(57)【要約】  本発明は、癌の治療での使用のための炭酸脱水酵素ＩＸ標的化合物に関し、その使用は、ＣＡＩＸ発現の定量化およびＣＡＩＸ発現に基づくＣＡＩＸスコアの決定を含む。本発明は、さらに、癌疾患を診断、予後判断および／または分類するための方法に関し、ＣＡＩＸ発現の定量化、およびＣＡＩＸスコアの決定を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の治療での使用のための炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）標的化合物であって、
前記使用は、治療される対象から得られる少なくとも１つの腫瘍サンプルにおけるＣＡＩＸ発現を定量化し、前記腫瘍サンプルにおける前記ＣＡＩＸ発現に基づいてＣＡＩＸスコアを決定することを含み、
前記対象は、事前に定義されたＣＡＩＸスコアに到達する場合に治療される、
炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）標的化合物。
【請求項２】
請求項１に記載のＣＡＩＸ標的化合物であって、
ＣＡＩＸ発現が、腫瘍細胞染色、好ましくは免疫組織化学染色によって、定量化される、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項３】
請求項１〜２に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記の発現されたＣＡＩＸが、ＣＡＩＸポリペプチドまたはＣＡＩＸポリペプチドのフラグメントを含む、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項４】
請求項１〜３に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記の発現されたＣＡＩＸが、ＣＡＩＸポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項５】
請求項１〜４に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記ＣＡＩＸスコアは、腫瘍細胞の程度および染色強度の組み合わせにより表されるＣＡＩＸ発現を決定および／または計算される、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項６】
請求項１〜５に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記ＣＡＩＸスコアは、式：
ＣＡＩＸスコア＝（０×染色強度がない生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）＋（１×かすかに染色強度を有する生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）＋（２×中程度の染色強度を有する生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）＋（３×強い染色強度を有する生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）
によって決定および／または計算される、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項７】
請求項１〜６に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記の事前に定義されたＣＡＩＸスコアが≧２．０である、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項８】
請求項１〜７に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記の事前に定義されたＣＡＩＸスコアが≧２．６である、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項９】
請求項１〜８に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記標的化合物が抗−ＣＡＩＸ抗体である、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記標的化合物が、アミノ酸配列ＬＳＴＡＦＡＲＶおよび／またはＡＬＧＰＧＲＥＹＲＡＬに結合する、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記標的化合物が、抗体ギレンツシキマブおよび／またはそのフラグメントである、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記癌は、頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、肝臓癌、膀胱癌、肺癌、頭頸部癌、胆道癌および腎細胞癌を含む群から選択される、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１２に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記癌は、腎明細胞癌（ＲＣＣ）である、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１３に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記標的化合物は、治療される対象が原発性腫瘍切除術を受けた後に用いられる、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４に記載の使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
アジュバント療法における、
ＣＡＩＸ標的化合物
【請求項１６】
ＣＡＩＸを発現している癌の治療での使用のためのＣＡＩＸ標的化合物であって、
癌細胞が、ＣＡＩＸスコア≧２．０、特に≧２．６によって特徴付けられる、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載のＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記ＣＡＩＸ標的化合物が、Ｇ２５０および／またはそのエピトープ結合フラグメントである、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１８】
請求項１６〜１７に記載のＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記癌が腎明細胞癌である、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項１９】
請求項１から１８のいずれか一項に記載のＣＡＩＸ標的化合物であって、
前記の治療される対象は、ヒトおよび／または６５才未満の年齢である、
ＣＡＩＸ標的化合物。
【請求項２０】
癌疾患を診断、予後判断および／または分類する方法であって、
（ａ）染色によって、癌サンプル中のＣＡＩＸの発現を定量化するステップ、および
（ｂ）染色された癌細胞の程度および染色強度に従って、前記癌疾患を分類するステップ、
を含む、
方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の癌疾患を診断する方法であって、
ＣＡＩＸスコアが決定される、
方法。
【請求項２２】
請求項２０〜２１に記載の癌疾患を診断する方法であって、
前記癌は、腎明細胞癌であり、特に、ＣＡＩＸスコアが≧２．０である、
方法。
【請求項２３】
癌を治療する方法であって、
前記方法は：
（ａ）染色によって、治療される対象から得られる癌細胞中のＣＡＩＸの発現を定義するステップ、
（ｂ）前記癌細胞の程度および染色強度に従って、ＣＡＩＸスコアを決定するステップ、
（ｃ）ステップ（ｂ）において、事前に定義されたＣＡＩＸ閾値を超えた場合に、ＣＡＩＸ標的化合物を投与するステップ、
を含む、
方法。
【請求項２４】
請求項２３の方法であって、
前記の治療される対象はヒトであり、および／または、６５才未満の年齢である、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の治療での使用のための炭酸脱水酵素ＩＸ標的化合物に関し、その使用は、ＣＡＩＸ発現の定量化およびＣＡＩＸ発現に基づくＣＡＩＸスコアの決定を含む。本発明は、さらに、癌疾患を診断、予後判断および／または分類するための方法に関し、ＣＡＩＸ発現の定量化、およびＣＡＩＸスコアの決定を含む。
【背景技術】
【０００２】
膜貫通タンパク質炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）は、炭酸脱水酵素の大きなファミリーのメンバーであり、二酸化炭素の炭酸への可逆的水和を触媒する能力を共有し、ｐＨの低下をもたらす（Ｏｐａｖｓｋｙ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９６，３３：４８０  ４８７）。ＣＡＩＸ遺伝子発現の上方制御は、低酸素誘導因子−１α（ＨＩＦ−１α）による直接的な転写活性化を介して、低酸素状態に応答して生じ、特に腫瘍の低酸素領域内において、低酸素細胞の酸性環境の検知および維持に関与すると考えられている（Ｗｙｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０００，６０：７０７５−７０８；Ｓｖａｓｔｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００４  ５７７：４３９−４４５）。
【０００３】
Ｇ２５０抗原は、数多くの癌腫、例えば腎細胞癌と深く関連する。Ｇ２５０抗原は、最初は、腎臓癌に関係のある抗原として説明された（ＷＯ８８／０８８５４）。後に、腫瘍関連抗原ＭＮ（炭酸脱水酵素活性を有する細胞表面抗原であって、ＣＡＩＸとも呼ばれる）と同一であることが分かった。
【０００４】
通常のＣＡＩＸ発現は、胃、腸および胆管の粘膜に見られ、その生理学的役割はｐＨ制御である。その正常な発現パターンの他に、ＣＡＩＸ発現は、様々な腫瘍（頸部、食道、結腸直腸、肺、膵臓、胆管および腎細胞明細胞癌（ＲＣＣ）を含む）に見られる。
【０００５】
ＣＡＩＸに対する抗体は、したがって、癌治療に用いることができる。抗−Ｇ２５０抗体は、例えば、ＥＰ  ６３７  ３３６、ＷＯ  ９３／１８１５２、ＷＯ  ９５／３４６５０、ＷＯ  ００／２４９１３、ＷＯ  ０２／０６３０１０、ＷＯ  ０４／０２５３０２、ＷＯ  ０５／０３７０８３、ＷＯ  ２０１１／１３９３７５およびそれらの外国対応特許に記載されている。さらに、ＷＯ  ０２／０６２９７２には、モノクローナル抗体Ｇ２５０を産生するハイブリドーマ細胞株ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２５２６が記載されている。モノクローナル抗体Ｇ２５０は、好ましくは、腎細胞癌細胞（ＲＣＣ）の膜上に発現されるが正常な近位尿細管上皮には発現されない抗原を認識する。Ｇ２５０抗体は、抗原Ｇ２５０（ＭＮ抗原とも呼ばれる（例えばＷＯ９３／１８１５２を参照））またはＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）に結合する。
【０００６】
ＣＡＩＸ発現を判定する方法は当業者に公知であり、限定されないが、組織断面の免疫組織化学染色を含み、例えば、Ｂｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３，９：８０２−８１１、Ａｔｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５，１１：３７１４−３７２１、ＵＳ  ５，９８９，８３８、ＵＳ  ６，００４，５３５、ＵＳ  ６，０９３，５４８、ＵＳ  ７，５２４，６３４、ＵＳ  ７，８５１，４５５に記載される。そのような方法は、ヒト腎明細胞癌の予後判断で用いられ得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、ＣＡＩＸに関連する癌疾患をさらに特徴付けて、ＣＡＩＸ標的化合物を用いた治療がどのくらい効率的であり、または成功するかを予測することを可能にする方法を提供することであった。本発明によれば、この目的は、新規のＣＡＩＸスコアの定義、および、癌の治療、診断、予後判断および分類におけるその使用によって、達成される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明の第１の態様は、癌の治療での使用のための炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）標的化合物に関し、その使用は、治療される対象から得られる少なくとも１つの腫瘍サンプルにおけるＣＡＩＸ発現を定量化し、腫瘍サンプルにおけるＣＡＩＸ発現に基づいてＣＡＩＸスコアを決定することを含み、対象は、事前に定義されたＣＡＩＸスコアに到達する場合に治療される。したがって、治療される癌は、事前に定義されたＣＡＩＸスコアにより特徴付けられる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＩＴＴ（ｉｎｔｅｎｄｅｄ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ）およびＰＰ個体群（ｐｅｒ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ個体群）に関する、増大するＣＡＩＸ−スコア値のＨＲ（ハザード比）およびｐ値
【図２】２．６のＣＡＩＸカットオフに関する、治療群（ｃＧ２５０対プラセボ）によるＤＦＳ
【図３】ＣＡＩＸスコア≧２．６を有するＰＰ個体群に関する、ＤＦＳ曲線
【図４】高いＣＡＩＸスコア（≧２．０）および年齢６５才未満（ＩＴＴ個体群）
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の観点から、ＣＡＩＸスコアは、好ましくは、腫瘍細胞の程度および染色強度の組み合わせにより表されるＣＡＩＸ発現に基づいて、それぞれ決定または計算される。換言すれば、ＣＡＩＸ抗原を発現している腫瘍細胞の量／パーセンテージ、および、染色された腫瘍細胞の染色強度は、両方とも、本明細書で用いられるＣＡＩＸスコアに考慮される。ＣＡＩＸ発現は、治療されるべき癌（好ましくは、癌はＲＣＣまたはｃｃＲＣＣである）を患っている患者の腫瘍組織内の抗原密度の尺度（好ましくは、ＣＡＩＸポリペプチド密度の尺度）と見なすことができる。ＣＡＩＸスコアは、サンプル中のＣＡＩＸなどのマーカーの免疫活性の量を表す値である。スコアは、染色強度と、特定の強度範囲で染色される細胞のパーセンテージの、両方を考慮する。スコアは、サンプル（例えばｃｃＲＣＣ癌の組織断面）中の、所定の染色強度（０〜１００）で染色される細胞のパーセンテージおよび染色強度（０〜３）の結果を合わせて決定される。好ましくは、スコアは、特定の区画（例えば細胞質、膜、核）に関して表すことができる。また、スコアは、染色強度に関して０〜４の数字目盛りを利用して決定することもできる。スコアは、０〜３の染色強度でのスコアの場合の０〜３００ではなく、０〜４００の範囲である（ＭｃＣｌｅｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：３５４５−３５５０，１９９０）。
【００１１】
特に、ＣＡＩＸスコアは、式：ＣＡＩＸスコア＝（０×染色強度がない生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）＋（１×かすかに見える染色強度を有する生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）＋（２×中程度の染色強度を有する生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）＋（３×強い染色強度を有する生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ）により決定および／または計算される。例えば、１の染色強度が１０％であり、２の染色強度が２０％であり、３の染色が２０％であり、染色されない細胞が２０％であるサンプルは、（１×１０）＋（２×２０）＋（３×２０）＋（０×５０）＝１１０のスコアを有し、または計算すると、（１×１０／１００）＋（２×２０／１００）＋（３×２０／１００）＋（０×５０／１００）＝１．１である。
【００１２】
ＣＡＩＸスコアは、０（染色なし）と３００（３＋の強度スケーリングを有する生存可能腫瘍細胞が１００％）との間、または０と３との間、好ましくは０．０と３．０との間の、任意の値をとることができる。
【００１３】
本発明に照らして、「腫瘍細胞の程度」またはＣＡＩＸ抗原を発現している腫瘍細胞の量は、生存可能腫瘍細胞のパーセンテージ率の示度およびそれらの染色強度による、本発明に係るＣＡＩＸスコアの式に考慮される。生存可能腫瘍細胞は、当業者に公知の方法により計測または決定してよい。例えば、細胞の数および／またはそれぞれのパーセンテージ率は、目視の計測または自動撮像システムのようなコンピュータ支援プログラムによって決定してよい。
【００１４】
ＣＡＩＸスコアの一部としての腫瘍細胞の程度は、４タイヤの（ｆｏｕｒ−ｔｉｒｅｄ）スケーリングファクター（０、１＋、２＋および３＋）に格付けされる。スケーリングファクター０は、コントロールサンプルと同程度のＣＡＩＸ染色に由来し、ＣＡＩＸ発現がないことを表す。スケーリングファクター１＋〜３＋は、ＣＡＩＸを発現している腫瘍細胞の平均サンプルに由来し、「かろうじて見える」から「強い」までの腫瘍細胞の染色を示す。通常、当分野の平均的な技術を持つ組織学者または病理学者は、目による従来の分析によって分類することができる（Ｃｒｅｇｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，２００６，１３０：１０２６−１０３０）。染色強度の絶対値は、例えば、用いた染色試薬、染色される腫瘍組織などに依存し得る。しかしながら、この問題は、とりわけ、グレード＋１〜＋３を含む上記のスケーリング系を用いることにより克服することができる。
【００１５】
腫瘍細胞での染色強度は、かろうじて見える染色から強い染色まで、ほぼ比例的に増大する。染色強度のこの線形の増大に沿って、ＣＡＩＸを発現している腫瘍細胞は、１＋から３＋までのスケーリングを有する３つのグループ（それぞれのグループに関して、染色強度のそれぞれの増大は同一である）に分けられる。換言すれば、生存可能腫瘍細胞は、かすかに、または、かろうじて見える染色強度（スケーリング１＋）、中程度の染色強度（２＋）、および、強い染色強度（３＋）を有する細胞に分けられる。
【００１６】
参照系を定義する腫瘍細胞の平均サンプルにおいて、特定の染色剤および特定の腫瘍細胞に関するスコア系が確立された時点で、それを、腫瘍細胞のさらなるサンプルに用いることができ、すなわち、もちろん、それぞれのＣＡＩＸスコア系は、腫瘍細胞の各サンプルに関して確立される必要はない。
【００１７】
本発明に係る「染色強度」は、４タイヤのスケーリングファクターそれぞれにおける、腫瘍細胞のパーセンテージを意味する。パーセンテージは、０％と１００％との間の任意であることができる。染色強度は、それぞれの組織サンプルに関して、かすかにまたはかろうじて見える膜染色を示す腫瘍細胞のパーセンテージとしてスケーリング＋１、中程度の膜染色を示す腫瘍細胞のパーセンテージとしてスケーリング＋２、中程度の膜染色を示す腫瘍細胞のパーセンテージとしてスケーリング＋３と決定される（表１）。
【００１８】
【表１】
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【００１９】
それぞれのスケーリングのグループにおける、ＣＡＩＸを発現している腫瘍細胞の分類は、サンプルの染色強度を、ＣＡＩＸスコアリング系のベースとした参照腫瘍サンプルと比較することにより、簡単に行なうことができる。したがって、腫瘍細胞のサンプルが、３つのスケーリングのグループをどれも含まない可能性がある。
【００２０】
当分野における平均的な技術を有する者は、スコア系を定義するため、または細胞の異なるサンプルを比較するため、または染色強度を比較する目的で細胞をスコア系に分類するためのいずれかの、染色強度を決定する方法を知っている（Ｃｒｅｇｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１０２６，Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，ｖｏｌ．１３０，Ｊｕｌｙ  ２００６を参照）。染色強度の決定またはスコア系への分類は、手作業で、またはコンピュータ支援プログラムまたは任意の他の適切な方法を介して、行なってよい。好ましい実施態様では、定量的および客観的な結果を提供する装置と組み合わせて標準化コントロール腫瘍分析を用いて、スコア系が適用される。
【００２１】
中程度の染色強度が４０％で強い染色強度が６０％である、１００％のＣＡＩＸ抗原発現程度について、ＣＡＩＸスコアを計算する例を以下に示す。異なる程度のＣＡＩＸ発現、異なる内訳の染色強度、およびそれぞれのスコアについて、さらなる例を表２に示す。
【００２２】
ＣＡＩＸスコアの計算：
中程度が４０％で強い染色強度が６０％である、１００％のＣＡＩＸ抗原発現程度
【数１】
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【００２３】
【表２】
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【００２４】
本発明によれば、ＣＡＩＸスコアは、決定されるべきＣＡＩＸ発現に基づく。本明細書において、用語「ＣＡＩＸ発現」および「ＣＡＩＸタンパク質発現」は、相互交換可能に用いることができる。好ましくは、用語「ＣＡＩＸ発現」は、発現されるＣＡＩＸタンパク質の量に関する。したがって、本発明のさらなる態様は、癌の治療での使用のためのＣＡＩＸ標的化合物に関し、その使用は、治療される対象から得られる少なくとも１つの腫瘍サンプルにおけるＣＡＩＸタンパク質を定量化し、腫瘍サンプルにおけるＣＡＩＸタンパク質に基づいてＣＡＩＸスコアを決定することを含み、対象は、事前に定義されたＣＡＩＸスコアに到達する場合に治療される。
【００２５】
本発明の別態様は、癌の治療での使用のための炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）標的化合物に関し、患者の癌が２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５または２．６以上のＣＡＩＸスコアを有することが分かった場合に、治療的に有効量のＣＡＩＸ拮抗薬を患者に投与することを含む。好ましい実施態様では、ＣＡＩＸスコアは、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０または２６０以上であり、最も好ましくは、ＣＡＩＸスコアは２６０以上である。
【００２６】
本発明のさらなる実施態様は、癌の治療での使用のための炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）標的化合物に関し、それにより、治療される対象の少なくとも１つの腫瘍組織サンプルは、少なくとも２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５または２．６のＣＡＩＸスコア、より好ましくは、少なくとも２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０または２６０のＣＡＩＸスコア、最も好ましくは、少なくとも２６０のＣＡＩＸスコアによって特徴付けられる。
【００２７】
その結果、もしあるのならば治療される対象から得られる１つまたは複数のサンプル中に存在する、発現されたＣＡＩＸが定量化される。好ましくは、治療される対象から得られるサンプルは、治療される癌の組織サンプルである。より好ましくは、治療される癌の組織サンプルは、腎細胞癌（ＲＣＣ）由来の、最も好ましくは、腎明細胞癌（ｃｃＲＣＣ）由来の、組織サンプルである。
【００２８】
好ましくは、発現されたＣＡＩＸは、腫瘍細胞染色、好ましくは免疫組織化学染色、より好ましくは免疫組織化学染色によって定量化され、ここで、ＣＡＩＸタンパク質またはＣＡＩＸポリペプチドは、モノクローナル抗体によって、より好ましくはＣＡＩＸのＮ−末端にエピトープ結合ドメインを有するモノクローナル抗体によって、さらにより好ましくはモノクローナル抗体Ｍ７５によって、最も好ましくはアクセッションナンバーＡＴＣＣ  ＨＢ  １１１２８を有するハイブリドーマＶＵ−Ｍ７５から分泌されるモノクローナル抗体によって、特異的に結合される。当業者は、免疫組織化学染色方法の適切な方法を知っている。免疫組織化学染色用のキットは市販されていて、限定されないが、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １００  Ａｃｏｒｎ  Ｐａｒｋ  Ｄｒｉｖｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ  ０２１４０，ＵＳＡにより提供されるＣＡＩＸ  ＩＨＣ  Ｋｉｔを含む。免疫組織化学染色の方法に関する別の例は、例えば、ＥＰ  １  ５０１  ９３９  Ｂ１に記載されている。組織断面の免疫組織化学染色は、Ｄａｋｏ染色システム（Ｄａｋｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）により記載される加熱処理を用いた抗原賦活化（ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｔｒｉｅｖａｌ）によるペルオキシダーゼ技術を利用して、抗−ＣＡＩＸ抗体を用いて行なうことができる。免疫分析および／または免疫組織化学染色で用いられる抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであってよい。好ましくは、モノクローナル抗体が用いられる。本発明に係る免疫組織化学染色の方法では、標識または無標識抗体を用いてよい。標識検出は、標識（蛍光手段、酵素、補酵素、放射性ヌクレオチド、化学発光手段、酵素基質、粒子、色素などを含んでよい）を含むことを意味する。それぞれの分析は、酵素免疫分析、蛍光免疫分析、放射免疫測定、ＥＬＩＳＡＳなどを含む。免疫組織化学染色組織で使用される検出抗体は、モノクローナル抗体Ｍ７５、ＭＮ９、ＭＮ、１２、ＭＮ７を含む。本発明により好ましく用いられる検出抗体は、Ｍ７５である。Ｍ７５抗体は、ＵＳ５，９８１，７１１にさらに記載され、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（上記参照）により提供されるＣＡＩＸ  ＩＨＣ  Ｋｉｔの一部である。特に好ましいのは、測定可能な、および／または、同等の結果（例えば色素強度、蛍光強度、電波信号、酵素活性など）を提供する染色方法である。
【００２９】
好ましい実施態様によれば、発現されるＣＡＩＸは、ＣＡＩＸポリペプチドまたはＣＡＩＸポリペプチドのフラグメントを含む。別の好ましい実施態様によれば、発現されるＣＡＩＸは、ＣＡＩＸポリペプチドまたはＣＡＩＸポリペプチドのフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。当業者は、細胞のサンプル中のｍＲＮＡ量を決定する方法、例えばノーザンブロット、マイクロアッセイ、リアルタイムＰＣＲなどを知っている。
【００３０】
好ましい実施態様によれば、対象から（好ましくは６５才未満の年齢の対象から）得られる腫瘍サンプル中のＣＡＩＸスコアが≧２．０である場合に、対象は治療されるべきである。さらにより好ましい実施態様では、スコアは≧２．１、より好ましくは≧２．２、より好ましくは≧２．３、さらにより好ましくは≧２．４、さらにより好ましくは≧２．５である。０．０〜３．０の全てのあり得るＣＡＩＸスコアに関する分析は、ＣＡＩＸスコアが大きくなればなるほど、治療効果がより大きいことを明らかにする。ＣＡＩＸスコアが≧２．６である患者は、ＣＡＩＸ標的化合物（特に抗−Ｇ２５０抗体）を用いて治療すると、統計的に有意な治療効果を示す。したがって、ＣＡＩＸスコア≧２．６は、最も好ましい実施態様と見なされる。好ましくは、対象から得られる腫瘍サンプルは、治療される対象の癌の少なくとも１つの組織サンプルである。より好ましくは、対象から得られる腫瘍サンプルは、治療される対象の腎細胞癌（ＲＣＣ）由来の、最も好ましくは腎明細胞癌（ｃｃＲＣＣ）由来の、少なくとも１つの組織サンプルである。
【００３１】
さらに好ましい実施態様によれば、ＣＡＩＸスコアまたは事前に定義されたＣＡＩＸスコアは、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５または２．６以上である。一部の実施態様では、ＣＡＩＸスコアは、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０または２６０以上である。好ましい実施態様では、ＣＡＩＸスコアは、２６０以上である。
【００３２】
ＣＡＩＸ標的化分子は任意の化合物であってよく、ＣＡＩＸを特異的に認識して、その活性をＣＡＩＸまたはそのフラグメントまたはスプライス変異への結合により仲介し；活性部位への入口で不可逆的に結合し、および／または、ＣＡＩＸの活性部位で亜鉛（ｚｉｎｋ）イオンと調和することによりＣＡＩＸを阻害する。好ましくは、ＣＡＩＸ標的化合物は、ＣＡＩＸポリペプチドと特異的に相互作用する。特異的に相互作用する（例えば認識する、または結合する）とは、ＣＡＩＸ標的化合物（例えば抗体）が、他のポリペプチドに対するよりも、ＣＡＩＸに対して、より大きな親和力を有することを意味する。一実施態様では、ＣＡＩＸ標的化合物は、ＣＡＩＸポリペプチドの活性を調節し、または、相互作用し（すなわち結合または認識し）、および／または、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体仲介性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する。したがって、一実施態様によれば、標的化合物は、ＣＡＩＸ阻害剤である。前記ＣＡＩＸ阻害剤は、タンパク質レベルまたは核酸レベルで作用し得る。例えばタンパク質レベルで作用するＣＡＩＸ阻害剤の例は、限定されないが、ペプチドおよび抗−ＣＡＩＸ抗体、ならびに、好ましくは分子量が５００ｇ／ｍｏｌよりも低いこれらの抗体または有機小分子の機能性フラグメントを含む。抗−ＣＡＩＸ抗体またはＣＡＩＸに対する抗体の例は、ＥＰ  ６３７  ３３６、ＷＯ  ９３／１８１５２、ＷＯ  ９５／３４６５０、ＷＯ  ００／２４９１３、ＷＯ  ０２／０６３０１０、ＷＯ  ０４／０２５３０２、ＷＯ  ０５／０３７０８３、ＷＯ  ２０１１／１３９３７５、Ｍｕｒｒｉ−Ｐｌｅｓｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２０１１，６５７：１７３−１８３に記載される。有機小分子の例は、限定されないが、スルホンアミド類、複素芳香族スルホンアミド類、スルファメート類、クマリン類およびチオクマリン類およびＢＡＹ−７９−４６２０を含む。核酸レベルで作用する阻害剤の例は、ｓｉＲＮＡ分子、リボザイムおよび／またはアンチセンス分子である。
【００３３】
特に好ましい実施態様によれば、ＣＡＩＸ標的化合物および／または阻害剤は、抗−ＣＡＩＸ抗体および／またはそのような抗体の機能性フラグメントである。好ましい実施態様によれば、抗−ＣＡＩＸ抗体のフラグメントは、抗−ＣＡＩＸ抗体の全長と本質的に同じＣＡＩＸ−結合および／または阻害活性を有し、および／または、抗−ＣＡＩＸ抗体のエピトープ−結合フラグメントである。
【００３４】
別の好ましい実施態様では、抗体または／およびその抗体フラグメントは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、それらの抗原結合フラグメント、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ、および、それらのキメラ化、ヒト化および完全ヒト変異からなる群から選択される。さらに好ましい実施態様によれば、この抗−ＣＡＩＸ抗体またはそのエピトープ−結合フラグメントは、アミノ酸配列ＬＳＴＡＦＡＲＶおよび／またはＡＬＧＰＧＲＥＹＲＡＬに結合する。
【００３５】
さらに特に好ましい実施態様によれば、ＣＡＩＸ標的化合物は、抗−Ｇ２５０抗体および／またはそのエピトープ−結合フラグメントである。抗−Ｇ２５０抗体は、例えば、ＥＰ−Ｂ−０  ６３７  ３３６に記載されている。抗−腫瘍抗体は、キメラまたはヒト化Ｇ２５０抗体および／またはそれらのフラグメントであることが特に好ましい。本発明での使用のための抗体は、制限されないが、ＰＣＴ／ＥＰ０２／０１２８２およびＰＣＴ／ＥＰ０２／０１２８３（参照により本明細書中に援用される）に記載の方法を含む、当技術分野で知られている任意の適切な方法により生産してよい。
【００３６】
特に好ましい抗体はｃＧ２５０であり、好ましくはギレンツシキマブ（ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）（ＩＮＮ）である。別の特に好ましい実施態様は、ハイブリドーマ細胞株ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２５２６により産生されるモノクローナル抗体Ｇ２５０である。抗体ｃＧ２５０は、ミューリンモノクローナル抗体ｍＧ２５０が元のＩｇＧ１κ軽鎖キメラ型である。
【００３７】
治療される癌は、ＣＡＩＸを発現していることにより特徴付けられる癌である。特に、その癌は、本明細書において定義されるＣＡＩＸスコアが≧２．０であることにより特徴付けられ（好ましくは６５才未満の年齢の対象由来）、そして、特に、上記に設定したＣＡＩＸスコアが≧２．６である。特に好ましい実施態様によれば、治療される対象は、６５才未満の年齢であり、ＣＡＩＸスコアが≧２．６である。
【００３８】
好ましくは、癌または患者の癌は、頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肺癌、頭頸部癌、胆道（ｂｉｌｌａｒｙ）癌、および腎細胞癌を含む群から選択される。
【００３９】
特に好ましい実施態様では、癌は腎明細胞癌（ＲＣＣ）である。
【００４０】
本発明の最も好ましい実施態様では、腎明細胞癌は、抗体Ｇ２５０、特にｃＧ２５０、好ましくはギレンツシキマブを投与することにより治療される。
【００４１】
治療される対象は、非転移型の癌または非転移性疾患と診断されていることが好ましく、より好ましくは非転移型の癌または非転移性疾患を有し、または／および、再発のリスクが高いと診断されるべきである。
【００４２】
さらなる実施態様によれば、ＣＡＩＸ標的化合物（特に抗−Ｇ２５０抗体）は、治療される対象が、原発性腫瘍切除術、好ましくは腫瘍腎摘出術、より好ましくは腫瘍腎摘出術およびリンパ節切除術を受けた後に、用いられるべきである。好ましくは、この原発性腫瘍は、特に、頸部癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、肝臓癌、膀胱癌、肺癌、胆道癌、頭頸部癌および腎明細胞癌（ｃｃＲＣＣ）の群から選択される、Ｇ２５０抗原を発現する腫瘍である。
【００４３】
したがって、さらに好ましい実施態様では、ＣＡＩＸ標的化合物（特に抗−Ｇ２５０抗体）は、アジュバント療法として用いられる。本発明の観点から、アジュバント療法は、見ることのできない任意の残っている癌細胞を標的化する手段を表す。アジュバント療法は、通常、任意の癌再発を守るために、手術または放射線のような一次療法の後に用いられる。アジュバント療法の例は、手術後（検出可能な疾患は全て取り除かれたが、潜在性疾患に起因して再発する統計的リスクが残っている）に通常は提供される、さらなる治療である。アジュバント療法のタイプは、化学療法、ホルモン療法、放射線療法および／または免疫療法を含む。例えば、放射線療法または全身療法は、一般に、乳癌のための手術後にアジュバント療法として提供される。全身療法は、化学療法、免疫療法または生物学的応答修正因子またはホルモン療法からなり得る。好ましくは、本発明に係るＣＡＩＸ標的化合物が用いられる場合、アジュバント療法は、任意のこれらの型の公知のアジュバント治療と組み合わせてよい。
【００４４】
本発明のさらなる態様は、ＣＡＩＸを発現している癌の治療での使用のためのＣＡＩＸ標的化合物に関し、ここで、癌細胞は、ＣＡＩＸスコアが≧２．０であること、特に≧２．６であることにより特徴付けられる。もちろん、上記に規定した任意のＣＡＩＸ標的化合物を用いることができる。好ましくは、ＣＡＩＸ標的化合物は、抗−Ｇ２５０抗体、特にｃＧ２５０抗体、および／または、それらのエピトープ結合フラグメントである。
【００４５】
さらなる実施態様によれば、ＣＡＩＸ標的化合物、特に抗体ｃＧ２５０は、ＣＡＩＸスコアが≧２．０、特に≧２．６である腎明細胞癌の治療での使用のためである。別の実施態様によれば、ＣＡＩＸ標的化合物、特に抗体ｃＧ２５０は、ＣＡＩＸスコアが≧２．０であって治療される対象の年齢が６５才未満である、および／または、ＣＡＩＸスコアが≧２．６である、腎明細胞癌の治療での使用のためである。
【００４６】
本発明のさらなる態様は、癌疾患を診断、予後判断および／または分類するための方法に関し、
（ａ）染色によって、癌サンプル中のＣＡＩＸの発現を定量化するステップ、および
（ｂ）染色された癌細胞の程度および染色強度に従って、癌疾患を分類するステップ、を含む。
【００４７】
診断方法は、上述のＣＡＩＸスコアの決定をさらに含んでよい。
【００４８】
診断および／または分類される癌は、好ましくは上述の癌であり、特に、腎明細胞癌である。好ましくは、この癌は、ＣＡＩＸスコアが≧２．０であり、さらにより好ましくは≧２．６である。
【００４９】
予後判断の実施態様は、ＣＡＩＸ標的化合物を用いた治療（特に、抗−Ｇ２５０抗体を用いた治療）に、治療される患者が反応するかしないか予測するために、ＣＡＩＸスコアの使用を含む。特に、ｃＧ２５０抗体を用いた治療（好ましくはギレンツシキマブを用いる）に患者が反応するかどうか予測するために用いられる。換言すれば、どの患者が、ＣＡＩＸ標的化合物を用いた治療の利益を受ける可能性があるか予知することができる。例えば、腎明細胞癌を有する患者（対応する腫瘍細胞サンプルはＣＡＩＸスコア≧２．６を示す）は、ｃＧ２５０抗体、好ましくはギレンツシキマブを用いた治療の利益を最も受けやすい。
【００５０】
Ｔ−ステージが高く（Ｔ３／Ｔ４）、グレーディングが低く（Ｇ１／Ｇ２）、リンパ節転移がなく（Ｎ０／ＮＸ）、そして転移性疾患がない（Ｍ０）患者は、ＣＡＩＸスコアが高い患者と比較して、ＣＡＩＸスコアが低くて予後が悪い。
【００５１】
本発明のさらなる態様は、癌を治療する方法に関し、前記方法は、
（ａ）染色によって、治療される対象から得られる癌細胞中のＣＡＩＸの発現を定義するステップ、
（ｂ）癌細胞の程度および染色強度に従って、ＣＡＩＸスコアを決定するステップ、および
（ｃ）ステップ（ｂ）において、事前に定義されたＣＡＩＸ閾値を超えた場合に、ＣＡＩＸ標的化合物を投与するステップ、を含む。
【００５２】
好ましい実施態様によれば、本発明のＣＡＩＸ標的化合物、特に抗−Ｇ２５０抗体は、単剤療法プロトコルとして投与され、好ましくは、単剤療法として投与される。
【００５３】
ＣＡＩＸ標的化合物、特に抗−Ｇ２５０抗体、好ましくはｃＧ２５０抗体、より好ましくは、ギレンツシキマブは、併用療法プロトコルで、または併用療法として投与してもよく、例えば、上記に既に概説されるとおり、アジュバント抗−Ｇ２５０抗体治療は、任意の他のタイプのアジュバント療法と組み合わせてよい。好ましくは、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を高めるため、および／または、患者の免疫系（例えばＮＫ細胞）を活性化するために、サイトカインを抗体とともに同時投与してよい。このサイトカインは、好ましくは、インターロイキン、例えばＩＬ−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１２、−１３、−１４、および−１５、インターフェロン、例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、およびＩＦＮ−γ、ＴＦＮ−α、ＴＮＦ−β、神経成長因子、ＣＤ４０、Ｆａｓ、ＣＤ２７およびＣＤ３０のリガンド、マクロファージ阻害タンパク質、Ｒａｎｔｅｓ、薬学的に許容できる類似体および誘導体の活性フラグメント、およびそれらの混合物、からなる群から選択される。より好ましくは、サイトカインは、ＩＬ−２およびＩＦＮ−αから選択される。もちろん、さらなる細胞毒性手段、例えば、ドキソルビシン、シス−プラチンまたはカルボプラチンおよび他の腫瘍性手段との組み合わせが可能である。
【００５４】
当業者は、用いられるＣＡＩＸ標的化合物（特にＧ２５０抗原特異抗体）の用量を、年齢、体重、疾患の状態および重症度などに基づいて、決定することができる。例えば、患者あたり１週間サイクルで、２０ｍｇまたは５０ｍｇのいずれかのｃＧ２５０抗体の投与レジメンは、０．５μｇ／ｍｌ好ましくは１μｇ／ｍｌを超える濃度を送達し、したがって、効能に十分であるはずである。したがって、好ましい実施態様では、５〜２５０ｍｇ／週、より好ましくは１０〜１００ｍｇ／週、最も好ましくは２０ｍｇ／週〜５０ｍｇ／週の、Ｇ２５０特異抗体の毎週の投与量が投与される。
【００５５】
好ましい実施態様によれば、Ｇ２５０抗原特異抗体および／またはその抗体フラグメントは、それを必要とする対象に、少なくとも２つの治療ステージ（異なる、好ましくは減っていく量の抗体が投与される）において、投与される。
【００５６】
本発明の方法は、Ｇ２５０抗原特異抗体または／およびその抗体フラグメントを、それを必要とする対象に、２つのステージで投与するステップを含むことがより好ましく、ここで、
（ａ）１０〜２５０ｍｇ／週、好ましくは２０〜１００ｍｇ／週、より好ましくは３０〜１００ｍｇ／週、さらにより好ましくは３０〜５５ｍｇ／週、最も好ましくは５０ｍｇ／週の投与量のＧ２５０抗原特異抗体が、第一の治療ステージにおいて投与され、および
（ｂ）５〜１００ｍｇ、好ましくは１０〜５０ｍｇ、より好ましくは１５〜２５ｍｇ、最も好ましくは２０ｍｇ／週の投与量のＧ２５０抗原特異抗体が、第二の治療ステージにおいて投与される。
【００５７】
第一の治療ステージは、５０ｍｇ／週のＧ２５０特異抗体の投与を含み、第二の治療ステージは、２０ｍｇ／週の投与を含むことが、さらにより好ましい。
【００５８】
抗腫瘍抗体は、好ましくは注入または静脈内注射によって、好ましくは静脈内に投与される。注入による抗体の投与は、好ましくは最高で約３０分で、より好ましくは約１５分で行なわれる。もちろん、ＣＡＩＸ標的化合物は、腹腔内または筋肉内に適用することもできる。
【００５９】
２０ｍｇまたは５０ｍｇのいずれかのｃＧ２５０抗体の、最高で２０週間の毎週の注入での投与スキームは、耐容性良好であり重大なＨＡＣＡ進行をもたらさないと考えられる。
【００６０】
したがって、第一の治療ステージは、最高で１２週、好ましくは最高で６週、さらにより好ましくは最高で１週を含むことが好ましく、第二の治療ステージは、最高で１５６週、好ましくは最高で１０４週、より好ましくは最高で５２週、さらにより好ましくは最高で１２〜２４週を含むことが好ましい。
【００６１】
最も好ましい実施態様では、腎明細胞癌の治療のために、第一の治療ステージは、最高で１週の、ｃＧ２５０抗体の５０ｍｇ／週の単一負荷投与量の投与を含み、第二の治療ステージは、最高で２４週の、ｃＧ２５０抗体の２０ｍｇ／週の投与を含む。
【００６２】
さらに好ましい実施態様では、腎明細胞癌の治療のために、第一の治療ステージは、最高で１週の、静脈内へｃＧ２５０抗体の５０ｍｇ／週の単一負荷投与量の投与を含み、第二の治療ステージは、最高で２４週の、ｃＧ２５０抗体の２０ｍｇ／週の投与を含み、好ましくは、腎明細胞癌の治療のために、第二の治療ステージは、ｃＧ２５０抗体の２０ｍｇ／週の少なくとも８連続の静脈内投与を含む。
【００６３】
ＣＡＩＸ標的化合物、特にｃＧ２５０抗体は、もちろん、医薬組成物で投与してよい。この薬学的に許容できる組成物は、許容できる担体、希釈剤および／またはアジュバントを含んでよい。用語「担体」は、本明細書で用いられる場合、担体、賦形剤および／または安定剤（用いられる用量および濃度で、それに曝される細胞または哺乳類に非毒性である）を含む。生理的に許容できる担体は、ｐＨ緩衝水溶液またはリポソームであることが多い。生理的に許容できる担体の例は、バッファー、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、および、グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物、ゲル化剤、例えば、ＥＤＴＡ、糖、アルコール類、例えば、マンニトールまたはソルビトール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／または、ＴＷＥＥＮ、ポリエチレンまたはポリエチレングリコールなどの非イオン性界面活性剤、を含む。
【００６４】
特に好ましい実施態様では、ＣＡＩＸ標的化合物は、通常の生理食塩水（水中０．９％滅菌塩化ナトリウム）で投与される。
【００６５】
特に好ましい実施態様によれば、抗体ｃＧ２５０は、通常の生理食塩水で、静脈内注入（例えば１００ｍｌ溶液）によって、１５分にわたって投与される。
【００６６】
用語「炭酸脱水酵素ＩＸ」および「ＣＡＩＸ」、「ＣＡ９」、「ＭＮ」および「Ｇ２５０」は、本明細書において同義であると見なされる。
【００６７】
「ｃＧ２５０」およびギレンツシキマブは、相互交換可能に用いられる。
【００６８】
「抗原」は、抗体などによって結合され得るリガンドを指す。抗体と接触する抗原の部分を「エピトープ」と呼ぶ。
【００６９】
別段の言及がなければ、本明細書において用いられる「染色」は、腫瘍細胞を可視化する任意の方法を指す。好ましい「染色」方法は、上述の免疫組織化学染色である。
【実施例】
【００７０】
以下の結果は、腎明細胞癌（ｃｃＲＣＣ）を有する、および、再発のリスクが高い、患者における、プラセボに対するアジュバントｃＧ２５０治療を評価するための、無作為化二重盲検フェーズＩＩＩ試験に基づく。
【００７１】
目的：
本研究における目的は、プラセボと比較した、ギレンツシキマブ療法における無病生存（ＤＦＳ）を評価すること、および、プラセボと比較した、ギレンツシキマブ療法における全生存（ＯＳ）を評価することであった。
【００７２】
患者：
８６４人の患者（ＩＴＴ）は、プラセボをコントロールにした、前向きの二群の無作為化二重盲検試験に参加した。無病生存の評価は、独立の放射線審査委員会により評価した。８５５人の患者は、少なくとも１つの試験処置（ｃＧ２５０またはプラセボ）を受け、独立のデータモニタリング委員会によって安全性が分析された。
【００７３】
患者に関する包含基準は以下であった：年齢≧１８才、文書化された明細胞組織学を有する原発性腎細胞癌の（部分的または全体的）腎摘出術の前、肉眼的および顕微鏡的残存病変の形跡がない。患者は、以下の高いリスク群（ＲＧ）（ＴＮＭ分類、第６版、ＵＩＣＣ、２００２を参照）の１つを有する必要がある：
【００７４】
ＲＧＩ：Ｔ３ａＮ０／ＸＭ０またはＴ３ｂＮ０／ＸＭ０またはＴ３ｃＮ０／ＸＭ０またはＴ４Ｎ０／ＸＭ０
ＲＧＩＩ：任意のＴステージおよびＮ＋疾患およびＭ０
ＲＧＩＩＩ：Ｔ１ｂＮ０／ＸＭ０またはＴ２Ｎ０／ＸＭ０、それぞれグレーディングＧ３を有する（Ｆｕｈｒｍａｎまたは少なくとも３グレードを有する任意の他の核グレーディングシステム（ｎｕｃｌｅａｒ  ｇｒａｄｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ））、
腎摘出術の日と無作為化との間は１２週を超えず、０〜１のＥＣＯＧ。
【００７５】
試験薬：
ギレンツシキマブ（ｃＧ２５０；ミューリンモノクローナル抗体ｍＧ２５０が元のＩｇＧ１κ軽鎖キメラ型）を５０ｍｇの単一負荷投与量で適用し（１週）、その後、２０ｍｇのギレンツシキマブ（２〜２４週）を毎週注入した。１００ｍｌの通常の生理食塩水（水中０．９％滅菌塩化ナトリウム）に薬剤を希釈して、１５分にわたって静脈内注入により適用した。プラセボ群は、有効成分を含まないポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）を含むリン酸緩衝生理食塩水を受けた。治療の持続時間は２４週であった。
【００７６】
免疫組織化学：
パラフィン包埋された腎摘出組織標本を、３〜５μｍの断面に切断して、個別の接着スライド上に集めた。脱パラフィンおよび脱水を、Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．が提供するＥＺ  Ｐｒｅｐ混合物を用いて行なった。組織材料をブロッキングし、希釈抗体（ＣＡＩＸ  Ｍ７５，１：１５０）の溶液を用いて染色した。ビオチン化ＩｇＧ抗−マウスＩｇＧ抗体（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）の後に、コンジュゲートされたストレプトアビジンホースラディッシュ  ペルオキシダーゼ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、抗体を検出した。ジアミノベンジジンおよび過酸化水素（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を用いてシグナルを検出した。ポジティブおよびネガティブの組織コントロールを参照として含んだ。
【００７７】
統計的方法：
効能評価は、無作為化された８６４人の患者全てからなるＩｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）個体群について一次解析した。さらに、７６６人の患者からなるＰｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ（ＰＰ）個体群について解析を繰り返した。試験薬の少なくとも８連続の投与（１〜８週）を受けて、非盲検の前に逸脱基準において定義される主なプロトコル逸脱がない患者は、Ｐｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ（ＰＰ）個体群として評価された。
【００７８】
サンプルサイズの計算は、プログラムＰａｓｓ  ２００２を用いて行なった。ＳＡＳ（登録商標）ソフトウェアのバージョン８．１またはそれより上を用いて統計的概要を産出した。効能解析のために、不完全／部分的な日付（ｄａｔｅｓ）が補完された（ｉｍｐｕｔｅｄ）；安全な日付がないもの（ｍｉｓｓｉｎｇ  ｓａｆｅｔｙ  ｄａｔｅｓ）は補完されなかった。医薬品規制用語集（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）を用いて、有害事象および病歴をコード化した；世界保健機関医薬品辞書（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ）を用いて薬剤をコード化した。一次効能解析は、Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）個体群に基づき、Ｐｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ個体群を用いて繰り返した。
【００７９】
観察数、算術平均、標準偏差、最小値、中央値および最大値を用いて、連続変数を表した。観察数およびパーセンテージを用いてカテゴリー変数を示した。階層テストをＤＦＳおよびＯＳに適用して、全体的な有意水準を両方に関して≦５％に維持した。ＤＦＳおよびＯＳの両方を、対数順位検定およびカプラン・マイヤー法を用いて、ギレンツシキマブ群とプラセボ群との間で比較した。全体の有意水準を５％で、群逐次法に関するＯ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇ法を用いて、ＯＳに関する有意水準を調整した。正確な方法（Ｐｅａｒｓｏｎ−Ｃｌｏｐｐｅｒ）を用いて、割合に関する９５％信頼区間を計算した。
【００８０】
Ｃｏｘ比例ハザードモデルを用いて、ＤＦＳおよびＯＳの両方についての予後因子の潜在的効果を試験した。比例ハザードモデルを用いて、ハザード比（ギレンツシキマブ治療対プラセボ）を、その関連する９５％信頼区間およびｐ値と合わせて評価した。
【００８１】
結果の概要：
データ解析のためのカットオフの時点で、局所的試験評価により、３６０人の患者（４１．７％）がＤＦＳ事象を経験し、５０４人（５８．３％）は、まだ疾患が存在しなかった。ＤＦＳ患者の０．６％は、局所的に、ベースラインにおいて転移性疾患を有すると評価された。１８１人の患者は全て死亡した。ＩＲＲＣ中央リーディング評価（ｃｅｎｔｒａｌ  ｒｅａｄｉｎｇ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）の後、ＤＦＳ事象は３８９人の患者（４５％）に割り当てる（ｂｅ  ａｓｓｉｇｎｅｄ  ｆｏｒ）ことができ、一方で、打ち切り日（ｃｅｎｓｏｒ  ｄａｔｅ）は残りの４７５人の（５５％）患者に割り当てることができた。ＩＴＴ個体群で生じたＤＦＳ事象の数（ベースラインにおいて転移性疾患を有する患者を除く２９３人）は、ギレンツシキマブ患者の１１．５％およびプラセボ患者の１０．７％で見られる、ベースライン（ＤＦＳ＝０）における転移の割合のように、治療群間で同等であった（ｃＧ２５０：１４２，３２．８％；プラセボ：１５１，３５．０％）。
【００８２】
ＩＴＴ個体群に関するＩＲＲＣ評価に基づくＤＦＳの一次解析は、治療群間の全体的な中央値ＤＦＳにおいて統計的な有意差を示さなかった（ハザード比［ＨＲ］＝０．９９９，ｐ＝０．７３７）。ギレンツシキマブの中央値ＤＦＳは７１．４月であり、プラセボ群の中央値ＤＦＳは到達されなかった（ｎｏｔ  ｒｅａｃｈｅｄ）。
【００８３】
高いリスク群（ＲＧ）の分類にかかわらず、治療群間のＤＦＳに統計的な有意差はなかった（ＲＧ  Ｉ：ＨＲ＝０．９３４，ｐ＝０．５９６；ＲＧ  ＩＩ：ＨＲ＝１．７３，ｐ＝０．０８４；ＲＧ  ＩＩＩ：ＨＲ＝０．９８４，ｐ＝０．６２７）。
【００８４】
さらに、Ｂｕｉら（Ｂｕｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３，９：８０２−８１１）によるＣＡＩＸ抗原発現のみに基づく分類を用いて行なった予備解析は、予後判断に関しても治療効果に関しても、統計的に有意な結果を生じなかった。しかしながら、驚くべきことに、抗原密度の尺度と見なすことができる、染色の強度とＣＡＩＸ抗原の発現との組み合わせ（ＣＡＩＸスコア）は、治療効果および予後判断に関して有意な結果を示した。
【００８５】
生存ツリー解析から得られたＣＡＩＸスコアカットオフに関する多変量解析（ＩＴＴに関して１．９１、および、ＩＴＴプラセボに関して１．５２）は、ＤＦＳ  ＩＴＴ、ＯＳ  ＩＴＴおよびＯＳプラセボにおいて、ＣＡＩＸスコアは予後になるが、予後判断に関する独立したファクターではないことを示す。結果は、１．５２のＣＡＩＸスコアカットオフ（ＩＴＴプラセボ）が予後判断に有用であり得ることを示唆する。
【００８６】
ＣＡＩＸスコアが低い患者については、異なる治療群に関するカプラン・マイヤー曲線は、用いられるカットオフに関係なく重なる。これは、ＣＡＩＸスコアが低い患者は治療の利益を受けないことを明らかに示す。
【００８７】
≧１．９１の高いＣＡＩＸスコアは、治療効果に好ましい傾向を示した（ＨＲ＝０．８７９，ｐ値０．２４８）。０．０〜３．０の全てのＣＡＩＸスコアに関するサブグループ分析は、ＣＡＩＸスコアが増えれば増えるほど、治療効果がより大きくなることを示した（図１）。
【００８８】
≧２．６のＣＡＩＸスコアは、プラセボ群での５１．２月から、ｃＧ２５０患者での７３．６月まで増加する中央値ＤＦＳで、統計的に有意な治療効果をもたらす（患者個体群全体の１７％、ＨＲ＝０．５６８；ｐ＝０．０２２；図２）。≧２．６の高いＣＡＩＸスコアを有するＩＴＴ個体群中の１５１人の患者は、ｃＧ２５０とプラセボ群との間で均一に分布した。興味深いことに、プラセボ群の患者は、治療群にかかわらず、ＣＡＩＸスコアが＜２．６である患者と同様に５年のＤＦＳ期間（５１．７月に対して４８．４月）を示した。ベースラインで転移を有する患者の個体数、または陽性リンパ節を有する患者の個体数を調整しても、結果は変わらなかった。ＣＡＩＸスコアが≧２．６であるＰＰ個体群（Ｎ＝１３９）を考慮すると、ハザード比および有意水準の両方とも改善した（ＨＲ＝０．５０８；ｐ＝０．００７；図２）。
【００８９】
概して、ＩＴＴ個体群で見られる結果は、ＰＰ個体群での結果によって反映された（図３）。
【００９０】
さらなるサブグループ分析は、プラセボ群での５５．２月から、ＣＡＩＸスコアが≧２．０で６５才未満のｃＧ２５０患者での７０．９月まで増加する中央値ＤＦＳで、統計的に有意な治療効果を示した（ＨＲ＝０．６０；９５％  ＣＩ  ０．４０〜０．８９；ｐ値＝０．０１；図４）。
【００９１】
さらに、分析は、Ｔ−ステージが高く（Ｔ３／Ｔ４）、グレーディングが低く（Ｇ１／Ｇ２）、リンパ節転移がなく（Ｎ０／ＮＸ）、そして転移性疾患がない、明細胞ＲＣＣ患者は、ＣＡＩＸスコアが高い患者と比較して、ＣＡＩＸスコアが低く、有意により悪い予後を有することを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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