(57)【要約】  本発明は、脆弱Ｘ症候群、および自閉症スペクトラム障害などの関連障害の徴候または症状を緩和する方法を提供する。
2016530291.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脆弱Ｘ症候群または関連障害の症状を処置または緩和する方法であって、それを必要とする対象者にメタドキシンを含んでなる組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項２】
１００〜３０００ｍｇの間の総一日用量のメタドキシンを投与することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記メタドキシンが毎日、１日おきに、または毎週投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記メタドキシンが１日当たり１、２、または３種類の剤形で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記メタドキシンが持続放出経口剤形で投与され、前記メタドキシンが徐放形態と即時放出形態の組合せとして処方される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）徐放形態が少なくとも８時間の前記メタドキシンの持続放出を提供し、かつ、
（ｂ）徐放メタドキシンと即時放出メタドキシンの相対比が約６０：４０〜８０：２０の間である、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記徐放メタドキシンと前記即時放出メタドキシンの相対比が約６５：３５である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記症状が学習障害または社会的行動障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記対象者が脆弱Ｘ症候群または自閉症スペクトラム障害を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記関連障害が自閉症スペクトラム障害である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１３年９月９日出願の仮出願第ＵＳＳＮ６１／８７５，３８４号、２０１３年９月２６日出願の第ＵＳＳＮ１４／０３８２５８号、および２０１４年５月９日出願の仮出願第ＵＳＳＮ６１／９９１，３５１号の優先権および利益を主張するものであり、これらの内容はそれぞれそれらの全内容が引用することにより本明細書の一部とされる。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般に、脆弱Ｘ症候群および関連障害の症状を処置または緩和する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
脆弱Ｘ症候群(fragile X Syndrome)（ＦＸＳ）は、その名称が意味するように、マップ位置Ｘｑ  ２７．３で中期染色体の同腕染色分体ギャップとして表される脆弱部位に関連する。脆弱Ｘ症候群は、Ｘ染色体上に位置する脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子の５’非翻訳領域の突然変異によって引き起こされる遺伝的な障害である。ＦＸＳを引き起こす突然変異は、脆弱Ｘ精神遅滞遺伝子ＦＭＲ１中のＣＧＧリピートに関連する。ほとんどの健常者では、ＣＧＧリピートの総数は１０未満〜４０の範囲であり、平均は約２９である。脆弱Ｘ症候群では、このＣＧＧ配列が２００〜１，０００回を超えて繰り返される。対象者が約２００を超えるＣＧＧリピートを有する場合、その脆弱Ｘ遺伝子は過剰にメチル化されるようになり、遺伝子は沈黙する(silences)。結果として、脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質（ＦＭＲＰ）が産生されないか、または低レベルでしか産生されず、対象者はＦＸＳの兆候を示す。
【０００４】
ＦＭＲ１遺伝子の前変異拡大（５５〜２００ＣＧＧリピート）は一般集団で頻繁に見られ、推定保有率は女性２５９人に１人、男性８１２人に１人である。前変異の保有者は、不安などの感情問題が共通しているが、一般に正常なＩＱを有する。高齢男性の前変異保有者（５０歳以上）は、進行性の企図振戦および運動失調を発症する。これらの運動障害は、多くの場合、記憶喪失、不安、および実行機能の欠陥、引きこもりまたは過敏性行動、および認知症を含む進行性の認知・行動問題を伴う。この障害は脆弱Ｘ関連振戦／運動失調症候群（ＦＸＴＡＳ）と呼ばれている。ＦＸＴＡＳを有する対象者の磁気共鳴画像法から、中小脳脚および隣接する小脳白質におけるＴ２強調シグナル強度の増強が明らかである。
【０００５】
ＦＸＳは、浸透率の低いＸ連鎖優性障害として分離している。いずれの性別でも、脆弱Ｘ突然変異を有する場合には知的障害を示し得るが、重篤度は様々である。ＦＸＳを有する小児および成人は、自閉症様の特徴および傾向を含む、様々な程度の知的障害または学習障害および行動・感情問題を有する。ＦＸＳを有する幼児は、座り方、歩き方および話し方の学習などの発達のマイルストーンに遅れを有する場合が多い。罹患小児は頻繁なかんしゃく、注意欠陥、頻繁な発作（例えば、側頭葉発作）を有する場合があり、多くの場合、高い不安を示し、打ちのめされやすく、感覚過覚醒障害、消化管障害を示すことがあり、会話障害および手をひらひらさせる、手を噛むなどの異常行動を示す場合がある。
【０００６】
ＦＸＳは、被験者由来のサンプル（例えば、血液サンプル、口内サンプル）に対して行われる確立された遺伝子検査によって診断することができる。この検査は、ＣＧＧリピートの数に基づき被験者のＦＭＲ１遺伝子に突然変異または前変異が存在するかどうかを判定する。
【０００７】
ＦＸＳを有する対象者は自閉症も有する場合がある。自閉症と診断された全小児の約５％がＦＭＲ１遺伝子に突然変異を有し、脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）も有する。自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）は、ＦＸＳを有する男性のおよそ３０％、女性の２０％に見られ、ＦＸＳ者のさらに３０％が、ＡＳＤ診断を持たずに自閉症症状を示す。知的障害がＦＸＳの顕著な特徴であるが、ＦＸＳ者は、軽度症例では内気、目を合わさない、および社交不安から、重度罹患では手をひらひらさせる、手を噛むおよび保続的会話までにわたる自閉症的特徴を示す場合が多い。ＦＸＳ者は、注意欠陥および多動、発作、感覚刺激に対する過敏性、強迫性行動および消化管機能の変化などの自閉症に関連する他の症状も示す。ＦＭＲ１突然変異は、単一のタンパク質（ＦＭＲＰ）の発現を抑制するか、または大幅に低下させる。ＦＭＲＰの不在下での脳発達は、ＦＸＳの主な症状を生じさせると思われる。
【０００８】
中核症状に加え、ＦＸＳを有する小児は、易刺激性、攻撃および自傷行為などの重篤な行動障害を有する場合が多い。ＦＸＳを有する男性（８〜２４歳）の最近の研究では、２か月の観察期間での自傷行為は被験者の７９％、攻撃行動は７５％と報告された。
【０００９】
ＦＸＳを有するヒトに対する現在利用可能な治療計画としては、例えば、行動修正ならびに抗鬱薬および抗精神病薬を含む一定範囲の投薬（ＦＸＳの治療としてはＦＤＡにより承認されていない）による処置が含まれる。認知行動療法は、ＦＸＳおよび自閉症者において言語および社会化を改善するために使用されている。近年では、非定型抗精神病薬リスペリドンによる薬理学的処置が、自閉症者の治療において非薬理学的アプローチを増強するために一般に使用されている。自閉症小児におけるリスペリドンの作為化プラセボ対照試験では、異常行動チェックリストおよび臨床全般印象改善の易刺激性サブスケールに有意な改善が示された(McCracken, J. T., et al., N. Engl. J. Med. 347:314-321 (2002))。しかしながら、有害事象は、体重増加、食欲増加、疲労、傾眠、目眩、および流涎を含んだ。社会的孤立およびコミュニケーションはリスペリドンの投与により改善されず、錐体外路系症状およびジスキネジアなどの有害な副作用は自閉症の小児においてリスペリドンと関連付けられた。現行の治療計画は有効でない場合が多いか、または特に抗精神病薬の場合には、長期使用により望ましくない副作用を生じるおそれがあるので、新たな治療の必要がある。
【発明の概要】
【００１０】
種々の面において、本発明は、必要とする対象者にメタドキシンを含んでなる組成物を投与することにより脆弱Ｘ症候群または関連障害の症状を治療または緩和する方法を提供する。症状は例えば、学習障害または社会的行動障害である。対象者は脆弱Ｘ症候群または自閉症スペクトラム障害を有する。関連障害は自閉症スペクトラム障害である。
【００１１】
いくつかの面では、１００〜３０００ｍｇの間の総一日用量のメタドキシンが投与され、メタドキシンは毎日、１日おきに、または毎週(weekly)投与される。
【００１２】
場合により、メタドキシンは、１日当たり１、２、または３種類の剤形(one, two, or three dosage forms)で投与される。いくつかの実施態様では、メタドキシンは、持続放出経口剤形(a sustained release oral dosage form)で投与され、この場合、メタドキシンは徐放形態と即時放出形態の組合せ(a combination of slow release and immediate release forms)として処方される。
【００１３】
例えば、徐放形態は、少なくとも８時間のメタドキシンの持続放出を提供する。徐放メタドキシンと即時放出メタドキシンの相対比(the relative proportion of the slow release metadoxine to the immediate release metadoxine)は、約６０：４０〜８０：２０の間である。好ましくは、徐放メタドキシンと即時放出メタドキシンの相対比は約６５：３５である。
【００１４】
そうではないことが定義されない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の熟練者が一般に理解しているものと同じ意味を有する。本発明の実施には本明細書に記載されているものと類似または等価な方法および材料が使用可能であるが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書に記載されている総ての刊行物、特許出願、特許および他の参照文献は、それらの全内容が明示的に引用することにより本明細書の一部とされる。矛盾があれば、定義を含む本明細書が優先する。加えて、本明細書に記載の材料、方法、および例は単に例示であり、限定することを意図するものではない。
【００１５】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになり、それらに包含される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおける文脈的恐怖条件付け(contextual fear conditioning)に対するビヒクル（Ｖ）またはメタドキシン（Ｍ）（１００、１５０、または２００ｍｇ／ｋｇ）の１日１回、７日の腹腔内（ｉｐ）投与の効果を示す。具体的には、パネルＡは、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇのメタドキシンの効果を示す。パネルＢは、ビヒクルまたは１００ｍｇ／ｋｇのメタドキシンの効果を示す。パネルＣは、ビヒクルまたは２００ｍｇ／ｋｇのメタドキシンの効果を示す。示されているデータは平均±平均の標準誤差（ｓｅｍ）、１群につきマウスＮ＝１０である。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびＮＳ＝有意でない。
【図２】図２は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおける社会的接近行動に対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日の腹腔内投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊ｐ＜０．０５および＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図３】図３は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおけるＹ迷路自発的交替行動（パネルＡ）、Ｙ迷路報酬交替行動（パネルＢ）またはＹ迷路水迷路空間弁別（パネルＣ）に対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日の腹腔内投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびＮＳ＝有意でない。
【図４】図４は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおけるＴ迷路報酬交替行動に対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日の腹腔内投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図５】Ｎ＝１０野生型（ＷＴ）またはＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）２か月齢マウス群における連続小路課題(successive alleys task)での行動に対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）による１日１回、７日処置の効果を示す。この装置の連続小路は探索マウスに段階的に不安を増す環境を提供した。従って、小路から降りた場合に不安と評価される。加えて、総合的な活動レベルもこの装置で定量することができた。
【図６】図６は、２か月齢Ｆｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおけるＥＲＫ（ＥＲＫ活性の指標）（パネルＡ）およびＡｋｔ（Ａｋｔ活性の指標）（パネルＢ）の全脳リン酸化レベルに対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日の腹腔内投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびＮＳ＝有意でない。
【図７】図７は、６か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおける文脈的恐怖条件付けに対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日間のｉｐ投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１およびｎｓ＝有意でない。
【図８】図８は、匂いの嗅ぎ合い(sniffing bouts)の回数または匂い嗅ぎの持続時間により測定される、６か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおける社会的接近行動（パネルＡおよびＣ）および社会的記憶行動（パネルＢおよびＤ）に対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日間のｉｐ投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびｎｓ＝有意でない。
【図９】図９は、６か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおけるＥＲＫ（パネルＡ）およびＡｋｔ（パネルＢ）の全脳リン酸化レベルに対するビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回、７日間のｉｐ投与の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびｎｓ＝有意でない。
【図１０】図１０は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおける文脈的恐怖条件付けに対する７日間の１５０ｍｇ／ｋｇでのメタドキシン（Ｍ）の１日１回ｉｐ投与またはビヒクル（Ｖ）もしくは１５０および３００ｍｇ／ｋｇメタドキシンの経口投与（ｐｏ）の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。具体的には、パネルＡは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスおよび野生型マウスにおけるビヒクルによるｉｐおよび経口処置を示す。パネルＢは、野生型マウスにおけるメタドキシンによるｉｐおよび経口処置を示す。パネルＣは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるメタドキシンによるｉｐおよび経口処置を示す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびｎｓ＝有意でない。
【図１１】図１１は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスにおける社会的接近（パネルＡ）および社会的記憶（パネルＢ）に対する７日間のビヒクル（Ｖ）１５０もしくは３００ｍｇ／ｋｇでのメタドキシン（Ｍ）の１日１回、ｉｐ投与または経口投与（ｐｏ）の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、およびｎｓ＝有意でない。
【図１２】図１２は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）および野生型（ＷＴ）マウスにおける、フローサイトメトリーを用いて評価されるリンパ球バイオマーカーに対する７日間のビヒクル（Ｖ）または１５０もしくは３００ｍｇ／ｋｇでのメタドキシン（Ｍ）の１日１回、ｉｐ投与または経口投与（ｐｏ）の効果を示す。示されているバイオマーカーは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスまたは野生型マウスにおけるｐＡｋｔ（パネルＡ）およびｐＥＲＫ（パネルＢ）である。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１およびｎｓ＝有意でない。
【図１３】図１３は、２か月齢の野生型（ＷＴ）およびＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）マウスの脳領域におけるｐＥＲＫレベルに対する７日間のビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回ｉｐ投与の効果を示す。分析領域は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスまたは野生型マウスにおける海馬（パネルＡ）、前頭前皮質（パネルＢ）、および線条体（パネルＣ）であった。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１およびｎｓ＝有意でない。
【図１４】図１４は、２か月齢の野生型（ＷＴ）およびＦｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）マウスの脳領域におけるｐＡｋｔレベルに対する７日間のビヒクル（Ｖ）または１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン（Ｍ）の１日１回ｉｐ投与の効果を示す。分析領域は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスまたは野生型マウスにおける海馬（パネルＡ）、前頭前皮質（パネルＢ）、および線条体（パネルＣ）であった。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につきマウスＮ＝１０である。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１およびｎｓ＝有意でない。
【図１５】図１５は、Ｆｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウス由来のニューロン海馬培養物における糸状仮足密度（パネルＡ）、長さ（パネルＢ）、および幅（パネルＣ）に対するビヒクル（Ｖ）または３００μＭメタドキシン（Ｍ）による５時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍである（野生型、Ｎ＝２０ニューロンおよびＦｍｒ１ノックアウトマウス、Ｎ＝２０ニューロン）。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、およびｎｓ＝有意でない。
【図１６】図１６は、Ｆｍｒ１ノックアウト（ＫＯ）または野生型（ＷＴ）マウスの４００μＭ海馬切片における基底ｄｅ  ｎｏｖｏタンパク質合成に対するビヒクル（Ｖ）または３００μＭメタドキシン（Ｍ）によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理の効果を示す。示されているデータは平均±ｓｅｍ、１群につき切片Ｎ＝６である。＊ｐ＜０．００１および＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【発明の具体的説明】
【００１７】
本発明は、メタドキシンは脆弱Ｘ症候群の検証済み動物モデルにおいて認知および社会機能を有意に改善するという発見に関する。
【００１８】
具体的には、メタドキシンは、文脈的恐怖パラダイム(contextual fear paradigm)の際の記憶および学習を用量依存的に有意に改善し、２種類の最高用量レベル（１５０および２００ｍｇ／ｋｇ）は、Ｆｍｒ１  ＫＯマウスの学習および記憶欠陥をＷＴマウスレベルと同等の程度まで完全に救済した。さらに、１５０ｍｇ／ｋｇのメタドキシンで処置したＦｍｒ１  ＫＯマウスにおいて記憶の有意な改善がＴ迷路などの挙動試験で認められ、認知結果の有意な改善を示した。これらの所見は、１５０ｍｇ／ｋｇのメタドキシンで処置したＫＯマウスの社会的相互作用の改善により補足された。重要なことには、検証済み脆弱Ｘマウスモデルにおけるメタドキシン処置後の認知実行機能、作業記憶および社会的相互作用の改善は、ニューロンシグナル伝達経路および酸化ストレスを反映する生化学的マーカー正常化と相関している。
【００１９】
脆弱Ｘ症候群は、自閉症の最も広まっている一遺伝子性の原因であり、少年間の精神遅滞の遺伝性の原因である。ＦＭＲ１遺伝子突然変異を有する人は子供に受け渡す可能性がある。疾病管理予防センター（ＣＤＣ）によれば、男性では４，０００人に、女性では８，０００人におよそ１人が脆弱Ｘ症候群を有する。この突然変異を有する総ての人が脆弱Ｘの徴候または症状を示すわけではなく、障害は軽度から重度にわたり、長い顔、大きなまたは突出した耳、大きな精巣（巨精巣症）などの身体的特徴と、常同性運動（例えば、手をひらひらさせる）および社交不安などの行動的特徴を伴う。脆弱Ｘは、Ｘ染色体に見られる脆弱Ｘ精神遅滞１(Fragile X Mental Retardation 1)（ＦＭＲ１）遺伝子の変化または突然変異を原因とする。この遺伝子は通常、脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質またはＦＭＲＰと呼ばれるタンパク質を生成する。このタンパク質は脳および神経系の細胞間の接続を作り出し、維持するために重要である。この突然変異は身体にこのタンパク質の小片しか作らせず、またはタンパク質を全く作らせず、多くの場合で脆弱Ｘの症状をもたらす。
【００２０】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）は、自閉症スペクトラム障害などの他の病態を併存する場合が多い。自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）は、重大な社会的、コミュニケーションおよび行動的問題を引き起こし得る一群の発達障害である。ＡＳＤを有する人々は、脳での情報の取り扱いが他の人々と異なる。
【００２１】
ＡＳＤは「スペクトラム障害」である。これは、ＡＳＤが人によって異なる影響を及ぼし、ごく軽度から重度までの範囲に及び得ることを意味する。ＡＳＤを有する人々は、社会的相互作用に伴う問題など、いくつかの類似症状を共通に持つ。しかし、症状がいつ始まるか、どの程度重篤か、および症状の厳密な性質には違いがある。ＡＳＤは、自閉症性障害（「古典的」自閉症とも呼ばれる）、アスペルガー症候群および広汎性発達障害を含む。
【００２２】
現在のところ、食品医薬品局（ＦＤＡ）は、脆弱Ｘまたはその症状の治療に対して薬物は特に承認していない。脆弱Ｘ症候群の特定の症状を処置するために適応外で使用される薬物はあるが、結果は患者によって大きく異なり、これらの薬物のいくつかは重大なリスクを持ち、最初は症状を悪化させたる場合や効果が出るまでに数週間かかる場合がある。本発明は、脆弱Ｘまたはその症状を治療するための薬物の、まだ対処されていない需要を提示する。
【００２３】
よって、本発明は、対象者にメタドキシンを含んでなる組成物を投与することにより脆弱Ｘ症候群および／または自閉症スペクトラム障害の徴候または症状を治療、予防または緩和する方法を提供する。
【００２４】
一般に、脆弱Ｘの徴候および症状は、５つのカテゴリーに入り、例えば、知能および学習；一般に脆弱Ｘに伴うまたは特徴を共通に持つ身体障害、社会障害および感情障害、会話障害および言語障害および感覚障害を含む。脆弱Ｘを有する個人は、知的機能障害、社交不安、言語障害および特定の感覚に対する感受性を有する。メタドキシンによる処置は学習を改善し、脆弱Ｘ症候群を有する対象者において社会性を増強する。
【００２５】
自閉症スペクトラム障害は、脆弱Ｘ症候群を有する個人に一般に随伴する。自閉症の徴候および症状としては、顕著な言語遅滞、社会性およびコミュニケーションの問題、ならびに異常な行動および関心が含まれる。自閉症性障害を有する多くの人が知的障害も有する。アスペルガー症候群を有する個人は通常、自閉症性障害の何らかの軽度症状を有する。例えば、これらの人は社会的問題ならびに異常な行動および関心を有する場合がある。広汎性発達障害（ＰＤＤ−ＮＯＳ）を有する個人は、自閉症性障害またはアスペルガー症候群の判定基準の、総てではないがいくつかを満たし、ＰＤＤ−ＮＯＳと診断される場合がある。ＰＤＤ−ＮＯＳを有する人々は通常、自閉症性障害を有する人々よりも症状が少なくかつ軽度である。これらの症状は、社会的およびコミュニケーションの問題のみを引き起こす場合がある。メタドキシンによる処置は、自閉症の症状を改善する。
【００２６】
メタドキシンは、カルボン酸ピロリドン（ＰＣＡ）とピリドキシン（ビタミンＢ６）の間のイオン対であり、これら２つの化合物が塩化により単一の生成物として連結されている。ＰＣＡとの対合は、ピリドキシンの薬理活性を相乗的に増強する（例えば、米国特許第４，３１３，９５２号参照）。メタドキシンは水および胃液に制限なく可溶である。この薬物の経口吸収は速く、高いバイオアベイラビリティ（６０〜８０％）を持つ。ヒト血清中でのメタドキシンの半減期は短く（４０〜６０分）、経口投与と静脈内投与の間に目に見える違いはない(Addolorato et al., 前掲; Lu Yuan et al., Chin. Med. 1 2007 120(2) 160-168)。
【００２７】
メタドキシンは、数カ国で、５００ｍｇ錠剤および３００ｍｇ注射剤の形態での処方薬として上市している。錠剤は、５００ｍｇのメタドキシン、微晶質セルロースおよびステアリン酸マグネシウムを含有する。アンプルは、３００ｍｇのメタドキシン、メタ重亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡナトリウム、メチル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートおよび水を含有する。
【００２８】
特定の実施態様では、例えば完全にまたは部分的に持続放出または制御放出用に処方された本発明のメタドキシン組成物は、脆弱Ｘ症候群および自閉症スペクトラム障害などのその関連の病態／障害の徴候または症状の治療、予防および／または緩和においてメタドキシンのより効率的な使用を可能とする。
【００２９】
本発明の上記方法のあるものにおいて、メタドキシンまたはその許容可能な誘導体は、対象者への投与時に即時放出するように処方してもよい。本発明の上記方法のあるものにおいて、メタドキシンまたはその許容可能な誘導体は、持続放出および／または制御制御用に処方してもよく、また場合によって、対象者への投与時に即時放出特徴と持続放出および／または制御放出特徴の両方を持つように処方してもよい。特定の実施態様では、メタドキシンまたはその生理学的に許容可能な誘導体は、非慢性投与用に処方される。本発明の方法に有用なメタドキシン製剤(formulation)を以下にさらに詳細に記載する。
【００３０】
特定の実施態様では、本発明は、脆弱Ｘ症候群および／または自閉症スペクトラム障害などのその関連の病態／障害の徴候または症状の改善、治療、予防および／または緩和のための、対象者に投与した際に持続放出および／または制御放出されるように処方された、メタドキシンまたはその誘導体を含んでなる組成物を提供する。
【００３１】
特定の実施態様では、本発明は、メタドキシンまたはその誘導体を含んでなり、メタドキシンまたは誘導体の一部が対象者に投与された際に持続放出および／または制御放出するように処方され、また、メタドキシンまたは誘導体の一部が即時放出するように処方されている、脆弱Ｘ症候群および／または自閉症スペクトラム障害などのその関連の病態／障害の徴候または症状の改善、治療、予防および／または緩和のための組成物を提供する。
【００３２】
特定の実施態様では、有効成分の有効血清レベルは、メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の投与後、約１０分〜約２０分または３０分または４０分または５０分または６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間以内に達成される。特定の実施態様では、前記対象者における有効成分の有効血清レベルは、メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の投与後、約５分〜約２０分または３０分または４０分または５０分または６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間以内に達成される。特定の実施態様では、有効成分の有効血清レベルは、メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の投与後、約２０分〜約２０分または３０分または４０分または５０分または６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間以内に達成される。特定の実施態様では、有効成分の有効血清レベルは、約５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、５０分または６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間以内に達成される。
【００３３】
本発明者らは、腸内経路（消化管を介する）および／または非経口経路（消化管以外の経路）に基づくメタドキシンまたはメタドキシン誘導体の投与のための革新的アプローチを開発した（Ｗ０２００９／００４６２９、その内容は引用することによりその全体が本明細書の一部とされる）。これらのアプローチは、対象とする送達系のための担体、例えば、適当な界面活性剤／補助界面活性剤組成物または有効成分を封入するマイクロ／ナノ粒子（例えば、リポソームもしくはナノリポソーム）、または他の添加剤もしくは賦形剤の細心の選択に基づく、所望の特性を有する送達系の合理的設計を提供する。腸内送達系は、経口投与（錠剤、サシェ剤、トローチ剤、カプセル剤、ゲルキャップ、滴剤、もしくは他の味の良い(palatable)形態）または直腸投与（坐剤もしくは（ミニ）浣腸形態）用に設計してもよい。加えて、対象とする送達系は、液体形態、例えば、滴剤溶液、シロップであってもよい。さらに、対象とする送達系は、飲料または食品の形態であってもよい。よって、本発明により使用される有効成分は、飲料、特に、ジュース、ネクター、水、炭酸水および他の炭酸飲料、シェイク、ミルクシェイクおよび他のミルク系飲料などのようなソフトドリンク中に含まれてよい。液体製剤はまた、水または炭酸水で希釈するための濃縮シロップの形態であってもよい。あるいは、有効成分は、スナックバー、ヘルスバー、ビスケット、クッキー、スィーツ、菓子製品、アイスクリーム、アイスキャンディーなどの食品中に含まれてもよい。
【００３４】
さらにまた、送達系は、生理学的に活性なピリドキシン誘導体、特に、ピリドキソールＬ，２−ピロリドン−５カルボキシレート（メタドキシン）を含んでなる食品または飲料製品であってもよい。特定の実施態様では、本発明の食品または飲料製品の摂取は、その摂取後約１０分から約４０〜６０分以内に有効成分の血清レベルの達成をもたらし得る。例としては、スィーツ、チョコレート、キャンディーおよびキャンディーバー、エネルギーバー、アイスクリーム、ペーストリー製品などが挙げられる。
【００３５】
投与の非経口経路としては、皮下、転移(transferal)（無傷な皮膚を経た拡散）、経粘膜（粘膜を経た拡散）、舌下、口内（歯肉線近傍の頬を経た吸収）投与、または吸入による投与が含まれる。特定の実施態様では、本発明により使用される組成物は、侵襲的処置様式では投与されない（すなわち、非侵襲的である）。特定の実施態様では、メタドキシンまたはメタドキシン誘導体組成物は、静注によっては投与されない。
【００３６】
特定の実施態様では、本発明により使用される組成物は、噴霧に好適な微晶質粉末または溶液として；腟内または直腸内投与のために、膣坐剤、坐剤、クリームまたはフォームとして送達される。好ましい製剤は、経口投与用製剤である。別の好ましい製剤は、局所投与用のものである。別の好ましい製剤は、経粘膜投与、舌下、口内（歯肉線近傍の頬を経た吸収）投与、吸入による投与または眼内投与、例えば、点眼剤用のものである。
【００３７】
医学的用途のためのメタドキシンまたはメタドキシン誘導体の投与は、安全かつ効率的な送達系を必要とする。本発明は、特殊な物理化学的特徴、特に、非侵襲的手段による直接吸収、および結果としての副作用の回避による種々の物質の安全な送達のための送達系を提供する。本送達系は、対象者に生物学的に活性な形態で送達される物質の濃度または量の低減を可能とするそのユニークな物理化学的特徴に基づき、メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の吸収の効率および質を有意に高める。本発明の送達系は、組織への有効物質の直接的接近を提供し、従って、処置対象に対してメタドキシンまたはメタドキシン誘導体の即時的または即時的に近い効果を与える。よって、特定の実施態様では、本発明は、生理学的に活性なピリドキシン、特に、ピリドキソールＬ，２−ピロリドン−５カルボキシレート（メタドキシン）、またはその生理学的に許容可能な誘導体の改善された投与のための、好適な担体中に有効成分として前記生理学的に活性なピリドキシンを含んでなる非侵襲的医薬送達系を使用する。特定の実施態様では、有効成分の血清レベルは、投与後約１０分から約４０分〜６０分以内に達成される。別の実施態様では、本発明は、必要とする対象者における認知行動の改善に使用することを目的とした、生理学的に活性なピリドキシン誘導体、特に、ピリドキソールＬ，２−ピロリドン−５カルボキシレート（メタドキシン）の改善された投与のための、好適な担体中に有効成分として前記ピリドキシン誘導体を含んでなる非侵襲的医薬送達系を使用する。特定の実施態様では、前記有効成分の血清レベルは、投与後約１０分から約４０分〜６０分以内に達成される。
【００３８】
特定の実施態様では、本発明により使用される薬物送達系は、経口、経鼻、眼内、直腸、皮下、転移(transferal)、経粘膜、舌下、口内または吸入投与用に設計することができる。薬物送達系は、有効物質を制御放出様式で提供し得る。特定の実施態様では、本発明の薬物送達系は、少なくとも１種類の付加的な薬学的に活性な薬剤をさらに含んでなり得る。本発明により使用される送達系は、一般に、緩衝剤、その浸透圧を調整する薬剤、および場合により、１種類以上の当技術分野で公知の薬学上許容可能な担体、賦形剤および／または添加剤を含んでなり得る。補助的な薬学上許容可能な有効成分も本組成物に配合可能である。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用により、分散物の場合には必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。本明細書で使用する場合、「薬学上許容可能な担体」は、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤などのいずれかおよび総てを含む。薬学的に有効な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は当技術分野で周知である。従来の媒体または薬剤が有効成分と不適合である場合を除き、治療用組成物中でのその使用が企図される。有効性薬剤はいずれの薬学上許容可能な経路によりおよびいずれの薬学上許容可能な剤形でも送達可能であると考えられる。経口形としては、限定されるものではないが、錠剤、カプセル剤、丸剤、サシェ剤、トローチ剤、滴剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ、懸濁液、シロップ、およびエマルションが含まれる。また、経口急速放出、制御放出、および遅延放出医薬剤形も含まれる。有効薬物成分は単一の剤形で投与することもできるし、または一緒もしくは独立に投与される別個の剤形で投与することもできる。有効薬物成分は、好適な医薬希釈剤、賦形剤または担体（本明細書では「担体」と総称する）との混合物として投与することができ、材料は意図される投与形態に対して適宜選択される。送達系が経口投与用であって、錠剤またはカプセル剤などの形態である場合、有効薬物成分は、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、修飾糖、加工デンプン、メチルセルロースおよびその誘導体、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール、および他の還元および非還元糖、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ステアリン酸カルシウムなどの非毒性の薬学上許容可能な不活性担体と組み合わせることができる。液体形態の経口投与では、有効薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの非毒性の薬学上許容可能な不活性担体と組み合わせることができる。所望により、または必要であれば、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤および香味剤を本混合物に配合することができる。抗酸化剤、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸、メタ重亜硫酸カルシウム、ヒドロキノン、および７−ヒドロキシクマリンなどの分解防止剤も、本剤形を安定化させるために添加することができる。他の好適な化合物としては、ゼラチン、甘味剤、アラビアガム、トラガカントガム、またはアルギネートどの天然および合成ガム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレン、グリコール、ワックスなどを含み得る。
【００３９】
これらの医薬組成物に使用可能な、さらなる好適な薬学上許容可能な担体としては、限定されるものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、バッファー物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれる。いくつかの実施態様では、薬学上許容可能な担体は、ステアリン酸マグネシウムである。一般に認知され使用されているさらなる医薬賦形剤は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences (Gennaro, A., ed., Mack Pub., 1990)に見られる。
【００４０】
非経口投与の目的で、ゴマ油もしくは落花生油などの好適な油中または水性プロピレングリコール中の溶液、ならびに対応する水溶性塩の無菌水溶液を使用することができる。このような水溶液は必要に応じて適宜緩衝させてもよく、液体希釈剤はまず十分な生理食塩水またはグルコースで等張としてもよい。これらの水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内注射の目的で特に好適である。これに関して、使用される無菌水性媒体は総て、当業者に周知の標準技術によって容易に得ることができる。一定量の有効成分を含む種々の医薬組成物を調製する方法は既知であるか、または当業者には本開示に鑑みれば自明である。ヒト血清中でのメタドキシンの半減期は極めて短い。Lu Yuan et al. (Chin. Med. J 2007 120(2) 160-168)は、平均半減期が約０．８時間であると示している。活性部分の血清レベルを延長する１つの方法は、材料を持続放出製剤として投与することによるものである。メタドキシンは水および種々の体液に制限無く可溶であることから、その放出を持続させ、その吸収時間を延長することは困難である。従って、持続放出が達成できるとは予想されなかった。メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の制御放出剤形は、長期間にわたって血漿レベルの小さな変動で持続的作用をもたらす、体液中への有効成分の所定の徐放出に基づくものであり得る。
【００４１】
特定の実施態様では、本発明により使用される送達系は、制御放出製剤で投与することができる。特定の実施態様では、投与方法は対象者の病態および必要の評価の後に担当の医師またはその他の当業者によって決定される。本発明の方法の実施態様は、本明細書に記載の治療用化合物を持続放出形で投与することである。Langer, Science 249(4976):1527-33 (1990)に記載されているものなど、当業者に既知の制御放出法または持続放出法はいずれも本発明の組成物および方法とともに使用可能である。このような方法は、持続放出組成物、坐剤、またはコーティングされた埋め込み可能な医療装置を、治療上有効な用量の本発明の組成物がこのような方法の対象に継続的に送達されるように投与することを含んでなる。持続放出はまた、この目的で設計および処方されたパッチを用いて達成してもよい。本発明の組成物は、一定期間にわたって薬剤の持続放出を可能とするカプセルによって送達してもよい。制御放出または持続放出組成物としては、親油性デポー（例えば、脂肪酸、ワックス、油類）中の製剤が含まれる。また、ポリマー（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）でコーティングされた粒状組成物も本発明により包含される。持続放出製剤もしくは装置、または任意の局所用製剤は、その組成物を安定化させるため、または皮膚もしくは粘膜などの生理学的障壁を透過するためにさらに組成物を含んでもよい。付加的成分の例としては、任意の生理学的に許容可能な洗剤、または例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの溶媒を含み得る。
【００４２】
本発明の総ての実施態様において、本発明の方法および使用は、単一の用量として処方された本発明により定義される塩付加物を含んでなる組成物を用い得る。前記単一の製剤は、当業者に公知の即時放出製剤、バースト製剤、長期放出製剤、持続放出製剤またはその他の制御放出製剤であり得る。
【００４３】
本発明の方法および使用の他の実施態様では、本発明により定義される塩付加物を含んでなる組成物は、異なるタイプの製剤が、すなわち、単一用量でまたは個別に、付随して(concomitantly)もしくは逐次に与えられる個別用量で与えられる当業者に公知の即時放出製剤、バースト製剤、長期放出製剤、持続放出製剤または他の任意の制御放出製剤の任意の組合せが、対象者に投与される組合せ投与製剤であってよく、ここで、個別用量の投与間の時間間隔は、対象者の疾患もしくは障害の状態および重篤度または前記対象者の身体の状態に基づいて定義される。
【００４４】
いくつかの実施態様では、本発明の方法により使用される組成物は組合せ剤形として処方され、ここで、本発明により定義される塩付加物(suit adduct)の少なくとも１つの剤形は即時放出形態であり、本発明により定義される塩付加物の少なくとも１つの剤形（即時放出製剤で処方された塩付加物と同じまたは異なる）は、制御（緩徐および／または持続）放出製剤として処方される。他の実施態様では、前記少なくとも１つの即時放出製剤および少なくとも１つの制御放出製剤中に含まれる本発明により定義される塩付加物の重量比は、１：１、１：２、２：１、３：２、２：３、１：３、３：１、４：１、１：４、５：２、２：５、１：５、５：１であり得る。本発明の方法または使用においてこのような組合せ剤形を使用する場合、上記で定義される塩付加物の前記少なくとも１つの即時放出形態および少なくとも１つの制御放出形態は、個別に、付随し、逐次に、同時に(concurrently)、連続してなどで対象者に投与してよい。いくつかの実施態様では、前記少なくとも１つの即時放出形態が最初に投与される。他の実施態様では、前記少なくとも１つの制御放出製剤が最初に投与される。
【００４５】
特定の実施態様では、本発明の組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２時間の期間にわたる持続放出または制御放出用に処方することができる。特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２時間の期間にわたる持続放出または制御放出用に処方することができる。特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、約０．５または１または２または３または４時間〜および約５、６、７、８、９、１０、１１または１２時間の間の期間にわたる持続放出または制御放出用に処方することができる。特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、約５または６または７または８時間〜約９、１０、１１または１２時間の間の期間にわたる持続放出または制御放出用に処方することができる。
【００４６】
特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、即時放出形態、急速放出形態またはバースト放出形態(immediate, fast of burst release form)であり得る。
【００４７】
特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、約０．５、１、２、３、４、５、６、７または８時間で総メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、９９．５または１００％までを放出するように処方することができる。特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、約０．５、１、２、３、４、５、６、７または８時間で総メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、９９．５または１００％以上を放出するように処方することができる。
【００４８】
特定の実施態様では、本発明により使用される組成物中のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体は、持続放出形態または徐放形態および即時放出形態または急速放出形態の組合せであり得る。特定の実施態様では、持続放出または徐放メタドキシンまたはメタドキシン誘導体と即時放出または急速放出メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の相対比は、例えば、１対９９、５対９５、１０対９０、１５対８５、２０対８０、２５対７５、３０対７０、３５対６５、４０対６０、４５対５５、５０対５０、５５対４５、６０対４０、６５対３５、７０対３０、７５対２５、８０対２０、８５対１５、９０対１０、９５対５、または９９対１である。
【００４９】
特定の実施態様では、メタドキシンまたはメタドキシン誘導体の放出を持続させるまたは制御するためにポリマー材料が使用される。特定の実施態様では、ポリマー材料のタイプおよびその使用量は、本発明の生成物からのメタドキシンまたはメタドキシン誘導体の放出速度に強い影響を持つ。ポリマーの例としては、疎水性および親水性双方のポリマーが含まれる。疎水性ポリマーの例としては、限定されるものではないが、エチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、グリセロールパルミトステレート、密蝋、グリコワックス、キャスターワックス、カルナウバワックス、グリセロールモノステレートまたはステアリルアルコールなどの脂肪類、疎水性ポリアクリルアミド誘導体および疎水性メタクリル酸誘導体、ならびにこれらのポリマーの混合物が含まれる。親水性ポリマーとしては、限定されるものではないが、親水性セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびヒドロキシエチルメチルセルロース  ポリビニルアルコール、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、エチレン酢酸ビニルコポリマー、ポリアクリレート、ポリ−ウレタン、ポリビニルピロリドン、ポリメチルメタクリレート、ポリ酢酸ビニル、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ならびにこれらのポリマーの混合物が含まれる。さらに、１以上の疎水性ポリマーと１以上の親水性ポリマーの任意の混合物が場合により使用可能である。
【００５０】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、ＦＭＣ  ＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ’ｓにより製造された「Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ  １０１」などの微晶質セルロースである。
【００５１】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、Ｓｈｉｎ−Ｅｔｓｕ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏにより生産される「Ｍｅｔｈｏｌｏｓｅ」などのヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
【００５２】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、Ｔｈｅ  Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙにより製造される「Ｅｔｈｏｃｅｌ（商標）」などのエチルセルロースである。
【００５３】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、Ｒｏｈｍ  ＧｍｂＨにより生産される「Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ（商標）」などのアクリル系ポリマーである。
【００５４】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、Ｄｅｇｕｓｓａにより製造される「Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）」などのコロイド状二酸化ケイ素である。
【００５５】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、ＢＡＳＦにより製造される「Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＳＲ」などのポリ（酢酸ビニル）である。
【００５６】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物中に使用されるポリマー材料は、Ｄｅｌａｓｃｏ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ  Ｌａｂ  ＆  Ｓｕｐｐｌｙ、Ｉｎｃ．により製造される「Ｄｕｒｏ−Ｔａｋ」などの酢酸エチルおよび酢酸ビニル溶液である。
【００５７】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物は、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００ｍｇ〜約１０００、１５００、２０００、２５００または３０００ｍｇのメタドキシンまたはメタドキシン誘導体を含んでなるか、またはから本質的になる。特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物は、約５、１００、５００、または１０００ｍｇ〜約２０００、４０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ｍｇのＡｖｉｃｅｌ  ＰＨ  １０１（商標）を含んでなるか、またはから本質的になる。特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物は、約２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０または６００ｍｇ〜約６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、５０００、１０，０００、１５，０００または２０，０００ｍｇのポリマー材料を含んでなるか、またはから本質的になる。特定の実施態様では、ポリマー材料は、Ｍｅｔｈｏｌｏｓｅ、Ｅｔｈｏｃｅｌ  Ｅ１０（商標）またはＥｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ（商標）である。特定の実施態様では、Ｍｅｔｈｏｌｏｓｅは、製剤の１〜９０％の間、好ましくは５〜７０％の間で含んでなるか、またはから本質的になる。特定の実施態様では、Ｅｔｈｏｃｅｌ（商標）は、製剤の１〜３０％の間、好ましくは２〜２０％の間で含んでなるか、またはから本質的になる。特定の実施態様では、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（商標）は、製剤の１〜９０％の間、好ましくは５〜７０％の間で含んでなるか、またはから本質的になる。
【００５８】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される送達系は、送達デバイスを含んでなる。特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物は、浸透圧ポンプによるなどの制御された速度での浸透圧的プロセスにより送達される。この系は、浸透圧活性剤を速度制御半透膜でコーティングすることにより構築することができる。この膜は、薬剤が送達される臨界サイズのオリフィスを含み得る。この剤形は、水性流体と接触するようになった後、膜の流体透過性とおよびコア製剤の浸透圧によって決定される速度で水を吸収する。この水の浸透性の吸収は、コア内で活性材料の飽和溶液の形成をもたらし、これは膜中の送達オリフィスから制御された速度で分配される。
【００５９】
特定の実施態様では、本発明の、または本発明により使用される組成物は、生分解性微粒子を用いて送達される。特定の実施態様では、微粒子を調製するための系は、揮発性溶媒と溶解しているポリマーから構成される有機相および水相中に乳化され、封入される材料からなる。特定の実施態様では、微粒子マトリックスに使用可能な生分解性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）または乳酸とグリコール酸のコポリマー（ＰＬＡＧＡ）を含んでなる。ＰＬＡＧＡポリマーは、加水分解により経時的にそのモノマー成分に分解し、これらは自然代謝により身体から容易に除去される。
【００６０】
本発明の、または本発明により使用される製剤はまた、吸収促進剤および他の任意選択の成分を含有してよい。吸収促進剤の例としては、限定されるものではないが、シクロデキストリン、リン脂質、キトサン、ＤＭＳＯ、Ｔｗｅｅｎ、Ｂｒｉｊ、グリココール酸塩、サポニン、フシジン酸塩およびエネルギーに基づく吸収促進装置が含まれる。
【００６１】
剤形中に存在する任意選択の成分としては、限定されるものではないが、希釈剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、着色剤、香味剤、緩衝剤、保存剤、分解防止剤などが含まれる。
【００６２】
「増量剤」とも呼ばれる希釈剤としては、例えば、リン酸二カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、ラクトース、セルロース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、加水分解デンプン、二酸化ケイ素、コロイドシリカ、酸化チタン、アルミナ、タルク、微晶質セルロース、および粉末糖が含まれる。液体形態での投与に関して、希釈剤としては、例えば、エタノール、ソルビトール、グリセロール、水などが含まれる。
【００６３】
結合剤は、製剤に凝集性の品質を付与するために使用される。好適な結合剤材料としては、限定されるものではないが、デンプン（コーンスターチおよびアルファ化デンプンを含む）、ゼラチン、糖類（スクロース、グルコース、デキストロース、ラクトースおよびソルビトールを含む）、ポリエチレングリコール、ワックス、天然および合成ガム、例えば、アラビアガム、トラガカントガム、アルギン酸ナトリウム、セルロース、およびビーガム、ならびにポリメタクリレートおよびポリビニルピロリドンなどの合成ポリマーが含まれる。
【００６４】
滑沢剤は、製造を容易にするために使用される；好適な滑沢剤の例としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、およびポリエチレングリコールが含まれる。
【００６５】
界面活性剤は、陰イオン性、陽イオン性、両性または非イオン性界面活性剤であり得、陰イオン性界面活性剤が好ましい。好適な陰イオン性界面活性剤としては、限定されるものではないが、ナトリウムイオン、カリウムイオンおよびアンモニウムイオンなどの陽イオンと会合される、カルボン酸イオン、スルホン酸イオンおよび硫酸イオンを含有するものが含まれる。特に好ましい界面活性剤としては、限定されるものではないが、長鎖アルキルスルホネートおよびアルキルアリールスルホネート、例えば、ナトリウムドデシルベンゼンスルホネート；ジアルキルナトリウムスルホスクシネート、例えば、ナトリウムビス−（２−エチルヘキシル）−スルホスクシネート；および硫酸アルキル、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。
【００６６】
抗酸化剤などの分解防止剤としては、限定されるものではないが、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸、メタ重亜硫酸カルシウム、ヒドロキノン、および７−ヒドロキシクマリンが含まれる。
【００６７】
所望により、本発明の、または本発明により使用される組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、保存剤など、微量の非毒性補助物質も含有してよい。
【００６８】
本発明の、または本発明により使用される組成物はいずれも単独でまたは認知行動の改善のための１以上の付加的治療薬と組み合わせて使用可能である。付加的治療薬の例は、アンフェタミン、メチルフェニデートＨＣｌ、塩酸デクスメチルフェニデート、アトモキセチン、レボキセチン、フルオキサチン(fluoxetine)、セルトラリン、パロキセチン、フルオロキサミン、シタロプラム、ベンラファキシン、ブプロピオン、ネファゾドンおよびミルタザピンである。
【００６９】
単一の剤形を作製するために担体材料と組み合わせ得る化合物と付加的治療薬両方の量は、処置される宿主および特定の投与様式によって異なる。好ましくは、本発明の組成物は、０．１〜１ｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは、０．１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重の間の用量が投与可能なように処方されるべきである。化合物の用量は、患者の状態および疾病、ならびに所望の一日用量によって異なる。ヒトの療法では、経口一日用量は、１０〜３０００ｍｇ、または好ましくは１００〜３０００ｍｇである。例えば、一日用量は、１０、２５、５０  １００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００，または３０００ｍｇである。これらの用量は単位剤形で投与され、単一の一日用量で投与してもよいし、または特定の場合には各日２〜３回の少用量に分割してもよい。
【００７０】
特定の実施態様では、本発明の組成物は、互いに組み合わせて相乗作用を示す場合があり、また、付加的治療薬の存在下でさらに相乗作用を示す場合がある。従って、このような組成物中の１または複数の化合物および１または複数の付加的治療薬の量は、その治療薬のみを使用する単剤療法で必要とされる量よりも少なくなる。このような組成物では、０．１〜１ｇ／ｋｇ体重／日の間の用量の付加的治療薬が投与可能である。
【００７１】
定義
便宜のため、本明細書、実施例、および付属の実施態様で使用される特定の用語をここにまとめる。そうではないことが定義されない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の熟練者(ordinary skilled in the art)が一般に理解しているものと同じ意味を有する。
【００７２】
冠詞「a」および「an」は、本明細書では、その冠詞の文法上の目的語の１以上（すなわち、少なくとも１つの）を指して用いられる。例として、「一要素(an element)」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
【００７３】
用語「含む」は、本明細書では、「限定されるものではないが含む」という句を意味して使用され、その句と互換的に使用される。
【００７４】
用語「または」は、本明細書では、文脈がそうではないことを明示しない限り、「および／または」という用語を意味して使用され、それと互換的に使用される。
【００７５】
用語「などの」は、本明細書では、「限定されるものではないがなどの」という句を意味して使用され、それと互換的に使用される。
【００７６】
用語「予防的」または「治療的」処置は、対象者に１以上の本発明の組成物を投与することを意味する。望ましくない病態（例えば、宿主動物の臨床状態または他の望ましくない状態）の臨床発現の前に投与される場合には、その処置は予防的であり、すなわち、それは望ましくない病態の発症に対する予防、すなわち、対象の保護に寄与し、一方、望ましくない病態の発現の後に投与される場合には、その処置は治療的である（すなわち、望ましくない病態の進行またはそれからの副作用を消散、改善または回避することが意図される）。
【００７７】
用語「治療効果」は、薬理学的に有効な１または複数の物質により引き起こされる動物、特に、哺乳動物、より詳しくは、ヒトにおける局所性または全身性の効果を意味する。従って、この用語は、疾患の診断、治癒、緩和、治療もしくは予防、または動物もしくはヒトにおける望ましい身体もしくは精神発達および状態の増進における使用を意図したいずれの物質も意味する。用語「治療上有効な量」は、いずれの処置にも適用可能な妥当な利益／リスク比で何らかの所望の局所性または全身性の効果をもたらす、このような物質の量を意味する。特定の実施態様では、化合物または組成物の治療上有効な量はその治療係数、溶解度などによって異なる。例えば、本発明の特定のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体製剤は、当業者により決定され得るように、選択された処置に適用可能な妥当な利益／リスク比を生じるのに十分な量で投与してよい。
【００７８】
用語「有効量」は、適当な用量および投与計画で対象者に投与した際に少なくとも１つの所望の結果を生じる治療用試薬の量を意味する。
【００７９】
本発明の方法により処置される「対象者」または「患者」は、ヒトまたは非ヒト動物のいずれか、好ましくは、哺乳動物を指し得る。用語「対象者」は、本明細書で使用する場合、健康な個体または脆弱Ｘ症候群もしくは自閉症スペクトラム障害に罹患している対象者を指し得る。別の実施態様では、用語「対象者」および「健康な対象者」および「必要とする対象者」および「必要とする患者」は、本明細書で使用する場合、どんな形であれアルコール摂取後にアルコールの影響下にある対象者、アルコール中毒者（アルコール嗜癖者）、および禁酒中のアルコール中毒者を除く。
【００８０】
本明細書で使用する場合、用語「塩付加物」は、２つ以上の異なるイオンの直接的付加の塩生成物を包含するものとし、この場合、この塩付加物の全体的な電荷はゼロである。特定の実施態様では、塩付加物は、単一の正電荷官能基を有する１つの正電荷部分（すなわち、この正電荷部分は＋１の正味電荷を有する）と、単一の負電荷官能基を有する１つの負電荷部分（すなわち、この負電荷部分は−１の正味電荷を有する）を含んでなる。特定の実施態様では、塩付加物は、同じであっても異なっていてもよい２つの正電荷官能基を有する１つの正電荷部分（すなわち、この正電荷部分は＋２正味電荷を有する）と、同じであっても異なっていてもよく、それぞれ単一の負電荷官能基を有する２つの負電荷部分（すなわち、各負電荷部分は−１の正味電荷を有する）を含んでなる。特定の実施態様では、塩付加物は、同じであっても異なっていてもよく、それぞれ１つの正電荷官能基を有する２つの正電荷部分（すなわち、各正電荷部分は＋１の正味電荷を有する）と、同じまたは異なる２つの負電荷官能基を有する１つの負電荷部分（すなわち、この負電荷部分は−２の正味電荷を有する）を含んでなる。特定の実施態様では、塩付加物は、＋ｎの正味電荷（同じであっても異なっていてもよい１以上の正電荷官能基に起源する）を有する正電荷部分と−ｎの正味電荷（同じであっても異なっていてもよい１以上の負電荷官能基の起源する）を有する負電荷部分を含んでなり、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６に相当し得る整数である。
【００８１】
本明細書で使用する場合、本発明の「塩付加物の正電荷部分」は、ピリドキシンの対応する酸、またはその任意の誘導体である。特定の実施態様では、正電荷部分の正電荷は、ピリドキシンのプロトン化塩基性窒素原子に由来するか（例えば、化合物（２）の場合）、またはその任意の誘導体に由来する（例えば、式（Ｉ）の化合物）。特定の実施態様では、正電荷ピリドキシン誘導体は、例えば、−ＮＨ３＋、−ＣＨ２ＮＨ３＋、ＮＨ２Ｒ＋、−ＮＨＲ２＋（ここで、各Ｒは独立にＣ１−Ｃ６アルキルであり）などの正電荷官能基で置換され、これは、いくつかの実施態様で、ピリジン環内の正電荷プロトン化塩基性芳香族窒素原子に加えて存在する。
【００８２】
本発明の塩付加物の部分はそれぞれ少なくとも１つのキラル中心を含む場合があり、従って、エナンチオマー、ジアステレオマー、または限定されるものではないがラセミ混合物を含むその任意の混合物を含むその任意の立体異性体として存在し、また単離される場合があると理解されるべきである。本発明は、本発明の塩付加物の各部分のいずれかの任意の存在し得る立体異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー）、限定されるものではないがラセミ混合物を含むその任意の混合物を含む。本発明の塩付加物の部分のそれぞれの調製のための本明細書に記載のプロセスが立体異性体の混合物を生成する場合、これらの異性体は、分取クロマトグラフィーなどの従来技術によって分離することができる。本発明の塩付加物の部分は、限定されるものではないが、そのラセミ混合物を含む、存在し得るその立体異性体のいずれの混合物でも、それぞれ製造可能であり、または個々の立体異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー）は、エナンチオ特異的合成により、またはラセミ化合物のキラルクロマトグラフィー分離により調製可能である。アミノ酸という場合にはいつも、本発明は、天然および非天然アミノ酸またはその任意の誘導体を包含するものと理解されるべきである。
【００８３】
本明細書を通じて、「を含んでなる(comprise)」という語または「を含んでなる(comprises)」または「を含んでなる(comprising)」などの変形形態は、記載の整数または整数群の包含を意味するが、他の任意の整数または整数群の排除を意味しないと理解される。
【００８４】
用語「バイオアベイラブル」は、特定の化合物の少なくとも一部の量が体循環中に存在することを意味する。経口バイオアベイラビリティの形式的計算はＦ値に関して記載されている("Fundamentals of Clinical Pharmacokinetics," John G. Wegner, Drug Intelligence Publications; Hamilton, Ill. 1975)。Ｆ値は、静脈内投与後の体循環（例えば、血漿）中の親薬物の濃度と非静脈経路（例えば、経口）による投与後の体循環中の親薬物の濃度の比から導き出される。従って、本発明の範囲内の経口バイオアベイラビリティは、静脈内投与と比較した経口投与後の血漿中に検出可能な親薬物の量の比またはＦ値を企図する。
【００８５】
用語「処置する（treating）」または「処置（treatment）」は、ヒトなどの哺乳動物における、少なくとも、病態、疾患もしくは障害の症状に対する鎮静、改善、軽減もしくは緩和、または病態、疾患もしくは障害に関連する確認できる測定値の改善を意味する。処置は、本明細書で使用する場合、健康な個人におけるものも包含する。
【００８６】
メタドキシンまたはメタドキシン誘導体に関して用語「許容可能な誘導体」は、対象者に投与した際に（直接的または間接的に）メタドキシンまたはその代謝産物もしくは機能的残渣、または測定可能なメタドキシン活性を提供し得る、メタドキシンの任意の塩、コンジュゲート、エステル、複合体もしくは他の化学誘導体、または前記を含んでなる部分のいずれかを意味する。用語「生理学的に適合するメタドキシン誘導体」は、本明細書において、用語「許容可能な誘導体」と互換的に使用でき、メタドキシンの機能的で活性な薬学上許容可能な誘導体を意味する。
【００８７】
用語「賦形剤」は、製剤中で有効成分の担体として使用される不活性物質を意味する。
【００８８】
用語「制御放出」は、制御された速度で長時間薬剤を送達し、所望の薬剤レベルプロファイルを達成するように設計されたいずれの製剤をも意味する。
【００８９】
用語「持続放出(sustained release)」は、その従来の意味で、長時間にわたって活性材料の漸進放出を提供する、特定の実施態様では、長時間にわたって実質的に一定の血液レベル、すなわち、制御放出もさらにもたらし得る製剤を意味して使用される。
【００９０】
用語「即時放出」は、その従来の意味で、投与時に活性材料の非遅延または制御放出を提供する製剤を意味して使用される。
【００９１】
物質の「半減期」という用語は、ある物質がその薬理学的、生理学的、またはその他の活性の半分を失うのに要する時間である。生体半減期は、重要な薬物動態パラメーターであり、通常、省略形ｔｉｎで表される。
【００９２】
用語「非侵襲的」は、皮膚を穿刺しない処置様式を意味する。
【００９３】
用語「非慢性投与」は、本明細書では、用語「急性投与」と互換的に使用でき、不規則な方法で対象者に測定または非測定量または部分の薬剤を与えることを意味する。非慢性投与は、単回用量処置であってもまたは複数用量処置であってもよく、場合により経時的に(over time)与えてもよい。常にではないが一般に、非慢性投与は非慢性病態を治療または予防するために与えられる。特定の慢性病態が、本明細書に記載のメタドキシンまたはメタドキシン誘導体組成物の非慢性投与からも利益を受け得る。
【００９４】
用語「慢性投与」は、対象者に規則的な方法で測定量の薬剤を与えることを意味する。いくつかの実施態様では、慢性投与は、１以上の慢性病態、障害または疾患の治療または予防を目的とする。慢性疾患は、以下の特徴のうち１以上を有する：慢性疾患は永続的である、後遺障害を残す、不可逆的病理変化によって生じる、リハビリテーションに患者の特別な訓練を必要とする、または長期の指導、観察、またはケアを必要とすると思われる。
【００９５】
用語「単回用量処置」は、一度に摂取される測定量の薬剤を与えることを意味する。これは、個人の必要に応じて、規則的な方法で非慢性病態を治療するために与えられる。
【００９６】
用語「ｔｍａｘ」は、濃度がピークに達する時間を意味する。単回用量投与後に最大濃度が生じる時間の計算は下式に従って実行される。
【数１】
2016530291.tif 000003
【００９７】
式中、λαおよびλｚは、それぞれ見掛けの吸収および排出速度定数である。
【実施例】
【００９８】
実施例１：一般法
本明細書に記載の実施例は一般に下記の試薬および方法を用いて実施した。
【００９９】
試験動物
まず、ノックアウトマウス（ＫＯ２）マウス（Ｔｈｅ  Ｄｕｔｃｈ−Ｂｅｌｇｉｕｍ  Ｆｒａｆｇｉｌ  Ｘ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ、１９９４）をＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手し、野生型（ＷＴ）同腹子をＣ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドで作成し、８世代を超えてＣ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドに対して繰り返し戻し交配した。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスを、１２時間明暗周期（午前７時から午後７時まで点灯；試験は明期に行った）の温度および湿度制御室で同じ遺伝子型の群内で飼育した。食餌および水を自由摂取させつつ、飼育室内で室温および湿度を継続的に記録した。試験は、行動試験中２または６か月齢の健康なＦｍｒ１ノックアウトマウスおよびそれらの野生型同腹子（処置群当たりマウスＮ＝１０）で行った。マウスは市販のプラスチックケージで飼育し、試験はＵＫ  Ａｍｉｎａｌｓ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）  Ａｃｔ、１９８６の要件に従って行った。総ての試験は、遺伝子型および薬物処置に対して盲検として行った。動物には実験を行う前に１週間の最小環境順化期間を設けた。環境順化期間には予防または治療処置は投与しなかった。
【０１００】
薬物
試験１（実施例２）では、メタドキシンを生理食塩水に溶かし、７日間、１００、１５０、または２００ｍｇ／ｋｇ／１日１回の用量で腹膜内投与した。試験２（実施例３）のｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、メタドキシンを生理食塩水に溶かし、７日間、１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇ／日の腹腔内用量または１５０または３００ｍｇ／ｋｇ／日（容量０．１ｍｌ）の経口用量で投与した。試験２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験では、メタドキシンを５時間、３００μＭの濃度で投与した。総ての場合で、生理食塩水をビヒクル（対照）として使用した。
【０１０１】
行動試験
社会的相互作用および社会的認知記憶：マウスは、接近、追跡、匂い嗅ぎ、グルーミング、攻撃的遭遇、交尾、養育行動、ネスティング、および身を寄せ合って群れで眠るなどの、容易にスコア化される社会的行動を営む社会的な種である。マウスにおける社会的接近は、初見マウスに対する匂い嗅ぎの時間によって評価した。
【０１０２】
マウスを、新鮮な木材チップを床に敷いた、成体のホームケージと同桁のサイズの試験アリーナ／ケージ（４０×２３×１２ｃｍケージ、マウスの観察を助けるためにパースペックスの蓋を持つ）に置いた。試験前に数匹の試験に用いないマウスをこの装置に置くことで、バックグラウンドのマウスの匂いをつけた。マウスは試験の１０〜１５分前にこの試験室に移した。試験対象および若年個体をこの試験ケージに同時に置いた。試験マウスによる刺激若年個体の匂い嗅ぎおよび近接追跡（尾から＜２ｃｍ）として定義される社会調査の対面の総時間および回数を３分間評価した。３０分後、同じ刺激若年個体を用いて試験を繰り返した。収集したデータパラメーターは習得および認知のための匂い嗅ぎの対面の総時間および総数であった。トライアル２／トライアル１＋２と定義される社会的記憶比を導いた。従って、記憶なし（例えば、２０／（２０＋２０）＝０．５および記憶あり（例えば、１０／（２０＋１０）＝＜０．５）。
【０１０３】
Ｙ迷路交替行動：  ２つの課題を実施した。１つ目は、アーム選択間の自発的交替行動のアンラーニングアセスメントであった。２つ目は空間参照記憶課題であり、ここでは、動物は２つのアームのうちどちらに食餌報酬があったかを学習しなければならなかった。この訓練の開始の前日に、マウスにこの迷路を５分間自由に探索させた。次に、これらのマウスは、餌が左のアームに置かれていたものと、餌が右のアームに置かれていたものの２つのトライアルを受けた。この手順により、これらのアームのうち一方の偏好が生じるのを防いだ。
【０１０４】
Ｙ水迷路：  透明なパースペックスＹ迷路に２０℃の水を２ｃｍまで入れた。これはマウスを一方のアームの遠位端の出口チューブまでパドリングした後に迷路を離れるよう誘導した。この迷路を顕著な視覚的刺激に取り囲まれた部屋の中央に置いた。
【０１０５】
報酬付きＴ迷路交替行動：  高架または壁のあるＴ字型の装置（水平に配置）を用いた。マウスをＴの基部に置き、このステムの他端に隣接するゴールアームの一方を選択させる。２回のトライアルを迅速に連続して行い、２回目のトライアルは、最初の選択の記憶を反映してマウスにそれまでにいなかったアームを選択するように要求した（自発的交替行動）。この傾向はマウスを空腹にさせ、マウスが交替行動を起こせば好みの餌の報酬を与えることによって強化された。具体的には、このＴ迷路に対する４日間の順化期間の後に、マウスを、アーム選択を変えて甘いコンデンスミルクを報酬として受けるよう訓練した。
【０１０６】
連続小路：  この装置は、４つの連続する直線上に配置された、塗装木材製の不安を増す小路（各連続する小路は薄い色を塗り、低い壁を備え、かつ／または手前の小路よりも狭くなっていた）からなった。各セクションまたは小路は２５ｃｍの長さであった。小路１は、高さ２５ｃｍの壁を備え、８．５ｃｍ幅であり、黒に塗られていた。０．５ｃｍ下がって小路２となり、これはまた８．５ｃｍ幅であるが、高さ１．３ｃｍの壁を備え、灰色であった。１．０ｃｍ下がって小路３となり、これは３．５ｃｍ幅であり、高さ０．８ｃｍの壁を備え、白色であった。０．４ｃｍ下がって小路４となり、これはまた白色であったが、１．２ｃｍ幅であり、高さ０．２ｃｍの壁であった。この装置は、小路１の裏を５０ｃｍの高さでスタンドに固定することによって高架とした。マウスが落ちた場合にアーム３と４の下にパディングを設けた。各マウスを小路１の閉鎖末端に壁に向けて置いた。タイマーをスタートし、１）試験の全長（５分）＋各アームに入る潜時、および２）小路１で過ごす時間を測定した。マウスが４本の脚を総て次の小路に置いた場合に、その小路に入ったと見なした。各小路で過ごす総時間（４本の脚総て）を記録した。
【０１０７】
文脈的恐怖条件付け：  文脈的恐怖条件付け試験では、マウスを新規な環境（暗チャンバー）に置き、および合図と電気フットショック（０．２ｍＡ  １秒（試験１）または０．７ｍＡ  ０．５秒（試験２））の対を与えた。次に、初期トレーニングとして試験した際に、マウスは不動反応(freezing)(Blanchard, 1969)または文脈的恐怖条件付けと呼ばれる自然の防御応答を示した。不動反応時間は、マウスが呼吸をせずに不動挙動で過ごした時間として定義された。このデータは試験期間に対するパーセンテージとして表した。トレーニングセッションの２４時間後に、マウスを５分間、ショック提供のないトレーニングチャンバーで試験し、不動反応挙動を観察した。
【０１０８】
統計学：  多変量分散分析を用いて、データの群の差異を評価した。行動データについて反復測定ＡＮＯＶＡを行った。各ＡＮＯＶＡにおける統計学的に有意な効果を、ニューマン−コイルス検定（試験１）またはチューキー検定（試験２）を用い、事後比較で追跡した。０．０５未満のｐ値を有意と見なした。
【０１０９】
生化学試験
リン酸化ＥＲＫおよびＡｋｔ：  Ｒａｓ−Ｍｅｋ−ＥＲＫおよびＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴｏＲシグナル伝達経路は、シナプスの可塑性の変化の基礎にある遺伝子転写に依存する活性の媒介に関与する(Klann and Dever, 2004)。リン酸化ＥＲＫおよびＡｋｔタンパク質の発現は、Lopez Verrilli (Lopez Verrilli et al., 2009)により従前に記載されているようにウエスタンブロット解析によって測定した。用いた抗体は、Ａｋｔ（１／１０００）およびキナーゼ（ＥＲＫ）１／２（１／２０００）に対する抗リン酸特異的抗体であった(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)。ホスホ−ＥＲＫに対する抗体は、ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）におけるリン酸化を検出し、ホスホ−Ａｋｔに対する抗体は、ホスホ−Ａｋｔ（Ｔｈｒ３０８）におけるリン酸化を検出する。総ＡｋｔおよびＥＲＫ１／２タンパク質含量およびリン酸化ＥＲＫ  およびＡｋｔは、抗ホスホ−Ａｋｔ抗体（１／１０００）および抗ホスホ−ＥＲＫ抗体（１／２０００）(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)で膜をブロットすることにより評価した。ＡｋｔまたはＥＲＫのリン酸化は、同じサンプル中のタンパク質含量に対して正規化し、基底レベルを１００％として、基底状態に対する変化の％として表した。タンパク質付加量は、膜を剥離し、β−アクチン抗体（１／１０００）(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)で再ブロットすることによって評価した。血液リンパ球でのリン酸化ＥＲＫおよびＡｋｔタンパク質の発現は、フローサイトメトリーにより測定した。リンパ球のバイオマーカーの決定のために、ＦＡＣＳｔａｒ  ｐｌｕｓ(Becton Dickinson)を４８８ｎｍに合わせた励起レーザーとともに用い、ＦＩＴＣからの緑色蛍光（ＧＳＴ）を、５１５〜５４５ｎｍバンドパスフィルターを通して採取した。平均ＦＩＴＣ蛍光強度を参照細胞の蛍光に対して計算した。平均細胞蛍光強度（ＭＦＩ）は、細胞当たりに結合したＡｂ分子の平均数に正比例する。
【０１１０】
ニューロンの形態：  海馬細胞培養物を、妊娠胎生１７．５日目（Ｅ１７．５）の野生型およびＦｍｒ１  ＫＯ胎児マウスから調製した。マウスを頚椎脱臼により殺し、摘出した海馬細胞を１５ｍｍマルチウェルバイアル（Ｆａｌｃｏｎ  Ｐｒｉｍａｒｉａ）に播種した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで５日後、薬物処置後の樹状突起棘形態形成のモニタリングを助けるために緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をトランスフェクトした(Ethell and Yamaguchi, 1999; Ethell et al., 2001, Henkemeyer et al., 2003)。樹状突起棘はｉｎ  ｖｉｔｒｏ１６日目（ＤＩＶ）前後に見られた。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ１７日目に培養物を３００μＭ濃度のメタドキシンで５時間処理した。
【０１１１】
ＧＦＰトランスフェクトニューロンの糸状仮足密度を、スタックトＺｅｉｓｓ共焦点で生成した画像（４０×対物レンズ、２０×０．２μｍのスタック）のＳｈｏｌｌ分析を行うことによって定量した。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウエアを用い、同心円の均等間隔の円（総て２０μｍ）を各ニューロンの細胞体の前後に描き、次に、糸状仮足の量を円ごとに計数した。計数値の平均を対応のない両側スチューデントのＴ検定を用いて比較した。
【０１１２】
ＧＦＰトランスフェクトニューロンの突起棘の成熟度を、Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウエア(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)を用いて解析した。突起棘形態測定分析のため、各ニューロンについて７０〜１００μｍの２か所の遠位樹状セグメントを選択した。各突起棘に関して、長さと幅を測定した。長さは突起の基部から先端までの距離と定義され；幅は突起棘の長軸に対して垂直の最大距離として定義された。測定値は対応のない両側スチューデントのＴ検定を用いて比較し、多重比較のためのＡＮＯＶＡ補正を行った。
【０１１３】
ｄｅ  ｎｏｖｏ海馬タンパク質合成：  海馬横断面切片（４００μｍ）を６週齢のＦｍｒ１ノックアウトおよびＷＴマウスから得た。タンパク質合成アッセイは、個々の哺乳動物細胞で、またヘテロ細胞集団でグローバルなタンパク質合成のモニタリングおよび定量を可能とする非放射性の蛍光活性化細胞選別に基づくアッセイであるｓｕｒｆａｃｅ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（ＳＵｎＳＥＴ）法(Hoeffer, 2011)を用いて従前に記載されたように行った。この試験で用いたメタドキシンの濃度は３００μＭであった。
【０１１４】
実施例２：脆弱Ｘ症候群のＦｍｒ１ノックアウトマウスモデルにおける学習および記憶欠陥ならびに生化学的異常に対するメタドキシン（１００〜２００ｍｇ／ｋｇ）処置の効果（試験１）
行動分析
文脈的恐怖条件付け：  最初の試験では、Ｎ＝１０のＷＴおよびＦｍｒ１ノックアウトマウス群における文脈的恐怖条件付けに対するビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン１日１回、７日間の腹腔内投与の効果を調べた。ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、試験セッション中の不動反応の減少に反映される文脈的恐怖条件付けパラダイムにおいて学習の欠損を示した（図１、パネルＡ（ｐ＜０．０００１））。メタドキシン投与は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける学習欠損効果を逆転させ、メタドキシン処置マウスはメタドキシン処置ＷＴマウスとは異なっていたので（ｐ＜０．０５）、この逆転は部分的なものであった。この試験を繰り返し、Ｎ＝１０のＷＴおよびＦｍｒ１ノックアウトマウス群における文脈的恐怖条件付けに対するビヒクル、１００または２００ｍｇ／ｋｇメタドキシン１日１回、７日間の腹腔内投与の用量依存効果を検討した（図１、パネルＢおよびＣ）。この試験において、ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ビヒクル処置ＷＴマウスに比べて学習欠損を示し（ｐ＜０．０００１）、最初の試験の再現となった。１００ｍｇ／ｋｇメタドキシンは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスの欠損の逆転をもたしたが（Ｐ＜０．０５）、メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置野生型マウスとは異なっていたことから（ｐ＜０．０００１）、これは部分的な逆転であった。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスで見られた学習欠損は、２００ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．メタドキシンによる処置の後に完全に逆転された（処置されたＦｍｒ１マウスはビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスとは異なっていたが（Ｐ＜０．０００１）、メタドキシン処置ＷＴマウスとは異なっていなかった）。メタドキシン処置は、どちらの試験でもＷＴマウスに対して効果はなかった（図１、パネルＡ〜Ｃ）。
【０１１５】
社会的接近：  ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、匂いの嗅ぎ合いにより示される社会的接近の低さを示した（図２（ｐ＜０．０００１））。７日間の１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンでの腹腔内処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスの社会的接近を増やした（ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスと比べてｐ＜０．０００１）。メタドキシンで処置されたＦｍｒ１ノックアウトマウスは、ＷＴマウスの効果に近づく傾向はあったものの、メタドキシン処置ＷＴマウスとは異なっていた（ｐ＜０．０５）。メタドキシン処置はＷＴマウスに効果は無かった。
【０１１６】
Ｙ迷路自発的交替行動：  Ｎ＝１０のＷＴまたはＦｍｒ１ノックアウトマウス群における自発的交替行動に対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンによる処置の効果を図３パネルＡに示す。ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ビヒクル処置Ｗマウスよりも低い自発的交替行動を示した（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるビヒクル処置に比べて自発的交替行動を増やしたが（ｐ＜０．０００１）、メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスに比べて欠損を示した（ｐ＜０．０１）。従って、メタドキシンは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに見られる欠損の部分的逆転をもたらした。
【０１１７】
Ｙ迷路参照記憶課題：  Ｎ＝１０のＷＴまたはＦｍｒ１ノックアウトマウス群における報酬付き参照記憶学習に対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンによる処置の効果を図３パネルＢに示す。ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ビヒクル処置ＷＴマウスよりも低い適当なアーム選択を行った（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスとは異なっていなかったので、メタドキシン処置は、ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに比べてこの欠損を軽減していた（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置はＷＴマウスに効果は無かった。
【０１１８】
Ｙ水迷路左右弁別：  Ｎ＝１０のＷＴまたはＦｍｒ１ノックアウトマウス群における嫌悪的動機付け空間弁別学習に対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンによる処置の効果を図３パネルＣに示す。ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ビヒクル処置ＷＴマウスよりも不適切なアーム選択の回数が多いことを示した。この欠損はメタドキシン処置により軽減された。
【０１１９】
Ｔ迷路報酬付き交替行動課題：  Ｎ＝１０のＷＴまたはＦｍｒ１ノックアウトマウス群における報酬交替行動作業記憶に対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンによる処置の効果を図４に示す。ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ビヒクル処置ＷＴマウスに比べて正しいアームに到達する潜時が長いことを示した（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるビヒクル処置に比べてこの欠損を軽減し（ｐ＜０．０００１）、メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはＷＴマウスよりも応答が遅かったことから（ｐ＜０．０００１）この逆転は部分的なものであった。
【０１２０】
連続小路：  Ｎ＝１０のＷＴまたはＦｍｒ１ノックアウトマウス群における連続小路課題での行動に対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンによる処置の効果を図５に示し、以下にさらに記載する。
【０１２１】
連続小路試験は、不安（小路１進入潜時）および活動過多（小路２〜４）を効果的に測定した。小路１から連続小路２、３、および４への進行は、ますます低くなる壁と狭くなり、より露出度の高くなる開放的アームを有するますます明るい色になる環境に曝されることを伴う。開放的アームで費やす時間および開放的アームへの進入は不安の指標となり；逆に、より開放的なアームで費やす時間が増えることは、活動過多を表した。これらの因子は、活動過多を伴う一定範囲の不安様行動を一括して取り扱う高感度試験を可能とした。
【０１２２】
小路１：  Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはＷＴマウスよりも大きい不安を示した（ｐ＜０．００１）。完全な正常化が見られたので、メタドキシンで処置したＦｍｒ１ノックアウトマウスは、ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに比べて不安の改善を示した（ｐ＜０．００１）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトとメタドキシン処置ＷＴマウスの間に差異は無かった。また、メタドキシン処置はＷＴマウスに効果は無かった。
【０１２３】
小路２：  ＷＴマウスは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスと比べた場合、小路２で低い活性を示した（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置はＦｍｒ１ノックアウトマウスの活動過多を軽減したが（ｐ＜０．００１）、メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトとＷＴマウスは異なっていたことから（ｐ＜０．００１）、この活動過多の逆転は部分的なものであった。メタドキシン処置はＷＴマウスに対して効果はなかった。
【０１２４】
小路３：  Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ＷＴマウスに比べて活動過多を示した（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスとは異なっていなかったことから、この活動過多はメタドキシンにより逆転されたものではなかった。メタドキシン処置はＷＴマウスに対して効果はなかった。
【０１２５】
小路４：  Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ＷＴマウスに比べて活動過多を示した（ｐ＜０．０１）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスよりも低い活動を示したことから（ｐ＜０．０１）、メタドキシン処置はこの活動過多を逆転していた。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったことから、この効果は正常化を表した。メタドキシン処置はＷＴマウスに対して効果はなかった。
【０１２６】
全体的に見れば、特定の理論に縛られることを望むものではないが、連続小路試験は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはＷＴマウスに比べて不安および活動過多の増大を呈するということを示したと考えられる。メタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるこの不安および活動過多を軽減したが、ＷＴマウスは影響を受けないままであった。
【０１２７】
生化学的分析
ＥＲＫおよびＡｋｔのリン酸化：  Ｎ＝５のＦｍｒ１ノックアウトまたはＷＴマウスにおける、脳のＥＲＫまたはＡｋｔの全脳リン酸化に対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンいずれかの腹腔内処置の効果を図６に示す。リン酸化レベルは全ＥＲＫに対するリン酸化物の比として評価した。この比の増大はＥＲＫの活性化を示した。ＥＲＫのリン酸化は、ビヒクル対照に比べてビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスで増大したが（ｐ＜０．００１）、この効果は脆弱Ｘ症候群を有するヒト対象で見られるＥＲＫの異常な活性化を再現した(Wang et al., 2012)。メタドキシン処置ＷＴマウスと比べた場合に差異は見られなかったので、この効果はメタドキシン処置により低減された（ｐ＜０．０１）。メタドキシンは、ＷＴマウスのＥＲＫのリン酸化またはいずれのマウスにおいても総ＥＲＫレベルに対して効果は無かった。総ＡＫＴに対するリン酸化Ａｋｔの比はまた、ビヒクル処置ＷＴマウスに比べてビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスで増大した（ｐ＜０．０００１）。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは対照と差異が無かったので、メタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるリン酸化Ａｋｔの相対レベルを低減した（ｐ＜０．０１）。メタドキシン処置はＷＴマウスに対して、またはいずれのマウスにおいても総Ａｋｔレベルに対して効果は無かった。
【０１２８】
実施例３：Ｆｍｒ１ノックアウト脆弱Ｘマウスモデルにおけるメタドキシンの評価（試験２）
６か月齢Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるメタドキシンの行動効果
文脈的恐怖条件付け：  最初の試験では、Ｎ＝１０の６か月齢ＷＴおよびＦｍｒ１ノックアウトマウス群における文脈的恐怖条件付けに対するビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン１日１回、７日間の腹腔内投与の効果を調べた。ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウス（ＫＯ−Ｖ）は、試験セッション中の不動反応の減少に反映される、ビヒクル処置ＷＴマウス（ＷＴ−Ｖ）と比べた場合の文脈的恐怖条件付けパラダイムにおける学習欠損を示した（図７（ｐ＜０．０００１））。メタドキシン投与は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける学習欠損効果を逆転させた（ｐ＜０．０００１  ＫＯ−Ｍ−１５０対ＫＯ−Ｖ）。メタドキシン処置ＫＯマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、これは完全な逆転であった。
【０１２９】
社会的接近および社会的記憶：  社会的接近データ（最初のトライアル１）を図８パネルＡ（匂いの嗅ぎ合いの回数）およびパネルＣ（匂い嗅ぎの持続時間）に示す。匂いの嗅ぎ合い社会的記憶データ（トライアル２、トライアル１の２４時間後）を図８パネルＢ（匂いの嗅ぎ合いの回数）およびパネルＤ（匂い嗅ぎの持続時間）に示す。これらの結果を以下にさらに考察する。
【０１３０】
トライアル１では、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ＷＴマウスに比べ、匂いの嗅ぎ合いの回数は多く（ｐ＜０．０００１）（図８パネルＡ参照）、匂い嗅ぎの持続時間は少なかった（ｐ＜０．０００１）（図８パネルＣ）。これらの社会的相互作用欠損は、他の研究者らによりＦｍｒ１ノックアウトマウスで報告されているものに一致する(Thomas et al., 2011)。対面の回数および匂い嗅ぎの持続時間の両方に関して、メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは匂いの嗅ぎ合いの回数の測定値に関してメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、メタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける異常の逆転をもたらした（ｐ＜０．０００１  それぞれＫＯ−Ｍ−１５０対ＫＯ−Ｖ）。匂い嗅ぎの持続時間の測定値に関して救済が示されたものの、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置のＷＴマウスに比べて差異があるままであったので（ｐ＜０．０５）、この効果は部分的なものであった。メタドキシンは、ＷＴマウスに対して効果は無かった。これらのデータは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける異常な社会的接近行動がメタドキシンにより救済されたことを示した。
【０１３１】
トライアル２では、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、野生型マウスに比べて匂いの嗅ぎ合いの回数の増加と匂い嗅ぎの持続時間の増加の両方を示した（各測定に関してｐ＜０．０００１、それぞれ図８パネルＢおよびＤ）。これは順化の失敗、従って、社会的記憶の欠損を反映した。メタドキシン処置は、これらの差異を軽減した（ｐ＜０．０００１  ＫＯ−Ｍ−１５０対ＫＯ−Ｖ）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスとメタドキシン処置ＷＴマウスの間の差異が維持されたことから（ｐ＜０．０５）、この匂いの嗅ぎ合いの回数の逆転は部分的なものであった。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトとメタドキシン処置ＷＴマウスの間に差異は見られかったことから、このメタドキシンによる逆転は、匂い嗅ぎの持続時間に関しては完全なものであった。メタドキシン処置は、ＷＴマウスに対して効果は無かった。これらのデータは、メタドキシンがＦｍｒ１ノックアウトマウスにおける社会的記憶障害を軽減したことを示した。この社会的記憶欠損の軽減を、社会的記憶比（実施例１に記載）の計算により以下に示す。
【０１３２】
社会的記憶比は、匂いの嗅ぎ合いの持続時間：トライアル２／トライアル１＋２として定義された。従って、記憶無しの例は、例えば、２０／（２０＋２０）＝０．５であり、記憶有りの例は、例えば、１０／（２０＋１０）＝＜０．５である。
【０１３３】
計算された社会的記憶比は次の通りであった。
ＷＴ−Ｖ  トライアル２／トライアル１＋トライアル２：１２．４／１２．４＋２６．８＝０．３、＜０．５  記憶有り
ＫＯ−Ｖ  トライアル２／トライアル１＋トライアル２：３２５／３２５＋２４．１＝０．９、記憶無し
ＷＴ−Ｍ  トライアル２／トライアル１＋トライアル２：１２．５／３８．５＋１２．５＝０．２、＜０．５  記憶有り
ＫＯ−Ｍ  トライアル２／トライアル１＋トライアル２：１２．７／２８．４＋１２．７＝０．３、＜０．５  記憶有り
【０１３４】
６か月齢Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるメタドキシンの生化学的効果
Ｎ＝１０のＦｍｒ１ノックアウトまたはＷＴマウスにおける全脳ｐＥＲＫに対する７日間の１日１回、ビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシンいずれかのｉｐ処置の効果（図９パネルＡ）および上記挙動試験後の脳のｐＡｋｔ（図９、パネルＢ）を図９に示す。具体的には、図９パネルＡは、従前の試験で見られたようにＷＴマウスに比べてＦｍｒ１ノックアウトマウスで増加したｐＡｋｔの脳レベルを示す（Ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、メタドキシン処置は、脳のｐＡｋｔにおけるこの増加を逆転していた（ｐ＜０．０００１  ＫＯ−Ｍ−１５０対ＫＯ−Ｖ）。図９パネルＢは、従前の試験で見られたようにＷＴマウスに比べてＦｍｒ１ノックアウトマウスで増加したｐＥＲＫの脳レベルを示す（ｐ＜０．０００１  ＫＯ−Ｍ−１５０対ＫＯ−Ｖ）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、この増加はメタドキシン処置により逆転されていた（ｐ＜０．０００１）。
【０１３５】
２か月齢マウスの行動に対する腹腔内または経口投与後のメタドキシンの効果
図１０は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウトおよびＷＴマウスにおける文脈的恐怖条件付けに対する７日間の１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ用量または１５０および３００ｍｇ／ｋｇ経口用量でのメタドキシン投与の効果を示す。具体的には、図１０パネルＡは、ビヒクルのｉｐおよび経口処置後のＦｍｒ１ノックアウトおよびＷＴマウスから得られた文脈的恐怖条件付けデータを示す。ビヒクルの投与経路に関する差異は無かった。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスは、ｉｐおよび経口経路を介したビヒクル処置後、ＷＴマウスに比べて不動反応行動の減少を示した（各場合でｐ＜０．０００１）。図１０パネルＢは、ＷＴマウスにおける両投与経路によるメタドキシン処置の効果を示す。効果は見られなかった。図１０パネルＣは、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるｉｐ  １５０ｍｇ／ｋｇおよび経口１５０および３００ｍｇ／ｋｇメタドキシン処置がＦｍｒ１ノックアウトマウスに見られる不動反応行動の減少を逆転したことを示す（ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０００１、およびｐ＜０．０００１、それぞれＫＯ−Ｍ−ｉｐ、ＫＯ−Ｍ−ｐｏ１５０、およびＫＯ−Ｍ−ｐｏ  ３００対ＫＯ−Ｖ−ｉｐおよびＫＯ−Ｖ  ｐｏ）。１５０ｍｇ  ｐｏメタドキシンによる投与効果は、３００ｍｇ／ｋｇ  ｐｏメタドキシンの投与効果と異ならなかった。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける１５０および３００ｍｇ／ｋｇ経口メタドキシンの効果は、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐメタドキシンの効果と異ならなかった。各場合において、メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、この逆転は完全なものであった。
【０１３６】
図１１は、Ｆｍｒ１ノックアウトおよびＷＴマウスにおける社会的接近および社会的記憶に対する７日間の１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐまたは１５０および３００ｍｇ／ｋｇ経口用量でのメタドキシンの投与の効果を示す。具体的には、図１１パネルＡは、Ｆｍｒ１ノックアウトまたはＷＴマウスにおける社会的接近行動に対するビヒクルまたは１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐまたは１５０および３００ｍｇ／ｋｇ経口でのメタドキシンの効果を示す。ビヒクルによるｉｐまたは経口処置後、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスの匂い嗅ぎ行動の持続時間は、ＷＴマウスに比べて減少した（各場合でｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置はいずれの用量でもＷＴマウスに効果は無かった。しかしながら、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ、１５０ｍｇ／ｋｇ、および３００ｍｇ／ｋｇ経口でのメタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに見られる社会的接近の欠損の逆転をもたらした（ｐ＜０．０００１  それぞれＫＯ−Ｍ−ｐｏ１５０およびＫＯ−Ｍ−ｐｏ３００対ＫＯ−Ｖ  ｐｏ）。経口メタドキシンのこの効果は、１５０〜３００ｍｇ／ｋｇの間では用量依存的でなかった。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、この逆転は完全なものであった。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐメタドキシンの効果は、１５０ｍｇ／ｋｇ経口または３００ｍｇ／ｋｇ経口メタドキシンの効果と異ならなかった。図１１パネルＢは、Ｆｍｒ１ノックアウトまたはＷＴマウスにおける社会的記憶に対する１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐまたは１５０および３００ｍｇ／ｋｇ経口でのビヒクルまたはメタドキシンの効果を示す。ビヒクルによるｉｐまたは経口処置後、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスの匂い嗅ぎ行動の持続時間は、ＷＴマウスに比べて増加した（各場合でｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置はいずれの用量でもＷＴマウスに効果は無かった。しかしながら、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ、１５０ｍｇ／ｋｇ経口、および３００ｍｇ／ｋｇ経口でのメタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに見られる社会的接近の欠損の逆転をもたらした（ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０５、およびｐ＜０．０１  それぞれＫＯ−Ｍ−ｉｐ１５０、ＫＯ−Ｍ−ｐｏ１５０、およびＫＯ−Ｍ−ｐｏ  ３００対ＫＯ−Ｖ−ｉｐおよびＫＯ−Ｖ  ｐｏ）。メタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスはメタドキシン処置ＷＴマウスと異ならなかったので、この逆転は完全なものであった。Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおける１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐメタドキシンの効果は、１５０ｍｇ／ｋｇ経口または３００ｍｇ／ｋｇ経口メタドキシンの効果と異ならなかった。また、１５０ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇの間ではこれらの経口メタドキシン処置の効果に用量依存性は無かった。
【０１３７】
２か月齢マウスにおける腹腔内または経口投与後の生化学マーカーに対するメタドキシンの効果
末梢リンパ球：  図１２は、２か月齢のＦｍｒ１ノックアウトおよびＷＴマウスにおけるフローサイトメトリーにより決定された、リンパ球ｐＡｋｔ（図１２パネルＡ）およびｐＥＲＫ（図１２パネルＢ）に対する７日間の１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐまたは１５０ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ／ｋｇ経口用量でのメタドキシンの投与の効果を示す。具体的には、図１２パネルＡは、ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスが、同等のビヒクル処置を受けたＷＴマウスに比べてリンパ球Ａｋｔのリン酸化の増大を呈したことを示す（ｉｐ投与および経口投与の両方に関してｐ＜０．０００１）。Ａｋｔレベルは、同じ処置を受けたメタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスおよびＷＴマウスの間で異ならなかったので、７日間の１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐまたは１５０ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇ経口用量でのメタドキシン処置は、過剰に活性化されたＡｋｔを正常化した。図１２パネルＢは、ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスが同等のビヒクル処置を受けたＷＴマウスに比べてリンパ球ＥＲＫのリン酸化の増大を示したことを示す（ｉｐ投与および経口投与の両方に関してｐ＜０．０００１）。ｐＥＲＫレベルは、同じ処置を受けたメタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスとＷＴマウスの間で異ならなかったので、７日間の１日１回、１５０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐまたは１５０ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇ経口用量でのメタドキシン処置は、過剰に活性化されたＥＲＫを正常化した。
【０１３８】
脳領域：  図１３は、海馬、前頭前皮質、および線条体のｐＥＲＫレベルに対する7日間の１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン投与の効果を示す。ｐＥＲＫレベルは、３つの脳領域の総てでＷＴマウスに比べてＦｍｒ１ノックアウトマウスで増加していた（総ての場合でｐ＜０．０００１）。ｐＥＲＫレベルは、ビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに比べてメタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおいて低下した（総ての場合でｐ＜０．０００１）。ＫＯ−Ｍ群とＷＴ−Ｍ群の間で海馬および線条体に差異は無く、ＥＲＫの活性化の完全な逆転を示す。前頭前皮質における効果は部分的なものであり、ＫＯ−Ｖ群とＫＯ−Ｍ群には差異があるままであった（ｐ＜０．０５）。メタドキシンはＷＴマウスに対して効果は無かった。
【０１３９】
図１４は、海馬、前頭前皮質および線条体のｐＡｋｔレベルに対する７日間の１５０ｍｇ／ｋｇメタドキシン投与の効果を示す。ｐＡｋｔレベルは、３つの脳領域の総てでＷＴマウスに比べてＦｍｒ１ノックアウトマウスで増加していた（総ての場合でｐ＜０．０００１）。ｐＡｋｔレベルは、３つの脳領域の総てでビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスに比べてメタドキシン処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおいて低下した（総ての場合でｐ＜０．０００１）。総ての場合で、ＫＯ−Ｍ群とＷＴ−Ｍ群の間で差異は無く、Ａｋｔの活性化の完全な逆転を示す。メタドキシンはＷＴマウスに対して効果は無かった。脳および血液で上昇したリン酸化ＥＲＫおよびＡｋｔレベルの減少はＦｍｒ１ノックアウトマウスの行動結果の改善と相関しており、このことは、リン酸化レベルがメタドキシン処置応答のバイオマーカーであることを示唆する。
【０１４０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＦｍｒ１ノックアウトマウス由来の樹状突起糸状仮足密度および初代海馬ニューロンの成熟に対するメタドキシンの効果
図１５（パネルＡ〜Ｃ）は、３００μＭメタドキシンによる５時間の処置の効果を示す。樹状突起は、それぞれ神経細胞体からの距離に基づいて１０μｍの１０セグメントに分けた（左から右へ近位から遠位）。突起棘密度は、セグメント３では、ＷＴマウス由来ニューロンに比べてＦｍｒ１ノックアウトマウス由来ニューロンで増加していた。具体的には、図１５パネルＡは、ニューロンの糸状仮足密度を示す。Ｆｍｒ１ノックアウトマウス由来の初代海馬ニューロンは、糸状仮足密度の増加を示した（ｐ＜０．００１）。３００μＭメタドキシンによる処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウスにおけるニューロンの糸状仮足密度の異常な増加を軽減した（ｐ＜０．００１）。Ｆｍｒ１ノックアウトマウス由来ニューロンは、未熟な特徴を有し、より長く（図１５パネルＢ（ｐ＜０．０１））、かつ、幅の狭い（図１５パネルＣ（ｐ＜０．０１））糸状仮足を示した。メタドキシン処置は、この糸状仮足長の増大を逆転させ（図１５パネルＢ（ｐ＜０．０１））、幅の増加を逆転させた（図１５パネルＣ（ｐ＜０．００１））。
【０１４１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＦｍｒ１ノックアウトマウスにおけるｄｅ  ｎｏｖｏ海馬タンパク質合成に対するメタドキシンの効果
図１６は、Ｆｍｒ１ノックアウトまたはＷＴマウス由来４００μＭ海馬切片における基底ｄｅ  ｎｏｖｏタンパク質合成に対するビヒクルまたは３００μＭメタドキシンのいずれかによる処置の効果を示す。タンパク質合成は、ビヒクル処置ＷＴ対照海馬よりもビヒクル処置Ｆｍｒ１ノックアウトマウス由来海馬で高かった（ｐ＜０．０００１）。メタドキシン処置は、Ｆｍｒ１ノックアウトマウス海馬におけるタンパク質合成速度を低下させた。Ｆｍｒ１ノックアウトマウス由来海馬はメタドキシン処置ＷＴマウス由来海馬よりも高いタンパク質合成速度を維持していたことから（ｐ＜０．００１）、この効果は部分的なものであった。
【０１４２】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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