(57)【要約】  本教示は、小さい平滑コア粒子を含む改善された顆粒集団を提供する。製造方法及び使用方法も提供される。
2016528881.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
顆粒集団であって、前記顆粒が、
小さい平滑コア粒子と、
活性物質と、を含み、
前記顆粒集団に含まれる前記小さい平滑コア粒子が、
３未満の平滑度指数と、
３００マイクロメートル未満の質量中央径と、
２．５未満の粒径分散指数と、を有する顆粒集団。
【請求項２】
前記活性物質が酵素である、請求項１に記載の顆粒集団。
【請求項３】
前記活性物質が、前記平滑コア粒子を取り囲む活性薬剤コーティング中にある、請求項１又は２に記載の顆粒集団。
【請求項４】
少なくとも１つの追加コーティングを更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項５】
少なくとも１つの追加コーティングを更に含み、前記少なくとも１つの追加コーティングのそれぞれが最終顆粒の少なくとも５％  ｗ／ｗで含まれる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項６】
前記小さい平滑コア粒子が塩結晶を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項７】
前記小さい平滑コア粒子が硫酸ナトリウム結晶を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項８】
前記活性物質が酵素を含み、前記酵素が、フィターゼ、プロテアーゼ、又はアミラーゼのうち少なくとも１つである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項９】
前記小さい平滑コア粒子が、
２．８未満、２．５未満、又は２未満の平滑度指数と、
２５０マイクロメートル未満、２２５マイクロメートル未満、２００マイクロメートル未満、１７５マイクロメートル未満、１５０マイクロメートル未満、１２５マイクロメートル未満、又は１００マイクロメートル未満の質量中央径と、
２．５未満、２未満、又は１．５未満の粒径分散指数と、を含む請求項１〜８のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項１０】
少なくとも１つの追加コーティングを更に含み、前記少なくとも１つの追加コーティングのそれぞれが、最終顆粒の少なくとも６％、７％、８％、９％、又は１０％  ｗ／ｗで含まれる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項１１】
小さい平滑コア粒子であって、
２．５未満であるが１．２５以上である平滑度指数と、
２５０マイクロメートル未満であるが１００マイクロメートル以上である質量中央径と、
２．５未満であるが１．５以上である粒径分散指数と、を有する小さい平滑コア粒子と、
酵素を含む活性薬剤コーティングであって、前記酵素が、フィターゼ、プロテアーゼ、又はアミラーゼのうち少なくとも１つである、活性薬剤コーティングと、
少なくとも１つの追加コーティングであって、前記少なくとも１つの追加コーティングのそれぞれが、最終顆粒の少なくとも７％であるが、１０％  ｗ／ｗ以下で含まれる、追加コーティングと、を含む顆粒集団。
【請求項１２】
水分バリア材料を含む第１水分バリアコーティングと、
前記第１水分バリアコーティングを取り囲む水和材料を含む水和コーティングと、を更に含む請求項１〜１１のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項１３】
前記水分バリア材料が、バリアポリマー、タンパク質、脂質、脂肪及び油、脂肪酸、並びにゴム類から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項１４】
前記水和材料が、デンプン、無機塩、及び糖から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の顆粒集団。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を含む、動物用飼料ペレット。
【請求項１６】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を含む、動物用飼料非ペレット化混合物。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を含む、洗濯洗剤組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を含む、食器洗剤組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を含む、繊維処理組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を含む、オーブン調理用組成物。
【請求項２１】
小さい平滑コア粒子を酵素を含む活性薬剤コーティングでコーティングする工程を含む顆粒集団の製造方法において、前記小さい平滑コア粒子が、２．５未満であるが１．２５以上である平滑度指数と、
３００マイクロメートル未満であるが１５０マイクロメートル以上である質量中位径と、
３．０未満であるが１．５以上である粒径分散指数と、を有する顆粒集団の製造方法。
【請求項２２】
動物用飼料組成物を製造するプロセスであって、
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を調製することと、
前記顆粒を飼料と共に混合し、非ペレット化混合物を得ることと、
前記非ペレット化混合物を７０℃〜９５℃の温度でペレット化することと、を含むプロセス。
【請求項２３】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を調製する工程と、
前記顆粒を、飼料用に許容可能なキャリア、希釈剤、又は賦形剤と混合する工程と、
（任意に）パッケージする工程と、を含む飼料添加剤顆粒集団の調製方法。
【請求項２４】
蒸気処理又はペレット化プロセスにおける、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団の使用。
【請求項２５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を製造する工程と、小さい平滑コア粒子を欠く顆粒集団の代表的なサンプルと保存安定性を比較する工程と、を含む保存安定性を改善する方法。
【請求項２６】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の顆粒集団を製造する工程と、小さい平滑コア粒子を欠く顆粒集団の代表的なサンプルとダストを比較することと、を含むダストを低下させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１３年６月１９日出願の米国特許仮出願第６１／８３７，１２２号の優先権の利益を主張するものであり、その全体を参照として本明細書に援用する。
【０００２】
（発明の分野）
本開示は、改善された活性物質を含有する顆粒集団、並びに製造法及び使用法を目的とする。
【背景技術】
【０００３】
洗剤、繊維用組成物、オーブン調理、食品及び動物用飼料など、工業用及び消費者用の用途における乾燥製品配合物に、酵素などの活性物質を使用することは一般的な手法となっている。酵素は、染みを分解すること、布地の色及び風合いを変更すること、生地及び食品の粘度を変更すること、並びに、可溶性リン酸塩などの栄養素の利用率を改善し、食品及び動物用飼料中のフィチン酸などの抗栄養因子を低下させることによって食品及び動物用飼料の消化率を改善し、動物の生産性を改善することが知られている。
【０００４】
酵素の不活性化は、乾燥製品配合物、例えば、粉末状洗濯用洗剤及び食器用洗剤、繊維処理配合剤、オーブン調理用粉類（baking flours）、穀粒（トウモロコシ又は大豆など）、ビタミン、塩化コリンなどの無機栄養素といった成分から構成される動物用飼料の保存中に、並びに追加的に、高温、蒸気又は高湿、圧縮又は剪断応力、及び化学物質（酸、塩基、界面活性剤、漂白剤、又は有機溶媒など）に曝露することによる工業的加工（動物用飼料の蒸気ペレット化など）中に起こる場合がある。不活性化は、加工後、例えば、蒸気処理及びペレット化後に冷却すると酵素が再活性化する場合は、少なくとも一部可逆的であるが、不活性化は、多くは非可逆的であり、加工後、例えば、蒸気処理及びペレット化後に冷却しても酵素の触媒作用は完全に回復しない。蒸気ペレット化などのプロセスにおいて、酵素の非可逆的不活性化及び活性低下は一般的に望ましくない。
【０００５】
乾燥飼料ミックスと比較して、飼料ペレットは、飼料の品質改善、病原体の低下、製造中粉塵量の低下、取り扱いの容易性、及び成分投与の更なる均一化など、業界で好まれる特性を有する。好ましい産業用ペレット化プロセスでは、ダイを通して蒸気で加熱された飼料成分、つまりコンディショニングされた粉餌を送り込むペレット化工程に先立ち、コンディショニングとして知られるプロセスにおける蒸気注入を利用して、水分を加えて温度を上げる。ペレット化プロセスの温度は、約７０℃〜９５℃、又はそれ以上であってよい。
【０００６】
ペレット化プロセスで使用される蒸気、温度、圧縮力及び化学物質によって、酵素の活性、つまり力価は、加工中、及びその後の保存中に著しく低下することが多い。実際に、飼料用酵素は、酵素の不活性化を避けるため、ペレット化プロセス後に飼料ペレット上に噴霧される安定化液体製品として業務用に提供されることが多い。しかしながら、例えば、酵素をペレット上に噴霧することにより酵素をペレット化後に適用すると、均質に与えることが難しく、ペレット化後に酵素を添加する装置のコストが高い。別の方法として、液体酵素配合物又は乾燥混合酵素配合物を、ペレット化に先立ってミキサーに加える場合がある。場合によっては、ペレット化中の損失を補うために、他の場合で必要とされるよりも多くの酵素を添加することもある。
【０００７】
かなりの酵素活性を損失することなく、最大数ヶ月若しくは数年にわたって保存される、又は、混合若しくは蒸気処理ペレット化プロセスなどの工業的加工作業にかけられる、製品中構成成分及びプレミックス配合物として供給される安定で耐久性のある酵素顆粒が、洗剤、繊維、オーブン調理、食品、及び飼料業界において必要である。
【０００８】
工業的プロセス中の酵素の不可逆的不活性化又は酵素活性の低下といった問題を避ける取り組みとして、新たな酵素源を同定すること（例えば、超好熱性微生物における既知の酵素の同定）、又は既知の酵素の安定化手段を特定することが挙げられる。Ｋｌｉｂａｎｏｖ，１９８３，（Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌｕｍｅ  ２９，ｐａｇｅ  １〜２８）では、酵素の安定化に、（１）固定化、（２）化学修飾、及び（３）添加剤の含有といった、３つの基本的な手段があることが開示されている。しかしながら、Ｋｌｉｂａｎｏｖ（１９８３）は、これら方法のうち任意のものが安定化若しくは不安定化につながり得、又は全く効果がないことを、更に開示している。この分野において、配合化によるこれまでの取り組みはある程度進歩している（例えば、国際公開第９７／２３６０６号、同第９８５４９８０号、同第９７３９１１６号、同第２００７０４４９６８号、欧州特許第１２２４２７３Ｂ１号、国際公開第２００９／１０２７７０号、米国特許第６，６０２，８４１号、欧州特許第１８０４５９２Ｂ１号、同第００９８６３１Ｂ１号、及び同第１９９６０２８号参照）が、本教示は、改良された顆粒構造を利用することによって、いくつかのこれら問題の克服に更なる進歩をもたらす。
【０００９】
多くの場合、顆粒状又は粒子状の高濃度の活性酵素を含む固体配合物の提供が望ましい。粒状顆粒は、コーティング、バリアコーティング、及び、不活性化に対する酵素の保護をもたらすよう設計される添加剤又は賦形剤を備えて配合される。これら保護コーティング、添加剤、及び賦形剤のコストを最小限にするため、かつ、製品輸送コストの影響を最小限にするため、可能な限り不活性成分に対する活性酵素の割合が最も高い顆粒酵素を配合することが望ましい。しかしながら、酵素濃度又は負荷量が上がるときに顆粒の粒径が一定に保たれる場合、最終製品又は用途に加えられる、一定量の酵素に対する粒子数が減少する。しかしながら、１回投与当たりの粒子数が減少しすぎると、各製品投与間のばらつきが高くなる恐れがある。例えば、１杯の洗剤、繊維処理用ブレンド、オーブン調理用生地、又は１回分の動物用飼料中の酵素顆粒の平均数が少ないと、個々の投与量又は給餌量間の酵素濃度の分布が不均一になり、それによって、酵素処理の効果が１回ごとにばらつくことにつながり得る。
【００１０】
１回当たりの粒子が不足していることによるばらつきの問題を避けつつ、酵素負荷量の増加による経済的利益を実現するためには、１回当たりの粒子数を十分に保つために、酵素顆粒の平均粒径の低下を試みることができる。しかしながら、流動床噴霧コーティング、パンコーティング、ドラムコーティングなどといったコーティングプロセス中に、より小さいコア粒子に酵素コーティング及び保護バリアコーティングを施すことは難しい。コア粒子の直径が小さく、特に約２５０マイクロメートル未満、２００マイクロメートル未満、１７５マイクロメートル未満、１５０マイクロメートル未満になると、粒子が凝集する傾向が高くなる。更に、より小さいコアに対してある重量パーセンテージのコーティング材料を適用すると、コーティングが薄くなり、そのため保護力が低いコーティングがもたらされる。特に粒子の形状が不規則であるとき、小さいコアに均一なコーティングを適用するという課題は困難である。表面上に尖った、つまり角度付いた角部及び縁部を有するコアにコーティングを施すと、薄い、つまり非連続なコーティングの領域が生じる場合がある。また、不規則コーティングに適用されたコーティングは、同じように接着されない場合、又は、近くのコア粒子上の表面の凸凹、又は表面の隆起部が互いに接触している、粒塊を生じる場合もある。より厚いコーティングの適用（凝集を起こさずになされる場合）によってこれを補うと、コストが増大する傾向があろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許仮出願第６１／８３７，１２２号
【特許文献２】国際公開第９７／２３６０６号
【特許文献３】国際公開第９８５４９８０号
【特許文献４】国際公開第９７３９１１６号
【特許文献５】国際公開第２００７０４４９６８号
【特許文献６】欧州特許第１２２４２７３Ｂ１号
【特許文献７】国際公開第２００９／１０２７７０号
【特許文献８】米国特許第６，６０２，８４１号
【特許文献９】欧州特許第１８０４５９２Ｂ１号
【特許文献１０】欧州特許第００９８６３１Ｂ１号
【特許文献１１】欧州特許第１９９６０２８号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｋｌｉｂａｎｏｖ，１９８３，（Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌｕｍｅ  ２９，ｐａｇｅ  １〜２８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって、効果的な連続保護コーティングを確実にしつつ、著しい凝集を起こさずに、酵素コーティングをコアに適用する改良された方法への必要性がある。より小さい粒子へのこのような高品質コーティングが達成されると、より高い負荷量を提供し、投与間のばらつきを増やさないために混合物の十分な均質性を維持しながらも、加工及び保存中の酵素の安定性が改善されよう。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の目的は、単独での保存中、工業的加工中、又は、他の成分との混合物中の、酵素の安定性を確実にし、又は改善し、それと同時に、粒子に対する一定で最小限の厚さの連続コーティング、つまり、コア、つまり酵素含有コアに適用されるコーティング材料の重量パーセンテージに関して、欠損部分薄い部分の数が少ないコーティングを適用する能力を改善することである。
【００１５】
驚くべきことに、より平滑でより規則的な表面、及び狭い粒径分布を有するコアを提供すると、一定で最小限の厚さを有する改善されたコーティングをより小さい粒子に施せることが見出された。いくつかの実施形態では、改善されたコーティング酵素顆粒は、平滑度指数が２．５未満、重量平均平均粒径が３００マイクロメートル未満、かつ、粒径分散指数（ＰＳＤＩ）が２．０未満であるコア集団から出発し、最終顆粒の少なくとも７％ｗ／ｗからなるポリマーを含む更なるコーティングで、酵素含有コアをコーティングすることによって達成される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】小さいが不規則である別のコア粒子と比較した、本発明の教示による例示の小さい平滑コア粒子を示す。
【図２】本発明の教示による例示のデータの一部を示す。
【図３】本発明の教示による例示のデータの一部を示す。
【図４】３つの代表的な顆粒バッチのペレット化結果を示すグラフである。黒色バーは粉餌の活性を示し、一方濃灰色及び明灰色バーはそれぞれ９０℃及び９５℃における回復率を示す。
【図５】３つの代表的なフィターゼ標準ＴＰＴバッチのペレット化結果を示すグラフである。黒色バーは粉餌の活性を示し、一方濃灰色及び明灰色バーはそれぞれ９０℃及び９５℃における回復率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本教示の実施では、別途記載のない限り、当該技術分野に含まれる、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、造粒、及び動物用飼料ペレット化の従来の手法を利用する。かかる技術は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０）、Ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｋａｄａｍ，１９９０）、及び、Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，Ｄ．１９９４．Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｐｅｌｌｅｔｉｎｇ  Ｃｏｓｔ  Ｃｅｎｔｅｒ．Ｉｎ  Ｆｅｅｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＩＶ．（ＭｃＥｌｌｈｉｎｅｙ，ｅｄｉｔｏｒ），Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆｅｅｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｖａ．，ｐｐ．１１０〜１３９などの文献で十分に説明されている。
【００１８】
本明細書において別途定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学的用語は、本教示が属する当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９４）、及びＨａｌｅ  ＆  Ｍａｒｋｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｐｅｒ  Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ，ＮＹ（１９９１）は、本発明で使用される用語の多くを含む一般的辞書を当業者に提供する。本明細書に記載されるものと類似する、又は同等の任意の方法及び材料を、本教示の実践又は試験に使用できる。
【００１９】
参照しやすさのために、１つ又は２つ以上の見出しの下に本教示の要素を記載している。各見出しの下にある教示は、別の見出しの下の教示にも適用されることに留意されたい。例えば、本教示の使用について言及した各実施形態及び態様は、等しく本教示の方法又は本教示の組成物についての実施形態又は態様である。同様に、本教示の方法又は使用について言及した各実施形態及び態様は、等しく本教示の組成物についての実施形態又は態様である。本願では、特に明記しない限り、単数形の使用により複数形が含まれる。
【００２０】
本明細書に引用された全ての特許、特許出願、出版物、資料、及び文献は、その全てが全体を参照することにより本明細書に援用される。
【００２１】
本明細書に記載される数値範囲は、その範囲を画定する数値を含む。
【００２２】
定義
本明細書で使用するとき、用語「顆粒」は、コア（典型的には小さい平滑コア粒子）、活性物質（典型的には酵素）、及び任意に少なくとも１つの追加のコーティングを含有する、粒子を指す。
【００２３】
本明細書で使用するとき、用語「コア」は、顆粒の内側核部を指し、典型的には「小さい平滑コア粒子」を含む。本教示のコアは、回転微粒化、湿式造粒、乾式造粒、噴霧乾燥、ディスク造粒、押出成形、パンコーティング、球形化、ドラム造粒、流動床凝集、高剪断造粒、流動床噴霧コーティング、結晶化、沈殿、エマルションゲル化、回転ディスク微粒化、及びその他注型成形法、並びにプリルプロセスなどの、様々な製造技術によって作製できる。かかるプロセスは、当該技術分野において既知であり、米国特許第４６８９２９７号及び同第５３２４６４９号（流動床プロセス）、欧州特許第６５６０５８Ｂ１号及び米国特許第４５４３３２号（押出成形プロセス）、米国特許第６２４８７０６号（造粒、高剪断）、並びに、欧州特許第８０４５３２Ｂ１号及び米国特許第６５３４４６６号（流動床コア及びミキサーコーティングを利用するプロセスの組み合わせ）に記載されている。
【００２４】
活性物質は、典型的には、コアの周囲にコーティングされる。本教示での使用に好適なコアは、本明細書に提供される平滑度指数、質量中央径、及び粒径の差異の定義を満たす任意の材料であってよい。本教示の一実施形態では、コアは、塩化ナトリウム又は硫酸ナトリウムの結晶を含む。本教示の別の実施形態では、コアは、スクロース結晶種を含む。無機塩及び／又は糖及び／又は小有機分子からなる粒子を、本教示のコアとして使用してよい。コアに組み込むための好適な水溶性成分として、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛などの無機塩、又は、尿素、クエン酸、スクロース、ラクトースなどの糖、その他同種のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、コア粒子は結晶性無機塩である。いくつかの実施形態では、コア粒子は結晶性硫酸ナトリウムである。
【００２５】
本明細書で使用されるとき、用語「小さい平滑コア粒子」は、本明細書に提供される特定の平滑度指数、質量中央径、及び粒径分散指数の測定値を呈する粒子、顆粒の内部粒子を指す。
【００２６】
本明細書で使用されるとき、用語「平滑度指数」は、代表的なコアサンプルについて計算した、外皮比表面積に対する実験的比表面積の比を指す。
【００２７】
本明細書で使用されるとき、「代表的なコアサンプル」は、少なくとも１５個のコア粒子の無作為サンプルを指す。
【００２８】
用語「実験的比表面積」は、本明細書で使用されるとき、ＢＥＴ（Ｂｒｕｎａｕｅｒ−Ｅｍｍｅｔｔ−Ｔｅｌｌｅｒ）ガス吸着法（Ｓ．Ｂｒｕｎａｕｅｒ，Ｐ．Ｈ．Ｅｍｍｅｔｔ  ａｎｄ  Ｅ．Ｔｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９３８，６０，３０９．ｄｏｉ：１０．１０２１／ｊａ０１２６９ａ０２３）を用いて求められる、代表的なコアサンプルのグラム当たりの実験的に測定した表面積（平方メートル／グラム単位で測定される）を指す。ＢＥＴ法の詳細は、以下の方法の項に記載する。
【００２９】
用語「外皮比表面積」は、本明細書で使用されるとき、全てのコア粒子が完全な球形であるという理想的仮定を用いて、代表的なコアサンプルの測定された粒径分布と平均真密度に基づいて計算された比表面積（平方メートル／グラム単位）を指す。外皮比表面積を計算するアルゴリズムは、以下の方法の項に記載する。
【００３０】
用語「粒径分布」（略してＰＳＤ）は、本明細書で使用されるとき、いくつかの直径寸法間隔のそれぞれに存在する小さい平滑コア粒子の質量パーセントによる相対量を指す。コアサンプルのＰＳＤは、レーザー光散乱によって測定される（例えば、Ｔ．Ａｌｌｅｎ，Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，Ｖｏｌ．１（Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，１９９７）参照）。本願では、ＰＳＤは、ＰＳＤの対数正規プロットから測定できる３種類の質量パーセンタイル径を特徴とする。
【００３１】
Ｄ５０又はＭＭＤ（質量中央径）、対数正規分布の質量中央径である。ＭＭＤは、質量平均粒径であると考えられ、代表的なサンプル中の５０％  ｗ／ｗ未満の粒子がその値より小さい直径を有する。
【００３２】
Ｄ１０：１０パーセンタイル径（ＴＰＤ）、代表的なサンプル中の１０％  ｗ／ｗの粒子がその値より小さい直径を有する直径である。
【００３３】
Ｄ９０：９０パーセンタイル径（ＮＰＤ）、代表的なサンプル中の９０％  ｗ／ｗの粒子がその値より小さい直径を有する直径である。
【００３４】
典型的には、Ｄ１０、Ｄ５０、及びＤ９０は、マイクロメートルで表される。
【００３５】
コアサンプルの「粒径分散指数」（ＰＳＤＩと略す）は、代表的なサンプルのＤ９０／Ｄ１０比である。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、用語「コーティング」は、下層の材料を取り囲む材料層を指す。第１コーティング層は、通常、コア表面の未ミーティング領域がわずかであるか、又はないように、実質的な連続層を形成するためにコアをカプセル化するもので、典型的には、活性薬剤コーティングである。続いての追加コーティング層は、成長する顆粒をカプセル化し、１つ又は２つ以上の追加の実質的な連続層（「追加コーティング」）を形成できる。顆粒中で使用される材料（例えば、活性物質、及び本明細書に詳述される構成成分）は、食品及び／又は動物用飼料においての使用に好適であってよいが、それらである必要はなく、したがって、食品用グレード又は飼料用グレードであってよい。
【００３７】
本教示のコーティングは、無機塩、有機酸の塩、糖、糖アルコール、デンプン（天然、アルファ化、加水分解、又は化学修飾）、及びその他多糖類、ゴム類、追加の活性物質、飼料用又は食品用グレードのポリマー、色素、粘土、可塑剤、界面活性剤、繊維材料、抗粘着剤、充填剤、展延剤、並びに、コーティングでの使用が既知であるその他化合物のうち、１つ又は２つ以上を更に含んでよい。好適なポリマーとして、部分的に及び完全に加水分解されたＰＶＡを含むポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリジン、及び、炭水化物ポリマー（例えば、デンプン、アミロース、アミロペクチン、α及びβ−グルカン、ペクチン、グリコーゲン、これらの混合物及び誘導体を含む）が挙げられる。コーティングにおいて有用な好適な充填剤として、嵩を増やし、コストを下げるために使用される、又は、最終顆粒中で目指す酵素活性を調整する目的で使用される、不活性材料が挙げられる。かかる充填剤の例として、塩、糖などの水溶性剤、並びに、粘土、タルク、ケイ酸塩、セルロース、及びデンプン、並びに、セルロース及びデンプンの誘導体などの水分散性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本教示のコーティングでの使用に好適な可塑剤は、低分子量有機化合物であり、可塑化されるポリマーに非常に特異的なものである。例として、糖（例えば、グルコース、フルクトース、及びスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール、キシリトール、及びマルチトール、並びにその他グリコール）、尿素などの極性の低分子量有機化合物、又は、水などのその他既知の可塑剤、若しくは飼料用グレードの可塑剤が挙げられるが、これらに限定されない。本教示のコーティングでの使用に好適な繊維材料として、セルロース及びセルロース誘導体、例えば、ＨＰＭＣ（ヒドロキシ−プロピル−メチルセルロース）、ＣＭＣ（カルボキシ−メチルセルロース）、ＨＥＣ（ヒドロキシ−エチルセルロース）が挙げられるが、これらに限定されない。本教示の一実施形態、特に飼料用途では、コーティングは、水溶性又は水分散性トウモロコシ穂軸材料、又は糖、又は塩結晶を含む。家庭用洗浄用途に特に好適な別の実施形態では、コーティングは、水溶性若しくは水分散性糖、又は塩結晶、又はノンパレイユを含む。当業者は、飼料及び食品用途では、コーティング（並びに、任意のポリマー、充填剤、可塑剤、繊維材料、及び展延剤）が、食品及び／又は飼料用途において許容されることを認識するであろう。家庭用洗浄用途では、そのような制限を適用する必要はない。
【００３８】
用語「活性薬剤コーティング」は、本明細書で使用されるとき、活性物質（典型的には酵素）を含有するコーティングを指す。一般に、活性薬剤コーティングを小さい平滑コア粒子に適用し、その後、追加コーティングを任意に適用できる。
【００３９】
用語「追加コーティング」は、本明細書で使用されるとき、小さい平滑コア粒子に任意に適用される１つ又は２つ以上のコーティングを指す。典型的には、小さい平滑コア粒子及び活性薬剤コーティングを含有する未完成の顆粒に、追加コーティングを適用し得る。追加コーティングの非限定例として、水分バリアコーティング及び水和コーティングが挙げられる。
【００４０】
用語「水分バリアコーティング」は、本明細書で使用されるとき、水分バリア材料を含むコーティングを指す。
【００４１】
用語「水和コーティング」は、本明細書で使用されるとき、水和材料を含むコーティングを指す。
【００４２】
用語「水分バリア材料」は、水の取り込みを排除する、防ぐ、又は実質的に遅らせる材料を指す。これらの材料は、典型的には疎水性又は両親媒性であり、水に対する遮蔽性をもたらし、本質的に水を吸収及び／又は結合しないものであり、フィルム形成材料が挙げられるが、これらに限定されない。水分バリア材料の例として、バリアポリマー、タンパク質、脂質、脂肪及び油、脂肪酸、並びにゴム類が挙げられる。フィルム形成水分バリア材料の例は、アラビアゴムなどの天然及び変性バリアポリマー、乳清、乳清タンパク質濃縮物、変性ＰＶＡ及び完全加水分解ＰＶＡを含むＰＶＡ、並びに、ラテックス、ＨＰＭＣ、及び酸処理ヒドロキシプロピルデンプン、例えばＰｕｒｅＣｏｔｅ（商標）、酸化デンプン、及び加工デンプンなどの合成ポリマーである。非フィルム形成水分バリア材料として、例えば、ワックス、脂肪、油、及び脂質、並びにレシチンが挙げられる。容易に参加されない選択された水分バリア材料は、例えば、ラテックスポリマー、及び、アラビアゴムなどのバリアポリマーである。
【００４３】
用語「水和材料」は、水などの水性液体を、あるいくつかのメカニズムによって吸収する材料を指す。第１の非限定メカニズムでは、材料は遊離水を吸収する。第２の非限定メカニズムでは、材料は、通常は水和した結晶水として存在する結合水を吸収する。したがって、材料は、部分的若しくは完全に水和した材料として、又は、水性液体を吸収若しくは結合し、かかる液体の活性物質への移行速度若しくは程度を遅らせる、若しくは低下させる非水和材料として、提供されてよい。第３の非限定メカニズムでは、水和材料は、顆粒内の活性物質への熱伝達を遅らせ、顆粒の外部表面の温度より低い温度に活性物質を維持することによって、活性物質を熱的に遮蔽する。水和材料として、炭水化物及び水和塩を含む無機塩、例えば、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、及び硫酸アンモニウム；マルトデキストリン；糖、例えば、スクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンが挙げられる。
【００４４】
本明細書で使用されるとき、用語「ペレット」及び「ペレット化」は、充実した、円形、球形、及び円筒形の錠剤、つまりペレット、並びに、かかる充実形状、特に飼料ペレット、及び充実した押し出し動物用飼料の形成プロセスに関する。既知の食品及び動物用飼料のペレット化製造プロセスは、通常、室温で約１〜約５分間食品又は飼料成分を混ぜ合わせることと、得られた混合物をサージビンに移すことと、混合物をスチームコンディショナーに運ぶことと、任意にスチームコンディション後の混合物を膨張装置に移すことと、混合物をペレットミル、つまり押出成形機に移すことと、最後に、ペレットをペレット冷却器に移すことと、を含む。Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，Ｄ．１９９４．Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｐｅｌｌｅｔｉｎｇ  Ｃｏｓｔ  Ｃｅｎｔｅｒ．Ｉｎ  Ｆｅｅｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＩＶ．（ＭｃＥｌｌｈｉｎｅｙ，ｅｄｉｔｏｒ），Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆｅｅｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｖａ．，ｐｐ．１１０〜１３９。
【００４５】
本明細書で使用するとき、用語「非ペレット化混合物」は、プレミックス又は前駆物質、ベースミックス、粉餌、及び希釈剤を指す。プレミックスは、典型的には、ビタミン及び微量ミネラルを含有する。ベースミックスは、典型的には、リン酸二カルシウム、石灰岩、塩及びビタミン及びミネラルプレミックスなどの食品及び飼料成分を含むが、穀粒及びタンパク質成分は含まない。希釈剤として、穀粒（例えば、小麦中ふすま及びコメヌカ）、並びに、粘土、例えばフィロケイ酸塩（ケイ酸マグネシウム海泡石、ベントナイト、カオリン、モンモリナイト、ヘクトライト、サポナイト、バイデライト、アタパルジャイト、及びスチーブンサイト）が挙げられるが、これらに限定されない。粘土は、飼料プレミックスのキャリア及び流動化剤、つまり希釈剤としても機能する。粉餌は、典型的には、動物用の完全食を含む。
【００４６】
本明細書で使用するとき、用語「活性回復率」は、（ｉ）加熱、加圧、ｐＨの上昇、ｐＨの低下、保存、乾燥、界面活性剤への曝露、溶媒（水／水分を含む）への曝露、及び機械的ストレスを含むストレス因子のうち、１つ又は２つ以上を伴う処理後の活性物質の活性の、（ｉｉ）処理前のフィターゼの活性に対する比を指す。活性回復率は、百分率で表すことができる。
【００４７】
活性回復率パーセントは、以下のように算出する。
【００４８】
【数１】
2016528881.tif 000003
【００４９】
ペレット化実験との関連において、「処理前活性」は、処理を受けていない粉餌中に含まれる活性物質の活性を、それ以外は処理を受ける活性物質に匹敵する方法で測定することによって概算できる。
【００５０】
例えば、未処理粉餌中の活性物質を、処理された（例えば、ペレット化された）粉餌中の活性物質と同様の時間、同様の条件下で取り扱って保存し、特定の処理自体以外の、起こり得る相互作用又はその他影響を制御する。
【００５１】
本明細書で使用するとき、用語「活性物質」は、顆粒に添加されてある用途に対する目的の機能性をもたらす、任意の物質であってよい。活性物質は、生物学的に生存可能な物質、食品若しくは飼料成分、抗菌剤、抗生物質代用剤、プレバイオティクス、プロバイオティクス、殺虫剤、肥料、若しくは除草剤などの農薬成分、医薬品成分、又は家庭ケア用活性成分、又はこれらの組み合わせであってよい。好ましい実施形態では、活性成分は、タンパク質、酵素、ペプチド、ポリペプチド、アミノ酸、炭水化物、脂質又は油、ビタミン、コ−ビタミン、ホルモン、又はこれらの組み合わせである。別の実施形態では、活性成分は、酵素、漂白剤、漂白活性化剤、香料、又は他の生物学的活性成分である。本質的に熱安定性の活性物質は、本教示に包含され、顆粒内で強化された熱安定性を呈することができる。食品及び飼料用途に最も好ましい活性成分は、酵素、ペプチド及びポリペプチド、アミノ酸、抗菌剤、消化管健康促進剤、ビタミン、及びこれらの組み合わせである。任意の酵素を使用することができ、酵素の非限定例として、フィターゼ、キシラナーゼ、β−グルカナーゼ、ホスファターゼ、プロテアーゼ、アミラーゼ（α又はβ又はグルコアミラーゼ）、セルラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、オキシダーゼ、トランスフェラーゼ、レダクターゼ、ヘミセルラーゼ、マンナナーゼ、エステラーゼ、イソメラーゼ、ペクチナーゼ、ラクターゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、他の酸化還元酵素、及びこれらの混合物が挙げられる。特に好ましい酵素として、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ由来のキシラナーゼ及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ由来の変異型キシラナーゼ（両方ともＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能）又は欧州特許第１２２２２５６Ｂ１号に記載される本質的に熱安定性のキシラナーゼ、並びに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｕｂｉｇｅｎｓｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃｌａｖａｔｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ  ｐａｔｒｉｃｉａｒｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｈｅｒｍｏｖｉｏｌａｃｅｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ  ｆｕｓｃａ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ由来のその他キシラナーゼが挙げられる。追加の特に好ましい酵素として、例えば、ＡＢ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能なＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種由来のフィターゼである、Ｆｉｎａｓｅ  Ｌ（登録商標）などのフィターゼ；共にＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ＤｕＰｏｎｔから入手可能なＰｈｙｚｙｍｅ（商標）ＸＰ（Ｅ．Ｃｏｌｉ由来フィターゼ）、及びＡｘｔｒａ  Ｐｈｙ（Ｂｕｔｔｉａｕｘｅｌ��ａ由来フィターゼ）、並びに、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｂｕｔｔｉａｕｘｅｌｌａ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｈｕｍｉｃｏｌａ、Ｈａｆｎｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、及びＰｅｎｉｏｐｈｏｒａの生物由来のその他フィターゼ、並びに、共に２０１２年２月１２日出願の米国特許出願第６１／５９５，９２３号及び同第６１／５９５，９４１号に記載のフィターゼが挙げられる。セルラーゼの例は、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ＤｕＰｏｎｔから入手可能なセルラーゼ（βグルカナーゼ）であるＭｕｌｔｉｆｅｃｔ（登録商標）ＢＧＬ、並びに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｈｕｍｉｃｏｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、及びＨｙｐｏｃｒｅａなどの種由来のその他セルラーゼである。米国特許出願公開第２００６０１９３８９７Ａ１号に記載されるセルラーゼ及びエンドグルカナーゼも使用できる。アミラーゼは、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓなどの種、例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ、Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ、及びＢ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ由来であってよい。好適な真菌アミラーゼは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、例えばＡ．ｏｒｙｚａｅ及びＡ．ｎｉｇｅｒ由来である。プロテアーゼは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、並びに、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ種由来であってよい。フィターゼ、キシラナーゼ、ホスファターゼ、プロテアーゼ、アミラーゼ、エステラーゼ、酸化還元酵素、リパーゼ、トランスフェラーゼ、セルラーゼ、及びβ−グルカナーゼは、動物用飼料に含有させるために汎用される酵素である。家庭用ケア用途向け錠剤に含有させるために好適な酵素は同様であり、特にプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ヘミセルラーゼ、酸化還元酵素、ペルオキシダーゼ、トランスフェラーゼ、及びセルラーゼである。本教示の特に好ましい態様では、酵素は、フィターゼ、キシラナーゼ、βグルカナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、及びこれらの混合物から選択される。本発明の一実施形態では、キシラナーゼ及びβ−グルカナーゼの２種類の酵素が顆粒内に提供される。本発明の別の実施形態では、顆粒内に提供される２種類の酵素は、プロテアーゼ及びアミラーゼである。酵素は共に混合されてよく、又は、別々に顆粒に適用されてよい。別の実施形態では、３種類の酵素、すなわちβ−グルカナーゼ、キシラナーゼ、及びフィターゼが、顆粒内に提供される。上記に挙げた酵素は例にすぎず、排他的であるわけではない。細菌、真菌、酵母、植物、昆虫、及び動物源の���生型、組み換え型、及び変異型酵素、並びに酸性、中性、又はアルカリ性酵素などの任意の酵素を、本教示の顆粒中で使用してよい。当業者には、使用される酵素量は、選択した酵素及びその使用目的の種類及び特性によって、少なくとも部分的に決まることが認識されるであろう。
【００５２】
方法
ＢＥＴ比表面積測定
コア粒子の比表面積を測定するため、ＢＥＴ法を使用して、ＭｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓのモデルＡＳＡＰ  ２４２０  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｐｏｒｏｓｉｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｒｅａ  Ｓｙｓｔｅｍを用い、クリプトンガス吸着／脱着によってコアの細孔分布を評価した。ＢＪＨ法（Ｅｌｌｉｏｔｔ  Ｐ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｌｅｓｌｉｅ  Ｇ．Ｊｏｙｎｅｒ，Ｐａｕｌ  Ｐ．Ｈａｌｅｎｄａ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５１，７３（１），ｐｐ  ３７３〜３８０，ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊａ０１１４５ａ１２６）を用いて、細孔体積分布を２０〜１０００Åの範囲で測定した。質量が約４〜６グラムのサンプルを、減圧下、１５０℃の温度で一晩脱ガスし、吸着された水及び／又は揮発性汚染物質を除去した。これらの重量を再測定し、真空下に置かれ、ガス（Ｋｒ）吸着等温線が圧力測定によって記録される点である−１９６℃（７７Ｋ）に冷却された、多孔度計に移した。表面積の範囲は、Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓが提供するＡＳＡＰ  ２４２０  Ｖ２．０７Ｊソフトウェアパッケージによって自動的に計算される。
【００５３】
外皮比表面積計算
外皮比表面積は、ＰＳＤが実際のコアサンプルのＰＳＤに合致する、完全に平滑で球形の、同等の理想的な粒子サンプルの比表面積を表す。コアの粒径分布（ＰＳＤ）は、再循環ループ内のバックグラウンド流体としてヘキサンを用い、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００を使用して、レーザー回折（参考文献ＩＳＯ  １３３２０−１：１９９９）によって測定される。十分な質量である量のコアサンプルを加え、レーザー不透明度を約１０％に達する。ＰＳＤは、回折パターンから、Ｍｉｅ理論を用いて自動的に計算される。硫酸ナトリウムの場合、粒子の複素屈折率は１．４６８＋０．０１ｉ、流体の屈折率は１．３７５と見なされる。生じたＰＳＤは、０．０１マイクロメートル〜１０，０００マイクロメートルにわたる、８１の対数的に分割されたサイズのビンのそれぞれにある粒子の割合を示す、示差質量フラクションである。必要に応じて、ＰＳＤを補正して再正規化し、細塵又は粒塊などのアーチファクト、特に６０マイクロメートル未満又は５００マイクロメートル超の任意の粒子を除外しなければならない。
【００５４】
各サイズのビンの上方及び下方サイズの分画の幾何学的平均直径は、上方及び下方サイズの分画の積の平方根を取ることによって計算される。所与のビンにおける平方メートル／グラムでの外皮比表面積は、６／（ｄ＊ρ）で与えられ、このとき、ｄは粒径（ｃｍ）であり、ρは粒子状の固体の真密度（空隙を除いた密度）（ｇ／ｃｍ３）である。硫酸ナトリウムの場合、ρ＝２．６６４ｇ／ｃｍ３である。ＰＳＤは質量加重分布であるため、総外皮表面積は、各サイズのビンの示差質量フラクションに、そのサイズのビンの比表面積を掛け、全サイズのビンを合計することによって計算される。
【００５５】
例示的実施形態
いくつかの実施形態では、本教示は、驚くべきことに、小さい平滑コアでないコアを含有する顆粒と比較して同等の安定性を持ち、それによって、材料コストの節減が可能な顆粒組成物を提供する。例えば、本教示の顆粒組成物は、驚くべきことに、同等の保存安定性を持つことができる。望ましい保存安定性は、食器洗剤、洗濯洗剤、動物用飼料、繊維、及びヒト用食品などの、任意の様々な状況において存在し得る。本教示の顆粒は、これらの様々な条件下において、同様に保存された本教示の小さい平滑コア粒子を欠く顆粒と比較して、安定性の改善を示すことができる。いくつかの実施形態では、本教示は、より大きい及び／又は非平滑のコアを含む顆粒と比較して、安定性の改善をもたらすと考えられる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本教示は、Ｈｅｕｂａｃｈダスト検査によって測定するとき、小さい平滑コアでないコアを含有する顆粒と比較して、ダスト発生に対する同等の抵抗性を有する顆粒組成物を提供する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本教示は、小さい平滑コアでないコアを含有する顆粒に対して、ダスト発生に対する抵抗性が改善された顆粒組成物をもたらすと考えられる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本教示は、小さい平滑コアでないコアを含有する顆粒と比較して、蒸気ペレット化に対する抵抗性が同等の顆粒組成物を提供する。例えば、上で定義した「活性回復率」の程度を、本教示の顆粒について測定し、本教示の小さい平滑コア粒子とは異なるコアを含む同様に処理された顆粒と比較できる。いくつかの実施形態では、本教示は、小さい平滑コアを含有する顆粒と比較して、蒸気ペレット化に対する抵抗性が改善された顆粒組成物をもたらすと考えられる。
【００５９】
本教示の顆粒を利用する追加の用途及び方法は、以下の非限定節において説明する。
【００６０】
オーブン調理用及び食品調理用組成物及び方法
本教示は、本顆粒組成物を含む、食品製品、動物用飼料、及び／又は食品／飼料添加剤が挙げられるが、これらに限定されない「食品組成物」、並びに、本顆粒組成物を１つ又は２つ以上の食品成分と混合することを含む、かかる食品組成物の調製方法、又はこれらの使用にも関する。
【００６１】
本顆粒組成物は、食品組成物の調製に使用することができ、ここで、食品組成物は、本顆粒組成物の添加後にオーブン調理される。本明細書で使用されるとき、用語「オーブン調理用組成物」は、オーブン調理用粉、生地、オーブン調理用添加剤、及び／又はオーブン調理済み製品が挙げられるが、これらに限定されない、オーブン調理済み食品製品を提供するプロセスによって調製された、任意の組成物及び／又は添加剤を意味する。食品組成物又は添加剤は、液体又は固体であってよい。
【００６２】
本明細書で使用するとき、用語「粉」は、製粉された、つまり粉砕された穀物を意味する。用語「粉」は、粉砕又は粉餌にされている、サゴ又は塊茎産物も意味する。いくつかの実施形態では、粉は、製粉又は粉餌にされた穀物又は植物物質に加える成分も含み得る。限定することを意図しないが、追加成分の例は膨張剤である。穀物として、小麦、オート麦、ライ麦、及び大麦が挙げられる。塊茎産物として、タピオカ粉、キャッサバ粉、及び粉末カスタードが挙げられる。用語「粉」は、粉砕されたトウモロコシ粉、コーンミール、米粉、全粒粉、ベーキングパウダー入り粉、タピオカ粉、キャッサバ粉、粉砕された米、栄養強化粉、及び粉末カスタードも含む。
【００６３】
業務用及び家庭用のオーブン調理及び食品製造用粉では、粉中の酵素活性を適切なレベルに維持することが重要である。高すぎる活性レベルにより、べたべたした及び／又は餅状の産物が得られ得るため、商品にはならない。不十分な酵素活性の粉は、本来の酵母機能に十分な糖を含んでおらず、乾燥したもろいパン、つまりオーブン調理済み産物が得られる場合がある。したがって、α−アミラーゼと組み合わせた本顆粒組成物を粉に加え、粉中の内因性酵素活性レベルを増すことができる。
【００６４】
本顆粒組成物中に、任意のアミラーゼを単独で、又は別のアミラーゼと組み合わせて加え、オーブン調理済み製品の老化、すなわち、クラムの硬化を防ぐ、又は遅らせることができる。抗老化アミラーゼの量は、典型的には、粉１ｋｇ当たりの酵素タンパク質が０．０１〜１０ｍｇの範囲、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ  ｄｓである。使用可能な追加の抗老化アミラーゼとして、エンドアミラーゼ、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ由来の細菌エンドアミラーゼが挙げられる。追加のアミラーゼは、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ由来の別のマルトース生成α−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１３３）であってよい。Ｎｏｖａｍｙｌ（登録商標）は、Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ系ＮＣＩＢ  １１８３７由来の代表的なマルトース生成α−アミラーゼであり、例えば、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｓｔａｒｃｈ  ５０：３９〜４５に記載されている。抗老化エンドアミラーゼの別の例として、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、例えばＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ又はＢ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ由来の細菌α−アミラーゼが挙げられる。抗老化アミラーゼは、例えば、大豆などの植物源、又はＢａｃｉｌｌｕｓなどの微生物源由来のエキソアミラーゼ、例えばβ−アミラーゼであってよい。
【００６５】
本顆粒組成物を含むオーブン調理用組成物は、ホスホリパーゼ、又はホスホリパーゼ活性を有する酵素を更に含んでよい。ホスホリパーゼ活性を有する酵素は、リパーゼ単位（ＬＵ）で測定され得る活性を有する。ホスホリパーゼは、リン脂質から脂肪酸を除いてリゾリン脂質を形成する、Ａ１又はＡ２活性を有し得る。リパーゼ活性、すなわち、トリグリセリド基質に対する活性を有しても、有さなくてもよい。ホスホリパーゼは、典型的には、３０〜９０℃、例えば、３０〜７０℃の範囲内に最適温度を有する。添加されたホスホリパーゼは、動物源、例えば、膵臓、例えば、ウシ若しくはブタ膵臓由来、ヘビ毒、又はハチ毒のものであってよい。あるいは、ホスホリパーゼは、微生物源、例えば、糸状菌、例えば酵母又は細菌由来であってよい。
【００６６】
オーブン調理後の初期に、特に最初の２４時間中に、パンのやわらかさを改善する量でホスホリパーゼを加える。ホスホリパーゼの量は、典型的には、粉１ｋｇ当たりの酵素タンパク質が０．０１〜１０ｍｇの範囲、例えば、０．１〜５ｍｇ／ｋｇである。すなわち、ホスホリパーゼ活性は、通常２０〜１０００ＬＵ／粉１ｋｇの範囲になり、ここでリパーゼ単位は、３０℃、ｐＨ  ７．０において、アラビアゴムを乳化剤、トリブチリンを基質として用いるとき、１分当たり１μモルの酪酸を放出するのに要する酵素量として定義される。
【００６７】
生地の組成は、一般的に、小麦全粒粉又は小麦粉、及び／又は、他の種類の全粒粉、粉、又はデンプン、例えば、トウモロコシ粉、トウモロコシデンプン、ライ麦全粒粉、ライ麦粉、オート麦粉、オート麦全粒粉、大豆粉、ソルガム全粒粉、ソルガム粉、ジャガイモ粉末、ジャガイモ粉、又はジャガイモデンプンを含む。生地は、生、冷凍、又は半焼成であってよい。生地は、膨張済み生地又は膨張させる生地であってよい。生地は、様々な方法、例えば、化学的膨張剤、例えば重炭酸ナトリウムの天下により、又は、パン種、すなわち発酵生地の添加により、膨張させてよい。生地は、好適な酵母培養液、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（パン酵母）、例えば、市販のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ系の培養液を添加することによって、膨張させてもよい。
【００６８】
また生地は、その他従来の生地成分、例えば、粉乳、グルテン、及び大豆などのタンパク質；卵（例えば、全卵、黄身、又は白身）；アスコルビン酸、臭素酸カリウム、ヨウ素酸カリウム、アゾジカーボンアミド（ＡＤＡ）又は過硫酸アンモニウムなどの酸化剤；Ｌ−システインなどのアミノ酸；糖；又は塩化ナトリウム、酢酸カルシウム、硫酸ナトリウム、又は硫酸カルシウムなどの塩を含んでもよい。生地は、脂肪、例えば、粒状脂肪又はショートニングなどのトリグリセリドを更に含んでよい。生地は、モノ−又はジグリセリド、モノ−又はジグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、脂肪酸の糖エステル、脂肪酸のポリグリセロールエステル、モノグリセリドの乳酸エステル、モノグリセリドの酢酸エステル、ステアリン酸ポリオキシエチレン、又はリゾレシチンなどの乳化剤を更に含んでよい。例えば、生地は、乳化剤を添加せずに製造されてよい。
【００６９】
生地製品は、任意の加工生地製品、例えば、蒸しパン及び餅などの、焼き、揚げ、ロースト、オーブン焼き、蒸し、及び茹で生地であってよい。一実施形態では、食品製品はベーカリー製品である。典型的なベーカリー（オーブンで焼いた）製品としてパンが挙げられ、例えば、ローフ、ロール、バンズ、ベーグル、ピザ生地など、ペストリー、プレッツェル、トルティーヤ、ケーキ、クッキー、ビスケット、クラッカーなどである。
【００７０】
所望により、抗老化アミラーゼ及びホスホリパーゼと共に、追加の酵素を使用してよい。追加の酵素は、アミログルコシダーゼ、β−アミラーゼ、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼなどの第２のアミラーゼであってよく、又は追加の酵素は、ペプチダーゼ、特にエキソペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、プロテアーゼ、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、例えば、国際公開第９５／００６３６号に開示されるタンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、例えば、グリコシルトランスフェラーゼ、分枝酵素（１，４−α−グルカン分枝酵素）、４−α−グルカノトランスフェラーゼ（デキストリングリコシルトランスフェラーゼ）、若しくは、オキシドレダクターゼ、例えば、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、グルコースオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ（lipooxygenase）、Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ、若しくは炭水化物オキシダーゼであってよい。追加の酵素は、任意の由来、例えば哺乳類及び植物、特に微生物（細菌、酵母、又は真菌）由来であってよく、当該技術分野において従来使用されている手法によって得ることができる。
【００７１】
キシラナーゼは、典型的には微生物源であり、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ株などの細菌又は真菌由来である。キシラナーゼとして、例えば、Ｐｅｎｔｏｐａｎ（登録商標）及びＮｏｖｏｚｙｍ  ３８４（登録商標）が挙げられ、これらは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉから産生される市販のキシラナーゼ調製物である。アミログルコシダーゼは、Ａ．ｎｉｇｅｒのアミログルコシダーゼ（例えば、ＡＭＧ（登録商標））であってよい。その他有用なアミラーゼ製品として、Ｇｒｉｎｄａｍｙｌ（登録商標）Ａ  １０００又はＡ  ５０００（Ｇｒｉｎｄｓｔｅｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｄｅｎｍａｒｋ））、及び、Ａｍｙｌａｓｅ（登録商標）Ｈ又はＡｍｙｌａｓｅ（登録商標）Ｐ（ＤＳＭ）が挙げられる。グルコースオキシダーゼは、真菌グルコースオキシダーゼ、特にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒのグルコースオキシダーゼ（例えば、Ｇｌｕｚｙｍｅ（登録商標））であってよい。代表的なプロテアーゼは、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（登録商標）である。
【００７２】
この工程は、生地から作られる任意の種類（やわらかい特徴又はパリパリとした特徴のいずれか、白色、明色、又は暗色タイプのいずれか）のオーブン調理済み製品に使用できる。この例は、典型的にはローフ又はロール状のパン、特に白色の全粒粉又はライ麦パンであり、フランスパン、ピタパン、トルティーヤ、ケーキ、パンケーキ、ビスケット、クッキー、パイ皮、クリスプブレッド、蒸しパン、ピザなどであるが、これらに限定されない。
【００７３】
本顆粒組成物は、粉が、抗老化アミラーゼ、ホスホリパーゼ、及び／又はリン脂質と共に含まれるプレミックス中で使用できる。プレミックスは、その他生地改良及び／又はパン改良添加剤、例えば、上記酵素を含む任意の添加剤を含んでよい。本顆粒組成物は、オーブン調理用添加剤として使用するため、抗老化アミラーゼ及びホスホリパーゼを含む酵素調製物の構成成分であってよい。
【００７４】
含有した送達用ビヒクルの保存、取り扱い、組み込みは、パッケージ化ミックスの手段によって達成できる。パッケージ化ミックスは、本顆粒組成物を含んでよい。しかしながら、パッケージ化ミックスは、製造業者又は製パン業者が必要とする、追加の成分を更に含んでよい。本顆粒組成物を生地内に混合した後、製パン業者は、その製品における通常の全製造プロセスを継続する。
【００７５】
食品が、本顆粒組成物を含む油、肉、ラード組成物である食品組成物が意図される。この意味での用語「［油／肉／ラード］組成物」は、それぞれ油、肉、又はラードをベースとした、これらから作られた、及び／又はこれらを含む任意の組成物を意味する。本顆粒組成物を、油／肉／ラード組成物、及び／又は添加剤成分と混合することを含む、本顆粒組成物を含む油若しくは肉若しくはラード組成物、及び／又は添加剤の製造方法が意図される。
【００７６】
食品組成物は、本顆粒組成物を含む、動物用飼料組成物、動物用飼料添加剤、及び／又はペットフードであってよい。本顆粒組成物自体を、１つ又は２つ以上の動物用飼料成分及び／又は動物用飼料添加剤成分及び／又はペットフード成分と混合することを含む、かかる動物用飼料組成物、動物用飼料添加剤組成物、及び／又はペットフードの製造方法が意図される。本顆粒組成物は、動物用飼料組成物及び／又は動物用飼料添加剤組成物及び／又はペットフードの製造に使用できる。
【００７７】
用語「動物」は、全ての非反芻動物及び反芻動物を含む。特定の実施形態では、動物は、ウマ及び単胃動物などの非反芻動物である。単胃動物の例として、ブタ類（ｐｉｇ及びｓｗｉｎｅ）、例えば、小ブタ、育成ブタ、雌ブタ；家禽類、例えば、シチメンチョウ、アヒル、ニワトリ、ブロイラー、レイヤー；魚類、例えば、サケ、マス、ティラピア、ナマズ、及びコイ；並びに、甲殻類、例えば小エビ及びエビが挙げられるが、これらに限定されない。更なる実施形態では、動物は、ウシ、子ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、バイソン、ムース、エルク、ヤク、水牛、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、カモシカ、エダツノカモシカ、及びニルガイが挙げられるが、これらに限定されない、反芻動物である。
【００７８】
この文脈では、用語「ペットフード」は、イヌ、ネコ、スナネズミ、ハムスター、チンチラ、ペット用ラット、モルモット；鳥類のペット、例えば、カナリア、インコ、及びオウム；爬虫類のペット、例えば、カメ、トカゲ、及びヘビ；水生のペット、例えば、熱帯魚及びカエルなどであるが、これらに限定されない、家庭用の動物用食品を意味すると理解されることを意図する。
【００７９】
用語「動物用飼料組成物」、「飼料」、及び「餌」は、互換的に使用され、ａ）小穀粒（例えば、小麦、大麦、ライ麦、オート麦、及びこれらの組み合わせ）並びに／又は大穀粒（例えば、トウモロコシ若しくはソルガム）などの穀物；ｂ）穀物由来の副産物、例えば、コーングルテンフィード、穀粒蒸留粕（ＤＤＧＳ）（特にトウモロコシ蒸留粕（ｃＤＤＧＳ）、小麦ヌカ、小麦中ふすま、小麦小ふすま、コメヌカ、もみ殻、オート麦殻、パーム核、及び柑橘パルプ；ｃ）大豆、ヒマワリ、ピーナッツ、ルピナス、エンドウ豆、ソラマメ、綿花、キャノーラ、魚肉、乾燥血漿タンパク質、肉及び骨粉、ジャガイモタンパク質、乳清、コプラ、ゴマなどの供給源から得られるタンパク質；ｄ）植物及び動物源から得られる油脂；ｅ）ミネラル及びビタミン、を含む群から選択される、１つ又は２つ以上の飼料材料を含んでよい。
【００８０】
繊維糊抜き組成物及び使用
更に意図されるのは、本顆粒組成物を用いる布地の処理（例えば、繊維の糊抜き）用組成物及び方法である。布地処理法は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第６，０７７，３１６号参照）。例えば、布地の感触や外観を、布地を溶液中の本顆粒組成物と接触させることを含む方法によって改善できる。布地を、加圧下で溶液と共に処理してよい。
【００８１】
繊維を織っている途中若しくはその後、又は糊抜き段階、若しくは、１つ若しくは２つ以上の追加の布地処理工程中に、本顆粒組成物を適用できる。繊維を織っている間、糸は、かなりの機械的ひずみに曝される。織機において織る前に、縦糸を糊付け用デンプン又はデンプン誘導体でコーティングし、引張り強度を増して、切断を防ぐことが多い。本顆粒組成物を織っている途中又はその後に適用し、この糊付け用デンプン又はデンプン誘導体を除去することができる。織り終わった後、均質で耐洗浄性の結果を確実にするために、本顆粒組成物を用いて、布地を更に処理する前に糊付けコーティングを除去できる。
【００８２】
本顆粒組成物は、例えば、水性組成物中で洗剤添加剤として、単独で、又は他の糊抜き用化学薬品及び／若しくは糊抜き用酵素と共に用いて、綿混生地などの布地の糊抜きをすることができる。本顆粒組成物は、藍染めデニム生地及び衣類にストーンウォッシュ加工を施す組成物及び方法においても、使用することができる。衣服の製造において、布地を切断して、衣服、つまり衣類に縫い上げ、その後仕上げをすることができる。特に、デニムジーンズの製造では、様々な酵素的仕上げ方法が開発されている。デニム衣類の仕上げは通常、衣類がデンプン分解酵素の作用を受けている間の、酵素的糊抜き工程によって始まり、布地に柔軟性をもたらして、後続の酵素的仕上げ工程に対して綿布をより利用しやすくする。本顆粒組成物は、デニム衣類の仕上げ（例えば、「バイオストーン工程」）、酵素的糊抜き、及び布地に柔軟性をもたらす方法において、並びに／又は仕上げ工程において、使用できる。
【００８３】
洗浄組成物
本組成物及び方法の態様は、本顆粒組成物を構成成分として含む洗浄組成物である。プロテアーゼポリペプチド、又はその他適切な酵素を、手洗い、洗濯機洗い、食器洗い、及びその他硬表面洗浄用の洗剤組成物中の構成成分として使用できる。
【００８４】
好ましくは、本顆粒組成物は、洗剤中でアミラーゼが従来使用される濃度で、又はそれに近い濃度で洗剤中に混合される。例えば、洗濯液／食器洗浄液１リットル当たり０．００００１〜１ｍｇ（純酵素タンパク質として計算）のアミラーゼに相当する量で、プロテアーゼポリペプチドを添加してよい。以下に例示するように、代表的な処方は本明細書で提供される。
【００８５】
プロテアーゼポリペプチドは、唯一の酵素として、又は、他のデンプン分解酵素を含むその他酵素と共に、洗剤組成物の構成成分であってよい。そのため、洗剤組成物中に、本顆粒組成物の形態で含まれてよい。この状況で使用されるとき、ワックス状コーティング材料の非限定例は、平均モル重量が１，０００〜２０，０００であるポリ（エチレンオキシド）産物（ポリエチレングリコール、ＰＥＧ）；１６〜５０個のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化ノニルフェノール；アルコールが１２〜２０個の炭素原子を含み、１５〜８０個のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化脂肪族アルコール；脂肪族アルコール；脂肪酸；並びに、脂肪酸のモノ−及びジ−及びトリグリセリドである。流動床法による適用に好適なフィルム形成コーティング材料の例は、例えば、英国特許第１４８３５９１号にある。
【００８６】
洗剤組成物は、１つ又は２つ以上の界面活性剤を含んでよく、これらはそれぞれアニオン性、非イオン性、カチオン性、又は双性イオン性であってよい。洗剤は通常、０％〜約５０％のアニオン性界面活性剤、例えば、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）；α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）；アルキルサルフェート（脂肪族アルコールサルフェート）（ＡＳ）；アルコールエトキシサルフェート（ＡＥＯＳ又はＡＥＳ）；第二級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）；α−スルホ脂肪酸メチルエステル；アルキル−若しくはアルケニルコハク酸；又は石鹸を含有する。この組成物は、０％〜約４０％の非イオン性界面活性剤、例えば、アルコールエトキシレート（ＡＥＯ又はＡＥ）、カルボキシル化アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、又はポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド（例えば、国際公開第９２／０６１５４号に記載）を含有してもよい。
【００８７】
洗剤組成物は、追加的に、１つ又は２つ以上のその他酵素、例えば、別のプロテアーゼ、別のデンプン分解酵素、クチナーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペルヒドラーゼ、マンナナーゼ、キシラナーゼ、ペルオキシダーゼ、及び／又はラッカーゼを、任意の組み合わせで含んでよい。
【００８８】
洗剤は、約１％〜約６５％の洗剤ビルダー又は錯化剤、例えば、ゼオライト、ジホスフェート、トリホスフェート、ホスホネート、シトレート、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＭＰＡ）、アルキル−又はアルケニルコハク酸、可溶性ケイ酸塩又は層状ケイ酸塩（例えば、ＨｏｅｃｈｓｔのＳＫＳ−６）を含有してよい。また洗剤は、ビルダーが加えられていない、すなわち、本質的に洗剤ビルダーを含まなくてもよい。酵素、及び具体的にはデンプン結合ドメインを含む、又は含まないアミラーゼを、洗濯及び食器洗い用途、表面洗浄剤などの様々な組成物中で、並びに、デンプン、つまりバイオマスからのエタノール産生用組成物中で使用できる。
【００８９】
洗剤は、１つ又は２つ以上のポリマーを含んでよい。例として、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、例えば、ポリアクリレート、マレイン／アクリル酸コポリマー、及びラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーが挙げられる。
【００９０】
洗剤は、過ホウ酸塩又は過炭酸塩などのＨ２Ｏ２源を含んでよく、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）又はノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）などの過酸生成漂白活性化剤と組み合わせてよい、漂白系を含有することができる。あるいは、漂白系は、ペルオキシ酸（例えば、アミド、イミド、又はスルホン型のペルオキシ酸）を含んでよい。漂白系は、酵素的漂白系、例えば、国際公開第２００５／０５６７８３号に記載されるものなどのペルヒドラーゼであってもよい。
【００９１】
洗剤組成物の酵素は、従来の安定化剤、例えば、プロピレングリコール又はグリセロールなどのポリオール；糖又は糖アルコール；乳酸；ホウ酸又は、例えば、芳香族ホウ酸エステルなどのホウ酸誘導体を用いて安定化してよく、組成物は、例えば、国際公開第９２／１９７０９号及び同第９２／１９７０８号に記載されるように配合してよい。
【００９２】
また洗剤は、例えば、粘土、起泡増進剤、泡抑制剤、防食剤、汚れ懸濁化剤、汚れ再付着防止剤、染料、殺菌剤、くもり阻害剤、蛍光増白剤、又は香料を含む、布地コンディショナーなどの他の従来の洗剤成分を含有してもよい。
【００９３】
ｐＨ（水溶液中で使用濃度において測定）は、通常は中性又はアルカリ性、例えば、ｐＨ約７．０〜約１１．０である。
【００９４】
本教示に含まれる洗剤組成物の特定の形態を、以下に記載する。
【００９５】
重質乾燥／固形（ＨＤＤ）洗濯洗剤組成物
代表的なＨＤＤ洗濯洗剤組成物は、アニオン性洗浄性界面活性剤（例えば、直鎖若しくは分枝鎖又はランダム鎖の、置換若しくは非置換アルキルサルフェート、アルキルスルホネート、アルキルアルコキシル化サルフェート、アルキルホスフェート、アルキルホスホネート、アルキルカルボキシレート、及び／又は、これらの混合物）、非イオン性洗浄性界面活性剤（例えば、直鎖、若しくは分枝鎖若しくはランダム鎖の、置換若しくは非置換Ｃ８〜Ｃ１８アルキルエトキシレート、及び／又はＣ６〜Ｃ１２アルキルフェノールアルコキシレート）、カチオン性洗浄性界面活性剤（例えば、アルキルピリジニウム化合物、アルキル四級アンモニウム化合物、アルキル四級ホスホニウム化合物、アルキル三級スルホニウム化合物、及びこれらの混合物）、双性イオン性及び／又は両性洗浄性界面活性剤（例えば、アルカノールアミンスルホ−ベタイン）、両性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤、及びこれらの混合物を含む、洗浄性界面活性剤；ホスフェートを含まないビルダー（例えば、ゼオライトビルダー、これらの例には、０重量％〜１０重量％未満の範囲のゼオライトＡ、ゼオライトＸ、ゼオライトＰ及びゼオライトＭＡＰが含まれる）、ホスフェートビルダー（例えば、０重量％〜１０重量％未満の範囲のトリポリリン酸ナトリウム）、クエン酸、クエン酸塩、及びニトリロ三酢酸、ケイ酸塩（例えば、０重量％〜１０重量％未満の範囲のケイ酸ナトリウム若しくはカリウム、又は、メタケイ酸ナトリウム、又は、層状ケイ酸塩（ＳＫＳ−６））を含む、ビルダー；カルボネート塩（例えば、０重量％〜８０重量％未満の範囲の炭酸ナトリウム及び／又は重炭酸ナトリウム）；並びに、光漂白剤（例えば、スルホン化フタロシアニン亜鉛、スルホン化フタロシアニンアルミニウム、キサンテン系染料、及びこれらの混合物）、疎水性又は親水性漂白活性化剤（例えば、ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシ安息香酸、又はこれらの塩、３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン−ＴＡＥＤ、ノナノイルオキシベンゼンスルホネート−ＮＯＢＳ、二トリルクアット、及びこれらの混合物）、過酸化水素源（例えば、無機過水和塩、これらの例には、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩、又は過ケイ酸塩の一又は四水和物ナトリウム塩が含まれる）、予生成された親水性及び／又は疎水性過酸（例えば、過カルボン酸及び塩、過炭酸及び塩、過イミド酸及び塩、ペルオキシ一硫酸及び塩、並びにこれらの混合物）、及び／又は、漂白触媒（例えば、イミン漂白強化剤（これらの例には、イミニウムカチオン及びポリイオンが含まれる）、イミニウム双性イオン、変性アミン、変性アミンオキシド、Ｎ−スルホニルイミン、Ｎ−ホスホニルイミン、Ｎ−アシルイミン、チアジアゾールジオキシド、ペルフルオロイミン、環状糖ケトン、及びこれらの混合物）、並びに、金属含有漂白触媒（例えば、亜鉛又はアルミニウムなどの補助金属カチオン、及びエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン四（メチレンホスホン酸）などの封鎖剤と併せた、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、又はマンガンカチオン、及びこれらの水溶性塩）を含む、漂白剤、を含む。
【００９６】
組成物は、好ましくは、酵素、例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、クチナーゼ、ラッカーゼ、ホスホリパーゼ、リゾホスホリパーゼ、アシルトランスフェラーゼ、ペルヒドラーゼ、アリールエステラーゼ、及びこれらの任意の混合物を含む。
【００９７】
組成物は、香料マイクロカプセル、デンプンで封入した香料アコード、色調剤、布地一体化カチオン性ポリマーなどの追加のポリマー、染料固定成分、布地用柔軟剤、増白剤（例えば、Ｃ．Ｉ．蛍光増白剤）、凝集剤、キレート剤、アルコキシル化ポリアミン、布地付着助剤、及び／又はシクロデキストリンを含む、追加の洗剤成分を任意に含んでよい。
【００９８】
自動食器洗い（ＡＤＷ）洗剤組成物
代表的なＡＤＷ洗剤組成物は、０〜１０重量％の量で存在する、エトキシ化非イオン性界面活性剤、アルコールアルコキシル化界面活性剤、エポキシ末端保護化ポリ（オキシアルキル化）アルコール、又はアミンオキシド界面活性剤を含む、非イオン性界面活性剤；５〜６０％の範囲の、ホスフェートビルダー（例えば、モノ−ホスフェート、ジ−ホスフェート、トリポリリン酸、その他オリゴマーポリホスフェート、ナトリウムトリポリホスフェート−ＳＴＰＰ）及びホスフェートを含まないビルダー（例えば、０．５重量％〜５０重量％の範囲の、アミノ酸系化合物、例えば、メチル−グリシン−二酢酸（ＭＧＤＡ）並びにこれらの塩及び誘導体、グルタミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）並びにこれらの塩及び誘導体、イミノ二コハク酸（ＩＤＳ）並びにこれらの塩及び誘導体、カルボキシメチルイヌリン並びにこれらの塩及び誘導体、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、Ｂ−アラニン二酢酸（Ｂ−ＡＤＡ）及びこれらの塩、ポリ−カルボン酸のホモポリマー及びコポリマー並びにこれらの部分的又は完全に中和した塩、モノマーポリカルボン酸及びヒドロキシカルボン酸、並びにこれらの塩）を含む、ビルダー；寸法安定性をもたらす、約０．１重量％〜約５０重量％の範囲のスルホネート化／カルボキシル化ポリマー；約０．１重量％〜約１０重量％の範囲の乾燥助剤（例えば、ポリエステル、特にアニオン性ポリエステルであって、任意に３〜６個の官能基（典型的には、重縮合をもたらす酸、アルコール又はエステル官能基）を有する更なるモノマーを共に有するもの、ポリカルボネート−、ポリウレタン−及び／又は、ポリ尿素−ポリオルガノシロキサン化合物、又はこれらの前駆化合物、特に反応性環状カルボネート及び尿素タイプのもの）；約１％〜約２０重量％の範囲のケイ酸塩（ケイ酸ナトリウム又はカリウム、例えば、二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム、及び結晶性フィロケイ酸塩を含む）；無機漂白剤（例えば、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩、及び過ケイ酸塩などの、過水和塩）及び有機漂白剤（例えば、ジペルオキシドデカン二酸、ジペルオキシテトラデカン二酸、及びジペルオキシヘキサデカン二酸などの過酸化ジアシル及びテトラアシルを含む、有機ペルオキシ酸、）；漂白活性化剤（すなわち、約０．１％〜約１０重量％の範囲の有機過酸前駆物質）；漂白触媒（例えば、マンガントリアザシクロノナン及び関連錯体、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｍｎ、及びＦｅビスピリジルアミン並びに関連錯体、並びに、ペンタミンアセテートコバルト（ＩＩＩ）及び関連錯体）；約０．１％〜５重量％の範囲の金属ケア剤（例えば、ベンゾトリアゾール（benzatriazoles）、金属塩及び錯体、及び／又はケイ酸塩）；自動食器洗い洗剤組成物１ｇ当たりの活性酵素が約０．０１〜５．０ｍｇの範囲の酵素（例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、クチナーゼ、ラッカーゼ、ホスホリパーゼ、リゾホスホリパーゼ、アシルトランスフェラーゼ、ペルヒドラーゼ、アリールエステラーゼ、及びこれらの混合物）；並びに、酵素安定化剤成分（例���ば、オリゴ糖類、多糖類、及び無機二価金属塩）、を含む。
【００９９】
追加の洗剤組成物
本顆粒組成物中で任意の様々な適切な酵素を添加できる追加の代表的な洗剤配合物を、番号をつけた項目において以下に記載する。
１）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約７％〜約１２％；アルコールエトキシサルフェート（例えば、Ｃ１２〜１８アルコール、１〜２個のエチレンオキシド（ＥＯ））又はアルキルサルフェート（例えば、Ｃ１６〜１８）を約１％〜約４％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１４〜１５アルコール、７個のＥＯ）を約５％〜約９％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約１４％〜約２０％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約２〜約６％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約１５％〜約２２％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を０％〜約６％；クエン酸ナトリウム／クエン酸（例えば、Ｃ６Ｈ５Ｎａ３Ｏ７／Ｃ６Ｈ８Ｏ７）を約０％〜約１５％；過ホウ酸ナトリウム（例えば、ＮａＢＯ３Ｈ２Ｏ）を約１１％〜約１８％；ＴＡＥＤを約２％〜約６％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約２％；ポリマー（例えば、マレイン／アクリル酸、コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）を０〜３％；酵素（純酵素として計算）を０．０００１〜０．１％のタンパク質；及び、微量成分（例えば、泡抑制剤、香料、蛍光増白剤、光漂白剤）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
２）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約６％〜約１１％；アルコールエトキシサルフェート（例えば、Ｃ１２〜１８アルコール、１〜２個のＥＯ）又はアルキルサルフェート（例えば、Ｃ１６〜１８）を約１％〜約３％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１４〜１５アルコール、７個のＥＯ）を約５％〜約９％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約１５％〜約２１％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約１％〜約４％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約２４％〜約３４％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を約４％〜約１０％；クエン酸ナトリウム／クエン酸（例えば、Ｃ６Ｈ５Ｎａ３Ｏ７／Ｃ６Ｈ８Ｏ７）を０％〜約１５％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約２％；ポリマー（例えば、マレイン／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）を１〜６％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；微量成分（例えば、泡抑制剤、香料）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
３）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約５％〜約９％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、７個のＥＯ）を約７％〜約１４％；脂肪酸として石鹸（例えば、Ｃ１６〜２２脂肪酸）を約１〜約３％；炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３として）を約１０％〜約１７％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約３％〜約９％；ゼオライト（ＮａＡｌＳｉＯ４として）を約２３％〜約３３％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を０％〜約４％；過ホウ酸ナトリウム（例えば、ＮａＢＯ３Ｈ２Ｏ）を約８％〜約１６％；ＴＡＥＤを約２％〜約８％；ホスホネート（例えば、ＥＤＴＭＰＡ）を０％〜約１％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約２％；ポリマー（例えば、マレイン／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）を０〜３％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；微量成分（例えば、泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
４）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約８％〜約１２％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、７個のＥＯ）を約１０％〜約２５％；炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３として）を約１４％〜約２２％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約１％〜約５％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約２５％〜約３５％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を０％〜約１０％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約２％；ポリマー（例えば、マレイン／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）を１〜３％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、泡抑制剤、香料）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
５）直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約１５％〜約２１％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、７個のＥＯ又はＣ１２〜１５アルコール、５個のＥＯ）を約１２％〜約１８％；脂肪酸として石鹸（例えば、オレイン酸）を約３％〜約１３％；アルケニルコハク酸（Ｃ１２〜１４）を０％〜約１３％；アミノエタノールを約８％〜約１８％；クエン酸を約２％〜約８％；ホスホネートを０％〜約３％；ポリマー（例えば、ＰＶＰ、ＰＥＧ）を０％〜約３％；ボレート（例えば、Ｂ４Ｏ７）を０％〜約２％；エタノールを０％〜約３％；プロピレングリコールを約８％〜約１４％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、分散剤、泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）を０〜５％、を含む、水性液体洗剤組成物。
６）直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約１５％〜約２１％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、７個のＥＯ、又はＣ１２〜１５アルコール、５個のＥＯ）を３〜９％；脂肪酸として石鹸（例えば、オレイン酸）を約３％〜約１０％；ゼオライト（ＮａＡｌＳｉＯ４として）を約１４％〜約２２％；カリウムシトレートを約９％〜約１８％；ボレート（例えば、Ｂ４Ｏ７）を０％〜約２％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約２％；ポリマー（例えば、ＰＥＧ、ＰＶＰ）を０％〜約３％；アンカーポリマー（例えば、ラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー；モル比２５：１、ＭＷ  ３８００）を０％〜約３％；グリセロールを０％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、分散剤、泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）を０〜５％、を含む、水性構造化液体洗剤組成物。
７）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、脂肪族アルコールサルフェートを約５％〜約１０％；エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミドを約３％〜約９％；脂肪酸として石鹸を０〜３％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約５％〜約１０％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約１％〜約４％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約２０％〜約４０％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を約２％〜約８％；過ホウ酸ナトリウム（例えば、ＮａＢＯ３Ｈ２Ｏ）を約１２％〜約１８％；ＴＡＥＤを約２％〜約７％；ポリマー（例えば、マレイン／アクリル酸コポリマー、ＰＥＧ）を約１％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、蛍光増白剤、泡抑制剤、香料）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
８）直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約８％〜約１４％；エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミドを約５％〜約１１％；脂肪酸として石鹸を０％〜約３％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約４％〜約１０％；可溶性ケイ酸塩（Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約１％〜約４％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約３０％〜約５０％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を約３％〜約１１％；クエン酸ナトリウム（例えば、Ｃ６Ｈ５Ｎａ３Ｏ７）を約５％〜約１２％；ポリマー（例えば、ＰＶＰ、マレイン／アクリル酸コポリマー、ＰＥＧ）を約１％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、泡抑制剤、香料）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
９）直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約６％〜約１２％；非イオン性界面活性剤を約１％〜約４％；脂肪酸として石鹸を約２％〜約６％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約１４％〜約２２％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約１８％〜約３２％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を約５％〜約２０％；クエン酸ナトリウム（例えば、Ｃ６Ｈ５Ｎａ３Ｏ７）を約３％〜約８％；過ホウ酸ナトリウム（例えば、ＮａＢＯ３Ｈ２Ｏ）を約４％〜約９％；漂白活性化剤（例えば、ＮＯＢＳ又はＴＡＥＤ）を約１％〜約５％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約２％；ポリマー（例えば、ポリカルボキシレート又はＰＥＧ）を約１％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、蛍光増白剤、香料）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
１０）直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約１５％〜約２３％；アルコールエトキシサルフェート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、２〜３個のＥＯ）を約８％〜約１５％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、７個のＥＯ、又はＣ１２〜１５アルコール、５個のＥＯ）を約３％〜約９％；脂肪酸として石鹸（例えば、ラウリン酸）を０％〜約３％；アミノエタノールを約１％〜約５％；クエン酸ナトリウムを約５％〜約１０％；ヒドロトロープ（例えば、ナトリウムトルエンスルホネート）を約２％〜約６％；ボレート（例えば、Ｂ４Ｏ７）を０％〜約２％；カルボキシメチルセルロースを０％〜約１％；エタノールを約１％〜約３％；プロピレングリコールを約２％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、ポリマー、分散剤、香料、蛍光増白剤）を０〜５％、を含む、水性液体洗剤組成物。
１１）直鎖アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）を約２０％〜約３２％；アルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２〜１５アルコール、７個のＥＯ、又はＣ１２〜１５アルコール、５個のＥＯ）を６〜１２％；アミノエタノールを約２％〜約６％；クエン酸を約８％〜約１４％；ボレート（例えば、Ｂ４Ｏ７）を約１％〜約３％；ポリマー（例えば、マレイン／アクリル酸コポリマー、アンカーポリマー、例えば、ラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーなど）を０％〜約３％；グリセロールを約３％〜約８％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、ヒドロトロープ、分散剤、香料、蛍光増白剤）を０〜５％、を含む、水性液体洗剤組成物。
１２）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、アニオン性界面活性剤（直鎖アルキルベンゼンスルホネート、アルキルサルフェート、α−オレフィンスルホネート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルカンスルホネート、石鹸）を約２５％〜約４０％；非イオン性界面活性剤（例えば、アルコールエトキシレート）を約１％〜約１０％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約８％〜約２５％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を約５％〜約１５％；硫酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＳＯ４）を０％〜約５％；ゼオライト（ＮａＡｌＳｉＯ４）を約１５％〜約２８％；過ホウ酸ナトリウム（例えば、ＮａＢＯ３・４Ｈ２Ｏ）を０％〜約２０％；漂白活性化剤（ＴＡＥＤ又はＮＯＢＳ）を約０％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；微量成分（例えば、香料、蛍光増白剤）を０〜３％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
１３）直鎖アルキルベンゼンスルホネートの全部又は一部が、（Ｃ１２〜Ｃ１８）アルキルサルフェートに置き換えられる、上記組成物１）〜１２）に記載の洗剤組成物。
１４）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、（Ｃ１２〜Ｃ１８）アルキルサルフェートを約９％〜約１５％；アルコールエトキシレートを約３％〜約６％；ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミドを約１％〜約５％；ゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）を約１０％〜約２０％；層状二ケイ酸塩（例えば、ＨｏｅｃｈｓｔのＳＫ５６）を約１０％〜約２０％；炭酸ナトリウム（例えば、Ｎａ２ＣＯ３）を約３％〜約１２％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を０％〜約６％；クエン酸ナトリウムを約４％〜約８％；過炭酸ナトリウムを約１３％〜約２２％；ＴＡＥＤを約３％〜約８％；ポリマー（例えば、ポリカルボキシレート及びＰＶＰ）を０％〜約５％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、蛍光増白剤、光漂白剤、香料、泡抑制剤）を０〜５％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
１５）少なくとも６００ｇ／Ｌの嵩密度を有し、（Ｃ１２〜Ｃ１８）アルキルサルフェートを約４％〜約８％；アルコールエトキシレートを約１１％〜約１５％；石鹸を約１％〜約４％；ゼオライトＭＡＰ又はゼオライトＡを約３５％〜約４５％；炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３として）を約２％〜約８％；可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ、２ＳｉＯ２）を０％〜約４％；過炭酸ナトリウムを約１３％〜約２２％；ＴＡＥＤを１〜８％；カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を０％〜約３％；ポリマー（例えば、ポリカルボキシレート及びＰＶＰ）を０％〜約３％；酵素（純酵素タンパク質として計算）を０．０００１〜０．１％；及び、微量成分（例えば、蛍光増白剤、ホスホネート、香料）を０〜３％、を含む、顆粒として配合された洗剤組成物。
１６）安定化した、又は封入した過酸を、追加成分として、又は、すでに規定した漂白剤系の代わりとして含有する、上記１）〜１５）に記載の洗剤配合物。
１７）過ホウ酸塩が過炭酸塩に置き換えられる、上記１）、３）、７）、９）、及び１２）に記載の洗剤組成物。
１８）追加的にマンガン触媒を含有する、上記１）、３）、７）、９）、１２）、１４）、及び１５）に記載の洗剤組成物。マンガン触媒は、例えば、「Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｃａｔａｌｙｓｔｓ  ｆｏｒ  ｌｏｗ−ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｂｌｅａｃｈｉｎｇ」，Ｎａｔｕｒｅ  ３６９：６３７〜６３９（１９９４）に記載される化合物のうちの１つである。
１９）例えば、直鎖アルコキシル化一級アルコールなどの液体非イオン性界面活性剤と、ビルダー系（例えば、ホスフェート）と、酵素（１つ又は複数）と、アルカリと、を含む、非水性洗剤液として配合される洗剤組成物。この洗剤は、アニオン性界面活性剤及び／又は漂白剤系も含んでよい。
【０１００】
上記のように、本酵素を、洗剤中で通常使用される濃度で含んでよい。今のところ、洗剤組成物において、酵素は、洗浄液１リットル当たり、０．００００１〜１．０ｍｇ（純酵素タンパク質として計算）の酵素ポリペプチドに相当する量で添加し得ると意図される。
【０１０１】
洗剤組成物は、その他従来の洗剤成分、例えば、解こう物質、充填物質、泡抑制剤、防食剤、汚れ懸濁化剤、金属イオン封鎖剤、汚れ再付着防止剤、脱水剤、染料、殺菌剤、蛍光剤、増粘剤、及び香料を含有してもよい。
【０１０２】
洗剤組成物は、染みの付いた布地の前処理に好適な洗濯用添加剤組成物、及びすすぎ液に添加する布地柔軟剤組成物を含む、手洗い（手動）若しくは洗濯機（自動）用洗濯洗剤組成物として配合されてよく、又は、一般的な家庭用硬表面洗浄作業に使用する洗剤組成物として配合されてよく、又は、手洗い若しくは食洗器による食器洗い作業用に配合されてよい。
【０１０３】
本明細書に記載される任意の洗浄組成物は、任意の数の追加の酵素を含んでよい。一般に、酵素は、選択された洗剤（例えば、至適ｐＨ、他の酵素成分及び非酵素成分への適合性などについて）と適合しなくてはならず、また酵素は、有効量で存在しなくてはならない。以下の酵素を例として記載する。
【０１０４】
プロテアーゼ：好適なプロテアーゼとして、動物、植物、又は微生物源のものが挙げられる。化学修飾された、又はタンパク質操作を受けた変異体、並びに自然に加工されたタンパク質が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ又はメタロプロテアーゼ、アルカリ性微生物プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、又はキモトリプシン様プロテアーゼであってよい。アルカリ性プロテアーゼの例は、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ由来のサブチリシンであり、例えば、サブチリシンＮｏｖｏ、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７、及びサブチリシン１６８である（例えば、国際公開第８９／０６２７９号参照）。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（例えば、ブタ又はウシ由来）、及びＦｕｓａｒｉｕｍプロテアーゼ（例えば、国際公開第８９／０６２７０号及び同第９４／２５５８３号参照）。更に有用なプロテアーゼとして、国際公開第９２／１９７２９号、同第９８／２０１１５号、同第９８／２０１１６号、及び同第９８／３４９４６号に記載される変異体も挙げられるが、これらに限定されない。市販のプロテアーゼ酵素として、ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ（商標）、ＤＵＲＡＬＡＳＥ（商標）、ＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（商標）、及びＢＬＡＺＥ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）；ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ（商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ  ＯＸＰ（商標）、ＦＮ２（商標）、及びＦＮ３（商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ  ＵＳ  Ｉｎｃ．）が挙げられるが、これらに限定されない。その他代表的なプロテアーゼとして、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｉｆａｃｉｅｎｓ由来のＮｐｒＥ、及びＣｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ種の６９Ｂ４系由来のＡＳＰが挙げられる。
【０１０５】
リパーゼ：好適なリパーゼとして、細菌又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された、タンパク質分解的に修飾された、又はタンパク質操作を受けた変異体が含まれる。有用なリパーゼの例として、Ｈｕｍｉｃｏｌａ（別名Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）由来のリパーゼ、例えば、Ｈ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）由来（例えば、欧州特許第２５８０６８号及び同第３０５２１６号参照）、Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ由来（例えば、国際公開第９６／１３５８０号参照）；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓのリパーゼ（例えば、Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ又はＰ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ；例えば、欧州特許第２１８２７２号参照）、Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ（例えば、欧州特許第３３１  ３７６号参照）、Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ（例えば、英国特許第１，３７２，０３４号参照）、Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種ＳＤ７０５系（例えば、国際公開第９５／０６７２０号及び同第９６／２７００２号参照）、Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ（例えば、国際公開第９６／１２０１２号参照）；Ｂａｃｉｌｌｕｓのリパーゼ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来；例えば、Ｄａｒｔｏｉｓｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１１３１：２５３〜３６０（１９９３）参照）、Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、特表昭６４／７４４９９２号参照）、又は、Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ（例えば、国際公開第９１／１６４２２号参照）が挙げられるが、これらに限定されない。配合物での使用が意図される追加のリパーゼ変異体として、例えば、国際公開第９２／０５２４９号、同第９４／０１５４１号、同第９５／３５３８１号、同第９６／００２９２号、同第９５／３０７４４号、同第９４／２５５７８号、同第９５／１４７８３号、同第９５／２２６１５号、同第９７／０４０７９号、同第９７／０７２０２号、欧州特許第４０７２２５号、及び同第２６０１０５号に記載されるものが挙げられる。一部の市販のリパーゼ酵素として、ＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）及びＬＩＰＯＬＡＳＥ  ＵＬＴＲＡ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【０１０６】
ポリエステラーゼ：例えば、国際公開第０１／３４８９９号、同第０１／１４６２９号、及び米国特許第６９３３１４０号に記載されるものなど、好適なポリエステラーゼを組成物に含めてもよい。
【０１０７】
アミラーゼ：組成物を、非産生強化アミラーゼなどのアミラーゼと組み合わせてもよい。これらには、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）及びＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）；ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、及びＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ  ＵＳ  Ｉｎｃ．）などであるが、これらに限定されない市販のアミラーゼを含んでよい。
【０１０８】
セルラーゼ：セルラーゼを組成物に添加できる。好適なセルラーゼとして、細菌又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された、又はタンパク質操作を受けた変異体が含まれる。好適なセルラーゼとして、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｈｕｍｉｃｏｌａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ属由来のセルラーゼ、例えば、Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ及びＦｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍから産生される真菌セルラーゼ（例えば、米国特許第４，４３５，３０７号、同第５，６４８，２６３号、同第５，６９１，１７８号、同第５，７７６，７５７号、及び国際公開第８９／０９２５９号に開示）が挙げられる。使用が意図される代表的なセルラーゼは、繊維の色処置利益を有するものである。かかるセルラーゼの例は、例えば、欧州特許第０４９５２５７号、同第０５３１３７２号、国際公開第９６／１１２６２号、同第９６／２９３９７号、及び同第９８／０８９４０号に記載のセルラーゼである。その他の例は、国際公開第９４／０７９９８号、同第９８／１２３０７号、同第９５／２４４７１号、国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号、欧州特許第５３１３１５号、米国特許第５，４５７，０４６号、同第５，６８６，５９３号、及び同第５，７６３，２５４号に記載されるものなどの、セルラーゼ変異体である。市販のセルラーゼとして、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）及びＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）；及びＰＵＲＡＤＡＸ  ＨＡ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ  ＵＳ  Ｉｎｃ．）；及び、ＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（Ｋａｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が挙げられる。
【０１０９】
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：組成物中で使用が意図される好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼとして、植物、細菌、又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された、又はタンパク質操作を受けた変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例として、Ｃｏｐｒｉｎｕｓ由来、例えば、Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ由来のペルオキシダーゼ、並びに、国際公開第９３／２４６１８号、同第９５／１０６０２号、及び同第９８／１５２５７号に記載のものなどの、これらの変異体が挙げられる。市販のペルオキシダーゼとして、例えば、ＧＵＡＲＤＺＹＭＥ（商標）（ＮＯＶＯ  ＮＯＲＤＩＳＫ  Ａ／Ｓ及びＮＯＶｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【０１１０】
洗剤組成物は、家庭及び／又は工場での繊維／洗濯物に存在するバイオフィルムを除去／洗浄するのに有効な、２，６−β−Ｄ−フルクタン加水分解酵素を含んでもよい。
【０１１１】
洗剤酵素（１つ又は複数）は、１つ又は２つ以上の酵素を含有する別々の添加剤を添加することによって、又は、これらの酵素の全てを含む混合添加剤を添加することによって、洗剤組成物に含めてよい。洗剤添加剤、すなわち、別々の添加剤又は混合添加剤は、例えば、顆粒、液体、スラリーなどとして、配合してよい。代表的な洗剤添加剤配合物として、顆粒、特に非ダスト性顆粒、液体、特に安定化液体、又はスラリーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
例えば、米国特許第４，１０６，９９１号及び同第４，６６１，４５２号に開示されるように、低ダスト性顆粒を作製して本顆粒組成物と加えることができ、当該技術分野において既知の方法で任意にコーティングできる。ワックス状コーティング材料の例は、平均モル重量が１，０００〜２０，０００であるポリ（エチレンオキシド）産物（例えば、ポリエチレングリコール、ＰＥＧ）；１６〜５０個のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化ノニルフェノール；アルコールが１２〜２０個の炭素原子を含み、１５〜８０個のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化脂肪族アルコール；脂肪族アルコール；脂肪酸；並びに、脂肪酸のモノ−及びジ−及びトリグリセリドである。流動床法による適用に好適なフィルム形成コーティング材料の例は、例えば、英国特許第１４８３５９１号にある。液体酵素調製物を、例えば、確立された方法によって、プロピレングリコールなどのポリオール、糖又は糖アルコール、乳酸又はホウ酸を添加することによって、安定化させてよい。
【０１１３】
洗剤組成物は、例えば、バー、タブレット、粉末、顆粒、ペースト、又は液体の、任意の都合のよい形態であってよい。液体洗剤は、典型的には、最大約７０％の水と、０％〜約３０％の有機溶媒と、を含む、水性であってよい。約３０％以下の水を含むコンパクト洗剤ゲルも意図される。洗剤組成物は、半極性を含む非イオン性、及び／又はアニオン性、及び／又はカチオン性、及び／又は双性イオン性であり得る、１つ又は２つ以上の界面活性剤を任意に含んでよい。界面活性剤は、約０．１％〜約６０重量％の広範囲で存在してよい。
【０１１４】
含まれるとき、洗剤は、典型的には、約１％〜約４０％のアニオン性界面活性剤、例えば、直鎖アルキルベンゼンスルホネート、α−オレフィンスルホネート、アルキルサルフェート（脂肪族アルコールサルフェート）、アルコールエトキシサルフェート、第二級アルカンスルホネート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル−若しくはアルケニルコハク酸、又は石鹸を含有する。
【０１１５】
含まれるとき、洗剤は、通常は、約０．２％〜約４０％の非イオン性界面活性剤、例えば、アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又はグルコサミン（「グルカミド」）のＮ−アシル−Ｎ−アルキル誘導体を含有する。
【０１１６】
洗剤は、０％〜約６５％の洗剤ビルダー又は錯化剤、例えば、ゼオライト、ジホスフェート、トリホスフェート、ホスホネート、カルボネート、シトレート、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸、アルキル−又はアルケニルコハク酸、可溶性ケイ酸塩又は層状ケイ酸塩（例えば、ＨｏｅｃｈｓｔのＳＫＳ−６）を含有してよい。
【０１１７】
洗剤は、１つ又は２つ以上のポリマーを含んでよい。代表的なポリマーとして、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピリジン−Ｎ−オキシド）、ポリ（ビニルイミダゾール）、ポリカルボキシレート、例えば、ポリアクリレート、マレイン／アクリル酸コポリマー、及びラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーが挙げられる。
【０１１８】
洗剤組成物の酵素は、従来の安定化剤、例えば、ポリオール（例えば、プロピレングリコール又はグリセロール）、糖又は糖アルコール、乳酸、ホウ酸、又はホウ酸誘導体（例えば、芳香族ホウ酸エステル）、又はフェニルボロン酸誘導体（例えば、４−ホルミルフェニルボロン酸）を用いて安定化してよい。組成物は、国際公開第９２／１９７０９号及び同第９２／１９７０８号に記載のように配合してよい。
【０１１９】
酵素含有洗剤組成物では、洗浄液１リットル当たり約０．０１〜約１００ｍｇの酵素タンパク質（例えば、洗浄液１リットル当たり約０．０５〜約５．０ｍｇの酵素タンパク質、又は洗浄液１リットル当たり０．１〜約１．０ｍｇの酵素タンパク質）に相当する量で添加できることが意図される。
【０１２０】
本組成物及び方法を以下に詳細に記載されているが、様々な変更を加えてよいことが理解されるであろう。
【０１２１】
多くの酵素洗浄アッセイは、試験用布片及び試験用小布片アッセイなどの当該技術分野において既知のものである。
【０１２２】
醸造用組成物
本顆粒組成物は、発酵飲料の提供プロセス、例えばビール醸造で使用される、醸造用組成物の構成成分であってよい。非発酵性炭水化物は、最終ビール中に溶解された固形分の大部分を形成すると考えられる。麦芽アミラーゼが、デンプンのα−１，６−結合を加水分解できないために、この残渣が残る。非発酵性炭水化物は、ビール約３４０グラム（１２オンス）辺り、約５０カロリーをもたらす。本顆粒組成物は、通常はグルコアミラーゼと、並びに任意にプルラナーゼ及び／又はイソアミラーゼと組み合わせて、デンプンをデキストリン及び発酵性糖に変換し、最終ビール中に残留する非発酵性炭水化物を低下させるのに役立つ。
【０１２３】
これら飲料の製造に使用される主な原材料は、水、ホップ、及び麦芽である。加えて、更には以下のものに限って、副原料、例えば、一般的なコーングリッツ、精製コーングリッツ、粉砕されたビール酵母、米、ソルガム、精製トウモロコシデンプン、大麦、大麦デンプン、脱穀した大麦、小麦、小麦デンプン、焙燥した穀物、穀物フレーク、ライ麦、オート麦、ジャガイモ、タピオカ、並びに、コーンシロップ、サトウキビシロップ、転化糖シロップ、大麦及び／又は小麦シロップなどのシロップ、並びにその他同種のものも、デンプン源として使用できる。
【０１２４】
多くの理由により、選択された様々な大麦から主に製造される麦芽は、ビールの全般的特長及び品質に重大な影響を及ぼす。第１に、麦芽は、ビールの主な着香料である。第２に、麦芽は、発酵性糖の大部分を供給する。第３に、麦芽は、ビールのボディ及び泡の特徴に寄与する、タンパク質を供給する。第４に、麦芽は、麦のすりつぶし中に必要な酵素活性を提供する。ホップも、フレーバーなどのビールの品質に非常に貢献する。特に、ホップ（又はホップ成分）は、ビールに望ましい苦味物質を加える。更に、ホップは、タンパク質沈殿剤として作用し、防腐性をもたらし、泡形成及び安定化に役立つことができる。
【０１２５】
穀物（穀粒）、例えば、大麦、オート麦、小麦、更に、トウモロコシ及び米は、多くの場合、産業醸造及び自家醸造の両方において、ビール醸造で用いられるが、その他の植物成分、例えば、ホップも、加えられることが多い。ビール醸造に使用される構成成分は、麦芽にしなくても、又は麦芽にしてもよく、すなわち、部分的に発芽させ、その結果、α−アミラーゼなどの酵素の量を上昇させる。ビール醸造の成功には、発酵のための適当な糖レベルと確実にするため、適当な量のα−アミラーゼ酵素活性が必要である。本顆粒組成物も、ビール醸造に使用される成分に添加してよい。
【０１２６】
本明細書で使用するとき、用語「ストック」は、粉砕又は砕かれる穀粒及び植物構成成分を意味する。例えば、ビール製造に使用される大麦は、粗く挽かれ、つまり粉砕されており、発酵のためのすりつぶした麦の作製に適切な稠度をもたらす穀粒である。本明細書で使用するとき、用語「ストック」は、粉砕された、つまり粗く挽かれた形態の、上記種類のうち任意の植物及び穀粒を含む。本明細書に記載される方法を用いて、粉及びストックの両方におけるα−アミラーゼ活性レベルを測定できる。
【０１２７】
ビールの製造プロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ｋｕｎｚｅ（２００４）「Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｂｒｅｗｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｌｔｉｎｇ」，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｅａｃｈｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｒｅｗｉｎｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（ＶＬＢ），３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎを参照されたい。簡潔にいうと、このプロセスは、（ａ）すりつぶした麦を準備することと、（ｂ）すりつぶした麦を濾過して麦汁を準備することと、（ｃ）麦汁を発酵させてビールなどの発酵飲料を得ることと、を含む。典型的には、ミル挽き又は粉砕された麦芽、麦芽及び副原料、又は副原料を水と混合して、制御温度下で一定時間保持し、麦芽及び／又は副原料中に存在する酵素によって、麦芽中に存在するデンプンを発酵性糖に変換させる。その後、すりつぶした麦をすりつぶした麦用のフィルターに移し、液体を穀粒残渣から分離する。この甘い液体を「麦汁」と呼び、残った穀粒残渣を「ビール粕」と呼ぶ。すりつぶした麦を、典型的には、残留する可溶性抽出物をビール粕から回収するために、すりつぶした麦に水を加えることを含む、抽出工程にかける。その後、麦汁を激しく沸騰させて麦汁を滅菌し、色、フレーバー、及び香りが生じるのを促進する。沸騰中のどこかの時点でホップを添加する。麦汁を冷却し、発酵槽に移す。
【０１２８】
続いて、麦汁を発酵槽中で酵母に接触させる。発酵槽を冷却して、発酵をとめてもよい。凝集し得る酵母を除去する。最後に、ビールを冷却して、ビールが澄明化し、フレーバーが発生する間一定時間保存し、ビールの外観、フレーバー、及び貯蔵寿命を損なう可能性がある全ての物質を沈殿させる。ビールは通常、約２％〜約１０％  ｖ／ｖのアルコールを含むが、より高いアルコール含量、例えば、１８％  ｖ／ｖのビールも得ることができる。パッケージに先立ち、ビールに炭酸を加え、所望により濾過して、低音殺菌する。
【０１２９】
α−アミラーゼ（１つ又は２つ以上の外因性酵素、例えば、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、及び／又はイソアミラーゼ、並びにこれらの任意の組み合わせ、と組み合わせることが多いが必須ではない）を含む醸造用組成物を、上記工程（ａ）、すなわち、すりつぶした麦の調製中に、すりつぶした麦に加えることができる。あるいは、又は追加的に、醸造用組成物を、上記工程（ｂ）、例えば、すりつぶした麦の濾過中に、すりつぶした麦に加えることができる。あるいは、又は追加的に、醸造用組成物を、上記工程（ｃ）、例えば、麦汁の発酵中に、麦汁に加えることができる。
【０１３０】
特定の実施形態は、上記用途、方法、又は発酵飲料のうち任意のものに関し、かかる発酵飲料は、ビール、例えば、オールモルトビール、「ビール純粋令（Reinheitsgebot）」下で醸造されたビール、エール、ＩＰＡ、ラガー、ビター、発泡酒（第２のビール）、第３のビール、ドライビール、ビールテイスト飲料、カロリーライトビール、低アルコールビール、低カロリービール、ポーター、ボックビール、スタウト、モルトリカー、ノンアルコールビール、ノンアルコールモルトリカーなどであるが、更に、別の穀物及び麦芽飲料、例えば、フルーツ味の麦芽飲料、例えば、レモン、オレンジ、ライムなどの柑橘味、例えば、ベリー味の麦芽飲料、リカー味の麦芽飲料、例えば、ウォッカ、ラム、若しくは、テキーラ味のモルトリカー、又はコーヒー味の麦芽飲料、例えば、カフェイン味のモルトリカーなどでもある。
【０１３１】
追加の動物用飼料実施形態
特に動物用飼料用途において、いくつかの実施形態では、本教示の顆粒は、様々な少なくとも１つの以下の酵素のうち、任意のものを用いて使用できる。
【０１３２】
【表１−１】
2016528881.tif 000004
【０１３３】
【表１−２】
2016528881.tif 000005
【０１３４】
【表２】
2016528881.tif 000006
【０１３５】
【表３】
2016528881.tif 000007
【０１３６】
【表４】
2016528881.tif 000008
【０１３７】
【表５】
2016528881.tif 000009
【０１３８】
【表６】
2016528881.tif 000010
【０１３９】
単なる例であるが、ニワトリ、例えば、ブロイラー鶏用飼料は、下表に列挙する１つ又は２つ以上の成分を、例えば、下表の割合で含むことができる。
【０１４０】
【表７】
2016528881.tif 000011
【０１４１】
単なる例であるが、ニワトリ、例えばブロイラー鶏向けの飼料規格は、下表のように設定してよい。
【０１４２】
【表８】
2016528881.tif 000012
【０１４３】
単なる例であるが、産卵鶏用飼料は、下表に列挙する１つ又は２つ以上の成分を、例えば、下表の割合で含むことができる。
【０１４４】
【表９】
2016528881.tif 000013
【０１４５】
単なる例であるが、産卵鶏向けの飼料規格は、下表のように設定してよい。
【０１４６】
【表１０】
2016528881.tif 000014
【０１４７】
単なる例であるが、シチメンチョウ用飼料は、下表に列挙する１つ又は２つ以上の成分を、例えば、下表の割合で含むことができる。
【０１４８】
【表１１】
2016528881.tif 000015
【０１４９】
単なる例であるが、シチメンチョウ向けの飼料規格は、下表のように設定してよい。
【０１５０】
【表１２】
2016528881.tif 000016
【０１５１】
単なる例であるが、小ブタ用飼料は、下表に列挙する１つ又は２つ以上の成分を、例えば、下表の割合で含むことができる。
【０１５２】
【表１３】
2016528881.tif 000017
【０１５３】
単なる例であるが、小ブタ向けの飼料規格は、下表のように設定してよい。
【０１５４】
【表１４】
2016528881.tif 000018
【０１５５】
単なる例であるが、育成期／肥育期ブタ用飼料は、下表に列挙する１つ又は２つ以上の成分を、例えば、下表の割合で含むことができる。
【０１５６】
【表１５】
2016528881.tif 000019
【０１５７】
単なる例であるが、育成期／肥育期ブタ向けの飼料規格は、下表のように設定してよい。
【０１５８】
【表１６】
2016528881.tif 000020
【０１５９】
飼料投与
本発明による飼料添加剤組成物は、１回投与用に設計されてよく、又は、日常的に与える飼料用に設計されてよい。
【０１６０】
本発明の組み合わせにおいて使用される組成物（及び、含まれる各構成成分）の最適量は、処理される製品、及び／又は、製品を組成物と接触させる方法、及び／又は、その使用目的によって決まる。
【０１６１】
組成物中で使用される酵素の量は、効果を示し、動物が食べた当該組成物を含有する飼料製品の性能改善の効果が十分に持続するために、十分な量でなくてはならない。この有効性の時間は、少なくとも、製品（例えば、飼料添加剤組成物又はそれを含有する飼料）の利用時間までは延長しなくてはならない。
【０１６２】
飼料用途における他の構成成分との組み合わせ
本明細書に記載の酵素は、他の構成成分と組み合わせて使用してよい。
【０１６３】
その構成成分は、プレバイオティクスであってよい。プレバイオティクスは、上部消化管において分解されず、又は吸収されない、典型的には非消化性炭水化物（オリゴ−又は多糖類）又は糖アルコールである。市販製品において使用され、本発明によって有用な既知のプレバイオティクスとして、イヌリン（フラクトオリゴ糖、つまりＦＯＳ）及びトランスガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ又はＴＯＳ）が挙げられる。好適なプレバイオティクスとして、パラチノースオリゴ糖、大豆オリゴ糖、アルギン酸、キサンタン、ペクチン、ローカストビーンガム（ＬＢＧ）、イヌリン、グアーガム、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、非分解性デンプン、ラクトサッカロース、ラクツロース、ラクチトール、マルチトール、マルトデキストリン、ポリデキストロース（すなわち、Ｌｉｔｅｓｓｅ（登録商標））、ラクチトール、ラクトスクロース、大豆オリゴ糖、パラチノース、イソマルトオリゴ糖、グルコオリゴ糖、及びキシロオリゴ糖が挙げられる。
【０１６４】
プレバイオティクスを、本発明による飼料添加剤組成物（又はその構成成分）と同時に（例えば、共に混合して、又は、同じ若しくは異なる経路から同時に投与して）、又は連続して（例えば、同じ又は異なる経路より）投与してよい。
【０１６５】
本発明の組み合わせの他の構成成分として、ポリデキストロース、例えばＬｉｔｅｓｓｅ（登録商標）、及び／又は、マルトデキストリン、及び／又は、ラクチトールが挙げられる。これらの他の構成成分を、任意に飼料添加剤組成物に添加して、乾燥プロセスを補助してもよい。
【０１６６】
他の好適な構成成分の更なる例として、１つ又は２つ以上の増粘剤、ゲル化剤、乳化剤、結合剤、結晶変性剤、甘味剤（人工甘味剤含む）、レオロジー変性剤、安定剤、抗酸化剤、染料、酵素、キャリア、媒体、賦形剤、希釈剤、潤滑剤、着香剤、着色物質、懸濁化剤、崩壊剤、粒子結合剤などが挙げられる。これら他の構成成分は天然のものであってよい。これら他の構成成分は、化学的及び／又は酵素的手法を用いて調製されてよい。
【０１６７】
１つの好ましい実施形態では、本発明で使用する酵素は、１つ又は２つ以上の脂質と組み合わせて使用できる。
【０１６８】
例えば、本発明で使用する酵素は、１つ又は２つ以上の脂質ミセルと組み合わせて使用できる。脂質ミセルは、単一の脂質ミセル、又は複合脂質ミセルであってよい。
【０１６９】
脂質ミセルは、脂質及び／又は油などの両親媒性物質が配向した分子の凝集体であってよい。
【０１７０】
本教示は、対象、例えば、家禽類又はブタ類の本発明による飼料添加剤組成物を含む飼料を与えることを含む、当該対象の体重増加量を増す方法を更に提供する。
【０１７１】
本発明は、実例として提供され、限定することを意図するものではない、以下の実施例を参照することによって、更に理解することができる。
【実施例】
【０１７２】
（実施例１）
硫酸ナトリウムコアの粒径分布及び平滑度指数
無水結晶性硫酸ナトリウムコア粒子の７つのサンプルを、２つの供給元、Ｍｉｎｅｒａ  ｄｅ  Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｔａ（Ｖｉｌｌａｒｕｂｉｏ，Ｓｐａｉｎ）及びＳａｌｔｅｘ（Ｆｏｒｔｈ  Ｗｏｒｔｈ，Ｔｅｘａｓ）から入手した。
【０１７３】
Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００レーザー回折式粒径分析器を用いるレーザー光散乱によって、サンプルの粒径分布を得た。これら粒径分布の外皮比表面積を、方法の項に記載するアルゴリズムを使用し、無水硫酸ナトリウムの真密度（２．６６４ｇ／ｃｍ３）を用いて算出した。方法の項に記載するように、ＢＥＴ比表面積を、ＭｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓのモデルＡＳＡＰ  ２４２０  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｐｏｒｏｓｉｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｒｅａ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて測定した。各サンプルの平滑度指数は、これら２つの比表面積の比として計算する。２つのロットのコアの代表的な画像を図１に示す。
【０１７４】
【表１７】
2016528881.tif 000021
【０１７５】
（実施例２）
硫酸ナトリウムコアを用いる洗剤酵素顆粒サンプルの製造
７９．８ｋｇの、Ｍｉｎｅｒａ  ｄｅ  Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｔａの硫酸ナトリウムコア（実施例１の表１中ＭＳＭロット＃３）を、バッチサイズ１５０ｋｇのパイロットスケールの流動床コーターに投入した。光散乱法によると、コアは、２５８マイクロメートルの質量中央径（Ｄ５０）、１８２マイクロメートルのＤ１０、及び３５８マイクロメートルのＤ９０を有しており、ふるい分け法では、２１０マイクロメートルのＤ５０を有していた。これに基づくと、ＭＳＭロット＃３は、３６２／１８２＝１．９９のＰＳＤＩを有していた。
【０１７６】
実施例１の表１によると、ＭＳＭロット＃３のコアの平滑度指数は１．１であり、完全に平滑な粒子の平滑度指数である１．０に非常に近かった。コアの光学顕微鏡写真走査型電子顕微鏡写真を図１に示す。これらのコアは、Ｓａｌｔｅｘの比較コアサンプルよりもかなり平滑であることが、同じ図から認めることができる。表１は、Ｓａｌｔｅｘロット＃１の平滑度指数が、完全な平滑度指数である１．０から大きくずれていることを示す、３．９であったことを示す。
【０１７７】
コアを、４１℃の床温度で流動させ、１％  ｗ／ｗの部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（酵素／ＰＶＡの最終固形分％ｗ／ｗ量は１６％）及び０．５％  ｗ／ｗの消泡剤（ポリグリコールＥＰ  ４３６Ｅ（ロット１Ｌ０５０９１５０１）を含有する、固形分２０％  ｗ／ｗの濃度（３４５０ＰＵ／ｇ）の水性プロテアーゼ酵素液（Ｐｕｒａｆａｓｔ）を、３．５（初期）〜３．９（最終）バール噴霧化エアプレッシャー勾配において、コアに噴霧した。
【０１７８】
酵素噴霧が完了した後、硫酸ナトリウム及び硫酸マグネシウムの混合物（ＭｇＳＯ４  ７Ｈ２Ｏ、３０．５％、Ｎａ２ＳＯ４、１５％）を含有する溶液をコアに噴霧して、最終顆粒重量に基づき、正味２０％  ｗ／ｗをコア上に送達した。４５℃の床温度、０．３５ＭＰａ（３．５バール）の噴霧化エアプレッシャーで、塩溶液を噴霧した。
【０１７９】
部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（Ｃｅｌｖｏｌ  ５〜８８）、チタンジオキシド、及びＬｕｔｅｎｓｏｌ非イオン性界面活性剤からなる最終コーティング溶液を、塩コーティング済み酵素コア上に噴霧し、正味１１％  ｗ／ｗである総コーティング重量を送達した。５５℃の床温度、０．４８ＭＰａ（４．８バール）まで低下させる、初期噴霧化エアプレッシャー０．５３ＭＰａ（５．３バール）で、コーティング溶液を噴霧した。
【０１８０】
コーティング済み顆粒のバッチを冷却後、流動床コーターから１５０ｋｇの生成物が回収された。最終顆粒は、３０８μｍのＤ５０（ふるい分け法）及び１．１８ｇ／ｃｍ３の嵩密度を有していた。顆粒は、Ｈｕｎｔｅｒの白色度のＬ値が７３、Ｈｅｕｂａｃｈの酵素総ダストが３．２ｍｇ／ｐａｄであった。
【０１８１】
（実施例３）
実施例２に記載する処方及びプロセスに従い、コア上にコーティングするＰｕｒａｆａｓｔ酵素濃縮溶液の量、コア粒径のみ変更して、異なる量の酵素固形分に対応するために必要に応じてコア投与量を調節して、追加の４バッチのＰｕｒａｆａｓｔ顆粒を調製した。追加のコーティング及びプロセスパラメータは変更しなかった。
【０１８２】
【表１８】
2016528881.tif 000022
【０１８３】
以下の酵素サンプルを、洗濯用粉末洗剤中で、様々な「ストレス下」保存条件において保存試験を行った。安定性は、性能及び生化学的分析によって評価した。
【０１８４】
保存試験：サンプル調製
対応する量の酵素（以下参照）を、１０ｇの洗濯洗剤に加え、７０％相対湿度で、３７、４５、及び６０℃の順応室において保存された、開放したプラスチック製カップ（１５０ｍＬ）に入れた。
【０１８５】
Ａ．１０ｇ洗濯用粉末洗剤＋サンプルＡ１
Ｂ．１０ｇ洗濯用粉末洗剤＋サンプルＢ１
Ｃ．１０ｇ洗濯用粉末洗剤＋サンプルＢ２
Ｄ．１０ｇ洗濯用粉末洗剤＋サンプルＣ１
Ｅ．１０ｇ洗濯用粉末洗剤＋サンプルＣ２
【０１８６】
新しい状態、並びに、１時間、２時間、及び３日間保存後（６０℃）、並びに、１、３、及び８日間（３７及び４５℃）保存後に、サンプルを分析した。
【０１８７】
性能評価
いわゆるＬａｕｎｄｒ−Ｏ−ｍｅｔｅｒにて、３０Ｃ、２５ＦＨ、及び１５分間で洗浄試験を行った。
【０１８８】
撹拌ビーカー中で２分間、２．５リットルの２５°ＦＨ水（以下参照）に１０ｇの保存サンプルを溶解した。３００ｍＬのこの溶液をＬＯＭビーカーに入れ、以下の染みを加えて、液対布比Ｌ／Ｃ〜９０（鋼球を除く）にした。
【０１８９】
２５Ｌの２５°ＦＨ＝２５０ｐｐｍ  Ｃａ＋２／Ｍｇ＋２＝２／１を調製するため、４１６．７５ｍＬの１５．０００ｐｐｍストック溶液を、２４５８３．２５ｍＬの脱イオン水（２５リットルにする）で希釈し、ストック溶液１５．０００ｐｐｍは、１リットルのＤＩ水中、１４．７０グラムのＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ＋１０．１６５グラムのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏである。
【０１９０】
ビーカー当たりの染み（反射率計で予め測定した試験用布片の初期反射率［Ｌ＊ａ＊ｂ，Ｄ６５光源］）：
【０１９１】
【表１９】
2016528881.tif 000023
【０１９２】
洗浄後、染みを、水道水の流水（１７ＦＨ、Ｃａ／Ｍｇ＝４／１）で３分間すすぎ、脱水して、周囲条件にて一晩風乾させた（黒っぽい布で覆った）。
【０１９３】
反射率計を用いて、試験用布片の最終反射率［Ｌ＊ａ＊ｂ，Ｄ６５光源］の測定を３回行った。％Δ染み除去（％ｄＥ）は、下式に従って計算する。
【０１９４】
【数２】
2016528881.tif 000024
式中、Ｌｒｅｆ＝９６．０
ａｒｅｆ＝０．５５
ｂｒｅｆ＝１．９５
【０１９５】
生化学的評価
この方法を用いて、発酵、回収、及び最終製品サンプル（液体及び顆粒）における、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅのタンパク質分解活性を判定した。このアッセイは、比色分析であり、Ｎ−スクシニル−ａｌａ−ａｌａ−ｐｒｏ−ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド（nitroanalide）基質の分解速度をモニタリングする。基質のｐ−ニトロアニリドの放出を、Ｋｏｎｅｌａｂ分析器において、４０５ｎｍで測定した。このアッセイは、指定の標準品に対して較正する。
【０１９６】
サンプル調製：
−１００ｇのトリス緩衝液（０．１Ｍトリス、０．０１Ｍ  ＣａＣＬ２、０．００５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｐＨ  ８．６）を、１０ｇの洗剤サンプルに加え、３０分間撹拌した。その後、２ｍＬの前記溶解液をエッペンドルフチューブに取り、１０分間、１４０００ｒｐｍで遠心分離した。
−ＨＡＭＩＬＴＯＮ希釈機及びトリス緩衝液を用いて、第２の溶解液（１０Ｘ）を調製した。
−希釈後サンプルをボルテックスし、Ｋｏｎｅｌａｂのために、対応するキュベットに注ぎ入れた。対照液も含めた（これらの場合、ＰＵ／ｇ）。キュベットをサンプルラックに置いた。ラックを機器に挿入した。
【０１９７】
Ｋｏｎｅｌａｂアッセイの実施：
−ワーキング基質液［Ｎ−スクシニル−ａｌａ−ａｌａ−ｐｒｏ−ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド（ＡＡＰＦ）（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｓ７３８８）］を調製し、試薬用容器に注ぎ入れ、試薬設置部に入れた（基質＝２０ｍＬ容器、コード＝ＡＡＰＦ）。
【０１９８】
試薬調製
１．ストック基質溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）：５００ｍｇのＡＡＰＦを５ｍＬのＤＭＳＯに溶解する。室温で遮光して保存する。溶液が黄色に変色したら廃棄する。１ヶ月安定である。
２．中間基質溶液（２０ｍｇ／ｍＬ）：８００μＬのストック基質溶液を３．２ｍＬのＤＭＳＯに加え、混合する。室温で遮光して保存する。溶液が黄色に変色したら廃棄する。１ヶ月安定である。
３．ワーキング基質溶液（１ｍｇ／ｍＬ）：２５０μＬの中間基質溶液を４．７５ｍＬのアッセイバッファーに加え、混合する。用事調製する。典型的には、氷上に保管した場合１時間安定である。溶液が黄色に変色したら廃棄する。
【０１９９】
−ソフトウェア中でサンプルカップをラベルし、Ｋｏｎｅｌａｂで試験が行われたことを明らかにした（６回繰り返す）。機器を操作し、校正を確認した。顆粒サンプルの活性の計算（この式は、１ｇ＝１ｍＬを、溶解液混合物の比重と仮定する）：
ＰＵ／ｇの顆粒＝［（ＰＵ／ｍＬ）＊（ワーキング希釈液）］＊［溶解液バッファー＋顆粒（ｍＬ）の重量／顆粒（ｇ）の重量］
【０２００】
−各サンプルの繰り返しで平均値を計算した。％ＣＶ（変動係数）を計算した。
【０２０１】
この実施例では、「ミニ」顆粒が、本発明の教示による小さい平滑コアを含むものである。
【０２０２】
データを図２に示す。
【０２０３】
（実施例４）
３つの代表的なバッチのフィターゼの製造
４５ｋｇの、Ｍｉｎｅｒａ  ｄｅ  Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｔａの硫酸ナトリウムコア（実施例１の表１中ＭＳＭロット４１４１８．Ｂ）を、バッチサイズ１５０ｋｇのパイロットスケールの流動床コーターに投入した。光散乱法によると、コアは、１９９マイクロメートルの質量中央径を有していた。
【０２０４】
コアを流動化させ、２％  ｗ／ｗの部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（Ｃｅｌｖｏｌ  ５〜８８）及び０．５％  ｗ／ｗのフィチン酸ナトリウム溶液（Ｄｒ．Ｓｔｒａｅｔｍａｎｓ；Ｄｅｒｍｏｆｅｅｌ  ＰＡ−３；ロットＮＡ２０６２）を含有する、固形分１７．５％  ｗ／ｗの濃度の水性フィターゼ酵素液（バッチ４８８１１５６１３）を、コア上に噴霧した。
【０２０５】
酵素噴霧後、硫酸ナトリウム（ＭＳＭ、ロット１３１３０４０５）を含有する溶液をコアに噴霧して、最終顆粒重量に基づいて正味５０％  ｗ／ｗを送達した。
【０２０６】
部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（Ｃｅｌｖｏｌ  ５〜８８）及びタルク（Ｍｉｃｒｏｔａｌｃ  ＦＣ  ＣＧ−ＡＷ、ロット１３／００３２８）からなる最終コーティング溶液を塩コーティング済み酵素コア上に噴霧し、正味９％  ｗ／ｗである総コーティング重量を送達した。
【０２０７】
コーティング済み顆粒の各バッチを冷却した後、流動床コーターから１３６ｋｇ、１４０ｋｇ及び１３４ｋｇの生成物が回収された。光散乱法によると、最終顆粒は、平均３６２μｍのＤ５０、及び１．２７ｇ／ｃｍ３の嵩密度を有していた。
【０２０８】
図４は、３つの代表的な顆粒バッチ（３１１５、３１１６、及び３１１７）のペレット化結果を示す。ペレット化実験は、Ｄａｎｉｓｈ  Ｔｅｋｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅで実施された。
【０２０９】
（実施例５）
同一濃縮物バッチから、３つの代表的なバッチのフィターゼ標準ＴＰＴ顆粒のパイロットスケールでの製造
６５ｋｇの、Ｍｉｎｅｒａ  ｄｅ  Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｔａの硫酸ナトリウムコア（ＭＳＭ  Ｎａ−Ｇ．ＩＩＩ−ＥＥ、ロット４１２３５，１２）を、バッチサイズ１５０ｋｇのパイロットスケールの流動床コーターに投入した。光散乱法によると、コアは、典型的には、２９０マイクロメートルの質量中央径を有していた。
【０２１０】
【表２０】
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【０２１１】
コアを流動化させ、２％  ｗ／ｗの部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（Ｃｅｌｖｏｌ  ５〜８８）及び０．５％  ｗ／ｗのフィチン酸ナトリウム溶液（Ｄｒ．Ｓｔｒａｅｔｍａｎｓ；Ｄｅｒｍｏｆｅｅｌ  ＰＡ−３；ロットＮＡ２０６２）を含有する、固形分１７．５％  ｗ／ｗの濃度の水性フィターゼ酵素液（バッチ４８８１１５６１３）を、コア上に噴霧した。
【０２１２】
酵素噴霧後、硫酸ナトリウム（ＭＳＭ、ロット１３１３０４０５）を含有する溶液をコアに噴霧して、最終顆粒重量に基づいて正味４０％  ｗ／ｗを送達した。
【０２１３】
部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（Ｃｅｌｖｏｌ  ５〜８８）及びタルク（Ｍｉｃｒｏｔａｌｃ  ＦＣ  ＣＧ−ＡＷ、ロット１３／００３２８）からなる最終コーティング溶液を塩コーティング済み酵素コア上に噴霧し、正味９％  ｗ／ｗである総コーティング重量を送達した。
【０２１４】
コーティング済み顆粒の各バッチを冷却した後、流動床コーターから１５１ｋｇ、１５１ｋｇ及び１５０ｋｇの生成物が回収された。光散乱法によると、最終顆粒は、平均３８８μｍのＤ５０、及び１．３９ｇ／ｃｍ３の嵩密度を有していた。
【０２１５】
３つの代表的なフィターゼ標準ＴＰＴバッチのペレット化を、図５に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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