(57)【要約】  本発明は、消化酵素生成物および特定量の栄養素を含む栄養配合物の栄養素を含む、経腸投与に適した安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスを提供する。さらに本発明は、経腸チューブにより、治療有効量の安定性を有し均一な液体組成物を効率的かつ効果的に投与する方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む経腸投与に適した安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスであって、前記プロセスが、
ａ）水性溶液に溶解した消化酵素の懸濁物を調製するステップであって、
ａ．１）前記消化酵素生成物の寸法を縮小させるステップと、
ａ．２）水性溶液を添加するステップと、
ａ．３）混合して前記懸濁物を形成するステップと、
ａ．４）前記懸濁物を、約５分を超える時間保存するステップと
を含むステップと、
ｂ）液体栄養配合物と前記懸濁物とを混合して、前記安定性を有し均一な液体組成物を形成するステップと
を含み、
前記栄養配合物が、約１０〜約３５ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質・炭水化物の栄養素総量を含有するか、または約４．５〜約１１．５ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質の栄養素総量を含有するか、または約３．０〜約７．０ｇ／１００ｍＬの脂肪の栄養素総量を含有するか、または約１．３〜約６．３ｇ／１００ｍＬのタンパク質の栄養素総量を含有する、
プロセス。
【請求項２】
前記ステップａ．４）の時間が、約１５〜約３０分である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記ステップａ．２）の水性溶液が１０ｍＬ未満の量で添加される、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記ステップａ．２）の水性溶液が、約１０，４００ＵＳＰ単位のリパーゼを含む消化酵素生成物に約２．５ｍＬの量で添加されるか、または複数のＵＳＰ単位のリパーゼを含む生成物に、対応する複数の量の溶液が添加される、請求項１、２、または３に記載のプロセス。
【請求項５】
前記消化酵素生成物が、非胃耐性生成物である、請求項１、２、３、または４に記載のプロセス。
【請求項６】
前記消化酵素生成物が、コーティングされていないかまたはコーティングされている、請求項１、２、３、４、または５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記消化酵素生成物が、コーティングされていないパンクレリパーゼ酵素生成物である、請求項６に記載のプロセス。
【請求項８】
前記パンクレリパーゼ酵素生成物が、粉末、顆粒、錠剤、スフィア、ミニタブレット、マイクロタブレット、マイクロ粒子、マイクロスフィア、マイクロカプセル、またはマイクロペレットの形態である、請求項１、２、３、４、５、６、または７に記載のプロセス。
【請求項９】
前記パンクレリパーゼ酵素生成物が、即時放出型のパンクレリパーゼ酵素の生成物または剤形である、請求項１、２、３、４、５、６、７、または８に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記消化酵素生成物が治療有効量である、請求項１、２、３、４、５、６、７、８、または９に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記栄養配合物が、成人／子供用の配合物または乳児用の配合物である、請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記酵素が、室温で約８時間保存した後、約９０％超のリパーゼ活性を有し、前記活性が、０時間での前記栄養配合物のリパーゼ活性に対する、約８時間での前記組成物中のリパーゼ活性の比率のパーセンテージとして計算される、請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記酵素が、室温で約８時間保存した後、約１００％のリパーゼ活性を有し、前記活性が、０時間での前記栄養配合物のリパーゼ活性に対する、約８時間での前記組成物中のリパーゼ活性の比率のパーセンテージとして計算される、請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む、経腸投与に適した安定性を有し均一な液体組成物であって、前記栄養配合物が、約１０〜約３５ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質・炭水化物の栄養素総量を含有するか、または約４．５〜約１１．５ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質の栄養素総量を含有するか、または約３．０〜約７．０ｇ／１００ｍＬの脂肪の栄養素総量を含有するか、または約１．３〜約６．３ｇ／１００ｍＬのタンパク質の栄養素総量を含有する、液体組成物。
【請求項１５】
前記消化酵素生成物が、非胃耐性パンクレリパーゼ酵素生成物である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記パンクレリパーゼ酵素生成物が、粉末、顆粒、錠剤、スフィア、ミニタブレット、マイクロタブレット、マイクロ粒子、マイクロスフィア、マイクロカプセル、またはマイクロペレットの形態である、請求項１４または１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記パンクレリパーゼ酵素生成物が、即時放出型のパンクレリパーゼ酵素の生成物または剤形である、請求項１４、１５、または１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記消化酵素生成物が、治療有効量である、請求項１４、１５、１６、または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記栄養配合物が、成人／子供用の配合物または乳児用の配合物である、請求項１４、１５、１６、または１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記酵素が、室温で約８時間保存した後約９０％超のリパーゼ活性を有し、前記活性が、時間での前記栄養配合物のリパーゼ活性に対する、約８時間での前記組成物中のリパーゼ活性の比率のパーセンテージとして計算される、請求項１４、１５、１６、１７、１８、または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む組成物を必要とする患者に投与する方法であって、
ａ）前記消化酵素生成物の寸法を縮小させるステップと、
ｂ）水性溶液を添加するステップと、
ｃ）混合して懸濁物を形成するステップと、
ｄ）前記懸濁物を、約５分を超える時間保存するステップと、
ｅ）前記ステップｄ）の懸濁物を液体栄養配合物と混合して安定性を有し均一な液体組成物を形成するステップと、
ｆ）分散バッグから前記患者へ、経腸チューブを介して前記組成物を分注するステップと
を含み、
前記栄養配合物が、約１０〜約３５ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質・炭水化物の栄養素総量を含有するか、または約４．５〜約１１．５ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質の栄養素総量を含有するか、または約３．０〜約７．０ｇ／１００ｍＬの脂肪の栄養素総量を含有するか、または約１．３〜約６．３ｇ／１００ｍＬのタンパク質の栄養素総量を含有する、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
先行出願の参照
本願は、２０１３年３月１５日出願の米国仮特許出願第６１／７９８，０２７号の利益を請求するものであり、この開示は参照により本明細書に援用される。
【０００２】
技術分野
本発明は、経腸投与に適した、消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスを目的とする。本プロセスは、消化酵素生成物のプレ懸濁物の調製およびこの懸濁物の栄養配合物への添加を含む。さらに本発明は、経腸チューブにより消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む、安定性を有し均一な液体組成物の治療有効量を効率的かつ効果的に投与する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
患者の適切な薬物の服用は、薬物の分野の中で重要な関心事である。特に、乳児、幼児、および高齢の患者、場合によっては成人人口でも、薬物の投与および服用方法は、しばしば重大な問題を提示する。当業者に周知のように、薬物は、多くの形態（たとえば液体、固体、および固体を含む液体の組み合わせ）で提供され、多くの方法（たとえば、経口的、注射を介して経皮的に）患者に送達される。しかしながら、未だ、膵酵素補助投与製剤の効率およびこの製剤を使用する際の患者のコンプライアンスの両方を改善するために、膵酵素補助投与製剤を最適化する必要がある。したがって、膵酵素を常に使用する状態（膵外分泌不全（ＥＰＩ）など）の患者にとっての問題は、最も低い用量で最も効果的であり、詳細に明らかにされる安全なプロファイルを有する膵酵素をどのように入手するかである。
【０００４】
ＦＤＡによれば、膵外分泌不全（ＥＰＩ）に２００，０００人超のアメリカ人が罹患しており、患者は膵臓により作製される消化酵素が不足しているため食物を適切に消化できないと推測されている。消化酵素の減少により、栄養素の消化不良および吸収不良などの障害が引き起こされ、これにより栄養障害および栄養障害に関連する結果として生じる他の望ましくない生理的状態が引き起こされる。これらの障害は、嚢胞性線維症（ＣＦ）ならびに、膵臓癌、膵切除、および膵炎などの膵臓の不十分な外分泌機能をもたらす他の状態に罹患した人々に良く見られる。この栄養障害は、特に乳児およびＣＦ患者で処置されていないままである場合、生命を危うくする場合があり、この障害により、小児の生育不全、易感染性免疫応答がもたらされ、平均余命が短くなる。
【０００５】
膵酵素が常に使用される他の状態は、通常、消化器系の解剖学的構造を変える状態（胃バイパス、膵頭十二指腸切除、小腸切除など）か、もしくは消化不良を引き起こす腸の機能を損なう状態（セリアック病、クローン病、糖尿病、細菌の過剰増殖など）、または吸収を変化させる他の二次的な生理的状態（胃腸腫瘍、薬理学的な薬剤［すなわちオクトレオチド］など）がある。
【０００６】
パンクレリパーゼ酵素および他の膵酵素生成物（ＰＥＰ）などの消化酵素は、ＥＰＩを少なくとも部分的に治療するために投与できる。消化酵素補助剤の投与により、患者が食物をより効率的に消化できる。
【０００７】
ＥＰＩを処置するために使用されるパンクレリパーゼ酵素は、主に、リパーゼ、プロテアーゼ、およびアミラーゼの３種類の酵素クラスを、これらの様々な補因子および補酵素と共に組み合わせたものである。これらの酵素は、膵臓で天然に産生され、脂肪、タンパク質、および炭水化物の消化にとって重要な酵素である。パンクレリパーゼ酵素は、概して、ブタの膵腺（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｇｌａｎｄ）から調製されるが、他の供給源も同様に使用できる。たとえば、これらは、米国特許第６，０５１，２２０号、米国特許公開公報第２００４／００５７９４４号、同第２００１／００４６４９３号、および国際公開第２００６／０４４５２９号に記載される。この酵素は、脂肪のグリセロールおよび脂肪酸への加水分解、デンプンのデキストリンおよび糖への加水分解、ならびにタンパク質のアミノ酸および派生物質への加水分解を触媒する。
【０００８】
膵酵素は、略中性であり、わずかにアルカリ性の条件下で最適な活性を示す。胃の条件の下、膵酵素は、生物学的な活性の結果として起こる損失を伴って不活性化され、ここで膵臓のリパーゼは、吸収不良の処置の鍵であり、特に胃の不活性に感受性がある。したがって、リパーゼの活性は、概してリパーゼを含む酵素組成物の安定性を決定するためにモニタリングされる。
【０００９】
パンクレリパーゼ酵素などの消化酵素を含む組成物は、カプセル（Ｚｅｎｐｅｐ（登録商標）、Ｃｒｅｏｎ（登録商標）、Ｃｏｔａｚｙｍ（登録商標）およびＰａｎｃｒｅａｚｅ（登録商標））、錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標）、Ｖｉｏｋａｓｅ（登録商標））、顆粒（Ｅｕｒｏｂｉｏｌ（登録商標））の形態で経口投与用に開発されている。しかしながら、患者がカプセルを飲み込むことができない場合、各カプセルを開けて、中身を、少量の食物、通常は軟らかい酸性食品（商業的に入手可能なアップルソースなど）に混ぜて、スプーンで患者に経口的に投与する場合がある。あるいは、このような薬物は、投与できる媒質に懸濁した薬物の含量を含むシリンジ装置を使用して、乳児および小児に経口投与してもよい。
【００１０】
また、ＥＰＩに罹患している小児および成人の患者を含む一部の患者に、胃および空腸の栄養チューブなどのより小型の管腔経腸栄養チューブを含む経腸チューブを介して栄養を与えることが必要であることが認識されている。したがって、経口的に消化酵素を摂取できない患者にパンクレリパーゼ酵素などの消化酵素の経腸投与することが明らかに必要である。ここで消化酵素は、粒子の形態であり、投与のため栄養配合物に添加できる。しかしながら、消化酵素が栄養配合物中のこれら酵素に感受性の強い成分に関して酵素活性を効率的に発揮することをどのように保証するか、微粒子による経腸栄養に対する潜在的な妨害を取り除くかといった問題が挙げられる。
【００１１】
国際公開第２０１２／０４２３７２号は、経腸投与によるものを含む、患者への投与のための、前消化した栄養配合物を調製する方法を開示している。この引用文献は、コーティングを溶解し、栄養配合物を消化するために有効である酵素を遊離するための、腸溶性コーティング膵酵素生成物の機械的または化学的な処置方法を開示している。この混合物は、成分および患者への投与の最中に起こる酵素反応の観点から非常に複雑なものであり、そのため不安定であり、脂質および水相の分離が起こり、不溶性成分の沈殿が起こりやすい。この引用文献は、経腸投与に適切であるよう十分に安定し、均一である前消化下栄養配合物を調製する方法を開示するものではない。
【００１２】
経腸栄養は、口（経口胃管またはＯＧ）；鼻（経鼻胃管またはＮＧ）；胃（胃瘻造設またはＧＴ）；腸（空腸瘻造設またはＪＴ）を介して得られてもよく、これらを使用して、夜中の睡眠中または日中にカロリーおよび栄養素を送達できる。鼻腔胃栄養チューブまたは「ＮＧチューブ」は、鼻を介して食道へと降り、胃までを通る。他方で胃栄養チューブまたは「Ｇチューブ」は、腹部の小さな切開部を介して胃へ直接挿入され、次第に胃栄養チューブを用いた治療は、慢性的な体重減少を呈し、長時間の経腸栄養を必要とする嚢胞性線維症の患者などの多くの患者にとって標準的な治療となっている。
【００１３】
また、侵入経路に関わらず、より長い栄養チューブ（ＯＧまたはＮＧ）は、胃を迂回して十二指腸または空腸に直接栄養素を送達するためにも使用される。
【００１４】
栄養チューブの配置は、患者の総合的な健康状態および年齢、状態の重症度、配置の持続時間、チューブの種類、配置手段、患者の快適性、煩わしさの軽減、感染の可能性、財政上の考慮、利用能、アクセスおよび用途を含む様々な条件に左右される。したがって、様々なチューブを、このような用途のためいくつかのサイズで利用することができる。
【００１５】
経腸栄養の短期での利点は、即自的な体重の増加およびエネルギーの増加を含む。長期的な増加は、体脂肪の増加、除脂肪筋肉量、強度の改善、強力な免疫系、肺感染症の最中の体重減少の低減、より大きな度合いの体重管理、および多くの他の利点を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
しかしながら、経腸栄養により提供される明らかな利点にも関わらず、固形経口用量薬剤の胃瘻造設投与は、活性薬学成分を無効にし得る多くの調製上および投与上の問題により複雑である。また、閉塞または固着することなくシリンジの出口およびＧチューブの管腔を介してパンクレリパーゼ酵素の一定した完全な送達を保証するために、入手可能な安定性を有し均一な複合体組成物を有することが必須である。
【００１７】
前述の観点から、異なる人々および異なる機器により適用できる消化酵素栄養組成物、
より具体的には、相分離および経腸栄養チューブの閉塞の感受率が全くない状態で経腸投与できる適切な時間の間安定性を有し均一な組成物を調製するための、迅速であり、実用的であり、安価で、簡潔かつ有効なプロセスが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、経腸投与に適した、消化酵素生成物および特定の栄養配合物の栄養素を含む、安定性を有し均一な液体組成物を調製するプロセスを目的とする。本プロセスは、消化酵素生成物のプレ懸濁物の調製および栄養配合物への懸濁物の添加を含む。さらに本発明は、経腸チューブにより、消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む安定性を有し均一な液体組成物の治療有効量を効率的かつ効果的に投与する方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【００１９】
本発明は、消化酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスであって、上記プロセスが、水性溶液中に溶解する消化酵素生成物の懸濁物の調製、次いで特定の量の栄養素を含む液体栄養配合物と上記懸濁物を混合することを含む、プロセスに関する。この液体組成物は、調製から少なくとも約８時間酵素の活性（リパーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ）を保持する。
【００２０】
本発明の１実施形態では、消化酵素懸濁物の調製は、ａ．１）粉砕、微粉砕、またはマッシュなどの手段により消化酵素の寸法を縮小させるステップと、ａ．２）少量の水性溶液を添加するステップと、ａ．３）水性溶液および消化酵素を混合して懸濁物を形成するステップとを含む。特定量の栄養素を有する液体栄養配合物に添加する前の短い時間の間、入手した消化酵素懸濁物を保持する。
【００２１】
本発明により使用する消化酵素生成物は、錠剤、カプセル、顆粒、または小袋を含むいずれかの適切な剤形であってもよい。本発明に係る有益であり適切な消化酵素生成物は、好ましくは、非胃耐性パンクレリパーゼ酵素である。非胃耐性酵素生成物は、胃液に耐性があると意図されていない生成物である。非胃耐性生成物はコーティングされていなくてもよく、またはコーティングされていてもよい。この生成物がコーティングされている場合、コーティングは胃液で溶解する。コーティングは、好ましくは、ｐＨ独立性水可溶性ポリマーである。またコーティングは、ｐＨ依存性水可溶性ポリマーであってもよいが、この場合、非常に少量で存在する、および／または生成物上で非均一に存在しており、したがって、生成物が胃環境に簡単に直接曝露されることとなり、したがって非胃耐性が観察される。
【００２２】
用語「コーティングしていない」または「コーティングした」は、それぞれ、生成物の周りのポリマー層の有無を示したものである。ｐＨに依存しない水可溶性ポリマーの例は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリビニルアルコールである。ｐＨ依存性水可溶性ポリマーの例は、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、シェラック、メタクリル酸メチルコポリマー、およびメタクリル酸／メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸−アクリル酸エチルコポリマー（１：１）（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ５５など）である。本発明に使用するパンクレリパーゼ酵素生成物は、好ましくはコーティングされていない。
【００２３】
本発明に有益な消化酵素生成物は、即時放出型パンクレリパーゼの任意の生成物または剤形であってもよい。
【００２４】
パンクレリパーゼ酵素生成物の例として、Ｖｉｏｋａｃｅ（商標）（米国で販売）、Ｖｉｏｋａｓｅ（登録商標）（カナダで販売）、Ｅｕｒｏｂｉｏｌ（登録商標）１２，５００  ＰｈＥｕｒ  リパーゼ単位（フランスで販売）およびＣｏｔａｚｙｍ（登録商標）（カナダで販売）が挙げられる。
【００２５】
本明細書で使用される用語「消化酵素」は、臓器により摂取または吸収できる食品の成分を分解する消化管中の酵素を指す。消化酵素の非限定的な例として、パンクレリパーゼ酵素（パンクレリパーゼ酵素またはパンクレアチンとも呼ばれる）、リパーゼ、コリパーゼ、トリプシン、キモトリプシン、キモトリプシンＢ、パンクレアトペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ、グリセロールエステルヒドロラーゼ、ホスホリパーゼ、ステロールエステルヒドロラーゼ、エラスターゼ、キニノゲナーゼ、リボヌクレアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、α−アミラーゼ、パパイン、キモパパイン、グルテナーゼ、ブロメライン、フィシン、β−アミラーゼ、セルラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ラクターゼ、スクラーゼ、イソマルターゼ、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００２６】
消化酵素は、粉末、顆粒、錠剤、スフィア（ｓｐｈｅｒｅｓ）、ミニタブレット、マイクロタブレット、マイクロ粒子、マイクロスフィア、マイクロカプセル、マイクロペレット、および最大約５ｍｍの直径を有するいずれかの粒子を含み、この粒子は任意の寸法および形状を有し得る。
【００２７】
本明細書で使用される用語「膵酵素」は、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、もしくはそれらの混合物、またはパンクレアチンなどの酵素活性を有する膵臓由来のいずれかの抽出物などの脾臓分泌物に存在する種類の酵素のうちのいずれか１種を指す。
【００２８】
用語「パンクレリパーゼ酵素」または「パンクレリパーゼ酵素」または「パンクレアチン」は、アミラーゼ、リパーゼ、およびプロテアーゼの酵素を含む、数種類の酵素の混合物を指す。パンクレリパーゼ酵素は、たとえば、Ｎｏｒｄｍａｒｋ  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ  ＧｍｂＨまたはＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＬＬＣから商業的に入手可能である。
【００２９】
用語「リパーゼ」は、脂質のグリセロールおよび単純な脂肪酸への加水分解を触媒する酵素を指す。本発明に適したリパーゼの例として、限定するものではないが、動物のリパーゼ（たとえばブタのリパーゼ）、細菌のリパーゼ（たとえばシュードモナスのリパーゼおよび／またはバークホルデリアリパーゼ）、真菌のリパーゼ、植物のリパーゼ、組み換えリパーゼ（たとえば、培養物中の細菌、酵母、真菌、植物、昆虫、もしくは哺乳類の宿主細胞のうちのいずれか１つから選択される、適切な宿主細胞による組み換えＤＮＡ技術を介して産生されるか、または天然に存在する配列と相同もしくは実質的に同一なアミノ酸配列を含む組み換えリパーゼ、または、天然に存在するリパーゼをコードする核酸と相同または実質的に同一な核酸によりコードされるリパーゼなど）、合成リパーゼ、化学変性リパーゼ、ならびにそれらの混合物が挙げられる。用語「脂質」は、脂肪、ワックス、ステロール、脂溶性ビタミン（ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、およびＫなど）、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質などを含む天然に存在する分子を広く含む。
【００３０】
用語「アミラーゼ」は、たとえば、αアミラーゼ、βアミラーゼ、γアミラーゼ、酸αグルコシダーゼ、プチリアンなどの唾液アミラーゼなど、デンプンを分解するグリコシドヒドロラーゼ酵素を指す。本発明の使用に適したアミラーゼとして、限定するものではないが、動物のアミラーゼ、細菌のアミラーゼ、真菌のアミラーゼ（たとえばアスペルギルスアミラーゼ、たとえばアスペルギルス・オリーゼのアミラーゼ）、植物アミラーゼ、組み換えアミラーゼ（たとえば培養物中の細菌、酵母、真菌、植物、昆虫、もしくは哺乳類の宿主細胞のうちのいずれか１種から選択される適切な宿主細胞による組み換えＤＮＡ技術を介して産生するか、または天然に存在する配列と相同もしくは実質的に同一なアミノ酸を含む組み換えアミラーゼ、天然に存在するアミラーゼをコードする核酸と相同または実質的に同一である核酸によりコードされるアミラーゼなど）、化学的変性アミラーゼ、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００３１】
用語「プロテアーゼ」は、一般的に、タンパク質のアミノ酸の間のペプチド結合を分解する酵素（たとえばプロテイナーゼ、ペプチダーゼ、またはタンパク質分解性酵素）を指す。プロテアーゼは、一般的に、たとえばアスパラギン酸ペプチダーゼ、システイン（チオール）ペプチダーゼ、メタロペプチダーゼ、セリンペプチダーゼ、スレオニンペプチダーゼ、アルカリ性またはセミアルカリ性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、および知られていない触媒機構のペプチダーゼといった、触媒の種類により同定される。本発明での使用に適したプロテアーゼの非限定的な例として、セリンプロテアーゼ、スレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ（たとえばプラスメプシン）、メタロプロテアーゼおよびグルタミン酸プロテアーゼが挙げられる。さらに、本発明の使用に適したプロテアーゼは、限定するものではないが、動物のプロテアーゼ、細菌のプロテアーゼ、真菌のプロテアーゼ（たとえばアスペルギルスメレウスプロテアーゼ）、植物のプロテアーゼ、組み換えプロテアーゼ（たとえば、培養物中の細菌、酵母、真菌、植物、昆虫もしくは哺乳類の宿主細胞のうちのいずれか１つから選択される適切な宿主細胞による組み換えＤＮＡ技術を介して産生されるか、または天然に存在する配列と相同もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含む組み換えプロテアーゼ、天然に存在するプロテアーゼをコードする核酸と相同もしくは実質的に同一な核酸によりコードされるプロテアーゼなど）、化学変性プロテアーゼ、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００３２】
本発明の組成物であるパンクレリパーゼ酵素は、１種以上のリパーゼ（すなわち１種のリパーゼもしくは２種以上のリパーゼ）、１種以上のアミラーゼ（すなわち１種のアミラーゼもしくは２種以上のアミラーゼ）、１種以上のプロテアーゼ（すなわち１種プロテアーゼもしくは２種以上のプロテアーゼ）、ならびにこれら酵素の異なる組み合わせおよび比率の混合物を含むことができる。
【００３３】
本発明に有益な組成物のリパーゼ活性は、約６５０〜約４５，０００ＩＵ（ＵＳＰ法）（または４５，０００ＵＳＰ単位）、約６７５〜約８２５ＩＵ、約２，５００〜約２８，０００ＩＵ、約２，７００〜約３，３００ＩＵ、約４，５００〜約５，５００ＩＵ、約８，０００〜約１１，０００ＩＵ、約１３，５００〜約１６，５００ＩＵ、および約１８，０００〜約２２，０００ＩＵ、約２２，５００〜約２７，５００ＩＵ、約３６，０００〜約４４，０００ＩＵ、ならびにそれらの間のすべての範囲および部分範囲であってよい。また、リパーゼ活性は、約５，０００ＰｈＥｕｒリパーゼ単位〜約３０，０００ＰｈＥｕｒリパーゼ単位の範囲とすることができ、約５，０００、または約１０，０００、または約１２，５００、約１５，０００または約２０，０００または約３０，０００、または約４０，０００ＰｈＥｕｒリパーゼ単位であってもよい。
【００３４】
本組成物のアミラーゼ活性は、約１，６００〜約６，５７５ＩＵ（ＵＳＰ）（または６，５７５ＵＳＰ単位）、約６，０００〜約２２５，０００ＩＵ、たとえば約６，４００〜約２６，３００ＩＵ、約１０，７００〜約４３，８００ＩＵ、約２１，５００〜約８７，５００ＩＵ、約３２，１００〜約１３１，３００ＩＵ、約４２，９００〜約１７５，０００ＩＵ、約５３，６００〜約２１８，７００ＩＵならびにそれらの間の全ての範囲および部分範囲であってよい。
【００３５】
本組成物のプロテアーゼ活性は、約１，２５０〜約３，８５０ＩＵ（ＵＳＰ）（または３，８５０ＵＳＰ単位）、約５，０００〜約１３０，０００ＩＵ、たとえば約５，０００〜約１５，４００ＩＵ、約８，４００〜約２５，７００ＩＵ、約１６，８００〜約５１，３００ＩＵ、約２５，０００〜約７７，０００ＩＵ、約３３，５００〜約１０２，８００ＩＵ、約４１，８００ＩＵ〜約１２８，３００ＩＵならびにそれらの間の全ての範囲および部分範囲であってよい。
【００３６】
リパーゼ活性は、約６７５〜約８２５ＩＵ（または８２５ＵＳＰ単位）、アミラーゼ活性は、約１，６００〜約６，５７５ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約１，２５０〜約３，８５０ＩＵ（ＵＳＰ）の範囲であってよい。あるいは、リパーゼ活性は、約２，７００〜約３，３００ＩＵ、アミラーゼ活性は、約６，４００〜約２６，３００ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約５，０００〜約１５，４００Ｉ（ＵＳＰ）（または１５，４００ＵＳＰ単位）の範囲であってよい。あるいは、リパーゼ活性は、約４，５００〜約５，５００ＩＵ、アミラーゼ活性は、約１０，７００〜約４３，８００ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約８，４００〜約２５，７００ＩＵ（ＵＳＰ）（または２５，７００ＵＳＰ単位）の範囲であってよい。あるいは、リパーゼ活性は、約９，０００〜約１１，０００ＩＵ、アミラーゼ活性は、約２１，５００〜約８７，５００ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約１６，８００〜約５１，３００ＩＵ（ＵＳＰ）（または５１，３００ＵＳＰ単位）の範囲であってよい。あるいは、リパーゼ活性は、約１３，５００〜約１６，５００ＩＵ、アミラーゼ活性は、約３２，１００〜約１３１，３００ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約２５，０００〜約７７，０００ＩＵ（ＵＳＰ）（または７７，０００ＵＳＰ単位）の範囲であってよい。リパーゼ活性は、約１８，０００〜約２２，０００ＩＵ、アミラーゼ活性は、約４２，９００〜約１７５，０００ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約３３，５００〜約１０２，６００ＩＵ（ＵＳＰ）（または１０２，５００ＵＳＰ単位）の範囲であってよい。リパーゼ活性は、約２２，０００〜約２７，５００ＩＵ、アミラーゼ活性は、約５３，６００〜約２１８，７００ＩＵ、およびプロテアーゼ活性は、約４１，８００ＩＵ〜約１２８，３００ＩＵ（ＵＳＰ）（または１２８，３００ＵＳＰ単位）の範囲であってよい。
【００３７】
本発明の１実施形態では、上述したアミラーゼ活性の画分を含む単一の単位も本発明のプロセスに使用できる。本発明のプロセスでは、懸濁物を調節するために使用したパンクレリパーゼ酵素の有効量は、合計約３，０００、約４，２００、約５，０００、約６，０００、約８０００、約１０，０００、約１０，４４０、約１０，５００、約１５，０００、約１６，０００、約１６，８００、１６，８００、約２０，０００、約２０，８８０、約２１，０００、約２４，０００、または２５，０００のＵＳＰ、リパーゼ単位もしくはそれらの倍数、または約５，０００、もしくは約１２，５００、もしくは約３０，０００ＰｈＥｕｒリパーゼ単位もしくはそれらの倍数であってもよい。
【００３８】
本発明の１実施形態では、消化酵素懸濁物の調製は、ａ．１）粉砕、微粉砕、またはマッシュなどの手段により、消化酵素（好ましくは非胃耐性）の寸法を縮小させるステップと、ａ．２）少量の水性溶液を添加するステップと、ａ．３）混合して懸濁物を形成するステップとを含む。得られた懸濁物は、特定量の栄養素を有する液体栄養配合物に添加する前に短時間保持される。この時間は、５分間超、より好ましくは１０分間超とすべきであり、好ましくは、約１５〜約３０分の時間から構成され、好ましくは約１５分間の時間である。
【００３９】
第１のステップでは、ａ．１）パンクレリパーゼ酵素の粒子を粉砕して微粉を入手し、手動のプロセス（セラミックの乳鉢および乳棒；コーヒーマグおよび金属スプーンを使用する）、または丸薬粉砕装置のいずれかで実施され得るこのステップの最中に用量の損失は起こらない。粉砕装置は、ＧＩＭＡ（登録商標）（Ｓ）、Ｇｅｎｉｕｓ（登録商標）（Ｓ）、Ａｐｅｘ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｉｌｌｓ  Ｃｒｕｓｈｅｒ（登録商標）（Ｓ）などのスクリュー（Ｓ）型であってもよい。粒子の次元および用量の回収の観点の両方での再現性のため、丸薬粉砕機を使用することが好ましい。
【００４０】
次いで、微粉砕したパンクレリパーゼ酵素を、少量の適切な投与ビヒクルに添加し、混合して均一な懸濁物の形成を可能にする。投与ビヒクルは水性溶液である。これは、１）精製水もしくは脱イオン水であって、無菌性の必要条件に遵守しないことを除き、非経口投与用の滅菌水に相当する、精製水もしくは脱イオン水；２）滅菌水；３）生理溶液（０．９％  ＮａＣｌ）；または４）水道水とすることができる。精製水または滅菌水、または生理溶液（もしくは生理食塩水）は、最も医薬品にとって好ましい希釈剤であるため好ましい。
【００４１】
均一な消化酵素懸濁物を入手することは、少量の溶液を使用して高密度の濃縮懸濁物を調製するために重要である（ステップａ．２）。この用量は１０ｍｌ未満とすべきである。好ましくは、対応する強度にしたがって少量の水性溶液中に懸濁すべきである。実際に、約９，１９０または約１０，４００ＵＳＰ単位の用量のリパーゼでは、好ましくは２．５ｍＬの容量が使用され、複数のＵＳＰ単位を有する剤形では、対応する複数の容量が使用される。例として、約１０，４００ＵＳＰ単位のリパーゼを含むパンクレリパーゼ酵素（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標）など）１錠は、２．５ｍＬ（ティースプーン１／２杯）の精製水に懸濁される。１２，５００ＰｈＥｕｒ単位のリパーゼを備えたパンクレリパーゼ酵素（Ｅｕｒｏｂｉｏｌ（登録商標）など、１２，５００ＰｈＥｕ単位のリパーゼは、９，１９１ＵＳＰ単位に対応し；ＰｈＥｕｒリパーゼ単位から使用したＵＳＰリパーゼ単位への転換係数は、１ＰｈＥｕｒ単位＝１．３６ＵＳＰ単位である）の１用量は、２．５ｍＬ（ティースプーン１／２杯）の精製水に懸濁される。２０，８８０ＵＳＰ単位のリパーゼを含むパンクレリパーゼ酵素（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標）など）の１用量は、５ｍｌ（ティースプーン１杯）の精製水に懸濁される。酵素の安定性が維持され、これを保持するために、高い濃度の懸濁物を調製すべきであり、酵素の活性分解に直接関係するため、希釈係数は安定性にとって重要な側面である。
【００４２】
均一な懸濁物を入手するためには、混合し、次いで液体栄養配合物に添加する前に室温で短時間混合物を保存することが重要である。この時間は、５分超、より好ましくは１０分超であり；好ましくは約１５分〜約３０分から構成される。約１５分は、選択した粉砕の種類または丸薬粉砕機の種類とは無関係に、様々な寸法の未処置の粒子またはフラグメントを含まない懸濁物を調製するのに特に適している。この時間の持続時間は、均一な懸濁物の調製を保証するだけでなく、リパーゼの活性の維持をも保証するものである。実際、使用したパンクレリパーゼ酵素の有効性成分含量から独立して用量の回収を常に完全にすることが重要である。懸濁物を栄養配合物に添加する前に、数秒間、スプーンまたはスパチュラを用いて懸濁物をゆっくりと撹拌してもよい。
【００４３】
次いで、水性溶媒に懸濁した微粉砕したパンクレリパーゼ酵素を、特定量の栄養素を含む液体栄養配合物に添加し、ここで、栄養配合物は、炭水化物、脂質、タンパク質、および水の混合物である。次いで、供給バッグから経腸チューブを介して、本組成物を患者に分注する前に、約１５分間などの適切な時間、振盪する。栄養配合物への懸濁物の添加は、好ましくは、栄養配合物をすでに含む供給（または分注）バッグで直接行われる。
【００４４】
本発明のプロセスは、所定の有効成分含量を保存することが可能であり、したがって、消化酵素生成物を完全に送達することが可能であり、実際、酵素活性の損失は起きておらず、液体組成物の調製の間に、活性酵素の分解も機械的な除去も全く起きていない。
【００４５】
また本発明は、特定量の栄養素を有する栄養配合物中のパンクレリパーゼ酵素の安定性を有し均一な分散物であるパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＮＦ）の液体組成物を目的とする。この液体組成物は、酵素活性（リパーゼ、プロテアーゼ、およびアミラーゼの活性）に関して安定したままである。実際に、この混合物は、栄養配合物に酵素を添加した直後に測定した活性である０時間での栄養配合物中のリパーゼ活性に対する所定の時間（ｔ）での組成物中のリパーゼ活性の比率のパーセンテージとして計算されるリパーゼ活性を保持する。約８時間後のリパーゼ活性は、室温で、約９０％超または約１００％であり、プロテアーゼの活性は約９０％または約１００％であり、アミラーゼの活性は、約８５％超または約１００％である。消化酵素栄養素組成物での酵素活性の収率は、所定の時間（ｔ）での酵素活性と、０時間である添加直後の混合物で計算した活性との間の比率である。さらに、少なくとも約８〜１０時間の同一時間、組成物中で相分離（脂質成分および水性成分の間の分離、タンパク質の沈殿など）は観察されない。したがって、本発明の組成物は、一定の用量かつ均一な栄養素の送達を可能にする。
【００４６】
このパンクレリパーゼ酵素および栄養素の組成物は、小児および成人の患者の胃腸系機能不全の栄養管理に使用されており、投与時間の間著しく明らかに相分離することなく供給ポンプおよびＧチューブを使用した連続注入を介した投与に適している。
【００４７】
本発明に使用される栄養配合物は、炭水化物、脂質、タンパク質の混合物；加水分解した形態であり得るポリマー成分である、特定量の栄養素を含む成人／小児用、または乳児用の栄養配合物であってもよい。この栄養配合物は、微量元素および繊維などの他の成分をさらに含んでもよい。
【００４８】
本発明に有益な製剤は、特定量の栄養素を有する栄養配合物である。脂肪・タンパク質・炭水化物の栄養素総量は、約１０〜約３５ｇ／１００ｍＬ、より好ましくは約１２〜３２である。栄養配合物が成人／小児用の栄養配合物である場合、脂肪・タンパク質・炭水化物の合計含量は、約２０〜約３２ｇ／１００ｍＬであり、栄養配合物が乳児の栄養配合物である場合、脂肪・タンパク質・炭水化物の栄養素総量は、約１２〜約１４ｇ／１００ｍＬである。
【００４９】
本発明に有益な別の実施形態は、約４．５〜約１１．５ｇ／１００ｍＬ、より好ましくは約４．９〜約１１．３の脂肪・タンパク質の栄養素総量を含有する栄養配合物である。栄養配合物が成人／小児用の栄養配合物である場合、脂肪およびタンパク質の合計含量は、約６．８〜約１１．３ｇ／１００ｍＬであり、栄養配合物が乳児の栄養配合物である場合、脂肪およびタンパク質の合計含量は、約４．９〜約５．３ｇ／１００ｍＬである。
【００５０】
本発明に有益な別の実施形態は、約３．０〜約７．０ｇ／１００ｍＬ、より好ましくは約３．３〜約６．８の脂肪の栄養素総量を含有する栄養配合物である。栄養配合物が成人／小児用の栄養配合物である場合、脂肪の栄養合計含量は、約３．８〜約６．８ｇ／１００ｍＬであり、栄養配合物が乳児の栄養配合物である場合、脂肪の合計含量は、約３．３〜約３．７ｇ／１００ｍＬである。
【００５１】
本発明に有益な別の実施形態は、約１．３〜約６．３ｇ／１００ｍＬ、より好ましくは約１．４〜約６．２のタンパク質の栄養素総量を含有する栄養配合物である。栄養配合物が成人／小児用の栄養配合物である場合、タンパク質の栄養素総量は、約３〜約６．２ｇ／１００ｍＬであり、栄養配合物が乳児の栄養配合物である場合、タンパク質の栄養素総量は、約１．４〜約１．６ｇ／１００ｍＬである。
【００５２】
一般的に使用される経腸製剤は、ポリマー製剤または他の特定の製剤を含む。牛乳を主成分とするか、またはラクトースフリーの商業的な製剤を含むポリマー製剤は、商業的に入手可能であり、一般的に、完全にバランスのとれた食事を提供する。特定の製剤は、加水分解したタンパク質または一部のアミノ酸の製剤を含み、複合タンパク質の消化が難しい患者に使用される。
【００５３】
本発明に適した商業的な脂質の成人／小児用経腸製剤は、限定するものではないが、Ｐｅｐｔａｍｅｎ（登録商標）Ｊｕｎｉｏｒ  １、Ｐｅｐｔａｍｅｎ（登録商標）Ｊｕｎｉｏｒ１．５、Ｅｎｓｕｒｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ、Ｆｏｒｔｉｍｅｌ（登録商標）などが使用され、また類似の生成物を使用してもよい。商業的な乳児の製剤の例として、Ｈｕｍａｎａ（登録商標）１、Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）１、およびＮｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）２がある。
【００５４】
本発明に使用される消化酵素生成物は、治療有効量である。パンクレリパーゼ酵素は、液体栄養配合物に投与される。この用量は、年齢、臨床症状に基づき個々の患者に適合していてもよい。本発明のプロセスでは、栄養配合物中、脂肪１ｇあたり約１，０００〜約５，００００、好ましくは約１，０００〜約４，５００の用量のリパーゼＵＳＰ単位が、液体栄養配合物と混合する際の開始用量として推奨される。
【００５５】
注入の最中、栄養素の変性が、脂質、タンパク質、炭水化物に関するパンクレリパーゼ酵素の酵素活性により起こり、消化済みの栄養素が形成される。これは、消化が起こっていることを保証する。にもかかわらず、これは栄養素の種類および比率を変化させ、かつ本発明の組成物の消化済の生成物は、８〜１０時間にわたり均一であり安定のままである。
【００５６】
本発明の特定の実施形態は、非胃耐性パンクレリパーゼ酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む経腸投与に適した、安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスであって、このプロセスは、ａ）水性溶液中に溶解したパンクレリパーゼ酵素の懸濁物を調製するステップであって、ａ．１）消化酵素生成物の寸法を縮小させるステップと、ａ．２）約１０，４００ＵＳＰ単位のリパーゼを含む消化酵素生成物に約２．５ｍＬの量の水性溶液を添加するか、または複数のＵＳＰ単位のリパーゼを含む生成物に対応する複数の量の溶液を添加するステップと、ａ．３）混合して懸濁物を形成するステップと、ａ．４）約５分超（好ましくは約５分〜約３０分間；好ましくは約１５分間）の時間懸濁物を保存するステップとを含む、ステップと、ｂ）液体栄養配合物で懸濁物を混合して、安定性を有し均一な液体組成物を形成するステップとを含み、栄養配合物が、約１０〜約３５ｇ／１００ｍＬ、さらにより好ましくは約２０〜約３２ｇ／１００ｍＬの脂肪・タンパク質・炭水化物の栄養素総量を有し、上記組成物が、調製してから少なくとも８時間安定したままであり（相の分離が起こらない）、酵素が、室温で約８時間保存した後に約９０％超のリパーゼ活性を有し、この活性が、液体栄養配合物に添加されるリパーゼ活性の単位のパーセンテージとして計算される、プロセスである。
【００５７】
本発明の別の特定の実施形態は、非胃耐性のパンクリアーゼ酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む、経腸投与に適した安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスであって、上記プロセスが、ａ）水性溶液中に溶解したパンクレリパーゼ酵素の懸濁物を調製するステップであって、ａ．１）消化酵素生成物の寸法を縮小させるステップと、ａ．２）約１０，４００ＵＳＰ単位のリパーゼを含む消化酵素生成物に、約２．５ｍＬの量の水性溶液を添加するか、または複数のＵＳＰ単位のリパーゼを含む生成物に対応する複数の量の溶液を添加するステップと、ａ．３）混合して懸濁物を形成するステップと、ａ．４）約５分超（好ましくは約５分〜約３０分、好ましくは約１５分間）の時間懸濁物を保存するステップとを含む、ステップと、ｂ）液体栄養配合物で懸濁物を混合して、安定性を有し均一な液体組成物を形成するステップとを含み、栄養配合物が、約４．５〜約１１．５ｇ／１００ｍＬ、さらにより好ましくは約６．８〜約１１．３ｇ／１００ｍＬの脂肪およびタンパク質の栄養素総量を有し、上記液体組成物が、調製から少なくとも８時間安定のまま（相分離が起こらない）であり、酵素は、室温で約８時間保存した後、約９０％超のリパーゼ活性を有し、この活性は、栄養配合物に添加したリパーゼ活性の単位のパーセンテージとして計算される、プロセスである。
【００５８】
本発明の別の特定の実施形態は、非胃耐性パンクレリパーゼ酵素および栄養配合物の栄養素を含む、経腸投与に適した安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスであって、上記プロセスが、ａ）水性溶液中に溶解したパンクレリパーゼ酵素の懸濁物を調製するステップであって、ａ．１）消化酵素の寸法を縮小するステップと、ａ．２）約１０，４００ＵＳＰ単位のリパーゼを含む消化酵素生成物に、約２．５ｍＬの量の水性溶液を添加するか、または複数のＵＳＰ単位のリパーゼを含む生成物に、対応する複数の量の溶液を添加するステップと、ａ．３）混合して懸濁物を形成するステップと、ａ．４）５分超（好ましくは約５分〜約３０分、好ましくは約１５分）の時間懸濁物を保存するステップとを含むステップと、ｂ）液体栄養配合物で懸濁物を混合して、安定性を有し均一な液体組成物を形成するステップとを含み、栄養配合物が、約３．０〜約７．０ｇ／１００ｍＬ、さらにより好ましくは約３．８〜約６．８ｇ／１００ｍＬの脂肪の栄養素総量を有し、上記液体組成物が、調製から少なくとも８時間安定したまま（相分離が起こらない）であり、酵素が、おおよそ室温で約８時間保存した後約９０％超のリパーゼ活性を有し、この活性は、液体栄養配合物に添加したリパーゼ活性の単位のパーセンテージとして計算される、プロセスである。
【００５９】
本発明の別の特定の実施形態は、非胃耐性パンクレリパーゼ酵素生成物および栄養配合物の栄養素を含む経腸投与に適した安定性を有し均一な液体組成物の調製するためのプロセスであって、上記プロセスが、ａ）水性溶液中に溶解したパンクレリパーゼ酵素の懸濁物を調製するステップであって、ａ．１）消化酵素生成物の寸法を縮小させるステップと、ａ．２）約１０，４００ＵＳＰ単位のリパーゼを含む消化酵素生成物に、約２．５ｍＬの量の水性溶液を添加するか、または複数のＵＳＰ単位のリパーゼを含む生成物に、対応する複数の量の溶液を添加するステップと、ａ．３）混合して懸濁物を形成するステップと、ａ．４）５分超（好ましくは、約５分〜約３０分、好ましくは約１５分）、懸濁物を保存するステップとを含む、ステップと、ｂ）液体栄養配合物と懸濁物を混合して、安定性を有し均一な液体組成物を形成するステップとを含み、栄養配合物が、約１．３〜約６．３ｇ／１００ｍＬ、さらにより好ましくは、約３〜約６．２ｇ／１００ｍＬのタンパク質の栄養素総量を有し、上記液体組成物が、調製してから少なくとも８時間安定したまま（相分離が起こらない）であり、酵素が、おおよそ室温で約８時間保存した後、約９０％超のリパーゼ活性を有し、この活性が、液体栄養配合物に添加したリパーゼ活性の単位のパーセンテージとして計算される、プロセスである。
【００６０】
パンクレリパーゼ酵素および栄養素の組成物は、乳児、小児、成人、高齢の患者またはＥＰＩに罹患した他の患者への投与に適しており、薬物を制御した用量で注意深く分注することが可能である。
【００６１】
また本発明は、本発明の消化酵素（パンクレリパーゼ酵素）および栄養素の組成物を小児または成人の患者に投与する方法をも含む。これは、ａ）粉砕、微粉砕、またはマッシュなどの手段により消化酵素の寸法を縮小させるステップと、ｂ）少量の水性溶液を添加するステップと、ｃ）混合して懸濁物を形成し、懸濁物を５分超保存するステップと、ｄ）特定量の栄養素を有する液体栄養配合物で懸濁物を混合して、分注バッグまた別のコンテナのいずれかに消化酵素−栄養組成物を形成するステップと、ｅ）供給バックから患者へ、経腸チューブを介して組成物を分注するステップであって、上記酵素および栄養素の組成物が、分注する前にゆっくりと撹拌されてもよい、ステップとを含む。
【００６２】
本発明は、胃瘻造設−チューブまたは経鼻胃管を介した液体パンクレリパーゼ酵素および栄養素の組成物の投与に適した確実な手法を記載し、チューブの開存性を閉塞、固着することなく、保つことなく、チューブの管腔を介して一定した用量の送達を保証する。この投与は、新生児から、小児、成人までの患者に応じて選択される、異なる経腸チューブを介して行われる。本明細書中に示される寸法の直径で成功した試験から、同一の種類および製造元のうち、より大きな直径のチューブを使用することが、記載される投与手法を使用する際に許容可能であることが示される。
【００６３】
上記の記載および実験部分から、本発明はいくつかの重要な利点を提供することがわかる。本発明は、パンクレリパーゼ酵素および特定の栄養配合物の栄養素の混合物の調製のための簡便かつ迅速なプロセスであって、この混合物は少なくとも約８時間均一性を保持し、リパーゼ活性が、懸濁したパンクレリパーゼ酵素の液体栄養配合物への添加の後に維持され、リパーゼが、約８時間にわたり組成物中で安定したままであり、脂肪分解が有効に達成される、プロセスを提供する。
【００６４】
実験例
材料
パンクレリパーゼ酵素：パンクレリパーゼ酵素の参照基準物質  ＵＳＰ  ｂａｔｃｈ  ８（アミラーゼ活性アッセイ：３４４ＵＳＰ単位／ｍｇ、プロテアーゼ活性アッセイ  ３５８ＵＳＰ単位／ｍｇ）、パンクレリパーゼ酵素の参照基準物質ＵＳＰ  ｂａｔｃｈ  ３（リパーゼ活性アッセイ：９３．３ＵＳＰ単位／ｍｇ）。
パンクレリパーゼ酵素生成物：米国にて販売されるＶｉｏｋａｃｅ（商標）（１０，４４０または２０，８８０単位のリパーゼ）生成物；賦形剤：クロスカルメロースナトリウム、コロイド状２酸化ケイ素、結晶セルロース、ステアリン酸、タルク；カナダで販売されるＶｉｏｋａｓｅ（登録商標）（８，０００または１６，０００ＵＳＰ単位のリパーゼ）生成物；賦形剤：クロスカルメロースナトリウム、コロイド状２酸化ケイ素、結晶セルロース、ステアリン酸、タルク；Ｅｕｒｏｂｉｏｌ（登録商標）１２，５００ＰｈＥｕｒ単位のリパーゼ／用量（２０ｇｒ）（Ｍａｙｏｌｙｌ  Ｓｐｉｎｄｌｅｒにより販売）；賦形剤：結晶セルロース（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｍｉｃｒｏｃｒｉｓｔａｌｌｉｎｅ）、クロスポビドン、コロイド状無水シリカ、ステアリン酸マグネシウム、コーティング：メタクリル酸−アクリル酸エチルコポリマー（１：１）、クエン酸トリエチル、タルク、シメチコンエマルジョン。
経腸製剤：Ｐｅｐｔａｍｅｎ（登録商標）Ｊｕｎｉｏｒ  １  Ｃａｌ（Ｎｅｓｔｌｅ、２５０ｍＬのパッケージ、バニラの人口香料）、Ｐｅｐｔａｍｅｎ（登録商標）Ｊｕｎｉｏｒ  １．５  Ｃａｌ（Ｎｅｓｔｌｅ、２５０ｍＬのパッケージ、香料なし）、Ｅｎｓｕｒｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｉｔａｌｉａ  ２００ｍＬのパッケージ、ストロベリーの人口香料）、Ｎｕｔｒｅｎ（登録商標）２．０（Ｎｅｓｔｌｅ、２５０ｍＬのパッケージ）、ＴｗｏＣａｌ（登録商標）ＨＮ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、２３７ｍＬのパッケージ）、およびＦｏｒｔｉｍｅｌ（登録商標）（Ｎｕｔｒｉｃｉａ、２００ｍｌのパッケージ）。
乳児用の配合物：Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）１（Ｕｎｉｆａｒｍ。製剤は製造元により説明されるように再構成される）、Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）２（Ｕｎｉｆａｒｍ。製剤は、製造元により説明されるように再構成される）、Ｈｕｍａｎａ（登録商標）１（Ｕｎｉｆａｒｍ、４７０ｍＬのパッケージ）、およびＮｕｔｒａｍｉｇｅｎ（商標）ＤＨＡ  ＆  ＡＲＡ（Ｅｎｆａｍｉｌ、９４６ｍＬのパッケージ）。
【００６５】
経腸および乳児の製剤の栄養素（脂肪＋タンパク質＋炭水化物）の含量を表１に示す。
【表１】
2016513634.tif 000002
【００６６】
方法
脂肪分解活性
パンクレリパーゼ酵素のＵＳＰの研究書に記載されるリパーゼアッセイにまとめられた手法に基づく方法を用いて測定を行う。これは、滴定に基づき、ｐＨスタット法によるものであり、使用される物質（オリーブ油）の中のエステル化脂肪酸の加水分解から形成される遊離脂肪酸を測定する。この測定は、リパーゼは、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の形成をもたらすトリグリセリドの加水分解を触媒するという原則に基づくものである。時間により形成されるＦＦＡの滴定は、リパーゼの酵素活性を決定するために提供する。これは、１Ｕ＝１マイクロモルの形成されるＦＦＡ／分で表すことができる。この反応は、ｐＨ値が固定値と比較して変化する際にＮａＯＨ（滴定剤）を添加するために提供する実験系（ｐＨスタット法）を介して定常のｐＨ値を維持することにより起こる。時間による添加した滴定剤の量は、トリグリセリドのリパーゼ作用により形成されるＦＦＡの量に対応する。曲線勾配｛添加した滴定剤＝ｆ（体積（ｍＬ）／時間（分））から、リパーゼ酵素活性が得られる。
【００６７】
タンパク質分解性およびアミロース分解性の活性の測定は、パンクレリパーゼ酵素ＵＳＰの研究書に記載される公定の手法により実行される。
【００６８】
トリグリセリドを、内部標準物質としてパルミチン酸コレステリル（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌｐａｌｍｉｔａｔｅ）を使用して、ヘキサン：イソプロパノール（３：２）で抽出し、ＨＰＬＣで解析する。ピークは、標準的なトリオレイン溶液ですべての保持時間を比較することにより同定する。
【００６９】
脂肪酸は、内部標準物質としてステアリルアルコールを使用して、ヘキサン：イソプロパノール（３：２）で抽出し、ＨＰＬＣで解析する。ピークは、脂肪酸標準物質、すなわちリノール酸、パルミチン酸、オレイン酸、およびステアリン酸で保持時間を比較することにより同定される。
【００７０】
タンパク質解析  １）タンパク質の合計含量は、ブラッドフォードアッセイにより定量化され；２）トリプトファンは、内部標準物質として５−メチルトリプトファンを使用してＨＰＬＣで解析される。
【００７１】
炭水化物の解析  １）短鎖の糖は、内部標準物質としてキシリトールを使用してＨＰＬＣで解析する。ピークは、糖の標準物質、すなわち、スクロース、マルトース、およびグルコースですべての保持時間を比較することにより同定される。２）マルトデキストリンを、Ｃａｒｒｅｚ  ＩおよびＣａｒｒｅｚ  ＩＩの存在下で抽出し、ＨＰＬＣで解析する。ピークは、マルトデキストリン標準物質、すなわち、マルトース１水和物、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオースおよびマルトヘプタオースですべての保持時間を比較することにより同定される。
【００７２】
器具
注入投与用の標準的な器具（臨床環境または家庭で使用するものと同一のもの、通常の供給手法の模倣物）は、供給バッグ（Ｋａｎｇａｒｏｏ  Ｊｏｅｙ（商標）経腸栄養ポンプセット）、ポンプ（Ｋａｎｇａｒｏｏ  Ｊｏｅｙ（商標）ｅポンプ経腸栄養ポンプ）およびＧチューブ（Ｋｉｍｂｅｒｌｙ  Ｃｌａｒｋ  ＭＩＣ−ＫＥＹ、管の長さ：４．０ｃｍ、外径：１２Ｆｒ（１２Ｆｒ＝０．３３ｍｍ））を含む。１０ｍＬ／ｈの注入供給比率では、流れが１０ｍＬ／ｈ、４時間ごとに３０ｍｌの水を流す、というパラメーターが設定される。１２５ｍＬ／ｈの注入供給比率では、流れが１２５ｍＬ／ｈ、４時間ごとに３０ｍＬの水を流す、というパラメーターが設定される。
【００７３】
丸薬の粉砕：ａ）セラミックの乳鉢および乳棒；コーヒーマグおよび金属スプーンを使用する手動のプロセス；ｂ）丸薬粉砕機、スクリュー（Ｓ）型：ＧＩＭＡ（Ｓ）、Ｇｅｎｉｕｓ（Ｓ）、Ａｐｅｘ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｉｌｌｓ  Ｃｒｕｓｈｅｒ（登録商標）（Ｓ）。
【００７４】
実施例
実施例１．投与ビヒクル中へのパンクレリパーゼ酵素錠剤の懸濁
生理溶液中のパンクレリパーゼ酵素（８，０００および１６，０００ＵＳＰ単位のリパーゼを含むＶｉｏｋａｓｅ（登録商標））ならびに経腸製剤ＥＦ３（Ｅｎｓｕｒｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ）ならびにＥＦ６（Ｆｏｒｔｉｍｅｌ（登録商標））の直接的な可溶化試験を、１）ビーカー（類似するカップ）中、スパチュラ（家庭用スプーンを模倣）を用いて混合するか、または２）ボトル中、手動で振盪（させて元の経腸製剤のパッケージと類似させる）することにより、実施する。固定した少量の投与ビヒクル中に、錠剤（表２の対応する有効成分含量を参照）を２時間手動で撹拌または振盪し、室温で維持する。錠剤の態様を視覚的に試験する（表２参照）。パンクレリパーゼ酵素の錠剤は、生理溶液を使用する際、３０分後に濁りのある懸濁物を提供し、錠剤は、経腸製剤ＥＦ３およびＥＦ６で未変化のままであり；ＥＦ３の懸濁物を得るために６時間が必要とされる。水性溶液および経腸製剤の両方は、パンクレリパーゼ酵素の直接的であり迅速な崩壊および可溶化を許容するものではなく；相分離が観察され；安定性を有し均一な組成物を調製できないため、適切ではない。
【００７５】
【表２】
2016513634.tif 000003
【００７６】
実施例２．錠剤の粉砕
パンクレリパーゼ酵素の錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標））を、異なる粉砕装置を使用して微粉砕して、錠剤の粉砕の再現性、用量収率（損失なし）、視覚的態様、および同定された粒子のうち最も大きな次元を評価する。異なる丸薬粉砕機は、異なる次元の粒子を含む均一な粉末を提供する。以下の試験を、Ｇｅｎｉｕｓ丸薬粉砕機：約２，０００ミクロン；Ａｐｅｘ丸薬粉砕機：約４，０００ミクロン；Ｇｉｍａ丸薬粉砕機：約５，０００ミクロン；セラミックの乳鉢および乳棒：２００−５００ミクロン；コーヒーマグおよび金属スプーン（約３，０００ミクロンの粗粒子を含む不規則な粉末を提供する）を用いて行う。Ｇｅｎｉｕｓ、ＡｐｅｘおよびＧｉｍａの丸薬粉砕装置は、閉鎖的な系であるため、再現性のある特性および完全な用量収率を容易に提供する。コーヒーマグおよび金属スプーンは、再現性のある粉末および簡単な手法を提供するものではなく、粉砕手法を実行する最中にカップから錠剤の画分がこぼれることにより用量の喪失が起こる場合がある。セラミックの乳鉢および乳棒は、微粉砕したパンクレリパーゼ酵素錠剤の粒子の寸法の観点から良好な結果を提供するが、人的要因の影響を受けやすいことが観察される。
【００７７】
実施例３．パンクレリパーゼ酵素懸濁物の調製：投与ビヒクル
以下の１０ｍLの水性媒体：１）精製（脱イオン）水；２）生理溶液（０．９％  ＮａＣｌ）；３）水道水の中で、２０，８８０ＵＳＰ単位のリパーゼをを含むパンクレリパーゼ酵素錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標））を微粉砕した３つの錠剤を用いて、３種類の懸濁物をそれぞれ調製した。
【００７８】
実施例４．パンクレリパーゼ酵素懸濁物の調製：送達の最適化
１６，０００ＵＳＰ単位のリパーゼを含む３つのパンクレリパーゼ酵素錠剤（Ｖｉｏｋａｓｅ（登録商標））を、適切な粉砕装置を用いて粉砕し（実施例２参照）、表３に記録されている量の適切な水性媒質（実施例３に記載）で懸濁した後、ＮＧチューブおよびＧチューブを介して投与した。最も困難な例として外径として１２Ｆｒを有する、内径および長さの観点から最も困難なＧチューブが使用される（すなわち、Ｍｉｃ  Ｋｉｍｂｅｒｌｙ  Ｃｌａｒｋ  Ｂｏｌｕｓ）。（表３に記録される）結果から、少なくとも１５分間懸濁時間を設けることにより、異なる種類の丸薬粉砕機は、懸濁した微粉砕パンクレリパーゼ酵素錠剤の送達可能性に影響を与えるものではなく；閉塞は観察されていないことがわかった。
【００７９】
この手法により、リパーゼ活性：Ｇチューブの通過前の活性が１９．７Ｕ  ＵＳＰ／ｍｇであり、Ｇチューブ通過後の活性が１９．８  Ｕ  ＵＳＰ／ｍｇであるよう維持することを可能にし、これにより完全な用量回収が保証される。
【００８０】
またこの手法は、幅広い範囲の有効性成分含量の送達（８，０００ＵＳＰを含む１つのパンクレリパーゼ酵素錠剤から、１６，０００ＵＳＰリパーゼユニットを含む最大３つのパンクレリパーゼ酵素錠剤まで）に適している。８，０００Ｕ  ＵＳＰリパーゼのそれぞれの錠剤を、２．５ｍｌ（ティースプーン１／２杯）の精製水に懸濁し、少なくとも１５分間維持し、さらなる量の水を表４に記録される容量に添加した。調製した懸濁物は、５Ｆｒチューブ（ＣＯＲＰＡＲＫなど）または８Ｆｒ（Ｔｙｃｏ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの製造元など）を有する、非常に小さな寸法であるＧチューブおよびＮＧチューブでのＮＧ投与（Ｍｉｃ−Ｋｅｙ）で投与可能である（ｄｏａｂｌｅ）ことがわかった。表４を参照されたい。
【表３】
2016513634.tif 000004
【表４】
2016513634.tif 000005
【００８１】
実施例５．注入（継続投与）‐直接投与手法のためのパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＥＦ）組成物
２０，８８０ＵＳＰのリパーゼ単位を含む錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標））を、適切な丸薬粉砕装置（実施例２に示される）を使用して微粉砕し、経腸製剤Ｅｎｓｕｒｅ（登録商標）Ｐｌｕｓを含む供給バッグに直接添加する。類似のＰａｎ−ＥＦ組成物を、異なる経腸製剤：Ｐｅｐｔａｍｅｎ  Ｊｕｎｉｏｒ（登録商標）１．５で調製する。この手法は、使用者とは無関係に使用が非常に簡単であり、供給バッグに微粉砕した錠剤を簡単に移すことができる。この手法を用いて、丸薬の画分は素早く分散せず、供給バックの底に残ったままである。この不均一な系は、安全性（安定しない用量投与）、不完全な用量送達および不均質な消化栄養素送達の観点から重篤な問題を提供する場合がある。
【００８２】
実施例６．注入−プレ懸濁物添加手法のためのパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＥＦ）組成物
この手法を用いて、１０，４４０Ｕ  ＵＳＰリパーゼを含むパンクレリパーゼ酵素錠剤（ＥＦ１では２つ、ＥＦ２およびＥＦ３では４つの錠剤）（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標））を、丸薬粉砕装置を用いて粉砕し、次いで、脱イオン水でプレ懸濁し、１５分間保存し、次いで供給バッグ中の経腸製剤パッケージに添加し、１５秒間振盪する。異なる経腸製剤：ＥＦ３  Ｅｎｓｕｒｅ（登録商標）Ｐｌｕｓ）、ＥＦ１（Ｐｅｐｔａｍｅｎ  Ｊｕｎｉｏｒ（登録商標））およびＥＦ２（Ｐｅｐｔａｍｅｎ  Ｊｕｎｉｏｒ（登録商標）１．５）を試験する。この手法は、経腸製剤中にパンクレリパーゼ酵素の均一な分散を提供し、したがって、調製した組成物により、一定の用量および均一の栄養送達が可能となる。このパンクレリパーゼ酵素水性懸濁物は、注入バッグに含まれ、送達が実行される。バッグの中の混合物の外観検査は、規則的に（時間ごとに）実行され、相分離は観察されず、写真が撮影される。したがって、この組成物は、明らかに相分離が行われることなく少なくとも８時間、供給ポンプおよびＧチューブを使用して継続注入を介した投与に適している。
【００８３】
実施例７．注入−プレ懸濁物添加手法のためのパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＥＦ）組成物
微粉砕したパンクレリパーゼ酵素を、１２，５００ｈＥｕリパーゼ単位の２つの用量（Ｅｕｒｏｂｉｏｌ（登録商標））から開始して、丸薬粉砕装置で調製し、次いで、脱イオン水（５．０ｍＬ）でプレ懸濁し、１５分間保存し、次いで、供給バックに予め注がれた経腸製剤パッケージに添加し、１５秒間振盪する。異なる経腸製剤：ＥＦ３、ＥＦ１（Ｐｅｐｔａｍｅｎ  Ｊｕｎｉｏｒ（登録商標））およびＥＦ２（Ｐｅｐｔａｍｅｎ  Ｊｕｎｉｏｒ（登録商標）１．５）を試験する。この手法は、経腸製剤中のパンクレリパーゼ酵素の均一な分散を提供し、したがって、一定した用量および均一な栄養送達を可能にする。このｐａｎ−ＥＦ組成物は、明らかな相分離を行うことなく、最大８〜１０時間、供給ポンプおよびＧチューブを使用した継続注入を介した投与に適している。バッグの中の混合物の外観検査は、規則的（時間ごと）に実行され、相分離は観察されず、写真が撮影される。
【００８４】
実施例８．注入−プレ懸濁物添加手法のためのパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＥＦ）組成物
上述の実施例６と同一の手法および同一の条件を使用して、１０，４４０ＵＳＰのリパーゼ単位の４つの微粉砕した錠剤から開始して懸濁物を調製し、１５分間保存し、これを、元々のパッケージ中の経腸製剤パッケージに添加し、１５秒間振盪し、次いで、供給バッグに移す。ＥＦ４（Ｎｕｔｒｅｎ（登録商標）２．０）およびＥＦ５（ＴｗｏＣａｌ（登録商標）ＨＮ）の乳児用の配合物を試験し、明らかな相分離が観察される。この分離は、継続投与でも試験したブランク試料（パンクレリパーゼ酵素錠剤の添加を行っていない）では観察されず、最大１６時間の物理的安定性が観察される。バッグの中の混合物の外観検査を、規則的（時間ごと）に実行し、相分離は観察されず、写真が撮影される。
【００８５】
実施例９．注入‐プレ懸濁添加手法のためのパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＥＦ）組成物
上述の実施例８と同一の手法および同一の条件を、精製水（１０ｍＬ）中、２つの１２，５００ＰｈＥｕリパーゼ単位の量の微粉砕したパンクレリパーゼ酵素（Ｅｕｒｏｂｉｏｌ（登録商標））のプレ懸濁物を調製し、１５分間保存し、次いで、これを、供給バッグに予め注がれる、ＥＦ４（Ｎｕｔｒｅｎ（登録商標）２．０）およびＥＦ５（ＴｗｏＣａｌ（登録商標）ＨＮ）の経腸製剤パッケージに添加し、１５秒間振盪することにより使用する。明らかな相分離が観察される。この分離は、継続投与でも試験したブランク試料（パンクレリパーゼ酵素錠剤の添加を行っていない）では観察されず、最大１６時間の物理的安定性か観察される。バッグの中の混合物の外観検査は、規則的（時間ごと）に行われ、相分離が観察されず、写真が撮影される。
【００８６】
実施例１０．注入−プレ懸濁物手法のためのパンクレリパーゼ酵素および乳児用の配合物（Ｐａｎ＋ＩＦ）組成物
上述の実施例６と同一の手法および同一の条件を、１０，４４０ＵＳＰリパーゼ単位を含む微粉砕したパンクレリパーゼ酵素錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標））を、５ｍｌの精製水に添加し、１５分間保存し、次いで、供給バッグに予め注いだ乳児用の配合物２５０ｍｌにこの懸濁物を添加し、１５秒間ゆっくりと振盪し、次いで供給バッグに移すことにより使用する。ＩＦｌ（Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）１）、ＩＦ２（Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）２）、ＩＦ３（Ｈｕｍａｎａ（登録商標）１）、ＩＦ４（Ｎｕｔｒａｍｉｇｅｎ（登録商標））の経腸製剤を試験する。明らかな相分離が、ＩＦ４で観察される。ＩＦ１、ＩＦ２、ＩＦ３では相分離は観察されず、これら乳児用の配合物においてパンクレリパーゼ酵素の均一で安定した分散が最大８時間維持され、一定した用量および均一な栄養送達を、ＩＦ１、ＩＦ２、ＩＦ３で達成でき、供給ポンプおよびＧチューブを使用した継続注入が実行できる。相分離は、継続投与でも試験したブランク試料（パンクレリパーゼ酵素錠剤の添加を行わない）で観察されず、最大１６時間の物理的安定性が観察される。バッグの中の混合物の外観検査は、規則的（時間ごと）に行われ、相分離が観察されず、写真が撮影される。この結果から、パンクレリパーゼ酵素錠剤を使用して、安定したＰａｎ＋ＩＦ組成物を調製できることが示される。
【００８７】
実施例１１．注入−プレ懸濁物添加手法のためのパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＩＦ）組成物
上述の実施例１０と同一の手法および同一の条件を、１２，５００ＰｈＥｕｒリパーゼ単位のそれぞれの２つの微粉砕したパンクレリパーゼ酵素（Ｅｕｒｏｂｉｏｌ）の用量を、５．０ｍＬの精製水に添加し、懸濁物を形成し、１５分間保存し、次いで、供給バッグにすでに注がれた乳児用の配合物２５０ｍＬに添加し、１５秒間ゆっくりと振盪することにより使用する。ＩＦｌ（Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）１）、ＩＦ２（Ｎｅｏｌａｔｔｅ（登録商標）２）、ＩＦ３（Ｈｕｍａｎａ（登録商標）１）、ＩＦ４（Ｎｕｔｒａｍｉｇｅｎ（登録商標））の経腸製剤を試験する。実施例１０に記録されるものと同一の結果がここで見出される。つまり、相分離がＩＦ４で観察されるが、ＩＦ１、ＩＦ２、ＩＦ３では相分離が観察されず、ＩＦ１、ＩＦ２、ＩＦ３でのパンクレリパーゼ酵素の均一で安定な分散が最大８時間維持される。バッグの中の混合物の外観検査が規則的（時間ごと）に行われ、相分離が観察されず、写真が撮影される。
【００８８】
実施例１２．パンクレリパーゼ酵素懸濁物の調製（ステップ１）
１０，４４０ＵＳＰリパーゼ単位を含むパンクレリパーゼ酵素錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標）、１０，４４０ＵＳＰ単位）を、丸薬粉砕装置（Ａｐｅｘ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｉｌｌｓ  Ｃｒｕｓｈｅｒ（登録商標））を使用して、１つずつ粉砕し微粒子を生成する。粉末化したパンクレリパーゼ酵素錠剤を小さなガラスコンテナに移す。１０，４４０ＵＳＰ単位のリパーゼ用量を含む錠剤ごとにティースプーン１／２杯（２．５ｍＬ）の水を添加する。並列実験では、２０，８８０ＵＳＰリパーゼ単位を含むパンクレリパーゼ酵素錠剤（Ｖｉｏｋａｃｅ（商標））を使用する：錠剤ごとにティースプーン１杯（５ｍＬ）の錠剤を添加する。水／パンクレリパーゼ酵素錠剤混合物を、スプーンまたはスパチュラを用いて３０秒間撹拌し、均一な懸濁物を作製する。この懸濁物を室温で１５分間保存し、分解を支援する。投与前に、数秒間、スプーンまたはスパチュラを用いて懸濁物を撹拌する。この調製した懸濁物は、少なくとも３０分間安定（安定したリパーゼ活性）である。
【００８９】
実施例１３．継続注入によるパンクレリパーゼ酵素および栄養組成物の投与（ステップ２）
実施例１２の懸濁物を、処方量の経腸製剤／パンクレリパーゼ酵素錠剤を含む供給バッグに添加し、バッグを１５秒間振盪して、パンクレリパーゼ酵素錠剤懸濁物および経腸製剤を均一化する。コンテナを追加的な１０ｍｌの水ですすぎ、残存する残渣を回収し、上述するように投与する。経腸供給ポンプを、製造元の説明書にしたがってポンプに挿入し、Ｇチューブに接続する。ポンプのスイッチを着け、正確な流量を設定する。チューブをゆるめ、ポンプを作動下に設定する。ポンプが作動しており、各チューブの接続からの漏出またはチューブのよじれが存在しないことを保証するため、供給を確認する。供給が完了すると、与えられている設定を止め、接続を解除する（ポンプは、なんらかの阻害が存在し、かつ供給が完了している場合を示す警告を有する）。処方された水洗浄を行う。伸長チューブが集められ、接続解除される。
【００９０】
実施例１４．継続注入−流体送達の効率によるパンクレリパーゼ酵素および栄養素（Ｐａｎ＋ＥＦ）組成物の投与
供給時間にわたる時間の関数としての送達されるＥＦの累積量（パンクレリパーゼありおよびなし）を、Ｇチューブ送達の後に適切なメスシリンダーを使用して計算する。Ｐａｎ−ＥＦを、代表的な注入機器（供給ポンプ：Ｋａｎｇａｒｏｏ（商標）ｅＰｕｍｐ経腸栄養ポンプ；バッグ：Ｋａｎｇａｒｏｏ  Ｊｏｅｙ（商標）経腸栄養ポンプセット；Ｇチューブ：Ｋｉｍｂｅｒｌｙ  Ｃｌａｒｋ  ＭＩＣ−ＫＥＹ  １２  Ｆｒ  ４．０ｃｍ）を使用して、実施例１２、１３に記載される調製手法を用いて投与する。１０ｍＬ／ｈ〜１２５ｍＬ／ｈの流れ（０〜１４歳の小児患者に適用される）を経腸供給のための通常の臨床投与を模倣するために使用する。ブランク投与（添加したパンクレリパーゼ酵素懸濁物を用いることないＥＦ）もまた、同一の機器を使用して実行する。所定の時点での送達量：２、４、６、および８時間（時間（ｈ）＝理論上の送達量（ｍＬ）／流れポンプ（ｍＬ／ｈ）を回収する。Ｐａｎ＋ＥＦ混合物−組成物の量を、３つの異なるシミュレートした投与を考慮して収集し、各時点でブランク投与と比較する。各時点でのＰａｎ＋ＥＦ組成物に対する流体送達の効率は、以下のように計算される。
【数１】
2016513634.tif 000006
【００９１】
表５のデータから、Ｐａｎ＋ＥＦ組成物送達の効率は、経腸製剤単独の送達と同一であることが示される。時間（ｔ）対ブランクでの％送達量は、９５〜１０５％が含まれる。
【表５】
2016513634.tif 000007
【００９２】
実施例１５．経腸製剤のパンクレリパーゼ酵素の安定性
パンクレリパーゼ酵素の安定性を、０、２、４、８時間の所定の時点において３種類の酵素（リパーゼ、プロテアーゼ、およびアミラーゼ）の活性を測定することにより、供給時間（８時間）にわたり経腸製剤において評価する。パンクレリパーゼ酵素懸濁物を、上述の実施例にしたがって表１に列挙される経腸製剤と混合し、実施例１２、１３に記載される供給機器を使用して投与する。継続注入の投与を、低いパンクレリパーゼ酵素／ＥＦ比率（１０，４４０ＵＳＰ単位リパーゼを含む１つの錠剤／２５０ｍＬ  ＥＦ）でのＰａｎ＋ＥＦ組成物を使用して実施する。これは、パンクレリパーゼ酵素の安定性の問題の観点から最も悪い事例を表す。酵素の安定性を、０時間（調製直後のＰａｎ＋ＥＦ組成物）で見出される活性と比較して、各時点で回収される活性として評価され、この結果を、回収パーセンテージ対０時間として表す。
【００９３】
１５．１．リパーゼ活性の決定
２時間および４時間の時点でのリパーゼ活性の決定に関する試料を、供給バッグに含まれるＰａｎ＋ＥＦ組成物およびＧチューブを介した送達される収集量の両方から回収する。この試料は、投与の均一性を例証する。リパーゼ活性は、酵素安定性の観点からコヒーレント結果を提供するため、サンプリング部位と無関係である。エンドポイントでの試料を、Ｇチューブを介して送達される量から収集する。
【表６】
2016513634.tif 000008
【００９４】
リパーゼ活性は、８時間にわたり試験した製剤で安定したままである。実験の過程で観察される酵素活性のゆっくりとした増加は、ＥＦ媒質により誘導される酵素の立体構造の変化によるものである（リパーゼ活性の増加に関連する）。
【００９５】
１５．２  プロテアーゼおよびアミラーゼ活性の決定を、バッグから取り出されたＰａｎ＋ＥＦ混合物‐組成物試料に関して実行する（組成物は、投与時間全体にわたり均一である。上述の実施例を参照）。プロテアーゼおよびアミラーゼのアッセイを、表７、８にまとめる。
【表７】
2016513634.tif 000009
【表８】
2016513634.tif 000010
【００９６】
この結果によると、リパーゼ、プロテアーゼおよびアミラーゼは、最大８時間注入状態において安定である：活性回収％は、リパーゼでは、９０〜１１０％の範囲内であり、アミラーゼでは、８５〜１１５％の範囲内である。
【００９７】
実施例１６．消化栄養素の評価
Ｐａｎ＋ＥＦ組成物の消化した栄養素のプロファイルは、２つの態様：１）経腸製剤に含まれる主要な栄養素（トリグリセリド、総タンパク質、およびマルトデキストリン）の減少、ならびに２）栄養素（遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、トリプトファン（ＡＡ）、および短鎖糖（ＳＣＳ））の消化由来の生成物の形成の増大を考慮するパンクレリパーゼ酵素により誘導される栄養素の消化の動態を調査することにより決定する。パンクレリパーゼ酵素の存在下の経腸製剤の栄養素の変化をモニタリングし、消化栄養素の各分類の代表的なマーカーを、経腸製剤の投与の間に消化の度合いを調査するために同定する。
【００９８】
消化試験。Ｐａｎ＋ＥＦ組成物を、上述の実施例にしたがって調製し、臨床実務を代表する供給機器を使用して投与する（実施例１２、１３）。ブランク（ＥＦのみ＝消化なし）もまた、同一の方法で調製する。所定の時点（０、２時間、４時間、８時間）で、Ｐａｎ＋ＥＦ組成物およびブランクの両方を、供給バッグから採取する。０時間は、調製した直後の懸濁物を採取することにより生成される。消化プロセスは、以下の２つの異なる調製物：高いパンクレリパーゼ酵素／ＥＦの比率を使用して実施される継続注入におけるＰａｎ＋ＥＦ組成物投与でシミュレーションされており、これにより、経腸製剤の変性の観点から最も問題のある状態を表す（高い酵素活性は消化の増大をもたらす）。消化の度合いは、以下の段落に記載される。
【００９９】
１６．１．脂肪の解析
１６．１．１）トリグリセリド（脂肪栄養素のマーカーとして）の量を、マーカーとしてのトリオレインを考慮してモニタリングする。実験の各時点（０、２、４、および８時間）で、各試料２ｍＬ（ＥＦのみ＝ブランク；Ｐａｎ＋ＥＦ組成物）を抽出して、脂質画分を定量的に回収される。それぞれのサンプリングの前に、懸濁物を１５秒間ゆっくりと振盪する。得られた結果を表９にまとめる。
【表９】
2016513634.tif 000011
【０１００】
全体の投与時間の間組成物に存在するリパーゼの脂肪分解活性は、トリグリセリドレベルの顕著な低下から明らかであり、対してブランクの投与は、同一の時間の間、一定量のトリグリセリドを示す。トリオレインの濃度は、２時間後に、最初の値の６９〜７５％まで落ち、８時間後に、最初のＴＧ（ＴＧ＝トリグリセリド）濃度の約２１〜３２％に達する。８時間後、約３０％のトリオレインが、実験の終わりに、Ｐａｎ＋ＥＦ混合物−組成物の中にまだ存在しており、したがって、脂肪酸の加水分解が、完全ではないことが示される。これは、試験条件で、油−水の界面からこれらの生成物（ミセル、胆汁酸塩、経腸吸着物）を除去するための受容体が存在しない場合、反応生成物（ＦＦＡ）により阻害されることにより起こる。
【０１０１】
１６．１．２）遊離脂肪酸（脂肪消化生成物マーカーとして）の量は、マーカーとしてのオレイン酸、リノール酸、およびパルミチン酸を考慮してモニタリングされる。実験の各時点（０、２、４、および８時間）で、各試料２ｍＬ（ＲＦのみ＝ブランク；Ｐａｎ＋ＥＦ組成物）を抽出して液体画分を定量的に回収する。それぞれをサンプリングする前に、懸濁物を、１５秒間ゆっくりと振盪する。得られた結果を表１０にまとめる。
【表１０】
2016513634.tif 000012
【表１１】
2016513634.tif 000013
【表１２】
2016513634.tif 000014
【０１０２】
これら組成物による経腸製剤は、ブランクのＨＰＬクロマトグラムでこれら化合物が存在しないことにより確認されるように、ＦＦＡを含むものではない。他方で、側鎖遊離脂肪酸は、Ｐａｎ＋ＥＦ混合物のクロマトグラムで検出され、脂肪分解が、０時間、すなわちＰａｎ＋ＥＦ組成物を調製した直後に、急速に発生することが確認される。
【０１０３】
１６．２．タンパク質解析
１６．２．１）総タンパク質（タンパク質栄養素マーカーとして）の量は、ブラッドフォード法を使用してモニタリングする。実験の各時点（０、２、４および８時間）で、各試料２ｍｌ（ＥＦのみ＝ブランク；Ｐａｎ＋ＥＦ組成物）を抽出して、タンパク質画分を定量的に回収する。各サンプリングの前に、懸濁物をゆっくりと１５秒間振盪する。得られた結果を表１３にまとめる。
【表１３】
2016513634.tif 000015
【０１０４】
総タンパク質量は、ブランクの投与全体にわたり、一定のままであるが、パンクレリパーゼ酵素物質の存在下でのプロテアーゼのタンパク質分解の活性作用としてのタンパク質レベルの顕著な低下が、Ｐａｎ＋ＥＦ組成物で観察される。８時間後に、初期の値の約６３〜６９％までタンパク質液滴の濃度が低下する。タンパク質分解は、８時間後には完了していない。
【０１０５】
１６．２．２）トリプトファン（タンパク質消化産物マーカーとして）
実験の各時点（０、２、４、および８時間）での各試料１ｍＬ（ＥＦのみ＝ブランク；Ｐａｎ＋ＥＦ組成物）を抽出して、アミノ酸画分を定量的に回収する。各サンプリングの前に、懸濁物をゆっくりと１５秒間振盪する。得られた結果を以下の表１４にまとめる。
【表１４】
2016513634.tif 000016
【０１０６】
これら組成物による経腸製剤はトリプトファンを含まず、これはブランク中にアミノ酸が存在しないことにより確認される（ＨＰＬＣにより決定）。他方で、側鎖トリプトファンは、Ｐａｎ＋ＥＦ組成物中で検出され（ＨＰＬＣにより決定）、タンパク質分解は、０時間（Ｐａｎ＋ＥＦ組成物を調製した直後）ですでに発生していることが確認された。
【０１０７】
１６．３．炭水化物解析
１６．３．１）マルトデキストリン（炭水化物栄養素マーカーとして）は、マーカーとしてマルトヘプタオース（Ｍｌ）、マルトヘキサオース（Ｍ６）およびマルトテトラオース（ｍａｌｔｏｔｅｔｒａｈｏｓｅ）（Ｍ４）を考慮して、ＨＰＬＣ法によりモニタリングされる。実験の各時点（０、２、４、および８時間）で、各試料（ＥＦのみ＝ブランク；Ｐａｎ＋ＥＦ混合物）２ｍＬを抽出して、炭水化物画分を定量的に回収する。各サンプリングの前に、懸濁物をゆっくりと１５秒間振盪する。結果を表１５にまとめる。
【表１５】
2016513634.tif 000017
【表１６】
2016513634.tif 000018
【表１７】
2016513634.tif 000019
【０１０８】
マルトデキストリンの量は、投与時間全体にわたりブランクの中て一定のままであった（ＨＰＬＣ法により決定）が、Ｐａｎｃ＋ＥＦ混合物中のマルトデキストリンの顕著な減少が（パンクレリパーゼ酵素物質の存在下でのアミラーゼのアミロース分解性（ａｍｙｌｏｌｉｔｉｃ）活性作用として）観察される。マルトヘプタオースの濃度は、２時間後初期の濃度と比較して急速に減少し、さらにマルトヘキサオースおよびマルトテトラオースは、２時間後でも完全に消化されていた。高分子量のマルトデキストリンの減少に付随して、関連する短鎖の糖、すなわちマルトースおよびマルトトリオースの増加が観察される。
【０１０９】
１６．３．２）短鎖の糖（炭水化物の消化産物マーカーとして）の量は、マーカーとしてのマルトースを考慮してモニタリングされる。実験の各時点で（０、２、４、および８時間）で、各試料２ｍＬ（ＥＦのみ＝ブランク；Ｐａｎ＋ＥＦ組成物）を抽出して、糖画分を定量的に回収する。各サンプリングの前に、懸濁物をゆっくりと１５秒間振盪する。得られた結果を以下の表にまとめる。
【表１８】
2016513634.tif 000020
【０１１０】
経腸製剤は、Ｐａｎ＋ＥＦ組成物で検出される量よりも低い量のマルトースを示し（ＨＰＬＣ法により決定）、デンプン分解（ａｍｙｌｏｌｉｓｉｓ）は、０時間（Ｐａｎ＋ＥＦ組成物を調製した直後）ですでに急速に発生していることが確認される。マルトースは、グルコースポリマー上のαアミラーゼの攻撃の最終産物であった。ショ糖は、この製剤の成分であるため、同様にＥＦ１で検出される、この糖の量は、投与時間全体にわたりほぼ一定のままであり（表１９参照）、ショ糖はアミラーゼの消化産物ではないと考えられる。
【表１９】
2016513634.tif 000021
【国際調査報告】
2016513634.tif 000022
2016513634.tif 000023
2016513634.tif 000024