(57)【要約】  酸化的滅菌剤のための滅菌インジケータであって、１つまたはそれ以上の微生物種の胞子を含む第１の区画であって、ここで該胞子が、酸化的滅菌剤と反応性である遷移金属イオンを含む化合物で前処理されておりかつ該化合物を含む、第１の区画；増殖培地を含む第２の区画であって、該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後の培養のために該第２の区画の内容物と該第１の区画の内容物とを合わせるように適合された、第２の区画；および増殖培地中に入れられ、そして該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後の該胞子の生存性を指示するように選択された薬剤；を含む、滅菌インジケータ。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化的滅菌剤のための滅菌インジケータであって、
１つまたはそれ以上の微生物種の胞子を含む第１の区画であって、ここで該胞子が、酸化的滅菌剤と反応性である遷移金属イオンを含む化合物で前処理されておりかつ該化合物を含む、第１の区画；
増殖培地を含む第２の区画であって、該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後の培養のために該第２の区画の内容物と該第１の区画の内容物とを合わせるように適合された、第２の区画；および
増殖培地中に入れられ、そして該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後の該胞子の生存性を指示するように選択された薬剤；
を含む、滅菌インジケータ。
【請求項２】
前記１つまたはそれ以上の微生物種が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィラスおよびバチルス・アトロファエウスの１つまたは両方を含む、請求項１に記載の滅菌インジケータ。
【請求項３】
前記薬剤が、色変化、濁度変化、蛍光発光または電気的に検出可能な反応の１つまたはそれ以上の手段により前記胞子の生存性を示す、請求項１または２のいずれかに記載の滅菌インジケータ。
【請求項４】
前記薬剤がｐＨインジケータである、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項５】
前記ｐＨインジケータが、ブリリアントグリーン、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、クレゾールレッド、メチレンブルー、ニュートラルレッド、フェノールレッド、レサズリン、またはチモールブルーを含む、請求項４に記載の滅菌インジケータ。
【請求項６】
前記薬剤が蛍光インジケータである、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項７】
前記蛍光インジケータが色シフト蛍光タンパク質である、請求項６に記載の滅菌インジケータ。
【請求項８】
前記薬剤が、検出可能な電気的信号を供給するように適合された少なくとも２つの電極を含む、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項９】
前記薬剤がテトラゾリウム塩を含む、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項１０】
前記遷移金属イオンが、鉄、銅、マンガン、チタン、亜鉛、バナジウム、銀、白金、ニッケル、モリブデン、コバルトおよびクロムの１つまたはそれ以上を含む、先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータ。
【請求項１１】
前記遷移金属イオンが、Ｋ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］またはＦｅ７（ＣＮ）１８中の鉄である、請求項８に記載の滅菌インジケータ。
【請求項１２】
前記酸化的滅菌剤が、過酸化水素、エチレンオキサイド、およびオゾンの１つまたはそれ以上を含む、先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータ。
【請求項１３】
酸化的滅菌剤を用いた滅菌プロセスの効力を判定する方法であって、
先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータを提供する工程；
該滅菌インジケータおよび滅菌されるべき１つまたはそれ以上の物品を酸化的滅菌剤に曝露する工程；および
培養した増殖培地の検査により、該滅菌が効果的であったかどうかを判定する工程；
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、滅菌プロセスの効力を試験するための生物学的インジケータに関する。より具体的には、酸化的滅菌剤とともに使用するための改善されたインジケータであって、酸化的滅菌剤とともに用いられる従来の生物学的インジケータよりも滅菌サイクル中によりさらに、生物学的インジケータに対する滅菌剤の効果のモニターを可能にする、インジケータに関する。
【背景技術】
【０００２】
最も重要な部類のインジケータは生物学的インジケータ（ＢＩ）である。生物学的インジケータは、処理された装填物全体にわたって滅菌条件が適合したことの最高度の保証を提供する。この種のインジケータは、インジケータ内またはインジケータ上で、特定の処理に高耐性の非常に多数の生物を提供することで、処理システムにとって最悪のケースを代表することを意味する。通常、細菌胞子は、滅菌システムをモニターするために最適な生物である。
【０００３】
生物学的インジケータは、典型的には、担体材料上に接種された微生物からなる。該微生物は、典型的には、それらが使用されるべき特定の滅菌媒体に非常に耐性であることが知られている細菌胞子である。該担体材料は、紙からプラスチックからステンレス鋼の範囲であり得、平坦な表面からバイアルのような容器までの範囲の様々な構成であってもよい。バイアルとキャップからなる生物学的インジケータは、自己完結型の生物学的インジケータ（ＳＣＢＩ）として知られている。なぜならそれらは、試料を処理、活性化および培養するために必要な全ての要素を含むからである。該担体は、医薬デバイス装填とともに滅菌サイクル中にセットされる。該サイクルの完了に続いて、生物学的インジケータは、最大で７日まで培養され、増殖をモニターされる。生物学的インジケータの増殖は、滅菌プロセスが、完全な滅菌を達成するために適当でないこと、および医療デバイス装填が使用前に再処理されることが必要であることを示す。生物学的インジケータが増殖しないことは、滅菌器内の条件が、少なくともインジケータ上に付加した細菌胞子の数（例えば、１０６細菌胞子）を殺すのに適当であったことを確認する。それゆえ、生物学的インジケータが増殖しないことは、医療デバイス装填物が無菌であることをあるレベルで保証する。
【０００４】
特定の滅菌処理に生物学的インジケータが耐性であることは、使用される胞子および生物学的インジケータ（例えば、ＳＣＢＩまたはプロセスチャレンジデバイス中のＳＣＢＩの構成の両方により決定される。それゆえ、耐性を変えるには、胞子形成方法を変える必要があるか、または、生物学的インジケータの新しい物理的構成が開発される必要がある。異なる滅菌処理に使用される異なる生物学的インジケータのための様々な胞子形成方法を持つことは、製造的視点からは好ましくない。生物学的インジケータの新しい物理的構成を設計することは費用がかかり得る。例えば、新しい型が必要だからである。それゆえ、単純な方法で既存の生物学的インジケータの耐性を変えることができることが望ましい。
【０００５】
揮発性過酸化水素およびその他の酸化的滅菌プロセスは、胞子のような耐性の生物さえも殺すのに非常に効果的である。これは、病院にとって有益である。多くの熱感受性医療デバイスを揮発性過酸化水素（ＶＨＰ）および他の酸化的滅菌剤を用いた滅菌装置により処理することを可能にするからである。しかしながら、そのような酸化的滅菌剤に由来する迅速な殺菌は、滅菌サイクル中に非常に遠くに効果的にモニターする生物学的インジケータを開発することを困難にする。すなわち、従来の生物学的インジケータが酸化的滅菌剤の滅菌プロセス中で使用されるとき、該生物学的インジケータ中の該生物は非常に迅速に殺されるため、酸化的滅菌剤の効果的な量が、インジケータがよりゆっくりと殺菌される場合のように医療デバイス装填物の全ての部分に対して効果的なレベルに達して維持されているかが、やや不確かである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
それゆえ、酸化的滅菌剤による生物学的インジケータの早すぎる殺菌の未解決の課題に対する解決のニーズが当面存在した。本発明はこの課題に対処することを意図している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
この開示中に記載された発明概念は、生物学的インジケータに対する化学添加物の使用を含む。ここで、化学添加物は、揮発性過酸化水素、エチレンオキサイドおよびオゾンのような酸化的滅菌剤に曝露されると胞子の殺菌速度を遅くさせる。本発明において、胞子は従来どおり繁殖され、集菌されるが、胞子を生物学的インジケータに接種する前に、胞子は化学溶液に再懸濁される（使用濃度で）。化学溶液は、酸化的滅菌剤（例えば、過酸化水素、エチレンオキサイドおよびオゾン）の作用を阻害するかまたは酸化的滅菌剤を非反応性成分に破壊するかもしくは分解する少なくとも１つの化学物質（例えば、遷移金属）を含む。
【０００８】
本発明の目的のために、化学添加物の作用は、（ａ）酸化的滅菌剤の作用の阻害（これは、複合体形成を含み得る）、および、（ｂ）酸化的滅菌剤の破壊または分解（これは、触媒的分解および／または化学的中和反応を含み得る）の１つまたはそれ以上を含み得る。これらの添加剤は、一般に、酸化的滅菌剤と反応する（および、反応または反応性のような類似した用語）と言われる。それゆえ、用語「酸化的滅菌剤と反応性」とは、本発明では、生物学的インジケータ中の胞子の殺菌速度を遅くさせるいかなる作用も含むと考えられる。特に、酸化的滅菌剤の作用の阻害ならびに分解および／または中和の両方を含む。
【０００９】
それゆえ、本発明の実施形態に従い、酸化的滅菌剤のための滅菌インジケータが提供され、当該滅菌インジケータは、
１つまたはそれ以上の微生物種の胞子を含む第１の区画であって、該胞子は、酸化的滅菌剤と反応性である遷移金属イオンを含む化合物で前処理されており、該化合物を含む、第１の区画；
増殖培地を含む第２の区画であって、該滅菌インジケータが酸化的滅菌剤に曝露された後の培養のために該第２の区画の内容物と該第１の区画の内容物とを合わせるように適合された、第２の区画；および
増殖培地中に入れられ、そして該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後の該胞子の生存性を指示するように選択された薬剤；
を含む。
【００１０】
１つの実施形態において、当該１つまたはそれ以上の微生物種は、ゲオバチルス・ステアロサーモフィラス（Geobacillus stearothermophilus）およびバチルス・アトロファエウス（Bacillus atrophaeus）の１つまたは両方を胞子の形態で含む。
【００１１】
１つの実施形態において、当該薬剤は、色変化、濁度変化、蛍光発光または電気的に検出可能な反応の１つまたはそれ以上の手段によって当該胞子の生存性を方法により示す。
【００１２】
１つの実施形態において、当該薬剤はｐＨインジケータである。１つの実施形態では、当該ｐＨインジケータは、ブリリアントグリーン、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、クレゾールレッド、メチレンブルー、ニュートラルレッド、フェノールレッド、レザズリン、またはチモールブルーを含む。
【００１３】
１つの実施形態において、当該薬剤は蛍光インジケータである。１つの実施形態において、当該蛍光インジケータは色シフト蛍光タンパク質である。
【００１４】
１つの実施形態において、当該薬剤は、検出可能な電気的信号を提供するように適合された少なくとも２つの電極を含む。
【００１５】
１つの実施形態において、当該薬剤はテトラゾリウム塩を含む。
【００１６】
１つの実施形態において、当該遷移金属イオンは、鉄、銅、マンガン、チタン、亜鉛、バナジウム、銀、白金、ニッケル、モリブデン、コバルトおよびクロムの１つまたはそれ以上を含む。
【００１７】
１つの実施形態において、当該遷移金属イオンは、Ｋ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］またはＦｅ７（ＣＮ）１８である。フェロシアン化カリウムは、通常、水和水を有し、Ｋ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］・３Ｈ２Ｏで表され得る。なお、プルシアンブルーはまた、式［Ｆｅ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］３］によっても特定され得、これはＦｅ７（ＣＮ）１８と実験的に同一である。なお、プルシアンブルーの理想式はＦｅ７（ＣＮ）１８であるが、プルシアンブルーは、通常、水和水を有する。１つの実施形態において、プルシアンブルーは、式Ｆｅ７（ＣＮ）１８・ｘＨ２Ｏ（ここでｘは、通常１４〜１６である）を有する。プルシアンブルーは水に溶けないので、通常、非常に細かいコロイド状の分散物として用いられる。
【００１８】
１つの実施形態において、当該酸化的滅菌剤は、過酸化水素およびオゾンの１つまたはそれ以上を含む。
【００１９】
１つの実施形態において、本発明はさらに、酸化的滅菌剤を使用する滅菌プロセスの効力を判定する方法を提供し、これは、
先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータを提供する工程；
該滅菌インジケータおよび滅菌されるべき１つまたはそれ以上の品目を酸化的滅菌剤に曝露する工程；および
培養された増殖培地の検査により、滅菌が効果的であったかどうかを判定する工程；
を含む。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
蒸気状態の過酸化水素が、微生物の殺菌に非常に効果的であるが、この殺菌の有効性が、サイクルの重要な部分をモニターする生物学的インジケータを伝統的な方法で設計および開発することを困難にしている。生物学的インジケータの固有の耐性を増加させる効果的な手段は、活性な滅菌剤の作用を阻害するか、活性な滅菌剤を非反応性成分に破壊する成分を添加することである。
【００２１】
溶液中の添加物の濃度は、効果的に滅菌サイクルのより多くをモニターするように生物学的インジケータの耐性を合わせるかまたは調整するために変化させ得る。生物学的インジケータは、（特に揮発性過酸化水素のような酸化的化学物質において）急速に殺菌され、通常、滅菌サイクルのまさに最初の数分（または、いくつかの従来の製品においては数秒）モニターするのみとなる。本発明は、滅菌のちょうど初期の数分または数秒よりも当該サイクルのより多くをモニターする生物学的インジケータを有益に提供する。
【００２２】
酸化的化学物質は、ある反応性化学物質の存在下で非反応性成分に分解され得る。例えば、揮発性過酸化水素は、鉄、銅、ニッケルおよびマンガンのようなほとんどの遷移金属の存在下で分解することがわかった。これらの金属を含む物質が揮発性過酸化水素滅菌剤を通して処理されるとき、これらの物質近辺の過酸化物の濃度が過酸化水素の非反応性成分への分解のために減少することがわかった。本発明は、揮発性過酸化水素のような酸化的滅菌剤をモニターするために使用する生物学的インジケータ中の殺菌速度を遅くするためにこの発見を利用する。
【００２３】
本発明に従って、鉄、銅、ニッケルおよびマンガン化合物を含む遷移金属試薬は、酸化的滅菌剤と反応し、酸化的滅菌プロセスに使用される滅菌インジケータに使用される生物学的インジケータに対する酸化的滅菌剤の効果を阻害するために使用される。鉄化合物は過酸化水素を非反応性成分に分解することがわかった。例えば、２つの好ましい鉄化合物は、フェリシアン化カリウムおよびプルシアンブルーである。フェリシアン化カリウムは、水に可溶であり、プルシアンブルーは、水に可溶ではないが水中で細かいコロイド状の分散物を形成する。
【００２４】
本発明の１つの実施形態において、酸化的滅菌剤のための滅菌インジケータが提供され、これは、１つまたはそれ以上の微生物種の胞子を含む第１の区画であって、ここで、胞子は、酸化的滅菌剤と反応性である遷移金属イオンを含む化合物で前処理され、それを含む第１の区画；増殖培地を含む第２の区画であって、滅菌インジケータが酸化的滅菌剤に曝露された後の培養のために第２の区画の内容物と第１の区画の内容物とを合わせるように適合された、第２の区画；および増殖培地中に入れられ、そして滅菌インジケータが酸化的滅菌剤に曝露された後の胞子の生存性を示すように選択された薬剤を含む。
【００２５】
第１および第２の区画は、増殖培地を保持するように適合されたキャップのついたバイアル、およびその中に胞子が配置できる容器のような、任意の適切な従来の滅菌インジケータデバイスであってもよい。胞子は直接容器内に入れられるか、または担体上に置かれ、その後担体内に入れられてもよい。１つのそのような適切なバイアルが米国特許公開公報ＵＳ２０１０／００８１１６５に開示され、それはさらなる詳細について参考にされ得る。ＵＳ２０１０／００８１１６５は、バイアルの構成に関するその教示のために参照により本明細書に援用される。他の適切な滅菌インジケータは担体および支持体を含み、生物学的インジケータが担体に支持されている。１つのそのような適切な担体および支持体が、米国特許出願公開番号２０１２／０１９６３５５号に開示され、それはさらなる詳細について参考にされ得る。ＵＳ２０１２／０１９６３５５は、担体、支持体および生物学的インジケータの構成に関するその教示のために参照により本明細書に援用される。２つの区画（１つは生物学的インジケータを含み、かつ１つは増殖培地を含む）を有する他の適した滅菌インジケータは、当業者により本発明に使用するために適切に選択され得る。
【００２６】
上述のように、１つの実施形態では、１つまたはそれ以上の微生物種は、ゲオバチルス・ステアロサーモフィラスおよびバチルス・アトロファエウスの１つまたは両方を胞子の形態で含む。これら２つの微生物は、生物学的インジケータにおいて一般的に使用される。ゲオバチルス・ステアロサーモフィラスは、揮発性過酸化水素と共により一般的に使用され、そしてバチルス・アトロファエウスは、エチレンオキサイド滅菌剤のためにより一般的に使用される。
【００２７】
１つの実施形態では、薬剤は、色変化、濁度変化、蛍光発光または電気的に検出可能な反応の１つまたはそれ以上の手段により胞子の生存性を示す。薬剤は当業者により適切に選択され得る。一般に、薬剤は、任意の適切な薬剤であり得る。本発明の重要な特徴は、胞子の死滅を遅延させる能力であり、インジケータは、胞子が全く死滅しなかったときの最悪のケースのシナリオを単に示すためのものである。次の薬剤が適切と考えられるが、当業者により理解されるようにさらなる薬剤も代わりに使用され得る。
【００２８】
１つの実施形態において、薬剤は、ｐＨインジケータである。１つの実施形態において、ｐＨインジケータは、ブリリアントグリーン、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、クレゾールレッド、メチレンブルー、ニュートラルレッド、フェノールレッド、レサズリン、またはチモールブルーを含む。１つの実施形態において、ｐＨインジケータはブロモクレゾールパープルであり、他の実施形態では、ｐＨインジケータはフェノールレッドである。
【００２９】
１つの実施形態において、薬剤は、蛍光インジケータである。１つの実施形態において、蛍光インジケータは、色シフト蛍光タンパク質である。このような色シフト蛍光タンパク質は、当該技術分野において知られている。例えば、Macmillanの「Color-shifting fluorescent roteins highlight biology,」 Vanderbilt University Medical Center Reporter, 2009を参照。また、例えば、Subachらの、「Monomeric fluorescent timers that change color from blue to red report on cellular trafficking」, Nature Chemical Biology 5, 118 - 126 (2009)およびTerskikhらの「『Fluorescent Timer』: Protein That Changes Color with Time」, Science, Vol. 290 no. 5496 pp. 1585-1588 (2000)を参照。他の蛍光インジケータは、当業者により適切に選択され得る。
【００３０】
１つの実施形態において、薬剤は、検出可能な電気的信号を提供するように適合された少なくとも２つの電極を含む。検出可能な電気的信号は、例えば、COUPLED ENZYME-BASED METHOD FOR ELECTRONIC MONITORING OF BIOLOGICAL INDICATORの名称で２０１３年３月１５日に出願された米国出願番号１３／８３２，１５８、または、NON-ENZYME BASED DETECTION METHOD FOR ELECTRONIC MONITORING OF BIOLOGICAL INDICATORの名称で、２０１３年３月１５日に出願された米国出願番号１３／８３６，７８７のいずれかに開示されているような、２つまたはそれ以上の電極を有する細片により検出され得る。２つ以上の電極は、電気的信号を検出に使用するために適切に選択され得る。
【００３１】
１つの実施形態において、薬剤は、テトラゾリウム塩を含む。適切なテトラゾリウム塩としては、例えば、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル（２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）、ヨードニトロテトラゾリウム塩化物（ＩＮＴ）、３，３−［（フェニルアミノ）カルボニル］−３，４−テトラゾリウム−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸ナトリウム水和物（ＮＴＴ）、および４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ］−１，３−ベンゼンジスルホネート（ＷＳＴ−１）が挙げられる。当該技術分野において知られているように、代謝的に活性な細胞の酵素によるテトラゾリウム塩の開裂は、ホルマザン結晶のような検出可能な産物の形成につながる。もしこれらのホルマザン塩が水溶性であれば、比色測定が、アッセイの終了時に上清を用いて直接になされ得る。もしホルマザン塩が水溶性でなければ、光吸収測定が行われ得る前に結晶の溶解が実施されなければならない。本発明のために、水溶性ホルマザン塩が好ましい。
【００３２】
１つの実施形態において、遷移金属イオンは、鉄、銅、マンガン、チタン、亜鉛、バナジウム、銀、白金、ニッケル、モリブデン、コバルト、およびクロムの１つまたはそれ以上を含む。任意の適切な遷移金属試薬も使用され得る。１つの実施形態において、遷移金属試薬は、鉄、銅、ニッケルまたはマンガン化合物の１つまたはそれ以上の組合せである。鉄化合物は、特に、過酸化水素を不活性化するのに使用するために効果的である。銅化合物は、エチレンオキサイドを不活性化するのに使用するために効果的である。鉄およびマンガン化合物は、オゾンを不活性化するのに使用するために効果的である。本発明で使用されるもののような酸化滅菌剤（oxidizing sterilants）と反応することが知られている他の遷移金属化合物は、当業者によって本発明とともに使用するために適切に選択され得る。
【００３３】
１つの実施形態において、該遷移金属イオンは、フェロシアン化カリウム、Ｋ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］の形態の鉄またはプルシアンブルー、Ｆｅ７（ＣＮ）１８の形態の鉄である。フェロシアン化カリウムは、通常、水和水を有し、Ｋ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］・３Ｈ２Ｏとして表され得る。プルシアンブルーはまた、式［Ｆｅ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］３］により特定され得、これはＦｅ７（ＣＮ）１８と実験的に同じである。なお、プルシアンブルーの理想式はＦｅ７（ＣＮ）１８であるが、プルシアンブルーは、通常、水和水を有する。１つの実施形態では、プルシアンブルーは、式Ｆｅ７（ＣＮ）１８・ｘＨ２Ｏ（ここでｘは、通常１４〜１６である）を有する。プルシアンブルーは、水に溶けないため、通常、非常に細かいコロイド状の分散物として用いられる。
【００３４】
１つの実施形態では、酸化的滅菌剤は、過酸化水素およびオゾンの１つまたはそれ以上を含む。
【００３５】
１つの実施形態では、本発明はさらに、酸化的滅菌剤を使用して滅菌プロセスの効果を判定する方法を提供し、この方法は、
先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータを提供する工程、
該滅菌インジケータおよび１つまたはそれ以上の滅菌されるべき品目を酸化的滅菌剤に曝露する工程、および
続く増殖およびｐＨインジケータの色変化により有効性を判定する工程、
を含む。
【００３６】
当業者によって理解されるように、本明細書に記載されている滅菌プロセスの基礎は、酸化的滅菌剤と反応性である遷移金属イオンを含む化合物で前処理され、該遷移金属イオンを含む１つまたはそれ以上の微生物種の胞子の提供を除いては、当該技術分野で知られているものと実質的に同様である。この胞子の前処理は、酸化的滅菌剤の作用に対する一時的な「保護」を提供するものであり、これは、滅菌インジケータに対する酸化的滅菌剤の効果を「遅くする」ためであり、けれども滅菌プロセス中の処理下にある装填物に対する酸化的滅菌剤の効果は遅くしない。上述のように、本発明は、滅菌インジケータ中の微生物の胞子全てを死滅させるために必要とされる時間を滅菌プロセス中によりさらに延ばすことにより、滅菌処理の効力のよりよい判断を提供することを意図している。それゆえ、本発明は、酸化的滅菌剤が従来の滅菌インジケータに作用する速さを相殺でき、それにより、それらをより向上させる。
【実施例】
【００３７】
生物学的インジケータにおいて使用するための胞子の再懸濁液において、これらの化学物質の両方を用いた試験結果を、次の実施例において提供する。
【００３８】
（実施例１：フェリシアン化カリウム中に再懸濁したゲオバチルス・ステアロサーモフィラスの胞子）
ゲオバチルス・ステアロサーモフィラスの胞子を、１ｍｌあたり１Ｅ８（１×１０８胞子／ミリリットル）の胞子濃度を有する試料中に、０．５μｇ／ｍｌ〜２００μｇ／ｍｌの範囲のフェリシアン化カリウム濃度で再懸濁する。ＳＣＢＩバイアルに、試料懸濁液の各々の２０μｌ（約２百万胞子）を接種し、少なくとも終夜風乾する。その後、該ＳＣＢＩに蓋をし、以下の表１に示された時間の間、５９％過酸化水素の０．８ｇ注入を用いてＶＨＰ  ＢＩＥＲベッセル中で処理する。表１は、試験した試料についての増殖（grow out）結果を示す。添加物を含むＳＣＢＩの増殖結果を対照と比較すると、添加物が生物学的インジケータシステムの耐性を顕著に増加させたことが実証される。
【００３９】
【表１】
2016511056.tif 000002
【００４０】
表１のデータ中に見られ得るように、インジケータ胞子の半分またはそれ以上が対照セット中で、わずか０．７５分で死滅し、１６分後には生残物は全く無い。しかしながら、わずか１００μｇ／ｍｌのフェリシアン化物を添加すると、曝露された胞子の半分が全１６分の曝露を生き残る。それに応じて、より少ない量（０．５〜５μｇ／ｍｌ）が、対照セットについて観察された１分間の曝露での殺菌率（２１／３８）を５０％未満に減少させるために必要とされる。フェリシアン化物の試験された量のいずれも、フェリシアン化物で処理されていないセットにおいては半分が殺菌されるにもかかわらず、０．７５分で、全ての胞子殺菌を除去するのに十分である。
【００４１】
（実施例２：プルシアンブルーに再懸濁されたゲオバチルス・ステアロサーモフィラスの胞子）
ゲオバチルス・ステアロサーモフィラスの胞子を、０．５μｇ／ｍｌ〜１２３ｍｇ／ｍｌの範囲のプルシアンブルー濃度で、１０８／ｍｌの胞子濃度で再懸濁する。ＳＣＢＩバイアルに、適切な懸濁液の２０μｌ（約２百万胞子）を接種し、少なくとも終夜風乾する。その後ＳＣＢＩに蓋をし、以下に列挙した時間の間、５９％過酸化水素の０．８ｇ注入を用いてＶＨＰ  ＢＩＥＲベッセル中で処理する。表２は、試験した試料についての増殖結果を示す。添加物を含むＳＣＢＩの増殖結果を対照と比較すると、添加物がシステムの耐性を顕著に向上させたことが実証される。
【００４２】
【表２】
2016511056.tif 000003
【００４３】
表２からわかるように、フェリシアン化カリウムで得られた結果（表１）と比較して、プルシアンブルーについて匹敵する結果が得られる。このことは、これらの鉄含有化合物は、揮発性過酸化水素の殺菌速度を遅延させるのに効果的で、それゆえ、生残性（および処理された胞子が性能をモニターする能力）を標準的な過酸化水素サイクル中にずっとよりさらに延ばすことを示す。
【００４４】
上で例示された２つの薬剤（フェリシアン化カリウムおよびプルシアンブルー）は、好ましいけれども、これらの化合物だけが酸化滅菌剤を分解するために使用され得るものであるわけではない。
【００４５】
本発明の重要な利点は、胞子を再懸濁するために使用される溶液中の添加物の濃度のみを変えることにより、酸化的滅菌剤に対する生物学的インジケータの耐性を「合わせる」または「セットする」能力である。これは、ＳＣＢＩコンテナの耐性特徴を物理的に変化させるための異なる胞子耐性特性／プロファイルまたは異なるカビ（molds）を達成するのに必要な多数の胞子形成方法の必要性を無くする。本発明において、酸化的滅菌剤を胞子に対して非反応性である亜成分に分解する生体適合性化学添加物が、生物学的インジケータの耐性を増加させ、延長し、そして改変するために使用される。これらの改変は濃度依存的であるから、これは、広い範囲の酸化的滅菌サイクル条件にわたって使用され得る繁殖後胞子作物（post propagation spore crops）の先例のない制御を提供する。
【００４６】
本発明の原理が、ある特定の実施形態に関連して説明されたが、これらの実施形態は例示の目的で提供される。これらの様々な改変が、本明細書を読んだ当業者に明らかになるであろうことが理解されるべきである。それゆえ、本明細書に開示された発明は、添付の請求項の範囲中に入るものとして、それらの改変もカバーすることを意図していることが理解されるべきである。本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定される。
【手続補正書】
【提出日】平成27年3月19日(2015.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化的滅菌剤のための滅菌インジケータであって、
１つまたはそれ以上の微生物種の胞子を含む第１の区画；
増殖培地を含む第２の区画であって、該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後の培養のために該第１の区画および該第２の区画の合わされた内容物を含むように構成された、第２の区画；および
増殖培地中に入れられ、そして該滅菌インジケータが該酸化的滅菌剤に曝露された後、該胞子の生存性を指示するために選択された薬剤；
を含み、
該第１の区画中の該胞子が、酸化的滅菌剤と反応性である遷移金属を含む化合物で前処理されており、かつ該胞子が該遷移金属イオンを含むことを特徴とする、
滅菌インジケータ。
【請求項２】
前記１つまたはそれ以上の微生物種が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィラスおよびバチルス・アトロファエウスの１または両方を含むことを特徴とする、請求項１に記載の滅菌インジケータ。
【請求項３】
前記薬剤が、生存胞子の存在下での色変化または蛍光発光の１つまたはそれ以上の手段により前記胞子の生存性を示すことを特徴とする、請求項１または２のいずれかに記載の滅菌インジケータ。
【請求項４】
前記薬剤がｐＨインジケータであることを特徴とする、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項５】
前記ｐＨインジケータが、ブリリアントグリーン、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、クレゾールレッド、メチレンブルー、ニュートラルレッド、フェノールレッド、レサズリン、またはチモールブルーを含むことを特徴とする、請求項４に記載の滅菌インジケータ。
【請求項６】
前記薬剤が蛍光インジケータであることを特徴とする、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項７】
前記蛍光インジケータが色シフト蛍光タンパク質であることを特徴とする、請求項６に記載の滅菌インジケータ。
【請求項８】
前記薬剤が、検出可能な電気的信号を供給するように適合された少なくとも２つの電極を含むことを特徴とする、請求項１に記載の滅菌インジケータ。
【請求項９】
前記薬剤がテトラゾリウム塩を含むことを特徴とする、請求項３に記載の滅菌インジケータ。
【請求項１０】
前記遷移金属イオンが、鉄、銅、マンガン、チタン、亜鉛、バナジウム、銀、白金、ニッケル、モリブデン、コバルトおよびクロムの１つまたはそれ以上を含むことを特徴とする、先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータ。
【請求項１１】
前記遷移金属イオンが、Ｋ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］またはＦｅ７（ＣＮ）１８中の鉄であることを特徴とする、請求項８に記載の滅菌インジケータ。
【請求項１２】
酸化的滅菌剤を用いた滅菌プロセスの効力を判定する方法であって、
先行する請求項のいずれかに記載の滅菌インジケータを提供する工程；
該滅菌インジケータおよび滅菌されるべき１つまたはそれ以上の物品を酸化的滅菌剤に曝露する工程；および
培養した増殖培地の検査により、該滅菌が効果的であったかどうかを判定する工程；
を含む、方法。
【請求項１３】
前記酸化的滅菌剤が、過酸化水素、エチレンオキサイド、およびオゾンの１つまたはそれ以上を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【国際調査報告】
2016511056.tif 000004
2016511056.tif 000005