞内の、ＳｎｃｍｔＲＮＡの細胞内局在化と符合する。
【０１４７】
（実施例５）
ｎｃｍｔＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドによるマウス骨髄腫細胞系の処置後における、マウスへの移植
自己骨髄移植は、多発性骨髄腫などの造血系がんを有する、増大しつつある数の患者のための主要な処置選択肢となっている。自己移植（ＡＴ）は、同種移植を凌駕する、複数の潜在的な利点を有する。しかし、ＡＴを使用するための主要な障害は、採取された骨髄中に保有される腫瘍細胞を隠す骨髄の注入の結果として、より急速な疾患の再発がもたらされることである。再発を最小化するために、多くの立案者が、新たな手法：回収された骨髄を、薬物で処置または清浄化して、悪性細胞またはそれらの前駆体（がん幹細胞）を消失させる手法を採択している。処置後、骨髄は、ようやく悪性細胞を除去されるであろう。
【０１４８】
骨髄を清浄化するための細胞モデルとして、本発明者らは、マウス骨髄腫細胞系であるＮＳＯ２で作業した。これらの細胞の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、マウスＡＳｎｃｍｔＲＮＡに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、正常なマウス細胞に影響を及ぼすことなく、アポトーシスによる大規模な細胞死を誘導する。ＡＳｎｃｍｔＲＮＡのノックダウンは、カスパーゼの活性化、ＤＮＡの断片化を誘導し、細胞をアネキシンＶ陽性とするが、これらは全て、アポトーシスの顕徴である。したがって、これらの結果に基づき、本発明者らは、これらの細胞を援用して、マウスへの移植の前における、マウスＡＳｎｃｍｔＲＮＡに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＮＳＯ２細胞の処置が、多発性骨髄腫と関連する症状を予防または減殺しうるのかどうか決定した。
【０１４９】
材料および方法
ＮＳＯ２細胞に、４８時間にわたり、１５０ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド対照（ＡＳＯ−Ｃ）もしくはマウスＡＳｎｃｍｔＲＮＡに相補的な１５０ｎＭのオリゴヌクレオチド（治療用ＡＳＯ：ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅまたはＡＳＯ−１５６０Ｓ）をトランスフェクトするか、または処置しないで放置した（非処置）。トランスフェクションは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの説明書に従い、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ  ２０００により実行した。トランスフェクションの４８時間後、細胞を採取し、カウントした。
【０１５０】
処置後、２００，０００個の細胞（対照または治療用ＡＳＯもしくはＡＳＯ−１５６０Ｓで処置された）を、ｂａｌｂ／ｃマウスへと腹腔内注射した。マウスの生存を、細胞の注射後９０日間にわたり追跡した。
【０１５１】
結果
図５において示される通り、細胞を注射した約４０日後（グラフ上の０日目）において、非処置の細胞またはＡＳＯ−Ｃで処置された細胞を注射されたマウスは死亡した。これに対し、治療用ＡＳＯもしくはＡＳＯ−１５６０Ｓで処置された細胞を注射されたマウスは、９０日後において、１００％の生存を呈示する。この時点で、組織病理学的研究のためにマウスを屠殺した。非処置マウスと比較して、肝臓、脾臓、腎臓、腸、心臓、および肺の組織病理学的変化を観察した。
【０１５２】
本発明について純粋に例示的であることを意図するものであり、したがって、いかなる様式でも本発明を限定するとは考えられるべきではない実施例はまた、上記で論じた、本発明の態様および実施形態についても記載および詳述する。前出の実施例および詳細な記載は、例示を目的として提示するものであり、限定を目的として提示するものではない。本明細書で引用される、すべての刊行物、特許出願、および特許は、各個別の刊行物、特許出願、または特許が、具体的かつ個別に参照により組み込むことを示された場合と同様に、参照により本明細書に組み込まれる。特に、本明細書で引用される全ての刊行物は、本発明との関連で使用されうる組成物および方法について記載および開示する目的で、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。前出の本発明は、例示および例を目的として、かつ、理解の明快さを目的として、ある程度詳細に記載されているが、本発明の教示に照らして、当業者には、付属の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱せずに、これらに対するある種の変化および改変を施しうることが明らかであろう。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【表２７】
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【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
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【表３４】
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【表３５】
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【表３６】
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【表３７】
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【表３８】
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【表３９】
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【表４０】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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