(57)【要約】  可動性及び軟骨を維持し、骨関節炎を防止するための関節健康組成物。組成物の１つはサンシュユ（Ｆｒｕｃｔｕｓ  ｃｏｒｎｉ）を含む。前記組成物は、クズ抽出物、及び／又はタンパク質源、カルシウム源及びビタミンＤ源をさらに含む。他の組成物はサンシュユ水抽出物及び粉乳を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユ（Ｆｒｕｃｔｕｓ  ｃｏｒｎｉ）を含む組成物。
【請求項２】
関節の健康は骨関節炎の防止により維持される、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
哺乳動物の可動性の維持における使用のための、請求項１又は２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
軟骨の維持における使用のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
サンシュユは水抽出物として提供される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
クズ抽出物をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
食品、飲料、栄養補助食品、栄養配合物、及びペット食品からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
ヒト又は動物に投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
成体又高齢個体に投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
４０歳以上の成人に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
アスリートに投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
１日当たり体重１ｋｇ当たり乾燥ベースで少なくとも１０ｍｇのサンシュユに相当する１日用量で投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
タンパク質源、カルシウム源及びビタミンＤ源をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
１〜３０％のサンシュユ水抽出物及び４０〜９９％の粉乳を含む組成物。
【請求項１５】
１００ｇの組成物が２〜２５μｇのビタミンＤ及び１〜３ｇのカルシウムを含む、請求項１４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、概して、健康上の利益のある組成物に関連する。特に、本発明は関節の健康の分野に関連する。本発明の主題は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユ（Ｆｒｕｃｔｕｓ  ｃｏｒｎｉ）を含む組成物である。本発明のさらなる態様は、サンシュユ水抽出物及び粉乳を含む組成物である。
【０００２】
関節疾患は高齢者の障害の最多原因である。関節の健康の損失は個人の肉体的活動を非常に困難とし、肥満のリスクの増加や生活の質の低下の要因となる。関節疾患のある高齢者はしばしば外出ができなくなる。多くの関節疾患は関節の炎症（関節炎）を伴う。骨関節炎（変形性関節症と呼ばれることもある。）は最も一般的な関節疾患であり、４０歳代、５０歳代の人々にしばしば症状が現れ、８０歳までには（必ずしも症状が現れるわけではないが）ほぼ万人に共通のものとなる。骨関節炎は、手、足、背中、尻、及び膝を含む体の大小の関節に影響し得る。骨関節炎は、基本的には日々の関節の摩耗により生じるが、スポーツでのけがなど負傷の結果としても生じ得る。骨関節炎は、他の関節変化とともに関節軟骨の破壊及び損失により特徴付けられる。
【０００３】
関節疾患はヒトだけでなく動物も罹患する。ペットの観点から言えば、骨関節炎は老猫において極めて一般的であり［Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｆｅｌｉｎｅ  Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．，１４，６５〜７５（２０１２）］、また、成犬では、５匹中１匹が骨関節炎に罹患していると推定されている［Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｃｉａｎ，２４，６６４〜６７５（２００３）］。骨関節炎は、圧痛、炎症及び疼痛だけでなく運動の制限も引き起こす。これらはすべてペットの生活の質に大きな影響を与え、ペットの所有者に心配と苦悩をもたらす。
【０００４】
現在、骨関節炎の薬理学的治療法はなく、一度破壊された軟骨を再生することは非常に難しい。大部分の治療法は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）を用いた疼痛緩和に重点が置かれている。それ故、関節の健康の維持に有効な組成物、例えば、健常な個体における骨関節炎を防止できる又は骨関節炎の発症を遅延させることができる組成物を発見することは有益であろう。
【０００５】
グルコサミンは、主に関節の健康用の栄養補助食品として大変な人気を得ている。動物モデル及びインビトロ実験において、グルコサミンが、軟骨の生成を刺激し、かつ軟骨分解を抑制することが示されている。グルコサミンサルフェートは、下肢の骨関節炎の症状を有意に低減させることができることが報告されており［Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，３２，２９５９〜２９６７（２０１２）］、欧州特許第１８９０７０９号には、チコリ、ニンジン及びキクイモなどの植物からどのようにグルコサミンが生成され得るかが記載されている。しかし、グルコサミンの有効性に関する見解は分かれている。
【０００６】
サンシュユ（Ｆｒｕｃｔｕｓ  ｃｏｒｎｉ）は、主に中国、日本及び朝鮮で生育しているＣｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（山茱萸（Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｃｏｒｎｅｌｉａｎ  ｃｈｅｒｒｙ）として知られているハナミズキの種（ｓｐｅｃｉｅｓ））の果実である。サンシュユは、２０００年以上の間、伝統的な漢方薬として広く使用されてきており、血中脂質の低下、食後高血糖の抑制、及び男性性機能の改善などの効果が報告されている。サンシュユは、典型的には、果実の乾燥果肉として生薬で使用されている。果実を沸騰水中に数分間浸漬し、次いで核を除去し、種なし果実を乾燥させると、サンシュユが得られる。サンシュユは、モロニサイド、ロガニンなどのグリコシドを含有する。中国では、サンシュユは商業的に生産され、機能性食品としての使用が許可されている。
【０００７】
国際公開第２００５／００３１４５号には、疼痛、炎症、及び自己免疫疾患を治療するために山茱萸（Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物を使用することが記載されている。記載されている自己免疫疾患の１つは関節リウマチであり、山茱萸の抽出物は免疫抑制効果を提供する。Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．には、罹患関節のインビトロモデルでのサンシュユの抽出物の効果が記載されている［Ｇｕｏ  Ｌｉｌｉ  Ｚｈｏｕ  Ｙｏｎｇ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ  Ｘｕｄａｎ，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｏｔａｌ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  ｆｒｏｍ  Ｓｈａｎｚｈｕｙｕ（ｔｈｅ  ｓａｒｏｃａｒｐ  ｏｆ  Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）ｏｎ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ  ｏｆ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ  ｏｆ  ａｒｔｈｒｉｔｉｃ  ｒａｔｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００２（０３）：３０〜２］。山茱萸の抽出物が健常者における関節の健康を維持し得るという報告はない。
【０００８】
関節の健康の維持における使用のための新規の組成物、特に健常な個体における軟骨変性を低減又は防止する組成物を発見する必要性がある。天然供給源由来の組成物及び日常の食事への組み入れに適した組成物をさらに同定することは特に有益であろう。
【０００９】
本発明の目的は、技術水準を改善し、関節の健康の維持のための改善された解決策を提供すること、あるいは少なくとも有用な代替手段を提供することである。本発明の目的は独立請求項の主題により達成される。従属請求項は本発明のアイデアをさらに発展させる。本明細書における先行技術文献への参照は、そのような先行技術が広く知られており又は当分野の常識の一部を形成していることを認めたものとみなされるべきではない。本明細書で使用される場合、「含む」（“ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ”，“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”）という単語及びそれに類似する単語は、排他的（ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ）又は網羅的（ｅｘｈａｕｓｔｉｖｅ）な意味で解釈されるべきではない。言い換えれば、それらは「〜を含むが、それらに限定されるものではない」を意味することが意図されている。
【００１０】
第一の態様において、本発明は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユ（Ｆｒｕｃｔｕｓ  ｃｏｒｎｉ）を含む組成物を提供する。第二の態様において、本発明は、１〜３０％のサンシュユ水抽出物及び４０〜９９％の粉乳を含む組成物に関する。別段の記載がない限り、本明細書のすべてのパーセンテージは重量ベースである。
【００１１】
卵巣摘出された成熟ラットは、健康な哺乳動物で生じる関節劣化のモデルを提供する［Ｈｏｅｇｈ−Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  ｔｈｅｒａｐｙ  ６（２），Ｒ１６９〜１８０（２００４）］。驚くべきことに、本発明者らは、サンシュユが、卵巣摘出された成熟ラットにおける軟骨変性に対してプラスの効果を有することを見出した。サンシュユ水抽出物は、軟骨変性のバイオマーカーであるＣＴＸ−ＩＩ（ＩＩ型コラーゲンの架橋Ｃ−テロペプチド）の濃度を減少させることが判明した。さらに、サンシュユ水抽出物による処置は、卵巣摘出されたラットの血清中の炎症マーカーＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）を減少させることが判明した。これらの知見は、サンシュユは、健常な個体における関節変性に対する防止効果を提供し、かつ抗炎症効果を提供し得ることを示している。それ故、サンシュユを含む組成物は、哺乳動物（例えば健常な哺乳動物）における関節の健康の維持において有効に使用され得る。
【００１２】
図１（Ｆｉｇ．１）は、偽手術群（Ａ）、卵巣摘出群（Ｂ）、サンシュユ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｃ）、サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｄ）、サンシュユ水抽出物及びクズ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｅ）、及びグルコサミンで処置した卵巣摘出群（Ｆ）に関する、６週目（■）及び１２週目（□）の血清ＣＴＸ−ＩＩ濃度（軟骨変性マーカー）（ｐｇ／ｍＬ）を示す。＊は、卵巣摘出群に対してＰ＜０．０１であることを示す。＃は、グルコサミン群に対してＰ＜０．０１であることを示す。
【００１３】
図２（Ｆｉｇ．２）は、偽手術群（Ａ）、卵巣摘出群（Ｂ）、サンシュユ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｃ）、サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｄ）、サンシュユ水抽出物及びクズ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｅ）、及びグルコサミンで処置した卵巣摘出群（Ｆ）に関する血清ＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍＬ）を示す。＊は、卵巣摘出群に対してＰ＜０．０５であることを示す。
【００１４】
本発明は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のための、サンシュユを含む組成物を提供する。健康な関節は、活動的で痛みのない生活を送るために大変重要である。健康な関節がないと、可動性の問題により、鬱や肥満などの他の有害な状態がもたらされ得る。関節の健康の維持とは、例えば、日々の関節の摩耗により経時的に生じる関節変性の防止又は低減であり得る。
【００１５】
骨関節炎（変形性関節症又は変形性関節疾患としても知られる。）は、関節の分解を伴う機械的異常の一群である。いずれの関節も骨関節炎に罹患し得るが、手、及び体重負荷を受ける関節（脊椎、尻、膝など）が最も頻繁に罹患する。肩、肘、足首などの他の関節も罹患する可能性が高い。ヒトでは４５歳以降に生じることが多いが、子供から高齢者までのすべての年齢の人にリスクがある。老齢まで生存する哺乳動物の大部分が骨関節炎に罹患している可能性が高い。例えば、骨関節炎はウマ、イヌ、ネコ、及び霊長類において知られている。本発明の組成物は、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のためのものであり得、ここで、関節の健康は骨関節炎の防止により維持される。
【００１６】
サンシュユを含む組成物は、哺乳動物の可動性の維持における使用のためのものであり得る。この組成物は関節の健康の維持に有用であり、このことは個体の活動性又は可動性の改善をもたらす。サンシュユを含む組成物をヒト、ペット又はウマに投与すると、それらの生活の質が大いに改善される。ペットの場合、可動性の改善はペットとその飼い主との交流を強化及び改善する。
【００１７】
骨関節炎は、通常、関節内の軟骨の破壊により引き起こされる。サンシュユは、ヒト又は他の動物における軟骨変性を低減する。軟骨とは、骨と骨の間の関節、胸郭、及び椎間板など、ヒト及び他の動物の身体の多くの領域に見られる柔軟な結合組織である。軟骨変性は関節の健康の損失の重大な側面である。例えば、軟骨変性は骨関節炎において生じる。サンシュユを含む組成物は、軟骨の維持における使用のためのものであり得る。
【００１８】
サンシュユは、ヒト又は動物への投与に適した任意の形態で提供され得る。例えば、サンシュユは乾燥粉末又は抽出物として提供され得る。本発明の組成物は水抽出物として提供され得る。サンシュユ水抽出物は、乾燥させたサンシュユを水、例えば沸騰水で抽出することによって得られる。ろ過の後、抽出物は濃縮及び乾燥させて粉末とする。
【００１９】
本発明の組成物は、関節の健康の維持に関連する他の材料、例えば、グルコサミン及び／又はコンドロイチン硫酸をさらに含み得る。本発明の組成物はクズ抽出物をさらに含み得る。クズ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ）は、中国起源の登攀性つる植物であり、１８００年代後半に日本からアメリカ合衆国に持ち込まれたものである。アメリカ合衆国東部エリアの大部分に分布し、アメリカ大陸南部ではごくありふれたものである。クズは、ヒト又は動物への投与に適した任意の形態で提供され得る。クズの根は、関節軟骨の分解を低減することが知られており［国際公開第２０１１／１３５０１１号］、そのため、一緒に摂取すれば、サンシュユを補完し、例えば、より少ない各々の用量で同様の効果を得ることを可能にする。
【００２０】
本発明の組成物は、ヒト又は動物による摂取に適した任意の組成物であり得る。したがって、組成物は、食品、飲料、栄養補助食品、栄養配合物、及びペット食品からなる群から選択され得る。フードサプリメント又はダイエタリーサプリメントとしても知られる栄養補助食品は、食事を補完し、個人の食事において不足している又は十分な量で摂取されない可能性のあるビタミン、ミネラル、繊維、脂肪酸又はアミノ酸などの栄養素を提供することを目的とする調製物である。栄養補助食品は、通常、錠剤の形態で経口的に摂取される。
【００２１】
栄養配合物は、投与される対象者の唯一の栄養供給源として十分な種類と量の多量栄養素（タンパク質、脂肪、及び炭水化物）及び微量栄養素を提供する完全栄養配合物であり得る。栄養配合物は、部分栄養を提供し、対象者の従来の食事を補完するものとしても働き得る。
【００２２】
本発明の組成物は経口的、経腸的又は局所的に投与され得る。大半のヒト及び動物は注射を嫌うため、注射せずに投与できる組成物を有することは有利である。
【００２３】
本発明の組成物はアスリートに投与され得る。トレーニングをし、スポーツの練習やプレイをする、初心者レベルに及ぶアスリートは、より適度なレベルで運動をする個体に比べて、関節の不良な健康状態、例えば骨関節炎を発症する可能性が高い。フットボール、ラグビー、及び陸上競技などの激しいスポーツをすると、関節への負担及び関節の損傷が生じ得る。これらは（場合により後年）軟骨変性をもたらし得る。
【００２４】
本発明の組成物は成体又は高齢個体に投与され得る。関節の健康はしばしば年齢とともに悪化するため、そのことは有利である。本発明に関しては、出身国における平均寿命の半分を超えていれば、好ましくは出身国における平均寿命の３分の２を超えていれば、さらに好ましくは出身国における平均寿命の４分の３を超えていれば、最も好ましくは出身国における平均寿命の５分の４を超えていれば、該対象者を「高齢」とみなすものとする。本発明による使用のための組成物は、４０歳以上、例えば５０歳以上、さらなる例として６０歳以上の成人に投与され得る。
【００２５】
関節の健康の悪化はヒトだけではなく他の動物にも起こるので、本発明の組成物は、ヒト又は動物、例えば、ネコ又はイヌなどのコンパニオンアニマルに投与され得る。
【００２６】
本発明の組成物の効力は用量反応曲線に従う。組成物は、関節の不良な健康状態を発症するリスクを少なくとも部分的に低減するのに十分な量で投与され得る。正確な量は、対象者の健康状態及び体重など、対象者に特異的ないくつかの要因に依存する。当業者はそのような用量を適切に決定できるであろう。しかし、概して、本発明の組成物は、１日当たり体重１ｋｇ当たり乾燥ベースで少なくとも１０ｍｇのサンシュユ、例えば、１日当たり体重１ｋｇ当たり乾燥ベースで少なくとも２０ｍｇのサンシュユ、さらなる例として、１日当たり体重１ｋｇ当たり乾燥ベースで少なくとも５０ｍｇのサンシュユに相当する１日用量で投与され得る。望ましくない副作用を回避するために、用量はある程度低用量に抑えられるべきである。本発明の組成物は、１日当たり体重１ｋｇ当たり乾燥ベースで１０ｍｇ〜５００ｍｇのサンシュユに相当する１日用量で投与され得る。
【００２７】
サンシュユからの異なる抽出方法は異なる濃度の有効成分を提供し得るが、用量はモロニサイド（ｍｏｒｒｏｎｉｓｉｄｅ）含有量に従って調整できる。モロニサイド含有量は、当技術分野で知られている方法により測定できる（例えば、Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．［Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（６），ｐｐ．４４１＋４４６＋４５７（２０１２）］）。乾燥サンシュユは、典型的には約１０ｍｇ／ｇのモロニサイドを含有する。したがって、本発明の組成物は、１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、又は０．５ｍｇのモロニサイドを含む１日用量で投与され得る。本発明の組成物は、１日当たり体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜５ｍｇのモロニサイドを含む１日用量で投与され得る。
【００２８】
本発明による使用のためのサンシュユを含む組成物はタンパク質源、カルシウム源及びビタミンＤ源をさらに含み得る。タンパク質源は、粉乳、乳清タンパク質、大豆タンパク質、又はそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。タンパク質は筋肉の増強を支援し、カルシウム及びビタミンＤは、強く健康な骨の構築及び維持を支援する。健康な筋肉、骨及び関節を有することは良好な可動性をもたらし、好循環として、関節の良好な健康状態の維持は、良好な可動性を有する個体においてより有効なものとなる。それ故、サンシュユ、タンパク質、カルシウム及びビタミンＤを含む組成物は、哺乳動物における関節の健康の維持において有益である。
【００２９】
本発明は、１〜３０％のサンシュユ水抽出物及び４０〜９９％の粉乳、例えば、５〜２５％のサンシュユ水抽出物及び５０〜９５％の粉乳、さらなる例として、１０〜２０％のサンシュユ水抽出物及び６０〜９０％の粉乳を含む組成物をさらに提供する。サンシュユ水抽出物は、概して、例えば、マルトデキストリンなどの担体とともに噴霧乾燥されて、粉末として製剤化される。しかし、担体の量が変動し得るため、本発明の組成物におけるサンシュユ水抽出物の量は乾燥ベースで与えられ、ともに製剤化されている可能性のある担体を含まない。１００ｇの組成物は１０ｍｇ〜３００ｍｇのモロニサイドを含み得る。乳は、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、又は全脂粉乳であり得る。サンシュユ水抽出物及び粉乳を含む組成物はさらにビタミン及びミネラルを含み得る。例えば、１００ｇの組成物は２〜２５μｇのビタミンＤ及び１〜３ｇのカルシウムを含み得る。ビタミンＤはコレカルシフェロールであり得る。カルシウム及びビタミンＤは、関節の健康にとって重要な強い骨を促進及び維持するのを支援する。良好な骨の健康状態は良好な関節の健康状態を促進する。例えば、健康な骨を有する高齢個体は依然として活動的であることができ、そのことは関節の健康に資する。ビタミンＤ、カルシウム及びサンシュユを乳と組み合わせることによって、関節の健康に有益な組成物が提供される。
【００３０】
当業者は、ここで開示される本発明のすべての特徴を自由に組み合わせることができることを理解するであろう。特に、本発明の製品に関して記載された特徴は本発明の方法と組み合わされ得、逆もまた同様である。さらに、本発明の異なる実施形態に関して記載された特徴を組み合わせてもよい。特定の特徴に対して既知の均等物が存在する場合、そのような均等物は、あたかも本明細書で具体的に言及されているかのように組み入れられている。本発明のさらなる利点及び特徴は図及び非限定的な例から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１（Ｆｉｇ．１）は、偽手術群（Ａ）、卵巣摘出群（Ｂ）、サンシュユ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｃ）、サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｄ）、サンシュユ水抽出物及びクズ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｅ）、及びグルコサミンで処置した卵巣摘出群（Ｆ）に関する、６週目（■）及び１２週目（□）の血清ＣＴＸ−ＩＩ濃度（軟骨変性マーカー）（ｐｇ／ｍＬ）を示す。＊は、卵巣摘出群に対してＰ＜０．０１であることを示す。＃は、グルコサミン群に対してＰ＜０．０１であることを示す。
【図２】図２（Ｆｉｇ．２）は、偽手術群（Ａ）、卵巣摘出群（Ｂ）、サンシュユ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｃ）、サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｄ）、サンシュユ水抽出物及びクズ水抽出物で処置した卵巣摘出群（Ｅ）、及びグルコサミンで処置した卵巣摘出群（Ｆ）に関する血清ＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍＬ）を示す。＊は、卵巣摘出群に対してＰ＜０．０５であることを示す。
【実施例】
【００３２】
実施例１（サンシュユ水抽出物（ＦＣｗ）の調製）：
１２ｋｇの乾燥させたサンシュユ（Ｂｏｚｈｏｕ  Ｙｏｎｇｇａｎ）を、２００Ｌ抽出タンク中で１４４Ｌの熱水と混合した。混合物を９５℃の温度で１時間撹拌し、その後、１００メッシュのステンレス篩に通してろ過した。次いで、この抽出の残渣を、９５℃で３０分間、さらなる６０Ｌの熱水で抽出し、その後、１００メッシュのステンレス篩に通してろ過した。２つの抽出物を合わせ、３５℃まで冷却し、遠心分離した。得られた清澄な液体を、逆浸透膜を用いて濃縮し、ブリックス値約５．５°Ｂｘの濃縮物を得た。その後、この濃縮物を、８０℃で１時間、真空中でさらに濃縮した。得られた濃縮物を６．５ｋｇのデキストリンと混合し、噴霧乾燥した。１０．８ｍｇ／ｇのモロニサイド含有量を有する１２ｋｇの噴霧乾燥粉末抽出物が得られた。
【００３３】
実施例２（サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物（ＦＣｒ）の調製）：
１２０Ｌのアンバーライト（商標）ＸＡＤ１６００樹脂（Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａａｓ）を、１％ＮａＯＨに１２時間浸漬することによって前処理し、その後、純水を用いて洗浄してｐＨ６．５〜７．５とし、９５％エタノール／水中に１２時間浸漬し、純水で繰り返し洗浄してエタノールを除去した。５０ｋｇの乾燥させたサンシュユ（Ｂｏｚｈｏｕ  Ｙｏｎｇｇａｎ）を、３０００Ｌ抽出タンク中で６００Ｌの熱水と混合した。混合物を９５℃の温度で１時間撹拌し、その後、１００メッシュのステンレス篩に通してろ過した。次いで、この抽出の残渣を、９５℃で３０分間、さらなる２５０Ｌの熱水で抽出し、その後、１００メッシュのステンレス篩に通してろ過した。２つの抽出物を合わせ、３５℃まで冷却し、遠心分離した。８００Ｌの清澄な液体を、２４０Ｌ／ｈの流量で１２０ＬのＸＡＤ１６００樹脂カラムにロードし、その後、３００Ｌの純水で洗い流した。樹脂カラムを、３００Ｌの７０％エタノール／水を用いて１２０Ｌ／ｈの流量で溶出した。エタノール／水画分を回収し、７０℃で１２０分間、真空下で濃縮して、エタノールを再利用した。これにより５０．４ｋｇの６．８°Ｂｘの濃縮物を得、それを（担体なしで）噴霧乾燥して、１８０ｍｇ／ｇのモロニサイド含有量を有する３．１５ｋｇの噴霧乾燥粉末抽出物を得た。
【００３４】
実施例３（インビボ研究）：
卵巣摘出した（ＯＶＸ）ラットを、閉経後の健常な女性の骨関節炎を模倣するモデルとして使用した。軟骨変性の抑制マーカー、ＩＩ型コラーゲンの架橋Ｃ−テロペプチド（ＣＴＸ−ＩＩ）、及び炎症の抑制マーカー、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に対するサンシュユの効果を調べた。
【００３５】
生後７か月の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｗｅｉｔｏｎｇ  Ｌｉｈｕａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｒｅより購入した。手術は、Ｓｈｅｎｙａｎｇ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅの研究チームにより行われた。ラットに、Ｈｙｐｎｏｒｍ（商標）／Ｄｏｒｍｉｃｕｍ（商標）（１部のＨｙｐｎｏｒｍ（商標）＋１部のＤｏｒｍｉｃｕｍ（商標）＋２部の滅菌水）を０．２ｍＬ／１００ｇ体重で注射して、麻酔をかけた。麻酔後、動物の背中の毛を剃り、皮膚を消毒した。脊椎上で皮膚を１箇所切開し、両方の卵巣へのアクセスを得た。筋肉を切断してアクセスを得、卵巣の位置を特定して切除した。各側の筋肉を１〜２針縫って塞ぎ、皮膚を３〜４針縫って塞いだ。偽手術については、卵巣が切除されなかったことを除いてＯＶＸ手術と同様の手順に従った。ラットには、手術当日及びそれに続く２日間、術後鎮痛法（Ｒｉｍａｄｙｌ（商標））が施された。
【００３６】
ラットは、１２時間／１２時間の明／暗サイクルを有する、温度及び湿度が制御された部屋（温度：２２±２℃、湿度：５０±２０％）に置かれた。ラットには、手術と実験的処置の開始との間に１週間の順化期間を設けた。処置は１２週間継続した。動物は、体重をマッチさせて下記の群にランダムに割り当てた。
【００３７】
【表１】
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【００３８】
飼料はＡＩＮ−９３Ｍ飼料であった［Ｐ．Ｇ．Ｒｅｅｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  １２３（１１），１９３９（１９９３）］。植物抽出物は飼料を介して投与した。クズ水抽出物はＨｉｇｈ  Ｓｔａｒ  Ｌｔｄ．より得た。各試験群の抽出物は、用量及び推定平均飼料摂取量に応じて飼料と均一に混合した。混合後、飼料ペレットを調製した。ラットに与える飼料の量を平均飼料摂取量の９０％とし、与えられたすべての飼料をラットが確実に摂取するようにした。グルコサミン（ＧＳ）塩酸塩（Ｒｅｇｅｎａｓｕｒｅ（登録商標）ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ，Ｃａｒｇｉｌｌ，ＵＳ）を抗軟骨変性の陽性対照として使用し、脱イオン飲料水を介して投与した。ラットは２匹ずつケージに入れられた。飼料の量は、各飼料についてラット１匹当たり１６ｇ／日（これは、順化期間中のラットの最小平均飼料摂取量である。）とした。すべてのラットは蒸留水に自由にアクセスできた。群Ｆのラットは、０．５％のグルコサミンを含有する蒸留水に自由にアクセスでき、消費された水の量は各ラットについて記録された。試験飼料による処置を卵巣摘出１週間後に開始し、１２週間継続した。余剰ラットには、処置の第１週の間の個体の交換に備えて各群の手術を施した。
【００３９】
１．５ｍＬの血液サンプルを、０週目、６週目及び１２週目にすべてのラットから採取した。採取した血液の遠心分離（３０００ｒｐｍ，１０分）によって血清を調製した。血清画分を、ラベル付きのエッペンドルフ（商標）チューブに慎重に回収し、後の分析用に−８０℃で冷凍保存した。研究の最後に、ラットにイソフルラン吸入により麻酔をかけた後、ＣＯ２吸入により安楽死させた。
【００４０】
ＣＴＸ−ＩＩは、Ｓｅｒｕｍ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｒｔｉｌａｐｓ  ＥＬＩＳＡ（Ｎｏｒｄｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｒｌｅｖ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて測定した。アッセイ内及びアッセイ間の変動係数（ＣＶｓ）はそれぞれ４．６％及び１６．２％であった。血清ＴＮＦαは、研究の最後に回収された血清についてのみ、Ｒａｔ  ＴＮＦ−α  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  ＥＬＩＳＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＵＳＡ）を用いて測定した。アッセイ内及びアッセイ間の変動係数（ＣＶｓ）はそれぞれ３．５％及び９．７％であった。
【００４１】
データは平均±標準偏差（ＳＤ）として表した。すべての統計解析は、ＳＰＳＳ１３．０の統計ソフトウェア（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を用いて行われた。群間の差異を試験するために一元配置分散分析（Ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を使用した。
【００４２】
０週目において、血清中のＣＴＸ−ＩＩ濃度に群間の有意差はなかった。６週目において、血清ＣＴＸ−ＩＩ濃度は、偽手術群（Ａ）と比較してＯＶＸ群（Ｂ）において有意に増加し（Ｐ＜０．０１）、このモデルの成功が示された（図１）。ＯＶＸ誘導性のＣＴＸ−ＩＩの増加は、６週目においてすべての処置群において有意に抑制された（Ｐ＜０．０１）。１２週目において、偽手術群とＯＶＸ群との間のＣＴＸ−ＩＩの差異は小さくなったものの、ＣＴＸ−ＩＩの抑制は、群Ｄ（サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物）及び群Ｅ（サンシュユ水抽出物＋クズ）において依然として観察された。
【００４３】
１２週目において、血清ＴＮＦ−α濃度は、偽手術群（Ａ）と比較してＯＶＸ群（Ｂ）において有意に増加した（Ｐ＜０．０５）（図２）。サンシュユ水抽出物による処置（Ｃ）は、ＯＶＸにより誘導されたＴＮＦ−αの増加を抑制した（Ｐ＜０．０５）が、これは、陽性対照のグルコサミン群（Ｆ）を含む他の処置群では観察されなかった。
【００４４】
サンシュユによる処置は、成熟ＯＶＸラットにおいて軟骨変性のマーカーＣＴＸ−ＩＩを減少させた。この効果は、サンシュユ水抽出物、サンシュユ樹脂エタノール／水抽出物、及びクズ水抽出物と組み合わされたサンシュユ水抽出物において観察された。効果の大きさは、陽性対照のグルコサミン群と同程度に良好であった。さらに、サンシュユ水抽出物はＯＶＸラットにおける血清中の炎症マーカーＴＮＦ−αを減少させたが、この効果はグルコサミンでは観察されなかった。炎症は概して軟骨損傷と一緒に生じ、個体の関節の健康全体を悪化させるので、炎症の低減は追加的な利益となる。これらの知見は、サンシュユが例えば加齢に伴う関節変性に対して防止効果を提供し得ることを示している。このことは、サンシュユを含む組成物が、哺乳動物における関節の健康の維持における使用のためのものであり得ることを示している。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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