(57)【要約】  本発明は、置換イミダゾピリダジン化合物、上記化合物を調製する方法、上記化合物を含む医薬組成物および組み合わせ、ならびに疾患、特に、過剰増殖および／または血管新生障害の治療または予防のための医薬組成物を製造するための、唯一の薬剤として、または他の活性成分と組み合わせての上記化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（A）、（B）または（C）の化合物：
【化１】
2016511252.tif 000049
2016511252.tif 000050
あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、あるいはそれらの混合物。
【請求項２】
疾患の治療または予防における使用のための、請求項1に記載の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物。
【請求項３】
前記疾患が、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患であり、特に、前記制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応が、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MEK-ERK）経路によって媒介され、とりわけ、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の前記疾患が、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移である、請求項2に記載の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物。
【請求項４】
請求項1に記載の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物、および医薬的に許容される希釈剤または担体を含む、医薬組成物。
【請求項５】
請求項1に記載の1つまたは複数の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物と；
ドセタキセル、パクリタキセルまたはタキソールなどのタキサン；イキサベピロン、パツピロンまたはサゴピロンなどのエポチロン；ミトキサントロン；プレドニゾロン；デキサメタゾン；エストラムスチン；ビンブラスチン；ビンクリスチン；ドキソルビシン；アドリアマイシン；イダルビシン；ダウノルビシン；ブレオマイシン；エトポシド；シクロホスファミド；イホスファミド；プロカルバジン；メルファラン；5−フルオロウラシル；カペシタビン；フルダラビン；シタラビン；Ara-C；2−クロロ−2’−デオキシアデノシン；チオグアニン；フルタミド、酢酸シプロテロンまたはビカルタミドなどの抗アンドロゲン剤；ボルテゾミブ；シスプラチンまたはカルボプラチンなどの白金誘導体；クロラムブシル；メトトレキサート；およびリツキシマブから選択される1つまたは複数の薬剤とを含む、医薬組み合わせ。
【請求項６】
式（A1）、（B1）または（C1）の中間化合物：
【化２】
2016511252.tif 000051
（式中、Z’は、−C（＝O）OHおよび−C（＝O）O−（C1−C6−アルキル）から選択される基を表す）
を、式Ibの化合物：
【化３】
2016511252.tif 000052
と反応させ、それによって、任意選択の脱保護の後、請求項1で規定した式（A）、（B）または（C）の化合物を得るステップを含む、請求項1に記載の化合物を調製する方法。
【請求項７】
一般式（A2）、（B2）または（C2）の中間化合物：
【化４】
2016511252.tif 000053
（式中、Q2は脱離基である）
を、一般式IIaの化合物：
【化５】
2016511252.tif 000054
（式中、Yは、ボロン酸基またはボロン酸基のエステルなどのカップリング反応において置換される置換基である）
と反応させ、それによって、任意選択の脱保護の後、請求項1で規定した式（A）、（B）または（C）の化合物を得るステップを含む、請求項1に記載の化合物を調製する方法。
【請求項８】
式（A3）、（B3）または（C3）の中間化合物：
【化６】
2016511252.tif 000055
（式中、Q1は脱離基である）
を、一般式（A4）、（B4）または（C4）の化合物：
【化７】
2016511252.tif 000056
と反応させ、それによって、任意選択の脱保護の後、請求項1で規定した一般式（A）、（B）または（C）の化合物を得る変換のステップを含む、請求項1に記載の化合物を調製する方法。
【請求項９】
式（A5）、（B5）または（C5）の中間化合物：
【化８】
2016511252.tif 000057
（式中、Q3は、任意選択で保護されたNH2−基である）
を、一般式（A6）、（B6）または（C6）の化合物：
【化９】
2016511252.tif 000058
と反応させ、それによって、イミンの還元後、および任意選択の脱保護の後、請求項1で規定した式（A）、（B）または（C）の化合物を得る変換のステップを含む、請求項1に記載の化合物を調製する方法。
【請求項１０】
式（A7）、（B7）または（C7）の中間化合物：
【化１０】
2016511252.tif 000059
（式中、R3’は脱離基である）
を、式（A8）、（B8）または（C8）の化合物：
【化１１】
2016511252.tif 000060
（式中、Yは、例えば、水素原子またはボロン酸基またはボロン酸エステル基などのカップリング反応において置換される置換基である）
と反応させ、それによって、請求項1で規定した式（A）、（B）または（C）の化合物を得る変換のステップを含む、請求項1に記載の化合物を調製する方法。
【請求項１１】
疾患の予防または治療のための請求項1に記載の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物の使用。
【請求項１２】
疾患の予防または治療のための医薬の調製のための、請求項1に記載の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物の使用。
【請求項１３】
前記疾患が、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患であり、特に、前記制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応は、前記マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MEK-ERK）経路によって媒介され、とりわけ、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の前記疾患が、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移である、請求項11または12に記載の使用。
【請求項１４】
請求項6、7、8、9または10で規定した式（A1）、（A2）、（A3）、（A5）、（A7）、（B1）、（B2）、（B3）、（B5）、（B7）、（C1）、（C2）、（C3）、（C5）または（C7）の化合物。
【請求項１５】
式（A）、（B）または（C）それぞれの化合物を調製するための、請求項6、7、8、9または10で規定した式（A1）、（A2）、（A3）、（A4）、（A5）、（A6）、（A7）、（A8）、（B1）、（B2）、（B3）、（B4）、（B5）、（B6）、（B7）、（B8）、（C1）、（C2）、（C3）、（C4）、（C5）、（C6）、（C7）または（C8）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書において記述および定義される置換イミダゾピリダジン化合物、上記化合物を調製する方法、上記化合物を含む医薬組成物および組み合わせ、疾患の治療または予防のための医薬組成物を製造するための上記化合物の使用、ならびに上記化合物の調製において有用な中間化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、Mps-1（単極性紡錘体1）キナーゼ（チロシンスレオニンキナーゼ、TTKとしても知られる。）を阻害する化合物に関する。Mps-1は二重特異性Ser／Thrキナーゼであり、有糸分裂チェックポイント（紡錘体チェックポイント、紡錘体形成チェックポイントとしても知られる。）の活性化において重要な役割を果たし、それによって有糸分裂中に染色体分離が適切に行われるようにする［Abrieu A et al., Cell, 2001, 106, 83-93］。すべての分裂細胞は、複製染色体が2個の娘細胞に確実に等しく分離しなければならない。有糸分裂に入ると、染色体はその動原体で紡錘体装置の微小管に結合する。有糸分裂チェックポイントは、未結合の動原体が存在する限り活性であり、有糸分裂細胞が分裂後期に入り、それによって未結合の染色体が存在したまま細胞分裂が終了しないようにする監視機構である［Suijkerbuijk SJ and Kops GJ, Biochemica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 24-31; Musacchio A and Salmon ED, Nat Rev Mol Cell Biol., 2007, 8, 379-93］。すべての動原体が正しい両性、すなわち双極性の形態で紡錘体と結合すると、チェックポイントを満足し、細胞は分裂後期に入り、有糸分裂が進む。有糸分裂チェックポイントは、MAD（有糸分裂停止不完全、MAD1〜3）およびBub（ベンゾイミダゾールによって発芽が抑制されない、Bub1〜3）ファミリーのメンバー、モータータンパク質CENP-E、Mps-1キナーゼならびに他の要素を含むいくつかの必須タンパク質の複雑なネットワークからなり、これらの多くが増殖性細胞（例えば、癌細胞）および組織において過剰発現している［Yuan B et al., Clinical Cancer Research, 2006, 12, 405-10］。有糸分裂チェックポイントシグナル伝達において、Mps-1キナーゼ活性の極めて重要な役割は、shRNAサイレンシング、化学遺伝学、ならびにMps-1キナーゼの化学阻害剤によって明らかにされている［Jelluma N et al., PLos ONE, 2008, 3, e2415; Jones MH et al., Current Biology, 2005, 15, 160-65; Dorer RK et al., Current Biology, 2005, 15, 1070-76; Schmidt M et al., EMBO Reports, 2005, 6, 866-72］。
【０００３】
低下した、しかし、不完全な有糸分裂チェックポイント機能と、異数性および腫瘍発生とを結びつける十分な証拠がある［Weaver BA and Cleveland DW, Cancer Research, 2007, 67, 10103-5; King RW, Biochimica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 4-14］。一方、有糸分裂チェックポイントの完全な阻害は、腫瘍細胞において重度の染色体不分離およびアポトーシス誘導につながると認識されてきた［Kops GJ et al., Nature Reviews Cancer, 2005, 5, 773-85; Schmidt M and Medema RH, Cell Cycle, 2006, 5, 159-63; Schmidt M and Bastians H, Drug Resistance Updates, 2007, 10, 162-81］。したがって、Mps-1キナーゼ、または有糸分裂チェックポイントの他の要素の薬理学的阻害による有糸分裂チェックポイントの抑止は、癌腫および肉腫などの固形腫瘍、ならびに白血病およびリンパ性悪性腫瘍、または制御されていない細胞増殖に関連する他の障害を含む増殖性障害の治療のための新しい手法となる。
【０００４】
ビンカアルカロイド、タキサンまたはエポチロンなど、確立されている有糸分裂阻害剤は、微小管の動態を安定化または不安定化することによって、有糸分裂停止を含むSACを活性化する。この有糸分裂停止は、姉妹染色分体が分離して2個の娘細胞を形成しないようにする。有糸分裂が長時間停止すると、細胞は細胞質分裂が行われずに有糸分裂を終了するか、または分裂死を起こして細胞死に至る。
【０００５】
一方、Mps-1の阻害剤は、有糸分裂により細胞の進行を速めるSAC不活性化を誘発し、重度の染色体不分離、そして最終的には細胞死に至る。
【０００６】
これらの知見は、Mps-1阻害剤が、ヒトなどの温血動物における、例えば、アルツハイマー病、心血管疾患または真菌性疾患などの癌、炎症、関節炎、ウイルス性疾患、神経変性疾患など、亢進された制御されていない細胞増殖過程に関連する増殖性障害の治療において治療上の価値があることを示唆する。
【０００７】
したがって、Mps-1の阻害剤は、単一薬剤として、または他の薬剤との組み合わせで治療選択肢を補完する価値のある化合物となる。
【０００８】
Mps-1キナーゼに対する阻害効果を示すさまざまな化合物が、先行技術において開示されている。国際公開第2010／124826（A1）号パンフレットには、置換イミダゾキノキサリン化合物がMps-1キナーゼの阻害剤として開示されている。国際公開第2011／026579（A1）号パンフレットには、置換アミノキノキサリンがMps-1阻害剤として開示されている。国際公開第2011／063908（A1）号パンフレット、国際公開第2011／064328（A1）号パンフレットならびに国際公開第2011／063907（A1）号パンフレットには、トリアゾロピリジン誘導体がMps-1キナーゼの阻害剤として開示されている。
【０００９】
イミダゾピリダジン誘導体は、以下の通り、さまざまな疾患の治療または予防のために開示されている：
【００１０】
国際公開第2007／038314（A2）号パンフレットは、MK2調節を含むキナーゼモジュレーターとして有用な縮合複素環式化合物に関する。特に、国際公開第2007／038314（A2）号パンフレットは、イミダゾ［1，2−b］ピリダジン類に関する。
【００１１】
米国特許出願公開第2008／0045536（A1）号明細書は、同様に、MK2調節を含むキナーゼモジュレーターとして有用な縮合複素環式化合物に関する。特に、この明細書はイミダゾ［1，2−b］ピリダジン類に関する。
【００１２】
国際公開第2010／042699（A1）号パンフレットは、キナーゼモジュレーター、特にCK2調節として有用な縮合複素環式化合物に関する。特に、国際公開第2010／042699（A1）号パンフレットは、3位をニトリル基で置換されたイミダゾ［1，2−b］ピリダジン類に関する。
【００１３】
国際公開第2007／025090（A2）号パンフレットは、MEKキナーゼの阻害剤として有用な複素環状化合物に関する。特に、国際公開第2007／025090（A2）号パンフレットは、とりわけ、イミダゾ［1，2−b］ピリダジン類に関する。
【００１４】
国際公開第1998／08847（A1）号パンフレットは、コルチコトロピン放出因子（ホルモン）CRF（CRH）アンタゴニストとして有用な複素環状化合物に関する。特に、国際公開第1998／08847（A1）号パンフレットは、とりわけ、イミダゾ［1，2−b］ピリダジン類に関する。
【００１５】
国際公開第2011／013729（A1）号パンフレットには、縮合イミダゾール誘導体がMps-1阻害剤として開示されている。開示されている縮合イミダゾール誘導体の中には、イミダゾ［1，2−b］ピリダジン類もある。
【００１６】
国際公開第2012／032031（A1）号パンフレットは、とりわけ、Mps-1阻害剤としてのイミダゾ［1，2−b］ピリダジン類に関係する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】国際公開第2010／124826（A1）号パンフレット
【特許文献２】国際公開第2011／026579（A1）号パンフレット
【特許文献３】国際公開第2011／063908（A1）号パンフレット
【特許文献４】国際公開第2011／064328（A1）号パンフレット
【特許文献５】国際公開第2011／063907（A1）号パンフレット
【特許文献６】国際公開第2007／038314（A2）号パンフレット
【特許文献７】米国特許出願公開第2008／0045536（A1）号明細書
【特許文献８】国際公開第2010／042699（A1）号パンフレット
【特許文献９】国際公開第2007／025090（A2）号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第1998／08847（A1）号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第2011／013729（A1）号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第2012／032031（A1）号パンフレット
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Abrieu A et al., Cell, 2001, 106, 83-93
【非特許文献２】Suijkerbuijk SJ and Kops GJ, Biochemica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 24-31
【非特許文献３】Musacchio A and Salmon ED, Nat Rev Mol Cell Biol., 2007, 8, 379-93
【非特許文献４】Yuan B et al., Clinical Cancer Research, 2006, 12, 405-10
【非特許文献５】Jelluma N et al., PLos ONE, 2008, 3, e2415
【非特許文献６】Jones MH et al., Current Biology, 2005, 15, 160-65
【非特許文献７】Dorer RK et al., Current Biology, 2005, 15, 1070-76
【非特許文献８】Schmidt M et al., EMBO Reports, 2005, 6, 866-72
【非特許文献９】Weaver BA and Cleveland DW, Cancer Research, 2007, 67, 10103-5
【非特許文献１０】King RW, Biochimica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 4-14
【非特許文献１１】Kops GJ et al., Nature Reviews Cancer, 2005, 5, 773-85
【非特許文献１２】Schmidt M and Medema RH, Cell Cycle, 2006, 5, 159-63
【非特許文献１３】Schmidt M and Bastians H, Drug Resistance Updates, 2007, 10, 162-81
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
しかし、上述の最先端技術には、式（A）、（B）または（C）のイミダゾピリダジン化合物、あるいは、本明細書において記述および定義され、以下で「本発明の化合物」と呼ぶその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物、あるいはそれらの薬理活性および安定性は具体的には記述されていない。
【００２０】
今回、本発明の上記化合物は、驚くべき有利な特性を有することが明らかになり、これは本発明の根源をなす。
【００２１】
特に、本発明の上記化合物は、驚くべきことに、Mps-1キナーゼを効果的に阻害することが明らかになっており、したがって、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患、あるいは制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応を伴う疾患、特に制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応が、Mps-1キナーゼによって媒介される疾患、例えば、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移など、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭部および頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移の治療または予防のために使用されてもよい。
【００２２】
本発明の化合物は、驚くべきことに、以下で示す通り、機能的アッセイ（紡錘体形成チェックポイントアッセイ）、抗増殖作用（HeLa細胞を用いる増殖アッセイ）、代謝安定性（ラット肝細胞内のインビトロ代謝安定性）および薬物−薬物相互作用ポテンシャル（肝酵素CYP3A4の阻害）において、Mps-1関連活性に関して全体的に優れたプロファイルを示す。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は、式（A）、（B）および（C）の化合物：
【化１】
2016511252.tif 000002
2016511252.tif 000003
あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、あるいはそれらの混合物を対象に含む。
【００２４】
本発明の化合物は、以下により特徴づけられる：紡錘体形成チェックポイントアッセイにおける活性＜1.0nM、HeLa細胞を用いる増殖アッセイにおける活性＜25nM、ラット肝細胞内のインビトロ代謝安定性Fmax≧39％、肝酵素CYP3A4の阻害≧5μM。
【００２５】
また、本発明は、上記化合物を調製する方法、上記化合物を含む医薬組成物および組み合わせ、疾患の治療または予防のための医薬組成物を製造するための上記化合物の使用、ならびに上記化合物の調製において有用な中間化合物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本明細書で述べられる用語は、好ましくは以下の意味を有する。
【００２７】
用語「ハロゲン原子」または「ハロ−（halo−）」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味すると理解されるべきである。
【００２８】
用語「C1−C6−アルキル」は、好ましくは、1個、2個、3個、4個、5個または6個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の一価の飽和炭化水素基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、イソペンチル、2−メチルブチル、1−メチルブチル、1−エチルプロピル、1，2−ジメチルプロピル、ネオ−ペンチル、1，1−ジメチルプロピル、4−メチルペンチル、3−メチルペンチル、2−メチルペンチル、1−メチルペンチル、2−エチルブチル、1−エチルブチル、3，3−ジメチルブチル、2，2−ジメチルブチル、1，1−ジメチルブチル、2，3−ジメチルブチル、1，3−ジメチルブチルまたは1，2−ジメチルブチル基、あるいはその異性体を意味すると理解されるべきである。特に、上記基は、1個、2個、3個または4個の炭素原子（「C1−C4−アルキル」）（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル基）を有し、とりわけ、1個、2個または3個の炭素原子（「C1−C3−アルキル」）（例えば、メチル、エチル、n−プロピル−またはイソプロピル基）を有する。
【００２９】
本明細書全体にわたって用いられる用語「C1−C6」は、例えば、「C1−C6−アルキル」の定義の文脈において、1個〜6個の有限数の炭素原子、すなわち、1個、2個、3個、4個、5個または6個の炭素原子を有するアルキル基を意味すると理解されるべきである。さらに、上記用語「C1−C6」は、その中に含まれる任意の部分範囲、例えば、C1−C6、C2−C5、C3−C4、C1−C2、C1−C3、C1−C4、C1−C5、C1−C6；特に、C1−C2、C1−C3、C1−C4、C1−C5、C1−C6；とりわけ、C1−C4と解釈されるべきであると理解されるべきである。
【００３０】
用語「置換される（substituted）」は、指定された原子上の1個または複数個の水素が、示した群から選択されたもので置き換えられることを意味する。ただし、現状での指定された原子の通常の結合価を超えず、置換によって安定な化合物になるものとする。置換基および／または変数の組み合わせは、このような組み合わせによって安定な化合物になる場合にのみ許容される。
【００３１】
用語「任意選択で置換される（optionally substituted）」は、指定された基（group、radical）または部分（moiety）での任意選択の置換を意味する。
【００３２】
本明細書において用いられるとき、用語「脱離基」は、結合電子を持つ安定化学種として化学反応において置換される原子または原子の群を指す。好ましくは、脱離基は、ハロ、特に、クロロ、ブロモまたはヨード、メタンスルホニルオキシ、p−トルエンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ、（4−ブロモベンゼン）スルホニルオキシ、（4−ニトロベンゼン）スルホニルオキシ、（2−ニトロベンゼン）スルホニルオキシ、（4−イソプロピルベンゼン）スルホニルオキシ、（2，4，6−トリイソプロピルベンゼン）スルホニルオキシ、（2，4，6−トリメチルベンゼン）スルホニルオキシ、（4−tert−ブチルベンゼン）スルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシおよび（4−メトキシベンゼン）スルホニルオキシを含む群から選択される。
【００３３】
化合物、塩、多形、水和物、溶媒和物などの単語の複数形が本明細書で用いられる場合、これは、単一の化合物、塩、多形、異性体、水和物、溶媒和物なども意味すると理解される。
【００３４】
「安定な化合物」または「安定な構造」により、有用な程度の純度までの反応混合物からの単離、および効果的な治療薬への処方に耐える十分に堅牢な化合物を意味する。
【００３５】
第1の態様によれば、本発明は、式（A）、（B）または（C）：
【化２】
2016511252.tif 000004
2016511252.tif 000005
の化合物を対象とする。
【００３６】
好ましい実施形態において、本発明は、上述の式（A）の化合物に関する。
【００３７】
別の好ましい実施形態において、本発明は、上述の式（B）の化合物に関する。
【００３８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、上述の式（C）の化合物に関する。
【００３９】
前述の態様のある実施形態において、本発明は、その互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物の形態の式（A）、（B）または（C）の化合物に関する。
【００４０】
本発明には、単一の立体異性体として、または任意の比の上記立体異性体の任意の混合物として、本発明の化合物のすべての可能な立体異性体が含まれる。本発明の化合物の単一の立体異性体、例えば、単一のエナンチオマーまたは単一のジアステレオマーの単離は、任意の適した最先端の方法、例えば、クロマトグラフィー、特にキラルクロマトグラフィーなどによって実現されてもよい。
【００４１】
さらに、本発明の化合物は、互変異性体として存在してもよい。例えば、ヘテロアリール基としてピラゾール部分を含む本発明の任意の化合物は、例えば、1H互変異性体もしくは2H互変異性体、または任意の量の2つの互変異性体の混合物としても存在することができて、あるいは、トリアゾール部分は、例えば、1H互変異性体、2H互変異性体もしくは4H互変異性体、または任意の量の上記1H、2Hおよび4H互変異性体、すなわち、
【化３】
2016511252.tif 000006
の混合物としても存在することができる。
【００４２】
本発明には、単一の互変異性体として、または任意の比の上記互変異性体の任意の混合物として、本発明の化合物のすべての可能な互変異性体が含まれる。
【００４３】
また、本発明には、本発明の化合物のすべての適した同位体の変形形態が含まれる。本発明の化合物の同位体の変形形態は、少なくとも1個の原子が、同じ原子番号を有するが、通常または主として天然に存在する原子質量とは異なる原子質量を有する原子によって置き換えられた化合物と定義される。本発明の化合物に取り込むことができる同位体の例には、2H（デューテリウム）、3H（トリチウム）、11C、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129Iおよび131Iなど、それぞれ、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体が含まれる。本発明の化合物のある特定の同位体の変形形態、例えば、3Hまたは14Cなど、1つまたは複数の放射性同位体が取り込まれた変形形態は、薬剤および／または基質組織の分布調査において有用である。トリチウム標識した同位体および炭素14、すなわち、14Cの同位体は、それらの調製および検出性を容易にするために特に好ましい。さらに、デューテリウムなどの同位体での置換によって、より大きな代謝安定性の結果生じる特定の治療上の利点、例えば、インビボでの半減期の増大、または必要用量の低減がもたらされることがあり、したがって、場合によっては好ましいこともある。本発明の化合物の同位体の変形形態は、概して、例示の方法によって、または、以下の実施例に記載されている調製によってなど、適した試薬の適切な同位体の変形形態を用いて、当業者に既知の従来の手順により調製することができる。
【００４４】
さらに、本発明の化合物はN−オキシドとして存在することができて、これは、本発明の化合物の少なくとも1つの窒素が酸化されていると定義される。本発明には、このようなすべての可能なN−オキシドが含まれる。
【００４５】
さらに、本発明には、本発明の化合物のすべての可能な結晶形または多形が、単一の多形として、または任意の比の1つを超える多形の混合物として含まれる。
【００４６】
本発明の化合物は、水和物または溶媒和物として存在することができて、ここで、本発明の化合物は、極性溶媒、特に、水、メタノールまたはエタノールを、例えば、化合物の結晶格子の構成要素として含む。極性溶媒、特に水の量は、化学量論比または非化学量論比で存在してもよい。化学量論的な溶媒和物の場合、例えば、水和物、ヘミ−、（セミ−）、モノ−、セスキ−、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−などの溶媒和物または水和物がそれぞれ可能である。本発明には、すべてのこのような水和物または溶媒和物が含まれる。
【００４７】
また、本発明は、代謝産物、水和物、溶媒和物、プロドラッグ、塩、特に医薬的に許容される塩、インビボで加水分解性のエステルおよび共沈物など、本明細書に開示されている化合物の有用な形態に関する。
【００４８】
用語「医薬的に許容される塩」は、比較的毒性のない本発明の化合物の無機または有機酸付加塩を指す。例えば、S.M.Berge, et al.“Pharmaceutical Salts," J.Pharm.Sci.1977, 66, 1-19を参照。
【００４９】
本発明の化合物の医薬的に許容される適した塩は、例えば、鎖内または環内に窒素原子を有する本発明の化合物の酸付加塩でもよく、例えば、これは、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、二硫酸、リン酸または硝酸など）との酸付加塩、または有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、2−（4−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ショウノウ酸、ケイ皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、3−ヒドロキシ−2−ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、3−フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、2−ヒドロキシエタンスルホナート、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、2−ナフタレンスルホン酸、ナフタリンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、アジピン酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、D−グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸またはチオシアン酸など）との酸付加塩など、十分に塩基性である。
【００５０】
さらに、十分に酸性である、本発明の化合物の医薬として適切に許容される別の塩はアルカリ金属塩であり、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩、アンモニウム塩、あるいは生理学的に許容される陽イオンを与える有機塩基との塩、例えば、N−メチル−グルカミン、ジメチル−グルカミン、エチル−グルカミン、リシン、ジシクロヘキシルアミン、1，6−ヘキサジアミン、エタノールアミン、グルコサミン、サルコシン、セリノール、トリス−ヒドロキシ−メチル−アミノメタン、アミノプロパンジオール、ソヴァーク塩基（sovak-base）、1−アミノ−2，3，4−ブタントリオールとの塩である。さらに、塩基性の窒素含有基は、低級ハロゲン化アルキル（メチル、エチル、プロピルおよびブチルのクロリド、ブロミドおよびヨージドなど）、ジアルキルスルファート（ジメチル、ジエチルおよびジブチルのスルファートおよびジアミルスルファートなど）、長鎖ハロゲン化物（デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルのクロリド、ブロミドおよびヨージドなど）、アラルキルハロゲン化物（ベンジルおよびフェネチルのブロミドなど）ならびにその他のような薬剤で四級化されてもよい。
【００５１】
さらに、記載された化合物の酸付加塩は、適切な無機酸または有機酸を用いて、いくつかの既知の方法のいずれかを経て化合物を反応させることにより調製されてもよいことを当業者は理解されよう。あるいは、本発明の酸性化合物のアルカリおよびアルカリ土類金属塩は、適切な塩基を用いて、さまざまな既知の方法を経て本発明の化合物を反応させることにより調製される。
【００５２】
本発明には、本発明の化合物のすべての可能な塩が、単一の塩として、または上記の塩の任意の比の任意の混合物として含まれる。
【００５３】
本明細書において用いられるとき、用語「インビボで加水分解性のエステル」は、カルボキシまたはヒドロキシ基を含む本発明の化合物のインビボで加水分解性のエステル、例えば、ヒトまたは動物の体内で加水分解され、元の酸またはアルコールを生成する医薬的に許容されるエステルを意味すると理解される。カルボキシに適した医薬的に許容されるエステルは、例えば、アルキル、シクロアルキル、および、任意選択で置換フェニルアルキル、特に、ベンジルエステル、C1−C6アルコキシメチルエステル、例えば、メトキシメチル、C1−C6アルカノイルオキシメチルエステル、例えば、ピバロイルオキシメチル、フタリジルエステル、C3−C8シクロアルコキシカルボニルオキシ−C1−C6アルキルエステル、例えば、1−シクロヘキシルカルボニルオキシエチル；1，3−ジオキソレン−2−オニルメチルエステル、例えば、5−メチル−1，3−ジオキソレン−2−オニルメチル；および、C1−C6−アルコキシカルボニルオキシエチルエステル、例えば、1−メトキシカルボニルオキシエチルを含み、本発明の化合物中の任意のカルボキシ基で形成されてもよい。
【００５４】
ヒドロキシ基を含む本発明の化合物のインビボで加水分解性のエステルには、リン酸エステルなどの無機エステル、およびα−アシルオキシアルキルエーテル、およびエステルのインビボでの加水分解の結果、分解して元のヒドロキシ基を与える関連化合物が含まれる。α−アシルオキシアルキルエーテルの例には、アセトキシメトキシおよび2，2−ジメチルプロピオニルオキシメトキシが含まれる。ヒドロキシに関するインビボで加水分解性のエステル生成基の選択肢には、アルカノイル、ベンゾイル、フェニルアセチルおよび置換ベンゾイルおよび置換フェニルアセチル、アルコキシカルボニル（炭酸アルキルエステルを与える。）、ジアルキルカルバモイルおよびN−（ジアルキルアミノエチル）−N−アルキルカルバモイル（カルバメートを与える。）、ジアルキルアミノアセチルおよびカルボキシアセチルが含まれる。本発明は、このようなエステルすべてを対象に含む。
【００５５】
本発明の化合物は、驚いたことに、Mps-1キナーゼを効果的に阻害することが明らかになっており、したがって、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患、あるいは制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応を伴う疾患、特に制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応が、Mps-1キナーゼによって媒介される疾患、例えば、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移など、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭部および頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移の治療または予防のために使用されてもよい。
【００５６】
したがって、上述の式（A）、（B）および（C）の化合物は、治療薬として価値があることが予想される。
【００５７】
したがって、別の実施形態によれば、本発明は、疾患の治療または予防における使用のための上述の式（A）、（B）または（C）の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物を対象とする。
【００５８】
別の実施形態では、本発明は、亢進された制御されていない細胞増殖過程に関連する障害を治療する方法を、このような治療を必要とする患者において提供し、この方法は、有効量の上述の式（A）、（B）または（C）の化合物を患者に投与するステップを含む。
【００５９】
この文書全体にわたって記載の用語「を治療する」または「治療」は、慣習的に用いられ、例えば、癌などの疾患または障害の状態の抑制、緩和、縮小、軽減、改善を目的とする対象の管理または看護である。
【００６０】
用語「対象」または「患者」は、ヒトおよび非ヒト動物など、細胞増殖障害を患う可能性のある生物、または、そうでなければ、本発明の化合物の投与の恩恵を受ける可能性のある生物を含む。好ましいヒトには、本明細書に記述される、細胞増殖障害または関連する状態を患う、または患いやすいヒト患者が含まれる。用語「非ヒト動物」は、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコおよび齧歯類、例えば、マウスなどの哺乳動物、ならびにニワトリ、両生類、爬虫類などの非哺乳動物などを含む。
【００６１】
用語「細胞増殖障害」または「亢進された制御されていない細胞増殖過程に関連する障害」は、細胞の望まれていない、または制御されていない増殖が関与する障害を含む。本発明の化合物は、細胞増殖および／または細胞分裂の阻止、阻害、ブロック、減少、低下、制御などに、かつ／またはアポトーシスを生じるのに利用することができる。この方法は、哺乳動物を含む、ヒトを含むこれらを必要とする対象に、障害の治療または予防に効果的である量の本発明の化合物、あるいは、その医薬的に許容される塩、異性体、多形、代謝産物、水和物または溶媒和物などを投与するステップを含む。
【００６２】
別の実施形態では、本発明は、疾患の治療または予防における使用のための式（A）、（B）または（C）の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物を対象とし、ここで、上記疾患は、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患であり、特に、ここで、上記制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応は、上記マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MEK-ERK）経路によって媒介され、とりわけ、ここで、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の上記疾患が、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭部および頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移である。
【００６３】
上述の式（A）、（B）および（C）の化合物は、唯一の医薬品として、または、組み合わせによって容認できない副作用が引き起こされない場合は1つまたは複数の別の治療薬と組み合わせて投与してもよい。この組み合わせ治療法は、式（A）、（B）または（C）の化合物、および1つまたは複数の別の治療薬を含む単一の医薬投与配合物の投与、ならびに式（A）、（B）または（C）の化合物、およびそれ自体別個の医薬投与配合物中の別の各治療薬の投与を含む。例えば、式（A）、（B）または（C）の化合物および治療薬が、錠剤またはカプセルなどの単一の経口投与組成物で一緒に患者に投与されてもよく、または、各薬剤が、別個の投与配合物で投与されてもよい。
【００６４】
別個の投与配合物が用いられる場合、式（A）、（B）または（C）の化合物、および1つまたは複数の別の治療薬は、実質的に同じ時間に（例えば、同時に）または時間をずらして別々に（例えば、順次）投与してもよい。
【００６５】
別の態様において、本発明は、一般式（A）、（B）または（C）の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物、および医薬的に許容される希釈剤または担体を含む医薬組成物を提供する。
【００６６】
好ましくは、医薬組み合わせは、：
−  一般式（A）、（B）または（C）の1つまたは複数の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物；ならびに
−  ドセタキセル、パクリタキセルまたはタキソールなどのタキサン；イキサベピロン、パツピロンまたはサゴピロンなどのエポチロン；ミトキサントロン；プレドニゾロン；デキサメタゾン；エストラムスチン；ビンブラスチン；ビンクリスチン；ドキソルビシン；アドリアマイシン；イダルビシン；ダウノルビシン；ブレオマイシン；エトポシド；シクロホスファミド；イホスファミド；プロカルバジン；メルファラン；5−フルオロウラシル；カペシタビン；フルダラビン；シタラビン；Ara-C；2−クロロ−2’−デオキシアデノシン；チオグアニン；フルタミド、酢酸シプロテロンまたはビカルタミドなどの抗アンドロゲン剤；ボルテゾミブ；シスプラチンまたはカルボプラチンなどの白金誘導体；クロラムブシル；メトトレキサート；およびリツキシマブから選択される1つまたは複数の薬剤を含む。
【００６７】
さらに別の態様において、本発明は、医薬組成物を調製するための工程を提供する。工程は、少なくとも1つの上で定義した式（A）、（B）または（C）の化合物と少なくとも1つの医薬的に許容される担体とを組み合わせるステップと、生じる組み合わせを適した投与形態にするステップとを含む。
【００６８】
さらに別の態様において、本発明は、細胞増殖障害の治療または予防のための医薬組成物の製造のための、上で定義した式（A）、（B）または（C）の化合物の使用を提供する。特定の実施形態では、細胞増殖障害は癌である。
【００６９】
式（A）、（B）または（C）の活性成分は、全身的および／または局所的に作用することができる。この目的のために、この活性成分は、適した方法で、例えば、経口的に、非経口的に、経肺的に、経鼻的に、舌下に、舌側に、頬側に、直腸に、経皮的に、結膜に、経耳的に、あるいは植込またはステントとして適用することができる。
【００７０】
本発明の化合物が医薬品としてヒトおよび動物に投与されるとき、それ自体で、または、例えば、0.1〜99.5％（より好ましくは、0.5〜90％）の活性成分を医薬的に許容される担体との組み合わせで含む医薬組成物として与えることができる。
【００７１】
選択した投与経路に関わらず、本発明の医薬組成物中で用いてもよい適した水和した形態および／または本発明の化合物は、当業者に既知の従来の方法によって、医薬的に許容される剤形に配合される。
【００７２】
本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投与レベルおよび投与の時間経過は、患者にとって毒性とならずに、特定の患者に所望の治療反応を得るのに効果的な活性成分の量、組成物および投与方法を得るように変化させてもよい。
【００７３】
別の態様によれば、本発明は、本発明の化合物を調製する方法を対象に含む。
【００７４】
第1の実施形態によれば、本発明は、上述の式（A）、（B）または（C）の化合物を調製する方法にも関し、上記方法は、一般式（A1）、（B1）または（C1）の中間化合物：
【化４】
2016511252.tif 000007
（式中、Z’は、−C（＝O）OHおよび−C（＝O）O−（C1−C6−アルキル）から選択される基を表す。）
を、式Ibの化合物：
【化５】
2016511252.tif 000008
と反応させ、それによって、任意選択の脱保護の後、式（A）、（B）または（C）の化合物を与えるステップを含む。
【００７５】
別の実施形態によれば、本発明は、上述の式（A）、（B）または（C）の化合物を調製する方法にも関し、上記方法は、式（A2）、（B2）または（C2）の中間化合物：
【化６】
2016511252.tif 000009
（式中、Q2は脱離基であり、好ましくはQ2はハロゲン原子である。）
を、一般式IIaの化合物：
【化７】
2016511252.tif 000010
（式中、Yは、例えば、ボロン酸基またはボロン酸基のエステルなど、カップリング反応において置換される置換基である。）
と反応させ、それによって、任意選択の脱保護の後、式（A）、（B）または（C）の化合物を与えるステップを含む。
【００７６】
別の実施形態によれば、本発明は、上述の式（A）、（B）または（C）の化合物を調製する方法にも関し、上記方法は、式（A3）、（B3）または（C3）の中間化合物：
【化８】
2016511252.tif 000011
（式中、Q1は脱離基、例えば、ハロゲン原子である。）
を、一般式（A4）、（B4）または（C4）の化合物：
【化９】
2016511252.tif 000012
と反応させ、それによって、任意選択の脱保護の後、一般式（A）、（B）または（C）：
【化１０】
2016511252.tif 000013
の化合物を与えるステップを含む。
【００７７】
別の実施形態によれば、本発明は、上述の式（A）、（B）または（C）の化合物を調製する方法にも関し、上記方法は、式（A5）、（B5）または（C5）の中間化合物：
【化１１】
2016511252.tif 000014
（式中、Q3は、任意選択で保護されたNH2−基である。）
を、一般式（A6）、（B6）または（C6）の化合物：
【化１２】
2016511252.tif 000015
と反応させ、それによって、イミンの還元後、および任意選択の脱保護の後、式（A）、（B）または（C）の化合物：
【化１３】
2016511252.tif 000016
を与えるステップを含む。
【００７８】
別の実施形態によれば、本発明は、式（A）、（B）または（C）の化合物を調製する方法に関し、上記方法は、式（A7）、（B7）または（C7）の中間化合物：
【化１４】
2016511252.tif 000017
（式中、R3’は脱離基である。）
を、式（A8）、（B8）または（C8）の化合物：
【化１５】
2016511252.tif 000018
（式中、Yは、例えば、水素原子またはボロン酸基またはボロン酸エステル基など、カップリング反応において置換される置換基である。）
と反応させ、それによって、式（A）、（B）または（C）の化合物：
【化１６】
2016511252.tif 000019
を与えるステップを含む。
【００７９】
別の態様によれば、本発明は、式（A）、（B）または（C）の本発明の化合物の調製において、特に、本明細書に記述される方法において有用な中間化合物を対象に含む。
【００８０】
特に、本発明は、式（A1）、（B1）および（C1）の中間化合物：
【化１７】
2016511252.tif 000020
（式中、Z’は、−C（＝O）OHおよび−C（＝O）O−（C1−C6−アルキル）から選択される基を表す。）
を対象に含む。
【００８１】
さらに別の態様によれば、本発明は、式（A2）、（B2）または（C2）の中間化合物：
【化１８】
2016511252.tif 000021
（式中、Q2は脱離基、好ましくはQ2はハロゲン原子である。）
を対象に含む。
【００８２】
別の態様によれば、本発明は、式（A3）、（B3）または（C3）の中間化合物：
【化１９】
2016511252.tif 000022
（式中、Q1は脱離基、例えば、ハロゲン原子である。）
を対象に含む。
【００８３】
別の態様によれば、本発明は、式（A5）、（B5）または（C5）の中間化合物：
【化２０】
2016511252.tif 000023
（式中、Q3は、任意選択で保護されたNH2−基である。）
を対象に含む。
【００８４】
別の態様によれば、本発明は、一般式（A7）、（B7）または（C7）の中間化合物：
【化２１】
2016511252.tif 000024
（式中、R3’は脱離基である。）
を対象に含む。
【００８５】
別の態様によれば、本発明は、上述の式（A）の化合物の調製のための、上述の式（A1）、（A2）、（A3）、（A4）、（A5）、（A6）、（A7）または（A8）の化合物の使用に関する。
【００８６】
別の態様によれば、本発明は、上述の式（B）の化合物の調製のための、上述の式（B1）、（B2）、（B3）、（B4）、（B5）、（B6）、（B7）または（B8）の化合物の使用に関する。
【００８７】
別の態様によれば、本発明は、上述の式（C）の化合物の調製のための、上述の式（C1）、（C2）、（C3）、（C4）、（C5）、（C6）、（C7）または（C8）の化合物の使用に関する。
【００８８】
実験の部
一般
以下の表は、この段落および実施例の部で用いられる略記を一覧にしたものである。
【００８９】
【表１】
2016511252.tif 000025
【００９０】
本発明の化合物の合成
式（A）、（B）または（C）の化合物は、スキームに示す通り合成することができて、式中、
Aは、
【化２２】
2016511252.tif 000026
を表し；
R3は、
【化２３】
2016511252.tif 000027
を表し；
R3’は脱離基を表し；
R5は、
【化２４】
2016511252.tif 000028
を表し；
Q1は、脱離基または任意選択で保護されたNH2−基を表し；
Q2は脱離基を表し；
式中、＊は、分子の残りの部分との上記基の結合点を示す。
【００９１】
典型的な脱離基の例には、塩素、臭素またはヨウ素原子などのハロゲン原子、または以下から選択される基が含まれるが、これらに限定されない：
メタンスルホニルオキシ、p−トルエンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ、（4−ブロモベンゼン）スルホニルオキシ、（4−ニトロベンゼン）スルホニルオキシ、（2−ニトロベンゼン）スルホニルオキシ、（4−イソプロピルベンゼン）スルホニルオキシ、（2，4，6−tri−イソプロピルベンゼン）スルホニルオキシ、（2，4，6−トリメチルベンゼン）スルホニルオキシ、（4−tert−ブチルベンゼン）スルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシおよび（4−メトキシベンゼン）スルホニルオキシ。
【化２５】
2016511252.tif 000029
【００９２】
スキーム
スキームは、合成中に、R3、R3’、R5、Q1、Q2およびAの変形形態を可能にする経路を例示している。R3、R3’、R5、Q1、Q2およびAの官能基部分は、合成の適した段階すべてにおいて変換することができる。
【００９３】
式Xの化合物は市販されていることがあり、または、当業者に既知の手順にしたがって、例えば、国際公開第2007／38314（A2）号パンフレットに記載の手順を適用して合成することもできる。
【００９４】
脱離基Q2を、当業者に既知の手順により、一般式X、VIまたはIIIの化合物に導入して、一般式IX、VまたはIIの化合物を得ることができる。実施例のように、ハロゲンは、N−ヨードスクシンイミド（NIS）、N−ブロモスクシンイミド（NBS）またはN−クロロスクシンイミド（NCS）などのハロゲン化試薬を、例えば、N，N−ジメチルホルムアミドまたは1−メチルピロリジン−2−オンなどの不活性溶媒中で、例えば、室温から溶媒の沸点までの範囲の温度で使用して導入することができる。
【００９５】
一般式I、IVまたはVIIIの化合物は、式II、VまたはIXの化合物のQ−基を持つ炭素原子に基Aを移すことができる、式Y-A（式中、Aは上で定義され、Yは適した官能基を表す。）の試薬との間のカップリング反応により、一般式II、VまたはIXの化合物から得ることができる。A-Y内のYに適した官能基の例には、ボロン酸A-B（OH）2、またはボロン酸のエステルA-B（OC1−C6−アルキル）2が含まれる。上記カップリング反応は、例えば、パラジウムベースの触媒など、例えば、酢酸パラジウム（II）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）クロリドまたは（1，1’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）などの適した触媒、および任意選択で、例えば、ホスフィンなど、例えば、P（oTol）3またはトリフェニルホスフィンなどの適した添加剤の存在下で、および任意選択で、例えば、炭酸カリウム、ナトリウム2−メチルプロパン−2−オラート、テトラブチルアンモニウムフルオリドまたは第三リン酸カリウムなどの適した塩基を用いて、例えば、テトラヒドロフランなどの適した溶媒中で実施される。
【００９６】
このようなカップリング反応の例は、“Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions”, Armin de Meijere （Editor）, Francois Diederich （Editor）September 2004, Wiley Interscience ISBN：978-3-527-30518-6と題する教科書に記載されている場合がある。
【００９７】
一般式I、II、IIIまたはVIIの化合物は、式IV、V、VIまたはVIIIの化合物のR3’を持つ炭素原子に基R3を移すことができる、式Y-R3（式中、R3は上で定義され、Yは適した官能基を表す。）の試薬を用いるカップリング反応により、一般式IV、V、VIまたはVIIIの化合物から得ることができる。カップリング反応での使用に適した官能基Yの例は、一般式II、VまたはIXの化合物からの一般式I、IVまたはVIIIの化合物の調製のために上に記載されている。
【００９８】
Y-R3内のYは、適した塩基、例えば、水素化ナトリウムにより、DMSOまたはテトラヒドロフランなどの適した溶媒中、室温から沸点までの範囲の温度で除去することができる酸性の水素を表してもよい。生じる求核試薬、フェノラートを用い、一般式IV、V、VIまたはVIIIの化合物内のR3’を置き換えてフェノールエーテルを付加し、一般式I、II、IIIまたはVIIの化合物を得ることができる。
【００９９】
フェノールエーテルを含む一般式I、II、IIIまたはVIIの化合物は、一般式IV、V、VIまたはVIIIの化合物（式中、R3’は、例えば、ヨウ素、臭素または塩素原子などの脱離基を表す。）から出発して、例えば、二酢酸銅（II）などの銅ベースの触媒など、適した触媒の存在下で、適した塩基、例えば、炭酸セシウムなどの存在下で、ウルマン型カップリング反応によって作ることもできる。任意選択で、N，N−ジメチルグリシンまたはピロリジン−2−イルホスホン酸水素フェニルなど、適したリガンドを加えることができる。
【０１００】
Q1が脱離基を表す場合、R5−CH2−基の導入は、式VII、VIII、IXまたはXの化合物内のQ1の求核置換によって実現することができて、すなわち、適した塩基、例えば、DIPEAなどの存在下、N，N−ジメチルホルムアミドまたは1−メチルピロリジン−2−オンなどの適した溶媒中、室温から溶媒の沸点までの範囲の温度で、適したアミンR5−CH2−NH2と反応させることによって一般式I、IV、VまたはVIのアミンが得られる。
【０１０１】
Q1が脱離基を表す場合、R5−CH2−基の導入は、カップリング反応において実現することもできて、ここで、式VII、VIII、IXまたはXの化合物内のQ1は、任意選択で、例えば、Pd2dba3およびBINAPなどの適した触媒の存在下で、任意選択で、例えば、ナトリウムtert−ブチラートなどの適した塩基を用いて、例えば、N，N−ジメチルホルムアミドまたは1−メチルピロリジン−2−オンなどの適した溶媒中、適したアミンR5−CH2−NH2と反応して、一般式I、IV、VまたはVIのアミンを与える。
【０１０２】
Q1が任意選択で保護されたNH2−基を表す場合、R5−CH2−基の導入は、NH2−基への脱保護の後、式O＝CHR5のアルデヒド、適した還元剤、例えば、トリス（アセタト−κO）（ヒドリド）ホウ酸ナトリウムまたはシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いる還元的アミノ化反応により、例えば、酢酸などの適した溶媒中、室温から溶媒の沸点までの範囲の反応温度で実現することができる。
【０１０３】
式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IXまたはXの化合物内の残基は、任意選択で修飾することができる。例えば、チオエーテルは、ジクロロメタンまたはアセトンなどの不活性溶媒中の3−クロロベンゼンカルボペルオキソ酸、オキソンまたはジメチルジオキシランなどの酸化試薬をそれぞれ用いて酸化することができる。酸化試薬と上述の化合物の化学量論比に応じて、スルホキシドまたはスルホン、あるいはその混合物が得られることになる。
【０１０４】
本発明の方法にしたがって生成される化合物および中間体は、精製が必要であることもある。有機化合物の精製は当業者に周知であり、同じ化合物を精製する方法がいくつかあることもある。場合によっては、精製が必要でないこともある。場合によっては、化合物は、結晶化によって精製されてもよい。場合によっては、不純物は、適した溶媒を用いて撹拌によって除去されてもよい。場合によっては、化合物は、クロマトグラフィー、特にフラッシュクロマトグラフィーによって、例えば、Separtis社のあらかじめ充填されたシリカゲルカートリッジ、例えば、Isolute（登録商標）Flashシリカゲル、または、Isolute（登録商標）Flash NH2シリカゲルなどを用い、Flashmaster II （Separtis）またはIsoleraシステム（Biotage）などの適したクロマトグラフシステム、および、例えば、ヘキサン／EtOAcまたはDCM／メタノールの勾配などの溶離液と組み合わせて精製されてもよい。場合によっては、化合物は、例えば、ダイオードアレイ検出器および／またはオンライン・エレクトロスプレーイオン化質量分析計を備えたWaters自動精製装置を用い、あらかじめ充填された適した逆相カラム、および、例えば、トリフルオロ酢酸、ギ酸またはアンモニア水などの添加剤を含んでもよい水およびアセトニトリルの勾配などの溶離液と組み合わせて、分取HPLCにより精製されてもよい。
【０１０５】
［実施例１］
N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化２６】
2016511252.tif 000030
2mLのジメチルスルホキシド中の128mg（900μmol）の3−フルオロ−4−メトキシフェノール溶液を36mg（900μmol）の水素化ナトリウムで処理し、室温で1時間撹拌した。次いで、中間体実施例1aにしたがって調製した68mg（150μmol）の4−｛6−ブロモ−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドを加え、混合物を130℃で1時間、120℃で一晩加熱して、HPLC精製後、17mg（20％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.43-0.50 (2H), 0.59-0.68 (2H), 2.11 (3H), 2.77 (1H), 3.35 (1H), 3.61 (2H), 3.83 (3H), 4.34 (2H), 4.63 (2H), 6.09 (1H), 7.02-7.09 (1H), 7.13-7.25 (2H), 7.30 (1H), 7.61-7.68 (1H), 7.77 (1H), 7.83 (1H), 7.91 (1H), 8.22 (1H)ppm.
【０１０６】
中間体実施例1a
4−｛6−ブロモ−8−［（オキセタン−3−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化２７】
2016511252.tif 000031
中間体実施例1bにしたがって調製した、150mLのTHF中の3000mg（6677μmol）の4−［6−ブロモ−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドの懸濁液に、873mg（1002μmol）の1−（オキセタン−3−イル）メタンアミンおよび2589mg（2003μmol）のDIPEAを加え、混合物を60℃で72時間加熱した。100mgの1−（オキセタン−3−イル）メタンアミンをさらに加えた後、60℃で8時間加熱し、溶媒を真空中で除去して残留物を酢酸エチルに取り、水で洗った。生成した沈殿物を濾過して取り出し、0.99g（33％）の表題化合物を得た。残りの水性相をDCMで再抽出し、合わせた有機相を蒸発させた。残留物をTHFと共に75℃で粉砕し、さらに1.65g（53％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.46-0.53 (2H), 0.61-0.69 (2H), 2.35 (3H), 2.75-2.85 (1H), 3.25 (1H), 3.54-3.69 (2H), 4.31 (2H), 4.62 (2H), 6.45 (1H), 7.36 (1H), 7.84 (1H), 7.90 (1H), 7.94 (1H), 8.12 (1H), 8.30 (1H) ppm.
【０１０７】
中間体実施例1b
4−［6−ブロモ−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化２８】
2016511252.tif 000032
中間体実施例1cにしたがって調製した、400mLのDMF中の12.5g（28.75mmol）の4−［6−ブロモ−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドの溶液に、53.03g（86.26mmol）の硫酸水素カリウム（ヒドロペルオキシスルホニル）オキシダニド（5：1：1：2）を加え、混合物を室温で一晩撹拌し、水系ワークアップの後、8.6g（60％）の表題化合物を得た（不純物は、4−［6−ブロモ−8−（メチルスルフィニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド）UPLC-MS：RT＝0.98分；m／z（ES＋）450.3［MH＋］；必要なMW＝449.3。
【０１０８】
中間体実施例1c
4−［6−ブロモ−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化２９】
2016511252.tif 000033
中間体実施例1dにしたがって調製した55.69g（150mmol）の6−ブロモ−3−ヨード−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン、中間体実施例1gにしたがって調製した68g（225mmol）のN−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド、11g（15mmol）の（1，1’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）、450mLの1M炭酸カリウム水溶液および632mLのテトラヒドロフランを含む混合物を60℃で12時間撹拌し、水系ワークアップの後、130gの未精製の生成物を得た。残留物をDCMと共に粉砕し、15.15g（24％）の表題化合物を得た。濾液をクロマトグラフィーにより精製し、さらに2.65g（3％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.47-0.54 (2H), 0.62-0.71 (2H), 2.36 (3H), 2.63 (3H), 2.77-2.85 (1H), 7.17 (1H), 7.40 (1H), 7.85 (1H), 7.90 (1H), 8.12 (1H), 8.31 (1H) ppm.
【０１０９】
中間体実施例1d
6−ブロモ−3−ヨード−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化３０】
2016511252.tif 000034
中間体実施例1eにしたがって調製した、3.8Lのジオキサン中の174g（432mmol）の6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジンの溶液に、30.28g（432mmol）のナトリウムメタンチオラートを加え、混合物を60℃で5日間撹拌した。さらに25gのナトリウムメタンチオラートを加え、混合物を80℃で2時間撹拌した。冷却後、溶液を4Lの水に注ぎ、水性相を酢酸エチルで抽出した。有機相を水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して蒸発させ、102g（64％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 6.79 (1H), 7.67 (1H)ppm.
【０１１０】
中間体実施例1e
6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化３１】
2016511252.tif 000035
中間体実施例1fにしたがって調製した156g（563mmol）の6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン、190g（1637mmol）のN−ヨードスクシンイミドおよび1.3Lのクロロホルムを含む混合物に5.5mLの濃HClを加え、懸濁液を70℃で一晩加熱した。沈殿物を濾過して取り出し、ジイソプロピルエーテルと共に粉砕し、119g（52％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 7.92 (1H), 8.00 (1H) ppm.
【０１１１】
中間体実施例1f
6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化３２】
2016511252.tif 000036
中間体実施例1gにしたがって調製した235g（931mmol）の4，6−ジブロモピリダジン−3−アミン、421mL（2792mmol）の2−ブロモ−1，1−ジエトキシエタン、2.93Lの水および227mLのTHFを含む混合物を125℃で時間、室温で一晩加熱した。固体のNaHCO3を加えて溶液を中和し、沈殿物を濾過して取り出し、水で洗って乾燥して、茶色がかった固体として156g（80％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 7.81 (1H), 8.40 (1H) ppm.
【０１１２】
中間体実施例1g
6，8−ジブロモイミダゾ［1，2−b］ピリダジン
【化３３】
2016511252.tif 000037
中間体実施例1hにしたがって調製した285g（1638mmol）の6−ブロモピリダジン−3−アミン、275g（3276mmol）のNaHCO3および2815mLのMeOHを含む混合物に、85mL（1638mmol）の臭素を室温で滴下し、これを室温で一晩撹拌した。34mL（655mmol）の臭素および55g（655mmol）のNaHCO3をさらに加えた後、混合物を再び一晩撹拌した。溶媒を約1000mLまで減少させ、混合物を5Lの水に注いだ。沈殿物を濾過して取り出し、水で洗って乾燥し、411g（99％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (CDCl3): δ= 6.14 (1H), 9.92 (2H) ppm.
【０１１３】
中間体実施例1h
6−ブロモピリダジン−3−アミン
【化３４】
2016511252.tif 000038
1.2Lの25％アンモニア水中の250g（1.05mol）の3，6−ジブロモピリダジンの溶液を11.7バールで一晩、100℃までオートクレーブ内で加熱した。冷却後、沈殿物を濾過して取り出し、水で洗って乾燥し、137g（75％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 6.58 (1H), 6.69 (2H), 7.41 (1H) ppm.
【０１１４】
中間体実施例1i
N−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド
【化３５】
2016511252.tif 000039
中間体実施例1jにしたがって調製した、23℃の2Lのジオキサン中の260g（1.02mol）の4−ブロモ−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドの溶液に、390gのビス（ピナコラト）ジボロン、19.5gの2−ジシクロヘキシルホスフィノ−2’，4’，6’−トリイソプロピルビフェニル、150gの酢酸カリウムおよび9.37gのトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0）を加え、混合物を6時間還流させた。23℃まで冷却した後、水および酢酸エチルを加え、混合物を15分間撹拌し、有機相を水で洗って硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して蒸発させた。残留物をクロマトグラフィーにより精製し、308g（56％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 0.59 (2H), 0.85 (2H), 1.33 (6H), 2.41 (3H), 2.87 (1H), 5.94 (1H), 7.28 (1H), 7.60 (1H), 7.63 (1H) ppm.
【０１１５】
中間体実施例1j
4−ブロモ−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化３６】
2016511252.tif 000040
23℃の8.4Lのジクロロメタン中の300g（1.4mol）の4−ブロモ−2−メチル安息香酸の撹拌した溶液に、79.6gのシクロプロパンアミンおよび320.9gのEDCを加えた。一晩撹拌した後、溶液を水で洗い、水性相をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して蒸発させた。残留した固体をジイソプロピルエーテルと共に粉砕し、濾過して洗い、真空中で乾燥して260g（73％）の表題化合物を得た。
【０１１６】
［実施例２］
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化３７】
2016511252.tif 000041
450mLのジメチルスルホキシド中の31.9g（199mmol）の2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノールの溶液を7.96g（199mmol）の水素化ナトリウムで処理し、室温で1時間撹拌した。次いで、中間体実施例2aにしたがって調製した16g（33.2mmol）の4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドを加え、混合物を130℃で一晩加熱した。冷却後、300mLの酢酸エチルを加え、有機相を水で洗った。有機相を蒸発させた後、残留物を200mLのEtOHと共に粉砕し、12.05g（65％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.47-0.53 (2H), 0.62-0.70 (2H), 2.11 (3H), 2.72 (2H), 2.80 (1H), 3.64 (2H), 3.92 (3H), 6.22 (1H), 7.12 (1H), 7.18 (1H), 7.27 (1H), 7.63 (1H), 7.72 (1H), 7.75-7.81 (1H), 7.97 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１１７】
中間体実施例2a
4−｛6−ブロモ−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミド
【化３８】
2016511252.tif 000042
中間体実施例2bにしたがって調製した127g（292mmol）の6−ブロモ−3−ヨード−N−（3，3，3−トリフルオロプロピル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−8−アミン、中間体実施例2cにしたがって調製した95.93g（438mmol）の［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］ボロン酸、23.8g（29mmol）の（1，1’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）ジクロロパラジウム（II）、438mLの1M炭酸カリウム水溶液および973mLのテトラヒドロフランを含む混合物を80℃で8時間撹拌し、さらに60℃で6日間撹拌した。酢酸エチルを分離した有機相に加え、混合物を水で洗った。ALLOXで濾過した後、有機相を蒸発させ、残留物を200mLのEtOHと共に粉砕して71.2g（51％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.48-0.58 (2H), 0.63-0.73 (2H), 2.38 (3H), 2.68 (2H), 2.83 (1H), 3.61 (2H), 6.49 (1H), 7.40 (1H), 7.87 (1H), 7.93 (1H), 7.96-8.04 (2H), 8.32 (1H) ppm.
【０１１８】
中間体実施例2b
6−ブロモ−3−ヨード−N−（3，3，3−トリフルオロプロピル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−8−アミン
【化３９】
2016511252.tif 000043
中間体実施例1eにしたがって調製した、800mLのTHF中の119g（295mmol）の6，8−ジブロモ−3−ヨードイミダゾ［1，2−b］ピリダジンの溶液に、66.8g（590.8mmol）の3，3，3−トリフルオロプロパン−1−アミンを加え、混合物を80℃で2時間、50℃で一晩撹拌した。溶液を蒸発させ、600mLの酢酸エチルを加え、混合物を水で洗った。有機相を乾燥および蒸発させ、127g（99％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 2.63 (2H), 3.55 (2H), 6.43 (1H), 7.59 (1H), 7.89-7.98 (1H) ppm.
【０１１９】
中間体実施例2c
［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］ボロン酸
【化４０】
2016511252.tif 000044
中間体実施例1iにしたがって調製した、アセトン（300mL）中のN−シクロプロピル−2−メチル−4−（4，4，5，5−テトラメチル−1，3，2−ジオキサボロラン−2−イル）ベンズアミド（20.2g、67.13mol）の溶液に室温で過ヨウ素酸ナトリウム（43.1g、201.40mol）および酢酸アンモニウム（134.26mol、134mLの1M水溶液）を加え、混合物を3時間撹拌した。さらに水を加え（120mL）、混合物を40℃でさらに2時間撹拌した。4NのHCl（32mL）を加えた後、有機相を真空中で除去し、残留物を酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、ワットマンフィルターで濾過して蒸発させた。残留物をトルエンに再溶解し、蒸発させて（2回）、14.59g（94.3％）の［4−（シクロプロピルカルバモイル）−3−メチルフェニル］ボロン酸を得た：
1H-NMR (300 MHz, d6-DMSO): δ =8.21 (1H), 8.04 (2H), 7.56 (2H), 7.17 (1H), 2.77 (1H), 2.25 (3H), 0.62 (2H), 0.47 (2H) ppm.
【０１２０】
［実施例３］
N−シクロプロピル−4−｛6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−［（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イルメチル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド
【化４１】
2016511252.tif 000045
中間体実施例3aにしたがって調製した、NMP（2mL）中の52mg（0.1mmol）のN−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミドの溶液に室温で1−（テトラヒドロ−2H−ピラン−4−イル）メタンアミン（35mg、0.3mmol）およびDIPEA（0.3mmol、51μL）を加え、混合物を110℃で72時間撹拌し、HPLC精製後、26.9mg（47％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.43-0.50 (2H), 0.58-0.69 (2H), 1.22 (2H), 1.62 (2H), 1.86-2.02 (1H), 2.04-2.11 (3H), 2.77 (1H), 3.19-3.30 (4H), 3.82 (2H), 3.89 (3H), 6.16 (1H), 7.03-7.13 (1H), 7.15 (1H), 7.20-7.30 (1H), 7.57-7.63 (1H), 7.69 (1H), 7.80 (1H), 7.93 (1H), 8.24 (1H) ppm.
【０１２１】
中間体実施例3a
N−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルホニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミド
【化４２】
2016511252.tif 000046
中間体実施例3bにしたがって調製した986mg（1986μmol）のN−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミドを中間体実施例1bと同様に変換し、ワークアップ後に1040mg（99％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.44-0.51 (2H), 0.61-0.69 (2H), 2.11 (3H), 2.73-2.84 (1H), 3.66 (3H), 3.91 (3H), 7.13-7.21 (1H), 7.23 (1H), 7.33-7.42 (1H), 7.64-7.70 (3H), 8.30 (1H), 8.40 (1H) ppm.
【０１２２】
中間体実施例3b
N−シクロプロピル−4−［6−（2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノキシ）−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−2−メチルベンズアミド
【化４３】
2016511252.tif 000047
中間体実施例1bにしたがって調製した3.1g（7428μmol）の4−［6−ブロモ−8−（メチルスルファニル）イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル］−N−シクロプロピル−2−メチルベンズアミドを、実施例2と同様に2，3−ジフルオロ−4−メトキシフェノールを用いて変換し、ワークアップおよび精製の後に1010mg（27％）の表題化合物を得た。
1H-NMR (DMSO-d6): δ= 0.44-0.50 (2H), 0.59-0.70 (2H), 2.09 (3H), 2.67 (3H), 2.73-2.83 (1H), 3.90 (3H), 7.06 (1H), 7.14 (1H), 7.19 (1H), 7.31 (1H), 7.58-7.65 (1H), 7.67 (1H), 8.09 (1H), 8.26 (1H)ppm.
【０１２３】
表1に記載の化合物の組は、驚いたことに、機能的アッセイ（紡錘体形成チェックポイントアッセイ）、抗増殖作用（HeLa細胞を用いる増殖アッセイ）、代謝安定性（ラット肝細胞内のインビトロ代謝安定性）および薬物−薬物相互作用ポテンシャル（肝酵素CYP3A4の阻害）において、Mps関連活性に関して全体的に優れたプロファイルを示す。不可逆的なCYP3A4の阻害の可能性をさらに評価するために、化合物の分配比を求めた。これは、酵素が不活性化する前にどれだけ多くの基質を代謝回転することができるかを示す。
【０１２４】
選択基準は、紡錘体形成チェックポイントアッセイにおける活性＜1.0nM、HeLa細胞を用いる増殖アッセイにおける活性＜25nM、ラット肝細胞内のインビトロ代謝安定性Fmax≧39％および肝酵素CYP3A4の阻害≧5μMならびに分配比≧10であった。
【０１２５】
表1において、参照は、国際公開第2012／032031（A1）号パンフレットの実施例80に開示されている参照化合物：（N−シクロプロピル−4−｛6−（3−フルオロフェノキシ）−8−［（3，3，3−トリフルオロプロピル）アミノ］イミダゾ［1，2−b］ピリダジン−3−イル｝−2−メチルベンズアミド）である。参照化合物は、本発明の化合物、特に式（B）の化合物に構造的に非常に似ている。構造的に似てはいるが、本発明の化合物は全体的に優れたプロファイルを示す。国際公開第2012／032031（A1）号パンフレットの教示からは、当業者は本発明の化合物の優れたプロファイルを得ることができない。
【０１２６】
【表２】
2016511252.tif 000048
【０１２７】
本発明の化合物の医薬組成物
また、本発明は、本発明の1つまたは複数の化合物を含む医薬組成物に関する。これらの組成物を利用して、それを必要とする患者に投与することにより、所望の薬理効果を得ることができる。本発明において、患者は、特定の状態または疾患のための治療を必要とする、ヒトを含む哺乳動物である。したがって、本発明は、医薬的に許容される担体および医薬として有効な量の本発明の化合物、またはその塩からなる医薬組成物を含む。医薬的に許容される担体は、好ましくは、担体に起因し得るどのような副作用も活性成分の有益な効果を損なわないように、活性成分の有効活性と調和する濃度で患者に対して比較的毒性がなく、無害な担体である。医薬として有効な量の化合物は、好ましくは、治療される特定の状態に対して結果を生じる、または影響を及ぼす量である。本発明の化合物は、当技術分野において周知の医薬的に許容される担体と共に、即時、遅延および時限放出製剤を含む任意の効果的な従来の投与単位形態を用いて、経口的に、非経口的に、局所的に、経鼻的に、点眼で、経耳的に、舌下に、直腸に、腟内でなど、投与することができる。
【０１２８】
経口投与については、化合物は、カプセル剤、丸剤、錠剤、トローチ、ロゼンジ、溶解物、粉末、溶液、懸濁液または乳剤などの固体または液体製剤に処方することができて、医薬組成物の製造のための当技術分野で既知の方法にしたがって調製してもよい。固体の単位投与形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤、ならびに、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウムおよびコーンスターチなどの不活性充填剤を含む、通常のハードシェルまたはソフトシェルゼラチンタイプであることができるカプセル剤にすることができる。
【０１２９】
別の実施形態では、本発明の化合物は、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤と組み合わせた、ラクトース、スクロースおよびコーンスターチなどの従来の錠剤基剤、バレイショデンプン、アルギン酸、コーンスターチおよびグアーガム、トラガカントゴム、アカシアなどの投与後に錠剤の崩壊および溶解を助けるための崩壊剤、錠剤の造粒の流動を改善し、錠剤の型および抜き型の表面に錠剤物質が付着しないようにするための滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸、あるいはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸亜鉛、錠剤の美的質を高め、患者により受け入れられやすくするためのペパーミント、冬緑油またはサクランボ香味料などの色素、着色剤および香味料を用いて錠剤にしてもよい。経口液体剤形での使用に適した賦形剤には、二リン酸カルシウム、ならびに、水およびアルコール、例えば、エタノール、ベンジルアルコールおよびポリエチレンアルコールなどの希釈剤が、医薬的に許容される界面活性剤、懸濁剤または乳化剤の添加あり、またはなしで含まれる。その他の種々の物質が、コーティングとして、または、そうでなければ、投与単位の物理的な形態を変更するために存在してもよい。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、セラック、砂糖またはその両方でコーティングしてもよい。
【０１３０】
分散性粉末および顆粒は、水性懸濁液の調製に適している。これらは、活性成分を、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および1つまたは複数の保存料との混合物で提供する。適した分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、既に前述のものによって例示されている。別の賦形剤、例えば、上述の甘味剤、香味料および着色剤が存在してもよい。
【０１３１】
また、本発明の医薬組成物は、水中油型エマルションの形態であってもよい。油性相は、液体パラフィンなどの植物油、または植物油の混合物でもよい。適した乳化剤は、（1）アラビアゴムおよびトラガカントゴムなどの天然に存在するゴム、（2）大豆およびレシチンなどの天然に存在するリン脂質、（3）脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレアート、（4）上記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートでもよい。また、乳剤は、甘味剤および香味料を含んでもよい。
【０１３２】
油性懸濁液は、活性成分を、例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油などの植物油に、あるいは液体パラフィンなどの鉱油に懸濁させることによって処方されてもよい。油性懸濁液は、例えば、蜜ろう、硬パラフィンまたはセチルアルコールなどの粘稠化剤を含んでもよい。また、懸濁液は、1つまたは複数の保存料、例えば、エチルまたはn−プロピルp−ヒドロキシベンゾアート、1つまたは複数の着色剤、1つまたは複数の香味料、および、スクロースまたはサッカリンなどの1つまたは複数の甘味剤を含んでもよい。
【０１３３】
シロップおよびエリキシルは、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味剤と共に処方されてもよい。また、このような配合物は、粘滑剤、ならびにメチルおよびプロピルパラベンなどの保存料、ならびに香味料および着色剤を含んでもよい。
【０１３４】
また、本発明の化合物は、石けんまたは洗浄剤などの医薬的に許容される界面活性剤、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロースなどの懸濁剤、あるいは、乳化剤および他の医薬アジュバントの添加あり、またはなしで、滅菌液、あるいは、水、食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖液、エタノール、イソプロパノールまたはヘキサデシルアルコールなどのアルコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコール、2，2−ジメチル−1，1−ジオキソラン−4−メタノールなどのグリセロールケタール、ポリ（エチレングリコール）400などのエーテル、油、脂肪酸、脂肪酸エステルまたは脂肪酸グリセリド、またはアセチル化脂肪酸グリセリドなどの液体の混合物にすることができる医薬担体を伴う、好ましくは、生理学的に許容される希釈剤中の注射可能な化合物の調剤として、非経口的に、すなわち、皮下に、静脈内に、眼内に、滑膜内に、筋肉内に、または腹腔内に投与されてもよい。
【０１３５】
本発明の非経口製剤中に用いることができる油の実例は、石油、動物、野菜または合成起源の油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ペトロラタムおよび鉱油である。適した脂肪酸には、オレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸およびミリスチン酸が含まれる。適した脂肪酸エステルは、例えば、エチルオレアートおよびイソプロピルミリスタートである。適した石けんには、脂肪酸のアルカリ金属塩、アンモニウム塩およびトリエタノールアミン塩が含まれ、適した洗浄剤には、カチオン性洗浄剤、例えば、ハロゲン化ジメチルジアルキルアンモニウム、ハロゲン化アルキルピリジニウムおよびアルキルアミンアセタート、アニオン性洗浄剤、例えば、アルキル、アリールおよびオレフィンスルホナート、アルキル、オレフィン、エーテルおよびモノグリセリドスルファートならびにスルホサクシネート、非イオン性洗浄剤、例えば、脂肪族アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミドおよびポリ（オキシエチレン−オキシプロピレン）またはエチレンオキシドまたはプロピレンオキシドコポリマー、両性洗浄剤、例えば、アルキル−β−アミノプロピオナートおよび2−アルキルイミダゾリンの四級アンモニウム塩、ならびに混合物が含まれる。
【０１３６】
本発明の非経口組成物は、通常、溶液中に重量で約0.5％から約25％の活性成分を含むことになる。また、保存料および緩衝液は、有利に用いられてもよい。注入部位での刺激を最小限に抑えるため、または除くために、このような組成物は、好ましくは約12から約17の親水性・親油性バランス（HLB）を有する非イオン性界面活性剤を含んでもよい。このような配合物中の界面活性剤の量は、好ましくは、重量で約5％から約15％の範囲である。界面活性剤は、上述のHLBを有する単一の構成成分にすることも、または、所望のHLBを有する2つ以上の構成成分の混合物にすることもできる。
【０１３７】
非経口製剤中で用いられる界面活性剤の実例は、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルのクラス、例えば、ソルビタンモノオレアート、および、プロピレンオキシドとプロピレングリコールの縮合によって生成される、エチレンオキシドと疎水性塩基の高分子量付加物である。
【０１３８】
医薬組成物は、注射可能な滅菌水性懸濁液の形態であってもよい。このような懸濁液は、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴム；レシチンなどの天然に存在するリン脂質、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物でもよい分散剤または湿潤剤、例えば、ポリオキシエチレンステアラート、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレアートなどのエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートなど、適した分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、既知の方法によって処方されてもよい。
【０１３９】
また、注射可能な滅菌製剤は、毒性のない非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、注射可能な滅菌溶液または懸濁液でもよい。用いられる希釈剤および溶媒は、例えば、水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液および等張性グルコース溶液でもよい。さらに、滅菌固定油は、従来、溶媒または懸濁媒体として用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性の固定油が用いられてもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の調製において用いることができる。
【０１４０】
また、本発明の組成物は、薬剤の直腸投与のための坐剤の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、薬剤を、常温では固体だが、直腸温では液体であり、したがって、直腸内で溶けて薬剤を放出する適した非刺激性の賦形剤と混合することによって調製することができる。このような物質は、例えば、カカオバターおよびポリエチレングリコールである。
【０１４１】
本発明の方法において用いられる別の配合物では、経皮送達デバイス（「パッチ」）を用いる。このような経皮パッチを用いて、本発明の化合物を制御された量で連続的または非連続的に注入してもよい。医薬品を送達するための経皮パッチの構成および使用は、当技術分野において周知である（例えば、米国特許第5023252号明細書（1991年6月11日発行）（参照により本明細書に組み込まれる。）を参照）。このようなパッチは、医薬品の連続的送達、パルス状送達またはオンデマンド送達のために構成されてもよい。
【０１４２】
非経口投与のための制御放出配合物には、当技術分野において既知のリポソーム、ポリマー微小球およびポリマーゲル配合物が含まれる。
【０１４３】
機械的な送達デバイスを介して医薬組成物を患者に導入することが望ましいか、または必要なことがある。医薬品を送達するための機械的な送達デバイスの構成および使用は、当技術分野において周知である。例えば、薬剤を脳に直接投与する直接法は、通常、血液脳関門を迂回するために患者の脳室系に薬剤送達カテーテルを留置するものである。身体の特定の解剖学的領域への薬剤の輸送に用いられるこのような埋め込み型送達システムの1つが、米国特許第5011472号明細書（1991年4月30日発行）に記載されている。
【０１４４】
また、本発明の組成物は、必要に応じて、または所望の通り、一般に担体または希釈剤と呼ばれる医薬的に許容されるその他の従来の配合成分を含むことができる。適切な剤形中のこのような組成物を調製するための従来の手順を利用することができる。
【０１４５】
このような成分および手順には、以下の参考文献に記載されているものが含まれる。Powell, M.F. et al., ”Compendium of Excipients for Parenteral Formulations” PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1998, 52（5）, 238-311； Strickley, R.G ”Parenteral Formulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in the United States （1999）−Part-1” PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999, 53（6）, 324-349； and Nema, S. et al., ”Excipients and Their Use in Injectable Products” PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997, 51（4）, 166-171（これらの開示はそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１４６】
組成物をその所期の投与経路のために処方する目的で適宜用いることができる一般に用いられる医薬成分には、以下が含まれる。
酸性化剤（例には、酢酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、硝酸が含まれるが、これらに限定されない。）；
アルカリ化剤（例には、アンモニア溶液、炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、水酸化カリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロラミンが含まれるが、これらに限定されない。）；
吸着剤（例には、粉末セルロースおよび活性炭が含まれるが、これらに限定されない。）；
エアロゾル噴霧剤（例には、二酸化炭素、CCl2F2、F2ClC−CClF2およびCClF3が含まれるが、これらに限定されない。）
空気置換剤（例には、窒素およびアルゴンが含まれるが、これらに限定されない。）；
抗真菌保存料（例には、安息香酸、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない。）；
抗菌保存料（例には、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀およびチメロサールが含まれるが、これらに限定されない。）；
酸化防止剤（例には、アスコルビン酸、アスコルビルパルミタート、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、プロピルガラート、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない。）；
結合物質（例には、ブロックポリマー、天然および合成ゴム、ポリアクリレート、ポリウレタン、シリコーン、ポリシロキサンおよびスチレン−ブタジエンコポリマーが含まれるが、これらに限定されない。）；
緩衝剤（例には、メタリン酸カリウム、リン酸ジカリウム、酢酸ナトリウム、無水クエン酸ナトリウムおよびクエン酸ナトリウム二水和物が含まれるが、これらに限定されない。）
運搬剤（例には、アカシアシロップ、芳香性シロップ、芳香性エリキシル、チェリーシロップ、ココアシロップ、オレンジシロップ、シロップ、トウモロコシ油、鉱油、ピーナッツ油、ゴマ油、静菌性塩化ナトリウム注射液および静菌性注射用水が含まれるが、これらに限定されない。）
キレート剤（例には、エデト酸二ナトリウムおよびエデト酸が含まれるが、これらに限定されない。）
着色料（例には、FD&C Red no.3、FD&C Red no.20、FD&C Yellow no.6、FD&C Blue no.2、D&C Green no.5、D&C Orange no.5、D&C Red no.8、カラメルおよび弁柄が含まれるが、これらに限定されない。）；
清澄剤（例には、ベントナイトが含まれるが、これに限定されない。）；
乳化剤（例には、アカシア、セトマクロゴール、セチルアルコール、グリセリルモノステアラート、レシチン、ソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレン50モノステアラートが含まれるが、これらに限定されない。）；
封入剤（例には、ゼラチンおよび酢酸フタル酸セルロースが含まれるが、これらに限定されない。）
香味料（例には、アニス油、桂皮油、ココア、メントール、オレンジ油、ハッカ油およびバニリンが含まれるが、これらに限定されない。）；
湿潤剤（例には、グリセロール、プロピレングリコールおよびソルビトールが含まれるが、これらに限定されない。）；
研和剤（例には、鉱油およびグリセリンが含まれるが、これらに限定されない。）；
油（例には、落花生油、鉱油、オリーブ油、ピーナッツ油、ゴマ油および植物油が含まれるが、これらに限定されない。）；
軟膏基剤（例には、ラノリン、親水性軟膏、ポリエチレングリコール軟膏、ペトロラタム、親水性ペトロラタム、白色軟膏、黄色軟膏およびバラ香水軟膏が含まれるが、これらに限定されない。）；
浸透促進剤（経皮送達）（例には、モノヒドロキシまたはポリヒドロキシアルコール、一価または多価アルコール、飽和または不飽和脂肪族アルコール、飽和または不飽和脂肪酸エステル、飽和または不飽和ジカルボン酸、精油、ホスファチジル誘導体、セファリン、テルペン、アミド、エーテル、ケトンおよび尿素が含まれるが、これらに限定されない。）
可塑剤（例には、ジエチルフタラートおよびグリセロールが含まれるが、これらに限定されない。）；
溶媒（例には、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、グリセロール、イソプロパノール、鉱油、オレイン酸、ピーナッツ油、精製水、注射用水、滅菌注射用水および滅菌灌注用水が含まれるが、これらに限定されない。）；
硬化剤（例には、セチルアルコール、セチルエステルワックス、ミクロクリスタリンワックス、パラフィン、ステアリルアルコール、白ろうおよび黄ろうが含まれるが、これらに限定されない。）；
坐剤基剤（例には、カカオバターおよびポリエチレングリコール（混合物）が含まれるが、これらに限定されない。）；
界面活性剤（例には、塩化ベンザルコニウム、ノノキシノール10、オクトキシノール9、ポリソルベート80、ラウリル硫酸ナトリウムおよびソルビタンモノパルミタートが含まれるが、これらに限定されない。）；
懸濁剤（例には、寒天、ベントナイト、カルボマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カオリン、メチルセルロース、トラガントおよびveegumが含まれるが、これらに限定されない。）；
甘味剤（例には、アスパルテーム、デキストロース、グリセロール、マンニトール、プロピレングリコール、サッカリンナトリウム、ソルビトールおよびスクロースが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤抗付着剤（例には、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤結合剤（例には、アカシア、アルギン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、圧縮性糖、エチルセルロース、ゼラチン、液体グルコース、メチルセルロース、非架橋ポリビニルピロリドンおよびアルファ化デンプンが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤およびカプセル剤希釈剤（例には、第二リン酸カルシウム、カオリン、ラクトース、マンニトール、微結晶セルロース、粉末セルロース、沈降炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ソルビトールおよびデンプンが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤コーティング剤（例には、液体グルコース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、酢酸フタル酸セルロースおよびセラックが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤直接圧縮賦形剤（例には、第二リン酸カルシウムが含まれるが、これに限定されない。）；
錠剤崩壊剤（例には、アルギン酸、カルボキシメチルセルロースカルシウム、微結晶セルロース、ポラクリリンカリウム、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウムおよびデンプンが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤滑剤（例には、コロイド状シリカ、コーンスターチおよびタルクが含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤滑沢剤（例には、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、ステアリン酸およびステアリン酸亜鉛が含まれるが、これらに限定されない。）；
錠剤／カプセル剤不透明化剤（例には、二酸化チタンが含まれるが、これに限定されない。）；
錠剤艶出し剤（例には、カルナウバろうおよび白ろうが含まれるが、これらに限定されない。）；
粘稠化剤（例には、蜜ろう、セチルアルコールおよびパラフィンが含まれるが、これらに限定されない。）；
等張化剤（例には、デキストロースおよび塩化ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない。）；
粘度増加剤（例には、アルギン酸、ベントナイト、カルボマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウムおよびトラガントが含まれるが、これらに限定されない。）；および
湿潤剤（例には、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、レシチン、ソルビトールモノオレアート、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート、およびポリオキシエチレンステアラートが含まれるが、これらに限定されない）。
【０１４７】
本発明による医薬組成物は、以下の通り説明することができる。
滅菌静脈注射用溶液：所望の本発明の化合物の5mg／mL溶液は、注射可能な滅菌水を用いて作ることができて、必要であればpHを調整する。溶液を、投与のために、滅菌5％デキストロースで1〜2mg／mLに希釈し、静脈内注入で約60分にわたって投与する。
【０１４８】
静脈内投与用凍結乾燥粉末：滅菌製剤は、（i）凍結乾燥粉末として100〜1000mgの所望の本発明の化合物、（ii）32〜327mg／mLのクエン酸ナトリウム、および（iii）300〜3000mgのデキストラン40を用いて調製することができる。配合物は、注射可能な滅菌食塩水または5％デキストロースを用いて10〜20mg／mLの濃度に再構成し、これを、食塩水または5％デキストロースを用いて0.2〜0.4mg／mLまでさらに希釈して、急速静注により、または静脈内注入により15〜60分にわたって投与する。
【０１４９】
筋肉内懸濁液：以下の溶液または懸濁液を、筋肉内注射用に調製することができる。
50mg／mLの所望の本発明の非水溶性化合物
5mg／mLのナトリウムカルボキシメチルセルロース
4mg／mLのTWEEN 80
9mg／mLの塩化ナトリウム
9mg／mLのベンジルアルコール
【０１５０】
ハードシェルカプセル剤：多数の単位カプセルを、標準的なツーピースハードゼラチンカプセルそれぞれに、100mgの粉末活性成分、150mgのラクトース、50mgのセルロースおよび6mgのステアリン酸マグネシウムを充填することにより調製する。
【０１５１】
ソフトゼラチンカプセル剤：大豆油、綿実油またはオリーブ油などの可消化油中の活性成分の混合物を調製し、容積式ポンプにより溶融したゼラチンに注入して、100mgの活性成分を含むソフトゼラチンカプセル剤を形成する。カプセルを洗浄して乾燥する。活性成分をポリエチレングリコール、グリセリンおよびソルビトールの混合物に溶解して、水混和性医薬混合物を調製することができる。
【０１５２】
錠剤：多数の錠剤を、従来の手順によって、投与単位が100mgの活性成分、0.2mgのコロイド状二酸化ケイ素、5mgのステアリン酸マグネシウム、275mgの微結晶セルロース、11mgのデンプンおよび98.8mgのラクトースとなるように調製する。適切な水性および非水性コーティングを適用して、嗜好性を高め、見栄え（elegance）および安定性を改善し、または吸収を遅延させてもよい。
【０１５３】
即時放出錠剤／カプセル剤：これらは、従来および新規の工程によって作られる固体経口剤形である。これらの単位は、薬剤の即時溶解および送達のために、経口的に水なしで服用される。活性成分は、砂糖、ゼラチン、ペクチンおよび甘味料などの成分を含む液体中で混合される。これらの液体は、凍結乾燥および固体抽出技術によって、固体錠剤またはカプレットに固化される。薬剤化合物を、粘弾性および熱弾性の糖およびポリマー、または発泡性成分と共に圧縮して、水を必要としない即時放出のための多孔性マトリックスを製造してもよい。
【０１５４】
組み合わせ治療法
本発明の化合物は、唯一の医薬品として、または、組み合わせによって容認できない副作用が引き起こされない場合は1つまたは複数の他の医薬品と組み合わせて投与することができる。本発明は、また、このような組み合わせに関する。例えば、本発明の化合物は、既知の抗過剰増殖剤または他の適応症の薬剤など、ならびにこれらの混合物および組み合わせと組み合わせることができる。他の適応症の薬剤には、抗血管新生剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、DNA挿入抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的反応修飾剤、または抗ホルモン剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５５】
追加の医薬品は、131I-chTNT、アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アルグラビン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、バシリキシマブ、BAY 80-6946、BAY 1000394、BAY 86-9766（RDEA 119)、ベロテカン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブセレリン、ブスルファン、カバジタキセル、ホリナートカルシウム、レボホリナートカルシウム、カペシタビン、カルボプラチン、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セレコキシブ、セルモロイキン、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デスロレリン、塩化ジブロスピジウム、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン＋エストロン、エクリズマブ、エドレコロマブ、エリプチニウムアセタート、エルトロンボパグ、エンドスタチン、エノシタビン、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エプタプラチン、エリブリン、エルロチニブ、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、ファドロゾール、フィルグラスチム、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、ホルメスタン、ホテムスチン、フルベストラント、硝酸ガリウム、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、glutoxim、ゴセレリン、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリン、ヒドロキシカルバミド、I-125シード、イバンドロン酸、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、インプロスルファン、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、イピリムマブ、イリノテカン、イキサベピロン、ランレオチド、ラパチニブ、レナリ
ドミド、レノグラスチム、レンチナン、レトロゾール、リュープロレリン、レバミソール、リスリド、ロバプラチン、ロムスチン、ロニダミン、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、アミノレブリン酸メチル、メチルテストステロン、ミファムルチド、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ネダプラチン、ネララビン、ニロチニブ、ニルタミド、ニモツズマブ、ニムスチン、ニトラクリン、オファツムマブ、オメプラゾール、オプレルベキン、オキサリプラチン、p53遺伝子治療、パクリタキセル、パリフェルミン、パラジウム103シード、パミドロン酸、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガスパルガーゼ、PEG−エポエチンベータ(メトキシPEG−エポエチンベータ)、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ−2b、ペメトレキセド、ペンタゾシン、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピシバニール、ピラルビシン、プレリキサフォル、プリカマイシン、ポリグルサム、リン酸ポリエストラジオール、ポリサッカライドK、ポルフィマーナトリウム、プララトレキサート、プレドニムスチン、プロカルバジン、キナゴリド、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラニムスチン、ラゾキサン、レゴラフェニブ、リセドロン酸、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、サルグラモスチム、シプロイセルT、シゾフィラン、ソブゾキサン、グリシジダゾールナトリウム、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タミバロテン、タモキシフェン、タソネルミン、テセロイキン、テガフール、テガフール＋ギメラシル＋オテラシル、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、チオグアニン、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラベクテジン、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トリロスタン、トリプトレリン、トロホスファミド、トリプトファン、ウベニメクス、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ボリノスタット、ボロゾール、イットリウムー90ガラスマイクロスフェア類、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、ゾレドロン酸、ゾルビシンにすることができる。
【０１５６】
好ましくは、追加の医薬品は、以下から選択される：アフィニトール、アルデスロイキン、アレンドロン酸、alfaferone、アリトレチノイン、アロプリノール、aloprim、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンゼメット、アラネスプ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アロマシン、5−アザシチジン、アザチオプリン、BCGまたはタイスBCG、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロクスウリジン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、キャンパス、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェゾン、セルモロイキン、セルビジン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、DaunoXome、デカドロン、デカドロンホスファート、デルエストロゲン、デニロイキンジフチトクス、デポ・メドロール、デスロレリン、デキスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、DW-166HC、エリガード、エリテック、エレンス、イメンド、エピルビシン、エポエチンアルファ、エポゲン、エプタプラチン、ergamisol、エストラース、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、ethyol、エチドロン酸、etopophos、エトポシド、ファドロゾール、farston、フィルグラスチム、フィナステリド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、5−フルオロデオキシウリジンリン酸、5−フルオロウラシル（5-FU）、フルオキシメステロン、フルタミド、ホルメスタン、フォステアビン、ホテムスチン、フルベストラント、ガンマガード、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、ギリアデル、ゴセレリン、グラニセトロン塩酸塩、ヒストレリン、ハイカムチン、ハイドロコートン、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ2、インターフェロンアルファ−2A、インターフェロンアルフ
ァ−2B、インターフェロンアルファ−n1、インターフェロンアルファ−n3、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ−1a、インターロイキン−2、イントロンA、イレッサ、イリノテカン、カイトリル、硫酸レンチナン、レトロゾール、ロイコボリン、リュープロリド、酢酸リュープロリド、レバミソール、レボホリン酸カルシウム塩、levothroid、levoxyl、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテート、メルファラン、メネスト、6−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、metvix、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、Modrenal、Myocet、ネダプラチン、neulasta、neumega、ニューポジェン、ニルタミド、ノルバデックス、NSC-631570、OCT-43、オクトレオチド、オンダンセトロン塩酸塩、orapred、オキサリプラチン、パクリタキセル、pediapred、ペガスパルガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、RDEA 119、レビフ、レニウム−186エチドロネート、リツキシマブ、ロフェロン−A、ロムルチド、サラジェン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソルメドロール、スパルホス酸、幹細胞治療法、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウム−89、シンスロイド、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、テストラクトン、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、testred、チオグアニン、チオテパ、サイロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、trexall、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、トリプトレリンアセタート、トリプトレリンパモ酸塩、UFT、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、virulizin、zinecard、ジノスタチンスチマラマー、ゾフラン、ABI-007、アコルビフェン、アクティミューン、affinitak、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン、アトラセンタン、ソラフェニブ（BAY43-9006）、アバスチン、CCI-779、CDC-501、セレブレックス、セツキシマブ、クリスナトール、酢酸シプロテロン、デシタビン、DN-101、ドキソルビシン−MTC、dSLIM、デュタステリド、エドテカリン、エフロルニチン、エクサテカン、フェンレチニド、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリンヒドロゲルインプラント、ホルミウム−166 DOTMP、イバンドロン酸、インターフェロンガンマ、イントロンPEG、イキサベピロン、キーホールリンペットヘモシアニン、L-651582、ランレオチド、ラソフォキシフェン、libra、ロナファーニブ、ミプロキシフェン、ミノドロン酸、MS-209、リポソームMTP-PE、MX-6、ナファレリン、ネモルビシン、ネオバスタット、ノラトレキセド、オブリメルセン、onco-TCS、osidem、ポリグルタミン酸パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、PN-401、QS-21、クアゼパム、R-1549、ラロキシフェン、ランピルナーゼ、13-cis−レチノイン酸、サトラプラチン、セオカルシトール、T-138067、タルセバ、タクサオプレキシン、チモシンアルファ1、チアゾフリン、ティピファニブ、チラパザミン、TLK-286、トレミフェン、TransMID-107R、バルスポダール、バプレオチド、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Z-100およびゾレドロン酸、またはこれらの組み合わせ。
【０１５７】
組成物に加えることができる任意選択の抗過剰増殖剤には、Merck Index（11th Edition，1996）の癌の化学療法投薬計画に記載されている化合物（参照により本明細書に組み込まれる。）、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エポチロン、エポチロン誘導体、エトポシド、5−フルオロウラシル、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、6−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンC、ミトキサントロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、チオグアニン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５８】
本発明の組成物との使用に適した他の抗過剰増殖剤には、Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics （Ninth Edition）, editor Molinoff et al., publ. by McGraw-Hill, p.1225-1287（1996）（参照により本明細書に組み込まれる。）中の腫瘍性疾患の治療において使用されることが認められている化合物、アミノグルテチミド、L−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、5−アザシチジンクラドリビン、ブスルファン、ジエチルスチルベストロール、2’，2’−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、エリスロヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、5−フルオロデオキシウリジン、5−フルオロデオキシウリジンリン酸、リン酸フルダラビン、フルオキシメステロン、フルタミド、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、インターフェロン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテート、メルファラン、ミトタン、パクリタキセル、ペントスタチン、N−ホスホノアセチル−L−アスパラギン酸（PALA）、プリカマイシン、セムスチン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオテパ、トリメチルメラミン、ウリジンおよびビノレルビンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５９】
本発明の組成物との使用に適した他の抗過剰増殖剤には、エポチロンおよびその誘導体、イリノテカン、ラロキシフェンおよびトポテカンなど、他の抗癌剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６０】
本発明の化合物は、タンパク質療法と組み合わせて投与されてもよい。癌または他の血管新生障害の治療および本発明の組成物との使用に適したこのようなタンパク質療法剤には、インターフェロン（例えば、インターフェロンアルファ、ベータまたはガンマ）超アゴニスト（supraagonistic）モノクローナル抗体、Tuebingen、TRP-1タンパク質ワクチン、Colostrinin、抗FAP抗体、YH-16、ゲムツズマブ、インフリキシマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、リツキシマブ、チモシンアルファ1、ベバシズマブ、メカセルミン、メカセルミンリンファバート、オプレルベキン、ナタリズマブ、rhMBL、MFE-CP1＋ZD-2767-P、ABT-828、ErbB2特異的イムノトキシン、SGN-35、MT-103、リンファバート、AS-1402、B43−ゲニステイン、L-19ベースの放射免疫療法剤、AC-9301、NY-ESO-1ワクチン、IMC-1C11、CT-322、rhCC10、r（m）CRP、MORAb-009、アビスクミン、MDX-1307、Her-2ワクチン、APC-8024、NGR-hTNF、rhH1.3、IGN-311、エンドスタチン、ボロシキシマブ、PRO-1762、レクサツムマブ、SGN-40、ペルツズマブ、EMD-273063、L19-IL-2融合タンパク質、PRX-321、CNTO-328、MDX-214、チガポチド、CAT-3888、ラベツズマブ、アルファ粒子放出放射性同位体結合リンツズマブ、EM-1421、超急性ワクチン、ツコツズマブ・セルモロイキン、ガリキシマブ、HPV-16-E7、ジャベリン−前立腺癌、ジャベリン−黒色腫、NY-ESO-1ワクチン、EGFワクチン、CYT-004-MelQbG10、WT1ペプチド、オレゴボマブ、オファツムマブ、ザルツムマブ、シントレデキン・ベスドトクス、WX-G250、アルブフェロン、アフリベルセプト、デノスマブ、ワクチン、CTP-37、efungumabまたは131I-chTNT-1／Bが含まれるが、これらに限定されない。タンパク質療法剤として有用なモノクローナル抗体には、ムロモナブ−CD3、アブシキシマブ、エドレコロマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、イブリツモマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、エファリズマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、ムロモナブ−CD3、リツキシマブ、ダクリズマブ、トラスツズマブ、パリビズマブ、バシリキシマブおよびインフリキシマブが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６１】
本発明の化合物は、抗体（例えば、アバスチン、リツキサン、アービタックス、ハーセプチン）または組換えタンパク質など、生物学的治療薬と組み合わせてもよい。
【０１６２】
本発明の化合物は、抗血管新生剤、例えば、アバスチン、アキシチニブ、DAST、recentin、ソラフェニブまたはスニチニブなどと組み合わせてもよい。プロテアソームの阻害剤またはmTOR阻害剤、あるいは抗ホルモン薬またはステロイド系の代謝酵素阻害剤との組み合わせも可能である。
【０１６３】
一般に、本発明の化合物または組成物と組み合わせた細胞傷害性薬剤および／または細胞分裂阻害剤の使用は、次の働きをする。
（1）いずれかの薬剤単独での投与と比較して、腫瘍の増殖の抑制において、より良い効果をもたらし、または、さらには腫瘍を消失させる、
（2）投与される化学療法剤の量がより少ない投与を可能にする、
（3）単一薬剤の化学療法および特定の他の組み合わせ治療法で観察されるよりも有害な薬理学的合併症が少なく、患者が良好な耐容性を示す化学療法治療を可能にする、
（4）哺乳動物、特にヒトにおいてより広範囲のさまざまな癌のタイプの治療を可能にする、
（5）治療した患者の中でより高い奏効率を可能にする、
（6）標準的な化学療法治療と比較して、治療した患者の中でより長い生存期間を可能にする、
（7）腫瘍進行の時間がより長くなる、および／または
（8）他の癌薬剤と組み合わせると拮抗作用を生じる既知の例と比較して、単独で使用される薬剤と少なくとも同様の効果および認容性の結果が得られる。
【０１６４】
放射線に対して細胞を感作する方法
本発明の異なる実施形態において、本発明の化合物を用いて、放射線に対して細胞を感作してもよい。すなわち、細胞の放射線処理前に本発明の化合物を用いて細胞を処理することにより、本発明の化合物を用いた処理を何も行わなかった細胞よりも、細胞がDNA損傷を受けやすくなったり、細胞死に至りやすくなる。1つの態様において、細胞は、少なくとも1つの本発明の化合物を用いて処理される。
【０１６５】
したがって、本発明は、細胞を死滅させる方法も提供し、ここで、細胞には、1つまたは複数の本発明の化合物が、従来の放射線療法と組み合わせて投与される。
【０１６６】
また、本発明は、細胞がより細胞死に至りやすくなる方法も提供し、ここで、細胞は、細胞死を引き起こすか、または誘発するための細胞の処理の前に、1つまたは複数の本発明の化合物を用いて処理される。1つの態様において、細胞が1つまたは複数の本発明の化合物を用いて処理された後、正常細胞の機能を阻害する目的で、または細胞を死滅させる目的でDNA損傷を引き起こすために、細胞は、少なくとも1つの化合物、または少なくとも1つの方法、またはその組み合わせを用いて処理される。
【０１６７】
1つの実施形態では、細胞は、少なくとも1つのDNA損傷剤を用いて細胞を処理することによって死滅させる。すなわち、細胞死に対して細胞を感作する1つまたは複数の本発明の化合物を用いて細胞を処理した後、細胞は、細胞を死滅させる少なくとも1つのDNA損傷剤を用いて処理される。本発明において有用なDNA損傷剤には、化学療法剤（例えば、シスプラチン）、電離放射線（X線、紫外線放射）、発癌剤および突然変異誘発剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６８】
別の実施形態では、細胞は、DNA損傷を引き起こすか、または誘発する少なくとも1つの方法を用いて細胞を処理することによって死滅させる。このような方法には、経路が活性化されたときにDNA損傷につながる細胞シグナル伝達経路の活性化、経路が阻害されたときにDNA損傷につながる細胞シグナル伝達経路の阻害、および細胞における生化学的変化の誘発であって、その変化がDNA損傷につながる誘発が含まれるが、これらに限定されない。非限定的な例として、細胞におけるDNA修復経路を阻害できて、それによって、DNA損傷の修復を妨げ、細胞におけるDNA損傷の異常蓄積をもたらす。
【０１６９】
本発明の1つの態様において、本発明の化合物は、放射、または細胞におけるDNA損傷の他の誘発の前に細胞に投与される。本発明の別の態様において、本発明の化合物は、放射、または細胞におけるDNA損傷の他の誘発と同時に細胞に投与される。本発明のさらに別の態様において、本発明の化合物は、放射、または細胞におけるDNA損傷の他の誘発の開始直後に細胞に投与される。
【０１７０】
別の態様において、細胞はインビトロである。別の実施形態では、細胞はインビボである。
【０１７１】
上述の通り、本発明の化合物は、驚いたことに、Mps-1を効果的に阻害することが明らかになっており、したがって、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患、あるいは制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応を伴う疾患、特に制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応が、Mps-1によって媒介される疾患、例えば、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移など、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭部および頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移の治療または予防のために使用されてもよい。
【０１７２】
したがって、別の態様によれば、本発明は、上述の通り、疾患の治療または予防における使用のための、本明細書において記述および定義される式（A）、（B）または（C）の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物を対象に含む。
【０１７３】
したがって、本発明の別の特定の態様は、上述の式（A）、（B）または（C）の化合物、あるいは、その立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物または塩、特に、その医薬的に許容される塩、あるいはそれらの混合物の、疾患の予防または治療のための使用である。
【０１７４】
したがって、本発明の別の特定の態様は、疾患の治療または予防のための医薬組成物の製造のための、上述の式（A）、（B）または（C）の化合物の使用である。
【０１７５】
前の2つの段落において言及した疾患は、制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応の疾患、あるいは制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応を伴う疾患、特に制御されていない細胞成長、増殖および／または生存、不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応が、Mps-1によって媒介される疾患、例えば、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移など、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、脳腫瘍および脳転移を含む頭部および頸部腫瘍、非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む胸部の腫瘍、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、腎、膀胱および前立腺腫瘍を含む泌尿器腫瘍、皮膚腫瘍および肉腫、および／またはその転移である。
【０１７６】
用語「不適切な」は、本発明の文脈の範囲内において、特に「不適切な細胞性免疫応答、または不適切な細胞性炎症反応」の文脈において、本明細書において用いられるとき、好ましくは、正常よりも低く、または高く、かつ、上記疾患の病態に関連するか、上記疾患の病態の原因となるか、または上記疾患の病態につながる応答を意味すると理解されるべきである。
【０１７７】
好ましくは、使用は、疾患の治療または予防におけるものであり、ここで、疾患は、血液腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移である。
【０１７８】
過剰増殖障害の治療方法
本発明は、哺乳類の過剰増殖障害を治療する目的で本発明の化合物およびその組成物を使用するための方法に関する。化合物は、細胞増殖および／または細胞分裂の阻害、ブロック、減少、低下などに、かつ／またはアポトーシスを生じるのに利用することができる。この方法は、これらを必要とするヒトを含む哺乳動物に、障害の治療に効果的である量の本発明の化合物、あるいは、その医薬的に許容される塩、異性体、多形、代謝産物、水和物、溶媒和物またはエステルなどを投与するステップを含む。過剰増殖障害には、例えば、乾癬、ケロイド、および皮膚に影響する他の過形成、良性前立腺肥大（BPH）、固形腫瘍、乳房、気道、脳、生殖器、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺の癌およびこれらの遠隔転移などが含まれるが、これらに限定されない。また、それらの障害には、リンパ腫、肉腫および白血病が含まれる。
【０１７９】
乳癌の例には、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非浸潤性乳管癌および非浸潤性小葉癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８０】
気道の癌の例には、小細胞および非小細胞肺癌、ならびに気管支腺腫および胸膜肺芽腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８１】
脳癌の例には、脳幹および視床下部神経膠腫、小脳および脳星細胞腫、髄芽腫、上衣腫、ならびに神経外胚葉性および松果体腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８２】
男性生殖器の腫瘍には、前立腺および精巣癌が含まれるが、これらに限定されない。女性生殖器の腫瘍には、子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣および外陰部の癌、ならびに子宮の肉腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８３】
消化管の腫瘍には、肛門、結腸、結腸直腸、食道、胆嚢、胃、膵臓、直腸、小腸および唾液腺の癌が含まれるが、これらに限定されない。尿路の腫瘍には、膀胱、陰茎、腎臓、腎盂、尿管、尿道およびヒト乳頭状腎の癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８４】
眼癌には、眼球内黒色腫および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８５】
肝臓癌の例には、肝細胞癌（線維層板型変異を伴う、または伴わない肝細胞癌）、胆管細胞癌（肝内胆管癌）および混合型肝細胞・胆管細胞癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８６】
皮膚癌には、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚癌および非黒色腫皮膚癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８７】
頭頸部癌には、喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭の癌、口唇および口腔の癌ならびに扁平細胞が含まれるが、これらに限定されない。リンパ腫には、エイズ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚T細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキン病、および中枢神経系のリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８８】
肉腫には、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８９】
白血病には、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病およびヘアリー細胞白血病が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９０】
これらの障害は、ヒトにおいてはっきりと特徴づけられているが、他の哺乳動物においても同様の病因で存在し、本発明の医薬組成物を投与することによって治療することができる。
【０１９１】
この文書全体にわたって記載の用語「を治療する」または「治療」は、慣習的に用いられ、例えば、癌などの疾患または障害の状態の抑制、緩和、縮小、軽減、改善などを目的とする対象の管理または看護である。
【０１９２】
キナーゼ障害を治療する方法
本発明は、また、脳卒中、心不全、肝腫大、心肥大、糖尿病、アルツハイマー病、嚢胞性線維症、異種移植拒絶反応の症状、敗血症性ショックまたは喘息を含むが、これらに限定されない異常なマイトジェン細胞外キナーゼ活性に関連する障害の治療のための方法も提供する。
【０１９３】
上の背景技術のセクションで述べた疾患（例えば、癌）を含め、本発明の化合物の有効量をこのような障害の治療に適用することができる。とはいえ、作用機序、および／またはキナーゼと障害との関係に関わらず、本発明の化合物を用いて、このような癌および他の疾患を治療することができる。
【０１９４】
語句「異常なキナーゼ活性」または「異常なチロシンキナーゼ活性」は、キナーゼをコードする遺伝子、またはそれがコードするポリペプチドのあらゆる異常な発現または活性を含む。このような異常な活性の例には、遺伝子またはポリペプチドの過剰発現；遺伝子増幅；構成的に活性な、または亢進したキナーゼ活性を生じる変異；遺伝子変異、欠失、置換、付加などが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９５】
本発明は、また、有効量の本発明の化合物（その塩、多形、代謝産物、水和物、溶媒和物、プロドラッグ（例えば、エステル）、およびこれらのジアステレオ異性体の形態を含む。）を投与するステップを含む、キナーゼ活性、特に、マイトジェン細胞外キナーゼを阻害する方法も提供する。キナーゼ活性は、細胞（例えば、インビトロ）において、または、哺乳類の対象、特に治療を必要とするヒト患者の細胞において阻害することができる。
【０１９６】
血管新生障害を治療する方法
本発明はまた、過剰および／または異常な血管新生に関連する障害および疾患を治療する方法を提供する。
【０１９７】
不適切かつ異所的な血管新生の発現は生物にとって有害であり得る。いくつかの病態は、外来性の血管の増殖に関連する。これらには、例えば、糖尿病性網膜症、虚血性網膜静脈閉塞症および未熟児網膜症［Aiello et al.New Engl.J.Med.1994, 331, 1480；Peer et al.Lab.Invest.1995, 72, 638］、加齢黄斑変性症［AMD；Lopez et al.Invest.Opththalmol.Vis.Sci.1996, 37, 855参照。］、血管新生緑内障、乾癬、後水晶体線維増殖症、血管線維腫、炎症、関節リウマチ（RA）、再狭窄、ステント内再狭窄、移植血管の再狭窄などが含まれる。さらに、癌組織および腫瘍性組織に関連する血液供給の増加は、増殖を助長し、急速な腫瘍拡大および転移につながる。さらに、腫瘍における新しい血管およびリンパ管の増殖は、反逆細胞に逃避経路を提供し、転移および結果として癌の拡大を助長する。したがって、本発明の化合物は、例えば、血管形成を阻害および／または低減することによって、内皮細胞増殖または血管新生に関与する他のタイプを阻害、ブロック、減少、低下などすることによって、ならびに、このような細胞型の細胞死またはアポトーシスを引き起こすことによって上述の血管新生障害のいずれかの治療または予防に利用することができる。
【０１９８】
用量および投与
過剰増殖障害および血管新生障害の治療に有用な化合物を評価する既知の標準的な実験技術に基づき、標準的な毒性試験によって、および、哺乳動物における上で明らかにした状態の治療を決定するための標準的な薬理学的アッセイによって、および、これらの結果と、これらの状態を治療するのに用いられる既知の医薬の結果との比較によって、本発明の化合物の効果的な投与量を、所望の適応症それぞれの治療のために容易に決定することができる。これらの状態のうちの1つの治療において投与される活性成分の量は、用いられる特定の化合物および投与単位、投与方法、治療期間、治療される患者の年齢および性別、ならびに治療される状態の性質および程度などを考慮して、大幅に変わり得る。
【０１９９】
投与される活性成分の総量は、概して、約0.001mg／kg〜約200mg／kg体重／日、好ましくは約0.01mg／kg〜約20mg／kg体重／日の範囲になる。臨床的に有用な投与スケジュールは、1日に1〜3回の投与から、4週間毎に1回の投与の範囲になる。さらに、患者にある一定の期間薬剤を投与しない「休薬期間」が、薬理効果と認容性の全体的なバランスのために有益なことがある。単位投与は、約0.5mg〜約1500mgの活性成分を含んでもよく、1日に1回または複数回、または1日に1回未満投与することができる。静脈内、筋肉内、皮下および非経口の注射を含む注射および点滴法の使用による投与の平均1日投与量は、好ましくは、全体重の0.01〜200mg／kgになる。直腸の平均1日投与計画は、好ましくは、全体重の0.01〜200mg／kgになる。膣の平均1日投与計画は、好ましくは、全体重の0.01〜200mg／kgになる。局所の平均1日投与計画は、好ましくは、1日に1〜4回の間で0.1〜200mg投与されることになる。経皮濃度は、好ましくは、0.01〜200mg／kgの一日量を維持するのに必要なものになる。吸入による平均1日投与計画は、好ましくは、全体重の0.01〜100mg／kgになる。
【０２００】
もちろん、各患者についての初期および継続的な特定の投与計画は、担当診断医によって決定される状態の性質および重症度、用いる特定の化合物の活性、患者の年齢および全身状態、投与時間、投与経路、薬剤の排泄速度、薬剤の組み合わせなどによって変わることになる。所望の治療法、および本発明の化合物、または医薬的に許容される塩またはエステルまたはその組成物の投与回数は、当業者によって従来の治療試験を用いて確認することができる。
【０２０１】
好ましくは、上記方法の疾患は、血液学的腫瘍、固形腫瘍および／またはその転移である。
【０２０２】
本発明の化合物は、腫瘍の増殖および転移、特に、すべての適応症および段階の固形腫瘍において、腫瘍の増殖の前治療あり、またはなしで、治療法および予防、すなわち予防において特に用いることができる。
【０２０３】
特定の薬理学的性質または医薬としての特性の試験方法は当業者に周知である。
【０２０４】
本明細書に記述される実験を行う実施例は、本発明を説明するためのものであり、本発明は記載の実施例に限定されない。
【０２０５】
生物学的アッセイ：増殖アッセイ
培養腫瘍細胞（MCF7、ホルモン依存性ヒト乳癌細胞、ATCC HTB22；NCI-H460、ヒト非小細胞肺癌細胞、ATCC HTB-177；DU 145、ホルモン非依存性ヒト前立腺癌細胞、ATCC HTB-81；HeLa-MaTu、ヒト子宮頸癌細胞、EPO-GmbH、ベルリン；HeLa-MaTu-ADR、多剤耐性ヒト子宮頸癌細胞、EPO-GmbH、ベルリン；HeLaヒト子宮頸部腫瘍細胞、ATCC CCL-2；B16F10マウス黒色腫細胞、ATCC CRL-6475）を、5000細胞／ウェル（MCF7、DU145、HeLa-MaTu-ADR）、3000細胞／ウェル（NCI-H460、HeLa-MaTu、HeLa）または1000細胞／ウェル（B16F10）の密度で、96ウェルマルチタイタープレートで、10％ウシ胎児血清を追加した200μLのそれぞれの増殖培地に播種した。24時間後、1つのプレート（ゼロ点プレート）の細胞をクリスタルバイオレット（下記参照）で染色し、一方で、他のプレートの培地を新鮮な培養培地（200μl）に置き換えて、そこに、試験物質をさまざまな濃度（0μMならびに0.01〜30μMの範囲；ジメチルスルホキシド溶媒の最終濃度は0.5％であった。）で加えた。細胞を試験物質の存在下で4日間インキュベートした。細胞増殖を、クリスタルバイオレットで細胞を染色することによって測定し、細胞を、20μl／測定点の11％グルタルアルデヒド溶液を室温で15分間加えることにより固定した。固定した細胞の水による3回の洗浄サイクルの後、プレートを室温で乾燥させた。100μl／測定点の0.1％クリスタルバイオレット溶液（pH3.0）を加えることによって細胞を染色した。染色した細胞の水による3回の洗浄サイクルの後、プレートを室温で乾燥させた。100μl／測定点の10％酢酸溶液を加えることによって色素を溶解した。吸光度を測光法により595nmの波長で測定した。ゼロ点プレート（＝0％）の吸光度および未処理（0μM）細胞（＝100％）の吸光度に対して測定値を規格化することによって、細胞数の変化をパーセントで計算した。IC50値を、自社のソフトウェアを用いて4パラメータフィットにより求めた。
【０２０６】
Mps-1キナーゼアッセイ
ヒトキナーゼMps-1はビオチン化基質ペプチドをリン酸化する。リン酸化生成物の検出は、ドナーとしてのユウロピウム標識抗ホスホ−セリン／スレオニン抗体から、アクセプターとしての架橋アロフィコシアニン（SA-XLent）で標識したストレプトアビジンへの時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（TR-FRET）によって実現される。化合物を、そのキナーゼ活性阻害について試験する。
【０２０７】
N末端GSTタグ付きヒト全長組換えMps-1キナーゼ（Invitrogen（Karslruhe、ドイツ）から購入。cat. no PV4071）を使用した。キナーゼ反応の基質として、アミノ酸配列PWDPDDADITEILGのビオチン化ペプチド（アミド型のC末端、Biosynthan GmbH（ベルリン）から購入。）を使用した。
【０２０８】
アッセイのために、DMSO中の50nLの試験化合物の100倍濃縮溶液を、黒色低容量384ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One、フリッケンハウゼン、ドイツ）にピペットで入れ、アッセイ緩衝液［0.1mM オルトバナジン酸ナトリウム、10mM MgCl2、2mM DTT、25mM Hepes（pH7.7）、0.05％ BSA、0.001％プルロニックF-127］中の2μlのMps-1の溶液を加え、混合物を22℃で15分間インキュベートして、キナーゼ反応の開始前に試験化合物をMps-1に事前に結合させた。次いで、3μlのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸（ATP、16.7μM→5μlのアッセイ容積中の最終濃度は10μM）およびペプチド基質（1.67μM→5μlのアッセイ容積中の最終濃度は1μM）の溶液を添加することによってキナーゼ反応を開始させ、生じる混合物を22℃で反応時間60分でインキュベートした。アッセイ中のMps-1の濃度を、酵素ロットの活性にあわせて調整し、アッセイが直線範囲内になるように適切に選んだ。典型的な酵素濃度は約1nMの範囲であった（5μlのアッセイ容積中の最終濃度）。3μlのHTRF検出試薬の溶液（100mM Hepes（pH7.4）、0.1％ BSA、40mM EDTA、140nMストレプトアビジン−XLent［＃61GSTXLB、Fa.Cis Biointernational、マルクール、フランス］、1.5nM抗ホスホ（Ser／Thr）−ユウロピウム−抗体［＃AD0180、PerkinElmer LAS、Rodgau-Jugesheim、ドイツ］）を添加することによって反応を停止させた。
【０２０９】
生じる混合物を22℃で1時間インキュベートし、リン酸化ペプチドを抗ホスホ（Ser／Thr）−ユウロピウム−抗体に結合させた。続いて、ユウロピウム標識抗ホスホ（Ser／Thr）抗体からストレプトアビジン−XLentへの共鳴エネルギー転移を測定することによってリン酸化基質の量を評価した。したがって、350nmで励起後、620nmおよび665nmでの蛍光発光を、Viewlux TR-FRETリーダー（PerkinElmer LAS、Rodgau-Jugesheim、ドイツ）で測定した。「ブランク補正規格化比」（Viewlux固有の読み取り値。従来の665nmおよび622nmでの発光の比に似ており、比を計算する前にブランクおよびEu−ドナークロストークを665nmのシグナルから引いたもの。）をリン酸化基質の量の測定値とした。データを規格化した（阻害剤なしでの酵素反応＝0％阻害、酵素以外のすべてのアッセイ成分＝100％阻害）。試験化合物は、同じマイクロタイタープレート上で、20μM〜1nMの範囲の10種類の異なる濃度（20μM、6.7μM、2.2μM、0.74μM、0.25μM、82nM、27nM、9.2nM、3.1nMおよび1nM、100倍濃縮原液のレベルで1：3系列希釈によりアッセイ前に調製される希釈系列）で各濃度につき二つ組の値で試験し、IC50値を、自社のソフトウェアを用いて4パラメータフィットにより計算した。
【０２１０】
紡錘体形成チェックポイントアッセイ
紡錘体形成チェックポイントは、有糸分裂中に染色体分離が適切に行われるようにする。有糸分裂に入ると、染色体が収縮し始め、これは、ヒストンH3のセリン10におけるリン酸化を伴う。ヒストンH3のセリン10における脱リン酸化は、分裂後期に始まり、分裂終期の初期に終わる。したがって、ヒストンH3のセリン10におけるリン酸化を、有糸分裂中の細胞のマーカーとして利用することができる。ノコダゾールは微小管不安定化物質である。したがって、ノコダゾールは微小管の動態に干渉し、紡錘体形成チェックポイントを移動させる。細胞は、G2／M移行期に有糸分裂が停止し、ヒストンH3のセリン10におけるリン酸化を示す。Mps-1阻害剤による紡錘体形成チェックポイントの阻害は、ノコダゾール存在下の有糸分裂の阻止を無効にし、細胞が有糸分裂を早く終了する。この変化を、ヒストンH3がセリン10においてリン酸化された細胞の減少によって検出する。この減少をマーカーとして使用し、有糸分裂の成功を導く本発明の化合物の能力を測定する。
【０２１１】
ヒト子宮頸部腫瘍細胞株HeLa（ATCC CCL-2）の培養細胞を、2500細胞／ウェルの密度、384ウェルマイクロタイタープレートで、1％（v／v）グルタミン、1％（v／v）ペニシリン、1％（v／v）ストレプトマイシンおよび10％（v／v）ウシ胎児血清を追加した20μlのダルベッコ培地（フェノールレッドなし、ピルビン酸ナトリウムなし、1000mg／mlグルコースあり、ピリドキシンあり）に播種した。37℃で一晩インキュベーション後、10μl／ウェルのノコダゾールを0.1μg／mlの最終濃度で細胞に加えた。24時間のインキュベーションの後、細胞周期進行のG2／M期で細胞を停止させた。ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解させた試験化合物をさまざまな濃度で加えた（0μMならびに0.005μM〜10μMの範囲；DMSO溶媒の最終濃度は0.5％（v／v）であった）。細胞を試験化合物の存在下、37℃で4時間インキュベートした。その後、リン酸緩衝食塩水（PBS）中の4％（v／v）パラホルムアルデヒド中、4℃で一晩細胞を固定し、次いで、PBS中の0.1％（v／v）Triton X（商標）100中、室温で20分間透過処理し、PBS中の0.5％（v／v）ウシ血清アルブミン（BSA）中、室温で15分間ブロックした。PBSで洗浄後、20μl／ウェルの抗体溶液（抗ホスホ−ヒストンH3クローン3H10、FITC；Upstate、Cat＃16-222；1：200希釈）を細胞に加え、これを、室温で2時間インキュベートした。その後、細胞をPBSで洗浄し、20μl／ウェルのHOECHST 33342色素溶液（5μg／ml）を細胞に加え、細胞を暗所で12分、室温でインキュベートした。細胞をPBSで2回洗浄し、次いで、PBSで覆い、分析を行うまで4℃で保管した。画像をPerkin Elmer OPERA（商標）High-Content Analysisリーダーを用いて取得した。画像を画像解析ソフトウェアMetaXpress（商標）（Molecular devices製）で、Cell Cycleアプリケーションモジュールを利用して解析した。このアッセイにおいて、HOECHST 33342およびセリン10におけるリン酸化ヒストンH3の両方の標識を測定した。HOECHST 33342はDNAを標識し、細胞数の計数に用いられる。セリン10におけるリン酸化ヒストンH3の染色によって有糸分裂細胞数を決定する。Mps-1の阻害は、ノコダゾールの存在下で有糸分裂細胞数を減少させ、不適切な有糸分裂進行を示す。未処理のアッセイデータを4パラメータロジスティック回帰分析によりさらに解析して、各試験化合物のIC50値を求めた。
【０２１２】
ラット肝細胞内のインビトロ代謝安定性の調査（インビボでの肝臓血中クリアランス（CL）の計算を含む）
Han Wistarラットの肝細胞を、2ステップ灌流法により単離した。灌流後、肝臓をラットから注意深く取り出し、肝臓被膜を開け、肝細胞を氷冷WMEの入ったペトリ皿に穏やかに振り出した。生じた細胞懸濁液を滅菌ガーゼで濾過して50mlのファルコンチューブに入れ、50×gで3分間、室温で遠心分離した。細胞ペレットを30mlのWMEに再懸濁し、Percoll（登録商標）勾配で、100×gで2回遠心分離した。肝細胞を再びWilliams E培地（WME）で洗浄し、5％FCSを含む培地に再懸濁した。細胞生存率をトリパンブルー排除試験により求めた。
【０２１３】
代謝安定性アッセイのために、肝細胞をガラスバイアルに、5％FCSを含むWME中、1.0×106生存細胞／mlの密度で散布した。試験化合物を加え、最終濃度1μMにした。インキュベーション中、肝細胞懸濁液を連続的に振盪し、一定分量を2分、8分、16分、30分、45分および90分に採取して、これに等量の冷メタノールをすぐに加えた。サンプルを−20℃で一晩凍結させ、続いて、3000rpmで15分間遠心分離した後、上清を、LCMS／MS検出を備えたAgilent 1200 HPLCシステムを用いて分析した。
【０２１４】
試験化合物の半減期を濃度−時間プロットから求めた。半減期から固有クリアランスを計算した。追加のパラメータである肝臓血流、インビボおよびインビトロ肝細胞の量と共に、インビボでの肝臓血中クリアランス（CL）および最大経口バイオアベイラビリティ（Fmax）を計算した。以下のパラメータ値を用いた：肝臓血流−4.2L／h／kgラット；肝臓比重量−32g／kgラット体重；インビボ肝細胞−1.1×108細胞／g肝臓、インビトロ肝細胞−0.5×106／ml。
【０２１５】
ヒトCYP3A4に対する阻害の可能性の判定
試験化合物がCYP3A4の競合的阻害剤として作用する可能性を、ヒト肝ミクロソームおよび参照基質のミダゾラムを用いてインビトロアッセイで評価した。試験化合物をアセトニトリルに溶解した。ヒト肝ミクロソーム製剤（HLMのプール）をアッセイに適用した。
【０２１６】
試験化合物の原液を、EDTA、NADP、グルコース6−リン酸およびグルコース6−リン酸デヒドロゲナーゼを含むリン酸緩衝液に加えた。この混合物をGenesis Workstation（Tecan, Crailsheim, FRG）で順次希釈した。予備加温した後、プローブ基質（ミダゾラム）の混合物を加えることにより反応を開始した。最終的に、インキュベーション混合物には、ヒト肝ミクロソーム（タンパク質濃度60μg／mL）、NADPH再生系（1mM NADP、5.0mM グルコース6−リン酸、グルコース6−リン酸デヒドロゲナーゼ（1.5U／mL）、1.0mM EDTA、試験化合物（6種類の濃度）、2.5μMミダゾラム（プローブ基質として）、リン酸緩衝液（50mM、pH7.4）が全体積200μL中に含まれていた。インキュベーションは、Genesis Workstation（Tecan, Crailsheim, FRG）で96ウェルプレート（マイクロタイタープレート、96ウェルプレート）内で37℃で実施した。プローブ基質の原液は水中で調製した（ミダゾラムは10mM）。ケトコナゾールを直接作用する阻害剤の陽性対照として用いた。参照サンプル（基質あり、阻害剤なし）を六つ組で並行してインキュベートした。これらは、試験インキュベーションとして同じ量の溶媒を含んでいた。内部標準を含む100μLのアセトニトリルを加えることにより、反応を停止した。沈殿したタンパク質を、ウェルプレートを遠心分離して除去し、上清をLC-MS／MSで分析した。
【０２１７】
試験化合物の存在下でのCYP3A4媒介代謝活性を、対応する基準値のパーセントで表した。対照活性のパーセントと試験阻害剤の濃度のプロットの非線形最小二乗回帰分析を適用して、S字形の曲線をデータに当てはめ、酵素阻害パラメータIC50を計算した。50％未満の阻害に注目して、データは外挿しなかった。したがって、適用した試験化合物の最大濃度を超えてIC50が報告された。
【０２１８】
機構に基づくヒトCYP3A4の阻害の判定
機構に基づく（不可逆な）CYP3A4の阻害を、ヒト肝ミクロソーム（0.5mg／mL）または組換えCYP3A4アイソフォーム（50または100pmol／mL）のいずれかを用いてインビトロで調査した。試験化合物を、濃度、NADPHおよび時間に依存した設定で37℃でインキュベートした。したがって、4種類の異なる濃度（例えば：1、2、5、10μM）で、NADPH（1M）および再生系の存在下、リン酸緩衝食塩水（0.05mM、pH7.4）中で試験化合物をインキュベートした。最大濃度の試験化合物をNADPHなしでインキュベートし、したがって、これがNADPH不足の対照として役目を果たした。さらに、不可逆なCYP3A4不活性化のために、同一アッセイ条件を適用して、媒体対照（陰性対照）としてアセトニトリル、陽性対照としてミベフラジルも含まれていた。
【０２１９】
各混合物を酵素（プレインキュベーション）と共に最大50分間インキュベートした。始めと10分毎にこのインキュベーション混合物の一定分量を取り外し、10〜50（好ましくは25）の倍率で、NADPH（1mM）、およびCYP3A4（主インキュベーション）に特異的な基質として150μMのテストステロンを含む新たなインキュベーションにさらに希釈し、追加の時間（例えば、10〜20分）インキュベーションし、最終的な酵素活性評価のために、アイソフォームに特異的な代謝産物を生成した。
【０２２０】
その後、主インキュベーションの反応を、アセトニトリル（内部標準を含む。）を加えることにより停止し、混合物を氷浴中に置いてタンパク質を沈殿させた。続いて、混合物を遠心分離してタンパク質を小球状にし、HPLC-MSによりアイソフォームに特異的な代謝産物、例えば、6β−ヒドロキシテストステロンおよび試験化合物の残量について上清を分析した。
【０２２１】
残りの酵素活性を時間0分の初期活性に規格化し、次いで、プレインキュベーション時間に応じた片対数プロットに表した。同時に、基質の代謝回転をプレインキュベーション時間に対してプロットした。これらのデータから、分配比r（不活性化されたCYP3A4のタンパク質分子によって代謝された不活性化因子分子の数）によって表されるこの過程の効率など、速度パラメータを計算した。分配比を求める方法の概要については、R.B.Silverman Methods Enzymol 1995, 249, 240-283を参照されたい。
【国際調査報告】
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2016511252.tif 000063
2016511252.tif 000064
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