(57)【要約】本明細書では、安定化量の１種または複数の安定化添加物の存在下に、ヒアルロン酸をベースとするポリマーおよびコルチコステロイドを含む、ヒアルロン酸をベースとする組成物、および関連する方法が提供される。得られた組成物は、保存、加工、および使用の条件下で、粘弾特性および関連するレオロジー特性を実質的に保持する。対象組成物および方法において使用されるヒアルロン酸ポリマーは、誘導体化されていてもよくまたは誘導体化されていなくてもよく、架橋されていてもよくまたは架橋されていなくてもよい。さらに、対象組成物は、化学修飾ヒアルロン酸（それ自体は、架橋されていてもよくまたは架橋されていなくてもよい）、架橋化ヒアルロン酸、非修飾ヒアルロン酸、または前述の組合せなどの２種以上の種類のヒアルロン酸を含んでもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸をベースとするポリマー組成物を、経時的な粘度低下に対して安定化させる方法であって、
ヒアルロン酸ポリマーおよびコルチコステロイドを含む水性組成物に、糖、糖アルコール、ポリオールおよびポリオール含有界面活性剤からなる群から選択される、安定化量の安定化添加物を組み入れて、
これにより、６０℃で６日間、保存した場合、その初期の値と比べて、約５０％以下の粘度低下を示す組成物を得る工程
を含む、方法。
【請求項２】
コルチコステロイドを含むヒアルロン酸をベースとするポリマー組成物の経時的な粘度低下を低減する方法であって、
ヒアルロン酸ポリマーおよびコルチコステロイドを含む水性組成物に、糖、糖アルコール、ポリオールおよびポリオール含有界面活性剤からなる群から選択される、安定化量の安定化添加物を組み入れて、
これにより、１．２よりも大きい安定化比を有する組成物を得る工程を含み、
前記安定化比が、ある時点および定義した一式の保存条件下で測定した場合の、前記安定化添加物を含む前記ヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物に関する粘度の保持率と、前記安定化添加物が存在しないヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物の粘度の保持率との比である、
方法。
【請求項３】
前記組み入れ工程が、前記安定化添加物を、前記ヒアルロン酸ポリマーおよびコルチコステロイドを含む水性組成物に組み入れる工程、および混合する工程を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸ポリマーが、架橋されていてもよくまたは架橋されていなくてもよい非修飾ヒアルロン酸、架橋されていてもよくまたは架橋されていなくてもよい化学修飾ヒアルロン酸、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記水性組成物が溶液である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記溶液が非修飾ヒアルロン酸を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記水性組成物がヒアルロン酸ポリマーをベースとするゲルを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
溶液中に非修飾ヒアルロン酸をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸ゲルが、２つ以上のチオール基を有するチオール架橋剤により架橋されている、ジビニルスルホンとの反応によってそのヒドロキシル基の１０％以下が誘導体化されているヒアルロン酸である、請求項７または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ヒアルロン酸の前記ヒドロキシル基の２−（ビニルスルホニル）エトキシ基への変換度が、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％および１０％から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ゲル中の最終的なヒアルロン酸含有量が、約０．０５〜５％（０．５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ）の範囲である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物中のヒアルロン酸とヒドロゲル粒子との相対量（重量比）が、約１０：１からの範囲にある、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記安定化添加物が、１つまたは複数のヒドロキシル低級アルキル基を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記安定化添加物が、スクロース、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチルグルコサミン、デキストラン−４０、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、カルボキシメチルセルロース、ＴＲＩＴＯＮ−Ｘ−１００、グリセロール、トレハロース、デキストロース、マルトースおよびラクトースからなる群から選択される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記安定化添加物がスクロースである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物に組み入れる安定化添加物の量が、約０．２５重量％〜約２０重量％の範囲にある、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物に組み入れる安定化添加物の量が、約０．５重量％〜約１０重量％の範囲にある、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記組み入れ工程が、１．５より大きい安定化比を有する組成物を実現するのに有効である、請求項２から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記安定化比が、６０℃で前記組成物を保存して６日目に測定される、請求項２から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記安定化比が、１日目、３日目、５日目、６日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、１か月、２か月、３か月または６か月から選択される時点で、２５℃、４０℃、４５℃、５５℃、６０℃、８０℃から選択される保存温度において、および３０％〜７５％の範囲の相対湿度において測定される、請求項２から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記コルチコステロイドが、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チクソコルトール、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンフレトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチレート、ヒドロコルチゾン−１７−バレレート、二プロピオン酸アクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、二プロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、クロベタゾン−１７−ブチレート、クロベタゾール−１７−プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン、二プロピオン酸ベクロメタゾン一水和物、フルニゾリド、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、およびフロ酸フルチカゾンからなる群から選択される、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記コルチコステロイドがトリアムシノロンアセトニドまたは薬学的に許容されるその塩形態である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記コルチコステロイドがトリアムシノロンアセトニドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記コルチコステロイドが、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンフレトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、および二酢酸トリアムシノロンからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、約０．０１重量％〜約２０重量％のコルチコステロイドを含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ヒアルロン酸ポリマー、コルチコステロイド、ならびに６０℃で６日間、保存した場合に、その初期値と比べて、約５０％以下の粘度低下を示す組成物を実現するのに有効な量の、糖、糖アルコール、ポリオールおよびポリオール含有界面活性剤からなる群から選択される安定化添加物を含む水性組成物であって、前記組成物が上の請求項１から２５のいずれか一項において定義されている、水性組成物。
【請求項２７】
ヒアルロン酸ポリマー、コルチコステロイド、ならびに１．２より大きい安定化比を有する組成物を実現するのに有効な量の、糖、糖アルコール、ポリオールおよびポリオール含有界面活性剤からなる群から選択される安定化添加物を含む水性組成物であって、前記組成物が請求項２から２５のいずれか一項において定義されており、前記安定化比が、ある時点および定義した一式の保存条件下で測定した場合の、前記安定化添加物を含むヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイドヒドロゲル組成物に関する粘度の保持率と、前記安定化添加物が存在しないヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイドヒドロゲル組成物の粘度の保持率との比である、水性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願に対する相互参照）
本願は、その内容が本明細書の全体において参考として援用される、２０１３年１月１１日に出願された、米国仮特許出願第６１／７５１，８１１号に対する優先権の利益を主張する。
【０００２】
本開示は、一般に、ヒアルロン酸および／またはヒアルロン酸をベースとするポリマーを含む組成物、ならびにこうした組成物を作製する、これを使用する、およびこれを安定化させる関連方法に関する。得られた生体適合性組成物、例えば医薬組成物は、例えば、生物活性剤を局所送達するため、および様々な医療状態を処置するために使用することができる。得られた組成物は、一般に、以下で一層詳細に記載されている、安定化量（stabilizing  amount）の安定化添加物が存在しない組成物と比べた場合、その粘度を経時的に一層良好に保持する。
【背景技術】
【０００３】
ヒアルロン酸は、結合組織、上皮組織、および神経組織全体に広範囲に分布している天然の陰イオン性非硫酸化グリコサミノグリカンである。平均７０ｋｇ（１５４ポンド）のヒトは、体内に約１５グラムのヒアルロン酸を有しており、その３分の１は、毎日入れ替えられる（分解および合成される）（Ｓｔｅｒｎ  Ｒ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、８３巻（７号）：３１７〜２５頁、（２００４年））。ヒアルロン酸は身体の多くの組織内に自然に見いだされ、したがって、生体適合性であるため、生物医学的用途に非常に適していると考えられる。不運なことに、ヒアルロン酸は、その自然発生形態で治療薬として投与および使用した場合、通常、身体から迅速にクリアランスされ、頻回の投与を必要とする。したがって、良好な生体適合性などの非変更ヒアルロン酸の利点を維持するが、迅速なクリアランスの問題を克服するヒアルロン酸製剤が非常に望ましい。そうした製剤は、理想的には、良好な細胞適合性、有益な化学的特性、レオロジー特性、および他の特性、良好な安定性を有し、かつ投与の簡便性を有するべきである。
ヒアルロン酸の化学修飾形態は、以前に記載されている。例えば、Ｊ．Ｗ．  Ｋｕｏら、Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎｓ  −  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  ａｎｄ  Ｉｍｐｌａｎｔ  Ｕｓｅｓ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２０１０年を参照されたい。ヒアルロン酸（ヒアルロナンとも呼ばれる）、その誘導体化形態、関連組成物およびコンジュゲートは、注射可能な生体物質として、ならびに医療用装具および埋込み可能な物質において、使用することができる。用途には、とりわけ、局所部位への治療分子の送達、組織工学における粘着剤またはシーラントとして、関節内補充薬として、および創傷治癒における使用が含まれる。ヒアルロン酸をベースとする物質は、様々な異なる形態、すなわち、粘弾性溶液、軟質または硬直性ヒドロゲル、不織布メッシュ、スポンジなどにおいて調製することができ、広範囲にわたる前臨床および臨床背景において使用することができる。多くの前臨床および臨床用途の場合、こうしたヒアルロン酸をベースとする物質の粘弾特性を維持することが重要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｔｅｒｎ  Ｒ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、８３巻（７号）：３１７〜２５頁、（２００４年）
【非特許文献２】Ｊ．Ｗ．  Ｋｕｏら、Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎｓ  −  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  ａｎｄ  Ｉｍｐｌａｎｔ  Ｕｓｅｓ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２０１０年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、その粘弾特性を実質的に維持するヒアルロン酸をベースとする組成物、すなわち、例えば、保存、加工、および使用の条件下で、良好な化学的および物理的安定性を示すヒアルロン酸をベースとする組成物を提供することができれば、非常に有利であると思われる。
【０００６】
本開示は、少なくとも一部は、トリアムシノロンアセトニドまたはその他のものなどのコルチコステロイドを含むヒアルロン酸ポリマーをベースとする組成物が、コルチコステロイドが存在しない同じＨＡポリマーをベースとする組成物に関して観察されるものよりもかなり大きな経時的な粘度低下を示すという、本出願人の発見に基づいている。前述に基づくと、本出願人らは、１種または複数の安定化添加物を組み入れることにより経時的な粘度低下が実質的に低減される、こうしたＨＡポリマー含有組成物を有意に安定化させるのに有効な、ある種のこうした物質を特定した。すなわち、本明細書では、安定化添加物が存在しない同等の組成物と比べた場合、その粘度を経時的により良好に保持する（すなわち、経時的な粘度低下の低減を示す）組成物が提供される。本明細書では、安定化比（以下に一層詳細に記載されているものなどの条件下）が、１超、好ましくは１．２超、より好ましくは１．３超となるのに有効な、安定化量の添加物を、組成物に組み入れることにより、コルチコステロイドを含む、こうしたヒアルロン酸をベースとする組成物の保存安定性を改善する方法も提供され、ここで該安定化比とは、安定化添加物が存在しない同じ組成物と比較して、安定化添加物を含む主題の組成物について、経時的な粘度低下を低減する尺度である（１を超える安定化比は、所与の時点およびある種の保存条件下で、添加物が存在しない対照組成物よりも粘度の保持率が増大していることを表す）。
【０００７】
本組成物、方法、使用などの追加的な実施形態は、以下の説明、実施例および特許請求の範囲から明らかになろう。上述および以下の説明から理解することができる通り、本明細書に記載のありとあらゆる特徴、および２つ以上のこうした特徴のありとあらゆる組合せが、本開示の範囲内に含まれるが、但し、こうした組合せに含まれる特徴は、互いに矛盾していない条件とする。さらに、任意の特徴または特徴の組合せは、本発明の任意の実施形態から、明確に除外してもよい。本発明のさらなる態様および利点は、特に添付の実施例および図と併せて考慮される場合、以下の記載において説明される。
【０００８】
（図面の簡単な説明）
本出願は、図面が添付されていない。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、これから、以下でより詳細に説明される。しかし、本発明は、多くの様々な形態で具現化することができ、本明細書に記載されている実施形態を限定するものとして解釈すべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的および完全なものであり、かつ本発明の範囲を当業者に完全に伝えるように提供される。
【００１０】
上記または以下であろうとも、本明細書において引用されているすべての刊行物、特許、および特許出願は、特に示さない限り、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。同一の用語が、参照により本明細書に組み込まれている刊行物、特許または特許出願と本開示の両方において定義されている場合、本開示における定義が、支配的な定義に相当する。特定の種類の化合物、化学物質などの説明のために参照される刊行物、特許および特許出願に関すると、こうした化合物、化学物質などに関連する部分は、参照により本明細書に組み込まれる文書の部分である。
定義
【００１１】
本明細書において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が特に明白に示さない限り、複数の指示物を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、「ポリマー」への言及は、単一のポリマーならびに２つ以上の同一または異なるポリマーを含む。
【００１２】
特に具体的に明記されない限り、本明細書における用語の定義は、有機合成、ならびにポリマーおよび医薬品科学の分野において使用されている標準の定義である。
【００１３】
本発明を説明および特許請求する際に、以下の専門用語が、以下に記載されている定義に従って使用されることになろう。
【００１４】
「生体適合性ポリマー」は、生体組織と適合性があるか、または有益な生物的特性を有し得る分解生成物を有するポリマーである。生体適合性ポリマーは、それ自体が生体適合性であってもよく、かつ／または生物活性剤と併せて使用した場合に、相乗的な生体適合性があってもよい。
【００１５】
用語「ヒアルロン酸ポリマー」とは、ヒアルロナンの二糖反復サブ単位を含むポリマーであって、該反復単位が、二糖反復サブ単位のＤ−グルクロン酸および／またはＤ−Ｎ−アセチルグルコサミン単位の１つまたは複数の位置で誘導体化され得る、ポリマーを指す。ヒアルロン酸ポリマーまたはヒアルロン酸をベースとするポリマーとは、ヒアルロン酸（ヒアルロナンとも呼ばれる）、誘導体化ヒアルロン酸、塩形態、およびヒアルロン酸リンカー複合体を包含することが意図される。
【００１６】
用語「ヒアルロン酸」とは、非修飾または非誘導体化ヒアルロン酸を指すことが意図される。
【００１７】
「ヒアルロン酸誘導体」または「誘導体化ヒアルロン酸」または「修飾ヒアルロン酸」または「置換ヒアルロン酸」という用語は、化学的に修飾されているヒアルロン酸を指す。
【００１８】
「反応性」という用語は、従来の有機合成条件下で容易に反応するか、または実用的な速度で反応する官能基（例えば、ポリマー中に存在する）を指す。これは、反応しないか、または反応するために強力な触媒もしくは非実用的な反応条件を必要とするかのいずれかの基（すなわち、「非反応性」または「不活性」基）とは対照的である。
【００１９】
本明細書で使用する場合、「分子質量」または分子量とは、ヒアルロン酸などの水溶性ポリマーの文脈においては、多角度光散乱法によって決定されるポリマーの名目上の平均分子質量を指す。分子量は、数平均分子量または重量平均分子量のいずれかとして表すことができる。特に示さない限り、本明細書において分子量へのすべての言及は、数平均分子量を指す。分子量の値を欠く場合、ポリマーは、分子量を測定するための粘度測定方法である、その固有または生来の粘度によっても特徴付けることができる。
【００２０】
「ヒドロゲル」という用語は、その中で水が連続相であり、例えば、含水量が５０％（ｗ／ｗ）よりも大きい、水含有の三次元親水性ポリマー網目構造またはゲルを指す。
【００２１】
「ゲル化」とは、物質がゲル化状態を形成することを意味する。
【００２２】
「無菌」組成物は、米国薬局方の無菌試験を用いて決定される生存可能な微生物を含まない組成物である。２００８年米国薬局方協会の第３０次改訂版「米国薬局方」を参照されたい。
【００２３】
互換的に使用される「薬物」または「薬学的な活性剤」または「生物活性剤」または「活性剤」という用語は、生物活性を有しており、かつ治療目的に適しているか、またはそのために使用される任意の有機もしくは無機化合物または物質を意味する。タンパク質、ホルモン、抗癌剤、低分子化学化合物および模倣物、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ならびに遺伝子治療は、「薬物」のより広範な定義下に含まれる。本明細書で使用する場合、本明細書におけるコルチコステロイドなどの薬物への言及、および他の化学化合物への言及は、適用される場合、本明細書に記載されている化合物のジアステレオマーおよび鏡像異性体などの異性体、塩、溶媒和物、ならびに多形体、特定の結晶形態、ならびにラセミ混合物および純粋な異性体を含めた、その薬学的に許容される形態のうちのいずれかにある化合物を含むよう意図される。
【００２４】
「水不溶性薬物」または「水難溶性薬物」とは、１０ｍｇ／ｍＬ未満の水溶解度を有する薬物のことである。
【００２５】
本明細書において提供される、組成物（またはヒドロゲルもしくはポリマー）の「有効量」または「薬学的有効量」または「治療有効量」という用語は、非毒性であるが、対象における疼痛を予防する、軽減する、または取り除くなどの所望の応答をもたらすのに十分な量の組成物を指す。必要とされる正確な量は、対象によって、対象の種、年齢および全身状態、処置される状態の重症度、使用される特定の１つの薬物または複数の薬物、組成物の詳細、投与形式などに応じて様々となろう。任意の個々の症例における適切な「有効」量は、型通りの実験を用いて当業者によって決定することができる。
【００２６】
「任意選択の」または「場合により」とは、状況が生じる場合および状況が生じない場合を説明が含むように、その後に記載される状況が生じ得るか、または生じ得ないことを意味する。
【００２７】
ある種の特徴または実体に関して「実質的に」という用語は、該特徴または実体に関して、著しい程度まで、またはほぼ完全であること（すなわち、８５％以上の程度）を意味する。
【００２８】
「約」という用語は、特に所与の量に関して、±５％の偏差を包含するよう意図される。
【００２９】
さらなる定義は、以下の項目においても見いだすことができる。
概説
【００３０】
本出願は、少なくとも一部は、ヒアルロン酸をベースとするポリマーおよびコルチコステロイド（corticostertoid）を含む組成物、通常、水性組成物を安定化させるのに有効なある種の添加物を本出願人が発見したことに基づいている。既に記載されている通り、本出願人らは、ヒアルロン酸をベースとするポリマーおよびコルチコステロイドを含む水性組成物は、コルチコステロイドが存在しない同じＨＡポリマーをベースとする組成物に関して観察されるものよりも、かなり大きな経時的な粘度低下を示すことを認識した。前述に基づくと、本出願人らは、経時的な粘度低下が、１種または複数の安定化添加物を組み入れることにより実質的に低減される、こうしたＨＡポリマー含有組成物を有意に安定化させるのに有効な、ある種のこうした物質を特定した。
【００３１】
本文脈では、「安定化させる」とは、例えば、添加物が存在しない組成物を含む同じヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイドと比べて、（ＨＡ−ＣＯＲＴ）組成物を含むヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイドに関して、経時的に観察される粘度低下の度合いが低減される（他の尺度も使用することができるが）ことを意味する。実施例１〜２７から分かる通り、加速保存安定性条件に曝した場合（すなわち、長期間にわたる加速温度）、その安定化比によって便利に示されるように、安定化量のある種の糖（単糖、二糖、多糖）、糖アルコール、ポリオール、およびポリオール含有界面活性剤を含むＨＡ−ＣＯＲＴ組成物は、こうした安定化添加物が存在しないＨＡ−ＣＯＲＴ組成物と比べて、かなり強化されてた粘度保持を示す。この安定化比とは、ある時点においておよびある種の保存条件下で測定される、ＨＡ−ＣＯＲＴの安定化添加物含有組成物（ＨＡ−ＣＯＲＴ−ＳＡ）に関するＨＡ粘度の保持率と、同じＨＡ−ＣＯＲＴ組成物（添加物が存在しない）のＨＡ粘度の保持率との比のことである。この場合、データを正規化することにより、該添加物の効果を容易に比較することができる。調製した組成物の場合、ヒアルロン酸ポリマーだけの組成物の場合のデータは、その低減により証拠となる通り、ＨＡの粘度に及ぼすコルチコステロイドの脱安定化作用を実証した。例えば、実施例１Ａを参照されたい。安定化添加物として有効な物質の場合、経時的な粘度の保持率が重要であった。例えば、特に有用な組成物は、６０℃で６日間、保存した場合、初期の粘度値（０時間）と比べて、約５０％以下の粘度低下を示す組成物である。安定化添加物として適した物質は、６０℃で保存した場合、対応する組成物に関して、安定化比が、６日目に、少なくとも１．２、好ましくは少なくとも１．３を一般に示すことになろう。実施例から分かる通り、有効な添加物は、上記の条件下で、約１．２〜約２．６の範囲の、またはそれより大きな安定化比となった。（加速保存条件／貯蔵寿命の選択は任意であり、単に、対象組成物中の添加物として使用するのに適した物質を評価する便利な尺度を提供するに過ぎない）。支持実施例において分かる通り、ＨＡをベースとする組成物は、様々な温度（４０℃、４５℃、５５℃、６０℃、８０℃など）、湿度（周囲湿度および高湿度）、および保存期間（１０時間、２０時間、２２時間、２５時間、３０時間などの時間、１日間、３日間、５日間、６日間、７日間、１５日間、３０日間、４５日間などの日数、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間などの週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月などの月数、または年数（１年以上）にもなる下で試験された。実施例において分かる通り、より顕著な効果は、一般に、高温（例えば、８０℃で行った実施例１３を参照されたい）（約５〜約７の範囲の安定化比が観察された）、または長期間（例えば、安定化組成物が７．４７の安定化比を有する実施例２２を参照されたい）などのより過酷な条件下で保存した試料について観察される。
組成物
ＨＡをベースとする成分
【００３２】
対象組成物および方法において使用されるヒアルロン酸ポリマーは、誘導体化されていてもよくまたは誘導体化されていなくてもよく、架橋されていてもよくまたは架橋されていなくてもよい。さらに、対象組成物は、化学修飾ヒアルロン酸（それ自体は、架橋されていてもよくまたは架橋されていなくてもよい）、架橋化ヒアルロン酸、非修飾ヒアルロン酸、または前述の組合せなどの２種以上の種類のヒアルロン酸を含んでもよい。より詳細には、このヒアルロン酸ポリマー成分は、液状形態もしくはゲル形態、または両方の組合せにあるとすることができる。好ましい一実施形態では、ヒアルロン酸ポリマーは、非修飾ヒアルロン酸の水溶液中に懸濁している修飾ヒアルロン酸ゲルを含む。
【００３３】
例示的な修飾ヒアルロン酸の１つは、そのヒドロキシル基をジビニルスルホンと反応させて誘導体化させ、次に、ＰＥＧ−ジチオールなどの架橋剤により少し架橋させたヒアルロン酸である。好ましい実施形態では、ヒアルロン酸は、ジビニルスルホンとの反応によって１０％以下程度に修飾されて、そのヒドロキシル基の１０％以下が（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）基に変換されている。特に、ヒアルロン酸は、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％および１０％から選択される、ヒドロキシル基の（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）基への変換度を有することができる。あるいは、ヒアルロン酸は、上記の百分率のいずれか２つの間の範囲内に収まるヒドロキシル基の変換度を有することができる（例えば、２〜７％、２〜６％、３〜８％、３〜７％などから提示される整数のありとあらゆる組合せについて、１〜１０％、２〜１０％、３〜１０％、４〜１０％などから）。さらにより具体的な実施形態では、ヒアルロン酸は、二糖反復単位あたり、約４〜５％の、ヒドロキシル基の（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）基への変換度を有する。親ポリマーの置換／修飾度は、いくつかの適切な方法、例えば、ＮＭＲ、ＵＶもしくはＩＲ分析、または元素分析のいずれかにより決定することができる。得られた活性化されたヒアルロン酸は、一般に、（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）ヒアルロン酸またはＶＳ−ＨＡと呼ばれ、米国特許第７，８２９，１１８号に記載されている。
【００３４】
ＶＳ−ＨＡなどのヒアルロン酸ポリマーとの反応に適した架橋剤の例には、２つ以上のチオール基を含有するチオール含有架橋剤が含まれる。こうしたチオール基は、ビニル−スルホン誘導体化ヒアルロン酸内などの、ビニルスルホンと反応することになる。例示的なチオール架橋剤には、ＰＥＧ−ジチオール（ＨＳ−ＰＥＧ−ＳＨ）、３−アームＰＥＧ−トリ−チオール（グリセリンコア）、４−アームＰＥＧ−テトラチオール（ペンタエリスリトールコア）、または８−アームＰＥＧ−オクタ−チオール（ヘキサグリセリンコア）が含まれる。好ましい架橋剤は、ＰＥＧ−ジチオールである。架橋剤の分子量は、通常、修飾ヒアルロン酸のそれよりも小さい。一般に、架橋剤の分子量は、約２００〜約２０，０００ダルトンの範囲である。ＰＥＧジチオールまたは他の適切な任意の架橋剤などの架橋剤に関する例示的な分子量には、とりわけ、約３３５０、３４００、および５０００ダルトンが含まれる。例えば、本明細書における実施例２８〜３３を参照されたい。実施例２８には、約４％のビニルスルホンの修飾レベルを有する、例示的なビニルスルホン誘導体化ヒアルロン酸の調製が記載されている。実施例２９には、低い修飾レベルを有するビニルスルホン誘導体化ヒアルロン酸と、分子量３４００を有する架橋剤のＰＥＧ−ジチオールとの反応によるゲルの調製が記載されている。実施例３０には、生理食塩水中のＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−ジチオールゲルのスラリーの調製が記載されている一方、実施例３１には、ヒアルロン酸溶液中でのＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−ジチオールゲルのスラリーの調製が記載されている。これらの製剤はすべて、安定化添加物の組み入れに適した、例示的なヒアルロン酸ポリマー成分、例えば、水溶液、ゲル、およびそれらの組合せを提供する。
【００３５】
ヒアルロン酸をベースとするポリマーはまた、ＰＣＴ／ＵＳ／２００４／０４０７２６（ＷＯ２００５／０５６６０８）において記載されている通り、ヒドラジド反応性基および／またはアミノオキシ反応性基も含むことができ、ＨＡの誘導体化および得られたポリマー自体に関連する、本開示の関連部分の全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３６】
あるいは、本ＨＡは、チオール誘導体化ヒアルロン酸などのチオール誘導体化されていてもよい。例示的なチオール誘導体化ヒアルロン酸ポリマーには、米国特許第７，９８１，８７１号、同第６，８８４，７８８号、同第６，６２０，９２７号、同第６，５４８，０８１号、同第６，５３７，９７９号、同第６，０１３，６７９号、同第５，５０２，０８１号、および同第５，３５６，８８３号において記載されているものが含まれ、こうしたチオール誘導体化ポリマーに関する上記特許の関連部分の全体は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３７】
ヒアルロン酸ポリマーの追加例には、以下に限定されないが、R.  V.  Sparerらの「Controlled  Release  from  Glycosaminoglycan  Drug  Complexes」、第６章、１０７〜１１９頁、T.  J.  RosemanらのCONTROLLED  RELEASE  DELIVERY  SYSTEMS、Marcel  Dekker、Inc.、New  York（１９８３年）に開示されているそうしたポリマーを含む、システイン−誘導体化ヒアルロン酸が含まれる。
【００３８】
追加の好ましいポリマーの例には、ヒドロカルビル基、アリール基、置換ヒドロカルビル基または置換アリール基を介して、Ｎ−アシルウレア基に連結している側鎖チオール基により誘導体化されているヒアルロン酸が含まれる。本明細書において提供される組成物および方法に使用するために例示的なポリマーには、Ｃａｒｂｙｌａｎ（商標）−Ｓ（国際特許出願番号ＷＯ２００５／０５６６０８に詳細に記載されている）が含まれる。
【００３９】
さらに、ヒアルロン酸または誘導体化ヒアルロン酸は、反応性リンカーに共有結合していてもよく、かつ／または二官能性または多官能性アクリレート化合物、アリル化合物もしくはメタクリレート化合物と架橋していてもよい。ヒアルロン酸の修飾に関する代表的なリンカーには、以下に限定されないが、ポリ（エチレングリコール）−ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ポリ（エチレングリコール）−ジメタクリレート（ＰＥＧＤＭ）、ポリ（エチレングリコール）−ジアクリルアミド（ＰＥＧＤＡＡ）、およびポリ（エチレングリコール）−ジメタクリルアミド（ＰＥＧＤＭＡ）、およびそれらの誘導体が含まれる。上記のリンカーのＰＥＧ部位は、例えば、２〜１００以上のサブ単位を含む、オリゴマーまたはポリマーであってもよい。ヒアルロン酸などのポリマーの修飾／官能基化に適した追加的なリンカーには、以下に限定されないが、デキストランアクリレート、デキストランメタクリレート、デキストラングリシジルメタクリレート、メタクリレート官能基化ヒアルロン酸、アクリレート官能基化ヒアルロン酸、グリセロールジメタクリレート、グリセロール１，３−ジグリセロレートジアクリレート、ソルビトールアクリレートおよびそれらの誘導体が含まれる。
【００４０】
ヒアルロン酸またはヒアルロン酸をベースとするポリマーは、通常、約７００〜３，０００，０００ダルトンの範囲の平均分子量を有することになろう。例示的な分子量の範囲は、約１，０００〜２，０００，０００ダルトンまたは約５，０００〜１，０００，０００ダルトンである。さらなる適切な分子量範囲には、約５０，０００ダルトン〜約１，０００，０００ダルトン、または約１００，０００ダルトン〜約１，２００，０００ダルトン、または約９０，０００ダルトン〜約３００，０００ダルトンが含まれる。ヒアルロン酸の分子量は、一般に、例えば、多角度レーザー光散乱排除（exlusion）クロマトグラフィー（ＭＡＬＬＳ−ＳＥＣ）により求めることができる、平均分子質量の値である。その供給元に応じて、ヒアルロン酸は、最大約３、またはより好ましくは最大約２の多分散性（Ｍｗ／Ｍｎ）を有することができる。一般的に、ヒアルロン酸は、約２．５未満、より好ましくは約２未満の値を含む、かなり狭い分子量分布を有することになろう。ヒアルロン酸ポリマーの例示的な多分散性は、約１．０２〜約２．５の範囲に及び、この場合、出発ヒアルロン酸は、約１．０２、１．０５、１．１、１．２、１．３、１．３、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４もしくは２．５、またはもっと大きい多分散性を有することができる。あるいは、本ヒアルロン酸ポリマーは、水中、特定の濃度において、上で提示されているいずれか１つまたは複数の平均分子量範囲に相当する、通常、センチポアズの粘度を有することができる。
【００４１】
上記の通り、ヒアルロン酸成分は、ヒアルロン酸の水溶液中に、架橋化されているＨＡをベースとするヒドロゲル粒子を含むことができる。こうした組成物の１つは、実施例３１に記載されている。好ましい水溶液は、ヒアルロン酸の生理食塩水溶液であり、該ヒドロゲルに添加されるヒアルロン酸の例示的な水溶液は、約０．３重量％〜約４重量％、または約０．５重量％〜約２重量％の範囲の濃度を有する。代表的な製剤の１つは、成分を以下の相対量：２０ｍｇ／ｍＬの濃度のヒアルロン酸２ｍＬを含む、ゲルスラリー（（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）１〜１０％ヒアルロン酸／ＰＥＧ−ジチオール）４ｍＬを含む。特に好ましい製剤は、２０ｍｇ／ｍＬの濃度のヒアルロン酸２ｍＬを含む、ゲルスラリー（（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）４％ヒアルロン酸／ＰＥＧ−ジチオール）４ｍＬを含む。通常、得られた膨潤ゲル中の最終的なヒアルロン酸含有量は、約０．０５〜５％（０．５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ）の範囲である。好ましくは、得られた膨潤ゲル中の最終的なヒアルロン酸含有量は、約０．１〜３％または約０．１〜１％、または約０．５〜０．８％である。得られた膨潤ゲル中の例示的な最終的なヒアルロン酸含有量は、例えば、以下の百分率：０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０および５．０のいずれかに相当し得る。例えば、得られた組成物中のヒアルロン酸と架橋化（例えば、（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）１〜１０％ヒアルロン酸／ＰＥＧ−ジチオール）ヒドロゲル粒子との代表的な相対量（重量比）は、通常、約１０：１から、または約５：１から、または約３：１から、または約１：１からの範囲内に収まる。
【００４２】
他の例示的なＨＡをベースとする組成物は、ＳＹＮＶＩＳＣ（登録商標）（ｈｙｌａｎ  Ａ流体、ｈｙｌａｎＢゲル、および生理食塩水を含むゲル様混合物）、ＨＹＬＡＳＴＡＮ（商標）、ＭＯＮＯＶＩＳＣ（商標）、ＧＥＬ−ＯＮＥ（登録商標）（例えば、米国特許公開第２０１２／０１４２６２２９号を参照されたい）、またはＤＵＲＯＬＡＮＥ（登録商標）と呼ばれる組成物を含み、さらにコルチコステロイドを含む。本明細書において提供されるコルチコステロイドおよび安定化添加物と組み合わせて使用するための、さらなるヒアルロン酸をベースとする組成物には、米国特許第４，７１３，４４８号、米国特許第５，１４３，７２４号、米国特許第５，８２７，９３７号、米国特許第６，０１３，６７９号、米国特許第５，３５６，８８３号、米国特許第５，５０２，０８１号、および米国特許第６，８８４，７８８号、同第６，５４８，０８１号、同第６，６２０，９２７号に記載されているものが含まれる。
【００４３】
１つまたは複数の実施形態では、本明細書において提供される本ヒアルロン酸ポリマー成分は無菌である。一般的な殺菌方法には、加熱、高圧滅菌、化学処理、またはろ過が含まれる。
コルチコステロイド
【００４４】
対象であるＨＡ−ポリマーをベースとする組成物は、コルチコステロイドを含む。先に議論した通り、本出願者らは、トリアムシノロンアセトニドなどのコルチコステロイドを含有する水性ヒアルロン酸ポリマー組成物は、コルチコステロイドが存在しない同じ組成物に関して観察されるものよりも、かなり大きな経時的粘度低下があることを実証することを認識した。したがって、経時的な粘度低下に対し強固な抵抗性を有するヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物を提供する必要性が認識された。
【００４５】
一般に、コルチコステロイドは、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チクソコルトール、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンフレトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチレート、ヒドロコルチゾン−１７−バレレート、二プロピオン酸アクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、二プロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、クロベタゾン−１７−ブチレート、クロベタゾール−１７−プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン、二プロピオン酸ベクロメタゾン一水和物、フルニゾリド、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、およびフロ酸フルチカゾンからなる１つまたは複数のものから選択される。
【００４６】
好ましい実施形態では、本組成物はトリアムシノロンアセトニドを含む。本明細書において提供されるヒドロゲル製剤において使用するために好ましい化合物の１つは、トリアムシノロン、すなわち（１１β，１６α）−９−フルオロ−１１，１６，１７，２１−テトラヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオン）、またはその誘導体（トリアムシノロンアセトニドなど）、またはその薬学的に許容される塩、エステルもしくは溶媒和物である。トリアムシノロンアセトニドの構造は、以下に示されている。
【化１】
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【００４７】
コルチコステロイドは、通常、本明細書において提供されるＨＡポリマーをベースとする組成物中に混合されている、その中で懸濁している、またはその内部に封入されていてもよい。あるいは、コルチコステロイドは、ポリマーコンジュゲートの形態にあってもよく、または放出可能な様式で使用される成分に共有結合して、ＨＡをベースとするヒドロゲルを調製することができる。
【００４８】
一般に、本組成物中に含有しているコルチコステロイドの量は、約０．５〜８０ｍｇ／ｍＬの範囲にある。あるいは、重量基準では、本明細書において提供される水性組成物は、その効力に応じて、約０．０１重量％〜約２０重量％のコルチコステロイドを含有している。コルチコステロイドの例示的な量（湿潤ゲル全体の重量基準）は、例えば、効力がより低いコルチコステロイドの場合、約１０重量％〜約２０重量％であり、例えば、トリアムシノロンアセトニドなどのより効力の高い生物活性剤の場合、約０．０１重量％〜約１０重量％、または約０．０１％〜約５％、または約０．０１％〜約３％、または約０．１〜約２％のコルチコステロイドであり、または約０．１〜約１％にもなるコルチコステロイドである。
安定化添加物
【００４９】
本明細書において提供されるヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物を安定化させる試みにおいて、本出願人らは、いくつかの異なる種類の添加物を探索し、それらの多くは、観察される粘度低下を防止するか最小限にするのに有効ではなかった。しかし、本明細書に記載されている、糖、糖アルコール、ポリオールおよび誘導体化ポリオールなどの添加物が、特に有効であることが発見された。したがって、本ＨＡ−ポリマーをベースとするコルチコステロイド組成物に組み入れるための安定化添加物には、ある種の糖（単糖、二糖、多糖）、糖アルコール、ポリオール、およびポリオール含有界面活性剤が含まれる。こうした物質は、一般に加工中の失活からタンパク質を安定化させるために使用されるが、こうした物質は、コルチコステロイドと組み合わせて、粘度または他のレオロジー特性の低下に対してＨＡ−ポリマーをベースとする物質を安定化させるのに使用することが今まで報告も認識もされていないように思われる。一実施形態では、本明細書に記載されている水性のＨＡをベースとするポリマー組成物は、治療用タンパク質またはペプチドが存在していない。いかなる理論にも拘泥しないが、一般に、本安定化添加物は、ヒドロキシル−低級アルキル基、すなわちヒドロキシメチル（−ＣＨ２−ＯＨ）またはヒドロキシエチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）などの１つまたは複数のヒドロキシアルキル基を有する傾向がある。本明細書において提供されるコルチコステロイド含有組成物における安定化添加物として好適であることが発見された物質には、支持実施例において例示されている通り、スクロースおよびデキストラン−４０および誘導体化多糖、カルボキシメチルセルロースなどの多糖、マンニトールおよびソルビトールなどの糖アルコール、ｎ−アセチルグルコサミンおよびデキストロースなどの単糖、トレハロース、マルトース、およびラクトースなどの二糖、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および誘導体化ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（商標）−Ｘ−１００（芳香族炭化水素部位およびＰＥＧ鎖を含む非イオン性界面活性剤である、４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェニル−ポリエチレングリコール）、およびグリセロール（単純ポリオール）などのポリオールが含まれる。使用に適したＰＥＧおよび誘導体化ポリオールなどのポリオールは、エチレンオキシド反復単位数が、約４〜約５００、または好ましくは約６〜約１００を有する。
【００５０】
実施例１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７はすべて、ヒアルロン酸ポリマー含有溶液中、およびヒアルロン酸ポリマーをベースとするゲルを追加的に含むヒアルロン酸ポリマー溶液中の安定化添加物として、スクロースの優れた性能を実証している。したがって、好ましい安定化添加物は、スクロースである。これらの実施例は、スクロースの添加が、試験した例示的な条件下で、粘度低下に対して、１．２倍から少なくとも１１．３倍の安定化効果を付与するのに有効であることを実証している。他の好ましい添加物には、マンニトール、ソルビトールおよびＮ−アセチルグルコサミン（例えば、実施例５、６、１３を参照されたい）、ラクトース、デキストラン−４０、ＰＥＧ４０００、カルボキシメチルセルロース、ＴＲＩＴＯＮ（商標）−ｘ−１００、およびグリセロール（例えば、実施例１６を参照されたい）、トレハロースおよびデキストロース（例えば、実施例１７を参照されたい）が含まれる。
【００５１】
一般に、顕著な安定化効果を付与するために、多量の安定化添加物を必要としない。例えば、有益な安定化効果は、１％重量／重量という少ない量の安定化添加物で、観察された。一般に、上で提示されている安定化添加物の量は、約０．２５％〜約２０％の範囲になろう。重量％基準の例示的な量は、スクロース、デキストラン−４０、カルボキシメチルセルロース、マンニトール、ソルビトール、ｎ−アセチルグルコサミン、デキストロース、トレハロース、マルトース、ラクトース、ポリエチレングリコール、ＴＲＩＴＯＮ（商標）−Ｘ−１００およびグリセロールから選択される安定化添加物が、約０．５重量％〜約１０重量％、より好ましくは約１重量％〜約５％の範囲となろう。本組成物における上述の例示的な量には、０．５％（すべて重量％である）、１．０％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、７％、８％および１０％が含まれる。例えば、６か月間（４０℃）で、７．４７の安定化比を実現するために、１％スクロースが有効である、実施例２２を参照されたい。
粘度および他の尺度
【００５２】
ヒアルロン酸ポリマーをベースとする組成物の安定性の指標として、粘度を使用することができるが、弾性係数、およびゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定される分子量変化などの他のレオロジー尺度も同様に、安定性を示すために好適に使用することができる。一般に、本実施例において、粘度は、実施例に説明されている条件下、レオメータを使用して測定した。この粘度は、例えば貯蔵寿命の指標を提示するよう、温度（熱安定性の指標）、湿度、および時間からなる様々な条件下で測定した。実施例から分かる通り、本明細書に記載されている安定化添加物は、様々な条件下で試験した例示のヒアルロン酸をベースとするコルチコステロイド組成物中で、大幅な粘度低下が経時的に起こるのを顕著に防止するのに有効であった。
例示的な組成物および方法
【００５３】
一般的に述べると、本明細書において提供される組成物および方法は、経時的な粘度低下に対して、コルチコステロイドを含むヒアルロン酸をベースとするポリマー組成物を安定化させるのに有効である。この安定化は、いくつかの様々な方法のいずれかで、例えば、６０℃で６日間、保存した場合に、その初期値と比べて、約５０％以下の粘度低下を示す組成物をもたらすことにより測定することができる。あるいは、本組成物は、６０℃で６日間、保存した場合、初期の値と比べて、約４５％以下の粘度低下を示し得る。好ましくは、本組成物は、６０℃で６日間、保存した場合、初期の値と比べて、約４０％以下の粘度低下を示す。さらにより好ましくは、本組成物は、６０℃で６日間、保存した場合、初期の値と比べて、約４０％以下の粘度低下を示す。添付の実施例において分かる通り、有利な安定化を評価するために適切な任意の閾値を使用することができる。６０℃で６日間保存するという選択（すなわち、加速保存条件下）は、比較的短期間で製剤安定性の評価を実現するので、便利な尺度である。しかし、実施例から分かる通り、安定性の向上は、いくつかの温度のいずれか、例えば、６０℃、５５℃、４０℃、４５℃、８０℃などにおいて、および任意の代表的な期間、例えば、１日目、３日目、５日目、６日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、１か月間、２か月間、３か月間もしくは６か月間にわたり、または相対湿度、例えば、通常、約３０％〜７５％の範囲の相対湿度で、測定することができる。
【００５４】
本明細書に記載されている安定化添加物の組み入れの安定化の利点を例示するための代替的な手法では、本明細書において提供される組成物は、一般に、１．２より大きな安定化比を有するであろう。先に記載した通り、安定化比（stabilizing  ratio）とは、所与の時点および定義した一式の保存条件下で測定した場合の、安定化添加物を含むヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物の場合の粘度の保持率と、安定化添加物が存在しない同じヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物の粘度の保持率との比である。すなわち、１．０の安定化比を有する組成物は、安定化添加物が存在しない組成物と同じ粘度低下を示す。すなわち、この添加物は、経時的な粘度低下に対して、測定可能な保護レベルをもたらさないということである。好ましくは、本明細書において提供される組成物は、少なくとも１．３、または少なくとも１．５の安定化比を有することになろう。特に好ましい組成物は、約１．８を超える安定化比を有する。添付の実施例において提示されている例示的な安定化比には、約１．５、約１．６、約１．７、約３．０、約４、約５．０、約７、約７．５、またはもっと高い値が含まれる。したがって、本明細書において提供される組成物および方法は、上記のいずれか１つまたは複数の値に相当する安定化比を有しているか、または上記の安定化比の値の任意の２つの間の範囲内にある、水性ヒアルロン酸ポリマー組成物を実現するのに好適である。安定化比は、任意の適切な時点において、例えば、１日目、３日目、５日目、６日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、１か月、２か月間、３か月間または６か月間において、および任意の適切な保存温度、例えば、２５℃、４０℃、４５℃、５５℃、６０℃または８０℃において、通常、約３０％〜７５％（例えば、３０％ＲＴ、３５％ＲＴ、４０％ＲＴ、４５％ＲＴ、５０％ＲＴ、５５％ＲＴ、６０％ＲＴ、６５％ＲＴ、７０％ＲＴおよび７５％ＲＴの任意の１つにおいて）の範囲の相対湿度において決定することができる。例えば、一実施形態では、安定化比は、６０℃で組成物を保存して、６日目に測定する。
【００５５】
経時的な粘度低下が低減したヒアルロン酸をベースとするポリマー組成物を作製する方法であって、ヒアルロン酸ポリマーおよびコルチコステロイドを含む水性組成物に、糖、糖アルコール、ポリオールおよびポリオール含有界面活性剤からなる群から選択される、安定化量の安定化添加物を組み入れ、これにより６０℃で６日間保存した場合、１．２より大きい安定化比を有するか、あるいは、その初期値と比べて、約５０％以下の粘度低下を示す組成物を得る工程を含む、方法も提供される。本方法では、本組成物は、例えば、それ自体がヒアルロン酸であるかもしくはヒアルロン酸をベースとするポリマーであってもよいヒアルロン酸ポリマーの水溶液とすることができ、または本組成物は、ヒアルロン酸をベースとするポリマー（polmer）の水溶液を含んでもよく、このポリマーは、ヒアルロン酸ポリマーをベースとするヒドロゲルと組み合わせたヒアルロン酸であってもよい。本水性組成物は、塩化ナトリウムなどの様々な塩、リン酸ナトリウムなどの様々な緩衝剤などを含むことができる。一般に、ヒアルロン酸ポリマー、安定化添加物およびコルチコステロイドを含む水性組成物を、例えば、数分間から数時間、混合する。次に、得られた組成物の試料は、一般に、無菌ガラス製バイアルなどの容器に移し、密封し、上記および実施例において記載されている選択した保存条件下に置かれる。保存の前に、この水溶液の粘度を測定（例えば、０に等しい時間において）すると、比較用の基本値を得るための初期値が得られる。
【００５６】
本明細書において提供される特に有効な水性組成物は、安定化添加物としてスクロースを含むものである。水性組成物中の例示的なスクロースの量は、１％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量、および１０％重量／重量である。実際のところ、スクロースは、１％、１．２５％、および１．７５％（重量／重量）などの低い濃度でさえも、安定化に特に有効であることが見いだされた。したがって、本開示による組成物は、安定化添加物すなわちスクロースを、例示的な量の任意の１つ、または上記の重量百分率の任意の２つの間に収まる量で含有することができる。
【００５７】
さらに、マンニトールは、１％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量、またはもっと多い場合でさえ、例えば５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量、および１０％重量／重量などの濃度でさえも、粘度低下を防止するのに特に有効であることが見いだされた。したがって、本開示による組成物は、安定化添加物すなわちマンニトールを例示的な量の任意の１つ、またはマンニトールを上記の重量百分率の任意の２つの間に収まる量で含有することができる。
【００５８】
さらなる安定化添加物、例えば、ソルビトール（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、Ｎ−アセチルグルコサミン（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、ラクトース（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、デキストラン−４０（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、ＰＥＧ４０００（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、カルボキシメチルセルロース（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、ＴＲＩＴＯＮ−ｘ−１００（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、グリセロール（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）、トレハロース（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量、および１０％重量／重量の濃度において）、およびデキストロース（例えば、％重量／重量、２％重量／重量、３％重量／重量、４％重量／重量、またはもっと多い、例えば、５％重量／重量、６％重量／重量、７％重量／重量、８％重量／重量、９％重量／重量および１０％重量／重量の濃度において）も、粘度低下を防止するのに特に有効であることが見いだされた。したがって、本開示によるさらなる組成物は、上記の例示的な添加物のいずれかを、上記の数量で、または上記の重量百分率の任意の２つの間に収まる量で含有することができる。
【００５９】
例示的な組成物は、以下に提示されている。一態様では、ヒアルロン酸をベースとするポリマー、コルチコステロイドおよび上記の安定化添加物を含む水性組成物が提供される。一実施形態では、この水性組成物は溶液である。例示的なヒアルロン酸ポリマーをベースとする溶液の例は、実施例１〜２２に提示されている。さらに別の実施形態では、水性組成物は、ヒアルロン酸ポリマー成分の場合、ヒアルロン酸をベースとするポリマーの溶液およびヒアルロン酸ポリマーをベースとするゲルを含み、この場合、上述の代表的な例は、実施例２３〜２７に提示されている。
【００６０】
好ましい水溶液は、例えば、生理食塩水中に非修飾ヒアルロン酸を含む溶液であり、この場合、ヒアルロン酸の例示的な水溶液は、約０．３重量％〜約４重量％、または約０．５重量％〜約２重量％の範囲の濃度を有する。あるいは、本水溶液は、本明細書において提供される任意の適切なヒアルロン酸をベースとするポリマーを含むことができる。水溶液または溶液−ゲルの組合せは、上記のコルチコステロイド、および安定化量の本明細書において提供される安定化添加物（例えば、糖、糖アルコール、ポリオール、または誘導体化ポリオール）をさらに含む。
【００６１】
特定の実施形態では、コルチコステロイドは、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チクソコルトール、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンフレトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチレート、ヒドロコルチゾン−１７−バレレート、二プロピオン酸アクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、二プロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、クロベタゾン−１７−ブチレート、クロベタゾール−１７−プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン、二プロピオン酸ベクロメタゾン一水和物、フルニゾリド、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸モメタゾン一水和物、およびフロ酸フルチカゾンからなる群から選択される。
【００６２】
１つまたは複数の好ましい実施形態では、コルチコステロイドは、トリアムシノロン、またはトリアムシノロンアセトニドなどのトリアムシノロン誘導体である。
【００６３】
１つまたは複数の特に好ましい実施形態では、コルチコステロイドは、トリアムシノロンアセトニドである。
【００６４】
さらなる実施形態では、本水性組成物は、重量％基準で、約０．５重量％〜約１０重量％、より好ましくは約１重量％〜約５％の安定化添加物を含む。
【００６５】
上述のいずれか１つまたは複数に関するさらに別の実施形態では、本安定化添加物は、スクロース、デキストラン−４０、カルボキシメチルセルロース、マンニトール、ソルビトール、ｎ−アセチルグルコサミン、デキストロース、トレハロース、マルトース、ラクトース、ポリエチレングリコール、ＴＲＩＴＯＮ（商標）−Ｘ−１００およびグリセロールからなる群から選択される。
【００６６】
上述に関するさらに１つまたは複数の好ましい実施形態では、本安定化添加物は、スクロースである。
【００６７】
例えば、一般に、上記の非修飾ヒアルロン酸と組み合わせた、ヒアルロン酸ポリマーをベースとするゲルを含む水性組成物に関すると、例示的な組成物は、本明細書において提供されている通りである。好ましい実施形態では、ヒアルロン酸ゲルは、２つ以上のチオール基を有するチオール架橋剤により架橋されている、ジビニルスルホンとの反応によってそのヒドロキシル基の１０％以下が誘導体化されているヒアルロン酸である。特に好ましい一実施形態では、ジビニルスルホンとの反応によってそのヒドロキシル基の１０％以下が誘導体化されているヒアルロン酸は、ＰＥＧ−ジチオールにより架橋化されている。例えば、本ヒアルロン酸のヒドロキシル基の２−（ビニルスルホニル）エトキシ基への変換度は、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％および１０％から一般に選択される。例えば、本明細書における実施例２８および２９を参照されたい。ゲル形態の場合、本組成物中のヒアルロン酸ポリマー成分は、水性スラリーなどの水性組成物中に存在してもよく、または非修飾ヒアルロン酸の溶液と合わせてもよい（例えば、実施例３１を参照されたい）。好ましい水溶液は、ヒアルロン酸の生理食塩水溶液であり、ヒドロゲルに添加されるヒアルロン酸の例示的な水溶液は、約０．３重量％〜約４重量％、または約０．５重量％〜約２重量％の範囲の濃度を有する。代表的な製剤の１つは、ヒアルロン酸ポリマーをベースとする成分を以下の相対量：２０ｍｇ／ｍＬの濃度のヒアルロン酸２ｍＬを含む、ゲルスラリー（（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）１〜１０％ヒアルロン酸／ＰＥＧ−ジチオール）４ｍＬで含む。特に好ましい製剤は、２０ｍｇ／ｍＬの濃度のヒアルロン酸２ｍＬを含む、ゲルスラリー（（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）４％ヒアルロン酸／ＰＥＧ−ジチオール）４ｍＬを含む。通常、得られた膨潤ゲル中の最終的なヒアルロン酸含有量は、約０．０５〜５％（０．５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ）の範囲である。好ましくは、得られた膨潤ゲル中の最終的なヒアルロン酸含有量は、約０．１〜３％または約０．１〜１％、または約０．５〜０．８％である。例示的な得られた膨潤ゲル中の最終的なヒアルロン酸含有量は、例えば、以下の百分率：０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、および５．０のいずれかに相当し得る。例えば、得られた組成物中の、ヒアルロン酸と架橋化（例えば、（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）１〜１０％ヒアルロン酸／ＰＥＧ−ジチオール）ヒドロゲル粒子との代表的な相対量（重量比）は、通常、約１０：１から、または約５：１から、または約３：１から、または約１：１からの範囲内に収まる。
【００６８】
特に好ましい製剤および関連方法は、上記で説明したヒアルロン酸ポリマー成分、トリアムシノロンアセトニドおよびスクロースを含むものである。
【００６９】
提供される本組成物および方法の１つまたは複数の実施形態では、本組成物は無菌である。さらに、本組成物は、後で使用するために、例えばシリンジ中に包装して保存することができる。
使用
【００７０】
本明細書に記載されている本安定化ヒアルロン酸ポリマー−コルチコステロイド組成物は、いくつかの用途、例えば創傷治癒、血管新生および腫瘍形成のために使用することができる。D.  D.  AllisonおよびK.  J.  Grande-Allen、Tissue  Engineering、１２巻、第８号、２１３１〜２１４０頁（２００６年）、G.  D.  Prestwichら、Tissue  Engineering、１２巻、第８号、２１７１〜２１８０頁（２００６年）、G.  D.  Prestwichら、Tissue  Engineering、１２巻、第１２号、３４０５〜３４１６頁（２００６年）を参照されたい。本安定化組成物はまた、組織充填剤、皮膚充填剤、例えば尿道用または食道用増量剤（esophageal  bulking  agent）としての増量剤、ならびに塞栓剤、ならびに軟骨の欠陥／傷害を修復するための作用剤、ならびに骨の修復および／または成長を強化するための作用剤として使用することもできる。有利には、安定化添加物を含めることに基づく本組成物は、これらの組成物が普通ならこうした添加物の非存在下の場合よりも高い程度にその粘度を維持して、延長された長い期間、標的部位に理想的にも存続することになる投与用の治療組成物をもたらすことになろう。
【００７１】
本組成物は、変形性関節症または関節リウマチの処置において、または痛風もしくはピロリン酸カルシウム結晶沈着症などの他の炎症性関節炎（例えば、関節の関節腔内への注射による）のため、または手術手順後に形成する恐れがある癒着の低減または予防において、使用することもできる。本組成物は、とりわけ、慢性または急性炎症を処置するために有用である。特に、対象組成物は、コルチコステロイドをヒアルロン酸ポリマーに組み入れることによって、コルチコステロイドを注射する際の軟骨への損傷を低減するのに有用である。例えば、ゲル含有製剤に関すると、コルチコステロイドの組み入れは、ステロイド粒子の大部分を関節組織に直接接触させるのを防止するのに有効である。さらに、ヒアルロン酸ポリマーをベースとするヒドロゲル中にステロイド粒子を封入させると、その全身的な濃度を最小化しながら、関節内のステロイドの局所濃度を最大化するのに有効である。さらに、本明細書において提供されるヒドロゲル製剤中にステロイド粒子を封入すると、関節からの早すぎるクリアランスからステロイド粒子を保護するのに有効である。最後に、ヒドロゲル中にステロイドを封入することにより、望ましくない局所的および全身的な副作用を最小限にしながら、ヒドロゲルへの封入なしに得られるものよりも低い総用量でステロイドの治療効力が得られる。
【００７２】
本組成物はまた、眼疾患の処置すなわち、急性痛風性関節炎、急性および亜急性滑液包炎、急性非特異的腱滑膜炎、上顆炎、または滑膜炎において使用することもできる。本組成物は、円形脱毛、円板状エリテマトーデス、ケロイド、限局性肥厚症、環状肉芽腫の浸潤炎症性病変、扁平苔癬、慢性単純性苔癬（神経皮膚炎）、および尋常性乾癬、糖尿病性リポイド類壊死の処置に使用することができる。本組成物は、腱膜または腱（節）の嚢胞性腫瘍にも有用となり得る。
【００７３】
本出願は、これから、本発明の範囲を限定するよう意図されていない、ある種の実施形態と併せて説明される。それどころか、本出願は、特許請求の範囲内に含まれる、すべての代替、修正および等価物に及ぶ。したがって、以下のものは、ある種の実施形態の例示目的のために本出願の実践を例示しており、その手順および概念的態様の有用かつ容易に理解される説明になると考えられるものを提供するために提示されている。
【実施例】
【００７４】
以下の実施例は、本明細書において提供される化合物、組成物および方法がどのように行われて評価されるかということの完全な開示および説明を、当業者に提供するために提示されており、真に例示的であることが意図されている。したがって、これらの実施例は、本発明者らが発明と見なしているものの範囲を限定する意図は決してない。反応条件の様々な変形および組合せ、例えば、純度、収率などの生成物特徴を最適化するために使用され得る、成分の濃度、所望の溶媒、溶媒混合物、温度、圧力、ならびに他の反応パラメータおよび条件が存在する。こうしたものは、同様に、本開示の範囲内にあると考えられる。本明細書において特に指摘がない限り、または文脈により明確な矛盾がない限り、考えられるすべての変形における上記の要素の任意の組合せが、本発明によって包含される。
（実施例１Ａ）
コルチコステロイドを含有している架橋化ヒアルロン酸をベースとする組成物に関して観察された粘度低下の向上
【００７５】
ヒアルロン酸溶液中に懸濁した架橋化ヒアルロン酸をベースとするヒドロゲルを含有している製剤について検討している間、２５℃で保存した場合、コルチコステロイド、トリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）の存在下で、ヒアルロン酸成分の粘度は、コルチコステロイド、トリアムシノロンアセトニドが存在しない同じ製剤と比べて、経時的により急速に低下することが観察された。
【表１】
2016506909.tif 000003
【００７６】
表１にまとめられている観察に基づき、上記の粘度低下が、例えば、可能性のある安定化添加物の組み入れを含めた様々な経路により改善され得るかどうかを決定するための追加検討を行った。
（実施例１Ｂ）
８０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００７７】
ヒアルロン酸、ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、８８８ＫＤａ）６．９ｇを０．９％ＮａＣｌ８８１ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。１Ｍリン酸ナトリウム３．９７ｍＬ、ｐＨ６．７１をこのＨＡ溶液に加えた。次に、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）３７２ｍｇを、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、溶解したＨＡ２２３．２ｍＬと混合した。スクロース約１．５ｇをそれぞれＨＡ／ＴＡ懸濁液７４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、分注したこれらの試料すべてを８０℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０時間における粘度との比により決定した。３０時間における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２】
2016506909.tif 000004
【００７８】
これらの結果はさらに、著しい粘度低下により示される通り、ＴＡの存在により、ＨＡの分解が増加していることを実証している。これらの結果はまた、スクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ試料と比較して、粘度低下の顕著な低減がもたらされたことも示している。
（実施例２）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００７９】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、８８８ＫＤａ）６．９ｇを０．９％ＮａＣｌ８８１ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。１Ｍリン酸ナトリウム３．９７ｍＬ、ｐＨ６．７１をこのＨＡ溶液に加えた。次に、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）３７２ｍｇを、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、溶解したＨＡ２２３．２ｍＬと混合した。スクロース約１．５ｇをそれぞれＨＡ／ＴＡ懸濁液７４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、分注したこれらの試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表３】
2016506909.tif 000005
【００８０】
これらの結果は、著しい粘度低下により示される通り、ＴＡの存在により、ＨＡの分解が増加していることを示している。これらの結果はさらに、スクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ試料と比較して、粘度低下の顕著な低減がもたらされたことも示している。
（実施例３）
５５℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００８１】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、８８８ＫＤａ）６．９ｇを０．９％ＮａＣｌ８８１ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。１Ｍリン酸ナトリウム３．９７ｍＬ、ｐＨ６．７１をこのＨＡ溶液に加えた。次に、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）１３５．３ｍｇを、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、溶解したＨＡ８１．２ｍＬと混合した。スクロース約０．５ｇをそれぞれＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±２ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、分注したこれらの試料すべてを５５℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表４】
2016506909.tif 000006
【００８２】
これらの結果は、粘度低下により示される通り、ＴＡの存在により、ＨＡの分解が増加していることを示している。これらの結果はさらに、スクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ試料と比べて、粘度低下の顕著な低減がもたらされており、各時点においてではあるが、特にさらなる時点において、スクロースの存在により、著しい安定化が付与されたことを実証している（例えば、添加物不含組成物と添加物含有組成物との間の粘度の差が、３日目などよりも６日目の方が大きいことを示している）。
（実施例４）
４０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００８３】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、８８８ＫＤａ）６．９ｇを０．９％ＮａＣｌ８８１ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。１Ｍリン酸ナトリウム３．９７ｍＬ、ｐＨ６．７１をこのＨＡ溶液に加えた。次に、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）３７２ｍｇを、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、溶解したＨＡ２２３．２ｍＬと混合した。スクロース約１．５ｇをそれぞれＨＡ／ＴＡ懸濁液７４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０週目の試料を除き、分注したこれらの試料すべてを４０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０週目における粘度との比により決定した。６週目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表５】
2016506909.tif 000007
【００８４】
これらの結果は、粘度低下により示される通り、ＴＡの存在により、ＨＡの分解が増加していることを示している。これらの結果はさらに、スクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ試料と比較して、粘度低下が著しく低減していることを実証している。この効果は、４０℃においてさらに立証されており、経時的に徐々に顕著になっている。
（実施例５）
４５℃におけるＨＡ粘度に及ぼす様々な添加物の効果
【００８５】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、９１０ＫＤａ）７．８３ｇを０．９％ＮａＣｌ１０００ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）４．３８ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）５００ｍｇを、溶解したＨＡ３００ｍＬと混合した。スクロース、デキストロース、マルトース、マンニトール、ソルビトールおよびＮ−アセチルグルコサミン約０．３７ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液３７±１ｍＬの個々の試料に加えて、約１％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０日目の試料を除き、分注したこれらの試料すべてを４５℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。１２週目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表６】
2016506909.tif 000008
【００８６】
これらの結果は、スクロース、マンニトール、ソルビトール、およびＮ−アセチルグルコサミンを添加すると、添加物を含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく（および実質的に）保持されることを示している。さらに、糖、デキストロース、およびマルトースは、添加物が存在しない組成物と比べた場合に観察される通り、ヒアルロン酸−トリアムシノロンアセトニド組成物を安定化させるのに有効ではなかった。
（実施例６）
８０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【００８７】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、９１０ＫＤａ）７．８３ｇを０．９％ＮａＣｌ１０００ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）４．３８ｍＬを加えた。約１６ｇ（±１ｇ）を６本の無菌ナルゲンボトルに分注した。各ボトル中の最終スクロース含有量がそれぞれ約２％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）および１０％（ｗ／ｗ）となるよう、スクロースを３本のボトルに加えた。残りの３本のボトルには、各ボトル中の最終ソルビトール含有量がそれぞれ約２％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）および１０％（ｗ／ｗ）となるよう、ソルビトールを加えた。各ＨＡ／添加物溶液約８ｇに、最終ＴＡ含有量がＨＡ／添加物溶液１グラムあたり約１．６７ｍｇとなるよう、トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）を加えた。対照試料は、緩衝ＨＡ溶液８．１７ｍｌをとり、最終ＴＡ含有量がＨＡ溶液１グラムあたり約１．６７ｍｇとなるよう、トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）を添加することにより調製した。ＴＡが溶液中に十分に分散するよう、これらの試料を撹拌した。次に、各試料約２ｍｌをガラス製シンチレーション用バイアルに移し、スクリューキャップを閉じた。試料の半分を８０℃に設定したオーブン中で２２時間、置いた。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、２２時間の試料に関する粘度（２つの試料の平均）と０時間の試料の粘度との比により決定した。２２時間における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表７】
2016506909.tif 000009
【００８８】
表７における結果は、スクロースおよびソルビトールを添加するとどちらも、どちらの添加物も含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例７）
８０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００８９】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、平均Ｍｗ≒８８０ＫＤａ）６．３１ｇを０．９％ＮａＣｌ８０５．５ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）３．７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）約１．２３ｇｍｇを、溶解したＨＡ７４０．５ｍＬと混合した。スクロース約０．４８ｇ、０．９６ｇ、１．４ｇおよび１．９ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液４８±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）および４％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを８０℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１０時間、２０時間および３０時間）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０時間における粘度との比により決定した。３０時間における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表８】
2016506909.tif 000010
【００９０】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例８）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００９１】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、平均Ｍｗ≒７３０ＫＤａ）６．３１ｇを０．９％ＮａＣｌ８０５．５ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）３．７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）約１．２３ｇｍｇを、溶解したＨＡ７４０．５ｍＬと混合した。スクロース約０．４８ｇ、０．９６ｇ、１．４ｇおよび１．９ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液４８±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）および４％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、４日目および６日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表９】
2016506909.tif 000011
【００９２】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例９）
５５℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【００９３】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、平均Ｍｗ≒８８０ＫＤａ）６．３１ｇを０．９％ＮａＣｌ８０５．５ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）３．７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）約１．２３ｇｍｇを、溶解したＨＡ７４０．５ｍＬと混合した。スクロース約０．４８ｇ、０．９６ｇ、１．４ｇおよび１．９ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液４８±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）および４％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを５５℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、５日目および７日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。７日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１０】
2016506909.tif 000012
【００９４】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例１０）
５５℃におけるＨＡ（８８０）粘度に及ぼすスクロースの効果
【００９５】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、８８０ＫＤａ）４．７ｇを０．９％ＮａＣｌ６００ｍＬに一晩溶解した。この溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このろ過済みＨＡ溶液１６７．５１ｍＬに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）０．８４ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）２４８．４ｍｇを、溶解したＨＡ１４４．２ｍＬと混合した。スクロース約０．２４ｇ、０．３０ｇ、０．３６ｇ、０．４２ｇおよび０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、１．２５％（ｗ／ｗ）、１．５％（ｗ／ｗ）、１．７５％（ｗ／ｗ）および２％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを５５℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および７日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。７日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率とスクロースのない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１１】
2016506909.tif 000013
【００９６】
これらのデータは、ＴＡの存在により、ＴＡを含まないＨＡ試料と比較して、ＨＡの粘度低下が向上することを示している。これらの結果は、ＨＡ／ＴＡ混合物へのスクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ混合物と比較して、ＨＡの粘度低下が低減することを示している。
（実施例１１）
ＭＷの効果
５５℃におけるＨＡ（７３０）粘度に及ぼすスクロースの効果
【００９７】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、７３０ＫＤａ）４．７ｇを０．９％ＮａＣｌ６００ｍＬに一晩溶解した。この溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液１７１．８ｍＬに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）０．８６ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）２４８．２ｍｇを、溶解したＨＡ１４８．９ｍＬと混合した。スクロース約０．２４ｇ、０．３０ｇ、０．３６ｇ、０．４２ｇおよび０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、１．２５％（ｗ／ｗ）、１．５％（ｗ／ｗ）、１．７５％（ｗ／ｗ）および２％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを５５℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および７日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。７日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率とスクロースのない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１２】
2016506909.tif 000014
【００９８】
これらのデータは、ＴＡの存在により、ＴＡを含まないＨＡ試料と比較して、ＨＡの粘度低下が向上することを示している。これらの結果は、ＨＡ／ＴＡ混合物へのスクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ混合物と比較して、ＨＡの粘度低下が低減することを示している。
（実施例１２）
５５℃におけるＨＡ（＞１０００）粘度に及ぼすスクロースの効果
【００９９】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、＞１０００ＫＤａ）１５．６６ｇを０．９％ＮａＣｌ２０００ｍＬに一晩溶解した。この溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液１８７３．９ｍｌに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）９．４ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）２５６．７ｍｇを、溶解したＨＡ１５４ｍＬと混合した。スクロース約０．２４ｇ、０．３０ｇ、０．３６ｇ、０．４２ｇおよび０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、１．２５％（ｗ／ｗ）、１．５％（ｗ／ｗ）、１．７５％（ｗ／ｗ）および２％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを５５℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および７日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。７日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率とスクロースのない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１３】
2016506909.tif 000015
【０１００】
これらの結果は、ＨＡ／ＴＡ混合物へのスクロースの添加により、スクロースを含まないＨＡ／ＴＡ混合物と比較して、ＨＡの粘度低下が低減することを示している。
（実施例１３）
８０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすマンニトールの効果
【０１０１】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、平均Ｍｗ≒８８０ＫＤａ）６．３１ｇを０．９％ＮａＣｌ８０５．５ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）３．７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）約１．２３ｇｍｇを、溶解したＨＡ７４０．５ｍＬと混合した。マンニトール約０．４８ｇ、０．９６ｇ、１．４ｇおよび１．９ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）および４％（ｗ／ｗ）のマンニトールを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを８０℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１０時間、２０時間および３０時間）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０時間における粘度との比により決定した。３０時間における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１４】
2016506909.tif 000016
【０１０２】
これらの結果は、マンニトールを添加すると、マンニトールを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例１４）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすマンニトールの効果
【０１０３】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、平均Ｍｗ≒７３０ＫＤａ）６．３１ｇを０．９％ＮａＣｌ８０５．５ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）３．７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）約１．２３ｇｍｇを、溶解したＨＡ７４０．５ｍＬと混合した。マンニトール約０．４８ｇ、０．９６ｇ、１．４ｇおよび１．９ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）および４％（ｗ／ｗ）のマンニトールを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、４日目および６日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１５】
2016506909.tif 000017
【０１０４】
これらの結果は、マンニトールを添加すると、マンニトールを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例１５）
５５℃におけるＨＡ粘度に及ぼすマンニトールの効果
【０１０５】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、平均Ｍｗ≒８８０ＫＤａ）６．３１ｇを０．９％ＮａＣｌ８０５．５ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）３．７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）約１．２３ｇｍｇを、溶解したＨＡ７４０．５ｍＬと混合した。マンニトール約０．４８ｇ、０．９６ｇ、１．４ｇおよび１．９ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）および４％（ｗ／ｗ）のマンニトールを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを５５℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、５日目および７日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。７日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１６】
2016506909.tif 000018
【０１０６】
これらの結果は、マンニトールを添加すると、マンニトールを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例１６）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【０１０７】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、ＩＶ＝２ｍ３／ｋｇ）３．９２ｇを０．９％ＮａＣｌ５００ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）２．１６ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）３４４．３ｍｇを、溶解したＨＡ２０６．６ｍＬと混合した。ラクトース、メリビオース、デキストラン４０、ポリエチレングリコール４０００（ＰＥＧ４０００）、カルボキシメチルセルロースナトリウム塩（ＣＭＣ）、ｔｉｔｒｏｎ−Ｘ１００、およびグリセロール約０．４８ｇを、それぞれ上記のＨＡ／ＴＡの各２４±１ｍＬと１時間混合して、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および７日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。７日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１７】
2016506909.tif 000019
【０１０８】
これらの結果は、粘度低下により示される通り、ＴＡの存在により、ＨＡの分解が増加していることを示している。これらの結果は、ラクトース、デキストラン４０、ＰＥＧ４００００、ＣＭＣ、ｔｒｉｔｏｎ  ｘ１００およびグリセロールの添加により、添加物を含まないＨＡ／ＴＡ試料と比較して、粘度低下が低減することを示している。
（実施例１７）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【０１０９】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、ＩＶ＝２ｍ３／ｋｇ）３．９２ｇを０．９％ＮａＣｌ５００ｍＬに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液に、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）２．１６ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）３４４．３ｍｇを、溶解したＨＡ２０６．６ｍＬと混合した。トレハロース、スクロース、デキストロース、マルトース、マンニトール、ソルビトールおよびＮ−アセチルグルコサミン約０．４８ｇを、それぞれ上記のＨＡ／ＴＡの各２４±１ｍＬと１時間混合して、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０時間の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および６日目）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１８】
2016506909.tif 000020
【０１１０】
これらの結果は、粘度低下により示される通り、ＴＡの存在により、ＨＡの分解が増加していることを示している。これらの結果は、トレハロース、スクロース、デキストロース、マルトース、マンニトール、ソルビトールおよびＮ−アセチルグルコサミンを添加すると、添加物を含まないＨＡ／ＴＡ試料と比べて、粘度低下が低減されることを示している。
（実施例１８）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【０１１１】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、ＩＶ＝２ｍ３／ｋｇ）１９．６ｇを０．９％ＮａＣｌ２．５Ｌに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液２２８．９ｍＬに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）１．１５ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンヘキサアセトニド（ＴＨ）３３４．９ｍｇを、溶解したＨＡ２００．９５ｍＬと混合した。マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトース約０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＨ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０日目の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表１９】
2016506909.tif 000021
【０１１２】
これらの結果は、トリアムシノロンヘキサアセトニドの存在により、トリアムシノロンヘキサアセトニドを含まないＨＡと比較して、ＨＡの粘度が低下することを示している。マンニトール、ソルビトール、スクロースおよびグリセロールをＨＡ／ＴＨ試料に添加すると、ＨＡ／ＴＨのみの試料と比べて、ＨＡ粘度の保持がより高い。
（実施例１９）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【０１１３】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、ＩＶ＝１．９ｍ３／ｋｇ）１５．６６ｇを０．９％ＮａＣｌ２Ｌに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液１．８７Ｌに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）９．４ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、酢酸メチルプレドニゾロン（ＭＰＡ）３３３．３ｍｇを、溶解したＨＡ２００ｍＬと混合した。マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトース約０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＭＰＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０日目の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２０】
2016506909.tif 000022
【０１１４】
マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトースをＨＡ／ＭＰＡ試料に添加すると、ＨＡ／ＭＰＡのみの試料と比較して、ＨＡ粘度の保持がより高い。６日目における安定化比は、添加物を含むすべての試料について、１より大きい。
（実施例２０）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【０１１５】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、ＩＶ＝１．９ｍ３／ｋｇ）１５．６６ｇを０．９％ＮａＣｌ２Ｌに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液１．８７Ｌに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）９．４ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、リン酸ベタメタゾンナトリウム（ＢＭＳＰ）３３８．９ｍｇを、溶解したＨＡ２０３．４ｍＬと混合した。マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトース約０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＢＭＳＰ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０日目の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２１】
2016506909.tif 000023
【０１１６】
マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトースをＨＡ／ＢＭＳＰ試料に添加すると、ＨＡ／ＢＭＳＰのみの試料と比較して、ＨＡ粘度の保持がより高い。６日目における安定化比は、添加物を含むすべての試料について、１より大きい。
（実施例２１）
６０℃におけるＨＡ粘度に及ぼす添加物の効果
【０１１７】
ＨＡ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ、ＩＶ＝１．９ｍ３／ｋｇ）１５．６６ｇを０．９％ＮａＣｌ２Ｌに一晩溶解した。溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液１．８７Ｌに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）９．４ｍＬを加えた。次に、２５０ｍＬの無菌ナルゲンボトル中で、酢酸プレドニゾロン（ＰＡ）３５６．７ｍｇを、溶解したＨＡ２１０．４ｍＬと混合した。マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトース約０．４８ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＰＡ懸濁液２４±１ｍＬの個々の試料に加えて、約２％（ｗ／ｗ）の添加物を含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０日目の試料を除き、これらの分注した試料すべてを６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２２】
2016506909.tif 000024
【０１１８】
マンニトール、ソルビトール、マルトース、スクロース、グリセロール、デキストラン４０およびラクトースをＨＡ／ＰＡ試料に添加すると、ＨＡ／ＰＡのみの試料と比較して、ＨＡ粘度の保持がより高い。６日目における安定化比は、添加物を含むすべての試料について、１より大きい。
（実施例２２）
４０℃におけるＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【０１１９】
ＨＡ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ、７３０ＫＤａ）３．５ｇを０．９％ＮａＣｌ４５０ｍＬに一晩溶解した。この溶解したＨＡを０．２ｕｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｏｐｔｉｃａｐ４”）により無菌ろ過した。このＨＡ溶液３５４ｍＬに、１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．７１）１．７７ｍＬを加えた。次に、無菌ナルゲンボトル中で、米国薬局方グレードのトリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）５９０ｍｇを、溶解したＨＡ３５４ｍＬと混合した。スクロース約０．５８７ｇをそれぞれ上記のＨＡ／ＴＡ懸濁液５８．７±１ｍＬの個々の試料に加えて、それぞれ約１％（ｗ／ｗ）のスクロースを含有する試料を得た。各混合物を１時間混合した。対照試料には添加物を加えなかった。各大量の試料の場合、２±０．２ｍＬのアリコートを４ｍＬの無菌ガラス製バイアルに入れ、次に、セプタムおよびアルミニウムキャップにより密封した。０日目の試料を除き、これらの分注した試料すべてを４０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１５日目、３０日目、４５日目および６か月）において、これらの試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６か月における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２３】
2016506909.tif 000025
（実施例２３）
ヒドロゲル／ＨＡ溶液に関するＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【０１２０】
製剤Ｂ：ビニルスルホン修飾ヒアルロン酸（ＨＡＶＳ）（Ｍｗ≒７３０ＫＤａ、平均置換＝３．９％）２９．１９ｇを注射用水（ＷＦＩ）１８３７．６ｍＬに溶解した。このＨＡＶＳ溶液８０７．６ｇを、８Ｌの無菌反応槽に無菌的に移送し、次いで０．２ｕｍフィルターカプセルにより、２回無菌ろ過を行った。無菌ろ過済みリン酸塩２２．７ｇ（第一リン酸ナトリウム一水和物［米国薬局方］、ＷＦＩ１６１ｇ中１２．４ｇ、ｐＨを６Ｎ  ＮａＯＨおよび６Ｎ  ＨＣＬを用いてｐＨ７．４に調節した）、次に、無菌トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）９．１９ｇをこの溶液に加えた。この混合物を５０ｒｐｍで１０分間、および１５０ｒｐｍで２時間撹拌した。この混合物に、無菌ろ過済みジチオールポリエチレングリコール３３５０溶液（ＷＦＩ中５０ｍｇ／ｍＬ）２８．４ｇを加えた。この混合物を１５０ｒｐｍで３分間、撹拌し、この後、循環水浴（４５℃）からの水を反応槽の水用ジャケットに循環させた。次に、この混合物を５０ｒｐｍで１５分間、撹拌し、その後、この撹拌を止めた。約１７時間後、水の循環を停止し、５０ｒｐｍで５分間、撹拌を作動させることにより、形成したゲルを小片に粉砕した。この粉砕ゲルに、無菌ろ過済みＨＡ／０．９％ＮａＣｌ溶液（７．８ｍｇ／ｍＬ、Ｍｗ≒７３０ＫＤａ）４．６５２１ｇを加えた。２時間後、得られた混合物を２×８４０ｕｍのメッシュに通して、充填槽に無菌的にポンプ注入した。このメッシュ処理した混合物を２０ｒｐｍで３時間、撹拌し、その後、この混合物をＢａｘａリピータポンプを使用して、１０ｍＬの無菌ガラス製シリンジに充填した（シリンジ１本あたり約６．２ｍＬ）。次に、このシリンジにストッパーを付けた。一部のシリンジを４０℃／７５％ＲＨで３か月間、保存し、別の一部のシリンジを２５℃／６０％ＲＨで３か月間、保存した。
【０１２１】
製剤Ｂ＋スクロース：使用したＨＡ／０．９％ＮａＣｌ溶液が、１．７％または２％（ｗ／ｗ）スクロース（米国薬局方）を含有した以外、記載したものと同様の方法を使用して、製剤を調製した。
【０１２２】
Ｃａｎｎｏｎ−Ｕｂｂｅｌｏｈｄｅセミマイクロガラス粘度計を使用し、上で調製した試料の上澄み溶液の比粘度を、２５℃に設定した水浴中で測定した。粘度測定用試料は、試料の上澄み液１ｍＬを採取し、これを０．１Ｍリン酸緩衝液（第一リン酸ナトリウム一水和物、ｐＨ７）７ｍＬにより希釈することによって調製した。このリン酸緩衝液を使用して、溶媒流通時間を測定した。ＨＡ粘度の保持率は、３か月時における比粘度（３つの試料の平均）と０か月における比粘度との比により決定した。
【表２４】
2016506909.tif 000026
【表２５】
2016506909.tif 000027
【０１２３】
これらのデータは、スクロースを製剤に添加すると、２５℃と４０℃のどちらにおいても、添加するスクロースを含まない製剤と比べて、ＨＡ成分の粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例２４）
８０℃におけるヒドロゲル／ＨＡ溶液に関するＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【０１２４】
ＨＡＶＳ（Ｍｗ７３０〜９５０ＫＤａ；平均置換＝３．９％）４．９２ｇをＷＦＩ３５１ｍＬに溶解した。次に、この溶液を０．２ｕｍフィルターを用いて、無菌ろ過した。このＨＡＶＳ溶液約１３．５±０．５ｍＬを１００ｍＬのプラスチック製ボトルに分注した。合計４本のボトルに充填した。トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）［ＴＡ］の含有量が約１．６７ｍｇ／ｍＬとなるよう、ＴＡを各アリコートに加えた。この内容物をよく混合した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）約０．３８ｍＬを各混合用ボトルに加え、この内容物をよく混合した。各ボトルに、５０ｍｇ／ｍｌのジチオールポリエチレングリコール３３５０溶液約０．４７ｍＬを加えた。この内容物をよく混合した。ボトルへのスクリューキャップを閉じ、各溶液を４５℃で一晩、温置した。ＨＡ溶液（０．９％生理食塩水）７．８３ｍｇ／ｍＬを調製し、０．２ｕｍフィルターによりろ過した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．７）３．４ｍＬを上記のＨＡ溶液６７８ｍＬに加えた。これらのボトルをオーブンから取り出し、ＨＡ溶液（ＭＷ＝７３０ＫＤａ；０．９％生理食塩水中７．８３ｍｇ／ｍＬ）約７７±２ｍＬを各ボトルに加えた。これらのボトルの１本に、スクロースを加え、スクロース約２％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。第２のボトルに、スクロースを加え、スクロース約３％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。１時間の混合後、６０ｍＬシリンジおよび８４０ｕｍのメッシュを含むシリンジフィルターを使用し、各ボトルの内容物をこのメッシュを介して押し出した。押し出した混合物の各々を、２０ｍｌのガラス製シンチレーション用バイアルに分注した（約６．２ｍＬ）。０時間の試料を除き、これらのバイアルをスクリューキャップの蓋で閉じ、これらの試料を８０℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１０時間、２０時間および３０時間）において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０時間における粘度との比により決定した。３０時間における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２６】
2016506909.tif 000028
【０１２５】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例２５）
８０℃におけるヒドロゲル／ＨＡ溶液に関するＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【０１２６】
ＨＡＶＳ（Ｍｗ７３０〜９５０ＫＤａ；平均置換＝３．９％）４．９２ｇをＷＦＩ３５１ｍＬに溶解した。次に、この溶液を０．２ｕｍフィルターを用いて、無菌ろ過した。このＨＡＶＳ溶液約１４．２±０．５ｍＬを１００ｍＬのプラスチック製ボトルに分注した。合計４本のボトルに充填した。トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）［ＴＡ］の含有量が約１．６７ｍｇ／ｍＬとなるよう、ＴＡを各アリコートに加えた。この内容物をよく混合した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）約０．４ｍＬを各混合用ボトルに加え、この内容物をよく混合した。各ボトルに、５０ｍｇ／ｍｌのジチオールポリエチレングリコール３３５０溶液約０．５ｍＬを加えた。この内容物をよく混合した。ボトルへのスクリューキャップを閉じ、各溶液を４５℃で一晩、温置した。ＨＡ溶液（０．９％生理食塩水）７．８３ｍｇ／ｍＬを調製し、０．２ｕｍフィルターによりろ過した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．７）３．９７ｍＬを上記のＨＡ溶液７９４．７ｍＬに加えた。これらのボトルをオーブンから取り出し、ＨＡ溶液（ＭＷ＝８８０ＫＤａ；０．９％生理食塩水中７．８３ｍｇ／ｍＬ）約８２±２ｍＬを各ボトルに加えた。これらのボトルの１本に、スクロースを加え、スクロース約２％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。第２のボトルに、スクロースを加え、スクロース約３％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。１時間の混合後、６０ｍＬシリンジおよび８４０ｕｍのメッシュを含むシリンジフィルターを使用し、各ボトルの内容物をこのメッシュを介して押し出した。押し出した混合物の各々を、２０ｍｌのガラス製シンチレーション用バイアルに分注した（約６．２ｍＬ）。０時間の試料を除き、これらのバイアルをスクリューキャップの蓋で閉じ、これらの試料を８０℃に設定したオーブンに入れた。０時間の試料を除いて、各時点（１０時間、２０時間および３０時間）において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０時間における粘度との比により決定した。３０時間における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２７】
2016506909.tif 000029
【０１２７】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例２６）
６０℃におけるヒドロゲル／ＨＡ溶液に関するＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【０１２８】
ＨＡＶＳ（Ｍｗ７３０〜９５０ＫＤａ；平均置換＝３．９％）４．９２ｇをＷＦＩ３５１ｍＬに溶解した。次に、この溶液を０．２ｕｍフィルターを用いて、無菌ろ過した。このＨＡＶＳ溶液約１３．５±０．５ｍＬを１００ｍＬのプラスチック製ボトルに分注した。合計４本のボトルに充填した。トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）［ＴＡ］の含有量が約１．６７ｍｇ／ｍＬとなるよう、ＴＡを各アリコートに加えた。この内容物をよく混合した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）約０．３８ｍＬを各混合用ボトルに加え、この内容物をよく混合した。各ボトルに、５０ｍｇ／ｍｌのジチオールポリエチレングリコール３３５０溶液約０．４７ｍＬを加えた。この内容物をよく混合した。ボトルへのスクリューキャップを閉じ、各溶液を４５℃で一晩、温置した。ＨＡ溶液（０．９％生理食塩水）７．８３ｍｇ／ｍＬを調製し、０．２ｕｍフィルターによりろ過した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．７）３．４ｍＬを上記のＨＡ溶液６７８ｍＬに加えた。これらのボトルをオーブンから取り出し、ＨＡ溶液（ＭＷ＝７３０ＫＤａ；０．９％生理食塩水中７．８３ｍｇ／ｍＬ）約７７±２ｍＬを各ボトルに加えた。これらのボトルの１本に、スクロースを加え、スクロース約２％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。第２のボトルに、スクロースを加え、スクロース約３％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。１時間の混合後、６０ｍＬシリンジおよび８４０ｕｍのメッシュを含むシリンジフィルターを使用し、各ボトルの内容物をこのメッシュを介して押し出した。押し出した混合物の各々を、２０ｍｌのガラス製シンチレーション用バイアルに分注した（約６．２ｍＬ）。０日目の試料を除き、これらのバイアルをスクリューキャップの蓋で閉じ、これらの試料を６０℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および６日目）において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２８】
2016506909.tif 000030
【０１２９】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例２７）
５５℃におけるヒドロゲル／ＨＡ溶液に関するＨＡ粘度に及ぼすスクロースの効果
【０１３０】
ＨＡＶＳ（Ｍｗ７３０〜９５０ＫＤａ；平均置換＝３．９％）４．９２ｇをＷＦＩ３５１ｍＬに溶解した。次に、この溶液を０．２ｕｍフィルターを用いて、無菌ろ過した。このＨＡＶＳ溶液約１４．２±０．５ｍＬを１００ｍＬのプラスチック製ボトルに分注した。合計４本のボトルに充填した。トリアムシノロンアセトニド（米国薬局方）［ＴＡ］の含有量が約１．６７ｍｇ／ｍＬとなるよう、ＴＡを各アリコートに加えた。この内容物をよく混合した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）約０．４ｍＬを各混合用ボトルに加え、この内容物をよく混合した。各ボトルに、５０ｍｇ／ｍｌのジチオールポリエチレングリコール３３５０溶液約０．５ｍＬを加えた。この内容物をよく混合した。ボトルへのスクリューキャップを閉じ、各溶液を４５℃で一晩、温置した。ＨＡ溶液（０．９％生理食塩水）７．８３ｍｇ／ｍＬを調製し、０．２ｕｍフィルターによりろ過した。１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．７）３．９７ｍＬを上記のＨＡ溶液７９４．７ｍＬに加えた。これらのボトルをオーブンから取り出し、ＨＡ溶液（ＭＷ＝８８０ＫＤａ；０．９％生理食塩水中７．８３ｍｇ／ｍＬ）約８２±２ｍＬを各ボトルに加えた。これらのボトルの１本に、スクロースを加え、スクロース約２％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。第２のボトルに、スクロースを加え、スクロース約３％（ｗ／ｗ）を含む製剤を得た。１時間の混合後、６０ｍＬシリンジおよび８４０ｕｍのメッシュを含むシリンジフィルターを使用し、各ボトルの内容物をこのメッシュを介して押し出した。押し出した混合物の各々を、２０ｍｌのガラス製シンチレーション用バイアルに分注した（約６．２ｍＬ）。０日目の試料を除き、これらのバイアルをスクリューキャップの蓋で閉じ、これらの試料を５５℃に設定したオーブンに入れた。０日目の試料を除いて、各時点（１日目、３日目および６日目）において、試料の３つをオーブンから取り出し、室温まで冷却した。各試料の粘度は、４０ｍｍで２°の綱製コーンを有するＡＲ５５０レオメータ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用し、２２℃で３分間の掃引時間で測定した。ＨＡ粘度の保持率は、特定の日の粘度（３つの試料の平均）と０日目における粘度との比により決定した。６日目における安定化比は、特定の添加物を含むＨＡ粘度の保持率と添加物のない試料のＨＡ粘度の保持率との比である。
【表２９】
2016506909.tif 000031
【０１３１】
これらの結果は、スクロースを添加すると、スクロースを含まない試料と比べて、ＨＡ粘度がより大きく保持されることを示している。
（実施例２８）
ビニルスルホン誘導体化ヒアルロン酸（ＨＡ−ＶＳ）の合成−低修飾度
【化２】
2016506909.tif 000032
【０１３２】
本実施例は、本明細書において提供される安定化組成物に関する、例示的かつ好ましい物質の調製を記載する。
【０１３３】
ヒアルロン酸（ＨＡ）５ｇ［９．４×１０４ｃｐｓ（水中３％）］を１Ｌの丸底フラスコに秤量した。このＨＡに５００ｍＬの無菌ろ過済み水を加えた。このフラスコを２０〜１００ｒｐｍの間で回転するよう設定した回転式蒸発器に取り付けた。ＨＡがすべて溶解するまで（約１６〜１８時間）、この溶液を回転した。次に、ＨＡ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を１Ｌのガラス製ビーカーに移した。この溶液にオーバーヘッド型撹拌器に連結した撹拌パドルを挿入し、この溶液が効率的に撹拌されるのを確実とする撹拌速度に設定した。この撹拌ＨＡ溶液に、０．２５Ｎ  ＮａＯＨ溶液（１Ｎ  ＮａＯＨ８３．２ｍＬを脱イオン水２４９．８ｍＬに加えた）３３３ｍＬを加えた。この撹拌溶液に、約１分後、ジビニルスルホン溶液（ジビニルスルホン１８ｍＬを脱イオン水１３２ｍＬに溶解）１５０ｍＬを迅速に加えた。１５秒後（ジビニルスルホン溶液の添加終了から測定）に、６Ｎ  ＨＣｌ約１４ｍＬを迅速に添加することにより、この溶液のｐＨを５〜６の間に調節した。次に、この反応溶液をタンジェンシャルフローろ過システム（ｓｐｅｃｔｒａｐｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ、カートリッジＰ／Ｎ  Ｍ６−１００Ｓ−３０１−０１Ｐ）を使用して透析した。全容量は元の溶液の容量の１１倍であった。精製工程を一旦完了すると、この溶液を濃縮して約１４〜２０ｍｇ／ｍＬにした。ビニルスルホン官能基化ＨＡ（ＨＡ−ＶＳ）をＴＦＦシステムから取り出し、プラスチック製容器に入れて、次にスクリュートップの蓋で閉じた。ＨＡ−ＶＳの試料を取り出し、−８０℃に冷凍し、次に凍結乾燥した。この乾燥試料を１Ｈ−ＮＭＲ分析のために送った。
ＨＡ−ＶＳに関するビニルスルホン置換率の決定
【０１３４】
乾燥試料約１５〜１７ｍｇを正味２ｍＬの管に秤量した。この試料をＤ２Ｏ１．５ｍＬ中で再構成した。この試料をＮＭＲ管に移した。試料の１Ｈ−ＮＭＲ（２５６スキャン）をとり、６．３〜６．５ｐｐｍにおける特定のピーク（２ＣＨ２由来の２本のピーク＝ビニルスルホン残基由来のプロトン）および１．５〜２．５ｐｐｍ（ＨＡのＮ−アセチル基由来の３ＣＨ３プロトン由来のシングレット）の領域を積分して、スペクトルを印刷した。修飾率は、以下の通り計算する。
【数１】
2016506909.tif 000033
【０１３５】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図１）により、ヒアルロン酸のアセトアミドメチル基に対するビニルスルホンのピークの積分値に基づくと、ＨＡは約４％のビニルスルホン置換レベルを有することが示された。
【０１３６】
ＨＡ−ＶＳの試料を使用して乾燥重量を求め、この重量を使用してＨＡ−ＶＳ溶液の具体的な濃度を求めた。ＨＡ−ＶＳ濃度は、１８ｍｇ／ｍＬであった。
（実施例２９）
ビニルスルホン修飾ヒアルロン酸（ＨＡ−ＶＳ）およびＰＥＧ−３４００−ジチオールから調製されるゲルの合成
【０１３７】
脱イオン水を使用して、実施例１に記載されている通りに調製したＨＡ−ＶＳ溶液を希釈し、濃度１４ｍｇ／ｍＬにした。ＨＡ−ＶＳ溶液１１ｍＬを２０ｍＬの無菌シリンジに入れた。０．２μｍの無菌シリンジフィルターによりこのＨＡ−ＶＳ溶液をろ過して、５０ｍＬの無菌遠心管に入れた。脱イオン水０．８０２ｍＬ中にＰＥＧ−（ＳＨ）２［Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ  Ｉｎｃ、品番ＳＨ−ＰＥＧ−ＳＨ−３４００−１ｇ］４０．１ｍｇを溶解することにより、ＰＥＧ−（ＳＨ）２の５０ｍｇ／ｍＬ溶液を調製した。ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液を１ｍＬの無菌シリンジに移し、０．２μｍの無菌シリンジフィルターによりろ過した。無菌ろ過済みＨＡ−ＶＳ１０ｍＬを５０ｍＬの無菌遠心管に移した。このＨＡ−ＶＳ溶液に０．５Ｍリン酸ナトリウム溶液２５０μＬ（０．２μｍの無菌シリンジフィルターによりろ過した）を加えた。得られた溶液を完全に混合した。このＨＡ−ＶＳ溶液に、５０ｍｇ／ｍＬの無菌ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液３８０μＬ［１９ｍｇのＰＥＧ−（ＳＨ）２］を添加した。得られた溶液を完全に混合した。上記の工程をバイオフード（biohood）中で行い、無菌を維持した。次に、このＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液を、少なくとも１６時間、３７℃のインキュベータに入れ、ゲル形成を促進させた。少なくとも１６時間後、このＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液を架橋して、ゲルを形成させた。次に、このゲル化した物質をインキュベータから取り出した。
（実施例３０）
ＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルのスラリーの調製−単回押出し
【０１３８】
実施例２９由来のＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルを、ガラス棒を使用して、物理的に片に粉砕した。このゲルを６０ｍＬの無菌シリンジに移し、このシリンジをシリンジキャップにより栓をした。このゲルに４０ｍＬの０．９％無菌ＮａＣｌを加えた。プランジャーをシリンジバレルに挿入し、このシリンジを逆さまにした。このシリンジキャップを開放して、いかなる圧力も放出し、次に閉じた。このシリンジを数回逆さまにして、生理食塩水とゲル片が良好に混合するのを確実にした。このゲルを一晩、膨潤させた（少なくとも１６時間）。
【０１３９】
２３ｍｍの革製穴あき器を使用して、ポリエステル製メッシュ（ＭｃＭａｓｔｅｒ  Ｃａｒｒ、カタログ番号９２１８Ｔ１３、メッシュサイズ：２０．３×２０．３、正方形／長方形サイズ：０．０３３１”、ミクロン等級：８４０ミクロン、開放面積の割合：４６、ネジ径：０．０１５７”）の直径２３ｍｍのディスクに裁断した。このディスクを２５ｍｍのシリンジフィルターホルダー（Ｃｏｌｅ  Ｐａｌｍｅｒ、カタログ番号ＥＷ−２９５５０−４２）に挿入し、このフィルターホルダーを閉じた。上記のメッシュを含むフィルターホルダーを高圧滅菌した。このシリンジのシリンジキャップを取り去り、このメッシュを含むシリンジフィルターをシリンジに取り付けた。ゲルをメッシュに通して、５０ｍＬの無菌遠心管に押し出した。この遠心管にスクリュートップの蓋で栓をした。得られた生成物は粒子からなるわずかに粘性のスラリーであり、この粒子は実際には沈殿しないが、通常、懸濁したままである。上記の工程をバイオフード中で行った。
（実施例３１）
ヒアルロン酸を含むＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルのスラリーの調製
【０１４０】
ヒアルロン酸２ｇ［９．４×１０４ｃｐｓ（水中３％）］を２５０ｍＬの丸底フラスコに秤量した。このフラスコ中のヒアルロン酸に、１００ｍＬの無菌生理食塩水を加えた。このフラスコを回転式蒸発器（Ｂｕｃｈｉ）に取り付け、５０ｒｐｍで少なくとも１６時間回転し、２％ヒアルロン酸溶液を形成させた。以下の一連の工程をバイオフード中で行った。このヒアルロン酸溶液を０．２ｕｍの無菌フィルターによりろ過した。ＨＡＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルのスラリーを使用し、調製したＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルのスラリーをヒアルロン酸と混合して、一連の製剤を調製した。これらの製剤を調製するために使用したヒアルロン酸溶液およびＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ（ＳＨ）２ゲルのスラリーの容量が以下の表に示されている。
【表３０】
2016506909.tif 000034
【０１４１】
上の表に特定されている、ヒアルロン酸溶液およびＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルのスラリーの表示されている容量を１５ｍＬの無菌遠心管に加えた。キャップを管に取り付け、成分がよく混ざるまで、この管を前後に逆さまにした。次に、シリンジキャップを有する１０ｍＬのガラス製シリンジに、各製剤を移し、その後、プランジャーを挿入して、過剰の空気を排出した。次に、このシリンジキャップを強く締めた。
（実施例３２）
トリアムシノロンアセトニドを含有するＨＡ−ＶＳ−ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルの合成
【０１４２】
脱イオン水を使用して、ＨＡ−ＶＳの溶液を希釈し、濃度１４ｍｇ／ｍＬにした。ＨＡ−ＶＳ溶液１１ｍＬを２０ｍＬの無菌シリンジに入れた。０．２ｕｍの無菌シリンジフィルターによりＨＡ−ＶＳ溶液をろ過して、５０ｍＬの無菌遠心管に入れた。脱イオン水０．８０２ｍＬ中にＰＥＧ３４００−（ＳＨ）２４０．１ｍｇを溶解することにより、ＰＥＧ−（ＳＨ）２の５０ｍｇ／ｍＬ溶液を調製した。ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液を１ｍＬの無菌シリンジに移し、０．２ｕｍの無菌シリンジフィルターによりろ過した。無菌ろ過済みＨＡ−ＶＳ１０ｍＬを５０ｍＬの無菌遠心管に移した。このＨＡＶＳ溶液に、トリアムシノロンアセトニド（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、米国薬局方グレード、ミクロン化）１００ｍｇを加えた。遠心管のキャップを管に取り付け、トリアムシノロンアセトニドがＨＡ−ＶＳと均一に混ざるまで、この溶液を前後に逆さまにした。このＨＡ−ＶＳ溶液に、無菌ろ過済み（０．２ｕｍ無菌フィルター）０．５Ｍリン酸ナトリウム溶液２５０μＬを加えた。得られた溶液を完全に混合した。このＨＡ−ＶＳ溶液に、５０ｍｇ／ｍＬの無菌ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液３８０μＬを添加した。得られた溶液を完全に混合した。上記の工程をバイオフード中で行った。次に、このＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液を、少なくとも１６時間３７℃のインキュベータに入れた。この段階で、このＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２溶液を架橋して、ゲルを形成させた。次に、ゲル化した物質をインキュベータから取り出した。得られたゲルは、約０．２％のトリアムシノロンアセトニドを含有する。
【０１４３】
このＨＡ−ＶＳ溶液にトリアムシノロンアセトニド（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、米国薬局方グレード、ミクロン化）２０ｍｇを加えたことを除き、上記で説明した通りに上記の手順も行った。
（実施例３３）
トリアムシノロンアセトニドを含有するＨＡ−ＶＳ−ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルのスラリーの調製：単回押出し
【０１４４】
トリアムシノロンアセトニド含有ＨＡ−ＶＳ／ＰＥＧ−（ＳＨ）２ゲルを、ガラス棒を使用して、物理的に片に粉砕した。このゲルを６０ｍＬの無菌シリンジに移し、このシリンジをシリンジキャップにより栓をした。このゲルに４０ｍＬの０．９％無菌ＮａＣｌを加えた。プランジャーをシリンジバレルに挿入し、このシリンジを逆さまにした。このシリンジキャップを開放して、いかなる圧力も放出し、次に閉じた。このシリンジを数回逆さまにして、生理食塩水とゲル片が良好に混合するのを確実にした。このゲルを一晩、膨潤させた（少なくとも１６時間）。
【０１４５】
２３ｍｍの革製穴あき器を使用して、ポリエステル製メッシュ（ＭｃＭａｓｔｅｒ  Ｃａｒｒ、カタログ番号９２１８Ｔ１３、メッシュサイズ：２０．３×２０．３、正方形／長方形サイズ：０．０３３１”、ミクロン等級：８４０ミクロン、開放面積の割合：４６、ネジ径：０．０１５７”）の直径２３ｍｍのディスクに裁断した。このディスクを２５ｍｍのシリンジフィルターホルダー（Ｃｏｌｅ  Ｐａｌｍｅｒ、カタログ番号ＥＷ−２９５５０−４２）に挿入し、このフィルターホルダーを閉じた。上記のメッシュを含むフィルターホルダーを高圧滅菌した。このシリンジのシリンジキャップを取り去り、このメッシュを含むシリンジフィルターをシリンジに取り付けた。ゲルをこのメッシュに通して、５０ｍＬの無菌遠心管に押し出した。この遠心管にスクリュートップの蓋で栓をした。上記の工程をバイオフード中で行った。
【国際調査報告】
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