(57)【要約】本発明は、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含む組成物を開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物。
【請求項２】
前記組成物のｐＨが６．０〜８．５のｐＨに調整される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記インスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体が、１００ＩＵ〜１０００ＩＵ／ｍｌの濃度範囲で存在する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体がインスリングラルギンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン類似体または誘導体が、組み換えヒトインスリン、インスリンＮＰＨ、インスリンリスプロ、インスリンリスプロプロタミン、インスリングルリジンおよびインスリンアスパルト、インスリンアスパルトプロタミン、Ａ２１Ｇｌｙインスリン、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８Ｌｙｓインスリン、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８Ｌｙｓ  Ｂ２９Ｐｒｏ、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８ＡｓｐおよびＶｉａｊｅｃｔ（速効型インスリン）からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体が、インスリンアスパルトまたはＡ２１Ｇｌｙインスリンである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記組成物がデキストランポリマーを欠く、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が、等張剤、界面活性剤、緩衝剤、亜鉛またはその塩、防腐剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、および可溶化剤からなる群から選択される賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体がインスリングラルギンであり、前記４．０〜５．７の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体がインスリンアスパルトまたはＡ２１Ｇｌｙインスリンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が１００ＩＵ〜３００ＩＵ／ｍｌのインスリングラルギンおよび１００ＩＵ〜３００ＩＵ／ｍｌのインスリンアスパルトまたはＡ２１Ｇｌｙインスリンを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記組成物が１００ＩＵ／ｍｌのインスリングラルギンおよび１００ＩＵ／ｍｌのインスリンアスパルトまたはＡ２１Ｇｌｙインスリンを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物の調製方法であって、前記調製方法が、
ａ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン類似体または誘導体を含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜４．５である医薬組成物を調製する工程と、
ｂ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン類似体または誘導体を含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を調製する工程と、
ｃ．前記組成物の最終ｐＨがｐＨ６．０〜８．０になるように、工程ａの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン類似体または誘導体の組成物中に、工程ｂの速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンの組成物を加える工程と、
を含む調製方法。
【請求項１３】
４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン類似体または誘導体が、組み換えヒトインスリン、インスリンＮＰＨ、インスリンリスプロ、インスリンリスプロプロタミン、インスリングルリジンおよびインスリンアスパルト、インスリンアスパルトプロタミン、Ａ２１Ｇｌｙインスリン、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８Ｌｙｓインスリン、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８Ｌｙｓ  Ｂ２９Ｐｒｏ、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８ＡｓｐおよびＶｉａｊｅｃｔ（速効型インスリン）からなる群から選択される、請求項１２に記載の調製方法。
【請求項１４】
４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体が、インスリンアスパルトまたはＡ２１Ｇｌｙインスリンである、請求項１３に記載の調製方法。
【請求項１５】
前記５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体がインスリングラルギンである、請求項１２に記載の調製方法。
【請求項１６】
１つ以上の賦形剤が、等張剤、界面活性剤、緩衝剤、亜鉛またはその塩、防腐剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、および可溶化剤からなる群から選択される、請求項１２に記載の調製方法。
【請求項１７】
患者における１型および２型糖尿病の治療方法であって、前記治療方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む治療方法。
【請求項１８】
患者における１型および２型糖尿病の治療において長時間作用型インスリンの曝露時間を延ばす方法であって、前記方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む方法。
【請求項１９】
１型または２型糖尿病に罹患している患者の夜間低血糖を減少させる方法であって、前記方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。本発明はまた、糖尿病疾患の治療における上述の二相製剤の調製方法およびその使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
グルコースは、エネルギーを生成し生命を支持するために体の全細胞が使用する単糖である。ヒトは生き続けるために常に血中に最低限のグルコースを必要とする。体が血中グルコースを生成する基本的な方法は食物の消化によってである。ヒトが食物の消化によって十分なグルコースを得られないとき、グルコースは組織における蓄えから生成され、肝臓によって放出される。体のグルコース値は、インスリンによって主に調整される。インスリンは膵臓から自然分泌されるペプチドホルモンである。インスリンは重要なエネルギー源をもたらすためにグルコースが体の細胞に吸収されるのを助ける。
【０００３】
糖尿病は、異常に高い血中グルコース値および不十分なインスリン値が特徴の疾病である。糖尿病は、真性糖尿病および尿崩症のように過度な排尿を有するヒトの疾患の総称である。真性糖尿病（ＤＭ）は、多くの事象を有するヒトにおいて発見された深刻な慢性疾患である。長期糖尿病から生じるいくつかの合併症は、失明、腎不全、および手足の切断である。インスリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）は、糖尿病の全症例の１０〜１５％を占める。
【０００４】
インスリン注射は糖尿病に罹患している患者に処方される。インスリンは天然ホルモンであり、血中の糖グルコース値をコントロールする。健康な人において、血中グルコース濃度が上がると、インスリンは膵臓から血中に放出される。食後に血中グルコース値が上がると、それに応じてインスリン分泌が増えることによって急速に補償される。インスリンは過度な血中グルコースをグリコーゲンに変換し、それを肝臓に蓄えることにおいて大きな役割を果たす。
【０００５】
１９２０年代にインスリンを導入して以来、持続的な進歩がなされ、糖尿病治療が向上した。極度の血糖値を避けるために、糖尿病患者は、食事ごとにインスリンを投与する複数回注射療法を行うことが多い。
【０００６】
インスリンは５１個のアミノ酸のポリペプチドであり、それらのアミノ酸は２つのアミノ酸鎖に分けられる。Ａ鎖は２１個のアミノ酸を有し、Ｂ鎖は３０個のアミノ酸を有する。鎖は２つのジスルフィド架橋によって互いに接続される。インスリン製剤は長年、糖尿病治療に使用されてきた。
【０００７】
従来、短時間作用型の標準のインスリン製剤または中時間作用型インスリンプロタミン製剤が、糖尿病患者を治療するために使用されていた。時間を経て、新たなインスリン類似体および誘導体が開発された。インスリン類似体および誘導体は、１つ以上のアミノ酸の位置および／またはアミノ酸鎖の長さがヒトインスリンと異なる。
【０００８】
いくつかのインスリン、インスリン類似体、および誘導体が市販されている。一般的に使用されているタイプのインスリン、インスリン類似体、またはインスリン誘導体は次のように分類される。
【０００９】
速効型インスリン類似体（ボーラス）：例えば、インスリンアスパルト（Ｎｏｖｏｌｏｇ（登録商標））、インスリンリスプロ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））、インスリングルリジン（Ａｐｒｉｄａ（登録商標））、速効型ヒトインスリン（Ｖｉａｊｅｃｔ（登録商標））がある。これらの類似体は投与してから５〜１５分以内に作用し始め、３〜４時間有効である。
【００１０】
短時間作用型インスリン（ボーラス）：例えば、標準のインスリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）またはＮｏｖｏｌｉｎ（登録商標））がある。標準のインスリンは投与後３０分以内に作用し始め、作用時間は約５〜８時間持続する。
【００１１】
中時間作用型インスリン：例えば、イソフェンインスリン、アスパルトプロタミン、リスプロプロタミンがある。投与後１〜３時間で作用し始める。作用時間は１６〜２４時間と幅がある。
【００１２】
長時間作用型インスリン（基礎）：例えば、インスリングラルギン、インスリンデテミルがある。これらの類似体はともに１〜２時間以内に作用し始め、作用時間は約１２〜約２４時間と幅がある。
【００１３】
混合型インスリン：例えばＮＰＨおよび標準インスリンを混合したものがある。混合型インスリンの異なる割合によっていくつかのバリエーションがある。これらの混合型製剤の作用の発現は約３０分後である。混合型インスリンは同じタイプのインスリンを含む。２つの異なるタイプのインスリンは混合させることができない。すなわち、インスリンリスプロはインスリンデテミル、インスリンアスパルト、またはインスリングラルギンと混合させることはできない。インスリンリスプロの混合製剤は、インスリンリスプロレギュラーおよびインスリンリスプロプロタミンの２つの形態のインスリンリスプロのみを含むことができる。
【００１４】
作用の発現が加速されたインスリン類似体が特許文献１〜３に記載されている。特許文献１は、とりわけＢ２７およびＢ２８の置換に関する。特許文献３は、さまざまなアミノ酸を有し、好ましくはＢ２９の位置がグルタミン酸ではなくプロリンであるインスリン類似体を記載している。
【００１５】
特許文献２はＢ２８の位置にリジンまたはアルギニンを有し、任意に付加的にＢ３および／またはＡ２１で修飾され得るインスリン類似体を記載している。特許文献４では、化学修飾に対して保護されるインスリン類似体が開示されている。この文献では、Ｂ３でアスパラギン、Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、またはＡ２１の位置で少なくとも１つのさらなるアミノ酸が修飾されている。特許文献５では、Ｂ１〜Ｂ６の位置の少なくとも１つのアミノ酸がリジンまたはアルギニンに置換されるインスリン類似体を記載している。特許文献５によれば、このタイプのインスリンは作用時間が長い。
【００１６】
理想的には、外因性インスリンは血漿プロファイルを生じさせる回数および投与量で投与し、健常者における外因性インスリンの血漿プロファイルを模倣する。インスリン代用のための市場に出ている天然インスリンのインスリン製剤は、インスリン源（例えば、ウシ、豚、ヒトインスリン、または他の哺乳類もしくは動物性インスリン）、そして作用プロファイル（作用の発現および作用時間）が影響され得る組成において異なる。内因性インスリンの血漿プロファイルが、さまざまなインスリン製剤を組み合わせることによって達成することができる。修正された反応速度を示す天然インスリン製剤およびインスリン誘導体またはインスリン類似体の製剤はしばらくの間市販されている。一般に、基礎インスリンは、インスリンの通常の内因性血漿プロファイルを模倣し、食後の糖値のより良いコントロールを与えるために、ボーラスインスリンとともに投与される。
【００１７】
インスリングラルギンおよびインスリンデテミルの２種の基礎インスリンが市販されている。インスリングラルギンＧｌｙ（Ａ２１）−Ａｒｇ（Ｂ３１）−Ａｒｇ（Ｂ３２）−ヒトインスリンの基礎インスリンは作用時間を延長する。それは１日１回注射され、変化が少ない血清プロファイルおよびそれに伴う夜間低血糖の危険の低減によって、他の長時間作用型インスリンと比較して際立っている（非特許文献１）。
【００１８】
それは、Ｓａｎｏｆｉ  Ａｖｅｎｔｉｓによってランタスの商品名で販売されている。ランタスは、酸性の透明な溶液で注射され、安定した六量体結合物として皮下組織の生理学的ｐＨの範囲でその溶液特性のために沈殿する。ランタスの２つの製剤が市販されている。
・３ｍｌカートリッジ組成物（Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）
・１０ｍｌバイアル組成物（Ｖｉａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）
【００１９】
３ｍｌカートリッジ組成物は、１００ＩＵ（３．６３７８ｍｇ）のインスリングラルギン、亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセロール、および注射用蒸留水を含む。組成物のｐＨはｐＨ４．０に調整される。１０ｍｌのバイアル組成物は、１００ＩＵのインスリングラルギン、亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセロール、および注射用蒸留水を含む。組成物のｐＨは、塩酸および水酸化ナトリウムの水溶液を添加することによってｐＨ４．０に調整される。
【００２０】
即効型インスリンは、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、およびインスリングルリジンを含む。即効型インスリンは非常に迅速に、すなわち３０分の投与で作用しはじめる。したがって、それらは、食後の糖値の上昇を効率的にコントロールするために使用される。これらの類似体は、１型（インスリン依存型）糖尿病および２型（非インスリン依存型）糖尿病を治療するために使用される。インスリンアスパルトは通常、別の長時間作用型インスリンとともに投与される。
【００２１】
市販されている組成物ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標）は、１００ＩＵのインスリンアスパルト、グリセリン、フェノール、メタクレゾール、亜鉛、リン酸水素二ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、および注射用蒸留水を含む。組成物のｐＨはｐＨ７．２〜７．６に調整される。
【００２２】
市販されている組成物Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）は、１００ＩＵのインスリンリスプロ、グリセリン、第二リン酸ナトリウム、メタクレゾール、酸化亜鉛、フェノール、および注射用蒸留水を含む。組成物のｐＨはｐＨ７．０〜８．０に調整される。
【００２３】
市販されている組成物Ａｐｒｉｄａ（登録商標）は、１００ＩＵのインスリングルリジン、メタクレゾール、トロメタミン、塩化ナトリウム、ポリソルベート２０、および注射用蒸留水を含む。組成物のｐＨはｐＨ７．３に調整される。
【００２４】
ノボノルディスクは、長時間作用型基礎インスリンのインスリンデグルデク、および速効型インスリン類似体のインスリンアスパルト（Ｂ２８Ａｓｐヒトインスリン）の可溶性合剤を製剤化した。ライゾデグは、皮下（ｓ．ｃ．）注射用の初めての完全に可溶性のすぐに使えるインスリン製品である。
【００２５】
毎日複数回の注射として投与される、またはインスリンポンプによる基礎ボーラスインスリン療法は、１型糖尿病における最適な血糖コントロールを達成するための糖尿病治療の中心である。１日に患者に投与する注射の数を減らすために、１回の注射で異なるタイプのインスリンを混合する試みがなされた。長時間作用型および速効型インスリンを混合することに対していくつかの警告が、速効型インスリンおよび基礎インスリンのイノベーターによって発された（インスリングラルギン、ランタス；サノフィ・アベンティス；サノフィ・アベンティス、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌａｎｔｕｓ．ｃｏｍ／ｈｃｐ／ｃｌｏｓｉｎｇ．ａｓｐｘから入手可；インスリンデテミルｒＤＮＡ源、商標名レベミルの薬の添付文書；ノボノルディスク、バウスベア、デンマーク）。
【００２６】
インスリン製剤の製造者からの警告にもかかわらず、患者および小児科医師の中には注射の直前に基礎インスリンおよびボーラスインスリンを１つの注射器の中で混合する者もいた。そのような警告の理由は、異なる等電点（ｐＩ）のインスリンが注射器の中で混合されるとき、制御できない沈殿が生じ、沈殿混合物の正確な投与量および作用時間を推定することが難しいためである。
【００２７】
公知の速効型インスリン類似体および未修飾インスリンは５〜５．５のｐＩを有するので、溶液中にそれらを含む製剤は、基本的な範囲、すなわち７．０〜８．０にあり、一方、インスリングラルギンのｐＩは６．５超であるので、ランタス製剤は酸性域、すなわちｐＨ３．８〜４．２の範囲にある。グラルギンは、ｐＩが他のインスリン類似体または誘導体と異なるため、短時間作用型または速効型インスリンなどの他の種類のインスリンとは混合することができない。いずれの先行技術も、所定の粒径を有する易解離性分子集合体を含む異なる等電点を有するインスリンの組み合わせを含む安定した製剤を開示していない。
【００２８】
基礎インスリンと速効型インスリン類似体との組み合わせ／混合およびその組み合わせを含む医薬組成物を開示するいくつかの先行技術がある。
【００２９】
Ｋａｐｌａｎ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）はグラルギンとリスプロまたはアスパルトインスリンを同じ注射器内で混合しグラルギンの投与量または１日２回の投与量に分けることは、短期血糖プロファイルに影響を及ぼさないと結論づけた（非特許文献２）。
【００３０】
Ｆｉａｌｌｏ−Ｓｃｈａｒｅｒ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６年）は、別個の注射を受けた子供と比較して、同じ注射器内でインスリングラルギンと速効型インスリン類似体を混合した子供に、血糖コントロールにおいて有意差はないことを開示している（非特許文献３）。
【００３１】
Ｈａｓｓａｎ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００８年）は、１日２回投与の速効型インスリン類似体と混合したインスリングラルギンを用いた血糖コントロールは、新たに診断された１型糖尿病における標準治療より著しく効果的と思われることを開示している。さらに、それは、患者にグラルギンと速効型インスリン類似体を混合させることによって糖尿病の子供の注射の痛みや負担を軽減する（非特許文献４）。
【００３２】
Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１年）は、インスリングラルギンもインスリンデテミルも、他のインスリン類似体と混合すると薬物動態特性を実質的に変えるので適さないことを開示している。
【００３３】
Ｎｉｃｏｌｕｃｃｉ（２０１１年）Ａｎｔｏｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．は、基礎インスリングラルギンと１回のインスリングルリジンのボーラス注射を別個に行って最適化することを開示している（非特許文献６）。
【００３４】
Ａｌ  Ｓｈａｍｓｉ  Ａ．Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００８年）は、１日２回投与した速効型インスリン類似体と混合したインスリングラルギン（ＩＧ）を用いた血糖コントロールが、新たに診断された１型糖尿病における標準治療より著しく効果的と思われることを開示している（非特許文献７）
【００３５】
Ｃｅｎｇｉｚ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０年）は、インスリンリスプロとインスリングラルギンの混合が、リスプロの初期の薬力学的ピークを著しく平坦化し、グルコース注入率（ＧＩＲ）曲線変化を右に移動させ、食事関連のグルコースの急激な変動をコントロールすることを難しくさせる可能性があることを開示している（非特許文献８）。
【００３６】
Ｌｕｃｃｈｅｓｉ  Ｍｂ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２年）は、皮下注射の直前のインスリンリスプロとインスリングラルギンの混合が、１型糖尿病グループの１２週間後の血糖プロファイルに影響を及ぼすことなくインスリンリスプロ血清ピーク濃度を減少させることを開示している（非特許文献９）。
【００３７】
Ｔｈａｎｈ  Ｍ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０年）は、インスリンアスパルトと混合したインスリンデテミルの１日２回投与は、１型糖尿病の子供における１日２回の別個の注射としてのインスリンデテミルとインスリンアスパルトの投与に比較すると、血中グルコースへの効果が同等であったことを開示している。どちらの治療においても低血糖は増加しなかった（非特許文献１０）。
【００３８】
Ｃｅｎｇｉｚ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２年）は、インスリンアスパルトとインスリンデテミルの混合が、インスリンアスパルトの初期の薬力学的作用を著しく低下させ、これらの類似体の別個の注射と比較して時間作用プロファイルを延長することを開示している（非特許文献１１）。
【００３９】
特許文献６および７は、長時間作用型インスリンと組み合わせて速効型または中時間作用型インスリンを含む組成物を開示している。ここで、組成物のｐＨは、長時間作用型インスリンを可溶化するために、ｐＨ３．８〜４．２に調整される。
【００４０】
特許文献８は、皮下投与に適した形態の中時間作用型インスリンと組み合わせて、キレート剤および溶解剤を含む即効型、速効型、または超速効型インスリンを含む注射可能な製剤を開示している。この特許は、ランタス（商標）（インスリングラルギン）をＶｉａｊｅｃｔ（商標）（速効型インスリン）と混合し、これらの製剤の混和性はランタスとＶｉａｊｅｃｔの組成物のｐＨが類似していることによる。特許文献８の特許は、患者に投与したときの当該組成物を開示し、ランタス（商標）は、Ｖｉａｊｅｃｔ（商標）とともに単回注射したときに、作用時間がより短かった。
【００４１】
特許文献９は、注射可能な水溶液の形態で組成物を開示している。組成物は、ｐＨは６．０〜８．０であり、少なくともａ）５．８〜８．５の等電点ｐＩを有する基礎インスリン、ｂ）修飾デキストランポリマーを含む。組成物はさらに食事のインスリンを含んでもよい。
【００４２】
特許文献１０および１１は、長時間作用型インスリン類似体と混合した新たな即効型インスリン類似体を含む医薬組成物を開示している。長時間作用型インスリン類似体との混合性は、ヒトインスリンのＢ−１０の位置のＺｎ結合ＨｉｓをＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＰｈｅで置換することによって達成される。
【００４３】
特許文献１２は、ＶＩＡＪＥＣＴ（商標）と混合した基礎インスリンの被験者の通常の１日投与量に相当する投与量のインスリングラルギンの注射を開示している。
【００４４】
特許文献１３は、さまざまな実施形態で１つ以上のインスリン類似体が長時間作用型インスリン類似体と即効型インスリン類似体との組み合わせを含むことを開示している。
【００４５】
先行技術のいずれも、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン類似体または誘導体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン類似体または誘導体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する予め混合されたすぐに使える二相医薬組成物を開示していない。製剤は、２種のインスリンを混合可能にするインスリン鎖における化学修飾を１つも含まない。インスリングラルギンは、ｐＨ６．８で等電点（ｐＩ）を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００４６】
【特許文献１】欧州特許第０２１４８２６号
【特許文献２】欧州特許第０３７５４３７号
【特許文献３】欧州特許第０６７８５２２号
【特許文献４】欧州特許第０４１９５０４号
【特許文献５】国際公開第９２／００３２１号
【特許文献６】米国特許第７，７１３，９２９号
【特許文献７】米国特許第７，７１８，６０９号
【特許文献８】米国特許第８，０８４，４２０号
【特許文献９】米国特許出願第２０１３００６５８２６号
【特許文献１０】ＰＣＴ公報第２００９０２１９５６Ａ１号
【特許文献１１】ＰＣＴ公報第２００９０２１９５５Ａ１号
【特許文献１２】ＰＣＴ公報第２００７０４１４８１号
【特許文献１３】ＰＣＴ公報第２０１１０９４６３２号
【非特許文献】
【００４７】
【非特許文献１】Ｓｃｈｕｂｅｒｔ−Ｚｓｉｌａｖｅｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，２：１２５−１３０（２００１）
【非特許文献２】Ｋａｐｌａｎ  Ｗ  ｅｔ  ａｌ．，２００４年，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｉｘｉｎｇ  ｇｌａｒｇｉｎｅ  ａｎｄ  ｓｈｏｒｔ−ａｃｔｉｎｇ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．２００４年１１月；２７（１１）：２７３９−４０）
【非特許文献３】Ｆｉａｌｌｏ−Ｓｃｈａｒｅｒ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６年（Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ．２００６年４月；１４８（４）：４８１−４）
【非特許文献４】Ｈａｓｓａｎ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８年（Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ２００８年；１２１：ｅ４６６−ｅ４７２）
【非特許文献５】Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１年
【非特許文献６】Ｎｉｃｏｌｕｃｃｉ，Ａｎｔｏｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１年（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，２０１１年，３４（１２），２５２４−２５２６）
【非特許文献７】Ａｌ  Ｓｈａｍｓｉ  Ａ．Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００８年（Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ．２００８年９月；１２２（３）：６７５−６；ａｕｔｈｏｒ  ｒｅｐｌｙ  ６７６）
【非特許文献８】Ｃｅｎｇｉｚ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０年（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，２０１０年；３３：１００９−１０１２）
【非特許文献９】Ｌｕｃｃｈｅｓｉ  Ｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２年（Ｄｉｂ  ＳＡ．，２０１２年１１月；１３（７）：５１９−２４．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１３９９−５４４８．２０１２．００８６７）
【非特許文献１０】Ｔｈａｎｈ  Ｍ．  Ｎ．  ｅｔ．  ａｌ．，２０１０年（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．，２０１０年８月；３３（８）：１７５０−１７５２）
【非特許文献１１】Ｃｅｎｇｉｚ  Ｅ  ｅｔ．  ａｌ．，２０１２年（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．，２０１２年４月；３５（４）：６９０−２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４８】
したがって、インスリングラルギンは酸性ｐＨで溶解でき、中性ｐＨで沈殿する。一方、他の全ての即効型、速効型、中時間作用型インスリンはｐＨ５．５〜５．８で等電点を有し、中性ｐＨでも可溶化される。したがって、活性剤が異なるｐＩを有する医薬組成物の製剤化は考案者にとって難しい。さらに、インスリンは高度に感応性の分子であることが知られ、製剤での少しの変化が、活性を変え得る表面モルホロジーおよび分子配座における重大な変化を引き起こす。したがって、放出を制御および定義できる、安定した生物学的に利用できる製剤にするために、異なる等電点を有するインスリンを混合することができる医薬組成物の必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【００４９】
本明細書で使用される語「易解離性分子集合体」とは、製剤の振とうまたは生体内投与の際にただちに個々の粒子に解離する緩く結合した分子集合体を意味する。
【００５０】
本明細書で使用される語「速効型または短時間作用型インスリン」とは、注射後３０分未満で急速に吸収され、１時間の短時間でインスリン濃度のピークに達し、通常のヒトインスリンと比較して短い３〜４時間の作用時間を有するインスリンのタイプを意味する。
【００５１】
本明細書で使用される語「中時間作用型インスリン」とは、注射後に１〜２時間以内に血中グルコースを低下させ始め、最高効果が６〜１２時間持続するインスリンのタイプを意味する。
【００５２】
本明細書で使用される語「医薬組成物」とは、哺乳類に影響を及ぼす特定の疾病または疾患を予防または治療またはコントロールするために、例えばヒトなどの哺乳類に投与される治療化合物を含む混合物を意味する。
【００５３】
本明細書で使用される語「緩衝剤」とは、ｐＨの変化に耐性がある弱酸およびその塩または弱塩基およびその塩のいずれかを含む溶液を意味する。
【００５４】
本明細書で使用される「防腐剤」とは、菌類および他の微生物の増殖を防ぐために使用することができる化合物のことを言う。
【００５５】
本明細書で使用される「等張剤」とは、製剤と接触する細胞膜を横切る水の正味の流動を防ぐために、製剤に対して生理的に許容され、適切な浸透圧を与える化合物のことを言う。
【００５６】
本明細書で使用される「ｐＨ調整剤」とは、酸とアルカリを組み合わせたもののことを言う。
【００５７】
本明細書で使用される「可溶化剤」とは、治療化合物および／またはポリマーを可溶化または部分的に可溶化できる物質のことを言う。
【００５８】
本明細書で使用される「キレート剤」とは、金属原子を用いてキレートを形成できるリガンドのことを言う。
【００５９】
本明細書で使用される「酸性化剤」とは、プロトンまたは水素イオンを提供し、および／または電子を受け取る化学種のことを言う。
【００６０】
本明細書で使用される「キレート剤を欠く」とは、キレート剤が最終製剤の０．０１％ｗ／ｖ未満の濃度で存在することを意味する。
【００６１】
本明細書で使用される「酸性化剤を欠く」とは、酸性化剤が最終製剤の０．０１％ｗ／ｖ未満の濃度で存在することを意味する。
【００６２】
本明細書で使用される「デキストランを欠く」とは、デキストランポリマーが製剤中に存在しないことを意味する。
【００６３】
本発明の態様の一つは、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【００６４】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療方法であって、前記治療方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む治療方法を提供する。
【００６５】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療において長時間作用型インスリンの曝露時間を延ばす方法であって、前記方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む方法を提供する。
【００６６】
本発明の別の態様は、１型または２型糖尿病に罹患している患者の夜間低血糖を減少させる方法であって、前記方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を必要としている患者に投与することを含む方法を提供する。
【００６７】
本発明の別の態様は、患者における時間プロファイルに対する平坦なインスリン血漿濃度を得るための方法であって、前記方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む方法を提供する。
【００６８】
本発明の別の態様は、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物の調製方法であって、前記調製方法が、
ａ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜４．５である医薬組成物を調製する工程と、
ｂ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの１つ以上の速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを含み、前記組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を調製する工程と、
ｃ．前記組成物の最終ｐＨがｐＨ６．５〜８．０になるように、工程ａの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、工程ｂの速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンの組成物と混合する工程と、
を含む調製方法を提供する。
【００６９】
本発明の態様の一つは、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、１つ以上の安定化剤と、任意に１つ以上の賦形剤またはその組み合わせと共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】インスリングラルギン３００ＩＵ組成物の顕微鏡写真である。
【図２】実施例１（ｃｏｍｂｏ  ＮＴＥ  １００１）の製剤の顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
インスリングラルギンと他のインスリン類似体の組み合わせを含む製剤を開発する間、本出願の発明者は、インスリングラルギンを１つ以上の速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンと配合し、組成物のｐＨを６．０〜８．０のｐＨに調整すると、結果として生じる製剤が安定していることを驚くべきことに発見した。本製剤は、製造するのに容易ですぐに使える。さらに、製剤の含量均一性は、充填時に２つの異なる製剤を同時に混合することによって達成することができる。本製剤は、長時間、すなわち２４時間超、抗糖尿病効果を発揮する。本発明は長い効果時間を有する。
【００７２】
本発明の態様の一つは、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤またはその組み合わせと共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜８．０のｐＨに調整される医薬組成物を提供する。
【００７３】
本発明の態様の一つは、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物のｐＨが６．０〜８．０のｐＨに調整される医薬組成物を提供する。
【００７４】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【００７５】
１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体は、１ｍｌあたり４０ＩＵ〜１０００ＩＵの濃度範囲で存在する。
【００７６】
本発明による４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン類似体または誘導体は、組み換えヒトインスリン、インスリンＮＰＨ、インスリンリスプロ、インスリンリスプロプロタミン、インスリングルリジンおよびインスリンアスパルト、インスリンアスパルトプロタミン、Ａ２１Ｇｌｙインスリン、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８Ｌｙｓインスリン、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８Ｌｙｓ  Ｂ２９Ｐｒｏ、Ａ２１Ｇｌｙ  Ｂ２８ＡｓｐまたはＶｉａｊｅｃｔ（速効型インスリン）を含む。
【００７７】
４．０〜５．７の等電点を有するインスリン類似体または誘導体は、インスリンアスパルトである。
【００７８】
４．０〜５．７の等電点を有するインスリン類似体または誘導体は、Ａ２１Ｇｌｙインスリンである。
【００７９】
５．８〜８．５の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体は、インスリングラルギンまたはＡ２１Ｇｌｙ  Ｂ３１Ａｒｇインスリンである。
【００８０】
５．８〜８．５の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体は、インスリングラルギンである。
【００８１】
本発明の組成物は二相組成物である。
【００８２】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を提供する。
【００８３】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物のｐＨが６．５〜７．５である医薬組成物を提供する。
【００８４】
本発明の態様の一つは、インスリングラルギンを、インスリンアスパルト、インスリンリスプロ、インスリングルリジン、またはＡ２１Ｇｌｙインスリンからなる群から選択される４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【００８５】
本発明の別の態様は、インスリングラルギンを、インスリンアスパルト、インスリンリスプロ、インスリングルリジン、またはＡ２１Ｇｌｙインスリンからなる群から選択される４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【００８６】
本発明の別の態様は、インスリングラルギンをインスリンアスパルトと組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【００８７】
本発明の別の態様は、インスリングラルギンをＡ２１Ｇｌｙインスリンと組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を提供する。
【００８８】
本発明の別の態様は、１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリンアスパルトと組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を対象とする。
【００８９】
本発明の別の態様は、１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリンリスプロと組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を対象とする。
【００９０】
本発明の別の態様は、１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングルリジンと組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を対象とする。
【００９１】
本発明の別の態様は、１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを１００ＩＵ〜１０００ＩＵのＡ２１Ｇｌｙインスリンと組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を対象とする。
【００９２】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物のｐＨが６．０〜８．０のｐＨに調整される医薬組成物を提供する。
【００９３】
注射量を減らすために、１ｍｌ中に１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体、および１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を含む製剤が開発された。したがって、製剤中に存在するインスリン、すなわち５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体、および４．０〜５．７の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体の総量は２００〜１０００ＩＵ／ｍｌである。１つのバイアル中に減らされた注射量で、製剤が５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、４．０〜５．７の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体との組み合わせを含むので、製剤は１日当たりより少ない注射を必要とする。これは患者の服薬順守の向上につながる。
【００９４】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物のｐＨが６．８〜７．２のｐＨに調整される医薬組成物を提供する。
【００９５】
５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体、および４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体が、１：９９〜９９：１の割合で医薬組成物中に存在する。
【００９６】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物がキレート剤を欠く医薬組成物を提供する。
【００９７】
本明細書で使用される適切なキレート剤は、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、ジメルカプロール（ＢＡＬ）、ペニシラミン、アルギン酸、クロレラ、コリアンダー葉、αリポ酸、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、ジメルカプトプロパンスルホネート（ＤＭＰＳ）、およびシュウ酸を含む。
【００９８】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物が酸性化剤を欠く医薬組成物を提供する。
【００９９】
適切な酸性化剤は、粒子状固体形態のものを含めて、ギ酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、酒石酸、ジアトリゾ酸、グルタミン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、クエン酸、または無水クエン酸を含む。
【０１００】
本発明の態様の一つは、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、組成物がデキストランポリマーを欠く医薬組成物を提供する。
【０１０１】
デキストランポリマーは、米国特許出願第２０１３００６５８２６号に記載のデキストランポリマーを意味し、本明細書で援用される。
【０１０２】
本発明の態様の一つは、患者において時間プロファイルに対して平坦なインスリン血漿濃度を得るための方法を提供し、この方法は、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を必要としている患者に投与することを含み、前記組成物は皮下、筋肉内、または静脈内経路を通じて投与される。
【０１０３】
本発明の別の態様は、患者において時間プロファイルに対して平坦なインスリン血漿濃度を得るための方法を提供し、この方法は、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を必要としている患者に投与することを含み、ここで前記組成物は皮下投与される。
【０１０４】
本発明の医薬組成物は、液体製剤または凍結乾燥製剤である。
【０１０５】
本発明の医薬組成物は、経口投与、経粘膜投与、経鼻投与、または非経口投与のためのものである。
【０１０６】
本発明の医薬組成物は、非経口投与のためのものである。
【０１０７】
本発明の医薬組成物は、皮下もしくは静脈内注射または静脈内注入として投与される。
【０１０８】
本発明の一態様においては、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物であって、前記賦形剤が、等張剤、界面活性剤、緩衝剤、亜鉛またはその塩、防腐剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、可溶化剤、および前述の賦形剤の組み合わせからなる群から選択される医薬組成物が提供される。
【０１０９】
本発明の一態様においては、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物であって、前記賦形剤が、等張剤、界面活性剤、緩衝剤、亜鉛またはその塩、防腐剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、および可溶化剤からなる群から選択される医薬組成物が提供される。
【０１１０】
賦形剤は、限定されないが、等張剤、界面活性剤、緩衝剤、亜鉛またはその塩、防腐剤、ｐＨ調整剤、可溶化剤、安定化剤、およびそれらの組み合わせを含む。
【０１１１】
「等張剤」は、グリセリンなどの化合物であり、公知の濃度でそのような目的で一般的に使用される。他の可能な等張性剤は、塩、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖、またはラクトースを含む。
【０１１２】
本明細書で使用される「界面活性剤」は、限定されないが、部分的脂肪酸エステル、および例えばグリセロール、ソルビトールなど（Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、特にＴｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０、  Ｍｙｒｊ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）またはポロクサマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）、およびＴｅｔｒｏｎｉｃｓ（登録商標））の多価アルコールのエーテル、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ（商標））、ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ラウリルジメチルアミンオキシド、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、ポリエトキシル化アルコール、ポリオキシエチレンソルビタン、オクトキシノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００（商標））、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン−Ｎ−オキシド、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ＨＴＡＢ）、ポリオキシル１０ラウリルエーテル、Ｂｒｉｊ７２１（商標）、胆汁酸塩（デオキシコール酸ナトリウム、コール酸ナトリウム）、ポリオキシルヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（商標））、ノニルフェノールエトキシレート（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標））、シクロデクストリン、レシチン、および塩化メチルベンゼトニウム（Ｈｙａｍｉｎｅ（商標））を含む。
【０１１３】
本明細書で使用される「緩衝剤」は、限定されないが、リン酸塩、アセテート、クエン酸塩、アルギニン、グリシルグリシン、またはＴＲＩＳ（すなわち２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−ｌ，３−プロパンジオール）緩衝剤、および対応する塩を含む。
【０１１４】
本明細書で使用される「防腐剤」は、限定されないが、安息香酸、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、２−フェノキシエタノール、硝酸フェニル第二水銀、チメロサール、メタクレゾール、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１１５】
本明細書で使用される「ｐＨ調整剤」は、ｏ−リン酸、クエン酸、酢酸、コハク酸、乳酸、グルコン酸、酒石酸、１，２，３，４−ブタンテトラカルボン酸、フマル酸、またはリンゴ酸からなる群から選択することができる。アルカリは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、またはトリエタノールアミンからなる群から選択される。
【０１１６】
本明細書で使用される「抗酸化剤」は、アスコルビン酸塩（ナトリウム／酸）、亜硫酸水素ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール（ｂｈａ）、ブチルヒドロキシトルエン（ｂｈｔ）、システイン／システイネートｈｃｌ、亜ジチオン酸ナトリウム（ナトリウムハイドロサルファイト、スルホキシル酸ナトリウム）、ゲンチシン酸、ゲンチシン酸エタノールアミン、グルタミン酸一ナトリウム、グルタチオン、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メチオニン、モノチオグリセロール（チオグリセロール）、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、アルファトコフェロール、アルファトコフェロール水素サクシネート、チオグリコール酸ナトリウム、またはそれらの組合せからなる群から選択することができる。
【０１１７】
本明細書で使用される「可溶化剤」は、限定されないが、湿潤剤、例えばポリソルベートおよびポロクサマー、非イオン性およびイオン性界面活性剤、食品酸および塩基（例えば炭酸水素ナトリウム）、多価アルコール、およびアルコールを含む。
【０１１８】
本明細書で使用される「安定化剤」は、限定されないが、界面活性剤、抗酸化剤、防腐剤、可溶化剤、エステラーゼ阻害剤、およびそれらの組み合わせを含む。安定化剤は、部分的脂肪酸エステル、および例えばグリセロール、ソルビトールなど（Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、特にＴｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０、Ｍｙｒｊ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（登録商標）またはポロクサマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）、およびＴｅｔｒｏｎｉｃｓ（登録商標））の多価アルコールのエーテル、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ（商標））、ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ラウリルジメチルアミンオキシド、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、ポリエトキシル化アルコール、ポリオキシエチレンソルビタン、オクトキシノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００（商標）、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン−Ｎ−オキシド、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ＨＴＡＢ）、ポリオキシル１０ラウリルエーテル、Ｂｒｉｊ７２１（商標）、胆汁酸塩（デオキシコール酸ナトリウム、コール酸ナトリウム）、ポリオキシルヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（商標））、ノニルフェノールエトキシレート（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標））、シクロデクストリン、レシチン、塩化メチルベンゼトニウム（Ｈｙａｍｉｎｅ（商標））、安息香酸、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、２−フェノキシエタノール、硝酸フェニル第二水銀、チメロサール、メタクレゾール、アスコルビン酸塩（ナトリウム／酸）、亜硫酸水素ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、システイン／システイネートＨＣｌ、亜ジチオン酸ナトリウム（ナトリウムハイドロサルファイト、スルホキシル酸ナトリウム）、ゲンチシン酸、ゲンチシン酸エタノールアミン、グルタミン酸一ナトリウム、グルタチオン、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メチオニン、モノチオグリセロール（チオグリセロール）、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、アルファトコフェロール、アルファトコフェロール水素サクシネート、チオグリコール酸ナトリウム、エステラーゼ阻害剤、例えば膵分泌性阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、およびセリンエステラーゼ阻害剤、例えばアプロチニンからなる群から選択される。
【０１１９】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療方法であって、前記治療方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、予め混合されたすぐに使える二相製剤である医薬組成物を、前記患者に投与することを含む治療方法を提供する。
【０１２０】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療方法であって、前記治療方法が、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、ｐＨが６．５〜８．０に調整される医薬組成物を、前記患者に投与することを含む治療方法を提供する。
【０１２１】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療方法であって、前記治療方法が、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、ｐＨが６．５〜８．０に調整される医薬組成物を、前記患者に投与することを含む治療方法を提供する。
【０１２２】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療において長時間作用型インスリンの曝露時間を延ばす方法であって、前記方法が、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物を、前記患者に投与することを含む方法を提供する。
【０１２３】
本発明の別の態様は、患者における１型および２型糖尿病の治療において長時間作用型インスリンの曝露時間を延ばす方法であって、前記方法が、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、１００ＩＵ〜１０００ＩＵの４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有し、ｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を、前記患者に投与することを含む方法を提供する。
【０１２４】
本発明の一態様では、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物の調製方法であって、前記調製方法が、
ａ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜４．５である医薬組成物を調製する工程と、
ｂ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの１つ以上の速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を調製する工程と、
ｃ．前記組成物の最終ｐＨがｐＨ６．５〜８．０になるように、工程ａのインスリングラルギン組成物と、工程ｂの速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを混合する工程と、
を含む調製方法が提供される。
【０１２５】
本発明の一態様では、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物の調製方法であって、前記調製方法が、
ａ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜４．５である医薬組成物を調製する工程と、
ｂ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの１つ以上の速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を調製する工程と、
ｃ．前記組成物の最終ｐＨがｐＨ６．５〜８．０になるように、バイアルまたはカートリッジに充填するときに、工程ａのインスリングラルギン組成物と、工程ｂの速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを同時に混合する工程と、
を含む調製方法が提供される。
【０１２６】
本発明の一態様では、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物の調製方法であって、前記調製方法が、
ａ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜４．５である医薬組成物を調製する工程と、
ｂ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの１つ以上の速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を調製する工程と、
ｃ．工程ａのインスリングラルギン組成物をバイアル中に加える工程と、
ｄ．前記組成物の最終ｐＨがｐＨ６．５〜８．０になるように、工程ｂの速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンの組成物を、工程ａのインスリングラルギン組成物を含む工程ｃのバイアル中に加える工程と、
を含む調製方法が提供される。
【０１２７】
本発明の一態様では、５．８〜８．５の等電点を有するインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体を、４．０〜５．７の等電点を有する１つ以上のインスリン、インスリン類似体、誘導体、または代謝体と、任意に１つ以上の賦形剤と共に、組み合わせることによって形成される易解離性分子集合体を含み、前記分子集合体が約５μｍ〜約２０μｍの平均粒径を有する医薬組成物の調製方法であって、前記調製方法が、
ａ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵのインスリングラルギンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが３．０〜４．５である医薬組成物を調製する工程と、
ｂ．１００ＩＵ〜１０００ＩＵの１つ以上の速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンを含む医薬組成物であって、前記組成物のｐＨが６．０〜８．０である医薬組成物を調製する工程と、
ｃ．前記組成物の最終ｐＨがｐＨ６．５〜８．０になり、前記組成物の全体積が１ｍｌになるように、工程ａのインスリングラルギン組成物を、工程ｂの速効、短時間作用、または中時間作用型インスリンの組成物と混合する工程と、
を含む調製方法が提供される。
【０１２８】
本発明の実施形態を示すために以下の実施例が役立つが、それは本発明の範囲を限定することは意図していない。
【実施例】
【０１２９】
実施例１：医薬組成物
Ａ．グラルギン溶液の調製
【０１３０】
【表１】
2016531847.tif 000002
【０１３１】
手順：表１に記載の医薬組成物を下記に詳述した手順にしたがって調製した。
【０１３２】
工程１：ＡＰＩ溶液の調製
インスリングラルギンの亜鉛含有結晶を、数μＬの１Ｍ  ＨＣｌを用いて、注射用蒸留水で溶解した。内因性亜鉛濃度を、適切な量の塩化亜鉛溶液（１％ｗ／ｖ）を加えることによって補った。
【０１３３】
工程２：防腐剤／安定化剤溶液の調製
２５ｍＭのメタクレゾール、２１７ｍＭのグリセロールとして８５％の最終濃度を得るために、メタクレゾール、グリセロールを注射用蒸留水で溶解することによって、防腐剤／安定化剤溶液を調製した。
【０１３４】
工程３：最終溶液の調製
工程１のＡＰＩ溶液および工程２の防腐剤／安定化剤溶液の両方を、混合後に最終濃度に希釈し、１ＭのＨＣｌまたは１ＭのＮａＯＨを用いてｐＨを４．０±０．１に調整した。その後、溶液を滅菌容器内で０．２ミクロンフィルターで濾過した。
【０１３５】
Ｂ．インスリンアスパルト溶液の調製
【０１３６】
【表２】
2016531847.tif 000003
【０１３７】
手順：表２に記載の医薬組成物を下記に詳述した手順にしたがって調製した。
【０１３８】
工程１：ＡＰＩ溶液の調製
インスリンアスパルト溶液を、数μＬの１Ｍ  ＨＣｌを用いて、注射用蒸留水で溶解することによって調製した。
【０１３９】
工程２：緩衝液の調製
１４ｍＭのメタクレゾール、１８ｍＭのフェノール、７ｍＭのリン酸水素二ナトリウム、および１７４ｍＭのグリセロールとして最終濃度を得るために、メタクレゾール、フェノール、リン酸水素二ナトリウム、およびグリセロールを注射用蒸留水で溶解することによって、緩衝液を調製した。
【０１４０】
工程３：最終溶液の調製
工程１のＡＰＩ溶液および工程２の緩衝液の両方を、混合後に最終濃度に希釈し、１ＭのＨＣｌまたは１ＭのＮａＯＨを用いてｐＨを７．２±０．２に調整した。その後、溶液を滅菌容器内で０．２ミクロンフィルターで濾過した。
【０１４１】
Ｃ．グラルギンおよびアスパルトの混合
比率が２０：８０（インスリンアスパルト：インスリングラルギン）になるように、インスリンアスパルト溶液を、インスリングラルギン溶液にゆっくりと加えた。この懸濁液を十分に混合した。懸濁液のｐＨは７．２であった。この製剤をバイアルに入れ、安定性試験を行った。
【０１４２】
実施例２：インスリングラルギンの結晶画像
実施例１（Ｃｏｍｂｏ  ＮＴＥ  １００１）およびインスリングラルギン組成物３００ＩＵ／ｍＬの製剤を光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ４０）下で観察した。試料を以下の方法で調製した。
【０１４３】
１．インスリングラルギンの３００ＩＵ／ｍＬの試料のｐＨを、ｐＨ９．５のリン酸緩衝剤を添加することによって７．２に上げた。試料をスライドガラス上に置き、１００Ｘ油浸顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ４０）で観察した。図１はインスリングラルギン３００ＩＵ／ｍｌの顕微鏡写真を示している。
【０１４４】
２．またｐＨ７．２を有する実施例１（Ｃｏｍｂｏ  ＮＴＥ  １００１）の製剤の顕微鏡写真を撮影し、図２に示した。
【図１】
2016531847.tif 000004
【図２】
2016531847.tif 000005
【国際調査報告】
2016531847.tif 000006
2016531847.tif 000007
2016531847.tif 000008