(57)【要約】本発明は、高コレステロール血症の分野に関する。特に、本発明は、３５０〜２，０００Ｄａの範囲の３〜８のアミノ酸配列を有する合成リガンドおよび／または合成リガンド誘導体を使用して、タンパク質ＰＣＳＫ９の立体構造を変えることにより低密度リポタンパク質の循環レベルを調節するための組成物ならびに方法を提供する。ＰＣＳＫ９の立体構造を変えることにより、ＰＣＳＫ９と、内在性低密度リポタンパク質受容体との間の相互作用に影響を与え、ＬＤＬコレステロールの循環レベルを増加または低下させることができる。高いＬＤＬ−コレステロールレベルは、心疾患に関するリスクの増加に関連する。低いＬＤＬ‐コレステロールレベルは、肝機能不全などの他の病態で問題となる場合があり、したがって、ＬＤＬレベルを上げることのできるリガンドも有用である。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）
ｉ）ＰＣＳＫ９タンパク質であって、アロステリック調節を誘導する結合部位および低密度リポタンパク質受容体結合部位を含む、ＰＣＳＫ９タンパク質と、
ｉｉ）前記結合部位に結合可能な、３〜８の範囲のアミノ酸配列からなる合成リガンドと、
ｉｉｉ）低密度リポタンパク質受容体および低密度リポタンパク質を含む複数の肝細胞と
を提供することと、
ｂ）前記合成リガンドを前記結合部位に結合することであって、前記合成リガンドが前記タンパク質の立体構造の変化を誘導することと、
ｃ）前記立体構造の変化により、前記低密度リポタンパク質受容体に対する前記低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性を調節することと
を含む方法。
【請求項２】
前記合成リガンドが、アロステリック阻害剤リガンドであり、前記調節により、前記低密度リポタンパク質受容体に対する前記低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性が減少し、それにより前記複数の肝細胞による前記低密度リポタンパク質の内部移行が増大する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記合成リガンドがアロステリックエンハーサーリガンドであり、前記調節により、前記低密度リポタンパク質受容体に対する前記低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性が増大し、それにより前記複数の肝細胞による前記低密度リポタンパク質の内部移行が減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記タンパク質の前記立体構造の変化が、誘導適合型の変化および生体力学的な変化からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記合成リガンドが、ＶＹＶＲＦＷ、ＶＬＥＬＹＷ、およびＩＳＤＬＳＹからなる群から選択される合成ペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記アロステリック阻害剤がペプチドであり、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、ＳＲＸ６１、ＳＲＸ６２、ＳＲＸ６３、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６５およびＳＲＸ６６からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記アロステリックエンハーサーペプチドが、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６７、ＳＲＸ６８、ＳＲＸ６９、ＳＲＸ７２およびＳＲＸ７３からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
ａ）
ｉ）ＰＣＳＫ９タンパク質であって、アロステリック調節を誘導する結合部位および低密度リポタンパク質受容体結合部位を誘導する結合部位を含む、ＰＣＳＫ９タンパク質と、
ｉｉ）前記結合部位に結合可能な、３〜８の範囲のアミノ酸配列からなる合成リガンドと、
ｉｉｉ）低密度リポタンパク質受容体の集合を含む複数の肝細胞と
を提供することと、
ｂ）前記結合部位に前記合成リガンドを結合することであって、前記合成リガンドが前記タンパク質の立体構造の変化を誘導することと、
ｃ）前記立体構造の変化により前記低密度リポタンパク質リポタンパク質受容体の前記集合を調節することと
を含む、方法。
【請求項９】
前記合成リガンドが、アロステリック阻害剤リガンドであり、前記調節により、前記肝細胞の細胞表面で測定可能な前記低密度リポタンパク質受容体の前記集合が増加する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記合成リガンドが、アロステリックエンハーサーリガンドであり、前記調節により、前記肝細胞の細胞表面で測定可能な前記低密度リポタンパク質受容体の前記集合が減少する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記タンパク質の前記立体構造の変化が、誘導適合型の変化および生体力学的な変化からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記リガンドが合成ペプチドであり、ＶＹＶＲＦＷ、ＶＬＥＬＹＷ、およびＩＳＤＬＳＹからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記アロステリック阻害剤がペプチドであり、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、ＳＲＸ６１、ＳＲＸ６２、ＳＲＸ６３、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６５およびＳＲＸ６６からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記アロステリックエンハーサーがペプチドであり、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６７、ＳＲＸ６８、ＳＲＸ６９、ＳＲＸ７２およびＳＲＸ７３からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
式
【化１】
2016508722.tif 000011
であって、式中、
ｉ）アミノ酸残基の数ｎが、３〜８の範囲の整数であり；
ｉｉ）構成アミノ酸が、独立して選択した天然または天然ではないアミノ酸の単一のエナンチオマーであり；
ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３が、独立して、水素、低級アルキル、分枝アルキル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、置換型または非置換型ベンゾイル、アルキルまたはアリール、メシル−スルホニル、トシル−スルホニルおよびカルバモイルからなる群から選択され；
ｉｖ）Ｒ１が、−ＯＨおよび−ＮＲ４−Ｒ５からなる群から選択され；
ｖ）Ｒ４およびＲ５が独立して、水素；低級アルキル、アリール、シクロアルキル、芳香複素環、ピリジン、テトラゾール、アルコキシ、シクロアルコキシからなる群から選択され；あるいは、Ｒ４およびＲ５が、ピペリジン；ピロリジン；モルフォリン；ピペラジン；４−メチルピペラジンなどの置換型複素環；またはジヒドロキノリンもしくはインドリンなどの縮合複素環などの複素環として結合し；ｖｉ）Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３が側鎖であり、少なくとも１つの側鎖が、極性基、負電荷極性基、および陽電荷極性基から選択される、
式の化合物。
【請求項１６】
負電荷極性基をさらに含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記負電荷極性基が、側鎖Ｓ１、Ｓ２、またはＳｎに組み込まれるＯ−ホスフェート、Ｏ−スルファート、５−Ｏ−、および５−Ｎ−テトラゾールからなる群のうち少なくとも１つから選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記側鎖のうちの少なくとも１つががホスホセリンを含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１９】
前記側鎖Ｓ１が、−ＣＨ２−ＮＨ−テトラゾールを含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２０】
極性Ｃ末端をさらに含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２１】
前記化合物が、Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、β−Ａｌａ−Ｐｈｅ（３−ＣＨ２ＮＨ２）−Ｖａｌ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｐ）−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｒｐ（５−Ｆ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリン、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ（４−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリンからなる群から選択される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２２】
前記化合物が、医薬組成物として製剤化される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２３】
前記医薬組成物が医薬品をさらに含む、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記医薬品が、スタチン、心血管治療薬、代謝薬、および高血圧治療薬からなる群から選択される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記医薬品が、エゼチミブ、アムロジピンベシル酸塩、シタグリプチン、メトホルミン、アトルバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群から選択される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２６】
前記医薬組成物が、錠剤、液剤、ゲル、カプセル、小袋、マイクロ粒子、リポソーム、ナノ粒子、塩、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、ストリップ剤、座薬、スプレー、および粉体からなる群から選択されるように製剤化される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２７】
前記極性基が、シトルリンである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２８】
前記極性Ｃ末端がグリシンである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２９】
前記陽電荷極性基がアミドである、請求項１５に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高コレステロール血症の分野に関する。特に、本発明は、３５０〜２，０００Ｄａの範囲の３〜８のアミノ酸配列を有する合成リガンドおよび／または合成リガンド誘導体を使用してタンパク質ＰＣＳＫ９の立体構造を変えることにより低密度タンパク質の循環レベルを調節する組成物ならびに方法を提供する。ＰＣＳＫ９の立体構造を変えることにより、ＰＣＳＫ９と内在性低密度リポタンパク質受容体との間の相互作用に影響を与え、ＬＤＬコレステロールの循環レベルを低下または増加させることができる。高いＬＤＬコレステロールレベルは心疾患のリスクの増加に関連する。低いＬＤＬコレステロールレベルは肝機能不全などの他の病態で問題となる場合があり、したがってＬＤＬレベルを上げることのできるリガンドも有用である。
【背景技術】
【０００２】
低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の血漿レベルの上昇は、冠動脈性心疾患の発症にとって最も高いリスク因子を意味する。血漿からのＬＤＬ−Ｃのクリアランスは、細胞表面の糖タンパク質であるＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）の作用を介して主に肝臓により行われる。ＬＤＬＲは、ＬＤＬ粒子上でアポリポタンパク質Ｂ１００（アポＢ１００）と高い親和性で結合し、エンドサイトーシスの取り込みを媒介する。（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１：１−３９（１９８５）。常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）は、ＬＤＬＲ（家族性高コレステロール血症（ＦＨ））またはアポＢ１００（ＦＤＢ（家族性アポＢ１００欠損）をコードする遺伝子で見出される血漿ＬＤＬクリアランスを低減する変異に関連する（それぞれＨｏｂｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２４，１３３−１７０  （１９９０）；およびＩｎｎｅｒａｒｉｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３１：１３３７−１３４９  （１９９０），）。
【０００３】
低密度タンパク質（ＬＤＬ）受容体（ＬＤＬＲ）は、ＶＬＤＬ、ＶＬＤＬレムナント、およびＬＤＬのエンドサイトーシスを効率的に媒介する。エンドサイトーシス工程の一部として、ＬＤＬＲは、リポタンパク質を肝臓のエンドソームへ放出する。
【０００４】
ＬＤＬコレステロールレベルを調節する手法の１つとして、ＬＤＬＲエンドサイトーシスによるリポタンパク質クリアランスの比率が希望通りに増加または減少するために、ＰＣＳＫ９と結合し、ＰＣＳＫ９およびＬＤＬＲの間の相互作用の動態を変えるペプチドの同定が挙げられる。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、高コレステロール血症の分野に関する。特に、本発明は、３５０〜２，０００Ｄａの範囲の３〜８のアミノ酸配列を有する合成リガンドおよび／または合成リガンド誘導体を使用して、タンパク質ＰＣＳＫ９の立体構造を変えることにより、低密度リポタンパク質の循環レベルを調節する組成物ならびに方法を提供する。ＰＣＳＫ９の立体構造を変えることにより、ＰＣＳＫ９と内在性低密度リポタンパク質受容体との間の相互作用に影響を与え、ＬＤＬコレステロールの循環レベルの減少または増加を引き起こすことができる。高いＬＤＬコレステロールレベルは、心疾患のリスクの増加に関連する。低いＬＤＬコレステロールレベルは、肝機能不全などの他の病態で問題となる場合がある。したがって、ＬＤＬレベルを上げることのできるリガンドも有用である。
【０００６】
一実施形態では、本発明は、ａ）ｉ）ＰＣＳＫ９タンパク質であって、アロステリック調節を誘導する結合部位および低密度リポタンパク質受容体結合部位を含む、ＰＣＳＫ９タンパク質、ｉｉ）上記結合部位に結合可能なリガンド、ｉｉｉ）低密度リポタンパク質受容体および低密度リポタンパク質を含む複数の肝細胞を提供することと、ｂ）上記結合部位に上記合成リガンドを結合することであって、上記合成リガンドが、上記タンパク質の立体構造の変化を誘導することと、ｃ）上記立体構造の変化により上記低密度リポタンパク質受容体に対する上記低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性を調節することとを考察する。一実施形態では、結合部位は、ＰＣＳＫ９タンパク質のＨｉｓ４１７、Ｌｙｓ４２１、Ｐｒｏ４４６、Ｔｒｐ４５３、Ｇｌｎ４５４、Ｇｌｕ６２８、Ｇｌｙ６２９、Ａｓｎ６５２、およびＴｈｒ６５３を含む。一実施形態では、合成リガンドは、アロステリック阻害剤のリガンドであって、上記調節が、上記低密度タンパク質受容体に対する低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性を減少することにより、上記複数の肝細胞による低密度リポタンパク質の内部移行が増加する。一実施形態では、合成リガンドは、合成リガンドは、アロステリックエンハーサーのリガンドであり、上記調節が、上記低密度リポタンパク質受容体に対する上記低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性を増大させることにより、上記複数の肝細胞による上記低密度リポタンパク質の内部移行が減少する。一実施形態では、上記タンパク質の立体構造の変化は、誘導適合型の変化および生体力学的な変化からなる群から選択される。一実施形態では、合成リガンドは、ＶＹＶＲＦＷ、ＶＬＥＬＹＷおよびＩＳＤＬＳＹからなる群から選択される合成ペプチドである。一実施形態では、アロステリック阻害剤はペプチドであり、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、ＳＲＸ６１、ＳＲＸ６２、ＳＲＸ６３、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６５およびＳＲＸ６からなる群より選択される。一実施形態では、アロステリックエンハーサーはペプチドであり、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６７、ＳＲＸ６８、ＳＲＸ６９、ＳＲＸ７２およびＳＲＸ７３からなる群から選択される。一実施形態では、合成ペプチドは約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、合成ペプチドは６つのアミノ酸を含む。一実施形態では、合成ペプチドは１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、合成ペプチドは約４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、合成ペプチドは、約１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。
【０００７】
一実施形態では、本発明は、ａ）ｉ）アロステリック調節を誘導する結合部位および低密度リポタンパク質受容体結合部位を含むＰＣＳＫ９タンパク質、ｉｉ）上記結合部位と結合可能な合成リガンド、ｉｉｉ）低密度リポタンパク質受容体の集合を含む複数の肝細胞を提供することと、ｂ）上記結合部位に上記合成リガンドを結合することであって、上記合成リガンドが、上記タンパク質の立体構造の変化を誘導することと、ｃ）上記立体構造の変化により、上記低密度リポタンパク質受容体の集合を調節することとを含む方法を考察する。一実施形態では、結合部位は、ＰＣＳＫ９タンパク質のＨｉｓ４１７、Ｌｙｓ４２１、Ｐｒｏ４４６、Ｔｉｐ４５３、Ｇｌｎ４５４、Ｇｌｕ６２８、Ｇｌｙ６２９、Ａｓｎ６５２、およびＴｈｒ６５３を含む。一実施形態では、合成リガンドはアロステリック阻害剤のリガンドであって、上記調節は、上記複数の肝細胞の細胞表面で測定可能な低密度リポタンパク質受容体の集合を増加させる。一実施形態では、合成リガンドは、アロステリックエンハーサーのリガンドであって、上記調節は、上記複数の肝細胞の細胞表面で測定可能な低密度リポタンパク質受容体の集合を減少させる。一実施形態では、上記タンパク質の立体構造の変化は、誘導適合型の変化および生体力学的変化からなる群から選択される。一実施形態では、リガンドは、ＶＹＶＲＦＷ、ＶＬＥＬＹＷおよびＩＳＤＬＳＹからなる群から選択される合成ペプチドである。一実施形態では、アロステリック阻害剤のペプチドは、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、ＳＲＸ６１、ＳＲＸ６２、ＳＲＸ６３、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６５およびＳＲＸ６６からなる群から選択される。一実施形態では、アロステリックエンハーサーのペプチドは、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６７、ＳＲＸ６８、ＳＲＸ６９、ＳＲＸ７２およびＳＲＸ７３からなる群から選択される。一実施形態では、合成ペプチドは、約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、合成ペプチドは、６つのアミノ酸である。一実施形態では、合成ペプチドは、１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、合成ペプチドは約４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、合成ペプチドは約５０〜１，０００Ｄａの範囲にある。
【０００８】
一実施形態では、本発明は、式
【化１】
2016508722.tif 000002
であって、
式中、
ｉ）アミノ酸残基の数のｎが、３〜８の範囲の整数であり；
ｉｉ）構成アミノ酸が、独立して選択される天然または天然ではないアミノ酸の単一のエナンチオマーであり；
ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３が、水素、低級アルキル、分枝アルキル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、置換型または非置換型ベンゾイル、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニル（たとえばメシルまたはトシル）およびカルバモイル（たとえばＢＯＣ）からなる群から独立して選択され；
ｉｖ）Ｒ１が、−ＯＨおよび−ＮＲ４−Ｒ５からなる群から選択され；
ｖ）Ｒ４およびＲ５が、独立して、水素；低級アルキル、アリール、シクロアルキル、芳香複素環、ピリジン、テトラゾール、アルコキシ、シクロアルコキシからなる群から選択され；あるいは、Ｒ４およびＲ５が、ピペリジン；ピロリジン；モルフォリン；ピペラジン；４−メチルピペラジンなどの置換型複素環；またはジヒドロキノリンもしくはインドリンなどの縮合複素環などの複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｅ）として結合し、Ｓ１、Ｓ２およびＳ３が側鎖である、
式の化合物を考察する。一実施形態では、本化合物は負電荷極性基をさらに含む。一実施形態では、負電荷極性基は、上記側鎖Ｓ１、Ｓ２、またはＳｎに組み込まれるＯ−ホスフェート、Ｏ−スルファート、５−Ｏ−および５−Ｎ−テトラゾールからなる群のうちの少なくとも１つから選択される。一実施形態では、Ｓ１、Ｓ２、およびＳｎからなる群から選択される側鎖はホスホセリンを含む。一実施形態では、側鎖Ｓ１は、−ＣＨ２−ＮＨ−テトラゾールを含む。一実施形態では、本化合物は、グリシンＣ末端をさらに含む。一実施形態では、本化合物は、Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、β−Ａｌａ−Ｐｈｅ（３−ＣＨ２ＮＨ２）−Ｖａｌ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｐ）−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−ＨＰｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｒｐ（５−Ｆ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリン、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ（４−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリンからなる群から選択される。一実施形態では、本化合物は、約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、本化合物は６つのアミノ酸である。一実施形態では、本化合物は、１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、本化合物は４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、本化合物は約１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。一実施形態では、本化合物は合成ペプチドを含む。一実施形態では、本化合物は医薬組成物として製剤化される。一実施形態では、医薬組成物は、医薬品をさらに含む。一実施形態では、医薬品は、スタチン、心血管治療薬、代謝薬、および高血圧治療薬からなる群から選択される。一実施形態では、医薬品は、エゼチミブ、アムロジピンベシル酸塩、シタグリプチン、メトホルミン、アトルバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群から選択される。一実施形態では、医薬組成物は、錠剤、液剤、ゲル、カプセル、小袋、マイクロ粒子、リポソーム、ナノ粒子、塩、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、ストリップ剤、座薬、スプレー、および粉体からなる群から選択されるように製剤化される。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、約３５０〜１，５００Ｄａの範囲のＰＣＳＫ９アロステリックリガンドを含む組成物を考察する。一実施形態では、ＰＣＳＫ９アロステリックリガンドは１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、ＰＣＳＫ９アロステリックリガンドは、約３〜６つのアミノ酸を含む。一実施形態では、ＰＣＳＫ９アロステリックリガンドは、約５５０〜１，０００Ｄａの範囲にある。一実施形態では、本組成物は医薬組成物である。一実施形態では、本組成物は、医薬組成物である。一実施形態では、この投与は、限定するものではないが、リポソーム、マイクロ粒子、およびナノ粒子を含む群から選択される送達システムをさらに含む。一実施形態では、医薬組成物は、上記リガンドの有効用量を含む。一実施形態では、医薬組成物は塩を含む。一実施形態では、医薬組成物は経口投与用に製剤化される。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、ａ）ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドを対象に投与することであって、上記対象が心血管疾患のうちの少なくとも１つの症状を有することと、ｂ）上記ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの投与により上記心血管疾患のうちの少なくとも１つの症状を低減することとを含む方法を考察する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が１０％〜８５％低減する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が２０％〜６５％低減する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が３０％〜５５％低減する。一実施形態では、心血管疾患は、冠疾患を含む。一実施形態では、心血管疾患は、高血圧を含む。一実施形態では、心血管疾患は高コレステロール血症を含む。一実施形態では、心血管疾患はアテローム性動脈硬化症を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、循環する高密度リポタンパク質の減少を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、循環コレステロールの増加を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、循環する低密度リポタンパク質の増加を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は高血圧を含む。一実施形態では、投与は、ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの有効用量を含む。一実施形態では、上記投与は、限定するものではないが、リポソーム、マイクロ粒子、およびナノ粒子を含む群から選択される送達システムをさらに含む。一実施形態では、有効用量は医薬組成物を含む。一実施形態では、医薬組成物は塩を含む。一実施形態では、医薬組成物は経口投与用に製剤化される。一実施形態では、アロステリック阻害剤ペプチドは、約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、アロステリック阻害剤ペプチドは６つのアミノ酸である。一実施形態では、アロステリック阻害剤ペプチドは、１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、アロステリック阻害剤ペプチドは、４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、アロステリック阻害剤ペプチドは、１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、ａ）ＰＣＳＫ９アロステリックエンハーサーペプチドを対象に投与することであって、上記対象が心血管疾患の少なくとも１つの症状を有することと、ｂ）ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの投与により、上記心血管疾患の少なくとも１つの症状を低減することとを含む、方法を考察する。一実施形態では、心血管疾患は高コレステロール血症を含む。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状は循環コレステロールの減少を含む。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状は、高密度リポタンパク質の増加を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、低密度リポタンパク質の減少を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、低血圧を含む。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が１０％〜８５％低減する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が２０％〜６５％低減する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が３０％〜５５％低減する。一実施形態では、上記投与は、上記ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの有効用量を含む。一実施形態では、上記投与は、限定するものではないが、リポソーム、マイクロ粒子、およびナノ粒子を含む群から選択される送達システムをさらに含む。一実施形態では、有効用量は医薬組成物を含む。一実施形態では、医薬組成物は塩を含む。一実施形態では、医薬組成物は経口投与用に製剤化される。一実施形態では、アロステリックエンハーサーペプチドは、約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、アロステリックエンハーサーペプチドは、６つのアミノ酸である。一実施形態では、アロステリックエンハーサーペプチドは、１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、アロステリックエンハーサーペプチドは約４６６〜１０６７Ｄａの範囲である。一実施形態では、アロステリックエンハーサーペプチドは、約１７５〜１，０００Ｄａの範囲である。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、ａ）ＰＣＳＫ９アロステリック合成ペプチドを対象に投与することであって、上記対象が肝疾患の少なくとも１つの症状を有することと、ｂ）上記ＰＣＳＫ９アロステリックペプチドの投与により上記肝疾患の少なくとも１つの症状を低減することとを含む、方法を考察する。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、低密度リポタンパク質受容体の密度の増加を含む。一実施形態では、少なくとも１つの症状は低密度リポタンパク質受容体の密度の低下を含む。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が１０％〜８５％低減する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が２０％〜６５％低減する。一実施形態では、上記少なくとも１つの症状が３０％〜５５％低減する。一実施形態では、ＰＣＳＫ９アロステリック合成ペプチドは、ＰＣＳＫ９アロステリックエンハーサーペプチドを含む。一実施形態では、ＰＣＳＫ９アロステリック合成ペプチドは、ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドを含む。一実施形態では、本投与は、上記ＰＣＳＫ９アロステリックペプチドの有効用量を含む。一実施形態では、上記投与は、限定するものではないが、リポソーム、マイクロ粒子、およびナノ粒子を含む群から選択される送達システムをさらに含む。一実施形態では、有効用量は医薬組成物を含む。一実施形態では、医薬組成物は塩を含む。一実施形態では、医薬組成物は経口投与用に製剤化される。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは６つのアミノ酸である。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは、１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは約４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは、約１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、ａ）ｉ）ＰＣＳＫ９タンパク質であって、アロステリック調節部位オルソステリック低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）結合部位を含むＰＣＳＫ９タンパク質、およびｉｉ）上記アロステリック調節部位に結合可能なアロステリック合成ペプチドを提供することと、ｂ）上記アロステリック調節部位に上記アロステリック合成ペプチドを結合することであって、上記アロステリック合成ペプチドが、上記オルソステリックＬＤＬＲ結合部位の立体構造の変化を誘導することとを含む、方法を考察する。一実施形態では、上記アロステリック調節部位への上記アロステリック合成ペプチドの結合は、上記オルソステリックＬＤＬＲ結合部位の誘導適合した立体構造の変化を阻害する。一実施形態では、この結合は上記ＰＣＳＫ９タンパク質の立体構造の変化を誘導する。一実施形態では、結果として得られるＰＣＳＫ９の立体構造の変化は、上記ＬＤＬＲに対する上記オルソステリックＬＤＬＲ結合部位の相互作用の結合親和性を低減し、ここで低密度リポタンパク質のクリアランスは増大する。一実施形態では、立体構造の変化は、低密度リポタンパク質受容体からの上記オルソステリック低密度リポタンパク質受容体の結合部位の解離を高める。一実施形態では、立体構造の変化は、結合リガンドに対するオルソステリックＣｉｓ−Ｈｉｓリッチドメイン（ＣＨＲＤ）の結合部位を低減する（たとえば、低ｐＨで小胞輸送を促進する；ＤｅＶａｙ  ｅｔ  ａｌ，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／Ｋｅｘｉｎ  Ｔｙｐｅ  ９（ＰＣＳＫ９）  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｖｉａ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２  （ＡＰＬＰ２）”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８８（１５）：１０８０５−１０８１８  （２０１３））。一実施形態では、オルソステリック低密度リポタンパク質受容体結合部位の立体構造の変化は、融合適合型の阻害を含む。一実施形態では、上記アロステリック合成ペプチドの結合は、ＰＣＳＫ９のオルソステリックＬＤＬＲ結合部位の誘導適合に必要な立体構造の変化を低減し、上記オルソステリックＬＤＬＲ相互作用の結合親和性を阻害し、低密度リポタンパク質のクリアランスを増加させる。一実施形態では、上記オルソステリック低密度リポタンパク質受容体結合部位の立体構造の変化の誘導は生体力学的である。一実施形態では、立体構造の変化は、ＰＣＳＫ９の触媒ドメインとＰＣＳＫ９のＣ末端ドメインとの間の結合ループの生体力学的硬化をもたらす。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、アミノ酸のアラニン４４３の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動を含む。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、アミノ酸バリン４４１の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動を含む。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、アミノ酸アスパラギン酸４４２側鎖および主鎖の転移性および／または回転性の移動を含む。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、アミノ���スレオニン１６２の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動を含む。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、アミノ酸プロリン４４５の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動を含む。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、アミノ酸プロリン４４６の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動を含む。一実施形態では、生体力学的な立体構造の変化は、ヒスチジン４４９の再配向および転移を含む。一実施形態では、生体力学的な機構は、アミノ酸アラニン４４３の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、生体力学的な機構は、アミノ酸バリン４４１の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、生体力学的な機構は、アミノ酸アスパラギン酸４２２の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、生体力学的な機構は、アミノ酸スレオニン１６２の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、生体力学的な機構は、アミノ酸プロリン４４５の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、生体力学的な機構は、アミノ酸プロリン４４６の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、生体力学的な変化は、ヒスチジン４４９の側鎖および／または主鎖の転移性および／または回転性の移動の阻害を含む。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドはＶＹＶＲＦＷである。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドはＶＬＥＬＹＷである。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドはＩＳＤＬＳＹである。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは、約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは６つのアミノ酸である。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは約４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、アロステリック合成ペプチドは約１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。
【００１４】
一実施形態では、本発明は、式
【化２】
2016508722.tif 000003
であって、式中、
ｉ）アミノ酸残基の数ｎが、３〜８の範囲の整数であり、ｉｉ）構成アミノ酸が、天然または天然ではないアミノ酸から独立して選択される単一のエナンチオマーであり、ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３が、水素、低級アルキル、分枝アルキル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、置換型または非置換型ベンゾイル、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニル（たとえばメシルまたはトシル）およびカルバモイル（たとえばＢＯＣ）からなる群から独立して選択され、ｉｖ）Ｒ１が、−ＯＨおよび−ＮＲ４−Ｒ５からなる群から選択され、ｖ）Ｒ４およびＲ５が、独立して、水素；低級アルキル、アリール、シクロアルキル、芳香複素環、ピリジン、テトラゾールからなる群から選択されるか；あるいはＲ４およびＲ５は、ピペリジン；ピロリジン；モルフォリン；ピペラジン；４−メチルピペラジンなどの置換型複素環；またはジヒドロキノリンもしくはインドリンなどの縮合複素環などの複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｅ）として結合する、式の化合物を考察する。一実施形態では、本化合物は負電荷極性基をさらに含む。一実施形態では、負電荷極性基は、限定するものではないが、Ｓ１、Ｓ２、もしくはＳ３に組み込まれるＯ−ホスフェート、Ｏ−スルファート、または５−Ｏ−または５−Ｎ−テトラゾールを含む。一実施形態では、側鎖Ｓ１、Ｓ２、またはＳ３はホスホセリンを含む。一実施形態では、側鎖Ｓ１は、−ＣＨ２−ＮＨ−テトラゾールを含む。一実施形態では、Ｃ末端はグリシンを含む。一実施形態では、本化合物は約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、本化合物は６つのアミノ酸である。一実施形態では、本化合物は１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、本化合物は約４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。一実施形態では、本化合物は、約１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。一実施形態では、本化合物は合成ペプチドを含む。
【００１５】
一実施形態では、本発明は、式Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００１６】
一実施形態では、本発明は、式β−Ａｌａ−Ｐｈｅ（３−ＣＨ２ＮＨ２）−Ｖａｌ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｐ）−Ｐｈｅ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００１７】
一実施形態では、本発明は、式Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００１８】
一実施形態では、本発明は、式Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００１９】
一実施形態では、本発明は、式Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、式Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００２１】
一実施形態では、本発明は、式Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、式Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、式Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒの化合物を考察する。
【００２４】
一実施形態では、本発明は、式Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒの化合物を考察する。
【００２５】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００２７】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｔｒｐ（５−Ｆ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリンの化合物を考察する。
【００２８】
一実施形態では、本発明は、式Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）の化合物を考察する。
【００２９】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙの化合物を考察する。
【００３０】
一実施形態では、本発明は、式Ｐｈｅ（４−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリンの化合物を考察する。
【００３１】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、Ａｌａ−Ｐｈｅ（３−ＣＨ２ＮＨ２）−Ｖａｌ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｐ）−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−ＮＨ２、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｒｐ（５−Ｆ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＴｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００３２】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨＣＨ３、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨＣＨ３、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリン、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−４−メチルピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｅ）、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ピペリジン、Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ピロリジンを含む化合物を考察する。
【００３３】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−ＴｙｒおよびＡｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）を含む化合物を考察する。
【００３４】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）およびＴｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）を含む化合物を考察する。
【００３５】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＴｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００３６】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）およびＡｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）を含む化合物を考察する。
【００３７】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００３８】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）およびＴｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）を含む化合物を考察する。
【００３９】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｎｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＡｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４０】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）およびＴｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）を含む化合物を考察する。
【００４１】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＡｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４２】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＡｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４３】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Αｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Αｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＡｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４４】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ａｃ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ａｃ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、Ａｃ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＡｃ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４５】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、ＢＯＣ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、ＢＯＣ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、ＢＯＣ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、ＢＯＣ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、ＢＯＣ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、ＢＯＣ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２、ＢＯＣ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２およびＢＯＣ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４６】
一実施形態では、本発明は、限定するものではないが、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ３）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−３，４−ジフルオロフェニル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−３−ヒドロキシフェニル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）、Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−３−メチルフェニル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）およびＡｃ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）−ＮＨ２を含む化合物を考察する。
【００４７】
一実施形態では、本発明は、式Ｐｈｅ（４−Ｐｈ）−Ｇｌｙ（Ｅｔ）−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリンを有する化合物を考察する。
【００４８】
一実施形態では、本発明は、Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ（６−ＯＭｅ）−Ｇｌｙ、Ａｃ−Ｔｙｒ（３−Ｆ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、ピバロイル−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、メシル−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、ＢＯＣ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、
【化３】
2016508722.tif 000004
および
2016508722.tif 000005
からなる群から選択される化合物を考察する。
【００４９】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ（３ＣＦ３）−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＨ２の化合物を考察する。
【００５０】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ（３Ｃｌ）−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＨ２の化合物を考察する。
【００５１】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＨ２の化合物を考察する。
【００５２】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｒｇの化合物を考察する。
【００５３】
一実施形態では、本発明は、式ＮＡｃ−ＮＭｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ（３ＯＨ）−Ｄ−Ｔｒｐ−ＮＨ２の化合物を考察する。
【００５４】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ（３ＣＦ３）−Ｇｌｙの化合物を考察する。
【００５５】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｎ（Ｍｅ）（Ｐｈ３ＣＦ３）の化合物を考察する。
【００５６】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ（３ＯＨ）−Ｄ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００５７】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ（３ＯＨ）−Ｄ−Ｔｒｐ−ＮＨ２の化合物を考察する。
【００５８】
一実施形態では、本発明は、式プロピオニル−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ（３ＯＨ）−Ｄ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００５９】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００６０】
一実施形態では、本発明は、式Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００６１】
一実施形態では、本発明は、式Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００６２】
一実施形態では、本発明は、式Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐの化合物を考察する。
【００６３】
一実施形態では、本発明は、式Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−Ｐｈｅ−Ｗ（Ｃｉｔ＝シトルリン）の化合物を考察する。
【００６４】
一実施形態では、本発明は、式
【化４】
2016508722.tif 000006
であって、式中、
ｉ）アミノ酸残基の数であるｎが、３〜８の範囲の整数であり；ｉｉ）構成アミノ酸が、独立して選択した天然または天然ではないアミノ酸である単一のエナンチオマーであり；ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３が、水素、低級アルキル、分枝アルキル、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、置換型または非置換型ベンゾイル、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニル（たとえばメシルまたはトシル）およびカルバモイル（たとえばＢＯＣ）からなる群から独立して選択され；ｉｖ）Ｒ１が、−ＯＨおよび−ＮＲ４−Ｒ５からなる群から選択され；ｖ）Ｒ４およびＲ５が、水素；低級アルキル、アリール、シクロアルキル、芳香複素環、ピリジン、テトラゾールからなる群から独立して選択されるか；あるいはＲ４およびＲ５が、ピペリジン；ピロリジン；モルフォリン；ピペラジン；４−メチルピペラジンなどの置換型複素環；またはジヒドロキノリンもしくはインドリンなどの縮合複素環などの複素環として結合する、式の化合物ならびにキャリアーを含む医薬組成物を考察する。一実施形態では、医薬組成物は負電荷極性基をさらに含む。一実施形態では、上記負電荷極性基は、Ｓ１、Ｓ２、またはＳ３に組み込まれるＯ−ホスフェート、Ｏ−スルファート、または５−Ｏ−もしくは５−Ｎ−テトラゾールからなる群のうち少なくとも１つから選択される。一実施形態では、側鎖Ｓ１、Ｓ２、またはＳ３は、ホスホセリンを含む。一実施形態では、側鎖Ｓ１は、−ＣＨ２−ＮＨ−テトラゾールを含む。一実施形態では、Ｃ末端はグリシンを含む。一実施形態では、医薬組成物はスタチンをさらに含む。一実施形態では、スタチンは、限定するものではないが、アトルバスタチン、ロスバスタチンおよび／またはシンバスタチンを含む。一実施形態では、医薬組成物は、抗糖尿病薬を含む。一実施形態では、医薬組成物は、心血管治療薬を含む。一実施形態では、医薬組成物はエゼチミブ（Ｚｅｔｉａ（登録商標））を含む。一実施形態では、医薬組成物は、限定するものではないが、アムロジピンベシル酸塩（Ｎｏｒｖａｓｃ（登録商標））を含む降圧剤を含む。一実施形態では、抗糖尿病薬は、限定するものではないが、シタグリプチン（Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標））および／またはメトホルミンを含む。一実施形態では、本化合物は、約３〜８つのアミノ酸を含む。一実施形態では、本化合物は６つのアミノ酸である。一実施形態では、本化合物は、１，３００Ｄａ未満である。一実施形態では、本化合物は約４６６〜１０６７Ｄａ未満の範囲にある。一実施形態では、本化合物は、約１７５〜１，０００Ｄａの範囲にある。一実施形態では、本化合物は合成ペプチドを含む。
【００６５】
定義
本明細書で使用される用語「化合物」または「リガンド」は、結合するパートナーと相互作用（たとえば付着、結合）することにより、結合するパートナーの生物学的機能を変えることのできる天然のアミノ酸を含むいずれかの外因性分子を指す。化合物／リガンドは、限定するものではないが、少なくとも２つのペプチド結合、抗体、タンパク質、ペプチド、および／またはトリペプチドを含むアミノ酸鎖を含んでもよい。このような化合物／リガンドは、限定するものではないが、ヒドロキシル、硫黄、アミン、アミド、エーテル、エステル、脂肪族鎖、芳香環、脂性環、置換型芳香環および／または置換型脂性環を含む置換基により誘導体化されてもよい。このような化合物／リガンドは、阻害剤化合物／リガンドまたはエンハーサー化合物／リガンドであってもよい。また化合物／リガンドは、「薬剤」を含むことにより、所望の作用を得る、投与できるいずれかの薬理学的活性物質を指してもよい。薬剤または化合物／リガンドは合成するか、または天然に存在するものとすることができる。
【００６６】
本明細書で使用される用語「合成リガンド」は、リガンドであるアミノ酸を含む分子を指し、ｅｘ  ｖｉｖｏで設計され、続いてｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの手段で合成して、予め特定した特徴（たとえば電荷、形状、分子量）の分子を生成し、別の天然に存在する生体分子により結合して、複合体を形成する。好ましくはこれらの合成リガンドは標的となる天然の生体分子より小さく、より好ましくはこれらの合成リガンドは、１，３００Ｄａ未満であり、より好ましくは３５０〜１２５０Ｄａである。
【００６７】
本明細書で使用される用語「合成ペプチド」は、約３〜８つのアミノ酸であり、約３５０〜１，５００Ｄａの範囲にある非天然のアミノ酸配列を指す。約４〜５つのアミノ酸であり、約５５０〜１，０００Ｄａの範囲にある非天然のアミノ酸が好ましい。たとえば、合成ペプチドは、６つのアミノ酸であり、１，３００Ｄａ未満であり、たとえば約４６６〜１０６７Ｄａの範囲にある。好ましくは、合成ペプチドは実施例Ｖにしたがって作製される。
【００６８】
本明細書で使用される用語「アロステリック部位」は、外因性リガンドへの結合が、（酵素としての）タンパク質の形状および活性を変化させる際の、本来の化学的活性／受容体結合部位以外のリガンド結合部位を指す。たとえば、「アロステリックエンハーサーペプチド」は、タンパク質の本来の活性および／またはそれぞれの親和性を増大させ得るアロステリック部位へ結合するリガンドを指す（たとえばＰＣＳＫ９アロステリックエンハーサーペプチド）。あるいは、「アロステリック阻害剤ペプチド」は、タンパク質の本来の活性および／またはそれぞれの親和性を減少させ得るアロステリック部位へ結合するリガンドを指す（たとえばＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチド）。たとえば、結合部位タンパク質は、ＰＣＳＫ９タンパク質のＨｉｓ４１７、Ｌｙｓ４２１、Ｐｒｏ４４６、Ｔｒｐ４５３、Ｇｌｎ４５４、Ｇｌｕ６２８、Ｇｌｙ６２９、Ａｓｎ６５２、およびＴｈｒ６５３を含む。
【００６９】
本明細書で使用される用語「オスロステリック部位」は、主に、受容体、結合部位および／または触媒部位へのリガンド（たとえばペプチド）の調節されていない結合部位を指す。
【００７０】
本明細書で使用される用語「立体構造」は、アミノ酸配列の３次元の立体化学上の構成を指す。たとえば、いずれかの特定の立体構造は、アミノ酸配列における個々のアミノ酸の間での立体相互作用、疎水性相互作用、電気化学的結合、および／または塩橋相互作用の間の熱力学的均衡からもたらされる。
【００７１】
本明細書で使用される用語「立体構造の変化」は、第１の熱力学的均衡（立体構造１）を第２の熱力学的均衡（立体構造２）に変えることが可能であるか、または、孤立したタンパク質、および／もしくはタンパク質−リガンド複合体、および／もしくはタンパク質‐タンパク質複合体の中の準安定的なフォールディング状態の動的範囲および／もしくは種類および／もしくは数を高める外因性の力または分子（たとえば阻害剤ペプチド）の導入を指す。さらに、立体構造の変化は、特定の外部条件（ｐＨ、温度など）の下、および／または、限定するものではないが、分子の認識、初期の結合相互作用、誘導適合相互作用、官能基の活性および／もしくは解離に好ましい条件を含む、孤立したタンパク質もしくは複数の複合体の寿命の範囲内の特定の期間の間で、優性的に示されてもよい。
【００７２】
本明細書で使用される用語「ＥＧＦＡ」は、低密度リポタンパク質受容体の最もアミノ性のＥＧＦ様ドメインを指す。たとえば、ＥＧＦ様ドメインは、ＬＤＬＲ受容体の細胞外の一部を指す。
【００７３】
本明細書で使用される用語「ＬＤＬ−Ｒ」および「ＬＤＬＲ」は、低密度リポタンパク質受容体の略語を指す。略語は、全体のＬＤＬ−Ｒ受容体タンパク質またはそのいずれかの一部に関してであってもよい。ＬＤＬ−Ｒは細胞表面にあり、低密度リポタンパク質と結合することにより、ＬＤＬ−Ｒ／ＬＤＬ複合体は、細胞（たとえば肝細胞）内で内部移行し、ＬＤＬは放出され、ＬＤＬ−Ｒは、細胞表面に戻り再利用されることが可能になる。
【００７４】
本明細書で使用される用語「結合面」は、少なくとも２つの異なる分子の官能基（たとえば、ヒドロキシル、アミド、アミン、カルボキシル、アミジン、グアニジン、炭化水素、スルホニルなど）の間での吸引相互作用（たとえば水素結合、静電相互作用、疎水性相互作用など）のいずれかの集合を指す。吸引力の集合は、安定した分子面を形成し、それにより、少なくとも２つの分子間に「結合面」を形成する。
【００７５】
本明細書で使用される用語「誘導適合」は、受容体の立体構造の変化を必要とするペプチドのいずれかの受け入れを指す。このような立体構造は、アミノ酸側鎖および可動性ループの転移性／回転性の移動により促進され、これにより、静電領域および／または疎水性領域を再配置してもよい。
【００７６】
本明細書で使用される用語「複合体」または「組成物」は、共有結合よりも静電結合により通常結合する２つ以上のイオンまたは分子のいずれかの化学的会合を指す。例えば、複合体または組成物は、本明細書に記載されるペプチドと、ＰＣＳＫ９アミノ酸配列との間で形成されそれにより、ペプチド／ＰＣＳＫ９アミノ酸配列複合体または組成物を作製してもよい。任意に、このような複合体または組成物はまた、限定するものではないが、ＥＧＦＡ領域を含むＬＤＬＲアミノ酸配列もしくはそのいずれかの一部を含んでもよい。
【００７７】
本明細書で使用される用語「水素結合」は、１つの極性分子（以後水）の水素原子と、同一または異なる極性物質である通常別の分子の小さな電気陰性原子（以後酸素、窒素、またはフッ素）との間の静電引力である。
【００７８】
本明細書で使用される用語「塩橋」は、水素結合および／または静電相互作用などのいずれかの相互作用または相互作用の組み合わせを指し、荷電した部位を重ねる方法で陽イオン性および陰イオン性の構造を整列させる。
【００７９】
本明細書で使用される用語「相互作用」は、１つの分子および／官能基が、別の分子および／または官能基を有し得るいずれかの作用を指す。このような作用は、限定するものではないが、立体的（たとえば物理的）作用、静電（たとえば、電気性吸引または反作用）作用、電磁作用、親水性作用、または疎水性作用を含んでもよい。
【００８０】
本明細書で使用される用語「重ねる」は、１つの分子の電子構造が、別の分子の境界上にあり、この境界を超えて延びる方法またはこの方法で位置付けされる分子のいずれかの位置付けを指す。
【００８１】
本明細書で使用される用語「高コレステロール血症」は、血液コレステロールレベルが、臨床的に推奨されるレベルを超えて上昇する、いずれかの医学的状態を指す。たとえば、コレステロールを、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を使用して測定する場合、測定したＬＤＬレベルがたとえば約７０ｍｇ／ｄｌを超える場合に、高コレステロール血症が発症し得る。あるいはコレステロールを、遊離血漿コレステロールを使用して測定する場合、測定した遊離コレステロールレベルがたとえば約２００〜２２０ｍｇ／ｄｌを超える場合に高コレステロール血症が発症し得る。
【００８２】
本明細書で使用される、「〜のリスクがある」との文言は、患者を特定の疾患または罹患
にさせやすい場合がある、患者により示される医学的状態または一連の医学的状態を指す。たとえば、これらの状態は、限定するものではないが、行動性、状動性、化学的、生化学的、または環境性の影響を含む影響からもたらされてもよい。
【００８３】
本明細書で使用される用語「有効量」は、臨床的に有益な結果（たとえば症状の低減）を達成する治療薬剤を含む医薬組成物の特定の量を指す。このような組成物の毒性および治療上の効力は、たとえば、ＬＤ５０（集合の５０％に致死性である用量）およびＥＤ５０（集合の５０％に治療上の有効性のある用量）を決定するために、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法により決定できる。毒性および治療有効性の間の用量の比率は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養物アッセイおよび追加的な動物試験から入手したデータは、ヒトに使用するある範囲の用量を製剤化する際に使用できる。このような化合物の用量は、好ましくは、ほとんど毒性がないか、または毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、使用する剤形、患者の重症度、および投与経路に応じこの範囲内で反動する。
【００８４】
本明細書で使用される用語「症状」は、患者により観察される疾患または身体的障害の主観的または客観的なエビデンスを指す。たとえば、主観的なエビデンスは、通常患者自身の報告に基づき、限定するものではないが、疼痛、頭痛、視覚障害、吐き気および／または嘔吐を含んでもよい。あるいは、客観的なエビデンスは、通常、限定するものではないが、体温、全血球計算値、脂質パネル、甲状腺パネル、血圧、心拍数、心電図、組織イメージングスキャン、および／または身体のイメージングスキャンを含む医療試験の結果である。
【００８５】
本明細書で使用される用語「疾患」および／または「障害」は、生活機能の特性を妨害または修正する生存する動物または植物体、またはそれらの一部の正常な状態のいずれかの機能障害を指す。概して、兆候および症状を識別することにより顕在化され、通常、ｉ）環境的な要因（栄養不良、工業災害、もしくは気候として）、ｉｉ）特定の感染因子（虫、細菌、もしくはウイルスとして）；ｉｉｉ）生物の遺伝上の欠損（遺伝子の異常）、および／またはｉｖ）これらの要因の組み合わせに応答する。
【００８６】
処置した対象と比較して処置していない対象のいずれかの症状の発現に関して、用語「低減する」、「阻害する」、「少なくする」、「抑制する」、「減少する」、「予防する」、および「文法上の同義語（「少ない」、「小さい」などを含む）は、医学的な訓練を受けたいずれかの人物により臨床的に関連すると認識される任意の量の差だけ、処置した対象の症状の量および／または大きさが、処置していない対象よりも少ないことを意味する。一実施形態では、処置した対象の症状の量および／または大きさは処置していない対象の症状の量および／または大きさの少なくとも１０％未満、少なくとも２５％未満、少なくとも５０％未満、少なくとも７５％未満、および／または少なくとも９０％未満である。
【００８７】
処置した対象と比較して処置していない対象のいずれかの症状の発現に関して、用語「増加する」、「高める」、「上がる」、および文法上の同義語（「高い」、「大きい」などを含む）は、医学的な訓練を受けたいずれかの人物により臨床的に関連すると認識される任意の量の差だけ、処置した対象の症状の量および／または大きさが、処置していない対象よりも大きいことを意味する。一実施形態では、処置した対象の症状の量および／または大きさは、未処置の対象の症状の量および／または大きさの、少なくとも１０％超、少なくとも２５％超、少なくとも５０％超、少なくとも７５％超、および／または少なくとも９０％超である。
【００８８】
本明細書で使用される用語「付着した」は、媒体（またはキャリアー）および薬剤の間のいずれかの相互作用を指す。付着は、可逆的または不可逆的であってもよい。このような付着は、限定するものではないが、共有結合、イオン結合、ファンデルワールス力または摩擦などを含む。薬剤は、含侵、組み込み、コーティング、懸濁、乳化、溶解、混合した場合、媒体（またはキャリアー）に付着する。
【００８９】
本明細書で使用される用語「投与した」または「投与する」は、組成物が患者に意図する作用を有するように、患者に組成物を提供するいずれかの方法を指す。例示的な投与方法は、局所組織投与（たとえば血管外配置）、経口取り込み、経皮パッチ、局所、吸引、座薬などの直接的な機構によるものである。
【００９０】
本明細書で使用される用語「患者」または「対象」は、ヒトまたは動物であり、入院する必要はない。たとえば、外来患者、老人ホームにいる人物は「患者」である。患者は、任意の年齢のヒトまたはヒトではない動物を含んでもよく、したがって、成人および若年（すなわち子供）を含む。用語「患者」は、医療処置の必要性を包有することを意図するものではなく、したがって患者は、自発的または不随意に、臨床的または基本的な科学試験を支援する実験の一部であってもよい。
【００９１】
本明細書で使用される用語「親和性」は、複数の複合体を形成するよう会合し、この複合体で会合を維持するための２つ以上の分子の熱力学的傾向の測定を指す。たとえば、ＳＲＸ５５リガンドは、ＰＣＳＫ９に高親和性を有し、複合体を形成するために熱力学的に適している。条件の変化（たとえば、受容体の内部移行工程の間のｐＨ）、たとえば、ＬＤＬＲおよび２つの分子に対するＬＤＬ親和性が減少すると、互いに解離または分離してもよいことが理解されるものである。
【００９２】
本明細書で使用される用語「由来する」は、化合物またはアミノ酸配列の供給源を指す。１つの態様では、化合物またはアミノ酸配列は、生物または特定の種に由来してもよい。別の態様では、化合物またはアミノ酸配列は、より大きな複合体または配列に由来してもよい。別の態様では、化合物または配列は、自然に見出されるアミノ酸配列の一部または全ての化学的修飾物により由来してもよい。
【００９３】
本明細書で使用される用語「タンパク質」は、ペプチド結合により結合するアミノ酸残基からなり、元素の炭素、水素、窒素、酸素、通常硫黄を含む、天然に存在する非常に複合的な物質（酵素または抗体として）のいずれかを指す。一般的に、タンパク質は、数百の範囲内の大きさの桁を有するアミノ酸を含む。
【００９４】
本明細書で使用される用語「ペプチド」は、別のカルボキシル基と１つの酸であるアミノ酸を組み合わせることによる３つ以上のアミノ酸に由来し、通常部分的なタンパク質の加水分解により得られる多様なアミドのいずれかを指す。一般的に、ペプチドは、１０以下の範囲内の大きさの桁を有するアミノ酸を含む。
【００９５】
本明細書で使用される用語「薬学的」または「薬理学的に許容可能な」は、動物またはヒトに投与する際に、逆反応、アレルギー反応、または他の有害な反応を起こさない分子エンティティおよび組成物を指す。
【００９６】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容可能なキャリアー」は、限定するものではないが、水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、ならびにジメチルスルホキシド、植物油、コーティン剤、等張剤、および吸収遅延剤、リポソーム、商業的に入手可能なクレンザーなどを含む、いずれかの、すべての溶媒または分散媒体を含む。補助的な生理活性成分もまた、このようなキャリアーに組み込むことができる。
【００９７】
本明細書で使用される用語「精製した」、または「単離した」は、多様な他の成分を除去し、組成物が実質的に生物学的な活性を呈したままである処置（たとえば分画）を行ったペプチド組成物を指し得る。
【００９８】
用語「実質的に精製した」を使用する際、この記載は、タンパク質またはペプチドが、組成物の約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％以上（たとえば重量／重量および重量／体積）を構成するなどの組成物の大部分を形成する組成物を指す。用語「均一に精製した」は、１種類のタンパク質（たとえばＳＤＳ＝ＰＡＧＥまたはＨＰＬＣ解析に基づく）が存在するように、「明らかに均一である」ように精製した組成物を含むよう使用される。精製した組成物は、いくらかの微量不純物が残り得る意味を意図するものではない。
【００９９】
本明細書で使用されるように、用語「実質的に精製した」は、天然の環境から除去され、天然に会合する他の成分から、少なくとも６０％遊離し、好ましくは７５％遊離し、より好ましくは９０％遊離する、アミノ酸配列などの分子を指す。したがって、「単離ポリペプチド」は、実質的に精製したポリペプチドである。
【０１００】
本明細書で使用されるように、用語「生体適合性」は、宿主の実質的に有害な応答を誘発するものではないいずれかの物質を指す。外来の物質が生存する体内に導入される際、この物質が、宿主において陰性作用を有する炎症応答などの免疫応答を誘導することが常に考察される。本発明の文脈では、生体適合性は、たとえば、包帯が皮膚に生体適合性があると考察され、またインプラント型医療装置は、身体の内部組織に生体適合性があると考察されるといったように設計される適用にしたがって評価される。好ましくは、生体適合性物質は、限定するものではないが、生物分解性物質および生体安定性物質を含む。
【０１０１】
本明細書で使用される用語「アミノ酸配列」「および「ポリペプチド配列」は、互換可能であり、アミノ酸配列を指す。
【０１０２】
タンパク質の「変異体」は、ポリペプチド配列またはポリペプチド配列のいずれかのホモログ由来の１つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸を含む。変異体は、「保存」変化を有しても良く、ここで、置換されたアミノ酸はたとえば、イソロイシンとロイシンの置換といった、類似の構造上または化学的な特性を有する。まれに、変異体は、たとえば、トリプトファンとグリシンの置換といった「非保存」変化を有してもよい。類似の少数の変異はまた、アミノ酸の欠損または挿入（追加）、またはその両方を含んでもよい。
【０１０３】
「欠損」は、１つ以上のアミノ酸残基がそれぞれ存在しないアミノ酸配列における変化と定義される。
【０１０４】
「挿入」または「追加」は、１つ以上のアミノ酸残基が追加されたアミノ酸配列における変化である。
【０１０５】
本明細書で使用される用語「誘導体」は、アミノ酸のいずれかの化学的修飾物を指す。このような修飾物の例として、限定するものではないが、アルキル、アリール、ヒドロキシル、スルフヒドリル、スルホキシル、スルホニル、アシル、ホスホリル、アルコキシル、アミノまたはアミノ複素環基による水素との置換を含む。たとえば、チロシンは、フェニルアミンの４−ヒドロキシルアミノ酸の誘導体であり、ホスホセリンは、セリンのＯ―リン酸誘導体である。他の可能性のある化学的修飾物は、限定するものではないが、Ｃ−末端のアミド、およびアシルまたはスルホニルのＮ末端修飾物を含んでもよい。
【０１０６】
本明細書で使用される用語「結合する」は、永続的または一時的であり得る物理的付着または閉鎖会合のいずれかを含む。一般的に、水素結合、疎水力、ファンデルワールス力、共有結合およびイオン結合などの相互作用は、対象となる分子と、測定または影響する分析物／標的との間の物理的な付着を容易にする。「結合」相互作用は、結合が化学的反応を発生させる状況のように明らかであってもよい。結合成分が酵素である際に、分析物／標的が酵素の基質であることが一般的である。結合剤と、分析物／標的との間の接触からもたらされる反応はまた、本発明の目的のための結合の定義の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】ＨｕＨ７細胞においてＦＡＣにより測定したＷＴ  ＰＣＳＫ９阻害の例示的なデータを示す。ＨｕＨ７細胞は、存在なし（Ｃｎｔ）もしくは０．７５μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９−ＷＴタンパク質単独で存在（ＷＴ）する中で、１８時間インキュベートするか、または１００μＭの多様なＳＲＸペプチドと混合した。細胞表面のＬＤＬＲのレベルを、抗ヒトＬＤＬＲ  ＡｂおよびＡｌｅｘａ  ６４７で標識した適切な二次抗体を使用して、ＦＡＣＳにより測定した。細胞表面のＬＤＬＲをＣｎｔと比較して記録した。活性の％阻害を［ＳＲＸ−ＷＴ］／［Ｃｎｔ−ＷＴ］×１００として計算した。
【図２】多くのＰＣＳＫ９アロステリック調節ペプチドによるＷＴ  ＰＣＳＫ９活性の例示的なデータを示す。ＨｕＨ７細胞を、存在なし（Ｃｎｔ）もしくは０．７５μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９−ＷＴタンパク質単独で存在（ＷＴ）する中で、合計２０時間９６ウェルプレートでインキュベートするか、１００μＭの多様なＳＲＸペプチドと混合した。１６時間後、ｄｉｌ−ＬＤＬ（５μｇ／ｍｌ）をインキュベーション混合物に添加した。４時間後、蛍光を測定した（Ｅｘ：５２０ｎｍ／Ｅｍ：５７５ｎｍ；カットオフ：５５０ｎｍ）。Ｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みを、細胞の数に関して補正したＲＦＵとして計算した。
【図３】多くのＰＣＳＫ９アロステリック調節ペプチドによる変異型ＰＣＳＫ９タンパク質（「機能獲得型」（ＧＯＦ）−Ｄ３７４Ｙ）調節の例示的なデータを示す。ＨｕＨ７細胞を、存在なし（Ｃｎｔ）もしくは０．５μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９−Ｄ３７４  Ｙタンパク質単独で存在（ＤＹ）する中で、合計２０時間９６ウェルプレートでインキュベートするか、または１００μＭの多様なＳＲＸペプチドと混合した。１６時間後、ｄｉｌ−ＬＤＬ（５μｇ／ｍｌ）をインキュベーション混合物に添加した。４時間後、蛍光を測定した（Ｅｘ：５２０ｎｍ／Ｅｍ：５７５ｎｍ；カットオフ：５５０ｎｍ）。Ｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みを、細胞の数に関して補正したＲＦＵとして計算した。
【図４】ＨｕＨ７細胞におけるｄｉｌ−ＬＤＬ取り込みにより測定される、ＳＲＸ５５による用量依存性阻害を示す変異型ＰＣＳＫ９タンパク質（「機能獲得型」ＧＯＦ−Ｄ３７４Ｙ）調節の例示的なデータを示す。ＨｕＨ７細胞を、存在なし（Ｃｎｔ）もしくは０．５μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９  ＧＯＦ−Ｄ３７４Ｙタンパク質単独の存在（ＤＹ）する中で、合計２０時間９６ウェルプレートでインキュベートするか、または増大した濃度の多様なＳＲＸペプチドと混合した。１６時間後、ｄｉｌ−ＬＤＬ（５μｇ／ｍｌ）をインキュベーション混合物に添加した。４時間後、蛍光を測定した（Ｅｘ：５２０ｎｍ／Ｅｍ：５７５ｎｍ；カットオフ：５５０ｎｍ）。Ｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みを、細胞の数に関して補正したＲＦＵとして計算した。
【図５】ＨｅｐＧ２細胞におけるｄｉｌ−ＬＤＬ取り込みにより測定される、ＳＲＸ５５による用量依存性阻害を示す変異型ＰＣＳＫ９タンパク質（「機能獲得型」ＧＯＦ−Ｄ３７４Ｙ）調節の例示的データを示す。ＨｅｐＧ２細胞を、存在なし（Ｃｎｔ）もしくは２μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９  ＧＯＦ−Ｄ３７４Ｙタンパク質単独（ＤＹ）で存在する中で、合計２０時間９６ウェルプレートでインキュベートするか、または増大する濃度のＳＲＸ５５ペプチドと混合した。１６時間後、ｄｉｌ−ＬＤＬ（５μｇ／ｍｌ）をインキュベーション混合物に添加した。４時間後、蛍光を測定した（Ｅｘ：５２０ｎｍ／Ｅｍ：５７５ｎｍ；カットオフ：５５０ｎｍ）。Ｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みを、細胞の数に関して補正したＲＦＵとして計算した。
【図６】存在なし（Ｃｎｔ）もしくはＰＣＳＫ９タンパク質単独（Ｄ３７４Ｙ：０．６μｇ／ｍｌ；ＷＴ：１．２μｇ／ｍｌ）で存在する中で、合計２０時間９６ウェルプレートでインキュベートするか、または増大する濃度のＳＲＸ５５ペプチドと混合した。１６時間後、ｄｉｌ−ＬＤＬ（５μｇ／ｍｌ）をインキュベーション混合物に添加したＨｅｐＧ２細胞の例示的なデータを示す。４時間後蛍光を測定した（Ｅｘ：５２０ｎｍ／Ｅｍ：５７５ｎｍ；カットオフ：５５０ｎｍ）。Ｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みを、細胞の数に関して補正したＲＦＵとして計算した。ＰＣＳＫ９および−／＋ＳＲＸ５５混合物を、細胞に添加する前に３時間にわたり３７℃で予めインキュベートした。
【図７】存在なし（Ｃｎｔ）もしくはＰＣＳＫ９タンパク質単独（Ｄ３７４Ｙ：０．６μｇ／ｍｌ；ＷＴ：１．２μｇ／ｍｌ）で存在する中で、合計２０時間９６ウェルプレートでインキュベートするか、または増大する濃度のＳＲＸ５５ペプチドと混合したＦＬ−８３Ｂ細胞の例示的なデータを示す。１６時間後、ｄｉｌ−ＬＤＬ（５μｇ／ｍｌ）をインキュベーション混合物に添加した。４時間後、蛍光を測定した（Ｅｘ：５２０ｎｍ／Ｅｍ：５７５ｎｍ；カットオフ：５５０ｎｍ）。Ｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みを、細胞の数に関して補正したＲＦＵとして計算した。ＰＣＳＫ９および−／＋ＳＲＸ５５混合物を、細胞に添加する前に、３時間にわたり３７℃でインキュベートした。
【図８】アロステリック調整合成ペプチド（たとえばＳＲＸ５５）のＰＣＳＫ９タンパク質に対する結合を示す例示的な実施形態を提示する。プロドメインは、水色で示される。ＰＣＳＫ９「触媒」ドメインの２つの両半分は、黄色および暗青色でそれぞれ示される。ＥＧＦ−Ａ結合部位は、青色および黄色の空白埋めで示される。ＳＲＸ５５（緑）は、アロステリックリガンド結合部位への結合を示す。Ｎ末端へリックスは白色で示される。
【発明を実施するための形態】
【０１０８】
本発明は、高コレステロール血症の分野に関する。特に、本発明は、３５０〜２，０００Ｄａの範囲の３〜８アミノ酸の合成ペプチドおよび／または合成ペプチド誘導体を使用して、タンパク質ＰＣＳＫ９の立体構造を変化させることにより、低密度リポタンパク質の循環レベルを調節する組成物ならびに方法を提供する。ＰＣＳＫ９の立体構造を変化させることにより、ＰＣＳＫ９と内在性低密度リポタンパク質受容体との間の相互作用に影響を与え、循環するＬＤＬコレステロールのレベルの低下または増加を引き起こす可能性がある。高いＬＤＬコレステロールレベルは心疾患のリスクの増加に関連する。低いＬＤＬ−コレステロールレベルは、肝機能不全などの他の病態で問題となる場合があり、したがって、ＬＤＬレベルを上げることのできるリガンドも有用である。
【０１０９】
Ｉ．天然のＰＣＳＫ９の生理的役割
プロタンパク質変換酵素スブチリシン／カチン９型はＰＣＳＫ９としても知られており、ヒトではＰＣＳＫ９遺伝子によりコードされる酵素である（Ｓｅｉｄａｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｎｅｕｒａｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  １  （ＮＡＲＣ−１）：ｌｉｖｅｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００  （３）：９２８−９３３  （２００３））。同様の遺伝子（オルソログ）は、多くの種で見出される。ＰＳＣＫ９を含む多くの酵素は、活性を阻止するペプチド鎖部を有しているため、最初に合成される際には不活性であり、プロタンパク質変換酵素がこの部分を除去して酵素を活性化させる。
【０１１０】
例示的な実施形態は、アロステリック調節合成ペプチド（たとえばＳＲＸ５５）のＰＣＳＫ９タンパク質に対する結合を示す。図８を参照されたい。プロドメインは水色で示される。ＰＣＳＫ９「触媒」ドメインの両半分は黄色および暗青色でそれぞれ示される。ＥＧＦ−Ａ結合部位は、青色および黄色の空白埋めで示される。ＳＲＸ５５（緑）は、アロステリックリガンド結合部位に対する結合を示す。Ｎ末端へリックスは白色で示される。
【０１１１】
ＰＳＣＫ９遺伝子は、分泌性のスブチラーゼファミリーのプロテイナーゼＫサブファミリーに属するプロタンパク質変換酵素をコードする。コードされるタンパク質は、小胞体内での自己触媒分子内処理を経る可溶性の酵素前駆体として合成される。タンパク質は、プロタンパク質変換酵素として機能してもよい。たとえば、ヒトＰＣＳＫ９のアミノ酸配列は、
【化５】
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である。
【０１１２】
ＰＳＣＫ９は、コレステロールのホメオスタシスを制御する役割を果たすと考えられている。たとえば、ＰＳＣＫ９は、ＬＤＬ−Ｒの内部移行および分解をもたらす低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬ−Ｒ）の上皮増殖因子様反復Ａ（ＥＧＦ−Ａ）ドメインに結合できる。明らかに、ＬＤＬ−Ｒレベルの低下はＬＤＬ−Ｃの代謝を減少させ、抗コレステロール血症をもたらす場合があることが予測される。
【０１１３】
約９００万人のアメリカ人が、ＰＣＳＫ９阻害剤が（特にスタチンとの併用の際に）有益である可能性のある心臓に関連する問題の高いまたは非常に高いリスクを有している。ＰＣＳＫ阻害剤は特定の病態でスタチンを置換する可能性を有するように広範な用途をもたらす可能性がある。ＰＣＳＫ９は、コレステロールのホメオスタシスに作用するため医学的に重要である。ＰＣＳＫ９の生物学的作用を阻害する薬剤は、（ＬＤＬ‐Ｒの利用能、および結果的にＬＤＬ−Ｃクリアランスを増大させることにより）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルの循環を少なくすると考えられている。このような薬剤は、ヒトにおいて安全性および有効性を評価し、心疾患の予後を改善できるかどうかを決定するために第ＩＩＩ相臨床試験を開始している。
【０１１４】
ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ９複合体の形成を阻害する薬剤は、商業的に入手可能なコレステロール降下剤（たとえばスタチン）よりもコレステロールを非常に少なくすることが示唆されている。またこのことは、コレステロールの上昇により引き起こされる心臓発作および他の疾患を少なくすることが生物学的にも妥当である。現在進行中の第ＩＩＩ相臨床試験を含むヒトでの試験は、ＰＣＳＫ９阻害が実際に、許容可能な副作用を伴いながら心血管疾患を低減するかどうかに焦点が当てられている（Ｌｏｐｅｚ  Ｄ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ”  Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．２１（６）：３２３−ｅ３０  （２００８）；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９：ａ  ｐｏｗｅｒｆｕｌ  ｗｅａｐｏｎ  ｆｏｒ  ａｃｈｉｅｖｉｎｇ  ｉｄｅａｌ  ＬＤＬ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（２４）：９５４６−９５４７  （２００９）；Ｍａｙｅｒ，“Ａｎｎｅｘｉｎ  Ａ２  ｉｓ  ａ  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ＰＣＳＫ９−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｅｖｅｌｓ”  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３（４６）：３１７９１−３１８０１  （（２００８）；およびＡｎｏｎｏｍｙｏｕｓ，“Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ｓｅｌｅｃｔｓ  Ｉｓｉｓ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＰＣＳＫ９  ａｓ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ”  Ｐｒｅｓｓ  Ｒｅｌｅａｓｅ．ＦｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈ．２００８−０４−０８）。
【０１１５】
現在、ＰＣＳＫ９抗体薬剤は臨床試験の段階にあることが報告されている（たとえばＳａｎｏｆｉ／Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ，Ａｍｇｅｎ，Ｐｆｉｚｅｒ，Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｒｏｃｈｅ）。しかしながら、抗体療法の欠点の１つは、投与が皮下注射または静脈内注射により実施される点である。ＬＲＬ−Ｒと相互作用し、したがって、ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ９複合体の形成を阻害する触媒ドメインの近くのＰＣＳＫ９に結合する多くのモノクローナル抗体は、現在臨床試験の段階にある。これらの抗体として、ＡＭＧ１４５（Ａｍｇｅｎ）、１Ｄ０５−ＩｇＧ２（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．）およびＳＡＲ２３６５５３／ＲＥＧＮ７２７（Ａｖｅｎｔｉｓ／Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）が挙げられる（Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ，“Ｔｈｅ  ＰＣＳ  ９  ｄｅｃａｄｅ”  Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．５３（１２）：２５１５−２５２４  （２０１２））。
【０１１６】
ＬＤＬ−ＲのＥＧＦ−Ａドメインを模倣するペプチドは、ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ９複合体の形成を阻害するために開発されてきた（Ｓｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“ＰＣＳ  ９  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｃａｎ  ｂｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ａｎ  ＥＧＦ−Ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ”．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３７５（１）：６９−７３  （２００８））。ＥＧＦ−Ａ結合部位のペプチドＰＣＳＫ９阻害剤は、リニアおよびジスルフィドー条件付き段階−表示ペプチドライブラリーの両方をスクリーニングすることにより同定した。この手法は、ＬＤＬ受容体の天然の結合ドメインの構造上の模倣物を含む１３のアミノ酸ペプチド（Ｐｅｐ２−８）を同定した。ペプチド阻害剤結合部位は、ＥＧＦ（Ａ）ドメインの結合部位と大きく重なるように決定され、したがって、Ｐｅｐ２−８は、ＬＤＬ受容体結合の競合阻害剤として作用する。これは、抗‐ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体の阻害機構と類似し、また、ＰＣＳＫ９とＬＤＬ受容体−ＥＧＦ（Ａ）の相互作用を妨害する（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｍａｌｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＰＣＳＫ９  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｌｏｗ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ’  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８９：９４２−９５５  （２０１４））。
【０１１７】
ＰＣＳＫ９アンチセンスオリゴヌクレオチド（Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、マウスにおいてＬＤＬ−Ｒの発現を増大し、循環する総コレステロールレベルを減少することが示されている（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／Ｋｅｘｉｎ  Ｔｙｐｅ  ９  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｓｅｒｕｍ  ＬＤＬ  ｉｎ  ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ｍｉｃｅ”  Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．４８（４）：７６３−７６７  （２００７））。ロックド核酸（Ｓａｎｔａｒｉｓ  Ｐｈａｒｍａ）が、マウスのＰＣＳＫ９ｍＲＮＡレベルを低減したことも報告されている（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  ｌｏｃｋｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  （ＬＮＡ）  ｓｉｌｅｎｃｅｓ  ＰＣＳＫ９  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ＬＤＬＲ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ”  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（５）：ｅ１０６８２  （２０１０）；およびＬｉｎｄｈｏｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，“ＰＣＳＫ９  ＬＮＡ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＬＤＬ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ”．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０（２）：３７６−３８１  （２０１２）。ＲＮＡｉ（ＡＬＮ−ＰＣＳ，Ａｌｎｙｌａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）の初期の臨床試験は、ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ９複合体の形成を阻害する有効な手段として肯定的な結果を示した（Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＮＡｉ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＰＣＳＫ９  ａｃｕｔｅｌｙ  ｌｏｗｅｒｓ  ｐｌａｓｍａ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔｓ  ａｎｄ  ＬＤＬ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０５（３３）：１１９１５−１１９２０  （２００８））。
【０１１８】
ＩＩ．ＰＣＳＫ９アロステリック部位調節ペプチド
ＰＣＳＫ９の変異体は、循環コレステロールを減少または増加させることができる（Ａｂｉｆａｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ＰＣＳＫ９  ｃａｕｓｅ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ”  Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３４  （２）：１５４−１５６（２００３））。ＬＤＬ−Ｃは、通常、肝細胞の表面でＬＤＬ−Ｒに結合する際に、血液から除去され、受容体リガンド複合体として肝細胞の中で内部移行する。しかしながら、ＰＣＳＫ９がＬＤＬ−Ｒに結合する際、ＬＤＬ−Ｒは、複合ＬＤＬ粒子と共に同時に分解される。しかしながら、ＰＣＳＫ９がＬＤＬ−Ｒに結合しない場合、ＬＤＬ−Ｒは、内部移行の後に再利用され、これにより、さらにコレステロールを除去するため細胞の表面に戻される。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、３〜８つの長さのアミノ酸であり、約１，３００Ｄａ未満であり、ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ複合体を形成するＰＣＳＫ９の特質に関する調節作用を有する、合成ペプチド配列に関する。いくつかの実施形態では、合成ペプチドは、脂溶性Ｎ末端アミノ酸（たとえばフェニルアラニン）を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＣＳＫ９アロステリック部位に結合するペプチドの用途を考察する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ９複合体形成を減少させ、それにより脂質調節不全を含む様々な疾患を処置することに有益となる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ＬＤＬ−Ｒ／ＰＣＳＫ９複合体形成を増加させ、それにより、ＬＤＬ調節不全に関連する治療の探索および開発に有益である。
【０１２０】
本発明の機構を理解する必要はないが、「機能獲得型」（ＧＯＦ）ＰＣＳＫ９の変異が、限定するものではないが、高コレステロール血症を含む病態をもたらし得ると考えられている。たとえば、ＰＣＳＫ９アロステリック部位に結合し、細胞（たとえば肝細胞）の表面の低密度リポタンパク質受容体に対するＰＣＳＫ９の低密度リポタンパク質受容体の親和性を増大させるペプチド（たとえば合成ペプチドおよび／または合成ペプチド誘導体）は、低密度リポタンパク質受容体の内部移行および分解を増大させることにより、高コレステロール血症の症状を増大させることが予測される。
【０１２１】
本発明の機構を理解する必要はないが、「機能喪失型」（ＬＯＦ）ＰＣＳＫ９の変異が、低密度リポタンパク質の減少を含む状態をもたらす場合があり、低コレステロール血症をもたらすことが予測され、これにより、限定するものではないが、冠動脈心疾患を含む心血管疾患のリスクを低減すると考えられている。たとえば、細胞（たとえば肝細胞）の表面の低密度リポタンパク質受容体に対するＰＣＳＫ９の低密度リポタンパク質受容体結合部位の親和性を減少するＰＣＳＫ９アロステリック部位に結合するペプチドは、同時に起こる低密度リポタンパク質受容体の再利用により低密度リポタンパク質の内部移行およびクリアランスを促進することにより、高コレステロール血症の症状を低減すると予想される。
【０１２２】
ＰＣＳＫ９アロステリックペプチドの本開示の実施形態は、上述したＬＤＬを制御する現在の治療上の戦略を上回るいくつかの利点を有する。たとえば、本明細書で考察される低分子ＰＣＳＫ９アロステリックペプチドは、これらのペプチドが、抗体投与に見られる免疫応答、または核酸投与（すなわちアンチセンスまたはロックド核酸）で見られる全身性の分解が行われることなく経口投与できる。にもかかわらず、これらの低分子ペプチドは半減期が長いため、リポソームまたは他の生分解性保護組成物などの封入剤送達システムは、抗体または核酸のいずれかよりも半減期が長くなる。
【０１２３】
本明細書で提示されたデータは、ＰＣＳＫ９アロステリック部位に結合することにより媒介されるＬＤＬ−Ｒに結合するＰＣＳＫ９の特質に関して様々な作用を有する１６の合成ペプチドを例示する。たとえば、これらの合成ペプチドは、ＨｕＨ７細胞におけるＦＡＣＳにより測定するように、ＷＴ  ＰＣＳＫ９／ＬＤＬ−Ｒ複合体の形成を予防することにより、ＬＤＬ−Ｒの細胞表面の発現を、６０〜９５％増大させることができた。特に、１つの合成ペプチド（ＳＲＸ５５）は、ＷＴ  ＰＣＳＫ９／ＬＤＬ−Ｒ複合体の親和性を変えることにより、ＬＤＬの細胞表面の発現を１００％増大させることができた。図１を参照されたい。これらの同一の３つの合成ペプチドは、ＨｕＨ７細胞におけるｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みにより測定されるように、ＬＤＬ内部移行を３０〜５０％増大させると判定された。別の試験では、１つのペプチドは、ＨｅｐＧ２細胞におけるｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みにより測定されるように、ＧＯＦ  ＰＣＳＫ９−Ｄ３７４Ｙの活性を１００％、ＨｕＨ７細胞におけるｄｉｌ−ＬＤＬの取り込みにより測定されるように、示される４つのペプチドの活性を２０〜３０％阻害できた。
【０１２４】
特に、本データは、ＰＣＳＫ９にペプチドを結合することにより、ＬＤＬＲの細胞表面レベルを調節するＰＣＳＫ９アロステリック合成ペプチドの特質を示す。図１を参照されたい。この実験では、肝細胞培養モデル（ＨｕＨ７細胞）のＬＤＬＲレベルを、実施例ＩＩＩにしたがってＦＡＣＳ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｏｒｔｉｎｇ）により測定した。細胞表面のＬＤＬＲは、ＬＤＬＲの基礎レベルのパーセンテージとして記録されており、上部のグラフのＣｎｔ＿Ａｍｍ．Ｂｉｃ、Ｃｎｔ＿Ａｃ．Ａｃｉｄ、およびＣｎｔのバーにより示される。図１（上部パネル）を参照されたい。外因性ＰＣＳＫ９の存在下でのＬＤＬＲレベルは、ＷＴ＿Ａｍｍ．Ｂｉｃ、ＷＴ−Ａｃ．Ａｃｉｄ、およびＷＴとして示され、試験ペプチドと併用した外因性ＰＣＳＫ９は、ＳＲＸ＃＃として示される。測定したＬＤＬＲレベルは、それぞれのグループの％対基礎対照（Ｃｎｔ）として記録される。ＬＤＬＲ細胞表面を陽性的に調節する（増加する）ペプチド（たとえばアロステリック合成阻害剤ペプチド）の例として、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、およびＳＲＸ６２が挙げられ、ＬＤＬＲ細胞表面レベルを陰性的に調節する（減少する）例示的なペプチド（たとえばアロステリック合成エンハーサーペプチド）として、ＳＲＸ６９、ＳＲＸ７２、およびＳＲＸ７３が挙げられる。これを、パーセント阻害としてさらに示し（％阻害は、［ＳＲＸ−ＷＴ］／［Ｃｎｔ−ＷＴ］×１００％で計算した）、ＬＤＬＲレベルの陽性調節（増加）は、陽性％阻害として記録し、ＬＤＬＲレベルの陰性調節（減少）は、陰性％阻害として記録する。図１（下部パネル）を参照されたい。
【０１２５】
ＰＣＳＫ９：ＬＤＬＲ複合体へのリガンドの結合による肝細胞のＬＤＬ内部移行を調節する特質は、図２〜７に例示される。ＬＤＬの内部移行を、外因性ＰＣＳＫ９存在なし（Ｃｎｔ）、外因性ＰＣＳＫ９（正常なＰＣＳＫ９＝ＷＴ、Ｄ３７４Ｙ変異体ＰＣＳＫ９＝ＤＹ）の存在する中、またはＰＣＳＫ９および試験ペプチドの存在する中（単一ペプチドの結果がグラフに示される場合、ＳＲＸ＃＃またはＳＲＸと表される）での蛍光的にタグ付したＬＤＬ分子（ｄｉｌ−ＬＤＬ）の取り込みにより測定した。
【０１２６】
ｄｉｌ−ＬＤＬ％取り込み対Ｃｎｔにより記録されるように、ＬＤＬ内部移行は、試験ＳＲＸペプチドの存在する中、モデルとなる肝細胞株（ＨｕＨ７）で調節できる。図２（上部パネル）を参照されたい。ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、およびＳＲＸ６７などのアロステリック合成阻害剤ペプチドにより陽性的に調節（増大）されることが示された。ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ３６、ＳＲＸ６１、ＳＲＸ６４、ＳＲＸ６５、ＳＲＸ６６、およびＳＲＸ７３などのアロステリック合成エンハーサーペプチドにより陰性的に調節（減少）できる。パーセント阻害は、ＬＤＬの内部移行における陽性調節（増加）が、＞０％阻害と記録され、ＬＤＬの内部移行における陰性調節（減少）が、＜０％阻害と記録されることを示す。図２（下部パネル）を参照されたい。
【０１２７】
ｄｉｌ−ＬＤＬ％取り込み対Ｃｎｔにより記録されるように、ＬＤＬの内部移行は、臨床的に関連する病理学的な機能獲得型Ｄ３７４Ｙ外因性ＰＣＳＫ９（ＤＹ）と組み合わせた試験ＳＲＸペプチドの存在により、モデルとなる肝細胞株（ＨｕＨ７）で調節できる。図３（上部パネル）を参照されたい。ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ５５、ＳＲＸ５６、ＳＲＸ６０、ＳＲＸ６３、ＳＲＸ６４、およびＳＲＸ６６などのアロステリック合成阻害剤ペプチドにより陽性的に調節（増大）することが示された。ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ３６、ＳＲＸ７１、ＳＲＸ７２、およびＳＲＸ７３などのアロステリック合成エンハーサーペプチドにより陰性的に調節（減少）できる。パーセント阻害は、ＬＤＬの内部移行における陽性調節（増大）が、＞０％阻害と記録され、ＬＤＬの内部移行における陰性調節（減少）が、＜０％阻害と記録されることを示す。図３（下部パネル）を参照されたい。
【０１２８】
ｄｉｌ−ＬＤＬ％取り込み対Ｃｎｔにより記録されるように、ＬＤＬの内部移行は、臨床的に関連する病理的機能獲得型Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９（ＤＹ）と組み合わせたアロステリック合成阻害剤ペプチド（ＳＲＸ５５、ＳＲＸ６０、ＳＲＸ６６およびＳＲＸ５６）の存在により陽性的に調節（増大）できる。ＳＲＸ５５は、用量依存性の方法で陽性的な調節を伴うことを示した。図４（上部パネル）を参照されたい。パーセント阻害は、ＬＤＬの内部移行における陽性調節（増大）が、＞０％阻害と記録され、ただし１１．１μＭのＳＲＸ５５は、０％のサンプリングノイズの範囲内にあることを示す。図４（下部パネル）を参照されたい。
【０１２９】
ｄｉｌ−ＬＤＬ％取り込み対Ｃｎｔにより記録されるように、ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ５５を用いる用量依存性の方法での、臨床的に関連する病理的機能獲得型Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９（ＤＹ）と組み合わせた第２のモデルとなる肝細胞株（ＨｅｐＧ２）で陽性的に調節（増大）できる。図５（上部パネル）を参照されたい。この陽性的な調節は、さらにパーセント阻害として示され、ここでＬＤＬの内部移行における陽性調節（増大）が、＞０％阻害と記録される。図５（下部パネル）を参照されたい。
【０１３０】
ｄｉｌ−ＬＤＬ％取り込み対Ｃｎｔにより記録されるように、ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ５５を用いる用量依存性の方法で臨床的に関連する病理的機能獲得型Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９（ＤＹ）または正常なＰＣＳＫ９（ＷＴ）と組み合わせて予めインキュベーションする際に第２の肝細胞株（ＨｅｐＧ２）で陽性的に調節できる。図６（上部パネル）を参照されたい。この陽性調節は、さらにパーセント阻害として示され、ここでＬＤＬの内部移行における陽性調節（増大）が、＞０％阻害と記録される。図６（下部パネル）を参照されたい。
【０１３１】
ｄｉｌ−ＬＤＬ％取り込みｖｓＣｎｔにより記録されるように、ＬＤＬの内部移行は、ＳＲＸ５５を用いる用量依存性の方法で、臨床的に関連する病理的機能獲得型Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９（ＤＹ）または正常なＰＣＳＫ９（ＷＴ）と組み合わせて予めインキュベートする際に第３の肝細胞株（ＦＬ８３Ｂ）で陽性的に調節（増大）できる。図７（上部パネル）を参照されたい。この陽性調節は、さらにパーセント阻害として示され、ここでＬＤＬの内部移行における陽性調節（増大）が、＞０％阻害と記録される。図７（上部パネル）を参照されたい。
【０１３２】
最実も有効なペプチド（たとえばＳＲＸ５５：化合物１）は、全てのアッセイおよびＰＣＳＫ９表現型を通して一貫した桁で施した。次いで、改善型ペプチドを、予備的な解析結果に応じて設計される際に良好な薬剤様の特性を有すると予測されるよう設計した。概して、これらの改善型ペプチドの設計は、リン酸塩、硫酸塩、テトラゾール、またはカルボン酸などの負電荷極性基と共に組み込まれたＣ末端由来の第１の３つのアミノ酸のうちの少なくとも１つを有する。たとえば、化合物３では、極性基は、リン酸基：
【化６】
2016508722.tif 000008
化合物３：Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ）
を含む。
【０１３３】
あるいは、化合物１４では、Ｃ末端のグリシンは、極性基：
【化７】
2016508722.tif 000009
を含む。
【０１３４】
構成アミノ酸は、通常、天然の「Ｌ」エナンチオマーと立体化学的に定義されてもよく、天然に存在する側鎖または合成側鎖を有してもよい。ペプチドの「Ｎ」末端は、自由にアルキル化、スルホン化、またはアシル化してもよい。「Ｃ」末端は、カルボン酸またはアミドとしてもよい。
【０１３５】
多様な天然のアミノ酸および天然ではないアミノ酸も考察されてもよい。トリプトファンのインドール側鎖は、アルキル、アルコキシ、ハロ、カルボキシなどと置換して、他の類似体を形成してもよい。フェニルアラニン（ｐｈｅｎｙａｌａｎｉｎｅ）、チロシン、およびホモフェニルアラニンのフェニル部位は、アルキル、アルコキシ、ハロ、カルボキシなどのさらなるフェニル置換を有してもよい。セリンは、いくつかの例ではアラニンにより置換されてもよい。スレオニンは、セリンまたはアラニンにより置換されてもよい。バリン、ロイシン、およびイソロイシンは、一部の類似体と交換されてもよい。アスパラギン酸などのカルボン酸側鎖を有するアミノ酸は、アミドとして誘導体化される側鎖を有しても良い。
【０１３６】
ＩＩＩ．臨床療法
いくつかの実施形態では、本発明は、心血管疾患の症状を有する対象へのＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの投与を考察する。一実施形態では、心血管疾患は高コレステロール血症を含む。一実施形態では、心血管疾患は高血圧を含む。一実施形態では、高コレステロール血症は、低密度リポタンパク質レベルの上昇を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本発明は、代謝性疾患の症状を有する対象へのＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの投与を考察する。一実施形態では、代謝性疾患は糖尿病を含む。
【０１３８】
本発明の機構を理解する必要はないが、ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤合成ペプチド（たとえばＳＲＸ５５）の投与が、ＰＣＳＫ９タンパク質の立体構造の変化を誘導し、それにより、低密度リポタンパク質受容体に対する低密度リポタンパク質結合部位の親和性が減少し、ＰＣＳＫ９／ＬＤＬ−Ｒ複合体の形成が減少すると考えられる。ＰＣＳＫ９／ＬＤＬ−Ｒ複合体の形成の減少は、循環ＬＤＬへの結合に関するＬＤＬ−Ｒ受容体の生物学的利用率の増加をもたらし、これによりＬＤＬ−ＲによるＬＤＬの内部移行およびクリアランスを増大させる。さらに、ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドが、肝細胞のＬＤＬ‐Ｒの生物学的利用率の増加をもたらすと考えられる。
【０１３９】
Ａ．高コレステロール血症
高コレステロール血症（Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａまたはｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ）は、血液中に高いレベルのコレステロールが存在することである。これは「高脂血症」（血液中での高いレベルの脂質）および「高リポタンパク質血症」（血液中での高いレベルのリポタンパク質）の形態である（Ｄｕｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｐ“Ｄｙｓｌｉｐｉｄａｅｍｉａ”Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  ３６２（９３８５）：７１７−７３１）。高コレステロール血症は、概して、環境上の要因および遺伝的な要因の組み合わせによるものである。環境上の要因は、肥満および食事の選択を含む。遺伝的な要因は、通常、複数の遺伝子の相加的な作用によるものであり、場合によっては、家族性高コレステロール血症の事例などの単一の遺伝的欠損によるものであってもよい。存在する多くの二次的な原因は、２型真性糖尿病、アルコール、単クローングロブリン血症、透析、ネフローゼ症候群、閉塞性黄疸、甲状腺機能低下症、クッシング症候群、神経性食欲不振症、薬物（チアジド系利尿薬、シクロスポリン、グルココルチコイド、β遮断薬、レチノイン酸）を含む（Ｂｈａｔｎａｇａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）“Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”ＢＭＪ  ３３７：ａ９９３）。遺伝的な異常は、家族性高コレステロール血症などの高コレステロール血症が全ての原因であり、ＰＣＳＫ９遺伝子またはＬＤＬ受容体遺伝子の常染色体優性  ＡＰＯＢ遺伝子、常染色体劣性  ＬＤＬＲＡＰ１遺伝子、常染色体優性家族性高コレステロール血症（ＨＣＨＯＬＡ３）変異体において、１つ以上の遺伝的変異が存在する（“Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ”  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｈｏｍｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，ｇｈｒ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ＝ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ）。高コレステロール血症の原因となる単一の変異が存在しない場合でさえ、遺伝的な素因は、ほとんど体を動かさないライフスタイル、肥満、またはアテローム生成食と併用して主要な役割を果たす（Ｃｉｔｋｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）“Ｐｏｌｙｇｅｎｉｃ  Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ”．ｅＭｅｄｉｃｉｎｅ  Ｍｅｄｓｃａｐｅ，ｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．ｍｅｄｓｃａｐｅ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅ／１２１４２４−ｏｖｅｒｖｉｅｗ）。
【０１４０】
コレステロールはステロールであり、これは全ての動物が膜を構築するために利用される３つに分類される主要な脂質のうちの１つであり、したがって、すべての動物細胞により産生される。植物細胞はコレステロールを産生しない。また、ステロイドホルモン、胆汁酸、およびビタミンＤの前駆体でもある。コレステロールは水に不溶であるため、タンパク質粒子（リポタンパク質）内の血液血漿に輸送される。リポタンパク質は、密度：非常に低い密度のリポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間型密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）により分類される（Ｂｉｇｇｅｒｓｔａｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）．“Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｓ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｏｆ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｌｉｐｉｄｓ”  Ａｄｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｄｕｃ  ２８（１−４）：１０５−６）。すべてのリポタンパク質はコレステロールを輸送するが、ＨＤＬ以外の高いレベルのリポタンパク質（非ＨＤＬコレステロールと呼ばれる）、特にＬＤＬコレステロールは、アテローム性動脈硬化症および冠動脈疾患のリスクの増加に関連する（Ｃａｒｍｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）“Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  ”  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０９（２３  Ｓｕｐｐｌ  １）：ＩＩＩ２−７）。対照的に、高いレベルのＨＤＬコレステロールは保護的である（Ｋｏｎｔｕｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  “Ａｎｔｉａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ  ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ  ＨＤＬ−  ｇｕａｒｄｉａｎ  ａｎｇｅｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｗａｌｌ？”  Ｎａｔ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ  ３（３）：１４４−  １５３）。血液中での高いレベルの非ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬは、食事、肥満、遺伝（ｉｎｈｅｒｉｔｅｄまたはｇｅｎｅｔｉｃ）疾患（家族性高コレステロール血症のＬＤＬ受容体変異など）の結果であってもよく、または糖尿病および甲状腺機能不全などの他の疾患の存在であってもよい。総コレステロールは、血液中のすべての脂肪量である。これらの脂肪は脂質と呼ばれる。総コレステロールを作製する異なる種類の脂質が存在する。２つの最も重要な種類は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）‐「悪玉」コレステロール、および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）‐「善玉」コレステロールである。コレステロール、特に「悪玉」コレステロール（ＬＤＬ）が高いと、動脈を妨害する場合がある。これは、心臓への血液の流れを低減し得る。高コレステロールは、心疾患、脳卒中、または心臓発作をもたらす場合がある。コレステロールは、デシリットル当たりのミリグラム（ｍｇ／ｄＬ）で測定される。心疾患または糖尿病などの病態では、ＬＤＬコレステロールは、１００ｍｇ／ｄＬ未満のままとすべきである。心疾患のリスクがある場合、ＬＤＬコレステロールは、１３０ｍｇ／ｄＬ未満であるべきである。一般的に、ＬＤＬコレステロールは、１６０〜１９０ｍｇ／ｄＬ未満である。あるいは、ＨＤＬ「善玉」コレステロールは高くあるべきである。たとえば、ＨＤＬレベルは、４０ｍｇ／ｄＬ超であるべきであり、ＨＤＬレベルは、女性では５０ｍｇ／ｄＬ超であるべきである。
【０１４１】
高コレステロール血症の１つの症状は、アテローム性動脈硬化症を引き起こす可能性のある血清コレステロールの長期間にわたる上昇を含む（Ｂｈａｔｎａｇａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）  “Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”  ＢＭＪ  ３３７：ａ９９３）。数十年の期間にわたり慢性的に上昇した血清コレステロールは、動脈にアテローム性プラークを形成するよう構築する。これは、関与する動脈の進行性の狭窄（閉塞）またさらには完全な閉塞（阻害）を引き起こす可能性がある。あるいは、より小さなプラークは血塊を破裂させ、血塊を引き起こすことにより、血流を形成し、閉塞する場合がある（Ｆｉｎｎ  ＡＶ，Ｎａｋａｎｏ  Ｍ，Ｎａｒｕｌａ  Ｊ，Ｋｏｌｏｄｇｉｅ  ＦＤ，Ｖｉｒｍａｎｉ  Ｒ  （Ｊｕｌｙ  ２０１０）．“Ｃｏｎｃｅｐｔ  ｏｆ  ｖｕｌｎｅｒａｂｌｅ／ｕｎｓｔａｂｌｅ  ｐｌａｑｕｅ”  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｅ．Ｂｉｏｌ  ３０（７）：１２８２−１２９２）。冠動脈の突然の閉塞は、心筋梗塞または心臓発作をもたらす。脳へ供給する動脈の閉塞は脳卒中を引き起こす場合がある。狭窄または閉塞の発症は、組織へ供給が緩慢になり、臓器が機能不全となるまでゆっくりと臓器を縮小する。組織虚血（血液供給の限定）が限定するものではないが、脳の一時的な虚血（一般的に一過性脳虚血発作とも呼ばれる）を含む特定の症状として現れ得るこの時点で、視覚の一時的な喪失、眩暈および平衡感覚の障害、失語症（発話が困難）、不全麻痺（脱力）、および知覚異常（しびれまたは刺痛）が、通常身体の片側に現れ得る。心臓への不十分な血液供給により胸の疼痛が現れる場合があり、眼の虚血により、一過性の片目の視覚喪失が現れる場合がある。脚への不十分な血液の供給により、歩行の際に腓腹筋痛が現れる場合があり、食事を行った後腸に腹痛が現れる場合がある（Ｇｒｕｎｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）  “Ｐｒｉｍａｒｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｒｏｍ  Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ：ａ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ＡＨＡ  Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｒｉｓｋ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ”  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９７（１８）：１８７６−１８８７）。
【０１４２】
Ｂ．低コレステロール血症
低コレステロール血症は、血液（‐血症）で異常に低い（ハイポ−）レベルのコレステロールが存在することである。高い総コレステロールの存在（高コレステロール血症）は、心血管疾患と相関するにも関わらず、体内でのコレステロールの産生の欠損は、同様に有害な結果をもたらす可能性がある。コレステロールは、哺乳類の細胞膜に必須の成分であり、適切な膜の透過性及び流動性を確立するために必要である。平均コレステロールレベルより低いレベルが直接的に有害であるかどうかは明らかではなく、しばしば特定の疾患で見受けられる。
【０１４３】
低コレステロールが起こり得る原因として、限定するものではないが、スタチン、甲状腺機能亢進症もしくは甲状腺機能亢進、副腎不全、肝疾患、セリアック病、栄養不良などの吸収障害（腸からの不適切な栄養吸収）、無βリポタンパク質血症（５０ｍｇ／ｄｌ未満のコレステロールの測定値をもたらす遺伝性疾患）、低βリポタンパク血症（５０ｍｇ／ｄｌ未満のコレステロールの測定値をもたらす遺伝性疾患）、マンガン欠乏症、スミス‐レムリ‐オピッツ症候群、マルファン症候群、白血病および他の血液疾患が挙げられる。
【０１４４】
人口統計上の研究から、低コレステロールが、主にうつ病、癌、出血性卒中、大動脈解離、および呼吸器疾患による死亡率の増加に関連することが示唆されている（Ｊａｃｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）．“Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｌｏｗ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ：Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ”  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８６  （３）：１０４６−１０６０；ａｎｄ  Ｓｕａｒｅｚ  Ｅ．Ｃ．，（１９９９）  “Ｒｅｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｒａｉｔ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｘｉｅｔｙ  ｔｏ  ｌｏｗ  ｌｉｐｉｄ  ａｎｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｙｏｕｎｇ  ａｄｕｌｔ  ｗｏｍｅｎ”．Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍ  Ｍｅｄ  ６１（３）：２７３−２７９．）。また低コレステロールレベルを引き起こすものがすべて死亡率をもたらし、低コレステロールが単純に健康不良のマーカーである可能性もある。
【０１４５】
Ｃ．糖尿病
２，０００万人超のアメリカ人が糖尿病を罹患している。４，０００万人を超えるアメリカ人が、（大抵２型糖尿病を発症する前段階である）糖尿病前症を有している。糖尿病は、通常、血液中に高いレベルの糖が存在する生涯にわたる（慢性）疾患である。インシュリンは、血糖を制御する脾臓により産生されるホルモンである。糖尿病は、非常に少ないインシュリン、インシュリンに対する抵抗性、またはその両方により引き起こされる場合がある。糖尿病を理解するために、まず食物の消化およびエネルギーのための身体での使用する際の通常の工程を理解することが重要である。
【０１４６】
食物を消化する際にいくつかの事象が行われる。グルコースと呼ばれる糖が血液中に入る。グルコースは、身体の燃料の供給源である。膵臓と呼ばれる臓器はインシュリンを作製する。インシュリンの役割は、血液から、グルコースを燃料として使用できる筋肉、脂肪、および肝細胞の中へグルコースを移動させることである。
【０１４７】
糖尿病を伴う患者の身体は、エネルギーを貯蔵する脂肪、肝臓、および筋肉の細胞へ糖を移動することができないため、高血糖を有する。これは、脾臓が十分なインシュリンを作製していないか、細胞がインシュリンに正常に応答していないかのいずれかによるものである。
【０１４８】
主に２つの種類の糖尿病が存在する。原因およびリスク因子はそれぞれの種類により異なる。１型糖尿病はいずれの年齢でも発症する場合があるが、大部分は、小児、１０代、または若年で診断される。この疾患では、身体でインシュリンがほとんどまたは全く作製されない。毎日インシュリンを注射することが必要である。正確な原因は知られていない。２型糖尿病は、糖尿病の大部分の事例を作製している。多くの場合成年で発症する。しかしながら肥満率が高いために、現在は１０代または若年でも２型糖尿病と診断されている。２型糖尿病を伴う多くの人々が、２型糖尿病を発症していることを認識していない。
【０１４９】
妊娠性糖尿病は、糖尿病を有していない女性が妊娠している最中のいずれかの時点で発症する高血糖である。
【０１５０】
糖尿病の症状は、高血糖からもたらされ得、限定するものではないが、霧視、過度の口渇、疲労、空腹感、多尿、および体重の減少が挙げられる。
【０１５１】
ＩＶ．医薬組成物
本発明は、医薬組成物（たとえば上述したペプチドを含む）をさらに提供する。本発明の医薬組成物は、局所的または全身的な処置が必要とされているか、および処置される領域に応じて多くの方法で投与される。投与は、局所的（眼、ならびに膣および直腸での送達含む粘膜での投与を含む）、肺性（たとえば、ネブライザーによるものを含む粉体もしくはエアロゾルの吸引もしくはガス注入；気管内、鼻腔内、上皮性、および経皮性投与）、経口または非経口であってもよい。非経口投与として、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内の注射もしくは注入；または頭蓋内（たとえば髄腔内もしくは脳室内）投与が挙げられる。
【０１５２】
局所投与用の医薬組成物および医薬製剤は、経皮パッチ、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、座薬、スプレー、液剤、および粉体を含んでも良い。従来の薬学的なキャリアー、水性、粉体、または油性の基剤、増粘剤などが、必要であるか、または望ましい場合がある。
【０１５３】
経口、舌下、または頬側の投与用の化合物および製剤は、粉体または顆粒、水もしくは非水性媒体の懸濁剤もしくは溶液、カプセル、ゲル、ドロップ、ストリップ剤、ガム、小袋、または錠剤を含む。増粘剤、芳香剤、希釈剤、乳化剤、分散剤、または結合剤が望ましい場合がある。
【０１５４】
非経口、髄腔内、脳室内の投与用の組成物および製剤は、緩衝剤、希釈剤、ならびに限定するものではないが、浸透促進剤、キャリアー化合物および他の薬学的に許容可能なキャリアーもしくは賦形剤などの他の適切な添加剤を含んでもよい。
【０１５５】
本発明の医薬組成物は、限定するものではないが、溶液、エマルジョン、およびリポソーム含有製剤を含む。これらの組成物は、限定するものではないが、予め形成した液剤、自己乳化する固体、および自己乳化する半固体を含む様々な成分から作製されてもよい。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、本医薬組成物は、他の薬剤、ホルモン、および／またはペプチドをさらに含んでもよい。たとえば、本医薬組成物はスタチン剤をさらに含んでもよい。スタチン（またはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤）は、肝臓のコレステロールの産生する役割を持つ酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害することによりコレステロールレベルを低下させるために使用する薬剤に分類される。コレステロールレベルの増加は、心血管疾患に関連するとされており、したがって、スタチンはこれら疾患の予防に使用されている（Ｌｅｗｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｂｌｏｏｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｂｙ  ａｇｅ，ｓｅｘ，ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ：ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｄａｔａ  ｆｒｏｍ  ６１  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ５５，０００  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｅａｔｈｓ”  Ｌａｎｃｅｔ  ３７０（９６０２）：１８２９−１８３９  （２００７））。研究から、スタチンが、二次的な予防方法として心血管疾患（ＣＶＤ）を処置するために最も有効であり、コレステロールの上昇に疑問のある利点を伴うが、従来のＣＶＤを伴うものではないことが見出されている（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．“Ｓｔａｔｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ”．Ｉ  Ｔａｙｌｏｒ，Ｆｉｏｎａ．Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ  Ｒｅｖ  （１）  （２０１１））。スタチンは、まれではあるが重篤な副作用、特に筋肉の損傷を有する。
【０１５７】
スタチンの特定の例として、限定するものではないが、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ（登録商標）およびＴｏｒｖａｓｔ（登録商標））、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標）、Ａｌｔｏｃｏｒ（登録商標）、Ａｌｔｏｐｒｅｖ（登録商標））、プラバスタチン（Ｌｉｖａｌｏ（登録商標）、Ｐｉｔａｖａ（登録商標））、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（登録商標）、Ｓｅｌｅｋｔｉｎｅ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標））、ロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標））およびシンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｌｉｐｅｘ（登録商標））が挙げられる。スタチンおよびエゼチミブ／シンバスタチンなどの別の薬剤を組み合わせたいくつかの調製物もまた利用可能である。
【０１５８】
心血管治療薬の特定の例として、限定するものではないが、プロプラノロール、ジギタリス、アムロジピンベシル酸塩、およびニフェジピンが挙げられる。
【０１５９】
他の医薬組成物の特定の例として、限定するものではないが、エゼチミブ（ｅｘｅｔｉｍｉｂｅ）（Ｚｅｔｉａ（登録商標））、アムロジピンベシル酸塩、（Ｎｏｒｖａｓｃ（登録商標））、ナイアシン、シタグリプチン（Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標））、メトホルミンまたはオルリスタット（Ａｌｌｉ（登録商標）／Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））が挙げてもよい。
【０１６０】
本発明の医薬組成物は、単位剤形にて簡便な状態で存在してもよく、医薬産業に良く知られている従来技術にしたがって調製されてもよい。このような技術は、薬学的なキャリアーまたは賦形剤と活性成分の会合を引き起こすステップを含む。一般的に、製剤は、液体キャリアーまたは細かく分割した固体キャリアーまたはその両方と活性成分の均一かつ密接な会合をもたらし、必要に応じて生成物の形状を整えることにより調製される。
【０１６１】
本発明の組成物は、限定するものではないが、錠剤、カプセル、液体シロップ、軟性ゲル、座薬および浣腸剤などの多くの可能な剤形のいずれかに製剤化されてもよい。また本発明の組成物は、水性、非水性、または混合型媒体の懸濁剤として製剤化されてもよい。水性懸濁剤は、たとえば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含む、懸濁剤の粘性を増大させる物質をさらに含んでもよい。また懸濁剤は安定化剤を含んでもよい。
【０１６２】
本発明の一実施形態では、本医薬組成物は泡として製剤化し、使用してもよい。薬学的な泡は、限定するものではないが、エマルジョン、マイクロエマルジョン、クリーム、ゼリー、およびリポソームなどの製剤を含む。基本的に、本来類似するこれらの製剤は、最終生成物の組成および整合性の点で異なる。
【０１６３】
本発明の組成物は、医薬組成物で従来見出されている他の調節成分をさらに含んでもよい。したがって、たとえば本組成物は、鎮痒薬、収斂薬、局麻剤もしくは抗炎症剤などの追加的であり適合可能な薬学的活性物質を含んでも良く、または色素、芳香剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、および安定剤などの本発明の組成物の多様な剤形を物理的に製剤化する際に有益な追加的な物質を含んでもよい。しかしながら、このような物質は添加する際に、本発明の組成物の成分の生物学的な活性を不当に妨害すべきではない。本製剤は、安定化させることができ、必要に応じて、たとえば本製剤の活性薬学的成分と有害な相互作用を行わない潤滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝剤、着色剤、芳香剤および／または香料などといった補助剤と混合できる。
【０１６４】
用量は、数日間から数か月間持続する処置工程の中で、または治癒に影響を与えるか、もしくは疾患状態の低減が達成されるまで、処置すべき疾患状態の重症度および応答性に依存する。最適な用量スケジュールは、患者の体内での薬剤の蓄積の測定値から計算できる。投与する医師は、最適用量、用量方法および反復率を容易に決定できる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対効力に応じて変動してもよく、一般的に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの動物モデルで有効であると見出されたＥＣ５０に基づき、または本明細書に記載されるペプチドに基づき評価できる。一般的に、用量は、０．１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重であり、毎日、毎週、毎月、毎年１回以上投与されてもよい。処置する医師は、体液または組織中の薬剤の測定した滞留時間および濃度に基づき投与するための反復率を推定できる。処置が成功した後、疾患状態の再発を予防する維持療法を対象に経験させることが望ましい場合があり、この際ペプチドを、毎日１回以上〜２０年ごとに１回、０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重の範囲の維持用量で投与する。
【０１６５】
実験
実施例Ｉ
細胞培養および遺伝子導入
内在性  ＰＣＳＫ９を欠損するＨｅｐＧ２／ｓｈＰＣＳＫ９またはＨｕＨ７／ｓｈＰＣＳＫ９細胞（１）を、１２ウェルマイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）中、１×１０５細胞／ウェルで播種した。次いでこれらの細胞を、５０μＭの各ペプチド（必要に応じて５０μＭ以下の最も活性するペプチド）と４時間予めインキュベートしたかまたはしていないＶ５−タグ付ＰＣＳＫ９またはその機能獲得型ＰＣＳＫ９−Ｄ３７４Ｙのいずれかを０．７μｇ／ｍｌ用いて、４時間または一晩インキュベートした。次いでこの細胞を、１％ノニデットＰ−４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１×コンプリート  プロテアーゼインヒビター混合物（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を補充した０．１％ＳＤＳを含有する１×ＲＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣ１、ｐＨ８．０）で溶解し、ウェスタンブロットで解析した。
【０１６６】
実施例ＩＩ
ウェスタンブロット解析
細胞溶解物中のタンパク質を、１０％Ｔｒｉｓ−グリシン  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分解した、ゲルをフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にブロッティングし、５％超の非脂肪ミルクを含むＴＢＳ−Ｔ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）中で１時間ブロッキングし、自家製のポリクローナルＰＣＳＫ９抗体（１：１０００）（１３）、ヒトＬＤＬＲ抗体（１：１０００、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、βアクチン（（１：５０００；Ｓｉｇｍａ）およびモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｖ５−ＨＲＰ（１：５０００；Ｓｉｇｍａ）で免疫ブロッティングした。適切なセイヨウワサビペルオキシダーゼ共役型二次抗体（１：１００００、Ｓｉｇｍａ）を、ＥＣＬ  Ｐｌｕｓキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、化学発光を高めた状態での検出に使用したタンパク質バンドの定量化は、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを使用して入手した。
【０１６７】
実施例ＩＩＩ
ＦＡＣＳ解析
ＨｕＨ７／ｓｈＰＣＳＫ９細胞を、５０μＭ（または最も活性したペプチドでは５０μＭ以下）で使用する例示的なペプチドのそれぞれと、予めインキュベートするかまたはしていないＰＣＳＫ９と、上述のように３７℃で４時間インキュベートした（Ｂｅｎｊａｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｅｇｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐＨ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＰＣＳ  ９：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｅｖｅｎｔｓ”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８５（５２）：４０９６５−４０９７８  （２０１０））。
【０１６８】
この細胞を、溶液Ａ（０．５％のウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）および１ｇ／リットルのグルコースを含むカルシウム／マグネシウムフリーダルベッコＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））で３回洗浄した。次いでこの細胞を１×バーセネート液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に、室温で１０分間インキュベートし、類で、５ｍｌの溶液Ａを添加した。次いで細胞をヒトＬＤＬＲ  ｍＡｂ−Ｃ７（１：１００；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を含む溶液Ａの中で４０分間インキュベートした。洗浄した後、細胞を二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７  ロバ抗マウス抗体；１：２５０；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を含む溶液Ａの中で２０分間インキュベートした。
【０１６９】
０．２％のヨウ化プロピジウムを含むＰＢＳで懸濁した後、細胞を、ＦＡＣＳ  ＢＤ  ＬＳＲ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７を伴う肝細胞におけるヨウ化プロピジウム（死細胞）およびＬＤＬＲに関してＦＡＣＳにより解析した。
【表１】
2016508722.tif 000010
＋は１００μＭで対照を超える＞３０％阻害を示す。
−は誤差の範囲内の阻害を示す。
（＋）は、１００μＭで対照未満である＞３０％阻害を示す。
【０１７０】
実施例ＩＶ
細胞ｄｉｌ−ＬＤＬ取り込みアッセイ
ＨｅｐＧ２、ＨｕＨ７、ＦＬ８３Ｂ、またはＨｅｐＧ２／ｓｈＰＣＳＫ９、ＨｕＨ７／ｓｈＰＣＳＫ９、ＦＬ８３Ｂ／ｓｈＰＣＳＫ９などのショートヘアピン型ＰＣＳＫ９ノックダウン配列を遺伝子導入した細胞株などの細胞を、９６ウェルプレートの中で、２×１０４細胞／ウェルで播種し、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳの中、３７℃で培養した。約２４時間後、細胞培地を吸引し、さらなる実験のためにＲＰＭＩ＋３−５ｍｇ／ｍＬ  ＬＰＤＳ（Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｓｅｒｕｍ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）培地と交換した（Ｂｅｎｊａｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｅｇｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐＨ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｅｖｅｎｔｓ”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８５（５２）：４０９６５−４０９７８  （２０１０））。
【０１７１】
ペプチドの活性を、ｉ）ＳＲＸペプチド／ＰＣＳＫ９タンパク質複合体なし（対照、Ｃｎｔ）、ｉｉ）ＰＣＳＫ９タンパク質；およびｉｉｉ）ＳＲＸペプチド／ＰＣＳＫ９複合体と細胞を培養することにより評価した。また、ｉ）野生型ＰＣＳＫ９（ＷＴ）；ｉｉ）変異型ＰＣＳＫ９（たとえばＤ３７４Ｙ変異ＰＣＳＫ９、ＤＹ）；ｉｉｉ）同一の濃度および／または組み合わせの様々なＳＲＸペプチドおよび／またはＰＣＳＫ９；ｉｖ）異なる濃度および／または組み合わせのＳＲＸペプチドおよび／またはＰＣＳＫ９；ｖ）遺伝子導入したショートヘアピン配列を用いるか、または用いることのない上述の異なる細胞の使用、ｖｉ）ＰＣＳＫ９およびＳＲＸペプチドのプレインキュベーション（たとえば、１時間、２時間、３時間、４時間など）；ｖｉｉ）限定するものでないが、体温（たとえば３７℃）、超生理的温度（たとえば３９℃）を含む様々な温度；およびｖｉｉｉ）撹拌（シェーカーまたはゆっくりとした定期的なボルテックス）を行う／行わない；ことを含む、これら実験の条件の様々な前突然変異を使用した。
【０１７２】
先行する段落に記載される条件の組み合わせの１つを使用した細胞を１６時間培養した。１６時間後、５μｇ／ｍＬのｄｉｌ−ＬＤＬの培地濃度となるように必要とされるある量のｄｉｌ−ＬＤＬ（１，１´−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドカルボシアニンペルクロラートと結合した低密度リポタンパク質）を、培養ウェルに添加し、細胞をこれらの新規の条件下でさらに４時間培養し続けた。４時間のインキュベーション期間（合計２０時間の細胞培養）の終わりに、細胞の取り込みを、脱イオン化し、オートクレーブした水またはＰＢＳなどの溶媒における４％ホルムアルデヒドを含む１０μＭ  Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２を添加して停止し、試料を２０℃で２０分間インキュベートした。
【０１７３】
細胞試料をＰＢＳで２回すすぎ、次いで蛍光度を励起時の３６０ｎｍおよび発光時の４６０ｎｍ時で測定して、ＤＮＡ含量を測定した。次いで細胞試料を、０．１％のＳＤＳを含む０．１Ｎ  ＮａＯＨでインキュベートしながら、１０分間振盪した。ｄｉｌ−ＬＤＬを含む試料の蛍光を、励起時の５３０ｎｍおよび結果として得られる発光時の５８０ｎｍで測定した。
【０１７４】
ｄｉｌ−ＬＤＬＲの蛍光測定を、評価した細胞数に対して正規化し、Ｈｏｅｃｈｓｔの蛍光から決定した。データを、異なる実験条件で解析し、Ｃｎｔ試料のパーセンテージ相対蛍光単位（ＲＦＵ）として記録した。パーセント阻害を、［（ＳＲＸ：ＲＦＵ）−（ＰＣＳＫ９−非ペプチド：ＲＦＵ）］／［（ＰＣＳＫ９−非ペプチド：ＲＦＵ）−（Ｃｎｔ：ＲＦＵ）］×１００として表すように、Ｃｎｔ試料のＲＦＵに対するＰＣＳＫ９‐非ペプチドの差異により除算したＰＣＳＫ９‐非ペプチドのＲＦＵに対するペプチドに曝露した試料のＲＦＵの差異として計算した。
【０１７５】
実施例Ｖ
ＰＣＳＫ９アロステリック阻害剤ペプチドの作製方法
この実施例は、本発明のペプチドの同定および合成方法を提示する（Ｒ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  （１９６３）．“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｉ．Ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ”．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５  （１４）：２１４９−２１５４；Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．（２０００）．Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  （１  ｅｄ．）．Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，ｐ．８４８．ＩＳＢＮ  ０−８２４７−０３５９−６；ａｎｄ  Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ  Ｆ，Ｃａｒｐｉｎｏ  ＬＡ．，“Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．
１９９７；２８９：１０４−１２６）。
【０１７６】
すべてのペプチドを、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）ケミストリー（２１ｓｔ  Ｃｅｎｔｕｒｙ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，２６０  Ｃｅｄａｒ  Ｈｉｌｌ  Ｓｔ．，Ｍａｒｌｂｏｒｏ，ＭＡ  ０１７５２）を使用して製造した。手短に述べると、ペプチドを、ポリスチレン樹脂を使用して作製し、適切なリンカーで官能基化し、次いでこのペプチドを、Ｉｎｔａｖｉｓ  ＲＳ  ペプチド合成器（ドイツ）を使用して製造するか、または真空により反応物を除去する粗いガラスフリットを備えるガラスペプチド合成容器（Ｃｈｅｍｇｌａｓｓ）を使用して手で製造する。
【０１７７】
いずれかの場合、アミノ酸を、以下のように経時的に添加する。アミノ酸を、ＮＭＰ（Ｎ−メチル−２−ピロリドン）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）のいずれかに溶解する；またこれらの溶媒を各ステップ後の樹脂の洗浄に使用する。転化するＦｍｏｃ‐保護型アミノ酸をＨＡＴＵ（０−（７−アザベンゾトリアゾール−ｌ−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスファート）またはＨＣＴＵ（２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウム・ヘキサフルオロホスファート）のいずれかを使用して活性化する。（樹脂に対して）添加する４−倍の化学量論に対して、３．９５倍の過度のＨＡＴＵまたはＨＣＴＵを使用して活性エステルを作製する。基剤としての８倍の過度のＤＩＰＥＡ（Ν，Ν−ジイソプロピルアミン）に加えて、これらの試薬は、次のアミノ酸の添加を触媒する。一旦アミノ酸が結合すると（各サイクルは、効率的な結合を保証するために二重の結合周期を含む）、樹脂を２０％の無水酢酸に曝露し、次のアミノ酸を添加しない（「キャップオフ」）の任意のペプチド鎖を終端とさせる。この樹脂を、ＤＭＦ（３Ｘ）、メタノール（ＭｅＯＨ、２Ｘ）およびＤＭＦで再び洗浄し、２×ピペリジンを使用いしてＮ末端アミンに曝露し、次のアミノ酸を添加できる各結合周期の終わりにＦｍｏｃ基を除去する。
【０１７８】
各ステップの合成が完了すると、（樹脂上の）ペプチドをＭｅＯＨ（３Ｘ）およびＤＣＭ（３Ｘ）を使用して乾燥させ、９２％ＴＦＡ、２％水、２％トリイソプロピルシラン、２％チオアニソールおよび２％エタンジチオールを使用して、室温で３〜４時間脱保護した。ペプチドを、冷たいジエチルエーテル中に沈殿させ、遠心し（２，０００ｒｐｍ）、ペレットを冷たいエーテルで２回洗浄した。乾燥後、ペプチドを０．１％ＴＦＡ（バッファーＡ）を含む水に可溶化し、Ｃ１８カラムを使用してＲＰ−ＨＰＬＣを受けた（バッファーＢ＝９５％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）。
【０１７９】
一部のＰＣＳＫ９アロステリック合成ペプチドおよびそれらの物理的な特徴を以下に列挙する。
化合物１（ＳＲＸ−５５）：Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ，計算値  ｍ／ｚ：８６８．４６；観測値：８６９．００
化合物２：（ＳＲＸ−５６）β−Ａｌａ−Ｐｈｅ（３−ＣＨ２ＮＨ２）−Ｖａｌ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｐ）−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ，計算値８６４．３６；観測値：８６４．８０
化合物３（ＳＲＸ−６０）：Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：１０５３．３９；観測値：１０５３．８０   
化合物４（ＳＲＸ−６１）：Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＮＨＣＨ２Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：１０６４．４２；観測値：１０６４．９０
化合物５：（ＳＲＸ−６２）Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（ＣＨ２ＣＨ２シクロヘキシル）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ１０２７．４６；観測値：
化合物６：（ＳＲＸ−６３）Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｈｐｈ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：１０２１．４２；観測値：１０２２．３０
化合物７：（ＳＲＸ−６４）Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（ＣＨ２−Ｐｈ）−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（３−Ｍｅ）−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：１０６７．４０；観測値：１０６７．８０
化合物８：（ＳＲＸ−６５）Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ，計算値  ｍ／ｚ：８２１．４３；観測値：８２１．９０
化合物９：（ＳＲＸ−６６）Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ，計算値  ｍ／ｚ：７４０．３７；観測値：７４０．８０
化合物１０：（ＳＲＸ−６７）Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ，計算値  ｍ／ｚ：７２２．３９；観測値：７２２．８０
化合物１１：（ＳＲＸ−６８）Ａｃ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：５００．１３；観測値：５００．１５
化合物１２：（ＳＲＸ−６９）Ａｃ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：４８４．１４；観測値：４８４．４０
化合物１３：（ＳＲＸ−７０）Ａｃ−Ｔｒｐ（５−Ｆ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリン，計算値  ｍ／ｚ：５７１．１８；観測値：５７１．００
化合物１４：（ＳＲＸ−７２）Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ，計算値  ｍ／ｚ：４６６．１９；観測値：４６６．４７
化合物１５：（ＳＲＸ−３６）Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ｐ），計算値  ｍ／ｚ：８６０．３３；観測値：８６０．００
化合物１６：（ＳＲＸ−７３）Ｐｈｅ（４−Ｐｈ）−Ａｌａ−Ｓｅｒ（ｐ）−モルフォリン，計算値  ｍ／ｚ：５４８．２０；観測値：５４８．００
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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