(57)【要約】  本発明は、脂肪分解酵素変異体を提供する。詳細には、本発明は、親脂肪分解酵素と比較して１つ以上の改変を有し、少なくとも１つの改良された特性を有する、脂肪分解酵素変異体を提供する。加えて、本発明は、本発明の脂肪分解酵素変異体を含む組成物を提供する。本発明は、本発明の脂肪分解酵素変異体を含む組成物を使用するクリーニング法も提供する。
2016506237.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１つの改変は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
並びに生産的な位置は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、８４、８５、８６、８７、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１４、１１５、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２５、１２６、１２７、１２８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４２、１４３、１４９、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７６、１７９、１８０、１８１、１８３、１８４、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９６、１９８、１９９、２００、２０２、２０５、２０６、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１６、２１７、２１８、２２１、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３６、２３７、２３８、２３９、２４２、２４３、２４４、２４６、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５９、２６０、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、及び２６９からなる群から選択され、前記リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも５０％は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産的な位置が、１、２、３、４、５、６、８、９、１３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３７、３８、３９、４６、５１、５２、５４、５８、６４、６６、６８、６９、７１、７２、７５、９０、９３、９４、１１１、１２０、１２２、１２３、１３０、１３１、１３７、１４０、１６２、１６３、１８９、２５０、２５２、及び２６４からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも３０％但し５０％未満の改変は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産的な位置は、１８、１９、２０、３０、３１、３２、４７、４８、４９、５０、５３、５６、６０、７３、７４、８５、８６、９１、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０５、１０８、１１５、１２５、１２７、１２８、１３２、１３３、１５１、１５９、１６４、１７９、１８３、１８７、１８８、１９０、２１６、２２３、２３２、２３７、２４４、２５１、２５４、２６３、２６７、及び２６９からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項４】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１５％但し３０％未満の改変は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産的な位置は、７、１１、１２、１５、２２、３５、４０、４２、４３、４４、４５、６１、６３、６５、６７、７６、７７、８４、８７、１１４、１１７、１１９、１２１、１３４、１３５、１３６、１４３、１５４、１５５、１５６、１５８、１６５、１６６、１６８、１７６、１８０、１９１、１９９、２００、２０２、２０９、２１１、２１４、２１７、２２１、２２４、２２５、２２８、２２９、２３１、２３３、２４８、２４９、２５３、２５５、２５６、２６５、及び２６８からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項５】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１つ但し１５％未満の改変は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ、前記生産的な位置は、１４、１６、１７、３４、４１、５５、５７、５９、６２、７０、７９、９２、１００、１０２、１０３、１０６、１０９、１１０、１１２、１１８、１２６、１３８、１３９、１４２、１４９、１５２、１５３、１６７、１６９、１７０、１８１、１８４、１９２、１９３、１９６、１９８、２０５、２０６、２０８、２１０、２１２、２１３、２１８、２２６、２２７、２３０、２３６、２３８、２３９、２４２、２４３、２４６、２５７、２５９、２６０、２６２、及び２６６からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項６】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも５０％は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産性の改変が、１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；及び２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項７】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも３０％は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産性の改変が、１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項８】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変の少なくとも１５％は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産性の改変は、１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項９】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、前記脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１つは、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記生産性の改変が、１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１４（Ａ，Ｓ，Ｖ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１６（Ｙ，Ｈ，Ｗ）；１７（Ｓ，Ｅ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３４（Ｉ，Ｐ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４１（Ｃ，Ｖ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５５（Ｆ，Ｇ，Ｗ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５７（Ｄ，Ｓ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；５９（Ｇ，Ｄ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６２（Ｄ，Ｎ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７０（Ｄ，Ｓ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；７９（Ｓ，Ａ，Ｍ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９２（Ｎ，Ａ，Ｔ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１００（Ｉ，Ｍ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０２（Ｄ，Ｈ）；１０３（Ｉ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０６（Ｇ，Ｈ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１０９（Ｇ，Ｔ）；１１０（Ｈ，Ｎ，Ｓ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１２（Ｇ，Ｆ，Ｑ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１８（Ｒ，Ｐ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２６（Ｑ，Ｉ，Ｍ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３８（Ｙ，Ｆ）；１３９（ＲＬＴ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４２（Ｆ，Ｈ，Ｙ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１４９（Ｇ，Ａ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５２（Ａ，Ｉ，Ｖ）；１５３（Ｔ，Ｓ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６７（Ｄ，Ｎ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１６９（Ｆ，Ｓ，Ｙ）；１７０（Ｓ，Ｇ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８１（Ｆ，Ｌ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８４（Ｆ，Ｗ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９２（Ｔ，Ｎ，Ｐ）；１９３（Ｌ，Ｔ）；１９６（Ｉ，Ｖ）；１９８（Ｈ，Ｇ，Ｓ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０５（Ｒ，Ｄ）；２０６（Ｌ，Ｎ）；２０８（Ｐ，Ｅ，Ｎ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１０（Ｅ，Ｓ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１２（Ｇ，Ｑ）；２１３（Ｙ，Ｓ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２１８（Ｐ，Ｔ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２６（Ｔ，Ｄ，Ｎ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３０（Ｖ，Ｗ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３６（Ｖ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２３８（Ｉ，Ｖ）；２３９（Ｅ，Ｋ）；２４２（Ｄ，Ｔ）；２４３（Ａ，Ｓ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４６（Ｇ，Ｉ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２５７（Ａ，Ｗ，Ｙ）；２５９（Ｌ，Ｗ，Ｙ）；２６０（Ｗ，Ｐ）；２６２（Ｆ，Ｄ，Ｋ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６６（Ｇ，Ｅ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【請求項１０】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、前記生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１つは、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ生産性の改変が、１１（Ａ，Ｅ，Ｉ）、２３（Ａ）、２４（Ｑ，Ｓ）、２７（Ｋ，Ｌ）、２９（Ｎ）、３０（Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｙ）、３１（Ｔ）、３３（Ｃ，Ｉ，Ｐ，Ｔ，Ｖ）、４５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）、４８（Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、４９（Ｃ，Ｙ）、５０（Ｍ）、５１（Ｈ，Ｖ）、５６（Ａ，Ｍ，Ｎ，Ｓ）、５８（Ａ，Ｆ）、７１（Ｃ，Ｆ，Ｐ）、７３（Ｑ，Ｔ）、７４（Ｉ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）、７５（Ｋ）、９１（Ｋ，Ｎ，Ｙ）、９４（Ａ，Ｈ）、１０１（Ａ）、１０８（Ａ）、１１１（Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ，Ｙ）、１２２（Ｋ，Ｌ，Ｑ）、１２８（Ｔ，Ｖ）、１３０（Ｋ，Ｍ）、１３３（Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｗ）、１３５（Ａ，Ｄ，Ｍ，Ｎ，Ｙ）、１４０（Ｙ）、１５９（Ｇ）、１６３（Ｑ）、１８３（Ｃ）、１８７（Ｃ，Ｉ）、１８８（Ａ，Ｍ，Ｗ）、１９０（Ｗ）、２２７（Ａ，Ｉ，Ｓ）、２３３（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、２５１（Ｖ）、及び２５２（Ｍ，Ｖ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項１１】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む、脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記脂肪分解酵素変異体は、次の基準の全てを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記改変は、１（Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、２（Ｉ，Ｌ）、３（Ｄ，Ｇ，Ｙ）、４（Ｄ，Ｆ，Ｗ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）、６（Ｉ，Ｔ）、７（Ｙ）、８（Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、９（Ｈ，Ｋ）、１１（Ｖ）、１３（Ｈ，Ｎ）、１４（Ｓ）、１６（Ｗ）、１７（Ｅ）、１８（Ｋ）、１９（Ｇ）、２０（Ｔ）、２３（Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）、２４（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）、２５（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、２６（Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、２７（Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）、２８（Ｄ，Ｅ，Ｉ，Ｎ，Ｓ）、２９（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、３１（Ｄ，Ｈ，Ｓ）、３３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）、３４（Ｐ）、３７（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｗ）、３８（Ｄ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｙ）、３９（Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｓ，Ｖ）、４０（Ｍ，Ｓ）、４２（Ｇ，Ｉ，Ｗ）、４３（Ｒ，Ｔ）、４４（Ｉ）、４５（Ｆ，Ｖ）、４６（Ｄ，Ｌ，Ｍ）、４７（Ｈ）、４８（Ｅ，Ｈ，Ｐ，Ｑ）、４９（Ｖ）、５０（Ｌ，Ｒ，Ｓ）、５１（Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｓ）、５２（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｖ）、５４（Ｐ，Ｔ，Ｖ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ）、６０（Ｇ）、６３（Ｔ）、６４（Ｇ）、６６（Ｈ，Ｍ，Ｗ）、６７（Ｉ，Ｖ）、６８（Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、６９（Ｉ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、７０（Ｓ）、７１（Ｄ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）、７２（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）、７３（Ｈ，Ｒ，Ｓ）、７４（Ｈ，Ｓ）、７５（Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、７９（Ａ）、８５（Ｔ）、８６（Ｐ，Ｔ）、８７（Ｇ）、９０（Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ）、９１（Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）、９２（Ｔ）、９４（Ｒ）、９５（Ｇ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）、９６（Ａ，Ｋ）、９７（Ｄ，Ｔ）、９８（Ｑ）、９９（Ｄ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１０１（Ｄ，Ｈ，Ｙ）、１０５（Ｋ）、１０８（Ｋ，Ｑ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｅ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）、１１４（Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）、１１５（Ｔ）、１１８（Ｐ）、１１９（Ｔ）、１２０（Ｙ）、１２１（Ｋ）、１２２（Ｈ，Ｉ）、１２３（Ｇ，Ｍ，Ｎ，Ｗ）、１２５（Ｇ，Ｑ）、１２７（Ｇ，Ｔ）、１３０（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｔ）、１３１（Ｈ，Ｉ，Ｑ）、１３２（Ｈ，Ｒ）、１３４（Ｌ，Ｖ）、１３５（Ｋ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）、１３９（Ｔ）、１５１（Ｉ，Ｔ，Ｖ）、１５４（Ｉ，Ｌ）、１５５（Ｇ，Ｓ）、１５８（Ｅ，Ｆ）、１６２（Ｇ，Ｒ）、１６３（Ｎ，Ｐ，Ｙ）、１６４（Ｖ）、１６６（Ｇ）、１７６（Ｉ，Ｌ）、１７９（Ｌ，Ｑ，Ｖ）、１８０（Ｋ）、１８１（Ｌ）、１８７（Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８８（Ｃ，Ｔ）、１８９（Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）、１９１（Ｆ，Ｌ，Ｖ）、１９６（Ｖ）、１９９（Ｇ）、２０２（Ｐ，Ｖ）、２０８（Ｅ）、２１１（Ｉ，Ｗ）、２１６（Ｎ，Ｗ）、２１７（Ｋ）、２２３（Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、２２５（Ｅ，Ｋ，Ｒ）、２２７（Ｍ）、２２８（Ｒ）、２３２（Ｉ，Ｍ，Ｔ）、２３３（Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）、２３７（Ｉ，Ｌ，Ｙ）、２４２（Ｔ）、２４４（Ｉ）、２５０（Ｑ，Ｒ）、２５１（Ｄ，Ｗ）、２５２（Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）、２５５（Ｌ）、２５６（Ａ，Ｓ）、２５７（Ｙ）、２６２（Ｄ）、２６４（Ｅ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ）、２６５（Ｍ，Ｑ）、２６７（Ｌ，Ｗ）、及び２６９（Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項１２】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記脂肪分解酵素変異体は、次の基準ａ）及びｂ）を満たすが、ｃ）は満たさず、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記改変は、１（Ｑ，Ｔ）、２（Ｆ，Ｇ，Ｍ，Ｐ）、３（Ｋ，Ｔ）、４（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｓ）、５（Ｋ，Ｗ）、６（Ｅ，Ｍ）、８（Ａ，Ｅ）、９（Ｅ，Ｇ，Ｎ，Ｒ）、１１（Ｈ，Ｋ，Ｙ）、１２（Ｆ，Ｈ，Ｖ）、１３（Ｑ）、１５（Ｓ）、１８（Ｑ）、１９（Ｃ）、２０（Ｇ，Ｓ）、２３（Ｃ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）、２４（Ｙ）、２５（Ｃ，Ｈ，Ｋ）、２６（Ｃ）、２７（Ｆ）、２８（Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ）、２９（Ｑ，Ｗ，Ｙ）、３０（Ｄ，Ｖ）、３１（Ｅ，Ｑ）、３２（Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｓ）、３５（Ｋ）、３７（Ｃ）、３８（Ｖ，Ｗ）、３９（Ｐ，Ｔ，Ｙ）、４０（Ｗ）、４２（Ｖ）、４３（Ｄ，Ｍ）、４５（Ｑ）、４６（Ｆ，Ｇ，Ｖ，Ｗ）、４７（Ｔ）、５０（Ａ）、５１（Ｎ，Ｒ，Ｔ）、５２（Ｅ，Ｒ，Ｗ）、５３（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｓ）、５４（Ｒ，Ｙ）、５５（Ｇ）、５６（Ｖ）、６４（Ｃ，Ｅ，Ｎ，Ｖ）、６６（Ｎ，Ｑ，Ｒ）、６７（Ｑ）、６９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｗ）、７１（Ｖ，Ｗ，Ｙ）、７２（Ｐ）、７３（Ｅ，Ｇ，Ｋ）、７４（Ｎ，Ｑ）、７５（Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｙ）、７６（Ｈ）、７７（Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）、８６（Ｌ，Ｍ）、８７（Ｐ，Ｖ）、９０（Ｑ，Ｔ）、９１（Ｆ）、９４（Ｄ）、９７（Ｑ）、９８（Ｄ，Ｅ，Ｉ）、９９（Ｋ）、１０５（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｐ）、１０８（Ｅ，Ｍ）、１２２（Ｅ，Ｎ）、１２３（Ｅ，Ｌ，Ｑ）、１２５（Ｎ，Ｔ）、１２６（Ｉ）、１２７（Ｅ，Ｆ，Ｒ）、１２８（Ｈ，Ｓ）、１３０（Ｆ，Ｑ）、１３１（Ｒ，Ｗ，Ｙ）、１３２（Ｄ，Ｋ，Ｗ）、１３３（Ｅ，Ｑ）、１３５（Ｆ，Ｔ）、１３６（Ｄ，Ｑ）、１３７（Ｓ，Ｖ）、１３９（Ｌ）、１４０（Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）、１４３（Ａ，Ｇ，Ｓ）、１４９（Ａ）、１５１（Ｎ）、１５４（Ｆ）、１５６（Ｆ，Ｗ）、１５８（Ｙ）、１５９（Ｅ）、１６３（Ｓ，Ｗ）、１６４（Ｎ，Ｓ）、１６５（Ｉ）、１６６（Ｄ，Ｗ）、１６７（Ｎ）、１６８（Ｌ）、１７９（Ｅ，Ｉ）、１８３（Ｖ）、１８８（Ｈ）、１８９（Ｋ，Ｖ）、２００（Ａ）、２０５（Ｄ）、２０９（Ｓ，Ｔ）、２１４（Ｄ）、２１６（Ｇ，Ｑ）、２１７（Ｈ）、２１８（Ｔ）、２２３（Ｍ）、２２６（Ｎ）、２２８（Ｅ）、２２９（Ｋ）、２３１（Ｋ，Ｌ，Ｍ）、２５２（Ｋ，Ｌ，Ｎ）、２５４（Ｈ）、２５５（Ｆ）、２５６（Ｔ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６４（Ｈ，Ｓ，Ｔ）、２６７（Ｐ）、及び２６９（Ｆ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項１３】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記脂肪分解酵素変異体は、次の基準ａ）、又はｂ）及びｃ）の両方、を満たすが、３つ全ては満たさず、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記改変は、１（Ｅ，Ｒ，Ｖ）、２（Ｖ，Ｈ，Ｔ）、３（Ｓ，Ｅ，Ｑ）、４（Ｑ，Ｙ）、５（Ｄ）、６（Ｌ，Ｑ，Ｖ）、７（Ｆ）、８（Ｎ）、９（Ｑ，Ａ，Ｉ）、１１（Ｎ）、１２（Ｌ）、１３（Ｆ）、１４（Ａ）、１５（Ｑ）、１６（Ｙ）、１７（Ｓ）、１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｓ）、１９（Ａ，Ｔ）、２０（Ａ，Ｐ）、２２（Ｃ）、２３（Ｇ，Ｐ）、２４（Ｋ，Ｆ）、２５（Ｎ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｖ，Ｗ）、２６（Ｎ，Ｌ，Ｑ）、２７（Ｄ）、２８（Ａ，Ｆ，Ｇ，Ｌ）、２９（Ｐ，Ｃ，Ｉ）、３０（Ａ，Ｈ，Ｒ，Ｗ）、３１（Ｇ）、３２（Ｔ，Ｑ）、３３（Ｎ，Ｋ）、３４（Ｉ）、３５（Ｔ，Ｅ，Ｒ）、３７（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ）、３８（Ｇ，Ｔ）、３９（Ｎ）、４０（Ａ）、４１（Ｃ）、４２（Ｐ）、４３（Ｅ，Ｉ）、４４（Ｖ，Ｈ，Ｔ）、４５（Ｅ）、４６（Ｋ，Ｅ）、４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｍ）、４８（Ｄ）、４９（Ａ，Ｈ，Ｋ）、５０（Ｔ，Ｄ，Ｗ）、５１（Ｆ）、５２（Ｌ，Ｔ）、５３（Ｙ，Ｌ，Ｗ）、５４（Ｓ）、５５（Ｆ）、５６（Ｅ）、５７（Ｄ）、５８（Ｓ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｗ）、５９（Ｇ）、６０（Ｖ）、６１（Ｇ，Ｌ）、６２（Ｄ）、６３（Ｖ）、６４（Ｔ，Ｄ，Ｉ，Ｌ）、６５（Ｇ，Ｖ）、６６（Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｖ）、６７（Ｌ）、６８（Ａ，Ｃ，Ｗ）、６９（Ｌ）、７０（Ｄ）、７１（Ｎ，Ｅ）、７２（Ｔ，Ｋ）、７３（Ｎ）、７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｇ）、７５（Ｌ）、７６（Ｉ，Ｖ）、７７（Ｖ，Ａ）、７９（Ｓ）、８４（Ｒ）、８５（Ｓ，Ｈ，Ｎ，Ｑ）、８６（Ｉ，Ｖ，Ｙ）、８７（Ｅ，Ｄ）、９０（Ｉ，Ｖ）、９１（Ｇ）、９２（Ｎ）、９３（Ｌ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｒ）、９４（Ｎ，Ｇ，Ｔ，Ｖ）、９５（Ｆ，Ｋ，Ｌ）、９６（Ｄ）、９７（Ｌ，Ａ，Ｍ）、９８（Ｋ，Ｈ）、９９（Ｅ）、１００（Ｉ）、１０１（Ｎ）、１０２（Ｄ）、１０３（Ｉ）、１０５（Ｓ，Ｗ）、１０６（Ｇ）、１０８（Ｒ，Ｆ）、１０９（Ｇ）、１１０（Ｈ，Ｓ）、１１１（Ｄ）、１１２（Ｇ）、１１４（Ｔ）、１１５（Ｓ，Ｇ，Ｍ，Ｒ，Ｖ）、１１７（Ｗ，Ｈ，Ｖ）、１１８（Ｒ）、１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ）、１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｓ，Ｗ）、１２１（Ａ）、１２２（Ｄ，Ａ，Ｆ）、１２３（Ｔ）、１２５（Ｒ，Ｙ）、１２６（Ｑ）、１２７（Ｋ）、１２８（Ｖ，Ｃ，Ｉ）、１３０（Ｄ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、１３１（Ａ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、１３２（Ｖ，Ｑ）、１３３（Ｒ，Ｉ）、１３４（Ｅ）、１３５（Ｈ）、１３６（Ｐ）、１３７（Ｄ，Ｉ，Ｒ，Ｗ）、１３８（Ｙ）、１３９（Ｒ）、１４０（Ｖ）、１４２（Ｆ，Ｈ，Ｙ）、１４３（Ｔ）、１４９（Ｇ）、１５１（Ｌ，Ｍ，Ｗ）、１５２（Ａ）、１５３（Ｔ，Ｓ）、１５４（Ｖ）、１５５（Ａ）、１５６（Ｇ，Ｍ）、１５８（Ｄ）、１５９（Ｌ，Ｑ，Ｒ）、１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｓ）、１６３（Ｇ，Ｆ，Ｌ）、１６４（Ｙ）、１６５（Ｄ）、１６６（Ｉ）、１６７（Ｄ）、１６８（Ｖ，Ｇ）、１６９（Ｆ，Ｓ）、１７０（Ｓ）、１７６（Ｖ）、１７９（Ｒ，Ｈ，Ｋ）、１８０（Ａ，Ｔ）、１８１（Ｆ）、１８３（Ｅ）、１８４（Ｆ，Ｙ）、１８７（Ｖ）、１８８（Ｑ）、１８９（Ｔ）、１９０（Ｇ）、１９１（Ｇ）、１９２（Ｔ）、１９３（Ｌ，Ｔ）、１９６（Ｉ）、１９８（Ｈ，Ｇ，Ｓ）、１９９（Ｔ）、２００（Ｎ，Ｓ）、２０２（Ｉ，Ｌ）、２０５（Ｒ）、２０６（Ｌ）、２０８（Ｐ）、２０９（Ｒ，Ｈ）、２１０（Ｅ）、２１１（Ｆ，Ｒ，Ｔ）、２１２（Ｇ）、２１３（Ｙ）、２１４（Ｓ，Ａ）、２１６（Ｓ，Ｖ）、２１７（Ｓ，Ｖ）、２１８（Ｐ）、２２１（Ｗ）、２２３（Ｋ，Ａ）、２２４（Ｓ）、２２５（Ｇ）、２２６（Ｔ）、２２７（Ｌ，Ｈ）、２２８（Ｖ）、２２９（Ｐ）、２３０（Ｖ，Ｗ）、２３１（Ｔ，Ｈ）、２３２（Ｒ，Ｐ）、２３３（Ｎ）、２３６（Ｖ）、２３７（Ｋ，Ｈ，Ｔ，Ｗ）、２３８（Ｉ）、２３９（Ｅ）、２４２（Ｄ）、２４３（Ａ）、２４４（Ｔ，Ｑ，Ｓ）、２４６（Ｇ）、２４８（Ｎ）、２４９（Ｑ）、２５０（Ｐ，Ｓ）、２５１（Ｎ）、２５２（Ｉ，Ｃ，Ｅ）、２５３（Ｐ，Ｒ）、２５４（Ｄ，Ｔ）、２５５（Ｉ）、２５６（Ｐ）、２５７（Ａ）、２５９（Ｌ）、２６０（Ｗ）、２６２（Ｆ）、２６３（Ｇ，Ｋ）、２６４（Ｌ，Ｃ，Ｇ）、２６５（Ｉ）、２６６（Ｇ）、２６７（Ｔ，Ｇ，Ｍ）、２６８（Ｃ，Ｈ）、及び２６９（Ｌ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項１４】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記脂肪分解酵素変異体は、次の基準のうちｂ）を満たすが、ａ）又はｃ）は満たさず、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記改変は、２（Ｋ）、３（Ａ，Ｈ）、４（Ｐ）、６（Ｋ，Ｙ）、７（Ｈ）、９（Ｄ，Ｗ）、１２（Ｗ）、１３（Ａ，Ｍ，Ｙ）、１５（Ｍ）、１６（Ｈ）、２０（Ｑ）、２２（Ｈ）、２３（Ｒ）、２５（Ｓ）、２９（Ｇ，Ｓ）、３０（Ｌ，Ｎ）、３３（Ｍ）、３７（Ｈ）、３９（Ｑ）、４０（Ｆ）、４７（Ｗ）、４８（Ｇ）、５０（Ｆ，Ｋ）、５１（Ｄ，Ｐ，Ｙ）、５２（Ｍ）、５４（Ｆ，Ｇ，Ｋ，Ｗ）、５５（Ｗ）、５８（Ｉ）、６０（Ｌ）、６４（Ｋ，Ｒ，Ｙ）、６５（Ｌ）、６６（Ｇ，Ｙ）、６７（Ｈ）、６８（Ｙ）、６９（Ｄ）、７５（Ｍ）、８４（Ｈ）、８６（Ｑ）、９０（Ｙ）、９２（Ａ）、９３（Ｉ，Ｐ，Ｖ）、９４（Ｓ）、９５（Ｈ，Ｔ）、９６（Ｖ）、９８（Ｍ）、１００（Ｍ）、１１５（Ｎ）、１１７（Ｑ）、１２２（Ｓ，Ｔ，Ｙ）、１２５（Ｉ）、１２６（Ｍ）、１２７（Ｄ）、１２８（Ｙ）、１３０（Ｃ，Ｒ）、１３２（Ｉ）、１３４（Ｐ）、１４０（Ｃ）、１５１（Ｐ）、１５２（Ｖ）、１５６（Ｔ）、１６４（Ｄ，Ｒ）、１６５（Ｙ）、１８８（Ｆ）、２０８（Ｎ）、２１３（Ｓ）、２１６（Ｄ）、２２７（Ｃ）、２２９（Ｉ）、２３２（Ｃ，Ｌ）、２３７（Ｅ）、２４９（Ｅ）、２５０（Ｅ）、２５２（Ｆ）、２５４（Ａ，Ｋ）、２５７（Ｗ）、及び２６７（Ｉ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項１５】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記脂肪分解酵素変異体は、次の基準のうちｃ）を満たすが、ａ）又はｂ）は満たさず、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記改変は、１（Ｃ，Ｌ）、３（Ｒ）、６（Ａ，Ｈ）、７（Ｍ，Ｖ）、８（Ｋ）、９（Ｙ）、１３（Ｋ，Ｔ，Ｖ）、１４（Ｖ）、１５（Ｇ，Ｈ）、１８（Ｍ，Ｎ，Ｗ）、１９（Ｉ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）、２０（Ｉ）、２２（Ｌ，Ｍ）、２４（Ｍ，Ｒ）、２５（Ｅ）、３１（Ｍ，Ｐ，Ｖ）、３７（Ｒ，Ｙ）、３８（Ａ，Ｅ）、３９（Ｃ，Ｗ）、４１（Ｖ）、４２（Ｃ）、４８（Ｌ）、４９（Ｇ，Ｌ，Ｗ）、５４（Ｅ，Ｈ，Ｍ）、５７（Ｓ）、５８（Ｄ，Ｒ）、５９（Ｄ）、６０（Ｋ，Ｙ）、６１（Ａ，Ｄ，Ｒ）、６２（Ｎ）、６３（Ｋ，Ｑ）、６５（Ｙ）、６６（Ａ，Ｓ，Ｔ）、７４（Ｅ）、７６（Ｓ）、７９（Ｍ）、８４（Ｑ，Ｗ）、８５（Ｆ，Ｉ）、８７（Ａ）、９３（Ｈ，Ｎ，Ｗ）、９４（Ｋ，Ｍ，Ｐ）、９６（Ｐ，Ｒ）、９７（Ｉ）、９９（Ｐ，Ｑ）、１０１（Ｃ，Ｅ，Ｍ）、１０２（Ｈ）、１０３（Ｙ）、１０５（Ｆ）、１０６（Ｈ）、１０９（Ｔ）、１１０（Ｎ）、１１１（Ｆ，Ｗ）、１１２（Ｆ，Ｑ）、１１５（Ｉ，Ｌ）、１１７（Ｋ）、１１９（Ｑ，Ｖ）、１２０（Ｉ）、１２１（Ｑ）、１２３（Ｉ，Ｋ）、１２５（Ｃ）、１２８（Ｌ，Ｎ，Ｗ）、１３０（Ｅ）、１３１（Ｃ，Ｎ）、１３２（Ｃ）、１３３（Ｆ，Ｎ，Ｖ）、１３６（Ｒ）、１３７（Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ）、１３８（Ｆ）、１４０（Ｅ，Ｉ，Ｌ，Ｎ）、１４３（Ｎ）、１５２（Ｉ）、１５４（Ｍ，Ｙ）、１５５（Ｔ）、１５９（Ｍ，Ｗ）、１６２（Ｍ，Ｐ，Ｙ）、１６３（Ａ，Ｍ，Ｒ）、１６５（Ｐ）、１６８（Ｑ）、１６９（Ｙ）、１７０（Ｇ）、１７６（Ｆ，Ｎ，Ｗ）、１８０（Ｄ，Ｑ）、１８３（Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）、１８４（Ｗ）、１８８（Ｅ，Ｒ）、１８９（Ｅ，Ｍ）、１９０（Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）、１９２（Ｎ，Ｐ）、１９９（Ｎ，Ｖ）、２００（Ｐ）、２０２（Ｍ）、２０６（Ｎ）、２１０（Ｓ）、２１２（Ｑ）、２１４（Ｍ）、２２１（Ｆ，Ｇ，Ｙ）、２２３（Ｈ，Ｌ）、２２４（Ａ，Ｆ，Ｐ）、２２５（Ｃ）、２２６（Ｄ）、２２８（Ａ）、２２９（Ｍ，Ｓ）、２３１（Ｇ）、２３２（Ｄ，Ｗ）、２３６（Ｗ）、２３８（Ｖ）、２３９（Ｋ）、２４３（Ｓ）、２４４（Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｐ）、２４６（Ｉ）、２４８（Ｄ，Ｌ，Ｙ）、２４９（Ｇ，Ｔ）、２５０（Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｔ）、２５１（Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）、２５２（Ｗ）、２５３（Ｆ，Ｈ，Ｎ）、２５４（Ｎ，Ｐ）、２５５（Ｗ）、２５６（Ｄ）、２５９（Ｗ，Ｙ）、２６０（Ｐ）、２６２（Ｋ）、２６３（Ｃ，Ｈ，Ｍ）、２６５（Ｌ，Ｒ，Ｗ）、２６６（Ｅ）、及び２６８（Ｄ，Ｎ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項１６】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、表面の曝露されている残基のものであり、望ましい疎水性であるか、又は帯電した表面改質部位であり、前記望ましい表面改質部位を有する脂肪分解酵素変異体は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記残基位置は、１８、２７、２９、３３、５１、５８、７２、７５、１０１、１０８、１１４、１２１、１３５、１３７、１５６、１６３、１８７、２５０、２５２、及び２６４からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項１７】
前記改変が、Ａ０１８Ｋ、Ｄ０２７Ｎ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｐ０２９Ｅ、Ｎ０３３Ｄ、Ｎ０３３Ｅ、Ｎ０３３Ｒ、Ｆ０５１Ｔ、Ｓ０５８Ｍ、Ｔ０７２Ｒ、Ｌ０７５Ｑ、Ｎ１０１Ｄ、Ｒ１０８Ｋ、Ｒ１０８Ｑ、Ｒ１０８Ｙ、Ｔ１１４Ｆ、Ｔ１１４Ｉ、Ａ１２１Ｋ、Ｈ１３５Ｆ、Ｄ１３７Ｖ、Ｇ１５６Ｗ、Ｇ１６３Ｙ、Ｖ１８７Ｎ、Ｖ１８７Ｗ、Ｐ２５０Ｅ、Ｉ２５２Ａ、Ｉ２５２Ｔ、又はＬ２６４Ｐである、請求項１６に記載の変異体。
【請求項１８】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、表面の曝露されている残基のものであり、望ましい疎水性を持つ表面改質部位であり、前記望ましい表面改質部位を有する脂肪分解酵素変異体は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
かつ前記残基位置は、１８、２７、２９、３３、５１、５８、７２、７５、１０１、１０８、１１４、１２１、１３５、１３７、１５６、１６３、１８７、２５０、２５２、及び２６４からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項１９】
前記改変が、Ａ０１８Ｋ、Ｄ０２７Ｎ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｐ０２９Ｅ、Ｎ０３３Ｄ、Ｎ０３３Ｅ、Ｎ０３３Ｒ、Ｆ０５１Ｔ、Ｓ０５８Ｍ、Ｔ０７２Ｒ、Ｌ０７５Ｑ、Ｎ１０１Ｄ、Ｒ１０８Ｋ、Ｒ１０８Ｑ、Ｒ１０８Ｙ、Ｔ１１４Ｆ、Ｔ１１４Ｉ、Ａ１２１Ｋ、Ｈ１３５Ｆ、Ｄ１３７Ｖ、Ｇ１５６Ｗ、Ｇ１６３Ｙ、Ｖ１８７Ｎ、Ｖ１８７Ｗ、Ｐ２５０Ｅ、Ｉ２５２Ａ、Ｉ２５２Ｔ、又はＬ２６４Ｐである、請求項１８に記載の変異体。
【請求項２０】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変が、表面の曝露されている残基のものであり、かつ望ましい帯電している表面改質部位であり、前記望ましい表面改質部位を有する脂肪分解酵素変異体が、次の基準のうちの少なくとも１つを満たし、
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
前記残基位置が、１８、２７、２９、３３、７２、１０１、１０８、１２１、１３７、及び２５０からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２１】
前記改質が、Ａ０１８Ｋ、Ｄ０２７Ｎ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｐ０２９Ｅ、Ｎ０３３Ｄ、Ｎ０３３Ｅ、Ｎ０３３Ｒ、Ｔ０７２Ｒ、Ｎ１０１Ｄ、Ｒ１０８Ｑ、Ｒ１０８Ｙ、Ａ１２１Ｋ、Ｄ１３７Ｖ、又はＰ２５０Ｅである、請求項２０に記載の変異体。
【請求項２２】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記改変は、発現及び洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、投与量の半分での洗剤性能について、親ＴＬＬに対する最小性能指数（ＰＩ）が１．１以上であり、前記生産性の改変が、１（Ｓ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｔ）、８（Ｈ）、９（Ｋ，Ｎ）、１１（Ｈ，Ｋ）、１３（Ｎ）、１９（Ｇ）、２３（Ｋ，Ｎ，Ｑ  Ｒ）、２７（Ｑ，Ｒ）、２９（Ｋ，Ｒ）、３２（Ａ）、３３（Ｄ）、３７（Ｇ，Ｈ，Ｑ）、３８（Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｗ，Ｙ）、３９（Ｉ，Ｌ）、４２（Ｗ）、４３（Ｄ，Ｉ，Ｒ，Ｔ）、４５（Ｆ，Ｑ，Ｖ）、５１（Ｍ）、５３（Ｅ）、５４（Ｐ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ）、５８（Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｗ）、６９（Ｒ）、７３（Ｒ）、７５（Ａ，Ｒ）、７５（Ｔ）、７７（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、９０（Ｆ，Ｔ）、９１（Ｉ，Ｑ）、９４（Ｒ）、１０５（Ｐ）、１０８（Ｋ）、１２２（Ｆ）、１２５（Ｔ）、１３０（Ａ，Ｒ）、１３２（Ｋ，Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｒ）、１５１（Ｔ）、１５５（Ｓ）、１５６（Ｗ）、１６３（Ｆ，Ｐ）、１６４（Ｒ）、１８０（Ｋ）、１８３（Ｖ）、１８４（Ｙ）、１８７（Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｇ，Ｑ）、２１１（Ｉ）、２１４（Ａ）、２２８（Ｒ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｑ）、２４４（Ｉ）、２５２（Ｎ）、及び２６５（Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項２３】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変が、発現及び洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、補助剤を併用した場合の投与量の半分での洗剤性能について、親ＴＬＬに対する最小性能指数（ＰＩ）が１．１以上であり、前記生産性の改変が、１（Ｓ）、３（Ｔ）、４（Ｆ）、５（Ｈ、Ｉ、Ｓ、Ｔ）、８（Ｈ、Ｔ、Ｖ）、９（Ｇ、Ｈ、Ｋ）、１１（Ｋ）、１２（Ｖ、Ｗ）、１８（Ｋ）、１９（Ｇ）、２３（Ｋ、Ｑ、Ｒ）、２７（Ｒ、Ｓ）、３２（Ｉ）、３８（Ｆ、Ｌ、Ｍ、Ｗ、Ｙ）、３９（Ｉ、Ｐ）、４３（Ｉ、Ｒ、Ｔ）、４５（Ｆ、Ｑ）、５３（Ｋ）、５４（Ｐ）、５６（Ｋ、Ｒ）、５８（Ｈ、Ｑ）、７５（Ｇ、Ｑ、Ｒ）、７７（Ｉ）、９０（Ｔ）、９１（Ｉ、Ｑ）、１０５（Ｐ）、１２３（Ｎ）、１２７（Ｆ）、１３０（Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｑ、Ｒ）、１３１（Ｒ）、１３６（Ｑ）、１３７（Ｒ、Ｓ）、１４３（Ｓ）、１５６（Ｔ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｓ）、１６４（Ｒ、Ｖ）、１６６（Ｇ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｇ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｗ）、１８８（Ｆ）、１８９（Ｄ、Ｇ）、１９９（Ｇ）、２２８（Ｒ）、２５２（Ｎ）、２６４（Ｒ）、及び２６５（Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２４】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、総投与量での洗剤性能について、親ＴＬＬに対する最小性能指数（ＰＩ）が１．１以上であり、前記生産性の改変が、１（Ｓ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｔ）、２３（Ｅ，Ｑ）、２９（Ｈ，Ｉ，Ｒ，Ｔ）、３９（Ｈ，Ｉ）、４３（Ｒ，Ｔ）、５４（Ｔ）、５８（Ｑ）、１１５（Ｔ）、１３０（Ａ，Ｒ）、１５４（Ｌ）、１５８（Ｅ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｔ）、２２８（Ｒ）、及び２６９（Ｗ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２５】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及びｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、前記生産性の改変が、２（Ｉ）、１１（Ｋ）、１５（Ｓ）、１８（Ｋ）、２３（Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、２４（Ｈ）、２６（Ｔ）、２７（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、２９（Ｅ）、３７（Ｐ）、４８（Ｅ，Ｑ）、５０（Ｓ）、５１（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｓ，Ｔ）、５６（Ｋ，Ｖ，）、５８（Ｍ）、６６（Ｎ，Ｑ）、７５（Ａ，Ｇ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ｉ，Ｔ）、９１（Ｅ，Ｑ）、９４（Ｒ）、９６（Ｋ）、９９（Ｄ，Ｓ）、１０１（Ｄ，Ｈ）、１０８（Ｋ，Ｍ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｅ，Ｑ）、１１４（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、１１７（Ｑ）、１２０（Ｎ）、１２１（Ｋ）、１３５（Ｆ）、１３７（Ｉ，Ｑ，Ｒ）、１５４（Ｆ，Ｉ，Ｌ）、１５５（Ｇ，Ｓ）、１５６（Ｗ）、１６３（Ｆ）、１６９（Ｓ）、１７６（Ｉ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｗ）、２２６（Ｎ）、２５０（Ｅ）、２５２（Ａ）、２５６（Ｔ）、２６４（Ｃ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２６】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及びｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）は、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、前記生産性の改変が、１２（Ｆ）、１３（Ｑ）、１５（Ｓ）、１９（Ｃ，Ｇ）、２０（Ｐ）、２３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｖ）、２４（Ｗ）、２６（Ｃ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）、２８（Ｄ，Ｐ）、３１（Ｅ）、３４（Ｐ）、３７（Ｃ，Ｄ）、３９（Ｅ，Ｌ，Ｐ）、４２（Ｉ，Ｖ）、４５（Ｆ，Ｖ）、４６（Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｗ）、４７（Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）、４９（Ｈ，Ｖ）、５１（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｓ，Ｔ）、６０（Ｌ）、６４（Ｖ）、６６（Ｑ）、６８（Ｓ，Ｔ，Ｖ）、７３（Ｅ，Ｇ，Ｒ，Ｓ）、７５（Ｅ，Ｇ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ａ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）、９１（Ｅ，Ｑ）、９４（Ｄ）、１０８（Ｅ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）、１１４（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、１２７（Ｔ）、１２８（Ｈ，Ｓ，Ｙ）、１３１（Ｒ，Ｗ，Ｙ）、１３２（Ｄ）、１３３（Ｅ，Ｑ）、１３６（Ｄ，Ｑ）、１３９（Ｍ）、１４０（Ｆ，Ｍ，Ｑ）、１４２（Ｙ）、１５４（Ｉ）、１５５（Ｓ）、１５６（Ｗ）、１５９（Ｅ，Ｒ）、１６３（Ｆ，Ｌ，Ｐ，Ｙ）、１６８（Ｇ，Ｌ）、１７９（Ｌ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、１８８（Ｆ）、１８９（Ｄ）、２０５（Ｄ）、２０８（Ｅ）、２０９（Ｓ）、２１４（Ｄ）、２２３（Ｔ）、２２５（Ｅ）、２２８（Ｅ）、２３７（Ｌ，Ｙ）、２５０（Ｅ）、２５１（Ｄ）、２５２（Ａ）、２５６（Ｔ）、２６４（Ｃ，Ｈ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）、及び２６５（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２７】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及びｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ＬＡＳ安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、前記親ＴＬＬに対し１．１以上であり、前記生産性の改変が、１（Ｆ，Ｒ）、４（Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）、５（Ｋ）、１１（Ｋ）、２３（Ｋ）、２７（Ａ，Ｈ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、３７（Ｐ）、３８（Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｗ，Ｙ）、４２（Ｖ）、４３（Ｉ，Ｒ）、４５（Ｆ，Ｑ，Ｖ）、４７（Ｔ）、４９（Ｖ）、５１（Ｉ，Ｍ，Ｓ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７３（Ｓ）、７５（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｑ，Ｒ）、９１（Ｑ）、９４（Ｒ）、１０１（Ｄ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ａ）、１１９（Ｄ，Ｔ）、１２０（Ｙ）、１５４（Ｉ）、１７９（Ｌ）、１８７（Ｔ）、１８９（Ｄ，Ｑ）、２００（Ａ）、２０９（Ｓ）、２１１（Ｗ）、２２６（Ｎ）、２５０（Ｅ，Ｑ）、２５１（Ｗ）、２５２（Ａ）、及び２５６（Ｔ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２８】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、前記生産性の改変が、２（Ｉ，Ｌ）、３（Ｄ）、４（Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｗ）、５（Ｈ，Ｙ）、８（Ｈ，Ｍ）、９（Ｋ）、１１（Ｈ，Ｋ）、１８（Ｋ）、２３（Ｋ）、２４（Ａ，Ｔ）、２６（Ｋ，Ｔ）、２７（Ａ，Ｉ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、３０（Ｒ，Ｖ）、３２（Ｓ）、３５（Ｋ）、３７（Ｇ）、４０（Ｍ）、５４（Ｖ）、６９（Ａ，Ｋ）、７１（Ｒ）、７２（Ｌ）、７４（Ａ）、７５（Ｍ，Ｓ）、９１（Ｉ）、９４（Ｒ）、１０１（Ｙ）、１０８（Ｋ，Ｙ）、１１１（Ｌ，Ｔ，Ｖ）、１１４（Ｉ）、１２２（Ｔ，Ｙ）、１２３（Ｑ）、１２５（Ｑ）、１３０（Ｆ，Ｈ）、１３２（Ｈ，Ｗ）、１３４（Ｌ，Ｖ）、１３７（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）、１５１（Ｔ，Ｗ）、１５５（Ｇ）、１５６（Ｗ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｙ）、１６６（Ｇ）、１７６（Ｉ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｋ）、２３２（Ｌ，Ｐ）、２３３（Ｄ，Ｈ）、２３７（Ｌ，Ｙ）、２４４（Ｉ）、２５２（Ｌ，Ｔ）、２５５（Ｌ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項２９】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＯ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、前記親ＴＬＬに対し１．１以上であり、前記生産性の改変が、１（Ｄ）、２（Ｌ）、３（Ｄ，Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｙ）、８（Ａ，Ｅ，Ｍ）、９（Ｒ）、１８（Ｋ）、２３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ）、２４（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｎ，Ｔ）、２６（Ｇ，Ｋ）、２７（Ａ，Ｅ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｅ，Ｑ，Ｒ）、３３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）、３７（Ｄ，Ｅ，Ｐ，Ｑ）、３８（Ｄ，Ｎ）、４０（Ｍ）、４８（Ｅ，Ｑ）、４９（Ｖ）、５０（Ｅ，Ｆ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、５４（Ｆ，Ｒ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、６４（Ｎ）、６６（Ｑ）、７４（Ｑ）、７５（Ｅ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｔ）、８７（Ｐ）、９０（Ｅ，Ｆ，Ｑ）、１０１（Ｄ）、１０５（Ｄ，Ｐ）、１０８（Ｋ，Ｑ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｅ，Ｌ，Ｑ，Ｔ）、１１４（Ｆ，Ｍ）、１１５（Ｒ）、１１７（Ｑ）、１２０（Ｎ）、１２２（Ｙ）、１２３（Ｅ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ）、１２５（Ｑ）、１２７（Ｅ，Ｆ，Ｒ）、１３０（Ａ，Ｆ，Ｈ，Ｑ）、１３２（Ｋ，Ｑ，Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、１５４（Ｆ，Ｌ）、１５５（Ｇ，Ｓ）、１５６（Ｆ，Ｗ）、１５８（Ｅ，Ｆ，Ｙ）、１６２（Ｇ，Ｒ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、１６９（Ｓ）、１７６（Ｉ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｄ，Ｑ，Ｒ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ｍ）、２２８（Ｅ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｄ，Ｇ，Ｑ）、２６４（Ｅ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ，Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３０】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、前記親ＴＬＬに対し１．１以上であるものであり、前記生産性の改変が、１（Ｑ，Ｓ）、３（Ｄ，Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｓ，Ｙ）、９（Ｍ）、１１（Ｋ）、１２（Ｆ）、１５（Ｓ）、２３（Ｆ）、２７（Ｅ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、３２（Ａ，Ｑ，Ｓ）、３３（Ｄ，Ｑ）、３５（Ｅ，Ｋ，Ｒ）、４０（Ｍ）、４８（Ｑ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｔ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７１（Ｅ）、７５（Ｒ）、７７（Ｉ，Ｔ）、８７（Ｐ）、１０５（Ａ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ａ，Ｌ）、１１４（Ｍ）、１１５（Ｒ）、１２７（Ｅ，Ｆ）、１３０（Ａ）、１３２（Ｑ，Ｒ，Ｗ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）、１４３（Ａ）、１５５（Ｓ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、１６４（Ｄ，Ｒ）、１６５（Ｉ，Ｙ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）、１８９（Ｒ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ａ，Ｍ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｑ）、２４４（Ｉ）、２５２（Ａ，Ｋ，Ｌ，Ｒ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６４（Ｈ，Ｒ，Ｔ）、及び２６９（Ｖ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３１】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ及びｐＮＰＯ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であるものであり、前記生産性の改変が、２（Ｌ）、３（Ｄ）、４（Ｄ，Ｌ）、５（Ｈ，Ｙ）、８（Ｍ）、１８（Ｋ）、２４（Ａ，Ｔ）、２６（Ｋ）、２７（Ａ，Ｉ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、４０（Ｍ）、７５（Ｍ）、１０８（Ｋ，Ｙ）、１１１（Ｌ，Ｔ）、１２２（Ｙ）、１２３（Ｑ）、１２５（Ｑ）、１３０（Ｆ，Ｈ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）、１５５（Ｇ）、１５６（Ｗ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｙ）、１７６（Ｉ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｄ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３２】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＯ及びｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であるものであり、前記生産性の改変が、３（Ｄ，Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｙ）、２３（Ｆ）、２７（Ｅ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、３３（Ｄ，Ｑ）、４０（Ｍ）、４８（Ｑ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７５（Ｒ）、７７（Ｉ，Ｔ）、８７（Ｐ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ａ，Ｌ）、１１４（Ｍ）、１１５（Ｒ）、１２７（Ｅ，Ｆ）、１３０（Ａ）、１３２（Ｑ，Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）、１５５（Ｓ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）、１８９（Ｒ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ｍ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｑ）、及び２６４（Ｒ，Ｔ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３３】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ、ｐＮＰＯ、及びｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であるものでり、前記生産性の改変が、３（Ｄ）、４（Ｄ，Ｌ）、５（Ｈ）、５（Ｙ）、２７（Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、４０（Ｍ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ｌ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｙ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｙ）、１８７（Ｈ，Ｓ，Ｗ）、及び２３２（Ｐ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３４】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以下であり、ｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１以上であるものであり、前記生産性の改変が、１（Ｑ）、９（Ｍ）、１２（Ｆ）、１５（Ｓ）、２３（Ｆ）、２７（Ｅ）、３２（Ｑ）、３５（Ｅ）、４８（Ｑ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７１（Ｅ）、７５（Ｒ）、１１５（Ｒ）、１３０（Ａ）、１３２（Ｑ，Ｒ）、１３７（Ｅ，Ｉ，Ｑ，Ｒ）、１４３（Ａ）、１５５（Ｓ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ）、１６４（Ｄ）、１６５（Ｉ，Ｙ）、１８７（Ｑ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ａ，Ｍ）、２３３（Ｑ）、２５２（Ａ，Ｋ，Ｒ）、２６４（Ｈ，Ｒ，Ｔ）、及び２６９（Ｖ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３５】
親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、前記改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＨ  ６でのｐＮＰＯ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であるものであり、前記生産性の改変が、１（Ｑ，Ｓ）、２（Ｌ）、３（Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｙ）、９（Ｋ）、１１（Ｋ）、１２（Ｆ）、１５（Ｓ）、２４（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｎ）、２７（Ａ，Ｅ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、３２（Ａ）、３３（Ｄ，Ｆ，Ｑ）、３８（Ｄ）、４０（Ｍ）、４８（Ｑ）、４９（Ｖ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｔ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、６９（Ａ）、７５（Ｒ）、７７（Ｔ）、９１（Ｑ）、９４（Ｒ）、９８（Ｉ）、１０５（Ａ）、１０８（Ｋ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｌ）、１１４（Ｉ，Ｍ，Ｖ）、１２１（Ｋ）、１２３（Ｅ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ）、１２５（Ｑ）、１２７（Ｅ，Ｆ）、１３０（Ａ，Ｈ）、１３２（Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）、１４３（Ａ）、１５１（Ｐ）、１５４（Ｆ，Ｉ，Ｌ）、１５５（Ｓ）、１５６（Ｗ）、１５８（Ｙ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｗ，Ｙ）、１６４（Ｄ，Ｒ）、１６５（Ｉ，Ｙ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｒ）、２２７（Ｍ）、２２８（Ｒ）、２３２（Ｐ）、２５２（Ｌ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される、脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３６】
前記変異体が、親脂肪分解酵素と比較して改良された特性を有する、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の脂肪分解酵素変異体又はその活性断片。
【請求項３７】
前記改良された特性が、クリーニング性能、加水分解の改良、基質特異性の変更、洗剤安定性又は熱安定性である、請求項３６に記載の脂肪分解酵素変異体。
【請求項３８】
前記親脂肪分解酵素がサーモミセス（Thermomyces）ファミリーに由来する、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の脂肪分解酵素変異体。
【請求項３９】
前記親脂肪分解酵素が、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）に由来する、請求項３８に記載の脂肪分解酵素変異体。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれか一項に記載の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体を含む、クリーニング組成物。
【請求項４１】
前記クリーニング組成物が、顆粒状、粉末状、固体状、バー状、液体状、錠剤状、ゲル状、又はペースト組成物である、請求項４０に記載のクリーニング組成物。
【請求項４２】
前記クリーニング組成物が洗剤組成物である、請求項４０又は４１のいずれか一項に記載のクリーニング組成物。
【請求項４３】
前記クリーニング組成物が、洗濯洗剤組成物、食器用洗剤組成物、又は硬質表面クリーニング組成物である、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載のクリーニング組成物。
【請求項４４】
前記食器用洗剤が、食器手洗い用洗剤組成物、又は自動食器洗浄機用洗剤組成物である、請求項４３に記載のクリーニング組成物。
【請求項４５】
前記クリーニング組成物が洗濯洗剤組成物である、請求項４３に記載のクリーニング組成物。
【請求項４６】
更に少なくとも１種の漂白剤を含む、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載のクリーニング組成物。
【請求項４７】
前記クリーニング組成物がリン酸塩を含まない、請求項４０〜４６のいずれか一項に記載のクリーニング組成物。
【請求項４８】
前記クリーニング組成物がリン酸塩を含有する、請求項４０〜４６のいずれか一項に記載のクリーニング組成物。
【請求項４９】
更に少なくとも１種の追加の酵素を含有する、請求項４０〜４８のいずれか一項に記載のクリーニング組成物。
【請求項５０】
前記追加の酵素が、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、脂肪分解酵素、メタロ脂肪分解酵素、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、及びアミラーゼからなる群から選択される、請求項４９に記載のクリーニング組成物。
【請求項５１】
表面又は物品を、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の脂肪分解酵素を少なくとも１種含むクリーニング組成物に接触させる工程を含む、クリーニング方法。
【請求項５２】
表面又は物品を、請求項４０〜５０のいずれか一項に記載のクリーニング組成物に接触させる工程を含む、クリーニングの方法。
【請求項５３】
前記表面又は物品のそれぞれを前記クリーニング組成物と接触させた後に、前記表面又は物品をすすぎ洗いすることを更に含む、請求項５１又は５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記物品が食器類である、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記物品が布地である、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記表面又は物品を前記クリーニング組成物に接触させる工程の後に、前記表面又は物品をすすぎ洗いする工程を更に含む、請求項５１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記表面又は物品をすすぎ洗いする工程の後に前記表面又は物品を乾燥する工程を更に含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
請求項４０〜５０のいずれか一項に記載のクリーニング組成物、及びクリーニングする必要のある表面又は物品を用意する工程、並びに前記表面又は物品の表面を洗浄するのに好適な条件下で、前記クリーニング組成物を前記表面又は物品と接触させて、前記表面又は物品を洗浄する工程、を含む、表面又は物品のクリーニング方法。
【請求項５９】
前記洗浄された表面又は物品をすすぎ洗いして、すすぎ洗いされた表面又は物品をもたらす工程を更に含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記すすがれた表面又は物品を乾燥する工程を更に含む、請求項５８又は５９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年１０月１２日に出願された米国仮出願特許第６１／７１３，４３６号の利益を主張し、参照によりその全体を本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００２】
油性の染みを除去するため、リパーゼ及びクチナーゼなどの脂肪分解酵素が洗剤洗浄組成物に使用されてきた。脂肪分解酵素の機能による一機序は、トリグリセリドを加水分解することにより脂肪酸を生成するものである。しかしながら、これらの酵素は洗浄組成物中に存在する界面活性剤及び他の成分によってしばしば阻害され、油性の染みを除去する性能が妨げられる。したがって、洗浄組成物に関連する過酷な環境において機能し得る脂肪分解酵素が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、改良された脂肪分解酵素を提供し、特に、洗剤組成物に有用な酵素を提供する。詳細には、本発明は、親脂肪分解酵素と比較して、置換などの１つ以上の改変を有する脂肪分解酵素変異体を提供する。この提供は、標準的な洗剤製剤における洗浄性能、並びに低濃度界面活性剤洗剤組成物、洗剤組成物中の酵素の安定性、酵素の熱安定性、基質の加水分解、洗浄サイクルにおいて酵素の有効性を改良する電荷／疎水特性の発現及び／又は改変を改良し、酵素を改良することにより達成され得る。本発明は、限定するものではないが、多様なクリーニング用途に特に良好に適し、かつ有用であるリパーゼ脂肪分解酵素変異体を含む、脂肪分解酵素変異体を提供する。本発明は、本発明の脂肪分解酵素変異体を使用するクリーニング方法も提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸の改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は、脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１つの改変は、次の基準のうちの少なくとも１つを満たす：
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである；
並びに生産的な位置は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、８４、８５、８６、８７、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１４、１１５、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２５、１２６、１２７、１２８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４２、１４３、１４９、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７６、１７９、１８０、１８１、１８３、１８４、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９６、１９８、１９９、２００、２０２、２０５、２０６、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１６、２１７、２１８、２２１、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３６、２３７、２３８、２３９、２４２、２４３、２４４、２４６、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５９、２６０、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、及び２６９からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【０００５】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変の少なくとも５０％は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な位置は、１、２、３、４、５、６、８、９、１３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３７、３８、３９、４６、５１、５２、５４、５８、６４、６６、６８、６９、７１、７２、７５、９０、９３、９４、１１１、１２０、１２２、１２３、１３０、１３１、１３７、１４０、１６２、１６３、１８９、２５０、２５２、及び２６４からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【０００６】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも３０％は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な位置は、１８、１９、２０、３０、３１、３２、４７、４８、４９、５０、５３、５６、６０、７３、７４、８５、８６、９１、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０５、１０８、１１５、１２５、１２７、１２８、１３２、１３３、１５１、１５９、１６４、１７９、１８３、１８７、１８８、１９０、２１６、２２３、２３２、２３７、２４４、２５１、２５４、２６３、２６７、及び２６９からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【０００７】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変の少なくとも１５％は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な位置は、７、１１、１２、１５、２２、３５、４０、４２、４３、４４、４５、６１、６３、６５、６７、７６、７７、８４、８７、１１４、１１７、１１９、１２１、１３４、１３５、１３６、１４３、１５４、１５５、１５６、１５８、１６５、１６６、１６８、１７６、１８０、１９１、１９９、２００、２０２、２０９、２１１、２１４、２１７、２２１、２２４、２２５、２２８、２２９、２３１、２３３、２４８、２４９、２５３、２５５、２５６、２６５、及び２６８からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【０００８】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変のうち１５％未満は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な位置は、１４、１６、１７、３４、４１、５５、５７、５９、６２、７０、７９、９２、１００、１０２、１０３、１０６、１０９、１１０、１１２、１１８、１２６、１３８、１３９、１４２、１４９、１５２、１５３、１６７、１６９、１７０、１８１、１８４、１９２、１９３、１９６、１９８、２０５、２０６、２０８、２１０、２１２、２１３、２１８、２２６、２２７、２３０、２３６、２３８、２３９、２４２、２４３、２４６、２５７、２５９、２６０、２６２、及び２６６からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変の少なくとも５０％は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な改変は１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；及び２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも３０％は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な改変は１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変のうち少なくとも１５％は、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な改変は１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を含む脂肪分解酵素変異体又はその活性断片であって、改変は脂肪分解酵素変異体の生産的な位置におけるものであり、生産的な位置において試験される改変の少なくとも１つは、上掲の基準ａ、ｂ、及びｃのうちの少なくとも１つを満たし、生産的な改変は１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１４（Ａ，Ｓ，Ｖ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１６（Ｙ，Ｈ，Ｗ）；１７（Ｓ，Ｅ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３４（Ｉ，Ｐ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４１（Ｃ，Ｖ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５５（Ｆ，Ｇ，Ｗ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５７（Ｄ，Ｓ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；５９（Ｇ，Ｄ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６２（Ｄ，Ｎ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７０（Ｄ，Ｓ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；７９（Ｓ，Ａ，Ｍ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９２（Ｎ，Ａ，Ｔ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１００（Ｉ，Ｍ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０２（Ｄ，Ｈ）；１０３（Ｉ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０６（Ｇ，Ｈ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１０９（Ｇ，Ｔ）；１１０（Ｈ，Ｎ，Ｓ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１２（Ｇ，Ｆ，Ｑ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１８（Ｒ，Ｐ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２６（Ｑ，Ｉ，Ｍ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３８（Ｙ，Ｆ）；１３９（ＲＬＴ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４２（Ｆ，Ｈ，Ｙ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１４９（Ｇ，Ａ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５２（Ａ，Ｉ，Ｖ）；１５３（Ｔ，Ｓ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６７（Ｄ，Ｎ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１６９（Ｆ，Ｓ，Ｙ）；１７０（Ｓ，Ｇ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８１（Ｆ，Ｌ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８４（Ｆ，Ｗ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９２（Ｔ，Ｎ，Ｐ）；１９３（Ｌ，Ｔ）；１９６（Ｉ，Ｖ）；１９８（Ｈ，Ｇ，Ｓ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０５（Ｒ，Ｄ）；２０６（Ｌ，Ｎ）；２０８（Ｐ，Ｅ，Ｎ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１０（Ｅ，Ｓ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１２（Ｇ，Ｑ）；２１３（Ｙ，Ｓ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２１８（Ｐ，Ｔ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２６（Ｔ，Ｄ，Ｎ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３０（Ｖ，Ｗ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３６（Ｖ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２３８（Ｉ，Ｖ）；２３９（Ｅ，Ｋ）；２４２（Ｄ，Ｔ）；２４３（Ａ，Ｓ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４６（Ｇ，Ｉ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２５７（Ａ，Ｗ，Ｙ）；２５９（Ｌ，Ｗ，Ｙ）；２６０（Ｗ，Ｐ）；２６２（Ｆ，Ｄ，Ｋ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６６（Ｇ，Ｅ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、上掲の通りの脂肪分解酵素変異体のうち少なくとも１種を含む洗浄組成物である。一部の実施形態では、本発明は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、脂肪分解酵素、メタロ脂肪分解酵素、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、及びアミラーゼからなる群からの追加の酵素を更に含む。
【００１４】
一実施形態では、本発明は、表面又は物品を、上掲の脂肪分解酵素変異体のうち少なくとも１種を含む洗浄組成物と接触させることを含む、洗浄方法である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ｐＨＹＴ−ＴＬＬｗｔのプラスミドマップである。
【図２】アジュバント濃度を様々に変化させた場合の、ＴＬＬリパーゼ酵素におけるリパーゼ活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、改良された脂肪分解酵素を提供し、特に、洗剤組成物に有用な酵素を提供する。詳細には、本発明は、親脂肪分解酵素と比較して、置換などの改変を１つ以上有する脂肪分解酵素変異体を提供する。この提供は、洗浄性能、洗剤組成物中の酵素の安定性、酵素の熱安定性、及び／又は改変された基質の加水分解、及び／又は洗浄サイクルにおいて酵素の有効性を改良する電荷／疎水特性を改良し、酵素を改良することにより達成され得る。本発明は、限定するものではないが、多様な洗浄用途特に良好に適し、かつ有用であるリパーゼ変異体脂肪分解酵素を含む、脂肪分解酵素変異体を提供する。本発明は、本明細書に示される脂肪分解酵素変異体（例えば、リパーゼ変異体）のうち少なくとも１種を含む組成物を包含する。このような組成物のうち一部のものは、洗剤組成物を含む。本発明は、サーモミセス（Thermomyces）種脂肪分解酵素変異体と、１種以上のこのようなリパーゼ変異体を含む組成物とを提供する。本発明の脂肪分解酵素変異体は、洗剤組成物に有用なその他の酵素と組み合わせることができる。本発明は、既知のリパーゼ脂肪分解酵素などの既知の脂肪分解酵素と比較して、同程度の又は改良された洗浄性能を有する、酵素組成物も提供する。本発明は、本発明の脂肪分解酵素変異体を使用するクリーニング方法も提供する。
【００１７】
本発明は、親脂肪分解酵素からの１つ以上の改変を有する、脂肪分解酵素の酵素変異体を包含する。酵素変異体は、洗浄性能、基質の加水分解、洗剤組成物中の酵素の安定性及び酵素の熱安定性に関し最低限の性能指数を有し、かつこれらの特性のうち少なくとも１つが親脂肪分解酵素から改良されている洗剤組成物に有用であり得る。
【００１８】
加えて、本発明は、洗剤組成物に有用であり得る脂肪分解酵素の１つ以上のアミノ酸位置における置換などの改変を提供し、ここで、望ましい改変の結果として、洗浄性能、基質の加水分解、洗剤組成物中の酵素の安定性、並びに酵素の熱安定性について最低限の性能指数を示し、かつこれらの特性のうちの少なくとも１つが、親脂肪分解酵素から改良されている。これらの改変は、本発明の好適な改変とみなされる。これらのアミノ酸位置は、親脂肪分解酵素に対するコンビナトリアルな改変に有用な位置であるとみなすことができる。有用な位置であることが判明している、脂肪分解酵素のアミノ酸位置は、洗剤組成物への使用に好適な複数の改変を有することを更に特徴とし得る。各位置に関し、好適な改変をすることのできる数が多くなるほど、特定の位置の生産性が高くなることを意味する。
【００１９】
本明細書において別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同様の意味を持つ。本願に記載されているものと類似した又は等価な多くの方法及び部材は本発明の実施において使用を見出すことができるが、一部の方法及び部材を本明細書に記載する。したがって、以降で定義される用語は、総じて本明細書を参照することでより詳しく説明される。本明細書で引用される全ての特許、特許出願、論文及び刊行物は、参照により明示的に本案件に組み込まれる。
【００２０】
また、本明細書で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、特に明示しない限り、複数形も含む。別途記載のない限り、核酸は左から右に向かって５’から３’の配向になるように、アミノ酸配列は左から右に向かってアミノからカルボキシという配向になるように、それぞれ記載される。当業者により使用される状況に基づき、方法論、プロトコル、及び試薬は変化することから、本発明は記載される特定の方法論、プロトコル、及び試薬に制限されるものではないことは理解されるであろう。
【００２１】
本明細書全体を通じて記載されているあらゆる最大数値限定には、それよりも小さいあらゆる数値限定が、あたかもこうした小さい数値限定が本明細書に明確に記載されているかのように包含されることが意図される。本明細書の全体を通じて与えられる全ての最小の数値限定には、これよりも大きいあらゆる数値限定が、あたかもこうしたより大きい数値限定が本明細書に明確に記載されていかのように包含される。本明細書の全体を通じて与えられる全ての数値範囲には、これよりも狭い数値範囲が、あたかもこうしたより狭い数値範囲が全て本明細書に明確に記載されているかのように包含される。
【００２２】
「タンパク質」又は「ポリペプチド」は、アミノ酸残基のポリマー配列からなる。「タンパク質」及び「ポリペプチド」なる用語は、本明細書で互換可能に使用される。ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＪＣＢＮ）に従い定義されるようなアミノ酸の一文字表記及び三文字表記を本開示を通して使用する。遺伝子暗号の縮重に起因し、ポリペプチドは１種以上のヌクレオチド配列によりコードされる場合があることも理解されたい。変異は、親アミノ酸の１文字表記、続いて数字、次に変異アミノ酸の１文字表記により記載される。例えば、位置８７でグリシン（Ｇ）がセリン（Ｓ）に置き換わる変異が生じている場合、「Ｇ０８７Ｓ」又は「Ｇ８７Ｓ」と表すことができる。複数の変異は、「−」を変異の間に挿入することで示すことができる。例えば、位置８７及び９０における変異は、「Ｇ０８７Ｓ−Ａ０９０Ｙ」又は「Ｇ８７Ｓ−Ａ９０Ｙ」又は「Ｇ８７Ｓ＋Ａ９０Ｙ」又は「Ｇ０８７Ｓ＋Ａ０９０Ｙ」のいずれかとして表すことができる。
【００２３】
用語「に由来する」及び「から得られる」は、対象とする生物株により生産される、あるいは生産され得る脂肪分解酵素だけでなく、このような株から単離されるＤＮＡ配列によりコードされる脂肪分解酵素、及びこのようなＤＮＡ配列を含有している宿主生物で生産されるプロテアーゼも指す。加えて、この用語は、合成及び／又はｃＤＮＡ由来のＤＮＡ配列によりコードされ、かつ対象とする脂肪分解酵素を識別する際の特性を有する脂肪分解酵素を指す。例示のため、「サーモミセス（Thermomyces）由来の脂肪分解酵素」は、サーモミセス（Thermomyces）により天然に生産される、脂肪分解活性を有する酵素、並びにサーモミセス（Thermomyces）資源により生産されるもののような脂肪分解酵素を指すものの、脂肪分解酵素をコードする核酸により形質転換された非サーモミセス（non-Thermomyces）生物によりもたらされる遺伝子組み換え法を介するものではない。
【００２４】
本明細書で使用するとき、「相同性」は、配列類似性又は同一性を指し、同一性が好ましい。相同性は、当該技術分野において既知の標準法を使用して求めることができる（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）；Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）；Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージに含まれるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡなどのソフトウェアプログラム（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）；並びにＤｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７〜３９５（１９８４）を参照されたい）。有用なアルゴリズムの一例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、ペアワイズアライメントのプログレッシブ法を用いて、一群の関連する配列から複数の配列のアライメントを行う。ＰＩＬＥＵＰは、アライメントを行うのに使用されるクラスタリング関係を示す系統樹をプロットすることもできる。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅのプログレッシブアライメント法を単純化して用いる（Ｆｅｎｇ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１〜３６０（１９８７）を参照されたい）。この方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐにより記載されるものと類似のものである（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１〜１５３（１９８９）を参照されたい）。有用なＰＩＬＥＵＰパラメーターとしては、３．００のデフォルトギャップ重みづけ（default gap weight）、０．１０のデフォルトギャップ伸長重みづけ（default gap length weight）及び重みつき末端ギャップ（weighted end gaps）が挙げられる。Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．により報告されているＢＬＡＳＴアルゴリズムもその他の有用なアルゴリズムの例である（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０（１９９０）；並びにＫａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３〜５７８７（１９９３）を参照されたい）。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムはＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２プログラムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：４６０〜４８０（１９９６）を参照されたい）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、複数の検索パラメーターを使用し、これらのうちのほとんどはデフォルト値に設定される。調製可能なパラメーターは以下の値に設定される：ｏｖｅｒｌａｐ  ｓｐａｎ＝１、ｏｖｅｒｌａｐ  ｆｒａｃｔｉｏｎ＝０．１２５、ｗｏｒｄ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ（Ｔ）＝１１。ＨＳＰ  Ｓ及びＨＳＰ  Ｓ２パラメーターは動的な値であり、特定の配列の構成、及び所望の配列を検索する特定のデータベースの構成に依存してプログラム自体により確立される。しかしながら、これらの値は、感度を上昇させるように調整することができる。
【００２５】
参照配列と対象とする試験配列との配列同一率は、当業者により容易に判定することができる。ポリヌクレオチド又はポリペプチド配列により共有される同一率は、配列をアライメントし、当該技術分野において既知の方法により同一性を判定することによって分子間での配列情報を直接比較することにより、判定される。配列類似性を判定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４１０（１９９０）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウェアは、米国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）より公的に入手可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中の同じ長さのワードとアライメントを行ったときに一致するか又はある程度ポジティブであると評価された（positive-valued）閾値スコアＴを満たすかのいずれかである問い合わせ配列中の長さＷの短いワードを同定することにより、高スコアの配列ペア（ＨＳＰ）を同定する。これらの最初にヒットした隣接ワードは、これらを含有するより長いＨＳＰを見つけるための開始点として働く。ワードのヒットは、累積アライメントスコアが増加し得る限り比較されている２つの配列の各々に沿って両方向に拡張される。ワードのヒットの拡張は、次の場合に止まる：累積アライメントスコアが最大達成値から量Ｘだけ減少する、累積スコアがゼロ以下になる、又は、いずれかの配列の末端に到達する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ及びＸは、感度及びアライメントの速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、ワード長（Ｗ）：１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９９２）を参照されたい）アライメント（Ｂ）：５０、期待値（Ｅ）：１０、Ｍ’５、Ｎ’−４をデフォルトとして使用し、両鎖を比較する。
【００２６】
次いで、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、類似する２つの配列間の統計解析を実行する（例えば、上掲Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌを参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の一つの尺度は、最小和確率（smallest sum probability）（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然により生じ得る確率の指標を提供する。例えば、試験する核酸を脂肪分解酵素の核酸と比較した際の最小和確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、及び最も好ましくは約０．００１未満である場合、核酸は本発明の脂肪分解酵素の核酸と類似していると考えられる。脂肪分解酵素ポリペプチドをコードしている試験核酸は、最小合計類似度の比較結果が約０．５未満、及びより好ましくは約０．２未満である場合に、特定の脂肪分解酵素の核酸と類似していると考えられる。
【００２７】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列についての文脈において、「同一率（percent identical or percent identity）」は、２つ以上の配列を最も一致するように比較及びアライメントし、配列比較アルゴリズムを用いて又は目視確認により判定したときに、２つ以上の配列が、同一であるか、あるいは核酸残基又はアミノ酸残基と、表記される割合で同一であることを指すものである。参照（すなわち、クエリー）アミノ酸配列に対する、対象とするアミノ酸配列の、「配列同一率」又は「同一率（％）」又は「配列同一率（％）」又は「アミノ酸配列同一率」は、対象とするアミノ酸配列が、配列を最適にアライメントした際の比較長さにわたってクエリーアミノ酸配列に対して表記される割合（すなわち、アミノ酸とアミノ酸を並べたときの同一度）だけ同一であることを意味する。したがって、２つのアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一率８０％又は同一率８０％は、最適にアライメントした２つのアミノ酸配列中のアミノ酸残基のうち８０％が同一であることを意味する。
【００２８】
参照（すなわち、クエリー）核酸配列に対する、対象とする核酸配列の、「配列同一率」又は「同一率（％）」又は「配列同一率（％）」又は「核酸配列同一率（％）」は、対象とする核酸配列が、配列を最適にアライメントした際の比較長さにわたってクエリー配列に対して表記される割合（すなわち、ヌクレオチドとヌクレオチドを並べたときの同一度）だけ同一であることを意味する。したがって、２つの核酸配列に対するヌクレオチド配列同一率８０％又は同一率８０％は、最適にアライメントした２つの核酸配列中のヌクレオチド残基のうち８０％が同一であることを意味する。
【００２９】
「最適アライメント」又は「最適アライメントを行った」は、最高の同一性パーセントスコアを与える２つ（以上）の配列のアライメントを指す。例えば、２つのタンパク質配列の最適なアライメントは、各配列中の同一のアミノ酸残基が最多数アライメントされるように、配列を手作業でアライメントさせることで、あるいはソフトウェアプログラム又は本明細書に記載の若しくは当該技術分野において既知の手順を用いることで、達成することができる。２つの核酸配列の最適アライメントは、各配列中の同一のヌクレオチド残基の最大数が共にアライメントされるよう手作業で配列のアライメントを行うことにより、あるいは、本明細書に記載の又は当該技術分野において既知の、ソフトウェアプログラム又は手順を用いることにより、達成することができる。
【００３０】
一部の実施形態では、２つのポリペプチド配列は、配列対に関し可能性のある最も高い類似性スコアが得られるように、定義されたアミノ酸置換行列、ギャップ開始ペナルティ（ギャップオープンペナルティとも呼ばれる）、及びギャップ伸長ペナルティなどの定義されたパラメーターを用いてアライメントされたときに、「最適にアライメントされた」と見なされる。ＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列（上掲のＨｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆを参照されたい）は、多くの場合、ポリペプチド配列アライメントアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ）でデフォルトのスコア置換行列として使用される。ギャップ存在ペナルティはアライメントされた配列の１つにアミノ酸ギャップが１つ導入された際に課せられ、ギャップ伸張ペナルティはギャップ中の各残基位置に対して課される。用いられる代表的なアライメントは以下のものである：ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス、ギャップ存在ペナルティ＝１１、及びギャップ伸張ペナルティ＝１。アライメントスコアは、アライメントが開始及び終了する各配列のアミノ酸位置により（例えば、アライメントウィンドウ）、並びに場合によっては可能な限り最高の類似性スコアを達成するように一方若しくは両方の配列の中に１つ若しくは複数のギャップを挿入することにより、決定される。
【００３１】
２つ以上の配列間の最適なアライメントは、目視確認により手作業で、又はコンピュータ（限定するものではないが、例えば、アミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰプログラム、及び核酸配列用のＢＬＡＳＴＮプログラムなど）を用いて、決定することができる（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜３４０２（１９９７）参照；ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）ウェブサイトも参照）。
【００３２】
対象とするポリペプチドは、対象とするポリペプチドが、親ポリペプチドのアミノ酸配列と少なくともアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる場合、親ポリペプチドと「実質的に同一」であるものとしてみなされ得る。２つのこのようなポリペプチド間の同一性（％）は、最適にアライメントされた２つのポリペプチド配列を目視確認することにより、又は標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム又はアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することで、手作業で判定することができる。２つのポリペプチドが実質的に同一である一つの印は、第一のポリペプチドが第二のポリペプチドと免疫学的に交差反応することである。典型的には、保存的なアミノ酸置換により異なるポリペプチドは、免疫学的に交差反応する。したがって、例えば、２つのペプチドが、保存的なアミノ酸置換のみ、又は１つ以上の保存的なアミノ酸置換のみで異なっている場合、このポリペプチドは第２ポリペプチドと実質的に同一である。
【００３３】
対象とする核酸は、対象とする核酸が、親核酸のヌクレオチド配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約９９．５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる場合、親核酸と「実質的に同一」であるものとしてみなされ得る。２つのこのような核酸間の同一性（％）は、最適にアライメントされた２つの核酸配列を目視確認することにより、又は標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム又はアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することで、手作業で判定することができる。厳密な条件下（例えば、中程度に厳密〜非常に厳密という範囲）で、２つの核酸分子が互いにハイブリッド形成することは、核酸配列が実質的に同一であることの１つの指標になる。
【００３４】
核酸又はポリヌクレオチドは、例えば他のタンパク質、核酸、細胞等が挙げられるがこれらに限定されない他の成分から部分的又は完全に分離されているときに「単離され」ている。同様に、ポリペプチド、タンパク質又はペプチドは、例えば他のタンパク質、核酸、細胞等が挙げられるがこれらに限定されない他の成分から部分的又は完全に分離されているときに「単離され」ている。モルベースで、単離された種は組成物中の他の種よりも豊富である。例えば、単離された種は、存在する全ての高分子種のうちの少なくとも約５０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は又は約１００％（モルベースで）を構成し得る。好ましくは、対象種は、本質的に均一に精製される（すなわち、従来の検出手法により組成物への他種の混入が検出されることはない）。純度及び均一度は、タンパク質又は核酸サンプルをアガロース又はポリアクリルアミドゲル電気泳動後に染色により可視化するなどの、当業者に周知である数多くの手法を用い測定することができる。必要に応じて、高解像度の技術、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は同様の手法を用いて材料を精製することができる。
【００３５】
核酸又はポリペプチドに使用される場合、用語「精製した」は、概して、当業者に周知の解析技術により測定した場合に、核酸又はポリペプチドが他の成分を本質的に含まないことを意味する（例えば、精製ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、電気泳動ゲルで、クロマトグラフィーによる溶出で、及び／又は密度勾配遠心分離にかけた媒質中で、別個のバンドを形成する）。例えば、電気泳動ゲルで本質的に１つのバンドを生じる核酸又はポリペプチドは「精製され」ている。精製された核酸又はポリペプチドは、少なくとも約５０％純粋であり、通常は少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％又はそれ以上純粋である（例えば、モルベースの重量％）。これに関連し、本発明は、本発明の１種以上のポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの本発明の１種以上の分子について組成物を濃縮する方法を提供する。精製又は濃縮技術の適用後に分子の濃度が実質的に上昇している場合、この組成物はその分子を濃縮されている。本発明の、実質的に純粋なポリペプチド又はポリヌクレオチド（例えば、それぞれ、本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする実質的に純粋な脂肪分解酵素又はポリヌクレオチド）は、典型的には、特定の組成物中で、全ての高分子種の少なくとも約５５％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８、約９９％、約９９．５％以上（モルベースで）を構成する。
【００３６】
所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基の位置は、本明細書において、典型的には、配列番号４に示されるサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列の対応するアミノ酸残基の位置に対して割り振られた番号を使用して、付番される。したがって、配列番号４のＴ．ラヌギノーサ（T. lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列は、参照親配列として提供される。本明細書に記載されるようなアライメントアルゴリズムを使用して、本明細書に記載の脂肪分解酵素変異体のアミノ酸配列などの所与のアミノ酸配列をＴＬＬ配列（配列番号４）と配列させることができ、並びにＴＬＬ配列中のアミノ酸残基と整列（好ましくは、最適に整列）する所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基は、リパーゼＴＬＬ配列中の対応するアミノ酸残基を参照することで、便宜上付番することもできる。
【００３７】
本発明の脂肪分解酵素
本明細書で使用するとき、脂肪分解酵素は、トリグリセリド又はリン脂質分解能などの脂質分解能を示す酵素、ポリペプチド、又はタンパク質を含む。脂肪分解酵素は、例えばリパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ又はクチナーゼであってよい。脂肪分解酵素は、α／β加水分解酵素の折りたたみ構造を有する脂肪分解酵素であってよい。これらの酵素は、典型的には、触媒三残基、すなわちセリン残基、アスパラギン酸残基及びヒスチジン残基を有する。α／β加水分解酵素には、リパーゼ及びクチナーゼが含まれる。多くの場合、リパーゼは、脂質−水境界面の存在下で立体構造が変化するのに対し、クチナーゼは、示したとしてもごく僅かな界面活性しか示さない（Ｌｏｎｇｈｉ  ａｎｄ  Ｃａｍｂｉｌｌａｕ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １４４１：１８５〜９６）。脂肪分解酵素の活性断片は、脂肪分解酵素のうちの脂質分解能を保有している部分である。活性断片は触媒三残基を保有する。本明細書で使用するとき、脂肪分解活性は、当該技術分野において既知の任意の手順により決定することができる（例えば、Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３７：６３〜７１，２００３；米国特許番号第５，９９０，０６９号；及び国際公開第９６／１  ８７２９（Ａ１）号を参照されたい）。
【００３８】
一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素はα／β加水分解酵素である。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素はリパーゼである。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素はクチナーゼである。
【００３９】
脂肪分解酵素の生産的な位置
本発明は、洗剤組成物に有用であり得る、脂肪分解酵素中のアミノ酸位置を提供し、ここで、望ましい改変の結果として、洗浄性能、基質の加水分解、洗剤組成物中の酵素の安定性、並びに酵素の熱安定性について最小限の性能指数を示し、かつこれらの特性のうちの少なくとも１つが、親脂肪分解酵素から改良されている。これらの改変は、本発明の好適な改変とみなされる。
【００４０】
本発明の脂肪分解酵素の安定性は、標準的な、例えば、配列番号３のサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬと比較することができる。
【００４１】
用語「熱安定性（thermal stability）」及び「熱安定性（thermostability）」は、例えば、温度変化に曝されている間に、脂肪分解プロセス、加水分解プロセス、洗浄プロセス又は本明細書において開示される他のプロセスにおいて優勢な条件下で一定の時間にわたって特定の温度に曝された後、所定量の酵素活性を維持する本開示のリパーゼのことを指す。温度変化には、温度の上昇、又は低下が含まれる。いくつかの実施形態では、当該リパーゼは、所定の時間、例えば少なくとも約６０分、約１２０分、約１８０分、約２４０分、約３００分といった時間にわたって温度変化に曝された後に、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９２％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の脂肪分解活性を維持する。
【００４２】
本明細書で使用するとき、脂肪分解酵素変異体の改良される特性としては、対応する親脂肪分解酵素（例えば、野生型又は天然に生じる脂肪分解酵素）と比較して、脂肪分解酵素変異体の、洗浄性能若しくはクリーニング性能が改良又は強化されていること、及び／又は洗浄又はクリーニング性能は保持されたまま安定性が改良されていること若しくは強化されていること、が挙げられる。脂肪分解酵素変異体の特性の改良には、洗浄又はクリーニング性能の改良、及び／又は安定性の改良、及び／又は基質加水分解の改良、及び／又は発現の改良が含まれ得る。一部の実施形態では、本発明は、次の特性：親脂肪分解酵素（例えば、野生型リパーゼなどの野生型脂肪分解酵素）と比較した場合の、手洗い性能の改良、食器手洗い性能又は手作業での食器洗浄性能の改良、自動食器洗浄性能の改良、洗濯性能の改良、及び／又は安定性の改良、のうち１つ以上を示す、本発明の脂肪分解酵素変異体を提供する。
【００４３】
有用な位置であることが判明している、脂肪分解酵素のアミノ酸位置には、洗剤組成物への使用に好適な、異なる改変を持たせることができる。改変には、特定の位置での挿入、欠失又は置換が含まれ得る。一実施形態では、改変は置換である。各位置に関し、可能である好適な改変の数が多くなるほど、位置の生産性スコアは高くなる。例えば、アミノ酸位置は、好適な改変として生産的な位置において試験される改変のうち、少なくとも５０％、３０％又は１５％の改変を有することができ、この改変は、次の好適な基準のうちの少なくとも１つを満たす：
ａ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する位置のものである；
ｂ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する位置のものである；又は
ｃ）発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する位置のものである。
【００４４】
好適な改変として試験された改変のうちの少なくとも５０％を有する、本発明の脂肪分解酵素の位置は、位置１、２、３、４、５、６、８、９、１３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３７、３８、３９、４６、５１、５２、５４、５８、６４、６６、６８、６９、７１、７２、７５、９０、９３、９４、１１１、１２０、１２２、１２３、１３０、１３１、１３７、１４０、１６２、１６３、１８９、２５０、２５２、及び２６４を包含し、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００４５】
好適な改変として試験した改変のうちの少なくとも５０％を有する本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；及び２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００４６】
好適な改変として試験した改変のうちの少なくとも３０％但し５０％未満を有する本発明の脂肪分解酵素の改変は、位置１８、１９、２０、３０、３１、３２、４７、４８、４９、５０、５３、５６、６０、７３、７４、８５、８６、９１、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０５、１０８、１１５、１２５、１２７、１２８、１３２、１３３、１５１、１５９、１６４、１７９、１８３、１８７、１８８、１９０、２１６、２２３、２３２、２３７、２４４、２５１、２５４、２６３、２６７、及び２６９からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００４７】
好適な改変として試験した改変のうちの少なくとも３０％を有する本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００４８】
好適な改変として試験した改変のうちの少なくとも１５％但し３０％未満を有する本発明の脂肪分解酵素の位置は、位置７、１１、１２、１５、２２、３５、４０、４２、４３、４４、４５、６１、６３、６５、６７、７６、７７、８４、８７、１１４、１１７、１１９、１２１、１３４、１３５、１３６、１４３、１５４、１５５、１５６、１５８、１６５、１６６、１６８、１７６、１８０、１９１、１９９、２００、２０２、２０９、２１１、２１４、２１７、２２１、２２４、２２５、２２８、２２９、２３１、２３３、２４８、２４９、２５３、２５５、２５６、２６５、及び２６８からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００４９】
好適な改変として試験した改変のうちの少なくとも１５％を有する本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５０】
好適な改変として試験した改変のうちの少なくとも１つの改変、但し１５％未満を有する本発明の脂肪分解酵素の位置は、位置１４、１６、１７、３４、４１、５５、５７、５９、６２、７０、７９、９２、１００、１０２、１０３、１０６、１０９、１１０、１１２、１１８、１２６、１３８、１３９、１４２、１４９、１５２、１５３、１６７、１６９、１７０、１８１、１８４、１９２、１９３、１９６、１９８、２０５、２０６、２０８、２１０、２１２、２１３、２１８、２２６、２２７、２３０、２３６、２３８、２３９、２４２、２４３、２４６、２５７、２５９、２６０、２６２、及び２６６を含み、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５１】
好適な改変として試験した少なくとも１つの改変を有する本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１４（Ａ，Ｓ，Ｖ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１６（Ｙ，Ｈ，Ｗ）；１７（Ｓ，Ｅ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３４（Ｉ，Ｐ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４１（Ｃ，Ｖ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５５（Ｆ，Ｇ，Ｗ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５７（Ｄ，Ｓ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；５９（Ｇ，Ｄ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６２（Ｄ，Ｎ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７０（Ｄ，Ｓ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；７９（Ｓ，Ａ，Ｍ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９２（Ｎ，Ａ，Ｔ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１００（Ｉ，Ｍ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０２（Ｄ，Ｈ）；１０３（Ｉ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０６（Ｇ，Ｈ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１０９（Ｇ，Ｔ）；１１０（Ｈ，Ｎ，Ｓ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１２（Ｇ，Ｆ，Ｑ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１８（Ｒ，Ｐ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２６（Ｑ，Ｉ，Ｍ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３８（Ｙ，Ｆ）；１３９（ＲＬＴ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４２（Ｆ，Ｈ，Ｙ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１４９（Ｇ，Ａ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５２（Ａ，Ｉ，Ｖ）；１５３（Ｔ，Ｓ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６７（Ｄ，Ｎ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１６９（Ｆ，Ｓ，Ｙ）；１７０（Ｓ，Ｇ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８１（Ｆ，Ｌ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８４（Ｆ，Ｗ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９２（Ｔ，Ｎ，Ｐ）；１９３（Ｌ，Ｔ）；１９６（Ｉ，Ｖ）；１９８（Ｈ，Ｇ，Ｓ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０５（Ｒ，Ｄ）；２０６（Ｌ，Ｎ）；２０８（Ｐ，Ｅ，Ｎ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１０（Ｅ，Ｓ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１２（Ｇ，Ｑ）；２１３（Ｙ，Ｓ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２１８（Ｐ，Ｔ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２６（Ｔ，Ｄ，Ｎ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３０（Ｖ，Ｗ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３６（Ｖ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２３８（Ｉ，Ｖ）；２３９（Ｅ，Ｋ）；２４２（Ｄ，Ｔ）；２４３（Ａ，Ｓ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４６（Ｇ，Ｉ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２５７（Ａ，Ｗ，Ｙ）；２５９（Ｌ，Ｗ，Ｙ）；２６０（Ｗ，Ｐ）；２６２（Ｆ，Ｄ，Ｋ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６６（Ｇ，Ｅ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５２】
好適な改変を有する本発明の追加の脂肪分解酵素の改変は、改変１１（Ａ，Ｅ，Ｉ）、２３（Ａ）、２４（Ｑ，Ｓ）、２７（Ｋ，Ｌ）、２９（Ｎ）、３０（Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｙ）、３１（Ｔ）、３３（Ｃ，Ｉ，Ｐ，Ｔ，Ｖ）、４５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）、４８（Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、４９（Ｃ，Ｙ）、５０（Ｍ）、５１（Ｈ，Ｖ）、５６（Ａ，Ｍ，Ｎ，Ｓ）、５８（Ａ，Ｆ）、７１（Ｃ，Ｆ，Ｐ）、７３（Ｑ，Ｔ）、７４（Ｉ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）、７５（Ｋ）、９１（Ｋ，Ｎ，Ｙ）、９４（Ａ，Ｈ）、１０１（Ａ）、１０８（Ａ）、１１１（Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ，Ｙ）、１２２（Ｋ，Ｌ，Ｑ）、１２８（Ｔ，Ｖ）、１３０（Ｋ，Ｍ）、１３３（Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｗ）、１３５（Ａ，Ｄ，Ｍ，Ｎ，Ｙ）、１４０（Ｙ）、１５９（Ｇ）、１６３（Ｑ）、１８３（Ｃ）、１８７（Ｃ，Ｉ）、１８８（Ａ，Ｍ，Ｗ）、１９０（Ｗ）、２２７（Ａ，Ｉ，Ｓ）、２３３（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、２５１（Ｖ）、及び２５２（Ｍ，Ｖ）を含む。
【００５３】
これらのアミノ酸位置は、親脂肪分解酵素に対するコンビナトリアルな改変に有用な位置であるとみなすことができる。したがって、本発明は、上記の位置のいずれかに１つ以上の改変を有する脂肪分解酵素を含む。
【００５４】
脂肪分解酵素の好適な改変
本発明は、親脂肪分解酵素からの１つ以上の改変を有する、脂肪分解酵素の酵素変異体を包含する。酵素変異体は、洗浄性能、洗剤組成物中の酵素の安定性及び酵素の熱安定性に関し最低限の性能指数を有し、かつこれらの特性のうち少なくとも１つが親脂肪分解酵素から改良されている洗剤組成物に有用であり得る。
【００５５】
好適な基準の３つ全てを満たす本発明の脂肪分解酵素の改変としては、１（Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、２（Ｉ，Ｌ）、３（Ｄ，Ｇ，Ｙ）、４（Ｄ，Ｆ，Ｗ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）、６（Ｉ，Ｔ）、７（Ｙ）、８（Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、９（Ｈ，Ｋ）、１１（Ｖ）、１３（Ｈ，Ｎ）、１４（Ｓ）、１６（Ｗ）、１７（Ｅ）、１８（Ｋ）、１９（Ｇ）、２０（Ｔ）、２３（Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）、２４（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）、２５（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、２６（Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、２７（Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）、２８（Ｄ，Ｅ，Ｉ，Ｎ，Ｓ）、２９（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、３１（Ｄ，Ｈ，Ｓ）、３３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）、３４（Ｐ）、３７（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｗ）、３８（Ｄ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｙ）、３９（Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｓ，Ｖ）、４０（Ｍ，Ｓ）、４２（Ｇ，Ｉ，Ｗ）、４３（Ｒ，Ｔ）、４４（Ｉ）、４５（Ｆ，Ｖ）、４６（Ｄ，Ｌ，Ｍ）、４７（Ｈ）、４８（Ｅ，Ｈ，Ｐ，Ｑ）、４９（Ｖ）、５０（Ｌ，Ｒ，Ｓ）、５１（Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｓ）、５２（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｖ）、５４（Ｐ，Ｔ，Ｖ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ）、６０（Ｇ）、６３（Ｔ）、６４（Ｇ）、６６（Ｈ，Ｍ，Ｗ）、６７（Ｉ，Ｖ）、６８（Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、６９（Ｉ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、７０（Ｓ）、７１（Ｄ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）、７２（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）、７３（Ｈ，Ｒ，Ｓ）、７４（Ｈ，Ｓ）、７５（Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、７９（Ａ）、８５（Ｔ）、８６（Ｐ，Ｔ）、８７（Ｇ）、９０（Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ）、９１（Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）、９２（Ｔ）、９４（Ｒ）、９５（Ｇ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）、９６（Ａ，Ｋ）、９７（Ｄ，Ｔ）、９８（Ｑ）、９９（Ｄ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１０１（Ｄ，Ｈ，Ｙ）、１０５（Ｋ）、１０８（Ｋ，Ｑ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｅ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）、１１４（Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）、１１５（Ｔ）、１１８（Ｐ）、１１９（Ｔ）、１２０（Ｙ）、１２１（Ｋ）、１２２（Ｈ，Ｉ）、１２３（Ｇ，Ｍ，Ｎ，Ｗ）、１２５（Ｇ，Ｑ）、１２７（Ｇ，Ｔ）、１３０（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｔ）、１３１（Ｈ，Ｉ，Ｑ）、１３２（Ｈ，Ｒ）、１３４（Ｌ，Ｖ）、１３５（Ｋ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）、１３９（Ｔ）、１５１（Ｉ，Ｔ，Ｖ）、１５４（Ｉ，Ｌ）、１５５（Ｇ，Ｓ）、１５８（Ｅ，Ｆ）、１６２（Ｇ，Ｒ）、１６３（Ｎ，Ｐ，Ｙ）、１６４（Ｖ）、１６６（Ｇ）、１７６（Ｉ，Ｌ）、１７９（Ｌ，Ｑ，Ｖ）、１８０（Ｋ）、１８１（Ｌ）、１８７（Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８８（Ｃ，Ｔ）、１８９（Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）、１９１（Ｆ，Ｌ，Ｖ）、１９６（Ｖ）、１９９（Ｇ）、２０２（Ｐ，Ｖ）、２０８（Ｅ）、２１１（Ｉ，Ｗ）、２１６（Ｎ，Ｗ）、２１７（Ｋ）、２２３（Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、２２５（Ｅ，Ｋ，Ｒ）、２２７（Ｍ）、２２８（Ｒ）、２３２（Ｉ，Ｍ，Ｔ）、２３３（Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）、２３７（Ｉ，Ｌ，Ｙ）、２４２（Ｔ）、２４４（Ｉ）、２５０（Ｑ，Ｒ）、２５１（Ｄ，Ｗ）、２５２（Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）、２５５（Ｌ）、２５６（Ａ，Ｓ）、２５７（Ｙ）、２６２（Ｄ）、２６４（Ｅ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ）、２６５（Ｍ，Ｑ）、２６７（Ｌ，Ｗ）、及び２６９（Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）が挙げられ、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５６】
好適な基準のうち、ｃ）を除きａ）及びｂ）を両方満たす本発明の脂肪分解酵素の改変としては、１（Ｑ，Ｔ）、２（Ｆ，Ｇ，Ｍ，Ｐ）、３（Ｋ，Ｔ）、４（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｓ）、５（Ｋ，Ｗ）、６（Ｅ，Ｍ）、８（Ａ，Ｅ）、９（Ｅ，Ｇ，Ｎ，Ｒ）、１１（Ｈ，Ｋ，Ｙ）、１２（Ｆ，Ｈ，Ｖ）、１３（Ｑ）、１５（Ｓ）、１８（Ｑ）、１９（Ｃ）、２０（Ｇ，Ｓ）、２３（Ｃ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）、２４（Ｙ）、２５（Ｃ，Ｈ，Ｋ）、２６（Ｃ）、２７（Ｆ）、２８（Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ）、２９（Ｑ，Ｗ，Ｙ）、３０（Ｄ，Ｖ）、３１（Ｅ，Ｑ）、３２（Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｓ）、３５（Ｋ）、３７（Ｃ）、３８（Ｖ，Ｗ）、３９（Ｐ，Ｔ，Ｙ）、４０（Ｗ）、４２（Ｖ）、４３（Ｄ，Ｍ）、４５（Ｑ）、４６（Ｆ，Ｇ，Ｖ，Ｗ）、４７（Ｔ）、５０（Ａ）、５１（Ｎ，Ｒ，Ｔ）、５２（Ｅ，Ｒ，Ｗ）、５３（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｓ）、５４（Ｒ，Ｙ）、５５（Ｇ）、５６（Ｖ）、６４（Ｃ，Ｅ，Ｎ，Ｖ）、６６（Ｎ，Ｑ，Ｒ）、６７（Ｑ）、６９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｗ）、７１（Ｖ，Ｗ，Ｙ）、７２（Ｐ）、７３（Ｅ，Ｇ，Ｋ）、７４（Ｎ，Ｑ）、７５（Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｙ）、７６（Ｈ）、７７（Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）、８６（Ｌ，Ｍ）、８７（Ｐ，Ｖ）、９０（Ｑ，Ｔ）、９１（Ｆ）、９４（Ｄ）、９７（Ｑ）、９８（Ｄ，Ｅ，Ｉ）、９９（Ｋ）、１０５（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｐ）、１０８（Ｅ，Ｍ）、１２２（Ｅ，Ｎ）、１２３（Ｅ，Ｌ，Ｑ）、１２５（Ｎ，Ｔ）、１２６（Ｉ）、１２７（Ｅ，Ｆ，Ｒ）、１２８（Ｈ，Ｓ）、１３０（Ｆ，Ｑ）、１３１（Ｒ，Ｗ，Ｙ）、１３２（Ｄ，Ｋ，Ｗ）、１３３（Ｅ，Ｑ）、１３５（Ｆ，Ｔ）、１３６（Ｄ，Ｑ）、１３７（Ｓ，Ｖ）、１３９（Ｌ）、１４０（Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）、１４３（Ａ，Ｇ，Ｓ）、１４９（Ａ）、１５１（Ｎ）、１５４（Ｆ）、１５６（Ｆ，Ｗ）、１５８（Ｙ）、１５９（Ｅ）、１６３（Ｓ，Ｗ）、１６４（Ｎ，Ｓ）、１６５（Ｉ）、１６６（Ｄ，Ｗ）、１６７（Ｎ）、１６８（Ｌ）、１７９（Ｅ，Ｉ）、１８３（Ｖ）、１８８（Ｈ）、１８９（Ｋ，Ｖ）、２００（Ａ）、２０５（Ｄ）、２０９（Ｓ，Ｔ）、２１４（Ｄ）、２１６（Ｇ，Ｑ）、２１７（Ｈ）、２１８（Ｔ）、２２３（Ｍ）、２２６（Ｎ）、２２８（Ｅ）、２２９（Ｋ）、２３１（Ｋ，Ｌ，Ｍ）、２５２（Ｋ，Ｌ，Ｎ）、２５４（Ｈ）、２５５（Ｆ）、２５６（Ｔ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６４（Ｈ，Ｓ，Ｔ）、２６７（Ｐ）、及び２６９（Ｆ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５７】
好適な基準のうち、ａ）、又はｂ）及びｃ）の両方、を満たす本発明の脂肪分解酵素の改変としては、１（Ｅ，Ｒ，Ｖ）、２（Ｖ，Ｈ，Ｔ）、３（Ｓ，Ｅ，Ｑ）、４（Ｑ，Ｙ）、５（Ｄ）、６（Ｌ，Ｑ，Ｖ）、７（Ｆ）、８（Ｎ）、９（Ｑ，Ａ，Ｉ）、１１（Ｎ）、１２（Ｌ）、１３（Ｆ）、１４（Ａ）、１５（Ｑ）、１６（Ｙ）、１７（Ｓ）、１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｓ）、１９（Ａ，Ｔ）、２０（Ａ，Ｐ）、２２（Ｃ）、２３（Ｇ，Ｐ）、２４（Ｋ，Ｆ）、２５（Ｎ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｖ，Ｗ）、２６（Ｎ，Ｌ，Ｑ）、２７（Ｄ）、２８（Ａ，Ｆ，Ｇ，Ｌ）、２９（Ｐ，Ｃ，Ｉ）、３０（Ａ，Ｈ，Ｒ，Ｗ）、３１（Ｇ）、３２（Ｔ，Ｑ）、３３（Ｎ，Ｋ）、３４（Ｉ）、３５（Ｔ，Ｅ，Ｒ）、３７（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ）、３８（Ｇ，Ｔ）、３９（Ｎ）、４０（Ａ）、４１（Ｃ）、４２（Ｐ）、４３（Ｅ，Ｉ）、４４（Ｖ，Ｈ，Ｔ）、４５（Ｅ）、４６（Ｋ，Ｅ）、４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｍ）、４８（Ｄ）、４９（Ａ，Ｈ，Ｋ）、５０（Ｔ，Ｄ，Ｗ）、５１（Ｆ）、５２（Ｌ，Ｔ）、５３（Ｙ，Ｌ，Ｗ）、５４（Ｓ）、５５（Ｆ）、５６（Ｅ）、５７（Ｄ）、５８（Ｓ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｗ）、５９（Ｇ）、６０（Ｖ）、６１（Ｇ，Ｌ）、６２（Ｄ）、６３（Ｖ）、６４（Ｔ，Ｄ，Ｉ，Ｌ）、６５（Ｇ，Ｖ）、６６（Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｖ）、６７（Ｌ）、６８（Ａ，Ｃ，Ｗ）、６９（Ｌ）、７０（Ｄ）、７１（Ｎ，Ｅ）、７２（Ｔ，Ｋ）、７３（Ｎ）、７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｇ）、７５（Ｌ）、７６（Ｉ，Ｖ）、７７（Ｖ，Ａ）、７９（Ｓ）、８４（Ｒ）、８５（Ｓ，Ｈ，Ｎ，Ｑ）、８６（Ｉ，Ｖ，Ｙ）、８７（Ｅ，Ｄ）、９０（Ｉ，Ｖ）、９１（Ｇ）、９２（Ｎ）、９３（Ｌ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｒ）、９４（Ｎ，Ｇ，Ｔ，Ｖ）、９５（Ｆ，Ｋ，Ｌ）、９６（Ｄ）、９７（Ｌ，Ａ，Ｍ）、９８（Ｋ，Ｈ）、９９（Ｅ）、１００（Ｉ）、１０１（Ｎ）、１０２（Ｄ）、１０３（Ｉ）、１０５（Ｓ，Ｗ）、１０６（Ｇ）、１０８（Ｒ，Ｆ）、１０９（Ｇ）、１１０（Ｈ，Ｓ）、１１１（Ｄ）、１１２（Ｇ）、１１４（Ｔ）、１１５（Ｓ，Ｇ，Ｍ，Ｒ，Ｖ）、１１７（Ｗ，Ｈ，Ｖ）、１１８（Ｒ）、１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ）、１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｓ，Ｗ）、１２１（Ａ）、１２２（Ｄ，Ａ，Ｆ）、１２３（Ｔ）、１２５（Ｒ，Ｙ）、１２６（Ｑ）、１２７（Ｋ）、１２８（Ｖ，Ｃ，Ｉ）、１３０（Ｄ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、１３１（Ａ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、１３２（Ｖ，Ｑ）、１３３（Ｒ，Ｉ）、１３４（Ｅ）、１３５（Ｈ）、１３６（Ｐ）、１３７（Ｄ，Ｉ，Ｒ，Ｗ）、１３８（Ｙ）、１３９（Ｒ）、１４０（Ｖ）、１４２（Ｆ，Ｈ，Ｙ）、１４３（Ｔ）、１４９（Ｇ）、１５１（Ｌ，Ｍ，Ｗ）、１５２（Ａ）、１５３（Ｔ，Ｓ）、１５４（Ｖ）、１５５（Ａ）、１５６（Ｇ，Ｍ）、１５８（Ｄ）、１５９（Ｌ，Ｑ，Ｒ）、１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｓ）、１６３（Ｇ，Ｆ，Ｌ）、１６４（Ｙ）、１６５（Ｄ）、１６６（Ｉ）、１６７（Ｄ）、１６８（Ｖ，Ｇ）、１６９（Ｆ，Ｓ）、１７０（Ｓ）、１７６（Ｖ）、１７９（Ｒ，Ｈ，Ｋ）、１８０（Ａ，Ｔ）、１８１（Ｆ）、１８３（Ｅ）、１８４（Ｆ，Ｙ）、１８７（Ｖ）、１８８（Ｑ）、１８９（Ｔ）、１９０（Ｇ）、１９１（Ｇ）、１９２（Ｔ）、１９３（Ｌ，Ｔ）、１９６（Ｉ）、１９８（Ｈ，Ｇ，Ｓ）、１９９（Ｔ）、２００（Ｎ，Ｓ）、２０２（Ｉ，Ｌ）、２０５（Ｒ）、２０６（Ｌ）、２０８（Ｐ）、２０９（Ｒ，Ｈ）、２１０（Ｅ）、２１１（Ｆ，Ｒ，Ｔ）、２１２（Ｇ）、２１３（Ｙ）、２１４（Ｓ，Ａ）、２１６（Ｓ，Ｖ）、２１７（Ｓ，Ｖ）、２１８（Ｐ）、２２１（Ｗ）、２２３（Ｋ，Ａ）、２２４（Ｓ）、２２５（Ｇ）、２２６（Ｔ）、２２７（Ｌ，Ｈ）、２２８（Ｖ）、２２９（Ｐ）、２３０（Ｖ，Ｗ）、２３１（Ｔ，Ｈ）、２３２（Ｒ，Ｐ）、２３３（Ｎ）、２３６（Ｖ）、２３７（Ｋ，Ｈ，Ｔ，Ｗ）、２３８（Ｉ）、２３９（Ｅ）、２４２（Ｄ）、２４３（Ａ）、２４４（Ｔ，Ｑ，Ｓ）、２４６（Ｇ）、２４８（Ｎ）、２４９（Ｑ）、２５０（Ｐ，Ｓ）、２５１（Ｎ）、２５２（Ｉ，Ｃ，Ｅ）、２５３（Ｐ，Ｒ）、２５４（Ｄ，Ｔ）、２５５（Ｉ）、２５６（Ｐ）、２５７（Ａ）、２５９（Ｌ）、２６０（Ｗ）、２６２（Ｆ）、２６３（Ｇ，Ｋ）、２６４（Ｌ，Ｃ，Ｇ）、２６５（Ｉ）、２６６（Ｇ）、２６７（Ｔ，Ｇ，Ｍ）、２６８（Ｃ，Ｈ）、及び２６９（Ｌ）が挙げられ、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５８】
好適な基準のうち、ｂ）のみを満たす（ａ）又はｃ）は除く）本発明の脂肪分解酵素の改変としては、２（Ｋ）、３（Ａ，Ｈ）、４（Ｐ）、６（Ｋ，Ｙ）、７（Ｈ）、９（Ｄ，Ｗ）、１２（Ｗ）、１３（Ａ，Ｍ，Ｙ）、１５（Ｍ）、１６（Ｈ）、２０（Ｑ）、２２（Ｈ）、２３（Ｒ）、２５（Ｓ）、２９（Ｇ，Ｓ）、３０（Ｌ，Ｎ）、３３（Ｍ）、３７（Ｈ）、３９（Ｑ）、４０（Ｆ）、４７（Ｗ）、４８（Ｇ）、５０（Ｆ，Ｋ）、５１（Ｄ，Ｐ，Ｙ）、５２（Ｍ）、５４（Ｆ，Ｇ，Ｋ，Ｗ）、５５（Ｗ）、５８（Ｉ）、６０（Ｌ）、６４（Ｋ，Ｒ，Ｙ）、６５（Ｌ）、６６（Ｇ，Ｙ）、６７（Ｈ）、６８（Ｙ）、６９（Ｄ）、７５（Ｍ）、８４（Ｈ）、８６（Ｑ）、９０（Ｙ）、９２（Ａ）、９３（Ｉ，Ｐ，Ｖ）、９４（Ｓ）、９５（Ｈ，Ｔ）、９６（Ｖ）、９８（Ｍ）、１００（Ｍ）、１１５（Ｎ）、１１７（Ｑ）、１２２（Ｓ，Ｔ，Ｙ）、１２５（Ｉ）、１２６（Ｍ）、１２７（Ｄ）、１２８（Ｙ）、１３０（Ｃ，Ｒ）、１３２（Ｉ）、１３４（Ｐ）、１４０（Ｃ）、１５１（Ｐ）、１５２（Ｖ）、１５６（Ｔ）、１６４（Ｄ，Ｒ）、１６５（Ｙ）、１８８（Ｆ）、２０８（Ｎ）、２１３（Ｓ）、２１６（Ｄ）、２２７（Ｃ）、２２９（Ｉ）、２３２（Ｃ，Ｌ）、２３７（Ｅ）、２４９（Ｅ）、２５０（Ｅ）、２５２（Ｆ）、２５４（Ａ，Ｋ）、２５７（Ｗ）、及び２６７（Ｉ）が挙げられ、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００５９】
好適な基準のうち、ｃ）のみを満たす（ａ）又はｂ）は除く）本発明の脂肪分解酵素の改変としては、１（Ｃ，Ｌ）、３（Ｒ）、６（Ａ，Ｈ）、７（Ｍ，Ｖ）、８（Ｋ）、９（Ｙ）、１３（Ｋ，Ｔ，Ｖ）、１４（Ｖ）、１５（Ｇ，Ｈ）、１８（Ｍ，Ｎ，Ｗ）、１９（Ｉ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）、２０（Ｉ）、２２（Ｌ，Ｍ）、２４（Ｍ，Ｒ）、２５（Ｅ）、３１（Ｍ，Ｐ，Ｖ）、３７（Ｒ，Ｙ）、３８（Ａ，Ｅ）、３９（Ｃ，Ｗ）、４１（Ｖ）、４２（Ｃ）、４８（Ｌ）、４９（Ｇ，Ｌ，Ｗ）、５４（Ｅ，Ｈ，Ｍ）、５７（Ｓ）、５８（Ｄ，Ｒ）、５９（Ｄ）、６０（Ｋ，Ｙ）、６１（Ａ，Ｄ，Ｒ）、６２（Ｎ）、６３（Ｋ，Ｑ）、６５（Ｙ）、６６（Ａ，Ｓ，Ｔ）、７４（Ｅ）、７６（Ｓ）、７９（Ｍ）、８４（Ｑ，Ｗ）、８５（Ｆ，Ｉ）、８７（Ａ）、９３（Ｈ，Ｎ，Ｗ）、９４（Ｋ，Ｍ，Ｐ）、９６（Ｐ，Ｒ）、９７（Ｉ）、９９（Ｐ，Ｑ）、１０１（Ｃ，Ｅ，Ｍ）、１０２（Ｈ）、１０３（Ｙ）、１０５（Ｆ）、１０６（Ｈ）、１０９（Ｔ）、１１０（Ｎ）、１１１（Ｆ，Ｗ）、１１２（Ｆ，Ｑ）、１１５（Ｉ，Ｌ）、１１７（Ｋ）、１１９（Ｑ，Ｖ）、１２０（Ｉ）、１２１（Ｑ）、１２３（Ｉ，Ｋ）、１２５（Ｃ）、１２８（Ｌ，Ｎ，Ｗ）、１３０（Ｅ）、１３１（Ｃ，Ｎ）、１３２（Ｃ）、１３３（Ｆ，Ｎ，Ｖ）、１３６（Ｒ）、１３７（Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ）、１３８（Ｆ）、１４０（Ｅ，Ｉ，Ｌ，Ｎ）、１４３（Ｎ）、１５２（Ｉ）、１５４（Ｍ，Ｙ）、１５５（Ｔ）、１５９（Ｍ，Ｗ）、１６２（Ｍ，Ｐ，Ｙ）、１６３（Ａ，Ｍ，Ｒ）、１６５（Ｐ）、１６８（Ｑ）、１６９（Ｙ）、１７０（Ｇ）、１７６（Ｆ，Ｎ，Ｗ）、１８０（Ｄ，Ｑ）、１８３（Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）、１８４（Ｗ）、１８８（Ｅ，Ｒ）、１８９（Ｅ，Ｍ）、１９０（Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）、１９２（Ｎ，Ｐ）、１９９（Ｎ，Ｖ）、２００（Ｐ）、２０２（Ｍ）、２０６（Ｎ）、２１０（Ｓ）、２１２（Ｑ）、２１４（Ｍ）、２２１（Ｆ，Ｇ，Ｙ）、２２３（Ｈ，Ｌ）、２２４（Ａ，Ｆ，Ｐ）、２２５（Ｃ）、２２６（Ｄ）、２２８（Ａ）、２２９（Ｍ，Ｓ）、２３１（Ｇ）、２３２（Ｄ，Ｗ）、２３６（Ｗ）、２３８（Ｖ）、２３９（Ｋ）、２４３（Ｓ）、２４４（Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｐ）、２４６（Ｉ）、２４８（Ｄ，Ｌ，Ｙ）、２４９（Ｇ，Ｔ）、２５０（Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｔ）、２５１（Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）、２５２（Ｗ）、２５３（Ｆ，Ｈ，Ｎ）、２５４（Ｎ，Ｐ）、２５５（Ｗ）、２５６（Ｄ）、２５９（Ｗ，Ｙ）、２６０（Ｐ）、２６２（Ｋ）、２６３（Ｃ，Ｈ，Ｍ）、２６５（Ｌ，Ｒ，Ｗ）、２６６（Ｅ）、及び２６８（Ｄ，Ｎ）からなる群から選択され、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６０】
表面改変
本発明は、表面に露出されているアミノ酸において１つ以上の改変を有する脂肪分解酵素の酵素変異体を含む。酵素変異体における表面改変は、洗浄性能、洗剤組成物中の酵素の安定性及び酵素の熱安定性に関し最低限の性能指数を有し、かつこれらの特性のうち少なくとも１つが親脂肪分解酵素から改良されている洗剤組成物に有用であり得る。一部の実施形態では、表面改変は、その位置におけるアミノ酸の疎水性及び／又は電荷を変化させる。疎水性は、Ｗｈｉｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｍｌｅｙ（Ｗｈｉｔｅ，Ｓ．Ｈ．ａｎｄ  Ｗｉｍｌｅｙ，Ｗ．Ｃ，．（１９９９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．２８：３１９〜６５などに記載のものなどの、当該技術分野において既知の手法を用い定量することができる。
【００６１】
本明細書で使用するとき、「表面特性」は、静電荷、並びにタンパク質の表面により示される疎水性及び親水性などの特性に関して使用できる。
【００６２】
好適な改変として少なくとも１つの表面改変を有する、本発明の脂肪分解酵素の位置は、位置１８、２７、２９、３３、５１、５８、７２、７５、１０１、１０８、１１４、１２１、１３５、１３７、１５６、１６３、１８７、２５０、２５２、及び２６４を含み、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６３】
好適な改変として少なくとも１つの表面改変を有する、本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変Ａ０１８Ｋ、Ｄ０２７Ｎ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｐ０２９Ｅ、Ｎ０３３Ｄ、Ｎ０３３Ｅ、Ｎ０３３Ｒ、Ｆ０５１Ｔ、Ｓ０５８Ｍ、Ｔ０７２Ｒ、Ｌ０７５Ｑ、Ｎ１０１Ｄ、Ｒ１０８Ｋ、Ｒ１０８Ｑ、Ｒ１０８Ｙ、Ｔ１１４Ｆ、Ｔ１１４Ｉ、Ａ１２１Ｋ、Ｈ１３５Ｆ、Ｄ１３７Ｖ、Ｇ１５６Ｗ、Ｇ１６３Ｙ、Ｖ１８７Ｎ、Ｖ１８７Ｗ、Ｐ２５０Ｅ、Ｉ２５２Ａ、Ｉ２５２Ｔ、又はＬ２６４Ｐを含み、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６４】
好適な改変として少なくとも１つの表面改変を有する本発明の脂肪分解酵素の位置には、位置１８、２７、２９、３３、５１、５８、７２、７５、１０１、１０８、１１４、１２１、１３５、１３７、１５６、１６３、１８７、２５０、２５２、及び２６４が含まれ、変更は、疎水性における変更であり（電荷は除く）、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６５】
好適な改変として少なくとも１つの表面改変を有する、本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変Ａ０１８Ｋ、Ｄ０２７Ｎ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｐ０２９Ｅ、Ｎ０３３Ｄ、Ｎ０３３Ｅ、Ｎ０３３Ｒ、Ｆ０５１Ｔ、Ｓ０５８Ｍ、Ｔ０７２Ｒ、Ｌ０７５Ｑ、Ｎ１０１Ｄ、Ｒ１０８Ｋ、Ｒ１０８Ｑ、Ｒ１０８Ｙ、Ｔ１１４Ｆ、Ｔ１１４Ｉ、Ａ１２１Ｋ、Ｈ１３５Ｆ、Ｄ１３７Ｖ、Ｇ１５６Ｗ、Ｇ１６３Ｙ、Ｖ１８７Ｎ、Ｖ１８７Ｗ、Ｐ２５０Ｅ、Ｉ２５２Ａ、Ｉ２５２Ｔ、又はＬ２６４Ｐを含み、変化は、疎水性における変化であり（電荷は除く）、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６６】
好適な改変として少なくとも１つの表面改変を有する本発明の脂肪分解酵素の位置は、位置１８、７、２９、３３、７２、１０１、１０８、１２１、１３７、及び２５０を含み、変更は電荷における変更であり（疎水性は除く）、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６７】
好適な改変として少なくとも１つの表面改変を有する、本発明の脂肪分解酵素の改変は、改変Ａ０１８Ｋ、Ｄ０２７Ｎ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｐ０２９Ｅ、Ｎ０３３Ｄ、Ｎ０３３Ｅ、Ｎ０３３Ｒ、Ｔ０７２Ｒ、Ｎ１０１Ｄ、Ｒ１０８Ｑ、１０８Ｙ、Ａ１２１Ｋ、Ｄ１３７Ｖ、又は２５０Ｅを含み、変更は電荷における変更であり（疎水性は除く）、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６８】
本発明の脂肪分解酵素の位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、投与量の半分での洗剤性能について、親ＴＬＬに対する最小性能指数（ＰＩ）が１．１以上であり、生産性の改変が、１（Ｓ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｔ）、８（Ｈ）、９（Ｋ，Ｎ）、１１（Ｈ，Ｋ）、１３（Ｎ）、１９（Ｇ）、２３（Ｋ，Ｎ，Ｑ  Ｒ）、２７（Ｑ，Ｒ）、２９（Ｋ，Ｒ）、３２（Ａ）、３３（Ｄ）、３７（Ｇ，Ｈ，Ｑ）、３８（Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｗ，Ｙ）、３９（Ｉ，Ｌ）、４２（Ｗ）、４３（Ｄ，Ｉ，Ｒ，Ｔ）、４５（Ｆ，Ｑ，Ｖ）、５１（Ｍ）、５３（Ｅ）、５４（Ｐ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ）、５８（Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｗ）、６９（Ｒ）、７３（Ｒ）、７５（Ａ，Ｒ）、７５（Ｔ）、７７（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、９０（Ｆ，Ｔ）、９１（Ｉ，Ｑ）、９４（Ｒ）、１０５（Ｐ）、１０８（Ｋ）、１２２（Ｆ）、１２５（Ｔ）、１３０（Ａ，Ｒ）、１３２（Ｋ，Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｒ）、１５１（Ｔ）、１５５（Ｓ）、１５６（Ｗ）、１６３（Ｆ，Ｐ）、１６４（Ｒ）、１８０（Ｋ）、１８３（Ｖ）、１８４（Ｙ）、１８７（Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｇ，Ｑ）、２１１（Ｉ）、２１４（Ａ）、２２８（Ｒ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｑ）、２４４（Ｉ）、２５２（Ｎ）、及び２６５（Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００６９】
本発明の脂肪分解酵素位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、補助剤を併用した場合の、投与量の半分での洗剤性能について、親ＴＬＬに対する最小性能指数（ＰＩ）が１．１以上であり、生産性の改変が、１（Ｓ）、３（Ｔ）、４（Ｆ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｓ，Ｔ）、８（Ｈ，Ｔ，Ｖ）、９（Ｇ，Ｈ，Ｋ）、１１（Ｋ）、１２（Ｖ，Ｗ）、１８（Ｋ）、１９（Ｇ）、２３（Ｋ，Ｑ，Ｒ）、２７（Ｒ，Ｓ）、３２（Ｉ）、３８（Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｗ，Ｙ）、３９（Ｉ，Ｐ）、４３（Ｉ，Ｒ，Ｔ）、４５（Ｆ，Ｑ）、５３（Ｋ）、５４（Ｐ）、５６（Ｋ，Ｒ）、５８（Ｈ，Ｑ）、７５（Ｇ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ｉ）、９０（Ｔ）、９１（Ｉ，Ｑ）、１０５（Ｐ）、１２３（Ｎ）、１２７（Ｆ）、１３０（Ａ，Ｆ，Ｈ，Ｑ，Ｒ）、１３１（Ｒ）、１３６（Ｑ）、１３７（Ｒ，Ｓ）、１４３（Ｓ）、１５６（Ｔ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｓ）、１６４（Ｒ，Ｖ）、１６６（Ｇ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８８（Ｆ）、１８９（Ｄ，Ｇ）、１９９（Ｇ）、２２８（Ｒ）、２５２（Ｎ）、２６４（Ｒ）、及び２６５（Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７０】
本発明の脂肪分解酵素の位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、総投与量での洗剤性能について、親ＴＬＬに対する最小性能指数（ＰＩ）が１．１以上であり、生産性の改変が１（Ｓ）、５（Ｈ，Ｉ，Ｔ）、２３（Ｅ，Ｑ）、２９（Ｈ，Ｉ，Ｒ，Ｔ）、３９（Ｈ，Ｉ）、４３（Ｒ，Ｔ）、５４（Ｔ）、５８（Ｑ）、１１５（Ｔ）、１３０（Ａ，Ｒ）、１５４（Ｌ）、１５８（Ｅ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｔ）、２２８（Ｒ）、及び２６９（Ｗ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７１】
本発明の脂肪分解酵素の位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及びｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が親ＴＬＬに対し０．８以上であり、熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、２（Ｉ）、１１（Ｋ）、１５（Ｓ）、１８（Ｋ）、２３（Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、２４（Ｈ）、２６（Ｔ）、２７（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、２９（Ｅ）、３７（Ｐ）、４８（Ｅ，Ｑ）、５０（Ｓ）、５１（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｓ，Ｔ）、５６（Ｋ，Ｖ，）、５８（Ｍ）、６６（Ｎ，Ｑ）、７５（Ａ，Ｇ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ｉ，Ｔ）、９１（Ｅ，Ｑ）、９４（Ｒ）、９６（Ｋ）、９９（Ｄ，Ｓ）、１０１（Ｄ，Ｈ）、１０８（Ｋ，Ｍ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｅ，Ｑ）、１１４（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、１１７（Ｑ）、１２０（Ｎ）、１２１（Ｋ）、１３５（Ｆ）、１３７（Ｉ，Ｑ，Ｒ）、１５４（Ｆ，Ｉ，Ｌ）、１５５（Ｇ，Ｓ）、１５６（Ｗ）、１６３（Ｆ）、１６９（Ｓ）、１７６（Ｉ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｗ）、２２６（Ｎ）、２５０（Ｅ）、２５２（Ａ）、２５６（Ｔ）、２６４（Ｃ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７２】
本発明の脂肪分解酵素の位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及びｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、洗剤安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、１２（Ｆ）、１３（Ｑ）、１５（Ｓ）、１９（Ｃ，Ｇ）、２０（Ｐ）、２３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｖ）、２４（Ｗ）、２６（Ｃ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）、２８（Ｄ，Ｐ）、３１（Ｅ）、３４（Ｐ）、３７（Ｃ，Ｄ）、３９（Ｅ，Ｌ，Ｐ）、４２（Ｉ，Ｖ）、４５（Ｆ，Ｖ）、４６（Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｗ）、４７（Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）、４９（Ｈ，Ｖ）、５１（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｓ，Ｔ）、６０（Ｌ）、６４（Ｖ）、６６（Ｑ）、６８（Ｓ，Ｔ，Ｖ）、７３（Ｅ，Ｇ，Ｒ，Ｓ）、７５（Ｅ，Ｇ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ａ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）、９１（Ｅ，Ｑ）、９４（Ｄ）、１０８（Ｅ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）、１１４（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、１２７（Ｔ）、１２８（Ｈ，Ｓ，Ｙ）、１３１（Ｒ，Ｗ，Ｙ）、１３２（Ｄ）、１３３（Ｅ，Ｑ）、１３６（Ｄ，Ｑ）、１３９（Ｍ）、１４０（Ｆ，Ｍ，Ｑ）、１４２（Ｙ）、１５４（Ｉ）、１５５（Ｓ）、１５６（Ｗ）、１５９（Ｅ，Ｒ）、１６３（Ｆ，Ｌ，Ｐ，Ｙ）、１６８（Ｇ，Ｌ）、１７９（Ｌ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、１８８（Ｆ）、１８９（Ｄ）、２０５（Ｄ）、２０８（Ｅ）、２０９（Ｓ）、２１４（Ｄ）、２２３（Ｔ）、２２５（Ｅ）、２２８（Ｅ）、２３７（Ｌ，Ｙ）、２５０（Ｅ）、２５１（Ｄ）、２５２（Ａ）、２５６（Ｔ）、２６４（Ｃ，Ｈ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）、及び２６５（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７３】
本発明の脂肪分解酵素の位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及びｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ＬＡＳ安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり生産性の改変が、１（Ｆ，Ｒ）、４（Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）、５（Ｋ）、１１（Ｋ）、２３（Ｋ）、２７（Ａ，Ｈ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）、３７（Ｐ）、３８（Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｗ，Ｙ）、４２（Ｖ）、４３（Ｉ，Ｒ）、４５（Ｆ，Ｑ，Ｖ）、４７（Ｔ）、４９（Ｖ）、５１（Ｉ，Ｍ，Ｓ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７３（Ｓ）、７５（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｑ，Ｒ）、９１（Ｑ）、９４（Ｒ）、１０１（Ｄ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ａ）、１１９（Ｄ，Ｔ）、１２０（Ｙ）、１５４（Ｉ）、１７９（Ｌ）、１８７（Ｔ）、１８９（Ｄ，Ｑ）、２００（Ａ）、２０９（Ｓ）、２１１（Ｗ）、２２６（Ｎ）、２５０（Ｅ，Ｑ）、２５１（Ｗ）、２５２（Ａ）、及び２５６（Ｔ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７４】
本発明の脂肪分解酵素位置は親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、２（Ｉ，Ｌ）、３（Ｄ）、４（Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｗ）、５（Ｈ，Ｙ）、８（Ｈ，Ｍ）、９（Ｋ）、１１（Ｈ，Ｋ）、１８（Ｋ）、２３（Ｋ）、２４（Ａ，Ｔ）、２６（Ｋ，Ｔ）、２７（Ａ，Ｉ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、３０（Ｒ，Ｖ）、３２（Ｓ）、３５（Ｋ）、３７（Ｇ）、４０（Ｍ）、５４（Ｖ）、６９（Ａ，Ｋ）、７１（Ｒ）、７２（Ｌ）、７４（Ａ）、７５（Ｍ，Ｓ）、９１（Ｉ）、９４（Ｒ）、１０１（Ｙ）、１０８（Ｋ，Ｙ）、１１１（Ｌ，Ｔ，Ｖ）、１１４（Ｉ）、１２２（Ｔ，Ｙ）、１２３（Ｑ）、１２５（Ｑ）、１３０（Ｆ，Ｈ）、１３２（Ｈ，Ｗ）、１３４（Ｌ，Ｖ）、１３７（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）、１５１（Ｔ，Ｗ）、１５５（Ｇ）、１５６（Ｗ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｙ）、１６６（Ｇ）、１７６（Ｉ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｋ）、２３２（Ｌ，Ｐ）、２３３（Ｄ，Ｈ）、２３７（Ｌ，Ｙ）、２４４（Ｉ）、２５２（Ｌ，Ｔ）、２５５（Ｌ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７５】
本発明の脂肪分解酵素位置は親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＯ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、１（Ｄ）、２（Ｌ）、３（Ｄ，Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｙ）、８（Ａ，Ｅ，Ｍ）、９（Ｒ）、１８（Ｋ）、２３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ）、２４（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｎ，Ｔ）、２６（Ｇ，Ｋ）、２７（Ａ，Ｅ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｅ，Ｑ，Ｒ）、３３（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）、３７（Ｄ，Ｅ，Ｐ，Ｑ）、３８（Ｄ，Ｎ）、４０（Ｍ）、４８（Ｅ，Ｑ）、４９（Ｖ）、５０（Ｅ，Ｆ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、５４（Ｆ，Ｒ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、６４（Ｎ）、６６（Ｑ）、７４（Ｑ）、７５（Ｅ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ）、７７（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｔ）、８７（Ｐ）、９０（Ｅ，Ｆ，Ｑ）、１０１（Ｄ）、１０５（Ｄ，Ｐ）、１０８（Ｋ，Ｑ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｅ，Ｌ，Ｑ，Ｔ）、１１４（Ｆ，Ｍ）、１１５（Ｒ）、１１７（Ｑ）、１２０（Ｎ）、１２２（Ｙ）、１２３（Ｅ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ）、１２５（Ｑ）、１２７（Ｅ，Ｆ，Ｒ）、１３０（Ａ，Ｆ，Ｈ，Ｑ）、１３２（Ｋ，Ｑ，Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）、１５４（Ｆ，Ｌ）、１５５（Ｇ，Ｓ）、１５６（Ｆ，Ｗ）、１５８（Ｅ，Ｆ，Ｙ）、１６２（Ｇ，Ｒ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、１６９（Ｓ）、１７６（Ｉ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｄ，Ｑ，Ｒ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ｍ）、２２８（Ｅ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｄ，Ｇ，Ｑ）、２６４（Ｅ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ，Ｑ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７６】
本発明の脂肪分解酵素位置は親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、１（Ｑ，Ｓ）、３（Ｄ，Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｓ，Ｙ）、９（Ｍ）、１１（Ｋ）、１２（Ｆ）、１５（Ｓ）、２３（Ｆ）、２７（Ｅ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、３２（Ａ，Ｑ，Ｓ）、３３（Ｄ，Ｑ）、３５（Ｅ，Ｋ，Ｒ）、４０（Ｍ）、４８（Ｑ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｔ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７１（Ｅ）、７５（Ｒ）、７７（Ｉ，Ｔ）、８７（Ｐ）、１０５（Ａ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ａ，Ｌ）、１１４（Ｍ）、１１５（Ｒ）、１２７（Ｅ，Ｆ）、１３０（Ａ）、１３２（Ｑ，Ｒ，Ｗ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）、１４３（Ａ）、１５５（Ｓ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、１６４（Ｄ，Ｒ）、１６５（Ｉ，Ｙ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）、１８９（Ｒ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ａ，Ｍ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｑ）、２４４（Ｉ）、２５２（Ａ，Ｋ，Ｌ，Ｒ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６４（Ｈ，Ｒ，Ｔ）、及び２６９（Ｖ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７７】
本発明の脂肪分解酵素の位置は親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ及びｐＮＰＯ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、２（Ｌ）、３（Ｄ）、４（Ｄ，Ｌ）、５（Ｈ，Ｙ）、８（Ｍ）、１８（Ｋ）、２４（Ａ，Ｔ）、２６（Ｋ）、２７（Ａ，Ｉ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、４０（Ｍ）、７５（Ｍ）、１０８（Ｋ，Ｙ）、１１１（Ｌ，Ｔ）、１２２（Ｙ）、１２３（Ｑ）、１２５（Ｑ）、１３０（Ｆ，Ｈ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）、１５５（Ｇ）、１５６（Ｗ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｙ）、１７６（Ｉ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｄ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７８】
本発明の脂肪分解酵素位置は親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＯ及びｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、３（Ｄ，Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｙ）、２３（Ｆ）、２７（Ｅ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、３３（Ｄ，Ｑ）、４０（Ｍ）、４８（Ｑ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｔ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７５（Ｒ）、７７（Ｉ，Ｔ）、８７（Ｐ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ａ，Ｌ）、１１４（Ｍ）、１１５（Ｒ）、１２７（Ｅ，Ｆ）、１３０（Ａ）、１３２（Ｑ，Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）、１５５（Ｓ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）、１８９（Ｒ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ｍ）、２３２（Ｐ）、２３３（Ｑ）、及び２６４（Ｒ，Ｔ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００７９】
本発明の脂肪分解酵素位置は親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ、ｐＮＰＯ、及びｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、３（Ｄ）、４（Ｄ，Ｌ）、５（Ｈ）、５（Ｙ）、２７（Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、４０（Ｍ）、１０８（Ｋ）、１１１（Ｌ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｙ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｙ）、１８７（Ｈ，Ｓ，Ｗ）、及び２３２（Ｐ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００８０】
本発明の脂肪分解酵素位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＮＰＢ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以下であり、ｐＮＰＰ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１以上であり、生産性の改変が、１（Ｑ）、９（Ｍ）、１２（Ｆ）、１５（Ｓ）、２３（Ｆ）、２７（Ｅ）、３２（Ｑ）、３５（Ｅ）、４８（Ｑ）、５８（Ｍ，Ｑ）、７１（Ｅ）、７５（Ｒ）、１１５（Ｒ）、１３０（Ａ）、１３２（Ｑ，Ｒ）、１３７（Ｅ，Ｉ，Ｑ，Ｒ）、１４３（Ａ）、１５５（Ｓ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｓ）、１６４（Ｄ）、１６５（Ｉ，Ｙ）、１８７（Ｑ）、２２５（Ｅ）、２２７（Ａ，Ｍ）、２３３（Ｑ）、２５２（Ａ，Ｋ，Ｒ）、２６４（Ｈ，Ｒ，Ｔ）、及び２６９（Ｖ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００８１】
本発明の脂肪分解酵素の位置は、親脂肪分解酵素に対するアミノ酸改変を有し、改変は、発現及び熱安定性についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し０．８以上であり、ｐＨ  ６でのｐＮＰＯ加水分解についての最小性能指数（ＰＩ）が、親ＴＬＬに対し１．１以上であり、生産性の改変が、１（Ｑ，Ｓ）、２（Ｌ）、３（Ｔ）、４（Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｍ）、５（Ｈ，Ｙ）、９（Ｋ）、１１（Ｋ）、１２（Ｆ）、１５（Ｓ）、２４（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｎ）、２７（Ａ，Ｅ，Ｑ，Ｔ）、２９（Ｒ）、３２（Ａ）、３３（Ｄ，Ｆ，Ｑ）、３８（Ｄ）、４０（Ｍ）、４８（Ｑ）、４９（Ｖ）、５１（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｔ）、５６（Ｈ，Ｋ，Ｔ）、５８（Ｍ，Ｑ）、６９（Ａ）、７５（Ｒ）、７７（Ｔ）、９１（Ｑ）、９４（Ｒ）、９８（Ｉ）、１０５（Ａ）、１０８（Ｋ，Ｙ）、１１１（Ａ，Ｌ）、１１４（Ｉ，Ｍ，Ｖ）、１２１（Ｋ）、１２３（Ｅ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ）、１２５（Ｑ）、１２７（Ｅ，Ｆ）、１３０（Ａ，Ｈ）、１３２（Ｒ）、１３４（Ｌ）、１３７（Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）、１４３（Ａ）、１５１（Ｐ）、１５４（Ｆ，Ｉ，Ｌ）、１５５（Ｓ）、１５６（Ｗ）、１５８（Ｙ）、１６２（Ｇ）、１６３（Ｆ，Ｐ，Ｗ，Ｙ）、１６４（Ｄ，Ｒ）、１６５（Ｉ，Ｙ）、１８０（Ｋ）、１８７（Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）、１８９（Ｒ）、２２７（Ｍ）、２２８（Ｒ）、２３２（Ｐ）、２５２（Ｌ）、２６３（Ｉ，Ｖ）、２６５（Ｍ）、及び２６９（Ｍ）からなる群から選択される改変であり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【００８２】
本発明のペプチド
本発明は新規ポリペプチドを提供し、これを集合的に「本発明のポリペプチド」と呼んでもよい。本発明のポリペプチドは、酵素活性（例えば脂肪分解活性）を有する、例えば脂肪分解酵素変異体ポリペプチドのような、単離された、組み換え型の、実質的に純粋な、又は非天然の脂肪分解酵素変異体ポリペプチドを包含する。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドはクリーニング用途に有用であり、クリーニングする必要のある物品又は表面（例えば、物品の表面）をクリーニングする方法に有用であるクリーニング組成物中に組み込むこともできる。
【００８３】
一部の実施態様では、脂肪分解酵素変異体は、サーモミセス（Thermomyces）属由来の親脂肪分解酵素の変異体であり得る。互いに、及び配列番号４に示すサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）（ＴＬＬ）由来の脂肪分解酵素に対し高い同一性を有する各種脂肪分解酵素は、サーモミセス（Thermomyces）属において発見されている。上記の節に記載される全ての脂肪分解酵素変異体はサーモミセス（Thermomyces）属由来の親脂肪分解酵素の変異体であり得るものであり、及びより具体的には配列番号４に示す、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）（ＴＬＬ）由来の脂肪分解酵素の変異体であり得る。
【００８４】
一部の実施形態では、脂肪分解酵素変異体は、サーモミセス（Thermomyces）属由来の脂肪分解酵素に対し５０、６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一性を有する変異体であり得る。各種実施態様では、脂肪分解酵素変異体は、配列番号４に示す、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）（ＴＬＬ）由来の脂肪分解酵素に対し５０、６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一性を有する変異体であり得る。
【００８５】
サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）（ＴＬＬ）からクローン化されたリパーゼに関連する組成物及び方法が記載される。組成物及び方法は、クローン化し、発現させたＴＬＬが、洗剤組成物の存在下でカルボキシルエステル加水分解酵素活性（カルボン酸エステルに作用）を有するという観察に一部基づくものである。これらの特徴のため、ＴＬＬは様々な洗浄用途における使用に良好に適したものであり、この酵素は、洗剤組成物に見られる界面活性剤及び他の成分の存在下で脂質を加水分解することができる。
【００８６】
ＴＬＬは様々な天然及び合成基質に対して活性を示すが、この酵素はＣ４〜Ｃ１６の基質に対して選択性を示し、Ｃ８の基質に対してピーク活性を示すことが判明している。この特異性プロファイルにより、ＴＬＬは、短鎖、中鎖及び長鎖トリグリセリドの加水分解、並びに短鎖、中鎖及び長鎖脂肪酸エステルを含むエステル交換反応の実施に良好に適したものになる。
【００８７】
一態様では、本組成物及び方法はＴＬＬ変異体ポリペプチドを提供する。親ＴＬＬポリペプチドは、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）から単離した（ａｂＨ２３．０１ファミリー由来、ＰＤＢ：１ＤＴ３として示される成熟リパーゼのアミノ酸配列を有するリゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor mihei）リパーゼ様（リパーゼ工学データベース、ｗｗｗ．ｌｅｄ．ｕｎｉ−ｓｔｕｔｔｇａｒｔ．ｄｅ））。成熟したＴＬＬポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。同様のほぼ同一のＴＬＬポリペプチドが、例えばＴ．ラヌギノーサ（T. lanuginosus）の他の株又は単離物などにおいて、天然に存在し得る。本発明の組成物及び方法には、これら及び他の組み換えＴＬＬポリペプチドが含まれる。
【００８８】
一部の実施形態では、本発明は、脂肪分解活性を有する、単離された脂肪分解酵素変異体、脂肪分解酵素変異体の組み換え体、実質的に純粋な脂肪分解酵素変異体、又は非天然に生じる脂肪分解酵素変異体であり、ポリペプチドは、本明細書で提供される脂肪分解酵素変異体をコードするアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチド配列からなる。
【００８９】
一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、例示のＴＬＬポリペプチドに対し、特定の度合いのアミノ酸配列相同性を有する、例えば、配列番号３又は４のアミノ酸配列に対し、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は更には少なくとも９９％配列相同性を有する変異体である。相同性は、例えば本明細書において述べるＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、又はＣＬＵＳＴＡＬなどのプログラムを使用して、アミノ酸配列をアライメントすることにより決定することができる。
【００９０】
脂肪分解活性を有する脂肪分解酵素変異体をコードする、単離された、組み換え型で、実質的に純粋で、又は非天然に生じる配列も提供され、前記脂肪分解酵素変異体（例えば、リパーゼ変異体）は、配列番号４のアミノ酸配列と、５０未満、４０未満、３０未満、３５未満、２５未満、２０未満、１９未満、１８未満、１７未満、１６未満、１５未満、１４未満、１３未満、１２未満、１１未満、１０未満、９未満、８未満、７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、２未満、又は１未満のアミノ酸残基（１つ又は複数）が異なるアミノ酸配列からなり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、脂肪分解酵素変異体のアミノ酸配列をサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と整列させることにより決定されるものとして、配列番号４に示される、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列中の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って付番される。
【００９１】
上記のように、本発明の脂肪分解酵素変異体のポリペプチドは酵素活性（例えば、脂肪分解活性など）を有し、ひいては、例えば、限定するものではないが、食器類、食卓用食器類、布地、及び硬質表面を有する物品（例えば、テーブル、卓上、壁、家具、床、天井などの硬質表面）などのクリーニングに関する方法などといった、クリーニング用途に有用である。本発明の脂肪分解酵素変異体ポリペプチドを１種以上含む代表的なクリーニング組成物を以下に記載する。本発明の脂肪分解酵素変異体ポリペプチドの酵素活性（例えば、脂肪分解酵素活性）は、当業者に周知の手順を用いて、容易に測定することができる。以下に示す実施例には、酵素活性、クリーニング性能、洗剤安定性及び／又は熱安定性を評価するための方法を記載する。染み除去（例えば脂質性の染みなどの除去）、硬質表面のクリーニング、又は洗濯物、食器類若しくは食卓用食器類のクリーニング時の本発明の脂肪分解酵素変異体の性能は、当業者に周知の手法を用い、及び／又は実施例に記載される手法を用い容易に測定することができる。
【００９２】
本発明のポリペプチドには、ポリペプチドの酵素活性を実質的に変えないような場所を含む１箇所以上のアミノ酸の保存的又は非保存的な挿入、欠失、及び／又は置換などといった様々な変更を加えることができる。同様に、本発明の核酸には、特定のコドンが同一の又は異なるアミノ酸をコードするように、１箇所以上で、１つ以上のコドンに含まれる１つ以上の核酸を置換して、サイレントな変化（例えば、コードされるアミノ酸が核酸変異により変更されなかった場合、ヌクレオチド配列中の変異はアミノ酸配列中にサイレント変異を生じる）を生じさせるよう、あるいは配列中の１つ以上の核酸（又はコドン）を１箇所以上で欠失させて、配列中に１つ以上の核酸（又はコドン）を付加又は挿入して、及び／又は配列中の１つ以上の核酸（又はコドン）を切断又は１箇所以上でトランケーションさせて、サイレントではない変化を生じさせるよう、複数の変化を加えることもできる。核酸配列における多くのこのような変更は、得られる配列にコードされる脂肪分解酵素変異体の酵素活性を、元の核酸配列によりコードされている脂肪分解酵素変異体のものと比較して実質的に変化させなくてもよい。同様に、発現系（例えば、細菌による発現系）で最適な発現をもたらすコドンが１つ以上包含されるように、必要に応じて、上記１つ以上のコドンには同一のアミノ酸をコードさせたまま、本発明の核酸を改変させてもよい。
【００９３】
一部の実施形態では、本発明は、所望の酵素活性（例えば、脂肪分解酵素活性又はクリーニング性能活性）を有する脂肪分解酵素変異体ポリペプチドを含むポリペプチド種を提供し、ポリペプチドは本明細書に記載されるアミノ酸置換を有する配列からなり、かつ保存的及び非保存的置換などのような更なるアミノ酸置換も１箇所以上に含み、ポリペプチドは、所望の酵素活性（例えば、脂肪分解酵素変異体のクリーニング活性又は性能に反映される通り、脂肪分解酵素活性又はリパーゼ活性）を示し、維持し、又は概ね維持する。本発明に従うアミノ酸置換には、限定するものではないが、１箇所以上での非保存的置換及び／又は１箇所以上での保存的なアミノ酸置換が包含され得る。保存的なアミノ酸残基置換は、典型的には、アミノ酸残基の機能分類に含まれるアミノ酸を、同様の機能分類（同一のアミノ酸残基は、機能的に相同であるとみなされ、すなわち算出された機能的相同性％で保存されている）に属する残基と交換することを包含する。保存的なアミノ酸置換は、典型的には、機能的に類似するアミノ酸によるアミノ酸置換をアミノ酸配列中に包含する。例えば、アラニン、グリシン、セリン、及びトレオニンは機能的に類似するものであり、ひいては互いに保存的なアミノ酸置換を提供し得る。アスパラギン酸及びグルタミン酸は、互いに保存的な置換を提供し得る。アスパラギン及びグルタミンは、互いに保存的な置換を提供し得る。アルギニン、リシン、及びヒスチジンは、互いに保存的な置換を提供し得る。イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及びバリンは、互いに保存的な置換を提供し得る。フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンは、互いに保存的な置換を提供し得る。
【００９４】
他の保存的なアミノ酸置換基も想定され得る。例えば、アミノ酸は、機能類似性又は化学構造若しくは組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、イオウ含有）により分類することができる。例えば、脂肪族基には、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）が包含される。互いに保存的な置換であるとみなされるアミノ酸を含有する他の基には：芳香族：フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；イオウ含有：メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）；塩基性：アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）；酸性：アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；非極性無電荷残基、システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）、及びプロリン（Ｐ）；親水性の無電荷残基：セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）、及びグルタミン（Ｑ）が包含される。アミノ酸のその他の分類も当業者に周知であり、様々な一般的な文献に記載されている。上記の置換基と共に、本明細書においてポリペプチド配列を列挙することで、保存的に置換された全てのポリペプチド配列の一覧を提供する。
【００９５】
上記の部類のアミノ酸残基には、同様に好適であり、あるいは好適であり得るより保存的な置換が存在する。より保存的な置換のための保存的な基としては：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、及びアスパラギン−グルタミンが挙げられる。したがって、例えば一部の実施形態では、本発明は、脂肪分解活性を有する、単離された、又は脂肪分解酵素変異体の組み換えポリペプチド（例えば、リパーゼ変異体）を提供し、上記脂肪分解酵素変異体のポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９．５％の配列相同性を有するアミノ酸配列からなる。本発明の脂肪分解酵素変異体における、他のアミノ酸による１つのアミノ酸の保存的な置換は、脂肪分解酵素変異体の酵素活性又はクリーニング活性を有意に変更させることを見込むものではない。得られる脂肪分解酵素の酵素活性又はクリーニング性能活性は、標準的なアッセイ及び本明細書に記載されるアッセイを用い、容易に測定することができる。
【００９６】
本発明の、ポリペプチド配列が保存的に置換された変異体（例えば、本発明の脂肪分解酵素変異体）は、同様の保存的な置換基の保存的に選択されたアミノ酸による、割合の低い置換を、しばしば、ポリペプチド配列のアミノ酸のうちの約２５％、約２０％、約１５％、約１４％、約１３％、約１２％、約１１％、約１０％、約９％、約８％、約７％、又は約６％未満が含有し、又はポリペプチド配列のアミノ酸のうちの約５％、約４％、約３％、約２％、又は約１％未満が含有する。
【００９７】
本発明の核酸
本発明は、単離された核酸、非天然の核酸、又は組み換え核酸（本明細書で「ポリヌクレオチド」とも呼ばれる）を提供し、これは集合的に「本発明の核酸」又は「本発明のポリヌクレオチド」と呼ばれることもあり、本発明のポリペプチドをコードする。本発明の核酸は、以下に記載の全てのものを含めて、本発明のポリペプチドの組み換え体の産生（例えば発現）、典型的には、対象とするポリペプチドをコードする配列又はそれらの断片を含むプラスミド発現ベクターの発現を介した産生に有用である。上述のように、ポリペプチドには、例えば、酵素活性（例えば、脂肪分解活性）を有する、リパーゼ変異体のポリペプチドなどの脂肪分解酵素変異体のポリペプチドが包含され、脂肪分解酵素変異体ポリペプチドは、クリーニング用途、及びクリーニングする必要のある物品又は表面（例えば、物品の表面）をクリーニングするためのクリーニング組成物に有用である。
【００９８】
一部の実施形態では、本発明は、上記の表題「本発明のポリペプチド」と付けられた節及び本明細書の他の場所に記載される、任意のポリペプチド（任意の融合タンパク質などが包含される）をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸、組み換え核酸、実質的に純粋な核酸又は非天然の核酸を提供する。本発明は、上記及び本明細書の他の箇所に記載の、本発明の任意のポリペプチドの２つ以上の組み合わせをコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸、組み換え核酸、実質的に純粋な核酸、又は非天然の核酸も提供する。
【００９９】
脂肪分解活性を有する脂肪分解酵素変異体をコードする、単離された、組み換え型で、実質的に純粋で、又は非天然に生じる配列も提供され、前記脂肪分解酵素変異体（例えば、リパーゼ変異体）は、配列番号４のアミノ酸配列と、５０未満、４０未満、３０未満、３５未満、２５未満、２０未満、１９未満、１８未満、１７未満、１６未満、１５未満、１４未満、１３未満、１２未満、１１未満、１０未満、９未満、８未満、７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、２未満、又は１未満のアミノ酸残基（１つ又は複数）が異なるアミノ酸配列からなり、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、脂肪分解酵素変異体のアミノ酸配列を、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と整列させることにより決定されるものとして、配列番号１に示される、サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）のリパーゼＴＬＬのアミノ酸配列中の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って付番される。
【０１００】
本発明は、これまでに記載の通り、サーモミセス（Thermomyces）リパーゼのリパーゼ変異体をコードする核酸を提供し、リパーゼ変異体のアミノ酸位置は、配列番号４に示すＴ．ラヌギノーサ（T. lanuginosus）リパーゼＴＬＬのアミノ酸配列と対応させて付番される。
【０１０１】
本発明の核酸は、任意の好適な合成、操作、及び／若しくは単離手法、又はこれらの組み合わせを用いて作製できる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、当業者に周知の固相合成法などの標準的な核酸合成技術を用い製造することもできる。本発明の核酸の合成は、古典的なホスホラミダイト法を用いる化学合成が挙げられるがこれに限定されない当該技術分野において既知の任意の好適な方法（例えば、Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２２：１８５９〜６９（１９８１）を参照されたい）；又は自動化合成法において典型的に実践されているように、Ｍａｔｔｈｅｓらが記載した方法（Ｍａｔｔｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．３：８０１〜８０５（１９８４）を参照されたい）によって、促進（又は別の方法としては実施）することができる。本発明の核酸は、自動ＤＮＡ合成装置を使用しても作製できる。カスタマイズされた核酸は、各種供給業者（例えば、Ｔｈｅ  Ｍｉｄｌａｎｄ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ｔｈｅ  Ｇｒｅａｔ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｏｐｅｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．及びＤＮＡ２．０）に発注することができる。核酸合成に関係するその他の技術、並びに関連する原子は当業界で既知である（例えば、Ｉｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３（１９８４）；及びＩｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８：１０５６（１９８４）を参照されたい）。
【０１０２】
本発明の脂肪分解酵素の改変変異体を作製するための方法
本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする本発明の改変ポリヌクレオチドを生成するのに好適な様々な方法が当該技術分野において既知であり、こうした方法としては、限定するものではないが、例えば、部位飽和変異導入、系統的変異導入、挿入変異導入、欠失変異導入、ランダム変異導入、部位特異的変異導入、及び定向進化、並びに様々な他の組み換え手法が挙げられる。改変されたポリヌクレオチド及びタンパク質（例えば、脂肪分解酵素変異体）の製造方法としては、遺伝子の非相同組み換えに基づく方法、例えばＩＴＣＨＹ（Ｏｓｔｅｒｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，７：２１３９〜４４（１９９９）を参照されたい）、ＳＣＲＡＣＨＹ（Ｌｕｔｚ  ｅｔ  ａｌ．９８：１１２４８〜５３（２００１）を参照されたい）、ＳＨＩＰＲＥＣ（Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９：４５６〜６０（２００１）を参照されたい）、及びＮＲＲ（Ｂｉｔｔｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０：１０２４〜９（２００１を参照されたい）；Ｂｉｔｔｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１０１：７０１１〜６（２００４））並びにランダムな及び標的とされる変異、欠失及び／又は挿入を組み込むためにオリゴヌクレオチドを使用することに基づく方法（Ｎｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０：１２５１〜５（２００２）；Ｃｏｃｏ  ｅｔ  ａｌ．、２０：１２４６〜５０（２００２）；Ｚｈａ  ｅｔ  ａｌ．，４：３４〜９（２００３）；Ｇｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１４９：３９０３〜１３（１９９２）を参照されたい）などのＤＮＡシャフリング方法が挙げられる。
【０１０３】
本発明の脂肪分解酵素変異体を産生するためのベクター、細胞、及び方法
本発明は、本明細書に記載の本発明の少なくとも１種のポリヌクレオチドを含む単離された又は組み換えベクター（例えば、本明細書に記載の本発明の脂肪分解酵素変異体をコードするポリヌクレオチド）、本発明の少なくとも１種の核酸又はポリヌクレオチドを含む単離された又は組み換え脂肪分解酵素発現ベクター又は発現カセット、本発明の少なくとも１種の核酸又はポリヌクレオチドを含む単離された、実質的に純粋の、又は組み換えＤＮＡコンストラクト、本発明の少なくとも１種のポリヌクレオチドを含む単離された又は組み換え細胞、本発明の少なくとも１種のポリヌクレオチドを含む細胞を含む細胞培養物、本発明の少なくとも１種の核酸又はポリヌクレオチドを含む細胞培養物、並びにこのようなベクター、核酸、発現ベクター、発現カセット、ＤＮＡコンストラクト、細胞、細胞培養物、又はこれらの任意の組み合わせ又はこれらの混合物などを１種以上含む組成物を提供する。
【０１０４】
一態様では、本発明は、本発明の少なくとも１種の核酸又はポリヌクレオチドを含む本発明のベクター（例えば、発現ベクター又はＤＮＡコンストラクト）を少なくとも１つ含む組み換え細胞を提供する。このような組み換え細胞の一部のものは、このような少なくとも１つのベクターにより形質転換又は形質移入される。このような細胞は、典型的には宿主細胞と呼ばれる。このような細胞の一部のものは、細菌細胞、例えば、限定するものではないが、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）細胞などのバチルス種（Bacillus sp.）細胞を含む。本発明は、本発明の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体を含む組み換え細胞（例えば、組み換え宿主細胞）も提供する。
【０１０５】
一部の実施形態では、本発明は、本発明の核酸又はポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。一部の実施形態では、ベクターは、本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする本発明のポリヌクレオチド配列が、効率的な遺伝子の発現に必要とされる核酸断片に、又は追加の核酸断片に、調節可能なように連結される発現ベクター又は発現カセットである（例えば、プロモーターは、本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする本発明のポリヌクレオチドに、調節可能なように連結される）。ベクターには、転写終結配列、及び／又は抗菌剤を含有している培地で増殖させた場合に、プラスミドを感染させた宿主細胞を持続的に維持培養することを可能にする、抗菌剤耐性遺伝子などの選別遺伝子を含ませてもよい。
【０１０６】
発現ベクターは、プラスミド又はウイルスＤＮＡに由来するものであったよく、あるいは代替的な実施形態では、これらの両方の要素を含有する。例示的なベクターとしては、限定するものではないが、ｐＸＸ、ｐＣ１９４、ｐＪＨ１０１、ｐＥ１９４、ｐＨＰ１３が挙げられる（Ｈａｒｗｏｏｄ  ａｎｄ  Ｃｕｔｔｉｎｇ［編］，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ［１９９０］；ｐ．９２に掲載されるものなどのＢ．サブチリス（B. subtilis）用の好適な複製プラスミドを参照；同様に、Ｐｅｒｅｇｏ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ，ｉｎ  Ｓｏｎｅｎｓｈｅｉｎら、［編］Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｇｒａｍ−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｂａｃｔｅｒｉａ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．［１９９３］，ｐｐ．６１５〜６２４も参照）。
【０１０７】
対象とするタンパク質（例えば、脂肪分解酵素変異体）を細胞で発現及び産生させる際、改変脂肪分解酵素をコードしているポリヌクレオチドのコピーを少なくとも１つ及び好ましくは複数含む発現ベクターを少なくとも１つ用い、脂肪分解酵素の発現に好適な条件下で細胞を形質転換する。本発明の一実施形態では、脂肪分解酵素変異体（並びにベクターに含まれる他の配列）をコードするポリヌクレオチド配列は宿主細胞のゲノムに組み込まれ、一方、他の実施形態では、脂肪分解酵素変異体をコードするポリヌクレオチド配列からなるプラスミドベクターは自律性の染色体外配列として細胞内に留まる。本発明は、染色体外の核酸要素、並びに宿主細胞のゲノムに組み込まれる組み込みヌクレオチド配列の両方を提供する。本明細書に記載のベクターは、本発明の脂肪分解酵素変異体の産生に有用である。一部の実施形態では、脂肪分解酵素変異体をコードするポリヌクレオチドコンストラクトは、脂肪分解酵素変異体をコードするポリヌクレオチドを細菌染色体に組み込み及び任意選択で増幅することのできる組み込みベクター上に存在する。組み込むための部位の例は、当業者に周知である。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体をコードしているポリヌクレオチドの転写は、選択された脂肪分解酵素前駆体用の野生型プロモーターによりもたらされる。一部の他の実施形態では、プロモーターは、脂肪分解酵素前駆体と非相同的なものであるものの、宿主細胞中で機能するものである。具体的には、細菌宿主細胞で使用するのに好適なプロモーターの例としては、限定するものではないが、例えば、ａｍｙＥ、ａｍｙＱ、ａｍｙＬ、ｐｓｔＳ、ｓａｃＢ、ｐＳＰＡＣ、ｐＡｐｒＥ、ｐＶｅｇ、ｐＨｐａＩＩプロモーター、Ｂ．ステアロサーモフィルス（B.stearothermophilus）マルトース生成型アミラーゼ遺伝子、Ｂ．アミロリケファシエンス（B.amyloliquefaciens）（ＢＡＮ）アミラーゼ遺伝子、Ｂ．サブチリス（B.subtilis）アルカリ脂肪分解酵素遺伝子、Ｂ．クラウシイ（B.clausii）アルカリ脂肪分解酵素遺伝子、Ｂ．プミリス（B.pumilis）キシロシダーゼ遺伝子、Ｂ．チューリンゲンシス（B.thuringiensis）ｃｒｙＩＩＩＡ、及びＢ．リケニフォルミス（B.licheniformis）α−アミラーゼ遺伝子が挙げられる。追加のプロモーターとしては、限定するものではないが、Ａ４プロモーター、並びにファージλ  ＰＲ又はＰＬプロモーター、及び大腸菌（E.coli）ｌａｃ、ｔｒｐ又はｔａｃプロモーターが挙げられる。
【０１０８】
本発明の脂肪分解酵素変異体は、微生物及び真菌を包含する任意の好適なグラム陽性細菌の宿主細胞で生産され得る。例えば、一部の実施形態では、脂肪分解酵素変異体は真菌及び／又は微生物由来の宿主細胞で産生される。一部の実施形態では、宿主細胞は、バチルス種（Bacillus sp.）、ストレプトマイセス種（Streptomyces sp.）、エシェリキア種（Escherichia sp.）、又はアスペルギルス種（Aspergillus sp.）である。一部の実施形態では、脂肪分解酵素変異体はバチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞により生産される。本発明の脂肪分解酵素変異体の生産における使用が見出されるバチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞の例としては、限定するものではないが、Ｂ．リケニフォルミス（B. licheniformis）、Ｂ．レンタス（B. lentus）、Ｂ．スブチリス（B. subtilis）、Ｔ．ラヌギノーサ（T. lanuginosus）、Ｂ．レンタス（B. lentus）、Ｂ．ブレビス（B. brevis）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）、Ｂ．アルカロフィルス（B. alkalophilus）、Ｂ．コアギュランス（B. coagulans）、Ｂ．サーキュランス（B. circulans）、Ｂ．プミリス（B. pumilis）、バチルス・チューリンゲンシス（B. thuringiensis）、バチルス・クラウシィ（B. clausii）、及びバチルス・メガテリウム（B. megaterium）、並びにバチルス（Bacillus）属に含まれるその他の生物が挙げられる。一部の実施形態では、バチルス・スブチリス（B. subtilis）宿主細胞は、脂肪分解酵素変異体の生産のため使用される。米国特許第５，２６４，３６６号及び同第４，７６０，０２５号（再発行特許第３４，６０６号）は、本発明の脂肪分解酵素変異体の産生に使用することができる様々なバチルス（Bacillus）宿主株を記載するが、他の好適な株も使用することができる。
【０１０９】
本発明の脂肪分解酵素変異体の生産に使用することができるいくつかの工業用の菌種としては、非組み替え型（すなわち、野生型）のバチルス種株、並びに天然に生じる変異体株及び／又は組み換え株が挙げられる。一部の実施形態では、宿主株は組み換え株であり、宿主には、対象とするポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが導入されている。一部の実施形態では、宿主株はＢ．スブチリス（B. subtilis）宿主株であり、特に組み換え型のバチルス・サブチルス（Bacillus subtilis）宿主株である。数多くのＢ．スブチリス（B. subtilis）株が既知であり、限定するものではないが、例えば、１Ａ６（ＡＴＣＣ  ３９０８５）、１６８（１Ａ０１）、ＳＢ１９、Ｗ２３、Ｔｓ８５、Ｂ６３７、ＰＢ１７５３〜ＰＢ１７５８、ＰＢ３３６０、ＪＨ６４２、１Ａ２４３（ＡＴＣＣ  ３９，０８７）、ＡＴＣＣ  ２１３３２、ＡＴＣＣ  ６０５１、ＭＩ１１３、ＤＥ１００（ＡＴＣＣ  ３９，０９４）、ＧＸ４９３１、ＰＢＴ  １１０、及びＰＥＰ  ２１１株が挙げられる（例えば、Ｈｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７３：２１５〜２２８［１９７３］を参照されたい；同様に、米国特許第４，４５０，２３５号及び同第４，３０２，５４４号、並びに欧州特許第０１３４０４８号を参照されたい、これらの各々は参照によりその全文が組み込まれる）。発現宿主細胞としてのＢ．スブチリス（B. subtilis）の使用は当業者に周知である（例えば、Ｐａｌｖａら、Ｇｅｎｅ  １９：８１〜８７［１９８２］；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ  ａｎｄ  Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６５：７９６〜８０４［１９８６］；並びにＷａｎｇら、Ｇｅｎｅ  ６９：３９〜４７［１９８８］を参照されたい）。
【０１１０】
一部の実施形態では、バチルス（Bacillus）宿主細胞は、次の遺伝子：ｄｅｇＵ、ｄｅｇＳ、ｄｅｇＲ及びｄｅｇＱのうちの少なくとも１つの遺伝子において変異又は欠失を含むバチルス種（Bacillus sp.）のものである。好ましい変異はｄｅｇＵ遺伝子におけるものであり、より好ましくは変異はｄｅｇＵ（Ｈｙ）３２である（例えば、Ｍｓａｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７２：８２４〜８３４［１９９０］；及びＯｌｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２５３：５６２〜５６７［１９９７］を参照されたい）。変異ｄｅｇＵ３２（Ｈｙ）を保有しているバチルス・スブチリス（Bacillus subtilis）も好適な宿主株である。一部の実施形態では、バチルス（Bacillus）宿主は、ｓｃｏＣ４（例えば、Ｃａｌｄｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８３：７３２９〜７３４０［２００１］）を参照されたい；ｓｐｏＩＩＥ（例えば、Ａｒｉｇｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：１４０７〜１４１５［１９９９］を参照されたい）；及び／又はｏｐｐオペロンのｏｐｐＡ又はその他の遺伝子（例えば、Ｐｅｒｅｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５：１７３〜１８５［１９９１］を参照されたい）において変異又は欠失を含む。実際に、本発明の改変バチルス（Bacillus）株の一部の実施形態での使用が見出される、ｏｐｐＡ遺伝子の変異と同様の表現型を生じる、ｏｐｐオペロンにおける任意の変異が想到される。一部の実施形態では、これらの変異は単独で生じるものの、他の実施形態では複数の変異が組み合わさって存在する。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体の生産に使用することができる改変されたバチルス（Bacillus）宿主細胞株は、上記の遺伝子のうちの１つ以上に予め変異を包含しているバチルス（Bacillus）宿主株である。加えて、内在性脂肪分解酵素遺伝子の変異及び／又は欠失を含むバチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞は使用を見出される。一部の実施形態では、バチルス（Bacillus）宿主細胞はａｐｒＥ及びｎｐｒＥ遺伝子の欠失を包含する。他の実施形態では、バチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞は５つの脂肪分解酵素遺伝子の欠失を含む一方で、他の実施形態では、バチルス種（Bacillus sp.）宿主細胞は９つの脂肪分解酵素遺伝子の欠失を含む（例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第２００５／０２０２５３５号を参照されたい）。
【０１１１】
宿主細胞は、本発明の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体をコードする核酸を少なくとも１つ用い、当該技術分野において既知の任意の好適な手段により形質転換される。ベクターに組み込まれる場合でも、あるいはプラスミドＤＮＡを存在させずに使用される場合でも、いずれにせよ、核酸は典型的には微生物に導入され、一部の実施形態では、好ましくは大腸菌細胞又は形質転換受容性のバチルス（Bacillus）細胞に導入される。プラスミドＤＮＡコンストラクト又はベクターを利用して、核酸（例えば、ＤＮＡ）をバチルス（Bacillus）細胞又は大腸菌細胞に導入する方法、及びこのようなプラスミドＤＮＡコンストラクト又はベクターにより細胞を形質転換する方法は周知である。一部の実施形態では、プラスミドは、続いて大腸菌細胞から単離され、バチルス（Bacillus）細胞に導入される。しかしながら、大腸菌などの微生物を介在させることは必須ではなく、一部の実施形態では、ＤＮＡコンストラクト又はベクターは直接バチルス（Bacillus）宿主に導入される。
【０１１２】
当業者であれば、バチルス（Bacillus）細胞に本発明の核酸又はポリヌクレオチド配列を導入するために好適な方法は十分把握されているであろう（例えば、Ｆｅｒｒａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，」ｉｎ  Ｈａｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．［ｅｄｓ．］，Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．［１９８９］，ｐｐ．５７〜７２；Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５７：７１８〜７２６［１９８４］；Ｈｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．９３：１９２５〜１９３７［１９６７］；Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３：１３１〜１３５［１９８６］；Ｈｏｌｕｂｏｖａ，Ｆｏｌｉａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３０：９７［１９８５］；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１〜１１５［１９７９］；Ｖｏｒｏｂｊｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．７：２６１〜２６３［１９８０］；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５１：６３４［１９８６］；Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３９：２１３〜２１７［１９８１］；及びＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３０：２０３［１９８４］を参照されたい）。実際に、プロトプラスト形質転換及び会合（congression）を包含する形質転換、形質導入、及び原形質融合などの方法は周知であり、本発明での使用に適する。本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする核酸を含むＤＮＡコンストラクト又はベクターを宿主細胞に導入するために、形質転換法が使用される。当該技術分野において既知である、バチルス（Bacillus）細胞の形質転換方法としては、部分的に相同である常在性プラスミドを保持する形質転換受容性細胞によるドナープラスミドの取り込みを伴う、プラスミドマーカーレスキュー形質転換などの方法が挙げられる（Ｃｏｎｔｅｎｔｅら、Ｐｌａｓｍｉｄ  ２：５５５〜５７１［１９７９］；Ｈａｉｍａら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２３：１８５〜１９１［１９９０］；Ｗｅｉｎｒａｕｃｈら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５４：１０７７〜１０８７［１９８３］；及びＷｅｉｎｒａｕｃｈら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：１２０５〜１２１１［１９８７］参照）。この方法では、導入するドナープラスミドは、染色体の形質転換を模倣する方法で、常在性の「ヘルパー」プラスミドの相同領域を組み換える。
【０１１３】
一般的に使用される方法に加えて、一部の実施形態では、宿主細胞は、本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする核酸を含むＤＮＡコンストラクト又はベクターにより直接的に形質転換される（すなわち、宿主細胞への導入前にＤＮＡコンストラクト又はベクターを増幅するためないしは他の加工を行うために、中間細胞を使用しない）。本発明のＤＮＡコンストラクト又はベクターの宿主細胞への導入法には、プラスミド又はベクター中に挿入せずに核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列）を宿主細胞に導入するための、当該技術分野において既知の物理的及び化学的方法が包含される。このような方法としては、限定するものではないが、塩化カルシウム沈殿法、電気穿孔法、ネイキッドＤＮＡ法、及びリポソーム法などが挙げられる。更なる実施形態では、ＤＮＡコンストラクト又はベクターは、プラスミドに挿入されず、プラスミドと共に同時形質転換に使用される。加えて、更なる実施形態では、選択マーカーは、当該技術分野において既知の方法により、改変バチルス（Bacillus）株から除去される（Ｓｔａｈｌら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５８：４１１〜４１８［１９８４］；及びＰａｌｍｅｒｏｓら、Ｇｅｎｅ  ２４７：２５５〜２６４［２０００］参照）。
【０１１４】
一部の実施形態では、本発明の形質転換細胞は、一般的な栄養培地で培養される。温度及びｐＨなどの好適な具体的な培養条件は当業者に既知であり、科学文献に詳しく記載されている。一部の実施形態では、本発明は、本発明の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体又は本発明の少なくとも１種の核酸を含む培養物（例えば、細胞培養物）を提供する。同様に、本発明の核酸、ベクター、又はＤＮＡコンストラクトを少なくとも１つ含む組成物も提供する。
【０１１５】
一部の実施形態では、本発明の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を、本発明の脂肪分解酵素の発現を可能にする条件下で、好適な栄養培地で培養した後、得られた脂肪分解酵素を培養物から回収する。細胞培養に使用する培地には、宿主細胞を増殖させるのに好適な、適切な添加剤を含有している最少培地又は複合培地などといった任意の一般的な培地を含む。好適な培地は、販売元から入手することができ、又は公開されている処方に従って調製することもできる（例えば、ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログを参照されたい）。一部の実施形態では、細胞により生産された脂肪分解酵素は、限定するものではないが、例えば、遠心沈降又は濾過による培地からの宿主細胞の分離、上清のタンパク質成分の沈殿又は塩（例えば、硫酸アンモニウム）を用いる濾過、クロマトグラフィー精製（例えば、イオン交換、ゲル濾過、親和性など）などの従来法により培養培地から回収される。本発明で使用するにあたり、脂肪分解酵素変異体を回収又は精製するための任意の好適な方法を選択することができる。
【０１１６】
一部の実施形態では、組み換え宿主細胞により生産された脂肪分解酵素変異体は、培養培地に分泌される。精製の助けとなるドメインをコードする核酸配列を使用して、可溶性タンパク質の精製を容易にすることもできる。脂肪分解酵素変異体をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクター又はＤＮＡコンストラクトには、脂肪分解酵素変異体の精製を促進するドメインをコードする核酸配列を更に含ませて、精製を容易にすることもできる（例えば、Ｋｒｏｌｌら、ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：４４１〜５３［１９９３］参照）。このような精製を促進するドメインとしては、限定するものではないが、例えば、固定化した金属での精製を可能にするヒスチジン−トリプトファンモジュールなどの金属キレートペプチド（Ｐｏｒａｔｈ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．３：２６３〜２８１［１９９２］を参照されたい）、固定化した免疫グロブリンでの精製を可能にするプロテインＡドメイン、並びにＦＬＡＧＳ付加／親和性精製システムにおいて利用されるドメイン（例えば、Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）から入手可能なプロテインＡドメイン）が挙げられる。精製ドメインと非相同的なタンパク質との間に、ファクターＸＡ又はエンテロキナーゼなどの、開裂させることのできるリンカー配列（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から得られる配列）を包含させることによっても精製が促進されることが見出されている。
【０１１７】
本発明の脂肪分解酵素変異体などの酵素の酵素活性の検出及び測定アッセイは周知である。脂肪分解酵素（例えば、本発明の脂肪分解酵素変異体など）の活性を検出及び測定するための様々なアッセイも当業者には既知である。詳細には、（リパーゼアッセイの参照を加えることにより）脂肪分解酵素活性を測定する際に、アッセイを利用可能である。宿主細胞における成熟脂肪分解酵素（例えば、本発明の成熟型脂肪分解酵素変異体）の生産量の決定には様々な方法を使用できる。このような方法としては、限定するものではないが、例えば、脂肪分解酵素に特異的なポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体のいずれかを利用する方法が挙げられる。例示的な方法としては、限定するものではないが、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、及び蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。これらのアッセイ及びその他のアッセイは当該技術分野において周知のものである（例えば、Ｍａｄｄｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１［１９８３］を参照されたい）。
【０１１８】
一部の他の実施形態では、本発明は、本発明の成熟型の脂肪分解酵素変異体を製造又は生産する方法を提供する。成熟型の脂肪分解酵素変異体は、シグナルペプチド配列又はプロペプチド配列を含まない。この方法の一部のものは、例えば、バチルス種（Bacillus sp.）細胞（例えば、Ｂ．スブチリス（B. subtilis））などの、組み換え細菌宿主細胞において、本発明の脂肪分解酵素変異体を製造又は生産することを含む。一部の実施形態では、本発明は、本発明の脂肪分解酵素変異体の生産方法を提供し、方法は、本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする核酸を含む組み換え発現ベクターを含む組み換え宿主細胞を、脂肪分解酵素変異体の生産を誘導する条件下で培養することを含む。このような方法のうちいくつかのものは、培養物から脂肪分解酵素変異体を回収することを更に含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、本発明は、本発明の脂肪分解酵素変異体の生産方法を提供し、方法は：（ａ）本発明の脂肪分解酵素変異体をコードする核酸を含む組み換え脂肪分解酵素発現ベクターを細胞集団（例えば、Ｂ．スブチリス（B. subtilis）細胞などの細菌細胞）に導入すること；及びｂ）発現ベクターによりコードされている脂肪分解酵素変異体の生産を誘導する条件下で、培養培地中で細胞を培養する工程、を包含する。このような方法のうち一部のものは、（ｃ）細胞又は培養培地から脂肪分解酵素変異体を単離する工程、を更に含む。
【０１２０】
布地ケア及びホームケア製品
一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体は、補助成分及び脂肪分解酵素変異体を含む組成物で使用することができ、ここで、組成物は布地ケア製品及びホームケア製品である。好適な組成物の例を実施例１に記載する。
【０１２１】
一部の実施形態では、少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体を含む布地及びホームケア製品を含む組成物は、次の成分のうちの１種以上を含む（組成物の合計重量に基づく）：約０．０００５重量％〜約０．５重量％、約０．００１重量％〜約０．１重量％、又は更には約０．００２重量％〜約０．０５重量％の前記脂肪分解酵素変異体；及び次のもののうち１種以上：約０．００００３重量％〜約０．１重量％布地色相剤；約０．００１重量％〜約５重量％の香料カプセル剤；約０．００１重量％〜約１重量％の冷水溶解性光沢剤；約０．００００３重量％〜約０．１重量％の漂白触媒；約０．００００３重量％〜約０．１重量％の細菌由来のクリーニング用セルラーゼ；及び／又は約０．０５重量％〜約２０重量％のＧｕｅｒｂｅｔ非イオン性界面活性剤。
【０１２２】
本明細書で使用するとき、脂肪分解酵素（例えば、本発明の脂肪分解酵素変異体）の「洗浄性能」は、脂肪分解酵素が、組成物に脂肪分解酵素変異体を加えていない洗剤と比較して、追加のクリーニング性能を洗剤に提供するよう、洗浄に貢献することを指す。洗浄性能は、関連する洗浄条件下で比較される。一部の試験系では、洗剤組成物、泡濃度、水硬度、洗浄機構、時間、ｐＨ、及び／又は温度などの他の関連する要因を、特定の市場区分における典型的な家事用途の条件（例えば、食器手洗い又は手作業での食器洗浄、食器自動洗浄、食器クリーニング、食卓用食器類クリーニング、及び布地クリーニングなど）に限定されるような様式に調節することもできる。
【０１２３】
一部の実施形態では、布地及びホームケア製品組成物は、顆粒状又は粉末洗濯洗剤である。
【０１２４】
一部の実施形態では、布地ケア製品及びホームケア製品組成物は液体洗濯洗剤、又は食器用洗剤である。
【０１２５】
布地ケア製品及びホームケア製品は、流体又は固体を包含する任意の好適な形態で提供されることが意図される。布地ケア製品及びホームケア製品は、特に、液体形態の場合には１回用量パウチの形態であってよく、典型的には、布地ケア製品及びホームケア製品は、少なくとも一部が又は更には全てが水溶性パウチ中に封入される。加えて、少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体を含む布地ケア製品及びホームケア製品の一部の実施例では、布地ケア製品及びホームケア製品は上記のパラメーター及び／又は特性の任意の組み合わせを有し得る。
【０１２６】
洗浄組成物
クリーニング組成物及びクリーニング配合物は、任意の物体、物品、及び／又は表面をクリーニング、漂白、消毒、及び／又は殺菌するのに好適な任意の組成からなる。このような組成物及び配合物としては、限定するものではないが、例えば、クリーニング又は洗剤組成物（例えば、液体、錠剤、ゲル、バー、顆粒、及び／又は固体洗濯組成物又は洗剤組成物及びおしゃれ着用洗剤組成物など）；硬質表面クリーニング組成物及び配合物（例えば、ガラス、木、セラミック及び金属製のカウンター及び窓）；カーペットクリーナー；オーブンクリーナー；布地フレッシュナー；布地柔軟剤；及び繊維製品、洗濯用洗浄性能増進クリーニング又は洗剤組成物、洗濯用添加型クリーニング組成物、及び洗濯物の染み抜き用クリーニング組成物；食器手洗い用又は手作業での食器洗浄用組成物（例えば、食器「手洗い」用又は食器「手作業での」洗浄用の洗剤）及び食器自動洗浄用組成物（例えば、「食器自動洗浄機用の洗剤」）を包含する食器洗浄用組成物が挙げられる。
【０１２７】
本明細書で使用するとき、クリーニング組成物又はクリーニング配合物としては、別途記載のない限り、顆粒型又は粉末型汎用又は強力洗浄剤、特に、クリーニング洗剤；液体型、顆粒型、ゲル型、固形、錠剤型又はペースト型汎用洗浄剤、特にいわゆる強力液体（ＨＤＬ）洗剤又は強力粉末洗剤（ＨＤＤ）型；液体リネン洗剤；高起泡型のものを含む食器手洗い又は食器手洗浄剤；食器手洗い又は手作業による食器洗浄、食器自動洗浄、又は家事用及び業務用の様々な錠剤型、粉末型、固形、顆粒型、液体型、ゲル型及びすすぎ助剤型の食器類若しくは食卓用食器類洗浄剤；抗菌性手洗い型の、クリーニングバー、マウスウォッシュ、義歯クリーナー、カーシャンプー、カーペットシャンプー、風呂場クリーナーなどの液体クリーニング及び消毒剤；人間及び他の動物用毛髪用シャンプー及び／又は毛髪リンス；シャワージェル及びバブルバス及び金属クリーナー；加えて漂白添加剤及び「染み抜き剤」又は前処理型のクリーニング助剤；が挙げられる。一部の実施形態では、顆粒状組成物は「コンパクト」形態であり；一部の実施形態では、液体組成物は「濃縮された」形態である。
【０１２８】
本明細書で使用するとき、用語「洗剤組成物」又は「洗剤配合物」は、特定の布地及び／又は非布地製の物体又は物品などの汚れた又は泥の付いた物体をクリーニングするための、洗浄媒質に使用することが意図される、組成物を参照する際に使用される。本発明のこのような組成物は、任意の特定の洗剤組成物又は洗剤配合物に限定されない。実際に、一部の実施形態では、本発明の洗剤は本発明の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体に加え、界面活性剤、転移酵素、加水分解酵素、酸化還元酵素、ビルダー（例えば、ビルダー塩など）、漂白剤、漂白活性化剤、ブルーイング剤、蛍光染料、ケーキング防止剤、マスキング剤、酵素活性化剤、抗酸化物質、及び／又は可溶化剤を１種以上含有する。場合によっては、ビルダー塩はケイ酸塩とリン酸塩の混合物であり、好ましくはリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム）よりもケイ酸塩（例えば、メタケイ酸ナトリウム）を多く含む。例えば、限定するものではないが、クリーニング組成物又は洗剤組成物などの、本発明の一部の組成物は、リン酸塩（例えば、リン酸塩又はリン酸塩ビルダー）を含まない。
【０１２９】
特に記載がない限り、本明細書に提供される成分又は組成物の濃度は全て、成分又は組成物の活性レベルに対するものであり、市販の供給源に存在し得る不純物、例えば、残留溶媒又は副生成物は除外される。酵素成分の重量は活性タンパク質の合計に基づくものである。比率（％）及び比は全て、別途記載のない限り重量で計算している。比率（％）及び比は全て、別途記載のない限り全組成物を基準として計算している。例示された洗剤組成物において、酵素濃度は、組成物の合計重量に基づき純粋な酵素濃度として表現され、かつ特に記載のない限り、洗剤成分は組成物の合計重量に基づき表現される。
【０１３０】
本明細書で示されるように、一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、更に、限定するものではないが、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、他の酵素、酵素安定化系、キレート剤、蛍光増白剤、汚れ剥離ポリマー、移染剤、分散剤、抑泡剤、染料、香料、着色剤、充填塩、ヒドロトロープ、光活性化剤、蛍光剤、布地コンディショナー、加水分解性界面活性剤、保存料、抗酸化剤、収縮防止剤、防皺剤、殺菌剤、防カビ剤、色スペックル、銀ケア、防曇剤及び／又は抗腐食剤、アルカリ供給源、可溶化剤、キャリア、加工助剤、色素、及びｐＨ調整剤などの補助成分を含む（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号、同第同第６，６０５，４５８号、同第５，７０５，４６４号、同第５，７１０，１１５号、同第５，６９８，５０４号、同第５，６９５，６７９号、同第５，６８６，０１４号及び同第５，６４６，１０１号を参照されたい、これらの各々は参照により本明細書に援用される）。クリーニング組成物材料の具体例は以下に詳細に例示する。クリーニング助剤が、クリーニング組成物中で本発明の脂肪分解酵素変異体と適合しない実施形態では、２つの成分を組み合わせることが適切になるまでの間、クリーニング助剤及び脂肪分解酵素を分離した（すなわち、互いに接触させない）ままにしておくという好ましい手段が使用される。このような分離手法には、当該技術分野において既知の任意の好適な方法が包含される（例えば、ゲルキャップ法、カプセル封入、錠剤、物理的分離など）。
【０１３１】
リパーゼを含有する洗剤組成物
例えば、本発明の洗剤組成物は、洗濯用助剤組成物及び染みの付いた布地類の前処理に使用するのに好適な組成物を含む手洗い及び機械洗い用洗濯洗剤組成物、すすぎ時添加用布地柔軟剤組成物、並びに家庭全般の硬質表面クリーニング操作及び食器洗浄操作に使用するための組成物として配合することもできる。
【０１３２】
本発明による洗剤組成物は、液体、ペースト、ゲル、バー又は顆粒形態であってよい。ｐＨ（使用濃度で水性溶液において測定）は、通常、中性又はアルカリ性であり、例えば、７〜１１、特に９〜１１の範囲である。本発明による顆粒状組成物は、「コンパクト形態」であってもよく、すなわち、従来の顆粒状洗剤と比較して高密度、すなわち、５５０〜９５０ｇ／Ｌを有し得る。
【０１３３】
本組成物には、１種以上の補助剤（例えば、布地から脂肪酸を除去するのに効果的な界面活性剤）及び１種以上の脂肪分解酵素を含有させることができる。一部の実施形態では、補助剤及び脂肪分解酵素は、単一の組成物として存在する。他の実施形態では、補助剤及び脂肪分解酵素は、布地上の油性の染みと接触させる前に合わせる、又は油性の染み上で合わせる別個の組成物として存在する。
【０１３４】
本クリーニング組成物には、脂肪分解（lypolytic）酵素と組み合わせて使用するための１種以上の補助剤（界面活性剤）を含有させることができる。好適な補助剤は、比較的小さい、実効電荷を持たない親水性部分と、線状又は飽和されている疎水性部分とを有し得る。一部の実施形態では、疎水性部分は、少なくとも６、７、８、又は９個の隣接する脂肪族炭素を含有する。一部の実施形態では、疎水性部分は環状である。一部の実施形態では、疎水性部分は分枝していない。好適な界面活性剤としては、糖系化合物及び双極性イオン性化合物が挙げられる。好適な補助剤は、国際公開第２０１１０７８９４９号に開示されており、該特許文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１３５】
糖系界面活性剤としては、マルトピラノシド、チオマルトピラノシド、グルコピラノシド、及びこれらの誘導体が挙げられる。マルトース系界面活性剤は、概して、グルコース系界面活性剤よりも有効であった。一部の実施形態では、好ましい糖系界面活性剤は、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、及び更には少なくとも７個の炭素原子が連なる疎水性のテール鎖を有する。テールは脂肪族又は環状であり得る。テールは未分岐であり得るものの、十分な鎖長を有していれば分岐も許容され得る。
【０１３６】
糖系界面活性剤の具体例としては、ノニル−β−Ｄ−マルトピラノシド、デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ウンデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、トリデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、テトラデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ヘキサエシル（hexaecyl）−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、及び同様物、２，６−ジメチル−４−ヘプチル−β−Ｄ−マルトピラノシド、２−プロピル−１−ペンチル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ノニル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ノニル−β−Ｄ−グルコピラノシド、デシル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ドデシル−β−Ｄ−グルコピラノシド、スクロースモノドデカノエート、特定のシクロヘキシルアルキル−β−Ｄ−マルトシド（例えば、ＣＹＭＡＬ（登録商標）及びＣＹＧＬＡ）、及びＭＥＧＡ（商標）界面活性剤が挙げられる。
【０１３７】
補助剤は、非糖、非イオン性界面活性剤であり得る。例示の界面活性剤としては、９個以下のエトキシレートリピートを有するＴｒｉｔｏｎ類が挙げられる。注目すべきＴｒｉｔｏｎはＡＮＡＰＯＥ（登録商標）−Ｘ−１００及びＡＮＡＰＯＥ（登録商標）−Ｘ−１１４である。一部の実施形態では、補助剤は、少なくとも約９個の炭素原子からなる疎水性テールを有する非イオン性ホスフィンオキシド系界面活性剤である。例示的な界面活性剤としては、ジメチルデシルホスフィンオキシド及びジメチルドデシルホスフィンオキシドが挙げられる。
【０１３８】
ＦＯＳ−ｃｈｏｌｉｎｅなどの双極性界面活性剤を補助剤とすることができる。一部の実施形態では、ＦＯＳ−ｃｈｏｌｉｎｅは、１２以上の鎖長を有する疎水性テールを有する。疎水性テールは飽和及び不飽和であってよく、かつ環状であってよい。例示的なＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ界面活性剤としては、ＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ（登録商標）−１２、ＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ（登録商標）−１３、ＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ（登録商標）−１４、ＬＹＳＯＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ（登録商標）−１４、ＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ（登録商標）−１５、ＦＯＳ−ＣＨＯＬＩＮＥ（登録商標）−１６、ＦＯＳ−ＭＥＡ（登録商標）−１２、ＤＯＤＥＣＡＦＯＳ、ＩＳＯ不飽和１１〜１０、ＩＳＯ  １１〜６、ＣＹＯＦＯ、ＮＯＰＯＬ−ＦＯＳ、ＣＹＣＬＯＦＯＳ（登録商標）（ＣＹＭＡＬ（登録商標））−５、−６、−７、−８など、及び同様物が挙げられる。
【０１３９】
一部の場合では、スルホベタイン双極性界面活性剤を補助剤とすることができる。好ましいスルホベタイン界面活性剤は、少なくとも炭素原子１２個を有する疎水性テールを有し、例えば、ＡＮＺＥＲＧＥＮＴ（登録商標）３〜１２及びＡＮＺＥＲＧＥＮＴ（登録商標）３〜１４である。典型的には、スルホベタイン類よりも多量の投入量では、双極性イオン性オキシド、及びＣＨＡＰＳ系界面活性剤（例えば、ＣＨＡＰＳ及びＣＨＡＰＳＯ）も有効である。
【０１４０】
一部の場合では、アニオン性洗剤、例えば、サルコシンを補助剤とすることができる。好ましいサルコシン類は、少なくとも炭素原子１０個を有する疎水性テールを有するものである。一部の場合では、デオキシコール酸塩もまた補助剤とすることができる。
【０１４１】
補助剤は、少なくとも０．００１％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％以上、又は少なくとも０．０１ｐｐｍ、少なくとも０．０５ｐｐｍ、少なくとも０．１ｐｐｍ、少なくとも０．５ｐｐｍ、少なくとも１ｐｐｍ、少なくとも５ｐｐｍ、少なくとも１０ｐｐｍ以上の量で組成物に存在させることができる。一部の場合では、補助剤は、予め選択された範囲内で、例えば、約０．００１〜０．０１％、約０．０１〜０．１％、約０．１〜１％、又は約０．０１〜１ｐｐｍ、約０．１〜１ｐｐｍ、又は約１〜１０ｐｐｍで存在させることもできる。一部の場合では、最適活性は、活性が減少する範囲にわたって、このような範囲超及び範囲未満で観察される。
【０１４２】
洗剤の界面活性剤系は、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性、及び／又は双極性界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、典型的には、０．１重量％〜６０重量％、例えば、１重量％〜４０重量％、特に１０重量〜４０重量％、好ましくは約３重量％〜約２０重量％の濃度で存在させる。洗剤は、通常、０〜５０％のアニオン性界面活性剤、例えば、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、αオレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、アルキルサルフェート（脂肪族アルコールサルフェート）（ＡＳ）、アルコールエトキシサルフェート（ＡＥＯＳ又はＡＥＳ）、二級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル又はアルケニルスクシン酸又は石鹸などを含有することになる。
【０１４３】
洗剤には、アルキルフェノール縮合体の非イオン性界面活性剤ポリアルキレンオキシド（例えば、ポリエチレンオキシド）を０〜４０％含有させることができる。好ましい非イオン性界面活性剤は、アルコールエトキシレート（ＡＥＯ又はＡＥ）、カルボキル化アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、アルキル（Ｎ−メチル）−グルコセアミド（glucoseamide）又はポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド（例えば、国際公開第９２１０６１５４号に記載される通り）である。
【０１４４】
半極性非イオン性界面活性剤は、非イオン性界面活性剤の別の分類であり、約１０〜約１８個の炭素原子からなるアルキル部分を１つと、約１〜約３個の炭素原子を含有するアルキル基及びヒドロキシアルキル基からなる群から選択される部分を２つ含有する水溶性アミンオキシド、約１０〜約１８個の炭素原子からなるアルキル部分を１つと、約１〜約３個の炭素原子を含有するアルキル基及びヒドロキシアルキル基からなる群から選択される部分を２つ含有する水溶性ホスフィンオキシド、及び約１０〜約１８個の炭素原子からなるアルキル部分を１つと、約１〜約３個の炭素原子を含有するアルキル及びヒドロキシアルキル部分からなる群から選択される部分を含有する水溶性スルホキシドを包含する。詳細には、アミンオキシド界面活性剤としては、Ｃ１０〜Ｃ１８アルキルジメチルアミンオキシド及びＣ８〜Ｃ１２アルコキシエチルジヒドロキシエチルアミンオキシドが挙げられる。
【０１４５】
洗剤組成物には、カチオン性界面活性剤を更に含ませることができる。使用されるカチオン性洗浄界面活性剤は、長鎖ヒドロカルビル基を１つ有するものである。このようなカチオン性界面活性剤の例としては、アルキルトリメチルアンモニウムハロゲン化物などのアンモニウム界面活性剤が挙げられる。非常に好ましいカチオン性界面活性剤は、水溶性四級アンモニウム化合物である。好適な四級アンモニウム化合物の例としては、ココナツトリメチルアンモニウムクロリド又はブロミド、ココナツメチルジヒドロキシエチルアンモニウムクロリド又はブロミド、デシルトリエチルアンモニウムクロリド、デシルジメチルヒドロキシルエチルアンモニウムクロリド又はブロミド、Ｃ１２〜１５ジメチルヒドロキシルエチルアンモニウムクロリド又はブロミド、ココナツジメチルヒドロキシルエチルアンモニウムクロリド又はブロミド、ミリスチルトリメチルアンモニウムメチルサルフェート、ラウリルジメチルベンジルアンモニウムクロリド又はブロミド、ラウリルジメチル（エテノキシ）４アンモニウムクロリド又はブロミド、コリンエステル、ジアルキルイミダゾリンが挙げられる。
【０１４６】
洗剤組成物には、更に両性界面活性剤を含有させることができる。これらの界面活性剤は、二級若しくは三級アミンの脂肪族誘導体、又は複素環式第二級及び第三級アミンの脂肪族誘導体として広範に記載することができ、脂肪族基は直鎖又は分岐鎖であってよい。脂肪族置換基のうち１つは、少なくとも約８個の炭素原子、典型的には約８〜約１８個の炭素原子を含有し、及び少なくとも１つはアニオン性の水溶性基、例えば、カルボキシ、スルホネート、スルフェートを含有する。この定義に該当する化合物の例は、３−（ドデシルアミノ）プロピオン酸ナトリウム、３−（ドデシルアミノ）−プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、２−（ドデシルアミノ）エチルスルホン酸ナトリウム、２−（ジメチルアミノ）オクタデカノン酸ナトリウム、３−（Ｎ−カルボキシメチルドデシルアミノ）プロパン−Ｉ−スルホン酸二ナトリウム、オクタデシル−イミノ二酢酸二ナトリウム、Ｉ−カルボキシメチル−２−ウンデシルイミダゾールナトリウム、及びＮ，Ｎ−ｂｉｓ（２−ヒドロキシエチル）−２−スルファト−３−ドデコキシ−プロピルアミンナトリウムである。３−（ドデシルアミノ）プロパン−Ｉ−スルホン酸ナトリウムが好ましい。
【０１４７】
同様に両性イオン性界面活性剤も、洗剤組成物、特に洗濯物用洗剤組成物に使用される。これらの界面活性剤は、第二級及び第三級アミンの誘導体、複素環式第二級及び第三級アミンの誘導体、又は第四級アンモニウム、第四級ホスホニウム又は第三級スルホニウム化合物の誘導体として広範に記載できる。第四級化合物中のカチオン性原子は、複素環の一部であり得る。これらの化合物の全てにおいて、少なくとも１つの脂肪族基、直鎖又は分岐鎖は約３〜１８個の炭素原子を含有し、少なくとも１つの脂肪族置換基はアニオン水溶性基、例えば、カルボキシ基、スルホン酸基、硫酸基、リン酸基、又はホスホン酸基を含有する。特に、エトキシル化双極性化合物と双極性界面活性剤とは、洗濯用途において、粘土汚れ除去のため使用されている。
【０１４８】
洗剤には、ゼオライト、二リン酸塩、三リン酸塩、ホスホン酸塩、クエン酸塩、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＭＰＡ）、アルキル又はアルケニルスクシン酸、可溶性ケイ酸塩、又は層状ケイ酸塩（例えば、ＳＫＳ−６（Ｈｏｅｃｈｓｔ））などの洗剤ビルダー又はそれらの複合剤を１〜６５％含有させることもできる。洗剤は、無ビルダーであってもよく、すなわち、洗剤ビルダーを本質的に含まないものであってもよい。
【０１４９】
洗剤ビルダーは、更にリン含有型及び無リン型に分類することもできる。リン含有無機アルカリ洗浄ビルダーの例としては、水溶性塩、特にアルカリ金属二リン酸塩、オルトリン酸塩、ポリリン酸塩、及びホスホン酸塩が挙げられる。無リン無機ビルダーの例としては、水溶性アルカリ金属炭酸塩、ホウ酸塩及びケイ酸塩、並びに層状ニケイ酸塩が挙げられ、ゼオライトの多様な種類の非水溶性結晶質又は非晶質アルミノケイ酸塩が代表例として最も既知である。好適な有機ビルダーの例としては、アルカリ金属、スクシネート、マロネート、脂肪酸マロネート、脂肪酸スルホネート、カルボキシメトキシスクシネート、ポリアセテート、カルボキシレート、ポリカルボキシレート、アミノポリカルボキシレート、及びポリアセチルカルボキシレートのアンモニウム又は置換アンモニウム塩が挙げられる。
【０１５０】
洗剤組成物に包含させるのに好適なキレート剤は、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＥＤＤＳ）、又はアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、若しくはこれらの置換アンモニウム塩、又はこれらの混合物である。好ましいＥＤＤＳ化合物は、遊離酸形態及びそれらのナトリウム又はマグネシウム塩である。このようなＥＤＤＳの好ましいナトリウム塩の例としては、Ｎａ２ＥＤＤＳ及びＮａ４ＥＤＤＳが挙げられる。このようなＥＤＤＳの好ましいマグネシウム塩の例としては、ＭｇＥＤＤＳ及びＭｇ２ＥＤＤＳが挙げられる。組成物に包含させるには、マグネシウム塩が最も好ましい。
【０１５１】
前記洗剤は、１種類以上のポリマーを含んでいてもよい。例としては、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、例えば、ポリアクリレート、マレイン酸／アクリル酸コポリマー類、及びラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー類が挙げられる。
【０１５２】
洗剤組成物には、塩素／臭素型又は酸素型の漂白剤を含有させることもできる。漂白剤は、被覆又はカプセル化してもよい。無機塩素／臭素型漂白剤の例は、次亜塩素酸若しくは次亜臭素酸リチウム、次亜塩素酸若しくは次亜臭素酸ナトリウム、又は次亜塩素酸若しくは次亜臭素酸カルシウム、並びに塩素化リン酸三ナトリウムである。漂白系には、例えば、テトラアセチル−エチレンジアミン（ＴＡＥＤ）又はノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）などの過酸形成漂白活性化剤と組み合わせることもできる、過ホウ酸塩又は過炭酸塩などの過酸化水素源を含有させてもよい。有機塩素／臭素型漂白剤の例は、例えば、トリクロロイソシアヌル酸、トリブロモイソシアヌル酸、ジブロモイソシアヌル酸及びジクロロイソシアヌル酸などの複素環式Ｎ−ブロモイミド及びＮ−クロロイミドであり、並びにそれらとカリウム及びナトリウムなどの水溶性カチオンとの塩である。ヒダントイン化合物も好適である。漂白系には、例えば、アミド、イミド、又はスルホン型の過酸を含ませることもできる。
【０１５３】
食器洗浄洗剤において、酸素漂白剤、例えば、無機過酸基塩の形態の、好ましくは、漂白剤前駆体を備える、又はペルオキシ酸化合物としての酸素漂白剤は好ましい。好適な過酸漂白剤化合物の典型的な例は、四水和物及び一水和物の両方のアルカリ金属過ホウ酸塩、アルカリ金属過炭酸塩、過ケイ酸塩及び過リン酸塩である。好ましい活性化剤は、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、ノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）、３，５−トリメチル−ヘキサノロキシベンゼンスルホネート（ＩＳＯＮＯＢＳ）又はペンタアセチルグルコース（ＰＡＧ）である。
【０１５４】
洗剤組成物に組み込まれる本発明のリパーゼ、又は所望により別の酵素は、通常、洗剤組成物に、酵素タンパク質が組成物の重量の０．００００１重量％〜３重量％となるよう組み込まれ、好ましくは酵素タンパク質が組成物の重量の０．０００１重量％〜１重量％となるよう組み込まれ、より好ましくは酵素タンパク質が組成物の重量の０．００１重量％〜０．５重量％となるよう組み込まれ、更により好ましくは酵素タンパク質が組成物の重量の０．０１重量％〜０．２重量％となるよう組み込まれる。リパーゼタンパク質の量は、洗浄液１ｇ当たり０．００１〜３０ｍｇ、又は洗浄液１Ｌ当たり０．００１〜１００ｍｇとすることができる。本発明のリパーゼ変異体は、７０〜１００重量％のアニオン性界面活性剤と、０〜３０重量％の非イオン性界面活性剤とを含む、特に８０〜１００重量％のアニオン性界面活性剤と、０〜２０重量％の非イオン性界面活性剤とを含む、アニオン性及び非イオン性界面活性剤の混合物を含む洗剤に特に好適である。更に記載される通り、本発明の一部の好ましいリパーゼは、４０〜７０％アニオン性界面活性剤と、３０〜６０％非イオン性界面活性剤とを含む洗剤にも好適である。洗剤組成物には、本発明のリパーゼに加えて、クリーニング性能及び／又は布地ケア効果を提供するその他の酵素（１種以上）、例えば、プロテアーゼ、追加のリパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、オキシダーゼ（例えば、ラッカーゼ）、マンナナーゼ、酸化還元酵素、及び／又はペクチン酸リアーゼを含有させることもできる。
【０１５５】
洗剤組成物の酵素は、従来の安定化剤を使用して安定化させてもよい（例えば、プロピレングリコール又はグリセロールなどのポリオール、糖又は糖アルコール、乳酸、ホウ酸、又はホウ酸誘導体、例えば、芳香族ホウ酸エステルなど）。酵素安定剤としてのボロン酸又はボリン酸誘導体としては、ホウ酸、チオフェン−３−ボロン酸、チオフェン−２−ボロン酸、４−メチルチオフェン−２−ボロン酸、５−エチルチオフェン−２−ボロン酸、５−メチルチオフェン−２−ボロン酸、５−ブロモチオフェン−２−ボロン酸、５−クロロチオフェン−２−ボロン酸、ジベンゾチオフェン−ｌ−ボロン酸、ジベンゾフラン−ｌ−ボロン酸、ジベンゾフラン（Dibenzofnran）−４−ボロン酸、ピコリン−２−ボロン酸、ジフェニルボリン酸（エタノールアミン複合体）、５−メトキシチオフェン−２−ボロン酸、チオナフトレン（Thionaphthrene）−ｌ−ボロン酸、フラン−２−ボロン酸、フラン−３−ボロン酸、２，５−ジメチル−チオフェン−３−ボロン酸、ベンゾフラン−ｌ−ボロン酸、３−メトキシチオ−フェン−２−ボロン酸、５−ｎ−プロピル−チオフェン−２−ボロン酸、５−メトキシフラン−２−ボロン酸、３−ブロモチオフェン−２−ボロン酸、５−エチルフラン−２−ボロン酸、４−カルバゾールエチルボロン酸が挙げられる。
【０１５６】
任意成分は消泡剤である（例えば、アルキル化シリコーンポリシロキサン材料、及びシリカ−シリコーン混合物により例示され、ここでシリカは、シリカエアロゲル及びキセロゲル、並びに様々な種類の疎水性シリカの形態である）。消泡剤は微粒子として組み込むことができ、消泡剤は、有利に、水溶性又は水分酸性の、実質的に界面活性を不含有の、洗剤不透性の担体に放出可能に組み込まれる。あるいは、消泡剤は、液体担体に溶解又は分散させることができ、及びその他の１つ以上の構成要素に噴霧することにより塗布できる。
【０１５７】
洗剤には、無機又は有機柔軟剤を含有させてもよい。無機柔軟剤は、スメクタイト粘土（５％〜１５％）により例示される。有機布地柔軟剤（０．５％〜５％）としては、非水溶性第三級アミン類、及びそれらとモノＣ１２〜Ｃ１４第四級アンモニウム塩、及びジ長鎖アミド、又は高分子量ポリエチレンオキシド材料との組み合わせが挙げられる。
【０１５８】
洗剤には、例えば、クレイを含む布地コンディショナー、解膠剤、起泡剤／抑泡剤（食器洗浄洗剤における抑泡剤）、防食剤、汚れ懸濁剤又は分散剤（０〜１０％）、抗汚れ再付着剤、染料、脱水剤、殺菌剤、蛍光増白剤、研磨剤、変色防止剤、着色剤、及び／又は封入化若しくは非封入化香料などのその他の一般的な洗剤成分を含有させることもできる。
【０１５９】
【表１】
2016506237.tif 000003
【０１６０】
【表２】
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【０１６１】
【表３】
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【０１６２】
アニオン性モデル洗剤Ａ
次の原材料（重量％）を混合し、モデル顆粒洗剤（全界面活性剤の９０％がアニオン性界面活性剤、溶液ｐＨ  １０．２）を作製した。
８．７％アニオン性界面活性剤：ＬＡＳ（Ｃ１０〜Ｃ１３）
７．４％アニオン性界面活性剤：ＡＳ（Ｃ１２）
１．８％非イオン性界面活性剤：アルコールエトキシレート（Ｃ１２〜Ｃ１５  ７ＥＯ）
３０％ゼオライトＰ（Ｗｅｓｓａｌｉｔｅ  Ｐ）
１８％炭酸ナトリウム
５％クエン酸ナトリウム
１７％硫酸ナトリウム
０．３％カルボキシメチルセルロース
６．５％ナトリウム−過炭酸塩一水和物
２．１％  ＮＯＢＳ
【０１６３】
アニオン性モデル洗剤Ｂ
次の原材料（重量％）を混合し、第２のモデル顆粒洗剤（全界面活性剤の７９％がアニオン性界面活性剤、溶液ｐＨ  １０．２）を作製した
２７％アニオン性界面活性剤：ＡＳ（Ｃ１２）
７％非イオン性界面活性剤（Ｃ１２〜１５、７ＥＯ）
６０％ゼオライトＰ（Ｗｅｓｓａｌｉｔｅ  Ｐ）
５％炭酸ナトリウム
０．６％Ｓｏｋａｌａｎ  ＣＰ５
１．５％カルボキシメチルセルロース
【０１６４】
アニオン性／非イオン性モデル洗剤
純水中３．２ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋（５：１）となるよう次の原材料を加え、モデル洗剤溶液（全界面活性剤の３２％がアニオン性界面活性剤、ｐＨ  １０．２）を作製した。
０．３００ｇ／Ｌアルキルサルフェート（ＡＳ；Ｃ１４〜１６）；
０．６５０ｇ／Ｌアルコールエトキシレート（ＡＥＯ；Ｃ１２〜１４、６ＥＯ）；
１．７５０ｇ／ＬゼオライトＰ
０．１４５ｇ／Ｌ  Ｎａ２ＣＯ３
０．０２０ｇ／Ｌ  Ｓｏｋａｌａｎ  ＣＰ５
０．０５０ｇ／Ｌ  ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）
【０１６５】
低濃度洗剤組成物
欧州向け洗濯用粉末洗剤
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち６％をＬＡＳとし、３％をＡＥＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩を含むビルダーを４７％含有させた。
【０１６６】
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち３％をＡＥＳとし、６％をＬＡＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩、ケイ酸塩、を含むビルダーを４７％含有させ、うち５％はポリカルボン酸ポリマーとした。
【０１６７】
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち３％をＡＥＳとし、６％をＬＡＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩、ケイ酸塩、を含むビルダーを４７％含有させ、うち５％はポリカルボン酸ポリマーとした。
【０１６８】
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち６％をＬＡＳとし、３％をＡＥＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩＆ケイ酸塩、５％ポリカルボキシレート分散ポリマー、１５％過ホウ酸ナトリウム、及び４％テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＯ）からなるビルダーを４７％含有させた。
【０１６９】
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち６％をＬＡＳとし、３％をＡＥＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、２２％ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩、並びに５％ポリカルボキシレート分散ポリマーからなるビルダーを４７％含有させた。
【０１７０】
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち６％をＬＡＳとし、３％をＡＥＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、２２％ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩、並びに５％ポリカルボキシレート分散ポリマーからなるビルダーを４７％含有させた。
【０１７１】
洗剤の１５％を界面活性剤とし、そのうち６％をＬＡＳとし、３％をＡＥＳとし、６％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、脂肪酸、２２％ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩、並びに５％ポリカルボキシレート分散ポリマーからなるビルダーを４７％含有させた。
【０１７２】
洗剤の２１％を界面活性剤とし、そのうち８．１％をＬＡＳとし、６．５％をＡＳとし、４．０％を非イオン性界面活性剤とし、２．５％をカチオン性界面活性剤（ＤＳＤＭＡＣ）とした。洗剤には、更に、脂肪酸、炭酸塩、ゼオライトＡ、ケイ酸塩、及びクエン酸塩からなるビルダーを６４％含有させ、分散ポリマーもまた２．７％含有させた。
【０１７３】
石鹸を含む１６．９％の界面活性剤のうち、１１％はＬＡＳとし、５．９％は非イオン性界面活性剤とし、４．１％は石鹸とし、並びに６３％はビルダーとした。
【０１７４】
欧州向け液体洗濯洗剤
洗剤の２７％を界面活性剤とし、そのうち１６．９％をＡＳとし、６．７％を非イオン性界面活性剤とし、３．５％をカチオン性界面活性剤（ＤＳＤＭＡＣ）とした。洗剤には、更に、脂肪酸、炭酸塩、クエン酸塩、及びホウ酸からなるビルダーを１８．７％含有させた。
【０１７５】
北アメリカ向け洗濯用液体洗剤
洗剤の２３％を界面活性剤とし、そのうち１６％をＡＥＳとし、５％をＬＡＳとし、２％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、石鹸、クエン酸、ＤＴＰＡ及びギ酸カルシウムを含むビルダーを６％含有させた。
【０１７６】
洗剤組成物中の界面活性剤濃度を通常濃度の５０％に減じ、その代わりに０．１％リパーゼタンパク質を加えた所、より良好な性能が得られた。
【０１７７】
洗剤の２３％を界面活性剤とし、そのうち１６％をＡＥＳとし、５％をＬＡＳとし、２％を非イオン性界面活性剤とした。洗剤には、更に、石鹸、クエン酸、ＤＴＰＡ及びギ酸カルシウム、及び５％ポリカルボキシレート分散ポリマーからなるビルダーを６％含有させた。
【０１７８】
北アメリカ向け洗濯用粉末洗剤
洗剤の１６．３％を界面活性剤とし、そのうち７．８％をＬＡＳとし、６．７％をＡＳとし、１．８％を非イオン性界面活性剤として、並びに６０％を、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩を含むビルダーとした。
【０１７９】
洗剤の１４．９％を界面活性剤とし、そのうち１１．５．％をＬＡＳとし、３．４％を非イオン性界面活性剤として、並びに５５％を、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩を含むビルダーとした。
【０１８０】
洗剤の１９．５％を界面活性剤とし、そのうち４．５％をＬＡＳとし、１３％をＡＳとし、２％を非イオン性界面活性剤として、並びに６１％を、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩を含むビルダーとした。
【０１８１】
日本向け洗濯用粉末洗剤
洗剤の２４．３％を界面活性剤とし、そのうち１１．１％をＬＡＳとし、１１．６％をスルホン酸エステルとし、１．６％を非イオン性界面活性剤として、並びに６０％を、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩及びケイ酸塩を含むビルダーとした。
【０１８２】
洗剤の２７．９％を界面活性剤とし、そのうち１５  ２７．５％をＬＡＳとし、０．４％を非イオン性界面活性剤として、並びに６４％を、ゼオライトＡ、炭酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、及びケイ酸塩を含むビルダーとした。
【０１８３】
欧州向け色物用コンパクト洗濯洗剤粉末
洗剤の２１．１％を界面活性剤系とし、そのうち８．１％をＬＡＳとし、６．５％をＡＳとし、２．５％をＡｒｇｕａｔ  ２Ｔ−７０とし、４％を非イオン性界面活性剤として、並びに６４％を、脂肪酸、ゼオライトＡ、炭酸塩、クエン酸、及びケイ酸塩を含むビルダーとした。界面活性剤系はビルダーとは別個に調製した。界面活性剤系は、Ｎｅｏｄｏｌ２５〜７又はＬｕｔｅｎｓｏｌ  ＯＮ６０のいずれかを非イオン性界面活性剤として調製した。
【０１８４】
【表４】
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【０１８５】
【表５】
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【０１８６】
【表６】
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【０１８７】
【表７】
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【０１８８】
【表８】
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【０１８９】
【表９】
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【０１９０】
【表１０】
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【０１９１】
【表１１】
2016506237.tif 000013
【０１９２】
本発明のクリーニング組成物は、例えば、洗濯用途、硬質表面クリーニング用途、食器洗浄用途、並びに義歯、歯、毛髪、及び皮膚などの化粧用途に好都合に採用される。加えて、低温の溶液中で作用が増大するという独特の利点を有することから、本発明の酵素は洗濯用途に理想的に適するものである。更に本発明の酵素は、顆粒及び液体組成物での使用が見出される。
【０１９３】
本発明の脂肪分解酵素変異体は、クリーニング添加剤製品にも使用される。一部の実施形態では、低温溶液を用いるクリーニング用途での使用が見出される。一部の実施形態では、本発明は、本発明の酵素を少なくとも１種含むクリーニング助剤を提供し、助剤は、更に漂白効果が所望される場合に、洗浄過程で包含させるのに理想的なものである。このような場合の例としては、限定するものではないが、例えば、低温溶液を用いるクリーニング用途が挙げられる。一部の実施形態では、助剤は最も単純な形態であり、すなわち１種以上の脂肪分解酵素である。一部の実施形態では、助剤は、クリーニング過程で添加するために、製剤としてパッケージングされている。一部の実施形態では、助剤には過酸素源が採用され、漂白効果の増加が所望され、かつクリーニング過程で添加するために製剤としてパッケージングされている。本発明は、限定するものではないが、例えば、丸剤、錠剤、ゲルキャップ、又は予め計量された粉末若しくは液体などの他の単回用量製剤が挙げられる、任意の好適な単回用量製剤での使用が見出される。一部の実施形態では、このような組成物を増量するために充填剤又はキャリア材料が用いられる。好適な充填剤又はキャリア材料としては、限定するものではないが、例えば、様々な硫酸塩、炭酸塩及びケイ酸塩並びにタルク、及びクレイなどが挙げられる。液体組成物に好適な充填剤又はキャリア材料としては、限定するものではないが、例えば、水、又はポリオール及びジオールなどの低分子量の一級及び二級アルコールが挙げられる。このようなアルコールの例としては、限定するものではないが、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールが挙げられる。一部の実施形態では、組成物は、このような材料を約５％〜約９０％含有する。酸性充填剤はｐＨを減少させるための使用が見出される。あるいは、一部の実施形態では、クリーニング助剤には、以下により詳細に記載されるような補助成分が含有される。
【０１９４】
本発明のクリーニング組成物及びクリーニング助剤は、本明細書で提供される有効量の少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体を単独で、あるいは他の脂肪分解酵素及び／又は追加の酵素と組み合わせて必要とする。必要とされる酵素濃度は、本発明の脂肪分解酵素変異体を１種以上加えることにより達成される。典型的には、本発明のクリーニング組成物は、少なくとも約０．０００１重量％、約０．０００１〜約１０重量％、約０．００１〜約１重量％、又は更には約０．０１〜約０．１重量％の、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む。
【０１９５】
本明細書におけるクリーニング組成物は、典型的には、水性クリーニング操作における使用時に、洗浄水が約５．０〜約１１．５、又は約６．０〜約８．０、又は更には約７．５〜１０．５のｐＨを有するように配合される。液体製品配合物は、典型的には、約３．０〜約９．０、又は更には約３〜約８の未希釈ｐＨを有するように配合される。顆粒状洗濯製品は、典型的には、約６〜約１１、又は更には約８〜約１０のｐＨを有するよう配合される。推奨される使用濃度にｐＨを調節する技術としては、緩衝剤、アルカリ、酸などの使用が挙げられ、これらは当業者には周知のものである。
【０１９６】
好適な「低ｐＨのクリーニング組成物」は、典型的には、未希釈ｐＨが約３〜約８のものであり、典型的には、このようなｐＨ環境で加水分解される界面活性剤を含まない。このような界面活性剤としては、エチレンオキシド部分を少なくとも１つ又は更にはエチレンオキシド部分を約１〜約１６モル含むアルキル硫酸ナトリウム界面活性剤が挙げられる。このようなクリーニング組成物は、典型的には、クリーニング組成物の未希釈ｐＨを約３〜約８にするのに十分な量のｐＨ調整剤、例えば、水酸化ナトリウム、モノエタノールアミン、又は塩酸などを含む。このような組成物は、典型的には、酸に安定な酵素を少なくとも１種含む。一部の実施形態では、組成物は液体である一方、他の実施形態では固体である。このような液体組成物のｐＨは、典型的には未希釈のｐＨとして測定される。このような固形組成物のｐＨは、上記組成物の固形分１０％の溶液として測定され、ここで、その溶媒は蒸留水である。これらの実施形態では、別途記載のない限り、ｐＨの測定は全て２０℃で行われた。
【０１９７】
一部の実施形態では、脂肪分解酵素変異体が顆粒状組成物又は液体組成物に採用された場合、保存時に脂肪分解酵素変異体を他の粒状組成物の成分から保護するために、脂肪分解酵素変異体はカプセル封入された粒子の形態であることが望ましい。加えて、カプセル封入は、クリーニング過程で脂肪分解酵素変異体の利用能を制御する手段でもある。一部の実施形態では、カプセル封入は、脂肪分解酵素変異体及び／又は追加の酵素の性能を増強する。この観点から、本発明の脂肪分解酵素変異体は、当該技術分野において既知の任意の好適な封入剤によりカプセル封入される。一部の実施形態では、封入材は、典型的には、本発明の脂肪分解酵素変異体に関する触媒の少なくとも一部を封入する。一般的には、封入材は、水溶性及び／又は水分散性である。一部の実施形態では、封入材のガラス転移温度（Ｔｇ）は０℃以上である。ガラス転移温度は、国際公開第９７／１１１５１号により詳細に記載される。封入剤は、一般的には、炭水化物、天然又は合成ゴム、キチン、キトサン、セルロース及びセルロース誘導体、ケイ酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、パラフィンワックス、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。封入材が炭水化物である場合、典型的には、単糖、オリゴ糖、多糖、及びこれらの組み合わせから選択される。一部の典型的な実施形態では、封入材はデンプンである（例えば、欧州特許第０  ９２２  ４９９号；米国特許第４，９７７，２５２号、同第５，３５４，５５９号、及び同第５，９３５，８２６号を参照されたい）。一部の実施形態では、封入材は、熱可塑性プラスチック、アクリロニトリル、メタクリロニトリル、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリロニトリル及びこれらの混合物から製造されるプラスチック製のマイクロスフェア、並びに限定するものではないが、使用が見出される、ＥＸＰＡＮＣＥＬ（登録商標）（Ｓｔｏｃｋｖｉｋｓｖｅｒｋｅｎ，Ｓｗｅｄｅｎ）により供給されるもの、並びにＰＭ  ６５４５、ＰＭ  ６５５０、ＰＭ  ７２２０、ＰＭ  ７２２８、ＥＸＴＥＮＤＯＳＰＨＥＲＥＳ（登録商標）、ＬＵＸＳＩＬ（登録商標）、Ｑ−ＣＥＬ（登録商標）、及びＳＰＨＥＲＩＣＥＬ（登録商標）（ＰＱ  Ｃｏｒｐ．，Ｖａｌｌｅｙ  Ｆｏｒｇｅ，ＰＡ）などの市販のマイクロスフェアである。
【０１９８】
本明細書に記載されるような、本発明の脂肪分解酵素変異体は、特に、限定するものではないが、洗濯及び食器用洗剤などが含まれるクリーニング産業での使用が見出される。これらの用途では、酵素は様々な環境ストレス下に置かれる。本発明の脂肪分解酵素変異体は、様々な条件下で安定であることから、現在使用されている多くの酵素よりも有利である。
【０１９９】
実際に、洗浄に関与する脂肪分解酵素が晒される、洗剤の配合、洗浄水の容量、洗浄水の温度、及び洗浄時間の長さの変更を含む、各種洗浄条件が存在する。加えて、異なる地理的条件下で使用される洗剤配合物では、洗浄水中に、関連する成分が異なる濃度で存在する。例えば、欧州の洗剤は一般的には２０００〜１００００ｐｐｍの洗剤成分を洗浄水中に有する一方、アジアの洗剤は一般的には３００ｐｐｍ〜２５００ｐｐｍの洗剤成分を洗浄水に有する。北米、特に米国では、洗剤は、一般的に、洗浄水中に約３００ｐｐｍ〜１５００ｐｐｍの洗剤成分を有する。
【０２００】
高濃度洗剤系には、洗浄水中に約２０００ｐｐｍ超の洗剤成分が存在しているものが包含される。洗浄水中に約２０００〜１００００ｐｐｍの洗剤成分が存在していることから、欧州の洗剤は、一般に高濃度洗剤系であると見なされる。
【０２０１】
南米の洗剤は一般に高発泡リン酸ビルダー洗剤であり、中南米で使用される洗剤の範囲は、洗浄水中の洗剤成分が１５００ｐｐｍ〜６０００ｐｐｍの範囲であることから、中濃度及び高濃度洗剤の両方に該当し得る。上記の通り、ブラジルでは、典型的には、洗浄水中に約１５００ｐｐｍの洗剤成分が存在する。しかしながら、限定するものではないが、中南米地域以外の、高起泡性リン酸塩ビルダー洗剤を使用しているその他の地域も、洗浄水中に最高約６０００ｐｐｍの洗剤成分が存在する高洗剤濃度を有し得る。
【０２０２】
上記を踏まえると、世界中で、一般的な洗浄溶液中の洗剤組成物濃度は、約３００ｐｐｍ未満の洗剤組成物（「洗剤濃度が低い地域」）から、欧州の１００００ｐｐｍ、及び高起泡性リン酸塩ビルダーを使用している地域の約６０００ｐｐｍと異なることが明らかである。
【０２０３】
一般的に、洗浄溶液の濃度は経験的に判断される。例えば、米国では、一般的な洗濯機の洗浄液容量は約６４．４Ｌである。したがって、洗剤濃度が約１０００ｐｐｍの洗浄溶液を得るためには、６４．４Ｌの洗浄溶液に約６４．４ｇの洗剤組成物を添加しなくてはならない。この量は、消費者が、洗剤用の軽量カップを用い洗浄水に量り入れる典型的な量である。
【０２０４】
更なる例として、異なる地域では異なる洗浄温度が使用される。日本で使用されている洗浄水の温度は、一般的に、欧州で使用されているものよりも低い。例えば、北アメリカ及び日本の洗浄水の温度は、典型的には約１０〜約３０℃（例えば、約２０℃）である一方、欧州の洗浄水の温度は、典型的には約３０〜約６０℃（例えば、約４０℃）である。しかしながら、エネルギーの節約の観点から、多くの消費者は冷水を用いる洗浄法に切り替えている。加えて、一部の更なる地域では、一般的に洗濯並びに食器洗浄用途には冷水が使用されている。一部の実施形態では、本発明の「冷水洗浄」は、約１０℃〜約４０℃、又は約２０℃〜約３０℃、又は約１５℃〜約２５℃、並びに約１５℃〜約３５℃の範囲内の全てのその他の組み合わせ、並びに１０℃〜４０℃の全ての範囲の洗浄温度に好適な「冷水用洗剤」を用いる。
【０２０５】
更なる例では、異なる地理条件下では、一般に異なる硬度の水が用いられている。水硬度は通常、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を組み合わせてガロン当たりのグレインで説明される。硬度は、水中のカルシウム（Ｃａ２＋）及びマグネシウム（Ｍｇ２＋）の量の尺度である。米国ではほとんどの水は硬水であるが、硬度は異なる。中硬水（６０〜１２０ｐｐｍ）〜硬水（１２１〜１８１ｐｐｍ）は、６０〜１８１ｐｐｍ（百万分率をＵＳガロンあたりのグレインに変換したものは、ｐｐｍ数を０．２９グラム毎リットル（１７．１当量のグレイン毎ガロン）で除算したものに相当する）の無機物を含有する。
【０２０６】
【表１２】
2016506237.tif 000014
【０２０７】
欧州の水硬度は、典型的には、約０．１８（例えば、約０．１８〜約０．３４）グラム毎リットル（１０．５（例えば、約１０．５〜約２０．０）グレイン毎ガロン）超となるようＣａ２＋／Ｍｇ２＋が混在している（例えば、約０．２６グラム毎リットル（１５グレイン毎ガロン）のＣａ２＋／Ｍｇ２＋が混在している）。北アメリカの水硬度は、一般的には日本の水硬度よりも高いものの、欧州の水硬度未満である。例えば、北米の水の硬度は約０．０５〜約０．１７ｇ、約０．０５〜約０．１４ｇ又は約０．１ｇ（約３〜約１０グレイン、約３〜約８グレイン又は約６グレイン）であり得る。日本の水の硬度は一般的に北米の水の硬度よりも低く、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋が、通常、約０．０７未満、例えば、約０．０５グラム毎リットル（約４、例えば、約３グレイン毎ガロン）混在している。
【０２０８】
したがって、一部の実施形態では、本発明は少なくとも１組の洗浄条件（例えば、水温、水の硬度、及び／又は洗剤濃度）において驚くべき洗浄性能を示す脂肪分解酵素変異体を提供する。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体の洗浄性能は、他のリパーゼ脂肪分解酵素に匹敵する。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体は、現在市販されているリパーゼ脂肪分解酵素と比較して増強された洗浄性能を示す。したがって、本発明の一部の実施形態では、本明細書に提供される脂肪分解酵素変異体は、酸化安定性、熱安定性、様々な条件下でのクリーニング性能、及び／又はキレート化剤安定性が改良されている。加えて、本発明の脂肪分解酵素変異体は、洗剤を含まず、更には洗剤を単独で含まずあるいは洗剤をビルダー及び安定剤との組み合わせとしても含まないクリーニング組成物での使用が見出されている。
【０２０９】
本発明の一部の実施形態では、クリーニング組成物は、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度の少なくとも１種の本発明の脂肪分解酵素変異体と、クリーニング助剤を含む残部（例えば、組成物の約９９．９９９重量％〜約９０．０重量％）とを含む。本発明の一部の他の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含み、クリーニング組成物の残部（例えば、約９９．９９９９重量％〜約９０．０重量％、約９９．９９９重量％〜約９８重量％、約９９．９９５重量％〜約９９．５重量％）はクリーニング助剤を含む。
【０２１０】
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、クリーニング性能及び／又は布地ケア及び／又は食器洗浄利益を提供する追加の洗剤用酵素を１種以上含む。好適な酵素の例としては、限定するものではないが、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、脂肪分解酵素、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、及びアミラーゼ、又はこれらの任意の組み合わせ又はこれらの混合物が挙げられる。一部の実施形態では、従来利用可能でありアミラーゼと組み合わせて使用される脂肪分解酵素、リパーゼ、クチナーゼ、及び／又はセルラーゼなどの酵素を含む、酵素混合物（すなわち、「カクテル」）が使用される。
【０２１１】
例えば、本発明の脂肪分解酵素変異体はプロテアーゼと組み合わせることができる。好適なタンパク質分解酵素としては、動物、植物、又は微生物由来のものが挙げられる。一部の実施形態では、微生物由来のタンパク質分解酵素を使用する。一部の実施形態では、タンパク質分解酵素は、好ましくはアルカリ性微生物タンパク質分解酵素又はトリプシン様タンパク質分解酵素である。アルカリ性（alkaline）脂肪分解酵素の例としては、リパーゼ、特にバチルス（Bacillus）由来のもの挙げられる（例えば、レンタス（lentus）、アミロリケファシエンス（amyloliquefaciens）、カールスバーグ（Carlsberg）、３０９、１４７及び１６８）。更なる例としては、米国再発行特許第３４，６０６号、同第５，９５５，３４０号、同第５，７００，６７６号、同第６，３１２，９３６号、及び同第６，４８２，６２８号に記載されるタンパク質分解酵素変異体が挙げられる。これらの各々は参照により本明細書に援用される。追加のプロテアーゼとしては、例えば、限定するものではないが、トリプシン（例えば、ブタ又はウシ由来）、及び国際公開第８９／０６２７０号に記載のフサリウム（Fusarium）プロテアーゼが挙げられる。一部の実施形態では、本発明における使用が見いだされる市販のプロテアーゼ酵素類としては、限定されるものではないが、ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ（商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＯＰＴＩＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＯＸＰ、ＰＵＲＡＭＡＸ（商標）、ＥＸＣＥＬＬＡＳＥ（商標）、及びＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＺＹＭ（商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＮＥＵＴＲＡＳＥ（登録商標）、ＲＥＬＡＳＥ（登録商標）及びＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＢＬＡＰ（商標）及びＢＬＡＰ（商標）変異体（Ｈｅｎｋｅｌ  Ｋｏｍｍａｎｄｉｔｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ａｕｆ  Ａｋｔｉｅｎ（Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ、ドイツ））、及びＫＡＰ（Ｂ．アルカロフィルス（B. alkalophilus）リパーゼ；花王株式会社（東京、日本））が挙げられる。様々なタンパク質分解酵素が、国際公開第９５／２３２２１号、国際公開第９２／２１７６０号、米国特許第２００８／００９０７４７号、及び米国特許第５，８０１，０３９号、同第５，３４０，７３５号、同第５，５００，３６４号、同第５，８５５，６２５号、米国再発行特許第３４，６０６号、米国特許第５，９５５，３４０号、同第５，７００，６７６号、同第６，３１２，９３６号、及び同第６，４８２，６２８号、並びに他の多様な特許に記載されている。一部の更なる実施形態では、本発明への使用が見出されるメタロプロテアーゼ酵素は、限定するものではないが、国際公開第０７／０４４９９３号に記載の中性のメタロプロテアーゼ酵素である。
【０２１２】
本発明の一部の実施形態では、任意の好適なアミラーゼが、本発明への使用を見出される。一部の実施形態では、アルカリ性溶液に使用するのに好適である任意のアミラーゼ（例えば、α及び／又はβ）も使用が見出される。好適なアミラーゼとしては、限定するものではないが、微生物由来のもの又は真菌由来のものが挙げられる。一部の実施例では、化学修飾された又は遺伝子操作された変異体が包含される。本発明への使用が見出されるアミラーゼとしては、限定するものではないが、Ｂ．リケニフォルミス（B.licheniformis）から得られるα−アミラーゼが挙げられる（例えば、英国特許第１，２９６，８３９号を参照されたい）。本発明への使用が見出される市販のアミラーゼとしては、限定するものではないが、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、及びＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、並びにＰＯＷＥＲＡＳＥ（商標）、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）及びＭＡＸＡＭＹＬ（登録商標）Ｐ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）が挙げられる。
【０２１３】
本発明の一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、更に組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度のアミラーゼ並びに組成物の重量に基づき残部のクリーニング助剤を更に含む。同様に、本発明の一部の他の実施例では、本発明のクリーニング組成物は組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度のアミラーゼを含む。
【０２１４】
一部の更なる実施形態では、任意の好適なセルラーゼが、本発明のクリーニング組成物での使用を見出される。好適なセルラーゼとしては、限定するものではないが、微生物又は真菌由来のものが挙げられる。一部の実施例では、化学修飾された又は遺伝子操作された変異体が包含される。好適なセルラーゼとしては、限定するものではないが、ヒュミコラ・インソレンス（Humicola insolens）のセルラーゼ（例えば、米国特許第４，４３５，３０７号を参照されたい）。特に好適なセルラーゼは、色ケア効果を有するセルラーゼである（例えば、欧州特許第０４９５２５７号を参照されたい）。本発明における使用が見いだされる市販のセルラーゼとしては、限定するものではないが、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、及びＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）ＰＵＲＡＤＡＸ  ＨＡ  １２００Ｅ（Ｄａｎｉｓｃｏ）、ＰＵＲＡＤＡＸ  ＥＧ  ７０００Ｌ（Ｄａｎｉｓｃｏ）が挙げられる。一部の実施形態では、セルラーゼは、野生型又は変異型成熟セルラーゼの一部又は断片として組み込まれ、変異型ではＮ末端の一部が欠損している（例えば、米国特許第５，８７４，２７６号を参照されたい）。本発明の一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度の追加のセルラーゼ、並びに組成物の重量に基づき残部のクリーニング助剤を更に含む。本発明の一部の他の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度のセルラーゼも含む。
【０２１５】
洗剤組成物で使用するのに好適な任意のマンナナーゼも同様に本発明において使用が見出される。好適なマンナナーゼとしては、限定するものではないが、微生物又は真菌由来のものが挙げられる。一部の実施例では、化学修飾された又は遺伝子操作された変異体が包含される。様々なマンナナーゼが本発明で使用を見出されることが既知である（例えば、米国特許第６，５６６，１１４号、同第６，６０２，８４２号、及び同第６，４４０，９９１号を参照されたい。これらの各々は参照により本明細書に援用される）。本発明の一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度の追加のマンナナーゼ、並びに組成物の重量に基づき残部のクリーニング助剤を更に含む。本発明の一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度のマンナナーゼも含む。
【０２１６】
一部の実施形態では、ペルオキシダーゼは過酸化水素又は過酸化酸素供給源（例えば、過炭酸塩、過ホウ酸塩又は過硫酸塩）と組み合わせて本発明の組成物に使用される。一部の代替的な実施形態では、オキシダーゼは酸素と組み合わせて使用される。これらの種類の酵素は両方とも「溶液を漂白」する（すなわち、布地を一緒に洗浄溶液で洗浄する場合に、布地の染料が、その染料で染色されている布から他の布へと色移りするするのを予防する）ために、好ましくは増感剤と共に使用される（例えば、国際公開第９４／１２６２１号及び国際公開第９５／０１４２６号を参照されたい）。好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼとしては、限定するものではないが、植物、微生物又は真菌由来のものが挙げられる。一部の実施例では、化学修飾された又は遺伝子操作された変異体が包含される。一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．００００１重量％〜約１０重量％の濃度の追加のペルオキシダーゼ、並びに組成物の重量に基づき残部のクリーニング助剤を更に含む。本発明の一部の他の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、組成物の約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．００１重量％〜約５重量％、約０．００１重量％〜約２重量％、約０．００５重量％〜約０．５重量％の濃度でペルオキシダーゼ及び／又はオキシダーゼ酵素を含む。
【０２１７】
一部の実施形態では、使用が見出される追加の酵素としては、限定するものではないがペルヒドロラーゼが挙げられる（例えば、国際公開第０５／０５６７８２号を参照されたい）。加えて、一部の実施形態では、上述の酵素、特に、１種以上の追加の脂肪分解酵素、アミラーゼ、プロテアーゼ、マンナナーゼ、及び／又は少なくとも１種のセルラーゼなどの酵素の混合物が、本発明に包含される。実際に、これらの酵素の多様な混合物が本発明への使用を見出され得ることは想到される。脂肪分解酵素変異体及び１種以上の追加の酵素の濃度は、いずれも独立して約１０％までの範囲で変化し、クリーニング組成物の残部はクリーニング助剤からなることも想到される。具体的なクリーニング助剤の選別は、処理される表面、物品、又は布地、並びに使用時（例えば、洗浄洗剤を用いる）のクリーニング条件に所望される組成物の形態を考慮することで容易になされる。
【０２１８】
好適なクリーニング助剤の例としては、限定するものではないが、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、他の酵素、酵素安定化剤、キレート剤、蛍光増白剤、汚れ剥離ポリマー、移染剤、移染防止剤、触媒材料、過酸化水素、過酸化水素供給源、予形成過酸、ポリマー型分散剤、粘土汚れ除去剤、構造弾性化剤、分散剤、抑泡剤、染料、香料、着色剤、フィラー塩、ヒドロトロープ、光活性化剤、蛍光剤、布地コンディショナー、布地柔軟剤、キャリア、ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒、色素、加水分解性界面活性剤、保存料、抗酸化剤、収縮防止剤、防皺剤、殺菌剤、防カビ剤、色スペックル、銀ケア、防曇剤及び／又は抗腐食剤、アルカリ供給源、可溶化剤、キャリア、加工助剤、色素、及びｐＨ調整剤が挙げられる（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，６０５，４５８号、同第５，７０５，４６４号、同第５，７１０，１１５号、同第５，６９８，５０４号、同第５，６９５，６７９号、同第５，６８６，０１４号及び同第５，６４６，１０１号を参照されたい，これらの各々は参照により本明細書に援用される）。クリーニング組成物材料の具体例は以下に詳細に例示する。クリーニング助剤が、クリーニング組成物中で本発明の脂肪分解酵素変異体と適合しない実施形態では、２つの成分を組み合わせることが適切になるまでの間、クリーニング助剤及び脂肪分解酵素を分離した（すなわち、互いに接触させない）ままにしておくという好ましい手段が使用される。このような分離手法には、当該技術分野において既知の任意の好適な方法が包含される（例えば、ゲルキャップ法、カプセル封入、錠剤、物理的分離など）。
【０２１９】
一部の実施形態では、本明細書で提供される有効な量の１種以上の脂肪分解酵素変異体は、脂質性の染みを除去する必要のある各種表面をクリーニングするのに有用な組成物中に含まれる。このようなクリーニング組成物としては、硬質表面、布地、及び皿などのクリーニング用途向けのクリーニング組成物が挙げられる。実際に、一部の実施形態では、本発明は布地クリーニング組成物を提供するが、他の実施形態では、本発明は非布地用クリーニング組成物を提供する。本発明は、任意の形態（すなわち、液体、顆粒状、棒状、半固形、ゲル、乳濁液、錠剤、カプセル剤など）の洗剤組成物を包含することを意図する。
【０２２０】
例として、本発明の脂肪分解酵素変異体の使用が見出される数種類のクリーニング組成物が以下により詳細に記載される。本発明のクリーニング組成物が、洗濯機を用いる洗浄用途に使用するのに好適な組成物として配合される一部の実施形態では、本発明の組成物は、好ましくは少なくとも１種の界面活性剤と、少なくとも１種のビルダー化合物と、並びに好ましくは、有機高分子化合物、漂白剤、追加の酵素、抑泡剤、分散剤、石鹸カス分散剤、汚れ懸濁剤及び再付着防止剤、及び腐食防止剤から選択される１種以上のクリーニング助剤と、を含有する。一部の実施形態では、洗濯用組成物は柔軟剤も含有する（すなわち、追加のクリーニング助剤として）。本発明の組成物は、固形又は液体形態の洗剤助剤として使用することも見出される。このような洗濯助剤製品は、従来の洗剤組成物の性能を補う及び／又は強化することが意図されるものであり、クリーニングプロセスの任意の工程で添加できる。組成物を２０℃で測定した場合に、一部の実施形態では洗濯洗剤組成物の密度は約４００〜１２００ｇ／リットルであり、一方で他の実施形態では約５００〜約９５０ｇ／リットルの範囲である。
【０２２１】
食器手洗い用途に使用する組成物として配合される実施形態では、本発明の組成物は、好ましくは少なくとも１種の界面活性剤と、好ましくは有機高分子化合物、起泡剤、第２族金属イオン、溶媒、ヒドロトロープ、及び追加の酵素から選択される少なくとも１種の追加のクリーニング助剤と、を含有する。
【０２２２】
一部の実施形態では、米国特許第６，６０５，４５８号に提供されるものなどの様々なクリーニング組成物を本発明の脂肪分解酵素変異体と併用することが見出される。したがって、一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含有する組成物は、コンパクト型顆粒状布地クリーニング組成物である一方、他の実施形態では、組成物は着色された布地を洗濯するのに有用な顆粒型布地洗浄組成物であり、他の実施形態では、組成物は洗浄性能を開始柔軟効果を提供する顆粒型布地クリーニング組成物であり、更なる実施形態では、組成物は重質液体布地クリーニング組成物である。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む組成物は、米国特許第６，６１０，６４２号及び同第６，３７６，４５０号に記載されるものなどの布地クリーニング組成物である。加えて、本発明の脂肪分解酵素変異体は、欧州又は日本の洗浄条件下で特に有用な顆粒型洗濯洗剤組成物での使用が見出される（例えば、米国特許第６，６１０，６４２号を参照されたい）。
【０２２３】
一部の代替的な実施形態では、本発明は、本明細書で提供される脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含有する硬質表面クリーニング組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む組成物は、米国特許第６，６１０，６４２号、同第６，３７６，４５０号及び同第６，３７６，４５０号に記載されるものなどの硬質表面クリーニング組成物である。
【０２２４】
更に他の実施形態では、本発明は、本明細書で提供される脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む食器洗浄用組成物を提供する。したがって、一部の実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む組成物は、米国特許第６，６１０，６４２号、及び同第６，３７６，４５０号に記載されるものなどの硬質表面クリーニング組成物である。更に他の一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供される脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む食器洗浄用組成物を提供する。一部の更なる実施形態では、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含む組成物は、米国特許第６，３７６，４５０号及び同第６，３７６，４５０号に記載のものなどの口腔ケア組成物を含む。上記の米国特許第６，３７６，４５０号、同第６，６０５，４５８号、同第６，６０５，４５８号、及び同第６，６１０，６４２号に包含される、化合物及びクリーニング助剤の配合及び記載を、本明細書で提供される脂肪分解酵素変異体と併用することが見出される。
【０２２５】
本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態に配合され、配合者により選択される、例えば、限定するものではないが米国特許第５，８７９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５６５，４２２号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号、及び同第５，４８６，３０３号に記載のものなどの任意のプロセスにより調製される。これらの各々は参照により本明細書に援用される。低ｐＨのクリーニング組成物が所望される場合、組成物のｐＨは、モノエタノールアミン又は酸性材料（例えば、ＨＣｌ）などの追加の材料により調整される。
【０２２６】
本発明の目的には必須でないが、以下に例示される助剤の非限定的な一覧は、本クリーニング組成物での使用に好適である。一部の実施形態では、これらの助剤は、例えば、クリーニングされる基材を処理する際のクリーニング性能を補助又は強化するために、あるいは香料、着色剤、又は染料などの場合にはクリーニング組成物の美観を改善するために組み込まれる。これらの助剤が本発明の脂肪分解酵素変異体に添加されることは理解されたい。このような追加成分の正確な性質及びその組み込み濃度は、組成物の物理的形態、及び組成物が使用される洗浄操作の性質によって決まる。好適な補助剤としては、限定するものではないが、界面活性剤、ビルダー、キレート化剤、移染防止剤、付着助剤、分散剤、追加の酵素、及び酵素安定化剤、触媒材料、漂白活性化剤、漂白増進剤、過酸化水素、過酸化水素源、予形成過酸、高分子分散剤、粘度汚れ除去剤／再付着防止剤、増白剤、抑泡剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、キャリア、ヒドロトロープ、加工助剤及び／又は色素が挙げられる。以下の開示に加え、このような他の補助剤の好適な例及び使用濃度は、米国特許第５，５７６，２８２号、同第６，３０６，８１２号、及び同第６，３２６，３４８号に記載されており、これらは参照により援用される。上述の補助成分は、本発明のクリーニング組成物の残部を構成し得る。
【０２２７】
一部の実施形態では、本発明に従うクリーニング組成物は、少なくとも１種の界面活性剤及び／又は界面活性剤系を含み、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双極性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤及びこれらの混合物から選択される。一部の低ｐＨクリーニング組成物の実施形態（例えば、未希釈ｐＨが約３〜約５の組成物の場合）では、界面活性剤がこのような組成物の酸性成分により加水分解される恐れがあると考えられることから、典型的には組成物にはアルキルエトキシル化サルフェートを含有させない。一部の実施形態では、界面活性剤はクリーニング組成物の約０．１重量％〜約６０重量％の濃度で存在する一方、代替的な実施形態では約１重量％〜約５０重量％の濃度で、あるいは更に他の実施形態では約５重量％〜約４０重量％の濃度で存在する。
【０２２８】
一部の実施形態では、本発明の洗剤組成物は、１種以上の洗剤ビルダー又はビルダー系を含んでよい。少なくとも１種のビルダーを組み込む一部の実施形態では、クリーニング組成物は、クリーニング組成物の少なくとも約１重量％、約３重量％〜約６０重量％又は更には約５重量％〜約４０重量％のビルダーを含む。ビルダーとしては、限定するものではないが、例えば、ポリリン酸のアルカリ金属、アンモニウム及びアルカノールアンモニウム塩、アルカリ金属ケイ酸塩、アルカリ土類及びアルカリ金属炭素塩、アルミノケイ酸塩、ポリカルボキン酸塩化合物、エーテルヒドロキシポリカルボキシレート、無水マレイン酸とエチレン又はビニルメチルエーテルのコポリマー、１，３，５−トリヒドロキシベンゼン−２，４，６−トリスルホン酸、及びカルボキシメチルオキシコハク酸、ポリ酢酸の様々なアルカリ金属、アンモニウム及び置換アンモニウム塩、例えばエチレンジアミン四酢酸及びニトリロ三酢酸、並びにメリト酸などのポリカルボキシレート、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリマレイン酸、ベンゼン１，３，５−トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸、及びこれらの可溶性塩が挙げられる。実際に、本発明の様々な実施形態で任意の好適なビルダーが使用され得る。
【０２２９】
一部の実施形態では、ビルダーは水溶性の水硬度イオン錯体（例えば、封鎖ビルダー）、例えば、クエン酸塩及びポリリン酸塩など（例えば、トリポリリン酸ナトリウム及びトリポリリン酸ナトリウム六水和物、トリポリリン酸カリウム、並びにトリポリリン酸ナトリウム及びカリウムの混合物など）を形成する。当該技術分野において既知のものが挙げられる（例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）、任意の好適なビルダーが、本発明への使用を見出されることが想到される。
【０２３０】
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は少なくとも１種のキレート剤を含有する。好適なキレート剤としては、限定するものではないが、銅、鉄及び／又はマンガンキレート剤及びこれらの混合物が挙げられる。少なくとも１種のキレート剤を使用する実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、対象とするクリーニング組成物の約０．１重量％〜約１５重量％又は更には約３．０重量％〜約１０重量％のキレート剤を含む。
【０２３１】
本明細書で提供される一部のより更なる実施形態では、少なくとも１種の付着助剤が含有される。好適な付着助剤としては、限定するものではないが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリカルボキシレート、ポリテレフタル酸などの汚れ剥離ポリマー、クレイ（カオリナイト、モンモリロナイト、アタパルジャイト（atapulgite）、イライト、ベントナイト、ハロイサイト、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０２３２】
本明細書に記載されるように、本発明の一部の実施形態では、再付着防止剤の使用が見出される。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤の使用が見出される。例えば、自動食器洗浄機の実施形態では、非イオン性界面活性剤は表面改質の目的で使用されており、特にフィルム形成と斑点形成を回避し、光沢を改善するためにシート化させる目的で使用される。これらの非イオン性界面活性剤は、汚れの再付着の防止にも使用が見出される。一部の実施形態では、再付着防止剤は、当該技術分野において既知の非イオン性界面活性剤である（例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０２３３】
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、１種以上の移染防止剤を含んでもよい。好適なポリマー移染防止剤としては、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ−オキシドポリマー、Ｎ−ビニルピロリドンとＮ−ビニルイミダゾールとのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドン及びポリビニルイミダゾール又はこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。少なくとも１種の移染防止剤が使用される実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、クリーニング組成物の重量に基づき約０．０００１重量％〜約１０重量％、約０．０１重量％〜約５重量％、又は更には約０．１重量％〜約３重量％を含む。
【０２３４】
一部の実施形態では、ケイ酸塩が本発明の組成物に含まれる。このような実施形態では、ケイ酸ナトリウム塩（例えば、二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム、及び結晶質フィロケイ酸塩）の使用が見出される。一部の実施形態では、ケイ酸塩は約１％〜約２０％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ケイ酸塩は組成物の約５重量％〜約１５重量％の濃度で存在する。
【０２３５】
一部の更なる実施形態では、本発明のクリーニング組成物は分散剤も含有する。好適な水溶性有機物質には、ホモポリマー若しくはコポリマーの酸又はそれらの塩が挙げられるがこれらに限定されず、ポリカルボン酸は、炭素原子２個を超えない程度に互いに離れている少なくとも２個のカルボキシルラジカルを含む。
【０２３６】
一部の更なる実施形態では、クリーニング組成物に使用される酵素は任意の好適な技術により安定化されている。一部の実施形態では、本明細書で選択される酵素は、最終組成物中に、酵素にカルシウムイオン及び／又はマグネシウムイオンを供給するそれらの水溶性供給源を存在させることで安定化させられる。一部の実施形態では、酵素安定化剤としては、オリゴ糖、多糖、及び無機二価金属塩、例えばアルカリ土類金属（カルシウム塩など）が挙げられる。酵素安定化に関する様々な技術が、本発明への使用を見出されることは想到される。例えば、一部の実施形態では、本明細書で採用される酵素は、最終組成物中に、亜鉛（ＩＩ）、カルシウム（ＩＩ）、及び／又はマグネシウム（ＩＩ）イオンの水溶性供給源を存在させることで安定化され、これらの酵素にこのようなイオンを供給する水溶性供給源は、同様に他の金属塩（例えば、バリウム（ＩＩ）、スカンジウム（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、アルミニウム（ＩＩＩ）、スズ（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、及びオキソバナジウム（ＩＶ））も酵素に供給する。塩酸塩及び硫酸塩も、本発明の一部の実施形態での使用が見出される。好適なオリゴ糖及び多糖（例えば、デキストリン）の例は、当該技術分野において既知である（例えば、国際公開第０７／１４５９６４号）を参照されたい。いくつかの実施形態では、ホウ素含有化合物（例えば、ホウ酸塩、４−ホルミルフェニルボロン酸）及び／又はトリペプチドアルデヒドなどの可逆的酵素阻害剤が、必要に応じて更に安定性を高めるうえで有用である。
【０２３７】
一部の実施形態では、本発明の組成物には漂白剤、漂白活性化剤及び／又は漂白触媒が存在する。一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、無機及び／又は有機漂白化合物を含む。無機漂白剤としては、限定するものではないが、過水和物塩（例えば、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩、及び過ケイ酸塩）が挙げられる。一部の実施形態では、無機過水和物塩はアルカリ金属塩である。一部の実施形態では、無機過水和物塩が、更なる保護はされずに結晶質の固体として含まれるが、一部の他の実施形態では、この塩はコーティングされる。当該技術分野において既知である任意の好適な塩が、本発明への使用を見出される（例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０２３８】
一部の実施形態では、漂白活性化剤を本発明の組成物に使用する。漂白活性化剤は、典型的には有機過酸前駆体であり、６０℃以下の温度にてクリーニング過程で漂白作用を増強する。本明細書に用いるのに好適な漂白活性化剤としては、過加水分解条件下で好ましくは約１〜約１０個の炭素原子、特に約２〜約４個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキシカルボン酸及び／又は任意に置換された過安息香酸を与える化合物が挙げられる。更なる漂白活性化剤も当該技術分野において既知であり、本発明への使用が見出される（例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０２３９】
加えて、一部の実施形態及び本明細書に記載される更なる実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、少なくとも１種の漂白触媒を更に含む。一部の実施形態では、マンガントリアザシクロノナン及び関連する錯体、並びにコバルト、銅、マンガン、及び鉄錯体も使用が見出される。その他の漂白触媒も本発明での使用が見出される（例えば、米国特許第４，２４６，６１２号、同第５，２２７，０８４号、及び同第４，８１０４１０号；国際公開第９９／０６５２１号；及び欧州特許第２  １００  ９４９号を参照されたい）。
【０２４０】
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は１種以上の触媒型金属錯体を含有する。一部の実施形態では、金属を含有している漂白触媒の使用が見出される。一部の実施形態では、金属漂白触媒には、所定の漂白触媒活性を有する遷移金属カチオン（例えば、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、又はマンガンカチオン）、漂白触媒活性をわずかに有する又は全く有さない補助金属カチオン（例えば、亜鉛又はアルミニウムカチオン）、及び触媒に関し所定の安定性定数を有するキレート化剤、並びに補助金属カチオン、特にエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン四（メチレンホスホン酸）及びこれらの水溶性塩からなる触媒系が使用される（例えば、米国特許第４，４３０，２４３号を参照されたい）。一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物はマンガン化合物により触媒作用される。このような化合物及び使用濃度は当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，５７６，２８２号を参照されたい）。追加の実施形態では、本発明のクリーニング組成物でのコバルト漂白触媒の使用が見出される。様々なコバルト漂白触媒が当該技術分野において既知であり（例えば、米国特許第５，５９７，９３６号及び同第５，５９５，９６７号を参照されたい）、既知の手順により容易に調製される。
【０２４１】
一部の更なる実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、大多環状剛性配位子（ＭＲＬ）の遷移金属錯体を含有する。実際問題として、制限を目的とするものではないが、一部の実施形態では、本発明により提供される組成物及びクリーニング方法は、水性洗浄媒質中に少なくとも１億分の１のオーダーで有益なＭＲＬ種を供給するように調整され、及び一部の実施形態では約０．００５ｐｐｍ〜約２５ｐｐｍ、より好ましくは約０．０５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、及び最も好ましくは約０．１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍのＭＲＬが洗浄溶液中に供給される。
【０２４２】
一部の実施形態では、本遷移金属漂白触媒の遷移金属としては、限定するものではないが、例えば、マンガン、鉄及びクロムが挙げられる。同様に、ＭＲＬとしては、限定するものではないが、例えば、特定の架橋型超剛性配位子（例えば、５，１２−ジエチル−１，５，８，１２−テトラアザビシクロ（６．６．２）ヘキサデカン）が挙げられる。好適な遷移金属ＭＲＬは、既知の手順により容易に調製される（例えば、国際公開第２０００／３２６０１号及び米国特許第６，２２５，４６４号を参照されたい）。
【０２４３】
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、金属ケア剤を含有する。金属ケア剤は、アルミニウム、ステンレス鋼、及び第一鉄以外の金属（例えば、銀及び銅）を包含する金属の、変色、腐食、及び／又は酸化の予防及び／又は減少に有用である。好適な金属ケア剤としては、米国特許第２  １００  ９４９号、国際公開第９４２６８６０号、及び同第９４／２６８５９号に記載のものが挙げられる。一部の実施形態では、金属処理剤は亜鉛塩である。一部の更なる実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、１種以上の金属処理剤を約０．１重量％〜約５重量％含む。
【０２４４】
上記のように、本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態に配合され、好ましくは配合者により選択される、例えば、限定するものではないが米国特許第５，８７９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号、及び同第５，４８６，３０３号に記載のものなどの任意のプロセスにより配合される。これらの各々は参照により本明細書に援用される。低ｐＨのクリーニング組成物が所望される一部の他の実施形態では、このような組成物のｐＨは、ＨＣｌなどの酸性成分を添加することで調整される。
【０２４５】
本明細書で開示されるクリーニング組成物は、部位のクリーニングでの使用が見出される（例えば、表面、物品、食器類又は布地）。典型的には、このような部位の少なくとも一部を、無希釈形態又は洗浄溶液に希釈された状態の、本発明のクリーニング組成物と接触させ、そしてその後、任意選択で、その部位を洗浄及び／又はすすぎ洗いしてもよい。本発明の目的に関し、「洗浄」には擦ること及び機械的撹拌が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、クリーニング組成物は、典型的には約３００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度の溶液として採用される。洗浄溶媒が水である場合、水の温度は、通常約５℃〜約９０℃の範囲であり、場所が衣類を含む場合、衣類に対する水の質量比は、通常約１：１〜約３０：１である。
【０２４６】
クリーニング組成物の製造及び使用プロセス
本発明のクリーニング組成物は、任意の好適な形態へと配合され、及び配合者により選択された任意の好適な方法により調製される（例えば、米国特許第同第５，８７９，５８４号、同第５，６９１，２９７号、同第５，５７４，００５号、同第５，５６９，６４５号、同第５，５６５，４２２号、同第５，５１６，４４８号、同第５，４８９，３９２号、同第５，４８６，３０３号、同第４，５１５，７０５号、同第４，５３７，７０６号、同第４，５１５，７０７号、同第４，５５０，８６２号、同第４，５６１，９９８号、同第４，５９７，８９８号、同第４，９６８，４５１号、同第５，５６５，１４５号、同第５，９２９，０２２号、同第６，２９４，５１４号及び同第６，３７６，４４５号を参照されたい）。
【０２４７】
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、錠剤、カプセル、分包剤、パウチ、及び多区画パウチなどの剤形で提供される。一部の実施形態では、製剤形式は、多区画パウチ（すなわち他の単位用量形式）内の成分を制御放出するよう設計される。好適な単位容量及び制御放出形式は、当該技術分野において既知である（単位容量及び制御放出形式での使用に好適な材料に関しては、例えば、欧州特許第２  １００  ９４９号、国際公開第０２／１０２９５５号、米国特許第４，７６５，９１６号及び同第４，９７２，０１７号、及び国際公開第０４／１１１１７８号を参照されたい）。一部の実施形態では、単位容量形態は、水溶性フィルム又は水溶性パウチで包装された錠剤として提供される。様々な形態の単位投与法が欧州特許第２  １００  ９４７号に提供され、及び当該技術分野において既知である。
【０２４８】
使用方法
一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、クリーニング表面（例えば、食器類）、洗濯、硬質表面、コンタクトレンズなどにおける使用が見いだされる。一部の実施形態では、表面の少なくとも一部を、無希釈形態の又は洗浄液に希釈された本発明のクリーニング組成物の少なくとも１つの実施形態と接触させ、次に、表面を、所望により洗浄及び／又はすすぎ洗いする。本発明の目的に関し、「洗浄」には擦ること及び機械的洗浄が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、溶液中約５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で使用される。洗浄溶媒が水である一部の実施形態では、水温は、典型的には約５℃〜約９０℃の範囲である。
【０２４９】
本発明は、クリーニングの必要がある物品又は表面（例えば、硬質表面）をクリーニング又は洗浄する方法を提供し、こうした方法としては、これらに限定するものではないが、食器類、食卓用食器類、布地物品、洗濯物物品、パーソナルケア物品等のクリーニング又は洗浄方法、及び硬質若しくは軟質表面（例えば、物品の硬質表面）のクリーニング又は洗浄方法が挙げられる。
【０２５０】
一部の実施形態では、本発明は、クリーニングする必要のある物品、対象物、又は表面をクリーニングするための方法を提供し、方法は、物品又は表面（又はクリーニングされることが所望される物品又は表面の一部）を本発明の少なくとも１種のリパーゼ脂肪分解酵素変異体又は本発明の組成物と十分な時間にわたって、及び／又は物品、対象物若しくは表面を、所望される程度に洗浄するのに好適及び／又は効果的な条件下で接触させることを含む。このような方法の一部は、物品、物体、又は表面を水ですすぎ洗いする工程を更に含む。このような方法の一部では、クリーニング組成物は食器洗剤組成物であり、クリーニングされる物品又は物体は食器類又は食卓用食器類である。本明細書で使用するとき、「食器類」は、食品を給仕する際又は食事を行う際に一般的に使用される物品である。食器類としては、例えば深皿、小皿、カップ、椀等が挙げられ得る。本明細書で使用するとき、「食卓用食器」はより広義の用語であり、例として深皿、刃物類、ナイフ、フォーク、スプーン、箸、ガラス食器、水差し、ソース入れ、飲用容器、給仕用具等が挙げられるが、これらに限定されない。「食卓用食器類」は食品を給仕する又は食べるための上記又は類似物品を包含することを意図する。このような方法の一部では、クリーニング組成物は、自動食器洗浄用洗剤組成物及び／又は食器手洗い用洗剤組成物であり、クリーニングされる物品又は物体は、食器又は食卓用食器類である。このような方法の一部では、クリーニング組成物は、洗濯洗剤組成物（例えば、粉末洗濯洗剤組成物又は液体洗濯洗剤組成物）であり、クリーニングされる物品は布地物品である。その他の一部の実施形態では、クリーニング組成物は洗濯物前処理用組成物である。
【０２５１】
一部の実施形態では、本発明は、所望によりクリーニング又は洗浄がそれぞれ必要な布地物品をクリーニング又は洗浄する方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、布地又は洗濯物クリーニング組成物を包含するがこれに限定されない脂肪分解酵素変異体を含む組成物、及びクリーニングが必要な布地物品又は洗濯物物品とを準備する工程と、この布地物品又は洗濯物物品（又は物品のクリーニングが望ましい部分）を、布地又は洗濯物物品を望ましい程度までクリーニング又は洗浄するために十分及び／又は有効な条件下で、組成物に接触させる工程とを含む。
【０２５２】
一部の実施形態では、本発明は、所望によりクリーニングする必要のある物品又は表面（例えば、硬質表面）をクリーニング又は洗浄するための方法を提供し、方法は、クリーニング又は洗浄される物品又は表面を準備する工程、並びに物品又は表面（又はクリーニング又は洗浄することが所望される物品又は表面の一部）を本発明の少なくとも１種のリパーゼ変異体又はこのようなリパーゼ変異体を少なくとも１種含有する本発明の組成物と、所望される程度に物品又は表面を十分に又は効果的にクリーニング又は洗浄するのに十分な時間にわたって、及び／又は条件下で接触させる工程を含む。このような組成物としては、これらに限定するものではないが、例えば、本発明のクリーニング組成物又は洗剤組成物（例えば、食器手洗い用洗剤組成物、食器手洗い用クリーニング組成物、洗濯洗剤又は布地洗剤又は洗濯物若しくは布地クリーニング組成物、液体洗濯洗剤、液体自動食器クリーニング用洗剤組成物、洗濯用補助クリーニング又は洗剤組成物、洗濯物クリーニング添加剤、及び洗濯物部分前処理用組成物（laundry pre-spotter composition）等が挙げられる。一部の実施形態では、本方法は、特に追加のクリーニング又は洗浄が望ましい場合に、１回以上繰り返される。例えば、場合によっては、本方法は任意に、物品又は表面を、その物品又は表面を望ましい程度にクリーニング又は洗浄するために十分又は有効な時間にわたって、少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体又は組成物に接触させたままにする工程を更に含む。一部の実施形態では、本方法は、物品又は表面を水及び／又は別の液体ですすぎ洗いする工程を更に含む。一部の実施形態では、本方法は、物品又は表面を少なくとも１種の本発明の脂肪分解酵素変異体又は本発明の組成物と再度接触させる工程と、その物品又は表面を、望ましい程度にクリーニング又は洗浄するために十分又は有効な時間にわたって、少なくとも１種の脂肪分解酵素変異体又は組成物に接触させたままにする工程とを更に含む。一部の実施形態では、クリーニング組成物は食器洗剤組成物であり、クリーニングされる物品は食器又は食卓用食器類である。本方法の一部の実施形態では、クリーニング組成物は、自動食器洗浄用洗剤組成物又は食器手洗い用洗剤組成物であり、クリーニングされる物品は食器又は食卓用食器類である。本方法の一部の実施形態では、クリーニング組成物は洗濯洗剤組成物であり、クリーニングされる物品は布地物品である。
【０２５３】
本発明はまた、自動食器洗浄機で食卓用食器類又は食器類をクリーニングする方法を提供し、この方法は、自動食器洗浄機を準備する工程、食卓用食器類又は食器類をクリーニングするのに十分な量の、本発明のリパーゼ変異体を少なくとも１種含有している自動食器洗浄機用組成物又は本発明の組成物を食洗機に配置する工程（例えば、組成物を適切に配置することにより、又は食洗機の洗剤区画又はディスペンサーに配置することにより）、食洗機の中に食器類又は食卓用食器類を配置する工程、並びに食卓用食器類又は食器類がクリーニングされるよう食洗機を操作する工程（例えば、製造元による取り扱い説明書に従って）を包含する。一部の実施形態では、方法は本明細書に記載の任意の自動食器洗浄機用組成物を包含し、組成物は、限定するものではないが本明細書で提供されるリパーゼ変異体を少なくとも１種含む。自動食器洗浄用組成物の使用量は、製造業者の指示又は提案に従って容易に決定することができ、本明細書に記載のものを含めて、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含むいかなる形態の自動食器洗浄用組成物（例えば、液体、粉末、固体、ゲル、錠剤等）も使用できる。
【０２５４】
本発明は、所望によりクリーニングの必要がある表面、物品又は物体をクリーニングする方法も提供し、この方法は、物品又は表面（又は物品又は表面のクリーニングが望ましい部分）を、無希釈形態又は洗浄液に希釈した状態の本発明の少なくとも１種のリパーゼ変異体又は本発明のクリーニング組成物に、十分な時間にわたって及び／又は物品若しくは表面を望ましい程度までクリーニング又は洗浄するために十分又は有効な条件下で、接触させる工程を含む。所望の場合には、その後、表面、物品、又は物体を（任意に）洗浄し及び／又はすすいでもよい。本発明の目的に関し、「洗浄」には、例えば擦ること及び機械的撹拌が包含されるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、クリーニング組成物は、約５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度の溶液（例えば水溶液）として採用される。洗浄溶媒が水である場合、水温は、典型的には、約５℃〜約９０℃であり、表面、物品又は物体が布地を含む場合、水と布地との質量比は、典型的には約１：１〜約３０：１である。
【０２５５】
本発明は、洗濯物又は布地物品を洗濯機でクリーニングする方法も提供し、方法は、洗濯機を準備する工程、洗濯物又は布地物品を洗濯機内でクリーニングするのに十分な量の本発明のリパーゼ変異体を少なくとも１種含む洗濯洗剤組成物を配置する工程（例えば、組成物を、洗濯機内の、適切な又は備え付けの洗剤区画又は分配器に配置する工程）、洗濯機内に洗濯物又は布地物品を配置する工程、及び洗濯物又は布地物品がクリーニングされるように洗濯機を操作する工程（例えば、製造元の取扱説明書に従って操作する工程）を包含する。本発明の方法は、限定するものではないが、本明細書で提供される少なくとも１種の任意のリパーゼ変異体を含有する本明細書に記載の任意の洗濯物洗浄用洗剤組成物を包含する。洗濯洗剤組成物の使用量は、製造業者の指示又は提案に従って容易に決定することができ、本明細書に記載のものを含めて、本発明の脂肪分解酵素変異体を少なくとも１種含むいかなる形態の洗濯洗剤組成物（例えば、固体、粉末、液体、錠剤、ゲル等）も使用できる。
【０２５６】
本発明は、エステラーゼ活性を有するＴＬＬ変異体などの変異体も提供する。エステラーゼ活性には、例えば、可溶性形態のトリグリセリド単量体のエステル部分の切断が含まれる。本発明の一部の実施例では、本発明の変異体は、例えば、ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド（Ｄ３１０）、ＬｙｓｏＦｏｓ  Ｃｈｏｌｉｎｅ  １４（Ｌ２１４）、Ａｎｚｅｒｇｅｎｔ  ３−１２（ＡＺ３１２）、及びＣＨＡＰＳＯ（Ｃ３１７）などの非イオン性又は双極性補助剤を含む、補助剤の存在下で使用できる。本発明の一部の実施例では、本発明の変異体は、限定するものではないが、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）の１倍、０．５倍、及び０．２５倍などの異なる補助剤濃度で使用できる。
【０２５７】
本発明は、繊維中の有機夾雑物の調節を含む、パルプ加工及び紙加工に有用なＴＬＬ変異体などの変異体も提供する。繊維はセルロース繊維であってよく、場合によっては、使い古しの段ボール箱（ＯＣＣ）、古新聞（ＯＮＰ）、混合オフィス古紙（ＭＯＷ）、又はこれらの組み合わせなどの各種紙製品又は繊維含有製品から再生された繊維である。これらの種類の紙含有製品は、典型的には、紙製品中に存在する大量の有機夾雑物を含有する。これらの種類の紙製品を再生するとき、これらの有機夾雑物は、製紙プロセスのパルプ化段階中に形成された繊維と共に存在する。これらの有機夾雑物が実質的に除去されない場合には、製紙プロセスの以降の段階で深刻な干渉が生じ、生成される製紙シートの品質に、及び／又は製紙に使用される機械に影響が出る恐れがある。したがって、このような有機夾雑物が繊維中に存在する場合、製紙プロセスではこのような有機夾雑物を除去することが重要である。
【０２５８】
本発明の目的では、有機夾雑物の例としては、工業において「スティッキー」として既知のものが挙げられ、限定するものではないが、接着剤及び同様物由来の合成ポリマー、膠、ホットメルト、コーティング、コーティングバインダー、残留インク、インク抜き化合物、樹脂、ロジン、及び未パルプ化湿潤強力樹脂が含まれる。これらの種類の材料は、典型的には、新聞紙、段ボール箱、及び／又は混合オフィス古紙などの紙含有製品で見られる。これらの有機夾雑物は、典型的には、スチレンブタジエンゴム、ビニルアクリレート、ポリイソプレン、ポリブタジエン、天然ゴム、エチル酢酸ビニル、ポリ酢酸ビニル、エチルビニルアルコール、ポリビニルアルコール、スチレンアクリル酸、及びその他の合成型ポリマーなどのポリマーを含有する。
【０２５９】
本発明のプロセスにおいて、これらの有機夾雑物は、繊維中に存在する有機夾雑物を調節するのに十分な時間にわたって、十分な量で、有機夾雑物を含有する繊維を、本発明の少なくとも１種の変異体を含有する組成物と接触させることにより調節される。本発明の組成物は、好ましくは、有機夾雑物を分散させ、又は製紙プロセスに影響を与えない有機種に変換する。例えば、ポリ酢酸ビニルは、好ましくは、分散され、及び／又は製紙プロセスに影響を与えないポリビニルアルコールに変換される。組成物が有機夾雑物の調節を実施するこの好ましい方法は、夾雑物を浮遊させて回収するものとは全く異なっている。
【０２６０】
本発明の目的では、有機夾雑物を有する繊維中に存在する有機夾雑物の調節は、夾雑粒子の大きさを減少させること、存在する測定可能な粒子の数若しくは量を減少させること、及び／又は有機夾雑物の粘着度を減少させること、のうちの１つ以上に該当するものとして理解される。一部の実施形態では、本発明の方法を用いて有機夾雑物を調節するとき、これらの減少が全て生じる。一部の実施形態では、夾雑粒子の大きさの減少は、本発明の変異体が存在しない場合と比較して、少なくとも約５％、又は約１０％〜約７５％である。同様にして、繊維中に存在する有機夾雑物の数又は量の減少は、本発明の変異体により処理していない繊維と比較して、少なくとも約５重量％、又は約１０％〜約７５％である。同様にして、有機夾雑物の粘着度の減少は、本発明の変異体により処理していない繊維と比較して、少なくとも約５％、又は約１０％〜約７５％である。
【０２６１】
少なくとも１種の本発明の変異体を含有する組成物には、任意成分として、限定するものではないが、界面活性剤、溶媒、懸濁助剤、充填剤、キレート剤、保存料、緩衝剤、水、安定剤、及び同様物などのその他の従来の紙処理化合物又は原材料を含有させることもできる。これらの追加の原材料は、従来の量で存在させることができる。
【０２６２】
本発明の一部の実施例では、清潔で、汚れていないポリエステルなどのポリエステルを処理するための方法が提供され、方法は、前記ポリエステル繊維製品を、ポリエステルの特性が改質される時間にわたって、そのような条件下で、本発明の変異体を有する酵素溶液と接触させることを含む。好ましくは、ポリエステルは、繊維、紡績糸、布地、又はこのような繊維、紡績糸、若しくは布地を含む仕上げられた繊維製品である。更に好ましくは、改質される特性には、このような繊維、織り糸又は物品から作製される繊維製品の手触り、肌触り、及び／又は重量の改良などが含まれる。一部の実施形態では、本発明は、ポリエステルを含む繊維製品の繊維製品特性を改質する機構のために提供される。したがって、本発明のこの実施形態において、汚れていない、すなわち、典型的には市販の洗濯洗剤により処理される染みを含まない繊維製品にポリエステラーゼを塗布することは、多くの場合有利である。他の実施形態では、本発明は、ポリエステル布の染みを洗濯する方法を提供する。
【０２６３】
本発明の他の実施形態では、ポリエステルの特性が改質される時間にわたって、このような条件下で、ポリエステル繊維、織り糸、又は布地を繊維製品に組み込む前に処理するための方法あるいは布地に本発明の酵素変異体を塗布するための方法が提供される。したがって、繊維製品の構成要素が個別に処理される実施形態において、被処理ポリエステル要素（すなわち、繊維、織り糸、布地）は、ポリエステル繊維製品を製造するための標準法により、例えば、機織り、縫合及び裁断及び縫製などのプロセスにより、繊維製品に組み込み、ひいては最終的な繊維製品を改良することができる。
【０２６４】
本発明の方法の更に別の実施形態では、ポリエステルの特性が改質される時間にわたって、このような条件下で、ポリエステル樹脂又はフィルムを本発明の酵素変異体により処理するための方法が提供される。非処理ポリエステルは、最終的な樹脂又はフィルム製品であってよく、あるいは例えば、機械的な構成を介して製品に組み込み、ひいては最終的な繊維製品を改良することもできる。
【０２６５】
本発明の方法の更に別の実施形態では、本発明の酵素変異体によりポリエステル廃棄物を処理し、ポリエステル廃棄物を分解して廃棄を容易にし、あるいは化合物の再利用を容易にする。本実施形態は、廃棄物の廃棄及び投棄がますます問題になっているポリエステル系樹脂の分解に特に有用である。この実施形態の代替では、本発明を使用して、このような廃棄物の完全な分解又は堆肥化を促進するため、廃棄物中の、微生物により分解可能な材料の量を増加させることができる。
【０２６６】
本発明による方法において、本明細書に提供される通りの本発明の酵素変異体を含有している溶液を、酵素にポリエステル改質を行わせるのに好適な条件下で、ポリエステル繊維、撚り糸、布地と、又は繊維、撚り糸若しくは布地を含んでいる繊維製品と接触させることを含む。本発明は、好ましくは、繊維製品の製造におけるポリエステラーゼの使用を目的とし、本発明では、着用中に生じる染みを除去する目的で洗剤と組み合わせる必要はない。したがって、本実施形態では、ポリエステル製品に対する本発明の酵素変異体の塗布は、繊維を撚り糸に紡績するより前に、撚り糸を布地に組み込むより前に、及び／又はポリエステル製品を含む繊維製品を構成するより前に、行われる。しかしながら、完成した布地製品を、本明細書において特定される本発明の酵素変異体により処理することは、同様に本発明の範囲内であり、本明細書における好ましい実施形態である。
【０２６７】
実験
本発明は、以降の実施例により、更に詳細に記載されるが、この記載により本発明の範囲が請求されたものとして、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。
【０２６８】
以降の実験についての開示では、以下の略記が適用される：ＰＩ（性能指数）、ｐｐｍ（１００万分率）、Ｍ（モル濃度）、ｍＭ（ミリモル濃度）、μＭ（マイクロモル濃度）、ｎＭ（ナノモル濃度）、ｍｏｌ（モル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、μｍｏｌ（マイクロモル）、ｎｍｏｌ（ナノモル）、ｇｍ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、μｇ（マイクログラム）、ｐｇ（ピコグラム）、Ｌ（リットル）、ｍｌ及びｍＬ（ミリリットル）、μＬ及びμＬ（マイクロリットル）、ｃｍ（センチメートル）、ｍｍ（ミリメートル）、μｍ（マイクロメートル）、ｎｍ（ナノメートル）、Ｕ（ユニット）、Ｖ（ボルト）、ＭＷ（分子量）、ｓｅｃ（秒）、ｍｉｎ（分）、ｈ及びｈｒ（時間）、℃（セルシウス度）、ＱＳ（十分量）、ＮＤ（実施せず）、ｒｐｍ（毎分回転数）、ＧＨ（ドイツ硬度）、Ｈ２Ｏ（水）、ｄＨ２Ｏ（脱イオン水）、ＨＣｌ（塩酸）、ａａ（アミノ酸）、ｂｐ（塩基対）、ｋｂ（キロ塩基対）、ｋＤ（キロダルトン）、ｃＤＮＡ（コピー又は相補的ＤＮＡ）、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）、ｓｓＤＮＡ（単鎖ＤＮＡ）、ｄｓＤＮＡ（２本鎖ＤＮＡ）、ｄＮＴＰ（デオキシリボヌクレオチド三リン酸）、ＲＮＡ（リボ核酸）、ＭｇＣｌ２（塩化マグネシウム）、ＮａＣｌ（塩化ナトリウム）、ｗ／ｖ（体積対重量）、ｖ／ｖ（体積対体積）、ｗ／ｗ（重量対重量）、ｇ（重さ）、ＯＤ（光学密度）、ｐｐｍ（１００万分率）、ダルベッコリン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ）、ＳＯＣ（２％バクトトリプトン、０．５％バクト酵母抽出物、１０ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＫＣｌ）、テリフィック培地（ＴＢ、１２ｇ／Ｌバクトトリプトン、２４ｇ／Ｌグリセロール、２．３１ｇ／Ｌ  ＫＨ２ＰＯ４、及び１２．５４ｇ／Ｌ  Ｋ２ＨＰＯ４）、ＯＤ２８０（２８０ｎｍでの光学密度）、ＯＤ６００（６００ｎｍでの光学密度）、Ａ４０５（４０５ｎｍでの吸光度）、Ｖｍａｘ（酵素触媒反応の飽和最大速度）、ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水［１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのナトリウムリン酸緩衝液、ｐＨ  ７．２］）、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．２５％  ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写ＰＣＲ）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ−［２−エタンスルホン酸］）、ＨＢＳ（ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水）、トリス−ＨＣｌ（トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタン−塩酸塩）、トリシン（Ｎ−［トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン）、ＣＨＥＳ（２−（Ｎ−シクロ−ヘキシルアミノ）エタン−スルホン酸）、ＴＡＰＳ（３−｛［トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳ（３−（シクロ−ヘキシルアミノ）−プロパン−スルホン酸、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＴＴ（１，４−ジチオ−ＤＬ−トレイトール）、ＳＡ（シナピン酸（ｓ，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸）、ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）、Ｇｌｕｔ及びＧＳＨ（還元グルタチオン）、ＧＳＳＧ（酸化グルタチオン���、ＴＣＥＰ（トリス［２−カルボキシエチル］ホスフィン）、Ｃｉ（キュリー）、ｍＣｉ（ミリキュリー）、μＣｉ（マイクロキュリー）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、ＲＰ−ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィー）、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化法−飛空時間型）、Ｔｓ（トシル）、Ｂｎ（ベンジル）、ＰＨ（フェニル）、Ｍｓ（メシル）、Ｅｔ（エチル）、Ｍｅ（メチル）、Ｔａｑ（サーマス・アクアチクスＤＮＡポリメラーゼ）、クレノウ（ＤＮＡポリメラーゼＩラージフラグメント（クレノウ）フラグメント））、ＥＧＴＡ（エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン五酢酸）、ｂｌａ（β−ラクタマーゼ又はアンピシリン耐性遺伝子）、ＨＤＬ（強力液体）、ＨＤＤ（強力粉末洗剤）、ＨＳＧ（高起泡顆粒洗剤）、ＣＥＥ（中央及び東ヨーロッパ）、ＷＥ（西ヨーロッパ）、洗剤を参照する際に使用する場合のＮＡ（北アメリカ）、洗剤を参照する際に使用する場合の日本及びＪＰＮ（日本）、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｒｅｎｏ，ＮＶ）、Ｂａｓｅｃｌｅａｒ（Ｂａｓｅｃｌｅａｒ  ＢＶ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｉｄｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、Ａｒｇｏ（Ａｒｇｏ  ＢｉｏＡｎａｌｙｔｉｃａ，Ｍｏｒｒｉｓ  Ｐｌａｉｎｓ，ＮＪ）、Ｓｅｉｔｚ  ＥＫＳ（ＳｅｉｔｚＳｃｈｅｎｋ  Ｆｉｌｔｅｒｓｙｓｔｅｍｓ  ＧｍｂＨ，Ｂａｄ  Ｋｒｅｕｚｎａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｐａｌｌ（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ  ａｎｄ  Ｂａｄ  Ｋｒｅｕｚｎａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ  Ｒａｎｃｈｏ，ＣＡ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ，ＴＸ）、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏ．，Ｅｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、ＣＦＴ（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｐ＆Ｇ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ（Ｐｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ，Ｉｎｃ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈａｌｆｏｎｔ  Ｓｔ．Ｇｉｌｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ＤＮＡ２．０（ＤＮＡ２．０，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）、ＯＸＯＩＤ（Ｏｘｏｉｄ，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）、Ｍｅｇａｚｙｍｅ（Ｍｅｇａｚｙｍｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｒｅｌａｎｄ  Ｌｔｄ．，Ｂｒａｙ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｐａｒｋ，Ｂｒａｙ，Ｃｏ．，Ｗｉｃｋｌｏｗ，Ｉｒｅｌａｎｄ）、Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ（Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ  Ｏｙ，Ｅｓｐｏｏ，Ｆｉｎｌａｎｄ）、Ｋｅｌｃｏ（ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）、Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）、（ＮＥＮ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、Ｐｈａｒｍａ  ＡＳ（Ｐｈａｒｍａ  ＡＳ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）、Ｄｙｎａｌ（Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）、Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，ＴＸ）、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）、Ｓｉｇｍａ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ及び／又はＣｌｏｎｔｅｃｈ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＣＬＯＮＴＥＣＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｏｐｅｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｏｐｅｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）、ＭＷＧ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＭＷＧ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｈｉｇｈ  Ｐｏｉｎｔ，ＮＣ）、Ｏｌｉｇｏｓ  Ｅｔｃ（Ｏｌｉｇｏｓ  Ｅｔｃ．Ｉｎｃ，Ｗｉｌｓｏｎｖｉｌｌｅ，ＯＲ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｂａｃｈｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）、Ｄｉｆｃｏ（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）、Ｏｘｏｉｄ（Ｏｘｏｉｄ  Ｉｎｃ．，Ｏｇｄｅｎｓｂｕｒｇ，ＮＹ）、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｅｈｏｌｄ，ＮＪ）、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ又はＧｉｂｃｏ  ＢＲＬ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＮＥＢ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、Ｓｉｇｍａ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｐｉｅｒｃｅ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、Ｔａｋａｒａ（Ｔａｋａｒａ  Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．Ｏｔｓｕ，Ｊａｐａｎ）、Ｒｏｃｈｅ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、Ｑｉａｇｅｎ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）、Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｌ．，Ｓａｃｏ，Ｍａｉｎｅ）、Ａｐｔａｇｅｎ（Ａｐｔａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）、Ｓｏｒｖａｌｌ（Ｓｏｒｖａｌｌ  ｂｒａｎｄ，ｆｒｏｍ  Ｋｅｎｄｒｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ａｓｈｅｖｉｌｌｅ，ＮＣ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ  Ｈａｎｄｅｌ（Ｓｉｅｇｆｒｉｅｄ  Ｈａｎｄｅｌ  ＡＧ，Ｚｏｆｉｎｇｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、Ｍａｒｓｈ（Ｍａｒｓｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、Ｇｅｎｅａｒｔ（Ｇｅｎｅａｒｔ  ＧｍｂＨ，Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）、（Ｂｉａｃｏｒｅ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＮＪ）、ＳｙｎＰｅｐ（ＳｙｎＰｅｐ，Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ）、Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ（Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ  ｂｒａｎｄ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｉｎｇｏｅｓ，ＮＪ）、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）、Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、Ｄｉｏｎｅｘ（Ｄｉｏｎｅｘ，Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、Ｍｏｎｓａｎｔｏ（Ｍｏｎｓａｎｔｏ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｗｉｎｔｅｒｓｈａｌｌ（Ｗｉｎｔｅｒｓｈａｌｌ  ＡＧ，Ｋａｓｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＢＡＳＦ（Ｂ
ＡＳＦ  Ｃｏ．，Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ，ＮＪ）、Ｈｕｎｔｓｍａｎ（Ｈｕｎｔｓｍａｎ  Ｐｅｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，ＵＴ）、Ｓｈｅｌｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｈｅｌｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）、Ｓｔｅｐａｎ（Ｓｔｅｐａｎ，Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、Ｃｌａｒｉａｎｔ（Ｃｌａｒｉａｎｔ，Ｓｕｌｚｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｚｅｏｌｉｔｅ（Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｚｅｏｌｉｔｅ  Ｌｔｄ．，Ｇｒａｙｓ，Ｅｓｓｅｘ，ＵＫ）、Ｊｕｎｇｂｕｎｚｌａｕｅｒ（Ｊｕｎｇｂｕｎｚｌａｕｅｒ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｓｏｌｖａｙ（Ｓｏｌｖａｙ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、３Ｖ  Ｓｉｇｍａ（３Ｖ  Ｓｉｇｍａ，Ｂｅｒｇａｍｏ，Ｉｔａｌｙ）、Ｉｎｎｏｓｐｅｃ（Ｉｎｎｏｓｐｅｃ，Ｅｌｌｅｓｍｅｒｅ  Ｐｏｒｔ，ＵＫ）、Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ（Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓ，Ｖｌｉｓｓｉｇｇｅｎ−Ｏｓｔ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ（Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｂａｒｒｙ，ＵＫ）、Ｅｎｉｃｈｅｍ（Ｅｎｉｃｈｅｍ  Ｉｂｅｒｉｃａ，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐａｉｎ）、Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ（Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ，Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ，ＮＶ，Ｄｅｌｆｔ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）、Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  Ｉｎｃ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）、ＲＢ（Ｒｅｃｋｉｔｔ−Ｂｅｎｃｋｉｓｅｒ，Ｓｌｏｕｇｈ，ＵＫ）、及びＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）。
【０２６９】
本明細書で使用するとき、一部の記載では３桁の数値表記を提供する目的で冒頭の各桁に「０」が示される（例えば、「００１」は「１」と同じであり、すなわち「Ａ００１Ｃ」は「Ａ１Ｃ」と同じである）。一部の一覧では、冒頭の「０」は記載されない。加えて、本明細書で使用するとき、「Ｘ」は任意のアミノ酸を指す。
【０２７０】
本明細書で提供される、例示された洗剤組成物において、酵素濃度は、組成物の合計重量に基づき純粋な酵素濃度として表現され、かつ別途記載のない限り、洗剤成分は組成物の合計重量に基づき表される。本明細書で略記され識別される用語は以下の意味を持つ：
【０２７１】
【表１３−１】
2016506237.tif 000015
2016506237.tif 000016
【０２７２】
【表１３−２】
2016506237.tif 000017
2016506237.tif 000018
2016506237.tif 000019
【０２７３】
北アメリカ（ＮＡ）及び西ヨーロッパ（ＷＥ）の強力液体洗濯（ＨＤＬ）洗剤に関しては、予め計量した液体洗剤（ガラス瓶内）を、９５℃のウォーターバスに２時間にわたって配置することで、市販の洗剤中に存在する酵素の加熱不活性化を実施する。ＮＡ及びＷＥの自動食器洗浄（ＡＤＷ）洗剤を加熱不活性化するためのインキュベート時間は８時間である。不活性化率を正確に測定するために、未加熱及び加熱洗剤のどちらも、洗剤を溶解させて５分以内にアッセイにする。酵素活性はＡＡＰＦアッセイにより試験する。
【０２７４】
加熱不活性化した洗剤の酵素活性の試験に関しては、洗剤の希釈標準溶液は加熱不活性化母液から調製した。所望の条件に一致するよう、適量の水硬度（例えば、０．１０ｇ／Ｌ又は０．２１ｇ／Ｌ（６ｇｐｇ又は１２ｇｐｇ））及び緩衝剤を洗剤溶液に加える。瓶をボルテックスにかけるか反転させるかして溶液を混合する。以下の表は本明細書で使用される市販の洗剤及び試験条件の一部についての情報を提供する。一部の実験では、追加の及び／又は他の市販の洗剤が以下の実施例で使用されることが見出される。
【０２７５】
【表１４】
2016506237.tif 000020
【０２７６】
一部の更なる実施例では、以下の溶液の使用が見出される：
【０２７７】
【表１５】
2016506237.tif 000021
【０２７８】
表Ｃは、布地の洗濯に好適な、本発明に従って製造された顆粒型洗濯洗剤組成物を提供する。
【０２７９】
【表１６】
2016506237.tif 000022
１  ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリビニルアセテートに対するポリエチレンオキシドの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
２  −ＮＨにつき２０個のエトキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）。
３  両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーは、−ＮＨにつき２４個のエトキシル基、及び−ＮＨにつき１６個のプロポキシル基を有するポリエチレンイミン（ＭＷ＝６００）である。
４  可逆性脂肪分解酵素阻害剤の構造：
【０２８０】
【化１】
2016506237.tif 000023
５エトキシル化チオフェン色調染料については米国特許第７，２０８，４５９（Ｂ２）号に記述されている。
【０２８１】
表Ｃ中、製品に添加した活性タンパク質の割合（％）として表される脂肪分解酵素（本発明のもの）を除き、全ての酵素濃度は酵素原材料の割合（％）として表される。
【０２８２】
表Ｄは、トップロード式自動洗浄装置（洗剤組成物７〜９）、及びフロントロード式洗浄装置（洗剤組成物１０〜１１）に好適な顆粒型洗濯洗剤組成物を提供する。洗浄液における最終濃度が０．０１ｐｐｍ〜１０ｐｐｍになるよう、これらの製剤に、本発明の試験した脂肪分解酵素変異体及び／又は脂肪分解酵素を別個に加えた。
【０２８３】
【表１７】
2016506237.tif 000024
【０２８４】
表Ｄにおいて、界面活性剤成分は、限定するものではないがＢＡＳＦ（例えば、ＬＵＴＥＮＳＯＬ（登録商標））、Ｓｈｅｌｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔｅｐａｎ、Ｈｕｎｔｓｍａｎ、及びＣｌａｒｉａｎｔ（例えば、ＰＲＡＥＰＡＧＥＮ（登録商標））が挙げられる、任意の好適な供給元から得ることができる。ゼオライトはＩｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｚｅｏｌｉｔｅなどの供給元から得ることができる。クエン酸及びクエン酸ナトリウムは、Ｊｕｎｇｂｕｎｚｌａｕｅｒなどの供給元から得ることができる。過炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びセスキ炭酸ナトリウムは、Ｓｏｌｖａｙなどの供給元から得ることができる。アクリル酸／マレエートコポリマーは、ＢＡＳＦなどの供給元から得ることができる。カルボキシメチルセルロース及び疎水変性カルボキシメチルセルロースは、ＣＰＫｅｌｃｏなどの供給元から得ることができる。Ｃ．Ｉ．蛍光増白剤２６０は、３Ｖ  Ｓｉｇｍａから得ることができる（例えば、ＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）、ＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）２Ｍ／Ｇ、ＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）２ＭＧ／ＬＴ  Ｅｘｔｒａ、又はＯＰＴＩＢＬＡＮＣ（登録商標）Ｅｃｏｂｒｉｇｈｔ）。Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン二コハク酸四ナトリウムは、Ｉｎｎｏｓｐｅｃなどの供給元から得ることができる。テレフタレートコポリマーは、Ｃｌａｒｉａｎｔ（例えば、ＲＥＰＥＬＯＴＥＸ  ＳＦ  ２）から得ることができる。加えて、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸は、Ｔｈｅｒｍｐｈｏｓから得ることができる。オキサジリジン系漂白増進剤は、式中、Ｒ１が２−ブチルオクチルである以下の構造を有するものであり、米国特許第２００６／００８９２８４（Ａ１）号に従って製造される。
【０２８５】
【化２】
2016506237.tif 000025
【０２８６】
酵素、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＣＬＥＡＮ（登録商標）及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから得ることができる。フタロシアニンテトラスルホン酸亜鉛は、Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから得ることができる（例えば、ＴＩＮＯＬＵＸ（登録商標）ＢＭＣ）。顆粒状抑泡剤は、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇから得ることができる。これらの洗剤組成物において、ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリビニルアセテートに対するポリエチレンオキシドの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
【０２８７】
表Ｅ〜Ｇは、洗濯機に好適な更なる顆粒型洗剤組成物を提供する（洗剤３６ａ〜ｎ）。これらの製剤に、本発明の試験したＧＧ３６脂肪分解酵素変異体又は冷水用脂肪分解酵素を個別に加える。
【０２８８】
【表１８】
2016506237.tif 000026
【０２８９】
【表１９】
2016506237.tif 000027
【０２９０】
【表２０】
2016506237.tif 000028
【０２９１】
表Ｅ、Ｆ、Ｇ中の洗剤組成物３６ａ〜ｎに関する注記：
界面活性剤材料は、次の企業から得ることができる：ＢＡＳＦ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）（Ｌｕｔｅｎｓｏｌ（登録商標））；Ｓｈｅｌｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）；Ｓｔｅｐａｎ（Ｎｏｒｔｈｆｉｅｌｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）；Ｈｕｎｔｓｍａｎ（Ｈｕｎｔｓｍａｎ，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，Ｕｔａｈ，ＵＳＡ）；Ｃｌａｒｉａｎｔ（Ｓｕｌｚｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ（Ｐｒａｅｐａｇｅｎ（登録商標）））。
【０２９２】
ゼオライトはＩｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｚｅｏｌｉｔｅ（ＵＫ）Ｌｔｄ（Ｇｒａｙｓ，Ｅｓｓｅｘ，ＵＫ）から得ることができる。
【０２９３】
クエン酸及びクエン酸ナトリウムは、Ｊｕｎｇｂｕｎｚｌａｕｅｒ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から得ることができる。
【０２９４】
過炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びセスキ炭酸ナトリウムは、Ｓｏｌｖａｙ（Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）から得ることができる。
【０２９５】
アクリル酸／マレエートコポリマーは、ＢＡＳＦ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から得ることができる。
【０２９６】
カルボキシメチルセルロース及び疎水変性カルボキシメチルセルロースは、ＣＰＫｅｌｃｏ（Ａｒｎｈｅｍ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から得ることができる。
【０２９７】
Ｃ．Ｉ．蛍光増白剤２６０は、３Ｖ  Ｓｉｇｍａ（Ｂｅｒｇａｍｏ、Ｉｔａｌｙ）からＯｐｔｉｂｌａｎｃ（登録商標）Ｏｐｔｉｂｌａｎｃ（登録商標）２Ｍ／Ｇ、Ｏｐｔｉｂｌａｎｃ（登録商標）２ＭＧ／ＬＴ  Ｅｘｔｒａ、又はＯｐｔｉｂｌａｎｃ（登録商標）Ｅｃｏｂｒｉｇｈｔとして得ることができる。
【０２９８】
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン二コハク酸四ナトリウムは、Ｉｎｎｏｓｐｅｃ（Ｅｌｌｅｓｍｅｒｅ  Ｐｏｒｔ，ＵＫ）から得ることができる。
【０２９９】
テレフタレートコポリマーは、Ｃｌａｒｉａｎｔから商標名Ｒｅｐｅｌｏｔｅｘ  ＳＦ  ２として入手することができる。
【０３００】
１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸はＴｈｅｒｍｐｈｏｓ（Ｖｌｉｓｓｉｎｇｅｎ−Ｏｏｓｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から得ることができる。
【０３０１】
オキサジリジニウム系漂白増進剤は、式中、Ｒ１が２−ブチルオクチルである以下の構造を有するものであり、米国特許第２００６／００８９２８４（Ａ１）号に従って製造される。
【０３０２】
【化３】
2016506237.tif 000029
【０３０３】
酵素Ｎａｔａｌａｓｅ（登録商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ（登録商標）、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ  Ｐｌｕｓ（登録商標）、Ｃｅｌｌｕｃｌｅａｎ（登録商標）及びＭａｎｎａｗａｙ（登録商標）は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ（Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ）から得ることができる。
【０３０４】
亜鉛フタロシアニンテトラスルホネートは、Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）からＴｉｎｏｌｕｘ（登録商標）ＢＭＣとして得ることができる。
【０３０５】
顆粒状抑泡剤はＤｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｂａｒｒｙ，ＵＫ）から得ることができる。
【０３０６】
ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリビニルアセテート側鎖とを有する、ポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド主鎖の分子量は約６０００であり、ポリビニルアセテートに対するポリエチレンオキシドの重量比は約４０：６０であり、５０個のエチレンオキシド単位当たりのグラフト点は１以下である。
【実施例】
【０３０７】
（実施例１）
方法
以下のアッセイは、以下に記載の実施例に使用する標準アッセイ法である。所望により、特定のプロトコルは、これらの標準アッセイ由来の変法であると呼ぶ。これらの場合、以下のこれらの標準解析プロトコル由来の変法を、実施例中に特定する。
【０３０８】
Ａ．性能指数
酵素の性能指数（ＰＩ）は、同一のタンパク質濃度にて、変異体（測定値）及び標準酵素（理論値又は測定値）の性能を比較する。加えて、標準酵素のＬａｎｇｍｕｉｒ等式のパラメーターを用いることで、理論値が算出できる。
【０３０９】
１を超える性能指数（ＰＩ）（ＰＩ＞１）は、変異により標準（例えば、ＴＬＬ、配列番号２）と比較して性能が改良されていることを示し、一方、１に等しいＰＩ（ＰＩ＝１）は、変異体が標準と同様に機能することを示し、１未満であるＰＩ（ＰＩ＜１）は、変異体が標準よりも劣って機能することを示す。
【０３１０】
Ｂ．ｐ−ニトロフェニルエステルの加水分解アッセイ
ＴＬＬ変異体の鎖長の選好性を決定するため、アルキル鎖長を変化させて、３つの異なるパラ−ニトロフェニル（ｐＮＰ）エステル基質に対するリパーゼ活性について、ＴＬＬ変異体をアッセイする。表１−１に、ｐＮＰエステル基質の詳細を示す。
【０３１１】
【表２１】
2016506237.tif 000030
【０３１２】
０．０５Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ８．２）又は０．０５Ｍ  ＭＥＳ（ｐＨ  ６．０）中エタノール（５％）に予め懸濁した０．８ｍＭ  ｐＮＰエステルを使用して、ｐＮＰエステル基質を添加した反応エマルジョンを調製する。
【０３１３】
ｐＮＰ−エステル／緩衝液懸濁液を混合し、酵素サンプルを含有させた９６ウェルマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）に総量２００μＬで分注した。酵素サンプルの希釈及びその分注量は、反応が線形範囲内で維持されるよう調節する。遊離ｐＮＰの生成を、ＯＤ４０５  ｎｍで３分間にわたって測定し、ブランク値（酵素不含有）を用いて補正する。ｐＮＰ検量線を使用して１秒当たりのｐＮＰ生成物を算出し、次にウェルに加えた酵素サンプルに対して正規化する（加えた酵素１ｍｇ当たりのμｍｏｌ  ｐＮＰ／秒を求める）。ｐＨ  ６．０にてｐ−ニトロフェニルカプリレートを使用する場合には、ｐＮＰ−エステル／緩衝液懸濁液を混合し、酵素サンプルを含有させた９６ウェルマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）に、総量１５０μＬで分注する。プレートを密閉し、ｉＥＭＳ振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、２５℃で９００ｒｍｐで１０分間振盪する。インキュベート後、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有させた０．２Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．２）を５０μＬ加える。ＯＤ４０５  ｎｍで遊離ｐＮＰの生成を読み取り、ブランク値（酵素不含有）を利用して補正する。
【０３１４】
特定のｐＮＰエステル基質に対する酵素変異体の加水分解を、ＴＬＬ酵素（配列番号２）のものと比較して、加水分解性能指数を求める。
【０３１５】
Ｃ．洗剤安定性アッセイ
ＴＬＬ変異体の洗剤安定性の促進は、高温下で、冷水用液体Ｔｉｄｅ（Ｐ＆Ｇ、ＵＳ；加熱処理）としての市販が知られる重質液体（ＨＤＬ）洗剤の１０％（ｖ／ｖ）溶液で変異体にストレスを与えることにより測定する。
【０３１６】
９６ウェルＰＣＲプレート内で、リパーゼの発酵原材料を冷水用液体Ｔｉｄｅの１０％（ｖ／ｖ）溶液により５０倍希釈する。混合後、１９２．５μＬ  ｐＮＰオクタノエート基質を含有させた９６ウェルプレートのウェルに７．５μＬを分注し、Ｂにおいて記載の通りに活性を測定し、非ストレス値を生成する。
【０３１７】
ＰＣＲプレートを密閉し、ＰＣＲ装置内で３０分間、４１℃でインキュベートする。インキュベートの終了後、プレートを４℃で３分間冷却した後、再度活性を測定する。１８５μＬのｐＮＰオクタノエート／緩衝液懸濁液を含有させた９６ウェルプレートにインキュベートした混合物１５ｕＬを分注して酵素変異体の活性を求め、Ｂ節において記載のとおりに活性を測定してストレス値を生成する。
【０３１８】
酵素変異体とＴＬＬ酵素（配列番号２）のストレス値対非ストレス値の活性比を比較して、洗剤安定性についての性能指数を求める。
【０３１９】
Ｄ．熱安定性アッセイ
ＴＬＬ変異体の熱安定性の促進は、高温下にて、１ｐｐｍサブチリシンＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｌプロテアーゼにより５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ８．２）中変異体にストレスを与えることによりモニターする。２０μＬの酵素サンプルを含有させた９６ウェルＰＣＲプレートのウェルに、プロテアーゼを加えた５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ８．２）８０μＬを分注する。混合後、１９８μＬのｐＮＰオクタノエート／緩衝液懸濁液を含有させた９６ウェルプレートに緩衝液／リパーゼ混合物２ｕＬを分注して酵素変異体の活性を求め、Ｂ節において記載のとおりに活性を測定する。
【０３２０】
ＰＣＲプレートを密閉し、ＰＣＲ装置内で３０分間、６４℃でインキュベートする。インキュベート後、プレートを３分間４℃で冷却した後、活性を測定する。１９６μＬのｐＮＰオクタノエート／緩衝液懸濁液を含有させた９６ウェルプレートにインキュベートした混合物４ｕＬを分注して酵素変異体の活性を求め、Ｂ節において記載のとおりに活性を測定する。
【０３２１】
熱安定性活性比は、加熱後の酵素活性を、加熱前の酵素活性により除算して求め、残存している活性の割合として表す。酵素変異体と、同様に処理したＴＬＬ酵素（配列番号２）の活性比を比較して、促進された熱安定度についての性能指数を求める。
【０３２２】
Ｄ．ＬＡＳ安定性アッセイ
ＴＬＬ変異体のＬＡＳ（直鎖アルキルベンゼンスルホネート、具体的には、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、Ｓｉｇｍａカタログ番号２８９９５７）安定性の促進は、ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ  ８）で希釈した０．１％  ＬＡＳ中で変異体にストレスを与えてモニターする。
【０３２３】
２０μＬの酵素サンプルを含有させた９６ウェルＰＣＲプレートのウェルに、０．１％  ＬＡＳ（ｗ／ｖ）（ｐＨ  ８．２）８０μＬを分注する。混合後、１９８μＬのｐＮＰオクタノエート／緩衝液懸濁液を含有させた９６ウェルプレートに緩衝液／リパーゼ混合物２ｕＬを分注して酵素変異体の活性を求め、Ｂ節において記載のとおりに活性を測定する。
【０３２４】
ＰＣＲプレートを密閉し、ＰＣＲ装置内で３０分間、２５℃でインキュベートする。インキュベート後、プレートを３分間４℃で冷却した後、活性を測定する。１９６μＬのｐＮＰオクタノエート／緩衝液懸濁液を含有させた９６ウェルプレートにインキュベートした混合物４ｕＬを分注して酵素変異体の活性を求め、Ｂ節において記載のとおりに活性を測定する。
【０３２５】
ＬＡＳ安定性活性比は、ＬＡＳ中でインキュベートした後の酵素活性を、ＬＡＳの非存在下での酵素活性により除算して算出し、残存している活性の割合として表す。酵素変異体と、同様に処理したＴＬＬ酵素（配列番号２）の活性比を比較して、ＬＡＳ安定性についての性能指数を求める。
【０３２６】
Ｅ．ＣＳ−６１布帛小片アッセイ
リパーゼ変異体の洗浄性能を布帛小片アッセイで試験する。ＣＳ−６１布帛片（牛脂及び赤色染料（試験材料センター、ＣＦＴ（Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ））で予め染みを付した木綿布帛片）を、９６ウェルプレートフォーマットで使用する。小片は直径５ｍｍに切り出し、ＭＴＰの各ウェルに入れる。３種類の洗剤バックグラウンド、冷水用液体Ｔｉｄｅの投与量全量（９５℃で３時間加熱処理済み、最終的な投与量：０．９２ｇ／Ｌ）、冷水用液体Ｔｉｄｅの投与量半量（９５℃で３時間加熱処理済み、最終的な投与量：０．４６ｇ／Ｌ）、及び冷水用液体Ｔｉｄｅの投与量半量（９５℃で３時間加熱処理済み）に加え、補助剤（ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド）（最終的な洗剤投与量：０．４６ｇ／Ｌ、補助剤：０．２７２μＭ）で、リパーゼ変異体の性能を試験する。
【０３２７】
ＭＴＰプレートで増殖させた培養物の培養ブロスをＭｉｌｌｉｐｏｒｅにより濾過し、試験するリパーゼ変異体のサンプルを得る。緩衝液には２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（最終濃度）（ｐＨ  ８．２）を使用し、水硬度は６ｇｐｇ  ２：１  Ｃａ：Ｍｇに調整する。
【０３２８】
布帛片を入れた９６ウェルプレートの各ウェルに用量２４７．５μＬのＨＤＬ洗剤溶液（上記）を加える。反応を開始するため、各ウェルに用量３．５μＬの酵素サンプルを加える。プレートを密閉し、ｉＥＭＳ振盪機（Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、３０℃、９００ｒｍｐで３０分間振盪する。インキュベート後、Ｈｙｄｒｏｓｐｅｅｄプレート洗浄機（Ｔｅｃａｎ、Ａｕｓｔｒｉａ）を使用し、布地を脱イオン水により３回すすぎ洗いし、５０℃で一晩乾燥する。染み除去は、すすぎ洗いし乾燥した布地をスキャナ（ＭｉＣｒｏｔｅｋ  Ｓｃａｎ  Ｍａｋｅｒ  ９００）により撮影して、ＲＧＢ測定することにより定量する。画像はＰｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳＩＩに取り込み、ＩＰＴＫ  ５．０（Ｒｅｉｎｄｅｅｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ）を使用して、布帛片を含む領域からＲＧＢ値を抽出する。洗浄した布地の汚れ除去（ＳＲＩ）値は、式：
【０３２９】
汚れ除去率（ＳＲＩ％）＝（ΔＥ／ΔＥｉｎｉｔｉａｌ）＊１００を使用して、未洗浄の布地と比較して算出する。
式中、
【０３３０】
【数１】
2016506237.tif 000031
である。
【０３３１】
式中、
【０３３２】
【数２】
2016506237.tif 000032
である。
【０３３３】
クリーニング性能の性能指数は、酵素変異体のＳＲＩを、変異体と同一の酵素投与量のＴＬＬ標準酵素（配列番号２）のＳＲＩと比較して算出する。変異体と同一の酵素投与量でのＴＬＬのＳＲＩの算出には、Ｌａｎｇｍｕｉｒ式を使用する。
【０３３４】
Ｆ．洗剤
市販の洗剤は、
冷水用液体Ｔｉｄｅ（Ｐ＆Ｇ）を使用する。２０１０年８月に市販品を購入し、加熱処理（９５℃で３時間）して製品製剤中の酵素を失活させた。
【０３３５】
Ｇ．タンパク質定量アッセイ
蛍光励起移動イムノアッセイを使用して、ＭＴＰプレートで増殖させた培養物を濾過した発酵ブロスについて、ＴＬＬ変異体のタンパク質濃度を求める。フルオレセイン標識ＴＬＬ抗原を、ローダミン標識した抗ＴＬＬウサギ抗体と抗原抗体比で混合し、フルオレセイン発光をクエンチする。混合物に加えると、ＴＬＬ変異体タンパク質は、標識抗ＴＬＬ抗体との結合に競合して、蛍光発光の増強をもたらす。フルオレセイン発光の増加は、ＴＬＬ変異体タンパク質濃度に正比例する。
【０３３６】
２０μＬのＴＬＬ変異体を濾過した発酵ブロスを、１４０μＬリン酸緩衝生理食塩水を入れた黒色平底９６ウェルプレートに分注し、混合する。各２０μＬのフルオレセイン標識したＴＬＬ及びローダミン標識した抗ＴＬＬウサギ抗体をプレートに分注し、混合した。室温で、暗所で３０分間のインキュベート後、４９５ｎｍの励起波長と、５２０ｎｍの発光波長とを利用して各ウェルの蛍光を測定する。ＴＬＬ酵素標準（配列番号２）の蛍光発光をグラフに当てはめ、各ＴＬＬ変異体のタンパク質濃度を求めた。
【０３３７】
（実施例２）
バチルス・スブチリス（Bacillus subtilis）におけるサーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）由来のリパーゼ−３のクローニング及び発現
サーモミセス・ラヌギノーサ（Thermomyces lanuginosus）リパーゼ−３（ＴＬＬ）は、ＰＤＢ：１ＤＴ３に示される成熟リパーゼのアミノ酸配列を有するファミリーａｂＨ２３．０１、リゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor mihei）リパーゼ様（リパーゼ工学データベース、ｗｗｗ．ｌｅｄ．ｕｎｉ−ｓｔｕｔｔｇａｒｔ．ｄｅ）に相当する。
【０３３８】
ＴＬＬのアミノ酸配列をもとにＢ．スブチリス（B. subtilis）を発現させるため、ＴＬＬ合成遺伝子（配列番号１）を設計した。ａｐｒＥプロモーター、ａｐｒＥシグナル配列及びＢＰＮ’サブチリシン遺伝子（Ｂ．アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens））ターミネーターを含有しｐＢＮ系バチルス（Bacillus）を複製する発現ベクターに、ＢｍｔＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ断片としてＴＬＬ遺伝子をサブクローン化した（Ｂａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７：１１７〜１２４）。このベクターを合成遺伝子とライゲーションし、ＴＬＬポリペプチドのＮ末端を、発現ベクターによりコードされるＢ．スブチリス（B. subtilis）ＡｐｒＥプロペプチドの３番目のアミノ酸と融合させた（ｐＢＮ系ベクターにおいて、シグナルペプチド内の−２アミノ酸には、予めＢｍｔＩ部位を導入した）。宿主内での天然のシグナルペプチダーゼによる切断後、このようにして生成された組換えＴＬＬタンパク質は、アミノ末端に３個の更なるアミノ酸（Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ）を有する。予想されるシグナル切断部位は、ＳｉｇｎａｌＰ−ＮＮシステム（Ｅｍａｎｕｅｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７），Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２：９５３〜９７１）に設定したＳｉｇｎａｌ  Ｐ  ３．０プログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／）により決定した。
【０３３９】
Ｂ．スブチリス（B. subtilis）におけるＴＬＬ遺伝子の発現には、ｐＨＹ３００ＰＬＫ系ベクター（Ｔａｋａｒａ）を使用し、ｐＨＹ３００ＰＬＫ系ベクターのＢｓｔＥＩＩ及びＥｃｏＲＩ部位には、オリゴヌクレオチドカセット（５’−ＧＴＴＡＣＣＴＴＧＡＡＴＧＴＡＴＡＴＡＡＡＣＡＴＴＣＴＣＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴＣＴＡＡＴＡＡＡＡＡＡＣＧＣＴＣＧＧＴＴＧＣＣＧＣＣＧＧＧＣＧＴＴＴＴＴＴＡＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＧ（配列番号５）を５’−ＡＡＴＴＣＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＴＡＡＡＡＡＡＣＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＡＡＣＣＧＡＧＣＧＴＴＴＴＴＴＡＴＴＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＴＴＧＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＡＡＧ（配列番号６）とアニーリングさせた）をライゲーションしてテトラサイクリン遺伝子の後に転写終結因子を組み込んだ。
【０３４０】
ＢａｍＨＩ−ＨｉｎｄＩＩＩリンカー（５−ＧＡＴＣＣＴＧＡＣＴＧＣＣＴＧ（配列番号７）を５’−ＡＧＣＴＣＡＧＧＣＡＧＴＣＡＧ（配列番号８）とアニール）を使用して、ＥｃｏＲＩ−ＢａｍＨＩ断片として、ｐＢＮ系ベクター由来の完全なＴＬＬ発現カセットをｐＨＹ３００ＰＬＫ系ベクターのＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ部位にクローニングし、クローニング後にｐＨＹ３００ＰＬＫ系ベクターのオリジナルのＨｉｎｄＩＩＩ部位を除去した。得られたベクターをｐＨＹＴ−ＴＬＬｗｔと呼ぶ（図２−１）。
【０３４１】
配列番号１には、合成ＴＬＬ遺伝子のヌクレオチド配列を示す。
【０３４２】
2016506237.tif 000033
【０３４３】
配列番号２には、発現プラスミドｐＨＹＴ−ＴＬＬｗｔにより産生されるＴＬＬのアミノ酸配列を示す（ＡｐｒＥシグナル配列（Ｓｉｇｎａｌ  Ｐにより予想される切断部位）には下線を付した）：
【０３４４】
2016506237.tif 000034
【０３４５】
配列番号３は、３つのアミノ酸によるアミノ末端における伸長を備え発現プラスミドｐＨＹＴ−ＴＬＬｗｔにより産生されるＴＬＬ成熟タンパク質のアミノ酸配列を示す。
【０３４６】
2016506237.tif 000035
【０３４７】
配列番号４は、天然に生じる遺伝子配列に基づき、ＴＬＬ成熟タンパク質のアミノ酸配列を示す。
【０３４８】
2016506237.tif 000036
【０３４９】
（実施例３）
ＴＬＬ部位評価ライブラリの作製
専用のプロセス（国際公開第２００４／０５９５５６Ａ３号）を用い、ＧＥＮＥＡＲＴにより占有又は実施許諾される技術に利用されるＤＮＡ分子を製造するＧＥＮＥＡＲＴにより、部位評価ライブラリ（ＳＥＬ）を作製した（欧州特許第０  ２００  ３６２号及び同第０  ２０１  １８４号；並びに米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号及び同第６，４７２，１８４号）。本実施例に記載のＴＬＬ  ＳＥＬの構築は、専用のＧＥＮＥＡＲＴ  ｋｎｏｗ−ｈｏｗ及び／又は知的財産権下のライブラリ作製用技術プラットフォームを使用し、ＧＥＮＥＡＲＴにより実施した。ＳＥＬを作製する際のＧＥＮＥＡＲＴの連続的順列アプローチは、企業ウェブページに概略が記載されている。
【０３５０】
テンプレートとしてｐＨＹＴ−ＴＬＬｗｔプラスミドＤＮＡを提供して、天然のＴＬＬ成熟領域（配列番号４）における全ての部位でＳＥＬを作製した。組換え型ＴＬＬタンパク質（配列番号３）中のＡｐｒＥプロ領域由来の最初の３つのアミノ酸（Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ）には変異を誘発しなかった。ＧＥＮＥＡＲＴには、標準プロトコルを利用し天然のＴＬＬ部位の全てでＳＥＬを作製するよう発注した（天然のＴＬＬ成熟タンパク質の最初のアミノ酸から付番を開始する）。ＧＥＮＥＡＲＴにより構築された２６９残基のそれぞれについての位置ライブラリには、部位当たり約１６個のアミノ酸置換が含有された。ライブラリは、記載の２６９位置にＴＬＬ変異体配列をコードする発現プラスミドを含有するよう形質転換したＢ．スブチリス（B. subtilis）細胞から構成した。ＧＥＮＥＡＲＴは、各ウェルに、グリセロールストックとして凍結させた１種の変異体の培養物を入れ、９６ウェルプレートとしてライブラリを提供した。
【０３５１】
ＴＬＬ置換変異体を含有するＢ．スブチリス（B. subtilis）形質転換体を、１０ｍｇ／Ｌテトラサイクリンを添加したトリプチケース・ソイ・ブロス（ＴＳＢ）により９６ウェルプレートで１６時間培養し、この前培養物１０μＬを、２５ｍｇ／Ｌテトラサイクリンを添加した１９０μＬのＭＢＤ培地（以下に記載）を入れたＣｏｒｎｉｎｇ  ３５９９  ＭＴＰに加えた。このプレートを、８０％湿度下、３００ｒｐｍの一定の旋回混合速度で３７℃で６０〜６５時間インキュベートした。２５００ｒｐｍで１０分間遠心沈降させて細胞を回収し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ真空システムを利用してＭｉｌｌｉｐｏｒｅマルチスクリーンフィルタープレートにより濾過した。培養上清をアッセイに使用した。培養培地（ＭＢＤ培地）は、主要な窒素源として尿素、主要な炭素源としてグルコースを富化させ、ロバストな細胞増殖のため１％ソイトンを添加したＭＯＰｓ緩衝剤系の半合成培地とした。
【０３５２】
（実施例４）
生産的な位置及び組み合わせ可能な変異
生産的な位置は、特性の改良されたコンビナトリアルな変異体を製造するのに最も有用な、これらの分子内位置として記載することができ、この位置では、少なくとも１つの変異を組み合わせることができる。組み合わせることのできる変異は、分子において、コンビナトリアルな変異体を作製するのに使用することのできるこれらの置換として記載され得る。組み合わせ可能な変異は、分子の少なくとも１つの所望の特性を改良しつつ、発現、活性、又は安定性のいずれかを大幅に低下させることのないものである。
【０３５３】
組み合わせ可能な変異は、分子の少なくとも１つの所望の特性を改良しつつ、発現、活性、又は安定性のいずれかを大幅に低下させることのないものである。ＴＬＬポリペプチドにおいて組み合わせ可能な変異は、実施例１：ＣＳ−６１布帛小片アッセイ、ｐ−ニトロフェニルエステルの加水分解、洗剤中安定性、ＬＡＳ中安定性、及び熱安定性、に記載のアッセイにより得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して決定した。
【０３５４】
組み合わせ可能な変異は、以降の基準に従って分類する：
発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．９以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．０以上のＰＩを有する変異体（第Ａ群）。
【０３５５】
発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．８以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．２以上のＰＩを有する変異体（第Ｂ群）。
【０３５６】
発現、ｐＨ  ８．２でのＣＳ−６１布帛小片活性、ｐＨ  ６又はｐＨ  ８．２下でのｐ−ニトロフェニルエステル基質に対する活性、及び洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、又は熱安定性について、親ＴＬＬに対して、最小性能指数（ＰＩ）が０．５以上であり、更には、これらの試験のうちのいずれか１つについて１．５以上のＰＩを有する変異体（第Ｃ群）。
【０３５７】
第Ａ、Ｂ、及びＣ群は、複数置換に対し許容度の異なるアミノ酸位置を更に含有する。生産的な位置を特定するため、本出願者らは各位置の置換許容度を評価し、各位置に生産性スコアを割り当てた。生産性スコアは、以降の基準を利用して、各位置の置換のうち、第Ａ、Ｂ、又はＣ群に当てはまるものの割合により割り当てた。
【０３５８】
生産的な位置は、複数の置換にある程度耐性を示し、なおかつ以降に示す通りのコンビナトリアルさに関する一群の基準を満たす位置として定義される。
【０３５９】
生産的な位置の生産性スコアを求めるための基準は次の通りのものである。
所定の位置での置換の５０％以上が第Ａ、Ｂ、又はＣ群に当てはまる場合、生産性スコア「４」が割り当てられる。これらの位置には、１、２、３、４、５、６、８、９、１３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３７、３８、３９、４６、５１、５２、５４、５８、６４、６６、６８、６９、７１、７２、７５、９０、９３、９４、１１１、１２０、１２２、１２３、１３０、１３１、１３７、１４０、１６２、１６３、１８９、２５０、２５２、及び２６４を含む。
【０３６０】
所定の位置での置換の３０％以上５０％未満が第Ａ、Ｂ、又はＣ群に当てはまる場合、生産性スコア「３」が割り当てられる。これらの位置には、１８、１９、２０、３０、３１、３２、４７、４８、４９、５０、５３、５６、６０、７３、７４、８５、８６、９１、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０５、１０８、１１５、１２５、１２７、１２８、１３２、１３３、１５１、１５９、１６４、１７９、１８３、１８７、１８８、１９０、２１６、２２３、２３２、２３７、２４４、２５１、２５４、２６３、２６７、及び２６９を含む。
【０３６１】
所定の位置での置換の１５％以上３０％未満が第Ａ、Ｂ、又はＣ群に当てはまる場合、生産性スコア「２」が割り当てられる。これらの位置には、
７、１１、１２、１５、２２、３５、４０、４２、４３、４４、４５、６１、６３、６５、６７、７６、７７、８４、８７、１１４、１１７、１１９、１２１、１３４、１３５、１３６、１４３、１５４、１５５、１５６、１５８、１６５、１６６、１６８、１７６、１８０、１９１、１９９、２００、２０２、２０９、２１１、２１４、２１７、２２１、２２４、２２５、２２８、２２９、２３１、２３３、２４８、２４９、２５３、２５５、２５６、２６５、及び２６８を含む。
【０３６２】
所定の位置での置換の１５％未満が第Ａ、Ｂ、又はＣ群に当てはまる場合、生産性スコア「１」が割り当てられる。これらの位置には、１４、１６、１７、３４、４１、５５、５７、５９、６２、７０、７９、９２、１００、１０２、１０３、１０６、１０９、１１０、１１２、１１８、１２６、１３８、１３９、１４２、１４９、１５２、１５３、１６７、１６９、１７０、１８１、１８４、１９２、１９３、１９６、１９８、２０５、２０６、２０８、２１０、２１２、２１３、２１８、２２６、２２７、２３０、２３６、２３８、２３９、２４２、２４３、２４６、２５７、２５９、２６０、２６２、及び２６６を含む。
【０３６３】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「１、２、３、及び４」に該当する生産的な位置を以降に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３６４】
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、８４、８５、８６、８７、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１４、１１５、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２５、１２６、１２７、１２８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４２、１４３、１４９、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７６、１７９、１８０、１８１、１８３、１８４、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９６、１９８、１９９、２００、２０２、２０５、２０６、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１６、２１７、２１８、２２１、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３６、２３７、２３８、２３９、２４２、２４３、２４４、２４６、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５９、２６０、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、及び２６９。
【０３６５】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「２、３、及び４」に該当する生産的な位置を以降に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３６６】
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１５、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５８、６０、６１、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、８４、８５、８６、８７、９０、９１、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０５、１０８、１１１、１１４、１１５、１１７、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２５、１２７、１２８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１４０、１４３、１５１、１５４、１５５、１５６、１５８、１５９、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６８、１７６、１７９、１８０、１８３、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９９、２００、２０２、２０９、２１１、２１４、２１６、２１７、２２１、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３１、２３２、２３３、２３７、２４４、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、及び２６９。
【０３６７】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「３及び４」に該当する生産的な位置を以降に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３６８】
１、２、３、４、５、６、８、９、１３、１８、１９、２０、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３７、３８、３９、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５６、５８、６０、６４、６６、６８、６９、７１、７２、７３、７４、７５、８５、８６、９０、９１、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０５、１０８、１１１、１１５、１２０、１２２、１２３、１２５、１２７、１２８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３７、１４０、１５１、１５９、１６２、１６３、１６４、１７９、１８３、１８７、１８８、１８９、１９０、２１６、２２３、２３２、２３７、２４４、２５０、２５１、２５２、２５４、２６３、２６４、２６７、及び２６９。
【０３６９】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「４」に該当する生産的な位置を以降に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３７０】
１、２、３、４、５、６、８、９、１３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３７、３８、３９、４６、５１、５２、５４、５８、６４、６６、６８、６９、７１、７２、７５、９０、９３、９４、１１１、１２０、１２２、１２３、１３０、１３１、１３７、１４０、１６２、１６３、１８９、２５０、２５２、及び２６４．
【０３７１】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「１、２、３、及び４」に該当する生産的な位置及び組み合わせられ得るこれらの位置の置換を以下に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３７２】
１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１４（Ａ，Ｓ，Ｖ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１６（Ｙ，Ｈ，Ｗ）；１７（Ｓ，Ｅ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３４（Ｉ，Ｐ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４１（Ｃ，Ｖ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５５（Ｆ，Ｇ，Ｗ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５７（Ｄ，Ｓ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；５９（Ｇ，Ｄ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６２（Ｄ，Ｎ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７０（Ｄ，Ｓ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；７９（Ｓ，Ａ，Ｍ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９２（Ｎ，Ａ，Ｔ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１００（Ｉ，Ｍ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０２（Ｄ，Ｈ）；１０３（Ｉ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０６（Ｇ，Ｈ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１０９（Ｇ，Ｔ）；１１０（Ｈ，Ｎ，Ｓ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１２（Ｇ，Ｆ，Ｑ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１８（Ｒ，Ｐ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２６（Ｑ，Ｉ，Ｍ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３８（Ｙ，Ｆ）；１３９（ＲＬＴ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４２（Ｆ，Ｈ，Ｙ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１４９（Ｇ，Ａ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５２（Ａ，Ｉ，Ｖ）；１５３（Ｔ，Ｓ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６７（Ｄ，Ｎ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１６９（Ｆ，Ｓ，Ｙ）；１７０（Ｓ，Ｇ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８１（Ｆ，Ｌ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８４（Ｆ，Ｗ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９２（Ｔ，Ｎ，Ｐ）；１９３（Ｌ，Ｔ）；１９６（Ｉ，Ｖ）；１９８（Ｈ，Ｇ，Ｓ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０５（Ｒ，Ｄ）；２０６（Ｌ，Ｎ）；２０８（Ｐ，Ｅ，Ｎ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１０（Ｅ，Ｓ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１２（Ｇ，Ｑ）；２１３（Ｙ，Ｓ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２１８（Ｐ，Ｔ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２６（Ｔ，Ｄ，Ｎ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３０（Ｖ，Ｗ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３６（Ｖ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２３８（Ｉ，Ｖ）；２３９（Ｅ，Ｋ）；２４２（Ｄ，Ｔ）；２４３（Ａ，Ｓ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４６（Ｇ，Ｉ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２５７（Ａ，Ｗ，Ｙ）；２５９（Ｌ，Ｗ，Ｙ）；２６０（Ｗ，Ｐ）；２６２（Ｆ，Ｄ，Ｋ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６６（Ｇ，Ｅ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）。
【０３７３】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「２、３、及び４」に該当する生産的な位置及び組み合わせられ得るこれらの位置の置換を以下に掲載する。配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく付番位置。
【０３７４】
１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７（Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１１（Ｎ，Ｈ，Ｋ，Ｖ，Ｙ）；１２（Ｌ，Ｆ，Ｈ，Ｖ，Ｗ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１５（Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｓ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２２（Ｃ，Ｈ，Ｌ，Ｍ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３５（Ｔ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４０（Ａ，Ｆ，Ｍ，Ｓ，Ｗ）；４２（Ｐ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｖ，Ｗ）；４３（Ｅ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ）；４４（Ｖ，Ｈ，Ｉ，Ｔ）；４５（Ｅ，Ｆ，Ｑ，Ｖ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６１（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｌ，Ｒ）；６３（Ｖ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６５（Ｇ，Ｌ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６７（Ｌ，Ｈ，Ｉ，Ｑ，Ｖ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；７６（Ｉ，Ｈ，Ｓ，Ｖ）；７７（Ｖ，Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｔ）；８４（Ｒ，Ｈ，Ｑ，Ｗ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８７（Ｅ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｐ，Ｖ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１４（Ｔ，Ｆ，Ｉ，Ｍ，Ｖ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１１７（Ｗ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｖ）；１１９（Ｓ，Ｄ，Ｉ，Ｑ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２１（Ａ，Ｋ，Ｑ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３４（Ｅ，Ｌ，Ｐ，Ｖ）；１３５（Ｈ，Ｆ，Ｋ，Ｔ）；１３６（Ｐ，Ｄ，Ｑ，Ｒ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１４３（Ｔ，Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｓ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５４（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｙ）；１５５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）；１５６（Ｇ，Ｆ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；１５８（Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｙ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１６５（Ｄ，Ｉ，Ｐ，Ｙ）；１６６（Ｉ，Ｄ，Ｇ，Ｗ）；１６８（Ｖ，Ｇ，Ｌ，Ｑ）；１７６（Ｖ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｗ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８０（Ａ，Ｄ，Ｋ，Ｑ，Ｔ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１９１（Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｖ）；１９９（Ｔ，Ｇ，Ｎ，Ｖ）；２００（Ｎ，Ａ，Ｐ，Ｓ）；２０２（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｖ）；２０９（Ｒ，Ｈ，Ｓ，Ｔ）；２１１（Ｆ，Ｉ，Ｒ，Ｔ，Ｗ）；２１４（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｍ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２１７（Ｓ，Ｈ，Ｋ，Ｖ）；２２１（Ｗ，Ｆ，Ｇ，Ｙ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２２４（Ｓ，Ａ，Ｆ，Ｐ）；２２５（Ｇ，Ｃ，Ｅ，Ｋ，Ｒ）；２２７（Ｌ，Ｃ，Ｈ，Ｍ）；２２８（Ｖ，Ａ，Ｅ，Ｒ）；２２９（Ｐ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ）；２３１（Ｔ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｍ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３３（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｑ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２４８（Ｎ，Ｄ，Ｌ，Ｙ）；２４９（Ｑ，Ｅ，Ｇ，Ｔ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５３（Ｐ，Ｆ，Ｈ，Ｎ，Ｒ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５５（Ｉ，Ｆ，Ｌ，Ｗ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６５（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；２６８（Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｎ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）。
【０３７５】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「３及び４」に該当する生産的な位置、及び組み合わせられ得るこれらの位置の置換を以下に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３７６】
１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｗ）；１９（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２０（Ａ，Ｇ，Ｉ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３０（Ａ，Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；３１（Ｇ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｖ）；３２（Ｔ，Ａ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；４７（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）；４８（Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｐ，Ｑ）；４９（Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｖ，Ｗ）；５０（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｒ，Ｓ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５３（Ｙ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５６（Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６０（Ｖ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｙ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７３（Ｎ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｒ，Ｓ）；７４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｎ，Ｑ，Ｓ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８５（Ｓ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；８６（Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９１（Ｇ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｒ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；９５（Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；９６（Ｄ，Ａ，Ｋ，Ｐ，Ｒ，Ｖ）；９７（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｍ，Ｑ，Ｔ）；９８（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｑ）；９９（Ｅ，Ｄ，Ｋ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１０１（Ｎ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｙ）；１０５（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｐ，Ｗ）；１０８（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｙ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１１５（Ｓ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１２５（Ｒ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｙ）；１２７（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｒ，Ｔ）；１２８（Ｖ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３２（Ｖ，Ｃ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１３３（Ｒ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｖ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１５１（Ｌ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１５９（Ｌ，Ｅ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１６４（Ｙ，Ｄ，Ｎ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１７９（Ｒ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｑ，Ｖ）；１８３（Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；１８７（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；１８８（Ｑ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｒ，Ｔ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；１９０（Ｇ，Ｄ，Ｈ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；２１６（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｎ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）；２２３（Ｋ，Ａ，Ｈ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；２３２（Ｒ，Ｃ，Ｄ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ，Ｗ）；２３７（Ｋ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２４４（Ｔ，Ａ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｓ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５１（Ｎ，Ｄ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；２５４（Ｄ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｔ）；２５６（Ｐ，Ａ，Ｄ，Ｓ，Ｔ）；２６３（Ｇ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｖ）；２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２６７（Ｔ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｗ）；及び２６９（Ｌ，Ｄ，Ｆ，Ｍ，Ｑ，Ｖ，Ｗ）。
【０３７７】
ＴＬＬにおいて、前出の生産性スコア「４」に該当する生産的な位置、及び組み合わせられ得るこれらの位置の置換を以下に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３７８】
１（Ｅ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｎ，ＰＱ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２（Ｖ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｔ）；３（Ｓ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｙ）；４（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；５（Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；８（Ｎ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；９（Ｑ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；１３（Ｆ，Ａ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２３（Ｇ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２４（Ｋ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２５（Ｎ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；２６（Ｎ，Ｃ，Ｇ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；２７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；２８（Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；２９（Ｐ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３３（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｓ）；３７（Ｔ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｗ，Ｙ）；３８（Ｇ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＮＴ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；３９（Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｐ，Ｑ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；４６（Ｋ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｌ，Ｍ，Ｖ，Ｗ）；５１（Ｆ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；５２（Ｌ，Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｍ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；５４（Ｓ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；５８（Ｓ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｑ，Ｒ，Ｗ）；６４（Ｔ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｒ，Ｖ，Ｙ）；６６（Ｆ，Ａ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，ＶＷ，Ｙ）；６８（Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；６９（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；７１（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；７２（Ｔ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｙ）；７５（Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９０（Ｉ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｎ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｙ）；９３（Ｌ，Ｄ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｖ，Ｗ）；９４（Ｎ，Ｄ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）；１１１（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｌ，Ｑ，Ｔ，Ｖ，Ｗ）；１２０（Ｖ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１２２（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｈ，Ｉ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｙ）；１２３（Ｔ，Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｗ）；１３０（Ｄ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｑ，Ｒ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１３１（Ａ，Ｃ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ，Ｙ）；１３７（Ｄ，Ａ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｖ，Ｗ，Ｙ）；１４０（Ｖ，Ｃ，Ｅ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｔ）；１６２（Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｙ）；１６３（Ｇ，Ａ，Ｆ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｗ，Ｙ）；１８９（Ｔ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｖ）；２５０（Ｐ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｋ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）；２５２（Ｉ，Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｌ，Ｎ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｗ）；及び２６４（Ｌ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ）。
【０３７９】
以降の試験において、ＴＬＬの生産的な位置における追加の置換を試験したところ、組み合わせ可能性が認められた。これらの位置において組み合わせ可能である追加の置換を以下に掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３８０】
１１（Ａ，Ｅ，Ｉ）、２３（Ａ）、２４（Ｑ，Ｓ）、２７（Ｋ，Ｌ）、２９（Ｎ）、３０（Ｅ，Ｇ，Ｉ，Ｓ，Ｙ）、３１（Ｔ）、３３（Ｃ，Ｉ，Ｐ，Ｔ，Ｖ）、４５（Ａ，Ｇ，Ｓ，Ｔ）、４８（Ｎ，Ｒ，Ｔ，Ｖ）、４９（Ｃ，Ｙ）、５０（Ｍ）、５１（Ｈ，Ｖ）、５６（Ａ，Ｍ，Ｎ，Ｓ）、５８（Ａ，Ｆ）、７１（Ｃ，Ｆ，Ｐ）、７３（Ｑ，Ｔ）、７４（Ｉ，Ｍ，Ｔ，Ｗ）、７５（Ｋ）、９１（Ｋ，Ｎ，Ｙ）、９４（Ａ，Ｈ）、１０１（Ａ）、１０８（Ａ）、１１１（Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｓ，Ｙ）、１２２（Ｋ，Ｌ，Ｑ）、１２８（Ｔ，Ｖ）、１３０（Ｋ，Ｍ）、１３３（Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｗ）、１３５（Ａ，Ｄ，Ｍ，Ｎ，Ｙ）、１４０（Ｙ）、１５９（Ｇ）、１６３（Ｑ）、１８３（Ｃ）、１８７（Ｃ，Ｉ）、１８８（Ａ，Ｍ，Ｗ）、１９０（Ｗ）、２２７（Ａ，Ｉ，Ｓ）、２３３（Ｆ，Ｉ，Ｖ）、２５１（Ｖ）、２５２（Ｍ，Ｖ）。
【０３８１】
（実施例５）
組み合わせ可能な変異及び安定性スコア
実施例３に示す通り、実施例１に記載のアッセイ：ＣＳ−６１布帛小片アッセイ、ｐ−ニトロフェニルエステルの加水分解（活性）、洗剤安定性、ＬＡＳ安定性、及び熱安定性アッセイ、並びにタンパク質定量（発現）により得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して、ＴＬＬにおいて組み合わせ可能な変異を決定した。実施例３に記載の基準により、第Ａ、Ｂ又はＣ群に対し、組み合わせ可能な変異を割り当てた。これらの置換には、置換が明らかである場合の各群（Ａ、Ｂ、Ｃ）に基づき更に適性スコアを割り当てた。適性スコアが高くなる程、コンビナトリアルな変異を作製する際の使用に適することを意味する。適性スコアを表５．１に定義する。上記基準に該当する、ＴＬＬの各置換の適性スコアを表５．２に報告する。
【０３８２】
表５．１は、組み合わせ可能な変異及び生産的な位置からなる群に関連するものとして各適性スコアを定義する。
【０３８３】
【表２２】
2016506237.tif 000037
【０３８４】
表５．２は、ＴＬＬにおける各置換の適性スコアを特定する。位置は、配列番号３に掲載される成熟ＴＬＬに基づき付番される。
【０３８５】
【表２３−１】
2016506237.tif 000038
【０３８６】
【表２３−２】
2016506237.tif 000039
【０３８７】
【表２３−３】
2016506237.tif 000040
【０３８８】
【表２３−４】
2016506237.tif 000041
【０３８９】
（実施例６）
表面改質
ＴＬＬの電荷又は疎水性を変更するなど、望ましい表面改質に寄与する位置及び置換を表５．１に掲載する。実施例３に記載の通りの生産的な位置についての基準を利用し、組み合わせ可能な置換を全て含有する生産的な位置を決定した。データを更に分析して、疎水性又は電荷を変化させ、かつ重要な特性は全て保持させる置換を決定した。各置換の疎水性は、Ｗｈｉｔｅ及びＷｉｍｌｅｙの方法を利用して決定した（Ｗｈｉｔｅ，Ｓ．Ｈ．ａｎｄ  Ｗｉｍｌｅｙ，Ｗ．Ｃ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｔ．２８：３１９〜６５，（１９９９））。ＴＬＬにおける望ましい表面改質を示す組み合わせ可能な位置及び置換の部分群を表６．１に示す。
【０３９０】
表６．１には、望ましい表面改質を示す置換を掲載する。位置の付番は、配列番号３に掲載する成熟ＴＬＬに基づく。
【０３９１】
【表２４】
2016506237.tif 000042
【０３９２】
（実施例７）
洗剤性能に基づき組み合わせ可能な変異
ＣＳ−６１布帛小片アッセイ（投与量の半量、投与量の半量＋補助剤、又は投与量の全量のいずれかにより実施）、洗剤安定性、及びタンパク質定量（発現）から得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して、ＴＬＬにおいて追加して組み合わせ可能な変異を特定した。表７．１は、投与量の半量、投与量の半量＋補助剤、又は投与量の全量で、親ＴＬＬに対して、発現については０．８以上、洗剤安定性については０．８以上、及び洗剤性能については１．１以上の性能指数（ＰＩ）を示す組み合わせ可能な位置及び置換を特定する。位置は、配列番号３に掲載される成熟ＴＬＬに基づき付番される。
【０３９３】
【表２５】
2016506237.tif 000043
【０３９４】
【表２６】
2016506237.tif 000044
【０３９５】
（実施例８）
安定性に基づき組み合わせ可能な変異
熱安定性、洗剤安定性、又はＬＡＳ安定性アッセイ、ｐＨ  ８下でのｐＮＰＯ基質の加水分解、及びタンパク質定量（発現）、から得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して、ＴＬＬにおいて追加して組み合わせ可能な変異を特定した。表８．１は、親ＴＬＬに対し、発現に関し０．８以上、ｐＨ  ８でのｐＮＰＯ基質の加水分解に関し０．８以上、並びに熱安定性、洗剤若しくはＬＡＳ安定性に関し１．１以上の性能指数（ＰＩ）を示す、組み合わせ可能な位置及び置換を特定する。位置は、配列番号３に掲載される成熟ＴＬＬに基づき付番される。
【０３９６】
【表２７】
2016506237.tif 000045
【０３９７】
【表２８】
2016506237.tif 000046
【０３９８】
（実施例９）
エステル加水分解に基づき組み合わせ可能な変異
ｐＨ  ８でのｐＮＰＢ、ｐＮＰＯ及びｐＮＰＰ基質の加水分解、熱安定性、並びにタンパク質定量（発現）により得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して、ＴＬＬにおいて追加して組み合わせ可能な変異を特定した。表９．１は、親ＴＬＬに対し、発現に関し０．８以上、熱安定性に関し０．８以上、及びｐＮＰＢ加水分解に関し１．１以上、又はｐＮＰＯ加水分解に関し１．１以上、又はｐＮＰＰ加水分解に関し１．１以上、又はｐＮＰＢ及びｐＮＰＯ加水分解に関し１．１以上、又はｐＮＰＯ及びｐＮＰＰ加水分解に関し１．１以上、あるいはｐＮＰＢ、ｐＮＰＯ、及びｐＮＰＰ加水分解に関し１．１以上の性能指数（ＰＩ）を示す、組み合わせ可能な位置及び置換を特定する。位置は、配列番号３に掲載される成熟ＴＬＬに基づき付番される。
【０３９９】
【表２９】
2016506237.tif 000047
【０４００】
【表３０−１】
2016506237.tif 000048
【０４０１】
【表３０−２】
2016506237.tif 000049
【０４０２】
（実施例１０）
Ｃ４：Ｃ１６基質の加水分解比を変更することによる組み合わせ可能な変異
ｐＨ  ８でのｐＮＰＢ、及びｐＮＰＰ基質の加水分解、熱安定性、並びにタンパク質定量（発現）により得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して、ＴＬＬにおいて追加して組み合わせ可能な変異を特定した。表１０．１は、親ＴＬＬに対し、発現に関し０．８以上、熱安定性に関し０．８以上、並びにｐＮＰＢ加水分解に関し０．８以下及びｐＮＰＰ加水分解に関し１以上の性能指数（ＰＩ）を示す、組み合わせ可能な位置及び置換を特定する。位置は、配列番号３に掲載される成熟ＴＬＬに基づき付番される。
【０４０３】
【表３１】
2016506237.tif 000050
【０４０４】
【表３２】
2016506237.tif 000051
【０４０５】
（実施例１１）
低ｐＨ下での加水分解をもとに組み合わせ可能な変異
ｐＨ  ６でのｐＮＰＯの加水分解、熱安定性、及びタンパク質定量（発現）により得られる性能指数（ＰＩ）値を利用して、ＴＬＬにおいて追加して組み合わせ可能な変異を特定した。表１１．１は、親ＴＬＬに対し、発現に関し０．８以上、熱安定性に関し０．８以上、及びｐＨ  ６でのｐＮＰＯ加水分解に関し１．１以上の性能指数（ＰＩ）を示す、組み合わせ可能な位置及び置換を特定する。位置は、配列番号３に掲載される成熟ＴＬＬに基づき付番される。
【０４０６】
【表３３】
2016506237.tif 000052
【０４０７】
【表３４】
2016506237.tif 000053
【０４０８】
（実施例１２）
異なる補助剤濃度下でのリパーゼ活性試験
異なる濃度の４種の補助化合物の存在下で、親ＴＬＬ酵素のエステラーゼ活性を決定した（表１２．１）。臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）、ＣＭＣの半分、又はＣＭＣの１／４に相当する濃度で、各補助剤を０．０５Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ  ８．２）に混合し、硬度０．１０ｇ／Ｌ（６ｇｐｇ）となるようミネラルを加えた。ｐＮＰオクタン酸塩の加水分解速度は、上記実施例１Ｂの通りに測定した。４種の補助剤化合物の全てに関し、親ＴＬＬ酵素のエステラーゼ活性は、完全濃度又はＣＭＣの１／２濃度の場合と比較してＣＭＣの１／４濃度のときに著しく高くなる（図１）。
【０４０９】
【表３５】
2016506237.tif 000054
【図１】
2016506237.tif 000055
【図２】
2016506237.tif 000056
【配列表】
2016506237000001.app
【国際調査報告】
2016506237.tif 000057
2016506237.tif 000058
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