(57)【要約】  本発明は、キメラポリヌクレオチド分子の調製、製造及び治療使用のための組成物及び方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチドをコードするキメラポリヌクレオチドであって、式Ｉ、
【化１】
2016530294.tif 000085
（式中：
Ａ及びＢの各々は、独立に、連結ヌクレオシド領域を含み；
Ｃは、任意選択の連結ヌクレオシド領域であり；
領域Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つは位置的に修飾されており、前記位置的に修飾された領域は、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ前記同じタイプのヌクレオシドの前記化学修飾の少なくとも２つは異なる化学修飾であり；
ｎ、ｏ及びｐは、独立に、１５〜１０００の整数であり；
ｘ及びｙは、独立に、１〜２０であり；
ｚは、０〜５であり；
Ｌ１及びＬ２は、独立に、任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかであり；及び
Ｌ３は、任意選択のコンジュゲート又は任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかである）
を含む配列を有するキメラポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記ポリヌクレオチドが２つの領域にわたってコードされている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３】
領域Ｂ又は領域Ｃが位置的に修飾されており、前記ポリペプチドが領域Ａ内で完全にコードされている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４】
領域Ａ又は領域Ｃが位置的に修飾されており、前記ポリペプチドが領域Ｂ内で完全にコードされている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記同じヌクレオチドタイプがウリジンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のウリジン修飾からなる群から選択される、請求項５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記同じヌクレオチドタイプがアデノシンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のアデノシン修飾からなる群から選択される、請求項５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記同じヌクレオチドタイプがチミジンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のチミジン修飾からなる群から選択される、請求項５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記同じヌクレオチドタイプがシチジンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のシチジン修飾からなる群から選択される、請求項５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記同じヌクレオチドタイプがグアノシンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１４】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のグアノシン修飾からなる群から選択される、請求項５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１５】
２つ以上の前記同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１６】
２つの前記同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記２つの前記同じヌクレオシドタイプが、ウリジン及びシチジンからなる群から選択される、請求項１６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１８】
３つ以上の前記同じヌクレオシドタイプ少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１９】
４つの前記同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２０】
領域Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つが、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも３つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが、生物学的製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質又はペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、原形質膜タンパク質、細胞質又は細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、標的化部分及びヒトゲノムによってコードされる任意のタンパク質からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２２】
第２のタンパク質をさらにコードする、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２３】
前記第２のタンパク質が抗体である、請求項２２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記異なる化学修飾が全て天然に存在するものである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２５】
前記異なる化学修飾が全て天然に存在しないものである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記領域Ａ、Ｂ、又はＣの少なくとも１つがヒト細胞での発現にコドン最適化されている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記コドン最適化領域の総Ｇ：Ｃ含量が、コドン最適化前のＧ：Ｃ含量以下である、請求項２６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２８】
環状である、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２９】
プリン類のみが位置的に修飾されている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３０】
キメラポリヌクレオチドを含む組成物の作製方法であって、
（ａ）２０〜１０００個の連結ヌクレオシドの第１の領域をインビトロ転写によって酵素的に合成するステップと；
（ｂ）最大１３０個の連結ヌクレオシドの第２の領域を化学的に合成するステップであって、前記第２の領域が、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ前記同じタイプのヌクレオシドの前記化学修飾の少なくとも２つが異なる化学修飾である、ステップと；
（ｃ）前記第１の領域と前記第２の領域とをライゲートするステップと
を含む方法。
【請求項３１】
位置的に修飾されたポリヌクレオチドを含む組成物の作製方法であって、
（ａ）第１のポリヌクレオチドを化学的に合成するステップであって、前記ポリヌクレオチドが位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ前記同じタイプのヌクレオシドの前記化学修飾の少なくとも２つが異なる化学修飾である、ステップと；
（ｂ）前記第１のポリヌクレオチドを第２のポリヌクレオチドにライゲートするステップと
を含む方法。
【請求項３２】
位置的に修飾されたポリヌクレオチドの作製方法において、
（ａ）連結ヌクレオシドの複数の領域を化学的に合成するステップであって、各領域が２〜１００ヌクレオシド長であり、前記複数の領域の少なくとも１つが位置的に修飾されている、ステップと；
（ｂ）前記複数の領域をライゲートして単一のポリヌクレオチドを形成するステップとを含む方法。
【請求項３３】
請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法によって作製された組成物。
【請求項３４】
（ａ）第１の連結ヌクレオシド領域であって、ヌクレオシドタイプの各ヌクレオシドが化学的に修飾され；前記ヌクレオシドタイプが、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、及びウリジンからなる群から選択される、第１の連結ヌクレオシド領域と；
（ｂ）ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第２の領域であって、前記第２の領域が位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、第２の領域と
を含むキメラポリヌクレオチド。
【請求項３５】
５’キャップ部分及びポリＡテイルを含む、請求項３４に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３６】
前記第１の連結ヌクレオシド領域が目的ポリペプチドをコードする、請求項３５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３７】
第３の連結ヌクレオシド領域であって、前記第１の領域の５’末端に位置する第３の領域をさらに含む、請求項３６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３８】
前記第３の領域がｎ個の連結ヌクレオシドを含み、且つ位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、請求項３７に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３９】
ｎ個の連結ヌクレオシドを有する前記第２の領域が目的ポリペプチドをコードする、請求項３５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４０】
前記目的ポリペプチドが、生物学的製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質又はペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、原形質膜タンパク質、細胞質又は細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、標的化部分及びヒトゲノムによってコードされる任意のタンパク質からなる群から選択される、請求項３５又は３９に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４１】
第３の連結ヌクレオシド領域であって、前記第２の領域の３’末端に位置する第３の領域をさらに含む、請求項３９に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４２】
前記第３の領域がｎ個の連結ヌクレオシドを含み、且つ位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、請求項４１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４３】
ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第３の領域をさらに含む、請求項３４に記載のキメラポリヌクレオチドであって、前記第３の領域が位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、キメラポリヌクレオチド。
【請求項４４】
前記第３の領域が前記第１の領域の５’末端又は前記第２の領域の３’末端のいずれかに位置する、請求項４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４５】
ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ｍｉＲＮＡシード、ロング非コードＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｓｎｏＲＮＡの１つ以上からなる群から選択される非コードＲＮＡを含む、請求項４４に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４６】
位置的に修飾されている領域における前記異なる化学修飾が、各々、天然に存在しない修飾である、請求項３４又は４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４７】
位置的に修飾されている領域における前記化学修飾の５パーセント未満が、天然に存在しない修飾である、請求項３４又は４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４８】
位置的に修飾されている領域における前記化学修飾の１０〜２０パーセントが、天然に存在しない修飾である、請求項３４又は４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４９】
位置的に修飾されている領域における前記化学修飾の５０パーセント超が、天然に存在しない修飾である、請求項３４又は４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記天然に存在しない修飾が、表２に掲載されるものからなる群から選択される、請求項４６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５１】
プリン類（アデニン及びグアニン）のみが化学的に修飾される、請求項５０に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５２】
ピリミジン類（ウラシル、チミジン及びシチジン）のみが化学的に修飾される、請求項５０に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記第１、第２又は第３の領域の少なくとも１つがヒト細胞での発現にコドン最適化される、請求項３４又は４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５４】
前記コドン最適化ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｔｉｄｅ）の総Ｇ：Ｃ含量がコドン最適化前のＧ：Ｃ含量以下である、請求項５３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５５】
環状である、請求項３４又は４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５６】
（ａ）ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第１の領域と；
（ｂ）ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第２の領域であって、前記第１の領域にライゲートされている第２の領域と；
（ｃ）任意選択で、前記第１の領域又は前記第２の領域のいずれかにライゲートされた、且つｎ個の連結ヌクレオシドを有する第３の領域と、を含み、
前記第１及び前記第２の領域、及び存在する場合に前記第３の領域の各々が位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、キメラポリヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キメラポリヌクレオチドの設計、調製、製造及び／又は製剤化のための組成物、方法、プロセス、キット及び装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９９０年代初め、ブルーム（Ｂｌｏｏｍ）及び共同研究者らはインビトロ転写バソプレシンｍＲＮＡを視床下部に注入することによりバソプレシン欠乏ラットをレスキューすることに成功した（非特許文献１）。しかしながら、翻訳レベルの低さ及び分子の免疫原性によって治療薬としてのｍＲＮＡの開発は阻まれ、以降、逆にこれらの落とし穴を利用し得る代替的適用、即ち癌抗原をコードするｍＲＮＡによる免疫化に労力が傾注されてきた。
【０００３】
近年、他の研究者らによって、ｍＲＮＡを使用した目的ポリペプチドをコードするコンストラクトの送達が調査されており、ｍＲＮＡ分子の特定の化学修飾、特にプソイドウリジン及び５−メチルシトシンが免疫刺激効果を低下させたことが示されている。
【０００４】
これらの研究は、例えば、リボステム・リミテッド（Ｒｉｂｏｓｔｅｍ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）、２００３年７月９日に出願され、現在放棄されている（特許文献１）、（特許文献２）として公開されている２００４年７月９日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２９８１号）、（特許文献３）として公開され、現在放棄されている２００６年６月８日に出願された米国特許出願国内段階移行（米国特許出願第１０／５６３，８９７号）、及び（特許文献４）として公開され、現在取り下げられている２００４年７月９日に出願された欧州特許出願国内段階移行（ＥＰ２００４７４３３２２号）；ノボザイムズ・インコーポレイテッド（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ，Ｉｎｃ．）、（特許文献５）として公開されている２００７年１２月１９日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２００７／８８０６０号）、（特許文献６）として公開されている２００９年７月２日に出願された米国特許出願国内段階移行（米国特許出願第１２／５２０，０７２号）、及び（特許文献７）として公開されている２００９年７月７日に出願された欧州特許出願国内段階移行（ＥＰ２００７８７４３７６号）；ロチェスター大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ）、（特許文献８）として公開されている２００６年１２月４日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２００６／４６１２０号）、及び（特許文献９）として公開されている２００６年１２月１日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１１／６０６，９９５号）；バイオＮテック・アーゲー（ＢｉｏＮＴｅｃｈ  ＡＧ）、２００７年１２月１４日に出願され、現在放棄されている欧州特許出願（特許文献１０）、（特許文献１１）として公開されている２００８年１２月１２日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０１０５９号）、（特許文献１２）として公開されている２０１０年６月２日に出願された欧州特許出願国内段階移行（ＥＰ２００８８６１４２３号）、（特許文献１３）として公開されている２０１０年１１月２４日に出願された米国特許出願国内段階移行（米国特許出願第１２／，７３５，０６０号）、２００５年９月２８日に出願された独国特許出願（特許文献１４）、（特許文献１５）として公開されている２００６年９月２８日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００６／０４４８号）、２０１２年３月２１日に公開された国内段階欧州特許（特許文献１６）、及び（特許文献１７）として公開されている２００９年８月１４日に出願された国内段階米国特許出願（米国特許出願第１１／９９２，６３８号）；イミューン・ディズィーズ・インスティテュート・インコーポレイテッド（Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．）、（特許文献１８）として公開されている２０１１年４月１５日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１３／０８８，００９号）、及び（特許文献１９）として公開されて
いる２０１１年４月１５日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／３２６７９号）；シャイアー・ヒューマン・ジェネティック・セラピューティクス（Ｓｈｉｒｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、（特許文献２０）として公開されている２０１０年１１月２０日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１２／９５７，３４０号）；セクイター・インコーポレイテッド（Ｓｅｑｕｉｔｕｒ  Ｉｎｃ．）、（特許文献２１）として公開されている１９９８年９月１８日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ１９９８／０１９４９２号）；スクリップス研究所（Ｔｈｅ  Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、（特許文献２２）として公開されている２０１０年２月２４日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００５６７号）、及び（特許文献２３）として公開されている２０１１年１１月３日に出願された米国特許出願国内段階移行（米国特許出願第１３／２０３，２２９号）；ルートヴィヒ・マクシミリアン大学（Ｌｕｄｗｉｇ−Ｍａｘｉｍｉｌｌｉａｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、（特許文献２４）として公開されている２０１０年７月３０日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００４６８１号）；セルスクリプト・インコーポレイテッド（Ｃｅｌｌｓｃｒｉｐｔ  Ｉｎｃ．）、２００８年６月３０日に出願され、２０１１年１０月１８日に付与された米国特許（特許文献２５）、（特許文献２６）として公開されている２０１０年１２月７日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１２／９６２，４９８号）、（特許文献２７）として公開されている２０１０年１２月７日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１２／９６２，４６８号）、（特許文献２８）として公開されている２０１１年９月２０日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１３／２３７，４５１号）、及び（特許文献２９）として公開されている２０１０年１２月７日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／５９３０５号）、及び（特許文献３０）として公開されている２０１０年１２月７日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／５９３１７号）；ペンシルバニア大学理事会（Ｔｈｅ  Ｔｒｕｓｔｅｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、（特許文献３１）として公開されている２００６年８月２１日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ２００６／３２３７２号）、及び（特許文献３２）として公開されている２００９年３月２７日に出願された米国特許出願国内段階移行（米国特許出願第１１／９９０，６４６号）；キュアバック・ゲーエムベーハー（Ｃｕｒｅｖａｃ  ＧＭＢＨ）、２００１年６月５日に出願された独国特許出願（特許文献３３）、２００１年１２月１９日に出願された（特許文献３４）、及び２００６年１０月３１日に出願された（特許文献３５）（全て放棄されている）、２００５年３月３０日に付与された欧州特許（特許文献３６）、及び２００８年１月２日に付与された（特許文献３７）、（特許文献３８）として公開されている２００２年６月５日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００２／０６１８０号）、（特許文献３９）として公開されて���る２００２年１２月１９日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００２／１４５７７号）、（特許文献４０）として公開されている２００７年１２月３１日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０９４６９号）、（特許文献４１）として公開されている２００８年４月１６日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０３０３３号）、（特許文献４２）として公開されている２００５年５月１９日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００４７８４号）、（特許文献４３）として公開されている２００７年１月９日に出願されたＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０００８１号）、及び（特許文献４４）として公開されている２００３年１２月５日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１０／７２９，８３０号）、（特許文献４５）として公開されている２００４年６月１８日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１０／８７０，１１０号）、（特許文献４６）として公開されている２００８年７月７日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１１／９１４，９４５号）、（特許文献４７）として公開され、現在放棄されている２００９年１０月２７日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１２／４４６，９１２号）、（特許文献４８）として公開されている２０１０年１月４日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１２／５２２，２１４号）、（特許文献４９）として公開されている２０１０年５月２６日に出願された米国
特許出願（米国特許出願第１２／７８７，５６６号）、（特許文献５０）として公開されている２０１０年５月２６日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１２／７８７，７５５号）、（特許文献５１）として公開されている２０１１年７月１８日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１３／１８５，１１９号）、及び（特許文献５２）として公開されている２０１１年５月１２日に出願された米国特許出願（米国特許出願第１３／１０６，５４８号）（これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】英国特許出願第０３１６０８９．２号明細書
【特許文献２】国際公開第２００５００５６２２号
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【特許文献４】欧州特許第１６４６７１４号明細書
【特許文献５】国際公開第２００８１４０６１５号
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【特許文献８】国際公開第２００７０６４９５２号
【特許文献９】米国特許出願公開第２００７０１４１０３０号明細書
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【特許文献１１】国際公開第２００９０７７１３４号
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【特許文献１３】米国特許出願公開第２０１１００６５１０３号明細書
【特許文献１４】ＤＥ１０  ２００５  ０４６  ４９０号明細書
【特許文献１５】国際公開第２００７０３６３６６号
【特許文献１６】欧州特許第１９３４３４５号明細書
【特許文献１７】米国特許出願公開第２０１００１２９８７７号明細書
【特許文献１８】米国特許出願公開第２０１２００４６３４６号明細書
【特許文献１９】国際公開第２０１１０１３０６２４号
【特許文献２０】米国特許出願公開第２０１１０２４４０２６号明細書
【特許文献２１】国際公開第１９９９０１４３４６号
【特許文献２２】国際公開第２０１００９８８６１号
【特許文献２３】米国特許出願公開第２０１２００５３３３３号明細書
【特許文献２４】国際公開第２０１１０１２３１６号
【特許文献２５】米国特許第８，０３９，２１４号明細書
【特許文献２６】米国特許出願公開第２０１１０１４３４３６号明細書
【特許文献２７】米国特許出願公開第２０１１０１４３３９７号明細書
【特許文献２８】米国特許出願公開第２０１２０００９６４９号明細書
【特許文献２９】国際公開第２０１１０７１９３１号
【特許文献３０】国際公開第２０１１０７１９３６号
【特許文献３１】国際公開第２００７０２４７０８号
【特許文献３２】米国特許出願公開第２００９０２８６８５２号明細書
【特許文献３３】ＤＥ１０  ２００１  ０２７  ２８３．９号明細書
【特許文献３４】ＤＥ１０  ２００１  ０６２  ４８０．８号明細書
【特許文献３５】ＤＥ  ２０  ２００６  ０５１  ５１６号明細書
【特許文献３６】欧州特許第１３９２３４１号明細書
【特許文献３７】欧州特許第１４５８４１０号明細書
【特許文献３８】国際公開第２００２０９８４４３号
【特許文献３９】国際公開第２００３０５１４０１号
【特許文献４０】国際公開第２００８０５２７７０号
【特許文献４１】国際公開第２００９１２７２３０号
【特許文献４２】国際公開第２００６１２２８２８号
【特許文献４３】国際公開第２００８０８３９４９号
【特許文献４４】米国特許出願公開第２００５００３２７３０号明細書
【特許文献４５】米国特許出願公開第２００５００５９６２４号明細書
【特許文献４６】米国特許出願公開第２００８０２６７８７３号明細書
【特許文献４７】米国特許出願公開第２０１００４７２６１号明細書
【特許文献４８】米国特許出願公開第２０１００１８９７２９号明細書
【特許文献４９】米国特許出願公開第２０１１００７７２８７号明細書
【特許文献５０】米国特許出願公開第２０１００２３９６０８号明細書
【特許文献５１】米国特許出願公開第２０１１０２６９９５０号明細書
【特許文献５２】米国特許出願公開第２０１１０３１１４７２号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ブルーム（Ｂｌｏｏｍ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２５５巻、ｐ．９９６〜９９８、１９９２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
これらの報告はあるものの、それらは、プソイドウリジン及び５−メチルシトシンを含む、修飾がｍＲＮＡに均一に存在する化学修飾の選択に限定されている。当該技術分野では、生理学的反応及び転帰を微調整し又は個別に合わせて調整すべく、種々の化学修飾の選択的組込みを阻む障壁を含む、ポリペプチドをコードする核酸の細胞内翻訳及びプロセシングの有効な調節を取り巻く無数の障壁に対処する治療モダリティが依然として必要とされている。
【０００８】
これまで、位置的に修飾されたポリヌクレオチド、例えば修飾の選択的組込みを有するものに関する研究は報告されていない。本発明は、当該技術分野における１つ以上の課題を回避する構造的及び／又は化学的特徴、例えば、核酸ベースの治療薬を最適化する一方で構造的及び機能的完全性を維持し、発現の閾値を克服し、発現率、半減期及び／又はタンパク質濃度を改善し、タンパク質局在化を最適化し、且つ免疫応答及び／又は分解経路などの有害な生物学的反応を回避するのに有用な特徴を有する核酸ベースの化合物又はキメラポリヌクレオチド（コード及び非コードの両方並びにそれらの組み合わせ）を提供することにより、この必要に対処する。これらの障壁の各々が、本発明を用いて軽減され又は解消され得る。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この点で、本発明者らは、化学修飾の配置、位置及びパーセント負荷のカスタマイズを可能にすることでポリヌクレオチドの特定の物理化学的及び薬学的特性を改善し、改変し又は最適化するキメラポリヌクレオチド及びそれらのポリヌクレオチドの合成方法を開発した。
【００１０】
本明細書には、キメラポリヌクレオチドの設計、調製、製造及び／又は製剤化のための組成物、方法、プロセス、キット及び装置が記載される。非限定的な一実施形態では、かかるキメラポリヌクレオチドは、目的ポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡ分子の形態をとり、又はそれとして機能する。一実施形態では、かかるキメラポリヌクレオチドは実質的に非コードである。
【００１１】
本発明によれば、ポリペプチドをコードするキメラポリヌクレオチドが提供され、このキメラポリヌクレオチドは、式Ｉ、
５’［Ａｎ］ｘ−Ｌ１−［Ｂｏ］ｙ−Ｌ２−［Ｃｐ］ｚ−Ｌ３  ３’
式Ｉ
（式中：
Ａ及びＢの各々は、独立に、連結ヌクレオシド領域を含み；
Ｃは、任意選択の連結ヌクレオシド領域であり；
領域Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つは位置的に修飾されており、前記位置的に修飾された領域は、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ同じタイプのヌクレオシドの化学修飾の少なくとも２つは異なる化学修飾であり；
ｎ、ｏ及びｐは、独立に（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｙ）、１５〜１０００の整数であり；ｘ及びｙは、独立に、１〜２０であり；
ｚは、０〜５であり；
Ｌ１及びＬ２は、独立に、任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかであり；及び
Ｌ３は、任意選択のコンジュゲート又は任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかである）
を含む配列又は構造を有する。
【００１２】
また、研究、診断学及び治療学における本キメラポリヌクレオチドの作製及び使用方法も提供される。
下記の説明に本発明の様々な実施形態の詳細を示す。この説明及び図面から、及び特許請求の範囲から、本発明の他の特徴、目的、及び利点が明らかになるであろう。
【００１３】
前述の及び他の目的、特徴及び利点が、添付の図面に示されるとおりの本発明の詳細な実施形態の以下の説明から明らかになるであろう。図面では、種々の図全てにわたり同様の参照符号は同じ部分を指す。図面は必ずしも一定の縮尺でなく、代わりに本発明の様々な実施形態の原理を図解することに重点が置かれている。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ポリヌクレオチドコンストラクトの概略図を示す図１Ａ及び図１Ｂを含む。図１Ａは、２０１３年３月９日に出願された所有者が共通する同時係属中の米国特許出願第１３／７９１，９２２号明細書（この内容は参照により本明細書に援用される）に教示されるポリヌクレオチドコンストラクトの概略図である。図１Ｂは、線状ポリヌクレオチドコンストラクトの概略図である。
【図２】本発明の一連のキメラポリヌクレオチドの概略図である。
【図３】一連のキメラポリヌクレオチドの概略図であり、位置修飾の様々なパターンを示し、及びｍＲＮＡポリヌクレオチドのそれらの領域と類似した領域を示す。
【図４】一連のキメラポリヌクレオチドの概略図であり、式Ｉに基づく位置修飾の様々なパターンを示す。
【図５】一連のキメラポリヌクレオチドの概略図であり、式Ｉに基づく位置修飾の様々なパターンを示し、及びブロック化又は構造化された３’末端をさらに示す。
【図６】本発明の環状コンストラクトの概略図である。
【図７】本発明の環状コンストラクトの概略図である。
【図８】少なくとも１つのスペーサ領域を含む本発明の環状コンストラクトの概略図である。
【図９】少なくとも１つのセンサー領域を含む本発明の環状コンストラクトの概略図である。
【図１０】少なくとも１つのセンサー領域とスペーサ領域とを含む本発明の環状コンストラクトの概略図である。
【図１１】本発明の非コード環状コンストラクトの概略図である。
【図１２】本発明の非コード環状コンストラクトの概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
治療学、診断学、試薬の分野において、及び生物学的アッセイにとって、インビトロ、インビボ、インサイチュ又はエキソビボのいずれであるにしろ、細胞内部における核酸、例えばリボ核酸（ＲＮＡ）の設計、合成及び送達を可能にすること、例えば、細胞、組織又は器官、及び最終的には生物に有益な生理学的帰結をもたらすことは、大きな関心となる。一つの有益な帰結は、核酸の細胞内翻訳及びコードされた目的ポリペプチドの産生を生じさせることである。同様に、非コードＲＮＡが多くの研究の焦点となっており；非コードポリヌクレオチドを単独で、及びコードポリヌクレオチドと併せて利用すると、治療シナリオにおいて有益な帰結がもたらされ得る。
【００１６】
本明細書には、ポリヌクレオチド、特にキメラポリヌクレオチドの設計、調製、製造及び／又は製剤化のための組成物（医薬組成物を含む）及び方法が記載される。
また、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドの選択、設計及び／又は利用のためのシステム、プロセス、装置及びキットも提供される。
【００１７】
本発明によれば、キメラポリヌクレオチドは、好ましくは、当該技術分野の他の分子が欠損することのないように修飾される。
ヒト疾患、抗体、ウイルス、獣医学適用分野及び種々の生体内状況におけるポリペプチドをコードする修飾ポリヌクレオチド（即ち、修飾ｍＲＮＡ）の使用が本発明者らによって調査されており、これらの研究は、例えば、同時係属中の米国仮特許出願第６１／６１８，８６２号明細書、同第６１／６８１，６４５号明細書、同第６１／７３７，１３０号明細書、同第６１／６１８，８６６号明細書、同第６１／６８１，６４７号明細書、同第６１／７３７，１３４号明細書、同第６１／６１８，８６８号明細書、同第６１／６８１，６４８号明細書、同第６１／７３７，１３５号明細書、同第６１／６１８，８７３号明細書、同第６１／６８１，６５０号明細書、同第６１／７３７，１４７号明細書、同第６１／６１８，８７８号明細書、同第６１／６８１，６５４号明細書、同第６１／７３７，１５２号明細書、同第６１／６１８，８８５号明細書、同第６１／６８１，６５８号明細書、同第６１／７３７，１５５号明細書、同第６１／６１８，８９６号明細書、同第６１／６６８，１５７号明細書、同第６１／６８１，６６１号明細書、同第６１／７３７，１６０号明細書、同第６１／６１８，９１１号明細書、同第６１／６８１，６６７号明細書、同第６１／７３７，１６８号明細書、同第６１／６１８，９２２号明細書、同第６１／６８１，６７５号明細書、同第６１／７３７，１７４号明細書、同第６１／６１８，９３５号明細書、同第６１／６８１，６８７号明細書、同第６１／７３７，１８４号明細書、同第６１／６１８，９４５号明細書、同第６１／６８１，６９６号明細書、同第６１／７３７，１９１号明細書、同第６１／６１８，９５３号明細書、同第６１／６８１，７０４号明細書、同第６１／７３７，２０３号明細書の表６；米国仮特許出願第６１／６８１，７２０号明細書、同第６１／７３７，２１３号明細書、同第６１／６８１，７４２号明細書の表６及び表７；国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６８号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６３号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６９号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６７０号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６４号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６５号パンフレット、国際公開第２０１３１５１７３６号パンフレットの表６；表６及び表７  国際公開第２０１３１５１６７２号パンフレット；国際公開第２０１３１５１６７１号パンフレットの表６、表１７８及び表１７９；米国仮特許出願第６１／６１８，８７０号明細書の表６、表２８及び表２９；米国仮特許出願第６１／６８１，６４９号明細書の表６、表５６及び表５７；表６、表１８６及び表１８７  米国仮特許出願第６１／７３７，１３９号明細書；国際公開第２０１３１５１６６７号パンフレットの表６、表１８５及び表１８６（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用され
る）に掲載されるものに開示されている。前述のいずれもキメラポリヌクレオチドとして合成することができ、かかる実施形態は本発明によって企図される。
【００１８】
従って、本明細書には、キメラポリヌクレオチドであって、そのキメラ性に基づき、組織における安定性及び／又はクリアランス、受容体取込み及び／又は動態、細胞到達、翻訳機構との関わり、ｍＲＮＡ半減期、翻訳効率、免疫回避、免疫誘導（ワクチンに対する）、タンパク質産生能、分泌効率（該当する場合）、循環への到達性、タンパク質半減期及び／又は細胞の状態、機能及び／又は活性の調節のうちの１つ以上を改善するように設計されているキメラポリヌクレオチドが提供される。
【００１９】
Ｉ．本発明の組成物
本発明は、キメラであって、且つ一部の実施形態では１つ以上の目的ポリペプチドをコードする核酸分子、特にポリヌクレオチドを提供する。用語「核酸」は、最も広義には、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。これらのポリマーは、多くの場合にポリヌクレオチドと称される。
【００２０】
本発明の例示的核酸又はポリヌクレオチドとしては、限定はされないが、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ、例えば、β−Ｄ−リボ配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡが含まれる）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）又はそれらのハイブリッド若しくは組み合わせが挙げられる。
【００２１】
好ましい実施形態において、核酸分子はメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり、又はそれとして機能する。本明細書で使用されるとき、用語「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）は、目的ポリペプチドをコードする任意のポリヌクレオチドであって、翻訳されることによりインビトロ、インビボ、インサイチュ又はエキソビボで目的コードポリペプチドを産生する能力を有するポリヌクレオチドを指す。
【００２２】
従来、ｍＲＮＡ分子の基本構成要素には、少なくともコード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、５’キャップ及びポリＡテイルが含まれる。図１は、ポリペプチドをコードする本発明のキメラポリヌクレオチドを設計する際の出発分子、親分子又は足場分子として働き得る代表的なポリヌクレオチド１００を示す。
【００２３】
図１Ａ及び図１Ｂによれば、ここでポリヌクレオチド１００は、第１のフランキング領域１０４と第２のフランキング領域（ｆｌａｋｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）１０６とが隣接する第１の連結ヌクレオチド領域１０２を含む。このポリヌクレオチドは、その５’末端で、シグナル配列領域１０３の１つ以上のシグナル配列をコードし得る。フランキング領域１０４は、完全にコドン最適化されていても、又は部分的にコドン最適化されていてもよい１つ以上の完全又は不完全な５’ＵＴＲ配列を含む連結ヌクレオチド領域を含み得る。フランキング領域１０４は、限定はされないが、ｍｉＲ配列、テルザック（ＴＥＲＺＡＫ）（商標）配列及び翻訳制御配列を含めた少なくとも１つの核酸配列を含み得る。フランキング領域１０４はまた、５’末端キャップ１０８も含み得る。５’末端キャッピング領域１０８は、天然に存在するキャップ、合成キャップ又は最適化されたキャップなどのキャップを含み得る。最適化されたキャップの非限定的な例としては、ローズ（Ｒｈｏａｄｓ）によって米国特許第７０７４５９６号明細書及び国際公開第２００８１５７６６８号パンフレット、国際公開第２００９１４９２５３号パンフレット及び国際公開第２０１３１０３６５９号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に教示されるキャップが挙げられる。第２のフランキング領域１０６
は、１つ以上の完全又は不完全な３’ＵＴＲを含む連結ヌクレオチド領域を含み得る。第２のフランキング領域１０６は完全にコドン最適化されていても、又は部分的にコドン最適化されていてもよい。フランキング領域１０６は、限定はされないが、ｍｉＲ配列及び翻訳制御配列を含めた少なくとも１つの核酸配列を含み得る。フランキング領域１０６はまた、３’テイル付加配列１１０も含み得る。３’テイル付加配列１１０は、合成テイル付加領域１１２及び／又は連鎖停止ヌクレオシド１１４を含み得る。合成テイル付加領域の非限定的な例としては、ポリＡ配列、ポリＣ配列、ポリＡ−Ｇ四重鎖が挙げられる。連鎖停止ヌクレオシドの非限定的な例としては、２’−Ｏメチル、Ｆ及びロックド核酸（ＬＮＡ）が挙げられる。
【００２４】
第１の領域１０２の５’末端と第１のフランキング領域１０４とを架橋するのが、第１の作動可能領域１０５である。従来、この作動可能領域は開始コドンを含む。作動可能領域は、或いは、開始コドンを含む任意の翻訳開始配列又はシグナルを含み得る。
【００２５】
第１の領域１０２の３’末端と第２のフランキング領域１０６とを架橋するのが、第２の作動可能領域１０７である。従来、この作動可能領域は終止コドンを含む。作動可能領域は、或いは、終止コドンを含む任意の翻訳開始配列又はシグナルを含み得る。複数の連続する終止コドンもまた用いられ得る。
【００２６】
この野生型モジュール構造を基に、本発明は、モジュール構成を維持しながらも、ポリヌクレオチドに有用な特性を付与する１つ以上の構造的及び／又は化学的修飾又は改変を含むキメラポリヌクレオチド又はＲＮＡコンストラクトを提供することにより、当該技術分野における従来のｍＲＮＡ分子並びにＩＶＴによって産生されるｍＲＮＡ分子の機能性の範囲を広げる。従って、本発明の修飾ｍＲＮＡ分子であるキメラポリヌクレオチドは、「キメラ修飾ｍＲＮＡ」又は「キメラｍＲＮＡ」と呼ばれる。
【００２７】
キメラポリヌクレオチドの構成
本発明に係る「キメラ」は、２つ以上の不調和な又は異質のパート又は領域を有する実体である。本明細書で使用されるとき、「キメラポリヌクレオチド」又は「キメラポリヌクレオチド」は、サイズ及び／又は化学修飾パターン、化学修飾位置、化学修飾パーセント又は化学修飾集合及び前述の組み合わせが異なる一部分又は領域を有する核酸ポリマーである。本明細書で使用されるとき、ポリヌクレオチドの「パート」又は「領域」は、ポリヌクレオチドの全長より短いポリヌクレオチドの任意の一部分として定義される。
【００２８】
キメラポリヌクレオチドがｍＲＮＡとして機能するとともに目的ポリペプチドをコードするパート又は領域の例としては、限定はされないが、非翻訳領域（ＵＴＲ、例えば５’ＵＴＲ又は３’ＵＴＲ）、コード領域、キャップ領域、ポリＡテイル領域、開始領域、終結領域、シグナル配列領域、及びそれらの組み合わせが挙げられる。図２は、ｍＲＮＡとして用いられ得る本発明のキメラポリヌクレオチドの特定の実施形態を示す。図３は、一連のキメラポリヌクレオチドの概略図を示し、位置修飾の様々なパターンを特定するとともに、ｍＲＮＡポリヌクレオチドのそれらの領域と類似した領域を示す。他の領域間をつなぎ合わせる又はその間にある領域又はパートもまた、サブ領域を有するように設計され得る。それらは図に示す。
【００２９】
一部の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、式Ｉを含む構造を有する。
５’［Ａｎ］ｘ−Ｌ１−［Ｂｏ］ｙ−Ｌ２−［Ｃｐ］ｚ−Ｌ３  ３’
式Ｉ
（式中：
Ａ及びＢの各々は、独立に、連結ヌクレオシド領域を含み；
Ｃは、任意選択の連結ヌクレオシド領域であり；
領域Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つは位置的に修飾されており、位置的に修飾された領域は、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ同じタイプのヌクレオシドの化学修飾の少なくとも２つは異なる化学修飾であり；
ｎ、ｏ及びｐは、独立に（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｙ）、１５〜１０００の整数であり；ｘ及びｙは、独立に、１〜２０であり；
ｚは、０〜５であり；
Ｌ１及びＬ２は、独立に、任意選択のリンカー部分であり、リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかであり；及び
Ｌ３は、任意選択のコンジュゲート又は任意選択のリンカー部分であり、リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかである）。
【００３０】
一部の実施形態では、式Ｉのキメラポリヌクレオチドは１つ以上の目的ペプチド又はポリペプチドをコードする。かかるコードされる分子は２つ以上の領域にわたってコードされ得る。
【００３１】
図４及び図５は、式Ｉに基づく位置修飾の様々なパターン並びにブロック化又は構造化された３’末端を有するものを示す一連のキメラポリヌクレオチドの概略図を提供する。
本発明のキメラポリヌクレオチドは、そのパート又は領域を含め、ヘミマー（ｈｅｍｉｍｅｒ）、ギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）、ウィングマー（ｗｉｎｇｍｅｒ）、又はブロックマー（ｂｌｏｃｋｍｅｒ）に分類され得る。
【００３２】
本明細書で使用されるとき、「ヘミマー」は、あるパターン、パーセント、位置又は集合の化学修飾の半分と、第２のパターン、パーセント、位置又は集合の化学修飾の半分とを含む領域又はパートを含むキメラポリヌクレオチドである。本発明のキメラポリヌクレオチドはまた、ヘミマーサブ領域も含み得る。一実施形態では、パート又は領域は５０％一方と５０％のもう一方である。
【００３３】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチド全体が５０％の一方と５０％の他方とであり得る。本発明の任意のキメラポリヌクレオチドの任意の領域又はパートがヘミマーであり得る。ヘミマーのタイプには、パターンヘミマー、集合ヘミマー又は位置ヘミマーが含まれる。定義上、ヘミマーは５０：５０パーセントヘミマーである。
【００３４】
本明細書で使用されるとき、「ギャップマー」は、少なくとも３つのパート又は領域を有し、それらのパート又は領域の間にギャップを含むキメラポリヌクレオチドである。「ギャップ」は、それに隣接する２つのパート又は領域のキメラの性質と異なる連結ヌクレオシド領域又は単一のヌクレオシドを含み得る。ギャップマーの２つのパート又は領域は互いに同じであっても又は異なってもよい。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、「ウィングマー」は、少なくとも３つのパート又は領域を有し、それらのパート又は領域の間にギャップを含むキメラポリヌクレオチドである。ギャップマーと異なり、ウィングマーではギャップを取り囲む２つの隣接するパート又は領域が同じ程度又は種類である。かかる類似性（ｓｉｍｉｌｉａｒｉｔｙ）は、種々の修飾の単位数長さ又は修飾数の点であり得る。ウィングマーのウィングはギャップより長いことも、又は短いこともある。ウィングパート又は領域は、ギャップを含む領域と比べて長さが２０、３０、４０、５０、６０  ７０、８０、９０又は９５％長い又は短いこともある。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、「ブロックマー」は、パート又は領域が同等のサイズ又は数及びタイプの修飾であるパターン化したポリヌクレオチドである。ブロックマーの領域
又はサブ領域は、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１  ６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０又は５００ヌクレオシド長（ｎｕｃｌｅｓｉｄｅｓ  ｌｏｎｇ）であり得る。
【００３７】
化学修飾パターンを有する本発明のキメラポリヌクレオチドは、そのパート又は領域を含め、「パターンキメラ」と称される。パターンキメラはまた、ブロックマーとも称され得る。パターンキメラは、領域又はパートの範囲内に、それらにわたって又はそれらの間に修飾パターンを有するポリヌクレオチドである。
【００３８】
パート又は領域の範囲内の修飾パターンは、定義された領域内で始まり、終わるものである。パート又は領域にわたる修飾パターンは、あるパート又は領域で始まり、別の隣接するパート又は領域で終わるパターンである。パート又は領域の間での修飾パターンは、あるパート又は領域で始まって終わり、必ずしもその第１の領域又はパートに隣接しているとは限らない異なるパート又は領域で繰り返されるものである。
【００３９】
パターンキメラ又はブロックマーの領域又はサブ領域は、ＡＢＡＢ［ＡＢ］ｎ（各「Ａ」及び各「Ｂ」は、異なる化学修飾（塩基、糖又は主鎖リンカーの少なくとも１つにおける）、異なるタイプの化学修飾（例えば、天然に存在する、及び天然に存在しない）、異なる割合の修飾又は異なる集合の修飾を表す）などの単純な交互のパターンを有し得る。パターンはｎ回（ｎ＝３〜３００）繰り返され得る。さらに、各Ａ又はＢが、パターン中の１〜２５００単位（例えば、ヌクレオシド）を表し得る。パターンはまた、ＡＡＢＢＡＡＢＢ［ＡＡＢＢ］ｎ（交互の２個組）又はＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ［ＡＡＡＢＢＢ］ｎ（交互の３個組）パターンなどの交互の複数個組であってもよい。パターンはｎ回（ｎ＝３〜３００）繰り返され得る。
【００４０】
また異なるパターンが一緒に混合され、二次パターンを形成してもよい。例えば、単一
の交互パターンが３個組の交互パターンと組み合わされ、二次交互パターンＡ’Ｂ’を形成し得る。一例を挙げれば、［ＡＢＡＢＡＢ］［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］［ＡＢＡＢＡＢ］［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］［ＡＢＡＢＡＢ］［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］（［ＡＢＡＢＡＢ］がＡ’であり、［ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ］がＢ’である）となる。同様に、これらのパターンはｎ回（ｎ＝３〜３００）繰り返され得る。
【００４１】
パターンは３個又はそれ以上の異なる修飾を含み、ＡＢＣＡＢＣ［ＡＢＣ］ｎパターンを形成し得る。これらの３成分パターンもまた、ＡＡＢＢＣＣＡＡＢＢＣＣ［ＡＡＢＢＣＣ］ｎなど複数個組であってもよく、ＡＢＣＡＢＣＡＡＢＢＣＣＡＢＣＡＢＣＡＡＢＢＣＣなど他のパターンとの組み合わせとして設計されてもよく、及びより高次のパターンであってもよい。
【００４２】
位置、パーセント、及び集合修飾の領域又はサブ領域が各修飾タイプからの等しい寄与を反映する必要はない。それらは「１−２−３−４」、「１−２−４−８」（各整数は特定の修飾タイプの単位数を表す）などの系列を形成し得る。或いは、それらは「１−３−３−１−３−１−５」など奇数個のみであるか、又は偶数個のみ、「２−４−２−４−６−４−８」であるか、又は「１−３−４−２−５−７−３−３−４」など奇数個の単位数と偶数個の単位数との混合であってもよい。
【００４３】
パターンキメラは、その化学修飾の点で程度（上記に記載されるものなど）又は種類（例えば、異なる修飾）が異なり得る。
同じヌクレオシドタイプ（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、又はＵ）の２つ以上のヌクレオシドメンバーの２つ以上の異なる化学修飾を含む少なくとも１つの領域を有する本発明のキメラポリヌクレオチドは、そのパート又は領域を含め、「位置的に修飾されている」キメラと称される。位置的に修飾されているキメラは、本明細書では、「選択的配置」キメラ又は「選択的配置ポリヌクレオチド」とも称される。その名前が示すとおり、選択的配置とは、任意のＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔ又はＵに対する修飾が合成方法に起因して同じである当該技術分野のポリヌクレオチドとは異なり、ポリヌクレオチド又はその領域中の個々のＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔ又はＵに異なる修飾を有し得るポリヌクレオチドの設計を指す。例えば、位置的に修飾されているキメラポリヌクレオチドでは、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、又はＵのヌクレオシドタイプのいずれかに対して２つ以上の異なる化学修飾があり得る。また、同じヌクレオシドタイプの任意の２つ以上に対する２つ以上の組み合わせもあり得る。例えば、位置的に修飾されている又は選択的配置のキメラポリヌクレオチドは、分子（ｍｏｌｅｕｃｌｅ）中のアデニンの集合に対して３つの異なる修飾を含むことができ、またコンストラクト中のシトシンの集合に対しても３つの異なる修飾を有し得る−これらは全て、ユニークで非ランダムな配置であり得る。
【００４４】
化学修飾パーセントを有する本発明のキメラポリヌクレオチドは、そのパート又は領域を含め、「パーセントキメラ」と称される。パーセントキメラは、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の位置、パターン又は集合修飾を含む領域又はパートを有し得る。或いは、パーセントキメラは、修飾位置、パターン、又は集合に関して完全に修飾されていてもよい。パーセントキメラの修飾パーセントは、天然に存在する修飾と天然に存在しない修飾とに分かれ得る。
【００４５】
化学修飾集合を有する本発明のキメラポリヌクレオチドは、そのパート又は領域を含め、「集合キメラ」と称される。集合キメラは、ヌクレオシド（その塩基、糖又は主鎖連結、又はそれらの組み合わせ）が選択の修飾集合を有する領域又はパートを含み得る。かか
る修飾は、表現型の帰結を誘導し、改変し又は調節する修飾などの機能的集合から選択され得る。例えば、機能的集合は、サイトカイン値を増加させる化学修飾の集合又は選択であり得る。他の機能的集合は、個々に、又はまとめて、１つ以上のサイトカイン値を低下させるように機能し得る。従って、キメラポリヌクレオチドにおいてこれらの同様の機能的修飾の選択を用いれば、「機能的集合キメラ」を構成し得る。本明細書で使用されるとき、「機能的集合キメラ」とは、そのユニークな機能的特徴が上記に記載したとおりの修飾の集合によって定義されるものであってもよく、又はこの用語はキメラポリヌクレオチドそれ自体の全体的な機能に適用されてもよい。例えば、全体としてキメラポリヌクレオチドが、非修飾又は非キメラポリヌクレオチドと比較したとき別様に、又はより優れた形で機能し得る。
【００４６】
同じヌクレオシドタイプのいずれかの全ての均一な化学修飾を有するか、又は同じヌクレオシドタイプのいずれかの全てにおいて、若しくは同じヌクレオシドタイプのいずれか全ての一定パーセントにおいて、しかしランダムな組込みで、同じ出発修飾の単なる下方タイトレーション（ｄｏｗｎｗａｒｄ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって生じる修飾の集合を有する、例えば全てのウリジンがウリジン類似体、例えばプソイドウリジンに置き換えられる場合などのポリヌクレオチドは、キメラと見なされないことに留意しなければならない。同様に、ポリヌクレオチド全体にわたり同じヌクレオシドタイプの２つ、３つ、又は４つの均一な化学修飾を有する（全てのウリジン及び全てのシトシン等が同じように修飾されているなどの）ポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドとは見なされない。キメラでないポリヌクレオチドの一例は、先行技術のカノニカルなプソイドウリジン／５−メチルシトシン修飾ポリヌクレオチドである。これらの先行技術のポリヌクレオチドはインビトロ転写（ＩＶＴ）酵素合成によって完全に得られ；及び合成酵素の制約上、ポリヌクレオチドに見られる同じヌクレオシドタイプ、即ち、アデノシン（Ａ）、チミジン（Ｔ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）又はウリジン（ｕｒａｄｉｎｅ）（Ｕ）の各々の存在毎に一種類の修飾のみを含む。
【００４７】
本発明のキメラポリヌクレオチドは構造的に修飾されても、又は化学的に修飾されてもよい。本明細書で使用されるとき、「構造的」修飾は、ヌクレオチドそれ自体に対する顕著な化学修飾なしにキメラポリヌクレオチドにおいて２つ以上の連結ヌクレオシドが挿入され、欠失し、重複し、逆位にされ又はランダム化されるものである。構造的修飾が生じるには、必然的に化学結合が破壊され、再編成されることになるため、構造的修飾は化学的性質のものであり、ひいては化学修飾である。しかしながら、構造的修飾は異なるヌクレオチド配列をもたらすことになる。例えば、ポリヌクレオチド「ＡＴＣＧ」は化学的に修飾されて「ＡＴ−５ｍｅＣ−Ｇ」になり得る。同じポリヌクレオチドが、「ＡＴＣＧ」から「ＡＴＣＣＣＧ」へと構造的に修飾され得る。ここではジヌクレオチド「ＣＣ」が挿入されており、ポリヌクレオチドの構造的修飾がもたらされている。
【００４８】
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは２つ以上のタンパク質又はペプチドをコードし得る。かかるタンパク質又はペプチドには、抗体の重鎖及び軽鎖、酵素及びその基質、標識及びその結合分子、二次メッセンジャー及びその酵素又は多量体タンパク質若しくは複合体の成分が含まれる。
【００４９】
本発明のキメラポリヌクレオチドの領域又はパートはリンカー又はスペーサ部分によって分離され得る。かかるリンカー又はスペーサ（ｓｐａｃｅｓ）は核酸ベースであっても、又は非ヌクレオシドであってもよい。
【００５０】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、自己開裂ペプチドをコードする配列を含み得る。自己開裂ペプチドは、限定はされないが、２Ａペプチドであってもよい。非限定的な例として、２Ａペプチドはタンパク質配列：ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧ
ＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１）、その断片又は変異体を有し得る。一実施形態では、２Ａペプチドは最後のグリシンと最後のプロリンとの間で開裂する。別の非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、タンパク質配列ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１）、その断片又は変異体を有する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。
【００５１】
２Ａペプチドをコードするかかるポリヌクレオチド配列の一つは、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号２）である。ポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知の方法によって修飾され、又はコドン最適化されてもよい。
【００５２】
一実施形態では、この配列が、２つ以上の目的ポリペプチドのコード領域を分けるために用いられ得る。非限定的な例として、２Ａペプチドをコードする配列が第１のコード領域Ａと第２のコード領域Ｂとの間にあってもよい（Ａ−２Ａｐｅｐ−Ｂ）。２Ａペプチドの存在により、１つの長いタンパク質が開裂してタンパク質Ａ、タンパク質Ｂ及び２Ａペプチドになり得る。タンパク質Ａとタンパク質Ｂとは同じ又は異なる目的ポリペプチドであってよい。別の実施形態では、２Ａペプチドが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれ以上のタンパク質を産生するために本発明のキメラポリヌクレオチドに用いられ得る。
【００５３】
前述に関わらず、本発明のキメラポリヌクレオチドは、位置的に修飾されない又は本明細書に定義するキメラでない領域又はパートを含み得る。
例えば、キメラポリヌクレオチドの領域又はパートは１つ又は複数の（ｏｎｅ  ｏｒｅ
ｍｏｒｅ）Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、又はＵで均一に修飾されてもよく、しかし本発明によれば、ポリヌクレオチドが全領域又はパートにわたって均一に修飾されることはない。
【００５４】
キメラポリヌクレオチドの領域又はパートは１５〜１０００ヌクレオシド長であってもよく、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるとおりの２〜１００個の異なる領域又は領域のパターンを有し得る。
【００５５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは１つ以上の目的ポリペプチドをコードする。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは実質的に非コードである。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドはコード及び非コードの両方の領域及びパートを有する。
【００５６】
図２は、図１のポリヌクレオチドの足場に基づいたときの本発明の特定のキメラポリヌクレオチドの設計を示す。この図にはキメラポリヌクレオチドの領域又はパートが示され、ここで網掛けのある領域は位置的に修飾されている領域を表し、白抜きの領域は、修飾されていることも又は修飾されていないこともあるが、修飾されている場合には均一に修飾されている領域を示す。本発明のキメラポリヌクレオチドは完全に位置修飾されていてもよく、又は部分的に位置修飾されていてもよい。本キメラポリヌクレオチドはまた、任意のパターン又は設計であってよいサブ領域も有し得る。この図には、キメラサブ領域及びヘミマーサブ領域が示される。
【００５７】
一実施形態では、ペプチドをコードする本発明のキメラポリヌクレオチドの領域のうち最も短い長さは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、又はデカペプチドをコードするのに十分な長さであり得る。別の実施形態では、この長さは、２〜３０アミノ酸、例えば５〜３０、１０〜３０、２〜２５、５〜２５、１０〜２５、又は１０〜２０アミノ酸のペプチドをコードするのに十分であってもよい。この長さは、少なくとも１１、１２、
１３、１４、１５、１７、２０、２５又は３０アミノ酸のペプチド、又は４０アミノ酸以下、例えば３５、３０、２５、２０、１７、１５、１４、１３、１２、１１又は１０アミノ酸以下のペプチドをコードするのに十分であってもよい。ポリヌクレオチド配列がコードすることのできるジペプチドの例としては、限定はされないが、カルノシン及びアンセリンが挙げられる。
【００５８】
一実施形態では、本発明の目的ポリペプチドをコードする領域の長さは約３０ヌクレオチド長より長い（例えば、約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００、４，０００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００以上、又は１００，０００ヌクレオチド以下）。本明細書で使用されるとき、かかる領域は「コード領域」又は「領域コーディング」と称され得る。
【００５９】
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは約３０〜約１００，０００ヌクレオチド（例えば、３０〜５０、３０〜１００、３０〜２５０、３０〜５００、３０〜１，０００、３０〜１，５００、３０〜３，０００、３０〜５，０００、３０〜７，０００、３０〜１０，０００、３０〜２５，０００、３０〜５０，０００、３０〜７０，０００、１００〜２５０、１００〜５００、１００〜１，０００、１００〜１，５００、１００〜３，０００、１００〜５，０００、１００〜７，０００、１００〜１０，０００、１００〜２５，０００、１００〜５０，０００、１００〜７０，０００、１００〜１００，０００、５００〜１，０００、５００〜１，５００、５００〜２，０００、５００〜３，０００、５００〜５，０００、５００〜７，０００、５００〜１０，０００、５００〜２５，０００、５００〜５０，０００、５００〜７０，０００、５００〜１００，０００、１，０００〜１，５００、１，０００〜２，０００、１，０００〜３，０００、１，０００〜５，０００、１，０００〜７，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜２５，０００、１，０００〜５０，０００、１，０００〜７０，０００、１，０００〜１００，０００、１，５００〜３，０００、１，５００〜５，０００、１，５００〜７，０００、１，５００〜１０，０００、１，５００〜２５，０００、１，５００〜５０，０００、１，５００〜７０，０００、１，５００〜１００，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜５，０００、２，０００〜７，０００、２，０００〜１０，０００、２，０００〜２５，０００、２，０００〜５０，０００、２，０００〜７０，０００、及び２，０００〜１００，０００）を含む。
【００６０】
本発明によれば、キメラポリヌクレオチドの領域又はサブ領域はまた、独立に、１５〜１，０００ヌクレオチド長の範囲（例えば、３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、及び９００ヌクレオチド超、又は少なくとも３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、及び１，０００ヌクレオチド）であり得る。
【００６１】
本発明によれば、キメラポリヌクレオチドの領域又はサブ領域は存在しない乃至５００ヌクレオチド長の範囲（例えば、少なくとも６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ヌクレオチド）であり得る。領域がポリＡテイルである場合、長さはポリＡ結合タンパク質の結合の単位で又はその関数として決ま
り得る。この実施形態では、ポリＡテイルは、ポリＡ結合タンパク質の少なくとも４個のモノマーと結合するのに十分な長さである。ポリＡ結合タンパク質モノマーは約３８ヌクレオチドのストレッチに結合する。従って、約８０ヌクレオチド（配列番号４）及び１６０ヌクレオチド（配列番号５）のポリＡテイルが機能性であることが観察されている。ｍＲＮＡとして機能する本発明のキメラポリヌクレオチドはポリＡテイルを含まなくてもよい。
【００６２】
本発明によれば、ｍＲＮＡとして機能するキメラポリヌクレオチドはキャッピング領域を有し得る。キャッピング領域は、単一のキャップか、又はキャップを形成する一連のヌクレオチドを含み得る。この実施形態では、キャッピング領域は、１〜１０、例えば２〜９、３〜８、４〜７、１〜５、５〜１０、又は少なくとも２、又は１０以下のヌクレオチド長であり得る。一部の実施形態では、キャップは存在しない。
【００６３】
環状キメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｃｕｌｅｏｔｉｄｅ）構成
本発明は、環状又は環式のキメラポリヌクレオチドを企図する。その名前が示すとおり、環状ポリヌクレオチドは本質的に環状であり、つまり、ライゲーション、共有結合、同じタンパク質又は他の分子若しくは複合体との共通の会合によるか、それともハイブリダイゼーションによるかに関わらず、末端が何らかの方法でつなぎ合わされていることを意味する。例えば２０１３年９月３日に出願された米国仮特許出願第６１／８７３，０１０号明細書（代理人整理番号Ｍ５１．６０）（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示されるとおりの任意の環状（ｃｉｃｕｌａｒ）ポリヌクレオチドが、本発明に係るキメラにされてもよい。
【００６４】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、図６〜図１２に示す環状ＲＮＡコンストラクト足場に従い設計され得る。かかるポリヌクレオチドは、環状（ｃｉｃｕｌａｒ）キメラポリヌクレオチド又は環状コンストラクトである。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「環状ポリヌクレオチド」又は「ｃｉｒｃＰ」は、実質的にＲＮＡのように働き、且つＲＮＡの特性を有する一本鎖環状ポリヌクレオチドを意味する。用語「環状」はまた、ｃｉｒｃＰの二次又は三次構造を包含することも意図される。
【００６６】
少なくとも１つの目的ポリペプチドをコードする本発明のｃｉｒｃＰは、環状ＲＮＡ又はｃｉｒｃＲＮＡとして知られる。本明細書で使用されるとき、「環状ＲＮＡ」又は「ｃｉｒｃＲＮＡ」は、少なくとも１つの目的ポリペプチドをコードすることのできる環状ポリヌクレオチドを意味する。少なくとも１つのセンサー配列を含み、且つ目的ポリペプチドをコードしない本発明のｃｉｒｃＰは、環状スポンジ又はｃｉｒｃＳＰとして知られる。本明細書で使用されるとき、「環状スポンジ」、「環状ポリヌクレオチドスポンジ」又は「ｃｉｒｃＳＰ」は、少なくとも１つのセンサー配列を含み、且つ目的ポリペプチドをコードしない環状ポリヌクレオチドを意味する。本明細書で使用されるとき、「センサー配列」は、内因性核酸結合分子の受容体又は擬受容体を意味する。センサー配列の非限定的な例としては、マイクロＲＮＡ結合部位、マイクロＲＮＡシード配列、シード配列のないマイクロＲＮＡ結合部位、転写因子結合部位及び擬受容体として働くように操作された人工結合部位並びにそれらの一部分及び断片が挙げられる。
【００６７】
少なくとも１つのセンサー配列を含み、且つ少なくとも１つの目的ポリペプチドをコードする本発明のｃｉｒｃＰは、環状ＲＮＡスポンジ又はｃｉｒｃＲＮＡ−ＳＰとして知られる。本明細書で使用されるとき、「環状ＲＮＡスポンジ」又は「ｃｉｒｃＲＮＡ−ＳＰ」は、少なくとも１つのセンサー配列と少なくとも１つの目的ポリペプチドをコードする少なくとも１つの領域とを含む環状ポリヌクレオチドを意味する。
【００６８】
図６は、本発明の代表的な環状コンストラクト２００を示す。本明細書で使用されるとき、用語「環状コンストラクト」は、ＲＮＡ分子と実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｔｌｌｙ）同様に働き、且つその特性を有し得る環状ポリヌクレオチド転写物を指す。一実施形態では、環状コンストラクトはｍＲＮＡとして働く。環状コンストラクトが１つ以上の目的ポリペプチドをコードする場合（例えば、ｃｉｒｃＲＮＡ又はｃｉｒｃＲＮＡ−ＳＰ）、ポリヌクレオチド転写物は、そこでコードされる目的ポリペプチドの翻訳を可能にするのに十分な構造的及び／又は化学的特徴を保持している。環状コンストラクトは本発明のポリヌクレオチドであってもよい。構造的又は化学的に修飾されているとき、コンストラクトは修飾ｃｉｒｃＰ、ｃｉｒｃＳＰ、ｃｉｒｃＲＮＡ又はｃｉｒｃＲＮＡ−ＳＰと称され得る。
【００６９】
図６に戻ると、ここで環状コンストラクト２００は、第１のフランキング領域２０４と第２のフランキング領域２０６とが隣接する第１の連結ヌクレオチド領域２０２を含む。本明細書で使用されるとき、「第１の領域」は、「コード領域」、「非コード領域」又は「領域コーディング」又は単に「第１の領域」と称され得る。一実施形態では、この第１の領域は、限定はされないが目的ポリペプチドをコードするヌクレオチド及び／又はセンサー領域をコードし又はそれを含むヌクレオチドなどを含み得る。目的ポリペプチドは、その５’末端に、シグナル配列領域２０３によってコードされる１つ以上のシグナルペプチド配列を含み得る。第１のフランキング領域２０４は、ｍＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列の非翻訳領域（ＵＴＲ）と同様に（ｓｉｍｉｌｉａｒｌｙ）働き得る連結ヌクレオシド領域又はその一部分を含み得る。第１のフランキング領域はまた、極性領域２０８も含み得る。極性領域２０８はＩＲＥＳ配列又はその一部分を含み得る。非限定的な例として、線状化した（ｌｉｎｅａｒｌｉｚｅｄ）とき、この領域が分かれて第１の部分が第１の領域２０２の５’末端上になり、第２の部分が第１の領域２０２の３’末端上になり得る。第２のフランキング領域２０６はテイル付加配列領域２１０を含むことができ、及びｍＲＮＡ及び／又はＤＮＡのＵＴＲと同様に（ｓｉｍｉｌｉａｒｌｙ）働き得る連結ヌクレオチド領域又はその一部分２１２を含むことができる。
【００７０】
第１の領域２０２の５’末端と第１のフランキング領域２０４とを架橋するのが、第１の作動可能領域２０５である。一実施形態では、この作動可能領域は開始コドンを含み得る。或いは、この作動可能領域は、開始コドンを含む任意の翻訳開始配列又はシグナルを含み得る。
【００７１】
第１の領域２０２の３’末端と第２のフランキング領域２０６とを架橋するのが、第２の作動可能領域２０７である。従来、この作動可能領域は終止コドンを含む。或いは、この作動可能領域は、終止コドンを含む任意の翻訳開始配列又はシグナルを含み得る。本発明によれば、複数の連続する終止コドンもまた用いられ得る。一実施形態では、本発明の作動領域は２つの終止コドンを含み得る。第１の終止コドンは「ＴＧＡ」又は「ＵＧＡ」であってもよく、第２の終止コドンは、「ＴＡＡ」、「ＴＧＡ」、「ＴＡＧ」、「ＵＡＡ」、「ＵＧＡ」又は「ＵＡＧ」からなる群から選択されてもよい。
【００７２】
図７を見ると、環状ポリヌクレオチド２００の調製に少なくとも１つの非核酸部分２０１が使用されてもよく、ここでは非核酸部分２０１を使用して第１のフランキング領域２０４が第２のフランキング領域２０６に近付けられている。本発明において使用し得る非核酸部分の非限定的な例は、本明細書に記載される。環状ポリヌクレオチド２００は２つ以上の非核酸部分を含むことができ、これらのさらなる非核酸部分（ｍｏｅｉｔｉｅｓ）は第１の非核酸部分にとって異種であっても、又は同種であってもよい。
【００７３】
図８を見ると、第１の連結ヌクレオシド領域２０２がスペーサ領域２１４を含み得る。このスペーサ領域２１４を使用することにより、第１の連結ヌクレオシド領域２０２を分
離し、環状コンストラクトが２つ以上のオープンリーディングフレーム、非コード領域又はオープンリーディングフレーム及び非コード領域を含むことができるようにし得る。
【００７４】
図９を見ると、第２のフランキング領域２０６が３’ＵＴＲ２１２に１つ以上のセンサー領域２１６を含み得る。本明細書で考察するとおりのこれらのセンサー配列は、環状コンストラクト又は環状ポリヌクレオチドの局所微小環境のリガンドに対する擬受容体（又は結合部位）として動作する。例えば、マイクロＲＮＡ結合（ｂｉｎｄｎｇ）部位又はｍｉＲＮＡシードがセンサーとして用いられてもよく、環状ポリヌクレオチドの環境に存在する任意のマイクロＲＮＡに対する擬受容体として機能する。図９に示すとおり、１つ以上のセンサー領域２１６がスペーサ領域２１４によって分離され得る。
【００７５】
図１０に示すとおり、１つ以上のセンサー領域２１６を含む環状コンストラクト２００は、第１の連結ヌクレオシド領域２０２にスペーサ領域２１４もまた含み得る。図７に関して上記で考察したとおり、このスペーサ領域２１４を使用することにより、第１の連結ヌクレオシド領域２０２を分離し、環状コンストラクトが２つ以上のオープンリーディングフレーム及び／又は２つ以上の非コード領域を含むことができるようにし得る。
【００７６】
図１１を見ると、環状コンストラクト２００は、限定はされないがセンサー領域２１６などの、少なくとも１つの非コード領域を含むｃｉｒｃＳＰとして知られる非コードコンストラクトであり得る。センサー領域２１６の各々には、限定はされないが、ｍｉＲ配列、ｍｉＲシード、ｍｉＲ結合部位及び／又はシードのないｍｉＲ配列が含まれ得る。
【００７７】
図１２を見ると、少なくとも１つの非核酸部分２０１を使用して、非コードコンストラクトである環状ポリヌクレオチド２００を調製し得る。非コードコンストラクトである環状ポリヌクレオチド２００は２つ以上の非核酸部分を含むことができ、これらのさらなる非核酸部分（ｍｏｅｉｔｉｅｓ）は第１の非核酸部分にとって異種であっても、又は同種であってもよい。
【００７８】
キメラポリヌクレオチドの多量体
本発明によれば、３’末端で修飾されているヌクレオチドを使用して複数の異なるキメラポリヌクレオチドが３’末端を介して互いに連結され得る。細胞への送達の化学量論を制御するために化学的コンジュゲーションが用いられ得る。例えば、グリオキシル酸回路酵素であるイソクエン酸リアーゼ及びリンゴ酸シンターゼを１：１比で細胞に供給すると、細胞脂肪酸代謝が改変され得る。この比は、一方のキメラポリヌクレオチド種の３’−アジド末端ヌクレオチドと、逆側のキメラポリヌクレオチド種のＣ５−エチニル又はアルキニル含有ヌクレオチドとを使用してキメラポリヌクレオチドを化学的に連結することにより制御し得る。修飾ヌクレオチドは、ターミナルトランスフェラーゼ（ニュー・イングランド・バイオラボ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）、マサチューセッツ州イプスウィッチ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））を使用して製造者のプロトコルに従い転写後に付加される。３’−修飾ヌクレオチドの付加後、２つのキメラポリヌクレオチド種が銅の存在又は非存在下で水溶液中に組み合わされ、文献に記載されるとおりのクリックケミストリー機構によって新規の共有結合性の連結が形成され得る。
【００７９】
別の例では、官能化されたリンカー分子を使用して３つ以上のポリヌクレオチドが互いに連結され得る。例えば、官能化サッカリド分子が複数の化学反応基（ＳＨ−、ＮＨ２−、Ｎ３等）を含むように化学的に修飾されることで３’−官能化ｍＲＮＡ分子（即ち、３’−マレイミドエステル、３’−ＮＨＳ−エステル、アルキニル）のコグネイト部分と反応し得る。修飾されたサッカリドの反応基の数を化学量論的に制御することにより、コンジュゲートされるキメラポリヌクレオチドの化学量論比を直接制御することができる。
【００８０】
キメラポリヌクレオチドのコンジュゲート及び組み合わせ
タンパク質産生をさらに増進させるため、本発明のキメラポリヌクレオチドは、他のポリヌクレオチド、色素、挿入剤（例えばアクリジン）、架橋剤（例えばソラレン（ｐｓｏｒａｌｅｎｅ）、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えばＥＤＴＡ）、アルキル化剤、リン酸塩、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えばビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ、タンパク質、例えば、糖タンパク質類、又はペプチド、例えば、コリガンドに対して特異的親和性を有する分子、又は抗体、例えば、癌細胞、内皮細胞、又は骨細胞などの特定の細胞型に結合する抗体、ホルモン及びホルモン受容体、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、又は薬物にコンジュゲートするように設計することができる。
【００８１】
コンジュゲーションは安定性及び／又は半減期の増加をもたらすことができ、キメラポリヌクレオチドを細胞、組織又は生物中の特定の部位に標的化することにおいて特に有用であり得る。
【００８２】
本発明によれば、キメラポリヌクレオチドは、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、トリプルヘリックス形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー又はベクターなどの１つ以上と共に投与され、それにコンジュゲートされ、又はそれをさらにコードし得る。
【００８３】
二官能性キメラポリヌクレオチド
本発明の一実施形態には、二官能性ポリヌクレオチド（例えば、二官能性キメラポリヌクレオチド）がある。その名前が示すとおり、二官能性ポリヌクレオチドは、少なくとも２つの官能基を有するか又はその能力を有するものである。これらの分子はまた、慣例により多官能性とも称され得る。
【００８４】
二官能性ポリヌクレオチドの複数の官能性はＲＮＡによってコードされ得るか（官能基は、コードされた産物が翻訳されるまで現れないこともある）、又はポリヌクレオチドそれ自体の特性であり得る。官能性は構造的又は化学的であり得る。二官能性修飾ポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドと共有結合的に又は静電的に会合する官能基を含み得る。さらに、２つの官能基は、キメラポリヌクレオチドと別の分子との複合体のコンテクストで提供され得る。
【００８５】
二官能性ポリヌクレオチドは抗増殖性のペプチドをコードし得る。これらのペプチドは線状、環状、制限又はランダムコイルであり得る。ペプチドは、アプタマー、シグナル伝達分子、リガンド又はその模倣体若しくはミメティクスとして機能し得る。抗増殖性ペプチドは翻訳時に３〜５０アミノ酸長となり得る。これらのペプチドは、５〜４０、１０〜３０、又は約１５アミノ酸長であり得る。これらのペプチドは単鎖、多鎖又は分枝状であってもよく、翻訳されると複合体、凝集体又は任意のマルチユニット構造を形成し得る。
【００８６】
非コードキメラポリヌクレオチド
本明細書に記載されるとおり、部分的に又は実質的に翻訳不可能な配列を有する、例えば非コード領域を有するキメラポリヌクレオチドが提供される。かかる非コード領域はキメラポリヌクレオチドの「第１の領域」であり得る。或いは、非コード領域は第１の領域以外の領域であり得る。かかる分子は概して翻訳されず、しかし、リボソームタンパク質又はトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）などの１つ以上の翻訳機構成分との結合及びその
封鎖、それによる細胞におけるタンパク質発現の有効な低下又は細胞における１つ以上の経路又はカスケードの調節と、次にはそれによるタンパク質レベルの改変のうちの１つ以上によってタンパク質産生に効果を及ぼし得る。キメラポリヌクレオチドは、１つ以上のロング非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ、又はｌｉｎｃＲＮＡ）又はその一部分、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏ−ＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）又はＰｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）を含み得るか、又はそれをコードし得る。かかるｌｎｃＲＮＡ分子及びかかるｌｎｃＲＮＡを標的化するように設計されたＲＮＡｉコンストラクト（そのいずれもキメラポリヌクレオチドにおいてコードされ得る）の例は、国際公開第２０１２／０１８８８１  Ａ２号パンフレット（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示される。
【００８７】
目的ポリペプチド
本発明のキメラポリヌクレオチドは１つ以上の目的ペプチド又はポリペプチドをコードし得る。本発明のキメラポリヌクレオチドはまた、１つ以上のポリペプチドのレベル、シグナル伝達又は機能に影響を及ぼし得る。本発明によれば、目的ポリペプチドには、例えば、同時係属中の米国仮特許出願第６１／６１８，８６２号明細書、同第６１／６８１，６４５号明細書、同第６１／７３７，１３０号明細書、同第６１／６１８，８６６号明細書、同第６１／６８１，６４７号明細書、同第６１／７３７，１３４号明細書、同第６１／６１８，８６８号明細書、同第６１／６８１，６４８号明細書、同第６１／７３７，１３５号明細書、同第６１／６１８，８７３号明細書、同第６１／６８１，６５０号明細書、同第６１／７３７，１４７号明細書、同第６１／６１８，８７８号明細書、同第６１／６８１，６５４号明細書、同第６１／７３７，１５２号明細書、同第６１／６１８，８８５号明細書、同第６１／６８１，６５８号明細書、同第６１／７３７，１５５号明細書、同第６１／６１８，８９６号明細書、同第６１／６６８，１５７号明細書、同第６１／６８１，６６１号明細書、同第６１／７３７，１６０号明細書、同第６１／６１８，９１１号明細書、同第６１／６８１，６６７号明細書、同第６１／７３７，１６８号明細書、同第６１／６１８，９２２号明細書、同第６１／６８１，６７５号明細書、同第６１／７３７，１７４号明細書、同第６１／６１８，９３５号明細書、同第６１／６８１，６８７号明細書、同第６１／７３７，１８４号明細書、同第６１／６１８，９４５号明細書、同第６１／６８１，６９６号明細書、同第６１／７３７，１９１号明細書、同第６１／６１８，９５３号明細書、同第６１／６８１，７０４号明細書、同第６１／７３７，２０３号明細書の表６；米国仮特許出願第６１／６８１，７２０号明細書、同第６１／７３７，２１３号明細書、同第６１／６８１，７４２号明細書の表６及び表７；国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６８号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６３号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６９号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６７０号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６４号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６５号パンフレット、国際公開第２０１３１５１７３６号パンフレットの表６；表６及び表７  国際公開第２０１３１５１６７２号パンフレット；国際公開第２０１３１５１６７１号パンフレットの表６、表１７８及び表１７９；米国仮特許出願第６１／６１８，８７０号明細書の表６、表２８及び表２９；米国仮特許出願第６１／６８１，６４９号明細書の表６、表５６及び表５７；表６、表１８６及び表１８７  米国仮特許出願第６１／７３７，１３９号明細書；国際公開第２０１３１５１６６７号パンフレットの表６、表１８５及び表１８６（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に掲載されるものに教示されるもののいずれかが含まれる。
【００８８】
本発明によれば、キメラポリヌクレオチドは、１つ以上の目的ポリペプチド又はその断片をコードするように設計され得る。かかる目的ポリペプチドとしては、限定はされないが、全ポリペプチド、複数のポリペプチド又はポリペプチドの断片を挙げることができ、これらは独立に、キメラポリヌクレオチドの１つ以上の領域又はパート又は全体によって
コードされ得る。本明細書で使用されるとき、用語「目的ポリペプチド」は、本発明のキメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）の範囲内でコードされるように選択されるか、又はそれによって機能が影響を受ける任意のポリペプチドを指す。
【００８９】
本明細書で使用されるとき、「ポリペプチド」は、ほとんどの場合にペプチド結合によって互いに連結されたアミノ酸残基（天然又は非天然）のポリマーを意味する。この用語は、本明細書で使用されるとき、任意のサイズ、構造、又は機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。場合によっては、コードされるポリペプチドは約５０アミノ酸より小さく、このときポリペプチドはペプチドと呼ばれる。ポリペプチドがペプチドである場合、それは少なくとも約２、３、４、又は少なくとも５アミノ酸残基長であり得る。従って、ポリペプチドには、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片及び前述の他の等価物、変異体、及び類似体が含まれる。ポリペプチドは単一の分子であってもよく、又は二量体、三量体若しくは四量体などの多分子複合体であってもよい。ポリペプチドはまた、抗体又はインスリンなどの単鎖又は多鎖ポリペプチドを含んでもよく、及び会合又は連結し得る。最も一般的には、多鎖ポリペプチドにはジスルフィド結合が見られる。用語ポリペプチドはまた、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的化学類似体であるアミノ酸ポリマーにも適用され得る。
【００９０】
用語「ポリペプチド変異体」は、アミノ酸配列が天然又は参照配列と異なる分子を指す。アミノ酸配列変異体は、天然又は参照配列と比較して、アミノ酸配列内の特定の位置に置換、欠失、及び／又は挿入を有し得る。通常、変異体は天然又は参照配列と少なくとも約５０％の同一性（相同性）を有し、好ましくは天然又は参照配列と少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％同一（相同）であり得る。
【００９１】
一部の実施形態では、「変異模倣体」が提供される。本明細書で使用されるとき、用語「変異模倣体」は、活性化配列を模倣し得る１つ以上のアミノ酸を含むものである。例えば、グルタミン酸は、ホスホロ−スレオニン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏ−ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）及び／又はホスホロ−セリン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏ−ｓｅｒｉｎｅ）の模倣体として働き得る。或いは、変異模倣体は失活をもたらすか、又は模倣体を含む不活性化産物をもたらすことができ、例えばフェニルアラニンはチロシンの不活性化置換として働き得る；又はアラニンはセリンの不活性化置換として働き得る。
【００９２】
「相同性」は、それがアミノ酸配列に適用されるとき、候補アミノ酸配列中の残基のうち、配列をアラインメントし、必要であればギャップを導入して最大パーセント相同性を達成した後に第２の配列のアミノ酸配列中の残基と同一となる割合として定義される。アラインメントのための方法及びコンピュータプログラムは当該技術分野において周知されている。相同性は同一性パーセントの計算に依存するが、計算に導入されるギャップ及びペナルティによって値が異なり得ることが理解される。
【００９３】
「ホモログ」とは、それがポリペプチド配列に適用されるとき、第２の種の第２の配列と実質的な同一性を有する他の種の対応する配列を意味する。
「類似体」とは、１つ以上のアミノ酸改変、例えばアミノ酸残基の置換、付加又は欠失分だけ異なるが、親ポリペプチド又は出発ポリペプチドの特性の１つ以上はなおも維持しているポリペプチド変異体を含むことが意味される。
【００９４】
本発明は、変異体及び誘導体を含めたポリペプチドベースのいくつかのタイプの組成物を企図する。それらには、置換、挿入、欠失及び共有結合による変異体及び誘導体が含まれる。用語「誘導体」は用語「変異体」と同義的に用いられ、しかし一般的には、参照分子又は出発分子と比べて何らかの形で修飾及び／又は変更されている分子を指す。
【００９５】
従って、参照配列と比べて置換、挿入及び／又は付加、欠失及び共有結合による修飾を含むポリペプチド、詳細には本明細書に開示されるポリペプチド配列をコードするキメラポリヌクレオチドが、本発明の範囲内に含まれる。例えば、配列タグ又はアミノ酸、例えば１つ以上のリジンが、本発明のペプチド配列に（例えば、Ｎ末端又はＣ末端に）付加され得る。配列タグはペプチド精製又は局在化に使用し得る。リジンはペプチドの溶解度を増加させ又はビオチン化を可能にするために使用し得る。或いは、ペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ末端及びアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基を任意選択で欠失させてトランケート配列を提供してもよい。或いは、例えば、可溶性の又は固体支持体に連結されたより大きい配列の一部として配列を発現させるなど、配列の用途に応じて特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端又はＮ末端残基）を欠失させてもよい。
【００９６】
「置換変異体」とは、ポリペプチドに関連するとき、天然又は出発配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が取り除かれ、その代わりに同じ位置に別のアミノ酸が挿入されるものである。置換は単一であってもよく、この場合は分子中の唯１つのアミノ酸が置換されており、又は置換は複数であってもよく、この場合は同じ分子中で２つ以上のアミノ酸が置換されている。
【００９７】
本明細書で使用されるとき、用語「保存的アミノ酸置換」は、通常配列中に存在するアミノ酸を同様のサイズ、電荷、又は極性の別のアミノ酸に換える置換を指す。保存的置換の例としては、イソロイシン、バリン及びロイシンなどの非極性（疎水性）残基を別の非極性残基の代わりとする置換が挙げられる。同様に、保存的置換の例としては、アルギニンとリジンとの間、グルタミンとアスパラギンとの間、及びグリシンとセリンとの間など、ある極性（親水性）残基を別の残基の代わりにする置換が挙げられる。加えて、リジン、アルギニン又はヒスチジンなどの塩基性残基を別の塩基性残基の代わりにする置換、又はアスパラギン酸又はグルタミン酸などのある酸性残基を別の酸性残基の代わりにする置換が、保存的置換のさらなる例である。非保存的置換の例としては、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニンなどの非極性（疎水性）アミノ酸残基をシステイン、グルタミン、グルタミン酸又はリジンなどの極性（親水性）残基の代わりにする置換、及び／又は極性残基を非極性残基の代わりにする置換が挙げられる。
【００９８】
ポリペプチドに言及するときの「挿入変異体」は、天然又は出発配列中の特定の位置にあるアミノ酸に直ちに隣接して１つ以上のアミノ酸が挿入されているものである。アミノ酸に「直ちに隣接」とは、アミノ酸のα−カルボキシ官能基又はα−アミノ官能基のいずれかに接続していることを意味する。
【００９９】
ポリペプチドに言及するときの「欠失変異体」は、天然又は出発アミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸が取り除かれているものである。通常、欠失変異体は、分子の特定の領域で１つ以上のアミノ酸が欠失している。
【０１００】
ポリペプチドに言及するときの「共有結合誘導体」は、天然又は出発タンパク質に対する有機タンパク質性又は非タンパク質性誘導体化剤による修飾、及び／又は翻訳後修飾を含む。共有結合修飾は、従来、タンパク質の標的アミノ酸残基を、選択の側鎖又は末端残基との反応能を有する有機誘導体化剤と反応させることによるか、又は選択の組換え宿主細胞で機能する翻訳後修飾機構を利用することによって導入される。得られる共有結合誘導体は、生物学的活性、イムノアッセイ、又は組換え糖タンパク質のイムノアフィニティー精製のための抗タンパク質抗体の調製にとって重要な残基を同定することを目的とするプログラムにおいて有用である。かかる修飾は当該分野の通常の技術の範囲内であり、過度の実験を行うことなく実施される。
【０１０１】
特定の翻訳後修飾は、組換え宿主細胞が発現後のポリペプチドに作用する結果である。グルタミニル及びアスパラギニル残基は高頻度で翻訳後に脱アミド化され、対応するグルタミル及びアスパルチル残基になる。或いは、これらの残基は弱酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も、本発明において産生されるポリペプチド中に存在し得る。
【０１０２】
他の翻訳後修飾としては、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化が挙げられる（Ｔ．Ｅ．クレイトン（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ）著、「タンパク質：構造と分子特性（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」、Ｗ．Ｈ．フリーマン・アンド・カンパニー（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．）、サンフランシスコ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）、ｐ．７９〜８６、１９８３年））。
【０１０３】
ポリペプチドに言及するときの「特徴」は、分子のなかの明確に異なるアミノ酸配列ベースの成分として定義される。本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの特徴には、表面発現、局所的コンホメーション形状、折り畳み、ループ、ハーフループ、ドメイン、ハーフドメイン、部位、末端又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。
【０１０４】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「表面発現」は、タンパク質の最も外側の表面に現れるポリペプチドベースの成分を指す。
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「局所的コンホメーション形状」は、タンパク質の限定的空間内に位置するタンパク質のポリペプチドベースの構造的な現れを意味する。
【０１０５】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「折り畳み」は、エネルギー最小化に応じて得られるアミノ酸配列のコンホメーションを指す。折り畳みは、折り畳みプロセスの二次又は三次レベルで起こり得る。二次レベルの折り畳みの例としては、βシート及びαヘリックスが挙げられる。三次レベルの折り畳みの例としては、エネルギーの力の凝集又は分離によって形成されるドメイン及び領域が挙げられる。このように形成される領域としては、疎水性及び親水性ポケットなどが挙げられる。
【０１０６】
本明細書で使用されるとき、用語「ターン」は、それがタンパク質コンホメーションに関係するとき、ペプチド又はポリペプチドの骨格の方向を変える屈曲を意味し、１つ、２つ、３つ又はそれ以上のアミノ酸残基が関わり得る。
【０１０７】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「ループ」は、ペプチド又はポリペプチドの骨格の方向を維持するように働き得るポリペプチドの構造的特徴を指す。ポリペプチドにループが見られ、骨格の方向のみを変える場合、それは４つ又はそれ以上のアミノ酸残基を含み得る。オリバ（Ｏｌｉｖａ）らは、少なくとも５つのクラスのタンパク質ループを同定している（ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ）、第２６６巻、第４号、ｐ．８１４〜８３０、１９９７年）。ループは開いていても、又は閉じていてもよい。閉じたループ即ち「環式」ループは、架橋部分の間に２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれ以上のアミノ酸を含み得る。かかる架橋部分は、ジスルフィド架橋を有するポリペプチドに典型的なシステイン−システイン架橋（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）を含み得るか、或いは架橋部分は、本明細書で使用されるジブロモジリル剤（ｄｉｂｒｏｍｏｚｙｌｙｌ  ａｇｅｎｔ）などの非タンパク質ベースであり得る。
【０１０８】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「ハーフループ」は、その由来となるループとしてのアミノ酸残基（ｒｅｓｉｄｅ）の数の少なくとも半分を有する同定されたループの一部分を指す。ループが偶数のアミノ酸残基を含有するとは限らないことが理解される。従って、ループが奇数のアミノ酸を含有するか、又はそれを含むと同定される場合、その奇数のループのハーフループはループの整数部分又は次の整数部分（ループ／２±０．５アミノ酸のアミノ酸数）を含むことになる。例えば、７アミノ酸ループと同定されるループは、３アミノ酸又は４アミノ酸のハーフループを生じ得る（７／２＝３．５±０．５で３又は４になる）。
【０１０９】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「ドメイン」は、１つ以上の同定可能な構造的又は機能的特徴又は特性（例えば、結合能、タンパク質間相互作用の部位として働くこと）を有するポリペプチドのモチーフを指す。
【０１１０】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「ハーフドメイン」は、その由来となるドメインとしてのアミノ酸残基（ｒｅｓｉｄｅ）の数の少なくとも半分を有する同定されたドメインの一部分を意味する。ドメインが偶数のアミノ酸残基を含有するとは限らないことが理解される。従って、ドメインが奇数のアミノ酸を含有するか、又はそれを含むと同定される場合、その奇数のドメインのハーフドメインはドメインの整数部分又は次の整数部分（ドメイン／２±０．５アミノ酸のアミノ酸数）を含むことになる。例えば、７アミノ酸ドメインと同定されるドメインは、３アミノ酸又は４アミノ酸のハーフドメインを生じ得る（７／２＝３．５±０．５で３又は４になる）。また、ドメイン又はハーフドメイン内にサブドメインが同定されてもよく、これらのサブドメインは、その由来となったドメイン又はハーフドメインに同定される構造的又は機能的特性の一部を有することも理解される。また、本明細書におけるドメインタイプのいずれかを含むアミノ酸は、ポリペプチドの骨格に沿って連続していなくてもよい（即ち、非隣接アミノ酸が構造的に折り畳まれてドメイン、ハーフドメイン又はサブドメインが生じ得る）ことも理解される。
【０１１１】
ポリペプチドに言及して本明細書で使用されるとき、用語「部位」は、それがアミノ酸に基づく実施形態に関連するとき、「アミノ酸残基」及び「アミノ酸側鎖」と同義的に用いられる。部位は、本発明のポリペプチドベースの分子の範囲内で修飾され、操作され、改変され、誘導体化され又は異なり得るペプチド又はポリペプチド内の位置を表す。
【０１１２】
本明細書で使用されるとき、ポリペプチドに言及するときの用語「末端（ｔｅｒｍｉｎｉ）」又は「末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）」はペプチド又はポリペプチドの端を指す。かかる端は、ペプチド又はポリペプチドの最初又は最後の部位のみに限定されず、末端領域のさらなるアミノ酸を含み得る。本発明のポリペプチドベースの分子は、Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を有するアミノ酸が終端となる）及びＣ末端（遊離カルボキシル基（ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸が終端となる）の両方を有するものとして特徴付けられ得る。本発明のタンパク質は、ある場合には、ジスルフィド結合によるか又は非共有結合性の力によって一緒になった複数のポリペプチド鎖（多量体、オリゴマー）で構成される。この種のタンパク質は複数のＮ末端及びＣ末端を有し得る。或いは、ポリペプチドの末端は、それらが場合によって有機コンジュゲートなどの非ポリペプチドベースの部分で始まり又は終わるように修飾されてもよい。
【０１１３】
これらの特徴のいずれかが、本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされるのに望ましいポリペプチドの所望の成分として同定又は定義された後、これらの特徴のいくつかの操作及び／又は修飾のいずれかが、移動させ、交換し、逆位にし、欠失させ、ランダム化し又は重複させることによって実施され得る。さらに、特徴の操作が本発明の分子に対する修飾と同じ結果をもたらし得ることが理解される。例えば、ドメインを欠失させ
ることが関わる操作であれば、完全長未満の分子をコードする核酸の修飾がもたらすであろうものとまさに同じ分子の長さの改変がもたらされ得る。
【０１１４】
修飾及び操作は、限定はされないが、部位特異的突然変異誘発又は化学合成中の先験的組込みなど、当該技術分野で公知の方法によって達成することができる。得られる修飾分子は、次に、本明細書に記載されるものなどのインビトロ若しくはインビボアッセイ又は当該技術分野において公知の任意の他の好適なスクリーニングアッセイを用いて活性に関して試験され得る。
【０１１５】
本発明によれば、ポリペプチドは、実験ラウンドを通じて発見されるコンセンサス配列を含み得る。本明細書で使用されるとき、「コンセンサス」配列は、１つ以上の部位におけるばらつきを許容する集団的配列集合を表す単一の配列である。
【０１１６】
当業者により認識されるとおり、タンパク質断片、機能タンパク質ドメイン、及び相同タンパク質もまた、本発明の目的ポリペプチドの範囲内にあると考えられる。例えば、本明細書には、参照タンパク質１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００又は１００超のアミノ酸長の任意のタンパク質断片（即ち、参照ポリペプチド配列と比べて少なくとも１アミノ酸残基だけ短いが、他は同じであるポリペプチド配列を意味する）が提供される。別の例では、本明細書に記載される配列のいずれかと約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又は約１００％同一の、約２０、約３０、約４０、約５０、又は約１００アミノ酸のストレッチを含む任意のタンパク質を本発明において利用することができる。特定の実施形態では、本発明において利用されるポリペプチドは、本明細書において提供され又は参照される配列のいずれかに示されるとおり２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上の突然変異を含む。
【０１１７】
目的ポリペプチドのタイプ
本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、生物学的製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質又はペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、原形質膜タンパク質、細胞質又は細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、ターゲティング部分、又は治療指標が同定されていないが、それにも関わらず研究及び創薬の分野で有用性があるヒトゲノムによってコードされるタンパク質を含めたいくつかの標的カテゴリーのいずれかから選択される目的ポリペプチドをコードするように設計され得る。
【０１１８】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、参照ポリペプチド配列とある程度の同一性を有する変異ポリペプチドをコードし得る。本明細書で使用されるとき、「参照ポリペプチド配列」は出発ポリペプチド配列を指す。参照配列は、野生型配列、又は別の配列の設計において参照される任意の配列であってよい。「参照ポリペプチド配列」は、例えば、同時係属中の米国仮特許出願第６１／６１８，８６２号明細書、同第６１／６８１，６４５号明細書、同第６１／７３７，１３０号明細書、同第６１／６１８，８６６号明細書、同第６１／６８１，６４７号明細書、同第６１／７３７，１３４号明細書、同第６１／６１８，８６８号明細書、同第６１／６８１，６４８号明細書、同第６１／７３７，１３５号明細書、同第６１／６１８，８７３号明細書、同第６１／６８１，６５０号明細書、同第６１／７３７，１４７号明細書、同第６１／６１８，８７８号明細書、同第６１／６８１，６５４号明細書、同第６１／７３７，１５２号明細書、同第６１／６１８，８８５号明細書、同第６１／６８１，６５８号明細書、同第６１／７３７，１５５号明細書、同第６１／６１８，８９６号明細書、同第６１／６６８，１５７号明細書、同第６１／６８１，６６１号明細書、同第６１／７３７，１６０号明細書、同第６１／６１８，９１１号明細書、同第６１／６８１，６６７号明細書、同第６１／７３７，１６８号明細書、同第
６１／６１８，９２２号明細書、同第６１／６８１，６７５号明細書、同第６１／７３７，１７４号明細書、同第６１／６１８，９３５号明細書、同第６１／６８１，６８７号明細書、同第６１／７３７，１８４号明細書、同第６１／６１８，９４５号明細書、同第６１／６８１，６９６号明細書、同第６１／７３７，１９１号明細書、同第６１／６１８，９５３号明細書、同第６１／６８１，７０４号明細書、同第６１／７３７，２０３号明細書の表６；米国仮特許出願第６１／６８１，７２０号明細書、同第６１／７３７，２１３号明細書、同第６１／６８１，７４２号明細書の表６及び表７；国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６８号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６３号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６９号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６７０号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６４号パンフレット、国際公開第２０１３１５１６６５号パンフレット、国際公開第２０１３１５１７３６号パンフレットの表６；表６及び表７  国際公開第２０１３１５１６７２号パンフレット；国際公開第２０１３１５１６７１号パンフレットの表６、表１７８及び表１７９；米国仮特許出願第６１／６１８，８７０号明細書の表６、表２８及び表２９；米国仮特許出願第６１／６８１，６４９号明細書の表６、表５６及び表５７；表６、表１８６及び表１８７  米国仮特許出願第６１／７３７，１３９号明細書；国際公開第２０１３１５１６６７号パンフレットの表６、表１８５及び表１８６（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に開示されるポリペプチドのいずれか一つであり得る。
【０１１９】
参照分子（ポリペプチド又はポリヌクレオチド）は、設計される分子（ポリペプチド又はポリヌクレオチド）とある程度の同一性を共有し得る。用語「同一性」は、当該技術分野において公知のとおり、配列の比較によって決定されるとおりの２つ以上のペプチド、ポリペプチド又はポリヌクレオチドの配列間の関係を指す。当該技術分野では、同一性はまた、２つ以上のアミノ酸残基又はヌクレオシドのストリング間のマッチ数によって決定されるとおりのそれらの間の配列関連性の程度も意味する。同一性は、特定の数学的モデル又はコンピュータプログラム（即ち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップアラインメント（存在する場合）で２つ以上の配列の小さい方の間における同一マッチのパーセントを測る。関連するペプチドの同一性は、公知の方法によって容易に計算することができる。かかる方法としては、限定はされないが、「計算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、レスク，Ａ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オクスフォード大学出版局（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク州（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８８年；「バイオコンピューティング：インフォマティクスとゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」、スミス，Ｄ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク州（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９３年；「配列データのコンピュータ解析、パート１（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １）」、グリフィン，Ａ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）、及びグリフィン，Ｈ．Ｇ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．）編、ヒュマーナプレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー州（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、１９９４年；「分子生物学における配列解析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、フォン・ハインジェ，Ｇ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年；「配列解析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）」、グリブスコフ，Ｍ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）．及びデベロー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍ．ストックトンプレス（Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク州（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年；及びカリロ（Ｃａｒｉｌｌｏ）ら著、ＳＩＡＭジャーナル・オン・アプライド・マセマティクス（ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．）、第４８巻、ｐ．１０７３、１９８８年に記載されるものが挙げられる。
【０１２０】
一部の実施形態では、コードされたポリペプチド変異体は参照ポリペプチドと同じ又は同様の活性を有し得る。或いは、変異体は参照ポリペプチドと比べて変化した（例えば、増加した又は低下した）活性を有し得る。概して、本発明の特定のポリヌクレオチド又はポリペプチドの変異体は、本明細書に記載され及び当業者に公知の配列アラインメントプログラム及びパラメータによって決定するとき、特定の参照ポリヌクレオチド又はポリペプチドの配列と少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％であるが１００％未満の配列同一性を有し得る。かかるアラインメントツールとしては、ＢＬＡＳＴスイートのものが挙げられる（ステファン・Ｆ・アルツシュール（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕｌ）、トーマス・Ｌ・マッデン（Ｔｈｏｍａｓ  Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ）、アレハンドロ・Ａ・シャファー（Ａｌｅｊａｎｄｒｏ
Ａ．Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ）、ジンフイ・ジャン（Ｊｉｎｇｈｕｉ  Ｚｈａｎｇ）、ジョン・ジャン（Ｚｈｅｎｇ  Ｚｈａｎｇ）、ウェブ・ミラー（Ｗｅｂｂ  Ｍｉｌｌｅｒ）、及びデイビッド・Ｊ・リップマン（Ｄａｖｉｄ  Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ）著、１９９７年、「ギャップ付きＢＬＡＳＴ及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：新世代のタンパク質データベース検索プログラム（Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ）」、ヌクレイック・アシッド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．）、第２５巻、ｐ．３３８９〜３４０２）。他のツールが本明細書において、特に「同一性」の定義に記載される。
【０１２１】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムのデフォルトパラメータには、例えば、１０の期待閾値、２８のワードサイズ、マッチ／ミスマッチスコア１、−２、ギャップコスト線形が含まれる。任意のフィルタ並びに種特異的リピートの選択、例えば、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）が適用され得る。
【０１２２】
生物学的製剤
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは１つ以上の生物学的製剤をコードし得る。本明細書で使用されるとき、「生物学的製剤」は、本明細書に提供される方法によって作製されるポリペプチドベースの分子であって、重篤な又は生命を脅かす疾患又は医学的状態を治療し、治癒させ、緩和し、予防し、又は診断するために使用し得るものである。本発明に係る生物学的製剤としては、限定はされないが、とりわけ、アレルゲンエキス（例えばアレルギー注射及び検査用）、血液成分、遺伝子療法製品、移植に用いられるヒト組織又は細胞製品、ワクチン、モノクローナル抗体、サイトカイン、成長因子、酵素、血栓溶解薬、及び免疫調節薬が挙げられる。
【０１２３】
本発明によれば、現在上市されている又は開発中の１つ以上の生物学的製剤が、本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされ得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、既知の生物学的製剤のコードポリヌクレオチドが本発明のキメラポリヌクレオチドに組み込まれると、少なくとも一部にはコンストラクト設計の特異性、純度及び／又は選択性に起因して、治療有効性の向上がもたらされるであろうことが考えられる。
【０１２４】
抗体
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは１つ以上の抗体又はその断片をコードし得る。用語「抗体」には、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、多エピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び単鎖分子）、並びに抗体断片が含まれる。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書では「抗体」と同義的に使用される。本明細書で使用
されるとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集合から得られる抗体を指し、即ち、少量存在し得る天然に存在する突然変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）の可能性を除いては、その集合を成す個々の抗体は同一である。モノクローナル抗体は極めて特異的であり、単一の抗原部位を標的にする。
【０１２５】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、特に、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）（キメラ抗体では、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が、特定の種に由来する又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である一方、１つ又は複数の鎖の残りの部分が、別の種に由来する又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である）、並びにかかる抗体の断片（それが所望の生物学的活性を呈する限りにおいて）が含まれる。本明細書における目的キメラ抗体としては、限定はされないが、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む「霊長類化」抗体が挙げられる。
【０１２６】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合及び／又は可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；抗体断片から形成されるダイアボディ；線状抗体；ナノボディ；一本鎖抗体分子及び多重特異性抗体が挙げられる。
【０１２７】
５つの免疫グロブリンクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのいずれも、それぞれα、δ、ε、γ及びμと称される重鎖を含め、本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされ得る。また、サブクラスγ及びμをコードするポリヌクレオチド配列も含まれる。従って、任意の抗体サブクラスが部分的に又は全てコードされることができ、以下のサブクラスが含まれる：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２。
【０１２８】
本発明によれば、現在上市されている又は開発中の１つ以上の抗体又は断片が、本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされ得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、本発明のキメラポリヌクレオチドへの組込みにより、少なくとも一部にはポリヌクレオチド設計の特異性、純度及び選択性に起因して、治療有効性の向上がもたらされるであろうことが考えられる。
【０１２９】
本発明のキメラポリヌクレオチドにおいてコードされる抗体は、限定はされないが、血液、心血管、ＣＮＳ、中毒（抗毒素を含む）、皮膚科学、内分泌学、胃腸、医用イメージング、筋骨格、腫瘍学、免疫学、呼吸器、感覚及び抗感染などの多くの治療分野において病態又は疾患の治療に利用され得る。
【０１３０】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、モノクローナル抗体及び／又はその変異体をコードし得る。抗体の変異体としてはまた、限定はされないが、置換変異体、保存的アミノ酸置換、挿入変異体、欠失変異体及び／又は共有結合誘導体も挙げられる。一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチド又はその領域は免疫グロブリンＦｃ領域をコードし得る。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは変異免疫グロブリンＦｃ領域をコードし得る。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、米国特許第８，２１７，１４７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの変異免疫グロブリンＦｃ領域を有する抗体をコードし得る。
【０１３１】
ワクチン
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、１つ以上のワクチンをコードし得る
。本明細書で使用されるとき、「ワクチン」は、特定の疾患又は感染病原体に対する免疫を向上させる生物学的調製物である。本発明によれば、現在上市されている又は開発中の１つ以上のワクチンが、本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされ得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、本発明のキメラポリヌクレオチドへの組込みにより、少なくとも一部にはコンストラクト設計の特異性、純度及び選択性に起因して、治療有効性の向上がもたらされるであろうことが考えられる。
【０１３２】
本発明のキメラポリヌクレオチドにおいてコードされるワクチンは、限定はされないが、心血管、ＣＮＳ、皮膚科学、内分泌学、腫瘍学、免疫学、呼吸器、及び抗感染などの多くの治療分野において病態又は疾患の治療に利用され得る。
【０１３３】
治療用タンパク質又はペプチド
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、１つ以上のバリデートされた又は「試験中の」治療用タンパク質又はペプチドをコードし得る。
【０１３４】
本発明によれば、現在上市されている又は開発中の１つ以上の治療用タンパク質又はペプチドが、本発明のキメラポリヌクレオチドによってコードされ得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、本発明のキメラポリヌクレオチドへの組込みにより、少なくとも一部にはコンストラクト設計の特異性、純度及び選択性に起因して、治療有効性の向上がもたらされるであろうことが考えられる。
【０１３５】
本発明のキメラポリヌクレオチドにおいてコードされる治療用タンパク質及びペプチドは、限定はされないが、血液、心血管、ＣＮＳ、中毒（抗毒素を含む）、皮膚科学、内分泌学、遺伝、泌尿生殖器、胃腸、筋骨格、腫瘍学、及び免疫学、呼吸器、感覚及び抗感染などの多くの治療分野において病態又は疾患の治療に利用され得る。
【０１３６】
細胞透過性ポリペプチド
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、１つ以上の細胞透過性ポリペプチドをコードし得る。本明細書で使用されるとき、「細胞透過性ポリペプチド」又はＣＰＰは、分子の細胞取込みを促進し得るポリペプチドを指す。本発明の細胞透過性ポリペプチドは１つ以上の検出可能標識を含有し得る。ポリペプチドは部分的に標識され、又は全体にわたり完全に標識され得る。キメラポリヌクレオチドは検出可能標識を完全にコードしてもよく、部分的にコードしてもよく又は全くコードしなくてもよい。細胞透過性ペプチドはまたシグナル配列も含み得る。本明細書で使用されるとき、「シグナル配列」は、タンパク質翻訳中に新生タンパク質のアミノ末端に結合するアミノ酸残基の配列を指す。シグナル配列は細胞透過性ポリペプチドの分泌シグナルの伝達に用いられ得る。
【０１３７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドはまた、融合タンパク質もコードし得る。融合タンパク質は、荷電タンパク質を治療用タンパク質に作動可能に連結することにより作成され得る。本明細書で使用されるとき、「作動可能に連結された」は、治療用タンパク質と荷電タンパク質とが細胞への導入時にその複合体の発現を可能にする形でつながっていることを指す。本明細書で使用されるとき、「荷電タンパク質」は、正電荷、負電荷又は全体で中性の電荷を有するタンパク質を指す。好ましくは、治療用タンパク質は融合タンパク質の形成過程で荷電タンパク質に共有結合的に連結され得る。全アミノ酸又は表面アミノ酸に対する表面電荷の比は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８又は０．９であり得る。
【０１３８】
キメラポリヌクレオチドによってコードされる細胞透過性ポリペプチドは、翻訳後に複合体を形成し得る。この複合体は、細胞透過性ポリペプチドに連結された、例えば共有結合的に連結された荷電タンパク質を含み得る。「治療用タンパク質」は、細胞への投与時
に治療的、診断的、及び／又は予防的効果を有し、及び／又は所望の生物学的及び／又は薬理学的効果を生じさせるタンパク質を指す。
【０１３９】
一実施形態では、細胞透過性ポリペプチドは第１のドメインと第２のドメインとを含み得る。第１のドメインは過荷電（ｓｕｐｅｒｃｈａｒｇｅｄ）ポリペプチドを含み得る。第２のドメインはタンパク質結合パートナーを含み得る。本明細書で使用されるとき、「タンパク質結合パートナー」には、限定はされないが、抗体及びその機能的断片、足場タンパク質、又はペプチドが含まれる。細胞透過性ポリペプチドは、タンパク質結合パートナーに対する細胞内結合パートナーをさらに含み得る。細胞透過性ポリペプチドは、キメラポリヌクレオチドが導入され得る細胞から分泌される能力を有し得る。細胞透過性ポリペプチドはまた、第１の細胞を透過する能力も有し得る。
【０１４０】
さらなる実施形態において、細胞透過性ポリペプチドは第２の細胞を透過する能力を有する。第２の細胞は第１の細胞と同じ範囲の細胞であってもよく、又はそれは異なる範囲の細胞であってもよい。範囲には、限定はされないが、組織及び器官が含まれ得る。第２の細胞はまた、第１の細胞より近位であっても、又は遠位であってもよい。
【０１４１】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、タンパク質結合パートナーを含み得る細胞透過性ポリペプチドをコードし得る。タンパク質結合パートナーとしては、限定はされないが、抗体、過荷電抗体又は機能的断片を挙げることができる。キメラポリヌクレオチドが細胞に導入され、そこにタンパク質結合パートナーを含む細胞透過性ポリペプチドが導入され得る。
【０１４２】
分泌タンパク質
ヒト及び他の真核細胞は膜によって多くの機能的に異なる区画に細分される。膜で囲まれた各区画、即ち細胞小器官は、細胞小器官の機能に必須の種々のタンパク質を含有する。細胞は「選別シグナル」（これはタンパク質内に位置するアミノ酸モチーフである）を使用してタンパク質を特定の細胞小器官に標的化する。
【０１４３】
シグナル配列、シグナルペプチド、又はリーダー配列と呼ばれるある種の選別シグナルは、あるクラスのタンパク質を小胞体（ＥＲ）と呼ばれる細胞小器官に仕向ける。
シグナル配列によってＥＲに標的化されたタンパク質は分泌タンパク質として細胞外空間に放出され得る。同様に、細胞膜にあるタンパク質もまた、タンパク質を膜に保持している「リンカー」のタンパク質分解切断によって細胞外空間へと分泌され得る。理論によって拘束されることを望むものではないが、本発明の分子を使用することで、上記に記載される細胞輸送を利用し得る。従って、本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは分泌タンパク質を発現するように提供される。分泌タンパク質は、本明細書に記載されるもの又は米国特許出願公開第２０１００２５５５７４号明細書（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）にあるものから選択され得る。
【０１４４】
一実施形態では、多量のヒト遺伝子産物の製造においてこれらが用いられ得る。
原形質膜タンパク質
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは細胞膜のタンパク質を発現するように提供される。
【０１４５】
細胞質又は細胞骨格タンパク質
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは細胞質又は細胞骨格タンパク質を発現するように提供される。
【０１４６】
細胞内膜結合タンパク質
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは細胞内膜結合タンパク質を発現するように提供される。
【０１４７】
核タンパク質
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは核タンパク質を発現するように提供される。
【０１４８】
ヒト疾患に関連するタンパク質
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ヒト疾患に関連するタンパク質を発現するように提供される。
【０１４９】
その他のタンパク質
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは現在のところ治療機能が分かっていないタンパク質を発現するように提供される。
【０１５０】
ターゲティング部分
本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドはターゲティング部分を発現するように提供される。ターゲティング部分には、インビボ又はインビトロのいずれでも、細胞を特定の組織空間に標的化させるか、又は特定の部分と相互作用するように機能する細胞表面上のタンパク質結合パートナー又は受容体が含まれる。好適なタンパク質結合パートナーとしては、限定はされないが、抗体及びその機能的断片、足場タンパク質、又はペプチドが挙げられる。加えて、キメラポリヌクレオチドを用いることにより、脂質、炭水化物、又は他の生物学的部分又は生体分子の合成及び細胞外局在を誘導することができる。
【０１５１】
ポリペプチドライブラリ
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドを使用してポリペプチドライブラリが作製され得る。これらのライブラリは、様々な構造的又は化学的修飾設計を各々が含み得るキメラポリヌクレオチドの集合を作製することによって生じ得る。この実施形態において、キメラポリヌクレオチドの集合は、限定はされないが、抗体又は抗体断片、タンパク質結合パートナー、足場タンパク質、及び本明細書に教示される又は当該技術分野において公知の他のポリペプチドを含む複数のコードポリペプチドを含み得る。一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは標的細胞又は培養物への直接導入に好適であってもよく、次には標的細胞又は培養物がコードポリペプチドを合成し得る。
【０１５２】
特定の実施形態では、薬物動態、安定性、生体適合性、及び／又は生物学的活性、又は発現レベルなどの生物物理学的特性の点で最良の変異体を決定するため、１つ又は複数の異なるアミノ酸修飾を各々が有する、あるタンパク質の複数の変異体が作製され、試験され得る。かかるライブラリは、１０、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９個、又は１０９個を超える候補変異体（限定はされないが、置換、１つ以上の残基の欠失、及び１つ以上の残基の挿入を含む）を含み得る。
【０１５３】
抗微生物及び抗ウイルスポリペプチド
本発明のキメラポリヌクレオチドは、１つ又は複数の（ｏｎ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）抗菌ペプチド（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ：ＡＭＰ）又は抗ウイルス性ペプチド（ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ：ＡＶＰ）をコードするように設計され得る。ＡＭＰ及びＡＶＰは、限定はされないが、微生物、無脊椎動物、植物、両生類、鳥類、魚類、及び哺乳類など多種多様な動物から単離され、記載されている（ワン（Ｗａｎｇ）ら著、ヌクレイック・アシッド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．）、２００９年、第３７巻（データベース版）、ｐ．Ｄ９３３〜７）。抗微生物及び抗ウイル
スポリペプチドは、国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット（この内容は本明細書において参照により援用される）に記載される。非限定的な（ｎｏｎ−ｌｉｍｔｉｎｇ）例として、抗微生物ポリペプチドが国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット（この内容は本明細書において参照により援用される）の段落［０００１８９］〜［０００１９９］に記載される。別の非限定的な例として、抗ウイルスポリペプチドが国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット（この内容は本明細書において参照により援用される）の段落［０００１８９］〜［０００１９５］及び［０００２００］に記載される。
【０１５４】
キメラポリヌクレオチド領域
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、他の核酸ベースの分子の既知の領域又はパートと同様に機能する領域、サブ領域又はパートを含むように設計され得る。かかる領域には、本明細書で考察されるｍＲＮＡ領域並びに非コード領域が含まれる。非コード領域は、領域が１つ以上の細胞傷害性ヌクレオシドであるか又はそれを組み込む場合のように単一のヌクレオシドのレベルであり得る。
【０１５５】
細胞傷害性ヌクレオシド
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは１つ以上の細胞傷害性ヌクレオシドを組み込み得る。例えば、細胞傷害性ヌクレオシドは二官能性修飾ＲＮＡ又はｍＲＮＡなどのキメラポリヌクレオチドに組み込まれ得る。細胞傷害性ヌクレオシド抗癌剤としては、限定はされないが、アデノシンアラビノシド、シタラビン、シトシンアラビノシド、５−フルオロウラシル、フルダラビン、フロクスウリジン、ＦＴＯＲＡＦＵＲ（登録商標）（テガフールとウラシルとの組み合わせ）、テガフール（（ＲＳ）−５−フルオロ−１−（テトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン）、及び６−メルカプトプリンが挙げられる。
【０１５６】
多くの細胞傷害性ヌクレオシド類似体が抗癌剤として臨床使用中であるか、又は臨床試験に供されている。かかる類似体の例としては、限定はされないが、シタラビン、ゲムシタビン、トロキサシタビン、デシタビン、テザシタビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン（ＤＭＤＣ）、クラドリビン、クロファラビン、５−アザシチジン、４’−チオ−アラシチジン、シクロペンテニルシトシン及び１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）−シトシンが挙げられる。かかる化合物の別の例はリン酸フルダラビンである。これらの化合物は全身投与されてもよく、限定はされないが、増殖性正常細胞と比べて腫瘍細胞に対し特異性がほとんど又は全くないなど、細胞傷害剤に典型的な副作用を有し得る。
【０１５７】
当該技術分野では、細胞傷害性ヌクレオシド類似体のプロドラッグもまた多く報告されている。例としては、限定はされないが、Ｎ４−ベヘノイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、Ｎ４−オクタデシル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、Ｎ４−パルミトイル−１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）シトシン、及びＰ−４０５５（シタラビン５’−エライジン酸エステル）が挙げられる。一般に、これらのプロドラッグは主に肝臓及び体循環中で活性薬物に変換されることができ、腫瘍組織における活性薬物の選択的な放出はほとんど又は全く示さない。例えば、５’−デオキシ−５−フルオロシチジンの（及び最終的には５−フルオロウラシルの）プロドラッグであるカペシタビンは、肝臓及び腫瘍組織の両方で代謝される。「生理的条件下で易加水分解性の基」を含有する一系列のカペシタビン類似体が、フジュウ（Ｆｕｊｉｕ）ら（米国特許第４，９６６，８９１号明細書）によって特許請求されており、本明細書において参照により援用される。フジュウ（Ｆｕｊｉｕ）によって記載される系列には、５’−デオキシ−５−フルオロシチジンのＮ４アルキル及びアラルキルカルバメートが含まれ、これは、これらの化合物が通常の生理的条件下で加水分解によって活性化され、５’−デオキシ−５−フルオロシチジンを提供し得ることを意味する。
【０１５８】
シタラビンＮ４−カルバメートの系列がファドル（Ｆａｄｌ）ら（ファーマジー（Ｐｈａｒｍａｚｉｅ）、１９９５年、第５０巻、ｐ．３８２〜７、本明細書において参照により援用される）によって報告されており、ここで化合物は肝臓及び血漿中でシタラビンに変換されるように設計された。国際公開第２００４／０４１２０３号パンフレット（本明細書において参照により援用される）はゲムシタビンのプロドラッグを開示しており、ここでプロドラッグの一部はＮ４−カルバメートである。これらの化合物はゲムシタビンの胃腸毒性を解消するように設計され、胃腸管からのインタクトなプロドラッグの吸収後に肝臓及び血漿中での加水分解放出によってゲムシタビンを提供することが意図された。ノムラ（Ｎｏｍｕｒａ）ら（バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、２００３年、第１１巻、ｐ．２４５３〜６１、本明細書において参照により援用される）は、１−（３−Ｃ−エチニル−β−Ｄ−リボ−ペントファラノシル（ｐｅｎｔｏｆａｒａｎｏｓｙｌ））シトシンのアセタール誘導体を記載しており、これが生体内還元時に生成する中間体は、細胞傷害性ヌクレオシド化合物の生成に酸性条件下でのさらなる加水分解を必要とするものであった。
【０１５９】
化学療法薬であり得る細胞傷害性ヌクレオチドとしてはまた、限定はされないが、ピラゾロ［３，４−Ｄ］−ピリミジン、アロプリノール、アザチオプリン、カペシタビン、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メルカプトプリン、６−チオグアニン、アシクロビル、アラ−アデノシン、リバビリン、７−デアザ−アデノシン、７−デアザ−グアノシン、６−アザ−ウラシル、６−アザ−シチジン、チミジンリボヌクレオチド、５−ブロモデオキシウリジン、２−クロロ−プリン、及びイノシン、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１６０】
非翻訳領域（ＵＴＲ）を有するキメラポリヌクレオチド
本発明のキメラポリヌクレオチドは、非翻訳領域として作用又は機能する１つ以上の領域又はパートを含み得る。キメラポリヌクレオチドが目的ポリペプチドをコードするように設計される場合、キメラポリヌクレオチドはこれらの非翻訳領域のうちの１つ以上を含み得る。
【０１６１】
定義上、遺伝子の野生型非翻訳領域（ＵＴＲ）は転写されるが、翻訳はされない。ｍＲＮＡにおいて、５’ＵＴＲは転写開始部位から始まり開始コドンまで続き、但し開始コドンは含まない；一方、３’ＵＴＲは終止コドンの直後から始まり転写終結シグナルまで続く。ＵＴＲが核酸分子の安定性及び翻訳の点で果たす調節的役割に関して一連の証拠が増えつつある。ＵＴＲの調節的特徴を本発明のキメラポリヌクレオチドに組み込むことにより、とりわけ、分子の安定性を増進させることができる。また特異的特徴を組み込むことにより、誤って所望外の器官部位に仕向けられた場合に転写物の制御された下方調節を確実にすることもできる。
【０１６２】
５’ＵＴＲ及び翻訳開始
天然５’ＵＴＲは、翻訳開始において役割を果たす特徴を備える。天然５’ＵＴＲは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始する際のプロセスに関わることが一般に知られるコザック配列などのシグネチャを有する。コザック配列はコンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（式中、Ｒは、次に別の「Ｇ」が続く開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（アデニン又はグアニン）である）を有する。５’ＵＴＲはまた、伸長因子結合に関わる二次構造を形成することも知られている。
【０１６３】
特定の標的器官の多量に発現する遺伝子に典型的に見られる特徴を操作することにより、本発明のキメラポリヌクレオチドの安定性及びタンパク質産生を増進させることができる。例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランス
フェリン、αフェトプロテイン、エリスロポエチン、又は第ＶＩＩＩ因子などの、肝臓に発現するｍＲＮＡの５’ＵＴＲの導入を用いれば、肝細胞系又は肝臓におけるキメラポリヌクレオチドなどの核酸分子の発現を増進させることができる。同様に、他の組織特異的ｍＲＮＡ由来の５’ＵＴＲを使用して当該組織における発現を向上させることが、筋肉（ＭｙｏＤ、ミオシン、ミオグロビン、ミオゲニン、ヘルキュリン（ｈｅｒｃｕｌｉｎ））、内皮細胞（Ｔｉｅ−１、ＣＤ３６）、骨髄性細胞（Ｃ／ＥＢＰ、ＡＭＬ１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ１１ｂ、ＭＳＲ、Ｆｒ−１、ｉ−ＮＯＳ）、白血球（ＣＤ４５、ＣＤ１８）、脂肪組織（ＣＤ３６、ＧＬＵＴ４、ＡＣＲＰ３０、アディポネクチン）及び肺上皮細胞（ＳＰ−Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ）について可能である。キメラポリヌクレオチドの設計及び製造に有用な非翻訳領域としては、限定されないが、同時係属中の、所有者が共通する米国仮特許出願第６１／８２９３７２号明細書（代理人整理番号Ｍ４２）（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）に開示されるものが挙げられる。
【０１６４】
他の非ＵＴＲ配列もまた、キメラポリヌクレオチド内の領域又はサブ領域として用いられ得る。例えば、イントロン又はイントロン配列の一部分が本発明のキメラポリヌクレオチドの領域に組み込まれてもよい。イントロン配列の組込みにより、タンパク質産生並びにポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｔｏｉｄｅ）レベルが増加し得る。
【０１６５】
特徴の組み合わせがフランキング領域に含まれてもよく、他の特徴内に包含されてもよい。例えば、ＯＲＦに、強力なコザック翻訳開始シグナルを含有し得る５’ＵＴＲ及び／又はポリＡテイルの鋳型依存的付加のためのオリゴ（ｄＴ）配列を含み得る３’ＵＴＲが隣接し得る。５’ＵＴＲは、米国特許出願公開第２０１００２９３６２５号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される５’ＵＴＲなどの、同じ及び／又は異なる遺伝子由来の第１のポリヌクレオチド断片と第２のポリヌクレオチド断片とを含み得る。
【０１６６】
同時係属中の、所有者が共通する米国仮特許出願第６１／８２９３７２号明細書（代理人整理番号Ｍ４２）が、本発明のキメラポリヌクレオチドにおいてフランキング領域として利用し得る例示的ＵＴＲの一覧を提供している。５’又は３’ＵＴＲの変異体が利用されてもよく、ここでは末端に対し、Ａ、Ｔ、Ｃ又はＧを含めた１つ以上のヌクレオチドが付加又は除去されている。
【０１６７】
キメラポリヌクレオチドの領域には、任意の遺伝子由来の任意のＵＴＲが組み込まれ得ることが理解されなければならない。さらに、任意の既知の遺伝子の複数の野生型ＵＴＲが利用され得る。また、野生型領域の変異体でない人工的ＵＴＲを提供することも、本発明の範囲内にある。これらのＵＴＲ又はその一部分は、それらが選択された元の転写物における向きと同じ向きに置かれてもよく、又は向き若しくは位置が改変されてもよい。従って５’又は３’ＵＴＲは反転され、短くされ、長くされ、１つ以上の他の５’ＵＴＲ又は３’ＵＴＲとのキメラにされてもよい。本明細書で使用されるとき、用語「改変される」は、それがＵＴＲ配列に関係するとき、ＵＴＲが参照配列と比べて何らかの形で変更されていることを意味する。例えば、３’又は５’ＵＴＲは野生型又は天然ＵＴＲに対し、上記に教示されるとおりの向き若しくは位置の変更によって改変されてもよく、又は追加的なヌクレオチドの挿入、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの交換若しくは転位によって改変されてもよい。「改変された」ＵＴＲ（３’又は５’のいずれであるかに関わらず）を生じさせるこれらの変更のいずれも、変異ＵＴＲを構成する。
【０１６８】
一実施形態では、二重、三重又は四重のＵＴＲ、例えば５’又は３’ＵＴＲが用いられ得る。本明細書で使用されるとき、「二重」ＵＴＲは、同じＵＴＲの２つのコピーが連続して又は実質的に連続してコードされるものである。例えば、米国特許出願公開第２０１００１２９８７７号明細書（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）に
記載されるとおり、二重β−グロビン３’ＵＴＲが使用されてもよい。
【０１６９】
また、パターン化したＵＴＲを有することも本発明の範囲内にある。本明細書で使用されるとき「パターン化したＵＴＲ」は、反復する又は交互のパターン、例えば、１回、２回、若しくは４回以上繰り返されるＡＢＡＢＡＢ又はＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢ又はＡＢＣＡＢＣＡＢＣ又はこれらの変種を反映するＵＴＲである。これらのパターンにおいて、各文字Ａ、Ｂ、又はＣはヌクレオチドレベルで異なるＵＴＲを表す。
【０１７０】
一実施形態では、フランキング領域は、タンパク質が特性の共通の機能、構造、特徴を共有する転写物ファミリーから選択される。例えば、目的ポリペプチドは、特定の細胞、組織において又は発生中の何らかの時点で発現するタンパク質ファミリーに属し得る。これらの遺伝子のいずれかに由来するＵＴＲが、同じ又は異なるタンパク質ファミリーの任意の他のＵＴＲに交換されてもよく、それにより新規キメラポリヌクレオチドが作り出され得る。本明細書で使用されるとき、「タンパク質ファミリー」は、少なくとも１つの機能、構造、特徴、局在性、起源、又は発現パターンを共有する２つ以上の目的ポリペプチドの群を指して最も広義に用いられる。
【０１７１】
非翻訳領域はまた、翻訳エンハンサーエレメント（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｅｌｅｍｅｎｔ：ＴＥＥ）も含み得る。非限定的な例として、ＴＥＥには、米国特許出願公開第２００９０２２６４７０号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるもの、及び当該技術分野において公知のものが含まれ得る。
【０１７２】
３’ＵＴＲ及びＡＵリッチエレメント
天然又は野生型３’ＵＴＲは、そこに組み込まれたアデノシン（「Ａ」ｄｅｎｏｓｉｎｅ）及びウリジン（「Ｕ」ｒｉｄｉｎｅ）のストレッチを有することが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャは、特に、ターンオーバー速度が高い遺伝子によく見られる。それらの配列特徴及び機能特性に基づけば、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）は３つのクラスに分けることができる（チェン（Ｃｈｅｎ）ら著、１９９５年）：クラスＩ  ＡＲＥはＵリッチ領域内にいくつかの分散したＡＵＵＵＡモチーフのコピーを含有する。Ｃ−Ｍｙｃ及びＭｙｏＤはクラスＩ  ＡＲＥを含有する。クラスＩＩ  ＡＲＥは、２つ以上のオーバーラップしたＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を有する。この種のＡＲＥを含有する分子には、ＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−ａが含まれる。クラスＩＩＩ  ＡＲＥはそれほど十分に定義付けられていない。これらのＵリッチ領域はＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。ｃ−Ｊｕｎ及びミオゲニンは、このクラスの十分に研究された２つの例である。ＡＲＥに結合する多くのタンパク質はメッセンジャーを不安定にすることが知られており、一方でＥＬＡＶファミリーのメンバー、中でも特にＨｕＲは、ｍＲＮＡの安定性を増加させることが実証されている。ＨｕＲは３つ全てのクラスのＡＲＥに結合する。ＨｕＲ特異的結合部位を核酸分子の３’ＵＴＲに入れ込むように操作すると、ＨｕＲ結合、ひいてはインビボでのメッセージの安定化がもたらされ得る。
【０１７３】
３’ＵＴＲ  ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）の導入、除去又は修飾を用いることにより、本発明のキメラポリヌクレオチドの安定性を調節することができる。特定のキメラポリヌクレオチドを操作するとき、ＡＲＥの１つ以上のコピーを導入して本発明のキメラポリヌクレオチドの安定性を低下させ、それにより翻訳を抑え、得られるタンパク質の産生を減少させることができる。同様に、ＡＲＥを同定して除去するか、又は突然変異させることにより、細胞内の安定性を増加させ、ひいては翻訳及び得られるタンパク質の産生を増加させることができる。本発明のキメラポリヌクレオチドを使用して、関連性のある細胞株でトランスフェクション実験を実施することができ、トランスフェクション後種々の時点でタンパク質産生をアッセイし得る。例えば、細胞に種々のＡＲＥ操作分子をトラン
スフェクトすることができ、及び関連性のあるタンパク質にＥＬＩＳＡキットを使用することにより、トランスフェクション後６時間、１２時間、２４時間、４８時間、及び７日の時点で産生されたタンパク質をアッセイし得る。
【０１７４】
マイクロＲＮＡ結合部位
マイクロＲＮＡ（又はｍｉＲＮＡ）は１９〜２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡであり、核酸分子の３’ＵＴＲに結合し、且つ核酸分子の安定性を低下させることによるか、或いは翻訳を阻害することによって遺伝子発現を下方制御する。本発明のキメラポリヌクレオチドは、１つ以上のマイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ配列（ｓｅｑｅｎｃｅ）、又はマイクロＲＮＡシードを含み得る。かかる配列は、米国特許出願公開第２００５／０２６１２１８号明細書及び米国特許出願公開第２００５／００５９００５号明細書（これらの内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示されるものなどの任意の既知のマイクロＲＮＡに対応し得る。
【０１７５】
マイクロＲＮＡ配列は、配列がｍｉＲＮＡ標的配列に対して完全なワトソン・クリック相補性を有する「シード」領域、即ち成熟マイクロＲＮＡの２〜８位の領域にある配列を含む。マイクロＲＮＡシードは成熟マイクロＲＮＡの２〜８位又は２〜７位を含み得る。一部の実施形態では、マイクロＲＮＡシードは７ヌクレオチド（例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２〜８）を含むことができ、ここで対応するｍｉＲＮＡ標的におけるシード相補部位にはマイクロＲＮＡ１位に対向するアデニン（Ａ）が隣接する。一部の実施形態では、マイクロＲＮＡシードは６ヌクレオチド（例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２〜７）を含むことができ、ここで対応するｍｉＲＮＡ標的におけるシード相補部位には、マイクロＲＮＡ１位の逆のアデニン（Ａ）が隣接する。例えば、グリムソン・Ａ（Ｇｒｉｍｓｏｎ  Ａ）、ファー・ＫＫ（Ｆａｒｈ  ＫＫ）、ジョンストン・ＷＫ（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ＷＫ）、ギャレット−エンゲル・Ｐ（Ｇａｒｒｅｔｔ−Ｅｎｇｅｌｅ
Ｐ）、リム・ＬＰ（Ｌｉｍ  ＬＰ）、バーテル・ＤＰ（Ｂａｒｔｅｌ  ＤＰ）著；モレキュラー・セル（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ）、２００７年７月６日、第２７巻、第１号、ｐ．９１〜１０５（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）を参照のこと。マイクロＲＮＡシードの塩基は標的配列と完全な相補性を有する。マイクロＲＮＡ標的配列を本発明のキメラポリヌクレオチドに（例えば、３’ＵＴＲ様領域又は他の領域において）入れ込むように操作することにより、問題のマイクロＲＮＡが利用可能であることを条件に、分解又は翻訳の低下のため分子を標的化することができる。このプロセスにより、核酸分子送達時のオフターゲット効果の危険が低下し得る。マイクロＲＮＡの同定、マイクロＲＮＡ標的領域、及びそれらの発現パターン及びバイオロジーにおける役割が報告されている（ボナウアー（Ｂｏｎａｕｅｒ）ら著、カレント・ドラッグ・ターゲッツ（Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ）、２０１０年、第１１巻、ｐ．９４３〜９４９；アナンド（Ａｎａｎｄ）及びチェレッシュ（Ｃｈｅｒｅｓｈ）著、カレント・オピニオン・イン・ヘマトロジー（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ）、２０１１年、第１８巻、ｐ．１７１〜１７６；コントレラス（Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ）及びラオ（Ｒａｏ）著、ロイケミア（Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、２０１２年、第２６巻、ｐ．４０４〜４１３（２０１１年１２月２０日、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；バーテル（Ｂａｒｔｅｌ）著、セル（Ｃｅｌｌ）、２００９年、第１３６巻、ｐ．２１５〜２３３；ランドグラフ（Ｌａｎｄｇｒａｆ）ら著、セル（Ｃｅｌｌ）、２００７年、第１２９巻、ｐ．１４０１〜１４１４；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０１７６】
例えば、核酸分子がｍＲＮＡであり、肝臓への送達は意図されていないが、最後にそこに至る場合、ｍｉＲ−１２２の１つ又は複数の標的部位をキメラポリヌクレオチドの３’ＵＴＲ領域に入れ込むように操作すれば、肝臓に豊富なマイクロＲＮＡであるｍｉＲ−１２２が目的の遺伝子の発現を阻害し得る。異なるマイクロＲＮＡについての１つ又は複数
の結合部位の導入を操作することにより、キメラポリヌクレオチドの寿命、安定性、及びタンパク質翻訳をさらに低下させることができる。
【０１７７】
本明細書で使用されるとき、用語「マイクロＲＮＡ部位」は、マイクロＲＮＡ標的部位又はマイクロＲＮＡ認識部位、又はマイクロＲＮＡが結合し又は会合する任意のヌクレオチド配列を指す。「結合」は従来のワトソン・クリックのハイブリダイゼーション法則に従うものであってもよく、又はマイクロＲＮＡとマイクロＲＮＡ部位における又はそれに隣接した標的配列との任意の安定した会合を反映してもよいことは理解されなければならない。
【０１７８】
逆に、本発明のキメラポリヌクレオチドの目的上、マイクロＲＮＡ結合部位は、それが存在する配列から抜け出るように操作する（即ちそれから取り除く）ことができ、例えばそれにより特定の組織におけるタンパク質発現を増加させることができる。例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位を取り除くと肝臓におけるタンパク質発現が改善し得る。複数の組織における発現の調節は、１個若しくは数個のマイクロＲＮＡ結合部位の導入又は除去によって達成することができる。
【０１７９】
マイクロＲＮＡがｍＲＮＡ、ひいてはタンパク質発現を調節することが知られる組織の例としては、限定はされないが、肝臓（ｍｉＲ−１２２）、筋肉（ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１２６）、骨髄性細胞（ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７）、脂肪組織（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ−１ｄ、ｍｉＲ−１４９）、腎臓（ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１２６）が挙げられる。マイクロＲＮＡはまた、血管新生（ｍｉＲ−１３２）などの複合的な生物学的過程も調節し得る（アナンド（Ａｎａｎｄ）及びチェレッシュ（Ｃｈｅｒｅｓｈ）、カレント・オピニオン・イン・ヘマトロジー（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ）、２０１１年、第１８巻、ｐ．１７１〜１７６；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０１８０】
本発明において有用な発現プロファイル、マイクロＲＮＡ及び細胞株には、例えば、各々２０１３年７月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／８５７，４３６号明細書（代理人整理番号Ｍ３９）及び同第６１／８５７，３０４号明細書（代理人整理番号Ｍ３７）（これらの内容は全体として参照により援用される）に教示されるものが含まれる。
【０１８１】
本発明のキメラポリヌクレオチドにおいては、キメラポリヌクレオチド発現の発現を生物学的に関連性のある細胞型又は関連性のある生物学的過程のコンテクストに合わせて調整するため、かかるプロセスに関与するマイクロＲＮＡの結合部位が除去又は導入され得る。マイクロＲＮＡ、ｍｉＲ配列及びｍｉＲ結合部位の一覧が、２０１３年１月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／７５３，６６１号明細書の表９、２０１３年１月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／７５４，１５９号明細書の表９、及び２０１３年１月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／７５８，９２１号明細書の表７（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に掲載される。
【０１８２】
組織又は疾患特異的遺伝子発現を駆動するためマイクロＲＮＡを使用する例が掲載される（ゲットナー（Ｇｅｔｎｅｒ）及びナルディニ（Ｎａｌｄｉｎｉ）著、ティッシュー・アンチゲンズ（Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ）、２０１２年、第８０巻、ｐ．３９３〜４０３；全体として参照により本明細書に援用される）。加えて、マイクロＲＮＡシード部位をｍＲＮＡに組み込むことにより、特定の細胞における発現を低下させて生物学的改善をもたらすことができる。これの例は、ＵＧＴ１Ａ１発現レンチウイルスベクターへ
のｍｉＲ−１４２部位の組込みである。ｍｉＲ−１４２シード部位の存在によって造血細胞における発現が低下し、結果として抗原提示（ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｎｇ）細胞における発現が低下して、ウイルスで発現したＵＧＴ１Ａ１に対する免疫応答が存在しなくなった（シュミット（Ｓｃｈｍｉｔｔ）ら著、ガストロエンテロロジー（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）、２０１０年、第１３９巻、ｐ．９９９〜１００７；ゴンザレス−アセキノラザ（Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ａｓｅｑｕｉｎｏｌａｚａ）ら著、ガストロエンテロロジー（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）、２０１０年、第１３９巻、ｐ．７２６〜７２９；両方ともに本明細書において全体として参照により援用される）。修飾ｍＲＮＡへのｍｉＲ−１４２部位の組込みは、造血細胞におけるコードタンパク質の発現を低下させることができたのみならず、ｍＲＮＡによりコードされるタンパク質に対する免疫応答もまた低下又は消失させることができた。ｍＲＮＡへのｍｉＲ−１４２シード部位（１つ又は複数）の組込みは、完全タンパク質欠損患者（ＵＧＴ１Ａ１タイプＩ、ＬＤＬＲ欠損患者、ＣＲＩＭ陰性ポンペ病患者等）の治療の場合に重要となり得る。
【０１８３】
最後に、種々の細胞型におけるマイクロＲＮＡの発現パターンの理解を通じて、特定の細胞型における、又は特定の生物学的条件下のみでのより標的化された発現となるようにキメラポリヌクレオチドを操作することができる。組織特異的マイクロＲＮＡ結合部位を導入することによって、ある組織における又はある生物学的条件のコンテクストでのタンパク質発現に最適であろうキメラポリヌクレオチドを設計し得る。
【０１８４】
操作されたキメラポリヌクレオチドを使用して、関連性のある細胞株でトランスフェクション実験を実施することができ、トランスフェクション後種々の時点でタンパク質産生をアッセイし得る。例えば、細胞に種々のマイクロＲＮＡ結合部位操作キメラポリヌクレオチドをトランスフェクトすることができ、及び関連性のあるタンパク質にＥＬＩＳＡキットを使用することにより、トランスフェクション後６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日の時点で産生されたタンパク質をアッセイし得る。マイクロＲＮＡ結合部位操作分子を使用して、製剤化されたキメラポリヌクレオチドの組織特異的発現の変化を調べるため生体内実験を実施することもできる。
【０１８５】
５’キャップを有する領域
天然ｍＲＮＡの５’キャップ構造は核外輸送、ｍＲＮＡ安定性の増加に関与し、及びｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（Ｃａｐ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：ＣＢＰ）に結合する。ＣＢＰは、ＣＢＰとポリ（Ａ）結合タンパク質の会合による成熟環状ｍＲＮＡ種の形成を介した細胞におけるｍＲＮＡ安定性及び翻訳能力に関与する。キャップはさらに、ｍＲＮＡスプライシング中に５’近位イントロンの除去を補助する。
【０１８６】
内因性ｍＲＮＡ分子は５’末端がキャッピングされ、ｍＲＮＡ分子の末端グアノシンキャップ残基と５’末端転写センスヌクレオチドとの間に５’−ｐｐｐ−５’−三リン酸連結を生じ得る。この５’−グアニル酸キャップが、次にメチル化されて、Ｎ７−メチル−グアニル酸残基が生じ得る。ｍＲＮＡの５’末端の終端及び／又は終端前の転写ヌクレオチドのリボース糖もまた、任意選択で２’−Ｏ−メチル化され得る。グアニル酸キャップ構造の加水分解及び開裂による５’−デキャッピングは、ｍＲＮＡ分子などの核酸分子を分解の標的にし得る。
【０１８７】
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、キャップ部分を組み込むように設計され得る。本発明のキメラポリヌクレオチドに対する修飾は、デキャッピングを防ぐ非加水分解性のキャップ構造を生じ、従ってｍＲＮＡ半減期が増加し得る。キャップ構造の加水分解には５’−ｐｐｐ−５’ホスホロジエステル連結の開裂が必要であるため、キャッピング反応中に修飾ヌクレオチドが用いられ得る。例えば、ニュー・イングランド・バイオラボ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）（マサチューセッツ州イプスウィッ
チ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））のワクシニアキャッピング酵素をα−チオ−グアノシンヌクレオチドと共に製造者の指示に従い使用して、５’−ｐｐｐ−５’キャップにホスホロチオエート連結を作成し得る。α−メチル−ホスホン酸及びセレノ−リン酸ヌクレオチドなどのさらなる修飾グアノシンヌクレオチドが用いられてもよい。
【０１８８】
さらなる修飾としては、限定はされないが、糖環の２’−ヒドロキシル基上のキメラポリヌクレオチド（上述のとおり）の５’末端及び／又は５’末端前のヌクレオチドのリボース糖の２’−Ｏ−メチル化が挙げられる。ｍＲＮＡ分子として機能するキメラポリヌクレオチドなど、核酸分子の５’キャップの作成には、複数の異なる５’キャップ構造を使用することができる。
【０１８９】
キャップ類似体（本明細書では合成キャップ類似体とも称される）、化学的キャップ、化学的キャップ類似体、又は構造的若しくは機能的キャップ類似体は、天然の（即ち内因性の、野生型の又は生理的な）５’キャップと化学構造の点で異なり、一方でキャップ機能は維持している。キャップ類似体は本発明のキメラポリヌクレオチドと化学的に（即ち非酵素的に）又は酵素的に合成され、及び／又は連結され得る。
【０１９０】
例えば、アンチリバースキャップ類似体（Ａｎｔｉ−Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｃａｐ  Ａｎａｌｏｇ：ＡＲＣＡ）キャップは、５’−５’−三リン酸基によって連結された２つのグアニンを含有し、ここで一方のグアニンはＮ７メチル基並びに３’−Ｏ−メチル基を含有する（即ち、Ｎ７，３’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシン（ｍ７Ｇ−３’ｍｐｐｐ−Ｇ；これは同等に（ｅｑｕｉｖａｌｉｅｎｔｌｙ）３’Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇと表され得る）。他の非修飾グアニンの３’−Ｏ原子が、キャッピングされたキメラポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに連結されるようになる。Ｎ７−及び３’−Ｏ−メチル化（ｍｅｔｈｌｙａｔｅｄ）グアニンは、キャッピングされたキメラポリヌクレオチドの末端部分を提供する。
【０１９１】
別の例示的キャップはｍＣＡＰであり、これはＡＲＣＡと同様であるが、グアノシンに２’−Ｏ−メチル基を有する（即ち、Ｎ７，２’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシン、ｍ７Ｇｍ−ｐｐｐ−Ｇ）。
【０１９２】
キャップ類似体はキメラポリヌクレオチド又はその領域の同時キャッピングを可能にするが、インビトロ転写反応では、転写物の最大２０％がキャッピングされないまま残り得る。このこと、並びにキャップ類似体と内因性の細胞性転写機構によって産生される核酸の内因性５’キャップ構造との構造的差異が、翻訳能力の低下及び細胞安定性の低下をもたらし得る。
【０１９３】
本発明のキメラポリヌクレオチドはまた、酵素を使用して、製造後に（ＩＶＴ又は化学合成のいずれであれ）キャッピングされてもよく、これにより真正性の高い５’キャップ構造が生じる。本明細書で使用されるとき、語句「真正性の高い」は、構造的に、或いは機能的に、内因性又は野生型の特徴を厳密に反映し又は模倣する特徴を指す。即ち、「真正性の高い」特徴は、先行技術の合成の特徴又は類似体等と比較して、内因性、野生型、天然又は生理的細胞機能及び／又は構造をより良好に代表するものであるか、又は対応する内因性、野生型、天然又は生理的特徴よりも１つ以上の点で優れている。本発明の真正性の高い５’キャップ構造の非限定的な例は、とりわけ、当該技術分野において公知の合成５’キャップ構造（又は野生型、天然若しくは生理的５’キャップ構造）と比較してキャップ結合タンパク質の増進した結合、半減期の増加、５’エンドヌクレアーゼに対する感受性の低下及び／又は５’デキャッピングの低下を有するものである。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素及び組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ酵素は、キメラポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドとグアニンキャップヌクレオチド
との間にカノニカルな５’−５’−三リン酸連結を作り出すことができ、ここでキャップグアニンはＮ７メチル化を含み、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルを含む。かかる構造はＣａｐ１構造と呼ばれる。このキャップは、例えば当該技術分野において公知の他の５’キャップ類似体構造と比較して、より高い翻訳能力及び細胞安定性並びに細胞炎症誘発性サイトカインの活性化の低下をもたらす。キャップ構造としては、限定はされないが、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ，ｐＮ２ｐ（ｃａｐ  ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（ｃａｐ  １）、及び７ｍＧ（５’）−ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（ｃａｐ  ２）が挙げられる。
【０１９４】
キメラポリヌクレオチドは製造後にキャッピングされ得るため、及びこのプロセスはより効率的であるため、ほぼ１００％のキメラポリヌクレオチドがキャッピングされ得る。これは、キャップ類似体をインビトロ転写反応の過程でキメラポリヌクレオチドに連結したときの約８０％と対照的である。
【０１９５】
本発明によれば、５’末端キャップは内因性キャップ又はキャップ類似体を含み得る。本発明によれば、５’末端キャップはグアニン類似体を含み得る。有用なグアニン類似体としては、限定はされないが、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、及び２−アジド−グアノシンが挙げられる。
【０１９６】
ウイルス配列
本発明のキメラポリヌクレオチドにおいて、さらなるウイルス配列、例えば、限定はされないが、オオムギ黄萎ウイルス（ＢＹＤＶ−ＰＡＶ）、ヤーグジークテヒツジレトロウイルス（ＪＳＲＶ）及び／又は地方病性鼻腫瘍ウイルスの翻訳エンハンサー配列（例えば、国際公開第２０１２１２９６４８号パンフレットを参照；本明細書において全体として参照により援用される）などが操作及び挿入されてもよく、それがコンストラクトの翻訳をインビトロ及びインビボで刺激し得る。関連性のある細胞株でトランスフェクション実験を実施することができ、トランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日目にＥＬＩＳＡによってタンパク質産生をアッセイすることができる。
【０１９７】
ＩＲＥＳ配列
さらに、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含み得るキメラポリヌクレオチドが提供される。ＩＲＥＳは、当初ピコルナウイルスＲＮＡの特徴として同定されたものであり、５’キャップ構造が存在しないときのタンパク質合成の開始において重要な役割を果たす。ＩＲＥＳは唯一のリボソーム結合部位として働き得るか、又はｍＲＮＡの複数のリボソーム結合部位のうちの１つとして役割を果たし得る。２つ以上の機能的リボソーム結合部位を含有するキメラポリヌクレオチドは、リボソームによって独立に翻訳されるいくつかのペプチド又はポリペプチドをコードし得る（「多シストロン性核酸分子」）。キメラポリヌクレオチドにＩＲＥＳが提供される場合、さらに任意選択で第２の翻訳可能領域が提供される。本発明に従い使用することのできるＩＲＥＳ配列の例としては、限定なしに、ピコルナウイルス（例えばＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ブタコレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）又はコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）由来のものが挙げられる。
【０１９８】
ポリＡテイル
ＲＮＡプロセシングの間、安定性を増加させるため、ｍＲＮＡ分子などのポリヌクレオチドにアデニンヌクレオチドの長鎖（ポリＡテイル）が付加され得る。転写後直ちに転写物の３’末端が開裂し、３’ヒドロキシルが遊離し得る。次にポリＡポリメラーゼがＲＮ
Ａにアデニンヌクレオチドの鎖を付加する。ポリアデニル化と呼ばれるこのプロセスによって、例えば約１００〜２５０残基長であり得るポリＡテイル（配列番号６）が付加される。
【０１９９】
ポリＡテイルはまた、コンストラクトが核から輸送された後にも付加され得る。
本発明によれば、安定化のためポリＡテイルの末端基が組み込まれ得る。本発明のキメラポリヌクレオチドはデス−３’ヒドロキシルテイルを含み得る。本発明のキメラポリヌクレオチドはまた、ジュンジエ・リー（Ｊｕｎｊｉｅ  Ｌｉ）ら（カレント・バイオロジー（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第１５巻、ｐ．１５０１〜１５０７、２００５年８月２３日）（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）によって教示されるとおり構造的部分又は２’−Ｏメチル修飾も含み得る。
【０２００】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、ヒストンｍＲＮＡを含めた代替的なポリＡテイル構造を含む転写物をコードするように設計されてもよい。ノーベリー（Ｎｏｒｂｕｒｙ）によれば、「ヒト複製依存性ヒストンｍＲＮＡでは末端ウリジル化もまた見出されている。これらのｍＲＮＡのターンオーバーは、染色体ＤＮＡ複製の完了又は阻害後の潜在的に毒性のヒストン蓄積の予防に重要であると考えられている。これらのｍＲＮＡは、それらに３’ポリ（Ａ）テイルがないことによって区別され、代わりにその機能は、安定したステム−ループ構造及びそのコグネイトステム−ループ結合タンパク質（ｓｔｅｍ−ｌｏｏｐ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ＳＬＢＰ）によって引き受けられる；ＳＬＢＰはポリアデニル化ｍＲＮＡのＰＡＢＰと同じ機能を果たす」（ノーベリー（Ｎｏｒｂｕｒｙ）、「細胞質ＲＮＡ：イヌを振るしっぽの場合（Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ＲＮＡ：ａ  ｃａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔａｉｌ  ｗａｇｇｉｎｇ  ｔｈｅ  ｄｏｇ）」、ネイチャー・レビューズ・モレキュラー・セル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）；ＡＯＰ、オンライン刊行２０１３年８月２９日；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｍ３６４５）（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）。
【０２０１】
ユニークなポリＡテイル長が、本発明のキメラポリヌクレオチドに特定の利点を提供する。
概して、存在する場合にポリＡテイルの長さは３０ヌクレオチド長より長い（配列番号７）。別の実施形態では、ポリＡテイルは３５ヌクレオチド長より長い（例えば、約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００ヌクレオチド以上）。一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド又はその領域は約３０〜約３，０００ヌクレオチド（例えば、３０〜５０、３０〜１００、３０〜２５０、３０〜５００、３０〜７５０、３０〜１，０００、３０〜１，５００、３０〜２，０００、３０〜２，５００、５０〜１００、５０〜２５０、５０〜５００、５０〜７５０、５０〜１，０００、５０〜１，５００、５０〜２，０００、５０〜２，５００、５０〜３，０００、１００〜５００、１００〜７５０、１００〜１，０００、１００〜１，５００、１００〜２，０００、１００〜２，５００、１００〜３，０００、５００〜７５０、５００〜１，０００、５００〜１，５００、５００〜２，０００、５００〜２，５００、５００〜３，０００、１，０００〜１，５００、１，０００〜２，０００、１，０００〜２，５００、１，０００〜３，０００、１，５００〜２，０００、１，５００〜２，５００、１，５００〜３，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜２，５００、及び２，５００〜３，０００）を含む。
【０２０２】
一実施形態では、ポリＡテイルは、キメラポリヌクレオチド全体の長さ又はキメラポリ
ヌクレオチドの特定の領域の長さに対して設計される。この設計は、コード領域の長さ、特定の特徴若しくは領域の長さに基づくか、又はキメラポリヌクレオチドから発現される最終産物の長さに基づき得る。
【０２０３】
これに関連して、ポリＡテイルは、キメラポリヌクレオチド又はその特徴と比べて長さが１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００％長くてもよい。ポリＡテイルはまた、それが属するキメラポリヌクレオチドの割合として設計されてもよい。これに関連して、ポリＡテイルは、コンストラクト、コンストラクト領域の全長又はコンストラクトの全長−ポリＡテイルの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０％又はそれ以上であってもよい。さらに、操作された結合部位及びポリＡ結合タンパク質に対するキメラポリヌクレオチドのコンジュゲーションは、発現を増進し得る。
【０２０４】
加えて、複数の異なるキメラポリヌクレオチドが、ポリＡテイルの３’末端の修飾ヌクレオチドを使用して３’末端でＰＡＢＰ（Ｐｏｌｙ−Ａ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ポリＡ結合タンパク質）によって互いに連結され得る。関連性のある細胞株でトランスフェクション実験を実施することができ、トランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日目にＥＬＩＳＡによってタンパク質産生をアッセイすることができる。
【０２０５】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドはポリＡ−Ｇ四重鎖領域を含むように設計される。Ｇ四重鎖は、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方のＧリッチ配列によって形成され得る４つのグアニンヌクレオチドの環状水素結合アレイである。この実施形態において、Ｇ四重鎖はポリＡテイルの末端に組み込まれる。得られるポリヌクレオチドは、種々の時点で安定性、タンパク質産生及びその他の、半減期を含めたパラメータに関してアッセイされる。ポリＡ−Ｇ四重鎖は、１２０ヌクレオチドのポリＡテイル（配列番号８）を単独で使用したときに見られるタンパク質産生の少なくとも７５％に相当するｍＲＮＡからのタンパク質産生をもたらすことが発見されている。
【０２０６】
開始コドン領域
一部の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、開始コドン領域と類似した、又はそれと同様に機能する領域を有し得る。
【０２０７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドの翻訳は、開始コドンＡＵＧではないコドンで始まり得る。キメラポリヌクレオチドの翻訳は、限定はされないが、ＡＣＧ、ＡＧＧ、ＡＡＧ、ＣＴＧ／ＣＵＧ、ＧＴＧ／ＧＵＧ、ＡＴＡ／ＡＵＡ、ＡＴＴ／ＡＵＵ、ＴＴＧ／ＵＵＧなどの代替開始コドンで始まり得る（トゥリオール（Ｔｏｕｒｉｏｌ）ら著、バイオロジー・オブ・ザ・セル（Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ）、第９５巻、２００３年、ｐ．１６９〜１７８及びマツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）及びマウロ（Ｍａｕｒｏ）、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ）、２０１０年、第５巻、ｐ．１１を参照；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドの翻訳は代替開始コドンＡＣＧで始まる。別の非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドの翻訳は代替開始コドンＣＴＧ／ＣＵＧで始まる。さらに別の非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドの翻訳は代替開始コドンＧＴＧ／ＧＵＧで始まる。
【０２０８】
翻訳を開始するコドン、例えば、限定はされないが、開始コドン又は代替開始コドンなどに隣接するヌクレオチドは、翻訳効率、ポリヌクレオチドの長さ及び／又は構造をもたらすことが知られている（例えば、マツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）及びマウロ（Ｍａｕｒｏ）、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ）、２０１０年、第５巻、第１１号を参照；この内容
は本明細書において全体として参照により援用される）。翻訳を開始するコドンに隣接する任意のヌクレオチドのマスキングを使用することにより、翻訳開始の位置、翻訳効率、ポリヌクレオチドの長さ及び／又は構造を改変し得る。
【０２０９】
一実施形態では、開始コドン又は代替開始コドンの近傍でマスキング剤が用いられてもよく、これによりコドンがマスキングされ又は隠されるため、マスキングされた開始コドン又は代替開始コドンで翻訳が開始される可能性が低減し得る。マスキング剤の非限定的な例としては、アンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）ポリヌクレオチド及びエクソンジャンクション複合体（ＥＪＣ）が挙げられる（例えば、マスキング剤のＬＮＡポリヌクレオチド及びＥＪＣについて記載しているマツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）及びマウロ（Ｍａｕｒｏ）（プロス・ワン（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ）、２０１０年、第５巻、ｐ．１１）を参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０２１０】
別の実施形態では、マスキング剤を使用してキメラポリヌクレオチドの開始コドンをマスキングしてもよく、これにより翻訳が代替開始コドンで開始される可能性が増加し得る。
【０２１１】
一実施形態では、マスキング剤を使用して第１の開始コドン又は代替開始コドンがマスキングされてもよく、これによりマスキングされた開始コドン又は代替開始コドンより下流の開始コドン又は代替開始コドンで翻訳が開始される可能性が増加し得る。
【０２１２】
一実施形態では、開始コドン又は代替開始コドンがｍｉＲ結合部位に対する完全な相補配列内に位置してもよい。ｍｉＲ結合部位の完全な相補配列は、マスキング剤と同様にキメラポリヌクレオチドの翻訳、長さ及び／又は構造を制御する助けとなり得る。非限定的な例として、開始コドン又は代替開始コドンはｍｉＲ−１２２結合部位に対する完全な相補配列の中央に位置してもよい。開始コドン又は代替開始コドンは、１番目のヌクレオチド、２番目のヌクレオチド、３番目のヌクレオチド、４番目のヌクレオチド、５番目のヌクレオチド、６番目のヌクレオチド、７番目のヌクレオチド、８番目のヌクレオチド、９番目のヌクレオチド、１０番目のヌクレオチド、１１番目のヌクレオチド、１２番目のヌクレオチド、１３番目のヌクレオチド、１４番目のヌクレオチド、１５番目のヌクレオチド、１６番目のヌクレオチド、１７番目のヌクレオチド、１８番目のヌクレオチド、１９番目のヌクレオチド、２０番目のヌクレオチド又は２１番目のヌクレオチドの後に位置してもよい。
【０２１３】
別の実施形態では、開始コドンでないコドンでキメラポリヌクレオチドの翻訳を開始させるため、キメラポリヌクレオチド配列からキメラポリヌクレオチドの開始コドンが除去され得る。キメラポリヌクレオチドの翻訳は、除去された開始コドンの次のコドン又は下流の開始コドン若しくは代替開始コドンで始まり得る。非限定的な例では、下流開始コドン又は代替開始コドンで翻訳を開始させるため、キメラポリヌクレオチド配列の最初の３ヌクレオチドとして開始コドンＡＴＧ／ＡＵＧが除去される。開始コドンが除去されたキメラポリヌクレオチド配列は、下流開始コドン及び／又は代替開始コドンに対する少なくとも１つのマスキング剤をさらに含んでもよく、これにより翻訳の開始、キメラポリヌクレオチドの長さ及び／又はキメラポリヌクレオチドの構造が制御され、又はその制御が試みられる。
【０２１４】
終止コドン領域
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の前に少なくとも２つの終止コドンを含み得る。終止コドンはＴＧＡ、ＴＡＡ及びＴＡＧから選択され得る。一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは終止コドンＴＧＡと１つの追加的な終止コドンとを含む。さらなる実施形態において、この追加的な終止コドン
はＴＡＡであってもよい。別の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは３つの終止コドンを含む。
【０２１５】
シグナル配列
キメラポリヌクレオチドはまた、治療上関連性のある部位へのポリペプチドの輸送を促進する追加的な特徴もコードし得る。タンパク質輸送を助ける一つのかかる特徴は、シグナル配列である。本明細書で使用されるとき、「シグナル配列」又は「シグナルペプチド」は、それぞれコード領域又はコードされるポリペプチドの５’（又はＮ末端）に組み込まれる約９〜２００ヌクレオチド長（３〜６０アミノ酸長）のそれぞれポリヌクレオチド又はポリペプチドである。これらの配列の付加は、１つ以上の分泌経路を通じた小胞体へのコードポリペプチドの輸送をもたらす。一部のシグナルペプチドは、タンパク質の輸送後にシグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。
【０２１６】
本発明において利用し得るさらなるシグナル配列としては、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ．ｄｅ／又はｈｔｔｐ：／／ｐｒｏｌｉｎｅ．ｂｉｃ．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｓｐｄｂ／で見られるものなどのデータベースに教示されるものが挙げられる。米国特許第８，１２４，３７９号明細書；同第７，４１３，８７５号明細書及び同第７，３８５，０３４号明細書に記載されるものもまた本発明の範囲内にあり、各々の内容は全体として参照により本明細書に援用される。
【０２１７】
タンパク質開裂シグナル及び部位
一実施形態では、本発明のポリペプチドは、少なくとも１つのタンパク質開裂部位を含有する少なくとも１つのタンパク質開裂シグナルを含み得る。タンパク質開裂部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、Ｎ末端とＣ末端との間の任意のスペース、例えば、限定はされないが、Ｎ末端とＣ末端との中間、Ｎ末端と中間点との間、中間点とＣ末端との間、及びそれらの組み合わせに位置し得る。
【０２１８】
本発明のポリペプチドは、限定はされないが、プロタンパク質転換酵素（又はプロホルモン転換酵素）、トロンビン又は第Ｘａ因子タンパク質開裂シグナルを含み得る。プロタンパク質転換酵素は、プロホルモン転換酵素１／３（ＰＣ１／３）、ＰＣ２、フューリン、ＰＣ４、ＰＣ５／６、塩基性アミノ酸対開裂酵素４（ｐａｉｒｅｄ  ｂａｓｉｃ  ａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ  ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  ４：ＰＡＣＥ４）及びＰＣ７として知られる、酵母ケキシンに関連する７個の塩基性アミノ酸特異的サブチリシン様セリンプロテイナーゼと、サブチリシンケキシンアイソザイム１（ＳＫＩ−１）及びプロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ  ｋｅｘｉｎ  ９：ＰＣＳＫ９）と呼ばれる、非塩基性残基で開裂する他の２つのサブチラーゼとを含む９個のプロテイナーゼのファミリーである。
【０２１９】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドが少なくとも１つのコードタンパク質開裂シグナルを含有するように操作され得る。コードタンパク質開裂シグナルは、限定はされないが、開始コドンの前、開始コドンの後、コード領域の前、コード領域内、例えば、限定はされないが、コード領域の中間、開始コドンと中間点との間、中間点と終止コドンとの間、コード領域の後、終止コドンの前、２つの終止コドンの間、終止コドンの後及びそれらの組み合わせなどを含めた任意の領域に位置し得る。
【０２２０】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つのタンパク質開裂部位を含有する少なくとも１つのコードタンパク質開裂シグナルを含み得る。コードタンパク質開裂シグナルには、限定はされないが、プロタンパク質転換酵素（又はプロホルモン転換酵素）、トロンビン及び／又は第Ｘａ因子タンパク質開裂シグナルが含まれ得る
。
【０２２１】
非限定的な例として、米国特許第７，３７４，９３０号明細書及び米国特許出願公開第２００９０２２７６６０号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）は、フューリン開裂部位を使用して細胞のゴルジ体から発現産物におけるＧＬＰ−１のＮ末端メチオニンを切断する。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、そのポリペプチドがＧＬＰ−１でないことを条件として、少なくとも１つのタンパク質開裂シグナル及び／又は部位を含む。
【０２２２】
挿入及び置換
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドの５’ＵＴＲは、同じ塩基のヌクレオシドの少なくとも１つの領域及び／又はストリングを挿入することによって置換され得る。ヌクレオチドの領域及び／又はストリングは、限定はされないが、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７又は少なくとも８ヌクレオチドを含むことができ、ヌクレオチドは天然及び／又は非天然であり得る。非限定的な例として、ヌクレオチド基は、５〜８個のアデニン、シトシン、チミン、本明細書に開示される任意の他のヌクレオチドのストリング及び／又はそれらの組み合わせを含み得る。
【０２２３】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドの５’ＵＴＲは、限定はされないが、アデニン、シトシン、チミン、本明細書に開示される他のヌクレオチドのいずれか及び／又はそれらの組み合わせなど、２つの異なる塩基のヌクレオチドの少なくとも２つの領域及び／又はストリングを挿入することによって置換され得る。例えば、５’ＵＴＲは、５〜８個のアデニン塩基を挿入し、続いて５〜８個のシトシン塩基を挿入することによって置換され得る。別の例において、５’ＵＴＲは、５〜８個のシトシン塩基を挿入し、続いて５〜８個のアデニン塩基を挿入することによって置換され得る。
【０２２４】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ＲＮＡポリメラーゼによって認識され得る転写開始部位の下流に少なくとも１つの置換及び／又は挿入を含み得る。非限定的な例として、少なくとも１つの置換及び／又は挿入は、転写開始部位の直ちに下流（限定はされないが、＋１〜＋６など）の領域にある少なくとも１つの核酸を置換することによって転写開始部位の下流に生じ得る。転写開始部位の直ちに下流のヌクレオチド領域の変化は開始速度に影響を与え、見掛けのヌクレオチド三リン酸（ＮＴＰ）反応定数値を増加させ、及び初期転写中の転写複合体からの短い転写物の解離を増加させ得る（ブリエバ（Ｂｒｉｅｂａ）ら著、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、２００２年、第４１巻、ｐ．５１４４〜５１４９；本明細書において全体として参照により援用される）。少なくとも１つのヌクレオシドの修飾、置換及び／又は挿入は配列のサイレント突然変異を引き起こし得るか、又はアミノ酸配列の突然変異を引き起こし得る。
【０２２５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは転写開始部位の下流の少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個又は少なくとも１３個のグアニン塩基の置換を含み得る。
【０２２６】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは転写開始部位の直ちに下流の領域における少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個又は少なくとも６個のグアニン塩基の置換を含み得る。非限定的な例として、領域中のヌクレオチドがＧＧＧＡＧＡである場合、グアニン塩基は少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個又は少なくとも４個のアデニンヌクレオチドによって置換され得る。別の非限定的な例では、領域中のヌクレオチドがＧＧＧＡＧＡである場合、グアニン塩基は少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個又は少なくとも４個のシトシン塩基によ
って置換され得る。別の非限定的な例では、領域中のヌクレオチドがＧＧＧＡＧＡである場合、グアニン塩基は少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個又は少なくとも４個のチミン、及び／又は本明細書に記載される任意のヌクレオチドによって置換され得る。
【０２２７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは開始コドンの上流に少なくとも１つの置換及び／又は挿入を含み得る。明確にしておくと、当業者であれば、開始コドンがタンパク質コード領域の最初のコドンである一方、転写開始部位が転写の始まる部位であることは理解するであろう。キメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、ヌクレオチド塩基の少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個又は少なくとも８個の置換及び／又は挿入を含み得る。ヌクレオチド塩基は、開始コドンの上流の１つ、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ又は少なくとも５つの位置に挿入又は置換され得る。挿入及び／又は置換されるヌクレオチドは、同じ塩基（例えば、全てＡ又は全てＣ又は全てＴ又は全てＧ）、２つの異なる塩基（例えば、ＡとＣ、ＡとＴ、又はＣとＴ）、３つの異なる塩基（例えば、ＡとＣとＴ又はＡとＣとＴ）又は少なくとも４つの異なる塩基であり得る。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドにおけるコード領域の上流のグアニン塩基が、アデニン、シトシン、チミン、又は本明細書に記載される任意のヌクレオチドで置換されてもよい。別の非限定的な例では、キメラポリヌクレオチドにおけるグアニン塩基の置換は、転写開始部位の下流及び開始コドンの前の領域に１個のグアニン塩基が残るように設計されてもよい（エスベルト（Ｅｓｖｅｌｔ）ら著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年、第４７２巻、第７３４４号、ｐ．４９９〜５０３を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、転写開始部位の下流であるが開始コドンの上流である１つの位置に少なくとも５個のヌクレオチドが挿入されてもよく、且つそれらの少なくとも５個のヌクレオチドは同じ塩基タイプであってもよい。
【０２２８】
転写後制御モジュレータの組込み
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは少なくとも１つの転写後制御モジュレータを含み得る。これらの転写後制御モジュレータは、限定はされないが、小分子、化合物及び調節配列であってもよい。非限定的な例として、転写後制御は、ＰＴＣ・セラピューティクス・インコーポレイテッド（ＰＴＣ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．）（ニュージャージー州サウス・プレーンフィールド（Ｓｏｕｔｈ  Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ））によるそのＧＥＭＳ（商標）（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｌｕｅｓ：小分子による遺伝子発現モジュレーション）スクリーニング法を用いて同定される小分子を使用して達成されてもよい。
【０２２９】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの少なくとも１つの転写後制御モジュレータを含み得る。転写後制御モジュレータの非限定的な例は、国際公開第２０１３１５１６６６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）の段落［０００２９９］〜［０００３０４］に記載されている。
【０２３０】
ＩＩ．キメラポリヌクレオチドの設計、合成及び定量化
設計−コドン最適化
キメラポリヌクレオチド、その領域又はパート又はサブ領域は、コドンを最適化し得る。コドン最適化方法は当該技術分野において公知であり、いくつかの目標の１つ以上を達成するために有用であり得る。これらの目標には、適切な折り畳みが確実となるように標的及び宿主生物においてコドン頻度を一致させること、ｍＲＮＡ安定性を高め又は二次構造を低減するためＧＣ含量にバイアスをかけること、遺伝子構築又は発現を損ない得るタ
ンデムリピートコドン又は塩基ラン（ｂａｓｅ  ｒｕｎ）を最小限に抑えること、転写及び翻訳制御領域をカスタマイズすること、タンパク質輸送配列を挿入又は除去すること、コードタンパク質において翻訳後修飾部位を除去／付加すること（例えばグリコシル化部位）、タンパク質ドメインを付加、除去又はシャッフルすること、制限部位を挿入し又は欠失させること、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、タンパク質の様々なドメインの適切な折り畳みが可能となるように翻訳速度を調整すること、又はポリヌクレオチド内の問題のある二次構造を低減し又は消失させることが含まれる。コドン最適化ツール、アルゴリズム及びサービスは当該技術分野において公知であり、非限定的な例としては、ジーンアート（ＧｅｎｅＡｒｔ）（ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））、ＤＮＡ２．０（カリフォルニア州メンロパーク（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ  ＣＡ））のサービス及び／又は専売の方法が挙げられる。一実施形態では、最適化アルゴリズムを使用してＯＲＦ配列が最適化される。各アミノ酸のコドン選択肢を表１に示す。
【０２３１】
【表１】
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【０２３２】
本発明の一部の実施形態において有益であると考えられ得る特徴は、キメラポリヌクレオチドの領域によってコードされることができ、かかる領域は、ポリペプチドをコードする領域の上流（５’）又は下流（３’）であり得る。これらの領域は、タンパク質コード領域又はオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）のコドン最適化の前及び／又はその後にキメラポリヌクレオチドに組み込まれ得る。キメラポリヌクレオチドが５’及び３’フランキング領域を両方とも含有する必要はない。かかる特徴の例としては、限定はされな
いが、非翻訳領域（ＵＴＲ）、コザック配列、オリゴ（ｄＴ）配列、及び検出可能タグを挙げることができ、ＸｂａＩ認識を有し得る多重クローニング部位が含まれ得る。
【０２３３】
一部の実施形態では、フランキング領域として５’ＵＴＲ及び／又は３’ＵＴＲ領域が提供され得る。フランキング領域に複数の５’又は３’ＵＴＲが含まれてもよく、それらは同じ配列であっても、又は異なる配列であってもよい。フランキング領域の任意の一部分がコドン最適化されてもよく（どれもコドン最適化されない場合を含む）、いずれも、コドン最適化前及び／又はその後に、独立に１つ以上の異なる構造的又は化学修飾を含有し得る。
【０２３４】
キメラポリヌクレオチド成分は、最適化（必要に応じて）の後に、限定はされないがプラスミド、ウイルス、コスミド、及び人工染色体などのベクターに再構成され、転換される。例えば、最適化されたポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｃｕｌｅｏｔｉｄｅ）が化学的にコンピテントな大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母、アカパンカビ、トウモロコシ、ショウジョウバエ等に再構成及び転換されてもよく、ここで高コピープラスミド様構造又は染色体構造は、本明細書に記載される方法によって生じる。
【０２３５】
合成ポリヌクレオチド及びそれらの核酸類似体は、生化学的過程の研究及び試験において重要な役割を果たす。ポリヌクレオチド及び核酸の合成のため、酵素を利用した、及び化学ベースの様々な方法が開発されている。
【０２３６】
酵素的方法
インビトロ転写−酵素合成
ｃＤＮＡをコードするキメラポリヌクレオチドは、インビトロ転写（ＩＶＴ）システムを使用して転写され得る。このシステムは、典型的には、転写緩衝液、ヌクレオチド三リン酸（ＮＴＰ）、ＲＮアーゼ阻害薬及びポリメラーゼを含む。ＮＴＰはインハウスで製造されてもよく、供給業者から選択されてもよく、又は本明細書に記載されるとおり合成されてもよい。ＮＴＰは、限定はされないが、天然及び非天然（修飾）ＮＴＰを含めた、本明細書に記載されるものから選択され得る。ポリメラーゼは、限定はされないが、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３  ＲＮＡポリメラーゼ及び突然変異ポリメラーゼ、例えば、限定はされないが、キメラポリヌクレオチド（例えば、修飾核酸）を組み込むことが可能なポリメラーゼから選択され得る。
【０２３７】
合成に有用なＲＮＡポリメラーゼ
本発明のキメラポリヌクレオチドの合成には、幾つものＲＮＡポリメラーゼ又は変異体を使用し得る。
【０２３８】
ＲＮＡポリメラーゼは、ＲＮＡポリメラーゼ配列のアミノ酸を挿入し又は欠失させることによって修飾し得る。非限定的な例として、ＲＮＡポリメラーゼは、非修飾ＲＮＡポリメラーゼと比較して２’−修飾ヌクレオチド三リン酸を組み込む能力の向上を呈するように修飾し得る（国際公開第２００８０７８１８０号パンフレット及び米国特許第８，１０１，３８５号明細書を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０２３９】
変異体は、ＲＮＡポリメラーゼを進化させ、ＲＮＡポリメラーゼアミノ酸及び／又は核酸配列を最適化することにより、及び／又は当該技術分野において公知の他の方法を用いることにより得られ得る。非限定的な例として、エスベルト（Ｅｓｖｅｌｔ）らによって提示される持続的定向進化システムを使用してＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ変異体を進化させてもよく（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年、第４７２巻、第７３４４号、ｐ．４９９〜５０３；本明細書において全体として参照により援用される）、ここではＴ７
ＲＮＡポリメラーゼのクローンが、限定はされないが、スレオニンを置換する９３位の
リジン（Ｋ９３Ｔ）、Ｉ４Ｍ、Ａ７Ｔ、Ｅ６３Ｖ、Ｖ６４Ｄ、Ａ６５Ｅ、Ｄ６６Ｙ、Ｔ７６Ｎ、Ｃ１２５Ｒ、Ｓ１２８Ｒ、Ａ１３６Ｔ、Ｎ１６５Ｓ、Ｇ１７５Ｒ、Ｈ１７６Ｌ、Ｙ１７８Ｈ、Ｆ１８２Ｌ、Ｌ１９６Ｆ、Ｇ１９８Ｖ、Ｄ２０８Ｙ、Ｅ２２２Ｋ、Ｓ２２８Ａ、Ｑ２３９Ｒ、Ｔ２４３Ｎ、Ｇ２５９Ｄ、Ｍ２６７Ｉ、Ｇ２８０Ｃ、Ｈ３００Ｒ、Ｄ３５１Ａ、Ａ３５４Ｓ、Ｅ３５６Ｄ、Ｌ３６０Ｐ、Ａ３８３Ｖ、Ｙ３８５Ｃ、Ｄ３８８Ｙ、Ｓ３９７Ｒ、Ｍ４０１Ｔ、Ｎ４１０Ｓ、Ｋ４５０Ｒ、Ｐ４５１Ｔ、Ｇ４５２Ｖ、Ｅ４８４Ａ、Ｈ５２３Ｌ、Ｈ５２４Ｎ、Ｇ５４２Ｖ、Ｅ５６５Ｋ、Ｋ５７７Ｅ、Ｋ５７７Ｍ、Ｎ６０１Ｓ、Ｓ６８４Ｙ、Ｌ６９９Ｉ、Ｋ７１３Ｅ、Ｎ７４８Ｄ、Ｑ７５４Ｒ、Ｅ７７５Ｋ、Ａ８２７Ｖ、Ｄ８５１Ｎ又はＬ８６４Ｆなどの少なくとも１つの突然変異をコードし得る。別の非限定的な例として、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ変異体は、米国特許出願公開第２０１００１２００２４号明細書及び同第２００７０１１７１１２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの突然変異を少なくともコードし得る。ＲＮＡポリメラーゼの変異体としてはまた、限定はされないが、置換変異体、保存的アミノ酸置換、挿入変異体、欠失変異体及び／又は共有結合誘導体も挙げられる。
【０２４０】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、野生型又は変異ＲＮＡポリメラーゼによって認識されるように設計され得る。その際、キメラポリヌクレオチドは、野生型又は親キメラポリヌクレオチドから配列が変化した部位又は領域を含有するように修飾され得る。
【０２４１】
ポリヌクレオチド又は核酸合成反応は、ポリメラーゼを利用した酵素的方法によって実施され得る。ポリメラーゼは、ポリヌクレオチド又は核酸鎖中のヌクレオチド間におけるリン酸ジエステル結合の作成を触媒する。現在知られているＤＮＡポリメラーゼは、アミノ酸配列比較及び結晶構造解析に基づき種々のファミリーに分類することができる。それらのファミリーの中でも、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のクレノウ断片、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＤＮＡポリメラーゼＩ、サーマス・アクアチクス（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ａｑｕａｔｉｃｕｓ）（Ｔａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ、及びＴ７  ＲＮＡ及びＤＮＡポリメラーゼを含むＤＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ  Ｉ）又はＡポリメラーゼファミリーは最もよく研究されている。もう一つの大きいファミリーは、あらゆる真核生物複製ＤＮＡポリメラーゼ並びにファージＴ４及びＲＢ６９由来のポリメラーゼを含むＤＮＡポリメラーゼα（ｐｏｌ  α）又はＢポリメラーゼファミリーである。これらは類似した触媒機構を用いるが、これらのポリメラーゼファミリーは基質特異性、基質類似体組込み効率、プライマー伸長の程度及び速度、ＤＮＡ合成方法、エキソヌクレアーゼ活性、及び阻害薬に対する感受性の点で異なる。
【０２４２】
ＤＮＡポリメラーゼはまた、反応温度、ｐＨ、並びに鋳型及びプライマー濃度などの、それが必要とする最適反応条件に基づいても選択される。所望のＤＮＡ断片サイズ及び合成効率を達成するため、２つ以上のＤＮＡポリメラーゼの組み合わせが用いられることもある。例えばチェン（Ｃｈｅｎｇ）らは、ｐＨを高くし、グリセロール及びジメチルスルホキシドを加え、変性時間を減らし、伸長時間を増やし、及び３’から５’方向のエキソヌクレアーゼ活性を有する二次耐熱性ＤＮＡポリメラーゼを利用して、クローニングしたインサート及びヒトゲノムＤＮＡから長い標的を有効に増幅させている（チェン（Ｃｈｅｎｇ）ら著、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第９１巻、ｐ．５６９５〜５６９９、１９９４年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。生化学及び生物物理学研究用のＲＮＡの調製には、バクテリオファージＴ３、Ｔ７、及びＳＰ６由来のＲＮＡポリメラーゼが広く使用されている。ＲＮＡポリメラーゼ、キャッピング酵素、及びポリＡポリメラーゼは、同時係属中の国際公開第２０１４０２８４２９号パンフレット（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に開示されている。
【０２４３】
一実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドの合成に使用し得るＲ
ＮＡポリメラーゼは、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼである（ジュー（Ｚｈｕ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１３年を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼは、近年ジュー（Ｚｈｕ）らによって海洋シアノファージＳｙｎ５から特徴付けられたものであり、ここでジュー（Ｚｈｕ）らはまた、プロモーター配列も同定している（ジュー（Ｚｈｕ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１３年を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。ジュー（Ｚｈｕ）らは、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼがＴ７  ＲＮＡポリメラーゼと比較して広範な温度及び塩分にわたりＲＮＡ合成を触媒したことを見出した。加えて、プロモーターにおける開始ヌクレオチドの必要性は、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼと比較してＳｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼについてストリンジェンシーが低いことが見出されており、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼはＲＮＡ合成に有望となっている。
【０２４４】
一実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドの合成においてＳｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼが用いられ得る。非限定的な例として、Ｓｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼは、正確な３’末端を必要とするキメラポリヌクレオチドの合成において用いられ得る。
【０２４５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドの合成においてＳｙｎ５プロモーターが用いられ得る。非限定的な例として、Ｓｙｎ５プロモーターは、ジュー（Ｚｈｕ）ら（ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１３年、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）により記載されるとおり５’−ＡＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＧＴＡＡＧＧＧ−３’（配列番号３）であってもよい。
【０２４６】
一実施形態では、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野で公知の少なくとも１つの化学修飾を含むキメラポリヌクレオチドの合成においてＳｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼが用いられ得る（例えば、ジュー（Ｚｈｕ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１３年（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される擬ＵＴＰ及び５Ｍｅ−ＣＴＰの組込みを参照）。
【０２４７】
一実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、ジュー（Ｚｈｕ）ら（ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１３年、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）によって記載される修正及び改良された精製手順を用いて精製されたＳｙｎ５  ＲＮＡポリメラーゼを使用して合成され得る。
【０２４８】
遺伝子工学における種々のツールは、鋳型として働く標的遺伝子の酵素的な増幅に基づく。目的とする個々の遺伝子又は特定の領域の配列の調査及び他の研究ニーズでは、少量のポリヌクレオチド又は核酸試料から複数の標的遺伝子コピーを作成することが必要となる。かかる方法は本発明のキメラポリヌクレオチドの製造において適用され得る。
【０２４９】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、標的遺伝子の高速増幅並びにゲノムマッピング及びシーケンシングに幅広い適用性がある。ＤＮＡ合成の重要な要素には、鋳型としての標的ＤＮＡ分子、標的ＤＮＡ鎖の末端に相補的なプライマー、構成要素としてのデオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰ）、及びＤＮＡポリメラーゼが含まれる。変性、アニーリング及び伸長ステップを通じてＰＣＲが進行するに従い、新規に産生されたＤＮＡ分子が次の一巡の複製の鋳型として働くことができ、標的ＤＮＡの指数関数的増幅が達成される
。ＰＣＲは変性及びアニーリングのため加熱及び冷却サイクルが必要である。基本的なＰＣＲの変法には、非対称ＰＣＲ［イニス（Ｉｎｎｉｓ）ら著、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第８５巻、ｐ．９４３６〜９４４０、１９８８年］、インバースＰＣＲ［オフマン（Ｏｃｈｍａｎ）ら著、ジェネティクス（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、第１２０巻、第３号、ｐ．６２１〜６２３、１９８８年］、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）（フリーマン（Ｆｒｅｅｍａｎ）ら著、バイオテクニクス（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、第２６巻、第１号、ｐ．１１２〜２２、１２４〜５、１９９９年（これらの内容は、全体として参照により本明細書に援用される）など）が含まれる。ＲＴ−ＰＣＲでは、一本鎖ＲＮＡが所望の標的であり、初めに逆転写酵素によって二本鎖ＤＮＡに変換される。
【０２５０】
ＰＣＲを代替又は補完するものとして、種々の等温インビトロ核酸増幅技法が開発されている。例えば、ストランド置換増幅（ｓｔｒａｎｄ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＳＤＡ）は、制限酵素がニックを形成する能力に基づく（ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）ら著、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第８９巻、ｐ．３９２〜３９６、１９９２年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。アニールされたプライマー配列に制限酵素認識配列が挿入される。プライマーがＤＮＡポリメラーゼ及びｄＮＴＰによって伸長され、二重鎖を形成する。二重鎖の一方のストランドのみが制限酵素によって切断される。次には一本鎖の各鎖が鋳型として続く合成に利用可能となる。ＳＤＡは、ＰＣＲの複雑な温度制御サイクルを必要としない。
【０２５１】
転写媒介性増幅（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＴＭＡ）とも称される核酸配列ベースの増幅（ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＮＡＳＢＡ）もまた、ＤＮＡポリメラーゼ、逆転写酵素、ＲＮアーゼＨ、及びＴ７  ＲＮＡポリメラーゼの組み合わせを利用する等温増幅方法である。［コンプトン（Ｃｏｍｐｔｏｎ）著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第３５０巻、ｐ．９１〜９２、１９９１年］この内容は、全体として参照により本明細書に援用される。標的ＲＮＡが鋳型として用いられ、逆転写酵素がその相補ＤＮＡ鎖を合成する。ＲＮアーゼＨがＲＮＡ鋳型を加水分解することにより、ＲＮＡ標的に相補的である第１のＤＮＡ鎖に相補的なＤＮＡ鎖がＤＮＡポリメラーゼによって合成されるスペースが作り出され、ＤＮＡ二重鎖が形成される。Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼが、このＤＮＡ二重鎖の相補ＲＮＡ鎖を連続的に生成する。これらのＲＮＡ鎖が新しいＤＮＡ合成サイクルの鋳型として働き、標的遺伝子の増幅がもたらされる。
【０２５２】
ローリングサークル増幅（ｒｏｌｌｉｎｇ−ｃｉｒｃｌｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＲＣＡ）は一本鎖環状ポリヌクレオチドを増幅するもので、多数の等温酵素合成ラウンドが関わり、ここではΦ２９ＤＮＡポリメラーゼが、ポリヌクレオチド環の周りに連続的に進んでその配列を何度も繰り返して複製することによりプライマーを伸長する。従って、環状鋳型の線状コピーが実現する。次にプライマーがこの線状コピーとアニールされてもよく、その相補鎖が合成され得る。［リザルディ（Ｌｉｚａｒｄｉ）ら著、ネイチャー・ジェネティクス（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、第１９巻、ｐ．２２５〜２３２、１９９８年］この内容は、全体として参照により本明細書に援用される。一本鎖環状ＤＮＡはまた、ＲＮＡポリメラーゼの存在下でのＲＮＡ合成の鋳型としての役割も果たし得る。（ドーバンディーク（Ｄａｕｂｅｎｄｉｅｋ）ら著、米国化学会誌（ＪＡＣＳ）、第１１７巻、ｐ．７８１８〜７８１９、１９９５年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。インバースｃＤＮＡ末端迅速増幅（ｒａｐｉｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  ｅｎｄｓ：ＲＡＣＥ）ＲＣＡは、ポリドロス（Ｐｏｌｉｄｏｒｏｓ）らによって記載される。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）がｃＤＮＡに逆転写され、続いてＲＮアーゼＨ処理によってｃＤＮＡが分離される。次にｃＤＮＡをサークリガーゼ（ＣｉｒｃＬｉｇａｓｅ）によって環状化させると、環状ＤＮＡとなる。得られた環状ＤＮＡの増幅はＲＣＡで達成される。（ポリドロス（Ｐｏｌｉｄｏｒｏｓ）ら
著、バイオテクニクス（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、第４１巻、ｐ．３５〜４２、２００６年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０２５３】
前述の方法のいずれも、本発明のキメラポリヌクレオチドの１つ以上の領域の製造に利用され得る。
ポリヌクレオチド又は核酸をリガーゼによってアセンブルすることもまた、広く用いられている。ＤＮＡ又はＲＮＡリガーゼは、リン酸ジエステル結合の形成を用いてポリヌクレオチド鎖の５’及び３’末端の分子間ライゲーションを促進する。リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）は、２つの隣接するポリヌクレオチドプローブが標的遺伝子の一方の鎖とハイブリダイズし、リガーゼによって互いにカップリングするという原理に基づく有望な診断技法である。標的遺伝子が存在しない場合、又は標的遺伝子に一塩基多型（ＳＮＰ）などのミスマッチがある場合、プローブはリガーゼできない。（ウィーデマン（Ｗｉｅｄｍａｎｎ）ら著、ＰＣＲメソッズ・アンド・アプリケーション（ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）、第３巻、第４号、ｐ．ｓ５１〜ｓ６４、１９９４年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。ＬＣＲは、検出感度を向上させるため、又はそれがポリヌクレオチド及び核酸の合成に使用される場合には産物量を増加させるため、様々な増幅技法と組み合わされ得る。
【０２５４】
現在、いくつかの核酸用ライブラリ調製キットが市販されている。それらのキットは、少量の核酸試料を下流適用のためインデックス付きのライブラリに変換する酵素及び緩衝液を含む。例えば、ＤＮＡ断片が、末端調製、ライゲーション、サイズ選択、クリーンアップ、ＰＣＲ増幅及び最終クリーンアップのためニューイングランド・バイオラボ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）（登録商標）によるＮＥＢネクスト（ＮＥＢＮＥＸＴ）（登録商標）ウルトラ（ＵＬＴＲＡ）（商標）ＤＮＡライブラリ調製キットに置かれ得る。
【０２５５】
増幅技法の改良を図る継続的な開発が続けられている。例えば、アサダ（Ａｓａｄａ）らに対する米国特許第８，３６７，３２８号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）は、反応エンハンサーを利用してＤＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ合成反応の効率を増加させることを教示する。この反応エンハンサーは酸性物質又は酸性物質のカチオン錯体を含む。キタバヤシ（Ｋｉｔａｂａｙａｓｈｉ）らに対する米国特許第７．３８４，７３９号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）は、酵素的ＤＮＡ合成を促進するカルボン酸イオン供給物質を教示し、ここでカルボン酸イオン（ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  ｉｏｉｎ）供給物質は、シュウ酸、マロン酸、シュウ酸エステル、マロン酸エステル、マロン酸塩、及びマレイン酸エステルから選択される。ソベック（Ｓｏｂｅｋ）らに対する米国特許第７，３７８，２６２号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）は、ＤＮＡ増幅のフィデリティーを増加させるための酵素組成物を開示する。この組成物は、３’エキソヌクレアーゼ活性を有するがポリメラーゼ活性は有しない一つの酵素と、ポリメラーゼであるもう一つの酵素とを含む。これらの酵素は両方とも熱安定性であり、より低温で不活性であるように可逆的に修飾される。
【０２５６】
ゲッツ（Ｇｅｔｔｓ）らに対する米国特許第７，５５０，２６４号明細書は、オリゴデオキシヌクレオチドテイルをｃＤＮＡ分子の３’末端に取り付け、ＲＮＡポリメラーゼを使用してＲＮＡ転写を惹起することによりセンスＲＮＡ分子の複数の合成ラウンドが実施されることを教示する（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。ロハイエム（Ｒｏｈａｙｅｍ）に対する米国特許出願公開第２０１３／０１８３７１８号明細書は、一本鎖ＤＮＡ鋳型に対してＲＮＡポリメラーゼ活性を呈するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲＮＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ：ＲｄＲｐ）によるＲＮＡ合成を教示する（この内容は、全体として参照により本明細書に援用され
る）。ベナー（Ｂｅｎｎｅｒ）に対する米国特許第６，６１７，１０６号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に開示されるとおり、非標準ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドが、非標準ヌクレオチドを含む鋳型を鋳型のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドの混合物と接触させることによって酵素重合で合成され得る。
【０２５７】
固相化学合成
本発明のキメラポリヌクレオチドは全体が又は部分的に固相法を用いて製造され得る。
ポリヌクレオチド又は核酸の固相化学合成は自動化された方法であり、ここでは分子が固体支持体上に固定化され、反応物溶液中においてステップバイステップで合成される。不純物及び過剰な試薬は洗い流され、各ステップ後の精製は不要である。このプロセスの自動化は、コンピュータ制御による固相合成機に適している。固相合成は比較的大規模でのポリヌクレオチド又は核酸の迅速な産生を可能にし、一部のポリヌクレオチド又は核酸の商業的な利用可能性をもたらす。さらに、固相合成はポリヌクレオチド又は核酸配列における化学修飾の部位特異的な導入において有用である。固相合成は、天然核酸の修飾誘導体の設計に不可欠なツールである。
【０２５８】
自動化された固相合成において、鎖は３’から５’方向に合成される。ヌクレオシドの３’末端のヒドロキシル基は、化学的に切断可能な又は光切断可能なリンカーによって固体支持体に係留される。活性化したヌクレオシドモノマー、例えば２’−デオキシヌクレオシド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ及びＴ）、リボヌクレオシド（Ａ、Ｃ、Ｇ、及びＵ）、又は化学修飾ヌクレオシドが、支持体に結合したヌクレオシドに順次付加される。現在最も広く利用されているモノマーは、ヌクレオシド構成要素の３’−ホスホラミダイト（ｐｈｏｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）誘導体である。活性化モノマーの３’リン原子が、支持体に結合したヌクレオシドの５’酸素原子とカップリングし、亜リン酸トリエステルを形成する。副反応を防ぐため、５’ヒドロキシル基、３’リン原子上のヒドロキシル基、リボヌクレオシドモノマーにおける２’ヒドロキシル基、及びプリン又はピリミジン塩基上のアミノ基など、カップリング反応に関与しない全ての官能基が、保護基によって全てブロックされる。次のステップは、亜リン酸トリエステルの酸化によるリン酸トリエステル又はホスホトリエステルの形成を含み、ここでリン原子は五価である。次に成長鎖の末端にある５’ヒドロキシル基上の保護基が除去され、入ってくる活性化モノマー構成要素とのカップリング準備が整う。合成終了時、アンモニア又は水酸化アンモニウムなどの切断剤が付加されることにより全ての保護基が除去され、固体支持体からポリヌクレオチド鎖が遊離する。ポリヌクレオチド鎖の切断には光が当てられてもよい。次に高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は電気泳動法で産物がさらに精製され得る。
【０２５９】
固相合成においては、ポリヌクレオチド鎖はその３’ヒドロキシル基を介して固体支持体に共有結合的に結合する。固体支持体は、典型的には直径５０〜２００μｍの、樹脂とも称される不溶性の粒子である。グザエフ（Ｇｕｚａｅｖ）［グザエフ（Ｇｕｚａｅｖ）、「核酸化学カレント・プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、３．１．１〜３．１．６０、２０１３年］（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）による「ポリヌクレオチド合成用の固相支持体（Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｓｕｐｐｏｒｔｓ  ｆｏｒ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」でレビューされているとおり、現在、多くの異なる種類の樹脂が利用可能である。樹脂の最も一般的な材料としては、高度に架橋したポリスチレンビーズ及びコントロールド・ポア・グラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ：ＣＰＧ）ビーズが挙げられる。ビーズの表面は、リンカーがヌクレオシドを係留するアンカリング点として用いられ得るアミノ基又はアミノメチル基などの官能基を有するように処理され得る。ビーズは、カラム、マルチウェルプレート、マイクロアレイ又はマイクロチップとして実現され得る。カラムベースのフォーマットは、ポ
リヌクレオチド又は核酸の比較的大規模な合成が可能である。樹脂はカラム内のフィルタの間に保持されるため、全ての試薬及び溶媒が自由に通過することが可能である。マルチウェルプレート、マイクロアレイ、又はマイクロチップは、特に対費用効果の高い小規模合成用に設計される。単一のマイクロアレイチップで最大１００万個のポリヌクレオチドを産生することができる。しかしながら、マイクロチップベースの合成のエラー率は従来のカラムベースの方法より高い。［ボロフコフ（Ｂｏｒｏｖｋｏｖ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第３８巻、第１９号、ｐ．ｅ１８０、２０１０年］この内容は、全体として参照により本明細書に援用される。マルチウェルプレートは、異なる配列のポリヌクレオチド又は核酸の同時の並列合成を可能にする。［シンデラー（Ｓｉｎｄｅｌａｒ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第２３巻、ｐ．９８２〜９８７、１９９５年］この内容は、全体として参照により本明細書に援用される。固体支持体上へのロードは限られている。加えて、伸長が進むにつれ、固体支持体上の成長鎖の形態及びかさ高さが、成長鎖の末端基と反応しようとする入ってくるモノマーの妨げとなり得る。従って、成長鎖に加えることのできるモノマーの数もまた限られている。
【０２６０】
鎖をさらに伸長させるため、固体支持体にリンカーが取り付けられる。リンカーは、合成の最後で鎖が固体支持体から離れるときを除き、合成プロセスに使用されるあらゆる試薬に対して安定している。特定のヌクレオシドリンカー、即ち、Ａ、Ｃ、ｄＴ、Ｇ、又はＵを有する固体支持体を使用することにより、配列中の１番目のヌクレオチドとしてそれぞれＡ、Ｃ、Ｔ、Ｇ、又はＵを有するポリヌクレオチドを調製することができる。非ヌクレオシドリンカーを有する汎用的な固体支持体は、あらゆるポリヌクレオチド配列に使用することができる。（グザエフ（Ｇｕｚａｅｖ）らに対する米国特許第６，６５３，４６８号明細書、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。汎用支持体向けに様々な非ヌクレオシドリンカーが開発されており、その多くは２つの隣接ヒドロキシル基を有する。例えば、スクシニル基が、よく使われるリンカーである。
【０２６１】
本明細書で使用されるとき、リンカーは一群の原子、例えば１０〜１，０００個の原子を指し、限定はされないが、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどの原子又は基を含み得る。リンカーは、核酸塩基又は糖部分の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドに取り付けられ得る。リンカーは核酸ベースであっても、又は非ヌクレオシドであってもよい。リンカーは、核酸配列への組込みを妨害しない十分な長さであり得る。リンカーは、本明細書に記載されるとおり、多量体（例えば、２つ以上のキメラポリヌクレオチド分子の連結によるもの）又はコンジュゲートの形成、並びに治療用分子の投与又は標識の組込みなど、任意の有用な目的のために用いられ得る。リンカーに組み込むことのできる化学基の例としては、限定はされないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、又はヘテロシクリル（これらの各々は、任意選択で、本明細書に記載されるとおり置換されていてもよい）が挙げられる。リンカーの例としては、限定はされないが、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール類（例えば、エチレン又はプロピレングリコールモノマーユニット、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、又はテトラエチレングリコール）、及びデキストランポリマー及びそれらの誘導体が挙げられる。他の例としては、限定はされないが、還元剤又は光分解を用いて切断することのできるリンカー内の切断可能部分、例えば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）又はアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）などが挙げられる。選択的に切断可能な結合の非限定的な例としては、例えばトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、又は他の還元剤、及び／又は光分解を使用して切断し得るアミド結合、並びに例えば酸性又は塩基性加水分解によって切断し得るエステル結合が挙げられる）。
【０２６２】
カップリング反応による鎖の伸長に必要な、活性化モノマー及び成長鎖の官能基を除いては、副反応を回避するため、他の全ての官能基が保護される必要がある。保護及び脱保護の条件、及び適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基のケミストリーについては、例えば、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）ら著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第２版、ワイリー・アンド・サンズ（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、１９９１年（全体として参照により本明細書に援用される）を参照することができる。例えば、活性化ヌクレオシドホスホラミダイトモノマー上の５’ヒドロキシル基が４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）で保護されてもよく、及びリン原子上のヒドロキシル基が２−シアノエチルで保護されてもよい。Ａ、Ｃ、Ｇ塩基上の環外アミノ基がアシル基で保護されてもよい。
【０２６３】
固相合成システムにおいては、媒体の不均一性のため、活性化モノマーの反応性が重要である。大多数の固相合成がホスホラミダイトヌクレオシド（その機構は上記で考察される）を用いる。別の活性化モノマーの例は、ヌクレオシドＨ−ホスホン酸である。［アブラモバ（Ａｂｒａｍｏｖａ）著、モレキュールズ（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、第１８巻、ｐ．１０６３〜１０７５、２０１３年］。固相合成システムにおいて高収率を確実にするには、大過剰の試薬、例えばモノマー、酸化剤、及び脱保護剤が必要である。
【０２６４】
固相合成方法のさらなる改良に向けた科学調査研究が進められている。例えば、十分に確立された３’から５’への合成に代えて、スリバスタバ（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ）らに対する米国特許第８，３０９，７０７号明細書及び米国特許出願公開第２０１３／００７２６７０号明細書は、新規ホスホラミダイト及び新規ヌクレオシド誘導体を利用して合成ＲＮＡの３’末端での容易な修飾を可能にする５’から３’へのＲＮＡ合成を開示した。チャーチ（Ｃｈｕｒｃｈ）らに対するＰＣＴ出願の国際公開第２０１３１２３１２５号パンフレット（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）は、複数の部分配列からの標的核酸配列のアセンブルを記載し、ここでは部分配列を有する樹脂がエマルション液滴中に置かれる。部分配列は樹脂から切断され、エマルション液滴内でアセンブルする。固体支持体のコストを削減するため、ヒドロキノン−Ｏ、Ｏ’−ジ酢酸リンカー（Ｑ−リンカー）による再利用可能なＣＰＧ固体支持体が開発されている（ポン（Ｐｏｎ）ら著、ヌクレイック・アシッド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第２７巻、ｐ．１５３１〜１５３８、１９９９年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０２６５】
固相合成用の新規保護基もまた開発されている。ナガット（Ｎａｇａｔ）らは、２−シアノエトキシメチル（ＣＥＭ）を２’−ヒドロキシ保護基として使用することによって、候補前駆体マイクロＲＮＡの配列を有する１１０ｎｔ長ＲＮＡの合成に成功している。（シバ（Ｓｈｉｂａ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第３５巻、ｐ．３２８７〜３２９６、２００７年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。また、ＣＥＭを２’−Ｏ−保護基として、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）の配列を含む３３アミノ酸ペプチドをコードする１３０ｎｔのｍＲＮＡが合成されている。この人工１３０ｎｔ  ｍＲＮＡの生物学的活性は、無細胞タンパク質合成システム及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞におけるＧＬＰ−１の産生により示されている。（ナガタ（Ｎａｇａｔａ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第３８巻、第２１号、ｐ．７８４５〜７８５７、２０１０年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。固相合成モノマー用の新規保護基としては、限定はされないが、デリンジャー（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ）らに対する米国特許第８，３０９，７０６号明細書に開示される炭酸塩保護基、デリンジャー（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ）らに対する米国特許第８，２４２，２５８号明細書に開示されるオルトエステル型２’ヒドロキシル
保護基及びアシル炭酸塩型ヒドロキシル保護基、デリンジャー（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ）らに対する米国特許第８，２０２，９８３号明細書に開示される２’−ヒドロキシルチオ炭素保護基、デリンジャー（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ）らに対する米国特許第７，９９９，０８７号明細書に開示される２’−シリル含有チオ炭酸塩保護基、アルバラド（Ａｌｖａｒａｄｏ）に対する米国特許第７，６６７，０３３号明細書に開示されるアミノ保護基としての９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＳ）誘導体、スカリンジ（Ｓｃａｒｉｎｇｅ）らに対する米国特許第５，８８９，１３６号明細書に開示されるフッ化物不安定性５’シリル保護基、及びグリフィ（Ｇｒｉｆｆｅｙ）らに対する米国特許出願公開第２００８／０１１９６４５号明細書に開示されるピキシル保護基（これらの内容は、全体として参照により本明細書に援用される）が挙げられる。デバート（Ｄｅｂａｒｔ）らに対する米国特許出願公開第２０１１／０２７５７９３号明細書は、塩基によって除去することのできるリボースの２’位にあるヒオキシル（ｈｙｏｘｙｌ）の保護基を使用したＲＮＡ合成を教示する（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。新規固体支持体は、ムーディ（Ｍｏｏｄｙ）らに対する米国特許第７．４７６，７０９号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示される重合可能な単位に取り付けられた保護されたヒドロキシポリＣ２〜４アルキレンオキシ鎖を含むモノマーで作られたポリマーを含む。
【０２６６】
液相化学合成
モノマー構成要素の逐次付加によるキメラポリヌクレオチドの合成は液相で行われてもよい。モノマー間又は成長鎖の末端官能基と入ってくるモノマーとの間に共有結合が形成される。反応に関与しない官能基は一時的に保護されている必要がある。各モノマー構成要素の付加後、次のモノマー構成要素を付加する前に反応混合物が精製されなければならない。次のモノマー構成要素との反応を可能にするため、鎖の一方の端にある官能基が脱保護されなければならない。液相合成は労力及び時間がかかり、自動化することができない。これらの制約にも関わらず、液相合成は短いポリヌクレオチドの大規模調製においてなおも有用である。このシステムは均一であるため大過剰の試薬は不要であり、この点で対費用効果が高い。
【０２６７】
種々の合成方法の組み合わせ
上記で考察した合成方法には、各々その独自の利点及び限界がある。これらの方法を組み合わせて限界を解消する試みが行われている。かかる方法の組み合わせは、本発明の範囲内にある。
【０２６８】
２〜４ヌクレオチドの短いポリヌクレオチド鎖を液相で調製した後、続いて固相合成による伸長反応のため固体支持体に結合させ得る。ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ＭＰＥＧ）ビーズをモノマー構成要素の支持体として使用する高効率液相（ｈｉｇｈ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｌｉｑｕｉｄ  ｐｈａｓｅ：ＨＥＬＰ）合成が開発されている。ＭＰＥＧは塩化メチレン及びピリジン溶媒に可溶性であるが、ジエチルエーテル溶媒中では沈殿する。適切な溶媒を選択することにより、均一液相システムにおいてモノマー間又は成長鎖とＭＰＥＧに結合した入ってくるモノマーとの間のカップリング反応を行うことができる。次にジエチルエーテル溶媒で混合物を洗浄することにより、生成物を容易に沈殿させ精製し得る。［ボノラ（Ｂｏｎｏｒａ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第１８巻、ｐ．３１５５〜３１５９、１９９０年］この内容は、全体として参照により本明細書に援用される。アダモ（Ａｄａｍｏ）らに対する米国特許第８，３０４，５３２号明細書（この内容は全体として本明細書に援用される）は、少なくとも一部の試薬が固体に支持されている溶相オリゴヌクレオチド合成を教示する。
【０２６９】
酵素的ライゲーションと組み合わせた固相又は液相化学合成の使用は、化学合成単独で
は得ることのできない長鎖ポリヌクレオチドの効率的な作成方法を提供する。ムーア（Ｍｏｏｒｅ）及びシャープ（Ｓｈａｒｐ）は、化学合成によるＲＮＡ断片１０〜２０ｎｔ長の調製を記載し、これに部位特異的な修飾が導入されてもよく、断片をｃＤＮＡ架橋にアニールして、次にＴ４  ＤＮＡリガーゼで断片をアセンブルし得る。（ムーア（Ｍｏｏｒｅ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２５６巻、ｐ．９９２〜９９７、１９９２年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０２７０】
固相合成機は、ＰＣＲ及び他の増幅技法を実施する（ｐｒｅｆｏｒｍ）のに十分な高純度ポリヌクレオチド又は核酸を作製し得る。アジレント・テクノロジー（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、市販のマイクロアレイを開発している。ポリヌクレオチドがマイクロアレイ基板上で合成され、強塩基又は光によって切断され、続いてＰＣＲ増幅されることにより、ポリヌクレオチドのライブラリが作成され得る。［クリアリー（Ｃｌｅａｒｙ）ら著、ネイチャー・メソッズ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、第１巻、第３号、ｐ．２４１〜２４７、２００４年］この内容は、全体として参照により本明細書に援用される。
【０２７１】
小領域合成
本発明のキメラポリヌクレオチドの領域又はサブ領域はｓｉＲＮＡなどの小さいＲＮＡ分子を含むこともあり、従って同様に合成し得る。ｓｉＲＮＡの調製には、適切に保護されたリボヌクレオシドホスホラミダイトを使用する化学合成、インビトロ転写、ｓｉＲＮＡ発現ベクター、及びＰＣＲ発現カセットなど、いくつかの方法がある。シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）（登録商標）はｓｉＲＮＡ供給業者の一つであり、２’位がｔ−ブチルメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基で保護されたリボヌクレオシドホスホラミダイトモノマーを使用してそのｓｉＲＮＡを合成する。シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）（登録商標）のウルトラファストパラレル合成（Ｕｌｔｒａ  Ｆａｓｔ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＵＦＰＳ）及びウルトラファストパラレル脱保護（Ｕｌｔｒａ  Ｆａｓｔ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ：ＵＦＰＤ）で固相化学合成を行うことにより、高いカップリング効率及び高速の脱保護が実現される。最終的なｓｉＲＮＡ産物はＨＰＬＣ又はＰＡＧＥで精製され得る。かかる方法は、キメラポリヌクレオチドの領域又はサブ領域の合成に使用し得る。
【０２７２】
ベクター又はＰＣＲ生成ｓｉＲＮＡカセットからのインビトロ転写及び発現には、ｓｉＲＮＡを産生する適切な鋳型が必要である。市販のアンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）（登録商標）サイレンサー（Ｓｉｌｅｎｃｅｒ）（登録商標）ｓｉＲＮＡ構築キットはＤＮＡ鋳型のインビトロ転写によってｓｉＲＮＡを作製するもので、必要な酵素、緩衝液、プライマーを含む。かかる方法は、キメラポリヌクレオチドの領域又はサブ領域の合成に使用し得る。
【０２７３】
キメラポリヌクレオチド領域又はサブ領域のライゲーション
ライゲーションは、ポリヌクレオチド又は核酸断片をアセンブルしてより大きいコンストラクトにするために不可欠な手段である。ＤＮＡ断片をリガーゼ触媒反応によってつなぎ合わせることにより、種々の機能の組換えＤＮＡを作り出すことができる。１つが５’ホスホリル基を有し、もう１つが遊離３’ヒドロキシル基を有する２つのオリゴデオキシヌクレオチドが、ＤＮＡリガーゼの基質として働く。蛍光又は化学発光標識を有するオリゴデオキシヌクレオチド（ｏｌｉｇｏｄｅｘｏｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）もまた、ＤＮＡリガーゼ基質として働く。（マルティネリ（Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉ）ら著、クリニカル・ケミストリー（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第４２巻、ｐ．１４〜１８、１９９６年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。Ｔ４  ＲＮＡリガーゼなどのＲＮＡリガーゼは、２つの一本鎖オリゴリボヌクレオチド又はＲＮＡ断片の間におけるリン酸ジエステル結合の形成を触媒する。大型ＤＮＡコンストラクトのコピ
ーが、ポリヌクレオチド断片、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、及びＤＮＡリガーゼの組み合わせで合成されている。イグナトフ（Ｉｇｎａｔｏｖ）らに対する米国特許出願公開第２００９／０１７００９０号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）は、ＤＮＡポリメラーゼに加えてＤＮＡリガーゼを使用することによるＰＣＴの改良、特に長距離ＰＣＲ及び／又は低コピーＤＮＡ鋳型ＰＣＲ増幅（ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ）の収率の増進を開示している。
【０２７４】
リガーゼを他の酵素と共に使用することにより、所望のキメラポリヌクレオチド又は核酸分子を調製し、及びゲノム解析を実施し得る。例えば、ライゲーションの媒介による選択的ＰＣＲ増幅が、カトウ（Ｋａｔｏ）に対する欧州特許出願公開第０７３５１４４号明細書に開示されている。組織由来又は細胞由来のＲＮＡから逆転写された相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）又はＤＮＡが、ＩＩＳ型制限酵素によって断片に消化される（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。この断片に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＮＡリガーゼによってビオチン化アダプター配列が取り付けられる。次にこのビオチン標識ＤＮＡ断片が、下流分析のため、ストレプトアビジンコーティングを有するビーズに固定化される。
【０２７５】
ライゲーションスプリント又はライゲーションスプリントオリゴは、リガーゼ又はリガーゼ活性を有する別の酵素を使用して１つの核酸の両端をつなぎ合わせる（即ち分子内接合）か、又は２つの核酸の両端をつなぎ合わせる（即ち分子間接合）のためのアニーリング部位又はライゲーション鋳型を提供するために用いられるオリゴヌクレオチドである。ライゲーションスプリントは互いに隣接する末端を保持し、ライゲートされる５’−リン酸化末端と３’−ヒドロキシル化末端との間にライゲーション接合部を作り出す。
【０２７６】
核酸の５’−リン酸化末端と３’−ヒドロキシル末端とがライゲートされる場合に、それらの末端が隣接するように末端がライゲーションスプリントにアニールされるとき、限定はされないが、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼ、アンプリガーゼ（Ａｍｐｌｉｇａｓｅ）（登録商標）ＤＮＡリガーゼ（エピセンター（登録商標）テクノロジーズ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））、Ｔｔｈ  ＤＮＡリガーゼ、Ｔｆｌ  ＤＮＡリガーゼ、又はＴｓｃ  ＤＮＡリガーゼ（ポロカリア（Ｐｒｏｋａｒｉａ））などの酵素を使用することができる。ファルグイ（Ｆａｒｕｇｕｉ）に対する米国特許第６，３６８，８０１号明細書は、Ｔ４  ＲＮＡリガーゼが、ＲＮＡスプリントにハイブリダイズしたとき互いに隣接するＲＮＡ分子の末端を効率的にライゲートし得ることを開示している（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。従って、Ｔ４  ＲＮＡリガーゼは、ＲＮＡ又は修飾ＲＮＡを含むライゲーションスプリントオリゴでＤＮＡ末端をつなぎ合わせるのに好適なリガーゼである。ＲＮＡスプリントの例としては、ダール（Ｄａｈｌ）らに対する米国特許第８，１３７，９１１号明細書及び米国特許出願公開第２０１２／０１５６６７９号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に開示されるデュラスクライブ（ＤｕｒａＳｃｒｉｂｅ）（登録商標）Ｔ７転写キット（エピセンター（登録商標）テクノロジーズ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を使用して作られる２’−フッ素−ＣＴＰ（２’−Ｆ−ｄＣＴＰ）及び２’−フッ素−ＵＴＰ（２’−Ｆ−ｄＵＴＰ）を含有する修飾ＲＮＡが挙げられる。デュラスクライブ（ＤｕｒａＳｃｒｉｂｅ）（登録商標）Ｔ７転写キットから作製される修飾ＲＮＡは、ＲＮアーゼＡ消化に対して完全な耐性を有する。ＤＮＡスプリント及びＤＮＡリガーゼは、ショスタク（Ｓｚｏｓｔａｋ）らに対する米国特許第６，２５８，５５８号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に開示されるＲＮＡ−タンパク質融合物の作成に用いられ得る。
【０２７７】
線状ｓｓＤＮＡの分子内ライゲーションについて、クール（Ｋｏｏｌ）らに対する米国特許第７，９０６，４９０号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により
援用される）は、ＤＮＡ合成機で線状オリゴデオキシヌクレオチド断片を作り、続いてＴ４  ＤＮＡリガーゼ及び２つの３０ヌクレオチドのスプリントオリゴヌクレオチドでライゲートすることによる８３ヌクレオチド環の構築を教示している。線状センスプロモーター含有ｃＤＮＡの環状化（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）が、ダール（Ｄａｈｌ）らに対する米国特許出願公開第２０１２／０１５６６７９号明細書（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に開示されている。サーモファージ（ＴｈｅｒｍｏＰｈａｇｅ）（商標）ｓｓＤＮＡリガーゼ（プロカザイム（Ｐｒｏｋａｚｙｍｅ））は、サーマス・スコトデュクツス（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｓｃｏｔｏｄｕｃｔｕｓ）を感染させるファージＴＳ２１２６に由来するものであり、ＤＮＡ及びＲＮＡのＡＴＰ依存性分子内及び分子間ライゲーションを触媒する。
【０２７８】
ホスホラミダイトモノマーを使用する固相化学合成方法は短鎖のＤＮＡ分子の産生に限られている。長さが１５０塩基を超えると、ＤＮＡ産物の純度及び反応の収率が悪くなる。長いポリヌクレオチドを高収率で合成するには、化学合成と並行して酵素的ライゲーション方法を使用することが、より好都合である。例えば、ムーア（Ｍｏｏｒｅ）及びシャープ（Ｓｈａｒｐ）は、化学合成によるＲＮＡ断片１０〜２０ｎｔ長の調製を記載し、これに部位特異的な修飾が導入されてもよく、断片をｃＤＮＡスプリントにアニールして、次にＴ４  ＤＮＡリガーゼで断片をアセンブルし得る。（ムーア（Ｍｏｏｒｅ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２５６巻、ｐ．９９２〜９９７、１９９２年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。大型の合成ＲＮＡを作成するためのオリゴリボヌクレオチドとＴ４  ＲＮＡリガーゼ及びＤＮＡスプリント又はポリリボヌクレオチドとのライゲーション反応については、ベイン（Ｂａｉｎ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第２０巻、第１６号、ｐ．４３７２、１９９２年、シュタルク（Ｓｔａｒｋ）ら著、ＲＮＡ、第１２巻、ｐ．２０１４〜２０１９、２００６年、及びデラス（Ｄｅｒａｓ）らに対する米国特許出願公開第２００５／０１３０２０１号明細書（これらの内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載されている。固相方法で合成されたオリゴヌクレオチドには、多くの場合に酵素付加によって５’−キャップ及び３’−ポリＡテイルが付加される。非限定的な例として、イワセ（Ｉｗａｓｅ）ら（ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第２０巻、ｐ．１６４３〜１６４８、１９９２年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）により記載されるとおり、酵素的にライゲートされた３つの断片として合成キャップ付き４２ｍｅｒ  ｍＲＮＡが合成されている。６００個のオーバーラップ６０ｍｅｒポリヌクレオチドから１６．３キロベースのマウスミトコンドリアゲノムが作製されている。これらの方法は、所望の長さに達するまで、インビトロ組換えと増幅との間で繰り返される。（ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）ら著、ネイチャー・メソッズ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、第７巻、ｐ．９０１〜９０３、２０１０年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。１．０８メガベースのマイコプラズマ・ミコイデス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ）ＪＣＶＩ−ｓｙｎ１．０ゲノムのアセンブリもまた報告されている。ポリヌクレオチド合成機から化学的に作成されたポリヌクレオチド断片をアセンブルすることにより、１０８０ｂｐカセットが作製される。次にゲノムが酵母における形質転換及び相同組換えによって３段階でアセンブルされる。（ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第３２９巻、ｐ．５２〜５６、２０１０年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０２７９】
短いＤＮＡ断片を化学的リンカーでつなぎ合わせる研究が行われている。アジドとアルキンとの間の環化付加反応である「クリック」ケミストリー又は「クリック」ライゲーションが、穏やかな反応条件、高収率、及び無害な副産物などのその利点から、多くの関心を集めている。「クリック」ケミストリーについては、ンウェ（Ｎｗｅ）らにより、キャンサー・バイオセラピー・アンド・ラジオファーマシューティカルズ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｂ
ｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、第２４巻、第３号、ｐ．２８９〜３０２、２００９年（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）にレビューされている。クリックライゲーションによって最大３００塩基長のＤＮＡコンストラクトが作製されており、さらに長い配列が実現可能である。ＰＣＲデータで実証されるところによれば、環化付加反応によって断片間にトリアゾールリンカーが生じるにも関わらず、様々なＤＮＡポリメラーゼが、クリックライゲーションによって作られた合成ＤＮＡコンストラクトを増幅する能力を有する。合成ＤＮＡコンストラクトに対し、インビトロ転写及びローリングサークル増幅もまた実施することができる。最大１００ヌクレオチド長のヘアピンリボザイム及び環状ミニＤＮＡ二重鎖もまたクリックライゲーションで調製されている。（エルサゲー（Ｅｌ−Ｓａｇｈｅｅｒ）ら著、アカウンツ・オブ・ケミカル・リサーチ（Ａｃｃｏｕｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第４５巻、第８号、ｐ．１２５８〜１２６７、２０１２年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０２８０】
固体基板上で連続ライゲーションが実施され得る。例えば、ビオチンで末端が修飾された初期リンカーＤＮＡ分子が、ストレプトアビジンコーティングを有するビーズに取り付けられる。リンカーＤＮＡ分子の３’末端は入ってくるＤＮＡ断片の５’末端と相補的（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）である。ビーズは各ライゲーションステップの後に洗浄して収集され、最終的な線状コンストラクトはメガヌクレアーゼによって遊離させる。この方法は、遺伝子を最適化された順序及び向きで迅速且つ効率的にアセンブルすることを可能にする。（タキタ（Ｔａｋｉｔａ）著、ＤＮＡリサーチ（ＤＮＡ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第２０巻、第４号、ｐ．１〜１０、２０１３年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。固体支持体上で合成される標識ポリヌクレオチドについては、ソロベイチク（Ｓｏｌｏｖｅｉｃｈｉｋ）らに対する米国特許出願公開第２００１／００１４７５３号明細書及びビナヤク（Ｖｉｎａｙａｋ）らに対する米国特許出願公開第２００３／０１９１３０３号明細書（これらの内容は全体として参照により本明細書に援用される）に開示されている。
【０２８１】
修飾及びコンジュゲートされたキメラポリヌクレオチド
所望の機能又は特性を実現するため、鎖の合成中又は合成後にキメラポリヌクレオチド又は核酸に非天然修飾ヌクレオチドが導入されてもよい。修飾は、インターヌクレオチド系統、プリン又はピリミジン塩基、又は糖上であってもよい。修飾は、鎖の末端又は鎖における他のどこにでも；化学合成によるか、又はポリメラーゼ酵素によって導入され得る。例えば、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）はヌクレアーゼ耐性を有し、ＲＮＡとの強力なハイブリダイゼーションを提供する。２つのコドンにヘキシトール残基を有する短いメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）が構築されている（ラブリク（Ｌａｖｒｉｋ）ら著、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第４０巻、ｐ．１１７７７〜１１７８４、２００１年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。５’及び３’ＨＮＡ配列が隣接するホスホロチオエート中心配列を含むキメラＨＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドのアンチセンス効果もまた調べられている。（カン（Ｋａｎｇ）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第３２巻、第４号、ｐ．４４１１〜４４１９、２００４年、この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）。ＲＮＡ干渉、アンチセンス療法又は他の適用における６員環を含む修飾ヌクレオチドの調製及び使用が、ヘルデウィジン（Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ）らに対する米国特許出願公開第２００８／０２６１９０５号明細書、米国特許出願公開第２０１０／０００９８６５号明細書、及びＰＣＴ出願国際公開第９７／３００６４号パンフレットに開示されている。修飾核酸及びそれらの合成が、同時係属中のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号明細書（代理人整理番号Ｍ０９）（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成及び戦略が、ヴェルマ（Ｖｅｒｍａ）及びエクスタイン（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ）により、
アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第７６巻、ｐ．９９〜１３４、１９９８年（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）にレビューされている。
【０２８２】
酵素的又は化学的のいずれのライゲーション方法も、蛍光標識、液体、ナノ粒子、送達剤等の異なる機能ブロックとのキメラポリヌクレオチド又はそれらの領域のコンジュゲートに使用することができる。ポリヌクレオチドのコンジュゲート及び修飾ポリヌクレオチドは、グッドチャイルド（Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ）によりバイオコンジュゲート・ケミストリー（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第１巻、第３号、ｐ．１６５〜１８７、１９９０年（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）にレビューされている。ビナヤク（Ｖｉｎａｙａｋ）らに対する米国特許第６，８３５，８２７号明細書及び米国特許第６，５２５，１８３号明細書は、標識された固体支持体を使用した標識オリゴヌクレオチドの合成を教示している。
【０２８３】
定量化
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、エキソソームで又は１つ以上の体液から得られたときに定量化され得る。本明細書で使用されるとき、「体液」には、末梢血、血清、血漿、腹水、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、喀痰、唾液、骨髄、滑液、眼房水、羊水、耳垢、母乳、気管支肺胞洗浄液、精液、前立腺液、カウパー腺液又は尿道球腺液、汗、糞便物質、毛髪、涙、嚢胞液、胸水及び腹水、心膜液、リンパ液、糜粥、乳糜、胆汁、間質液、月経、膿、皮脂、嘔吐物、腟分泌物、粘膜分泌物、便汁、膵液、副鼻腔洗浄液、気管支肺吸引液、胚盤胞腔（ｂｌａｓｔｏｃｙｌ  ｃａｖｉｔｙ）液、及び臍帯血が含まれる。或いは、エキソソームは、肺、心臓、膵臓、胃、腸、膀胱、腎臓、卵巣、精巣、皮膚、結腸、乳房、前立腺、脳、食道、肝臓、及び胎盤からなる群から選択される器官から回収されてもよい。
【０２８４】
エキソソーム定量化方法では、対象から２ｍＬ以下の試料が採収され、サイズ排除クロマトグラフィー、密度勾配遠心法、分画遠心法、ナノ膜限外ろ過、免疫吸収捕捉（ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂｅｎｔ  ｃａｐｔｕｒｅ）、アフィニティー精製、マイクロ流体分離、又はそれらの組み合わせによってエキソソームが単離される。分析では、キメラポリヌクレオチドのレベル又は濃度は、投与されたコンストラクトの発現レベル、存在、非存在、トランケーション又は改変であり得る。そのレベルを１つ以上の臨床表現型又はヒト疾患バイオマーカーのアッセイと相関付けることが有利である。アッセイは、コンストラクト特異的プローブ、サイトメトリー、ｑＲＴ−ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、ＰＣＲ、フローサイトメトリー、電気泳動、質量分析、又はそれらの組み合わせを用いて実施され得る一方、エキソソームは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）方法などの免疫組織化学的方法を用いて単離され得る。エキソソームはまた、サイズ排除クロマトグラフィー、密度勾配遠心法、分画遠心法、ナノ膜限外ろ過、免疫吸収捕捉（ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂｅｎｔ  ｃａｐｔｕｒｅ）、アフィニティー精製、マイクロ流体分離、又はそれらの組み合わせによって単離されてもよい。
【０２８５】
これらの方法は、研究者が残っている又は送達されたキメラポリヌクレオチドのレベルをリアルタイムでモニタすることを可能にする。これが可能であるのは、本発明のキメラポリヌクレオチドが構造的又は化学的修飾に起因して内因性形態と異なるためである。
【０２８６】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、紫外・可視分光法（ＵＶ／Ｖｉｓ）などの方法を用いて定量化され得る。ＵＶ／Ｖｉｓ分光計の非限定的な例は、ナノドロップ（ＮＡＮＯＤＲＯＰ）（登録商標）分光計（サーモフィッシャー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、マサチューセッツ州ウォルサム（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））である。定量化されたキメラポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドが適切なサイズ
であり得るかどうかを決定し、及びキメラポリヌクレオチドの分解が起こっていないことを確認するため、分析され得る。キメラポリヌクレオチドの分解は、限定はされないが、アガロースゲル電気泳動、ＨＰＬＣベースの精製方法、例えば、限定はされないが、強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、及び疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、キャピラリー電気泳動法（ＣＥ）及びキャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）などの方法によって確認され得る。
【０２８７】
精製
キメラポリヌクレオチド精製には、限定はされないが、ポリヌクレオチドクリーンアップ、品質保証及び品質管理が含まれ得る。クリーンアップは、限定はされないが、アジェンコート（ＡＧＥＮＣＯＵＲＴ）（登録商標）ビーズ（ベックマン・コールター・ゲノミクス（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）、マサチューセッツ州ダンバーズ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ））、ポリＴビーズ、ＬＮＡ（商標）オリゴＴ捕捉プローブ（エキシコン（登録商標）インコーポレイテッド（ＥＸＩＱＯＮ（登録商標）Ｉｎｃ）、ベズベック（Ｖｅｄｂａｅｋ）、デンマーク）又はＨＰＬＣベースの精製方法、例えば、限定はされないが、強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、及び疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）などの当該技術分野において公知の方法によって実施され得る。用語「精製された」は、「精製キメラポリヌクレオチド」など、ポリヌクレオチドに関して使用されるとき、少なくとも１つの夾雑物から分離されたものを指す。本明細書で使用されるとき、「夾雑物」は、別の物質を不適当、不純又は劣等なものにする任意の物質である。従って、精製ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡ）は、それが天然で見られる形態又は状況と異なる形態又は状況か、或いはそれを治療又は精製方法に供する以前に存在していた形態又は状況と異なる形態又は状況で存在する。
【０２８８】
品質保証及び／又は品質管理チェックは、限定はされないが、ゲル電気泳動、ＵＶ吸光度、又は解析的ＨＰＬＣなどの方法を用いて行われ得る。
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、限定はされないが逆転写酵素ＰＣＲを含む方法によってシーケンシングされてもよい。
【０２８９】
ＩＩＩ．修飾
本明細書でポリヌクレオチド（キメラポリヌクレオチドなど、コードか非コードかに関わらず）において使用されるとき、用語「化学修飾」又は適宜「化学的に修飾された」は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）又はシチジン（Ｃ）リボヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド（ｄｅｏｘｙｒｉｂｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）に関するそれらの位置、パターン、パーセント又は集合の１つ以上の修飾を指す。概して、本明細書においては、これらの用語が天然に存在する５’末端ｍＲＮＡキャップ部分のリボヌクレオチド修飾を指すことは意図されない。
【０２９０】
ポリペプチドにおいて、用語「修飾」は、カノニカルな一組の２０種アミノ酸と比較したときの修飾を指す。
修飾は種々の個別的な修飾であり得る。一部の実施形態では、領域は、１つ、２つ、又はそれ以上の（任意選択で異なる）ヌクレオシド又はヌクレオチド修飾を含有し得る。一部の実施形態では、細胞に導入される修飾キメラポリヌクレオチドは、非修飾ポリヌクレオチドと比較したとき細胞における分解の低下を呈し得る。
【０２９１】
本発明において有用な修飾としては、限定されないが（ｂｕｔ  ａｒｅ  ｎｏｔ  ｌｉｍｔｅｄ  ｔｏ）、表２のものが挙げられる。この表中に示されるのは、修飾の記号、核酸塩基タイプ及び修飾が天然に存在するか否かである。
【０２９２】
【表２−１】
2016530294.tif 000003
【０２９３】
【表２−２】
2016530294.tif 000004
【０２９４】
【表２−３】
2016530294.tif 000005
【０２９５】
【表２−４】
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【０２９６】
【表２−５】
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【０２９７】
【表２−６】
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【０２９８】
【表２−７】
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【０２９９】
【表２−８】
2016530294.tif 000010
【０３００】
【表２−９】
2016530294.tif 000011
【０３０１】
【表２−１０】
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【０３０２】
【表２−１１】
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【０３０３】
【表２−１２】
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【０３０４】
【表２−１３】
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【０３０５】
【表２−１４】
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【０３０６】
【表２−１５】
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【０３０７】
【表２−１６】
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【０３０８】
【表２−１７】
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【０３０９】
【表２−１８】
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【０３１０】
【表２−１９】
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【０３１１】
【表２−２０】
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【０３１２】
【表２−２１】
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【０３１３】
【表２−２２】
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【０３１４】
本発明のキメラポリヌクレオチドにおいて有用であり得る他の修飾を表３に掲載する。
【０３１５】
【表３−１】
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【０３１６】
【表３−２】
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【０３１７】
【表３−３】
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【０３１８】
【表３−４】
2016530294.tif 000028
【０３１９】
キメラポリヌクレオチドは、ヌクレオシド間に任意の有用なリンカーを含み得る。かかるリンカーを、骨格修飾を含めて表４に示す。
【０３２０】
【表４】
2016530294.tif 000029
【０３２１】
キメラポリヌクレオチドは、糖、核酸塩基、又はインターヌクレオシド連結（例えば連結リン酸との／リン酸ジエステル連結との／リン酸ジエステル骨格との）などに任意の有用な修飾を含み得る。ピリミジン核酸塩基の１つ以上の原子は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているチオール、任意選択で置換されているアルキル（例えば、メチル又はエチル）、又はハロ（例えば、クロロ又はフルオロ）によって置き換えられ又は置換されてもよい。特定の実施形態では、修飾（例えば、１つ以上の修飾）は、糖及びインターヌクレオシド連結の各々に存在する。本発明に係る修飾は、リボ核酸（ＲＮＡ）からデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）への修飾、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコー
ル核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）又はそれらのハイブリッドであり得る）。さらなる修飾が本明細書に記載される。
【０３２２】
一部の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫応答を実質的に誘導しない。誘導される自然免疫応答の特徴（ｆｅａｔｕｅｓ）には、１）炎症誘発性サイトカインの発現の増加、２）細胞内ＰＲＲ（ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５等の活性化、及び／又は、３）タンパク質翻訳の終結又は低下が含まれる。
【０３２３】
特定の実施形態では、細胞に導入されるキメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｌｃｌｅｏｔｉｄｅ）を細胞内で分解することが望ましいとされ得る。例えば、タンパク質産生の正確なタイミングが所望される場合にキメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｌｃｌｅｏｔｉｄｅ）の分解が好ましいとされ得る。従って、一部の実施形態では、本発明は、分解ドメインを含有するキメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｌｃｌｅｏｔｉｄｅ）を提供し、分解ドメインは、細胞内で指向的な作用を受ける能力を有する。
【０３２４】
キメラポリヌクレオチドの領域のいずれも、本明細書に教示されるとおり、又は２０１２年１０月３日に出願された国際出願ＰＣＴ／２０１２／０５８５１９号明細書（代理人整理番号Ｍ９）及び２０１３年６月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／８３７２９７号明細書（代理人整理番号Ｍ３６）（これらの各々の内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示されるとおり化学的に修飾され得る。
【０３２５】
修飾キメラポリヌクレオチド分子
本発明はまた、キメラポリヌクレオチド分子の構成要素、例えば、修飾リボヌクレオシド、及び修飾リボヌクレオチドも含む。例えば、これらの構成要素は、本発明のキメラポリヌクレオチドの調製に有用であり得る。かかる構成要素は、２０１２年１０月３日に出願された国際出願ＰＣＴ／２０１２／０５８５１９号明細書（代理人整理番号Ｍ９）及び２０１３年６月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／８３７２９７号明細書（代理人整理番号Ｍ３６）（これらの各々の内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示される。
【０３２６】
糖の修飾
キメラポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ又はｍＲＮＡ、本明細書に記載されるとおり）に組み込まれ得る修飾ヌクレオシド及びヌクレオチド（例えば、構成要素分子）は、リボ核酸の糖において修飾することができる。例えば、２’ヒドロキシル基（ＯＨ）が幾つもの異なる置換基で修飾され又は置き換えられ得る。２’位における例示的置換としては、限定はされないが、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されているＣ１〜６アルキル；任意選択で置換されているＣ１〜６アルコキシ；任意選択で置換されているＣ６〜１０アリールオキシ；任意選択で置換されているＣ３〜８シクロアルキル；任意選択で置換されているＣ３〜８シクロアルコキシ；任意選択で置換されているＣ６〜１０アリールオキシ；任意選択で置換されているＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ、任意選択で置換されているＣ１〜１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、又は本明細書に記載される任意のもの）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ［式中、ＲはＨ又は任意選択で置換されているアルキルであり、及びｎは０〜２０（例えば、０〜４、０〜８、０〜１０、０〜１６、１〜４、１〜８、１〜１０、１〜１６、１〜２０、２〜４、２〜８、２〜１０、２〜１６、２〜２０、４〜８、４〜１０、４〜１６、及び４〜２０）の整数である］；２’−ヒドロキシルがＣ１〜６アルキレン又はＣ１〜６ヘテロアルキレン架橋によって同じリボース糖の４’−炭素に結合される「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（ここで例示的架橋には、メチレン、プロピレン、エーテル、又はアミノ架橋が含まれる）；本明細書に定義する、アミノアルキル；本明細書に定義する、アミノアルコキシ；本明細書に定義する、アミノ；及び本明細書に定義
する、アミノ酸が挙げられる。
【０３２７】
概して、ＲＮＡは糖基リボースを含み、これは酸素を有する５員環である。例示的で非限定的な修飾ヌクレオチドは、リボース中のこの酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、又はアルキレン、例えばメチレン又はエチレンによる）置換；二重結合の付加（例えば、それによりリボースがシクロペンテニル又はシクロヘキセニルで置換される）；リボースの環縮小（例えば、それによりシクロブタン又はオキセタンの４員環が形成される）；リボースの環拡大（例えば、それにより、追加的な炭素又はヘテロ原子を有する６員又は７員環であって、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、及びモルホリノなど、ホスホルアミデート骨格もまた有する環が形成される）；多環型（例えば、トリシクロ；及び「アンロックド」型、例えばグリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ−ＧＮＡ又はＳ−ＧＮＡ、ここでリボースはリン酸ジエステル結合に結合したグリコール単位によって置換される）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここでリボースはα−Ｌ−トレオフラノシル−（３’→２’）で置換される）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、ここでは２−アミノ−エチル−グリシン連結がリボース及びリン酸ジエステル骨格を置換する）を含む。糖基はまた、リボース中の対応する炭素と逆の立体化学的配置を有する１つ以上の炭素も含み得る。従って、キメラポリヌクレオチド分子は、糖として例えばアラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。かかる糖修飾は、２０１２年１０月３日に出願された国際出願ＰＣＴ／２０１２／０５８５１９号明細書（代理人整理番号Ｍ９）及び２０１３年６月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／８３７２９７号明細書（代理人整理番号Ｍ３６）（これらの各々の内容は、本明細書に全体として参照により援用される）に教示される。
【０３２８】
核酸塩基の修飾
本開示は修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドを提供する。本明細書に記載されるとき、「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントース又はリボース）又はその誘導体を有機塩基（例えば、プリン又はピリミジン）又はその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）との組み合わせで含有する化合物として定義される。本明細書に記載されるとき、「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドとして定義される。修飾ヌクレオチドは、本明細書に記載されるとおりの、任意の有用な方法によって合成され得る（例えば、化学的に、酵素的に、又は組換えによって合成され、それにより１つ以上の修飾された又は非天然ヌクレオシドが含められる）。キメラポリヌクレオチドは連結ヌクレオシドの１つ又は複数の領域を含み得る。かかる領域は可変の骨格連結を有し得る。この連結は標準的なリン酸エステル連結であってもよく、この場合、キメラポリヌクレオチドはヌクレオチドの領域を含み得る。
【０３２９】
修飾ヌクレオチド塩基対合は、標準的なアデノシン−チミン、アデノシン−ウラシル、又はグアノシン−シトシン塩基対のみならず、ヌクレオチド間及び／又は非標準若しくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチド間に形成される塩基対もまた包含し、ここでは水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの構成によって、非標準塩基と標準塩基との間又は２つの相補的な非標準塩基構造の間の水素結合が可能となる。かかる非標準塩基対合の一例は、修飾ヌクレオチドイノシンとアデニン、シトシン又はウラシルとの間の塩基対合である。
【０３３０】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは修飾核酸塩基を含み得る。ＲＮＡに見られる核酸塩基の例としては、限定はされないが、アデニン、グアニン、シトシン、及びウラシルが挙げられる。ＤＮＡに見られる核酸塩基の例としては、限定はされないが、アデニン、グアニン、シトシン、及びチミンが挙げられる。かかる修飾核酸塩基（天然に存在するものと天然に存在しないものとの区別を含む）は、２０１２年１０月３日に出願された国際出願ＰＣＴ／２０１２／０５８５１９号明細書（代理人整理番号Ｍ９）及び２０１３年６月
２０日に出願された米国仮特許出願第６１／８３７２９７号明細書（代理人整理番号Ｍ３６）（これらの各々の内容は、本明細書に全体として参照により援用される）に教示される。
【０３３１】
修飾糖、核酸塩基、及びインターヌクレオシド連結の組み合わせ
本発明のキメラポリヌクレオチドは、糖、核酸塩基、及び／又はインターヌクレオシド連結に対する修飾の組み合わせを含むことができる。これらの組み合わせには、本明細書に記載される任意の１つ以上の修飾が含まれ得る。
【０３３２】
修飾ヌクレオチド及び修飾ヌクレオチドの組み合わせの例が、以下の表５及び表６に提供される。修飾ヌクレオチドのこれらの組み合わせを使用して、本発明のキメラポリヌクレオチドを形成することができる。特に注記されない限り、修飾ヌクレオチドが本発明のキメラポリヌクレオチドの天然ヌクレオチドを完全に置換してもよい。非限定的な例として、天然ヌクレオチドウリジンが、本明細書に記載される修飾ヌクレオシドで置換されてもよい。別の非限定的な例では、天然ヌクレオチドウリジンが、本明細書に開示される修飾ヌクレオシドの少なくとも１つで部分的に（例えば、約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９９．９％）置換されてもよい。
【０３３３】
本発明のキメラポリヌクレオチドには、塩基／糖又はリンカーの任意の組み合わせが組み込まれてもよく、かかる修飾は、国際公開第２０１３０５２５２３号パンフレット（代理人整理番号Ｍ９）及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／７５１７７号明細書（代理人整理番号Ｍ３６）；２０１３年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／９１５，９１７号明細書（代理人整理番号Ｍ７１）；２０１３年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／９１５，９０７号明細書（代理人整理番号Ｍ７２）；２０１４年６月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／０１４，６６３号明細書（代理人整理番号Ｍ７９）（これらの各々の内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に教示される。
【０３３４】
【表５−１】
2016530294.tif 000030
【０３３５】
【表５−２】
2016530294.tif 000031
【０３３６】
【表６−１】
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【０３３７】
【表６−２】
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【０３３８】
【表６−３】
2016530294.tif 000034
【０３３９】
【表６−４】
2016530294.tif 000035
【０３４０】
【表６−５】
2016530294.tif 000036
【０３４１】
【表６−６】
2016530294.tif 000037
【０３４２】
本発明によれば、本発明のポリヌクレオチドは、表６の組み合わせ又は単一の修飾を含むように合成され得る。
単一の修飾が挙げられる場合、その挙げられているヌクレオシド又はヌクレオチドが、修飾されている当該のＡ、Ｕ、Ｇ又はＣヌクレオチド又はヌクレオシドの１００パーセントを表す。割合が挙げられる場合、それらは、存在するＡ、Ｕ、Ｇ、又はＣ三リン酸の総量のうちの当該の特定のＡ、Ｕ、Ｇ又はＣ核酸塩基三リン酸の割合を表す。例えば、組み合わせ：２５％５−アミノアリル−ＣＴＰ＋７５％ＣＴＰ／２５％５−メトキシ−ＵＴＰ＋７５％ＵＴＰは、シトシン三リン酸の２５％が５−アミノアリル−ＣＴＰである一方、シトシンの７５％がＣＴＰであり；他方でウラシルの２５％が５−メトキシＵＴＰである
一方、ウラシルの７５％がＵＴＰであるポリヌクレオチドを指す。修飾ＵＴＰが挙げられていない場合には、ポリヌクレオチドに見られるそれらのヌクレオチドの部位の１００％で、天然に存在するＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ及び／又はＣＴＰが用いられる。この例では、ＧＴＰ及びＡＴＰヌクレオチドは全て修飾されないままである。
【０３４３】
ＩＶ．医薬組成物
製剤化、投与、送達及び投薬
本発明は、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わせたキメラポリヌクレオチド組成物及び複合体を提供する。医薬組成物は、任意選択で、１つ以上の追加の活性物質、例えば治療上及び／又は予防上活性な物質を含み得る。本発明の医薬組成物は無菌及び／又はパイロジェンフリーであり得る。医薬品の製剤化及び／又は製造における一般論については、例えば、レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆
Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（全体として参照により本明細書に援用される）を参照し得る。
【０３４４】
一部の実施形態では、組成物はヒト、ヒト患者又は対象に投与される。本開示の目的上、語句「活性成分」は、概して、本明細書に記載されるとおり送達されるべきキメラポリヌクレオチドを指す。
【０３４５】
本明細書に提供される医薬組成物の説明は、主としてヒトへの投与に好適な医薬組成物を対象にしているが、当業者は、かかる組成物が概して任意の他の動物、例えば、非ヒト動物、例えば非ヒト哺乳動物への投与に好適であることを理解するであろう。ヒトへの投与に好適な医薬組成物を修飾して組成物を種々の動物への投与に好適なものにすることは十分に理解されており、通常の技術を有する獣医薬理学者は、例えあったとしても単に通常の実験によって、かかる修飾を設計及び／又は実施することができる。医薬組成物の投与が企図される対象としては、限定はされないが、ヒト及び／又は他の霊長類；哺乳動物、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／又はラットなどの商業的に関連性のある哺乳動物；及び／又はトリ、例えば、家禽、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、及び／又はシチメンチョウなどの商業的に関連性のあるトリが挙げられる。
【０３４６】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の技術分野で公知の又は今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を賦形剤及び／又は１つ以上の他の補助成分と結び付いた状態にするステップと、次に、必要である及び／又は望ましい場合には、製品を所望の単回投与又は頻回投与単位に分割し、成形し及び／又は包装するステップとを含む。
【０３４７】
本発明に係る医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は任意の追加の成分の相対量は、治療対象のアイデンティティ、サイズ、及び／又は状態に応じて異なり、さらには、組成物を投与する経路に応じて異なり得る。例として、組成物は、０．１％〜１００％、例えば、０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０３４８】
製剤化
本発明のキメラポリヌクレオチドは、１つ以上の賦形剤を使用して製剤化することにより、（１）安定性を増加させ；（２）細胞トランスフェクションを増加させ；（３）持続放出又は遅延放出（例えば、キメラポリヌクレオチドのデポー製剤からの）を可能にし；（４）体内分布を改変し（例えば、キメラポリヌクレオチドを特定の組織又は細胞型に標的化させる）；（５）インビボでのコードタンパク質の翻訳を増加させ；及び／又は（６
）インビボでのコードタンパク質の放出プロファイルを改変することができる。あらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体媒体、分散又は懸濁補助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤などの従来の賦形剤に加え、本発明の賦形剤としては、限定なしに、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、キメラポリヌクレオチドをトランスフェクトした細胞（例えば、対象への移植のため）、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣体及びそれらの組み合わせを挙げることができる。従って、本発明の製剤は１つ以上の賦形剤を、各々、一緒になってキメラポリヌクレオチドの安定性を増加させ、キメラポリヌクレオチドによる細胞トランスフェクションを増加させ、キメラポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の発現を増加させ、及び／又はキメラポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の放出プロファイルを改変する量で含むことができる。さらに、本発明のキメラポリヌクレオチドは、自己組織化核酸ナノ粒子を使用して製剤化されてもよい。
【０３４９】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の技術分野で公知の又は今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を賦形剤及び／又は１つ以上の他の補助成分と結び付けるステップを含む。
【０３５０】
本開示における医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、及び／又は複数の単一単位用量として調製され、包装され、及び／又は販売され得る。本明細書で使用されるとき、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別的な量を指す。活性成分の量は、対象に投与され得る活性成分の投薬量及び／又はかかる投薬量の好都合な割合、例えば、かかる投薬量の２分の１又は３分の１に略等しい。
【０３５１】
本開示における医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は任意の追加の成分の相対量は、治療下の対象のアイデンティティ、サイズ、及び／又は状態に応じて異なり、さらには、組成物を投与する経路に応じて異なり得る。例えば、組成物は０．１％〜９９％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。例として、組成物は０．１％〜１００％、例えば、０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０３５２】
一部の実施形態では、本明細書に記載される製剤は少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含有し得る。非限定的な例として、製剤は、１、２、３、４又は５つのキメラポリヌクレオチドを含有し得る。一実施形態では、製剤は、限定はされないが、ヒトタンパク質、獣医学用タンパク質、細菌タンパク質、生物学的タンパク質、抗体、免疫原性タンパク質、治療用ペプチド及びタンパク質、分泌タンパク質、原形質膜タンパク質、細胞質及び細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質及び／又は非ヒト疾患に関連するタンパク質などのカテゴリーから選択されるタンパク質をコードするキメラポリヌクレオチドを含有し得る。一実施形態では、製剤は、タンパク質をコードする少なくとも３つのキメラポリヌクレオチドを含有する。一実施形態では、製剤は、タンパク質をコードする少なくとも５つのキメラポリヌクレオチドを含有する。
【０３５３】
医薬製剤は薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含むことができ、本明細書で使用されるとき、賦形剤には、限定はされないが、所望される特定の投薬形態に好適なとおりのあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体媒体、分散又は懸濁補助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤などが含まれる。医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物の調製技法は当該技術分野において公知である（レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、Ａ．Ｒ．ジェンナーロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）著、リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、メリーランド州ボルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）、２００６年を参照；全体として参照により本明細書に援用される）。従来の賦形剤媒体の使用が本開示の範囲内であると考えられてもよく、但し、任意の従来の賦形剤媒体が任意の望ましくない生物学的効果を生じたり、又はその他、医薬組成物の任意の他の構成成分と有害な形で相互作用したりするなどによって物質又はその誘導体と適合しないこともあり得る場合は除外するものとする。
【０３５４】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の粒径を増加させ及び／又は低下させ得る。粒径を変えると、限定はされないが炎症などの生物学的反応を抑えることができ、又は哺乳動物に送達される修飾ｍＲＮＡの生物学的効果を増加させることができる。
【０３５５】
医薬組成物の製造で使用される薬学的に許容可能な賦形剤としては、限定はされないが、不活性希釈剤、表面活性剤及び／又は乳化剤、保存剤、緩衝剤、潤滑剤、及び／又は油が挙げられる。かかる賦形剤は任意選択で本発明の医薬製剤に含まれ得る。
【０３５６】
リピドイド
リピドイドの合成については広範に記載されており、これらの化合物を含有する製剤はキメラポリヌクレオチドの送達に特に適している（マーン（Ｍａｈｏｎ）ら著、バイオコンジュゲート・ケミストリー（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．）、２０１０年、第２１巻、ｐ．１４４８〜１４５４；シュレーダー（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ）ら著、ジャーナル・オブ・インターナル・メディシン（Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．）、２０１０年、第２６７巻、ｐ．９〜２１；アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００８年、第２６巻、ｐ．５６１〜５６９；ラブ（Ｌｏｖｅ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１０年、第１０７巻、ｐ．１８６４〜１８６９；ジークバルト（Ｓｉｅｇｗａｒｔ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ
Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１１年、第１０８巻、ｐ．１２９９６〜３００１を参照；これらは全て、全体として本明細書に援用される）。
【０３５７】
これらのリピドイドはげっ歯類及び非ヒト霊長類において二本鎖低分子干渉ＲＮＡ分子の有効な送達に用いられているが（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００８年、第２６巻、ｐ．５６１〜５６９；フランク−カーメネツキー（Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００８年、第１０５巻、ｐ．１１９１５〜１１９２０；アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００９年、第１７巻、ｐ．８７２〜８７９；ラブ（Ｌｏｖｅ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ
Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１０年、第１０７巻、ｐ．１８６４〜１８６９；ロイシュナー（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２０１１年、第２９巻、ｐ．１００５〜１０１０を参照；これらは全て、全体として本明細書に援用される）、本開示は、それらの製剤化及びキメラポリヌクレオチドの送達における使用を記載する。
【０３５８】
複合体、ミセル、リポソーム又は粒子は、これらのリピドイドを含有して調製することができ、従って、局所的及び／又は全身的投与経路によるリピドイド製剤の注射後にコードされたタンパク質の産生によって判断するとき、キメラポリヌクレオチドの有効な送達をもたらすことができる。キメラポリヌクレオチドのリピドイド複合体は、限定はされないが、静脈内、筋肉内、又は皮下経路を含めた様々な手段によって投与することができる。
【０３５９】
核酸のインビボ送達は、限定はされないが、製剤組成、粒子ＰＥＧ化の性質、負荷の程度、ポリヌクレオチド対脂質比、及び限定はされないが粒径などの生物物理学的パラメータを含め、多くのパラメータによって影響を受け得る（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００９年、第１７巻、ｐ．８７２〜８７９；本明細書において全体として参照により援用される）。例として、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）脂質のアンカー鎖長の僅かな変化が、インビボ有効性に大きい効果をもたらし得る。限定はされないが、ペンタ［３−（１−ラウリルアミノプロピオニル）］−トリエチレンテトラミンヒドロクロリド（ＴＥＴＡ−５ＬＡＰ；別名９８Ｎ１２−５、ムルガイア（Ｍｕｒｕｇａｉａｈ）ら著、アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第４０１巻、ｐ．６１、２０１０年を参照；本明細書において全体として参照により援用される）、Ｃ１２−２００（誘導体及び変異体を含む）、及びＭＤ１を含め、種々のリピドイドを含む製剤が、インビボ活性に関して試験され得る。
【０３６０】
本明細書において「９８Ｎ１２−５」と称されるリピドイドが、アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００９年、第１７巻、ｐ．８７２〜８７９によって開示され、全体として参照により援用される。
【０３６１】
本明細書において「Ｃ１２−２００」と称されるリピドイドが、ラブ（Ｌｏｖｅ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１０年、第１０７巻、ｐ．１８６４〜１８６９及びリュー（Ｌｉｕ）及びファン（Ｈｕａｎｇ）著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、２０１０年、ｐ．６６９〜６７０（これらは両方とも、本明細書に全体として参照により援用される）によって開示される。リピドイド製剤は、キメラポリヌクレオチドに加えて、３つ、或いは４つ又はそれ以上の構成成分を含む粒子を含み得る。例として、特定のリピドイドを含む製剤としては、限定はされないが９８Ｎ１２−５が挙げられ、これは４２％リピドイド、４８％コレステロール及び１０％ＰＥＧ（Ｃ１４アルキル鎖長）を含有し得る。別の例として、特定のリピドイドを含む製剤としては、限定はされないがＣ１２−２００が挙げられ、これは５０％リピドイド、１０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｃｈｏｌｉｎｅ）、３８．５％コレステロール、及び１．５％ＰＥＧ−ＤＭＧを含有し得る。
【０３６２】
一実施形態では、全身静脈内投与用にリピドイドと共に製剤化されたキメラポリヌクレオチドは、肝臓を標的にし得る。例えば、キメラポリヌクレオチドを使用し、且つ約７．５対１の総脂質対キメラポリヌクレオチドの最終重量比で４２％９８Ｎ１２−５、４８％コレステロール、及び１０％ＰＥＧ−脂質の脂質モル組成、及びＰＥＧ脂質上にＣ１４アルキル鎖長を含み、平均粒径が約５０〜６０ｎｍの、最終的な最適化された静脈内製剤は、肝臓に９０％より高い製剤の分布をもたらし得る。（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００９年、第１７巻、ｐ．８７２〜８７９を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。別の例において、Ｃ１２−２００（米国仮特許出願第６１／１７５，７７０号明細書及び国際公開第２０１０１２９７０９号パンフレットを参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）リピドイドを使用した静脈内製剤は、５０／１０／３８．５／１．５のモル比のＣ１２−２００／ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｃｈｏｌｉｎｅ）／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧを有し、重量比が７対１の総脂質対キメラポリヌクレオチド、及び平均粒径が８０ｎｍであってもよく、キメラポリヌクレオチドを肝細胞に送達するのに有効であり得る（ラブ（Ｌｏｖｅ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１０年、第１０７巻、ｐ．１８６４〜１８６９を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。別の実施形態では、インビボでキメラポリヌクレオチド
を肝細胞に有効に送達するため、ＭＤ１リピドイド含有製剤が用いられ得る。
【０３６３】
筋肉内又は皮下経路用に最適化されたリピドイド製剤の特徴は、標的細胞型及び製剤が細胞外マトリックスを通じて血流中へと拡散する能力に応じて著しく異なり得る。有効な肝細胞送達には、内皮窓のサイズに起因して１５０ｎｍ未満の粒径が望ましいこともあるが（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００９年、第１７巻、ｐ．８７２〜８７９を参照、本明細書において全体として参照により援用される）、リピドイド製剤化キメラポリヌクレオチドを使用した、限定はされないが、内皮細胞、骨髄性細胞、及び筋細胞を含めた他の細胞型への製剤の送達は、同様にサイズが限られていないこともある。
【０３６４】
リピドイド製剤を使用した骨髄性細胞及び内皮などの他の非肝細胞へのインビボｓｉＲＮＡ送達が報告されている（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００８年、第２６巻、ｐ．５６１〜５６９；ロイシュナー（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２０１１年、第２９巻、ｐ．１００５〜１０１０；チョー（Ｃｈｏ）ら著、アドバンスド・ファンクショナル・マテリアルズ（Ａｄｖ．Ｆｕｎｃｔ．Ｍａｔｅｒ．）、２００９年、第１９巻、ｐ．３１１２〜３１１８、第８回国際ジュダ・フォークマン会議（８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｕｄａｈ  Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ）、マサチューセッツ州ケンブリッジ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、２０１０年１０月８〜９日を参照；これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）。単球などの骨髄性細胞への有効な送達、リピドイド製剤は同様の構成成分モル比を有し得る。種々の比のリピドイド及び限定はされないが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｃｈｏｌｉｎｅ）、コレステロール及びＰＥＧ−ＤＭＧを含めた他の構成成分を使用することにより、キメラポリヌクレオチドの製剤が、限定はされないが、肝細胞、骨髄性細胞、筋細胞等を含めた種々の細胞型への送達用に最適化され得る。例えば、構成成分モル比としては、限定はされないが、５０％Ｃ１２−２００、１０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｃｈｏｌｉｎｅ）、３８．５％コレステロール、及び％１．５  ＰＥＧ−ＤＭＧが挙げられ得る（ロイシュナー（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ）、２０１１年、第２９巻、ｐ．１００５〜１０１０を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。リピドイド製剤を使用した皮下送達又は筋肉内送達のいずれかによる細胞（限定はされないが、脂肪細胞及び筋細胞など）への核酸の局所的送達は、全身送達に望ましい全ての製剤構成成分を必要としないこともあり、従ってリピドイド及びキメラポリヌクレオチドのみを含み得る。
【０３６５】
リピドイドはキメラポリヌクレオチドによる細胞トランスフェクションを増加させる能力；及び／又はコードされるタンパク質の翻訳を増加させる能力を有し得るため、種々のリピドイドの組み合わせを使用してキメラポリヌクレオチドの誘導によるタンパク質産生の有効性を改善し得る（ホワイトヘッド（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．）、２０１１年、第１９巻、ｐ．１６８８〜１６９４を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０３６６】
リポソーム、リポプレックス、及び脂質ナノ粒子
本発明のキメラポリヌクレオチドは、１つ以上のリポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子を使用して製剤化することができる。一実施形態では、キメラポリヌクレオチドの医薬組成物はリポソームを含む。リポソームは人工的に調製された小胞であり、主として脂質二重層で構成され得るとともに、栄養素及び医薬製剤を投与するための送達媒体として使用され得る。リポソームは、限定はされないが、多層小胞（ＭＬＶ）（これは直
径数百ナノメートルであってもよく、狭い水性区画によって分離された一連の同心二重層を含有し得る）、小型単細胞小胞（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＳＵＶ）（これは直径５０ｎｍ未満であり得る）、及び大型単層小胞（ＬＵＶ）（これは直径５０〜５００ｎｍであり得る）など、様々なサイズであり得る。リポソーム設計には、リポソームと非健常組織の結合を向上させるため、又は限定はされないがエンドサイトーシスなどのイベントを活性化するため、限定はされないがオプソニン又はリガンドが含まれ得る。リポソームは、医薬製剤の送達を向上させるため、低ｐＨ又は高ｐＨを含み得る。
【０３６７】
リポソームの形成は、限定はされないが、封入される医薬製剤及びリポソーム成分、脂質小胞を分散させる媒体の性質、封入物質の有効濃度及びその潜在的毒性、小胞の適用中及び／又は送達中に関与する任意のさらなるプロセス、意図される適用に対する小胞の最適粒径、多分散性及び貯蔵寿命、並びに安全で効率的なリポソーム製品のバッチ間再現性及び大量生産の可能性などの物理化学的特性に依存し得る。
【０３６８】
非限定的な例として、合成膜小胞などのリポソームは、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３８号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３７号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３６号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３５号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３４号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７７６３３号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１８３３７５号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１８３３７３号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１８３３７２号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法、機器及び装置によって調製され得る。
【０３６９】
一実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、限定なしに、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、マリーナ・バイオテック（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）（ワシントン州ボセル（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））のＤｉＬａ２リポソーム、１，２−ジリノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、及びＭＣ３（米国特許出願公開第２０１００３２４１２０号明細書；本明細書において全体として参照により援用される）及び限定はされないが、ヤンセン・バイオテック・インコーポレイテッド（Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）（ペンシルベニア州ホーシャム（Ｈｏｒｓｈａｍ，ＰＡ））のドキシル（ＤＯＸＩＬ）（登録商標）など、小分子薬物を送達し得るリポソームから形成されるものなどのリポソームを含み得る。
【０３７０】
一実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、限定なしに、以前記載され、且つオリゴヌクレオチドのインビトロ及びインビボ送達に好適であることが示されている安定化プラスミド−脂質粒子（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｐｌａｓｍｉｄ−ｌｉｐｉｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅ：ＳＰＬＰ）又は安定化核酸脂質粒子（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅ：ＳＮＡＬＰ）の合成から形成されるものなどのリポソームを含み得る（ホイーラー（Ｗｈｅｅｌｅｒ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、１９９９年、第６巻、ｐ．２７１〜２８１；チャン（Ｚｈａｎｇ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、１９９９年、第６巻、ｐ．１４３８〜１４４７；ジェフズ（Ｊｅｆｆｓ）ら著、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．）、２００５年、第２２巻、ｐ．３６２〜３７２；モリシー（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００５年、第２巻、ｐ．１００２〜１００７；チンマーマン（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ）ら著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２００６年、第４４１巻、ｐ．１１１〜１１４；ヘイエス（Ｈｅｙｅｓ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリ
ース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．）、２００５年、第１０７巻、ｐ．２７６〜２８７；センプル（Ｓｅｍｐｌｅ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．）、２０１０年、第２８巻、ｐ．１７２〜１７６；ジャッジ（Ｊｕｄｇｅ）ら著、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．）、２００９年、第１１９巻、ｐ．６６１〜６７３；デフージュロールズ・ハン（ｄｅ  Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ）著、ヒューマン・ジーン・セラピー（Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．）、２００８年、第１９巻、ｐ．１２５〜１３２；米国特許出願公開第２０１３０１２２１０４号明細書を参照；これらは全て、全体として本明細書に援用される）。ホイーラー（Ｗｈｅｅｌｅｒ）らによる当初の製造方法はデタージェント透析方法であったが、これは後にジェフズ（Ｊｅｆｆｓ）らによって改良されており、自発的小胞形成方法と称される。リポソーム製剤は、キメラポリヌクレオチドに加えて３〜４つの脂質構成成分で構成される。例として、リポソームは、限定はされないが、ジェフズ（Ｊｅｆｆｓ）らにより記載されるとおり、５５％コレステロール、２０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｃｈｏｌｉｎｅ）（ＤＳＰＣ）、１０％ＰＥＧ−Ｓ−ＤＳＧ、及び１５％１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）を含有し得る。別の例として、ある種のリポソーム製剤は、限定はされないが、４８％コレステロール、２０％ＤＳＰＣ、２％ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ、及び３０％カチオン性脂質を含有してもよく、ここでカチオン性脂質は、ヘイエス（Ｈｅｙｅｓ）らにより記載されるとおり、１，２−ジステアリル（ｄｉｓｔｅａｒｌｏｘｙ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、又は１，２−ジリノレニルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）であり得る。
【０３７１】
一部の実施形態では、リポソーム製剤は、約２５．０％コレステロール〜約４０．０％コレステロール、約３０．０％コレステロール〜約４５．０％コレステロール、約３５．０％コレステロール〜約５０．０％コレステロール及び／又は約４８．５％コレステロール〜約６０％コレステロールを含み得る。好ましい実施形態において、製剤は、２８．５％、３１．５％、３３．５％、３６．５％、３７．０％、３８．５％、３９．０％及び４３．５％からなる群から選択される割合のコレステロールを含み得る。一部の実施形態では、製剤は、約５．０％〜約１０．０％ＤＳＰＣ及び／又は約７．０％〜約１５．０％ＤＳＰＣを含み得る。
【０３７２】
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つの免疫原又は任意の他の目的ポリペプチドをコードし得るキメラポリヌクレオチドを送達するように形成され得るリポソームを含み得る。キメラポリヌクレオチドはリポソームに封入されてもよく、及び／又はキメラポリヌクレオチドは水性コア中に含まれ、次には水性コアがリポソームに封入されてもよい（国際公開第２０１２０３１０４６号パンフレット、国際公開第２０１２０３１０４３号パンフレット、国際公開第２０１２０３０９０１号パンフレット及び国際公開第２０１２００６３７８号パンフレット並びに米国特許出願公開第２０１３０１８９３５１号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１９５９６９号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０２０２６８４号明細書を参照；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０３７３】
別の実施形態では、リポソームは標的化送達用に製剤化されてもよい。非限定的な例として、リポソームは肝臓への標的化送達用に製剤化されてもよい。標的化送達に使用されるリポソームとしては、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１９５９６７号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるリポソーム及びそれに記載されるリポソームの作製方法を挙げることができる。
【０３７４】
別の実施形態では、免疫原をコードし得るキメラポリヌクレオチドがカチオン性水中油
型エマルションに製剤化されてもよく、ここでエマルション粒子は、油コアと、キメラポリヌクレオチドと相互作用して分子をエマルション粒子にアンカリングし得るカチオン性脂質とを含む（国際公開第２０１２００６３８０号パンフレットを参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０３７５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、中に親水性相が分散している連続疎水性相を含む油中水型エマルションに製剤化されてもよい。非限定的な例として、エマルションは国際公開第２０１０８７７９１号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作られ得る。
【０３７６】
別の実施形態では、脂質製剤は、少なくとも、トランスフェクションを増進させ得る脂質であるカチオン性脂質と、脂質部分に連結した親水性頭部基を含有する少なくとも（ａ
ｌｅａｓｔ）１つの脂質とを含み得る（国際公開第２０１１０７６８０７号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１１０２００５８２号明細書；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。別の実施形態では、免疫原をコードするキメラポリヌクレオチドが、官能化された脂質二重層の間に架橋を有し得る脂質小胞に製剤化されてもよい（米国特許出願公開第２０１２０１７７７２４号明細書を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０３７７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｌｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）は、国際公開第２０１３０８６５２６号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのリポソーム（ｌｉｐｓｏｍｅ）に製剤化されてもよい。キメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１３０８６５２６号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり、逆ｐＨ勾配及び／又は最適化内部緩衝液組成物を使用してリポソームに封入されてもよい。
【０３７８】
一実施形態では、医薬組成物は、限定はされないが、ＤｉＬａ２リポソーム（マリーナ・バイオテック（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ワシントン州ボセル（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、スマーティクルズ（ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ）（登録商標）（マリーナ・バイオテック（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ワシントン州ボセル（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）ベースのリポソーム（例えば、卵巣癌のためのｓｉＲＮＡ送達（ランデン（Ｌａｎｄｅｎ）ら著、キャンサー・バイオロジー・アンド・セラピー（Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ
＆  Ｔｈｅｒａｐｙ）、２００６年、第５巻、第１２号、ｐ．１７０８〜１７１３）；本明細書において全体として参照により援用される）及びヒアルロナンコーティングリポソーム（クワイエット・セラピューティクス（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、イスラエル）などのリポソームに製剤化されてもよい。
【０３７９】
一実施形態では、カチオン性脂質は、米国特許出願公開第２０１３００９０３７２号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの低分子量カチオン性脂質であり得る。
【０３８０】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、官能化された脂質二重層の間に架橋を有し得る脂質小胞に製剤化されてもよい。
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、カチオン性脂質を含むリポソームに製剤化されてもよい。リポソームは、国際公開第２０１３００６８２５号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり、１：１〜２０：１のカチオン性脂質中窒素原子とＲＮＡ中リン酸（ｐｈｏｐｈａｔｅ）とのモル比（Ｎ：Ｐ比）を有し得る。別の実施形態では、リポソームは２０：１より大きい又は１：１より小さいＮ：Ｐ比を有し得る。
【０３８１】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは脂質−ポリカチオン複合体に製剤化されてもよい。脂質−ポリカチオン複合体の形成は、当該技術分野において公知の及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１７８７０２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法によって達成され得る。非限定的な例として、ポリカチオンには、カチオン性ペプチド又はポリペプチド、例えば、限定はされないが、ポリリジン、ポリオルニチン及び／又はポリアルギニン及び国際公開第２０１２０１３３２６号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１３０１４２８１８号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照によりに援用される）に記載されるカチオン性ペプチドが含まれ得る。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、コレステロール又はジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）などの中性脂質をさらに含み得る脂質−ポリカチオン複合体に製剤化されてもよい。
【０３８２】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドはアミノアルコールリピドイドに製剤化されてもよい。本発明において使用し得るアミノアルコールリピドイドは、米国特許第８，４５０，２９８号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって調製され得る。
【０３８３】
リポソーム製剤は、限定はされないが、カチオン性脂質構成成分の選択、カチオン性脂質飽和度、ＰＥＧ化の性質、全構成成分の比及びサイズなどの生物物理学的パラメータによって影響を受け得る。センプル（Ｓｅｍｐｌｅ）らによる一例では（センプル（Ｓｅｍｐｌｅ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．）、２０１０年、第２８巻、ｐ．１７２〜１７６；本明細書において全体として参照により援用される）、リポソーム製剤は５７．１％カチオン性脂質、７．１％ジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％コレステロール、及び１．４％ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡで構成された。別の例として、カチオン性脂質の組成を変更すると、ｓｉＲＮＡを様々な抗原提示細胞へとより有効に送達することができた（バシャ（Ｂａｓｈａ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１１年、第１９巻、ｐ．２１８６〜２２００；本明細書において全体として参照により援用される）。一部の実施形態では、リポソーム製剤は、約３５〜約４５％カチオン性脂質、約４０％〜約５０％カチオン性脂質、約５０％〜約６０％カチオン性脂質及び／又は約５５％〜約６５％カチオン性脂質を含み得る。一部の実施形態では、リポソーム中の脂質とｍＲＮＡとの比は約５：１〜約２０：１、約１０：１〜約２５：１、約１５：１〜約３０：１及び／又は少なくとも３０：１であり得る。
【０３８４】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤中のＰＥＧの比率を増加又は低下させてもよく、及び／又はＰＥＧ脂質の炭素鎖長をＣ１４からＣ１８に修飾してＬＮＰ製剤の薬物動態及び／又は体内分布を改変してもよい。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、ＤＳＰＣ及びコレステロールと比較して、約０．５％〜約３．０％、約１．０％〜約３．５％、約１．５％〜約４．０％、約２．０％〜約４．５％、約２．５％〜約５．０％及び／又は約３．０％〜約６．０％の脂質モル比のＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを含有し得る。別の実施形態では、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧがＰＥＧ脂質、例えば、限定はされないが、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＭＧ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール）及び／又はＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）などで置き換えられ得る。カチオン性脂質は、限定はされないが、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、Ｃ１２−２００及びＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡなどの、当該技術分野において公知の任意の脂質から選択され得る。
【０３８５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１２１７０９３０号パン
フレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０３８６】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドを含む製剤は、少なくとも１つの脂質を含み得るナノ粒子である。脂質は、限定はされないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ化脂質及びアミノアルコール脂質から選択され得る。別の態様では、脂質は、限定はされないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ及びアミノアルコール脂質などのカチオン性脂質であってもよい。アミノアルコールカチオン性脂質は、米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載され、及び／又はそれに記載される方法によって作製される脂質であり得る。非限定的な例として、カチオン性脂質は、２−アミノ−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ，２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号明細書の化合物１）；２−アミノ−３−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号明細書の化合物２）；２−アミノ−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−［（オクチルオキシ）メチル］プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号明細書の化合物３）；及び２−（ジメチルアミノ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号明細書の化合物４）；又はこれらの任意の薬学的に許容可能な塩又は立体異性体であり得る。
【０３８７】
一実施形態では、カチオン性脂質は、限定はされないが、国際公開第２０１２０４０１８４号パンフレット、国際公開第２０１１１５３１２０号パンフレット、国際公開第２０１１１４９７３３号パンフレット、国際公開第２０１１０９０９６５号パンフレット、国際公開第２０１１０４３９１３号パンフレット、国際公開第２０１１０２２４６０号パンフレット、国際公開第２０１２０６１２５９号パンフレット、国際公開第２０１２０５４３６５号パンフレット、国際公開第２０１２０４４６３８号パンフレット、国際公開第２０１００８０７２４号パンフレット、国際公開第２０１０２１８６５号パンフレット、国際公開第２００８１０３２７６号パンフレット、国際公開第２０１３０８６３７３号パンフレット及び国際公開第２０１３０８６３５４号パンフレット、米国特許第７，８９３，３０２号明細書、同第７，４０４，９６９号明細書、同第８，２８３，３３３号明細書、及び同第８，４６６，１２２号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００３６１１５号明細書、米国特許出願公開第２０１２０２０２８７１号明細書、米国特許出願公開第２０１３００６４８９４号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１２９７８５号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１５０６２５号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７８５４１号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０２２５８３６号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるカチオン性脂質から選択され得る。別の実施形態では、カチオン性脂質は、限定はされないが、国際公開第２０１２０４０１８４号パンフレット、国際公開第２０１１１５３１２０号パンフレット、国際公開第２０１１１４９７３３号パンフレット、国際公開第２０１１０９０９６５号パンフレット、国際公開第２０１１０４３９１３号パンフレット、国際公開第２０１１０２２４６０号パンフレット、国際公開第２０１２０６１２５９号パンフレット、国際公開第２０１２０５４３６５号パンフレット、国際公開第２０１２０４４６３８号パンフレット及び国際公開第２０１３１１６１２６号パンフレット又は米国特許出願公開第
２０１３０１７８５４１号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０２２５８３６号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される式Ａから選択され得る。さらに別の実施形態では、カチオン性脂質は、限定はされないが、国際公開第２００８１０３２７６号パンフレットの式ＣＬＩ〜ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，８９３，３０２号明細書の式ＣＬＩ〜ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，４０４，９６９号明細書の式ＣＬＩ〜ＣＬＸＸＸＸＩＩ及び米国特許出願公開第２０１０００３６１１５号明細書の式Ｉ〜ＶＩ、米国特許出願公開第２０１３０１２３３３８号明細書の式Ｉ（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）から選択され得る。非限定的な例として、カチオン性脂質は、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０，２３−ジエン−１０−アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ（ｄｉｍｅｍｙｌｈｅｘａｃｏｓａ）−１７，２０−ジエン−９−アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ５Ｎ−ジメチルペンタコサ−ｌ  ６、１９−ジエン−８−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルドコサ−１３，１６−ジエン−５−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘニコサ−１２，１５−ジエン−４−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−１４，１７−ジエン−６−アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルテトラコサ−１５，１８−ジエン−７−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−１０−アミン、（１５Ζ，１８Ζ）−Ν，Ν−ジメチルテトラコサ−１５，１８−ジエン−５−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−１４，１７−ジエン−４−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ（ｄｉｍｅｉｈｙｌｏｃｔａｃｏｓａ）−１９，２２−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−８−アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７，２０−ジエン−７−アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６，１９−ジエン−６−アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２，２５−ジエン−１０−アミン、（２１Ｚ，２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリアコンタ−２１，２４−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ（ｄｉｍｅｔｙｌｈｅｐｔａｃｏｓ）−１８−エン−１０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７−エン−９−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ−１９，２２−ジエン−７−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサン−１０−アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルノナコサ−２０，２３−ジエン−ｌ０−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−ｌ−ノニリコサ−１１，１４−ジエン−ｌ−イル］ピロリジン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−２０−エン−ｌ  ０−アミン、（１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエプタコサ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｅｐｔａｃｏｓ）−１５−エン−ｌ  ０−アミン、（１４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１４−エン−ｌ０−アミン、（��７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１７−エン−ｌ０−アミン、（２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリトリアコンタ−２４−エン−ｌ０−アミン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０−エン−ｌ  ０−アミン、（２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２−エン−ｌ０−アミン、（１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６−エン−８−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘニコサ−１２，１５−ジエン−１−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−ｌ３，１６−ジエン−ｌ−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｌ−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］エプタデカン（ｅｐｔａｄｅｃａｎ）−８−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−ヘキシルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナデカン−１０−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２１−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘニコサン−ｌ０−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（ｌＲ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル（ｐｅｎｔｙｌｃｙｃＩｏｐｒｏｐｙｌ）］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン−８−アミン、Ν，Ν−ジメチル−［（ｌＲ，２Ｓ）−２−ウンデシルシクロプロピル（ｕｎｄｅｃｙ
Ｉｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ）］テトラデカン−５−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−｛７−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘプチル｝ドデカン−１−アミン、１−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−ヘプチルシクロプロピル］−Ν，Ν−ジメチルオクタデカン−９−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−デシルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタデカン−６−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｌ−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ペンタデカン−８−アミン、Ｒ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、Ｓ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−［（５Ｚ）−オクタ−５−エン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（ヘプチルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−（ノニルオキシ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン；（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（ペンチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ）−３−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ν，Ν−ジメチル（ｄｉｍｅｔｈｙ１）−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−ｌ３，１６−ジエン−ｌ−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−１３，１６−ジエン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イ��オキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｈ（１−メトイルオクチル（ｍｅｔｏｙｌｏ  ｃｔｙｌ））オキシ］−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−１−［（３，７−ジメチルオクチル）オキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（オクチルオキシ）−３−（｛８−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−｛［８−（２−オクチルシクロプロピル（ｏｃ１ｙｌｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ））オクチル］オキシ｝−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン及び（１ｌＥ，２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−ｌ１，２０，２−トリエン−１０−アミン又はこれらの薬学的に許容可能な塩若しくは立体異性体から選択され得る。
【０３８８】
一実施形態では、脂質は、国際公開第２０１２１７０８８９号パンフレット（本明細書
において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、切断可能な脂質であり得る。
【０３８９】
別の実施形態では、脂質は、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３００６４８９４号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）の式（Ｉ）などの、カチオン性脂質であり得る。
【０３９０】
一実施形態では、カチオン性脂質は、当該技術分野において公知の方法及び／又は国際公開第２０１２０４０１８４号パンフレット、国際公開第２０１１１５３１２０号パンフレット、国際公開第２０１１１４９７３３号パンフレット、国際公開第２０１１０９０９６５号パンフレット、国際公開第２０１１０４３９１３号パンフレット、国際公開第２０１１０２２４６０号パンフレット、国際公開第２０１２０６１２５９号パンフレット、国際公開第２０１２０５４３６５号パンフレット、国際公開第２０１２０４４６３８号パンフレット、国際公開第２０１００８０７２４号パンフレット、国際公開第２０１０２１８６５号パンフレット、国際公開第２０１３０８６３７３号パンフレット及び国際公開第２０１３０８６３５４号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法によって合成され得る。
【０３９１】
別の実施形態では、カチオン性脂質はトリアルキルカチオン性脂質であってもよい。トリアルキルカチオン性脂質の非限定的な例並びにトリアルキルカチオン性脂質の作製及び使用方法は、国際公開第２０１３１２６８０３号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０３９２】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドのＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを３％脂質モル比で含有し得る。別の実施形態では、ＬＮＰ製剤キメラポリヌクレオチドは、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを１．５％脂質モル比で含有し得る。
【０３９３】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドの医薬組成物は、国際公開第２０１２０９９７５５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるＰＥＧ化脂質の少なくとも１つを含み得る。
【０３９４】
一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ｐｈｏｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００）を含有し得る。一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００と当該技術分野において公知のカチオン性脂質と少なくとも１つ他の構成成分とを含有し得る。別の実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００と当該技術分野において公知のカチオン性脂質とＤＳＰＣとコレステロールとを含有し得る。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ
２０００とＤＬｉｎ−ＤＭＡとＤＳＰＣとコレステロールとを含有し得る。別の非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００とＤＬｉｎ−ＤＭＡとＤＳＰＣとコレステロールとを２：４０：１０：４８のモル比で含有し得る（例えば、ギール（Ｇｅａｌｌ）ら著、「自己増幅ＲＮＡワクチンの非ウイルス性送達（Ｎｏｎｖｉｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｅｌｆ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ＲＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ）」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２０１２年、ＰＭＩＤ：２２９０８２９４を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０３９５】
一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、国際公開第２０１１１２７２５５号パンフレット又は国際公開第２００８１０３２７６号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって製剤化されてもよい。非限定的な例として、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０
１１１２７２５５号パンフレット及び／又は国際公開第２００８１０３２７６号パンフレット（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのＬＮＰ製剤に封入されてもよい。
【０３９６】
一実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１２０２０７８４５号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの非経口経路によって送達されるナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０３９７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１３０１５６８４５号明細書又は国際公開第２０１３０９３６４８号パンフレット又は国際公開第２０１２０２４５２６号パンフレット（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製される脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０３９８】
本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１６４４００号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるシステム及び／又は方法によって無菌環境で作製され得る。
【０３９９】
一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、米国特許第８，４９２，３５９号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される核酸−脂質粒子などのナノ粒子に製剤化されてもよい。非限定的な例として、脂質粒子は、１つ以上の活性薬剤又は治療剤；粒子中に存在する総脂質の約５０ｍｏｌ％〜約８５ｍｏｌ％を構成する１つ以上のカチオン性脂質；粒子中に存在する総脂質の約１３ｍｏｌ％〜約４９．５ｍｏｌ％を構成する１つ以上の非カチオン性脂質；及び粒子中に存在する総脂質の約０．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％を構成する粒子の凝集を阻害する１つ以上のコンジュゲート脂質を含み得る。ナノ粒子中の核酸は、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドであってもよく、及び／又は当該技術分野において公知である。
【０４００】
一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、国際公開第２０１１１２７２５５号パンフレット又は国際公開第２００８１０３２７６号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって製剤化されてもよい。非限定的な例として、本明細書に記載される修飾ＲＮＡが、国際公開第２０１１１２７２５５号パンフレット及び／又は国際公開第２００８１０３２７６号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのＬＮＰ製剤に封入されてもよい。
【０４０１】
一実施形態では、本明細書に記載されるＬＮＰ製剤はポリカチオン組成物を含み得る。非限定的な例として、ポリカチオン組成物は、米国特許出願公開第２００５０２２２０６４号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）の式１〜６０から選択され得る。別の実施形態では、ポリカチオン組成物を含むＬＮＰ製剤は、本明細書に記載される修飾ＲＮＡのインビボ及び／又はインビトロ送達に用いられ得る。
【０４０２】
一実施形態では、本明細書に記載されるＬＮＰ製剤は透過性エンハンサー分子をさらに含み得る。非限定的な透過性エンハンサー分子は、米国特許出願公開第２００５０２２２０６４号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０４０３】
一実施形態では、医薬組成物は、限定はされないが、ＤｉＬａ２リポソーム（マリーナ・バイオテック（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ワシントン州ボセル（Ｂｏｔｈｅｌ
ｌ，ＷＡ））、スマーティクルズ（ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ）（登録商標）（マリーナ・バイオテック（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ワシントン州ボセル（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）ベースのリポソーム（例えば、卵巣癌のためのｓｉＲＮＡ送達（ランデン（Ｌａｎｄｅｎ）ら著、キャンサー・バイオロジー・アンド・セラピー（Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ
＆  Ｔｈｅｒａｐｙ）、２００６年、第５巻、第１２号、ｐ．１７０８〜１７１３）；本明細書において全体として参照により援用される）及びヒアルロナンコーティングリポソーム（クワイエット・セラピューティクス（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、イスラエル）などのリポソームに製剤化されてもよい。
【０４０４】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１２０６０２９３号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの凍結乾燥ゲル相リポソーム組成物に製剤化されてもよい。
【０４０５】
ナノ粒子製剤はリン酸コンジュゲートを含み得る。リン酸コンジュゲートはインビボ循環時間を増加させ及び／又はナノ粒子の標的化送達を増加させ得る。本発明で使用されるリン酸コンジュゲートは、国際公開第２０１３０３３４３８号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１３０１９６９４８号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。非限定的な例として、リン酸コンジュゲートは、国際公開第２０１３０３３４３８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される式のいずれか一つの化合物を含み得る。
【０４０６】
ナノ粒子製剤はポリマーコンジュゲートを含み得る。ポリマーコンジュゲートは水溶性コンジュゲートであってもよい。ポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３００５９３６０号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの構造を有し得る。一態様において、本発明のキメラポリヌクレオチドを含むポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３００７２７０９号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法及び／又は分割ポリマー試薬を使用して作製され得る。別の態様では、ポリマーコンジュゲートは、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１９６９４８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるポリマーコンジュゲートなどの環部分を含むペンダント側基を有し得る。
【０４０７】
ナノ粒子製剤は、対象における本発明のナノ粒子の送達を増進させるためコンジュゲートを含み得る。さらに、コンジュゲートは対象における粒子の食作用クリアランスを阻害し得る。一態様において、コンジュゲートは、ヒト膜タンパク質ＣＤ４７から設計された「自己」ペプチド（例えば、ロドリゲス（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ）ら（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２０１３巻、第３３９号、ｐ．９７１〜９７５）（本明細書において全体として参照により援用される）によって記載される「自己」粒子）であってもよい。ロドリゲス（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ）らによって示されるとおり、自己ペプチドはナノ粒子のマクロファージ媒介性クリアランスを遅延させ、それによりナノ粒子の送達が増進された。別の態様では、コンジュゲートは膜タンパク質ＣＤ４７であってもよい（例えば、ロドリゲス（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２０１３巻、第３３９号、ｐ．９７１〜９７５を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。ロドリゲス（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ）らは、「自己」ペプチドと同様に、ＣＤ４７が、スクランブルペプチド及びＰＥＧコーティングナノ粒子と比較して、対象における循環粒子比率を増加させ得ることを示した。
【０４０８】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、対象における本発明のナノ粒子
の送達を増進させるためコンジュゲートを含むナノ粒子に製剤化される。コンジュゲートはＣＤ４７膜であってもよく、又はコンジュゲートは、先述の「自己」ペプチドなど、ＣＤ４７膜タンパク質から誘導されてもよい。別の態様では、ナノ粒子はＰＥＧとＣＤ４７のコンジュゲート又はその誘導体とを含み得る。さらに別の態様では、ナノ粒子は上記に記載される「自己」ペプチド及び膜タンパク質ＣＤ４７の両方を含み得る。
【０４０９】
別の態様では、本発明のキメラポリヌクレオチドの送達について本明細書に記載されるとおり、「自己」ペプチド及び／又はＣＤ４７タンパク質がウイルス様粒子又は偽ウイルスにコンジュゲートされ得る。
【０４１０】
別の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドと分解性の連結を有し得るコンジュゲートとを含む医薬組成物。コンジュゲートの非限定的な例としては、イオン化可能な水素原子を含む芳香族部分、スペーサ部分、及び水溶性ポリマーが挙げられる。非限定的な例として、分解性の連結を有するコンジュゲートを含む医薬組成物及びかかる医薬組成物の送達方法が、米国特許出願公開第２０１３０１８４４４３号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０４１１】
ナノ粒子製剤は、炭水化物担体とキメラポリヌクレオチドとを含む炭水化物ナノ粒子であってもよい。非限定的な例として、炭水化物担体としては、限定はされないが、無水物修飾フィトグリコーゲン又はグリコーゲンタイプの材料、フィトグリコーゲン（ｐｈｔｏｇｌｙｃｏｇｅｎ）コハク酸オクテニル、フィトグリコーゲンβ−デキストリン、無水物修飾フィトグリコーゲンβ−デキストリンを挙げることができる（例えば、国際公開第２０１２１０９１２１号パンフレットを参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４１２】
本発明のナノ粒子製剤は、粒子の送達を向上させるため、界面活性剤又はポリマーでコーティングされ得る。一実施形態では、ナノ粒子は、限定はされないが、ＰＥＧコーティング及び／又は中性表面電荷を有するコーティングなどの親水性コーティングでコーティングされ得る。親水性コーティングは、限定はされないがキメラポリヌクレオチドなどの、より大きいペイロードを有するナノ粒子を中枢神経系内に送達することを助け得る。非限定的な例として、親水性コーティングを含むナノ粒子及びかかるナノ粒子の作製方法が、米国特許出願公開第２０１３０１８３２４４号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０４１３】
一実施形態では、本発明の脂質ナノ粒子は親水性ポリマー粒子であってもよい。親水性ポリマー粒子及び親水性ポリマー粒子の作製方法の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１３０２１０９９１号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０４１４】
別の実施形態では、本発明の脂質ナノ粒子は疎水性ポリマー粒子であってもよい。
脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質を、急速排泄型脂質ナノ粒子（ｒａｐｉｄｌｙ  ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ：ｒｅＬＮＰ）として知られる生分解性カチオン性脂質に置き換えることによって改良し得る。イオン化可能なカチオン性脂質、例えば、限定はされないが、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、及びＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡなどは、時間とともに血漿及び組織に蓄積することが示されており、潜在的な毒性源となり得る。急速排泄型脂質の急速な代謝により、ラットにおいて脂質ナノ粒子の忍容性及び治療指数を１ｍｇ／ｋｇ用量から１０ｍｇ／ｋｇ用量のオーダで改善することができる。酵素的に分解されるエステル連結を含めると、ｒｅＬＮＰ製剤の活性をなおも維持しながら、カチオン性構成成分の分解及び代謝プロファイルを改善することができる。エステル連結は脂質鎖内で内部に位置することができ、又はエス
テル連結は脂質鎖の末端端部で末端に位置してもよい。内部エステル連結は脂質鎖中の任意の炭素を置き換え得る。
【０４１５】
一実施形態では、内部エステル連結は、飽和炭素のいずれの側にも位置し得る。
一実施形態では、ナノ種、ポリマー及び免疫原を含み得る脂質ナノ粒子を送達することにより、免疫応答が誘発され得る。（米国特許出願公開第２０１２０１８９７００号明細書及び国際公開第２０１２０９９８０５号パンフレット；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。ポリマーがナノ種を封入するか又はナノ種を部分的に封入してもよい。免疫原は、組換えタンパク質、修飾ＲＮＡ及び／又は本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドであってもよい。一実施形態では、脂質ナノ粒子は、限定はされないが、病原体に対するワクチンなど、ワクチン中での使用向けに製剤化されてもよい。
【０４１６】
脂質ナノ粒子は、粒子の表面特性が改変されることで脂質ナノ粒子が粘膜関門を通過し得るように操作されてもよい。粘膜組織、限定されないが（ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｔｅｄ  ｔｏ）、口腔（例えば、頬粘膜及び食道粘膜及び扁桃腺組織）、眼、胃腸（例えば、胃、小腸、大腸、結腸、直腸）、鼻、呼吸（例えば、鼻粘膜、咽頭粘膜、気管粘膜及び気管支粘膜）、生殖器（例えば、腟粘膜、子宮頸管粘膜及び尿道粘膜）などには粘液が位置する。１０〜２００ｎｍより大きいナノ粒子は、高い薬物封入効率及び幅広い種類の薬物の持続的送達をもたらす能力に好ましいが、粘膜関門を通過して急速に拡散するには大き過ぎると考えられている。粘液は絶えず分泌され、流れ落ち、廃棄されるか又は消化され、再生するため、捕捉された粒子のほとんどが、数秒以内又は数時間以内に粘膜組織（ｍｕｃｏｓｌａ  ｔｉｓｓｕｅ）から除去され得る。低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で密にコーティングされている大きいポリマーナノ粒子（直径２００ｎｍ〜５００ｎｍ）は、粘液を通じた拡散が同じ粒子の水中での拡散の僅か４分の１〜６分の１であった（レイ（Ｌａｉ）ら著、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２００７年、第１０４巻、第５号、ｐ．１４８２〜４８７；レイ（Ｌａｉ）ら著、アドバンスド・ドラッグ・デリバリー・レビューズ（Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．）、２００９年、第６１巻、第２号、ｐ．１５８〜１７１；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。ナノ粒子の輸送は、透過速度及び／又は蛍光顕微鏡技法、例えば、限定はされないが、蛍光退色後回復測定（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ａｆｔｅｒ  ｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇ：ＦＲＡＰ）及び高分解能多粒子トラッキング（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｔｒａｃｋｉｎｇ：ＭＰＴ）を用いて決定し得る。非限定的な例として、粘膜関門を透過することのできる組成物は、米国特許第８，２４１，６７０号明細書又は国際公開第２０１３１１００２８号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり作製され得る。
【０４１７】
粘液を通過するように操作された脂質ナノ粒子は、ポリマー材料（即ちポリマーコア）及び／又はポリマー−ビタミンコンジュゲート及び／又はトリブロックコポリマーを含み得る。ポリマー材料としては、限定はされないが、ポリアミン類、ポリエーテル類、ポリアミド類、ポリエステル類、ポリカーバメート類、ポリ尿素類、ポリカーボネート類、ポリ（スチレン）類、ポリイミド類、ポリスルホン類、ポリウレタン類、ポリアセチレン類、ポリエチレン類、ポリエチレンイミン類（ｐｏｌｙｅｔｈｙｅｎｅｉｍｉｎｅｓ）、ポリイソシアネート、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、ポリアクリロニトリル類、及びポリアリーレート類を挙げることができる。ポリマー材料は生分解性及び／又は生体適合性であってもよい。生体適合性ポリマーの非限定的な例は、国際公開第２０１３１１６８０４号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。ポリマー材料はさらに照射されてもよい。非限定的な例として、ポリマー材料はγ線照射されてもよい（例えば、国際公開第２０１２８２１６５号パンフレ
ットを参照、本明細書において全体として参照により援用される）。特定のポリマーの非限定的な例としては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＥＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＰＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート（ｃｙａｎｏａｃｒａｌａｔｅ）、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）類、ポリ無水物類、ポリオルトエステル類、ポリ（エステルアミド）類、ポリアミド類、ポリ（エステルエーテル）類、ポリカーボネート類、ポリアルキレン類、例えばポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール類、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリアルキレンオキシド類（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート類、例えばポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール類（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル類、ポリビニルエステル類、例えばポリ（酢酸ビニル）、ポリハロゲン化ビニル類、例えばポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン類、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリウレタン類、誘導体化セルロース、例えばアルキルセルロース類、ヒドロキシアルキルセルロース類、セルロースエーテル類、セルロースエステル類、ニトロセルロース類、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸ポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）並びにこれらのコポリマー及び混合物、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート類、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー類、ポリ（オルト）エステル類、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ及びトリメチレンカーボネート、ポリビニルピロリドンが挙げられる。脂質ナノ粒子は、限定はされないが、ブロックコポリマー（国際公開第２０１３０１２４７６号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される分枝状ポリエーテル−ポリアミドブロックコポリマーなど）、及び（ポリ（エチレングリコール））−（ポリ（酸化プロピレン））−（ポリ（エチレングリコール））トリブロックコポリマー（例えば、米国特許出願公開第２０１２０１２１７１８号明細書及び米国特許出願公開第２０１００００３３３７号明細書及び米国特許第８，２６３，６６５号明細書を参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）などのコポリマーでコーティングされるか又はそれと結合されてもよい。コポリマーは、一般に安全と認められるもの（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｇａｒｄｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ：ＧＲＡＳ）であるポリマーであってもよく、脂質ナノ粒子の形成は、新規の化学的実体が作り出されないような方法であり得る。例えば、脂質ナノ粒子は、新規の化学的実体を形成することのない、それでもなおヒト粘液を急速に通過する能力を有するポロキサマーコーティングＰＬＧＡナノ粒子を含み得る（ヤン（Ｙａｎｇ）ら著、アンゲヴァンテ・ケミー・インターナショナル・エディション（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．）、２０１１年、第５０巻、ｐ．２５９７〜２６００；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。ヒト粘液を通過し得るナノ粒子を作製するための拡張性のある非限定的な方法が、スー（Ｘｕ）らによって記載される（例えば、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２０１３年、第１７０巻、第２号、ｐ．２７９〜８６を参照；この内容は本明
細書において全体として参照により援用される）。
【０４１８】
ポリマー−ビタミンコンジュゲートのビタミンはビタミンＥであってもよい。コンジュゲートのビタミン部分は、限定はされないが、ビタミンＡ、ビタミンＥ、他のビタミン類、コレステロール、疎水性部分、又は他の界面活性剤の疎水性構成成分（例えば、ステロール鎖、脂肪酸、炭化水素鎖及びアルキレンオキシド鎖）などの他の好適な構成成分で置換され得る。
【０４１９】
粘液を通過するように操作された脂質ナノ粒子としては、表面改変剤、例えば、限定はされないが、キメラポリヌクレオチド、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、カチオン性界面活性剤、例えばジメチルジオクタデシル−臭化アンモニウムなど）、糖類又は糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン、オウシュウヨモギ（ｍｕｇｗｏｒｔ）、ブロメライン、パパイン、クサギ属（ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ）、アセチルシステイン、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、チモシンβ４  ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、エルドステイン）及びｒｈＤＮアーゼを含む様々なＤＮアーゼを挙げることができる。表面改変剤は粒子の表面に埋め込まれ若しくは絡められ得るか、又は脂質ナノ粒子の表面上に（例えば、コーティング、吸着、共有結合連結、又は他のプロセスによって）置かれ得る。（例えば、米国特許出願公開第２０１００２１５５８０号明細書及び米国特許出願公開第２００８０１６６４１４号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１６４３４３号明細書を参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４２０】
一実施形態では、粘液通過性脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含み得る。キメラポリヌクレオチドは脂質ナノ粒子に封入され、及び／又は粒子（ｐａｒｉｃｌｅ）の表面上に置かれ得る。キメラポリヌクレオチドは脂質ナノ粒子と共有結合的にカップリングされ得る。粘液通過性脂質ナノ粒子の製剤は複数のナノ粒子を含み得る。さらに、製剤は、粘液と相互作用して周囲の粘液の構造特性及び／又は粘着特性を改変する粒子を含有してもよく、それにより粘膜付着が低下するため、粘膜組織への粘液通過性脂質ナノ粒子の送達が増加し得る。
【０４２１】
別の実施形態では、粘液通過性脂質ナノ粒子は、粘膜通過増進コーティングを含む低張製剤であり得る。この製剤は、それが送達される上皮に対して低張性（ｈｙｐｏｔｏｎｉｃｅ）であり得る。低張製剤の非限定的な例は、国際公開第２０１３１１００２８号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）を参照することができる。
【０４２２】
一実施形態では、粘膜関門を通じた送達を増進させるため、製剤は低張液を含み得るか、又は低張液であり得る。低張液は、粘液不活性（ｍｕｃｏｉｎｅｒｔ）粒子、限定はされないが粘液通過性粒子などが腟上皮表面に到達可能な速度を増加させることが分かった（例えば、エンサイン（Ｅｎｓｉｇｎ）ら著、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１３年、第３４巻、第２８号、ｐ．６９２２〜９を参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４２３】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドはリポプレックス、例えば、限定なしに、サイレンス・セラピューティクス（Ｓｉｌｅｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（英国ロンドン）のアトゥプレックス（ＡＴＵＰＬＥＸ）（商標）システム、ＤＡＣＣシステム、ＤＢＴＣシステム及び他のｓｉＲＮＡ−リポプレックス技術、ステムジェント（ＳＴＥＭ
ＧＥＮＴ）（登録商標）（マサチューセッツ州ケンブリッジ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））のステムフェクト（ＳＴＥＭＦＥＣＴ）（商標）、及び核酸のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）又はプロタミンベースの標的化及び非標的化送達（アレク（Ａｌｅｋｕ）ら著、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）、２００８年、第６８巻、ｐ．９７８８〜９７９８；ストラムバーグ（Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ）ら著、インターナショナル・ジャーナル・オブ・クリニカル・ファーマコロジー・アンド・セラピューティクス（Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ）、２０１２年、第５０巻、ｐ．７６〜７８；サンテル（Ｓａｎｔｅｌ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ）、２００６年、第１３巻、ｐ．１２２２〜１２３４；サンテル（Ｓａｎｔｅｌ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ）、２００６年、第１３巻、ｐ．１３６０〜１３７０；グートバイヤー（Ｇｕｔｂｉｅｒ）ら著、プルモナリー・ファーマコロジー・アンド・セラピューティクス（Ｐｕｌｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第２３巻、ｐ．３３４〜３４４；カウフマン（Ｋａｕｆｍａｎｎ）ら著、ミクロバスキュラー・リサーチ（Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ）、２０１０年、第８０巻、ｐ．２８６〜２９３、ワイデ（Ｗｅｉｄｅ）ら著、ジャーナル・オブ・イムノセラピー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．）、２００９年、第３２巻、ｐ．４９８〜５０７；ワイデ（Ｗｅｉｄｅ）ら著、ジャーナル・オブ・イムノセラピー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．）、２００８年、第３１巻、ｐ．１８０〜１８８；パスコロ（Ｐａｓｃｏｌｏ）著、エキスパート・オピニオン・オン・バイオロジカル・セラピー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．）、第４巻、ｐ．１２８５〜１２９４；フォティン−ムレツェク（Ｆｏｔｉｎ−Ｍｌｅｃｚｅｋ）ら著、２０１１年、ジャーナル・オブ・イムノセラピー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．）、第３４巻、ｐ．１〜１５；ソング（Ｓｏｎｇ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００５年、第２３巻、ｐ．７０９〜７１７；ペール（Ｐｅｅｒ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００７年、第６巻、第１０４号、ｐ．４０９５〜４１００；デフージュロールズ・ハン（ｄｅ  Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ）著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００８年、第１９巻、ｐ．１２５〜１３２；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）として製剤化される。
【０４２４】
一実施形態では、また、限定はされないが、肝細胞、免疫細胞、腫瘍細胞、内皮細胞、抗原提示細胞、及び白血球を含む種々の細胞型にインビボで受動的又は能動的に仕向けられるように、かかる製剤が構築され又は組成物が改変されてもよい（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１８巻、ｐ．１３５７〜１３６４；ソング（Ｓｏｎｇ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００５年、第２３巻、ｐ．７０９〜７１７；ジャッジ（Ｊｕｄｇｅ）ら著、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．）、２００９年、第１１９巻、ｐ．６６１〜６７３；カウフマン（Ｋａｕｆｍａｎｎ）ら著、ミクロバスキュラー・リサーチ（Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ）、２０１０年、第８０巻、ｐ．２８６〜２９３；サンテル（Ｓａｎｔｅｌ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ）、２００６年、第１３巻、ｐ．１２２２〜１２３４；サンテル（Ｓａｎｔｅｌ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ）、２００６年、第１３巻、ｐ．１３６０〜１３７０；グートバイヤー（Ｇｕｔｂｉｅｒ）ら著、プルモナリー・ファーマコロジー・アンド・セラピューティクス（Ｐｕｌｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第２３巻、ｐ．３３４〜３４４；バシャ（Ｂａｓｈａ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．）、２０１１年、第１９巻、ｐ．２１８６〜２２００；フェンスケ（Ｆｅｎｓｋｅ）及びカリス（Ｃｕｌｌｉｓ）著、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２００８年、第５巻、ｐ．２５〜４４；ペール（Ｐｅｅｒ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２００８年、第３１９巻、ｐ．６２７〜６３０；ペール（Ｐｅｅｒ）及びリーバーマン（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ）著、ジーン・セラピー（Ｇｅ
ｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１１年、第１８巻、ｐ．１１２７〜１１３３；これらは全て、全体として参照により本明細書に援用される）。肝臓細胞への製剤の受動的ターゲティングの一例は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ及びＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡベースの脂質ナノ粒子製剤を含み、これらはアポリポタンパク質Ｅに結合してインビボで肝細胞へのこれらの製剤の結合及び取込みを促進することが示されている（アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１８巻、ｐ．１３５７〜１３６４；本明細書において全体として参照により援用される）。製剤はまた、限定はされないが、葉酸塩、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、及び抗体標的化手法によって例示されるとおりの、その表面上における種々のリガンドの発現によっても選択的に標的化され得る（コルハトカー（Ｋｏｌｈａｔｋａｒ）ら著、カレント・ドラッグ・ディスカバリー・テクノロジーズ（Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．）、２０１１年、第８巻、ｐ．１９７〜２０６；ムサッキオ（Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ）及びトーチリン（Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ）著、フロンティアーズ・イン・バイオサイエンス（Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．）、２０１１年、第１６巻、ｐ．１３８８〜１４１２；ユー（Ｙｕ）ら著、モレキュラー・メンブレン・バイオロジー（Ｍｏｌ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．）、２０１０年、第２７巻、ｐ．２８６〜２９８；パティル（Ｐａｔｉｌ）ら著、クリティカル・レビューズ・イン・セラピューティック・ドラッグ・キャリア・システムズ（Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．）、２００８年、第２５巻、ｐ．１〜６１；ブノワ（Ｂｅｎｏｉｔ）ら著、バイオマクロモレキュルズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、２０１１年、第１２巻、ｐ．２７０８〜２７１４；ジャオ（Ｚｈａｏ）ら著、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２００８年、第５巻、ｐ．３０９〜３１９；アキンク（Ａｋｉｎｃ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１８巻、ｐ．１３５７〜１３６４；スリニバサン（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ）ら著、メソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．）、２０１２年、第８２０巻、ｐ．１０５〜１１６；ベン−アリー（Ｂｅｎ−Ａｒｉｅ）ら著、メソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．）、２０１２年、第７５７巻、ｐ．４９７〜５０７；ペール（Ｐｅｅｒ）著、２０１０年、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、第２０巻、ｐ．６３〜６８；ペール（Ｐｅｅｒ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ
Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．４０９５〜４１００；キム（Ｋｉｍ）ら著、メソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．）、２０１１年、第７２１巻、ｐ．３３９〜３５３；スブラマニヤ（Ｓｕｂｒａｍａｎｙａ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１８巻、ｐ．２０２８〜２０３７；ソング（Ｓｏｎｇ）ら著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００５年、第２３巻、ｐ．７０９〜７１７；ペール（Ｐｅｅｒ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２００８年、第３１９巻、ｐ．６２７〜６３０；ペール（Ｐｅｅｒ）及びリーバーマン（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ）著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１１年、第１８巻、ｐ．１１２７〜１１３３；これらは全て、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０４２５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは固体脂質ナノ粒子として製剤化される。固体脂質ナノ粒子（ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ：ＳＬＮ）は平均直径が１０〜１０００ｎｍの球状であり得る。ＳＬＮは、脂溶性分子を可溶化することができ、且つ界面活性剤及び／又は乳化剤で安定化させ得る固体脂質コアマトリックスを有する。さらなる実施形態において、脂質ナノ粒子は自己組織化脂質−ポリマーナノ粒子であってもよい（チャン（Ｚｈａｎｇ）ら著、ＡＣＳナノ（ＡＣＳ  Ｎａｎｏ）、２００８年、第２巻、第８号、ｐ．１６９６〜１７０２を参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、ＳＬＮは、国際公開第２０１３１
０５１０１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるＳＬＮであってもよい。別の非限定的な例として、ＳＬＮは、国際公開第２０１３１０５１０１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法又はプロセスによって作製されてもよい。
【０４２６】
リポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子を使用すると、これらの製剤はキメラポリヌクレオチドによる細胞トランスフェクションを増加させ；及び／又はコードタンパク質の翻訳を増加させることが可能であり得るため、キメラポリヌクレオチドの誘導によるタンパク質産生の有効性を改善し得る。一つのそのような例には、脂質封入を使用してポリプレックスプラスミドＤＮＡの有効な全身送達を可能にすることが含まれる（ヘイエス（Ｈｅｙｅｓ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００７年、第１５巻、ｐ．７１３〜７２０；本明細書において全体として参照により援用される）。リポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子はまた、キメラポリヌクレオチドの安定性を増加させるためにも用いられ得る。
【０４２７】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、制御放出及び／又は標的化送達用に製剤化することができる。本明細書で使用されるとき、「制御放出」は、治療結果を生じさせるため特定の放出パターンに従う医薬組成物又は化合物の放出プロファイルを指す。一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、制御放出及び／又は標的化送達に関して本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知の送達剤に封入されてもよい。本明細書で使用されるとき、用語「封入する」は、囲い込み、取り囲み又は包み込むことを意味する。それが本発明の化合物の製剤に関係するとき、封入は実質的、完全又は部分的であり得る。用語「実質的に封入された」とは、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９％超又は９９．９９９％超の本発明の医薬組成物又は化合物が送達剤内に囲い込まれ、取り囲まれ、又は包み込まれ得ることを意味する。「部分的な封入」は、本発明の医薬組成物又は化合物の１０未満、１０、２０、３０、４０  ５０又はそれ未満が送達剤内に囲い込まれ、取り囲まれ、又は包み込まれ得ることを意味する。有利には、封入は、蛍光及び／又は電子顕微鏡写真を使用して本発明の医薬組成物又は化合物の漏れ又は活性を計測することにより決定され得る。例えば、本発明の医薬組成物又は化合物の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９又は９９．９９％超が送達剤に封入される。
【０４２８】
一実施形態では、制御放出製剤には、限定はされないが、トリブロックコポリマーが含まれ得る。非限定的な例として、製剤は２つの異なる種類のトリブロックコポリマーを含み得る（国際公開第２０１２１３１１０４号パンフレット及び国際公開第２０１２１３１１０６号パンフレット；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４２９】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは脂質ナノ粒子又は急速排泄型脂質ナノ粒子に封入されてもよく、次にはその脂質ナノ粒子又は急速排泄型脂質ナノ粒子が、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知のポリマー、ヒドロゲル及び／又は外科用シーラントに封入されてもよい。非限定的な例として、ポリマー、ヒドロゲル又は外科用シーラントは、ＰＬＧＡ、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ゲルサイト（ＧＥＬＳＩＴＥ）（登録商標）（ナノセラピューティクス・インコーポレイテッド（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、フロリダ州アラチュア郡（Ａｌａｃｈｕａ，ＦＬ））、ハイレネックス（ＨＹＬＥＮＥＸ）（登録商標）（ハロザイム・セラピューティクス（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ））、外科用シーラント、例えば、フィブリノゲンポリマー（エチコン・インコーポレイテッド（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．）、ジョー
ジア州コルネリア（Ｃｏｒｎｅｌｉａ，ＧＡ））、ティセル（ＴＩＳＳＥＬＬ）（登録商標）（バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、イリノイ州ディアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））、ＰＥＧ系シーラント、及びコシール（ＣＯＳＥＡＬ）（登録商標）（バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、イリノイ州ディアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））であってもよい。
【０４３０】
別の実施形態では、脂質ナノ粒子は、対象への注入時にゲルを形成し得る当該技術分野において公知の任意のポリマーに封入されてもよい。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、生分解性であってもよいポリマーマトリックス中に封入され得る。
【０４３１】
一実施形態では、制御放出及び／又は標的化送達用のキメラポリヌクレオチド製剤はまた、少なくとも１つの制御放出コーティングも含み得る。制御放出コーティングとしては、限定はされないが、オパドライ（ＯＰＡＤＲＹ）（登録商標）、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、オイドラギットＲＬ（ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ）（登録商標）、オイドラギットＲＳ（ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ）（登録商標）及びセルロース誘導体、例えばエチルセルロース水性分散液（アクアコート（ＡＱＵＡＣＯＡＴ）（登録商標）及びシュアリース（ＳＵＲＥＬＥＡＳＥ）（登録商標））が挙げられる。
【０４３２】
一実施形態では、制御放出及び／又は標的化送達製剤は、ポリカチオン側鎖を含有し得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含み得る。分解性（ｄｅｇｒａｄｅａｂｌｅ）ポリエステルとしては、限定はされないが、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。別の実施形態では、分解性ポリエステルはＰＥＧコンジュゲーションを含んでＰＥＧ化ポリマーを形成し得る。
【０４３３】
一実施形態では、少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含む制御放出及び／又は標的化送達製剤は、米国特許第８，４０４，２２２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの少なくとも１つのＰＥＧ及び／又はＰＥＧ関連ポリマー誘導体を含み得る。
【０４３４】
別の実施形態では、少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含む制御放出送達製剤は、米国特許出願公開第２０１３０１３０３４８号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される制御放出ポリマーシステムであり得る。
【０４３５】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは治療用ナノ粒子に封入されてもよい。治療用ナノ粒子は、本明細書に記載される方法、及び限定はされないが、国際公開第２０１０００５７４０号パンフレット、国際公開第２０１００３０７６３号パンフレット、国際公開第２０１０００５７２１号パンフレット、国際公開第２０１０００５７２３号パンフレット、国際公開第２０１２０５４９２３号パンフレット、米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号明細書、米国特許出願公開第２０１００１０４６４５号明細書、米国特許出願公開第２０１０００８７３３７号明細書、米国特許出願公開第２０１０００６８２８５号明細書、米国特許出願公開第２０１１０２７４７５９号明細書、米国特許出願公開第２０１０００６８２８６号明細書、米国特許出願公開第２０１２０２８８５４１号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１２３３５１号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０２３０５６７号明細書及び米国特許第８，２０６，７４７号明細書、同第８，２９３，２７６号明細書、同第８，３１８，２０８号明細書及び同第８，３１８，２１１
号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）などの当該技術分野において公知の方法によって製剤化されてもよい。別の実施形態では、治療用ポリマーナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１２０１４０７９０号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって同定され得る。
【０４３６】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は持続放出用に製剤化されてもよい。本明細書で使用されるとき、「持続放出」は、特定の時間にわたってある放出速度に従う医薬組成物又は化合物を指す。この時間としては、限定はされないが、数時間、数日、数週間、数ヵ月及び数年が挙げられる。非限定的な例として、持続放出ナノ粒子は、ポリマーと、限定はされないが本発明のキメラポリヌクレオチドなどの治療剤とを含み得る（米国特許出願公開第２０１００７５０７２号明細書及び米国特許出願公開第２０１００２１６８０４号明細書、米国特許出願公開第２０１１０２１７３７７号明細書及び米国特許出願公開第２０１２０２０１８５９号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。別の非限定的な例では、持続放出製剤は、限定はされないが、結晶、高分子ゲル及び／又は粒子懸濁液などの、持続的なバイオアベイラビリティを可能にする薬剤を含み得る（米国特許出願公開第２０１３０１５０２９５号明細書を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４３７】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は標的特異的であるように製剤化されてもよい。非限定的な例として、治療用（ｔｈｅｒｅａｐｅｕｔｉｃ）ナノ粒子はコルチコステロイドを含み得る（国際公開第２０１１０８４５１８号パンフレットを参照；本明細書において全体として参照により援用される）。一実施形態では、治療用ナノ粒子は癌特異的であるように製剤化されてもよい。非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、国際公開第２００８１２１９４９号パンフレット、国際公開第２０１０００５７２６号パンフレット、国際公開第２０１０００５７２５号パンフレット、国際公開第２０１１０８４５２１号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１０００６９４２６号明細書、米国特許出願公開第２０１２０００４２９３号明細書及び米国特許出願公開第２０１００１０４６５５号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０４３８】
一実施形態では、本発明のナノ粒子はポリマーマトリックスを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、限定はされないが、ポリエチレン類、ポリカーボネート類、ポリ無水物類、ポリヒドロキシ酸類、ポリプロピルフメレート（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅ）類、ポリカプロラクトン類、ポリアミド類、ポリアセタール類、ポリエーテル類、ポリエステル類、ポリ（オルトエステル）類、ポリシアノアクリレート類、ポリビニルアルコール類、ポリウレタン類、ポリホスファゼン類、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、ポリシアノアクリレート類、ポリ尿素類、ポリスチレン類、ポリアミン類、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）又はそれらの組み合わせなどの２つ以上のポリマーを含み得る。
【０４３９】
一実施形態では、治療用ナノ粒子はジブロックコポリマーを含む。一実施形態では、ジブロックコポリマーは、限定はされないが、ポリエチレン類、ポリカーボネート類、ポリ無水物類、ポリヒドロキシ酸類、ポリプロピルフメレート（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅ）類、ポリカプロラクトン類、ポリアミド類、ポリアセタール類、ポリエーテル類、ポリエステル類、ポリ（オルトエステル）類、ポリシアノアクリレート類、ポリビニルアルコール類、ポリウレタン類、ポリホスファゼン類、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、ポリシアノアクリレート類、ポリ尿素類、ポリスチレン類、ポリアミン類、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチ
ド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）又はそれらの組み合わせなどのポリマーとの組み合わせでＰＥＧを含み得る。別の実施形態では、ジブロックコポリマーは、欧州特許公開番号（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるジブロックコポリマーを含み得る。さらに別の実施形態では、ジブロックコポリマーは、国際公開第２０１３１２００５２号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどのハイＸ（ｈｉｇｈ−Ｘ）ジブロックコポリマーであり得る。
【０４４０】
非限定的な例として、治療用ナノ粒子はＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを含む（米国特許出願公開第２０１２０００４２９３号明細書及び米国特許第８，２３６，３３０号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。別の非限定的な例では、治療用ナノ粒子は、ＰＥＧとＰＬＡ又はＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコポリマーを含むステルスナノ粒子である（米国特許第８，２４６，９６８号明細書並びに国際公開第２０１２１６６９２３号パンフレットを参照、これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。さらに別の非限定的な例において、治療用ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのステルスナノ粒子又は標的特異的ステルスナノ粒子である。
【０４４１】
一実施形態では、治療用ナノ粒子はマルチブロックコポリマーを含み得る（例えば、米国特許第８，２６３，６６５号明細書及び同第８，２８７，９１０号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１９５９８７号明細書を参照；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４４２】
さらに別の非限定的な例において、脂質ナノ粒子はブロックコポリマーＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧを含む（例えば、感熱性ヒドロゲル（ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）が、リー（Ｌｅｅ）ら著、「Ｔｇｆ−β１遺伝子送達媒体としての感熱性ヒドロゲルは糖尿病性創傷治癒を増進する（Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ａｓ  ａ  Ｔｇｆ−β１  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ）」、ファーマシ
ューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００３年、第２０巻、第１２号、ｐ．１９９５〜２０００ではＴＧＦ−β１遺伝子送達媒体として使用され；リー（Ｌｉ）ら著、「感熱性生分解性ヒドロゲルをベースとする制御遺伝子送達システム（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ）」、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００３年、第２０巻、第６号、ｐ．８８４〜８８８；及びチャン（Ｃｈａｎｇ）ら著、「非イオン性両親媒性生分解性ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーはラット骨格筋における遺伝子送達効率を増進する（Ｎｏｎ−ｉｏｎｉｃ  ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ）」、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２００７年、第１１８巻、ｐ．２４５〜２５３では制御遺伝子送達システムとして使用されたことを参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。本発明のキメラポリヌクレオチドは、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを含む脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０４４３】
一実施形態では、治療用ナノ粒子はマルチブロックコポリマーを含み得る（例えば、米国特許第８，２６３，６６５号明細書及び同第８，２８７，９１０号明細書並びに米国特
許出願公開第２０１３０１９５９８７号明細書を参照；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４４４】
一実施形態では、本明細書に記載されるブロックコポリマーは、非ポリマーミセルとブロックコポリマーとを含むポリイオン複合体に含まれ得る（例えば、米国特許出願公開第２０１２００７６８３６号明細書を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４４５】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は少なくとも１つのアクリルポリマーを含み得る。アクリルポリマーとしては、限定はされないが、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸・メタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート類、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート類及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０４４６】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は少なくとも１つのポリ（ビニルエステル）ポリマーを含み得る。ポリ（ビニルエステル）ポリマーは、ランダムコポリマーなどのコポリマーであり得る。非限定的な例として、ランダムコポリマーは、国際公開第２０１３０３２８２９号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１３０１２１９５４号明細書（これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの構造を有し得る。一態様において、ポリ（ビニルエステル）ポリマーは、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドにコンジュゲートされ得る。別の態様では、本発明において使用し得るポリ（ビニルエステル）ポリマーは、（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであり得る。
【０４４７】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は少なくとも１つのジブロックコポリマーを含み得る。ジブロックコポリマーは、限定はされないが、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであり得る（例えば、国際公開第２０１３０４４２１９号パンフレットを参照；本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、治療用ナノ粒子は癌の治療に用いられ得る（国際公開第２０１３０４４２１９号パンフレットを参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４４８】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知の少なくとも１つのカチオン性ポリマーを含み得る。
一実施形態では、治療用ナノ粒子は、限定はされないが、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、ポリ（β−アミノエステル）類（例えば、米国特許第８，２８７，８４９号明細書を参照；本明細書において全体として参照により援用される）及びそれらの組み合わせなどの少なくとも１つのアミン含有ポリマーを含み得る。
【０４４９】
別の実施形態では、本明細書に記載されるナノ粒子は、国際公開第２０１３０５９４９６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどのアミンカチオン性脂質を含み得る。一態様において、カチオン性脂質はアミノ−アミン又はアミノ−アミド部分を有し得る。
【０４５０】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は、ポリカチオン側鎖を含有し得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含み得る。分解性（ｄｅｇｒａｄｅａｂｌｅ）ポリエステルとしては、限定はされないが、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。別の実施形態では、分解性ポリエステルはＰＥＧコンジュゲーションを含んでＰ
ＥＧ化ポリマーを形成し得る。
【０４５１】
別の実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのターゲティングリガンドのコンジュゲーションを含み得る。ターゲティングリガンドは、限定はされないがモノクローナル抗体などの、当該技術分野において公知の任意のリガンドであってよい（キルポーチン（Ｋｉｒｐｏｔｉｎ）ら著、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）、２００６年、第６６巻、ｐ．６７３２〜６７４０；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５２】
一実施形態では、治療用ナノ粒子は、癌の標的化に用いられ得る水溶液に製剤化されてもよい（国際公開第２０１１０８４５１３号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１１０２９４７１７号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５３】
一実施形態では、少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含む治療用ナノ粒子は、ポドビンスキ（Ｐｏｄｏｂｉｎｓｋｉ）らによって米国特許第８，４０４，７９９号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法を用いて製剤化されてもよい。
【０４５４】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは合成ナノ担体に封入され、それに連結され、及び／又はそれと結び付けられ得る。合成ナノ担体としては、限定はされないが、国際公開第２０１０００５７４０号パンフレット、国際公開第２０１００３０７６３号パンフレット、国際公開第２０１２１３５０１号パンフレット、国際公開第２０１２１４９２５２号パンフレット、国際公開第２０１２１４９２５５号パンフレット、国際公開第２０１２１４９２５９号パンフレット、国際公開第２０１２１４９２６５号パンフレット、国際公開第２０１２１４９２６８号パンフレット、国際公開第２０１２１４９２８２号パンフレット、国際公開第２０１２１４９３０１号パンフレット、国際公開第２０１２１４９３９３号パンフレット、国際公開第２０１２１４９４０５号パンフレット、国際公開第２０１２１４９４１１号パンフレット、国際公開第２０１２１４９４５４号パンフレット及び国際公開第２０１３０１９６６９号パンフレット、並びに米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号明細書、米国特許出願公開第２０１００１０４６４５号明細書、米国特許出願公開第２０１０００８７３３７号明細書及び米国特許出願公開第２０１２０２４４２２２号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。合成ナノ担体は、当該技術分野において公知の方法及び／又は本明細書に記載される方法を用いて製剤化されてもよい。非限定的な例として、合成ナノ担体は、国際公開第２０１０００５７４０号パンフレット、国際公開第２０１００３０７６３号パンフレット及び国際公開第２０１２１３５０１号パンフレット並びに米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号明細書、米国特許出願公開第２０１００１０４６４５号明細書、米国特許出願公開第２０１０００８７３３７号明細書及び米国特許出願公開第２０１２０２４４２２号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって製剤化されてもよい。別の実施形態では、合成ナノ担体製剤は、国際公開第２０１１０７２２１８号パンフレット及び米国特許第８，２１１，４７３号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって凍結乾燥され得る。さらに別の実施形態では、本発明の製剤は、限定はされないが合成ナノ担体を含め、米国特許出願公開第２０１３０２３０５６８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって凍結乾燥され、又は再構成され得る。
【０４５５】
一実施形態では、合成ナノ担体は、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドを放出するため反応基を含有し得る（国際公開第２０１２０９５２５５２号パンフレット及び
米国特許出願公開第２０１２０１７１２２９号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５６】
一実施形態では、合成ナノ担体は、合成ナノ担体の送達による免疫応答を増進させるため免疫刺激剤を含有し得る。非限定的な例として、合成ナノ担体は、免疫系のＴｈ１に基づく応答を増進させ得るＴｈ１免疫刺激剤を含み得る（国際公開第２０１０１２３５６９号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１１０２２３２０１号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５７】
一実施形態では、合成ナノ担体は、標的化された放出用に製剤化されてもよい。一実施形態では、合成ナノ担体は、特定のｐＨで及び／又は所望の時間間隔後にキメラポリヌクレオチドを放出するように製剤化される。非限定的な例として、合成ナノ粒子は、２４時間後に及び／又は４．５のｐＨでキメラポリヌクレオチドを放出するように製剤化されてもよい（国際公開第２０１０１３８１９３号パンフレット及び国際公開第２０１０１３８１９４号パンフレット並びに米国特許出願公開第２０１１００２０３８８号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００２７２１７号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５８】
一実施形態では、合成ナノ担体は、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドの制御放出及び／又は持続放出用に製剤化されてもよい。非限定的な例として、持続放出用の合成ナノ担体は、当該技術分野において公知の方法、本明細書に記載される方法及び／又は国際公開第２０１０１３８１９２号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１００３０３８５０号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法によって製剤化されてもよい。
【０４５９】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、制御放出及び／又は持続放出用に製剤化されてもよく、ここで製剤は、結晶性側鎖（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｓｉｄｅ  ｃｈａｉｎ：ＣＹＳＣ）ポリマーである少なくとも１つのポリマーを含む。ＣＹＳＣポリマーについては、米国特許第８，３９９，００７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０４６０】
一実施形態では、合成ナノ担体はワクチンとしての使用向けに製剤化されてもよい。一実施形態では、合成ナノ担体は、少なくとも１つの抗原をコードする少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを封入し得る。非限定的な例として、合成ナノ担体は、少なくとも１つの抗原と、ワクチン投薬形態用の賦形剤とを含み得る（国際公開第２０１１１５０２６４号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１１０２９３７２３号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。別の非限定的な例として、ワクチン投薬形態は、同じ又は異なる抗原と賦形剤とを有する少なくとも２つの合成ナノ担体を含み得る（国際公開第２０１１１５０２４９号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１１０２９３７０１号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。ワクチン投薬形態は、本明細書に記載される方法、当該技術分野において公知の方法及び／又は国際公開第２０１１１５０２５８号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２００２７８０６号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって選択され得る）。
【０４６１】
一実施形態では、合成ナノ担体は、少なくとも１つのアジュバントをコードする少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含み得る。非限定的な例として、アジュバントは、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド、ジメチルジオクタデシルアンモニウムホスフェート又はジメチルジオクタデシル
アンモニウムアセテート（ＤＤＡ）及びマイコバクテリウムの全脂質抽出物の無極性画分又は無極性画分の一部を含み得る（例えば、米国特許第８，２４１，６１０号明細書を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。別の実施形態では、合成ナノ担体は、少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドとアジュバントとを含み得る。非限定的な例として、アジュバントを含む合成ナノ担体は、国際公開第２０１１１５０２４０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１１０２９３７００号明細書（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載される方法によって製剤化されてもよい。
【０４６２】
一実施形態では、合成ナノ担体は、ウイルス由来のペプチド、断片又は領域をコードする少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを封入し得る。非限定的な例として、合成ナノ担体には、限定はされないが、国際公開第２０１２０２４６２１号パンフレット、国際公開第２０１２０２６２９号パンフレット、国際公開第２０１２０２４６３２号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２００６４１１０号明細書、米国特許出願公開第２０１２００５８１５３号明細書及び米国特許出願公開第２０１２００５８１５４号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるナノ担体が含まれ得る。
【０４６３】
一実施形態では、合成ナノ担体は、体液性応答及び／又は細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を惹起することが可能であり得るキメラポリヌクレオチドにカップリングされ得る（例えば、国際公開第２０１３０１９６６９号パンフレットを参照、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４６４】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは双性イオン脂質に封入され、それに連結され、及び／又はそれと結び付けられ得る。双性イオン脂質及び双性イオン脂質の使用方法の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１３０２１６６０７号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。一態様において、双性イオン脂質は、本明細書に記載されるリポソーム及び脂質ナノ粒子中に使用されてもよい。
【０４６５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１３０１９７１００号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのコロイドナノ担体に製剤化されてもよい。
【０４６６】
一実施形態では、ナノ粒子は経口投与に最適化され得る。ナノ粒子は、限定はされないがキトサン又はその誘導体などの、少なくとも１つのカチオン性バイオポリマーを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１２０２８２３４３号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって製剤化されてもよい。
【０４６７】
一部の実施形態では、ＬＮＰは脂質ＫＬ５２（米国特許出願公開第２０１２／０２９５８３２号明細書（全体として参照により本明細書に明示的に援用される）に開示されるアミノ脂質）を含む。ＬＮＰ投与の活性及び／又は安全性（ＡＬＴ／ＡＳＴ、白血球数及びサイトカイン誘導のうちの１つ以上を調べることにより計測されるとおりの）が、かかる脂質の組込みによって改善し得る。ＫＬ５２を含むＬＮＰは、静脈内に及び／又は１つ以上の用量で投与され得る。一部の実施形態では、ＫＬ５２を含むＬＮＰの投与は、ＭＣ３を含むＬＮＰと比較して同等の又は向上したｍＲＮＡ及び／又はタンパク質発現をもたらす。
【０４６８】
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは小型のＬＮＰを使用して送達され得る
。かかる粒子は、０．１ｕｍ未満から１００ｎｍまで、例えば、限定はされないが、０．１ｕｍ未満、１．０ｕｍ未満、５ｕｍ未満、１０ｕｍ未満、１５ｕｍ未満、２０ｕｍ未満、２５ｕｍ未満、３０ｕｍ未満、３５ｕｍ未満、４０ｕｍ未満、５０ｕｍ未満、５５ｕｍ未満、６０ｕｍ未満、６５ｕｍ未満、７０ｕｍ未満、７５ｕｍ未満、８０ｕｍ未満、８５ｕｍ未満、９０ｕｍ未満、９５ｕｍ未満、１００ｕｍ未満、１２５ｕｍ未満、１５０ｕｍ未満、１７５ｕｍ未満、２００ｕｍ未満、２２５ｕｍ未満、２５０ｕｍ未満、２７５ｕｍ未満、３００ｕｍ未満、３２５ｕｍ未満、３５０ｕｍ未満、３７５ｕｍ未満、４００ｕｍ未満、４２５ｕｍ未満、４５０ｕｍ未満、４７５ｕｍ未満、５００ｕｍ未満、５２５ｕｍ未満、５５０ｕｍ未満、５７５ｕｍ未満、６００ｕｍ未満、６２５ｕｍ未満、６５０ｕｍ未満、６７５ｕｍ未満、７００ｕｍ未満、７２５ｕｍ未満、７５０ｕｍ未満、７７５ｕｍ未満、８００ｕｍ未満、８２５ｕｍ未満、８５０ｕｍ未満、８７５ｕｍ未満、９００ｕｍ未満、９２５ｕｍ未満、９５０ｕｍ未満、９７５ｕｍ未満などの直径を含み得る。
【０４６９】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、直径約１ｎｍ〜約１００ｎｍ、約１ｎｍ〜約１０ｎｍ、約１ｎｍ〜約２０ｎｍ、約１ｎｍ〜約３０ｎｍ、約１ｎｍ〜約４０ｎｍ、約１ｎｍ〜約５０ｎｍ、約１ｎｍ〜約６０ｎｍ、約１ｎｍ〜約７０ｎｍ、約１ｎｍ〜約８０ｎｍ、約１ｎｍ〜約９０ｎｍ、約５ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５ｎｍ〜約１０ｎｍ、約５ｎｍ〜約２０ｎｍ、約５ｎｍ〜約３０ｎｍ、約５ｎｍ〜約４０ｎｍ、約５ｎｍ〜約５０ｎｍ、約５ｎｍ〜約６０ｎｍ、約５ｎｍ〜約７０ｎｍ、約５ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５ｎｍ〜約９０ｎｍ、約１０〜約５０ｎＭ、約２０〜約５０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約５０〜約８０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ及び／又は約７０〜約９０ｎｍを含み得る小型のＬＮＰを使用して送達され得る。
【０４７０】
一部の実施形態では、かかるＬＮＰは、マイクロ流体ミキサーを含む方法を用いて合成される。例示的マイクロ流体ミキサーとしては、限定はされないが、スリットインターデジタル（ｉｎｔｅｒｄｉｇｉｔｉａｌ）マイクロミキサー、例えば、限定はされないが、マイクロイノーバ（Ｍｉｃｒｏｉｎｎｏｖａ）（アラーハイリゲン・バイ・ヴィルドン（Ａｌｌｅｒｈｅｉｌｉｇｅｎ  ｂｅｉ  Ｗｉｌｄｏｎ）、オーストリア）によって製造されるもの、及び／又はスタガードヘリンボーンマイクロミキサー（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ  ｈｅｒｒｉｎｇｂｏｎｅ  ｍｉｃｒｏｍｉｘｅｒ：ＳＨＭ）を挙げることができる（ジガルツェフ，Ｉ．Ｖ．（Ｚｈｉｇａｌｔｓｅｖ，Ｉ．Ｖ．）ら著、「ミリセカンドマイクロ流体混合を使用した水性及びトリグリセリドコアを有する限界サイズ脂質ナノ粒子システムのボトムアップ設計及び合成（Ｂｏｔｔｏｍ−ｕｐ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｉｍｉｔ  ｓｉｚｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｗｉｔｈ  ａｑｕｅｏｕｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｃｏｒｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｍｉｌｌｉｓｅｃｏｎｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｍｉｘｉｎｇ）」が発表されている（ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）、２０１２年、第２８巻、ｐ．３６３３〜４０；ベリボー，Ｎ．Ｍ．（Ｂｅｌｌｉｖｅａｕ，Ｎ．Ｍ．）ら著、「ｓｉＲＮＡのインビボ送達用の極めて強力な限界サイズ脂質ナノ粒子のマイクロ流体合成（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｌｉｍｉｔ−ｓｉｚｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ）」、モレキュラー・セラピー−ヌクレイック・アシッズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ）、２０１２年、第１巻、ｐ．ｅ３７；チェン，Ｄ．（Ｃｈｅｎ，Ｄ．）ら著、「制御されたマイクロ流体製剤化によって可能となる強力なｓｉＲＮＡ含有脂質ナノ粒子の迅速な発見（Ｒａｐｉｄ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｉＲＮＡ−ｃｏｎｔａｉｎｉ
ｎｇ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｅｎａｂｌｅｄ  ｂｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）」、米国化学会誌（Ｊ
Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．）、２０１２年、第１３４巻、第１６号、ｐ．６９４８〜５１；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。一部の実施形態では、ＳＨＭを含むＬＮＰ作成の方法は、少なくとも２つの入力ストリームの混合をさらに含み、ここで混合は、微細構造が引き起こすカオス的移流（ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｈａｏｔｉｃ  ａｄｖｅｃｔｉｏｎ：ＭＩＣＡ）によって起こる。この方法によれば、ヘリンボーンパターンで存在するチャネルを通って流体ストリームが流れることで回転流れが起こり、流体が互いの周りに折り重なる。この方法はまた流体混合用の表面も含むことができ、ここでこの表面は流体が循環している間に向きが変わる。ＳＨＭを使用したＬＮＰの作成方法としては、米国特許出願公開第２００４／０２６２２２３号明細書及び同第２０１２／０２７６２０９号明細書（これらの各々は、全体として参照により本明細書に明示的に援用される）に開示されるものが挙げられる。
【０４７１】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、インスティテュート・フュール・マイクロテクニク・マインツ・ゲーエムベーハー（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ｆｕｅｒ  Ｍｉｋｒｏｔｅｃｈｎｉｋ  Ｍａｉｎｚ  ＧｍｂＨ）、マインツ、独国）のスリットインターデジタル微細構造ミキサー（ＳＩＭＭ−Ｖ２）又は標準スリットインターデジタルマイクロミキサー（ＳＳＩＭＭ）又はキャタピラー（ＣＰＭＭ）又は衝突ジェット（ＩＪＭＭ）などのマイクロミキサーを使用して作成された脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０４７２】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、マイクロ流体技術を使用して作成された脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい（ジョージ・Ｍ・ホワイトサイズ（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ，Ｇｅｏｒｇｅ  Ｍ）著、「マイクロフルイディクスの起源と未来（Ｔｈｅ
Ｏｒｉｇｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２００６年、第４４２巻、ｐ．３６８〜３７３；及びアブラハム（Ａｂｒａｈａｍ）ら著、「マイクロチャネル用のカオス的ミキサー（Ｃｈａｏｔｉｃ  Ｍｉｘｅｒ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌｓ）」、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２００２年、第２９５巻、ｐ．６４７〜６５１を参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、制御マイクロ流体製剤は、マイクロチャネルにおいて低いレイノルズ数で定常圧力の駆動による流れのストリームを受動的に混合する方法を含む（例えば、アブラハム（Ａｂｒａｈａｍ）ら著、マイクロチャネル用のカオス的ミキサー（Ｃｈａｏｔｉｃ  Ｍｉｘｅｒ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌｓ）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２００２年、第２９５巻、ｐ．６４７〜６５１を参照；これは本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４７３】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、ハーバード・アパレイタス（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）（マサチューセッツ州ホリストン（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ））又はドロマイト・マイクロフルイディクス（Ｄｏｌｏｍｉｔｅ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）（ロイストン（Ｒｏｙｓｔｏｎ）、英国）のものなどのマイクロミキサーチップを使用して作成される脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい。マイクロミキサーチップは、分割及び再合流機構による２つ以上の流体ストリームの急速混合に使用することができる。
【０４７４】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１３０６３４６８号パンフレット又は米国特許第８，４４０，６１４号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される薬物封入ミクロスフェアを使用した送達用に製剤化されてもよい。ミクロスフェアは、国際公開第２０１３０６３４６
８号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）又は（ＶＩ）の化合物を含み得る。別の態様では、本発明のキメラポリヌクレオチドを細胞に送達することにおいて、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、脂質（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ，ｐｅｐｔｉｄｅ，ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ｌｉｐｉｄｓ：ＡＰＰＬ）が有用である（国際公開第２０１３０６３４６８号パンフレットを参照、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４７５】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、約１０〜約１００ｎｍ、例えば、限定はされないが、約１０〜約２０ｎｍ、約１０〜約３０ｎｍ、約１０〜約４０ｎｍ、約１０〜約５０ｎｍ、約１０〜約６０ｎｍ、約１０〜約７０ｎｍ、約１０〜約８０ｎｍ、約１０〜約９０ｎｍ、約２０〜約３０ｎｍ、約２０〜約４０ｎｍ、約２０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約２０〜約１００ｎｍ、約３０〜約４０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約３０〜約１００ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約４０〜約１００ｎｍ、約５０〜約６０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ  約５０〜約８０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約５０〜約１００ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ、約６０〜約１００ｎｍ、約７０〜約８０ｎｍ、約７０〜約９０ｎｍ、約７０〜約１００ｎｍ、約８０〜約９０ｎｍ、約８０〜約１００ｎｍ及び／又は約９０〜約１００ｎｍの直径を有する脂質ナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０４７６】
一実施形態では、脂質ナノ粒子は約１０〜５００ｎｍの直径を有し得る。
一実施形態では、脂質ナノ粒子は、１００ｎｍ超、１５０ｎｍ超、２００ｎｍ超、２５０ｎｍ超、３００ｎｍ超、３５０ｎｍ超、４００ｎｍ超、４５０ｎｍ超、５００ｎｍ超、５５０ｎｍ超、６００ｎｍ超、６５０ｎｍ超、７００ｎｍ超、７５０ｎｍ超、８００ｎｍ超、８５０ｎｍ超、９００ｎｍ超、９５０ｎｍ超又は１０００ｎｍ超の直径を有し得る。
【０４７７】
一態様において、脂質ナノ粒子は、国際公開第２０１３０５９９２２号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される限界サイズ脂質ナノ粒子であってもよい。限界サイズ脂質ナノ粒子は、水性コア又は疎水性コアを取り囲む脂質二重層を含み得る；ここで脂質二重層は、限定はされないが、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、セファリン、セレブロシド、Ｃ８〜Ｃ２０脂肪酸ジアシルホスファチジルコリン（ｄｉａｃｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、及び１−パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）などのリン脂質を含み得る。別の態様では、限界サイズ脂質ナノ粒子は、限定はされないが、ＤＬＰＥ−ＰＥＧ、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ、ＤＰＰＣ−ＰＥＧ及びＤＳＰＥ−ＰＥＧなどのポリエチレングリコール−脂質を含み得る。
【０４７８】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１３０６３５３０号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される送達方法を用いて特定の部位に送達され、局在化され及び／又は濃縮され得る。非限定的な例として、対象へのキメラポリヌクレオチドの送達前に、その送達と同時に、又はその送達の後に対象に空のポリマー粒子が投与されてもよい。空のポリマー粒子は対象と接触すると容積の変化を起こし、対象の特定の部位に詰め込まれ、埋め込まれ、固定化され又は捕捉されるようになる。
【０４７９】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは活性物質放出システムに製剤化されてもよ
い（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１０２５４５号明細書を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。活性物質放出システムは、１）触媒活性核酸とハイブリダイズするオリゴヌクレオチド阻害剤鎖に結合した少なくとも１つのナノ粒子、及び２）治療上有効な物質（例えば、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチド）に結合した少なくとも１つの基質分子に結合した化合物を含むことができ、ここで治療上有効な物質は触媒活性核酸による基質分子の切断によって放出される。
【０４８０】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、非細胞材料を含む内側コアと、細胞膜を含む外表面とを含むナノ粒子に製剤化されてもよい。細胞膜は、ウイルス由来の細胞又は膜に由来し得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、国際公開第２０１３０５２１６７号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。別の非限定的な例として、国際公開第２０１３０５２１６７号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるナノ粒子が、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドの送達に用いられ得る。
【０４８１】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、多孔質ナノ粒子担持脂質二重層（プロトセル）に製剤化されてもよい。プロトセルについては、国際公開第２０１３０５６１３２号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０４８２】
一実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、米国特許第８，４２０，１２３号明細書及び同第８，５１８，９６３号明細書並びに欧州特許第２０７３８４８Ｂ１号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの、又はそれらに記載される方法によって作製されるポリマーナノ粒子に製剤化されてもよい。非限定的な例として、ポリマーナノ粒子は、米国特許第８，５１８，９６３号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるナノ粒子又はそれに記載される方法によって作製されるナノ粒子など、高いガラス転移温度を有し得る。別の非限定的な例として、経口、非経口及び局所製剤用のポリマーナノ粒子が、欧州特許第２０７３８４８Ｂ１号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０４８３】
別の実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、イメージングで使用されるナノ粒子に製剤化されてもよい。こうしたナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１２９６３６号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどのリポソームナノ粒子であってもよい。非限定的な例として、リポソームは、ガドリニウム（ＩＩＩ）２−｛４，７−ビス−カルボキシメチル−１０−［（Ｎ，Ｎ−ジステアリルアミドメチル−Ｎ’−アミド−メチル］−１，４，７，１０−テトラ−アザシクロドデカ−１−イル｝−酢酸及び中性の完全飽和リン脂質構成成分を含み得る（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１２９６３６号明細書を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４８４】
一実施形態では、本発明において使用し得るナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１３０３４８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって形成される。
【０４８５】
本発明のナノ粒子は、限定はされないが、その欠乏が貧血症から神経管閉鎖不全に至るまでの健康上の危険を引き起こし得るものなどの、栄養素をさらに含み得る（例えば、国際公開第２０１３０７２９２９号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるナノ粒子を参照）。非限定的な例として、栄養素は
、第一鉄、第二鉄塩又は元素鉄の形態の鉄、ヨウ素、葉酸、ビタミン類又は微量栄養素であってもよい。
【０４８６】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは膨潤性ナノ粒子に製剤化されてもよい。膨潤性ナノ粒子は、限定はされないが、米国特許第８，４４０，２３１号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。非限定的な実施形態として、膨潤性ナノ粒子は、本発明のキメラポリヌクレオチドを肺系統に送達するのに用いられ得る（例えば、米国特許第８，４４０，２３１号明細書を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４８７】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、米国特許第８，４４９，９１６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどのポリ無水物ナノ粒子に製剤化されてもよい。
【０４８８】
本発明のナノ粒子及びマイクロパーティクルは、マクロファージ及び／又は免疫応答をモジュレートするように幾何学的に操作され得る。一態様において、幾何学的に操作される粒子は、限定はされないが肺送達などの、標的化送達用に本発明のキメラポリヌクレオチドを組み込むため、様々な形状、サイズ及び／又は表面電荷を有し得る（例えば、国際公開第２０１３０８２１１１号パンフレットを参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。他の物理的特徴、幾何学的に操作する粒子は、限定はされないが、フェネストレーション（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎ）、角度のついたアーム、非対称及び表面粗さ、電荷を有し、それらを含むことができ、これらは細胞及び組織との相互作用を改変することができる。非限定的な例として、本発明のナノ粒子は、国際公開第２０１３０８２１１１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０４８９】
一実施形態では、本発明のナノ粒子は、限定はされないが、国際公開第２０１３０９０６０１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの水溶性ナノ粒子であってもよい。ナノ粒子は、良好な水溶性を呈するように、コンパクトな双性イオンリガンドを有する無機ナノ粒子であってもよい。ナノ粒子はまた、流体力学的径（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｄｉａｍｅｔｅｒ：ＨＤ）が小さく、時間、ｐＨ、及び塩分に関する安定性を有し、及び非特異的タンパク質結合レベルが低いものであってもよい。
【０４９０】
一実施形態では、本発明のナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって開発されてもよい。
【０４９１】
一実施形態では、本発明のナノ粒子は、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、ステルスナノ粒子又は標的特異的ステルスナノ粒子である。本発明のナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０４９２】
別の実施形態では、ステルス又は標的特異的ステルスナノ粒子はポリマーマトリックスを含み得る。ポリマーマトリックスは、限定はされないが、ポリエチレン類、ポリカーボネート類、ポリ無水物類、ポリヒドロキシ酸類、ポリプロピルフメレート（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅ）類、ポリカプロラクトン類、ポリアミド類、ポリアセタール類、ポリエーテル類、ポリエステル類、ポリ（オルトエステル）類、ポリシアノアクリレ
ート類、ポリビニルアルコール類、ポリウレタン類、ポリホスファゼン類、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、ポリシアノアクリレート類、ポリ尿素類、ポリスチレン類、ポリアミン類、ポリエステル類、ポリ無水物類、ポリエーテル類、ポリウレタン類、ポリメタクリレート類、ポリアクリレート類、ポリシアノアクリレート類又はそれらの組み合わせなどの２つ以上のポリマーを含み得る。
【０４９３】
一実施形態では、ナノ粒子は、高密度核酸層を有するナノ粒子−核酸ハイブリッド構造であってもよい。非限定的な例として、ナノ粒子−核酸ハイブリッド構造は、米国特許出願公開第２０１３０１７１６４６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。ナノ粒子は、限定はされないが、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知のキメラポリヌクレオチドなどの核酸を含み得る。
【０４９４】
本発明のナノ粒子の少なくとも１つは、ナノ構造のコアに埋め込まれ得るか、又はナノ構造内若しくはその表面上に少なくとも１つのペイロードを保持し又はそれと結び付けることが可能な低密度多孔質３−Ｄ構造又はコーティングで被覆され得る。少なくとも１つのナノ粒子を含むナノ構造の非限定的な例は、国際公開第２０１３１２３５２３号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。ポリマー、生分解性ナノ粒子、及びコアシェルナノ粒子
本発明のキメラポリヌクレオチドは、天然及び／又は合成ポリマーを使用して製剤化することができる。送達に使用し得るポリマーの非限定的な例としては、限定はされないが、ダイナミック・ポリコンジュゲート（ＤＹＮＡＭＩＣ  ＰＯＬＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥ）（登録商標）（アローヘッド・リサーチ・コーポレイション（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐ．）、カリフォルニア州パサディナ（Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ））、ミラス（登録商標）バイオ（ＭＩＲＵＳ（登録商標）Ｂｉｏ）（ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））及びロシュ・マディソン（Ｒｏｃｈｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ）（ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））の製剤、フェーズＲＸ（ＰＨＡＳＥＲＸ）（商標）ポリマー製剤、例えば、限定なしに、スマート・ポリマー・テクノロジー（ＳＭＡＲＴＴ  ＰＯＬＹＭＥＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）（商標）（フェーズＲＸ（ＰＨＡＳＥＲＸ）（登録商標）、ワシントン州シアトル（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ））、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、バイカル（Ｖｉｃａｌ）（カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））のバクスフェクチン（ＶＡＸＦＥＣＴＩＮ）（登録商標）アジュバント、キトサン、カランド・ファーマシューティカルズ（Ｃａｌａｎｄｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（カリフォルニア州パサディナ（Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ））のシクロデキストリン、デンドリマー及びポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ポリマーが挙げられる。ロンデル（ＲＯＮＤＥＬ）（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（アローヘッド・リサーチ・コーポレイション（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、カリフォルニア州パサディナ（Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ））及びｐＨ応答性コブロックポリマー、例えば、限定はされないが、フェーズＲＸ（ＰＨＡＳＥＲＸ）（登録商標）（ワシントン州シアトル（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ））。
【０４９５】
キトサン製剤の非限定的な例は、正電荷キトサンのコアと負電荷基質の外側部分とを含む（米国特許出願公開第２０１２０２５８１７６号明細書；本明細書において全体として参照により援用される）。キトサンには、限定はされないが、Ｎ−トリメチルキトサン、モノ−Ｎ−カルボキシメチルキトサン（ＭＣＣ）、Ｎ−パルミトイルキトサン（ＮＰＣＳ）、ＥＤＴＡ−キトサン、低分子量キトサン、キトサン誘導体、又はそれらの組み合わせが含まれる。
【０４９６】
一実施形態では、本発明で使用されるポリマーは、限定はされないが細菌などの、望ま
しくない物質がポリマーの表面に付着することを低減し及び／又は阻害するための処理を受けている。ポリマーは、公知の方法及び／又は当該技術分野において記載される方法及び／又は国際公開第２０１２１５０４６７号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって処理され得る。
【０４９７】
ＰＬＧＡ製剤の非限定的な例としては、限定はされないが、ＰＬＧＡ注射用デポーが挙げられる（例えば、６６％Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）と残りの水性溶媒及びロイプロリドとの中にＰＬＧＡを溶解することによって形成されるエリガード（ＥＬＩＧＡＲＤ）（登録商標）。注射後、ＰＬＧＡ及びロイプロリドペプチドが皮下腔に沈殿する）。
【０４９８】
これらのポリマー手法の多くは、細胞質へのオリゴヌクレオチドのインビボ送達における有効性が実証されている（デフージュロールズ（ｄｅ  Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ）著、ヒューマン・ジーン・セラピー（Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００８年、第１９巻、ｐ．１２５〜１３２（本明細書において全体として参照により援用される）にレビューされる）。核酸のロバストなインビボ送達を、この場合低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）で生じさせる２つのポリマー手法は、ダイナミックポリコンジュゲート及びシクロデキストリン系ナノ粒子である（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１５６７２１号明細書を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。これらの送達手法の１つ目はダイナミックポリコンジュゲートを使用するもので、マウスにおいてインビボでｓｉＲＮＡを有効に送達して肝細胞の内因性標的ｍＲＮＡをサイレンシングすることが示されている（ロゼマ（Ｒｏｚｅｍａ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．１２９８２〜１２８８７；本明細書において全体として参照により援用される）。この特定の手法は多成分ポリマーシステムであり、その主な特徴には、核酸、この場合ｓｉＲＮＡがジスルフィド結合を介して共有結合的にカップリングする膜活性ポリマーが含まれ、ここではＰＥＧ基（電荷マスキング用）及びＮ−アセチルガラクトサミン基（肝細胞標的化用）の両方がｐＨ感受性結合を介して連結される（ロゼマ（Ｒｏｚｅｍａ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．１２９８２〜１２８８７；本明細書において全体として参照により援用される）。肝細胞との結合及びエンドソームへの侵入に伴い、ポリマー複合体は低ｐＨ環境で分解し、ポリマーはその正電荷が露出し、エンドソームエスケープ及びポリマーからのｓｉＲＮＡの細胞質放出が引き起こされる。Ｎ−アセチルガラクトサミン基をマンノース基に置き換えることによって、アシアロ糖タンパク質受容体発現肝細胞から類洞内皮細胞及びクッパー細胞に標的を変更し得ることが示された。別のポリマー手法には、トランスフェリン標的化シクロデキストリン含有ポリカチオンナノ粒子を使用することが関わる。これらのナノ粒子はトランスフェリン受容体発現ユーイング肉腫腫瘍細胞におけるＥＷＳ−ＦＬＩ１遺伝子産物の標的化したサイレンシングが実証されており（フー−リースコバン（Ｈｕ−Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ）ら著、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）、２００５年、第６５巻、ｐ．８９８４〜８９８２；本明細書において全体として参照により援用される）、これらのナノ粒子に製剤化されるｓｉＲＮＡは非ヒト霊長類において良好に忍容された（ハイデル（Ｈｅｉｄｅｌ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．５７１５〜２１；本明細書において全体として参照により援用される）。これらの送達戦略は両方ともに、標的化送達及びエンドソームエスケープ機構の両方を使用した合理的な手法を取り入れている。
【０４９９】
ポリマー製剤は、キメラポリヌクレオチドの（例えば、筋肉内注射又は皮下注射後の）持続放出又は遅延放出を可能にし得る。キメラポリヌクレオチドの改変された放出プロファイルにより、例えば、コードされるタンパク質の長期間にわたる翻訳がもたらされ得る。ポリマー製剤はまた、キメラポリヌクレオチドの安定性を増加させるためにも用いられ
得る。生分解性ポリマーは、これまで、キメラポリヌクレオチド以外の核酸を分解から保護するために用いられており、インビボでペイロードの持続放出をもたらすことが示されている（ロゼマ（Ｒｏｚｅｍａ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．１２９８２〜１２８８７；サリバン（Ｓｕｌｌｉｖａｎ）ら著、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２０１０年、第７巻、ｐ．１４３３〜１４４６；コンバーチン（Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｅ）ら著、バイオマクロモレキュルズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、２０１０年１０月１日；チュー（Ｃｈｕ）ら著、アカウンツ・オブ・ケミカル・リサーチ（Ａｃｃ  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．）、２０１２年１月１３日；マンガニエロ（Ｍａｎｇａｎｉｅｌｌｏ）ら著、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１２年、第３３巻、ｐ．２３０１〜２３０９；ブノワ（Ｂｅｎｏｉｔ）ら著、バイオマクロモレキュルズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、２０１１年、第１２巻、ｐ．２７０８〜２７１４；シンガ（Ｓｉｎｇｈａ）ら著、ヌクレイック・アシッド・セラピューティクス（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｔｈｅｒ．）、２０１１年、第２巻、ｐ．１３３〜１４７；デフージュロールズ・ハン（ｄｅ  Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ）著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００８年、第１９巻、ｐ．１２５〜１３２；シャファート（Ｓｃｈａｆｆｅｒｔ）及びワーグナー（Ｗａｇｎｅｒ）著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００８年、第１６巻、ｐ．１１３１〜１１３８；チャトゥアベディ（Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ）ら著、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２０１１年、第８巻、ｐ．１４５５〜１４６８；デイビス（Ｄａｖｉｓ）著、モレキュラー・ファーマシューティクス（Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．）、２００９年、第６巻、ｐ．６５９〜６６８；デイビス（Ｄａｖｉｓ）著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６４巻、ｐ．１０６７〜１０７０；これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０５００】
一実施形態では、医薬組成物は持続放出製剤であってもよい。さらなる実施形態において、持続放出製剤は皮下送達用であってもよい。持続放出製剤としては、限定はされないが、ＰＬＧＡミクロスフェア、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ゲルサイト（ＧＥＬＳＩＴＥ）（登録商標）（ナノセラピューティクス・インコーポレイテッド（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、フロリダ州アラチュア郡（Ａｌａｃｈｕａ，ＦＬ））、ハイレネックス（ＨＹＬＥＮＥＸ）（登録商標）（ハロザイム・セラピューティクス（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ））、外科用シーラント、例えばフィブリノゲンポリマー（エチコン・インコーポレイテッド（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．）、ジョージア州コルネリア（Ｃｏｒｎｅｌｉａ，ＧＡ））、ティセル（ＴＩＳＳＥＬＬ）（登録商標）（バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、イリノイ州ディアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））、ＰＥＧ系シーラント、及びコシール（ＣＯＳＥＡＬ）（登録商標）（バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、イリノイ州ディアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））を挙げることができる。
【０５０１】
非限定的な例として、修飾ｍＲＮＡは、調節可能な放出速度（例えば、数日間及び数週間）のＰＬＧＡミクロスフェアを調製し、且つ封入プロセスの間に修飾ｍＲＮＡの完全性を維持しながらそのＰＬＧＡミクロスフェアに修飾ｍＲＮＡを封入することにより、ＰＬＧＡミクロスフェアに製剤化されてもよい。ＥＶＡｃは、非生分解性（ｎｏｎ−ｂｉｏｄｅｇｒａｄｅａｂｌｅ）で生体適合性のポリマーであり、前臨床持続放出インプラント適用において広く用いられている（例えば、緑内障用のピロカルピン眼科用インサートである長時間放出製品オキュサート（Ｏｃｕｓｅｒｔ）又は持続放出プロゲステロン子宮内装
置であるプロゲスタサート（ｐｒｏｇｅｓｔａｓｅｒｔ）；経皮送達システムのテストデルム（Ｔｅｓｔｏｄｅｒｍ）、デュラジェシック（Ｄｕｒａｇｅｓｉｃ）及びセレギリン；カテーテル）。ポロキサマーＦ−４０７  ＮＦは、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンの親水性非イオン性界面活性剤トリブロックコポリマーであり、５℃未満の温度では低粘度であり、１５℃より高い温度で固体ゲルを形成する。ＰＥＧ系外科用シーラントは、送達装置中で混合される２つの合成ＰＥＧ構成成分を含み、これは１分で調製することができ、３分でシールし、３０日以内に再吸収される。ゲルサイト（ＧＥＬＳＩＴＥ）（登録商標）及び天然ポリマーは、投与部位におけるインサイチュでのゲル化能を有する。これらはイオン性相互作用（ｉｏｎｉｃ  ｉｎｅｒａｃｔｉｏｎ）でタンパク質及びペプチド治療薬候補と相互作用して安定効果をもたらすことが示されている。
【０５０２】
ポリマー製剤はまた、限定はされないが、葉酸塩、トランスフェリン、及びＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）により例示されるとおりの種々のリガンドの発現によって選択的に標的化することもできる（ブノワ（Ｂｅｎｏｉｔ）ら著、バイオマクロモレキュルズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、２０１１年、第１２巻、ｐ．２７０８〜２７１４；ロゼマ（Ｒｏｚｅｍａ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２００７年、第１０４巻、ｐ．１２９８２〜１２８８７；デイビス（Ｄａｖｉｓ）著、モレキュラー・ファーマシューティクス（Ｍｏｌ
Ｐｈａｒｍ．）、２００９年、第６巻、ｐ．６５９〜６６８；デイビス（Ｄａｖｉｓ）著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６４巻、ｐ．１０６７〜１０７０；これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０５０３】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、ポリマー化合物と共に又はその中に製剤化されてもよい。ポリマーには、限定はされないが、ポリエテン類、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ｌ−リジン）（ＰＬＬ）、ＰＬＬにグラフトされたＰＥＧ、カチオン性リポポリマー、生分解性カチオン性リポポリマー、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、架橋分枝状ポリ（アルキレンイミン）類、ポリアミン誘導体、修飾ポロキサマー、生分解性ポリマー、弾性生分解性ポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルブロックランダムコポリマー、マルチブロックコポリマー、直鎖状生分解性コポリマー、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸）（ＰＡＧＡ）、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、ポリカーボネート類、ポリ無水物類、ポリヒドロキシ酸類、ポリプロピルフメレート（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅ）類、ポリカプロラクトン類、ポリアミド類、ポリアセタール類、ポリエーテル類、ポリエステル類、ポリ（オルトエステル）類、ポリシアノアクリレート類、ポリビニルアルコール類、ポリウレタン類、ポリホスファゼン類、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、ポリシアノアクリレート類、ポリ尿素類、ポリスチレン類、ポリアミン類、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、アクリルポリマー、アミン含有ポリマー、デキストランポリマー、デキストランポリマー誘導体又は又はそれらの組み合わせなどの少なくとも１つのポリマーが含まれ得る。
【０５０４】
非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、米国特許第６，１７７，２７４号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのＰＬＬがグラフトされたＰＥＧのポリマー化合物と共に製剤化されてもよい。この製剤は、細胞のインビトロトランスフェクション又はキメラポリヌクレオチドのインビボ送達に用いられ得る。別の例において、キメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２００９００４２８２９号明細書及び同第２００９００４２８２５号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり、カチオン性
ポリマーと共に溶液又は媒体中、乾燥医薬組成物中、又は乾燥させることが可能な溶液中に懸濁され得る。
【０５０５】
別の非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー（米国特許出願公開第２０１２０００４２９３号明細書及び米国特許第８，２３６，３３０号明細書を参照、全体として参照により本明細書に援用される）又はＰＬＧＡ−ＰＥＧ−ＰＬＧＡブロックコポリマー（米国特許第６，００４，５７３号明細書を参照、本明細書において全体として参照により援用される）と共に製剤化されてもよい。非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、ＰＥＧとＰＬＡ又はＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコポリマーと共に製剤化されてもよい（米国特許第８，２４６，９６８号明細書を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５０６】
核酸を送達し、又は疾患を治療及び／又は予防し、又は植込み型若しくは注射用装置に入れるため、ポリアミン誘導体が用いられ得る（米国特許出願公開第２０１００２６０８１７号明細書（現在、米国特許第８，４６０，６９６号明細書）これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、医薬組成物は、キメラポリヌクレオチドと、米国特許出願公開第２０１００２６０８１７号明細書（現在、米国特許第８，４６０，６９６号明細書；これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるポリアミン誘導体とを含み得る。非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、炭水化物ジアジドモノマーを、オリゴアミンを含むジルキン（ｄｉｌｋｙｎｅ）単位と組み合わせることにより調製される１，３−双極性付加ポリマーを含むポリマーなどのポリアミンド（ｐｏｌｙａｍｉｎｄｅ）ポリマーを使用して送達され得る（米国特許第８，２３６，２８０号明細書；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５０７】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つのアクリルポリマーと共に製剤化されてもよい。アクリルポリマーとしては、限定はされないが、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸・メタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート類及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０５０８】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１１１１５８６２号パンフレット、国際公開第２０１２０８２５７４号パンフレット及び国際公開第２０１２０６８１８７号パンフレット並びに米国特許出願公開第２０１２０２８３４２７号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される少なくとも１つのポリマー及び／又はその誘導体と共に製剤化されてもよい。別の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１１１１５８６２号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの式Ｚのポリマーと共に製剤化されてもよい。さらに別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１２０８２５７４号パンフレット又は国際公開第２０１２０６８１８７号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２０２８３４２号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの式Ｚ、Ｚ’又はＺ”のポリマーと共に製剤化されてもよい。本発明の修飾ＲＮＡと共に製剤化されるポリマーは、国際公開第２０１２０８２５７４号パンフレット又は国際公開第２０１２０６８１８７号パンフレット（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって合成されてもよい。
【０５０９】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つのアクリルポリマーと共に製剤化されてもよい。アクリルポリマーとしては、限定はされないが、アクリル酸、メタクリル
酸、アクリル酸・メタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート類及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０５１０】
本発明のキメラポリヌクレオチドの製剤は、限定はされないが、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー類、ポリ（アミン−ｃｏ−エステル）類又はそれらの組み合わせなどの、少なくとも１つのアミン含有ポリマーを含み得る。非限定的な例として、ポリ（アミン−ｃｏ−エステル）類は、国際公開第２０１３０８２５２９号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される及び／又はそれに記載される方法によって作製されるポリマーであってもよい。
【０５１１】
例えば、本発明のキメラポリヌクレオチドは、ポリ（アルキレンイミン）、生分解性カチオン性リポポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ポリマー、又は生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルポリマー、生分解性ポリエステルランダムコポリマー、直鎖状生分解性コポリマー、ＰＡＧＡ、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー又はそれらの組み合わせを含む医薬化合物に製剤化されてもよい。生分解性カチオン性リポポリマーは、当該技術分野において公知の方法及び／又は米国特許第６，６９６，０３８号明細書、米国特許出願公開第２００３００７３６１９号明細書及び同第２００４０１４２４７４号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。ポリ（アルキレンイミン）は、当該技術分野において公知の方法及び／又は米国特許出願公開第２０１００００４３１５号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法を用いて作製されてもよい。生分解性（ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂａｌｅ）ポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルポリマー、又は生分解性ポリエステルランダムコポリマーは、当該技術分野において公知の方法及び／又は米国特許第６，５１７，８６９号明細書及び同第６，２６７，９８７号明細書（これらの内容は、各々全体として参照により本明細書に援用される）に記載されるとおりの方法を用いて作製されてもよい。直鎖状生分解性コポリマーは、当該技術分野において公知の方法を用いて及び／又は米国特許第６，６５２，８８６号明細書に記載されるとおり作製されてもよい。ＰＡＧＡポリマーは、当該技術分野において公知の方法を用いて及び／又は米国特許第６，２１７，９１２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり作製されてもよい。ＰＡＧＡポリマーは、共重合されることにより、限定はされないが、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアルギン（ｐｏｌｙａｒｇｉｎｅ）、ポリオルニチン、ヒストン、アビジン、プロタミン、ポリラクチド類及びポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）類などのポリマーとコポリマー又はブロックコポリマーを形成し得る。生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、当該技術分野において公知の方法及び／又は米国特許第８，０５７，８２１号明細書、同第８，４４４，９９２号明細書又は米国特許出願公開第２０１２００９１４５号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法によって作製されてもよい。例えば、マルチブロックコポリマーは、分枝状ポリエチレンイミンと比較して異なるパターンを有する線状ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）ブロックを使用して合成されてもよい。さらに、組成物又は医薬組成物は、当該技術分野において公知の方法、本明細書に記載される方法、又は米国特許出願公開第２０１００００４３１５号明細書又は米国特許第６，２６７，９８７号明細書及び同第６，２１７，９１２号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法によって作製されてもよい。
【０５１２】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、ポリカチオン側鎖を含有し得る少なくとも１つの
分解性ポリエステルと共に製剤化されてもよい。分解性（ｄｅｇｒａｄｅａｂｌｅ）ポリエステルとしては、限定はされないが、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。別の実施形態では、分解性ポリエステルはＰＥＧコンジュゲーションを含んでＰＥＧ化ポリマーを形成し得る。
【０５１３】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つの架橋性ポリエステルと共に製剤化されてもよい。架橋性ポリエステルとしては、当該技術分野において公知のもの及び米国特許出願公開第２０１２０２６９７６１号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０５１４】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つのシクロデキストリンポリマー内に又はそれと共に製剤化されてもよい。シクロデキストリンポリマー及びシクロデキストリンポリマーの作製方法としては、当該技術分野において公知のもの及び米国特許出願公開第２０１３０１８４４５３号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０５１５】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つの架橋カチオン結合ポリマー内に又はそれと共に製剤化されてもよい。架橋カチオン結合ポリマー及び架橋カチオン結合ポリマーの作製方法としては、当該技術分野において公知のもの及び国際公開第２０１３１０６０７２号パンフレット、国際公開第２０１３１０６０７３号パンフレット及び国際公開第２０１３１０６０８６号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０５１６】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝ポリマー内に又はそれと共に製剤化されてもよい。分枝ポリマー及び分枝ポリマーの作製方法としては、当該技術分野において公知のもの及び国際公開第２０１３１１３０７１号パンフレット（この各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０５１７】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくともＰＥＧ化アルブミンポリマー内に又はそれと共に製剤化されてもよい。ＰＥＧ化アルブミンポリマー及びＰＥＧ化アルブミンポリマーの作製方法としては、当該技術分野において公知のもの及び米国特許出願公開第２０１３０２３１２８７号明細書（この各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０５１８】
一実施形態では、本明細書に記載されるポリマーは、脂質末端ＰＥＧにコンジュゲートされ得る。非限定的な例として、ＰＬＧＡは脂質末端ＰＥＧにコンジュゲートされてＰＬＧＡ−ＤＳＰＥ−ＰＥＧを形成し得る。別の非限定的な例として、本発明で使用されるＰＥＧコンジュゲートは、国際公開第２００８１０３２７６号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。ポリマーは、限定はされないが、米国特許第８，２７３，３６３号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるコンジュゲートなどのリガンドコンジュゲートを使用してコンジュゲートされ得る。
【０５１９】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、投与前にＰＥＧ又はリン酸ナトリウム／炭酸ナトリウム溶液と混合され得る。別の実施形態では、目的タンパク質をコードするキメラポリヌクレオチドはＰＥＧと混合され、またリン酸ナトリウム／炭酸ナトリウム溶液とも混合され得る。さらに別の実施形態では、目的タンパク質をコードするキメラポリヌクレオチドがＰＥＧと混合され得るとともに、第２の目的タンパク
質をコードするキメラポリヌクレオチドがリン酸ナトリウム／炭酸ナトリウム溶液と混合され得る。
【０５２０】
一実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは別の化合物とコンジュゲートされ得る。コンジュゲートの非限定的な例は、米国特許第７，９６４，５７８号明細書及び同第７，８３３，９９２号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。別の実施形態では、本発明の修飾ＲＮＡは、米国特許第７，９６４，５７８号明細書及び同第７，８３３，９９２号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの式１〜１２２のコンジュゲートとコンジュゲートされ得る。本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、金などの金属とコンジュゲートされ得る（例えば、ジルジョハン（Ｇｉｌｊｏｈａｎｎ）ら著、米国化学会誌（Ｊｏｕｒｎ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、２００９年、第１３１巻、第６号、ｐ．２０７２〜２０７３を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。別の実施形態では、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは金ナノ粒子にコンジュゲートされ及び／又は封入され得る（国際公開第２０１２１６２６９号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２０３０２９４０号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１７７５２３号明細書；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５２１】
米国特許出願公開第２０１００００４３１３号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり、遺伝子送達組成物はヌクレオチド配列とポロキサマーとを含み得る。例えば、本発明（ｐｒｅｓｅｎｔ  ｉｎｖｅｉｔｉｏｎ）のキメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１００００４３１３号明細書に記載されるポロキサマーを有する遺伝子送達組成物中に用いられ得る。
【０５２２】
一実施形態では、本発明のポリマー製剤は、カチオン性担体を含み得るポリマー製剤を、コレステロール及びポリエチレングリコール基に共有結合的に連結し得るカチオン性リポポリマーと接触させることによって安定化させ得る。ポリマー製剤は、米国特許出願公開第２００９００４２８２９号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法を用いてカチオン性リポポリマーと接触させ得る。カチオン性担体としては、限定はされないが、ポリエチレンイミン、ポリ（トリメチレンイミン）、ポリ（テトラメチレンイミン）、ポリプロピレンイミン、アミノグリコシド−ポリアミン、ジデオキシ−ジアミノ−ｂ−シクロデキストリン、スペルミン、スペルミジン、ポリ（２−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、ポリ（リジン）、ポリ（ヒスチジン）、ポリ（アルギニン）、カチオン化ゼラチン、デンドリマー、キトサン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−塩化トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）、１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキシアミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、３Ｂ−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロールクロリド（ＤＣ−コレステロールＨＣｌ）ジヘプタデシルアミドグリシルスペルミジン（ＤＯＧＳ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリドＤＯＤＡＣ）及びそれらの組み合わせを挙げることができる。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１３００６５９４２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどのカチオン性リポポリマーと共に製剤化されてもよい。
【０５２３】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、１つ以上のポリマーのポリプレックスに製剤化されてもよい（例えば、米国特許第８，５０１，４７８号明細書、米国特許出願公開第２０１２０２３７５６５号明細書及び同第２０１２０２７０９２７号明細書及び同第２０１３０１４９７８３号明細書及び国際公開第２０１３０９０８６１号パンフレットを参照；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、ポリプレックスは、国際公開第２０１３０９０８６１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される新規（ｎｏｖａｌ）α−アミノアミジンポリマーを使用して形成され得る。別の非限定的な例として、ポリプレックスは、米国特許第８，５０１，４７８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるクリックポリマーを使用して形成され得る。
【０５２４】
一実施形態では、ポリプレックスは２つ以上のカチオン性ポリマーを含む。カチオン性（ｃａｔｉｏｉｎｉｃ）ポリマーは、線状ＰＥＩなどのポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）を含み得る。別の実施形態では、ポリプレックスはｐ（ＴＥＴＡ／ＣＢＡ）、そのＰＥＧ化類似体ｐ（ＴＥＴＡ／ＣＢＡ）−ｇ−ＰＥＧ２ｋ及びそれらの混合物を含む（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１４９７８３号明細書を参照（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５２５】
本発明のキメラポリヌクレオチドはまた、ポリマー、脂質、及び／又は他の生分解性薬剤、例えば、限定はされないがリン酸カルシウムなどの組み合わせを使用してナノ粒子として製剤化することもできる。構成成分がコアシェル、ハイブリッド、及び／又はレイヤー・バイ・レイヤー構造で組み合わされることによりナノ粒子の微調整が可能となり、従ってポリヌクレオチド、キメラポリヌクレオチドの送達が増進され得る（ワン（Ｗａｎｇ）ら著、ネイチャー・マテリアルズ（Ｎａｔ  Ｍａｔｅｒ．）、２００６年、第５巻、ｐ．７９１〜７９６；フラー（Ｆｕｌｌｅｒ）ら著、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２００８年、第２９巻、ｐ．１５２６〜１５３２；デコカー（ＤｅＫｏｋｅｒ）ら著、アドバンスド・ドラッグ・デリバリー・レビューズ（Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．）、２０１１年、第６３巻、ｐ．７４８〜７６１；エンドレス（Ｅｎｄｒｅｓ）ら著、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１１年、第３２巻、ｐ．７７２１〜７７３１；スー（Ｓｕ）ら著、モレキュラー・ファーマシューティクス（Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．）、２０１１年６月６日、第８巻、第３号、ｐ．７７４〜８７；本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、ナノ粒子は、限定はされないが、親水性−疎水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ）、疎水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）及び／又は親水性ポリマー（国際公開第２０１２０２２５１２９号パンフレット；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）などの複数のポリマーを含み得る。
【０５２６】
別の非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドに対する親水性ポリマーを含むナノ粒子は、国際公開第２０１３１１９９３６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものか、又はそれに記載される方法によって作製されるものであってもよい。
【０５２７】
一実施形態では、本発明において使用し得る生分解性ポリマーはポリ（エーテル−無水物）ブロックコポリマーである。非限定的な例として、本明細書において使用される生分解性ポリマーは、国際公開第２００６０６３２４９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのブロックコポリマー、又は国際公開第２００６０６３２４９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されるブロックコポリマーであってもよい。
【０５２８】
別の実施形態では、本発明において使用し得る生分解性ポリマーは、アルキル及びシクロアルキル末端生分解性脂質である。非限定的な例として、アルキル及びシクロアルキル末端生分解性脂質は、国際公開第２０１３０８６３２２号パンフレットに記載されるもの、及び／又は国際公開第２０１３０８６３２２号パンフレットに記載される方法によって作製されるもの（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）であってもよい。
【０５２９】
さらに別の実施形態では、本発明において使用し得る生分解性ポリマーは、脂質部分に位置する１つ以上の生分解性基を有するカチオン性脂質である。非限定的な例として、生分解性脂質は、米国特許出願公開第２０１３０１９５９２０号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。
【０５３０】
脂質及び／又はポリマーと組み合わせた生分解性リン酸カルシウムナノ粒子は、キメラポリヌクレオチドをインビボ送達することが示されている。一実施形態では、アニスアミドなどのターゲティングリガンドもまた含有し得る脂質コーティングリン酸カルシウムナノ粒子が、本発明のポリヌクレオチド、キメラポリヌクレオチドの送達に用いられ得る。例えば、マウス転移性肺モデルにおいてｓｉＲＮＡを有効に送達するため、脂質コーティングリン酸カルシウムナノ粒子が使用された（リー（Ｌｉ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．）、２０１０年、第１４２巻、ｐ．４１６〜４２１；リー（Ｌｉ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ
Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．）、２０１２年、第１５８巻、ｐ．１０８〜１１４；ヤン（Ｙａｎｇ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１２年、第２０巻、ｐ．６０９〜６１５；本明細書において全体として参照により援用される）。この送達システムは、標的化されるナノ粒子とエンドソームエスケープを増進させる構成成分、リン酸カルシウムとの両方を含み、それによりｓｉＲＮＡの送達を改善する。
【０５３１】
一実施形態では、リン酸カルシウムをＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマーと共に使用してキメラポリヌクレオチドが送達され得る（カジカワ（Ｋａｚｉｋａｗａ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．）、２００４年、第９７巻、ｐ．３４５〜３５６；カジカワ（Ｋａｚｉｋａｗａ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．）、２００６年、第１１１巻、ｐ．３６８〜３７０；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５３２】
一実施形態では、ＰＥＧ−電荷変換（ＰＥＧ−ｃｈａｒｇｅ−ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎａｌ）ポリマー（ピテッラ（Ｐｉｔｅｌｌａ）ら著、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１１年、第３２巻、ｐ．３１０６〜３１１４；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）を使用してナノ粒子が形成され、本発明のキメラポリヌクレオチドが送達され得る。ＰＥＧ−電荷変換ポリマーは、酸性ｐＨでポリカチオンに切断され、それによりエンドソームエスケープを増進させることにより、ＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマーを改良し得る。
【０５３３】
一実施形態では、本発明で使用されるポリマーは、限定はされないが、国際公開第２０１３０５５３３１号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるペンタブロックポリマーなどのペンタブロックポリマーであってもよい。非限定的な例として、ペンタブロックポリマーはＰＧＡ−ＰＣＬ−ＰＥＧ−ＰＣＬ−ＰＧＡを含む［式中、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、ＰＣＬはポリ（Ｅ−カプロラクトン）であり、ＰＧＡはポリ（グリコール酸）であり、及びＰＬＡはポリ（乳酸）である］。別の非限定的な例として、ペンタブロックポリマーはＰＥＧ−ＰＣＬ−ＰＬＡ−ＰＣ
Ｌ−ＰＥＧを含む［式中、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、ＰＣＬはポリ（Ｅ−カプロラクトン）であり、ＰＧＡはポリ（グリコール酸）であり、及びＰＬＡはポリ（乳酸）である］。
【０５３４】
一実施形態では、本発明において使用し得るポリマーは、少なくとも１つのジエポキシドと少なくとも１つのアミノグリコシドとを含む（例えば、国際公開第２０１３０５５９７１号パンフレットを参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。ジエポキシドは、限定はされないが、１，４ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４Ｂ）、１，４−シクロヘキサンジメタノールジグリシジルエーテル（１，４Ｃ）、４−ビニルシクロヘキセンジエポキシド（４ＶＣＤ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＤＧＥ）、グリセロールジグリシジルエーテル（ＧＤＥ）、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル（ＮＰＤＧＥ）、ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、ポリ（プロピレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＰＧＤＥ）及びレソルシノールジグリシジルエーテル（ＲＤＥ）から選択され得る。アミノグリコシドは、限定はされないが、ストレプトマイシン、ネオマイシン、フラマイセチン、パロモマイシン、リボスタマイシン、カナマイシン、アミカシン、アルベカシン、ベカナマイシン、ジベカシン、トブラマイシン、スペクチノマイシン、ハイグロマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、シソマイシン、イセパマイシン、ベルダマイシン、アストロマイシン、及びアプラマイシンから選択され得る。非限定的な例として、ポリマーは、国際公開第２０１３０５５９７１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。別の非限定的な例として、少なくとも１つのジエポキシドと少なくとも１つのアミノグリコシドとを含むポリマーのいずれかを含む組成物が、国際公開第２０１３０５５９７１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０５３５】
一実施形態では、本発明において使用し得るポリマーは、架橋ポリマーであってもよい。非限定的な例として、架橋ポリマーは、米国特許第８，４１４，９２７号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの粒子を形成するために使用し得る。別の非限定的な例として、架橋ポリマーは、米国特許出願公開第２０１３０１７２６００号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって得られてもよい。
【０５３６】
別の実施形態では、本発明において使用し得るポリマーは、米国特許第８，４６１，１３２号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの架橋ポリマーであってもよい。非限定的な例として、架橋ポリマーは、生体組織の治療用の治療組成物中に使用されてもよい。治療組成物は、注射又はカテーテル法など、当該技術分野において公知の及び／又は本明細書に記載される様々な方法を用いて損傷組織に投与され得る。
【０５３７】
一実施形態では、本発明において使用し得るポリマーは、限定はされないが、国際公開第２０１３０４９３２８号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどのジ脂肪族（ｄｉ−ａｌｐｈａｔｉｃ）置換ＰＥＧ化脂質であってもよい。
【０５３８】
一実施形態では、ブロックコポリマーはＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧであり（例えば、感熱性ヒドロゲル（ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）が、リー（Ｌｅｅ）ら著、「Ｔｇｆ−β１遺伝子送達媒体としての感熱性ヒドロゲルは糖尿病性創傷治癒を増進する（Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ａｓ  ａ  Ｔｇｆ−β１  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａ
ｌｉｎｇ）」、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００３年、第２０巻、第１２号、ｐ．１９９５〜２０００ではＴＧＦ−β１遺伝子送達媒体として使用され；リー（Ｌｉ）ら著、「感熱性生分解性ヒドロゲルをベースとする制御遺伝子送達システム（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ）」、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００３年、第２０巻、第６号、ｐ．８８４〜８８８；及びチャン（Ｃｈａｎｇ）ら著、「非イオン性両親媒性生分解性ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーはラット骨格筋における遺伝子送達効率を増進する（Ｎｏｎ−ｉｏｎｉｃ  ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ）」、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２００７年、第１１８巻、ｐ．２４５〜２５３では制御遺伝子送達システムとして使用されたことを参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）、本発明において使用し得る。本発明は、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧと共に、限定はされないが筋肉内投与及び皮下投与などの投与用に製剤化されてもよい。
【０５３９】
別の実施形態では、本発明においてＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを使用して生分解性持続放出システムが開発される。一態様では、本発明のキメラポリヌクレオチドは投与前にブロックコポリマーと混合される。別の態様では、本発明のキメラポリヌクレオチド酸（ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｃｉｄｓ）はブロックコポリマーと共投与される。
【０５４０】
一実施形態では、本発明で使用されるポリマーは、限定はされないが、米国特許第８４５４９４６号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの多官能性Ｎ−マレイミジルポリマー誘導体などの、多官能性ポリマー誘導体であってもよい。
【０５４１】
コアシェルナノ粒子の使用は、カチオン性架橋ナノゲルコアと様々なシェルとを合成するハイスループット手法がさらなる焦点となっている（ジークバルト（Ｓｉｅｇｗａｒｔ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１１年、第１０８巻、ｐ．１２９９６〜１３００１；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。ポリマーナノ粒子の複合体形成、送達、及びインターナリゼーションは、ナノ粒子のコア及びシェルの両構成成分の化学組成を改変することによって正確に制御し得る。例えば、コアシェルナノ粒子は、それがコレステロールをナノ粒子に共有結合的に結合した後には、ｓｉＲＮＡをマウス肝細胞に効率的に送達し得る。
【０５４２】
一実施形態では、中間のＰＬＧＡ層とＰＥＧを含有する外側の中性脂質層とを含む中空脂質コアを使用して本発明のポリヌクレオチド、キメラポリヌクレオチドを送達し得る。非限定的な例として、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒｅａｓｅ）発現腫瘍を担持するマウスでは、脂質−ポリマー−脂質ハイブリッドナノ粒子が従来のリポプレックスと比較してルシフェラーゼ発現を有意に抑制したことが明らかにされた（シャイ（Ｓｈｉ）ら著、アンゲヴァンテ・ケミー・インターナショナル・エディション（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ．）、２０１１年、第５０巻、ｐ．７０２７〜７０３１；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５４３】
一実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーの
いずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用してコア中のキメラポリヌクレオチドが保護され得る。
【０５４４】
本発明のキメラポリヌクレオチドと共に使用されるコアシェルナノ粒子は、米国特許第８，３１３，７７７号明細書又は国際公開第２０１３１２４８６７号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に開示され、及びそれらに記載される方法によって形成され得る。
【０５４５】
一実施形態では、コアシェルナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーのいずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用してコア中のキメラポリヌクレオチドが保護され得る。
【０５４６】
一実施形態では、本明細書に記載される製剤と共に使用されるポリマーは、国際公開第２０１１１２００５３号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの修飾ポリマー（限定はされないが、修飾ポリアセタールなど）であってもよい。
【０５４７】
一実施形態では、製剤は、ポリマー担体と少なくとも１つの核酸分子とを含むポリマー担体カーゴ複合体であってもよい。ポリマー担体カーゴ複合体の非限定的な例は、国際公開第２０１３１１３３２６号パンフレット、国際公開第２０１３１１３５０１号パンフレット、国際公開第２０１３１１３３２５号パンフレット、国際公開第２０１３１１３５０２号パンフレット及び国際公開第２０１３１１３７３６号パンフレット及び欧州特許出願公開第２６２３１２１号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。一態様において、ポリマー担体カーゴ複合体は、限定はされないが、国際公開第２０１３１１３３２５号パンフレット及び国際公開第２０１３１１３５０２号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、負電荷核酸分子を含み得る。
【０５４８】
一実施形態では、医薬組成物は、本明細書のキメラポリヌクレオチドとポリマー担体カーゴ複合体とを含み得る。キメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、感染症に関連する病原体由来の抗原、アレルギー若しくはアレルギー性疾患に関連する抗原、自己免疫疾患に関連する抗原又は癌若しくは腫瘍疾患に関連する抗原などの目的タンパク質をコードし得る（例えば、国際公開第２０１３１１３３２６号パンフレット、国際公開第２０１３１１３５０１号パンフレット、国際公開第２０１３１１３３２５号パンフレット、国際公開第２０１３１１３５０２号パンフレット及び国際公開第２０１３１１３７３６号パンフレット及び欧州特許出願公開第２６２３１２１号明細書に記載される抗原を参照、これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５４９】
非限定的な例として、コアシェルナノ粒子を使用して眼疾患又は障害が治療され得る（例えば、米国特許出願公開第２０１２０３２１７１９号明細書を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５５０】
一実施形態では、本明細書に記載される製剤と共に使用されるポリマーは、国際公開第２０１１１２００５３号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの修飾ポリマー（限定はされないが、修飾ポリアセタールなど）であってもよい。
【０５５１】
ペプチド及びタンパク質
本発明のキメラポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドによる細胞のトランスフ
ェクションを増加させるため、ペプチド及び／又はタンパク質と共に製剤化することができる。一実施形態では、限定はされないが、細胞透過性ペプチド及びタンパク質並びに細胞内送達を可能にするペプチドなどのペプチドが、医薬製剤の送達に用いられ得る。本発明の医薬製剤と共に用いられ得る細胞透過性ペプチドの非限定的な例としては、細胞内空間への送達を促進するポリカチオンに結合した細胞透過性ペプチド配列、例えば、ＨＩＶ由来ＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トランスポータン、又はｈＣＴ由来細胞透過性ペプチドが挙げられる（例えば、キャロン（Ｃａｒｏｎ）ら著、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．）、第３巻、第３号、ｐ．３１０〜８、２００１年；ランゲル（Ｌａｎｇｅｌ）著、「細胞透過性ペプチド：方法と応用（Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」（ＣＲＣプレス（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）、フロリダ州ボーカラトーン（Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ  ＦＬ）、２００２年）；エル・アンダルッシ（Ｅｌ−Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ）ら著、カレント・ファーマシューティカル・デザイン（Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．）、第１１巻、第２８号、ｐ．３５９７〜６１１、２００３年；及びデエー（Ｄｅｓｈａｙｅｓ）ら著、セルラー・アンド・モレキュラー・ライフ・サイエンシーズ（Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．）、第６２巻、第１６号、ｐ．１８３９〜４９、２００５年を参照、これらは全て、全体として参照により本明細書に援用される）。組成物はまた、細胞内空間への組成物の送達を増進する細胞透過剤、例えばリポソームを含むように製剤化することもできる。本発明のキメラポリヌクレオチドは、細胞内送達を可能にするため、ペプチド及び／又はタンパク質、例えば、限定はされないが、エルロン・セラピューティクス（Ａｉｌｅｒｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（マサチューセッツ州ケンブリッジ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））及びパーメオン・バイオロジクス（Ｐｅｒｍｅｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）（マサチューセッツ州ケンブリッジ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））のペプチド及び／又はタンパク質などと複合体化し得る（クロニカン（Ｃｒｏｎｉｃａｎ）ら著、ＡＣＳ・ケミカル・バイオロジー（ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．）、２０１０年、第５巻、ｐ．７４７〜７５２；マクノートン（ＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、２００９年、第１０６巻、ｐ．６１１１〜６１１６；ソイヤー（Ｓａｗｙｅｒ）著、ケミカル・バイオロジー・アンド・ドラッグ・デザイン（Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．）、２００９年、第７３巻、ｐ．３〜６；ヴァーダイン（Ｖｅｒｄｉｎｅ）及びヒリンスキ（Ｈｉｌｉｎｓｋｉ）著、メソッズ・イン・エンジモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．）、２０１２年、第５０３巻、ｐ．３〜３３；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５５２】
一実施形態では、細胞透過性ポリペプチドは第１のドメインと第２のドメインとを含み得る。第１のドメインは過荷電ポリペプチドを含み得る。第２のドメインはタンパク質結合パートナーを含み得る。本明細書で使用されるとき、「タンパク質結合パートナー」には、限定はされないが、抗体及びその機能的断片、足場タンパク質、又はペプチドが含まれる。細胞透過性ポリペプチドは、タンパク質結合パートナーに対する細胞内結合パートナーをさらに含み得る。細胞透過性ポリペプチドは、キメラポリヌクレオチドが導入され得る細胞から分泌される能力を有し得る。
【０５５３】
含有ペプチド又はタンパク質の製剤を使用することにより、キメラポリヌクレオチドによる細胞トランスフェクションを増加させ、キメラポリヌクレオチドの体内分布を（例えば、特定の組織又は細胞型を標的化することにより）改変し、及び／又はコードタンパク質の翻訳を増加させ得る（例えば、国際公開第２０１２１１０６３６号パンフレット及び国際公開第２０１３１２３２９８号パンフレットを参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５５４】
一実施形態では、細胞透過性ペプチドは、限定はされないが、米国特許出願公開第２０
１３０１２９７２６号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１３７６４４号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１６４２１９号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。
【０５５５】
細胞
本発明のキメラポリヌクレオチドはエキソビボで細胞にトランスフェクトすることができ、これは続いて対象に移植される。非限定的な例として、医薬組成物は、修飾ＲＮＡを肝臓及び骨髄性細胞に送達するための赤血球、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）で修飾ＲＮＡを送達するためのビロソーム、及び修飾ＲＮＡを送達するためのエレクトロポレーション処理細胞、例えば、限定はされないが、マックスサイト（ＭＡＸＣＹＴＥ）（登録商標）（メリーランド州ゲイサーズバーグ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））及びエリテック（ＥＲＹＴＥＣＨ）（登録商標）（仏国リヨン（Ｌｙｏｎ））のものを含み得る。赤血球、ウイルス粒子及びエレクトロポレーション処理細胞を使用したキメラポリヌクレオチド以外のペイロードの送達の例が報告されている（ゴッドフリン（Ｇｏｄｆｒｉｎ）ら著、エキスパート・オピニオン・オン・バイオロジカル・セラピー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ
Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１２年、第１２巻、ｐ．１２７〜１３３；ファング（Ｆａｎｇ）ら著、エキスパート・オピニオン・オン・バイオロジカル・セラピー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２０１２年、第１２巻、ｐ．３８５〜３８９；フー（Ｈｕ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ
Ｕ  Ｓ  Ａ）、２０１１年、第１０８巻、ｐ．１０９８０〜１０９８５；ルンド（Ｌｕｎｄ）ら著、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．）、２０１０年、第２７巻、ｐ．４００〜４２０；ハックリーデ（Ｈｕｃｋｒｉｅｄｅ）ら著、ジャーナル・オブ・リポソーム・リサーチ（Ｊ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓ．）、２００７年、第１７巻、ｐ．３９〜４７；クシ（Ｃｕｓｉ）著、ヒューマン・ワクチンズ・アンド・イムノセラピューティクス（Ｈｕｍ  Ｖａｃｃｉｎ．）、２００６年、第２巻、ｐ．１〜７；ド・ジョンジュ（ｄｅ  Ｊｏｎｇｅ）ら著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００６年、第１３巻、ｐ．４００〜４１１；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５５６】
キメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１１０８５２３１号パンフレット及び国際公開第２０１３１１６６５６号パンフレット並びに米国特許出願公開第２０１１０１７１２４８号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって合成される合成ＶＬＰで送達されてもよい。
【０５５７】
本発明のキメラポリヌクレオチドの細胞ベースの製剤を使用することにより、細胞トランスフェクション（例えば、細胞性担体における）を確実にし、キメラポリヌクレオチドの体内分布を（例えば、細胞担体を特定の組織又は細胞型に標的化することにより）改変し、及び／又はコードタンパク質の翻訳を増加させ得る。
【０５５８】
細胞への導入
細胞への核酸の導入には、ウイルス介在及び非ウイルス介在技法を含め、種々の方法が当該技術分野において公知であり、好適である。典型的な非ウイルス介在技法の例としては、限定はされないが、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム媒介性移入、ヌクレオフェクション、ソノポレーション、熱ショック、マグネトフェクション、リポソーム媒介性移入、マイクロインジェクション、マイクロプロジェクタイル媒介性移入（ナノ粒子）、カチオン性ポリマー媒介性移入（ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）又は細胞融合が挙げられる。
【０５５９】
ソノポレーション、又は細胞音波処理の技法は、音波（例えば、超音波周波数）の使用による細胞原形質膜の透過性の修飾である。ソノポレーション法は当業者に公知であり、
核酸のインビボ送達に使用される（ユン（Ｙｏｏｎ）及びパク（Ｐａｒｋ）著、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２０１０年、第７巻、ｐ．３２１〜３３０；ポステマ（Ｐｏｓｔｅｍａ）及びギルジャ（Ｇｉｌｊａ）著、カレント・ファーマシューティカル・バイオテクノロジー（Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００７年、第８巻、ｐ．３５５〜３６１；ニューマン（Ｎｅｗｍａｎ）及びベッティンガー（Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ）著、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００７年、第１４巻、ｐ．４６５〜４７５；全て本明細書において全体として参照により援用される）。ソノポレーション法は当該技術分野において公知であり、また、例えばそれが細菌に関係するとき米国特許出願公開第２０１００１９６９８３号明細書に、及びそれが他の細胞型に関係するとき、例えば、米国特許出願公開第２０１００００９４２４号明細書に（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）教示される。
【０５６０】
エレクトロポレーション技法もまた当該技術分野において周知されており、核酸のインビボ送達に、及び臨床的に用いられている（アンドレ（Ａｎｄｒｅ）ら著、カレント・ジーン・セラピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１０巻、ｐ．２６７〜２８０；キアレッラ（Ｃｈｉａｒｅｌｌａ）ら著、カレント・ジーン・セラピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１０巻、ｐ．２８１〜２８６；ホジュマン（Ｈｏｊｍａｎ）著、カレント・ジーン・セラピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１０巻、ｐ．１２８〜１３８；全て本明細書において全体として参照により援用される）。世界中で多くの会社が、限定はされないが、ＢＴＸ（登録商標）インスツルメント（ＢＴＸ（登録商標）Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）（マサチューセッツ州ホリストン（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ））（例えば、アジャイルパルス（ＡｇｉｌｅＰｕｌｓｅ）インビボシステム）及びイノビオ（Ｉｎｏｖｉｏ）（ペンシルベニア州ブルーベル（Ｂｌｕｅ  Ｂｅｌｌ，ＰＡ））（例えば、イノビオ（Ｉｎｏｖｉｏ）ＳＰ−５Ｐ筋肉内送達装置又はセレクトラ（ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ）（登録商標）３０００皮内送達装置）を含め、エレクトロポレーション装置を販売している。一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは実施例９に記載されるとおりエレクトロポレーションによって送達され得る。
【０５６１】
マイクロ臓器
キメラポリヌクレオチドはマイクロ臓器に含まれてもよく、次にはそれが持続性治療製剤においてコードされた目的ポリペプチドを発現することができる。一態様において、マイクロ臓器は、１つ以上の調節配列に作動可能に連結された、目的ポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、本発明のキメラポリヌクレオチド）を含むベクターを含み得る。非限定的な例として、本発明に伴い使用される持続性治療用マイクロ臓器は、米国特許第８４５９４８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。別の非限定的な例として、マイクロ臓器は、持続時間にわたり目的ポリペプチドの所望のレベルを維持するために用いられ得る（例えば、米国特許第８４５９４８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおり生理的ヘモグロビンレベルを維持する）。
【０５６２】
マイクロ臓器は、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも（ａ  ｌｅａｓｔ）７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも３週間、少なくとも１ヵ月間及び／又は少なくとも２ヵ月間、少なくとも３ヵ月間、少なくとも４ヵ月間、少なくとも５ヵ月間、少なくとも６ヵ月間又は６ヵ月超にわたり目的ポリペプチドを産生することが可能であってもよい。
【０５６３】
一実施形態では、マイクロ臓器は直径が少なくとも０．５ｍｍ〜少なくとも２０ｍｍ、例えば、限定はされないが、少なくとも０．５ｍｍ、少なくとも１ｍｍ、少なくとも１．５ｍｍ、少なくとも２ｍｍ、少なくとも２．５ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも３．５ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、少なくとも４．５ｍｍ、少なくとも５ｍｍ、少なくとも５．５ｍｍ、少なくとも６ｍｍ、少なくとも６．５ｍｍ、少なくとも７ｍｍ、少なくとも７．５ｍｍ、少なくとも８ｍｍ、少なくとも８．５ｍｍ、少なくとも９ｍｍ、少なくとも９．５ｍｍ、少なくとも１０ｍｍ、少なくとも１０．５ｍｍ、少なくとも１１ｍｍ、少なくとも１１．５ｍｍ、少なくとも１２ｍｍ、少なくとも１２．５ｍｍ、少なくとも１３ｍｍ、少なくとも１３．５ｍｍ、少なくとも１４ｍｍ、少なくとも１４．５ｍｍ、少なくとも１５ｍｍ、少なくとも１５．５．ｍｍ、少なくとも１６ｍｍ、少なくとも１６．５ｍｍ、少なくとも１７ｍｍ、少なくとも１７．５ｍｍ、少なくとも１８ｍｍ、少なくとも１８．５ｍｍ、少なくとも１９ｍｍ、少なくとも１９．５ｍｍ又は少なくとも２０ｍｍであり得る。別の実施形態では、マイクロ臓器は直径が０．５〜２．５ｍｍ、１〜２．５ｍｍ、１．５〜２．５ｍｍ、０．５〜３ｍｍ、１〜３ｍｍ、１．５〜３ｍｍ、０．５〜３．５ｍｍ、１〜３．５ｍｍ、１．５〜３．５ｍｍ、０．５〜４ｍｍ、１〜４ｍｍ、１．５〜４ｍｍ、２〜４ｍｍ、０．５〜５ｍｍ、１〜５ｍｍ、１．５〜５ｍｍ、２〜５ｍｍ、２．５〜５ｍｍ、３〜５ｍｍ、０．５〜６ｍｍ、１〜６ｍｍ、１．５〜６ｍｍ、２〜６ｍｍ、２．５〜６ｍｍ、３〜６ｍｍ、３．５〜６ｍｍ、４〜６ｍｍ、０．５〜７ｍｍ、１〜７ｍｍ、１．５〜７ｍｍ、２〜７ｍｍ、２．５〜７ｍｍ、３〜７ｍｍ、３．５〜７ｍｍ、４〜７ｍｍ、４．５〜７ｍｍ、５〜７ｍｍ、０．５〜８ｍｍ、１〜８ｍｍ、１．５〜８ｍｍ、２〜８ｍｍ、２．５〜８ｍｍ、３〜８ｍｍ、３．５〜８ｍｍ、４〜８ｍｍ、４．５〜８ｍｍ、５〜８ｍｍ、５．５〜８ｍｍ、６〜８ｍｍ、０．５〜９ｍｍ、１〜９ｍｍ、１．５〜９ｍｍ、２〜９ｍｍ、２．５〜９ｍｍ、３〜９ｍｍ、３．５〜９ｍｍ、４〜９ｍｍ、４．５〜９ｍｍ、５〜９ｍｍ、５．５〜９ｍｍ、６〜９ｍｍ、６．５〜９ｍｍ、７〜９ｍｍ、０．５〜１０ｍｍ、１〜１０ｍｍ、１．５〜１０ｍｍ、２〜１０ｍｍ、２．５〜１０ｍｍ、３〜１０ｍｍ、３．５〜１０ｍｍ、４〜１０ｍｍ、４．５〜１０ｍｍ、５〜１０ｍｍ、５．５〜１０ｍｍ、６〜１０ｍｍ、６．５〜１０ｍｍ、７〜１０ｍｍ、７．５〜１０ｎｍ又は８〜１０ｎｍであり得る。
【０５６４】
一実施形態では、マイクロ臓器は長さが少なくとも２ｍｍ〜少なくとも１５０ｍｍ、例えば、限定はされないが、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、少なくとも５ｍｍ、少なくとも６ｍｍ、少なくとも７ｍｍ、少なくとも８ｍｍ、少なくとも９ｍｍ、少なくとも１０ｍｍ、少なくとも１５ｍｍ、少なくとも２０ｍｍ、少なくとも２５ｍｍ、少なくとも３０ｍｍ、少なくとも３５ｍｍ、少なくとも４０ｍｍ、少なくとも４５ｍｍ、少なくとも５０ｍｍ、少なくとも５５ｍｍ、少なくとも６０ｍｍ、少なくとも６５ｍｍ、少なくとも７０ｍｍ、少なくとも７５ｍｍ、少なくとも８０ｍｍ、少なくとも８５ｍｍ、少なくとも９０ｍｍ、少なくとも９５ｍｍ、少なくとも１００ｍｍ、少なくとも１０５ｍｍ、少なくとも１１０ｍｍ、少なくとも１１５ｍｍ、少なくとも１２０ｍｍ、少なくとも１２５ｍｍ、少なくとも１３０ｍｍ、少なくとも１３５ｍｍ、少なくとも１４０ｍｍ、少なくとも１４５ｍｍ又は少なくとも１５０ｍｍであり得る。別の実施形態では、マイクロ臓器は長さが５〜１００ｍｍ、１０〜１００ｍｍ、１５〜１００ｍｍ、２０〜１００ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜１００ｍｍ、３５〜１００ｍｍ、４０〜１００ｍｍ、４５〜１００ｍｍ、５０〜１００ｍｍ、５５〜１００ｍｍ、６０〜１００ｍｍ、６５〜１００ｍｍ、７０〜１００ｍｍ、７５〜１００ｍｍ、８０〜１００ｍｍ、８５〜１００ｍｍ、９０〜１００ｍｍ、５〜９０ｍｍ、１０〜９０ｍｍ、１５〜９０ｍｍ、２０〜９０ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜９０ｍｍ、３５〜９０ｍｍ、４０〜９０ｍｍ、４５〜９０ｍｍ、５０〜９０ｍｍ、５５〜９０ｍｍ、６０〜９０ｍｍ、６５〜９０ｍｍ、７０〜９０ｍｍ、７５〜９０ｍｍ、８０〜９０ｍｍ、５〜８０ｍｍ、１０〜８０ｍｍ、１５〜８０ｍｍ、２０〜８０ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜８０ｍｍ、３５〜８０ｍｍ、４０〜８０ｍｍ、４５〜８０ｍｍ、５０〜８０ｍｍ、５５〜８０ｍｍ、６０〜８０ｍｍ、６５〜８０ｍｍ、
７０〜８０ｍｍ、５〜７０ｍｍ、１０〜７０ｍｍ、１５〜７０ｍｍ、２０〜７０ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜７０ｍｍ、３５〜７０ｍｍ、４０〜７０ｍｍ、４５〜７０ｍｍ、５０〜７０ｍｍ、５５〜７０ｍｍ、６０〜７０ｍｍ、５〜６０ｍｍ、１０〜６０ｍｍ、１５〜６０ｍｍ、２０〜６０ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜６０ｍｍ、３５〜６０ｍｍ、４０〜６０ｍｍ、４５〜６０ｍｍ、５０〜６０ｍｍ、５〜５０ｍｍ、１０〜５０ｍｍ、１５〜５０ｍｍ、２０〜５０ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜５０ｍｍ、３５〜５０ｍｍ、４０〜５０ｍｍ、５〜４０ｍｍ、１０〜４０ｍｍ、１５〜４０ｍｍ、２０〜４０ｍｍ、２５〜１０ｍｍ、３０〜４０ｍｍ、５〜３０ｍｍ、１０〜３０ｍｍ、１５〜３０ｍｍ、２０〜３０ｍｍ、５〜２０ｍｍ、１０〜２０ｍｍ又は５〜１０ｍｍであり得る。
【０５６５】
ヒアルロニダーゼ
本発明のキメラポリヌクレオチドの筋肉内又は皮下局所注射は、ヒアルロナンの加水分解を触媒するヒアルロニダーゼを含み得る。ヒアルロニダーゼは、間質バリアの成分であるヒアルロナンの加水分解を触媒することによりヒアルロナンの粘度を低下させ、それによって組織透過性を増加させる（フロスト（Ｆｒｏｓｔ）著、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２００７年、第４巻、ｐ．４２７〜４４０；本明細書において全体として参照により援用される）。ヒアルロニダーゼは、トランスフェクト細胞によって産生されるコードタンパク質のその分散及び全身分布を加速させるのに有用である。或いは、ヒアルロニダーゼは、筋肉内又は皮下投与された本発明のキメラポリヌクレオチドに曝露される細胞の数を増加させるために使用することができる。
【０５６６】
ナノ粒子模倣体
本発明のキメラポリヌクレオチドはナノ粒子模倣体の中に封入され、及び／又はそれに吸収され得る。ナノ粒子模倣体は、送達機能生物又は粒子、例えば、限定はされないが、病原体、ウイルス、細菌、真菌、寄生体、プリオン及び細胞を模倣し得る。非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、ウイルスの送達機能を模倣することのできる非ビリオン（ｖｉｒｏｎ）粒子に封入されてもよい（国際公開第２０１２００６３７６号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１３０１７１２４１号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１９５９６８号明細書を参照、これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５６７】
ナノチューブ
本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、ロゼットナノチューブ、リンカーを伴う対の塩基を有するロゼットナノチューブ、カーボンナノチューブ及び／又は単層カーボンナノチューブなどの少なくとも１つのナノチューブに取り付けるか又は他の形で結合させることができ、キメラポリヌクレオチドは、力、例えば、限定はされないが、立体、イオン、共有結合及び／又は他の力によってナノチューブに結合され得る。
【０５６８】
一実施形態では、ナノチューブは１つ以上のキメラポリヌクレオチドを細胞中に放出することができる。体内でのナノチューブの相互作用を制御するため、及び／又は本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドに取り付ける又は結合させるため、少なくとも１つのナノチューブのサイズ及び／又は表面構造が改変されてもよい。一実施形態では、少なくとも１つのナノチューブの構成要素及び／又は構成要素に取り付けられた官能基を改変することにより、ナノチューブの寸法及び／又は特性が調整され得る。非限定的な例として、ナノチューブの長さは、ナノチューブが正常な血管の壁にある穴を通過するのは妨げるが、しかし腫瘍組織の血管にある大きい穴を通過するにはなおも十分な小ささであるように改変されてもよい。
【０５６９】
一実施形態では、少なくとも１つのナノチューブはまた、ポリマー、例えば、限定はさ
れないがポリエチレングリコールを含めた、送達を増進する化合物でコーティングされてもよい。別の実施形態では、少なくとも１つのナノチューブ及び／又はキメラポリヌクレオチドは薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は送達媒体と混合され得る。
【０５７０】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは少なくとも１つのロゼットナノチューブに取り付けられ、及び／又は他の形で結合される。ロゼットナノチューブは、当該技術分野において公知の方法によって形成されても、及び／又は国際公開第２０１２０９４３０４号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって形成されてもよい。少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１２０９４３０４号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法によって少なくとも１つのロゼットナノチューブに取り付けられ、及び／又は他の形で結合されてもよく、ここではロゼットナノチューブ又はロゼットナノチューブを形成するモジュールが、少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドとロゼットナノチューブとの取り付け又は他の形での結合を生じさせ得る条件下において水性媒体中で少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドと混合される。
【０５７１】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは少なくとも１つのカーボンナノチューブに取り付けられ、及び／又は他の形で結合され得る。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは連結剤に結合されてもよく、その連結剤がカーボンナノチューブに結合されてもよい（例えば、米国特許第８，２４６，９９５号明細書を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。カーボンナノチューブは単層ナノチューブであってもよい（例えば、米国特許第８，２４６，９９５号明細書を参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５７２】
コンジュゲート
本発明のキメラポリヌクレオチドは、担体又はターゲティング基に共有結合的に連結したキメラポリヌクレオチドなどのコンジュゲート、又は一緒になって融合タンパク質を作り出す２つのコード領域を含む（例えば、ターゲティング基と治療用タンパク質又はペプチドとを担持する）コンジュゲートを含む。
【０５７３】
本発明のコンジュゲートは、天然に存在する物質、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、又はグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン又はヒアルロン酸）；又は脂質を含む。リガンドはまた、組換え又は合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば合成ポリアミノ酸、オリゴヌクレオチド（例えばアプタマー）であってもよい。ポリアミノ酸の例としてはポリアミノ酸が挙げられ、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−マレイン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｅｄ））コポリマー、ジビニルエーテル−マレイン酸無水物コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル酸（ｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｌｉｃ  ａｃｉｄ））、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマー、又はポリホスファジンである。ポリアミンの例としては、以下が挙げられる：ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、プソイドペプチド−ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第四級塩、又はアルファヘリックスペプチド。
【０５７４】
ポリヌクレオチドコンジュゲート（特にＲＮＡとの）の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第４，８２８，９７９号明細書；同第４，９４
８，８８２号明細書；同第５，２１８，１０５号明細書；同第５，５２５，４６５号明細書；同第５，５４１，３１３号明細書；同第５，５４５，７３０号明細書；同第５，５５２，５３８号明細書；同第５，５７８，７１７号明細書、同第５，５８０，７３１号明細書；同第５，５９１，５８４号明細書；同第５，１０９，１２４号明細書；同第５，１１８，８０２号明細書；同第５，１３８，０４５号明細書；同第５，４１４，０７７号明細書；同第５，４８６，６０３号明細書；同第５，５１２，４３９号明細書；同第５，５７８，７１８号明細書；同第５，６０８，０４６号明細書；同第４，５８７，０４４号明細書；同第４，６０５，７３５号明細書；同第４，６６７，０２５号明細書；同第４，７６２，７７９号明細書；同第４，７８９，７３７号明細書；同第４，８２４，９４１号明細書；同第４，８３５，２６３号明細書；同第４，８７６，３３５号明細書；同第４，９０４，５８２号明細書；同第４，９５８，０１３号明細書；同第５，０８２，８３０号明細書；同第５，１１２，９６３号明細書；同第５，２１４，１３６号明細書；同第５，０８２，８３０号明細書；同第５，１１２，９６３号明細書；同第５，２１４，１３６号明細書；同第５，２４５，０２２号明細書；同第５，２５４，４６９号明細書；同第５，２５８，５０６号明細書；同第５，２６２，５３６号明細書；同第５，２７２，２５０号明細書；同第５，２９２，８７３号明細書；同第５，３１７，０９８号明細書；同第５，３７１，２４１号明細書、同第５，３９１，７２３号明細書；同第５，４１６，２０３号明細書、同第５，４５１，４６３号明細書；同第５，５１０，４７５号明細書；同第５，５１２，６６７号明細書；同第５，５１４，７８５号明細書；同第５，５６５，５５２号明細書；同第５，５６７，８１０号明細書；同第５，５７４，１４２号明細書；同第５，５８５，４８１号明細書；同第５，５８７，３７１号明細書；同第５，５９５，７２６号明細書；同第５，５９７，６９６号明細書；同第５，５９９，９２３号明細書；同第５，５９９，９２８号明細書及び同第５，６８８，９４１号明細書；同第６，２９４，６６４号明細書；同第６，３２０，０１７号明細書；同第６，５７６，７５２号明細書；同第６，７８３，９３１号明細書；同第６，９００，２９７号明細書；同第７，０３７，６４６号明細書が挙げられる；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される。
【０５７５】
一実施形態では、本発明のコンジュゲートは本発明のキメラポリヌクレオチドの担体として機能し得る。コンジュゲートは、限定はされないが、ポリアミン、ポリリジン、ポリアルキレンイミン、及びポリエチレンイミンなどの、ポリ（エチレングリコール）がグラフトされ得るカチオン性ポリマーを含み得る。非限定的な例として、コンジュゲートは、米国特許第６，５８６，５２４号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるポリマーコンジュゲート及びポリマーコンジュゲートの合成方法と同様であり得る。
【０５７６】
基質とのコンジュゲーション方法の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１３０２１１２４９号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。この方法を用いて、キメラポリヌクレオチドを含むコンジュゲートポリマー粒子を作製し得る。
【０５７７】
コンジュゲートはまた、ターゲティング基、例えば、細胞又は組織ターゲティング剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質又はタンパク質、例えば腎細胞などの特定の細胞型に結合する抗体も含むことができる。ターゲティング基は、サイロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−ｇｕｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）  多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチドミメティクス又
はアプタマーであり得る。
【０５７８】
ターゲティング基は、タンパク質、例えば、糖タンパク質類、又はペプチド、例えば、コリガンドに対して特異的な親和性を有する分子、又は抗体、例えば、癌細胞、内皮細胞、又は骨細胞などの特定の細胞型に結合する抗体であり得る。ターゲティング基にはまた、ホルモン及びホルモン受容体も含まれ得る。これらにはまた、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−ｇｕｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）  多価マンノース、多価フコース、又はアプタマーも含まれ得る。リガンドは、例えば、リポ多糖、又はｐ３８ＭＡＰキナーゼのアクチベータであり得る。
【０５７９】
ターゲティング基は、特定の受容体を標的化する能力を有する任意のリガンドであり得る。例としては、限定なしに、葉酸塩、ＧａｌＮＡｃ、ガラクトース、マンノース、マンノース−６Ｐ、アプタマー（ａｐａｔａｍｅｒ）、インテグリン受容体リガンド、ケモカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ、及びＨＤＬリガンドが挙げられる。詳細な実施形態において、ターゲティング基はアプタマーである。アプタマーは修飾されていなくてもよく、又は本明細書に開示される修飾の任意の組み合わせを有してもよい。
【０５８０】
非限定的な例として、ターゲティング基は、血液−中枢神経系（ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｉｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ）関門を通る標的化送達のためのグルタチオン受容体（ＧＲ）結合コンジュゲートであってもよい（例えば、米国特許出願公開第２０１３０２１６６１０１２号明細書を参照（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５８１】
一実施形態では、本発明のコンジュゲートは相乗的生体分子−ポリマーコンジュゲートであってもよい。相乗的生体分子−ポリマーコンジュゲートは、より高い治療有効性を提供する長時間作用型持続放出システムであってもよい。相乗的生体分子−ポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３０１９５７９９号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。
【０５８２】
別の実施形態では、本発明において使用し得るコンジュゲートはアプタマーコンジュゲートであってもよい。アプタマー（ａｐａｔａｍｅｒ）コンジュゲートの非限定的な例は、国際公開第２０１２０４０５２４号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。アプタマーコンジュゲートは、キメラポリヌクレオチドを含む製剤の標的化送達をもたらすために用いられ得る。
【０５８３】
一実施形態では、本発明において使用し得るコンジュゲートはアミン含有ポリマーコンジュゲートであってもよい。アミン含有ポリマーコンジュゲートの非限定的な例は、米国特許第８，５０７，６５３号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。第ＩＸ因子部分のポリマーコンジュゲートは遊離可能な連結を含み、対象への送達時及び／又は送達後にキメラポリヌクレオチドを遊離させ得る。
【０５８４】
一実施形態では、本発明の医薬組成物は、限定はされないがロックド核酸と同様の修飾など、化学修飾を含み得る。
サンタリス（Ｓａｎｔａｒｉｓ）のものなど、ロックド核酸（ＬＮＡ）の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、以下が挙げられる：米国特許第６，２６８，４９０号明細書；同第６，６７０，４６１号明細書；同第６，７９４，４９９号明細書；同第６，９９８，４８４号明細書；同第７，０５３，２０７号明細書；同第７，０
８４，１２５号明細書；及び同第７，３９９，８４５号明細書、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される。
【０５８５】
ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第５，５３９，０８２号明細書；同第５，７１４，３３１号明細書；及び同第５，７１９，２６２号明細書（これらの各々は、本明細書において参照により援用される）が挙げられる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、例えば、ニールセン（Ｎｉｅｌｓｅｎ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１９９１年、第２５４巻、ｐ．１４９７〜１５００を参照することができる。
【０５８６】
本発明で取り上げる一部の実施形態は、ホスホロチオエート骨格を有するキメラポリヌクレオチド、及び他の修飾骨格、詳細には、上記で参照した米国特許第５，４８９，６７７号明細書の−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−［別名メチレン（メチルイミノ）又はＭＭＩ骨格］、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−及び−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−［式中、天然リン酸ジエステル骨格は−Ｏ−Ｐ（Ｏ）２−Ｏ−ＣＨ２−で表される］、及び上記で参照した米国特許第５，６０２，２４０号明細書のアミド骨格を有するオリゴヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、本明細書で取り上げるポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｔｏｔｉｄｅ）は、上記で参照した米国特許第５，０３４，５０６号明細書のモルホリノ骨格構造を有する。
【０５８７】
２’位の修飾もまた送達を助け得る。好ましくは、２’位の修飾はポリペプチドコード配列に位置せず、即ち翻訳可能領域に位置しない。２’位の修飾は、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ及び／又はテイル付加領域に位置し得る。２’位の修飾には、２’位にある以下のうちの１つが含まれ得る：Ｈ（即ち、２’−デオキシ）；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、又はＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、又はＮ−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−又はＮ−アルキニル；又はＯ−アルキル−Ｏ−アルキル（式中、アルキル、アルケニル及びアルキニルは置換又は非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル又はＣ２〜Ｃ１０アルケニル及びアルキニルであってもよい）。例示的な適した修飾には、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）．ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２（式中、ｎ及びｍは１〜約１０である）が含まれる。他の実施形態では、キメラポリヌクレオチドには、２’位にある以下のうちの１つが含まれる：Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリール又はＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ開裂基、レポーター群、インターカレーター、薬物動態特性を改善するための基、又は薬力学的特性を改善するための基、及び同様の特性を有する他の置換基。一部の実施形態では、修飾には、２’−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、別名２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）又は２’−ＭＯＥ）（マーティン（Ｍａｒｔｉｎ）ら著、ヘルベチカ・シミカ・アクタ（Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ）、１９９５年、第７８巻、ｐ．４８６〜５０４）、即ち、アルコキシ−アルコキシ基が含まれる。別の例示的修飾は、本明細書の以下の例に記載されるとおりの２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、即ち、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、別名２’−ＤＭＡＯＥ、及び同様に本明細書の以下の例に記載されるとおりの２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ（当該技術分野において別名２’−Ｏ−ジメチルアミノエトキシエチル又は２’−ＤＭＡＥＯＥ）、即ち、２’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２）２である。他の修飾には、２’−メトキシ（２’−ＯＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）及び２’−フルオロ（２’−Ｆ）が含まれる。同様の修飾が他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上の糖又は２’−５’連結ｄｓＲＮＡにおける３’位及び５’末端ヌ
クレオチドの５’位に作製されてもまたよい。本発明のポリヌクレオチドはまた、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などの糖ミメティクスも有し得る。かかる修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第４，９８１，９５７号明細書；同第５，１１８，８００号明細書；同第５，３１９，０８０号明細書；同第５，３５９，０４４号明細書；同第５，３９３，８７８号明細書；同第５，４４６，１３７号明細書；同第５，４６６，７８６号明細書；同第５，５１４，７８５号明細書；同第５，５１９，１３４号明細書；同第５，５６７，８１１号明細書；同第５，５７６，４２７号明細書；同第５，５９１，７２２号明細書；同第５，５９７，９０９号明細書；同第５，６１０，３００号明細書；同第５，６２７，０５３号明細書；同第５，６３９，８７３号明細書；同第５，６４６，２６５号明細書；同第５，６５８，８７３号明細書；同第５，６７０，６３３号明細書；及び同第５，７００，９２０号明細書が挙げられ；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される。
【０５８８】
さらに他の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは細胞透過性ポリペプチドに共有結合的にコンジュゲートされる。細胞透過性ペプチドはまたシグナル配列も含み得る。本発明のコンジュゲートは、安定性の増加；細胞トランスフェクションの増加；及び／又は体内分布の改変（例えば、特定の組織又は細胞型に標的化される）を有するように設計することができる。
【０５８９】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、送達を増進させるための薬剤とコンジュゲートされ得る。非限定的な例として、薬剤は、国際公開第２０１１０６２９６５号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのターゲティングブロックを有するターゲティングモノマー又はポリマーなどのモノマー又はポリマーであってもよい。別の非限定的な例では、薬剤は、本発明のキメラポリヌクレオチドに共有結合的にカップリングした輸送剤であってもよい（例えば、米国特許第６，８３５．３９３号明細書及び同第７，３７４，７７８号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。さらに別の非限定的な例において、薬剤は、米国特許第７，７３７，１０８号明細書及び同第８，００３，１２９号明細書（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載されるものなどの膜バリア輸送増進剤であってもよい。
【０５９０】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドはスマート・ポリマー・テクノロジー（ＳＭＡＲＴＴ  ＰＯＬＹＭＥＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）（登録商標）（フェーズＲＸ（登録商標）インコーポレイテッド（ＰＨＡＳＥＲＸ（登録商標），Ｉｎｃ．）、ワシントン州シアトル（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ））にコンジュゲートされ得る。
【０５９１】
別の態様では、コンジュゲートは、組織又は生物においてナノ粒子をニューロンに選択的に仕向けるペプチドであってもよい。非限定的な例として、使用されるペプチドは、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１２９６２７号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるペプチドであってもよい。
【０５９２】
さらに別の態様では、コンジュゲートは、血液脳関門の通過を補助することのできるペプチドであってもよい。
自己組織化ナノ粒子
核酸自己組織化ナノ粒子
核酸鎖は容易に再プログラム可能であり得るため、自己組織化ナノ粒子は、正確に制御し得る十分に定義されたサイズを有する。例えば、直径が２０ｎｍより大きいと腎クリアランスが回避され、透過性及び保持効果の増進によって特定の腫瘍への送達が増進されるため、癌標的化ナノ送達担体に最適な粒径は２０〜１００ｎｍである。自己組織化核酸ナノ粒子を使用して、送達を増進させるための癌標的化リガンドの正確に制御された空間的
向き及び密度を有するサイズ及び形状が均一な単一集合。非限定的な例として、短いＤＮＡ断片及び治療用ｓｉＲＮＡのプログラム可能な自己組織化を用いてオリゴヌクレオチドナノ粒子が調製された。これらのナノ粒子は分子的に同一であり、制御可能な粒径並びに標的リガンド位置及び密度を有する。ＤＮＡ断片及びｓｉＲＮＡは一段階反応物に自己組織化し、標的化インビボ送達用のＤＮＡ／ｓｉＲＮＡ四面体ナノ粒子が生成された（リー（Ｌｅｅ）ら著、ネイチャー・ナノテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、２０１２年、第７巻、ｐ．３８９〜３９３；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５９３】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは自己組織化ナノ粒子として製剤化されてもよい。非限定的な例として、核酸を使用して、本発明のキメラポリヌクレオチドの送達システムで使用し得るナノ粒子が作製され得る（例えば、国際公開第２０１２１２５９８７号パンフレットを参照；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０５９４】
一実施形態では、核酸自己組織化ナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーのいずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用してコア中のキメラポリヌクレオチドが保護され得る。
【０５９５】
本発明において使用し得る金属ナノ粒子は、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１３８０３２号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、ｐＨ感受性ナノ粒子であってもよい。
【０５９６】
一態様において、金属及び／又は金属合金（ｍｅｔａｌ−ａｌｌｏｗ）ナノ粒子が、米国特許出願公開第２０１３０１３３４８３号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０５９７】
ポリマーベースの自己組織化ナノ粒子
ポリマーを使用して、ナノ粒子に自己組織化するシートが形成されてもよい。これらのナノ粒子は本発明のキメラポリヌクレオチドの送達に用いられ得る。一実施形態では、これらの自己組織化ナノ粒子は、ＲＮＡヘアピンの長いポリマーで形成されるミクロスポンジであってもよく、ＲＮＡヘアピンは結晶性の「ひだ状」シートを形成した後、自己組織化してミクロスポンジとなる。これらのミクロスポンジは、密に充填されたスポンジ様マイクロパーティクルであり、効率的な担体として機能し得るとともに、細胞にカーゴを送達することが可能であり得る。ミクロスポンジは直径１ｕｍ〜３００ｎｍであり得る。ミクロスポンジは、当該技術分野において公知の他の薬剤と複合体化して、より大きいミクロスポンジを形成し得る。非限定的な例として、ミクロスポンジは、ポリカチオンポリエチレンイミ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｅ）（ＰＥＩ）など、薬剤と複合体化して外層を形成し、細胞取込みを促進し得る。この複合体は、高温（１５０℃）で安定した状態を保つことのできる２５０ｎｍ直径粒子を形成し得る（グラボー（Ｇｒａｂｏｗ）及びイエーガー（Ｊａｅｇａｒ）著、ネイチャー・マテリアルズ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１２年、第１１巻、ｐ．２６９〜２６９；本明細書において全体として参照により援用される）。さらに、これらのミクロスポンジは、リボヌクレアーゼによる分解からの並外れて高度な保護を呈することが可能であり得る。
【０５９８】
別の実施形態では、限定はされないがミクロスポンジなどの、ポリマーベースの自己組織化ナノ粒子は、完全にプログラム可能なナノ粒子であってもよい。ナノ粒子の幾何学的配置、サイズ及び化学量論が、限定はされないがキメラポリヌクレオチドなどの、カーゴの送達に最適なナノ粒子を作り出すように正確に制御され得る。
【０５９９】
一実施形態では、ポリマーベースのナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーのいずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態において、ポリマーシェルは、コア中のキメラポリヌクレオチドの保護に用いられ得る。
【０６００】
さらに別の実施形態では、ポリマーベースのナノ粒子は、国際公開第２０１３００９７３６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの複数の不均一なモノマーを含む非核酸ポリマーを含み得る。
【０６０１】
自己組織化巨大分子
キメラポリヌクレオチドは、送達のため両親媒性巨大分子（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ：ＡＭ）に製剤化されてもよい。ＡＭは、ポリ（エチレングリコール）に共有結合的に連結したアルキル化糖骨格を有する生体適合性の両親媒性ポリマーを含む。水溶液中でＡＭは自己組織化してミセルを形成する。ＡＭの形成方法及びＡＭの非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１３０２１７７５３号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６０２】
無機ナノ粒子
本発明のキメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｓ）は、無機ナノ粒子に製剤化されてもよい（米国特許第８，２５７，７４５号明細書、本明細書において全体として参照により援用される）。無機ナノ粒子としては、限定はされないが、水膨潤性の粘土物質を挙げることができる。非限定的な例として、無機ナノ粒子は、単純ケイ酸塩で作られる合成スメクタイト粘土を含み得る（例えば、米国特許第５，５８５，１０８号明細書及び同第８，２５７，７４５号明細書を参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６０３】
一実施形態では、無機ナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーのいずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用してコア中のキメラポリヌクレオチドが保護され得る。
【０６０４】
半導体及び金属ナノ粒子
本発明のキメラポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｓ）は、半導体又は金属材料を含む水分散性ナノ粒子に製剤化されてもよく（米国特許出願公開第２０１２０２２８５６５号明細書；本明細書において全体として参照により援用される）、又は磁性ナノ粒子に形成されてもよい（米国特許出願公開第２０１２０２６５００１号明細書及び同第２０１２０２８３５０３号明細書；これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）。水分散性ナノ粒子は疎水性ナノ粒子又は親水性ナノ粒子であってもよい。
【０６０５】
一実施形態では、半導体及び／又は金属ナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーのいずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用してコア中のキメラポリヌクレオチドが保護され得る。
【０６０６】
外科用シーラント：ゲル及びヒドロゲル
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、対象への注入時に
ゲルを形成し得る当該技術分野において公知の任意のヒドロゲルに封入されてもよい。ヒドロゲルは親水性のポリマー鎖のネットワークであり、水が分散媒となるコロイド状ゲルとして見られることもある。ヒドロゲルは、高度吸収剤の（９９％超の水を含有し得る）天然又は合成ポリマーである。ヒドロゲルはまた、その多量の含水量に起因して、天然組織と極めて類似した柔軟度も有する。本明細書に記載されるヒドロゲルは、生体適合性、生分解性及び／又は多孔質である脂質ナノ粒子の封入に用いられ得る。ヒドロゲルは溶液注入からインサイチュで作製するか、又は植え込むことができる。
【０６０７】
非限定的な例として、ヒドロゲルはアプタマー機能化ヒドロゲルであってもよい。アプタマー機能化ヒドロゲルは、核酸ハイブリダイゼーションを使用して１つ以上のキメラポリヌクレオチドを放出するようにプログラム化され得る（バッティグ（Ｂａｔｔｉｇ）ら著、米国化学会誌（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃｉｅｔｙ）、２０１２年、第１３４巻、ｐ．１２４１０〜１２４１３；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６０８】
別の非限定的な例として、ヒドロゲルは逆オパールとして付形されてもよい。オパールヒドロゲルは高い膨潤比を呈し、さらに膨潤速度論が従来のヒドロゲルより速いオーダである。オパールヒドロゲルの作製方法及びオパールヒドロゲルの説明は、国際公開第２０１２１４８６８４号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６０９】
さらに別の非限定的な例において、ヒドロゲルは抗細菌性ヒドロゲルであってもよい。抗細菌性ヒドロゲルは、限定はされないが、医薬品グレード及び／又は医療グレード銀塩及びアロエベラゲル又は抽出物など、薬学的に許容可能な塩又は有機材料を含み得る（国際公開第２０１２１５１４３８号パンフレット、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６１０】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは脂質ナノ粒子に封入されてもよく、次には脂質ナノ粒子がヒドロゲルに封入されてもよい。
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、当該技術分野において公知の任意のゲルに封入されてもよい。非限定的な例として、ゲルは、フルオロウラシル注射用ゲル又は当該技術分野において公知の化学的化合物及び／又は薬物を含有するフルオロウラシル注射用ゲルであってもよい。別の例として、キメラポリヌクレオチドは、エピネフリンを含有するフルオロウラシルゲルに封入されてもよい（例えば、スミス（Ｓｍｉｔｈ）ら著、キャンサー・ケモセラピー・アンド・ファーマコロジー（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）、１９９９年、第４４巻、第４号、ｐ．２６７〜２７４を参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６１１】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル又はフィブリン糊に封入されてもよい。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子又は急速排泄型脂質ナノ粒子に製剤化された後にフィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル又はフィブリン糊に封入されてもよい。さらに別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、リポプレックスとして製剤化された後にフィブリンゲル、ヒドロゲル又はフィブリン糊に封入されてもよい。フィブリンゲル、ヒドロゲル及び糊は、２つの構成成分、フィブリノゲン溶液とカルシウムに富むトロンビン溶液とを含む（例えば、スパイサー（Ｓｐｉｃｅｒ）及びミコス（Ｍｉｋｏｓ）著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）著、２０１０年、第１４８巻、ｐ．４９〜５５；キッド（Ｋｉｄｄ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏ
ｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２０１２年、第１５７巻、ｐ．８０〜８５を参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。フィブリンゲル、ヒドロゲル及び／又は糊の構成成分の濃度を改変することにより、限定はされないが、フィブリンゲル、ヒドロゲル及び／又は糊の放出特性を変えるなど、ゲル、ヒドロゲル及び／又は糊の特性、網目の大きさ、及び／又は分解特性を変えることができる（例えば、スパイサー（Ｓｐｉｃｅｒ）及びミコス（Ｍｉｋｏｓ）著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２０１０年、第１４８巻、ｐ．４９〜５５；キッド（Ｋｉｄｄ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２０１２年、第１５７巻、ｐ．８０〜８５；カテラス（Ｃａｔｅｌａｓ）ら著、ティッシュー・エンジニアリング（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、２００８年、第１４巻、ｐ．１１９〜１２８を参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。この特徴は、本明細書に開示される修飾ｍＲＮＡの送達に用いられるとき有利であり得る（例えば、キッド（Ｋｉｄｄ）ら著、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２０１２年、第１５７巻、ｐ．８０〜８５；カテラス（Ｃａｔｅｌａｓ）ら著、ティッシュー・エンジニアリング（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、２００８年、第１４巻、ｐ．１１９〜１２８を参照；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６１２】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３００７１４５０号明細書又は同第２０１３０２１１２４９号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるヒドロゲルなど、ヒドロゲルと共に用いられ得る。
【０６１３】
非限定的な例として、本発明において使用し得るヒドロゲルは、国際公開第２０１３１２４６２０号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０６１４】
別の実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、経皮送達用に製剤化されてもよい。製剤は、米国特許出願公開第２０１３００７１４５０号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される少なくとも１つのヒドロゲルを含み得る。
【０６１５】
一実施形態では、本発明において使用し得るヒドロゲルは、米国特許第８，４２０，６０５号明細書、米国特許第８，４１５，３２５号明細書及び／又は国際公開第２０１３０９１００１号パンフレット及び国際公開第２０１３１２４６２０号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６１６】
一実施形態では、本発明において使用し得るヒドロゲルは、限定はされないが、アトリゲル（ＡＴＲＩＧＥＬ）（登録商標）（ＱＬＴインコーポレイテッド（ＱＬＴ  Ｉｎｃ．）、ブリティッシュコロンビア州バンクーバー（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ））、キトサン、アルギン酸塩（ａｌｉｇｉｎａｔｅ）、コラーゲン又はヒアルロン酸ヒドロゲルであってもよい。
【０６１７】
別の実施形態では、本発明において使用し得るヒドロゲルは架橋メタクリレートである。非限定的な例として、本発明のヒドロゲルは創傷ドレッシングに用いられ得る。
本発明において使用し得るヒドロゲルはまた、限定はされないが、ＰＥＩ、ＰＶＡ、ポリリジン、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー４０７、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３１及びポロキサマー３３８を含めた、
本明細書に記載される薬剤及び賦形剤と共に複合体化されてもよい。ヒドロゲルを薬剤及び／又は賦形剤と共に複合体化すると、細胞、組織及び／又は生物におけるｍＲＮＡの安定性及び取込みを改善する助けとなり得る。非限定的な例として、ヒドロゲルは、ｍＲＮＡの安定性及び取込みを改善するためポロキサマー１８８と共に複合体化され得る。
【０６１８】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは外科用シーラントに製剤化されてもよい。外科用シーラントは、限定はされないが、フィブリノゲンポリマー系シーラント（エチコン・インコーポレイテッド（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．）、ジョージア州コルネリア（Ｃｏｒｎｅｌｉａ，ＧＡ））、ティセル（ＴＩＳＳＥＬＬ）（登録商標）（バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、イリノイ州ディアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））又はＰＥＧ系シーラント、例えば、限定はされないが、コシール（ＣＯＳＥＡＬ）（登録商標）（バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、イリノイ州ディアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））及びデュラシール（ＤＵＲＡＳＥＡＬ）（商標）（トリリジンアミン／ＰＥＧ−エステル）（コヴィディエン（Ｃｏｖｉｄｉｅｎ）、マサチューセッツ州ウォルサム（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））であってもよい。
【０６１９】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、コシール（ＣＯＳＥＡＬ）（登録商標）に製剤化され、又はコシール（ＣＯＳＥＡＬ）（登録商標）と共投与されるか若しくはそれが細胞、組織又は生物に投与された後に投与されてもよい。コシール（ＣＯＳＥＡＬ）（登録商標）は、２つの合成ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（ペンタエリスリトールＰＥＧエステルテトラスクシンイミジルとペンタエリスリトールＰＥＧエーテルテトラチオール）、希塩化水素溶液、及びリン酸ナトリウム／炭酸ナトリウム溶液を含む。ＰＥＧは、投与時まで、希塩化水素溶液中のリン酸ナトリウム／炭酸ナトリウム溶液と別々にしておかれる。投与後にヒドロゲルが形成され、ヒドロゲルは組織に付着し得るとともに数秒で硬いゲルを形成し、これは３０日以内に再吸収される。
【０６２０】
別の実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、巨大分子マトリックスを含むヒドロゲルに製剤化されてもよい。巨大分子マトリックスは、コラーゲン構成成分と架橋し得るヒアルロン酸構成成分を含み得る。本発明で使用されるヒドロゲルは、限定はされないが、国際公開第２０１３１０６７１５号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるヒドロゲルであり得る。
【０６２１】
さらに別の実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、キトサングリセロリン酸（ｃｈｉｔｏｓａｎ  ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ：ＣＧＰ）ヒドロゲルに製剤化されてもよい。製剤は、ＣＧＰヒドロゲルを溶解してＣＧＰヒドロゲルに結び付いたキメラポリヌクレオチドを遊離させるのに有効な量のキトサナーゼをさらに含み得る。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１３０１８９２４１号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるＣＧＰヒドロゲルを含む制御放出送達システムに製剤化されてもよい。
【０６２２】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１９６９１５号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される多孔質マトリックスコンポジット及び製剤などの、制御放出用に製剤化されるヒドロゲルに製剤化されてもよい。
【０６２３】
別の実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、分解性連結を有し得るヘテロ二官能性ポリ（アルキレンオキシド）類を含むヒドロゲルに製剤化されてもよい。ヘテロ二官能性ポリ（アルキレンオキシド）類の非限定的な例は、米国特許第８，
４９７，３５７号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６２４】
さらに別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、インスリン送達システムとして用いられ得るヒドロゲルに製剤化されてもよい。非限定的な例として、ヒドロゲルは、国際公開第２０１３１２３４９１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりのグルコース結合両親媒性ペプチドヒドロゲルであってもよい。別の非限定的な例として、ヒドロゲルは、国際公開第２０１３１２３４９２号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるグルコース反応性ミクロゲルなどのミクロゲルであってもよい。
【０６２５】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、限定はされないがマルチコンパートメントヒドロゲルなどの、ヒドロゲルシステムに製剤化されてもよい。マルチコンパートメントヒドロゲル及びこのヒドロゲルの作製方法の非限定的な例は、国際公開第２０１３１２４８５５号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。マルチコンパートメントヒドロゲルは対象の損傷組織の修復又は再生に用いられ得る。
【０６２６】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドはククルビツリル系ヒドロゲルに製剤化されてもよい。ククルビツリル系ヒドロゲルの非限定的な例は、国際公開第２０１３１２４６５４号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６２７】
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドはＰＥＧ系外科用シーラント又はヒドロゲルに製剤化されてもよい。
一実施形態では、外科用シーラント又はヒドロゲルは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ又は７つ以上のＰＥＧ脂質を含み得る。ＰＥＧ脂質は、限定はされないが、ペンタエリスリトールＰＥＧエステルテトラスクシンイミジル及びペンタエリスリトールＰＥＧエーテルテトラチオール、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＳＡ（１，２−ジステアリルオキシプロピル−３−アミンにカップリングしたＰＥＧ）、ＰＥＧ−ＤＭＡ（１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミンにカップリングしたＰＥＧ、ＰＥＧ−ｃ−ＤＮＡ、ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ、ＰＥＧ−Ｓ−ＤＳＧ、ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ、ＰＥＧ−ＤＰＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ  ２０００及び本明細書に記載されるもの及び／又は当該技術分野において公知のものから選択され得る。外科用シーラント又はヒドロゲル中におけるＰＥＧ脂質の濃度及び／又は比率は、製剤を送達及び／又は投与に最適化するため様々であり得る。
【０６２８】
外科用シーラント又はヒドロゲルのＰＥＧ脂質と組み合わせて使用される緩衝剤及び／又は酸の量もまた様々であり得る。一つの非限定的な例において、緩衝剤及び／又は酸とＰＥＧ脂質との比は１：１である。非限定的な例として、外科用シーラント又はヒドロゲルを最適化するため、ＰＥＧ脂質と共に使用される緩衝剤及び／又は酸の量を増加させて緩衝剤／酸とＰＥＧとの比を変えてもよい。別の非限定的な例として、外科用シーラント又はヒドロゲルを最適化するため、ＰＥＧ脂質と共に使用される緩衝剤及び／又は酸の量を減少させて緩衝剤／酸とＰＥＧとの比を変えてもよい。
【０６２９】
緩衝剤、酸及び／又はＰＥＧ脂質中に負荷されるキメラポリヌクレオチドの量は様々で
あり得る。緩衝剤、酸及び／又はＰＥＧ脂質中に負荷されるキメラポリヌクレオチドの量は、限定はされないが、少なくとも１ｕＬ、少なくとも２ｕＬ、少なくとも５ｕＬ、少なくとも１０ｕＬ、少なくとも１５ｕＬ、少なくとも２０ｕＬ、少なくとも２５ｕＬ、少なくとも３０ｕＬ、少なくとも３５ｕＬ、少なくとも４０ｕＬ、少なくとも４５ｕｌ、少なくとも５０ｕＬ、少なくとも５５ｕＬ、少なくとも６０ｕＬ、少なくとも６５ｕＬ、少なくとも７０ｕＬ、少なくとも７５ｕＬ、少なくとも８０ｕＬ、少なくとも８５ｕＬ、少なくとも９０ｕＬ、少なくとも１００ｕＬ、少なくとも１２５ｕＬ、少なくとも１５０ｕＬ、少なくとも２００ｕＬ、少なくとも２５０ｕＬ、少なくとも３００ｕＬ、少なくとも３５０ｕＬ、少なくとも４００ｕＬ、少なくとも４５０ｕＬ、少なくとも５００ｕＬ又は５００ｕＬ超であり得る。
【０６３０】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドはＰＥＧに負荷され、また緩衝剤又は酸にも負荷され得る。ＰＥＧに負荷されるキメラポリヌクレオチドの量は、緩衝剤又は酸に負荷される量と同じであっても、それより多くても、又はそれより少なくてもよい。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ＰＥＧ、緩衝剤又は酸への負荷前に、本明細書に記載される方法及び／又は当該技術分野において公知の方法によって製剤化されてもよい。
【０６３１】
本発明において使用し得るＰＥＧ系ヒドロゲルの非限定的な例は、米国特許第８，５２４，２１５号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。ＰＥＧ系ヒドロゲル（ｈｙｒｄｒｏｇｅｌ）は、約３〜約８本のアームを有するマルチアームＰＥＧ−ビニルスルホン及び約３〜約８本のアームを有するマルチアーム−ＰＥＧ−Ｒ−スルフヒドリルから調製される吸収性ヒドロゲルであってもよい（例えば、米国特許第８，５２４，２１５号明細書を参照）。一実施形態では、ＰＥＧ系ヒドロゲルは吸収性ヒドロゲルであってもよい。理論によって拘束されることを望むものではないが、吸収性ヒドロゲルは体によって吸収及び排出され得るため、吸収性ＰＥＧ系ヒドロゲルは持続的な慢性異物反応を低減するのに有益であり得る。
【０６３２】
一実施形態では、ヒドロゲルは感熱性ヒドロゲルであってもよい。一態様において、感熱性ヒドロゲルは、限定はされないが、本明細書に記載されるもの及び当該技術分野において公知のものなどのトリブロックポリマーであり得る。非限定的な例として、トリブロックポリマーはＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧであってもよい（例えば、感熱性ヒドロゲル（ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）が、リー（Ｌｅｅ）ら著、「Ｔｇｆ−β１遺伝子送達媒体としての感熱性ヒドロゲルは糖尿病性創傷治癒を増進する（Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ａｓ  ａ  Ｔｇｆ−β１  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ）」、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００３年、第２０巻、第１２号、ｐ．１９９５〜２０００ではＴＧＦ−β１遺伝子送達媒体として使用され；リー（Ｌｉ）ら著、「感熱性生分解性ヒドロゲルをベースとする制御遺伝子送達システム（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ）」、ファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００３年、第２０巻、第６号、ｐ．８８４〜８８８；及びチャン（Ｃｈａｎｇ）ら著、「非イオン性両親媒性生分解性ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーはラット骨格筋における遺伝子送達効率を増進する（Ｎｏｎ−ｉｏｎｉｃ
ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ）」、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２００７年、第１１８巻、ｐ．２４５〜２５３では制御遺伝子送達システムとして使用されたことを参照
；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、感熱性ヒドロゲルを使用することにより、国際公開第２０１３１２３４０７号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によってナノ粒子及びリポソームが作製され得る。
【０６３３】
別の実施形態では、ヒドロゲルは生分解性コポリマーヒドロゲルであってもよい（例えば、グエン（Ｎｇｕｙｅｎ）及びリー（Ｌｅｅ）によって記載される生分解性ヒドロゲルを参照（「注射用生分解性ヒドロゲル（Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ）」、マクロモレキュラー・バイオサイエンス（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、２０１０年、第１０巻、ｐ．５６３〜５７９）、本明細書において全体として参照により援用される）。これらのヒドロゲルは、限定はされないが、温度変化、ｐＨ交互変化（ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ）又は両方などの、外部刺激に反応するゾル−ゲル相転移を呈し得る。生分解性コポリマーヒドロゲルの非限定的な例としては、トリブロックコポリマーＰＥＧ−ＰＬＬＡ−ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＰＬＡ−ＰＥＧ（例えば、チャン（Ｃｈａｎｇ）ら著、「非イオン性両親媒性生分解性ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーはラット骨格筋における遺伝子送達効率を増進する（Ｎｏｎ−ｉｏｎｉｃ  ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ）」、ジャーナル・オブ・コントロールド・リリース（Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）、２００７年、第１１８巻、ｐ．２４５〜２５３を参照、本明細書において全体として参照により援用される）、ＰＬＧＡ−ＰＥＧ−ＰＬＧＡ、ＰＥＧ−ＰＣＬ−ＰＥＧ、ＰＣＬ−ＰＥＧ−ＰＣＬ、ポリエステル類、例えばポリ［（Ｒ）−３−ヒドロキシブチレート］（ＰＨＢ）、ポリホスファゼン類、例えばＬ−イソロイシン（Ｌ−ｓｉｏｌｅｕｃｉｎｅ）エチルエステル（ＩｌｅＯＥｔ）、Ｄ，Ｌ−ロイシンエチルエステル（ＬｅｕＯＥｔ）、Ｌ−バリンエチルエステル（ＶａｌＯＥｔ）、又はジペプチド、トリペプチド及びオリゴペプチド、ポリペプチド及びキトサンが挙げられる。生分解性コポリマーヒドロゲルの形成に使用し得る温度及びｐＨ感受性ポリマーとしては、限定はされないが、スルファメチアジン系、ポリ（β−アミノエステル）系、ポリ（アミノウレタン）系、及びポリ（アミドアミン）系ポリマーが挙げられる。生分解性コポリマーヒドロゲルとキメラポリヌクレオチドとの製剤は、部位特異的な放出挙動制御を用いて投与され得る。
【０６３４】
一実施形態では、本発明で使用されるヒドロゲルは、限定はされないが、国際公開第２０１３０８２５９０号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、ＰＥＧ系ヒドロゲルであってもよい。ＰＥＧ系ヒドロゲルは、限定はされないが、硬化時に５０％以下の総ポリマー重量濃度を有し得る。非限定的な例として、ＰＥＧ系ヒドロゲルは、国際公開第２０１３０８２５９０号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０６３５】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ナノ構造ゲル組成物に製剤化されてもよい。ナノ構造ゲルは、封入されたキメラポリヌクレオチドの制御放出を可能にし得る。ナノ構造（ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｅｄ）ゲル又は自己組織化（ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｌｅｄ）ゲルの非限定的な例は、国際公開第２０１２０４０６２３号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６３６】
一実施形態では、外科用シーラント、ゲル及び／又はヒドロゲル中における本発明のキメラポリヌクレオチドの濃度は、所望の治療効果を有する範囲内の投薬量を提供するように選択され得る。
【０６３７】
一実施形態では、外科用シーラント、ゲル及び／又はヒドロゲル中における本発明のキメラポリヌクレオチドの濃度は、少なくとも０．１ｍｌ〜少なくとも３０ｍｌの外科用シーラント、ゲル又はヒドロゲル中少なくとも０．００１ｍｇ〜少なくとも１５０ｍｇであり得る。本発明のキメラポリヌクレオチドの濃度は、少なくとも０．１ｍｌ、少なくとも０．２ｍｌ、少なくとも０．３ｍｌ、少なくとも０．４ｍｌ、少なくとも０．５ｍｌ、少なくとも０．６ｍｌ、少なくとも０．７ｍｌ、少なくとも０．８ｍｌ、少なくとも０．９ｍｌ、少なくとも１ｍｌ、少なくとも２ｍｌ、少なくとも３ｍｌ、少なくとも４ｍｌ、少なくとも５ｍｌ、少なくとも６ｍｌ、少なくとも７ｍｌ、少なくとも８ｍｌ、少なくとも９ｍｌ、少なくとも１０ｍｌ、少なくとも１１ｍｌ、少なくとも１２ｍｌ、少なくとも１３ｍｌ、少なくとも１４ｍｌ、少なくとも１５ｍｌ、少なくとも１６ｍｌ、少なくとも１７ｍｌ、少なくとも１８ｍｌ、少なくとも１９ｍｌ、少なくとも２０ｍｌ、少なくとも２１ｍｌ、少なくとも２２ｍｌ、少なくとも２３ｍｌ、少なくとも２４ｍｌ、少なくとも２５ｍｌ、少なくとも２６ｍｌ、少なくとも２７ｍｌ、少なくとも２８ｍｌ、少なくとも２９ｍｌ又は少なくとも３０ｍｌの外科用シーラント、ゲル又はヒドロゲル中少なくとも０．００１ｍｇ、少なくとも０．００５ｍｇ、少なくとも０．０１ｍｇ、少なくとも０．０５ｍｇ、少なくとも０．１ｍｇ、少なくとも０．５ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも７ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１２、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも１７ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも２２ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも２７ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも３２ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも５５ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも６５ｍｇ、少なくとも７０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも８０ｍｇ、少なくとも８５ｍｇ、少なくとも９０ｍｇ、少なくとも９５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも１０５ｍｇ、少なくとも１１０ｍｇ、少なくとも１１５ｍｇ、少なくとも１２０ｍｇ、少なくとも１２５ｍｇ、少なくとも１３０ｍｇ、少なくとも１３５ｍｇ、少なくとも１４０ｍｇ、少なくとも１４５ｍｇ又は少なくとも１５０ｍｇであり得る。
【０６３８】
別の実施形態では、外科用シーラント、ゲル及び／又はヒドロゲル中における本発明のキメラポリヌクレオチドの濃度は、少なくとも０．００１ｍｇ／ｍｌ  少なくとも０．００５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１２、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４５ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも５０ｍｇ／ｍｌであり得る。
【０６３９】
当該技術分野において公知の皮下注入大容積を可能にする技術、例えば、限定はされないが、ハイレネックス（ＨＹＬＥＮＥＸ）（登録商標）（ハロザイム・セラピューティクス（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））なども用いられ得る。ハイレネックス（ＨＹＬＥＮＥＸ）（登録商標）はヒアルロン酸を一時的に壊すことによって皮膚開口部微視的チャネルの外表面の真下にある皮下腔で（約２４時間にわたる）一時的（ｔｅｍｐｏｒｔｙ）分解を引き起こし、体内における流体又は薬物の分散及び吸収を可能にするため、ハイレネックス（ＨＹＬＥＮＥＸ）（登録商標）の使用に伴い、本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡの分散及び／又は吸着が増加し得る。
【０６４０】
一実施形態では、ヒドロゲルは、局所適用に用いられ得るＰＥＧ系ヒドロゲルである（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１４９３１８号明細書を参照、本明細書において
全体として参照により援用される）。
【０６４１】
別の実施形態では、ヒドロゲルは吸収性ヒドロゲルである。吸収性（ａｂｓｏｒｂａｂｌｙ）ヒドロゲルは、国際公開第２０１２０１８７１８号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの及び／又はそれに記載される方法によって作製されるＰＥＧ系ヒドロゲルであってもよい。吸収性ヒドロゲルは、本発明で使用される持続放出組成物の形成に用いられ得る（例えば、国際公開第２０１２０１８７１８号パンフレットを参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６４２】
一実施形態では、ヒドロゲルは、国際公開第２０１３０９１００１号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるポリマーを含み得る。
【０６４３】
懸濁製剤
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド、水不混和性油性デポー、界面活性剤及び／又は共界面活性剤及び／又は共溶媒を含む懸濁製剤が提供される。油と界面活性剤との組み合わせが、キメラポリヌクレオチドを含む懸濁製剤を可能にし得る。水不混和性デポー中のキメラポリヌクレオチドの送達を用いることにより、デポーから周囲の生理的環境へのｍＲＮＡの持続放出によってバイオアベイラビリティを改善し、ヌクレアーゼによるキメラポリヌクレオチドの分解を防止し得る。
【０６４４】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡの懸濁製剤は、キメラポリヌクレオチドと油性溶液と界面活性剤との組み合わせを使用して調製されてもよい。かかる製剤は、キメラポリヌクレオチドを含む水相と、油及び界面活性剤を含む油性相とを含む二液型システムとして調製されてもよい。懸濁製剤用の例示的油としては、限定はされないが、ゴマ油及びミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（飽和ヤシ油及びパーム核油由来カプリル及びカプリン脂肪酸のエステルとグリセリン又はプロピレングリコールとを含む）、トウモロコシ油、大豆油、ピーナッツ油、蜜ろう及び／又はパーム種油を挙げることができる。例示的界面活性剤としては、限定はされないが、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリエチレングリコール、トランスクトール、キャップムル（Ｃａｐｍｕｌ）（登録商標）、ラブラソール（ｌａｂｒａｓｏｌ）、ミリスチン酸イソプロピル、及び／又はスパン８０（Ｓｐａｎ  ８０）を挙げることができる。一部の実施形態では、懸濁液は、限定はされないが、エタノール、グリセロール及び／又はプロピレングリコールを含め、共溶媒を含み得る。
【０６４５】
懸濁液は、初めに、キメラポリヌクレオチドの水溶液と１つ以上の界面活性剤を含む油性相とを含むキメラポリヌクレオチド製剤を調製することによって形成され得る。懸濁液形成は、これらの２つの相（水性及び油性）を混合する結果として起こる。一部の実施形態では、かかる懸濁液が水相に送達され、水中油型エマルションを形成し得る。一部の実施形態では、懸濁液を水相に送達することにより、キメラポリヌクレオチドを含む油性相によってナノメートルサイズの液滴からマイクロメートルサイズの液滴にまで及ぶサイズ範囲であり得る液滴が形成される水中油型エマルションの形成がもたらされる。一部の実施形態では、特定の組み合わせの油、界面活性剤、共界面活性剤及び／又は共溶媒を利用することによりキメラポリヌクレオチドが油相中に懸濁され、及び／又は水性環境中への送達時に水中油型エマルションが形成され得る。
【０６４６】
一部の実施形態では、懸濁液は、周囲環境中へのキメラポリヌクレオチドの放出の調節をもたらし得る。かかる実施形態において、キメラポリヌクレオチドの放出は、水不混和性デポーからの拡散と、続く周囲環境中（例えば水性環境中）への再可溶化によって調節
され得る。
【０６４７】
一部の実施形態では、水不混和性デポー中のキメラポリヌクレオチド（例えば油相中に懸濁されている）は、キメラポリヌクレオチド安定性の改変（例えばヌクレアーゼによる分解の改変）をもたらし得る。
【０６４８】
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、注射時に（例えば水相に送達されると）エマルションが自発的に形成されるように製剤化されてもよい。かかる粒子形成は、油相から水相へとキメラポリヌクレオチドを放出するため高い表面積対容積比を提供し得る。
【０６４９】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、米国特許第８，４９６，９４５号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるナノエマルションなどの、ナノエマルションに製剤化されてもよい。ナノエマルションは、本明細書に記載されるナノ粒子を含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、脂質層又は界面活性剤層に取り囲まれているか又は被覆されていてもよい液状疎水性コアを含み得る。脂質層又は界面活性剤層は少なくとも１つの膜インテグレートペプチドを含んでもよく、またターゲティングリガンドも含み得る（例えば、米国特許第８，４９６，９４５号明細書を参照、この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６５０】
カチオン及びアニオン
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドの製剤は、カチオン又はアニオンを含み得る。一実施形態では、製剤は、限定はされないが、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｇ＋及びそれらの組み合わせなどの金属カチオンを含む。非限定的な例として、製剤は、金属カチオンと錯体を形成したポリマー及びキメラポリヌクレオチドを含み得る（例えば、米国特許第６，２６５，３８９号明細書及び同第６，５５５，５２５号明細書を参照、これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）。
【０６５１】
一部の実施形態では、二価カチオンと一価カチオンとの組み合わせを含むカチオン性ナノ粒子が、キメラポリヌクレオチドと共に製剤化されてもよい。かかるナノ粒子は、溶液中において所与の時間（例えば数時間、数日間等）で自発的に形成され得る。かかるナノ粒子は、二価カチオン単独の存在下又は一価カチオン単独の存在下では形成されない。カチオン性ナノ粒子中又はカチオン性ナノ粒子を含む１つ以上のデポー中のキメラポリヌクレオチドの送達は、長時間作用型デポーとして作用することにより、及び／又はヌクレアーゼによる分解速度を低下させることにより、キメラポリヌクレオチドバイオアベイラビリティを改善し得る。
【０６５２】
成形ナノ粒子及びマイクロパーティクル
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、ナノ粒子及び／又はマイクロパーティクルに製剤化されてもよい。これらのナノ粒子及び／又はマイクロパーティクルは、任意のサイズ、形状及びケミストリーに成形され得る。例として、ナノ粒子及び／又はマイクロパーティクルは、リキダ・テクノロジーズ（ＬＩＱＵＩＤＡ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ）（登録商標）（ノースカロライナ州モリスビル（Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ））によるプリント（ＰＲＩＮＴ）（登録商標）技術を用いて作製されてもよい（例えば、国際公開第２００７０２４３２３号パンフレットを参照；この内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６５３】
一実施形態では、成形ナノ粒子は、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドのコアとポリマーシェルとを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されるポリマーの
いずれかであってもよく、当該技術分野において公知である。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用してコア中のキメラポリヌクレオチドが保護され得る。
【０６５４】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドはマイクロパーティクルに製剤化されてもよい。マイクロパーティクルは、キメラポリヌクレオチドのコアと生体適合性及び／又は生分解性ポリマーの表層（ｃｏｒｔｅｘｔ）とを含有し得る。非限定的な例として、本発明で使用し得るマイクロパーティクルは、米国特許第８，４６０，７０９号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１２９８３０号明細書及び国際公開第２０１３０７５０６８号パンフレット（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。別の非限定的な例として、マイクロパーティクルは、本発明のキメラポリヌクレオチドの放出を所望の期間にわたり延長するように設計され得る（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１２９８３０号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）における治療用タンパク質の長時間放出を参照）。
【０６５５】
本発明で使用されるマイクロパーティクルは、少なくとも１ミクロン〜少なくとも１００ミクロン（例えば、少なくとも１ミクロン、少なくとも５ミクロン、少なくとも１０ミクロン、少なくとも１５ミクロン、少なくとも２０ミクロン、少なくとも２５ミクロン、少なくとも３０ミクロン、少なくとも３５ミクロン、少なくとも４０ミクロン、少なくとも４５ミクロン、少なくとも５０ミクロン、少なくとも５５ミクロン、少なくとも６０ミクロン、少なくとも６５ミクロン、少なくとも７０ミクロン、少なくとも７５ミクロン、少なくとも８０ミクロン、少なくとも８５ミクロン、少なくとも９０ミクロン、少なくとも９５ミクロン、少なくとも９７ミクロン、少なくとも９９ミクロン、及び少なくとも１００ミクロン）の直径を有し得る。
【０６５６】
ナノジャケット及びナノリポソーム
本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、キーストーン・ナノ（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  Ｎａｎｏ）（ペンシルベニア州ステートカレッジ（Ｓｔａｔｅ  Ｃｏｌｌｅｇｅ，ＰＡ））によるナノジャケット及びナノリポソームに製剤化されてもよい。ナノジャケットは、カルシウム、リン酸塩を含めた、体内で天然に見られる化合物で作られ、また少量のケイ酸塩も含み得る。ナノジャケットはサイズが５〜５０ｎｍの範囲であってもよく、限定はされないがキメラポリヌクレオチドなどの、親水性及び疎水性化合物の送達に用いられ得る。
【０６５７】
ナノリポソームは、限定はされないが体内に天然に存在する脂質など、脂質で作られる。ナノリポソームはサイズが６０〜８０ｎｍの範囲であってもよく、限定はされないがキメラポリヌクレオチドなどの親水性及び疎水性化合物の送達に用いられ得る。一態様において、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは、限定はされないがセラミドナノリポソームなどの、ナノリポソーム中に製剤化される。
【０６５８】
偽ウイルス
一実施形態では、本明細書に開示されるキメラポリヌクレオチドは偽ウイルス（例えば、偽ビリオン）に製剤化されてもよい。非限定的な例として、偽ウイルスは開発されるものであってもよく、及び／又はオーラ・バイオサイエンシーズ（Ａｕｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（マサチューセッツ州ケンブリッジ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））によって記載される。一態様において、偽ウイルスは、薬物をケラチノサイト及び基底膜に送達するように開発され得る（例えば、米国特許出願公開第２０１３００１２４５０号明細書、米国特許出願公開第２０１３００１２５６６号明細書、米国特許第２１０３００１２４２６号明細書及び米国特許出願公開第２０１２０２０７８４０号明細書及び国際公開第２０１３００９７１７号パンフレットを参照、これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６５９】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドの送達に使用される偽ウイルスは、限定はされないが、ヘルペスウイルス及びパピローマウイルスなどのウイルスに由来し得る（例えば、米国特許出願公開第２０１３００１２４５０号明細書、米国特許出願公開第２０１３００１２５６６号明細書、米国特許第２１０３００１２４２６号明細書及び米国特許出願公開第２０１２０２０７８４０号明細書及び国際公開第２０１３００９７１７号パンフレット（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）；及びマー（Ｍａ）ら著、「ＤＮＡ送達媒体としてのＨＰＶ偽ウイルス（ＨＰＶ  ｐｓｅｕｄｏｖｉｒｉｏｎｓ  ａｓ  ＤＮＡ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ）」、セラピューティック・デリバリー（Ｔｈｅｒ  Ｄｅｌｉｖ．）、２０１１年、第２巻、第４号、ｐ．４２７〜４３０；キネス（Ｋｉｎｅｓ）ら著、「パピローマウイルス感染を引き起こす初期段階は細胞表面結合の前に基底膜で起こる（Ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｓｔｅｐｓ
ｌｅａｄｉｎｇ  ｔｏ  ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｃｃｕｒ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｉｏｒ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２００９年、第１０６巻、第４８号、ｐ．２０４５８〜２０４６３；ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）ら著、「マウスモデルにおけるＨＰＶの性器感染はノノキシノール−９によって増強され、カラギーナンによって阻害される（Ｇｅｎｉｔａｌ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＨＰＶ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｉｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｎｏｎｏｘｙｎｏｌ−９  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）」、ネイチャー・メディシン（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、２００７年、第１３巻、第７号、ｐ．８５７〜８６１；ゴードン（Ｇｏｒｄｏｎ）ら著、「ＳＩＶ  ＤＮＡを送達するヒトパピローマウイルス偽ウイルスワクチンによる腟粘膜のターゲティング（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｖａｇｉｎａｌ  Ｍｕｃｏｓａ  ｗｉｔｈ  Ｈｕｍａｎ  Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  Ｐｓｅｄｕｄｏｖｉｒｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ  ＳＩＶ  ＤＮＡ）」、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、２０１２年、第１８８巻、第２号、ｐ．７１４〜７２３；キュブル（Ｃｕｂｕｒｕ）ら著、「ＨＰＶベクターによる腟内免疫化は組織常在性ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答を誘導する（Ｉｎｔｒａｖａｇｉｎａｌ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＨＰＶ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｉｓｓｕｅ−ｒｅｓｉｄｅｎｔ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）」、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）、２０１２年、第１２２巻、第１２号、ｐ．４６０６〜４６２０；ハン（Ｈｕｎｇ）ら著、「ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子を有するＨＰＶ−１６偽ウイルスを使用した卵巣癌遺伝子療法（Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｕｓｉｎｇ  ＨＰＶ−１６
Ｐｓｅｄｕｄｏｖｉｒｉｏｎ  Ｃａｒｒｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ＨＳＶ−ｔｋ  Ｇｅｎｅ）」、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ）、２０１２年、第７巻、第７号、ｅ４０９８３；ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）ら著、「ヒトパピローマウイルスによるマウス雌生殖器への付着とその感染におけるヘパラン硫酸の役割（Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｈｅｐａｒａｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ  ｉｎ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｔｏ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｆｅｍａｌ  Ｇｅｎｉｔａｌ  Ｔｒａｃｔ  ｂｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ）」、ジャーナル・オブ・バイロロジー（Ｊ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．）、２００９年、第８３巻、第５号、ｐ．２０６７〜２０７４（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）を参照）。
【０６６０】
偽ウイルスは、米国特許出願公開第２０１２００１５８９９号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１７７５８７号明細書及び国際公開第２０１００４７８３９号パンフレット  国際公開第２０１３１１６６５６号パンフレット、国際公開第２０１３１０６５２５号パンフレット及び国際公開第２０１３１２２２６２号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって
調製されるウイルス様粒子（ＶＬＰ）であってもよい。一態様において、ＶＬＰは、限定はされないが、バクテリオファージＭＳ、Ｑβ、Ｒ１７、ｆｒ、ＧＡ、Ｓｐ、ＭＩ、Ｉ、ＭＸＩ、ＮＬ９５、ＡＰ２０５、ｆ２、ＰＰ７、及び植物ウイルスのカブクリンクルウイルス（ＴＣＶ）、トマトブッシースタントウイルス（ＴＢＳＶ）、インゲンマメ南部モザイクウイルス（ＳＢＭＶ）及びブロモウイルス属（Ｂｒｏｍｏｖｉｒｕｓ）のメンバー、例えば、ソラマメ斑紋ウイルス、ブロムモザイクウイルス、カシアイエローブロッチウイルス、ササゲ退緑斑紋ウイルス（ＣＣＭＶ）、フシグロ黄色斑紋ウイルス、及びスプリングビューティ潜在ウイルスであってもよい。別の態様では、ＶＬＰは、米国特許出願公開第２０１３０１７７５８７号明細書又は米国特許第８，５０６，９６７号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりインフルエンザウイルスに由来し得る。さらに別の態様では、ＶＬＰは、国際公開第２０１３１１６６５６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるなどの、脂質膜又は粒子外面にアンカリングされたＢ７−１及び／又はＢ７−２分子を含み得る。一態様において、ＶＬＰは、国際公開第２０１２０４９３６６号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるＶＬＰなど、ノロウイルス、ロタウイルス組換えＶＰ６タンパク質又は二層ＶＰ２／ＶＰ６に由来し得る。
【０６６１】
偽ウイルスは、限定はされないが、国際公開第２０１０１２０２６６号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２０１７１２９０号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）及びマー（Ｍａ）ら著、「送達媒体としてのＨＰＶ偽ウイルス（ＨＰＶ  ｐｓｅｕｄｏｖｉｒｉｏｎｓ  ａｓ  ＤＮＡ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ
ｖｅｈｉｃｌｅｓ）」、セラピューティック・デリバリー（Ｔｈｅｒ  Ｄｅｌｉｖ．）、２０１１年、第２巻、第４号、ｐ．４２７〜４３０；キネス（Ｋｉｎｅｓ）ら著、「パピローマウイルス感染を引き起こす初期段階は細胞表面結合の前に基底膜で起こる（Ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｓｔｅｐｓ  ｌｅａｄｉｎｇ  ｔｏ  ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｃｃｕｒ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｉｏｒ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２００９年、第１０６巻、第４８号、ｐ．２０４５８〜２０４６３；ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）ら著、「マウスモデルにおけるＨＰＶの性器感染はノノキシノール−９によって増強され、カラギーナンによって阻害される（Ｇｅｎｉｔａｌ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＨＰＶ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｉｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｎｏｎｏｘｙｎｏｌ−９  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）」、ネイチャー・メディシン（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、２００７年、第１３巻、第７号、ｐ．８５７〜８６１；ゴードン（Ｇｏｒｄｏｎ）ら著、「ＳＩＶ  ＤＮＡを送達するヒトパピローマウイルス偽ウイルスワクチンによる腟粘膜のターゲティング（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｖａｇｉｎａｌ  Ｍｕｃｏｓａ  ｗｉｔｈ  Ｈｕｍａｎ  Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  Ｐｓｅｄｕｄｏｖｉｒｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ  ＳＩＶ  ＤＮＡ）」、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、２０１２年、第１８８巻、第２号、ｐ．７１４〜７２３；キュブル（Ｃｕｂｕｒｕ）ら著、「ＨＰＶベクターによる腟内免疫化は組織常在性ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答を誘導する（Ｉｎｔｒａｖａｇｉｎａｌ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＨＰＶ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｉｓｓｕｅ−ｒｅｓｉｄｅｎｔ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）」、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）、２０１２年、第１２２巻、第１２号、ｐ．４６０６〜４６２０；ハン（Ｈｕｎｇ）ら著、「ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子を有するＨＰＶ−１６偽ウイルスを使用した卵巣癌遺伝子療法（Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｕｓｉｎｇ  ＨＰＶ−１６  Ｐｓｅｄｕｄｏｖｉｒｉｏｎ  Ｃａｒｒｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ＨＳＶ−ｔｋ  Ｇｅｎｅ）」、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ）、２０１２年、
第７巻、第７号、ｅ４０９８３；ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）ら著、「ヒトパピローマウイルスによるマウス雌生殖器への付着とその感染におけるヘパラン硫酸の役割（Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｈｅｐａｒａｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ  ｉｎ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｔｏ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｆｅｍａｌ  Ｇｅｎｉｔａｌ  Ｔｒａｃｔ  ｂｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ）」、ジャーナル・オブ・バイロロジー（Ｊ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．）、２００９年、第８３巻、第５号、ｐ．２０６７〜２０７４（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、ヒトパピローマウイルス様粒子であってもよい。
【０６６２】
一態様において、偽ウイルスは、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３０１１６４０８号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１１５２４７号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、ビリオン由来のナノ粒子であってもよい。非限定的な例として、ビリオン由来のナノ粒子を使用して、癌の治療に使用し得るキメラポリヌクレオチドを送達し、及び／又は免疫系の腫瘍認識を増進させ得る。非限定的な例として、薬剤を少なくとも１つの腫瘍に選択的に送達し得るビリオン由来のナノ粒子は、国際公開第２０１３１１９８７７号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるパピローマ由来の粒子であってもよい。ビリオン由来のナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１１６４０８号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１１５２４７号明細書又は国際公開第２０１３１１９８７７号パンフレット（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。
【０６６３】
一実施形態では、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）は自己組織化粒子であってもよい。自己組織化ＶＬＰ及び自己組織化ＶＬＰの作製方法の非限定的な例は、国際公開第２０１３１２２２６２号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６６４】
ミニ細胞
一態様において、キメラポリヌクレオチドは細菌ミニ細胞に製剤化されてもよい。非限定的な例として、細菌ミニ細胞は、国際公開第２０１３０８８２５０号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１３０１７７４９９号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものであってもよい。本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドなどの治療剤を含む細菌ミニ細胞を使用して脳腫瘍に治療剤を送達し得る。
【０６６５】
半固体組成物
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、半固体組成物を形成するため疎水性マトリックスと共に製剤化されてもよい。非限定的な例として、半固体組成物又はペースト様組成物は、国際公開第２０１３０７６０４号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって作製されてもよい。半固体組成物は、国際公開第２０１３０７６０４号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの持続放出製剤であってもよい。
【０６６６】
別の実施形態では、半固体組成物は、組成物の周りに形成された微多孔膜又は生分解性ポリマーをさらに有し得る（例えば、国際公開第２０１３０７６０４号パンフレットを参照、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０６６７】
本発明のキメラポリヌクレオチドを使用した半固体組成物は、国際公開第２０１３０７６０４号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの半固体混合物の特性（例えば、少なくとも１０−４Ｎ・ｍｍ−２の弾性係数、
及び／又は少なくとも１００ｍＰａ・ｓの粘度）を有し得る。
【０６６８】
エキソソーム
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドはエキソソームに製剤化されてもよい。エキソソームは少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを負荷され、細胞、組織及び／又は生物に送達され得る。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１３０８４０００号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるエキソソームに負荷され得る。
【０６６９】
シルクベースの送達
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、持続放出性のシルクベースの送達システムに製剤化されてもよい。シルクベースの送達システムは、絹フィブロイン溶液を治療剤、例えば、限定はされないが、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知のキメラポリヌクレオチドと接触させることにより形成され得る。非限定的な例として、本発明において使用し得る持続放出性のシルクベースの送達システム及びかかるシステムの作製方法は、米国特許出願公開第２０１３０１７７６１１号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７０】
マイクロパーティクル
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドを含む製剤はマイクロパーティクルを含み得る。マイクロパーティクルは、限定はされないが、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル及びポリ無水物などの、本明細書に記載される及び／又は当該技術分野において公知のポリマーを含み得る。マイクロパーティクルは吸着剤表面を有し、キメラポリヌクレオチドなどの生物学的に活性な分子を吸着し得る。非限定的な例として、本発明で使用されるマイクロパーティクル及びマイクロパーティクルの作製方法は、米国特許出願公開第２０１３１９５９２３号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１９５８９８号明細書及び米国特許第８，３０９，１３９号明細書及び同第８，２０６，７４９号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７１】
別の実施形態では、製剤は、マイクロパーティクルとキメラポリヌクレオチドとを含むマイクロエマルションであってもよい。非限定的な例として、マイクロパーティクルを含むマイクロエマルションは、米国特許出願公開第２０１３１９５９２３号明細書及び米国特許出願公開第２０１３０１９５８９８号明細書及び米国特許第８，３０９，１３９号明細書及び同第８，２０６，７４９号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７２】
アミノ酸脂質
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドはアミノ酸脂質に製剤化されてもよい。アミノ酸脂質は、アミノ酸残基と１つ以上の親油性テイルとを含む親油性化合物である。アミノ酸脂質及びアミノ酸脂質の作製方法の非限定的な例は、米国特許第８，５０１，８２４号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７３】
一実施形態では、アミノ酸脂質は親水性部分と親油性部分とを有する。親水性部分はアミノ酸残基であってもよく、親油性部分は少なくとも１つの親油性テイルを含んでもよい。
【０６７４】
一実施形態では、アミノ酸脂質製剤を使用してキメラポリヌクレオチドを対象に送達し得る。
別の実施形態では、アミノ酸脂質製剤は、キメラポリヌクレオチドを結合して遊離させるアミノ酸脂質を含む遊離可能な形態のキメラポリヌクレオチドを送達し得る。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドの遊離は、限定はされないが、米国特許第７，０９８，０３２号明細書、同第６，８９７，１９６号明細書、同第６，４２６，０８６号明細書、同第７，１３８，３８２号明細書、同第５，５６３，２５０号明細書、及び同第５，５０５，９３１号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものなどの、酸に不安定なリンカーによってもたらされ得る。
【０６７５】
微小胞
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは微小胞に製剤化されてもよい。微小胞の非限定的な例としては、米国特許出願公開第２０１３０２０９５４４号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものが挙げられる。
【０６７６】
一実施形態では、微小胞はＡＲＲＤＣ１媒介性微小胞（ＡＲＲＤＣ１−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ：ＡＲＭＭ）である。ＡＲＭＭ及びＡＲＭＭの作製方法の非限定的な例は、国際公開第２０１３１１９６０２号パンフレット（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７７】
高分子電解質錯体
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは高分子電解質錯体に製剤化されてもよい。高分子電解質錯体は、電荷動的ポリマー（ｃｈａｒｇｅ−ｄｙｎａｍｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ）が１つ以上のアニオン性分子と錯体を形成すると形成される。電荷動的ポリマー及び高分子電解質錯体及び高分子電解質錯体の作製方法の非限定的な例は、米国特許第８，５２４，３６８号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７８】
結晶性（ｃｙｒｓｔａｌｌｉｎｅ）ポリマーシステム
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは結晶性ポリマーシステムに製剤化されてもよい。結晶性ポリマーシステムは、結晶性部分及び／又は結晶性部分を含む末端ユニットを有するポリマーである。「ＣＹＣポリマー」と呼ばれる結晶性部分及び／又は結晶性部分を含む末端ユニットを有するポリマー、結晶性ポリマーシステム並びにかかるポリマー及びシステムの作製方法の非限定的な例は、米国特許第８，５２４，２５９号明細書（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０６７９】
賦形剤
医薬製剤は薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含むことができ、薬学的に許容可能な賦形剤には、本明細書で使用されるとき、限定はされないが、所望の特定の投薬形態に好適なとおりのあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体媒体、分散又は懸濁補助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤、固体結合剤、潤滑剤、矯味剤、安定剤、抗酸化剤、重量オスモル濃度調整剤、ｐＨ調整剤などが含まれる。医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物の調製技法は当該技術分野において公知である（レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、Ａ．Ｒ．ジェンナーロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）著、（リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、メリーランド州ボルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）、２００６年を参照；全体として参照により本明細書に援用される）。従来の賦形剤媒体の使用が本開示の範囲内であると考えられてもよく、但し、任意の従来の賦形剤媒体が、任意の望ましくない生物学的効果を生じたり、又はその他、その使用が本発明の範囲内にあると考えられる医薬組成物の任意の他の構成成分と有害な形で相
互作用したりするなどによって物質又はその誘導体と適合しない場合は除外するものとする。
【０６８０】
一部の実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％純粋であり得る。一部の実施形態では、賦形剤は、ヒトでの使用及び獣医学的使用が承認されている。一部の実施形態では、賦形剤はアメリカ食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認済みであってもよい。一部の実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。一部の実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／又は国際薬局方の規格に適合し得る。
【０６８１】
医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容可能な賦形剤としては、限定はされないが、不活性希釈剤、分散剤及び／又は造粒剤、表面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、潤滑剤、及び／又は油が挙げられる。かかる賦形剤は任意選択で医薬組成物中に含まれ得る。組成物はまた、ココアバター及び坐薬ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、矯味剤、及び／又は芳香剤などの賦形剤も含み得る。
【０６８２】
例示的希釈剤としては、限定はされないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉末糖等、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【０６８３】
例示的造粒剤及び／又は分散剤としては、限定はされないが、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材産物、天然スポンジ、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（スターチ１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミウニムマグネシウム（ビーガム（ＶＥＥＧＵＭ）（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第４級アンモニウム化合物等、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【０６８４】
例示的表面活性剤及び／又は乳化剤としては、限定はされないが、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びビーガム（ＶＥＥＧＵＭ）（登録商標）［ケイ酸アルミウニムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、モノステアリン酸トリアセチン、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、及びモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー類（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸重合体、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ツイーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ツイーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標
）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ツイーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標）８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［スパン（ＳＰＡＮ）（登録商標）４０］、モノステアリン酸ソルビタン［スパン（ＳＰＡＮ）（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［スパン（ＳＰＡＮ）（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［スパン（ＳＰＡＮ）（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル類（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレン［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレン、及びソルトール（ＳＯＬＵＴＯＬ）（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル類、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル類（例えばクレモフォール（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル類、（例えばポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、プルオリンク（ＰＬＵＯＲＩＮＣ）（登録商標）Ｆ  ６８、ポロキサマー（ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ）（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム等及び／又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【０６８５】
例示的結合剤としては、限定はされないが、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）；ゼラチン；糖類（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；アミノ酸（例えば、グリシン）；天然及び合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイルランドコケ抽出物、パンワーガム（ｐａｎｗａｒ  ｇｕｍ）、ガッティガム、イサポールの殻（ｉｓａｐｏｌ  ｈｕｓｋ）の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミウニムマグネシウム（ビーガム（ＶＥＥＧＵＭ）（登録商標））、及びカラマツアラボガラクタン）；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート類；ワックス；水；アルコール；その他；及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０６８６】
例示的保存剤としては、限定はされないが、抗酸化剤、キレート剤、抗菌性保存剤、抗真菌性保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤、及び／又は他の保存剤を挙げることができる。酸化はｍＲＮＡ、特に液体ｍＲＮＡ製剤にとって、潜在的な分解経路である。酸化を防止するため、製剤に抗酸化剤を添加することができる。例示的抗酸化剤としては、限定はされないが、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル（ａｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ＥＤＴＡ、ｍ−クレゾール、メチオニン、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオグリセロール及び／又は亜硫酸ナトリウムが挙げられる。例示的キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／又はエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的抗菌性保存剤としては、限定はされないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミドウレア、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／又はチメロサールが挙げられる。例示的抗真菌性保存剤としては、限定はされないが、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、
プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／又はソルビン酸が挙げられる。例示的アルコール保存剤としては、限定はされないが、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸塩、及び／又はフェニルエチルアルコールが挙げられる。例示的酸性保存剤としては、限定はされないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／又はフィチン酸が挙げられる。他の保存剤としては、限定はされないが、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシムメシル酸塩（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  ｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌ）（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、グリダント・プラス（ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ）（登録商標）、フェノニップ（ＰＨＥＮＯＮＩＰ）（登録商標）、メチルパラベン、ジャーモール（ＧＥＲＭＡＬＬ）（登録商標）１１５、ジャーマベン（ＧＥＲＭＡＢＥＮ）（登録商標）ＩＩ、ネオロン（ＮＥＯＬＯＮＥ）（商標）、カトン（ＫＡＴＨＯＮ）（商標）、及び／又はユーキシル（ＥＵＸＹＬ）（登録商標）が挙げられる。
【０６８７】
一部の実施形態では、安定性を向上させるため、キメラポリヌクレオチド溶液のｐＨはｐＨ５〜ｐＨ８に維持される。ｐＨを制御する例示的緩衝液としては、限定はされないが、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ヒスチジン（又はヒスチジンＨＣｌ）、炭酸ナトリウム、及び／又はリンゴ酸ナトリウムを挙げることができる。別の実施形態では、上記に列挙する例示的緩衝液が、さらなる一価対イオン（限定はされないがカリウムを含む）と共に用いられてもよい。二価カチオンもまた緩衝液対イオンとして用いられ得る；しかしながら、これらは複合体形成及び／又はｍＲＮＡ分解があるため好ましくない。
【０６８８】
例示的緩衝剤としてはまた、限定はされないが、クエン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、リン酸緩衝溶液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、第二リン酸カリウム、第一リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張生理食塩水、リンゲル溶液、エチルアルコール等、及び／又はそれらの組み合わせも挙げることができる。
【０６８９】
例示的潤滑剤としては、限定はされないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｂｅｈａｎａｔｅ）、硬化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム等、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０６９０】
例示的油としては、限定はされないが、扁桃油、杏仁油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、クロフサスグリ（ｂｌａｃｋ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｓｅｅｄ）油、ルリジサ油、カデ油、カモミール油、キャノーラ油、カラウェー油、カルナウバ、ヒマシ油、桂皮油
、ココアバター、ヤシ油、タラ肝油、コーヒー油、コーン油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、月見草油、魚油、アマニ油、ゲラニオール油、ヒョウタン油、グレープシード油、ヘーゼルナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、リツェアクベバ油、マカダミアナッツ（ｍａｃａｄｅｍｉａ  ｎｕｔ）油、マロー油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ニクズク油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、桃仁油、ピーナッツ油、ケシ種子油、カボチャ種子油、ナタネ油、米糠油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サスカナ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セイボリー油、シーバックソーン油、ゴマ油、シアバター、シリコーン油、大豆油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチバー油、クルミ油、及びコムギ胚種油が挙げられる。例示的油としては、限定はされないが、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコーン、セバシン酸ジエチル、ジメチコーン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱物油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【０６９１】
配合者の判断に基づき、組成物中には、ココアバター及び坐薬ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、矯味剤、及び／又は芳香剤などの賦形剤が存在し得る。
例示的添加剤としては、生理的に生体適合性の緩衝液（例えば、トリメチルアミン塩酸塩）、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡ又はＤＴＰＡ−ビスアミドなど）又はカルシウムキレート錯体（例えばカルシウムＤＴＰＡ、ＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアミドなど）の添加、又は任意選択で、カルシウム塩又はナトリウム塩（例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム又は乳酸カルシウム）の添加が挙げられる。加えて、抗酸化剤及び懸濁剤が用いられ得る。
【０６９２】
ｍＲＮＡ用の凍結保護剤
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド製剤は凍結保護剤（ｃｙｒｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含み得る。本明細書で使用されるとき、ここで「凍結保護剤」は、所与の物質と組み合わせたとき、凍結時に起こる当該の物質の損傷を抑え又はなくす助けとなる１つ以上の薬剤を指す。一部の実施形態では、凍結保護剤をキメラポリヌクレオチドと組み合わせることにより、凍結中のキメラポリヌクレオチドの安定化が図られる。キメラポリヌクレオチドの長期（例えば３６ヵ月）安定には、−２０℃〜−８０℃でのｍＲＮＡの凍結貯蔵が有利であり得る。一部の実施形態では、凍結保護剤をキメラポリヌクレオチド製剤中に含めることで、凍結／融解サイクルを通じた、及び凍結貯蔵条件下でのキメラポリヌクレオチドが安定化する。本発明の凍結保護剤としては、限定はされないが、スクロース、トレハロース、ラクトース、グリセロール、デキストロース、ラフィノース及び／又はマンニトールを挙げることができる。トレハロースは、食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）が一般に安全と認められるもの（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｇａｒｄｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ：ＧＲＡＳ）としてリストに挙げており、市販の医薬製剤に一般的に使用されている。
【０６９３】
増量剤
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド製剤は増量剤を含み得る。本明細書で使用されるとき、それらの（ｔｈｅｒ）用語「増量剤」は、製剤に対する所望のコンシステンシー及び／又は製剤構成成分の安定化を付与するため製剤中に含まれる１つ以上の薬剤を指す。一部の実施形態では、増量剤が凍結乾燥キメラポリヌクレオチド製剤中に含められることにより「薬学的にエレガントな」ケーキが生じ、長期（例えば３６ヵ月）貯蔵の間の凍結乾燥キメラポリヌクレオチドが安定化する。本発明の増量剤としては、限定はされないが、スクロース、トレハロース、マンニトール、グリシン、ラクトース及び／又はラフィノースを挙げることができる。一部の実施形態では、凍結保護剤と増量剤との組み合わせ（例えば、スクロース／グリシン又はトレハロース／マンニトール）が含められる
ことにより、凍結中のキメラポリヌクレオチドが安定し得るとともに、凍結乾燥のための増量剤も提供され得る。
【０６９４】
本発明のキメラポリヌクレオチドの製剤及び製剤化方法の非限定的な例は、２０１２年１２月１４日に出願された国際公開第２０１３０９０６４８号パンフレット（この内容は、全体として参照により本明細書に援用される）にもまた提供される。
【０６９５】
非活性成分
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド製剤は、非活性成分である少なくとも１つの賦形剤を含み得る。本明細書で使用されるとき、それらの（ｔｈｅｒ）用語「非活性成分」は、製剤中に含まれる１つ以上の不活性薬剤を指す。一部の実施形態では、本発明の製剤に用いられ得る非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、いずれも未承認であってもよく、又は一部が承認済みであってもよい。非活性成分及び非活性成分を製剤化し得る投与経路の非包括的リストを表７に記載する。表７において、「ＡＮ」は麻酔薬を意味し、「ＣＮＢＬＫ」は頸神経ブロックを意味し、「ＮＢＬＫ」は神経ブロックを意味し、「ＩＶ」は静脈内を意味し、「ＩＭ」は筋肉内を意味し、及び「ＳＣ」は皮下を意味する。
【０６９６】
【表７−１】
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【０６９７】
【表７−２】
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【０６９８】
【表７−３】
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【０６９９】
【表７−４】
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【０７００】
【表７−５】
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【０７０１】
【表７−６】
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【０７０２】
【表７−７】
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【０７０３】
【表７−８】
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【０７０４】
【表７−９】
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【０７０５】
【表７−１０】
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【０７０６】
【表７−１１】
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【０７０７】
【表７−１２】
2016530294.tif 000049
【０７０８】
【表７−１３】
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【０７０９】
【表７−１４】
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【０７１０】
【表７−１５】
2016530294.tif 000052
【０７１１】
【表７−１６】
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【０７１２】
【表７−１７】
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【０７１３】
【表７−１８】
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【０７１４】
【表７−１９】
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【０７１５】
【表７−２０】
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【０７１６】
【表７−２１】
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【０７１７】
【表７−２２】
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【０７１８】
【表７−２３】
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【０７１９】
【表７−２４】
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【０７２０】
【表７−２５】
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【０７２１】
【表７−２６】
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【０７２２】
【表７−２７】
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【０７２３】
【表７−２８】
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【０７２４】
送達
本開示は、薬物送達科学の見込まれる進歩を考慮した、任意の適切な経路による治療、医薬、診断又はイメージングのいずれかのためのキメラポリヌクレオチドの送達を包含する。送達はネイキッド送達であっても、又は製剤化送達であってもよい。
【０７２５】
ネイキッド送達
本発明のキメラポリヌクレオチドはネイキッドで細胞に送達されてもよい。本明細書で使用されるとき、「ネイキッド」は、トランスフェクションを促進する薬剤のないキメラポリヌクレオチドの送達を指す。例えば、細胞に送達されるキメラポリヌクレオチドが修飾を含まなくてもよい。ネイキッドキメラポリヌクレオチドは、当該技術分野において公知の及び本明細書に記載される投与経路を用いて細胞に送達され得る。
【０７２６】
製剤化送達
本発明のキメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載される方法を用いて製剤化されてもよい。製剤は、修飾されていることも、及び／又は修飾されていないこともあるキメラポリヌクレオチドを含有し得る。製剤は、限定はされないが、細胞透過剤、薬学的に許容可能な担体、送達剤、生体内侵食性又は生体適合性ポリマー、溶媒、及び持続放出送達デポーをさらに含み得る。製剤化キメラポリヌクレオチドは、当該技術分野において公知の及び本明細書に記載される投与経路を用いて細胞に送達され得る。
【０７２７】
組成物はまた、当該技術分野におけるいくつかの方法のうちのいずれか、例えば、限定はされないが、直接浸す又はつけるか、カテーテルを用いるか、ゲル、散剤、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／又は点滴薬によるか、組成物でコーティングした又はそれを含浸させた織物又は生分解性材料などの基材を使用することによるなどして臓器又は組織に直接送達するように製剤化されてもよい。
【０７２８】
投与
本発明のキメラポリヌクレオチドは、治療上有効な結果をもたらす任意の経路によって投与され得る。それらとしては、限定はされないが、経腸（腸の中に）、胃腸内、硬膜外（硬膜の中に）、経口（口を通じて）、経皮、硬膜周囲、脳内（大脳の中に）、脳室内（脳室の中に）、皮膚上（皮膚上への塗布）、皮内（皮膚それ自体の中に）、皮下（皮膚の下に）、経鼻投与（鼻を通じて）、静脈内（静脈の中に）、静脈内ボーラス、静脈内点滴、動脈内（動脈の中に）、筋肉内（筋肉の中に）、心臓内（心臓の中に）、骨内注入（骨髄の中に）、髄腔内（脊柱管の中に）、腹腔内（腹膜の中への注入又は注射）、膀胱内注入、硝子体内（眼を通じて）、空洞内注射（病的腔の中に）、腔内（陰茎の基部の中に）
、腟内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身に分布させるためのインタクトな皮膚を通じた拡散）、経粘膜（粘膜を通じた拡散）、経腟、インサフレーション（鼻から吸引する）、舌下、下唇下、浣腸、点眼薬（結膜上に）、点耳薬、耳介（耳に、又は耳を通じて）、頬側（頬に向けて）、結膜、皮膚、歯（１つ又は複数の歯に対して）、電気浸透、子宮頚管内、洞内、気管内、体外、血液透析、浸潤、間質内、腹腔内、羊膜内、関節内、仙骨内、気管支内、嚢内、軟骨内（軟骨内部に）、仙骨内（馬尾（ｃａｕｄａ  ｅｑｕｉｎｅ）内部に）、大槽内（小脳延髄大槽内部に）、角膜内（角膜内部に）、歯冠内（ｄｅｎｔａｌ  ｉｎｔｒａｃｏｒｎａｌ）、冠内（冠動脈内部に）、陰核海綿体内（陰茎の陰核海綿体の膨張性の腔の内部に）、椎間板内（椎間板の内部に）、管内（腺管の内部に）、十二指腸内（十二指腸の内部に）、硬膜内（硬膜の内部に又はその下に）、表皮内（表皮に対して）、食道内（食道に対して）、胃内（胃の内部に）、歯肉内（歯肉の内部に）、回腸内（小腸遠位部の内部に）、病巣内（局所病変の内部に又はそれに直接導入される）、管腔内（管腔の内部に）、リンパ内（リンパの内部に）、髄内（骨髄腔の内部に）、髄膜内（髄膜の内部に）、眼内（眼の内部に）、卵巣内（卵巣の内部に）、心膜内（心膜の内部に）、胸膜内（胸膜の内部に）、前立腺内（前立腺の内部に）、肺内（肺又はその気管支の内部に）、洞内（鼻洞又は眼窩周囲洞の内部に）、脊髄内（脊柱の内部に）、滑液嚢内（関節の滑膜腔の内部に）、腱内（腱の内部に）、精巣内（精巣の内部に）、くも膜下腔内（任意の脳脊髄軸レベルの脳脊髄液の内部に）、胸腔内（胸部の内部に）、管内（臓器細管の内部に）、腫瘍内（腫瘍の内部に）、鼓室内（中耳（ａｕｒｕｓ  ｍｅｄｉａ）の内部に）、血管内（１つ又は複数の血管の内部に）、脳室内（脳室の内部に）、イオントフォレーシス（電流を用いて、ここでは可溶性塩のイオンが体の組織中に移動する）、潅注（開放創又は体腔を浴洗し、又はフラッシュするため）、喉頭（喉頭上に直接）、経鼻胃（鼻から胃の中に）、密封包帯療法（局所経路投与、その後包帯で被覆して範囲を閉塞する）、眼（外眼部に対して）、口腔咽頭（口及び咽頭に直接）、非経口、経皮、関節周囲、硬膜周囲、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器（局所作用又は全身作用のため経口的又は経鼻的に吸入することによって気道の内部に）、球後（橋の後方又は眼球の後方）、軟部組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤（胎盤を通じて又はそれにわたって）、経気管（気管壁を通じて）、経鼓室（鼓室にわたって又はそれを通じて）、尿管（尿管に対して）、尿道（尿道に対して）、腟内、仙骨ブロック、診断、神経ブロック、胆管潅流、心潅流、フォトフェレーシス又は脊髄が挙げられる。具体的な実施形態において、組成物は、組成物が血液脳関門、血管関門、又は他の上皮性関門を通過することを可能にする方法で投与され得る。一実施形態では、ある投与経路用の製剤が少なくとも１つの非活性成分を含み得る。投与経路及び特定の投与経路用の製剤に含め得る非活性成分の非限定的な例を表８に示す。表８では、「ＡＮ」は麻酔を意味し、「ＣＮＢＬＫ」は頸神経ブロックを意味し、「ＮＢＬＫ」は神経ブロックを意味し、「ＩＶ」は静脈内を意味し、「ＩＭ」は筋肉内を意味し、及び「ＳＣ」は皮下を意味する。
【０７２９】
【表８−１】
2016530294.tif 000066
【０７３０】
【表８−２】
2016530294.tif 000067
【０７３１】
【表８−３】
2016530294.tif 000068
【０７３２】
【表８−４】
2016530294.tif 000069
【０７３３】
【表８−５】
2016530294.tif 000070
【０７３４】
【表８−６】
2016530294.tif 000071
【０７３５】
【表８−７】
2016530294.tif 000072
【０７３６】
【表８−８】
2016530294.tif 000073
【０７３７】
【表８−９】
2016530294.tif 000074
【０７３８】
【表８−１０】
2016530294.tif 000075
【０７３９】
【表８−１１】
2016530294.tif 000076
【０７４０】
【表８−１２】
2016530294.tif 000077
【０７４１】
【表８−１３】
2016530294.tif 000078
【０７４２】
【表８−１４】
2016530294.tif 000079
【０７４３】
【表８−１５】
2016530294.tif 000080
【０７４４】
【表８−１６】
2016530294.tif 000081
【０７４５】
【表８−１７】
2016530294.tif 000082
【０７４６】
【表８−１８】
2016530294.tif 000083
【０７４７】
本発明のキメラポリヌクレオチドの非限定的な投与経路を以下に記載する。
非経口及び注射剤投与
非経口投与用の液体投薬形態としては、限定はされないが、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及び／又はエリキシル剤が挙
げられる。活性成分に加え、液体投薬形態は、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（詳細には、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール類及びソルビタン脂肪酸エステル類、及びこれらの混合物などを含み得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、矯味剤、及び／又は芳香剤を含むことができる。非経口投与に関する特定の実施形態では、組成物は、クレモフォール（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／又はそれらの組み合わせなどの可溶化剤と混合される。
【０７４８】
非経口投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。非経口投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、塩酸、マンニトール、窒素、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び水酸化ナトリウムが含まれる。
【０７４９】
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性又は油性懸濁液は、好適な分散剤、湿潤剤、及び／又は懸濁剤を使用して公知の技術により製剤化し得る。無菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤及び／又は溶媒中の、例えば１，３−ブタンジオール溶液としての無菌注射用溶液、懸濁液、及び／又はエマルションであってもよい。利用し得る許容可能な媒体及び溶媒の中には、水、リンゲル溶液（Ｕ．Ｓ．Ｐ．）、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。無菌固定油が、従来、溶媒又は懸濁媒として利用されている。本目的上、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含め、任意の無刺激固定油を利用することができる。注射剤の調製には、オレイン酸などの脂肪酸を使用することができる。無菌製剤は、局所麻酔薬、保存剤及び緩衝剤などの補助剤もまた含み得る。
【０７５０】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルタによるろ過、及び／又は使用前に滅菌水又は他の滅菌注射用媒体中に溶解し又は分散させ得る無菌固体組成物の形態の滅菌剤の添合によって滅菌することができる。
【０７５１】
活性成分の効果を延長させるため、多くの場合に、皮下又は筋肉内注射からの活性成分の吸収を遅延させることが望ましい。これは、難水溶性の結晶性又は非晶質物質の液体懸濁物を使用して達成し得る。次に薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、ひいては結晶サイズ及び結晶形に依存し得る。或いは、非経口投与薬物形態の遅延吸収は、薬物を油媒体中に溶解又は懸濁することにより達成される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に薬物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって作製される。薬物対ポリマー比及び利用する特定のポリマーの性質に応じて薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）類及びポリ（無水物）類が挙げられる。デポー注射用製剤は、生体組織と適合性を有するリポソーム又はマイクロエマルション中に薬物を閉じ込めることによって調製される。
【０７５２】
直腸及び腟内投与
直腸又は腟内（例えば、経腟）投与用の組成物は、典型的には坐薬であり、坐薬は、周囲温度では固体でありながら体温では液体の、従って直腸又は腟腔で融解して活性成分を放出するココアバター、ポリエチレングリコール又は坐薬ワックスなどの好適な非刺激性の賦形剤を組成物と混合することによって調製し得る。
【０７５３】
非限定的な例として、直腸及び／又は腟内投与用の製剤は、常温では固体でありながら直腸温度では液体の、従って直腸及び／又は腟で融解して薬物を放出することになる好適な非刺激性の賦形剤を薬物と混合することによって調製し得る。かかる材料としては、ココアバター及びポリエチレングリコール類が挙げられる。
【０７５４】
直腸投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。直腸投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、アルコール、アルコール（無水）、塩基性酢酸アルミニウム、無水クエン酸、アニス油、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ペルーバルサム、安息香酸、ベンジルアルコール、次没食子酸ビスマス、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチルパラベン、カラメル、カルボマー９３４、カルボマー９３４ｐ、カルボキシポリメチレン、セラシントｓｅ（ｃｅｒａｓｙｎｔ−ｓｅ）、セチルアルコール、ココアバター、ヤシ油（硬化）、ヤシ油／パーム核油グリセリド（硬化）、コラノキ種子抽出物、ｄ＆ｃ黄色１０号、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ジメチルジオクタデシルアンモニウムベントナイト、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸、エピラクトース、エチレンジアミン、脂肪（食用）、脂肪（硬質）、ｆｄ＆ｃ青色１号、ｆｄ＆ｃ緑色３号、ｆｄ＆ｃ黄色６号、フレーバｆｉｇ  ８２７１１８、フレーバラズベリーｐｆｃ−８４０７、フルクトース、ガラクトース、グリセリン、パルミチン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル／ステアリン酸ｐｅｇ、ステアリン酸グリセリル／ステアリン酸ｐｅｇ−４０、グリシン、炭化水素、塩酸、硬化パーム油、ヒプロメロース、ラクトース、ラノリン、レシチン、軽油、ケイ酸アルミウニムマグネシウム、ケイ酸アルミウニムマグネシウム水和物、メチルパラベン、窒素、パーム核油、パラフィン、ワセリン（白色）、ポリエチレングリコール１０００、ポリエチレングリコール１５４０、ポリエチレングリコール３３５０、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール８０００、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、酢酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、プロピレングリコール、プロピルパラベン、サッカリンナトリウム、サッカリンナトリウム（無水）、二酸化ケイ素（コロイド状）、シメチコン、安息香酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、ソルビトール、ソルビトール液、デンプン、ステアレス−１０、ステアレス−４０、スクロース、タガトース（ｄ−）、酒石酸（ｄｌ−）、トロラミン、トロメタミン、植物油グリセリド（硬化）、植物油（硬化）、ワックス（乳化）、白ろう、キサンタンガム及び酸化亜鉛が含まれる。
【０７５５】
腟内投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。腟内投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、アジピン酸、アルコール（変性）、アラントイン、無水ラクトース、杏仁油ｐｅｇ−６エステル類、硫酸バリウム、蜜ろう、ベントナイト、安息香酸、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、乳酸カルシウム、カルボマー９３４、カルボマー９３４ｐ、セルロース（微結晶性）、セテス−２０、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、セチルエステルワックス、パルミチン酸セチル、コレステロール、コレス、クエン酸、クエン酸一水和物、ヤシ油／パーム核油グリセリド（硬化）、クロスポビドン、エデト酸二ナトリウム、エチルセルロース、エチレン酢酸ビニルコポリマー（２８％酢酸ビニル）、エチレン酢酸ビニルコポリマー（９％酢酸ビニル）、脂肪アルコール類、ｆｄ＆ｃ黄色５号、ゼラチン、グルタミン酸（ｄｌ−）、グリセリン、イソステアリン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、ステア
リン酸グリセリル、グアーガム、高密度ポリエチレン、ヒドロゲルポリマー、硬化パーム油、ヒプロメロース２２０８（１５０００ｍｐａ．ｓ）、ヒプロメロース、ミリスチン酸イソプロピル、乳酸、乳酸（ｄｌ−）、ラクトース、ラクトース一水和物、ラクトース、水和、ラノリン、ラノリン（無水）、レシチン、レシチン（大豆）、軽油、ケイ酸アルミウニムマグネシウム、ケイ酸アルミウニムマグネシウム水和物、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸メチル、メチルパラベン、微結晶性ワックス、鉱物油、硝酸、オクチルドデカノール、ピーナッツ油、ステアリン酸ｐｅｇ６−３２／ステアリン酸グリコール、ステアリン酸ｐｅｇ−１００、ステアリン酸ｐｅｇ−１２０グリセリル、ステアリン酸ｐｅｇ−２、オレイン酸ｐｅｇ−５、ステアリン酸ペゴキソール７、ワセリン（白色）、酢酸フェニル水銀、ホスホリポン（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ）９０ｇ、リン酸、ピペラジン六水和物、ジメチルビニル又はジメチルヒドロキシ又はトリメチル末端ブロック型ポリ（ジメチルシロキサン／メチルビニルシロキサン／メチルハイドロジェンシロキサン）、ポリカルボフィル、ポリエステル、ポリエチレングリコール１０００、ポリエチレングリコール３３５０、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール８０００、オレイン酸ポリグリセリル−３、オレイン酸ポリグリセリル−４、パルミチン酸ポリオキシル、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポリウレタン、カリウムミョウバン、水酸化カリウム、ポビドンｋ２９／３２、ポビドン類、プロムルゲンｄ（ｐｒｏｍｕｌｇｅｎ  ｄ）、プロピレングリコール、モノパルミトステアリン酸プロピレングリコール、プロピルパラベン、クォータニウム−１５（シス型）、二酸化ケイ素、二酸化ケイ素（コロイド状）、シリコーン、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（第二、無水）、リン酸ナトリウム（第一、無水）、ソルビン酸、モノステアリン酸ソルビタン、ソルビトール、ソルビトール液、鯨ろう、２−エチルヘキサン酸第一スズ、デンプン、スターチ１５００（アルファ化）、デンプン（トウモロコシ）、ステアラミドエチルジエチルアミン、ステアリン酸、ステアリルアルコール、酒石酸（ｄｌ−）、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノン、オルトケイ酸テトラプロピル、トロラミン、尿素、植物油（硬化）、ウェコビーｆｓ（ｗｅｃｏｂｅｅ  ｆｓ）、白色セレシンワックス及び白ろうが含まれる。
【０７５６】
経口投与
経口投与用の液体投薬形態としては、限定はされないが、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及び／又はエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加え、液体投薬形態は、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤及び／又は賦形剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（詳細には、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール類及びソルビタン脂肪酸エステル類、及びこれらの混合物などを含み得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、矯味剤、及び／又は芳香剤を含むことができる。非経口投与に関する特定の実施形態では、組成物は、クレモフォール（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／又はそれらの組み合わせなどの可溶化剤と混合される。
【０７５７】
シロップ及びエリキシル剤は、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、グルコース又はスクロースと共に製剤化することができる。かかる製剤は、粘滑剤、保存剤並びに矯味剤及び着色剤もまた含有することができる。医薬組成物は無菌注射用水性又は油性懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、上記で言及している好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して公知の技術により製剤化することができる
。無菌注射用製剤はまた、非毒性の親的に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）許容可能な希釈剤又は溶媒中の、例えば１，３−ブタンジオール溶液としての無菌注射用溶液又は懸濁液であってもよい。利用し得る許容可能な媒体及び溶媒の中には、水、リンゲル溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌固定油が、従来、溶媒又は懸濁媒として利用されている。本目的上、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含め、任意の無刺激固定油を利用することができる。加えて、注射剤の調製には、オレイン酸などの脂肪酸の利用が見出される。
【０７５８】
経口投薬用の懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤との混合物中に活性物質を含有し得る。かかる賦形剤は懸濁剤であってもよく、非限定的な例として、懸濁剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム及びアカシアゴムであってもよく；分散剤又は湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物、例えばステアリン酸ポリオキシエチレン；又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコール類との縮合物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールなど、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合物、例えばモノオレイン酸ポリエチレンソルビタンであり得る。水性懸濁液はまた、１つ以上の保存剤、例えばエチル、又はｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル、１つ以上の着色剤、１つ以上の矯味剤、及び１つ以上の甘味剤、例えばスクロース又はサッカリンも含有し得る。
【０７５９】
経口投薬用の油性懸濁液は、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油又はヤシ油中、又は鉱物油、例えば流動パラフィン中に活性成分を懸濁することによって製剤化し得る。油性懸濁液は増粘剤、例えば蜜ろう、固形パラフィン又はセチルアルコールを含有することができる。甘味剤及び矯味剤を添加すると、美味な経口調製物を提供することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を添加することによって調製し得る。
【０７６０】
経口投薬はまた、水中油型エマルションの形態であってもよい。油性相は植物油又は鉱物油又はこれらの混合物であり得る。好適な乳化剤は、天然に存在するゴム、例えばアカシアゴム又はトラガカントゴム、天然に存在するホスファチド、例えば大豆、レシチン、並びに脂肪酸及びヘキシトール無水物から誘導されるエステル又は部分エステル、例えばモノオレイン酸ソルビタン、及び部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであり得る。エマルションはまた、甘味剤及び矯味剤も含有し得る。
【０７６１】
経口投与用の固形投薬形態としては、カプセル、錠剤、丸薬、散剤、及び顆粒が挙げられる。かかる固形投薬形態では、活性成分が、少なくとも１つの不活性の薬学的に許容可能な賦形剤、例えばクエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム及び／又は充填剤又は増量剤（例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸）、結合剤（例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアカシア）、保湿剤（例えばグリセロール）、崩壊剤（例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム）、溶解抑制剤（例えばパラフィン）、吸収促進剤（例えば第４級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えばセチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えばカオリン及びベントナイト粘土）、及び潤滑剤（例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール類、ラウリル硫酸ナトリウム）、並びにこれらの混合物と混合される。カプセル、錠
剤及び丸薬の場合、投薬形態は緩衝剤を含み得る。固形投薬形態はまた、限定はされないが、唾液（ｓａｌｖｉａ）及び胆汁などの液体と接触すると溶解してもよい。
【０７６２】
経口使用が意図される組成物は、医薬組成物製造の技術分野にとって公知の任意の方法により調製することができ、かかる組成物は、薬学的にエレガント且つ美味な調製物を提供するため、１つ以上のかかる甘味剤、矯味剤、着色剤又は保存剤を含有することができる。
【０７６３】
固形投薬形態はコーティングされていなくてもよく、又は公知の技法によってコーティングすることもできる。ある場合には、かかるコーティングは、胃腸管内での崩壊及び吸収を遅延させることにより長時間の持続作用をもたらすように公知の技法によって調製することができる。例えば、モノステアリン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｍｏｎｏｓｔｅｒａｔｅ）又はジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質が用いられ得る。
【０７６４】
経口使用向けの製剤はまた、硬ゼラチンカプセルとして調製することもでき、この場合活性成分は不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はカオリンと混合され、又は軟ゼラチンカプセルとして調製することもでき、この場合活性成分は水又は油媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィン若しくはオリーブ油と混合される。
【０７６５】
経口送達用の投薬形態はまた咀嚼剤であってもよく、又は舐剤（例えば、ロゼンジ形態）であってもよい。咀嚼剤投薬形態は、持続放出製剤、例えば、限定はされないが、国際公開第２０１３０８２４７０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１３０１４２８７６号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される持続放出組成物などであってもよい。咀嚼剤投薬形態は、両親媒性脂質、例えば、限定はされないが、国際公開第２０１３０８２４７０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１３０１４２８７６号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるものを含み得る。
【０７６６】
局所又は経皮投与
本明細書に記載されるとおり、本発明のキメラポリヌクレオチドを含有する組成物は、局所投与及び／又は経皮投与用に製剤化されてもよい。皮膚は容易に到達できるため、送達に理想的な標的部位であり得る。遺伝子発現が皮膚に制限されて非特異的毒性が潜在的に回避されるのみならず、皮膚内の特定の層及び細胞型にもまた制限され得る。
【０７６７】
送達された組成物の皮膚発現部位は核酸送達経路に依存することになる。キメラポリヌクレオチドを皮膚に送達するには、一般に３つの経路が考えられる：（ｉ）局所適用（例えば局所的／局部的治療用及び／又は美容適用向け）；（ｉｉ）皮内注射（例えば局所的／局部的治療用及び／又は美容適用向け）；及び（ｉｉｉ）全身送達（例えば皮膚及び皮膚外領域の両方に発症する皮膚疾患の治療用）。キメラポリヌクレオチドは、当該技術分野において公知のいくつかの異なる手法によって皮膚に送達することができる。多くの局所送達手法、限定はされないが、非カチオン性リポソーム−ＤＮＡ複合体、カチオン性リポソーム−ＤＮＡ複合体の局所適用、粒子媒介性（遺伝子銃）、穿孔媒介性遺伝子トランスフェクション、及びウイルスによる送達手法などが、ＤＮＡの送達に機能することが示されている。核酸の送達後、限定はされないが、基底ケラチノサイト、皮脂腺細胞、皮膚線維芽細胞及び真皮マクロファージを含めた多くの異なる皮膚細胞型で遺伝子産物が検出されている。
【０７６８】
局所投与用の軟膏、クリーム及びゲルは、例えば、好適な増粘剤及び／又はゲル化剤及び／又は溶媒の添加を伴い水性又は油性基剤と共に製剤化することができる。従って、かかる基剤の非限定的な例としては、例えば、水及び／又は油、例えば流動パラフィン又は
植物油、例えばラッカセイ油又はヒマシ油、又は溶媒、例えばポリエチレングリコールを挙げることができる。基剤の性質に応じて様々な増粘剤及びゲル化剤を使用することができる。かかる薬剤の非限定的な例としては、軟パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール類、羊毛脂、蜜ろう、カルボキシポリメチレン及びセルロース誘導体、及び／又はモノステアリン酸グリセリル及び／又は非イオン性乳化剤が挙げられる。
【０７６９】
局所投与用のローションは水性又は油性基剤と共に製剤化されてもよく、一般にはまた１つ以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁剤又は増粘剤も含有し得る。
一実施形態では、本発明は、本発明の方法を好都合に及び／又は有効に実施するための種々のドレッシング（例えば、創傷ドレッシング）又はバンデージ（例えば、絆創膏）を提供する。典型的にはドレッシング又はバンデージは、使用者が１例又は複数例の対象の治療を複数回行うのに十分な量の本明細書に記載される医薬組成物及び／又はキメラポリヌクレオチドを含み得る。
【０７７０】
一実施形態では、本発明は、２回以上の注射で送達されるキメラポリヌクレオチド組成物を提供する。
一実施形態では、局所投与及び／又は経皮投与前に組織、例えば皮膚の少なくとも１つの範囲が、透過性を高め得る装置及び／又は溶液に供され得る。一実施形態では、組織がアブレーション装置に供されることで皮膚の透過性が高められ得る（米国特許出願公開第２００８０２７５４６８号明細書を参照、本明細書において全体として参照により援用される）。別の実施形態では、組織は超音波式促進装置に供され得る。超音波式促進装置としては、限定はされないが、米国特許出願公開第２００４０２３６２６８号明細書並びに米国特許第６，４９１，６５７号明細書及び同第６，２３４，９９０号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される装置を挙げることができる。組織の透過性の促進方法は、米国特許出願公開第２００４０１７１９８０号明細書及び同第２００４０２３６２６８号明細書並びに米国特許第６，１９０，３１５号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される。
【０７７１】
一実施形態では、本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡの製剤を送達する前に、装置を使用して組織の透過性が高められ得る。皮膚の透過性は、当該技術分野において公知の方法及び／又は米国特許第６，１９０，３１５号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって計測され得る。非限定的な例として、修飾ｍＲＮＡ製剤は、米国特許第６，１９０，３１５号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される薬物送達方法によって送達されてもよい。
【０７７２】
別の非限定的な例では、透過性を高め得る装置に組織を供し得る前、その最中及び／又はその後に、組織が局所麻酔薬共融混合物（ｅｕｔｅｃｔｉｃ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｏｆ  ｌｏｃａｌ  ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃｓ：ＥＭＬＡ）クリームで処理されてもよい。カッツ（Ｋａｔｚ）ら（アネスシージア・アンド・アナルジージア（Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ）、２００４年、第９８巻、ｐ．３７１〜７６；本明細書において全体として参照により援用される）は、ＥＭＬＡクリームを低エネルギーと組み合わせて使用すると、低エネルギー超音波による前処置後５分という速さで浅層皮膚の無痛覚の発生が見られたことを示している。
【０７７３】
一実施形態では、透過性が高まるように組織が処置される前、その最中、及び／又はその後に、組織に促進手段が適用されてもよい。促進手段としては、限定はされないが、輸送促進手段、物理的促進手段、及びキャビテーション促進手段が挙げられる。促進手段の非限定的な例は、米国特許第６，１９０，３１５号明細書（本明細書において全体として
参照により援用される）に記載される。
【０７７４】
一実施形態では、組織の透過性を高めるため、本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡの製剤の送達前に装置が用いられてもよく、製剤は、免疫応答を引き起こす物質をさらに含有し得る。別の非限定的な例では、免疫応答を引き起こす物質を含有する製剤は、米国特許出願公開第２００４０１７１９８０号明細書及び同第２００４０２３６２６８号明細書（これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって送達されてもよい。
【０７７５】
組成物の局所投与及び／又は経皮投与用の投薬形態としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、散剤、溶液、スプレー、吸入薬及び／又はパッチを挙げることができる。概して、活性成分は、無菌条件下で薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は任意の必要とされる保存剤及び／又は緩衝液と適宜混合される。
【０７７６】
加えて、本発明は経皮パッチの使用を企図し、経皮パッチは多くの場合に、体に対する化合物の制御送達をもたらすという追加的な利点を有する。かかる投薬形態は、例えば、化合物を適切な媒体に溶解し及び／又は分散させることによって調製し得る。それに代えて又は加えて、律速膜を提供するか、及び／又は化合物をポリマーマトリックス及び／又はゲルに分散させるかのいずれかによって速度を制御し得る。
【０７７７】
局所投与に好適な製剤としては、限定はされないが、液体及び／又は半液体製剤、例えば、リニメント剤、ローション、水中油型及び／又は油中水型エマルション、例えばクリーム、軟膏及び／又はペースト、及び／又は溶液及び／又は懸濁液が挙げられる。
【０７７８】
局所投与可能製剤は、例えば約０．１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得るが、活性成分の濃度は、溶媒に対する活性成分の溶解限度に達する高さであってもよい。局所投与用の製剤は、本明細書に記載される追加的な成分の１つ以上をさらに含み得る。
【０７７９】
局所投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。局所投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、α−テルピネオール、α−トコフェロール、α−酢酸トコフェロール（ＤＬ−）、α−トコフェロール（ＤＬ−）、１，２，６−ヘキサントリオール、１−Ｏ−トリルビグアニド、２−エチル−１，６−ヘキサンジオール、酢酸、アセトン、アセチル化ラノリンアルコール、アクリレートコポリマー、粘着テープ、アルコール、アルコール（無水）、アルコール（変性）、アルコール（希釈）、アルキルアンモニウムスルホン酸ベタイン、アルキルアリールスルホン酸ナトリウム、アラントイン、扁桃油、酢酸アルミニウム、クロロヒドロキシアラントイン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｃｈｌｏｒｈｙｄｒｏｘｙ  ａｌｌａｎｔｏｉｎａｔｅ）、水酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム−スクロース（水和）、水酸化アルミニウムゲル、水酸化アルミニウムゲルＦ  ５００、水酸化アルミニウムゲルＦ  ５０００、モノステアリン酸アルミニウム、酸化アルミニウム、ケイ酸アルミニウム、デンプンオクテニルコハク酸アルミニウム、ステアリン酸アルミニウム、無水硫酸アルミニウム、アメルコールｃ（ａｍｅｒｃｈｏｌ−ｃ）、アメルコールｃａｂ（ａｍｅｒｃｈｏｌ−ｃａｂ）、アミノメチルプロパノール、アンモニア溶液、アンモニア溶液（濃）、水酸化アンモニウム、ラウリル硫酸アンモニウム、ノノキシノール−４硫酸アンモニウム、ｃ−１２〜ｃ−１５直鎖第一級アルコールエトキシレートのアンモニウム塩、アンモニクス（ａｍｍｏｎｙｘ）、アンホテリック−２、アンホテリック−９、無水クエン酸、無水クエン酸三ナトリウム、アノキシドｓｂｎ（ａｎｏｘｉｄ  ｓｂｎ）、消泡剤、杏仁油ｐｅｇ−６エステル類、アクアフォー（ａｑｕａｐｈｏｒ）、アルラセル（ａｒｌａｃｅｌ）、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、蜜ろ
う、蜜ろう（合成）、ベヘネス−１０、ベントナイト、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ベータデクス、ホウ酸、ブタン、ブチルアルコール、ビニルメチルエーテル／マレイン酸無水物コポリマーのブチルエステル（１２５０００ｍｗ）、ステアリン酸ブチル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチレングリコール、ブチルパラベン、ｃ２０−４０パレス−２４、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、カナダバルサム、トリカプリル酸／カプリン酸グリセリド、トリカプリル酸／カプリン酸／ステアリン酸グリセリド、カプタン、カラメル、カルボマー１３４２、カルボマー１３８２、カルボマー９３４、カルボマー９３４ｐ、カルボマー９４０、カルボマー９４１、カルボマー９８０、カルボマー９８１、カルボマーホモポリマーｂ型（アリルペンタエリスリトール架橋）、カルボマーホモポリマーｃ型（アリルペンタエリスリトール架橋）、カルボキシビニルコポリマー、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシポリメチレン、カラギーナン、カラギーナン塩、ヒマシ油、ニオイヒバ油、セルロース、セラシントｓｅ（ｃｅｒａｓｙｎｔ−ｓｅ）、セレシン、セテアレス−１２、セテアレス−１５、セテアレス−３０、セテアリルアルコール／セテアレス−２０、エチルヘキサン酸セテアリル、セテス−１０、セテス−２、セテス−２０、セテス−２３、セトステアリルアルコール、塩化セトリモニウム、セチルアルコール、セチルエステルワックス、パルミチン酸セチル、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、コレステロール、コレス−２４、クエン酸、クエン酸一水和物、コカミドエーテル硫酸塩、コカミン酸化物、ココベタイン、ココジエタノールアミド、ココモノエタノールアミド、ココアバター、ココグリセリド類、ヤシ油、ココイルカプリロカプレート、コラーゲン、着色懸濁液、クリーム基剤、クレアチニン、クロスポビドン、シクロメチコーン、シクロメチコーン／ジメチコーンコポリオール、ｄ＆ｃ赤色２８号、ｄ＆ｃ赤色３３号、ｄ＆ｃ赤色３６号、ｄ＆ｃ赤色３９号、ｄ＆ｃ黄色１０号、デシルメチルスルホキシド、デヒダグ（ｄｅｈｙｄａｇ）ワックスｓｘ、デヒドロ酢酸、デヒムルスｅ（ｄｅｈｙｍｕｌｓ  ｅ）、安息香酸デナトニウム、デキストリン、ジアゾリジニル尿素、ジクロロベンジルアルコール、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ジエタノールアミン、セバシン酸ジエチル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジヒドロキシアルミニウムアミノアセテート、ジイソプロパノールアミン、アジピン酸ジイソプロピル、ジリノール酸ジイソプロピル、ジメチコーン３５０、ジメチコーンコポリオール、ジメチコーンメディカルフルイド３６０、ジメチルイソソルビド、ジメチルスルホキシド、ジノセブアンモニウム塩、ココアンホジ酢酸二ナトリウム、ラウレススルホコハク酸二ナトリウム、ラウリルスルホコハク酸二ナトリウム、ｄｍｄｍヒダントイン、ドコサノール、ドキュセートナトリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸、エントスホン、エントスホンナトリウム、塩酸エピテトラサイクリン、エッ���ンスブーケ（ｅｓｓｅｎｃｅ  ｂｏｕｑｕｅｔ）９２００、酢酸エチル、エチルセルロース、エチレングリコール、エチレンジアミン、エチレンジアミン二塩酸塩、ヒドロキシステアリン酸エチルヘキシル、エチルパラベン、脂肪酸ペンタエリスリトール（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｏｌ）エステル、脂肪酸、脂肪アルコールクエン酸塩、ｆｄ＆ｃ青色１号、ｆｄ＆ｃ赤色４号、ｆｄ＆ｃ赤色４０号、ｆｄ＆ｃ黄色１０号（除外）、ｆｄ＆ｃ黄色５号、ｆｄ＆ｃ黄色６号、酸化第二鉄、フレーバロディア・ファーマシューティカル（Ｒｈｏｄｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）Ｒｆ４５１号、ホルムアルデヒド、ホルムアルデヒド溶液、分画ヤシ油、フレグランス３９４９−５、フレグランス５２０ａ、フレグランス６．００７、フレグランス９１−１２２、フレグランス９１２８−ｙ、フレグランス９３４９８ｇ、フレグランスバルサムパイン５１２４号、フレグランスブーケ（ｂｏｕｑｕｅｔ）１０３２８、フレグランスケモデルム（ｃｈｅｍｏｄｅｒｍ）６４０１−ｂ、フレグランスケモデルム（ｃｈｅｍｏｄｅｒｍ）６４１１、フレグランスクリーム（ｃｒｅａｍ）７３４５７号、フレグランスｃｓ−２８１９７、フレグランスフェルトン（ｆｅｌｔｏｎ）０６６ｍ、フレグランスフィルメニッヒ（ｆｉｒｍｅｎｉｃｈ）４７３７３、フレグランスジボダンｅｓｓ（ｇｉｖａｕｄａｎ  ｅｓｓ）９０９０／１ｃ、フレグランスｈ−６５４０、フレグランスハーバル１０３９６、フレグランスｎｊ−
１０８５、フレグランスｐ  ｏ  ｆｌ−１４７、フレグランスｐａ  ５２８０５、フレグランスペラ・デルム（ｐｅｒａ  ｄｅｒｍ）ｄ、フレグランスｒｂｄ−９８１９、フレグランスショー・マッジ（ｓｈａｗ  ｍｕｄｇｅ）ｕ−７７７６、フレグランスｔｆ  ０４４０７８、フレグランスアンゲラー（ｕｎｇｅｒｅｒ）ハニーサックルｋ  ２７７１、フレグランスアンゲラー（ｕｎｇｅｒｅｒ）ｎ５１９５、ゼラチン、グルコノラクトン、グリセリン、クエン酸グリセリル、イソステアリン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、オレイン酸グリセリル、オレイン酸グリセリル／プロピレングリコール、パルミチン酸グリセリル、リシノール酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル−ラウレス−２３、ステアリン酸グリセリル／ステアリン酸ｐｅｇ−１００、ステアリン酸グリセリル−ステアラミドエチルジエチルアミン、ジステアリン酸グリコール、ステアリン酸グリコール、グアーガム、ヘアコンディショナー（１８ｎ１９５−１ｍ）、ヘキシレングリコール、高密度ポリエチレン、ヒアルロン酸ナトリウム、炭化水素ゲル（可塑化）、塩酸、塩酸（希）、過酸化水素、硬化ヒマシ油、硬化パーム／パーム核油Ｐｅｇ−６エステル類、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシステアリン酸ヒドロキシオクタコサニル、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、イミドウレア、アイルランドコケ抽出物、イソブタン、イソセテス−２０、アクリル酸イソオクチル、イソプロピルアルコール、イソステアリン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル−ミリスチルアルコール、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸、イソステアリルアルコール、ジェレン（ｊｅｌｅｎｅ）、カオリン、カトン（ｋａｔｈｏｎ）ｃｇ、カトン（ｋａｔｈｏｎ）ｃｇ  ｉｉ、乳酸塩、乳酸、乳酸（ｄｌ−）、ラネス、ラノリン、ラノリンアルコール−鉱物油、ラノリンアルコール類、ラノリン（無水）、ラノリンコレステロール、ラノリン（エトキシ化）、ラノリン（水素添加）、酸化ラウラミン、ラウルジモニウム加水分解動物コラーゲン、ラウレス硫酸塩、ラウレス−２、ラウレス−２３、ラウレス−４、ラウリン酸ジエタノールアミド、ラウリン酸ミリスチン酸ジエタノールアミド、ラウリル硫酸塩、ラバンデュラ・アングスチフォリア（Ｌａｖａｎｄｕｌａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）花頂、レシチン、レシチン（無漂白）、レモン油、軽油、軽油（８５  ｓｓｕ）、リモネン（（±）−）、リポコール（ｌｉｐｏｃｏｌ）ｓｃ−１５、ケイ酸アルミウニムマグネシウム、ケイ酸アルミウニムマグネシウム水和物、硝酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、マプロフィックス（ｍａｐｒｏｆｉｘ）、医療用消泡剤（ａｎｔｉｆｏｒｍ）ａ−ｆエマルション、メントール、メチルグルセス−１０、メチルグルセス−２０、セスキステアリン酸メチルグルセス−２０、セスキステアリン酸メチルグルコース、サリチル酸メチル、ステアリン酸メチル、メチルセルロース、メチルクロロイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン、メチルパラベン、微結晶性ワックス、鉱物油、モノグ��セリド及びジグリセリド、クエン酸モノステアリル、マルチステロールエキス、ミリスチルアルコール、乳酸ミリスチル、ナイアシンアミド、硝酸、窒素、ノノキシノールヨード、ノノキシノール−１５、ノノキシノール−９、オートミール、オクタデセン−１／マレイン酸コポリマー、オクトキシノール−１、オクトキシノール−９、オクチルドデカノール、オレイン酸、オレス−１０／オレス−５、オレス−２、オレス−２０、オレイルアルコール、オレイン酸オレイル、オリーブ油、パルミトアミン酸化物、パラベン、パラフィン、パラフィン、白色軟質、パルファムクレーム４５／３、ピーナッツ油、ピーナッツ油（精製）、ペクチン、ステアリン酸ｐｅｇ６−３２／ステアリン酸グリコール、ステアリン酸ｐｅｇ−１００、ラウリン酸ｐｅｇ−１２グリセリル、ステアリン酸ｐｅｇ−１２０グリセリル、ジオレイン酸ｐｅｇ−１２０メチルグルコース、ｐｅｇ−１５コカミン、ジステアリン酸ｐｅｇ−１５０、ステアリン酸ｐｅｇ−２、ｐｅｇ−２２メチルエーテル／ドデシルグリコールコポリマー、ｐｅｇ−２５プロピレンステアリン酸グリコール、ジラウリン酸ｐｅｇ−４、ラウリン酸ｐｅｇ−４、ｐｅｇ−４５／ドデシルグリコールコポリマー、オレイン酸ｐｅｇ−５、ステアリン酸Ｐｅｇ−５０、ｐｅｇ−５４硬化ヒマシ油、イソステアリン酸ｐｅｇ−６、ｐｅｇ−６０硬化ヒマシ油、ｐｅｇ−７メチルエーテル、ｐｅｇ−７５ラノリン、ラウリン酸ｐｅｇ−８、ステアリン酸ｐｅｇ
−８、ステアリン酸ペゴキソール７、ヤシ脂肪酸ペンタエリスリトール、ハッカ油、パフューム２５６７７、パフューム（ブーケ（ｂｏｕｑｕｅｔ））、パフュームｅ−１９９１、パフュームｇｄ  ５６０４、パフュームタナ（ｔａｎａ）９０／４２  ｓｃｂａ、パフュームＷ−１９５２−１、ワセリン、ワセリン（白色）、石油蒸留物、フェノニップ（ｐｈｅｎｏｎｉｐ）、フェノキシエタノール、酢酸フェニル水銀、リン酸、松葉油（ヨーロッパアカマツ（Ｐｉｎｕｓ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ））、プラスチベース−５０ｗ、塩化ポ
リドロニウム、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２３７、ポロキサマー４０７、ポリカルボフィル、ポリエチレングリコール１０００、ポリエチレングリコール１４５０、ポリエチレングリコール１５００、ポリエチレングリコール１５４０、ポリエチレングリコール２００、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール３００−１６００、ポリエチレングリコール３３５０、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール５４０、ポリエチレングリコール６００、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール８０００、ポリエチレングリコール９００、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリイソブチレン、ポリイソブチレン（１１０００００ｍｗ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン１８００、ポリオキシエチレンアルコール類、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンプロピレン、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシル４０、ステアリン酸ポリオキシル４００、パルミトステアリン酸ポリオキシル６及びポリオキシル３２、ジステアリン酸ポリオキシル、ステアリン酸ポリオキシルグリセリル、ポリオキシルラノリン、ステアリン酸ポリオキシル、ポリプロピレン、ポリクオタニウム−１０、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリビニルアルコール、カリ、クエン酸カリウム、水酸化カリウム、カリウム石鹸、ソルビン酸カリウム、ポビドンアクリレートコポリマー、ポビドンヒドロゲル、ポビドンｋ９０、ポビドン／エイコセンコポリマー、ポビドン類、ｐｐｇ−１２／ｓｍｄｉコポリマー、ｐｐｇ−１５ステアリルエーテル、ジステアリン酸ｐｐｇ−２０メチルグルコースエーテル、オレイン酸ｐｐｇ−２６、プロダクト・ワット（ｐｒｏｄｕｃｔ  ｗａｔ）、プロムルゲンｄ（ｐｒｏｍｕｌｇｅｎ  ｄ）、プロムルゲンｇ（ｐｒｏｍｕｌｇｅｎ  ｇ）、プロパン、噴射剤ａ−４６、没食子酸プロピル、炭酸プロピレン、プロピレングリコール、二酢酸プロピレングリコール、ジカプリル酸プロピレングリコール、モノパルミトステアリン酸プロピレングリコール、パルミトステアリン酸プロピレングリコール、リシノール酸プロピレングリコール、プロピレングリコール／ジアゾリジニル尿素／メチルパラベン／プロピルパラベン（ｐｒｏｐｙｌｐａｒｂｅｎ）、プロピルパラベン、タンパク質加水分解物、クォータニウム−１５、クォータニウム−１５（シス型）、クォータニウム−５２、サッカリン、サッカリンナトリウム、ベニバナ油、ｓｄアルコール３ａ、ｓｄアルコール４０、ｓｄアルコール４０−２、ｓｄアルコール４０ｂ、セピネオ（ｓｅｐｉｎｅｏ）ｐ  ６００、シアバター、ケイ素、二酸化ケイ素、シリコーン、シリコーン接着剤ｂｉｏ−ｐｓａ  ｑ７−４２０１、シリコーン接着剤ｂｉｏ−ｐｓａ  ｑ７−４３０１、シリコーンエマルション、シメチコン、シメチコンエマルション、シポンｌｓ（ｓｉｐｏｎ  ｌｓ）２０ｎｐ、酢酸ナトリウム、酢酸ナトリウム（無水）、アルキ���硫酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、セトステアリル硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ココイルサルコシン酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、乳酸ナトリウム、ラウレス−２硫酸ナトリウム、ラウレス−３硫酸ナトリウム、ラウレス−５硫酸ナトリウム、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（第二）、リン酸ナトリウム（第二、無水）、リン酸ナトリウム（第二、二水和物）、リン酸ナトリウム（第二、七水和物）、リン酸ナトリウム（第一）、リン酸ナトリウム（第一、無水
）、リン酸ナトリウム（第一、二水和物）、リン酸ナトリウム（第一、一水和物）、ポリアクリル酸ナトリウム（２５０００００ｍｗ）、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ナトリウムスルホコハク酸化ウンデシレンモノアルキロールアミド（ｓｏｄｉｕｍ  ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎａｔｅｄ  ｕｎｄｅｃｙｃｌｅｎｉｃ  ｍｏｎｏａｌｋｙｌｏｌａｍｉｄｅ）、チオ硫酸ナトリウム、キシレンスルホン酸ナトリウム、ソメイ４４（ｓｏｍａｙ  ４４）、ソルビン酸、ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタン、ラウリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、ソルビトール、ソルビトール液、大豆粉、大豆油、スペアミント油、鯨ろう、スクアラン、デンプン、塩化ステアラルコニウム、ステアラミドエチルジエチルアミン、ステアレス−１０、ステアレス−１００、ステアレス−２、ステアレス−２０、ステアレス−２１、ステアレス−４０、ステアリン酸、ステアリン酸ジエタノールアミド、ステアロキシトリメチルシラン、ステアルトリモニウム加水分解動物コラーゲン、ステアリルアルコール、スチレン／イソプレン／スチレンブロックコポリマー、スクロース、ジステアリン酸スクロース、スクロースポリエステル類、スルファセタミドナトリウム、硫酸、サーファクトールｑｓ（ｓｕｒｆａｃｔｏｌ  ｑｓ）、タルク、トール油、獣脂グリセリド、酒石酸、テノックス（ｔｅｎｏｘ）、テノックス（ｔｅｎｏｘ）−２、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、チメロサール、二酸化チタン、トコフェロール、トコフェルソラン、トリクロロモノフルオロメタン、トリデセス−１０、ラウリル硫酸トリエタノールアミン、トリグリセリド、中鎖、トリヒドロキシステアリン、リン酸トリラネス−４、リン酸トリラウレス−４、クエン酸三ナトリウム二水和物、ｈｅｄｔａ三ナトリウム、トリトンｘ−２００、トロラミン、トロメタミン、チロキサポール、ウンデシレン酸、植物油、植物油（硬化）、ビスカリン（ｖｉｓｃａｒｉｎ）、ビタミンＥ、ワックス（乳化）、ウェコビーｆｓ（ｗｅｃｏｂｅｅ  ｆｓ）、白ろう、キサンタンガム及び酢酸亜鉛が含まれる。
【０７８０】
経皮投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。経皮投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、アクリレートコポリマー、アクリル酸−イソオクチルアクリレートコポリマー、アクリル接着剤７８８、アドコート（ａｄｃｏｔｅ）７２ａ１０３、エアロテックス（ａｅｒｏｔｅｘ）樹脂３７３０、アルコール、アルコール（無水）、アルミニウムポリエステル、ベントナイト、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチレングリコール、酪酸、トリカプリル酸／カプリン酸グリセリド、カルボマー１３４２、カルボマー９４０、カルボマー９８０、カラギーナン、塩化セチルピリジニウム、クエン酸、クロスポビドン、ドーベル１−５ペストル（マット）１６４ｚ（ｄａｕｂｅｒｔ  １−５  ｐｅｓｔｒ（ｍａｔｔｅ）１６４ｚ）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、フタル酸ジエチルヘキシル、ジメチコーンコポリオール、ジメチコーンｍｄｘ４−４２１０、ジメチコーンメディカルフルイド３６０、メタクリル酸ジメチルアミノエチル−メタクリル酸ブチル−メチルメタクリレートコポリマー、ジプロピレングリコール、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）２８０−２５１６、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）３８７−２５１６、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８０−１１９６、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８７−２０７０、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８７−２１９４、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８７−２２８７、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８７−２２９６、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８７−２８８８、デュロ−タック（ｄｕｒｏ−ｔａｋ）８７−２９７９、エデト酸二ナトリウム、酢酸エチル、オレイン酸エチル、エチルセルロース、エチレン酢酸ビニルコポリマー、エチレン−プロピレンコポリマー、脂肪酸エステル類、ゲルバ７３７（ｇｅｌｖａ  ７３７）、グリセリン、ラウリン酸グリセリル、オレイン酸グリセリル、ヘプタン、高密度ポリエチレン、塩酸、水素添加ポリブテン６３５−６９０、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ラクトース、ラノリン（無水）、ラウリル乳酸塩、レシチン、レブリン酸、軽油、医療用接着剤（修飾）ｓ−１５、メチルアルコール、ラウリン酸メチル、鉱物油、窒素、オクチサレート、オクチルドデカノール、オレイン酸、オレイルアルコール、オレイン酸オレイル、ペンタデカラクトン、ワセリン（白色）、ポラクリリン、ポリアクリル酸（２５００００ｍｗ）、ポリブテン（１４００ｍｗ）、ポリエステル、ポリエステルポリアミンコポリマー、ポリエステルレーヨン、ポリエチレンテレフタレート類、ポリイソブチレン、ポリイソブチレン（１１０００００ｍｗ）、ポリイソブチレン（３５０００ｍｗ）、ポリイソブチレン１７８−２３６、ポリイソブチレン２４１−２９４、ポリイソブチレン３５−３９、ポリイソブチレン（低分子量）、ポリイソブチレン（中間分子量）、ポリイソブチレン／ポリブテン接着剤、ポリプロピレン、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニル−ポリ酢酸ビニルコポリマー、ポリビニルピリジン、ポビドンｋ２９／３２、ポビドン類、プロピレングリコール、モノラウリン酸プロピレングリコール、ｒａ−２３９７、ｒａ−３０１１、ケイ素、二酸化ケイ素（コロイド状）、シリコーン、シリコーン接着剤４１０２、シリコーン接着剤４５０２、シリコーン接着剤ｂｉｏ−ｐｓａ  ｑ７−４２０１、シリコーン接着剤ｂｉｏ−ｐｓａ  ｑ７−４３０１、シリコーン／ポリエステルフィルムストリップ、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、モノオレイン酸ソルビタン、ステアラルコニウムヘクトライト／炭酸プロピレン、二酸化チタン、トリアセチン、トロラミン、トロメタミン、ユニオン７６（ｕｎｉｏｎ  ７６）アムスコ−レス（ａｍｓｃｏ−ｒｅｓ）６０３８及びビスコース／綿が含まれる。
【０７８１】
皮内投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。皮内投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クレアチニン、エデト酸二ナトリウム、グリセリン、塩酸、メタクレゾール、メチルパラベン、フェノール、ポリソルベート８０、硫酸プロタミン、酢酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（第二）、リン酸ナトリウム（第二、七水和物）、リン酸ナトリウム（第一、無水）及び塩化亜鉛が含まれる。
【０７８２】
デポー投与
本明細書に記載されるとおり、一部の実施形態では、組成物は、長時間放出用のデポーに製剤化される。概して、特定の臓器又は組織（「標的組織」）が投与の標的とされる。
【０７８３】
本発明の一部の態様において、キメラポリヌクレオチドは空間的に標的組織内又はその近位に保持される。組成物、詳細には組成物の１つ又は複数の核酸成分が実質的に標的組織に保持される、即ち組成物の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９％又は９９．９９％超が標的組織に保持されるような条件下で標的組織（これは１つ以上の標的細胞を含有する）を組成物と接触させることによって哺乳類対象の標的組織に組成物を提供する方法が提供される。有利には、保持率は、組成物中に存在する核酸のうち１つ以上の標的細胞に侵入する量を計測することにより決定される。例えば、投与から所定の時間後、対象に投与された核酸の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９％又は９９．９９％超が細胞内に存在する。例えば、リボ核酸及びトランスフェクション試薬を含有する組成物水溶液を使用して哺乳類対象への筋肉内注射が実施され、組成物の保持率が、筋細胞中に存在するリボ核酸の量を計測することにより決定される。
【０７８４】
本発明の態様は、組成物が実質的に標的組織に保持されるような条件下で標的組織（１
つ以上の標的細胞を含有する）を組成物と接触させることによって哺乳類対象の標的組織に組成物を提供する方法に関する。組成物は、少なくとも１つの標的細胞で目的ポリペプチドが産生されるように有効量のキメラポリヌクレオチドを含有する。組成物は概して、細胞透過剤と（しかしながら「ネイキッド」核酸（細胞透過剤又は他の薬剤のない核酸など）もまた企図される）、薬学的に許容可能な担体とを含有する。
【０７８５】
状況によっては、組織において細胞が産生するタンパク質の量は、望ましくは増加する。好ましくは、このタンパク質産生の増加は、空間的に標的組織内の細胞に限定されている。従って、哺乳類対象の組織における目的タンパク質の産生を増加させる方法が提供される。組成物が提供され、この組成物は、標的組織の所定容積内に含まれる実質的な割合の細胞で目的ポリペプチドを産生するように組成物の単位量が決定されていることを特徴とするキメラポリヌクレオチドを含有する。
【０７８６】
一部の実施形態では、組成物は複数の異なるキメラポリヌクレオチドを含み、これらのキメラポリヌクレオチドの１つ又は２つ以上が目的ポリペプチドをコードする。任意選択で、組成物はまた、組成物の細胞内送達を補助するため細胞透過剤も含有する。標的組織の所定容積内に含まれる実質的な割合の細胞において（概して、所定容積に隣接する臓器、又は標的組織の遠位にある組織における目的ポリペプチドの多量の産生を誘導することなしに）目的ポリペプチドを産生するのに必要な組成物の用量が決定される。この決定後、決定された用量が哺乳類対象の組織に直接導入される。
【０７８７】
一実施形態では、本発明は、キメラポリヌクレオチドが２回以上の注射で、又は分割用量注射によって送達されることを提供する。
一実施形態では、本発明は、小型使い捨て薬物リザーバ、パッチポンプ又は浸透圧ポンプを使用して標的組織近傍に保持されてもよい。パッチポンプの非限定的な例としては、ＢＤ（登録商標）（ニュージャージー州フランクリン・レークス（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ））、インシュレット・コーポレーション（Ｉｎｓｕｌｅｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（マサチューセッツ州ベッドフォード（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ））、ステディーメド・セラピューティクス（ＳｔｅａｄｙＭｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（カリフォルニア州サンフランシスコ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ））、メドトロニック（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ）（ミネソタ州ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））（例えば、ミニメド（ＭｉｎｉＭｅｄ））、ユニライフ（ＵｎｉＬｉｆｅ）（ペンシルベニア州ヨーク（Ｙｏｒｋ，ＰＡ））、ヴァレリタス（Ｖａｌｅｒｉｔａｓ）（ニュージャージー州ブリッジウォーター（Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ））、及びスプリングリーフ・セラピューティクス（ＳｐｒｉｎｇＬｅａｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（マサチューセッツ州ボストン（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ））によって製造及び／又は販売されるものが挙げられる。浸透圧ポンプの非限定的な例としては、デュレクト（ＤＵＲＥＣＴ）（登録商標）（カリフォルニア州クパチーノ（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ））（例えば、デュロス（ＤＵＲＯＳ）（登録商標）及びアルゼット（ＡＬＺＥＴ）（登録商標））によって製造されるものが挙げられる。
【０７８８】
肺内投与
医薬組成物は、頬側口腔を介した肺内投与に好適な製剤として調製、包装、及び／又は販売され得る。かかる製剤は、活性成分を含み、且つ約０．５ｎｍ〜約７ｎｍ又は約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲の直径を有する乾燥粒子を含み得る。かかる組成物は、好適には、粉末を分散させるように噴射剤の流れが向けられ得る乾燥粉末リザーバを含む装置を使用した投与及び／又は密閉容器内の低沸点噴射剤中に溶解及び／又は懸濁された活性成分を含む装置などの自己噴射溶媒／粉末分注容器を使用した投与向けの乾燥粉末の形態である。かかる粉末は粒子を含み、ここで重量基準で粒子の少なくとも９８％が０．５ｎｍより大きい直径を有し、数基準で粒子の少なくとも９５％が７ｎｍ未満の直径を有する。或いは
、重量基準で粒子の少なくとも９５％が１ｎｍより大きい直径を有し、数基準で粒子の少なくとも９０％が６ｎｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は糖などの固体微粉希釈剤を含んでもよく、好都合には単位用量形態で提供される。
【０７８９】
低沸点噴射剤は、概して、大気圧下で１８．３℃（６５°Ｆ）未満の沸点を有する液体噴射剤を含む。概して噴射剤は組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を占めることができ、活性成分は組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を占めることができる。噴射剤は、液体非イオン性及び／又は固体アニオン性界面活性剤及び／又は固体希釈剤（これは活性成分を含む粒子と同じオーダの粒径を有し得る）などの追加的な成分をさらに含み得る。
【０７９０】
非限定的な例として、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、米国特許第８，２５７，６８５号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法によって肺送達用に製剤化されてもよい。
【０７９１】
肺送達用に製剤化される医薬組成物は、溶液及び／又は懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供し得る。かかる製剤は、任意選択で無菌の、活性成分を含む水性及び／又は希釈アルコール溶液及び／又は懸濁液として調製され、包装され、及び／又は販売されてもよく、好都合には任意の噴霧化及び／又は微粒化装置を使用して投与され得る。かかる製剤は、限定はされないが、矯味剤、例えばサッカリンナトリウム、揮発性油、緩衝剤、表面活性剤、及び／又は保存剤、例えばヒドロキシ安息香酸メチルを含めた１つ以上の追加的な成分をさらに含み得る。この投与経路によって提供される液滴は、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均直径を有し得る。
【０７９２】
肺送達に使用し得る本明細書に提供される組成物及び製剤は、１つ以上の界面活性剤をさらに含み得る。本発明の組成物の取込みを増進させるのに好適な界面活性剤又は界面活性剤構成成分としては、とりわけ、合成及び天然の、並びに完全な及びトランケートされた形態のサーファクタントタンパク質Ａ、サーファクタントタンパク質Ｂ、サーファクタントタンパク質Ｃ、サーファクタントタンパク質Ｄ及びサーファクタントタンパク質Ｅ、ジ飽和ホスファチジルコリン（ジパルミトイル以外）、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン；ホスファチジン酸、ユビキノン類、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、パルミトイル−リゾホスファチジルコリン、デヒドロエピアンドロステロン、ドリコール類、スルファチジン酸（ｓｕｌｆａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ）、グリセロール−３−リン酸、ジヒドロキシアセトンリン酸、グリセロール、グリセロ−３−ホスホコリン、ジヒドロキシアセトン、パルミチン酸塩、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）ジアシルグリセロール、ＣＤＰコリン、コリン、コリンリン酸塩；並びに天然及び人工ラメラ体（これは界面活性剤の構成成分の天然担体媒体である）、ω−３脂肪酸、ポリエン酸（ｐｏｌｙｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリエン酸（ｐｏｌｙｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、レシチン、パルミチン酸、酸化エチレン又はプロピレンの非イオン性ブロックコポリマー、ポリオキシプロピレン（モノマー及びポリマー）、ポリオキシエチレン（モノマー及びポリマー）、デキストラン及び／又はアルカノイル側鎖を有するポリ（ビニルアミン）、Ｂｒｉｊ  ３５、トリトンＸ−１００（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）及び合成界面活性剤ＡＬＥＣ、エキソサーフ（Ｅｘｏｓｕｒｆ）、サーバン（Ｓｕｒｖａｎ）及びアトバコンが挙げられる。これらの界面活性剤は、製剤中の単一の構成成分又は複数の構成成分のうちの一部の界面活性剤として、或いは本明細書における医薬組成物の核酸成分の５’及び／又は３’末端に共有結合的に結合した付加物として使用することができる。
【０７９３】
鼻腔内、経鼻及び頬側投与
肺送達に有用であるとおりの本明細書に記載される製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達に
有用である。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み且つ約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒子を有する粗末である。かかる製剤は、嗅ぐようにして、即ち鼻の近くに保持した粉末容器から鼻道を介して急速吸入することによって投与される。
【０７９４】
経鼻投与に好適な製剤は、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）に過ぎない程度から１００％（ｗ／ｗ）に至るまでの活性成分を含むことができ、本明細書に記載される追加的な成分の１つ以上を含み得る。医薬組成物は、頬側投与に好適な製剤として調製され、包装され、及び／又は販売され得る。かかる製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤及び／又はロゼンジの形態であってもよく、例えば０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）が活性成分であって、残りが口腔内で溶解可能な及び／又は分解性の組成物、及び任意選択で、本明細書に記載される追加的な成分の１つ以上を含み得る。或いは、頬側投与に好適な製剤は、活性成分を含む粉末及び／又はエアロゾル化及び／又は微粒化された溶液及び／又は懸濁液を含み得る。かかる粉末化、エアロゾル化、及び／又はエアロゾル化された製剤は、分散時に、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均粒径及び／又は液滴径を有することができ、さらに、本明細書に記載される任意の追加的な成分の１つ以上を含み得る。
【０７９５】
吸入（呼吸器）投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。吸入（呼吸器）投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、アセトン亜硫酸水素ナトリウム、アセチルシステイン、アルコール、アルコール（無水）、アンモニア、アパフルラン、アスコルビン酸、塩化ベンザルコニウム、炭酸カルシウム、二酸化炭素、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、クエン酸、ｄ＆ｃ黄色１０号、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、エデト酸二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ｆｄ＆ｃ黄色６号、フルオロクロロ炭化水素、ゼラチン、グリセリン、グリシン、塩酸、塩酸（希）、ラクトース、ラクトース一水和物、レシチン、レシチン（水素添加大豆）、レシチン（大豆）、リジン一水和物、マンニトール、メントール、メチルパラベン、硝酸、窒素、ノルフルラン、オレイン酸、ポリエチレングリコール１０００、ポビドンｋ２５、プロピレングリコール、プロピルパラベン、サッカリン、サッカリンナトリウム、二酸化ケイ素（コロイド状）、重硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム（無水）、亜硫酸ナトリウム、ソルビタントリオレエート、硫酸、チモール、二酸化チタン、トリクロロモノフルオロメタン、トロメタミン及び酸化亜鉛が含まれる。
【０７９６】
経鼻投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。経鼻投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、酢酸、アルコール（無水）、アリルα−イオノン、無水デキストロース、無水クエン酸三ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、カフェイン、二酸化炭素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロース（微結晶性）、クロロブタノール、クエン酸、クエン酸一水和物、デキストロース、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、エデト酸二ナトリウム、グリセリン、水素添加ロジンのグリセロールエステル、塩酸、ヒプロメロース２９１０（１５０００ｍｐａ．ｓ）、メチルセルロース、メチルパラベン、窒素、ノルフルラン、オレイン酸、ワセリン（白色）、フェニルエチルアルコール、ポリエチレングリコール３３５０、ポリエチレングリコール４００、ステアリン酸ポリオキシル４００、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、リン酸カリウム（第一）、ソルビン酸カリウム、プロピレングリコール、プロピルパラベン、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（第二）、リン酸ナトリウム（第二、無水）、リン酸
ナトリウム（第二、二水和物）、リン酸ナトリウム（第二、十二水和物）、リン酸ナトリウム（第二、七水和物）、リン酸ナトリウム（第一、無水）、リン酸ナトリウム（第一、二水和物）、ソルビタントリオレエート、ソルビトール、ソルビトール液、スクラロース、硫酸、トリクロロモノフルオロメタン及びクエン酸三ナトリウム二水和物が含まれる。
【０７９７】
経眼投与及び耳介（経耳）投与
医薬組成物は、眼に対する及び／又はその周囲への送達及び／又は耳に対する送達（例えば、耳介（経耳）投与）に好適な製剤として調製され、包装され、及び／又は販売され得る。眼に対して及び／又はその周囲に送達するための投与経路の非限定的な例としては、球後、結膜（ｃｏｎｊｕｃｔｉｖａｌ）、角膜内、眼内、硝子体内、経眼（ｏｐｈｔｈｌａｍｉｃ）及び結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｕｃｔｉｖａ）が挙げられる。かかる製剤は、例えば、水性又は油性液体賦形剤中０．１／１．０％（ｗ／ｗ）の活性成分の溶液及び／又は懸濁液を例えば含む点眼薬又は点耳薬の形態であってもよい。かかる点薬は、緩衝剤、塩、及び／又は本明細書に記載される任意の追加的な成分のうちの１つ以上の他のものをさらに含み得る。他の有用な経眼投与可能製剤としては、微結晶形態及び／又はリポソーム調製物で活性成分を含むものが挙げられる。点耳薬及び／又は点眼薬は本発明の範囲内にあるものと考えられる。眼及び／又は周囲組織に送達するため、医薬組成物を含有するように多層薄膜装置が調製されてもよい。
【０７９８】
経眼投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。経眼投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、酢酸、アルコール、アルコール（無水）、アルギン酸、アメルコールｃａｂ（ａｍｅｒｃｈｏｌ−ｃａｂ）、水酸化アンモニウム、無水クエン酸三ナトリウム、アンチピリン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化ベンゾドデシニウム、ホウ酸、カフェイン、塩化カルシウム、カルボマー１３４２、カルボマー９３４ｐ、カルボマー９４０、カルボマーホモポリマーｂ型（アリルペンタエリスリトール架橋）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒマシ油、セチルアルコール、クロロブタノール、クロロブタノール（無水）、コレステロール、クエン酸、クエン酸一水和物、クレアチニン、ジエタノールアミン、フタル酸ジエチルヘキシル、ジビニルベンゼンスチレンコポリマー、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二ナトリウム（無水）、エデト酸ナトリウム、エチレン酢酸ビニルコポリマー、ジェランガム（低アシル）、グリセリン、ステアリン酸グリセリル、高密度ポリエチレン、炭化水素ゲル（可塑化）、塩酸、塩酸（希）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース２９０６、ヒプロメロース２９１０（１５０００ｍｐａ．ｓ）、ヒプロメロース、ジェレン（ｊｅｌｅｎｅ）、ラノリン、ラノリンアルコール類、ラノリン（無水）、ラノリン非イオン性誘導体、塩化ラウラルコニウム、ラウロイルサルコシン、軽油、塩化マグネシウム、マンニトール、メチルセルロース（４０００ｍｐａ．ｓ）、メチルセルロース、メチルパラベン、鉱物油、硝酸、窒素、ノノキシノール−９、オクトキシノール−４０、オクチルフェノールポリメチレン、ワセリン、ワセリン（白色）、フェニルエチルアルコール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、リン酸、塩化ポリドロニウム、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリカルボフィル、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール８０００、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン１８００、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリプロピレングリコール、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポリビニルアルコール、酢酸カリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム（第一）、ソルビン酸カリウム、ポビドンｋ２９／３２、ポビドンｋ３０、ポビドンｋ９０、ポビドン類、プロピレングリコール、プロピルパラベン、ソーダ灰、酢酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム十水和物、炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム一水和物、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、
水酸化ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム二水和物、リン酸ナトリウム（第二）、リン酸ナトリウム（第二、無水）、リン酸ナトリウム（第二、二水和物）、リン酸ナトリウム（第二、七水和物）、リン酸ナトリウム（第一）、リン酸ナトリウム（第一、無水）、リン酸ナトリウム（第一、二水和物）、リン酸ナトリウム（第一、一水和物）、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム（無水）、硫酸ナトリウム十水和物、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ソルビン酸、ラウリン酸ソルビタン、ソルビトール、ソルビトール液、安定化オキシクロロ複合体、硫酸、チメロサール、二酸化チタン、トコフェルソラン、クエン酸三ナトリウム二水和物、トリトン７２０、トロメタミン、チロキサポール及び塩化亜鉛が含まれる。
【０７９９】
球後投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。球後投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、塩酸及び水酸化ナトリウムが含まれる。
【０８００】
眼内投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。眼内投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、塩化ベンザルコニウム、塩化カルシウム、クエン酸一水和物、塩酸、塩化マグネシウム、ポリビニルアルコール、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム及び水酸化ナトリウムが含まれる。
【０８０１】
硝子体内投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。硝子体内投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、塩化カルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロース（微結晶性）、ヒアルロン酸ナトリウム、塩酸、塩化マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ポリソルベート８０、ポリビニルアルコール、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、水酸化ナトリウム、第二リン酸ナトリウム七水和物、第一リン酸ナトリウム一水和物及びクエン酸三ナトリウム（無水）が含まれる。
【０８０２】
結膜下投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。結膜下投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、ベンジルアルコール、塩酸及び水酸化ナトリウムが含まれる。
【０８０３】
耳介投与用の医薬組成物は、少なくとも１つの非活性成分を含み得る。使用される非活性成分は、全てがアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認済みであってもよく、又はいずれも未承認であってもよい。耳介投与用の医薬組成物に使用される非活性成分の非包括的リストには、酢酸、酢酸アルミニウム、無水硫酸アルミニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ホウ酸、炭酸カルシウム、セチルアルコール、クロロブタノール、クロロキシレノール、クエン酸、クレアチニン、硫酸第二銅、硫酸第二銅（無水）、エデト酸二ナトリウム、エデト酸、グリセリン、ステアリン酸グリセリル、塩酸、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシエチルセルロース、ミリスチン酸イソプロピル、乳酸、レシチン（水素添加）、メチルパラベン、鉱物油、ワセリン、ワセリン（白色）、フェニルエチルアルコール、ステアリン酸ポリオキシル４０、ステアリン酸ポリオキシル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリビニルアルコール、メタ重亜硫酸カリウム、リン酸カリウム（第一）、ポビドンｋ９０ｆ、ポビドン類、プロピレングリコール、二酢酸プロピレングリコール、プロピルパラベン、酢酸ナトリウム、亜硫酸水
素ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム（第二、無水）、リン酸ナトリウム（第二、七水和物）、リン酸ナトリウム（第一、無水）、亜硫酸ナトリウム、硫酸及びチメロサールが含まれる。
【０８０４】
ペイロード投与：検出可能薬剤及び治療剤
本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、生物学的標的への物質（「ペイロード」）の送達、例えば標的を検出するための検出可能物質の送達、又は治療剤の送達が所望される幾つもの異なるシナリオで使用することができる。検出方法としては、限定はされないが、インビトロイメージング方法及びインビボイメージング方法の両方、例えば、免疫組織化学、生物発光画像法（ＢＬＩ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、電子顕微鏡法、Ｘ線コンピュータ断層撮影法、ラマン画像法、光干渉断層撮影法、吸収画像法、熱画像法、蛍光反射率画像法、蛍光顕微鏡法、蛍光分子断層画像法、核磁気共鳴画像法、Ｘ線画像法、超音波画像法、光音響画像法、実験アッセイ、又はタグ標識／染色／イメージングが要求される任意の状況下を挙げることができる。
【０８０５】
キメラポリヌクレオチドは、リンカー及びペイロードの両方を任意の有用な配向で含むように設計することができる。例えば、両端を有するリンカーを使用して一端がペイロードに、及び他端が核酸塩基に、例えばデアザ−アデノシン又はデアザ−グアノシンのＣ−７又はＣ−８位で、或いはシトシン又はウラシルのＮ−３又はＣ−５位などに取り付けられる。本発明のポリヌクレオチドは、２つ以上のペイロード（例えば、標識及び転写阻害薬）、並びに開裂可能なリンカーを含むことができる。一実施形態では、修飾ヌクレオチドは修飾７−デアザ−アデノシン三リン酸であり、ここでは開裂可能なリンカーの一端が７−デアザ−アデニンのＣ７位に取り付けられ、リンカーの他端が阻害薬に（例えば、シチジンにおける核酸塩基のＣ５位に）取り付けられ、及び標識（例えば、Ｃｙ５）がリンカーの中心に取り付けられる（例えば、米国特許第７，９９４，３０４号明細書（参照により本明細書に援用される）の図５並びに第９欄及び第１０欄のＡ＊ｐＣｐ  Ｃ５  Ｐａｒｇキャップレスの化合物１を参照のこと）。修飾７−デアザ−アデノシン三リン酸がコード領域に組み込まれると、得られるポリヌクレオチドは、標識及び阻害薬（例えば、ポリメラーゼ阻害薬）に取り付けられた開裂可能なリンカーを有する。リンカーが（例えば、開裂可能なジスルフィド部分を有するリンカーを還元する還元条件で）開裂すると、標識及び阻害薬が遊離する。さらなるリンカー及びペイロード（例えば、治療剤、検出可能標識、及び細胞透過性ペイロード）が本明細書及び２０１３年３月９日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２号明細書（代理人整理番号Ｍ３００）（これらの内容は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載される。
【０８０６】
例えば、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、再プログラム化された人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）で使用することができ、これはクラスター状の全細胞と比較してトランスフェクトされた細胞を直接トラッキングし得る。別の例において、キメラポリヌクレオチドにリンカーを介して取り付けられ得るとともに蛍光標識され得る薬物を使用して、インビボで、例えば細胞内で薬物をトラッキングすることができる。他の例としては、限定はされないが、細胞への可逆的な薬物送達におけるキメラポリヌクレオチドの使用が挙げられる。
【０８０７】
本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、特定の細胞小器官に対するペイロード、例えば検出可能薬剤又は治療剤の細胞内ターゲティングにおいて使用することができる。例示的細胞内標的としては、限定はされないが、高度ｍＲＮＡプロセシングのための核局在化、又は阻害薬を含有するｍＲＮＡに連結した核局在化配列（ＮＬＳ）を挙げることができる。
【０８０８】
加えて、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、例えば、生きている動物の
細胞又は組織に対する治療剤の送達に使用することができる。例えば、本明細書に記載されるキメラポリヌクレオチドは、癌細胞を死滅させるため極めて極性の高い化学療法剤の送達に使用することができる。リンカーを介して治療剤に取り付けられたキメラポリヌクレオチドはメンバーの透過（ｍｅｍｂｅｒ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ）を促進することができ、治療剤が細胞中を移動して細胞内標的に到達することを可能にし得る。
【０８０９】
一例において、リンカーはリボース環の２’位及び／又はキメラポリヌクレオチドの３’位及び／又は５’位に取り付けられる（例えば、国際公開第２０１２０３０６８３号パンフレットを参照、本明細書において全体として参照により援用される）。リンカーは、本明細書に開示される、当該技術分野において公知の及び／又は国際公開第２０１２０３０６８３号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に開示される任意のリンカーであってもよい。
【０８１０】
別の例において、キメラポリヌクレオチドは、開裂可能なリンカーを介してキメラポリヌクレオチドウイルス性阻害ペプチド（ＶＩＰ）に取り付けることができる。開裂可能なリンカーはＶＩＰを遊離させて細胞内を染色することができる。別の例において、キメラポリヌクレオチドは、一部の細菌毒素、例えば、コレラ毒素、ジフテリア毒素、及び百日咳毒素の作用に関与するＡＤＰリボシル化物にリンカーを介して取り付けることができる。これらの毒素タンパク質は、ヒト細胞中の標的タンパク質を修飾するＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼである。例えば、コレラ毒素ＡＤＰ−リボシル化物Ｇタンパク質は、生命を脅かす下痢を引き起こす小腸の内膜からの多量の体液分泌を生じさせることによってヒト細胞を修飾する。
【０８１１】
一部の実施形態では、ペイロードは、治療剤、例えば、細胞毒、放射性イオン、化学療法薬、又は他の治療剤であってもよい。細胞毒又は細胞傷害剤には、細胞にとって有害であり得る任意の薬剤が含まれる。例としては、限定はされないが、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｎｔｈｒａｃｉｎｅｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、メイタンシノイド類、例えば、メイタンシノール（米国特許第５，２０８，０２０号明細書を参照、全体として本明細書に援用される）、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５、米国特許第５，４７５，０９２号明細書、同第５，５８５，４９９号明細書、及び同第５，８４６，５４５号明細書を参照、これらは全て、参照により本明細書に援用される）、及びそれらの類似体又はホモログが挙げられる。放射性イオンとしては、限定はされないが、ヨウ素（例えば、ヨウ素１２５又はヨウ素１３１）、ストロンチウム８９、亜リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ）、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３、及びプラセオジムが挙げられる。他の治療剤としては、限定はされないが、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン類（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、及び抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール及びメイタンシノイド類）が挙げられる。
【０８１２】
一部の実施形態では、ペイロードは、検出可能薬剤、例えば様々な有機小分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素又は酵素基質、蛍光物質、発光物質（例えば、ルミノール）、生物発光物質（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリン）、化学発光物質、放射性物質（例えば、１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、又は９９ｍＴｃ（例えば、過テクネチウム酸塩（テクネチウム酸塩（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４−）として）、及び造影剤（例えば、金（例えば、金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えば、キレートＧｄ）、酸化鉄（例えば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）、及び超小型超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ））、マンガンキレート（例えば、Ｍｎ−ＤＰＤＰ）、硫酸バリウム、ヨウ化造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブル、又はペルフルオロカーボン）などであってもよい。かかる光学的に検出可能な標識としては、例えば、限定なしに、４−アセトアミド−４’−イソチオシアナトスチルベン−２，２’ジスルホン酸；アクリジン及び誘導体（例えば、アクリジン及びアクリジンイソチオシアネート）；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５ジスルホネート；Ｎ−（４−アニリノ−ｌ−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ＢＯＤＩＰＹ；ブリリアントイエロー；クマリン及び誘導体（例えば、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、及び７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１））；シアニン色素；シアノシン；４’，６−ジアミニジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５”−ジブロモピロガロール−スルホンフタレイン（ｓｕｌｆｏｎａｐｈｔｈａｌｅｉｎ）（ブロモピロガロールレッド）；７−ジエチルアミノ−３−（４’−イソチオシアナトフェニル）−４−メチルクマリン；ジエチレントリアミンペンタアセテート；４，４’−ジイソチオシアナトジヒドロ−スチルベン−２，２’−ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；５−［ジメチルアミノ］−ナフタレン−１−スルホニルクロリド（ＤＮＳ、ダンシルクロリド）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシン及び誘導体（例えば、エオシン及びエオシンイソチオシアネート）；エリスロシン及び誘導体（例えば、エリスロシンＢ及びエリスロシンイソチオシアネート）；エチジウム；フルオレセイン及び誘導体（例えば、５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４’５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、Ｘ−ローダミン−５−（及び−６）−イソチオシアネート（ＱＦＩＴＣ又はＸＲＩＴＣ）、及びフルオレサミン）；２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−２Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール−２−イリデン］エチリデン］−２−［４−（エトキシカルボニル）−１−ピペラジニル］−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル（ｓｕｌｆｏｒｐｒｏｐｙｌ））−１Ｈ−ベンズ［ｅ］インドリウム水酸化物、分子内塩、ｎ，ｎ−ジエチルエタンアミン（１：１）（ＩＲ１４４）を含む化合物；５−クロロ−２−［２−［３−［（５−クロロ−３−エチル−２（３Ｈ）−ベンゾチアゾール−イリデン）エチリデン］−２−（ジフェニルアミノ）−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−３−エチルベンゾチアゾリウムペルクロレート（ＩＲ１４０）；マラカイトグリーンイソチオシアネート；４−メチルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラロザニリン；フェノールレッド；Ｂ−フィコエリトリン；ｏ−フタルジアルデヒド；ピレン及び誘導体（例えば、ピレン、酪酸ピレン、及びスクシンイミジル１−ピレン）；酪酸量子ドット；リアクティブレッド４（チバクロン（ＣＩＢＡＣＲＯＮ）（商標）ブリリアントレッド３Ｂ−Ａ）；ローダミン及び誘導体（例えば、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢスルホニルクロリドローダルニン（ｒｈｏｄａｒｎｉｎｅ）（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソ
チオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１のスルホニルクロリド誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）テトラメチルローダミン、及びテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ））；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）；ＩＲＤ  ７００；ＩＲＤ  ８００；アレクサ（Ａｌｅｘａ）６４７；ラ・ホルタ（Ｌａ  Ｊｏｌｔａ）ブルー；フタロシアニン；及びナフタロシアニンが挙げられる。
【０８１３】
一部の実施形態では、検出可能薬剤は、活性化すると検出可能になる検出不能の前駆物質であってもよい（例えば、蛍光発生テトラジン−フルオロフォア構築物（例えば、テトラジン−ボディピーＦＬ（ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ）、テトラジン−オレゴングリーン４８８、又はテトラジン−ボディピーＴＭＲ−Ｘ（ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ−Ｘ））又は酵素活性化可能な蛍光発生薬剤（例えば、プロセンス（ＰＲＯＳＥＮＳＥ）（登録商標）（ビゼン・メディカル（ＶｉｓＥｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ））））。酵素標識組成物を使用し得るインビトロアッセイとしては、限定はされないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光法、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及びウエスタンブロット分析が挙げられる。
【０８１４】
組み合わせ
キメラポリヌクレオチドは１つ以上の他の治療剤、予防剤、診断剤、又は造影剤と組み合わせて用いられ得る。「〜と組み合わせて」とは、薬剤が同時に投与されなければならない及び／又は一緒の送達となるよう製剤化されなければならないことを含意する意図はないが、しかしながらこれらの送達方法は本開示の範囲内にある。組成物は１つ以上の他の所望の治療薬又は医療手技と同時に、その前に、又はその後に投与することができる。一般に、各薬剤は、当該の薬剤について決定される用量及び／又はタイムスケジュールで投与されることになる。一部の実施形態では、本開示は、医薬、予防、診断、又はイメージング組成物の、それらのバイオアベイラビリティを改善し、それらの代謝を低減及び／又は修飾し、それらの排泄を阻害し、及び／又はそれらの体内分布を修飾し得る薬剤と組み合わせた送達を包含する。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、癌の治療用の又は過剰増殖細胞を制御する医薬品と組み合わせて使用され得る。本明細書において全体として参照により援用される米国特許第７，９６４，５７１号明細書には、インターロイキン−１２をコードするＤＮＡプラスミドを含む医薬組成物をリポポリマーと共に使用し、また少なくとも１つの抗癌剤又は化学療法薬を投与して固形原発性又は転移性腫瘍を治療するための併用療法が記載されている。さらに、抗増殖性分子をコードする本発明のキメラポリヌクレオチドが、少なくとも１つの化学療法薬又は抗癌剤と共に投与され得るリポポリマーを含む医薬組成物中にあってもよい（例えば、米国特許出願公開第２０１１０２１８２３１号明細書（本明細書において全体として参照により援用される）を参照、抗増殖性分子をコードするＤＮＡプラスミドとリポポリマーとを含む医薬組成物を特許請求している）（例えば、米国特許第８，５１８，９０７号明細書及び国際公開第２０１２１８７５４号パンフレットの「組み合わせ（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」の節を参照；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０８１５】
キメラポリヌクレオチド及びその医薬製剤は、単独で対象に投与されてもよく、又は１つ以上の他の治療剤、例えば抗癌剤と組み合わせて使用されても、又はそれを含んでもよい。従って、キメラポリヌクレオチドと他の抗癌剤又は化学療法剤の組み合わせは本発明の範囲内である。かかる薬剤の例については、Ｖ．Ｔ．デビタ（Ｖ．Ｔ．Ｄｅｖｉｔａ）及びＳ．ヘルマン（Ｓ．Ｈｅｌｌｍａｎ）（編者）、第６版（２００１年２月１５日）、リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス出版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）による「癌の原理と腫瘍
学実践（Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）」を参照することができる。当業者は、関与する薬物及び癌の詳細な特徴に基づきどの薬剤の組み合わせが有用となり得るかを理解することができるであろう。かかる抗癌剤としては、限定はされないが、以下が挙げられる：エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容体モジュレータ、細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬及び他の血管新生阻害薬、細胞増殖及び生存シグナル伝達阻害薬、アポトーシス誘導剤及び細胞周期チェックポイントを妨げる薬剤。キメラポリヌクレオチドはまた、ＨＣＣの治療で使用される任意の治療剤、例えば限定なしにソラフェニブと組み合わせても有用であり得る。キメラポリヌクレオチドは放射線療法と共投与されるとき、特に有用であり得る。
【０８１６】
特定の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、以下を含む公知の抗癌剤との組み合わせで有用であり得る：エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容体モジュレータ、細胞傷害剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬、ＨＩＶプロテアーゼ阻害薬、逆転写酵素阻害薬、及び他の血管新生阻害薬。
【０８１７】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るエストロゲン受容体モジュレータの例としては、限定はされないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾン、及びＳＨ６４６が挙げられる。
【０８１８】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るアンドロゲン受容体モジュレータの例としては、限定はされないが、フィナステリド及び他の５α−レダクターゼ阻害薬、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、及び酢酸アビラテロンが挙げられる。
【０８１９】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るかかるレチノイド受容体モジュレータの例としては、限定はされないが、ベキサロテン、トレチノイン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、９−ｃｉｓ−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、ｔｒａｎｓ−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、及びＮ−４−カルボキシフェニルレチンアミドが挙げられる。
【０８２０】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る細胞傷害剤の例としては、限定はされないが、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモズルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ｃｉｓ−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド、ＧＰＸ１００、（ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ）−ビス−μ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−μ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサン
トレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカミノマイシン（ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、及び４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（国際公開第００／５００３２号パンフレットを参照）が挙げられる。
【０８２１】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る低酸素で活性化可能な化合物の例は、チラパザミンである。
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るプロテアソーム阻害薬の例としては、限定はされないが、ラクタシスチン及びボルテゾミブが挙げられる。
【０８２２】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る微小管阻害薬／微小管安定化剤の例としては、限定はされないが、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド（配列番号９）、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号明細書及び同第６，２８８，２３７号明細書を参照）及びＢＭＳ１８８７９７が挙げられる。
【０８２３】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るトポイソメラーゼ阻害薬の一部の例としては、限定はされないが、トポテカン、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−シャールトルーシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ラルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ、５  ａＢ、８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ（ｈｙｄｒｏ０ｘｙ）−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソギノリン（ｉｓｏｇｕｉｎｏｌｉｎｅ）−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、及びジメスナが挙げられる。
【０８２４】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る有糸分裂キネシン、詳細にはヒト有糸分裂キネシンＫＳＰの阻害薬の例としては、限定はされないが、ＰＣＴ公開国際公開第０１／３０７６８号パンフレット、国際公開第０１／９８２７８号パンフレット、国際公開第０３／０５０，０６４号パンフレット、国際公開第０３／０５０，１２２号パンフレット、国際公開第０３／０４９，５２７号パンフレット、国際公開第０３／０４９，６７９号パンフレット、国際公開第０３／０４９，６７８号パンフレット、国際公開第０４／０３９７７４号パンフレット、国際公開第０３／０７９９７３号パンフレット、国際公開第０３／０９９２１１号パンフレット、国際公開第０３／１０５８５５号パンフレット、国際公開第０３／１０６４１７号パンフレット、国際公開第０４／０３７１７１号パンフレット、国際公開第０４／０５８１４８号パンフレット、国際公開第０４／０５８７００号パンフレット、国際公開第０４／１２６６９９号パンフレット、国際公開第０５／０１８６３８号パンフレット、国際公開第０５／０１９２０６号パンフレット、国際公開第０５／０１９２０５号パンフレット、国際公開第０５／０１８５４７号パンフレット、国際公開第０５／０１７１９０号パンフレット、米国特許出願公開第２００５／０１７６７７６号明細書に記載される阻害薬が挙げられる。ある実施形態において、有糸分裂キネシンの阻害薬としては、限定はされないが、ＫＳＰの阻害薬、ＭＫＬＰ１の阻害薬、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害薬、ＭＣＡＫの阻害薬、Ｋｉｆ１４の阻害薬、Ｍｐｈｏｓｐｈｌの阻害薬及びＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害薬が挙げられる。
【０８２５】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る「ヒストン脱アセチル化酵素阻害薬」の例としては、限定はされないが、ＴＳＡ、オキサムフラチン、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８、バルプロ酸及びスクリプタイドが挙げられる。他のヒストン脱アセチル化酵素阻害薬に関するさらなる参照が、以下の論稿に見出され得る；ミラー，Ｔ．Ａ．（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．）ら著、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、第４６巻、第２４号、ｐ．５０９７〜５１１６、２００３年。
【０８２６】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る有糸分裂進行に関与するキナーゼの阻害薬としては、限定はされないが、オーロラキナーゼの阻害薬、ポロ様キナーゼ（ＰＬＫ）の阻害薬（詳細にはＰＬＫ−１の阻害薬）、ｂｕｂ−１の阻害薬及びｂｕｂ−Ｒ１の阻害薬が挙げられる。
【０８２７】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る抗増殖剤としては、限定はされないが、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えば、Ｇ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、及びＩＮＸ３００１、及び代謝拮抗薬、例えば、エノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスファート、フォステアビンナトリウム（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ  ｓｏｄｉｕｍ）水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクチナサイジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スウェインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シア
ノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン及び３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒドチオセミカルバゾンが挙げられる。
【０８２８】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るモノクローナル抗体標的化治療剤の例としては、癌細胞特異的又は標的細胞特異的モノクローナル抗体に取り付けられた細胞傷害剤又は放射性同位元素を有する治療剤、例えばベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）などが挙げられる。
【０８２９】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用してもよく、使用し得るＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬の例としては、限定はされないが、ロバスタチン（メバコール（ＭＥＶＡＣＯＲ）（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８号明細書、同第４，２９４，９２６号明細書及び同第４，３１９，０３９号明細書を参照）、シンバスタチン（ゾコール（ＺＯＣＯＲ）（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４号明細書、同第４，８２０，８５０号明細書及び同第４，９１６，２３９号明細書を参照）、プラバスタチン（プラバコール（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ）（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７号明細書、同第４，５３７，８５９号明細書、同第４，４１０，６２９号明細書、同第５，０３０，４４７号明細書及び同第５，１８０，５８９号明細書を参照）、フルバスタチン（レスコール（ＬＥＳＣＯＬ）（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２号明細書、同第４，９１１，１６５号明細書、同第４，９２９，４３７号明細書、同第５，１８９，１６４号明細書、同第５，１１８，８５３号明細書、同第５，２９０，９４６号明細書及び同第５，３５６，８９６号明細書を参照）及びアトルバスタチン（リピトール（ＬＩＰＩＴＯＲ）（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５号明細書、同第４，６８１，８９３号明細書、同第５，４８９，６９１号明細書及び同第５，３４２，９５２号明細書を参照）が挙げられる。本方法で使用し得るこれらの及びさらなるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬の構造式が、Ｍ．ヤルパニ（Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ）著、「コレステロール降下薬（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ）」、ケミストリー・アンド・インダストリー（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）、ｐ．８５〜８９（１９９６年２月５日）の８７頁並びに米国特許第４，７８２，０８４号明細書及び同第４，８８５，３１４号明細書に記載されている。
【０８３０】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬の例としては、限定はされないが、以下の公報及び特許において参照し得るものが挙げられる：国際公開第９６／３０３４３号パンフレット、国際公開第９７／１８８１３号パンフレット、国際公開第９７／２１７０１号パンフレット、国際公開第９７／２３４７８号パンフレット、国際公開第９７／３８６６５号パンフレット、国際公開第９８／２８９８０号パンフレット、国際公開第９８／２９１１９号パンフレット、国際公開第９５／３２９８７号パンフレット、米国特許第５，４２０，２４５号明細書、米国特許第５，５２３，４３０号明細書、米国特許第５，５３２，３５９号明細書、米国特許第５，５１０，５１０号明細書、米国特許第５，５８９，４８５号明細書、米国特許第５，６０２，０９８号明細書、欧州特許出願公開第０  ６１８  ２２１号明細書、欧州特許出願公開第０  ６７５  １１２号明細書、欧州特許出願公開第０  ６０４  １８１号明細書、欧州特許出願公開第０  ６９６  ５９３号明細書、国際公開第９４／１９３５７号パンフレット、国際公開第９５／０８５４２号パンフレット、国際公開第９５／１１９１７号パンフレット、国際公開第９５／１２６１２号パンフレット、国際公開第９５／１２５７２号パンフレット、国際公開第９５／１０５１４号パンフレット、米国特許第５，６６１，１５２号明細書、国際公開第９５／１０５１５号パンフレット、国際公開第９５／１０５１６号パンフレット、国際公開第９５／２４６１２号パンフレット、国際公開第９５／３４５３５号パンフレット、国際公開第９５／２５０８６号パンフレット、国際公開第９６／０５５２９号パンフレット、国際公開第９６／０６１３８号パンフレット、国際公開第９６／０６１９３号パンフレット、国際公開第９６／１６４４３号パンフレット、国際公
開第９６／２１７０１号パンフレット、国際公開第９６／２１４５６号パンフレット、国際公開第９６／２２２７８号パンフレット、国際公開第９６／２４６１１号パンフレット、国際公開第９６／２４６１２号パンフレット、国際公開第９６／０５１６８号パンフレット、国際公開第９６／０５１６９号パンフレット、国際公開第９６／００７３６号パンフレット、米国特許第５，５７１，７９２号明細書、国際公開第９６／１７８６１号パンフレット、国際公開第９６／３３１５９号パンフレット、国際公開第９６／３４８５０号パンフレット、国際公開第９６／３４８５１号パンフレット、国際公開第９６／３００１７号パンフレット、国際公開第９６／３００１８号パンフレット、国際公開第９６／３０３６２号パンフレット、国際公開第９６／３０３６３号パンフレット、国際公開第９６／３１１１１号パンフレット、国際公開第９６／３１４７７号パンフレット、国際公開第９６／３１４７８号パンフレット、国際公開第９６／３１５０１号パンフレット、国際公開第９７／００２５２号パンフレット、国際公開第９７／０３０４７号パンフレット、国際公開第９７／０３０５０号パンフレット、国際公開第９７／０４７８５号パンフレット、国際公開第９７／０２９２０号パンフレット、国際公開第９７／１７０７０号パンフレット、国際公開第９７／２３４７８号パンフレット、国際公開第９７／２６２４６号パンフレット、国際公開第９７／３００５３号パンフレット、国際公開第９７／４４３５０号パンフレット、国際公開第９８／０２４３６号パンフレット、及び米国特許第５，５３２，３５９号明細書。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬の役割の例に関しては、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ）、第３５巻、９号、ｐ．１３９４〜１４０１、１９９９年を参照のこと。
【０８３１】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る血管新生阻害薬の例としては、限定はされないが、チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）及びＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害薬、表皮由来、線維芽細胞由来、又は血小板由来成長因子の阻害薬、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害薬、インテグリン遮断薬、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ペントサンポリ硫酸、シクロオキシゲナーゼ阻害薬、例えば非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばアスピリン及びイブプロフェン並びに選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬、例えばセレコキシブ及びロフェコキシブ（米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第８９巻、ｐ．７３８４、１９９２年；ジャーナル・オブ・ザ・ナショナル・キャンサー・インスティテュート（ＪＮＣＩ）、第６９巻、ｐ．４７５、１９８２年；アーカイブス・オブ・オフサルモロジー（Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．）、第１０８巻、ｐ．５７３、１９９０年；アナトミカル・レコード（Ａｎａｔ．Ｒｅｃ．）、第２３８巻、ｐ．６８、１９９４年；ＦＥＢＳレターズ（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）、第３７２巻、ｐ．８３、１９９５年；クリニカル・オーソペディクス・アンド・リレイテッド・リサーチ（Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．）、第３１３巻、ｐ．７６、１９９５年；ジャーナル・オブ・モレキュラー・エンドクリノロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．）、第１６巻、ｐ．１０７、１９９６年；ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）、第７５巻、ｐ．１０５、１９９７年；キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）、第５７巻、ｐ．１６２５、１９９７年；セル（Ｃｅｌｌ）、第９３巻、ｐ．７０５、１９９８年；インターナショナル・ジャーナル・オブ・モレキュラー・メディシン（Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．）、第２巻、ｐ．７１５、１９９８年；ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、第２７４巻、ｐ．９１１６、１９９９年）、ステロイド系抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド類、ミネラルコルチコイド類、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレド（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄ）、ベタメタゾン）、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンジオスタチン、トロポニン−１、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬（フェルナンデス（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ）ら著、ジャーナル・オブ・
ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）、第１０５巻、ｐ．１４１〜１４５、１９８５年を参照）、及びＶＥＧＦに対する抗体（ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、第１７巻、ｐ．９６３〜９６８、１９９９年１０月；キム（Ｋｉｍ）ら著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第３６２巻、ｐ．８４１〜８４４、１９９３年；国際公開第００／４４７７７号パンフレット；及び国際公開第００／６１１８６号パンフレットを参照）が挙げられる。
【０８３２】
血管新生を調節又は阻害する他の治療剤もまたキメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用することができ、凝固系及び線溶系を調節又は阻害する薬剤を含み得る（クリニカル・ケミストリー・アンド・ラボラトリー・メディシン（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．）、第３８巻、ｐ．６７９〜６９２、２０００年のレビューを参照）。キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る凝固及び線溶経路を調節又は阻害するかかる薬剤の例としては、限定はされないが、ヘパリン（トロンボシス・アンド・ヘモスタシス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．）、第８０巻、ｐ．１０〜２３、１９９８年を参照）、低分子量ヘパリン及びカルボキシペプチダーゼＵ阻害薬（活性トロンビン活性化可能線溶阻害薬［ａｃｔｉｖｅ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ  ａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ  ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ＴＡＦＩａ］の阻害薬としても知られる）（トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．）、第１０１巻、ｐ．３２９〜３５４、２００１年を参照）が挙げられる。ＴＡＦＩａ阻害薬に関しては、ＰＣＴ公報国際公開第０３／０１３，５２６号パンフレット及び米国仮特許出願第６０／３４９，９２５号明細書（２００２年１月１８日に出願）に記載されている。
【０８３３】
本発明の化合物と組み合わせて使用し得る細胞周期チェックポイントを妨げる薬剤としては、限定はされないが、ＡＴＲ、ＡＴＭ、Ｃｈｋ１及びＣｈｋ２キナーゼの阻害薬並びにｃｄｋｕｚ及びｃｄｃキナーゼ阻害薬が挙げられ、特に、７−ヒドロキシスタウロスポリン（ｈｙｄｒｏｘｙｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎ）、フラボピリドール、ＣＹＣ２０２（サイクラセル（Ｃｙｃｌａｃｅｌ））及びＢＭＳ−３８７０３２によって例示される。
【０８３４】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨げる薬剤としては、限定はされないが、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３及びＣＴＮＮＢ１の阻害薬が挙げられる。さらなる薬剤としては、ブーム−イェンセン（Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ）及びハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）著、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第４１１巻、ｐ．３５５〜３６５、２００１年によって記載されるとおりのＲＴＫの阻害薬が挙げられる。
【０８３５】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る細胞増殖及び生存シグナル伝達経路の阻害薬としては、限定はされないが、ＥＧＦＲの阻害薬（例えばゲフィチニブ及びエルロチニブ）、ＥＲＢ−２の阻害薬（例えばトラスツズマブ）、ＩＧＦＲの阻害薬、サイトカイン受容体の阻害薬、ＣＴＮＮＢ１の阻害薬、ＰＩ３Ｋの阻害薬（例えばＬＹ２９４００２）、セリン／スレオニンキナーゼ（限定はされないが、国際公開第０２／０８３０６４号パンフレット、国際公開第０２／０８３１３９号パンフレット、国際公開第０２／０８３１４０号パンフレット、米国特許出願公開第２００４−０１１６４３２号明細書、国際公開第０２／０８３１３８号パンフレット、米国特許出願公開第２００４−０１０２３６０号明細書、国際公開第０３／０８６４０４号パンフレット、国際公開第０３／０８６２７９号パンフレット、国際公開第０３／０８６３９４号パンフレット、国際公開第０３／０８４４７３号パンフレット、国際公開第０３／０８６４０３号パンフレット、国際公開第２００４／０４１１６２号パンフレット、国際公開第２００４／０９６１３１号パンフレット、国際公開第２００４／０９６１２９号パンフレット、国際公開第２００４／０９６１３５号パンフレット、国際公開第２００４／０９６１３０号パンフレット、国際公
開第２００５／１００３５６号パンフレット、国際公開第２００５／１００３４４号パンフレットに記載されるなどのＡｋｔの阻害薬を含む）、Ｒａｆキナーゼの阻害薬（例えばＢＡＹ−４３−９００６）、ＭＥＫの阻害薬（例えばＣＩ−１０４０及びＰＤ−０９８０５９）及びｍＴＯＲの阻害薬（例えばワイス（Ｗｙｅｔｈ）  ＣＣＩ−７７９）が挙げられる。かかる薬剤には小分子阻害薬化合物及び抗体拮抗薬が含まれる。
【０８３６】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るアポトーシス誘導剤としては、限定はされないが、ＴＮＦ受容体ファミリーメンバー（ＴＲＡＩＬ受容体を含む）のアクチベータが挙げられる。
【０８３７】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る選択的ＣＯＸ−２阻害薬であるＮＳＡＩＤｓとしては、限定はされないが、米国特許第５，４７４，９９５号明細書、米国特許第５，８６１，４１９号明細書、米国特許第６，００１，８４３号明細書、米国特許第６，０２０，３４３号明細書、米国特許第５，４０９，９４４号明細書、米国特許第５，４３６，２６５号明細書、米国特許第５，５３６，７５２号明細書、米国特許第５，５５０，１４２号明細書、米国特許第５，６０４，２６０号明細書、米国特許第５，６９８，５８４号明細書、米国特許第５，７１０，１４０号明細書、国際公開第９４／１５９３２号パンフレット、米国特許第５，３４４，９９１号明細書、米国特許第５，１３４，１４２号明細書、米国特許第５，３８０，７３８号明細書、米国特許第５，３９３，７９０号明細書、米国特許第５，４６６，８２３号明細書、米国特許第５，６３３，２７２号明細書、及び米国特許第５，９３２，５９８号明細書（これらは全て、本明細書によって参照により援用される）に開示されるＮＳＡＩＤｓが挙げられる。
【０８３８】
キメラポリヌクレオチドとの組み合わせに特に有用なＣＯＸ−２の阻害薬としては、３−フェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン；及び５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）−フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリジン；又はその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０８３９】
ＣＯＸ−２の具体的な阻害薬として記載されている、従って本発明において有用な化合物としては、限定はされないが、パレコキシブ、セレブレックス（ＣＥＬＥＢＲＥＸ）（登録商標）及びベクストラ（ＢＥＸＴＲＡ）（登録商標）又はその薬学的に許容可能な塩が挙げられる。
【０８４０】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得る血管新生阻害薬としては、限定はされないが、エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）−フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペンタオースホスフェート、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホネート）、及び３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）が挙げられる。
【０８４１】
キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るチロシンキナーゼ阻害薬としては、限定はされないが、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチルイデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン
、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホネート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミン、及びＥＭＤ１２１９７４が挙げられる。
【０８４２】
本組成物及び方法には、抗癌化合物以外の化合物との組み合わせもまた包含される。例えば、キメラポリヌクレオチドとＰＰＡＲ−γ（即ち、ＰＰＡＲ−ガンマ）作動薬及びＰＰＡＲ−δ（即ち、ＰＰＡＲ−デルタ）作動薬との組み合わせが、ある種の悪性腫瘍の治療において有用である。ＰＰＡＲ−γ及びＰＰＡＲ−δは、核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ及びδである。内皮細胞でのＰＰＡＲ−γの発現及び血管新生におけるその関与が文献に報告されている（ジャーナル・オブ・カーディオバスキュラー・ファーマコロジー（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）、第３１巻、ｐ．９０９〜９１３、１９９８年；ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、第２７４巻、ｐ．９１１６〜９１２１、１９９９年；インベスティゲイティブ・オフサルモロジー・アンド・ビジュアル・サイエンス（Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．）、第４１巻、ｐ．２３０９〜２３１７、２０００年を参照）。近年、ＰＰＡＲ−γ作動薬は、インビトロでＶＥＧＦに対する血管新生反応を阻害することが示されている；マレイン酸トログリタゾン及びマレイン酸ロシグリタゾンは両方ともに、マウスにおける網膜血管新生の発症を阻害する（アーカイブズ・オブ・オフサルモロジー（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．）、第１１９巻、ｐ．７０９〜７１７、２００１年）。キメラポリヌクレオチドと組み合わせて使用し得るＰＰＡＲ−γ作動薬及びＰＰＡＲ−γ／α作動薬の例としては、限定はされないが、チアゾリジンジオン（ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン、ロシグリタゾン、及びピオグリタゾンなど）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、Ｇ１２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸（米国特許出願第０９／７８２，８５６号明細書に開示される）、及び２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸（米国仮特許出願第６０／２３５，７０８号明細書及び同第６０／２４４，６９７号明細書に開示される）が挙げられる。
【０８４３】
本発明の別の実施形態は、癌を治療するための遺伝子療法と組み合わせたキメラポリヌクレオチドの使用である。癌治療の遺伝的戦略を概観するには、ホール（Ｈａｌｌ）ら（アメリカン・ジャーナル・オブ・ヒューマン・ジェネティクス（Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ）、第６１巻、ｐ．７８５〜７８９、１９９７年）及びクフェ（Ｋｕｆｅ）ら（カンサー・メディシン（Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、第５版、ｐ．８７６〜８８９、ＢＣデッカー（ＢＣ  Ｄｅｃｋｅｒ）、ハミルトン（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）、２０００年）を参照されたい。遺伝子療法は、任意の腫瘍抑制遺伝子の送達に使用することができる。かかる遺伝子の例としては、限定はされないが、組換えウイルス媒介性遺伝子導入によ
って送達することのできるｐ５３（例えば、米国特許第６，０６９，１３４号明細書を参照）、ｕＰＡ／ｕＰＡＲ拮抗薬（「ｕＰＡ／ｕＰＡＲ拮抗薬のアデノウイルス媒介性送達はマウスにおける血管新生依存性腫瘍成長及び播種を抑制する（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｕＰＡ／ｕＰＡＲ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ）」、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、８月、第５巻、第８号、ｐ．１１０５〜１３、１９９８年）、及びインターフェロンγ（ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ）、第１６４巻、ｐ．２１７〜２２２、２０００年）が挙げられる。
【０８４４】
キメラポリヌクレオチドはまた、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）、詳細には輸送タンパク質の高発現レベルに関連するＭＤＲの阻害薬と組み合わせて投与されてもよい。かかるＭＤＲ阻害薬としては、ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）の阻害薬、例えば、ＬＹ３３５９７９、ＸＲ９５７６、ＯＣ１４４−０９３、Ｒ１０１９２２、ＶＸ８５３及びＰＳＣ８３３（バルスポダール）が挙げられる。
【０８４５】
キメラポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドを単独で又は放射線療法と共に用いることによって生じ得る急性、遅延性、遅発性、及び予期的嘔吐を含めた、悪心又は嘔吐を治療するため制吐剤と併せて利用されてもよい。嘔吐の予防又は治療には、キメラポリヌクレオチドｎは、他の制吐剤、特にニューロキニン−１受容体拮抗薬、５ＨＴ３受容体拮抗薬、例えば、オンダンセトロン、グラニセトロン、トロピセトロン、及びザチセトロン（ｚａｔｉｓｅｔｒｏｎ）、ＧＡＢＡＢ受容体作動薬、例えば、バクロフェン、コルチコステロイド、例えば、デカドロン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ）（デキサメタゾン）、ケナログ（Ｋｅｎａｌｏｇ）、アリストコート（Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ）、ナサリド（Ｎａｓａｌｉｄｅ）、プレフェリド（Ｐｒｅｆｅｒｉｄ）、ベネコルテン（Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎ）又はその他の、米国特許第２，７８９，１１８号明細書、同第２，９９０，４０１号明細書、同第３，０４８，５８１号明細書、同第３，１２６，３７５号明細書、同第３，９２９，７６８号明細書、同第３，９９６，３５９号明細書、同第３，９２８，３２６号明細書及び同第３，７４９，７１２号明細書に開示されるもの、抗ドーパミン薬、例えば、フェノチアジン（例えばプロクロルペラジン、フルフェナジン、チオリダジン及びメソリダジン）、メトクロプラミド又はドロナビノールと併せて用いられ得る。ある実施形態では、ニューロキニン−１受容体拮抗薬、５ＨＴ３受容体拮抗薬及びコルチコステロイドから選択される抗嘔吐剤が、キメラポリヌクレオチドの投与時に起こり得る嘔吐を治療又は予防するための補助剤として投与される。
【０８４６】
キメラポリヌクレオチドと併用のニューロキニン−１受容体拮抗薬に関しては、例えば、米国特許第５，１６２，３３９号明細書、同第５，２３２，９２９号明細書、同第５，２４２，９３０号明細書、同第５，３７３，００３号明細書、同第５，３８７，５９５号明細書、同第５，４５９，２７０号明細書、同第５，４９４，９２６号明細書、同第５，４９６，８３３号明細書、同第５，６３７，６９９号明細書、同第５，７１９，１４７号明細書；欧州特許出願公開第０  ３６０  ３９０号明細書、同第０  ３９４  ９８９号明細書、同第０  ４２８  ４３４号明細書、同第０  ４２９  ３６６号明細書、同第０  ４３０  ７７１号明細書、同第０  ４３６  ３３４号明細書、同第０  ４４３  １３２号明細書、同第０  ４８２  ５３９号明細書、同第０  ４９８  ０６９号明細書、同第０  ４９９  ３１３号明細書、同第０  ５１２  ９０１号明細書、同第０  ５１２  ９０２号明細書、同第０  ５１４  ２７３号明細書、同第０  ５１４  ２７４号明細書、同第０  ５１４  ２７５号明細書、同第０  ５１４  ２７６号明細書、同第０  ５１５  ６８１号明細書、同第０  ５１７  ５８９号明細書、同第０  ５２０  ５５５号明細書、同第０  ５２２  ８０８号明細書、同第０  ５２８  ４９５号明細書、同第０  ５３２  ４５６号明細書、同第０  ５３３  ２８０号明細書、同第０  ５３６  ８１７号明細書、同第０  ５
４５  ４７８号明細書、同第０  ５５８  １５６号明細書、同第０  ５７７  ３９４号明細書、同第０  ５８５  ９１３号明細書、同第０  ５９０  １５２号明細書、同第０  ５９９  ５３８号明細書、同第０  ６１０  ７９３号明細書、同第０  ６３４  ４０２号明細書、同第０  ６８６  ６２９号明細書、同第０  ６９３  ４８９号明細書、同第０  ６９４  ５３５号明細書、同第０  ６９９  ６５５号明細書、同第０  ６９９  ６７４号明細書、同第０  ７０７  ００６号明細書、同第０  ７０８  １０１号明細書、同第０  ７０９  ３７５号明細書、同第０  ７０９  ３７６号明細書、同第０  ７１４  ８９１号明細書、同第０  ７２３  ９５９号明細書、同第０  ７３３  ６３２号明細書及び同第０  ７７６  ８９３号明細書；ＰＣＴ国際公開第９０／０５５２５号パンフレット、同第９０／０５７２９号パンフレット、同第９１／０９８４４号パンフレット、同第９１／１８８９９号パンフレット、同第９２／０１６８８号パンフレット、同第９２／０６０７９号パンフレット、同第９２／１２１５１号パンフレット、同第９２／１５５８５号パンフレット、同第９２／１７４４９号パンフレット、同第９２／２０６６１号パンフレット、同第９２／２０６７６号パンフレット、同第９２／２１６７７号パンフレット、同第９２／２２５６９号パンフレット、同第９３／００３３０号パンフレット、同第９３／００３３１号パンフレット、同第９３／０１１５９号パンフレット、同第９３／０１１６５号パンフレット、同第９３／０１１６９号パンフレット、同第９３／０１１７０号パンフレット、同第９３／０６０９９号パンフレット、同第９３／０９１１６号パンフレット、同第９３／１００７３号パンフレット、同第９３／１４０８４号パンフレット、同第９３／１４１１３号パンフレット、同第９３／１８０２３号パンフレット、同第９３／１９０６４号パンフレット、同第９３／２１１５５号パンフレット、同第９３／２１１８１号パンフレット、同第９３／２３３８０号パンフレット、同第９３／２４４６５号パンフレット、同第９４／００４４０号パンフレット、同第９４／０１４０２号パンフレット、同第９４／０２４６１号パンフレット、同第９４／０２５９５号パンフレット、同第９４／０３４２９号パンフレット、同第９４／０３４４５号パンフレット、同第９４／０４４９４号パンフレット、同第９４／０４４９６号パンフレット、同第９４／０５６２５号パンフレット、同第９４／０７８４３号パンフレット、同第９４／０８９９７号パンフレット、同第９４／１０１６５号パンフレット、同第９４／１０１６７号パンフレット、同第９４／１０１６８号パンフレット、同第９４／１０１７０号パンフレット、同第９４／１１３６８号パンフレット、同第９４／１３６３９号パンフレット、同第９４／１３６６３号パンフレット、同第９４／１４７６７号パンフレット、同第９４／１５９０３号パンフレット、同第９４／１９３２０号パンフレット、同第９４／１９３２３号パンフレット、同第９４／２０５００号パンフレット、同第９４／２６７３５号パンフレット、同第９４／２６７４０号パンフレット、同第９４／２９３０９号パンフレット、同第９５／０２５９５号パンフレット、同第９５／０４０４０号パンフ��ット、同第９５／０４０４２号パンフレット、同第９５／０６６４５号パンフレット、同第９５／０７８８６号パンフレット、同第９５／０７９０８号パンフレット、同第９５／０８５４９号パンフレット、同第９５／１１８８０号パンフレット、同第９５／１４０１７号パンフレット、同第９５／１５３１１号パンフレット、同第９５／１６６７９号パンフレット、同第９５／１７３８２号パンフレット、同第９５／１８１２４号パンフレット、同第９５／１８１２９号パンフレット、同第９５／１９３４４号パンフレット、同第９５／２０５７５号パンフレット、同第９５／２１８１９号パンフレット、同第９５／２２５２５号パンフレット、同第９５／２３７９８号パンフレット、同第９５／２６３３８号パンフレット、同第９５／２８４１８号パンフレット、同第９５／３０６７４号パンフレット、同第９５／３０６８７号パンフレット、同第９５／３３７４４号パンフレット、同第９６／０５１８１号パンフレット、同第９６／０５１９３号パンフレット、同第９６／０５２０３号パンフレット、同第９６／０６０９４号パンフレット、同第９６／０７６４９号パンフレット、同第９６／１０５６２号パンフレット、同第９６／１６９３９号パンフレット、同第９６／１８６４３号パンフレット、同第９６／２０１９７号パンフレット、同第９６／２１６６１号パンフレット、同第９６／２９３０４号パンフレット、同第９６／２９３１７号パンフレット、同第９６／２
９３２６号パンフレット、同第９６／２９３２８号パンフレット、同第９６／３１２１４号パンフレット、同第９６／３２３８５号パンフレット、同第９６／３７４８９号パンフレット、同第９７／０１５５３号パンフレット、同第９７／０１５５４号パンフレット、同第９７／０３０６６号パンフレット、同第９７／０８１４４号パンフレット、同第９７／１４６７１号パンフレット、同第９７／１７３６２号パンフレット、同第９７／１８２０６号パンフレット、同第９７／１９０８４号パンフレット、同第９７／１９９４２号パンフレット及び同第９７／２１７０２号パンフレット；及び英国特許出願公開第２  ２６６  ５２９号明細書、同第２  ２６８  ９３１号明細書、同第２  ２６９  １７０号明細書、同第２  ２６９  ５９０号明細書、同第２  ２７１  ７７４号明細書、同第２  ２９２  １４４号明細書、同第２  ２９３  １６８号明細書、同第２  ２９３  １６９号明細書、及び同第２  ３０２  ６８９号明細書に詳しく記載されている。かかる化合物の調製に関しては、前述の特許及び公報（これらは参照により本明細書に援用される）に詳しく記載されている。
【０８４７】
ある実施形態では、キメラポリヌクレオチドと併用されるニューロキニン−１受容体拮抗薬は、２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）−フェニル）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オキソ−１Ｈ，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、又はその薬学的に許容可能な塩（米国特許第５，７１９，１４７号明細書に記載される）から選択される。
【０８４８】
キメラポリヌクレオチドはまた、ビスホスホネート類（ビスホスホネート類、ジホスホネート類、ビスホスホン酸及びジホスホン酸を含むと理解される）と組み合わせて、骨癌を含む癌の治療又は予防にも有用であり得る。ビスホスホネート類の例としては、限定はされないが：エチドロネート（ダイドロネル（Ｄｉｄｒｏｎｅｌ））、パミドロネート（アレディア（Ａｒｅｄｉａ））、アレンドロネート（フォサマックス（Ｆｏｓａｍａｘ））、リセドロネート（アクトネル（Ａｃｔｏｎｅｌ））、ゾレドロネート（ゾメタ（Ｚｏｍｅｔａ））、イバンドロネート（ボニバ（Ｂｏｎｉｖａ））、インカドロネート又はシマドロネート、クロドロネート、ＥＢ−１０５３、ミノドロネート、ネリドロネート、ピリドロネート及びチルドロネートが、これらのあらゆる薬学的に許容可能な塩、誘導体、水和物及び混合物を含め、挙げられる。
【０８４９】
キメラポリヌクレオチドはまた、貧血症の治療に有用な薬剤と共に投与されてもよい。かかる貧血症治療剤は、例えば、持続性エリスロポエチン（ｅｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ）受容体アクチベータ（エポエチンアルファなど）である。
【０８５０】
キメラポリヌクレオチドはまた、好中球減少症の治療に有用な薬剤と共に投与されてもよい。かかる好中球減少症治療剤は、例えば、ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）などの好中球の産生及び機能を調節する造血成長因子である。Ｇ−ＣＳＦの例としては、フィルグラスチム及びＰＥＧ−フィルグラスチムが挙げられる。
【０８５１】
キメラポリヌクレオチドはまた、免疫増進薬、例えば、レバミゾール、イソプリノシン及びザダキシン（Ｚａｄａｘｉｎ）と共に投与されてもよい。
キメラポリヌクレオチドはまた、アロマターゼ阻害薬と組み合わせた乳癌の治療又は予防にも有用であり得る。アロマターゼ阻害薬の例としては、限定はされないが、アナストロゾール、レトロゾール及びエキセメスタンが挙げられる。
【０８５２】
キメラポリヌクレオチドはまた、他の核酸治療薬と組み合わせた癌の治療又は予防にも有用であり得る。
キメラポリヌクレオチドはまた、γ−セクレターゼ阻害薬及び／又はＮＯＴＣＨシグナリングの阻害薬と組み合わせて投与されてもよい。かかる阻害薬としては、国際公開第０
１／９００８４号パンフレット、国際公開第０２／３０９１２号パンフレット、国際公開第０１／７０６７７号パンフレット、国際公開第０３／０１３５０６号パンフレット、国際公開第０２／３６５５５号パンフレット、国際公開第０３／０９３２５２号パンフレット、国際公開第０３／０９３２６４号パンフレット、国際公開第０３／０９３２５１号パンフレット、国際公開第０３／０９３２５３号パンフレット、国際公開第２００４／０３９８００号パンフレット、国際公開第２００４／０３９３７０号パンフレット、国際公開第２００５／０３０７３１号パンフレット、国際公開第２００５／０１４５５３号パンフレット、米国特許出願第１０／９５７，２５１号明細書、国際公開第２００４／０８９９１１号パンフレット、国際公開第０２／０８１４３５号パンフレット、国際公開第０２／０８１４３３号パンフレット、国際公開第０３／０１８５４３号パンフレット、国際公開第２００４／０３１１３７号パンフレット、国際公開第２００４／０３１１３９号パンフレット、国際公開第２００４／０３１１３８号パンフレット、国際公開第２００４／１０１５３８号パンフレット、国際公開第２００４／１０１５３９号パンフレット及び国際公開第０２／４７６７１号パンフレット（ＬＹ−４５０１３９を含む）に記載される化合物が挙げられる。
【０８５３】
キメラポリヌクレオチドはまた、ＰＡＲＰ阻害薬と組み合わせた癌の治療又は予防にも有用であり得る。
キメラポリヌクレオチドはまた、以下の治療剤と組み合わせた癌の治療にも有用であり得る：アバレリックス（プレナキシス・デポー（Ｐｌｅｎａｘｉｓ  Ｄｅｐｏｔ）（登録商標））；アルデスロイキン（プロカイン（Ｐｒｏｋｉｎｅ）（登録商標））；アルデスロイキン（プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標））；アレムツヅマブ（（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂｂ）（キャンパス（Ｃａｍｐａｔｈ）（登録商標））；アリトレチノイン（パンレチン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ））；アロプリノール（ザイロプリム（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ）（登録商標））；アルトレタミン（ヘキシレン（Ｈｅｘｙｌｅｎ）（登録商標））；アミホスチン（エチオール（Ｅｔｈｙｏｌ）（登録商標））；アナストロゾール（アリミデックス（Ａｒｉｍｉｄｅｘ）（登録商標））；三酸化ヒ素（トリセノックス（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ）（登録商標））；アスパラギナーゼ（エルスパール（Ｅｌｓｐａｒ）（登録商標））；アザシチジン（ビダーザ（Ｖｉｄａｚａ）（登録商標））；塩酸ベンダムスチン（トレアンダ（Ｔｒｅａｎｄａ）（登録商標））；ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）（登録商標））；ベキサロテンカプセル（タルグレチン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）（登録商標））；ベキサロテンゲル（タルグレチン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）（登録商標））；ブレオマイシン（ブレノキサン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）（登録商標））；ボルテゾミブ（ベルケイド（Ｖｅｌｃａｄｅ）（登録商標））；ブレフェルジンＡ；ブスルファン静脈内（ブスルフェクス（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ）（登録商標））；ブスルファン経口（ミレラン（Ｍｙｌｅｒａｎ）（登録商標））；カルステロン（メトサーブ（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ）（登録商標））；カペシタビン（ゼローダ（Ｘｅｌｏｄａ）（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ）（登録商標））；カルムスチン（ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（グリアデル（Ｇｌｉａｄｅｌ）（登録商標））；カルムスチン含有ポリフェプロサン２０インプラント（グリアデル・ウエハ（Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ）（登録商標））；セレコキシブ（セレブレックス（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ））；セツキシマブ（エルビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）（登録商標））；クロラムブシル（ロイケラン（Ｌｅｕｋｅｒａｎ）（登録商標））；シスプラチン（プラチノール（Ｐｌａｔｉｎｏｌ）（登録商標））；クラドリビン（ロイスタチン２−ＣｄＡ（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ  ２−ＣｄＡ）（登録商標））；クロファラビン（クロラール（Ｃｌｏｌａｒ）（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）（登録商標）、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン注射薬（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン錠剤（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｔａｂｌｅｔ）（登録商標））；シタラビン（シトサール−Ｕ（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ）（登録商
標））；シタラビンリポソーム（デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ））；ダカルバジン（ＤＴＩＣドーム（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ）（登録商標））；ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ（コスメゲン（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ）（登録商標））；ダルテパリンナトリウム注射薬（フラグミン（Ｆｒａｇｍｉｎ）（登録商標））；ダルベポエチンアルファ（アラネスプ（Ａｒａｎｅｓｐ）（登録商標））；ダサチニブ（スプリセル（Ｓｐｒｙｃｅｌ）（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（ダウノキソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ）（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（ダウノルビシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（セルビジン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ）（登録商標））；デガレリクス（ファーマゴン（Ｆｉｒｍａｇｏｎ）（登録商標））；デニロイキンジフチトクス（オンタック（Ｏｎｔａｋ）（登録商標））；デクスラゾキサン（ザインカード（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（登録商標））；塩酸デクスラゾキサン（トテクト（Ｔｏｔｅｃｔ）（登録商標））；ジデムニンＢ（ｄｉｄｅｍｎｉｎ  Ｂ）；１７−ＤＭＡＧ；ドセタキセル（タキソテール（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシンＰＦＳ（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ）（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）（登録商標）、ルベックス（Ｒｕｂｅｘ）（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシンＰＦＳ注射薬（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（ドロモスタノロン（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（マステロン注射薬（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；エクリズマブ注射薬（ソリリス（Ｓｏｌｉｒｉｓ）（登録商標））；エリオットＢ溶液（エリオットＢ溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（登録商標））；エルトロンボパグ（プロマクタ（Ｐｒｏｍａｃｔａ）（登録商標））；エピルビシン（エレンス（Ｅｌｌｅｎｃｅ）（登録商標））；エポエチンアルファ（エポゲン（Ｅｐｏｇｅｎ）（登録商標））；エルロチニブ（タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ）（登録商標））；エストラムスチン（エムサイト（Ｅｍｃｙｔ）（登録商標））；エチニルエストラジオール；リン酸エトポシド（エトポホス（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ）（登録商標））；エトポシド、ＶＰ−１６（ベプシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ）（登録商標））；エベロリムス錠（アフィニトール（Ａｆｉｎｉｔｏｒ）（登録商標））；エキセメスタン（アロマシン（Ａｒｏｍａｓｉｎ）（登録商標））；フェルモキシトール（フェラヘム注射薬（Ｆｅｒａｈｅｍｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；フィルグラスチム（ニューポジェン（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）（登録商標））；フロクスウリジン（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（フルダラ（Ｆｌｕｄａｒａ）（登録商標））；フルオロウラシル、５−ＦＵ（アドルシル（Ａｄｒｕｃｉｌ）（登録商標））；フルベストラント（ファスロデックス（Ｆａｓｌｏｄｅｘ）（��録商標））；ゲフィチニブ（イレッサ（Ｉｒｅｓｓａ）（登録商標））；ゲルダナマイシン；ゲムシタビン（ジェムザール（Ｇｅｍｚａｒ）（登録商標））；ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ゾラデックスインプラント（Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｉｍｐｌａｎｔ）（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ゾラデックス（Ｚｏｌａｄｅｘ）（登録商標））；酢酸ヒストレリン（ヒストレリンインプラント（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ  Ｉｍｐｌａｎｔ）（登録商標））；ヒドロキシウレア（ハイドレア（Ｈｙｄｒｅａ）（登録商標））；イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン（Ｚｅｖａｌｉｎ）（登録商標））；イダルビシン（イダマイシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ）（登録商標））；イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（グリベック（Ｇｌｅｅｖｅｃ）（登録商標））；インターフェロンα２ａ（ロフェロンＡ（Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ）（登録商標））；インターフェロンα−２ｂ（イントロンＡ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ）（登録商標））；ヨーベングアン１１２３注射薬（アドレビュー（ＡｄｒｅＶｉｅｗ）（登録商標））；イリノテカン（カンプトサール（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）（登録商標））；イクサベピロン（イグゼンプラ（Ｉｘｅｍｐｒａ）（登録商標））；ラパチニブ錠（タイカーブ（Ｔｙｋｅｒｂ）（登録商標））；レナリドマイド（レブリミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）（登録商標））；レトロゾール（フェマーラ（Ｆ
ｅｍａｒａ）（登録商標））；ロイコボリン（ウェルコボリン（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ）（登録商標）、ロイコボリン（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）（登録商標））；酢酸ロイプロリド（エリガード（Ｅｌｉｇａｒｄ）（登録商標））；レバミゾール（エルガミゾール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）（登録商標））；ロムスチン、ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ）；ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ（メクロレタミン）、ナイトロジェンマスタード（ムスタルゲン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）（登録商標））；酢酸メゲストロール（メゲース（Ｍｅｇａｃｅ）（登録商標））；メルファラン、Ｌ−ＰＡＭ（アルケラン（Ａｌｋｅｒａｎ）（登録商標））；メルカプトプリン、６−ＭＰ（プリネトール（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ）（登録商標））；メスナ（メスネックス（Ｍｅｓｎｅｘ）（登録商標））；メスナ（メスネックス錠（Ｍｅｓｎｅｘ  Ｔａｂｓ）（登録商標））；メトトレキサート（メトトレキサート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）（登録商標））；メトキサレン（ウヴァデックス（Ｕｖａｄｅｘ）（登録商標））；８−メトキシソラレン；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ）（登録商標））；ミトタン（リソドレン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ）（登録商標））；ミトキサントロン（ノバントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）（登録商標））；ミトラマイシン；フェニルプロピオン酸ナンドロロン（デュラボリン−５０（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０））；ネララビン（アラノン（Ａｒｒａｎｏｎ）（登録商標））；ニロチニブ（タシグナ（Ｔａｓｉｇｎａ）（登録商標））；ノフェツモマブ（ベルルマ（Ｖｅｒｌｕｍａ）（登録商標））；オファツムマブ（アーゼラ（Ａｒｚｅｒｒａ）（登録商標））；オプレルベキン（ニューメガ（Ｎｅｕｍｅｇａ）（登録商標））；オキサリプラチン（エロキサチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）（登録商標））；パクリタキセル（パキセン（Ｐａｘｅｎｅ）（登録商標））；パクリタキセル（タキソール（Ｔａｘｏｌ）（登録商標））；パクリタキセルタンパク質結合粒子（アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）（登録商標））；パリフェルミン（ケピバンス（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ）（登録商標））；パミドロネート（アレディア（Ａｒｅｄｉａ）（登録商標））；パニツムマブ（ベクチビックス（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）（登録商標））；パゾパニブ錠（ヴォトリエント（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ）（商標）（登録商標））；ペガデマーゼ（アダジェン（Ａｄａｇｅｎ）（ペガデマーゼウシ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ  Ｂｏｖｉｎｅ））（登録商標））；ペグアスパラガーゼ（オンキャスパー（Ｏｎｃａｓｐａｒ）（登録商標））；ペグフィルグラスチム（ニューラスタ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）（登録商標））；ペメトレキセド二ナトリウム（アリムタ（Ａｌｉｍｔａ）（登録商標））；ペントスタチン（ニペント（Ｎｉｐｅｎｔ）（登録商標））；ピポブロマン（ベルサイト（Ｖｅｒｃｙｔｅ）（登録商標））；プレリキサフォル（モゾビル（Ｍｏｚｏｂｉｌ）（登録商標））；プリカマイシン、ミトラマイシン（ミトラシン（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ）（登録商標））；ポルフィマーナトリウム（フォトフリン（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ）（登録商標））；プララトレキセート注射薬（フォロチン（Ｆｏｌｏｔｙｎ）（登録商��））；プロカルバジン（マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（登録商標））；キナクリン（アタブリン（Ａｔａｂｒｉｎｅ）（登録商標））；ラパマイシン；ラスブリカーゼ（エリテック（Ｅｌｉｔｅｋ）（登録商標））；塩酸ラロキシフェン（エビスタ（Ｅｖｉｓｔａ）（登録商標））；リツキシマブ（リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）（登録商標））；ロミデプシン（イストダックス（Ｉｓｔｏｄａｘ）（登録商標））；ロミプロスチム（Ｎプレート（Ｎｐｌａｔｅ）（登録商標））；サルグラモスチム（リューカイン（Ｌｅｕｋｉｎｅ）（登録商標））；サルグラモスチム（プロカイン（Ｐｒｏｋｉｎｅ））；ソラフェニブ（ネクサバール（Ｎｅｘａｖａｒ））；ストレプトゾシン（ザノサー（Ｚａｎｏｓａｒ）（登録商標））；マレイン酸スニチニブ（スーテント（Ｓｕｔｅｎｔ））；タルク（スクレロゾール（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ））；タモキシフェン（ノルバデックス（Ｎｏｌｖａｄｅｘ））；テモゾロミド（テモダール（Ｔｅｍｏｄａｒ））；テムシロリムス（トーリセル（Ｔｏｒｉｓｅｌ））；テニポシド、ＶＭ−２６（ブモン（Ｖｕｍｏｎ）（
登録商標））；テストラクトン（テスラック（Ｔｅｓｌａｃ）（登録商標））；チオグアニン、６−ＴＧ（チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）（登録商標））；チオプリン；チオテパ（チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標））；トポテカン（ハイカ
ムチン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）（登録商標））；トレミフェン（フェアストン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ））；トシツモマブ（ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ））；トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）（登録商標））；ｔｒａｎｓ−レチノイン酸；トラスツズマブ（ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（登録商標））；トレチノイン、ＡＴＲＡ（ベサノイド（Ｖｅｓａｎｏｉｄ）（登録商標））；トリエチレンメラミン；ウラシルマスタード（ウラシルマスタードカプセル（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｃａｐｓｕｌｅ）（登録商標））；バルルビシン（バルスター（Ｖａｌｓｔａｒ）（登録商標））；ビンブラスチン（ベルバン（Ｖｅｌｂａｎ）（登録商標））；ビンクリスチン（オンコビン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）（登録商標））；ビノレルビン（ナベルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）（登録商標））；ボリノスタット（ゾリンザ（Ｚｏｌｉｎｚａ）（登録商標））；ワートマニン；及びゾレドロン酸塩（ゾメタ（Ｚｏｍｅｔａ）（登録商標））。
【０８５４】
上記に言及した組み合わせは、好都合には医薬製剤の形態での使用向けに提供されることができ、従って上記に定義するとおりの組み合わせを薬学的に許容可能な希釈剤又は担体と共に含む医薬組成物は、本発明のさらなる態様に相当する。
【０８５５】
かかる組み合わせの個々の化合物は、逐次的に或いは同時に、別々の或いは組み合わされた医薬製剤で投与することができる。一実施形態では、個々の化合物は、組み合わされた医薬製剤で同時に投与され得る。
【０８５６】
さらに、組み合わせて利用される治療、予防、診断、又はイメージング活性を有する薬剤が単一の組成物で一緒に投与されてもよく、又は異なる組成物で別々に投与されてもよいことは理解されるであろう。一般に、組み合わせで利用される薬剤は、それらが個別に利用されるときのレベルを超えないレベルで利用されるであろうことが予想される。一部の実施形態では、組み合わせで利用されるレベルは、個別に利用されるレベルより低くなり得る。一実施形態では、組み合わせは、各々が、又は併せて、本明細書に記載される分割投与レジメンに従い投与され得る。
【０８５７】
投与
本発明は、本発明における修飾ｍＲＮＡ及びそれらのコードタンパク質又は複合体を、それを必要としている対象に投与するステップを含む方法を提供する。核酸、タンパク質又は複合体、又はそれらの医薬、イメージング、診断、若しくは予防組成物は、疾患、障害、及び／又は病態（例えば、作業記憶欠損に関連する疾患、障害、及び／又は病態）の予防、治療、診断、又はイメージングに有効な任意の量及び任意の投与経路を用いて対象に投与され得る。必要となる正確な量は、対象の種、年齢、及び全身状態、疾患の重症度、詳細な組成物、その投与様式、その作用様式などに応じて対象毎に異なり得る。本発明における組成物は、典型的には、投与のし易さ及び投薬量の均一さを図り、投薬量単位形態で製剤化される。しかしながら、本発明の組成物の１日の総使用量は、主治医が健全な医学的判断の範囲内で決定し得ることが理解されるであろう。任意の特定の患者に対する具体的な治療上有効な、予防上有効な、又は適切なイメージングの用量レベルは、治療下の障害及び障害の重症度；用いられる具体的な化合物の活性；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別及び食事；用いられる具体的な化合物の投与時間、投与経路、及び排泄速度；治療継続期間；用いられる具体的な化合物と組み合わせて又はそれと同時に使用される薬物；及び医学分野で周知されている同様の要因を含め、種々の要因に依存し得る。
【０８５８】
特定の実施形態では、本発明における組成物は、１日１回以上で１日当たり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜
約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）を送達して所望の治療、診断、予防、又はイメージング効果を達成するのに十分な投薬量レベルで投与され得る（例えば、国際公開第２０１３０７８１９９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される単位用量の範囲を参照）。所望の投薬量は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日、３日毎、毎週、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に送達され得る。特定の実施形態では、所望の投薬量は頻回投与を用いて送達され得る（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、又はそれ以上の投与）。頻回投与が用いられる場合、本明細書に記載されるものなどの分割投与レジメンが用いられ得る。
【０８５９】
本発明によれば、キメラポリヌクレオチドを分割用量レジメンで投与することにより哺乳類対象において高いタンパク質レベルが生じることが発見された。本明細書で使用されるとき、「分割用量」は、単一単位用量又は総１日用量を２つ以上の用量、例えば単一単位用量の２回以上の投与に分けることである。本明細書で使用されるとき、「単一単位用量」は、１用量／１回／単一の経路／単一の接触点、即ち単一の投与イベントで投与される任意の治療薬の用量である。本明細書で使用されるとき、「総１日用量」は、２４時間の期間に与えられる又は処方される量である。総１日用量が単一単位用量として投与されてもよい。一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは分割用量で対象に投与される。キメラポリヌクレオチドは、緩衝液のみに製剤化されても、又は本明細書に記載される製剤に製剤化されてもよい。
【０８６０】
投薬形態
本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載される投薬形態、例えば、局所、鼻腔内、気管内、又は注射用（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、皮下）の投薬形態に製剤化することができる。
【０８６１】
液体投薬形態
非経口投与用の液体投薬形態としては、限定はされないが、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及び／又はエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加え、液体投薬形態は、限定はされないが、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（詳細には、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール類及びソルビタン脂肪酸エステル類、及びこれらの混合物を含めた、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含み得る。非経口投与に関する特定の実施形態では、組成物は、クレモフォール（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／又はそれらの組み合わせなどの可溶化剤と混合され得る。
【０８６２】
注射剤
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性又は油性懸濁液は、公知の技術によって製剤化し得るとともに、好適な分散剤、湿潤剤、及び／又は懸濁剤を含み得る。無菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤及び／又は溶媒中、例えば１，３−ブタンジオール溶液中の無菌注射用溶液、懸濁液、及び／又はエマルションであってもよい。利用し得る許容可能な媒体及び溶媒の中には、限定はされないが、水、リンゲル溶液（Ｕ．Ｓ．Ｐ．）、及び等張塩化ナトリウム溶液が挙げられる。無菌固定油が、従来、溶媒又は懸濁媒として利用されている。本目的上、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含め、任意の
無刺激固定油を利用することができる。注射剤の調製においては、オレイン酸などの脂肪酸を使用することができる。
【０８６３】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルタでろ過することによって、及び／又は使用前に滅菌水又は他の無菌注射用媒体中に溶解し又は分散させることのできる無菌固体組成物の形態の滅菌剤を添合することによって滅菌し得る。
【０８６４】
活性成分の効果を延長させるため、皮下又は筋肉内注射からの活性成分の吸収を遅延させることが望ましい可能性もある。これは、難水溶性の結晶性又は非晶質物質の液体懸濁物を使用して達成し得る。このときキメラポリヌクレオチドの吸収速度はその溶解速度に依存し、ひいては結晶サイズ及び結晶形に依存し得る。或いは、非経口投与されるキメラポリヌクレオチドの遅延吸収は、キメラポリヌクレオチドを油媒体中に溶解し又は懸濁することによって達成し得る。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中にキメラポリヌクレオチドのマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって作製される。キメラポリヌクレオチドとポリマーの比及び利用する特定のポリマーの性質に応じてキメラポリヌクレオチド放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、限定はされないが、ポリ（オルトエステル）類及びポリ（無水物）類が挙げられる。デポー注射用製剤は、生体組織と適合性を有するリポソーム又はマイクロエマルション中にキメラポリヌクレオチドを閉じ込めることによって調製され得る。
【０８６５】
肺
肺送達に有用であるとおりの本明細書に記載される製剤はまた、医薬組成物の鼻腔内送達にも用いられ得る。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み且つ約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒子を有する粗末であってもよい。かかる製剤は、嗅ぐようにして、即ち鼻の近くに保持した粉末容器から鼻道を介して急速吸入することによって投与され得る。
【０８６６】
経鼻投与に好適な製剤は、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）に過ぎない程度から１００％（ｗ／ｗ）に至るまでの活性成分を含むことができ、本明細書に記載される追加的な成分の１つ以上を含み得る。医薬組成物は、頬側投与に好適な製剤として調製され、包装され、及び／又は販売され得る。かかる製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤及び／又はロゼンジの形態であってもよく、例えば約０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含有することができ、ここで残りは、口腔内で溶解可能な及び／又は分解性の組成物、及び任意選択で、本明細書に記載される追加的な成分の１つ以上を含み得る。或いは、頬側投与に好適な製剤は、活性成分を含む粉末及び／又はエアロゾル化及び／又は微粒化された溶液及び／又は懸濁液を含み得る。かかる粉末化、エアロゾル化、及び／又はエアロゾル化された製剤は、分散時に、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均粒径及び／又は液滴径を有することができ、さらに、本明細書に記載される任意の追加的な成分の１つ以上を含み得る。
【０８６７】
医薬品の製剤化及び／又は製造における一般論については、例えば、レミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（全体として参照により本明細書に援用される）を参照し得る。
【０８６８】
コーティング又はシェル
錠剤、糖衣剤、カプセル、丸薬、及び顆粒の固形投薬形態は、コーティング及びシェル、例えば腸溶性コーティング及び医薬品製剤化の技術分野において周知されている他のコ
ーティングで調製することができる。コーティング及びシェルは任意選択で乳白剤を含んでもよく、腸管の特定の部分において、任意選択で遅延する形で１つ又は複数の活性成分のみを放出するか、又はそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用し得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。同様のタイプの固体組成物が、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコール類などの賦形剤を使用する軟充填及び硬充填ゼラチンカプセル中の充填剤として用いられてもよい。
【０８６９】
複数用量及び反復用量投与
一部の実施形態では、本発明の化合物及び／又は組成物は２つ以上の用量で投与されてもよい（本明細書では「複数用量投与」と称される）。かかる用量は同じ構成成分を含んでもよく、又は前回の用量に含まれない構成成分を含んでもよい。かかる用量は前回の用量と比較して同じ質量及び／又は容積の構成成分を含んでもよく、又は変化した質量及び／又は容積の構成成分を含んでもよい。一部の実施形態では、複数用量投与には反復用量投与が含まれ得る。本明細書で使用されるとき、用語「反復用量投与」は、実質的に同じ質量及び／又は容積で提供される実質的に同じ構成成分を含む連続して又は反復用量レジメンの範囲内で投与される２つ以上の用量を指す。一部の実施形態では、対象は反復用量反応を示し得る。本明細書で使用されるとき、用語「反復用量反応」は、反復用量投与レジメンの範囲内で投与される別の用量の場合と異なる反復用量に対する対象の反応を指す。一部の実施形態では、かかる反応は、ｍＲＮＡを含む反復用量に応答したタンパク質の発現であり得る。かかる実施形態では、反復用量投与レジメンの範囲内で投与される別の用量と比較してタンパク質発現は上昇してもよく、又は反復用量投与レジメンの範囲内で投与される別の用量と比較してタンパク質発現は低下してもよい。タンパク質発現の変化は約１％〜約２０％、約５％〜約５０％、約１０％〜約６０％、約２５％〜約７５％、約４０％〜約１００％及び／又は少なくとも１００％であり得る。反復用量レジメンの一部として投与されるｍＲＮＡの発現の低下は（投与されたＲＮＡから翻訳されるタンパク質レベルが反復用量レジメンの範囲内の別の用量と比較して４０％より大きく低下する）、本明細書では「反復用量耐性」と称される。
【０８７０】
医薬組成物の特性
本明細書に記載される医薬組成物は、以下の特性の１つ以上によって特徴付けることができる。
【０８７１】
バイオアベイラビリティ
キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるとおりの送達剤と共に組成物に製剤化されると、本明細書に記載されるとおりの送達剤を含まない組成物と比較してバイオアベイラビリティの増加を呈し得る。本明細書で使用されるとき、用語「バイオアベイラビリティ」は、哺乳動物に投与された所与の量のキメラポリヌクレオチドの全身アベイラビリティを指す。バイオアベイラビリティは、哺乳動物への化合物の投与後に変化していない形態の化合物の曲線下面積（ＡＵＣ）又は最高血清若しくは血漿濃度（Ｃｍａｘ）を計測することによって評価することができる。ＡＵＣは、横座標（Ｘ軸）に沿った時間に対して化合物の血清又は血漿濃度を縦座標（Ｙ軸）に沿ってプロットした曲線の下にある面積の決定である。概して、特定の化合物のＡＵＣは、当業者に公知の方法及びＧ．Ｓ．バンカー（Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ）著、モダン・ファーマシューティクス、ドラッグズ・アンド・ザ・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第７２巻、マルセル・デッカー・ニューヨーク・インコーポレイテッド（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｉｎｃ．）、１９９６年（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるとおりの方法を用いて計算することができる。
【０８７２】
Ｃｍａｘ値は、哺乳動物への化合物の投与後に哺乳動物の血清又は血漿中で達成される化合物の最高濃度である。特定の化合物のＣｍａｘ値は、当業者に公知の方法を用いて計測することができる。語句「バイオアベイラビリティを増加させる」又は「薬物動態を改善する」とは、本明細書で使用されるとき、哺乳動物においてＡＵＣ、Ｃｍａｘ、又はＣｍｉｎとして計測される第１のキメラポリヌクレオチドの全身アベイラビリティが、本明細書に記載されるとおりの送達剤と共投与したとき、かかる同時投与が行われないときと比べて高いことを意味する。一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドのバイオアベイラビリティは、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％増加し得る。
【０８７３】
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドの液体製剤は様々な生体内半減期を有することができ、治療効果を生じさせるためには用量の調節が必要である。これに対処するため、本発明の一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド製剤は、反復投与の間にバイオアベイラビリティ及び／又は治療効果が向上するように設計され得る。かかる製剤はキメラポリヌクレオチドの持続放出を可能にし、及び／又はヌクレアーゼによるキメラポリヌクレオチド分解速度を低下させ得る。一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチド、水不混和性油性デポー、界面活性剤及び／又は共界面活性剤及び／又は共溶媒を含む懸濁製剤が提供される。油と界面活性剤とを組み合わせると、キメラポリヌクレオチドを含む懸濁製剤が可能となり得る。水不混和性デポー中のキメラポリヌクレオチドの送達を用いることにより、デポーから周囲の生理的環境へのキメラポリヌクレオチドの持続放出によってバイオアベイラビリティを改善し、及び／又はヌクレアーゼによるキメラポリヌクレオチド分解を防止し得る。
【０８７４】
一部の実施形態では、二価及び一価カチオンの組み合わせを含むカチオン性ナノ粒子がキメラポリヌクレオチドと共に製剤化されてもよい。かかるナノ粒子は、溶液中において所与の期間（例えば数時間、数日間等）で自発的に形成され得る。かかるナノ粒子は、二価カチオン単独の存在下又は一価カチオン単独の存在下では形成されない。カチオン性ナノ粒子中又はカチオン性ナノ粒子を含む１つ以上のデポー中のキメラポリヌクレオチドの送達は、長時間作用型デポーとして作用することにより、及び／又はヌクレアーゼによる分解速度を低下させることにより、キメラポリヌクレオチドバイオアベイラビリティを改善し得る。
【０８７５】
治療ウィンドウ
キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるとおりの送達剤と共に組成物に製剤化されるとき、本明細書に記載されるとおりの送達剤を含まない投与キメラポリヌクレオチド組成物の治療ウィンドウと比較して、投与キメラポリヌクレオチド組成物の治療ウィンドウの増加を呈し得る。本明細書で使用されるとき、「治療ウィンドウ」は、治療効果を生じさせる確率が高い血漿濃度の範囲、又は作用部位における治療上有効な物質のレベルの範囲を指す。一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドの治療ウィンドウは、本明細書に記載されるとおりの送達剤と共投与されるとき、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％増加し得る。
【０８７６】
分布容積
キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるとおりの送達剤と共に組成物に製剤化されるとき、本明細書に記載されるとおりの送達剤を含まない組成物と比べて分布容積（Ｖｄｉｓｔ）の改善、例えば低下又は標的化を呈し得る。分布容積（Ｖｄｉｓｔ）は、体内にある薬物の量を血液中又は血漿中の薬物濃度と関係付ける。本明細書で使用されるとき、用語「分布容積」は、体内において血液又は血漿と同じ濃度で薬物の総量を含むのに必要となる液量を指す：Ｖｄｉｓｔは、体内の薬物量／血中又は血漿中の薬物濃度に等しい。例えば、１０ｍｇ用量及び１０ｍｇ／Ｌの血漿濃度であれば、分布容積は１リットルとなる。分布容積は、薬物が血管外組織に存在する程度を反映する。大きい分布容積は、化合物が血漿タンパク質結合と比較して組織構成成分に結合し易い傾向を反映する。臨床状況では、Ｖｄｉｓｔは、定常状態濃度に達するための負荷用量の決定に使用することができる。一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドの分布容積は、本明細書に記載されるとおりの送達剤と共投与されるとき、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％低下し得る。
【０８７７】
生物学的効果
一実施形態では、動物に送達される修飾ｍＲＮＡの生物学的効果は、動物におけるタンパク質発現を分析することによって分類され得る。タンパク質発現は、本発明の修飾ｍＲＮＡを投与された哺乳動物から採取される生体試料を分析することにより決定し得る。一実施形態では、哺乳動物に投与された修飾ｍＲＮＡによってコードされる発現タンパク質は少なくとも５０ｐｇ／ｍｌが好ましいとされ得る。例えば、哺乳動物に送達された修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質について５０〜２００ｐｇ／ｍｌのタンパク質発現が哺乳動物におけるタンパク質の治療有効量と見なされ得る。
【０８７８】
質量分析法によるキメラポリヌクレオチド酸（ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｃｉｄｓ）の検出
質量分析法（ＭＳ）は、イオンに変換された後の分子に関する構造情報及び分子質量／濃度情報を提供し得る分析技法である。分子は初めにイオン化されて正電荷又は負電荷を獲得し、次に質量分析器中を通ってその質量／電荷（ｍ／ｚ）比に応じた種々の検出器領域に到達する。
【０８７９】
質量分析法は、さらなる分析のため分画試料をイオン化して荷電分子を生じさせるためのイオン源を備える質量分析計を使用して実施される。例えば試料のイオン化は、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）、光イオン化法、電子イオン化法、高速原子衝撃（ＦＡＢ）／液体二次イオン化法（ＬＳＩＭＳ）、マトリックス支援レーザ脱離／イオン化法（ＭＡＬＤＩ）、電界イオン化法、電界脱離、サーモスプレー／プラズマスプレーイオン化法、及びパーティクルビームイオン化法によって実施されてもよい。当業者は、イオン化方法の選択が、計測する分析物、試料のタイプ、検出器のタイプ、ポジティブモードかネガティブモードかの選択等に基づき決定され得ることを理解するであろう。
【０８８０】
試料がイオン化された後、それによって生じた正電荷又は負電荷イオンが分析され、質量電荷比（即ち、ｍ／ｚ）が決定される。質量電荷比の決定に好適な分析器としては、四重極分析器、イオントラップ分析器、及び飛行時間型分析器が挙げられる。イオンは、いくつかの検出モードを使用して検出され得る。例えば、選択イオンが（即ち、選択イオンモニタリング（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ；ＳＩＭ）モードを使用して）検出されてもよく、或いはイオンはスキャニングモード、例えば、多重反応モ
ニタリング（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ：ＭＲＭ）又は選択反応モニタリング（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ：ＳＲＭ）を使用して検出されてもよい。
【０８８１】
ペプチド標準の安定同位体標識希釈物と組み合わせた液体クロマトグラフィー−多重反応モニタリング（ＬＣ−ＭＳ／ＭＲＭ）は、タンパク質の確認に有効な方法であることが示されている（例えば、ケシシアン（Ｋｅｓｈｉｓｈｉａｎ）ら著、モレキュラー・アンド・セルラー・プロテオミクス（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）、２００９年、第８巻、ｐ．２３３９〜２３４９；クーン（Ｋｕｈｎ）ら著、クリニカル・ケミストリー（Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ）、２００９年、第５５巻、ｐ．１１０８〜１１１７；ロペス（Ｌｏｐｅｚ）ら著、クリニカル・ケミストリー（Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ）、２０１０年、第５６巻、ｐ．２８１〜２９０；これらの各々は、本明細書において全体として参照により援用される）。バイオマーカー発見研究で多く用いられる非標的質量分析法と異なり、標的ＭＳ方法は、機器の全分析能力を複合混合物中の数十個乃至数百個の選択ペプチドに集中させるペプチド配列ベースのＭＳモードである。検出及びフラグメンテーションを目的タンパク質由来のそれらのペプチドのみに制限することにより、発見モードのＭＳ方法と比較して感度及び再現性が劇的に向上する。タンパク質を質量分析法ベースで多重反応モニタリング（ＭＲＭ）により定量化するこの方法は、臨床試料の迅速で標的化された多重的なタンパク質発現プロファイリングによって、バイオマーカーの発見及び定量化に劇的に影響を及ぼす。
【０８８２】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡによってコードされる少なくとも１つのタンパク質を含有し得る生体試料は、ＭＲＭ−ＭＳ方法で分析されてもよい。生体試料の定量化は、さらに、限定はされないが、同位体で標識されたペプチド又はタンパク質を内部標準として含み得る。
【０８８３】
本発明によれば、生体試料は対象から得られた後、酵素消化に供され得る。本明細書で使用されるとき、用語「消化」は、バラバラにしてより短いペプチドにすることを意味する。本明細書で使用されるとき、語句「試料を処理してタンパク質を消化する」は、試料中のタンパク質が分解するような方法で試料を操作することを意味する。これらの酵素としては、限定はされないが、トリプシン、エンドプロテアーゼＧｌｕ−Ｃ及びキモトリプシンが挙げられる。一実施形態では、本発明の少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡによってコードされる少なくとも１つのタンパク質を含有し得る生体試料が、酵素を使用して消化され得る。
【０８８４】
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生体試料は、タンパク質に関してエレクトロスプレーイオン化法を用いて分析されてもよい。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）質量分析法（ＥＳＩＭＳ）は、電気的エネルギーを使用して溶液から気相へのイオンの移動を補助した後、イオンが質量分析法によって分析されるものである。試料は、当該技術分野において公知の方法を用いて分析され得る（例えば、ホー（Ｈｏ）ら著、クリニカル・バイオケミスト・レビュー（Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｒｅｖ．）、２００３年、第２４巻、第１号、ｐ．３〜１２；本明細書において全体として参照により援用される）。溶液中に含まれるイオン種は、荷電液滴の微細スプレーを分散させ、溶媒を蒸発させて荷電液滴からイオンを吐き出させ、高電荷液滴のミストを作成することにより気相に移される。高電荷液滴のミストは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ又は少なくとも４つの質量分析器、例えば、限定はされないが、四重極質量分析器を使用して分析され得る。さらに、質量分析方法は精製ステップを含み得る。非限定的な例として、第１の四重極が単一のｍ／ｚ比を選択するように設定されてもよく、従ってそれが異なるｍ／ｚ比を有する他の分子イオンをフィルタリングして除き得るため、ＭＳ分析前の複雑で時間のかかる試料精製手順を省くことができる
。
【０８８５】
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生体試料は、タンパク質に関してタンデムＥＳＩＭＳシステム（例えば、ＭＳ／ＭＳ）で分析されてもよい。非限定的な例として、液滴は、プロダクトスキャン（又はドータスキャン）、プリカーサスキャン（ペアレントスキャン）、ニュートラルロス又は多重反応モニタリングを使用して分析されてもよい。
【０８８６】
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生体試料は、マトリックス支援レーザ脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析法（ＭＡＬＤＩＭＳ）を使用して分析されてもよい。ＭＡＬＤＩは、タンパク質などの、大分子及び小分子の両方の非破壊気化及びイオン化を提供する。ＭＡＬＤＩ分析では、初めに分析物が大モル過剰のマトリックス化合物と共結晶化され、マトリックス化合物はまた、限定はされないが紫外線吸収弱有機酸も含み得る。ＭＡＬＤＩに使用されるマトリックスの非限定的な例は、α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸、３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシ桂皮酸及び２，５−ジヒドロキシ安息香酸である。分析物−マトリックス混合物のレーザ放射によってマトリックス及び分析物が気化し得る。レーザによって誘導される脱離は、インタクトな分析物の高いイオン収率をもたらし、化合物の高精度計測を可能にする。試料は当該技術分野において公知の方法を用いて分析されてもよい（例えば、ルイス（Ｌｅｗｉｓ）、ウェイ（Ｗｅｉ）及びシュウズダク（Ｓｉｕｚｄａｋ）著、エンサイクロペディア・オブ・アナリティカル・ケミストリー（Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第２０００巻、ｐ．５８８０〜５８９４；本明細書において全体として参照により援用される）。非限定的な例として、ＭＡＬＤＩ分析で使用される質量分析器には、直線飛行時間型（ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆｌｉｇｈｔ：ＴＯＦ）、ＴＯＦリフレクトロン型又はフーリエ変換型質量分析器が含まれ得る。
【０８８７】
一実施形態では、分析物−マトリックス混合物はドライドドロップレット法を用いて形成されてもよい。生物学的試料をマトリックスと混合して飽和マトリックス溶液が作成され、ここでマトリックス対試料比は約５０００：１である。次にこの飽和マトリックス溶液のアリコート（約０．５〜２．０ｕＬ）を乾燥させると、分析物−マトリックス混合物が形成される。
【０８８８】
一実施形態では、分析物−マトリックス混合物は薄層法を用いて形成されてもよい。初めにマトリックス均一膜が形成され、次に試料が加えられ、マトリックスによって吸収され得ることにより、分析物−マトリックス混合物が形成される。
【０８８９】
一実施形態では、分析物−マトリックス混合物は厚層法を用いて形成されてもよい。ニトロ−セルロースマトリックス添加剤を伴いマトリックス均一膜が形成される。一様なニトロ−セルロースマトリックス層が得られると、試料が加えられ、マトリックスに吸収されることにより、分析物−マトリックス混合物が形成される。
【０８９０】
一実施形態では、分析物−マトリックス混合物はサンドイッチ法を用いて形成されてもよい。マトリックス結晶の薄層が薄層法のとおりに調製され、続いてトリフルオロ酢酸水溶液、試料及びマトリックスの液滴が加えられる。次に試料がマトリックスに吸収されることにより、分析物−マトリックス混合物が形成される。
【０８９１】
Ｖ．本発明のキメラポリヌクレオチドの使用
本発明のキメラポリヌクレオチドは、好ましい実施形態において、免疫応答及び／若しくは分解経路などの有害な生体反応の回避又は逃避、発現の閾値の克服及び／又はタンパク質生産能力の向上、発現速度若しくは翻訳効率の改善、薬剤若しくはタンパク質半減期
及び／又はタンパク質濃度の改善、最適化されたタンパク質局在化を可能にすると共に、以下：組織中での安定性及び／又はクリアランス、受容体取込み及び／又は動態、組成物による細胞進入、翻訳機構への関与、分泌効率（適用可能であれば）、循環への進入可能性、及び／又は細胞の状態、機能及び／又は活性の調節の１つ又は複数を改善するように、設計される。
【０８９２】
治療薬
治療薬剤
本発明のキメラポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載する修飾核酸及び修飾ＲＮＡ、並びにそれらから翻訳されたタンパク質を治療又は予防薬剤として用いることができる。これらは、医療の分野での使用のために提供される。例えば、本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドを対象に投与することができ、ここで、キメラポリヌクレオチドは、インビボで翻訳されて、対象において治療又は予防用ポリペプチドを産生する。ヒト及び他の動物における疾患又は状態の診察、治療若しくは予防のための組成物、方法、キット、及び試薬が提供される。本発明の活性治療薬としては、キメラポリヌクレオチド、キメラポリヌクレオチドを含有する細胞、又はキメラポリヌクレオチドから翻訳されたポリペプチドが挙げられる。
【０８９３】
特定の実施形態では、抗体依存性細胞障害作用を誘導するタンパク質と一緒に哺乳動物対象の免疫を促進する１つ又は複数のタンパク質をコード化する翻訳可能な領域を含有する１つ又は複数のキメラポリヌクレオチドを含む併用療法が、本明細書において提供される。例えば、トラスツズマブ及び顆粒球コロニー形成因子（Ｇ−ＣＳＦ）をコード化する１つ又は複数の核酸を含有する治療薬が、本明細書において提供される。特に、かかる併用療法は、トラスツズマブに対して誘導された耐性を発生するＨｅｒ２＋乳癌患者において有用である。（例えば、アルベレヒト（Ａｌｂｒｅｃｈｔ）著、免疫療法（Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）、２（６）：ｐ．７９５〜８（２０１０年））。
【０８９４】
本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドを用いて、細胞集団中に組換えポリペプチドの翻訳を誘導する方法が、本明細書において提供される。かかる翻訳は、インビボ、エクスビボ、培養下、又はインビトロのいずれであってもよい。細胞集団を、少なくとも１つのヌクレオシド修飾と、組換えポリペプチドをコード化する翻訳可能領域とを有する核酸を含有する有効量の組成物と接触させる。核酸が細胞集団の１つ又は複数の細胞に局在化され、且つ組換えポリペプチドが、この核酸から細胞に翻訳されるような条件下で、集団を接触させる。
【０８９５】
組成物の「有効量」は、少なくとも部分的に、標的組織、標的細胞型、投与手段、核酸の物理的特徴（例えば、サイズ、及び修飾ヌクレオシドの範囲）、及び他の決定因子に基づいて提供される。一般に、組成物の有効量は、細胞中での効率的なタンパク質産生、好ましくは、対応する非修飾核酸含有の組成物より効率的なタンパク質産生をもたらす。効率増加は、細胞トランスフェクション（すなわち、核酸でトランスフェクトした細胞のパーセンテージ）の増加、核酸からのタンパク質翻訳の増加、核酸分解の減少（例えば、修飾核酸からのタンパク質翻訳の時間増加により示される）、又は宿主細胞の自然免疫応答の低減によって立証され得る。
【０８９６】
本発明の態様は、それを必要とする哺乳動物対象における組換えポリペプチドのインビボ翻訳を誘導する方法に関する。そこで、少なくとも１つの構造又は化学修飾と、組換えポリペプチドをコード化する翻訳可能領域とを有する核酸を含有する有効量の組成物を、本明細書に記載する送達方法を用いて対象に投与する。核酸は、この核酸が、対象の細胞に局在化され、組換えポリペプチドが、核酸から細胞に翻訳されるような条件下で提供される。核酸が局在化される細胞、又は細胞が存在する組織を、１回又は２回以上のラウン
ドの核酸投与によってターゲティングすることができる。
【０８９７】
特定の実施形態では、投与されたキメラポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドが翻訳される細胞、組織若しくは生物には実質的に存在しない機能活性を賦与する１つ又は複数のポリペプチドの産生を指令する。例えば、欠損した機能活性は、天然の酵素、構造、又は遺伝子調節活性であってよい。関連する実施形態において、投与されるキメラポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドが翻訳される細胞に存在するが、実質的に欠損した機能活性を（例えば、相乗的に）増大する１つ又は複数のポリペプチドの産生を指令する。
【０８９８】
他の実施形態では、投与されるキメラポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドが翻訳される細胞において実質的に存在しないポリペプチド（又は複数のポリペプチド）に代わる１つ又は複数の組換えポリペプチドの産生を指令する。かかる非存在は、コード化遺伝子又はその調節経路の遺伝子突然変異によるものと考えられる。一部の実施形態では、組換えポリペプチドは、細胞中の内在性タンパク質のレベルを望ましいレベルまで増加し、かかる増加によって、内在性タンパク質のレベルは、正常以下のレベルから正常レベルに、又は正常レベルから正常を上回るレベルに到達させ得る。
【０８９９】
或いは、組換えポリペプチドは、細胞中、細胞の表面上の内在性タンパク質、又は細胞から分泌される内在性タンパク質の活性に拮抗するように機能する。通常、内在性タンパク質の活性は、対象に対して有害であり；これは、例えば、改変された活性又は局在化を引き起こす内在性タンパク質の突然変異に起因する。さらに、組換えポリペプチドは、細胞中、細胞の表面上の生体部分、又は細胞から分泌される生体部分の活性に、直接又は間接的に拮抗する。拮抗される生体部分の例として、脂質（例えば、コレステロール）、リポタンパク質（例えば、低密度リポタンパク質）、核酸、炭水化物、志賀毒素及び破傷風毒素などのタンパク質毒素、又はボツリヌス、コレラ及びジフテリア毒素などの小分子毒素が挙げられる。さらに、拮抗される生体分子は、細胞傷害又は静細胞活性などの望ましくない活性を呈示する内在性タンパク質であってもよい。
【０９００】
本明細書に記載する組換えタンパク質は、細胞内、潜在的には核などの特定のコンパートメント内での局在化のために操作してもよく、或いは、細胞からの分泌、又は細胞の形質膜への輸送のために操作する。
【０９０１】
一部の実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡ及びそれらのコード化ポリペプチドは、多様な疾患、障害、及び／又は状態のいずれの治療にも用いることができ、かかる疾患、障害、及び／又は状態は、限定はされないが、以下に挙げるものの１つ又は複数を含む：自己免疫障害（例えば、糖尿病、狼瘡、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ）；炎症性障害（例えば、関節炎、骨盤内炎症性疾患）；感染症（例えば、ウイルス感染症（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＲＳＶ）、細菌感染症、真菌感染症、敗血症）；神経障害（例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、自閉症；デュシェンヌ筋ジストロフィー）；心血管障害（例えば、動脈硬化、高コレステロール血症、血栓症、凝固障害、加齢黄斑変性などの血管新生性障害）；増殖障害（例えば、癌、良性新形成）；呼吸器障害（例えば、慢性閉塞性肺疾患）；消化器障害（例えば、炎症性腸疾患、潰瘍）；筋骨格障害（例えば、線維筋痛症、関節炎）；内分泌、代謝、及び栄養障害（例えば、糖尿病、骨粗鬆症）；泌尿器障害（例えば、腎疾患）；精神障害（例えば、抑うつ、統合失調症）；皮膚障害（例えば、創傷、湿疹）；血液及びリンパ系障害（例えば、貧血、血友病）など。
【０９０２】
機能障害性又は異常なタンパク質活性を特徴とする疾患としては、嚢胞性線維症、鎌状赤血球性貧血、表皮水疱症、筋萎縮性側索硬化症、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症が挙げられる。本発明は、本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドを含有する核酸又は細胞ベースの治療薬を導入することにより、対象のかかる状態又は疾患
を治療する方法であって、キメラポリヌクレオチドが、対象の細胞に存在する異常タンパク質活性に拮抗するか、或いはこれを克服する方法を提供する。機能障害性タンパク質の具体的な例は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子のミスセンス突然変異体であり、これは、ＣＦＴＲタンパク質の機能障害性タンパク質変異体を産生して、嚢胞性線維症を引き起こす。
【０９０３】
タンパク質活性の欠損（又は適正な（正常若しくは生理学的タンパク質機能が起こらないような実質的低減）を特徴とする疾患として、嚢胞性線維症、ニーマン・ピック病Ｃ型、βサラセミア・メジャー、デュシェンヌ筋ジストロフィー、ハーラー症候群、ハンター症候群、及び血友病Ａが挙げられる。かかるタンパク質は、存在しないか、又はほぼ非機能性である。本発明は、本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドを含有する核酸又は細胞ベースの治療薬を導入することにより、対象のかかる状態又は疾患を治療する方法であって、キメラポリヌクレオチドが、対象の標的細胞から欠損するタンパク質活性を代替するタンパク質をコード化する方法を提供する。機能障害性タンパク質の具体的な例は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子のナンセンス突然変異体であり、これは、ＣＦＴＲタンパク質の非機能性タンパク質変異体を産生して、嚢胞性線維症を引き起こす。
【０９０４】
従って、機能性ＣＦＴＲポリペプチドをコード化する翻訳可能領域を有するキメラポリヌクレオチドと対象の細胞を、有効量のＣＴＦＲポリペプチドが細胞中に存在するような条件下で、接触させることにより、哺乳動物対象の嚢胞性線維症を治療する方法が提供される。好ましい標的細胞は、上皮、内皮及び中皮細胞、例えば、肺であり、投与方法は、標的組織を考慮して決定する；すなわち、肺への送達の場合には、ＲＮＡ分子を吸入による投与のために製剤化する。
【０９０５】
別の実施形態では、本発明は、近年、ゲノム研究により特性決定されたタンパク質であるソーティリン（Ｓｏｒｔｉｌｉｎ）をコード化する修飾ｍＲＮＡ分子を、患者の細胞集団に導入することによって、対象の高脂血症を改善することにより、対象の高脂血症を治療する方法を提供する。ＳＯＲＴ１遺伝子は、ソーティリン（Ｓｏｒｔｉｌｉｎ）と呼ばれるトランスゴルジネットワーク（ＴＧＮ）膜貫通タンパク質をコード化する。遺伝学研究により、５人の個体のうち１人が、ＳＯＲＴ１遺伝子の１Ｐ１３遺伝子座に一塩基多型、ｒｓ１２７４０３７４を有し、これは上記個体が低レベルの低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）及び超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）を有しやすくする。約３０％の人に存在するマイナー対立遺伝子は１コピーにつき、ＬＤＬコレステロールを８ｍｇ／ｄＬ改変するが、集団の約５％に存在する２コピーのマイナー対立遺伝子は、ＬＤＬコレステロールを１６ｍｇ／ｄＬ低下させる。また、マイナー対立遺伝子の保有者は、心筋梗塞のリスクが４０％低いことも判明している。マウスでの機能性インビボ研究は、マウス肝臓組織中のＳＯＲＴ１の過剰発現により、８０％もの低下という有意に低いＬＤＬ−コレステロールレベルを招き、ＳＯＲＴ１のサイレンシングによって、ＬＤＬコレステロールが、約２００％増加したことを示している（ムスヌル  Ｋ（Ｍｕｓｕｎｕｒｕ  Ｋ）ら著、１Ｐ１３コレステロール遺伝子座でのＳＯＲＴ１により非コード変異体から表現型へ（Ｆｒｏｍ
ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ  ｖａｒｉａｎｔ  ｔｏ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｖｉａ  ＳＯＲＴ１  ａｔ  ｔｈｅ  １Ｐ１３  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｏｃｕｓ）、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６６巻、ｐ．７１４〜７２１）。
【０９０６】
別の実施形態では、造血障害、心血管疾患、腫瘍、嚢胞性線維症、神経疾患、先天性代謝異常、皮膚及び全身障害、及び盲を治療する方法を提供する。これらの具体的疾患を治療するための分子標的のアイデンティティが記載されている（テンプレトン（Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ）編、遺伝子及び細胞療法：治療機構及び戦略（Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒａｔ
ｅｇｉｅｓ）、第３版、フロリダ州ボータラトーン（Ｂｏｔａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ）、ＣＲＣプレス（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）；本明細書において全体として参照により援用される）。
【０９０７】
感染症及び／又は敗血症を発症するリスクのある対象において感染症及び／又は敗血症を予防する方法が、本明細書に記載され、この方法は、抗微生物ポリペプチド（例えば、抗細菌ポリペプチド）、又は部分的若しくは完全にプロセシングされたその形態をコード化するキメラポリヌクレオチド前駆体を含む組成物を、感染症及び／又は敗血症を予防するのに十分な量で、そのような予防を必要とする対象に投与するステップを含む。特定の実施形態では、感染症及び／又は敗血症を発症するリスクのある対象は、癌患者であってよい。特定の実施形態では、癌患者は、前処置レジメンを受けていてもよい。一部の実施形態では、前処置レジメンは、限定はされないが、化学療法、放射線療法、又はその両方を含んでもよい。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、プロテインＣ、そのチモーゲン又はプレプロタンパク質、プロテインＣの活性化形態（ＡＰＣ）若しくはプロテインＣの変異体（当該技術分野において公知である）をコード化することができる。キメラポリヌクレオチドは、化学修飾し、細胞に送達してもよい。本発明の化学修飾ｍＲＮＡ内でコード化され得るポリペプチドの非限定的な例として、米国特許第７，２２６，９９９号明細書；同第７，４９８，３０５号明細書；同第６，６３０，１３８号明細書に教示されているものが挙げられる（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。上記の特許は、プロテインＣ様分子、変異体及び誘導体を教示しており、そのいずれを本発明の化学修飾分子内にコード化してもよい。
【０９０８】
本明細書にはさらに、対象の感染症及び／又は敗血症を治療する方法が記載され、この方法は、抗微生物ポリペプチド（例えば、抗細菌ポリペプチド）、例えば、本明細書に記載する抗微生物ポリペプチド、又は部分的若しくは完全にプロセシングされたその形態をコード化するキメラポリヌクレオチド前駆体を含む組成物を、感染症及び／又は敗血症を治療するのに十分な量で、そのような治療を必要とする対象に投与するステップを含む。特定の実施形態では、治療を必要とする対象は、癌患者である。特定の実施形態では、癌患者は、前処置レジメンを受けている。一部の実施形態では、前処置レジメンは、限定はされないが、化学療法、放射線療法、又はその両方を含んでもよい。
【０９０９】
特定の実施形態では、対象は、急性又は慢性微生物感染（例えば、細菌感染）を呈示する者でよい。特定の実施形態では、対象は、特定の療法を受けたことがあってもよく、又は受けていてもよい。特定の実施形態では、上記の療法は、限定はされないが、放射線療法、化学療法、ステロイド、紫外線照射、又はこれらの組み合わせを含み得る。特定の実施形態では、患者は、細小血管障害に罹患する者でであってもよい。一部の実施形態では、細小血管障害は、糖尿病であってもよい。特定の実施形態では、患者は、創傷を有してもよい。一部の実施形態では、創傷は、潰瘍であってもよい。具体的な実施形態では、創傷は、糖尿病性足部潰瘍であってもよい。特定の実施形態では、対象は、１つ又は複数の熱傷を有していてもよい。特定の実施形態では、投与は、局所又は全身のいずれであってもよい。特定の実施形態では、投与は、皮下であってよい。特定の実施形態では、投与は、静脈内であってもよい。特定の実施形態では、投与は、経口であってもよい。特定の実施形態では、投与は、局所であってもよい。特定の実施形態では、投与は、吸入によるものであってもよい。特定の実施形態では、投与は、直腸内であってもよい。特定の実施形態では、投与は、膣内であってもよい。
【０９１０】
本開示の他の態様は、キメラポリヌクレオチドを含む細胞の哺乳動物対象への移植に関する。哺乳動物対象への細胞の投与は、当業者には公知であり、限定はされないが、局所移植（例えば、局部若しくは皮下投与）、器官送達又は全身注射（例えば、静脈内注射若しくは吸入）、並びに薬学的に許容される担体を用いた細胞の製剤化が挙げられる。キメ
ラポリヌクレオチドを含有するかかる組成物は、筋肉内、経動脈、腹腔内、静脈内、鼻内、皮下、内視鏡、経皮、又は髄腔内投与のために製剤化することができる。一部の実施形態では、組成物は、徐放のために製剤化してもよい。
【０９１１】
治療薬を投与することができる対象は、疾患、障害、若しくは有害な状態に罹患しているか、又はそれを発症するリスクがある者であってもよい。これらの基準に基づいて患者を識別、診断、及び分類する方法が提供され、かかる方法は、臨床診断、バイオマーカレベル、ゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）、及び当該技術分野で公知の他の方法を含み得る。
【０９１２】
創傷の管理
本発明のキメラポリヌクレオチドは、創傷、例えば、治癒の遅れを示す創傷の治療に用いてもよい。創傷の治療を管理するために、キメラポリヌクレオチドの投与を含む方法が本明細書に記載される。本明細書に記載する方法は、キメラポリヌクレオチドの投与前、投与と同時、又は投与後のいずれかに、実施されるステップをさらに含む。例えば、創傷治癒を促進すると共に、できれば創傷閉鎖を達成するために、創面環境（ｗｏｕｎｄ  ｂｅｄ）を清浄にし、調整する必要がある。創傷治癒を促進すると共に、創傷閉鎖を達成するために、いくつかの戦略を用いることができ、そのようなものとして、限定はされないが、以下が挙げられる：（ｉ）創面切除、任意選択で繰り返し行う、鋭い創面切除（創傷からの死滅若しくは感染組織の外科的除去）、任意選択で、壊死組織を除去するための化学創面切除剤（例えば、酵素）を含む；（ｉｉ）湿潤した温環境を創傷に付与し、組織修復及び治癒を促進するための創傷ドレッシング。
【０９１３】
創傷ドレッシングの製剤化に用いられる材料の例として、限定はされないが、ヒドロゲル（例えば、アクアソーブ（ＡＱＵＡＳＯＲＢ）（登録商標）；デュオダーム（ＤＵＯＤＥＲＭ）（登録商標））、ヒドロコロイド（例えば、アクアセル（ＡＱＵＡＣＥＬ）（登録商標）；コムフィール（ＣＯＭＦＥＥＬ）（登録商標））、フォーム（例えば、リオフォーム（ＬＹＯＦＯＡＭ）（登録商標）；スピロソーブ（ＳＰＹＲＯＳＯＲＢ）（登録商標））、及びアルギネート（アルギサイト（ＡＬＧＩＳＩＴＥ）（登録商標）；キュラソーブ（ＣＵＲＡＳＯＲＢ）（登録商標））；（ｉｉｉ）細胞分裂及び増殖を刺激すると共に、創傷治癒を促進する別の増殖因子、例えば、ベカプレルミン（レグラネクスゲル（ＲＥＧＲＡＮＥＸ  ＧＥＬ）（登録商標））、神経障害性足潰瘍の治療のためにＦＤＡにより承認されているヒト組換え血漿由来増殖因子；（ｉｖ）軟組織創傷被覆が挙げられ、清浄な非治癒創傷の被覆を得るために、皮膚移植片が必要な場合もある。軟組織被覆に用いることができる皮膚移植片の例として、限定はされないが、以下：オートロガス皮膚移植片、死体の皮膚移植片、遺伝子組み換えによる代用皮膚（例えば、アプリグラフ（ＡＰＬＩＧＲＡＦ）（登録商標）；ダーマグラフト（ＤＥＲＭＡＧＲＡＦＴ）（登録商標））が挙げられる。
【０９１４】
特定の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、ヒドロゲル（例えば、アクアソーブ（ＡＱＵＡＳＯＲＢ）（登録商標）；デュオダーム（ＤＵＯＤＥＲＭ）（登録商標））、ヒドロコロイド（例えば、アクアセル（ＡＱＵＡＣＥＬ）（登録商標）；コムフィール（ＣＯＭＦＥＥＬ）（登録商標））、フォーム（例えば、リオフォーム（ＬＹＯＦＯＡＭ）（登録商標）；スピロソーブ（ＳＰＹＲＯＳＯＲＢ）（登録商標））、及び／又はアルギネート（アルギサイト（ＡＬＧＩＳＩＴＥ）（登録商標）；キュラソーブ（ＣＵＲＡＳＯＲＢ）（登録商標））をさらに含んでもよい。特定の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、限定はされないが、オートロガス皮膚移植片、死体の皮膚移植片、遺伝子組み換えによる代用皮膚（例えば、アプリグラフ（ＡＰＬＩＧＲＡＦ）（登録商標）；ダーマグラフト（ＤＥＲＭＡＧＲＡＦＴ）（登録商標））などの皮膚移植片と一緒に用いてもよい。一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、創傷ドレッシング
製剤及び／又は皮膚移植片と一緒に適用してもよく、或いは、限定はされないが、浸漬又は噴霧などの方法により、個別に適用してもよい。
【０９１５】
一部の実施形態では、創傷管理のための組成物は、抗微生物ポリペプチド（例えば、抗細菌ポリペプチド）及び／又は抗ウイルスポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを含んでもよい。抗微生物ポリペプチドの前駆体又は一部若しくは全部がプロセシングされた形態をコード化してもよい。組成物は、包帯（例えば、絆創膏）を用いた投与のために製剤化してもよい。抗微生物ポリペプチド及び／又は抗ウイルスポリペプチドをドレッシング組成物と混合してもよく、或いは、例えば、浸漬若しくは噴霧により、個別に適用してもよい。
【０９１６】
抗体の生成
本発明の一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、抗体及びそのような抗体の断片をコード化することができる。これらは、本明細書に記載する方法のいずれか１つによって生成することができる。抗体は、異なるサブクラス又はアイソタイプの免疫グロブリン、例えば、限定はされないが、ＩｇＡ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＭのいずれか、又は他のサブクラスのいずれであってもよい。本発明に従い調製することができる抗体分子及び断片の例として、限定はされないが、免疫グロブリン分子、実質的にインタクトな免疫グロブリン分子、及びパラトープを含有し得る免疫グロブリン分子の部分が挙げられる。かかるパラトープを含有する抗体の部分として、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ｖ）及び当該技術分野で公知の部分が挙げられる。
【０９１７】
本発明のポリヌクレオチドは、参照ポリペプチド配列とある程度の同一性を有するか、又は参照ポリペプチド配列との類似又は非類似結合特徴を有し得る変異体抗体ポリペプチドをコード化することができる。
【０９１８】
本発明の方法により得られる抗体は、免疫動物から得られる非ヒト抗体由来可変領域配列と、ヒト抗体由来定常領域配列とを含むキメラ抗体であってもよい。さらに、これらは、免疫動物から得られる非ヒト抗体の相補的決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト抗体から得られるフレームワーク領域（ＦＲ）及び定常領域とを含むヒト化抗体であってもよい。別の実施形態では、本明細書に記載する方法は、細胞培養方法において抗体タンパク質産物収率を高める上で有用となり得る。
【０９１９】
感染症の管理
一実施形態では、抗微生物ポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを投与することにより、患者の微生物感染（例えば、細菌感染）及び／又は微生物若しくはウイルス感染に関連する疾患、障害、若しくは状態、又はその症状を治療又は予防する方法が提供される。投与は、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤）、例えば、本明細書に記載する抗微生物ポリペプチド又は小分子抗微生物化合物と組み合わせてもよい。抗微生物剤として、限定はされないが、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗原生動物剤、抗寄生体剤、及び抗プリオン剤が挙げられる。
【０９２０】
薬剤は、同時に、例えば、組み合わせた単位用量で投与する（例えば、両方の薬剤の同時送達を行う）ことができる。薬剤は、指定の時間間隔、例えば、限定はされないが、数分、数時間、数日若しくは数週間の間隔でも投与することができる。一般に、これらの薬剤は、対象において、同時に生物活性であり得る、例えば、検出可能であり得る。一部の実施形態では、薬剤は、ほぼ同時に投与してもよく、例えば、２つの単位用量を同時に投与するか、２つの薬剤を合わせた単位用量で投与してもよい。別の実施形態では、薬剤は、個別の単位用量で送達してもよい。薬剤は、任意の順で、又は２つ以上の薬剤を含む１つ又は複数の製剤として投与してもよい。好ましい実施形態では、薬剤の１つ（例えば、
第１薬剤）の少なくとも１回の投与を、別の薬剤（例えば、第２薬剤）投与の数分、１、２、３、若しくは４時間、又は１若しくは２日以内に実施してよい。一部の実施形態では、併用によって、相乗作用結果、例えば、相加作用結果より高い、例えば、相加作用結果より少なくとも２５、５０、７５、１００、２００、３００、４００、若しくは５００％高い結果を達成することができる。
【０９２１】
細菌感染に関連する状態
細菌感染に関連すると考えられる疾患、障害、又は状態は、以下に挙げるものの１つ又は複数を含むが、これらに限定されるわけではない：膿瘍、アクチノミセス症、急性前立腺炎、エロモナス・ハイドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、一年生ライグラス中毒、炭疽病、細菌性紫斑病、菌血症、細菌性胃腸炎、細菌性髄膜炎、細菌性肺炎、細菌性膣炎、細菌関連性皮膚症状、バルトネラ症、ＢＣＧ性腫瘍（ＢＣＧ−ｏｍａ）、ボトリオミセス症、ボツリヌス中毒症、ブラジル紫斑熱、ブロディ骨膿瘍、ブルセラ症、ブルーリ潰瘍、カンピロバクター症、カリエス、キャリオン病、猫ひっかき病（ｃａｔ  ｓｃｒａｔｃｈ  ｄｉｓｅａｓｅ）、蜂窩織炎、クラミジア感染症、コレラ、慢性細菌性前立腺炎、慢性再発性多巣性骨髄炎、クロストリジウム性壊死性腸炎、歯周−歯内複合病変、牛肺疫、ジフテリア、ジフテリア性口内炎、エーリキア症、丹毒、喉頭蓋炎、丹毒、フィッツ・ヒュー・カーティス症候群、ノミ媒介紅斑熱、腐蹄（感染性足皮膚炎）、ガレーの硬化性骨髄炎、淋病、鼠径部肉芽腫、ヒト顆粒球アナプラズマ症、ヒト単球向性エールリヒア症、百日咳、膿痂疹、遅発性先天性梅毒性眼病、レジオネラ症、レミエール症候群、らい病（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、リンパ節炎、類鼻疽、髄膜炎菌感染症、髄膜炎菌性敗血症、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）（ＭＡＩ）、マイコプラズマ肺炎、壊死性筋膜炎、ノカルジア症、ノーマ（水癌若しくは壊疽性口内炎）、臍炎、眼窩蜂巣炎、骨髄炎、脾臓摘出後重症感染症（ＯＰＳＩ）、ヒツジブルセラ症、パスツレラ症、眼窩周囲蜂巣炎、百日咳（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（百日咳（ｗｈｏｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｇｈ））、ペスト、肺炎球菌性肺炎、ポット病、直腸炎、緑膿菌感染症、オウム病、膿血症、化膿性筋炎、Ｑ熱、回帰熱（ｒｅｌａｐｓｉｎｇ  ｆｅｖｅｒ）（回帰熱（ｔｙｐｈｉｎｉａ））、リウマチ熱、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、リケッチア症、サルモネラ症、猩紅熱、敗血症、セラチア感染症、細菌性赤痢、南部ダニ紅斑病、ブドウ球菌性熱傷様皮膚症候群、連鎖球菌咽頭炎、プール肉芽腫、ブタブルセラ症、梅毒、梅毒性大動脈炎、破傷風、毒素性ショック症候群（ＴＳＳ）、トラコーマ、塹壕熱、熱帯潰瘍、結核、野兎病、腸チフス、チフス、尿生器結核症、尿路感染症、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌感染症、ウォーターハウス・フリードリヒセン症候群、偽結核（エルシニア）症、及びエルシニア症。細菌感染に関する他の疾患、障害、及び／又は状態は、例えば、以下を含み得る：アルツハイマー病、神経性無食欲症、喘息、アテローム性硬化症、注意欠陥・多動性障害、自閉症、自己免疫疾患、双極性障害、癌（例えば、大腸癌、膀胱癌、肺癌、膵臓癌、及び胃癌）、慢性疲労症候群、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、冠動脈性心疾患、痴呆、抑うつ、ギランバレー症候群、代謝症候群、多発性硬化症、心筋梗塞、肥満、強迫性障害、パニック障害、乾癬、関節リウマチ、類肉腫症、統合失調症、発作、閉塞性血栓性血管炎（バージャー病）、及びトゥレット症候群。
【０９２２】
細菌病原体
本明細書に記載する細菌は、グラム陽性菌又はグラム陰性菌であってよい。細菌病原体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ
ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、ウシ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ）、ブル
セラ・カニス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｃａｎｉｓ）、ヤギ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）、ブタ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、腸管毒素原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＴＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｅ．ｃｏｌｉ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、レプトスピラ・インテロガンス（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒａｌｉｓ）、らい菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｅｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｓｐｓ．）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、斑点熱リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、腸チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｅｎｓ）、Ｂ群赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、Ｄ群赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・サプロフィチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ）、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、及びエルシニア・ペスティス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）。また、細菌病原体は、耐性菌感染症を引き起こす細菌病原体、例えば、以下のものも含み得る：クリンダマイシン耐性クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、フルオロキノロン耐性クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）、多剤耐性エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、多剤耐性エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、多剤耐性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、多剤耐性アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃ
ｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、及びバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＶＲＳＡ）。
【０９２３】
抗生物質併用
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡは、１種又は複数の抗生物質と一緒に投与してもよい。かかる抗生物質として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アクニロクス（Ａｋｎｉｌｏｘ）、アムビゾーム（Ａｍｂｉｓｏｍｅ）、アモキシシリン（Ａｍｏｘｙｃｉｌｌｉｎ）、アンピシリン（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、オーグメンチン（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ）、アベロックス（Ａｖｅｌｏｘ）、アジスロマイシン（Ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、バクトロバン（Ｂａｃｔｒｏｂａｎ）、ベタジン（Ｂｅｔａｄｉｎｅ）、ベトノベート（Ｂｅｔｎｏｖａｔｅ）、ブレファミド（Ｂｌｅｐｈａｍｉｄｅ）、セファクロル（Ｃｅｆａｃｌｏｒ）、セファドロキシル（Ｃｅｆａｄｒｏｘｉｌ）、セフジニル（Ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、セフェピム（Ｃｅｆｅｐｉｍｅ）、セフィックス（Ｃｅｆｉｘ）、セフィキシム（Ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セフォキシチン（Ｃｅｆｏｘｉｔｉｎ）、セフポドキシム（Ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ）、セフプロジル（Ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフロキシム（Ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ）、セフジル（Ｃｅｆｚｉｌ）、セファレキシン（Ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、セファゾリン（Ｃｅｐｈａｚｏｌｉｎ）、セプタズ（Ｃｅｐｔａｚ）、クロラムフェニコール（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、クロルヘキシジン（Ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ）、クロロマイセチン（Ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）、クロルシグ（Ｃｈｌｏｒｓｉｇ）、シプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、クラリスロマイシン（Ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、クリンダゲル（Ｃｌｉｎｄａｇｅｌ）、クリンダマイシン（Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、クリンダテック（Ｃｌｉｎｄａｔｅｃｈ）、クロキサシリン（Ｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、コリスチン（Ｃｏｌｉｓｔｉｎ）、コ−トリモキサゾール（Ｃｏ−ｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、デメクロサイクリン（Ｄｅｍｅｃｌｏｃｙｃｌｉｎｅ）、ジクロシル（Ｄｉｃｌｏｃｉｌ）、ジクロキサシリン（Ｄｉｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、ドキシシクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、デュリセフ（Ｄｕｒｉｃｅｆ）、エリスロマイシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、フラマジン（Ｆｌａｍａｚｉｎｅ）、フロキシン（Ｆｌｏｘｉｎ）、フラマイセチン（Ｆｒａｍｙｃｅｔｉｎ）、フシジン（Ｆｕｃｉｄｉｎ）、フラダンチン（Ｆｕｒａｄａｎｔｉｎ）、フシジック（Ｆｕｓｉｄｉｃ）、ガチフロキサシン（Ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、ゲミフロキサシン（Ｇｅｍｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、ゲミフロキサシン（Ｇｅｍｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、イロソン（Ｉｌｏｓｏｎｅ）、ヨウ素（Ｉｏｄｉｎｅ）、レバキン（Ｌｅｖａｑｕｉｎ）、レボフロキサシン（Ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、ロメフロキサシン（Ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）、マキサキン（Ｍａｘａｑｕｉｎ）、メホキシン（Ｍｅｆｏｘｉｎ）、メロネム（Ｍｅｒｏｎｅｍ）、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ）、モキシフロキサシン（Ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、ミアムブトール（Ｍｙａｍｂｕｔｏｌ）、ミコスタチン（Ｍｙｃｏｓｔａｔｉｎ）、ネオスポリン（Ｎｅｏｓｐｏｒｉｎ）、ネトロマイシン（Ｎｅｔｒｏｍｙｃｉｎ）、ニトロフラントイン（Ｎｉｔｒｏｆｕｒａｎｔｏｉｎ）、ノルフロキサシン（Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、ノリレト（Ｎｏｒｉｌｅｔ）、オフロキサシン（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、オムニセフ（Ｏｍｎｉｃｅｆ）、オスパモクス（Ｏｓｐａｍｏｘ）、オキシテトラサイクリン（Ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、パラキシン（Ｐａｒａｘｉｎ）、ペニシリン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）、ニューモバクス（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ）、ポリファクス（Ｐｏｌｙｆａｘ）、ポビドン（Ｐｏｖｉｄｏｎｅ）、リファジン（Ｒｉｆａｄｉｎ）、リファンピン（Ｒｉｆａｍｐｉｎ）、リファキシミン（Ｒｉｆａｘｉｍｉｎ）、リフィナ（Ｒｉｆｉｎａｈ）、リマクタン（Ｒｉｍａｃｔａｎｅ）、ロセフィン（Ｒｏｃｅｐｈｉｎ）、ロキシスロマイシン（Ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、セロマイシン（Ｓｅｒｏｍｙｃｉｎ）、ソフラマイシン（Ｓｏｆｒａｍｙｃｉｎ）、スパルフロキサシン（Ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、スタフレックス（Ｓｔａｐｈｌｅｘ）、タルゴシド（Ｔａｒｇｏｃｉｄ）、テトラサイクリン（Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、テトラドックス（Ｔｅｔｒａｄｏｘ）、テトラリサール（Ｔｅｔｒａｌｙｓａｌ）、トブラマ
イシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、トブラマイシン（Ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、トレカトル（Ｔｒｅｃａｔｏｒ）、チガシル（Ｔｙｇａｃｉｌ）、バンコシン（Ｖａｎｃｏｃｉｎ）、ベロセフ（Ｖｅｌｏｓｅｆ）、ビブラマイシン（Ｖｉｂｒａｍｙｃｉｎ）、キシファキサン（Ｘｉｆａｘａｎ）、ザガム（Ｚａｇａｍ）、ジトロテク（Ｚｉｔｒｏｔｅｋ）、ゾデルム（Ｚｏｄｅｒｍ）、ザイマー（Ｚｙｍａｒ）、及びザイボックス（Ｚｙｖｏｘ）。
【０９２４】
抗細菌剤
例示的抗細菌剤として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アミノグリコシド（例えば、アミカシン（アミキン（ＡＭＩＫＩＮ）（登録商標））、ゲンタミシン（ガラマイシン（ＧＡＲＡＭＹＣＩＮ）（登録商標））、カナマイシン（カントレックス（ＫＡＮＴＲＥＸ）（登録商標））、ネオマイシン（マイシフラジン（ＭＹＣＩＦＲＡＤＩＮ）（登録商標））、ネチルミシン（ネトロマイシン（ＮＥＴＲＯＭＹＣＩＮ）（登録商標））、トブラマイシン（ネブシン（ＮＥＢＣＩＮ）（登録商標））、パロモマイシン（Ｐａｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）（フマチン（ＨＵＭＡＴＩＮ）（登録商標）））、アンサマイシン（例えば、ゲルタナマイシン、ヘルビマイシン）、カルバセフェム（例えば、ロラカルベフ（ロラビッド（ＬＯＲＡＢＩＤ）（登録商標））、カルバペネム（Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）（例えば、エルタペネム（インバンズ（ＩＮＶＡＮＺ）（登録商標））、ドリペネム（ドリバックス（ＤＯＲＩＢＡＸ）（登録商標））、イミペネム／シラスタチン（プリマキシン（ＰＲＩＭＡＸＩＮ）（登録商標））、メロペネム（メレム（ＭＥＲＲＥＭ）（登録商標））、セファロスポリン（第１世代）（例えば、セファドロキシル（デュリセフ（ＤＵＲＩＣＥＦ）（登録商標））、セファゾリン（アンセフ（ＡＮＣＥＦ）（登録商標））、セファロチン又はセファロシン（ケフリン（ＫＥＦＬＩＮ）（登録商標））、セファレキシン（ケフレクス（ＫＥＦＬＥＸ）（登録商標））、セファロスポリン（第２世代）（例えば、セファクロル（セクロル（ＣＥＣＬＯＲ）（登録商標））、セファマンドール（マンドール（ＭＡＮＤＯＬ）（登録商標））、セフォキシチン（メフォキシン（ＭＥＦＯＸＩＮ）（登録商標））、セフプロジル（セフジル（ＣＥＦＺＩＬ）（登録商標））、セフロキシム（セフチン（ＣＥＦＴＩＮ）（登録商標）、ジンナト（ＺＩＮＮＡＴ）（登録商標）））、セファロスポリン（第３世代）（例えば、セフィキシム（スプラクス（登録商標））、セフジニル（オムニセフ（ＯＭＮＩＣＥＦ）（登録商標）、セフジエル（ＣＥＦＤＩＥＬ）（登録商標））、セフジトレン（スペクトラセフ（ＳＰＥＣＴＲＡＣＥＦ）（登録商標））、セフォペラゾン（セフォビッド（ＣＥＦＯＢＩＤ）（登録商標））、セフォタキシム（クラフォラン（ＣＬＡＦＯＲＡＮ）（登録商標））、セフポドキシム（バンチン（ＶＡＮＴＩＮ）（登録商標））、セフタジム（フォルタズ（ＦＯＲＴＡＺ）（登録商標））、セフチブテン（セダックス（ＣＥＤＡＸ）（登録商標））、セフチゾキシム（セフィゾックス（ＣＥＦＩＺＯＸ）（登録商標））、セフトリアキソン（ロセフィン（ＲＯＣＥＰＨＩＮ）（登録商標）））、セファロスポリン（第４世代）（例えば、セフェピム（マキシピム（ＭＡＸＩＰＩＭＥ）（登録商標）））、セファロスポリン（第５世代）（例えば、セフトビプロール（ゼフテラ（ＺＥＦＴＥＲＡ）（登録商標）））、グリコペプチド（例えば、テイコプラニン（タルゴシド（ＴＡＲＧＯＣＩＤ）（登録商標））、バンコマイシン（バンコシン（ＶＡＮＣＯＣＩＮ）（登録商標））、テラバンシン（ビバティブ（ＶＩＢＡＴＩＶ）（登録商標））、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン（クレオシン（ＣＬＥＯＣＩＮ）（登録商標））、リノマイシン（リンコシン（ＬＩＮＣＯＣＩＮ）（登録商標）））、リポペプチド（例えば、ダプトマイシン（キュビシン（ＣＵＢＩＣＩＮ）（登録商標））、マクロリド（例えば、アジスロマイシン（ジスロマックス（ＺＩＴＨＲＯＭＡＸ）（登録商標）、スマメド（ＳＵＭＡＭＥＤ）（登録商標）、ジトロシン（ＺＩＴＲＯＣＩＮ）（登録商標））、クラリスロマイシン（ビアキシン（ＢＩＡＸＩＮ）（登録商標））、ジリスロマイシン（ダイナバック（ＤＹＮＡＢＡＣ）（登録商標））、エリスロマイシン（エリソシン（ＥＲＹＴＨＯＣＩＮ）（登録商標）、エリスロペド（ＥＲＹＴＨＲＯＰＥＤ）（登録商標））、ロキシスロマイシン、トロレアンド
マイシン（タオ（ＴＡＯ）（登録商標））、テリスロマイシン（ケテック（ＫＥＴＥＫ）（登録商標））、スペクチノマイシン（トロビシン（ＴＲＯＢＩＣＩＮ）（登録商標）））、モノバクタムス（例えば、アズトレナム（アザクタム（ＡＺＡＣＴＡＭ）（登録商標）））、ニトロフラン（例えば、フラゾリドン（フロキソン（ＦＵＲＯＸＯＮＥ）（登録商標）、ニトロフラントイン（マクロダンチン（ＭＡＣＲＯＤＡＮＴＩＮ）（登録商標））、マクロビッド（ＭＡＣＲＯＢＩＤ）（登録商標）））、ペニシリン（例えば、アモキシシリン（ノバモックス（ＮＯＶＡＭＯＸ）（登録商標）、アモキシル（ＡＭＯＸＩＬ）（登録商標））、アンピシリン（プリンシペン（ＰＲＩＮＣＩＰＥＮ）（登録商標））、アゾロシリン、カルベニシリン（ゲオシリン（ＧＥＯＣＩＬＬＩＮ）（登録商標））、クロキサシリン（テゴペン（ＴＥＧＯＰＥＮ）（登録商標））、ジクロキサシリン（ダイナペン（ＤＹＮＡＰＥＮ）（登録商標））、フルクロキサシリン（プロキサペン（ＦＬＯＸＡＰＥＮ）（登録商標））、メズロシリン（メズリン（ＭＥＺＬＩＮ）（登録商標））、メチシリン（スタフシリン（ＳＴＡＰＨＣＩＬＬＩＮ）（登録商標））、ナフシリン（ユニペン（ＵＮＩＰＥＮ）（登録商標））、オキサシリン（プロスタフリン（ＰＲＯＳＴＡＰＨＬＩＮ）（登録商標））、ペニシリンＧ（ペンティズ（ＰＥＮＴＩＤＳ）（登録商標））、ペニシリンＶ（ＰＥＮ−ＶＥＥ−Ｋ）（登録商標））、ピペラシリン（ピプラシル（ＰＩＰＲＡＣＩＬ）（登録商標））、テモシリン（ネガバン（ＮＥＧＡＢＡＮ）（登録商標））、チカルシリン（ティカール（ＴＩＣＡＲ）（登録商標）））、ペニシリン併用剤（例えば、アモキシシリン／カルブラネート（オーグメンチン（ＡＵＧＭＥＮＴＩＮ）（登録商標））、アンピシリン／スルバクタム（ユナシン（ＵＮＡＳＹＮ）（登録商標））、ピペラシリン／タゾバクタム（ゾシン（ＺＯＳＹＮ）（登録商標））、チカルシリン／クラブラネート（チメンチン（ＴＩＭＥＮＴＩＮ）（登録商標）））、ポリペプチド（例えば、バシトラシン、コリスチン（コリ−マイシン−Ｓ（ＣＯＬＹ−ＭＹＣＩＮ−Ｓ）（登録商標））、ポリミキシンＢ、キノロン（例えば、シプロフロキサシン（シプロ（ＣＩＰＲＯ）（登録商標）、シプロキシン（ＣＩＰＲＯＸＩＮ）（登録商標）、シプロベイ（ＣＩＰＲＯＢＡＹ）（登録商標））、エノキサシン（ペネトレックス（ＰＥＮＥＴＲＥＸ）（登録商標））、ガチフロキサシン（テクイン（ＴＥＱＵＩＮ）（登録商標））、レボフロキサシン（レバクイン（ＬＥＶＡＱＵＩＮ）（登録商標））、ロメフロキサシン（マキサクイン（ＭＡＸＡＱＵＩＮ）（登録商標））、モキシフロキサシン（アベロックス（ＡＶＥＬＯＸ）（登録商標））、ナリジクス酸（ネググラム（ＮＥＧＧＲＡＭ）（登録商標））、ノルフロキサシン（ノロキシン（ＮＯＲＯＸＩＮ）（登録商標））、オフロキサシン（フロキシン（ＦＬＯＸＩＮ）（登録商標）、オキュフロックス（ＯＣＵＦＬＯＸ）（登録商標））、トロバフロキサシン（トロバン（ＴＲＯＶＡＮ）（登録商標））、グレパフロキサシン（ラクサル（ＲＡＸＡＲ）（登録商標））、スパルフロキサシン（ザガム（ＺＡＧＡＭ）（登録商標））、テマフロキサシン（オムニフロクス（ＯＭＮＩＦＬＯＸ）（登録商標）））、スルホンアミド（例えば、マフェニド（スルファミロン（ＳＵＬＦＡＭＹＬＯＮ）（登録商標））、スルホンアミドクリソイジン（プロントシル（ＰＲＯＮＴＯＳＩＬ）（登録商標））、スルファセタミド（スラミド（ＳＵＬＡＭＹＤ）（登録商標）、ブレフ−１０（ＢＬＥＰＨ−１０）（登録商標））、スルファジアジン（ミクロ−スルフォン（ＭＩＣＲＯ−ＳＵＬＦＯＮ）（登録商標））、スルファジアジン銀（シルバデン（ＳＩＬＶＡＤＥＮＥ）（登録商標））、スルファメチゾール（チオスルフィル・フォルテ（ＴＨＩＯＳＵＬＦＩＬ  ＦＯＲＴＥ）（登録商標））、スルファメトキサゾール（ガンタノール（ＧＡＮＴＡＮＯＬ）（登録商標））、スルファニリミド、スルファサラジン（アズルフィジン（ＡＺＵＬＦＩＤＩＮＥ）（登録商標））、スルフィソキサゾール（ガントリシン（ＧＡＮＴＲＩＳＩＮ）（登録商標））、トリメトプリム（プロロプリム（ＰＲＯＬＯＰＲＩＭ）（登録商標）、トリムペックス（ＴＲＩＭＰＥＸ）（登録商標））、トリメトプリム−スルファメトキサゾール（コ−トリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）（バクトリム（ＢＡＣＴＲＩＭ）（登録商標）、セプトラ（ＳＥＰＴＲＡ）（登録商標））、テトラサイクリン（例えば、デメクロサイクリン（デメクロマイシン（ＤＥＣＬＯＭＹＣＩＮ）（登録商標））、ドキシサイクリン（ビブラマイシン（ＶＩＢＲＡＭＹ
ＣＩＮ）（登録商標））、ミノサイクリン（ミノシン（ＭＩＮＯＣＩＮ）（登録商標））、オキシテトラサイクリン（テラマイシン（ＴＥＲＲＡＭＹＣＩＮ）（登録商標））、テトラサイクリン（スマイシン（ＳＵＭＹＣＩＮ）（登録商標）、アクロマイシン（ＡＣＨＲＯＭＹＣＩＮ）（登録商標）Ｖ、ステクリン（ＳＴＥＣＬＩＮ）（登録商標）））、マイコバクテリアに対する薬剤（例えば、クロファジミン（ラムプレン（ＬＡＭＰＲＥＮＥ）（登録商標））、ダプソン（アブロスルフォン（ＡＶＬＯＳＵＬＦＯＮ）（登録商標））、カプレオマイシン（カパスタト（ＣＡＰＡＳＴＡＴ）（登録商標））、シクロセリン（セロマイシン（ＳＥＲＯＭＹＣＩＮ）（登録商標））、エタムブトール（ミアムブトール（ＭＹＡＭＢＵＴＯＬ）（登録商標））、エチオナミド（トレカトル（ＴＲＥＣＡＴＯＲ）（登録商標））、イソニアジド（Ｉ．Ｎ．Ｈ．（登録商標））、ピラジナミド（アルジナミド（ＡＬＤＩＮＡＭＩＤＥ）（登録商標））、リファンピン（リファジン（ＲＩＦＡＤＩＮ）（登録商標）、リマクタン（ＲＩＭＡＣＴＡＮＥ）（登録商標））、リファブチン（マイコブチン（ＭＹＣＯＢＵＴＩＮ）（登録商標））、リファペンチン（プリフチン（ＰＲＩＦＴＩＮ）（登録商標））、ストレプトマイシン）、並びにその他（例えば、アルスフェナミン（サルバルサン（ＳＡＬＶＡＲＳＡＮ）（登録商標））、クロラムフェニコール（クロロマイセチン（ＣＨＬＯＲＯＭＹＣＥＴＩＮ）（登録商標））、ホスホマイシン（モヌロール（ＭＯＮＵＲＯＬ）（登録商標））、フシジン酸（ＦＵＣＩＤＩＮ）（登録商標））、リネゾリド（ザイボックス（ＺＹＶＯＸ）（登録商標））、メトロニダゾール（フラジール（ＦＬＡＧＹＬ）（登録商標））、ムピロシン（バクトロバン（ＢＡＣＴＲＯＢＡＮ）（登録商標））、プラテンシマイシン、キヌプリスチン／ダルホプリスチン（シナシッド（ＳＹＮＥＲＣＩＤ）（登録商標））、リファキシミン（キシファキサン（ＸＩＦＡＸＡＮ）（登録商標））、チアンフェニコール、チゲサイクリン（チガシル（ＴＩＧＡＣＹＬ）（登録商標））、チニダゾール（チンダマックス（ＴＩＮＤＡＭＡＸ）（登録商標））、ファシジン（ＦＡＳＩＧＹＮ）（登録商標）））。
【０９２５】
ウイルス感染に関連する状態
別の実施形態では、抗ウイルスポリペプチド、例えば、抗ウイルス剤と組み合わせた本明細書に記載の抗ウイルスポリペプチド、例えば、本明細書に記載の抗ウイルスポリペプチド又は小分子抗ウイルス剤をコードするキメラポリヌクレオチドを投与することにより、患者のウイルス感染、及び／又はウイルス感染に関連する疾患、障害、若しくは状態、又はその症状を治療又は予防する方法が提供される。
【０９２６】
ウイルス感染に関連する疾患、障害、若しくは状態として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：急性熱性咽頭炎、咽頭結膜熱、流行性角結膜炎、小児胃腸炎、コクサッキーウイルス感染症、伝染性単核症、バーキットリンパ腫、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、一次ＨＳＶ−１感染（例えば、小児の歯肉口内炎、成人の扁桃炎及び咽頭炎、角結膜炎）、潜在性ＨＳＶ−１感染（例えば、口唇ヘルペス及び単純疱疹）、一次ＨＳＶ−２感染、潜在性ＨＳＶ−２感染、無菌性髄膜炎、伝染性単核症、巨大細胞封入体症、カポジ肉腫、多中心性キャッスルマン病、原発性滲出性リンパ腫、ＡＩＤＳ、インフルエンザ、ライ症候群、麻疹、感染後脳脊髄炎、流行性耳下腺炎、上皮過形成性病変（例えば、尋常性、扁平、足底及び肛門性器疣贅、喉頭乳頭腫、疣贅状表皮発育異常症）、子宮頸癌、扁平上皮癌、クループ、肺炎、細気管支炎、感冒、ポリオ、狂犬病、細気管支炎、肺炎、インフルエンザ様症候群、肺炎を伴う重症細気管支炎、風疹、先天性風疹、水痘、及び帯状疱疹。
【０９２７】
ウイルス病原体
ウイルス病原体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デングウイルス、脳炎ウイルス、エプスタイン・バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒ
トヘルペスウイルス８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＲＳウイルス、風疹ウイルス、帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス、及び黄熱ウイルス。さらに、ウイルス病原体は、耐性ウイルス感染を引き起こすウイルスも含み得る。
【０９２８】
抗ウイルス剤
抗ウイルス剤の例として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アバカビル（ザイアジェン（ＺＩＡＧＥＮ）（登録商標））、アバカビル／ラミブジン／ジドブジン（トリジビル（ｔｒｉｚｉｖｉｒ）（登録商標））、アシクロビル（ａｃｉｃｌｏｖｉｒ）又はアシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）（シクロビル（ＣＹＣＬＯＶＩＲ）（登録商標）、ヘルペックス（ＨＥＲＰＥＸ）（登録商標）、アシビル（ＡＣＩＶＩＲ）（登録商標）、アシビラックス（ＡＣＩＶＩＲＡＸ）（登録商標）、ゾビラックス（ＺＯＶＩＲＡＸ）（登録商標）、ゾビル（ＺＯＶＩＲ）（登録商標））、アデフォビル（プレベオン（Ｐｒｅｖｅｏｎ）（登録商標）、ヘプセラ（Ｈｅｐｓｅｒａ）（登録商標））、アマンタジン（シンメトレル（ＳＹＭＭＥＴＲＥＬ）（登録商標））、アンプレナビル（アジェネラーゼ（ＡＧＥＮＥＲＡＳＥ）（登録商標））、アンプリゲン、アルビドール、アタザナビル（レヤタズ（ＲＥＹＡＴＡＺ）（登録商標））、ボセプレビル、シドフォビル、ダルナビル（プレジスタ（ＰＲＥＺＩＳＴＡ）（登録商標））、デラビルジン（レスクルプター（ＲＥＳＣＲＩＰＴＯＲ）（登録商標））、ジダノシン（ビデックス（ＶＩＤＥＸ）（登録商標））、ドコサノール（アブレバ（ＡＢＲＥＶＡ）（登録商標））、エドクスジン、エファビレンツ（サスティバ（ＳＵＳＴＩＶＡ）（登録商標）、ストクリン（ＳＴＯＣＲＩＮ）（登録商標））、エムトリシタビン（エムトリバ（ＥＭＴＲＩＶＡ）（登録商標））、エムトリシタビン／テノフォビル／エファビレンツ（アトリプラ（ＡＴＲＩＰＬＡ）（登録商標））、エンフビルチド（フゼオン（ＦＵＺＥＯＮ）（登録商標））、エンテカビル（バラクルード（ＢＡＲＡＣＬＵＤＥ）（登録商標）、エンタビル（ＥＮＴＡＶＩＲ）（登録商標））、ファムシクロビル（ファムビル（ＦＡＭＶＩＲ）（登録商標））、フォミビルセン（ビトラベン（ＶＩＴＲＡＶＥＮＥ）（登録商標））、ホスアンプレナビル（レキシバ（ＬＥＸＩＶＡ）（登録商標）、テルジル（ＴＥＬＺＩＲ）（登録商標））、ホスカルネ（ホスカビル（ＦＯＳＣＡＶＩＲ）（登録商標））、ホスホネト、ガンシクロビル（シトベン（ＣＹＴＯＶＥＮＥ）（登録商標）、シメベン（ＣＹＭＥＶＥＮＥ）（登録商標）、ビトラセルト（ＶＩＴＲＡＳＥＲＴ）（登録商標））、ＧＳ  ９１３７（エルビテグラビル（ＥＬＶＩＴＥＧＲＡＶＩＲ）（登録商標））、イミキモド（アルダラ（ＡＬＤＡＲＡ）（登録商標）、ジクララ（ＺＹＣＬＡＲＡ）（登録商標）、ベセルナ（ＢＥＳＥＬＮＡ）（登録商標））、インジナビル（クリキシバン（ＣＲＩＸＩＶＡＮ）（登録商標））、イノシン、イノシンプラノベックス（イムノビル（ＩＭＵＮＯＶＩＲ）（登録商標））、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、クタプレッシン（ネクサビル（ＮＥＸＡＶＩＲ）（登録商標））、ラミブジン（ゼフィックス（ＺＥＦＦＩＸ）（登録商標）、ヘプトビル（ＨＥＰＴＯＶＩＲ）（登録商標）、エピビル（ＥＰＩＶＩＲ）（登録商標））、ラミブジン／ジドブジン（コムビビル（ＣＯＭＢＩＶＩＲ）（登録商標））、ロピナビル、ロビリド、マラビロク（セルゼントリー（ＳＥＬＺＥＮ���ＲＹ）（登録商標）、セルセントリ（ＣＥＬＳＥＮＴＲＩ）（登録商標））、メチサゾン、ＭＫ−２０４８、モロキシジン、ネルフィナビル（ビラセプト（ＶＩＲＡＣＥＰＴ）（登録商標））、ネビラピン（ビラムン（ＶＩＲＡＭＵＮＥ）（登録商標））、オセルタミビル（タミフル（ＴＡＭＩＦＬＵ）（登録商標））、ペジンテルフェロンα−２ａ（ペガシス（ＰＥＧＡＳＹＳ）（登録商標））、ペシクロビル（デナビル（ＤＥＮＡＶＩＲ）（登録商標））、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン（コンジロックス（ＣＯＮＤＹＬＯＸ）（登録商標））、ラルテグラビル（イセントレス（ＩＳＥＮＴＲＥＳＳ）（登録商標））、リバビリン（コペグス（ＣＯＰＥＧＵｓ）（登録商標）、レベトール（ＲＥＢＥＴＯＬ）（登録商標）、リバスフェール（ＲＩＢＡＳＰＨＥＲＥ
）（登録商標）、ビローナ（ＶＩＬＯＮＡ）（登録商標）、及びビラゾール（ＶＩＲＡＺＯＬＥ）（登録商標））、リマンタジン（フルマジン（ＦＬＵＭＡＤＩＮＥ）（登録商標））、リトナビル（ノルビル（ＮＯＲＶＩＲ）（登録商標））、ピラミジン、サキナビル（インビラーゼ（ＩＮＶＩＲＡＳＥ）（登録商標）、フォルトベース（ＦＯＲＴＯＶＡＳＥ）（登録商標））、スタブジン、ティーツリー（ｔｅａ  ｔｒｅｅ）油（メラルーカ（ｍｅｌａｌｅｕｃａ）油）、テノフォビル（ビリード（ＶＩＲＥＡＤ）（登録商標））、テノフォビル／エムトリシタビン（トルバダ（ＴＲＵＶＡＤＡ）（登録商標））、チプラナビル（アプチブス（ＡＰＴＩＶＵＳ）（登録商標））、トリフルリジン（ビロプチック（ＶＩＲＯＰＴＩＣ）（登録商標））、トロマンタジン（ビル−メルズ（ＶＩＲＵ−ＭＥＲＺ）（登録商標））、バラシクロビル（バルトレックス（ＶＡＬＴＲＥＸ）（登録商標））、バルガンシクロビル（バルサイト（ＶＡＬＣＹＴＥ）（登録商標））、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル（レレンザ（ＲＥＬＥＮＺＡ）（登録商標））、並びにジドブジン（アジドチミジン（ＡＺＴ）、レトロビル（ＲＥＴＲＯＶＩＲ）（登録商標）、レトロビス（ＲＥＴＲＯＶＩＳ）（登録商標））。
【０９２９】
真菌感染に関連する状態
真菌感染に関連する疾患、障害、若しくは状態として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アスペルギルス症、ブラストミセス症、カンジダ症、コクシジオイデス症、クリプトコッカス症、ヒストプラズマ症、足菌腫、パラコクシジオイドマイコーシス、及び足白癬。さらに、免疫不全を有する人は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｃｏｃｕｓ）、ヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、及びニューモシスチス（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ）などの真菌属による疾患に特に罹患しやすい。他の真菌は、眼、爪、毛髪、並びに特に皮膚を攻撃し得る、いわゆる皮膚糸状真菌及び好角質性真菌であり、多様な状態を引き起こし、中でも、水虫などの白癬が一般的である。また、真菌胞子は、アレルギーの主要原因であり、異なる分類学群に属する多様な真菌が、一部の人にアレルギー反応を引き起こす恐れがある。
【０９３０】
真菌病原体
真菌病原体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：子嚢菌門（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）（例えば、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ニューモシスチス・ジロベシ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）／ポサダシ（ｐｏｓａｄａｓｉｉ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ））、担子菌門（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）（例えば、フィロバシジエラ・ネオフォルマンス（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｅｌｌａ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ））、微胞子虫（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ）（例えば、エンセファリトゾーン・クニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）、エンテロシトゾーン・ビエヌーシ（Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｏｚｏｏｎ  ｂｉｅｎｅｕｓｉ））、及びケカビ亜門（Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、ムコール・シルシネロイデス（Ｍｕｃｏｒ  ｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、リクテイミア・コリムビフェラ（Ｌｉｃｈｔｈｅｉｍｉａ  ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ））。
【０９３１】
抗真菌剤
抗真菌剤の例として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：ポリエン系抗真菌剤（例えば、ナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アムホテリシンＢ、カンジシン、ハマイシン）、イミダソール系抗真菌剤（例えば、ミコナゾール（ミカチン（ＭＩＣＡＴＩＮ）（登録商標）、ダクタリン（ＤＡＫＴＡＲＩＮ）（登録商標））、
ケトコナゾール（ニゾラル（ＮＩＺＯＲＡＬ）（登録商標）、フンゴラル（ＦＵＮＧＯＲＡＬ）（登録商標）、セビゾール（ＳＥＢＩＺＯＬＥ）（登録商標））、クロトリマゾール（ロトリミン（ＬＯＴＲＩＭＩＮ）（登録商標）、ロトリミン（ＬＯＴＲＩＭＩＮ）（登録商標）ＡＦ、カネステン（ＣＡＮＥＳＴＥＮ）（登録商標））、エコナゾール、オモコナゾール、ビホナゾール、ブトコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール（エトラクゾ（ＥＲＴＡＣＺＯ）（登録商標））、スルコナゾール、チオコナゾール）、トリアゾール系抗真菌剤（例えば、アルバコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、イサブコナゾール、ラブコナゾール、ポサコナゾール、ボリコナゾール、テルコナゾール）、チアゾール抗真菌剤（例えば、アバファンギン）、アリルアミン（例えば、テルビナフィン（ラミシル（ＬＡＭＩＳＩＬ）（登録商標））、ナフチフィン（ナフチン（ＮＡＦＴＩＮ）（登録商標））、ブテナフィン（ロトリミン（ＬＯＴＲＩＭＩＮ）（登録商標）ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）））、エキノカンジン（例えば、アニデュラファンギン、カスポファンギン、ミカファンギン）、並びにその他（例えば、ポリゴジアル、安息香酸、シクロピロックス、トルナフタート（チナクチン（ＴＩＮＡＣＴＩＮ）（登録商標）、デセネックス（ＤＥＳＥＮＥＸ）（登録商標）、アフタート（ＡＦＴＡＴＥ）（登録商標））、ウンデシレン酸、フルシトシン又は５−フルオロシトシン、グリセオフルビン、ハロプロギン、炭酸水素ナトリウム、アリシン）。
【０９３２】
原生動物感染に関連する状態
原生動物感染に関連する疾患、障害、若しくは状態として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アメーバ症、ジアルジア症、トリコモナス症、アフリカ睡眠病、アメリカ睡眠病、リーシュマニア症（カラアザール（Ｋａｌａ−Ａｚａｒ））、バランチジウム症、トキソプラズマ症、マラリア、アカントアメーバ角膜炎、及びバベシア症。
【０９３３】
原生動物病原体
原生動物病原体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉｌａ）、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ブルーストリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、クルーズトリパノソーマ（Ｔ．ｃｒｕｚｉ）、ドノバン・リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、トキソプラズマ・ゴンジ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、プラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）、及びバベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）。
【０９３４】
抗原生動物剤
抗原生動物剤の例として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：エフロルニチン、フラソリドン（フロキソン（ＦＵＲＯＸＯＮＥ）（登録商標）、デペンダル−Ｍ（ＤＥＰＥＮＤＡＬ−Ｍ）（登録商標））、メラルソプロール、メトロニダゾール（フラジール（ＦＬＡＧＹＬ）（登録商標））、オルニダゾール、硫酸パロモマイシン（フマチン（ＨＵＭＡＴＩＮ）（登録商標））、ペンタミジン、ピリメタミン（ダラプリム（ＤＡＲＡＰＲＩＭ）（登録商標））、及びチニダゾール（チニダマックス（ＴＩＮＤＡＭＡＸ）（登録商標）、ファシジン（ＦＡＳＩＧＹＮ）（登録商標））。
【０９３５】
寄生体感染に関連する状態
寄生体感染に関連する疾患、障害、若しくは状態として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アカントアメーバ角膜炎、アメーバ症、回虫症、バベシア症、バランチジウム症、アライグマ回虫症（ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉａｓｉｓ）、シャーガス病、肝吸虫症、コクリオミ属（ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａ）、クリプトスポリジウム症、裂頭条虫症、メジナ虫症、エキノコックス症、象皮病、蟯虫症、肝蛭症、肥大吸虫症、フィラリア症、ジアルジア症、顎口虫症、膜様条虫症、イソスポラ症、片山熱、リーシュマニア症、
ライム病、マラリア、横川吸虫症、ハエウジ病、オンコセルカ症、しらみ寄生症、疥癬、住血吸虫症、睡眠病、糞線虫症、テニヤ条虫症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫病、及び鞭虫症。
【０９３６】
寄生体病原体
寄生体病原体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アカントアメーバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、アニサキス（Ａｎｉｓａｋｉｓ）、ヒトカイチュウ（Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）、ウマバエ（ｂｏｔｆｌｙ）、大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ナンキンムシ（ｂｅｄｂｕｇ）、条虫類（Ｃｅｓｔｏｄａ）、ツツガムシ（ｃｈｉｇｇｅｒｓ）、ラセンウジバエ（Ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａ  ｈｏｍｉｎｉｖｏｒａｘ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、肝蛭（Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、鉤虫（ｈｏｏｋｗｏｒｍ）、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、イヌタムシ（Ｌｉｎｇｕａｔｕｌａ  ｓｅｒｒａｔａ）、肝吸虫（ｌｉｖｅｒ  ｆｌｕｋｅ）、ロア糸状虫（Ｌｏａ  ｌｏａ）、肺吸虫（Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ）、ギョウチュウ（ｐｉｎｗｏｒｍ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）、糞線虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ）、ダニ（ｍｉｔｅ）、条虫（ｔａｐｅｗｏｒｍ）、トキソプラズマ・ゴンジ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）、鞭虫（ｗｈｉｐｗｏｒｍ）、バンクロフト糸状虫（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ）。
【０９３７】
抗寄生体剤
抗寄生体剤の例として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：抗線虫薬（例えば、メベンダゾール、パモ酸ピランテル、チアベンダゾール、ジエチルカルバマジン、イベルメクチン）、抗条虫薬（例えば、ニクロサミド、プラジカンテル、アルベンダゾール）、抗吸虫薬（例えば、プラジカンテル）、抗アメーバ薬（例えば、リファンピン、アムホテリシンＢ）、及び抗原虫薬（例えば、メラルソプロール、エフロルニチン、メトロニダゾール、チニダゾール）。
【０９３８】
プリオン感染に関連する状態
プリオン感染に関連する疾患、障害、若しくは状態として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、医原性クロイツフェルト・ヤコブ病（ｉＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、家族性クロイツフェルト・ヤコブ病（ｆＣＪＤ）、散発性クロイツフェルト・ヤコブ病（ｓＣＪＤ）、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、クール（Ｋｕｒｕ）、スクレイピー、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、狂牛病、伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、慢性消耗症（ＣＷＤ）、ネコ海綿状脳症（ＦＳＥ）、エキゾチック有蹄類脳症（ＥＵＥ）、及び海綿状脳症。
【０９３９】
抗プリオン剤
抗プリオン剤の例として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：フルピルチン、ポリ硫酸ペントサン、キナクリン、及び四環化合物。
【０９４０】
免疫応答の調節
免疫応答の回避
本明細書に記載するように、本発明のキメラポリヌクレオチドの有用な特徴は、細胞の自然免疫応答を低減、逃避又は回避する能力である。一態様では、目的のポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドが本明細書に記載され、キメラポリヌクレオチドは、細胞に送達されると、参照化合物（例えば、本発明のキメラポリヌクレオチドに対応す
る非修飾ポリヌクレオチド、又は本発明の別のキメラポリヌクレオチド）によりトリガーされた応答と比較して、低減した宿主からの応答をもたらす。本明細書で使用されるとき、「参照化合物」は、哺乳動物に投与されると、既知の程度、レベル若しくは量の免疫刺激を有する自然免疫応答を引き起こす任意の分子又は物質である。参照化合物は、核酸分子である必要はなく、本発明のキメラポリヌクレオチドのいずれである必要もない。従って、キメラポリヌクレオチドによる免疫応答のトリガーの回避、逃避若しくは不発生の度合いは、かかる応答をトリガーすることがわかっている任意の化合物若しくは物質に対して表すことができる。
【０９４１】
「自然免疫応答」という用語は、一般にウイルス又は細菌を起原とする外性一本鎖核酸に対する細胞応答を包含し、これは、サイトカイン（特に、インターフェロン）発現及び放出、並びに細胞死の誘導を伴う。本明細書で使用されるとき、自然免疫応答又はインターフェロン応答は、単一細胞レベルで作動し、サイトカイン発現、サイトカイン放出、タンパク質合成の全体的な阻害、細胞ＲＮＡの全体的な破壊、主要組織適合性分子の上方制御、及び／又はアポトーシス細胞死の誘導、アポトーシスに関与する遺伝子の遺伝子転写の誘導、抗増殖、並びに自然及び適応免疫細胞活性化を引き起こす。Ｉ型ＩＦＮにより誘導された遺伝子のうちのいくつかは、ＰＫＲ、ＡＤＡＲ（ＲＮＡに作用するアデノシンデアミナーゼ）、ＯＡＳ（２’，５’−オリゴアデニル酸シンテターゼ）、ＲＮａｓｅ  Ｌ、及びＭｘタンパク質を含む。ＰＫＲ及びＡＤＡＲは、それぞれ、翻訳開始及びＲＮＡ編集の阻害をもたらす。ＯＡＳは、エンドリボヌクレアーゼＲＮａｓｅ  Ｌを活性化して、ｓｓＲＮＡを分解するｄｓＲＮＡ依存性シンテターゼである。
【０９４２】
一部の実施形態では、自然免疫応答は、Ｉ型又はＩＩ型インターフェロンの発現を含み、Ｉ型又はＩＩ型インターフェロンの発現は、本発明のキメラポリヌクレオチドと接触させていない細胞からの標準と比較して、２倍以上増加しない。
【０９４３】
一部の実施形態では、自然免疫応答は、１つ又は複数のＩＦＮシグネチャー遺伝子の発現を含み、この場合、１つ又は複数の（ｏｎｅ  ｏｆ  ｍｏｒｅ）ＩＦＮシグネチャー遺伝子の発現は、本発明のキメラポリヌクレオチドと接触させていない細胞からの標準と比較して、３倍以上増加しない。
【０９４４】
一部の状況では、細胞における自然免疫応答を排除するのが有利となり得るが、本発明は、投与されると、かかる応答を完全に排除することなく、実質的に低減した（実質的に低い）免疫応答（インターフェロンシグナル伝達を含む）をもたらすキメラポリヌクレオチドを提供する。
【０９４５】
一部の実施形態では、免疫応答は、参照化合物により誘導される免疫応答と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、又は９９．９％以上低い。免疫応答自体は、１型インターフェロンの発現若しくは活性レベル又はトール様受容体（ＴＬＲ７及びＴＬＲ８）などのインターフェロン調節遺伝子の発現を決定することにより、測定することができる。また、自然免疫応答の低減は、細胞集団への１回又は複数回の投与後の細胞死のレベルを測定することにより、測定することができ；例えば、細胞死は、参照化合物を用いて観測される細胞死頻度よりも、１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、又は９５％以上低い。さらに、細胞死は、キメラポリヌクレオチドと接触させた細胞の５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％、０．１％、０．０１％又はそれ以上より少ない細胞に影響し得る。
【０９４６】
別の実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、同じ配列を有するインビトロ合成非修飾キメラポリヌクレオチド、又は参照化合物よりも、有意に低免疫原性である。
本明細書で使用されるとき、「有意に低免疫原性である」とは、検出可能な免疫原性の減少を指す。別の実施形態では、この用語は、免疫原性の倍率減少を指す。別の実施形態では、この用語は、検出可能な免疫応答をトリガーすることなく、有効量のキメラポリヌクレオチドを投与することができるような減少を指す。別の実施形態では、この用語は、組換えタンパク質の発現を検出可能に低減するのに十分な免疫応答を誘発することなく、キメラポリヌクレオチドを繰り返し投与することができるような減少を指す。別の実施形態では、この減少は、組換えタンパク質の検出可能な発現を排除するのに十分な免疫応答を誘発することなく、キメラポリヌクレオチドを繰り返し投与することができるようなものである。
【０９４７】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、その非修飾対応部分又は参照化合物よりも２倍低免疫原性である。別の実施形態では、免疫原性は、３倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、５倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、７倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、１０倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、１５倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、特定の倍数で減少される。別の実施形態では、免疫原性は、５０倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、１００倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、２００倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、５００倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、１０００倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、２０００倍減少される。別の実施形態では、免疫原性は、別の異なる倍数で減少される。
【０９４８】
免疫原性を決定する方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮα、ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α若しくはβ、ＩＬ−６、ＩＦＮ−β、又はＩＬ−８）の分泌を測定する、ＤＣ活性化マーカ（例えば、ＣＤ８３、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８０及びＣＤ８６）の発現を測定する、適応免疫応答のアジュバントとして作用する能力を測定するなどがある。
【０９４９】
修飾の組み合わせを含む本発明のキメラポリヌクレオチドは、治療方法としてこれらをより好適にする、優れた特性を有すると考えられる。
当該技術分野における「悉無律（ａｌｌ  ｏｒ  ｎｏｎｅ）」モデルは、修飾ｍＲＮＡの治療有効性に関連する生物学的現象を説明する上で極めて不十分であることが判明している。本発明者らは、タンパク質産生を改善するために、修飾、又は修飾の組み合わせの性質、修飾率を考慮して、２つ以上のサイトカイン若しくは測定基準を調査することにより、特定の修飾ｍＲＮＡの効力及びリスクプロフィールを決定し得ることをみいだした。
【０９５０】
本発明の一態様では、非修飾物と比較して、修飾ｍＲＮＡの有効性を決定する方法は、その発現が、本発明の外性核酸の投与によってトリガーされる１つ又は複数のサイトカインの測定及び分析を含む。これらの値を、非修飾核酸の投与、又はサイトカイン応答、ＰｏｌｙＩＣ、Ｒ−８４８などの標準的測定基準、或いは、当該技術分野で公知の他の標準と比較する。
【０９５１】
本発明において開発される標準的測定基準の一例は、細胞、組織若しくは生物において産生されたコードされたポリペプチド（タンパク質）のレベル又は量と、修飾核酸の投与又はそれとの接触によって、細胞、組織若しくは生物においてその発現がトリガーされる１種又は複数（若しくは１群）のサイトカインのレベル又は量との比を基準とするものである。かかる比は、本明細書において、タンパク質：サイトカイン比又は「ＰＣ」比と呼ぶ。ＰＣ比が高いほど、修飾核酸（測定されるタンパク質をコード化するポリヌクレオチド）は有効である。本発明の好ましいＰＣ比（サイトカインによる）は、１より大きい、１０より大きい、１００より大きい、１０００より大きい、１０，０００より大きい又はそれ以上のものであってよい。異なる、又は非修飾構築物の修飾核酸より高いＰＣ比を有
する修飾核酸が好ましい。
【０９５２】
ＰＣ比は、ポリヌクレオチドに存在する修飾率によってさらに定量することもできる。例えば、１００％修飾核酸に対して正規化し、サイトカイン（若しくはリスク）の関数又はサイトカインプロフィールとしてタンパク質産生を定量することができる。
【０９５３】
一実施形態において、本発明は、各種化学、サイトカイン若しくは修飾率全体にわたって、修飾核酸（キメラポリヌクレオチド）のＰＣ比を比較することにより、いずれか特定の修飾キメラポリヌクレオチドの相対効力を決定する方法を提供する。
【０９５４】
様々なレベルの核酸塩基置換を含むキメラポリヌクレオチドを生成することができ、これらは、増大したタンパク質産生及び低減した免疫刺激能を維持する。その天然に存在するヌクレオチド対応物に対する任意の修飾ヌクレオチドの相対比率（％）は、ＩＶＴ反応中に変動し得る（例えば、シチジンに対して、１００、５０、２５、１０、５、２．５、１、０．１、０．０１％の５メチルシチジン使用率；ウリジンに対して、１００、５０、２５、１０、５、２．５、１、０．１、０．０１％のプソイドウリジン又はＮ１−メチル−プソイドウリジン使用率）。また、同じ塩基に対して異なる比の２種以上の異なるヌクレオチドを使用する（例えば、異なる比のプソイドウリジン及びＮ１−メチル−プソイドウリジン）を使用するキメラポリヌクレオチドを作製することもできる。さらに、２つ以上の「塩基」位置での混合比、例えば、５メチルシチジン／シチジン及びプソイドウリジン／Ｎ１−メチル−プソイドウリジンの比を同時に用いて、キメラポリヌクレオチドを作製することもできる。改変した比の修飾ヌクレオチドを有する修飾ｍＲＮＡの使用は、化学修飾ヌクレオチドに対する曝露の可能性を低減する上で有益となり得る。最後に、タンパク質産生若しくは免疫刺激能又はその両方を調節するキメラポリヌクレオチドへの修飾ヌクレオチドの位置的導入も可能である。かかるキメラポリヌクレオチドがかかる特性改善を示す能力は、インビトロで（本明細書に記載するＰＢＭＣアッセイなどのアッセイを用いて）評価することができ、また、キメラポリヌクレオチドコード化タンパク質産生及び自然免疫認識の媒介物質（例えば、サイトカイン）両方の測定により、インビボで評価することもできる。
【０９５５】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチド及びその非修飾対応物の相対免疫原性は、非修飾ヌクレオチド又は参照化合物の所定量と同じ程度まで前記応答の１つを誘発するのに必要なキメラポリヌクレオチドの量を決定することによって決定する。例えば、同じ応答を誘発するのに２倍のキメラポリヌクレオチドが必要であれば、キメラポリヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチド又は参照化合物より２倍低免疫原性である。
【０９５６】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチド及びその非修飾対応物の相対免疫原性は、非修飾ヌクレオチド又は参照化合物の同じ量と比較し、キメラポリヌクレオチドの投与に応答して分泌されたサイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮα、ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α若しくはβ、ＩＬ−６、ＩＦＮ−β、又はＩＬ−８）の量を決定することによって決定する。例えば、半分の量のサイトカインが分泌されれば、キメラポリヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチドより２倍低免疫原性である。別の実施形態では、前記方法で免疫原性を計算する前に、刺激のバックグラウンドレベルを差し引く。
【０９５７】
さらに、本明細書には、細胞若しくは細胞集団における免疫応答の力価測定、低減又は排除を実施する方法も記載する。一部の実施形態では、様々な量の同じキメラポリヌクレオチドと細胞を接触させて、用量応答を評価する。一部の実施形態では、同じ若しくは異なる用量のいくつかの異なるキメラポリヌクレオチドと細胞を接触させて、要望される効果を生み出すのに最適な組成を決定する。免疫応答に関して、要望される効果とは、細胞の免疫応答を回避、逃避若しくは低減することであってよい。また、要望される効果は、
タンパク質産生の効率を改変することであってもよい。
【０９５８】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、国際公開第２０１３００３４７５号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法を用いて、免疫応答を低減するために使用してもよい。
【０９５９】
免疫応答の活性化：ワクチン
本発明によれば、本明細書に開示するキメラポリヌクレオチドは、１種又は複数のワクチンをコード化し得る。本明細書で使用されるとき、「ワクチン」は、特定の疾患又は感染因子に対する免疫を改善する生物学的製剤である。ワクチンは、対象の組織若しくは細胞中に抗原を導入して、免疫応答を誘発することにより、対象を特定の疾患又は病原体感染から防御する。本発明のキメラポリヌクレオチドは、抗原をコード化することができ、キメラポリヌクレオチドが細胞において発現されると、要望の免疫応答が達成される。
【０９６０】
ワクチンとしてのＲＮＡの使用によって、免疫応答を生み出す安全性、実現可能性、適用可能性、及び有効性に関する、細胞へのＤＮＡ組込みを含む従来の遺伝子ワクチン接種の問題点が解消される。ＲＮＡの方が分解されやすいため、ＲＮＡ分子は、ＤＮＡワクチン接種よりも有意に安全であると考えられる。ＲＮＡ分子は、生物から迅速に排泄され、ゲノム中に組み込まれて、制御不能な様式で細胞の遺伝子発現に影響を及ぼし得ない。さらに、ＲＮＡワクチンは、自己免疫疾患又は抗ＤＮＡ抗体の生成のような深刻な副作用を引き起こす可能性も低い（ブリングマン  Ａ．（Ｂｒｉｎｇｍａｎｎ  Ａ．）ら著、生物医学及び生物工学誌（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（２０１０年）、第２０１０巻、論文ＩＤ６２３６８７）。ＲＮＡによるトランスフェクションは、細胞の細胞質への挿入だけでよいため、核への挿入より達成しやすい。しかし、ＲＮＡは、細胞の細胞質中でＲＮａｓｅ分解及び他の自然分解を被りやすい。ＲＮＡワクチンの安定性及び貯蔵寿命を高めるために様々な試み。フォン・デル・ムルベ（Ｖｏｎ  Ｄｅｒ  Ｍｕｌｂｅ）らの米国特許出願公開第２００５／００３２７３０号明細書は、ｍＲＮＡ分子のＧ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含量を増加することにより、ｍＲＮＡワクチン組成物の安定性を改善することを開示している。フェルグナー（Ｆｅｌｇｎｅｒ）らの米国特許第５５８０８５９号明細書は、ｍＲＮＡに結合して、その安定性を調節する調節タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の組込みを教示する。理論に束縛されるわけではないが、本発明のキメラポリヌクレオチドは、少なくとも部分的に、構築物設計の特異性、純度及び選択性によって、改善された安定性及び治療効力をもたらすと考えられる。
【０９６１】
さらに、いくつかの修飾ヌクレオシド、又はその組み合わせは、本発明のキメラポリヌクレオチドに導入されると、自然免疫応答を活性化する。かかる活性化分子は、ポリペプチド及び／又は他のワクチンと組み合わせると、アジュバントとして有用である。特定の実施形態では、活性化分子は、ワクチンとして有用なポリペプチド配列をコード化する翻訳可能領域を含有するため、自己アジュバントである能力を賦与する。
【０９６２】
一実施形態において、本発明のキメラポリヌクレオチドは、抗原又は感染因子により引き起こされる疾患及び身体的障害の予防、治療及び診断に使用することができる。本発明のキメラポリヌクレオチドは、目的の少なくとも１つのポリペプチド（例えば、抗体又は抗原）をコード化することができるため、免疫系を刺激して病原体から防御する目的で、個体に提供することができる。非限定的な例として、抗原又は感染因子からの生物活性及び／又は作用は、抗原及び／又は感染因子に結合して、これを中和する能力を有する１つ又は複数のキメラポリヌクレオチドを提供することにより、阻害及び／又は無効化することができる。
【０９６３】
一実施形態において、本発明のキメラポリヌクレオチドは、免疫原をコード化することができる。免疫原をコード化するキメラポリヌクレオチドの送達により、免疫応答を活性化することができる。非限定的な例として、複数の自然免疫応答をトリガーするために、免疫原をコード化するキメラポリヌクレオチドを細胞に送達してよい（国際公開番号：国際公開第２０１２００６３７７号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１３０１７７６３９号明細書を参照のこと；本明細書において全体として参照により援用される）。別の非限定的な例として、免疫原をコード化する本発明のキメラポリヌクレオチドは、脊椎動物に対して免疫原性であるのに十分な用量で、脊椎動物に送達してもよい（国際公開番号：国際公開第２０１２００６３７２号パンフレット及び同第２０１２００６３６９号パンフレット並びに米国特許出願公開第２０１３０１４９３７５号明細書及び同第２０１３０１７７６４０号明細書を参照のこと；本明細書において全体として参照により援用される）。キメラポリヌクレオチドワクチンが治療し得る感染症の非制限的リストは、以下を含む：ウイルス感染症、例えば、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ）、Ａ、Ｂ若しくはＣ型肝炎、ヘルペス、帯状疱疹（水痘）、風疹（風疹ウイルス）、黄熱、デング熱など（フラビウイルス）、インフルエンザ（インフルエンザウイルス）、出血性感染症（マールブルグ（Ｍａｒｂｕｒｇ）又はエボラ（Ｅｂｏｌａ）ウイルス）、細菌感染症、例えば、レジオネラ症（レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、胃潰瘍（ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ））、コレラ（ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染症、ブドウ球菌感染症、サルモネラ感染症若しくはレンサ球菌感染症、破傷風（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、又は原生動物感染症（マラリア、睡眠病、リーシュマニア症、トキソプラズマ症、すなわち、マラリア原虫、トリパノソーマ、リーシュマニア及びトキソプラズマを原因とする感染症）。
【０９６４】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、癌を治療するために腫瘍抗原をコード化することができる。腫瘍抗原の非限定的な例として、以下のものが挙げられる：７０７−ＡＰ、ＡＦＰ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、．β．−カテニン／ｍ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＳＰ−８、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ＣＴ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＡＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ（又はｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＣ１Ｒ、ミオシン／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＭ−１、−２、−３、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ１９０マイナーｂｃｒ−ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲ．α．、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１若しくはＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１若しくはＳＡＲＴ−３、ＴＥＵＡＭＬ１、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２及びＷＴ１。
【０９６５】
本発明のキメラポリヌクレオチドは、ワクチン用のポリペプチド配列をコード化すると共に、阻害物質をさらに含んでもよい。阻害物質は、抗原提示を障害し、及び／又は当該技術分野で公知の様々な経路を阻害し得る。非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチドは、抗原提示を障害することができる阻害剤と組み合わせたワクチンとして用いることができる（国際公開番号：国際公開第２０１２０８９２２５号パンフレット及び同第２０１２０８９３３８号パンフレットを参照のこと；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０９６６】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、自己複製ＲＮＡであってもよい。自己複製ＲＮＡ分子は、ＲＮＡ送達の効率及び封入された遺伝子産物の発現を増強することができる。一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載する、及び／又は当該技術分野で公知の少なくとも１つの修飾を含んでもよい。一実施形態では、自己複製ＲＮＡが感染性ウイルス粒子の産生を誘導しないように、自己複製ＲＮＡを設計す
ることができる。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、米国特許出願公開第２０１１０３００２０５号明細書及び国際公開第２０１１００５７９９号パンフレット及び同第２０１３０５５９０５号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている方法によって設計してもよい。
【０９６７】
一実施形態では、本発明の自己複製キメラポリヌクレオチドは、免疫応答を高め得るタンパク質をコード化することができる。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つの抗原をコード化し得る自己複製ｍＲＮＡであってもよい（米国特許出願公開第２０１１０３００２０５号明細書、米国特許出願公開第２０１３０１７１２４１号明細書、同第２０１３０１７７６４０号明細書及び同第２０１３０１７７６３９号明細書並びに国際公開番号：国際公開第２０１１００５７９９号パンフレット、同第２０１２００６３７２号パンフレット、同第２０１２００６３７７号パンフレット、同第２０１３００６８３８号パンフレット、同第２０１３００６８４２号パンフレット、同第２０１２００６３６９号パンフレット及び同第２０１３０５５９０５号パンフレットを参照のこと；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。一態様では、自己複製ＲＮＡは、大型哺乳動物における免疫応答を高めるのに十分な用量で、哺乳動物に投与してよい（例えば、国際公開第２０１２００６３６９号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）を参照のこと）。
【０９６８】
一実施形態では、本発明の自己複製キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載する方法又は当該技術分野で公知の方法を用いて、製剤化することができる。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、ゲオール（Ｇｅａｌｌ）らにおいて記載されている（自己増幅ＲＮＡワクチンの非ウイルス送達（Ｎｏｎｖｉｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｅｌｆ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ＲＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ）、ＰＮＡＳ  ２０１２；ＰＭＩＤ：２２９０８２９４；この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）送達のために製剤化してもよい。
【０９６９】
別の非限定的な例として、本発明のキメラポリヌクレオチド（例えば、自己複製ＲＮＡなどの免疫原をコード化する核酸分子）は、ペグ化リポソーム内に実質的に被包してもよい（国際特許出願番号：国際公開第２０１３０３３５６３号パンフレットを参照のこと；本明細書において全体として参照により援用される）。また別の非限定的な例において、自己複製ＲＮＡは、国際特許出願番号：国際公開第２０１３０５５９０５号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載のように製剤化してもよい。一非限定的な例では、自己複製ＲＮＡは、国際公開番号：国際公開第２０１２００６３５９号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１３０１８３３５５号明細書（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、生分解性ポリマー粒子を用いて製剤化してもよい。
【０９７０】
一実施形態では、自己複製ＲＮＡは、ビリオン様粒子に製剤化してもよい。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、国際公開番号：国際公開第２０１２００６３７６号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、ビリオン様粒子に製剤化する。
【０９７１】
別の実施形態では、自己複製ＲＮＡは、リポソームに製剤化してもよい。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、国際公開番号：国際公開第２０１２００６７３７８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、リポソームに製剤化してもよい。一態様では、リポソームは、限定はされないが、ｍＲＮＡなどのキメラポリヌクレオチドの送達のために有利となり得るｐＫａ値を有する脂質を含んでもよい。別の態様では、リポソームは、生理学的ｐＨでほぼ中性の表面電荷を有してもよく、従って、免疫に有効となり得る（例えば、国際公開番号：国際公開第２０１２
００６７３７８号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているリポソームを参照のこと）。
【０９７２】
また別の実施形態では、自己複製ＲＮＡは、カチオン性水中油型エマルジョン中に製剤化してもよい。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、国際公開番号：国際公開第２０１２００６３８０号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているカチオン性水中油型エマルジョン中に製剤化してもよい。本明細書に記載する自己複製ＲＮＡ（例えば、キメラポリヌクレオチド）と一緒に用いることができるカチオン性水中油型エマルジョンは、国際公開番号：国際公開第２０１２００６３８０号パンフレット（本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている方法により作製することができる。
【０９７３】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドは、両親媒性及び／又は免疫原性両親媒性ペプチドをコード化し得る。
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドの製剤は、両親媒性及び／又は免疫原性両親媒性ペプチドをさらに含んでもよい。非限定的な例として、両親媒性及び／又は免疫原性両親媒性ペプチドを含むキメラポリヌクレオチドは、米国特許出願公開第２０１１０２５０２３７号明細書、並びに国際公開番号：国際公開第２０１０００９２７７号パンフレット及び同第２０１０００９０６５号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように製剤化してもよい。
【０９７４】
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチドの製剤は、免疫刺激性であってもよい。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、プラス鎖又はマイナス鎖ＲＮＡウイルスゲノムの全部若しくは一部をコード化し得る（国際公開番号：国際公開第２０１２０９２５６９号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２０１７７７０１号明細書を参照のこと；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。別の非限定的な例では、本発明の免疫刺激性キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載する、及び／又は当該技術分野で公知のように投与用の賦形剤と一緒に製剤化してもよい（国際公開番号：国際公開第２０１２０６８２９５号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２０２１３８１２号明細書を参照のこと；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。キメラポリヌクレオチドは、免疫応答を促進するサイトカイン、例えば、モノカイン、リンホカイン、インターロイキン若しくはケモカイン、例えば、Ｌ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＮＦ−α、ＩＮＦ−γ、ＧＭ−ＣＦＳ、ＬＴ−α、  又はｈＧＨなどの増殖因子をさらに含んでもよい。
【０９７５】
一実施形態では、本明細書に記載する方法によって製剤化されたワクチンの応答は、様々な化合物の添加によって増強することにより、治療効果を誘導することができる。非限定的な例として、ワクチン製剤は、ＭＨＣ結合ペプチド又はＭＨＣ結合ペプチドと類似の配列を有するペプチドを含んでもよい（国際公開番号：国際公開第２０１２０２７３６５号パンフレット、同第２０１１０３１２９８号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２００７０４９３号明細書、同第２０１１０１１０９６５号明細書を参照のこと；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。別の例として、ワクチン製剤は、対象においてニコチン残基に対する抗体応答を生成することができる修飾ニコチン化合物を含んでもよい（国際公開番号：国際公開第２０１２０６１７１７号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１２０１１４６７７号明細書を参照のこと；これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０９７６】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つの抗体又はその断片若し
くは部分をコード化し得る。抗体は、多様な感染因子を阻害し、それらから防御することができる、広域中和抗体であってもよい。非限定的な例として、感染症から対象を防御する、及び／又は感染症を治療するために、少なくとも１つの抗体又はその断片若しくは部分をコード化するキメラポリヌクレオチドが提供される。別の非限定的な例として、感染症から対象を防御する、及び／又は感染症を治療するために、広範囲の感染因子を中和することができる２つ以上の抗体又はその断片若しくは部分をコード化するキメラポリヌクレオチドが提供される。
【０９７７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコード化することができる。抗体重鎖及び抗体軽鎖をコード化するキメラポリヌクレオチドの最適な比を評価することにより、機能性抗体及び／又は要望される応答の最大量を生み出す比を決定することができる。キメラポリヌクレオチドはまた、抗体の単一ｓｖＦｖ鎖をコード化することもできる。
【０９７８】
本発明によれば、感染性ウイルスへの曝露の前に、１つ又は複数の広域中和抗体をコード化するキメラポリヌクレオチドを対象に投与してもよい。
一実施形態では、細胞、組織又は対象に供給されるキメラポリヌクレオチドの有効量は、免疫防御に十分であり得る。
【０９７９】
一部の実施形態では、癌細胞特異的タンパク質をコード化するキメラポリヌクレオチドを癌ワクチンとして製剤化してもよい。非限定的な例として、本発明の少なくとも１つのキメラポリヌクレオチドを含む癌ワクチンは、予防的に癌を予防するために用いることができる。ワクチンは、アジュバント及び／又は防腐剤を含んでもよい。非限定的な例として、アジュバントは、スクアレンであってよい。別の非限定的な例として、防腐剤は、チメロサールであってよい。
【０９８０】
一実施形態では、本発明は、１つ又は複数の抗体をコード化するポリヌクレオチド、及び／又は他の抗感染試薬を含有する免疫原性組成物を提供する。これらの免疫原性組成物は、アジュバント及び／又は防腐剤を含んでもよい。非限定的な例として、抗体は、広域中和抗体であってもよい。
【０９８１】
別の例では、本発明は、１つ又は複数の抗体をコード化するキメラポリヌクレオチド、及び／又は他の抗感染試薬を含有する抗体治療薬を提供する。
一実施形態では、本発明のキメラポリヌクレオチド組成物は、他の予防又は治療化合物と一緒に投与してもよい。非限定的な例として、予防又は治療化合物は、アジュバント又はブースタであってもよい。本明細書で使用されるとき、ワクチンなどの予防用組成物に関して言うとき、用語「ブースタ」は、予防組成物の追加投与を指す。ブースタ（若しくは追加ワクチン）は、これより早期に行われる予防組成物の投与後に実施してよい。予防組成物の最初の投与とブースタとの間の投与時間は、限定はされないが、以下に挙げるものであってよい：１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、３６時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、１０日、２週間、３週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、１年、１８ヵ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２５年、３０年、３５年、４０年、４５年、５０年、５５年、６０年、６５年、７０年、７５年、８０年、８５年、９０年、９５年又は９９年超。
【０９８２】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、生ワクチンの投与と同様に鼻内に投与してよい。別の態様では、キメラポリヌクレオチドは、当該技術分野で公知の不活性化ワクチンの投与と同様に、筋肉内又は皮内に投与してもよい。
【０９８３】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、新興の脅威又は遺伝子操作による脅威（既知又は未知いずれでもあり得る）の伝染から防御する、及び／又は予防するために用いることができる。
【０９８４】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、本明細書に記載する方法により製剤化することができる。製剤は、２種以上の抗体又はワクチンのためのキメラポリヌクレオチドを含んでよい。一態様では、製剤は、２つ以上の疾患、障害若しくは状態に治療及び／又は予防効果を有し得るキメラポリヌクレオチドを含んでよい。非限定的な例として、製剤は、抗原、抗体又はウイルスタンパク質をコード化するキメラポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０９８５】
さらに、本発明の抗体は、多くの用途における研究のために用いることができ、かかる用途には、例えば、限定はされないが、細胞内及び細胞外タンパク質、タンパク質相互作用、シグナル経路及び細胞生物学の同定及び位置決定などがある。
【０９８６】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、例えば、限定はされないが、国際公開番号：国際公開第２０１３０９３６２９号パンフレット（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているモジュラーワクチンなどのワクチンに用いることができる。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、少なくとも１つの抗原、少なくとも１つの細胞内局在エレメント及び少なくとも１つのＣＤ４ヘルパーエレメントをコード化する。一態様では、細胞内局在エレメントは、細胞質ゾルからの抗原の輸出をもたらすタンパク質配列のシグナルペプチドであってもよい。別の態様では、ＣＤ４ヘルパーエレメントは、限定はされないが、Ｐ３０、ＮＥＦ、Ｐ２３ＴＴ、Ｐ３２ＴＴ、Ｐ２１ＴＴ、ＰｆＴ３、Ｐ２ＴＴ、ＨＢＶｎｃ、ＨＡ、ＨＢｓＡｇ及びＭＴ（国際公開番号：国際公開第２０１３０９３６２９号パンフレット；この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）であってもよい。
【０９８７】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ＲＳＶ感染の予防若しくは治療、又はＲＳＶ感染のリスクの低減に用いることができる。バイシュノー（Ｖａｉｓｈｎａｗ）らは、米国特許出願公開第２０１３１０６５４９９号明細書（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）において、ＲＳＶ感染を治療及び／又は予防する目的でのｓｉＲＮＡを含む組成物の使用を記載している。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、ＲＳＶ感染の予防及び／又は治療を目的とする鼻内投与のために製剤化することができる（例えば、米国特許出願公開第２０１３０１６５４９９号明細書を参照のこと；この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０９８８】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、インフルエンザウイルスの感染、例えば、限定はされないが、高度に病原性のトリインフルエンザウイルス（例えば、限定はされないが、Ｈ５Ｎ１サブタイプ）感染及びヒトインフルエンザウイルス（例えば、限定はされないが、Ｈ１Ｎ１サブタイプ及びＨ３Ｎ２サブタイプ）感染のリスクを低減するか、又はそれを阻害するのに用いることができる。米国特許第８４７０７７１号明細書に記載されているタンパク質配列のいずれかをコード化することができる本明細書に記載のキメラポリヌクレオチドは、インフルエンザ感染の治療に、又はそのリスクを低減するために用いることができる。
【０９８９】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ワクチンとして、又は寄生体により産生
されるタンパク質に対する免疫応答を調節するために用いることができる。バークマン−リートナー（Ｂｅｒｇｍａｎｎ−Ｌｅｉｔｎｅｒ）らは、米国特許第８４７０５６０号明細書（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）において、マラリア原虫のスポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）に対するＤＮＡワクチンを記載している。非限定的な例として、キメラポリヌクレオチドは、Ｃ３ｄのＣＲ２結合モチーフをコード化することができるため、マラリア原虫のＣＳＰに対する免疫系を調節するためのワクチン又は治療薬として用いることができる。
【０９９０】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、アルキン修飾生体分子で標識してもよく、このようなものとして、例えば、限定はされないが、国際公開第２０１３１１２７７８号パンフレット及び同第２０１３１１２７８０号パンフレット（これらの内容は各々、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているものがある。標識ウイルスは、ウイルスの感染性を増大し得ることから、ワクチン製造に有益となり得る。標識ウイルスは、国際公開番号：国際公開第２０１３１１２７７８号パンフレット及び同第２０１３１１２７８０号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているものなど、様々な方法により生産することができる。
【０９９１】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ワクチンとして用いることができ、アジュバントをさらに含んでもよく、これは、このワクチンが、より高い免疫応答を誘発することを可能にし得る。非限定的な例として、アジュバントは、ヒト小児集団においてより高い免疫応答を誘発することができるサブミクロン水中油型エマルジョンであってよい（例えば、米国特許出願公開第２０１２００２７８１３号明細書及び米国特許第８５０６９６６号明細書（これらの内容は各々、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているアジュバント添加ワクチンを参照のこと）。
【０９９２】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、ワクチンとして用いることができ、これは、安定性を改善するとともに、ワクチンの発現を高めるために、５’キャプ類似体も含んでよい。５’キャプ類似体の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１２０１９５９１７号明細書（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されている。
【０９９３】
天然に存在する突然変異体
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、改善された疾患修飾活性（増大した生物活性、改善された患者転帰、又は防御機能など）を有する天然に存在する（天然で生じる）タンパク質の変異体を発現させるために使用することができる。多くのかかる変更遺伝子が哺乳動物において記載されている（ナドゥー（Ｎａｄｅａｕ）著、カレントオピニオン・イン・ジェネティックス＆デベロップメント（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）２００３年、１３：２９０〜２９５；ハミルトン（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）及びユー（Ｙｕ）著、ＰＬｏＳジェネティックス（ＰＬｏＳ  Ｇｅｎｅｔ．）、２０１２年；８：ｅ１００２６４４；コーダ（Ｃｏｒｄｅｒ）ら著、ネイチャー・ジェネティックス（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）１９９４年、７：１８０〜１８４；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。ヒトに関する例としては、Ａｐｏ  Ｅ２タンパク質、Ａｐｏ  Ａ−Ｉ変異型タンパク質（Ａｐｏ  Ａ−ＩＭｉｌａｎｏ、Ａｐｏ  Ａ−ＩＰａｒｉｓ）、過剰活性因子ＩＸタンパク質（因子ＩＸ  Ｐａｄｕａ  Ａｒｇ３３８Ｌｙｓ）、トランスサイレチン突然変異体（ＴＴＲ  Ｔｈｒ１１９Ｍｅｔ）がある。ＡｐｏＥ２（ｃｙｃ１１２、ｃｙｓ１５８）の発現は、アルツハイマー病並びに恐らく心血管疾患などの他の状態への罹患しやすさを低減することにより、他のＡｐｏＥアイソフォーム（ＡｐｏＥ３（ｃｙｃ１１２、ａｒｇ１５８）及びＡｐｏＥ４（ａｒｇ１１２、ａｒｇ１５８））と比較して、防御を付与す
ることが証明されている（コーダ（Ｃｏｒｄｅｒ）ら著、ネイチャー・ジェネティックス（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）１９９４年、７：１８０〜１８４；セリパ（Ｓｅｒｉｐａ）ら著、リジューヴェネイション研究（Ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．）２０１１年、１４：４９１〜５００；リュウ（Ｌｉｕ）ら著、ネイチャー・レビューズ・ニューロロジー（Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ．）２０１３年、９：１０６〜１１８；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。Ａｐｏ  Ａ−Ｉ変異体の発現は、コレステロール低下と関連している（ドゥゴーマ（ｄｅＧｏｍａ）及びレーダ（Ｒａｄｅｒ）、２０１１年、ネイチャー・レビューズ・カーディオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｒｄｉｏｌ）８：２６６〜２７１；ニッセン（Ｎｉｓｓｅｎ）ら著、２００３年、ＪＡＭＡ  ２９０：２２９２〜２３００；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。特定の集団におけるＡｐｏＡ−Ｉのアミノ酸配列は、Ａｐｏ  Ａ−ＩＭｉｌａｎｏ（Ａｒｇ１７３がＣｙｓに変更）及びＡｐｏ  Ａ−ＩＰａｒｉｓ（Ａｒｇ１５１がＣｙｓに変更）において、システインに変更される。位置Ｒ３３８Ｌ（ＦＩＸ  Ｐａｄｕａ）での因子ＩＸ突然変異により、約１０倍増大した活性を有する因子ＩＸタンパク質が得られる（シミオニ（Ｓｉｍｉｏｎｉ）ら著、ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．）２００９年、３６１：１６７１〜１６７５；フィン（Ｆｉｎｎ）ら著、血液（Ｂｌｏｏｄ．）２０１２年、１２０：４５２１〜４５２３；カントア（Ｃａｎｔｏｒｅ）ら著、血液（Ｂｌｏｏｄ．）２０１２年、１２０：４５１７〜２０；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。１０４又は１１９位でのトランスサイレチンの突然変異（Ａｒｇ１０４  Ｈｉｓ、Ｔｈｒ１１９Ｍｅｔ）は、Ｖａｌ３０Ｍｅｔ突然変異を引き起こす疾患も有する患者に対する防御を付与することが証明されている（サライバ（Ｓａｒａｉｖａ）著、ヒト突然変異（Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ．）２００１年、１７：４９３〜５０３；トランスサイレチン突然変異に関するデータベース（ＤＡＴＡ  ＢＡＳＥ  ＯＮ  ＴＲＡＮＳＴＨＹＲＥＴＩＮ  ＭＵＴＡＴＩＯＮＳ）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｂｍｃ．ｕｐ．ｐｔ／ｍｊｓａｒａｉｖａ／ｔｔｒｍｕｔ．ｈｔｍｌ；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）。Ｍｅｔ１１９及びＨｉｓ１０４突然変異をそれぞれ有するポルトガル及び日本人のＭｅｔ３０患者間での臨床症状及び症状の重症度の差が、非病原性突然変異体によって及ぼされる明らかな防御効果と共に観察されており（コエロー（Ｃｏｅｌｈｏ）ら著、１９９６年、神経筋障害（Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）（別冊（Ｓｕｐｐｌ））６：Ｓ２０；寺崎（Ｔｅｒａｚａｋｉ）ら著、１９９９年、生化学及び生物理学研究コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ）２６４：３６５〜３７０；これらは全て、本明細書において全体として参照により援用される）、これは、より高い安定性を分子に付与する。これらのＴＴＲ対立遺伝子をコード化する修飾ｍＲＮＡをＴＴＲアミロイドーシス患者において発現させ、これによって、病原性突然変異ＴＴＲタンパク質の作用を低減することができる。
【０９９４】
病原性生物又は罹患細胞のターゲティング
静細胞又は細胞傷害性ポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを用いて、細菌、酵母、原生動物、蠕虫などの病原性微生物、又は癌細胞などの罹患細胞をターゲティングする方法が提供される。好ましくは、導入されたｍＲＮＡは、修飾ヌクレオチド又は他の核酸配列修飾物を含有し、これらは、起こり得る治療薬のオフターゲット効果を低減するために、標的病原性生物において、排他的、又は優先的に翻訳される。かかる方法は、血液、精液、卵などの任意の生物材料、並びに胚、組織、及び臓器などの移植材料にみいだされる病原性生物の除去、又は罹患細胞の殺傷に有用である。
【０９９５】
バイオプロセシング
本明細書に記載する方法は、細胞培養工程におけるタンパク質産物収率を増強するために有用となり得る。複数の宿主細胞を含有する細胞培養物において、本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドの導入によって、対応する非修飾核酸と比較して、タンパク質生
産効率の増加が得られる。かかるタンパク質生産効率の増加は、例えば、細胞トランスフェクションの増大、キメラポリヌクレオチドからのタンパク質翻訳の増大、核酸分解の減少、及び／又は宿主細胞の自然免疫応答の低減を示すことによって、証明することができる。タンパク質生産は、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定することができ、当該技術分野で公知の様々な機能アッセイにより測定することができる。タンパク質生産は、連続又は流加方法で実施してもよい。
【０９９６】
さらに、潜在的関心対象の細胞株又は細胞株のコレクションにおいて、特定のポリペプチド、特に、既知活性を有する参照タンパク質のタンパク質変異体などの目的のポリペプチドの発現を最適化することが有用である。一実施形態では、複数の標的細胞型を用意し、複数の標的細胞型の各々と、目的のポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを独立に接触させることによって、標的細胞における目的のポリヌクレオチドの発現を最適化する方法が提供される。細胞は、２つ以上のキメラポリヌクレオチドで同時又は連続的にトランスフェクトしてもよい。
【０９９７】
特定の実施形態では、１つ又は複数の目的の核酸又はタンパク質の発現が増大した細胞を得るために、本明細書に記載する方法を複数ラウンド用いてもよい。例えば、目的の核酸又はタンパク質をコード化する１つ又は複数のキメラポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトしてもよい。本明細書に記載する方法に従って、細胞を単離する前、目的の核酸又はタンパク質をコード化する１つ又は複数の核酸によるさらに複数ラウンドのトランスフェクションに付し、その後さらに単離してもよい。この方法は、タンパク質の複合体、同じ若しくは関連の生物学的経路における核酸又はタンパク質、互いの上流若しくは下流で作用する核酸又はタンパク質、互いに調節、活性化若しくは抑制機能を有する核酸又はタンパク質、機能若しくは活性について互いに依存する核酸又はタンパク質、或いは、相同性を有する核酸又はタンパク質の発現が増大した細胞を生成するのに有用となり得る。
【０９９８】
さらに、タンパク質生産効率を高めるために、培養条件を改変してもよい。次に、複数の標的細胞型における目的のポリペプチドの存在及び／又はレベルを検出及び／又は定量して、効率的な標的細胞及びそれに関連する細胞培養条件の選択により、ポリペプチドの発現の最適化を可能にする。かかる方法は、ポリペプチドが、１つ又は複数の翻訳後修飾を含むか、又は実質的な三次構造、すなわち、往々にして効率的なタンパク質生産を困難にする状況を有する場合、特に有用である。
【０９９９】
一実施形態では、本発明の方法に用いられる細胞を培養することができる。細胞は、懸濁液中、又は粘着培養物として培養してよい。細胞は、様々な容器、例えば、限定はされないが、バイオリアクタ、細胞培養バッグ、ウェーブバッグ、培養プレート、フラスコ及び当業者には周知の他の容器において培養することができる。細胞は、ＩＭＤＭ（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、カタログ番号１２４４０−５３）又は任意の他の好適な培地（限定はされないが、化学合成培地製品など）において培養することができる。温度及び雰囲気組成など、細胞培養に好適となり得る周囲条件は、当業者には周知である。本発明の方法は、タンパク質生産に用いるのに好適な任意の細胞と一緒に使用してもよい。
【１０００】
本発明は、例えば、インビトロ、エクスビボ、インサイチュ、又はインビボでの標的細胞集団への修飾核酸の反復導入（例えば、トランスフェクション）を可能にする。例えば、同じ細胞集団との接触を１回又は複数回（例えば、２、３、４、５回若しくは６回以上）反復してよい。一部の実施形態では、細胞集団をキメラポリヌクレオチドと接触させるステップは、細胞集団において予定した効率のタンパク質翻訳が達成されるように十分な回数反復する。核酸修飾により、標的細胞集団の一般に低い細胞傷害性がもたらされれば
、本明細書に記載するように、多様な細胞型において、及び多種の組織内で、反復トランスフェクションが達成可能である。
【１００１】
一実施形態では、本発明のバイオプロセシング方法は、抗体又はその機能性断片を生成するのに用いることができる。機能性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖドメイン、ｓｃＦｖ、又はダイアボディを含み得る。これらは、補体決定領域（ＣＤＲ）を含む任意の領域において可変性であってよい。一実施形態において、ＣＤＲ３領域には完全な多様性がある。別の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ３領域内を除いて、実質的に保存されている。
【１００２】
ヒト、病原体若しくは非ヒトのいずれを起原とするかにかかわらず、任意の生体分子と結合するか、又は会合する抗体を作製することもできる。病原体は、非ヒト哺乳動物、臨床試料中に存在するもの、又は美容品若しくは医薬品材料などの市販の製品に由来するものであってもよい。これらは、臨床試料又は任意の生物からの組織サンプルなどの任意の試料若しくはサンプルに結合し得る。
【１００３】
一部の実施形態では、接触ステップは、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、８４時間、９６時間、及び１０８時間からなる群から選択される頻度で、２０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満若しくは１００ｎＭ未満の濃度で、複数回反復する。組成物はまた、１ｍＭ未満、５ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、１００ｍＭ未満又は５００ｍＭ未満で投与してもよい。
【１００４】
一部の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、細胞当たり５０分子、１００分子／細胞、２００分子／細胞、３００分子／細胞、４００分子／細胞、５００分子／分子、６００分子／細胞、７００分子／細胞、８００分子／細胞、９００分子／細胞、１０００分子／細胞、２０００分子／細胞、又は５０００分子／細胞の量で添加する。
【１００５】
別の実施形態では、キメラポリヌクレオチドは、以下：０．０１ｆモル／１０６細胞、０．１ｆモル／１０６細胞、０．５ｆモル／１０６細胞、０．７５ｆモル／１０６細胞、１ｆモル／１０６細胞、２ｆモル／１０６細胞、５ｆモル／１０６細胞、１０ｆモル／１０６細胞、２０ｆモル／１０６細胞、３０ｆモル／１０６細胞、４０ｆモル／１０６細胞、５０ｆモル／１０６細胞、６０ｆモル／１０６細胞、１００ｆモル／１０６細胞、２００ｆモル／１０６細胞、３００ｆモル／１０６細胞、４００ｆモル／１０６細胞、５００ｆモル／１０６細胞、７００ｆモル／１０６細胞、８００ｆモル／１０６細胞、９００ｆモル／１０６細胞、及び１ｐモル／１０６細胞からなる群から選択される濃度で添加する。
【１００６】
一部の実施形態では、１つ又は複数の測定可能なバイオプロセスパラメータ、例えば、以下：細胞密度、ｐＨ、酸素レベル、グルコースレベル、乳酸レベル、温度、及びタンパク質産生からなる群から選択されるパラメータをモニターすることによって、生物学的産物の産生を検出する。タンパク質産生は、特定生産性（ＳＰ）（溶液中の産物、例えば、異種発現ポリペプチドの濃度）として測定することができ、ｍｇ／Ｌ又はｇ／Ｌとして表すことができ；これ以外に、特定生産性は、ｐｇ／細胞／日として表すこともできる。ＳＰの増加は、既定の２セットの条件下で（例えば、修飾ｍＲＮＡで処理しなかった対照と比較して）産生された産物の濃度の絶対又は相対増加を示すことができる。
【１００７】
細胞
一実施形態では、細胞は、哺乳動物、細菌細胞、植物、微生物、藻類及び真菌細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞は、例えば、限定はされないが、ヒト、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ウサギ、ハムスター又はウシ細胞などの哺乳動物細胞で
あってよい。別の実施形態では、細胞は、限定はされないが、以下：ヒーラ（ＨｅＬａ）、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＫＥＫ  ２９３Ｔ、ベロ（Ｖｅｒｏ）、Ｃａｃｏ、Ｃａｃｏ−２、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、Ｋ５６２、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）、ＣＨＯ−Ｋ１、ＤＧ４４、ＣＨＯＫ１ＳＶ、ＣＨＯ−Ｓ、Ｈｕｖｅｃ、ＣＶ−１、Ｈｕｈ−７、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、２９３、Ａ５４９、ＨｅｐＧ２、ＩＭＲ−９０、ＭＣＦ−７、Ｕ−２０Ｓ、Ｐｅｒ．Ｃ６、ＳＦ９、ＳＦ２１又はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む樹立細胞株に由来するものであってもよい。
【１００８】
特定の実施形態では、細胞は、真菌細胞、例えば、限定はされないが、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）細胞、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）細胞、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）細胞、タマホコリカビ属（Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ）細胞、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）細胞、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）細胞、シゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）細胞、及びアオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）細胞である。
【１００９】
特定の実施形態では、細胞は、細菌細胞、例えば、限定はされないが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、又はＢＬ２１細胞である。本発明の方法によってトランスフェクトしようとする初代細胞及び二次細胞は、多様な組織から取得することができ、例えば、限定はされないが、培養物中に維持することができるあらゆる細胞型を含む。例えば、本発明の方法によってトランスフェクトすることができる初代及び二次細胞として、限定はされないが、線維芽細胞、ケラチノサイト、上皮細胞（例えば、哺乳動物上皮細胞、腸管上皮細胞）、内皮細胞、グリア細胞、神経細胞、血液の形成成分（例えば、リンパ球、骨髄細胞）、筋肉細胞及びこれら体細胞型の前駆体が挙げられる。初代細胞は、同じ種のドナー又は別の種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、トリ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）から得ることもできる。
【１０１０】
精製及び単離
当業者であれば、培養細胞から目的のタンパク質を精製又は単離するために用いる方法を決定することができるであろう。一般に、これは、アンフィニティ結合又は非アンフィニティ精製を用いた捕捉方法によって実施する。目的のタンパク質が、培養細胞により分泌されない場合には、精製又は単離の前に、培養細胞の溶解を実施する必要がある。細胞培地成分、さらには培養添加物、例えば、消泡化合物、並びに他の栄養素及び補充物、細胞、細胞残屑、宿主細胞タンパク質、ＤＮＡ、ウイルスなどと一緒に、目的のタンパク質を含有する非浄化細胞培養液を用いることができる。このプロセスは、バイオリアクタ自体において実施してもよい。液体をｐＨ、温度又はその他の刺激特性などの要望される刺激に対して事前に順化するか、又は液体をポリマーの添加時に順化してもよく、或いは、ポリマーを担体液体に添加してもよく、この担体液体は、液体中に可溶化させようとするポリマーに要する刺激条件に必要なパラメータに対して適切に順化する。ポリマーは、液体と一緒に全体に循環させた後、刺激を適用して（ｐＨ、温度、塩濃度の変化など）、要望されるタンパク質及びポリマー沈殿物を溶液から取り出すことができる。ポリマー及び要望のタンパク質は、残りの液体から分離した後、任意選択で、１回又は複数回洗浄することにより、捕捉された又は緩く結合した混入物を全て除去することができる。次に、例えば、溶離などによって、要望のタンパク質をポリマーから回収することができる。好ましくは、溶離は、ポリマーがその沈殿形態中に残り、要望のタンパク質の選択溶離の工程中にそれに対する任意の不純物を保持するような１セットの条件下で実施してよい。ポリマー及びタンパク質並びに任意の不純物は、アフィニティ、イオン交換、疎水性、又はポリマー若しくは不純物に対して、タンパク質に優先性及び選択性を有するいずれか他のタイプのクロマトグラフィーなどの手段により回収することができる。続いて、溶離したタンパク質を回収し、必要に応じてバッチ様ステップ又は連続フロースルーステップいずれかの追加処理ステップに付すことができる。
【１０１１】
別の実施形態では、潜在的関心対象の細胞株又は細胞株のコレクションにおける特定のポリペプチド、特に、既知の活性を有する参照タンパク質のタンパク質変異体などの目的のポリペプチドの発現を最適化することは有用となり得る。一実施形態では、複数の標的細胞型を用意し、複数の標的細胞型の各々と、ポリペプチドをコード化する修飾ｍＲＮＡを接触させることにより、標的細胞中の目的のポリペプチドの発現を最適化する方法が提供される。さらに、タンパク質生産効率を高めるために、培養条件を改変してもよい。次に、複数の標的細胞型における目的のポリペプチドの存在及び／又はレベルを検出及び／又は定量して、効率的な標的細胞及びそれに関連する細胞培養条件の選択により、ポリペプチドの発現の最適化を可能にする。かかる方法は、ポリペプチドが、１つ又は複数の翻訳後修飾を含むか、又は実質的な三次構造、すなわち、往々にして効率的なタンパク質生産を困難にする状況を有する場合、特に有用である。
【１０１２】
タンパク質回収
目的のタンパク質は、好ましくは、分泌ポリペプチドとして培地から回収するか、又は分泌シグナルなしで発現される場合、宿主細胞溶解物から回収することができる。目的のタンパク質の実質的に均質な調製物が得られるように、他の組換えタンパク質及び宿主細胞タンパク質から目的のタンパク質を精製することが必要な場合がある。細胞及び／又は粒子状細胞残屑を細胞培地又は溶解物から除去してもよい。続いて、目的の産物を混入可溶性タンパク質、ポリペプチド及び核酸から、例えば、免疫アフィニティ又はイオン交換カラムでの分別、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、セファデックス（ＳＥＰＨＡＤＥＸ）（登録商標）クロマトグラフィー、シリカ若しくはカチオン交換樹脂（ＤＥＡＥなど）でのクロマトグラフィーにより、精製することができる。宿主細胞により発現された異種タンパク質を精製する方法は、当該技術分野で公知である。
【１０１３】
本明細書に記載する方法及び組成物は、内在性アゴニスト生体応答を減弱又は阻止する、及び／又は哺乳動物対象において受容体若しくはシグナル伝達分子に拮抗することができるタンパク質を生成するために用いることができる。例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３受容体シグナル伝達を、多発性硬化症などの慢性自己免疫障害、並びに関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎及びクローン病などの炎症性疾患において、増強することができる（キクリー  Ｋ（Ｋｉｋｌｙ  Ｋ）、リュウ  Ｌ（Ｌｉｕ  Ｌ）、Ｎａ  Ｓ、セジウィック（Ｓｅｄｇｗｉｃｈ  ＪＤ）著、（２００６年）カレントオピニオン・イン・イムノロジー（Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、１８（６）：６７０〜５）。別の実施形態では、核酸は、ケモカイン受容体のためのアンタゴニストをコード化する。ケモカイン受容体ＣＸＣＲ−４及びＣＣＲ−５は、宿主細胞へのＨＩＶ侵入に必要である（アレンザナ−セイスデドス  Ｆ（Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ
Ｆ）ら著、（１９９６年）ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ．）１０月３日；３８３（６５９９）：４００）。
【１０１４】
遺伝子サイレンシング
本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドは、細胞集団における１つ又は複数の標的遺伝子の発現をサイレンシングする（すなわち、阻止するか、又は実質的に低減する）上で有用である。ポリペプチドが翻訳されて、ヒストンＨ３メチル化及び後のヘテロクロマチン形成によって標的遺伝子の遺伝子翻訳を低減するような条件下で、配列特異的ヒストンＨ３メチル化を指令することができる目的のポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを集団内の細胞に導入する。一部の実施形態では、サイレンシング機構は、哺乳動物対象に存在する細胞集団に対して実施される。非限定的な例として、有用な標的遺伝子は、突然変異したヤヌスキナーゼ（Ｊａｎｕｓ  Ｋｉｎａｓｅ）−２ファミリーメンバーであり、ここで、哺乳動物対象は、突然変異型標的遺伝子を発現し、異常キナーゼ活性に起因する骨髄増殖性疾患に罹患している。
【１０１５】
キメラポリヌクレオチド及びＲＮＡｉ剤の同時投与も本明細書に記載する。
生物学的経路の調節
細胞に導入される急速な翻訳キメラポリヌクレオチドは、標的生物学的経路を調節する望ましい機構を提供する。かかる調節は、所与の経路の拮抗作用又は作動を含む。一実施形態では、細胞における生物学的経路に拮抗する方法が提供され、この方法は、キメラポリヌクレオチドが前記細胞に局在化されて、キメラポリヌクレオチドから前記細胞においてポリペプチドが翻訳されることができるような条件下で、目的のポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを含む有効量の組成物と、細胞を接触させることにより実施され、ここで、ポリペプチドは、生物学的経路において機能性のポリペプチドの活性を阻害する。生物学的経路の例は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、又はクローン病などの自己免疫若しくは炎症性疾患において欠損した経路であり；とりわけ、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３シグナル伝達経路の拮抗作用が特に有用である。（キクリー  Ｋ（Ｋｉｋｌｙ  Ｋ）、リュウ  Ｌ（Ｌｉｕ  Ｌ）、Ｎａ  Ｓ、セジウィック（Ｓｅｄｇｗｉｃｋ  ＪＤ）著、（２００６年）カレントオピニオン・イン・イムノロジー（Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）１８（６）：６７０〜５を参照のこと）。
【１０１６】
さらに、ケモカイン受容体のアンタゴニストをコード化するキメラポリヌクレオチドが提供され；ケモカイン受容体ＣＸＣＲ−４及びＣＣＲ−５は、例えば、宿主細胞へのＨＩＶの侵入に必要である（アレンザナ−セイスデドス  Ｆ（Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ  Ｆ）ら著、（１９９６年）ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ．）１０月３日；３８３（６５９９）：４００）。
【１０１７】
或いは、細胞における生物学的経路を作動化する方法が提供され、この方法は、核酸が細胞に局在化されて、核酸から細胞において組換えポリペプチドが翻訳されることができ、組換えポリペプチドが、生物学的経路において機能性のポリペプチドの活性を誘導するような条件下で、組換えポリペプチドをコード化する有効量のキメラポリヌクレオチドと、細胞を接触させることにより実施される。生物学的経路の例は、細胞運命決定を調節する経路を含む。かかる作動化は、可逆的であるか、或いは、不可逆的である。
【１０１８】
細胞表面上でのリガンド又は受容体の発現
本明細書に記載する一部の態様及び実施形態では、細胞表面上にリガンド又は受容体（例えば、ホーミング部分）を発現させるために、本明細書に記載するキメラポリヌクレオチドを用いることができる。細胞表面に結合したリガンド又はリガンド受容体部分によって、細胞は、インビボで組織又は薬剤との要望される生物学的相互作用を有することが可能になる。リガンドは、抗体、抗体断片、アプタマー、ペプチド、ビタミン、炭水化物、タンパク質若しくはポリペプチド、受容体、例えば、細胞表面受容体、接着分子、糖タンパク質、糖残基、治療薬、薬剤、グリコサミノグリカン、又はこれらの任意の組み合わせであってよい。例えば、リガンドは、癌細胞特異的抗原を認識する抗体であってよく、これは、細胞が、優先的に腫瘍細胞と相互作用させて、修飾細胞の腫瘍特異的局在化を可能にすることができるようにする。好ましいリガンドは、治療しようとする組織の外側面上の標的分子と相互作用することができると考えられることから、リガンドは、治療しようとする組織中に蓄積する細胞組成物の能力を付与することができる。他の組織に対して限定された交差反応性を有するリガンドが一般に好ましい。
【１０１９】
一部の態様では、リガンドは、細胞が、特定の組織をターゲティングする、又は特定のリガンドと相互作用することを可能にするホーミング部分として作用することができる。このようなホーミング部分として、限定はされないが、以下：特定の結合ペアの任意のメンバー、抗体、モノクローナル抗体、又はそれらの誘導体若しくは類似体、例えば、限定
はされないが、Ｆｖフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、単一ドメイン抗体、ラクダ抗体及びその抗体断片、ヒト化抗体及びその抗体断片、並びにこれらの多価形態；多価結合試薬、限定はされないが、単一特異性若しくは二重特異性抗体、例えば、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖタンデム（（ＳＣＦＶ）２フラグメント）、ジアボティ、トリボディ若しくはテトラボディ（これらは、典型的に、共有結合、或いは安定化（すなわち、ロイシンジッパー若しくはヘリックス安定化）ｓｃＦｖ断片である）を挙げることができ；また、他のホーミング部分として、例えば、アプタマー、受容体及び融合タンパク質がある。
【１０２０】
一部の実施形態では、ホーミング部分は、表面結合抗体であってもよく、これは、細胞ターゲティング特異性の調整を可能にし得る。要望されるターゲティング部位についての目的のエピトープに対して、高度に特異的な抗体を増強することができるため、これは、特に有用である。一実施形態では、複数の抗体を細胞の表面上に発現させるが、これによって、各抗体は、要望の標的について異なる特異性を有し得る。かかる手法は、ホーミング相互作用の結合活性及び特異性を高めることができる。
【１０２１】
当業者は、要望される細胞の局在化又は機能に基づいて任意のホーミング部分を選択することができ、例えば、タモキシフェンなどのエストロゲン受容体リガンドは、細胞表面に増加した数のエストロゲン受容体を有するエストロゲン依存性乳癌細胞に細胞をターゲティングさせることができる。リガンド／受容体相互作用の他の非限定的な例として、ＣＣＲＩ（例えば、関節リウマチ、及び／又は多発性硬化症における炎症関節組織又は脳の治療のため）、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８（例えば、リンパ節組織へのターゲティング）、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０（例えば、腸組織へのターゲティングのため）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ１０（例えば、皮膚へのターゲティングのため）、ＣＸＣＲ４（例えば、移動の全体的増強のため）、ＨＣＥＬＬ（例えば、炎症及び炎症性疾患、骨髄の治療のため）、α４β７（例えば、腸粘膜ターゲティングのため）、ＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１（例えば、内皮へのターゲティング）が挙げられる。一般に、ターゲティングに関与するあらゆる受容体（例えば、癌転移）を、本明細書に記載する方法及び組成物での使用に利用することができる。
【１０２２】
細胞系譜の調節
標的哺乳動物細胞における細胞運命の改変を誘導する方法が提供される。標的哺乳動物細胞は、前駆体細胞であってもよく、改変は、特定の系譜への分化の駆動、又はかかる分化の阻止を含み得る。或いは、標的哺乳動物細胞は、分化した細胞であってもよく、細胞運命の改変は、多能性前駆細胞への脱分化の駆動、又はかかる脱分化（例えば、癌幹細胞への癌細胞の脱分化）の阻止を含む。細胞運命の変化が要望される状況では、細胞運命誘導性ポリペプチドをコード化する有効量のｍＲＮＡを、細胞運命の改変が誘導されるような条件下で、標的細胞に導入する。一部の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、細胞の亜集団を第１表現型から第２表現型に再プログラムする上で有用である。かかる再プログラム化は、一過性又は永続的のいずれであってもよい。任意選択で、再プログラム化は、中間表現型を採用するように標的細胞を誘導する。
【１０２３】
さらに、本発明の方法は、高い効率のトランスフェクション、細胞を再トランスフェクトする能力、及び標的細胞中に産生される組換えポリペプチドの量の維持能力によって、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）を作製する上で特に有用である。さらに、本明細書に記載する方法を用いて作製されたｉＰＳ細胞の使用は、奇形腫形成の発生率低下をもたらすと予想される。
【１０２４】
また、標的細胞集団における細胞分化を低減する方法も提供される。例えば、ポリペプチドが翻訳されて、前駆細胞の分化を低減するような条件下で、１つ又は複数の前駆細胞
型を含有する標的細胞集団を、ポリペプチドをコード化する有効量のキメラポリヌクレオチドと接触させる。非限定的な例では、標的細胞集団は、哺乳動物対象において損傷組織、又は外科的処置により影響を受けた組織を含む。前駆細胞は、例えば、間質前駆細胞、神経前駆細胞、又は間葉前駆細胞である。
【１０２５】
具体的な実施形態では、１つ又は複数の分化因子Ｇａｔａ４、Ｍｅｆ２ｃ及びＴｂｘ４をコード化するキメラポリヌクレオチドが提供される。これらのｍＲＮＡ生成因子を線維芽細胞に導入して、心筋細胞への再プログラム化を駆動する。かかる再プログラム化は、ｍＲＮＡ含有パッチ又は他の材料を損傷心臓組織と接触させて、心臓の再生を促進することにより、インビボで実施することができる。かかる方法は、線維形成とは対照的に、心筋細胞発生を促進する。
【１０２６】
細胞死の媒介
一実施形態では、細胞死受容体、細胞死受容体リガンド又はこれらの組み合わせの発現を増大することによって、細胞（例えば、癌細胞）にアポトーシスを誘導するために、キメラポリヌクレオチド組成物を用いることができる。この方法は、任意の要望される細胞に細胞死を誘導するために用いることができ、細胞が自然のアポトーシスシグナルから逃れる癌の治療において特に有用である。
【１０２７】
アポトーシスは、複数の独立したシグナル伝達経路によって誘導することができ、これらの経路は、いくつかの「細胞死受容体」及びそれらのリガンド（腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体／リガンドスーパーファミリーに属する）同士の多重相互作用から成る最終エフェクター機構に収束する。最もよく特性決定された細胞死受容体は、ＣＤ９５（「Ｆａｓ」）、ＴＮＦＲＩ（ｐ５５）、細胞死受容体３（ＤＲ３又はＡｐｏ３／ＴＲＡＭＯ）、ＤＲ４及びＤＲ５（ａｐｏ２−ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）である。アポトーシスの最終エフェクター機構は、カスパーゼと呼ばれる一連のプロテイナーゼの活性化であると考えられる。これらカスパーゼの活性化は、一連の生存細胞のタンパク質の切断及び細胞死を引き起こす。細胞死受容体／リガンド誘導によるアポトーシスの分子機構は当該技術分野において公知である。例えば、Ｆａｓ／Ｆａｓ媒介アポトーシスは、３つのＦａｓＬ分子の結合によって誘導され、この結合は、Ｃ末端細胞死ドメイン（ＤＤ）を介してＦａｓ受容体の三量体化を誘導し、次に、これが、アダプタタンパク質ＦＡＤＤ（細胞死ドメインを有するＦａｓ関連タンパク質）及びカスパーゼ−８を動員する。この３分子複合体、Ｆａｓ／ＦＡＩＤＤ／カスパーゼ−８のオリゴマー化によって、プロ酵素カスパーゼ−８の活性カスパーゼ−８へのタンパク質分解切断が起こり、次に、これが、タンパク質分解を介して他の下流カスパーゼ（カスパーゼ−３など）を活性化することにより、アポトーシスプロセスを開始する。細胞死リガンドは、一般に、三量体又はより高次の構造に形成されるとき、アポトーシス性となる。単量体の場合、これらは、細胞死受容体との結合のために、三量体と競合することにより、抗アポトーシス因子として作用し得る。
【１０２８】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチド組成物は、細胞死受容体（例えば、Ｆａｓ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＭＯ、ＴＮＦＲ、ＴＬＲなど）をコード化する。キメラポリヌクレオチドのトランスフェクションにより細胞死受容体を発現するようにした細胞は、その受容体を活性化するリガンドによって細胞死を受けやすくなる。同様に、例えば、細胞表面上に細胞死リガンドを発現するようにした細胞は、トランスフェクト細胞が標的細胞と接触すると、受容体によって細胞死を誘導する。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチド組成物は、細胞死受容体リガンド（例えば、ＦａｓＬ、ＴＮＦなど）をコード化する。別の実施形態では、キメラポリヌクレオチド組成物は、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、カスパーゼ８、カスパーゼ９など）をコード化する。癌細胞が、非増殖又は制御された増殖形態への適正な分化の失敗を頻繁に示す場合、別の実施形態において、合成、キメラポリヌクレオチド組成物は、細胞死受容体と、その適切な活性化リガンドの両方をコード
化する。別の実施形態では、合成、キメラポリヌクレオチド組成物は、分化因子をコード化し、これは、癌幹細胞などの癌細胞に発現されると、非病原性若しくは非自己再生表現型（例えば、細胞増殖速度の低下、細胞分裂の抑制など）に分化するように細胞を誘導するか、又は休止細胞期（例えば、Ｇ０休止期）に入るよう細胞を誘導する。
【１０２９】
当業者であれば、アポトーシス誘導技術の使用は、キメラポリヌクレオチドを、例えば、腫瘍細胞に適正にターゲティングして、広範囲に広がる不要な細胞死を防止する必要があることは理解されよう。従って、キメラポリヌクレオドを癌細胞だけで発現させるように癌抗原を認識する送達機構（例えば、結合リガンド又は抗体、標的リポソームなど）を使用することができる。
【１０３０】
美容品用途
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドを美容状態の治療、改善又は予防に用いることもできる。かかる状態としては、座瘡、酒さ、瘢痕、皺、湿疹、帯状疱疹、乾癬、シミ、母斑、乾燥肌、皮膚硬結、発疹（例えば、おむつかぶれ、汗疹）、疥癬、蕁麻疹、疣贅、虫刺され、尋常性白斑、ふけ、そばかす、並びに加齢の一般的兆候が挙げられる。
【１０３１】
ＶＩ．キット及び装置
キット
本発明は、本発明の方法を好都合及び／又は効果的に実施するための各種キットを提供する。典型的に、キットは、ユーザが、対象の様々な治療を実施する、及び／又は様々な実験を実施することを可能にするのに十分な量及び／又は数の成分を含む。
【１０３２】
一態様では、本発明は、本発明の分子（キメラポリヌクレオチド）を含むキットを提供する。一実施形態では、キットは、１つ又は複数の機能性抗体又はその機能性断片を含む。
【１０３３】
キットは、タンパク質産生を目的とするものであってよく、翻訳可能な領域を含む第１キメラポリヌクレオチドを含む。キットは、製剤組成物を形成するためのパッケージング及び説明書並びに／又は送達剤をさらに含んでもよい。送達剤は、食塩水、緩衝液、脂肪様物質（ｌｉｐｉｄｏｉｄ）又は本明細書に開示する任意の送達剤を含み得る。
【１０３４】
一実施形態では、緩衝液は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸塩及び／又はＥＤＴＡを含んでもよい。別の実施形態では、緩衝液は、限定はされないが、食塩水、２ｍＭカルシウムを含む食塩水、５％スクロース、２ｍＭカルシウムを含む５％スクロース、５％マンニトール、２ｍＭカルシウムを含む５％マンニトール、乳酸リンゲル液、塩化ナトリウム、２ｍＭカルシウムを含む塩化ナトリウム、及びマンノースを含んでもよい（例えば、米国特許出願公開第２０１２０２５８０４６号明細書を参照のこと；本明細書において全体として参照により援用される）。別の実施形態では、緩衝液を沈殿させてもよく、又は凍結乾燥してもよい。一定の、再現可能で、しかもより高い濃度の食塩水又は単純な緩衝液配合を可能にするために、各成分の量を変えてもよい。また、特定の期間にわたり、及び／又は様々な条件下で、緩衝液中の修飾ｍＲＮＡの安定性を高めるために、成分を変えてもよい。一態様では、本発明は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、以下のものを含む：標的細胞に導入されたとき、翻訳可能領域によりコード化される要望の量のタンパク質を産生するのに有効な量で提供される、翻訳可能領域を含むキメラポリヌクレオチド；細胞の自然免疫応答を実質的に阻害するのに有効な量で提供される、阻害性核酸を含む第２ポリヌクレオチド；並びにパッケージング及び説明書。
【１０３５】
一態様では、本発明は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、翻訳可能領域を含むキメラポリヌクレオチド（このポリヌクレオチドは、細胞ヌクレアーゼによる分
解の低減を呈示する）、並びにパッケージング及び説明書を含む。
【１０３６】
一態様では、本発明は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、翻訳可能領域を含むキメラポリヌクレオチド（このポリヌクレオチドは、細胞ヌクレアーゼによる分解の低減を呈示する）、並びに第１核酸の翻訳可能領域の翻訳に好適な哺乳動物細胞を含む。
【１０３７】
装置
本発明は、目的のポリペプチドをコード化するキメラポリヌクレオチドを組み込むことができる装置を提供する。これらの装置は、安定な製剤において、ヒト患者など、それを必要とする対象に直ちに送達するために利用可能な製剤中にポリヌクレオチドを合成するための試薬を含有する。
【１０３８】
投与のための装置は、本明細書に教示する単一回、複数回、又は分割投与レジメンに従い、本発明のキメラポリヌクレオチドを送達するために使用することができる。かかる装置は、例えば、２０１３年３月９日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２号明細書（代理人整理番号Ｍ３００）（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に教示されている。
【１０３９】
細胞、臓器及び組織への複数回投与のための当該技術分野で公知の方法及び装置が、本発明の実施形態として開示される方法及び組成物と一緒に使用するために考慮される。これらは、例えば、複数の針を有する方法及び装置、例えば、管腔若しくはカテーテルを使用するハイブリッド装置、並びに熱、電流若しくは放射線駆動機構を使用する装置を含む。
【１０４０】
本発明によれば、これらの複数回投与装置は、本明細書で考慮する単一回、複数回、又は分割用量を送達するために用いることができる。かかる装置は、例えば、２０１３年３月９日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２号明細書（代理人整理番号Ｍ３００）（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に教示されている。
【１０４１】
一実施形態では、キメラポリヌクレオチドを３つの異なる、任意選択で隣接した部位に、同時に、又は６０分の時間内に（例えば、４、５、６、７、８、９、又は１０の部位への同時又は６０分の時間内の投与）、少なくとも３つの針で皮下若しくは筋肉内投与する。
【１０４２】
カテーテル及び／又は管腔を使用する方法及び装置
カテーテル及び管腔を使用する方法及び装置は、単一回、複数回、又は分割投与スケジュールに従い、本発明のキメラポリヌクレオチドを投与するために使用することができる。かかる方法及び装置は、２０１３年３月９日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２号明細書（代理人整理番号Ｍ３００）（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に教示されている。
【１０４３】
電流を使用する方法及び装置
電流を使用する方法及び装置は、本明細書に教示する単一回、複数回、又は分割投与レジメンに従い、本発明のキメラポリヌクレオチドを送達するために使用することができる。かかる方法及び装置は、例えば、２０１３年３月９日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２号明細書（代理人整理番号Ｍ３００）（この内容は、本明細書において全体として参照により援用される）に教示されている。
【１０４４】
ＶＩＩ．定義
本明細書の様々な箇所で、本開示の化合物の置換基を群又は範囲で開示する。本開示は、そのような群及び範囲のメンバーのあらゆる個別の部分組み合わせを含む。例えば、用語「Ｃ１〜６アルキル」は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、及びＣ６アルキルを個別に示すことを意図する。本明細書において、形態「任意選択で置換されたＸ」（例えば、任意選択で置換されたアルキル）というフレーズは、「Ｘ（Ｘは、任意選択で置換されている）」（例えば、「アルキル（前記アルキルは、任意選択で置換されている」）と同等であることを意図する。「Ｘ」（例えば、アルキル）という特徴自体が任意選択であることを意味するものではない。
【１０４５】
約：本明細書で使用されるとき、用語「約」は、記載する値の＋／−１０％を意味する。
併用した投与：本明細書で使用されるとき、用語「併用した投与」又は「併用投与」は、患者に対して各薬剤の効果のオーバーラップが存在し得るように、２つ以上の薬剤を同時に、又は所定の時間間隔内に、対象に投与する。一部の実施形態では、互いに約６０、３０、１５、１０、５、若しくは１分以内に投与する。一部の実施形態では、薬剤の投与は、組み合わせ（例えば、相乗）効果が達成されるように、十分に短い間隔にする。
【１０４６】
アジュバント：本明細書で使用されるとき、用語「アジュバント」は、抗原に対する対象の免疫応答を増強する物質を意味する。
動物：本明細書で使用されるとき、用語「動物」は、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」は、任意の発育段階のヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」は、任意の発育段階のヒト以外の動物を指す。特定の実施形態では、ヒト以外動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、畜牛、霊長類、又はブタ）である。一部の実施形態では、動物として、限定はされないが、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び蠕虫が挙げられる。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作した動物、又はクローンである。
【１０４７】
抗原：本明細書で使用されるとき、用語「抗原」は、各々の抗体に特異的に結合する物質を指す。抗原は、本明細書に用いる癌抗原など、身体を起原とするもの、又は例えば、感染因子などの外部環境を起原とするもののいずれであってもよい。
【１０４８】
目的の抗原又は要望される抗原：本明細書で使用されるとき、用語「目的の抗原」又は「要望される抗原」は、抗体及び断片、突然変異体、変異体、並びに本明細書に記載するそれらの改変物によって免疫特異的に結合される、本明細書に記載のタンパク質及びその他の生体分子を包含する。目的の抗原の例として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：インスリン、インスリン様増殖因子、ｈＧＨ、ｔＰＡ、サイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、インターフェロン（ＩＦＮ）α、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮω、又はＩＦＮτ、ＴＮＦα及びＴＮＦβなどの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＮＦγ、ＴＲＡＩＬ；Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１及びＶＥＧＦ。
【１０４９】
約：本明細書で使用されるとき、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」又は「約（ａｂｏｕｔ）」は、対象とする１つ又は複数の値に適用されるとき、記載する参照値に類似する値を指す。特定の実施形態では、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」又は「約（ａｂｏｕｔ）」は、別に記載があるか、又は文脈から明らかに別の意味に解釈されるのでない限り、記載される参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％
、４％、３％、２％、１％、又はそれ以下の範囲内に、いずれかの方向で（より大きいか、又はより小さい）入る値の範囲を指す（ただし、かかる数値が、考えられる値の１００％を超える場合を除く）。
【１０５０】
〜と会合した：本明細書で使用されるとき、用語「〜と会合した」、「結合した」、「連結した」、「結合した」、及び「テザリングした」は、２つ以上の部分に関して用いられるとき、これらの部分が、直接、若しくは結合物質として作用する１つ又は複数の別の部分を介して、互いに物理的に結合又は連結することにより、当該構造が用いられる条件、例えば、生理学的条件下で、部分が物理的に結合されるように、十分に安定した構造を形成することを意味する。「結合」は、厳密に直接的共有化学結合によるものである必要はない。また、これは、「結合した」実体は、物理的に結合したままであるように、十分に安定したイオン若しくは水素結合又はハイブリダイゼーションによる結合性を示す場合もある。
【１０５１】
二官能性：本明細書で使用されるとき、用語「二官能性」は、少なくとも２つの機能を維持することができるか、又は維持する任意の物質、分子若しくは部分を指す。機能は、同じ成果又は異なる成果を果たし得る。機能を生み出す構造は、同じか、又は異なり得る。例えば、本発明の二官能性修飾ｍＲＮＡは、細胞傷害性ペプチドをコード化し得（第１機能）、これらのコード化ＲＮＡを含むヌクレオチドは、それ自体で、且つおのずから細胞傷害性である（第２機能）。この例では、癌細胞に対する二官能性修飾ＲＮＡの送達は、癌を改善又は治療し得るペプチド若しくはタンパク質分子を産生するだけでなく、細胞にヌクレオシドの細胞傷害性ペイロードを送達し、それによって修飾ＲＮＡの翻訳ではなく、分解が起こる。
【１０５２】
生体適合性：本明細書で使用されるとき、用語「生体適合性」は、免疫系による傷害、毒性若しくは拒絶のリスクをほとんど若しくは全く呈示せずに、生存細胞、組織、臓器若しくは系と適合性であることを意味する。
【１０５３】
生分解性：本明細書で使用されるとき、用語「生分解性」は、生物の作用により、無害の生成物に分解可能であることを意味する。
生物活性：本明細書で使用されるとき、用語「生物活性」は、生物系及び／又は生物において、活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、ある生物に投与されて、この生物に生物学的作用を及ぼす物質は、生物活性であると考えられる。詳細な実施形態において、本発明のキメラポリヌクレオチドは、キメラポリヌクレオチドの一部であっても、生物活性であるか、又は生物学的に関連すると考えられる活性を模倣する場合には、生物活性であるとみなされ得る。
【１０５４】
癌幹細胞：本明細書で使用されるとき、用語「癌幹細胞」は、自己再生及び／又は異常増殖及び分化を経て、腫瘍を形成し得る細胞である。
化学用語：以下に、「アシル」から「チオール」までの各化学用語の定義を記載する。
【１０５５】
本明細書で使用されるとき、用語「アシル」は、本明細書に定義するカルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義する水素又はアルキル基（例えば、ハロアルキル基）を示し、例として、ホルミル（すなわち、カルボキシアルデヒド基）、アセチル、トリフルオロアセチル、プロピオニル、ブタノイルなどが挙げられる。例示的非置換アシル基は、１〜７、１〜１１、又は１〜２１個の炭素を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【１０５６】
任意選択で置換されたアシル基の非限定的な例として、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアシル、アリールアルコキシカルボニル、アリーロイル、カルバモイル、
カルボキシアルデヒド、（ヘテロシクリル）イミノ、及び（ヘテロシクリル）オイルが挙げられる。
【１０５７】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニル」基は、カルボニル原子を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアルコキシを示す（例えば、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）。例示的非置換アルコキシカルボニルは、１〜２１個の炭素（例えば、１〜１１又は１〜７個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルコキシ基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【１０５８】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアシル」基は、本明細書に定義するアルコキシカルボニルで置換した、本明細書に定義するアシル基を示す（例えば、−Ｃ（Ｏ）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）。例示的非置換アルコキシカルボニルアシルは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ１〜６アシル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜１０アシル、又はＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜２０アシルのように、３〜１０、３〜１３、３〜１７、３〜２１、又は３〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルコキシ及びアルキル基はさらに、各基について、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）で独立に置換される。
【１０５９】
本明細書で使用されるとき、「アリールアルコキシカルボニル」基は、カルボニルを介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアリールアルコキシ基を示す（例えば、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ−アルキル−アリール）。例示的非置換アリールアルコキシ基は、８〜３１個の炭素（例えば、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ−カルボニル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルコキシ−カルボニル、又はＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜２０アルコキシ−カルボニルのように、８〜１７又は８〜２１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アリールアルコキシカルボニル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０６０】
本明細書で使用されるとき、「アリーロイル」基は、カルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアリール基を示す。例示的非置換アリーロイル基は、炭素数７〜１１である。一部の実施形態では、アリール基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０６１】
本明細書で使用されるとき、「カルバモイル」基は、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲＮ１）２を示し、ここで、各ＲＮ１の意味は、本明細書に記載する「アミノ」の定義にみいだされる。
本明細書で使用されるとき、「カルボキシアルデヒド」基は、構造−ＣＨＯを有するアシル基を示す。
【１０６２】
本明細書で使用されるとき、「（ヘテロシクリル）イミノ」基は、イミノ基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するヘテロシクリル基を示す。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０６３】
本明細書で使用されるとき、「（ヘテロシクリル）オイル」基は、カルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するヘテロシクリル基を示す。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０６４】
本明細書で使用されるとき、用語「アルキル」は、別に明示されていない限り、１〜２０個の炭素（例えば、１〜１０又は１〜６個の炭素）の直鎖及び分岐鎖飽和基の両方を含む。アルキル基の例として、メチル、エチル、ｎ−及びイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−、イソ−及びｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチルなどが挙げられ、これらは、任意選択で、以下のものからなる群から独立に選択される１、２、３個、又は炭素数２以上のアルキル基の場合には、４個の置換基で置換してもよい：（１）Ｃ１〜６アルコキシ；（２）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（３）本明細書に定義するアミノ（例えば、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）又は置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２、ここで、ＲＮ１は、アミノについて定義した通り）；（４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２〜９ヘテロシクリル）オキシ；（８）任意選択でＯ−保護基で置換されたヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒド又はアシル）；（１１）Ｃ１〜７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）任意選択でＯ−保護基で置換された−ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ＲＢ’及びＲＣ’は各々、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１６）−ＳＯ２ＲＤ’、ここで、ＲＤ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）ヒドロキシからなる群から選択される；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ＲＥ’及びＲＦ’は各々、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ’、ここで、ＲＧ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’、ここで、ＲＨ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０
（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；（２０）−ＮＲＪ’Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ’、ここで、ＲＪ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＫ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；並びに（２１）アミジン。一部の実施形態では、これらの基は各々、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリールのアルキレン基をオキソ基でさらに置換することにより、それぞれのアリーロイル置換基を付与することができる。
【１０６５】
本明細書で使用されるとき、用語「アルキレン」は、２つの水素原子の除去により、直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素から得られる飽和二価炭化水素基を示し、例として、メチレン、エチレン、イソプロピレンなどが挙げられる。用語「Ｃｘ〜ｙアルキレン」及び接頭辞「Ｃｘ〜ｙアルク−（ａｌｋ−）」は、ｘ〜ｙ個の炭素を有するアルキレン基を示す。ｘの例示的値は、１、２、３、４、５、及び６であり、ｙの例示的値は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、又は２０である（例えば、Ｃ１〜６、Ｃ１〜１０、Ｃ２〜２０、Ｃ２〜６、Ｃ２〜１０、又はＣ２〜２０アルキレン）。一部の実施形態では、アルキレンは、アルキル基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。同様に、任意の基に付けられる接尾辞「−エン（−ｅｎｅ）」は、その基が、二価の基であることを表す。
【１０６６】
任意選択で置換されたアルキル及びアルキレン基の非限定的な例として、以下：アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルフィニルアルキル、アミノアルキル、カルバモイルアルキル、カルボキシアルキル、カルボキシアミノアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ペルフルオロアルキル、及びスルホアルキルが挙げられる。
【１０６７】
本明細書で使用されるとき、「アシルアミノアルキル」基は、アミノ基に結合し、次にはこれが、本明細書に定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアシル基を示す（すなわち、−アルキル−Ｎ（ＲＮ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基（例えば、ハロアルキル）であり、ＲＮ１は、本明細書に定義する通りである）。例示的非置換アシルアミノアルキル基は、１〜４１個の炭素（例えば、１〜７、１〜１３、１〜２１、２〜７、２〜１３、２〜２１、又は２〜４１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキレン基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換
され、及び／又はアミノ基は、−ＮＨ２又は−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立に、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、アリール、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、若しくは本明細書に記載するその他）、又はアルコキシカルボニルアルキルであり、ＲＮ２は各々、Ｈ、アルキル、若しくはアリールであってよい。
【１０６８】
本明細書で使用されるとき、「アシルオキシアルキル」基は、酸素原子に結合し、次にはこれが、アルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアシル基を示す（すなわち、−アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）。例示的非置換アシルオキシアルキル基は、１〜２１個の炭素（例えば、１〜７又は１〜１１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキレン基は、独立に、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【１０６９】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシアルキル」基は、アルコキシ基で置換されているアルキル基を示す。例示的非置換アシルオキシアルキル基は、２〜４０個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ−Ｃ１〜１０アルキル、又はＣ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルキルのように、２〜１２又は２〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル及びアルコキシは、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１０７０】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアルキル」基は、本明細書に定義するアルコキシカルボニル基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す（例えば、−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜２０、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜６アルキル基である）。例示的非置換アルコキシカルボニルアルキルは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜１０アルキル、又はＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜２０アルキルのように、３〜１０、３〜１３、３〜１７、３〜２１、又は３〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル及びアルコキシ基は各々、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに独立に置換されている。
【１０７１】
本明細書で使用されるとき、「アルキルスルフィニルアルキル」基は、アルキルスルフィニル基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す。例示的非置換アルキルスルフィニルアルキル基は、２〜１２、２〜２０、又は２〜４０個の炭素を含む。一部の実施形態では、アルキル基は各々、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１０７２】
本明細書で使用されるとき、「アミノアルキル」基は、本明細書に定義するアミノ基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す。アルキル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基からなる群から選択される）。
【１０７３】
本明細書で使用されるとき、「カルバモイルアルキル」基は、本明細書に定義するカルバモイル基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す。アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１０７４】
本明細書で使用されるとき、「カルボキシアルキル」基は、本明細書に定義するカルボ
キシ基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す。アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができ、カルボキシ基は、任意選択で、１つ又は複数のＯ−保護基で置換することができる。
【１０７５】
本明細書で使用されるとき、「カルボキシアミノアルキル」基は、本明細書に定義するカルボキシで置換された、本明細書に定義するアミノアルキル基を示す。カルボキシ、アルキル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基、及び／又はＯ−保護基からなる群から選択される）。
【１０７６】
本明細書で使用されるとき、「ハロアルキル」基は、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す。ハロアルキルは、１、２、３個、又は炭素数２以上のアルキル基の場合には、４個のハロゲンでさらに置換してもよい。ハロアルキル基としては、ペルフルオロアルキル（例えば、−ＣＦ３）、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、及び−ＣＨＩＣＨ３が挙げられる。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１０７７】
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシアルキル」基は、ただ１個のヒドロキシ基がアルキル基の１炭素原子に結合し得るという条件で、１〜３個のヒドロキシ基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示し、例として、ヒドロキシメチル、ジヒドロキシプロピルなどが挙げられる。一部の実施形態では、ヒドロキシアルキル基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【１０７８】
本明細書で使用されるとき、「ペルフルオロアルキル」基は、本明細書に定義するアルキル基を示し、ここで、アルキル基に結合した水素ラジカルは各々、フッ化物ラジカルによって置換されている。ペルフルオロアルキル基の例として、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどが挙げられる。
【１０７９】
本明細書で使用されるとき、「スルホアルキル」基は、−ＳＯ３Ｈのスルホ基で置換された、本明細書に定義するアルキル基を示す。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができ、スルホ基は、１個又は複数のＯ−保護基（例えば、本明細書に記載するもの）でさらに置換することができる。
【１０８０】
本明細書で使用されるとき、用語「アルケニル」は、別に明示されていない限り、１個又は複数の炭素−炭素二重結合を含む、２〜２０個の炭素（例えば、２〜６又は２〜１０個の炭素原子）の一価直鎖又は分岐鎖基を示し、例として、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルなどが挙げられる。アルケニルは、シス及びトランス異性体を含む。アルケニル基は、任意選択で、本明細書に定義するアミノ、アリール、シクロアルキル、若しくはヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又は本明細書に記載する例示的アルキル置換基のいずれかから独立に選択される１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０８１】
任意選択で置換されるアルケニル基の非限定的な例として、以下：アルコキシカルボニルアルケニル、アミノアルケニル、及びヒドロキシアルケニルが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアルケニル」基は、本明細書に定義するアルコキシカルボニル基で置換された、本明細書に定義するアルケニル基を示す（例えば、−アルケニル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜２０、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜６アルキル基）。例示的非置換アルコキシカルボニルアルケニルは、４〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜１０アルケニル、又はＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜２０アルケニルのように、４〜１０、４〜１３、４〜１７、４〜２１、又は４〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル、アルケニル及びアルコキシ基は各々、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに独立に置換されている。
【１０８２】
本明細書で使用されるとき、「アミノアルケニル」基は、本明細書に定義するアミノ基で置換された、本明細書に定義するアルケニル基を示す。アルケニル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基からなる群から選択される）。
【１０８３】
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシアルケニル」基は、ただ１個のヒドロキシ基がアルキル基の１炭素原子に結合し得るという条件で、１〜３個のヒドロキシ基で置換された、本明細書に定義するアルケニル基を示し、例として、ジヒドロキシプロペニル、ヒドロキシイソペンテニルなどが挙げられる。一部の実施形態では、ヒドロキシアルケニル基は、アルキルについて本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【１０８４】
本明細書で使用されるとき、用語「アルキニル」は、１炭素−炭素三重結合を含む、２〜２０個の炭素（例えば、２〜４、２〜６、又は２〜１０個の炭素原子）の一価直鎖又は分岐鎖基を示し、例として、エチニル、１−プロピニルなどが挙げられる。アルキニル基は、任意選択で、本明細書に定義するアリール、シクロアルキル、若しくはヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又は本明細書に記載する例示的アルキル置換基のいずれかから独立に選択される、１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０８５】
任意選択で置換されるアルキニル基の非限定的な例として、以下：アルコキシカルボニルアルキニル、アミノアルキニル、及びヒドロキシアルキニルが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアルキニル」基は、本明細書に定義するアルコキシカルボニル基で置換された、本明細書に定義するアルキニル基を示す（例えば、−アルキニル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜２０、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜６アルキル基である）。例示的非置換アルコキシカルボニルアルキニルは、４〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜１０アルキニル、又はＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜２０アルキニルのように、４〜１０、４〜１３、４〜１７、４〜２１、又は４〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル、アルキニル及びアルコキシ基は各々、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに独立に置換されている。
【１０８６】
本明細書で使用されるとき、「アミノアルキニル」基は、本明細書に定義するアミノ基で置換された、本明細書に定義するアルキニル基を示す。アルキニル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０
アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基からなる群から選択される）。
【１０８７】
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシアルキニル」基は、ただ１個のヒドロキシ基がアルキル基の１炭素原子に結合し得るという条件で、１〜３個のヒドロキシ基で置換された、本明細書に定義するアルキニル基を示す。一部の実施形態では、ヒドロキシアルキニル基は、アルキルについて本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【１０８８】
本明細書で使用されるとき、用語「アミノ」は、−Ｎ（ＲＮ１）２を示し、ここで、ＲＮ１は各々、独立に、Ｈ、ＯＨ、ＮＯ２、Ｎ（ＲＮ２）２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、Ｎ−保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アルクアリール、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、カルボキシアルキル（例えば、任意選択でＯ−保護基で置換されたもの、例えば、任意選択で置換されたアリールアルコキシカルボニル基又は本明細書に記載のいずれか）、スルホアルキル、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、又は本明細書に記載するその他）、アルコキシカルボニルアルキル（例えば、Ｏ−保護基で任意選択により置換されたもの、例えば、任意選択で置換されたアリールアルコキシカルボニル基又は本明細書に記載のいずれか）、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又はアルクヘテロシクリル（例えば、アルクヘテロアリール）であり、ここに挙げたＲＮ１基の各々は、それぞれの基について本明細書に定義するように、任意選択で置換することができ；或いは、２つのＲＮ１が結合して、ヘテロシクリル又はＮ−保護基を形成し、ここで、ＲＮ２は各々、独立に、Ｈ、アルキル、又はアリールである。本発明のアミノ基は、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）又は置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２）であってよい。好ましい実施形態では、アミノは、−ＮＨ２又は−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立に、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、カルボキシアルキル、スルホアルキル、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、又は本明細書に記載するその他）、アルコキシカルボニルアルキル（例えば、ｔ−ブトキシカルボニルアルキル）又はアリールであり、ＲＮ２は各々、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、又はＣ６〜１０アリールである。
【１０８９】
任意選択で置換されるアミノ基の非限定的な例として、アシルアミノ及びカルバミルが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「アシルアミノ」基は、本明細書に定義するアミノ基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアシル基を示す（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基（例えば、ハロアルキル）であり、ＲＮ１は、本明細書に定義する通りである）。例示的非置換アシルアミノ基は、１〜４１個の炭素（例えば、１〜７、１〜１３、１〜２１、２〜７、２〜１３、２〜２１、又は２〜４１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換され、及び／又はアミノ基は、−ＮＨ２又は−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立に、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、アリール、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、若しくは本明細書に記載するその他）、又はアルコキシカルボニルアルキルであり、ＲＮ２は各々、Ｈ、アルキル、若しくはアリールであってよい。
【１０９０】
本明細書で使用されるとき、「カルバミル」基は、構造−ＮＲＮ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ又は−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＮ１）２を有するカルバメート基を指し、ここで、ＲＮ１は各々、本明細書に記載する「アミノ」の定義にある意味を有し、Ｒは、本明細書に記載するアルキル、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、アリール、アルカリール、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又はアルクヘテロシクリル（例えば、アルクヘテロアリ
ール）である。
【１０９１】
本明細書で使用されるとき、用語「アミノ酸」は、側鎖、アミノ基、及び酸性基（例えば、−ＣＯ２Ｈのカルボキシ基又は−ＳＯ３Ｈのスルホ基）を有する分子を指し、ここで、アミノ酸は、側鎖、アミノ基、又は酸性基（例えば、側鎖）により、親分子基に結合されている。一部の実施形態では、アミノ酸は、カルボニル基により親分子基に結合されており、ここで、側鎖又はアミノ基が、カルボニル基に結合されている。側鎖の例として、任意選択で置換されたアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルカリール、アルクヘテロシクリル、アミノアルキル、カルバモイルアルキル、及びカルボキシアルキルが挙げられる。例示的なアミノ酸としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシノルバリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ピロリシン、セレノシステイン、セリン、タウリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが挙げられる。アミノ酸基は、任意選択で、以下のものからなる群から独立に選択される１、２、３個、又は炭素数２以上のアミノ酸基の場合には、４個の置換基で置換してもよい：（１）Ｃ１〜６アルコキシ；（２）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（３）本明細書に定義するアミノ（例えば、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）又は置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２、ここで、ＲＮ１は、アミノについて定義した通り）；（４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２〜９ヘテロシクリル）オキシ；（８）ヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒド又はアシル）；（１１）Ｃ１〜７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）−ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ＲＢ’及びＲＣ’は各々、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１６）−ＳＯ２ＲＤ’、ここで、ＲＤ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）ヒドロキシからなる群から選択される；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ＲＥ’及びＲＦ’は各々、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ’、ここで、ＲＧ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１
０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’、ここで、ＲＨ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；（２０）−ＮＲＪ’Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ’、ここで、ＲＪ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＫ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）、並びに（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３は各々、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、ＲＮ１は各々、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）からなる群から選択される；並びに（２１）アミジン。一部の実施形態では、これらの基は各々、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。
【１０９２】
本明細書で使用されるとき、用語「アリール」は、１個又は複数の芳香族基を有する単環式、二環式、又は多環式炭素環系を示し、例として、フェニル、ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、フルオレニル、インダニル、インデニルなどが挙げられ、任意選択で、以下のものからなる群から独立に選択される１、２、３、４、又は５個の置換基で置換してもよい：（１）Ｃ１〜７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル−Ｃ１〜６アルキル、アミノ−Ｃ１〜６アルキル、アジド−Ｃ１〜６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１〜６アルキル、ハロ−Ｃ１〜６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１〜６アルキル、ニトロ−Ｃ１〜６アルキル、又はＣ１〜６チオアルコキシ−Ｃ１〜６アルキル）；（３）Ｃ１〜２０アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシなどのＣ１〜６アルコキシ）；（４）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６〜１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３〜８シクロアルキル；（１０）Ｃ１〜６アルク−Ｃ３〜８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１〜２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１〜６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’、ここで、ｑは、０〜４の整数
であり、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’及びＲＣ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、以下：（ａ）アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’及びＲＦ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２１）チオール；（２２）Ｃ６〜１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３〜８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（２５）Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（２６）Ｃ２〜２０アルケニル；及び（２７）Ｃ２〜２０アルキニル。一部の実施形態では、これらの基は各々、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリール又はＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基をオキソ基でさらに置換することにより、それぞれのアリーロイル及び（ヘテロシクリル）オイル置換基を付与することができる。
【１０９３】
本明細書で使用されるとき、「アリールアルキル」基は、本明細書に定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアリール基を示す。例示的非置換アリールアルキル基は、７〜３０個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ６〜１０アリール、又はＣ１〜２０アルク−Ｃ６〜１０アリールのように、７〜１６又は７〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキレン及びアリールは、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。接頭辞「アルク−（ａｌｋ−）」が前に付く他の基も同様に定義され、「アルク−（ａｌｋ−）」は、別に注記のない限り、Ｃ１〜６アルキレンを指し、結合した化学構造は、本明細書に定義する通りである。
【１０９４】
用語「アジド」は、−Ｎ３基を示し、−Ｎ＝Ｎ＝Ｎとして表すこともできる。
本明細書で使用されるとき、用語「二環式」は、２つの環を有する構造を指し、これは、芳香族又は非芳香族のいずれであってもよい。二環式構造は、本明細書に定義するスピロシクリル基と、１つ又は複数の架橋を共有する２つの環を含み、かかる架橋は、１個の原子、又は２、３、若しくはそれ以上の原子を有する鎖を含み得る。二環式基の例として、以下のものが挙げられる：二環式カルボシクリル基（第１及び第２環が、本明細書に定義するカルボシクリル基である）；二環式アリール基（第１及び第２環が、本明細書に定義するアリール基である）；二環式ヘテロシクリル基（第１環が、ヘテロシクリル基であり、第２環が、カルボシクリル（例えば、アリール）又はヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）基である）；並びに二環式ヘテロアリール基（第１環が、ヘテロアリール基であり、第２環が、カルボシクリル（例えば、アリール）又はヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）基である）。一部の実施形態では、二環式基は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、及びアリール基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０９５】
本明細書で使用されるとき、用語「ボラニル」は、−Ｂ（ＲＢ１）３を示し、ここで、ＲＢ１は各々、独立に、Ｈ及び任意選択で置換されたアルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、ボラニル基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１０９６】
本明細書で使用されるとき、用語「炭素環式」及び「カルボシクリル」は、任意選択で
置換されたＣ３〜１２単環式、二環式、又は三環式構造を指し、ここで、環（芳香族又は非芳香族のいずれであってもよい）は、炭素原子によって形成される。炭素環式構造として、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、及びアリール基が挙げられる。
【１０９７】
本明細書で使用されるとき、用語「カルボニル」は、Ｃ（Ｏ）基を示し、Ｃ＝Ｏとして表すこともできる。
本明細書で使用されるとき、用語「カルボキシ」は、−ＣＯ２Ｈを意味する。
【１０９８】
本明細書で使用されるとき、用語「シアノ」は、−ＣＮ基を示す。
本明細書で使用されるとき、用語「シクロアルキル」は、別に明記しない限り、炭素数３〜８の一価飽和又は不飽和非芳香族環状炭化水素基を示し、例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、二環ヘプチルなどが挙げられる。そうでなければシクロアルキル基となり得るものが、１つ又は複数の炭素−炭素二重結合を含む場合、この基は、「シクロアルケニル」基と呼ばれる。本発明の目的のために、シクロアルケニルは、アリール基を排除する。そうでなければシクロアルキルとなり得るものが、１つ又は複数の炭素−炭素三重結合を含む場合、この基は、「シクロアルキニル」基と呼ばれる。シクロアルケニル基の例として、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどが挙げられる。本発明のシクロアルキル基は、任意選択で以下のもので置換することができる：（１）Ｃ１〜７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル−Ｃ１〜６アルキル、アミノ−Ｃ１〜６アルキル、アジド−Ｃ１〜６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１〜６アルキル、ハロ−Ｃ１〜６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１〜６アルキル、ニトロ−Ｃ１〜６アルキル、又はＣ１〜６チオアルコキシ−Ｃ１〜６アルキル）；（３）Ｃ１〜２０アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシなどのＣ１〜６アルコキシ）；（４）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６〜１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３〜８シクロアルキル；（１０）Ｃ１〜６アルク−Ｃ３〜８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１〜２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１〜６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’及びＲＣ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６〜１０アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、以下：（ａ）Ｃ６〜１０アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’及びＲＦ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６〜１０アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２１）チオール；（２２）Ｃ６〜１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３〜８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（２５）Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）Ｃ２〜２０アルケニル；及び（２８）Ｃ２〜２０アルキニル。一部の実施形態では、これらの基は各々、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリール又はＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基をオキソ基でさらに置換することにより、それぞれのアリーロイル及び（ヘテロシクリル）オイル
置換基を付与することができる。
【１０９９】
本明細書で使用されるとき、「シクロアルキルアルキル」基は、本明細書に定義するアルキレン基（例えば、炭素数１〜４、１〜６、１〜１０又は１〜２０のアルキレン基）を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するシクロアルキル基を示す。一部の実施形態では、アルキレン及びシクロアルキルは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１００】
本明細書で使用されるとき、用語「ジアステレオマー」は、互いの鏡像ではなく、互いに重なり合わない立体異性体を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「鏡像体」は、本発明の化合物の各々個別の光学的に活性な形態を意味し、これは、少なくとも８０％（すなわち、一鏡像体の少なくとも９０％及び他の鏡像体の最大１０％）、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９８％の光学純度又は鏡像体過剰率（当該技術分野で標準的な方法により決定される）を有する。
【１１０１】
本明細書で使用されるとき、用語「ハロ」は、臭素、塩素、ヨウ素、又はフッ素から選択されるハロゲンを示す。
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアルキル」は、成分の炭素原子の１又は２個が、各々、窒素、酸素、又はイオウによって置換された、本明細書に定義するアルキル基を指す。一部の実施形態では、ヘテロアルキル基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアルケニル」及び「ヘテロアルキニル」は、それぞれ、成分の炭素原子の１又は２個が、各々、窒素、酸素、又はイオウによって置換された、本明細書に定義するアルケニル基及びアルキニル基を指す。一部の実施形態では、ヘテロアルケニル基及びヘテロアルキニル基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１０２】
任意選択で置換されたヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、及びヘテロアルキニル基の非限定的な例として、アシルオキシ、アルケニルオキシ、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルキニルオキシ、アミノアルコキシ、アリールアルコキシ、カルボキシアルコキシ、シクロアルコキシ、ハロアルコキシ、（ヘテロシクリル）オキシ、ペルフルオロアルコキシ、チオアルコキシ、及びチオヘテロシクリルアルキルが挙げられる。
【１１０３】
本明細書で使用されるとき、「アシルオキシ」基は、酸素原子を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアシル基を示す（すなわち、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、又はＣ１〜２０アルキル基である）。例示的非置換アシルオキシ基は、１〜２１個の炭素（例えば、１から７又は１〜１１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【１１０４】
本明細書で使用されるとき、「アルケニルオキシ」基は、別に明示されていない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ２〜２０アルケニル基（例えば、Ｃ２〜６又はＣ２〜１０アルケニル基））の化学置換基を示す。アルケニルオキシ基の例として、エテニルオキシ、プロペニルオキシなどが挙げられる。一部の実施形態では、アルケニル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換することができる。
【１１０５】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシ」基は、別に明示されていない限り、式−Ｏ
Ｒ（Ｒは、Ｃ１〜２０アルキル基（例えば、Ｃ１〜６又はＣ１〜１０アルキル基）である）の化学置換基を示す。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシ及びイソプロポキシ）、ｔ−ブトキシなどが挙げられる。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ又はアルコキシ）でさらに置換することができる。
【１１０６】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシアルコキシ」基は、アルコキシ基で置換されたアルコキシ基を示す。例示的非置換アルコキシアルコキシ基は、２〜４０個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシ−Ｃ１〜１０アルコキシ、又はＣ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシのように、２〜１２又は２〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルコキシ基は各々、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１０７】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアルコキシ」基は、本明細書に定義するアルコキシカルボニル基で置換されたアルコキシ基を示す（例えば、−Ｏ−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、又はＣ１〜２０アルキル基である）。例示的非置換アルコキシカルボニルアルコキシ基は、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜１０アルコキシ、又はＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜２０アルコキシのように、３〜１０、３〜１３、３〜１７、３〜２１、又は３〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルコキシ基は各々、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに独立に置換される。
【１１０８】
本明細書で使用されるとき、「アルキニルオキシ」基は、別に明示されていない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ２〜２０アルキニル基（例えば、Ｃ２〜６又はＣ２〜１０アルキニル））の化学置換基を示す。アルキニルオキシ基の例として、エチニルオキシ、プロピニルオキシなどが挙げられる。一部の実施形態では、アルキニル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換することができる。
【１１０９】
本明細書で使用されるとき、「アミノアルコキシ」基は、本明細書に定義するアミノ基で置換された、本明細書に定義するアルコキシ基を示す。アルキル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシからなる群から選択される）でさらに置換することができる。
【１１１０】
本明細書で使用されるとき、「アリールアルコキシ」基は、酸素原子を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するアルカリール基を示す。例示的非置換アリールアルコキシ基は、７〜３０個の炭素（例えば、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルコキシ、又はＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜２０アルコキシのように、７〜１６又は７〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アリールアルコキシ基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１１１１】
本明細書で使用されるとき、「アリールオキシ」基は、別に明示されていない限り、式−ＯＲ’（Ｒ’は、炭素数６〜１８のアリール基である）の化学置換基を示す。一部の実施形態では、アリール基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１１１２】
本明細書で使用されるとき、「カルボキシアルコキシ」基は、本明細書に定義するカル
ボキシ基で置換された、本明細書に定義するアルコキシ基を示す。アルコキシ基は、アルキル基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができ、また、カルボキシ基は、任意選択で１つ又は複数のＯ−保護基で置換することができる。
【１１１３】
本明細書で使用されるとき、「シクロアルコキシ」基は、別に明示されていない限り、本明細書に定義する式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ３〜８シクロアルキル基である）の化学置換基を示す。シクロアルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。例示的非置換シクロアルキル基は、炭素数３〜８である。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１１４】
本明細書で使用されるとき、「ハロアルコキシ」基は、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、若しくはＩ）で置換された、本明細書に定義するアルコキシ基を示す。ハロアルコキシは、１、２、３個、又は炭素数２以上のアルキル基の場合には、４個のハロゲンで置換してもよい。ハロアルコキシ基としては、ペルフルオロアルコキシ（例えば、−ＯＣＦ３）、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、及び−ＯＣＨＩＣＨ３が挙げられる。一部の実施形態では、ハロアルコキシ基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１１５】
本明細書で使用されるとき、「（ヘテロシクリル）オキシ」基は、酸素原子を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するヘテロシクリル基を示す。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【１１１６】
本明細書で使用されるとき、「ペルフルオロアルコキシ」基は、アルコキシ基に結合した各水素ラジカルが、フッ化物ラジカルにより置換された、本明細書に定義するアルコキシ基を示す。ペルフルオロアルコキシ基の例として、トリフルオロメトキシ、ペンタフルオロエトキシなどが挙げられる。
【１１１７】
本明細書で使用されるとき、「アルキルスルフィニル」基は、式−Ｓ（Ｏ）−基を介して、親分子に結合されたアルキル基を示す。例示的非置換アルキルスルフィニル基は、炭素数１〜６、１〜１０、又は１〜２０である。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１１８】
本明細書で使用されるとき、「チオアリールアルキル」基は、式−ＳＲ（Ｒは、アリールアルキル基である）の化学置換基を示す。一部の実施形態では、アリールアルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１１９】
本明細書で使用されるとき、「チオアルコキシ」基は、本明細書に定義する式−ＳＲ（Ｒは、アルキル基である）の化学置換基を示す。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１２０】
本明細書で使用されるとき、「チオヘテロシクリルアルキル」基は、式−ＳＲ（Ｒは、ヘテロシクリルアルキル基である）の化学置換基を示す。一部の実施形態では、ヘテロシクリルアルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１２１】
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアリール」は、芳香族である（すなわち、単
環式又は多環式環系内に４ｎ＋２ｐｉ電子を含む）、本明細書に定義するヘテロシクリルのサブセットを示す。例示的非置換ヘテロアリール基は、炭素数１〜１２（例えば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、又は２〜９）である。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、ヘテロシクリル基について定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【１１２２】
用語「ヘテロアリールアルキル」は、本明細書に定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するヘテロアリール基を示す。例示的非置換ヘテロアリール基は、炭素数２〜３２（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール、又はＣ１〜２０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリールのように、２〜２２、２〜１８、２〜１７、２〜１６、３〜１５、２〜１４、２〜１３、又は２〜１２）である。一部の実施形態では、アルキレン及びヘテロアリールは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。ヘテロアリールアルキル基は、ヘテロシクリルアルキル基のサブセットである。
【１１２３】
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロシクリル」は、別に明示されていない限り、窒素、酸素、及びイオウからなる群から独立に選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子を含有する５、６若しくは７員環を示す。５員環は、０〜２個の二重結合を含み、６及び７員環は、０〜３個の二重結合を含む。例示的非置換ヘテロシクリル基は、炭素数１〜１２（例えば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、又は２〜９）である。用語「ヘテロシクリル」はまた、１個又は複数の炭素及び／又はヘテロ原子が、単環式環、例えば、キヌクリジニル基の２つの非隣接メンバーを架橋する、架橋多環式構造を有する複素環式化合物も示す。用語「ヘテロシクリル」は、前記複素環式環のいずれかが、１、２、若しくは３つの炭素環式環、例えば、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、又は別の単環式複素環、例えば、インドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニルなどに融合している二環式、三環式、及び四環式基を含む。融合したヘテロシクリルの例としては、トロパン及び１，２，３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジンがある。複素環式基の例としては、以下：ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペラジニル、ホモピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニル、ジヒドロキノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、ベンジミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル（例えば、１，２，３−オキサジアゾリル）、プリニル、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾリル）、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、ジヒドロキノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ジヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニルなどが挙げられ、１つ又は複数の二重結合が還元されて、水素で置換されるこれらのジヒドロ及びテトラヒドロ形態を含む。また別のヘテロシクリルの例として、以下のものが挙げられる：２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−オキサゾリル；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−イミダゾリル；２，３，４，５−テトラヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル（例えば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−フェニル−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル）；２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−１Ｈ−イミダゾリル（例えば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−５−メチル−５−フ
ェニル−１Ｈ−イミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−１，３，４−オキサゾリル（例えば、２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−５−フェニル−１，３，４−オキサゾリル）；４，５−ジヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−チアゾリル（例えば、４，５−ジヒドロ−３−メチル−４−アミノ５−オキソ−１Ｈ−チアゾリル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリジニル（例えば、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３，３−ジエチルピリジニル）；２，６−ジオキソ−ピペリジニル（例えば、２，６−ジオキソ−３−エチル−３−フェニルピペリジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソピリジミニル；１，６−ジヒドロ−４−オキソピリミジニル（例えば、２−（メチルチオ）−１，６−ジヒドロ−４−オキソ−５−メチルピリミジン−１−イル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリミジニル（例えば、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３−エチルピリミジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−ピリダジニル（例えば、１，６−ジヒドロ−６−オキソ−３−エチルピリダジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル（例えば、１，６−ジヒドロ−５−イソプロピル−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル（例えば、３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル及び２，３−ジヒドロ−２−オキソ−３，３’−スピロプロパン−１Ｈ−インドール−１−イル）；１，３−ジヒドロ−１−オキソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１Ｈ−ベンゾピラゾリル（例えば、１−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ベンゾピラゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル（例えば、３−エチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾキサゾリル（例えば、５−クロロ−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾキサゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾキサゾリル；２−オキソ−２Ｈ−ベンゾピラニル；１，４−ベンゾジオキサニル；１，３−ベンゾジオキサニル；２，３−ジヒドロ−３−オキソ，４Ｈ−１，３−ベンゾキチアジニル；３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル（例えば、２−メチル−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル（例えば、１−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル（例えば、１，２，３，６−テトラヒドロ−１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル（例えば、１，２，３，６−テトラヒドロ−３，７−ジメチル−２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル）；２−オキソベンズ［ｃ，ｄ］インドリル；１，１−ジオキソ−２Ｈ−ナフト［１，８−ｃ，ｄ］イソチアゾリル；並びに１，８−ナフチレンジカルボキサミド。別の複素環式基としては、３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロ−ピロロ［３，４−ｂ］ピロール−（２Ｈ）−イル、及び２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル、ホモピペラジニル（又はジアゼパニル）、テトラヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、オキセパニル、チエパニル、アゾカニル、オキセカニル、及びチオカニルが挙げられる。複素環式基はまた、式：
【１１２４】
【化１】
2016530294.tif 000084
【１１２５】
（式中、Ｅ’は、−Ｎ−及び−ＣＨ−からなる群から選択され；Ｆ’は、−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２−、−Ｏ−、及び−Ｓ−からなる群から選択され；Ｇ’は、−ＣＨ−及び−Ｎ−からなる群から選択される）
の基も含む。本明細書に記載する複素環式基のいずれも、任意選択で、以下のものからなる群から独立に選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基で置換することができる：（１）Ｃ１〜７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル−Ｃ１〜６アルキル、アミノ−Ｃ１〜６アルキル、アジド−Ｃ１〜６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１〜６アルキル、ハロ−Ｃ１〜６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１〜６アルキル、ニトロ−Ｃ１〜６アルキル、又はＣ１〜６チオアルコキシ−Ｃ１〜６アルキル）；（３）Ｃ１〜２０アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシなどのＣ１〜６アルコキシ）；（４）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６〜１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３〜８シクロアルキル；（１０）Ｃ１〜６アルク−Ｃ３〜８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ２〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１〜２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１〜６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’及びＲＣ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’及びＲＦ’は各々、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２１）チオール；（２２）Ｃ６〜１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３〜８シクロアルコキシ；（２４）アリールアルコキシ；（２５）Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）イミノ；（２８）Ｃ２〜２０アルケニル；及び（２９）Ｃ２〜２０アルキニル。一部の実施形態では、これらの基は各々、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリール又はＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基をオキソ基でさらに置換することにより、それぞれのアリーロイル及び（ヘテロシクリル）オイル置換基を付与することができる。
【１１２６】
本明細書で使用されるとき、「ヘテロシクリルアルキル」基は、本明細書に定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義するヘテロシクリル基を示す。例示的非置換ヘテロシクリル基は、炭素数２〜３２（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル、又はＣ１〜２０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリルのように、炭素数２〜２２、２〜１８、２〜１７、２〜１６、３〜１５、２〜１４、２〜１３、又は２〜１２）である。一部の実施形態では、アルキレン及びヘテロシクリルは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【１１２７】
本明細書で使用されるとき、用語「炭化水素」は、炭素と水素原子のみから構成される基を示す。
本明細書で使用されるとき、用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ基を示す。
【１１２８】
本明細書で使用されるとき、用語「異性体」は、本発明のいずれかの化合物の任意の互変異性体、立体異性体、鏡像体、又はジアステレオマーを意味する。本発明の化合物が、１つ又は複数のキラル中心及び／又は二重結合を有し得るため、二重結合異性体（すなわち、幾何異性体（すなわち、幾何Ｅ／Ｚ異性体）或いは、ジアステレオマー（例えば、鏡像体（すなわち、（＋）若しくは（−））又はシス／トランス異性体）のような立体異性体として存在し得ることは認識されよう。本発明によれば、本明細書に説明する化学構造、従って、本発明の化合物は、対応する立体異性体の全て、すなわち、立体化学的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性的に純粋、又はジアステレオマーとして純粋な）並びに、鏡像体及び立体異性体混合物、例えば、ラセミ体の両方を包含する。本発明の化合物の鏡像体及び立体異性体混合物は、典型的に、公知の方法、例えば、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高性能液体クロマトグラフィー、キラル塩複合体としての化合物の結晶化、又はキラル溶媒中での化合物の結晶化によって、それらの成分鏡像体又は立体異性体に分割することができる。また、鏡像体及び立体異性体は、公知の不斉合成方法により、立体異性体又は鏡像異性体的に純粋な中間体、試薬、及び触媒から取得することもできる。
【１１２９】
本明細書で使用されるとき、用語「Ｎ−保護アミノ」は、本明細書に定義する１つ又は２つのＮ−保護基が結合した、本明細書に定義するアミノ基を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｎ−保護基」は、合成工程中に望ましくない反応からアミノ基を保護することが意図される基を示す。一般に用いられるＮ保護基は、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第３版（ジョン・ウィリー＆サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク、１９９９年）に開示されており、これは、本明細書において参照により援用される。Ｎ−保護基としては、以下のものが挙げられる：アシル、アリーロイル、又はカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、及びキラル補助基、例えば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニンなどの保護若しくは非保護Ｄ，Ｌ若しくはＤ，Ｌ−アミノ酸；スルホニル含有基、例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど；カルバメート形成基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２，−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルカルボニル、フェニルチオカルボニルなど、アルカリール基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど、並びにシリル基、例えば、トリメチルシリルなど。好ましいＮ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、（Ｂｏｃ）、及びベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。
【１１３０】
本明細書で使用されるとき、用語「ニトロ」は、−ＮＯ２基を示す。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｏ−保護基」は合成工程中に望ましくない反応から、酸素含有（例えば、フェノール、ヒドロキシル、又はカルボニル）基を保護することが意図される基を示す。一般に用いられるＯ−保護基は、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第３版（ジョン・ウィリー＆サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ
＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク、１９９９年）に開示されており、これは、本明細書において参照により援用される。例示的なＯ−保護基としては、以下のものが挙げられる：アシル、アリーロイル、又はカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、ｔ−ブチルジメチルシリル、トリ−イソ−プロピルシリルオキシメチル、４，４’−ジメトキシトリチル、イソブチリル、フェノキシアセチル、４−イソプロピルペヘノキシアセチル、ジメチルホルムアミジノ、及び４−ニトロベンゾイル；アルキルカルボニル基、例えば、アシル、アセチル、プロピオニル、ピバロイルなど；任意選択で置換されたアリールカルボニル基、例えば、ベンゾイル；シリル基、例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリ−イソ−プロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）など；ヒドロキシルを有するエーテル形成基、例えば、メチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、トリチルなど；アルコキシカルボニル、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブチルオキシカルボニル、イソブチルオキシカルボニル、ｓｅｃ−ブチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、２−エチルヘキシルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、メチルオキシカルボニルなど；アルコキシアルコキシカルボニル基、例えば、メトキシメトキシカルボニル、エトキシメトキシカルボニル、２−メトキシエトキシカルボニル、２−エトキシエトキシカルボニル、２−ブトキシエトキシカルボニル、２−メトキシエトキシメトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、プロパルギルオキシカルボニル、２−ブテノキシカルボニル、３−メチル−２−ブテノキシカルボニルなど；ハロアルコキシカルボニル、例えば、２−クロロエトキシカルボニル、２−クロロエトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルなど；任意選択で置換されたアリールアルコキシカルボニル基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メチルベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２，４−ジニトロベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメチルベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル−カルボニル、フルオレニルメチルオキシカルボニルなど；並びに任意選択で置換されたアリールオキシカルボニル基、例えば、フェノキシカルボニル、ｐ−ニトロフェノキシカルボニル、ｏ−ニトロフェノキシカルボニル、２，４−ジニトロフェノキシカルボニル、ｐ−メチル−フェノキシカルボニル、ｍ−メチルフェノキシカルボニル、ｏ−ブロモフェノキシカルボニル、３，５−ジメチルフェノキシカルボニル、ｐ−クロロフェノキシカルボ��ル、２−クロロ−４−ニトロフェノキシ−カルボニルなど）；置換されたアルキル、アリール、及びアルカリールエーテル（例えば、トリチル；メチルチオメチル；メトキシメチル；ベンジルオキシメチル；シロキシメチル；２，２，２，−トリクロロエトキシメチル；テトラヒドロピラニル；テトラヒドロフラニル；エトキシエチル；１−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］エチル；２−トリメチルシリルエチル；ｔ−ブチルエーテル；ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、及びニトロベンジル）；シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル；トリエチルシリル；トリイソプロピルシリル；ジメチルイソプロピルシリル；ｔ−ブチルジメチルシリル；ｔ−ブチルジフェニルシリル；トリベンジルシリル；トリフ
ェニルシリル；及びジフェニルメチルシリル）；炭酸塩（例えば、メチル、メトキシメチル、９−フルオレニルメチル；エチル；２，２，２−トリクロロエチル；２−（トリメチルシリル）エチル；ビニル、アリル、ニトロフェニル；ベンジル；メトキシベンジル；３，４−ジメトキシベンジル；及びニトロベンジル）；カルボニル保護基（例えば、ジメチルアセタール、１，３−ジオキソランなどのアセタール及びケタール基；アシラール基；及び１，３−ジチアン、１，３−ジチオランなどのジチアン基）；カルボン酸保護基（例えば、メチルエステル、ベンジルエステル、ｔ−ブチルエステル、オルトエステルなどのエステル基；及びオキサゾリン基。
【１１３１】
本明細書で使用されるとき、用語「オキソ」は、＝Ｏを示す。
本明細書で使用されるとき、接頭辞「ペルフルオロ」は、アルキル基に結合した水素ラジカルが各々、フッ化物ラジカルによって置換された、任意の基を示す。例えば、ペルフルオロアルキル基の例として、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどが挙げられる。
【１１３２】
本明細書で使用されるとき、用語「保護ヒドロキシ」は、Ｏ−保護基に結合した酸素原子を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「スピロシクリル」は、両端が、親基の同じ炭素原子に結合して、スピロ環式基を形成するＣ２〜７アルキレンジラジカル、さらにまた、両端が同じ原子に結合したＣ１〜６ヘテロアルキレンジラジカルを示す。スピロシクリル基を形成するヘテロアルキレンラジカルは、窒素、酸素、及びイオウからなる群から独立に選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子を含有し得る。一部の実施形態では、スピロシクリル基は、ジラジカルが結合した炭素原子を除いて、１〜７個の炭素を含む。本発明のスピロシクリル基は、任意選択で、シクロアルキル及び／又はヘテロシクリル基のための任意選択の置換基として本明細書に記載される１、２、３、又は４個の置換基で置換してもよい。
【１１３３】
本明細書で使用されるとき、用語「立体異性体」は、化合物が有し得る（例えば、本明細書に記載するいずれかの式の化合物）考えられる全ての異なる異性体、並びに立体配座形態、特に、基本的分子構造の考えられる全ての立体化学及び立体配座異性体形態、全てのジアステレオマー、鏡像体及び／又は配座異性体を指す。本発明の一部の化合物は、様々な互変異性体形態中に存在してもよく、これらの互変異性体は全て、本発明の範囲に含まれる。
【１１３４】
本明細書で使用されるとき、用語「スルホニル」は、−Ｓ（Ｏ）２−基を示す。
本明細書で使用されるとき、用語「チオール」は、−ＳＨ基を示す。
化合物：本明細書で使用されるとき、用語「化合物」は、説明する構造のあらゆる立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び放射線同位体を包含するものとする。
【１１３５】
本明細書に記載する化合物は、不斉性（例えば、１つ又は複数の立体中心を有する）であってよい。別に記載のない限り、あらゆる鏡像体及びジアステレオマーなどの立体異性体が意図される。不斉置換炭素原子を含有する本開示の化合物は、任意選択で活性又はラセミ形態で単離することができる。光学活性出発材料から光学活性形態を調製する方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、ラセミ混合物の分割又は立体選択的合成によるものなどがある。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体も本明細書に記載する化合物に存在し得るが、かかる安定な異性体は全て、本開示において考慮される。本開示の化合物のシス及びトランス幾何異性体が記載され、これらは、異性体の混合物又は分離した異性体形態として単離することができる。
【１１３６】
本開示の化合物はまた、互変異性体形態も含む。互変異性体形態は、プロトンの同時転
移を伴う、隣接する二重結合による単結合の交換（ｓｗａｐｐｉｎｇ）によって得られる。互変異性体形態は、同じ実験式及び総電荷を有する異性体プロトン化状態であるプロトン互変異性体（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｃ  ｔａｕｔｏｍｅｒ）を包含する。プロトン互変異性体の例として、ケトン−エノールペア、アミド−イミド酸ペア、ラクタム−ラクチムペア、アミド−イミド酸ペア、エナミン−イミンペア、並びにプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占有し得る環状形態、例えば、１Ｈ−及び  ３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−及び４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−及び２Ｈ−イソインドール、並びに１Ｈ−及び２Ｈ−ピラゾールを包含する。互変異性形態は、平衡状態にあってもよく、又は適切な置換によって１つの形態へと立体的に固定（ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ  ｌｏｃｋ）することができる。
【１１３７】
本開示の化合物はまた、中間体又は最終化合物において生じる、原子の全ての同位体も包含する。「同位体」は、同じ原子番号を有するが、核における中性子の数が異なるために異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体は、トリチウム及び重水素を含む。
【１１３８】
本開示の化合物及び塩は、溶媒又は水分子と組み合わせて調製することにより、常用の方法により、溶媒和物及び水和物を形成することができる。
コミットした：本明細書で用いる用語「コミットした」は、細胞に関していう場合、細胞が、異なる細胞型へ分化、又はより未分化の細胞型に逆分化するのではなく、正常な状況で、特定の細胞型又は細胞型のサブセットに分化し続ける分化経路中に十分に進行している場合を意味する。
【１１３９】
保存されている：本明細書で使用されるとき、用語「保存されている」は、ポリヌクレオチド配列又はポリペプチド配列のヌクレオシド又はアミノ酸残基をそれぞれ指し、これらは、比較される２つ以上の配列の同じ位置で改変されずに存在するものである。比較的保存されているヌクレオチド又はアミノ酸は、当該配列の他の場所に出現するヌクレオチド又はアミノ酸よりも関連する配列の間で保存されているものである。
【１１４０】
一部の実施形態では、２つ以上の配列が互いに１００％同一である場合、これらは「完全に保存されている」と言う。一部の実施形態では、２つ以上の配列が、互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、又は少なくとも９５％同一であれば、これらは「高度に保存されている」と言う。一部の実施形態では、２つ以上の配列が、互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、又は約９９％同一であれば、これらは「高度に保存されている」と言う。一部の実施形態では、２つ以上の配列が、互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、又は少なくとも９５％同一であれば、これらは「保存されている」と言う。一部の実施形態では、２つ以上の配列が、互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、又は約９９％同一であれば、これらは「保存されている」と言う。配列の保存は、ポリヌクレオチド又はポリペプチドの全長に適用されるか、又はその一部、領域若しくは特徴に適用され得る。
【１１４１】
制御放出：本明細書で使用されるとき、用語「制御放出」は、治療成果をもたらすような特定の放出パターンに従う医薬組成物又は化合物放出プロフィールを指す。
環状又は環化：本明細書で使用されるとき、用語「環状」は、連続的ループの存在を指す。環状分子は、環状である必要はなく、結合して、切れ目のないサブユニットの鎖を形成していればよい。本発明の操作ＲＮＡ又はｍＲＮＡのような環状分子は、単一の単位若しくは多量体であってもよく、或いは、複合体又はより高次の構造の１つ又は複数の成分
を含んでもよい。
【１１４２】
静細胞：本明細書で使用されるとき、「静細胞」とは、細胞（例えば、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生体、プリオン、又はこれらの組み合わせの成長、分裂、若しくは増殖を阻害、低減、抑制することを指す。
【１１４３】
細胞傷害性：本明細書で使用されるとき、「細胞傷害性」とは、細胞（例えば、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生体、プリオン、又はこれらの組み合わせを殺傷するか、又はそれに対して傷害、毒性、若しくは致死的作用を引き起こすことを指す。
【１１４４】
送達：本明細書で使用されるとき、「送達」とは、化合物、物質、実体、部分、カーゴ又はペイロードを送達する行為又は様式を指す。
送達剤：本明細書で使用されるとき、「送達剤」とは、標的細胞に対するキメラポリヌクレオチドのインビボ送達を、少なくとも部分的に促進する任意の物質を指す。
【１１４５】
不安定化した：本明細書で使用されるとき、用語「不安定な」、「不安定化する」、又は「不安定化領域」は、同じ領域又は分子の出発、野生型若しくはネイティブ形態よりも、不安定な領域又は分子を意味する。
【１１４６】
不安定な標識：本明細書で使用されるとき、「不安定な標識」とは、Ｘ線撮影、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光など、当該技術分野において公知の方法によって容易に検出される別の実体と結合した、これが組み込まれた、又は会合した１つ又は複数のマーカ、シグナル、若しくは部分を指す。検出可能な標識として、放射線同位体、発蛍光団、発色団、酵素、色素、金属イオン、リガンド、例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン及びハプテン、量子ドットなどが挙げられる。検出可能な標識は、本明細書に開示するペプチド又はタンパク質における任意の位置に配置してよい。これらは、アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質内にあってもよく、或いは、Ｎ−又はＣ−末端に位置してもよい。
【１１４７】
ジアステレオマー：本明細書で使用されるとき、用語「ジアステレオマー」は、互いに鏡像ではなく、しかも、互いに重なり合わない立体異性体を意味する。
消化する：本明細書で使用されるとき、用語「消化する」は、より小さい部分又は成分に分解することを意味する。ポリペプチド又はタンパク質に関して言う場合、消化によって、ペプチドの産生が起こる。
【１１４８】
分化細胞：本明細書で使用されるとき、用語「分化細胞」は、そのネイティブ形態において、多能性ではない任意の体細胞を指す。分化細胞はまた、部分的に分化した細胞も包含する。
【１１４９】
分化：本明細書で使用されるとき、用語「分化因子」は、発生能改変因子、例えば、細胞を要望される細胞型に分化するように誘導することができるタンパク質、ＲＮＡ若しくは小分子を指す。
【１１５０】
分化する：本明細書で使用されるとき、「分化する」とは、非コミット又は低コミット細胞が、コミット細胞の特徴を獲得するプロセスを指す。
遠位：本明細書で使用されるとき、用語「遠位」は、中心から離れて、又は対象の地点若しくは領域から離れて位置していることを意味する。
【１１５１】
投与レジメン：本明細書で使用されるとき、用語「投与レジメン」は、投与スケジュール又は医師が決定した治療、予防若しくは緩和医療のレジメンである。
用量分割係数（ＤＳＦ）−１日の総用量又は１単位用量をＰＵＤで割って得られる、用量分割治療のＰＵＤの比。この値は、投与レジメン群の比較から得られる。
【１１５２】
鏡像体：本明細書で使用されるとき、用語「鏡像体」は、本発明の化合物の各々個別の光学的に活性な形態を意味し、これは、少なくとも８０％（すなわち、一鏡像体の少なくとも９０％及び他の鏡像体の最大１０％）、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９８％の光学純度又は鏡像体過剰率を有する。
【１１５３】
被包する：本明細書で使用されるとき、用語「被包する」は、封入する、取り囲む、又は包むことを意味する。
コード化タンパク質切断シグナル：本明細書で使用されるとき、「コード化タンパク質切断シグナル」とは、タンパク質切断シグナルをコード化するヌクレオチド配列を指す。
【１１５４】
操作（された）：本明細書で使用されるとき、本発明の実施形態が、出発点、野生型若しくはネイティブ分子から変異した特徴又は特性（構造若しくは化学のいずれにかかわらず）を有するように設計されていれば、これらは「操作」されている。
【１１５５】
有効量：本明細書で使用されるとき、ある薬剤の「有効量」という用語は、有益又は要望される結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、従って、「有効量」は、それが適用される状況に応じて変動する。例えば、癌を治療する薬剤を投与する状況では、薬剤の有効量は、例えば、薬剤の投与なしで得られる応答と比較して、本明細書に定義する癌の治療を達成するのに十分な量である。
【１１５６】
エキソソーム：本明細書で使用されるとき、「エキソソーム」とは、哺乳動物細胞により分泌される小胞又はＲＮＡ分解に関与する複合体である。
発現：本明細書で使用されるとき、核酸配列の「発現」とは、以下のイベントの１つ又は複数を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／又は３’末端プロセシング）；（３）ポリペプチド又はタンパク質へのＲＮＡの翻訳；並びに（４）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾。
【１１５７】
特徴：本明細書で使用されるとき、「特徴」とは、特徴、特性、又は特有の要素を指す。
製剤：本明細書で使用されるとき、「製剤」とは、少なくともキメラポリヌクレオチド及び送達剤を含む。
【１１５８】
断片：本明細書で使用されるとき、「断片」とは、１部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離した完全長タンパク質を消化することにより得られたポリペプチドを含み得る。
【１１５９】
機能性：本明細書で使用されるとき、「機能性」生体分子とは、それが特徴とする特性及び／又は活性を呈示する形態における生体分子である。
相同性：本明細書で使用されるとき、用語「相同性」は、ポリマー分子同士、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／若しくはＲＮＡ分子）並びに／又はポリペプチド分子同士の全体的関連性を指す。一部の実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、若しくは９９％同一又は類似していれば、互いに「相同性」であると考えられる。用語「相同性」は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド又はポリペプチド配列）同士の比較に関する。本発明によれば、２つのポリヌクレオチド配列は、これらがコード化するポリペプチドが、냥ꪁ臣ꢁ戼㹲节듧銼볯ꊂ菣躃藩꺁냥ꪁ臣ꢁ苣醼賥鎖臣ꒁ臣ꚁ胣醰臣辁臣节듧閼볯薼胣隼볯薼胣鞼볯薼胣颼볯薼胣馼볯薼胣馼볯薼胣ꖋ臣辁臣馼볯薼臣芁苣낁胣뢛郥Ꞁ臣芁苣ꢁ胨袁苣貂苣芀룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀鯧貐菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣钼胣閼胥꺁룤辄髧ꮁ賦骮臣貂臣ꊂ菣躃藩꺁賥鎖苣뎂菣覃賥馁苣붃諥ꮁ苣ꎁ臣릉뻥颻臣覂苣讂胣랕臣隼볯貃苣것苣膃菣ꪜ뫦꺁菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣뒠郥ꮁ臣膀鯧貐胦꾁胣醰臣辁臣节볯鲀볯讀臣肸蓦蒚臣螌껥閁苣龁苣龃菣뢅臣몌雩銂苣벃菣隌臣讂菨鮊臣袂臣ꚁ뇦骮臣貂苣芀鳦몙飦ꮁ苣貂臣膀볯ꒁ臣뾂菣醃苣ꪳ藩鞈臣膀臣貂苣꺁苣뎃菣꾂돨貁胣醰臣辁臣节듧銼볯ꊂ菣躃藩꺁냥ꪁ臣ꢁ苣醼賥鎖臣ꒁ臣ꚁ胣醰臣辁臣节듧閼볯薼胣隼볯薼胣鞼볯薼胣颼볯薼胣ꖋ臣辁臣馼볯薼郥肸臣芁苣낁胣뢛郥Ꞁ臣芁苣ꢁ胨袁苣貂苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯隼볯醀⼼䥄㹖 貐룤Ꞁ볯겜飦내鯦ꞁ뷤ꢔ臣貂苣ꢁ臣膀铧麪胣貐룤Ꞁ胣꾁胣鶃菣麃菣蚈귥貐ꏥ膀뻤袁臣膀菣ꪃ菣꾂菣ꪂ菣覃裥邭볯设臣낁胣꒼볯ꆼ裥邭迥뎁볯ꖋ臣辁臣늼볯ꆼ裥邭볯ꚸ臣ꮁ볯袏臣鶃菣骃菣膃菣蚈귥貐ꏥ꺁藥鎽髧ꊖ胩Ꞁ苣螌臣芀볯ꒁ臣鶃菣貃苣것苣膃菣超裥꺁郥肸胦袼볯覼臣袨껧꾁胣设臣낁胣肜臩ꪁ꿦莼鯧蒚臣龁苣ꮁ胣銼臣꺁藩鞈苣ꊂ菣ꒂ菣ꆃ菣袃臣讂臣ꢁ臣袂臣ꚁ껥붖臣讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂볯设臣낁胣肜臩ꊂ菣ꒂ菣ꆃ菣袃臣龁苣ꮁ곧醼迥뎁곧銼ꃦ뢅藩鞈臣肸雦袏臣ꆸ雦ꮁ胣꺂菣莃菣銂냥ꖅ臣讂臣ꢁ臣ꞁ臣膀鷩貐룤超裥꾁胣钯볨꺛髧꺁臣膂臣膀蓧隦臣讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂볯芀觧骮臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀꿦莼鯧蒚臣龁苣ꮁ苣ꦃ苣뎃菣뎃菣馁苣超裥꺁闩閁臣膀迥ꞅ藩鞈臣랕臣꺁냥ꪁ臣ꢁ苣鎼볯薼胣醰臣辁臣节볯邼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣閼볯薼胣醰臣辁臣节볯邼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣鞼볯薼胣醰臣辁臣节볯邼볯膀냥ꪁ臣ꢁ苣馼볯薼胣醰臣辁臣节볯閼볯膀迥꾁볯邼볯薼臣芁苣芀곦ꮁ胣뺯뿥馁苣貃苣것苣膃菣趽뷧ꞁ臣貃苣것苣膃菣銂꿦莼臣讂胣견볯超裥ꮁ臣醁苣醼뷤꺽臣膀곧銼藩鞈臣誁臣讂꿥鲿뷤꺽臣貐臣貃苣것苣膃菣ꮁ苣ꎁ臣ꂍ苣覂苣ꚁ臣貂臣膀臣꺁裥邭臣鶁臣趽뷧ꞁ郥肸臣芁苣芀볯ꒁ臣超裥貐ꏥ꺁郥肸胦袼볯覼臣膀볯ꒁ臣超裥꺁鳦ꦁ苣ꦃ苣뎃菣뎃菣ꮁ냥ꖅ臣讂뿥膦臣芁苣꺂菣莃菣꺁闦膀郥꺂菣莃菣꺁闩閁苣莀藦鞁臣膀藩鞈臣놅胩ꮁ鳦馁苣貐臣趽뷧꺁闦꺁雩낕臣芁苣芀볯ꒁ臣超裥貐ꏥ꺁藩鞈꿦莼迥뎁郥肸胦袼볯覼臣몱껥꾁胣낕귥ꊂ菣뒂菣몂菣銂铧蒁臣钁裦馁苣鎁臣貁臣趁苣芀뻤袁臣膀볯ꒁ臣貃苣것苣膃菣超裥貐ꏥ꺁郥肸胦袼볯覼臣膀믤许볯蚈귥袨껧龔觧ꚭ볯ꎼ뷯趽뷯閽뷯膽뷯覽뷯躽뷯貽†볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒꊼ뷯辽뷯辽뷯馽볯膀菣릂苣貼볯躼볯躼볯겼뷯鎽뷯貼볯躼볯躼볯膀럧膀苣莃苣릂菣ꦂ菣覃ꓥꚭ菣것苣袼볯颽뷯辽뷯蒽†볯躽뷯隽뷯銽뷯覽뷯馽†볯銽뷯鎽뷯覼胣讃菣벃菣벃苣膀볯馼볯颼맥鮼菣ꒂ苣뎂菣钃菣벃菣ꎂ菣낂볯ꒂ菣閃苣벃菣蚃苣莃苣릂迥뎁苣躃菣鞃菣뢂苣꾂菣袼볯覽뷯莽뷯趽뷯閽뷯覽뷯螽볯ꦼ뷯蚽뷯銽뷯膽뷯覽뷯鎽†뷯躽뷯₄Ꞽ뷯躽뷯趽뷯₅낼뷯辽뷯薽뷯钽뷯覼胣릂菣릂볯꒼볯랼볯袼볯趽뷯钽뷯貼볯躼볯躼볯膀럧膀苣ꮂ菣龃菣꾂菣것苣袼볯莽뷯蒽뷯趽뷯莽†볯銽뷯鎽뷯覼胣讃菣벃菣벃苣膀볯馼볯鎼맥鮼裥邭铧ꦉ귥ꮁ臣醁苣超裥ꎧ黦袼볯薽뷯閽뷯躽뷯薽†볯躽뷯貽뷯鎽뷯鎽†뷯躽†볯辽뷯薽뷯閽뷯膽뷯ₒꊼ뷯辽뷯辽뷯馽볯膀菣ꦂ菣뮃菣ꒂ菣颃볯Ꞽ볯袼뷯辽뷯₎ꢼ뷯覽뷯誽뷯貼볯躼볯鞑胣ꊂ苣螃菣莃苣鞃菣릂볯ꆼ뷯膽뷯薽뷯覽뷯₃낼뷯薽뷯鎽볯膀볯馼볯鞼맥鮼藩鞈菣벃苣꺁苣뎃菣ꖃ菣뾂꟨邞볯ꎼ뷯趽뷯閽뷯薽뷯ₒꆼ뷯膽뷯馽뷯覽뷯ₓ辽뷯₆뎼뷯醽뷯薽뷯莽뷯₅꒼뷯钽뷯覼胣견볯ꢃ胣낂菣閃苣뎃볯ꆼ볯궼볯袼볯銽뷯蚽뷯覽뷯貼볯躼볯躼볯膀迥뎁苣ꪃ菣ꎂ菣貼볯躼볯躼볯Ꞽ뷯覽뷯蚽뷯躽볯ꢼ볯Ꞽ볯覼胣ꢷ胣銃菣麃菣뮃菣것苣袼볯閽뷯膽뷯膽†볯銽뷯鎽뷯覼胣讃菣벃苣ꎃ菣뢂菣膀볯馼볯钼맥鮼룤뎁臣超裥ꎧ黦鞃菣ꒂ菣벃볯뎼뷯醽뷯薽뷯莽뷯₅ꆼ뷯膽뷯馽뷯覽뷯ₓ낼뷯覽뷯薽뷯覼胣낂菣隃苣뎂菣貼볯躼볯Ꞽ뷯覽뷯鎽뷯辽뷯貼볯躼볯誏臣螃菣궃菣貼볯躼볯꒼뷯隽뷯銽뷯閽뷯貼볯躼볯膀럧膀볯₭릂菣莃苣袃菣뮃菣것苣袼볯₭뎼뷯辽뷯讽뷯辽뷯₎낼뷯薽뷯鎽볯膀菣ꖃ菣ꢃ菣꾂胣醼볯馼볯뒹볯鎁苣覂臣蒐胣膀鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁ迥ꞅ臣袂苣뒏铧閁苣讂볯ꮁ꣨覼臣貂臣蒁苣节臣ꪁ臣꺁雦閳苣ꢔ臣ꚁ胣몱껥馁苣鎁臣貁臣趁苣芀뻤袁臣膀볯ꒁ臣貃苣것苣膃菣超裥貐ꏥ꺁郥肸胦袼볯覼臣膀菣ꒂ菣벃苣袼볯薽뷯薽뷯鎽볯誏臣龃菣벃볯궼뷯貽뷯薽뷯覼볯ꎼ볯ꊼ볯꾼볯膀볯馼볯馼맥膀볯骼볯醼胣醼볯覼臣ꊂ菣뒂菣몂菣銂铧蒁臣몱껥馁苣鎁臣貁臣趁胣鎁臣ꊂ菣뒂菣몂菣꾁胣ꆼ볯ꦼ볯꺼菣궃苣ꦃ菣袼菣벃苣ꞃ菣銼볯邼볯ꮁ뗧뾁뻨뺁苣ꚁ臣誂胣낼볯궼볯銼볯趇蟩议鿥ꢡ胣꺂菣莃菣랕菣誃菣蚃苣醼볯誏臣꺂菣莃菣骃菣ꮃ菣ꎂ볯銂뷤ꢔ臣讂胣隈臣꾁胣銼臣꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈郥ꮣ臣貐룤Ꞁ볯薼볯꾁胣꺼볯뎼뷯膽뷯蒽뷯膽볯ꎼ볯낼菣袃菣莃苣릂苣ꢔ臣龁볯ꎼ볯붂菣袃苣Ꞃ苣醃菣놂菣뢂룤꺁볯ꆼ볯鞃菣낂菣ꂃ苣ꢔ臣ꚁ뇦骮臣讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂戼㹲芀藩鞈郥ꮣ臣貐룤Ꞁ볯薼볯銂뇦骮臣讂臣膂臣肸裨ꮁ铧蒁苣貂苣릖돦ꢁ臣ꚁ胣邙껥꾁臣貂臣蒁臣膀苣ꪃ菣貼볯躼볯ꎼ뷯銽뷯貽뷯辽볯ꢼ볯覼迥뎁菣莃菣麃菣貼볯躼볯겼뷯邽뷯膽뷯貼볯躼볯膀볯ꦼ볯궼†볯鲿铧낕귥貪볯뎼볯ꆼ볯₭ꪼ†볯邽뷯貽뷯薽뷯₄궼뷯钽뷯躼볯膀볯颼볯醼볯鞼볯袼볯馼볯颼맥覼볯겜飦내鯦ꮁ臣蒁臣芏藧ꮁ苣誂迦ꢔ臣貂苣覼臣讖ꓧ閁苣ꚁ臣讂苣꺁臣芁苣芀郥肸胦銂뇦骮臣讂諦鎡臣膀룤겈臣ꖅ触꾏菨ꪁ苣뎃菣ꖃ菣뾂菣궃苣ꦃ菣ꮁ뷤뮳賥閁苣ꚁ臣讂胣銼臣꺁藩鞈郥ꮣ臣뢛郥Ꞁ苣몱껥馁苣龁苣꺁苣뎃菣ꖃ菣뾂苣閃菣Ꚃ苣ꊂ臣设臣鞁臣膀駩骮臣閁苣ꪁ臣貁胣ꖻ룤꺁苣꺁臣馌臣覂苣讂볯Ꞽ볯Ꞽ菣궃苣ꦃ菣醃菣놂菣뢂胣螃菣궃菣貼볯躼볯꒼뷯隽뷯銽뷯閽뷯貼볯躼볯覂釨膀ꃦ뢅ꃧ뚩볯꺼뷯莽뷯薽뷯莽†볯莽뷯蒽뷯ₓ늼뷯鎽뷯膽뷯莽뷯覼胣醼볯袼볯覼胣鎼볯鞼볯醼볯颼볯뒹볯覼胣ꊼ볯ꆼ볯뒼볯膀볯겼볯뎼볯꺼胣誏臣ꚼ볯뎼볯ꆼ胣ꊂ菣袃苣ꖃ菣貼볯躼볯躼볯ꆼ뷯钽뷯莽뷯閽뷯貼볯躼볯躼볯覂釨膀裥邭铧ꦉ귥袼볯辽뷯薽뷯躼볯覽뷯貽볯覼胣銼볯閼볯钼볯鎼볯醼볯馼볯뒹볯覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†蓦鎟鯥邭볯겜飦내鯦ꞁ뷤ꢔ臣貂苣ꢁ臣膀菣것菣몂胣龄鿦ꂛ귥趀臣膀蓦鎟苣閼臣략臣馁臣ꢁ臣ꞁ臣讂鯥邭苣辄釥馁苣芀戼㹲 몁볤邭臣몙迧銂飩뎮臣讂볯겜飦내鯦ꞁ뷤ꢔ臣貂苣ꢁ臣膀菣것菣몂胣몁볤邭臣몙迧銂飩뎮臣讂胣꾁胣몁볤邭臣몙迧ꎔ觧꺁蟩ꮁ뷤鮸苣閼臣략臣馁臣ꢁ苣辄釥馁苣芀駧뺏铧ꦉ臣膀臩鶼귥讁苣ꊻ蛥閁苣龁볯꺼볯袼뻤袁臣膀뷯늼볯ꆼ볯膀迥꾁臩鶼귥讁苣ꊻ蛥閁苣龁뷯늼볯ꆼ臣覂뿧뎨臣貂臣鶃菣骃菣膃菣ꞁ臣ꎁ臣袂臣芀藥讞髧ꮁ胣趽볯꺼볯꺁菣馃菣躽룤꾁胣鶁臣讁苣뮿꣨閁苣龁菣ꪃ菣鞃菣覃臣것菣ꮃ뷤许苣节臣覂臣芀駧뺏臣것菣ꮃ臣膀뷯늼볯ꆼ迥꾁苣뎃菣꾂돨銂룦骮臣讂臣膂臣馨뫦蒚諦鎡苣ꢔ臣ꚁ胣몱껥馁苣鎁臣貁臣趁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯隼볯醀⼼䥄㹖 龄鿦ꂛ귥骼鳦躘듧뢛臣뾽铧閁苣讂臣趁胣貀蓦鎟鯥邭胣꾁胣龔觧ꖷ귥꺁뗧鲞臣鞁臣趓뷤馁苣鎁臣貁臣趁苣뮻蓦꺁뻥龔觧膀苣ꒂ菣릂胣龄鿦Ꞁ觧ꪳ胣袏臣龔觧붣觥銂賦鞁胣隈臣꾁胣讁臣讂믤辄臣꺾铧ꦉ胣Ꚃ苣ꮃ苣膀蓦鎟胦ꦉ돨膀迥꾁铧ꦉꏨꒉ臣뮻蓦꺁ꓥ뚄迥꾁臩鶼귥趓뷤邈裥꾁胣銃菣膀该ꦉ胣趤觧袏臣ꖈ臣龔觧ꮁ臣蒁臣膀雦袈迥꾁볤鎟胦뺖苦膀귦ꆺ迥꾁믤꺁铧ꦉ귥蒚ꧦ붃룤ꢅ苣閼臣략臣鞁뻥讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†苣뎃菣ꮃ苣뎃苣骼鳦躘듧뢛臣뾽铧閁苣讂臣趁胣貀苣뎃菣ꮃ苣뎃苣趀迥꾁胣閃菣벃볯蚽뷯閽볯趀臣膀苣ꮃ苣龃苣붂苣ꒂ菣릂꟧袼볯銽뷯袽뷯趽뷯颽뷯隽뷯銽뷯蒽뷯薽볯꺁볯꺼볯Ꚃ苣ꮃ苣ꞁ臣讂苣뎃菣ꮃ苣뎃苣Ꚃ苣ꮃ苣銂軥ꂛ臣馁苣ꖳꇩ誏臣몓매開觧꺁蓦鎟韧ꞁ臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯醼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†闧Ꞁ뷤骼鳦躘듧뢛臣뾽铧閁苣讂臣趁胣ꢔꫨ貀闧Ꞁ뷤趀臣膀鳦몙飦꺁臣骁苣讁臣隌郥ꦉ臣뮻蓦꺁뫤覤闧Ꞁ뷤膀ꯧ鎽闧Ꞁ뷤膀迩较뷤膀迥꾁苣ꊂ苣蚃菣ꪂ菣벃苣辄釥馁苣芀鳦몙飦꺁賥袐觧貁胣醼臣袏臣螤闦꺁苣ꦃ菣궸뿥誏臣込迥꾁뫤趇뗧袐苣覜臣鞾苣龁苣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