(57)【要約】  プレバイオティクス効果を有する食品、栄養補助食品および／または薬物組成物ならびにヒトおよび動物のケアにおけるそれらの使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレバイオティクスとして、対象におけるプロバイオティクス細菌の増殖を促進するのに使用するための、ならびに／または、対象における腸内細菌、バクテロイデスおよび／もしくはクロストリジウムからなる群から選択される病原性細菌の増殖を阻害するのに使用するための、シソ属植物（Ｐｅｒｉｌｌａ）調合物を含む組成物。
【請求項２】
前記調合物がシソ属植物抽出物であり、好ましくは液体、煎汁（ｔｅａ）または粉末である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記調合物がシソ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）またはエゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｏｃｙｍｏｉｄｅｓ）調合物であり、好ましくは前記調合物がシソ属植物の空中部の調合物であり、好ましくは葉または茎調合物である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記プロバイオティクス細菌がビフィズス菌および乳酸菌からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記プロバイオティクス細菌が、ラクトバチルス・ブルカリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｃａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｄｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）およびビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）からなる群から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記シソ属植物調合物が病原性細菌の増殖に対して中立的効果を有する、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記シソ属植物調合物が病原性細菌を中和する、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記シソ属植物調合物が病原性細菌の増殖を阻害する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記病原性細菌が腸内細菌、バクテロイデスおよびクロストリジウムからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記病原性細菌がネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、大腸菌およびエンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）からなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
更なるプレバイオティクス剤、繊維、プロバイオティクス剤、脂質、生理的に活性な脂肪酸、ステロール、ステロールエステル、スタノールエステル、充填剤、薬剤、鎮痙攣剤または抗炎症剤、抗酸化剤、植物性フェノール、フェノール代謝産物、カテキン、ビタミン、ミネラル、精油または植物調合物を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
新鮮な葉からのシソ属植物調合物の濃度が２ｍｇ〜４００ｇの範囲内であり、乾燥したシソの葉からの濃度が０．２５ｍｇ〜５０ｇの範囲内であり、またはシソ属植物抽出物もしくは煎汁からの濃度が０．０５ｍｇ〜１０ｇの範囲内である、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
食品、栄養補助食品、医療装置または薬剤中に含まれている、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
消化器官の健康（ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ｈｅａｌｔｈ）を維持する、健康な腸管微生物叢を維持する、正常な消化を維持する、腸管規則性を向上させる、健康な腸管可動性、便通および／もしくは健康な排便回数、便の硬さおよび／もしくは形状を支援する、免疫系、皮膚および／もしくは毛髪を改善する、脂質代謝を調節する、グルコース恒常性、体重管理および／もしくは口腔内細菌叢を改善する、または腸機能を改善するための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
鼓張を低減する、拡延を低減する、ガスの流れを低減する、腹鳴を低減する、膨満感を低減する、便秘を改善する、下痢を改善する、内臓過敏症を低減する、痙攣もしくは痛みなどの腹部不快感を低減する、炎症性腸疾患もしくは過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／もしくは結腸がんを予防もしくは低減する、病原性細菌の増殖を低減および／もしくは阻害する、腸管感染症を治療もしくは予防する、アレルギーもしくは免疫疾患を治療する、アトピー性皮膚炎を予防および／もしくは低減する、皮膚および／もしくは毛髪疾患を予防する、またはコレステロールおよび／もしくはトリアシルグリセロール血漿濃度を低下させるのに使用するための、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記腸管感染症が旅行者下痢または食物感染症である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
キットにパッケージされる、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のシソ属植物調合物を対象に投与することを含む、対象におけるプロバイオティクス細菌の増殖を促進する方法。
【請求項１９】
前記プロバイオティクス細菌の増殖の促進が、消化器官の健康を維持する、健康な腸管微生物叢を維持する、正常な消化を維持する、腸管規則性を向上させる、健康な腸管可動性、便通および／もしくは健康な排便回数、便の硬さおよび／もしくは形状を支援する、免疫系、皮膚および／もしくは毛髪を改善する、脂質代謝を調節する、グルコース恒常性、体重管理および／もしくは口腔内細菌叢を改善する、または腸機能を改善するための使用、または、鼓張を低減する、拡延を低減する、ガスの流れを低減する、腹鳴を低減する、膨満感を低減する、便秘を改善する、下痢を改善する、内臓過敏症を低減する、痙攣もしくは痛みなどの腹部不快感を低減する、炎症性腸疾患もしくは過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／もしくは結腸がんを予防もしくは低減する、病原性細菌の増殖を低減および／もしくは阻害する、腸管感染症を治療もしくは予防する、アレルギーもしくは免疫疾患を治療する、アトピー性皮膚炎を予防および／もしくは低減する、う歯を予防する、皮膚および／もしくは毛髪疾患を予防する、またはコレステロールおよび／もしくはトリアシルグリセロール血漿濃度を低下させるのに使用するためのものであり、好ましくは前記腸管感染症が旅行者下痢または食物感染症である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれかに記載のシソ属植物組成物を対象に投与することを含む、対象における腸内細菌、バクテロイデスおよび／もしくはクロストリジウムからなる群から選択される病原性細菌の増殖を阻害する方法。
【請求項２１】
請求項１〜１３のいずれかに記載のシソ属植物組成物を対象に投与することを含む、対象における腸管感染症を治療または予防する方法。
【請求項２２】
前記腸管感染症が旅行者下痢または食物感染症である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
プロバイオティクス細菌の増殖をインビトロで促進するための、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２４】
腸内細菌、バクテロイデスおよび／またはクロストリジウムからなる群から選択される病原性細菌の増殖をインビトロで阻害するための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シソ属植物（Ｐｅｒｉｌｌａ）を含むことを特徴とする食品、栄養補助食品、機能性食品、医療用装置および／または薬物組成物、ならびに、特にヒトまたは動物のケアに使用するそのプレバイオティクス効果に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの腸の微生物叢は、消化管内で精密にバランスを保たれた系である。１０００を超える様々な微生物種を見ることができる。優占集団は、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）およびビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）のような絶対嫌気性細菌からなる。亜優占種叢は、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）および乳酸桿菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ならびに、程度は低いが、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）および酵母（ｙｅａｓｔｓ）に属する細菌を包含する。これらの種の大半は有益な役割を有するが、その他の種はクロストリジウムの一部の種のように潜在的に病原性である。しかしながら、それらの数は少なくまた他の細菌と競合するため、それらの増殖および病原性作用は防止される。［１］
【０００３】
胃腸管叢は様々な機能を司る。一次防御は１つの重要な機能であり、病原性微生物のコロニー形成を防ぎ、免疫刺激剤の生成を誘発することによって免疫系を調節する。更に、微生物叢は消化を調節する上で需要な役割を果たす。
【０００４】
胃腸管叢の質は幾つかのパラメータに応じて変わる。生理学的パラメータは、年齢、ストレスおよび食事摂取量である。更に、疾患、特に下痢、炎症性腸疾患また過敏性腸症候群、大腸炎およびクローン病、ならびに薬物、特に抗生物質の消費は微生物叢を有害な方法で変える。
【０００５】
プレバイオティクス、プロバイオティクスおよびシンバイオティクスの消費は、胃腸管微生物叢を安定化して改善するという有益な効果を有する。プレバイオティクス成分の消費の、有益な健康への効果を規定する広範な文献がある。プレバイオティクスは、胃腸管（ＧＩ）感染症の期間および愁訴を防止および／または低減し、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）または過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／または結腸がんを予防して低減する有益な効果を有し得る。様々な胃腸症状に対する有益な効果に加えて、プレバイオティクス剤が様々な他の効果を有することが示されている。特に、プレバイオティクスは免疫系に対する有益な効果を有し、アレルギーを緩和して免疫疾患を改善する。それらは口腔内細菌叢を改善し、う歯を防止する。更に、プレバイオティクスは、炎症およびアトピー性皮膚炎の低減を支援することが知られている。それらは、ミネラル吸収を改善し、結果として骨密度および安定性を改善し、脂質代謝、より低いコレステロールおよびトリアシルグリセロール血漿濃度を調節する。また、グルコース恒常性の改善による体重管理に関する有益な効果も報告されている。［３、４、５］
【０００６】
プレバイオティクスは、結腸中の１つまたは限定数の細菌の増殖および／または活性を選択的に刺激することによって宿主の健康を改善する能力を有する食品成分と定義される。第一に、有益な微生物株は、プレバイオティクス物質を利用して増殖の改善を示すか、またはプレバイオティクス物質を代謝して周囲環境のｐＨ値を減少させ、これにより有利でない／病原性微生物の増殖を制限または阻害する。更に、有益な微生物株は、大腸がんの危険性を減少させることが示されている短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、例えばブチル酸、の生成を増強する。更に、病原性細菌の増殖は、プレバイオティクス物質によって直接的に、またはプレバイオティクス物質の代謝後に有益な株のＳＣＦＡ生成によって間接的に抑制される。既知のプレバイオティクスは、イヌリン、大豆繊維、ラクツロース、ペクチン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、イソマルトオリゴ糖（ＩＯＳ）、キシロオリゴ糖、グルコシルショ糖（ＧＳ）、ラクツスクロース（ｌａｃｔｕｓｕｃｒｏｓｅ）（ＬＳ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖（ＭＯＳ）、ガムおよび／またはそれらの加水分解物、母乳オリゴ糖、キトサンなどの食物繊維であり、これらは消化に耐えて結腸内のビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）などの腸管微生物叢の有益なメンバーを選択的に刺激する。［２、３］
【０００７】
学術研究者や薬学および食物業界による多大な努力にもかかわらず、胃腸管微生物叢を安定化して改善し、結果として良好な健康を支援して維持し、腸の健康を改善して維持し、胃腸の問題を防止して低減するか、または胃腸疾患を治療するための新たなプレバイオティクス物質の提供に対するニーズが依然として存在する。繊維のような既存のプレバイオティクスは、鼓張のような副作用を示し、炎症性腸症状に苦しむ人々に対して逆効果でさえあり得る。更に、多くのプレバイオティクの有効投薬量は数グラムを必要とし、これは消費するのが容易ではなく、消費者のコンプライアンスの低下につながる。故に、低くて無理のない有効投薬量であって、鼓張や胃腸の不快感のような副作用のない革新的なプレバイオティクス組成物が必要とされる。
【０００８】
本発明の目的は、食品、機能性食品、栄養補助食品、医療装置成分および／または薬物として好適な、胃腸管微生物叢を向上させ、結果として健康および胃腸の健康状態を向上させる新規成分を提供することであった。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、驚くべきことに、シソ属植物調合物を含む組成物が、好ましくはプロバイオティクス細菌の増殖を促進するための、プレバイオティクスとして使用可能であることを見出した。よって、１つの実施形態において、本発明は、プレバイオティクスとして対象におけるプロバイオティクス細菌の増殖を促進するのに使用されるシソ属植物調合物を含む組成物に関する。好ましくは、当該調合物はシソ属植物抽出物であり、更に好ましくは液体、煎汁または粉末である。特に、本発明者らは、驚くべきことに、シソ属植物調合物を含む組成物がプロバイオティクス細菌の増殖を促進または刺激する、および／または、病原性細菌を中和する（阻害する）、特に病原性細菌の増殖を低減または阻害することを示した。
【００１０】
驚くべきことに、本発明者らは、シソ属植物調合物がプロバイオティクス細菌の増殖を促進するが、腸内細菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）および／またはクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）などの病原性細菌の増殖は促進しないことを示した。故に、１つの実施形態において、本発明は、対象におけるプロバイオティクス細菌の増殖を促進するのに使用するためのプレバイオティクスとして使用するためのシソ属植物調合物に関し、当該調合物は、（ｉ）プロバイオティクス細菌（例えば、ビフィズス菌および／または乳酸菌）の増殖を促進し、および／または（ｉｉ）病原性細菌（例えば、腸内細菌、バクテロイデスおよび／またはクロストリジウム）の増殖を阻害する、または病原性細菌（例えば、腸内細菌、バクテロイデスおよび／またはクロストリジウム）の増殖に対して中立的効果を有することができる。
【００１１】
更に、本発明は、シソ属植物を含む、好ましくは相乗効果を可能にする更なるプロバイオティクス成分を含む組成物に関する。特に、本発明は更に、シソ属植物とプロバイオティクス剤とを含む組成物を含むシンバイオティクス剤に関する。
【００１２】
好ましい実施形態において、シソ属植物調合物は、シソ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）またはエゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｏｃｙｍｏｉｄｅｓ）調合物であり、より好ましくはＰｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ（Ｌ．）  Ｂｒｉｔｔｏｎ  ｖａｒ．  Ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ、  Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  ｖａｒ．  ｃｒｉｓｐａ、Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  ｖａｒ．  ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓまたはＰｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  ｖａｒ．  ｈｉｒｔｅｌｌａである。
【００１３】
好ましくは、当該調合物は、シソ属植物の空中部の調合物であり、好ましくは葉または茎調合物であり、より好ましくは新鮮なまたは乾燥した葉調合物である。
【００１４】
更に、当該調合物は、好ましくはビセニン２を含む抽出物であり、当該抽出物は標準化されているのが好ましい。
【００１５】
驚くべきことに、シソ属植物調合物は、好ましくはビフィズス菌および乳酸菌からなる群から選択される、より好ましくはラクトバチルス・ブルカリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｃａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｄｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）およびビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）からなる群から選択される、プロバイオティクス細菌の増殖を促進することを示すことができた。この点で最も好ましい株はラクトバチルス・ブルカリクス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ビフィドバクテリウム・ビフィダムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムである。プロバイオティクス細菌の増殖の促進は、胃腸管微生物叢を改善し、結果として腸の健康を支援する、および／または胃腸の問題を防止または低減する、例えば腸管の感染症を低減する。
【００１６】
更に、シソ属植物調合物がプロバイオティクス細菌の増殖を促進するという特徴とは無関係に、またはその特徴と組み合わせて、本発明者らは驚くべきことに、シソ属植物抽出物が病原性細菌を中和するために使用可能であることを見出した。病原性細菌の中和は、例えば、好ましくは病原性細菌の増殖を低減するかまたは阻害する、即ち、遅延させるかまたは防止することによって起こり得る。病原性細菌は、例えば、腸内細菌、バクテロイデスおよびクロストリジウムからなる群から選択され、好ましくは、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、大腸菌およびエンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）からなる群から選択可能である。腸管における病原性細菌の増殖を中和または低減することにより、結果として腸管感染症が低減されることが注目に値する。
【００１７】
更に好ましい実施形態において、組成物は、更なるプレバイオティクス剤（繊維など）、プロバイオティクス剤、脂質、生理的に活性な脂肪酸、ステロール、ステロールエステル、スタノールエステル、充填剤、薬剤、鎮痙攣剤または抗炎症剤、植物性フェノール、フェノール代謝産物、ミネラル、ビタミン、精油または植物調合物を含む。この関連で、当該組成物においてシソ属植物調合物がプレバイオティクス活性を有する、即ち、活性成分であることが重要である。
【００１８】
１つの実施形態において、シソ属植物調合物は、（ｉ）ビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進し；  かつ（ｉｉ）腸内細菌、バクテロイデスおよび／またはクロストリジウムの増殖を阻害することができるシソ属植物調合物である。
【００１９】
好ましくは、更なるプレバイオティクス剤は、繊維（例えば、キウィ繊維、バオバブ繊維または大豆繊維）、イヌリン、ペクチン、ラクツロース、オリゴ糖の種類、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、イソマルトオリゴ糖（ＩＯＳ）、キシロオリゴ糖、グルコシルショ糖（ＧＳ）、ラクツスクロース（ＬＳ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖（ＭＯＳ）、アラビノガラクタン、キトサンおよびキトサン誘導体、オオバコ、ガムおよび／またはそれらの加水分解物または母乳オリゴ糖である。
【００２０】
好ましくは、更なるプロバイオティクス剤は、ビフィズス菌、乳酸菌、酵母またはそれらの混合物である。
【００２１】
更なる好ましい実施形態において、植物性フェノールは、アントシアニン、プロシアニジン、フラボノイド、フラバノン、フラボノール、カテキン、タンニンおよびイソフラボンからなる群から選択される。精油は、好ましくはハッカ油またはキウィフルーツ油を包含する。
【００２２】
好ましくは、薬剤は、更なるプレバイオティクス剤、抗生物質、抗感染症薬、三環式抗うつ剤、コレシストキニン−１拮抗薬、セロトニン作用薬、ベンゾジアゼピンまたは類似体、ニューロキニン拮抗薬、グアニル酸シクラーゼ−Ｃ作動薬、Ｃ１−Ｃ２チャネル活性化剤、Ｃｌ分泌遮断剤、ＧＬＰ１類似体、κ−オピオイド作動薬、制酸薬、リン酸ナトリウム、ＮＡ再摂取阻害剤、オメプラゾール類似体、糖質コルチコイド、スタチン、抗ヒスタミン薬、ビタミンＢコンプレックス（ビタミンＢ２、３、６、１２）、亜鉛、尿素、コレステリン再吸収阻害剤またはチョウセンアザミ属植物（ｃｙｎａｒａ）調合物である。
【００２３】
好ましくは、更なる薬剤としての植物調合物は、レモンバーベナ（Ａｌｏｙｓｉａ  ｔｒｉｐｈｙｌｌａ）、セント・ジョーンズ・ワート（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ）、トウゲシバ（Ｈｙｐｅｒｚｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）、スノードロップ（Ｇａｌａｎｔｈｕｓ  ｎｉｖａｌｉｓ）、セージ（Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、チョウセンニンジン（Ｐａｎｅｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）、コウスイボク（Ｌｉｐｐｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）、レモンバーム（Ｍｅｌｉｓｓａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、チャボトケイソウ（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ  ｉｎｃａｒｎａｔｅ）、クダモノトケイソウ（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ  ｅｄｕｌｉｓ）、オトメアゼナ（Ｂａｃｏｐａ  ｍｏｎｎｉｅｒｉ）、ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、スノーフレーク（Ｌｅｕｃｏｊｕｍ  ａｅｓｔｒｕｍ）、コンコララス・プルリカウリス（Ｃｏｎｃｏｌｕｌｕｓ  ｐｌｕｒｉｃａｕｌｉｓ）、ツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）、アムラ（Ｅｍｂｌｉｃａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、オウレン（Ｃｏｐｔｉｄｉｓ  Ｒｈｉｚｏｍａ）、グリークセージ（Ｓａｌｖｉａ  ｔｒｉｌｏｂａ）、コショウ（Ｐｉｐｅｒ  ｎｉｇｒｕｍ）、フェヌグリーク（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ  ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ）、ブラックコホシュ（Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ  ｒａｃｅｍｏｓａ）、タンジン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）、イワベンケイ（Ｒｈｏｄｉｏｌａ  ｒｏｓｅａ）、ハブランタス・ジャメソニイ（Ｈａｂｒａｎｔｈｕｓ  ｊａｍｅｓｏｎｉｉ）、フィセラ・ハーバーティアナ（Ｐｈｙｃｅｌｌａ  ｈｅｒｂｅｒｔｉａｎａ）、ロドフィアラ・メンドシナ（Ｒｈｏｄｏｐｈｉａｌａ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）、ゼフィランサス・フィリフォリア（Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓ  ｆｉｌｉｆｏｌｉａ）、ステファニア・ピエレイ（Ｓｔｅｐｈａｎｉａ  ｐｉｅｒｒｅｉ）、クロショウガ（Ｋａｅｍｐｆｅｒａ  ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）、ステファニア・ヴェノサ（Ｓｔｅｐｈａｎｉａ  ｖｅｎｏｓａ）、サフラン（Ｃｒｏｃｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ）、サルビア種、オトメアゼナ（Ｂａｃｏｐａ  ｍｏｎｎｉｅｒｉ）、ツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）、ムイラプアマ（Ｐｔｙｃｈｏｐｅｔａｌｕｍ  ｏｌａｃｏｉｄｅｓ）、アシュワガンダ（Ｗｉｔｈａｎｉａ  ｓｏｍｎｉｆｅｒａ）、エスピニェイラサンタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ）、スペアミント（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｉｃａｔａ）、コリアンダー（Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）、ウルティカ・サーキュラリス（Ｕｒｔｉｃａ  Ｃｉｒｃｕｌａｒｉｓ）、リクノフォラ・ポーリイ（Ｌｙｃｈｎｏｐｈｏｒａ  ｐｏｈｌｉｉ）、リクノフォラ・トリパノシダル（Ｌｙｃｈｎｏｐｈｏｒａ  ｔｒｙｐａｎｏｃｉｄａｌ）、ジョディナ・ロムビフォリオ（Ｊｏｄｉｎａ  ｒｈｏｍｂｉｆｏｌｉｏ）、ルイボス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）、シクロピア種、アフリカバオバブ（Ａｄａｎｓｏｎｉａ  ｄｉｇｉｔａｔａ）、マルーラ（Ｓｃｌｅｒｏｃａｒｙａ  ｂｉｒｒｅａ）、マンゴー（Ｍａｎｇｉｆｅｒａ  ｉｎｄｉｃａ）、オニママタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、マトリ��リア・レクティタ（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ）、ペパーミント（Ｍｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａ）、ヘラオオバコ（Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、モリンダ・モリンドイデス（Ｍｏｒｉｎｄａ  ｍｏｒｉｎｄｏｉｄｅｓ）、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒｉｓ）、グアバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ）、レモンバーベナ（Ａｌｏｙｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）、トウチュウカソウ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、ラミナリアディギタータ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ  ｄｉｇｉｔａｔａ）、アーティチョーク（Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ）、キャラウェイ（Ｃａｒｕｍ  ｃａｒｖｉ）、イベリス・アマラ（Ｉｂｅｒｉｓ  ａｍａｒａ）、セイヨウトウキ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ａｒｃｈａｎｇｅｌｉｃａ）、シリバム・マリアナム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ）、クサノオウ（Ｃｈｅｌｉｄｏｎｉｕｍ  ｍａｊｕｓ）、スペインカンゾウ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、オオミノツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ）、セイヨウスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、ノーザン・ハイブッシュ・ブルーベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｃｏｒｙｍｂｏｓｕｍ）、ラビットアイ・ブルーベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ａｓｈｅｉ）、ローブッシュ・ブルーベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ）、チョークチェリー（Ｐｒｕｎｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、レッドハックルベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｍ）、ゲーリュサッキア種、コケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ）、サスカトゥーン・ベリー・ナット（Ａｍｅｌａｎｃｈｉｅｒ  ａｌｎｉｆｏｌｉａ  Ｎｕｔｔ）、チョウセンアザミ種、シダレヤナギ種またはそれらの組み合わせからなる群からの１またはそれ以上の抽出物から選択される。より好ましい実施形態において、当該植物調合物は、レモンバーベナ（Ａｌｏｙｓｉａ  ｔｒｉｐｈｙｌｌａ）、コウスイボク、レモンバーム、コショウ、スペアミント、ルイボス、シクロピア種、アフリカバオバブ、ペパーミント、レモンバーベナ（Ａｌｏｙｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）、セイヨウスノキ、トウモロコシ（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）、シソ科植物（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）、クマツヅラ科植物（Ｖｅｒｂｅｎａｃｅａｅ）、ゴマノハグサ科植物（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）またはそれらの組み合わせから選択される。
【００２４】
好ましい実施形態において、新鮮なシソ属植物の葉の濃度は、２ｍｇ〜４００ｇ、好ましくは４００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは１０００ｍｇ〜１０ｇ、２０００ｍｇ〜６０００ｍｇまたは約４０００ｍｇであり、乾燥したシソ属植物の葉の濃度は、０．２５ｍｇ〜５０ｇ、好ましくは５０ｍｇ〜５０００ｍｇ、より好ましくは１２５ｍｇ〜１２５０ｍｇ、２５０ｍｇ〜７５０ｍｇまたは約５００ｍであり、またはシソ属植物調合物（抽出物または煎汁）の濃度は、０．０５ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは２５ｍｇ〜２５０ｍｇ、５ｍｇ〜１５０ｍｇまたは１０ｍｇ〜１００ｍｇである。
【００２５】
実施例に示されるように、シソ属植物調合物はプレバイオティクスとして効果的であるので、他のプレバイオティクス剤は必ずしも必要ではない。故に、１つの実施形態において、当該組成物は、他のプレバイオティクスおよび／またはプロバイオティクス成分を含まない。よって、１つの実施形態において、組成物は、任意に賦形剤を含むシソ属植物調合物からなる。よって、１つの更なる実施形態において、組成物は例えばＷＯ２０１３／０７９６２３（本書に組み込む）に記載されているようなプレバイオティクスおよび／またはプロバイオティクス剤を更に包含しない。特に、本発明による組成物は、更なる（即ち、他の）プレバイオティクス剤および／またはプロバイオティクス剤を実質的に含まなくてもよい。
【００２６】
前述の実施形態のいずれか１つによる組成物は、食品、機能性食品、飲料、栄養補助食品、医療装置または薬剤中に含まれていてもよい。別の言い方をすると、本発明は、先に規定したような組成物を含む食品、機能性食品、飲料、栄養補助食品、医療装置または薬剤に関する。
【００２７】
更に、シソ属植物を含む調合物は、消化器官の健康（ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ｈｅａｌｔｈ）を維持する、健康な腸管微生物叢を維持する、腸内細菌感染症のようなＧＩ感染症の期間および／もしくは愁訴を防止および低減する、正常な消化を維持する、腸管規則性を向上させる、健康な腸管可動性、便通および／もしくは健康な排便回数、便の硬さおよび／もしくは形状を支援する、鼓張を低減する、拡延を低減する、ガスの流れを低減する、腹鳴を低減する、膨満感を低減する、腸機能を向上させる、便秘を改善する、下痢を改善する、または内臓過敏症および／もしくは痛みおよび痙攣のような腹部不快感を低減するために使用され得る。更に、シソ属植物を含む調合物を使用して、炎症性腸疾患または過敏性腸症候群および／または結腸がんを予防および／または低減することができる。
【００２８】
更に、免疫系、皮膚および／または毛髪を改善する、皮膚および／または毛髪疾患を予防する、アレルギーを緩和する、免疫疾患を改善する、アトピー性皮膚炎を予防および／または低減する、脂質代謝を調節する、コレステロールおよび／またはトリアシルグリセロール血漿濃度を低下させる、グルコース恒常性を向上させる、および／または体重管理に関する有益な効果を誘発するために、シソ属植物を含む調合物を使用してもよい。この文脈では、有益な効果を「向上させる」または「誘発する」は互換可能に使用することができる。
【００２９】
更に、当該組成物は、好ましくは食物感染症（旅行者下痢を含む）である腸管感染症の期間および愁訴を防止および／または低減するのに使用してもよい。更に、当該組成物は、口腔内細菌叢を改善するおよび／またはう歯を予防するために使用してもよい。
【００３０】
別の言い方をすると、本発明は、対象におけるプロバイオティクス細菌の増殖を促進する、ならびに／または、対象における腸内細菌、バクテロイデスおよび／もしくはクロストリジウムからなる群から選択される病原性細菌の増殖を阻害することにより、上記症状を治療する際に使用するためのシソ属植物調合物を含む組成物に関する。
【００３１】
よって、本発明は、プレバイオティクス剤が対象における疾患または症状に対する有益な効果を有する、疾患または症状の治療または改善に関する。
【００３２】
これに関し、当業者は、プレバイオティクス剤が上述の症状に対して有益な効果を有することを理解する。更に、上述のように、プロバイオティクス細菌の増殖の促進は、胃腸管微生物叢を改善し、結果として腸の健康を支援する、および／または胃腸の問題を防止もしくは低減する。腸管内の病原性細菌の中和または低減が、結果として腸管感染症を低減することが強調される。
【００３３】
胃腸感染症は世界的に罹患率および死亡率の主要な原因である。２００６年に行われた研究は、世界的に、重度の下痢および脱水症が毎年１，５７５，０００名の５歳未満の子供の死因となっていることを見出した。これは、この年齢群において１年間に１０，５００，０００名の死亡した子供の１５％である。広範な症状を予防および治療するためのプロバイオティクスの使用は、抗生物質などの従来の療法に代わる療法を見つけ出す必要性ならびにＧＩ疾患のための良好な治療の欠如に起因し、過去１０年支持されてきた。プロバイオティクスがヒトの健康に影響を及ぼし得るメカニズムの同定は、（Ｂｒｉｔｔｏｎ  および  Ｖｅｒｓａｌｏｖｉｃ  ２００８）に要約されている。
【００３４】
プロバイオティクスは胃腸感染症の予防および治療のための重要な戦略となり得る。プロバイオティクスは、宿主の免疫機能および粘膜防御の完全性を刺激し得る。様々な共生メカニズムを介して作用することによって、プロバイオティクスは、プロセスの様々な工程で効果を生じ得る。プロバイオティクスは、予防的に投与されると、疾患の発生を防止し得る。プロバイオティクスはまた、治療の文脈において疾患の重篤度または期間を抑制または減少させ得る。
【００３５】
通常の腸管微生物叢は、病原性細菌のコロニー形成を防止し、重要な免疫機能を有する。現代の生活スタイルや食習慣が、疾患の発生に繋がる腸管微生物叢の変化をもたらした。集団が均質でないにもかかわらず、結果は、プロバイオティクスが様々な疾患、特に感染症（例えばウイルス感染症）に対して有益な効果を有することを示している。プロバイオティクスはウイルスに対する直接的な作用によっては抗ウイルス作用を示さないが、免疫系を刺激するメカニズムによって感染が低減され得る（Ｉｑｂａｌ  ｅｔ．  ａｌ．  ２０１４）。
【００３６】
しかしながら、本発明は胃潰瘍またはヘリコバクターピロリ感染症の治療に関するものではない。
【００３７】
本発明は更に、前述の実施形態のいずれか１つの組成物または調合物を含むキットに関する。特に、本発明は、キットにパッケージされる、先に規定されたような組成物に関する。
【００３８】
本発明は、シソ属植物調合物を含む調合物または組成物を個体に投与することによって、プロバイオティクス細菌の増殖を促進する、および／または、病原性細菌の増殖を阻害または低減する方法を提供する。
【００３９】
更に、本発明は、プロバイオティクス細菌の増殖を促進する、および／または、病原性細菌の増殖を阻害または低減するための、シソ属植物を含む組成物のインビトロでの使用に関する。
【００４０】
１つの実施形態において、本発明は、先に規定されたようなシソ属植物組成物を投与することを含む、対象における腸内細菌、バクテロイデスおよび／またはクロストリジウムからなる群から選択される病原性細菌の増殖を阻害する方法、または、先に規定されたようなシソ属植物組成物を投与することを含む、対象における腸管感染症を治療または予防する方法に関する。
【００４１】
好ましくは、腸管感染症は旅行者下痢または食物感染症である。
【００４２】
更に、本発明は、プロバイオティクス細菌の増殖をインビトロで促進するための先に規定されたような組成物の使用、または、好ましくは腸内細菌、バクテロイデスおよび／またはクロストリジウムからなる群から選択される病原性細菌の増殖をインビトロで阻害するための先に規定されたような組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】寒天平板上で増殖実験物を調製するためのプロバイオティクス株のスポッティングスキームである。
【図２】植物抽出物処方物が補充された２４時間の培養後のｓＭＲＳ培地上でのプロバイオティクス乳酸菌株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図３】植物抽出物処方物が補充された２４時間の培養後のＬＭＭ培地上でのプロバイオティクス乳酸菌株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図４】植物抽出物処方物が補充された４８時間の培養後のｓＭＲＳ培地上でのプロバイオティクス乳酸菌株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図５】植物抽出物処方物が補充された４８時間の培養後のＬＭＭ培地上でのプロバイオティクス乳酸菌株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図６】植物抽出物処方物が補充された４８時間の培養後の特別なビフィズス菌培地上でのプロバイオティクスビフィズス菌株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図７】植物抽出物処方物が補充された４８時間の培養後のＬＭＭ培地上でのプロバイオティクスビフィズス菌株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図８】９６時間の培養後のビフィズス菌および植物抽出物処方物が補充されたＬＭＭ培地上での株９（ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ｓｕｂｓｐ．  ｌｏｎｇｕｍ））の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図９】寒天平板上での増殖を評価するための非プロバイオティクス株のスポッティングスキームである。
【図１０】１６時間の培養後の植物抽出物処方物が補充されたＣＡＳＯ培地上での腸内細菌の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図１１】２４時間の培養後の植物抽出物処方物が補充されたＣＡＳＯ培地上での腸内細菌の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図１２】２４時間の培養後の植物抽出物処方物が補充されたＭ１１０培地上でのクロストリジウム株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図１３】４８時間の培養後の植物抽出物処方物が補充されたＭ１１０培地上でのクロストリジウム株の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【図１４】７日後の植物抽出物処方物が補充されたＭ１１０培地上でのバクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）の増殖を、グルコースを含む場合およびＣ供給源を含まない場合と比較したもの。１−シソ属植物抽出物（培地ｓＭＲＳ＋１％Ｃを使用）；２−陽性対照（培地ｓＭＲＳ＋１％グルコースを使用）；３−陰性対照（培地ｓＭＲＳ（Ｃ供給源なし）を使用）。希釈：１０−１、１０−２、１０−３、１０−４（左から右）。
【発明の詳細な説明】
【００４４】
発明者らは驚くべきことに、シソ属植物調合物を含む組成物をプレバイオティクスとして使用できることを見出した。有利には、シソ属植物を含むプレバイオティクス組成物は、低用量のシソ属植物を必要とし、副作用を誘発しない。更に、シソ属植物に含まれる効果は２４時間以内に生じる。
【００４５】
本発明は、選択された全てのプロバイオティクス株が唯一のＣ供給源としてシソ属植物抽出物粉末が補充された培地上で増殖を示したので、シソ属植物抽出物の粉末がプレバイオティクス特性を呈することを初めて実証する。これらの株の中には、グルコース（通常、微生物にとって最適なＣ供給源として考えられている）上での増殖に匹敵する増殖をシソ属植物抽出物上で呈したものもあることは注目に値する。シソ属植物抽出物は、プロバイオティクス微生物に対する顕著な増殖促進活性を有するようである（特に、株２−ラクトバチルス・アシドフィルス、株７−ラクトバチルス・ブルガリクス、株８−ビフィドバクテリウム・ビフィダムおよび株９−ビフィドバクテリウム・ロンガム）。これは、これらの株が独占的に天然のシソ属植物抽出物を対応する平板上の唯一のＣ供給源として使用したことを意味する。これら４種の株は、シソ属植物調合物とのシンバイオティクス（これらの株の１つと組み合わせた植物抽出物）として非常に好適である。
【００４６】
プレバイオティクス物質の主要な基本的特徴は、プロバイオティクス細菌（例えば、ビフィズス菌および乳酸菌）の増殖を選択的に刺激または促進しつつ、潜在的な病原性細菌（例えば、バクテロイデス、クロストリジウム）の増殖に対して有害な影響を全く（ｎｏ  ｏｒ  ｅｖｅｎ）及ぼさない能力である（６，７）。本発明の結果は、単一の培養実験において植物抽出物にとって重要なこの特徴をインビトロで実証する。
【００４７】
しかしながら、この知見は、胃腸の徴候および、更に、細菌増殖に関する幾つかの他の徴候（例えば、健康な口腔内細菌叢の維持およびう歯の低減）、免疫学的徴候またはミネラル吸収、脂質代謝、グルコース代謝および／または炎症性プロセスに関する徴候のための使用を提供する。
【００４８】
試験した非プロバイオティクス細菌に対するシソ属植物抽出物の効果に関し、本データは、試験した株（条件的嫌気性および３種の絶対的嫌気性細菌）がＣ供給源としてのシソ属植物抽出物を代謝することができないことを示す。
【００４９】
３種の病原体、つまり、ネズミチフス菌、大腸菌およびエンテロバクター・クロアカの増殖は、シソ属植物抽出物製剤（Ｃ）によって阻害されてもいた（著しく遅延された、または完全に阻害された）。
【００５０】
これは全て、シソ属植物抽出物のプレバイオティクス効果を強調し、シソ属植物抽出物が腸管微生物叢を有益な片利共生細菌種へとシフトさせる可能性を有することを示しており、これはプレバイオティクス物質が呈するべき重要な特性である。これは、胃腸感染症、う歯または口腔内感染症を治療する上で有用である。
【００５１】
胃腸管通過中のシソ属植物抽出物粉末のプレバイオティクス特性は、シソ属植物抽出物をプレバイオティクス食品化合物として適用する際にも安定している。
【００５２】
新規なプレバイオティクス剤または調合物は、とりわけ、丸薬、ペレット、粉末製剤、錠剤、カプセル、スティック製剤、サシェ製剤または流体に含まれていてもよい。流体は、スポイトを備えたボトルに収められていてもよい。カプセル、錠剤での経口用途に加えて、スティック包装体中にてブレンド混合する準備ができた状態で提供される、粉末および顆粒製剤も使用される。このスティック製剤は直接水に溶解し得る。
【００５３】
シソ属植物調合物およびその抽出物は、特にビセニン２を含む組成物が国際出願第ＷＯ２０１３／０７９６２３号（８ページ１７行目〜１０ページ２１行目、１４ページ２７行目〜１５ページ１２行目および１５ページ１５行目〜２６行目）ならびに国際出願第ＷＯ２０１３／０７９６２４号（６ページ２０行目〜９ページ６行目、１５ページ３行目〜１８行目および１５ページ２１行目〜１６ページ３行目）に詳細に記載されており、これらの開示内容を参照により本書に組み込む。
【００５４】
定義
用語「１つの（ａまたはａｎ）」ものは、１またはそれ以上の当該ものを指すことに留意されたい。例えば、「調合物」は、１またはそれ以上の調合物を表すと理解される。したがって、用語「１つの（ａまたはａｎ）」、「１またはそれ以上」および「少なくとも１つ」は、本明細書において互換的に使用することができる。
【００５５】
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、任意の対象、特に診断、予後診断、予防または治療が望まれる哺乳動物対象、例えば、ヒトの患者を意味する。
【００５６】
本細書で使用するとき、用語「プレバイオティクス」は、個体の結腸における限定数の細菌の１またはそれ以上の増殖および／または活性を選択的に刺激することによって、個体に有益な影響を与えるべく、個体により経口消費される物質を指す。好ましいプレバイオティクスは、ビフィズス菌および／または乳酸菌（ラクトバチルス）の増殖および／または活性を選択的に刺激するものである。更により好ましいのは、腸内細菌、バクテロイデスまたはクロストリジウムなどの病原性細菌に優先してビフィズス菌および／または乳酸菌（ラクトバチルス）の増殖および／または活性を刺激するものである。
【００５７】
用語「煎汁」は、水で抽出したシソ属植物の空中部からの材料を指す。
【００５８】
用語「空中調合物」は、地面より上にあるシソ属植物の部分（即ち、葉と茎）を指す。
【００５９】
「更なるプレバイオティクス剤」は、イヌリン、大豆繊維、ラクツロース、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、母乳オリゴ糖、キトサンなどの食物繊維を指し、これらは消化に耐えて結腸内でビフィズス菌などの腸管微生物叢の有益なメンバーを選択的に刺激することができる。大半のプレバイオティクス剤には、非デンプン多糖類およびヒトの酵素によってほとんど消化されないオリゴ糖が含まれる。
【００６０】
本発明による「プロバイオティクス細菌」は、健康な哺乳動物の腸管内に見られる有益な細菌、例えばビフィズス菌および乳酸菌である。
【００６１】
「シンバイオティクス剤」は、プレバイオティクス剤およびプロバイオティクス剤を組み合わせて含む薬剤に関する。
【００６２】
「病原性細菌」は、病気や疾患を生じる細菌であり、腸内細菌、バクテロイデスおよびクロストリジウムなど、生物に対して有害な細菌である。
【００６３】
「病原性細菌の増殖に対して中立的効果」を持つことは、加速または阻害効果を伴わない病原性細菌の増殖に関する。
【００６４】
用語「病原性細菌を中和する」は、病原性細菌を打ち消すまたは細菌の病原性効果を無効にすることを指し、別の言い方をすると、病原性細菌を阻害することである。中和は、増殖を阻害する、または増殖を正常なレベルに戻すことを含む、病原性細菌の増殖を低減する（予防する、または遅延させる）ことによって生じ得る。
【００６５】
プレバイオティクス効果を評価するための当業者に知られている以下の試験方法の１またはそれ以上を使用してもよい：１）インビトロ法：プレバイオティクスを供給することにより、寒天平板上の単一の微生物株を発酵させ、細菌の増殖数をカウントする；２）インビトロ法：プレバイオティクスを供給することにより寒天平板上の細菌の複合混合物を発酵させ、異なる細菌属の増殖数をカウントする；３）酸耐性テスト：プレバイオティクスを胃酸で処置して胃腸の影響を模倣し、結果として、プレバイオティクスをテスト１）または２）に適用することにより、活性が依然として測定可能であるかどうかを証明する；４）動物またはヒトにプレバイオティクスを供給し、プレバイオティクス適用の前後に糞便試料中の細菌組成物を分析することにより、プレバイオティクス効果をインビボで実証する。（Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ  ２００７）
【００６６】
本発明による「機能性食品」は、栄養価に加えて、健康上の利益を与え、健康および健全性を支援して向上させることにより、疾患が発症する危険性を低減するのを助ける食品、飲料または乳児用調製粉乳製品であると理解される。
【００６７】
本発明による「栄養補助製品」は、口から摂取されることを意図した丸剤、錠剤、カプセル、ペレット、丸薬、粉末または液体の形態をなす食品であり、ビタミン、ミネラル、食物、植物、アミノ酸のような物質を含有し、通常の食事を介してこれらの物質の通常摂取量を補うことを意図している。
【００６８】
本発明による「薬剤／薬物／医薬」は、疾患を予防もしくは治療する、または身体的もしくは精神的な安泰を向上させる可能性を有する任意の物質である。特記しない限り、用語「薬物」、「医薬」または「薬剤」は本書では互換可能に使用され、（Ａ）内用もしくは外用の物品、医薬および調合物、および、ヒトもしくは他の動物の疾患の診断、治癒、緩和、治療または予防のための使用を意図した任意の物質もしくは物質の混合物；（Ｂ）ヒトや他の動物の身体の構造もしくはいずれかの機能に影響を与えることを意図した物品、医薬および調合物（食品以外）；ならびに（Ｃ）（Ａ）および（Ｂ）項で特定されたいずれかの物品の構成要素として使用することを意図した物品の全てを含むが、これらに限定されない。用語「薬物」、「医薬」または「薬剤」は、１またはそれ以上の「剤」、「成分」、「化合物」、「物質」または「（化学）組成物」および、他の幾つかの文脈では、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、流動促進剤、結合剤などの他の医薬的に不活性な賦形剤を含有する、または、ヒトもしくは他の動物の身体内での意図された標的位置での（例えば、皮膚での、胃または腸内での）、「薬物」、「医薬」または「薬剤」の簡単な輸送、崩壊、分解、溶解および生物学的アベイラビリティを保証する、ヒトもしくは他の動物における使用を意図した調合物の完全な処方を包含するものとする。用語「剤」、「化合物」または「物質」は、本書では互換可能に使用され、より具体的な文脈では、全ての薬理学的活性剤、即ち、所望の生物学的または薬理学的効果を誘発する、または本発明の方法によってそのような可能な薬理学的効果を誘導する能力について調査または試験される剤を含むが、これらに限定されない。
【００６９】
本書で使用するとき、用語「治療する」または「治療」は、その目的が胃腸感染症の発症などの望ましくない生理学的変化または障害を防止または減速する（軽減）することである、治療的処置および予防的または防止的手段の両方を指す。有益なまたは所望の臨床結果としては、検出可能であれ検出不能であれ、症状の緩和、疾患の程度の低下、疾患状態の安定化（すなわち、悪化させないこと）、疾患進行の遅延または遅滞、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的または全体的）を含むが、これらに限定されない。治療を必要とするものとしては、症状もしくは障害を既に持っているもの、ならびに、症状もしくは障害を有しやすいもの、または、症状もしくは障害の徴候が防止されるべきものが挙げられる。この文脈において、本書では、向上、改善または治療を互換的に使用することができる。
【００７０】
特記しない限り、用語「障害」および「疾患」は、本書では互換的に使用される。
【００７１】
本発明による「健康な腸管を維持する」は、痛みおよび／または鼓張を伴うことなく、正常な腸管可動性および排便回数でもって正常な消化を維持することとして理解することができる。
【００７２】
本書で使用されるとき、「便秘」は、便通の頻度が低いこと、排便回数が減少することならびに排泄物が通過しづらいこととして定義することができる。
【００７３】
用語「健康な腸管微生物叢」は、安定的かつバランスのとれた腸管微生物叢に関し、ここではプロバイオティクス細菌が病原性細菌よりも優勢であるので、制御されない病原性細菌の増殖は起らず、個体は腸の健康に問題（ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を有さない。
【００７４】
「旅行者疾患」または「旅行者下痢」は、突然発症する下痢に関連し、通常は旅行の最初の週に旅行者において散発的に発生する腹部痙攣、嘔吐および発熱を伴うことが多く、最も一般的には大腸菌種のような病原性細菌の慣れていない株により引き起こされる。
【００７５】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、後に述べるいずれかの要素に限定されず、機能的重要性が高いまたは低い不特定要素を包含することを意味する。言い換えると、列挙した工程、要素または選択肢は網羅的である必要はない。用語「包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語が使用されるときはいつでも、これらの用語は、上記で定義した「含む」と同等であることを意味する。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」を包含することを意図する。
【００７６】
これらのおよび他の実施形態は、本発明の説明および実施例に開示され、包含される。本発明に従って使用される材料、方法、使用および化合物のいずれか１つに関する更なる文献は、例えば電子機器を使用して、公共のライブラリおよびデータベースから検索することができる。例えば、国立生物工学情報センターおよび／または国立衛生研究所の国立医学図書館が主催する公共のデータベース「Ｍｅｄｌｉｎｅ」または「ＰｕｂＭｅｄ」を利用してもよい。仮想ライブラリ「Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ’ｓ  ｃｅｎｔｅｒ」などの更なるデータベースおよびウェブアドレスが当業者に知られており、また、インターネット検索エンジンを使用して得ることができる。
【００７７】
幾つかの文献が本明細書の本文中に引用されている。全ての引用文献の内容（本出願および製造業者の仕様書、説明書などに引用されるような参考文献、発行された特許、公開された特許出願を含む）を参照により本書に組み込む。しかしながら、引用された文献が実際に本発明に関する従来技術であるとは認められていない。
【００７８】
上記開示は、本発明を概して説明する。より完全な理解は、以下の具体例を参照することによって得ることができるが、これらは例示目的のみのために本書に提供され、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００７９】
背景およびプロジェクトの目的：
プロバイオティクス微生物ならびにビフィドバクテリウム属およびラクトバチルス属の更なる選択された菌株によるシソ属植物抽出物（製剤Ｃ）の利用を評価することによって、ならびに、胃腸管の典型的な片利共生かつ病原性種の増殖に対する植物抽出物の効果を評価することによって、インビトロ研究における選択された物質のプレバイオティクスの可能性を検討した。
【００８０】
実施例１：  シソ属植物はプロバイオティクス細菌の増殖を促進する
株の事前選択
表１は、本実施例で試験した市販のプロバイオティクス株をまとめたものである。
表１：試験したプロバイオティクス株の一覧。
【表１】
2016525520.tif 000002
プロバイオティクス株に加えて、本実施例では、８種の片利共生または病原性株を選択して試験した。
【００８１】
寒天平板上でのプロバイオティクス株による増殖実験：
株１〜１０の分析
選択した１０種のプロバイオティクス株の増殖挙動を、異なるＣ（炭素）供給源を補充した２つの異なる培地組成物を含む寒天平板上で試験した。
【００８２】
以下の培養試験を、１０種の株のそれぞれについて寒天平板上で行った：
１．Ｃ供給源としてシソ属植物抽出物を用いた１株当たり２回の培養（体積当たりの重量：１％）−製剤Ｃ
２．Ｃ供給源としてグルコースを用いた１株当たり２回の培養（体積当たりの重量：１％）−陽性対照１
３．グルコースを用いない１株当たり２回の培養−陰性対照
【００８３】
アッセイで使用する前に植物抽出物製剤を更に滅菌しなかった。
【００８４】
培地として、寒天ベースのｓＭＲＳ培地（合成ＭＲＳ；ＭＲＳ＝ｄｅ  Ｍａｎ−Ｒｏｇｏｓａ−Ｓｈａｒｐｅ培地＝乳酸菌のための典型的な培地）およびＬＭＭ培地（乳酸菌最少培地）を使用して乳酸菌による増殖実験を行った。これら２種の培地を選択したのは、ｓＭＲＳが酵母抽出物およびペプトンのような不確定化合物を含有する複合培地を表し、一方、ＬＭＭ培地が排他的に規定された成分を含有する培地であるからである。ビフィズス菌による増殖実験のために、特殊なビフィズス菌培地を複合培地として選択し、システインを補充した（０．５ｇ／ｌ）ＬＭＭ培地を特定培地として使用した。
【００８５】
使用した培地の組成を表２、３および４に列挙する。
表２：ｓＭＲＳ培地の組成
【表２】
2016525520.tif 000003
【００８６】
表３：ＬＭＭ培地の組成
【表３】
2016525520.tif 000004
【００８７】
表４：ビフィズス菌培地の組成
【表４】
2016525520.tif 000005
【００８８】
実験設定の確立および培地の調製
培養培地を調製するために、グルコースの２０％（ｗ／ｖ）溶液（水中）および炭素供給源製剤を調製した。シソ属植物抽出物製剤（Ｃ）を非滅菌溶液として適用した。２０％（ｗ／ｖ）グルコース溶液を滅菌処理した。
【００８９】
ペトリ皿に培地を注ぐ直前に、寒天ベースに異なる炭素供給源を補充した。調製した各寒天中の試料製剤の適用濃度は１％（ｗ／ｖ）であった。１つの陽性対照を１％グルコースを用いて調製した。陰性対照として、Ｃ供給源を添加しない培地を作製した。培地ごとに合計３種の異なる調合物を使用した。
【００９０】
培地の初期ｐＨを、腸の条件をシミュレートするために、６〜７の中性のｐＨ値に調整した。シソ属植物抽出物製剤が培地のｐＨ値に影響を与えるかどうかを決定するために、シソ属植物抽出物溶液の添加後にｐＨ値も測定した。これを行ったのは、酸性の栄養補助食品が、培地のｐＨ値の低下を引き起し得ることが知られているからである。ｐＨ値が低いと、細菌の望ましくない増殖阻害を引き起こし、それにより、異なる栄養補助食品を含む培地中での細菌の増殖を比較することが困難になり得る。
【００９１】
一例として、表５は、植物抽出物製剤またはグルコースの添加後のｓＭＲＳ培地のｐＨ測定結果を表す。
表５：対照としての植物抽出物製剤およびグルコースを含有するｓＭＲＳ培地のｐＨ値
【表５】
2016525520.tif 000006
表５のデータは、植物抽出物製剤ならびにグルコースの添加が試験培地のｐＨ値に何ら影響を及ぼさなかったことを明らかにする。
【００９２】
表１に列挙したプロバイオティクス株の増殖挙動を評価するために、細胞をＭＲＳ培地またはビフィズス菌培地で事前培養し、２４時間３７℃で培養した。その後、細胞を採取し、寒天平板上でのその後の増殖実験に対する培地中の残留栄養素の起こり得る影響を避けるべくＰＢＳ中に再懸濁した。
【００９３】
寒天平板上にスポッティングするために、各プロバイオティクス株の様々な希釈物（１０−１〜１０−４）を調製した。図１は、対応するスポッティングスキームを示す。様々な細菌希釈物をスポッティングした後、接種した寒天平板を７２時間、嫌気性条件下で３７℃にてインキュベートした。異なるＣ供給源を含む寒天平板上でのプロバイオティクス株の増殖を、２４時間、４８時間および７２時間後に写真記録により評価した。
【００９４】
結果
寒天平板上でのプロバイオティクス培養物の増殖を、７２時間の培養の間モニタした。株間の増殖の違いは、培養から２４時間後および４８時間後に最も明白であった。従って、これらの２つの時点を菌株の増殖挙動の評価のために考慮した。２４時間の培養後の結果を、図２〜３に示す。
【００９５】
図２は、まず、全ての株がＣ供給源としてのグルコース（２）上で良好に増殖したことを示す。グルコースを含まない（３）寒天平板上で、株１、２、５、６および１０は増殖することができたが、グルコースを添加した陽性対照と比較して限られた程度であった。しかしながら、株７は、Ｃ供給源なしでは増殖しなかった。
【００９６】
シソ属植物抽出物（１）を補充した寒天平板上では、全ての株が、グルコースを補充した寒天平板上での増殖に匹敵する増殖を呈した。故に、シソ属植物抽出物（植物）を、試験した全ての株によるＣ供給源として使用可能であると結論付けられる。
【００９７】
ＬＭＭ培地上のプロバイオティクス乳酸菌株の２４時間の培養後の結果を図３に示す。
【００９８】
図３は、まず、全ての株が、グルコースを補充したＬＭＭ寒天平板（２；陽性対照）上で良好に増殖したことを示す。Ｃ供給源を添加しない場合、全ての株はごくわずかな増殖を示すのみであった（３）。
【００９９】
４８時間のインキュベーション後のｓＭＲＳおよびＬＭＭ培地上でのプロバイオティクス乳酸菌株の培養結果を図４および５に示す。２４時間のインキュベーションと比較して、４８時間の培養後の植物抽出物製剤上での株の増殖はより明確である。株１、５、６および１０は、全ての植物抽出物製剤上ならびにＣ供給源を含まない陰性対照平板上で明確な増殖を示した。しかしながら、この株１の増殖は、陰性対照と比較して、シソ属植物抽出物（１）上で著しく良好であった。株２（ラクトバチルス・アシドフィルス）および７（ラクトバチルス・ブルガリクス）は、シソ属植物抽出物（１）上では増殖を示したが、Ｃ−供給源を含まない陰性対照平板上では示さなかった。これは、植物抽出物がこれらの２種の株により炭素供給源として排他的に使用されることを示す。
【０１００】
ビフィズス菌株に関する最も重要な結果は、４８時間の培養後に得られた。４８時間の培養後のビフィズス菌培地およびＬＭＭ培地上でのプロバイオティクスビフィズス菌株の培養結果を図６および図７に示す。
【０１０１】
図６は、ビフィドバクテリウム属の全ての株が、Ｃ供給源としてのグルコース（２）上で良好に増殖したことを示す。グルコースを含まない（３）寒天平板上で、株３および４はまだ増殖することができたが、グルコースを含む陽性対照と比較して増殖の低下を示した。株８は、Ｃ供給源の補充なしには増殖しなかった。
【０１０２】
全てのビフィズス菌株は、陽性対照（グルコース）に匹敵する増殖を、シソ属植物抽出物（１）上で示した。株３および４は、グルコースと同程度に良好にシソ属植物抽出物製剤（１）上で増殖することができた。また、株８は、製剤Ｃ（シソ属植物抽出物）上での増殖を示した。
【０１０３】
最少の特定ＬＭＭ培地上でのビフィズス菌株の増殖実験から得られた結果（図７）は、概して、複合ビフィズス菌培地上での増殖に匹敵する。
【０１０４】
株９（ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム）を別個に試験した。図８は、９６時間の培養後の特別なビフィズス菌培地およびＬＭＭ培地上での株９の増殖後に得られた結果を表示する。
【０１０５】
図８は、株９が、特別なビフィズス菌培地を伴う平板上ならびにＬＭＭ培地を伴う平板上で、Ｃ供給源としてのグルコース（２）上で増殖したことを示す。株９は、Ｃ供給源の添加なし（陰性対照）には増殖しなかった。しかしながら、株は、Ｃ供給源としてのシソ属植物抽出物（１）を利用することができたが、ＬＭＭ培地上での増殖が非常に限られていたとき、これは複合培地上での培養後にしか観察されなかった。
【０１０６】
実施例２：シソ属植物抽出物は、消化管の病原性細菌を中和する
寒天平板上での非プロバイオティクス株による増殖実験を、株１〜７を分析することによって行った。
表６−試験した非プロバイオティクス片利共生または病原性株の一覧
【表６】
2016525520.tif 000007
【０１０７】
事前選択された７種の非プロバイオティクス（片利共生または病原性）株の増殖挙動を試験した。株を２つの群：条件的嫌気性である４つの腸内細菌および３つの絶対的嫌気性細菌（クロストリジウムおよびバクテロイデス・フラジリス）に分類した。２つの分類された群ごとに、典型的な増殖培地（例えば、ＤＳＭＺ株コレクションにより推奨されるもの）を選択し、製剤Ｃおよびグルコースを補充した。Ｃ供給源を添加しない陰性対照も調製した。
【０１０８】
増殖性能試験を嫌気性条件下で寒天平板上で行った。
【０１０９】
以下の培養試験を、８種の株の各々について寒天平板上で行った。
１．Ｃ供給源としてシソ属植物抽出物を用いた１株当たり１回の培養（体積当たりの重量：１％）−製剤Ｃ
２．Ｃ供給源としてグルコースを用いた１株当たり１回の培養（体積当たりの重量：１％）−陽性対照２
３．グルコースを用いない１株当たり１回の培養−陰性対照
【０１１０】
アッセイで使用する前に植物抽出物製剤を更に滅菌しなかった。
【０１１１】
培養実験に先立って、７種の非プロバイオティクス株をそれらの増殖要件および培養条件に応じて２つの群に分類した。
【０１１２】
第１群は、腸内細菌科のファミリーに属するメンバーで構成される。このファミリーのメンバーは、酸素耐性および特定の栄養素に対する要件などの共通特性を共有する。この群に属する選択された株は、ネズミチフス菌、大腸菌、エンテロバクター・クロアカおよび肺炎桿菌である。
【０１１３】
第２群は、クロストリジウム・ディフィシル、ウェルシュ菌およびバクテロイデス・フラジリスを含み、これらは全て絶対的嫌気性である。
【０１１４】
腸内細菌および絶対的嫌気性株の各群について、１つの特定の複合培地を使用して植物抽出物製剤上での細菌増殖を評価した。
【０１１５】
腸内細菌科のメンバーを含む第１群について、ＣＡＳＯ培地（腸内細菌科のための典型的な複合培地）を使用して増殖実験を行った。ＣＡＳＯ培地の組成を表７に示す。
表７：ＣＡＳＯ培地の組成
【表７】
2016525520.tif 000008
【０１１６】
クロストリジウム・ディフィシル、ウェルシュ菌およびバクテロイデス・フラジリスを含む第２群について、複合培地Ｍ１１０（絶対的嫌気性細菌のための複合培地）を選択した。Ｍ１１０は、潜在的な炭水化物供給源を除外するべく、セロビオース、マルトースおよびデンプンのような糖類を含まない修飾された形態で使用された。
【０１１７】
Ｍ１１０培地の組成を表８に示す。
表８：Ｍ１１０培地の組成
【表８】
2016525520.tif 000009
【０１１８】
実験設定の確立および培地の調製
培養培地を調製するために、グルコースの２０％（ｗ／ｖ）溶液（水中）および植物抽出物製剤を調製した。植物抽出物製剤（Ｃ）を非滅菌溶液として適用した。２０％（ｗ／ｖ）グルコース溶液を滅菌処理した。
【０１１９】
ペトリ皿に培地を注ぐ直前に、寒天ベースに異なるＣ供給源を補充した。各寒天中の植物抽出物製剤の適用濃度は１％（ｗ／ｖ）であった。１つの陽性対照を１％グルコースを用いて調製した。陰性対照として、Ｃ供給源を添加しない培地を作製した。培地ごとに合計３種の調合物を使用した。
【０１２０】
寒天平板を調製した後、事前培養およびそれに続くＰＢＳでの洗浄後の各非プロバイオティクス株の様々な希釈物（１０−３〜１０−６）を調製し、寒天平板上にスポッティングした。図９は、対応するスポッティングスキームの例を示す。
【０１２１】
接種した寒天平板を数日間、嫌気性条件下で３７℃にてインキュベートした。異なるＣ供給源を含む寒天平板上での非プロバイオティクス株の増殖を、株に応じた好適な時間間隔で写真記録により視覚的に評価した。
【０１２２】
結果
株の増殖は非常に多様であったため、各株の増殖を区別するのに最も適切な時点を選択した。
腸内細菌
【０１２３】
腸内細菌は、複合培地上での急速な増殖によって特徴付けられる。そのため、これらの株の培養実験のために高細胞希釈物を調製した。最初の増殖の評価は、１６時間のインキュベーションの後に行った。１６時間および２４時間の培養の後のＣＡＳＯ培地上での増殖実験の結果を図１０および１１に示す。
【０１２４】
図１０および１１に示す結果は、株１、２、３および４がＣ供給源としてグルコースを含有するＣＡＳＯ培地上で非常に良好に増殖することを示す。Ｃ供給源を添加しない（３；陰性対照）寒天平板上で、これらの株は、グルコース上の増殖と同様の増殖を示した。
【０１２５】
株がＣ供給源を添加しない（３）ＣＡＳＯ培地上で増殖を示したという事実は、細胞がＣ供給源として培地中で他の栄養素を代謝することができたことを示している。
【０１２６】
しかしながら、病原性株２および３の増殖は、シソ属植物抽出物製剤（１）によって遅延された。それは、株２（大腸菌）と株３（エンテロバクター・クロアカ）の希釈工程の著しく限定された増殖を特徴としていた。株１（ネズミチフス菌）の増殖は、シソ属植物抽出物製剤によって完全に阻害された。株は、エネルギー源として植物抽出物を使用することができなかった。
【０１２７】
株４（肺炎桿菌）の場合、異なるＣ供給源間で有意差は見られなかった。この株は、試験した植物抽出物製剤（１）上ならびにグルコース上で増殖することができた。これらの結果は、植物抽出物製剤がＣＡＳＯ培地上の肺炎桿菌の増殖に影響を及ぼさないことを示している。
【０１２８】
絶対的嫌気性細菌
２４時間培養後のＭ１１０培地上の２種のクロストリジウム株５（クロストリジウム・ディフィシル）および６（ウェルシュ菌）の増殖実験の結果を図１２に示す。図１３は、培養４８時間後の結果を例証する。
【０１２９】
図１２および１３は、クロストリジウム・ディフィシル（株５）およびウェルシュ菌（菌株６）がＣ供給源としてのシソ属植物抽出物製剤（１）を代謝することができることを示している。
【０１３０】
これらの株は、２％の濃度のグルコースを添加した対照培地上で増殖の低下を示す。
【０１３１】
株７（バクテロイデス・フラジリス）は、寒天平板上で緩慢な増殖を示す。故に、最適な結果を、この株の培養の７日後にモニタすることができた。図１４は、異なるＣ供給源上での株７の増殖を表示する。
【０１３２】
バクテロイデス・フラジリスを用いた培養実験の結果（図１４）は、異なるＣ供給源がこの株の増殖に影響を及ぼさなかったことを実証している。植物抽出物製剤をＣ供給源として適用した場合、Ｂ．フラジリスの増殖も刺激または減少されなかった。故に、これらの結果は、植物抽出物製剤がＭ１１０培地中でのＢ．フラジリスの増殖に影響を及ぼさないことを示している。
【０１３３】
実施例の概要
１０種のプロバイオティクス株および７種の非プロバイオティクス株を、Ｃ供給源としてシソ属植物抽出物製剤を利用するそれらの能力について試験した。その目的のために、グルコース（陽性対照）（２）、シソ属植物抽出物製剤（１）を補充した、またはＣ供給源を含まない（陰性対照）（３）寒天平板上での増殖実験を行った。増殖実験のために、３種の異なる基本培地組成を使用した。
【０１３４】
プロバイオティクス乳酸菌およびビフィズス菌を用いた増殖実験は、試験したすべてのプロバイオティクス株がＣ供給源としてシソ属植物抽出物（Ｃ）が補充された培地上で増殖することができることを実証した。これらの株は全て、Ｃ供給源としてのグルコース上での増殖に等しい増殖を示した。グルコースは通常、最適なＣ供給源として考えられているため、これは注目に値する。３種の株（株７−ラクトバチルス・ブルガリカス、株８−ビフィドバクテリウム・ビフィダム、株９−ビフィドバクテリウム・ロンガム）は、陰性対照寒天平板（Ｃ供給源を含まない基本培地ｓＭＲＳおよびＬＭＭの両方）上で何ら増殖を示さなかった。株２（ラクトバチルス・アシドフィルス）もまた、Ｃ供給源を含まない最少ＬＭＭ培地上で増殖を示さなかったが、Ｃ供給源を含まない複合培地上ではごくわずかな増殖を示した。
【０１３５】
これは、これら４種の株が対応する平板上の唯一の炭素源として排他的にシソ属植物抽出物を使用したことを意味する。これら４種の株は、これらの株の１つと組み合わせたシンバイオティクスシソ属植物抽出物（プレバイオティクス）の開発のために非常に適している。
【０１３６】
Ｃ供給源を含まない複合培地上で増殖した別の６株は、増殖のためのＣ供給源として培地のベース（ｓＭＲＳまたはビフィズス菌培地）の複合成分（酵母抽出物、ペプトン）の成分を使用することができるようである。したがって、植物抽出物製剤を補充した培地上でのこれら６株の増殖が、複合培地ベースおよび植物抽出物製剤におけるこの化合物の組み合わせ効果であることを除外することはできない。
【０１３７】
増殖アッセイの結果は、複合培地と特定最少培地との有意な差を示していないが、一部の場合、最少培地上での培養から得られた結果は、バックグラウンド増殖が低いために、より明確に複合培地に匹敵した。
【０１３８】
ＣＡＳＯ培地上での非プロバイオティクス株を用いた最初の増殖実験により、試験した腸内細菌株の４種がＣ供給源としてのグルコース上で良好に増殖することができたことが明らかとなった。Ｃ供給源を添加しない（３；陰性対照）培地では、これら４種の株は、グルコース上での増殖と同様の増殖を示した。ＣＡＳＯは栄養素が豊富な複合培地であるので、一部の化合物を細菌増殖のためのＣ供給源として使用することができた可能性がある。
【０１３９】
株４および５の増殖は、プレバイオティクス物質とよく適合する植物抽出物によって刺激されなかった。
【０１４０】
病原性株２（大腸菌）および３（エンテロバクター・クロアカ）の増殖は、シソ属植物抽出物製剤（Ｃ）によって阻害（大幅に遅延）されさえした。株１（ネズミチフス菌）の増殖は、天然のシソ属植物抽出物製剤によって完全に阻害された。
【０１４１】
シソ属植物抽出物によるこれらの３種の株の阻害は、病原性細菌に対して中立的効果だけでなく有害な影響も観察されたため、顕著である。これは、積極的にプレバイオティクス指標に強い影響を及ぼす。
【０１４２】
異なるＣ供給源の肺炎桿菌（株４）の増殖に有意差は認められなかった。この株は、試験した植物抽出物製剤（１）上ならびにグルコース上で増殖することができた。これらの結果は、シソ属植物抽出物製剤が、プレバイオティクス物質とよく適合する試験した条件下でのＣＡＳＯ培地寒天平板上での肺炎桿菌の増殖に何ら影響を及ぼさないことを示している。
【０１４３】
絶対嫌気性菌の増殖を、Ｍ１１０複合培地上で試験した。結果は、シソ属植物抽出物製剤を培地に添加したときに、いずれの株の増殖も改善されなかったことを実証する。
【０１４４】
要約すると、本発明者らは驚くべきことに、シソ属植物調合物がプレバイオティクス活性を有することを見出した。従来技術のプレバイオティクスと比較してシソ属植物調合物は低用量で投与することができるので、これは有利な知見である。また、シソ属植物は副作用を引き起こさず、プレバイオティクス効果は投与後２４時間以内に開始し、胃腸管内で安定的である。よって、シソ属植物抽出物は、様々な胃腸の徴候ならびにプレバイオティクス剤がヒトまたは動物の身体の他の部分で有用である徴候のために使用することができる。
【０１４５】
文献
１．  Ｓｅｋｉｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０  Ｇｕｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ９０：  ８５９−９０４．
２．  Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｅｒ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｒｅｓｅ  ２００１  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，  ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ，  ａｎｄ  ｓｙｎｂｉｏｔｉｃｓ  −  ａｐｐｒｏａｃｈｉｎｇ  ａ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ．  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ７３（ｓｕｐｐｌ）：３６１−３６４．
３．  Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ：  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ｈｅａｌｔｈ  ｂｅｎｅｆｉｔｓ．  Ｂｒｉｔ  Ｊ  ｏｆ  Ｎｕｔｒ  １０４：  ００７−１１４５．
４．  Ｗｏｒｌｄ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ２００８  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ．
５．  Ｃｏｌｌｉｎｓ  ａｎｄ  Ｇｉｂｓｏｎ  １９９９  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，  ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ，  ａｎｄ  ｓｙｎｂｉｏｔｉｃｓ：  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏｂｉｌ  ｅｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｕｔ．  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ６９（ｓｕｐｐｌ）：１０５２（Ｓ）−７Ｓ．
６．  Ｍａｎｄａｌａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．  ２００７  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｐｅｃｔｉｃ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｒｉｃｈ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｂｅｒｇａｍｏｔ  ｐｅｅｌ．  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ７３：１１７３−９．
７．  Ｍａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｏｒａｎｇｅ  ｊｕｉｃｅ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｂｙ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｓｔｒｅａｍ．  Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ７１：８３８３−９．
８．  Ｂｒｉｔｔｏｎ  ａｎｄ  Ｖｅｒｓａｌｏｖｉｃ  ２００８  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．，  Ｖｏｌ．  ２００８．
９．  Ｉｑｂａｌ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１４  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．  Ｐａｋ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  Ｖｏｌ．  ２７，  Ｎｏ．  ２：  ４０５／１５．
１０．  Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ  ２００７  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ：  Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｅｐｔ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．  Ｊ．  Ｎｕｔｒ．  １３７：  ８３０−７．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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