(57)【要約】  本発明は、濃縮された硝酸塩含有量、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、サポニン、アルカロイド、炭水化物、タンパク質、カリウムと、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有するアマランスの抽出物を開示する。前記アマランスの抽出物は、新鮮なまたは乾燥したアマランスの葉および茎から調製することができる。それは、様々な剤形（ｄｏｓａｇｅ）、すなわち、速溶錠、ロゼンジ、キャンディ、チューインガム、飲料、錠剤、カプセル剤、丸剤、および散剤にして患者に投与することができる。前記アマランスの濃縮抽出物は、血液中ならびに唾液中の一酸化窒素濃度、硝酸塩レベル濃度、および亜硝酸塩レベルを向上させる能力を有する。そのため、投与することによってそれは人間において血圧を低下させ、身体的持久力を増加させ、水泳持久力を増加させ、ランニング持久力を増加させ、性的機能を改善することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アマランスの抽出物であって、前記抽出物が
約０．１％〜約２０％の硝酸塩；
約０．１％〜約１０％のＬ−アルギニン；
約０．００１％〜約１０％のフラボノイド；
約０．０１％〜約１５％のサポニン；
約０．０１％〜約１０％のアルカロイド；
約１０％〜約３０％の炭水化物；
約５％〜約２５％のタンパク質；
約５％〜約２５％のカリウム；および、
約０．０１％〜約５０％の全シュウ酸を含み、前記全シュウ酸が遊離シュウ酸およびシュウ酸塩を含む、
抽出物。
【請求項２】
アムラ抽出物、ターメリック抽出物、ブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、ザクロ抽出物、ココア抽出物、ココナツ根抽出物、ローズマリー抽出物、ミント葉抽出物、スターアニス、スイートバジル抽出物、シナモン抽出物／クローブ抽出物、ショウガ抽出物、クミン種子抽出物、ブラックペッパー抽出物、フェヌグリーク抽出物、およびそれらの組合せからなる群から選択される第２の抽出物をさらに含む、
請求項１に記載のアマランスの抽出物。
【請求項３】
ビタミンＣをさらに含む、
請求項１に記載のアマランスの抽出物。
【請求項４】
前記アマランスが、アマランサス・カウダツス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃａｕｄａｔｕｓ）、アマランサス・クルエンタス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｒｕｅｎｔｕｓ）、アマランサス・トリコロール（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｔｒｉｃｏｌｏｒ）、アマランサス・ビリツム（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｂｌｉｔｕｍ）、アマランサス・ビリディス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｖｉｒｉｄｉｓ）、アマランサス・ヅビウス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｄｕｂｉｕｓ）およびそれらの組合せからなる群から選択される、
請求項１に記載のアマランスの抽出物。
【請求項５】
全シュウ酸含有量の低いアマランスの抽出物であって、前記抽出物が、
約３％〜約２０％の硝酸塩；
約１％〜約１０％のＬ−アルギニン；
約１％〜約１０％のフラボノイド；
約５％〜約１５％のサポニン；
約３％〜約１０％のアルカロイド；
約１０％〜約３０％の炭水化物；
約５％〜約２５％のタンパク質；
約１％〜約５％のカリウム；および、
約０．１％の全シュウ酸を含み、前記全シュウ酸が遊離シュウ酸およびシュウ酸塩を含む、
抽出物。
【請求項６】
アムラ抽出物、ターメリック抽出物、ブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、ザクロ抽出物、ココア抽出物、ココナツ根抽出物、ローズマリー抽出物、ミント葉抽出物、スターアニス、スイートバジル抽出物、シナモン抽出物／クローブ抽出物、ショウガ抽出物、クミン種子抽出物、ブラックペッパー抽出物、フェヌグリーク抽出物、およびそれらの組合せからなる群から選択される第２の抽出物をさらに含む、
請求項５に記載のアマランスの抽出物。
【請求項７】
ビタミンＣをさらに含む、
請求項５に記載の抽出物。
【請求項８】
前記アマランスが、アマランサス・カウダツス、アマランサス・クルエンタス、アマランサス・トリコロール、アマランサス・ビリツム、アマランサス・ビリディス、アマランサス・ヅビウスおよびそれらの組合せからなる群から選択される、
請求項５に記載のアマランスの抽出物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抽出物を含む剤形であって、前記剤形が、速溶錠、ロゼンジ、キャンディ、チューインガム、飲料、錠剤、カプセル剤、丸剤、および散剤からなる群から選択される、
剤形。
【請求項１０】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、血圧を低下させる方法。
【請求項１１】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、身体的持久力を増加させる方法。
【請求項１２】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、水泳持久力を増加させる方法。
【請求項１３】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、ランニング持久力を増加させる方法。
【請求項１４】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、性的機能を向上させる方法。
【請求項１５】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、血液中の一酸化窒素濃度を高める方法。
【請求項１６】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、血液中の硝酸塩濃度を高める方法。
【請求項１７】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、血液中の亜硝酸塩濃度を高める方法。
【請求項１８】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、唾液中の一酸化窒素濃度を高める方法。
【請求項１９】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、唾液中の硝酸塩濃度を高める方法。
【請求項２０】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、唾液中の亜硝酸塩濃度を高める方法。
【請求項２１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抽出物を投与することを含む、血液中の硝酸塩レベルを約２倍〜約１０倍高める方法。
【請求項２２】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、血液中の亜硝酸塩レベルを約３倍〜約１５倍高める方法。
【請求項２３】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、血液中の一酸化窒素レベルを約２倍〜約１０倍高める方法。
【請求項２４】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抽出物を投与することを含む、唾液中の硝酸塩レベルを約２倍〜約１０倍高める方法。
【請求項２５】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、唾液中の亜硝酸塩レベルを約３倍〜約１５倍高める方法。
【請求項２６】
請求項１〜８に記載の抽出物を投与することを含む、唾液中の一酸化窒素レベルを約２倍〜約１０倍高める方法。
【請求項２７】
新鮮なアマランスの粉末状抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕して、破砕された材料を得る工程と、
前記破砕された材料をメタノールで抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濾過して濾液を得る工程と；
前記濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る工程と、
前記濃縮された濾液を乾燥させて、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項２８】
新鮮なアマランスの粉末状抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕して、破砕された材料を得る工程と、
前記破砕された材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を乾燥させて、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項２９】
乾燥したアマランスの粉末状抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
乾燥したアマランスの葉および茎を粉末化して粉末状材料を得る工程と、
前記粉末状材料をメタノールで抽出して、上清を得る工程と、
前記上清を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して、濃縮されたメタノール濾液を得る工程と、
前記濃縮されたメタノール濾液を乾燥させて、乾燥したアマランスの粉末状抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項３０】
乾燥したアマランスの粉末状抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
乾燥したアマランスの葉および茎を粉末化して粉末状材料を得る工程と、
前記粉末状材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して、濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を乾燥させて、乾燥したアマランスの粉末状抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項３１】
アマランスの抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得る工程と、
前記スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ処理された材料を加熱して、ペクチナーゼ不活性化材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して濃縮された上清を得る工程と、
前記濃縮された上清を乾燥させて、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項３２】
アマランスの抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得る工程と、
前記スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ処理された材料を加熱して、ペクチナーゼ不活性化材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して、濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸および／またはシュウ酸塩の結晶ならびに第２の上清を得る工程と；
前記第２の上清を１０℃で２４時間冷却して、第３の上清ならびに第２のシュウ酸および／またはシュウ酸塩結晶を得る工程と；
前記第３の上清を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る工程と、
前記濃縮された濾液を乾燥させて粉末状抽出物を得る工程とを含み、前記粉末状抽出物が０．１％未満の全シュウ酸を含み、全シュウ酸が遊離シュウ酸およびシュウ酸塩を含む、
方法。
【請求項３３】
アマランスの抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得る工程と、
前記スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ処理された材料を加熱して、ペクチナーゼ不活性化材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して、濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸および／またはシュウ酸塩の結晶ならびに第２の上清を得る工程と；
前記第２の上清を１０℃で２４時間冷却して、第３の上清ならびに第２のシュウ酸および／またはシュウ酸塩結晶を得る工程と；
前記第３の上清を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る工程と、
前記濃縮された濾液を乾燥させて粉末状抽出物を得る工程と、
前記粉末状抽出物をヘキサンで処理して混合物を得る工程と、
前記混合物を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮されたヘキサン抽出物を得る工程と、
前記濃縮されたヘキサン抽出物を乾燥させて、粉末状ヘキサン抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項３４】
アマランスの抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得る工程と、
前記スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ処理された材料を加熱して、ペクチナーゼ不活性化材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して、濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸および／またはシュウ酸塩の結晶ならびに第２の上清を得る工程と；
前記第２の上清を１０℃で２４時間冷却して、第３の上清ならびに第２のシュウ酸および／またはシュウ酸塩結晶を得る工程と；
前記第３の上清を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る工程と、
前記濃縮された濾液を乾燥させて粉末状抽出物を得る工程と、
前記粉末状抽出物をクロロホルムで処理して混合物を得る工程と、
前記混合物を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮されたクロロホルム抽出物を得る工程と、
前記濃縮されたクロロホルム抽出物を乾燥させて、粉末状クロロホルム抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項３５】
アマランスの抽出物を調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得る工程と、
前記スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ処理された材料を加熱して、ペクチナーゼ不活性化材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して、濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸および／またはシュウ酸塩の結晶ならびに第２の上清を得る工程と；
前記第２の上清を１０℃で２４時間冷却して、第３の上清ならびに第２のシュウ酸および／またはシュウ酸塩結晶を得る工程と；
前記第３の上清を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る工程と、
前記濃縮された濾液を乾燥させて粉末状抽出物を得る工程と、
前記粉末状抽出物を二塩化エチレンで処理して混合物を得る工程と、
前記混合物を濾過して第２の濾液を得る工程と、
前記第２の濾液を濃縮して濃縮された二塩化エチレン抽出物を得る工程と、
前記濃縮された二塩化エチレン抽出物を乾燥させて、粉末状二塩化エチレン抽出物を得る工程とを含む、
方法。
【請求項３６】
アマランスの抽出物をさらにアムラ抽出物とともに調製する方法であって、前記方法が、
アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得る工程と、
前記スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ処理された材料を加熱して、ペクチナーゼ不活性化材料を得る工程と、
前記ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して上清および残渣を得る工程と、
前記上清を濃縮して、濃縮された水抽出物を得る工程と、
前記濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸および／またはシュウ酸塩の結晶ならびに第２の上清を得る工程と；
前記第２の上清を１０℃で２４時間冷却して、第３の上清ならびに第２のシュウ酸および／またはシュウ酸塩結晶を得る工程と；
前記第３の上清を濾過して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る工程と、
前記濃縮された濾液を乾燥させて粉末状抽出物を得る工程と、
前記粉末状抽出物をヘキサンで処理して混合物を得る工程と、
前記混合物を濾過して第２の濾液を得る工程と、
前記第２の濾液を濃縮して濃縮されたキサン抽出物を得る工程と、
前記濃縮されたヘキサン抽出物を乾燥させて粉末状ヘキサン抽出物を得る工程と、
前記粉末状ヘキサン抽出物をメタノールに溶解して、アマランスのヘキサン抽出物の溶液を得る工程と、
アムラのメタノール抽出物の粉末をアマランスのヘキサン抽出物の前記溶液に添加して第２の混合物を得る工程と、
前記第２の混合物を蒸発させて濃縮物を得る工程と、
前記濃縮物を乾燥させて、アマランスおよびアムラ抽出物の粉末を得る工程とを含み、
前記アムラ抽出物の粉末状メタノール抽出物が、
新鮮なアムラ果実をパルプ状にしてパルプを得る工程と、
前記パルプをメタノールで抽出して濾液を得る工程と、
前記濾液を濃縮してアムラの濃縮されたメタノール抽出物を得る工程と、
前記アムラの濃縮されたメタノール抽出物を乾燥させて、アムラの前記粉末状メタノール抽出物を得る工程とを含むプロセスによって調製される、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、哺乳動物、特に人間の血圧を低下させ（高血圧症）、持久力を高めるための、濃縮された硝酸塩含有量、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、アルカロイド、カリウムおよびごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有するアマランス抽出物起源の薬用組成物に関する。前記アマランスの濃縮抽出物は、血漿および唾液中の一酸化窒素のレベルを高めるために有用である。アマランスの濃縮抽出物はまた、血漿および唾液中の亜硝酸塩および硝酸塩のレベルを高めるために、そして血圧を低下させ（高血圧症）、持久力を高めるためにも有用である。
【０００２】
本開示はまた、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有する前記アマランスの濃縮抽出物を製造するためのプロセスにも関する。より具体的には、本開示は、３〜２０％の範囲の硝酸塩の百分率を得るためのアマランスの抽出のプロセスおよび主に硝酸塩による抽出物の濃縮に関する。さらに、本開示はまた、血液および唾液中の一酸化窒素のレベルを高めるための、そして血漿および唾液中の亜硝酸塩および硝酸塩のレベルを高めるためにも有用な処置の方法も開示する。本開示は、口からの吸収を簡便にするために速溶錠、ロゼンジ、キャンディ、チューインガム、飲料などとして硝酸塩濃縮製剤を経口送達することによる、そして胃から吸収されるように錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤などの形態で硝酸塩濃縮製剤を経口送達することによる、血圧を低下させ（高血圧症）、持久力を増加させるための処置の方法を開示する。
【背景技術】
【０００３】
一酸化窒素は、多くの生理的プロセスおよび病理的プロセスに関与する重要な細胞シグナル伝達分子である。それは数秒の短い血中半減期をもつ強力な血管拡張薬である。一酸化窒素は我々の身体で細胞によって産生される遊離形態のガスである。それは、身体の酵素がアミノ酸アルギニンに分解される場合に産生され、主に細胞間情報伝達に使用される。一酸化窒素は、我々の体内の主要な生理機能に必要とされる。それは１つの細胞から別の細胞へと自由に移動し、多様な生物学的機能を助ける。必要に応じて、一酸化窒素は、ホルモン、神経伝達物質および細胞内メッセンジャーとして働くことができる。
【０００４】
一酸化窒素は多様な身体機能に極めて重要であり、細胞が我々の体内で十分な量のこのガスを産生することが必要不可欠である。ボディビルダーまたは厳しい身体活動を行う人は、より多くの量のＮＯを必要とする。それは、ＮＯが筋肉を作っている間の血流の増加を可能にするためである。ＮＯ欠乏症の徴候には、極度の疲労および身体的脱力感が含まれる。それは不眠症、肥満、糖尿病および性的問題などの多様な状態を治療する際に有用である。心血管系では、ＮＯは基底血管緊張の重要な決定因子であり、血小板活性化を妨げ、内皮への白血球接着を制限し、心筋収縮性を調節する。ＮＯはまた、ショック状態を伴う低血圧症、本態性高血圧症、およびアテローム性動脈硬化症を含む一般的な心血管障害の病態形成において役割を果たすこともある。一酸化窒素は、体全体の血液循環を調節し、血管の直径を増大させ、血塊の形成を阻止する。それは内皮細胞が血管を制御および弛緩させるのを助ける。一酸化窒素は、内皮細胞によって産生されるマクロファージの細胞傷害性薬剤であり、ニューロンのメッセンジャー分子であり、血管拡張薬である。我々の体内の免疫細胞は、一酸化窒素を放出して細菌、ウイルス、および感染を引き起こし得るその他の有害外来生物を破壊する。ＮＯが体細胞の中で腫瘍および癌性増殖を防ぐことも公知である。
【０００５】
一酸化窒素が勃起機能のメディエーターであることも示されている。一酸化窒素は、体内で性的応答機構を刺激し、活気づけ、増幅する。感覚的および精神的な刺激は、神経細胞に一酸化窒素を放出させる。これにより、陰茎筋肉が弛緩し、血液が陰茎に流入し、勃起が起こる。このプロセスは女性に対しても同じであり、血流は膣組織で増加する。一酸化窒素は筋肉細胞の持続レベルを増加させて、より重い荷物を持ち上げ、力の必要な活動を容易に行うことを可能にする。一酸化窒素は、神経細胞をはじめとする身体の様々な細胞間の細胞内メッセンジャーとして働く。十分な量のＮＯが体内に存在すると、神経細胞間の情報伝達は速く、迅速な応答ならびに集中および覚醒状態の増加をもたらす。アテローム性動脈硬化症を促進する一般的な障害、例えば高血圧症、高脂血症、喫煙、および糖尿病などは、全て異常な内皮機能に関連しており、その１つの徴候は生理活性ＮＯのかなりの欠乏である。消化管でニューロンを産生するＮＯの欠乏は、胃腸運動の特定の異常、例えばヒルシュスプルング病、アカラシア、および慢性偽性腸閉塞などの原因になると考えられている。ＮＯはまた、おそらく粘膜血流量の増加および胃上皮機能の調節によって、胃の細胞保護作用に重要な役割を果たすと考えられている。
【０００６】
人体における一酸化窒素の産生（生合成）
【０００７】
ＮＯは、アミノ酸Ｌ−アルギニンから一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）の酵素作用によって産生される。ＮＯＳには２つの内皮型：構成的ＮＯＳ（ｃＮＯＳ；ＩＩＩ型）および誘導性ＮＯＳ（ｉＮＯＳ；ＩＩ型）がある。ＮＯＳの補助因子には、酸素、ＮＡＤＰＨ、テトラヒドロビオプテリンおよびフラビンアデニンヌクレオチドが含まれる。内皮ＮＯＳに加えて、脳において、そして末梢神経系の様々な神経、例えば陰茎の勃起組織および血管拡張をもたらすための身体のその他の専門組織を神経支配する非アドレナリン作動性神経、非コリン作動性自律神経において伝達物質として働く神経型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ；Ｉ型）がある。
【０００８】
血管の通常の基底状態下では、ＮＯはｃＮＯＳによって継続的に産生されている。ｃＮＯＳの活性は、カルシウムおよびカルモジュリン依存性である。ｃＮＯＳの刺激には２つの基本的な経路があり、その両方が筋細胞膜下の貯蔵部位からのカルシウムイオンの放出を含む。第１に、血流によって生成される血管内皮で作用する剪断力がカルシウムの放出およびその後のｃＮＯＳ活性化を引き起こす。そのため、血流の増加がＮＯ形成を刺激する（流れ依存性ＮＯ形成）。第２に、多様なリガンドの内皮受容体がカルシウム放出およびその後のＮＯ産生を刺激する（受容体刺激性ＮＯ形成）。アセチルコリン、ブラジキニン、サブスタンスＰ、アデノシンの受容体、および多くのその他の血管作動性物質が含まれる。
【０００９】
内皮ＮＯＳのその他のイソ型はｉＮＯＳである。それは、その活性化がカルシウム非依存性であるという点でｃＮＯＳとは一部異なる。通常の基底状態下では、ｉＮＯＳの活性は非常に低い。ｉＮＯＳの活性は、炎症中に細菌エンドトキシン（例えば、リポ多糖類）ならびに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびインターロイキンなどのサイトカインによって刺激を受ける。炎症中、ｉＮＯＳによって産生されるＮＯの量は、ｃＮＯＳによって産生される量よりも１，０００倍多いことがある。
【００１０】
食事性硝酸塩からのＮＯの産生
【００１１】
食事性硝酸塩は哺乳動物において一酸化窒素の重要な供給源である。緑色の葉の多い野菜、および一部の根野菜（例えばビートルートなど）は、高濃度の硝酸塩を有する。摂食されて血流に吸収されると、硝酸塩は唾液中で濃縮され（約１０倍）、片利共生の通性嫌気性細菌の生物膜によって舌表面で亜硝酸塩に還元される。この亜硝酸塩は嚥下され、酸と反応し、胃の中の物質（例えばアスコルビン酸塩など）を還元して高濃度の一酸化窒素を生成する。
【００１２】
硝酸塩の１日許容摂取量（Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｄａｉｌｙ  Ｉｎｔａｋｅ：ＡＤＩ）の３．７ｍｇ／体重ｋｇ／日（６０ｋｇの成人１日あたり２２２ｍｇの硝酸塩に等しい）は、以前の食品に関する科学委員会（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｆｏｏｄ：ＳＣＦ）により確立され、ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品添加物専門家会議（Ｊｏｉｎｔ  ＦＡＯ／ＷＨＯ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｆｏｏｄ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ：ＪＥＣＦＡ）によって再確認された。
【００１３】
食事または内在性供給源由来の硝酸塩の生体内活性化は、亜硝酸塩へのその最初の還元を必要とする。哺乳動物は特異的および効果的な硝酸塩還元酵素を欠くので、この変換は主に消化管内および体表面上の片利共生の細菌によって実行される。亜硝酸塩は、酸化（ＮＯ２ラジカル）および還元（ＮＯラジカル）シグナル伝達間のその酸化還元位置ならびに血液および組織中のその相対安定性の点で窒素酸化物に特有である。ひとたび亜硝酸塩が形成されると、ヘモグロビン、ミオグロビン、キサンチンオキシドレダクターゼ、アスコルビン酸塩、ポリフェノールおよびプロトンを伴う、そのＮＯへのさらなる還元のための多数の経路が体内にある。これらの経路によるＮＯの発生は、低酸素症およびアシドーシスの間に大いに強化され、それによって酸素依存性ＮＯＳ酵素活性が損なわれる状況でのＮＯ産生を確実にする。食事性硝酸塩は、上部消化管で急速に吸収される。血液中で、それはＮＯＳ酵素から産生された内在性ＮＯの酸化から形成された硝酸塩と混じる。
【００１４】
口腔で一度、片利共生の通性嫌気性細菌は硝酸塩を呼吸中の酸素の代わりの電子受容体として使用し、硝酸還元酵素の作用によって唾液硝酸塩を亜硝酸塩に効果的に還元する。哺乳類細胞はこの陰イオンを効果的に代謝することができないので、ヒトの硝酸塩還元は、これらの細菌の存在を必要とする（このことにより、機能的な共生関係が示唆される）。食事性硝酸塩の添加後、唾液硝酸塩レベルは１０ｍＭに、亜硝酸塩レベルは１〜２ｍＭに近づくことができる。唾液が酸性の胃に入ると（１日あたり１〜１．５ｌ）、多くの亜硝酸塩は急速にプロトン化されて亜硝酸を形成し（ＨＮＯ２；ｐＫａ約３．３）、それはさらに分解してＮＯおよびその他の窒素酸化物を形成する。ＮＯへの亜硝酸塩の還元は、その両者とも食事中に大量に存在するビタミンＣおよびポリフェノールなどの化合物を還元することによって大いに促進される。
【００１５】
葉菜類における硝酸塩含有量の百分率は、経口摂取される場合の血液中の一酸化窒素レベルを著しく増加させるには非常に少ない。かなりのレベルの血中一酸化窒素を得るためには、一定の間隔でより多くの量が摂取されることが求められる。大量の葉菜類を定期的に消費することは、そのような忙しい生活では不都合である。従って、コンパクトな送達系の形で硝酸塩を含有する植物から開発されたサプリメントを提供することは、血液中のより高い一酸化窒素含有量を生成するための便利な代替手段となるであろう。さらに、硝酸塩は、口内でそれ自体で（片利共生の通性嫌気性細菌によって）亜硝酸塩に変換されることが必要とされるので、硝酸塩を多く含む製剤をチューインガム、ロゼンジ、キャンディなどの形態で口に送達することができるならばより有利であろう。口腔による送達は、従来の薬剤送達に勝る特定の利点を提供する。
【００１６】
口腔の薬物投与部位には、口床（舌下）、頬の内側（頬側）および歯茎（歯肉）が含まれる。口腔による薬物投与は、いくつかの特徴的な利点を提供する：
・頬側粘膜は、豊富な血液供給に比較的浸透性であり、その他の粘膜組織と比較して強い。
・初回通過効果を迂回し、薬物を胃腸流体に露出させない。
・粘膜との接触時間が長時間であるので、多くの薬物の能力が向上する。
・薬物投与のその他の非経口経路と比較して患者許容性が高い。
・粘着および密接な接触の結果として、製剤はより長く送達部位にとどまり、疾患治療用の低いＡＰＩ濃度を用いるＡＰＩバイオアベイラビリティを改善する。
・薬物の経口送達に存在する厳しい環境因子が、口内薬物送達によって回避される。
【００１７】
ヒトの血液中の一酸化窒素のレベルを高めることに、そして、豊富に天然に利用可能な植物に起源をもつ（植物供給源）薬物／製剤を含む薬物／製剤の投与方法に多くの研究が行われている。一部の先行技術を簡単に見直してみると、その他の先行技術と比較して本発明者らがこの問題にどのように取り組んできたか、ならびにヒトの血液中の一酸化窒素のレベルを高めることおよび疾患を治療する方法ならびにヒトの特定の欠乏症を克服するための供給源に本発明者らがどのように効果的に取り組むことができたかが分かるであろう。
【００１８】
米国特許第８３０３９９５号（Ｂｒｙａｎ等）は、亜硝酸塩製剤および一酸化窒素プロドラッグとしてのそれらの使用を開示する。組成物は、約４０重量部〜約１０００重量部の植物の硝酸塩供給源；約２０重量部〜約５００重量部の亜硝酸塩還元活性の植物供給源；および約４重量部〜約１００重量部の亜硝酸塩を含む。亜硝酸塩還元活性の植物供給源は、ホーソンベリー、マツブサ属、緑茶、ビートの根、松樹皮、ホーリーバジル、ギムネマ・シルベスタ、アシュワガンダ根、サルビア、セント・ジョンズ・ワート、ブロッコリー、ステビア、ホウレンソウ、イチョウ、ケルプ、トリブルス属、エレウテロコックス属、イカリソウ属、ユーコミア属、ロディオラ属、緑茶、コドノプシス（ｃｏｄｏｎｏｐｓｙｓ）、朝鮮人参、アストラガルス属、ネナシカズラ種子、コルディセプス属、漿果類、茶、ビール、ブドウ、ワイン、オリーブ油、チョコレート、ココア、コーヒー、胡桃、ピーナッツ、ボロホ、ザクロ、ポップコーン、イェルバ・マテ、およびそれらの混合物からなる群から選択される。トリグリセリドを還元する方法またはＣ反応性タンパクレベルを低下させる方法も提供される。
【００１９】
米国特許第８２９８５８９号特許（Ｂｒｙａｎ等）は、「亜硝酸塩製剤、ならびにナトリウムおよびカリウムの亜硝酸塩（１０ｍｇ〜１００ｍｇ）、硝酸塩（５０ｍｇ〜５００ｍｇ）、アスコルビン酸（１００ｍｇ〜２０００ｍｇ）を含む組成物を有する一酸化窒素プロドラッグとしてのそれらの使用」に関する。
【００２０】
米国特許出願公開第２０１３００７１４９４号（Ｂｒｙａｎ等）も、亜硝酸塩製剤およびそれらの一酸化窒素プロドラッグとしての使用を開示する。組成物は、約４０重量部〜約１０００重量部の植物の硝酸塩供給源；約２０重量部〜約５００重量部の亜硝酸塩還元活性の植物供給源；および約４重量部〜約１００重量部の亜硝酸塩を含む。トリグリセリドを還元する方法またはＣ反応性タンパクレベルを低下させる方法における前記組成物の使用もここに開示される。
【００２１】
米国特許出願公開第２０１２０３２１７２４号特許および国際公開第２０１３２３２１７号（Ｂｒｙａｎ等）は、唾液亜硝酸塩試験物質を提供し、唾液亜硝酸塩レベルを試験物質で試験し、試験で検出された亜硝酸塩レベルを測定し；測定された亜硝酸塩レベルとインビボでの一酸化窒素のバイオアベイラビリティとを相関させることによる、個体においてインビボで一酸化窒素および亜硝酸塩レベルを測定する方法を開示する。
【００２２】
米国特許第８４３５５７０号特許において、Ｂｒｙａｎ等は、亜硝酸塩、硝酸塩、およびアスコルビン酸を含む組成物を開示する。哺乳動物において心血管の能力を促進するかまたは有害な心血管イベントを処置する方法も提供される。
【００２３】
米国特許出願公開第２０１３００７１３７１号（Ｂｒｙａｎ等）特許は、一酸化窒素および亜硝酸塩治療法を患者に提供する組成物および方法に関し、それにより分散性媒体を含む治療量は投与の約３０分以内に生体利用可能である。該開示の実施形態では、一酸化窒素は口腔で産生される。
【００２４】
上記特許において、硝酸塩供給源は、合成供給源か、またはホウレンソウ、ビートの根、アーティチョーク、ホーリーバジル、緑茶などを含む植物硝酸塩供給源由来の供給源かの何れかである。
【００２５】
硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物の補給により、体内の硝酸塩および亜硝酸塩レベルが高まる。ビタミンＣの存在は、体内での亜硝酸塩の一酸化窒素への変換を促進し、それにより、体内の抗酸化の潜在能力が増加する。現在の製剤中にビタミンＣを含む硝酸塩強化アマランス抽出物の製剤は、体内でアマランス抽出物から送達された亜硝酸塩の一酸化窒素への変換を促進することにより、一酸化窒素の発生をさらに改善する。使用するビタミンＣは、合成起源のものであっても天然起源のものであってもよい。
【００２６】
アマランサス属は、ヒユ科に属する食物の葉菜類である。アマランスはアマランサス属に属し、様々な種としては、アマランサス・ヅビウス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｄｕｂｉｕｓ）、アマランサス・スピノスス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｓｐｉｎｏｓｕｓ）、アマランサス・フィムブリアツス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ）、アマランサス・フロリダヌス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｆｌｏｒｉｄａｎｕｓ）、アマランサス・グラエシザンス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｇｒａｅｃｉｚａｎｓ）などが挙げられる。硝酸塩のその他の食物源は、ホウレンソウ（スピナシア・オレラシア（Ｓｐｉｎａｃｉａ  ｏｌｅｒａｃｉａ）、科：ヒユ科）、ビートの根（ベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、科：ヒユ科）、レタス（ラクツカ・サティバ（Ｌａｃｔｕｃａ  ｓａｔｉｖａ）、科：キク科）などである。
【００２７】
アマランサス属は世界中に分布する約７０の種を含み、それにはアカザ、ウォーターヘンプ（ｗａｔｅｒ  ｈｅｍｐｓ）、および穀物のアマランサスが含まれる。ヒトの消費には、栽培された穀物のアマランサス−Ａ．カウダツス（Ａ．ｃａｕｄａｔｕｓ）、Ａ．クルエンタス（Ａ．ｃｒｕｅｎｔｕｓ）およびＡ．ヒポコンドリアカス（Ａ．ｈｙｐｏｃｈｏｎｄｒｉａｃｕｓ）および野菜のアマランサス−主にＡ．ズビウス（Ａ．ｄｕｂｉｕｓ）、Ａ．トリコロール（Ａ．ｔｒｉｃｏｌｏｒ）およびＡ．クルエンタス（Ａ．ｃｒｕｅｎｔｕｓ）がある。最近では、穀物のアマランサスは温帯から熱帯まで、野菜のアマランサスは主に南アフリカおよび南アジアで栽培されている。
【００２８】
９０センチメートル〜１５０センチメートルの高さまで生育するこれらの植物は、世界の多くの地域で豊富にある雑草である。全てのアマランスは互生単葉を有する。それらは茎に赤色を有することがある。それらは植物の最上部の密集した群れの中に微小な緑がかった花をつける。それらの種子は、雑草種では褐色または黒色、飼育種では明るい色であることがある。一部のアマランス種は、世界の様々な地域で、特に南アメリカで穀物作物および園芸野菜として生長してきた。
【００２９】
アマランサスは非常に有望な作物である。主な理由は、タンパク質、脂肪および活性物質の含有量であり得る。種子タンパク質の含有量は、１３〜１８％の範囲内であり、非常にバランスのよいアミノ酸を含む。リジン含有量は、一般的な穀類と比較して相対的に高い。葉の粗タンパク質の含有量は、２７〜４９％（ｄ．ｍ．）であり、ホウレンソウの葉中の含有よりも多い。アマランサスは、全卵タンパク質に匹敵するかそれよりも多くの量の必須アミノ酸を有する。脂肪含有量は、０．８〜８．０％の範囲内である。リノール酸が主な脂肪酸であるが、少量のオレイン酸およびパルミチン酸を含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３０】
【特許文献１】米国特許第８３０３９９５号明細書
【特許文献２】米国特許第８２９８５８９号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１３００７１４９４号明細書
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１２０３２１７２４号特許明細書
【特許文献５】国際公開第２０１３２３２１７号パンフレット
【特許文献６】米国特許第８４３５５７０号明細書
【特許文献７】米国特許出願公開第２０１３００７１３７１号明細書
【発明の概要】
【００３１】
本開示は、アマランスの抽出物から得られる薬用組成物を提供する。本開示は、シュウ酸含有量の低いアマランスの抽出物を提供する。アマランス抽出物には、
約０．１％〜約２０％の硝酸塩；
約０．１％〜約１０％のＬ−アルギニン；
約０．００１％〜約１０％のフラボノイド；
約０．０１％〜約１５％のサポニン；
約０．０１％〜約１０％のアルカロイド；
約１０％〜約３０％の炭水化物；
約５％〜約２５％のタンパク質；
約５％〜約２５％のカリウム；および、
約０．０１％〜約５０％の全シュウ酸が含まれる。全シュウ酸含有量の決定には、抽出物中の遊離シュウ酸およびシュウ酸塩の測定が含められた。
【００３２】
本開示はまた、組成物の口腔吸収を簡便にするための、速溶錠、ロゼンジ、チューインガムなどのアマランスの組成物の経口投与剤形を提供する。本開示はまた、胃から吸収するための錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤などの剤形を提供する。
【００３３】
本開示は、アマランス抽出物を製造するための方法を提供する。アマランスの抽出物は、新鮮なまたは乾燥したアマランスの葉および茎から調製することができる。
【００３４】
組成物の一部の実施形態は、血漿中の一酸化窒素の量を高めるのに有用であることが見出された。一部の実施形態は、唾液中の一酸化窒素の量を高める。一部の実施形態は、血漿中の硝酸塩および亜硝酸塩のレベルを高める。抽出物の一部の実施形態は、唾液中の硝酸塩および亜硝酸塩のレベルを高める。一部の実施形態は、哺乳動物において抗酸化活性を高める。一部の実施形態では、組成物は血圧を低下させる（高血圧症）。組成物の一部の実施形態は、持久力を増加させる。
【００３５】
一部の実施形態では、アマランス抽出物は、アムラ抽出物を添加することによって強化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
本開示のその他の特徴および利点は、以下の好ましいプロセスの説明から明白となるはずであり、添付の図面と併せて読むべきである。それらの図面は本発明の特定の好ましい実施形態ならびに知見下で実行される様々なプロセス試行に含まれるプロセスステップを実証する。
【００３７】
【図１】メタノールによる新鮮なアマランスの抽出のフローチャートを示す図である。
【図２】水による新鮮なアマランスの抽出のフローチャートを示す図である。
【図３】メタノールによる乾燥したアマランスの抽出のフローチャートを示す図である。
【図４】水による乾燥したアマランスの抽出のフローチャートを示す図である。
【図５】ペクチナーゼ処理による新鮮なアマランスの抽出のフローチャートを示す図である。
【図６】ペクチナーゼ処理およびシュウ酸の除去による新鮮なアマランスの抽出のフローチャートを示す図である。
【図７】ペクチナーゼ処理およびシュウ酸除去後の新鮮なアマランスのヘキサン抽出のフローチャートを示す図である。
【図８】ペクチナーゼ処理およびシュウ酸除去後の新鮮なアマランスのクロロホルム抽出のフローチャートを示す図である。
【図９】ペクチナーゼ処理およびシュウ酸除去後の新鮮なアマランスのＥＤＣ抽出のフローチャートを示す図である。
【図１０】アムラの抽出のフローチャートを示す図である。
【図１１】アムラと組み合わせた、ペクチナーゼ処理およびシュウ酸除去後の新鮮なアマランスのヘキサン抽出のフローチャートを示す図である。
【図１２】乾燥したアマランス葉粉末の調製のフローチャートを示す図である。
【図１３】アマランス汁の調製のフローチャートを示す図である。
【図１４Ａ】アマランスの異なる抽出物および速溶錠中の活性剤の百分率を示す表である。
【図１４Ｂ】アマランスの異なる抽出物および速溶錠中の活性剤の百分率を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本開示は、独特の抽出方法によって硝酸塩供給源としてアマランスから調製した全く異なる薬用組成物を提供する。開示されるプロセスは、硝酸塩、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、アルカロイド、カリウムを濃縮し、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有するアマランスの抽出物を提供する。多くの野菜は、高い量の全シュウ酸を遊離シュウ酸またはシュウ酸塩の形態で含有し、このシュウ酸またはシュウ酸塩含有量は、ヒトの健康に有毒である。野菜からの抽出物は、その他の活性成分とともにシュウ酸を含有する。アマランスの抽出物もシュウ酸およびシュウ酸塩を含有する。しかし開示される方法において、本発明者らはシュウ酸およびシュウ酸塩をアマランス抽出物から除去して、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有するアマランスの抽出物を得た。全シュウ酸含有量は、ＨＰＬＣ法によって測定され、抽出物中の遊離シュウ酸とシュウ酸塩の両方の合計を得た。
【００３９】
アマランスの濃縮抽出物から得た組成物は、血圧を低下させ（高血圧症）、血漿および唾液中の一酸化窒素のレベルを高め、血漿および唾液中の硝酸塩および亜硝酸塩のレベルを高め、抗酸化活性を高め、持久力を増加させるのに有用である。本開示は、アマランス抽出物の薬用組成物に関する。組成物は濃縮された硝酸塩含有量、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、アルカロイド、カリウムおよびごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩を有する。
【００４０】
アマランス抽出物は、アマランスの新鮮な葉および茎と乾燥した葉および茎の両方から得ることができる。抽出物は、哺乳動物特にヒトに投与された場合に、血圧を低下させ（高血圧症）、持久力を増加させることができる。同じ抽出物を酵素処理によってさらに濃縮すれば、抽出物は血圧を低下させ（高血圧症）、持久力を増加させる能力を促進することができる。
【００４１】
さらに注意されることは、濃縮されたアマランス抽出物起源の組成物が、血漿および唾液中の一酸化窒素の量を高める性質、ならびに血漿および唾液中の硝酸塩および亜硝酸塩のレベルを高める性質を有することである。組成物は、抗酸化活性を高めるために有用であることも見出される。
【００４２】
一部の実施形態は、濃縮された硝酸塩含有量、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、サポニン、アルカロイド、カリウムを含み、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有する、アマランスの新鮮な葉および茎からのアマランスの抽出物から得られる組成物を提供し、この際、硝酸塩は、抽出物中に３％〜２０％の範囲で存在し、Ｌ−アルギニンは、抽出物中に１％〜１０％存在し、フラボノイドは、抽出物中に１％および１０％の範囲で存在し、サポニンは５％〜１５％の範囲で存在し、アルカロイドは３％〜１０％の範囲で存在する。抽出物はまた、炭水化物を１０％〜３０％、カリウム含有量を５％〜２５％を含み、タンパク質は５％〜２５％の範囲で存在する。
【００４３】
一部の実施形態は、全シュウ酸含有量の低いアマランスの抽出物を提供する。抽出物には、
約０．１％〜約２０％の硝酸塩；
約０．１％〜約１０％のＬ−アルギニン；（０．１〜２％；０．１〜６％；０．１〜１０％）
約０．００１％〜約１０％のフラボノイド；
約０．０１％〜約１５％のサポニン；
約０．０１％〜約１０％のアルカロイド；（０．０１〜５％）
約１０％〜約３０％の炭水化物；
約５％〜約２５％のタンパク質；
約５％〜約２５％のカリウム；および、
約０．０１％〜約５０％の全シュウ酸が含まれる。全シュウ酸には、抽出物中の遊離シュウ酸およびシュウ酸塩が含まれる。
【００４４】
抽出物の一部の実施形態では、硝酸塩は、約０．１％から約３％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、硝酸塩は、約１％から約１０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、硝酸塩は、約１０％から約２０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、硝酸塩は、約３％から約２０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、Ｌ−アルギニンは、約０．１％から約２％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、Ｌ−アルギニンは、約０．１％から約６％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、Ｌ−アルギニンは、約０．１％から約１０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、アルカロイドは、約０．０１％から約５％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約０．０１％から約０．１％に及ぶ。抽出物中の全シュウ酸含有量は、抽出物中の遊離シュウ酸およびシュウ酸塩含有量の両方を測定するためにＨＰＬＣ法によって定量された。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約０．０１％から約１％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約０．１％から約１％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約１％から約１０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約１％から約２０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約１％から約３０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約１％から約４０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約１％から約５０％に及ぶ。抽出物の一部の実施形態では、全シュウ酸は、約１０％から約２０％に及ぶ。
【００４５】
一部の実施形態は、全シュウ酸含有量の低いアマランスの抽出物を提供する。抽出物には、約３％〜約２０％の硝酸塩；
約１％〜約１０％のＬ−アルギニン；
約１％〜約１０％のフラボノイド；
約５％〜約１５％のサポニン；
約３％〜約１０％のアルカロイド；
約１０％〜約３０％の炭水化物；
約５％〜約２５％のタンパク質；
約１％〜約５％のカリウム；および、
約０．１％の全シュウ酸が含まれる。全シュウ酸は、抽出物中の遊離シュウ酸およびシュウ酸塩を測定するためにＨＰＬＣ法によって求められた。
【００４６】
本開示は、濃縮された硝酸塩、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、アルカロイド、カリウムを有し、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有する抽出物を提供し、この際、抽出物は、レッドアマランスまたはスプレーンアマランス（Ｓｐｌｅｅｎ  ａｍａｒａｎｔｈ）または赤ホウレンソウ（アマランサス・ヅビウス）または、Ａ．カウダツス、Ａ．クルエンタス、Ａ．ヒポコンドリアカス、Ａ．トリコロール、Ａ．ビリツム、Ａ．ビリディスなどのようなアマランスの任意の近縁種から得られてよい。
【００４７】
本開示はまた、口からの吸収を簡便にするための速溶錠、ロゼンジ、キャンディ、チューインガム、飲料などとしての硝酸塩濃縮製剤の経口送達、および、胃から吸収されるように錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤などの形態の硝酸塩濃縮製剤の経口送達も記載する。一部の実施形態は、アマランス抽出物を有する剤形を提供する。剤形は、速溶錠、ロゼンジ、キャンディ、チューインガム、飲料、錠剤、カプセル剤、丸剤、および散剤からなる群から選択される。
【００４８】
一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる血圧を低下させる方法を提供する。一部の実施形態は、アマランス抽出物の投与の後、血液中の一酸化窒素濃度を高める方法を提供する。一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる、身体的持久力を増加させる方法を提供する。一部の実施形態は、アマランス抽出物を投与することによる、水泳持久力を増加させるための方法を提供する。一部の実施形態は、アマランス抽出物を投与することによる、ランニング持久力を増加させるための方法を提供する。一部の実施形態は、アマランス抽出物を投与することによる、性的機能を改善するための方法を提供する。一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる、血液中の硝酸塩レベルを高める方法を提供する。一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる、血液中の亜硝酸塩レベルを高める方法を提供する。一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる、唾液中の硝酸塩レベルを高める方法を提供する。一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる、唾液中の亜硝酸塩レベルを高める方法を提供する。一部の実施形態は、アマランスの抽出物を投与することによる、唾液中の一酸化窒素レベルを高める方法を提供する。
【００４９】
実施例２６に示される一部の実施形態では、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を含有する速溶錠を投与することは、錠剤の投与の前の血漿レベルと比較して、血漿中のＮＯ３、ＮＯ２およびＮＯ含有量のレベルの増加を導いた。一部の実施形態では、ＮＯ３レベルは、１時間後にベースライン値の約６倍に増加する。一部の実施形態では、ＮＯ２レベルは、６倍よりも多く増加する。一部の実施形態では、ＮＯレベルは約６倍増加する。
【００５０】
実施例２７に示される一部の実施形態では、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を含有する速溶錠を投与することは、錠剤の投与の前のベースラインと比較して、唾液中のＮＯ３、ＮＯ２およびＮＯレベルの増加を導いた。一部の実施形態では、ＮＯ３レベルは、１時間後にベースライン値の約６．９倍に増加する。一部の実施形態では、ＮＯ２レベルは、９．２倍よりも多く増加する。一部の実施形態では、ＮＯレベルは、７．５倍増加する。
【００５１】
実施例２８に示される一部の実施形態では、水と混合した硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を投与することは、抽出物の投与の前の唾液中のレベルと比較して、唾液中のＮＯ３、ＮＯ２およびＮＯレベルの増加を導いた。一部の実施形態では、ＮＯ３レベルは、１時間後にベースライン値の約６．６倍に増加する。一部の実施形態ではＮＯ２レベルは、９．１倍増加する。一部の実施形態ではＮＯレベルは、７．３倍増加する。
【００５２】
一部の実施形態では、アマランス抽出物の投与は、硝酸塩の血漿レベルを２倍〜１０倍高めた。一部の実施形態では、アマランス抽出物の投与は、亜硝酸塩の血漿レベルを約３倍〜約１５倍高めた。一部の実施形態では、アマランス抽出物の投与は、一酸化窒素の血漿レベルを約２倍〜約１０倍高めた。
【００５３】
一部の実施形態では、アマランス抽出物の投与は、硝酸塩の唾液レベルを２倍〜１０倍高めた。一部の実施形態では、アマランス抽出物の投与は、亜硝酸塩の唾液レベルを約３倍〜約１５倍高めた。一部の実施形態では、アマランス抽出物の投与は、一酸化窒素の唾液レベルを約２倍〜約１０倍高めた。
【００５４】
一部の実施形態では、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を投与することにより、体内の硝酸塩および亜硝酸塩レベルが高まった。おそらく、ビタミンＣの存在が体内での亜硝酸塩の一酸化窒素への変換を促進し、それにより体内の抗酸化の潜在能力が増加するのであろう。一部の実施形態は、ビタミンＣを含む硝酸塩強化アマランス抽出物の製剤を提供し、製剤を投与することは、アマランス抽出物から送達された亜硝酸塩の一酸化窒素への体内での変換を促進することによって、一酸化窒素の発生をさらに改善する。アマランス抽出物に添加されるビタミンＣは、合成起源のものであっても天然起源のものであってもよい。
【００５５】
本開示は、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ｎ−ブチルおよびそれらの組合せのような溶媒を用いることによって抽出されるアマランスの異なる抽出物を提供する。
【００５６】
抽出物の調製で使用することのできる低分子量アルコールとしては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールおよびそれらの組合せが挙げられる。抽出物調製に使用することのできるエステルとしては、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ｎ−ブチルおよびそれらの組合せが挙げられる。抽出物の調製に使用することのできるアルカンとしては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、イソオクタン、およびそれらの組合せが挙げられる。
【００５７】
抽出物をそれから調製することのできるアマランスの多様な種としては、アマランサス・アカントキトン（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ａｃａｎｔｈｏｃｈｉｔｏｎ）、アマランサス・アクチロバス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ａｃｕｔｉｌｏｂｕｓ）、アマランサス・ビリディス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｖｉｒｉｄｉｓ）、アマランサス・アルバス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ａｌｂｕｓ）、アマランサス・アレニコラ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ａｒｅｎｉｃｏｌａ）、アマランサス・アウストラリス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ａｕｓｔｒａｌｉｓ）、アマランサス・ビゲロビイ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｂｉｇｅｌｏｖｉｉ）、アマランサス・ブリトイデス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｂｌｉｔｏｉｄｅｓ）、アマランサス・ビリツム（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｂｌｉｔｕｍ）、アマランサス・ブロウニー（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｂｒｏｗｎｉｅ）、アマランサス・カリホルニクス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｓ）、アマランサス・カンナビヌス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃａｎｎａｂｉｎｕｓ）、アマランサス・カウダツス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃａｕｄａｔｕｓ）、アマランサス・キフアフエンシス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｈｉｈｕａｈｕｅｎｓｉｓ）、アマランサス・クロロスタキス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｈｌｏｒｏｓｔａｃｈｙｓ）、アマランサス・クラシペス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｒａｓｓｉｐｅｓ）、アマランサス・クリスプス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｒｉｓｐｕｓ）、アマランサス・クルエンタス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｒｕｅｎｔｕｓ）、アマランサス・デフレクサス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｄｅｆｌｅｘｕｓ）、アマランサス・ヅビウス、アマランサス・フィムブリアツス、アマランサス・フロリダヌス、アマランサス・グラエシザンス、アマランサス・グレッギー（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｇｒｅｇｇｉｉ）、アマランサス・ハイブリダス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｈｙｂｒｉｄｕｓ）、アマランサス・ヒポコンドリアカス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｈｙｐｏｃｈｏｎｄｒｉａｃｕｓ）、アマランサス・ロイコカルプス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｌｅｕｃｏｃａｒｐｕｓ）、アマランサス・リネアツス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｔｕｓ）、アマランサス・リビヅス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｌｉｖｉｄｕｓ）、アマランサス・マンテガジアヌス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｍａｎｔｅｇａｚｚｉａｎｕｓ）、アマランサス・ミニムス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｍｉｎｉｍｕｓ）、アマランサス・ムリカタス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｍｕｒｉｃａｔｕｓ）、アマランサス・オブコルダツス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｏｂｃｏｒｄａｔｕｓ）、アマランサス・オレラセウス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｏｌｅｒａｃｅｏｕｓ）、アマランサス・パルメリ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｐａｌｍｅｒｉ）、アマランサス・パニクルス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｐａｎｉｃｕｌｕｓ）、アマランサス・ポリゴノイデス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｐｏｌｙｇｏｎｏｉｄｅｓ）、アマランサス・ポウェリイ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｐｏｗｅｌｌｉｉ）、アマランサス・プリングレイ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｐｒｉｎｇｌｅｉ）、アマランサス・プミルス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、アマランサス・クイテンシス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｑｕｉｔｅｎｓｉｓ）、アマランサス・レトロフレクサス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｅｔｒｏｆｌｅｘｕｓ）などが挙げられる。
【００５８】
一部の実施形態では、アマランスの抽出物には第２の抽出物が含まれる。第２の抽出物は、アムラ抽出物、ターメリック抽出物、ブドウ種子抽出物、緑茶抽出物、ザクロ抽出物、ココア抽出物、ココナツ根抽出物、ローズマリー抽出物、ミント葉抽出物、スターアニス、スイートバジル抽出物、シナモン抽出物／クローブ抽出物、ショウガ抽出物、クミン種子抽出物、ブラックペッパー抽出物、フェヌグリーク抽出物、またはそれらの組合せからなる群から選択される。
【００５９】
アマランスの抽出物の一部の実施形態では、アマランスは、アマランサス・カウダツス、アマランサス・クルエンタス、アマランサス・トリコロール、アマランサス・ビリツム、アマランサス・ビリディス、アマランサス・ヅビウス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｄｕｂｉｓ）またはそれらの組合せからなる群から選択される。
【００６０】
アマランスの新鮮な葉の抽出により調製される、硝酸塩含有量、Ｌ−アルギニン、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、アルカロイド、カリウムを濃縮し、ごく少量のシュウ酸またはシュウ酸塩含有量を有する抽出物の調製のための様々な方法は、以下の通りである。
【００６１】
一部の実施形態では（図１参照）、アマランスの新鮮な葉および茎を洗浄し、破砕し、ソックスレー抽出器中で６５℃でメタノールを用いて５時間抽出した後、濾過する。得られる抽出物を、６０℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。後に、濃縮された抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアマランスの「メタノール抽出物」の粉末を形成する。
【００６２】
一部の実施形態では、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を調製する方法が提供される。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕して破砕された材料を得ることが含まれる。次に、破砕された材料をメタノールで抽出して、上清および残渣を得ることが含まれる。次に、上清を濾過して濾液を得ることが含まれる。次に、濾液を濃縮して濃縮された濾液を得ることが含まれる。次に、濃縮された濾液を乾燥させて、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を得ることが含まれる。
【００６３】
別の実施形態によれば（図２参照）、アマランスの新鮮な葉および茎を洗浄し、破砕し、還流冷却器を備えた抽出器中で水を用いて約１時間抽出して、残渣および上清を得る。残渣および上清は、濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離される。得られる上清を、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。後に、濃縮された抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアマランスの「水抽出物」の粉末を形成する。
【００６４】
一部の実施形態は、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を調製する方法を提供する。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕して破砕された材料を得ることが含まれる。次に、破砕された材料を水で抽出して、上清および残渣を得ることが含まれる。次に、上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得ることが含まれる。次に、濃縮された水抽出物を乾燥させて、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を得ることが含まれる。
【００６５】
一部の実施形態では（図３参照）、アマランスの新鮮な葉および茎を洗浄し、乾燥させ、粉末化する。その後、粉末をソックスレー抽出器中で６５℃でメタノールを用いて５時間抽出した後、濾過する。得られる抽出物を、６０℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。後に、濃縮された抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、乾燥したアマランスの「メタノール抽出物」の粉末を形成する。
【００６６】
一部の実施形態は、乾燥したアマランスの粉末状抽出物を調製する方法を提供する。この方法には、乾燥したアマランスの葉および茎を粉末化して粉末状材料を得ることが含まれる。次に、粉末状材料をメタノールで抽出して上清を得る。次に、上清を濾過して濾液を得る。次に、濾液を濃縮して濃縮されたメタノール濾液を得る。次に、濃縮されたメタノール濾液を乾燥させて、乾燥したアマランスの粉末状抽出物を得る。
【００６７】
別の実施形態によれば（図４参照）、アマランスの新鮮な葉および茎を洗浄し、乾燥させ、粉末化する。還流冷却器を備えた抽出器で水を用いて約１時間粉末を抽出して残渣および上清を得る。残渣および上清は、濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離される。得られる上清を、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。後に、濃縮された抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、乾燥したアマランスの「水抽出物」の粉末を形成する。
【００６８】
一部の実施形態は、乾燥したアマランスの粉末状抽出物を調製する方法を提供する。この方法には、乾燥したアマランスの葉および茎を粉末化して粉末状材料を得ることが含まれる。次に、粉末状材料を水で抽出して上清および残渣を得る。次に、上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る。次に、濃縮された水抽出物を乾燥させて、乾燥したアマランスの粉末状抽出物を得る。
【００６９】
もう一つの実施形態では（図５参照）、アマランスの新鮮な葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを形成する。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理する。次に、スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させる。ペクチナーゼ処理したアマランススラリーを、還流冷却器を備えた抽出器で水を用いて約１時間抽出して残渣および上清を得る。残渣および上清は、濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離される。得られる上清を、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。後に、濃縮された抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、アマランスのペクチナーゼ処理した「水抽出物」の粉末を形成する。
【００７０】
アマランス抽出物を調製する方法の一部の実施形態では、方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得ることが含まれる。次に、スラリーをペクチナーゼで処理してペクチナーゼ処理された材料を得ることが含まれる。次に、ペクチナーゼ処理された材料を加熱してペクチナーゼ不活性化材料を得ることが含まれる。次に、ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して上清および残渣を得ることが含まれる。次に、上清を濃縮して濃縮された上清を得ることが含まれる。そして、濃縮された上清を乾燥させて、新鮮なアマランスの粉末状抽出物を得ることが含まれる。
【００７１】
さらにもう一つの実施形態では（図６参照）、アマランスの新鮮な葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを形成する。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理する。次に、スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させる。ペクチナーゼ処理したアマランススラリーを、還流冷却器を備えた抽出器で水を用いて約１時間抽出して残渣および上清を得る。残渣および上清は、濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離される。得られる上清を、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間保持してシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させる。上清をデカントし、再び上清を１０℃でさらに２４時間保持して残りのシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させる。上清をデカントおよび濾過し、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を得る。
【００７２】
一部の実施形態では、アマランスの抽出物を調製する方法が提供される。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得ること、次にスラリーをペクチナーゼで処理してペクチナーゼ処理された材料を得ること、その後、ペクチナーゼ処理された材料を加熱してペクチナーゼ不活性化材料を得ることが含まれる。次に、ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る。上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る。濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶および第２の上清を得る。第２の上清を１０℃で２４時間冷却して第３の上清および第２のシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶を得る。次に、第３の上清を濾過して濾液を得る。次に、濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る。そして、濃縮された濾液を乾燥させて、アマランスの粉末状抽出物を得る。一部の実施形態では、粉末状抽出物は、０．１％未満のシュウ酸を有する。
【００７３】
別の実施形態に従って（図７参照）、濃縮された硝酸塩含有量を有するアマランス抽出物が提供される。シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物の乾燥粉末を、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸の除去の後に得、ソックスレー抽出器中でヘキサンで６時間さらに抽出する。その後、撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）においてヘキサン抽出物を濾過し濃縮する。ペクチナーゼで処理し、シュウ酸を除去し、硝酸塩含有量を濃縮した後に、濃縮されたヘキサン抽出物を真空乾燥させて新鮮なアマランスのヘキサン抽出物の粉末を得る。
【００７４】
一部の実施形態では、濃縮された硝酸塩含有量を有するアマランスの抽出物を調製する方法が提供される。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得ることが含まれる。スラリーは、ペクチナーゼで処理されてペクチナーゼ処理された材料が得られる。次に、ペクチナーゼ処理された材料を加熱してペクチナーゼを不活性化し、ペクチナーゼ不活性化材料を得る。次に、ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る。次に、上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る。濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶および第２の上清を得る。第２の上清を１０℃で２４時間冷却して第３の上清および第２のシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶を得る。第３の上清を濾過して濾液を得る。濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る。濃縮された濾液を乾燥させて、粉末状抽出物を得る。次に、粉末状抽出物をヘキサンで処理して混合物を得る。次に、混合物を濾過して濾液を得る。次に、濾液を濃縮して濃縮されたヘキサン抽出物を得る。次に、濃縮されたヘキサン抽出物を乾燥させて、粉末状ヘキサン抽出物を得る。
【００７５】
もう一つの実施形態では（図８参照）、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸の除去の後に得られるシュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物の乾燥粉末は、ヘキサンの代わりに冷浸によりクロロホルムでさらに抽出される。撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）においてクロロホルム抽出物を濾過し濃縮する。次に、それを真空乾燥させて、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸の除去の後に新鮮なアマランスのクロロホルム抽出物の粉末を得る。
【００７６】
一部の実施形態では、アマランスの抽出物を調製する方法が提供される。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得ることが含まれる。
【００７７】
次に、スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る。次に、ペクチナーゼ処理された材料を加熱してペクチナーゼ不活性化材料を得る。次に、ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る。次に、上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る。次に、濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶および第２の上清を得る。次に、第２の上清を１０℃で２４時間冷却して第３の上清および第２のシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶を得る。次に、第３の上清を濾過して濾液を得る。次に、濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る。次に、濃縮された濾液を乾燥させて、粉末状抽出物を得る。次に、粉末状抽出物をクロロホルムで処理して混合物を得る。混合物を濾過して濾液を得る。濾液を濃縮して濃縮されたクロロホルム抽出物を得る。濃縮されたクロロホルム抽出物を乾燥させて、粉末状クロロホルム抽出物を得る。さらに別の実施形態に従って（図９参照）、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸の除去の後に得られるシュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物の乾燥粉末は、ヘキサン／クロロホルムの代わりにソックスレー抽出器において二塩化エチレン（ＥＤＣ）で６時間さらに抽出される。撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）においてクロロホルム抽出物を濾過および濃縮し、その後、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸の除去の後に、それを真空乾燥させて新鮮なアマランスのクロロホルム抽出物の粉末を得る。
【００７８】
一部の実施形態では、アマランスの抽出物を調製する方法が提供される。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得ることが含まれる。スラリーは、ペクチナーゼで処理されてペクチナーゼ処理された材料が得られる。ペクチナーゼ処理された材料を加熱してペクチナーゼ不活性化材料を得る。ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る。上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る。濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶および第２の上清を得る。第２の上清を１０℃で２４時間冷却して第３の上清およびシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶の第２のセットを得る。第３の上清を濾過して濾液を得る。濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る。濃縮された濾液を乾燥させて、粉末状抽出物を得る。粉末状抽出物を二塩化エチレンで乾燥させて、混合物を得る。混合物を濾過して第２の濾液を得る。第２の濾液を濃縮して濃縮された二塩化エチレン抽出物を得る。濃縮された二塩化エチレン抽出物を乾燥させて、粉末状二塩化エチレン抽出物を得る。
【００７９】
もう一つの実施形態では（図１１参照）、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸の除去の後に得られるシュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物の乾燥粉末は、ソックスレー抽出器においてヘキサンで６時間さらに抽出される。その後、撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）においてヘキサン抽出物を濾過し濃縮する。濃縮されたヘキサン抽出物を真空乾燥させて、ヘキサン抽出物の粉末を得る。それをメタノールに溶解し、既に調製したアムラ抽出物を添加し、機械撹拌機を用いて１００ｒｐｍで１時間撹拌する。蒸発させ、真空乾燥させて粉末を形成する。このように、アムラと組み合わせた、新鮮なアマランスのヘキサン抽出物は、ペクチナーゼによる処理およびシュウ酸除去の後に得られる。
【００８０】
ここで使用されるアムラ抽出物（図１０参照）は、以下の方法に従って調製することができる。
【００８１】
アムラの果実をパルプ化し、ソックスレー抽出器中で５時間６５℃でメタノールを用いてパルプを抽出する。得られるメタノール抽出物を、６０℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濾過し、濃縮して、濃縮された抽出物を形成する。濃縮された抽出物を５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させてアムラのメタノール抽出物の粉末を形成する。
【００８２】
一部の実施形態では、アマランスの抽出物を調製する方法が提供される。この方法には、アマランスの新鮮な葉および茎を破砕してスラリーを得ることが含まれる。次に、スラリーをペクチナーゼで処理して、ペクチナーゼ処理された材料を得る。ペクチナーゼ処理された材料を加熱してペクチナーゼ不活性化材料を得る。ペクチナーゼ不活性化材料を水で抽出して、上清および残渣を得る。上清を濃縮して濃縮された水抽出物を得る。濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間冷却した後、濾過してシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶および第２の上清を得る。第２の上清を１０℃で２４時間冷却して第３の上清および第２のシュウ酸またはシュウ酸塩の結晶を得る。第３の上清を濾過して濾液を得る。濾液を濃縮して濃縮された濾液を得る。濃縮された濾液を乾燥させて、粉末状抽出物を得る。粉末状抽出物をヘキサンで処理して混合物を得る。混合物を濾過して第２の濾液を得る。第２の濾液を濃縮して、濃縮されたヘキサン抽出物を得る。濃縮されたヘキサン抽出物を乾燥させて、粉末状ヘキサン抽出物を得る。粉末状ヘキサン抽出物をメタノールに溶解してアマランスのヘキサン抽出物の溶液を得る。アムラのメタノール抽出物の粉末を、アマランスのヘキサン抽出物の溶液に添加して、第２の混合物を得る。第２の混合物を蒸発させて蒸発物を得る。この蒸発物を乾燥させてアマランスおよびアムラ抽出物の粉末を得る。アムラ抽出物の粉末状メタノール抽出物を、新鮮なアムラ（エンブリカ・オフィシナリス（Ｅｍｂｌｉｃａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ））果実をパルプ化することを含むプロセスによって調製して、パルプを得る。パルプをメタノールで抽出して濾液を得る。濾液を濃縮して濃縮されたアムラのメタノール抽出物を得る。濃縮されたアムラのメタノール抽出物を乾燥させて、粉末状のアムラのメタノール抽出物を得る。
【００８３】
一部の実施形態では、アムラ抽出物／ターメリック抽出物／ブドウ種子抽出物／緑茶抽出物／ザクロ抽出物／ココア抽出物／ココナツ根抽出物／ローズマリー抽出物／ミント葉抽出物／スターアニス／スイートバジル抽出物／シナモン抽出物／クローブ抽出物／ショウガ抽出物／クミン種子抽出物／ブラックペッパー抽出物／フェヌグリーク抽出物を、全シュウ酸またはシュウ酸塩含有量の低い、ペクチナーゼ処理されたアマランスの新鮮な葉に添加して、アマランス抽出物を強化する。この組合せ抽出物は、血液中の一酸化窒素の量を高めるために哺乳動物に投与することができる。
【００８４】
一部の実施形態では（図１３参照）、アマランスの新鮮な葉および茎は、洗浄され、スクリューエキスペラーで破砕される。スクリューエキスペラーのトレイに得られる最初の汁は２７℃の室温下で供給タンクに収集される。最初の汁を遠心して濾液を得、残渣を取り出す。濾液を回転ディスク型清澄器（ＲＰＭ−１８０００）で清澄化して、最終の濾液および残渣を得る。残渣を除去し、最終濾液を回収する（アマランスの葉の清澄化された液汁）。
【００８５】
実行される試験／実験の一部の詳細と知見を下に例として説明する。
【実施例１】
【００８６】
メタノールによるアマランスの新鮮な葉の抽出物の調製
【００８７】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕した。破砕された材料をソックスレー抽出器に充填し、メタノール（３００Ｌ）で抽出した。抽出は、約６５℃の温度で５時間行った。抽出の完了後、６０℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で上清を濾過し、濃縮して、濃縮されたメタノール抽出物を形成した。濃縮されたメタノール抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアマランスのメタノール抽出物の粉末を得た（収量２Ｋｇ）。図１の抽出物の調製も参照されたい。
【００８８】
新鮮なアマランスのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーにより１．５％であることが分かった。
【実施例２】
【００８９】
水によるアマランスの新鮮な葉の抽出物の調製
【００９０】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕した。破砕されたアマランスの材料の１０倍量の水を添加して混合物を形成した。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して最初の残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。濃縮された水抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアマランスの水抽出物の粉末を得た。（収率３％）。図２の抽出物の調製も参照されたい。
【００９１】
新鮮なアマランスの水抽出物中の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーにより１．６％であることが分かった。
【実施例３】
【００９２】
メタノールによるアマランスの乾燥した葉の抽出物の調製
【００９３】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、乾燥させた。乾燥した葉および茎を粉末化した。粉末化したアマランスをソックスレー装置に充填し、メタノール（５００Ｌ）で抽出した。抽出は、約６５℃の温度で５時間行った。抽出の完了後、６０℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で上清を濾過し、濃縮して、濃縮されたメタノール抽出物を形成した。濃縮されたメタノール抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、乾燥したアマランスのメタノール抽出物の粉末を得た。１００ｋｇの新鮮なアマランスで開始した場合、２４Ｋｇの収量の乾燥したアマランスのメタノール抽出物の粉末が得られた。図３の抽出物の調製も参照されたい。
【００９４】
乾燥したアマランスのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーにより１．６５％であることが分かった。
【実施例４】
【００９５】
水によるアマランスの乾燥した葉の抽出物の調製
【００９６】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、乾燥させた。乾燥したアマランスを粉末化した。乾燥したアマランスの粉末の１０倍量の水をアマランスの粉末に添加して混合物を形成した。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して最初の残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。濃縮された水抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、乾燥したアマランスの水抽出物の粉末を得た。（収率２５％）。図４の抽出物の調製も参照されたい。
【００９７】
乾燥したアマランスの水抽出物中の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーにより１．７％であることが分かった。
【実施例５】
【００９８】
ペクチナーゼでの処理によるアマランス抽出物の収率の増強。
【００９９】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを作成した。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理した。スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させた。酵素処理の後、ペクチナーゼ処理した新鮮な葉を水で抽出した。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて水で実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して最初の残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。濃縮された水抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアマランスの水抽出物の粉末を得た（収量３．５Ｋｇ）。図５の抽出物の調製も参照されたい。
【０１００】
抽出物の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーによって測定して２％であることが分かった。
【実施例６】
【０１０１】
シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物。
【０１０２】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを作成した。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理した。スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させた。酵素処理の後、ペクチナーゼ処理した新鮮な葉を水で抽出した。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて水で実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。
【０１０３】
濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間保持してシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。上清をデカントして分離し、再び１０℃で２４時間保持して残りのシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。この溶液からの上清をデカントし、濾過し、真空下で蒸発乾固させて、シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を得た（２．２Ｋｇ）。図６の抽出物の調製も参照されたい。
【０１０４】
抽出物の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーによって測定して５％であることが見出された。
【実施例７】
【０１０５】
ヘキサンでの抽出によるアマランス抽出物中の硝酸塩の濃縮。
【０１０６】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを作成した。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理した。スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させた。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて水で実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して最初の残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。
【０１０７】
濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間保持してシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。上清をデカントして分離し、再び１０℃で２４時間保持して残りのシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。この溶液からの上清をデカントし、濾過し、真空下で蒸発乾固させて、シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を得た（２．２Ｋｇ）。
【０１０８】
このシュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を、ソックスレー抽出器中で６時間、ヘキサンでさらに抽出した。抽出物を濾過し、真空下で蒸発乾固させて、硝酸塩濃縮アマランス抽出物を得た（１．６Ｋｇ）。抽出物の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーによって測定して１８％であることが見出された。図７の抽出物の調製も参照されたい。
【実施例８】
【０１０９】
クロロホルムでの抽出によるアマランス抽出物中の硝酸塩の濃縮。
【０１１０】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを作成した。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理した。スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させた。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて水で実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して最初の残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。
【０１１１】
濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間保持してシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。上清をデカントして分離し、再び１０℃で２４時間保持して残りのシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。この溶液からの上清をデカントし、濾過し、真空下で蒸発乾固させて、シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を得た（２．２Ｋｇ）。
【０１１２】
このシュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を、冷浸によってクロロホルムでさらに抽出した。抽出物を濾過し、真空下で蒸発乾固させて、硝酸塩濃縮アマランス抽出物を得た（１．６Ｋｇ）。図８の抽出物の調製も参照されたい。
【０１１３】
抽出物の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーによって測定して１６％であることが見出された。
【実施例９】
【０１１４】
二塩化エチレン（ＥＤＣ）での抽出によるアマランス抽出物中の硝酸塩の濃縮。
【０１１５】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉および茎を洗浄し、破砕してスラリーを作成した。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理した。スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させた。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて水で実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。
【０１１６】
濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間保持してシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。上清をデカントして分離し、再び１０℃で２４時間保持して残りのシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。この溶液からの上清をデカントし、濾過し、真空下で蒸発乾固させて、シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を得た（２．２Ｋｇ）。
【０１１７】
このシュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランス抽出物を、ソックスレー抽出器中で８時間、ＥＤＣでさらに抽出した。抽出物を濾過し、真空下で蒸発乾固させて、硝酸塩濃縮アマランス抽出物を得た（１．６Ｋｇ）。図９の抽出物の調製も参照されたい。
【０１１８】
抽出物の硝酸塩含有量は、イオンクロマトグラフィーによって測定して１７％であることが見出された。
【実施例１０】
【０１１９】
アムラ抽出物の調製。
【０１２０】
量さ１０Ｋｇの新鮮なアムラ果実をパルプ化し、パルプをソックスレー装置中で８時間６５℃でメタノールで抽出した。抽出の完了後、上清を６０℃の温度で濾過し、濃縮して、アムラの濃縮されたメタノール抽出物を形成した。濃縮されたメタノール抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアムラ果実のメタノール抽出物を得た（収量：５００ｇｍ）。図１０の抽出物の調製も参照されたい。
【実施例１１】
【０１２１】
アムラ抽出物で濃縮したアマランス抽出物
【０１２２】
１．５Ｋｇの新鮮なアマランス葉抽出物（実施例７由来）をビーカーにとり、メタノール（５Ｌ）に溶解した。１５０ｇｍのアムラ抽出物（実施例１０由来）をこの溶液に添加し、機械撹拌機を用いて１００ｒｐｍで１時間撹拌した。得られる混合物を、真空下で蒸発乾固させて、合した抽出物を得た。図１１の抽出物の調製も参照されたい。
【０１２３】
この合した抽出物の硝酸塩含有量は１７％であった。
【実施例１２】
【０１２４】
アマランス葉粉末の調製方法。
【０１２５】
新鮮なアマランスを収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉を洗浄し、乾燥させた。乾燥した葉を粉末化してアマランス葉粉末を得た。図１２の抽出物の調製も参照されたい。
【実施例１３】
【０１２６】
アマランス葉からの汁の調製方法。
【０１２７】
新鮮なアマランス葉を収集した（２Ｋｇ）。新鮮なアマランスの葉を洗浄した。洗浄した葉をスクリューエキスペラーで破砕した。スクリューエキスペラーのトレイに得られる最初の汁を、２７℃の室温下で供給タンクに収集した。最初の汁を遠心して濾液を得、それを収集し、残渣を除去した。収集した濾液を回転ディスク型清澄器（ＲＰＭ−１８０００）で清澄化して、最終の濾液およびいくらかの残渣を得た。残渣を除去した後、最終の濾液（アマランスの葉の清澄化された液汁）を、２Ｋｇのアマランス葉から汁７５０ｍｌの収量で収集した。図１３の抽出物の調製も参照されたい。
【実施例１４】
【０１２８】
異なる種類のアマランスを用いるアマランスの新鮮な葉のメタノール抽出物の調製。
【０１２９】
アマランサス・トリコロールの新鮮な葉および茎を収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランサス・トリコロールの葉および茎を洗浄し、破砕した。破砕された材料をソックスレー抽出器に充填し、メタノール（３００Ｌ）で抽出した。抽出は、約６５℃の温度で５時間行った。抽出の完了後、６０℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で上清を濾過し、濃縮して、濃縮されたメタノール抽出物を形成した。濃縮されたメタノール抽出物を、５００ｍｍ水銀柱を超える真空下で乾燥させて、新鮮なアマランサス・トリコロールのメタノール抽出物の粉末を得た（生成物１）（収量２．１Ｋｇ）。
【０１３０】
新鮮なアマランサス・トリコロールのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより１．４８％であることが分かった。
【０１３１】
アマランスの異なる種類のメタノール抽出物は、上述と同じ手順に従って調製された。
【０１３２】
抽出に使用したアマランサスの異なる種類は、アマランサス・カウダツス、アマランサス・クルエンタス、アマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリディスである。異なる種類のメタノール抽出の後に得られたのは以下である。
【０１３３】
１．新鮮なアマランサス・カウダツスのメタノール抽出物の粉末（生成物ＩＩ）（収量１．９５Ｋｇ）。
【０１３４】
新鮮なアマランサス・カウダツスのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１．５５％であることが分かった。
【０１３５】
２．新鮮なアマランサス・クルエンタスのメタノール抽出物の粉末（生成物ＩＩＩ）（収量２Ｋｇ）。
【０１３６】
新鮮なアマランサス・クルエンタスのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１．５３％であることが分かった。
【０１３７】
３．新鮮なアマランサス・ビリツムのメタノール抽出物の粉末（生成物ＩＶ）（収量２．０５Ｋｇ）。
【０１３８】
新鮮なアマランサス・ビリツムのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１．５％であることが分かった。
【０１３９】
４．新鮮なアマランサス・ビリディスのメタノール抽出物の粉末（生成物Ｖ）（収量２．１５Ｋｇ）。
【０１４０】
新鮮なアマランサス・ビリディスのメタノール抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１．４９％であることが分かった。
【実施例１５】
【０１４１】
ヘキサンでの抽出によるアマランス（異なる種類）抽出物中の硝酸塩の濃縮。
【０１４２】
アマランサス・トリコロールの新鮮な葉および茎を収集した（１００Ｋｇ）。新鮮なアマランサス・トリコロールの葉および茎を洗浄し、破砕して、スラリーを作成した。スラリーをペクチナーゼ（１％）で２時間処理した。スラリーを９０℃で１０分間加熱することによって酵素を失活させた。抽出は、還流冷却器を備えた抽出器を用いて水で実施した。抽出器の底部に、ポリプロピレン（１００μｍ）の濾布を取り付けた。混合物を１時間還流して残渣および上清を得た。残渣および上清は、遠心ポンプを用いてポリプロピレン濾布を通して抽出器底部から上清を抜き取ることによって分離した。最初の抽出の後、最初の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第２の残渣および上清を得た。第２の残渣を１０倍量の水でさらに抽出して、第３の残渣および上清を得た。全ての上清をプールし、８５℃の温度で撹拌薄膜蒸発器（ＡＴＦＥ）中で濃縮して、濃縮された水抽出物を形成した。
【０１４３】
濃縮された水抽出物を１０℃で４８時間保持してシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。上清をデカントして分離し、再び１０℃で２４時間保持して残りのシュウ酸またはシュウ酸塩を結晶化させた。この溶液からの上清をデカントし、濾過し、真空下で蒸発乾固させて、シュウ酸またはシュウ酸塩を含まないアマランサス・トリコロールの抽出物を得た（２．２２Ｋｇ）。
【０１４４】
このシュウ酸またはシュウ酸塩を含まない、アマランサス・トリコロールの抽出物を、ソックスレー抽出器中で６時間、ヘキサンでさらに抽出した。抽出物を濾過し、真空下で蒸発乾固させて、硝酸塩濃縮アマランサス・トリコロールの抽出物を得た（生成物Ｉ）（１．６３Ｋｇ）。
【０１４５】
抽出物の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣによって測定して１７．７％であることが見出された。
【０１４６】
アマランサスの異なる種類の硝酸塩濃縮抽出物を、上述と同じ手順に従って調製した。
【０１４７】
抽出に使用したアマランサスの異なる種類は、アマランサス・カウダツス、アマランサス・クルエンタス、アマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリディスである。異なる種類の抽出の後に得られたのは以下である。
【０１４８】
１．新鮮なアマランサス・カウダツスの硝酸塩濃縮抽出物の粉末（生成物ＩＩ）（収量１．６２Ｋｇ）。
【０１４９】
新鮮なアマランサス・カウダツスの硝酸塩濃縮抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１７．９％であることが分かった。
【０１５０】
２．新鮮なアマランサス・クルエンタスの硝酸塩濃縮抽出物の粉末（生成物ＩＩＩ）（収量１．６Ｋｇ）。
【０１５１】
新鮮なアマランサス・クルエンタスの硝酸塩濃縮抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１８％であることが分かった。
【０１５２】
３．新鮮なアマランサス・ビリツムの硝酸塩濃縮抽出物の粉末（生成物ＩＶ）（収量１．５８Ｋｇ）。
【０１５３】
新鮮なアマランサス・ビリツムの硝酸塩濃縮抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１８．３％であることが分かった。
【０１５４】
４．新鮮なアマランサス・ビリディスの硝酸塩濃縮抽出物の粉末（生成物Ｖ）（収量１．６１Ｋｇ）。
【０１５５】
新鮮なアマランサス・ビリディスの硝酸塩濃縮抽出物中の硝酸塩含有量は、ＨＰＬＣにより、１８．１％であることが分かった。
【実施例１６】
【０１５６】
イオンクロマトグラフィーによるアマランス中の硝酸塩および亜硝酸塩含有量の定量。
【０１５７】
試料の５０μｌのアリコートを、ピペットで３００μｌガラス管（Ｓｃｉ−Ｖｉ、Ｃｈｒｏｍａｃｏｌ、Ｗｅｌｗｙｎ、ＵＫ）に移した。アセトニトリル（５０μｌ）を添加し、この管とオートサンプラーに制限される量のインサートスプリングを４ｍｌ  ＷＩＳＰバイアルの中に入れ、蓋をかぶせ、混合し、２０００ｇで２分間遠心した。上清を分析用に注入した。
【０１５８】
ＷＩＳＰオートサンプラー（Ｗａｔｅｒｓ、Ｗａｔｆｏｒｄ、ＵＫ）を取り付けた８８２コンパクトＩＣプラス・クロマトグラフ（Ｍｅｔｒｏｈｍ、ＵＳＡ）。カラムはＭｅｔｒｏｓｅｐ  Ａ  Ｓｕｐｐ５〜１５０／４．０イオン交換カラム、１５０ｍｍ×４ｍｍ（Ｍｅｔｒｏｈｍ）であり、溶出剤は、１．７ｍＭ炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、１．８ｍＭ炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）であり、１．５ｍｌ／分でポンプで送液した。検出は、亜鉛ランプ（Ｗａｔｅｒｓ）を取り付けた４４１検出器を用いる導電率（ＤＸ１００）および２１４ｎｍ吸光度によった。データを獲得し、８４０データシステム（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて処理した。
【実施例１７】
【０１５９】
ＨＰＬＣ法による硝酸塩および亜硝酸塩の定量。
【０１６０】
硝酸塩（ＮＯ３）の標準液を、８１．５３ｍｇの硝酸カリウム（純度９９％）を秤量して１００ｍｌの標準フラスコに入れ、水で標線に合わせることによって調製した。１００ｍｌ溶液から１ｍｌをピペットで取り出して５０ｍｌ標準フラスコに入れ、標線まで水を加えた。
【０１６１】
亜硝酸塩（ＮＯ２）の標準液を、９２．４９ｍｇの亜硝酸カリウム（純度９６％）を秤量して１００ｍｌの標準フラスコに入れ、水で標線に合わせることによって調製した。１００ｍｌ溶液から１ｍｌをピペットで取り出して５０ｍｌ標準フラスコに入れ、標線まで水を加えた。再び５０ｍｌ溶液から１ｍｌをピペットで取り出して５０ｍｌ標準フラスコに入れ、再び標線まで水を加えた。
【０１６２】
１ｍｌの亜硝酸塩標準液および１ｍｌの移動相Ａ（１．３ｇの水酸化テトラブチルアンモニウム溶液（１０％水性）を秤量）を、１０００ｍｌ標準フラスコに添加した。標線まで水を加えた。その後、濃Ｈ２ＳＯ４でＰＨを２．５０に調節し、２００μ  Ｇｒｉｅｓｓ  Ａ（５０．００ｍｇスルファニル酸を秤量し、１．５ｍｌ酢酸および３ｍｌ精製水を添加し、溶解した）および２分後に、２００μ  Ｇｒｉｅｓｓ  Ｂ（４．００ｍｇ  １−ナフチルアミンを秤量し、４．０ｍｌ酢酸を添加し、溶解した）をプラスチック管に添加した。注入の前に０．４５μｍメンブランフィルターに通して濾過した。
【０１６３】
試料（アマランス抽出物）は、２０〜２５ｍｇの抽出物粉末を正確に秤量して２５ｍｌ標準フラスコに入れ、標線まで脱塩水を加えることによって調製した。０．４５μｍメンブランフィルターに通して濾過し、２つの部分に分割した。１つの部分は硝酸塩の定量に使用し、もう一方の部分は亜硝酸塩の定量に使用した。
【０１６４】
ＮＯ３は、ＨＰＬＣによってＢＥＴＡＳＩＬ  Ｃ−１８カラム（２５０×４．６ｍｍ）で、脱イオン水中の水酸化テトラブチルアンモニウム、移動相としてアセトニトリルおよびメタノールならびに２２２ｎｍでのフォトダイオードアレイ検出を用いて分析した。ＮＯ２は、同じ条件を用いて５２０ｎｍで分析した。
【０１６５】
亜硝酸塩％＝試料中の亜硝酸塩ピーク面積×標準液の量×標準液の純度
標準液中の亜硝酸塩ピーク面積×試料の重量
硝酸塩％＝試料中の硝酸塩ピーク面積×標準液の量×標準液の純度標準液中の硝酸塩ピーク面積×試料の重量
【実施例１８】
【０１６６】
一酸化窒素（ＮＯ）の定量。
【０１６７】
血漿中の全ＮＯ含有量は、血漿中の全硝酸塩（ＮＯ３）および亜硝酸塩（ＮＯ２）の合計と解釈することができる。
【０１６８】
（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２０１０）：３（３）：１５３−１５９，Ｐｌａｓｍａ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１，Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ａｎｄ  Ｏｘｉｄｅ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ａ  Ｍｕｌｔｉｅｔｈｎｉｃ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃｏｃｈｏｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ａｒａｂ  Ｅｍｉｒａｔｅｓ）。
【０１６９】
ＮＯレベルをＮＯの２つの主な代謝産物、亜硝酸塩および硝酸塩の合計として記録した。
【実施例１９】
【０１７０】
全シュウ酸含有量の定量。
【０１７１】
シュウ酸を、Ｃ１８カラム（２５０×４．６ｍｍ、Ｇｅｍｉｎｉ  ５μｍ、ＵＳＡ）で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ）によって推定した。移動相は、５ｍＭ  Ｈ２ＳＯ４であり、１ｍｌ／分の溶出剤流量で無勾配条件下で使用した。シュウ酸を２１０ｎｍで検出した。
【０１７２】
標準液は、５ｍｇの標準のシュウ酸（純度９５％）を秤量し、６ｍＭ  Ｈ２ＳＯ４で５０ｍｌとすることによって調製された。試料は、５０ｍｇのアマランスの乾燥抽出物を秤量し、６ｍＭ  Ｈ２ＳＯ４で５０ｍｌとすることによって調製された。試料と標準液のどちらも、ＨＰＬＣカラムへの注入の前に０．２μｍメンブランフィルターを通して別々に濾過された。注入量は２０μｌであった。シュウ酸を２１０ｎｍで検出した。標準液および試料の面積を比較することにより、試料中に存在するシュウ酸の百分率を数量化した。
シュウ酸％＝試料の面積×標準液の量×標準液の純度
【０１７３】
試料の量×標準液の面積
【実施例２０】
【０１７４】
カリウム含有量の定量。
【０１７５】
カリウムは、原子吸光分析（ＡＡＳ）によって定量した。カリウム標準液（ＫＣ１）の１００ｐｐｍ溶液を調製した。濃度の異なる７つの異なるカリウム標準液を、上記１００ｐｐｍ溶液を単に希釈することによって調製した。試料溶液および標準液をＡＡＳ機において７６６．５ｎｍで測定して、試料溶液中のカリウム含有量の定量のための検量線を作成した。
【実施例２１】
【０１７６】
速溶錠の調製。
【０１７７】
速溶錠は、Ｆａｓｔ−Ｍｅｌｔ（１１９．２ｇｍ）とアマランス硝酸塩濃縮（硝酸塩１８％）抽出物（８０ｇｍ）を混合することにより作成した（実施例７の通り）。錠剤の打錠の前にステアリン酸マグネシウム（０．８ｇｍ）を混合物に添加した。２００ｍｇの重さの錠剤を、５Ｋｇの硬度を得るために８ｍｍダイを用いて自動打錠機で打錠した。各々の錠剤の最終の組成は、Ｆ−Ｍｅｌｔ  １１９．２ｍｇ、抽出物８０ｍｇ（硝酸塩約１４．４ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム０．８ｍｇであった。錠剤の崩壊時間は約３０秒であった。
【実施例２２】
【０１７８】
速溶錠の調製。
【０１７９】
速溶錠を、Ｆａｓｔ−Ｍｅｌｔ（７４５ｇｍ）と実施例７の通り調製したアマランス硝酸塩濃縮（硝酸塩１８％）抽出物（５００ｇｍ）を混合することにより作成した。錠剤の打錠の前にステアリン酸マグネシウム（５ｇｍ）を混合物に添加した。１２５０ｍｇの重さの錠剤を、５Ｋｇの硬度を得るために１２ｍｍダイを用いて自動打錠機で打錠した。各々の錠剤の最終の組成は、Ｆ−Ｍｅｌｔ  ７４５ｍｇ、抽出物５００ｍｇ（硝酸塩約９０ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム５ｍｇであった。錠剤の崩壊時間は約３０秒であった。
【０１８０】
上記抽出物を以下に置き換えることにより、同様に速溶錠を作成した。
【０１８１】
１．アマランスの新鮮な葉のメタノール抽出物（硝酸塩１．５％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇのＦ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇの抽出物（硝酸塩約７．５ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【０１８２】
２．アマランスの新鮮な葉の水抽出物（硝酸塩１．６％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇのＦ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇの抽出物（硝酸塩約８ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【０１８３】
３．アマランスの乾燥した葉のメタノール抽出物（硝酸塩１．６５％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇのＦ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇの抽出物（硝酸塩約８．２５ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【０１８４】
４．アマランスの乾燥した葉の水抽出物（硝酸塩１．７％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇのＦ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇの抽出物（硝酸塩約８．５ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【０１８５】
５．ペクチナーゼ処理された、アマランスの新鮮な葉の水抽出物（硝酸塩２％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇのＦ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇの抽出物（硝酸塩約１０ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【０１８６】
６．硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムの抽出物（硝酸塩１８．３％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇ  Ｆ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇの抽出物（硝酸塩約９１．５ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【０１８７】
７．硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリズス（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｖｉｒｉｄｕｓ）の抽出物（硝酸塩１８．１％）（速溶錠の最終組成は、７５０ｍｇ  Ｆ−Ｍｅｌｔ、５００ｍｇ
の抽出物（硝酸塩約９０．５ｍｇ）および５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含有）
【実施例２３】
【０１８８】
チューインガムの調製。
【０１８９】
チューインガムは、アマランス硝酸塩濃縮抽出物（１個のチューインガムに対して８０ｍｇ）をベース材料（１個のチューインガムに対して９２０ｍｇ）に添加することによって調製した。ベース材料は、約３８重量％の量のポリ酢酸ビニル、約１０重量％の量の天然ゴム、約１１％重量％の量の部分水素化大豆油、約１２％重量％の量のポリイソブチレン、約１３．９２％重量％の量の第二リン酸カルシウム、約３％重量％の量のトリアセチン、約７％重量％の量のモノ−ジ−グリセリド、約５％重量％の量の液体グルコース、および約０．０８％重量％の量のＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシルトルエン）からなる。
【０１９０】
チューインガム成分（液体グルコースおよびＢＨＴを除く）を、強い、水平に置かれたＺ−刃を備えるミキサーで混合した。それにより成分は均質なガム素材に加工される。ミキサーを約５０〜６０℃の温度に加熱した。混合プロセスは、３分間ガムベースを混合および溶融することから始まる。
【０１９１】
次に液体グルコースを添加し、４分間混合した。その後、アマランス硝酸塩濃縮抽出物を添加し、混合物をさらに６分間混合した。次に、ＢＨＴを添加し、さらに５分間混合した。混合が完了すると、ガム素材を取り出してトレイの上に載せ、１〜２ｃｍの厚さのシートに圧延した。チューインガム素材をその後約１５〜２０分間、ガム素材の正しいテクスチャが達成されるまで冷却した。
【０１９２】
次に、形成し冷却したチューインガムコアを、コーティングおよび研磨プロセスの間回転する丸いステンレス鋼製コーティング釜の中でコーティングし、コーティング懸濁液で研磨した。コーティング懸濁液は、キシリトール（５８．２％）、マンニトール（１０．６％）、ゼラチン（１．２％）、二酸化チタン（０．９％）、アセスルファムＫ（０．１％）および水（２９％）からなる。
【０１９３】
研磨は、カルナウバロウ（０．１％）がコーティングされたチューインガムに一度に添加された、回転する釜の中で行われた。研磨は、輝く表面が達成されるまで、一般的に１０〜２０分間行った。各々のチューインガムは８０ｍｇの抽出物（約１４．４ｍｇの硝酸塩）を含んだ。
【実施例２４】
【０１９４】
ラットにおける一酸化窒素レベル。
【０１９５】
体重２００〜２５０ｇｍの１８匹のアルビノラット（スプラーグドーリー（ＳＤ）系）を研究に使用した。動物を動物収容条件（温度２４±２℃、相対湿度６５％、１２時間の明／暗サイクル）に１週間順応させた。動物を、各群が６匹の動物を含む３つの群に分割した。動物を一晩絶食させ、血液を採取してベースライン一酸化窒素レベルを求めた。動物は以下の通り処理された：
【０１９６】
群１：溶媒対照
群２：アマランス乾燥葉粉末−１ｇｍ／ｋｇ
群３：アマランス硝酸塩濃縮抽出物（実施例７由来）−１００ｍｇ／ｋｇ摂食の３０分後、全ての動物からＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）被覆管に血液を採取し、直ちに４０００ｒｐｍ（毎分回転数）で１０分間管を遠心分離することによって血漿を分離した。血漿は分析まで−８０℃以下で貯蔵した。
血漿の一酸化窒素（ＮＯ）含有量は、μモル／Ｌとして報告された。
【表１】
2016529221.tif 000002
【実施例２５】
【０１９７】
マウスにおける一酸化窒素レベル。
【０１９８】
体重２５〜３０ｇｍの１８匹のスイスアルビノマウスを研究に使用した。動物を動物収容条件（温度２４±２℃、相対湿度６５％、１２時間の明／暗サイクル）に１週間順応させた。動物を、各群が６匹の動物を含む３つの群に分割した。動物を一晩絶食させ、血液を採取してベースライン一酸化窒素レベルを求めた。動物は以下の通り処理された：
【０１９９】
群１：溶媒対照
群２：アマランス乾燥葉粉末（実施例１２由来）−１ｇｍ／ｋｇ
群３：アムラ抽出物で濃縮したアマランス抽出物（実施例１１由来）−２００ｍｇ／ｋｇ
【０２００】
摂食の３０分後、全ての動物からＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）被覆管に血液を採取し、直ちに４０００ｒｐｍで１０分間管を遠心分離することによって血漿を分離した。血漿は分析まで−８０℃以下で貯蔵した。
【０２０１】
血漿の一酸化窒素（ＮＯ）含有量は、μモル／Ｌとして報告される。
【表２】
2016529221.tif 000003
【実施例２６】
【０２０２】
ラットにおける経口毒性研究。
【０２０３】
この研究は、化学物質の試験のためのＯＥＣＤガイドライン（経済協力開発機構）（Ｎｏ．−４０８）に従って実行された。１００匹のウィスターアルビノラット（雄５０匹／雌５０匹）を、各群２０匹の動物（雄１０匹および雌１０匹）からなる４つの群、および各群１０匹の動物（雄５匹および雌５匹）からなる２つの群（サテライト群）に分割した。投薬の開始の前に７日間動物を順応させた。各々２０匹のラット（雄１０匹および雌１０匹）からなる３つの群に、シリンジの付いたカニューレを用いて９０日間、アマランス硝酸塩濃縮抽出物（実施例８由来）を、１００ｍｇ／体重ｋｇ（低用量）、５００ｍｇ／体重ｋｇの投薬レベルで（中用量）および１０００ｍｇ／体重ｋｇ（高用量）の投薬レベルでそれぞれ週に７日間投与した。同様に、２０匹のラット（雄１０匹および雌１０匹）からなる４つの群に、トウモロコシ油のみ（溶媒）を９０日間経口投与し、対照群と名付けた。
【０２０４】
各々１０匹のラット（雄５匹および雌５匹）からなる２つのさらなるサテライト群も維持し、「サテライト対照」および「サテライト高用量」と名付けてトウモロコシ油（溶媒）およびアマランス硝酸塩濃縮抽出物（１０００ｍｇ／ｋｇ）をそれぞれ９０日間投与した。試験群および対照群の動物を最後に犠牲にした後、両方のサテライト群の動物（サテライト対照およびサテライト高用量）をさらに２８日間観察下に置いて、可逆性、持続性または遅延毒作用を確認した（存在する場合）。動物は、行動、外見および中毒学的徴候および症状について毎日観察された。詳細な血液学的および化学的評価のために、最後に犠牲にする前に全ての動物から血液を採取した。尿試料も実験の終了時に全ての動物から採取した。化合物関連作用を評価するために用いた判断基準には；外見、行動、罹患率、死亡率、体重、飼料消費量、血液学的および生化学的分析、尿分析、器官重量、剖検および組織病理学が含まれた。
【０２０５】
処置に関連する毒性の徴候および症状は、低用量（１００ｍｇ／体重ｋｇ）、中用量（５００ｍｇ／体重ｋｇ）、高用量（１０００ｍｇ／体重ｋｇ）およびサテライト高用量（１０００ｍｇ／体重ｋｇ）群の動物において、それらのそれぞれの対照対応群と比較した場合に、観察されなかった。全ての試験および対照群動物の体重は毎週記録した。全ての処置群およびサテライト群動物（ＬＤ、ＩＤ、ＨＤおよびサテライトＨＤ）の体重増加は、それらのそれぞれの対応物に匹敵した。低用量、中用量、高用量およびサテライト高用量の動物の飼料消費量は、対照群およびサテライト対照群動物に匹敵した。
【０２０６】
対照群動物と比較した場合に、低用量（１００ｍｇ／体重ｋｇ）、中用量（５００ｍｇ／体重ｋｇ）、高用量（１０００ｍｇ／体重ｋｇ）およびサテライト高用量（１０００ｍｇ／体重ｋｇ）群の動物の血液学的パラメータに変動はなかった。同様に、全ての処置群、すなわち低用量、中用量および高用量の動物の生化学的パラメータは、最後に犠牲となった時点の対照群動物の生化学的パラメータに匹敵した。サテライト高用量群の生化学的パラメータもそのサテライト対照対応物に匹敵した。試験群の血液学的（ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ）パラメータならびに生化学的パラメータは、それぞれの対照群とあまり異ならなかった。
【０２０７】
尿試料を実験の終了時に全ての動物から採取した。対照群と比較した場合に、用量群動物の何れの尿パラメータにおいても重要な変化は見られなかった。サテライト群の動物を後処理の２８日後に犠牲にした。研究の間、処置群においてもサテライト群においても動物は１匹も死ななかった。９０日の投薬期間の終了後、全ての動物（処置および対照）を、両方のサテライト群を除いて犠牲にし、肉眼での病理所見について調べた。全ての動物（処置および対照）の器官から、付着する脂肪組織を切り取り、その重量を量った。全ての処置群の動物の器官重量は、それらのそれぞれの対応物に匹敵した。低用量群、中用量群、高用量群およびサテライト高用量群の動物において、それらのそれぞれの対応物と比較した場合に、著しい病理組織学的変化はなかった。
【０２０８】
この研究では、９０日間の経口経路によるウィスターラットへの１０００ｍｇ／体重ｋｇの投薬レベルでのアマランス硝酸塩濃縮抽出物の反復投与は、その対応する動物の対照群と比較した場合に、観察可能な毒性作用を誘導しなかった。
【実施例２７】
【０２０９】
ヒト被験体における一酸化窒素レベル。
【０２１０】
１８名の健康なヒトボランティア（３５〜５５歳）を研究に採用した。被験者は、研究の１週間前に標準的な食事（硝酸塩／亜硝酸塩を含む食物を除去したもの）を与えられた。被験者を、各群が６名の被験者を含む３つの群に分割した。被験者を一晩絶食させ、血液を採取してベースライン一酸化窒素レベルを求めた。採血の後、被験者は以下の通り処置された：
【０２１１】
群１：溶媒対照
群２：アマランスの新鮮な葉自体−１００ｇｍ
群３：アマランス硝酸塩濃縮抽出物を含有するアマランス速溶錠（実施例２１の通り調製された錠剤あたり１４．４ｍｇの硝酸塩、および実施例７の通り調製された錠剤を作成するために使用された抽出物）
【０２１２】
摂食の３０分後、全ての被験者からＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）被覆管に血液を採取し、直ちに４０００ｒｐｍで１０分間管を遠心分離することによって血漿を分離した。血漿は一酸化窒素含有量の分析まで−８０℃以下で貯蔵した。血漿の一酸化窒素（ＮＯ）含有量は、μモル／Ｌとして報告される。
【表３】
2016529221.tif 000004
【実施例２８】
【０２１３】
ヒト被験者における抗高血圧活性。
【０２１４】
高血圧前症［ＳＢＰ（収縮期血圧）、１３０〜１４０ｍｍＨｇおよびＤＢＰ（拡張期血圧）、８５〜９０ｍｍＨｇ］または高血圧症（ＳＢＰ（収縮期血圧）、１４０ｍｍＨｇ以上およびＤＢＰ（拡張期血圧）、９０ｍｍＨｇ以上）をもつ１０名の４０〜６０歳の被験者（男性６名女性４名）を研究に登録した。除外基準には妊婦および授乳中の女性、過去３カ月のうちに微量元素サプリメントを摂取した人、胃または利尿の治療を受けている人、急性腎不全の患者、または最近の手術または急性感染の病歴のある人が含まれた。全ての被験者は、研究の目的を知らされ、研究全体を通して自由に質問することができ、調査者の１人が証人として署名したインフォームドコンセントの用紙に署名した。
【表４】
2016529221.tif 000005
【０２１５】
患者に、６０錠の速溶性の口で溶ける錠剤（実施例２１由来）を含有するビンを与え、毎日１錠を２回、１２時間間隔で３０日間服用するよう指示した。処置中、食生活は制限されなかった。しかし、ＰＧの作用に対して起こり得る干渉を避けるために、試験の間のビタミンサプリメントおよび機能性食品の消費を禁止した。各々の被験者のＢＰ（血圧）は、開始時、１５日および治験の最後に測定した。被験者のＢＰ（血圧）は、デジタルＢＰ分析計を用いて測定し、２つの測定値の平均として記録した。測定は常に１５分の休息後に同じ場所および時間に行われた。
【実施例２９】
【０２１６】
マウスにおける水泳持久力試験。
【０２１７】
水泳持久力研究のため、実験の前に、各々のマウスを試験の実現可能性について試験した。水泳群の全てのマウスは泳ぐことができた。マウスを、各群が６匹の動物を含む３つの群に分割した。以下の処置をマウスのそれぞれの群に与えた：
【０２１８】
群１：溶媒対照
群２：アマランス乾燥葉粉末（実施例１２由来）−１ｇｍ／ｋｇ
群３：アマランス硝酸塩濃縮抽出物（実施例８由来）−１００ｍｇ／ｋｇ処置は４週間行われた。
【０２１９】
全てのマウスを、２５℃で維持される、水を１９インチの深さまで満たした水プール（４８×２８×２４インチ）の中で泳がせた。水泳試験中、各々のマウスは尾をプラスチックのひものついた４つのペーパークリップで固定された。ペーパークリップとプラスチック糸の重量は約１．８１グラムであった。この重さを身につけて、全てのマウスに非常に一生懸命に泳ぐことを強制した。全てのマウスを消耗する（肢の動きを止めて浮く）まで泳がせた。マウスが消耗するまでの最大水泳時間を水泳持久能力の指標として用いた。この試験は最初とその後毎週４週まで実施した。血液も最初と毎週後に採取して血漿中の一酸化窒素レベルを求めた。
【表５】
2016529221.tif 000006
【表６】
2016529221.tif 000007
【実施例３０】
【０２２０】
マウスにおけるランニング持久力試験。
【０２２１】
ランニング持久力研究のため、ランニング研究の前に３日間ロータロッド装置（トレッドミル）で個々のマウスにランニングの訓練をした。訓練中、ロータロッドの速度を徐々に増加させて動物をより強く運動させ、少なくとも１分間走らせた。マウスを、各群が６匹の動物を含む３つの群に分割した。以下の処置をマウスのそれぞれの群に与えた：
【０２２２】
群１：溶媒対照
群２：アマランス乾燥葉粉末（実施例１２由来）−１ｇｍ／ｋｇ
群３：アマランス硝酸塩濃縮抽出物（実施例９由来）−１００ｍｇ／ｋｇ処置は４週間行われた。
【０２２３】
ロータロッドトレッドミルは５つの試験ゾーンを有し、各々のゾーンは動物がトレッドミルから落下すると感知するフォトビーン（ｐｈｏｔｏ  ｂｅａｎ）を有し、それはトレッドミル上でのランニング時間を自動的に計算するためにコンピュータに接続されていた。ロータロッドの速度は３５ＲＰＭ（毎分回転数）に設定された。消耗（ロータロッドからの落下）までの最大ランニング時間をランニング持久能力の指標として用いた。各々のマウスの消耗までの最大ランニング時間を記録した。この試験は最初とその後毎週４週まで実施した。
【表７】
2016529221.tif 000008
【実施例３１】
【０２２４】
ラットにおける性的機能研究。
【０２２５】
１２匹の雄ウィスターラット（２００〜２５０ｇｍ）を、各々６匹の動物を含む２つの群に無作為化した。動物を３０日間、溶媒／抽出物で処置し、様々な試験パラメータを評価した。
【０２２６】
群１（溶媒のみ）対照の役割を果たした。
群ＩＩ：アムラ抽出物で濃縮したアマランス抽出物（実施例１１由来）−毎日１００ｍｇ／Ｋｇ（経口）
【０２２７】
定位行動分析
【０２２８】
定位活動の分析を実行し、３つの区分で分析した。雄ラットの定位行動を、以下の採点方法を用いて決定した：雌に対する定位−（嗅ぐ動作ごとに１点および舐める動作ごとに２点）
自己に対する定位−（非生殖器グルーミングに１点および生殖器グルーミングに２点）
環境に対する定位−（探索に１点、立ち上がりに２点およびクライミングに３点）
【０２２９】
ラットをその定位活動について毎日観察した。処置の０、１５、３０日後の累積得点を記録した。
【０２３０】
性的行動分析
【０２３１】
雄ラットを、ケージ環境に慣れさせるために観察用ガラスチャンバに入れた。次に、性的受容雌ラットを試験ケージの内部に側面ドアから静かにケージに入らせた。以下のパラメータを考慮して行動観察を行った。
【０２３２】
マウント行動−それは以下のパラメータで決定され特徴付けられた。
（Ａ）マウント頻度−３０分の観察の間のマウントの平均回数。
（Ｂ）マウント潜時−雌がケージの中に導入されてから最初のマウントまでのレグタイム（ｌｅｇ  ｔｉｍｅ）。
挿入行動−それは以下のように評価された。
（Ａ）挿入頻度−３０分の観察の間の挿入の平均回数。
（Ｂ）挿入潜時−挿入潜時（ＩＬ）は雌がケージの中に導入されてから最初の挿入までの時間とみなされた。
【０２３３】
陰茎勃起指数
【０２３４】
陰茎勃起（ＰＥ）は、観察期間の間にラットがその直立した陰茎を舐めるためにかがんだ時に決定した。陰茎勃起指数（ＰＩ）は、３０分の観察期間中の陰茎勃起の少なくとも１つのエピソードを示すラットの百分率に陰茎勃起の平均回数を乗算することによって求めた。
【０２３５】
ＰＩ＝陰茎勃起を示すラット％×勃起の平均回数。
表：雄ラットにおける濃縮されたアマランス抽出物の定位活動への影響
【表８−１】
2016529221.tif 000009
【表８−２】
2016529221.tif 000010
表：雄ラットにおける濃縮されたアマランス抽出物の性的機能パラメータへの影響
【表９】
2016529221.tif 000011
【実施例３２】
【０２３６】
ヒト被験者の血漿中の硝酸塩（ＮＯ３）亜硝酸塩（ＮＯ２）および一酸化窒素（ＮＯ）含有量。
【０２３７】
３２名の健康なヒトボランティア（３５〜５５歳）を研究に採用した。被験者は、研究の１週間前に標準的な食事を与えられた。被験者を、各群が４名の被験者を含む８つの群に分割した。被験者を一晩絶食させ、血液を採取してベースラインＮＯ３およびＮＯ２レベルを決定した。ベースラインの採血の後、被験者は以下の通り処置された：
【０２３８】
群１：溶媒対照
群２：アマランス葉の新鮮な汁自体−１００ｍｌ（硝酸塩１００ｍｇ／汁１００ｍｌ）（実施例１３の通り調製）
群３：アマランスの新鮮な葉のメタノール抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり７．５ｍｇの硝酸塩）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例１の通りである）
群４：アマランス乾燥葉のメタノール抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり８．２５ｍｇの硝酸塩）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例３の通りである）
群５：アマランスの新鮮な葉の水抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩８ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例２の通りである）
群６：アマランス乾燥葉の水抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩８．５ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例４の通りである）
群７：ペクチナーゼ処理された、アマランスの新鮮な葉の水抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩１０ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例５の通りである）
群８：アマランス硝酸塩濃縮抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩９０ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例７の通りである）
【０２３９】
全ての被験者は、水／汁を経口的に消費することが許され（群番号１〜２）、アマランス錠を口腔にとどめて溶解させた（群番号３〜８）。
【０２４０】
錠剤／汁／溶媒の摂食から１時間、２時間および３時間後に、全ての被験者から血液をＥＤＴＡ被覆管に採取した。この管を５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することにより、血漿を直ちに分離した。血漿試料は分析まで−８０℃以下で貯蔵した。このようにして得た血漿を、アセトニトリルを用いて除タンパク質し、ＨＰＬＣを用いる硝酸塩／亜硝酸塩の定量に上清液体を使用した。ＮＯ３は、ＨＰＬＣによってＢＥＴＡＳＩＬ  Ｃ−１８カラム（２５０×４．６ｍｍ）で、脱イオン水中の水酸化テトラブチルアンモニウム、移動相としてアセトニトリルおよびメタノールならびに２２２ｎｍでのフォトダイオードアレイ検出を用いて分析した。ＮＯ２は、同じ条件を用いて５２０ｎｍで分析した。血漿中のＮＯ３およびＮＯ２レベルはμモル／Ｌとして報告された。
表：血漿中の硝酸塩（ＮＯ３）含有量
【表１０】
2016529221.tif 000012
表：血漿中の亜硝酸塩（ＮＯ２）含有量
【表１１】
2016529221.tif 000013
表：血漿中の全一酸化窒素（ＮＯ）含有量
【表１２】
2016529221.tif 000014
【０２４１】
アマランスの新鮮な汁自体の消費は、１時間後にＮＯ３含有量をわずかに増加させた。アマランスの新鮮な葉および乾燥葉からのメタノール抽出物もＮＯ３含有量のわずかな増加を示した。ペクチナーゼ処理された、アマランスの新鮮な葉の水抽出物で作成した錠剤は、その他の錠剤の消費よりも少し多い増加を示した。しかし、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を含有する速溶錠を消費した後、ＮＯ３レベルは１時間後にベースライン値の６倍に増加した。このベースラインからの増加は３時間まで維持される。溶媒を投与した後にはＮＯ３レベルに著しい変化はなかった。
【０２４２】
ＮＯ２の場合もまた、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を含有する速溶錠は、ＮＯ２レベルを６倍よりも多く増加させ、この高いレベルが３時間維持された。アマランスの新鮮な汁自体の消費は、１時間後にＮＯ２含有量をわずかに増加させた。アマランスの新鮮な葉および乾燥葉からのメタノール抽出物もＮＯ２含有量のわずかな増加を示した。ここでも溶媒は被験者のＮＯ２レベルに影響を及ぼさなかった。
【０２４３】
全体的な結論は、アマランス速溶錠において観察されるＮＯ３およびＮＯ２のレベルの増加のほうが、アマランスの新鮮な汁、および新鮮なまたは乾燥した葉からのメタノール抽出物中の硝酸塩および亜硝酸塩のレベルと比較して大きかったということである。「硝酸塩の濃縮抽出物を含有するアマランス速溶錠」の全一酸化窒素（ＮＯ）含有量の増加は、ベースラインの６倍であり、それは３時間増加したままであった。全ＮＯは、全ＮＯ３とＮＯ２の合計から求められる（すなわち、ＮＯ３およびＮＯ２のレベルはヒト体内のＮＯレベルの尺度と解釈することができる）。そのためＮＯ３およびＮＯ２レベルの増加は、ＮＯレベルの増加と解釈することができる。ＮＯレベルをＮＯの２つの主な代謝産物、亜硝酸塩および硝酸塩の合計として記録した。
【実施例３３】
【０２４４】
ヒト被験者の唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）、亜硝酸塩（ＮＯ２）および一酸化窒素（ＮＯ）含有量。
【０２４５】
３２名の健康なヒトボランティア（３５〜５５歳）を研究に採用した。被験者は、研究の１週間前に標準的な食事を与えられた。被験者を、各群が４名の被験者を含む８つの群に分割した。被験者を一晩絶食させ、唾液を採取してベースラインＮＯ３およびＮＯ２レベルを決定した。唾液採取の後、被験者は以下の通り処置された：
【０２４６】
群１：溶媒対照
群２：アマランス葉の新鮮な汁自体−１００ｍｌ（硝酸塩１００ｍｇ／汁１００ｍｌ）（実施例１３の通り調製）
群３：アマランスの新鮮な葉のメタノール抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩７．５ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例１の通りである）。
群４：アマランス乾燥葉のメタノール抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩８．２５ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例３の通りである）。
群５：アマランスの新鮮な葉の水抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩８ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例２の通りである）。
群６：アマランス乾燥葉の水抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩８．５ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例４の通りである）
群７：ペクチナーゼ処理された、アマランスの新鮮な葉の水抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩１０ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例５の通りである）
群８：アマランス硝酸塩濃縮抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩９０ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例７の通りである）
【０２４７】
全ての被験者は、水／汁を経口的に消費することが許され（群番号１〜２）、アマランス錠を口腔にとどめて溶解させた（群番号３〜
８）。
【０２４８】
摂食から１時間、２時間および３時間の時点の各々の後、全ての被験者から５．０ｍｌ  ＰＴＦＥ管に唾液を採取した。この唾液をＮＯ３およびＮＯ２含有量の分析まで−８０℃以下で貯蔵した。このようにして得た唾液を、アセトニトリルを用いて除タンパク質し、ＨＰＬＣを用いるＮＯ３およびＮＯ２の定量に上清液体を使用した。ＮＯ３は、ＨＰＬＣによってＢＥＴＡＳＩＬ  Ｃ−１８カラム（２５０×４．６ｍｍ）で、脱イオン水中の水酸化テトラブチルアンモニウム、移動相としてアセトニトリルおよびメタノールならびに２２２ｎｍでのフォトダイオードアレイ検出を用いて分析した。ＮＯ２は、同じ条件を用いて５２０ｎｍで分析した。唾液の硝酸塩および亜硝酸塩は、μモル／Ｌとして報告される。
表：唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）含有量
【表１３】
2016529221.tif 000015
表：唾液中の亜硝酸塩（ＮＯ２）含有量
【表１４】
2016529221.tif 000016
表：唾液中の全一酸化窒素（ＮＯ）含有量
【表１５】
2016529221.tif 000017
【０２４９】
アマランスの新鮮な汁自体の消費は、１時間後にＮＯ３含有量をわずかに増加させた。アマランスの新鮮な葉および乾燥葉からのメタノール抽出物もＮＯ３含有量のわずかな増加を示した。ペクチナーゼ処理された、アマランスの新鮮な葉の水抽出物で作成した錠剤は、その他の錠剤の消費よりも少し多い増加を示した。しかし、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を含有する速溶錠を消費した後、ＮＯ３レベルは１時間後にベースライン値の６．９倍に増加し、このＮＯ３の増加は３時間維持された。溶媒を投与した後にはＮＯ３レベルに著しい変化はなかった。
【０２５０】
ＮＯ２の場合もまた、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を含有する速溶錠は、ＮＯ２レベルを９．２倍よりも多く増加させ、このＮＯ２の増加は３時間維持された。アマランスの新鮮な汁自体の消費は、１時間後にＮＯ２含有量をわずかに増加させた。アマランスの新鮮な葉および乾燥葉からのメタノール抽出物もＮＯ２含有量のわずかな増加を示した。ここでも溶媒は被験者のＮＯ２レベルに影響を及ぼさなかった。
【０２５１】
全体的な結論は、アマランス速溶錠において観察される全ＮＯ３およびＮＯ２レベルの増加のほうが、アマランスの新鮮な汁、新鮮なまたは乾燥した葉からのメタノール抽出物と比較して大きかったということである。「硝酸塩の濃縮抽出物を含有するアマランス速溶錠」の全ＮＯ含有量の増加は、ベースラインの７．５倍であり、そしてそれは３時間増加したままであった。全ＮＯは、全ＮＯ３とＮＯ２の合計と解釈された。ＮＯ３およびＮＯ２のレベルを用いてヒト体内のＮＯレベルを解釈した。そのためＮＯ３およびＮＯ２レベルの増加は、ＮＯレベルの増加と解釈された。ＮＯレベルをＮＯの２つの主な代謝産物、すなわち、亜硝酸塩および硝酸塩の合計として記録した。（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２０１０）：３（３）：１５３−１５９，Ｐｌａｓｍａ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１，Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ａｎｄ  Ｏｘｉｄｅ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ａ  Ｍｕｌｔｉｅｔｈｎｉｃ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃｏｈｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ａｒａｂ  Ｅｍｉｒａｔｅｓ）。
【実施例３４】
【０２５２】
ヒト被験者の唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）、亜硝酸塩（ＮＯ２）および一酸化窒素（ＮＯ）含有量。
【０２５３】
１８名の健康なヒトボランティア（３５〜５５歳）を研究に採用した。被験者は、研究の１週間前に標準的な食事を与えられた。被験者を、各群が６名の被験者を含む３つの群に分割した。被験者を一晩絶食させ、唾液を採取してベースラインＮＯ３およびＮＯ２レベルを決定した。唾液採取の後、被験者は以下の通り処置された：
【０２５４】
群１：溶媒対照（水）
群２：アマランス葉の新鮮な汁自体−１００ｍｌ（硝酸塩１００ｍｇ／汁１００ｍｌ）（実施例１３の通り調製）
群３：硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物（実施例７の通り調製、硝酸塩１８％）を水と混合する（水３００ｍｌ中５６０ｍｇの抽出物）。
【０２５５】
全ての被験者は、水／汁を経口的に消費することが許された（群番号１〜２）。水と混合した、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物は、直接口腔で消費された（群番号３）
【０２５６】
摂食から１時間、２時間および３時間の時点の各々の後、全ての被験者から５．０ｍｌ  ＰＴＦＥ管に唾液を採取した。この唾液をＮＯ３およびＮＯ２含有量の分析まで−８０℃以下で貯蔵した。このようにして得た唾液を、アセトニトリルを用いて除タンパク質し、ＨＰＬＣを用いるＮＯ３およびＮＯ２の定量に上清液体を使用した。ＮＯ３は、ＨＰＬＣによってＢＥＴＡＳＩＬ  Ｃ−１８カラム（２５０×４．６ｍｍ）で、脱イオン水中の水酸化テトラブチルアンモニウム、移動相としてアセトニトリルおよびメタノールならびに２２２ｎｍでのフォトダイオードアレイ検出を用いて分析した。ＮＯ２は、同じ条件を用いて５２０ｎｍで分析した。唾液の硝酸塩および亜硝酸塩は、μモル／Ｌとして報告された。
表：唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）含有量
【表１６】
2016529221.tif 000018
表：唾液中の亜硝酸塩（ＮＯ２）含有量
【表１７】
2016529221.tif 000019
表：唾液中の全一酸化窒素（ＮＯ）含有量
【表１８】
2016529221.tif 000020
【０２５７】
アマランスの新鮮な汁自体の消費は、１時間後にＮＯ３含有量をわずかに増加させた。しかし、水と混合した、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物を消費した後、ＮＯ３レベルは１時間後にベースライン値の６．６倍に増加し、３時間増加したままであった。溶媒を投与した後にはＮＯ３レベルに著しい変化はなかった。
【０２５８】
ＮＯ２の場合もまた、水と混合した、硝酸塩を濃縮したアマランス抽出物は、ＮＯ２レベルを９．１倍増加させ、３時間増加したままであった。アマランスの新鮮な汁自体の消費は、１時間後にＮＯ２含有量をわずかに増加させた。
【０２５９】
全体的な結論は、水と混合したアマランス濃縮抽出物を投与することによって観察される全ＮＯ３およびＮＯ２レベルの増加のほうが、アマランスの新鮮な汁を投与することと比較して大きかったということである。「水と混合したアマランス濃縮抽出物」の全ＮＯ含有量の増加は、ベースラインの７．３倍であり、そしてそれは３時間増加したままであった。
【実施例３５】
【０２６０】
硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を投与した後の、ヒト被験者の血漿および唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）、亜硝酸塩（ＮＯ２）および一酸化窒素（ＮＯ）含有量。
【０２６１】
９名の健康なヒトボランティア（３５〜５５歳）を研究に採用した。被験者は、研究の１週間前に標準的な食事を与えられた。被験者を、各群が３名の被験者を含む３つの群に分割した。被験者を一晩絶食させ、血液および唾液を採取してベースラインＮＯ３およびＮＯ２レベルを決定した。ベースラインの血液および唾液の採取の後、被験者は以下の通り処置された：
【０２６２】
群１：溶媒対照
群２：硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムの抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩９１．５ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例１５の通りである）。
群３：硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリズスの抽出物を含有するアマランス速溶錠（錠剤あたり硝酸塩９０．５ｍｇ）（錠剤は実施例２２の通り調製され、錠剤を調製するために使用された抽出物は実施例１５の通りである）。
【０２６３】
全ての被験者は、水を経口的に消費することが許された（群番号１）。アマランス錠は、口腔にとどめて溶解させた（群番号２〜３）。
【０２６４】
錠剤／溶媒の摂食から１時間、２時間および３時間後に、全ての被験者から血液をＥＤＴＡ被覆管に採取し、同じ被験者から唾液を５．０ｍｌ  ＰＴＦＥ管に採取した。この管を５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することにより、血漿を直ちに分離した。血漿試料および唾液は分析まで−８０℃以下で貯蔵した。血漿および唾液を、アセトニトリルを用いて除タンパク質し、ＨＰＬＣを用いる硝酸塩／亜硝酸塩の定量に上清液体を使用した。ＮＯ３は、ＨＰＬＣによってＢＥＴＡＳＩＬ  Ｃ−１８カラム（２５０×４．６ｍｍ）で、脱イオン水中の水酸化テトラブチルアンモニウム、移動相としてアセトニトリルおよびメタノールならびに２２２ｎｍでのフォトダイオードアレイ検出を用いて分析した。ＮＯ２は、同じ条件を用いて５２０ｎｍで分析した。血漿中のＮＯ３およびＮＯ２レベルはμモル／Ｌとして報告された。
血漿中の硝酸塩（ＮＯ３）亜硝酸塩（ＮＯ２）および一酸化窒素（ＮＯ）レベル。
表：血漿中の硝酸塩（ＮＯ３）含有量
【表１９】
2016529221.tif 000021
【表２０−１】
2016529221.tif 000022
【表２０−２】
2016529221.tif 000023
【表２１】
2016529221.tif 000024
【０２６５】
硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を含有する速溶錠を消費した後、ＮＯ３レベルは１時間後にベースライン値の６倍に増加し、ベースラインからのこの増加は３時間まで維持された。溶媒を投与した後にはＮＯ３レベルに著しい変化はなかった。
【０２６６】
ＮＯ２の場合もまた、硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を含有する速溶錠は、ＮＯ２レベルを６倍よりも多く増加させ、この高いレベルが３時間維持された。ここでも溶媒は被験者のＮＯ２レベルに影響を及ぼさなかった。
【０２６７】
「硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を含有するアマランス速溶錠」の全一酸化窒素（ＮＯ）含有量の増加は、ベースラインの６倍であり、それは３時間増加したままであった。全ＮＯは、全ＮＯ３とＮＯ２の合計から求められた（すなわち、ＮＯ３およびＮＯ２のレベルはヒト体内のＮＯレベルの尺度と解釈することができる）。そのためＮＯ３およびＮＯ２レベルの増加は、ＮＯレベルの増加と解釈された。
【０２６８】
唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）、亜硝酸塩（ＮＯ２）および一酸化窒素（ＮＯ）レベル。
表：唾液中の硝酸塩（ＮＯ３）含有量
【表２２】
2016529221.tif 000025
表：唾液中の亜硝酸塩（ＮＯ２）含有量
【表２３】
2016529221.tif 000026
表：唾液中の全一酸化窒素（ＮＯ）含有量
【表２４】
2016529221.tif 000027
【０２６９】
硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を含有する速溶錠を消費した後、ＮＯ３レベルは１時間後にベースライン値の６．９倍に増加し、このＮＯ３の増加は３時間維持された。溶媒を投与した後にはＮＯ３レベルに著しい変化はなかった。
【０２７０】
ＮＯ２の場合もまた、硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を含有する速溶錠は、ＮＯ２レベルを９．２倍よりも多く増加させ、このＮＯ２の増加は３時間維持された。ここでも溶媒は被験者のＮＯ２レベルに影響を及ぼさなかった。
【０２７１】
「硝酸塩を濃縮したアマランサス・ビリツムおよびアマランサス・ビリズスの抽出物を含有するアマランス速溶錠」の全ＮＯ含有量の増加は、ベースラインの７．５倍であり、それは３時間増加したままであった。全ＮＯは、全ＮＯ３とＮＯ２の合計と解釈された。（ＮＯ３およびＮＯ２のレベルを用いてヒト体内のＮＯレベルのレベルを解釈した）。そのためＮＯ３およびＮＯ２レベルの増加は、ＮＯレベルの増加と解釈された。
【０２７２】
本発明者は、当業者が本開示を理解し思い浮かべることができるように、本発明のもとで好ましい実施形態の一部を説明することによって、本発明の新規な特徴を説明した。また、本発明がその出願において上の説明に示される詳細または実施例に説明される詳細に制限されないことも当然理解される。本発明は、その特定の好ましい実施形態を参照してかなり詳細に説明されているが、本明細書上文に記載される本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な変更形態を作ることができる。
【図１】
2016529221.tif 000028
【図２】
2016529221.tif 000029
【図３】
2016529221.tif 000030
【図４】
2016529221.tif 000031
【図５】
2016529221.tif 000032
【図６】
2016529221.tif 000033
【図７】
2016529221.tif 000034
【図８】
2016529221.tif 000035
【図９】
2016529221.tif 000036
【図１０】
2016529221.tif 000037
【図１１】
2016529221.tif 000038
【図１２】
2016529221.tif 000039
【図１３】
2016529221.tif 000040
【図１４Ａ】
2016529221.tif 000041
【図１４Ｂ】
2016529221.tif 000042
【国際調査報告】
2016529221.tif 000043
2016529221.tif 000044
2016529221.tif 000045
2016529221.tif 000046
2016529221.tif 000047