(57)【要約】本明細書に記載の方法、組成物、およびアッセイ法は、ウルシオール曝露、乾癬、および他の炎症性皮膚疾患などのある特定の病状に関係する炎症をCD1aが媒介するという発見に部分的に基づいている。本明細書において提供される1つの局面は、炎症性皮膚疾患を有する対象にCD1aの阻害物質の治療的有効量を投与して、それによって該炎症性皮膚疾患を治療または予防する段階を含む、炎症性皮膚疾患を治療または予防するための方法に関する。2016531843.tif 000003
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性皮膚疾患を有する対象にCD1aの阻害物質の治療的有効量を投与して、それによって該炎症性皮膚疾患を治療または予防する段階を含む、炎症性皮膚疾患を治療または予防するための方法。
【請求項２】
前記CD1aの阻害物質がCD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
CD1a発現の前記阻害物質がRNA干渉分子または小分子である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
CD1a活性の前記阻害物質が小分子、抗体もしくはその断片、またはペプチドである、請求項2に記載の方法。
【請求項５】
前記炎症性皮膚疾患が、T細胞媒介性の皮膚疾患または皮膚障害である、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記炎症性皮膚疾患がウルシオール誘発性接触皮膚炎である、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記炎症性皮膚疾患が乾癬および／またはアトピー性皮膚炎である、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
CD1a活性の前記阻害物質が、CD1aへのリガンドの結合またはCD1a媒介性抗原提示活性を阻害する、請求項2または4に記載の方法。
【請求項９】
前記リガンドがウルシオールである、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
CD1a活性の前記阻害物質が、ランゲルハンス細胞の抗原提示活性を阻害する、請求項2または4に記載の方法。
【請求項１１】
CD1aの阻害物質の治療的有効量と薬学的に許容される担体とを含む、炎症性皮膚疾患を治療するための薬学的組成物。
【請求項１２】
前記CD1aの阻害物質が、RNA干渉分子、小分子、ペプチド、および抗体またはその断片からなる群より選択される、請求項11に記載の組成物。
【請求項１３】
全身送達用に製剤化されている、請求項11に記載の組成物。
【請求項１４】
局所送達用に製剤化されている、請求項11に記載の組成物。
【請求項１５】
a．1つのランゲルハンス細胞またはランゲルハンス細胞の集団を作用物質と接触させる段階、
b．該細胞または該細胞の集団におけるCD1aの発現および／または活性を測定する段階であって、
i．CD1aの発現および／または活性の低下により、該作用物質が炎症性皮膚疾患の治療のための候補作用物質であることが示される、段階
を含む、炎症性皮膚疾患を治療するための候補作用物質をスクリーニングするための方法。
【請求項１６】
前記候補作用物質が、RNA干渉分子、小分子、ペプチド、および抗体またはその断片からなる群より選択される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
a．ランゲルハンス細胞の集団を候補作用物質と接触させる段階、
b．段階（a）の細胞を標識CD1aリガンドと接触させる段階、
c．結合した検出可能な該リガンド由来のシグナルの強度を測定する段階、
d．該シグナルの測定された該強度を参照値と比較する段階、ならびに
測定された該強度が該参照値に比べて低い場合に、
e．該候補作用物質を該細胞におけるCD1a発現および／またはCD1a活性の阻害物質として同定する段階
を含む、アッセイ法。
【請求項１８】
前記CD1aリガンドがウルシオールである、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
炎症性皮膚疾患の治療または予防における使用のための、CD1aの阻害物質。
【請求項２０】
炎症性皮膚疾患の治療または予防のための医薬の製造のための、CD1aの阻害物質の使用。
【請求項２１】
前記CD1aの阻害物質がCD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する、請求項19または20に記載の使用。
【請求項２２】
CD1a発現の前記阻害物質がRNA干渉分子または小分子である、請求項21に記載の使用。
【請求項２３】
CD1a活性の前記阻害物質が小分子、抗体もしくはその断片、またはペプチドである、請求項21に記載の使用。
【請求項２４】
CD1a活性の前記阻害物質が、CD1aへのリガンドの結合またはCD1a媒介性抗原提示活性を阻害する、請求項23に記載の使用。
【請求項２５】
前記リガンドがウルシオールである、請求項24に記載の使用。
【請求項２６】
CD1a活性の前記阻害物質が、ランゲルハンス細胞の抗原提示活性を阻害する、請求項23に記載の使用。
【請求項２７】
前記炎症性皮膚疾患が、T細胞媒介性の皮膚疾患または皮膚障害である、請求項19〜26のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記炎症性皮膚疾患がウルシオール誘発性接触皮膚炎である、請求項19〜26のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
前記炎症性皮膚疾患が乾癬および／またはアトピー性皮膚炎である、請求項19〜26のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
前記CD1aの阻害物質が全身送達用および／または局所送達用に製剤化されている、請求項19〜29のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2013年9月20日に提出された米国仮特許出願第61／880,522号の恩典を主張し、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
技術分野
本技術分野は、炎症性皮膚疾患の治療のための組成物および方法に関する。本分野はまた、炎症性皮膚疾患の治療用の作用物質に関するスクリーニングアッセイ法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
さまざまな皮膚病状が、真皮および表皮におけるT細胞活性化および異常抗原提示の増大と関連づけられている。例えば、接触性アレルギー皮膚炎では、皮内T細胞の活性化が観察される。アトピー性皮膚炎を呈する患者の皮膚では、ランゲルハンス細胞の含有数が増加していることが公知である。乾癬の皮膚では、ランゲルハンス細胞と非ランゲルハンス細胞のクラスIIMHC保有する抗原提示細胞の両方で構成される抗原提示細胞の数が増加している。
【０００４】
T細胞は、標的細胞と抗原提示細胞との相互作用による免疫応答に大きな役割を果たす。例えば、T細胞により媒介される標的細胞の死滅は、標的細胞への細胞溶解性T細胞（エフェクター細胞）の接着を最初に伴う多段階過程である。また、ヘルパーT細胞も、抗原提示細胞への接着によって免疫応答を惹起させる一助となる。
【０００５】
T細胞と標的細胞および抗原提示細胞とのこれらの相互作用は、非常に特異性が高く、T細胞の表面上の多くの特異的抗原受容体のうちの1つによる、標的細胞または抗原提示細胞の表面上にある抗原の認識に依存する。
【０００６】
T細胞が活性化される1つのやり方は、マクロファージなどの抗原提示細胞の表面上にあるペプチド-MHC複合体への、それらの抗原特異的T細胞受容体の結合による。T細胞活性化は2種類の機能的T細胞の増殖および分化を刺激する。すなわち、抗体産生性Bリンパ球の増殖および成熟を促進するヘルパー細胞、ならびに標的細胞を溶解させるキラー細胞である。
【０００７】
CD1タンパク質は、T細胞に対する自己由来または微生物由来の脂質抗原および糖脂質抗原の提示を、MHCクラスI分子に類似した様式で媒介する、膜貫通性糖タンパク質のファミリーである。CD1a分子は、主として、皮膚における主要な樹状抗原提示細胞であるランゲルハンス細胞上に見いだされる。
【発明の概要】
【０００８】
概要
本明細書に記載の方法、組成物、およびアッセイ法は、CD1aが、ウルシオール曝露（例えば、有毒オーク、ツタウルシ、およびドクウルシ）、乾癬、およびアトピー性皮膚炎などのある特定の病状を媒介するという発見に部分的に基づいている。さらに、本発明者らは、CD1aの阻害物質が、これらおよび他の炎症性皮膚疾患を治療的に処置または予防するために有効であることも発見した。
【０００９】
本明細書において提供される1つの局面は、炎症性皮膚疾患を有する対象にCD1aの阻害物質の治療的有効量を投与して、それによって炎症性皮膚疾患を治療または予防する段階を含む、炎症性皮膚疾患を治療または予防するための方法に関する。
【００１０】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の1つの態様において、CD1aの阻害物質はCD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する。
【００１１】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、CD1a発現の阻害物質はRNA干渉分子または小分子である。
【００１２】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、CD1a活性の阻害物質は小分子、抗体もしくはその断片、またはペプチドである。
【００１３】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の1つの態様において、CD1aの阻害物質は、米国特許第7,968,092号に記載されたCD1aに対するヒト結合分子であり、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
【００１４】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、炎症性皮膚疾患はT細胞媒介性の皮膚疾患または皮膚障害である。
【００１５】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、炎症性皮膚疾患はウルシオール誘発性接触皮膚炎である。
【００１６】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、炎症性皮膚疾患は乾癬および／またはアトピー性皮膚炎である。
【００１７】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、CD1a活性の阻害物質は、CD1aへのリガンドの結合またはCD1a媒介性抗原提示活性を阻害する。
【００１８】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、リガンドはウルシオールである。
【００１９】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、CD1a活性の阻害物質は、ランゲルハンス細胞の抗原提示活性を阻害する。
【００２０】
CD1aの阻害物質の治療的有効量と薬学的に許容される担体とを含む、炎症性皮膚疾患を治療するための薬学的組成物もまた、別の局面において本明細書で提供される。
【００２１】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、CD1aの阻害物質は、RNA干渉分子、小分子、ペプチド、および抗体またはその断片からなる群より選択される。
【００２２】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の1つの態様において、組成物は、米国特許第7,968,092号に記載された、CD1aに対するヒト結合分子であるCD1aの阻害物質を含み、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
【００２３】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、組成物は全身送達用に製剤化されている。
【００２４】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の別の態様において、組成物は局所送達用に製剤化されている。
【００２５】
本明細書において提供される別の局面は、（a）1つのランゲルハンス細胞またはランゲルハンス細胞の集団を作用物質と接触させる段階、（b）該細胞または該細胞の集団におけるCD1aの発現および／または活性を測定する段階であって、CD1aの発現および／または活性の低下により、該作用物質が炎症性皮膚疾患の治療のための候補作用物質であることが示される、段階を含む、炎症性皮膚疾患を治療するための候補作用物質をスクリーニングするための方法に関する。
【００２６】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の1つの態様において、候補作用物質は、RNA干渉分子、小分子、ペプチド、および抗体またはその断片からなる群より選択される。
【００２７】
（a）ランゲルハンス細胞の集団を候補作用物質と接触させる段階、（b）段階（a）の細胞を標識CD1aリガンドと接触させる段階、（c）結合した検出可能な該リガンド由来のシグナルの強度を測定する段階、（d）該シグナルの測定された該強度を参照値と比較する段階、ならびに、測定された該強度が該参照値に比べて低い場合に、（e）該候補作用物質を該細胞におけるCD1a発現および／またはCD1a活性の阻害物質として同定する段階を含む、アッセイ法もまた、別の局面において本明細書で提供される。
【００２８】
本明細書に記載のこの局面および他の局面の1つの態様において、CD1aリガンドはウルシオールである。
【００２９】
本明細書において提供される別の局面は、炎症性皮膚疾患の治療または予防における使用のための、CD1aの阻害物質に関する。
【００３０】
炎症性皮膚疾患の治療または予防のための医薬の製造のための、CD1aの阻害物質の使用もまた、別の局面において本明細書で提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】CD1aとウルシオールとの間の相互作用、およびツタウルシに対する免疫応答の概念を示している。ウルシオールとランゲルハンス細胞の表面上のCD1aとの間の例示的な相互作用、および、ツタウルシに対する免疫応答を図示している概略図である。
【図１Ｂ】CD1aとウルシオールとの間の相互作用、および、ツタウルシに対する免疫応答の概念を示している。インビトロプレート結合アッセイ法で、ウルシオールがリガンドとしてCD1aモノマーと相互作用することを示している。
【図２Ａ】CD1aトランスジェニックマウスにおける炎症に対するウルシオールの影響を示している。CD1aトランスジェニックマウスにウルシオールを投与するための例示的な実験プロトコールを示している。
【図２Ｂ】CD1aトランスジェニックマウスにおける炎症に対するウルシオールの影響を示している。図2Aに示された通りにウルシオールを投与した野生型B6マウスおよびCD1aトランスジェニックマウスにおける耳介腫脹の度合いを示している。
【図２Ｃ】CD1aトランスジェニックマウスにおける炎症に対するウルシオールの影響を示している。ウルシオール負荷マウスの耳における炎症性顆粒球を示している。
【図２Ｄ】CD1aトランスジェニックマウスにおける炎症に対するウルシオールの影響を示している。ウルシオール負荷マウスの耳におけるT細胞サブセットを示している。
【図３Ａ】ウルシオール誘発性皮膚炎におけるCD1a媒介性サイトカインプロファイルを示している。ウルシオール誘発性皮膚炎におけるIL-17AおよびIFN-γを示している。
【図３Ｂ】ウルシオール誘発性皮膚炎におけるCD1a媒介性サイトカインプロファイルを示している。ウルシオール誘発性皮膚炎におけるIL-17A CD4+ T細胞サブセットを示している。
【図３Ｃ】ウルシオール誘発性皮膚炎におけるCD1a媒介性サイトカインプロファイルを示している。ウルシオール誘発性皮膚炎におけるIL-17AサイトカインおよびIL-22を示している。
【図３Ｄ】ウルシオール誘発性皮膚炎におけるCD1a媒介性サイトカインプロファイルを示している。ウルシオール誘発性皮膚炎におけるIL-17A／IL-22 CD4+ T細胞サブセットを示している。
【図４Ａ】ウルシオール投与マウスにおける抗CD1a遮断抗体の軽減効果を示している。CD1aの遮断によって皮膚炎症が抑止されることを示すデータを示している。
【図４Ｂ】ウルシオール投与マウスにおける抗CD1a遮断抗体の軽減効果を示している。CD1aの阻害によって好中球浸潤が減少することを示すデータを示している。
【図４Ｃ】ウルシオール投与マウスにおける抗CD1a遮断抗体の軽減効果を示している。耳におけるCD1a発現細胞によるデータを示すとともに、抗CD1aが皮膚の中のランゲルハンス細胞を枯渇させることを示している。
【図４Ｄ】ウルシオール投与マウスにおける抗CD1a遮断抗体の軽減効果を示している。抗CD1a投与によってIL-17A産生性CD4 T細胞が減少することを示すデータを示している。
【図５Ａ】乾癬におけるCD1aの寄与を示している。CD1aが、乾癬のモデルとしてのイミキモド（IMQ）に対する免疫応答を調節することを示している。
【図５Ｂ】乾癬におけるCD1aの寄与を示している。乾癬免疫応答がCD1aに依存することを示している。
【図５Ｃ】乾癬におけるCD1aの寄与を示している。CD1aが乾癬におけるTh17型応答を媒介することを示している。
【図６Ａ】乾癬モデルにおける抗CD1a投与の軽減効果を示している。乾癬のマウスモデルにおける耳介腫脹の度合いに対する抗CD1a処理の効果を示している。
【図６Ｂ】乾癬モデルにおける抗CD1a投与の軽減効果を示している。CD1a療法によって皮膚におけるT細胞浸潤が減少することを示している。
【図６Ｃ】乾癬モデルにおける抗CD1a投与の軽減効果を示している。抗CD1aによる処理によって乾癬モデルにおけるTh17表現型が抑止されることを示している。
【図７Ａ】CD1aが2,4,-ジニトロ-1-フルオロベンゼン（DNFB）に対する免疫応答を抑制することを示している。野生型マウスまたはCD1aトランスジェニックマウスにおけるDNFBに対する応答を評価するための例示的な実験プロトコールを図示している略図を示している。
【図７Ｂ】CD1aが2,4,-ジニトロ-1-フルオロベンゼン（DNFB）に対する免疫応答を抑制することを示している。DNFBを投与した野生型マウスおよびCD1aトランスジェニックマウスにおける耳介腫脹の度合いを示している。
【図７Ｃ】CD1aが2,4,-ジニトロ-1-フルオロベンゼン（DNFB）に対する免疫応答を抑制することを示している。DNFBに対する免疫応答がCD1aトランスジェニックマウスでは低下していることを示すデータを示している。
【図７Ｄ】CD1aが2,4,-ジニトロ-1-フルオロベンゼン（DNFB）に対する免疫応答を抑制することを示している。CD1aが、ハプテン（DNFB）に応答して起こるIFN-γ産生性CD8 T細胞の生成をモジュレートすることを示すデータを示している。
【図８】図8Aおよび8Bは、CD1aが主にCD4 T細胞の増大を助長することを示している。図8Aは、ウルシオールに曝露されたCD1aトランスジェニックマウスにおけるCD8+およびCD4+マーカーの増大を示している。図8Bは、ウルシオールに曝露されたCD1aトランスジェニックマウスにおけるCD8+およびCD4+ T細胞の数を示している。
【図９Ａ】MC903適用後の皮膚炎症がCD1aの存在下で悪化することを示している。ビタミンD3類似体MC903を用いて、マウスでアトピー性皮膚炎様症状を誘発させた。CD1aトランスジェニックマウスにおける耳介腫脹増大が抗CD1a注射によって抑止されたことを示している。CD1a遮断のために、200μgの抗CD1a AbをCD1aトランスジェニックマウスに対して隔日（MC903投与の前および後の-1日、+1日、+3日、+5日および+7日）に腹腔内注射した。
【図９Ｂ】MC903適用後の皮膚炎症がCD1aの存在下で悪化することを示している。ビタミンD3類似体MC903を用いて、マウスでアトピー性皮膚炎様症状を誘発させた。抗CD1a Ab注射による炎症性耳組織におけるCD11b+Gr-1+炎症性顆粒球の減少を示している。CD1a遮断のために、200μgの抗CD1a AbをCD1aトランスジェニックマウスに対して隔日（MC903投与の前および後の-1日、+1日、+3日、+5日および+7日）に腹腔内注射した。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
詳細な説明
本明細書に記載の方法およびアッセイ法は、皮膚の中のランゲルハンス細胞上で発現する分子CD1aが炎症性皮膚疾患の発生に関与するという発見に部分的に基づいている。理論に拘束されることは望まないが、CD1aは、IL-17のようなサイトカインの顕著な産生を特徴とする炎症性T細胞応答を媒介する。このことは、皮膚疾患を予防するため、治療するため、またはさらに治癒させるための、特異的抗体、小分子阻害物質、またはRNAiによる、CD1aを標的とする治療的処置の基盤となる。
【００３３】
定義
本明細書で用いる場合、「治療する」、「治療」、「治療すること」、または「改善」という用語は、疾患または障害に関連する病状の進行または重症度を好転させること、緩和すること、改善すること、阻害すること、緩徐化すること、または停止させることを目的とする治療的処置を指す。「治療すること」という用語は、炎症性皮膚障害に関連する病状、疾患、または障害の有害作用または症状の少なくとも1つを軽減または緩和することを指す。治療は一般に、1つまたは複数の症状または臨床的マーカーが軽減される場合に「有効」である。または、治療は、疾患の進行が軽減されるかまたは停止する場合に「有効」である。すなわち、「治療」は、症状またはマーカーの改善だけでなく、治療が行われない場合に予想される症状の進行または悪化の停止または少なくとも緩徐化も含みうる。有益なまたは所望の臨床的結果には、検出可能であるか検出不能であるかを問わず、炎症性皮膚疾患の1つまたは複数の症状の緩和、炎症性皮膚疾患の程度の減少、炎症性皮膚疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと、疾患の進行の遅延または緩徐化、炎症性皮膚疾患状態の改善または一時的緩和、および寛解（部分的であるか完全であるかを問わず）が非限定的に含まれる。疾患の「治療」には、疾患の症状または副作用を和らげること（姑息的治療を含む）も含まれる。
【００３４】
1つの態様において、本明細書で用いる場合、「予防」または「予防すること」という用語は、対象に関連して用いられる場合、炎症性皮膚疾患に関連する免疫疾患および症状の発症を停止させること、妨げること、および／または緩徐化することを指す。
【００３５】
本明細書で用いる場合、「治療的有効量」という用語は、少なくとも部分的に、所望の効果を達成するため、治療される特定の疾患もしくは障害（例えば、炎症性皮膚疾患）の症状発現を遅らせるため、その進行を阻害するため、または症状発現もしくは進行を完全に停止させるために必要な量を意味する。そのような量は、当然ながら、治療される特定の病状、病状の重症度、ならびに年齢、身体状態、体格、体重、および併用治療を含む個々の患者パラメーターに依存すると考えられる。これらの要因は当業者には周知であり、日常的程度の実験によって対処することができる。いくつかの態様においては、治療用物質の最大用量、すなわち適切な医学的判断による最大の安全用量が用いられる。しかし、当業者には、医学的理由、心理学的な理由、またはほぼすべての他の理由から、より低用量または耐容量が投与されうることが理解されるであろう。
【００３６】
1つの態様において、炎症性皮膚疾患を治療する方法のための本明細書に記載の薬学的製剤または組成物の治療的有効量は、炎症性皮膚疾患の少なくとも1つの症状（例えば、疼痛、炎症、掻痒、発赤、膿汁、サイトカイン産生など）のレベルを、化合物、化合物の組み合わせ、薬学的組成物／製剤、または組成物の非存在下におけるレベルと比較して低下させるのに十分な量のことである。他の態様において、投与される組成物の量は、安全であり、かつ炎症性皮膚疾患を治療するのに、その発症を遅らせるのに、および／または疾患の症状発現を遅らせるのに十分であることが好ましい。いくつかの態様において、その量はそれ故に、炎症性皮膚疾患を治癒させること、その症状の改善をもたらすこと、疾患の経過を緩徐化すること、疾患の症状を緩徐化するかもしくは阻害すること、または炎症性皮膚疾患の続発性症状の確立もしくは発症を緩徐化するかもしくは阻害することができる。例えば、本明細書に記載の組成物の有効量は、炎症性皮膚疾患に関連するさらなる疼痛および／または炎症を阻害し、炎症性皮膚疾患に関連する疼痛および／または炎症の軽減を引き起こすかまたはさらには完全に阻害し、さらには疾患の完全縮退も惹起し、かつ炎症性皮膚疾患に関連する臨床症状を低下させる。1つの態様において、障害、疾患、または医学的病状を治療または改善するための有効量は、障害、疾患、または医学的病状の症状の軽減または完全除去をもたらすのに十分な量である。ある所与の治療用物質の有効量は、該物質の性質、投与経路、該治療用物質を投与される動物の体格または種、および投与の目的といった要因に応じて異なると考えられる。このため、正確な「治療的有効量」を特定することは可能でもなく慎重でもない。しかし、あらゆる所与の場合に、適切な「有効量」は、当業者により、当技術分野において確立された方法に従って日常的な実験のみを用いて決定されうる。
【００３７】
「減少する」、「低下した」、「低下」、または「阻害する」という用語はすべて、本明細書において、統計的に有意な量の減少を意味する。いくつかの態様において、「低下する」、「低下」または「減少する」または「阻害する」は、典型的には、参照レベル（例えば、所与の治療の非存在下）と比較して少なくとも10％の減少を意味し、これには例えば、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、またはそれ以上の減少が含まれうる。本明細書で用いる場合、「低下」または「阻害」は、参照レベルと比較した完全な阻害または低下を範囲に含まない。「完全阻害」は、参照レベルと比較した100％阻害である。減少は、好ましくは、それにより、ある所与の障害を有しない個体に関する正常範囲内にあると受け入れられているレベルまで下がりうる。
【００３８】
「増加した」、「増加する」または「強化する」または「活性化する」という用語はすべて、本明細書において、統計的に有意な量の増加を一般に意味する。誤解を避けるために言うと、「増加した」、「増加する」または「強化する」または「活性化する」という用語は、参照レベルと比較して少なくとも10％の増加、例えば参照レベルと比較して少なくとも約20％、もしくは少なくとも約30％、もしくは少なくとも約40％、もしくは少なくとも約50％、もしくは少なくとも約60％、もしくは少なくとも約70％、もしくは少なくとも約80％、もしくは少なくとも約90％、もしくは100％以下の増加、もしくは10〜100％の間の任意の増加、または、参照レベルと比較して少なくとも約2倍、もしくは少なくとも約3倍、もしくは少なくとも約4倍、もしくは少なくとも約5倍、もしくは少なくとも約10倍の増加、少なくとも約20倍の増加、少なくとも約50倍の増加、少なくとも約100倍の増加、少なくとも約1000倍の増加、またはそれ以上の増加を意味する。
【００３９】
「統計的に有意な」または「有意に」という用語は、統計的有意性を指し、一般に、正常よりも二標準偏差（2SD）低いか、またはそれ未満であることを意味する。この用語は、差があるという統計的証拠を指す。これは、帰無仮説が実際に真である場合に帰無仮説を棄却する判断を下す確率として定義される。この判断は多くの場合、p値を用いて行われる。
【００４０】
本明細書で用いる場合、「候補作用物質」という用語は、炎症性皮膚疾患の少なくとも1つの症状を少なくとも10％軽減すると予期される組成物を指し、例えば、候補作用物質はCD1aとリガンドとの相互作用を阻害することができるか、またはそうでなければ炎症性皮膚疾患の炎症の度合い、病変サイズ、外観などを軽減することができる。続いて候補作用物質を、初代ランゲルハンス細胞を用いる本明細書に記載のスクリーニングアッセイ法を用いて試験して、候補作用物質が所望の転帰を再現性よく引き起こすことができ、その結果、CD1aの阻害物質、または対象における炎症性皮膚疾患のための治療として有用でありうるか否かを判定することができる。
【００４１】
「核酸」とは、本明細書に記載される場合、RNAまたはDNAであってよく、かつ一本鎖または二本鎖であってよく、例えば、以下を含む群から選択されうる：関心対象のタンパク質をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、核酸類似体、例えばペプチド-核酸（PNA）、疑似相補的PNA（pc-PNA）、ロックド核酸（LNA）など。そのような核酸配列には、例えば、例えば転写リプレッサーとして作用するタンパク質をコードする核酸配列、アンチセンス分子、リボザイム、例えばRNAi、shRNAi、siRNA、マイクロRNAi（mRNAi）、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどを非限定的に含む、低分子阻害性核酸配列が非限定的に含まれる。
【００４２】
本明細書で用いる場合、「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を輸送できる核酸分子を指す。ベクターの一種が「プラスミド」であり、これは環状二本鎖DNAループを指し、該ループ中に追加の核酸セグメントが連結されることができる。別の種類のベクターは、追加の核酸がウイルスゲノム中に連結されることができる、ウイルスベクターである。ある種のベクターは、それらが導入された宿主細胞内で自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、その結果、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある種のベクターは、それらと機能的に連結された遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターを、本明細書では「組換え発現ベクター」、またはより簡単に「発現ベクター」と称する。一般に、組換えDNA手法において有用性のある発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に用いられるが、これはプラスミドが最も一般的に用いられるベクターの形態であるためである。しかし、本発明は、同等の機能を果たす発現ベクターの同様の他の形態、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製能欠損レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）も含むことを意図している。1つの態様において、レンチウイルスは、本発明の1つまたは複数のsiRNA分子を細胞に送達するために用いられる。
【００４３】
発現ベクターの内部で、「機能的に連結された」とは、関心対象のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロ転写／翻訳システムにおいて、またはベクターが標的細胞に導入される場合は標的細胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で、調節配列と連結されていることを意味することを意図している。「調節配列」という用語は、プロモーター、エンハンサー、および他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図している。そのような調節配列は、例えば、Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)に記載されている。調節配列には、多くの種類の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を導くもの、およびある特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配列の発現を導くもの（例えば、組織特異的調節配列）が含まれる。さらに、本発明のsiRNAの合成を特定の間隔でまたは特定の期間にわたって導くための調節配列を含むベクターを介してRNA干渉物質を送達することもできる。発現ベクターの設計が標的細胞の選択、所望のsiRNAの発現レベルなどの要因に依存しうることは、当業者には理解されるであろう。
【００４４】
本発明の発現ベクターを標的細胞に導入して、それによって本発明のsiRNA分子を産生させることができる。1つの態様においては、DNAテンプレート、例えば、CD1aを対象とするsiRNA分子をコードするDNAテンプレートを、RNAポリメラーゼIII（PolIII）の制御下の発現ベクター中に連結させて、標的細胞に送達することができる。PolIIIは、3'末端が、4〜5個のチミジンの連鎖内で終結していることによって規定される、小さな非コード性転写物、の合成を導く。このようにして、DNAテンプレートを用いて、RNAiを生じさせるsiRNAのセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方をインビボで合成することができる（Sui, et al. (2002) PNAS 99(8):5515）。
【００４５】
「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性を伴わずに哺乳動物に投与することができる化合物および組成物を指す。「薬学的に許容される担体」という用語から、組織培養基は除外される。例示的な薬学的に許容される塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩、および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸の塩が非限定的に含まれる。
【００４６】
本明細書で用いる場合、「含む（comprising）」という用語は、提示された所定の要素に加えて他の要素も存在しうることを指す。「含む」の使用は、限定ではなく包含を示している。
【００４７】
本明細書で用いる場合、「〜から本質的になる」という用語は、ある所与の態様のために必要な要素を指す。この用語は、本発明のその態様の基本的なかつ新規または機能的な特徴に実質的に影響を及ぼさない追加の要素の存在を許容する。
【００４８】
「〜からなる」という用語は、態様のその記載に列記されていない要素を全く含まない、本明細書に記載される組成物、方法、および各々の構成要素を指す。
【００４９】
さらに、文脈に特別の規定のない限り、単数形の用語は複数形も含むものとし、複数形の用語は単数形も含むものとする。
【００５０】
操作例における場合以外、または別様に指定される場合を除き、本明細書で用いられる成分の数量または反応条件を表す数字はすべて、いかなる場合にも「約」という用語によって修飾されると理解されるべきである。「約」という用語は、パーセンテージとともに用いられる場合は±1％を意味しうる。
【００５１】
本発明は本明細書に記載の特定の方法、プロトコール、および試薬などに限定されず、そのため異なってもよいことが理解されるべきである。本明細書で用いられる用語は、特定の態様のみを説明することを目的としており、特許請求の範囲によってのみ定められる本発明の範囲を限定することは意図していない。
【００５２】
CD1a
CD1タンパク質は、T細胞に対する、自己由来または微生物由来の脂質抗原および糖脂質抗原の提示を、MHCクラスI分子に類似した様式で媒介する、膜貫通性糖タンパク質のファミリーである。CD1a分子は、主として、皮膚における主要な樹状抗原提示細胞であるランゲルハンス細胞上に見いだされる。
【００５３】
CD1タンパク質は典型的には、樹状細胞、単球、および胸腺細胞の表面に発現する。CD1分子のファミリーは、MHC-Iと相同性があり、かつ抗原提示においても働く（Brigl, M. and Brenner, M.B. Annu. Rev. Immunol. 22, 817-890 (2004)）。MHCによるペプチド提示とは対照的に、CD1タンパク質は脂質抗原をT細胞に提示する（Cohen, N.R et al. Adv. Immunol. 102, 1-94 (2009)）。配列相同性に基づいて、CD1分子はグループ1（CD1a〜c）とグループ2（CD1d）とに分けられる。CD1dはNKT細胞の一定の集団を刺激するが、グループ1のCD1分子は多様なT細胞受容体（TCR）レパートリーを有するポリクローナルTリンパ球を活性化する（Bendelac, A., et al. Annu. Rev. Immunol. 25, 297-336 (2007), Strominger,J.L. J. Immunol. 184, 3303-3305 (2010)）。TCRの多様性は活性化の機能的様式にも反映されており、NKT細胞が自然のようなリンパ球と同じように反応し、グループ1 CD1拘束性T細胞がむしろ適応免疫系のT細胞と同じように挙動する（Cohen, N.R et al. Adv. Immunol. 102, 1-94 (2009), Darmoise, A. et al. Immunity. 33, 216-228 (2010)）。CD1dおよびNKT細胞はすべての哺乳動物に存在するが、CD1a〜cは主にヒトで発現し、マウスには欠如している。このため、グループ1 CD1拘束性T細胞の分析は、患者の末梢血由来のリンパ球を用いるインビトロ実験に限定される。その結果、それらの細胞のインビボ機能を明確にすることは依然として行われていない。
【００５４】
しかし、グループ1 CD1拘束性T細胞に関して記載されている機能からは、それらがヒトの免疫学において重要な役割を有することが示される（Brigl, M. and Brenner, M.B. Annu. Rev. Immunol. 22, 817-890 (2004)）。すなわち、CD1a分子、CD1b分子、およびCD1c分子は、感染中に結核菌（Mycobacterium tuberculosis）などの病原体由来の外因性脂質抗原をT細胞に提示して、その後にそれを活性化することができる（Cohen, N.R et al. Adv. Immunol. 102, 1-94 (2009)）。加えて、T細胞はCD1a〜cによって提示された自己脂質も認識し、このことはそれらに自己反応性がある可能性を示している（Moody, D.B. Adv. Immunol. 89, 87-139 (2006)）。実際に、以前の諸研究により、CD1aに反応するT細胞は末梢血中に多量に存在し、ヒトT細胞集団の生理的構成要素であることが実証されている（de Jong, A. et al. Nat. Immunol. 11, 1102-1109 (2010), de Lalla, C. et al. Eur. J. Immunol. 41, 602-610 (2011)）。とりわけ、これらのCD1a-自己反応性T細胞は皮膚ホーミング受容体を発現し、皮膚の恒常性および炎症に関与するサイトカインIL-22を主として産生した（Duhen, T., et al. Nat. Immunol. 10, 857-863 (2009)）。さらに、IL-22産生性T細胞はランゲルハンス細胞によって刺激された（Fujita, H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 106, 21795-21800 (2009)）が、ランゲルハンス細胞はヒト皮膚における強力な抗原提示細胞（APC）であり、顕著な特徴の1つとしてCD1aを多量に発現する（Hunger, R.E. et al. J. Clin. Invest 113, 701-708 (2004), Pena-Cruz,V., et al. J. Invest Dermatol. 121, 517-521 (2003)）。 
【００５５】
炎症性皮膚疾患
皮膚は、生物を損傷から防御するための機械的、生化学的、および免疫学的障壁として機能する、大規模でかつ極めて重要な器官である（Perera, G.K., et al. Annu. Rev. Pathol. (2012)）。ヒトの皮膚は、外表皮とその下にある真皮とを含むいくつかの層からなり、真皮は外表皮とを皮下組織から分離する。表皮は主に、ケラチノサイトと名づけられた上皮細胞からなり、これは上部に角化層を生じる。表皮APCであるランゲルハンス細胞は、基底膜近くの基底層に位置する（Fujita, H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 106, 21795-21800 (2009)）。真皮は、血管、真皮樹状細胞（DC）、およびT細胞を含有する結合組織からなる。ヒトの皮膚は定常状態では1cm2当たり100万〜200万個のTリンパ球を含有し、それ故に皮膚は大規模な免疫器官である（Clark, R.A. et al. J. Immunol. 176, 4431-4439 (2006)）。
【００５６】
さまざまな皮膚病状が、真皮および表皮におけるT細胞活性化および異常抗原提示の増大と関連づけられている（Cooper, Curr. Probl. Dermatol, eds. van Vloten et al., 19, pp. 69-80 at pp. 73, 74, 76 (1990)）。例えば、接触性アレルギー皮膚炎では、皮内T細胞の活性化が観察される。アトピー性皮膚炎を呈する患者の皮膚では、ランゲルハンス細胞の含有数が増加していることが公知である（Cooper, 前記）。乾癬の皮膚では、ランゲルハンス細胞および非ランゲルハンス細胞のクラスIIMHC保有抗原提示細胞の両方で構成される抗原提示細胞の数が増加している（Cooper, 前記）。
【００５７】
皮膚恒常性の調節不全は、乾癬およびアトピー性皮膚炎などにおける炎症を招く恐れがある（Perera, G.K., et al. Annu. Rev. Pathol. (2012)）。乾癬はT細胞により媒介される慢性の再発性皮膚炎症として知られており、米国での有病率がほぼ5％であることから公衆衛生上の重要な問題となっている。これは肉眼的には、隆起、紅斑、および落屑を含む古典的な皮膚病変を呈する。組織学的には、乾癬皮膚は、表皮の肥厚化（表皮肥厚）、真皮中への表皮拡張（乳頭腫症）、および有核角化層（不全角化）を招くケラチノサイトの分化上の欠陥を特徴とする（Perera, G.K., et al. Annu. Rev. Pathol. (2012)）。乾癬皮膚における細胞浸潤物は、表皮ではCD8 T細胞からなり、真皮では主にCD4 T細胞からなる。Nestleらによる重要な研究により、乾癬患者の乾癬前（健常）皮膚を免疫不全マウスに移植すると乾癬が自然発症したことが実証されている（Boyman, O. et al. J. Exp. Med. 199, 731-736 (2004)）。この状況では、皮膚に常在するパッセンジャーT細胞が炎症性疾患を引き起こす原因であった（Boyman, O. et al. J. Exp. Med. 199, 731-736 (2004)）。
【００５８】
本明細書に記載の方法および組成物は、CD1a発現またはCD1a活性の阻害物質を投与することによって、真皮および表皮におけるT細胞活性化および異常抗原提示の増大を特徴とする哺乳動物（例えば、ヒト）皮膚病状を予防または治療するために有用である。本明細書に記載の方法および組成物は、炎症性皮膚疾患の治療的処置および炎症性皮膚疾患の予防処置の両方の目的を想定している。CD1a媒介性炎症を含む本質的にあらゆる炎症性皮膚疾患を、本明細書に記載の方法およびアッセイ法を用いて治療することができる。
【００５９】
本明細書で用いる場合、「炎症性皮膚疾患」という用語は、T細胞によって部分的に媒介される炎症を伴う皮膚病状を指す。炎症性皮膚疾患の非限定的な例には、乾癬、滴状乾癬、逆性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、急性熱性好中球性皮膚症、湿疹、乾燥性湿疹、異汗性湿疹、小水疱性手掌湿疹、尋常性座瘡、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、皮膚筋炎、剥脱性皮膚炎、手湿疹、汗疱、酒さ、サルコイドーシスに起因する酒さ、強皮症に起因する酒さ、スウィート症候群に起因する酒さ、全身性エリテマトーデスに起因する酒さ、蕁麻疹に起因する酒さ、帯状疱疹痛に起因する酒さ、スウィート病、好中球性汗腺炎、無菌性膿疱、薬疹、脂漏性皮膚炎、ばら色粃糠疹、皮膚菊地病、掻痒性蕁麻疹様丘疹および妊娠プラーク、スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死融解症、刺青反応、ウェルズ症候群（好酸球性蜂巣炎）、反応性関節炎（ライター症候群）、腸関連皮膚症-関節炎症候群、リウマチ性好中球性皮膚症、好中球性エクリン汗腺炎、手背部の好中球性皮膚疾患、形質細胞限局性亀頭炎、亀頭包皮炎、ベーチェット病、遠心性環状紅斑、色素異常性固定紅斑、多形紅斑、環状肉芽腫、手の皮膚炎、光沢苔癬、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬、慢性単純性苔癬、棘状苔癬、貨幣状皮膚炎、壊疽性膿皮症、サルコイドーシス、角質下膿疱性皮膚症、蕁麻疹、一過性棘融解性皮膚症、ウルシオール誘発性接触皮膚炎などが含まれる。
【００６０】
1つの態様において、炎症性皮膚疾患はウルシオール誘発性接触皮膚炎であり、これは、トキシコデンドロン（Toxicodendron）科の植物（例えば、有毒オーク、ツタウルシ、ドクウルシ）、ウルシ科のメンバー（例えば、マンゴー、レンガス（Rengas）の木、ビルマのウルシ、インドのスミウルシノキ、およびカシューナッツの外殻）、またはイチョウ（Ginkgo biloba）への曝露によって引き起こされることがある。
【００６１】
別の態様において、炎症性皮膚疾患は乾癬である。
【００６２】
ウルシオール誘発性接触皮膚炎
毎年およそ350,000〜500,000人の米国人がウルシオール曝露によって起こる皮疹に罹患している。特に、トキシコデンドロン属の種（例えば、西洋および東洋の有毒オーク（T.ジベルシロブム（T. diversilobum）、ツタウルシのT.ラジカンス（T. radicans）、およびドクウルシまたはハナミズキのT.ベルニクス（T. vernix））は、北米に広く分布している。ウルシオールの他の供給源には、ポイズンウッド（フロリダおよびバハマにおいて）、および日本の漆器に上塗り剤として用いられるアジアのウルシ（トキシコデンドロン・ルスベルニシフルア（Toxicodendron verniciflua））の樹液（生漆）、およびカシューナッツ外殻が含まれる（例えば、Tucker and Swan (1998) NEJM, 339(4): 235.を参照）。
【００６３】
ウルシオールに対する反応は、生物学的酸化形態のウルシオール（オルトキノン）に対する免疫学的応答である。米国人口のおよそ50〜70％は、ウルシオールに対してアレルギー性であるか、または、反復曝露によってそれに感作されるとアレルギー性になると考えられる。ウルシオール曝露によるアレルギー性接触皮膚炎（しばしばウルシ皮膚炎と称される）の症状は、軽度の不快さから、数週間にわたるかぶれおよび疼痛までさまざまである。時には、曝露によって、腎障害、およびさらには致死性の全身アナフィラキシーが引き起こされることもある。
【００６４】
現時点での最良の治療は、ウルシオールとの接触を避けることである。少し前の接触の後にウルシオールを除去するために推奨されている方法は多くあり、これには、水、石鹸水、有機溶媒、ならびにTECHNU、IVYCLEANSE、ALL-STOP、ZANFEL（脂肪酸、アルコール、および界面活性剤ラウロイルサルコシンナトリウムを含む）を含む種々の市販の可溶化用混合物、さらにはDIAL ultra食器洗い用石鹸が含まれる。接触皮膚炎の薬物治療は通常、ヒドロコルチゾン、β-メタゾン、および他の類似の副腎皮質ステロイドによる局所的および／または経腸的治療の過程を伴う。
【００６５】
乾癬
乾癬は、皮膚の発赤、掻痒、および厚く乾燥した銀白色の鱗屑の頻回なエピソードを特徴とする炎症性皮膚病状である。乾癬は、表皮増殖の一次変質および二次変質を伴いうる病変、皮膚の炎症性反応、ならびにリンホカインおよび炎症性因子などの調節分子の発現を含む。乾癬皮膚は、形態的には、表皮細胞の代謝回転の増大、肥厚した表皮、異常角質化、表皮中の炎症細胞浸潤物、ならびに表皮層への多形核白血球およびリンパ球の浸潤を特徴とする。乾癬はまた、点状陥凹、爪の分離、肥厚化、および変色を高頻度に呈する手指の爪または足手指の爪に関係する場合もある。乾癬にはしばしば、他の炎症性障害、例えば、関節リウマチを含む関節炎、炎症性腸疾患（IBD）、およびクローン病も伴う。
【００６６】
乾癬の証拠となる所見は、体幹、肘、膝、頭皮、皮膚のひだ、または手指の爪において最もよく見られるが、これは皮膚の任意の部分またはすべての部分を冒すこともある。通常、新たな皮膚細胞が下層から表面に移動するまでには約1カ月かかる。乾癬では、この過程にわずか数日しかかからず、その結果、死んだ皮膚細胞の堆積および厚い鱗屑の形成が起こる。乾癬の症状には以下が含まれる：乾性であるか赤く、銀白色の鱗屑によって覆われており、赤色の境界を伴う隆起した皮膚斑であり、ひび割れしたり痛くなったりすることがあり、通常は肘、膝、体幹、頭皮および手に位置する、皮膚斑；膿疱、皮膚のひび割れおよび皮膚発赤を含む、皮膚病変；関節炎、例えば乾癬性関節炎に伴うことがある、関節の疼痛またはうずく痛み。
【００６７】
乾癬の診断は通常、皮膚の外観に基づく。さらに、他の皮膚障害の可能性を除外するために、皮膚生検、または皮膚斑の擦過および培養が必要になることもある。関節痛が存在し、持続性である場合には、乾癬性関節炎について検査するためにX線を用いることができる。
【００６８】
乾癬の重症度は、標準的な臨床的定義に従って決定することができる。例えば、乾癬疾患の強度を判定するために、乾癬病巣範囲重症度指数（Psoriasis Area and Severity Index）（PASI）が皮膚科医によって用いられている。この指数は、乾癬病変の典型的な3つの徴候である紅斑、浸潤および落屑の定量的評価と、罹患皮膚表面積とを組み合わせたものに基づく。1978年に開発されて以来、この手段は世界中で臨床研究者によって用いられている（Fredriksson T, Petersson U: Severe psoriasis-oral therapy with a new retinoid. Dermatologica 1978; 157: 238-41）。PASIは、PASI 50（PASIがベースラインから50パーセント改善）、PASI 75（PASIがベースラインから75パーセント改善）、PASI 90（PASIがベースラインから90パーセント改善）、およびPASI 100（PASIがベースラインから100パーセント改善）として示される。
【００６９】
乾癬の活動度を評価して、治療に対する臨床反応をモニターするためには、医師総合評価（Physicians Global Assessment）（PGA）が用いられる。これは、プラークの総合的性質（紅斑、落屑、および厚さ）ならびに程度をベースライン評価と比較してまとめた6点制のスコアである。患者の反応は、悪化、不良（0〜24％）、中程度（25〜49％）、良好（50〜74％）、優良（75〜99％）、または消失（100％）としてランクづけされる（van der Kerkhof P. The psoriasis area and severity index and alternative approaches for the assessment of severity: persisting areas of confusion. Br J Dermatol 1997; 137:661-662）。
【００７０】
乾癬を有する対象の疾患状態の改善に関する別の尺度には、Dermatology Life Quality Index（DLQI）またはMinimum Clinically Important Difference（MCID）などの臨床反応が含まれる。
【００７１】
アトピー性皮膚炎
アトピー性皮膚炎（AD）は別の慢性炎症性皮膚疾患であり、有病率は小児では5〜20％であり、米国人口全体ではほぼ11％である。主症状には掻痒（かゆみ）および乾燥症（皮膚乾燥）が含まれる。加えて、患者は紅斑および小水疱の発生を示す。慢性期には、表皮肥厚化が主に屈曲部位での苔癬化を招く。ADの病因は不明であり、発生病理は歴史的にアトピーによって説明されており（それ故にこの名称である）、これはIgE細胞およびTh2細胞により媒介されるアレルギー性炎症を特徴とする。しかし、ADのほとんどの症例では、アレルギー性鼻炎および喘息を含むアトピー複合状態（atopic complex）は伴っていない。現在の見解では、それとは異なり、ADの発生を、皮膚刺激物質への曝露を招いてその後に炎症を誘導する表皮障壁機能の基礎的な欠陥によって説明している。急性期には、Th2細胞が多数を占める浸潤物が炎症を左右する。しかし、ADの慢性期には、Th1細胞ならびにIL-17産生細胞が炎症反応に関与する。さらに、IL-22がケラチノサイト増殖を助長して、表皮肥厚化を促進する。ADの治療は主として対症的であり、乾燥症に対する軟化剤、および炎症を抑制するための副腎皮質ステロイドに基づく。ADの治療のための生物学的製剤は現時点では使用できない。
【００７２】
代替的な適応症
肥満細胞症：肥満細胞症は、肥満細胞の制御不能な増幅のことである。肥満細胞症は希少疾患であり、米国では毎年200,000例未満が診断されているに過ぎない。肥満細胞はc-kit受容体およびIgE受容体を発現することが公知であり、さらにヒスタミンなどの炎症メディエーターも含有する。
【００７３】
肥満細胞の脱顆粒反応は、アレルギー症状を、局所性（例えば、色素性蕁麻疹）または全身性（例えば、腸管などの器官を冒す）のいずれかとして引き起こす。肥満細胞症には、特に皮膚病変、アレルギー性反応、ショック、および全腸炎が伴ってみられる。現行の治療は、抗ヒスタミン薬などの薬物を用いる対症的なものである。
【００７４】
肥満細胞症では、肥満細胞がCD1aを発現することが示されている。このため、本明細書では、本明細書に記載の方法および組成物を用いて肥満細胞症も治療しうると想定している。CD1aに基づく2つの治療選択肢を想定している：（i）抗CD1a抗体を用いる「腫瘍性」肥満細胞の枯渇（正常肥満細胞はCD1a陰性であり、「もとのまま」である）、および（ii）CD1aの小分子阻害物質を用いる、肥満細胞に増殖シグナルを与えるCD1a媒介性T細胞応答の遮断。
【００７５】
組織球症：ランゲルハンス細胞組織球症（LCH）は、ランゲルハンス細胞の異常増大として定義されており、発生率は200,000人におよそ1人である。公知の臨床型には、（i）単巣性（好酸球性肉芽腫）、（ii）多巣性（ハンド・シュラー・クリスチャン病）、および（iii）多系統性（アブト・レッテル・シーヴェ病）の3つが挙げられる。組織球症は主として骨を冒し、有痛性の骨腫脹および骨折を引き起こすが、これには皮膚病変、肺炎症、および内分泌障害（例えば、尿崩症）も伴ってみられる。組織球症に対する現行の治療には、副腎皮質ステロイドおよび化学療法が含まれる。
【００７６】
本明細書では、（i）抗CD1a抗体を用いての腫瘍性ランゲルハンス細胞の枯渇、および（ii）CD1a拘束性炎症を阻止するためのCD1aを標的とする小分子阻害物質を非限定的に含む、本明細書に記載のCD1aに基づく治療法を用いる組織球症の治療を想定している。
【００７７】
サルコイドーシス：サルコイドーシスは、主に肺を冒す慢性炎症性疾患である。これは米国における発生率が100,000人当たり10〜20人である。サルコイドーシスは、肉芽腫形成を特徴とする炎症を含む。サルコイドーシスの徴候および症状には、肺肉芽腫、リンパ節症、および皮膚病変（例えば、結節性紅斑）が非限定的に含まれる。現行の治療法には、副腎皮質ステロイドおよび化学療法が含まれる。
【００７８】
サルコイドーシスは乾癬に伴ってみられることが公知であり、続発性疾患として発症することがある。したがって、本明細書に記載の方法および組成物は、サルコイドーシスの治療における使用も想定されている。
【００７９】
抗体
1つの態様においては、例えばCD1aと結合する治療用抗体を、本明細書において炎症性皮膚疾患の予防処置または治療に用いる。
【００８０】
本明細書に記載の方法に従って用いることのできる「抗体」には、完全な免疫グロブリン、免疫グロブリンの抗原結合性断片、ならびに免疫グロブリンの抗原結合ドメインを含む抗原結合性タンパク質が含まれる。免疫グロブリンの抗原結合性断片には、例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、およびdAbが含まれる。結合特異性は保ちつつ、望ましいと言ってもよい他の特性、例えば、二重特異性、多価性（3つ以上の結合部位）、およびコンパクトなサイズ（例えば、結合ドメインのみ）も有する、改変された抗体形式が開発されている。単鎖抗体は、それらの由来元である抗体全体の定常ドメインの一部またはすべてを欠いている。このため、それらは抗体全体の使用に付随する問題のいくつかを克服することができる。例えば、単鎖抗体は、重鎖定常領域と他の生体分子との間の特定の望ましくない相互作用がない傾向がある。さらに、単鎖抗体は抗体全体よりもかなり小さく、抗体全体よりも大きな透過性を有することができ、それにより、単鎖抗体を標的抗原結合部位により効率的に局在させて結合させることが可能になる。さらに、単鎖抗体はサイズが比較的小さいため、それらがレシピエントにおいて望ましくない免疫応答を誘発する可能性は抗体全体よりも低い。各単鎖抗体が第1のペプチドリンカーによって共有結合性に連結された1つのVHドメインおよび1つのVLドメインを有する複数の単鎖抗体を、少なくとも1つまたは複数のペプチドリンカーによって共有結合性に連結して、単一特異性または多重特異性でありうる多価単鎖抗体を形成させることができる。多価単鎖抗体の各鎖は、可変軽鎖断片および可変重鎖断片を含み、ペプチドリンカーによって少なくとも1つの他の鎖と連結されている。ペプチドリンカーは少なくとも15個のアミノ酸残基から構成される。リンカーアミノ酸残基の最大数はおよそ100個である。2つの単鎖抗体を組み合わせてダイアボディ（diabody）を形成させることができ、これは二価ダイマーとしても公知である。ダイアボディは2つの鎖および2つの結合部位を有し、単一特異性または二重特異性でありうる。ダイアボディの各鎖は、VHドメインがVLドメインと連結されたものを含む。これらのドメインは、同一鎖上のドメイン間の対合を防いで、それ故に異なる鎖上の相補的ドメイン間の対合が起こって、2つの抗原結合部位を再形成させるのに十分に短いリンカーによって接続されている。3つの単鎖抗体を組み合わせてトリアボディ（triabody）を形成することができ、これは三価トリマーとしても公知である。トリアボディは、VLドメインまたはVHドメインのアミノ酸末端をVLドメインまたはVHドメインのカルボキシル末端と直接融合させて、すなわち、リンカー配列を伴わずに構築されている。トリアボディは3つのFv頭部を有し、ポリペプチドが環状に頭-尾結合様式で配列されている。トリアボディに関して予想される立体配座は平面的であり、この場合には3つの結合部位が互いに120度の角度で1つの平面に位置する。トリアボディは単一特異性、二重特異性、または三重特異性でありうる。したがって、本明細書に記載の方法において有用な抗体には、抗原と特異的に結合する、天然抗体、(Fab')2などの二価断片、Fabなどの一価断片、単鎖抗体、単鎖Fv(scFv)、単一ドメイン抗体、多価単鎖抗体、ダイア���ディ、トリアボディなどが非限定的に含まれる。
【００８１】
当業者に公知の方法によって、ポリペプチドまたはポリペプチドの一部分に対して抗体を産生させることもできる。抗体は、遺伝子産物またはその断片による免疫処置によって、ウサギまたはマウスなどの動物において容易に産生される。免疫処置を受けたマウスは、ハイブリドーマの製造のためのB細胞の供給源を得るためには特に有用であり、続いてそのハイブリドーマを培養して、大量のモノクローナル抗体を産生させる。抗体の製造方法は、例えば、Harlow et al., 1988に詳細に記載されている。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体はいずれも本明細書に記載の方法に用いうるが、特定のタンパク質に対する特異性の向上を必要とする条件であれば、モノクローナル抗体を用いることが好ましい。
【００８２】
有用なモノクローナル抗体および断片は、任意の種（ヒトを含む）から得られることができるか、または複数の種の配列を使用するキメラタンパク質として形成させることができる。ヒトモノクローナル抗体または「ヒト化」マウス抗体もまた、本発明に従って用いられる。例えば、マウスモノクローナル抗体は、マウスFv領域（すなわち、抗原結合部位を含む）またはその相補性決定領域をコードするヌクレオチド配列を、ヒト定常ドメイン領域およびFc領域をコードするヌクレオチド配列と遺伝子組換えすることによって、「ヒト化」することができる。ヒト化標的化部分は、宿主レシピエントにおいて抗体またはポリペプチドの免疫反応性を低下させることにより、半減期を延長させて、有害な免疫反応の可能性を低下させることが認識されている。マウスモノクローナル抗体は、好ましくはヒト型で使用されるべきである。抗原結合活性は、抗体の可変部分（Fv）の軽鎖上および重鎖上に（各3つずつ）位置する6つの相補性決定領域（CDR）のアミノ酸の配列およびコンフォメーションによって決定される。25kDaの単鎖Fv（scFv）分子は、短いペプチドスペーサー配列を介して連結された軽鎖の可変領域（VL）および重鎖の可変領域（VH）で構成される。scFvの遺伝子を含む糸状ファージの表面上にscFv断片を提示させる手法が開発されている。広範囲にわたる抗原特異性を有するscFv分子が、scFvファージライブラリーの1つの大きいプールに存在しうる。
【００８３】
キメラ抗体は、異なる動物種に由来する2つまたはそれ以上のセグメントまたは部分を特徴とする免疫グロブリン分子である。一般に、キメラ抗体の可変領域は、マウスモノクローナル抗体などの非ヒト哺乳動物抗体に由来し、免疫グロブリン定常領域はヒト免疫グロブリン分子に由来する。いくつかの態様において、両方の領域および組み合わせは、日常的に測定した場合、低い免疫原性を有する。
【００８４】
1つの態様において、CD1aの阻害物質は、米国特許第7,968,092号に記載されたCD1aに対するヒト結合分子であり、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
【００８５】
1つの態様において、CD1aの阻害物質は、米国特許第7,968,092号に記載された、ヒトCD1aと結合するモノクローナル抗体であり、このモノクローナル抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【００８６】
1つの態様において、CD1aの阻害物質は、米国特許第7,968,092号に記載された、ヒトCD1aと結合するモノクローナル抗体であり、IgG1である。
【００８７】
1つの態様において、CD1aの阻害物質は、米国特許第7,968,092号に記載された、ヒトCD1aと結合するモノクローナル抗体であり、CD1a発現細胞に対する細胞傷害活性を有する。
【００８８】
CD1a発現の核酸阻害物質
選択された標的ポリペプチドの発現を阻害するための強力なアプローチは、RNA干渉物質の使用によるものである。RNA干渉（RNAi）では、選択的分解のために標的ポリペプチドをコードするメッセンジャーRNAを標的とする低分子干渉RNA（siRNA）二重鎖を用いる。遺伝子発現のsiRNA依存的な転写後サイレンシングは、siRNAによって導かれた部位で標的メッセンジャーRNA分子を切断することを伴う。「RNA干渉（RNAi）」は進化的に保存された過程であり、この過程では、標的遺伝子と同一であるか非常に類似する配列のRNAの発現または導入が、その標的遺伝子から転写されたメッセンジャーRNA（mRNA）の配列特異的分解または特異的転写後遺伝子サイレンシング（PTGS）をもたらし（Coburn, G. and Cullen, B. (2002) J. of Virology 76(18):9225を参照）、それによって標的遺伝子の発現を阻害する。1つの態様において、RNAは二本鎖RNA（dsRNA）である。この過程は、植物、無脊椎動物、および哺乳動物細胞において説明されている。自然界では、RNAiは、長いdsRNAの、siRNAと名づけられた二本鎖断片への前進的切断（processive cleavage）を促進するdsRNA特異的エンドヌクレアーゼであるダイサー（Dicer）によって開始される。siRNAは、標的mRNAを認識して切断するタンパク質複合体（「RNA誘導サイレンシング複合体」または「RISC」と名づけられる）に組み込まれる。また、RNAiを、標的遺伝子の発現を阻害またはサイレンシングするために、核酸分子、例えば合成siRNAまたはRNA干渉物質を導入することによって開始させることもできる。本明細書で用いる場合、「標的遺伝子発現の阻害」は、RNA干渉が誘導されていない状況と比較した、標的遺伝子または標的遺伝子によってコードされるタンパク質の発現またはタンパク質活性もしくはレベルの何らかの低下を含む。この低下は、RNA干渉物質による標的とされていない標的遺伝子の発現または標的遺伝子によってコードされるタンパク質の活性もしくはレベルと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、もしくは99％、またはそれ以上の低下であると考えられる。
【００８９】
「RNA干渉物質」および「RNA干渉」という用語は、それらが本明細書で用いられる場合、RNA干渉物質がsiRNA、miRNA、shRNA、または他の二本鎖RNA分子を含むか否かにかかわらず、二本鎖RNAによって媒介される遺伝子サイレンシングのそのような形態を範囲に含むことを意図している。本明細書において「低分子干渉RNA」（small interfering RNA）とも称される「短鎖干渉RNA」（short interfering RNA（siRNA））は、例えばRNAiによって、標的遺伝子の発現を阻害するように機能するRNA作用物質として定義される。siRNAは化学的に合成するか、インビトロ転写によって生成させるか、または宿主細胞内で産生させることが可能である。1つの態様において、siRNAは、長さが約15〜約40個のヌクレオチド、好ましくは約15〜約28個のヌクレオチド、より好ましくは長さが約19〜約25個のヌクレオチド、より好ましくは長さが約19、20、21、22、または23個のヌクレオチドの二本鎖RNA（dsRNA）分子であり、約0、1、2、3、4または5個のヌクレオチドの長さを有する3'および／または5'オーバーハングを各鎖上に含むことができる。オーバーハングの長さは2本の鎖間で独立しており、すなわち、一方の鎖上のオーバーハングの長さは、他方の鎖上のオーバーハングの長さに依存しない。好ましくは、siRNAは、標的メッセンジャーRNA（mRNA）の分解または特異的転写後遺伝子サイレンシング（PTGS）を介してRNA干渉を促進することができる。
【００９０】
siRNAには、低分子ヘアピン（ステムループとも呼ばれる）RNA（shRNA）も含まれる。1つの態様において、これらのshRNAは、短い（例えば、約19〜約25個のヌクレオチドの）アンチセンス鎖と、これに続く約5〜約9個のヌクレオチドのヌクレオチドループ、および類似のセンス鎖から構成される。または、センス鎖がヌクレオチドループ構造に先行してもよく、アンチセンス鎖があとに続いてもよい。これらのshRNAをプラスミド、レトロウイルス、およびレンチウイルス中に含めて、例えば、pol III U6プロモーターまたは別のプロモーターから発現させることができる（例えば、全体として参照により本明細書に組み入れられるStewart, et al. (2003) RNA Apr;9(4):493-501を参照）。RNA干渉物質の標的遺伝子または配列は、細胞遺伝子またはゲノム配列、例えばCD1a配列とすることができる。siRNAは、標的遺伝子もしくはゲノム配列、またはその断片と実質的に相同でありうる。これに関連して用いられる「相同」という用語は、標的のRNA干渉を生じさせるために、標的mRNAまたはその断片と、実質的に同一であること、十分に相補的であること、または類似していることとして定義される。標的配列の発現を阻害するかまたは該発現に干渉するのに適したRNAには、ネイティブなRNA分子のほかに、RNA誘導体および類似体も含まれる。好ましくは、siRNAはその標的と同一である。siRNAはただ1つの配列を標的とすることが好ましい。siRNAなどのRNA干渉物質のそれぞれは、例えば、発現プロファイリングによって、可能性のあるオフターゲット効果についてスクリーニングすることができる。そのような方法は当業者に公知であり、例えば、Jackson et al. Nature Biotechnology 6:635-637, 2003に記載されている。発現プロファイリングに加えて、オフターゲット効果を有する可能性のある配列を同定するために、可能性のある標的配列を配列データベース中の類似配列についてスクリーニングすることもできる。例えば、Jacksonら（同上）によれば、配列同一性を有する15個の連続するヌクレオチド、またはおそらくは11個程度の短さの連続するヌクレオチドでも、非標的化転写産物のサイレンシングを導くのに十分である。このため、BLASTなどの任意の公知の配列比較法による配列同一性分析を用いて、可能性のあるオフターゲットサイレンシングを避けるために、提案されたsiRNAを最初にスクリーニングすることができる。siRNA配列は、siRNAのアンチセンス（ガイド）鎖のRISCへの取り込みを最大にし、それによって分解のためにヒトGGT mRNAを標的とするRISCの能力を最大にするように選択される。これは、アンチセンス鎖の5'末端で最小の結合自由エネルギーを有する配列についてスキャニングを行うことによって達成することができる。より低い自由エネルギーはsiRNA二重鎖のアンチセンス鎖の5'末端の巻き戻しの強化を招き、それにより、アンチセンス鎖がRISCに取り込まれてmRNAの配列特異的切断を導くことを確実にする。siRNA分子は、RNAのみを含む分子に限定される必要はなく、例えば、化学的に修飾されたヌクレオチドおよび非ヌクレオチドをさらに範囲に含み、また、リボース糖分子が別の糖分子にまたは同様の機能を果たす分子に置換されている分子も含む。さらに、ヌクレオチド残基間の非天然の結合、例えば、ホスホロチオエート結合を用いることもできる。RNA鎖は、フ��オロフォアなどのレポーター基の反応性官能基によって誘導体化することができる。特に有用な誘導体は、RNA鎖の一端または両端において、典型的にはセンス鎖の3'末端において修飾されている。例えば、3'末端の2'-ヒドロキシルは種々の基で容易にかつ選択的に誘導体化することができる。他の有用なRNA誘導体は、2'O-アルキル化残基または2'-O-メチルリボシル誘導体および2'-O-フルオロリボシル誘導体といった修飾された糖質部分を有するヌクレオチドを組み入れている。RNA塩基を修飾することもできる。標的配列の発現を阻害するかまたは該発現に干渉するために有用な任意の修飾塩基を用いることができる。例えば、5-ブロモウラシルおよび5-ヨードウラシルなどのハロゲン化塩基を組み入れることができる。また、塩基をアルキル化することもでき、例えば、7-メチルグアノシンをグアノシン残基の代わりに組み入れることができる。好首尾な阻害を生じさせる非天然塩基を組み入れることもできる。最も好ましいsiRNA修飾には、2'-デオキシ-2'-フルオロウリジンまたはロックド核酸（LAN）ヌクレオチド、およびホスホジエステルまたはさまざまな数のホスホロチオエート結合のいずれかを含むRNA二重鎖が含まれる。そのような修飾は当業者に公知であり、例えば、Braasch et al., Biochemistry, 42: 7967-7975, 2003に記載されている。siRNA分子にとって有用な修飾のほとんどは、アンチセンスオリゴヌクレオチド技術のために確立された化学反応を用いて導入することができる。好ましくは、修飾は2'-O-メチル修飾を最小限にしか含まず、好ましくはそのような修飾は除外される。修飾からは、好ましくはsiRNAの遊離5'-ヒドロキシル基の修飾も除外される。
【００９１】
1つの好ましい態様において、RNA干渉物質は薬学的に許容される担体中にある状態で送達または投与される。リポソームなどの追加の担体物質を、薬学的に許容される担体に加えることができる。別の態様において、RNA干渉物質は、薬学的に許容される担体中にある状態で、低分子ヘアピンRNA（shRNA）をコードするベクターによって、個体の器官の細胞に送達される。shRNAは、細胞によって、転写後に例えばCD1aを標的とすることができるsiRNAに変換される。
【００９２】
1つの態様において、ベクターは、テトラサイクリン誘導性ベクターなどの調節可能なベクターである。例えば、pTet-Onベクター（BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA）を用いる、Wang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 100: 5103-5106に記載された方法を用いることができる。1つの態様において、本明細書に記載の方法に用いられるRNA干渉物質は、ベクターを用いることなく、静脈内注入、例えば水圧注入（hydrodynamic injection）の後にインビボで細胞によって能動的に取り込まれ、これはRNA干渉物質の効率のよいインビボ送達の例証となる。siRNAを送達するための1つの方法は、適切な薬学的に許容される担体中にある状態での局所投与による。また、本発明の方法に用いられるRNA干渉物質、例えばsiRNAまたはshRNAを送達するための他の戦略、例えば、ベクター、例えばプラスミド、またはレンチウイルスベクターなどのウイルスベクターによる送達を使用することもできる。そのようなベクターは、例えば、Xiao-Feng Qin et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 100: 183-188に記載されたように用いることができる。他の送達方法には、RNA干渉物質を塩基性ペプチド、例えばTATペプチドの断片とコンジュゲートさせるかもしくは混合することによって塩基性ペプチドを用いて、陽イオン性脂質と混合して、または粒子に製剤化して、本発明のRNA干渉物質、例えばsiRNAまたはshRNAなどを送達することが含まれる。RNA干渉物質、例えばCD1a mRNAを標的とするsiRNAは、単独で送達してもよいか、または、例えば他の細胞遺伝子を対象とするsiRNAなどの他のRNA干渉物質、例えばsiRNAと組み合わせて送達してもよい。また、siRNAを、皮膚の炎症を含む疾患または障害を治療または予防するために用いられる他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。shRNA分子を含む合成siRNA分子は、当業者に公知のいくつかの手法を用いて得ることができる。例えば、siRNA分子は、当技術分野において公知の方法を用いて、例えば、適切に保護されたリボヌクレオシドホスホロアミダイトおよび従来のDNA／RNA合成装置を用いて、化学的に合成すること、または組換え法によって生成させることができる（例えば、Elbashir, S.M. et al. (2001) Nature 411 :494-498；Elbashir, S.M., W. Lendeckel and T. Tuschl (2001) Genes & Development 15: 188-200；Harborth, J. et al . (2001) J. Cell Science 114:4557-4565；Masters, J.R. et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 98:8012-8017；およびTuschl, T. et al . (1999) Genes & Development 13:3191-3197を参照）。または、いくつかの商業的なRNA合成の供給元を用いることもでき、これには、Proligo （Hamburg, Germany）、Dharmacon Research（Lafayette, CO, USA）、Pierce Chemical（Perbio Scienceの一部、Rockford, IL, USA）、Glen Research（Sterling, VA, USA）、ChemGenes（Ashland, MA, USA）、およびCruachem（Glasgow, UK）が非限定的に含まれる。このように、siRNA分子は合成することが過度に困難ではなく、RNAiに適した品質で容易に提供される。さらに、dsRNAを、プラスミドベクター、レトロウイルス、およびレンチウイルスによってコードされたステムループ構造として発現させることもできる（Paddison, P. J. et al. (2002) Genes Dev. 16:948-958；McManus, M.T. et al. (2002) RNA 8:842-850；Paul, CP. et al. (2002) Nat. Biotechnol. 20:505-508；Miyagishi, M. et al. (2002) Nat. Biotechnol. 20:497-500；Sui, G. et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 99:5515-5520；Brummelkamp, T. et al. (2002) Cancer Cell 2:243；Lee, N.S., et al. (2002) Nat. Biotechnol. 20:500-505；Yu, J.Y., et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 99:6047-6052；Zeng, Y., et al. (2002) Mol. Cell 9: 1327-1333；Rubinson, D.A., et al. (2003) Nat. Genet. 33:401-406；Stewart, S.A., et al. (2003) RNA 9:493-501）。これらのベクターは一般に、dsRNAの上流にpol IIIプロモーターを有し、センスおよびアンチセンスRNA鎖を別々におよび／またはヘアピン構造として発現することができる。細胞内で、ダイサーが短鎖ヘアピンRNA（shRNA）を有効なsiRNAにプロセシングする。本発明のsiRNA分子の標的領域は、所与の標的遺伝子配列、例えば、開始コドンの約25〜50ヌクレオチド下流、約50〜75ヌクレオチド下流、または約75〜100ヌクレオチド下流から始まる、CD1aコード配列から選択することができる。ヌクレオチド配列は、5'または3' UTRおよび開始コドンの近傍の領域を含んでもよい。本発明のsiRNA分子を設計する1つの方法は、23ヌクレオチドの配列モチーフAA（N19）TT（Nは任意のヌクレオチドであってよい）を同定して、少なくとも25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、または75％のG／C含量を有するヒットを選択することを伴う。配列の「TT」部分は任意である。または、そのような配列が見いだされない場合には、モチーフNA（N21）を用いて検索を拡張することができ、Nは任意のヌクレオチドであってよい。この状況では、センスsiRNAの3'末端を、センスおよびアンチセンス3'オーバーハングの配列組成に関して対称的な二重鎖の生成を可能にするために、TTに変換することができる。続いて、アンチセンスsiRNA分子を、23ヌクレオチド配列モチーフのヌクレオチド位置1〜21に対する相補鎖として合成させることができる。対称的な3' TTオーバーハングの使用は、低分子干渉リボ核タンパク質粒子（siRNP）を、ほぼ等しいセンスおよびアンチセンス標的RNA切断siRNPの比で確実に形成させるために好都合でありうる（Elbashir et al., （2001） 前記およびElbashir et al, 2001 前記）。また、NCBI、BLAST、DerwentおよびGenSeqを非限定的に含む配列データベースの分析、ならびにOligoengine（登録商標）などの商業的に使用可能なオリゴ合成会社を利用して、ただ1つの遺伝子のみが確実に標的となるようにESTライブラリーに対してsiRNA配列を選択することもできる。
【００９３】
CD1aを標的とするsiRNA配列を、いくつかある中でも特に、INVITROGEN（商標）、THERMO SCIENTIFIC（商標）、ORIGENE（商標）から商業的に入手することもできる。
【００９４】
RNA干渉物質の送達
RNA干渉物質、例えばsiRNA、またはRNA干渉物質を含むベクターを、取り込みのために標的細胞、例えばランゲルハンス細胞、皮膚細胞、または他の所望の標的細胞に送達する方法には、RNA干渉物質、例えばsiRNAを含む組成物の局所投与もしくは注入、または細胞、例えばランゲルハンス細胞と、RNA干渉物質、例えばsiRNAを含む組成物との直接接触が含まれる。別の態様において、RNA干渉物質、例えばsiRNAは、静脈、動脈、細静脈、または細動脈などの血管に、例えば水圧注入またはカテーテル挿入によって直接注入することができる。投与は1回の注入によっても、または2回もしくはそれ以上の注入によってもよい。RNA干渉物質は薬学的に許容される担体中にある状態で送達される。1種または複数種のRNA干渉物質を同時に用いることができる。1つの態様においては、ヒトCD1aを標的とする単一のsiRNAを用いる。1つの態様においては、特定の細胞をRNA干渉の標的とし、RNA干渉の非特異的標的化によって引き起こされるRNA干渉の潜在的な副作用を制限する。この方法では、例えば、RNA干渉を細胞に有効に送達するために用いられる細胞標的化部分とRNA干渉結合部分とを含む複合体または融合分子を用いることができる。例えば、抗体-プロタミン融合タンパク質は、siRNAと混合されると、siRNAと結合して、その抗体によって認識される抗原を発現する細胞内にsiRNAを選択的に送達し、その結果、その抗原を発現する細胞においてのみ遺伝子発現のサイレンシングを引き起こす。siRNAまたはRNA干渉誘導分子の結合部分は、タンパク質またはタンパク質の核酸結合ドメインもしくは断片であり、結合部分は標的化部分の一部分と融合されている。標的化部分の場所は、構築物のカルボキシル末端もしくはアミノ末端のいずれか、または融合タンパク質の中央でありうる。また、ウイルス媒介性送達機構を、Xia, H. et al. (2002) Nat Biotechnol 20(10): 1006）に記載されたように、インビトロおよびインビボで細胞にsiRNAを送達するために用いることもできる。また、Rubinson, D.A., et al.（(2003) Nat. Genet. 33:401-406）およびStewart, S.A., et al.（(2003) RNA 9:493-501）に記載されたように、shRNAのプラスミド媒介性またはウイルス媒介性送達機構を、インビトロおよびインビボで細胞にshRNAを送達するために用いることもできる。RNA干渉物質、例えばsiRNAまたはshRNAを、以下の作用の1つまたは複数を遂行する構成要素とともに導入することができる：細胞、例えばリンパ球または他の細胞による、RNA干渉物質、例えばsiRNAの取り込みを強化すること、一本鎖のアニーリングを阻害すること、一本鎖を安定化すること、またはそうでなければ標的細胞への送達を助長して、標的遺伝子、例えばCD1aの阻害を増大させること。特定のRNA干渉物質の用量は、特定の標的遺伝子のRNA干渉、例えば翻訳後遺伝子サイレンシング（PTGS）を達成し、それによって、標的遺伝子発現の阻害、または標的遺伝子によってコードされるタンパク質の活性もしくはレベルの阻害をもたらすために必要な量であると考えられる。
【００９５】
CD1aの活性または発現の小分子阻害
本明細書で用いる場合、「小分子」という用語は、ペプチド、ペプチド模倣体、アミノ酸、アミノ酸類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、アプタマー、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、1モル当たり約10,000グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物（すなわち、ヘテロ有機化合物および有機金属化合物を含む）、1モル当たり約5,000グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物、1モル当たり約1,000グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物、1モル当たり約500グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物、ならびにそのような化合物の塩、エステル、および他の薬学的に許容される形態を非限定的に含む、化学物質を指す。
【００９６】
CD1a発現および／またはCD1a活性の本質的にあらゆる小分子阻害物質を、本明細書に記載の方法を用いる炎症性皮膚疾患の治療において使用することができる。CD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する候補小分子作用物質を同定するためのスクリーニングアッセイ法を、本明細書において提供する。
【００９７】
投与量および投与
1つの局面において、本明細書に記載の方法は、対象における炎症性皮膚疾患（いくつかある中でも特に、例えば、ウルシオール誘発性接触皮膚炎、乾癬）を治療するための方法を提供する。1つの態様において、対象は哺乳動物であってよい。別の態様において、哺乳動物はヒトであってよいが、このアプローチはすべての哺乳動物に関して有効である。本方法は、CD1aと結合する阻害物質を薬学的に許容される担体中に含む薬学的組成物の有効量を対象に投与する段階を含む。いくつかの態様において、CD1aの阻害物質は、抗体またはペプチドなどの結合タンパク質を含む。他の態様において、CD1aの阻害物質は、小分子またはRNA干渉分子（例えば、siRNA、shRNAなど）を含む。
【００９８】
作用物質の投与量の範囲はその有効性に依存し、所望の効果、例えば免疫応答のモジュレーションを生じさせるのに十分に多い量を含む。投与量は、許容されない有害な副作用を引き起こすほどは多くないべきである。一般に、投与量は、阻害物質の種類（例えば、抗体または断片、小分子、siRNAなど）、ならびに患者の年齢、状態および性別に応じて異なると考えられる。投与量は当業者によって決定可能であり、また、合併症の場合には個々の医師によっても調整されうる。典型的には、投与量は0.001mg／kg体重〜5g／kg体重の範囲である。いくつかの態様において、投与量の範囲は0.001mg／kg体重〜1g／kg体重、0.001mg／kg体重〜0.5g／kg体重、0.001mg／kg体重〜0.1g／kg体重、0.001mg／kg体重〜50mg／kg体重、0.001mg／kg体重〜25mg／kg体重、0.001mg／kg体重〜10mg／kg体重、0.001mg／kg体重〜5mg／kg体重、0.001mg／kg体重〜1mg／kg体重、0.001mg／kg体重〜0.1mg／kg体重、0.001mg／kg体重〜0.005mg／kg体重である。または、いくつかの態様において、投与量の範囲は、0.1g／kg体重〜5g／kg体重、0.5g／kg体重〜5g／kg体重、1g／kg体重〜5g／kg体重、1.5g／kg体重〜5g／kg体重、2g／kg体重〜5g／kg体重、2.5g／kg体重〜5g／kg体重、3g／kg体重〜5g／kg体重、3.5g／kg体重〜5g／kg体重、4g／kg体重〜5g／kg体重、4.5g／kg体重〜5g／kg体重、4.8g／kg体重〜5g／kg体重である。1つの態様において、用量の範囲は5□g／kg体重〜30□g／kg体重である。または、用量の範囲は、5□g／mL〜30□g／mLの血清レベルを維持するように微調整されると考えられる。
【００９９】
上に列挙した用量の投与は、限られた期間にわたって繰り返すことができる。いくつかの態様において、用量は1日1回、または1日に複数回、例えば、限定するものではないが1日3回投与される。1つの好ましい態様において、上に列挙した用量は、数週間または数カ月にわたって毎日投与される。治療の継続期間は、対象の臨床的進展および治療法に対する反応に依存する。初期の比較的高い治療用量の後に、継続的な比較的低い維持用量を想定している。
【０１００】
治療的有効量とは、免疫応答の統計的に有意で測定可能な変化を生じさせるのに十分な作用物質の量のことである（以下の「有効性測定」を参照）。そのような有効量は、所与の作用物質に関して、動物試験ならびに臨床的治験において見積もることができる。
【０１０１】
本明細書に記載の方法および組成物において有用な作用物質は、局所的に、静脈内に（ボーラス注入または持続注入による）、経口的に、吸入により、腹腔内に、筋肉内に、皮下に、体腔内に投与することができ、必要に応じて蠕動手段によって、または当業者に公知の他の手段によって送達することができる。1つの態様においては、本明細書に記載の方法のための作用物質を、病変に直接投与することが好ましい（例えば、手術中に、または直接注入により）。作用物質は、所望であれば全身投与することができる。
【０１０２】
少なくとも1種の作用物質を含む治療用組成物を、従来通りに単位用量で投与することができる。治療用組成物に言及して用いられる「単位用量」という用語は、対象に対する単位投与量として適する物理的に離散的な単位量を指し、各単位は、所望の治療効果を生じるように算出された活性物質の所定量を、必要な生理的に許容される希釈剤、すなわち担体、またはビヒクルとともに含有する。
【０１０３】
組成物は、投薬製剤に適合する様式で、治療的有効量で投与される。投与される量およびタイミングは、治療しようとする対象、有効成分を活用する対象の系の能力、および所望の治療効果の度合いに依存する。作用物質は、例えば、抗体または標的化リポソーム技術などの標的化部分によって標的化することができる。いくつかの態様において、作用物質は、例えば抗リガンド抗体（Ab）と特異的標的を対象とするAbとの化学結合によって作製される、二重特異性抗体を用いることによって、組織に対して標的化することができる。化学コンジュゲートの限界を回避する目的で、リガンドおよび／またはキメラ阻害物質を細胞表面分子に向けさせる組換え二重特異性単鎖Abの作製のために、抗体の分子コンジュゲートを用いることができる。作用物質に抗体を付加することにより、作用物質を所望の標的部位（例えば、病変）に相加的に蓄積させることが可能になる。抗体に基づく標的化部分または非抗体に基づく標的化部分を使用して、リガンドまたは阻害物質を標的部位に送達させることができる。調節不全または疾患に関連した抗原に対する天然の結合物質をこの目的のために用いることが好ましい。
【０１０４】
投与することが必要な有効成分の正確な量は医師の判断に依存し、各個体に対して特有である。しかし、全身適用のために適した投与量の範囲は、本明細書に開示されており、投与経路に依存する。投与のための適したレジメンもさまざまであるが、初期投与の後に、1つまたは複数の間隔をおいて、その後の注射または他の投与による反復投与を行うことが典型的である。または、血中濃度をインビボ治療法に関して指定された範囲に維持するのに十分な持続的静脈内注入も想定している。
【０１０５】
薬学的組成物
本発明は、本明細書に記載の治療方法を実施するために有用な治療用組成物を非限定的に含む。治療用組成物は、生理的に耐容される担体を、有効成分としてその中に溶解または分散された本明細書に記載の活性作用物質とともに含有する。1つの好ましい態様において、治療用組成物は、哺乳動物またはヒト患者に対して治療目的で投与された場合に免疫原性がない。本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される」、「生理的に耐容される」、およびそれらの文法的変形物は、それらが組成物、担体、希釈剤、および試薬を指す場合には互換的に用いられ、これらの物質を、悪心、めまい、急性胃蠕動などの望ましくない生理的作用を生じることなく哺乳動物に投与できることを表す。薬学的に許容される担体は、所望されない限り、それと混合される作用物質に対する免疫応答の惹起を促進しないと考えられる。溶解または分散されている有効成分を含有する薬理学的組成物の調製は当技術分野で十分に了解されており、製剤に基づいて限定される必要はない。典型的には、そのような組成物は溶液または懸濁液のいずれかとして注入可能なように調製されるが、使用前に液体によって溶液または懸濁液にするのに適した固体剤形を調製することもできる。また、調製物を乳化させること、またはリポソーム組成物として提示することもできる。有効成分は、薬学的に許容されかつ有効成分と適合性がある賦形剤と、本明細書に記載の治療方法に用いるのに適した量で混合することができる。適切な賦形剤には、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびこれらの組み合わせが含まれる。さらに、必要に応じて、組成物は、有効成分の有効性を強化する、湿潤剤、乳化剤、pH緩衝剤などの少量の補助物質を含んでもよい。本発明の治療用組成物は、その中の構成要素の薬学的に許容される塩を含むことができる。薬学的に許容される塩には、例えば塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸により形成される（ポリペプチドの遊離アミノ基と形成される）酸付加塩が含まれる。遊離カルボキシル基と形成される塩を、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または第二鉄の水酸化物などの無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から導き出すこともできる。生理的に耐容される担体は当技術分野において周知である。例示的な液体担体は、有効成分および水のほかに何の物質も含有しないか、または緩衝剤、例えば生理的pH値のリン酸ナトリウム、生理食塩水もしくはその両方、例えばリン酸緩衝食塩水などを含む滅菌水溶液である。さらになお、水性担体は、複数の緩衝塩、ならびに塩化ナトリウムおよび塩化カリウムなどの塩、デキストロース、ポリエチレングリコール、および他の溶質を含有することができる。液体組成物はまた、水に加えてまたは水を除外して液相を含むことができる。そのような追加の液相の例には、グリセリン、綿実油などの植物油、および水-油エマルションがある。特定の障害または病状の治療に有効と考えられる本発明に記載の方法に用いられる有効作用物質の量は、その障害または病状の性質に依存する���考えられ、標準的な臨床的手法によって決定することができる。
【０１０６】
1つの態様において、組成物は、米国特許第7,968,092号に記載された、CD1aに対するヒト結合分子であるCD1aの阻害物質を含む。
【０１０７】
1つの態様において、組成物は、米国特許第7,968,092号に記載された、ヒトCD1aと結合するモノクローナル抗体であるCD1aの阻害物質を含み、このモノクローナル抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【０１０８】
1つの態様において、組成物は、米国特許第7,968,092号に記載された、ヒトCD1aと結合するIgG1モノクローナル抗体であるCD1aの阻害物質を含む。
【０１０９】
1つの態様において、組成物は、米国特許第7,968,092号に記載された、CD1a発現細胞に対する細胞傷害活性を有する、ヒトCD1aと結合するモノクローナル抗体であるCD1aの阻害物質を含む。
【０１１０】
有効性測定
炎症性皮膚疾患（いくつかある中でも特に、例えば、ウルシオール誘発性接触皮膚炎、乾癬）に対する所与の治療の有効性は、熟練した臨床医によって判定されうる。しかし、治療は、CD1aと結合するかまたはCD1aの抗原提示活性に干渉する阻害物質を含む作用物質による治療後に、免疫疾患の徴候もしくは症状のいずれか1つまたはすべてが有益な様式で変更され、疾患の臨床的に認められた他の症状またはマーカーが向上するか、またはさらには例えば少なくとも10％改善される場合に、本明細書で使用される用語である「有効な治療」と判断される。また、有効性を、免疫疾患、入院、または医学的介入の必要性の安定化（すなわち、疾患の進行が停止するか、または少なくとも緩徐化する）による評価で、個体が悪化しないことに関して測定することもできる。これらの指標を測定する方法は当業者に公知であり、かつ／または本明細書に記載されている。治療には、個体または動物（いくつかの非限定的な例にはヒトまたは哺乳動物が含まれる）における疾患の任意の治療が含まれ、これには以下が含まれる：（1）疾患を阻害すること、例えば、免疫疾患の進行を停止させるかもしくは緩徐化すること；または（2）疾患を和らげること、例えば、症状の縮退を引き起こすこと；および（3）炎症性皮膚疾患の発症を予防するかもしくはその見込みを低下させること、または炎症性疾患に伴う続発性疾患／障害（例えば、瘢痕化、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）などの続発性細菌感染症など）を予防すること。
【０１１１】
疾患の治療のための有効量とは、それを必要とする哺乳動物に投与された場合に、その疾患に関して、本明細書において定義された用語である有効な治療をもたらすのに十分である量を意味する。作用物質の有効性は、炎症性皮膚疾患の身体的指標、例えば、発赤、疼痛、炎症、病変のサイズ、滲出または膿汁形成の度合い、掻痒などを評価することによって判定することができる。
【０１１２】
スクリーニングアッセイ法
本明細書で想定されるスクリーニングアッセイ法は、CD1a発現および／CD1aまたは活性をモジュレートするモジュレーター、すなわち、候補化合物もしくは被験化合物または作用物質（例えば、ペプチド、抗体、ペプチド模倣体、小分子（有機もしくは無機）、または他の薬物）を同定するために用いることができる。これらのアッセイ法は、例えば、CD1aとウルシオールなどのリガンドとの相互作用に干渉する化合物、またはCD1aによるT細胞活性化を防止する化合物を同定するために設計される。
【０１１３】
「候補作用物質」という用語は、本明細書において、CD1aとリガンドとの相互作用をモジュレートする能力に関して調査される任意の作用物質を意味する。この方法は一般に、治療用物質として作用しうる、これまで知られていなかった分子を同定するためのスクリーニングアッセイ法として用いられるが、本明細書に記載のスクリーニングを、例えば、治療用物質の活性の標準化において、そのような活性を有することが公知である作用物質が実際に活性を有することを確かめるために用いることもできる。候補作用物質は、所望の活性をモジュレートする能力、例えば、CD1a発現および／またはCD1a活性を低下させる能力に関して調査することが望まれる、例えばペプチド、ペプチド模倣体、ポリヌクレオチド、または小型有機分子を含む、あらゆる種類の分子であってよい。本明細書に記載の方法はハイスループット形式に容易に適応させることができ、それ故に、本方法は複数の被験作用物質を逐次的または並列的にスクリーニングするために好都合であることは認識されていると考えられる。複数の被験作用物質は、例えば、被験作用物質のコンビナトリアル法ライブラリーによって生成された被験作用物質のライブラリーであってよい。治療活性について試験することができる分子のコンビナトリアルライブラリーを調製するための方法は当技術分野において周知であり、これには、例えば、拘束性（constrained）ペプチドであってもよいペプチドのファージディスプレイライブラリー（例えば、それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第5,622,699号；同第5,206,347号；Scott and Smith, Science 249:386-390, 1992；Markland et al., Gene 109: 1319, 1991を参照）；ペプチドライブラリー（参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,264,563号）；ペプチド模倣体ライブラリー（Blondelle et al., Trends Anal. Chem. 14:8392, 1995；核酸ライブラリー（それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、O'Connell et al., supra, 1996；Tuerk and Gold, 前記、1990；Gold et al., 前記、1995）；オリゴ糖ライブラリー（それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、York et al., Carb. Res., 285:99128, 1996；Liang et al., Science, 274:1520-1522, 1996；Ding et al., Adv. Expt. Med. Biol., 376:261-269, 1995）；リポタンパク質ライブラリー（全体として参照により本明細書に組み入れられるde Kruif et al., FEBS Lett., 399:232-236, 1996）；糖タンパク質もしくは糖脂質ライブラリー（全体として参照により本明細書に組み入れられるKaraoglu et al., J. Cell Biol., 130:567-577, 1995）；または、例えば薬物もしくは他の薬剤を含む化学物質ライブラリー（それぞれ全体として参照により本明細書に組み入れられる、Gordon et al., J. Med. Chem., 37: 1385-1401, 1994；Ecker and Crooke, Bio/Technology, 13:351-360, 1995；）を作製する方法が含まれる。
【０１１４】
したがって、本明細書で用いる「作用物質」という用語は、小分子、核酸、ポリペプチド、ペプチド、薬物、イオンなどの、ただしこれらには限定されない、あらゆる化合物または物質を意味する。「作用物質」は、合成および天然のタンパク質性および非タンパク質性の実体を非限定的に含む、あらゆる化学物質、実体または部分であってよい。いくつかの態様において、作用物質は、タンパク質、オリゴヌクレオチド、リボザイム、DNAザイム（DNAzyme）、糖タンパク質、siRNA、リポタンパク質、アプタマー、ならびにそれらの改変物および組み合わせなどを非限定的に含む、核酸、核酸類似体、タンパク質、抗体、ペプチド、アプタマー、核酸オリゴマー、アミノ酸、または糖質である。いくつかの態様において、核酸は、DNAまたはRNA、および核酸類似体であり、例えばそれはPNA、pcPNA、およびLNAであってよい。核酸は一本鎖または二本鎖であってよく、以下を含む群から選択することができる；関心対象のタンパク質をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、PNAなど。そのような核酸配列には、例えば、転写リプレッサー、アンチセンス分子、リボザイム、例えばRNAi、shRNAi、siRNA、マイクロRNAi（miRNAi）であるがただしこれらには限定されない低分子阻害性核酸配列、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドなどとして作用するタンパク質をコードする核酸配列が非限定的に含まれる。タンパク質および／もしくはペプチド作用物質またはそれらの断片は、関心対象のあらゆるタンパク質であってよく、これには例えば、タンパク質が細胞内に通常は存在しないかまたは低レベルで発現する、突然変異タンパク質；治療用タンパク質；切断型タンパク質があるが、これらには限定されない。関心対象のタンパク質は、以下を含む群から選択することができる；突然変異タンパク質、遺伝子操作タンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、それらの改変されたタンパク質および断片。
【０１１５】
候補作用物質にはまた、合成または天然の非タンパク質性実体を非限定的に含む、あらゆる化学物質、実体、または部分も含まれる。ある態様において、候補作用物質は、化学部分を有する小分子である。そのような化学部分は、例えば、非置換または置換アルキル、芳香族、または複素環式部分を含み、典型的には少なくとも1つのアミン基、カルボニル基、ヒドロキシル基、またはカルボキシル基を含み、しばしば、マクロライド、レプトマイシン、およびそれらの関連天然生成物または類似体を含む化学官能基のうち少なくとも2つを含む。候補作用物質は、所望の活性および／もしくは特性を有することが公知であってもよいか、または多様な化合物のライブラリーから選択することもできる。また候補作用物質に含まれるものには、薬理活性のある薬物、遺伝的活性のある分子などがある。関心対象のそのような候補作用物質には、例えば、化学療法薬、ホルモンまたはホルモン拮抗薬、増殖因子または組換え増殖因子、ならびにそれらの断片および変異体が含まれる。本明細書に記載のスクリーニング方法に用いるのに適した薬剤の例には、"The Pharmacological Basis of Therapeutics," Goodman and Gilman, McGraw-Hill, New York, N.Y., (1996), Ninth editionの以下の項：Water, Salts and Ions；Drugs Affecting Renal Function and Electrolyte Metabolism；Drugs Affecting Gastrointestinal Function；Chemotherapy of Microbial Diseases；Chemotherapy of Neoplastic Diseases；Drugs Acting on Blood-Forming organs；Hormones and Hormone Antagonists；Vitamins, Dermatology；およびToxicologyに記載されたものがあり、これらはすべて全体として参照により本明細書に組み入れられる。また含まれるものには、毒素、ならびに生物兵器剤および化学兵器剤があり、例えば、Somani, S. M. (Ed.), "Chemical Warfare Agents," Academic Press, New York, 1992)を参照されたく、その内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。化合物などの候補作用物質は、小分子化合物などの合成化合物または天然化合物のライブラリーを含む、多種多様な供給源から入手することができる。例えば、ランダム化オリゴヌクレオチドおよびオリゴペプチドの発現を含む、生体分子を含む多種多様な有機化合物のランダム合成および定方向合成のための数多くの手段が使用可能である。または、細菌抽出物、真菌抽出物、植物抽出物、および動物抽出物の形態の天然化合物のライブラリーも使用可能であるか、または容易に作製される。さらに、天然のまたは合成で作製されたライブラリーおよび化合物は、従来の化学的、物理的、および生化学的手段を通じて容易に修飾され、コンビナトリアルライブラリーを作製するために用いることができる。公知の薬理作用物質をアシル化、アルキル化、エステル化、アミド化などの指向的またはランダムな化学修飾に供して、構造類似体を生成させることもできる。本明細書に記載のスクリーニング方法に用いるための候補化合物を合成するのに有用な合成化学変換および保護基法（保護および脱保護）は、当技術分野において公知であり、これには例えば、R. Larock (1989) Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers; T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed., John Wiley and Sons (1991)；L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)；およびL. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)、ならびにそれらのその後の版に記載されたものが含まれ、これらのそれぞれの内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当技術分野において、例えば、DeWitt et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6909；Erb et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 11422；Zuckermann et al. (1994) J. Med. Chem. 37:2678；Cho et al. (1993) Science 261: 1303；Carrell et al. (1994) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2059；Carell et al (1994) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061；およびGallop et al. (1994) J. Med. Chem. 37: 1233に見いだすことができ、これらのそれぞれの内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。また、いくつかの態様において、候補作用物質のライブラリーは、溶液中に（例えば、Houghten (1992), Biotechniques 13:412-421）またはビーズ（Lam (1991), Nature 354:82-84）、チップ（Fodor (1993) Nature 364:555-556）、細菌（Ladner、米国特許第5,223,409号）、胞子（Ladner 米国特許第5,223,409号）、プラスミド（Cull et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA 89:1865-1869）上もしくはファージ上（Scott and Smith (1990) Science 249:386-390；Devlin (1990) Science 249:404-406；Cwirla et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. 87:6378-6382；Felici (1991) J. Mol. Biol. 222:301-310；Ladner 前記）に提示させることもでき、これらのそれぞれの内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。被験化合物または候補作用物質は、当技術分野において公知のコンビナトリアルライブラリー法において、以下を含む数多くのアプローチのいずれかを用いて得ることができる：生物学的ライブラリー；空間的にアドレス指定可能な並列的な固相または液相ライブラリー；デコンボリューションを必要とする合成ライブラリー法；「1ビーズ1化合物（one-bead one-compound）」ライブラリー法；およびアフィニィークロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーのアプローチはペプチドライブラリーに限定されるが、他の4種のアプローチはペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の小分子ライブラリーに適用可能である（Lam, K. S. (1997) Anticancer Drug Des. 12: 145）。分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当技術分野において、例えば以下に見いだすことができる：DeWitt et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6909；Erb et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 11422；Zuckermann et al. (1994). J. Med. Chem. 37:2678；Cho et al. (1993) Science 261: 1303；Carrell et al. (1994) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2059；Carell et al. (1994) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061；およびGallop et al. (1994) J. Med. Chem. 37: 1233。候補作用物質のライブラリーは、溶液中に（例えば、Houghten (1992) Biotechniques 13:412-421）、またはビーズ上（Lam (1991) Nature 354:82-84）、チップ（Fodor (1993) Nature 364:555-556）、細菌（Ladner 米国特許第5,223,409号）、胞子（Ladner 米国特許第'409号）、プラスミド（Cull et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA 89: 1865-1869）、またはファージ上（Scott and Smith (1990) Science 249:386-390）；（Devlin (1990) Science 249:404-406）；（Cwirla et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. 87:6378-6382）；（Felici (1991) J. Mol. Biol. 222:301-310）；（Ladner 前記）上に提示させることができる。本明細書に記載の方法はさらに、上記のスクリーニングアッセイ法によって同定された新規作用物質にも関する。介入に関しては、CD1a発現および／またはCD1a活性をモジュレートするあらゆる治療を、ヒトへの治療介入のための候補として考慮すべきである。
【０１１６】
1つの態様において、アッセイ法は、培養中の皮膚細胞（例えば、ランゲルハンス細胞）を候補作用物質と接触させる段階、ならびに、抗原提示活性、CD1aリガンド結合活性、またはT細胞活性化をモジュレートする（例えば、誘導または阻害する）候補作用物質の能力を決定する段階を含む、細胞ベースのアッセイ法である。
【０１１７】
1つの態様において、スクリーニングアッセイ法は、CD1aと脂質リガンドとの間の分子相互作用の度合いを測定するために設計されたインビトロアッセイ法である。組換えCD1a分子に検出可能部分を結合させ、それから1つまたは複数の候補作用物質の存在下または非存在下で、公知の脂質リガンド（例えば、スルファチド）とともにインキュベートする。検出可能部分により、候補作用物質がCD1aとそのリガンドの間の相互作用を阻害しうるか否かを測定することが可能になる。本明細書で用いる場合、「レポーター部分」または「検出可能部分」という用語は、例えば蛍光、化学発光、比色シグナルなどの検出可能シグナルを生じることができる分子または分子の部分を指す。
【０１１８】
または、1つの態様において、スクリーニングアッセイ法では、バイオセンサーチップ上に固定化されたタンパク質の層および内部参照層という2つの表面から反射された白色光の干渉パターンを分析する光学的分析手法である「バイオレイヤー干渉測定」などの非標識技術を用いる。バイオセンサーチップに結合した分子数に変化があると、干渉パターンの推移が引き起こされ、それをリアルタイムに測定することができる。バイオセンサーチップ表面上に固定化されたリガンドと溶液中の分析物との間の結合により、バイオセンサーチップで光学的厚さの増加が生じ、それが生物学的層の厚さの変化の直接的尺度となる波長シフトΔλをもたらす。相互作用をリアルタイムで測定することにより、結合特異性、会合および解離の速度、または濃度を正確かつ高精度にモニターする能力が得られる。バイオレイヤー干渉測定システムは、例えば、FORTEBIOから販売されている。FORTEBIOによるOCTETシステムにより、1つまたは複数（例えば、多数）の候補作用物質の存在下または非存在下で、組換えCD1aと脂質リガンド（例えば、スルファチド）との間の分子相互作用を反映する高感度かつ特異的な結合曲線を測定することが可能になる。
【０１１９】
別の態様において、スクリーニングアッセイ法では、「表面プラズモン共鳴」などの非標識技術を用いる。「表面プラズモン共鳴」とは、本明細書で用いる場合、入射光が平面の金属表面で電子流に強く変換される物理現象を指し、ナノメートルサイズの構造物の表面プラズモン共鳴については「局在表面プラズモン共鳴（LSPR）」という用語を用いることもできる。振動電流が、（非伝導性の）周囲媒質中で、金属の表面付近で強い電場を生み出す。この電場が続いて、周囲媒質における電気分極を誘導する。電気分極は、その媒質に特徴的な波長、すなわち「ラマン波長」の光の放出を引き起こすことが周知である。この現象に関するそのほかの背景情報は、Surface Enhanced Raman Scattering, ed. Chang and Furtak, Plenum Press, NY (1982)に見いだすことができ、その開示内容はすべて参照により本明細書に組み入れられる。本明細書で用いる場合、「ラマン散乱」は、光波が物質の分極性と相互作用する、関連するすべての物理現象、例えば、ブルリアン散乱またはポラリトン散乱などを範囲に含むことを意図している。
【０１２０】
本明細書で用いる場合、「表面プラズモン」、「表面プラズモンポラリトン」、または「プラズモン」は、プラズモン表面、例えば金属などでの遊離電子の集団振動を指す。これらの振動は、金属／誘電体（または金属／真空）境界面に対して平行な方向に伝播する自己持続的な表面電磁波を生じさせる。この波は金属と外部媒質（例えば、空気または水）との境界にあるため、これらの振動はこの境界のあらゆる変化、例えば、生体分子標的の金属表面に対する吸着などに対して極めて感度が高い。引き続いて、振動性電子は、振動性電子と同じ頻度で電磁放射線を放射する。これは同じ入射波長の光の再放射であり、「プラズモン散乱」と称される。これらの振動は、プラズモン性ナノ粒子の溶液の濃い色調および／または強い散乱も生じさせることができる。金属プラズモン性ナノ粒子の場合には、光による励起により、局在集合電子電荷振動、すなわち「局在表面プラズモンポラリトン（polarition）」（LSPR）がもたされる。それらは共鳴波長で近接場振幅の増強を呈する。この場はナノ粒子に高度に局在しており、プラズモン性ナノ粒子／誘電体境界面から離れて誘電体バックグラウンドに向かうと急速に減衰するが、粒子による遠隔場散乱も共鳴によって増強しうる。LSPRはサブ波長レベルで極めて高い空間分解能を有し、これはプラズモン性ナノ粒子のサイズによって決定される。「プラズモン吸収」とは、本明細書で用いる場合、金属表面プラズモンによって引き起こされる減光（吸収および散乱による）を指す。表面プラズモン共鳴は、候補作用物質がCD1aとそのリガンドの間の相互作用を妨害または阻害するか否かを判定することを目的として、CD1aとCD1aを結合させるリガンドとの間の相互作用を候補作用物質の存在下または非存在下で測定するために、本明細書に記載の方法およびアッセイ法とともに用いることができる。
【０１２１】
機能的T細胞実験を用いるスクリーニングアッセイ法もまた、本明細書において想定されている。1つの態様において、機能的T細胞実験は、例えば、バイオレイヤー干渉測定または表面プラズモン共鳴を通じて同定された候補作用物質をさらに試験するために、本明細書に記載の少なくとも1つの他のスクリーニングアッセイ法とともに行われる。別の態様において、機能的T細胞実験は、本明細書に記載の他のスクリーニングアッセイ法とは独立に行われる。機能的T細胞アッセイは、CD1a拘束性T細胞と共培養中のCD1a発現性抗原提示細胞（APC）を含むインビトロアッセイ法である。T細胞はCD1aに対して反応性があり、APCの細胞表面上のCD1aの適正な提示との何らかの干渉があればT細胞刺激が妨げられる。T細胞共培養物を、試験しようとする少なくとも1つの候補作用物質の存在下または非存在下でインキュベートする。T細胞活性化、T細胞増殖、およびサイトカイン産生を、単独で、またはELISAを用いて組み合わせて測定することができる。想定している具体的なサイトカインには、IFN-γおよびIL-17が非限定的に含まれる。CD1a媒介性T細胞活性化の阻害により、候補作用物質がCD1a媒介性炎症の阻害に有効であることが示される。
【０１２２】
本明細書に記載のCD1aトランスジェニックマウスを用いるインビトロスクリーニングアッセイ法もまた、本明細書において想定されている。例えば、本明細書に記載の乾癬モデルのウルシオール媒介性接触皮膚炎モデルを用いて、炎症性皮膚疾患を誘発させる。候補作用物質を動物に投与して、炎症性皮膚疾患の度合いを本明細書に記載の通りに評価する。当業者は、各候補作用物質の用量反応曲線を含めるように、そのようなスクリーニングアッセイ法を設計することができる。
【０１２３】
本明細書に記載のスクリーニングアッセイ法は単独で用いることもできるか、または本明細書に記載の少なくとも1つの他のスクリーニングアッセイ法と組み合わせて用いることもできる。
【０１２４】
乾癬、ウルシオール媒介性炎症、または他の炎症性皮膚疾患の治療のための治療薬の研究または開発における使用のためのスクリーニングキットもまた、本明細書において想定されている。そのようなキットは、以下の作用物質の1つまたは複数を含みうる：組換えCD1a、脂質リガンド、CD1aを発現する抗原提示細胞、CD1a拘束性T細胞、CD1aトランスジェニックマウスモデル、陽性対照、さまざまな緩衝液、試薬など、および使用説明書。
【０１２５】
前記の詳細な説明および以下の実施例は単なる例示であり、本発明の範囲の限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。開示された態様に対するさまざまな変更および改変は、当業者には明らかであり、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく行うことができる。さらに、示されたすべての特許、特許出願、および刊行物は、例えば、本発明に関連して使用されうるそのような刊行物に記載の方法を説明および開示する目的で、参照により本明細書に明示的に組み入れられる。これらの刊行物は、本出願の出願日以前のそれらの開示のためだけに提供される。これに関連して何ごとも、先行発明であるという理由でまたはその他の理由で、そのような開示に先行する権利が本発明者らにはないことを承認するものとして解釈されるべきでない。これらの文書の日付に関する記述または内容に関する表記はすべて、本出願人らにとって入手可能な情報に基づいており、これらの文書の日付または内容の正確性に関していかなる承認も与えない。
【０１２６】
本発明のいくつかの態様は、以下の項目のいずれかの通りに定義することができる。
[1] 炎症性皮膚疾患を有する対象にCD1aの阻害物質の治療的有効量を投与して、それによって該炎症性皮膚疾患を治療または予防する段階を含む、炎症性皮膚疾患を治療または予防するための方法。
[2] 前記CD1aの阻害物質がCD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する、項目1に記載の方法。
[3] CD1a発現の前記阻害物質がRNA干渉分子または小分子である、項目2に記載の方法。
[4] CD1a活性の前記阻害物質が小分子、抗体もしくはその断片、またはペプチドである、項目2に記載の方法。
[5] 前記炎症性皮膚疾患が、T細胞媒介性の皮膚疾患または皮膚障害である、項目1に記載の方法。
[6] 前記炎症性皮膚疾患がウルシオール誘発性接触皮膚炎である、項目1に記載の方法。
[7] 前記炎症性皮膚疾患が乾癬および／またはアトピー性皮膚炎である、項目1に記載の方法。
[8] CD1a活性の前記阻害物質が、CD1aへのリガンドの結合またはCD1a媒介性抗原提示活性を阻害する、項目2または4に記載の方法。
[9] 前記リガンドがウルシオールである、項目8に記載の方法。
[10] CD1a活性の前記阻害物質が、ランゲルハンス細胞の抗原提示活性を阻害する、項目2または4に記載の方法。
[11] CD1aの阻害物質の治療的有効量と薬学的に許容される担体とを含む、炎症性皮膚疾患を治療するための薬学的組成物。
[12] 前記CD1aの阻害物質が、RNA干渉分子、小分子、ペプチド、および抗体またはその断片からなる群より選択される、項目11に記載の組成物。
[13] 前記CD1aの阻害物質がCD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する、項目11に記載の組成物。
[14] CD1a発現の前記阻害物質がRNA干渉分子または小分子である、項目13に記載の組成物。
[15] CD1a活性の前記阻害物質が小分子、抗体もしくはその断片、またはペプチドである、項目13に記載の組成物。
[16] 前記炎症性皮膚疾患が、T細胞媒介性の皮膚疾患または皮膚障害である、項目11に記載の組成物。
[17] 前記炎症性皮膚疾患がウルシオール誘発性接触皮膚炎である、項目11に記載の組成物。
[18] 前記炎症性皮膚疾患が乾癬および／またはアトピー性皮膚炎である、項目11に記載の組成物。
[19] CD1a活性の前記阻害物質が、CD1aへのリガンドの結合またはCD1a媒介性抗原提示活性を阻害する、項目13または15に記載の組成物。
[20] 前記リガンドがウルシオールである、項目19に記載の組成物。
[21] CD1a活性の前記阻害物質が、ランゲルハンス細胞の抗原提示活性を阻害する、項目13または15に記載の組成物。
[22] 全身送達用に製剤化されている、項目11〜21のいずれかに記載の組成物。
[23] 局所送達用に製剤化されている、項目11〜21のいずれかに記載の組成物。
[24] a．1つのランゲルハンス細胞またはランゲルハンス細胞の集団を作用物質と接触させる段階、
b．該細胞または該細胞の集団におけるCD1aの発現および／または活性を測定する段階であって、
CD1aの発現および／または活性の低下により、該作用物質が炎症性皮膚疾患の治療のための候補作用物質であることが示される、段階
を含む、炎症性皮膚疾患を治療するための候補作用物質をスクリーニングするための方法。
[25] 前記候補作用物質が、RNA干渉分子、小分子、ペプチド、および抗体またはその断片からなる群より選択される、項目24に記載の方法。
[26] a．ランゲルハンス細胞の集団を候補作用物質と接触させる段階、
b．段階（a）の細胞を標識CD1aリガンドと接触させる段階、
c．結合した検出可能な該リガンド由来のシグナルの強度を測定する段階、
d．該シグナルの測定された該強度を参照値と比較する段階、ならびに
測定された該強度が該参照値に比べて低い場合に、
e．該候補作用物質を該細胞におけるCD1a発現および／またはCD1a活性の阻害物質として同定する段階
を含む、アッセイ法。
[27] 前記CD1aリガンドがウルシオールである、項目26に記載の方法。
[28] 炎症性皮膚疾患の治療または予防における使用のための、CD1aの阻害物質。
[29] 炎症性皮膚疾患の治療または予防のための医薬の製造のための、CD1aの阻害物質の使用。
[30] 前記CD1aの阻害物質がCD1a発現および／またはCD1a活性を阻害する、項目28または29に記載の使用。
[31] CD1a発現の前記阻害物質がRNA干渉分子または小分子である、項目30に記載の使用。
[32] CD1a活性の前記阻害物質が小分子、抗体もしくはその断片、またはペプチドである、項目30に記載の使用。
[33] CD1a活性の前記阻害物質が、CD1aへのリガンドの結合またはCD1a媒介性抗原提示活性を阻害する、項目30または32に記載の使用。
[34] 前記リガンドがウルシオールである、項目33に記載の使用。
[35] CD1a活性の前記阻害物質が、ランゲルハンス細胞の抗原提示活性を阻害する、項目30または32に記載の使用。
[36] 前記炎症性皮膚疾患が、T細胞媒介性の皮膚疾患または皮膚障害である、項目28〜35のいずれかに記載の使用。
[37] 前記炎症性皮膚疾患がウルシオール誘発性接触皮膚炎である、項目28〜36のいずれかに記載の使用。
[38] 前記炎症性皮膚疾患が乾癬および／またはアトピー性皮膚炎である、項目28〜37のいずれかに記載の使用。
[39] 前記CD1aの阻害物質が全身送達用および／または局所送達用に製剤化されている、項目28〜38のいずれかに記載の使用。
【実施例】
【０１２７】
本発明者らは、炎症性皮膚疾患の発生における、皮膚のランゲルハンス細胞上に発現する分子CD1aの機能を発見した。これらの病状には、ツタウルシによる接触皮膚炎ならびに乾癬が含まれる。本発明者らの研究は、CD1aが、IL-17のようなサイトカインの顕著な産生を特徴とする炎症性T細胞応答を媒介することを実証している。重要なこととして、CD1aに対する実験的抗体による治療により、皮膚炎症は完全に抑止される。このことは、皮膚疾患を予防するため、治療するため、またはさらに治癒させるための、特異的抗体、小分子阻害物質、またはRNAiによる、CD1aを標的とする治療的処置の基盤となる。乾癬に対する現行の治療選択肢は、例えば生物学的製剤である遮断性サイトカインなどは、有効性が限定的であること、およびかなりの副作用があることによる限界がある。したがって、この治療の非常に特異的な機構的性質からみて、CD1aに基づく治療法は、副作用を最小限に抑えながら炎症性皮膚疾患の転帰を改善するという大きな可能性を有する。
【０１２８】
本発明者らの発明の中核をなすのは、ランゲルハンス細胞上に発現したCD1aが、CD1a拘束性T細胞の誘導を通じて皮膚炎症を媒介しうるという発見である。すなわち、CD1aによって刺激されたT細胞は、炎症性皮膚疾患の発症を助長するインターフェロン（IFN）γおよびIL-17などの炎症性サイトカインを産生する（図1A）。このCD1a媒介性機構は、ツタウルシ接触皮膚炎ならびに乾癬を含む多様な皮膚疾患に当てはまる。ツタウルシに対する免疫応答におけるCD1aの重要性を実証するために、本発明者らはまず、ウルシオールと呼ばれるツタウルシ由来の脂質分子がCD1aのリガンドであるか否かについて調べた。このために、本発明者らは、精製ウルシオールおよび組換えCD1aを用いるプレート結合型結合アッセイ法を行った。マイクロタイタープレートを、ウルシオール、または陽性対照としての公知のCD1aリガンドであるスルファチドでコーティングした後に、プレートを洗浄し、その後にビオチン化CD1aとともにインキュベートした。ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼおよび各々の発色性酵素基質とのインキュベーション後に、結合効率を示す光学密度を測定した。陽性対照であるスルファチドと比較すると、ウルシオールはCD1aへの特異的結合を明らかに示した（図1B）。したがって、ツタウルシ由来のウルシオールはCD1aのリガンドである。
【０１２９】
次に、本発明者らは、ウルシオールに対するインビボ応答におけるCD1aの機能を調べようとした。しかし、CD1aはヒトで主に発現し、実験用マウスには存在しない。このため、CD1a機能を調べるインビボ研究はこれまでは不可能であった。このことから、本発明者らは、この障壁を克服するために、ヒトCD1aのトランスジェニックマウスを用いた。図2Aは、皮膚ツタウルシに対する免疫応答を調べるための実験的設定を図示している。したがって、野生型（WT）マウスと比較したCD1aトランスジェニックマウスを皮膚上の経路によって腹部でウルシオールに感作させた。5日後に、マウスに対して耳皮膚に負荷を行い、負荷から48時間後に炎症性の耳、および流入領域リンパ節を採取した。ウルシオール負荷から2日後の耳の厚さにより、CD1aトランスジェニックマウスではWT対照と比較して耳介腫脹が劇的に増大したことが明らかとなり、このことからCD1aの存在下で炎症が強く増強されることが示された（図2B）。その後に、本発明者らは、耳組織のインビトロ酵素消化を用いて、耳から炎症性細胞を単離し、その後に好中球サブセットおよびTリンパ球サブセットを染色した。すなわち、本発明者らが好中球をマーカー分子Gr-1およびCD11bについて染色したところ、フローサイトメトリーによる分析を用いて、CD1aトランスジェニックマウスにおける好中球浸潤の著明な増加が観察された（図2C）。さらに、本発明者らが皮膚におけるγδ T細胞およびαβ T細胞の割合を分析したところ、ウルシオールの負荷を行った皮膚ではCD4+ αβT細胞がCD1a依存的な様式で特異的に増大していることが見いだされた（図2D）。
【０１３０】
これに並行して、本発明者らは、炎症性皮膚に浸潤するT細胞のサイトカインプロファイルも判定した。すなわち、本発明者らは、IFN-γ、IL-17、およびIL-22に対する細胞内サイトカイン染色を行い、その後にフローサイトメトリーによる分析を行った。驚いたことに、ツタウルシは、通常は炎症および遅延型過敏症（DTH）において多く認められるサイトカインのIFN-γ応答を誘導することができなかった。対照的に、ウルシオール負荷に応答したT細胞は主にサイトカインIL-17およびIL-22を産生した（図3A〜3D）。IL-17は好中球の動員を媒介することが公知であり、IL-22は上皮細胞に作用してそれらの過剰増殖を誘発するが、これらはいずれも皮膚炎症の基本的な特徴である。
【０１３１】
CD1aが皮膚炎症を促進するという本発明者らの知見に基づいて、本発明者らは次に、皮膚疾患を抑止する目的で、CD1aを標的とする治療戦略を開発することを目指した。この目的に向けて、本発明者らは、マウスの腹腔内注射用の、CD1aに対する実験的遮断抗体を用いた。治療計画には、ウルシオールによる感作の前日から始めて、負荷および組織採取まで隔日に注射を続けるという、100μgの抗CD1aの5回の注射を含めた。炎症の指標として耳介腫脹を測定したところ、本発明者らは、CD1a遮断抗体の投与後に耳の厚さの著明な減少を観察した（図4A）。皮膚炎症に対するこの治療的影響は、フローサイトメトリーによって測定された、抗CD1a投与マウスにおけるGr-1+ CD11b+細胞の集団の減少に反映されるような、好中球の浸潤の顕著な低下に対応していた（図4B）。抗体治療の効率を制御するために、本発明者らは耳細胞を、ランゲルハンス細胞の決定的な表面マーカーであるCD1aについて染色した。フローサイトメトリー分析により、抗CD1a投与によってCD1a+細胞集団の効率的な枯渇が可能になったことが明らかになった（図4C）。さらに、本発明者らは、IL-17産生性CD4 T細胞（Th17細胞とも呼ばれる）の存在量に対する抗CD1a投与の影響についても調べた。ウルシオールを負荷したCD1aトランスジェニックマウスでは、Th17細胞の頻度は劇的に増加した。しかし、抗CD1a投与により、Th17細胞の存在量は減少し、それらのサイトカイン産生はWT対照動物で認められるレベルまで減少した（図4D）。以上を総合すると、本発明者らは、抗CD1a療法が皮膚炎症を抑止するという原理証明を提供するものである。
【０１３２】
とりわけ、本発明者らがウルシオール誘発性接触皮膚炎において観察したTh17細胞表現型は、乾癬に関して記載されている炎症過程と類似している。このため、本発明者らは続いて、CD1aが乾癬においても重要な役割を果たすか否かについて調べた。このために、本発明者らは、毎日投与した場合に3〜6日後に乾癬様病態が誘導される、マウスの皮膚に対して小分子イミキモド（IMQ）を適用するという十分に確立されたモデルを用いた。顕著なことに、CD1aトランスジェニックマウスは、WT対照と比較して高度の耳介腫脹を示すという反応を示した（図5A）。フローサイトメトリーを行って耳内の浸潤性白血球サブセットを分析したところ、本発明者らは、CD1aトランスジェニックマウスの皮膚におけるGr-1+ CD11b+ 好中球ならびにαβ T細胞の劇的な増加を観察した（図5B）。その上、炎症性T細胞はIL-17およびIL-22を産生するCD4 T細胞から主になっていた（図5C）。これらの知見は、CD1aが乾癬様病態においても重要な役割を果たすこと、およびCD1aトランスジェニックマウスで観察された免疫学的表現型が乾癬患者において知られているものに対応することを実証するものである。
【０１３３】
抗CD1a療法が乾癬における皮膚炎症を抑止しうるか否かを検証するために、本発明者らはマウスのIMQ投与を行い、上記のように並行して抗CD1a抗体を投与した。炎症の尺度としての耳介腫脹は、抗CD1a抗体によるCD1aトランスジェニックマウスの処理によって完全に抑止された（図6A）。これに対応して、フローサイトメトリーによって測定した場合、皮膚におけるCD4+ αβ T細胞の増大はバックグラウンドレベルまで低下した（図6B）。注目すべきことに、抗CD1a療法は、IL-17産生性CD4 T細胞の浸潤を阻止した。結論として言えば、本発明者らは、CD1aに基づく治療法により、Th17細胞表現型および乾癬などの炎症性皮膚疾患が抑止されることを実証した。
【０１３４】
最後に、本発明者らは、CD1aトランスジェニックマウスが一般に炎症反応を起こしやすいか否かを調査することにした。この目的に向けて、本発明者らは、十分に確立されたハプテンDNFB（ジニトロフルオロベンゼン）をマウスに投与した。図7Aは、DNFBおよびウルシオールの適用のために用いた皮膚感作および負荷の計画を図示している。驚いたことに、ツタウルシ負荷とは対照的に、CD1aトランスジェニックマウスは、耳介腫脹の軽減によって示されるように、DNFBに対してはより軽度の炎症という反応を示した（図7B）。これに一致して、ウルシオールはCD1aトランスジェニックマウスにおける好中球浸潤を増強したものの、フローサイトメトリーによって測定した場合、DNFBに対する反応では炎症性顆粒球の存在量は著明に減少した（図7C）。DNFBのようなハプテンは、本発明者らがWTマウスで観察したように、顕著なIFN-γ応答を誘導することが周知である（図7D）。しかし、T細胞由来のIFN-γはCD1aトランスジェニック動物では有意に減少し、サイトカイン応答はむしろIL-17側に偏っていた（図7D）。結論として、これらのデータは、CD1aトランスジェニックマウスが、種々の誘発物質に対する炎症反応の全般的増大を特徴とすることはないことを示している。対照的に、DNFBに対する古典的な遅延型過敏症（DTH）反応は、CD1aの存在下でむしろ減少した。このことは、ウルシオール誘発性接触皮膚炎および乾癬におけるCD1a機能の特別な性質を明確に示すものである。
【０１３５】
さらに、皮膚におけるT細胞浸潤は、ツタウルシに対する反応ではCD4 T細胞によって主として媒介された（図8）。このことは、DNFBのような物質に対するDTHにおけるCD8 T細胞の関与という公知現象とは対照的であり、CD1a媒介性皮膚炎症が公知のアレルギー性経路の範囲を越える独特の機構であることを改めて示している。
【０１３６】
さらに、本発明者らは、アトピー性皮膚炎（AD）におけるCD1aの役割を調べることにより、CD1aに基づく薬物の適応症となる可能性があるものの範囲を拡張した。すなわち、本発明者らは、十分に確立されたADのマウスモデルとして、CD1aトランスジェニックマウスにカルシポトリオール（MC903）を投与した。とりわけ、CD1aは皮膚炎症を顕著に増大させ、CD1a遮断抗体はこのADモデルにおける炎症性皮膚疾患を軽減した。
【０１３７】
アトピー性皮膚炎は、かゆみを伴う再発性湿疹性皮膚病変を特徴とする炎症性皮膚疾患である。これには小児のおよそ30％および成人の10％が罹患しており、米国では毎年38億ドルの費用がかかっている。アトピー性皮膚炎の原因は未だに不明であり、治癒法もない。最近、IL-22産生性CD4 T細胞がアトピー性皮膚炎の惹起および進行に関連することが報告されている。このため、抗CD1a療法をアトピー性皮膚炎にも拡張しうるか否かを検証することは有意義である。このために、本発明者らは、実験用マウスの耳に対して、赤い落屑性で湿疹性の病変を特徴とするアトピー性皮膚炎様皮膚炎症を誘発するMC903（カルシポトリオール、ビタミンD類似体）を毎日適用して、アトピー性皮膚炎のマウスモデルを用意した。耳介腫脹およびGr1+CD11b+顆粒球浸潤によって示される炎症は、WT B6対照と比較してCD1aトランスジェニックマウスにおいて有意に増強された。その上、抗CD1a Ab注射により、CD1aトランスジェニックマウスにおける耳介腫脹および顆粒球浸潤は抑制された。これらの結果は、CD1aがアトピー性皮膚炎モデルにおける皮膚炎症を促進し、それ故にアトピー性皮膚炎の将来の治療に向けての新規な治療標的となることを示唆する。
【０１３８】
本発明者らは、MC903誘発性アトピー性皮膚炎におけるCD1a存在の寄与について調べた。ビタミンD3類似体であるMC903を用いて、野生型（WT-B6）マウス、CD1aトランスジェニックマウス、および抗CD1a Abを投与したCD1aトランスジェニックマウスにおいてAD様症状を誘発させた。CD1a遮断のために、200μgの抗CD1a Abを、CD1aトランスジェニックマウスに対して隔日（MC903投与の前および後の-1日、+1日、+3日、+5日、および+7日）に腹腔内注射した。図9Aおよび9Bは、MC903適用後の皮膚炎症がCD1aの存在下で悪化することを示している。図9Aは、CD1aトランスジェニックマウスにおける耳介腫脹が抗CD1a注射によって抑止されることを示している。図9Bは、抗CD1a Ab注射による、炎症性耳組織におけるCD11b+Gr-1+炎症性顆粒球の減少を示している。
【０１３９】
乾癬患者由来のT細胞を用いるトランスレーショナル研究：
CD1aに基づく治療法がヒトの系において作用するか否かを調べる目的で、本発明者らは乾癬患者におけるCD1a拘束性T細胞の活性化を実証することを考えている。さらに、本発明者らは、乾癬患者による炎症性T細胞応答を抗CD1a抗体を用いて遮断することも目指している。これらの実験により、CD1aが乾癬患者において重要な役割を果たすこと、および、CD1aの標的化が、ヒト疾患に対するCD1aに基づく薬物開発のための極めて重要な選択肢であることが確かめられると考えられる。この目的のために、中程度から重度の乾癬に罹患した患者由来ならびに健常ドナー由来の末梢血を、これらの試験のために用いる。T細胞を血液から単離して、その後にCD1aを発現する抗原提示細胞（APC）と共培養する。APCのT細胞とのインキュベーション後に、ELISAを用いて、細胞培養上清をIFN-γ、IL-17、およびIL-22などの炎症性サイトカインの量に関して分析する。並行して、共培養物に対して、CD1a媒介性T細胞刺激を遮断するために抗CD1a抗体を投与する。本発明者らは、乾癬患者ではCD1a拘束性T細胞が増大していると予想しており、その理由はそれらが炎症反応の重要なエフェクターであるためである。したがって、本発明者らは、乾癬患者由来のT細胞のサイトカイン応答が健常ドナーよりも増大していると予想している。本発明者らはさらに、CD1a遮断により、乾癬患者に由来する炎症性T細胞応答が抑止されることも予想している。これらの実験により、マウスで観察された本発明者らの結果と同様に、CD1aがヒトにおける炎症性皮膚疾患の治療のための極めて重要な標的であるという確認が得られると考えられる。
【０１４０】
例示的なスクリーニングアッセイ法
本明細書に記載の方法およびアッセイ法とともに用いることを想定している例示的なスクリーニングアッセイ法が本明細書に提示されている。本明細書に記載のスクリーニングアッセイ法の改変は、当業者の技能の範囲内に十分にあり、本明細書において想定されている。
【０１４１】
CD1aに対する小分子阻害物質を開発するために、プラットフォームとしてのCD1a結合アッセイ法を用いて化合物ライブラリーからの有望な阻害物質を試験することができる。このために、本発明者らは既に、CD1aと脂質リガンドとの間の分子相互作用を高感度に測定するための、OCTET機器（FORTEBIO製）を用いる読み取りを確立している。OCTETの測定原理は、表面プラズモン共鳴（BIACORE）と同等に2つの結合パートナー間の速度定数を決定することができる、バイオレイヤー干渉測定（BLI）と呼ばれる技術に基づく。しかし、OCTETの大きな利点は、その単純明快なアッセイ設定、およびそれが384ウェルプレート形式を用いるハイスループットスクリーニングに適用可能であることにある。すなわち、本発明者らは、組換えCD1a分子をバイオセンサーに結合させて、その後に公知の脂質リガンドであるスルファチドとのインキュベーションを行う。この実験設定により、CD1aとスルファチドとの間の分子相互作用を反映する高感度かつ特異的な結合曲線が得られる。次の段階では、化合物ライブラリーに由来する小型有機分子のプールを用い、それらをCD1a-スルファチド結合アッセイ法に加えることによって試験する。その後に、小分子候補がCD1aとそのリガンドの間の相互作用を阻害しうるか否かを測定することができる。
【０１４２】
CD1aのリガンドとのCD1aの結合を遮断する小分子候補がひとたび同定されれば、これらの阻害物質がCD1aによるT細胞活性化も防止することができるか否かを判定することができる。この目的に向けて、本発明者らは、CD1aを発現する抗原提示細胞（APC）とCD1a拘束性T細胞との共培養を用いて、インビトロで機能的T細胞実験を行うことができる。注目すべきことに、用いられるT細胞はCD1aに対する反応性があり、かつ、APCの細胞表面上のCD1aの適正な提示との何らかの干渉によりT細胞刺激が妨げられる。その後に、T細胞共培養物を、一次スクリーニングによる小型分子阻害物質とともにインキュベートする。T細胞活性化の指標として、T細胞増殖、ならびにIFN-γおよびIL-17を含むサイトカイン産生をELISAによって測定する。強力な小分子阻害物質は、CD1a媒介性T細胞活性化を完全に抑止する可能性が高い。この二次スクリーニングは、炎症性皮膚疾患の発症を引き起こすT細胞応答も阻止することのできる小分子阻害物質を同定するように設計する。
【０１４３】
第3の段階では、二次スクリーニングで同定された強力阻害物質を、本明細書に記載のCD1aトランスジェニックマウスを用いてインビボで試験する。この目的のために、ウルシオール媒介性接触皮膚炎ならびに乾癬の本発明者らのモデルを用いて炎症性皮膚疾患を誘発させる。このようにして、種々の適用計画で試験される候補阻害物質を、炎症性皮膚疾患を抑止するそれらの能力を判定するために投与する。インビボで最も高い有効性を有する小分子を、臨床開発に向けて毒性および安全性についてさらに試験することができる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【国際調査報告】
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