(57)【要約】  本発明は、高純度ペメトレキセド製造のための向上された中間体製造方法及びこれを用いて高純度ペメトレキセドを製造する方法に関する。より詳しくは、ペメトレキセド製造のための中間体であるペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を高純度で製造する新しい方法及びその中間体を用いて、ペメトレキセド二ナトリウム塩を高純度で製造する方法に関するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（４）
【化１】
2016531925.tif 000015
のペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩の製造方法であって：
（１）下記式（５）
【化２】
2016531925.tif 000016
のＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩を塩基性水溶液で脱塩化し、有機溶媒を用いて抽出する工程、
（２）前記工程（１）で得られた脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルに、ジメチルホルムアミド、下記式（６）
【化３】
2016531925.tif 000017
の化合物、Ｎ−メチルモルホリン及び２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンを順に添加して、反応させる工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
前記工程（１）で、塩基が、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、アンモニア、Ｎ−メチルモルホリン、塩化カルシウム、炭酸カルシウムから選ばれた一つ以上の塩基であり、
有機溶媒が、ジクロロメタンであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式（６）の化合物が、下記式（７）
【化４】
2016531925.tif 000018
の化合物から製造されたものであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記工程（２）の反応混合物に、水と有機溶媒を添加し、有機層を抽出した後、そこに、エタノールと酸を添加して、最終結果物をペメトレキセドジエチルエステルの酸塩として得る工程を、さらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
酸が、ｐ−トルエンスルホン酸であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ペメトレキセドジエチルエステルと酸との反応が、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド及びエタノールを混合溶媒中で行われることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項７】
得られたペメトレキセドジエチルエステルの酸塩のＨＰＬＣ純度が、９９．０％以上であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項８】
下記式（１）
【化５】
2016531925.tif 000019
のペメトレキセド二ナトリウム塩の製造方法であって：
（ａ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法で製造されたペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を、水酸化ナトリウムと反応させる工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）の結果物に酸を添加して、下記式（２）
【化６】
2016531925.tif 000020
のペメトレキセド二酸を製造する工程と、
（ｃ）前記工程（ｂ）で製造されたペメトレキセド二酸を、水酸化ナトリウムと反応させる工程と、
を含む、方法。
【請求項９】
前記工程（ｂ）で、酸添加後結果液のｐＨが２．８〜３．２であることを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
（ｃ）工程で、反応後、酸を添加して、ｐＨを７．５〜８．５に調節することを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
得られたペメトレキセド二ナトリウム塩のＨＰＬＣ純度が、９９．９％以上であり、個々の不純物含量が、０．０５％以下であることを特徴とする請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高純度ペメトレキセド製造のための向上された中間体製造方法及びこれを用いて高純度ペメトレキセドを製造する方法に関する。より詳しくは、ペメトレキセド製造のための中間体であるペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を高純度で製造する新しい方法及びその中間体を用いて、ペメトレキセド二ナトリウム塩を高純度で製造する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ペメトレキセド（Pemetrexed）は、Ｎ−（４−［２−（２−アミノ−４,７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸｛N-（4-[2-（2-amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl）ethyl]benzoyl）-L-glutamic acid｝であり、その二ナトリウム塩は、下記式（１）の構造を有する。
【０００３】
【化１】
2016531925.tif 000002
【０００４】
ペメトレキセドは、抗葉酸活性を示し、イーライリリ・アンド・カンパニー社製のＡｌｉｍｔａ（登録商標）という商品名（有効成分：ペメトレキセド二ナトリウム塩７水和物、静脈投与用無菌凍結乾燥粉末）で肺癌及び胸膜中皮腫治療剤として販売されている。
【０００５】
ペメトレキセド二ナトリウム塩は、特許文献１に記載されたように、下記反応式1により製造することができ、より具体的な製造方法は、非特許文献１に開示されている。
【０００６】
【化２】
2016531925.tif 000003
【０００７】
前記反応式１によれば、ペメトレキセド二ナトリウム塩は、下記工程によって製造される:
【０００８】
１）式（７）化合物を、ＮａＯＨ水溶液で加水分解した後、ＨＣｌ水溶液でｐＨを約４．４に調節し、式（６）化合物を固体として得た後、真空乾燥する。
【０００９】
２）式（６）化合物に、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ）、Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩（ＬＧＡ）を添加した後、２５℃で反応し、抽出及び濃縮し、濃縮液にＥｔＯＨとｐ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）を添加して、中間体である式（３）化合物をＰＴＳＡ塩の固体として得る。また、追加精製のために、これをＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ条件で再結晶する。
【００１０】
３）式（３）化合物を、ＮａＯＨ水溶液で加水分解した後、ＨＣｌ水溶液でｐＨを約３に調節し、遊離二酸形態のペメトレキセドリン式（２）化合物を固体として得た後、真空乾燥する。
【００１１】
４）式（２）化合物をＮａＯＨ（２〜３ｅｑ）水溶液に溶解した後、ＨＣｌ水溶液を添加し、ＥｔＯＨを添加して、目的物であるペメトレキセド二ナトリウム塩（式（１））を固体として得る。
【００１２】
反応式１に係るペメトレキセド二ナトリウム塩製造方法の問題点は、中間体であるペメトレキセドジエチルエステル（式（４）化合物）形成のために、室温でＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩添加時、急激な発熱が発生することであり、また、室温反応時、時間経過によって副産物がたくさん発生する問題がある。
【００１３】
前記した問題により、反応式１の方法で製造されたペメトレキセドジエチルエステル（式（４）化合物）は、ＨＰＬＣ純度９０％以下の低純度であり、精製のためにＰＴＳＡ塩として製造した場合（式（３）化合物）にも、ＨＰＬＣ純度が９５％以下水準に過ぎなかった。その上、ＨＰＬＣ純度分析時、ＲＲＴ（Relative Retention Time）約１．０１〜１．０３で発生する副産物の量は、最大５〜６％であり、精製後にも０．５％以上残留した。
【００１４】
このような低純度及び副産物発生の問題は、反応温度を室温より低くすることにより改善され得る。例えば、中間体製造時反応温度を０〜１５℃に下げた場合、追加精製を通してペメトレキセドジエチルエステルのＨＰＬＣ純度を９７〜９８％に上げ、ＨＰＬＣ純度分析時、ＲＲＴ約１．０１〜１．０３の副産物の量を０．５％以下に低減することができる。しかし、反応温度を０〜１５℃に下げ、追加精製を行ってもＨＰＬＣ純度分析時、ＲＲＴ約１．０１〜１．０３の副産物の量を０．１５％以下に低減するのは困難であり、この副産物の量をペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩の製造過程で０．１５％以下にできなければ、最終製品であるペメトレキセド二ナトリウム塩では、個々の不純物（any other single impurity）が０．１％以上残留する重大な問題となり、これを防ぐためにはペメトレキセド二酸の追加精製が必須的に求められる。
【００１５】
要するに、前記反応式１に係るペメトレキセド二ナトリウム塩製造方法は、中間体製造時、低純度及び副産物発生において深刻な問題を抱えている。この問題の幾つかの点は、反応温度を低くし、追加精製を行う等の変形を加えても許容しうる水準までに改善されない。従って、高純度のペメトレキセド二ナトリウム塩の製造のためには、反応式１の方法とは別の、根本的に新しい中間体の製造方法が求められる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】韓国  登録特許公報  第０１６２６５４号
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】C.J. Barnett, et al., “A Practical Synthesis of Multitargeted Antifolate LY231514,” Organic Process Research & Development, 3（3）: 184-188 （1999）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、前述の従来技術の問題点を解決するためのものであり、ペメトレキセド製造のための中間体であるペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を高純度で製造する新しい方法及びその中間体を用いて最終生成物リンペメトレキセド二ナトリウム塩を高純度、高収率で製造する方法を提供することを技術的課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
前記した技術的課題を達成するために、本発明の一形態は、下記式（４）
【００２０】
【化３】
2016531925.tif 000004
【００２１】
のペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩の製造方法であって：
（１）下記式（５）
【００２２】
【化４】
2016531925.tif 000005
【００２３】
のＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩を塩基性水溶液で脱塩化し、有機溶媒を用いて抽出する工程、
（２）前記工程（１）で得られた脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルに、ジメチルホルムアミド、下記式（６）
【００２４】
【化５】
2016531925.tif 000006
【００２５】
の化合物、Ｎ−メチルモルホリン及び２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンを順に添加して、反応させる工程と、
を含む、方法を提供する。
【００２６】
本発明の好ましい一形態によれば、前記ペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩の製造方法であって、前記工程（２）の反応混合物に、水と有機溶媒を添加し、有機層を抽出した後、そこにエタノールと酸を添加し、最終結果物をペメトレキセドジエチルエステルの酸塩として収得する工程を、さらに含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２７】
本発明の他の形態によれば、下記式（１）
【００２８】
【化６】
2016531925.tif 000007
【００２９】
のペメトレキセド二ナトリウム塩の製造方法：
（ａ）前記方法で製造されたペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を、水酸化ナトリウムと反応させる工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）の結果物に酸を添加して、下記式（２）
【００３０】
【化７】
2016531925.tif 000008
【００３１】
のペメトレキセド二酸を製造する工程と、
（ｃ）前記工程（ｂ）で製造されたペメトレキセド二酸を、水酸化ナトリウムと反応させる工程と、
を含む、方法を提供する。
【発明の効果】
【００３２】
本発明によれば、ペメトレキセド二ナトリウム塩の製造のための中間体として有用なペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を高純度で製造することができ、本発明によって製造された高純度のペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を用いれば、さらに精製することなく、高純度のペメトレキセド二酸及び高純度のペメトレキセド二ナトリウム塩を高効率で製造することができ、産業的に非常に有用である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下で、本発明を詳細に説明する。
【００３４】
本発明に係るペメトレキセドジエチルエステル（式（４））またはその塩の製造方法では、まず、Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩（式（５））を塩基性水溶液で脱塩化した後、有機溶媒を用いて脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルを抽出する［工程（１）］。
【００３５】
Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩の脱塩に用いられる塩基性水溶液には特に制限がなく、好ましくは、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、アンモニア、Ｎ−メチルモルホリン、塩化カルシウム、炭酸カルシウムから選ばれた一つ以上の塩基が挙げられ、より好ましくは、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）の飽和水溶液が挙げられる。抽出に用いられる有機溶媒には特に制限がなく、例えば、塩素系として、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、カーボンテトラクロリド、クロロホルムなどがあり、エーテル系としては、ジエチルエーテル、メチルt-ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）などがあり、芳香族類として、トルエン、キシレン、ベンゼンなどがあり、炭素数４個以上のアルコール類として、ブチルアルコール、ペンチルアルコールなどがあり、炭素数４個以上のヒドロカーボン類として、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンなどがあり、エステル類として酢酸エチルなどがあり、前記溶媒またはこれらの２種以上の組み合わせが用いられていてもよい。Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩の脱塩は、通常の脱塩条件、例えば、室温で１０分〜２時間行うことができるが、これに制限されない。有機層を抽出した後には、別途の脱水することなく、ＤＭＦ溶媒をさらに添加し、真空濃縮し、抽出用有機溶媒（例えば、ＤＣＭ）を８０％以上除去した後、以後の工程で使用する。
【００３６】
次に、前記工程（１）で得られた脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルに、反応溶媒としてジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、前記式（６）の化合物、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）及び２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ）を順に連続的に添加して反応させる［工程（２）］。
【００３７】
前記式（６）の化合物は、下記式（７）の化合物から製造されたのが好ましい。
【００３８】
【化８】
2016531925.tif 000009
【００３９】
従って、本発明のペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩の製造方法は、前記式（７）の化合物から式（６）の化合物を製造する工程を、さらに含む。
【００４０】
前記工程（２）で用いられる試薬の当量（ｅｑ．）数は、式（６）の化合物１当量に対して、ＮＭＭは、好ましくは、１．２〜３．１当量、より好ましくは、１．５〜３．０当量、最も好ましくは、２．９〜３．０当量であり、ＣＤＭＴは、好ましくは、１．０〜１．４当量、より好ましくは、１．１〜１．３当量、最も好ましくは、１．１５〜１．２５当量であり、ＬＧＡは、好ましくは１．０〜１．４当量、より好ましくは、１．１〜１．３当量、最も好ましくは、１．１５〜１．２５当量である。
【００４１】
前記工程（２）で試薬等の添加温度は０〜２０℃でああり、０〜１５℃が好ましく、０〜１０℃がより好ましい。また、試薬添加後、反応温度は０〜２７℃であり、０〜２０℃が好ましく、０〜１５℃がより好ましく、５〜１５℃がさらに好ましい。反応時間は５分〜３時間であり、１０分〜１時間が好ましく、３０分〜１時間がより好ましい。
【００４２】
本発明の好ましい一具体例には、前記工程（２）の反応混合物に、水（例えば、精製水）と有機溶媒を添加し、有機層を抽出した後、そこにエタノール（ＥｔＯＨ）と酸を添加して、最終結果物をペメトレキセドジエチルエステルの酸塩として収得する工程が、さらに含まれる。
【００４３】
前記有機層の抽出に用いられる溶媒には、ジクロロメタン（ＤＣＭ）が好ましく、ペメトレキセドジエチルエステルの酸塩を得るために添加される酸には、硫酸、塩酸、酒石酸またはｐ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）が挙げられ、好ましくは、ｐ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）が挙げられる。また、ペメトレキセドジエチルエステルと酸との反応は、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）及びエタノール（ＥｔＯＨ）の混合溶媒中で行われるのが好ましく、室温以上の温度（例えば、４０〜６０℃）で、例えば、３０分〜３時間行うことができる。
【００４４】
このようにして製造されたペメトレキセドジエチルエステルの酸塩を、以後、冷却、ろ過、洗浄及び真空乾燥し、ペメトレキセドジエチルエステルの塩、例えば、下記式（３）で示されるペメトレキセドジエチルエステルのｐ−トルエンスルホン酸塩をＨＰＬＣ純度９９．０％以上の高純度で収得した。
【００４５】
【化９】
2016531925.tif 000010
【００４６】
従来技術においては、ペメトレキセドジエチルエステルを製造するためには、ＮＭＭとＣＤＭＴを用いて、式（６）化合物の酸性基を活性化した後、そこに式（５）の化合物を添加し、アミドカップリングさせる方法が一般的であった［Organic Process Research & Development 2005, 9, 738-742/Tetrahedron Lett. 1985, 26, 2901-2904］。しかし、前述するように、このような方法は、式（５）の化合物を添加する過程での発熱によって目的物の純度が低くなり、副産物が発生する問題があった。これを補完するために、式（５）の化合物を脱塩化（desalting）した後に添加しても目的物の低純度及び副産物発生の問題を解決することができなかった。
【００４７】
しかし、本発明で提案されたように、まず、式（５）の化合物を脱塩化した後、そこに、式（６）の化合物を添加すれば、即ち、従来の方法とは逆順で試薬を添加して反応を行えば、反応速度が速くなり、従来技術に比べて、目的物の純度を顕著に高めることができ（ＨＰＬＣ純度：９９．０％以上、より好ましくは９９．５％以上）、同時に副産物の発生も顕著に低減することができた（ＨＰＬＣ純度分析時、ＲＲＴ約１．０１〜１．０３で発生する個々の不純物含量：０．１５％以下、より好ましくは０．１％以下）。
【００４８】
従って、本発明の他の側面によれば、（ａ）前記方法で製造されたペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を水酸化ナトリウムと反応させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の結果物に酸を添加し、前記式（２）のペメトレキセド二酸（diacid）を製造する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）で製造されたペメトレキセド二酸を水酸化ナトリウムと反応させる工程と、を含む、前記式（１）のペメトレキセド二ナトリウム塩の製造方法が提供される。
【００４９】
前記工程（ａ）で、水酸化ナトリウムは、水溶液形態（例えば、１Ｎ水溶液）で提供されるのが好ましく、ペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩と水酸化ナトリウムの反応は、好ましくは５〜２０℃で、より好ましくは５〜１５℃で、例えば、３０分〜３時間、より好ましくは１時間〜２時間行われる。
【００５０】
前記工程（ｂ）で、用いられる酸は塩酸が好ましく、その添加量は、酸添加後の結果液のｐＨを２．８〜３．２に調節する量が好ましく、工程（ｂ）の反応温度は５〜２５℃が好ましく、５〜１５℃がより好ましい。工程（ｂ）で製造されたペメトレキセド二酸は、ろ過し、後続工程で使用した。
【００５１】
前記工程（ｃ）で、水酸化ナトリウムは、水溶液形態（例えば、１Ｎ水溶液）で提供されるのが好ましく、ペメトレキセド二酸と水酸化ナトリウムとの反応は、好ましくは５〜２５℃で、より好ましくは５〜１５℃で、例えば、３０分〜３時間、より好ましくは３０分〜１時間行われる。反応後、酸（例えば、塩酸）を添加して、ｐＨを７．５〜８．５に調節することができる。
【００５２】
本発明の一具体例によれば、前記工程（ｃ）で製造されたペメトレキセド二ナトリウム塩に対して、その後、例えば、結晶化（５０〜６０℃、ＥｔＯＨ中）,冷却、ろ過、洗浄及び真空乾燥などの後処理を行うことができ、その結果、ＨＰＬＣ純度９９．９％以上、個々の不純物含量０．０５％以下である高純度のペメトレキセド二ナトリウム塩を得ることができる。
【００５３】
要するに、本発明が提供する式（１）のペメトレキセド二ナトリウム塩の製造方法は、（ｉ）前記式（５）のＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩を塩基性水溶液で脱塩化し、有機溶媒を用いて抽出する工程と、（ｉｉ）前記工程（ｉ）で得られた脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルに、ジメチルホルムアミド、前記式（６）の化合物,Ｎ−メチルモルホリン及び２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンを順に添加し、反応して、前記式（４）のペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を製造する工程と、（ｉｉｉ）前記工程（ｉｉ）で製造されたペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を水酸化ナトリウムと反応させる工程と、（ｉｖ）前記工程（ｉｉｉ）の結果物に酸を添加して、前記式（２）のペメトレキセド二酸（diacid）を製造する工程と、（ｖ）前記工程（ｉｖ）で製造されたペメトレキセド二酸を水酸化ナトリウムと反応させる工程と、を含む。
【００５４】
以下、実施例を通して本発明を詳細に説明する。しかし、以下の実施例は本発明を例示的に説明するだけのものであり、本発明の範囲がこれらによって制限されるものではない。
【実施例】
【００５５】
以下の実施例で製造したペメトレキセドジエチルエステル及びペメトレキセド二酸または二ナトリウム塩の純度をモニターリングするためのＨＰＬＣ（high performance liquid chromatography）方法は、以下の通りである。
【００５６】
（１）ペメトレキセドジエチルエステルの純度モニターリング方法
【００５７】
ａ）ＨＰＬＣ：HP 1100 series with Chemstation
【００５８】
ｂ）流速（Flow rate）：1.0mL/min
【００５９】
ｃ）添加量（Injection volume）：10mL
【００６０】
ｄ）検出（Detection）：at 250nm
【００６１】
ｅ）カラム温度：20℃
【００６２】
ｆ）カラム 
2016531925.tif 000011
【００６３】
ｇ）移動相（Mobile phase）
−溶液Ａ（Solution A）：0.2% TFA in 100% water
−溶液Ｂ（Solution B）：0.2% TFA in 100% acetonitrile (ACN)  
2016531925.tif 000012
【００６４】
ｈ）検液製造
−希釈液製造：希釈液は希釈液Ａ／Ｂ＝１／１混合
−希釈液Ａ：無水ナトリウムホスフェート二塩基（Ｎａ２ＨＰＯ４）約４．０ｇを量り、１Ｌの超純水に溶かす（ｐＨ８．５〜９．５）
−希釈液Ｂ：アセトニトリル
【００６５】
（２）ペメトレキセド二酸または二ナトリウム塩の純度モニターリング方法
【００６６】
ａ）ＨＰＬＣ：HP 1100 series with Chemstation
【００６７】
ｂ）流速（Flow rate）：0.5mL/min
【００６８】
ｃ）添加量（Injection volume）：10mL
【００６９】
ｄ）検出（Detection）：at 250nm
【００７０】
ｅ）カラム温度：20℃
【００７１】
ｆ）カラム
2016531925.tif 000013
【００７２】
ｇ）移動相（Mobile phase）
−溶液Ａ：0.2% TFA in 100% water
−溶液Ｂ：0.2% TFA in 100% CAN
2016531925.tif 000014
【００７３】
ｈ）検液製造
−希釈液Ａ：無水ナトリウムホスフェート二塩基（Ｎａ２ＨＰＯ４）約４．０gを量り、１Ｌの超純水に溶かす（ｐＨ８．５〜９．５）
−希釈液Ｂ：アセトニトリル
−ペメトレキセド二酸の希釈液：希釈液Ａ／Ｂ＝１／１混合液
−ペメトレキセド二ナトリウム塩の希釈液：超純水精製水
【００７４】
実施例１：ペメトレキセドジエチルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩（式（３））の製造
反応器に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１ＬとＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩（ＬＧＡ）８８ｇを添加し、室温で３０分間撹拌した後、ＤＣＭ  １Ｌを添加し、有機層を抽出した。分離した有機層に、ＤＭＦ  ０．５Ｌを添加した後、混合物を２０〜３０℃で濃縮して、ＤＣＭを８０％以上除去した。濃縮液に、４−［２−（２−アミノ−４,７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−d］ピリミジン−５−イル）エチル］安息香酸（式（６）、ＨＰＬＣ純度９８．３％）９３ｇを添加し、０〜１０℃に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）９３ｇと２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ）６５ｇを順に添加した。反応混合物を５〜１５℃で１時間撹拌した後、ＤＣＭ  １Ｌと精製水１Ｌを添加し、有機層を抽出した（ＨＰＬＣ純度９７．９％）。抽出液に、ＤＭＦ  ０．３Ｌ、ＥｔＯＨ  ３．３Ｌ及びｐ−トルエンスルホン酸１４８ｇを添加し、約５０℃で２時間撹拌した。生成された固体を３０℃に冷却し、ろ過し、ＥｔＯＨ  １Ｌで洗浄し、５０〜６０℃で１６時間真空乾燥して、ペメトレキセドジエチルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩１７３ｇを白色の固体として得た（収率：８５％、ＨＰＬＣ純度：９９．５％、個々の不純物含量：＜０．１％）。
【００７５】
比較例１：ペメトレキセドジエチルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩（式（３））の製造
Organic Process Research & Development, 3(3): 184-188 (1999)に記載の方法に従って、４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］安息香酸（式（６）、ＨＰＬＣ純度９８．３％）１０ｇを用いて、ペメトレキセドジエチルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩を製造した。反応後有機層のＨＰＬＣ純度は、８５．４％（ＲＲＴ  １．０２：５．７％）、製造されたｐ−トルエンスルホン酸塩のＨＰＬＣ純度は９３．６％（ＲＲＴ  １．０２：３．３％）であった。
【００７６】
実施例２:ペメトレキセド二酸（式（２））の製造
反応器に１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液１Ｌを添加し、５〜１５℃で、実施例１で製造された式（３）の化合物１４３ｇを添加した。５〜１５℃で２時間撹拌し後、混合物をろ過した（ＨＰＬＣ純度９９．８％）。ろ液に、ＥｔＯＨ  ２Ｌを添加し、５〜１５℃で２Ｎ  ＨＣｌ水溶液をゆっくり滴下して、ｐＨ３．０に調節した。生成された結晶混合物を４０〜５０℃で１時間撹拌し、４０℃でろ過した。ろ過物を精製水２Ｌで洗浄し、さらにＥｔＯＨ  １Ｌで洗浄した。得られたろ過物をＥｔＯＨ／精製水（１：１、ｖ／ｖ）４Ｌに添加し、混合物を４０〜５０℃で１時間撹拌し、冷却し、室温でろ過した。ろ過物を精製水２Ｌで洗浄し、さらにＥｔＯＨ  １Ｌで洗浄した。４０〜４５℃で１６時間真空乾燥して、ペメトレキセド二酸８８ｇを白色の固体として得た（収率：９５％、ＨＰＬＣ純度：９９．９％、個々の不純物含量：＜０．０５％）。
【００７７】
実施例３：ペメトレキセド二ナトリウム塩（式（１））の製造
反応器に１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液を添加し、５〜１５℃で、実施例２で製造された式（２）の化合物８７ｇを添加した。３０分間撹拌した後、混合物をろ過した。ろ液に０．５Ｎ  ＨＣｌ水溶液をゆっくり滴下して、ｐＨを７．５〜８．５に調節した。溶液を５０〜６０℃に加熱し、ＥｔＯＨ  ７Ｌをゆっくり滴下して、結晶を生成した。生成された白色の固体をゆっくり室温に冷却し、ろ過し、ＥｔＯＨ／精製水混合液１Ｌ（４：１、ｖ／ｖ）で洗浄し、４０℃で２１時間真空乾燥して、ペメトレキセド二ナトリウム塩９１ｇを白色の固体として得た（収率：８７％、ＨＰＬＣ純度：＞９９．９％、個々の不純物含量：＜０．０５％）。カールフィッシャー法で測定した水分含量は、９．０５重量％と２．５水和物であることを確認した（要求基準：８．５〜１１重量％）。
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月26日(2016.4.26)
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（４）【化１】
2016531925.tif 000021
のペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩の製造方法であって：脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルに、ジメチルホルムアミド、下記式（６）
【化２】
2016531925.tif 000022
の化合物、Ｎ−メチルモルホリン及び２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンを順に添加して、反応させる工程を含む、方法。
【請求項２】
脱塩化されたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルが、下記式（５）【化３】
2016531925.tif 000023
のＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩を塩基性水溶液で脱塩化し、有機溶媒を用いて抽出する方法によって得られたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
塩基が、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、アンモニア、Ｎ−メチルモルホリン、塩化カルシウム、炭酸カルシウムから選ばれた一つ以上の塩基であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
有機溶媒が、ジクロロメタン、カーボンテトラクロリド、クロロホルム、ジエチルエーテル、メチル  ｔ−ブチルエーテル、トルエン、キシレン、ベンゼン、炭素数４以上のアルコール、炭素数４以上のヒドロカーボン、酢酸エチル、から選ばれた一つ以上の有機溶媒であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項５】
式（６）の化合物が、下記式（７）【化４】
2016531925.tif 000024
の化合物から製造されたものであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記工程の反応混合物に、水と有機溶媒を添加し、有機層を抽出した後、そこに、エタノールと酸を添加して、最終結果物をペメトレキセドジエチルエステルの酸塩として得る工程を、さらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
酸が、ｐ−トルエンスルホン酸であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ペメトレキセドジエチルエステルと酸との反応が、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド及びエタノールを混合溶媒中で行われることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項９】
得られたペメトレキセドジエチルエステルの酸塩のＨＰＬＣ純度が、９９．０％以上であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
下記式（１）【化５】
2016531925.tif 000025
のペメトレキセド二ナトリウム塩の製造方法であって：  （ａ）請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法で製造されたペメトレキセドジエチルエステルまたはその塩を、水酸化ナトリウムと反応させる工程と、  （ｂ）前記工程（ａ）の結果物に酸を添加して、下記式（２）
【化６】
2016531925.tif 000026
のペメトレキセド二酸を製造する工程と、  （ｃ）前記工程（ｂ）で製造されたペメトレキセド二酸を、水酸化ナトリウムと反応させる工程と、を含む、方法。
【請求項１１】
前記工程（ｂ）で、酸添加後結果液のｐＨが２．８〜３．２であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
（ｃ）工程で、反応後、酸を添加して、ｐＨを７．５〜８．５に調節することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
得られたペメトレキセド二ナトリウム塩のＨＰＬＣ純度が、９９．９％以上であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
酸が塩酸であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【国際調査報告】
2016531925.tif 000027
2016531925.tif 000028
2016531925.tif 000029
2016531925.tif 000030