(57)【要約】  本発明は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連疾患の治療における医薬品の製造のための式Ａの化合物の使用、及びＴＮＦ関連疾患を治療する方法であって、必要とする対象に、式Ａの化合物の治療上有効な量を投与するステップを含む方法を提供する。    【化１】2016539077.tif 000011 【選択図】図３
2016539077.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＮＦ関連疾患の治療における医薬品の製造のための、式Ａの化合物
【化１】
2016539077.tif 000010
（式中、
置換基Ｒ’は、Ｈ、２個〜４個の炭素原子を有するアルカノイル又はアルケノイルから選択され、
置換基Ｒは、Ｈ、２個〜２２個の炭素原子を有するアルカノイル又はアルケノイルから選択される）
の使用。
【請求項２】
ＴＮＦ関連疾患が、関節炎であり、好ましくは、前記関節炎が、リウマチ性関節炎又は関節リウマチであることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ’が２個〜４個の炭素原子を有するアルカノイルである場合、前記アルカノイルがアセチルであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
置換基Ｒが、１１個〜２２個の炭素原子を有するアルケノイルであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
置換基Ｒ’が、Ｈであり、置換基Ｒが、１個又は２個以上、好ましくは１個〜６個の炭素−炭素二重結合を含有し、かつ１１個〜２２個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルケノイルであることを特徴とする、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
置換基Ｒが、分岐状アルケノイルであり、二重結合が、主鎖又は分岐鎖にあってもよく、好ましくは、置換基Ｒが、ウンデカ−２−エノイルであることを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
置換基Ｒが、１１個〜２２個の炭素原子を有するアルカノイルであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
置換基Ｒ’が、Ｈであり、置換基Ｒが、１１個〜２２個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルカノイルであることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
置換基Ｒが、ウンデカノイル、ドコサノイル、オクタデカノイル及びイソステアロイルから選択されることを特徴とする、請求項１〜３、７及び８のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
ＴＮＦ関連疾患を治療する方法であって、必要とする対象に、請求項１〜９のいずれかに記載の式Ａの化合物の治療上有効な量を投与するステップを含み、
好ましくは、前記式Ａの化合物が、注射によって投与されることを特徴とする、前記方法。
【請求項１１】
ＴＮＦ関連疾患が、関節炎であり、好ましくは、前記関節炎が、リウマチ性関節炎又は関節リウマチであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品の分野に属し、特に一般式Ａの化合物の新規な医療上の使用に関する。特に、本発明は、ＴＮＦ関連疾患、例えばリウマチ性関節炎、関節リウマチなどの治療における７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７β−ジオール及びそのエステル誘導体の新規な使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
フルベストラントとも称される、７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７β−ジオールは、抗エストロゲン療法に応答せず、且つエストロゲン受容体陽性である閉経後進行性乳がんの治療に一般に使用される公知のエストロゲン受容体遮断薬である。
【０００３】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α, tumor necrosis factor-α）は、関節リウマチ（ＲＡ, rheumatoid arthritis）における原発性炎症性サイトカインであり、活性化された単核細胞、マクロファージ及びＴリンパ球によって放出される。その受容体に結合した後、ＴＮＦ−αは、免疫制御機構で機能することができ、発熱、炎症、感染、外傷治癒及び腫瘍死滅を含めた、体内の様々な病態生理学的プロセスに関与することができる。正常な環境下では、ＴＮＦ−αの発現及び分泌は、体に厳格に阻害される一方で、様々な疾患における炎症応答に関与するとＴＮＦ−αは発現される。ＴＮＦ−αは、関節に病理学的変化をもたらす可能性のある炎症の制御に関与し、ＲＡにおけるＴＮＦ−αの異常な発現は、ＲＡの病因において主要な因子である。ＴＮＦ−αは、炎症経路における重要なサイトカインであり、関節リウマチを有する患者の滑膜組織、滑液及び血清中に存在する。ＴＮＦ−αは、ＴＮＦ−α及び種々の組織因子及びマトリックスタンパク質の間の相互作用を通して、滑膜細胞のＲＡ炎症応答、異常な増殖及びアポトーシス、軟骨及び骨の角膜血管増殖の形成及び破壊を促進し、ＲＡ炎症応答の継続的進行を促進する。したがって、ＴＮＦ−αは、ＲＡ疾患活性の臨床指標並びにＲＡの治療における有効な標的とみなされ得る。
【０００４】
現在、ＴＮＦ関連疾患の治療における、フルベストラントによって表される一般式Ａの化合物の使用は、報告されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）関連疾患の治療における医薬品の製造についての式Ａの化合物の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の目的は、以下の技術的解決策によって達成される。
【０００７】
１つの態様では、本発明は、ＴＮＦ関連疾患の治療における医薬品の製造のための、式Ａの化合物
【０００８】
【化１】
2016539077.tif 000003
【０００９】
（式中、
置換基Ｒ’は、Ｈ、２個〜４個の炭素原子を有するアルカノイル又はアルケノイルから選択され、
置換基Ｒは、Ｈ、２個〜２２個の炭素原子を有するアルカノイル又はアルケノイルから選択される）
の使用を提供し、
前記ＴＮＦ関連疾患が、関節炎であり、好ましくは前記関節炎が、リウマチ性関節炎又は関節リウマチであり、
Ｒ’が２個〜４個の炭素原子を有するアルカノイルである場合、前記アルカノイルがアセチルであり、
好ましくは、前記置換基Ｒが、１１個〜２２個の炭素原子を有するアルケノイルであり、
好ましくは、前記置換基Ｒ’が、Ｈであり、置換基Ｒが、１個又は２個以上、好ましくは１個〜６個の炭素−炭素二重結合を含有し、１１個〜２２個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルケノイルであり、
好ましくは、置換基Ｒが、分岐状アルケノイルであり、前記二重結合が、主鎖又は分岐鎖にあり得、好ましくは、置換基Ｒが、ウンデカ−２−エノイルであり、
好ましくは、前記置換基Ｒが、１１個〜２２個の炭素原子を有するアルカノイルであり、
好ましくは、前記置換基Ｒ’が、Ｈであり、置換基Ｒが、１１個〜２２個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルカノイルであり、
好ましくは、置換基Ｒが、ウンデカノイル、ドコサノイル、オクタデカノイル及びイソステアロイルから選択される。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ＴＮＦ関連疾患を治療する方法であって、上述のとおり、必要とする対象に、式Ａの化合物の治療上有効な量を投与するステップを含み、
好ましくは、前記式Ａの化合物が、注射によって投与され、
好ましくは、前記ＴＮＦ関連疾患が、関節炎であり、さらに好ましくは、前記関節炎が、リウマチ性関節炎又は関節リウマチである、方法も提供する。
【００１１】
本発明は、ＳＤラットにおけるニワトリII型コラーゲンで誘発された関節炎モデルを使用して、そのモデルにおける式Ａの化合物（特に、以下の化合物Ｉ〜VIを含む）の治療効果を調査する。
【００１２】
炎症を起こしたモデルがＳＤラットで樹立するのに成功した後、ＳＤラットを、体重によって試験薬物のモデル対照群（１２匹のラット）、低用量群、中程度用量群（各々８匹のラット）、及び高用量群（１２匹のラット）に無作為に分けた。７日間１日おきに尾部静脈注射により、モデル対照群のラットに、ブランクの脂肪乳剤注射（０．５ｍＬ）を投与した。７日間１日おきに尾部静脈注射により、試験薬物の低用量群及び中程度用量群のラットに、式Ａの化合物（特に、以降に記述される化合物Ｉ〜VIを含む）の脂肪乳剤注射を投与した。１４日間１日おきに尾部静脈注射により、試験薬物の高用量群のラットに、式Ａの化合物の脂肪乳剤注射を投与した。正常な対照群の１２匹の同じモデルにも、ブランクの脂肪乳剤注射を投与した。後足の関節のスコア、後足の関節厚さ測定、血清及び後足の関節組織におけるＴＮＦ−αレベル、後足の関節の病理学上の切片などの指標は、薬物の効力を評価するために使用された。
【００１３】
その結果から、式Ａの化合物が、顕著に、ラットの後足の腫れの程度及び後足の足首関節の厚さを低減し、血清中のＴＮＦ−αレベルを低下させ、且つ、足首関節におけるＴＮＦ−αレベルを低下させる上で機能することが示された。ラットの足首関節の病理学上の切片の結果は、血清学のものと実質的に一致した。これは、式Ａの化合物が、抗リウマチ性関節炎効果及び抗関節リウマチ効果を示すことを示した。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
以降に、本発明の実施態様が、図面と組み合わせて詳細に示される。
【図１】正常な対照群のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図２】モデル対照群のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図３】化合物Ｉの高用量群（１．４０ｍｇ／ｋｇ）のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図４】化合物Ｖの高用量群（１．８０ｍｇ／ｋｇ）のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図５】化合物IIの高用量群（１．８０ｍｇ／ｋｇ）のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図６】化合物IIIの高用量群（２．１６ｍｇ／ｋｇ）のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図７】化合物IVの高用量群（２．０ｍｇ／ｋｇ）のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【図８】化合物VIの高用量群（１．４８ｍｇ／ｋｇ）のラットの後足の足首関節の病理学上の切片を示す画像である（×４００）。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、下の特定の実施態様と組み合わせてさらに記述される。提供される実施例は、例示のためであるにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。
【００１６】
本発明で使用される化合物Ｉは、Xi'an Libang Pharmaceutical Co., Ltd.社から購入され、化合物II〜IVは、以下の方法によって合成された。本発明に使用されるＳＤラットは、Super-B&K Laboratory Animal Corp. Ltd.社から購入され、ニワトリII型コラーゲンは、Sigma社から購入され（ロット番号８７Ｈ５２２７）、ラット腫瘍壊死因子α［ＴＮＦ−α］酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ, enzyme-linked immunoassay）キットは、Shanghai Biovol Biotech Co., Ltd.社から購入された（ロット番号ＢＶ−Ｅ１２１０２２０１）。
【００１７】
本発明は、ＳＤラットにおけるII型コラーゲンで誘発された関節炎モデルを使用して、関節炎（例えば、リウマチ性関節炎及び関節リウマチ）における化合物Ｉ及びそのエステル誘導体II〜VIの治療効果を調査する。
【実施例１】
【００１８】
化合物IIの合成
１）反応処理
３ｇフルベストラント（４．９５ｍｍｏｌ）を、２５０ｍＬ丸底フラスコに添加し、その後撹拌しながら１６０ｍＬジクロロメタンで溶解した。その後、前記フラスコに０．０８２２ｇ（０．６６ｍｍｏｌ）４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ, 4-dimethylaminopyridine）、０．９６ｇ（５．０５ｍｍｏｌ）ウンデカン酸及び１．０２ｇ（４．９８ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ, N,N-dicyclohexylcarbodiimide）を順次添加した。４８時間、室温（例えば、２０±５℃）で撹拌下で反応後、反応を停止させた。
【００１９】
２）後プロセス
反応系を最初に凍結して、できる限り反応副産物Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ, N,N'-dicyclohexylurea）を沈殿させた。濾過して、固形物ＤＣＵを除去した後、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、その後中性になるまで水で洗浄して、回転エバポレーターで蒸発させて、ジクロロメタンを除去して、無色透明のコロイド状の液体を得、それを少量の酢酸エチルに溶解させ、その後、白色固形物ＤＣＵがまったく析出しなくなるまで、冷蔵庫で凍結させた（例えば、凍結温度は、−１５±３℃であってよい）。濾液を濃縮して酢酸エチルを除去し、ｎ−ヘキサン−酢酸エチルの混合溶媒から再結晶化し、濾過して、析出した白色固体（未反応の原材料フルベストラント）を除去した。母液を回転乾燥して、溶媒を除去し、無色油状物を得た。前記油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤は、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：１、体積比）であった）によってさらに精製し、その後回転エバポレーターによって蒸発させて、１．０６１１ｇの無色油状物を得、その油状物は、化合物II（純度９９．１０４％、ＨＰＬＣによって測定された、Ｃ１８カラム、流動相：水中６７％テトラヒドロフラン（ＴＨＦ, tetrahydrfuran）、流速：１．０ｍＬ／分、検出波長：２２０ｎｍ）であり、モル収率は、２７．７％であった。
ＩＲ（ｃｍ−１）：３３８５、２９２６、２８５５、１７５６、１４９４、１４６３、１１９９、１１５２、１０５９、１０１７、９８５、７２１。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  ７．２８（ｓ，１Ｈ）、６．８３（ｄ，１Ｈ）、６．７７（ｄ，１Ｈ）、３．７３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、２．８８〜１．１７（ｔ，５７Ｈ）、０．８９（ｓ，３Ｈ）、０．７７（ｓ，３Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  １７２．６４、１４８．５２、１３７．１３、１２６．９１、１２２．３７、１２０．１０、１１８．６４、８１．９３、５２．７５、５１．０３、４６．４７、４３．３３、４１．６７、３８．２３、３６．８９、３４．５０、３４．４５、３３．８５、３１．８９、２９．６７、２９．５０、２９．６３、２９．５５、２９．４９、２９．４６、２９．３４、２９．３０、２９．２６、２９．１６、２９．１２、２８．８０、２８．２３、２７．１１、２５．７０、２５．０１、２４．８８、２２．６６、１４．６２、１４．５０、１１．５０。
【実施例２】
【００２０】
化合物IIIの合成
１）反応処理
３ｇフルベストラント（４．９５ｍｍｏｌ）を、２５０ｍＬ丸底フラスコに添加し、その後撹拌しながら、１６０ｍＬジクロロメタンで溶解した。その後、前記フラスコに０．０８２２ｇ（０．６６ｍｍｏｌ）ＤＭＡＰ、１．８７ｇ（５．０５ｍｍｏｌ）ドコサン酸及び１．０２ｇ（４．９８ｍｍｏｌ）ＤＣＣを順次添加した。４８時間、室温（例えば、２０±５℃）で撹拌下で反応させた後、反応を停止させた。
【００２１】
２）後プロセス
実施例１における後プロセスに従って、反応液を処理して、１．０１６ｇの白色固体粉末（ＨＰＬＣにより純度９２．６３４％）（Ｃ１８カラム、流動相：水中７５％ＴＨＦ、流速：１．０ｍＬ／分、検出波長：２２０ｎｍ）を得、その粉末は、化合物IIIであり、モル収率は、２２．１％であった。
ＩＲ（ｃｍ−１）：３６０７、３４２４、２９１９、２８５１、１７５４、１４９５、１４７１、１１９９、１１５３、１１４１、１１１２、１０８１、９８５、７１９。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  ７．２８（ｄ，１Ｈ）、６．８３（ｄ，１Ｈ）、６．７７（ｄ，１Ｈ）、３．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、２．９１〜１．０５（ｔ，７９Ｈ）、０．８９（ｔ，３Ｈ）、０．７７（ｓ，３Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  １７２．６４、１４８．５３、１３７．１３、１２６．９１、１２２．３７、１１８．６４、８１．９３、５２．８３、５１．１１、４６．４８、４３．３４、４１．６８、３８．２４、３６．８９、３４．５０、３３．１５、３１．９４、３０．５６、２９．９４、２９．８６、２９．７１、２９．６７、２９．６３、２９．６２、２９．５１、２９．４８、２９．３７、２９．３５、２９．２７、２９．１７、２９．１３、２８．８１、２８．２３、２７．１２、２５．７０、２５．０１、２４．８８、２３．１６、２２．６６、１４．５０、１４．０１、１１．５０。
【実施例３】
【００２２】
化合物IVの合成
３ｇフルベストラント（４．９５ｍｍｏｌ）を、２５０ｍＬ丸底フラスコに添加し、その後、撹拌しながら、１６０ｍＬジクロロメタンに溶解した。その後、前記フラスコに０．０８２２ｇ（０．６６ｍｍｏｌ）ＤＭＡＰ、１．４４ｇ（５．０５ｍｍｏｌ）イソステアリン酸及び１．０２ｇ（４．９８ｍｍｏｌ）ＤＣＣを順次添加した。４８時間、室温（例えば、２０±５℃）で撹拌下で反応させた後、反応を停止させた。
【００２３】
実施例１における後プロセスに従って、反応液を処理して、１．００２８ｇの無色コロイド（純度９９．３１２％、ＨＰＬＣによって測定された）（実施例２と同じ方法で）を得、そのコロイドは、化合物IVであり、モル収率は２３．２％であった。
ＩＲ（ｃｍ−１）：３３９６、２９２８、２８６６、１７４８、１４９４、１４６６、１３６４、１１９８、１１４９、１１２１、１０５８、１０１７、９８４、７２０。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  ７．２８（ｓ，１Ｈ）、６．８３（ｄ，１Ｈ）、６．７６（ｓ，１Ｈ）、３．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、２．３５〜１．０３（ｔ，７１Ｈ）、１．０９〜０．９４（ｔ，３Ｈ）、０．８９（ｓ，３Ｈ）、０．７７（ｓ，３Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  １７１．１５、１４８．６０、１３７．０３、１２６．８８、１２２．４５、１１８．７２、８１．９４、５３．３４、５３．０４、５２．８２、５１．３９、５０．９６、４８．４６、４８．３９、４８．３２、４６．４８、４３．３３、４１．６８、３８．２１、３７．９２、３７．８６、３７．７９、３６．８９、３４．５０、３３．１６、３２．３７、３２．０５、３１．１１、３０．５６、３０．０６、２９．９６、２９．８７、２９．６９、２９．５５、２９．５０、２９．３７、２９．３２、２９．１８、２８．８１、２８．２６、２７．１１、２６．０９、２５．６５、２４．８１、２２．６６、２１．２１、１９．４０、１４．６１、１４．５０、１１．５１。
【実施例４】
【００２４】
化合物Ｖの合成
０．３６ｇフルベストラント（０．６ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬ丸底フラスコに添加し、その後、撹拌しながら、２５ｍＬジクロロメタンで溶解した。その後、前記フラスコに９．９３ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）ＤＭＡＰ、０．１１３ｇ（０．６１ｍｍｏｌ）ウンデセン酸及び０．１３ｇ（０．６４ｍｍｏｌ）ＤＣＣを順次添加した。４８時間、室温（例えば、２０±５℃）で撹拌下で反応させた後、反応を停止させた。
【００２５】
実施例２における後プロセスに従って、反応液を処理して、明るい黄色油状物を得た。前記油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで３回、中性アルミナで１回さらに精製し、乾固するまで蒸発させて、０．１ｇの明るい黄色油状物（純度９６．０１０％、ＨＰＬＣによって測定された）（実施例２と同じ方法で）を得、この油状物は、化合物Ｖであり、収率は、２１．５％であった。
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３３８７、２９２７、２８５５、１７３６、１６５２、１４９４、１４６１、１３５６、１３１２、１１９８、１１５４、１１２１、１０５９、１０１６、９８３、７２１。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  ７．２７（ｔ，１Ｈ）、７．１５（ｔ，１Ｈ）、６．８７（ｓ，１Ｈ）、６．８２（ｓ，１Ｈ）、６．４３（ｔ，２Ｈ）、５．９９（ｔ，１Ｈ）、３．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、３．２〜１．１（ｔ，５１Ｈ）、０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、０．７７（ｓ，３Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  １７０．９０、１６５．３８、１５１．７１、１４８．５５、１３７．１０、１３５．５５、１２６．９１、１２２．４４、１２０．９４、１２０．１２、１１８．７９、８１．９３、５２．７７、５１．０４、４６．５０、４３．３５、４１．７１、３８．２７、３６．９１、３４．５１、３３．１８、３１．８５、３０．５６、２９．９４、２９．８７、２９．７０、２９．６２、２９．５１、２９．３６、２９．３４、２９．１９、２９．１６、２９．０９、２８．９６、２８．８１、２８．２３、２７．１３、２５．７０、２４．８８、２２．６６、１４．５０、１３．５０、１１．１０。
【実施例５】
【００２６】
化合物VIの合成
０．３１ｇ（０．４ｍｍｏｌ）化合物Ｖ（実施例４で合成された）、４ｍＬ（４０ｍｍｏｌ）無水酢酸、０．２ｇ（１．６ｍｍｏｌ）４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を、５０ｍＬ丸底フラスコに順次添加した。その後、３０ｍＬのＴＨＦ溶液を、前記フラスコに添加した。４８時間、還流反応させた後、反応を停止させた。
【００２７】
反応系を冷却した後、それを、中性になるまで水で洗浄し、相を分離した。有機層を、回転乾燥して、勾配溶出（溶出剤は、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（４０：１／１０：１／５：１、体積比）であった）を通して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。その後、乾固するまで溶出剤を蒸発させて、ミルク様白色コロイド液を得、このコロイド液は化合物VIであった。
ＩＲ（ｃｍ−１）：３４４９、２９２７、２８５５、１７３６、１６５１、１４９４、１４６１、１３７３、１３６０、１３１１、１２４５、１１９８、１１５４、１１２１、１０４５、１０２７、９８３、８９６、８２２、７２０。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  ７．２７（ｔ，１Ｈ）、７．１５（ｔ，１Ｈ）、６．８７（ｔ，１Ｈ）、６．８１（ｄ，１Ｈ）、６．４０（ｔ，１Ｈ）、６．００（ｄ，１Ｈ）、５．６３（ｔ，１Ｈ）、４．７０（ｔ，１Ｈ）、２．７〜１．１（ｔ，５２Ｈ）、２．０５（ｔ，３Ｈ）、０．８９（ｔ，３Ｈ）、０．８２（ｓ，３Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ  １７０．９０、１６５．３６、１５１．７２、１４８．５６、１３７．０７、１３６．９７、１２６．９２、１２２．４３、１２２．３２、１２０．９２、１１８．７３、８２．７６、５２．７１、５０．９８、４６．２６、４２．９４、４１．４０、３８．２０、３８．１２、３７．０６、３４．５０、３３．１７、３２．５０、３２．４１、３１．８４、２９．８５、２９．６７、２９．５５、２９．４９、２９．３５、２９．３２、２９．１８、２９．１５、２８．７９、２８．１６、２６．９６、２５．６４、２２．７８、２２．６５、２１．１７、１４．６３、１２．０２。
【実施例６】
【００２８】
薬力学的実験
モデルの樹立：
ニワトリII型コラーゲンを、２ｍｇ／ｍＬ濃度で十分に溶解するように４℃で、撹拌しながら、０．１ｍｏｌ／Ｌ酢酸に溶解した。得られた溶液を、一夜４℃で冷蔵庫に入れた。液体パラフィン及びラノリンを、２：１（体積比）の比で混合し、混合物を、オートクレーブにかけて、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ, incomplete Freund's adjuvant）を調製した。１時間、８０℃で、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌, Bacillus Calmette Guerin）ワクチン（６０ｍｇ）を不活化し、乳鉢に移し、この乳鉢にＩＦＡを滴下で添加した。均一に破砕した後、得られた混合物を、二重シリンジによって繰り返し押し引きして、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ, complete Freund's adjuvant）を調製し、ＢＣＧワクチンの最終濃度は、２ｍｇ／ｍＬであった。等量のニワトリII型コラーゲン酸溶液を、ＣＦＡと混合して、安定な乳剤（１ミリリットル当たり１ｍｇのニワトリII型コラーゲンを含有する）になった。
【００２９】
１２匹の雌ＳＤラットを、正常な対照群として１９２匹の雌ＳＤラットから無作為に選択した。残りの１８０匹のラットを、ヨードチンキで消毒した。７５％エタノールで脱ヨード化した後、ラットの各々に、尾部の基部に皮内注射することにより、１５０μＬコラーゲン乳剤を投与し、右の後足の足裏での皮内注射によって、１００μＬコラーゲン乳剤を投与した。したがって、各ラットについて総計２５０μＬを投与した。７日後、等量のコラーゲン乳剤を、二次免疫として腹腔内に注射した。
【００３０】
ラットのグループ分け及び投与：炎症を起こしたラットを、モデル対照群、体重に基づき試験薬物の低用量群、中程度用量群、及び高用量群に分けた。以下の表１に示される薬物、群、用量及び投与時間に従って投与を行った。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
ここで、試験薬物は、以下に示される化合物Ｉ〜VIである：
化合物Ｉ：
７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７β−ジオール
化合物II：
７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−ヒドロキシル−１７−ウンデカノイル
化合物III：
７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−ヒドロキシル−１７−ドコサノイル
化合物IV：
７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−ヒドロキシル−１７−イソステアロイル
化合物Ｖ：
７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−ヒドロキシル−１７−（ウンデカ−２−エノイル）
化合物VI：
７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−アセチル−１７−（ウンデカ−２−エノイル）
これらの試験薬物の全ては、脂肪乳剤注射後に投与した。
【００３３】
結果の評価及びデータ収集
各群のラットを、後足の関節についてスコアを付け、炎症を起こす前に足首関節の厚さについて測定した。正常なラットの眼窩静脈叢から血液を採った。その血液の血清を分離し、−２０℃で凍結保存して、サイトカインを検出した。３日間炎症を起こさせた後、ラットの関節についてスコアを付け、投与前（炎症を起こしてから１９日目に）、投与（炎症を起こしてから２０日目に）後３日目及び８日目に足首関節の厚さを測定した。炎症が重篤であるときに（炎症を起こした後２３日目に）各群のラットの眼窩静脈叢から血液を採った。その血液の血清を分離し、−２０℃で凍結保存した。各群について８匹のラットを、炎症を起こした後２８日目に犠牲にし、腹腔内静脈から血液を採った。この血液の血清を分離し、血清学的検出にかけた（ＴＮＦ−α）。残りのラットを、炎症を起こしてから３５日目に犠牲にし、組織学上の指標検出（histology index detection）を行った。
【００３４】
試験結果
（１）後足の関節のスコアの結果
モデルの樹立及び投与後のラットの後足の関節のスコアの結果を、表２に示した。正常な対照群と比較して、モデル対照群の関節のスコアは、有意に増加した（ｐ＜０．０１）。投与後３日目における炎症が最も重篤であった。モデル対照群の関節のスコアが最高であった。投与群の関節のスコアが減少し、そのほとんどは、モデル対照群と比較して有意差があった（ｐ＜０．０１）。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
（２）後足の足首関節の厚さの判定
表３には、投与後の関節炎を有するラットの右の足首関節の厚さにおける変化が示された。判定結果は、正常な対照群と比較して、モデル対照群の足首関節の厚さが有意に増大し（ｐ＜０．０１）、同時に、各投与群における足首関節の厚さが、モデル対照群のものと比較して減少し、高用量群は、有意差を有した（ｐ＜０．０１）ことを示す。投与の前後のそれ自体の比較では、試験薬物の各群におけるラットの後足の足首関節の厚さが、投与の初期に増大し続け、投与時間の延長と共に減少することを示した。
【００３７】
【表３】
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【００３８】
（３）血清中のＴＮＦ−αの判定結果
各群のラットの血清におけるＴＮＦ−αの判定結果を、表４に示した。ラットに投与した後３日目に、各群における血清中のＴＮＦ−αレベルは、正常な群におけるものと比較して有意に増大し、最も有意な増大は、モデル対照群でのものであり（ｐ＜０．０１）、同時に投与群におけるＴＮＦ−αレベルは、モデル対照群と比較して有意に低減し、高用量群は、有意差を有した（ｐ＜０．０１）。投与後８日目に、モデル対照群における血清中のＴＮＦ−αレベルは増大し続け、低用量群におけるＴＮＦ−αレベルは、わずかに増大したが、モデル対照群におけるものよりなお低く、その結果は、有意差を示した。
【００３９】
【表４】
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【００４０】
（４）後足の足首関節の組織におけるＴＮＦ−αの判定結果
各群のラットでの後足の足首関節におけるＴＮＦ−α含量の判定結果を、表５に示した。各投与群での左右の後足の足首関節におけるＴＮＦ−αレベルは、正常な群でのラットのものより有意に高かった（ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０５）。左の足首関節では、足首関節におけるＴＮＦ−αレベルは、各治療群で有意に低減し、モデル対照群と比較して有意差を有し（ｐ＜０．０１）、同時に、正常な群でのラットの足首関節におけるＴＮＦ−α含量と比較して明らかな差は示さなかった。右の足首では、足首関節におけるＴＮＦ−αレベルも、各治療群で顕著に低減したが、総体的効果は、左の足首でのものと同程度によくはなかった。
【００４１】
【表５】
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【００４２】
（５）ラットの後足の足首関節の病理学的試験結果
ラットの後足の足首関節の病理学的試験結果は、表６及び図１〜７に示された。表６には、関節炎徴候は、最も重篤な関節病巣を有するモデル対照群で明らかであることが示された。関節炎における治療効果は、高用量群で明らかであり、モデル対照群と比較して有意差があった。図１では、正常なラットの顕著な病理学的変化が観察された関節骨、軟骨及び滑膜組織がないこと、両側関節の周囲にある皮膚及び皮下組織における炎症性細胞浸潤がないことが示された。図２では、モデル対照群のラットのほとんどの関節の滑膜組織は、炎症細胞によって浸潤され、滑膜細胞はその少数が増殖しながら変性し、関節の周囲の皮下組織は中程度又は重篤な炎症反応を有したことが示された。図３〜７では、投与の高用量群における病巣状態が、モデル対照群におけるものより軽いことが示された。
【００４３】
【表６】
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【００４４】
（６）結論
本発明は、ラットのニワトリII型コラーゲン及びアジュバントで同時誘発された関節炎における化合物Ｉ、II、III、IV、Ｖ及びVIの脂肪乳剤注射の治療効果を調査し、関節炎を有するラットにおける様々な指標の分析を通して関節炎の治療でのそれの薬理学上の活性を評価した。
【００４５】
ラットモデル及び投与群のラットの後足の腫れの程度、並びに後足の足首関節の治療の結果から、所定の効果が、ラットの後足の腫れの程度及び後足の足首関節の厚さを低減する上で起こることを知見できる。血清中のＴＮＦ−αの検出結果は、血清中のＴＮＦ−αレベルを低減できること、及びラットの足首関節の病理学的切片の結果は、血清学のものと実質的に一致したことを示した。
【００４６】
結局、化合物Ｉ及びそのエステル誘導体は、この関節炎モデルに治療効果を示し、効力は、用量の増加及び投与時間の延長でよくなることが予想できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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