(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）の化合物：【化１】2016525505.tif 000021［式中、  Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および- - - - -は、それぞれ異なる意味を有する。］、これらを含有する医薬組成物、ならびに医療における、特には、細菌感染疾患の処置および／または予防のためのこれらの使用に関する。
2016525505.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物：
【化１】
2016525505.tif 000018
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ、独立に、水素およびヒドロキシル保護基から選択され；かつ、
- - - - -は、単結合または二重結合を表す。］。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ、独立に、Ｈまたは
−  式−Ｒ’のエーテル；
−  式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’のエステル；および
−  式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’のカーボネート
から選択されるヒドロキシル保護基（ここで、Ｒ’は、独立に、置換または非置換のアルキルおよび置換または非置換のアリールから選択することができる。）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ヒドロキシ保護基が、独立に、メチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、３，４−ジメトキシベンジルエーテル、トリチルエーテル、アリルエーテル、メトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、１−メトキシエチルエーテル、１−エトキシエチルエーテル、１−ｎ−プロポキシエチルエーテル、１−イソプロポキシエチルエーテル、１−ｎ−ブトキシエチルエーテル、１−イソブトキシエチルエーテル、１−ｓｅｃ−ブトキシエチルエーテル、１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルエーテル、１−エトキシ−ｎ−プロピルエーテル、メトキシプロピルエーテル、エトキシプロピルエーテル、１−メトキシ−１−メチルエチルエーテル、１−エトキシ−１−メチルエチルエーテル；テトラヒドロピラニル；アセテート、ヒドロキシアセテート、ベンゾエート、ピバレート、メトキシアセテート、クロロアセテート、レブリネート；ベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート、アリルカーボネートから選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＨ、−ＣＯＣＨ３または−ＣＯＣＨ２ＯＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３がＨまたはＣ１−Ｃ１８アルキルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３がメチルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
以下の：
【化２】
2016525505.tif 000019
または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
以下の：
【化３】
2016525505.tif 000020
または薬学的に許容可能なその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物からなる群から選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物の少なくとも１つと薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１２】
医療における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
細菌感染疾患の処置および／または予防に使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
細菌感染疾患がグラム陰性菌により引き起こされる、請求項１３に定義される使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物を得るための方法であって、制御された液内好気条件下で、資化性の炭素源および窒素源ならびに塩を有する水性栄養培地においてＯ．コラエ株ＣＢＳ  １０２２１６を培養する工程と、その後、培養ブロスから一般式（Ｉ）の化合物を回収および精製する工程とを含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、これらを含有する医薬組成物および医療における、特には、細菌感染を処置、予防または制御することができる薬剤としてのこれらの使用に関する。本発明はまた、このような化合物および組成物を製造するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現時点の技術水準において抗菌活性を示す数多くの物質が知られている。公知の抗菌薬のいくつかの例としては、キノロン（フルオロキノロン、ナリジクス酸）、セファロスポリン（アモキシシリン、セファマイシン、セフタジジム）、ペニシリン（アミノペニシリン、カルボキシペニシリン、メシリナム）、カルバペネム（イミペネム、エルタペネム、メロペネム）、マクロライド（エリスロマイシン、アジスロマイシン）、テリスロマイシン、クリンダマイシン、フィダキソマイシン）、グリコペプチド（バンコマイシン、テイコプラニン）、ホスホマイシン、アミノグリコシド（ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン）、テトラサイクリン（チゲサイクリン、ドキシサイクリン）、オキサゾリジノン（リネゾリド）、リファンピシン、クロラムフェニコール、リポペプチド（ポリミキシン、コリスチン）、環状リポペプチド（ダプトマイシン）、スルホンアミド（トリメトプリム／スルファメトキサゾール）等が挙げられる。
【０００３】
しかしながら、細菌により引き起こされる感染症は、これらの病原体の多くが種々の一般的な抗生物質に耐性があることから医学的関心が高まっている。このような微生物としては、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・ヘモリチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）およびその他の病原性細菌が挙げられる。Ｆ．Ｄ．Ｌｏｗｙ  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ２００３，１１１（９），１２６５；Ｇｅｏｒｇｅ  Ｔａｌｂｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｄ  Ｂｕｇｓ  Ｎｅｅｄ  Ｄｒｕｇｓ：Ａｎ  Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｐｉｐｅｌｉｎｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，４２  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＩＮＦＥＣＴＩＯＵＳ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ  ６５７（２００６）；Ｂｒａｄ  Ｓｐｅｌｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｅｐｉｄｅｍｉｃ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：Ａ  Ｃａｌｌ  ｔｏ  Ａｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，４６  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＩＮＦＥＣＴＩＯＵＳ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ  １５５（２００７）を参照されたい。
【０００４】
このような多剤耐性生物に対して効果的な新規の抗菌化合物が必要とされ、この分野に熱心な努力が注がれているにも関わらず、規制機関により承認された新規の抗生物質化合物はごくわずかである。この点において、２０１３年に米国感染症学会により、２０１０年から米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認されたのは１つの新規抗生物質（セフタロリン  フォサミル）のみであり、進行中の新薬もわずかであることが報告された。本報告によればまた、２０２０年までに１０の新規抗生物質を開発することを目的として、２０１０年から第２相または第３相試験に到達した多剤耐性グラム陰性桿菌を標的とする新規抗生物質はわずかに７つであることが判明した。Ｈｅｌｅｎ  Ｗ．Ｂｏｕｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１０×‘２０Ｐｒｏｇｒｅｓｓ-Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  Ａｃｔｉｖｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｇｒａｍ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂａｃｉｌｌｉ：Ａｎ  Ｕｐｄａｔｅ  Ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ（２０１３）を参照されたい。
【０００５】
よって、公知の抗生物質に耐性のある細菌を含む細菌の増殖を阻害する強力な抗生物質製剤が依然として望まれている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、公知の抗生物質に耐性のある特定の細菌を含む細菌の増殖を阻害することができる新規の化合物を提供することにより前記課題を解決する。
【０００７】
１つの面において、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物：
【化１】
2016525505.tif 000003
［式中、
各Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、独立に、水素およびヒドロキシル保護基から選択され、かつ、
- - - - -は、単結合または二重結合を表す。］に向けられている。
【０００８】
本発明の他の面としては、上記で定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物の少なくとも１つと薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬または医薬組成物に関する。
【０００９】
本発明の他の面としては、医療における使用、特には、細菌感染疾患の処置および／または予防のための、上記で定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物に関する。
【００１０】
本発明の他の面としては、細菌感染疾患の処置および／または予防のための医薬の製造のための、上記で定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物の使用に関する。
【００１１】
本発明の他の面としては、細菌感染疾患を処置および／または予防する方法であって、そのような処置または予防を必要とする対象に、上記で定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量を投与することを含んでなる方法に関する。
【００１２】
よって、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩、立体異性体、プロドラッグもしくは溶媒和物が病原菌の増殖を阻害することを確立する。本発明の化合物は、耐性細菌に対し幅広い抗菌スペクトル、具体的には、グラム陰性菌に対し強力な抗菌活性を示すことが見出された。従って、本発明の化合物は、有利には、抗生物質として使用することができる。
【００１３】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の、これらを生産することができる微生物、具体的には、オフィオスフェレラ・コラエ（Ｏｐｈｉｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｋｏｒｒａｅ）として同定される菌類、より具体的には、株Ｏ．コラエＣＢＳ  １０２２１６からの取得、および得られた化合物からの誘導体の形成に関する。好ましい態様においては、式（Ｉ）の化合物を得るための方法は、制御された水中好気条件下で、資化性の炭素源および窒素源ならびに塩を有する水性栄養培地においてＯ．コラエＣＢＳ  １０２２１６等のこれらを生産することができる微生物株を培養する工程と、その後培養ブロスから本発明による化合物を回収および精製する工程とを含んでなる。
【００１４】
これらの面およびそれらの好ましい態様はまた、以下の発明の具体的説明や特許請求の範囲においてさらに定義される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】株大腸菌ａｃｒＡＢ：：Ｔｎ９０３に対し２×ＭＩＣで細胞壁生合成についてシグナルを示すＭＤＮ−００５７の高分子合成の阻害の決定。
【発明の具体的説明】
【００１６】
毎年ＦＤＡにより承認される新規抗生物質の数は１９８０年から確実に減少しており、これはあらゆる薬剤に当てはまる傾向である。これにより、ある感染症、特には、現在上市されているすべての抗生物質に時には耐性のあるグラム陰性菌により引き起こされる感染症、に対してはわずかな処置しか選択肢が残されていない。
【００１７】
本発明は、抗菌活性を有する新規の天然産物のファミリーに関する。これらの化合物は、広範囲の活性を有する強力な抗生物質物質であり、ヒトおよび動物の細菌感染症に関連する病原体に対し用いることができる。さらに、本発明の抗生物質物質は、種々の公知の抗生物質に耐性のある感染症を処置するための療法に重要な貢献を果たす。
【００１８】
よって、本発明は、抗生物質活性を示し、かつ、アシネトバクター・バウマニ、大腸菌、緑膿菌およびクレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）等のグラム陰性菌や、日和見感染や院内感染の原因として医療の現場で重大な問題を引き起こす微生物に対し特に有用であることが見出された、上記で定義されるような一般式（Ｉ）の新規の抗菌化合物に関する。
【００１９】
これらの化合物において、各基は以下の指針に従って選択することができる。
【００２０】
アルキル基は、分岐鎖または非分岐鎖であってよく、好ましくは、１〜約１８個の炭素原子、例えば、１〜約１２個の炭素原子を有する。より好ましいアルキル基は、１〜約６個の炭素原子を有し、さらに好ましくは、１、２、３または４個の炭素原子を有するアルキル基である。本発明の化合物においては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピルならびにｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｉｓｏ−ブチルを含むブチルが特に好ましいアルキル基である。環状基は少なくとも３個の炭素環員を含んでなるが、本明細書で使用されるアルキルとの用語は、特に明記しない限り、環状基および非環状基の双方を意味する。
【００２１】
本発明の化合物におけるアルケニルおよびアルキニル基は、分岐鎖または非分岐鎖であってよく、１または複数の不飽和結合および２〜約１８個の炭素原子、例えば、２〜約１２個の炭素原子を有する。より好ましいアルケニルおよびアルキニル基は、２〜約６個の炭素原子を有し、さらに好ましくは、２、３または４個の炭素原子を有するアルケニルおよびアルキニル基である。環状基は少なくとも３個の炭素環員を含んでなるが、本明細書で使用されるアルケニルおよびアルキニルとの用語は、環状基および非環状基の双方を意味する。
【００２２】
本発明の化合物における適切なアリール基としては、分離（separate）および／または縮合アリール基を含有する多環式化合物を含む単環式および多環式化合物が挙げられる。典型的なアリール基は、１〜３個の分離および／または縮合環および６〜約１８個の炭素環原子を含有する。好ましくは、アリール基は、６〜約１０個の炭素環原子を含有する。特に好ましいアリール基としては、置換または非置換フェニル、置換または非置換ナフチル、置換または非置換ビフェニル、置換または非置換フェナントリルおよび置換または非置換アントリルが挙げられる。
【００２３】
上述した各基は、１または複数の利用可能な位置でＯＲ’、＝Ｏ、ＳＲ’、ＳＯＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＯＳＯ２Ｒ’、ＯＳＯ３Ｒ’、ＮＯ２、ＮＨＲ’、Ｎ（Ｒ’）２、＝Ｎ−Ｒ’、Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ’、Ｎ（ＣＯＲ’）２、Ｎ（Ｒ’）ＳＯ２Ｒ’、Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）Ｒ’、ＣＮ、ハロゲン、ＣＯＲ’、ＣＯＯＲ’、ＯＣＯＲ’、ＯＣＯＯＲ’、ＯＣＯＮＨＲ’、ＯＣＯＮ（Ｒ’）２、ＣＯＮＨＲ’、ＣＯＮ（Ｒ’）２、ＣＯＮ（Ｒ’）ＯＲ’、ＣＯＮ（Ｒ’）ＳＯ２Ｒ’、ＰＯ（ＯＲ’）２、ＰＯ（ＯＲ’）Ｒ’、ＰＯ（ＯＲ’）（Ｎ（Ｒ’）Ｒ’）、置換または非置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換または非置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換または非置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニルおよび置換または非置換アリール（ここで、各Ｒ’基は、独立に、水素、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＳＨ、ＣＮ、ハロゲン、ＣＯＨ、ＣＯアルキル、ＣＯＯＨ、置換または非置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換または非置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換または非置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニルおよび置換または非置換アリールからなる群から選択される。）等の１または複数の適切な基により置換されていてもよい。当該基自体が置換されている場合は、置換基は前述のリストから選択されてもよい。
【００２４】
本発明の化合物における適切なハロゲン基または置換基としては、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩが挙げられる。
【００２５】
適切な保護基は当業者によく知られている。有機化学における保護基の一般的概説については、Ｗｕｔｓ，ＰＧＭ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ  ＴＷ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈＥｄ．Ｗｉｌｅｙ−ＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅおよびＫｏｃｉｅｎｓｋｉ  ＰＪ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ，３ｒｄＥｄ．Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇにより提供される。これらの文献はヒドロキシ基およびアミノ基のための保護基についてのセクションを提供する。これらの文献はいずれも全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。 
【００２６】
当該保護されたＯＨの例としては、エーテル、シリルエーテル、エステル、スルホネート、スルフェネートおよびスルフィネート、カーボネートならびにカルバメートが挙げられる。エーテルの場合、ＯＨの保護基は、メチル、メトキシメチル、メチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル、［（３，４−ジメトキシベンジル）オキシ］メチル、ｐ−ニトロベンジルオキシメチル、ｏ−ニトロベンジルオキシメチル、［（Ｒ）−１−（２−ニトロフェニル）エトキシ］メチル、（４−メトキシフェノキシ）メチル、グアヤコールメチル、［（ｐ−フェニルフェニル）オキシ］メチル、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、２−シアノエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、メントキシメチル、ｏ−ビス（２−アセトキシエトキシ）メチル、テトラヒドロピラニル、フルオラステトラヒドロピラニル、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル、１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イル、１−（４−クロロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イル、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、２−ヒドロキシエチル、２−ブロモエチル、１−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、１−メチル−１−フェノキシエチル、２，２，２−トリクロロエチル、１，１−ジアニシル−２，２，２−トリクロロエチル、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−フェニルイソプロピル、１−（２−シアノエトキシ）エチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（ベンジルチオ）エチル、２−フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、シクロヘキシル、１−メチル−１’−シクロプロピルメチル、アリル、プレニル、シンナミル、２−フェナリル、プロパルギル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ニトロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、２，３，５，６−テトラフルオロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、２，６−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ペンタジエニルニトロベンジル、ペンタジエニルニトロピペロニル、ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、２，４−ジクロロベンジル、２，６−ジフルオロベンジル、ｐ−シアノベンジル、フルオラスベンジル、４−フルオラスアルコキシベンジル、トリメチルシリルキシリル、ｐ−フェニルベンジル、２−フェニル−２−プロピル、ｐ−アシルアミノベンジル、ｐ−アジドベンジル、４−アジド−３−クロロベンジル、２−トリフルオロメチルベンジル、４−トリフルオロメチルベンジル、ｐ−（メチルスルフィニル）ベンジル、ｐ−シレタニルベンジル、４−アセトキシベンジル、４−（２−トリメチルシリル）エトキシメトキシベンジル、２−ナフチルメチル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、２−キノリニルメチル、６−メトキシ−２−（４−メチルフェニル−４−キノリンメチル、１−ピレニルメチル、ジフェニルメチル、４−メトキシジフェニルメチル、４−フェニルジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベロイル、トリフェニルメチル、トリス（４−ｔ−ブチルフェニル）メチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシ）フェニルジフェニルメチル、４，４’，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、４，４’−ジメトキシ−３’’−［Ｎ−（イミダゾリルメチル）］トリチル、４，４’−ジメトキシ−３’’−［Ｎ−（イミダゾリルエチル）カルバモイル］トリチル、ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、４−（１７−テトラベンゾ［ａ，ｃ，ｇ，ｉ］フルオレニルメチル）−４，４’’−ジメトキシトリチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−フェニルチオキサンチル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イルおよび４，５−ビス（エトキシカルボニル）−［１，３］−ジオキソラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシドから選択することができる。シリルエーテルの場合、ＯＨの保護基は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルヘキシルシリル、２−ノルボルニルジメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ−ｔ−ブチルメチルシリル、ビス（ｔ−ブチル）−１−ピレニルメトキシシリル、トリス（トリメチルシリル）シリル、（２−ヒドロキシスチリル）ジメチルシリル、（２−ヒドロキシスチリル）ジイソプロピルシリル、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、ｔ−ブトキシジフェニルシリル、１，１，３，３−テトライソプロピル−３−［２−（トリフェニルメトキシ）エトキシ］ジシロキサン−１−イルおよびフルオラスシリルから選択することができる。エステルの場合、ＯＨの保護基は、ホルメートエステル、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリクロロアセトアミデート、トリフルオロアセテー���、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、フェニルアセテート、ジフェニルアセテート、３−フェニルプロピオネート、ビスフルオラス鎖型プロパノイル、４−ペンテノエート、４−オキソペンタノエート、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート、５［３−ビス（４−メトキシフェニル）ヒドロキシメチルフェノキシ］レブリネート、ピバレート（ｐｉｖａｌｏａｔｅ）、１−アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート、４−ブロモベンゾエート、２，５−ジフルオロベンゾエート、ｐ−ニトロベンゾエート、ピコリネート、ニコチネート、２−（アジドメチル）ベンゾエート、４−アジドブチレート、（２−アジドメチル）フェニルアセテート、２−｛［（トリチルチオ）オキシ］メチル｝ベンゾエート、２−｛［（４−メトキシトリチルチオ）オキシ］メチル｝ベンゾエート、２−｛［メチル（トリチルチオ）アミノ］メチル｝ベンゾエート、２−｛｛［（４−メトキシトリチル）チオ］メチルアミノ｝−メチル｝ベンゾエート、２−（アリルオキシ）フェニルアセテート、２−（プレニルオキシメチル）ベンゾエート、６−（レブリニルオキシメチル）−３−メトキシ−２−ニトロベンゾエート、６−（レブリニルオキシメチル）−３−メトキシ−４−ニトロベンゾエート、４−ベンジルオキシブチレート、４−トリアルキルシリルオキシブチレート、４−アセトキシ−２，２−ジメチルブチレート、２，２−ジメチル−４−ペンテノエート、２−ヨードベンゾエート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２−（クロロアセトキシメチル）ベンゾエート、２−［（２−クロロアセトキシ）エチル］ベンゾエート、２−［２−（ベンジルオキシ）エチル］ベンゾエート、２−［２−（４−メトキシベンジルオキシ）エチル］ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルホスホロジアミデートおよび２−クロロベンゾエートから選択することができる。スルホネート、スルフェネートおよびスルフィネートの場合、ＯＨの保護基は、サルフェート、アリルスルホネート、メタンスルホネート、ベンジルスルホネート、トシレート、２−［（４−ニトロフェニル）エチル］スルホネート、２−トリフルオロメチルベンゼンスルホネート、４−モノメトキシトリチルスルフェネート、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、２，２，５，５−テトラメチルピロリジン−３−オン−１−スルフィネート、ボレートおよびジメチルホスフィノ��オリルから選択することができる。カーボネートの場合、ＯＨの保護基は、メチルカーボネート、メトキシメチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート、エチルカーボネート、ブロモエチルカーボネート、２−（メチルチオメトキシ）エチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカーボネート、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート、２−［ジメチル（２−ナフチルメチル）シリル］エチルカーボネート、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート、ｃｉｓ−［４−［［（メトキシトリチル）スルフェニル］オキシ］テトラヒドロフラン−３−イル］オキシカーボネート、イソブチルカーボネート、ｔ−ブチルカーボネート、ビニルカーボネート、アリルカーボネート、シンナミルカーボネート、プロパルギルカーボネート、ｐ−クロロフェニルカーボネート、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート、６−ブロモ−７−ヒドロキシクマリン−４−イルメチルカーボネート、ベンジルカーボネート、ｏ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−メトキシベンジルカーボネート、３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、アントラキノン−２−イルメチルカーボネート、２−ダンシルエチルカーボネート、２−（４−ニトロフェニル）エチルカーボネート、２−（２，４−ジニトロフェニル）エチルカーボネート、２−（２−ニトロフェニル）プロピルカーボネート、アルキル２−（３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロフェニル）プロピルカーボネート、２−シアノ−１−フェニルエチルカーボネート、２−（２−ピリジル）アミノ−１−フェニルエチルカーボネート、２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ピリジル）］アミノ−１−フェニルエチルカーボネート、フェナシルカーボネート、３’，５’−ジメトキシベンゾインカーボネート、メチルジチオカーボネートおよびＳ−ベンジルチオカーボネートから選択することができる。カルバメートの場合、ＯＨの保護基は、ジメチルチオカルバメート、Ｎ−フェニルカルバメート、Ｎ−メチル−Ｎ−（ｏ−ニトロフェニル）カルバメートから選択することができる。これらの基についての記載は、ＯＨについての保護基を単に説明するものとして記載されるものであって、本発明の範囲を限定す
るものと解釈されるべきではなく、前記機能を有するさらなる基も当業者であれば分かり、本発明に包含されると理解される。 
【００２７】
「塩」との用語は、イオン型をとる、または、荷電し、対イオン（陽イオンまたは陰イオン）と結合する、または、溶液中にあるといった本発明による活性化合物の任意の形態を意味すると理解される。また、活性化合物と他の分子およびイオンとの複合体、特には、イオン相互作用を介して複合体化される複合体も意味する。この定義は特に生理学的に許容可能な塩を含み、この用語は「薬理学的に許容可能な塩」または「薬学的に許容可能な塩」と同等と理解される。
【００２８】
「薬理学的に許容可能な塩」または「薬学的に許容可能な塩」との用語は、本発明に照らして、特には、生理学的に許容される酸と形成される（上記で定義されたような）塩、すなわち、特定の活性化合物と生理学的に許容される（特にヒトおよび／または哺乳類に使用される場合に）無機または有機酸との塩、または生理学的に許容される（特にヒトおよび／または哺乳類に使用される場合に）少なくとも１つの（好ましくは無機の）陽イオンと形成される（上記で定義されたような）塩と理解することができる。特定の酸の生理学的に許容される塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、臭化水素酸塩、一臭化水素酸塩、一塩酸塩もしくは塩酸塩、メチオジド、メタンスルホン酸、ギ酸、酢酸、シュウ酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、マンデル酸、フマル酸、乳酸、クエン酸、グルタミン酸、場尿酸、ピクリン酸および／またはアスパラギン酸の塩である。特定の塩基の生理学的に許容される塩の例は、アルカリ金属およびアルカリ土類金属の塩ならびにＮＨ４との塩である。
【００２９】
当業者には、薬学的に許容可能でない塩も、薬学的に許容可能な塩を得るための可能な手段として、本発明の範囲に含まれることが明らかであろう。
【００３０】
本発明による「溶媒和物」との用語は、本発明による化合物が非共有結合を介して他の分子（最も可能性が高いのは極性溶媒）に付着するといった本発明による化合物の任意の形態（特に、水和物やアルコール和物、例えば、メタノール和物を含む）を意味すると理解される。溶媒化の方法は当技術分野において一般的に知られている。本発明の化合物は種々の多形形態を示し得るものであって、本発明はこのようなすべての形態を包含することが意図される。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物のプロドラッグである任意の化合物も本発明の範囲内である。「プロドラッグ」との用語は、その最も広い意味で使用され、イン・ビボで本発明の化合物に変換されるそれらの誘導体を包含する。プロドラッグの例としては、これらに限定されるものではないが、生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバメート、生加水分解性カーボネート、生加水分解性ウレイドおよび生加水分解性ホスフェート類似体等の生加水分解性部分を含む式（Ｉ）の化合物の誘導体が挙げられる。好ましくは、カルボキシル官能基を有する化合物のプロドラッグはカルボン酸の低級アルキルエステルである。カルボン酸エステルは分子に存在するカルボン酸部分のいずれかをエステル化することにより簡便に形成される。プロドラッグは典型的には、Ｂｕｒｇｅｒの「Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ６ｔｈ  ｅｄ．」（Ｄｏｎａｌｄ  Ｊ．Ａｂｒａｈａｍ  ｅｄ．，２００１，Ｗｉｌｅｙ）、「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｄ．，１９８５，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）およびＫｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．の「Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓ（Ａｐｒｉｌ  ２００２）に記載されるような方法等の周知の方法を用いて調製することができる。
【００３２】
本明細書に記載される任意の化合物は、当該特定の化合物も一定の変形または形態も意図される。上記の式（Ｉ）で表される本発明の化合物は立体異性体を含む。本明細書で用いられる「立体異性体」との用語は、当該化合物の任意のエナンチオマー、ジアステレオマーまたは幾何異性体（Ｅ／Ｚ）を含む。特には、本明細書に記載される化合物は不斉中心を有し得、それゆえ、種々のエナンチオマーまたはジアステレオマー型が存在する。よって、本明細書に記載される任意の所定の化合物は、ラセミ化合物、１または複数のエナンチオマー型、１または複数のジアステレオマー型およびこれらの混合物のいずれかを表すことが意図される。同様に、二重結合についての立体異性または幾何異性もまた可能であり、それゆえ、いくつかの場合では、分子は（Ｅ）−異性体または（Ｚ）−異性体（トランスおよびシス異性体）として存在することができる。分子がいくつかの二重結合を含有する場合、各二重結合は、その分子の他の二重結合の立体異性と同一でも異なっていてもよい独自の立体異性を有することになる。本明細書に記載される化合物のエナンチオマー、ジアステレオマーおよび幾何異性体を含むあらゆる立体異性体ならびにこれらの混合物は本発明の範囲内であるとみなされる。
【００３３】
さらに、本明細書に記載される任意の化合物は、互変異性体として存在し得る。具体的には、互変異性体との用語は、平衡状態で存在し、ある異性体から他の異性体へ直ちに変換される２または複数の化合物の構造異性体の１つを意味する。一般的な互変異性対は、エナミン−イミン、アミド−イミド酸、ケト−エノール、ラクタム−ラクチム等である。
【００３４】
特に明記しない限り、本発明の化合物は、同位体で標識された形態、すなわち、１または複数の同位体が濃縮された原子が存在することのみが異なる化合物も意味する。例えば、少なくとも１つの水素原子を重水素もしくは三重水素に置き換える、または、少なくとも１つの炭素を１３Ｃ−もしくは１４Ｃ−濃縮炭素に置き換える、または、少なくとも１つの窒素を１５Ｎ−濃縮窒素に置き換える以外は現在の構造を有する化合物は本発明の範囲内である。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物またはそれらの塩もしくは溶媒和物は、好ましくは、薬学的に許容可能または実質的に純粋な形態である。薬学的に許容可能な形態とは、とりわけ、希釈剤や担体等の通常の医薬品添加物を除き、薬学的に許容可能な純度のレベルを有し、かつ、通常の投与量レベルで毒性と考えられる物質を含まないことを意味する。薬剤物質の純度レベルは、好ましくは、５０％を上回り、より好ましくは、７０％を上回り、最も好ましくは、９０％を上回る。好ましい態様において、式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグは９５％を上回る。
【００３６】
より簡潔に説明するために、本明細書に記載される量的表現のいくつかは「約」との用語で特定されていない。「約」との用語が明確に使用されていてもいなくても、本明細書に記載されるあらゆる量は、実際の所定の値に言及することを意味するとともに、当該所定の値についての実験および／または測定条件に起因する等価量および近似値を含む、当技術分野における通常の技術に基づいて合理的に推測できる当該所定の値の近似値に言及することも意味すると理解される。
【００３７】
式（Ｉ）の好ましい化合物は、下記式（Ｉ’）に示される絶対配置を有するものである：
【化２】
2016525505.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および- - - - -は、一般式（Ｉ）において上記で定義される通りである。］。
【００３８】
特定の態様によれば、一般式（Ｉ）および（Ｉ’）の化合物において、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ、独立に、Ｈまたは
−  式−Ｒ’のエーテル；
−  式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’のエステル；および
−  式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’のカーボネート
から選択されるヒドロキシル保護基（ここで、Ｒ’は、独立に、置換または非置換のアルキルおよび置換または非置換のアリールから選択することができる。）である。
【００３９】
当業者であれば分かるように、ヒドロキシル保護基は酸素原子を考慮して一般的に命名される。従って、「エーテル」、「エステル」および「カーボネート」等の用語は、本明細書においては実際にはＲ１〜Ｒ３と酸素原子により形成される化学基、すなわち、それぞれ−ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’または−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ’を意味する。
【００４０】
より特に好ましいヒドロキシ保護基としては、メチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、３，４−ジメトキシベンジルエーテル、トリチルエーテル、アリルエーテル、メトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、１−メトキシエチルエーテル、１−エトキシエチルエーテル、１−ｎ−プロポキシエチルエーテル、１−イソプロポキシエチルエーテル、１−ｎ−ブトキシエチルエーテル、１−イソブトキシエチルエーテル、１−ｓｅｃ−ブトキシエチルエーテル、１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルエーテル、１−エトキシ−ｎ−プロピルエーテル、メトキシプロピルエーテル、エトキシプロピルエーテル、１−メトキシ−１−メチルエチルエーテル、１−エトキシ−１−メチルエチルエーテル；テトラヒドロピラニルおよび関連エーテル等のエーテル； アセテート（いくつかの態様においては置換されている、例えば、ヒドロキシアセテート）、ベンゾエート、ピバレート、メトキシアセテート、クロロアセテート、レブリネー等のエステル；ベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート、２−（トリメチルシリル)エチルカーボネート、アリルカーボネート等のカーボネート、が挙げられる。
【００４１】
好ましい態様によれば、一般式（Ｉ）および（Ｉ’）の化合物において、Ｒ１はＨである。
【００４２】
好ましい態様によれば、一般式（Ｉ）および（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２はＨ、−ＣＯＣＨ３または−ＣＯＣＨ２ＯＨであり、より好ましくは、Ｒ２は−ＣＯＣＨ３または−ＣＯＣＨ２ＯＨである。
【００４３】
好ましい態様によれば、一般式（Ｉ）および（Ｉ’）の化合物において、Ｒ３はＨまたはＣ１−Ｃ１８アルキルであり、より好ましくは、Ｒ３はＣ１−Ｃ４アルキルであり、さらにより好ましくは、Ｒ３はメチルである。
【００４４】
本発明の特に好ましい化合物は以下の化合物である：
【化３】
2016525505.tif 000005
【００４５】
本発明のさらにより好ましい特定の化合物は、本明細書においてＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０と呼ばれる以下の化合物：
【化４】
2016525505.tif 000006
または薬学的に許容可能なその塩、プロドラッグもしくは溶媒和物である。
【００４６】
さらなる好ましい態様においては、上記式中における種々の基および置換基について上述される好ましい選択肢が組み合わされる。本発明はこのような組み合わせにも向けられる。
【００４７】
化合物ＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０は、ＵＳＡにおいて収集されたシノドン・ダクチロン（Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙｌｏｎ）から単離された内生菌である、オフィオスフェレラ・コラエとして同定された菌類から単離された。該菌類はメディナ財団（Ｆｕｎｄａｃｉｏｎ  ＭＥＤＩＮＡ）の微生物株保存機関に受託番号ＣＦ−２４４，５１４で寄託され、また、ブダペスト条約の下、ＣＢＳ真菌生物多様性センター（Ｃｅｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ  ｖｏｏｒ  Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ）（ウップサララーン  ８３５８４  ＣＴ  ユトレヒト、オランダ）の微生物株保存機関に受託番号ＣＢＳ１０２２１６で寄託される。
【００４８】
本発明において、オフィオスフェレラ・コラエの菌発酵物から単離される天然物の新規ファミリーが記載される。これらの化合物は、種々の病原体（これらの多くは現在入手可能な抗生物質に耐性を示している）に対して抗菌活性を示す。
【００４９】
化合物ＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０は、発酵において相当量が蓄積されるまで、以下に示すような適切な栄養培地においてＯ．カラエ  ＣＢＳ  １０２２１６を培養することにより得てもよい。
【００５０】
株は通常、資化性の炭素源および窒素源を含有する水性栄養培地において培養する。例えば、培養物は液内（ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ）好気条件下で（例えば、振盪培養、液内培養等）または固体発酵において増殖させてもよい。水性培地は好ましくは発酵プロセスの開始および終了（採取）の時点で約６〜８のｐＨに維持される。所望のｐＨはモルホリノエタン−スルホン酸（ＭＥＳ）、モルホリノプロパン−スルホン酸（ＭＯＰＳ）等の緩衝液の使用や、緩衝特性を本質的に有する栄養物質を選択することにより維持してもよい。栄養培地における適切な炭素源としては、グルコース、キシロース、ガラクトース、グリセリン、デンプン、スクロース、デキストリン等の炭水化物が挙げられる。使用し得る他の適切な炭素源としては、マルトース、ラムノース、ラフィノース、アラビノース、マンノース、コハク酸ナトリウム等が挙げられる。適切な窒素源は、酵母抽出物、肉抽出物、ペプトン、グルテンミール、綿実ミール、大豆ミールおよび他の植物ミール（部分的または全体的に脱脂）、カゼイン加水分解物、大豆加水分解物、酵母加水分解物、コーンスティープリカー、乾燥酵母、小麦胚芽、フェザーミール、ピーナッツ粉末、蒸留可溶物等、ならびにアンモニウム塩（硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿素、アミノ酸等の無機および有機窒素化合物である。微量の成長因子、ビタミンや大量の無機栄養素を含有する不純物質(less pure materials)もまた使用に適していることから、有利には組み合わせて用い得る炭素源および窒素源は、それぞれ純粋な形で用いる必要はない。適切な場合は、炭酸ナトリウムまたはカルシウム、リン酸ナトリウムまたはカリウム、塩化ナトリウムまたはカリウム、ヨウ化ナトリウムまたはカリウム等の無機塩、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩等を培地に加えてもよい。必要であれば、特には培養培地が過剰に泡立つ場合は、１または複数の消泡剤（例えば、流動パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油またはシリコーン）を加えてもよい。液内好気培養条件は、膨大な量の細胞を生産するために細胞を培養する典型的な方法である。小規模生産については、フラスコまたは瓶において振盪または表面培養を行ってもよい。大型タンクで増殖を行う場合は、生産プロセスにおける増殖の停滞を避けるために、生産タンクにおいて接種するために生物の栄養型（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ｆｏｒｍｓ）を用いることが好ましい。従って、まず、「スラント」またはペトリ皿に生産された生物の胞子または菌糸を有する培養培地の比較的少量を接種し、「種培地」とも呼ばれる前記接種された培地を培養することにより、生物の栄養種菌（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ｉｎｏｃｕｌｕｍ）を生産し、その後、培養された栄養種菌を無菌で大型タンクに移すことが望ましいであろう。種菌が生産される発酵培地は、一般的には接種前に該培地を滅菌するために加圧滅菌処理される。培地のｐＨは一般的には加圧滅菌処理工程の前に約６〜７に調整する。培養混合物の撹拌および通気は種々の方法で達成されてよい。撹拌は、プロペラもしくは類似の機械的撹拌機器、発酵槽を回転させるもしくは振ること、種々のポンプ機器、または無菌の空気を培地に通過させることにより提供��れてよい。発酵は通常、約２０℃および３０℃の間（例えば、約２２℃および２５℃の間）の温度で約７〜２８日の期間行われ、パラメーターは発酵の条件や規模に従って変化してもよい。発酵を行うための好ましい培養／生産培地はとしては実施例に記載される培地が挙げられる。ＹＥＳまたはＹＥＣ等の培養培地が特に好ましい。
【００５１】
本発明の化合物の粗活性抽出物からの分離および精製は、常法のクロマトグラフィー技術の適切な組み合わせを用いて行うことができる。
【００５２】
さらに、本発明の化合物は、天然源から既に得られたものを改変すること、または種々の化学反応、例えば、誘導体化、保護／脱保護および異性化反応を用いて既に改変されたものをさらに改変することにより得ることができる。従って、ヒドロキシル基は、標準的なカップリングまたはアシル化手順により、例えば、ピリジン等において酢酸、塩化アセチルまたは無水酢酸を用いて、アシル化することができる。ギ酸塩基は、ギ酸においてヒドロキシル前駆体を加熱することにより得ることができる。カルバメートは、イソシアネートとともにヒドロキシル前駆体を加熱することにより得ることができる。ヒドロキシル基は、ヨウ化物、臭化物または塩化物のために中間体スルホネートを介するか、またはフッ化物のために硫黄トリフルオリドを直接用いてハロゲン基へ変換することができ、あるいは、中間体スルホネートの還元により水素に還元することができる。ヒドロキシル基はまた、臭化、ヨウ化またはスルホン酸アルキルを用いるアルキル化によりアルコキシ基に、または、例えば、保護２−ブロモエチルアミンを用いてアミノ低級アルコキシ基に変換することができる。アミド基は、例えば、ピリジン等においてＫＨおよびヨウ化メチルまたは塩化アセチルをそれぞれ用いることによる標準的なアルキル化またはアシル化手順によりアルキル化またはアシル化することができる。エステル基は、カルボン酸に加水分解またはアルデヒドもしくはアルコールに還元することができる。カルボン酸は、標準的なカップリングまたはアシル化手順により、アミンと一緒になってアミドを提供することができる。必要であれば、置換基に適当な保護基を用いて反応基が影響を受けないようにすることができる。これらの誘導体を調製するのに必要な手順や試薬は当業者に知られており、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００７，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ等の一般的な教科書に見つけることができる。当業者であれば分かるように、式（Ｉ）のある化合物は、式（Ｉ）の他の化合物の調製における中間産物として有用であり得る。
【００５３】
上記化合物の重要な特徴は、それらの生物活性、特には、種々の病原体に対するそれらの抗菌活性である。よって、本発明のさらなる面としては、細菌感染疾患の処置および／または予防に使用するための、少なくとも式（Ｉ）の化合物、場合により、少なくとも他の抗菌剤および少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる、種々の医薬形態の医薬または組成物に関する。
【００５４】
医薬組成物の例としては、経口、局所または非経口（例えば、静脈内）投与のための任意の固体（錠剤、丸剤、カプセル剤、粒剤等）、半固体（クリーム、軟膏等）または液体（液剤、懸濁剤または乳剤）組成物が挙げられる。
【００５５】
個々の医薬は、その投与経路によるが、当業者に知られる１または複数の賦形剤も含有してもよい。本発明による医薬は、当業者に知られる標準的な手順に従って製造してもよい。
【００５６】
「賦形剤」との用語は、有効成分以外の薬剤化合物の成分を意味する（欧州医薬品庁（ＥＭＡ）から得られた定義）。好ましくは、「担体、アジュバントおよび／またはビヒクル」が挙げられる。担体は、薬剤の伝達や有効性を向上させるために、物質が組み込まれる形態である。薬剤担体は、イン・ビボでの薬物作用を延長し、薬物代謝を減らし、薬物毒性を低減させるために、放出制御技術等の薬物伝達システムにおいて使用される。担体は、薬理活性の標的部位への薬物伝達の有効性を増加させるための設計においても使用される（アメリカ国立医学図書館、国立衛生研究所）。アジュバントは、予測可能な形で有効成分の活性に影響を与える、製剤処方物に添加される物質である。ビヒクルは、医薬の投与のために量を増すための媒体として使用される、好ましくは治療作用を有しない賦形剤または物質である（Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｐｅｌｌｃｈｅｃｋｅｒ、（著作権）２００６  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ）。このような医薬担体、アジュバントまたはビヒクルは、水や、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油等の石油、動物、植物または合成起源のものを含む油等の滅菌液、賦形剤、崩壊剤、湿潤剤または希釈剤とすることができる。適切な医薬担体はＥ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。これらの賦形剤の選択や使用する量は、医薬組成物の適用の形態に依存するであろう。
【００５７】
本明細書において使用される「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「処置」との用語は、一般に、細菌疾患をその発症後に根絶、除去、逆転、緩和、調節または制御することを含む。
【００５８】
本明細書において使用される「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防の」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」および予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）との用語は、所定の物質、組成物または医薬が細菌疾患の発症または進行をその発症前に回避する、最小にするまたは難しくする能力を意味する。
【００５９】
本発明の化合物は、グラム陽性およびグラム陰性菌の双方を含む種々の病原性細菌に対して使用することができる。１つの特定の態様において、式（Ｉ）の化合物は、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、スタフィロコッカス・ヘモリチカス、化膿連鎖球菌、肺炎連鎖球菌、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、緑膿菌、アシネトバクター・バウマニ、大腸菌、ステノトロホモナス・マルトフィリアおよびクロストリジウム・ディフィシルからなる群から選択される１つの細菌に対して使用される。
【００６０】
好ましくは、本発明に照らして処置可能な細菌疾患としては、一次的に呼吸器の問題を引き起こす種（インフルエンザ菌（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、クレブシエラ・ニューモニエ、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、緑膿菌）、一次的に泌尿器の問題を引き起こす種（大腸菌、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ））および一次的に胃腸の問題を引き起こす種（ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ））を含むグラム陰性病原菌、ならびに、病院施設の集中治療室において菌血症、二次的髄膜炎および人工呼吸器関連肺炎を引き起こすアシネトバクター・バウマニ等の院内感染に関連するグラム陰性菌により引き起こされるものが挙げられる。
【００６１】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物と他の抗菌剤との組み合わせを包含する。少なくとも式（Ｉ）の化合物と少なくとも他の抗菌剤との組み合わせは、その同時、個別または逐次投与のために処方されてもよい。このことは、２つの化合物の組み合わせが、
−  同一の医薬処方物の一部であり、ひいては２つの化合物が常に同時に投与される組み合わせとして、
−  同時、逐次または個別投与の可能性を生じさせる、各ユニットが１つの物質を有する２つのユニットの組み合わせとして
投与され得ることを含む。
【００６２】
特定の態様においては、式（Ｉ）の化合物は、他の抗菌剤と独立して（すなわち、２つのユニットにおいて）、しかし同時に投与される。
【００６３】
他の特定の態様においては、まず式（Ｉ）の化合物が投与され、次に他の抗菌剤が個別にまたは逐次投与される。
【００６４】
さらに他の特定の態様においては、まず他の抗菌剤が投与され、次に式（Ｉ）の化合物が上記で定義されるように個別にまたは逐次投与される。
【００６５】
本発明に照らして、式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つと組み合わせて使用することができる抗菌剤の例としては、これらに限定されるものではないが、キノロン（フルオロキノロン、ナリジクス酸）、セファロスポリン（アモキシシリン、セファマイシン、セフタジジム）、ペニシリン（アミノペニシリン、カルボキシペニシリン、メシリナム）、カルバペネム（イミペネム、エルタペネム、メロペネム）、マクロライド（エリスロマイシン、アジスロマイシン、テリスロマイシン、クリンダマイシン、フィダキソマイシン）、グリコペプチド（バンコマイシン、テイコプラニン）、ホスホマイシン、アミノグリコシド（ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン）、テトラサイクリン（チゲサイクリン、ドキシサイクリン）、オキサゾリジノン（リネゾリド）、リファンピシン、クロラムフェニコール、リポペプチド（ポリミキシン、コリスチン）、環状リポペプチド（ダプトマイシン）、スルホンアミド（トリメトプリム／スルファメトキサゾール）が挙げられる。
【００６６】
本発明の他の面としては、細菌感染疾患に罹患している、または細菌疾患に罹患する可能性がある患者、特にはヒトを処置する方法であって、そのような処置または予防を必要とする患者に式（Ｉ）の化合物の有効量を投与することを含んでなる方法である。
【００６７】
薬剤または薬理活性物質の「有効」量または「治療上の有効量」は、毒性を示さないが、該薬剤または物質が所望の効果を提供するのに十分な量を意味する。本発明の療法において、式（Ｉ）の化合物の「有効量」は、所望の効果を提供するのに有効な化合物の量である。「有効」な量は、個人の年齢や一般的な症状、個別の活性物質等に応じて被験者により異なる。従って、正確な「有効量」を特定することが常に可能なわけではない。しかしながら、個々の症例における適当な「有効量」は日常的な実験を用いて当業者により決定され得る。
【００６８】
以下の実施例は本発明の特定の態様を単に例示するものであり、本発明を何等か限定するものとみなされるものではない。
【実施例】
【００６９】
実施例１：ＹＥＳ培地中でのエルレンマイヤーフラスコにおける発酵
深型９６ウェルプレートにおける１ｍＬマイクロ発酵における１２培地栄養アレイにおいて、株ＣＢＳ１０２２１６により生産される物質の抗菌活性が最初に検出された（Ｇ．Ｂｉｌｌｓ，Ｇ．Ｐｌａｔａｓ，Ａ．Ｆｉｌｌｏｌａ，Ｍ．Ｒ．Ｊｉｍｅｎｅｚ，Ｊ．Ｃｏｌｌａｄｏ，Ｆ．Ｖｉｃｅｎｔｅ，Ｊ．Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ．Ｂｕｒ−Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｒ．Ｔｏｒｍｏ＆Ｆ．Ｐｅｌａｅｚ．２００８．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ａｎｄ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  ｆｕｎｇｉ  ｂｙ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｎ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ａｒｒａｙｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １０４：１６４４−１６５８）。ＹＥＳと名付けられた培地（１０００ｍＬ蒸留Ｈ２Ｏ中、スクロース（シグマ）１５０ｇ、酵母抽出物（バクト）２０ｇ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、微量元素溶液１ｍＬ（１００ｍＬに対しＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  １ｇ、ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ））の抽出物から最も強力な活性がさらなる研究のために選択された。
【００７０】
この活性を担う分子をさらに特徴づけるために、１Ｌ発酵物を準備した。３〜４個の菌糸体ディスクを、以下の組成（ｇ／Ｌ）：（ネオペプトン（バクト）１０ｇ、マルトース（シグマ）４０ｇ、酵母抽出物（バクト）１０ｇ、寒天４ｇ）の種培地ＳＭＹＡ５０ｍＬを含有する２５０ｍＬエルレンマイヤーフラスコに接種するのに使用した。オービタルシェーカー（２２０ｒｐｍ、５ｃｍスロー）上、２２℃、７０％相対湿度でフラスコをインキュベートし、均質菌糸懸濁液を生産した。７日間の種菌期の培養後、この種培養物のアリコートを、基礎培地としてＹＥＳ（１０００ｍＬ蒸留Ｈ２Ｏ中、スクロース（シグマ）１５０ｇ、酵母抽出物（バクト）２０ｇ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、微量元素溶液１ｍＬ（１００ｍＬに対しＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  １ｇ、ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ））を用いる１Ｌ発酵物に接種するのに使用した。２００ｍＬの液体ＹＥＳを含有する５００ｍＬフラスコにおける発酵物に３ｍＬの種のアリコートを接種し、旋回シェーカー（２２０ｒ．ｐ．ｍ）上、１４日間、２２℃でインキュベートした。
【００７１】
実施例２：ＹＥＣ培地における生産およびバイオリアクターにおけるスケールアップ
ＭＤＮ−００５７および類似体の生産を向上させるために、スクロースの代わりにＤ−セロビオースを培地組成物における代替炭素源として用いた。７日間の種菌の増殖後、この種培養物のアリコートを、基礎培地としてＹＥＣ（１０００ｍＬ蒸留Ｈ２Ｏ中、セロビオース（シグマ）１５０ｇ、酵母抽出物（バクト）２０ｇ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、０．８ｍＬ（フルカ）Ｐ２０００，微量元素溶液１ｍＬ（１００ｍＬに対しＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  １ｇ、ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ））を用いる６００ｍＬ発酵物に接種するのに使用した。２００ｍＬの液体ＹＥＣを含有する５００ｍＬフラスコにおける発酵物に４ｍＬの種のアリコートを接種し、旋回シェーカー（２２０ｒ．ｐ．ｍ）上、１４日間、２２℃でインキュベートした。
【００７２】
培養物をバイオリアクター（Ａｐｐｌｉｋｏｎ  ＢｉｏＢｕｎｄｌｅ−５Ｌ）においてスケールアップするために、ＹＭ寒天培養物からの１０個の菌糸体ディスクを、５０ｍＬの種培地（ＳＭＹＡ）を含有する２５０ｍＬエルレンマイヤーフラスコに接種するのに使用した。２２０ｒｐｍのオービタルシェーカーにおいて７日間、２２℃、７０％相対湿度（ＨＲ）で種培養物をインキュベートした。１．５ｍＬの種培養物を、５０ｍＬの種培地（ＳＭＹＡ）を含有する２５０ｍＬエルレンマイヤーフラスコ５個に接種するのに使用し、２２０ｒ．ｐ．ｍのオービタルシェーカーにおいて７日間、２２℃、７０％ＨＲでインキュベートした。７日後、２５０ｍＬの種培地を、ラッシュトン６枚刃（１００ｍｍ直径）のインペラおよびマリン３枚刃のインペラ（６０ｍｍ直径）を有するバイオリアクター中の４Ｌの培地ＹＥＣに１０日間、２２℃で接種するのに用いた。インキュベーション過程の間、空気流量は２Ｌ／分に調整し、インペラ速度は５００ｒｐｍに調整し、ｐＨは最初に５．５に調整した。
【００７３】
実施例３：ＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０の単離および構造同定
ＹＥＳ培地（５Ｌ）における発酵ブロスを２２０ｒｐｍでの連続振盪の下、２．５時間、アセトン（５Ｌ）で抽出した。菌糸体を遠心分離で分離し、上清（１０Ｌ）を窒素気流の下、アセトンの大部分を除去して５Ｌに濃縮した。濾紙による濾過後、あらかじめ水と平衡化されたＳＰ−２０７ＳＳ逆相樹脂（臭素化スチレンポリマー、６５ｇ）を詰めたカラムに、残った溶液を連続１：１水希釈とともに充填した。カラムをさらに水（５Ｌ）で洗浄し、その後、４０分間の水中１０％〜１００％アセトンの直線勾配と２０分の１００％アセトンによる最終洗浄工程とを用いて８ｍＬ／分で溶出し、２０ｍＬの２８のフラクションを収集した。対象の化合物を同定し、ＨＰＬＣによる４：１アセトン−水フラクションに溶出させた。その後、これらのフラクションを各化合物の量や存在に従って５つの異なるセットに分類した。
【００７４】
５つすべてのセットを、１５分を超える５％〜４５％の水中ＡＣＮの直線勾配、２５分の水中４５％ＡＣＮのアイソクラティック工程、１０分間の水中ＡＣＮの４５％〜１００％直線勾配および１０分の１００％ＡＣＮの最終洗浄を伴う逆相分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８、２１．２×２５０ｍｍ、７μｍ；２０ｍＬ／分、２１０ｎｍでのＵＶ検出）によりさらに精製すると、ＭＤＮ−００５７は１６．３分で、ＭＤＮ−００５８は１７．０分で、ＭＤＮ−００５９は１９．５分で、ＭＤＮ−００６０は２０．５分で溶出された。
【００７５】
対象の化合物を含有する分取ＨＰＬＣフラクションを、１０分を超える５％〜４０％ＡＣＮの水中ＡＣＮの直線勾配、２５分の水中４０％ＡＣＮのアイソクラティック工程、１０分間の水中ＡＣＮの第二の４０％〜１００％直線勾配および１０分の１００％ＡＣＮの最終洗浄を伴う逆相セミ分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８、９．３×２５０ｍｍ、５μｍ；３．６ｍＬ／分、２１０ｎｍでのＵＶ検出）によりさらに再精製すると、ＭＤＮ−００５７は１５．５分で、ＭＤＮ−００５８は１６．５分で、ＭＤＮ−００５９は２２．５分で、ＭＤＮ−００６０は２４．５分で溶出された。
【００７６】
最初の５Ｌ発酵物から得られた化合物４つすべての総収量は、ＭＤＮ−００５７：９５．８ｍｇ；ＭＤＮ−００５８：８６．０ｍｇ；ＭＤＮ−００５９：１０．８ｍｇおよびＭＤＮ−００６０：１３．８ｍｇであった。
【００７７】
ＭＤＮ−００５７：無色の油；［α］２５Ｄ＋５０．６（ｃ＝０．１，ＭｅＯＨ）；ＩＲ（ＡＴＲ）νｃｍ−１：３３５９，３１３２，３０５１，２９９９，２９３８，２８６８，２８３８，２１３０，２１２０，１７４８，１６１２，１５１４，１２４７，１１９８，１１８０，１０９３，１０３１，７３３。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３８５．１７５５［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃ２１Ｈ２５Ｎ２Ｏ５についての計算値、３８５．１７５８）；４０２．２０３３［Ｍ＋ＮＨ４］＋（Ｃ２１Ｈ２８Ｎ３Ｏ５についての計算値、４０２．２０２４）；１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲデータは表１を参照；
【００７８】
表１．ＭＤＮ−００５７についてのＮＭＲ分光分析データ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
【表１】
2016525505.tif 000007
【００７９】
【化５】
2016525505.tif 000008
【００８０】
ＭＤＮ−００５８：無色の油；［α］２５Ｄ＋１２１．０（ｃ＝０．１，ＭｅＯＨ）；ＩＲ（ＡＴＲ）νｃｍ−１：３３４８，３１３２，３０４３，２９９９，２９５８，２９３５，２９１６，２８３８，２１１９，１７４７，１６１２，１５１４，１２５１，１１９２，１１８１，１０９６，１０２８，７３５。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３８３．１５９１［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃ２１Ｈ２３Ｎ２Ｏ５についての計算値、３８３．１６０２）；４００．１８７１［Ｍ＋ＮＨ４］＋（Ｃ２１Ｈ２６Ｎ３Ｏ５についての計算値、４００．１８６７）；１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲデータは表２を参照；
【００８１】
表２．ＭＤＮ−００５８についてのＮＭＲ分光分析データ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
【表２】
2016525505.tif 000009
【００８２】
【化６】
2016525505.tif 000010
【００８３】
ＭＤＮ−００５９：無色の油；［α］２５Ｄ＋６１．０（ｃ＝０．１，ＭｅＯＨ）；ＩＲ（ＡＴＲ）νｃｍ−１：３３７７，３１３０，３０４２，２９９９，２９３７，２８６９，２８３８，２１１９，１７３６，１６１２，１５１４，１２３２，１１９７，１１７９，１０２６，７３５。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３６９．１８１３［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃ２１Ｈ２５Ｎ２Ｏ４についての計算値、３６９．１８０９）；３８６．２０８６［Ｍ＋ＮＨ４］＋（Ｃ２１Ｈ２８Ｎ３Ｏ４についての計算値、３８６．２０７４）；１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲデータは表３を参照；
【００８４】
表３．ＭＤＮ−００５９についてのＮＭＲ分光分析データ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
【表３】
2016525505.tif 000011
【００８５】
【化７】
2016525505.tif 000012
【００８６】
ＭＤＮ−００６０：白色の無定形固体；［α］２５Ｄ＋９３．５（ｃ＝０．１，ＭｅＯＨ）；ＩＲ（ＡＴＲ）νｃｍ−１：３４５７，３１３０，３０４０，２９９８，２９３５，２８７６，２８３６，２１１８，１７３５，１６１２，１５１４，１２２９，１０２３。ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３６７．１６５５［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃ２１Ｈ２３Ｎ２Ｏ４についての計算値、３６７．１６５２）；３８４．１９２４［Ｍ＋ＮＨ４］＋（Ｃ２１Ｈ２６Ｎ３Ｏ４についての計算値、３８４．１９１８）；１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲデータは表４を参照；
【００８７】
表４．ＭＤＮ−００６０についてのＮＭＲ分光分析データ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
【表４】
2016525505.tif 000013
【００８８】
【化８】
2016525505.tif 000014
【００８９】
実施例４：ＹＥＣ培地における発酵からのＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０の単離
４ＬのＹＥＣ培地における培養ブロス（フラスコで発酵された６００ｍＬおよび発酵槽由来の３．４Ｌ）をすりつぶし、２２０ｒｐｍで１時間の連続振盪の下、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で抽出した。菌糸体を濾過により分離し、その上清（４Ｌ）をデカントして有機相と水相に分離した。バイオマスをさらにＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出し、細胞を圧搾して、第二の抽出物を得た。水相をさらにＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）での液体−液体抽出に供した。有機抽出物（液相およびバイオマスからの）をすべてあわせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、６ｇの粗生成物を得た。
【００９０】
この粗抽出物をＣ１８逆相クロマトグラフィー、１０ｍＬ／分の流速、６０分のＭｅＯＨ１０〜１００％のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏの段階的勾配と２０分の１００％メタノールによる最終洗浄工程および２２４および２７５ｎｍでのＵＶ検出を用いて分画し、１５ｍＬの４０のフラクションを得た。ＬＣ／ＭＳ分析に従う対象の化合物を含有するフラクションを蒸発させ、各化合物の量や存在に従って４つの異なるセットに分類した。
【００９１】
ＭＤＮ−００５７およびＭＤＮ−００５８を含有する２つのフラクションをあわせて（３７３ｍｇ）、５０分を超えるＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ水  ３５／６５の混合物を用いるアイソクラティック溶出を伴う逆相分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８、２１．２×２５０ｍｍ、７μｍ；２０ｍＬ／分、２２４および２７５ｎｍでのＵＶ検出）によりさらに精製すると、ＭＤＮ−００５７は３５．０分で、ＭＤＮ−００５８は４０．０分で溶出された。対象の化合物を含有する分取ＨＰＬＣフラクションを蒸発させ、５０分を超えるＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ水  ３８／６２の混合物を用いるアイソクラティック溶出を伴う逆相セミ分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＲＸ−Ｃ８、９．４×２５０ｍｍ、５μｍ；３．６ｍＬ／分、２２４および２７５ｎｍでのＵＶ検出）によりさらに再精製すると、ＭＤＮ−００５７は３４．５分で、ＭＤＮ−００５８は３９．８分で溶出された。最初の４Ｌ発酵物から得られた化合物の総収量は、ＭＤＮ−００５７：１３７．２ｍｇ；ＭＤＮ−００５８：４４ｍｇであった。
【００９２】
ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０を含有する２つのフラクション（１６０ｍｇ）を、４０分を超えるＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ５０／５０の混合物を用いるアイソクラティック溶出を伴う逆相セミ分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＲＸ−Ｃ８、９．４×２５０ｍｍ、５μｍ；３．６ｍＬ／分、２２４および２７５ｎｍでのＵＶ検出）によりさらに精製すると、ＭＤＮ−００５９は２３．７分で、ＭＤＮ−００６０は２５．６分で溶出された。最初の４Ｌ発酵物から得られた化合物の総収量は、ＭＤＮ−００５９：３．６ｍｇ；ＭＤＮ−００６０：１１ｍｇであった。
【００９３】
実施例５：ＭＤＮ−００５７〜ＭＤＮ−００６０の絶対配置の決定
化合物のファミリーの相対配置を、ＭＤＮ−００５７の１Ｈ  ＮＭＲにおいて測定されるカップリング定数の分析およびＮＯＥＳＹ相関により決定した。プロトンＨ−１についてのシグナルは２つの１０．５Ｈｚカップリング定数を示し、シクロヘキサン環におけるこのプロトンの軸配向を明らかにし、また、２．６３ｐｐｍでこのシグナルにおいて測定された２つの１０．５Ｈｚカップリング定数により裏付けられたプロトンＨ−６についての軸配向も確認した。Ｈ−６およびＨ−４の間の強いＮＯＥＳＹ相関の存在は同様に後者のプロトンの軸配向を明らかにし、化合物ＭＤＮ−００５７の相対配置を１Ｓ＊、４Ｓ＊、６Ｒ＊と確立した。炭素Ｃ−７の配置は現時点では決定されないままであった。
【００９４】
Ｃ−４そしてＣ−１およびＣ−６の絶対配置を決定するためのモッシャー分析を行うために化合物ＭＤＮ−００６０を選択した。
【００９５】
室温の乾燥重水素化クロロホルム（２００μＬ、０．０６４Ｍ）中、ＭＤＮ−００６０（２００μｇ、０．５４μｍｏｌ）および乾燥ピリジン（０．１５μＬ、１．６７μｍｏｌ、３．１ｅｑ．）の撹拌溶液に、（Ｒ）または（Ｓ）−ＭＴＰＡ−Ｃｌ（１μＬ、５．４μｍｏｌ、１０当量）を添加した。反応の進行を分析ＨＰＬＣにより観察した。化合物を完全に消費した後、混合反応物のアリコートを１Ｈ  ＮＭＲにより分析した。その後、反応混合物を水（２×２００μＬ）で洗浄し、有機層を蒸発させ、セミ分取ＨＰＬＣ（Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８、９．４×２５０ｍｍ、３７分の５〜１００％の勾配Ｈ２Ｏ−ＣＨ３ＣＮとその後の１５分の１００％ＣＨ３ＣＮ、３．６ｍＬ／分、２１０および２８０ｎｍでのＵＶ検出）で精製し、ＭＤＮ−００６０の対応するＳ−ＭＴＰＡ（Ｒｔ＝４６．２２分、１４０μｇ、４４．５％）またはＲ−ＭＴＰＡエステル（Ｒｔ＝４６．２１分、１６０μｇ、５０．８％）を白色固体として得た。
【００９６】
δＳ−δＲ値の分布（表５）により、Ｃ−４のキラル中心についてＲ絶対配置であることが確認され、よって、化合物ＭＤＮ−００６０の絶対配置を１Ｓ、４Ｒ、６Ｒとして確立したが、Ｃ−７キラル中心の配置については決定されないままであった。構造的類似性から、ＭＤＮ−００５８に同一の絶対配置を割り当てたが、カーン−インゴルド−プレローグ則に従う置換基順位の変化に基づいてＭＤＮ−００５７およびＭＤＮ−００５９には１Ｓ、４Ｓ、６Ｒの絶対配置を割り当てた。
【００９７】
表５．化合物ＭＤＮ−００６０（Ｓ）−ＭＴＰＡおよび（Ｒ）−ＭＴＰＡエステルの１Ｈ−ＮＭＲデータおよびΔδ＝δＳ−δＲ値
【表５】
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【００９８】
実施例６：化合物ＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０の抗菌活性の評価
化合物ＭＤＮ−００５７、ＭＤＮ−００５８、ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０の抗菌活性をブロス微量希釈法を用いて評価した。この方法は、一晩インキュベーションした後、微生物の明らかな増殖を阻害する抗菌性化合物の最低濃度として定義される最少阻止濃度（ＭＩＣ）を決定するのに用いた。公知化合物への耐性／感受性および臨床的重要性のために選択された細菌のパネルに対するこのようなアッセイにおいては、これらの発明化合物は公知の抗生物質と同等の濃度で有効であることが見出される。
【００９９】
マイクロブロス希釈アッセイにおいては、クライオバイアルからの細菌培養物をミューラーヒントンＩＩ（ＭＨＩＩ）寒天プレートに画線することにより微生物を選択し、３７℃で一晩インキュベートした。その後、３〜５個の特徴的で新鮮なコロニーを選択し、２５ｍＬのＭＨＩＩブロス培地に懸濁し、２２０ｒｐｍで２時間振盪した。アッセイ用種菌を得るために、２時間のブロス培養物を６６０ｎｍで０．１１１の吸光度に調整し、その後１：１００に希釈した。
【０１００】
評価された４つの化合物は１００％ＤＭＳＯに希釈係数２で連続的に希釈し、８ｍｇ／ｍＬで始まる１０の化合物濃度を提供した。
【０１０１】
アッセイのために、９０μＬ／ウェルの適切に希釈された種菌を、１．６μＬ／ウェルの各化合物の濃縮物および８．４μＬ／ウェルのＭＨＩＩブロス培地と混合し、これらの化合物のさらなる希釈をもたらし、アッセイウェルに１２８μｇ／ｍＬ〜０．２５μｇ／ｍＬの濃度を生じさせた。その後、アッセイプレートをテカン製ウルトラエボリューション分光光度計において６１２ｎｍでＴ０（ゼロ時間）について読んだ。その後、プレートを静的に３７℃で２０時間インキュベートした。インキュベーション後、これらをＤＰＣ  Ｍｉｃｒｏｍｉｘ−５で振盪し、再度、Ｔｆ（最終時間）について読んだ。増殖阻害のパーセンテージを以下の標準化を用いて計算した：
％阻害＝［１−［（Ｔｆサンプル−Ｔ０サンプル）−（Ｔｆブランク−Ｔ０ブランク）／（Ｔｆ増殖−Ｔ０増殖）−（Ｔｆブランク−Ｔ０ブランク）］ｘ１００
ここで、
Ｔ０  サンプル＝ゼロ時間（インキュベーション前）に測定されたサンプル存在下での株増殖の吸光度
Ｔｆ  サンプル＝最終時間（インキュベーション後）に測定されたサンプル存在下での株増殖の吸光度
Ｔ０  増殖＝ゼロ時間（インキュベーション前）に測定されたサンプル不存在下での株増殖の吸光度
Ｔｆ  増殖＝最終時間（インキュベーション後）に測定されたサンプル不存在下での株増殖の吸光度
Ｔ０  ブランク＝ゼロ時間（インキュベーション前）に測定されたブロス培地（ブランク）の吸光度
Ｔｆ  ブランク＝最終時間（インキュベーション後）に測定されたブロス培地（ブランク）の吸光度。
【０１０２】
化合物ＭＤＮ−００５７およびＭＤＮ−００５８は、大腸菌、緑膿菌、Ａ．バウマニおよびＫ．ニューモニエの株に対するＭＩＣ値が２〜６４μｇ／ｍＬを示した。Ｓ．アウレウス（１２８μｇ／ｍＬ）または真核細胞（＞５１２μｇ／ｍＬ）に対しては活性を示さなかった。化合物ＭＤＮ−００５９およびＭＤＮ−００６０は、緑膿菌の野生型株に対するＭＩＣ値が１６〜６４μｇ／ｍＬを、Ａ．バウマニに対しては０．５〜２μｇ／ｍＬ示した（表６）。
【０１０３】
表６．４つの試験化合物について得られた抗菌ＭＩＣ値
【表６】
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【０１０４】
実施例７：耐性バイオアッセイにおける耐性の評価
ＭＤＮ−００５７およびＭＤＮ−００５８に対する耐性の頻度について大腸菌ａｃｒＡＢ：：Ｔｎ９０３（ＣＢ−２１９）および野生型（ＷＴ）アシネトバクター・バウマニ（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−７４７）に対し評価した。この目的のために、各株に対するＭＤＮ−００５７の最少阻止濃度を臨床検査標準協会出版物Ｍ０７−Ａ９、Ｖｏｌ．３２、Ｎｏ．２「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ」２０１２年１月に記載されるブロス微量希釈により決定した。ミューラーヒントンＩＩ寒天培地を含有する６ウェルプレート（５ｍＬ／ウェル）を、ＭＩＣの４倍および８倍を超える濃度のＭＤＮ−００５７またはＭＤＮ−００５８とともに準備した。培養物は後期対数期まで増殖し、寒天に広がった。プレートを３７℃でインキュベートし、インキュベーションの１および２日後に試験した。
【０１０５】
Ａ．バウマニについては、２４時間のインキュベーション後、ブロスＭＩＣの４倍および８倍を超える濃度のＭＤＮ−００５７でコロニーの菌叢が明らかとなった。大腸菌ａｃｒＡＢ：：Ｔｎ９０３については、４８時間のインキュベーション後、ブロスＭＩＣの４倍および８倍を超える濃度のＭＤＮ−００５７で数えられないほど多数のピンポイントコロニーが明らかとなった。プレートからの増殖物を抗生物質不使用のトリプシン大豆寒天プレートに再度画線することにより各種から６〜８個の分離株を得、分離株に対するＭＤＮ−００５７のＭＩＣを続いて決定した。大腸菌分離株のＭＩＣは、親株ＣＢ−２１９と比較して少なくとも１６〜６４倍に上昇した。対照的に、Ａ．バウマニ分離株のＭＩＣは、親株Ａ．バウマニＢＡＡ−７４７と有意に相違しなかった。
【０１０６】
表７．ＭＤＮ−００５７およびＭＤＮ−００５８についての大腸菌ＣＢ−２１９に対するマイクロＲＩバイオアッセイ
【表７】
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【０１０７】
実施例８：高分子標識アッセイを用いる作用機序の評価
高分子の細胞内構成要素の阻害を測定する高分子合成アッセイは、化合物の広範囲のＭＯＡを理解するための指針を提供する。
【０１０８】
脂質、細胞壁、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質合成経路における高分子の合成に対する阻害作用を大腸菌ａｃｒＡＢ：：Ｔｎ９０３の増殖細胞において決定した。細胞をトリプチケースソイ寒天培地において３５℃で一晩増殖させ、この培養物を１５ｍＬのミューラーヒントンブロスＩＩ（ＭＨＢ）に接種するのに使用した。培養物は３５℃および２００ｒｐｍでシェーカーにおいてインキュベートしながら初期指数増殖期（ＯＤ６００＝０．２〜０．３）まで増殖した。
【０１０９】
初期指数増殖期における細胞をＭＤＮ−００５７に曝し、各経路における放射性前駆物質のそれらの取り込みを決定した。リファンピシン、シプロフロキサシン、テトラサイクリン、イミペネムおよびイルガサンを、それぞれＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、細胞壁および脂質合成の阻害についての陽性対照としてインキュベートした（図１）。
【０１１０】
ＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質合成：細胞が初期対数期に到達したら、１００μＬの培養物を、種々の濃度のＭＤＮ−００５７または対照抗生物質（２．５μＬ）を１００％ＤＭＳＯまたは脱イオン水（ｄＨ２Ｏ）中、４０×最終濃度で含有する三通りのウェルに添加した。２．５％ＤＭＳＯまたはｄＨ２Ｏ単独で処理された培養物をすべての実験について「薬剤なし」の対照として提供した。細胞を、各反応物に添加する薬剤の容量の大部分を占めるＭＨＢに１０２．５％で、または、タンパク質合成反応のためにＭ９最少培地に添加した。室温での５分のインキュベーションの後、実験に応じて、［３Ｈ］チミジン（ＤＮＡ合成）、［３Ｈ］ウリジン（ＲＮＡ合成）または［３Ｈ］ロイシン（タンパク質合成）のいずれかを０．５−１．０μＣｉ／反応で添加した。反応を室温で１５〜４０分進行させ、その後、１２μＬの冷５％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）または５％ＴＣＡ／２％カザミノ酸（タンパク質合成）を添加することにより停止させた。 反応物を氷上で３０分間インキュベートし、ＴＣＡ沈殿物質を２５ｍｍＧＦ／１．２μｍ  ＰＥＳ９６ウェルフィルタープレート（コーニング）に収集した。２００μＬ／ウェルの冷５％ＴＣＡで５回洗浄した後、フィルターを乾燥させ、その後、パッカードトップカウントマイクロプレートシンチレーションカウンターを用いて数を数えた。
【０１１１】
細胞壁合成：初期指数増殖期における細菌細胞をＭ９最少培地に移し、上記のように種々の濃度のＭＤＮ−００５７または対照抗生物質（２．５μＬ）を１００％ＤＭＳＯまたはｄＨ２Ｏ中、４０×最終濃度で含有する１．５ｍＬエッペンドルフチューブ（１００μｌ／チューブ）に添加した。３７℃での５分のインキュベーションの後、［１４Ｃ］Ｎ−アセチルグルコサミン（０．４μＣｉ／反応）を各チューブに添加し、３７℃の加熱ブロック中で３０分間インキュベートした。各チューブに１００μＬの８％ＳＤＳを添加することにより反応を停止した。その後、反応物を加熱ブロックにおいて９５℃で３０分間加熱し、冷却し、簡単に遠心分離し、プレウェットＨＡフィルター（０．４５μＭ）にスポットした。５ｍＬの０．１％ＳＤＳで３回洗浄した後、フィルターを５ｍＬのｄＨ２Ｏで２回すすぎ、乾燥させ、その後、ベックマンＬＳ３８０１液体シンチレーションカウンターを用いて数を数えた。
【０１１２】
脂質合成：細菌細胞をＭＨＢにおいて初期指数増殖期まで増殖させ、１００μＬを、種々の濃度のＭＤＮ−００５７または対照抗生物質を上記のように含有する１．５ｍＬエッペンドルフチューブ（３通り）に添加した。室温での５分のインキュベーションの後、［３Ｈ］グリセロールを０．５μＣｉ／反応で添加した。反応を室温で４０分間進行させ、その後、３７５μＬのクロロホルム／メタノール（１：２）の添加により停止させ、その後、各添加の後２０秒間ボルテックスした。その後、ボルテックスしながらクロロホルム（１２５μＬ）を各反応物に添加し、その後、１２５μＬのｄＨ２Ｏを添加し、ボルテックスした。反応物を１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、その後、１５０μＬの有機相をシンチレーションバイアルに写し、ドラフトにおいて少なくとも１時間乾燥させた。その後、液体シンチレーションカウンターによりサンプルの数を数えた。
【０１１３】
大腸菌ａｃｒＡＢ：：Ｔｎ９０３における高分子合成に対するＭＤＮ−００５７の効果を図１に示す。大腸菌ａｃｒＡＢ：：Ｔｎ９０３細胞にＭＤＮ−００５７をＭＩＣの８倍まで曝してもＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質または脂質合成について阻害はわずかであるか、あるいは起こらなかった。細胞壁合成についてはＭＩＣの２〜８倍で最大阻害が約７５％阻害である投与量依存的な阻害が明らかとなった。
【図１】
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【国際調査報告】
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