(57)【要約】  本発明は炎症性疾患（例えば中等度から重度の関節リウマチ）及び／又は骨量減少等の疾患の治療用として、Ｊａｋ２キナーゼに対する阻害活性が軽微であるＪＡＫ１キナーゼ選択的阻害剤の単独使用又はメトトレキサート等のＤＭＡＲＤ（疾患修飾性抗リウマチ薬）との併用に関する。本発明はその医薬組成物、投与製剤、投与経路及び投与スケジュールも提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおけるヤヌスキナーゼ１（Ｊａｋ１）の選択的阻害方法であって、前記ヒトに有効量の遊離塩基形態の化合物を投与する段階を含み、
前記ヒトにおいてＪａｋ１活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害され、Ｊａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満又は５％未満が阻害され、
前記化合物が（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである、前記方法。
【請求項２】
前記ヒトにおいてＪａｋ１活性の５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超、９９％超が阻害される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒトが、Ｊａｋ１活性の阻害により治療可能な病態の治療を必要とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記病態が、炎症性疾患／障害又は自己免疫疾患／障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記病態が、関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、糖尿病性腎症、ドライアイ症候群、シェーグレン症候群、円形脱毛症，白斑又はアトピー性皮膚炎である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記クローン病が、成人における中等度から重度の活動性クローン病（ＣＤ）である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記成人が、ＣＤであると新規に診断されているか、又は第一選択療法もしくは抗ＴＮＦα療法に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記成人が、アザチオプリン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、アミノサリチル酸塩、スルファサラジン、メサラミン、コルチコステロイド、プレドニゾン、プレドニゾン等価物、ブデソニド、プロビオティック、メトトレキサート、シクロスポリン、タクロリムス、メトロニダゾール、シプロフロキサシン、レフルノミド、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、トファシチニブ、バリシチニブ、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴルもしくはＪＡＫ阻害剤に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＲＡが、成人における中等度から重度の活動性ＲＡである、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記成人におけるＲＡに伴う骨びらんを抑制する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記成人が、ＲＡであると新規に診断されているか、経口もしくは生物学的ＤＭＡＲＤに効果不十分であるか、又はメトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、トファシチニブ、ゴリムマブ、バリシチニブ、エタネルセプト、インフリキシマブもしくはアダリムマブに対する効果減弱もしくはその許容できない毒性により治療を中断している、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記方法が、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数及び／又はｉＮＫＴ細胞数を実質的に減少させない、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記方法が、前記ヒトにおける赤血球造血、顆粒球／単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）シグナル伝達、又は微生物感染に反応する緊急骨髄造血を実質的に阻害しない、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ヒトが、貧血をもつか、又は全血中ヘモグロビン濃度が１２ｇ／ｄＬ未満、１１ｇ／ｄＬ未満、１０ｇ／ｄＬ未満、９ｇ／ｄＬ未満、８ｇ／ｄＬ未満、７ｇ／ｄＬ未満、６ｇ／ｄＬ未満又は５ｇ／ｄＬ未満である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＡＵＣ０−２４が前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬの実質的定常レベルに達するまで前記化合物を前記ヒトに投与する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物を前記ヒトに等量ずつ１日２回（ＢＩＤ）投与する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物の遊離塩基換算量で約３〜２４ｍｇずつ１日２回前記化合物を前記ヒトに投与する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＡＵＣ０−２４を治療期間にわたって実質的に同一レベルに維持する段階を更に含む、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記治療期間が、少なくとも１４日間である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
エキソビボ刺激ＩＬ−６依存性ＳＴＡＴ３リン酸化、エキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化及び／又は末梢ＮＫ細胞数を測定することによりＪａｋ１活性の阻害を測定する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＧＭ−ＣＳＦ依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を測定することによりＪａｋ２活性の阻害を測定する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
哺乳動物免疫系を調節するもの又は抗炎症剤である１種以上の他の薬剤を前記ヒトに投与する段階を更に含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記１種以上の他の薬剤が、アスピリン、アセトアミノフェン、アミノサリチル酸塩、シプロフロキサシン、コルチコステロイド、シクロスポリン、メトロニダゾール、プロビオティック、タクロリムス、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、プレドニゾロン、デキサメタゾン、抗炎症性ステロイド、メトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の免疫モジュレーターから構成される群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ヒトにおける自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療方法であって、前記方法は前記ヒトに有効量の遊離塩基形態の化合物を投与する段階を含み、
前記有効量が網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数を治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下の範囲で減少させ、
前記化合物が、（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである、前記方法。
【請求項２５】
ヒトにおける自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療方法であって、前記方法は前記ヒトに有効量の遊離塩基形態の化合物を投与する段階を含み、
前記有効量が前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４を実現し、
前記化合物が、（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである、前記方法。
【請求項２６】
前記ヒトにおいてＪａｋ１活性の５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超、９９％超が阻害される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害が関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、糖尿病性腎症、ドライアイ症候群、シェーグレン症候群、円形脱毛症、白斑又はアトピー性皮膚炎である、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記クローン病が、成人における中等度から重度の活動性クローン病（ＣＤ）である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記成人が、ＣＤであると新規に診断されているか、又は第一選択療法もしくは抗ＴＮＦα療法に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記成人が、アザチオプリン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、アミノサリチル酸塩、スルファサラジン、メサラミン、コルチコステロイド、プレドニゾン、プレドニゾン等価物、ブデソニド、プロビオティック、メトトレキサート、シクロスポリン、タクロリムス、メトロニダゾール、シプロフロキサシン、レフルノミド、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、トファシチニブ、バリシチニブ、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴルもしくはＪＡＫ阻害剤に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＲＡが、成人における中等度から重度の活動性ＲＡである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記成人におけるＲＡに伴う骨びらんを抑制する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記成人が、ＲＡであると新規に診断されているか、ＤＭＡＲＤに効果不十分であるか、又はメトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、トファシチニブ、ゴリムマブ、バリシチニブ、エタネルセプト、インフリキシマブもしくはアダリムマブに対する効果減弱もしくはその許容できない毒性により治療を中断している、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記方法が、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数及び／又はｉＮＫＴ細胞数を実質的に減少させない、請求項２４から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記方法が、前記ヒトにおける赤血球造血、顆粒球／単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）シグナル伝達、又は微生物感染に反応する緊急骨髄造血を実質的に阻害しない、請求項２４から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
ＡＵＣ０−２４が、前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬの実質的定常レベルに達するまで前記化合物を前記ヒトに投与する、請求項２４から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記化合物を前記ヒトに等量ずつ１日２回（ＢＩＤ）投与する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記化合物の遊離塩基換算量で約３〜２４ｍｇずつ１日２回前記化合物を前記ヒトに投与する、請求項２４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＡＵＣ０−２４を治療期間にわたって実質的に同一レベルに維持する段階を更に含む、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記治療期間が、少なくとも１４日間である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
エキソビボ刺激ＩＬ−６依存性ＳＴＡＴ３リン酸化、エキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化及び／又は末梢ＮＫ細胞数を測定することによりＪａｋ１活性の阻害を測定する、請求項２６から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
ＧＭ−ＣＳＦ依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を測定することによりＪａｋ２活性の阻害を測定する、請求項２６から４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
免疫系を調節するもの又は抗炎症剤である１種以上の他の薬剤を前記ヒトに投与する段階を更に含む、請求項２４から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記１種以上の他の薬剤が、アスピリン、アセトアミノフェン、アミノサリチル酸塩、シプロフロキサシン、コルチコステロイド、シクロスポリン、メトロニダゾール、プロビオティック、タクロリムス、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、プレドニゾロン、デキサメタゾン、抗炎症性ステロイド、メトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の免疫モジュレーターから構成される群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
（１）前記化合物を投与したが、効果又は治療有効性が不十分又は至適以下であるヒト対象を同定する段階と、
（２）前記ヒト対象の網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を測定し、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の減少が夫々網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の治療前ベースライン値に対して３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下又は１０％以下であるならば、前記ヒト対象は用量増加の候補であると判断する段階と；
（３）用量を増加して前記化合物を前記候補に投与する段階
を更に含む、請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
所望の転帰を達成するまで段階（１）〜（３）を繰返す段階を更に含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤であり、前記医薬組成物が（１）単位用量の遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドと、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬのＡＵＣ０−２４が得られる、前記医薬製剤。
【請求項４８】
前記単位用量が、カプセル剤である、請求項４７に記載の医薬製剤。
【請求項４９】
前記単位用量が、前記化合物の遊離塩基換算量で０．５ｍｇ、１ｍｇ、３ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１２ｍｇ、１８ｍｇ又は２４ｍｇである、請求項４７に記載の医薬製剤。
【請求項５０】
前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害が、成人におけるクローン病である、請求項４７から４９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５１】
前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害が成人における関節リウマチ（ＲＡ）である、請求項４７から４９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５２】
前記医薬的に許容される賦形剤が、微結晶セルロース、二塩基性リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース又はその混合物を含む、請求項４７から５１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５３】
経口、局所、経皮、管腔内又は眼内投与用に製剤化された、請求項４７から５２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
タンパク質キナーゼは多様な細胞プロセスの調節と細胞機能の維持に中心的役割を果たすタンパク質の大きなファミリーである。これらのキナーゼの一部を構成する非限定的な例としては、ヤヌスキナーゼファミリー（Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３及びＴｙｋ２）、融合キナーゼ（例えばＢＣＲ−Ａｂｌ）、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ及びＳｙｋ等の非受容体型チロシンキナーゼ；血小板由来増殖因子受容体キナーゼ（ＰＤＧＦ−Ｒ）、幹細胞因子の受容体キナーゼであるｃ−ｋｉｔ、肝細胞増殖因子受容体であるｃ−Ｍｅｔ、及び線維芽細胞増殖因子受容体であるＦＧＦＲ３等の受容体型チロシンキナーゼ；並びにｂ−ＲＡＦ、分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（例えばＭＫＫ６）及びＳＡＰＫ２β等のセリン／スレオニンキナーゼが挙げられる。良性及び悪性増殖性疾患や、免疫系及び神経系の不適切な活性化に起因する疾患を含む多くの疾患状態では異常なキナーゼ活性が確認されている。本発明の化合物は１種以上のタンパク質キナーゼの活性を他の類縁キナーゼに対して選択的に阻害するので、これらの類縁キナーゼの阻害に伴う望ましくない副作用を避けながら、選択的に阻害されるキナーゼが介在する疾患の治療に有用であると予想される。
【０００２】
特に、ＪａｋはＪａｋ１、２、３及びチロシンキナーゼ２（Ｔｙｋ２）の４種の公知ファミリーメンバーを含む。これらの細胞質チロシンキナーゼは共通γ鎖受容体や糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０）膜貫通タンパク質等の膜サイトカイン受容体と会合する（Ｍｕｒｒａｙ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８（５）：２６２３−２６２９，２００７）。ほぼ４０種のサイトカイン受容体がこれらの４種のＪａｋとそれらの下流の基質である７種のシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）ファミリーメンバーを介してシグナル伝達する（Ｇｈｏｒｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２２８（１）：２７３−２８７，２００９）。サイトカインはその受容体と結合すると、トランス自己リン酸化によりＪａｋ活性化を開始する。次に、Ｊａｋはサイトカイン受容体残基をリン酸化し、ＳＴＡＴ因子や他のレギュレーター等のタンパク質を含む肉腫ホモロジー２（ＳＨ２）の結合部位を形成し、その後、これらのタンパク質はＪａｋリン酸化により活性化される。活性化されたＳＴＡＴは核内に移行し、生存因子、サイトカイン、ケモカイン及び白血球細胞内トラフィッキングを助長する分子の発現を開始する（Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８２（２８）：２００５９−２００６３，２００７）。Ｊａｋ活性化はホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）とタンパク質キナーゼＢ介在経路を介して細胞増殖も生じる。
【０００３】
Ｊａｋ３とＪａｋ１は共通γ鎖サイトカイン受容体複合体の成分であり、どちらを遮断しても、炎症性サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ）−２、４、７、９、１５及び２１によるシグナル伝達が阻害される（Ｇｈｏｒｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２８（１）：２７３−２８７，２００９）。一方、ＩＬ−６等の他の病理的に重要なサイトカインはＪａｋ１のみに依存する。従って、Ｊａｋ１を遮断すると、多くの炎症性サイトカインのシグナル伝達が阻害される（Ｇｕｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１４（７）：１４２１−１４２９，１９９５）。ＩＬ−６受容体中和抗体であるトシリズマブによりＲＡで臨床的有効性が認められている（Ｍａｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５４（９）：２８１７−２８２９，２００６）。
【０００４】
Ｊａｋ１とＪａｋ２を欠損するヒトについては記載されていない。Ｊａｋ１を欠損するマウスは周産期に死亡する（Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８２（２８）：２００５９−２００６３，２００７）。マウスのＪａｋ２欠損も致死性であり、Ｊａｋ２−／−胎児は赤血球造血不良により受胎後１２日〜１３日で死亡する（Ｎｅｕｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９３（３）：３９７−４０９，１９９８）。Ｊａｋ３欠損はヒトについて記載されており、生後数カ月で重症複合免疫不全症を発症し、体重増加不良、重度の再発性感染症、鵞口瘡及び下痢等の症状を伴う。Ｊａｋ３を欠損する乳幼児は循環Ｔ細胞及びＮＫ細胞が存在せず、Ｂ細胞機能に異常がある。Ｔｙｋ２欠損もヒトについて記載されており、抗微生物反応低下、血清ＩｇＥ高値及びアトピー性皮膚炎の症状を発現する（Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５（５）：７４５−７５５，２００６）。
【０００５】
Ｊａｋ１とＪａｋ２の高度の構造類似性（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８７（１）：２１９−２３２，２００９）により、文献はＪａｋ１阻害剤の大半がＪａｋ２も阻害すると示唆している（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ．ｐｒｅｓｓ  ｒｅｌｅａｓｅ，１０  Ｎｏｖ．２０１０；Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０２（５６４６）：８７５−８７８，２００３）。
【０００６】
関節リウマチ（ＲＡ）の治療では抗サイトカイン療法が標準的になっている。ヒトでは、Ｊａｋ１阻害がＲＡの徴候及び症状の治療に有効な治療法であることを示唆する証拠が増えつつある。Ｐｆｉｚｅｒ社のＪａｋ１／３阻害剤であるトファシチニブ（フェーズ３試験）（Ｋｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６０（７）：１８９５−１９０５，２００９；Ｒｉｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４（４）：５１３−５２６，２０１０）、Ｉｎｃｙｔｅ／Ｌｉｌｌｙ社のＪａｋ１／２阻害剤であるＩＮＣＢ−２８０５０／ＬＹ３００９１０４（フェーズ２ｂ）（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ．ｐｒｅｓｓ  ｒｅｌｅａｓｅ，１０  Ｎｏｖ  ２０１０）、又はＧａｌａｐａｇｏｓ社のＪａｋ１阻害剤であるＧＬＰ０６３４（フェーズ２ａ）（Ｇａｌａｐａｇｏｓ  ＮＶ  ｐｒｅｓｓ  ｒｅｌｅａｓｅ，２２  Ｎｏｖ  ２０１１）を投与した複数の臨床試験がこの疾患における統計的に有意な有効性を実証している。
【０００７】
Ｊａｋ１、Ｊａｋ２及びＪａｋ３の非選択的阻害剤であるトファシチニブはメトトレキサート（ＭＴＸ）に効果不十分又は不耐性の中等度から重度の活動性ＲＡの成人患者を適応とし、単剤療法での使用又はＭＴＸもしくは他の非生物学的ＤＭＡＲＤとの併用を米国及び世界中の他の国々で承認されている。ＲＡ患者を対象としてトファシチニブをプラセボと比較したフェーズ２及びフェーズ３試験からの安全性データ（Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４（３）：３３５−３４１，２０１２；Ｋｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４（４）：９７０−９８１，２０１２；Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４（３）：６１７−６２９，２０１２）によると、最も発生率の高い重大な有害反応は肺炎、蜂窩織炎、帯状疱疹及び尿路感染症を含む感染症であることが分かっている。また、結核（播種性結核の症例を含む）と、他の抗酸菌症、クリプトコッカス症、食道カンジダ症、ニューモシスチス症、複発性帯状疱疹、サイトメガロウイルス及びＢＫウイルス等の日和見感染症も報告されている。トファシチニブを投与した患者ではリンパ腫及び他の悪性腫瘍が確認されている。トファシチニブと免疫抑制薬を併用投与した腎移植患者ではエプスタイン・バーウイルス関連移植後リンパ増殖性疾患が高頻度で確認されている。トファシチニブを投与した患者では胃腸穿孔も報告されている。
【０００８】
また、好中球絶対数とヘモグロビンの用量相関的減少を含む臨床検査値異常が記載されている。更に、肝トランスアミナーゼ（アラニンアミノトランスフェラーゼ［ＡＬＴ］、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ［ＡＳＴ］）及び血清クレアチニンの若干の上昇と、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール及び総コレステロールの高値も報告されている。
【０００９】
ＲＡ患者におけるＶＸ−５０９（Ｊａｋ３の阻害剤）のフェーズ２試験も感染症の危険増加と脂質値の上昇を示している（Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６３：ＬＢ３，２０１１）。
【００１０】
経口投与による選択的Ｊａｋ１及びＪａｋ２阻害剤であるバリシチニブを２０１人の活動性ＲＡ患者で試験した５２週間非盲検長期延長フェーズ２ｂ試験によると、日和見感染症、結核症例又はリンパ腫は確認されなかった。臨床的に有意な臨床検査値異常は低頻度でしか確認されず（被験者各１人でＡＬＴ上昇、貧血、クレアチンキナーゼ［ＣＫ］上昇、汎血球減少症が報告された）、臨床検査値異常（ＡＬＴ上昇）により中断した被験者は１人であった。１人が死亡し、死因は心筋梗塞と推定された（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７１（Ｓｕｐｐｌ  ３）：１５２，２０１２；Ｇｅｎｏｖｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４（Ｓｕｐｐｌ  １０）：２４８７，２０１２；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，ａｂｓｔｒａｃｔ  ＯＰ００４７，ＥＵＬＡＲ  ２０１３，ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｌｅａｇｕｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ．２０１３  Ｊｕｎ  １２−１５；Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ）。
【００１１】
多数の治療選択肢があるように思われるが、多くのＲＡ患者は疾患活動性の実質的低下を得ることができない。初期の試験によると、Ｊａｋ遮断が疾患管理と寛解達成に有効であると思われるが、用量を制限するその忍容性と安全性の問題が少なくとも一因となり、第１世代のＪａｋ阻害剤（例えばトファシチニブとバリシチニブ）はその潜在能力を十分に発揮できていない。
【００１２】
具体的に言うと、第１世代のＪａｋ阻害剤であるトファシチニブとバリシチニブは夫々Ｊａｋ１／Ｊａｋ３及びＪａｋ１／Ｊａｋ２阻害剤として特徴付けられている（Ｆｒｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８４：５２９８−５３０７，２０１０；Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．（Ｌｏｎｄ．）７：４１，２０１０；及びＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ５２：ｉ４４−ｉ５５，２０１３）。当初の好結果にも拘わらず、これらの第１世代のＪａｋ阻害剤は用量を制限する忍容性の問題によりその潜在能力を十分に発揮できていない（Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４：３３５−３４１，２０１２；Ｒｉｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４：５１３−５２６，２０１０）。ＪＡＫは４０種を越える経路の調節に役割を果たすことが知られている（Ｍｕｒｒａｙ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８：２６２３−２６２９，２００７）。しかし、これらの２種類の化合物は他のキナーゼファミリーよりもＪＡＫに対する選択性が高いが、これらの阻害剤のＪＡＫファミリー内のキナーゼに対する選択性が最適であるとは言えない。例えば、ＲＡにおけるトファシチニブのフェーズＩＩ進行中に重度貧血の発生が用量制限因子となることが報告されている（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ  Ｂｒｏｃｈｕｒｅ．Ｉｎ  ＦＤＡ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｂｏａｒｄ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ），２０１２；Ｒｉｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４：５１３−５２６，２０１０）。更に、フェーズＩＩＩトファシチニブ試験では、潜在的にＮＫ細胞数の減少に続発するヘルペスウイルス感染症の増加が報告されている（Ｏ’Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７２（Ｓｕｐｐｌ  ２）：ｉｉ１１１−１１５，２０１３；Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ  Ｂｒｏｃｈｕｒｅ．Ｉｎ  ＦＤＡ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｂｏａｒｄ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ），２０１２）。これらの結果が夫々Ｊａｋ２とＪａｋ３を介するＥＰＯ及びＩＬ−１５シグナル伝達の阻害に起因すると考えるのは理にかなっている（Ｊｏｓｔ  ａｎｄ  Ａｌｔｆｅｌｄ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６３−１９４，２０１３；Ｋｅｎｎｅｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：７７１−７８０，２０００；及びＲｉｃｈｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５：１４６−１５５，２００５）。実際に、ＲＡに伴う貧血に治療介入できないため、治療反応を完全に成功させる機会が制限されていると思われる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｍｕｒｒａｙ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８（５）：２６２３−２６２９，２００７
【非特許文献２】Ｇｈｏｒｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２２８（１）：２７３−２８７，２００９
【非特許文献３】Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８２（２８）：２００５９−２００６３，２００７
【非特許文献４】Ｇｕｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１４（７）：１４２１−１４２９，１９９５
【非特許文献５】Ｍａｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５４（９）：２８１７−２８２９，２００６
【非特許文献６】Ｎｅｕｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９３（３）：３９７−４０９，１９９８
【非特許文献７】Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５（５）：７４５−７５５，２００６
【非特許文献８】Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８７（１）：２１９−２３２，２００９
【非特許文献９】Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ．ｐｒｅｓｓ  ｒｅｌｅａｓｅ，１０  Ｎｏｖ．２０１０
【非特許文献１０】Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０２（５６４６）：８７５−８７８，２００３
【非特許文献１１】Ｋｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６０（７）：１８９５−１９０５，２００９
【非特許文献１２】Ｒｉｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４（４）：５１３−５２６，２０１０
【非特許文献１３】Ｇａｌａｐａｇｏｓ  ＮＶ  ｐｒｅｓｓ  ｒｅｌｅａｓｅ，２２  Ｎｏｖ  ２０１１
【非特許文献１４】Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４（３）：３３５−３４１，２０１２
【非特許文献１５】Ｋｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４（４）：９７０−９８１，２０１２
【非特許文献１６】Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４（３）：６１７−６２９，２０１２
【非特許文献１７】Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６３：ＬＢ３，２０１１
【非特許文献１８】Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７１（Ｓｕｐｐｌ  ３）：１５２，２０１２
【非特許文献１９】Ｇｅｎｏｖｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６４（Ｓｕｐｐｌ  １０）：２４８７，２０１２
【非特許文献２０】Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，ａｂｓｔｒａｃｔ  ＯＰ００４７，ＥＵＬＡＲ  ２０１３，ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｌｅａｇｕｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ．２０１３  Ｊｕｎ  １２−１５；Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ
【非特許文献２１】Ｆｒｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８４：５２９８−５３０７，２０１０
【非特許文献２２】Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．（Ｌｏｎｄ．）７：４１，２０１０
【非特許文献２３】Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ５２：ｉ４４−ｉ５５，２０１３
【非特許文献２４】Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ  Ｂｒｏｃｈｕｒｅ．Ｉｎ  ＦＤＡ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｂｏａｒｄ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ），２０１２
【非特許文献２５】Ｏ’Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．７２（Ｓｕｐｐｌ  ２）：ｉｉ１１１−１１５，２０１３
【非特許文献２６】Ｊｏｓｔ  ａｎｄ  Ａｌｔｆｅｌｄ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６３−１９４，２０１３
【非特許文献２７】Ｋｅｎｎｅｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：７７１−７８０，２０００
【非特許文献２８】Ｒｉｃｈｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５：１４６−１５５，２００５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
従って、Ｊａｋ阻害剤を使用した現在の治療選択肢では未だ満たされていない医療ニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
化合物１は第２世代のＪａｋ阻害剤であり、Ｊａｋ１のＡＴＰ結合活性部位の外側では示差的な結合相互作用を生じる可能性があるが、Ｊａｋ２及び他の類縁Ｊａｋにはその可能性がないという構造予測を使用してＪａｋ１に対する選択性を高めるように設計されている。Ｊａｋ１とＪａｋ２及びＪａｋ３との間には僅かな差異があることが構造解析により明らかになり、化合物１はこの差異に基づいて設計され、同時に医薬品化学を使用して構造活性相関を解明するための仮説が立てられた。トファシチニブに比較して化合物１はＪａｋ３に対する効力が弱く、インビトロ酵素試験によるとＪａｋ１／Ｊａｋ２指数が顕著ではないが、有意に改善されている。化合物１の生化学的選択性は細胞選択性を多少改善させたが、Ｊａｋ依存性生理機能のインビボ薬理学的評価で意外にも実質的な相対的改善が認められた。健常ヒト対象に投与した場合、化合物１は有効曝露量でトファシチニブに比較してＮＫ細胞に及ぼす影響が小さい点を含めてラットで認められる作用と同様の薬力学的（ＰＤ）作用があり、その生化学的プロファイルが種間で類似していることが分かる。これらの特性から、化合物１は既存の薬剤に比較してＲＡ患者における副作用プロファイルが改善されると予想され、従って、初期の第２世代Ｊａｋ阻害剤の有用性を制限していた顕著な望ましくない副作用を誘発せずに用量増加とより高いレベルの有効性が可能になると思われる。
【００１６】
具体的には、数種のＪａｋ１及びＪａｋ２依存性細胞アッセイと、関節炎ラット疾患モデル（ラットＡＩＡ、［Ｊａｋ１阻害］）における有効性を赤血球造血（ＥＰＯ刺激による網状赤血球の産生、［Ｊａｋ２阻害］）に及ぼす影響と比較したインビボ実験を根拠の一部とし、出願人は化合物１がＪａｋ１を阻害する有効薬物濃度でＪａｋ２阻害に軽微な影響しか与えないため、Ｊａｋ１選択的阻害剤であることを実証した。Ｊａｋの阻害のこの差別的な選択性プロファイル、特にＪａｋ２及び他の類縁ＪＡＫ（例えばＪａｋ３及びＴｙｋ２）に対するその優先的／選択的なＪａｋ１の阻害に鑑み、化合物１は現在臨床試験中の他のＪａｋ阻害剤や、ＲＡ及びＪａｋ１活性が有害に作用する他の炎症性疾患又は自己免疫疾患をもつ患者の他の治療ストラテジーに比較してメリット対リスクプロファイルが改善される可能性がある。
【００１７】
従って、１態様において、本発明はヒトにおけるヤヌスキナーゼ１（Ｊａｋ１）の選択的阻害方法を提供し、前記ヒトに有効量の遊離塩基形態の化合物を投与する段階を含み、前記ヒトにおいてＪａｋ１活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害され、Ｊａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満又は５％未満が阻害され、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００１８】
１関連態様において、本発明はヒトにおける自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療方法を提供し、前記方法は前記ヒトに有効量の遊離塩基形態の化合物を投与する段階を含み、前記有効量は網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数を治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下の範囲で減少させ、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００１９】
更に別の関連態様において、本発明はヒトにおける自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療方法を提供し、前記方法は前記ヒトに有効量の遊離塩基形態の化合物を投与する段階を含み、前記有効量は前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４を実現し、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００２０】
所定の実施形態では、前記ヒトにおいてＪａｋ１活性の５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超、９９％超が阻害される。
【００２１】
所定の実施形態において、前記ヒトはＪａｋ１活性の阻害により治療可能な病態の治療を必要とする。例えば、前記病態としては、関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糖尿病性腎症、ドライアイ症候群  シェーグレン症候群  円形脱毛症、白斑又はアトピー性皮膚炎等の炎症性疾患／障害又は自己免疫疾患／障害が挙げられる。
【００２２】
クローン病（ＣＤ）は胃腸管のあらゆる部位に起こり得る限局性、非対称性、全層性で場合によっては肉芽腫性の炎症により発現される一連の臨床的及び病理学的プロセスである。この疾患はあらゆる年齢の人に起こり、１０歳代〜２０歳代での発症頻度が最も高い。男性よりも女性の罹患者がやや多く、人種によっては疾患の危険度が高い。北米では、ＣＤの罹患率は人口１００，０００人当たり３．１〜１４．６症例であると推定される。有病率は人口１００，０００人当たり２６〜９９症例である。ヨーロッパでは、ＣＤの罹患率は人口１００，０００人当たり０．７〜９．８症例であり、有病率は人口１００，０００人当たり８．３〜２１４症例である。
【００２３】
ＣＤは合併症を生じる進行性疾患として特徴付けられている。ノルウェー南東部からの人口ベースの調査では、相当数の患者が診断から１０年後に狭窄性又は浸潤性表現型を示した。更に、ＣＤと診断された患者の約８０％は何らかの時点で疾患に関連する外科手術が少なくとも１回は必要になる。
【００２４】
ＣＤには現在公知の内科的又は外科的治癒法が存在しないため、治療ストラテジーは症状の緩和、クオリティオブライフの改善、内視鏡画像上の炎症の軽減、並びに短期及び長期毒性と合併症を最低限に抑えることである。現在、中等度から重度の疾患患者は通常ではコルチコステロイド類と、アザチオプリン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）又はメトトレキサート（ＭＴＸ）等の免疫調節剤を含む従来の薬理学的介入により治療される。コルチコステロイド類の長期使用による潜在的危険は周知である。コルチコステロイド類の短期使用に伴う有害事象（ＡＥ）としては、ざ瘡、ムーンフェイス、浮腫、皮膚線条、グルコース不耐症、及び睡眠／気分障害が挙げられ、長期使用（通常では１２週間以上であるが、より短期間の場合もある）で認められる潜在的ＡＥとしては、後嚢下白内障、骨粗鬆症、大腿骨頭壊死症、ミオパシー及び易感染性が挙げられる。ＡＺＡ及び６−ＭＰの安全性の危険としては、膵炎、骨髄抑制、感染性合併症及び悪性新生物が挙げられる。ＭＴＸは骨髄抑制と肝・肺毒性を伴う場合がある。従来の治療法が無効な患者は抗ＴＮＦα療法等の生物学的製剤で治療する場合がある。抗ＴＮＦα剤に伴う潜在的危険としては、輸液又は注射部位反応、重症感染症、リンパ腫、心不全、ループス様症候群及び脱髄病態が挙げられる。
【００２５】
入手可能な抗ＴＮＦα剤で有益な結果が達成されているが、初回投与した患者の約４０％は臨床的に有意義な反応を生じない（一次無効）。初期に反応し、長期間維持治療を続ける患者のうち、約３８％は６カ月後に無効となり、約５０％は１年後に無効となる（二次無効）。初期に第１の抗ＴＮＦα剤に反応するが、その後、反応しなくなる患者は第２の抗ＴＮＦα剤に対する反応性が低く、寛解率が低くなる傾向がある。抗ＴＮＦα療法に耐えることができない患者及び／又は抗ＴＮＦα療法による治療に効果不十分であった患者については、現在の治療選択肢は限られており、このような患者にはコルチコステロイド類の反復クールを適用できるが、複数の臓器系に影響を与える広範囲の毒性作用を伴う。
【００２６】
抗ＴＮＦαの使用歴のある患者で新規類の生物学的製剤である抗インテグリン抗体が試験されている。α４β１及びα４β７インテグリンに対するヒト化モノクローナル抗体であるナタリズマブは抗ＴＮＦα療法を以前に受けている患者に有望であり、患者の過半数が導入レジメンに反応した。しかし、２００８年に承認後のナタリズマブの使用は潜伏しているＪＣウイルスの活性化に起因する進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の重大な危険により著しく制限されている。別の抗インテグリン抗体であるベドリズマブはα４β７インテグリンと結合し、メモリーＴリンパ球が内皮細胞を通過して炎症を起こした胃腸実質組織内に移動するのを抑制するモノクローナル抗体であり、ＴＮＦ遮断薬又は免疫調節剤に効果不十分、効果減弱又は不耐性の中等度から重度の活動性ＣＤの成人患者を適応として最近承認された。
【００２７】
トファシチニブはＪＡＫ１、ＪＡＫ２及びＪＡＫ３を標的とする非選択的ＪＡＫ阻害剤であるが、ＪＡＫ３を最も強力に阻害する。トファシチニブはＲＡの臨床徴候及び症状を改善するが、重症感染症、悪性腫瘍、帯状疱疹及び血液有害事象の発生率の明白な増加に関して安全性プロファイルの周辺の問題が残っている。トファシチニブは対象によってはヘモグロビン、白血球絶対数及び総白血球数の数値低下も報告されており、更に血清クレアチニン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）及び肝トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の上昇も報告されている。血清クレアチニン、脂質及び肝トランスアミナーゼ値の上昇は通常では無症候性で可逆的であり、腎又は肝機能の明白な低下に結び付けられていない。
【００２８】
従来の治療法及び抗ＴＮＦα剤に効果不十分又は不耐性の患者についてＣＤにおける他の治療選択肢の医療ニーズがあることは明白である。
【００２９】
化合物１はＪＡＫ２及びＪＡＫ３に対する阻害作用を最小限に抑えた新規ＪＡＫ１選択的阻害剤であり、非選択的ＪＡＫ阻害についてはＪＡＫ２及びＪＡＫ３シグナル伝達経路の阻害に起因すると考えられている安全性の問題が報告されているが、このような問題の一部を潜在的に最小限にすることができる。以下の事実に鑑み、化合物１はＣＤ患者の治療に有効であると思われる：１）炎症の前臨床モデルでトファシチニブと比較して化合物１の効力改善が実証された；２）前臨床及び臨床両状況下で化合物１のＪＡＫ１選択性が確認された；３）２種類の動物種における慢性毒性試験で前臨床毒性所見が許容可能であった；４）健常ボランティアにおける単回投与用量漸増（ＳＡＤ）試験及び反復投与用量漸増（ＭＡＤ）試験で化合物１の安全性及び忍容性プロファイルが許容可能であった；５）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の前臨床モデルにおけるＪＡＫ阻害は臨床的及び内視鏡的改善をもたらすことが立証された。
【００３０】
前記クローン病は成人における中等度から重度の活動性クローン病（ＣＤ）とすることができる。所定の実施形態において、前記成人はＣＤであると新規に診断されている（例えば結腸又は回結腸クローン病歴が≧３カ月である）か、又は第一選択療法もしくは抗ＴＮＦα療法（例えばアザチオプリン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、アミノサリチル酸塩（例えばスルファサラジン、メサラミン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾン又はプレドニゾン同等薬、ブデソニド）、プロビオティック、メトトレキサート、シクロスポリン、タクロリムス、メトロニダゾール、シプロフロキサシン、レフルノミド、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、トファシチニブ、バリシチニブ、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル又はＪＡＫ阻害剤）に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している。代表的なＪａｋ阻害剤としては、ルキソリチニブ、トファシチニブないしＣＰ−６９０５５０、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４、ＩＮＣＢ２８０５０）、ＣＹＴ３８７、ＧＬＰＧ０６３４、ＧＳＫ２５８６１８４、レスタウルチニブ、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）及びＴＧ１０１３４８が挙げられる。
【００３１】
所定の実施形態において、クローン病をもつ前記成人は平均１日液状便／低粘度軟便回数スコアが≧２．５であるか、又は平均１日腹痛スコアが≧２．０であり、且つ２２０≦ＣＤＡＩ≦４５０とすることができる。所定の実施形態において、クローン病をもつ前記成人はクローン病の簡易型内視鏡スコア（ＳＥＳ−ＣＤ）が≧６であり、又は疾患が回腸に限定している対象では≧４とすることができる。
【００３２】
前記ＲＡは成人における中等度から重度の活動性ＲＡとすることができる。所定の実施形態では、前記成人におけるＲＡに伴う骨量減少又は骨びらんが抑制される。所定の実施形態において、前記成人はＲＡであると新規に診断されているか、（経口又は生物学的）ＤＭＡＲＤ、生物学的製剤もしくは抗ＴＮＦα療法に効果不十分であるか、又はメトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、トファシチニブ、ゴリムマブ、バリシチニブ、エタネルセプト、インフリキシマブもしくはアダリムマブに対する効果減弱もしくはその許容できない毒性により治療を中断している。
【００３３】
所定の実施形態において、前記方法は共通γ鎖シグナル伝達、例えばＪａｋ１及びＪａｋ３を介する共通γ鎖シグナル伝達を実質的に抑制又は阻害しない。所定の実施形態において、前記共通γ鎖シグナル伝達はＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５及びＩＬ−２１の１種以上により刺激される。所定の実施形態において、前記方法はマッチングサンプルにおけるｍｏｃｋ／ｓｈａｍ処置対照に比較して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下の範囲で共通γ鎖シグナル伝達を抑制又は阻害する。
【００３４】
所定の実施形態において、前記方法はＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を実質的に減少させない。所定の実施形態では、以下に記載する方法を使用してＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を測定する。
【００３５】
所定の実施形態において、前記方法は前記ヒトにおける赤血球造血、顆粒球／単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）シグナル伝達、又は微生物感染に反応する緊急骨髄造血を実質的に阻害しない。
【００３６】
所定の実施形態において、前記有効量は少なくとも１４日間（例えば少なくとも約２９日間ないし約１カ月間、３カ月間、６カ月間、９カ月間、１年間、２年間、５年間、１０年間、２０年間、５０年間等）の治療期間にわたって網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数を治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下の範囲で減少させる。
【００３７】
所定の実施形態では、循環網状赤血球数又はヘモグロビン（Ｈｂ）濃度（ｇ／ｄＬ）により赤血球造血を測定する。
【００３８】
所定の実施形態において、前記ヒトは貧血をもち、又は全血中ヘモグロビン濃度が１２ｇ／ｄＬ未満、１１ｇ／ｄＬ未満、１０ｇ／ｄＬ未満、９ｇ／ｄＬ未満、８ｇ／ｄＬ未満、７ｇ／ｄＬ未満、６ｇ／ｄＬ未満もしくは５ｇ／ｄＬ未満である。例えば、前記全血中ヘモグロビン濃度は全血試料からのＣＢＣ（全血球算定）検査等の標準臨床検査法により測定することができる。
【００３９】
所定の実施形態では、ＡＵＣ０−２４が前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬの実質的定常レベルに達するまで前記化合物を前記ヒトに投与する。例えば、前記化合物を等量ずつ１日２回（ＢＩＤ）前記ヒトに投与することができる。特定の実施形態では、前記化合物の遊離塩基換算量で各回約３〜２４ｍｇ（例えば３ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１２ｍｇ、１８ｍｇ又は２４ｍｇ）の用量で１日２回前記化合物を前記ヒトに投与する。他の実施形態では、前記化合物を前記ヒトに１日１回（ＱＤ）投与してもよい。特定の実施形態では、前記化合物の遊離塩基換算量で約１８ｍｇ又は２４ｍｇの用量で１日１回前記化合物を前記ヒトに投与する。
【００４０】
所定の実施形態において、前記方法は更に少なくとも１４日間（例えば少なくとも１カ月間、３カ月間、６カ月間、９カ月間、１年間、２年間、５年間、１０年間、２０年間、５０年間等）の期間等の治療期間にわたって前記ＡＵＣ０−２４を実質的に同一レベルに維持する段階を含む。
【００４１】
所定の実施形態では、エキソビボ刺激ＩＬ−６依存性ＳＴＡＴ３リン酸化、エキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化及び／又は末梢ＮＫ細胞数を測定することによりＪａｋ１及び／又はＪａｋ３活性の阻害を測定する。
【００４２】
所定の実施形態では、共通β鎖サイトカイン（例えばＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３又はＩＬ−５）依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を測定することによりＪａｋ２活性の阻害を測定する。例えば、所定の実施形態では、エキソビボ刺激ＧＭ−ＣＳＦ依存性ＳＴＡＴ５リン酸化等のＧＭ−ＣＳＦ依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を測定することによりＪａｋ２活性の阻害を測定する。
【００４３】
所定の実施形態において、前記エキソビボサイトカイン刺激ＳＴＡＴリン酸化アッセイはいずれも個体／患者からの全血試料に由来する試料を使用して実施される。
【００４４】
他の実施形態では、ＥＰＯ依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を測定することによりＪａｋ２活性の阻害を測定する。
【００４５】
所定の実施形態において、前記方法は更に哺乳動物免疫系を調節するもの又は抗炎症剤である１種以上の他の薬剤を前記ヒトに投与する段階を含む。前記１種以上の他の薬剤はアスピリン、アセトアミノフェン、アミノサリチル酸塩、シプロフロキサシン、コルチコステロイド、シクロスポリン、メトロニダゾール、プロビオティック、タクロリムス、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、プレドニゾロン、デキサメタゾン、抗炎症性ステロイド、メトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の免疫モジュレーター（例えばアクチベーター）から構成される群から選択することができる。
【００４６】
所定の実施形態において、前記方法は更に、（１）前記化合物を投与したが、効果又は治療有効性が不十分又は至適以下であるヒト対象を同定する段階と、（２）前記ヒト対象の網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を測定し、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の減少が夫々網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の治療前ベースライン値に対して３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下又は１０％以下であるならば、前記ヒト対象は用量増加の候補であると判断する段階と；（３）用量を増加して前記化合物を前記候補に投与する段階を含む。所定の実施形態において、前記方法は更に所望の転帰を達成するまで段階（１）〜（３）を繰返す段階を含む。
【００４７】
別の関連態様において、本発明は自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤を提供し、前記医薬組成物は、（１）単位用量の遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドと、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬのＡＵＣ０−２４が得られる。
【００４８】
１関連態様において、本発明は自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤を提供し、前記医薬組成物は、（１）単位用量の遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドと、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、前記ヒトにおいてＪａｋ１の活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害され、Ｊａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満が阻害される。
【００４９】
別の関連態様において、本発明は自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤を提供し、前記医薬組成物は（１）単位用量の遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドと、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数が治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下の範囲で減少する。
【００５０】
所定の実施形態において、前記単位用量はカプセル剤である。所定の実施形態において、前記単位用量は前記化合物の遊離塩基換算量で０．５ｍｇ、１ｍｇ、３ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１２ｍｇ、１８ｍｇ又は２４ｍｇである。
【００５１】
所定の実施形態において、前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害は成人におけるクローン病（例えば中等度から重度の活動性クローン病（ＣＤ））である。
【００５２】
所定の実施形態において、前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害は成人における中等度から重度の活動性ＲＡ等の関節リウマチ（ＲＡ）である。
【００５３】
所定の実施形態において、前記医薬的に許容される賦形剤は微結晶セルロース、二塩基性リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース又はその混合物を含む。
【００５４】
所定の実施形態において、前記医薬製剤は経口（例えば小腸の所定部分での選択的放出）、局所、経皮、管腔内（例えば浣腸による胃腸又は結腸投与）又は眼内投与用に製剤化される。
【００５５】
当然のことながら、単に本発明の１態様として記載する実施形態を含めて本願に記載する全実施形態は不適切な場合又は明確に否定している場合を除いて任意の他の１以上の実施形態と組合せることができると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】０．１ｍＭ  ＡＴＰの存在下で測定したＪａｋアイソフォームであるＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３及びＴｙｋ２に対する化合物１（遊離塩基形態）（左）とトファシチニブ（右）のＩＣ５０を示す。これらの曲線から取得したＩＣ５０値を図中の表にまとめる。化合物１はＪａｋ１のＡＴＰ競合阻害剤であり（データは示さず）、６０種以上のタンパク質キナーゼに良好な選択性を示す（データは示さず）。Ｊａｋ２に対する強さは約３分の１であり、Ｊａｋ３組換えキナーゼドメインタンパク質に対する強さは約５４分の１である。これに対して、トファシチニブは他の文献（Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．（Ｌｏｎｄ．）７：４１，２０１０）でも報告されているように、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２及びＪａｋ３に対して同等の強さである。
【図２】ＬｅｗｉｓラットにおけるＣｏｎＡ誘導性ＩＦＮ−γに及ぼす化合物１の効果を示す。
【図３】Ｌｅｗｉｓラットにおけるアジュバント誘導性関節炎（ＡＩＡ）に及ぼす化合物１の効果を用量反応曲線と曝露量反応曲線により示す。
【図４Ａ】図４ＡはＬｅｗｉｓラットにおけるＡＩＡに及ぼす化合物１の効果を示し、骨びらんに及ぼす治療効果をＭｉｃｒｏＣＴスキャンにより表示し、足根骨体積測定値の変化を示す。
【図４Ｂ】図４ＢはＬｅｗｉｓラットにおけるＡＩＡに及ぼす化合物１の効果を示し、骨びらんに及ぼす治療効果をＭｉｃｒｏＣＴスキャンにより表示し、溶媒をｂｉｄ投与したラットからの代表的な足根骨の画像を示す。
【図４Ｃ】図４ＣはＬｅｗｉｓラットにおけるＡＩＡに及ぼす化合物１の効果を示し、骨びらんに及ぼす治療効果をＭｉｃｒｏＣＴスキャンにより表示し、化合物１、３ｍｇ／ｋｇをｂｉｄ投与したラットからの代表的な足根骨の画像を示す。
【図５Ａ】図５Ａはラットに経口投与した化合物１とエキソビボ刺激ｐＳＴＡＴ５の曝露量反応関係を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂはサイトカイン誘導性ＳＴＡＴ（即ちＳＴＡＴ３又はＳＴＡＴ５）リン酸化の阻害が用量反応性であることを示す。指定した種々の用量で化合物１を健常ヒト対象に経口投与した。指定時点（時間）で対象から採取した血液試料にＩＬ６又はＩＬ７を加え、夫々ＳＴＡＴ３又はＳＴＡＴ５リン酸化に及ぼす化合物１の曝露量の効果をフローサイトメトリーにより評価した。
【図５Ｃ】図５Ｃは経口投与後１時間、６時間及び１２時間の指定時点における化合物１及びトファシチニブによる夫々ＩＬ−６又はＩＬ−７刺激ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５リン酸化の阻害結果を示す。同図から明らかなように、ヒトに経口投与した際に５ｍｇのトファシチニブと３ｍｇの化合物１は（ｐＳＴＡＴ３の阻害率％により測定した場合に）同等レベルのＩＬ６誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を生じる。同じく同図から明らかなように、ヒトにトファシチニブ５ｍｇと同レベルのＩＬ−７誘導性ｐＳＴＡＴ５の阻害を生じるには１２ｍｇの化合物１が必要である。
【図５Ｄ】図５Ｄは指定用量の投与から１時間後におけるＧＭ−ＣＳＦ誘導性ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害結果を示す。低用量又は遅い時点では阻害が認められなかった。同図から明らかなように、ＧＭＣＳＦ誘導性ｐＳＴＡＴ５の阻害により評価した場合、２４ｍｇの化合物１をヒトに経口投与するとＪａｋ２シグナル伝達の阻害の部分的阻害を生じるが、１２ｍｇでは生じない。
【図６Ａ】図６Ａはラットにおける末梢ＮＫ細胞数と化合物１の曝露量反応関係を示す。図６Ａはｌｏｇ  ＡＵＣ０−２４により測定した化合物１の用量に対するＮＫ細胞数の減少率％を示す
【図６Ｂ】図６Ｂはラットにおける末梢ＮＫ細胞数と化合物１の曝露量反応関係を示す。図６ＢはＣｍｉｎでのｐＳＴＡＴ５減少率％と２週間後のＮＫ細胞数減少率％の間には実質的に直線的な関係があることを示す。
【図７】健常ラットで認められるＮＫ細胞の減少を疾患活動性に及ぼす曝露量の対応する効果と比較して示す。ＮＫ＝ナチュラルキラー；ＰＳ＝足浮腫。網かけ部分はヒトにおける反復投与用量漸増試験の指定用量で予想される曝露量範囲を強調表示している。
【図８】５０ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日又は２００ｍｇ／ｋｇ／日でラットに経口投与後の化合物１の血漿中濃度（左）と曲線下面積（ＡＵＣ、右）を示す。結果を平均（±）ＳＤとして表す（ｎ＝雌雄各５）。
【図９】０．５ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日又は５ｍｇ／ｋｇ／日でイヌに反復経口投与後の化合物１の血漿中濃度（左）、曲線下面積（ＡＵＣ）及び用量標準化ＡＵＣ（ＡＵＣ／Ｄ）を平均（±）ＳＤとして示す。
【図１０】予想有効曝露量、ヒト曝露量範囲及び非臨床ＮＯＡＥＬ（無毒性量）について化合物１の血漿曝露量を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａはエリスロポエチン（ＥＰＯ）を静脈注射すると、多くはないが、明確な網状赤血球増加がラットに生じたことを示す。これに対して、ＰＢＳ対照は効果が（あったとしても）ごく僅かであった。
【図１１Ｂ】図１１ＢはラットＡＩＡ疾患モデルにおいて有効な曝露量範囲で網状赤血球増加に及ぼす化合物１の影響がトファシチニブよりも小さいことを示す。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは有効曝露量での網状赤血球増加がＪａｋ１／Ｊａｋ２選択性と密接な関係があることを示す。化合物１に類縁の高度に選択的なＪａｋ１阻害剤である化合物７と、Ｊａｋ１とＪａｋ２の阻害剤であるバリシチニブ（Ｇｒａｓ，Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ３８：６１１−６１７，２０１３）も試験した。Ｊａｋ１／Ｊａｋ２細胞選択性の程度と、網状赤血球増加に及ぼす化合物の影響の間には良好な整合性があった。これらの化合物が示した傾向は、Ｊａｋ１／Ｊａｋ２選択性増加が単位有効性当たりのＥＰＯシグナル伝達に及ぼす影響の低下に相関するという見解を裏付けている。
【図１２】疾患モデル有効性と末梢ＮＫ細胞数の合成曝露量／反応曲線である。同図から明らかなように、末梢ＮＫ細胞数に及ぼす化合物１の影響は有効曝露量範囲でトファシチニブの影響よりも小さい。トファシチニブと化合物１のｌｏｇ濃度をＡＵＣ曝露量（ｎｇ・ｈｒ／ｍＬ）として表す。各ＮＫ細胞データ点は個々の用量群におけるラット４匹の平均を表す。各足浮腫データ点はラット９匹の平均を表す。
【図１３】単位有効性当たりのＮＫ細胞効果のプロットである。同図はラットからの実験データに鑑み、高用量の化合物１がトファシチニブに比較してＮＫ細胞数に比較的軽微な影響しか与えないことを示唆している。
【図１４Ａ】図１４Ａは健常ヒト対象に化合物１を３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回（ｂｉｄ）１４日間投与した場合の末梢ＮＫ細胞の変化を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは健常ヒト対象に化合物１を３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回１４日間投与した場合の末梢ＮＫＴ細胞の変化を示す。
【図１４Ｃ】図１４Ｃは健常ヒト対象に化合物１を３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回１４日間投与した場合の循環網状赤血球の変化を示す。
【図１５Ａ】図１５ＡはＲＡ患者／対象に化合物１を６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回２６日間投与し、２７日目に１回投与した場合の循環網状赤血球の変化を示す。
【図１５Ｂ】図１５ＢはＲＡ患者／対象に化合物１を６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回２６日間投与し、２７日目に１回投与した場合のヘモグロビン（Ｈｂ）濃度の変化を示す。
【図１６Ａ】図１６Ａは健常日本人及び中国人被験者に１８ｍｇをＢＩＤ投与後１日目（ＡＭ）の化合物１の予備的平均ＰＫプロファイル（線形軸及び対数線形軸）を示す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは健常日本人及び中国人被験者に１８ｍｇをＢＩＤ投与後１日目（ＡＭ）の化合物１の予備的平均ＰＫプロファイル（線形軸及び対数線形軸）を示す。
【図１７Ａ】図１７Ａは健常日本人及び中国人被験者に１８ｍｇをＢＩＤ投与後１４日目（ＡＭ）の化合物１の予備的平均ＰＫプロファイル（線形軸及び対数線形軸）を示す。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは健常日本人及び中国人被験者に１８ｍｇをＢＩＤ投与後１４日目（ＡＭ）の化合物１の予備的平均ＰＫプロファイル（線形軸及び対数線形軸）を示す。
【図１８Ａ】図１８Ａは健常日本人被験者と西洋人被験者を比較した化合物１の予備的ＰＫプロファイル（平均）（線形軸及び対数線形軸）を示す。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは健常日本人被験者と西洋人被験者を比較した化合物１の予備的ＰＫプロファイル（平均）（線形軸及び対数線形軸）を示す。
【図１９Ａ】図１９Ａは健常日本人被験者と西洋人被験者を比較した化合物１の予備的用量標準化ＡＵＣ及びＣｍａｘを示す。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは健常日本人被験者と西洋人被験者を比較した化合物１の予備的用量標準化ＡＵＣ及びＣｍａｘを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
１．概説
Ｊａｋファミリーキナーゼ（Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３及びＴｙｋ２）は膜結合型サイトカイン受容体と会合する細胞質チロシンキナーゼである。サイトカインはその受容体と結合すると、トランス自己リン酸化プロセスによりＪａｋキナーゼ活性化を開始する。活性化されたＪａｋキナーゼはサイトカイン受容体上の残基をリン酸化し、シグナル伝達兼転写活性化（ＳＴＡＴ）因子や他のシグナル伝達レギュレーター（例えばサイトカインシグナル伝達サプレッサー（ＳＯＣＳ）タンパク質やＳＨ２ドメイン含有イノシトール５’−ホスファターゼ（ＳＨＩＰ））等のＳＨ２ドメイン含有タンパク質のホスホチロシン結合部位を形成する。このプロセスによりＳＴＡＴ因子が活性化されると、その二量化、核内移行及び新規ｍＲＮＡ転写を生じ、免疫細胞増殖因子、生存因子、他のサイトカイン、ケモカイン及び細胞内トラフィッキングを助長する分子が発現される（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００７，１７８，ｐ．２６２３参照）。
【００５８】
Ｊａｋキナーゼは多くの異なるサイトカインファミリーのシグナルを伝達するため、多種多様な病状を伴う疾患で潜在的に役割を果たし、限定するものではないが、以下の例が挙げられる。Ｊａｋ１とＪａｋ３はいずれも所謂共通γ鎖サイトカイン（ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１５及びＩＬ２１）のシグナル伝達を制御するため、Ｊａｋ１又はＪａｋ３のどちらかを同時に阻害すると、ＩＬ２、ＩＬ７及びＩＬ１５シグナル伝達の遮断により関節リウマチ等のＴｈ１介在性疾患に影響を与えると予想することができる。他方、ＩＬ２シグナル伝達は制御性Ｔ細胞の発生と恒常性維持に不可欠であることが最近報告されている（Ｍａｌｅｋ  ＴＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００２，１７（２），：１６７−１７８）。例えば、遺伝子データによると、ＩＬ２シグナル伝達を遮断するだけで自己免疫反応が生じると予想される（Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，２００７，３９（３）：３２９−３３７及びＷｉｌｌｅｒｆｏｒｄ  ＤＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９５，３（４）：５２１−５３０）。Ｔｈ２はＩＬ４及びＩＬ９シグナル伝達遮断により喘息やアトピー性皮膚炎等の疾患を生じた。Ｊａｋ１とＴｙｋ２はＩＬ１３のシグナル伝達に介在する（Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０００，１２：１４９９参照）。従って、これらの遮断は喘息に治療効果があるとも予想できる。これらの２種類のキナーゼはＩ型インターフェロンシグナル伝達に介在するとも考えられるため、その遮断は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の重症度を低下させると予想することができる。Ｔｙｋ２とＪａｋ２はＩＬ１２とＩＬ２３のシグナル伝達に介在する。実際に、モノクローナル抗体を使用してこれらのサイトカインを遮断すると、乾癬の治療に有効であった。従って、これらのキナーゼの阻害剤を使用してこの経路を遮断すると、乾癬にも有効であると予想することができる。
【００５９】
要約すると、本発明は自己免疫疾患の進行に重要であると考えられる数種のメカニズムに中心的役割を果たすＪａｋファミリーキナーゼ活性を阻害、制御及び／又は調節する低分子化合物に関し、このような疾患としては、限定されないが、中等度から重度のＲＡ等の関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、中等度から重度のクローン病等のクローン病、中等度から重度の慢性プラーク乾癬等の乾癬、中等度から重度の潰瘍性大腸炎等の潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、中等度から重度の多関節型ＪＩＡ等の若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、及び喘息等が挙げられる。
【００６０】
特に、本発明の化合物はＪａｋ２、Ｊａｋ３及びＴｙｋ２を含む他のＪＡＫファミリーキナーゼに対して選択的にＪａｋ１を阻害するため、Ｊａｋ２及び／又はＪａｋ３キナーゼ等の他のキナーゼの阻害に起因する副作用と、このようなキナーゼが介在するシグナル伝達経路（例えば赤血球造血及びＮＫ細胞機能）への影響を（なくすことはできないとしても）抑えながら、治療可能な疾患に対して有効であると予測される。本発明は特に、所望の治療有効性を達成するようにＪａｋ１が選択的又は優先的に阻害され、それと同時に望ましくない副作用を避けるようにＪａｋ２及び／又はＪａｋ３等の他のＪＡＫキナーゼが殆ど又は実質的に阻害されないような本発明の化合物の望ましい薬物動態（ＰＫ）プロファイルをもたらす投与レジメンも提供する。
【００６１】
具体的に言うと、数種の薬理学的に重要なサイトカインはＪａｋ１のみを介してシグナル伝達する（Ｇｕｓｃｈｉｎ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９５  Ａｐｒ  ３，１４（７）：１４２１−１４２９；Ｐａｒｇａｎａｓ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９８  Ｍａｙ  １，９３（３）：３８５−３９５；及びＲｏｄｉｇ  Ｓ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１９９８  Ｍａｙ  １，９３（３）：３７３−３８３）。ＩＬ６Ｒ中和抗体を使用してこれらの１種であるＩＬ６を遮断すると、ヒト関節リウマチ患者において疾患スコアが有意に改善されることが示されている（Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．，２００７，６６（９）：１１６２−１１６７）。同様に、中和モノクローナル抗体又は標的遺伝子欠損を使用して同じくＪａｋ１のみに介在されるＧＣＳＦシグナル伝達を遮断すると、マウスの実験的関節炎を抑制することができる（Ｌａｗｌｏｒ  Ｋ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００４，１０１（３１）：１１３９８−１１４０３）。従って、Ｊａｋ１等のキナーゼのシグナル伝達を選択的又は優先的に阻害、制御及び／又は調節する本発明の低分子化合物は自己免疫疾患又はＪａｋ１機能異常に関連する他の疾患を予防又は治療するための望ましい手段である。
【００６２】
Ｊａｋ２は前立腺癌、結腸癌、卵巣癌、乳癌、メラノーマ、白血病及び他の造血器悪性腫瘍等の多様なヒト癌で活性化される。また、古典的な骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）はＪａｋ２遺伝子の体細胞点突然変異との関連性が高いが、他の骨髄疾患では稀であることが確認されている。造血器悪性腫瘍では染色体転位によりＪａｋ２活性の構成的活性化も生じている。Ｊａｋ／ＳＴＡＴ経路の阻害、特にＪａｋ２活性の阻害は主にＳＴＡＴのリン酸化の阻害により抗増殖・アポトーシス促進作用を生じることも示されている。このようなＪａｋ２遮断はエリスロポエチン（ＥＰＯ）及び顆粒球／単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）シグナル伝達不良と赤血球造血不良に繋がる可能性がある（Ｎｅｕｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９３（３）：３９７−４０９，１９９８参照）。これらのシグナル伝達経路に遺伝的、先天的又は後天的欠陥をもつ個体は貧血や好中球機能異常等の潜在的に生命を脅かす合併症を生じる可能性がある。
【００６３】
従って、１態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）におけるヤヌスキナーゼ１（Ｊａｋ１）の選択的阻害方法を提供し、前記方法は前記哺乳動物（例えばヒト）に有効量の化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩を投与する段階を含み、前記哺乳動物（例えばヒト）においてＪａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満が阻害され、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。所定の実施形態では、Ｊａｋ１活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害される。
【００６４】
１関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）における自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療方法を提供し、前記方法は前記哺乳動物（例えばヒト）に有効量の化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩を投与する段階を含み、前記有効量は前記自己免疫疾患もしくは障害又は前記炎症性疾患もしくは障害の症状の進行を緩和又は抑制するために十分であり、前記有効量は網状赤血球数もしくはＮＫ細胞数もしくはＮＫＴ細胞数もしくはｉＮＫＴ細胞数もしくはＣＤ８＋細胞数及び／又はＮＫ細胞活性を治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下又は５％以下の範囲で減少させ、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００６５】
更に別の関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）における自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療方法を提供し、前記方法は前記哺乳動物（例えばヒト）に有効量の化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩を投与する段階を含み、前記有効量は前記自己免疫疾患もしくは障害又は前記炎症性疾患もしくは障害の症状の進行を緩和又は抑制するために十分であり、前記有効量は前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４を実現し、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００６６】
別の関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）におけるヤヌスキナーゼ１（Ｊａｋ１）の選択的阻害用医薬の製造における化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩の使用を提供し、有効量の前記医薬を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与すると、前記哺乳動物（例えばヒト）においてＪａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満が阻害され、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。所定の実施形態では、Ｊａｋ１活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害される。
【００６７】
別の関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）における自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬の製造における化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩の使用を提供し、有効量の前記医薬を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与すると、前記自己免疫疾患もしくは障害又は前記炎症性疾患もしくは障害の症状の進行が緩和又は抑制され、網状赤血球数もしくはＮＫ細胞数もしくはＮＫＴ細胞数もしくはｉＮＫＴ細胞数もしくはＣＤ８＋細胞数及び／又はＮＫ／ＮＫＴ細胞活性が治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下又は５％以下の範囲で減少し、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００６８】
更に別の関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）における自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬の製造における化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩の使用を提供し、有効量の前記医薬を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与すると、前記自己免疫疾患もしくは障害又は前記炎症性疾患もしくは障害の症状の進行が緩和又は抑制され、前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４が実現及び／又は維持され、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。
【００６９】
別の態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）におけるヤヌスキナーゼ１（Ｊａｋ１）の選択的阻害用医薬組成物を提供し、有効量の前記医薬組成物を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与すると、前記哺乳動物（例えばヒト）においてＪａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満が阻害され、前記医薬組成物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドの化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩を含有する。所定の実施形態では、Ｊａｋ１活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害される。
【００７０】
１関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）における自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬組成物を提供し、有効量の前記医薬組成物を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与すると、前記自己免疫疾患もしくは障害又は前記炎症性疾患もしくは障害の症状の進行が緩和又は抑制され、網状赤血球数もしくはＮＫ細胞数もしくはＮＫＴ細胞数もしくはｉＮＫＴ細胞数もしくはＣＤ８＋細胞数及び／又はＮＫ／ＮＫＴ細胞活性が治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下又は５％以下の範囲で減少し、前記医薬組成物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドの化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩を含有する。
【００７１】
更に別の関連態様において、本発明は哺乳動物（例えばヒト）における自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬組成物を提供し、有効量の前記医薬組成物を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与すると、前記自己免疫疾患もしくは障害又は前記炎症性疾患もしくは障害の症状の進行が緩和又は抑制され、前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４が実現及び／又は維持され、前記医薬組成物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドの化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩を含有する。
【００７２】
本願で使用する「ナチュラルキラー細胞（又はＮＫ細胞）」なる用語は自然免疫系に重要な細胞傷害性リンパ球の１種を意味する。主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラス１の「自己」マーカーをもたない細胞を死滅させるために活性化を必要としないと当初は考えられたことから「ナチュラルキラー」と名付けられた。（自然リンパ球群に属する）ＮＫ細胞は大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）と定義され、Ｂリンパ球とＴリンパ球に分化するリンパ球系共通前駆細胞とは区別される第３種の細胞を構成する。
【００７３】
本願で使用する「ナチュラルキラーＴ（又はＮＫＴ）細胞」なる用語はＴ細胞とナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の両方の性質をもつＴ細胞の不均一な集団を意味する。これらの細胞の多くは自己及び他家由来の脂質及び糖脂質と結合する抗原提示分子である非多型性のＣＤ１ｄ分子を認識する。これらは全末梢血Ｔ細胞の僅か０．１％程度である。「ＮＫＴ細胞」なる用語はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞関連マーカーであるＮＫ１．１（ＣＤ１６１）を発現しているＴ細胞のサブセットを定義するためにマウスで最初に使用された。現在では「ＮＫＴ細胞」なる用語は非常に偏ったセミインバリアントＴ細胞受容体（ＴＣＲ）やＮＫ細胞マーカーを共発現するものを含めてマウスとヒトに存在するＣＤ１ｄ拘束性Ｔ細胞を意味することが一般に認められている。
【００７４】
ＮＫＴ細胞はαβＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を共発現するだけでなく、ＮＫ１．１等のＮＫ細胞に典型的に関連付けられる各種分子マーカーも発現するＴ細胞のサブセットである。最もよく知られているＮＫＴ細胞はそのＴＣＲの多様性が著しく限られているという点で定型的なαβＴ細胞と相違する（「インバリアント」ないし「１型」ＮＫＴ）。これらと他のＣＤ１ｄ拘束性Ｔ細胞（「２型」ＮＫＴ）はペプチド−ＭＨＣ複合体を認識するのではなく、抗原提示分子のＣＤ１ファミリーのメンバーであるＣＤ１ｄ分子により提示される脂質及び糖脂質を認識する。
【００７５】
ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋細胞とＮＫ１．１−細胞に加え、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ４−細胞、ＣＤ８＋細胞及びＣＤ８−細胞が挙げられる。ナチュラルキラーＴ細胞はＣＤ１６及びＣＤ５６の発現やグランザイム産生等の他の特徴もＮＫ細胞と共通している。インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞は転写調節因子である前骨髄球性白血病亜鉛フィンガー（ＰＬＺＦ）の発現レベルが高く、その分化はこの因子に依存する。
【００７６】
ＣＤ１ｄ依存性ＮＫＴ細胞の最もよく知られているサブセットはインバリアントＴ細胞受容体α（ＴＣＲ−α）鎖を発現する。これらをＩ型ないしインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞と言う。これらの細胞はヒトとマウスの間で保存されており、多くの免疫学的プロセスに関与している。そのＴＣＲレパートリーは通常ではＶα１４−Ｊα１８：Ｖβ８．２，７，２（マウス）及びＶα２４−Ｊα１８：Ｖβ１１（ヒト）である。
【００７７】
ＮＫ細胞は起源と夫々のエフェクター機能によりナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）とは表現型が異なり、多くの場合、ＮＫＴ細胞活性はＩＦＮγを分泌することによりＮＫ細胞活性を促進する。ＮＫＴ細胞とは異なり、ＮＫ細胞はＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）又はＰａｎ  ＴマーカーであるＣＤ３又は表面免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｂ細胞受容体を発現せず、通常では表面マーカーであるＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩ）及びＣＤ５６をヒトにおいて発現し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスではＮＫ１．１又はＮＫ１．２を発現する。ヒトＮＫ細胞の８０％まではＣＤ８も発現する。
【００７８】
所定の実施形態では、前記哺乳動物（例えばヒト）においてＪａｋ１活性の４０％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９９％超が阻害される。
【００７９】
所定の実施形態では、Ｊａｋ１の活性がＪａｋ２の活性よりも優先的に阻害される。例えば、Ｊａｋ２阻害のＩＣ５０に対するＪａｋ１阻害のＩＣ５０の逆比として定義されるＪａｋ１／Ｊａｋ２効力比により優先的阻害を測定することができる。所定の実施形態において、前記Ｊａｋ１／Ｊａｋ２効力比は少なくとも約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８５又はそれ以上である。所定の実施形態では、例えば化合物１を投与した対象に由来する試料（例えば血液試料）を使用してエキソビボＩＬ６刺激ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害によりＪａｋ１阻害のＩＣ５０を測定する。所定の実施形態では、例えば化合物１を投与した対象に由来する試料（例えば血液試料）を使用してエキソビボＥＰＯ刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害によりＪａｋ２阻害のＩＣ５０を測定する。
【００８０】
所定の実施形態では、Ｊａｋ１の活性がＪａｋ３の活性よりも優先的に阻害される。例えば、Ｊａｋ３阻害のＩＣ５０に対するＪａｋ１阻害のＩＣ５０の逆比として定義されるＪａｋ１／Ｊａｋ３効力比により優先的阻害を測定することができる。所定の実施形態において、前記Ｊａｋ１／Ｊａｋ３効力比は少なくとも約３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６５、７０又はそれ以上である。所定の実施形態では、例えば化合物１を投与した対象に由来する試料（例えば血液試料）を使用してエキソビボＩＬ６刺激ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害によりＪａｋ１阻害のＩＣ５０を測定する。
【００８１】
所定の実施形態において、前記哺乳動物（例えばヒト）はＪａｋ１活性の阻害により治療可能な病態の治療を必要とする。所定の実施形態において、前記病態は前記哺乳動物（例えばヒト）におけるＪａｋ１活性の全身阻害により治療可能である。このような病態としては、炎症性疾患／障害又は自己免疫疾患／障害が挙げられる。
【００８２】
例えば、所定の実施形態において、前記病態は関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糖尿病性腎症、ドライアイ症候群、シェーグレン症候群、臓器移植拒絶反応、喘息、円形脱毛症、白斑又はアトピー性皮膚炎である。
【００８３】
所定の実施形態において、前記クローン病は成人患者における中等度から重度の活動性クローン病（ＣＤ）とすることができる。所定の実施形態において、前記成人はＣＤであると新規に診断されたもの（例えば結腸又は回結腸クローン病歴が≧３カ月）でもよいし、又は第一選択療法もしくは抗ＴＮＦα療法（例えばアザチオプリン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、アミノサリチル酸塩（例えばスルファサラジン、メサラミン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾン又はプレドニゾン同等薬、ブデソニド）、プロビオティック、メトトレキサート、シクロスポリン、タクロリムス、メトロニダゾール、シプロフロキサシン、レフルノミド、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、トファシチニブ、バリシチニブ、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル又はＪＡＫ阻害剤）に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している。代表的なＪａｋ阻害剤としては、ルキソリチニブ、トファシチニブないしＣＰ−６９０５５０、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４、ＩＮＣＢ２８０５０）、ＣＹＴ３８７、ＧＬＰＧ０６３４、ＧＳＫ２５８６１８４、レスタウルチニブ、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）及びＴＧ１０１３４８が挙げられる。
【００８４】
所定の実施形態において、クローン病をもつ前記成人は平均１日液状便／低粘度軟便回数スコアが≧２．５であるか、又は平均１日腹痛スコアが≧２．０であり、且つ２２０≦ＣＤＡＩ≦４５０とすることができる。所定の実施形態において、クローン病をもつ前記成人はクローン病の簡易型内視鏡スコア（ＳＥＳ−ＣＤ）が≧６であり、又は疾患が回腸に限定している対象では≧４とすることができる。
【００８５】
所定の実施形態において、前記ＲＡは成人患者における中等度から重度の活動性ＲＡである。所定の実施形態では、前記成人におけるＲＡに伴う骨量減少又は骨びらんが抑制される。例えば、骨量減少／びらんの程度、度合又は速度が低下又は遅れるように骨量減少又は骨びらんを部分的に抑制することができる。治療開始と同時に又はその後まもなく骨量減少又は骨びらんがそれ以上生じなくなるように骨量減少又はびらんを完全に抑制することもできる。所定の実施形態では、治療開始と同時に又はその後まもなく骨量の純増加が生じるように骨量減少又はびらんを逆行させることもできる。これに関連して、本発明の方法は関節炎（例えば成人におけるＲＡ又は中等度から重度の活動性ＲＡ）における骨量減少又は骨びらんを治療するために使用することができる。
【００８６】
所定の実施形態において、前記成人はＲＡであると新規に診断されたものでもよいし、ＤＭＡＲＤ（例えば経口又は生物学的ＤＭＡＲＤ）に効果不十分であるか、又はメトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブ、トファシチニブ、ゴリムマブ、バリシチニブ、エタネルセプト、インフリキシマブもしくはアダリムマブに対する効果減弱もしくはその許容できない毒性により治療を中断している。
【００８７】
本発明の顕著な特徴はＪａｋ２、Ｊａｋ３及び／又はＴｙｋ２等の他のＪａｋキナーゼの活性を有意に阻害又は低下させずにＪａｋ１キナーゼ活性を選択的に阻害するために、治療を必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物を（好ましくは全身に）投与できるという点にある。
【００８８】
従って、所定の実施形態において、本発明の方法はＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を実質的に減少させない（例えば５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下又はそれ以下の範囲で減少させる）。
【００８９】
所定の実施形態において、前記方法は前記哺乳動物（例えばヒト）における赤血球造血、顆粒球／単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）シグナル伝達、又は微生物感染に反応する緊急骨髄造血を実質的に阻害しない（例えば５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下又はそれ以下の範囲で阻害する）。
【００９０】
所定の実施形態において、前記ヒトは貧血をもち、又は全血中ヘモグロビン濃度が１２ｇ／ｄＬ未満、１１ｇ／ｄＬ未満、１０ｇ／ｄＬ未満、９ｇ／ｄＬ未満、８ｇ／ｄＬ未満、７ｇ／ｄＬ未満、６ｇ／ｄＬ未満もしくは５ｇ／ｄＬ未満である。例えば、前記全血中ヘモグロビン濃度は全血試料からのＣＢＣ（全血球算定）検査等の標準臨床検査法により測定することができる。
【００９１】
所定の実施形態では、実質的定常レベルの治療有効ＡＵＣ０−２４レベルに到達し、維持されるまで、治療有効量の前記化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、その立体異性体又はその医薬的に許容される塩を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与する。
【００９２】
例えば、ヒト患者では、例えば関節リウマチ（成人患者における中等度から重度の活動性ＲＡ）の場合、前記化合物の遊離塩基換算量で約０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４が治療有効レベルである。
【００９３】
所定の実施形態では、本発明の化合物（例えば遊離塩基形態の化合物１）、その異性体、その立体異性体又はその医薬的に許容される塩を好ましくは化合物１の遊離塩基換算量で３〜２４ｍｇ（例えば３ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１２ｍｇ、１８ｍｇ又は２４ｍｇ）の等量ずつ前記ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与することにより前記ＡＵＣ０−２４を成人患者において達成することができる。
【００９４】
所定の実施形態では、例えば前記化合物の遊離塩基換算量で約１８ｍｇ又は２４ｍｇの用量で１日１回（ＱＤ）前記化合物を前記ヒトに投与することができる。
【００９５】
所定の実施形態では、治療期間にわたって前記ＡＵＣ０−２４を実質的に同一レベルに維持する。例えば、前記治療期間は少なくとも１４日間、少なくとも１カ月間、３カ月間、６カ月間、９カ月間、１年間、２年間、５年間、１０年間、２０年間、５０年間等とすることができる。
【００９６】
所定の実施形態では、エキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化及び／又は末梢ＮＫ細胞数もしくはＮＫＴ細胞数もしくはｉＮＫＴ細胞数もしくはＣＤ８＋細胞数及び／又はＮＫ細胞活性を測定することにより、他のＪａｋキナーゼ（例えばＪａｋ３）を有意に阻害しないようなＪａｋ１活性の阻害を測定することができる（下記参照）。例えば、クロム放出アッセイやフローサイトメトリー等の当分野で認められている任意の方法を使用して末梢ＮＫ細胞数／活性を測定することができる。ＫａｎｅらはＮＫ細胞活性の臨床測定用のフローサイトメトリーアッセイについて記載しており（本願に援用するＣｌｉｎ．Ｄｉａｇｎ．Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３（３）：２９５−３００，１９９６）、本発明の方法で使用することができる。
【００９７】
所定の実施形態において、前記方法は更に哺乳動物免疫系を調節するもの又は抗炎症剤である１種以上の他の薬剤を前記哺乳動物（例えばヒト）に投与する段階を含む。
【００９８】
例えば、前記他の薬剤はシクロスポリンＡ、ラパマイシン、タクロリムス、デオキシスペルグアリン、マイコフェノラート、ダクリズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、抗胸腺細胞グロブリン、アスピリン、アセトアミノフェン、アミノサリチル酸塩、シプロフロキサシン、コルチコステロイド、シクロスポリン、メトロニダゾール、プロビオティック、タクロリムス、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、プレドニゾロン、デキサメタゾン、抗炎症性ステロイド、メトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の免疫モジュレーター（例えばアクチベーター）から構成される群から選択することができる。
【００９９】
所定の実施形態において、前記方法は更に、（１）前記化合物を投与したが、効果又は治療有効性が不十分又は至適以下であるヒト対象を同定する段階と；（２）前記ヒト対象の網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を測定し、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の減少が夫々網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の治療前ベースライン値に対して３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下又は１０％以下であるならば、前記ヒト対象は用量増加の候補であると判断する段階と；（３）用量を増加して前記化合物を前記候補に投与する段階を含む。所定の実施形態において、前記方法は更に所望の転帰を達成するまで段階（１）〜（３）を繰返す段階を含む。
【０１００】
関連実施形態において、前記方法は更に、（１）前記化合物を投与したが、効果又は治療有効性が不十分又は至適以下であるヒト対象を同定する段階と；（２）前記ヒト対象の網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を測定し、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の減少が夫々網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の治療前ベースライン値に対して３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下又は１０％以下であるならば、前記ヒト対象は用量増加の候補であると判断する段階と；（３）第２の治療剤を前記候補に投与する段階を含む。所定の実施形態において、前記方法は更に所望の転帰を達成するまで段階（１）〜（３）を繰返す段階を含む。
【０１０１】
別の関連実施形態において、前記方法は更に、（１）前記化合物を投与したが、その投与に不耐性のヒト対象を同定する段階と；（２）前記ヒト対象の網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数を測定し、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の減少が夫々網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数の治療前ベースライン値に対して３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超又は７０％超であるならば、前記ヒト対象は用量減少の候補であると判断する段階と；（３）用量を減らして前記化合物を前記候補に投与する段階を含む。所定の実施形態において、前記方法は更に所望の転帰を達成するまで段階（１）〜（３）を繰返す段階を含む。
【０１０２】
上記各種実施形態は、Ｊａｋ３に対してＪａｋ１を選択的に阻害すると、望ましくない副作用（例えばＮＫ細胞数減少）の大部分を避けるように（Ｊａｋ１及びＪａｋ３シグナル伝達に依存する）ＩＬ７及び他の共通γ鎖サイトカインによるシグナル伝達に比較的軽微な影響しか与えずに、ＩＬ６介在性（Ｊａｋ１特異的）シグナル伝達の比較的特異的な阻害が得られ、優れた治療有効性を達成できるという驚くべき発見に多少なりとも基づく。
【０１０３】
具体的に言うと、ＩＬ７及び他の共通γ鎖サイトカイン（例えばＩＬ２、ＩＬ９、ＩＬ１５及びＩＬ２１）によるシグナル伝達はＪａｋ１とＪａｋ３の両方の阻害の何らかの作用に基づいて阻害される。しかし、本発明以前には、Ｊａｋ１又はＪａｋ３のどちらを阻害しても全体的なシグナル伝達効率に何らかの影響があるということ以外は、その作用が相加的であるのか又は相乗的であるのかはっきり分かっていない。Ｊａｋ１又はＪａｋ３のどちらを強力に阻害しても共通γ鎖シグナル伝達とその下流の生物学的アウトプット（例えばＮＫ細胞数）は著しく阻害又は悪化するであろうと予想された。
【０１０４】
しかし、本願に示すデータによると、これらの２種類のキナーゼは従来考えられていたよりもシグナル伝達複合体においてさほど協同的ではない（又は多少独立して作用する）ように思われる。化合物１はＪａｋ３よりもＪａｋ１に対する選択性が高い（例えばＪａｋ１／Ｊａｋ３効力比は約５８倍である）ため、共通γ鎖シグナル伝達の阻害はＪａｋ１阻害の影響が大きいと思われる。実際に、ＩＬ６とＩＬ７のシグナル伝達に対する化合物１の効力はよく似ているが、Ｊａｋ３に対して実質的な阻害作用をもつ他の化合物（例えばトファシチニブ）はＩＬ６シグナル伝達よりも共通γ鎖シグナル伝達に対する効力のほうが大きい。
【０１０５】
従って、化合物１による治療を受けたが、治療有効性が不十分又は至適以下である（例えば疾患症状の所望程度の緩和又は改善に達していない）患者、あるいは単に標準治療レジメン下で他の患者のように治療に反応しない患者では、この患者が望ましくない副作用（例えば網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数の減少）に耐えられる限り、より良好な治療有効性を達成するために用量増加を検討することができる。効果不十分であるが、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数の減少がごく少ない患者を同定すると、標準用量で得られるよりも良好な治療有効性を必要とし且つ用量増加に耐えられるこのような患者集団の治療が容易になると思われる。
【０１０６】
このような患者は網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数の減少が既に比較的大きくなっている他の患者よりも付随する副作用に耐えられる可能性が高いので、上記の代わりに又は上記に加えて、より良好な治療有効性を達成するために第２の治療剤を投与してもよい。本発明の化合物との併用療法に適していると考えられる任意治療剤を前記第２の治療剤とすることができる。
【０１０７】
逆に、化合物１による治療を受けたが、耐えられない副作用（例えば網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数の過度の減少）を示す患者では、治療有効性を維持しながらこのような耐えられない副作用を緩和するために用量低下を検討することができる。網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数が耐えられないほど減少している患者を同定すると、このような患者集団の治療が容易になると思われる。
【０１０８】
上記の代わりに又は上記に加えて、前記患者が既に化合物１と１種以上の第２の治療剤を使用する併用療法下にある場合には、網状赤血球数、ＮＫ細胞数、ＮＫＴ細胞数、ｉＮＫＴ細胞数及び／又はＣＤ８＋細胞数の減少に及ぼす影響を少なくするためにこのような第２の治療剤の１種以上を併用療法から取り除いてもよい。
【０１０９】
本発明の更に別の態様は自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤を提供し、前記医薬組成物は（１）単位用量の化合物（例えば遊離塩基形態の前記化合物）、その異性体、立体異性体又は医薬的に許容される塩（但し、前記化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドである。）と、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、前記化合物の遊離塩基換算量で０．１０〜１．１μｇ・ｈｒ／ｍＬ（又は０．１２８〜１．０５８μｇ・ｈｒ／ｍＬ）のＡＵＣ０−２４が得られる。
【０１１０】
１関連態様において、本発明は自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤を提供し、前記医薬組成物は、（１）単位用量の遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドと、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、前記ヒトにおいてＪａｋ１の活性がＪａｋ２の活性、Ｊａｋ３の活性及びＴｙｋ２の活性よりも優先的に阻害され、Ｊａｋ２及び／又はＪａｋ３活性の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満が阻害される。
【０１１１】
別の関連態様において、本発明は自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害の治療用医薬製剤を提供し、前記医薬組成物は、（１）単位用量の遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドと、（２）医薬的に許容される賦形剤を含有しており、前記単位用量を成人ヒトに１日２回（ＢＩＤ）投与すると、網状赤血球数又はＮＫ細胞数又はＮＫＴ細胞数又はｉＮＫＴ細胞数又はＣＤ８＋細胞数が治療前数値に対して５０％以下、４０％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下の範囲で減少する。
【０１１２】
所定の実施形態において、前記単位用量はカプセル剤、溶液剤、懸濁剤、錠剤、ピル剤、サシェ剤、カプセル剤、マルチパーティクル及び散剤である。
【０１１３】
所定の実施形態において、前記単位用量は前記化合物の遊離塩基換算量で約０．５ｍｇ、１ｍｇ、３ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１２ｍｇ、１８ｍｇ又は２４ｍｇである。
【０１１４】
所定の実施形態において、前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害は成人におけるクローン病（例えば中等度から重度の活動性ＣＤ）である。
【０１１５】
所定の実施形態において、前記自己免疫疾患もしくは障害又は炎症性疾患もしくは障害は成人患者における中等度から重度の活動性ＲＡ等の関節リウマチ（ＲＡ）である。
【０１１６】
所定の実施形態において、前記医薬的に許容される賦形剤は微結晶セルロース、二塩基性リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース又はその混合物を含む。
【０１１７】
所定の実施形態において、前記医薬的に許容される塩は塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、サッカリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩から構成される群から選択される。所定の実施形態において、前記医薬的に許容される塩は酒石酸塩である。
【０１１８】
所定の実施形態において、前記医薬製剤は経口（例えば小腸の所定部分での選択的放出）、局所、経皮、管腔内（例えば浣腸による胃腸又は結腸投与）又は眼内投与用に製剤化される。
【０１１９】
以上、本発明を概説したが、以下のセクションでは本発明の特定態様について詳述する。
【０１２０】
２．本発明の化合物、その異性体、立体異性体及び塩
本願で使用する本発明の化合物ないし「化合物１」としては、遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミド（Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏ）、その異性体、その立体異性体又はその医薬的に許容される塩（例えば酒石酸塩（Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏ・Ｃ４Ｈ６Ｏ６））が挙げられる。
【０１２１】
所定の実施形態において、化合物１とは遊離塩基形態の（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドを意味する。
【０１２２】
所定の実施形態において、化合物１とは後述する所定の実施例で使用される酒石酸塩形態を意味する。前記化合物１の酒石酸塩は（ＵＳＰ基準に従い、３７℃で）白色〜淡黄色粉末であり、ｐＨ４．５でやや溶けにくく、ｐＨ６．８で溶けにくい。化合物１の酒石酸塩は２つの立体中心をもち、単一の立体異性体として製造される。
【０１２３】
所定の実施形態において、化合物１とは遊離塩基形態の化合物（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミド（Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏ）を意味し、そのエナンチオマーを含まない。
【０１２４】
本発明の所定の化合物はもともと塩基性のものでよく、種々の無機酸及び有機酸と共に多種多様な塩を形成することができる。このような塩はヒトを含む動物に投与するのに医薬的に許容可能でなければならないが、実際には先ず反応混合物から医薬的に許容できない塩として本発明の化合物を単離してからアルカリ試薬で処理することによりこの塩を単純に遊離塩基に戻した後、この遊離塩基を医薬的に許容される酸付加塩に変換することが望ましい場合が多い。本発明の塩基性化合物の酸付加塩はこの塩基性化合物を水性溶媒又は適切な有機溶媒（例えばメタノール又はエタノール）中にて実質的に等モル量の選択された無機酸又は有機酸で処理することにより容易に製造される。溶媒を注意深く蒸発させると、所望の固体状の塩が容易に得られる。遊離塩基の有機溶媒溶液に適切な無機酸又は有機酸を加えることにより、この溶液から所望の酸性塩を沈殿させることもできる。
【０１２５】
「医薬的に許容される塩」とは、遊離塩基の生物学的な有効性と性質を維持し、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸及びリン酸）又は有機酸（例えばスルホン酸、カルボン酸、有機リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、乳酸、モノリンゴ酸、モノ蓚酸、酒石酸（例えばモノ酒石酸（例えば（＋）もしくは（−）−酒石酸又はその混合物））、アミノ酸（例えば（＋）もしくは（−）−アミノ酸又はその混合物）等との反応により得られる塩を意味する。これらの塩は当業者に公知の方法により製造することができる。
【０１２６】
本発明の所定の化合物は医薬的に適合可能な対イオンとの塩として提供することができる。医薬的に適合可能な塩は多くの酸と形成することができ、限定されないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等が挙げられる。塩は対応する遊離塩基形態よりも水性又は他のプロトン性溶媒に溶け易い傾向がある。
【０１２７】
従って、本発明は本発明の化合物（例えば遊離塩基形態の化合物１）の医薬的に許容される酸付加塩、その異性体及び立体異性体にも関する。医薬的に許容される酸付加塩を製造するために使用される酸は非毒性酸付加塩、即ち塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、サッカリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩（例えば１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸）塩）等の薬理学的に許容されるアニオンを含有する塩を形成する酸である。
【０１２８】
本発明の所定の化合物とその塩は２種以上の結晶形で存在する場合があり、本発明は各結晶形とその混合物を含む。
【０１２９】
本発明の所定の化合物とその塩は溶媒和物（例えば水和物）として存在する場合もあり、本発明は各溶媒和物とその混合物を含む。
【０１３０】
本発明の所定の化合物はキラル中心を２個以上含み、異なる光学活性形で存在する場合がある。一般に、化合物がキラル中心を１個含む場合には、その化合物は２種のエナンチオマーとして存在することができ、両方のエナンチオマーとラセミ混合物等のエナンチオマーの混合物を含む。エナンチオマーは当業者に公知の方法により分割することができ、例を挙げると、例えば結晶化により分離可能なジアステレオマー塩の形成；例えば結晶化、気−液もしくは液体クロマトグラフィーにより分離可能なジアステレオマー誘導体もしくは錯体の形成；一方のエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応（例えば酵素触媒エステル化）；又はキラルな環境下、例えばキラル担体（例えばキラルリガンドを結合したシリカ）の使用やキラル溶媒の存在下における気−液もしくは液体クロマトグラフィーが挙げられる。当然のことながら、上記分離法の１種により所望のエナンチオマーが別の化学種に変換される場合には、所望のエナンチオマーを遊離させるために別の工程が必要になる。あるいは、光学活性試薬、基質、触媒もしくは溶媒和物を使用した不斉合成により、又は不斉変換により一方のエナンチオマーを他方に変換することにより、特定のエナンチオマーを合成することもできる。
【０１３１】
本発明の化合物が２個以上のキラル中心を含む場合には、ジアステレオマーとして存在する場合がある。ジアステレオマー化合物は当業者に公知の方法（例えばクロマトグラフィー又は結晶化）により分離することができ、個々のエナンチオマーを上記のように分離することができる。本発明は本発明の化合物（例えば化合物１）の各ジアステレオマーとその混合物を含む。
【０１３２】
本発明の所定の化合物は種々の互変異性体又は種々の幾何異性体として存在する場合があり、本発明は本発明の化合物の各互変異性体及び／又は幾何異性体とその混合物を含む。
【０１３３】
本発明の所定の化合物は分離可能な種々の安定な立体配座形で存在する場合がある。非対称な単結合のまわりの回転は例えば立体障害や環ひずみにより束縛されるため、ねじれひずみを生じ、各コンホマーが分離する場合がある。本発明は本発明の化合物の各配座異性体とその混合物を含む。
【０１３４】
従って、本発明の化合物は全配座異性体（例えばシス及びトランス異性体）を含む。本発明の化合物は不斉中心をもつため、種々のエナンチオマー及びジアステレオマーとして存在する。所定の実施形態において、本発明は本発明の化合物の全光学異性体及び立体異性体並びにその混合物の使用と、これらを利用又は含有し得る全医薬組成物及び治療方法に関する。所定の実施形態において、本発明は（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミド（Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ６Ｏ）等の本発明の化合物の選択された光学異性体及び立体異性体の使用と、前記選択された光学異性体及び立体異性体を利用又は含有し得る全医薬組成物及び治療方法に関する。
【０１３５】
本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もある。所定の実施形態において、本発明はこのような全互変異性体とその混合物の使用に関する。
【０１３６】
本発明の所定の化合物は両性イオン形で存在する場合があり、本発明は本発明の化合物の各両性イオン形とその混合物を含む。
【０１３７】
（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドを含む本発明の化合物、その医薬的に許容される塩、その立体異性体及びその異性体の合成はその開示内容全体を本願に援用する米国特許第８，４２６，４１１号に記載されている。
【０１３８】
例えば、（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドは以下のスキームに従って合成することができる。
【０１３９】
ハロゲン化アルキル、α−ハロケトン又はα−ハロアミドを使用したＮ−アルキル化
丸底フラスコにＮａＨ（６０％鉱油分散物）、Ｋ２ＣＯ３又はＣｓ２ＣＯ３等の塩基（好ましくはＮａＨ（６０％鉱油分散物）０．９〜１．５当量、好ましくは０．９５当量）と有機溶媒（例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１，４−ジオキサン又はＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、好ましくはＤＭＦ）を仕込む。混合液を約−１０℃〜周囲温度（好ましくは約０℃）まで冷却し、適当に置換されたアミン（好ましくは１当量）の有機溶媒（例えばＤＭＦ）溶液を加える。あるいは、約０℃〜周囲温度で前記アミンと有機溶媒の溶液に前記塩基を少量ずつ加えてもよい。反応混合液を約−１０℃〜周囲温度（好ましくは約０℃）で約５〜９０分間（好ましくは約１５〜３０分間）撹拌後、ハロゲン化アルキル、α−ハロケトン又はα−ハロアミド（１〜２当量、好ましくは１．２当量）を加える。あるいは、ハロゲン化アルキル、α−ハロケトン又はα−ハロアミドの有機溶媒溶液に約０℃でアミンと塩基の有機溶媒溶液を加えてもよい。反応混合液を約−１０℃〜周囲温度（好ましくは周囲温度）で約０．５〜２４時間（好ましくは約１時間）撹拌する。場合により、有機溶媒を減圧除去してもよい。場合により、反応混合液又は残渣を水、ＮＨ４Ｃｌ水溶液又はＮａＨＣＯ３水溶液で希釈してもよい。沈殿が形成される場合には、場合により減圧濾過により固形分を採取し、目的化合物を得る。あるいは、有機溶媒（例えば酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）又はＤＣＭ）を水性混合液に加え、層分離する。水層を場合により有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ及び／又はＤＣＭ）で更に抽出してもよい。有機層を合わせて場合により更にブライン等の水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４又はＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮乾涸する。
【０１４０】
ｔｅｒｔ−ブチル（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル）カルバメートからｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−２−オキソエチル（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−２−イル）カルバメートを製造する際の上記手順を以下に具体的に説明する。
【０１４１】
ｔｅｒｔ−ブチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−２−イルカルバメート（１．００ｇ，２．５７ｍｍｏｌ，実施例番号３，工程Ｅ）のＤＭＦ（１３ｍＬ）溶液に窒素下で約０℃にてＮａＨ（６０％鉱油分散物，０．１１３ｇ，２．８３ｍｍｏｌ）を一度に加えた。約３０分後に、２−ブロモアセトアミド（０．３９１ｇ，２．８３ｍｍｏｌ）を一度に加えた。約３０分後に氷浴を除去し、溶液を周囲温度で約２時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液／水（１：１，１００ｍＬ）を加えた。約１０分間撹拌後に、混合液を濾過し、水を使用してフィルターケーキを洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。フィルターケーキをＥｔＯＡｃに溶解し、有機層に加えた。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。２０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンのグラジエント溶出により生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−２−オキソエチル（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピラジン−２−イル）カルバメート（０．９８０ｇ，８２％）を得た：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ｎ）Ｒｔ＝０．７０分；ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４２】
ｔｅｒｔ−ブチル（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル）カルバメートとベンジル３−（２−ブロモアセチル）−４−エチルピロリジン−１−カルボキシレートからベンジル３−エチル−４−（２−（（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル）アミノ）アセチル）ピロリジン−１−カルボキシレートを合成する際にも同様の反応条件を使用することができる。
【０１４３】
ジチアホスフェタン試薬を使用したケトンの環化（例えばベンジル３−エチル−４−（２−（（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル）アミノ）アセチル）ピロリジン−１−カルボキシレートから（３Ｓ，４Ｒ）−ベンジル３−エチル−４−（３−トシル−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）ピロリジン−１−カルボキシレートの合成）
ケトン（好ましくは１当量）の有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）又は１，４−ジオキサン（好ましくは１，４−ジオキサン））溶液にローソン試薬やベリュー試薬（２，４−ビス（４−フェノキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン−２，４−ジスルフィド）等のチオール化試薬（０．５〜２．０当量、好ましくはローソン試薬０．５〜０．６当量）を加える。反応液を約３０℃〜１２０℃（好ましくは約６０〜７０℃）に約０．５〜１０時間（好ましくは約１〜２時間）加熱する。場合により、更にチオール化試薬（０．５〜２．０当量、好ましくは０．５〜０．６当量）を反応混合液に加え、約０．５〜１０時間（好ましくは約１〜２時間）加熱を続けてもよい。反応混合液を減圧濃縮する。
【０１４４】
（３Ｓ，４Ｒ）−ベンジル３−エチル−４−（３−トシル−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）ピロリジン−１−カルボキシレートから８−（（シス）−４−エチルピロリジン−３−イル）−３−トシル−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジンの製造
（シス）−ベンジル３−エチル−４−（３−トシル−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（０．８３８ｇ，１．５４１ｍｍｏｌ）の溶液にＨＢｒ（２．５０ｍＬ，１５．１９ｍｍｏｌ，酢酸中３３％）の溶液を加える。反応混合液を周囲温度で約１時間撹拌する。反応液をジエチルエーテル又はＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）で希釈する。層を約３分間撹拌し、有機層をデカントした後、この手順を５回繰返す。水層を約０℃まで冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で約ｐＨ７まで塩基性化する。水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせて無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、茶色い固体を得る。この固体をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、水洗（３×２０ｍＬ）し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、８−（（シス）−４−エチルピロリジン−３−イル）−３−トシル−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン（０．４５３，６１％）を茶色い残渣として得る：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ａ）Ｒｔ＝１．７３分；ＭＳ  ｍ／ｚ：４１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４５】
スルホンアミドの加水分解（例えば８−（（３Ｒ，４Ｓ）−４−エチルピロリジン−３−イル）−３−トシル−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジンから８−（（３Ｒ，４Ｓ）−４−エチルピロリジン−３−イル）−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジンへの変換）
スルホンアミド（例えばスルホニル保護ピロール）（好ましくは１当量）と有機溶媒（例えば１，４−ジオキサン、メタノール（ＭｅＯＨ）又はＴＨＦ／ＭｅＯＨ、好ましくは１，４−ジオキサン）を仕込んだフラスコに塩基水溶液（例えばＮａ２ＣＯ３水溶液又はＮａＯＨ水溶液１〜３０当量、ＮａＯＨ水溶液の場合には好ましくは２〜３当量、Ｎａ２ＣＯ３水溶液の場合には好ましくは１５〜２０当量）を加える。混合液を約２５〜１００℃（好ましくは約６０℃）で約１〜７２時間（好ましくは約１〜１６時間）撹拌する。ＴＬＣ、ＬＣ／ＭＳ又はＨＰＬＣにより追跡して反応が完了まで進行していないと確認される場合には、更に塩基水溶液（例えばＮａ２ＣＯ３水溶液１０〜２０当量、好ましくは１０当量、又はＮａＯＨ水溶液１〜５当量、好ましくは１〜２当量）及び／又は補助溶媒（例えばエタノール（ＥｔＯＨ））を加える。約２５〜１００℃（好ましくは約６０℃）で約０．２５〜３時間（好ましくは約１〜２時間）反応を続ける。他に塩基に不安定な基（例えばエステル、トリフルオロメチル又はシアノ基）が存在する場合には、この基も加水分解してもよい。以下の方法の１種を使用して反応の後処理を行う。方法１．有機溶媒を場合により減圧除去し、適切な酸水溶液（例えばＨＣｌ水溶液）を加えて水溶液を中和する。適切な有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ又はＤＣＭ）と水を加え、層分離し、有機溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４又はＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮乾涸し、目的化合物を得る。方法２．有機溶媒を場合により減圧除去し、適切な有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ又はＤＣＭ）を加え、層分離し、有機溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４又はＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮乾涸し、目的化合物を得る。方法３．反応混合液を減圧濃縮し、後続方法の１種により直接精製する。
【０１４６】
夫々ＣＤＩ又はチオカルボニルジイミダゾールを使用した尿素の形成（例えば８−（（３Ｒ，４Ｓ）−４−エチルピロリジン−３−イル）−３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジンから（３Ｓ，４Ｒ）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドへの変換）
アミン又はアミン塩（１〜３当量、好ましくは１〜２当量）のＤＣＭ、ＴＨＦ又はＤＭＦ等の有機溶媒（好ましくはＤＭＦ）溶液又はスラリーに約２０〜８０℃（好ましくは約６５℃）にて場合によりトリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ピリジン等の有機塩基（好ましくはＴＥＡ）（１〜１０当量、好ましくは１〜５当量）を加えた後、ＣＤＩ又は１，１’−チオカルボニルジイミダゾール（０．５〜２当量、好ましくは１当量）を加える。約０．５〜２４時間（好ましくは約１〜３時間）後に、第２のアミン又はアミン塩（１〜１０当量、好ましくは１〜３当量）を純液又はＤＣＭ、ＴＨＦもしくはＤＭＦ等の有機溶媒（好ましくはＤＭＦ）溶液もしくはスラリーとして加える。反応を約２０〜８０℃（好ましくは約６５℃）で約２〜２４時間（好ましくは約３時間）続ける。反応混合液を加熱する場合には、周囲温度まで冷却する。反応混合液を有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ、ＤＣＭ又は１，４−ジオキサン）と塩基水溶液（例えば飽和ＮａＨＣＯ３水溶液又は飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液、好ましくは飽和ＮａＨＣＯ３水溶液）に分液する。場合により、反応混合液を減圧濃縮し、残渣を上記のように分液する。いずれの場合も、その後、場合により水層を更にＥｔＯＡｃやＤＣＭ等の有機溶媒で抽出する。有機層を合わせ、場合によりブライン洗浄し、減圧濃縮又は無水Ｎａ２ＳＯ４もしくはＭｇＳＯ４で乾燥後、デカント又は濾過した後、減圧濃縮し、目的化合物を得ることもできる。場合により、反応混合液を減圧濃縮し、残渣を直接精製する。
【０１４７】
キラル分取ＨＰＬＣ精製
Ｖａｒｉａｎ  ２１８  ＬＣポンプと、切替弁と溶媒、カラム及び温度の自動制御用ヒーターを取り付けたＶａｒｉａｎ  ＣＶＭ  ５００と、Ｖａｒｉａｎ  ７０１フラクションコレクターを使用してキラル精製を実施する。検出法はＶａｒｉａｎ  ２１０可変波長検出器と、定性的旋光度（＋／−）を測定するために使用するインライン旋光計（ＰＤＲ−キラル次世代レーザー旋光計，モデルＡＬＰ２００２）と、１００：１スプリットフローを使用する蒸発型光散乱検出器（ＥＬＳＤ）（ＰＳ−ＥＬＳ  ２１００（Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を利用する。ＥＬＳＤ設定はエバポレーター４６℃、ネブライザー２４℃及び流速１．１ＳＬＭとする。精製した化合物の絶対立体配置を任意に割り当て、そのまま表示する。市販の純エナンチオマー出発材料、又は立体配置が明確な中間体、又はＸ線回折法を使用して絶対立体配置を決定した本発明の化合物には実施例番号の後に星印を付ける。
【０１４８】
上記方法を使用して単離した（シス）−３−エチル−４−（３Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピロロ［２，３−ｅ］ピラジン−８−イル）−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピロリジン−１−カルボキサミドはＲｔが１．５２分であり、ｍ／ｚ  ＥＳＩ＋（Ｍ＋Ｈ）＋が３８１である。
【０１４９】
上記合成スキームの出発材料と中間体は以下のスキームを使用して得ることができる。
【０１５０】
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−エチルピロリジン−３−カルボン酸の出発材料の製造
工程Ａ：エチルペンタ−２−イノエートから（Ｚ）−エチルペンタ−２−エノエートへの変換
リンドラー触媒（０．８４４ｇ，０．３９６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）とピリジン（１０．００ｍＬ）に分散させたスラリーにエチルペンタ−２−イノエート（５．２２ｍＬ，３９．６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液に約１０分間水素スパージし、バルーンにより水素雰囲気を維持する。約１５時間後に反応混合液をＣｅｌｉｔｅ（Ｒ）パッドで濾過し、Ｅｔ２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、飽和ＣｕＳＯ４水溶液（４０ｍＬ）で洗浄後、水洗（４０ｍＬ）する。有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮し、粗生成物である（Ｚ）−エチルペンタ−２−エノエートを得る（５ｇ，９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．０５（ｔ，３Ｈ），１．２８（ｔ，３Ｈ），２．６５（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｑ，２  Ｈ），５．７２（ｍ，１Ｈ），６．２１（ｍ，１Ｈ）。
【０１５１】
工程Ｂ：（（Ｚ）−エチルペンタ−２−エノエートとＮ−ベンジル−１−メトキシ−Ｎ−（（トリメチルシリル）メチル）メタンアミンから）（シス）−エチル１−ベンジル−４−エチルピロリジン−３−カルボキシレートの製造
Ｎ−ベンジル−１−メトキシ−Ｎ−（（トリメチルシリル）メチル）メタンアミン（９．９８ｍＬ，３９．０ｍｍｏｌ）と（Ｚ）−エチルペンタ−２−エノエート（５ｇ，３９．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に室温でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（０．０３０ｍＬ，０．３９０ｍｍｏｌ）を加える。約２日後に反応混合液を減圧濃縮し、粗生成物である（シス）−エチル１−ベンジル−４−エチルピロリジン−３−カルボキシレート（９．８ｇ，９６％）を油状物として得る。ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ａ）Ｒｔ＝１．６２分；ＭＳ  ｍ／ｚ：２６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５２】
工程Ｃ：エチル１−ベンジル−４−エチルピロリジン−３−カルボキシレートから（シス）−エチル４−エチルピロリジン−３−カルボキシレートへの変換
パールシェーカーに炭素担持ＰｄＯＨ２（２．２４３ｇ，３．１９ｍｍｏｌ）と（シス）−エチル１−ベンジル−４−エチルピロリジン−３−カルボキシレート（１６．７ｇ，６３．９ｍｍｏｌ）を仕込んだ後、ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を加える。反応混合液を脱気し、水素ガスをパージ後、パールシェーカーで６０ｐｓｉにて約４日間周囲温度で振盪する。反応混合液を脱気し、窒素パージする。懸濁液をＣｅｌｉｔｅ（Ｒ）パッドで濾過し、ＥｔＯＨ（〜９００ｍＬ）で洗浄する。溶媒を減圧除去し、（シス）−エチル４−エチルピロリジン−３−カルボキシレート（８．６９ｇ，７９％）を油状物として得る：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ａ）Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ  ｍ／ｚ：１７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５３】
工程Ｄ：（シス）−エチル４−エチルピロリジン−３−カルボキシレートから（シス）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−エチルピロリジン−３−カルボン酸への変換
（シス）−エチル４−エチルピロリジン−３−カルボキシレート（８．６９ｇ，５０．７ｍｍｏｌ）を仕込んだフラスコにＨＣｌ水溶液（６Ｎ，１３０ｍＬ，７８２ｍｍｏｌ）を加える。溶液を約７５℃に約１２時間加熱する。ＨＣｌ水溶液（６Ｎ，１００ｍＬ，５９９ｍｍｏｌ）を加え、約８０℃で約２０時間撹拌する。ＨＣｌ水溶液（６Ｎ，１００ｍＬ，５９９ｍｍｏｌ）を加え、約８０℃で約２０時間撹拌を続ける。反応混合液を周囲温度まで冷却し、溶媒を減圧除去する。１，４−ジオキサン（２７５ｍＬ）と水（５０ｍＬ）を加えた後、Ｎａ２ＣＯ３（１３．５ｇ，１２７ｍｍｏｌ）を少量ずつ加える。二炭酸−ｔｅｒｔ−ブチル（１３．３ｇ，６０．９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合液を周囲温度で約１６時間撹拌する。固形分を濾過し、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄する。水層をＨＣｌ水溶液（１Ｎ）で約ｐＨ３〜４まで酸性化する。二層を分液し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせて無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧除去する。有機層がほぼ完全に濃縮される（残量〜１０ｍＬ）につれて固形分が沈殿した。ヘプタン（３０ｍＬ）を加え、固形分を濾過し、ヘプタンで洗浄し、（シス）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−エチルピロリジン−３−カルボン酸（３．９ｇ，３２％）をオフホワイト固体状の生成物として得る：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ｃ）Ｒｔ＝０．５７分；ＭＳ  ｍ／ｚ：２４２（Ｍ−Ｈ）−。
【０１５４】
中間体ベンジル３−（２−ブロモアセチル）−４−エチルピロリジン−１−カルボキシレートの合成
Ｂｏｃ保護アミンの酸開裂（例えば１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−エチルピロリジン−３−カルボン酸から４−エチルピロリジン−３−カルボン酸塩酸塩への変換）
Ｂｏｃ保護アミン（好ましくは１当量）の有機溶媒（例えばＤＣＭ、１，４−ジオキサン又はＭｅＯＨ）溶液にＴＦＡ又はＨＣｌ（好ましくは４Ｎ  ＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液２〜３５当量、好ましくは２〜１５当量）を加える。反応液を約２０〜１００℃（好ましくは周囲温度〜約６０℃）で約１〜２４時間（好ましくは約１〜６時間）撹拌する。他に酸に不安定な基（例えばｔ−ブチルエステル）が存在する場合には、反応中にこの基も開裂してもよい。場合により、ＴＬＣ、ＬＣ／ＭＳ又はＨＰＬＣにより追跡して反応が完了まで進行していないと確認される場合には、更にＴＦＡ又はＨＣｌ（好ましくは４Ｎ  ＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液２〜３５当量、好ましくは２〜１５当量）を反応混合液に加えてもよい。反応が許容されるレベルまで進行したら、反応混合液を減圧濃縮し、アミンを塩として得ることができる。あるいは、反応液を有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ、ＤＣＭ又は１，４−ジオキサン）と塩基水溶液（例えば飽和ＮａＨＣＯ３水溶液又は飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液、好ましくは飽和ＮａＨＣＯ３水溶液）に分液してもよい。水層を場合により更に有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ又はＤＣＭ）で抽出してもよい。有機層を合わせて場合によりブライン洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４又はＭｇＳＯ４で乾燥後、デカント又は濾過した後、減圧濃縮し、目的化合物が得られる。
【０１５５】
アミンのＣｂｚ保護（例えば４−エチルピロリジン−３−カルボン酸塩酸塩から１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４−エチルピロリジン−３−カルボン酸への変換）
アミン又はアミン塩（好ましくは１当量）と塩基（例えばＮａ２ＣＯ３又はＮａＯＨ１〜３当量、好ましくはＮａ２ＣＯ３  １．６当量）の水溶液又は水性有機溶媒（例えば水／１，４−ジオキサン又は水／アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、好ましくは水／１，４−ジオキサン）溶液を周囲温度で約１〜１０分間（好ましくは５分間）撹拌する。ベンジル２，５−ジオキソピロリジン−１−イルカーボネート（１〜２当量、好ましくは１．０当量）の有機溶媒（例えば１，４−ジオキサン又はＭｅＣＮ）溶液を反応液に加える。反応液を周囲温度で約８〜１４４時間（好ましくは約７２時間）撹拌する。場合により，反応混合液を減圧濃縮する。得られた水溶液を有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ又はＤＣＭ）で希釈する。有機抽出層を場合により水及び／又はブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４又はＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過又はデカントし、減圧濃縮する。あるいは、得られた水溶液にＮＨ４Ｃｌ水溶液やＨＣｌ水溶液等の酸を加えて酸性化した後、有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ又はＤＣＭ）で抽出する。
【０１５６】
酸からブロモメチルケトンの形成（例えば１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４−エチルピロリジン−３−カルボン酸からベンジル３−（２−ブロモアセチル）−４−エチルピロリジン−１−カルボキシレートへの変換）
カルボン酸（好ましくは１当量）の有機溶媒（ＤＣＭ又は１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、好ましくはＤＣＭ）溶液に塩化オキサリル（１．２〜３．０当量、好ましくは２．２当量）をゆっくりと加えた後、ＤＭＦ（０．０１〜０．２０当量、好ましくは約０．１５当量）を滴下する。反応液を約０〜４０℃（好ましくは周囲温度）で約３〜２４時間（好ましくは約１４時間）撹拌後、安定した重量になるまで減圧濃縮し、粗生成物である酸塩化物を得る。粗生成物である酸塩化物（好ましくは１当量）の有機溶媒（例えばＴＨＦ、ＭｅＣＮ、Ｅｔ２Ｏ又はＴＨＦ／ＭｅＣＮ、好ましくはＴＨＦ／ＭｅＣＮ）溶液を約−２０〜２０℃（好ましくは約０℃）にてＴＨＦ、ＭｅＣＮ、Ｅｔ２Ｏ又はＴＨＦ／ＭｅＣＮ等の適切な有機溶媒（好ましくはＴＨＦ／ＭｅＣＮ）中でトリメチルシリルジアゾメタン（２．０Ｍ  Ｅｔ２Ｏ溶液）又はジアゾメタンのＥｔ２Ｏ溶液（Ａｌｄｒｉｃｈプロトコール又はＪ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｓｃｉ．１９９１，２９：８に従ってＤＩＡＺＡＬＤ（Ｒ）から製造）（２〜１０当量、好ましくはトリメチルシリルジアゾメタン３．５当量）に加える。反応混合液を約０．５〜５時間（好ましくは約３時間）約−２０〜２０℃（好ましくは約０℃）で撹拌後に４８％ＨＢｒ水溶液（５〜４０当量、好ましくは約１０当量）を滴下する。約０〜３０分（好ましくは約５分）後に、反応混合液を濃縮乾涸すると、目的の生成物を得ることができ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液の滴下により中和し、又は場合により有機溶媒（例えばＥｔＯＡｃ又はＤＣＭ、好ましくはＥｔＯＡｃ）の添加後に場合によりブライン洗浄する。反応混合液を水性後処理する場合には、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４又はＭｇＳＯ４（好ましくはＭｇＳＯ４）で乾燥し、濾過し、減圧濃縮する。
【０１５７】
中間体ｔｅｒｔ−ブチル（５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル）カルバメートの合成
工程Ａ：３，５−ジブロモピラジン−２−アミンから５−ブロモ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）ピラジン−２−アミンへの変換
３，５−ジブロモピラジン−２−アミン（１２５ｇ，４９４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（２０７．０ｍＬ，１４８３ｍｍｏｌ）及びヨウ化銅（Ｉ）（０．９４１ｇ，４．９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２５５ｍＬ）溶液にＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（３．４７ｇ，４．９４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を約−５〜０℃まで冷却し、（トリメチルシリル）アセチレン（６５．０ｍＬ，４７０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５７ｍＬ）溶液を約１５分間かけて滴下する。反応混合液を約−５〜０℃で約１．５時間撹拌後、室温（ＲＴ）まで一晩昇温する。次に反応混合液をＣＥＬＩＴＥ（Ｒ）パッドで濾過し、生成物が溶出しなくなるまでＴＨＦで洗浄する。濾液を減圧濃縮し、茶色がかったオレンジ色の固体を得る。石油エーテル（ｂ．ｐ．３０〜６０℃，４００ｍＬ）を加えて固体をトリチュレーション及び超音波処理し、室温まで冷却し、採取し、石油エーテル（ｂ．ｐ．３０〜６０℃；２×６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、５−ブロモ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）ピラジン−２−アミン（１２４ｇ，９３％、９３％純度）を茶色い固体として得る：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ｂ）Ｒｔ＝２．５１分；ＭＳ  ｍ／ｚ：２７０，２７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５８】
工程Ｂ：５−ブロモ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）ピラジン−２−アミンから２−ブロモ−５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンへの変換
５−ブロモ−３−（（トリメチルシリル）エチニル）ピラジン−２−アミン（３．００ｇ，１１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）溶液に約０℃にてＮａＨ（６０％鉱油分散物，０．５７７ｇ，１４．４ｍｍｏｌ）を３回に分けて加える。約１５分後にｐ−トルエンスルホニルクロリド（２．７５ｇ，１４．４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を周囲温度までゆっくりと昇温する。約１６時間後に反応混合液を氷冷水（１２０ｍＬ）に注ぎ、沈殿を減圧濾過により採取する。粗生成物である固体をＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２−ブロモ−５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを得る（２．１６ｇ，５２％）：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ｃ）Ｒｔ＝１．５８分；ＭＳ  ｍ／ｚ：３５２，３５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５９】
工程Ｃ：２−ブロモ−５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンからメチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボキシレートへの変換
５Ｌ丸底フラスコ内で２−ブロモ−５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（５０．０ｇ，１４２ｍｍｏｌ）のオレンジ色のＤＭＦ（２．５０Ｌ）溶液に約２分間ＣＯをバブリングする。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（９．９６ｇ，１４．２ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（５９ｍＬ，４２３ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（１７３．０ｍＬ，４２５９ｍｍｏｌ）を加え、フラスコにＣＯバルーンを取付ける。混合液をＣＯ雰囲気（１気圧）下で約９５℃に加熱する。一晩撹拌後、反応混合液を周囲温度まで一晩冷却し、氷水（３．２Ｌ）に注ぐ。混合液を約１０分間撹拌し、沈殿を水洗下に濾取し、１時間乾燥する。粗生成物をＤＣＭに溶解し、残留水から分離し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、シリカゲルを加え、減圧濃縮し、クロマトグラフィーに備える。ＤＣＭ中０−５％ＭｅＯＨを溶離液として粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、添加剤として５ｍｏｌ％ＤＣＭを含有するメチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボキシレートを得る（４０．７ｇ，８６％、９３％純度）：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ａ）Ｒｔ＝２．３５分；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６０】
工程Ｄ：メチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボキシレートから５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボン酸への変換
２Ｌ丸底フラスコ内でメチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボキシレート（１７．８ｇ，５３．６ｍｍｏｌ）の黄色い１，４−ジオキサン（７１５ｍＬ）溶液にＨＣｌ（６Ｎ水溶液，７１４ｍＬ）を加え、混合液を約６０℃に約１６時間加熱する。反応混合液を周囲温度まで冷却する。有機溶媒を減圧除去し、沈殿を採取し、水洗し、乾燥し、５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボン酸（１４．４ｇ，８５％）を黄色い固体として得る：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ａ）Ｒｔ＝１．６３分；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１６（Ｍ−Ｈ）−。
【０１６１】
工程Ｅ：５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボン酸からｔｅｒｔ−ブチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イルカルバメートへの変換
５００ｍＬ丸底フラスコ内で５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−カルボン酸（１４．４ｇ，４５．３ｍｍｏｌ）、ジフェニルホスホリルアジド（９．７８ｍＬ，４５．３ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１３．９ｍＬ，１００ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブタノール（ｔ−ＢｕＯＨ）（２００ｍＬ）に加え、オレンジ色の懸濁液を得る。混合液を約７０℃に約１６時間加熱し、周囲温度まで冷却し、不溶分を濾去する。溶媒を減圧除去し、ヘプタン中２５−６０％ＥｔＯＡｃを溶離液として粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル５−トシル−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イルカルバメート（９．７５ｇ，５４％）をオフホワイト固体として得る：ＬＣ／ＭＳ（表１，方法ａ）Ｒｔ＝２．７９分；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６２】
３．治療可能な疾患
Ｊａｋ１は所定のＩ型及びＩＩ型サイトカインのシグナル伝達に不可欠なチロシンキナーゼである。Ｉ型サイトカイン受容体の共通γ鎖（γｃ）と相互作用し、ＩＬ−２受容体ファミリー（例えばＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ及びＩＬ−１５Ｒ）、ＩＬ−４受容体ファミリー（例えばＩＬ−４Ｒ及びＩＬ−１３Ｒ）及びｇｐ１３０受容体ファミリー（例えばＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＬＩＦ−Ｒ、ＯＳＭ−Ｒ、カルジオトロフィン−１受容体（ＣＴ−１Ｒ）、毛様体神経栄養因子受容体（ＣＮＴＦ−Ｒ）、ニューロトロフィン−１受容体（ＮＮＴ−１Ｒ）及びＬｅｐｔｉｎ−Ｒ）からシグナルを誘発する。ＩＩ型サイトカイン受容体を介してＩ型（ＩＦＮ−α／β）及びＩＩ型（ＩＦＮ−γ）インターフェロンとＩＬ−１０ファミリーのメンバーによりシグナルを伝達するためにも重要である。従って、Ｊａｋ１は複数の主要なサイトカイン受容体ファミリーに対する反応を開始するのに重要な役割を果たす。
【０１６３】
新生マウスにおけるＪａｋ１の欠損は恐らく授乳が困難になることから致命的である（Ｒｏｄｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９３（３）：３７３−３８３，１９９８）。癌細胞でＪａｋ１が発現すると、個々の細胞が収縮し、その腫瘍が流出し、生体の他の部分へ転移する可能性がある。
【０１６４】
本発明の化合物は免疫調節、炎症、又は癌等の増殖性疾患を含む多数の病態に関係する細胞内シグナル伝達経路に関与するＪａｋ１キナーゼの選択的阻害剤である。従って、本発明の化合物はＪａｋ１活性が有害に作用する病態の少なくとも１種の症状の緩和、及び／又はＪａｋ１活性が有害に作用する病態の少なくとも１種の症状もしくは徴候の進行の抑制を含めて、このような病態を治療するために使用することができる。
【０１６５】
例えば、多くの自己免疫疾患及び慢性炎症と急性反応を伴う疾患はそのシグナル伝達がＪＡＫキナーゼに依存する１種以上のサイトカインの過剰又は無制御な産生又は活性に関連付けられている。このような疾患としては、中等度から重度のＲＡ等の関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、中等度から重度のクローン病等のクローン病、中等度から重度の慢性プラーク乾癬等の乾癬、中等度から重度の潰瘍性大腸炎等の潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、中等度から重度の多関節型ＪＩＡ等の若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糖尿病性腎症、ドライアイ症候群、シェーグレン症候群、円形脱毛症、白斑又はアトピー性皮膚炎が挙げられる。
【０１６６】
これらの疾患もしくは病態の治療又はこれらの疾患もしくは病態の少なくとも１種の症状の緩和は１種以上の当分野で認められている治療有効性測定により測定することができ、このような測定については、ＲＡ、ＪＩＡ、クローン病、乾癬性関節炎、乾癬、潰瘍性大腸炎及び強直性脊椎炎等の数種の代表的な治療可能な疾患又は病態に関して本セクションの後半に詳述する。
【０１６７】
従って、本発明は（ａ）関節リウマチ、多発性硬化症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、ループス、クローン病、血管炎、心筋症、乾癬、ライター症候群、糸球体腎炎、潰瘍性大腸炎、アレルギー性喘息、インスリン依存性糖尿病、末梢神経障害、ぶどう膜炎、線維化性肺胞炎、Ｉ型糖尿病、若年性糖尿病、若年性関節炎、キャッスルマン病、好中球減少症、子宮内膜症、自己免疫性甲状腺疾患、精子及び精巣自己免疫、強皮症、軸索及びニューロン神経障害、アレルギー性鼻炎、シェーグレン症候群、溶血性貧血、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ＩｇＡ腎症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎，ベーチェット病、サルコイドーシス、水疱性皮膚症、筋炎、原発性胆汁性肝硬変、リウマチ性多発性筋痛症、自己免疫性免疫不全症、シャーガス病、川崎症候群、乾癬性関節炎、セリアックスプルー、重症筋無力症、自己免疫性心筋炎、ＰＯＥＭＳ症候群並びに慢性疲労症候群から構成される群から選択される障害又は病態の治療又は予防用の医薬組成物に関する。
【０１６８】
所定の実施形態において、本発明は（ａ）ループス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病及び糖尿病合併症（例えば糖尿病性腎症）、アトピー性皮膚炎、自己免疫性甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病並びに他の自己免疫疾患から構成される群から選択される障害もしくは病態の治療もしくは予防用、又は（ｂ）ヒトを含む哺乳動物におけるタンパク質キナーゼもしくはヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）の阻害用の医薬組成物として、このような障害もしくは病態で有効な量の本発明の化合物（例えば化合物１）又はその医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体を含有する組成物に関する。
【０１６９】
本発明はヒトを含む哺乳動物におけるタンパク質チロシンキナーゼ又はヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）の阻害方法として、有効量の本発明の化合物（例えば化合物１）又はその医薬的に許容される塩を前記哺乳動物に投与する段階を含む方法にも関する。
【０１７０】
本発明はヒトを含む哺乳動物における多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病及び他の自己免疫疾患から選択される障害又は病態の治療又は予防方法として、このような病態を治療するのに有効な量の本発明の化合物（例えば化合物１）又はその医薬的に許容される塩を前記哺乳動物に投与する段階を含む方法にも関する。
【０１７１】
本発明の化合物は眼病、全身性炎症反応症候群、全身性若年性関節リウマチ、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、大動脈炎症、虹彩毛様体炎／ぶどう膜炎／視神経炎、若年性脊髄性筋萎縮症、糖尿病網膜症又は微小血管症、慢性炎症、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、アレルギー疾患、皮膚炎、強皮症、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、自己免疫性水疱症、自己免疫性溶血性貧血、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン症候群／シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎（ＡＳ）及びＡＳ関連肺疾患、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫性低血糖症、１型乾癬、２型乾癬、プラーク乾癬、中等度から重度の慢性プラーク乾癬、自己免疫性好中球減少症、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、シェーグレン症候群、自己免疫性血小板減少症の治療にも有用である。
【０１７２】
所定の実施形態において、本発明の化合物は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）やループス腎炎等の炎症要素を伴う慢性腎臓病の治療に有用である。
【０１７３】
Ａ．関節リウマチ（ＲＡ）
所定の実施形態において、本発明の化合物は中等度から重度の活動性ＲＡの成人患者等の成人患者における徴候及び症状の緩和、著明な臨床効果の導入、構造的損傷の進行抑制、並びに身体機能の改善を含めて関節リウマチ（ＲＡ）を治療するために使用することができる。
【０１７４】
本発明の化合物は単独で使用してもよいし、メトトレキサートもしくは他の非生物学的疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）と併用してもよいし、及び／又は抗ＴＮＦα生物学的製剤と併用してもよく、このような生物学的製剤としては、ＴＮＦアンタゴニストとしてキメラ、ヒト化もしくはヒトＴＮＦ抗体であるアダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）、ＣＡ２（商品名ＲＥＭＩＣＡＤＥ（ＴＭ）のインフリキシマブ）等のインフリキシマブ、ＳＩＭＰＯＮＩ（ＴＭ）（ゴリムマブ）等のゴリムマブ、ＣＩＭＺＩＡ（ＴＭ）等のセルトリズマブペゴル、ＡＣＴＥＭＲＡ（ＴＭ）等のトシリズマブ、ＣＤＰ５７１及び可溶性ｐ５５もしくはｐ７５ＴＮＦ受容体、その誘導体であるｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（商品名ＥＮＢＲＥＬ（ＴＭ）のエタネルセプト）等のエタネルセプトやｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト）（上記参照）等が挙げられる。
【０１７５】
活動性関節リウマチ（ＲＡ）患者は１９８７年改定版米国リウマチ学会（ＡＣＲ）分類基準又は２０１０年版ＡＣＲ／ＥＵＬＡＲ基準に従って診断することができる。所定の実施形態において、ＲＡは少なくとも膨張関節数６及び圧痛関節数９の患者を基準に診断することができる。所定の実施形態において、本発明の化合物で治療可能な患者としては、少なくとも１種（例えば少なくとも１種〜４種以下）のＤＭＡＲＤによる治療に失敗している患者及び／又はメトトレキサート、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプトもしくは他の抗ＴＮＦα生物学的製剤もしくは抗ＴＮＦ薬以外の生物学的製剤に効果不十分な患者が挙げられる。
【０１７６】
所定の実施形態において、本発明の化合物は疾患進行を阻止及び／又は前記疾患の少なくとも１種の症状を緩和し、このような症状はＸ線画像上の関節損傷の進行を含むＸ線検査結果により検出又は監視することができる。
【０１７７】
所定の実施形態では、治療を必要とする個々の患者又は患者集団におけるＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０及び／又はＡＣＲ７０の改善により治療有効性を測定することができる。所定の実施形態では、治療期間（例えば１週間、２週間、４週間、２カ月間、３カ月間、６カ月間、１年間、２年間、５年間、１０年間又はそれ以上）にわたってＡＣＲ基準の１項目以上で（プラセボ又は未治療対照に比較して）統計的に有意な改善が達成される。統計的有意差は０．０５未満又は０．０１未満のｐ値により表される。
【０１７８】
ＡＣＲ改善項目は当分野で周知であり、圧痛関節数の中央値、膨張関節数の中央値、視覚的アナログスケールにより測定されるもの等の医師による全般的評価、視覚的アナログスケールにより測定されるもの等の患者による全般的評価、視覚的アナログスケールにより測定されるもの等の痛み、健康評価質問票の機能障害指数（ＨＡＱスコア）及びＣＲＰ（ｍｇ／ｄＬ）を含む。
【０１７９】
所定の実施形態では、６カ月間にわたるＡＣＲ７０改善の持続として定義される著明な臨床効果が達成される。
【０１８０】
所定の実施形態では、Ｘ線画像上で構造的関節損傷を評価し、例えば１２カ月後にベースラインと比較した総シャープスコア（ＴＳＳ）とその個別スコアである骨びらんスコア及び関節裂隙狭小化（ＪＳＮ）スコアの変化として表すことができる。
【０１８１】
所定の実施形態では、健康評価質問票の機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）及び／又は短文式健康調査（ＳＦ３６）により評価した健康転帰等の患者身体機能改善により前記疾患の徴候及び症状の改善を測定することができる。身体的健康度（Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｓｕｍｍａｒｙ，ＰＣＳ）と精神的健康度（Ｍｅｎｔａｌ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｓｕｍｍａｒｙ，ＭＣＳ）の一方又は両方により改善を測定することもできる。ＲＡの就労不安定性スケール（ＲＡ−ＷＩＳ）により更に改善を測定することができる（本願に援用するＧｉｌｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｅ  ＆  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）４９（３）：３４９−３５４，２００３参照）。
【０１８２】
Ｂ．若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）
所定の実施形態では、４歳以上の患者等の小児患者における中等度から重度の活動性多関節型ＪＩＡの徴候及び症状の緩和を含め、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）を治療するために本発明の化合物を使用することができる。所定の実施形態において、前記ＪＩＡ患者はＮＳＡＩＤ、鎮痛剤、コルチコステロイド類又はＤＭＡＲＤの前治療歴があるにも拘わらず、中等度又は重度活動性疾患の徴候を示す。
【０１８３】
所定の実施形態では、前記ＪＩＡの徴候及び症状とその改善を治療期間にわたって小児ＡＣＲ３０、ＡＣＲ５０及び／又はＡＣＲ７０により測定する。
【０１８４】
Ｃ．乾癬性関節炎（ＰｓＡ）
所定の実施形態では、活動性ＰｓＡの成人患者における徴候及び症状の緩和、構造的損傷の進行抑制、並びに身体機能の改善を含め、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）を治療するために本発明の化合物を使用することができる。所定の実施形態において、治療可能な患者としては、中等度から重度の活動性ＰｓＡの患者（例えば膨張関節数＞３且つ圧痛関節数＞３の患者）が挙げられる。所定の実施形態において、このような患者はＮＳＡＩＤ療法に効果不十分であり、（１）遠位指節間関節（ＤＩＰ）病変；（２）多関節型関節炎（リウマチ結節がなく、プラーク乾癬がある）；（３）破壊性関節炎；（４）非対称性ＰｓＡ；又は（５）ＡＳ様病変のいずれかとして発現され得る。
【０１８５】
所定の実施形態において、本発明の化合物は疾患進行を阻止及び／又は前記疾患の少なくとも１種の症状を緩和し、１種以上の疾患活動性尺度の改善により測定することができる。所定の実施形態において、疾患活動性の尺度としては、治療を必要とする個々の患者又は患者集団におけるＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０及び／又はＡＣＲ７０が挙げられる。所定の実施形態では、治療期間（例えば１週間、２週間、４週間、２カ月間、３カ月間、６カ月間、１年間、２年間、５年間、１０年間又はそれ以上）にわたってＡＣＲ基準の１項目以上で（プラセボ又は未治療対照に比較して）統計的に有意な改善が達成される。統計的有意差は０．０５未満又は０．０１未満のｐ値により表される。
【０１８６】
ＡＣＲ改善項目は当分野で周知であり、圧痛関節数の中央値、膨張関節数の中央値、視覚的アナログスケールにより測定されるもの等の医師による全般的評価、視覚的アナログスケールにより測定されるもの等の患者による全般的評価、視覚的アナログスケールにより測定されるもの等の痛み、健康評価質問票の機能障害指数（ＨＡＱスコア）及びＣＲＰ（ｍｇ／ｄＬ）が挙げられる。
【０１８７】
所定の実施形態では、疾患進行度を評価するため及び／又は前記疾患の少なくとも１種の症状を緩和するために体表面積（ＢＳＡ）当たり少なくとも３％の乾癬病変をもつ患者の乾癬面積重症度指数（ＰＡＳＩ）の改善を評価することもできる。
【０１８８】
所定の実施形態において、本発明の化合物は疾患進行を阻止及び／又は前記疾患の少なくとも１種の症状を緩和し、このような症状はＸ線画像上の手、手首及び足の変化により測定することができる。例えば、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月又は１２カ月等の所定時点でベースラインと比較した総シャープスコア（ＴＳＳ）とその個別スコアである骨びらんスコア及び関節裂隙狭小化（ＪＳＮ）スコアの変化を測定することができる。検査者に治療群を知らせずに遠位指節間関節を含む（即ち関節リウマチに使用されるＴＳＳと同一ではない）修正総シャープスコア（ｍＴＳＳ）を使用してもらい、Ｘ線画像を評価することができる。
【０１８９】
所定の実施形態では、健康評価質問票の機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）及び／又は短文式健康調査（ＳＦ３６）により評価した健康転帰等の患者身体機能改善により前記疾患の徴候及び症状の改善を測定することができる。身体的健康度（ＰＣＳ）と精神的健康度（ＭＣＳ）の一方又は両方により改善を測定することもできる。
【０１９０】
Ｄ．強直性脊椎炎（ＡＳ）
所定の実施形態では、活動性ＡＳの成人患者における徴候及び症状の緩和を含めて強直性脊椎炎（ＡＳ）を治療するために本発明の化合物を使用することができる。活動性ＡＳは（１）バースＡＳ疾患活動性指数（ＢＡＳＤＡＩ）スコア≧４ｃｍ、（２）合計腰痛の視覚的アナログスコア（ＶＡＳ）≧４０ｍｍ、及び（３）朝のこわばり≧１時間からなる３項目の基準の少なくとも２項目を満たす患者として定義することができる。所定の実施形態において、前記患者はグルココルチコイド類、ＮＳＡＩＤ、鎮痛剤、メトトレキサート又はスルファサラジンに効果不十分のものとすることができる。
【０１９１】
所定の実施形態において、本発明の化合物は疾患進行を阻止及び／又は前記疾患の少なくとも１種の症状を緩和し、このような症状は１種以上の疾患活動性尺度の改善により測定することができる。所定の実施形態において、疾患活動性尺度としてはＡＳＡＳ２０／５０／７０が挙げられる。所定の実施形態では、１種以上の疾患活動性尺度の改善により、特定治療期間後に（４項目のＡＳＡＳ改善パラメータの各々において［０〜１００ｍｍのスケールで］＜２０の数値として定義される）低レベルの疾患活動性が得られる。前記４項目のＡＳＡＳ改善パラメータはＡＳＡＳ２０改善基準、ＢＡＳＤＡＩ（バース強直性脊椎炎疾患活動性指数）スコア、ＢＡＳＭＩ（バース強直性脊椎炎可動域指数）スコア及びＣＲＰ値（ｍｇ／ｄＬ）を含む。ＡＳＡＳ２０改善基準自体については、患者による疾患活動性の全般的評価（０＝「なし」及び１００＝「重度」とする視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）で測定した場合に少なくとも２０％及び１０単位の改善を示す対象の％）、合計腰痛、炎症（ＢＡＳＤＡＩの質問項目５及び６の平均）、及びＢＡＳＦＩ（バース強直性脊椎炎身体機能指数）を含む。
【０１９２】
所定の実施形態では、強直性脊椎炎クオリティオブライフアンケート（ＡＳＱｏＬ）スコアや短文式健康調査（ＳＦ−３６）身体的健康度（ＰＣＳ）スコア等の患者身体機能改善により前記疾患の徴候及び症状の改善を測定することができる。
【０１９３】
Ｅ．クローン病（ＣＤ）
所定の実施形態では、従来型の治療に効果不十分であった中等度から重度の活動性クローン病の成人患者における徴候及び症状の緩和と臨床的寛解の導入及び維持や、これらの患者がインフリキシマブ、アダリムマブ及び／又はエタネルセプト等の１種以上の抗ＴＮＦα生物学的製剤にも効果減弱又は不耐性の場合にはこれらの患者における徴候及び症状の緩和と臨床的寛解の導入を含め、クローン病（ＣＤ）を治療するために本発明の化合物を使用することができる。
【０１９４】
所定の実施形態において、前記治療可能な成人患者としては、クローン病活動性指数（ＣＤＡＩ）が２２０≦ＣＤＡＩ≦４５０として定義される中等度から重度の活動性クローン病の成人患者が挙げられる。
【０１９５】
所定の実施形態では、（ＣＤＡＩ＜１５０として定義される）臨床的寛解の導入により本発明の化合物の治療有効性を測定することができる。所定の実施形態では、（少なくとも７０ポイントのＣＤＡＩ低下として定義される）臨床効果の導入により本発明の化合物の治療有効性を測定することができる。所定の実施形態では、治療プログラム又はレジメン下で６カ月間又は１年間等の所定期間にわたる臨床的寛解の維持により本発明の化合物の治療有効性を測定することができる。
【０１９６】
所定の実施形態では、実施例１１に従って本発明の化合物の治療有効性を測定することもできる。
【０１９７】
Ｆ．潰瘍性大腸炎（ＵＣ）
所定の実施形態では、コルチコステロイド類、アザチオプリン又は６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）等の免疫抑制剤に効果不十分であった中等度から重度の活動性潰瘍性大腸炎の成人患者における臨床的寛解の導入及び維持や、インフリキシマブ、アダリムマブ及び／又はエタネルセプト等のＴＮＦ遮断薬に効果減弱又は不耐性であった患者における徴候及び症状の緩和を含め、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を治療するために本発明の化合物を使用することができる。
【０１９８】
所定の実施形態において、中等度から重度の活動性潰瘍性大腸炎とは、メイヨースコアが１２点スケールで６〜１２であり且つ内視鏡サブスコアが０〜３のスケールで２〜３であるとして定義される。所定の実施形態において、前記患者はコルチコステロイド類、アザチオプリン又は６−ＭＰ等の免疫抑制剤による同時又は前治療を受けている。
【０１９９】
所定の実施形態では、治療開始後１週間、２週間、４週間、８週間、１２週間又は１６週間等の特定治療期間で（メイヨースコアが≦２であり、且つ個々のサブスコアに＞１のものがないとして定義される）臨床的寛解の導入により本発明の化合物の治療有効性を測定することができる。
【０２００】
Ｇ．プラーク乾癬（Ｐｓ）
所定の実施形態では、全身療法又は光線療法の候補である中等度から重度の慢性プラーク乾癬の成人患者において他の全身療法が医学的に妥当性が低いときの治療を含め、プラーク乾癬（Ｐｓ）を治療するために本発明の化合物を使用することができる。
【０２０１】
所定の実施形態において、中等度から重度の慢性プラーク乾癬（Ｐｓ）患者は全身療法又は光線療法の候補であり、体表面積（ＢＳＡ）当たり≧１０％の病変をもつ慢性Ｐｓであり、医師による全般的評価（ＰＧＡ）が少なくとも中等度の疾患重症度であり、３回の治療期間内で乾癬面積重症度指数（ＰＡＳＩ）が≧１２の患者である。
【０２０２】
所定の実施形態では、６点ＰＧＡスケールで疾患重症度が「異常なし」又は「軽微」となった患者集団の割合と、ＰＡＳＩスコアが所定の治療時点（例えば４週間、８週間、１２週間、１６週間、２０週間又は２４週間）でベースラインから少なくとも７５％低下した患者（ＰＡＳＩ７５）の割合により本発明の化合物の治療有効性を測定することができる。
【０２０３】
所定の実施形態では、所定の治療時点まで（例えば３３週以降５２週まで）ＰＧＡによる疾患重症度を「異状なし」（プラーク隆起がなく、鱗屑がなく、場合により色素沈着過剰又はびまん性のピンク色もしくは赤色の発赤があると定義）もしくは「軽微」（例えば正常な皮膚からプラークの僅かな隆起を確認できる場合もあるが、確認し難く、場合により表面が乾燥して若干白くなり、場合により発赤まで）に維持した対象又はＰＡＳＩ７５改善を維持した対象の割合により本発明の化合物の治療有効性を測定することができる。
【０２０４】
４．併用療法
本発明の化合物は単独で使用することもできるし、１種以上の他の薬剤（例えば治療剤）と併用してもよく、前記他の薬剤はその所期目的に合わせて当業者により選択される。例えば、前記他の薬剤は本発明の化合物により治療される疾患又は病態を治療するのに有用であると当分野で認められている治療剤とすることができる。前記他の薬剤は治療組成物に有益な属性を付与する薬剤（例えば組成物の粘度に影響を与える薬剤）でもよい。
【０２０５】
本発明の化合物はどの投与経路が適切であるかに関係なく、前記他の薬剤の前、後又は同時に投与することができる。
【０２０６】
所定の実施形態において、本発明の化合物と前記他の薬剤は相加的又は相乗的に作用する。
【０２０７】
例えば、本発明の化合物は医薬的に許容される形態で単独投与してもよいし、哺乳動物免疫系を調節する１種以上の他の薬剤又は抗炎症剤と併用投与してもよい。これらの薬剤としては、限定されないが、シクロスポリンＡ（例えばＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（Ｒ）ないしＮＥＯＲＡＬ（Ｒ））、ラパマイシン、ＦＫ−５０６（タクロリムス）、レフルノミド、デオキシスペルグアリン、マイコフェノラート（例えばＣＥＬＬＣＥＰＴ（Ｒ））、アザチオプリン（例えばＩＭＵＲＡＮ（Ｒ））、ダクリズマブ（例えばＺＥＮＡＰＡＸ（Ｒ））、ＯＫＴ３（例えばＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ（Ｒ））、ＡｔＧａｍ、アスピリン、アセトアミノフェン、アミノサリチル酸塩、シプロフロキサシン、コルチコステロイド、メトロニダゾール、プロビオティック、タクロリムス、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム及び抗炎症性ステロイド（例えばプレドニゾロン又はデキサメタゾン）が挙げられる。所定の実施形態において、前記１種以上の他の薬剤はアスピリン、アセトアミノフェン、アミノサリチル酸塩、シプロフロキサシン、コルチコステロイド、シクロスポリン、メトロニダゾール、プロビオティック、タクロリムス、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、プレドニゾロン、デキサメタゾン、抗炎症性ステロイド、メトトレキサート、クロロキン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、スルファサラジン、レフルノミド、トシリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ、ベドリズマブ、ナタリズマブ、ウステキヌマブ、リツキシマブ、エファリズマブ、ベリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の免疫モジュレーター（例えばアクチベーター）から構成される群から選択される。
【０２０８】
これらの薬剤は標準医薬プラクティスに従って同一又は別々の製剤の一部として同一又は異なる投与経路により同一又は異なる投与スケジュールで投与することができる。
【０２０９】
例えば、手術後４８時間以内に１２時間おきにＦＫ５０６（タクロリムス）を０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ体重で経口投与する。血清中タクロリムストラフ濃度により用量をモニターする。手術後４８時間以内に１２時間おきにシクロスポリンＡ（ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（Ｒ）経口もしくは静脈内製剤又はＮＥＯＲＡＬ（Ｒ）経口溶液もしくはカプセル剤）を５ｍｇ／ｋｇ体重で経口投与する。血中シクロスポリンＡトラフ濃度により用量をモニターする。
【０２１０】
更に当然のことながら、本発明に含まれる併用剤はその所期目的に有用な併用剤である。以下に挙げる薬剤は例証を目的とし、これらに限定するものではない。本発明の一部である併用剤は本発明の化合物と以下に挙げるものから選択される少なくとも１種の他の薬剤から構成することができる。形成される組成物がその目的とする機能を果たすことができるような併用剤であるならば、併用剤は２種以上の他の薬剤、例えば２種又は３種の他の薬剤を含むこともできる。
【０２１１】
所定の実施形態では、非ステロイド性抗炎症薬（別称ＮＳＡＩＤ）と併用し、例えばイブプロフェン等の医薬品が挙げられる。プレドニゾロン等のコルチコステロイド類と併用してもよく、患者に本発明の化合物と併用投与する場合に必要なステロイド用量を漸減することによりステロイド使用の周知の副作用を減らすことや、なくすこともできる。
【０２１２】
本発明の化合物と併用することができる関節リウマチ治療剤の非限定的な例としては、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）や、他のヒトサイトカイン又は増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の化合物は細胞表面分子（例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ）、又はそのリガンド（例えばＣＤ１５４（ｇｐ３９ないしＣＤ４０Ｌ））に対する抗体と併用することもできる。治療剤の併用剤は免疫反応とその後の炎症カスケードにおける種々の点に介入することができ、このような例としては、ＴＮＦアンタゴニストとしてキメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体であるアダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）、ＣＡ２（商品名ＲＥＭＩＣＡＤＥ（ＴＭ）のインフリキシマブ）等のインフリキシマブ、ゴリムマブ（例えばＳＩＭＰＯＮＩ（ＴＭ））（ゴリムマブ）、セルトリズマブペゴル（例えばＣＩＭＺＩＡ（ＴＭ））、トシリズマブ（例えばＡＣＴＥＭＲＡ（ＴＭ））、ＣＤＰ５７１及び可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、その誘導体であるｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（商品名ＥＮＢＲＥＬ（ＴＭ）のエタネルセプト）等のエタネルセプトやｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト）、更にはＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が挙げられ、同様にＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡ等）も同じ理由から有効であると思われる。他の併用剤はインターロイキン１１を含む。更に他の併用剤はＩＬ−１８機能と平行、依存又は共働して作用し得る自己免疫反応の他のキープレーヤーであり、特にＩＬ−１２抗体や可溶性ＩＬ−１２受容体等のＩＬ−１２アンタゴニスト又はＩＬ−１２結合性タンパク質が挙げられる。ＩＬ−１２とＩＬ−１８は機能に共通点があるが、同一ではなく、両者のアンタゴニストを併用すると最も有効であり得ることが示されている。更に非細胞除去性抗ＣＤ４阻害剤と併用してもよい。更に他の併用剤は共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）又はＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストを含み、抗体、可溶性受容体又は拮抗性リガンドを含む。
【０２１３】
本発明の化合物はメトトレキサート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、スルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、金チオリンゴ酸塩（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド類（経口、吸入及び局所注射）、β２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール）、キサンチン類（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリク酸塩、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド類（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＴＮＦ−αやＩＬ−１等の炎症性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えばＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、Ｔ細胞内シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、メタロプロテアーゼ阻害剤、スルファサラジン、６−メルカプトプリン類、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体とその誘導体であるｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（商品名Ｅｎｂｒｅｌ（ＴＭ）のエタネルセプト）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（レネルセプト）、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、ヒドロキシクロロキン硫酸塩、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン酢酸エステル、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、葉酸塩、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、オキシコドン塩酸塩、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、トラマドール塩酸塩、サルサレート、スリンダク、シアノコバラミン／葉酸／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、モルヒネ硫酸塩、リドカイン塩酸塩、インドメタシン、グルコサミン硫酸塩／コンドロイチン、アミトリプチリン塩酸塩、スルファジアジン、オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン、オロパタジン塩酸塩、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１、Ｓ１Ｐ１アゴニスト（例えばＦＴＹ７２０）、ＰＫＣファミリー阻害剤（例えばルボキシスタウリンないしＡＥＢ−０７１）及びメソプラム等の非生物学的ＤＭＡＲＤ又は他の薬剤と併用してもよい。所定の実施形態において、併用剤はメトトレキサート又はレフルノミドを含み、中等度又は重度ＲＡ患者では、シクロスポリンと上記のような抗ＴＮＦα抗体も含む。
【０２１４】
本発明の化合物と併用することができる炎症性腸疾患（ＩＢＤ）治療剤の非限定的な例としては、（限定されないが）ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド類；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチル酸塩類；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化物質；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカイン又は増殖因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）、細胞表面分子（例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０）又はそのリガンドに対する抗体又はアンタゴニスト；メトトレキサート；シクロスポリン；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；レフルノミド；ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）；コルチコステロイド類（例えばプレドニゾロン）；ホスホジエステラーゼ阻害剤；アデノシンアゴニスト；抗血栓薬；補体阻害剤；アドレナリン作動薬；ＴＮＦ−αやＩＬ−１等の炎症性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えばＮＩＫ、ＩＫＫ又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤；ＴＮＦα変換酵素阻害剤；Ｔ細胞内シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）；メタロプロテアーゼ阻害剤；スルファサラジン；アザチオプリン；６−メルカプトプリン類；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）が挙げられる。
【０２１５】
本発明の化合物と併用することができるクローン病治療剤の例としては、ＴＮＦアンタゴニストとして、例えば抗ＴＮＦ抗体であるアダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）、ＣＡ２（商品名ＲＥＭＩＣＡＤＥ（ＴＭ）のインフリキシマブ）等のインフリキシマブ、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇコンストラクトであるｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（商品名ＥＮＢＲＥＬ（ＴＭ）のエタネルセプト）等のエタネルセプトやｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（ＴＭ））等のレネルセプト及びＰＤＥ４阻害剤が挙げられる。
【０２１６】
本発明の化合物はコルチコステロイド類（例えばブデノシドやデキサメタゾン）；スルファサラジン、５−アミノサリチル酸；オルサラジン；及びＩＬ−１等の炎症性サイトカインの合成又は作用を妨害する薬剤（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤やＩＬ−１ｒａ）；Ｔ細胞内シグナル伝達阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）；６−メルカプトプリン；ＩＬ−１１；メサラミン；プレドニゾン；アザチオプリン；メルカプトプリン；メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム；ジフェノキシラート／アトロピン硫酸塩；ロペラミド塩酸塩；メトトレキサート；オメプラゾール；葉酸塩；シプロフロキサシン／ブドウ糖水溶液；重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン；テトラサイクリン塩酸塩；フルオシノニド；メトロニダゾール；チメロサール／ホウ酸；コレスチラミン／スクロース；シプロフロキサシン塩酸塩；ヒオシアミン硫酸塩；メペリジン塩酸塩；ミダゾラム塩酸塩；オキシコドン塩酸塩／アセトアミノフェン；プロメタジン塩酸塩；リン酸ナトリウム；スルファメトキサゾール／トリメトプリム；セレコキシブ；ポリカルボフィル；ナプシル酸プロポキシフェン；ヒドロコルチゾン；マルチビタミン類；バルサラジド二ナトリウム；コデインリン酸塩／アセトアミノフェン；コレセベラム塩酸塩；シアノコバラミン；葉酸；レボフロキサシン；メチルプレドニゾロン；ナタリズマブ及びインターフェロンγと併用することができる。
【０２１７】
本発明の化合物と併用することができる多発性硬化症（ＭＳ）治療剤の非限定的な例としては、コルチコステロイド類；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロンβ１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（Ｒ）；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロンβ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（Ｒ）；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロンα（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（Ｒ）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高気圧酸素治療；静注用免疫グロブリン；クラドリビン；他のヒトサイトカイン又は増殖因子とその受容体（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の化合物はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０等の細胞表面分子又はそのリガンドに対する抗体と併用することもできる。本発明の化合物はメトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、Ｓ１Ｐ１アゴニスト、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド類（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＴＮＦ−αやＩＬ−１等の炎症性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えばＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞内シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、メタロプロテアーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン類、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）等の薬剤と併用してもよい。本発明の化合物と併用することができる多発性硬化症治療剤の例としては、インターフェロンβ（例えばＩＦＮβ１ａ及びＩＦＮβ１ｂ）；コパキソン、コルチコステロイド類、カスパーゼ阻害剤（例えばカスパーゼ１の阻害剤）、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、並びにＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体が挙げられる。
【０２１８】
本発明の化合物はアレムツズマブ、ドロナビノール、ダクリズマブ、ミトキサントロン、キサリプロデン塩酸塩、ファムプリジン、グラチラマー酢酸塩、ナタリズマブ、シンナビドール、α−イムノカインＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入ミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）、ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害剤）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバックス、ピルフェニドン、アロトラップ１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラムパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−β２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えばＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４  Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト及びＩＬ−４アゴニスト等の薬剤と併用してもよい。
【０２１９】
本発明の化合物と併用することができる強直性脊椎炎（ＡＳ）治療剤の非限定的な例としては、イブプロフェン、ジクロフェナク、ミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、及び抗ＴＮＦ抗体であるアダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）、ＣＡ２（商品名ＲＥＭＩＣＡＤＥ（ＴＭ）のインフリキシマブ）等のインフリキシマブ、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇコンストラクトであるｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（商品名ＥＮＢＲＥＬ（ＴＭ）のエタネルセプト）等のエタネルセプトやｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（ＴＭ））等のレネルセプトが挙げられる。
【０２２０】
本発明の化合物と併用することができる乾癬（中等度から重度のプラーク乾癬等のＰｓ）治療剤の非限定的な例としては、カルシポトリエン、クロベタゾールプロピオン酸エステル、トリアムシノロンアセトニド、ハロベタゾールプロピオン酸エステル、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル増量、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、ベタメタゾン吉草酸エステル、モメタゾンフランカルボン酸エステル、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、ヒドロコルチゾン吉草酸エステル、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、クロベタゾールプロピオン酸エステル／エモリエント、フルチカゾンプロピオン酸エステル、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿剤、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、ジフロラゾン二酢酸エステル、エタネルセプト、葉酸塩、乳酸、メトキサレン、ヒドロコドン／次没食子酸ビスマス／酸化亜鉛／レゾルシノール、メチルプレドニゾロン酢酸エステル、プレドニゾン、日焼け止め剤、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デソキシメタゾン、ジアゼパム、エモリエント、フルオシノニド／エモリエント、鉱油／ひまし油／乳酸ナトリウム、鉱油／ピーナッツ油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、プソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジン、ＡＢＴ−８７４、ウステキヌマブ及びアダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）が挙げられる。
【０２２１】
本発明の化合物と併用することができる乾癬性関節炎（ＰｓＡ）治療剤の非限定的な例としては、メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、メチルプレドニゾロン酢酸エステル、インドメタシン、ヒドロキシクロロキン硫酸塩、プレドニゾン、スリンダク、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル増量、インフリキシマブ、メトトレキサート、葉酸塩、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、グルコサミン硫酸塩、金チオリンゴ酸ナトリウム、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、アダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）及びエファリズマブが挙げられる。
【０２２２】
本発明の化合物と併用することができるＳＬＥ（ループス）治療剤の例としては、ＮＳＡＩＤ（例えばジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン）；ＣＯＸ２阻害剤（例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ）；抗マラリア剤（例えばヒドロキシクロロキン）；ステロイド類（例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン）；細胞毒性薬（例えばアザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサート）；ＰＤＥ４の阻害剤又はプリン合成阻害剤（例えばＣｅｌｌｃｅｐｔ（Ｒ））が挙げられる。本発明の化合物はスルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、Ｉｍｕｒａｎ（Ｒ）及びＩＬ−１等の炎症性サイトカインの合成、産生又は作用を妨害する薬剤（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤等のカスパーゼ阻害剤やＩＬ−１ｒａ）等の薬剤と併用してもよい。本発明の化合物はＴ細胞内シグナル伝達阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）；又はＴ細胞活性化分子を標的とする分子（例えばＣＴＬＡ−４−ＩｇＧ又は抗Ｂ７ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体）と併用してもよい。本発明の化合物はＩＬ−１１又は抗サイトカイン抗体（例えばフォントリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体））又は抗受容体受容体抗体（例えば抗ＩＬ−６受容体抗体）及びＢ細胞表面分子に対する抗体と併用することができる。本発明の化合物はＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を減少又は不活性化させる薬剤（例えばリツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンフォスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体））、ＴＮＦアンタゴニストとして、例えば抗ＴＮＦ抗体であるアダリムマブ（例えば商品名ＨＵＭＩＲＡ（ＴＭ）のアダリムマブ）、ＣＡ２（商品名ＲＥＭＩＣＡＤＥ（ＴＭ）のインフリキシマブ）等のインフリキシマブ、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇコンストラクトであるｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（商品名ＥＮＢＲＥＬ（ＴＭ）のエタネルセプト）等のエタネルセプトやｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（ＴＭ））等のレネルセプトと併用してもよい。
【０２２３】
所定の実施形態では、上記ＴＮＦαアンタゴニスト等の生物学的ＤＭＡＲＤ、又はアザチオプリンやシクロスポリン等の強力な免疫抑制剤と本発明の化合物を併用しない。
【０２２４】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の免疫モジュレーターと本発明の化合物を併用してもよい。Ｔｒｅｇ細胞は正常な免疫恒常性を維持するのに不可欠である。自己免疫疾患患者では、Ｔｒｅｇ細胞数の減少又は機能低下が認められており、この微調整メカニズムの低下につながっている。ヒト化拮抗モノクローナル抗体ＢＴ−０６１はヒトＣＤ４の固有のエピトープと結合し、Ｔｒｅｇ特異的シグナル伝達イベントを誘導し、その機能活性化をもたらす。Ｔｒｅｇ細胞とＲＡ滑液を使用した前臨床データによると、ＢＴ−０６１はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔエフェクター細胞増殖の抑制、炎症性サイトカインの発現低下、並びに抗炎症性サイトカインＴＧＦβの産生増加をもたらす。従って、限定されないが、関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、糖尿病性腎症、ドライアイ症候群、シェーグレン症候群、円形脱毛症、白斑又はアトピー性皮膚炎等の本願に記載する炎症性疾患／障害又は自己免疫疾患／障害のいずれかを治療するために、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の同様の免疫モジュレーターも本発明の化合物と併用投与することができる。所定の実施形態において、前記併用剤は中等度から重度の活動性ＲＡ、ＣＤ、乾癬又は乾癬性関節炎を含むＲＡ、ＣＤ、乾癬又は乾癬性関節炎を治療する。所定の実施形態において、治療するＲＡ、ＣＤ、乾癬又は乾癬性関節炎患者は第一選択療法（例えばメトトレキサート等のＤＭＡＲＤ）もしくは抗ＴＮＦα療法に効果不十分であるか、又はこれらに対する効果減弱もしくは不耐性により治療を中断している。
【０２２５】
所定の実施形態において、前記免疫モジュレーターは以下の特性の１以上（又は全部）をもつ：（１）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞を含むＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットを活性化させる；（２）マウスＩｇＧ１抗ＣＤ４モノクローナル抗体Ｂ−Ｆ５又は（文中に開示されているＶＨ鎖及びＶＬ鎖の全配列を含めて本願に援用する）米国特許第７，４５２，９８１号に記載されているようなＢＴ−０６１  ｈＢ−Ｆ５抗体であるトレガリズマブ等のそのヒト化抗体を結合させることができるヒトＣＤ４抗原の固有のエピトープ（例えばＣＤ４のＩｇＧ様Ｃ２タイプ１ドメイン）のみと結合する；（３）内在性Ｔｒｅｇ細胞に活性化シグナルを提供するが、通常のＴ細胞（例えば（１）で活性化されないＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞等）を活性化しない；（４）ＣＤ４＋Ｔ細胞を除去する細胞除去性抗ＣＤ４抗体ではない、及び／又はＡＤＣＣもしくはＣＤＣを感知できるほどには誘導しない。
【０２２６】
代表的なこのような免疫モジュレーターは米国特許第７，４５２，９８１号に記載されている。所定の実施形態において、前記免疫モジュレーターはマウスモノクローナル抗ＣＤ４抗体Ｂ−Ｆ５に由来するヒト化ｈＢ−Ｆ５抗体であり、前記ｈＢ−Ｆ５抗体はａ）ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＪＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡ  ＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）の配列を含むＨ鎖Ｖ領域；ｂ）ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＦＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）の配列を含むＬ鎖Ｖ領域；及びｃ）その組合せから構成される群から選択されるＶ領域を含み、前記ｈＢ−Ｆ５抗体はＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞を含むＴ  ＣＤ４＋細胞サブセットを活性化させることができる。
【０２２７】
所定の実施形態において、前記免疫モジュレーターは上記ｈＢ−Ｆ５抗体の断片を含み、前記断片は配列番号１及び配列番号２のＶ領域を含む。所定の実施形態において、前記免疫モジュレーターはａ）配列番号１のＨ鎖Ｖ領域をコードする配列を含むポリヌクレオチドと；ｂ）配列番号２のＬ鎖Ｖ領域をコードする配列を含むポリヌクレオチドから構成される群から選択されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを含む。例えば、前記ポリヌクレオチドはａ）米国特許第７，４５２，９８１号の配列番号３の配列を含むポリヌクレオチド（本願に援用するヒト化抗体ｈＢＦ−５のＨ鎖Ｖ領域）；及びｂ）米国特許第７，４５２，９８１号の配列番号４の配列を含むポリヌクレオチド（本願に援用するヒト化抗体ｈＢＦ−５のＫ鎖Ｖ領域）から構成される群から選択することができる。
【０２２８】
特定の理論に拘束するものではないが、ＢＴ−０６１（トレガリズマブ）はＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化させるヒト化モノクローナル抗体であり、従って、エフェクターＴ細胞（例えばＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）を抑制し、過剰な免疫反応を防ぐ生体の自然な機能を強化する。開発されている他の抗ＣＤ４抗体とは異なり、ＢＴ−０６１（トレガリズマブ）は免疫反応低下に繋がるＣＤ４＋Ｔ細胞の減少を生じない。
【０２２９】
所定の実施形態では、前記免疫モジュレーター（例えばＢＴ−０６１）を皮下又は静脈内投与する。所定の実施形態では、前記免疫モジュレーター（例えばＢＴ−０６１）を約１．２５ｍｇ〜１００ｍｇ（例えば１回当たり２５ｍｇ、５０ｍｇ又は７５ｍｇ）の用量で週１回皮下投与する。
【０２３０】
５．投与及び剤形
本願に記載する疾患又は病態を治療又は改善するための用量で本発明の１種以上の化合物をヒト患者にそのまま投与することもできるし、生物学的に適切且つ医薬的に許容される担体又は賦形剤と混合した医薬組成物として投与することもできる。これらの化合物の混合物を前記患者に単一の混合物として投与することもできるし、別々に製剤化された適切な医薬組成物として投与することもできる。
【０２３１】
一般に、本発明の化合物を含有する医薬組成物は例えば混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、研和、乳化、カプセル化、封入又は凍結乾燥工程により、それ自体公知の方法で製造することができる。本願の化合物の製剤化及び投与技術については、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡの最新版等の当業者に周知に文献を参考にされたい。
【０２３２】
適切な投与経路としては、例えば経口（例えば小腸の所定部分での選択的放出）、眼内、点眼、経直腸、経粘膜、局所、経皮、管腔内（例えば浣腸による胃腸又は結腸投与）又は経腸投与や、筋肉内注射、皮下注射、髄内注射、髄腔内注射、直接心室内注射、静脈注射、腹腔内注射、鼻腔内注入又は眼内注射等の非経口送達が挙げられる。
【０２３３】
本発明により使用する医薬組成物は活性化合物を医薬として使用可能な製剤に加工し易くする賦形剤及び助剤を含む１種以上の生理的に許容される担体を使用して従来通りに製剤化することができる。適切な製剤は使用する投与経路によって異なる。
【０２３４】
例えば、治療有効量の本発明の活性化合物を経口、口腔、鼻腔内、非経口（例えば静脈内、筋肉内又は皮下）又は経直腸投与用に製剤化してもよいし、吸入又は吹送による投与に適した形態に製剤化してもよい。当業者に周知の方法に従って本発明の活性化合物を持続送達用に製剤化してもよい。このような製剤の例については、米国特許第３，５３８，２１４号、４，０６０，５９８号、４，１７３，６２６号、３，１１９，７４２号及び３，４９２，３９７号を参照されたい。
【０２３５】
所定の実施形態では、経口投与用に製剤化された剤形（例えば錠剤又はカプセル剤）の医薬組成物とした本発明の化合物を対象に経口投与する。
【０２３６】
経口投与用として、前記医薬組成物は例えば錠剤又はカプセル剤の形態をとることができ、結合剤（例えばα化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えばラクトース、微結晶セルロース又はリン酸カルシウム）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）、崩壊剤（例えばジャガイモ澱粉又はデンプングリコール酸ナトリウム）又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等の医薬的に許容される賦形剤を使用して従来の手段により製造される。錠剤は当分野で周知の方法によりコーティングしてもよい。経口投与用液体製剤は例えば溶液剤、シロップ剤又は懸濁剤の形態でもよいし、使用前に水又は他の適切な溶媒で再構成する乾燥製剤の形態でもよい。このような液体製剤は懸濁化剤（例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース又は水素化食用脂）、乳化剤（例えばレシチン又はアラビイガム）、非水性溶媒（例えばアーモンド油、油性エステル類又はエチルアルコール）及び防腐剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル又はソルビン酸）等の医薬的に許容される添加剤を使用して従来の手段により製造することができる。
【０２３７】
経口使用することができる医薬製剤としては、ゼラチンから構成される嵌合式カプセル剤と、ゼラチンとグリセロールやソルビトール等の可塑剤から構成される密封式軟カプセル剤が挙げられる。嵌合式カプセル剤は充填剤（例えばラクトース）、結合剤（例えば澱粉類）及び／又は滑沢剤（例えばタルク又はステアリン酸マグネシウム）、更に場合により安定化剤との混合物として前記活性成分を収容することができる。軟カプセル剤では、脂肪油、液体パラフィン又は液体ポリエチレングリコール等の適切な液体に活性化合物を溶解又は懸濁すればよい。更に、安定化剤を加えてもよい。全経口投与用製剤はこのような投与に適した投与量とすべきである（下記参照）。
【０２３８】
経口投与用では、当分野で周知の医薬的に許容される担体及び／又は賦形剤を活性化合物に加えることにより化合物を容易に製剤化することができる。このような担体により、治療する患者が経口摂取するように錠剤、ピル剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤等として本発明の化合物を製剤化することができる。経口用医薬製剤は活性化合物に固体賦形剤を加え、得られた混合物を場合により粉砕し、必要に応じて適切な助剤の添加後に顆粒混合物を加工し、錠剤又は糖衣錠コアとすることにより得ることができる。適切な賦形剤は特に充填剤であり、ラクトース、スクロース、マンニトール又はソルビトール等の糖類や、例えばトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、コメ澱粉、ジャガイモ澱粉、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等のセルロース調製品が挙げられる。
【０２３９】
他の担体又は賦形剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種糖類、澱粉類、セルロース誘導体、ゼラチン及びポリマー類（例えばポリエチレングリコール）が挙げられる。
【０２４０】
所定の実施形態では、微結晶セルロース、二塩基性リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム及びヒドロキシプロピルセルロースを含む賦形剤で本発明の化合物をカプセル剤として経口投与用に製剤化する。
【０２４１】
所定の実施形態において、前記カプセル剤又は錠剤は即放性及び／又は徐放性製剤として製剤化される。
【０２４２】
必要に応じて、架橋型ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸もしくはその塩（例えばアルギン酸ナトリウム）等の崩壊剤を加えてもよい。
【０２４３】
前記組成物を必要に応じてパック又はディスペンサーデバイスとし、活性成分を含有する１以上の単位用量形態を収容してもよい。前記パックは例えばブリスターパック等の金属又はプラスチック箔から構成してもよい。前記パック又はディスペンサーデバイスに投与説明書を添付してもよい。適合可能な医薬担体で製剤化した本発明の化合物を含有する組成物を製造し、適切な容器に入れ、適応症を表示してもよい。
【０２４４】
製剤によっては、例えば流体エネルギー粉砕により得られるような非常に小寸法の粒子の形態で本発明の化合物を使用すると有益な場合がある。
【０２４５】
以下、医薬組成物の製造における本発明の化合物の使用について具体的に説明する。以下の記載において、「活性化合物」なる用語は本発明の任意化合物を意味するが、特に下記実施例のいずれかの最終生成物である任意化合物を意味する。
【０２４６】
ａ）カプセル剤
カプセル剤の製造では、活性化合物１０重量部とラクトース２４０重量部を離解及びブレンドする。各カプセル剤に単位用量又は単位用量の一部の活性化合物を収容するように、混合物をハードゼラチンカプセル剤に充填する。
【０２４７】
ｂ）錠剤
錠剤は例えば以下の成分から製造することができる。
重量部
活性化合物  １０
ラクトース  １９０
トウモロコシ澱粉  ２２
ポリビニルピロリドン  １０
ステアリン酸マグネシウム  ３
活性化合物と、ラクトースと、澱粉の一部を離解、ブレンドし、得られた混合物をポリビニルピロリドンのエタノール溶液で顆粒化する。乾燥顆粒をステアリン酸マグネシウム及び澱粉の残余とブレンドする。次に混合物を打錠機で打錠し、各々単位用量又は単位用量の一部の活性化合物を含有する錠剤を得る。
【０２４８】
ｃ）腸溶性コーティング錠剤
上記方法（ｂ）により錠剤を製造する。２０％酢酸フタル酸セルロースと３％フタル酸ジエチルのエタノール：ジクロロメタン（１：１）溶液を使用して従来通りに錠剤に腸溶性コーティングする。
【０２４９】
糖衣錠コアに適切なコーティングを施してもよい。この目的では、濃縮糖溶液を使用することができ、場合によりアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、並びに適切な有機溶媒又は混合溶媒を加えてもよい。識別のため又は活性化合物用量の種々の組合せを表示するために錠剤又は糖衣錠コーティングに染料又は顔料を加えてもよい。
【０２５０】
所定の実施形態では、経口投与して小腸の所定部分で活性成分（例えば化合物１）を選択的に放出するように本発明の医薬製剤を製剤化する。例えば、Ｂｌａｎｃｈｅｔｔｅら（本願に援用するＭａｔ．Ｒｅｓ．Ｓｏｃ．Ｓｙｒｕｐ．Ｐｒｏｃ．，７２４：２１５−２２０，２００２）は製剤が胃から小腸上部に入るときに化学療法剤であるブレオマイシンをｐＨ変化に反応して小腸上部に標的送達するために所定の担体材料を使用することを報告している。具体的には、メタクリル酸（ＭＡＡ）とポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）からなるハイドロゲルナノスフィアにｉｎ  ｓｉｔｕ重合法によりブレオマイシンを充填した。その結果、ナノスフィアの周囲の環境のｐＨに応じてナノスフィアからブレオマイシンが放出されることが分かった。
【０２５１】
管腔内ｐＨは十二指腸では４〜５であるが、次第にアルカリ性となり、回腸下部では８に近づくので、特定のｐＨ値に基づいて薬物放出を制御すると、ｐＨが一致する胃腸管の特定部分に前記薬物を放出し易くなると思われる。
【０２５２】
あるいは、例えば化合物を多くの場合にはデポー製剤又は徐放性製剤として浮腫部位に直接注射することにより、化合物を全身ではなく局所に投与してもよい。
【０２５３】
更に、標的ドラッグデリバリーシステム（例えば内皮細胞特異的抗体をコーティングしたリポソーム）として薬物を投与してもよい。
【０２５４】
口腔投与用として、前記組成物は従来通りに製剤化した錠剤又はロゼンジ剤の形態でもよい。
【０２５５】
従来のカテーテル点滴技術又は輸液の使用を含めて注射（例えばボーラス注射又は連続輸液）による非経口投与用に本発明の化合物を製剤化してもよい。水溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液又は緩衝生理食塩水等の生理的に適合可能な緩衝液で本発明の化合物を製剤化してもよい。注射用製剤は防腐剤を添加した単位用量形態（例えばアンプルやマルチドーズ容器）でもよい。前記組成物は油性又は水性溶媒で懸濁液、溶液又はエマルションの形態にしてもよく、懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散剤等の製剤化剤を含有することができる。あるいは、使用前に適切な溶媒（例えば滅菌パイロジェンフリー水）で再構成するように活性成分を粉末形態にしてもよい。
【０２５６】
非経口投与用医薬製剤としては、水溶性形態の活性化合物の水溶液が挙げられる。また、適切な油性注射用懸濁液として活性化合物の懸濁液を製造してもよい。適切な親油性溶媒又は媒体としては、脂肪油（例えばゴマ油）又は合成脂肪酸エステル類（例えばオレイン酸エチル又はトリグリセリド）又はリポソームが挙げられる。懸濁液の粘度を増加させる物質（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストラン）を水性注射用懸濁液に加えてもよい。場合により、適切な安定化剤や、より高濃度の溶液を製造できるように化合物の溶解度を上げる物質を懸濁液に更に加えてもよい。
【０２５７】
例えばカカオ脂や他のグリセリド等の従来の坐剤用基剤を加えた坐剤や保留浣腸剤等の経直腸組成物として本発明の化合物を製剤化してもよい。このような組成物は例えばクローン病、ＩＢＤ、潰瘍性大腸炎等の胃腸又は結腸適応症の治療用として管腔内投与することができる。
【０２５８】
あるいは、使用前に適切な溶媒（例えば滅菌パイロジェンフリー水）で再構成するように活性成分を粉末形態にしてもよい。
【０２５９】
経粘膜投与には、浸透させる関門に適した浸透剤を製剤で使用する。このような浸透剤は当分野で公知である。
【０２６０】
鼻腔内投与又は吸入投与には、患者が押し出しやポンプで操作するポンプスプレー容器から溶液又は懸濁液として本発明の化合物を送達したり、適切な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切な気体）を使用して加圧容器又はネブライザーからエアゾールスプレー剤として送達すると好適である。加圧エアゾールの場合には、規定量を送達するように弁を備えることにより用量単位を決定することができる。加圧容器又はネブライザーに活性化合物の溶液又は懸濁液を収容することができる。本発明の化合物とラクトースや澱粉等の適切な粉末基剤の粉末混合物を充填し、インヘラー又はインサフレーター用の（例えばゼラチンからなる）カプセルやカートリッジを製剤化してもよい。
【０２６１】
上記製剤に加え、デポー製剤として前記化合物を製剤化してもよい。このような長期作用型製剤は移植（例えば皮下又は筋肉内又は筋肉内注射）により投与することができる。従って、例えば、（例えば許容される油中エマルションとして）適切なポリマーもしくは疎水性材料又はイオン交換樹脂で前記化合物を製剤化してもよいし、やや溶けにくい誘導体として（例えばやや溶けにくい塩として）製剤化してもよい。
【０２６２】
本発明の疎水性化合物の医薬担体の１例はベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー及び水相を含む補助溶媒系である。前記補助溶媒系としてはＶＰＤ補助溶媒系が挙げられる。ＶＰＤは３％ｗ／ｖのベンジルアルコールと、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤であるポリソルベート８０と、６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００に無水エタノールを加えて全量とした溶液である。ＶＰＤ補助溶媒系（ＶＰＤ：５Ｗ）は５％デキストロース水溶液で１：１に希釈したＶＰＤから構成される。この補助溶媒系は疎水性化合物をよく溶かし、それ自体は全身投与しても毒性が低い。当然のことながら、補助溶媒系の割合はその溶解性と毒性特性を損なわない限り、大幅に変動させることができる。更に、補助溶媒成分の種類も変えることができ、例えばポリソルベート８０の代わりに他の低毒性非極性界面活性剤を使用してもよいし、ポリエチレングリコールの分子量を変えてもよいし、ポリエチレングリコールの代わりに他の生体適合性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン）を使用してもよいし、デキストロースの代わりに他の糖類又は多糖類を使用してもよい。
【０２６３】
あるいは、疎水性医薬化合物用の他の送達システムを利用してもよい。リポソームとエマルションは疎水性薬物の送達媒体又は担体の周知例である。ジメチルスルホキシド等の所定の有機溶媒を利用してもよいが、通常では毒性が高くなる。更に、治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス等の徐放システムを使用して前記化合物を送達してもよい。種々の徐放性材料が開発されており、当業者に周知である。徐放性カプセル剤はその化学種に応じて数時間から数日間まで前記化合物を放出することができる。治療剤の化学種と生物学的安定性に応じて、他のタンパク質安定化ストラテジーを利用してもよい。
【０２６４】
６．治療有効量
「治療有効量」とは本発明の化合物又は所定の実施形態では２種以上のこのような化合物の組合せの量であって、治療する病態の進行を完全もしくは少なくとも部分的に抑制する量、又は治療する病態の１種以上の症状を少なくとも部分的に緩和する量である。所定の実施形態において、治療有効量は治療する病態の１種以上の症状を抑えるのに有効でありながら、（例えば網状赤血球数の減少として現れる）赤血球造血及び／又は（例えばＮＫ細胞数の減少として現れる）ＮＫ細胞機能への負の影響等の望ましくない顕著な副作用を生じない。
【０２６５】
所定の実施形態において、治療有効量は予防有効量とすることもできる。一方、所定の実施形態において、治療有効量は予防有効量を意味しない。治療有効量は患者の体格と性別、治療する病態、病態の重症度及び要求される結果により異なる場合がある。
【０２６６】
特定の患者では、本願の教示に鑑みて当業者に公知の方法により治療有効量をある程度まで決定することができる。
【０２６７】
本発明の方法で使用する全化合物について、治療有効用量は細胞アッセイから当初に推定することができる。例えば、細胞アッセイで決定されるＩＣ５０（即ちＪＡＫ１活性等の所定のタンパク質キナーゼ活性の半数阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲となるように細胞及び動物モデルで用量を決定することができる。
【０２６８】
実施形態によっては、３〜５％の血清アルブミンの存在下でＩＣ５０を決定すると、化合物への血漿タンパク質の結合効果に近くなるので適切な場合もある。このような情報はヒトで有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。更に、全身投与に最も好ましい化合物は血漿中で安全に達成可能な濃度で無傷の細胞におけるタンパク質キナーゼシグナル伝達を有効に阻害する。
【０２６９】
本発明の化合物の毒性と治療有効性は、例えば最大耐用量（ＭＴＤ）とＥＤ５０（最大反応の５０％有効用量）を決定する手順等の標準医薬手順により細胞培養物及び／又は実験動物で決定することができる。毒性作用と治療効果の用量比は治療指数であり、ＭＴＤとＥＤ５０の比として表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータはヒト用の投与量範囲を決定するのに使用することができる。このような化合物の投与量は毒性を殆ど又は全く生じずにＥＤ５０を含む循環濃度範囲内にあることが好ましい。前記投与量は利用する剤形と利用する投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。的確な製剤、投与経路及び投与量は本願に記載する投与量レベルに基づき、個々の医師が患者の病態を考慮して変更することができる（例えばＦｉｎｇｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈ．１  ｐ．１参照）。危機状態の治療では、迅速な反応を得るために急性ボーラスの投与又はＭＴＤに近い輸液が必要な場合もある。
【０２７０】
活性種の血漿中濃度がキナーゼ調節効果を維持するために十分な濃度、即ち最低有効濃度（ＭＥＣ）となるように投与量と投与間隔を例えば個々に調整してもよい。ＭＥＣは化合物毎に異なるが、インビトロデータ（例えば本願に記載するアッセイを使用して５０〜９０％のタンパク質キナーゼ阻害率を達成するために必要な濃度）から推算することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は個々の特性と投与経路により異なる。一方、血漿中濃度を測定するにはＨＰＬＣアッセイ又はバイオアッセイを使用することができる。
【０２７１】
ＭＥＣ値を使用して投与間隔を決定することもできる。所望の症状改善が達成されるまで時間の１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％にわたって血漿中濃度をＭＥＣよりも高く維持するレジメンを使用して化合物を投与することができる。
【０２７２】
上記の代わりに又は上記に加えて、約０．０５〜１．５０μｇ・ｈｒ／ｍＬ、約０．１０〜１．０６μｇ・ｈｒ／ｍＬ、約０．１０〜０．５０μｇ・ｈｒ／ｍＬ、約０．１１〜０．３０μｇ・ｈｒ／ｍＬ、約０．１２〜０．１５μｇ・ｈｒ／ｍＬ、約０．１２８μｇ・ｈｒ／ｍＬのＡＵＣ０−２４等の所望のＡＵＣ０−２４値を達成及び維持するレジメンを使用して及び／又は所望の症状改善が達成されるまで化合物を投与することができる。
【０２７３】
本願で使用するＡＵＣ０−２４とは「０時点から投与後２４時間までの濃度−時間曲線下面積」を意味する。これは先ず投与（例えば経口投与）後２４時間にわたって化合物（例えば化合物１）の累積血漿中濃度のｌｏｇ１０をプロットした後に、同一時間の間に形成された濃度−時間曲線の下の面積を計算することにより算出される。
【０２７４】
所定の実施形態において、前記レジメンはｑｄ（１日１回）である。所定の実施形態において、前記レジメンは例えば等量ずつｂｉｄ（１日２回）である。所定の実施形態において、前記レジメンは例えば等量ずつｔｉｄ（１日３回）である。所定の実施形態において、前記レジメンは例えば等量ずつｑｉｄ（１日４回）である。
【０２７５】
所定の実施形態では、単位用量形態当たり（例えばカプセル１錠当たり）約２ｍｇ、２．５ｍｇ又は３ｍｇの量の本発明の化合物（例えば遊離塩基形態の化合物１）を等量ずつｂｉｄ（１日２回）（例えば約２．５ｍｇずつ１日２回）ヒト患者に経口投与する。
【０２７６】
しかし、局所投与又は選択的取込みの場合には、薬物の有効局所濃度が血漿中濃度と相関しない場合がある。その場合には、局所薬物濃度により形成される局所ＡＵＣに基づいて投与量を測定してもよい。
【０２７７】
所定の実施形態において、組成物投与量は治療する対象、例えば対象の体重、疾患の重症度、投与方法及び処方する医師の判断によりある程度異なる場合もある。
【０２７８】
７．アッセイ及び動物モデル
本願に記載するアッセイ及び動物モデルはＪａｋキナーゼ阻害度の評価方法等の本発明の方法で使用することができる典型的な実施形態である。アッセイ及び動物モデルで記載する特定の条件は実例としての手引きを提供する目的であり、従って、限定的ではない。当業者は本願の一般的な教示に反しない限り、具体的に記載した特定の条件又はパラメータを容易に変更することができる。
【０２７９】
ヒトＴブラストＩＬ−２  ｐＳＴＡＴ５細胞アッセイ
インターロイキン−２（ＩＬ−２）はＪａｋ１とＪａｋ３の両方のキナーゼ活性を必要とする受容体複合体を介してシグナル伝達すると考えられている。細胞コンテクストにおいて本発明の化合物（例えば化合物１）がＪａｋ１／Ｊａｋ３阻害に及ぼす影響を評価するためには、エキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を測定することによりヒトＴブラストにおける本発明の化合物（例えば化合物１）によるＳＴＡＴ５のＩＬ−２誘導性リン酸化の阻害を測定することができ、例えばＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ読み取り（ＳＴＡＴ５  ｐ−Ｔｙｒ６９４／６９９）により評価することができる。
【０２８０】
例えば、対象に由来する血液試料（例えば本発明の医薬組成物の投与前及び／又は投与後に得られた試料）から単離したＴブラスト細胞をエキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイに供し、治療前後のＪａｋ１キナーゼ活性を求めることができる。Ｊａｋ１活性の変化を使用してＪａｋ１阻害度（例えば［治療後活性−治療前活性］／（治療前活性））を求めることができる。
【０２８１】
市販材料を使用したエキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイの１例を以下に記載する。軽微な変更を加えて患者試料に同一アッセイを使用することができる。
【０２８２】
材料：
フィトヘマグルチニンＴブラストはＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ  １８９１５から購入したＬｅｕｋｏｐａｃｋｓ等の市販原料から作製することができる。Ｔブラストはアッセイで使用するまで５％ＤＭＳＯ／培地で凍結保存することができる。
【０２８３】
このアッセイに備え、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  ２５０３０−０８１）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ  １５６３０−０８０）、１００μｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  １５１４０−１２２）及び１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １０４３８０２６）を添加したＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ  １１８７５０９３）を典型的な組成とするアッセイ培地で細胞を解凍する。アッセイで使用する他の材料としては、ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｄ２６５０）、９６ウェル希釈用プレート（ポリプロピレン）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３３６５）、９６ウェルアッセイプレート（白色，１／２面積，９６ウェル）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６４２）、Ｄ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １４０４０１３３）、ＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  ２０２−ＩＬ−１０（１０μｇ））、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ  ｐＳＴＡＴキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＴＧＲＳ５Ｓ１０Ｋ）及びＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎプロテインＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ６７６０６１７Ｍ）が挙げられる。
【０２８４】
方法：
アッセイ前にＴブラストを解凍し、ＩＬ−２の不在下で約２４時間培養する。試験化合物又は対照を１００％ＤＭＳＯで溶解し、系列希釈する。次にＤＭＳＯストックを細胞培養培地で５０倍に希釈し、４倍化合物ストック（２％ＤＭＳＯ含有）を作製する。Ｃｏｒｎｉｎｇ白色９６ウェル，１／２面積プレートを使用し、培地１０μＬに２×１０５個／１０μｌ／ウェルとなるように細胞を播種した後、４倍試験化合物５μＬを２枚に加える。細胞を化合物と共に約０．５時間約３７℃でインキュベートする。次に、ＩＬ−２ストック５μＬを最終濃度２０ｎｇ／ｍＬとなるように加える。製造元に指定されているようにＩＬ−２を４μｇ／ｍＬストック溶液として小分けして約−２０℃で保存し、使用直前にアッセイ培地（８０ｎｇ／ｍＬまで）で５０倍に希釈する。プレートの側面を数回注意深く叩いてウェルの内容物を混合した後、約３７℃で約１５分間インキュベートする。５倍濃度ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ細胞溶解バッファー５μＬを加えてオービタルシェーカーで約１０分間室温にて振盪することによりアッセイを終了する。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒのプロトコールに従ってＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアクセプタービーズミックスを再構成する。再構成したＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアクセプタービーズミックス３０μＬ／ウェルを加え、アルミ箔で覆った後、オービタルシェーカーで高速で約２分間後、低速で約２時間振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコールに従ってドナービーズミックスを再構成し、１２μＬ／ウェルを加え、アルミ箔で覆った後、高速で約２分間、低速で約２時間振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコール説明書に従ってＥｎＶｉｓｉｏｎリーダーでプレートを読み取る。
【０２８５】
ＴＦ−１  ＩＬ−６  ｐＳＴＡＴ３細胞アッセイ
インターロイキン−６（ＩＬ−６）はＪａｋ１分子２個のキナーゼ活性を必要とする受容体複合体を介してシグナル伝達すると考えられている。細胞コンテクストにおいて本発明の化合物（例えば化合物１）がＪａｋ１阻害に及ぼす影響を評価するためには、例えばＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ読み取り（ＳＴＡＴ３  ｐ−Ｔｙｒ７０５）を使用してＩＬ−６  ｐＳＴＡＴ３細胞アッセイにより赤白血病ＴＦ−１細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２００３）等のヒト赤芽球におけるＳＴＡＴ３のＩＬ−６誘導性リン酸化の阻害を評価することができる。ヒト赤芽球はＨｕら（本願に援用する“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｓ  ａｔ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｓｔａｇｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，”Ｂｌｏｏｄ，１２１（１６）：３２４６−３２５３，２０１３）等の当分野で認められている任意方法を使用して患者試料から単離することができる。
【０２８６】
材料：
ＴＦ−１細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−２００３）。培養培地：２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  ２５０３０−０８１）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ  １５６３０−０８０）、１００μｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  １５１４０−１２２）、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ  ２５０８０−０９４）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ  １１３６０−０７０）、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １０４３７−０２８）、及び２ｎｇ／ｍＬ  ＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  ２１５−ＧＭ−０１０）を添加したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ  １１９６０−０４４）。このアッセイで使用する他の材料としては、ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｄ２６５０）、９６ウェル希釈用プレート（ポリプロピレン）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３３６５）、９６ウェルアッセイプレート（白色，１／２面積，９６ウェル）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６４２）、Ｄ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １４０４０１３３）、ＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  ２０６−ＩＬ／ＣＦ−０５０（５０μｇ））、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ  ｐＳＴＡＴ３キット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＴＧＲＳ３Ｓ１０Ｋ）及びＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎプロテインＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ６７６０６１７Ｍ）が挙げられる。
【０２８７】
方法：
アッセイに先立ち、ＧＭ−ＣＳＦを添加しない培養培地で細胞を約１８時間培養する。試験化合物又は対照を１００％ＤＭＳＯに溶解し、系列希釈する。次にＤＭＳＯストックを細胞培養培地で５０倍に希釈し、４倍化合物ストック（２％ＤＭＳＯ含有）を作製する。Ｃｏｒｎｉｎｇ白色９６ウェル，１／２面積プレートを使用し、培地１０μＬに２×１０７個／１０μＬ／ウェルとなるように細胞を播種した後、４倍試験化合物ストック５μＬを２枚に加える。細胞を化合物と共に約０．５時間約３７℃でインキュベートした後、４００ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−６を５μＬ加える。エンドトキシンフリーＤ−ＰＢＳ（０．１％ＢＳＡ）を使用してＩＬ−６を１０μｇ／ｍＬアリコートとして約−２０℃で保存する。アッセイ前に、ＩＬ−６を培養培地で４００ｎｇ／ｍＬまで希釈し、陰性対照ウェルを除く全ウェルに加え（５μＬ／ｗｅｌｌ）、陰性対照ウェルには培地５μＬ／ウェルを加える。プレートの側面を数回注意深く叩いてウェルの内容物を混合する。プレートを約３７℃で約３０分間インキュベートする。５倍濃度ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ細胞溶解バッファー５μＬを全ウェルに加えて細胞を溶解し、約１０分間室温で振盪後、アッセイする。あるいは、アッセイプレートを約−８０℃で凍結後、室温で解凍してもよい。ｐＳＴＡＴ３  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ａｓｓａｙキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ＃ＴＧＲＳ３Ｓ１０Ｋ）を使用し、Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコール説明書に従ってアクセプタービーズミックスを再構成する。ウェル当たり３０μＬを加えた後、プレートをアルミ箔で覆い、オービタルシェーカーで室温にて高速で約２分間後、低速で約２時間振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコール説明書に従ってドナービーズミックスを再構成する。ウェル当たり１２μＬを加えた後、アルミ箔で覆い、オービタルシェーカーで約３７℃にて高速で約２分間後、低速で約２時間振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコール説明書に従ってＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー室温にてプレートを読み取る。
【０２８８】
ＵＴ７／ＥＰＯ  ｐＳＴＡＴ５細胞アッセイ
ＵＴ−７は急性巨核芽球性白血病患者の骨髄から樹立された細胞株である。ＵＴ−７細胞の増殖はＧＭ−ＣＳＦ（１ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ３（１０単位／ｍＬ）又はＥＰＯ（１単位／ｍＬ）に厳密に依存する。ＵＴ−７細胞の増殖はＩＬ６によっても刺激される。ＵＴ−７／ＥＰＯはＥＰＯの存在下で６カ月超保存したＵＴ−７細胞から樹立されたＵＴ−７細胞の亜株である。ＵＴ−７／ＥＰＯの増殖はＧＭ−ＣＳＦ又はＩＬ３に依存しない。本発明の化合物がＥＰＯ刺激により誘導されたＪａｋ１キナーゼ活性を阻害する能力を評価するためにこの細胞株も使用できる。
【０２８９】
上記の代わりに又は上記に加えて、患者試料（例えば患者血液試料）を使用し、ＧＭ−ＣＳＦ誘導性ＳＴＡＴリン酸化に依存するエキソビボアッセイを同様に実施することができる。実際に、これまでに試験した全Ｊａｋ阻害剤化合物は一貫して同程度の差でＥＰＯシグナル伝達よりもＧＭ−ＣＳＦシグナル伝達に対して強力である。従って、ＧＭ−ＣＳＦ刺激ＳＴＡＴリン酸化アッセイを阻害効力測定の代用手段として使用することができる。
【０２９０】
材料：
ＵＴ７／ＥＰＯ細胞にエリスロポエチン（ＥＰＯ）を継代接種し、週２回分割し、新鮮な培養培地を解凍し、分割時に加える。培養培地：２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  ２５０３０−０８１）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ  １５６３０−０８０）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  １５１４０−１２２）、１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １０４３７−０２８）、ＥＰＯ（５μＬ／ｍＬ＝培地１ｍＬ当たり７μｇ／ｍＬストック７．１μＬ）を添加したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ  １１９６０−０４４）。アッセイ培地：２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、５％ＦＢＳ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを添加したＤＭＥＭ。このアッセイで使用する他の材料としては、ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ｄ２６５０）、９６ウェル希釈用プレート（ポリプロピレン）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３３６５）、９６ウェルアッセイプレート（白色，１／２面積，９６ウェル）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６４２）、Ｄ−ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １４０４０１３３）、ＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  ２０２−ＩＬ−１０（１０μｇ））、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ  ｐＳＴＡＴ５キット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＴＧＲＳ５Ｓ１０Ｋ）及びＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎプロテインＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ６７６０６１７Ｍ）が挙げられる。
【０２９１】
方法：
アッセイを実施する前にＥＰＯの不在下で細胞を約１６時間培養する。試験化合物又は対照を１００％ＤＭＳＯに溶解し、系列希釈する。次にＤＭＳＯストックを細胞培養培地で５０倍に希釈し、４倍化合物ストック（２％ＤＭＳＯ含有）を作製する。Ｃｏｒｎｉｎｇ白色９６ウェル，１／２面積プレートを使用し、培地１０μＬに２×１０５個／１０μＬ／ウェルとなるように細胞を播種した後、４倍試験化合物ストック５μＬを２枚に加える。細胞を化合物と共に約０．５時間約３７℃でインキュベートする。インキュベーション後、最終濃度が１ｎＭ  ＥＰＯとなるようにＥＰＯ  ５μＬを加える。プレートの側面を数回注意深く叩いてウェルの内容物を混合した後、約３７℃で約２０分間インキュベートする。５倍濃度ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ溶解バッファー５μＬを加えた後、オービタルシェーカーで約１０分間室温にて振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコールに従って再構成後にアクセプタービーズ３０μＬ／ウェルを加え、アルミ箔で覆い、オービタルシェーカーで高速で約２分間後、低速で約２時間振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコール説明書に従ってドナービーズミックスを再構成した後、１２μＬ／ウェルを加え、アルミ箔で覆い、オービタルシェーカーで高速で約２分間、低速で約２時間振盪する。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコール説明書に従ってＥｎＶｉｓｉｏｎリーダーでプレートを読み取る。
【０２９２】
化合物によるＪＡＫ阻害の急性インビボ測定：
ＬｅｗｉｓラットにおけるコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）誘導性サイトカイン産生を使用した測定
０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量となるように試験化合物を不活性溶媒（例えば、０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃Ｈ３７８５）／０．０２％Ｔｗｅｅｎ  ８０（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃４７８０）水溶液が挙げられるが、これに限定するものではない）で所望の濃度に製剤化する。６週齢雄性Ｌｅｗｉｓラット（１２５ｇ〜１５０ｇ）（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に化合物をゼロ時点（０分）で経口投与する。約３０分後にＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃１４１９０）に溶解したコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ，ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｃａｔ＃１７−０４５０−０１）１０ｍｇ／ｋｇをラットに静脈（ｉ．ｖ．）注射する。約４時間後にラットから心臓採血し、その血漿中のＩＬ−２濃度（ＥＬＩＳＡキット：Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｃａｔ＃Ｒ２０００）とＩＦＮ−γ濃度（ＥＬＩＳＡキット：Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｃａｔ＃ＲＩＦ００）を定量する。
【０２９３】
関節炎疾患モデルに及ぼす化合物の慢性インビボ効果の測定：
Ｌｅｗｉｓラットにおけるアジュバント誘導性関節炎（ＡＩＡ）を使用した測定
ヒト型結核菌Ｈ３７ＲＡ（Ｄｉｆｃｏ，ｃａｔ＃２３１１４１）２００μｇを加えた鉱物油懸濁液（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃Ｍ５９０５）１００μＬを雌性Ｌｅｗｉｓラット（６週齢，体重１２５ｇ〜１５０ｇ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右後肢足蹠に皮内（ｉ．ｄ．）免疫する。初回免疫から７日後に対側（左）後肢に炎症が現れる。免疫から７日後に、化合物を不活性溶媒（例えば、０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃Ｈ３７８５）／０．０２％Ｔｗｅｅｎ  ８０（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃４７８０）水溶液が挙げられるが、これに限定するものではない）で製剤化し、１日１回又は２回少なくとも１０日間経口投与する。０日目に水置換プレチスモグラフ（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．ＰＡ  １９４７３，Ｍｏｄｅｌ＃７１４０）を使用してベースライン足体積を測定する。ラットを吸入麻酔薬（イソフルラン）で軽く麻酔し、対側（左）後肢をプレチスモグラフに浸し、足体積を記録する。ラットを免疫後１７日目まで１日おきに採点する。免疫後１７日目に全ラットをイソフルラン麻酔下で心臓穿刺により失血させ、左後肢を採取し、ボクセルサイズ１８μｍ、閾値４００、σガウス０．８，サポートガウス１．０でマイクロＣＴスキャン（ＳＣＡＮＣＯ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔｅｒｎ，ＰＡ，Ｍｏｄｅｌ＃μＣＴ４０）を使用して骨びらんに及ぼす影響を評価する。前記後肢の足根断面を含む３６０μｍ（２００スライス）垂直断面について骨体積及び密度を求める。脛距関節に下基準点を設定し、中足骨基部から脛骨上端部まで３６０μｍ断面を解析する。ＬＣ／ＭＳを使用して血漿中の薬物曝露量を求める。
【０２９４】
Ｌｅｗｉｓラットにおけるコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）を使用した測定
−１日目に、ウシ鼻中隔に由来する可溶性ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）（Ｅｌａｓｔｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｔ＃ＣＮ２７６）をラット１匹当たり６００μｇの用量に計りとり、濃度４ｍｇ／ｍＬとなるように０．０１Ｍ酢酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，ｏｒｄｅｒ＃９５２２−０３のＵＳＰグレードＨＯＡｃ  １５０μＬとＭｉｌｌｉ  Ｑ水２５０ｍＬの混合物）を加える。バイアルをアルミ箔で覆い、ロッカーに載せて約４℃で一晩振盪する。０日目にガラスハミルトンルアーロックシリンジ（ＳＧＥ  Ｓｙｒｉｎｇｅ  Ｐｅｒｆｅｃｔｉｏｎ  ＶＷＲ  ｃａｔ＃００７２３０）を使用してコラーゲンストック溶液を不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）（Ｄｉｆｃｏ  ｌａｂｓ，ｃａｔ＃２６３９１０）で１：１に希釈し、最終濃度２ｍｇ／ｍＬとする。免疫時体重約１５０ｇで７日間馴化させた雌性Ｌｅｗｉｓラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）にイソフルラン（５％）と酸素を使用して麻酔室で麻酔する。ラットに完全に麻酔がかかったら、ノーズコーンに移し、注射の間、麻酔を維持する。ラットの尾の基部を剃毛し、５００μＬルアーロックシリンジと２７ｇ針を用いて各群ｎ＝９のラットの臀部３カ所に１００μＬずつコラーゲン３００μＬを皮内注射する。ＩＦＡ対照ラットも同様に注射する（ｎ＝６）。ＩＦＡは０．０１Ｍ酢酸との１：１エマルションとする。試験の６日目に追加免疫を行う。この日は剃毛せず、免疫と同様に注射を行う。初回免疫から１０日後に両後肢に炎症が現れる。免疫から１０日後に、化合物を不活性溶媒（例えば、０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃Ｈ３７８５）／０．０２％Ｔｗｅｅｎ  ８０（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃４７８０）水溶液が挙げられるが、これに限定するものではない）で製剤化し、１日１回又は２回少なくとも９日間経口投与する。７日目に水置換プレチスモグラフ（Ｖｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．ＰＡ  １９４７３，Ｍｏｄｅｌ＃７１４０）を使用してベースライン足体積を測定した。ラットを吸入麻酔薬（イソフルラン）で軽く麻酔し、両後肢をプレチスモグラフに浸し、足体積を記録する。ラットを免疫後１８日目まで週２〜３回採点する。免疫後１８日目に全ラットをイソフルラン麻酔下で心臓穿刺により失血させ、後肢を採取し、ボクセルサイズ１８μｍ、閾値４００、σガウス０．８，サポートガウス１．０でマイクロＣＴスキャン（ＳＣＡＮＣＯ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔｅｒｎ，ＰＡ，Ｍｏｄｅｌ＃μＣＴ４０）を使用して骨びらんに及ぼす影響を評価する。前記後肢の足根断面を含む３６０μｍ（２００スライス）垂直断面について骨体積及び密度を求める。脛距関節に下基準点を設定し、中足骨基部から脛骨上端部まで３６０μｍ断面を解析する。ＬＣ／ＭＳを使用して血漿中の薬物曝露量を求める。
【０２９５】
喘息疾患モデルに及ぼす化合物の慢性インビボ効果の測定：
ＯＶＡ誘導性ラット喘息モデルを使用した測定
０日目と７日目にオボアルブミン（ＯＶＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）４０μｇをＩｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の２０ｍｇ／ｍｌ溶液と混合して雌性Ｂｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラット（７〜９週齢）に感作する。次に１９日目と２０日目にＯＶＡ  １．５μｇをＰＢＳ  ５０μＬに混合してラットの気管支内に追加感作する。１８日目に阻害剤の投与を開始し、２２日目まで続ける。２回目の追加感作から４８時間後の２２日目に、ラットに麻酔・拘束下で肺機能試験を実施する。全身プレチスモグラフィーを使用して気道過敏性（ＡＨＲ）を評価する。簡単に説明すると、ケタミン６０ｍｇ／ｋｇとキシラジン５ｍｇ／ｋｇ（Ｈｅｎｒｙ  Ｓｃｈｅｉｎ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）の腹腔内注射により切開面の麻酔を誘導する。第３気管輪と第４気管輪の間を切開し、気管カニューレを挿入する。０．１２ｍｇ／ｋｇ臭化パンクロニウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の頸静脈注射により自発呼吸できないようにする。動物を全身プレチスモグラフ（Ｂｕｘｃｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）に入れ、従量式ベンチレーター（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）で毎分呼吸回数１５０回となるように０．２ｍＬの空気を機械的に送り込む。トランスデューサーを使用して肺内圧とプレチスモグラフ内の流量を測定し、Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  Ｘａソフトウェア（Ｂｕｘｃｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ）を使用して内圧／流量として肺抵抗を計算する。ベースラインで気道抵抗を測定し、メサコリン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）３ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ及び３０ｍｇ／ｍＬをインライン超音波ネブライザーで送り込んで追加感作した後にも測定する。肺機能試験の完了後、両肺を滅菌ＰＢＳ  １ｍＬで３回洗浄した。１回目の洗浄液を２０００ｒｐｍで５分間遠心し、その後の分析に備えて上清を保存する。１回目の洗浄液から得られたペレットに２回目〜３回目の洗浄液を加えた後、フローサイトメトリーによる細胞浸潤評価に備えて処理する。大静脈から採血した血液から血漿を採取し、薬物濃度の評価に使用する。
【０２９６】
経口投与したヒトに由来する血液試料中のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及びＮＫＴ細胞の測定方法
ＴＢＮＫ細胞数：
以下の手順は本発明の化合物を経口投与したヒト対象から採取したもの等の血液試料からＴＢＮＫ細胞を計数する方法について具体的に説明するものである。（使用する機器及び試薬の種類を含めて）本願に記載する方法は非限定的であり、以下の手順の軽微な変更や、同等の機器及び試薬も容易に想到することができる。
【０２９７】
具体的には、特定時点で３ｍＬラベンダーＫ２  ＥＤＴＡ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒに血液試料を採取し、採血管を混合する。試料を周囲温度で一晩の間に分析施設に輸送し、好ましくは受領日に試料分析を行う。
【０２９８】
試料当たり２本のＢＤ  Ｔｒｕｃｏｕｎｔ試験管（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃３４０３３４）を使用し、試料番号の後にＡ又はＢと記したラベルを付ける。試料分析時毎に試験間対照として使用する安定化血液試料であるＢＤ  Ｍｕｌｔｉ−Ｃｈｅｃｋ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃３４０９１１）の試験管も２本ずつ準備する。ＢＤ  ＭｕｌｔｉＴｅｓｔ  ＩＭＫキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃３４０５０３）を使用し、製造元の説明書に従い、Ａの全試験管に抗体混合物Ａ２０μＬを入れ、Ｂの全試験管に抗体混合物Ｂ２０μＬを入れる。製造元の説明書に従い、各血液試料（５０μＬ）をＡ及びＢの両方の試験管に入れる。試験管を温和にボルテックスして混合し、暗所に１５分間置く。１倍固定／溶解バッファー４５０μＬを全試験管に加え、温和にボルテックスして混合する。試験管を暗所で１５分間インキュベートした後、細胞数（例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）の解析用ＢＤ  Ｍｕｌｔｉｔｅｓｔソフトウェアを使用してＢＤ  ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒで試験する。機械の設定と校正用にＢＤ  Ｃａｌｉｂｒｉｔｅ  ３ビーズとＡＰＣビーズを使用する（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃３４０４８６及び２３０５６）。Ｍｕｌｔｉｔｅｓｔソフトウェアを使用してＴリンパ球、Ｂリンパ球及びＮＫ細胞の細胞数を計算する。
【０２９９】
ＮＫＴ細胞測定では、ＦｌｏｗＪｏを使用し、ＣＤ３＋／ＣＤ１６＋／ＣＤ５６＋集団に着目することにより細胞数を求める。以下の式：（細胞集団におけるイベント数／ビーズ絶対数計数領域におけるイベント数）×（試験当たりのビーズ数＊／試験体積）を使用して１μＬ当たりの細胞数を計算する。＊この値はＢＤ  Ｔｒｕｃｏｕｎｔ試験管ラベルに記載されている。
【０３００】
経口投与したヒトに由来する血液試料におけるエキソビボＩＬ−６及び共通γ鎖シグナル伝達の阻害の測定方法
エキソビボ刺激アッセイ：
以下の手順は本発明の化合物を経口投与したヒト対象から採取したもの等の血液試料から夫々のＪａｋキナーゼによるＩＬ−６及び共通γ鎖シグナル伝達の阻害を測定する方法を具体的に説明するものである。（使用する機器及び試薬の種類を含めて）本願に記載する方法は非限定的であり、以下の手順の軽微な変更や、同等の機器及び試薬も容易に想到することができる。
【０３０１】
具体的に説明すると、対象毎に時点＝０時間、１時間、６時間、１２時間（又は他の所定間隔）で静脈穿刺により２ｍＬヘパリンナトリウム入り試験管に採血する。血液は氷上保存し、各時点で採血後できるだけ早く処理する。各時点で血液１５０μＬを１５ｍＬ円錐管６本に加え、１０分間３７℃でインキュベートする。組換えヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃２０６−ＩＬ，４００ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃２０７−ＩＬ，４００ｎｇ／ｍＬ）又はＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃２１５−ＧＭ，８０ｎｇ／ｍＬ）を各１本、ｄＰＢＳを３本（各サイトカインの陰性対照）に５０μＬずつ加え、よく混合する。管を１０分間３７℃でインキュベートする。次に管を氷上に置き、抗ＣＤ１４−ＡＰＣ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃３４０４３６，３μＬ／本）をＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦ（−／＋）管に加え、よく混合する。抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５５３３９，３μＬ／本）をＩＬ−７管（−／＋）に加え、よく混合する。これらの管を氷上で２０分間インキュベートする。固定／溶解バッファー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５８０４９，３７℃まで１回予熱済みのものを１．８ｍＬ／本）を全管に加え、激しく混合し、１０分間３７℃でインキュベートする。次に試料を固定／溶解バッファーで２回洗浄し、ペレットを固定／溶解バッファー１００μＬに懸濁し、−７０℃以下で凍結し、ドライアイスで梱包して輸送する。
【０３０２】
試料を室温で解凍し、９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９９）に移し、（４１１×ｇで５分間遠心後、上清を除去した）ペレットをｄＰＢＳ／２％ＦＢＳで２回洗浄後、ＢＤ  ＰｅｒｍバッファーＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５８０５０，−２０℃まで冷却）２００μＬをペレットに加え、アルミ箔で覆って氷上で３０分間インキュベートすることにより細胞内染色を行う。試料を再びｄＰＢＳ／２％ＦＢＳで２回洗浄し、ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃１４５０６−５０，１μｇ／１００μＬ／試料）を添加したｄＰＢＳ／２％ＢＳＡで氷上にて２０分間ブロッキングする。試料をもう１回洗浄し、適切なＢＤリン酸化ＳＴＡＴ−ＰＥ抗体を添加したブロッキング溶液１００μＬにペレットを再懸濁する。抗ｐＳＴＡＴ５−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｃａｔ＃６１２５６７，４μＬ／ウェル／１００μＬ）をＩＬ−７及びＧＭ−ＣＳＦ試料に加え、抗ｐＳＴＡＴ３−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５８５５７，４μＬ／ウェル／１００μＬ）をＩＬ−６試料に加える。これをアルミ箔で覆って６０〜９０分間室温でインキュベートした後、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ  ＨＴＳで試験する。
【０３０３】
ＦｌｏｗＪｏ解析ソフトウェアを使用して次のように幾何平均を求める。ＩＬ−７（−／＋）試料ではリンパ球集団からのＣＤ３＋細胞にゲートをかけ、ＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦ（−／＋）試料では単球／マクロファージ集団のＣＤ１４＋細胞にゲートをかける。ＩＬ−７試料については、ＢＤ  ＣｏｍｐＢｅａｄｓ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５２８４３）をＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体及びＰＥ−ｐＳＴＡＴ５抗体の両者と夫々一緒に流した後にＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して蛍光補正を行う。ｐＳＴＡＴ濃度の変化率百分率を次のように計算する：変化率％＝１−（ＴｎにおけるΔ幾何平均の平均／Ｔ０におけるΔ幾何平均の平均）、但し、Δ幾何平均＝（サイトカイン存在下）−（サイトカイン不在下）。
【０３０４】
網状赤血球増加アッセイ
ＥＰＯ静脈注射により網状赤血球を増加させ、多くはないが、非常に明確な網状赤血球増加を誘導した。化合物１又はトファシチニブをＥＰＯ注射の３０分前に投与後、１２時間おきに１回ずつ３日間投与した。
【０３０５】
ＰＫ／ＰＤモデル化
有効濃度範囲とヒト有効量の予測に最も役立つのは直接最大増加モデルであった。化合物１又はトファシチニブの１２時間累積血漿中濃度のＬｏｇ１０（ＡＵＣ０−１２）に対してプロットした試験最終日の足浮腫に基づいて有効ＡＵＣを求めた。ＡＩＡラットでは、１０ｍｇのｂｉｄ  ＡＵＣ曝露量レベル（〜３００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ）により足浮腫の約６０％阻害（ＡＵＣ６０）が達成される。この方法を使用して対比すると、化合物１の有効曝露量（ＡＵＣ６０）は８５ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬであると推定された。
【実施例】
【０３０６】
以下、本発明の化合物又はその医薬的に許容される塩がヤヌスキナーゼ１を阻害し、従って、ヤヌスキナーゼ１により特徴付けられる障害又は病態の治療に有効であることを実施例により実証する。
【０３０７】
しかし、当然のことながら、以下の実施例は例証を目的としており、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【０３０８】
実施例１  Ｊａｋキナーゼ及び類縁キナーゼに対する化合物１の効力
アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）を競合阻害剤とするインビトロ反応を使用して組換えＪａｋファミリーキナーゼドメインに及ぼす化合物１の効力を求めた。
【０３０９】
その結果、化合物１はＡＴＰ競合阻害剤であり、Ｊａｋ１に対して最も強力であり、０．１ｍＭ  ＡＴＰで試験した場合に５０％阻害（ＩＣ５０）濃度は約０．０４５μＭであり（図１）、０．００１ｍＭ  ＡＴＰでは＜０．００３μＭである（データは示さず）ことが分かった。
【０３１０】
化合物１はＪａｋ３も含む６０種以上のタンパク質キナーゼ群で良好な選択性を示す（データは示さず）。この群のキナーゼのうち、１４種のキナーゼは化合物１のＩＣ５０が１０μＭ未満であるが、ＩＣ５０が１μＭ未満であるのはＪａｋキナーゼ以外の２種のみである（Ｒｏｃｋ１の０．５５μＭとＲｏｃｋ２の０．４３μＭ）。
【０３１１】
実施例２  細胞アッセイ及び他のアッセイにおける化合物１の効力
インターロイキン−２（ＩＬ−２）はＪａｋ１とＪａｋ３の両方のキナーゼ活性を必要とする受容体複合体を介してシグナル伝達すると考えられている。細胞コンテクストにおいて化合物１がＪａｋ１／Ｊａｋ３阻害に及ぼす影響を評価するために、ヒトＴブラストにおける化合物１によるＳＴＡＴ５のＩＬ−２誘導性リン酸化の阻害をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ読み取り（ＳＴＡＴ５  ｐ−Ｔｙｒ６９４／６９９）により評価した。化合物１のＩＣ５０は２１±４ｎＭであった（表１）。
【０３１２】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）はＪａｋ１分子２個のキナーゼ活性を必要とするｇｐ１３０／ＩＬ−６Ｒα受容体複合体を介してシグナル伝達すると考えられている。細胞コンテクストにおいて化合物１がＪａｋ１阻害に及ぼす影響を評価するために、ヒト赤白血病ＴＦ−１細胞における化合物１によるＳＴＡＴ３のＩＬ−６誘導性リン酸化の阻害をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ読み取り（ＳＴＡＴ３  ｐ−Ｔｙｒ７０５）により評価した。化合物１のＩＣ５０は９±５ｎＭであった（表１）。
【０３１３】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）はＪａｋ２分子２個のキナーゼ活性を必要とする受容体複合体を介してシグナル伝達すると考えられている。細胞コンテクストにおいて化合物１がＪａｋ２阻害に及ぼす影響を評価するために、ヒトＥＰＯ依存性巨核芽球性白血病ＵＴ−７細胞におけるＳＴＡＴ５のＥＰＯ誘導性リン酸化の阻害をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ読み取り（ＳＴＡＴ５  ｐ−Ｔｙｒ６９４／６９９）により評価した。化合物１のＩＣ５０は６２８±１６１ｎＭであった（表１）。
【０３１４】
これらのアッセイの結果は一貫して化合物１がＪａｋ２よりもＪａｋ１に対して選択的であることを示しており、生化学的プロファイルの選択性が高いほどＪａｋ２依存性細胞内経路への作用低減により臨床プロファイルが改善されるか否かを判定するための基盤となる。
【０３１５】
化合物１の代わりにＦＤＡ承認済みのＲＡ治療薬であるトファシチニブを使用して同様のアッセイも実施した。比較のためにこれらの実験の結果も表１に示す。
【０３１６】
【表１】
2016539927.tif 000002
【０３１７】
細胞選択性と潜在的に相関する臨床データの可用性により、トファシチニブをベンチマークとして加えた。上記表１及び下記表１Ａに示すように、化合物１はＪａｋ２（約６００ｎＭ）よりもＪａｋ１（約８〜９ｎＭ）に対して約７４倍選択的であった。同一アッセイを使用して対比すると、トファシチニブは約２４倍選択的であった（１１１０に対して４４）。ＥＰＯシグナル伝達を赤血球骨髄コロニー形成アッセイで評価した処、どちらの化合物もＪａｋ２に対して若干強力になった（表１Ａ）。一対測定の結果、化合物１の選択性の比はトファシチニブと比較して統計的に有意に高いことが分かった（ｐ値＝０．００１４）。
【０３１８】
ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−３シグナル伝達に対する化合物１と数種のトファシチニブ類縁分子の効力。ＥＰＯと同様に、ＧＭ−ＣＳＦとＩＬ−３はＪａｋ２に依存するが、共通β鎖ファミリーのメンバーである受容体複合体を使用する。驚くべきことに、これらの共通β鎖サイトカインのシグナル伝達は試験した全化合物に対して一貫してＥＰＯシグナル伝達よりも感受性が低かった（データは示さず）。この結果から、Ｊａｋ２感受性は受容体コンテクストに影響され易いと思われる。
【０３１９】
最後に、ＩＬ−６シグナル伝達と共通γ鎖サイトカインＩＬ−７及びＩＬ−１５によるシグナル伝達に対して全血中の化合物の効力を測定した（表１Ａ）。この場合、化合物１はＩＬ−６シグナル伝達に対してトファシチニブよりも一貫して４〜５倍強力であり、他方、共通γ鎖シグナル伝達に対するそれらの効力には大きくはないが、統計的に有意な２倍の差があった（表１Ａ）。これらの試験でトファシチニブについて得られた数値は他の文献（Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．，（Ｌｏｎｄ．）７：４１，２０１０）で報告されている数値と非常に似ている。
【０３２０】
【表２】
2016539927.tif 000003
【０３２１】
これらのアッセイによると、化合物１はＪａｋ２よりもＪａｋ１に選択的な阻害剤であることが明白である。Ｊａｋ２に対するＪａｋ１のＩＣ５０値の逆比として定義されるＪａｋ１／Ｊａｋ２効力比は化合物１では約７４倍（例えば約１／（９／６２８））であり、トファシチニブでは約２４倍（例えば約１／（４３／１１１０））である。
【０３２２】
Ｊａｋ１／Ｊａｋ３効力比を測定する別の１組の実験では、化合物１の効力比は約５８倍であり、トファシチニブの効力比は約２倍である。従って、Ｊａｋ２に対する選択性が低く、Ｊａｋ３に対する選択性が非常に低い市販薬であるトファシチニブに比較して化合物１は（Ｊａｋ２及びＪａｋ３のどちらよりも）著しく選択性の高いＪａｋ１阻害剤であることが実験データから実証される。表２（Ｊａｋ１及びＪａｋ３阻害をＩＣ５０値（μＭ）として表す）参照。
【０３２３】
【表３】
2016539927.tif 000004
【０３２４】
実施例３  動物モデルにより測定したインビボ効力
急性（コンカナバリンＡ誘導性インターフェロン［ＩＦＮ］γ）及び慢性（アジュバント誘導性関節炎）ラットモデルでＪａｋ１インビボ効力を測定した。
【０３２５】
経口生体利用性を評価できると共にＪａｋ１依存性メカニズムに及ぼす効果を迅速に測定できるという理由でラットコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）モデルを急性スクリーニングモデルとして選択した。ＣｏｎＡをＬｅｗｉｓラットに静脈注射すると、Ｔ細胞受容体ライゲーションと活性化を生じ、自己分泌メカニズムによりＩＬ−２放出とＩＦＮ−γ誘導を生じる。ＩＬ−２放出はＪａｋ非依存性であり、ＩＦＮ−γ誘導はＪａｋ１阻害剤により阻止される。
【０３２６】
これらの阻害剤の大半で認められる経口投与時の最高血漿中濃度到達時間（Ｔｍａｘ）と一致するように、ＣｏｎＡ静脈注射の３０分前にラットに経口投与する。４時間後に尾静脈採血でＩＦＮ−γとＩＬ−２の血漿中濃度を評価する。
【０３２７】
化合物１を１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇで上記のように経口投与した処、ＩＦＮ−γ放出の用量依存的阻害が認められ、有効量（ＥＤ）５０とＥＤ８０は夫々０．４ｍｇ／ｋｇと５．８ｍｇ／ｋｇであった（図２）。
【０３２８】
確立された前臨床ＲＡモデルであるＡＩＡ（アジュバント誘導性関節炎モデル）雌性Ｌｅｗｉｓラットを使用して化合物１が複雑な疾病状況下で炎症を調節する能力を評価した。
【０３２９】
化合物１を０．１〜１０ｍｇ／ｋｇで１日２回（ｂｉｄ）経口投与した結果、足浮腫の用量及び曝露量依存的軽減が得られた（図３、左）。化合物１の１２時間累積血漿中濃度のＬｏｇ１０（ＡＵＣ０−１２）に対してプロットした試験最終日の足浮腫に基づいて最大反応の６０％阻害を生じるＡＵＣ（ＡＵＣ６０）を有効ＡＵＣとした。ＡＵＣ６０を計算した処、合計ＡＵＣ０−１２は８５±２０ｎｇ・ｈｒ／ｍＬであり、非結合型画分ＡＵＣ０−１２は３４±７ｎｇ・ｈｒ／ｍＬであった（図３、右）。これに対して、市販のＲＡ薬であるトファシチニブを１０ｍｇ  ｂｉｄ投与した場合にＡＵＣ６０を計算した処、合計ＡＵＣ０−１２は３９２±１２１ｎｇ・ｈｒ／ｍＬであり、非結合型画分ＡＵＣ０−１２は３００±９８ｎｇ・ｈｒ／ｍＬであった（データは示さず）。
【０３３０】
ＡＩＡは複雑な疾患状況の様相に似せて確立されたＲＡモデルであるので、ＡＩＡ実験からのデータをＰＫ／薬力学（ＰＤ）モデル化に使用した。前臨床データと臨床データの相関を立証し、トランスレーショナルＰＫ／ＰＤモデルを構築するために、トファシチニブを使用して遡及的モデル化を実施した。このモデル化から明らかなように、有効濃度範囲とヒト有効量の予測に最も役立つのは直接最大増加モデルである。更に、ＡＩＡモデルで前臨床ＡＵＣ６０を利用した結果、トファシチニブの臨床データで認められた有効曝露量が確実に予想された。
【０３３１】
この方法により化合物１の有効曝露量（ＡＵＣ６０）は８５ｎｇ・ｈｒ／ｍＬであると推定された（上記及び図３参照）。この有効曝露量の相当量を安全域計算とヒトＰＫ予測に使用した。更に、マイクロＣＴスキャンにより足根骨体積の変化を測定して評価した処、骨びらんの完全な保護は３ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄで認められた（図４）。
【０３３２】
実施例４  薬力学的試験
本実施例では、単位曝露量当たりのインビボ標的（Ｊａｋ１、Ｊａｋ１／３）カバー率を評価し、効力と相関させるために、インビボと血液試料のエキソビボでＪａｋ阻害レベルを測定することを目的とした実験について記載する。
【０３３３】
Ｊａｋ阻害剤であるトファシチニブを使用して報告されている結果は齧歯類、サル及びヒトでＮＫ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞に効果があることを実証している（Ｃｏｎｋｌｙｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６（６）：１２４８−１２５５，２００４；ｖａｎ  Ｇｕｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ８７（１）：７９−８６，２００９）。これらの報告はＴ細胞及びＮＫ  細胞増殖／生存因子ＩＬ−２、ＩＬ−７及びＩＬ−１５に対するトファシチニブの効力と一致する。
【０３３４】
エキソビボ刺激アッセイ
最初の実験で、経口投与した化合物１はエキソビボ刺激ＩＬ−７依存性ＳＴＡＴ５リン酸化を阻害することが分かった。
【０３３５】
他の共通γ鎖受容体と異なり、ＩＬ−７受容体は末梢血Ｔ細胞で比較的多量に発現されるため、ＩＬ−７をエキソビボ刺激アッセイでアゴニストとして使用することができる。全血をＩＬ−７で刺激すると、ＳＴＡＴ５のリン酸化が生じ、フローサイトメトリーにより測定することができる。ＳＴＡＴタンパク質はＪａｋキナーゼ基質であるため、そのリン酸化の阻害はＪａｋ阻害の機構的計測値とみなすことができる。
【０３３６】
この場合、ラットに化合物１を１４日間ｂｉｄ投与し、最終投与から１２時間後に採血した後、ＩＬ７で追加感作した。約２０ｎＭのＩＣ５０値でＩＬ−７誘導性ｐＳＴＡＴ５形成を阻害する化合物１による阻害の曝露量反応関係を図５Ａに示すが、同様のラット全血アッセイで得られた１１ｎＭのＩＣ５０とよく一致する。
【０３３７】
同様のエキソビボ刺激実験を実施し、経口投与した健常ヒト対象に由来する血液試料におけるＩＬ６及び共通γ鎖エキソビボシグナル伝達の阻害を測定した。結果を図５Ｂに示す。
【０３３８】
具体的にエキソビボ刺激アッセイについて説明すると、対象毎に時点＝０時間、１時間、６時間及び１２時間で静脈穿刺により２ｍＬヘパリンナトリウム入り試験管に採血した。血液は氷上保存し、各時点で採血後できるだけ早く処理した。各時点で血液１５０μＬを１５ｍＬ円錐管６本に加え、１０分間３７℃でインキュベートした。組換えヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃２０６−ＩＬ，４００ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃２０７−ＩＬ，４００ｎｇ／ｍＬ）又はＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃２１５−ＧＭ，８０ｎｇ／ｍＬ）を各１本、ｄＰＢＳを３本（各サイトカインの陰性対照）に５０μＬずつ加え、よく混合した。管を１０分間３７℃でインキュベートした。次に管を氷上に置き、抗ＣＤ１４−ＡＰＣ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃３４０４３６，３μＬ／本）をＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦ（−／＋）管に加え、よく混合した。抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５５３３９，３μＬ／本）をＩＬ−７管（−／＋）に加え、よく混合した。これらの管を氷上で２０分間インキュベートした。固定／溶解バッファー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５８０４９，３７℃まで１回予熱済みのものを１．８ｍＬ／本）を全管に加え、激しく混合し、１０分間３７℃でインキュベートした。次に試料を固定／溶解バッファーで２回洗浄し、ペレットを固定／溶解バッファー１００μＬに懸濁し、−７０℃以下で凍結し、ドライアイスで梱包して輸送した。
【０３３９】
試料を室温で解凍し、９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９９）に移し、（４１１×ｇで５分間遠心後、上清を除去した）ペレットをｄＰＢＳ／２％ＦＢＳで２回洗浄後、ＢＤ  ＰｅｒｍバッファーＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５８０５０，−２０℃まで冷却）２００μＬをペレットに加え、アルミ箔で覆って氷上で３０分間インキュベートすることにより細胞内染色を行った。試料を再びｄＰＢＳ／２％ＦＢＳで２回洗浄し、ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ＃１４５０６−５０，１μｇ／１００μＬ／試料）を添加したｄＰＢＳ／２％ＢＳＡで氷上にて２０分間ブロッキングした。試料をもう１回洗浄し、適切なＢＤリン酸化ＳＴＡＴ−ＰＥ抗体を添加したブロッキング溶液１００μＬにペレットを再懸濁した。抗ｐＳＴＡＴ５−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｃａｔ＃６１２５６７，４μＬ／ウェル／１００μＬ）をＩＬ−７及びＧＭ−ＣＳＦ試料に加え、抗ｐＳＴＡＴ３−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５８５５７，４μＬ／ウェル／１００μＬ）をＩＬ−６試料に加えた。これをアルミ箔で覆って６０〜９０分間室温でインキュベートした後、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ  ＨＴＳで試験した。
【０３４０】
ＦｌｏｗＪｏ解析ソフトウェアを使用して次のように幾何平均を求めた。ＩＬ−７（−／＋）試料ではリンパ球集団からのＣＤ３＋細胞にゲートをかけ、ＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦ（−／＋）試料では単球／マクロファージ集団のＣＤ１４＋細胞にゲートをかける。ＩＬ−７試料については、ＢＤ  ＣｏｍｐＢｅａｄｓ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃａｔ＃５５２８４３）をＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体及びＰＥ−ｐＳＴＡＴ５抗体の両者と夫々一緒に流した後にＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して蛍光補正を行った。ｐＳＴＡＴ濃−度の変化率百分率を次のように計算した：変化率％＝１−（ＴｎにおけるΔ幾何平均の平均／Ｔ０におけるΔ幾何平均の平均）、但し、Δ幾何平均＝（サイトカイン存在下）−（サイトカイン不在下）。
【０３４１】
図５Ｃに示すように、投与後時間に伴ってＩＬ６誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害率％としてプロットしたエキソビボＩＬ６誘導性ｐＳＴＡＴ３アッセイ（上記参照）によると、５ｍｇのトファシチニブと３ｍｇの化合物１を単回経口投与した場合に健常ヒト対象におけるＪａｋ１シグナル伝達に同様の薬力学的（ＰＤ）効果がある。データから明らかなように、トファシチニブと化合物１によるＩＬ６誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害率％はほぼ同一のＰＤプロファイルに従っており、試験した夫々の用量でトファシチニブと化合物１によるＪａｋ１活性の阻害（従って、臨床効力）は全く同一ではないとしても同様であると考えられる。更に、ＩＬ−７誘導性ｐＳＴＡＴ５を５ｍｇのトファシチニブと同程度まで阻害するには１２ｍｇの化合物１が必要であり（図５Ｃ）、トファシチニブに比較して化合物１は共通γ鎖サイトカインシグナル伝達への作用が低減することが分かる。
【０３４２】
インビボ薬力学的試験
薬力学的効果を測定するために、健常ラットに化合物１を２週間ｂｉｄ投与後、末梢ＮＫ細胞数とエキソビボＩＬ−７誘導性ｐＳＴＡＴ５形成の阻害を評価した。末梢ＮＫ細胞数に及ぼす化合物１の曝露量依存的効果を図６の左グラフに示す。この効果とエキソビボサイトカインシグナル伝達阻害との相関を図６の右グラフに示す。これらの測定結果はよく相関し、ＮＫ細胞数エンドポイントのＪａｋ依存性が確認された。
【０３４３】
ＮＫ細胞数の変化と非臨床効力の関係を立証するために、ＮＫ細胞数の変化を単位曝露量当たりのラットＡＩＡ疾患活動性の低下と比較した。ＮＫ細胞数と疾患活動性がＡＵＣ曝露量の変化にどのように呼応するかを図７に示す。
【０３４４】
これらのラットモデルによると、化合物１は目標臨床曝露量範囲でＮＫ細胞数を最大約４０％減少させると予測される。
【０３４５】
これらの結果はＪａｋキナーゼに直接依存するエンドポイントと機構的に末端のエンドポイントとの量的関係を実証するものである。この関係の利点はアゴニストに依存せず、ロジスティクス面でより好都合であるという点である。この関係について記述すると、末端のエンドポイント（末梢ＮＫ細胞数）がＪａｋ作用機構と無関係になる危険が減るので重要である。末梢ＮＫ細胞数は接近しやすい区画（末梢血）で薬物濃度測定用試料等の他の臨床試料採取と同時に測定できるので、機構的に有意義な薬力学的バイオマーカーである。
【０３４６】
実施例５  薬物動態及び製剤代謝
単回投与後の化合物１の薬物動態パラメータ
サルとイヌにおける化合物１のＰＫプロファイルは中程度のクリアランス値（範囲＝０．６６Ｌ／ｈｒ・ｋｇ［イヌ］〜１．３Ｌ／ｈｒ・ｋｇ［サル］）を特徴とし、ラットのほうが高いクリアランス値であった（ＣＬｐ＝２．０〜３．８Ｌ／ｈｒ・ｋｇ；表３）。分布容積は全動物種で高かった（Ｖｓｓ＝１．６〜２．７Ｌ／ｋｇ）。静脈内投与後の化合物１の血漿消失半減期はラット（ｔ１／２＝１時間）とサル（ｔ１／２＝１．２時間）で最も短く、イヌ（ｔ１／２＝３．１時間）のほうがやや長く、経口投与後の血漿消失半減期は静脈内投与後に観測された数値よりもやや長くなる傾向があり、数値は一般に３〜５時間の範囲であった。
【０３４７】
化合物１は溶液製剤からゆっくりと吸収され、ピーク濃度は投与後１〜６時間で観測された。ラットにおける生体利用率は中程度（３０．５％）であり、サル（５９．３％）とイヌ（７６．８％）で観測された数値のほうが高かった。溶液製剤を投与したイヌでは、Ｃｍａｘ値は飼料を与えた場合には約３分の１となり、ＡＵＣ値は絶食時に投与した同一製剤から得られた数値に比較して約４０％低かった。酒石酸塩の溶液を投与すると、イヌに経口投与（用量０．５〜２ｍｇ塩基／ｋｇ）後に遊離塩基の溶液製剤から得られた数値と同等のＣｍａｘとＡＵＣ値が得られた。ラットでは、酒石酸塩の懸濁液からの曝露量も遊離塩基で得られた数値と同等であった。
【０３４８】
反復投与後の化合物１の薬物動態パラメータ
雌性ラットにおける化合物１の血漿中濃度は１０ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日又は２００ｍｇ／ｋｇ／日を２９日間連続して経口投与した雄性ラットから得られた数値よりも高くなる傾向があり、２９日目に２００ｍｇ／ｋｇ／日投与群の動物から血漿中濃度は得られなかった。全用量群で動物間の変動度が高いという特徴があった。２９日目の化合物１の血漿中濃度は投与初日（１日目）の測定値と同等以上であった。定常状態において、５０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日投与群のＣｍａｘ及びＡＵＣ値は用量にほぼ比例し、他の２群の投与群から１０ｍｇ／ｋｇ／日投与群の数値はもっと低くなると予想された（表４、図８）。
【０３４９】
１０ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日を２９日間投与後の雄／雌ラットにおける化合物１のピーク血漿中濃度は夫々平均で０．３３／０．６５μｇ／ｍＬ、２．３２／８．８５μｇ／ｍＬ、５．７２／１４．９μｇ／ｍＬであり、同一投与群のＡＵＣ値は平均で１．４９／２．２８μｇ・ｈｒ／ｍＬ、１６．８／３３．２μｇ・ｈｒ／ｍ及び４０．８／６３．８μｇ・ｈｒ／ｍＬであった。
【０３５０】
イヌに０．５ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日又は５ｍｇ／ｋｇ／日を経口投与後の化合物１の血漿中濃度に一貫した雌雄差はなく、２８日目の濃度は初回投与後に測定した数値と同等であった（１日；表５，図９）。ＡＵＣ値はこの試験では全用量にほぼ比例した。０．５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇを投与後２８日目の化合物１のピーク血漿中濃度は夫々平均で０．０７６μｇ／ｍＬ、０．２９７μｇ／ｍＬ、０．５４７μｇ／ｍＬ及び１．０２μｇ／ｍＬであり、同一投与群におけるＡＵＣ値は夫々平均で０．３３９μｇ・ｈｒ／ｍＬ、１．２０μｇ・ｈｒ／ｍＬ、２．１４μｇ・ｈｒ／ｍＬ及び４．１０μｇ・ｈｒ／ｍＬであった。
【０３５１】
吸収
ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１（トランスポーター）
ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１モデルを使用して汎トランスポーター阻害剤であるシクロスポリンＡと共に単一濃度で化合物１の透過性を評価した。化合物１の透過性は１１．５×１０−６ｃｍ／ｓであり、中程度に高い透過性に相当し、ヒトで良好に吸収されると予想される。双方向ＭＤＣＫＩＩ−ＭＤＲ１及び−ＢＣＲＰアッセイでＰ−ｇｐ（ＭＤＲ１）又はＢＣＲＰによる化合物１の透過量を評価した。双方向ＭＤＣＫＩＩ−ＭＤＲ１アッセイで純透過量比は（２回の独立した実験から）２．０及び３．１であり、化合物１はＰ−ｇｐ基質であることが分かる。双方向ＭＤＣＫＩＩ−ＢＣＲＰアッセイで純透過量比は（２回の独立した実験から）２．７及び３．４であり、化合物１はＢＣＲＰ基質であることが分かる。
【０３５２】
化合物１はＰ−ｇｐ及びＢＣＲＰのどちらにも不良な阻害剤であり、ＩＣ５０は夫々３４８μＭ及び１２６μＭであった。
【０３５３】
インビボ吸収
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雄性ラットの胆管にカニューレを挿入し、［１４Ｃ］化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）を単回経口投与して胆汁と尿に回収された放射能の合計を調べた処、投与量の少なくとも６３．７％が吸収されており、上記の高い透過性と生体利用性に一致した。
【０３５４】
分布
血漿タンパク結合、結合部位、赤血球分布
インビトロデータによると、化合物１は血漿タンパク結合率が各動物種で６４％（ラット）、３９％（サル）、１８％（イヌ）及び４７％（ヒト）と中程度から低度であることが分かった。平均血中濃度対血漿中濃度比は各動物種で１．２７〜１．４８であり、化合物１はラット、イヌ、サル及びヒトでは血漿中よりも血中のほうがやや多く分布していると考えられる。
【０３５５】
組織分布試験
［１４Ｃ］化合物１を雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに３ｍｇ／ｋｇで静脈内投与後、照射した放射能は肝臓、腎臓及び皮膚に多く分布した（照射から１時間後の組織対血漿比［Ｔ／Ｐ］≧１）が、肺、筋肉、精巣、リンパ節、心臓及び脂肪の分布は少なかった（Ｔ／Ｐ＜１）。選択した全組織で、照射から１時間後に最大放射能濃度が観測された後、放射能は経時的に低下した。放射能の組織特異的残留はなかった。
【０３５６】
代謝
化合物１の代謝経路を下記スキームに示す。
【０３５７】
【表４】
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【０３５８】
【表５】
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【０３５９】
【表６】
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【０３６０】
インビトロ代謝
各動物種で肝ミクロソーム（０．５μＭ）と肝細胞（１μＭ）において単一濃度で化合物１の代謝安定性を評価した。肝ミクロソームにおける化合物１の固有クリアランス（肝重量／体重基準）はラットでは５．０８Ｌ／ｈｒ／ｋｇであり、サルでは＜１．６Ｌ／ｈｒ／ｋｇであり、イヌでは＜２．０Ｌ／ｈｒ／ｋｇであった。肝細胞における化合物１の固有クリアランスはラットでは４．０７Ｌ／ｈｒ／ｋｇであり、サルでは０．４１３Ｌ／ｈｒ／ｋｇであり、イヌでは０．４１５Ｌ／ｈｒ／ｋｇであった。
【０３６１】
ヒト肝ミクロソーム及び肝細胞インキュベーションで化合物１は低い固有クリアランスを示した（夫々１．８７Ｌ／ｈ／ｋｇ及び０．３６６Ｌ／ｈ／ｋｇ）。組換えシステムを使用して［１４Ｃ］化合物１がＣＹＰ酵素とフラビンモノオキシゲナーゼにより代謝される可能性について評価した。親化合物残存百分率に基づいて［１４Ｃ］化合物１の代謝に潜在的に寄与することが確認された酵素はＣＹＰ３Ａ４（３６．０％）、２Ｄ６（７３．４％）及び３Ａ５（８０．６％）であった。他の全ＣＹＰの親化合物残存百分率は９８．０％超であった。
【０３６２】
ラット、イヌ、サル及びヒトに由来する肝サイトゾル及び肝細胞と組換えヒトシトクロムＰ４５０酵素（ＣＹＰ３Ａ４、３Ａ５及び２Ｄ６）を使用して［１４Ｃ］化合物１のインビトロ代謝を調べた。化合物１のインビトロ生体内変換は主にイミダゾールピロロピラジニルエチルピロリジン部分で生じた。肝サイトゾルインキュベーションで［１４Ｃ］化合物１の代謝は認められなかった。肝細胞では、［１４Ｃ］化合物１の代謝回転率が非常に低かった（＜１０％）。ＣＹＰ３Ａ４が主に化合物１をインビトロ代謝し、ピロロピラジン部分での酸化により主要代謝産Ｍ１１を形成した後、開環した。ＣＹＰ２Ｃ９とＣＹＰ２Ｄ６の副次的な寄与も認められた。
【０３６３】
排出
照射した放射能の平均総回収率は静脈内投与後９６．０％であり、経口投与後９６．８％であった。薬物関連放射能は主に胆汁中（静脈内投与量の４９．７％及び経口投与量の５２．６％）に排泄された後、尿中（静脈内投与の２３．７％及び経口投与の１１．１％）に排泄された。合計すると、静脈内投与後に親薬物の２５％と１９％が夫々胆汁中と尿中に未変化体のまま排泄された。経口投与後に親薬物の１９％と９％が夫々胆汁中と尿中に未変化体のまま排泄された。
【０３６４】
薬物動態−薬物相互作用
阻害
プローブ基質を使用して化合物１がＣＹＰ１Ａ２、２Ｂ６、２Ｃ８、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６又は３Ａ４（ミダゾラム／テストステロン）を阻害する能力をヒト肝ミクロソームで評価した。化合物１は３０μＭまでの濃度で試験したアイソフォーム１Ａ２、２Ｂ６、２Ｃ８、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６又は３Ａ４（ミダゾラム／テストステロン）のいずれをも阻害しなかった。ヒト肝ミクロソームにおいてＣＹＰ１Ａ２、２Ｃ８、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６、２Ｂ６及び３Ａ４の明白な時間依存的阻害は認められなかった。
【０３６５】
誘導
プレートに播種した凍結保存ヒト肝細胞におけるｍＲＮＡレベルでのＣＹＰ１Ａ２、２Ｂ６及び３Ａ４の潜在的誘導剤として化合物１を濃度１μＭ、３μＭ及び１０μＭで評価した。化合物１はＣＹＰ１Ａ２及び３Ａ４のｍＲＮＡ発現を増加しなかった。化合物１は１μＭと３μＭではＣＹＰ２Ｂ６のｍＲＮＡ発現を増加せず、１０μＭではフェノバルビタールの反応の２５％までの範囲でＣＹＰ２Ｂ６  ｍＲＮＡ発現を僅かに増加させた。
【０３６６】
トランスポーター
化合物１はＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴ３、ＭＡＴＥ１及びＭＡＴＥＫの阻害剤であり、ＩＣ５０値は夫々４８μＭ、４３μＭ、１１μＭ及び＞１５μＭである。化合物１が３０μＭまでではＯＡＴＰ１Ｂ３、ＯＣＴ１、ＯＣＴ２又はＯＡＴ１取込みの有意な阻害は認められなかった。
【０３６７】
薬物間相互作用シミュレーション
生理学的ＰＫモデル化を使用した予備的予測によると、ＣＹＰ３Ａ４／５基質としての化合物１は夫々ケトコナゾール及びリファンピシン等の強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤又は誘導剤との間で中程度の相互作用を生じる可能性が高いと思われる。
【０３６８】
実施例６  毒性試験
イヌにおける単回用量５ｍｇ／ｋｇ／日での４週間非ＧＬＰ経口毒性試験と、ラットとイヌの両方におけるＧＬＰ適合ピボタル経口毒性試験を含む非臨床毒性試験で化合物１の毒性プロファイルを評価した。ＧＬＰ適合試験は各々ラットとイヌの両方に４週間経口投与後、４週間の回復期間を設けた後、ラット（６カ月間経口投与）とイヌ（９カ月間経口投与）でＧＬＰ適合慢性毒性試験を行った。一連の標準インビトロ遺伝毒性試験とインビボラット骨髄小核試験でも化合物１を評価した。ラットとウサギで化合物１による最終的ＧＬＰ胚・胎児発生試験も実施した。
【０３６９】
経口生体利用性が良好であることから、ビーグル犬を化合物１の非齧歯類毒性試験動物種として使用した。ＰＫと代謝によりラットを齧歯類動物種として選択した。現在までの全インビボ非臨床試験では、製剤化した化合物１を１日体重１キログラム当たりの遊離塩基ミリグラム値（ｍｇ／ｋｇ／日）として表した用量で１日１回経口投与した（インビボラット骨髄小核試験とラット及びイヌにおける４週間ＧＬＰ試験では遊離塩基として使用し、６カ月間ラット及び９カ月間イヌＧＬＰ試験と最終的胚・胎児発生試験では化合物１の酒石酸塩として使用した）。
【０３７０】
化合物１によるピボタル４週間ラット試験では、１００ｍｇ／ｋｇ／日及び２００ｍｇ／ｋｇ／日での死亡率により用量制限効果も試験した。化合物１を１００ｍｇ／ｋｇ／日で４週間投与後のラットには赤血球量の軽度減少のみがあった（対照平均と比較してＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度及びヘマトクリット値が夫々−１３％、−１２％及び−１４％）が、４週間の回復期間後にこれらの減少はなくなった。１０ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日のラットには循環リンパ球の有害ではない用量依存的減少（対照に比較して−７１％まで）があり、４週間の回復期間の終わりに部分的な回復を示した。これらのラットにおける化合物１のＮＯＡＥＬは５０ｍｇ／ｋｇ／日であり、従って、Ｃｍａｘは５．５９μｇ／ｍＬであり、ＡＵＣ０−２４は２５．０μｇ・ｈｒ／ｍＬであった（雌雄合わせた数値）。
【０３７１】
化合物１による次の６カ月間慢性ラット試験でＮＯＡＥＬは雄と雌で２０ｍｇ／ｋｇ／日と判定され、従って、Ｃｍａｘ値は夫々１．１１μｇ／ｍＬ及び２．２４μｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣ０−２４値は夫々３．８３μｇ・ｈｒ／ｍＬ及び６．８４μｇ・ｈｒ／ｍＬとなった。
【０３７２】
有害所見は５０ｍｇ／ｋｇ／日のみのラットにおける軽微から中等度の腎管変性／再生であった。５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日及び／又は５０ｍｇ／ｋｇ／日でリンパ組織（脾臓、胸腺及びリンパ節）に有害ではない所見があった。また、化合物１の全用量で雌雄共に主にリンパ球の減少による総ＷＢＣの軽度から中等度の減少が認められた。主に５０ｍｇ／ｋｇ／日では雌雄共に赤血球量と網状赤血球の軽度減少が認められた。赤血球量のこれらの軽度減少は程度から判断して有害ではないとみなされた。
【０３７３】
非ＧＬＰ４週間イヌ試験とＧＬＰ４週間イヌ試験のいずれでも、化合物１の投与に関連する生命に関わる所見は認められなかった。ピボタルＧＬＰ適合試験で３ｍｇ／ｋｇ／日及び５ｍｇ／ｋｇ／日を４週間経口投与後のイヌにおける有害作用としては、赤血球量（ＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度及びヘマトクリット値）の減少と膝窩リンパ節の顕微鏡所見（被膜周囲組織に拡張した混合細胞性浸潤）があった。赤血球量の減少は網状赤血球の減少と相関し、投与期間が長いほど重症度の上昇を示し、赤血球造血の抑制と一致した。循環網状赤血球の減少は４週間の回復期間の前半２週間後に逆転可能であり、個々の赤血球パラメータ（ＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値）はピボタル４週間毒性試験で回復期間の終わりまでにほぼベースライン値に戻った。１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄には有害ではない赤血球量の減少（１２匹のうちの２匹でベースライン値に比較して−１８％まで）があり、１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した１匹と０．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した１匹では膝窩リンパ節における（有害ではないとみなされる）軽微な混合細胞性浸潤があった。４週間の回復期間後に、膝窩リンパ節における混合細胞性浸潤は５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した回復動物では持続していたが、１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した動物には認められず、１．５ｍｇ／ｋｇ／日のみでの可逆性に一致した。化合物１を５ｍｇ／ｋｇ／日で投与した動物には循環リンパ球の有害ではない軽度減少（ベースライン値に比較して−２０％から−３７％まで）が認められ、４週間の回復期間の前半２週間後の可逆性が裏付けられた。
【０３７４】
従って、化合物１遊離塩基１．５ｍｇ／ｋｇ／日がイヌにおけるＮＯＡＥＬと判定され、従って、Ｃｍａｘは０．２９７μｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣ０−２４は１．２μｇ・ｈｒ／ｍＬとなった（雌雄合わせた数値）。
【０３７５】
イヌにおける次の９カ月間慢性毒性試験では、１．５ｍｇ／ｋｇ／日までの１日投与量で有害所見はなかった。化合物１投与の唯一の直接的な影響は０．５ｍｇ／ｋｇ／日と１．５ｍｇ／ｋｇ／日で投与日２８日目から１８２日目までの赤血球量の有害ではない軽微から軽度の減少であった。投与の終了時（２６５日目）に、赤血球量の減少は９１日目に報告された減少と同等以下であった。連続投与に伴う変化及び／又は改善の程度から判断し、赤血球量のこれらの減少は有害とみなされなかった。１カ月間試験とは対照的に、溶媒を単独投与したイヌで検出されたレベルを上回る膝窩リンパ節の顕微鏡所見（被膜周囲組織に拡張した混合細胞性浸潤）は検出されなかった。化合物１の投与によると考えられる免疫調節に関連する他の二次的な影響は有害ではないとみなされた。
【０３７６】
これらの所見によると、ＮＯＡＥＬは１．５ｍｇ／ｋｇ／日であり、従って、２７２日目の平均（雌雄）Ｃｍａｘは２１２ｎｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣは８８８ｎｇ・ｈｒ／ｍＬとなった。
【０３７７】
【表７】
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【０３７８】
予想有効曝露量、ヒト曝露量範囲並びに化合物１によるイヌ及びラット毒性試験の非臨床ＮＯＡＥＬについて血漿曝露量の概要を図１０に示す。
【０３７９】
化合物１で実施した全毒性試験の概要を表６に示す。
【０３８０】
イヌにおける単回用量５ｍｇ／ｋｇ／日での非ＧＬＰ４週間経口毒性試験と、ラットとイヌの両方におけるＧＬＰ適合ピボタル経口毒性試験を含む非臨床毒性試験で化合物１の経口毒性を評価した。ＧＬＰ適合試験はラットとイヌの両方に４週間経口投与後、４週間の回復期間を設けた後、ラット（６カ月間経口投与）とイヌ（９カ月間経口投与）でＧＬＰ適合慢性毒性試験を行った。
【０３８１】
【表８】
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【０３８２】
齧歯類試験
０ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日及び２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで毎日経口投与（強制飼養）により４週間ラット試験を実施した。０ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日で化合物１を投与した群の指定回復動物には更に４週間の無投与期間を継続した。２００ｍｇ／ｋｇ／日の化合物１では、投与日１日目に数匹が死亡したので、組織病理学的評価を行わずに投与日２日目と投与日３日目にこの投与群全体を終了した。死亡した動物の死因は不明であった。１００ｍｇ／ｋｇ／日では、投与日１日目、３日目、４日目、１８日目及び２６日目に雄５匹の死亡が確認されるか又は臨床状態を考慮して安楽死させた。１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与した動物の有害組織病理学的所見としては、腎皮質管上皮の軽微から顕著な変性／再生があった。臨床化学パラメータの相関する所見は雌雄共に１００ｍｇ／ｋｇ／日で投与期間の終わりにおける平均リン値の（対照平均値に比較して＋１０％までの）軽度増加であった。４週間の回復期間の終わりまで生存した動物には腎臓の組織病理学的所見と血清リン値増加は認められず、可逆性と一致した。１００ｍｇ／ｋｇ／日の投与群では早期死亡動物（５匹のうちの３匹）に限り、中等度から顕著な多発性巣状、中間帯又はびまん性肝壊死もあった。１０ｍｇ／ｋｇ／日又は５０ｍｇ／ｋｇ／日を投与した動物に有害病理学的所見は認められなかった。
【０３８３】
従って、ラットにおける化合物１のＮＯＡＥＬは５０ｍｇ／ｋｇ／日であり、従って、Ｃｍａｘは５．５９μｇ／ｍＬであり、ＡＵＣ０−２４は２５．０μｇ・ｈｒ／ｍＬであった（雌雄合わせた値）。
【０３８４】
４週間ラット試験における有害ではない所見としては、１０ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日の化合物１で循環リンパ球の軽度（対照に比較して−７１％）の用量依存的減少があり、４週間の回復期間の終わりまでの部分的な回復を示した。
【０３８５】
化合物１を１００ｍｇ／ｋｇ／日で投与した雌のみに赤血球量の（有害ではないとみなされる）軽度減少（対照平均と比較してＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度及びヘマトクリット値が夫々−１３％、−１２％及び−１４％）があり、これらの減少は４週間の回復期間後に回復を示した。有害ではない組織病理学的所見としては、５０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与したラットにおける胸腺のリンパ球数減少、１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄における脾臓辺縁帯のリンパ球数減少、並びに１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与したラットにおける骨髄の軽微から軽度の細胞減少があった。胸腺、脾臓及び骨髄のこれらの所見は４週間の回復期間の終わりまで生存した動物には認められなかった。リンパ組織における所見は化合物１の予想される薬理学的効果と一致した。
【０３８６】
０ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日及び５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで毎日経口投与（強制飼養）により６カ月間慢性ラット試験を実施した。２０ｍｇ／ｋｇ／日及び５０ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄では（対照に比較して）体重増加の有害ではない用量相関的減少（試験終了時に夫々１０％及び１５％）が認められ、飼料消費量低下が第３週投与中に最初に認められた後、投与期間を通して続いたことに対応した。
【０３８７】
化合物１をラットに６カ月間投与することによって生じた有害所見は５０ｍｇ／ｋｇ／日での軽微から中等度の腎管変性／再生であった。５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日及び／又は５０ｍｇ／ｋｇ／日ではリンパ組織（脾臓、胸腺及びリンパ節）、胃及び／又は舌に有害ではない所見があった。リンパ組織における所見は種々の程度のリンパ球減少であり、化合物１の予想薬理活性と一致した。５０ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雌雄の胃における所見は、主に非腺胃の境界縁の粘膜における軽微から軽度のびらん及び潰瘍形成と、亜急性／慢性炎症、浮腫及び／又は上皮過形成であった。２０ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄１匹には境界縁に軽微な局限的潰瘍形成があった。程度が軽微から軽度であることとヒトに解剖学的相関物が存在しない（ヒトには非腺胃がない）ことから、これらの所見は化合物１の投与に関連するが、有害ではないとみなされた。同様に、５０ｍｇ／ｋｇ／日では雌雄の舌に軽微から軽度の粘膜びらんがあったが、有害ではないとみなされた。
【０３８８】
雌雄ともに主に５０ｍｇ／ｋｇ／日で赤血球量と網状赤血球の軽度減少が認められた。これらの赤血球量の軽度減少は程度から判断して有害ではないとみなされた。雌雄ともに全用量の化合物１で主にリンパ球減少による総ＷＢＣ数の軽度から中等度の減少が認められた。
【０３８９】
５０ｍｇ／ｋｇ／日のみで有害腎臓所見があったことから、ラットに６カ月間投与後のＮＯＡＥＬは雄と雌で２０ｍｇ／ｋｇ／日であると判定され、従って、Ｃｍａｘ値は夫々１．１１μｇ／ｍＬ及び２．２４μｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣ０−２４値は夫々３．８３μｇ・ｈｒ／ｍＬ及び６．８４μｇ・ｈｒ／ｍＬとなった。
【０３９０】
非齧歯類試験
ビーグル犬における単回用量５ｍｇ／ｋｇ／日での非ＧＬＰ４週間経口毒性試験では、化合物１の投与に関連する生命に関わる所見は認められなかった。
【０３９１】
イヌ４匹のうちの１匹のみに赤血球量（ＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値）の軽度減少があったが、これらの減少はその重症度が軽度であることから、有害ではないとみなされた。
【０３９２】
０ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日及び５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で毎日経口カプセル剤投与によりビーグル犬においてＧＬＰ適合４週間イヌ試験を実施した。この試験では、０ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日及び５ｍｇ／ｋｇ／日で化合物１を投与した群の雌雄２匹ずつに更に４週間の回復期間を継続した。
【０３９３】
投与期間又は回復期間中に化合物１に関連する臨床所見又は飼料消費量もしくは体重の変化はなかった。３ｍｇ／ｋｇ／日と５ｍｇ／ｋｇ／日では、赤血球量（ＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度及びヘマトクリット値）の軽度から中等度の減少があり、減少の程度（３ｍｇ／ｋｇ／日と５ｍｇ／ｋｇ／日で夫々−２３％及び−３２％まで）から判断して有害であるとみなされた。赤血球量の減少は網状赤血球の減少と相関し、投与期間が長いほど重症度の上昇を示し、赤血球造血の抑制と一致した。循環網状赤血球の減少は４週間の回復期間の前半２週間後に逆転可能であり、個々の赤血球パラメータ（ＲＢＣ数、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値）はこの試験の回復期間の終わりまでにほぼベースライン値に戻った。３ｍｇ／ｋｇ／日及び５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄と５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雌には骨髄の軽微から軽度の細胞減少があり、循環網状赤血球の減少と一致した。しかし、この所見は回復期間の終わりにはなくなり、赤血球量と循環網状赤血球の減少の可逆性と一致した。
【０３９４】
１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した動物には赤血球量の減少もあったが、発生率が低く、ベースライン値に対する減少の重症度が軽度（１２匹のうちの２匹でベースライン値に比較して−１８％まで）であることから、有害ではないとみなされた。
【０３９５】
５ｍｇ／ｋｇ／日までの用量のこの試験のイヌは全て臨床的に正常であり、化合物１に関連する臨床所見又は飼料消費量もしくは体重の変化がなく、総合的な健康状態に与える明白な影響もなかった。
【０３９６】
試験の全用量で病変部の膝窩リンパ節は肉眼的には正常であり（例えば拡大していない）、試験した他のリンパ節（下顎、腸間膜又は気管気管支）に病変はなかった。全身炎症反応の存在を示すような血液パラメータの明白な変化はなかった。更に、膝窩リンパ節における混合細胞性浸潤の発生率と重症度が明白に用量に相関していたのは０．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した８匹のうちの１匹と、１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した８匹のうちの１匹のみであり、この所見の重症度は軽微であった。この所見は用量依存的であると思われ、３ｍｇ／ｋｇ／日及び５ｍｇ／ｋｇ／日の用量では被膜周囲組織に浸潤が拡張するが、発生率と重症度の上昇は中等度までであった。０．５ｍｇ／ｋｇ／日又は１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与したイヌでは、混合細胞性浸潤は膝窩リンパ節の辺縁洞及び／又は被膜に局限しており、正常なリンパ節構造に構造的な変化はなかった。膝窩リンパ節の混合細胞性浸潤は５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した動物では４週間の回復期間後も持続したが、化合物１を１．５ｍｇ／ｋｇ／日で投与した動物にはこの所見はなかった。膝窩リンパ節におけるこの所見は５ｍｇ／ｋｇ／日で回復期間が長い（例えば３カ月）と可逆的であると予想された。つまり、化合物１を０．５ｍｇ／ｋｇ／日又は１．５ｍｇ／ｋｇ／日で４週間投与したイヌの膝窩リンパ節における軽微な混合細胞性浸潤の所見は化合物１の投与に関連するとみなされるが、有害所見であるとはみなされない。
【０３９７】
化合物１を３ｍｇ／ｋｇ／日又は５ｍｇ／ｋｇ／日で４週間投与後の有害所見の存在に鑑み、１．５ｍｇ／ｋｇ／日をイヌにおけるＮＯＡＥＬと判定し、従って、Ｃｍａｘは０．２９７μｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣ０−２４は１．２μｇ・ｈｒ／ｍＬとなった（雌雄合わせた数値）。
【０３９８】
０ｍｇ／ｋｇ／日、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日及び１．５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で毎日経口カプセル剤投与により次の９カ月間のＧＬＰ適合慢性イヌ試験をビーグル犬で実施した。投与期間中に化合物１に関連する飼料消費量又は体重の変化は認められなかった。全匹とも試験の終わりまで生存したが、１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄１匹は化合物１投与に続発するとみなされる臨床所見（好中球数増加、足浮腫及び毛包虫症の存在）により化合物１の投与を中止した。この１匹は無投与のまま、２７５日目の投与期間の終わりまで必要な獣医の処置の下に試験を続けた。
【０３９９】
この９カ月間イヌ試験において、化合物１に関連する直接的な影響は０．５ｍｇ／ｋｇ／日又は１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雄（−１８％まで）と雌（−７％まで）で投与日２８日目、９１日目及び１８２日に認められた軽微から軽度の一般に用量依存的な（平均ヘモグロビン値により表される）赤血球量の減少に限られていた。投与終了時付近（投与日２６５日）では、個々のヘモグロビン値の減少は０．５ｍｇ／ｋｇ／日及び１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雌雄で投与日９１日に報告された減少と同等以下であった。持続投与に伴う変化及び／又は改善の程度に鑑み、赤血球量の減少は有害ではないとみなされた。
【０４００】
０．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した８匹のうちの６匹と、１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した８匹のうちの７匹では、殆どの時点で個々の平均ベースライン値に比較して赤血球量指数（ＲＢＣ数、ヘモグロビン及びヘマトクリット値）の軽微から軽度の減少が生じた。総じて、減少は雌よりも雄のほうが大きかった。１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雌雄ともに、（個々のヘモグロビン値により表される）赤血球量の減少が最低だったのは投与日９１日目であった。０．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雌雄ともに、赤血球量の減少は一般に各時点で一定していた。投与終了時に、個々のヘモグロビン値の減少は０．５ｍｇ／ｋｇ／日と１．５ｍｇ／ｋｇ／日を投与した雌雄ともに投与日９１日に報告された減少と同等以下であった。持続投与に伴う程度及び／又は改善に鑑み、赤血球量の減少はいずれの用量レベルでも有害であるとはみなされなかった。
【０４０１】
９カ月間イヌ試験で有害所見がなかったことから、ＮＯＡＥＬは１．５ｍｇ／ｋｇ／日であると判定し、従って、２７２日目の平均（雌雄）Ｃｍａｘは２１２ｎｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣは８８８ｎｇ・ｈｒ／ｍＬとなった。
【０４０２】
最終的ＧＬＰラット試験では、週齢一致雌性ＣＤ（Ｒ）（Ｃｒｌ：ＣＤ（Ｒ）［ＳＤ］）ラット２５匹／群からなる治療群３群に夫々５ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日又は７５ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで化合物１を投与した。更に週齢一致雌２５匹１群を対照とし、溶媒として０．２％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ，高粘度）の脱イオン水溶液を投与した。溶媒又は化合物１は全群に妊娠日（ＧＤ）６日から１７日まで１日１回経口強制飼養により投与した。
【０４０３】
臨床所見、妊娠体重、体重変化、飼料消費量又は母体顕微鏡検査で化合物１に関連する影響は認められなかった。
【０４０４】
最終的ＧＬＰウサギ試験では、週齢一致雌性Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ  Ｈｒａ：（ＮＺＷ）ＳＰＦウサギ２０匹／群からなる治療群３群に夫々２．５ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日又は２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで化合物１を投与した。更に週齢一致雌２０匹１群を対照とし、溶媒として０．２％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ，高粘度）の脱イオン水溶液を投与した。溶媒又は化合物１は全群にＧＤ７日から１９日まで１日１回経口強制飼養により投与した。
【０４０５】
２．５ｍｇ／ｋｇ／日と１０ｍｇ／ｋｇ／日では、臨床所見、妊娠体重もしくは体重変化、飼料消費量又は顕微鏡検査で化合物１に関連する影響は認められなかった。同様に、子宮移植パラメータ、胎児性別比、胎児体重、又は胎児外観、内臓もしくは骨格検査でこれらの用量レベルの投与の影響は認められなかった。
【０４０６】
実施例７  前臨床試験で網状赤血球に及ぼす化合物１とトファシチニブの影響の比較
網状赤血球発生に及ぼす化合物１投与の潜在的影響を調べるために、化合物１を市販のＦＤＡ承認済み関節リウマチ（ＲＡ）薬であるトファシチニブと比較する並行実験を実施した。
【０４０７】
図１１Ａに示すように、０日目と１日目にエリスロポエチン（ＥＰＯ）を静脈注射すると、多くはないが、明確な網状赤血球増加がラットに生じ、注射後３〜５日付近でピークとなった後、６日目と７日目でバックグラウンドレベルまで低下した。これに対して、ＰＢＳ対照は影響が（あったとしても）ごく僅かである。これはＥＰＯがＪａｋ２を介してシグナル伝達し、網状赤血球発生を刺激するという事実に一致する。
【０４０８】
更に表１に示す結果と一致し、化合物１はＪａｋ２阻害よりもＪａｋ１阻害に対して約７４倍選択的であるが、トファシチニブは約２４倍に過ぎない。その結果、図１１Ｂに示すように、ラットＡＩＡ疾患モデルにおいて有効な曝露量範囲で網状赤血球増加に及ぼす化合物１の影響はトファシチニブよりも少ない。網状赤血球増加阻害を示す曲線の傾きは左グラフ（トファシチニブ）のほうが右グラフ（化合物１）よりも著しく急であり、化合物１を使用すると、網状赤血球発生阻害等の副作用がさほど増加せずに著しく高い治療有効性（又は疾患の「阻害率％」）を達成できると思われる。
【０４０９】
同様に、図１１Ｃは有効曝露量での網状赤血球増加がＪａｋ１／Ｊａｋ２選択性と密接な関係があることを示す。同図では、トファシチニブ、バリシチニブ（現在臨床試験中のＲＡ薬候補である別のＪａｋ阻害剤）及び化合物１について、（従来記載されている）ラットＡＩＡモデルにおける「最終日の足浮腫の抑制率％」により測定した治療有効性を「網状赤血球の抑制率％」により測定した望ましくない副作用の程度に対してプロットしている。治療有効性は恐らく薬物濃度の上昇により増加するが、それにつれて付随する望ましくない副作用も増加することが明白である。しかし、Ｊａｋ１／Ｊａｋ２効力比が約７４倍と比較的高い化合物１の場合には、このような副作用の増加は著しく少ない。これに対して、Ｊａｋ１／Ｊａｋ２効力比が約２４倍と比較的低いトファシチニブでは、副作用が著しく急速に増加する。バリシチニブの影響は化合物１とトファシチニブの効果の中間であり、Ｊａｋ１／Ｊａｋ２効力比がその中間の約２７倍であることに一致する。データから明らかなように、望ましくない網状赤血球抑制の比較的急速な増加によりトファシチニブの治療有効性は足浮腫の約６０％抑制に止まっているが、化合物１は網状赤血球抑制レベルがほぼ同一で約８０％抑制を達成する。
【０４１０】
実施例８  前臨床試験でＮＫ細胞に及ぼす化合物１とトファシチニブの影響の比較
ＮＫ細胞数に及ぼす化合物１投与の潜在的影響を調べるために、化合物１をトファシチニブと比較する並行実験を実施した。
【０４１１】
図１２に示すように、末梢ＮＫ細胞数に及ぼす化合物１の影響は有効曝露量範囲でトファシチニブよりも小さい。トファシチニブと化合物１のｌｏｇ濃度をＡＵＣ曝露量（ｎｇ・ｈｒ／ｍＬ）として表す。
【０４１２】
トファシチニブではｌｏｇ濃度が増加するにつれ、「足浮腫減少率％」（治療有効性の測定値）が増加するが、同時にほぼ同一ペースで「ＮＫ細胞数減少率％」（望ましくない副作用の測定値）も増加する。これに対して、化合物１ではｌｏｇ濃度が増加すると、「ＮＫ細胞数減少率％」が増加し始めるよりも著しく前に「足浮腫減少率％」が増加するので、（ＮＫ細胞数減少により測定した）副作用を比較的低く抑えながら治療有効性の高い治療濃度域が得られる。
【０４１３】
図１３はラットからの実験データに鑑み、高用量の化合物１がトファシチニブに比較してＮＫ細胞数に比較的小さな影響しか与えないことを示唆している。同図では、トファシチニブと化合物１の両方について、（ラットＡＩＡモデルからの）「足浮腫の抑制率％」として測定した有効性を「ＮＫ細胞数減少率％」としての有害な副作用に対してプロットしている。トファシチニブと化合物１のどちらも単位有効性当たりのＮＫ細胞数減少は増加することが明白である。しかし、トファシチニブでの増加率は化合物１よりも著しく顕著であり、有効性（足浮腫の抑制率％）が約６０％のとき、ＮＫ細胞数減少率はトファシチニブでは１０ｍｇの用量を投与した場合に約８０％に達するが、化合物１では比較的無害な２５％に止まる。このＮＫ細胞数減少レベルのとき、化合物１の用量はヒト対象で現在試験されている用量よりも低い。
【０４１４】
データによると、高用量の化合物１はトファシチニブに比較してＮＫ細胞数に与える影響が比較的小さいので、化合物１はＮＫ細胞数が著しく減少する前により高い有効性レベルを達成するためにより高用量レベルで投与できると予想される。
【０４１５】
下表８に示すように、恐らくＩＬ６シグナル伝達に対する効力増大によるものと思われるが、化合物１は有効曝露量で末梢ＮＫ細胞数への作用が低減する。
【０４１６】
【表９】
2016539927.tif 000010
【０４１７】
実施例７及び８のデータから明らかなように、化合物１とトファシチニブはインビトロでは効力の差が（確実にあるが）僅かであるが、インビボでは特定の関連するサイトカイン刺激に依存する転帰に相当の差があった。例えば、化合物１は健常ラットにおける単位有効性当たりのＥＰＯ依存性網状赤血球増加に及ぼす影響がトファシチニブよりも著しく少なかった。同様に、化合物１は有効曝露量で末梢ＮＫ細胞数に及ぼす影響がトファシチニブよりも著しく少なかった。ＮＫ細胞数に及ぼす影響に差があるのはＩＬ−６シグナル伝達に比較して共通γ鎖シグナル伝達に対する化合物１の効力が比較的低いためであると思われる。
【０４１８】
ＦＤＡ規制資料によると、トファシチニブをＲＡ患者に投与すると、末梢ＮＫ細胞数が実質的に増加するが、それと同時にウイルス感染症と悪性腫瘍も増加する。更に、トファシチニブは移植患者とカニクイザルでもＮＫ細胞数が減少した（Ｂｏｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７９：７９１−８０１，２００５；ｖａｎ  Ｇｕｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ８：１７１１−１７１８，２００８）。ヒトＮＫ細胞機能の不良は水痘帯状疱疹ウイルスを含む一連の特徴的な感染症に結び付けられるため、臨床有効曝露量でＮＫ細胞又はＮＫサブセットへの作用低減効果（ｓｐａｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）はＲＡ患者におけるＪａｋ阻害剤の安全性と忍容性を改善すると予想される。
【０４１９】
実施例９  臨床試験でエキソビボＮＫ細胞及び網状赤血球に及ぼす化合物１とトファシチニブの影響の比較
ヒト対象においてＮＫ細胞数と網状赤血球発生に及ぼす化合物１投与の潜在的影響を調べるために、化合物１をトファシチニブと比較する並行実験を実施した。
【０４２０】
図１４Ａ及び１４Ｂに示すように、化合物１を健常ヒト対象に１４日間ｂｉｄ投与すると、１２ｍｇと２４ｍｇ（予想治療有効用量よりも高い用量）の場合のみに１μＬ当たりの末梢ＮＫ又はＮＫＴ細胞数が減少した。
【０４２１】
図１４Ｃに示すように、この同一用量範囲で網状赤血球数は用量依存的に減少しない。この結果と一致し、図１５Ａ及び１５Ｂに示すように、化合物１を６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回２９日間投与したＲＡ患者では循環網状赤血球とヘモグロビン値が低下しなかった。
【０４２２】
これらのデータによると、Ｊａｋ１阻害を基準にして有効と思われる用量又はそれ以上の用量で化合物１は網状赤血球数、ＮＫ細胞数又はＮＫＴ細胞数をさほど減少させないので、少なくともトファシチニブと比較して有効用量で望ましくない副作用がごく少ないと予想される。
【０４２３】
実施例１０  ヒトにおける効果
化合物１はファーストインヒューマン単回投与用量漸増試験Ｍ１３−４０１と、次いで反復投与用量漸増試験Ｍ１３−８４５の２種類のフェーズ１試験で試験されている。食事効果と薬物間相互作用を試験するようにデザインされた完了済みの単回投与無作為化二重盲検プラセボ対照比較試験では、合計５４人の健常ボランティアに化合物１が投与され、健常ボランティア１４人に対照としてプラセボが投与された。この試験の主目的は健常ボランティアにおいて化合物１の単回投与用量漸増の安全性、忍容性及びＰＫを評価することと、化合物１の安全性とＰＫに及ぼす食事とケトコナゾールの影響を評価することである。
【０４２４】
また、合計３２人の健常ボランティアに化合物１が１４日間反復投与された（試験Ｍ１３−８４５、サブスタディ１）。
【０４２５】
更に、ＲＡ患者１４人が試験Ｍ１３−８４５の二重盲検サブスタディ２に登録され、完了している。この試験は反復投与多施設共同無作為化試験としてデザインされ、その主目的は健常成人ボランティアにおいて化合物１の反復投与用量漸増の安全性、忍容性及びＰＫを評価することと、持続的なメトトレキサートレジメンで治療中のＲＡ患者において化合物１の反復投与の安全性、忍容性及びＰＫを評価することである。
【０４２６】
以下、これらの試験の詳細と得られた結果について記載する。
【０４２７】
薬物動態試験
２種類のフェーズ１試験が実施され、試験Ｍ１３−４０１では単回投与用量漸増、試験Ｍ１３−８４５では反復投与用量漸増として化合物１のＰＫを求めた。
【０４２８】
単回投与試験
試験Ｍ１３−４０１は健常成人における無作為化二重盲検プラセボ対照比較試験であり、２種類のサブスタディから構成された。サブスタディ１では、１．０ｍｇから４８．０ｍｇまで単回用量漸増経口投与後に化合物１のＰＫを評価し、サブスタディ２では、３．０ｍｇの化合物１を単回投与した場合のＰＫに及ぼす食事とケトコナゾールの影響を評価した。
【０４２９】
試験Ｍ１３−４０１サブスタディ１及び２の用量群を表１０に示す。
【０４３０】
【表１０】
2016539927.tif 000011
【０４３１】
サブスタディ１における化合物１の単回投与のＰＫパラメータを表１１に示す。サブスタディ２におけるケトコナゾールと食事の影響の評価のＰＫ結果を以下にまとめる。
【０４３２】
具体的には、試験Ｍ１３−４０１サブスタディ２では強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤であるケトコナゾールが化合物１の曝露量に与える影響を評価した（薬物間相互作用試験）。その結果、強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤であるケトコナゾールは化合物１のＡＵＣとＣｍａｘを約１．７倍〜１．８倍に増加することが分かった。
【０４３３】
試験Ｍ１３−４０１サブスタディ２も化合物１の曝露量に与える食事の影響を評価するようにデザインされた。その結果、食事は化合物１のＡＵＣに影響を与えないようであり、食事の存在下では＜１％のＡＵＣ低下が認められた。
【０４３４】
反復投与試験
試験Ｍ１３−８４５は３種類のサブスタディから構成された。サブスタディ１では、健常被験者に３ｍｇ〜２４ｍｇの化合物１又はプラセボを１日２回１４日間反復経口投与した。サブスタディ２では、持続的なＭＴＸ治療中の軽度から中等度のＲＡ被験者に化合物１又はプラセボを４週間反復経口投与した。サブスタディ３では、健常被験者にトファシチニブ５ｍｇを１日２回１４日間反復投与した。サブスタディ１から予備的結果が入手可能である（Ｎ＝４４）。
【０４３５】
【表１１】
2016539927.tif 000012
【０４３６】
サブスタディ１の用量群を表１２に示す。
【０４３７】
【表１２】
2016539927.tif 000013
【０４３８】
サブスタディ１における化合物１の予備的ＰＫパラメータを表１３に示す。
【０４３９】
安全性
試験Ｍ１３−４０１からの安全性結果を以下にまとめる。
【０４４０】
フェーズ１ファーストインヒューマン試験（試験Ｍ１３−４０１）からの安全性データ
試験Ｍ１３−４０１には健常成人男女被験者（Ｎ＝６８）が登録された。被験者５６人がサブスタディ１に登録され、完了した。被験者１２人がサブスタディ２に登録され、１１人が全３期間を完了した。
【０４４１】
パート１は健常成人被験者に化合物１を単回経口投与した場合の安全性と薬物動態に及ぼす食事の影響を評価するようにデザインされた２期間クロスオーバー調査であった。
【０４４２】
パート２はケトコナゾールと化合物１の潜在的代謝相互作用を評価するようにデザインされた１期間調査であった。
【０４４３】
被験者１人はサブスタディ２のパート１の期間１及び２の完了後にクレアチンホスホキナーゼ検査値が非臨床的に有意であったため、治験担当医師により試験から早期離脱させられた。
【０４４４】
【表１３】
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【０４４５】
サブスタディ１又はサブスタディ２における有害事象のうちで重度、重症又は致命的なものはなく、試験薬の中断に繋がるものはなかった。この試験中で臨床検査値、バイタルサイン又はＥＣＧ所見に臨床的に有意な変化は認められなかった。サブスタディ１又は２の被験者でＱＴ間隔又はＱＴｃＦ間隔の潜在的に臨床的に有意なＥＣＧ値について規定された基準を満たすものはなかった。ＱＴ間隔のＥＣＧ値で治験担当医師又は医療モニターにより臨床的に有意又は異常とみなされたものはなく、有害事象又は試験中断に結び付かなかった。
【０４４６】
健常ボランティア及び関節リウマチ患者におけるフェーズ１試験（試験Ｍ１３−８４５）からの予備的データ
３種類のサブスタディから構成され、サブスタディ１とサブスタディ３（いずれも健常ボランティアで実施）の登録は完了しており、サブスタディ２（持続的にＭＴＸを投与中のＲＡ被験者で実施）の登録は登録の問題により早期終了した。なお、被験者１４人はサブスタディ２を完了している。これらの２種類のサブスタディで報告された有害事象（ＡＥ）のうちで重度、重症又は致命的なものはなく、試験薬の中断に繋がるものはなかった。更に、臨床検査値、バイタルサイン又は心電図（ＥＣＧ）所見に臨床的に有意な変化は認められなかった。
【０４４７】
サブスタディ１は健常ボランティアにプラセボ又は化合物１を３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回１４日間投与した場合を評価した。化合物１を投与した被験者４２人のうちの６人（１４．３％）と、プラセボを投与した被験者１４人のうちの３人（１６．７％）が試験治療下で発現又は増悪したＡＥ（ＴＥＡＥ）を報告した。化合物１を投与した被験者２人以上により報告されたＡＥは頭痛（化合物１の４８ｍｇ用量群の被験者２人）と失神前状態（化合物１の６ｍｇ及び２４ｍｇ用量群で被験者各１人）であった。化合物１投与群全体で他の全ＡＥは被験者１人により報告され、下痢、投与部位皮膚炎、浮動性めまい及び鼻出血であった。全事象は重症度が軽度であると評価され、化合物１投与群の頭痛と下痢のみはある程度試験薬に関連する可能性があるとみなされた。
【０４４８】
サブスタディ３では健常ボランティアにトファシチニブ５ｍｇを１日２回１４日間投与した場合を評価し、１件の有害事象（掻痒）が報告された（被験者１人で発生）。
【０４４９】
サブスタディ２は持続的なＭＴＸ治療中の軽度から中等度のＲＡ被験者における化合物１の反復投与の安全性、忍容性及びＰＫを評価するための無作為化二重盲検プラセボ対照並行群間比較試験としてデザインされた。この試験は被験者約３２人を無作為に１：１：１：１で４群（プラセボ、６ｍｇ  ＢＩＤ、１２ｍｇ  ＢＩＤ及び２４ｍｇ  ＢＩＤ）に割り当てて登録するようにデザインされたが、登録の問題により早期終了した。試験に登録し、完了した被験者１４人（プラセボ［ｎ＝４］；化合物１  ６ｍｇ  ＢＩＤ［ｎ＝４］、化合物１  １２ｍｇ  ＢＩＤ［ｎ＝３］、化合物１  ２４ｍｇ  ＢＩＤ［ｎ＝３］）のうち、７人で９件のＡＥが報告された。２件（疲労及び嘔吐）がプラセボ群で発生し、化合物１投与群全体で７件（吐き気、嘔吐、上気道感染、胃腸炎、外傷性頸部症候群、腰痛及び不眠症）が発生したが、いずれも化合物１投与に関連しないと報告された。全ＡＥは重症度が軽度又は中等度であるとみなされた。
【０４５０】
つまり、健常ボランティアに化合物１を１〜４８ｍｇの範囲の用量で単回投与した場合と、３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回１４日間反復投与した場合の安全性データによると、用量制限毒性はないことが判明した。化合物１は全用量で忍容性が良好であった。報告された有害事象のうちで重度、重症又は致命的なものはなく、試験薬の中断に繋がるものはなかった。更に、臨床検査値、バイタルサイン測定値又はＥＣＧ所見に臨床的に有意な変化は認められなかった。
【０４５１】
化合物１は新規なＪａｋ１選択的阻害剤である。Ｊａｋ１を阻害すると、ＩＬ−６、ＩＬ−２、ＩＬ−７及びＩＬ−１５を含む多くの炎症性サイトカインのシグナル伝達が遮断される。ラットＡＩＡモデルにおいて、化合物１はＮＫ細胞数とＣＤ８＋及びＣＤ２５＋Ｔ細胞数の減少と相関した効果として、疾患進行を阻止した。これらの前臨床実験と他のＪａｋ阻害剤について報告されているデータから、化合物１はＲＡ患者の治療に有望であると判断される。化合物１はＪａｋ２よりもＪａｋ１に選択的であるため、差別性の低い薬剤の治療プロファイルを改善できると仮定される。
【０４５２】
入手可能なデータによると、化合物１は前臨床試験で選択性が高いため、他のＪａｋ阻害剤に比較して血液関連有害事象を生じにくい用量でＲＡ及び他の炎症性又は自己免疫障害の患者における臨床プロファイルを改善すると思われる。
【０４５３】
インビトロ試験によると、化合物１の代謝はＣＹＰ３Ａ４、３Ａ５及び２Ｄ６により介在されると予想される。強力なＣＹＰ３Ａ４／５阻害剤が化合物１曝露量に与える影響を解明するために、ケトコナゾールを使用して薬物間相互作用試験を実施した。予備的臨床試験結果によると、化合物１を強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤であるケトコナゾールと併用投与すると、化合物１のＣｍａｘとＡＵＣが約１．７倍〜１．８倍に増加した。従って、強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤を化合物１と併用投与すると、化合物１曝露量がある程度増加すると予想される。
【０４５４】
インビトロにおいて、化合物１は３０μＭまでの濃度ではＣＹＰ１Ａ２、２Ｂ６、２Ｃ８、２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６又は３Ａ４の阻害剤ではない。従って、これらの経路の基質である併用薬への曝露量に臨床的に有意義な変化は予想されない。
【０４５５】
化合物１を一連の安全性薬理アッセイで試験した。イヌでは、化合物１は０．４２μｇ／ｍＬのＣｍａｘを起点として平均動脈圧と心拍数に中程度の用量依存的効果を生じた。一方、ＦＩＨ試験で４８ｍｇ（Ｃｍａｘ＝０．３１μｇ／ｍＬ）の最高用量を単回投与した場合に血圧と心拍数への影響は認められなかった。
【０４５６】
４週間試験と両動物種（ラットでは６カ月間、イヌでは９カ月間）の慢性試験を含むラットとイヌにおける反復投与試験で化合物１の毒性プロファイルが評価されている。ピボタル４週間試験において、化合物１に関連する影響としては、循環リンパ球の減少とリンパ組織の細胞密度低下に加え、赤血球造血の抑制とそれに伴う網状赤血球及び赤血球量の減少があった。非臨床毒性試験では、イヌが最も感受性の高い動物種であると確認されている。
【０４５７】
イヌにおける９カ月毒性試験では、１．５ｍｇ／ｋｇ／日まで毎日投与した場合に化合物１投与の有害影響は認められなかった。化合物１投与の唯一の直接的な影響は０．５ｍｇ／ｋｇ／日と１．５ｍｇ／ｋｇ／日で投与日２８日目から１８２日目までの赤血球量の有害ではない軽微から軽度の減少であった。投与終了時（２６５日目）に、赤血球量の減少は９１日目に報告された減少と同等以下であり、これらの減少が持続投与に伴って改善されたか又は悪化しなかったことを示唆している。イヌの足の炎症所見とそれに続く流入領域リンパ節の炎症はイヌをケージの床材の上で飼育していることに関係しているため、ヒトに当て嵌まるとは考えられない。９カ月試験で有害所見がなかったため、ＮＯＡＥＬは１．５ｍｇ／ｋｇ／日であり、従って、平均（雌雄）で２７２日目のＣｍａｘは２１２ｎｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣは８８８ｎｇ・ｈｒ／ｍＬとなった。
【０４５８】
ラットにおける６カ月毒性試験。雌雄ともに主に５０ｍｇ／ｋｇ／日で赤血球量と網状赤血球の軽度減少が認められた。赤血球量のこれらの軽度減少は程度から判断して有害ではないとみなされた。ラットに６カ月間投与後のＮＯＡＥＬは雄と雌で２０ｍｇ／ｋｇ／日と判定され、従って、Ｃｍａｘ値は夫々１．１１μｇ／ｍＬ及び２．２４μｇ／ｍＬとなり、ＡＵＣ０−２４値は夫々３．８３μｇ・ｈｒ／ｍＬ及び６．８４μｇ・ｈｒ／ｍＬとなった。
【０４５９】
報告されている試験によると、Ｊａｋ１経路阻害はインターロイキンシグナル伝達への影響に関係があり、Ｊａｋ２阻害は赤血球発生及び他の経路（血小板産生を調節するトロンボポエチンや、血管緊張の調節に重要な役割を果たすアンギオテンシンを含む）の障害に関係があるとされている。ヒトにおいて、Ｊａｋ３欠損は常染色体劣性型重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）に関係があり、循環Ｔ細胞とナチュラルキラー細胞を欠くが、Ｂ細胞は正常数であるという特徴がある。Ｊａｋ３欠損によるＳＣＩＤ患者の典型例は体重増加不良、重度又は反復性下痢及び呼吸器感染症の幼児である。
【０４６０】
上記情報と他の動物試験からの結果に鑑み、化合物１投与はヒトにおいてＷＢＣとサイトカインシグナル伝達への影響に関係があると予想される。これらの免疫調節作用は感染の危険増加をもたらす可能性がある。ＲＡ患者における他の低選択性Ｊａｋ阻害剤の試験によると、血清クレアチニン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール及び肝トランスアミナーゼの上昇が報告されている。血清クレアチニン、脂質及び肝トランスアミナーゼ値の上昇は通常では非症候性で可逆的であり、腎又は肝機能の明白な低下に結び付けられていない（Ｒｉｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４（４）：５１３−５２６，２０１０；Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６３：ＬＢ３，２０１１）。また、ＲＡ患者におけるＪａｋ阻害剤であるトファシチニブの臨床試験試験では胃腸穿孔イベントも報告されている。処方情報によると、トファシチニブは胃腸穿孔の危険の高い患者（例えば憩室炎の病歴のある患者）では慎重に使用する必要がある。
【０４６１】
更に、免疫反応に作用する薬物は特に長期投与した場合に悪性腫瘍の危険が増す可能性がある。トファシチニブ（Ｊａｋ１、Ｊａｋ２及びＪａｋ３の非選択的阻害剤）の臨床試験では、リンパ腫及び他の悪性腫瘍が報告されている。
【０４６２】
２種類のサブスタディから構成された試験Ｍ１３−４０１からヒトにおける化合物１のＰＫと安全性に関する結果が入手可能である。サブスタディ１では１ｍｇ〜４８ｍｇの７種類の用量で化合物１の単回投与を評価した。化合物１は迅速に吸収され、絶食状態でＴｍａｘの中央値は約１時間であった。Ｃｍａｘに達した後、化合物１は二相性で低下するようであった。化合物１濃度はＴｍａｘ後に急速に低下した後、約３〜１５時間のｔ１／２で消失相が続く。サブスタディ２（食事効果／ケトコナゾール相互作用）では、１２人の被験者に絶食及び非絶食条件下で３ｍｇの化合物１をケトコナゾールと併用投与した。食事は化合物１（ＡＵＣ）に影響を与えないようであり、食事の存在下でＡＵＣの低下は＜１％であった。従って、化合物１は食事の有無に拘わらず投与することができる。予備的臨床試験結果によると、化合物１を強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤であるケトコナゾールと併用投与すると、化合物１のＣｍａｘとＡＵＣは約１．７倍〜１．８倍に増加した。従って、強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤を化合物１と併用投与すると、化合物１曝露量がある程度増加すると予想される。化合物１を公知の強力なＣＹＰ３Ａ阻害剤又は強力なＣＹＰ３Ａ誘導剤と併用投与する前に試験プロトコールを参照する必要がある。
【０４６３】
反復投与試験Ｍ１３−８４５からの予備的結果によると、化合物１は蓄積が軽微からゼロであり、Ｔｍａｘの中央値は約２時間であり、その後、消失相が続き、ｔ１／２は１４日目の最終投与後約８〜１６時間であった。化合物１曝露量はほぼ用量に比例するようであった。
【０４６４】
化合物１の約１９％〜２１％は定常状態で投与間隔中に親薬剤の未変化体として尿中に排泄された。健常ボランティアに化合物１を１〜４８ｍｇの範囲の用量で単回投与した場合（試験Ｍ１３−４０１）と、３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ及び２４ｍｇずつ１日２回１４日間反復投与した場合（試験Ｍ１３−８４５，サブスタディ１）の予備的安全性データによると、用量制限毒性はないことが判明した。
【０４６５】
化合物１は全用量で忍容性が良好であった。報告された有害事象のうちで重度、重症又は致命的なものはなく、試験薬の中断に繋がるものはなかった。更に、臨床検査値、バイタルサイン測定値又はＥＣＧ所見に臨床的に有意な変化は認められなかった。ＱＴ間隔又はＱＴｃＦ間隔のＥＣＧ値で治験担当医師又は医療モニターにより臨床的に有意又は異常とみなされたものはなく、有害事象又は試験中断に結び付かなかった。
【０４６６】
化合物１の臨床試験では、全被験者の安全性監視として、理学的検査、血液化学検査及び血液学的検査の評価、尿検査、心電図並びに心拍数と血圧を含むバイタルサイン測定を行う。試験期間を通して有害事象評価を実施する。臨床検査値評価は血小板数を含めた全血球算定、網状赤血球数、肝機能検査、血清クレアチニン、脂質プロファイル及びリンパ球サブセットを含む。（プロトコールに指定されているような）臨床的に有意な血液学的異常、肝又は腎機能障害及び有意な心血管疾患をもつ被験者は初期臨床試験から除外する。
【０４６７】
活動性もしくは慢性感染症に罹患しているか又は生ワクチンを最近接種した被験者は感染の潜在的危険が大きいため、試験から除外する。また、化合物１の試験に参加している間は被験者に生ウイルスワクチンを接種すべきではない。試験薬の投与中及び投与後の感染について被験者を綿密に監視する必要があり、徴候及び症状が発生している場合には、免疫が低下した被験者に適した診断試験を速やかに行う。被験者が重篤な感染症又は日和見感染症を起こしている場合には、試験薬を中断すべきである。必要に応じて、抗微生物療法を開始し、被験者を綿密に監視する必要がある。
【０４６８】
他のＪａｋ阻害剤による臨床試験では、ヘルペスウイルス再活性化の症例（例えば帯状疱疹）を含むウイルス再活性化が認められている。化合物１の初期試験では、慢性Ｂ型又はＣ型肝炎感染の徴候のある被験者を除外すべきである。また、化合物１の試験で試験薬を投与する前に全被験者を（プロトコールに従って）結核について検査すべきであり、活動性又は未治療の潜在性結核の徴候のある被験者は試験から除外すべきである。
【０４６９】
前臨床試験において、化合物１は光不安定性と高いモル吸光係数値を示しており、組織分布試験によると、化合物１は皮膚に多く分布している。ラットとイヌにおける夫々６カ月間と９カ月間の反復投与経口毒性試験では、皮膚又は眼毒性の徴候は認められていない。更に、化合物１はＢａｌｂ／ｃ  ３Ｔ３マウス線維芽細胞におけるニュートラルレッド取り込み光毒性アッセイで光毒性の可能性について陰性であった。
【０４７０】
投与の終了後は（最低３０日間）被験者を監視し、最終観察時に被験者の血液学的検査値又は化学検査値が基準範囲外であり、治験担当医師が臨床的に有意な変化であると判断する場合には、満足な臨床結果となるまで追跡すべきである。選択された臨床検査値（ヘモグロビン、リンパ球絶対数、好中球絶対数、総ＷＢＣ数、血小板数、アラニンアミノトランスフェラーゼ／アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、血清クレアチニン）の毒性管理ガイドラインをフェーズ２プロトコールに記載する。
【０４７１】
実施例１１  抗ＴＮＦα療法に効果不十分又は不耐性の患者における中等度から重度の活動性クローン病の治療
以下の実施例は抗ＴＮＦα療法に効果不十分又は不耐性の中等度から重度の活動性クローン病（ＣＤ）の被験者の治療について簡単に記載する。
【０４７２】
粘膜炎症の徴候がある中等度から重度の活動性クローン病と診断された男女成人患者を試験の被験者とし、診断の定義は（１）クローン病の簡易型内視鏡スコア（ＳＥＳ−ＣＤ）が≧６（疾患が回腸に限定している患者ではＳＥＳ−ＣＤ≧４）であり、（２）平均１日液状便／低粘度軟便回数が≧２．５であるか、又は平均１日腹痛スコアが≧２．０であり、且つ２２０≦ＣＤＡＩ≦４５０であるものとする。前記成人患者は抗ＴＮＦ療法に効果不十分又は不耐性の病歴をもつものでもよい。被験者の３５％までは抗ＴＮＦα治療に一次無効でもよい。
【０４７３】
前治療に効果不十分又は抗ＴＮＦα剤による前治療に不耐性の基準を以下に挙げる。
・以下の薬剤：
−インフリキシマブ：５ｍｇ／ｋｇＩＶ、少なくとも２週間隔で２回；
−アダリムマブ：少なくとも２週間隔で１６０ｍｇを１回皮下投与後、８０ｍｇを１回皮下投与（又は８０ｍｇを１回皮下投与）後、４０ｍｇを１回投与；
−セルトリズマブペゴル：４００ｍｇを少なくとも２週間隔で２回皮下投与；
のうちの１種の４週間導入レジメンの少なくとも１回の治療歴があるにも拘わらず、持続的に活動性の疾患の徴候及び症状がある；又は
・過去に臨床効果があった後にスケジュール管理投与中に症状が再発した（臨床効果があったにも拘わらず中断した場合は含まない）；又は
・少なくとも１種のＴＮＦαアンタゴニストの不耐性の既往歴（限定されないが、輸液関連反応、脱髄、鬱血性心不全、感染症）がある。
【０４７４】
登録された被験者に試験用量の化合物１（例えば３ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１２ｍｇ、１８ｍｇ又は２４ｍｇをＢＩＤ又はＱＤ）又はプラセボのいずれかを投与する。
【０４７５】
効果不十分の基準は以下の通りである。
・平均１日液状便／低粘度軟便回数が＞２．２であるか、又は平均１日腹痛スコアが＞１．８であり、且つ
・ｈｓ−ＣＲＰの増加レベルがベースラインから少なくとも１ｍｇ／Ｌであるか、又はｈｓ−ＣＲＰが≧５ｍｇ／Ｌである。
【０４７６】
実施例１２  健常日本人及び中国人被験者における化合物１の予備的薬物動態（ＰＫ）結果（試験Ｍ１３−５４３）
各用量レベルで６人ずつ３群のボランティア日本人被験者に１．０ｍｇ、６．０ｍｇ及び２４．０ｍｇを単回用量漸増経口投与後に化合物１のＰＫを評価した。更に２人の被験者をプラセボ対照として各用量レベルに割り当てた。
【０４７７】
また、健常日本人又は中国人被験者に化合物１又はプラセボを１８ｍｇずつ１日２回（ＢＩＤ）１４日間反復経口投与した。１群では、日本人被験者８人に１８ｍｇ／回を２週間投与し、更に２人の被験者をプラセボ対照とした。別の群では、中国人被験者８人に１８ｍｇ／回を２週間投与し、更に２人の被験者をプラセボ対照とした。
【０４７８】
期間終了後に上記全群の化合物１のＰＫ値を評価した。化合物１の予備的平均（％ＣＶ）薬物動態パラメータを下表１４に示す。また、健常日本人及び中国人被験者に化合物１を１８ｍｇずつＢＩＤ投与後１日目（ＡＭ）と１４日目（ＡＭ）の化合物１の予備的平均ＰＫプロファイルを図１６Ａ〜１７Ｂに示し、両人種群における１２時間（１日）又は７２時間（１４日）の化合物１の血漿中濃度を示す。
【０４７９】
健常日本人、中国人及び西洋人被験者で反復経口ＢＩＤ投与後に化合物１の用量標準化曝露量と終末相半減期の比較も行った。結果を下表１５にまとめる。
【０４８０】
本実施例のデータは以下の点を示唆している。
・反復投与後、化合物１の用量標準化曝露量は日本人、中国人及び西洋人健常被験者で同等であるように思われた。但し、
−化合物１の用量標準化ＡＵＣ及びＣｔｒｏｕｇｈは西洋人よりも東洋人のほうが約２０％高かった。
−化合物１の用量標準化Ｃｍａｘは西洋人よりも東洋人のほうが約４０％高かった。
・西洋人被験者における従来の観測結果と同様に、化合物１は日本人及び中国人健常被験者で反復ＢＩＤ投与による蓄積が軽微であった。
・化合物１の終末相ｔ１／２は日本人、中国人及び西洋人健常被験者で同等であった（約７〜９．５時間）。
【０４８１】
同様に、健常日本人被験者に単回投与後の化合物１の予備的平均（％ＣＶ）ＰＫパラメータを西洋人被験者と比較して下表１６にまとめる。
【０４８２】
西洋人被験者と比較した健常日本人被験者における化合物１の予備的ＰＫプロファイル（平均）を図１８Ａ〜Ｂに示す。西洋人被験者と比較した健常日本人被験者における化合物１の予備的用量標準化ＡＵＣ及びＣｍａｘを図１９Ａ〜Ｂに示す。
【０４８３】
上記試験から得られたデータから以下の点を示唆している。
・日本人被験者に３ｍｇ、６ｍｇ及び２４ｍｇを単回投与後の化合物１の曝露量は西洋人被験者で従来観測されている曝露量と同等であった。
−３ｍｇ皮下では、化合物１のＣｍａｘとＡＵＣは西洋人被験者で従来観測されているよりも夫々２２％及び１４％低かった。
−６ｍｇと２４ｍｇの単回投与では、化合物１のＣｍａｘとＡＵＣは西洋人被験者で従来観測されているよりも夫々９％及び１６〜１８％高かった。
−これらの差は試験間の変動の範囲内である。
・化合物１のＣｍａｘとＡＵＣは日本人被験者では３〜２４ｍｇの単回投与時にほぼ用量に比例して増加した。
【０４８４】
【表１４】
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【０４８５】
【表１５】
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【０４８６】
【表１６】
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【０４８７】
雑誌論文、特許及び公開特許出願を含めた全参考文献の教示はその内容全体を本願に援用する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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