(57)【要約】  【課題】本発明は、１つ以上のグリコシダーゼ酵素のレジメンにより誘発される免疫カスケードを用いた癌の治療および予防を提供することを目的とする。  【解決手段】本発明は、薬物耐性、再発性、および／または転移性癌を含む、癌を治療し、癌治療の転帰を改善するための組成物および方法ならびに早期癌を治療するための方法を提供する。治療は、患者にグリコシダーゼ酵素レジメン（例えば、１つ以上のグリコシダーゼ酵素のレジメン）をインビボ施与することを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌治療における転帰または応答率を改善するための方法であって、癌細胞および／または免疫細胞および／または血清タンパク質から有効量のグリコシル残基を除去するために、免疫寛容性グリコシダーゼのレジメンを、癌の治療を受けている１人以上の患者に施与することを含む、方法。
【請求項２】
前記グリコシダーゼが、悪性細胞上の抗原を露出させることを容易にし、かつ／または免疫カスケードを容易にする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記グリコシダーゼが、ノイラミニダーゼ、ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、フコシダーゼ、グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、およびマンノシダーゼのうちの１つ以上を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記グリコシダーゼが、少なくとも２つまたは３つのグリコシダーゼ酵素を含む、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記グリコシダーゼ酵素が、ノイラミニダーゼおよび／またはβ−ガラクトシダーゼを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記１人以上の患者が、前記腫瘍または癌細胞の分子分析を受けない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１人以上の患者が、前記腫瘍または癌細胞の化学感受性試験を受けない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記患者が、生存の予後不良を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が各々、固形腫瘍を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌が、極度にシアル化される、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌が、ＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣを含む肺癌、中皮腫、脳癌、膠芽腫、頭頚部癌、食道癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、肝癌、胃癌、結腸または結腸直腸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、および黒色腫のうちの１つ以上である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌が、Ｉ期であるか、または前転移性である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌が、ＩＩまたはＩＩＩ期である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が、ＩＶ期であるか、または転移性である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌が、切除不可能である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が、多剤耐性である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記癌が、白血病である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記白血病が、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）であり、薬物耐性であり得る、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者が、寛解期にある、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌が、再発である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記グリコシダーゼレジメンが、放射線療法のため前記患者を準備するために施与される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記グリコシダーゼレジメンが、放射線療法後に施与される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記グリコシダーゼが、放射線治療レジメン中に投与される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記グリコシダーゼレジメンが、任意にネオアジュバント化学療法と共に、腫瘍切除前に施与される、請求項１〜１６および１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記グリコシダーゼレジメンが、任意にアジュバント化学療法と共に、腫瘍切除後に施与される、請求項１〜１６および１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者が、アントラサイクリン、タキソールもしくはタキソイド、ビンカアルカロイド、アルキル化剤、インターカレート剤、免疫調節剤もしくは免疫複合体、キナーゼ阻害剤、およびナイトロジェンマスタードから選択される化学療法を受ける、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記患者が、トポイソメラーゼ阻害剤（ＩまたはＩＩ）、アポトーシス誘発剤、プロテアーゼ阻害剤、微小管阻害剤、有糸分裂阻害剤、代謝拮抗薬、シグナル伝達阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはアロマターゼ阻害剤を受容する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記患者が、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アドリアマイシン、ビンクリスチン、カルムスチン、シスプラチン、５−フルオロウラシル、タモキシフェン、プロダソン、サンドスタチン、マイトマイシンＣ、ホスカルネット、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、フルダラビン、カルボプラチン、ロイコボリン、タモキシフェン、ゴセレリン、ケトコナゾール、ロイプロリド、フルタミド、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン塩酸塩、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アムサクリン、メルバロン、ピロキサントロン塩酸塩、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、トリメトレキサート、アシビシン、アラノシン、ピラゾフリン、ペントスタチン、５−アザシチジン、５−アザシチジン、５−アザ−５−アザ−２'−デオキシシチジン、アデノシンアラビノシド（Ａｒａ−Ａ）、クラドリビン、フトラフル、ＵＦＴ（ウラシルとフトラフルの組み合わせ）、５−フルオロ−２'−デオキシウリジン、５−フルオロウリジン、５'−デオキシ−５−フルオロウリジン、ヒドロキシ尿素、ジヒドロレンチオランブシル（ｄｉｈｙｄｒｏｌｅｎｃｈｉｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、チアゾフリン、オキサリプラチン、メルファラン、チオテパ、ブスルファン、クロラムブシル、プリカマイシン、ダカルバジン、イフォスファミドリン酸塩、シクロホスファミド、ピポプロマン、４−イポメアノール、ジヒドロレンペロン（ｄｉｈｙｄｒｏｌｅｎｐｅｒｏｎｅ）、スピロマスチン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ゲルデナマイシン（ｇｅｌｄｅｎａｍｙｃｉｎ）、サイトカラシン、デプシペプチド、４'−シアノ−３−（４−（例えば、Ｚｏｌａｄｅｘ）、および４'−シアノ−３−（４−フルオロフェニルスルホニル）−２−ヒドロキシ−３−メチル−３'−（トリフルオロメタ−イル）プロピオンアニリドのうちの１つ以上を受容する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記患者が、ハーセプチンなどの抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体、アービタックスなどの抗ＥＧＦＲ抗体、アバスチンなどの成長因子受容体抗体、タルセバ、イレッサ、もしくはスニチニブなどの小分子阻害剤）、またはリツキサンなどの抗ＣＤ２０のうちの１つ以上を受容する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記患者が、エルロチニブ、ゲフィニチブ、ラパチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、またはイマチニブを受容する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記患者が、口腔毒性化学療法を受ける、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記口腔毒性化学療法が、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、およびエトポシドのうちの１つ、またはこれらの組み合わせである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記グリコシダーゼレジメンが、化学療法の代替えとして施与される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記患者が、化学療法治療の候補とならない、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記グリコシダーゼレジメンが、化学療法サイクル前に施与される、請求項２４〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記グリコシダーゼレジメンが、化学療法サイクルの合間に施与される、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記グリコシダーゼレジメンが、化学療法の完了後に施与される、請求項２４〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記患者が、骨髄移植を受け、前記グリコシダーゼレジメンが、移植前、および／または移植後に提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記グリコシダーゼの用量および／または投与頻度が、遷延性の関節不快または倦怠を引き起こさない、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記グリコシダーゼが、関節不快または倦怠の時期に投与されない、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
化学療法治療に耐性である腫瘍を治療するための方法であって、免疫寛容性グリコシダーゼレジメンを前記患者に施与することを含む、方法。
【請求項４２】
前記グリコシダーゼレジメンが、化学療法治療が奏功しなかった後に施与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記癌が、化学療法治療後の再発である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記癌が、耐性癌の１つ以上のバイオマーカーを有する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記グリコシダーゼ用量および／または投与頻度が、遷延性の不快を引き起こさない、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記グリコシダーゼが、関節不快または倦怠の時期に投与されない、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
癌を発症する素因がある患者において癌を予防する方法であって、免疫寛容性グリコシダーゼシグナル伝達レジメンを前記患者に施与することを含む、方法。
【請求項４８】
前記患者が、任意に乳癌、結腸癌、または皮膚癌である、遺伝的素因により特徴付けられる、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記患者が、以前に少なくとも２回、癌を発症している、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記グリコシダーゼが、舌下、鼻、ポート、真皮下、経管栄養、眼内、静脈内、筋肉内、皮下、経皮的、および頬側から選択される経路により投与される、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記グリコシダーゼが、舌下投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記グリコシダーゼが、生体由来のもの、またはその誘導体もしくは活性部分であり、免疫カスケード活性を維持する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記グリコシダーゼが、生物源に由来するか、または組換えもしくは合成である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記グリコシダーゼが、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月間、平均で毎日２〜６回投与される、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記グリコシダーゼが、少なくとも２ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、平均で毎日２〜６回投与される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記患者がその後、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間、または少なくとも２年間、または少なくとも５年間以上、毎日約１用量で長期的に治療される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記グリコシダーゼ用量または投薬頻度が、関節不快などの不快に基づき調節される、請求項５０〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
ノイラミニダーゼ、ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、フコシダーゼ、グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、およびマンノシダーゼのうちの少なくとも２つ、ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項５９】
前記組成物が、ノイラミニダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼを含む、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記グリコシダーゼが、集合的に、約１０−３ｍｇ〜１０−８ｍｇで存在する、請求項５８または５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記組成物が、舌下送達用に製剤化される、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
請求項５８〜６１のいずれか一項に記載のグリコシダーゼ組成物を投与するための薬物アプリケータであって、少なくとも１００用量の前記グリコシダーゼ組成物を含む、薬物アプリケータ。
【請求項６３】
前記アプリケータが、舌下、鼻、経皮、徐放性真皮下、眼内、経管栄養、ポート、皮下、経口、または頬側の送達用である、請求項６２に記載の薬物アプリケータ。
【請求項６４】
前記アプリケータが、舌下送達用である、請求項６２に記載の薬物アプリケータ。
【請求項６５】
前記アプリケータが、前記残りの用量の無菌状態を維持する様式で用量を分与する、請求項６２〜６５のいずれか一項に記載の薬物アプリケータ。
【請求項６６】
前記アプリケータが、５０〜１００μｌの用量を送達する、請求項６５に記載の薬物アプリケータ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１３年１月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／７５４，０５６号に基づく優先権およびその利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、１つ以上のグリコシダーゼ酵素のレジメンにより誘発される免疫カスケードを用いた癌の治療および予防に関する。様々な態様において、本発明は、転移もしくは再発を予防する、または従来の癌療法による転帰および治療成功の率を改善するための癌の治療および管理に関する。
【背景技術】
【０００３】
非常に多くのレベルの研究および薬事開発が癌の治療に焦点を当てている。癌は、薬事パイプラインの最上位の標的のうちの１つに留まっている。開発中の製品は、キナーゼ阻害剤から血管新生阻害剤、腫瘍標的に対するモノクローナル抗体、アポトーシス誘発剤、抗腫瘍ワクチン接種、ならびに様々な腫瘍標的に対する、および様々な細胞傷害性作用を有する従来の化学療法剤に及ぶ。これらの薬物の多くは併用して使用され、狭い範囲の患者または癌の種類にのみ有効であり、いくつかは特定の癌の対象集団の約１０％にのみ有効である。Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．２００６，３５５：２７３３−４３、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．２００４，３５１：３３７−３４５を参照。この理由のため、および大半の癌治療レジメンの莫大な費用を考えると、どの患者が特定の治療に応答し得るかをより高い精度で予測する試みで、腫瘍分子または細胞分析に焦点を当てる巨大産業が出現した。Ｂｉｎ  Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ＭＴＴ  ａｓｓａｙ  ａｓ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｆｏｒ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：ｏｎｅ  ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ’ｓ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００８，Ｍａｙ  ２１；１４（１９）３０６４−３０６８。これらの分子および細胞診断の費用は高いままであり、癌の治療におけるそれらの全体的な価値は議論の的となっている。さらに、一部の癌は、利用可能な活性剤に対して高度に耐性であるか、または応答する可能性がないと判断されている。
【０００４】
従来の療法による転帰を実質的に改善するか、または従来の療法に応答する患者の数を増加させるため、ならびに実験または治療を個別化するためによく理解されていない分子もしくは細胞試験に依存する必要性を減少させるために、癌または特定の種類の癌に広範に適用可能である治療が必要である。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、薬物耐性、再発性、および／または転移性癌を含む、癌を治療し、癌治療の転帰を改善するための組成物および方法ならびに早期癌を治療するための方法を提供する。治療は、患者にグリコシダーゼ酵素レジメン（例えば、１つ以上のグリコシダーゼ酵素のレジメン）をインビボ施与することを含む。様々な実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、患者の免疫系を標的としない。様々な実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、哺乳類細胞（例えば、癌細胞および／または免疫細胞）および／または血清タンパク質（例えば、基特異的成分）上の１つ以上の末端グリコシル基の除去に活性な１つ以上のグリコシダーゼ酵素を提供する。グリコシダーゼ療法は、癌細胞上の抗原決定基を露出させ、免疫細胞および／または血清タンパク質上のその作用を介して免疫シグナル伝達カスケードを誘導する。標的とされる末端グリコシル基は、例えば、特に、シアロシル、β−ガラクトシル、Ｎ−アセチルガラクトサミノ、フコシル、グルコシル、Ｎ−アセチルグルコサミノ、およびマンノシル残基を含み得る。よって、様々な実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、特に、ノイラミニダーゼ、ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトシダーゼ、フコシダーゼ、グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、およびマンノシダーゼのうちの１つ以上を含み得る。理論に束縛されるものではないが、本レジメンは、有効量のグリコシル構造（例えば、シアル酸）を、免疫細胞および／または血清タンパク質の表面から除去することにより、ならびに癌細胞が免疫監視をより受けやすくなり得るように、癌細胞（正常な細胞と比較して圧倒的多数の異常なグリコシル構造を有し得る）を顕出させることにより、免疫シグナル伝達を増加させる。この様式では、グリコシダーゼレジメンは、有効な免疫応答を組織化またはプログラムし、有害細胞の抗原標的を可能にするだけでなく、療法のために適切なレベルのサイトカイン／ケモカインカスケードを誘発する。これらまたは他の実施形態では、グリコシダーゼ酵素は、癌細胞および／または免疫細胞の表面上に、重要な末端グリコシル残基（例えば、ノイラミニダーゼおよび／またはガラクトシダーゼ）に特異的な少なくとも１つの酵素、および重要な最後から２番目のグリコシル残基（例えば、β−ガラクトシダーゼ、フコシダーゼ、またはマンノシダーゼ）に特異的な少なくとも１つの酵素を含む。いくつかの実施形態では、そのような酵素は、癌治療に関して、ノイラミニダーゼと相乗的に作用する。本レジメンは、癌との闘いに極めて重要な患者の免疫系を調節不全にせず（代わりにそれと調和し）、免疫細胞に対して有害作用を有するある特定のレベルの細胞傷害性化学療法および／または放射線治療の存在下でも有効である。さらに、本レジメンは、早期癌を減少または排除する一方で、外科的切除、放射線、もしくは化学療法を減少させるか、または完全に回避するために適用可能であるか、あるいは様々な実施形態において、本レジメンは、薬剤が免疫系を標的としないため、再発を防止するための長期療法、または再発もしくは独立した癌が発症した場合の反復療法に使用することができる。様々な実施形態において、本レジメンは、正常な細胞��正常な機能を維持するように、正常な細胞からのシアル酸または他のグリコシル構造の過剰な除去を回避する。
【０００６】
治療レジメンは、癌の種類にわたって、または特定の種類の癌の患者集団にわたって広範に適用可能であり、よって高い成功率を提供する。よって、同じ種類および同じ期の癌を有する１０人以上の患者、または２０人以上の患者、または５０人以上の患者、または１００人以上の患者が治療される場合、より予測可能な、改善された転帰が得られる。治療レジメンは、分子腫瘍分析または他の化学感受性ツールに依存する必要がない。様々な実施形態では、本治療は、腫瘍切除、放射線治療、および化学療法を含む、他の治療を用いた成功率を増加させる。例えば、いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、患者が従来の癌療法によりうまく耐えることができるように、患者の全身状態を強化し、かつ／または免疫毒性化学療法および放射線療法の治療指数を増加させる。いくつかの実施形態では、治療レジメンは、癌細胞の侵襲性を減少させ、かつ／または腫瘍量を減少させ、外科手術前のネオアジュバント療法と共にレジメンを有用なものにする。本発明は、癌患者全体における治療があまり不均一にならず、実質的な個別化介入の必要性を減少させることにより癌治療を改革する。
【０００７】
また他の態様では、本発明は、ノイラミニダーゼ、ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、フコシダーゼ、グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、およびマンノシダーゼのうちの少なくとも２つ、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。例えば、本組成物は、ノイラミニダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼを含み得る。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼは、集合的に、または個別に、約１０−３ｍｇ〜１０−８ｍｇで存在する。本組成物は、舌下および非経口送達を含む、様々な投与経路用に製剤化され得る。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
一態様では、本発明は、癌治療における転帰または応答率を改善するための方法を提供する。この態様では、本発明は、１つ以上のグリコシダーゼ酵素のインビボレジメンを癌の治療を受けている１人以上の患者に施与することを含む。本インビボレジメンは、有効量のグリコシド、いくつかの実施形態では、特にシアル酸を、免疫細胞および／または血清タンパク質の表面から除去することにより免疫シグナル伝達を刺激し、癌細胞を顕出させ（これもまた、有効量のグリコシル構造を除去することにより）、シアル酸を含むグリコシドを正常な細胞から過剰に除去することを回避する。本レジメンは、誘導された免疫カスケードによる癌細胞の持続的抗原標的を可能にする。いくつかの実施形態では、本レジメンは、癌細胞上に蔓延している、および様々な実施形態では、末端または最後から２番目のグリコシドであるグリコシドの除去に活性な酵素を含む。いくつかの実施形態では、本レジメンは、ノイラミニダーゼ、および蔓延した最後から２番目のグリコシル残基の除去に特異的な第２のグリコシダーゼを含み、これは、グリコシル鎖を再シアル化および／または再キャッピングを回避する、防止する、または遅らせることにより相乗的な治療を提供することができる。補助的療法として含まれ、かつ簡便な患者用量監視を伴う実施形態を含む投与レジメンは、本明細書において詳細に記載される通りである。この態様によると、本方法の有効性は、従来の多くの療法とは異なり、癌の分子特性または患者の固有の生態に強く依存しない。よって、癌細胞がグリコシダーゼ治療による抗原露出を広く受けやすいため、本方法は、患者が治療前に腫瘍または癌細胞の分子分析を受けることを必要としない。
【０００９】
多くの癌療法は細胞の成長または増殖の原因である、またはそれに関与する細胞因子を標的とするため、および／または多くの場合、癌がそれらの細胞決定基で薬物耐性を生じるため、生検により除去された癌細胞は、腫瘍マーカーの分子分析を頻繁に受ける。場合によっては、腫瘍細胞の分子プロファイルは、利用可能な治療に対する感受性または耐性の可能性を理解するために生成される。例示的な分子分析は、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦＲβ、ＣＤ３１、ＨＥＲ２、ＰＴＥＮ、ＥＲＣＣ１、ＢＲＣＡ１、ＴＯＰＯ２α、Ｋｉ−６７、Ｐ５３、ＴＳ、ＥＲ、ＰＲ、もしくはＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、およびＰＩ３Ｋのうちの１つ以上における突然変異のうちの１つ以上の存在または過剰発現を含む。様々な実施形態において本明細書に記載されるレジメンの有効性は、特定のバイオマーカーの突然変異の発現に依存しない。よって、いくつかの実施形態では、本方法は、癌療法に対する感受性または耐性を予測するための腫瘍の分子分析（例えば、成長因子もしくは成長因子受容体発現または過剰発現、腫瘍抑制因子タンパク質発現、アポトーシスマーカー発現、ＤＮＡ修復タンパク質発現、またはキナーゼ突然変異のうちの１つ以上に関して）を除外する。
【００１０】
これらまたは他の実施形態では、患者の腫瘍細胞は、インビトロ化学感受性分析を受けない。化学感受性アッセイは、インビトロ化学療法によって死滅する腫瘍細胞の数を測定する実験室試験である。例示的な化学感受性（または「化学応答」アッセイ）は、米国特許第ＵＳ２０１１／０２３８３２２号に記載されており、その説明は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。グリコシダーゼレジメンは腫瘍細胞に対して広範な有効性を有し、本明細書に記載されるように、実際に他の化学療法剤の有効性を増加させることができるため、化学感受性試験はあまり有用ではない。
【００１１】
他の実施形態では、患者は、従来の療法による生存の予後不良を有すると判断される。例えば、予後は、５年未満、３年未満、２年未満、または１年未満の生存（例えば、５０％超の可能性）と予測され得る。予後は、癌の種類の、放射線療法および／または化学療法に対する集団応答率を含む癌の種類に基づき、かつ／またはＶＥＧＦ、ＰＤＧＦＲβ、ＣＤ３１、ＨＥＲ２、ＰＴＥＮ、ＥＲＣＣ１、ＢＲＣＡ１、ＴＯＰＯ２α、Ｋｉ−６７、Ｐ５３、ＴＳ、ＥＲ、ＰＲ、またはＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、およびＰＩ３Ｋのうちの１つ以上における突然変異の発現レベルを含む、腫瘍細胞分子特性に基づき得る。あるいは、予後は、化学療法耐性、癌再発の可能性、または生存の高リスク群を示す癌の遺伝子発現シグネチャーに基づき得る。遺伝子発現シグネチャーは、療法に対する腫瘍応答を予測するため、および／または予後の腫瘍の他の分類にますます利用可能となっている。例示的な遺伝子発現シグネチャーは、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２２５９４号（結腸癌）、米国特許第ＵＳ８，２１１，６４３号（ＮＳＣＬＣ）、第ＵＳ２０１０−０３３１２１０号（乳癌）、米国特許第７，０５６，６７４号、米国特許第７，０８１，３４０号、米国特許第７，５６９，３４５号、および米国特許第７，５２６，３８７号に記載されており、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、予後は、一部、患者の状態および全体的な健康もしくは全身状態（以下にさらに詳細に記載される）に基づく。よって、いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、従来の療法単独で予後不良の患者に施与される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、グリコシドレジメンは、外科手術、放射線、または化学療法の必要性を実質的に低減または排除するために、早期癌の患者に施与される。例えば、レジメンは、１〜４ヶ月（例えば、１〜２ヶ月）間施与され、その後、患者は切除または化学療法を含む従来の療法の必要性を再評価され得る。再評価は、一般的に、腫瘍量、血液パネル（本明細書に記載される）、悪性マーカー、および患者の全体的な健康または状態における改善を含む。
【００１３】
様々な実施形態におけるグリコシダーゼレジメンは、疾病状態の進行を防止し、化学療法および／または放射線治療を受け入れる（または潜在的にそのような治療の必要性を回避する）患者の能力を強化するために、全身状態が高い患者（例えば、カルノフスキー採点システムを使用して少なくとも８０％、または少なくとも７０％）に施与される。例えば、これらの実施形態では、グリコシダーゼ療法の開始時点の患者は、歩行可能であり、自己ケアができる。また他の実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、従来の放射線療法および／または化学療法に耐えることができるように、全身状態が低い患者（例えば、カルノフスキー採点システムを使用して５０％未満、３０％未満、または２０％未満）に施与される。これらの実施形態では、グリコシダーゼ療法の開始時点の患者は、ほぼ寝たきりまたは椅子に座ったままであり、自己ケアさえできない。本明細書に記載されるグリコシダーゼレジメンは、従来の化学療法治療もしくは放射線治療を可能にする、または治療に耐える患者の能力を改善するために、患者の全身状態を増加させる（例えば、療法の１〜約６ヶ月後、または療法の１〜約４ヶ月後）能力を有し得る。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼ療法は、患者の進行期または全身状態により、放射線または化学療法に不適切であると思われる患者に施与される。そのような実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、それらの治療のために、彼らの身体の健康を強化する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも６５歳、または少なくとも７０歳、または少なくとも７５歳などの高齢者であり、よって、放射線および／または化学療法もしくは外科手術にあまり適していない可能性がある。
【００１５】
全身状態は、任意のシステムを使用して定量化することができる。患者の全身状態を採点するための方法は、当該技術分野において既知である。測定は、多くの場合、患者が化学療法を受けることができるか否かを判断するため、用量調節の調節、および緩和ケアの程度を判断するために使用される。カルノフスキースコアおよびズブロドスコアを含む様々な採点システムがある。並列採点システムには、精神医学の診断および統計マニュアル（ＤＳＭ）の第５軸として組み込まれた、機能の全体的評価（ＧＡＦ）スコアが含まれる。カルノフスキースコアは１００から０までであり、１００は「全く」健康であり、０は死亡である。スコアは、１０間隔で採用することができ、１００％は正常であり、症状がなく、疾患の兆候がない；９０％は、通常の活動ができ、疾患のいくつかの症状もしくは兆候がある；８０％は、ある程度の困難はあるが通常の活動ができ、いくつかの症状もしくは兆候がある；７０％は、自分でケアができるが通常の活動もしくは作業ができない；６０％は、ある程度の助けを必要とし、大半の個人の要求を処理することができる；５０％は、助けを必要とする場合が多く、医療ケアが頻繁に必要である；４０％は、障害を持ち、特別なケアが必要である；３０％は、重度の障害を持ち、入院が示されるが、死亡のリスクはない；２０％は、重病であり、早急に入院を必要とし、補助的な対策または治療を必要とする；そして１０％は、瀕死であり、急速に進行する致命的な疾患プロセスである。全身状態のズブロド採点システムでは、０は、十分活動的であり、制限されることなく全ての前疾患能力を実行することができる；１は、身体的に精力的な活動が制限されるが、歩行し、軽いもしくは座った姿勢の作業、例えば、軽い家事、オフィスワークを行うことができる；２は、歩行し、全ての自己ケアが可能だが、いずれの作業活動を行う、覚醒時間の約５０％超起きていることができない；３は、限定された自己ケアしかを行うことができず、覚醒時間の５０％超は寝たきりまたは椅子に座ったままである；４は、完全に障害を持ち、いずれの自己ケアを行うことができず、完全に寝たきりまたは椅子に座ったままである；５は死亡である。
【００１６】
本明細書に記載される方法は、固形腫瘍および白血病を含む、様々な癌に適用可能である。いくつかの実施形態では、癌は、極度にシアル化されるものである。様々な実施形態では、癌は、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、線維肉腫、筋肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、または上皮性癌である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は、漿液性腺癌、類内膜腺癌、粘液性腺癌、未分化腺癌、移行細胞腺癌、または腺癌である。例示的な癌は、ＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣを含む肺癌、中皮腫、脳癌、膠芽腫、頭頚部癌、食道癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵臓癌、肝癌、胃癌、腎癌、結腸または結腸直腸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣癌、および黒色腫を含む。また他の実施形態では、癌は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）などの白血病である。いくつかの実施形態では、癌は、転移性結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、切除不可能な肝癌または脳癌である。いくつかの実施形態では、癌が切除不可能な固形腫瘍である場合、グリコシダーゼレジメンは、経時的に（例えば、以下に記載されるように、少なくとも６ヶ月、または少なくとも１年の療法）腫瘍を減少させ、かつ／または排除する。
【００１７】
本発明は、癌の種類および期により異なり得る利点を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍は下層組織に浸潤しておらず、グリコシダーゼレジメンは、悪性病変の進行を防止し、さらなる浸潤を防止するのに有効である。また他の実施形態では、癌は、下層組織に浸潤しているが、局所リンパ節併発または転移がない。そのような実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、組織の浸潤の継続を防止する、または遅らせる。他の実施形態では、局所リンパ節併発があるが、遠位部位への転移がない。そのような実施形態では、グリコシダーゼレジメンにより完全な転移を回避する、または遅らせる。また他の実施形態では、治療レジメンは、複数の転移性病巣で免疫攻撃の刺激を助長する。理論に束縛されるものではないが、本発明のレジメンは、免疫細胞および／または血清タンパク質）の脱グリコシル化による免疫シグナル伝達における相補的増加により、癌細胞の直接インビボ脱グリコシル化の利益を平衡する。脱シアル化は脱グリコシル化投薬の用量および／または頻度によって有益な閾値内に保たれるため、正常な細胞機能に干渉する可能性がある実質的な脱グリコシル化の有意な有害作用は回避される。Ｖａｒｋｉ  ａｎｄ  Ｇａｇｎｅｕｘ，  Ｍｕｌｔｉｆａｒｉｏｕｓ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１２５３：１６−３６（２０１２）を参照。いくつかの実施形態では、適切なインビボ脱グリコシル化（例えば、脱シアル化）は、本明細書に詳細に記載される患者により調節された投薬により達成される。
【００１８】
患者ケアの文脈において、癌の期によりグリコシダーゼレジメンの適切な使用を判断することができる。図示のため、全体的な期の分類化を使用して、Ｉ期の癌は、身体の一部に限局され、ＩＩ期の癌は、ＩＩＩ期の癌と同様、局所的に進行している。癌がＩＩ期またはＩＩＩ期と称されるか否かは、癌の特定の種類に依存する場合があり、例えば、ホジキン病では、ＩＩ期は、横隔膜の片側のみのリンパ節が罹患していることを示し、一方、ＩＩＩ期は、横隔膜の上と下のリンパ節が罹患していることを示す。したがって、ＩＩおよびＩＩＩ期の特定の基準は、診断により異なる。ＩＶ期の癌は、転移しているか、または他の臓器もしくは身体全体に広がっている場合が多い。よって、いくつかの実施形態では、癌は、Ｉ期であり、局所的に進行していない。これらの実施形態によると、グリコシダーゼレジメンは、疾患の進行を防止し、いくつかの実施形態では、癌を排除することができ、いくつかの実施形態では、利益よりも害になる細胞傷害性化学療法、または外科手術なしで排除することができる。いくつかの実施形態では、癌は、ＩＩまたはＩＩＩ期である、つまり、癌は局所的に進行している場合がある。そのような実施形態では、本発明は、転移の防止を助長し、癌の進行を遅らせる、もしくは停止させるか、または腫瘍量を減少させ、患者の体の健康を向上させ、これは、化学療法、放射線療法、および／または切除をより有効にする。また他の実施形態では、癌は、ＩＶ期であるか、または転移性である。そのような実施形態では、レジメンは、転移の制御、減少、または排除、および腫瘍負荷の減少を助長する。各場合において、グリコシダーゼレジメンは、本明細書に記載される他の癌療法と併用して提供され得る。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、化学療法および／または放射線療法が推奨される用量で耐えることができるように患者の全身状態（例えば、全身状態）の向上を助長する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、癌は切除不可能であり、疾患の進行を防止する、または遅らせるためにグリコシダーゼレジメンが提供される。切除不可能な癌は、転移性病巣の数、または外科手術危険区域にあるためのいずれかにより、外科的に除去できない悪性病変である。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、化学療法および／または放射線治療前に患者を準備し、かつ／または腫瘍量を減少させ、必要とされる化学療法または放射線の線量を減少させる可能性がある。
【００２０】
いくつかの実施形態では、癌は、多剤耐性である。例えば、患者は、実質的な応答がなく、１回以上の化学療法サイクルを受けた可能性がある。あるいは、または加えて、腫瘍は、多剤耐性の１つ以上のマーカーを有する。そのようなマーカーは、化学応答（ｃｈｅｍｏｒｅｓｐｏｎｓｅ）アッセイまたは分子アッセイ（既に記載されるように含まれる）を含み得る。よって、本明細書で使用される、用語「多剤耐性」は、癌が併用化学療法の少なくとも１サイクルに非応答性を呈したか、あるいはドセタキセル、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、カルボプラチン、シスプラチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、オキサリプラチン、カルムスチン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、シクロホスファミド、イフォスファミド、トポテカン、エルロチニブ、エトポシド、およびマイトマイシン（比較可能な薬剤を含む）のうちの少なくとも２つに対して耐性として採点された（診断的に）ことを意味する。そのような実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、治療枠を増加させ、化学療法をより有効にし得る。
【００２１】
いくつかの実施形態では、患者は寛解にある。寛解を達成した患者に関して、従来の癌療法（グリコシダーゼ治療を用いて、またはそれなしで）によるか否かに関わらず、グリコシダーゼレジメンは、寛解期を維持する。そのような実施形態では、これらの患者は、再発を回避する、または遅らせるために、長期グリコシダーゼ治療を受けてよい。本明細書に記載される、長期治療は、正常な免疫機能に実質的に干渉することなく、１年間超、２年間超、５年間以上続く場合がある。
【００２２】
他の実施形態では、癌は、早期癌の従来の化学療法後の再発である。多くの場合、再発癌は、薬物耐性を発現し、よって、治療が特に困難であり、生存の予後不良となる場合が多い。そのような実施形態では、本明細書に記載されるグリコシダーゼレジメンは、他の療法と併用して、または併用せずに、生存を延ばし、よりよい生活の質のために効果のない化学療法による不必要な毒性を回避することができる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、放射線療法のために患者を準備するために施与されるか、または他の実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、患者の放射線療法からの回復を助長するために、放射線療法後に施与される。またあるいは、グリコシダーゼレジメンは、転帰を強化し、かつ／または副作用を低減するために、放射線治療レジメン中に施与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるレジメンは、カンジダ症、リンパ節腫脹、疱疹性感染、深層真菌感染、細菌感染、栄養障害、脱水症、口内乾燥症、および口腔粘膜炎（ＯＭ）から選択される、化学療法および／または放射線療法の副作用を予防する、または遅らせる。いくつかの実施形態のレジメンは、化学療法および／または放射線療法の中止および／または中断の必要性、ならびに放射線療法および／または化学療法治療レジメンの拒絶を減少させる。ある特定の実施形態では、本発明は、紅斑、浮腫、潰瘍形成、角化症、および患者の口腔内の偽膜性粘膜から選択される病態の発症を予防する、または遅らせる。
【００２４】
いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、口腔粘膜炎の発症を予防する、または遅らせるために提供される。口腔粘膜炎（ＯＭ）または口内炎は一般的であり、癌化学療法および放射線療法の衰弱性合併症である。ＯＭは、放射線療法および化学療法ならびに他の細胞傷害性療法の施与に応答して生じる口腔内の口腔粘膜および口腔内軟組織構造の炎症応答である。典型的には、頬および唇の内側表面、口底、舌の外側表面および舌の底部表面、ならびに軟口蓋を冒す。病変は、硬口蓋および舌の上側表面上にも生じ得る。具体的には、ＯＭは、口腔粘膜または口腔に指向された口腔毒性化学療法剤の全身作用および放射線の局所作用に起因する。粘膜炎は、化学療法または放射線療法の十分なレジメンに耐える患者の能力を限定する可能性があり、それによって、治療の有効性に影響を及ぼす。さらに、化学療法および放射線療法に起因する口腔粘膜の損傷および免疫の低下を伴う患者は、口の日和見感染も起こしやすい。したがって、ＯＭができる限り予防または低減されることが重要である。よって、本発明のこれらの態様により、患者は、十分な栄養状態を維持することにより、およびＯＭに関連する著しい痛みおよび不快を回避することにより、予定された治療過程をより完了することができる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、患者は、頭頚部癌の放射線療法を受ける。例えば、癌は、口腔、中咽頭、下咽頭、または喉頭の扁平上皮細胞癌であってよい。他の実施形態では、頭頚部癌は、唾液腺腫瘍、リンパ腫、または肉腫である。患者は、１つの、または複数の口腔部位の放射線手術を必要とし得る。そのような腫瘍を標的とする放射線療法は、（従来）ＯＭを誘発する作用を有する。
【００２６】
そのような放射線療法に加えて、またはその代替えとして、いくつかの実施形態では、患者は、従来粘膜炎を誘発する（口腔毒素（ｓｔｏｍａｔｏｔｏｘｉｎ））化学療法などの化学療法レジメンを受けることができる。化学療法は、これらに限定されないが、例えば、パクリタキセル、ドキソルビシン、ミトラマイシン、ドセタキセル、白金系化学療法剤（これらに限定されないが、シスプラチンおよびカルボプラチンを含む）、マイトマイシン、メトトレキサート、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ビノレルビン、トポテカン、イリノテカン、ブレオマイシン、ブレオマイシンヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｒｘｙｕｒｅａ）、マイトマイシン、アクチノマイシン、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅｓ）、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン、エトポシド、テニポシド、ルビテカン、およびこれらの誘導体であってよい。化学療法は、タキサンおよび／もしくは代謝拮抗薬ならびに／またはこれらの誘導体を含み得る。
【００２７】
頭頚部に対して従来の放射線療法を受ける患者は、典型的には、療法開始から約２週間以内に紅斑および口の痛みを感じ、次の２週間以内に口腔上皮により重度の損傷を生じる場合が多い。化学療法および放射線療法の両方が施与される場合、口腔粘膜炎の発生率および重度は、悪化し得る。
【００２８】
グリコシダーゼレジメンは、放射線療法の準備のために施与される、放射線療法と共に、または放射線療法後の回復のために施与され得る。放射線療法は、体外ビーム療法（ＥＢＴ）または強度調節された放射線療法（ＩＭＲＴ）を含み得る。ＥＢＴは、高エネルギーＸ線のビームを腫瘍の位置に送達する。ビームは、患者の体外で発生させ（通常、線形加速器により）、腫瘍部位を標的とする。これらのＸ線は、癌細胞を破壊することができ、慎重な治療計画は周囲の正常な組織を残すことを可能にする。放射能源は患者の身体内に設置されない。ＩＭＲＴは、正確な放射線量を悪性腫瘍または腫瘍内の特定の領域に送達するために、コンピュータ制御Ｘ線加速器を利用する先端モードの高精密放射線療法である。放射線量は、健康な細胞に対する放射線照射を最小にしながら、腫瘍に高放射線量を集中させるために、放射線ビームの強度を調節または制御することにより、腫瘍の３次元（３−Ｄ）形状に一致するように設計される。一時的または永久のいずれかであってよい治療領域内に移植される密封された放射能源を使用する密封小線源療法も採用することができる。
【００２９】
典型的には、放射線治療は、１日１回または２回、５〜７週間の間、１週間に約５日与えられる。本発明のある特定の実施形態では、放射線療法過程は、持続期間が３〜１０週である。放射線療法過程は、持続期間が約５〜約７週であってよい。放射線療法過程は、１週間に約５〜約１５回の放射線治療を伴い得る。放射線療法過程は、１週間に約７〜約１０回の放射線治療を伴い得る。患者は、５〜約７週間の間、１日に１回または２回、１週間に少なくとも５日受けることができる。
【００３０】
頭頚部癌が懸念される場合、放射線療法過程は、少なくとも１つの口腔部位に対して少なくとも約３０Ｇｙの蓄積量を伴い得る。いくつかの実施形態では、放射線療法過程は、少なくとも１つの口腔部位に対して少なくとも約４０Ｇｙ、約５０Ｇｙ、約６０Ｇｙ、または約７０Ｇｙの蓄積量である。よって、放射線療法過程は、少なくとも１つの口腔部位に対して約５０〜約７５Ｇｙの蓄積量を伴い得る。そのような実施形態では、１日１回の照射は、少なくとも１つの口腔部位に対して約１．５Ｇｙ〜約２．５Ｇｙである。勿論、毎日の照射および蓄積量は、３または４つの口腔部位を含む２つ以上の口腔部位に指向され得る。
【００３１】
いくつかの実施形態では、患者は、化学療法および放射線療法の両方を受ける。化学療法は、これらに限定されないが、タキサン、代謝拮抗薬、および／または抗生物質を含む、口腔毒素化合物を伴い得る。様々な実施形態では、化学療法は、シスプラチン、フルオロウラシル、カルボプラチン、および／またはパクリタキセルの投与を含む。化学療法がシスプラチンを含む場合、患者は、１ヶ月に２〜約４回、約８０〜約１００ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを受容することができる。例えば、患者は、約３週間毎（３週間に１回）に約８０〜約１００ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを受容することができる。シスプラチンがほぼ週線量で投与される場合、線量は、約３０〜４０ｍｇ／ｍ２の範囲であってよい。
【００３２】
他の実施形態では、化学療法は、放射線療法過程前に行う場合よりも有効であり得るため、放射線療法過程中に行うことができる。特に、癌が進行している場合（進行ＩＩＩ期またはＩＶ期）、放射線治療のスケジュールは、時折、化学療法を含む。放射線療法と併用して最も一般的に与えられる薬物は、シスプラチン（プラチノール）およびセツキシマブ（アービタックス）である。時々、他の薬物としては、フルオロウラシル（５−ＦＵ、アドルシル）、カルボプラチン（パラプラチン）、およびパクリタキセル（タキソール）を含み得る。化学療法は、低い日用量、適度に低い週用量、または３〜４週毎に比較的高い用量を含む、様々な方法で行われ得る。
【００３３】
グリコシダーゼのレジメンは、毎日の放射線治療、または各放射線治療の（ほぼ）前、および／または化学療法施与過程中の線量を含み得る。ある特定の実施形態では、グリコシダーゼの用量は、比較的一定したレベルのグリコシダーゼシグナル伝達を維持するために、放射線および／または化学療法が施与されない日にも投与される。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、患者の免疫系が実質的に正常である場合、放射線および／または化学療法治療の開始前に開始される（例えば、放射線および／または化学療法薬治療を開始するまでの約２週間、または約１ヶ月）。これらの実施形態では、グリコシダーゼ治療が療法を通して続けられる場合、患者の免疫系は、放射線および／または化学療法の攻撃に耐えることができたほうがよい。
【００３４】
グリコシダーゼレジメンは、化学療法および／または放射線療法に関連するある程度の副作用および毒性を低減し、患者の全体的な状態を改善する作用を有するため、いくつかの実施形態では、患者は、放射線療法過程中、胃瘻造設栄養管を必要としない。いくつかの実施形態では、患者は、放射線療法の少なくとも最初の３週間の間、または放射線療法の少なくとも最初の５週間の間、オピオイドを投与されないか、または放射線療法過程中オピオイドを投与されない。オピオイドは、ブプレノルフィン、コデイン、フェンタニール、およびモルヒネなどの薬物を含む。様々な実施形態では、予定された放射線療法および／または化学療法過程は、毒性または患者の不快により中断されない。他の実施形態では、本レジメンは、療法の不快または合併症による病院および／またはクリニックへの訪問の回数および／または頻度を低減する。また他の実施形態では、本方法は、化学療法および／または放射線療法の停止および／または中断の必要性を低減する。さらに他の実施形態では、本発明の方法は、放射線療法および／または化学療法治療レジメンの拒絶を減少させる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、任意にネオアジュバント化学療法と共に、腫瘍切除前に施与される。よって、ある特定の実施形態では、患者は、癌組織を除去するために外科手術を受けなかったが、任意の外科手術前に腫瘍を縮小し、かつ／または期を下げるために化学療法を受ける。用語「ネオアジュバント化学療法」は、外科手術前に癌患者に施与される化学療法を意味する。ネオアジュバント化学療法が通常考慮される癌の種類は、例えば、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、頚部癌、膀胱癌、および肺癌を含む。ある特定の実施形態では、患者は、ネオアジュバント化学療法を受ける乳癌患者である。そのような実施形態では、グリコシダーゼ治療レジメン（ネオアジュバント療法と共に、またはその前に行われる）は、ネオアジュバント療法の有効性を強化し、同時に、患者が免疫機能を維持すること、および外科手術の介入（必要な場合）の準備を助長する。これらの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、ネオアジュバント化学療法の１〜４週間前に提供され得る。勿論、本明細書に記載される様々な実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、外科手術前に腫瘍量を減少させるための唯一のネオアジュバント療法である。これらの実施形態では、レジメンは、腫瘍の最適な縮小の達成を助長する。
【００３６】
また他の実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、任意に、アジュバント化学療法と共に、腫瘍切除後に施与される。そのような実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、療法の成功の可能性を増加するか、または再発までの時間を増大する。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、最適な縮小状態の患者に施与される。他の実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、準最適な縮小状態の患者に施与される。縮小状態は、外科手術または放射線治療による腫瘍サイズの減少を意味する。縮小状態は、例えば、最適または準最適のように、断定的に採点され得る。最適なスコアは、放射線および／または外科手術後の残存疾患が約１ｃｍ未満である患者を含む。準最適スコアは、放射線および／または外科手術後の残存疾患が約１ｃｍより大きい患者を含む。縮小後、特に縮小状態が最適ではない場合、グリコシダーゼレジメンは、化学療法または放射線療法が外科手術後に提供される場合を含む、実質的な腫瘍の再成長または疾患の進行の予防を助長する。
【００３７】
グリコシダーゼレジメンに加えて、患者は、アントラサイクリン、タキソールもしくはタキソイド、ビンカアルカロイド、アルキル化剤、挿入剤、キナーゼ阻害剤、またはナイトロジェンマスタードから選択される化学療法を受けることができる。例示的な薬剤としては、トポイソメラーゼ阻害剤（ＩまたはＩＩ）、アポトーシス誘発剤、プロテアーゼ阻害剤、微小管阻害剤、有糸分裂阻害剤、代謝拮抗薬、シグナル伝達阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはアロマターゼ阻害剤が挙げられる。
【００３８】
例示的な化学療法剤としては、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アドリアマイシン、ビンクリスチン、カルムスチン、シスプラチン、５−フルオロウラシル、タモキシフェン、プロダソン、サンドスタチン、マイトマイシンＣ、ホスカルネット、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、フルダラビン、カルボプラチン、ロイコボリン、タモキシフェン、ゴセレリン、ケトコナゾール、ロイプロリド、フルタミド、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン塩酸塩、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アムサクリン、メルバロン、ピロキサントロン塩酸塩、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、トリメトレキサート、アシビシン、アラノシン、ピラゾフリン、ペントスタチン、５−アザシチジン、５−アザシチジン、５−アザ−５−アザ−２'−デオキシシチジン、アデノシンアラビノシド（Ａｒａ−Ａ）、クラドリビン、フトラフル、ＵＦＴ（ウラシルとフトラフルの組み合わせ）、５−フルオロ−２'−デオキシウリジン、５−フルオロウリジン、５'−デオキシ−５−フルオロウリジン、ヒドロキシ尿素、ジヒドロレンチオランブシル（ｄｉｈｙｄｒｏｌｅｎｃｈｉｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、チアゾフリン、オキサリプラチン、メルファラン、チオテパ、ブスルファン、クロラムブシル、プリカマイシン、ダカルバジン、イフォスファミドリン酸塩、シクロホスファミド、ピポプロマン、４−イポメアノール、ジヒドロレンペロン（ｄｉｈｙｄｒｏｌｅｎｐｅｒｏｎｅ）、スピロマスチン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ゲルデナマイシン（ｇｅｌｄｅｎａｍｙｃｉｎ）、サイトカラシン、デプシペプチド、４'−シアノ−３−（４−（例えば、Ｚｏｌａｄｅｘ）、および４'−シアノ−３−（４−フルオロフェニルスルホニル）−２−ヒドロキシ−３−メチル−３'−（トリフルオロメタ−イル）プロピオンアニリドのうちの１つ以上が挙げられる。
【００３９】
いくつかの実施形態では、患者は、ハーセプチンなどの抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体、アービタックスなどの抗ＥＧＦＲ抗体、アバスチンなどの成長因子受容体抗体、タルセバ、イレッサ、もしくはスニチニブなどの小分子阻害剤）、またはリツキサンなどの抗ＣＤ２０のうちの１つ以上を受容する。また他の実施形態では、患者は、エルロチニブ、ゲフィニチブ、ラパチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、またはイマチニブを受容する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、化学療法は、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、およびエトポシドのうちの１つまたはこれらの組み合わせなどの口腔毒性化学療法である。
【００４１】
また他の実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、化学療法の代替えとして施与される。そのような実施形態では、患者は、薬物耐性の分子マーカーの存在または患者の病態などの他のリスク因子のいずれかにより、化学療法治療の候補にはならない場合がある。
【００４２】
化学療法が施与される場合、グリコシダーゼレジメンは、化学療法サイクルの前、化学療法サイクルの合間、または化学療法完了後に施与することができる。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、化学療法の開始前に開始され、レジメンは化学療法サイクルを通して継続される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、処置のために患者を準備することを助長するため、または免疫系の回復を助長するために、患者は骨髄移植を受け、移植前および／または移植後にグリコシダーゼレジメンが提供される。
【００４４】
また他の実施形態では、患者は、グリコシダーゼ自体の免疫攻撃の誘発を回避するために、任意の追加の免疫刺激剤（例えば、グリコシダーゼ療法以外）を受容しない。例えば、いくつかの実施形態では、グリコシダーゼ投与の約１〜２週間内の癌ワクチンまたは免疫アジュバントもしくは免疫刺激剤（薬草刺激剤およびビタミンＣ補助剤を含む）は避けられる。
【００４５】
また他の実施形態では、グリコシダーゼ治療は、樹状細胞ワクチンであってよい癌ワクチンと併用して施与される。抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、Ｔ細胞の抗原特異的プライミングに重要であり、樹状細胞（ＤＣ）は、最も強力な刺激ＡＰＣである。ＤＣは細胞の異種集団であり、骨髄（ＢＭ）および末梢血前駆体の両方から区別することができる。ＤＣは、Ｔ細胞媒介抗腫瘍免疫の発生に関して、少なくとも５つの重要な特性を呈する。いくつかの腫瘍関連抗原は、ＤＣ系ワクチン接種戦略において潜在的免疫原として特定されてきた。そのような腫瘍拒絶抗原は、例えば、癌遺伝子（ｒａｓ）、過剰発現遺伝子（ＨＥＲ−２／ｎｅｕ）、胚遺伝子（ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ）、正常な分化遺伝子（ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、チロシナーゼ）、ウイルス遺伝子（ＨＰＶ）、腫瘍抑制因子遺伝子（ｐ５３）、Ｂ細胞イディオタイプ、および他の腫瘍関連タンパク質（ＰＳＭＡ、ＭＵＣ１）に由来する。本明細書に記載されるグリコシダーゼレジメンは、抗腫瘍ワクチン接種、特に腫瘍抗原提示を必要とするワクチン接種を用いた成功例を改善することができる。しかしながら、また他の実施形態では、グリコシダーゼ療法は、免疫療法前（例えば、癌免疫療法の１週間以内）または免疫療法後（例えば、１週間以内）のいずれかに施与されるが、グリコシダーゼ酵素に対する免疫反応を回避するために、免疫療法と同時に施与されない。
【００４６】
よって、いくつかの実施形態では、グリコシダーゼ療法は、免疫調節剤または免疫チェックポイント阻害剤を含む癌免疫療法と共に提供される。例えば、グリコシダーゼ療法は、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（アバタセプト）を用いた治療前、治療中、または治療後に施与される。
【００４７】
いくつかの態様では、本発明は、癌を発症する傾向がある患者において、癌を予防する方法を提供し、免疫寛容性グリコシダーゼレジメンを患者に施与することを含む。いくつかの実施形態では、患者は、任意に、乳癌、結腸癌、または皮膚癌である癌の遺伝的素因により特徴付けられる。例えば、患者は、癌を患った少なくとも２人の近親がいる可能性があるか、または患者は、癌を少なくとも２回発症したが、グリコシダーゼ治療が開始される時期には癌がない状態である。
【００４８】
グリコシダーゼレジメンは、哺乳類細胞（例えば、癌細胞および／または免疫細胞）上の１つ以上の末端および／または最後から２番目のグリコシル基の除去に活性な１つ以上のグリコシダーゼ酵素を提供する。そのような末端および最後から２番目のグリコシル基は、例えば、シアロシル、ガラクトシル、Ｎ−アセチルガラクトサミノ、フコシル、グルコシル、Ｎ−アセチルグルコサミノ、およびマンノシル残基を含む。よって、様々な実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、ノイラミニダーゼ、ガラクトシダーゼ（例えば、β−ガラクトシダーゼ）、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、フコシダーゼ、グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、およびマンノシダーゼのうちの１つ以上を含み得る。
【００４９】
いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、ノイラミニダーゼ治療を含む。ノイラミニダーゼ療法は、ノイラミニダーゼもしくはノイラミニダーゼ（シアリダーゼ）活性を有する精製された画分、またはその活性部分もしくは活性誘導体を採用し得る。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼは微生物（例えば、細菌、ウイルス、寄生虫、または真菌源）である。また他の実施形態では、ノイラミニダーゼは哺乳類または植物である。ノイラミニダーゼは、パン酵母ならびにラクトコッカス種およびラクトバチルス種を含む食品に用途が見出される微生物を含む食品材料から精製され得る。ある特定の実施形態では、ノイラミニダーゼは細菌性である。ノイラミニダーゼはその天然源から精製もしくは単離されるか、または組換えもしくは合成（例えば、化学的に合成される）であってよい。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼは、宿主細胞およびウイルスの表面上の末端シアル酸残基を炭水化物部分から切断する、エクソ−α−シアリダーゼ、α−Ｂ群、またはアセチルＢ群として知られるγ−Ｂ群ノイラミニダーゼである。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼは、オリゴ糖、糖脂質、およびコロミン酸における末端シアル酸残基のα−２，３、α−２，６、および／またはα−２，８グリコシド連結の加水分解を触媒する。
【００５０】
例えば、様々な実施形態では、ノイラミニダーゼは、例えば、末端シアル酸残基のα−（２→３）、α−（２→６）、および／もしくはα−（２→８）グリコシド連結のエクソ加水分解を触媒するか、またはオリゴ−もしくはポリ（シアル）酸における（２→８）−α−シアロシル連結のエンド加水分解を触媒するエンドまたはエクソシアリダーゼである。例示的なノイラミニダーゼ剤としては、優に１００を超える既知のノイラミニダーゼ酵素、またはその活性部分もしくは誘導体のいずれかが挙げられる。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼは、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ）、アルスロバクター・ウレアファシエンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ）、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、またはストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、または活性が十分に特徴付けされた他のもののうちの１つ以上からの酵素である。そのようなノイラミニダーゼ酵素は、その微生物源から精製もしくは単離されるか、または組換えもしくは合成により生成され得る。Ｃａｓｓｉｄｙ  ＪＴ，Ｔｈｅ  Ｓｉａｌｉｃ  Ａｃｉｄｓ−ＶＩ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４０：９：３５０１−３５０６（１９６５）、Ｃｒｅｎｎｅｌｌ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ  ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｄｕａｌ  ｌｅｃｔｉｎ−ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｉｎ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｄｏｍａｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：５３５−５４４（１９９４）、Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ．Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０６：１０８６−１０８９（１９７９）を参照し、これらの参照は、参照により本明細書に組み込まれる。精製された形態である場合、ノイラミニダーゼは、組成物のタンパク質成分の少なくとも１０％、組成物のタンパク質成分の少なくとも２５％、組成物のタンパク質成分の５０％、もしくは総タンパク質成分の少なくとも７５％、または総タンパク質成分の少なくとも９０％、もしくは総タンパク質成分の少なくとも９５％、もしくは総タンパク質成分の少なくとも９９％である。
【００５１】
ノイラミニダーゼタンパク質の例示的なアミノ酸配列としては、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＥＩＡ１７６０９．１、ＥＩＡ１７９７７．１、ＮＰ＿５６１４６９．１、ＣＡＡ５０４３６．１、（クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ））、ＡＡＸ２２７５８．１、ＢＡＤ６６６８０．２（アルスロバクター・ウレアファシエンス）、ＡＡＷ３１７５１．２、ＡＡＡ２７５４６．１、ＡＥＡ７８７６１．１（ビブリオ・コレラエ）、２ＶＷＯ＿Ａ（ストレプトコッカス・ニューモニエ）、およびＡＡＬ１９８６４（サルモネラ・ティフィムリウム）により定義されるものが挙げられ、それら各々は、参照により本明細書に組み込まれる。ノイラミニダーゼは、ＥＩＡ１７６０９．１、ＥＩＡ１７９７７．１、ＮＰ＿５６１４６９．１、ＣＡＡ５０４３６．１、ＡＡＸ２２７５８．１、ＢＡＤ６６６８０．２、ＡＡＷ３１７５１．２、ＡＡＡ２７５４６．１、ＡＥＡ７８７６１．１、２ＶＷＯ＿Ａ、およびＡＡＬ１９８６４により定義されるアミノ酸配列のうちの１つ以上に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％以上のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。さらなるノイラミニダーゼ酵素は、米国特許第８，０１２，７３３号、米国特許第６，９１６，９１６号、米国特許第５，９８５，８５９号、米国特許第５，８３０，７４８号、および米国特許第４，０７１，４０８号に記載され、これらの記載は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００５２】
好適なノイラミニダーゼは、商業的な供給源から得ることができる。例示的なノイラミニダーゼ酵素としては、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈの製品番号Ｎ２８７６、Ｎ３００１、Ｎ５６３１、Ｎ２１３３（クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ））、Ｎ７８８５、Ｎ６５１４（ビブリオ・コレラエ）、Ｎ３７８６、およびＮ８２７１（アルスロバクター・ウレアファシエンス）が挙げられる。
【００５３】
これらの誘導体もしくは変異体または他のノイラミニダーゼ酵素の調製は、Ｋｉｍ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｉａｌｉｄａｓｅｓ，Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１，９１（１）：１−１５、Ｃｒｅｎｎｅｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  （ｆｒｏｍ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ  ＬＴ２）  ｓｈｏｗｓ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｆｏｌｄ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９３  ９０（２１）：９８５２−６、Ｃｈａｖａｓ  ＬＭ，Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  Ｎｅｕ２：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００５  ２８０（１）：４６９−７５、Ｘｕ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮａｎＢ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００８  ３８４（２）：４３６−４９、Ｎｅｗｓｔｅａｄ  ＳＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ  ＮａｎＩ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００８  ２８３（１４）：９０８０−８、Ｃｈａｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｎｄ  ｖｉｒａｌ  ｓｉａｌｉｄａｓｅｓ：ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｔｏ  ｃａｔａｌｙｓｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１２  ５１（１）：４３３−４１、Ｃｈｉｅｎ  ＣＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ａｎｄ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｇｅｎｅ，ｎａｎＨ，ｏｆ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ  ＡＴＣＣ  １０５４３，Ｅｎｚｙｍｅ  Ｍｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９（４）：２６７−２７６（１９９６）、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ａｎｄ  Ｅｇｅｂｊｅｒｇ，Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｆｒｏｍ  Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：２２５−２３１（２００５）に記載されるものを含む、既知の構造または研究のいずれかにより指導され得る。これらの参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００５４】
ノイラミニダーゼ活性は、一般に、定義された条件下で（例えば、ｐＨ５．０および３７℃）、好適な基質から放出されるシアル酸の量を決定することによって、単位（Ｕ）で記載され得る。例示的な基質は、ＮＡＮ−ラクトースまたはウシ顎下腺ムチンである。Ｗａｒｒｅｎ  Ｌ，Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３４  １９７１（１９５９）を参照。
【００５５】
これらおよび他の独立した実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、ガラクトシダーゼの施与を含み、これは、いくつかの実施形態では、β−ガラクトシダーゼである。ガラクトシダーゼは、２つ以上のグリコシダーゼ酵素を含む実施形態において、ノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他の酵素と共製剤化され得る。α−またはβ−ガラクトシル残基（１→３連結および１→４連結を含む）は、癌細胞および免疫細胞を含む哺乳類細胞上の末端グリコシドとして作用し、かつ／または最後から２番目のグリコシル残基であってよく、いくつかの場合において、末端シアル酸に連結され得る。Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ａｂｅｒａｎｔ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｓ  Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４５，２４０５−２４１４  （１９８５）、Ｄｗｅｋ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｈａｒｎｅｓｉｎｇ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：４２５−４４２（２００４）。よって、ガラクトシダーゼ（例えば、β−ガラクトシダーゼ）は、本明細書に記載される方法により、独立して使用されるか、またはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）もしくは他のグリコシダーゼと併用して使用され得、これは、いくつかの実施形態では、グリコシル構造の再シアル化または再キャッピングを防止するか、または遅らせ、よって、レジメンをより有効にし、投与頻度の減少および／または投薬の低下を支持する。
【００５６】
例示的なガラクトシダーゼは周知であり、商業的に入手可能である。例えば、β−ガラクトシダーゼは、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クリベロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、およびストレプトコッカス・ニューモニエ、ならびに他の微生物（例えば、細菌または真菌）および哺乳類源を含む生物源から得ることができる。例えば、好適なβ−ガラクトシダーゼは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｇ５６３５から得ることができる。
【００５７】
これらおよび他の独立した実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼの施与を含む。２つ以上のグリコシダーゼ酵素を含む実施形態において、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼは、ノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他の酵素と共製剤化され得る。Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ａｂｅｒａｎｔ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｓ  Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４５，２４０５−２４１４  （１９８５）、Ｄｗｅｋ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｈａｒｎｅｓｉｎｇ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：４２５−４４２（２００４）。Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼは、本明細書に記載される方法により独立して使用されるか、またはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他のグリコシダーゼと併用して使用され得、これは、いくつかの実施形態では、グリコシル鎖の再シアル化もしくは再キャッピングを防止するか、または遅らせる。
【００５８】
例示的なＮ−アセチルガラクトサミニダーゼは周知であり、商業的に入手可能である。例えば、β−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼは、バチルス種ならびに他の微生物（例えば、細菌または真菌）および哺乳類源を含む生物源から得ることができる。例えば、好適なβ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ａ２４６４から得ることができる。
【００５９】
これらおよび他の独立した実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、フコシダーゼの施与を含み、これは、いくつかの実施形態では、α−フコシダーゼである。２つ以上のグリコシダーゼ酵素を含む実施形態において、フコシダーゼは、ノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他の酵素と共製剤化され得る（例えば、ガラクトシダーゼまたはＮ−アセチルガラクトサミニダーゼと共製剤化され得る）。フコシル残基（α  １→２連結、α  １→３連結、およびα  １→４連結を含む）は、癌細胞および免疫細胞を含む哺乳類細胞上の末端グリコシドとして作用し、かつ／または最後から２番目のグリコシル残基であってよく、いくつかの場合において、末端シアル酸に連結され得る。Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ａｂｅｒａｎｔ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｓ  Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４５，２４０５−２４１４  （１９８５）、Ｄｗｅｋ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｈａｒｎｅｓｉｎｇ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：４２５−４４２（２００４）。よって、フコシダーゼ（例えば、α−フコシダーゼ）は、本明細書に記載される方法により独立して使用されるか、またはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）と併用して使用され得、これは、いくつかの実施形態では、グリコシル鎖の再シアル化、再キャッピングを防止するか、または遅らせ、よって、レジメンをより有効にし、投与頻度の減少および／または投薬の低下を支持する。
【００６０】
例示的なフコシダーゼ酵素は周知であり、商業的に入手可能である。例えば、α−フコシダーゼは、キサントモナス種（例えば、マニホチス（ｍａｎｉｈｏｔｉｓ））ならびに他の微生物（例えば、細菌または真菌）および哺乳類源を含む生物源から得ることができる。例えば、好適なα−フコシダーゼは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｆ３０２３およびＦ１９２４から得ることができる。
【００６１】
これらおよび他の独立した実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、グルコシダーゼの施与を含み、これは、いくつかの実施形態では、α−グルコシダーゼである。２つ以上のグリコシダーゼ酵素を含む実施形態において、グルコシダーゼは、ノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他の酵素と共製剤化され得る（例えば、ノイラミニダーゼ、マンノシダーゼ、またはＮ−アセチルグルコサミニダーゼと共製剤化され得る）。グリコシル残基（α  １→２連結、α  １→３連結、およびα  １→４連結を含む）は、癌細胞および免疫細胞を含む哺乳類細胞上の末端グリコシドとして作用し、かつ／またはいくつかの場合においては、内部グリコシル残基であってよい。Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ａｂｅｒａｎｔ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｓ  Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４５，２４０５−２４１４  （１９８５）、Ｄｗｅｋ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｈａｒｎｅｓｉｎｇ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：４２５−４４２（２００４）。よって、グルコシダーゼ（例えば、α−グルコシダーゼ）は、本明細書に記載される方法により独立して使用されるか、またはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）、マンノシダーゼ、または他のグリコシダーゼと併用して使用され得、これは、いくつかの実施形態では、グリコシル鎖の再シアル化、再キャッピングを防止するか、または遅らせ、よって、レジメンをより有効にし、投与頻度の減少および／または投薬の低下を支持する。
【００６２】
例示的なグルコシダーゼ酵素は周知であり、商業的に入手可能である。例えば、α−グルコシダーゼは、サッカロマイセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、またはバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ならびに他の微生物（例えば、細菌または真菌）および生物源（米などの食物源を含む）から得ることができ、哺乳類源を含む。例えば、好適なα−グルコシダーゼは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｇ５００３、Ｇ０６６０、７０７９７、４９２９１、Ｇ９２５９、およびＧ３６５１から得ることができる。
【００６３】
これらおよび他の独立した実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼの施与を含み、これは、いくつかの実施形態では、β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼである。２つ以上のグリコシダーゼ酵素を含む実施形態において、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼは、ノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他の酵素と共製剤化され得る（例えば、ノイラミニダーゼ、マンノシダーゼ、および／またはグルコシダーゼと共製剤化され得る）。Ｎ−アセチルグルコサミン残基（β１→４連結、β１→６連結、およびその他）は、癌細胞および免疫細胞を含む哺乳類細胞上の末端グリコシドとして作用し、かつ／またはいくつかの場合においては、最後から２番目または内部グリコシル残基であってよい。Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ａｂｅｒａｎｔ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｓ  Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４５，２４０５−２４１４  （１９８５）、Ｄｗｅｋ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｈａｒｎｅｓｉｎｇ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：４２５−４４２（２００４）。よって、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（例えば、β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ）は、本明細書に記載される方法により独立して使用されるか、またはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）、マンノシダーゼ、またはグルコシダーゼと併用して使用され得、これは、いくつかの実施形態では、グリコシル鎖の再シアル化、再キャッピングを防止するか、または遅らせ、よって、レジメンをより有効にし、投与頻度の減少および／または投薬の低下を支持する。
【００６４】
例示的なＮ−アセチルグルコサミニダーゼ酵素は周知であり、商業的に入手可能である。例えば、β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼは、ストレプトコッカス・ニューモニエおよびタチナタマメ（Ｃａｎａｖａｌｉａ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ）ならびに他の微生物（例えば、細菌または真菌）および生物源（食物源を含む）から得ることができ、哺乳類源を含む。例えば、好適なβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ａ２２６４およびＡ６８０３から得ることができる。
【００６５】
これらおよび他の独立した実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、マンノシダーゼの施与を含み、これは、いくつかの実施形態では、α−マンノシダーゼである。２つ以上のグリコシダーゼ酵素を含む実施形態において、マンノシダーゼは、ノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）または他の酵素と共製剤化され得る（例えば、ノイラミニダーゼ、グルコシダーゼ、および／またはＮ−アセチルグルコサミニダーゼと共製剤化され得る）。マンノシル残基（α  １→２連結、α  １→３連結、α  １→６連結、β１→４連結、およびその他）は、癌細胞および免疫細胞を含む哺乳類細胞上の末端グリコシドとして作用し、かつ／またはいくつかの場合においては、最後から２番目または内部グリコシル残基であってよい。Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ａｂｅｒａｎｔ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ａｓ  Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４５，２４０５−２４１４（１９８５）、Ｄｗｅｋ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｈａｒｎｅｓｉｎｇ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ４：４２５−４４２（２００４）。よって、マンノシダーゼ（例えば、α−マンノシダーゼ）は、本明細書に記載される方法により独立して使用されるか、またはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）、グルコシダーゼ、および／またはＮ−アセチルグルコサミニダーゼと併用して使用され得、これは、いくつかの実施形態では、グリコシル鎖の再シアル化、再キャッピングを防止するか、または遅らせ、よって、レジメンをより有効にし、投与頻度の減少および／または投薬の低下を支持する。
【００６６】
例示的なマンノシダーゼ酵素は周知であり、商業的に入手可能である。例えば、マンノシダーゼは、タチナタマメ（α）またはリンゴマイマイ（Ｈｅｌｉｘ  ｐｏｍａｔｉａ）（β）ならびに他の微生物（例えば、細菌または真菌）および生物源（食物源を含む）から得ることができ、哺乳類源を含む。例えば、好適なマンノシダーゼは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｍ７２５７またはＭ９４００から得ることができる。
【００６７】
理論に束縛されるものではないが、様々な実施形態では、ノイラミニダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、α−マンニダーゼ（ｍａｎｎｉｄａｓｅ）、フコシダーゼ（ならびに本明細書に記載されるものを含む、他のグリコシダーゼ酵素）のうちの１つ以上を含み得るグリコシダーゼレジメンは、ビタミンＤ結合タンパク質（基特異的成分、またはＧｃとしても知られる）を、インビボで有効なマクロファージ活性化因子に変換し、マクロファージの活性化をもたらす。例えば、米国特許第５，３２６，７４９号（参照により本明細書に組み込まれる）、Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１５１：２７９４−２８０２（１９９３）を参照。ＤＢＰとしても知られるビタミンＤ結合タンパク質は、進化的に保存された糖タンパク質であり、遺伝学的に多型である。ＤＢＰは、約５２，０００の相対分子量を有し、通常、約０．５％の血漿タンパク質を構成する。本明細書に記載される適切な用量およびレジメンは、インビボでＤＢＰを脱グリコシル化し、有効な、一貫した、長期インビボマクロファージ活性化および抗腫瘍活性をもたらす。
【００６８】
有効量の製剤化されたグリコシダーゼの、ヒトまたは動物への投与は、免疫機能および／または癌細胞もしくは他の組織、または病理に関与する他の組織もしくは細胞に対する直接作用、ならびに血清タンパク質の脱グリコシル化の調節を通して癌の症状の予防または排除に役立つ。様々な実施形態では、グリコシダーゼ酵素は、正常な細胞機能に影響を及ぼすことなく、癌の症状または病理の減少を呈するような用量および頻度で投与される。
【００６９】
いくつかの実施形態では、投与の用量および／または頻度は、遷延性の関節不快または倦怠（例えば、全身の不快感、または１つ以上の関節における関節炎の感覚）を引き起こさない用量および／または頻度である。患者が関節または全身の不快を感じる場合、不快が治まる、または正常化するまで、患者は、投与の用量または頻度を調節することができる。例えば、患者が不快を感じる場合、患者は、不快が治まる、または正常化するまで、１日、２日、または３日の投薬を省き、かつ／またはレジメンから１回または２回の日用量を減らし、かつ／または用量間の時間を増加することができる。よって、患者は、遷延性の関節不快を誘発しない、または不快が最小となる投与の最高用量および／または頻度が分かる。例えば定量アプリケータを使用して用量が制御されるいくつかの実施形態では、用量は減少されるが、スケジュールは維持され得る。よって、各患者は、遷延性の関節不快または倦怠を誘発しない最高用量／頻度を見出すことにより、患者固有の生態の状態、疾患、または免疫系の状態を考慮して、必要に応じて用量を調整することができる。実践において、グリコシダーゼ製剤は、投薬単位当たり約１０−２未満または約１０−３ｍｇ未満でヒトまたは動物に投与され得る。ある特定の実施形態では、グリコシダーゼは、約１０−３ｍｇ〜１０−８ｍｇで投与される。また他の実施形態では、グリコシダーゼの用量は、約１０−３ｍｇ〜１０−７ｍｇ、１０−３ｍｇ〜１０−６ｍｇ、１０−３ｍｇ〜１０−５ｍｇであるか、または約１０−４ｍｇである。いくつかの実施形態では、合計日用量は、対象当り約１０−３ｍｇを超えないか、またはいくつかの実施形態では、約５×１０−３〜１０−４ｍｇを超えない。
【００７０】
ノイラミニダーゼを含むある特定のグリコシダーゼは、ホモ二量体（例えば、三量体、四量体）を形成する傾向を有し得るが、様々な実施形態では、グリコシダーゼは、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により決定可能である、実質的に高度な凝集体を含まない単量体および／または二量体として存在するように製剤化される（例えば、希釈される）。
【００７１】
グリコシダーゼは、舌下、鼻、または頬側送達用を含む、水性製剤として製剤化され得る。いくつかの実施形態では、水性製剤は、生理食塩水を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．９％のイオン強度の生理食塩水など、約０．５〜約２％のイオン強度の生理食塩水を有する。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼは、標準的な生理食塩水（例えば、約０．９％の生理食塩水）において製剤化される。
【００７２】
舌下、鼻、または頬側送達用の他の従来の担体も採用することができる。グリコシダーゼは、芳香族またはフェノール系防腐剤であってよい防腐剤と共にさらに製剤化され得る。例えば、いくつかの実施形態では、防腐剤はフェノールである。例えば、いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼは、任意に他のグリコシダーゼと共に、例えば、０．０５〜０．５％のフェノール、または比較可能な量の類似する作用の防腐剤において製剤化される。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼおよび可能性として他のグリコシダーゼの活性は、少なくとも０．２％、０．３％、または０．４％のフェノールなどのフェノールの存在により増加する。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼ（例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｎ２８７６、Ｎ３００１、Ｎ５６３１、Ｎ２１３３、Ｎ７８８５、Ｎ６５１４、Ｎ３７８６、Ｎ８２７１）は、約０．２％〜約１％のフェノール（例えば、０．２〜０．６％のフェノール、または約０．４％のフェノール）を含む溶液中でインキュベートされ、次いで、０．０５％〜約０．２％のフェノールを含み得る最終製剤に希釈されるか、またはそれが得られる。いくつかの実施形態では、そのようなノイラミニダーゼの「活性化」は、適切な活性レベルを維持しながら、免疫標的を回避する低用量で活性剤を投与することを可能にする。
【００７３】
図示のため、任意に他のグリコシダーゼ酵素と共に、ノイラミニダーゼを、０．９％の生理食塩水と混合し、フィルタ減菌し、室温で１０分〜５時間（例えば、約３０分〜約３時間）放置することができる。室温でインキュベーション後、フェノール生理食塩水を添加し、０．９％の生理食塩水溶液中約０．１％の最終フェノール濃度を得る。溶液は、４℃で貯蔵される。
【００７４】
あるいは、ノイラミニダーゼおよび任意の他のグリコシダーゼ酵素は、約０．４％のフェノール生理食塩水と混合される。この溶液をフィルタ減菌し、室温で５分〜約５時間（例えば、約３０分、約１時間、または約３時間）放置する。室温でインキュベーション後、約０．１％のフェノール、０．９％の生理食塩水の最終濃度が得られる。溶液は、４℃で貯蔵される。
【００７５】
グリコシダーゼ製剤は、舌下、鼻、ポート、真皮下、経管栄養、眼内、静脈内、筋肉内、皮下、経皮的、および頬側を含む様々な経路により投与され得る。様々な実施形態では、グリコシダーゼは、舌下投与される。グリコシダーゼが舌下投与されるいくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼは、約１〜約５分間、好ましくは約３分間、約４分間、または約５分間、舌の下に維持される。患者は、この時間の間、話をするのを控えるべきである。患者は、投与１５分以内は摂食または飲食するべきではない。
【００７６】
本発明の態様によると、グリコシダーゼ酵素のレジメンは、特に免疫易感染性または進行例に関して、少なくとも２週間、または少なくとも１ヶ月間、１日平均２〜６回施与される。毎日の施与は、実質的に等間隔であるべきだが、様々な実施形態では、約１５分〜５時間の間隔があけられる。例えば、用量は、約１５分、約３０分、約１時間、約２時間、または約３時間の間隔があけられてよい。例えば、グリコシダーゼ製剤は、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、または少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間、１日平均２〜８回投与され得る。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼ製剤は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月にわたって、１日約２回、約３回、または約４回投与される。一般に、グリコシダーゼ製剤は、実質的な関節の不快（例えば、関節炎の感覚）または倦怠を呈することなく、癌の病理の減少または免疫系の刺激に有効であるような用量および頻度で投与される。患者が関節または全身の不快を感じる場合、患者は、不快が治まる、または正常化するまで、用量および／または頻度を調節する（例えば、ノイラミニダーゼの投薬を１、２、または３日省くか、または日用量を１または２回の投与に減らす）。よって、いくつかの実施形態では、投与レジメンは、関節が不快である間は中断される。
【００７７】
例えば、治療の初日は、約８用量で開始され、最初の３〜５回は最初の１または２時間内に行われ、残りは終日ほぼ等間隔で行われ得る。次いで、患者は、１日約４用量で治療され得、悪影響についての監視が周期的に行われる。悪影響が検知されない場合でも、関節の不快または倦怠に基づき時々調節されるため、患者は、１日２〜７用量のレジメンに留まる。
【００７８】
療法は、化学療法、放射線療法、もしくは外科治療の準備において、あるいは有効性を増大するために治療中に、および／または回復目的のための治療後に上述のように開始され得る。しかしながら、いくつかの実施形態では、グリコシダーゼレジメンは、これらの従来の療法に替わるものである。いくつかの実施形態では、患者はその後、少なくとも約６ヶ月間、または少なくとも約１年間、または少なくとも約２年間、または少なくとも約５年間以上、１日約１用量で長期的に治療されるか、またはそのような長期治療が選択されるか、もしくは処方される。いくつかの実施形態では、この後の長期治療は、再発または疾患の進行の可能性を減少させるための化学療法薬または他の療法を含まない。例えば癌を予防する、または癌の再発もしくは局所的に進行した疾患への進行を防止するための長期グリコシダーゼ治療は、１日１回または２回施与され得る。
【００７９】
いくつかの実施形態では、患者は、関節の硬直または倦怠を監視するように指示される。そのような状態は、グリコシダーゼ治療が調節されるべきであることを示唆する。調節は、投薬を１日もしくは２日または最大１週間省くか、あるいは症状がなくなるまで１日１もしくは２投与まで用量を下げることを含み得る。他の分子アッセイが同じ作用に対して使用することができるが、関節の硬直または不快は、患者のコンプライアンスの容易さを提供する。よって、レジメンの経過にわって、グリコシダーゼ用量が患者ごとに容易に調節され、よって、最適なケアが長期維持され得る。
【００８０】
グリコシダーゼレジメンが他の介入前の早期癌の治療を提供する様々な実施形態、または他の場合では、他の治療のためにさらに進行した患者の体の健康を向上するために、グリコシダーゼレジメンの長さは、バイオマーカーパネルの改善もしくは正常化、または例えば血液もしくは尿において決定され得る１つ以上の腫瘍マーカーの減少によって決定され得る。そのようなマーカーは、約１週間、または約２週間、または約１ヶ月の間評価され、グリコシダーゼレジメンは、マーカーの改善または正常化が観察される限り継続される。外科手術、化学療法、および／または放射線療法は延期され、グリコシダーゼ療法自体が癌を排除するのに十分ではない限りにおいてのみ開始される。
【００８１】
いくつかの実施形態では、グリコシダーゼ療法は、１つ以上の腫瘍マーカーまたは免疫パラメータを介して利益が観察され得る限り継続される。
【００８２】
例えば、いくつかの実施形態では、癌は肝癌または生殖細胞癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のα−胎児性タンパク質（ＡＦＰ）レベルによって監視される。
【００８３】
いくつかの実施形態では、癌は、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、またはリンパ腫であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のβ−２−ミクログロブリンレベル（Ｂ２Ｍ）もしくは免疫グロブリンレベル、または尿によって監視されるか、あるいはＢＣＲ−ＡＢＬ検出によって監視される。
【００８４】
いくつかの実施形態では、癌は絨毛腫瘍または精巣癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中または尿中のβ−ヒト線毛性腺刺激ホルモン（β−ｈＣＧ）レベルによって監視される。
いくつかの実施形態では、癌は乳癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のＣＡ１５−３／ＣＡ２７．２９レベルによって監視される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、癌は、膵臓癌、胆嚢癌、胆管癌、または胃癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のＣＡ１９−９レベルによって監視される。
【００８６】
いくつかの実施形態では、癌は卵巣癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のＣＡ−１２５レベルによって監視される。
【００８７】
いくつかの実施形態では、癌は延髄甲状腺癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のカルシトニンレベルによって監視される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、癌は乳癌または結腸直腸癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中の癌胎児性抗原（ＣＥＡ）レベル、または腫瘍におけるウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）およびプラスミノゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ−１）の存在もしくはレベルによって監視される。
【００８９】
いくつかの実施形態では、癌は神経内分泌腫瘍であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）レベルによって監視される。
【００９０】
いくつかの実施形態では、癌は膀胱癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、尿中のフィブリン／フィブリノゲンレベルまたは核マトリックスタンパク質２２レベルによって監視される。
【００９１】
いくつかの実施形態では、癌は卵巣癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中のＨＥ４レベルによって監視される。
【００９２】
いくつかの実施形態では、癌は生殖細胞癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中の乳酸脱水素酵素レベルによって監視される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、癌は前立腺癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、血中の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）レベルによって監視される。
【００９４】
いくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌であり、グリコシダーゼ療法に対する応答は、腫瘍におけるサイログロブリンレベルによって監視される。
【００９５】
改善または正常化のために監視され得る標準的な免疫または血液パラメータは、次のうちの１つ：白血球、赤血球、またはヘマトクリットもしくは赤血球指数、ヘモグロビンもしくは平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨもしくはＭＣＨＣ）、好中球、リンパ球、単核細胞、好酸球、好塩基球、血小板、または平均血小板量（ＭＰＶ）を含む。
【００９６】
本発明のまた他の態様では、必要に応じて単一グリコシダーゼ用量を投与するための送達ビヒクルを含む薬学的組成物が提供され、ビヒクルは、少なくとも５０用量、または少なくとも１００用量、少なくとも１５０用量、または少なくとも２００用量の完全グリコシダーゼレジメンを含む。投与されるグリコシダーゼの各用量は、最大約１０−２ｍｇのグリコシダーゼの量であり、既に記載されるように薬学的に不活性成分である。薬学的組成物は、ノイラミニダーゼ、ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、フコシダーゼ、グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、およびマンノシダーゼのうちの少なくとも２つ、ならびに薬学的に許容される賦形剤を含み得る。例えば、本組成物は、ノイラミニダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼを含み得る。グリコシダーゼは、集合的に、約１０−３ｍｇ〜１０−８ｍｇで、または上に開示される用量に従い存在し得る。本組成物は、舌下送達を含む、本明細書に開示される様々な投与経路用に製剤化され得る。
【００９７】
様々な実施形態では、治療レジメンは、約１０−３ｍｇのグリコシダーゼを超えない量の分割投与を含むが、ある特定の場合では、任意の１日に投与されたグリコシダーゼの合計量はこの制限量を超えてよい。
【００９８】
グリコシダーゼ製剤は、様々な経路および形態で投与することができる。例えば、グリコシダーゼは、酵素が埋設されるか、生分解性もしくは生物浸食性マトリックス中に混合される場合、固体として投与することができる。マトリックスは、徐放性マトリックスであってよい。これらのマトリックスは当業者に周知である。グリコシダーゼは、注射により、または舌下経路により投与され得る。一実施形態では、ビヒクルは不活性容器内に収容される水溶液である。別の変形では、組成物は、座薬の形態である。液体形態の組成物は、皮下、筋肉内、または静脈内注射され得る。加えて、組成物は、鼻粘膜などの粘膜を通して投与することができる。
【００９９】
ある特定の実施形態では、グリコシダーゼ組成物は、薬物アプリケータを介して投与され、アプリケータは、少なくとも１００用量の組成物、または少なくとも１５０用量、または少なくとも２００用量を含む。様々な実施形態では、アプリケータは、舌下、鼻、経皮、徐放性真皮下、眼内、経管栄養、ポート、皮下、経口、または頬側の送達用である。例えば、アプリケータは舌下送達用である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、アプリケータは、必要に応じて患者が調節することができる定量を送達する。
【０１０１】
アプリケータは、好ましくは、残りの用量の無菌状態を維持する様式で用量を分与する。非限定的な例としては、アプリケータは、米国特許第４，８３０，２８４号、第４，５６５，３０２号、第５，０１１，０４６号、第５，１４７，０８７号、第５，８９３，４８４号、第６，８７７，６７２号、第６，８８６，５５６号、および第７，２０１，２９６号に記載されるもののいずれかであってよく、これらは各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、アプリケータは、ポンプシリンダと排出開口部との間の領域に存在する培地が乾燥しないか、またはさもなければ周囲の影響により変化しないことを確実にできる噴霧または投薬ポンプであってよい。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，８３０，２８４号を参照。いくつかの実施形態では、アプリケータは、内容物を無菌に維持するために０．２μｍフィルタを採用する。加えて、アプリケータは、１回の動作の排出で用量を分与することができる。そのようなアプリケータは、米国特許第５，８９３，４８４号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される。アプリケータは、鼻送達、皮膚送達、咽喉送達、または舌下送達用に構成され得る。いくつかの実施形態では、アプリケータは、正確な用量を監視し、したがって、用量の数および／または持続投薬に関して不適切な投薬を大幅に排除することができる操作可能な投薬機構を可能にする。本明細書に組み込まれる米国特許第４，５６５，３０２号を参照。いくつかの実施形態では、アプリケータは、例えば、米国特許第６，８８６，５５６号に記載されるアプリケータなど（参照により本明細書に組み込まれる）、５０〜１００μｌの用量を送達する。
【国際調査報告】
2016505043.tif 000002
2016505043.tif 000003