(57)【要約】本発明は、蛍光性分子ローター化合物、鉱油および粉砕媒体の混合物を、ボールミリング撹拌にかけるステップと、この混合物を軟膏用の疎水性ビヒクルと合わせるステップとを含む、軟膏を調製するためのプロセスに関する。本発明は、薬学的に許容される担体、および以下の構造式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩2016539932.tif 000051を含む、眼科用製剤にも関する。構造式（Ｉ）中の変数の値および好ましい値は、本明細書に記載されている。
2016539932.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼科用軟膏を調製するためのプロセスであって：
（ａ）蛍光性分子ローター化合物を研和剤としての鉱油と合わせ、それによって第１の混合物を得るステップと；
（ｂ）前記第１の混合物を、粉砕媒体を用いてボールミリング撹拌にかけ、それによって第２の混合物を得るステップと；
（ｃ）前記第２の混合物を疎水性ビヒクルと合わせ、それによって軟膏を得るステップと
を含むプロセス。
【請求項２】
前記第２の混合物が蛍光性分子ローター化合物の粒子を含み、前記粒子が約２０ミクロン未満のｄ（０．９５）粒子サイズを特徴とするサイズ分布を有する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
ボールミリング撹拌のための前記粉砕媒体が、少なくとも３ｍｍの平均サイズを有するビーズを含む、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４】
前記粉砕媒体体積とボールミリング容器体積の比が約０．０５〜約０．３５の範囲である、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５】
前記粉砕媒体が、マグネシア安定化ジルコニア、ケイ酸ジルコニウム、ジルコニア安定化アルミナ、アルミナ−ジルコニア複合体、ｂｕｒｕｎｄｕｍおよびイットリウム安定化ジルコニアからなる群から選択されるセラミックである、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６】
前記粉砕媒体がイットリウム安定化ジルコニアである、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記第２の混合物が、臨界ミル速度の約５０％〜約７０％で撹拌される、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項８】
前記疎水性ビヒクルが、ペトロラタム、鉱油、ポリグリコール、シリコーン油、フルオロカーボン、ラノリン、ゲル状鉱油および界面活性剤のうちの１つまたは複数から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項９】
前記疎水性ビヒクルが、ペトロラタムおよび鉱油のうちの１つまたは複数から選択される、請求項８に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記第１の混合物を形成させる前に、前記蛍光性分子ローター化合物および前記鉱油を照射するステップをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記第１の混合物を照射するステップをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記蛍光性分子ローター化合物が、以下の構造式（Ｉ）を有する化合物または薬学的に許容されるその塩である：
【化３１】
2016539932.tif 000036
（式中、
Ａ１は、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１８アリーレン、任意選択で置換されたＣ５〜Ｃ１８ヘテロアリーレンであるか、または以下の構造式：
【化３２】
2016539932.tif 000037
で表され、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであるか、またはＲ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ５は、−ＯＨ、任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＮＲ６Ｒ７であるか、または以下の構造式：
【化３３】
2016539932.tif 000038
で表され、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立に、水素、メチル、エチルであるか、またはＲ６とＲ７は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個の環ヘテロ原子を含む５〜７員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
ｙは１〜１０の整数であり；
Ｒ８は、出現ごとに独立に、水素、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ９は、水素、−ＮＲ１０Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルであり；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである）、前記請求項のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１３】
Ａ１が、任意選択で置換されたフェニル、任意選択で置換されたナフチル、任意選択で置換された（Ｅ）−スチルベンまたは任意選択で置換された（Ｚ）−スチルベンからなる群から選択される、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
Ａ１が任意選択で置換されたナフチルである、請求項１２または請求項１３に記載のプロセス。
【請求項１５】
Ｒ１とＲ２が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成している、請求項１２から１４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１６】
Ｒ５が
【化３４】
2016539932.tif 000039
である、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１７】
Ｒ５が
【化３５】
2016539932.tif 000040
であり；
ｙは３であり；
Ｒ９はメチルである、請求項１２から１６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１８】
前記蛍光性分子ローター化合物が、以下の構造式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）を有する化合物あるいは薬学的に許容されるその塩である：
【化３６】
2016539932.tif 000041
（式中、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素、−ＯＨまたは任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である）、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１９】
前記蛍光性分子ローター化合物が、
【化３７】
2016539932.tif 000042
【化３８】
2016539932.tif 000043
【化３９】
2016539932.tif 000044
からなる群から選択される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項２０】
眼科用軟膏を調製するためのプロセスであって：
（ａ）以下の構造式の蛍光性分子ローター化合物：
【化４０】
2016539932.tif 000045
を研和剤としての鉱油と合わせ、それによって第１の混合物を得るステップと；
（ｂ）前記第１の混合物をボールミリング撹拌にかけ、それによって第２の混合物を得るステップと；
（ｃ）前記第２の混合物を疎水性ビヒクルと合わせ、それによって軟膏を得るステップと
を含むプロセス。
【請求項２１】
有効量の以下の構造式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩：
【化４１】
2016539932.tif 000046
（式中、
Ａ１は任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１８アリーレン、任意選択で置換されたＣ５〜Ｃ１８ヘテロアリーレンであるか、または以下の構造式：
【化４２】
2016539932.tif 000047
で表され、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであるか、またはＲ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ５は、−ＯＨ、任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＮＲ６Ｒ７であるか、または以下の構造式：
【化４３】
2016539932.tif 000048
で表され、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立に、水素、メチル、エチルであるか、またはＲ６とＲ７は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個の環ヘテロ原子を含む５〜７員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
ｙは１〜１０の整数であり；
Ｒ８は、出現ごとに独立に、水素、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ９は、水素、−ＮＲ１０Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルであり；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである）
および薬学的に許容される担体を含む眼科用軟膏。
【請求項２２】
有効量の以下の構造式（ＩＩ）の化合物：
【化４４】
2016539932.tif 000049
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであるか、またはＲ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ５は、−ＯＨ、任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＮＲ６Ｒ７であるか、または以下の構造式：
【化４５】
2016539932.tif 000050
で表され、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立に、水素、メチル、エチルであるか、またはＲ６とＲ７は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個の環ヘテロ原子を含む５〜７員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３は水素、−ＯＨまたは任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；
ｙは１〜１０の整数であり；
Ｒ８は、出現ごとに独立に、水素、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ９は、水素、−ＮＲ１０Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルである）
および薬学的に許容される担体を含む眼科用軟膏。
【請求項２３】
請求項１から２０のいずれかに記載のプロセスによって得られる眼科用軟膏。
【請求項２４】
神経変性疾患の診断のための、請求項２０から２３のいずれかに記載の眼科用軟膏の使用。
【請求項２５】
前記神経変性障害がアミロイド形成障害である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記アミロイド形成障害が、アルツハイマー病（ＡＤ）、家族性ＡＤ、散発性ＡＤ、クロイツフェルト・ヤコブ病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病、海綿状脳症、プリオン病（スクレイピー、ウシ海綿状脳症および他の獣医学的プリオノパシーを含む）、パーキンソン病、ハンチントン病（およびトリヌクレオチドリピート病）、筋萎縮性側索硬化症、ダウン症候群（トリソミー２１）、ピック病（前頭側頭認知症）、レビー小体病、脳の鉄沈着を伴う神経変性（ハレルフォルデン・スパッツ病）、シヌクレイン病（パーキンソン病、多系統萎縮症、レビー小体を伴う認知症、その他を含む）、神経核内封入体病、タウオパチー（進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、遺伝性前頭側頭認知症（パーキンソニズムを伴うかまたは伴わない）およびグアム筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症コンプレックスを含む）から選択される、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記診断が、眼の核上領域および／または皮質水晶体領域中のアミロイド凝集体の量を決定するステップを含む、請求項２３から２６のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１３年１０月３１日に出願された、米国仮出願第６１／８９８，１３１号の利益を主張する。上記出願の全教示を、参照により本明細書に組み込む。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
疾患および疾患の危険性の早期診断および検出は、一般に、疾患の予後を良くし、治療の選択肢を広くする。最近、眼の水晶体を分析すると、様々な種類の疾患の兆候を得ることができることが発見されている。例えば、アミロイド形成障害などの神経変性疾患は、最近、眼の核上領域および／または皮質水晶体領域における凝集体の存在またはその量の増大と関連付けられている。アミロイド形成障害の一例はアルツハイマー病（ＡＤ）であり、これは、記憶喪失、人格変化および理由付けの障害を含む認知能力の進行性の消失を特徴とする。神経変性疾患の診断および検出のための、革新的な製剤、ならびに眼科用製剤および診断用軟膏などの製剤を調製するためのプロセスは、これらの健康問題の負担を軽減する助けとなる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
発明の要旨
本明細書で記載し特許請求する方法によって製造した場合、蛍光性分子ローター化合物を含む軟膏は、有利な特性（例えば、粒子含量の均一性）を有することをここに発見した。例えば、本明細書で記載し特許請求する方法を使用することによって、特に診断目的で、被験体の眼において使用するのに適した軟膏が得られることを見出した。本方法は、蛍光性分子ローター化合物の場合に特に有利であることが分かった。本方法を適用することによって、微粒子形態で提供される蛍光性分子ローター化合物は、化合物材のそれほどの損失なく、均一な粒子サイズ分布を有する粒子の混合物に転換される。例示的な実施形態では、蛍光性分子ローター化合物を含む眼科用製剤を調製するためのプロセスは、アミロイド形成障害を診断し、その疾患の危険性を評価するのに有用な製剤を提供する。いくつかの実施形態では、アミロイド形成障害を診断し、その疾患の危険性を評価するのに使用される眼科用製剤は軟膏である。例えば、本発明の軟膏は：
（ａ）蛍光性分子ローター化合物を研和剤としての鉱油と合わせ、それによって第１の混合物を得るステップと；
（ｂ）その第１の混合物を、粉砕媒体を用いてボールミリング撹拌にかけ、それによって第２の混合物を得るステップと；
（ｃ）その第２の混合物を疎水性ビヒクルと合わせ、それによって軟膏を得るステップと
を含む方法で製造することができる。
【０００４】
一実施形態では、その蛍光性分子ローター化合物は、構造式（Ｉ）または薬学的に許容されるその塩：
【化１】
2016539932.tif 000003
（式中、
Ａ１は、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１８アリーレン、任意選択で置換されたＣ５〜Ｃ１８ヘテロアリーレンであるか、または以下の構造式：
【化２】
2016539932.tif 000004
で表され；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであるか、またはＲ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ５は、−ＯＨ、任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＮＲ６Ｒ７であるか、または以下の構造式：
【化３】
2016539932.tif 000005
で表され、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立に、水素、メチル、エチルであるか、またはＲ６とＲ７は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個の環ヘテロ原子を含む５〜７員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
ｙは１〜１０の整数であり；
Ｒ８は、出現ごとに独立に、水素、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ９は、水素、−ＮＲ１０Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルであり；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである）
で表される。
【０００５】
いくつかの実施形態では、本発明は軟膏、好ましくは眼科用軟膏を調製するためのプロセスであって：
ａ）以下の構造式の蛍光性分子ローター化合物：
【化４】
2016539932.tif 000006
を研和剤としての鉱油と合わせ、それによって第１の混合物を得るステップと；
ｂ）その第１の混合物をボールミリング撹拌にかけ、それによって第２の混合物を得るステップと；
ｃ）その第２の混合物を疎水性ビヒクルと合わせ、それによって軟膏を得るステップと
を含むプロセスに関する。
【０００６】
いくつかの実施形態では、本発明は、構造式（Ｉ）、構造式（ＩＩ）、構造式（ＩＩＩ）で表される蛍光性分子ローター化合物または薬学的に許容されるその塩および薬学的に許容される担体を含む眼科用製剤に関する。
【０００７】
特定の実施形態では、ボールミリング撹拌にかけられる蛍光性分子ローター化合物および鉱油を含む眼科用軟膏を調製するためのプロセスは、他のプロセスで調製される製剤と比較して、内容物の高度の均一性を有する製剤を提供する。内容物の高度の均一性は、蛍光性分子ローター化合物粒子の粒子サイズの均一性および分散の均一性を含むことができる。例えば、蛍光性分子ローター化合物の粒子は、約１０ミクロン未満のｄ（０．９５）粒子サイズを特徴とするサイズ分布を有する。例えば、本プロセスが、ボールミリング撹拌のために、少なくとも３ｍｍの平均粒子サイズを有する粉砕媒体または粉砕ビーズを含む場合、粒子の分散性および粒子サイズの均一性を高めることができる。
【０００８】
ボールミリング撹拌を含む本発明のプロセスによって調製される眼科用製剤および軟膏は、より安定で均一な製剤を提供することができ、したがって、眼への製剤の投与を容易にし、より正確な活性化合物の投与を可能にすることができる。さらに、その均一な粒子サイズ分布は、例えば眼に対する炎症性が、他のプロセスを用いて調製された製剤より、潜在的に少ない製剤を提供することを実行可能にする。いくつかの実施形態では、この製剤は、アミロイド形成障害を診断するための眼の検査において有用である。好ましい実施形態では、製剤は、眼の検査におけるアミロイド形成障害の診断およびその疾患の危険性の評価を助けるのに有用である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
発明の詳細な説明
本発明の例示的な実施形態の説明は以下の通りである。
用語解説
【００１０】
単独かまたは「ハロアルキル」もしくは「アルコキシアルキル」などのより大きい部分の一部として使用される「アルキル」は、特定された数の炭素を有する、代表的には１〜１２個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の飽和脂肪族基を指す。より具体的には、脂肪族基は１〜８個、１〜６個または１〜４個の炭素原子を有することができる。アルキルは、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどの基によって例示される。
【００１１】
「ヘテロアルキル」は、窒素、酸素および硫黄から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する１〜１２員の直鎖状または分枝状の飽和脂肪族基を指す。ヘテロアルキル基の例には、エチレンジアミン、ヘキシルアミンなどが含まれる。
【００１２】
「シクロアルキル」は、３〜１２員の完全に飽和または部分的に不飽和の単環式環系を指す。シクロアルキル基の例には、シクロヘキサン、シクロペンタン、シクロウンデカンなどが含まれる。
【００１３】
「ヘテロシクロアルキル」は、窒素、酸素および硫黄から独立に選択される１〜３個の環ヘテロ原子を含む３〜７員の完全に飽和または部分的に不飽和の単環式環系を指す。任意選択で置換されたヘテロシクロアルキル基の例には、ピペリジン、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルピペリジン、モルホリン、ピペラジン、スクシンイミドなどが含まれる。
【００１４】
「ハロゲン」および「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。
【００１５】
「シアノ」は基−ＣＮを指す。
【００１６】
「カルボニル」は二価の−Ｃ（Ｏ）−基を指す。
【００１７】
「アリール」は、単環または複数の縮合した環を有する６〜１８個の炭素原子の芳香族炭素環式基を指す。「アリール」という用語は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基と縮合した芳香族炭素環も含む。アリール基の例には、フェニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール、ナフチル、フェナントレニルなどが含まれる。
【００１８】
「アリーレン」は上記に定義したような二置換アリール基を指す。
【００１９】
「ヘテロアリール」は、窒素、酸素および硫黄から独立に選択される１〜４個の環ヘテロ原子を含む５〜１８員の単環式、二環式または三環式の複素芳香族環系を指す。「ヘテロアリール」という用語は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基と縮合した複素芳香環も含む。ヘテロアリール基の具体的な例には、任意選択で置換されたピリジル、ピロリル、ピリミジニル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル，１，３，４−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、ベンゾフリル、［２，３−ジヒドロ］ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、ベンゾイミダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサ−ゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル（ｐｔｈａｌａｚｉｎｙｌ）、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル（ｎａｐｔｈｙｒｉｄｉｎｙｌ）、ピリド［３，４−ｂ］ピリジル、ピリド［３，２−ｂ］ピリジル、ピリド［４，３−ｂ］ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、ベンゾキノリルなどが含まれる。
【００２０】
「ヘテロアリーレン」は、上記に定義したような二置換ヘテロアリール基を指す。
【００２１】
「スチルベン」は、ジアリールエテンを指し、以下の構造式：
【化５】
2016539932.tif 000007
によって表される。上記構造式において、波線
【化６】
2016539932.tif 000008
の使用は、置換基Ｒ３およびＲ４が、Ｅの立体配置（ｃｏｎｆｉｇｕａｔｉｏｎ）であってもＺの立体配置であってもよいことを表す。
【００２２】
「アミノ」は−ＮＨ２を意味する。「アルキルアミン」および「ジアルキルアミン」はそれぞれ−ＮＨＲおよび−ＮＲ２を意味する。ここで、Ｒはアルキル基である。
【００２３】
「アルキル」、「シクロアルキル」、「アリーレン」等に適した置換基は、本発明の安定な化合物を形成するものである。適切な置換基の例は、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（５〜７員）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（５〜７員）ヘテロシクロアルキル、（５〜７員）ヘテロシクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、−ＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＯＣＯＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）２、−ＣＯ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＯＣＯ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈまたは−ＣＯ２Ｈからなる群から選択されるものである。例えば、適切な置換基は、水素、メチル、−ＯＭｅ、−Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、１−メチルピペラジンおよび２−モルホリノエタンアミンからなる群から選択することができる。
【００２４】
本明細書で開示する化合物の薬学的に許容される塩は、本発明に包含される。例えば、アミンまたは他の塩基性基を含む化合物の酸性塩は、その化合物を、薬学的に許容されるアニオン塩の形態をもたらす適切な有機酸または無機酸と反応させることによって得ることができる。アニオン塩の例には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、酸性酒石酸塩、ブロミド、エデト酸カルシウム塩、カンシル酸塩、炭酸塩、クロリド、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グリセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（ｇｌｙｃｏｌｌｙｌａｒｓａｎｉｌａｔｅ）、ヘキシルレゾルシネート、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨージド、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩（ｍｕｃａｔｅ）、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシレート、トリエチオジド（ｔｒｉｅｔｈｉｏｄｉｄｅ）およびトリフルオロ酢酸塩が含まれる。
【００２５】
酸性官能基を含む化合物の塩は、適切な塩基と反応させることによって調製することができる。そうした薬学的に許容される塩は、薬学的に許容されるカチオンを与える塩基で作製することができ、それらには、アルカリ金属塩（特にナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属塩（特にカルシウムおよびマグネシウム）、アルミニウム塩およびアンモニウム塩、ならびに生理学的に許容される有機塩基から作製される塩、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、モルホリン、ピリジン、ピペリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、２−ヒドロキシエチルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、プロカイン、ジベンジルピペリジン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ，Ｎ’−ビスデヒドロアビエチルアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、コリジン、キニーネ、キノリン、ならびにリジンおよびアルギニンなどの塩基性アミノ酸が含まれる。
【００２６】
「蛍光性分子ローター化合物」は、化合物構造の一部の、その分子の残りに対する回転によって励起状態を形成する能力を有する化合物である。蛍光性分子ローター化合物の発光は、例えば、その化合物を取り巻くミクロ環境の極性および粘度に依存する。蛍光性分子ローター化合物は、例えば色素凝集、タンパク結合および溶媒相互作用によって回転が束縛された場合に、光子吸収後に蛍光を発する。発光は、蛍光性分子ローター化合物が自由に回転するミクロ環境においては遮断される。
【００２７】
本発明の蛍光性分子ローター化合物は、１つもしくは複数のキラル中心または二重結合をもつことができ、したがって、いくつかの立体異性形態で存在することができる。すべての立体異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、個々の異性体およびその混合物は、本発明の範囲に含まれる。ラセミ化合物は、分取ＨＰＬＣおよびキラル固定相を有するカラムを使用して分離するか、または、当業者に公知の方法を使用して、それを分割して個々のエナンチオマーを得ることができる。さらに、本発明のキラル化合物を調製するために、キラル中間体化合物を分割し使用することができる。
【００２８】
本発明で使用するのに適した蛍光性分子ローター化合物には、限定されないが、蛍光性分子ローター化合物の部類および以下に挙げる特定の蛍光性分子ローター化合物、ならびに式（Ｉ）、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）で表される蛍光性分子ローター化合物が含まれる。
【００２９】
本明細書で使用する「ボールミリング」または「ボールミリング撹拌」という語句は、軸周りに回転して粒子サイズを小さくし、必要なら、その粒子を適切なビヒクル中で分散させる、粉砕媒体と一緒になって粉砕されることになる材料で部分的に満たされた容器を使用する粉砕のプロセスを指す。本発明のボールミリングプロセスは、好ましくは、およそ球状または楕円体状の粒子をもたらす。
【００３０】
本明細書で使用する「ミル速度」は、ボールミリングプロセスにおいて、上記段落で説明したような容器を回転させる速度を指す。すべての粉砕媒体（または粉砕ビーズ）がボールミリング容器の内壁へ押しつけられるミル速度は「臨界ミル速度」であり、臨界ミル速度またはそれ超で所望の粉砕は起こらない。いくつかの実施形態では、ボールミリング撹拌は、臨界ミル速度のあるパーセンテージとして表されるミル速度、例えば臨界ミル速度の３０％より高い速度で行われる。別の実施形態では、ボールミリング撹拌は、臨界ミル速度の約５０％〜約７０％で行われる。
【００３１】
本明細書で使用する「粉砕媒体」または「粉砕ビーズ」は、ボールミリングプロセスで使用される材料、好ましくは不活性材料を指す。いくつかのパラメーターによって、ボールミリングプロセスにおける所与の材料の性能が決定される。一般に、材料は、ミリングプロセスで使用される容器より好ましくは大きい破砕強度および耐摩耗性を有するものが選択される。さらに、適切な粉砕材料は、粉砕プロセスにかけられる材料より高い密度を有する。例えば、粉砕媒体は、セラミック、ガラス、鋼鉄およびめのうを含む材料からなる。例えば、セラミック粉砕材料は、マグネシア安定化ジルコニア、ケイ酸ジルコニウム、ジルコニア安定化アルミナ、アルミナ−ジルコニア複合体、ｂｕｒｕｎｄｕｍおよびイットリウム安定化ジルコニアから選択される。いくつかの実施形態では、粉砕媒体は、球状、ビーズ状、棒状または天然の形状を有していてよい。好ましい実施形態では、粉砕媒体は、セラミックビーズ、好ましくはイットリウム安定化ジルコニアビーズを含む。好ましい実施形態では、粉砕媒体は、０．１〜２５ｍｍの範囲、好ましくは０．５〜１５ｍｍの範囲、より好ましくは２ｍｍ〜１０ｍｍの範囲、さらにより好ましくは３〜８ｍｍの範囲、最も好ましくは４〜６ｍｍの範囲の平均直径を有するビーズを含む。別の実施形態では、粉砕媒体は、５ｍｍの直径を有するビーズを含む。好ましくは、粉砕媒体は、５ｍｍの直径を有するセラミックビーズを含む。いくつかの実施形態では、より大きいビーズサイズは、より小さいビーズサイズより好ましい。特に、そうした実施形態では、２ｍｍ超の直径、好ましくは４〜１０ｍｍの直径のビーズサイズを使用することが好ましい可能性がある。いくつかの実施形態では、そうしたより大きいビーズサイズは、均一な粒子サイズ分布を確実にするためにやはり好ましい、より小さい粒子サイズが得られるようにすることができる。
【００３２】
本明細書で使用する、粒子の「サイズ分布」は、目的の試料中のすべてのサイズの総数のパーセンテージとして与えられる種々のサイズ範囲のそれぞれに含まれる、上記に定義したような第１の混合物または第２の混合物中の粒子の数を指す。粒子のサイズ分布の重要な特性は、それより下で粒子の９５体積％が見出される、ミクロンでのサイズであるｄ（０．９５）である。したがって、１０ミクロン（μｍ）未満のｄ（０．９５）は、組成物中の粒子の９５体積パーセントが、直径１０ミクロン未満の直径を有することを意味する。本発明の好ましい実施形態では、それぞれ、第２の混合物または眼科用軟膏中の粒子の少なくとも９０％、ｄ（０．９）、好ましくは少なくとも９５％、ｄ（０．９５）、さらにより好ましくは少なくとも９９％、ｄ（０．９９）が、１０μｍ未満の直径を有する。ここで、その粒子の１０％未満、好ましくは５％未満、より好ましくは２％未満は５μｍ未満の直径を有する。
【００３３】
本明細書で使用する「中央粒径」は、その粒径に関して、目的の試料中の粒子の５０％がそれより小さい直径を有し、粒子の５０％がそれより大きい直径を有する粒径を指す。例えば、１０μｍ未満のｄ（０．５）は、組成物中の粒子の５０体積％が直径１０μｍ未満を有することを意味し、これは、１０μｍ未満の中央粒径に相当する。中央粒径は、目的の試料中の粒子のすべてのサイズの中央にある粒径を表す。一実施形態では、中央粒径は、１０μｍ未満、好ましくは９μｍ未満、より好ましくは８μｍ未満、さらにより好ましくは７μｍ未満であり、最も好ましくは６μｍ未満である。好ましくは、中央粒径は２〜１０μｍの範囲、より好ましくは３〜８μｍの範囲であり、さらにより好ましくは４〜７μｍである。最も好ましくは、中央粒径は４〜６μｍである。そうした好ましい中央粒子サイズについて、粒子のサイズ分布も、特定の値、好ましくは１０μｍ未満のｄ（０．９０）、より好ましくはｄ（０．９５）の値を有する。
【００３４】
本明細書で使用する「疎水性ビヒクル」は、水に不溶性であるか、または非常に限られた溶解度しかもたない任意のビヒクルまたはビヒクルの混合物を含む。疎水性ビヒクルは、例えば、眼への投与に適している。特に、疎水性ビヒクルは眼組織に許容されるものである。疎水性ビヒクルは非水性媒体でもある。例えば、疎水性ビヒクルは、ペトロラタム、鉱油、ポリグリコール、シリコーン油、フルオロカーボン、ラノリン、ゲル状鉱油および界面活性剤のうちの１つまたは複数から選択される。
【００３５】
「ペトロラタム」は、石油から得られる飽和炭化水素の半固体混合物である。例えば、ペトロラタムには、ワセリン（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ  ｊｅｌｌｙ）、白色ワセリン（ｗｈｉｔｅ  ｐｅｔｒｏｌａｔｕｍ）、白色石油、黄色ワセリン（ｙｅｌｌｏｗ  ｐｅｔｒｏｌａｔｕｍ）、赤色ワセリン（ｒｅｄ  ｐｅｔｒｏｌａｔｕｍ）、軟パラフィン、パラフィンゼリーおよびミネラルゼリーが含まれる。
【００３６】
「鉱油」は、非植物性（鉱物性）供給源からのＣ１５〜Ｃ４０アルカンの混合物である。例えば、鉱油は、好ましくはパラフィン系オイル、より好ましくはナフテン油、またはさらにより好ましくは芳香油である。例えば、鉱油には、ヌジョール、軽質鉱油、重質鉱油、パラフィン油および流動ワセリン（ｌｉｑｕｉｄ  ｐｅｔｒｏｌａｔｕｍ）が含まれる。いくつかの実施形態では、軽質鉱油は、２５℃で約０．８３〜約０．８６ｇ／ｍＬの密度を有する。いくつかの実施形態では、重質鉱油は、２５℃で約０．８７５〜約０．９０５ｇ／ｍＬの密度を有する。
【００３７】
「ポリグリコール」は、合成潤滑油ベースとして使用されるエチレンオキシド、プロピレンオキシドまたはブチレンオキシドのポリマーである。例えば、ポリグリコールには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、例えば約４００〜約４０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するもの）、メトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリブチレングリコール（ＰＢＧ）が含まれる。ＰＥＧには、例えばポリエチレングリコール４０ステアレート（ＰＥＧ−４０ステアレート）などのＰＥＧ誘導体も含まれる。
【００３８】
「シリコーン油」は、有機側鎖を有する液体重合化シロキサンである。例えば、２５℃で約５センチストークス〜約１００，０００センチストークスの範囲の粘度を有する、以下の構造式：
【化７】
2016539932.tif 000009
の単位を含むポリマーは、ジメチコーンおよびポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）とも称される。例えば、シリコーン油には、メチコン（モノメチル化された直鎖状シロキサンポリマー）ならびにジメチコーンおよびメチコンの直鎖状シロキサンポリマーの誘導体が含まれる。
【００３９】
「フルオロカーボン」は、炭素原子、フッ素原子、および水素などのフッ素ではない少なくとも１個の原子からなる分子である。特定の実施形態では、フルオロカーボンは、ペルフルオロカーボンではない。すなわちどの水素もフッ素原子で置き換えられているフルオロカーボンではない。例えば、フルオロカーボンには、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ−１３４ａもしくはＨＣＦＣ−１３４ａまたはＣ２Ｈ２Ｆ４）、１−クロロ−２，２，２−トリフルオロエタン（ＨＦＣ−１３３ａまたはＣ２Ｈ２Ｆ３Ｃｌ）、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン（ＨＦＡ−２３６ｆａまたはＣ３Ｈ２Ｆ６）および１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＣ−２２７ｅａまたはＣ３ＨＦ７）が含まれる。
【００４０】
「ラノリン」は、羊毛担持動物によって分泌されるろう様物質を指し、それはラノリン誘導体を包含する。例えば、ラノリンには、ラノリン、ラノリンワックス、ラノリンアルコール、ＰＥＧ−７５ラノリン、アセチル化ラノリン、ヒドロキシル化ラノリン、イソプロピルラノレートおよびアセチル化ラノリンアルコールが含まれる。
【００４１】
「ゲル状鉱油」は、ゲルを形成するための鉱油および水素化コポリマーを含む。水素化コポリマーの例には、水素化ブチレン／エチレン／スチレン（ｓｔｒｙｒｅｎｅ）コポリマーおよび水素化エチレン／プロピレン／スチレンコポリマーが含まれる。ゲル状鉱油の例には、Ｐｌａｓｔｉｂａｓｅ  ５０Ｗ（商標）およびＶｉｓｃＵｐ（登録商標）１６０（Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれる。
【００４２】
本明細書で使用する「界面活性剤」という用語は、表面活性剤、すなわち、その物質が溶解される液体の表面張力を低下させる傾向がある物質を指す。適切な界面活性剤には、ポリソルベート、ポロクサマー、Ｔｒｉｔｏｎ、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびベタインが含まれる。例えば、界面活性剤には、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（例えば、Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈからのＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、ポロクサマー１８８、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー（例えばＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈからのＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８）、ポリエチレングリコール６６０−１２−ヒドロキシステアレート（Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５、ＢＡＳＦ）、コカミドプロピルベタイン、リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、セチルベタイン、ポリエトキシ化ひまし油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、現在Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＢＡＳＦ）およびレシチンが含まれる。
【００４３】
軟膏および眼科用製剤は、蛍光性分子ローター化合物および医薬組成物の一部としての「薬学的に許容される担体」と一緒に被験体に投与することができる。薬学的に許容される担体は、その化合物と相互作用をしない不活性構成要素を含むことができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに記載されているものなどの標準的な医薬製剤技術を使用することができる。眼科用製剤用の薬学的に許容される担体には、例えば、ペトロラタム、鉱油、ポリグリコール、シリコーン油、フルオロカーボン、ラノリン、ゲル状鉱油および界面活性剤が含まれる。
【００４４】
「保存剤」は、製剤における細菌活性または望ましくない化学変化を低減するために、その製剤に加えることができる化合物である。保存剤の例には、ベンジルアルコール、エタノール、メタノール、イソプロパノール、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、カテコール（ｃａｔｈｅｃｈｏｌ）、２−クロロフェノール、ｍ−クレゾール、フェノール、レゾルシノール、キシリトール、２，６−ジメチルシクロヘキサノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、ポリビニルピロリドン、塩化ベンゼトニウム、メルチオレート（チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｓｏｓａｌ））、安息香酸、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウムおよび塩化セチルピリジニウムが含まれる。
【００４５】
本明細書で使用する「有効量」は、標的障害を診断するまたはその危険性を評価するのに十分な蛍光性分子ローター化合物の量を指す。有効量の例は、代表的に、約０．０００１ｍｇ／体重ｋｇ〜約５００ｍｇ／体重ｋｇの範囲である。当業者は、体重および蛍光性分子ローター化合物の特性をもとにして有効量を決定することができる。
【００４６】
本明細書で使用する「被験体」という用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指すが、獣医学的な診断または危険性評価を必要とする動物、例えばコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）を意味することもできる。
【００４７】
蛍光性分子ローター化合物を含む軟膏は、本明細書で記載し特許請求する方法で製造した場合、有利な特性（例えば、粒子含量の均一性）を有しており、そこでは、これらの特性は、軟膏を、眼組織への投与、好ましくは水晶体への投与に特に適したものにすることをここに発見した。例えば、本発明の軟膏は：
（ａ）蛍光性分子ローター化合物を研和剤としての鉱油と合わせ、それによって第１の混合物を得るステップと；
（ｂ）その第１の混合物を、粉砕媒体を用いてボールミリング撹拌にかけ、それによって第２の混合物を得るステップと；
（ｃ）その第２の混合物を疎水性ビヒクルと合わせ、それによって軟膏を得るステップと
を含む方法で製造することができる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本プロセスは、その粒子が１０ミクロン未満のｄ（０．９）〜ｄ（０．９９）を特徴とするサイズ分布を有する蛍光性分子ローター化合物の粒子を含む第２の混合物を含む。例えば、その粒子は、約１〜約２５ミクロンのｄ（０．９５）粒子サイズを特徴とするサイズ分布を有することができる。例示的な実施形態は、約５〜約２０ミクロンのｄ（０．９５）粒子サイズを特徴とするサイズ分布を有する。例えば、その粒子は、約１０ミクロン未満のｄ（０．９５）粒子サイズを特徴とするサイズ分布を有することができる。
【００４９】
一実施形態では、中央粒子サイズ直径は、１０μｍ未満、好ましくは９μｍ未満、より好ましくは８μｍ未満、さらにより好ましくは７μｍ未満であり、最も好ましくは６μｍ未満である。好ましくは、２〜１０μｍの範囲、より好ましくは３〜８μｍの範囲、さらにより好ましくは４〜７μｍの中央粒径である。最も好ましくは、中央粒径は４〜６μｍである。
【００５０】
蛍光性分子ローター化合物の粒子サイズは、レーザー光回折法、透過型電子顕微鏡法、走査型電子顕微鏡法、光学顕微鏡法、Ｘ線回折法および光散乱法またはコールターカウンター分析法（例えば、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｕｌｋ  Ｓｏｌｉｄｓ」、  Ｄ．  ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５年を参照されたい）によって決定することができる。例えば、蛍光性分子ローター化合物の粒子サイズは、Ｍａｌｖｅｒｎによって製造されている湿式サンプリングシステムモデル番号Ｈｙｄｒｏ  ２０００Ｓを備えた、Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓによって製造されている粒子サイズ分析用のレーザー光回折分析器モデルＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００を使用して決定することができる。すべての試料についてのｄ（０．９５）を、モデルＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００用にＭａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓによって提供されているソフトウェアを使用して計算することができる。
【００５１】
例えば、粉砕媒体は、０．０３ｍｍ、０．０５ｍｍ、０．１ｍｍ、０．２ｍｍ、０．３ｍｍ、０．４ｍｍ、０．５ｍｍ、０．６５ｍｍ、０．８ｍｍ、１ｍｍ、１．２５ｍｍ、１．５ｍｍ、１．７５ｍｍ、２ｍｍ、２．３ｍｍ、２．７ｍｍ、３ｍｍ、５ｍｍ、１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍおよび２５ｍｍの平均サイズまたは直径を有するビーズを含むことができる。いくつかの実施形態では、本プロセスは、少なくとも３ｍｍの平均サイズを有する粒子を含むボールミリング撹拌のための粉砕媒体を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、その粉砕媒体は、マグネシア安定化ジルコニア、ケイ酸ジルコニウム、ジルコニア安定化アルミナ、アルミナ−ジルコニア複合体、ｂｕｒｕｎｄｕｍおよびイットリウム安定化ジルコニアからなる群から選択されるセラミックである。好ましくは、粉砕媒体は、マグネシア安定化ジルコニア、より好ましくはケイ酸ジルコニウム、さらにより好ましくはジルコニア安定化アルミナ、さらにより好ましくはアルミナ−ジルコニア複合体を含み、最も好ましくはｂｕｒｕｎｄｕｍを含む。いくつかの実施形態では、粉砕媒体は、ＹＴＺ（登録商標）粉砕媒体（Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）などのイットリウム安定化ジルコニアである。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本プロセスは、約０．０５〜約０．７の範囲の粉砕媒体体積と鉱油および蛍光性分子ローター化合物の重量の比を含む。例えば、７ｍＬのＹＴＺ（登録商標）粉砕媒体を、約０．６７の比となるように、約１０ｇの鉱油および約０．５ｇの蛍光性分子ローター化合物と混合することができる。いくつかの実施形態では、粉砕媒体体積と鉱油および蛍光性分子ローター化合物の比は約０．２６である。
【００５４】
一実施形態では、疎水性ビヒクルは、ペトロラタム、鉱油、ポリグリコール、シリコーン油、フルオロカーボン、ラノリン、ゲル状鉱油および界面活性剤のうちの１つまたは複数から選択される。いくつかの実施形態では、疎水性ビヒクルは、ペトロラタムおよび鉱油のうちの１つまたは複数から選択される。例えば、疎水性ビヒクルは、重質鉱油と白色石油との組合せであってよい。以下の表１に、本発明の軟膏において使用できる例示的なビヒクル製剤の概要を示す。１列目は製剤名を表し、２列目および３列目は、製剤のグラムごとに使用される成分の量（ｍｇ）の概要を示す。例えば、８０／２０ビヒクルは、８０％白色石油（１ｇの軟膏当たり８００ｍｇの白色石油）と２０％重質鉱油（１ｇの軟膏当たり２００ｍｇの白色石油）を含む。いくつかの実施形態では、眼科用軟膏は、０．５％での化合物１１（ｗ／ｗ、または１ｇの軟膏当たり５ｍｇの化合物１１）、２０％重質鉱油（１ｇの軟膏当たり１９９ｍｇの白色石油）および８０％白色石油（１ｇの軟膏当たり７９６ｍｇの白色石油）を含む。
【００５５】
【表１】
2016539932.tif 000010
【００５６】
いくつかの実施形態では、軟膏を、制御点滴チップ（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｏｐｐｅｒ  ｔｉｐ）を備えた瓶、自然流チップ（ｎａｔｕｒａｌ  ｓｔｒｅａｍ  ｔｉｐ）を備えた瓶、１ｍＬシリンジおよび軟膏を分配するための容器としてのチューブに充填することができる。
【００５７】
軟膏または眼科用製剤は、被験体に投与する前に、当業界で公知の方法で殺菌することができる。例えば、軟膏を、電子線照射で殺菌することができる。いくつかの実施形態では、電子線曝露は、１４ｋＧｙ〜２１ｋＧｙの範囲であってよい。好ましい実施形態では、軟膏を製造し調製する前に、加熱または電子線照射によって軟膏の成分を殺菌する。軟膏を調製するためのプロセスは、ボールミリング撹拌を施す第１の混合物を形成させる前に、蛍光性分子ローター化合物および鉱油を、照射により殺菌するステップを含むこともできる。いくつかの実施形態では、蛍光性分子ローター化合物と鉱油を合わせた後であるがボールミリング撹拌をする前に、第１の混合物を、電子線照射により殺菌することもできる。実施例３に記載する濃度分析で決定されるようにして、照射試料中の蛍光性分子ローター化合物の面積パーセントを、非照射試料と比較することができる。処方および軟膏照射に起因した蛍光性分子ローター化合物の分解を評価するために、照射前後で、蛍光性分子ローター化合物の面積と比較した、関連物質ピークの相対面積の変化を比較することができる。
【００５８】
例えば、本発明の軟膏を調製するためのプロセスは、神経変性疾患を検出し診断する診断目的で使用できる軟膏を含む。本発明のプロセスは、被験体、例えばヒト被験体の眼組織を、アミロイドタンパク質またはプレアミロイドタンパク質凝集体と結合する蛍光性分子ローター化合物と接触させることによって、診断目的で使用できる軟膏を調製するために使用できる。蛍光性分子ローター化合物は、他のβプリーツシート含有タンパク質と比較して、アミロイドタンパク質と優先的に結合する。アミロイド形成障害などの神経変性疾患は、最近、眼の核上領域および／または皮質水晶体領域における凝集体の存在またはその量の増大と関連付けられている。本発明の好ましい実施形態では、軟膏を、診断において、または診断方法において助けとなるように使用する。そうした方法は、眼の核上領域および／または皮質水晶体領域中のアミロイド凝集体の量を決定することを含むことができる。好ましくは、軟膏は、例えば、アミロイド形成障害、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、家族性ＡＤ、散発性ＡＤ、クロイツフェルト・ヤコブ病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病、海綿状脳症、プリオン病（スクレイピー、ウシ海綿状脳症および他の獣医学的プリオノパシーを含む）、パーキンソン病、ハンチントン病（およびトリヌクレオチドリピート病）、筋萎縮性側索硬化症、ダウン症候群（トリソミー２１）、ピック病（前頭側頭認知症）、レビー小体病、脳の鉄沈着を伴う神経変性（ハレルフォルデン・スパッツ病）、シヌクレイン病（パーキンソン病、多系統萎縮症、レビー小体を伴う認知症、その他を含む）、神経核内封入体病、タウオパチー（進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、遺伝性前頭側頭認知症（パーキンソニズムを伴うまたは伴わない）およびグアム筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症コンプレックスを含む）の診断において使用される。これらの障害は、単独でも、また種々の組合せでも起こる可能性がある。凝集体分析は、脳の致命的な海綿状の神経変性を特徴とし、重篤で致命的な神経学的兆候および症状に関係するプリオン媒介疾患である伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）を検出するのにも有用である。ＴＳＥプリオノパシーには、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）；新規の変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｎｖ−ＣＪＤ）；ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（Ｇｅｒｔｓｍａｎｎ−Ｓｔｒａｕｓｓｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｎｋｅｒ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；致死性家族性不眠症；クールー病（Ｋｕｒｕ）；アルパーズ症候群；ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）；スクレイピー；および慢性消耗病（ＣＷＤ）が含まれる。
【００５９】
例えば、軟膏および眼科用製剤は、眼の中のアミロイドペプチドを検出するために、アミロイド結合性の生物学的に利用可能な脂溶性蛍光性分子ローター化合物を利用することができる。脳組織（眼組織ではない）を分析するのに使用されている蛍光性分子ローター化合物の例には、Ｘ−３４および｛（ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ）−１−ブロモ−２，５−ビス−（３−ヒドロキシカルボニル−４−ヒドロキシ）スチリルベンゼン（（ｔｒａｎｓ，  ｔｒａｎｓ）−１−ｂｒｏｍｏ−２，５−ｂｉｓ−（３−ｈｙｄｒｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−４−ｈｙｒｄｏｘｙ）ｓｔｙｒｌｂｅｎｚｅｎｅ）（ＢＳＢ）｝（Ｓｔｙｒｅｎら、２０００年、Ｊ．  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．、４８巻：１２２３〜１２３２頁；Ｌｉｎｋら、２００１年、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  Ａｇｉｎｇ、２２巻：２１７〜２２６頁；およびＳｋｏｖｒｏｎｓｋｙら、２０００年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．、Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．、９７巻（１３号）：７６０９〜７６１４頁）が含まれる。これらの蛍光性分子ローター化合物は青色〜緑色の範囲の光を発する。したがって、診断上関連する蛍光のレベルは、青色〜緑色の範囲におけるヒト水晶体自己蛍光の量を上回る。例えば、他の有用な蛍光性分子ローター化合物には、Ｍｅ−Ｘ０４（１，４−ビス（４’−ヒドロキシスチリル）−２−メトキシベンゼン）、クリサミンまたはクリサミン誘導体化合物、例えば｛（ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ）−１−ブロモ−２，５−ビス−（３−ヒドロキシカルボニル−４−ヒドロキシ）スチリルベンゼン（ＢＳＢ）｝が含まれる。そうした化合物は、Ｍａｔｈｉｓら、Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．、１０巻（１３号）：１４６９〜９３頁（２００４年）；米国特許第６，４１７，１７８号、同第６，１６８，７７６号、同第６，１３３，２５９号；および同第６，１１４，１７５号に記載されている。そのそれぞれを、その全体において、参照により本明細書に組み込む。非特異的なアミロイド親和性（ａｍｙｌｏｉｄｐｈｉｌｉｃ）の蛍光性分子ローター化合物、例えばチオフラビンＴ、チオフラビンＳまたはコンゴーレッド染料も使用することができる。例えば、以下の構造式：
【化８】
2016539932.tif 000011
および
【化９】
2016539932.tif 000012
は、蛍光性分子ローター化合物である可能性がある。
【００６０】
一実施形態では、蛍光性分子ローター化合物は、構造式（Ｉ）または薬学的に許容されるその塩：
【化１０】
2016539932.tif 000013
（式中、
Ａ１は、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１８アリーレン、任意選択で置換されたＣ５〜Ｃ１８ヘテロアリーレンであるか、または、以下の構造式：
【化１１】
2016539932.tif 000014
で表され、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであるか、またはＲ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ５は、−ＯＨ、任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＮＲ６Ｒ７であるか、または以下の構造式：
【化１２】
2016539932.tif 000015
で表され、
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立に、水素、メチル、エチルであるか、またはＲ６とＲ７は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個の環ヘテロ原子を含む５〜７員のヘテロシクロアルキルを形成しており；
ｙは１〜１０の整数であり；
Ｒ８は、出現ごとに独立に、水素、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ９は、水素、−ＮＲ１０Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルまたは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルであり；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである）
によって表される。
【００６１】
いくつかの実施形態では、Ａ１は、任意選択で置換されたフェニル、任意選択で置換されたナフチル、任意選択で置換された（Ｅ）−スチルベンまたは任意選択で置換された（Ｚ）−スチルベンからなる群から選択される。別の実施形態では、Ａ１は任意選択で置換されたナフチルである。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６２】
好ましい実施形態では、眼科用（ｏｐｔｈｔｈａｌｍｉｃ）軟膏を調製するためのプロセスにおいて使用される蛍光性分子ローター化合物は、構造式（ＩＩ）による化合物である。式（ＩＩ）の化合物は、Ａ１が以下の構造式：
【化１３】
2016539932.tif 000016
で表される式（Ｉ）の化合物であり、以下の構造式（ＩＩ）または薬学的に許容されるその塩：
【化１４】
2016539932.tif 000017
（式中、Ｒ１３は水素、−ＯＨまたは任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である）
によって表される。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６３】
好ましい実施形態では、眼科用軟膏を調製するためのプロセスにおいて使用される蛍光性分子ローター化合物は、構造式（ＩＩＩ）による化合物である。式（ＩＩＩ）の化合物は、Ａ１が以下の構造式：
【化１５】
2016539932.tif 000018
で表される式（Ｉ）の化合物であり、以下の構造式（ＩＩＩ）または薬学的に許容されるその塩：
【化１６】
2016539932.tif 000019
（式中、Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素、−ＯＨまたは任意選択で置換された−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である）
によって表される。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１とＲ２はどちらも任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１とＲ２はどちらも、メチル、エチル、プロピルおよびブチルからなる群から選択される。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成している。別の実施形態では、Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、ピペリジン、モルホリン、ピペラジンおよび１−メチルピペラジンからなる群から選択されるヘテロシクロアルキルを形成している。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６６】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、
【化１７】
2016539932.tif 000020
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６７】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、
【化１８】
2016539932.tif 000021
であり；
ｙは１であり；
Ｒ８は−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ９は−ＯＨである。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６８】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、
【化１９】
2016539932.tif 000022
であり；
ｙは３であり；
Ｒ９はメチルである。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００６９】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、
【化２０】
2016539932.tif 000023
であり；
ｙは４であり；
Ｒ９はメチルである。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７０】
いくつかの実施形態では、Ａ１は、任意選択で置換されたフェニル、任意選択で置換されたナフチル、任意選択で置換された（Ｅ）−スチルベンまたは任意選択で置換された（Ｚ）−スチルベンからなる群から選択され；Ｒ１とＲ２はどちらも任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；Ｒ５は、
【化２１】
2016539932.tif 000024
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７１】
いくつかの実施形態では、Ａ１は、任意選択で置換されたフェニル、任意選択で置換されたナフチル、任意選択で置換された（Ｅ）−スチルベン、または任意選択で置換された（Ｚ）−スチルベンからなる群から選択され；Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；Ｒ５は、
【化２２】
2016539932.tif 000025
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７２】
いくつかの実施形態では、Ａ１は任意選択で置換されたフェニルであり；Ｒ１とＲ２はどちらも任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；Ｒ５は、
【化２３】
2016539932.tif 000026
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７３】
いくつかの実施形態では、Ａ１は任意選択で置換されたフェニルであり；Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；Ｒ５は、
【化２４】
2016539932.tif 000027
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７４】
いくつかの実施形態では、Ａ１は任意選択で置換されたナフチルであり；Ｒ１とＲ２はどちらも任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；Ｒ５は
【化２５】
2016539932.tif 000028
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７５】
いくつかの実施形態では、Ａ１は、任意選択で置換されたナフチルであり；Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、任意選択で置換された３〜１２員のヘテロシクロアルキルを形成しており；Ｒ５は、
【化２６】
2016539932.tif 000029
である。
変数の残りの値および好ましい値は、式（Ｉ）に関連して上記および以下に定義する通りである。
【００７６】
いくつかの実施形態では、蛍光性分子ローター化合物は：
【化２７】
2016539932.tif 000030
【化２８】
2016539932.tif 000031
【化２９】
2016539932.tif 000032
からなる群から選択される。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本発明は、有効量の以下の構造式（Ｉ）、構造式（ＩＩ）または構造式（ＩＩＩ）の化合物あるいは薬学的に許容されるその塩：
【化３０】
2016539932.tif 000033
および薬学的に許容される担体を含む眼科用製剤に関する。
【００７８】
構造式（Ｉ）の蛍光性分子ローター化合物は、当業者に公知の任意の方法で合成することができる。例えば、適切な蛍光性分子ローター化合物は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１１／０７２２５７（これを、その全体において、参照により本明細書に組み込む）に記載されている方法で合成することができる。
【実施例】
【００７９】
例示
（実施例１）
鉱油中での蛍光性分子ローター化合物の混合物のためのボールミリング撹拌条件の最適化
ボールミリング撹拌に使用される粉砕媒体の粒子サイズが、蛍光性分子ローター化合物の粒子サイズに影響を及ぼしているかどうかをテストするために、実験を実施した。重質鉱油中の化合物１１  ＨＣｌ塩の混合物を、０．５ｍｍ、２ｍｍおよび５ｍｍの平均直径を有する粉砕媒体ＹＴＺ（登録商標）ビーズを用いてボールミリング撹拌にかけた。
【００８０】
０．５ｍｍの平均直径を有する５．０７０３ｇのＹＴＺ（登録商標）ビーズ（イットリウム安定化ジルコニアセラミック粉砕媒体、Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）、０．５０４３ｇの化合物１１  ＨＣｌ塩および９．９７７５ｇの重質鉱油（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）からなる粉砕媒体を、２０ｍＬ琥珀色ガラス瓶に加えた。混合物を含む瓶を、ボールミリング撹拌のため、２５の速度設定（約５０ｒｐｍに相当する）で、ＵＳ  Ｓｔｏｎｅｗａｒｅボールミル（ＳＮ  ＣＺ−９２０４０）上に１日間置いた。目視検査により、１日後に化合物１１塩の大きい塊が残留しているのが認められた。ボールミリング撹拌をさらに３日間続行しても（合計４日間）、外観はそれほど変化しなかった。ボールミリング撹拌の時間量を増大させても化合物１１の粒子サイズに影響を及ぼさなかったので、追加の２０．７３ｇのＹＴＺ（登録商標）粉砕媒体をその混合物に加えた。次いで、混合物を、さらにもう１日ボールミリング撹拌にかけた。その後、化合物１１塩の大きい塊の大部分は消失した。
【００８１】
５ｍｍおよび２ｍｍの平均直径を有するより大きいサイズのＹＴＺ（登録商標）粉砕媒体（イットリウム安定化ジルコニアセラミック粉砕媒体、Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いてさらなる実験を実施して、粉砕媒体の粒子サイズの増大が、ボールミリング撹拌の時間を短縮できるかどうかを評価した。１０．２２ｇの、５ｍｍの平均直径を有するＹＴＺ（登録商標）ビーズ（Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）、０．５０４８ｇの化合物１１  ＨＣｌ塩および１０．０２ｇの重質鉱油（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の混合物を２０ｍＬ琥珀色ガラス瓶に加え、次いで、ＵＳ  Ｓｔｏｎｅｗａｒｅボールミルを使用して３日間、ボールミリング撹拌にかけた。５．０９ｇの、２ｍｍの平均直径を有するＹＴＺ（登録商標）ビーズ（Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）、０．５０１３ｇの化合物１１  ＨＣｌ塩および９．９４ｇの重質鉱油（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の混合物を２０ｍＬ琥珀色ガラス瓶に加え、次いで、ＵＳ  Ｓｔｏｎｅｗａｒｅボールミルを使用して３日間、ボールミリング撹拌にかけた。目視検査により、２ｍｍ  ＹＴＺ（登録商標）ビーズと比較して、粉砕媒体として５ｍｍのものを使用したプロセスは、３日間のボールミリング撹拌後、より均一な混合物を生成することが示された。より大きい平均ビーズ直径（２ｍｍおよび０．５ｍｍに対して５ｍｍ）を有する粉砕媒体を使用したプロセスは、重質鉱油と化合物１１粒子の混合物の均一性を増大させた。これは、本発明の最終的な軟膏を調製するのに使用される第１の混合物に望ましいものであった。また、より小さい平均ビーズ直径を有する粉砕媒体は、ビーズの表面からの材料の回収などの実際的な取り扱いの問題をもたらす恐れがある。
【００８２】
（実施例２）
均一性を評価するためのボールミリング撹拌後の混合物の顕微鏡検査
ボールミリング後の混合物の顕微鏡検査を、均一性を評価し、蛍光性分子ローター化合物の粒子サイズを推定するために用いることができる。化合物１１を含む混合物の顕微鏡検査を、目盛り付き接眼ミクロメーターすなわちレチクルを備えた複式光学顕微鏡を使用して実施した。例えば、接眼ミクロメーターであるレチクルを、レチクルのゼロ線と対物ミクロメーターのゼロ線の位置を合わせることによって、対物ミクロメーターと位置を合わせ校正することができ、ミクロメーターまたはスケール間の比を、サイズおよび距離を決定するために使用することができる。顕微鏡分析は、ボールミリングプロセスのための０．５ｍｍ粉砕媒体ビーズを使用して４日間ボールミリング撹拌した後、微細な粒子を支配的に示したが、この混合物についての測定濃度は、予測された濃度と一致しなかった。５ｍｍの平均直径を有するＹＴＺ（登録商標）ビーズを用いてボールミリング撹拌にかけた重質鉱油中の化合物１１  ＨＣｌ塩の混合物の顕微鏡検査は、２ｍｍの平均直径を有するＹＴＺ（登録商標）ビーズ（Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用したプロセス（これは、化合物１１粒子のある範囲のサイズを示した）より均一であった。顕微鏡検査は、約５ミクロンの直径の粒子の均一な混合物を示した。これは、５ｍｍ粉砕媒体ビーズを用いたプロセスでの、蛍光性分子ローター化合物粒子サイズのための目標範囲内であった。
【００８３】
（実施例３）
混合物中の蛍光性分子ローター化合物の濃度のＨＰＬＣ分析
以下のＨＰＬＣ法を、鉱油と化合物１１の混合物中の蛍光性分子ローター化合物の濃度が、その混合物の予測された濃度と一致しているかどうかを分析するために使用した。ＨＰＬＣ分析を、混合物中の化合物１１の分解を評価するためにも使用した。使用したＨＰＬＣ装置は、１．０ｍＬ／ｍｉｎの勾配流量を送出できるポンプまたは同等のものを含むＷａｔｅｒｓ２６９５分離モジュールまたは同等のもの、ならびに２１５ｎｍおよび３２０ｎｍで検出可能なＷａｔｅｒｓ２４８７多波長検出器または二波長検出器または同等のものであった。使用したカラムは、Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａｐａｋ  Ｃ１８カラム、５μｍ、３．９×１５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、カタログ番号：ＷＡＴ０１１７９３）であった。流量は１．０ｍＬ／ｍｉｎであり、２１５ｎｍの波長および２５℃のカラム温度で検出した。濃度試料評価のために使用した注入体積は２０μＬであり、関連物質試料評価のために使用した注入体積は５０μＬであった。移動相は、Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液、Ｃ：メタノール、およびＤ：エタノールであり、表２に示した勾配プログラムをＨＰＬＣ法のために使用した。
【００８４】
【表２】
2016539932.tif 000034
【００８５】
表３は、ＨＰＬＣ分析によって判明した試料成分を、およその保持時間（ＲＴ）、および化合物１１の保持時間（８．５ｍｉｎ）に対する比として計算される相対保持時間（ＲＲＴ）を用いて示す。標準試料と比較した混合物試料において、化合物１１のピーク面積（８．５ｍｉｎのＲＴ、表３）と比較した関連物質ピークの増大した相対ピーク面積（３．８ｍｉｎのＲＴ、表３）は、化合物１１の分解を示しているようである。化合物１１の混合物試料における濃度は、化合物１１の標準試料と比較して、８．５ｍｉｎの保持時間でのＨＰＬＣピーク（表３）を分析することによって決定した。
【００８６】
【表３】
2016539932.tif 000035
【００８７】
ＨＰＬＣ分析により、ボールミリング撹拌後、強制的に分解させた後に出現するピークに対応する関連物質ピーク（３．８ｍｉｎのＲＴ、表３）での変化をもとにすると、化合物１１の有意な分解は示されなかった。しかし、０．５ｍｍの平均直径のＹＴＺ（登録商標）粉砕媒体ビーズを用いたボールミリング撹拌後の化合物１１と重質鉱油の混合物の濃度は、ＨＰＬＣ（８．５ｍｉｎのＲＴ、表３）により、４８．１２ｍｇ／ｇの予測濃度（５０４．３ｍｇ／１０．４８ｇ、鉱油および化合物１１）に対して４．７５ｍｇ／ｇと決定された。この濃度の乖離は、化合物１１は混合物中で均一に分散しておらず、０．５ｍｍビーズでのボールミリング撹拌が、許容されない混合物をもたらしたことを示した。５ｍｍの平均直径のビーズを用いたボールミリング撹拌後の、化合物１１と重質鉱油の混合物のＨＰＬＣで測定された濃度は、４７．９８ｍｇ／ｇの予測された濃度（５０４．８ｍｇ／１０．５２ｇ、鉱油および化合物１１）に対して４４．９ｍｇ／ｇであった。これは、許容範囲内であった。ＹＴＺ（登録商標）５ｍｍビーズでボールミリング撹拌を使用する本発明のプロセスは、ＨＰＬＣで分析して化合物１１の分解を伴うことなく、許容される化合物１１の濃度を有する混合物を提供した。
【００８８】
（実施例４）
蛍光性分子ローター化合物を用いる軟膏製剤の調製
軟膏稠度のためのビヒクル成分の最適比にもとづいて、軟膏を、特許請求するプロセスを使用して調製することができる。１０．２２ｇの、５ｍｍの平均直径を有するＹＴＺ（登録商標）ビーズ（Ｔｏｓｏｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）、０．５０４８ｇの化合物１１  ＨＣｌ塩および１０．０２ｇの重質鉱油（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の混合物を、２０ｍＬ琥珀色ガラス瓶に加える。混合物を、ＵＳ  Ｓｔｏｎｅｗａｒｅボールミルを使用して３日間、ボールミリング撹拌にかける。粉砕媒体ビーズを除去した後、その混合物を、約１０ｇの重質鉱油および約７９．５ｇの白色石油を含む混合物に加える。
この軟膏は：
５０４．８ｍｇ／（１０．０２ｇ＋０．５０４８ｇ＋１０ｇ＋８０ｇ）＝５０４．８ｍｇ／１００．５２４８ｇ、または最終軟膏中に５．０２ｍｇ／ｇの化合物１１、または０．５％（ｗ／ｗ）化合物１１
の計算された濃度を有する。
【００８９】
本明細書で引用したすべての特許、公開出願および文献の教示を、それらの全体において、参照により本明細書に組み込む。
【００９０】
本発明を、その例示的な実施形態を参照して具体的に示し、説明してきたが、当業者は、添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲を逸脱することなく、形態および詳細において種々の変更を加えることができることを理解されよう。
【国際調査報告】
2016539932.tif 000052
2016539932.tif 000053