(57)【要約】化合物（Ｉ-１）（（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＳ）−６−イソブチル−９−メトキシ−３−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン）：若しくは、薬学的に許容可能なその塩；及び化合物2016539086.tif 000067（１２）（（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＳ）−６−イソブチル−９−メトキシ−３，１０−ジメチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン）：若しくは、薬学的に許容可能なその塩である、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する化合物が開示される。また、ＢＣＲＰを阻害する、またはＢＣＲＰ活性を低下させる方法、及び潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法も開示される。
2016539086.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｉ−１）の化合物：
【化５３】
2016539086.tif 000061
若しくは、薬学的に許容可能なその塩、または：
【化５４】
2016539086.tif 000062
若しくは、薬学的に許容可能なその塩。
【請求項２】
前記化合物が、（Ｉ−１）、若しくは薬学的に許容可能なその塩である、請求項１に記載の前記化合物。
【請求項３】
請求項１の化合物若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び１つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項４】
乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させる方法であって、ＢＣＲＰを発現させた細胞、または、ＢＣＲＰを含む膜調製物を：
化合物（Ｉ−１）
【化５５】
2016539086.tif 000063
若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び、
化合物１２：
【化５６】
2016539086.tif 000064
若しくは薬学的に許容可能なその塩；
から成るグループから選択される化合物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項５】
前記細胞がインビボである、請求項４に記載の前記方法。
【請求項６】
前記細胞がインビトロである、請求項４に記載の前記方法。
【請求項７】
前記細胞が、腸管内の腸細胞、肝細胞、腎臓の近位尿細管細胞、脳内皮細胞、胎盤細胞、幹細胞、乳腺細胞、乳房上皮または血管細胞を含む、請求項４に記載の前記方法。
【請求項８】
前記細胞が癌細胞を含む、請求項４に記載の前記方法。
【請求項９】
前記細胞がＣａｃｏ−２細胞である、請求項４に記載の前記方法。
【請求項１０】
前記細胞が、ＢＣＲＰを過剰発現する細胞を含む、請求項４に記載の前記方法。
【請求項１１】
前記細胞が、ＢＣＲＰを過剰発現する分極した上皮細胞株の細胞を含む、請求項４に記載の前記方法。
【請求項１２】
潜在的ＢＣＲＰ基質を決定する方法であって：
（ａ）化合物（Ｉ-１）：
【化５７】
2016539086.tif 000065
若しくは薬学的に許容可能なその塩；及び
化合物（１２）：
【化５８】
2016539086.tif 000066
若しくは薬学的に許容可能なその塩；
から成るグループから選択される化合物の存在下、または非存在下でＢＣＲＰを発現する細胞サンプルまたはＢＣＲＰを含む膜調製物を、候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
（ｂ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｃ）排出が化合物により阻害される場合、前記の候補ＢＣＲＰ基質がＢＣＲＰ基質であることを決定する；
段階を含む、前記方法。
【請求項１３】
前記細胞サンプルがインビトロである、請求項１２記載の前記方法。
【請求項１４】
前記細胞サンプルがインビボである、請求項１２記載の前記方法。
【請求項１５】
前記細胞サンプルが腸管内の腸細胞、肝細胞、腎臓の近位尿細管細胞、脳内皮細胞、胎盤細胞、幹細胞、乳腺細胞、乳房上皮または血管細胞を含む、請求項１２記載の前記方法。
【請求項１６】
前記細胞サンプルが癌細胞を含む、請求項１２記載の前記方法。
【請求項１７】
前記細胞サンプルがＣａｃｏ−２細胞である、請求項１２記載の前記方法。
【請求項１８】
前記細胞サンプルがＢＣＲＰ過剰発現細胞を含む、請求項１２記載の前記方法。
【請求項１９】
細胞のサンプルが、ＢＣＲＰを過剰発現する、分極した上皮細胞株の細胞含む、請求項１２記載の前記方法。
【請求項２０】
化合物の存在下及び非存在下で、候補ＢＣＲＰ基質のネットフラックス比を測定することを更に含む、請求項１２記載の前記方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１３年１０月７日出願の米国特許仮出願第６１／８８７，４７６号、及び２０１４年３月２６日出願の米国特許仮出願第６１／９７０，５４３号に優先権を主張する。上記出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれたものとする。
【０００２】
抗癌剤に対する耐性は、癌における化学療法の失敗の主要な原因である（Ｍ．Ｋ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ２０１０，  １８，  ４８２．）。７５ｋＤａのヒト乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）は、多くの薬剤耐性細胞株、固形腫瘍、及び血液悪性腫瘍において検出される、多型の原形質膜輸送タンパク質である。ＢＣＲＰ（ＡＢＣＧ２でコードされる、また、ＡＢＣＧ２、及びＭＸＲ（ミトキサントロン耐性タンパク質）として知られている）、ＡＴＰ結合カセット輸送体は、多剤耐性に関与する最も重要なトランスポーターの一つである  。（即ち、）癌細胞におけるＢＣＲＰ発現は、白血病における薬物耐性を付与し、そして、より高いレベルが、消化管、子宮内膜、肺及び黒色腫の腺癌から固形腫瘍で報告されている。ヒト腫瘍における多剤耐性関連タンパク質ＢＣＲＰ／ＭＸＲ／ＡＢＣＰ／ＡＢＣＧ２の頻度の高い発現が、パラフィン包埋材料でＢＸＰ−２１モノクローナル抗体により検出された。（Ｄｉｅｓｔｒａ，Ｊ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，  ２００２．  １９８（２）：ｐ．  ２１３−９．）。
【０００３】
Ｋｏ１４３は、新規なフミトレモルギンＣの類似体であり、そして、ノボビオシン、タリキダル（ＸＲ９５７６）、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゲフィチニブ、及びイマチニブなどのＢＣＲＰの他の公知の阻害剤よりも強力かつ特異的な阻害剤であることが報告されている（Ｊ．Ｄ．  Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，  ２００２，  １，  ４１７；  Ａ．  Ｐｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．，  １９９９，  ９，  ５９５．）。重要なことに、Ｋｏ１４３は、有効なインビトロ及びインビボ濃度において非毒性である（Ｊ．Ｄ．Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）。Ｋｏ１４３の合成のためのその後のルートが報告されている。（Ｙ．Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，２００８，  ４９，  １４８０；  Ｃ．Ｑ．  Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｕｓｅｄ  ＣＹＰ３Ａ４  ａｎｄ  ｅｆｆｌｕｘ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｔｈｅ  １３ｔｈ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ＩＳＳＸ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  Ｍａｕｉ，  ＨＩ  （２００５）．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗ．  Ｖｏｌ  ３７  （ｓｕｐｐｌ  ２）：  ｐ３０４  （＃５５６））。  
米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）からの指導指針の草案によると、Ｐ−ｇｐ（Ｐ−糖タンパク質、ＡＢＣＢ１、ＭＤＲ１）、別のＡＴＰ結合カセットトランスポーター、及びＢＣＲＰの両者は、胃腸管、肝臓、及び腎臓において発現される。そして経口的な生物学的利用能を制限する役割を有する。従って、低透過性のある治験薬は、それらがＰ−ｇｐまたはＢＣＲＰの潜在的な基質であるかどうかを判断するために、インビトロで評価されるべきである（参照：Ｄｒａｆｔ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ−Ｓｔｕｄｙ  Ｄｅｓｉｇｎ，  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｄｏｓｉｎｇ，  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ，  ７７  ＦＲ  ９９４６，  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２１，  ２０１２．）。それ故、特定のＢＣＲＰ阻害剤を用いた動物での薬物の動態を確認することが有益であろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｍ．Ｋ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ２０１０，  １８，  ４８２．
【非特許文献２】Ｄｉｅｓｔｒａ，Ｊ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，  ２００２．  １９８（２）：ｐ．  ２１３−９．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様において、本開示は、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の有効な阻害剤である化合物を提供する。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰは、ヒトＢＣＲＰ、例えば、タンパク質、タンパク質のホモ二量体、またはＧｅｎＰｅｐｔ受託番号ＮＭ＿００４８２７に記載のタンパク質、または、ＧｅｎＰｅｐｔ受託番号ＮＭ＿００１２５７３８６に記載のそのアイソフォーム、または、そのホモ二量体、または、アイソフォームを含む複合体である。これらの化合物は、インビトロ及びインビボでＢＣＲＰ活性を阻害するのに有用である。一態様において、化合物は、（Ｉ−１）：
【化１】
2016539086.tif 000003
若しくは、薬学的に許容可能なその塩である。
【０００６】
一態様において、本開示は、化合物（Ｉ−１）、若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び一つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【０００７】
一態様において、本開示は、ＢＣＲＰを阻害させ、またはＢＣＲＰの活性を低下させ、化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩とＢＣＲＰを発現する細胞を接触させることを含む方法に関する。
【０００８】
一態様において、本開示は、ＢＣＲＰを発現する細胞のサンプルを提供し、かつ、候補ＢＣＲＰ基質を提供することを含み、上記化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で、候補ＢＣＲＰ基質と細胞サンプルを接触させ、化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し、排出が化合物（Ｉ−１）により阻害される場合は、候補ＢＣＲＰ基質はＢＣＲＰ基質であると決定する、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法に関する。
【０００９】
一態様において、本発明は、ＢＣＲＰの有効な阻害剤である化合物を提供する。これらの化合物は、インビトロ及びインビボでＢＣＲＰ活性を阻害するのに有用である。一態様において、化合物は、８：
【化２】
2016539086.tif 000004
若しくは、薬学的に許容可能なその塩である。
【００１０】
一態様において、本発明は、化合物８、若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び１つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００１１】
一態様において、本開示は、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩である化合物とＢＣＲＰを発現する細胞を接触させることを含む、ＢＣＲＰを阻害し、またはＢＣＲＰの活性を低下させる方法に関する。
【００１２】
一態様において、本開示は、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し、及び候補ＢＣＲＰ基質を提供することを含み、化合物８、若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で候補ＢＣＲＰ基質と細胞サンプルを接触させ、化合物の存在下または非存在下でＢＣＲＰ媒介排出輸送を測定し、排出が化合物８により阻害される場合は、候補ＢＣＲＰ基質がＢＣＲＰ基質であると決定することを含む、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法に関する。
【００１３】
一態様において、本開示は、ＢＣＲＰの有効な阻害剤である化合物を提供する。これらの化合物は、インビトロ及びインビボでＢＣＲＰ活性を阻害するのに有用である。一態様において、化合物は、１２：
【化３】
2016539086.tif 000005
若しくは、薬学的に許容可能なその塩である。
【００１４】
一態様において、本発明は、化合物１２、若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び１つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００１５】
一態様において、本開示は、ＢＣＲＰを発現させる細胞を化合物１２、若しくは薬学的に許容可能なその塩である化合物と接触させることを含む、ＢＣＲＰを阻害し、またはＢＣＲＰの活性を低下させる方法に関する。
【００１６】
一態様において、本開示は、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し、及び候補ＢＣＲＰ基質を提供することを含み、化合物１２、または薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で候補ＢＣＲＰ基質と細胞サンプルを接触させ、化合物の存在下または非存在下でＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し、排出が化合物１２により阻害される場合は、候補ＢＣＲＰ基質はＢＣＲＰ基質である、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
化合物及び定義
本開示の化合物は、例えば、上記の化合物（Ｉ−１）など、一般的に記載されるものを含む。本明細書で使用するとき、以下の定義は、特に指示のない限り適用される。
【００１８】
特に指示のない限り、本明細書中に示される構造は、また、全ての構造体の異性形態（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何異性体（または、配座異性体））；例えば、各々の不斉中心に対して、Ｒ及びＳ立体配置体、（Ｚ）及び（Ｅ）二重結合異性体、並びに（Ｚ）及び（Ｅ）配座異性体を含むことを意味している。従って、本化合物の単一の立体化学異性体、並びに、エナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何（または、配座異性体）異性体の混合物は本開示の範囲内にある。特に指示のない限り、本開示の化合物の互変異性体は本開示の範囲内にある。更に、特に指示のない限り、本明細書で図示される構造は、また、１つ若しくはそれ以上の同位体が富化された原子の存在のみ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、重水素または三重水素による水素の置換、または１３Ｃ−若しくは１４Ｃ−富化炭素による炭素の置換を除いて、本構造を有する化合物は、本開示の範囲内である。このような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【００１９】
用語「立体異性体」、「エナンチオマー」、「ジアステレオマー」、「エピマー」、及び「キラル中心」は、当業者が通常使用する所定の意味に基づいて本明細書で使用される。従って、立体異性体は、同じ原子接続性を有するが、原子の空間的配置が異なる化合物である。エナンチオマーは、鏡像関係を有する、つまり、対応するすべてのキラル中心における立体化学的配置が、逆である立体異性体である。ジアステレオマーは、対応するキラル中心の、すべてではないが、少なくとも１つの立体化学構造が逆であり、互いに異なる二つ以上のキラル中心を有する立体異性体である。エピマーは、１つのキラル中心のみ立体化学的配置が異なるジアステレオマーである。
【００２０】
開示された化合物は、少なくとも１つのキラル中心を有する場合、本開示は、対応する光学異性体、化合物の両光学異性体のラセミ混合物、その対応する光学異性体に対して一方のエナンチオマーが富化された混合物を実質的に含まない化合物の１つのエナンチオマーを包含することを理解すべきである。混合物が、その光学異性体に対して、１つのエナンチオマーに富化されたとき、その混合物は、例えば、少なくとも５０％、７５％、９０％、９５％、９９％、若しくは、９９．５％のエナンチオマー過剰率を含む。
【００２１】
本開示のエナンチオマーは、当業者に公知の方法により、例えば、結晶化により分別することができるジアステレオマー塩の形成により；例えば、結晶化、ガス−液体、または液体クロマトグラフィーにより分別できるジアステレオマー異性誘導体または錯体の形成により；エナンチオマー特異的試薬による１つのエナンチオマーの選択的反応、例えば，酵素エステル化反応により；または、キラル環境下での、例えば、キラル担持上で、例えば、結合キラルリガンドとのシリカ、またはキラル溶媒存在下のシリカ上での、ガス−液体、若しくは、液体クロマトグラフィーにより、分割することができる。望ましいエナンチオマーが、上記の分別手法の一つにより別の化学物質に変換される場合、更なる段階が、望ましいエナンチオマー形態を遊離させるために必要とされる。代替的に、特定のエナンチオマーは、光学活性な試薬、基質、触媒または溶媒を用いる不斉合成により、または、不斉転換による１つのエナンチオマーを他のエナンチオマーに転換することにより、合成することができる。
【００２２】
開示された化合物が、少なくとも２つのキラル中心を有する場合には、本開示は、他のジアステレオマーを実質的に含まないジアステレオマー、他の立体異性体を実質的に含まないジアステレオマーのエナンチオマー対、ジアステレオマーの混合物、ジアステレオマーのエナンチオマー対の混合物、１つのジアステレオマーが、他の単数若しくは複数のジアステレオマーに対して富化されたジアステレオマーの混合物、及びジアステレオマーの１つのエナンチオ対が、他の立体異性体に対して富化されたジアステレオマーのエナンチオマー対の混合物を包含する。混合物が他の立体異性体に比べて１つのジアステレオマー、またはジアステレオマー対のエナンチオマー対に富化される場合には、混合物は、図示され、または参照されたジアステレオマー、若しくは、ジアステレオマーのエナンチオマー対に、上記化合物の他の立体異性体にたいして、例えば、少なくとも５０％、７５％、９０％、９５％、９９％、及び９９．５％モル過剰で富化される。
【００２３】
本明細書で使用する用語「ジアステレオマー比」は、１つのキラル中心での立体化学的配置において、同一分子内にある第二のキラル中心に対して異なるジアステレオマー間の比率を指す。一例として、２つのキラル中心を有する化学構造は、４つの可能な立体異性体：Ｒ＊Ｒ、Ｒ＊Ｓ、Ｓ＊Ｒ、及びＳ＊Ｓを提供し、ここに、アスタリスクは、各立体異性体における対応するキラル中心を示す。立体異性体のそのような混合物のためのジアステレオマー比は、１つのジアステレオマー及びそのエナンチオマーの、他のジアステレオマー及びそのエナンチオマーに対する比率＝（Ｒ＊Ｒ＋Ｓ＊Ｓ）：（Ｒ＊Ｓ＋Ｓ＊Ｒ）である。
【００２４】
当業者は、分子が２つより多くのキラル中心を有する場合、追加の立体異性体が可能であることを認識するであろう。本開示の目的のために、用語「ジアステレオマー比」は、２つのキラル中心を有する化合物に関することと、複数のキラル中心を有する化合物に関することと同一の意味を有する。従って、用語「ジアステレオマー比」は、特定のキラル中心でのＲ＊ＳまたはＳ＊Ｒ立体配置を有するすべての化合物に対して指定されたキラル中心でのＲ＊ＲまたはＳ＊Ｓ立体配置を有する全ての化合物の割合を指す。便宜上、この比は、第２の特定のキラル中心に対して、アステリスクを付けた炭素上でのジアステレオマー比と本明細書で呼ぶ。
【００２５】
ジアステレオマー比は、指定されたキラル中心で異なる相対的立体化学配置を有するジアステレオマー化合物間を区別するのに適した任意の分析方法により測定することができる。このような方法としては、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法が挙げられるが、それに限定されない
【００２６】
ジアステレオ異性体対は、例えば、クロマトグラフィーまたは結晶化など、当業者に公知の方法により分別することができ、そして各対内の個々のエナンチオマーは、上記の通りに分別することができる。本明細書中に開示される、化合物の調製に使用される前駆体のクロマトグラフィーで分別するジアステレオマー対のための具体的な手法は、本明細書の実施例で提供される。
【００２７】
本明細書で使用する用語「ＢＣＲＰ基質」は、その細胞からの流出がＢＣＲＰにより媒介される薬物または他の化合物を指す。ＢＣＲＰ基質の例としては、エストロン−３−サルフェート（Ｅ３Ｓ）、メトトレキサート、ミトキサントロン、イマチニブ、イリノテカン、ラパチニブ、ロスバスタチン、スルファサラジン、トポテカン、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、それに限定されない。（参照：Ｄｒａｆｔ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ−Ｓｔｕｄｙ  Ｄｅｓｉｇｎ，  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｄｏｓｉｎｇ，  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ，  ７７  ＦＲ  ９９４６，  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２１，  ２０１２）。ＢＣＲＰ基質の更なる例としては、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ビサントレン、フラブピリドール、エトポシド、テニポシド３、９−アミノカンプトテシン、ゲフィチニブ、ジフロモテカン、ジドブジン、ローダミン１２３、ＳＮ−３８、及びその任意の組み合わせが挙げられる。（Ｉｅｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００９，  ５（７）：７０３−７２９；  Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ２００６，  ４６：３８１−４１０）。与えられた物質が、ＢＣＲＰの基質であるか否かを決定する方法は、当該分野で公知である。例えば、ＢＣＲＰの排出活性は、ＢＣＲＰを発現する細胞または細胞株で目的の化合物の、基底から頂端／頂端から基底（Ｂ→Ａ／Ａ→Ｂ）の、排出率を監視することにより評価できる。（Ｘｉａ，  Ｃ．Ｑ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｃａｃｏ−２  ｃｅｌｌｓ．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．  Ｄｉｓｐ．，  ３３  （５）：  ６３７−６４３  （２００５））。
【００２８】
幾つかの実施形態において、本開示の化合物は、（Ｉ−１）：
【化４】
2016539086.tif 000006
若しくは薬学的に許容可能なその塩である。
【００２９】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物（Ｉ−１）、若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び１つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３０】
幾つかの実施形態において、本開示の化合物は、８：
【化５】
2016539086.tif 000007
若しくは、薬学的に許容可能なその塩である、
【００３１】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物８、若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び１つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３２】
幾つかの実施形態において、本開示の化合物は、１２：
【化６】
2016539086.tif 000008
若しくは、薬学的に許容可能なその塩である。
【００３３】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物１２、若しくは薬学的に許容可能なその塩、及び１つ若しくはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３４】
幾つかの実施形態において、本開示は、ＢＣＲＰを発現する細胞、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を、化合物（Ｉ−１）、
【化７】
2016539086.tif 000009
若しくは薬学的に許容可能なその塩と接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させる方法を提供する。
【００３５】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物を、ＢＣＲＰを発現する細胞またはＢＣＲＰを含む膜調製物を化合物と接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させるための化合物（Ｉ−１）、
【化８】
2016539086.tif 000010
若しくは薬学的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【００３６】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させる方法を提供する。
【化９】
2016539086.tif 000011
【００３７】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞、またはＢＣＲＰを含む膜調製物をを接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【化１０】
2016539086.tif 000012
【００３８】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【化１１】
2016539086.tif 000013
【００３９】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩である化合物を提供し；
【化１２】
2016539086.tif 000014
（ｂ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し；及び
（ｃ）サンプル（ｂ）を化合物（ａ）と接触させる；  
段階を含むサンプルにおける乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【００４０】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を、化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で、候補ＢＣＲＰ基質と接触させることを含み；
【化１３】
2016539086.tif 000015
（ｂ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介排出輸送を測定し；及び
（ｃ）候補ＢＣＲＰ基質は、排出が化合物（Ｉ―１）により阻害される場合、ＢＣＲＰ基質であることを決定する；
段階を含む潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００４１】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を、化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で、候補ＢＣＲＰ基質と接触させることを含み；
【化１４】
2016539086.tif 000016
（ｂ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｃ）候補ＢＣＲＰ基質は、化合物（Ｉ―１）の非存在下で測定された排出が化合物（Ｉ―１）の存在下で測定された排出より大きい場合，ＢＣＲＰ基質であることを決定する；
段階を含む潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００４２】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し；
（ｂ）候補ＢＣＲＰ基質を提供し；
（ｃ）化合物（Ｉ−１）若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で、（ａ）のサンプルを（ｂ）の候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
【化１５】
2016539086.tif 000017
（ｄ）化合物の存在下または非存在下でＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｅ）候補ＢＣＲＰ基質は、排出が化合物（Ｉ−１）により阻害される場合、ＢＣＲＰ基質であると決定する；
段階を含む潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００４３】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物８、若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させる方法を提供する。
【化１６】
2016539086.tif 000018
【００４４】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物と、ＢＣＲＰを発現する細胞またはＢＣＲＰを含む膜調製物を化合物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させるための化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【化１７】
2016539086.tif 000019
【００４５】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させる方法を提供する。
【化１８】
2016539086.tif 000020
【００４６】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【化１９】
2016539086.tif 000021
【００４７】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【化２０】
2016539086.tif 000022
【００４８】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）化合物８、若しくは薬学的に許容可能なその塩を提供し；
【化２１】
2016539086.tif 000023
（ｂ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し；及び
（ｃ）サンプル（ｂ）を化合物（ａ）と接触させる；  
段階を含むサンプルにおける乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【００４９】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で、候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
【化２２】
2016539086.tif 000024
（ｂ）化合物の存在下または非存在下でＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｃ）候補ＢＣＲＰ基質は、排出が化合物８により阻害される場合、ＢＣＲＰ基質であると決定する；
段階を含む、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００５０】
幾つかの実施形態において、本開示は：  
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
【化２３】
2016539086.tif 000025
（ｂ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｃ）候補ＢＣＲＰ基質は、化合物８の非存在下で測定された排出が化合物８の存在下で測定された排出より大きい場合ＢＣＲＰ基質であると決定する；
段階を含む、潜在的なＢＣＲＰ基質決定の方法を提供する。
【００５１】
幾つかの実施形態において、本開示は：  
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し；
（ｂ）候補ＢＣＲＰ基質を提供し；
（ｃ）（ａ）のサンプルを、化合物８若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下で、（ｂ）の候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
【化２４】
2016539086.tif 000026
（ｄ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｅ）候補ＢＣＲＰ基質は、排出が化合物８で阻害される場合、ＢＣＲＰ基質であることを決定する；
段階を含む、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００５２】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させるための方法を提供する。
【化２５】
2016539086.tif 000027
【００５３】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物とＢＣＲＰを発現する細胞またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させるための化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【化２６】
2016539086.tif 000028
【００５４】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルまたはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性を低下させるための方法を提供する。
【化２７】
2016539086.tif 000029
【００５５】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞またはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害するための方法を提供する。
【化２８】
2016539086.tif 000030
【００５６】
幾つかの実施形態において、本開示は、化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩と、ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルまたはＢＣＲＰを含む膜調製物を接触させることを含む、乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害するための方法を提供する。
【化２９】
2016539086.tif 000031
【００５７】
幾つかの実施形態において、本開示は:    
（ａ）化合物１２、若しくは薬学的に許容可能なその塩を提供し；
【化３０】
2016539086.tif 000032
（ｂ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し；及び
（ｃ）サンプル（ｂ）を化合物（ａ）と接触させる；
段階を含む、サンプルにおける乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）を阻害する方法を提供する。
【００５８】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
【化３１】
2016539086.tif 000033
（ｂ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｃ）候補ＢＣＲＰ基質は、排出が化合物１２で阻害される場合、ＢＣＲＰ基質であることを決定する；
段階を含む、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００５９】
幾つかの実施形態において、本開示は：  
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプル、またはＢＣＲＰを含む膜調製物を化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下または非存在下で候補ＢＣＲＰ基質と接触させ；
【化３２】
2016539086.tif 000034
（ｂ）化合物の存在下または非存在下で、ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を測定し；及び
（ｃ）候補ＢＣＲＰ基質は、化合物１２の非存在下で測定した排出が、化合物１２の存在下で測定した排出より大きい場合、ＢＣＲＰ基質であると決定する；
段階を含む、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００６０】
幾つかの実施形態において、本開示は：  
（ａ）ＢＣＲＰを発現する細胞サンプルを提供し；
（ｂ）候補ＢＣＲＰ基質を提供し；
（ｃ）サンプル（ａ）を、化合物１２若しくは薬学的に許容可能なその塩の存在下、または非存在下で、候補ＢＣＲＰ基質（ｂ）と接触させ；
【化３３】
2016539086.tif 000035
（ｄ）ＢＣＲＰ媒介の排出輸送を化合物の存在下または非存在下で測定し；及び
（ｅ）候補ＢＣＲＰ基質は、排出が化合物１２で阻害される場合、ＢＣＲＰ基質であると決定する；
段階を含む、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法を提供する。
【００６１】
本明細書で使用する用語「ネットフラックス比（net  flux  ratio）」は、細胞膜における、例えば、基底面から頂端方向への内因的に発現したトランスポーターの排出量を、頂端から基底面方向への排出量で割ることより誘導される数値、即ち、「排出比」である。或いは、ネットフラックス比は、例えば、トランスポーターを外因的に発現する、または過剰発現する細胞を用いた方法の排出比を、トランスポーターを発現しない、または過剰発現しない対照群細胞を用いた方法での排出比で割ったものである。１より大きいネットフラックス比を有するトランスポータは、活性があると考えることができるが、しかし、例えば、他のトランスポーターが存在する場合、細胞系の特徴は、この値を非差別的と想定することができる。１、１と２の間、２より大きい比率が、使用される細胞システムでの経験により支持される通り、非差別的と見なされる場合、２より大きいネットフラックス比、または陽性対照に対する計算比は、誤検出を回避するために使用してもよい。偽陽性を識別するための更なる方法は、ネットフラックス比がトランスポーター阻害剤により阻害することができるかどうかである。ネットフラックス比のトランスポーター阻害剤による有意な低下（例えば、５０％以上）、または、１への低下は、トランスポーターが阻害されていることを示している。
【００６２】
幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰの活性を低下させる方法は、更に、ＢＣＲＰ基質を提供することを含む。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰの活性を低下させる方法は、更に、ネットフラックス比を測定することを含む。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰの活性を低下させる方法は、ネットフラックス比を１に低下させる。幾つかの実施形態において、ネットフラックス比は、阻害剤の非存在下での比から５０％以上低下する。
【００６３】
幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰを阻害する方法は、更に、ＢＣＲＰ基質を提供することを含む。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰを阻害する方法は、更に、ネットフラックス比を測定することを含む。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰ阻害剤のネットフラックス比は１である。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰ阻害剤のネットフラックス比は、１未満である。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰ阻害剤によるネットフラックス比の低下は、阻害剤の非存在下でのネットフラックス比に比較して、５０％よりも大きい。
【００６４】
幾つかの実施形態において、更に、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法は、Ｅ３Ｓなど、知られているＢＣＲＰ基質の排出と候補ＢＣＲＰ基質の排出を比較することを含む。幾つかの実施形態において、潜在的なＢＣＲＰ基質を決定する方法は、更に、ネットフラックス比を測定することを含む。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰ基質のネットフラックス比は、１よりも大きい。他の実施形態では、ＢＣＲＰ基質のネットフラックス比は２より大きい。
【００６５】
幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、ＢＣＲＰを発現する細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞はインビボである。幾つかの実施形態において、細胞はインビトロである。幾つかの実施形態において、細胞サンプルはヒト細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、患者からのヒト細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、動物細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、非ヒト哺乳動物細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、サル細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、イヌ細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、ラット細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、マウス細胞を含む。
【００６６】
幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、ＢＣＲＰを過剰発現する細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、ＢＣＲＰを過剰発現する、分極した上皮細胞株の細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、腸管内の腸細胞、肝細胞、腎臓の近位尿細管細胞、脳内皮細胞、胎盤細胞、幹細胞、乳腺細胞、乳房上皮または血管細胞を含む。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、Ｃａｃｏ−２細胞を含む。
【００６７】
幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、１つ若しくはそれ以上の細胞または組織において、ＢＣＲＰを発現し、または過剰発現するように設計した、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、マウス、ラットまたはウサギである。幾つかの実施形態において、細胞のサンプルは、ヒトＢＣＲＰを発現するトランスジェニック非ヒト動物である。幾つかの実施形態において、トランスジェニック動物における発現のために設計したＢＣＲＰは、通常、その動物おいて、または動物の特定の組織において発現する内因性ＢＣＲＰを代替する。単数若しくは複数の組織特異的調節配列は、胃腸管などの特定の細胞または組織へのＢＣＲＰの発現を指向するために、作動可能にトランスジェニックＢＣＲＰコード配列に連結することができる。そのようなトランスジェニック動物を作製するための方法は、当該分野で知られている。
【００６８】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、ＢＣＲＰを発現する細胞の膜調製物と共に使用することができる。幾つかの実施形態において、膜調製物は、ＢＣＲＰを発現する細菌細胞からのものである。幾つかの実施形態において、膜調製物は、ＢＣＲＰを発現する昆虫細胞からのものである。幾つかの実施形態において、膜調製物は、ＢＣＲＰを発現するＳｆ９昆虫細胞からのものである。
【００６９】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、培養中のＢＣＲＰ発現細胞と一緒に、例えば、インビトロで、例えば、生体外で、または、生体位で、癌を有する患者からの生検または細胞などのサンプルにおいて使用することができる。幾つかの実施形態において、ＢＣＲＰを発現する細胞（例えば、腫瘍または転移性病変の生検により収集された細胞；確立された癌細胞株からの細胞；または組換え細胞）は、インビトロで、培養媒体中で培養でき、そして接触段階は、ＢＣＲＰ阻害剤化合物、及び／または、ＢＣＲＰ基質を培養培地に添加することにより行われる。幾つかの実施形態において、本開示の方法は、癌細胞に使用することができる。  幾つかの実施形態において、本開示の方法は、白血病細胞、または消化管、子宮内膜、肺及びメラノーマの腺癌に由来する細胞など固形腫瘍からの細胞に使用することができる。幾つかの実施形態において、本開示の方法は、また、インビボでＢＣＲＰ発現細胞に使用することができる。
【００７０】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、化合物（Ｉ−１）の存在下及び非存在下での、候補ＢＣＲＰ基質のネッとフラックス比を測定することを含む。
【００７１】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、化合物８の存在下及び非存在下での、候補ＢＣＲＰ基質のネットフラックス比を測定することを含む。
【００７２】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、化合物１２の存在下及び非存在下での、候補ＢＣＲＰ基質のネッとフラックス比を測定することを含む。
【００７３】
幾つかの実施形態において、本開示の化合物は、高い生物学的利用能及びインビボでの低いクリアランスを示す。
合成工程
スキーム1：Ｉ−１の合成
【化３４】
2016539086.tif 000036
スキーム２：８の合成
【化３５】
2016539086.tif 000037
スキーム３：１２の合成
【化３６】
2016539086.tif 000038
【００７４】
スキーム１は、化合物Ｉ−１の調製のための典型的な方法の概要を示す。スキーム２は、化合物８の調製のための典型的な方法の概要を示し、及びスキーム３は、化合物１２の調製のための典型的な方法の概要を示す。図示した反応順序の段階１〜３は、Ｌｉらが説明した通りに実施されてもよい。（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，２００８，４９，１４８０）。
【００７５】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（４）化合物２とＢｏｃ保護アミノ酸の間のペプチドカップリング；及び
（５）Ｂｏｃ保護基の除去、その後の環化反応；
の段階を含む、化合物２からの化合物（Ｉ−１）の合成方法を提供する。
【００７６】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（４）化合物８とＢｏｃ保護アミノ酸の間のペプチドカップリング；及び
（５）Ｂｏｃ保護基の除去、その後の環化反応；
の段階を含む、化合物６からの化合物８の合成方法を提供する。
【００７７】
幾つかの実施形態において、本開示は：
（４）化合物１２とＢｏｃ保護アミノ酸の間のペプチドカップリング；及び
（５）Ｂｏｃ保護基の除去、その後の環化反応；
の段階を含む、化合物１０からの化合物１２の合成方法を提供する。
【００７８】
スキーム１、スキーム２、及びスキーム３で示す反応順序において、段階４で示すペプチドカップリングは、次の段階における環化反応のためのＢｏｃ−アラニン前駆体を提供する。
【００７９】
幾つかの実施形態において、段階４のペプチドカップリングは、ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート）のカップリング剤により行われる。幾つかの実施形態において、ペプチドカップリングは、また、例えば、ＨＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート）；ＴＢＴＵ（（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウム  テトラフルオロボレート）；ＥＤＣ（１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド）；ＣＩＰ（２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウム  ヘキサフルオロホスフェート）；ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート；または、ＢＥＰ（２−ブロモ−１−エチル−ピリジニウム  テトラフルオロボレート）；などの適切なカップリング剤の存在下で行われる。
【００８０】
幾つかの実施形態において、段階４のペプチドカップリングは、有機溶媒、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中で、カップリング剤により行われる。このペプチドカップリングは、また、例えば、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、クロロホルム、ＮＭＰ（１−メチル−２−ピロリジノン）、または、ＤＭＡＣ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）などの有機溶媒中で実施できる。
【００８１】
幾つかの実施形態において、段階４のペプチドカップリングは、（ｉＰｒ）２ＮＥｔ（ＤＩＰＥＡ；Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）などの塩基の存在下で実施される。この段階は、また、例えば、ＮＥｔ３（トリエチルアミン）、ジエチルアミン、ピリジン、ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン）、モルホリン、またはＤＡＢＣＯ（１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン）などの別の第三級アミン塩基の存在下でも実施できる。
【００８２】
スキーム１、スキーム２、スキーム３で示す通り、段階５の環化反応は、それぞれ、化合物（Ｉ−１）、化合物８、及び化合物１２の調製をもたらす。一実施形態において、Ｂｏｃアミノ酸は酸の存在下で除去された後、弱塩基の存在下で環化が起こる。。
【００８３】
幾つかの実施形態において、段階５（１）において、Ｂｏｃ基の除去は、  ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）の存在下で行われる。保護基の除去は、また、例えば、ＨＣｌ（塩酸）、Ｈ２ＳＯ４（硫酸）、ＨＮＯ３（硝酸）、またはＨ３ＰＯ４（リン酸）などの酸の存在下で行われる。
【００８４】
幾つかの実施形態において、段階５（１）において、Ｂｏｃ基の除去は、ＣＨ２Ｃｌ２（ＤＣＭ）などの有機溶媒中で行われる。この除去は、また、例えば、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）、クロロホルム、エーテル、ジブチルエーテル、またはＭＴＢＥ（ｔ−ブチルメチルエーテル）などの有機溶媒中で行われ得る。
【００８５】
幾つかの実施形態において、化合物（Ｉ−１）、化合物８、または化合物１２を生成させるために、段階５（２）における環化反応は、飽和ＮａＨＣＯ３（重炭酸ナトリウム）の存在下で行われ得る。環化反応は、また、例えば、ＮＥｔ３（トリエチルアミン）、ジエチルアミン、ピリジン、（ｉＰｒ）２ＮＥｔ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン）、モルホリン、ＤＡＢＣＯ（１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、Ｎａ２ＣＯ３（炭酸ナトリウム）、またはＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）などの弱塩基の存在下で行える。
【００８６】
ＢＣＲＰ阻害剤の薬学的に許容可能な塩をこれらの組成物に使用する場合、塩は、好ましくは、無機酸若しくは有機酸、または塩基から誘導される。好適な塩の総説としては、例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６：１−１９  （１９７７）  ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  Ｅｄ．，  ｅｄ．  Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照のこと。
【００８７】
好適な酸付加塩の非限定の例としては、以下のものが挙げられる：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンフル酸塩、カンファスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、半硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒロドキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカン酸塩。
【００８８】
好適な塩基付加塩としては、アンモニウム塩；ナトリウム及びカリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ｔ−ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、及びコリンなどの有機塩基との塩；及びアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩などが挙げられるが、それに限定されない。
【００８９】
また、塩基性の窒素含有基は、メチル、エチル、プロピル、及びブチルクロリド、ブロミド、及びヨージドなどの低級アルキルハライド；硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、及びジアミルなどの硫酸ジアルキル；デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリルクロリド、ブロミド、及びヨージドなどの長鎖ハライド；ベンジル及びフェネチルブロミドなどのアラルキルハライド；及びその他の試薬で第四級化できる。水または油に可溶な、または分散可能な製品は、それにより得られる。
【００９０】
用語「薬学的に許容可能な担体」または「薬学的に許容可能な賦形剤」は、本本明細書において、レシピエントの対象に適合性があり、薬剤の活性を停止せずに、標的部位に活性薬剤を送達するのに適している材料を指す。  幾つかの実施形態において、対象は哺乳動物、例えば、ヒトである。幾つかの実施形態において、担体に関連する、もしあれば、毒性及び有害作用は、活性剤の使用目的のための合理的なリスク／利益比に見合うものである。
【００９１】
用語「担体」、「助剤」または「ビヒクル」は、本明細書で、相互交換可能に用いられ、そして、望ましい特定の剤形に適したものとして、いずれか、及び全ての溶媒、希釈剤、及び他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増ちょう剤または乳化剤、保存剤、固形バインダー、潤滑剤などが挙げられる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  Ｅｄ．，  ｅｄ．  Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００：は、その調製のための薬学的に許容可能な組成物及び既知の技術で製剤化するのに使用される種々の担体を開示する。任意の従来の担体媒体は、望ましくない生物学的影響を生成し、さもなくば薬学的に許容可能な組成物の単数もしくは複数のいずれか他の成分と一緒に有害な手法で相互作用することより本開示の化合物と不適合である場合を除いて、その使用は、本開示の範囲内にあると想定される。薬学的に許容可能な担体として機能し得る物質の幾つかの例としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム；レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質；リン酸水素ジナトリウム、リン酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、水酸化マグネシウム、及び水酸化アルミニウムなどの緩衝物質；グリシン、ソルビン酸、またはソルビン酸カリウム；飽和の植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物；水；発熱物質を含まない水；硫酸プロタミン、リン酸水素ジナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、及び塩化亜鉛などの塩または電解質；コロイダルシリカ、トリケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、羊毛脂；ラクトース、グルコース、スクロースなどの糖類；コーンスターチ及びポテトスターチなどのスターチ類；ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース及びセルロースアセテートなどのセルロース及びその誘導体；粉末トラガント；モルト；ゼラチン；タルク；ココアバター及び座薬用ワックスなどの賦形剤；ピーナツ油、綿実油、ベニハナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油などの油；プロピレングリコール及びポリエチレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチル、ラウリン酸エチルなどのエステル；寒天、アルギン酸、等張性生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液；エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール及びグリセロ―ルなどのアルコール；シクロデキストリン；ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどの滑剤；ミネラルオイル及びワセリンなどの石油系炭化水素；が挙げられるが、それに限定されない。着色剤、剥離剤、被覆剤、甘味剤、香味剤及び芳香剤、防腐剤および酸化防止剤は、また、調合者の判断に基づき組成物に存在してもよい。
【００９２】
本開示の医薬組成物は、従来の造粒、混合、溶解、カプセル化、凍結乾燥、または乳化プロセスなど、当該分野で公知の方法により製造できる。組成物は、顆粒、沈殿物、または微粒子、粉末を含み、凍結乾燥、回転乾燥、またはスプレー乾燥粉末；非晶性粉末、錠剤、カプセル、シロップ、座薬、注射剤、乳化剤、エリキシル、懸濁液、または溶液を含む、様々な形態で製造してもよい。製剤は、場合により、望ましい特定剤形に適した通り、溶媒、希釈剤、及び他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、等調剤、増ちょう剤または乳化剤、安定化剤、及び保存剤、固形バインダー、潤滑剤などを含んでもよい。
【００９３】
好ましい実施形態に基づき、本開示の組成物は、哺乳動物、好ましくはヒトへの薬学的投与のために処方され得る。本開示のこのような医薬組成物は、吸入スプレーより、局所的に、直腸に、経鼻的に、口腔に、膣に、または移植リザーバーを介して、経口、非経口投与することもできる。本明細書で使用される用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内注射または注入技術を含む。好ましくは、組成物は、経口的に、静脈内、または皮下に投与される。本開示の製剤は、短時間作用型、高速放出型、または長時間作用型であるように設計してもよい。尚、化合物は、更に、腫瘍部位における（例えば、注射により）投与など、系統的な手段でなく局所投与することもできる。
【００９４】
経口投与用の液体剤型としては、薬学的に許容可能な乳化剤、ミクロ乳化剤、溶液、懸濁剤、シロップ、及びエリキシルを含むが、それに限定されない。活性化合物に加えて、液体剤型は、例えば、水または他の溶媒；エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、シクロデキストリン、ジメチルホルムアミドなどの可溶化剤及び乳化剤；油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）；グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びその混合物などを当該分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。不活性希釈剤以外に、経口組成物は、また、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、香味料、及び香料などの助剤を含んでもよい。
【００９５】
注射可能な製剤、例えば、滅菌の注射可能な水性または油性の懸濁液は、      適切な分散剤または湿潤剤及び懸濁剤を用いて、公知の技術に従い処方することができる。滅菌注射用製剤は、また、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、滅菌注射用溶液、懸濁液または乳化液であってもよい。許容可能なビヒクルの間で、使用してもよい溶媒は、水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、米国薬局方、及び等張性の塩化ナトリウム溶液である。更に、滅菌性で不揮発油は、従来、溶媒または懸濁性媒体として使用されていた。この目的のために、合成したモノ、またはジグリセリドを含む任意の無刺激性の不揮発油を、使用することができる。更に、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製に使用される。注射用製剤は、例えば、細菌、及び／または、ウイルス保持フィルターを介してろ過により、または、使用前に、滅菌水または他の滅菌注射用媒体中に、溶解または分散させることができる、無菌の固体組成物の形態に滅菌剤を組み込むことにより滅菌することができる。非経口投与のための組成物製剤は、ボーラス注射により、または時限プッシュにより注入してもよく、または連続注入により投与することもできる。
【００９６】
開示の化合物の効果を延長するために、皮下または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることがしばしば望ましい。これは、水溶性の低い結晶または非晶質材料の液体懸濁液の使用により達成することができる。化合物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、同様に、結晶サイズ及び結晶形態にも依存し得る。あるいは、非経口投与される化合物形態の遅延吸収は、化合物を油性ビヒクルに溶解し、または懸濁することにより達成される。注射可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより作製される。化合物のポリマーに対する比率、及び使用する特定ポリマーの性質に依存して、化合物の放出速度を調整できる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（酸無水物）が挙げられる。デポー注射可能製剤は、身体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に化合物を封入することにより調製される。
【００９７】
直腸または膣投与のための組成物は、好ましくは、本開示の化合物を、適当な非刺激性賦形剤、またはココアバター、ポリエチレングリコール、または、常温で固体であるが、体温で液体であり、従って、直腸または膣腔で融解して活性化合物を放出する座薬ワックスなどの担体を混合することにより調製することができる座薬である。
【００９８】
経口投与用の固体剤形は、カプセル、錠剤、ピル、粉末、及び顆粒を含む。その様な固体剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ジカルシウムなどの少なくとも１つの不活性で、薬学的に許容可能な賦形剤または担体、及び／または、ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸などの充填剤または増量剤；ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアカシアなどのバインダー；ｃ）グリセロールなどの湿潤剤；ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ポテト、またはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；ｅ）パラフィンなどの溶液遅延剤；ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；ｇ）例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセリンなどの湿潤剤；ｈ）カオリン及びベントナイトクレイなど吸収剤；及びｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びその混合物などの滑剤；と混合する。カプセル剤、錠剤及びピルの場合には、剤形は、また、リン酸塩または炭酸塩のような緩衝剤を含んでもよい。
【００９９】
類似タイプの固体組成物は、また、ラクトースまたはミルク糖、並びに、高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質及び硬質ゼラチン充填カプセル中の充填剤として使用することができる。錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル及び顆粒の固体剤形は、腸溶性コーティング剤、及び、医薬製剤分野で公知の他のコーティング剤などのコーティング剤、及びシェルを用いて調製することができる。それらは、場合により、不透明化剤を含有してもよく、また、それらが単数もしくは複数の活性成分のみを放出し、または、好ましくは、腸管の特定の部分においてのみ、場合により遅延様式で放出する組成物であってもよい。使用可能な組み込み組成物の例としては、高分子物質及びワックスが含まれる。類似タイプの固形組成物は、また、ラクトースまたはミルク糖、並びに、高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質及び硬質ゼラチン充填カプセル中の充填剤として使用することができる。
【０１００】
活性化合物は、また、上記で記載した通り、１つ若しくはそれ以上の賦形剤でマイクロカプセル化形態にすることができる。錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、及び顆粒の固体剤形は、腸陽性コーティング剤、放出調整コーティング剤、及び薬学製剤分野で公知の他のコーティング剤などのコーティング剤及びシェルで調製できる。このような固体剤形において、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合することができる。このような投薬形態は、また、通常時のように、例えば、ステアリン酸マグネシウム及びマイクロ結晶化セルロースなどの錠剤化滑剤及び他の錠剤化助剤などの不活性希釈剤以外の更なる物質を含んでもよい。カプセル、錠剤及びピルの場合、剤形は、また、緩衝剤を含んでいてもよい。それらは、場合により、不透明化剤を含有してもよく、また、それらが単数もしくは複数の活性成分のみを放出し、または、好ましくは、腸管の特定の部分においてのみ、場合により遅延様式で放出する組成物であってもよい。使用可能な組み込み組成物の例としては、高分子物質及びワックスが含まれる。
【０１０１】
本開示の化合物の局所または経皮投与用の剤形としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤またはパッチが挙げられる。活性成分は、薬学的に許容可能な担体、及び必要に応じて任意の必要な防腐剤または緩衝剤と滅菌条件下で混合される。眼科用製剤、点耳薬、及び点眼薬も、本開示の範囲内であると考えられる。更に、本開示は、身体への化合物の制御された送達を提供する更なる利点を有する経皮パッチの使用を意図する。このような剤形は、適切な媒体に化合物を溶解または分配することにより作製することができる。吸収促進剤は、また、皮膚に行き渡る化合物の流れを増大させるために使用することができる。速度は、速度制御膜を提供することにより、または、ポリマーマトリックス若しくはゲル中に化合物を分散させることにより制御することができる。
【０１０２】
本開示の化合物は、当業者に公知の方法により、及び／または、以下に示すスキーム及び合成実施例を参照して調製することができる。典型的な合成ルートは以下の実施例で記載する。
【０１０３】
本開示をより完全に理解するために、以下の調製及びテストの実施例を記載する。これらの実施例は、いかなる意味においても本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１０４】
略号及び命名法
ＡＡ：酢酸アンモニウム；
ＡＣＮ：    アセトニトリル；
ｄ：二重項：
ｄｄ：二重項の二重項；
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；
ＦＡ：ギ酸；
Ｊ：結合定数；  
ｈｒ：時間；
Ｈｚ：ヘルツ；
（ｉＰｒ）２ＮＥｔ：ジイソプロピルエチルアミン；
ＬＡＨ：リチウムアルミニウムハイドライド；
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー・質量分析；
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド；
ｍ     ：多重項；  
ＭｅＯＨ    ：メタノール；
ｓ：一重項；
ｔ：三重項：
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
ｑ：四重項；
（実施例１）
【０１０５】
合成方法及び分析データ：
全合成スキームは、スキーム１（化合物Ｉ−１）、スキーム２（化合物８）、及びスキーム３（化合物１２）に表す。
【０１０６】
全ての試薬は、６−メトキシインドール（Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ社、  ＩＮ−００５４）を例外として、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手した。重水素化ＮＭＲ溶媒は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社から入手した。全ての反応は、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズＬＣ／ＭＳを用いて監視した。
【０１０７】
ＬＣＭＳデータは、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ、５μｍＣ１８（２）：１５０×４．６ｍｍ）、及びＡｇｉｌｅｎｔ質量分析計を用いて得られた。
【０１０８】
ＮＭＲスペクトルは、測定用の５ｍｍＱＮＰプローブを装備した、３００ＭＨｚ、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅスペクトルメータ、及び５ｍｍＱＮＰプローブを装備した、４００ＭＨｚ、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩ  スペクトルメータを用いてプロトンＮＭＲで示し、δ値は、ｐｐｍで表す。
【０１０９】
（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチル（１）の調製
【化３７】
2016539086.tif 000039
２首の１Ｌ丸底フラスコ内で、１時間窒素ガス下で乾燥した後、６−メトキシインドール（１８．７５０ｇ、１２７．４０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２４０ｍＬ）に室温で溶解した。反応混合物に、（Ｓ）−（−）−１，２−アジリジンジカルボン酸１−ベンジル２−メチル（１５ｇ、６３．７７ｍｍｏｌ）、及びイッテルビウム（ＩＩＩ）トリフレート（３９．３８ｇ、６３．４８ｍｍｏｌ）を、３部分に分け９０分毎加えた。反応フラスコは、アルミニウムフォイル（製品が光感受性であるので）で覆い、室温で２４時間撹拌した。ＨＰＬＣで反応の完結をチェックした後、反応混合物を水（２４０ｍＬ、３×）で洗浄し、そして組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、ヘキサン／酢酸エチルの傾斜溶出を用いたシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した。生成物を含む留分を組み合せ、そして真空下で濃縮し、黄色油（１５．７７ｇ、６４．７％）として（１）を得た。
【０１１０】
（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（５，６−ジメトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチル（５）の調製
【化３８】
2016539086.tif 000040
化合物５は、化合物１で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：４８．６％）。
【０１１１】
（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（６−ジメトキシ−５−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチル（９）の調製
【化３９】
2016539086.tif 000041
化合物９は、化合物１で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：５１．５％）。
【０１１２】
（１Ｓ，３Ｓ）−１−イソブチル−７−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（２）、及び（１Ｓ，３Ｒ）−１−イソブチル−７−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（２Ａ）の調製
【化４０】
2016539086.tif 000042
１Ｌの丸底フラスコ内で、（Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチル（１２．９４ｇ、３３．８３８ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（２１７ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）を、メタノール（３４６．８ｍＬ）に加えた。フラスコを高真空に取り付け、そして、吸引し、高真空に取り付けた水素バルーンから水素を充填した。反応混合物を室温で撹拌した。２４時間後、反応混合物は、ＨＰＬＣで反応の完結をチェックし、セライトを通してろ過して触媒を除去し、水（９０ｍＬ）で希釈し、塩化メチレン（９０ｍＬ、３×）で洗浄した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮し、保護基を脱離したアミン中間体を薄茶色油として得た。
【０１１３】
反応残留物の（Ｓ）−２−アミノ−３−（６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチルは、窒素雰囲気下で、塩化メチレン（１３５．５３ｍＬ）に溶解し、ドライアイスとエタノールのバスで、−２５〜−３０℃に冷却した。イソバレルアルデヒド（４．７２ｍＬ、４４．０ｍｍｏｌ）を加え、５分間撹拌した。トリフルオロ酢酸（３．３９ｍＬ、４４．０ｍｍｏｌ）を加え、反応をＴＬＣ及びＨＰＬＣで監視した。１時間後、反応混合物を飽和のＮａＨＣＯ３（１３６ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレン（１３６ｍＬ、３×）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。生成物は、ヘキサン／酢酸エチル傾斜溶出法を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２をメタリック調の薄黄色の粉末（６．７９８ｇ、収率：６３．５％）として、化合物２Ａを薄黄色の粉末（２．２６６ｇ、収率：２１．２％）として得た。
【０１１４】
（１Ｓ，３Ｓ）−１−イソブチル−６，７−ジメトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（６）  及び（１Ｓ，３Ｒ）−１−イソブチル−６，７−ジメトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（６Ａ）の調製
【化４１】
2016539086.tif 000043
化合物６及び化合物６Ａは、化合物２及び化合物２Ａで記載した方法と類似の方法で調製した（化合物６に対して、収率：１４．９％、及び化合物６Ａに対して、収率：４０％）。
【０１１５】
（１Ｓ，３Ｓ）−１−イソブチル−７−メトキシ−６−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（１０）、及び、（１Ｓ，３Ｒ）−１−イソブチル−７−メトキシ−６−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（１０Ａ）の調製
【化４２】
2016539086.tif 000044
化合物１０及び化合物１０Ａは、化合物２及び化合物２Ａで記載した方法と類似の方法で調製した（化合物１０に対して、収率：２４．４％、及び化合物１０Ａに対して、収率：３９．６％）。
【０１１６】
（１Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル）−１−イソブチル−７−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（３）の調製
【化４３】
2016539086.tif 000045
（１Ｓ，３Ｓ）−１−イソブチル−７−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（７５０．０００ｍｇ、２．３７０４６ｍｍｏｌ）、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニン（６７３ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１４００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）溶液を含む、５０ｍＬの丸底フラスコを、０℃に冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６１９ｍＬ、３．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニン、ＨＡＴＵ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの第二及び第三部分を、各々２４時間後に加え、そして反応混合物を、更に、２４時間撹拌した。４日後、反応の完結をＨＰＬＣでチェックした。反応混合物を水（１２ｍＬ）で希釈し、塩化メチレン（１２ｍＬ、３×）で抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下、オイルバスで４０〜５０℃で濃縮し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを除去した。生成した残留物をヘキサン／酢酸エチルでの傾斜溶出法を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（３）を薄茶色油（１．０６１ｇ、８３．４％）として得た。
【０１１７】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５７（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８２−６．６７（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｍ，１Ｈ），４．８４（ｍ，１Ｈ），４．１４−３．９８（ｑ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．４９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．１６（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｍ，１Ｈ），１．９８（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，６Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．２，５．８Ｈｚ，３Ｈ），１．１９（ｍ，３Ｈ）。
【０１１８】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．３８，１７１．１２，１５６．６７，１５５．０４，１３７．０８，１３１．９７，１２０．８３，１１８．９２，１０９．５４，１０４．８３，９５．２０，６０．５７，５５．８５，５３．１１，４８．９９，４７．４０，４５．０２，２８．４４，２５．３１，２２．３７，１９．６９，１４．３３。
【０１１９】
（１Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル）−１−イソブチル−６，７−ジメトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（７）の調製
【化４４】
2016539086.tif 000046
化合物７は、化合物３で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：９１．８％）。
【０１２０】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．４７（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），５．２７（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｓ，１Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，６Ｈ），３．６１−３．５４（ｍ，３Ｈ），３．３３−３．２７（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．７３（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．４６（ｍ，１Ｈ），１．４５−１．３９（ｍ，３Ｈ），１．３７−１．３０（ｍ，９Ｈ），１．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，６．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１２１】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．１０，１７０．７６，１５５．１４，１４６．５９，１４４．６０，１３２．３９，１３０．８９，１１９．３７，１０４．０４，１０１．４６，９５．８８，７８．４４，６０．１９，５６．５４，５６．２７，５２．６８，５２．３７，４７．９３，４５．２０，２８．６５，２８．５７，２８．４０，２４．４４，２３．８７，２１．２０，１７．５０，１４．５３。
【０１２２】
（１Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル）−１−イソブチル−７−メトキシ−６−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−  β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（１１）の調製
【化４５】
2016539086.tif 000047
化合物１１は、化合物３で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：７２．８％）。
【０１２３】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．４８（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），６．８４−６．７８（ｍ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），５．２５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ），２．１８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ），１．４６−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ），１．２５（ｄｄｄｑ，Ｊ＝２．９，１．７，１．２，０．６Ｈｚ，３Ｈ），１．０２−０．８５（ｍ，６Ｈ）。
【０１２４】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７５．０７，１７０．７４，１５５．６７，１５４．２３，１３５．８３，１３２．０９，１２０．１２，１１９．１３，１１７．９０，１０３．６１，９３．４４，７８．３３，６０．１７，５５．６４，５２．６４，４９．２３，４７．９１，４５．１５，２８．６４，２８．５７，２８．３７，２４．４４，２１．２１，２１．１７，２１．１５，１７．４８，１４．５０。
【０１２５】
（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＳ）−６−イソブチル−９−メトキシ−３−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（化合物（Ｉ−１））の調製
【化４６】
2016539086.tif 000048
２５０ｍＬの丸底フラスコで、（１Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル）−１−イソブチル−７−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチル（６９０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１１ｍＬ、１７０ｍｍｏｌ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１１ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）を、０℃で滴下した。反応混合物を０℃で、１５分間、そして、室温で１〜２時間撹拌し、その間ＨＰＬＣで監視した。反応が完結したとき、全ての揮発分を、ロータリーエバポレーターで３０分間除去し、暗紫色の残留物を得た。生成した残留物を塩化メチレン２０ｍＬに溶解し、そして水相のｐＨが１０になるまで、飽和のＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ、２×）で洗浄した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮し、ヘキサン／酢酸エチルの傾斜溶出法を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（Ｉ−１）を薄黄色粉末（２１１ｍｇ、収率：４２．２％）として得た。
【０１２６】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８２（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｄｄ，Ｊ＝９．３，４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１３−４．０２（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝１５．９，１１．８Ｈｚ，１Ｈ），１．８４−１．７１（ｍ，１Ｈ），１．５６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．２５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．３Ｈｚ，２Ｈ），１．０７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１２７】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７０．４５，１６９．５６，１５６．５２，１３６．６７，１３３．３１，１２０．７５，１１８．８１，１０９．７１，１０６．５２，９５．３６，５６．１３，５５．８９，５１．２１，５０．３１，４５．９８，２４．９６，２３．９６，２１．８９，２１．８６，１６．６１。
【０１２８】
ＨＲＭＳｍ／ｚ：計算値：３５６．１９６９（Ｍ＋１）、分析値：３５６．１９８５（Ｍ＋１）。
【０１２９】
（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＳ）−６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−３−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（８）の調製
【化４７】
2016539086.tif 000049
化合物８は、化合物Ｉ−１で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：２７．４％）。
【０１３０】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．７３（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１４−４．０７（ｍ，１Ｈ），４．０７−３．９８（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，６Ｈ），２．７６（ｄｄ，Ｊ＝１５．７，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４８（ｑ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），１．５６（ｔｄ，Ｊ＝８．８，４．３Ｈｚ，１Ｈ），１．５１−１．３７（ｍ，２Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ），０．７３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１３１】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７０．１７，１７０．１７，１４６．４７，１４４．８５，１３３．６１，１３０．３８，１１９．２２，１０５．６３，１０１．３２，９５．９３，５６．４３，５６．１９，５５．７５，５０．４５，４９．５８，４６．３５，２４．６０，２４．２０，２２．５１，２１．９５，１６．１９。
【０１３２】
ＨＲＭＳｍ／ｚ：計算値：３８６．２０７４（Ｍ＋１）、分析値：３８６．２０８０（Ｍ＋１）。
【０１３３】
（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＳ）−６−イソブチル−９−メトキシ−３，１０−ジメチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（１２）の調製
【化４８】
2016539086.tif 000050
化合物１２は、化合物Ｉ−１で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：２４％）。
【０１３４】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．７５（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．２，４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０７（ｍ，１Ｈ），４．０６−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１５．７，５．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８２−２．６９（ｍ，１Ｈ），２．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ），１．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．７，８．５，４．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝６．９，４．８，３．２Ｈｚ，１Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ），０．７３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１３５】
13Ｃ ＮＭＲ  （７５  ＭＨｚ,  ＣＤＣｌ３）δ  １７０．２２,  １７０．１８,  １５４．１２,  １３５．３８，  １３３．３９，  １１９．９５，  １１９．１２，  １１８．３１，  １０５．１１，  ９３．６０，  ５５．６６，  ５５．６２，  ５０．４１，  ４９．５７，  ４６．２７，  ２４．５８，  ２４．２１,  ２２．５６,  ２１．７９,  １７．２１,  １６．１８。
【０１３６】
ＨＲＭＳｍ／ｚ：計算値：３７０．２１２５  （Ｍ＋１）、分析値：３７０．２１２９  （Ｍ＋１）。
【０１３７】
（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＲ）−６−イソブチル−９−メトキシ−３−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（４）の調製  
【化４９】
2016539086.tif 000051
化合物３Ａは、化合物３で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：８１．３％）。化合物４は、化合物（Ｉ−１）で記載した方法と類似の方法で調製した。
【０１３８】
収率=５０％
【０１３９】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７４（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），５．９２−５．８２（ｍ，１Ｈ），４．４０（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．１７（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１５．４，４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９６−２．８３（ｍ，１Ｈ），１．８８−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，４．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５４（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ），０．９９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１４０】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６７．８０，１６５．８５，１５６．８３，１３６．８９，１３２．２３，１２０．８５，１１８．８３，１０９．６２，１０６．４０，９５．１７，５５．８８，５２．８１，５１．７７，４８．０４，４３．６８，２８．２１，２５．３５，２３．４３，２３．１７，２２．５６。
【０１４１】
ＨＲＭＳｍ／ｚ：計算値：３５６．１９６９（Ｍ＋１）、分析値：３５６．１９８６（Ｍ＋１）。
【０１４２】
（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＲ）−６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−３−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（８Ａ）の調製
【化５０】
2016539086.tif 000052
化合物７Ａは、化合物７で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：９０％）。化合物８Ａは、化合物８で記載した方法と類似の方法で調製した。
【０１４３】
収率=４３．６％
【０１４４】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．６６（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），５．６７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，７Ｈ），３．１７（ｄｄ，Ｊ＝９．４，４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７８−２．６４（ｍ，１Ｈ），１．７９（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），１．５９（ｓ，２Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１４５】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６６．８８，１６６．５６，１４６．６８，１４４．７１，１３２．９６，１３０．５８，１１９．３３，１０５．１８，１０１．４４，９５．８２，５６．４７，５６．２６，５２．４４，５０．８７，４７．５９，４２．９３，２８．２３，２５．０７，２３．８４，２２．７６，２２．４９。
【０１４６】
ＨＲＭＳｍ／ｚ：計算値：３８６．２０７４（Ｍ＋１），分析値：３８６．２０７４（Ｍ＋１）。
【０１４７】
（３Ｓ，６Ｓ，１２ａＲ）−６−イソブチル−９−メトキシ−３，１０−ジメチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１'，２'：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（１２Ａ）の調製  
【化５１】
2016539086.tif 000053
化合物１１Ａは、化合物１１で記載した方法と類似の方法で調製した（収率：９１％）。化合物１２Ａは、化合物１２で記載した方法と類似の方法で調製した。
【０１４８】
収率＝２５．２％．
【０１４９】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．６９（ｓ，１Ｈ），８．４５−８．３８（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），５．７１−５．６４（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０６−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．１２（ｄｄ，Ｊ＝１５．３，４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．７５−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，３Ｈ），１．８０（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），１．５７（ｔｔ，Ｊ＝９．２，４．４Ｈｚ，２Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１５０】
１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６６．８６，１６６．５７，１５４．３３，１３５．５６，１３２．７５，１２０．０８，１１９．１７，１１８．１６，１０４．７０，９３．４５，５５．６７，５２．４０，５０．８６，４７．５４，４２．８４，２８．０８，２５．０８，２３．８４，２２．７６，２２．４９，１７．１７。
【０１５１】
ＨＲＭＳｍ／ｚ：計算値：３７０．２１２５（Ｍ＋１），分析値：３７０．２１２９（Ｍ＋１）。
（実施例２）
【０１５２】
化合物（Ｉ−１）、化合物８、及び化合物１２の特徴
【化５２】
2016539086.tif 000054
ＢＣＲＰ及びＰ−ｇｐトランスポータに関するＩＣ５０の決定：
表中に示した化合物Ｋｏ１３４及びＫｏ１４３は、Ｌｉらの方法に基づき調製できる。（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，２００８，４９，１４８０）。化合物（Ｉ−１）、４、８、８Ａ、１２及び１２Ａは、上記で示した通りに調製した。
【０１５３】
トランスポーターの阻害に対する化合物の効力を決定するために、双方向輸送研究は、Ｘｉａらに基づき、Ｃａｃｏ−２細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，  Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）で、空気中、３７℃で実施する。（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｃａｃｏ−２  ｃｅｌｌｓ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．  Ｄｉｓｐ．，３３（５）：６３７−６４３  （２００５））。各実験の前に、トランスウェル（商標）インサート上の合流した細胞単層を洗浄し、３０分間輸送媒体で平衡化した。（１０ｍＭのＮ−２−ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎ'−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）及び１０ｍＭのグルコースを含む、Ｈaｎｋのバランス塩溶液（ＨＢＳＳ）、ｐＨ：７．４）。３Ｈ−ジゴキシン（２５ｎＭ、ｐ−ｇｐ用の基質）、または、３Ｈ−Ｅ３Ｓ（１７ｎＭ、ＢＣＲＰ用基質）を含む溶液を頂端（Ａ→Ｂ輸送）、または基底面（Ｂ→Ａ輸送）区画のいずれかに、種々の濃度での化合物（Ｉ−１）またはＫｏ１４３の存在下または非存在下で加えて、実験を開始した。予め設定された時点で、受理溶液の０．０５ｍＬのアリコートを、基底面からサンプリングし（Ａ→Ｂ輸送）、または頂端からサンプリングし（Ｂ→Ａ輸送）、そして、最終時点（培養の終了時）を除いて、直ちに、等量の新鮮な輸送媒体で代替した。各試料中の放射能を、１４５０ＭｉｃｒｏβＴｒｉＬｕｘ、マイクロプレートシンチレーション及び発光カウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）で測定した。投与溶液の放射能（３Ｈ）を測定し、基質の初期ドナー濃度を計算するために使用した。
【０１５４】
化合物（Ｉ−１）及び他の化合物のＢＣＲＰの排出トランスポータに関するＩＣ５０を、この方法に基ずき決定し、結果を表１及び表１Ａに示す。
【表１】
2016539086.tif 000055
【表１Ａ】
2016539086.tif 000056
【０１５５】
化合物（Ｉ−１）及びＫｏ１４３のＰ−ｇｐのトランスポータに関するＩＣ５０を、この方法を用いて決定した。表２で示す結果は、化合物（Ｉ−１）は、選択的ＢＣＲＰ阻害剤であることを示した。
【表２】
2016539086.tif 000057
ＣＹＰ酵素阻害プロファイルの決定
【０１５６】
ヒト肝臓ミクロソーム（ＨＬＭ）（０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液中０．３ｍｇ／ｍＬ；ｐＨ：７．４）を、ＣＹＰ（チトクロームＰ４５０）アイソザイム選択的基質（ＣＹＰ１Ａ２に対してフェナセチン；ＣＹＰ２Ｃ８に対してアモジアキン；ＣＹＰ２Ｃ９に対してジュクロフェナック；ＣＹＰ２Ｃ１９に対してＳ−メフェニトイン；ＣＹＰ２Ｄ６に対してデクストロメトルファン；ＣＹＰ３Ａ４／５に対して、ミダロザム）、及び化合物（Ｉ−１）の複数濃度、またはＫｏ１４３（０、０．０４１、０．１２、０．３７、１．１１、３．３３，１０、及び３０μＭ）で、９６ウエルプレートにおいて培養した。反応は、０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．４中での、β−ＮＡＤＰＨ（２ｍＭ）及びＭｇＣｌ２（３ｍＭ）の添加により開始した。反応は、３７℃で１２分間培養し、その後、１-μＭのカルブタミドを（ＩＳ）を含むＡＣＮを等量加えて終了させた。  プレートを１５分間約４℃に冷却した後、沈殿したタンパク質をペレット化するために遠心分離した。上澄液を各ＣＹＰアイソザイムにより形成される代謝物の量についてＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【０１５７】
化合物（Ｉ−１）、Ｋｏ１４３は、この方法に基づき試験し、そのＣＹＰ（チトクロムＰ４５０）阻害プロファイルを表３に示した。
【表３】
2016539086.tif 000058
インビボ薬物動態学的プロファイルの決定
【０１５８】
化合物（Ｉ−１）のインビボ薬物動態学的プロファイルを決定するために、スプラーグドーリ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ，  Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，  ＭＡ）に、０．５％ＨＰＭＣ／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中で調整した、２．０ｍｇ／ｋｇ若しくは２０ｍｇ／ｋｇの化合物（Ｉ−１）、または、２．０ｍｇ／ｋｇ若しくは５０ｍｇ／ｋｇのＫｏ１４３をそれぞれ静脈内で、または経口で投与した。化合物（Ｉ−１）またはＫｏ１４３を投与した後、血液は、投与前、及び投与後、０．０８３、０．２５、０．５、１、４、８、２４時間ですべての動物から得られた。約２００μＬの全血液を、各動物の頚静脈カテーテルから、エチレンジアミン四酢酸ジカリウム（Ｋ２ＥＤＴＡ）抗凝血剤を含むチューブ内に収集し、そして、さらに約４℃で血漿内に加工した。血漿中の化合物（Ｉ−１）またはＫｏ１４３の濃度は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて決定した。個々の血漿濃度データの薬物動態学的分析は、非検証プログラムを用いて実行した。（Ｐｈｏｅｎｉｘ（商標）  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）、６．１版［Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社製（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）］）。
【０１５９】
化合物（Ｉ−１）、Ｋｏ１４３は、この方法に基づき試験した。この研究結果は表４に示した。化合物（Ｉ−１）は、図示したラットにおいて高い生物学的利用能及び低クリアランスを示した。
【表４−１】
2016539086.tif 000059
【表４−２】
2016539086.tif 000060
【０１６０】
前述の開示は、明確さ及び理解の目的のためにある程度詳細に説明してきたが、これらの特定の実施形態は、例示的であって、制限的なものではないと考えるべきである。形態及び詳細における種々の変更が本発明の真の範囲から逸脱することなく行うことができることができ、それは特定の実施形態によるのでなく、添付の特許請求の範囲により定義されるべきであることを当業者は本開示を読むことにより理解するであろう
【０１６１】
本明細書に参照された特許及び科学文献は、当業者に利用可能な知識を確立する。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、一般的に、本開示が属する該当分野の当業者により理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中で引用される発行された特許、特許出願、ＧｅｎＰｅｐｔ配列及び参考文献は、それぞれが具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるように本明細書に同程度に導入される。矛盾する場合、定義を含む本開示が支配する。
【国際調査報告】
2016539086.tif 000068