(57)【要約】活性薬剤で体表面を処理する方法は、治療有効量の組成物を体表面に投与することを含み、該組成物は少なくとも約1時間の持続時間にわたって体表面との接触を保つ効果があるバリア被膜を体表面上に形成する。前記組成物は以下の要件を満足する：約0.0001%≦C≦約0.4%、約0.07%≦H≦約70%、任意で抗菌剤A、かつ治療有効量のX；又は0%≦C≦約0.4%、約55%≦H≦約70%、任意で抗菌剤A、かつ治療有効量のX。全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり、Cは炭水化物ガム；Hは湿潤剤；そしてXは活性薬剤であって、該活性薬剤は身体に治療効果をもたらす効果がある。
2016504383.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性薬剤で体表面を処理する方法であって、
治療有効量の組成物を体表面に投与するステップを含み、該組成物は少なくとも約1時間の持続時間にわたって該体表面との接触を保つ効果があるバリア被膜を該体表面上に形成し、該組成物が以下の要件を満足する方法：
約0.0001%≦C≦約0.4%、
約0.07%≦H≦約70%、
任意で抗菌剤A、かつ
治療有効量のX；
又は
0%≦C≦約0.4%、
約55%≦H≦約70%、
任意で抗菌剤A、かつ
治療有効量のXを含み、
ここで、全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり；
Cは炭水化物ガム、Hは湿潤剤、そしてXは活性薬剤であって、該活性薬剤は身体に治療効果をもたらす効果がある。
【請求項２】
前記活性薬剤が、少なくとも0.0005%の量で存在し、これまでに承認された該活性薬剤の最小用量よりも少ない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記活性薬剤が、制酸剤、プロバイオティクス、ビタミン、栄養補助剤、銀、酸化防止剤、感冒若しくはインフルエンザの対症療薬、抗プリオン剤、免疫刺激剤、抗下痢剤、制吐剤、局所麻酔薬、局所鎮痛薬、鎮痒（かゆみ止め）剤、抗アレルゲン薬、局所ステロイド剤、うっ血除去剤、鎮咳剤、火傷若しくは日焼け処置剤、去痰剤、抗ヒスタミン剤、局所NSAID、局所サリチル酸塩、発毛剤、勃起不全治療薬、局所抗生剤、局所創傷処置剤、抗酸化剤、痔核治療薬、局所抗真菌薬、抗ざ瘡剤、瘢痕治療薬、乾癬治療薬、乾燥頭皮治療薬、フケ防止剤、殺シラミ剤、ヘアケア剤、体臭改善薬、制汗剤、及び足臭改善薬からなる群より選択される1つ又は複数からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
治療有効量の前記組成物を、約2〜約12時間毎に、治療効果が不要になるまで前記表面に投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が抗菌剤を含み、該抗菌剤がモノ第4級アンモニウム化合物又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物を投与する前記ステップが、以下に対応して発生することを更に含む、請求項1に記載の方法：
ａ．個体が高いリスク状態で存在する又は存在することになる汚染環境を特定すること（ここで、該汚染環境は、有害なウイルス、真菌、若しくは細菌微生物で汚染されていることが知られている又は予想される）；又は
ｂ．環境内で汚染事象が観察されること（ここで、個体は高いリスク状態で該環境に存在する又は該環境に存在することになる）。
【請求項７】
前記組成物が500cps未満の粘度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が溶液である、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
治療有効量の前記組成物がヒトの消費に対して無毒である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記体表面が皮膚である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物の皮膚表面上の微生物を殺滅する方法であって、
抗菌剤を含む組成物を皮膚表面に塗布するステップと；
その被膜の中で、該表面上で接触した微生物及び該塗布ステップ実施後に周囲環境から来て接触した微生物を殺滅又は中和することと；
該表面上に被膜層を形成することと；を含み、
該組成物は湿潤剤及び抗菌剤を含み；
該抗菌剤はモノ第4級アンモニウム化合物又はその薬学的に許容される塩を含み；
該被膜層は、少なくとも約1時間の殺菌作用又は静菌作用を持つ、方法。
【請求項１２】
前記被膜組成物が、約50重量%未満の湿潤剤を含み、炭水化物ガムを本質的に含まない、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記被膜組成物が以下の要件を満足する、請求項１１に記載の方法：
約0.07%≦H≦約10%；かつ
0.0005%＜Aであり、
ここで、全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり；
Hは前記湿潤剤であり、Aは前記抗菌剤である。
【請求項１４】
前記抗菌剤が塩化セチルピリジニウムである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記被膜層が、0.25 mLの用量で一枚の紙製ストックカードの1インチ径の面積に塗布された場合、前記被膜層に接触して配置された二枚目の紙製ストックカードから完全に引き離される前に、約0.5インチ以下の絞り深さを有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記微生物が、カンジダ、ニューモニア、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、レンサ球菌、ポルフィロモナス・ジンジバリス、化膿レンサ球菌、肺炎レンサ球菌、ストレプトコッカス・ミュータンス、黄色ブドウ球菌、エルシニア・エンテロコリチカ、アシネトバクター・バウマニ、ストレプトコッカス・サングイス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス・サリバリウス、ストレプトコッカス・ゴルドニ、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス、フソバクテリウム・ヌクレアタム、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・クルセイ、カンジダ・トロピカリス、カンジダ・グラブラータ、ＨＩＶ、ＥＢＶ、インフルエンザウイルス、上気道感染症を引き起こす微生物、センティペーダ・ペリオドンティイ、アイケネラコローデンス、腸内細菌、フソバクテリウム・ヌクレアタム亜種ヌクレアタム、フソバクテリウム・ヌクレアタム亜種ポリモルフム、フソバクテリウム・ヌクレアタム亜種ビンセンティ、フゾバクテリウム・ペリオドンティカム、ポルフィロモナス・エンドドンタリス、プレボテラ（バクテロイデス）・メラニノジェニカ、プレボテラ・インテルメディア、バクテロイデス（バクテロイデス）・レーシェイ、ソロバクテリウム・ムーレイ、タンネレラ・フォーサイシア（バクテロイデス・フォーサイシア）、トレポネーマ・デンティコラ、クロストリジウム・ディフィシレ、百日咳菌、バークホルデリア、アスペルギルス・フミガーツス、ペニシリウム属、クラドスポリウム、HPV、感冒ウイルス、肺炎桿菌、豚コレラ菌、大腸菌（O157:H7）、毛瘡白癬菌、ライノウイルス39型、RSウイルス、ポリオウイルス1型、ロタウイルスWa株、A型インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス1型及び2型、並びにA型肝炎ウイルスからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗菌剤成分が、多価アルコールの脂肪酸エーテル若しくは脂肪酸エステル又はそれらのアルコキシル化誘導体を含まない、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記皮膚表面が手であり、前記組成物が少なくとも毎日塗布される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
以下を含む、体表面処理用組成物：
約0.0001%≦C≦約0.4%、
約0.07%≦H≦約70%、
任意で抗菌剤A、かつ
治療有効量のX；
又は
0%≦C≦約0.4%、
約55%≦H≦約70%、
任意で抗菌剤A、かつ
治療有効量のXを含み、
ここで、全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり；
Cは炭水化物ガム、Hは湿潤剤、Aは抗菌剤、そしてXは活性薬剤であって；
該活性薬剤は、制酸剤、プロバイオティクス、ビタミン、栄養補助剤、銀、酸化防止剤、感冒若しくはインフルエンザの対症療薬、抗プリオン剤、免疫刺激剤、抗下痢剤、制吐剤、局所麻酔薬、局所鎮痛薬、鎮痒（かゆみ止め）剤、抗アレルゲン薬、局所ステロイド剤、うっ血除去剤、鎮咳剤、火傷若しくは日焼け処置剤、去痰剤、抗ヒスタミン剤、局所NSAID、局所サリチル酸塩、発毛剤、勃起不全治療薬、局所抗生剤、局所創傷処置剤、抗酸化剤、痔核治療薬、局所抗真菌剤、抗ざ瘡剤、瘢痕治療薬、乾癬治療薬、乾燥頭皮治療薬、フケ防止剤、殺シラミ剤、ヘアケア剤、体臭改善薬、制汗剤、及び足臭改善薬のうちの1つ又は複数からなる群より選択される。
【請求項２０】
前記抗菌剤がモノ第4級アンモニウム化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記活性薬剤が、体臭改善薬、制汗剤、又は両方である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、溶液であり、140 U.S.メッシュにかけると、該組成物の95〜100重量%が30秒後に通過する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記活性薬剤がユーカリプトールである、請求項１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、皮膚抗菌組成物及び局所活性剤で人体表面を処理する方法に関する。
（関連出願の相互参照）
【０００２】
本願は、2013年1月4日に出願された米国仮出願第61/749,195号（「Barrier-Forming Composition with Active Agents and Method.」）の優先権の利益を主張する。本願はまた、2013年10月25日に出願された米国特許出願第14/063,974号（「Low-Tack Surface Anti-Microbial Coating Composition and Method of Application.」）の優先権の利益を主張し、その一部継続出願である。本願はまた、2013年1月4日に出願された米国特許出願第13/734,363号（「Long-Lasting Surface Anti-Microbial and Method of Application.」）の優先権の利益を主張し、その一部継続出願である。本願はまた、2013年5月31日に出願された米国仮出願第61/829,608号（「Method for Reducing Microbial Load for Treatment of Disease Caused or Aggravated by Microorganisms or Relieving Symptoms Thereof.」）の優先権の利益を主張する。当該仮出願の内容全体を参照により本明細書に援用するものとする。
【背景技術】
【０００３】
皮膚病変、又は粘膜表面などの人体表面を処理するための多数の局所組成物が入手可能である。そのような組成物は、様々な状態及び疾病を治療するための活性薬剤を含む。しかしながら局所組成物は、多くの場合容易に洗い流されるか、そうでなければ、それらの効果を最大限にするのに十分な期間にわたる身体表面との接触を保たれてはいないため、効果が限られている。多くの局所組成物は、持続的な保護を提供しない、断続的で一時的なオプションである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許公報2012/0270909
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Yang, et al. "Concentrations and Size Distributions of Airborne Influenza A Viruses Measured Indoors at a Health Centre, a Day-Care Centre, and on Aeroplanes," J.R. Soc. Interface (Feb. 7, 2011)
【非特許文献２】Frank-Albert Pitten and Axel Kramer, "Efficacy of Cetylpyridinium Chloride Used as Oropharyngeal Antiseptic," Arzneim.Forsch./Drug Res.51 (II), pp588-595 (2001)
【非特許文献３】Department of Health and Human Services (Food and Drug Administration) (1994) Oral Health Care Drug Products for Over-the-Counter Human Use; Tentative Final Monograph for Oral Antiseptic Drug Products. Proposed Rules (21 CFR Part 356, Docket No. 81N-033A, RIN 0905-AA06). Federal Register 59:6084-124
【非特許文献４】Chandra et al. "In vitro Growth and Analysis of Candida Biofilms" Nature Protocols 3(12):1909-1924 (2008)
【非特許文献５】Pig Skin as Test Substitute for Evaluating Topical Antimicrobial Activity," J. of Clinical Microbiology, p. 343-348 (Sept. 1986).
【発明の概要】
【０００６】
活性薬剤で体表面を処理する方法は、治療有効量の組成物を体表面に投与することを含み、該組成物は少なくとも約1時間の持続時間にわたって該体表面との接触を保つ効果があるバリア被膜を該体表面上に形成する。前記組成物は以下の要件を満足する：約0.0001%≦C≦約0.4%、約0.07%≦H≦約70%、任意で抗菌剤A、かつ治療有効量のX；又は0%≦C≦約0.4%、約55%≦H≦約70%、任意で抗菌剤A、かつ治療有効量のX。全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり、Cは炭水化物ガム；Hは湿潤剤；そしてAは活性薬剤であって、活性薬剤は身体に治療効果をもたらす効果がある。
【０００７】
哺乳動物の皮膚表面上の微生物を殺滅する方法は、抗菌剤を含む組成物を皮膚表面に塗布すること；その被膜の中で、表面上で接触した微生物及び塗布ステップ実施後に周囲環境から来て接触した微生物を殺滅又は中和すること；表面上に被膜層を形成することを含む。前記組成物は湿潤剤及び抗菌剤を含む。前記抗菌剤はモノ第四級アンモニウム化合物又はその薬学的に許容される塩を含む。前記被膜層は、少なくとも約1時間の殺菌作用又は静菌作用を持つ。
【０００８】
体表面処理用組成物は、約0.0001%≦C≦約0.4%、約0.07%≦H≦約70%、任意で抗菌剤A、かつ治療有効量のX；又は0%≦C≦約0.4%、約55%≦H≦約70%、任意で抗菌剤A、かつ治療有効量のXを含む。全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり、Cは炭水化物ガム、Hは湿潤剤、Aは抗菌剤、そしてXは活性薬剤である。該活性薬剤は、制酸剤、プロバイオティクス、ビタミン、栄養補助剤、銀、酸化防止剤、感冒若しくはインフルエンザの対症療薬、抗プリオン剤、免疫刺激剤、抗下痢剤、制吐剤、局所麻酔薬、局所鎮痛薬、鎮痒（かゆみ止め）剤、抗アレルゲン薬、局所ステロイド剤、うっ血除去剤、鎮咳剤、火傷若しくは日焼け処置剤、去痰剤、抗ヒスタミン剤、局所NSAID、局所サリチル酸塩、発毛剤、勃起不全治療薬、局所抗生剤、局所創傷処置剤、抗酸化剤、痔核治療薬、局所抗真菌剤、抗ざ瘡剤、瘢痕治療薬、乾癬治療薬、乾燥頭皮治療薬、フケ防止剤、殺シラミ剤、ヘアケア剤、体臭改善薬、制汗剤、及び足臭改善薬のうちの1つ又は複数からなる群より選択される。
【０００９】
本明細書で使用する不定冠詞の「a」及び定冠詞の「the」は、別段の指定がない限り「one or more（1つ又は複数の）」を意味する。
【００１０】
本明細書では「アイテム（item）」及び「装置（apparatus）」という用語を同義に使用する。
【００１１】
本明細書では「治療（therapeutic）」という用語を予防的処置にも用いる。
【００１２】
本明細書で使用する「又は」という用語は、別段の指定がない限り排他的な意味を持つものではない。
【００１３】
本明細書で使用する「個体（individual）」又は「哺乳動物（mammal）」という用語は、一般に哺乳動物として定義されるヒト又は動物を意味する。
【００１４】
「病変（lesion）」という用語は、「崩壊（disruption）」とほとんど同じ意味として本明細書で使用されている。
【００１５】
本明細書で使用する「遮断する（block）」又は「遮断（blocking）」という用語は、捕捉することで通過を遮断するという意味を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】処理済み及び未処理の無生物表面、並びに微生物と接触した場合の結果を示すフローチャートである。
【図１Ｂ】被膜組成物の一実施形態における、提案された抗菌活性機序を示す図である。
【図２】実験例2において記載する、粘膜表面上のバリアの形成を示す概略図である。
【図３】実験例27〜28において記載する、EHOMアッセイの上部チャンバ及び下部チャンバ内における微生物増殖の評価方法を示す概略図である。
【図４】実験例27〜28において記載する、EHOMアッセイの上部チャンバ及び下部チャンバ内の微生物増殖を示す寒天培地プレートの写真を示す図である。
【図５】実験例31〜32における、被膜組成物で処理済み及び未処理の操作ヒト口腔粘膜（EHOM）の拡大断面写真を示す図である。
【図６】実験例33〜40において記載する、未処理のEHOM上、又は例示的な被膜組成物で処理したEHOM上における微生物の増殖と、その後のC. albicans（カンジダ・アルビカンス）への感染を示す写真を示す図である。
【図７】実験例33〜40において記載する、未処理のEHOM上、又は製剤で処理したEHOM上における微生物の増殖と、その後のS. mutans（ストレプトコッカス・ミュータンス）への感染を示す写真を示す図である。
【図８】実験例33〜40において記載する、例示的な被膜組成物で処理したEHOMの（下部チャンバから収集した）「フロースルー」培地に由来する微生物の増殖を示す写真を示す図である。
【図９】実験例40〜47において記載する、食塩水（対照群）又は例示的な被膜組成物で処理したEHOMによるLDH放出と、その後の（A）C. albicans、又は（B）S. mutansへの感染を示すグラフである。
【図１０】実験例63〜69において記載する、細菌及び真菌に対する被膜組成物の事後抗菌効果を示すグラフである。
【図１１】実験例71〜76において記載する、未処理又は被膜組成物で処理済みのS. sanguis、 C. albicans及びS. mutansを示す走査型電子顕微鏡写真を示す図である。
【図１２】実験例77〜79において記載する、細菌及び真菌によって形成されるバイオフィルムに対する例示的な被膜組成物の活性を示すグラフである。
【図１３】実験例80〜81において記載する、1分間の曝露後の微生物のバイオフィルムに対する例示的な被膜組成物の活性を示すグラフである。
【図１４】実験例85〜86において記載する、インフルエンザ（H1N1）に感染したMDCK細胞の細胞変性効果（CPE）に対する例示的な被膜組成物の効果を示す蛍光顕微鏡写真を示す図である。
【図１５】実験例85〜86において記載する、H1N1ウイルスに対する例示的な被膜組成物の効果を示す蛍光顕微鏡写真を示す図である。
【図１６】実験例87〜88において記載する、被膜組成物で処理済み及び未処理の感染細胞中のインフルエンザウイルスのレベル（定量PCRで判定）を示すグラフである。
【図１７】実験例89〜91において記載する、防腐剤及びインフルエンザウイルスに対する抗菌剤（CPC）を用いて又は用いずに調製した例示的な被膜組成物の直接抗ウイルス活性（定量PCRで判定）を示すグラフである。
【図１８】H1N1ウイルスに対する例示的な被膜組成物の6時間中の活性を示す図であり、パネル（A）は未処理の対照群と比較したウイルス増殖の阻害率を示すグラフであり、パネル（B）及び（C）は、（B）が未処理の細胞の顕微鏡写真、（C）が被膜組成物で処理した細胞の顕微鏡写真を示す図である。
【図１９】実験例94-96において記載する、HIVに対する製剤の活性を示すグラフである。
【図２０】実験例97において記載する、エプスタインバールウイルス（Epstein-Barr Virus：EBV）に対する実験例8の活性を示すウエスタンブロットを示す図である。
【図２１】例示的な被膜組成物の口腔粘膜表面被覆能力を証明する写真を示す図である。
【図２２】実験例162〜163において記載する、例示的な被膜組成物に1分間晒した後の細菌増殖の経時的顕微鏡検査結果の写真を示す図である。画像はそれぞれ曝露後20分後、120分後、又は360分後の細菌増殖を示す。
【図２３】実験例164〜166において記載する、健康な人間の口腔微生物負荷量に対する例示的な被膜組成物の単回投与の効果を示すグラフであり、ベースラインと比較した（A）CFUにおける微生物負荷量、及び（B）微生物負荷量の減少（%）を示す。
【図２４】実験例167〜169において記載する、3人の健康な成人の口腔細菌レベルに対する例示的な被膜組成物の5日間にわたる影響を示すグラフである。
【図２５】実験例170〜198において記載する、31人の健康な被験者において例示的な被膜組成物を5日間使用した後の、口腔内の微生物負荷量に対する例示的な被膜組成物の影響を示すグラフである。
【図２６】実験例170〜198において記載する、代表的な3人の研究参加者から得た口腔試料中の微生物負荷量を示すグラフである。
【図２７】実験例199〜205において記載する、例示的な被膜組成物により形成されたバリアを越える微生物の浸透を評価するためのin vitroフィルター挿入ベースモデルを説明する概略図である。
【図２８】実験例219〜224において記載する、PBS（対照、A、C、E）及び実験例7の被膜組成物（B、D、F）で処理したシリコーン・エラストマーディスク表面のMRSAバイオフィルムの増殖を示す写真である。
【図２９】実験例252の被膜組成物の異なる時間間隔（a）、（b）、及び（c）、並びに対照実験例253（d）の実施形態で処理した細胞単層を示す写真である。
【図３０】実験例252の被膜組成物の異なる時間間隔（a）、（b）、及び（c）、並びに対照実験例253（d）の実施形態で処理した細胞単層を示す免疫蛍光の写真である。
【図３１】実験例255に相当する、水洗浄後の試験組成物と比較物を示すグラフである。
【図３２】ガム非含有実施形態と比較した、粘着性、粘度、及び厚さの違いを実証するガム含有実施形態を描写する写真を示す図である。
【図３３】ガム非含有実施形態と比較した、粘度、厚さ、及び表面被覆率の違いを実証するガム含有実施形態を描写する写真を示す図である。
【図３４】実験例261に相当する、感染して処理された豚皮試料をインプリントした寒天プレートの写真を示す図である。
【図３５】実験例262に相当する、感染して処理された豚皮試料をインプリントした寒天プレートの写真を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
一実施形態において、様々な活性薬剤を含む安定な溶液組成物が、哺乳動物体表面の局所治療のために開示される。一実施形態において、治療有効量の本組成物は哺乳動物に無毒であり安全である（すなわち、粘膜又は他の体表面を損傷しない）。
【００１８】
一実施形態において、局所抗菌組成物は、静菌作用又は殺菌作用により微生物の増殖を長時間にわたって阻止する働きをする。一実施形態において、消毒剤などの該組成物は、長時間持続して強力であり、広範囲の微生物（例えば真菌、細菌、及びウイルス）を殺滅する。該組成物は、処理表面に既存する微生物、及び／若しくは抗菌被膜が塗布された露出（上部）表面に後から接触してきた微生物を捕捉して中和並びに／又は殺滅するように作用する。一実施形態において、該組成物は、処理表面に既存する微生物を捕捉して殺滅する若しくは中和する、並びに／又はバリア形成組成物の塗布が実施された後に、バリア上部、すなわちバリア被膜の露出している表面に付着する微生物を捕捉して殺滅する若しくは中和する効果があるバリア形成被膜である。
【００１９】
一実施形態において、該組成物は安定で、体表面上の活性薬剤の持続期間及び有効性を増加させるバリア形成組成物である。一実施形態において、治療有効量のバリア形成組成物は哺乳動物に無毒であり安全である（すなわち、粘膜又は他の体表面を損傷しない）。バリア形成組成物は、活性薬剤を体表面上に留めるバリア被膜を形成する。様々な活性薬剤が該組成物の実施形態に含まれていてもよい。
【００２０】
一実施形態において、該組成物は、哺乳動物の皮膚の治療のための局所抗菌組成物である。一実施形態において、哺乳動物の皮膚の治療のための局所抗菌剤は、該組成物の低粘着性バリエーションである。皮膚用局所抗菌剤の他の実施形態はまた、以下に述べるように、ガム及び／又はより高濃度の湿潤剤を含んでいてもよい。
【００２１】
低粘着性実施形態において、被膜組成物は以下の要件を満足する：
約0.07%≦H≦約10%；かつ
0.0005%＜Aであり、
ここで、Hは湿潤剤、Aは抗菌剤であり；
全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものである。
【００２２】
一実施形態において、湿潤剤の濃度は約3%〜約8%、約0.35%〜約1%未満、又は約0.1%〜約0.5%未満であってよい。別の実施形態において、被膜組成物の湿潤剤は以下の要件を満足する：約0.07%≦H＜1%。この低湿潤剤の実施形態は、前記組成物の粘性又は接着性を低減させ、無生物表面へのより良い触感を提供する。抗菌剤は、約0.0005%〜5%重量の範囲で存在してもよい。抗菌剤の更なる種類も、以下に記載されている。
【００２３】
低粘着性実施形態において、被膜組成物は炭水化物ガムを本質的に含まず、例えば、0.00009%未満の炭水化物ガムを含む、検出可能炭水化物ガムを含まない、又は炭水化物ガムを全く含まない。本質的に含まないという用語は、全く含まないということも含む。
【００２４】
前記組成物は、重量で約50〜約98 %の水、例えば、約75〜約97%の水、又は約85〜約95%の水を含む。
【００２５】
一実施形態において、前記組成物は本質的に湿潤剤と、抗菌剤とからなり、それに加えて、該組成物の捕捉作用又は抗菌作用に影響を与えない防腐剤、香味剤、又は他の薬剤のみを含む。本明細書で使用される「本質的に〜からなる（”consists essentially of”又は” consisting essentially of”）」とは、典型的に適応される意味を持ち、特定の材料並びに前記組成物の基本的及び新規の特性（複数含む）に物質的に影響を与えないものを意味する。諸実施形態において、これは、重量で1%未満、0.01%未満、又は0.0001%未満の非特定物質を含んでいてもよい。一実施形態において、低粘着性組成物は、本明細書に記載されている追加的な活性薬剤を含んでいてもよい。
【００２６】
そのような実施形態において、皮膚局所抗菌剤として使用される場合、抗菌剤はモノ第四級アンモニウム化合物又はそれらの薬学的に許容される塩であってもよく、例えば、QAC、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、塩化セタルコニウム、塩化セチルピリジニウム、ミリスタルコニウムクロリド、及びポリサイドなどであってよい。一実施形態において、前記組成物の抗菌成分は、本質的にモノ第四級アンモニウム化合物又はそれらの薬学的に許容される塩からなっていてもよく、塩化セチルピリジニウムは、少量の湿潤剤並びに前記組成物の捕捉作用や抗菌活性に影響を与えない防腐剤、香味剤、及び／又は他の薬剤のみとで、優れた有効性を示した。このような前記組成物は、他の皮膚消毒局所組成物に勝るいくつかの安全面及び環境への利点を持つ。実験例256を参照されたい。一実施形態において、抗菌成分は、それが抗菌剤として作用する唯一の薬剤であると、本質的に塩化セチルピリジニウムからなる。
【００２７】
一実施形態において、前記組成物は炭水化物ガム（C）、湿潤剤（H）、任意で抗菌剤（A）、及び活性薬剤（X）を含み、バリア形成組成物は以下の要件を満足する：
約0.0001%≦C≦約0.4%；
約0.07%≦H≦約70%；
任意で0.0005%＜A；かつ
治療有効量のX；
又は
0%≦C≦約0.4%；
約55%≦H≦約70%；
任意で0.0005%＜A；かつ
治療有効量のXを含む。
全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものである。効果的に塗布された後、任意の抗菌剤を含むバリア層は殺菌作用又は静菌作用を示す。Xの治療有効量は、使用する活性薬剤に応じて異なるが、バリア形成組成物との組み合わせを除いた従来技術で教示されるような典型的な投与量における活性薬剤の有効量を通常は超えない。例えば、活性薬剤は少なくとも約0.0005%の量で存在してもよく、例えば約0.001%〜約0.01%、約0.1%〜約1%、又は約2%〜約50%の量で存在してもよい。一実施形態において、Xの量は従来技術の既知薬剤用量よりも少なく、例えば既知従来技術の最小有効用量よりも10%〜95%少ない、又は既知従来技術の最小有効用量よりも25%〜75%少ない、又は既知従来技術の最小有効用量よりも50%少ない。
【００２８】
別の実施形態において、バリア形成組成物は以下の要件を満足する：
約0.01%≦C≦約0.4%；
約4.5%≦H≦約65%； 
任意で0.0005%＜A；かつ
治療有効量のX；
又は
0%≦C≦約0.4%；
約55%≦H≦約65%； 
任意で0.0005%＜A；かつ
治療有効量のXを含み、
ここでCは炭水化物ガム；Hは湿潤剤；Aは抗菌剤；そしてXは活性薬剤であって、活性薬剤は身体に治療効果をもたらす効果がある。
【００２９】
1つ又は複数の活性薬剤を含むバリア形成組成物の一実施形態において、該組成物は以下の要件を満足する：
約0.0001%≦C≦約0.4%、
約0.07%≦H≦約70%；かつ
治療有効量のX；
又は
0%≦C≦約0.4%、
約55%≦H≦約70%；かつ
治療有効量のXを含み；
ここで、全てのパーセンテージは全組成物の重量によるものであり；
Cは炭水化物ガム；Hは湿潤剤；そしてXは活性薬剤であって、該活性薬剤は身体に治療効果をもたらす効果がある。
【００３０】
別の実施形態において、前記組成物の湿潤剤は以下の要件を満足する：約0.07%≦H＜1%。この低湿潤剤の実施形態は、前記組成物の粘性を低減させる。
【００３１】
一実施形態において、バリア形成組成物はグリセリン又は1つ又は複数の同様の保湿物質を含む。一実施形態において、湿潤剤の濃度は、前記組成物全体の約0.07%重量%〜約10重量%の範囲、例えば約3%〜約8%、約0.35%〜約1%未満、又は約0.1%〜約0.5%未満であってよい。別の実施形態において、湿潤剤は、前記組成物全体の約2重量%〜約70重量%の範囲、例えば約4.5%〜約65%、約7%〜約35%、又は約15%〜約45%であってよい。グリセリンと同様の湿潤剤は一般にポリオールとして分類され得る。湿潤剤としては、例えばグリセリン、ソルビトール、キシリトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物が挙げられる。一実施形態において、グリセリンは、ガムの非存在下で約55%〜約65%等の高濃度で使用可能である。
【００３２】
一実施形態において、前記組成物はガムを含む。ガムは、例えば多糖類、キサンタンガム、アラビアガム、又はグアーガムであってよい。一般に、このようなガムは、全体として負電荷を有する炭水化物ガムとして分類され得る。別の実施形態において、ガムは、例えばキサンタンガム、グアーガム、アラビアガム、トラガントガム、カラヤガム、ローカストビーンガム、イナゴマメガム、及びペクチンであってよい。これらのガムは一般に、全体として負電荷を有する炭水化物ガムとして分類され得る。一実施形態において、ガムは、全組成中の重量パーセントで約0.0001%〜約0.4%、例えば約0.0005%〜約0.25重量%存在してもよい。別の実施形態において、ガムは、全組成中の重量パーセントで約0.01%〜約0.4%、例えば約0.25%〜約0.35%、約0.05%〜約0.25%、又は約0.4重量%存在してもよい。
【００３３】
一実施形態において、前記組成物は湿潤剤、活性薬剤、及び任意にガムを含み、ガムが存在する場合、ガムが組成物全体の約0.0001重量%〜約0.4重量%の量で存在する。
【００３４】
一実施形態において、抗菌剤が前記組成物中に存在する。例えば、前記組成物は、1つ以上の抗ウイルス剤、又は抗真菌剤、又は抗細菌剤、又はこれらの組み合わせを含んでよい。また、そのような抗菌剤の効果は、静菌作用及び／又は殺菌作用を含む。
【００３５】
抗菌剤としては、例えばモノ第4級アンモニウム化合物（QAC、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、塩化セタルコニウム、塩化セチルピリジニウム、ミリスタルコニウムクロリド、ポリサイド）、ビクオターナリ（biquaternaries）及びビスビグアニド（クロルヘキシジン、Barquat、ヒビテン）、ビグアニド、ポリマービグアニド、ポリヘキサメチレンビグアニド、バントシル、コスモシル、ジアミジン、塩素系及びヨウ素系化合物を含むハロゲン放出剤、銀及び銀の抗菌化合物、過酢酸（PAA）、スルファジアジン銀、フェノール類、ビスフェノール類、過酸化水素、ヘキサクロロフェン、それだけに限らないがクロロキシレノール（4-クロロ-3,5-ジメチルフェノール；p-クロロ-m-キシレノール）を含むハロフェノール等のカチオン性抗菌剤及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３６】
また、抗微生物剤は、殺菌性及び静菌性の両方を持ち、異なるクラスの抗菌剤、例えばテトラサイクリン、クロラムフェニコール、フシジン酸、フルオロキノロン、マクロライド系抗菌剤、オキサゾリジノン、キノロンカルボン酸、ナフチリドンカルボン酸、シトラール、トリメトプリム及びスルファメトキサゾール（単独及び組み合わせ）、アミノグリコシド、ポリミキシン、ペニシリン並びにこれらの誘導体であってよく、又はこれらを含むものであってもよい。また、抗菌剤は、例えば下記のクラスの抗真菌剤、すなわちアゾール類、ポリエン類、エキノカンジン類、及びピリミジン類も含むことができる。上記抗菌剤の任意の組み合わせも企図される。前述の抗菌剤の多くはカチオン種又はそれらの薬学的に許容される塩であり、一実施形態では、前記組成物中でカチオン性抗菌剤が利用される。一実施形態では、前記組成物は、二酸化塩素、又は反応剤を生成する二酸化塩素などの蒸気を放出することに限定した薬剤である。
【００３７】
一実施形態において、前記組成物は、微生物の変異又は耐性発現を引き起こすことはない。これは、微生物に対する作用機序が、バリア及び選ばれた抗菌剤によるためである。
【００３８】
任意の抗菌剤は、例えば全組成中の重量%で約0.0005%〜5%、例えば約0.0025%〜約1%、約0.005%〜約0.006%、又は約0.0006%〜約0.003%の範囲の量で存在してもよい。別の実施形態において、抗菌剤は、例えば全組成中の重量%で約0.05%〜約0.1%、例えば約0.05%〜約0.06%又は約0.06%〜約0.1%の範囲の量で存在してもよい。一実施形態において、抗菌剤の量は、例えば使用される抗菌剤がより高い濃度でも溶解性の問題を引き起こさないとすれば、約5%以下、約3%以下、又は約1.5%以下である。
【００３９】
諸実施形態において、前記組成物は更に、例えばコポビドン及び他の潤滑剤、メチルパラベンやプロピルパラベン等のパラベン類、香味剤、安息香酸ナトリウム等の保存剤、リン酸一ナトリウムやリン酸二ナトリウム等の緩衝剤、甘味料、酸化エチレン硬化ヒマシ油、及びカルボキシメチルセルロースのような他の成分も含むことができる。これらの成分は、例えば全組成中の重量%で約0.01%〜約5%、例えば約0.1%〜約2%の範囲の量で含有されてもよい。別の実施形態において、該成分は、例えば約0.0001%〜約0.05%の範囲の量で含有されてもよい。緩衝剤（リン酸一ナトリウムやリン酸二ナトリウム等）も使用することができる。
【００４０】
精製水及び／又はアルコールは、前記組成物の希釈剤成分として使用可能である。一実施形態において、前記組成物は、スプレーに適した自由流動性の液体である。これは、通常自由流動性ではなくスプレーに適さないペースト又は練り歯磨きとは対照的である。加えて、一実施形態において、前記組成物は、練り歯磨きに通常使われる研磨剤を含まない。
【００４１】
一実施形態において、実質的に自由流動性であり、凝集塊を実質的に含まないことは、140 U.S.メッシュ（0.10 mm孔径）に組成物を通すことで判断され、前記組成物の95〜100%（重量）、例えば96%〜99.9%は30秒後に通過する。本実施形態において、前記組成物はゲルではない。
【００４２】
一実施形態において、前記組成物は、本質的にガムと、湿潤剤と、活性薬剤とからなり、前記組成物のバリア又は活性薬剤の作用に影響を与えない防腐剤又は香味剤のみを含む。一実施形態において、前記組成物は、歯及び／又は歯肉に対して作用する、例えば研磨剤（練り歯磨きに使われるようなもの）、歯のホワイトニング剤又は減感剤等の薬剤を含まない。一実施形態において、前記組成物はセロオリゴ糖類も含まない。一実施形態において、抗菌剤は、多価アルコールの脂肪酸エーテル若しくは脂肪酸エステル又はそれらのアルコキシル化誘導体などの脂質を含まない。一実施形態において、前記組成物は、持続放出剤、アレルギー緩和化合物、アゼラスチン、シリコンベース油、精油、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール及び硝酸カリウムのうちの1つ又は複数を含まない。一実施形態において、前記組成物は、例えば揮発性アルコールなどの揮発性有機化合物を含まない。一実施形態において、前記組成物は全てのアルコール類を含まない。一実施形態において、前記組成物は界面活性剤又は起泡剤を含まない。誤解を避けるために、上記のどの記載についても、全ての実施形態がこれらの化合物を含まないことを意味するものと解釈すべきではない。
【００４３】
一実施形態において、前記組成物の製造方法は、炭水化物ガムと、湿潤剤と、任意の抗菌剤とを含む成分を混合して加熱するステップを含む。一実施形態において、加熱するステップを、混合時間を延長するステップに置き換えられる。活性薬剤を含む他の成分もまた、単回又は複数回の混合ステップで混合される。バリア形成組成物の全ての成分は、一度に混合され、安定した保存期間を持つ組成物を生成する。これは、使用するために短時間で別々に加えなければならない活性成分を有する組成物とは対照的である。したがって一実施形態において、前記組成物は、使用する際、活性化するために他の組成物と混合させる必要のない、安定した単一構成の組成物である。
【００４４】
一実施形態において、前記組成物は液体であり、気泡性はない。一実施形態において、前記組成物は溶液であり、エマルション又はマイクロエマルションではない。
【００４５】
上記記述のように、一実施形態において、前記組成物はスプレーに適しており、したがってその粘度もまたスプレーに適している。一実施形態において、前記組成物は500cps未満の粘度、例えば約490 cps〜約10 cps、又は約400 cps〜約15 cpsの粘度を有する。別の実施形態において、前記組成物は約16 cps〜約20 cpsの粘度、例えば約17 cps〜約19 cpsの粘度を有する。
【００４６】
事後抗菌効果（post antimicrobial effect：PAE）は、抗菌剤への限定的な曝露後に持続する微生物の増殖を抑制することと定義される。PAEが長くなるほど微生物の増殖の持続的な阻止が可能となるので抗菌剤にとって有利と考えられ、PAEが長い作用物質は、PAEが短い作用物質よりも低頻度の投与を必要とするため、投与計画に影響を及ぼす可能性がある。抗菌剤を含む諸実施形態において、前記組成物は、約6時間以上、例えば約6時間〜約16時間、又は約16時間〜24時間持続するPAEを有していてもよい。
【００４７】
一実施形態において、前記組成物はヒトに無毒であり、ここで該組成物の少なくとも一部は摂取されてもよく、ヒトの消費に対して安全である。例えば、少なくとも治療有効量の前記組成物は、ヒトの消費に対して安全である。
【００４８】
理論に縛られるものではないが、前記組成物は親水性でないため、前記組成物が、粘膜表面に付着し当該表面を覆うよう、より大きな親和性を有することが可能となる。さらに、一実施形態では、非親水性組成物に埋め込まれる抗菌剤によって、処理済みの表面における抗菌活性の持続が可能となる。一実施形態において、前記組成物はそれ自体両親媒性であるか両親媒性成分を有する。
【００４９】
親水性の一つの尺度は、水中クロマトグラフィーによって判定されるRf（relative front）値である。一実施形態において、前記組成物の水中でのRf値は0〜約0.25、例えば約0.0001〜約0.15、又は約0.03〜約0.1である。
【００５０】
一実施形態において、前記組成物のpHは約4〜約8、約5〜約7、又は約6〜約7.5である。別の実施形態において、前記組成物のpHは約5.5〜約8であり、塩化セチルピリジニウム等の抗菌剤が最も有効である。
【００５１】
一実施形態において、被膜組成物は不燃性である。
【００５２】
一般に、微生物に対するバリア及び抗菌剤を提供する二重作用機序により、in vitro、模擬in vivoの両方を特徴とする長期持続効果がもたらされる。in vivo例を以下に示す。in vivoの例では、バリア形成組成物が少なくとも6時間殺菌効果（殺菌又は静菌）を有することが示された。バリア特性自体は模擬in vivo試験（人工のヒト粘膜EHOMを対象とする）で検査され、バリア自体の持続時間が約6時間超、例えば約8時間超、約6時間〜約16時間、約24時間又はそれより長い時間に大幅に延長されることが示された。また、in vitro試験では、抗菌効果が約2時間超、約6時間超、及び検査した微生物に応じて、8時間超、約6時間〜約16時間、及び約24時間又はそれより長い時間に大幅に延長されることが示された。
【００５３】
一実施形態において、バリア形成組成物で使用され得る活性薬剤は、遅延放出性又は持続放出性を有するものであるか、あるいは体表面上に長く存在するほど向上する有効性を有するものである。例示的な活性薬剤には、制酸剤、プロバイオティクス、ビタミン、栄養補助剤、銀、酸化防止剤、感冒若しくはインフルエンザの対症療薬、抗プリオン剤、免疫刺激剤、又は上記の組み合わせが含まれる。活性薬剤の更なる例には、抗下痢剤、制吐剤、局所麻酔薬、局所鎮痛薬、鎮痒（かゆみ止め）剤、抗アレルゲン薬、局所ステロイド剤、うっ血除去剤、鎮咳剤、火傷又は日焼け処置剤、去痰剤、抗ヒスタミン剤、局所NSAID、局所サリチル酸塩、発毛剤、勃起不全治療薬、局所抗生剤、局所創傷処置剤、抗酸化剤、痔核治療薬、局所抗真菌薬、抗ざ瘡剤、瘢痕治療薬、乾癬治療薬、乾燥頭皮治療薬、フケ防止剤、殺シラミ剤、ヘアケア剤、体臭改善薬、制汗剤、足臭改善薬が含まれる。
【００５４】
以下のより具体的な薬剤の検討で個別に記載されない限り、活性薬剤の有効量は、従来の薬剤に使用される量と同程度であるか、それ以下である。前記組成物のバリア保持特性のため、従来から使用されているものよりも少量の活性薬剤が同様の効果のために必要となることが予想される。
【００５５】
一般に、活性薬剤は、有効量において可溶である又は有効量において前記組成物と少なくとも混合可能である限り、及び前記組成物のバリア形成特性を破壊しない限り、前記組成物中に含めることができる。
【００５６】
1つ又は複数の活性薬剤を含むバリア形成組成物の一般的実施形態において、薬剤は哺乳動物の皮膚の局所治療に有効である。1つ又は複数の活性薬剤を含むバリア形成組成物の別の実施形態において、薬剤は哺乳動物の体内及び／又は粘膜の治療に有効である。
【００５７】
局所麻酔活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は痛みを麻痺させるために使用される。前記組成物は、例えば咽喉炎の痛みを治療するために、例えば口腔又は咽頭の粘膜に塗布されてもよい。別の実施形態において、前記組成物は、例えば皮膚又は下層の筋肉の痛みを治療するために、皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚に噴霧、塗り込み、擦り込み、回転塗布、又は分散してもよく、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な局所麻酔剤には、ベンゾカイン、ブタンベン、ジブカイン、オキシブプロカイン、プラモキシン、プロパラカイン、プロキシメタカイン、アンドテトラカイン、フェノール化合物、トロラミンサリチル酸又はサリチル酸メチルリドカイン及びテトラカインが含まれる。
【００５８】
鎮痛活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は痛みを減少させるために使用される。前記組成物は、例えば咽喉炎の痛みを治療するために、若しくは循環血中への吸収のために、例えば口腔又は咽頭の粘膜に塗布されてもよい。別の実施形態において、前記組成物は、例えば皮膚又は下層の筋肉の痛みを治療するために、皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚又は粘膜に噴霧、塗り込み、擦り込み、回転塗布、若しくは分散してもよく、若しくは口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な鎮痛剤には、プロピオン酸誘導体、ナプロキセン、イブプロフェン、酢酸誘導体、インドメタシン、エトドラク、エノール酸誘導体、フェナム酸誘導体、COX-2誘導体、アセトアミノフェン、スルホンアニリド、ジクロフェナク、カプサイシン、NSAID、イブプロフェン、トロラミンサリチル酸又はサリチル酸メチル、メンサシン及びゾストライクスが含まれる。
【００５９】
鎮痒活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、皮膚又は粘膜の痒みを低減するために使用される。前記組成物は、例えば口腔、咽頭、膣、又は肛門の粘膜に塗布されてもよい。別の実施形態において、前記組成物は、例えば皮膚の痒みを治療するために皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚又は粘膜に噴霧、塗り込み、擦り込み、回転塗布、若しくは分散してもよい。例示的な鎮痒活性剤には、ジフェンヒドラミンなどの抗ヒスタミン剤、ヒドロコルチゾンなどのコルチコステロイド、ベンゾカインなどの局所麻酔薬、ハッカ油、メントール、樟脳などの反対刺激剤が含まれる。
【００６０】
抗アレルゲン活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、皮膚又は粘膜の痒みを低減するために使用される。前記組成物は、活性剤を輸送して体循環血中へ吸収させるために、例えば口腔、咽頭、膣、又は肛門の粘膜に塗布されてもよい。別の実施形態において、前記組成物は、例えばアレルギー反応による皮膚の痒み又はかぶれを治療するために皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚又は粘膜に噴霧、塗り込み、擦り込み、回転塗布、若しくは分散してもよい。例示的な抗アレルゲン活性剤には、ジフェンヒドラミン、セチリジン、フェキソフェナジン、及びユーカリプトールなどの抗ヒスタミン薬が含まれる。
【００６１】
ステロイド活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、皮膚又は粘膜の炎症を低減するために使用される。前記組成物は、活性剤を輸送して体循環血中へ吸収させるために、例えば口腔、咽頭、膣、又は肛門の粘膜に塗布されてもよい。別の実施形態において、前記組成物は、例えば皮膚の炎症、痒み、若しくはかぶれ、又はアトピー性皮膚炎、乾癬、湿疹、脂漏症、虫刺され、及び接触性皮膚炎などの状態を治療するために皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚又は粘膜に噴霧、塗り込み、擦り込み、回転塗布、若しくは分散してもよい。例示的なステロイド活性剤には、コルチゾン、フルオシノロン、デソニド、プレドニカルベート( predicarbate)、及びプロピオン酸フルチカゾンが含まれる。
【００６２】
火傷又は日焼け緩和剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、火傷の不快感の軽減または治癒を促進するために使用される。前記組成物は、例えば患部に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚に噴霧、回転塗布、塗り込み、擦り込み、若しくは分散してもよい。例示的な活性剤には、アロエベラ、ステロイド、及びNSAIDが含まれる。βカロテン及び／又はリコピンなどの活性剤は、日焼けに対する保護剤並びに予防剤として有効であり得る。
【００６３】
反対刺激剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、皮膚又は粘膜のかぶれを低減するために使用される。前記組成物は、例えば鼻腔、口腔、又は咽頭の粘膜若しくは皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を粘膜に噴霧、回転塗布、擦り込み、塗り込み、若しくは分散してもよい。例示的な反対刺激剤には、ニフェジピン、α-ビサボロール、キャノーラ油、グリセリン、ヘキサペプチド、及び、冷暖感を起こさせることで痛みやかぶれを治療するもの、例えば樟脳、ユーカリ、メントール、又はイチャクソウが含まれる。
【００６４】
発毛剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、又はより重篤な形態の脱毛症（全頭性若しくは全身性）の治療などにおいて、発毛のために使用される。前記組成物は、例えば頭皮、又は顔などの通常毛が生えている他の皮膚領域に塗布されてもよい。前記組成物を頭皮に噴霧、回転塗布、擦り込み、塗り込み、若しくは分散してもよい。例示的な発毛剤には、ミノキシジル、トウガラシ、ケトコナゾール、及びフィナステリドなどの刺激剤が含まれる。
【００６５】
勃起不全治療薬を有する実施形態では、バリア形成組成物は、男性のインポテンス又は勃起不全を治療するために使用される。前記組成物は、循環血中への吸収のために、例えば鼻腔、口腔、又は咽頭の粘膜若しくは皮膚に塗布されてもよい。前記組成物を男性器に噴霧、回転塗布、擦り込み、塗り込み、若しくは分散してもよい。前記組成物を頭皮に噴霧、回転塗布、擦り込み、塗り込み、若しくは分散してもよい。例示的な勃起不全治療薬には、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、アルプロスタジル及びヨヒンビンが含まれる。
【００６６】
創傷処置剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、傷の不快感の軽減又は治癒を促進するために使用される。前記組成物は、例えば患部に塗布されてもよい。前記組成物を皮膚に噴霧、回転塗布、塗り込み、擦り込み、若しくは分散してもよい。例示的な活性剤には、NSAID、抗菌剤、及び組織再生剤が含まれる。一実施形態において、創傷被覆材を塗布直前にバリア形成組成物で処理してもよく、又は前処理済み創傷被覆材として包装してもよい。
【００６７】
制酸活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、酸逆流又は胃酸過多の治療のために使用される。前記組成物は、例えば喉や咽頭の粘膜、又は口腔粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込んだり吐き出すと胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な制酸活性剤には、炭酸カルシウム及びマグネシウム、水酸化マグネシウム及びアルミニウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、及びC7H5BiO4並びにそれらの混合物が含まれる。
【００６８】
プロバイオティクス活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、腸炎、下痢、尿生殖器感染症、腸の感染症若しくは炎症、又はアレルギーなどの様々な症状の治療のために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、肛門、膣、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的なプロバイオティクスには、乳酸菌（LAB）及びビフィズス菌が含まれる。プロバイオティクス酵母又は桿菌は、他の例である。プロバイオティクス活性剤は、抗菌剤を含む前記組成物の実施形態では適合性が低いかもしれないが、抗菌剤を投与した後に有益な微生物を回復するために、それらを別々の実施形態で使用してもよい。
【００６９】
栄養補助活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、高コレステロール血症、癌、動脈の健康状態の悪化、心血管疾患などの種々の状態の治療又は予防のために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、肛門、膣、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な栄養補助剤には、赤ブドウ製品由来のレスベラトロール、柑橘類、茶、ワイン、及びダークチョコレートのフラボノイド、ベリーに見られるアントシアニン、オオバコ種子殻などの可溶性食物繊維製品、ブロッコリー（スルフォラファン）、ゼンマイ（クサソテツ）、大豆若しくはクローバー（イソフラボノイド）、亜麻若しくはチアシード由来のアルファリノレン酸、魚油のオメガ3脂肪酸、チョウセンニンジン及びニンニク油などの植物及びハーブエキスが含まれる。
【００７０】
酸化防止剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は、心臓病又は神経学的疾患などの種々の状態の治療又は予防のために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な酸化防止剤には、チオール、カロチン、ユビキノール、アスコルビン酸、又はポリフェノールが含まれ、疎水性若しくは親水性のいずれかであってよい。
【００７１】
一実施形態では、感冒及びインフルエンザ薬剤がバリア形成組成物において活性薬剤であり、該組成物は感冒及びインフルエンザの症状の治療又は予防のために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。例示的な薬剤には、充血除去剤、抗下痢剤、制吐剤、及び抗ヒスタミン薬が含まれ、更なる詳細は本明細書に個別に記載されている。
【００７２】
抗ヒスタミン薬を有する実施形態では、バリア形成組成物は上気道呼吸器系の粘液の緩和のために使用される。前記組成物は、例えば鼻、口、又は咽頭粘膜に、又は別の実施形態では目や耳に塗布されてよい。前記組成物は粘膜上に噴霧、回転塗布、滴下、あるいは分散され得る。例示的な抗ヒスタミン薬には、アゼラスチン、ヒドロキシジン、デスロラタジン、シプロヘプタジン、エメダスチン、レボカバスチン、カルビノキサミン、レボセチリジン、フェキソフェナジン、ジフェンヒドラミン、ブロムフェニラミン、ロラタジン、クレマスチン、クロルフェニラミン及びセチリジンが含まれる。
【００７３】
一実施形態において、抗プリオン剤はバリア形成組成物において活性薬剤であり、該組成物はアルツハイマー病、若しくはクールー病や狂牛病などのその他のプリオン病などの脳の状態の治療又は予防のために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。例示的な抗プリオン剤は、平面芳香族構造内でテザーを介して結合しているキノリン又はアクリジン環である。この構造は、例えば、硫酸化グリカン又はトリメシン酸などの他の化合物を包含する。
【００７４】
免疫刺激活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は身体の免疫系を刺激するために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な免疫刺激剤には、特異的及び非特異的免疫刺激剤、内因性免疫刺激剤、デオキシコール酸、マクロファージ刺激物質、合成免疫刺激剤、マクロカイン、イミキモド、レシキモド、並びに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子が含まれる。免疫刺激剤は、前記組成物の抗菌剤との組み合わせで特に効果的となり、疾患を予防する場合がある。
【００７５】
ビタミン活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物はビタミン欠乏症を治療するため、あるいは身体に必要なビタミンを供給するために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的なビタミンには、ビタミンA、B、C、D、E、及びK、並びにそれらの添字のある種類が含まれる。
【００７６】
抗下痢活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は下痢の治療のために使用される。前記組成物は、例えば口、鼻、肛門、膣、又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。前記組成物は、注腸アプリケーターで肛門粘膜に塗布することができる。例示的な抗下痢活性剤には、例えば、ジサリチル酸ビスマスのような抗炎症溶液、メチルセルロースのような増量剤、グアーガム又は植物繊維（ふすま、ステルクリア属、イサゴール、メチルセルロースなどの吸収剤、オピオイド、及びロペラミド塩酸塩が含まれる。
【００７７】
制吐活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は吐き気の治療のために使用される。前記組成物は、例えば口腔又は咽頭の粘膜に塗布されてもよく、バリア形成組成物を飲み込むことで胃のコーティングがなされ得る。前記組成物を口腔内に噴霧、又は口腔内に入れて飲み込んだり吐き出してもよい。例示的な制吐活性剤には、例えば、オランザピン、5-HT3受容体アンタゴニスト、ドーパミンアンタゴニスト、ドラセトロン、NK1受容体アンタゴニスト、アプレピタント、ヒスタミンH1受容体アンタゴニスト、シクリジン、ジフェンヒドラミン、カンナビノイド、大麻、ドロナビノール、ベンゾジアゼピン、ミダゾラム、ロラゼパム、抗コリン薬、ヒヨスチン、ステロイド、及びデキサメタゾンが含まれる。
【００７８】
充血除去活性剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は過剰な粘液の軽減のために使用される。前記組成物は、例えば鼻、口、又は咽頭粘膜に塗布されてよい。前記組成物は粘膜上に噴霧、回転塗布、あるいは分散され得る。例示的な充血除去剤には、プソイドエフェドリン、フェニレフリン、エフェドリン、レボメタンフェタミン、ナファゾリン、オキシメタゾリン、フェニルプロパノールアミン、プロピルヘキセドリン、シネフリン、及びテトラヒドロゾリンが含まれる。
【００７９】
鎮咳剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は咳の軽減のために使用される。前記組成物は、例えば鼻、口、又は咽頭粘膜に塗布されてよい。前記組成物は粘膜上に噴霧、回転塗布、あるいは分散され得る。例示的な鎮咳剤には、鎮咳薬、デキストロメトルファン、コデイン、ノスカピン、ブロムヘキシン、アセチルシステイン、去痰剤、粘液溶解薬、及び蜂蜜が含まれる。
【００８０】
去痰剤を有する実施形態では、バリア形成組成物は上気道呼吸器系の粘液の緩和のために使用される。前記組成物は、例えば鼻、口、又は咽頭粘膜に塗布されてよい。前記組成物は粘膜上に噴霧、回転塗布、あるいは分散され得る。例示的な去痰剤には、アセチルシステイン及びアンブロキソール、グイネフェシンが含まれる。
【００８１】
一実施形態において、上記の活性剤を有するバリア形成組成物はまた、静菌作用又は殺菌作用により微生物の増殖を長時間にわたって阻止する抗菌成分を含む。結合したバリア被膜と抗菌剤は相乗的に作用して、処理表面に最近付着した微生物を、及び／若しくはバリア被膜の露出（上部）表面に後から接触してきた微生物を遮断して中和並びに／又は殺滅し、それにより抗菌剤単独よりもかなり強力な長時間持続抗菌剤を提供する。バリア被膜は、処理表面に既存の微生物を捕捉して殺滅若しくは中和する及び／又はバリア形成組成物の塗布が実施された後に、バリア上部、すなわちバリア被膜の露出している表面に付着する微生物を捕捉して殺滅する若しくは中和する効果がある。
【００８２】
理論に縛られるものではないが、抗菌剤を含むバリア形成組成物の作用機序は、まず形成したバリア被膜内で細菌を捕捉し、その後抗菌活性成分によって殺滅する、相乗的な二重作用機序に基づくものである。一実施形態において、バリア形成組成物は、親水性でなく、理論に縛られるものではないが、持続的有効性を増強することが理論付けられている。
【００８３】
皮膚又は粘膜表面にシールをして作用する同様の二重作用機序もまた、活性物質を有するバリア被膜により提供され得る。活性薬剤は、当該技術分野で認識されている表面への活性を有し、バリア組成物に含まれることで長時間表面との接触が維持され、それにより体表面上での持続時間の増加がもたらされる。
【００８４】
後述の実施例に示すように、少なくとも下記の10種類のアプローチを使用して、活性剤を含まない組成物、抗菌剤のみを含む組成物、及び抗菌剤とホメオパシー活性剤とを含む組成物の特性の評価を行った。（1）in vitro抗微生物感受性テスト、（2）in vitroタイムキルアッセイ、（3）in vitroバイオフィルムモデル、（4）in vitroフィルターインサートベースモデル、（5）in vivo様操作ヒト口腔粘膜（EHOM）モデル、（6）電子顕微鏡評価、（7）疎水性アッセイ、（8）物理化学的適合性アッセイ、（9）単層のヒト細胞株を使用した細胞培養ベースモデル、及び（10）ヒト臨床試験。
【００８５】
バリア形成組成物は、活性成分が治療することを目的としている疾病を引き起こす高いリスク状態にある個体に特に有用である。延長した持続時間とバリア被膜の向上活性のため、そのような人は、継続的で積極的な治療のための反復投与でのバリア形成組成物投与から恩恵を受ける場合がある。例えば、前記組成物の延長した持続時間及び有効性は、慢性痛若しくは定期的に痛みを被る（痛みを伴う医療行為）個体にとって、又は定期的に活性薬剤を必要とする場合が増える状態にある個体、例えばビタミン欠乏症（ビタミン活性薬剤）の個体などにとって、特に有用であり得る。
【００８６】
高いリスク状態は、病気を効率的に治療しなかったことから生じる重い合併症の高いリスク、又は高いリスクを引き起こす環境状態又は汚染にさらされる高いリスク、例えば、アレルゲン汚染によるアレルギー反応の高いリスクなど、に起因する場合がある。
【００８７】
一実施形態において、活性薬剤を含むバリア形成組成物の投与は、当該活性薬剤に典型的なように、該活性薬剤での治療の必要性の認識に対応して行われる。しかしながら、別の実施形態において、投与は、当該活性薬剤での治療が将来必要になることが認識されること又は予想されること、例えば、治療計画の時間枠で現在認識されているよりも後の将来で認識される当該活性薬剤の必要性に対応して行われてもよい。前記組成物の延長した持続期間は、そのような使用を容易にする。例えば、延長した持続期間は、制酸剤、抗アレルゲン剤、制吐剤、又は局所筋肉痛の薬（NSAID、サリチル酸塩、ステロイド）の必要性が認識されるよりかなり前にバリア形成組成物を利用するのを容易にする。バリアの持続時間のため、将来の必要性が認識される最長約24時間前、例えば約1時間〜約16時間、約2時間〜約8時間、又は約6時間〜約10時間の間に、バリア形成組成物を投与してもよい。この増加時間枠は、以前には不可能であった治療の選択肢を提供する。
【００８８】
一実施形態において、活性薬剤で体表面を処理するための方法は、治療有効量のバリア形成組成物を体表面に投与することを含み、該バリア形成組成物は少なくとも約1時間の持続時間にわたって該体表面との接触を保つ効果があるバリア被膜を該体表面上に形成する。
【００８９】
本方法の一実施形態において、バリア形成組成物の投与ステップは、以下の条件のうちの1つに対応して実施される：（a）活性薬剤の将来の必要性の特定；及び（b）活性薬剤の将来の必要性を引き起こす事象の観察。一実施形態において、投与ステップは（a）又は（b）に対応して実施され、個人が活性薬剤を必要としなくなるまで続く複数回投与計画を開始するための最初のバリア形成組成物の投与とされてもよい。一実施形態において、2回目又はその後の治療有効量は、（a）又は（b）の状況に応じて投与することができる。例えば、観察された事象が発生したときにバリア形成組成物を人に投与し、そして個体が汚染事象の周辺を離れるまで上記の投与間隔でバリア形成組成物の投与を続けてもよい。別の実施例において、投与計画が始まった後において、投与が記載の投薬時間間隔の最短時間よりも早く発生しない限り、個体は2回目又はその後の投与を新たな汚染事象が観察されたときに行なってもよい。
【００９０】
一実施形態において、観察される事象は汚染事象を含む。汚染事象には、例えば個体のくしゃみ、咳、若しくは嘔吐、又は更に一般的に、体液若しくは体から出る物質が付着する場合などが含まれる。また、空気中又は表面上へのアレルゲンの分散が含まれる。一実施形態において、汚染事象は、個体の近くにあり、投与反応を誘発する。個体の近くとは、同じ部屋、乗り物、又は個体の約10ヤード以内にいることと定められてよい。
【００９１】
一実施形態において、バリア形成組成物は、高いリスク状態にある個体の粘膜に塗布される。粘膜は口腔、咽頭、又は鼻粘膜であってよい。一実施形態において、投与ステップは、汚染されていると見られ環境との接触に対応して、又は汚染が確認された事象に対応して実施される。バリア形成組成物は、活性薬剤の活性を持続させるバリア被膜を粘膜上に提供する。抗アレルゲン実施形態において、バリア形成組成物は、アレルゲンが粘膜上に移ること若しくは反応を引き起こすことを予防又は阻止し得る。
【００９２】
別の実施形態において、バリア形成組成物は、損傷粘膜又は皮膚病変を患う哺乳動物、例えば免疫不全の哺乳動物を治療する方法で投与される。哺乳動物の損傷部位又は病変部は認識され、治療有効量のバリア形成組成物が少なくとも哺乳動物の粘膜の損傷部位に投与される。抗菌剤を有するバリア形成組成物は、活性微生物が粘膜の損傷部位に広まるのを効果的に抑制するバリアを粘膜の損傷部位に提供する。開放創への塗布に安全なその他の活性薬剤が、治癒を促進するために含まれていてもよい。
【００９３】
一実施形態において、抗菌剤若しくはその他の活性剤を有する局所抗菌組成物又はバリア形成組成物は、感染症の予防方法において使用される。ステップは、哺乳動物が接触すると予想される汚染環境又は汚染アイテムを特定することを含む。汚染環境は、有害ウイルス、真菌、若しくは細菌微生物に汚染されていることが知られている若しくは予想される屋内若しくは屋外スペース、又は哺乳動物若しくはヒトの近傍などの環境である。所与の環境が汚染されているかどうかの判断は、時季、コミュニティで流行している病気に関する公開情報、又は病気と見られる、若しくはくしゃみなどで病原体を撒き散らしている他の個体の観察に基づく。後者の因子はまた、汚染事象の観察ということができる。
【００９４】
汚染環境又はアイテムが接触するかどうかの予測又は特定は、哺乳動物が近い将来に環境に入るか、又はアイテムに接触すると予想を計画しているか、又は予想されているかどうかに基づく決定であることができる。これは汚染環境又はアイテムに接触する時間の推定を含む。汚染環境又はアイテムとの推定接触時間の約24時間前以下の時間に、例えば約16時間前以下、約12時間前以下、約6時間前以下又は約2時間前以下の時間に、前記組成物を投与してもよい。前記組成物は、例えば投与1分以内、例えば30秒以内に迅速に設けられ、有害微生物が粘膜に感染するのを予防又は抑制するように使用可能でなければならない。そのため、前記組成物は、汚染環境又はアイテムと接触している間に塗布されて、効果を示し得る。
【００９５】
一実施形態において、局所抗菌組成物は、哺乳動物の皮膚上の病原体を殺滅するために使用される。前記組成物は噴霧、塗り込み、又は手、腕、足、脚、顔、若しくは生殖器などの局所表面に広げることで塗布されてもよい。一実施形態において、前記組成物は、汚染環境又はアイテムとの接触が確認された又は疑われた後に塗布される。一実施形態において、前記組成物は、手の消毒剤として、食事前やトイレ使用後などに毎日又は1日に数回塗布される。一実施形態において、前記組成物は、手術室などの有害微生物が存在してはいけない環境に入る前に、又は手術、侵襲的な身体治療、出産、歯科処置、手術前前の洗浄、若しくは創傷治療などの活動に参加する前に皮膚に塗布される。一実施形態において、皮膚表面は、事前に決めた手術部位である。一実施形態において、皮膚表面には生殖器は含まれていない。
【００９６】
一実施形態において、本明細書に記載の組成物並びに治療及び予防方法は、病院などの環境における感染、及びそのような感染性微生物で汚染された環境でよく見られる感染の予防に有用であり得る。上述のように、本明細書に記載の方法及び組成物は、免疫不全患者、又はヘルスケア施設で多くの労働時間を過ごす人々に特に適応されてもよい。また、前記組成物は、通常創傷に感染する微生物による感染症の予防に有用であり得る。
【００９７】
汚染環境としては、例えば公共交通機関の車両、公共の集合場所、病気であることが知られている又は予想される哺乳動物を収容した部屋若しくは車両、又は病気であることが知られている又は予想される哺乳動物の近傍が挙げられる。汚染環境として一般に認識される航空機、保育所、保健センター等の環境に関する更なる情報は、Yang, et al. "Concentrations and Size Distributions of Airborne Influenza A Viruses Measured Indoors at a Health Centre, a Day-Care Centre, and on Aeroplanes," J.R. Soc. Interface (Feb. 7, 2011)に開示されている（当該文献の内容を参照により本明細書に援用する）。
【００９８】
より具体的には、一実施形態において、公共輸送車両は例えば航空機、バス又はタクシーであり得る。公共の集合場所としては、例えば診療所、病院、学校、保育所、教会、ホテル又はレストランが挙げられる。病気であることが知られている又は予想される哺乳動物の近傍としては、例えば当該哺乳動物の半径1フィート（30.48cm）以内、又は当該哺乳動物と自動車に同乗する場合が挙げられる。公共の航空機は、多くの場合汚染環境として特定される環境の一般的かつとりわけ注目すべき例として挙げられる。航空会社に勤務するような人、又は週2〜3回など非常に頻繁に公共の飛行機で旅行するような人は、微生物への曝露が多いことに起因する高いリスク状態にあると考えることができる。
【００９９】
一実施形態において、治療又は予防のための継続的な投与方法では、バリア形成組成物に使用される特定の活性薬剤の所定の投与計画と一致している限り、バリア形成組成物は分割用量での治療有効量で投与されてもよい。継続的な投与方法は、例えば約1〜12時間毎に1回、約2〜8時間毎に1回、又は約4〜6時間毎に1回であってよい。別の実施形態において、治療有効量のバリア形成組成物は、約2〜12時間毎、例えば約3〜8時間毎、又は約4〜6時間毎に表面に投与される。「約2〜12時間毎」に投与するとは、1回の治療有効用量が投与された後、次の用量が約2時間後〜最長約12時間後に投与され、追加の用量が服用される場合、その後に約2時間〜最長約12時間単位で投与されることを意味する。局所抗菌組成物は同じ用量で塗布されてもよい。投与計画は治療効果が必要とされなくなるまで続けられてもよい。
【０１００】
一実施形態において、バリア形成組成物は、治療有効量で、24時間以内に3回又は4回以上を、5回の24時間の期間又はそれ以上にわたって、例えば、4〜12回、又は6〜10回、を6〜10日にわたって、又は7〜30日にわたって投与される。別の実施形態において、予防方法は、例えば1日又はそれ以上、例えば約2日〜約1週間続けられる。別の実施形態において、3回又は4回以上、の用量は、日照時間内にのみ又は個体が起きている時間内にのみ、例えば6 AM〜6 PM、又は9 PM〜5 PMに投与されてもよい。一実施形態において、個体は、職場やその他の公共の集合場所にいる間中ずっと保護を提供するような投与計画に従ってもよい。一実施形態において、連続投与方法は、被験者が汚染環境又はアイテムと長時間接触しているときに好適であり得る。
【０１０１】
処理される体表面は、バリア形成組成物中の活性薬剤に応じて異なる。処理される粘膜は、例えば鼻咽頭（上咽頭）、中咽頭（咽頭）又は咽喉頭（下咽頭）のような口腔、鼻腔又は喉頭すなわち咽頭腔の粘膜表面であってよい。哺乳動物の他の開口部の他の粘膜も処理されてよく、例えば膣、肛門、又は外耳道などが含まれる。皮膚又はその他の体表面、例えば、筋肉痛、感染症、傷、にきび、頭皮、目などの部位も、活性薬剤とその典型的な塗布部位に基づいて処理されてもよい。一実施形態において、前記組成物は、皮膚にのみ投与され、粘膜には投与されず、又は内服されない。
【０１０２】
一実施形態において、皮膚又は粘膜病変の特定に応じて、前記組成物を皮膚又は粘膜病変に投与する。その後の投与量は、上述の投与間隔に従い塗布される。一実施形態において、病変部が治癒したとき、すなわち病変部が新しい皮膚又は粘膜組織で覆われたときに、投与計画は終了される。
【０１０３】
一実施形態において、バリア形成組成物は、バリア形成組成物に接触する全ての有害微生物を捕捉及び／又は殺滅若しくは中和する。別の実施形態において、バリアは、バリア形成組成物に接触する十分量の有害微生物を実質的に捕捉及び／又は殺滅若しくは中和し、微生物が感染症を引き起こすのを抑制又は阻止する。後者の場合、有害微生物がバリアを浸透するのが遅い及び／又は弱められていれば、それは微生物が疾患又は広範囲の感染を引き起こすのを防ぐ身体自身の能力を強化する。ステロイドなどの他の活性薬剤の追加は、抗菌剤を有するバリア形成組成物の有効性を高め得る。局所抗菌組成物において、効果的な皮膚抗菌のためにバリアが形成されることが必ずしも必要ではない。
【０１０４】
in vitro試験により、バリア形成組成物の諸実施形態が、約2時間以上、約6時間以上、約16時間以上、約24時間以上を含む長時間にわたって、全ての活性細菌がバリアを貫通するのを防止することが証明された。in vitro試験から、バリア形成組成物の諸実施形態に曝露したウイルスでは、増殖が約2日間以上（インフルエンザ等）〜約9日間以上（HIV等）阻止され得ることが分かり、その後もウイルス数は例えば約2〜3日間の長期間にわたってMICを下回ることが示された。インフルエンザウイルスに対する阻害活性は最大48時間観察された。
【０１０５】
バリア形成組成物は、臨床試験において、ヒトの微生物負荷量を減少させる活性を示した。例えば、投与ステップの約1〜約6時間後から、約50%〜約99%の驚くほど効果的な微生物負荷量の減少が実証された。諸実施形態において、微生物負荷量は、投与ステップの約1〜約6時間後に約10%より多く、約25%より多く、又は約70%より多く減少することがある。その上、微生物負荷量のこれらの減少範囲は、開示の投薬計画で長期間持続可能である。
【０１０６】
図1Aは、未処理の皮膚表面（左）及び被膜組成物が投与された結果として被膜層が形成された皮膚表面（右）に接触する微生物を示すフローチャートであり、皮膚表面での被膜組成物の主な有効性を示す。微生物の感染から粘膜を保護する代わりに、皮膚表面に処理した場合、被膜層は、表面上の微生物を殺滅し、微生物が表面に結合すること、コロニーを形成すること、及びバイオフィルムを形成することを防止する。バイオフィルムの破壊は難しいことが知られている。したがって被膜組成物は、迅速かつ短期間の、既に表面にいる微生物のみの殺滅だけに焦点を当てる清浄剤と比べて、驚くほど効果的な消毒された皮膚表面への解決策を提供する。バリア被膜を形成しない抗菌溶液が瞬時に表面上のバイオフィルム中の微生物をある程度殺滅する一方、バイオフィルム内の全ての微生物を殺滅することは事実上不可能であり、バイオフィルムはすぐに再びコロニーを形成し始める。一実施形態において、被膜組成物は、まずバイオフィルムが形成するのを防ぎ、既に形成されたバイオフィルムを破壊する長期活性も有する。被膜組成物の低粘着性の実施形態は、より湿潤剤及び炭水化物ガムを有する他の実施形態のように微生物の通過を防止するほど頑丈ではないかもしれないが、微生物を殺滅又は中和するのに有効であることが見出され、MRSA及びカンジダに対する強力な活性を有することが示された。
【０１０７】
図1に示すバリア形成組成物の提案される機序を示す一実施形態において、バリア形成組成物は抗ウイルス活性をもたらす。ウイルスが細胞に接触すると宿主細胞上の受容体に結合する。5〜6時間が経過すると、ウイルスは宿主細胞によって取り込まれ宿主細胞内で増殖し、他の宿主細胞に感染する追加のウイルス粒子を発生させる細胞溶解を誘発する。
【０１０８】
対照的に、バリア形成組成物で処理した細胞では、保護バリアは宿主細胞の表面上にある。バリアは、細胞及び細胞上の受容体を覆うのに十分なほど厚く、ウイルス粒子が細胞受容体に結合するのを阻止する。このため感染及び溶解も防止される。バリア形成組成物は、約1時間以上、約2時間以上、約6時間以上、約16時間以上、約16時間〜約24時間、又は約24時間以上という長い持続時間にわたってバリアを保持し、それにより宿主細胞を保護し感染を予防する。殺菌作用又は静菌作用も、約2時間以上、約6時間以上、約16時間以上、約24時間以上、又は約48時間以上という長い持続時間にわたって保持され、それにより微生物を殺滅し、微生物負荷量を減少させる。これら持続期間はウイルス、細菌、及び真菌に当てはまる。
【０１０９】
有害微生物とは、微生物に起因する伝染病などの感染症を引き起こすことが知られている下記のような微生物、例えばカンジダ属（例えばC. albicans（カンジダ・アルビカンス）、 C. glabrata（カンジダ・グラブラータ）、C. krusei（カンジダ・クルセイ）、C. tropicalis（カンジダ・トロピカリス）等）、ブドウ球菌種（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、MRSAを含む）、連鎖球菌種（例えばS. sanguis（ストレプトコッカス・サングイス）、S. oralis（ストレプトコッカス・オラリス）、S. mitis（ストレプトコッカス・ミティス）、S. salivarius s（ストレプトコッカス・サリバリウス）、S. gordonii（ストレプトコッカス・ゴルドニ）、S. pneumoniae（肺炎レンサ球菌））、アシネトバクター・バウマニ、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム等の微生物、上気道感染症若しくは風邪（ライノウイルス）を引き起こすその他の微生物、及びインフルエンザウイルス、及びニューモニア、ポルフィロモナス・ジンジバリス、エルシニア・エンテロコリチカ、アシネトバクター・バウマニ、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス、臭気の原因となる微生物、表面の外観を損なう微生物、クロストリジウム・ディフィシレ、百日咳菌、バークホルデリア、アスペルギルス・フミガーツス、ペニシリウム属、クラドスポリウム、肺炎桿菌、豚コレラ菌、大腸菌（O157:H7）、毛瘡白癬菌、ライノウイルス39型、RSウイルス、ポリオウイルス1型、ロタウイルスWa株、A型インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス1型及び2型、及びA型肝炎ウイルスである。一実施形態において、本明細書に記載するバリア形成組成物並びに処理及び予防方法は、例えば性感染症（例えばヒト免疫不全ウイルス（HIV）、単純ヘルペス又はヒトパピローマウイルス（HPV）に起因する感染症等）に起因する感染症の予防に有用である可能性がある。
【０１１０】
上記の微生物種のほとんどは、試験され、バリア形成組成物によって効果的に抑制または殺滅されることが見出された。さらに、バリア形成組成物は、例えば約30nm以上、例えば約100nm（HIV；球状）、約100nm〜約300nm（インフルエンザ；細長球状）、約120nm〜約260nm（EBV；球状／ディスク状）、約30nm（ライノウイルス；球状）の直径を有する微生物に対して有効性を示した。したがって、バリア組成物は約30nm又は約30nm超の直径を有する他の微生物に対しても有効性を有することになる。
【０１１１】
前記組成物は、根絶させるのがかなり困難であるバイオフィルムへの、強力で目覚ましい抑制活性まで示した。一実施形態において、本願の方法は、バリア形成組成物を粘膜や病変部に形成したバイオフィルムに投与することを含む。
【０１１２】
微生物は空気中の微生物であってもよい。一実施形態において、微生物とは、伝染病を引き起こすようなものである。一実施形態において、微生物とは、アレルギー反応又は歯科疾患、例えば、虫歯（カリエス）、歯肉炎、又は季節性アレルギーなどを引き起こすようなものを含まない。同様に、一実施形態において、本予防方法は、歯科疾患又はアレルギー反応、例えば、虫歯（カリエス）、歯肉炎、又は季節性アレルギーなどを、単独で又は追加的に予防はしない。
【０１１３】
しかし、別の実施形態において、一般的にアレルゲンと分類されるような真菌、その他アレルゲン、及び空気中の粘膜刺激物のような微生物は、本願のバリア形成組成物及び方法によって遮断される。
【０１１４】
活性薬剤を含むバリア組成物全体の治療有効量には、粘膜又は病変部上に形成するバリア層となるバリア被膜を形成するバリア形成組成物で標的粘膜又は病変部を被覆するのに十分な量が含まれる。例えば、洗口製剤では約100μL〜約10mL、例えば約1mL〜約8mL、約2mL〜約5mL等、スプレー製剤では約0.125mL〜約2mL、例えば約0.5mL〜約1mLである。投与量は平方センチメートル当たりの体積換算で表すことができ、例えば洗口製剤では約0.5μL/cm2〜約50μL/cm2、例えば約5μL/cm2〜約40μL/cm2又は約10μL/cm2〜約25μL/cm2、又はスプレー製剤では約0.625μL/cm2〜約10μL/cm2、例えば約2.5μL/cm2〜約5μL/cm2とすることができる。溶解性ストリップ等の他の送達媒体は、濃度及び当業者に知られる他の要因を調整して、これらの範囲に由来する投与量を有することができる。また、バリア形成組成物から粘膜上に形成される薄膜の平均厚さは、例えば約0.001mm〜約0.2mm、例えば約0.01mm〜約0.1mm又は約0.08mm〜約0.15mmの範囲であり得る。例えば、所与のヒト又は動物について、治療有効量は処置被験体となる哺乳動物の年齢又は体重又はサイズに基づいて決定することができ、投与量は上記のものであってよい。特に非ヒト哺乳動物の場合、投薬量は、上記の平方センチメートル当たりの値と、処置被験体の粘膜表面又は体腔の表面積の近似値とに従って調整可能である。局所抗菌組成物は、皮膚表面に同じ量で塗布されてもよい。
【０１１５】
前記組成物を、液体充填トローチ剤又はロールオン式の塗布器、又は処理済みの擦り込み材料などの他の送達媒体は、濃度及び当業者に知られる他の要因を調整して、これらの範囲に由来する投与量を有することができる。
【０１１６】
バリア形成組成物から粘膜、皮膚、若しくは皮膚病変表面上に形成される薄膜又は被膜の平均厚さは、例えば約0.001mm〜約0.2mm、例えば約0.01mm〜約0.1mm又は約0.08mm〜約0.15mmの範囲であり得る。
【０１１７】
機械的作用ポンプスプレー装置又はエアロゾル化スプレー装置が使用されてもよい。エアロゾル化の実施形態において、バリア形成組成物は、CO2、窒素、及び炭化水素などの一般的な推進剤と混合されてもよい。しかし、バッグオンバルブの実施形態も使用されてよく、前記組成物は、推進剤と組成物成分の分離が必要とならないほど十分に安定である。
【０１１８】
後述の実施例に示すように、本発明のバリア形成組成物は、多岐にわたる代表的な真菌、細菌及びウイルスを遮断及び捕捉して、殺滅又は中和することが証明されている。
【０１１９】
いくつかの実験を実施して、哺乳動物を対象とする前記組成物の安全性及び操作ヒト口腔粘膜（EHOM）モデル及び豚皮上に保護バリアを形成するスプレー製剤の能力を評価した。実験証拠から、本発明の組成物が、組織及び皮膚上にバリア被膜を形成し、このバリアが組織中への微生物の侵入を防止し、長時間持続する被膜を提供することが示された。
【実施例】
【０１２０】
（実験例1）
＜ヒト歯肉上皮細胞及び線維芽細胞の培養物＞
【０１２１】
正常ヒト歯肉細胞（上皮細胞及び線維芽細胞）をScienCell研究所（米国カリフォルニア州カールスバッド）から入手した。線維芽細胞は、胎児ウシ血清（FBS；Gibco社（カナダオンタリオ州バーリントン）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（DME；Invitrogen Life Technologies社（カナダオンタリオ州バーリントン））にて最終濃度10%まで培養した。上皮細胞は、5μg/mLのヒトトランスフェリン、2nMの3,3',5'‐トリヨード‐L‐チロニンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（DME）／Ham’s F12（3：1）（DMEH）にて培養した。
【０１２２】
0.4μg/mLのヒドロコルチゾン、10ng/mLの上皮増殖因子、ペニシリン及びストレプトマイシン、並びに10%FBS（最終濃度）を添加したダルベッコ改変イーグル（DME）／Ham's F12（3:1）（DMEH）培地にて培養した。この培地を上皮細胞については1日1回、線維芽細胞については週に3回取り替えた。培養物が90%コンフルエントに達したときに、0.05%トリプシン‐0.1%エチレンジアミン四酢酸（EDTA）溶液を使用して細胞をフラスコから剥離し、これを2回洗浄し、DMEM（上皮細胞の場合）又はDMEH添加培地（線維芽細胞の場合）の中に再懸濁させた。
（実験例2）
＜操作ヒト口腔粘膜（EHOM）組織＞
【０１２３】
EHOMモデルは、正常なヒト口腔粘膜で見られるものと同様の複雑な三次元空間細胞構成を形成するのに用いた歯肉線維芽細胞及び実験例1の上皮細胞を使用して作製した。固有層は、I型コラーゲン（Gibco-Invitrogen社（カナダオンタリオ州バーリントン））を歯肉線維芽細胞と混合して製造し、10%FBS添加培地で4日間培養した。次いで、この固有層に歯肉上皮細胞を播種してEHOMを得た。固有層の全表面が上皮細胞で覆われるまで、組織標本を浸漬条件下で増殖させた。重層上皮を生成するために、EHOMを、更に4日間気液界面まで上昇させて、上皮の別の層への組織化を促進させた。
【０１２４】
粘膜固有層は、上皮下にあって上皮と共に粘膜を構成する緩結合組織の薄い層である。図2は、被膜組成物で覆われた粘膜内の位置を矢印で示したEHOMの粘膜組織図である。
（実験例3〜9）
[158] Examples 3-9 
【０１２５】
被膜組成物の各例は、50mLの遠心管に下記の成分を添加し、ボルテックスして「自由流動」濃度とすることによって作製した。各組成物の成分及びそれらの近似量を表Iに記載する（表I中の値は全組成中の重量%である）。
【０１２６】
【表１】
2016504383.tif 000003
【０１２７】
下記の結果から、防腐剤がバリア被膜形成及び抗菌活性に不必要であることが分かった。
（実験例10〜26）
【０１２８】
粘膜表面上での前記組成物の安全性を実証するために、実験例10〜26を実施した。先行米国特許公報第2012/0270909号明細書及び本願が優先権の利益を主張する仮出願は、この情報を含む。
（実験例27及び28）
＜被膜組成物が、粘膜組織を通過する微生物に対するEHOMの機械的バリア機能に影響を及ぼすか否かの判定＞
【０１２９】
実験例27及び28では、2つのアプローチを使用して、対照例が、粘膜組織を通過する微生物を遮断し、固有の抗菌効果も有するバリア被膜を形成したかどうかを判定した。パススルーチャンバ内とEHOM表面上の増殖を、寒天培地内の増殖評価によって評価した。
【０１３０】
実験例27では、実験例2のEHOMを実験例4の1%及び5%希釈液（無血清培地にて希釈）に入れて2分間接触させた。次いで、組織を無血清培地で2回洗浄した後、体積300μLの1×106カンジダ菌細胞を重層した。次いで、組織を空気‐液体培養プレート上に置き、37℃の5%CO2湿潤雰囲気下で24時間インキュベートした。次に、EHOM（ベントラルチャンバ）下の培養培地を回収して、サブロー寒天プレート上に播種し、微生物が組織を貫通して下記の培養培地に達しているかどうかを確認した。EHOM表面からも培養物を回収し、サブロー寒天プレート上に播種した。このプロセスを図３に図示する。
【０１３１】
実験例28では、実験例4の組成物の1%及び5%希釈物で2分間処理した実験例2のEHOMを24時間にわたってカンジダ菌体で覆い、サブローデキストロース寒天プレート上に裏返して置き、所定位置に5分間放置した。次いで、EHOMを除去し、プレートを30℃で24時間インキュベートした後、微生物の増殖を肉眼で確認し写真を撮影した。各実験を5回ずつ繰り返して同様の結果を得た。
【０１３２】
図4は、EHOM面（パネルC及びD）の培養物、及び底部（ベントラル）チャンバ（パネルA及びB）のパススルー液の培養物の結果を示す。パネルA及びCは実験例4の1%希釈液で処理したEHOMであり、パネルB及びDは実験例4の5%希釈液で処理したEHOMSである。これらのデータから、実験例4の組成物によって形成されるバリア被膜は、微生物によるEHOM組織の貫通を防止するが固有の抗菌効果を有さないことが示された。
（実験例29及び30）
【０１３３】
実験例29及び30は、EHOMをS. mutansに感染させた点を除いて、実験例27及び28の繰り返しである。被膜組成物によりS. mutans微生物がバリア被膜を通過することを防止するバリア被膜が形成されるが抗菌効果を有さないことを示す、同様の結果が得られた。
（実験例31及び32）
＜被膜組成物が微生物侵入に対抗するEHOMの機械的バリア機能に影響を与えるか否かの判定＞
【０１３４】
実験例32では、実験例2のEHOM組織セットを実験例4の被膜組成物で処理した後、C. albicansで重層した。対照例31では、対照セットにC. albicansで重層する前の被膜組成物による処理を行わなかった。各接触時間の経過直後に各EHOMから生検をそれぞれ採取し、パラホルムアルデヒド溶液で固定し、パラフィンに包埋した。薄切片（4μm）をエオシンヘマトキシリンで染色した。光学顕微鏡を使用して切片の観察を行い、組織内の微生物細胞の浸潤／浸透を分析した。顕微鏡観察後、各条件の代表的な写真を撮影し提示した。この実験を3回繰り返し同様の結果を得た。実験例3による処理でも同様の結果が得られた（データは示さず）。
【０１３５】
図5は、EHOM組織の微生物侵入に対する被膜組成物の影響を示している。パネル（A）は未処理の対照例31の代表的な写真であり、パネル（B）は処理済み実験例32の写真である。矢印は未処理の対照例31における侵入菌糸を示す。
（実験例33〜40）
【０１３６】
上記のEHOMモデルも使用して、実験例5〜7のバリア被膜形成能を評価した。バリア被膜形成能は、（a）口腔内細菌（S. mutans）及び真菌（Candida albicans）がヒト口腔粘膜に侵入／浸透するのを防止すること、及び（b）宿主細胞を損傷しないことである（細胞毒性アッセイ）。
【０１３７】
実験例33〜40は表IIに従って調製した。
【０１３８】
【表２】
2016504383.tif 000004
【０１３９】
実験例33〜40では、実験例27及び28の手順に従って前処置及びインキュベーションを行った後、（1）フロースルー培地を下部チャンバから回収し、（2）サブローデキストロース寒天ペトリ皿の表面に裏返して置き24時間インキュベートした。実験例27及び28において記載したように、回収したフロースルー培地を寒天培地プレート上に広げて24時間インキュベートした。表IIには、裏返した各実験例の培養物上の微生物の増殖を示す各実験例の写真を掲載した参照図番号も示してある。
【０１４０】
図6及び7は、カンジダとストレプトコッカスの両方が実験例5〜6の組成物で処理したEHOMの表面上で増殖できたことを示している。対照的に、図8に示すように、実験例36又は40のEHOMの下部チャンバから収集した「フロースルー」培地、すなわち実験例7の組成物で処理した培地では、微生物の増殖は観察されなかった。このことは、実験例7の組成物でEHOMを処理しても、粘膜組織の表面への損傷が起こらず、処理したEHOMに生物が浸透できなかったことを示す。実験例5及び6の組成物で処理したEHOMでも同様の結果が得られた（データは示さず）。これらのデータは、グリセリン及びキサンタンガムの組合せが粘膜組織上に保護バリア被膜を形成することができることを示している。
（実験例41〜47）
＜検査製剤は毒性がなく細胞／組織を損傷させない＞
【０１４１】
実験例41〜47では、EHOMモデルを使用して組成物の毒性を評価した。実験例41〜47は表IIIに従って調製した。
【０１４２】
【表３】
2016504383.tif 000005
【０１４３】
実験例27及び28の手順に従って前処理及びインキュベーションを行った後、実施例41〜48のEHOM組織から培養上清を回収しLDH活性の測定に使用した。
【０１４４】
図9に示すように、実験例41〜48では、製剤が保存剤を含む又は含まない塩化セチルピリジニウムを含有するかどうか、またCandida albicans又はS. mutansのいずれかに感染したかどうかに関わらず、LDHレベルの有意な増加は観察されなかった。これらのデータから、実験例の被膜組成物の非毒性効果が示され、これらの製剤が宿主粘膜組織の完全性を維持することも示された。
【０１４５】
データは平均±SDである。未処理組織と処理済み組織との間に有意な差は認められなかった。
【０１４６】
まとめると、上記のデータから、実験例の組成物がヒトの粘膜組織を貫通して侵入する微生物を防止することが可能な効果的かつ安全なバリアを提示することが示された。
（実験例48〜61）
【０１４７】
被膜組成物の前臨床評価から、該組成物が多くの細菌及び酵母に対して有効であることが示された。S. salivarius、P. gingivalis、S. pyogenes、S. pneumonia、Fusobacterium nucleatum、S. mutans、S. aureus、Y. enterocolitica、S. oralis、S. mitis、C. albicans、C. krusei、C. tropicalis、及びC. glabrataを含む、患者から得た複数の臨床分離株に対して、実験例7の被膜組成物の抗菌活性を評価した。実験例7の被膜組成物の活性は、臨床及び検査標準協会（CLSI）の文書番号M07-A8、M11-A7及びM27-A3に記載されている標準法を使用して最小発育阻止濃度（MIC）を判定することにより評価した。
【０１４８】
いくつかのタイプの好気性又は嫌気性細菌（1×104細胞/mL）の標準化接種材料を、比較例として、実験例7の段階希釈溶液（0.1%又は1μg/mLのCPC含有）又は2%グルコン酸クロルヘキシジン（CHX、20μg/mL）でインキュベートした。細胞を試験薬剤の存在下又は非存在下（増殖制御）で24時間増殖させた。各作用物質のMICは（無薬物対照と比較して）100%の発育阻止を誘発した濃度として定義した。
【０１４９】
同様の微量希釈ベースのCLSI法（M27-A2）を使用して、アルビカンス及び非アルビカンスのカンジダ種に対する実験例7の活性を評価した。
【０１５０】
【表４】
2016504383.tif 000006
【０１５１】
被膜組成物は、MRSA、Acinetobacter baumannii、Streptococcus sanguis、S. gordonii、及びAggregatibacter actinomycetemcomitansに対して強力な抗菌活性を有することも判明した。
【０１５２】
表IVから分かるように、実験例7の組成物は、多くの好気性及び嫌気性細菌、並びに真菌に対して強力な活性を示した。
【０１５３】
S. oralis及びS. mitisに対する例7の被膜組成物のMICは、他の生物に比べて著しく上昇した（500μg/mL）。S. oralis及びS. mitisが口腔の正常な片利共生生物であることは興味深い。一般に使用される抗菌クロルヘキシジン（2%溶液）の活性も同様の方法により判定した。表IVは、種々の微生物に対する比較例として、実験例7の被膜組成物及びクロルヘキシジン（2%溶液）のMICを示す。
【０１５４】
まとめると、これらの結果から、実験例7が一般に口腔から単離された病原性細菌や真菌に対して強力な活性を有することが実証された。この活性はクロルヘキシジンで観察されるものよりも強力であった。
【０１５５】
実験例10及び11の被膜組成物についても類似の活性プロフィルが観察された。
（実験例62）
【０１５６】
更なる比較として、公表されているデータから、試験した被膜組成物は、CPC単独比較で（すなわち、本明細書に開示するバリア被膜製剤による組成物中ではなく）優れた又は少なくとも同等のMICを有することが示されている（Frank-Albert Pitten and Axel Kramer, "Efficacy of Cetylpyridinium Chloride Used as Oropharyngeal Antiseptic," Arzneim.Forsch./Drug Res.51 (II), pp588-595 (2001)参照。当該文献の内容を参照により本明細書に援用する）。データは試験微生物に応じて変動するが、例えばS. mutansに対するCPC（単独）のMICは5.0μg/mL〜6.25μg/mLであり、この値は実験例53で報告された1.95μg/mLよりも効果が小さくなる。このことは、CPCが製剤中の他の賦形剤と混合したときにその活性を失うリスクを有することに照らして、予想外の結果であった。詳しくはDepartment of Health and Human Services (Food and Drug Administration) (1994) Oral Health Care Drug Products for Over-the-Counter Human Use; Tentative Final Monograph for Oral Antiseptic Drug Products. Proposed Rules (21 CFR Part 356, Docket No. 81N-033A, RIN 0905-AA06). Federal Register 59:6084-124を参照されたい。
（実験例63〜69）
＜in vitroにおける被膜組成物の抗菌活性持続時間：ポスト抗菌効果（PAE）判定＞
【０１５７】
いくつかの微生物に対する実験例8のPAEを実験例63〜68で評価した。対照例69も準備した。いくつかの微生物を実験例8に（MICと等しい濃度で）1分間曝露した後、残留製剤を除去するために3回洗浄した。次いで、処理した細胞を37℃でインキュベートした寒天培地プレート上に広げ、細胞の再増殖に要した時間を測定した。PAEは、未処理対照例69と比較して、発育阻止率（%）が実験例63〜68によって維持された時間（hour）として表した。
【０１５８】
図10に示すように、実験例8は、試験した生物（S. aureus、S. pneumonia、S. gordonii、S. sanguis、S. salivarius、及びS. mitis）に応じて4時間〜24時間の間のPAEを示した。実験例8と同様の活性をカンジダに対して観察した（データは示さず）。他の実験例の被膜組成物は微生物に対して同様のPAEを示した。
（実験例70）
【０１５９】
CPC含量を0.7%に低下させた同様の比較例と比較した、実験例7のS. mutansに対する被膜組成物のPAE試験から、実験例7のPAEは、比較実験例70の6時間に対して24時間であることが示された。したがって、実験例7が比較実験例70より長い時間抗菌活性を示し、CPC含量の追加が抗菌活性に対して単なる相加効果以上のものを発揮することが証明された。
（実験例71〜76）
【０１６０】
走査型電子顕微鏡を使用してS. sanguis（実験例71）、S. oralis（実験例72）及びC. albicans（実験例73）の実験例3の組成物による処理が細胞完全性を損なうことが示された。
【０１６１】
実験例71〜73では、細胞を、実験例3の存在下で24時間増殖させた。次に、細胞を、洗浄して残留製剤を除去し、一連のアルコール溶液（10%〜100%（v/v））に通して脱水し、SEM分析用に加工した。対照例74〜76は、実験例3の存在下で増殖させなかった点で、実験例71〜73と異なる。
【０１６２】
SEM写真から、健康で無傷の細胞（図11A、図11C、図11E）であることが証明された未処理の対照例74〜76とは異なり、実験例3の被膜組成物に曝露した微生物が変形し、崩壊し、細胞質物質の漏出の明らかな証拠となる細胞の完全性の全面的な破壊が示された（図11B、図11D、図11F）。
（実験例77〜79）
【０１６３】
バイオフィルムは実験例77〜79における特定の感染症の前駆体であることから、被膜組成物が細菌及び酵母菌によるバイオフィルムの形成を防止することができるかどうかを判定する実験を行った。バイオフィルムはin vitroモデルを使用して形成した。in vitroモデルの詳細は、Chandra et al. "In vitro Growth and Analysis of Candida Biofilms" Nature Protocols 3(12):1909-1924 (2008)を参照されたい。
【０１６４】
実験例77〜79では、標準的なバイオフィルムモデルを利用して、実験例3の被膜組成物が、細菌及び真菌バイオフィルムに対して活性を示すかどうかを判定した。実験例77〜79では、3種類の微生物（C. albicans、S. oralis、S. salivarius）を基板上に90分間接着させて接着相にバイオフィルムを形成させた。次に、付着細菌を含むディスクを、濃度50%の実験例3（適切な培地で1:1希釈）で15分間、30分間又は60分間インキュベートした。インキュベーション後、バイオフィルムを、剥離し、培養培地上に広げ、インキュベートし、コロニー形成単位（CFU）を判定した。リン酸緩衝生理食塩水（PBS（1:1））で希釈した培地を対照として使用した。表Vは0分（対照）、15分、30分及び60分の時点のデータを示す。
【０１６５】
【表５】
2016504383.tif 000007
【０１６６】
実験例77〜79に関するデータは、図12にも阻止率対増殖制御のグラフとして示されている。これらの結果から、実験例3の被膜組成物が、S. salivarius、S. oralis又はC. albicansによって形成されるバイオフィルムに対して0.2%のMICで細菌及び真菌微生物を阻害することが示された。
（実験例80及び81）
【０１６７】
実験例80において、本発明者らは、C. albicansの初期段階のバイオフィルムを実験例3に1分間曝露した際の影響を評価した結果、1分程度の短時間の曝露であってもバイオフィルム形成を阻害することができることが分かった（図13）。実験例81は未処理の対照試料とした。
（実験例82及び84）
＜被膜組成物による成熟バイオフィルムの処理能力＞
【０１６８】
被膜組成物がバイオフィルムを処理することができるかどうかを判定するために、本発明者らは、完全に形成された成熟バイオフィルムに対するバリア形成組成物の活性を評価した。バイオフィルムを成熟期まで成長させ、その後実験例7に2時間又は4時間曝露し、その結果得られたCFUを判定した。未処理の細胞と比較して微生物CFUを少なくとも2 log reductionだけ減少させる組成物は、微生物バイオフィルムに対して有効であると考えられる。
【０１６９】
表VIに示すように、実験例7への曝露によりC. albicans及びS. oralisによって形成されたバイオフィルムが完全に除去され、S. salivariusによって形成されたバイオフィルムのCFUが未処理対照と比較して3.4 log reductionだけ減少した（log CFUは、それぞれ3.95対7.36）。
【０１７０】
【表６】
2016504383.tif 000008
【０１７１】
要約すると、上記の結果は、実験例7が、細菌及び真菌によって形成されるバイオフィルムに対して強力な活性を有することを示している。
（実験例85〜86）
＜被膜組成物はウイルスに対しても活性がある＞
【０１７２】
呼吸器系ウイルス（インフルエンザウイルスH1N1、株2009/H1N1/infA）やヒト免疫不全ウイルス（HIV）等のウイルスに対する被膜組成物の活性を測定した。
【０１７３】
被膜組成物はインフルエンザAの感染性を阻害する。
【０１７４】
インフルエンザウイルスの感染性に対する被膜組成物の影響を評価するために、メイディン・ダービー・イヌ腎臓（MDCK）細胞を感染前に37℃で≧90%コンフルエントまで増殖させた。MDCK細胞は、インフルエンザウイルスが関与するアッセイのために日常的に使用されている。
【０１７５】
実験例85では、細胞単層を実験例7の被膜組成物に曝露した。対照例86では、細胞層をOptiMEM（+P/S、+Lglu）組織培養培地に異なる時間曝露した：（1）T1：30分間曝露、（2）T2：1時間曝露、（3）T3：2時間曝露。次に、製剤を除去し、細胞単層をインフルエンザウイルスに感染させた（感染多重度（MOI）=0.1）。未処理の細胞又は曝露直後（T0）に感染した細胞をベースライン対照として使用した。次いで、感染した細胞を遠心分離し、増殖培地500μLに再懸濁し、32.5℃で48時間インキュベートした。また、免疫蛍光顕微鏡（FITC標識抗インフルエンザ抗体を使用）を使用して、哺乳動物細胞に対するインフルエンザウイルスの感染能に対する実験例7の被膜組成物の影響も評価した。
【０１７６】
図14は、インフルエンザに感染したMDCK細胞（実験例85）（パネルA及びC）及び対照例86（パネルB及びD）の細胞変性効果に対する実験例7の影響を示す。画像は下記から取得した。位相コントラスト（A〜B）、及び免疫蛍光顕微鏡（C〜D）：特定の細胞変性効果（CPE）は製剤で処理した細胞では認められなかった。未処理細胞は、局所的な円形化（focal rounding）や退行性変化を含む典型的なCPEを呈した。
【０１７７】
これらのデータから、細胞単層を実験例7に30分間、1時間又は2時間曝露してもコンフルエントかつ健常（実験例85）のままであることが示された。対照的に、未処理の細胞及び感染直前（T0）に処理した細胞（対照例86）では、実質的な細胞変性効果が示された。図14のパネルCに示されるように、実験例86の未処理細胞では蛍光が示されたが（図14、パネルD）、実験例85の被膜組成物で処理した細胞では蛍光が観察されなかった。
【０１７８】
実験例85及び86に対応する更なる蛍光顕微鏡像を図15に示す。
（実験例87及び88）
＜定量PCRを使用したウイルス負荷量に対する被膜組成物の活性＞
【０１７９】
図16は、定量PCRにより判定した、感染した処理済み細胞（実験例87）及び未処理細胞（実験例88）におけるインフルエンザウイルスレベルを示す。実験例87では細胞を実験例7で処理し、対照例88では細胞を未処理のままとした。その後上清を回収してウイルスの有無を分析した。
【０１８０】
実験例87及び88と同様のアッセイから細胞培養上清を回収し、QIAampウイルスRNAキット（QIAGEN社（カリフォルニア州バレンシア））を使用して核酸抽出した。Random Hexamer Primers（Invitrogen社（カリフォルニア州カールズバッド））を使用して各試料のcDNAライブラリーを作成した。逆転写反応は、製造業者（Invitrogen社（カリフォルニア州カールズバッド））の仕様によるM-MLV RTを使用して実施した。定量分析は、StepOne Plus Taqman Real Time PCR（Applied Biosystems社（ニュージャージー州ブランチバーグ））上で、TaqMan Universal PCR Master Mix（Applied Biosystems社（ニュージャージー州ブランチバーグ））、cDNA試料2μL、及びプライマー／プローブを使用してインフルエンザマトリックス遺伝子を標的として実施した。参照標準は、従来のRT-PCR、精製ゲル（QIAquick、Qiagen社（カリフォルニア州バレンシア））によって増幅されたH1N1マトリックス遺伝子及びヒトRNAse PのcDNA断片を使用して調製し、分光光度計（Beckman Coulter社（カリフォルニア州ブレア）を使用して定量した。
【０１８１】
図16及び表VIIに示すように、実験例7で30分間又は60分間処理した実験例87の細胞は、感染後48時間で検出可能なインフルエンザを有さなかった。さらに、実験例7で2時間処理した結果、未処理対照又は感染直前に処理したもの（実験例88）と比較して、ウイルス負荷量が1/6に減少した。
【０１８２】
【表７】
2016504383.tif 000009
（実験例89〜91）
＜被膜組成物は、インフルエンザウイルスに対する直接的な抗ウイルス効果を有する＞
【０１８３】
被膜組成物がインフルエンザウイルスに対する直接的な抗ウイルス活性を有するかどうかを判定するために、本発明者らは、ウイルスアフリカミドリザル腎臓（CV-1）細胞（90%コンフルエントまで24ウェルプレート内で増殖させた）を実験例7で前処理したインフルエンザに感染させた。CV-1細胞は、診断及びウイルス研究のために日常的に使用される高感受性基材である。
【０１８４】
実験例89〜91では、標準化された量のインフルエンザウイルス（0.1 MOI）を室温で5分間、（1）実験例7（実験例89を形成するため）、（2）対照例6、CPCなし防腐剤あり化合物（実験例90を形成するため）、（3）対照例5のプラセボ単独（CPC及び保存剤なしの化合物）（実験例91を形成するため）で前処理した。5分間のインキュベーション後に、ウイルス／薬物混合物をOptiMEM（+P/S、+Lglu）で追加的な同体積分だけ希釈して、処理組成物を希薄にした。
【０１８５】
実験例89〜91では、上記で説明したようにCV-1細胞を調製した。次いで、実験例89〜91で処理済みの及び未処理のウイルスを上記のように細胞に接種した。
【０１８６】
インフルエンザウイルス負荷量は上述のようにリアルタイムPCRによって判定した。図17に示すデータから、抗菌剤CPC（実験例89）を含有する実験例7の被膜組成物で前処理したインフルエンザウイルスについて、被膜組成物及び／又は防腐剤を含むがCPCを含まないもの（実験例90及び91）と比較して、ウイルス負荷量の有意な減少が示された。実験例7によるウイルスの前処理は、CPCを含まない製剤と比較して、ウイルスコピーの有意な減少を示した。
【０１８７】
これらの結果は、実験例7の被膜組成物が実験例5及び6に固有ではないインフルエンザウイルスに対する直接的な抗ウイルス活性を有することを証明している。
（実験例92及び93）
【０１８８】
実験例92及び93では、インフルエンザA（2009/H1N1/infA）の感染を阻害する被膜組成物の能力を試験した。アフリカミドリザル腎臓（CV-1）細胞を90%コンフルエントまで24ウェルプレート中で増殖させた。次に、実験例7の被膜組成物を実験例92の細胞（20%の実験例7、80%のOptiMem、ワーキングCPC濃度0.02%）に塗布した。各時点は対照例93（被膜組成物の塗布なし。100% OptiMem）と一致する。被膜組成物を表面上に30分間滞留させた後、細胞単層から除去した。細胞を無菌optiMEM（+PfS、+Lglu）で2回十分に洗浄した。インフルエンザをMOI=0.1にてT0からT＋6時間まで30分間隔で接種した。感染後、細胞を2200rpmで30分間、500μLのoptiMEM（+P/S、+Lglu、2μg/mLのトリプシン（sigma-Aldrich社（ミズーリ州セントルイス））で遠心分離した。感染細胞を32.5℃で96時間、5%CO2にて増殖させた。インフルエンザウイルス負荷量はリアルタイムPCRによって判定した。
【０１８９】
図18に示すように、グリセリン‐キサンタンガム製剤による宿主単層の前処理により、未処理の対照と比較して最大84.93%ウイルス感染が阻害された。被膜組成物の除去にもかかわらず宿主細胞中でウイルス感染の阻害が観察されたという事実は、被膜組成物により、ウイルス侵入を少なくとも6時間防止する保護バリア被膜が宿主細胞に形成されたことを示している。
【０１９０】
図1Bは、感染の阻害に対処する可能な機序として参照することができる。
（実験例94〜96）
＜被膜組成物はHIVに対して活性を示す＞
【０１９１】
実験例94〜96では、被膜組成物がHIVに対する活性を有するかどうかを判定した。宿主MT哺乳動物細胞をRPMI／10%FBS／PS中15,000細胞／ウェルの密度で96ウェル丸底プレートに播種した。翌日（2日目）、ウイルスを対照例5（実験例94を形成）、対照例6（実験例95を形成）、又は実験例7（実験例96を形成）で5分間前処理して細胞に添加した。製剤への曝露から24時間後にMT（マカク）哺乳動物細胞をリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で3回洗浄し、新鮮な培地に取り替えた。1日目、2日目、5日目、6日目、7日目及び9日目に処理後の上清（10μL）を回収し、逆転写酵素（RT）活性によりウイルス負荷量を測定した。図19は、9日間に及ぶ各実験例72〜74のmL当たりのウイルスコピーのグラフを示す。
【０１９２】
図示の結果は、実験例96中の実験例7が、処理後の全ての監視時点において抗HIV活性を呈したことを示している。
【０１９３】
実験例94及び95におけるCPC及び／又は保存剤なしの対照例5又は対照例6が、最も小さい抗HIV活性を示した。
【０１９４】
要約すると、我々の調査結果から、CPCを含む被膜組成物の実験例7が、HIVに対する長時間持続する抗ウイルス活性を示すことが証明された。
（実験例97）
【０１９５】
代表的な生物ウイルス病変は、様々な粘膜組織における重要な感染症である。実験例97では、被膜組成物が一般的な口腔エプスタインバールウイルス（EBV）に対する活性を示すかどうかを判定するための実験を行った。ウェスタンブロッティングを使用して、実験例8の被膜組成物による溶菌ウイルスタンパク質EAD（ウイルス複製の阻害を示す）の分解能を評価した。
【０１９６】
実験例97では、EBVに感染した胃上皮細胞を実験例8の異なる希釈物（1:16、1:32、1:64）に曝露し、特異的抗体を使用してEADタンパク質の存在を検出した。細胞性β‐アクチンの存在を上皮細胞の完全性の指標とした。図20に示すように、実験例8の1:64希釈液は、細胞性アクチンに影響を及ぼすことなくEADを分解した。これらの結果は、実験例8が、ウイルス複製を固有に阻害し、したがって有効な抗ウイルスであり、ウイルス感染の防止に有用であることを証明している。
（実験例98〜100）
＜抗菌バリア対市販洗口製品の持続時間＞
【０１９７】
被膜組成物が抗菌活性を維持可能な持続時間を判定するために、細菌及び真菌を、ウェル中の実験例7の被膜組成物で処理した実験例2のEHOMと、同等の市販品で処理した実験例2のEHOMとに2分間曝露した。細菌及び真菌微生物を、未処理の対照EHOM（実験例98）及び処理済みのEHOM（実験例99及び比較例100）の上に重層した。次に、残留（フロースルー）溶液をウェル底（EHOMモデルの下部チャンバ）から取り出し、寒天培地プレート上に広げた。図3は、この試験法を更に明確化するものである。これらのプレートを37℃でインキュベートし、24時間後の増殖微生物細胞数（コロニー形成単位；CFU）を計数した。
【０１９８】
対照例98では未処理のEHOMを試験した。実験例99では、S. mitis細菌を上記のように被膜組成物に重層した。実験例100は、細菌をS. mitis細菌に対する市販のLISTERINE（エタノール（26.9%）、メントール、チモール、サリチル酸メチル及びオイカリプトールを含む）の活性を示す比較例である。結果を表VIIIに示す。
【０１９９】
【表８】
2016504383.tif 000010
（実験例101〜103）
【０２００】
実験例101〜103では、Candida albicans細菌を上記のような被膜組成物で試験したこと以外は、実験例98〜100と同じ手順を実施した。結果を表IXに示す。実験例103は市販のLISTERINEの活性を示す比較例である。
【０２０１】
【表９】
2016504383.tif 000011
【０２０２】
これらのデータは更に、実験例7の被膜組成物が最大24時間を含む活性を維持することを示している。まとめると、これらの結果は、LISTERINEとは異なり、実験例7の被膜組成物が、最大24時間EHOM組織に無傷のバリアを維持し続けたことを示している。
（実験例104〜153）
【０２０３】
実験例104〜153を試験し、微生物の通過を防ぐのに効果的なバリアを形成するグリセリン及びキサンタンガムの濃度の更なる例を特定した。この投与は微生物の通過を防止するバリアを必要としないので、このデータは省略した。しかし、米国特許公報2012/0270909、及びこの出願が優先権の利益を主張する仮出願は、この情報を含む。
【０２０４】
注目すべきは、有効な抗菌剤を加えると、より低いグリセリン濃度及び／又はキサンタンガム濃度で、表面治療に有効なバリア被膜を形成することができることである。これは、抗菌剤とバリア被膜とが相まって有害な細菌を阻止及び／又は殺滅するからである。無生物表面に塗布するための組成物の場合、無生物表面が感染することはないので、バリア被膜の反対側への微生物の通過を阻止することは、それほど重要ではない。
（実験例154〜160）
【０２０５】
粘膜表面上での組成物の安全性を実証するために、実験例154〜160を実施した。米国特許公報第2012/0270909号明細書及び本願が優先権の利益を主張する仮出願は、この情報を含む。
（実験例161）
＜グリセリン‐キサンタンガム製剤がヒト口腔粘膜上に被膜を形成する＞
【０２０６】
グリセリン‐キサンタンガム製剤がヒト口腔粘膜上に被膜を形成できるかどうかを判定するために、本発明者らは、ゲンチアナバイオレット（GV）をマーカー色素として用いて、実験例7の製剤を添加した。添加した産物（750μL）をヒトボランティアの口腔に噴霧した。塗布後、口腔内染色の有無を観察し、デジタルカメラを使用して画像を撮影した。図21に示すように、この製剤は両頬と舌の背側／腹側面とを染色した。
（実験例162及び163）
＜被膜組成物への微生物の曝露が細胞増殖を阻害する経時的顕微鏡検査法＞
【０２０７】
被膜組成物が微生物に対する活性を示す阻害活性及び持続時間を判定するために、未処理の細菌及び真菌と比較して、被膜組成物に曝露した細胞について経時的分析を実施した。
【０２０８】
実験例162では、S. mutans菌体を実験例7に1分間曝露し、洗浄して残留物質を除去し、新鮮な増殖培地を収容したペトリ皿内で増殖させた。37℃での生物の増殖を6時間観察し、顕微鏡に接続したカメラを使用して6時間のインキュベーション期間中20分毎に顕微鏡写真を撮影した。
【０２０９】
対象実験例163では、未処理の細胞に同じ手順を実施した。
【０２１０】
図22に示すように、細胞が6時間以内にコンフルエントに達した未処理の細菌とは対照的に、実験例7の被膜組成物で処理した微生物は、曝露後の同期間中に再増殖しなかった。同様に、実験例7の被膜組成物にカンジダ細胞を曝露した場合は、インキュベーション期間中の増殖が完全に阻害された（データは示さず）。
【０２１１】
さらに、これらの結果から被膜組成物が長期の抗菌活性を有することが確認された。
（実験例164〜166）
＜in vivo試験：被膜組成物（実験例7）はヒトにおける口腔微生物負荷量を低減する：短期活性及び長期活性＞
＜短期活性＞
【０２１２】
口腔微生物の微生物負荷量に対する単回塗布の効果を評価することにより、実験例7の活性持続時間を健康な個体で測定した。実験例164〜166では、（年齢18歳以上の健康な口）3人の健常者のインフォームドコンセントを得て、各自の両頬に実験例7の組成物の単回塗布を依頼した。単回塗布は体積0.25mLずつを3噴霧と定義した。次に、これらの人間からベースライン（前処置）、処置後1時間経過後、処置後2時間経過後及び処置後6時間経過後のスワブを採取した。これらのスワブを好気性又は嫌気性生物に特異的な寒天培地プレート上で培養し、37℃で24〜28時間インキュベートし、CFU数を計数した。微生物負荷量に対する実験例7の影響（CFU）を判定し、ベースライン（0分）のCFUを基準にして各露光後時点の阻害率を計算した。
【０２１３】
得られた結果から、実験例7の塗布により最大6時間にわたる微生物負荷量の一貫した低下が確認された（代表的な被験者のCFUを示す図23A参照）。被膜組成物による処置によって口腔内微生物負荷量が69%〜96%低下した（代表的な被験者の微生物負荷量の減少を示す図23B参照）。
（実験例167〜169）
＜長期活性＞
【０２１４】
口腔微生物に対する5日間にわたる被膜組成物の活性を評価した。実験例167-169では、3人の健常者を登録し、実験例7の単回用量（3回噴霧の合計：0.75mL）を1日3回（目安として午前9時、正午及び午後3時の3回）塗布する処置を5日間（典型的な週5日制）続けることを依頼した。ベースライン（1日目の塗布前）及び5日間の試験期間における各日の終わりに、被験者からスワブを採取した。収集したスワブを寒天培地プレート上で培養し、37℃の5%CO2湿潤雰囲気下で24〜28時間インキュベートし、CFUの数を計数した。
【０２１５】
微生物負荷量に対する実験例7の被膜組成物の影響を（3名の被験者のメジアンCFUとして）判定し、各露光後時点の阻害率をベースライン（0分）CFUを基準として計算した。図24は、これらの結果をCFU対時間（図24A）、及び微生物負荷量の減少対時間（図24B）を示すグラフである。実験例167〜169は、5日間の実験例7の塗布が、5日間の試験期間中一貫した微生物負荷量の低下をもたらしたことを証明する（図24A）。実験例7の被膜組成物による処置により、研究参加者の口腔内の微生物負荷量中央値が65%〜88%減少した（図24B）。
（実験例170〜198）
【０２１６】
臨床試験では、29人の健常者をインフォームドコンセント後に登録した。ベースライン情報（年齢、性別、民族及び登録日）を記録した。口の構内検査を実施し、口（頬）の内側を無菌培養スワブで消毒した。ベースラインの口腔スワブ試料を培養して試験前の細菌負荷量を判定した。実験例170〜198では、29人の参加者各自に実験例7の被膜組成物を含むスプレーボトルを渡し、それを各自の口の内側に総体積0.75mL噴霧し、その後30秒間口内で攪拌してから飲み込むよう指示した。ほぼ同数の参加者で構成される2つのグループについて検査を行った。一方のグループは、実験例の被膜組成物を2時間毎に1日3回5日間（典型的な週間労働日数）にわたって使用した。他方のグループは、実験例の被膜組成物を2時間毎に1日4回5日間（典型的な週間労働日数）にわたって使用した。これら2つのグループで大きな差は認められなかった。1日目、2日目、3日目及び5日目の終わり（被膜組成物の初回投与時点から8時間後）にスワブを回収し、好気性及び嫌気性細菌に特異的な培地上で培養した。データは好気性と嫌気性に分けて微生物数：合計で表した。図25は総微生物負荷量のグラフであり、合計を処理直前と処理5日目の好気性及び嫌気性のカウントに分けて示す。図26は、代表的な3人の研究参加者から得た口腔試料中の5日間にわたる微生物負荷量のグラフを示す。
【０２１７】
全体として、in vivo試験から、これらの生物レベルの低下によって測定されるように、被膜組成物が短期と長期の両方の持続期間にわたって口腔微生物に対する抗菌活性を有することが示された。
【０２１８】
これらのデータは、被膜組成物による処理が全体の好気性微生物及び嫌気性生物について5日間にわたる口腔微生物負荷量の減少をもたらしたことを示した。
（実験例199〜205）
＜微生物侵入を防止するためのバリアを形成する追加的な保湿剤の識別＞
【０２１９】
例199では、インビトロフィルタ挿入ベースモデル（図27参照）を使用して様々な濃度の様々な保湿剤を試験した。
【０２２０】
実験例3〜8で使用した混合手順に基づいて、6種の組成物を表Xに従って調製した。
【０２２１】
【表１０】
2016504383.tif 000012
【０２２２】
次に、100μLの実験例199〜205をフィルターインサート（細菌と真菌の両方を通過させる孔サイズ：直径0.8μm）に入れて層を形成させた。次に、生物を、試験用液により形成した層に重層した。次いで、試験溶液の層及び微生物を含むフィルターインサートを寒天培地プレートの表面上に置き、37℃で24時間インキュベートした。インキュベーション期間経過後、寒天培地プレートについて、フィルターインサート上及び寒天培地内の発育の有無を評価した。フィルターインサート上では発育が確認されたが寒天培地内では発育が確認されなかったことから、試験溶液が微生物の通過を防止するバリアを形成したことが示された。対照的に、フィルターインサート及び寒天培地内で微生物の発育が確認された場合は、そのようなバリアが形成されなかったことを示す。
【０２２３】
得られた結果から、試験保湿剤（単独又は組合せ）を含むキサンタンガムベースの各溶液が、土台の寒天培地まで微生物が通過することを防止する無傷のバリアをフィルターインサート上に形成したことが示された。
（実験例206〜213）
【０２２４】
＜キサンタンガムの溶解限度の判定＞
【０２２５】
キサンタンガムの溶解度を判定するために、キサンタンガムを様々な濃度で水と混合し、塊の有無及び混合物の自由流動を監視することにより溶解度を観察した。表XIは結果及び濃度を示す。
【０２２６】
【表１１】
2016504383.tif 000013
【０２２７】
本発明者らは、0.4%で混合した場合にキサンタンガムが自由流動粘性溶液（表XIII）を形成することを発見した。対照的に、0.45%又は0.5%のキサンタンガムを含有する混合物は、粘性流体を形成するが小塊を含んでいた。塊の程度はキサンタンガムの濃度の上昇（0.6%及び0.7%）と共に増加した。濃度≧0.8%では、キサンタンガム混合物はゼリー様の粘稠度を有し自由流動のない広範囲の塊を含んでいた。
（実験例214）
＜被膜組成物中のカチオン性CPCと被膜組成物中の中性抗菌剤との比較＞
【０２２８】
実験例214では、CPCの代わりに中性剤シトラールを使用した点を除いて、実験例7の製剤を調製した。CPC（0.1%）又はシトラール（0.5%）を含有する製剤の連鎖球菌に対する抗菌活性を確認した。これらの研究を行うために、実験例48〜61において上記で説明したアッセイを使用した。
【０２２９】
得られた結果から、シトラールを含有する製剤が抗菌活性（MIC=12.5%）を示すことが示された。しかしながら、シトラールを含有する製剤の活性はCPC（MIC=0.098%）を含有する製剤より大幅に低い。
（実験例215）
＜疎水性の物理化学的試験及び比較＞
【０２３０】
実験例215では、薄層クロマトグラフィー分析を使用して実験例7と疎水性組成物の疎水性を比較した。疎水性組成物の成分は表XIIに示すとおりである。
【０２３１】
【表１２】
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【０２３２】
10μLの実験例7及び疎水性組成物を予め用意したTLCプレート上に（下端から2cmの距離まで）堆積させた。スポットを5分間空気乾燥し、各プレートを、溶媒として水を含有するTLCクロマトグラフィージャーに入れた。溶媒前線がプレート上端に達するまでTLCシステムを実行した。プレートを取り出して溶媒及び試料前線をマークした。これら2つのサンプルの相対前面（RF）の値を式Iによって計算した。
式I：
RF＝スポットの移動距離／溶媒前面の距離
【０２３３】
得られた結果から、疎水性組成物及び実験例7のRf値がそれぞれ0.33及び0であり、これによって疎水性組成物の水混和性が高いことが示された。対照的に、実験例7は水性溶媒中でどのような移動性も示さず、これによって本製剤が疎水性であること又は親水性でないことが証明された。
（実験例216）
【０２３４】
下記の表XIIIに記載の各種成分を水中で混合し溶液として、被膜組成物を調製した。  
米国ホメオパシー薬局方に基づき5倍量のオイカリプトール成分も含めた。これは試験結果には影響を及ぼさなかったが、本例の組成物が追加成分と協働して作用することが証明された。以下、「%」は全て重量%を示す。
【０２３５】
【表１３】
2016504383.tif 000015
（実験例217〜219）
【０２３６】
本例の被膜組成物は、アレルギーを誘発するカビを殺滅するのに有効であることも示された。ポリスチレンプラスチック表面にてMIC試験を行った。
【０２３７】
実験例217では、実験例216の被膜組成物を検査してStachybotrys MRL 9740に対するMICを判定した。実験例7の組成物のMICは0.06μg/mLであった。
【０２３８】
実験例218では、実験例216の被膜組成物を検査してAspergillus fumigatus 18748に対するMICを判定した。実験例7の組成物のMICは0.49μg/mLであった。
【０２３９】
実験例219では、実験例216の被膜組成物を検査してCladosporiumに対するMICを判定した。実験例7の組成物のMICは0.39μg/mLであった。
【０２４０】
Stachybotrys及びAspergillus fumigatusはカビを発生させる有機物であるので、これらの実験例は更に、被膜組成物を表面に塗布してカビの増殖又は変色を防止又はそれらに対処する実施形態もサポートする。
（実験例219〜224）
【０２４１】
実験例219〜224では、シリコーンエラストマーディスク表面上でMRSAバイオフィルムに対する被膜組成物の影響を評価した。
【０２４２】
実験例219〜221では、直径1cm の3枚のシリコーンエラストマーディスクに実験例7の被膜組成物0.25mLを予め噴霧し、60分間37℃でインキュベートした。実験例222〜224では、シリコーンエラストマーディスクを当量のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で60分間処理することにより対照例とし、37℃でインキュベートした。
【０２４３】
実験例219〜224の前処理したディスクをそれぞれ4mLのMRSA懸濁液（1×107細胞/mL）に浸漬し、37℃で90分間インキュベートした（「接着段階」）。次いで、接着細胞を含むディスクを取り出し、4mLのブレインハートインフュージョン（BHI）を含むウェルに移した。これらのウェルをロッカーに置き37℃で24時間インキュベートした。BHI寒天培地における定量培養によりディスク上のバイオフィルム形成評価を行った。スキャナを使用して各ウェルのスキャン画像を記録した。
【０２４４】
表XIVに示されるように、実施例7の被膜組成物による前処理を行った場合はディスク表面上にバイオフィルムが形成されなかった。図28は、MRSAにより、PBS処理ディスク（A, C, E）及び実施例7で処理したディスク（B, D, F）上に形成されるバイオフィルム内のコロニー数（colony burden）の画像を示す。
【０２４５】
【表１４】
2016504383.tif 000016
（実験例225〜246）
【０２４６】
実験例7の被膜組成物を検査して数株のBordetella pertussisに対する有効性を判定した。実験例225〜235では、実施例7の被膜組成物をRegan-Lowe Charcoal Agar BBL #297883プレートに入れ、64μg/mLの水希釈液として寒天ベースアッセイを行った。対照例236〜246は、実施例7の被膜組成物を含まない寒天プレートとした。実験例225〜246では、それぞれ細胞数5×104（50μL）のBordetella pertussisを試験面にスポットし、各プレートを37℃で24時間インキュベートした。表XVに示されるように、対照例236〜246では密集増殖が観察されたが、実験例236〜246では増殖が認められなかった。表中「4+」は顕著な増殖を示す。
【０２４７】
【表１５】
2016504383.tif 000017
（実験例247〜252）
【０２４８】
実施例7の（様々な希釈濃度の）被膜組成物につき、ライノウイルスのATCC VR-1200株に対する抗ウイルス活性を評価した。
【０２４９】
ヒト肝細胞癌（HUH-7）細胞を、10%熱不活性化ウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）を加えた24ウェルプレート中で調製し、L-グルタミン（Lglu）及びペニシリン／ストレプトマイシン（P/S）（特に明記しない限り、全てGibco社（ニューヨーク州）製の試薬）を補充した。全ての培養細胞をCO2濃度5%、37℃の条件下で90%〜100%コンフルエンスまで増殖させた後、感染前に一度OptiMEM （+ P/S + Lglu）にて洗浄した。
【０２５０】
実験例247〜251では、実験例7の組成物を、0.005%、0.01%、0.015%、0.02%、及び0.05%のCPC作用濃度に対する諸種の濃度（OptiMEM（+ P/ S、+ Lglu）400μL中の希釈濃度5%、10%、15%、20%、50%）で細胞単層に塗布し、それぞれ接種前に1時間滞留させた。対照例252では、400μLのOptiMEM（+ P/S、+ Lglu）を細胞に塗布し、接種前に1時間滞留させた。
【０２５１】
次いで、実験例7の希釈液又は対照のOptiMEMから細胞単層を取り出してライノウイルスを塗布し、感染多重度（MOI）を0.1とした。細胞をウイルスとともに32.5℃で1時間インキュベートした。この後、接種材料を除去し、500μLのOptiMEM + P/S + Lgluを細胞上に置いた。次いで、CO2濃度5%、32.5℃の条件下で細胞を増殖させた。5日間のインキュベーション後、細胞培養上清をライノウイルス負荷量の定量化のために収集した。
【０２５２】
実験例247〜251の細胞培養上清のライノウイルス力価は、リアルタイムPCRによって測定した。対照例252と比較して、実験例251ではライノウイルス負荷量の有意な減少が示され、実施例7の50%の濃度であった。表XVIを参照。
【０２５３】
【表１６】
2016504383.tif 000018
（実験例253及び254）
【０２５４】
実験例253は、OptiMEM（+ P/S、+ Lglu）500μL中50%である実施例7の希釈懸濁液（CPC濃度0.05）で調製した。対照例254は、実験例7（500μLのOptiMEM（+ P/S、+ Lglu））を含まない対照溶液として調製した。実験例253及び254を実験例246〜252で開示した細胞に塗布した。前処理の時間間隔は次のとおり定義した：T-1＝感染1時間前、T-30＝感染30分前、T-0＝感染直前。
【０２５５】
次いで、実験例253の懸濁液及び実験例254の対照溶液から細胞単層を取り出した。処理した細胞単層にライノウイルス粒子を感染多重度（MOI）0.1で塗布した。細胞をウイルスと共に32.5℃で1時間インキュベートした。この後、接種材料を除去し、500μLのOptiMEM + P/S + Lgluを細胞上に置いた。次いで、CO2濃度5%、32.5℃の条件下で細胞を5日間増殖させた。実験例253及び254で処理した各細胞を毎日観察し、細胞変性効果の有無を確認した。5日間のインキュベーション後、細胞培養上清を免疫蛍光及びライノウイルス負荷量の定量化のために収集した。
【０２５６】
図29は、実験例253で処理した細胞の写真を示す。図29（a）はT-1（1時間前）、図29（c）はT-30（30分前）、図29（b）はT-0（直前）である。これらの写真ではいずれも細胞変性効果は確認されず、プレート一面に健康な細胞が増殖した。一方、図29（d）に示されるように、実験例254の未処理の対照細胞では、巣状円形化(focal rounding)、解離、及び細胞死が確認された。細胞変性効果の判定として、巣状円形化の進行、細胞サイズの拡大又は縮小、合胞体形成、多核巨細胞の発達、及び解離を判定した。
【０２５７】
免疫蛍光測定を以下のように行った。ウイルスに感染した細胞単層及び非感染対照を滅菌PBSで洗浄した。これらの細胞を、トリプシン処理し、スライド上のウェル上にスポットし、アセトンで固定した。各スライドを、FITC標識モノクローナル抗体を利用したDFAにより試験した。Light Diagnostics Pan-Enterovirus Detection Kit（Millipore社）を使用して間接免疫蛍光アッセイを行った。この検出キットは、ライノウイルス感染細胞との交差反応性を示すことでよく知られている。全ての抗体滞留ステップを37℃で1時間行った。最終洗浄後、各細胞の蛍光の有無を488nmの波長で評価した。
【０２５８】
図30は、実験例253で前処理した細胞の免疫蛍光写真を示す。図30（d）はT-1（1時間前）、図30（b）はT-30（30分前）、図30（c）はT-0（直前）である。実施例253で処理した細胞は1時間30分にわたって免疫蛍光を示さなかった。実験例253で処理したT-0（直前）の細胞は、わずかな蛍光を示した。一方、未処理の対照例254は、顕著な免疫蛍光を示し、重度のウイルス感染が示唆された（図30（a）参照）。
【０２５９】
サンプルのウイルス負荷量を下記のように定量した。細胞培養上清を回収し、−80℃で保存した。核酸はQIAamp Viral RNA Kit（QIAGEN社（カリフォルニア州バレンシア）を使用して抽出した。Random Hexamer Primers（Invitrogen社（カリフォルニア州カールズバッド））を使用して各試料のcDNAライブラリーを作成した。逆転写反応は、製造業者（Invitrogen社（カリフォルニア州カールズバッド））の仕様によるM-MLV RTを使用して実施した。定量分析は、StepOne Plus Taqman Real Time PCR（Applied Biosystems社（ニュージャージー州ブランチバーグ））上で、TaqMan Universal PCR Master Mix（Applied Biosystems社（ニュージャージー州ブランチバーグ））、cDNAサンプル2μL、及びプライマー／プローブを使用してライノウイルスポリプロテイン遺伝子を標的として実施した。参照標準は、従来のRT-PCR 、精製ゲル（QIAquick、Qiagen社（カリフォルニア州バレンシア））によって増幅されたアンプリコンを使用して調製し、分光光度計（Beckman Coulter社（カリフォルニア州ブレア）を使用して定量した。結果を表XVIIに示す。
【０２６０】
【表１７】
2016504383.tif 000019
【０２６１】
感染5日後、T-1（1時間前）、T-30（30分前）、又はT-0（直前）のいずれの時点でもライノウイルスの増幅は認められなかった。未処理の（対照）細胞では、顕著な増幅（>108コピー/mL）が示され、ウイルス感染が示唆された。
（実験例255）
＜塩化セチルピリジニウム組成物は無生物表面で抗菌活性を示す＞
【０２６２】
実験例255では、塩化セチルピリジニウム系スプレー消毒剤のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）に対する活性を評価した。組成物でプレコーティングした表面の抗菌効果を分析し、水洗浄が活性維持に与える影響を分析した。
【０２６３】
一実施形態において、塩化セチルピリジニウムを含む被膜組成物は、水洗浄した後にも、ステンレススチール表面上で相当量の殺菌作用又は静菌作用、例えば少なくとも約35%〜約50%、又は約15%〜約40%などの殺菌作用又は静菌作用を水洗浄した後に保持した。
【０２６４】
テストCPC組成物は、以下の配合率を有する：93%〜97%水、0.5〜1% CPC抗菌剤、0.5〜1%グリセリン、並びにクレモフォールRH-40、コポビドン、パラベン、および安息香酸ナトリウムなどの防腐剤を含み、それらのどれも約1%の量を超えて存在していない、組成物の残部。
【０２６５】
テストCPC組成物の活性（CPCsd）はステンレススチール担体を、MRSA懸濁液（1 x 108細胞）に15分間、37℃で浸漬させることにより評価しました。次いで過剰な液体を排出し、担体にCPCsd（0.5 mL用量）を30秒間スプレーし、空気乾燥させ、ブレインハートインフュージョン培地（BHI）で一晩インキュベートした。培地のアリコートは、その後定量的に培養した。
【０２６６】
プレコート担体への効果を測定するために、ディスクにCPCsd（0.50 mL用量）をスプレーし、2〜4分間空気乾燥させ、MRSAと共に15分間、37℃でインキュベートした。過剰な液体を排出し、担体をBHIで一晩インキュベートした後に定量培養した。
【０２６７】
結果は、CPCsdが汚染担体上のMRSAの増殖を阻害したことを示した（CFUカウント＝0）。これはまだ2.54 x 108のCFUカウントを有する対照試料とは対照であった。その上、CPCsdでのプレコーティングは、担体の細菌汚染を防止した（CFU＝0）。これは3.5 x 108のCFUカウントを有する対照試料とは対照である。
【０２６８】
塩化ベンザルコニウム及びエタノールを含む市販の消毒剤をコンパレーター（Bkc- EtOH）として使用し、同様に試験した。コンパレーターも類似の抗菌活性を示した。
【０２６９】
持続的な殺菌活性に対する水洗浄の影響を、ミリQでプレコート担体を洗浄し（プレコート担体を2 mLミリQオートクレーブ水に移し、2〜3秒で取り出す）、次いでMRSAに15分間曝露して調べ、約16〜24時間、37℃でのインキュベーションの後にコロニー形成単位数（CFUs）を測定した。塩化ベンザルコニウム及びエタノールを含む市販の消毒剤をコンパレーター（Bkc-EtOH）として使用し、同様に試験した。消毒剤を含まない細胞及びリン酸緩衝生理食塩水処理をした細胞を対照試料として使用した。
【０２７０】
水洗浄後、及び16〜24時間後、CPCsd処理した担体はまだ33%の細菌数減少を示し、10%の減少であるコンパレーター処理した担体とは対照であった（図31）。したがって、試験組成物CPCsdは、コンパレーターより3倍高い活性を水洗浄後に維持することができた。
（実験例256）
【０２７１】
実験例255で試験した組成物と一般的なアルコール系家庭用洗剤との比較を提示する。
【０２７２】
【表１８】
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【０２７３】
実験例255の組成物は、初期抗菌活性では同程度であるが、水洗浄後は、全ての安全カテゴリーと活性とで優れている。
（実験例257〜260）
【０２７４】
表XIXでは、実験例255で作製したガムを含有せず湿潤剤を低い割合でのみ含む組成物（製剤2）、と実験例7で記載したもののような炭水化物ガム成分を含む組成物（製剤1）とを比べることによって、比較をしたことが示される。
【０２７５】
【表１９】
2016504383.tif 000021
【０２７６】
図32に示される実験例257〜259では、0.25 mLの用量の製剤1を一枚の紙製ストックカード（paper-stock card）に噴霧して試験を行なった。その後、もう一枚の紙製ストックカードを1秒間貼り付けて引き離した。この二枚目のカードを貼り付けて引き離した後に、最初のカード上の残留物が両方のカードに連続して貼り付いているかどうかを分析するために、これらカードを写真に撮った。図32で見られるように、製剤1の組成物は、約0.5インチの絞り深さ（draw depth）で依然として試験カードに付着していた。製剤2でも同じ手法に従い、同じように引くと、二枚目のカードに残留物は貼り付いていなかった。粘度と被膜厚の違いも、試験した2つの製剤間で見られた。
【０２７７】
図33に示される実験例258〜260では、0.25 mLの用量の製剤1及び2をラッカー被覆繊維板に噴霧し、粘度、層厚、並びに表面積被覆率の試験を行い、撮影した。製剤1の試験では、製剤2の試験に対して、より厚い被膜とより狭い表面積が観測された。粘度は、製剤2の試験に比べて製剤1の試験で高いのも明らかであった。
【０２７８】
各実験例257〜260は、室温、約21℃で実施した。
（実験例261）
【０２７９】
ヒトの皮膚を含む哺乳動物の皮膚への被膜組成物の殺菌効果を試験するために、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）感染した局所豚皮モデルにおける被膜組成物の抗菌活性を試験することにより、実験例261を実施した。この試験は、Bushらによる「Pig Skin as Test Substitute for Evaluating Topical Antimicrobial Activity," J. of Clinical Microbiology, p. 343-348 (Sept. 1986).」で報告された試験モデルに基づく。
【０２８０】
採取した豚皮を剃毛、洗浄し、3 x 3 cmの正方形片に切断した。3つの正方形片をマウントに取り付けて、105細胞のMRSA懸濁液0.1mLを接種した。接種菌液が乾燥した後、1つの正方形を、実験例255で作製した被膜組成物約0.5 mLで処理（噴霧）した。
【０２８１】
マウントホルダーを反転させ処理済み皮膚及び未処理の皮膚を寒天表面に押し付けることで、インプリントを作製した。インプリントは、処理の0分前、接種の3分後、10分後、30分後、1時間後、2時間後、及び4時間後に作製した。図34は、これらの時間間隔で作製して、37℃で24時間インキュベートした後の寒天表面の写真を表す。
（実験例262）
【０２８２】
手での塗布をシミュレートした方法で前記組成物を分布させるために、噴霧処理した皮膚をもう一つの接種済み正方形片に塗りつけ、それ以外は同様の方法により実験例261の試験を繰り返した。未処理試料、噴霧処理済み試料、及び塗りつけ処理済み試料のインプリントを、処理の0分前、並びに接種の3分後及び10分後に作製した。図35は、これらの時間間隔で作製して、37℃で24時間インキュベートした後の寒天表面の写真を表す。インプリントを6時間後に作製しても、、微生物コロニーが認められず、持続した有効性が示された。
（実験例263）
【０２８３】
MRSAの代わりにカンジダ菌を豚皮試料に接種し、それ以外は同様の方法により実験例262の試験を繰り返した。インプリントを実験例262と同じ時間間隔で作製した結果、コロニーが形成されず、持続した有効性が示された。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４（Ａ）】
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【図４（Ｂ）】
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【図４（Ｃ）】
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【図４（Ｄ）】
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【図５（Ａ）】
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【図５（Ｂ）】
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【図６（Ａ）】
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【図６（Ｂ）】
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【図６（Ｃ）】
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【図６（Ｄ）】
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【図７（Ａ）】
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【図７（Ｂ）】
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【図７（Ｃ）】
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【図７（Ｄ）】
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【図８（Ａ）】
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【図８（Ｂ）】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４（Ａ）】
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【図１４（Ｂ）】
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【図１４（Ｃ）】
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【図１４（Ｄ）】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９（Ａ）】
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【図２９（Ｂ）】
2016504383.tif 000066
【図２９（Ｃ）】
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【図２９（Ｄ）】
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【図３０（Ａ）】
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【図３０（Ｂ）】
2016504383.tif 000070
【図３０（Ｃ）】
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【図３０（Ｄ）】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【国際調査報告】
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