(57)【要約】本願は、ＢＴＫを阻害する、一般式（Ｉ）に係る化合物について開示する（式中、全ての変数は、本明細書に記載する通り定義される）。本明細書に開示する化合物は、ＢＴＫの活性を調節し、そして、過剰のＢＴＫ活性に関係する疾患を処置するために有用である。該化合物は、更に、関節リウマチ等の異常なＢ細胞増殖に関係する炎症性疾患及び自己免疫疾患を処置するために有用である。また、式（Ｉ）で表される化合物と、少なくとも１つの担体、希釈剤、又は賦形剤とを含有する組成物についても開示する。
2016513621.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化２６】
2016513621.tif 000031
（式中、
Ａ１は、Ｈ又はＡ１’であり；
Ａ１’は、低級アルキル又はフェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されており；
各Ａ１”は、独立して、ハロ又は低級アルキルであり；
Ａ２は、Ｈ又はＡ２’であり；
Ａ２’は、ヘテロアリールであり、場合により低級アルキルで置換されており；
Ｘ１は、−ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）であるか又は存在せず；
Ｘ２は、−ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）であるか又は存在せず；
Ｘ３は、低級アルキレンであるか又は存在せず；そして、
Ｘ４は、−ＮＨであるか又は存在しない）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｘ１が、−ＮＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ２が、−Ｃ（＝Ｏ）である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ３が、存在しない、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
Ａ１が、フェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されている、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ４が、存在しない、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
Ａ２が、Ｈである、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ１が、−Ｃ（＝Ｏ）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ２が、−ＮＨである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ３が、メチレンである、請求項８又は９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａ１が、フェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されている、請求項８〜１０のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１２】
Ａ２が、Ｈである、請求項８〜１１のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘ４が、存在しない、請求項８〜１２のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘ４が、−ＮＨであり、Ａ２が、ピラゾリルであり、そして、Ａ２’が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）シクロヘキシル］ベンズアミド；
Ｎ−［（３−クロロフェニル）メチル］−３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）シクロヘキサン−１−カルボキサミド；
６−Ｎ−シクロヘキシル−２−Ｎ−（１−メチルピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン；
６−Ｎ−（３−メチルシクロヘキシル）−２−Ｎ−（１−メチルピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン；及び
４−tert−ブチル−Ｎ−［３−［［２−［（１−メチルピラゾール−４−イル）アミノ］−９Ｈ−プリン−６−イル］アミノ］シクロヘキシル］ベンズアミド
からなる群より選択される、請求項１〜１４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１６】
４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド；
３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸３−クロロ−ベンジルアミド、
Ｎ＊６＊−シクロヘキシル−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン；
Ｎ＊６＊−（３−メチル−シクロヘキシル）−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン；及び
４−tert−ブチル−Ｎ−｛３−［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−ベンズアミド
からなる群より選択される、請求項１〜１４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１７】
炎症及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１８】
炎症状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１９】
関節リウマチを処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２０】
喘息を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２１】
少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項２２】
炎症及び／又は自己免疫状態の処置における、請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２３】
炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための医薬を調製するための、請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２４】
炎症及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２５】
本明細書に記載される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＢＴＫを阻害し、かつ、異常なＢ細胞活性化によって引き起こされる自己免疫及び炎症性疾患の処置に有用である、新規化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは、ヒトの酵素の最も大きなファミリーの１つを構成し、そして、リン酸基をタンパク質に付加することによって、多くの異なるシグナル伝達過程を調節する（T. Hunter, Cell 1987 50:823-829）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール部分でタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の成長、移動及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫及び炎症性疾患を含む、様々なヒトの疾患に関与している。プロテインキナーゼは、細胞のシグナル伝達の重要な調節因子の１つであるので、これらは、小分子キナーゼ阻害剤で細胞機能を調節するためのターゲットを提供し、そのために良好な薬剤設計ターゲットとなる。キナーゼ媒介疾患過程の処置に加えて、選択的かつ効果的なキナーゼ活性阻害剤もまた、細胞のシグナル伝達過程の調査及び治療上関心の高いその他の細胞ターゲットの同定に有用である。
【０００３】
Ｂ細胞が、自己免疫及び／又は炎症性疾患の病因において重要な役割を果たしているという確かな証拠がある。リツキサン（Rituxan）等のＢ細胞を枯渇させるタンパク質ベースの治療法は、関節リウマチ等の自己抗体によって生じる炎症性疾患に対して効果的である（Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477）。したがって、Ｂ細胞活性化においてある役割を果たすプロテインキナーゼの阻害剤は、自己抗体産生等のＢ細胞媒介疾患病理に対する有用な治療法であるはずである。
【０００４】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介するシグナル伝達は、成熟した抗体産生細胞への増殖及び分化を含む、広範なＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性に対する重要な調節点であり、そして、異常なシグナル伝達は、無秩序なＢ細胞の増殖及び病原性自己抗体の形成を引き起こし、多数の自己免疫及び／又は炎症性疾患を招く恐れがある。ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、膜近位のＢＣＲのすぐ下流にある、非ＢＣＲ関連キナーゼである。ＢＴＫの欠如は、ＢＣＲシグナル伝達を遮断することが知られており、したがって、ＢＴＫの阻害は、Ｂ細胞媒介疾患過程を遮断する有用な治療アプローチでありうる。
【０００５】
ＢＴＫは、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、初期Ｂ細胞発生並びに成熟Ｂ細胞活性化及び生存の重要な調節因子であることが知られている（Khan et al. Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611）。ヒトのＢＴＫの突然変異は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）状態を引き起こす（Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431及びLindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200に概説されている）。これらの患者は免疫不全状態であり、そして、Ｂ細胞の成熟障害、免疫グロブリン及び末梢Ｂ細胞レベルの減少、Ｔ細胞非依存性免疫応答の低下並びにＢＣＲ刺激後のカルシウム動員の減衰を示す。
【０００６】
自己免疫及び炎症性疾患にＢＴＫがある役割を果たしているという証拠もまた、ＢＴＫ欠損マウスモデルによって提供された。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルにおいて、ＢＴＫ欠損マウスは、疾患進行の著しい改善を示す。さらに、ＢＴＫ欠損マウスは、コラーゲン誘発関節炎に耐性を示す（Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459）。選択的ＢＴＫ阻害剤は、マウスの関節炎モデルにおいて、用量依存的効果を示すことが実証された（Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61）。
【０００７】
ＢＴＫはまた、疾患過程に関与し得るＢ細胞以外の細胞によっても発現される。例えば、ＢＴＫは、肥満細胞によって発現され、そして、ＢＴＫ欠損骨髄由来の肥満細胞は、抗原誘発脱顆粒障害を示す（Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261）。これは、ＢＴＫがアレルギー及び喘息等の病的な肥満細胞応答を処置するために有用でありうることを示す。また、ＢＴＫ活性が欠如したＸＬＡ患者由来の単球は、刺激後にＴＮＦα産生の減少を示す（Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003）。したがって、ＴＮＦα媒介炎症は、小分子ＢＴＫ阻害剤によって調節されうる。また、ＢＴＫは、アポトーシスにおいてある役割を果たすことが報告されており（Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49）、したがって、ＢＴＫ阻害剤は、ある種のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用でありうる（Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837）。
【０００８】
発明の概要
本願は、本明細書において以下に記載する通り、式Ｉで表されるＢＴＫ阻害剤化合物、その使用方法を提供する。
【０００９】
本願は、式Ｉ：
【化１】
2016513621.tif 000003
（式中、
Ａ１は、Ｈ又はＡ１’であり；
Ａ１’は、低級アルキル又はフェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されており；
各Ａ１”は、独立して、ハロ又は低級アルキルであり；
Ａ２は、Ｈ又はＡ２’であり；
Ａ２’は、ヘテロアリールであり、場合により低級アルキルで置換されており；
Ｘ１は、−ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）であるか又は存在せず；
Ｘ２は、−ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）であるか又は存在せず；
Ｘ３は、低級アルキレンであるか又は存在せず；そして、
Ｘ４は、−ＮＨであるか又は存在しない）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００１０】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本願は、少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含む、医薬組成物を提供する。
【００１２】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において使用される表現「一つ（"a"又は"an"）」の実体は、一つ以上のその実体を指す；例えば、化合物（a compound）は、一つ以上の化合物又は少なくとも一つの化合物を指す。そのため、用語「a」（又は「an」）、「一つ以上」、及び「少なくとも一つ」は、本明細書では、互換的に使用されうる。
【００１３】
表現「本明細書上記に定義されるような」は、発明の概要又は最も広い特許請求の範囲に与えられるような各基についての最も広い定義を指す。下記に与えられる全てのその他の実施態様において、各実施態様に存在することができ、かつ明確に定義されていない置換基は、発明の概要に与えられる最も広い定義を保持する。
【００１４】
本明細書において使用されるように、特許請求の範囲における移行句であるか本文であるかを問わず、用語「含む（comprise(s)）」及び「含む（comprising）」は、オープンエンド（制限のない）の意味を有すると解釈されるべきである。すなわち、これらの用語は、表現「少なくとも〜を有する（having at least）」又は「少なくとも〜を含む（including at least）」と同意的に解釈されるべきである。方法に関連して使用する場合、用語「含む（comprising）」は、方法が少なくとも記載された工程を含むが、さらなる工程を含みうることを意味する。化合物又は組成物に関連して使用する場合、用語「含む（comprising）」は、化合物又は組成物が、少なくとも記載された特徴又は成分を含むが、さらなる特徴又は成分も含みうることを意味する。
【００１５】
本明細書において使用されるように、特に具体的に示さない限り、用語「又は」は、「及び／又は」の「包含的」意味で使用され、「いずれか／又は」の「排他的」意味では使用されない。
【００１６】
用語「独立して」は、本明細書において、同一の化合物内で、同じ又は異なる定義を有する変数の存在又は不在に関わらず、変数が、任意の一つの場合に適用されることを示すために使用される。したがって、Ｒ"が２回出現し、それが「独立して炭素又は窒素」と定義される化合物においては、両方のＲ"が炭素であることも、両方のＲ"が窒素であることも、又は一方のＲ"が炭素であり、他方が窒素であることもありうる。
【００１７】
任意の変数が本発明中で使用され又は請求されている化合物を表し、そして記載している任意の部分又は式中に１回より多く出現する場合、出現ごとのその定義は、すべての他の出現でのその定義とは独立している。同じく、置換基及び／又は変数の組合せは、そのような化合物が安定した化合物に至る場合に限り許容される。
【００１８】
結合の終端部の記号「＊」又は結合を貫いて描かれる「------」は、各々、官能基又は他の化学部分が、その一部である分子の残りに結合する点を指す。したがって、例えば：
【化２】
2016513621.tif 000004
【００１９】
環系中に描かれる結合（明確な頂点で連結されたものと対照をなす）は、結合が適切な環原子のいずれかに結合されうることを示す。
【００２０】
本明細書において使用される用語「場合による」又は「場合により」は、続いて記載される事象又は状況が起こってもよいが起こる必要もなく、その記載は、その事象又は状況が起こる場合と起こらない場合とを含むことを意味する。例えば「場合により置換されている」は、場合により置換される部分が、水素原子又は置換基を組み込みうることを意味する。
【００２１】
表現「場合による結合」は、結合が存在してもよいし又はしなくてもよく、そしてその記載は単結合、二重結合又は三重結合を含むことを意味する。置換基が「結合」又は「存在しない」ことが示される場合、置換基に結合される原子は、その後直接連結される。
【００２２】
用語「約」は本明細書において、およそ、ほぼ、おおまかに、あたりを意味するために使用される。用語「約」が数値範囲との組み合わせで使用される場合、それは記載される数値の上及び下に境界を拡張することによってその範囲を修正する。概して、用語「約」は本明細書において、数値を、記載された値の上及び下に２０％の変動で修正するために使用される。
【００２３】
式Ｉで表される特定の化合物は、互変異性を示し得る。互変異性化合物は、２種以上の相互転換可能な種として存在できる。プロトン移動（prototropic）互変異性体は、二つの原子間における共有結合した水素原子の移動から生じる。互変異性体は、一般的に、平衡状態で存在し、個々の互変異性体を単離しようとすると、通例、化合物の混合物と変わらない化学的及び物理的性質を有する混合物を生成する。平衡の位置は、分子内の化学的特徴に依存する。例えば、アセトアルデヒド等の多くの脂肪族アルデヒド及びケトンでは、ケト型が優位を占める一方、フェノールでは、エノール型が優位を占める。一般的なプロトン移動互変異性体は、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）及びアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体を含む。後者二つはヘテロアリール及び複素環において特に一般的であり、本発明は本化合物のすべての互変異性型を包含する。
【００２４】
本明細書において使用される技術及び科学用語は、特に定義されない限り、本発明が関連する技術における当業者によって、一般に理解される意味を有する。当業者に知られた様々な方法論及び材料を、本明細書において引用する。Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001) を含む標準引例は、薬理学の一般的原理を説明するのに役立つ。当業者に知られた任意の適切な材料及び／又は方法を、本発明を実施する際に用いることができる。しかしながら、好ましい材料及び方法が記載されている。以下の記載及び実施例で引用される材料、試薬等は、特に指示のない限り、商業的供給源より入手可能である。
【００２５】
本明細書に記載される定義は、例えば、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」等の化学的に関連する組み合わせを形成するために追加される。用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語の後に接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名前を挙げた基から選択される１〜２個の置換基により置換されている、上記で定義されるアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、１〜２個のフェニル置換基を有するアルキル基を指し、したがって、ベンジル、フェニルエチル、及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２個のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」は、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピル等を含む。したがって、本明細書において使用されるように、用語「ヒドロキシアルキル」は、以下に定義されるヘテロアルキル基のサブセットを定義するために使用される。用語−（ar）アルキルは、非置換アルキル又はアラルキル基を指す。用語（ヘテロ）アリール又は（het）アリールは、アリール又はヘテロアリール基を指す。
【００２６】
本明細書において使用されるように、用語「スピロシクロアルキル」は、例えば、スピロ［３．３］ヘプタンのようにスピロ環式のシクロアルキル基を意味する。本明細書において使用されるように、用語スピロヘテロシクロアルキルは、例えば、２，６−ジアザスピロ〔３．３〕ヘプタンのようにスピロ環式のヘテロシクロアルキルを意味する。
【００２７】
本明細書において使用される用語「アシル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒで表される基を示し、式中、Ｒは、水素又は本明細書において定義される低級アルキルである。本明細書において使用される用語「アルキルカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒで表される基を示し、式中、Ｒは、本明細書において定義されるアルキルである。用語Ｃ１−６アシルは、６個の炭素原子を含む基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。本明細書において使用される用語「アリールカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒで表される基（式中、Ｒは、アリール基である）を意味し；本明細書において使用される用語「ベンゾイル」は、「アリールカルボニル」基（ここでＲは、フェニルである）を意味する。
【００２８】
本明細書において使用される用語「エステル」は、式‐Ｃ（＝Ｏ）ＯＲで表される基を示し、式中、Ｒは、本明細書において定義される低級アルキルである。
【００２９】
本明細書において使用される用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を含む、非分岐又は分岐鎖の飽和一価の炭化水素残基を示す。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐鎖の炭化水素残基を示す。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルキル」は、１〜１０個の炭素からなるアルキルを指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチル（を含む低級アルキル基）、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びオクチルを含むが、これらに限定されない。
【００３０】
用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語の後に接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名前を挙げた基から選択される１〜２個の置換基により置換されている、上記で定義されるアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、基Ｒ’Ｒ”−（ここで、フェニルアルキル部分の結合点はアルキレン基上であるという理解の下で、本明細書で定義されるように、Ｒ’はフェニル基であり、Ｒ”はアルキレン基である）を示す。アリールアルキル基の例は、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルを含むが、これらに限定されない。用語「アリールアルキル」又は「アラルキル」は、Ｒ’がアリール基であることを除き、同様に解釈される。用語「（het）アリールアルキル」又は「（het）アラルキル」は、Ｒ’が、場合によりアリール又はヘテロアリール基であることを除き、同様に解釈される。
【００３１】
用語「ハロアルキル」又は「ハロ低級アルキル」又は「低級ハロアルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖又は分枝鎖炭化水素残基を指し、ここで、１個以上の炭素原子は１個以上のハロゲン原子で置換される。
【００３２】
本明細書中で使用される用語「アルキレン」又は「アルキレニル」は、特に示さない限り、１〜１０個の炭素原子の二価の飽和直鎖炭化水素基（例えば、（ＣＨ２）ｎ）、又は２〜１０個の炭素原子の分岐飽和二価炭化水素基（例えば、−ＣＨＭｅ−又は−ＣＨ２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ２−）を示す。メチレンの場合を除いて、アルキレン基の開いた原子価は、同じ原子には結合しない。アルキレン基の例は、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１，１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンを含むが、これらに限定されない。
【００３３】
本明細書において使用される用語「アルコキシ」は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（これらの異性体を含む）等の、−Ｏ−アルキル基（ここで、アルキルは、上記で定義されるとおりである）を意味する。本明細書で使用される「低級アルコキシ」は、先に定義される「低級アルキル」基を有するアルコキシ基を示す。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルコキシ」は、アルキルが、Ｃ１−１０である−Ｏ−アルキルを指す。
【００３４】
用語「ＰＣｙ３」は、３つの環状部分で三置換基されたホスフィンを指す。
【００３５】
用語「ハロアルコキシ」又は「ハロ低級アルコキシ」又は「低級ハロアルコキシ」は、低級アルコキシ基を指し、ここで、１個以上の炭素原子は、１個以上のハロゲン原子で置換される。
【００３６】
本明細書において使用される用語「ヒドロキシアルキル」は、異なる炭素原子上の１〜３個の水素原子が水酸基により置き換えられている、本明細書において定義されるアルキル基を示す。
【００３７】
本明細書において使用される用語「アルキルスルホニル」及び「アリールスルホニル」は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義される通りである）で表される基を指す。本明細書で使用される用語「ヘテロアルキルスルホニル」は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、本明細書に定義される「ヘテロアルキル」である）で表される基を示す。
【００３８】
本明細書において使用される用語「アルキルスルホニルアミノ」及び「アリールスルホニルアミノ」は、式−ＮＲ’Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、Ｒ’は、水素又はＣ１−３アルキルであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義される通りである）で表される基を指す。
【００３９】
本明細書において使用される用語「シクロアルキル」は、３〜８個の炭素原子を含む飽和炭素環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチルを指す。本明細書において使用される「Ｃ３−７シクロアルキル」は、炭素環が３〜７個の炭素原子からなるシクロアルキルを指す。
【００４０】
本明細書において使用される用語「カルボキシ−アルキル」は、ヘテロアルキル基の結合点が炭素原子を介するという理解の下で、１個の水素原子がカルボキシルで置換されているアルキル部分を指す。用語「カルボキシ」又は「カルボキシル」は、−ＣＯ２Ｈ部分を指す。
【００４１】
本明細書において使用される用語「ヘテロアリール」又は「複素環式芳香族」は、ヘテロアリール基の結合点が芳香環又は部分不飽和環上に存在するという理解の下で、環１つ当たり４〜８個の原子を含み、１個以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子が組み込まれ、残りの環原子が炭素である少なくとも１つの芳香環又は部分不飽和環を有する、５〜１２個の環原子の単環式又は二環式の基を意味する。当業者に周知である通り、ヘテロアリール環は、全てが炭素である対応物よりも低い芳香族特性を有する。したがって、本発明の目的のために、ヘテロアリール基は、ある程度の芳香族特性しか必要としていない。ヘテロアリール部分の例は、５〜６個の環原子及び１〜３個のヘテロ原子を有する単環式芳香族複素環を含み、例えば、場合により、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルボニルアミノ、及びアリールカルボニルアミノから選択される１つ以上、好ましくは１又は２つの置換基で置換されていてもよい、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサゾリル、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール、及びオキサジアキソリン（oxadiaxoline）を含むが、これらに限定されない。二環式部分の例は、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，６］ナフチリジニル、及びベンズイソチアゾールを含むが、これらに限定されない。二環式部分は、いずれかの環において場合により置換されていてもよいが、結合点は、ヘテロ原子を含有する環上に存在する。
【００４２】
本明細書において使用される用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、又は「複素環」は、環１つ当たり３〜８個の原子を有し、１個以上の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）０−２から選択される）が組み込まれている１つ以上の環、好ましくは１〜２個の環（スピロ環系を含む）からなり、そして、特に示さない限り、場合により、独立して、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びこれらのイオン形態から選択される１つ以上、好ましくは１又は２つの置換基で置換されていてもよい、一価飽和環式基を示す。複素環式基の例は、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル、及びイミダゾリニル、並びにこれらのイオン形態を含むが、これらに限定されない。また、例は、例えば、３，８−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタン、又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン等の二環式であってもよい。
【００４３】
ＢＴＫの阻害剤
本願は、式Ｉ：
【化３】
2016513621.tif 000005
（式中、
Ａ１は、Ｈ又はＡ１’であり；
Ａ１’は、低級アルキル又はフェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されており；
各Ａ１”は、独立して、ハロ又は低級アルキルであり；
Ａ２は、Ｈ又はＡ２’であり；
Ａ２’は、ヘテロアリールであり、場合により低級アルキルで置換されており；
Ｘ１は、−ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）であるか又は存在せず；
Ｘ２は、−ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）であるか又は存在せず；
Ｘ３は、低級アルキレンであるか又は存在せず；そして、
Ｘ４は、−ＮＨであるか又は存在しない）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００４４】
本願は、Ｘ１が、−ＮＨである、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００４５】
本願は、Ｘ２が、−Ｃ（＝Ｏ）である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４６】
本願は、Ｘ３が、存在しない、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４７】
本願は、Ａ１が、フェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されている、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４８】
本願は、Ｘ４が、存在しない、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４９】
本願は、Ａ２が、Ｈである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５０】
本願は、Ｘ１が、−Ｃ（＝Ｏ）である、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００５１】
本願は、Ｘ２が、−ＮＨである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５２】
本願は、Ｘ３が、メチレンである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５３】
本願は、Ａ１が、フェニルであり、場合により１つ以上のＡ１”で置換されている、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５４】
本願は、Ａ２が、Ｈである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５５】
本願は、Ｘ４が、存在しない、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５６】
本願は、Ｘ４が、−ＮＨであり、Ａ２が、ピラゾリルであり、そして、Ａ２’が、メチルである、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００５７】
本願は、以下からなる群より選択される、式Ｉで表される化合物を提供する：
４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）シクロヘキシル］ベンズアミド；
Ｎ−［（３−クロロフェニル）メチル］−３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）シクロヘキサン−１−カルボキサミド；
６−Ｎ−シクロヘキシル−２−Ｎ−（１−メチルピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン；
６−Ｎ−（３−メチルシクロヘキシル）−２−Ｎ−（１−メチルピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン；及び
４−tert−ブチル−Ｎ−［３−［［２−［（１−メチルピラゾール−４−イル）アミノ］−９Ｈ−プリン−６−イル］アミノ］シクロヘキシル］ベンズアミド。
【００５８】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５９】
本願は、関節リウマチを処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６０】
本願は、喘息を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６１】
本願は、式Ｉで表される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００６２】
本願は、少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００６３】
本願は、炎症性障害を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６４】
本願は、自己免疫障害を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６５】
本願は、関節リウマチを処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６６】
本願は、喘息を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６７】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための上記化合物の使用を提供する。
【００６８】
本願は、関節リウマチを処置するための上記化合物の使用を提供する。
【００６９】
本願は、喘息を処置するための上記化合物の使用を提供する。
【００７０】
本願は、本明細書に記載する化合物、方法、又は組成物を提供する。
【００７１】
化合物及び調製
本発明に包含され、本発明の範囲内である代表的な化合物の例を、以下の表で提供する。下記の実施例及び調製例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することを可能とするために提供される。これらは、本発明の範囲を制限するものではなく、本発明の例示的及び代表的なものとしてのみ考えられるべきである。
【００７２】
一般に、本願に使用される命名法は、IUPAC系統的命名法の生成のためのBeilstein InstituteコンピュータシステムであるAUTONOMTM v. 4.0に基づく。示された構造とその構造に与えられる名称との相違がある場合、示された構造がより重視される。加えて、構造又は構造の一部の立体化学が、例えば太字又は破線によって示されていない場合、その構造又は構造の一部は、その立体異性体の全てを包含すると解釈すべきである。
【００７３】
表Ｉは、一般式Ｉに係る化合物の例を示す。
【表１】
2016513621.tif 000006
2016513621.tif 000007
【００７４】
一般的な合成スキーム
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製することができる。これら化合物を合成するのに適切な方法は、実施例に提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームに従って調製することができる。
【００７５】
【化４】
2016513621.tif 000008
【００７６】
式６で表される化合物（式中、Ｒ１は、式Ｉの属において上記した通りである）は、スキーム１に従って調製することができる。（３−アミノ−シクロヘキシル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（化合物１）で出発して、２とアシル化反応させて、式３で表される化合物中にアミド結合を与えることができる。化合物２においてＸ＝Ｃｌである場合、弱塩基（例えば、トリエチルアミン及びＤＩＰＥＡ）が反応を実施する。化合物２においてＸ＝ＯＨである場合、極性溶媒（例えば、ＤＭＦ）を用いて、塩基の存在下で、カップリング試薬（例えば、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ））が、式３で表される化合物を与える。この転換にも用いることができるカップリング試薬のリストは、この総説（Chemical Review 2011, 111, 6557）中に見出すことができる。ＴＦＡ／ＤＣＭ混合物等の酸性条件下でtert−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）保護基を容易に除去して、式４で表される遊離アミンを与えることができる。他の保護基を用いてもよく、そして、当業者に公知である。（優れた参考文献については、P.G. M. Wuts and T. W. Greene in Green's Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley and Sons, 2007を参照）。次いで、マイクロ波照射下で遊離アミン誘導体４を６−クロロプリン５とカップリングさせて、芳香族求核置換を通して誘導体６を与えることができる。有機合成におけるマイクロ波の使用についての更なる情報は、この総説：Current Organic Chemistry, 2010, 14, 1050に記載されている。また、この転換は、塩基（例えば、ＤＩＰＥＡ）及び溶媒（例えば、ＤＭＦ）を用いて、約１００℃の温度で３〜数時間の反応時間、従来の加熱下で達成することもできる。
【００７７】
【化５】
2016513621.tif 000009
【００７８】
同様に、式１１で表される化合物（式中、Ｒは、式１の属において上記した通りである）は、スキーム２に従って調製することができる。３−tert−ブチルカルボニルアミノ−シクロヘキサンカルボン酸（化合物７）から出発して、スキーム１に上記したのと同じ一連の工程を適用して、式１１で表される化合物を調製することができる。
【００７９】
【化６】
2016513621.tif 000010
【００８０】
式１６で表される化合物は、スキーム３に示す通り調製することができる。この手順によれば、２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン（１２）は、芳香族求核置換を受ける。この反応は、塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン）及び極性溶媒（例えば、ＤＭＦ）の存在下で、約１００℃の温度で３〜数時間の反応時間、従来の加熱下で進行し得る。あるいは、該反応は、約１５０℃の温度で３０分間〜２時間の反応時間、マイクロ波照射下で生じ得る。化合物１２における６位のより反応性の高い塩素を、この反応中に位置選択的に置換した。２位のより反応性の低い塩素は、式１６で表される本発明の化合物を与えるために、より過酷な条件を必要とし、そして、１６０℃で１時間マイクロ波で加熱した過剰のＴＭＳＣｌ及び１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４アミンの使用を必要とした（関連する手順：Organic Process Research & Development 2006, 10, 799）。
【００８１】
【化７】
2016513621.tif 000011
【００８２】
式２０で表される本発明の化合物は、スキーム４に示す通り作製することができる。式２０で表される化合物を得るための類似の工程は、上記されている。
【００８３】
医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、多種多様な経口投与用の剤形及び担体で製剤化してよい。経口投与は、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、液剤（solutions）、乳剤、シロップ剤又は懸濁剤の形態でありうる。本発明の化合物は、その他の投与経路の中でも、連続的（点滴）局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透促進剤を含みうる）、口腔内、鼻腔内、吸入及び坐剤投与を含む他の投与経路によって投与されたときに効果的である。好ましい投与方法は、一般的に、苦痛の程度及び有効成分に対する患者の応答に従って調整されうる簡便な一日用量レジメンを使用する経口である。
【００８４】
本発明の化合物（１つ又は複数）並びにそれらの薬学的に使用可能な塩は、１つ以上の従来の賦形剤、担体又は希釈剤と一緒に、医薬組成物及び単位用量の形態にしてよい。医薬組成物及び単位用量の形態は、従来の成分を従来の割合で、追加の活性化合物若しくは成分と共に又は無しで含むことができ、単位剤形は、使用される１日用量の意図される範囲に釣り合う有効成分のあらゆる適切な有効量を含むことができる。医薬組成物は、固形剤（例えば、錠剤若しくは充填カプセル剤）、半固形剤、粉末剤、持続性放出製剤、又は液剤（liquids）（例えば、液剤（solutions）、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤若しくは経口的使用の充填カプセル剤）として；又は直腸内若しくは膣内投与用の坐剤の形態で；又は非経口的使用の注射用滅菌液剤（solutions）の形態で使用することができる。典型的な製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物（１つ又は複数）（w/w）を含有する。用語「製剤」又は「剤形」は、活性化合物の固体製剤と液体製剤の両方を含むことを意図し、当業者であれば、ターゲット臓器又は組織及び所望の用量及び薬物動態パラメーターに応じて、異なる製剤において有効成分が存在し得ることが理解されよう。
【００８５】
本明細書において使用される用語「賦形剤」は、一般的に安全で無毒であり、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない医薬組成物の調製において有用である化合物を指し、そして、獣医学的使用並びにヒトへの薬学的使用に許容し得る賦形剤を含む。本発明の化合物は、単独で投与することができるが、一般的に、意図される投与経路及び標準的な薬務に関して選択される１つ以上の適切な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体との混合物で投与される。
【００８６】
「薬学的に許容し得る」は、それが、一般的に安全で無毒であり、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない医薬組成物の調製において有用であることを意味し、獣医学的並びにヒトへの薬学的使用に許容可能であるものを含む。
【００８７】
有効成分の「薬学的に許容し得る塩」形態は、また、最初に、非塩形態において存在しなかった望ましい薬物動態特性を有効成分に付与することができ、そして、有効成分の薬力学に対して体内でのその治療活性に関して正の影響をさらに与え得る。化合物の「薬学的に許容し得る塩」という表現は、薬学的に許容し得るものであって、親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。このような塩としては、以下が挙げられる：（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸と共に形成される酸付加塩；又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、１０−カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等の有機酸と共に形成される酸付加塩；あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン（例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、又はアルミニウムイオン）によって置換されるか又は有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン等）に配位するときに形成される塩。
【００８８】
固体形態の製剤は、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、及び分散性顆粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩解剤又はカプセル化材料としても作用することができる１種以上の物質であってよい。粉末剤では、担体は、一般に、微粉化した有効成分との混合物である微粉化固体である。錠剤では、有効成分は、一般的に、必要な結合能力を有する担体と適切な割合で混合され、所望の形状及び大きさに成形される。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ロウ、ココアバター等を含むが、これらに限定されない。固体形態の製剤は、有効成分に加えて、着色剤、香味剤、安定剤、緩衝剤、人工及び天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含有してもよい。
【００８９】
液体製剤は、また、経口投与に適しており、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水性液剤（solutions）、水性懸濁剤を含む液体製剤を含む。これらは、使用直前に液体形態の製剤に変換することを意図する固体形態の製剤を含む。乳剤は、溶液中、例えば、プロピレングリコール水溶液中に調製してもよく、又はレシチン、ソルビタンモノオレエート若しくはアカシア等の乳化剤を含有してもよい。水性液剤（solutions）は、有効成分を水に溶解し、適切な着色剤、香味剤、安定剤及び増粘剤を加えることにより調製できる。水性懸濁剤は、微粉化した有効成分を、天然又は合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他の周知の懸濁化剤のような粘性材料と共に水に分散することにより調製できる。
【００９０】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例としてはボーラス注射（bolus injection）又は連続注入による）のために製剤化することができ、アンプル、充填済注射器（pre-filled syringes）、防腐剤を添加した小型注入容器又は多用量容器に単位用量形態で存在できる。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤（solutions）又は乳剤、例えばポリエチレングリコール水溶液中の液剤（solutions）のような形態をとることができる。油性又は非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）を含み、防腐剤、湿潤剤、乳化剤又は懸濁化剤、安定剤及び／又は分散剤のような配合剤を含有してよい。あるいは、有効成分は、滅菌固体の無菌分離によるか、又は適切なビヒクル、例えば滅菌した発熱物質を含まない水を用いて、使用前の構成用溶液から凍結乾燥することにより得られる粉末形態であってよい。
【００９１】
本発明の化合物は、軟膏剤、クリーム剤若しくはローション剤として又は経皮パッチ剤として表皮に局所投与するために製剤化することができる。例えば、軟膏剤及びクリーム剤は、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を加え、水性又は油性基剤を用いて製剤化することができる。ローション剤は、水性又は油性基剤を用いて製剤化することができ、また一般的に、１種以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤又は着色剤も含有する。口腔内の局所投与に適切な製剤は、香味付けした基剤、通常、ショ糖及びアカシア又はトラガカント中に活性剤を含むトローチ剤；ゼラチン及びグリセリン又はショ糖及びアカシアのような不活性基剤中に有効成分を含むパステル剤；並びに適切な液体担体中に有効成分を含む洗口剤を含む。
【００９２】
本発明の化合物は坐剤として投与するために製剤化することができる。脂肪酸グリセリド又はココアバターの混合物のような低融点ロウを、最初に溶融して、有効成分を例えば撹拌により均質に分散する。次に均質溶融混合物を、都合のよい大きさの成形型に注ぎ、冷却させ、凝固させる。
【００９３】
本発明の化合物は膣内投与用に製剤化することができる。ペッサリー剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤又はスプレー剤は、有効成分に加えて、当該技術分野で適切であることが公知である担体を含有する。
【００９４】
本発明の化合物は鼻腔内投与用に製剤化することができる。液剤（solutions）又は懸濁剤を、慣用の方法により、例えば、滴瓶、ピペット又はスプレーを用いて直接鼻腔に適用する。製剤は単回投与又は多回投与形態で提供することができる。滴瓶又はピペットの後者の場合、液剤（solution）又は懸濁剤の適切で所定の容量を患者に投与することで、それを達成することができる。スプレーの場合、例えば計量噴霧スプレーポンプを用いて達成することができる。
【００９５】
本発明の化合物は、特に、鼻内投与を含む、気道へのエアゾール投与用に製剤化することができる。化合物は、一般的に、例えば５ミクロン以下程度の小さい粒径を有する。そのような粒径は、当該技術で公知の方法、例えば微粒子化により得ることができる。有効成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタン、若しくは二酸化炭素、又は他の適切な気体のような、適切な噴射剤を用いた加圧パックで提供される。エアゾールはまた、レシチンのような界面活性剤を都合よく含有することができる。薬剤の用量は、計量弁により制御されうる。あるいはまた、有効成分は、乾燥粉末の形態で、例えば、乳糖、デンプン、デンプン誘導体（ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）等）のような適切な粉末基剤中の化合物の粉末混合物の形態で提供されうる。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセル若しくはカートリッジ、又はブリスターパックのような単位用量形態で存在してよく、これから粉末が吸入器により投与される。
【００９６】
所望であれば、製剤は、有効成分の持続的又は制御的放出投与に適合する腸溶性コーティングを用いて調製できる。例えば本発明の化合物は、経皮又は皮下薬剤送達装置に製剤化できる。これらの送達系は、化合物の持続的放出が必要であり、患者の処置レジメンに対するコンプライアンスが重要である場合に有利である。経皮送達系における化合物は、多くの場合、皮膚付着固体支持体に結合されている。目的の化合物は、また、浸透向上剤、例えばアゾン（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わせることができる。持続的放出送達系は、手術又は注射により皮下層に皮下的に挿入される。皮下インプラントは、脂溶性膜、例えばシリコーンゴム又は生物分解性ポリマー、例えばポリ乳酸で化合物を包み込む。
【００９７】
適切な製剤は、薬学的担体、希釈剤及び賦形剤と共に、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載されている。熟練の製剤科学者であれば、本発明の組成物を不安定にすることなく又はそれらの治療活性を損なうことなく、特定の投与経路のための多くの製剤を提供するために、本明細書の教示の範囲内で製剤を修正することができる。
【００９８】
水又はその他のビヒクルにより可溶性にするための本化合物の修正は、例えば、小さな修正（塩形成、エステル化等）によって容易に達成することができ、これらは十分に当該分野における通常の技能の範囲内である。また、患者に最大の有益な効果を与えるように本化合物の薬物動態を管理するために、特定の化合物の投与経路及び用量レジメンを修正することも十分に当該分野における通常の技能の範囲内である。
【００９９】
本明細書において使用される用語「治療有効量」は、個体の疾患の症状を軽減するのに必要な量を意味する。用量は、各特定の症例において、個々の要件に対して調整される。その用量は、多くの要因、例えば、処置される疾患の重症度、患者の年齢及び総体的な健康状態、患者の処置に用いられているその他の医薬、投与経路及び形態、並びに担当医の選好及び経験等に応じて、広い範囲内で変更することができる。経口投与の場合、単剤療法及び／又は併用療法では、一日あたり約０．０１〜約１０００mg/kg体重の一日用量が適切であろう。好ましい一日用量は、一日当たり約０．１〜約５００mg/kg体重、より好ましくは、０．１〜約１００mg/kg体重、最も好ましくは、１．０〜約１０mg/kg体重である。従って、７０kgの人への投与では、用量範囲は、一日当たり約７mg〜０．７ｇであろう。一日用量は、単回用量又は分割用量（典型的には、１〜５回の用量／日）で投与することができる。一般的に、処置は、化合物の最適用量より少ない用量から開始する。その後、個々の患者に最適な効果が得られるまで、用量を少量ずつ増やしていく。本明細書に記載される疾患を処置する当業者であれば、必要以上の実験を実施することなく、個人の知識、経験及び本願の開示を頼りに所与の疾患及び患者について本発明の化合物の治療有効量を確定することができるであろう。
【０１００】
医薬製剤は、好ましくは単位剤形である。そのような形態では、製剤は、有効成分の適切な量を含有する単位用量に細分化されている。単位剤形は、パッケージ製剤であることができ、そのパッケージは、パケット錠剤、カプセル剤及びバイアル又はアンプル中の粉末剤のような製剤の別個の分量を含有する。また、単位剤形は、それ自体カプセル剤、錠剤、カシェ剤又はトローチ剤であることができるか、又はパッケージ形態におけるこれらのうちのいずれかの適切な数であることができる。
【０１０１】
適応症及び処置方法
一般式Ｉで表される化合物は、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）を阻害する。上流のキナーゼによるＢＴＫの活性化により、ホスホリパーゼ−Ｃγが活性化され、続いて、炎症誘発性メディエーターの放出が刺激される。式Ｉで表される化合物は、関節炎、並びに他の抗炎症及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Ｉで表される化合物は、関節炎の処置に有用である。式Ｉで表される化合物は、細胞内のＢＴＫを阻害するため及びＢ細胞の発生を調節するために有用である。本発明は、更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含有する医薬組成物を含む。
【０１０２】
本明細書に記載される化合物は、キナーゼ阻害剤、特に、ＢＴＫ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳動物において、キナーゼ阻害に応答する１つ以上の疾患（ＢＴＫ阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を含む）を処置するために有用でありうる。いかなる特定の理論に束縛されることは望まないが、本発明の化合物とＢＴＫの相互作用がＢＴＫ活性の阻害をもたらすために、これらの化合物が薬学的有用性を有すると考えられる。したがって、本発明は、ＢＴＫ活性の阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を有する哺乳動物（例えば、ヒト）を処置する方法であって、そのような疾患を有する哺乳動物に、有効量の本明細書に与えられる少なくとも１つの化学物質を投与することを含む方法を含む。有効濃度は、実験的に、例えば、化合物の血中濃度をアッセイすることによって、又は理論的にバイオアベイラビリティを計算することによって確認することができる。ＢＴＫの他に影響を受け得るその他のキナーゼは、その他のチロシンキナーゼ及びセリン／トレオニンキナーゼを含むが、これらに限定されない。
【０１０３】
キナーゼは、増殖、分化及び死（アポトーシス）等の基本的な細胞過程を制御するシグナル伝達経路において特筆すべき役割を果たす。異常なキナーゼ活性は、多発性癌、自己免疫及び／又は炎症性疾患並びに急性炎症反応を含む、広範な疾患に関与している。重要な細胞のシグナル伝達経路におけるキナーゼのこの多面的な役割は、キナーゼ及びシグナル伝達経路をターゲットとする新規薬剤を同定する重要な機会を提供する。
【０１０４】
１つの実施態様は、ＢＴＫ活性及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する、自己免疫及び／若しくは炎症性疾患又は急性炎症反応を有する患者を処置する方法を含む。
【０１０５】
本発明の化合物及び組成物を使用して影響を受け得る自己免疫及び／又は炎症性疾患は、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、シェーグレン病、組織移植片拒絶反応及び移植臓器の超急性拒絶反応、喘息、全身性エリテマトーデス（及び関連する糸球体腎炎）、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、血管炎（ＡＮＣＡ関連及びその他の血管炎）、自己免疫性の溶血及び血小板減少状態、グッドパスチャー症候群（並びに関連する糸球体腎炎及び肺出血）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血性ショック並びに重症筋無力症を含むが、これらに限定されない。
【０１０６】
本明細書に提供される少なくとも１つの化学物質が抗炎症剤と組み合わせて投与される処置法が本明細書に含まれる。抗炎症剤は、ＮＳＡＩＤ、非特異的及びＣＯＸ−２特異的シクロオキシゲナーゼ酵素阻害剤、金化合物、コルチコステロイド、メトトレキサート、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）受容体拮抗剤、免疫抑制剤及びメトトレキサートを含むが、これらに限定されない。
【０１０７】
ＮＳＡＩＤの例は、イブプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン及びナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、ジクロフェナクナトリウムとミソプロストールの組み合わせ、スリンダク、オキサプロジン、ジフルニサル、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、ケトプロフェン、ナトリウムナブメトン、スルファサラジン、トルメチンナトリウム並びにヒドロキシクロロキンを含むが、これらに限定されない。ＮＳＡＩＤの例は、また、セレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ及び／又はエトリコキシブ等のＣＯＸ−２特異的阻害剤を含む。
【０１０８】
いくつかの実施態様において、抗炎症剤は、サリチル酸塩である。サリチル酸塩は、アセチルサリチル酸（すなわち、アスピリン）、サリチル酸ナトリウム並びにサリチル酸コリン及びマグネシウムを含むが、これらに限定されない。
【０１０９】
抗炎症剤は、また、コルチコステロイドでありうる。例えば、コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム又はプレドニゾンでありうる。
【０１１０】
追加の実施態様において、抗炎症剤は、金チオリンゴ酸ナトリウム又はオーラノフィン等の金化合物である。
【０１１１】
本発明は、また、抗炎症剤が、代謝阻害剤、例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤（メトトレキサート等）、又はジヒドロオロット酸デヒドロゲナーゼ阻害剤（レフルノミド等）である実施態様を含む。
【０１１２】
本発明の他の実施態様は、少なくとも１つの抗炎症化合物が、抗Ｃ５モノクローナル抗体（エクリズマブ又はパキセリズマブ等）、ＴＮＦ拮抗剤（エンタネルセプト（entanercept）等）又は抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるインフリキシマブである組み合わせに関する。
【０１１３】
本発明のさらに他の実施態様は、少なくとも１つの活性剤が、メトトレキサート、レフルノミド、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン及びミコフェノール酸モフェチルから選択される免疫抑制化合物等の免疫抑制化合物である組み合わせに関する。
【０１１４】
ＢＴＫを発現するＢ細胞及びＢ細胞前駆体は、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含む）、ヘアリー細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性及び急性骨髄性白血病並びに慢性及び急性リンパ性白血病を含むがこれらに限定されない、Ｂ細胞の悪性腫瘍の病理に関与している。
【０１１５】
ＢＴＫは、Ｂリンパ球系細胞のＦａｓ／ＡＰＯ−１（ＣＤ−９５）死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の阻害剤であることが知られている。白血病／リンパ腫細胞の運命は、ＤＩＳＣにより活性化されるカスパーゼの対抗するアポトーシス促進効果とＢＴＫ及び／又はその基質が関わる上流の抗アポトーシス調節メカニズムとの間のバランスに依存し得る（Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656）。
【０１１６】
また、ＢＴＫ阻害剤が、化学療法増感剤として有用であり、したがって、その他の化学療法薬、特に、アポトーシスを誘導する薬剤との組み合わせで有用であることが発見されている。化学療法増感性のＢＴＫ阻害剤と組み合わせて使用することができるその他の化学療法薬の例は、トポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン又はトポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ダウノマイシン及びエトポシド）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン及びＢＣＮＵ）、チューブリン作用剤（例えば、タキソール及びビンブラスチン）並びに生物学的作用物質（例えば、抗ＣＤ２０抗体等の抗体、ＩＤＥＣ８、免疫毒素及びサイトカイン）を含む。
【０１１７】
ＢＴＫ活性は、また、第９及び第２２染色体の一部の転座から生じるｂｃｒ−ａｂｌ融合遺伝子を発現するいくつかの白血病と関連している。この異常は、通常、慢性骨髄性白血病に認められる。ＢＴＫは、ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼによって構成的にリン酸化され、これが下流の生存シグナルを開始して、ｂｃｒ−ａｂｌ細胞におけるアポトーシスを回避する（N. Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201(11):1837-1852）。
【０１１８】
処置の方法
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１１９】
本願は、炎症状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２０】
本願は、関節リウマチを処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２１】
本願は、喘息を処置する方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０１２２】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２３】
本願は、関節炎を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２４】
本願は、喘息を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２５】
本願は、Ｂ細胞増殖を阻害する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２６】
本願は、式Ｉのいずれか１つで表されるＢＴＫ阻害化合物を投与することを含む、ＢＴＫ活性を阻害する方法であって、前記ＢＴＫ阻害化合物が、ＢＴＫ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて５０マイクロモル濃度以下のＩＣ５０を示す方法を提供する。
【０１２７】
上記方法の１つの変形では、ＢＴＫ阻害化合物は、ＢＴＫ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１００ナノモル濃度以下のＩＣ５０を示す。
【０１２８】
上記方法の別の変形では、該化合物は、ＢＴＫ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１０ナノモル濃度以下のＩＣ５０を示す。
【０１２９】
本願は、炎症状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物と組み合わせて治療有効量の抗炎症化合物を同時投与することを含む方法を提供する。
【０１３０】
本願は、関節炎を処置する方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物と組み合わせて治療有効量の抗炎症化合物を同時投与することを含む方法を提供する。
【０１３１】
本願は、リンパ腫又はＢＣＲ−ＡＢＬ１＋白血病細胞を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表されるＢＴＫ阻害化合物を投与することによる方法を提供する。
【０１３２】
本発明は、治療活性物質としての上記化合物の使用を提供する。
【０１３３】
本発明は、炎症及び／又は自己免疫状態の処置における上記化合物の使用を提供する。
【０１３４】
本発明は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための医薬を調製するための上記化合物の使用を提供する。
【０１３５】
本発明は、炎症及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための上記化合物を提供する。
【０１３６】
本発明は、関節リウマチの処置において使用するための上記化合物を提供する。
【０１３７】
本発明は、喘息の処置において使用するための上記化合物を提供する。
【０１３８】
本発明は、本明細書に記載される発明を提供する。
【０１３９】
実施例
略語
ＡｃＯＨ                  酢酸
ＢＯＣ                    tert−ブトキシカルボニル
Ｂｕ                      ブチル
ＢｕＯＨ                  ブタノール
ＣＤＩ                    カルボニルジイミダゾール
Ｃｓ２ＣＯ３              炭酸セシウム
ＤＣＭ                    ジクロロメタン
ＤＨＰ                    ジヒドロピラン
ＤＭＡ                    ジメチルアセトアミド
ＤＩＰＥＡ                ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ                    Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ                  ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ                酢酸エチル
ＥｔＯＨ                  エチルアルコール
Ｈ                        時間
ＨＡＴＵ                  Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ                            ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホ                            スファート
ＨＣｌ                    塩化水素
ＬＣ−ＭＳ                液体クロマトグラフィー質量分析
ＨＰＬＣ                  高圧液体クロマトグラフィー
Ｋ２ＣＯ３                炭酸カリウム
ＭｅＯＨ                  メチルアルコール
Ｍｉｎ                    分
ＭＷ                      マイクロ波
ＮＭＰ                    １−メチル−２−ピロリジノン
Ｐｄ／Ｃ                  パラジウム炭
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）    ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］                            ジクロロパラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ２（ｄｂａ）３        トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
Ｐｄ（ＯＡｃ）２          酢酸パラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４        パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン
ＰＴＳＡ                  パラトルエンスルホン酸
ＲＴ（又はｒｔ）          室温
ｔＢｕＯＫ                カリウムtert−ブトキシド
ＴＦＡ                    トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ                    テトラヒドロフラン
ＴＨＰ                    テトラヒドロピラン
ＴＬＣ                    薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳＣｌ                塩化トリメチルシリル
Ｘｐｈｏｓ                ２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−ト                            リイソプロピルビフェニル
【０１４０】
一般的に用いられる略語は、以下を含む：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、雰囲気（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−tert−ブチルピロカーボナート又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ケミカルアブストラクト登録番号（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）、アゾジカルボン酸ジ−イソ−プロピル（ＤＩＡＤ）、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）、イソプロピルマグネシウムクロリド（ｉＰｒＭｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、ヘキサメチルジシラザンリチウム（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロ過安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メ���ルピロリドン（ＮＭＰ）、ピリジニウムクロロクロマート（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、ピリジニウムジクロマート（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１’−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、sec−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフラート又はＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−又はトシル（Ｔｓ）、並びにＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。接頭辞ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、二級（sec−）、三級（tert−）、及びネオを含む従来の命名法は、アルキル部分で用いられるときの慣習上の意味を有する。（J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.）。
【０１４１】
一般的条件
本発明の化合物は、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって、市販の出発物質で始めて調製することができる。以下の概要は、このような化合物を調製するのに適切な反応スキームである。更なる例示は、具体的な実施例に見出すことができる。
【０１４２】
予備実施例
試薬は、Aldrich、Sigma、Maybridge、Oakwood、Arkpharminc又は他の供給業者から購入し、そして、更に精製することなく用いた。加熱のためにマイクロ波照射を用いる反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを用いて実施した。数ミリグラム〜数グラムの規模の化合物の精製は、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー等の当業者に公知の方法によって実施し；また、場合によっては、CombiFlash systemで溶離させた数グラムのシリカゲルが事前充填された使い捨てカラム（RediSep）（商標）を使用し、分取フラッシュカラム精製を行った。また、Biotage（商標）及びISCO（商標）は、中間体の精製のために本発明で用いることができたフラッシュカラム装置である。
【０１４３】
化合物の同定及び純度の評価のために、以下のシステムを用いてＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）スペクトルを記録した。質量スペクトルの測定については、システムは、Micromass Platform II分光計：ポジティブモードのＥＳイオン化（質量範囲：１５０〜１２００amu）からなる。以下のＨＰＬＣシステムを用いて同時クロマトグラフ分離を達成した：ES Industries Chromegabond WR C-18 3u 120Å（３．２×３０mm）カラムカートリッジ；移動相Ａ：水（０．０２％ ＴＦＡ）及び相Ｂ：アセトニトリル（０．０２％ ＴＦＡ）；勾配：３分間で１０％ Ｂから９０％ Ｂ；平衡時間：１分間；流速：２mL/分。
【０１４４】
また、式１で表される多くの化合物は、当業者に周知の方法を用いて逆相ＨＰＬＣによって精製した。場合によっては、Shimadzu分取ＨＰＬＣシステム及びLeap自動注入装置に取り付けられたGilson 215コレクターを制御するPE Sciex 150 EX Mass Specを用いて、分取ＨＰＬＣ精製を実施した。化合物は、陽イオン検出のＬＣ／ＭＳ検出を用いて溶離流から回収した。Ｃ−１８カラム（２．０×１０cm、２０mL/分で溶離）からの化合物の溶離は、１０分間にわたって、溶媒（Ａ）０．０５％ ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ ＴＦＡ／アセトニトリルの適切な線形勾配モードを用いて行った。ＨＰＬＣシステムに注入するために、メタノール、アセトニトリル、及びＤＭＳＯの混合物に粗サンプルを溶解させた。Bruker 400 MHz NMR分光計を用いて１Ｈ−ＮＭＲによって化合物の特性評価を行った。
【０１４５】
本発明の化合物は、公知の技術に従って合成してよい。以下の実施例及び参考文献は、本発明の理解を助けるために提供される。しかし、実施例は、本発明を限定することを意図するものではなく、本発明の真の範囲は、添付の特許請求の範囲に記載される。実施例における最終生成物の名称は、Isis AutoNom 2000を用いて作成した。
【０１４６】
実施例１：
４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド
【化８】
2016513621.tif 000012
【０１４７】
工程１）  ［３−（４−tert−ブチル−ベンゾイルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化９】
2016513621.tif 000013
ＤＭＦ（１０．０mL）中の（３−アミノ−シクロヘキシル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（０．２５０ｇ、１．１６mmol）の撹拌した溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１．５mL、７mmol）を室温で加えた。同じ温度で１５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（０．５２９ｇ、１．３９mmol）を反応混合物に加え、続いて４−tert−ブチル−安息香酸（０．２０８ｇ、１．１６mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。水（１０mL）での希釈後、混合物を酢酸エチル（２×５０mL）で抽出した。合わせた有機相を水、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％酢酸エチル-ヘキサン）により精製して、［３−（４−tert−ブチル−ベンゾイルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（０．２５０ｇ、４８％）を白色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２２Ｈ３４Ｎ２Ｏ３（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３７５  実測値：３７５．４。
【０１４８】
工程２）  Ｎ−（３−アミノ−シクロヘキシル）−４−tert−ブチル−ベンズアミド  
【化１０】
2016513621.tif 000014
ジクロロメタン（８．０mL）中の［３−（４−tert−ブチル−ベンゾイルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（０．２５０ｇ、０．６６mmol）の撹拌した溶液に、ＴＦＡ（０．２５mL  ３．３mmol）を０℃で加えた。０℃で１５分間撹拌後、反応混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ジクロロメタン（３×３０mL）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去して、Ｎ−（３−アミノ−シクロヘキシル）−４−tert−ブチル−ベンズアミド（０．１７０ｇ、９４％）を明黄色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１７Ｈ２６Ｎ２Ｏ３（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：２７５  実測値：２７５．４。
【０１４９】
工程３）  ４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド
【化１１】
2016513621.tif 000015
ＮＭＰ（２．０mL）中の６−クロロ−９Ｈ−プリン（０．１００ｇ、０．６４mmol）の溶液に、Ｎ−（３−アミノ−シクロヘキシル）−４−tert−ブチル−ベンズアミド（０．２１１ｇ、０．７７mmol）及びジイソプロピルエチルアミン（０．２６mL、１．６０mmol）を室温で加えた。反応混合物を、マイクロ波中で１５０℃にて３０分間照射した。反応混合物を水（１０mL）で希釈し、酢酸エチル（２×２０mL）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％ ＭｅＯＨ−ジクロロメタン）により精製して、４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド（０．０３７ｇ、１５％）を白色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２２Ｈ２８Ｎ６Ｏ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３９３  実測値：３９３．４。
【０１５０】
実施例２：
３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸  ３−クロロ−ベンジルアミド
【化１２】
2016513621.tif 000016
【０１５１】
工程１）  ［３−（３−クロロ−ベンジルカルバモイル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化１３】
2016513621.tif 000017
２５０mLの丸底フラスコ中で、３−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサンカルボン酸（２ｇ、８．２２mmol）、（３−クロロフェニル）メタンアミン（１．２８ｇ、９．０４mmol）及びＨＡＴＵ（３．４４ｇ、９．０４mmol）を、ＤＭＦ（２０mL）と合わせた。ＤＩＰＥＡ（１．４４mL、８．２２mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。粗物質をＤＣＭで粉砕して、所望の化合物を与え、これを濾過し、大気下で乾燥させた。［３−（３−クロロ−ベンジルカルバモイル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステルを白色の固体として得た（２．８ｇ、９３％）。
【０１５２】
工程２）  ３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸  ３−クロロ−ベンジルアミド
【化１４】
2016513621.tif 000018
２０mLのシンチレーションバイアル中で、［３−（３−クロロ−ベンジルカルバモイル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１．０ｇ、２．７３mmol）を、ＤＣＭ（５mL）及びＴＦＡ（５mL）で溶解した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質をＤＭＦ（２mL）に溶解した。６−クロロ−９Ｈ−プリン（０．４６３ｇ、３．０mmol）及びＤＩＰＥＡ（２．４mL、１３．６mmol）を加えた。反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応混合物を冷やし、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして水で洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。得られた粗物質を、ＭｅＯＨで粉砕して、３−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸 ３−クロロ−ベンジルアミド（０．１２ｇ、１１％）を褐色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１９Ｈ２１ＣｌＮ６Ｏ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３８５  実測値：３８５．０。
【０１５３】
実施例３：
Ｎ＊６＊−シクロヘキシル−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン
【化１５】
2016513621.tif 000019
【０１５４】
工程１）  （２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−シクロヘキシル−アミン
【化１６】
2016513621.tif 000020
ＤＭＦ（５mL）中の２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン（５００mg、２．６mmol）及びシクロヘキシルアミン（２８９mg、２．９１mmol）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．４９mL、２．９１mmol）を加え、そして窒素雰囲気下で１００℃に１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷やし、水を加えた。沈殿した固体を濾過し、乾燥させて、（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−シクロヘキシル−アミン（６００mg、９０．１％）を黄色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１１Ｈ１４ＣｌＮ５（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：２５２  実測値：２５２。
【０１５５】
工程２）  Ｎ＊６＊−シクロヘキシル−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン
【化１７】
2016513621.tif 000021
ｎ−ＢｕＯＨ（２．０mL）中の（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−シクロヘキシル−アミン（３００mg、１．１９mmol）の溶液に、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミン（８１０mg、８．３４mmol）及びＴＭＳ−Ｃｌ（０．５６７mL、４．６５mmol）を加えた。反応混合物を、マイクロ波中で１６０℃にて１時間照射した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ［カラム＝Gemini NX C18（１００×３０．０ mm）５μ、５mM ＮＨ４ＯＡｃ／アセトニトリル］により精製して、Ｎ＊６＊−シクロヘキシル−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン（６０mg、１６％）をオフホワイトの固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１５Ｈ２０Ｎ８（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３１３  実測値：３１３．２。
【０１５６】
実施例４：
Ｎ＊６＊−（３−メチル−シクロヘキシル）−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン
【化１８】
2016513621.tif 000022
【０１５７】
工程１）  （２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−（３−メチル−シクロヘキシル）−アミン
【化１９】
2016513621.tif 000023
ＤＭＦ（５mL）中の２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン（５００mg、２．６mmol）及び３−メチル−シクロヘキシルアミン（３２９mg、２．９１mmol）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．４９mL、２．９１mmol）を加え、そして窒素雰囲気下で１００℃に１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷やし、水を加えた。沈殿した固体を濾過し、乾燥させて、（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−（３−メチル−シクロヘキシル）−アミン（６００mg、８６％）を黄色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１２Ｈ１６ＣｌＮ５（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：２６６  実測値：２６６．３。
【０１５８】
工程２）  Ｎ＊６＊−（３−メチル−シクロヘキシル）−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン
【化２０】
2016513621.tif 000024
ｎ−ＢｕＯＨ（２．０mL）中の（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−（３−メチル−シクロヘキシル）−アミン（２００mg、０．７５５mmol）の溶液に、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミン（５１３mg、５．３mmol）及びＴＭＳ−Ｃｌ（０．３６mL、２．９４mmol）を加えた。反応混合物を、マイクロ波中で１６０℃にて１時間照射した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ［カラム＝Gemini NX C18（１００×３０．０mm）５μ、５mM ＮＨ４ＯＡｃ／アセトニトリル］により精製して、Ｎ＊６＊−（３−メチル−シクロヘキシル）−Ｎ＊２＊−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−９Ｈ−プリン−２，６−ジアミン（６５mg、２７％）をオフホワイトの固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１６Ｈ２２Ｎ８（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３２７  実測値：３２７．２。
【０１５９】
実施例５：
４−tert−ブチル−Ｎ−｛３−［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−ベンズアミド
【化２１】
2016513621.tif 000025
【０１６０】
工程１）  ［３−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化２２】
2016513621.tif 000026
ＤＭＦ（１５mL）中の２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン（１．５ｇ、７．９３mmol）及び（３−アミノ−シクロヘキシル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１．８８ｇ、８．７３mmol）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（１．４９mL、８．７３mmol）を加え、そして１１０℃に１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷やし、水を加えた。沈殿した固体を濾過し、乾燥させて、［３−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１．８ｇ、粗）を褐色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１６Ｈ２３ＣｌＮ６Ｏ２（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３６７  実測値：３６７．２。
【０１６１】
工程２）  Ｎ−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−シクロヘキサン−１，３−ジアミン ＴＦＡ塩
【化２３】
2016513621.tif 000027
ＤＣＭ（５mL）中の［３−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル 粗（９００mg、２．４５mmol）の撹拌した溶液に、ＤＣＭ（１０mL）中の３３％ ＴＦＡを０℃で滴下し、そして室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質をエーテル（２×５mL）で洗浄して、Ｎ−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−シクロヘキサン−１，３−ジアミン ＴＦＡ塩（１．９５ｇ、粗）を黒色の粘着性の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１１Ｈ１５ＣｌＮ６（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：２６７  実測値：２６７．２。
【０１６２】
工程３）  ４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド
【化２４】
2016513621.tif 000028
ＤＭＦ（２０mL）中のＮ−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−シクロヘキサン−１，３−ジアミン ＴＦＡ塩（１．９ｇ、５．０mmol）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．６５mL、１５．０mmol）を加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、続いてＨＡＴＵ（２．２８ｇ、６．０mmol）及び４−tert−ブチル−安息香酸（０．８９ｇ、５．０mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水（４０mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×６０mL）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質をヘキサン（４０mL）で洗浄し、乾燥させて、４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド（８００mg、３工程で４７％）を褐色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２２Ｈ２７ＣｌＮ６Ｏ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４２７  実測値：４２７．２。
【０１６３】
工程４）  ４−tert−ブチル−Ｎ−｛３−［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−ベンズアミド
【化２５】
2016513621.tif 000029
ｎ−ＢｕＯＨ（２．０mL）中の４−tert−ブチル−Ｎ−［３−（２−クロロ−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ベンズアミド（２００mg、０．４６mmol）の溶液に、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミン（３１９mg、３．２８mmol）及びＴＭＳ−Ｃｌ（０．２３mL、２１．８３mmol）を加えた。反応混合物を、マイクロ波中で１６０℃にて１時間照射した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ［カラム＝Gemini NX 110A C18（１００×３０．０mm）５μ、５mM ＮＨ４ＯＡｃ／アセトニトリル］により精製して、４−tert−ブチル−Ｎ−｛３−［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−ベンズアミド（５２mg、２２％）をオフホワイトの固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２６Ｈ３３Ｎ９Ｏ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４８８  実測値：４８８．２。
【０１６４】
生物学的実施例
ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害アッセイ
このアッセイでは、濾過を通して放射性３３Ｐリン酸化生成物を捕捉する。ＢＴＫ、ビオチン化ＳＨ２ペプチド基質（Ｓｒｃ相同）、及びＡＴＰの相互作用により、ペプチド基質がリン酸化される。ビオチン化生成物を、ストレプトアビジンセファロースビーズに結合させる。全ての結合している放射標識生成物をシンチレーションカウンターで検出する。
【０１６５】
アッセイするプレートは、９６ウェルポリプロピレン（Greiner）及び９６ウェル１．２μm親水性ＰＶＤＦフィルタープレート（Millipore）である。本明細書に報告する濃度は、最終アッセイ濃度である：ＤＭＳＯ（Burdick and Jackson）中１０〜１００μM 化合物、５〜１０nM ＢＴＫ酵素（Ｈｉｓタグ付き、完全長）、３０μM ペプチド基質（ビオチン−Ａｃａ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ−ＮＨ２）、１００μM ＡＴＰ（Sigma）、８mMイミダゾール（Sigma、pH７．２）、８mM グリセロール−２−リン酸（Sigma）、２００μM ＥＧＴＡ（Roche Diagnostics）、１mM ＭｎＣｌ２（Sigma）、２０mM ＭｇＣｌ２（Sigma）、０．１mg/mL ＢＳＡ（Sigma）、２mM ＤＴＴ（Sigma)、1μCi ３３Ｐ  ＡＴＰ（Amersham）、２０％ストレプトアビジンセファロースビーズ（Amersham）、５０mM ＥＤＴＡ（Gibco）、２M ＮａＣｌ（Gibco）、２M ＮａＣｌ  w/１％リン酸（Gibco）、microscint−２０（Perkin Elmer）。
【０１６６】
ＩＣ５０の決定は、標準的な９６ウェルプレートアッセイテンプレートから得られたデータを利用して、１化合物当たり１０個のデータ点から計算する。１つの対照化合物及び７つの未知阻害剤を各プレートにおいて試験し、そして、各プレートを２回測定した。典型的に、化合物は、１００μMで始まり、そして、３nMで終わるように半対数（half-log）希釈を行った。対照化合物は、スタウロスポリンであった。バックグラウンドは、ペプチド基質の非存在下で計数した。総活性は、ペプチド基質の存在下で決定した。以下のプロトコールを用いて、ＢＴＫ阻害を決定した。
【０１６７】
１）  サンプルの調製：試験化合物をアッセイ緩衝液（イミダゾール、グリセロール−２−リン酸、ＥＧＴＡ、ＭｎＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＢＳＡ）によって半対数増分で希釈した。
【０１６８】
２）  ビーズの調製
ａ．）  ５００ｇで遠心分離することによってビーズをすすぐ。
ｂ．）  該ビーズをＰＢＳ及びＥＤＴＡで再構成して２０％ビーズスラリーを生成する。
【０１６９】
３）  ３０℃で１５分間、基質を含まない反応ミックス（アッセイ緩衝液、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ  ＡＴＰ）及び基質を含むミックス（アッセイ緩衝液、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ  ＡＴＰ、ペプチド基質）をプレインキュベートする。
【０１７０】
４）  アッセイを開始するために、室温で１０分間、酵素緩衝液（イミダゾール、グリセロール−２−リン酸、ＢＳＡ）中ＢＴＫ １０μL及び試験化合物 １０μLをプレインキュベートする。
【０１７１】
５）  基質を含まないか又は含む反応混合物 ３０μLをＢＴＫ及び化合物に添加する。
【０１７２】
６）  ３０℃で３０分間、全アッセイミックス ５０μLをインキュベートする。
【０１７３】
７）  アッセイ ４０μLをフィルタープレート中のビーズスラリー １５０μLに移して、反応を停止させる。
【０１７４】
８）  ３０分後、以下の工程を用いてフィルタープレートを洗浄する。
ａ．  ３×ＮａＣｌ ２５０μL
ｂ．  ３×１％リン酸を含有するＮａＣｌ ２５０μL
ｃ．  １×Ｈ２Ｏ ２５０μL
【０１７５】
９）  ６５℃で１時間又は室温で一晩プレートを乾燥させる。
【０１７６】
１０）  microscint−２０ ５０μLを添加し、そして、シンチレーションカウンターで３３Ｐ（cpm）を計数する。
生データ（cpm）から活性率を計算する。
活性率＝（サンプル−ｂｋｇ）／（総活性−ｂｋｇ）×１００
１サイト用量応答シグモイドモデルを用いて、活性率からＩＣ５０を計算する。
ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）Ｄ））））
ｘ＝化合物の濃度、ｙ＝活性率（％）、Ａ＝最低、Ｂ＝最高、Ｃ＝ＩＣ５０、Ｄ＝１（ヒル勾配）
【０１７７】
ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害のＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイ
このＢＴＫ競合アッセイでは、ＦＲＥＴ（フェルスター／蛍光共鳴エネルギー転移）技術を用いて、ブルトンチロシンキナーゼの不活化状態についての化合物の能力（ＩＣ５０）を測定する。ＢＴＫ−Ｅｕ複合体を氷上で１時間インキュベートした後、５０nM ＢＴＫ-Bioease（商標）：１０nM Ｅｕ−ストレプトアビジン（Perkin-Elmer  カタログ番号＃ＡＤ００６２）の開始濃度で用いた。アッセイ緩衝液は、２０mM ＨＥＰＥＳ（pH７．１５）、０．１mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ２、３％キナーゼ安定剤（Fremont Biosolutions、カタログ番号＃ＳＴＢ−Ｋ０２）を含む０．５mg/mL ＢＳＡからなっていた。１時間後、上記で得られた反応混合物をアッセイ緩衝液で１０倍希釈して、５nM ＢＴＫ：１nM Ｅｕ−ストレプトアビジン複合体（ドナーフルオロフォア）を作製した。次いで、０．１１nM ＢＴＫ−Ｅｕ及び０．１１nM キナーゼトレーサー１７８（Invitrogen、カタログ番号＃ＰＶ５５９３）の混合物 １８μLを、非ネガティブ対照としてのＢＴＫ−Ｅｕのみと共に、３８４ウェル平底プレート（Greiner、７８４０７６）に分配した。アッセイにおいて試験する化合物は、１０倍濃縮物として調製し、そして、１０点曲線を作成するためにＤＭＳＯによって半対数増分で連続希釈した。ＦＲＥＴ反応を開始させるために、１０倍ＤＭＳＯ原液として調製した化合物をプレートに添加し、該プレートを１４℃で１８〜２４時間インキュベートした。
【０１７８】
インキュベートした後、プレートをBMG Pherastar蛍光プレートリーダー（又は等価物）で読み取り、そして、ユウロピウムドナーフルオロフォア（６２０nm 発光）及びＦＲＥＴ（６６５nm 発光）からの発光エネルギーを測定するために用いた。ネガティブ対照のウェルの値を平均して平均最低を得た。「阻害剤を含まない」ポジティブ対照のウェルを平均して、平均最高を得た。最高ＦＲＥＴ率（％）を以下の式を用いて計算した：
最高ＦＲＥＴ率（％）＝１００×［（ＦＳＲ化合物−ＦＳＲ平均最低）／（ＦＳＲ平均最高−ＦＳＲ平均最低）］
（式中、ＦＳＲ＝ＦＲＥＴシグナル比）。最高ＦＲＥＴ率（％）曲線をActivity Base（Excel）にプロットし、そして、ＩＣ５０（％）、ヒル勾配、ｚ’及びＣＶ（％）を決定した。Microsoft Excelを用いて二連曲線（２つの独立な希釈液から得た１本の阻害曲線）から平均ＩＣ５０及び標準偏差を得る。
【０１７９】
このアッセイについての代表的な化合物のデータを以下の表ＩＩに列挙する。
【表２】
2016513621.tif 000030
【０１８０】
ＣＤ６９の発現によって測定した全血におけるＢ細胞活性化の阻害
ヒト血液におけるＢ細胞のＢ細胞受容体媒介活性化を抑制するＢＴＫ阻害剤の能力を試験するための手順は、以下の通りである。
【０１８１】
２４時間薬剤を服用していない非喫煙者という制限条件で、健常ボランティアからヒト全血（ＨＷＢ）を得る。ヘパリンナトリウムで抗凝固処理したバキュテナー（Vacutainer）チューブに静脈穿刺によって血液を収集する。試験化合物を、ＰＢＳ（２０×）で所望の開始薬剤濃度に１０倍希釈し、次いで、ＰＢＳ中１０％ ＤＭＳＯで３倍連続希釈して、９点用量応答曲線を作成する。各化合物希釈液 ５．５μLを２mL ９６ウェルＶ底プレート（Analytical Sales and Services、＃５９６２３−２３）に二連で添加し；ＰＢＳ中１０％ＤＭＳＯ ５．５μLを対照及び非刺激ウェルに添加する。ＨＷＢ（１００μL）を各ウェルに添加し、そして、混合した後、プレートを３７℃、５％ ＣＯ２、湿度１００％で３０分間インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Southern Biotech、＃２０２２−１４）（５００μg/mL溶液 １０μL、最終濃度５０μg/mL）を混合しながら各ウェル（非刺激ウェルを除く）に添加し、そして、プレートを更に２０時間インキュベートする。
【０１８２】
２０時間のインキュベートの最後に、３７℃、５％ ＣＯ２、湿度１００％で３０分間、蛍光プローブ標識抗体（ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０ １５μL、BD Pharmingen、＃５５５６２３及び／又はＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９ ２０μL、BD Pharmingen、＃５５５５３３）と共にサンプルをインキュベートする。補償調整及び初期電圧設定のために、誘導された対照、未染色、及び単回染色を含める。次いで、１×Pharmingen Lyse Buffer（BD Pharmingen  ＃５５５８９９）１mLでサンプルを溶解させ、そして、プレートを１８００rpmで５分間遠心分離する。吸引を介して上清を除去し、そして、残りのペレットを別の１×Pharmingen Lyse Buffer １mLで再度溶解させ、そして、プレートを上記の通り遠心沈殿する。上清を吸引し、そして、残りのペレットをＦＡＣｓ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）で洗浄する。最後のスピンの後、上清を除去し、そして、ペレットをＦＡＣｓ緩衝液 １８０μLに再懸濁させる。BD LSR IIフローサイトメーターにおけるHTS９６ウェルシステムで測定するのに適切な９６ウェルプレートにサンプルを移す。
【０１８３】
用いるフルオロフォアに適切な励起及び発光波長を用いて、データを取得し、そして、Cell Questソフトウェアを用いて陽性細胞率の値を得る。結果は、まず、FACS解析ソフトウェア（Flow Jo）によって解析する。試験化合物のＩＣ５０は、抗ＩｇＭによる刺激後にＣＤ２０陽性でもあるＣＤ６９陽性細胞の割合が５０％低下する濃度として定義される（非刺激バックグラウンドの８つのウェルの平均を減じた後の８つの対照ウェルの平均）。ＩＣ５０値は、XLfitソフトウェア、バージョン３、式２０１を用いて計算する。
【０１８４】
Ｂ細胞活性化の阻害−Ramos細胞におけるＢ細胞ＦＬＩＰＲアッセイ
本発明の化合物によるＢ細胞活性化の阻害を、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞の応答に対する試験化合物の効果を決定することによって示す。
【０１８５】
Ｂ細胞ＦＬＩＰＲアッセイは、抗ＩｇＭ抗体による刺激から細胞内のカルシウム増加の潜在的阻害剤の効果を決定する、細胞に基づく機能的方法である。Ramos細胞（ヒトバーキットリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）を成長培地（下記）で培養した。アッセイの１日前、Ramos細胞を新鮮成長培地（上記と同じ）に再懸濁させ、そして、組織培養フラスコ内において０．５×１０６/mLの濃度に設定した。アッセイ当日、細胞を計数し、そして、組織培養フラスコ内においてFLUO-3AM（TefLabsカタログ番号０１１６、無水ＤＭＳＯ及び１０％プルロニック酸中で調製）１μMを添加した成長培地中１×１０６/mLの濃度に設定し、そして、３７℃（４％ＣＯ２）で１時間インキュベートする。細胞外色素を除去するため、遠心分離（５分間、１０００rpm）によって細胞を回収し、１×１０６細胞/mLでＦＬＩＰＲ緩衝液（下記）に再懸濁させ、次いで、１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンでコーティングされた黒色／透明プレート（ＢＤカタログ番号３５６６９２）に分配した。試験化合物を、１００μM〜０．０３μMの様々な濃度（７濃度、詳細は後述）で添加し、そして、室温で３０分間細胞と共にインキュベートするにまかせた。１０μg/mL 抗ＩｇＭ（Southern Biotech、カタログ番号２０２０−０１）を添加することによってRamos細胞のＣａ２＋シグナル伝達を刺激し、そして、ＦＬＩＰＲ（Molecular Devices、４８０nM励起のアルゴンレーザーを備えるＣＣＤカメラを用いて９６ウェルプレートの画像を捕捉）で測定した。
【０１８６】
培地／緩衝液：
成長培地：Ｌ−グルタミン（Invitrogen、カタログ番号６１８７０−０１０）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Summit Biotechnology、カタログ番号ＦＰ−１００−０５）；１mM ピルビン酸ナトリウム（Invitrogen、カタログ番号１１３６０−０７０）を有するＲＰＭＩ１６４０培地。
【０１８７】
ＦＬＩＰＲ緩衝液：ＨＢＳＳ（Invitrogen、カタログ番号１４１１７５−０７９）、２mM ＣａＣｌ２（Sigma、カタログ番号Ｃ−４９０１）、ＨＥＰＥＳ（Invitrogen、カタログ番号１５６３０−０８０）、２．５mM プロベネシド（Sigma、カタログ番号Ｐ−８７６１）、０．１％ＢＳＡ（Sigma、カタログ番号Ａ−７９０６）、１１mM グルコース（Sigma、カタログ番号Ｇ−７５２８）。
【０１８８】
化合物の希釈の詳細：
１００μMの最高最終アッセイ濃度を達成するために、１０mM 化合物原液（ＤＭＳＯで作製）２４μLをＦＬＩＰＲ緩衝液 ５７６μLに直接添加する。（Biomek2000ロボットピペッターを用いて）試験化合物をＦＬＩＰＲ緩衝液で希釈し、以下の希釈スキームを得る：ビヒクル、１．００×１０−４M、１．００×１０−５、３．１６×１０−６、１．００×１０−６、３．１６×１０−７、１．００×１０−７、３．１６×１０−８。
【０１８９】
アッセイ及び分析：
カルシウムの細胞内増加は、最高−最低統計値（Molecular DevicesのＦＬＩＰＲコントロール及び統計値エクスポートソフトウェアを用いて刺激性抗体の添加によって引き起こされるピークから静止ベースラインを減じる）を用いて報告した。非線形曲線当てはめ（GraphPad Prismソフトウェア）を用いてＩＣ５０を決定した。
【０１９０】
マウスコラーゲン誘発関節炎（ｍＣＩＡ）
０日目に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中ＩＩ型コラーゲンのエマルション（i.d.）をマウスの尾の付け根又は背中の数ヶ所に注射する。コラーゲン免疫後、動物は、約２１〜３５日で関節炎を発現する。関節炎の発症は、２１日目に不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；i.d.）中コラーゲンを全身投与することによって同期（追加免疫）される。追加免疫に対するシグナルである軽度の関節炎（スコア１又は２；以下のスコアの記載を参照）の任意の発症について、２０日後から毎日動物を検査する。追加免疫後、マウスにスコアをつけ、規定の期間（典型的に、２〜３週間）及び投与頻度（１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で候補治療剤を投与する。
【０１９１】
ラットコラーゲン誘発関節炎（ｒＣＩＡ）
０日目に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中ウシＩＩ型コラーゲンのエマルションをラットの背中の数ヶ所に皮内（i.d.）注射する。約７日目、尾の付け根又は背中の別の部位にコラーゲンエマルションの追加免疫注射（i.d.）を行う。関節炎は、一般的に、最初のコラーゲン注射の１２〜１４日後に観察される。１４日目以降、下記（関節炎の評価）の通り関節炎の発現について動物を評価してよい。２回目の抗原曝露時から始めて、規定の期間（典型的に、２〜３週間）及び投与頻度（１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で、動物に候補治療剤を予防的に投与する。
【０１９２】
関節炎の評価：
両モデルにおいて、下記基準に従って４本の足を評価することを含む採点システムを用いて、足及び肢関節の炎症発現を定量する。
【０１９３】
採点：  １＝足又は１本の指の腫脹及び／又は発赤
２＝２つ以上の関節における腫脹
３＝２つ超の関節を含む、著しい足の腫脹
４＝足及び指全体の重篤な関節炎
【０１９４】
評価は、ベースライン測定については０日目に行い、最初の徴候又は腫脹から再度始めて、実験の最後まで１週間に３回以下行う。個々の足の４つのスコアを足すことによって各マウスの関節炎指数を得、動物１匹当たり最高１６のスコアを与える。
【０１９５】
ラットインビボ喘息モデル
雄のBrown-Norwayラットを、ミョウバン ０．２mL中ＯＡ（オボアルブミン） １００μgで３週間にわたって週１回（０、７、及び１４日目）腹腔内で（i.p.）感作する。２１日目（最後の感作の１週間後）に、ＯＡエアゾールで抗原曝露（１％ＯＡで４５分間）する０．５時間前に、ラットにビヒクル又は化合物製剤のいずれかを１日１回皮下投与し、そして、抗原曝露の４又は２４時間後に終了する。殺処分時に、それぞれ血清検査及びＰＫのために全ての動物から血清及び血漿を回収する。気管カニューレを挿入し、そして、肺をＰＢＳで３回洗浄する。気管支肺胞洗浄液（BAL fluid）を全白血球数及び白血球分画について分析する。細胞のアリコート（２０〜１００μL）中の全白血球数は、Coulter Counterで測定する。白血球分画については、サンプル ５０〜２００μLをCytospinで遠心分離し、そして、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を用いて光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球、及びリンパ球の比率を計数し、そして、百分率として表す。ＢＴＫの代表的な阻害剤は、対照レベルと比較して、ＯＡ感作及び抗原曝露したラットの気管支肺胞洗浄において全白血球数の減少を示す。
【０１９６】
前述の発明は、明確性及び理解のために、説明及び実施例を通して詳細に記載した。添付の特許請求の範囲の範囲内で変更及び修正を行い得ることが当業者には明らかである。したがって、上記記載は、例示を意図するものであって、限定を意図するものではないことが理解される。したがって、本発明の範囲は、上記記載を参照して決定されるべきではなく、代わりに、特許請求の範囲が権利を与える等価物の全範囲と共に、以下の添付の特許請求の範囲を参照して決定されるべきである。
【０１９７】
本願に引用される全ての特許、特許出願、及び刊行物は、各個々の特許、特許出願、又は刊行物が個々に表されているのと同程度に、全ての目的のために参照により全文が本明細書に組み入れられる。
【国際調査報告】
2016513621.tif 000032
2016513621.tif 000033