(57)【要約】本発明は、特に、現在使用中の化学療法剤に対する耐性を有する場合、腫瘍の治療のためにヒトおよび家畜の医薬で用いられる化学療法剤治療の有効性を高めるためのルチンの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法剤、および／またはアルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリンのそのままもしくはこれらの化合物を含有する植物抽出物の形態と組み合わせて、化学療法耐性腫瘍の治療において使用するためのルチン。
【請求項２】
前記化学療法剤が、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体、タキサン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンから選択されるものである、請求項１に記載の使用のためのルチン。
【請求項３】
アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリン、ルチンのそのままもしくはこれらの化合物を含有する植物抽出物の形態を、適する賦形剤と混合して含有する組成物。
【請求項４】
ａ）ゴボウ、クニカスベネディクタス、および水母雪蓮花を含む群から選択されるキク科に属する植物；
ｂ）セイヨウメギ、ベルベリスアリスタタ、およびヒイラギナンテンを含む群から選択されるメギ科に属する植物；
ｃ）ハナビシソウ、タケニグサ、およびボッコニア・フルテセンスを含む群から選択されるケシ科に属する植物
に由来する抽出物を含有する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
ａ）ゴボウ；
ｂ）セイヨウメギ；
ｃ）ハナビシソウ
に由来する抽出物を含有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
腫瘍の治療における使用のため、ならびに発育抑制剤に対する化学療法耐性および／または放射線治療に対する放射線耐性の予防／抑制のための、アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリン、およびルチンのそのままもしくはこれらの化合物を含有する植物抽出物の形態の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に、現在使用中の化学療法剤に対する耐性を有する場合、腫瘍の治療のためにヒトおよび家畜の医療で用いられる化学療法治療の有効性を高めるためのルチンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、化学療法治療に対する腫瘍細胞の耐性は、継続的な発達の下で大きな課題を示す。薬物耐性は、固形腫瘍およびリンパ系腫瘍の両方で生じ、治療に対する最初の陽性反応後に、治療開始またはその後から起こりうる。例えば、化学療法耐性は、腫瘍再発の治療過程で非常に頻繁に生じる。さらにより深刻な問題は、複数の化学療法耐性、すなわち、ある化学療法剤による治療後に他の化学療法剤で起こることによって示される。
【０００３】
化学療法治療の初期に応答するほとんどの腫瘍で生じる化学療法耐性の起源についての最も信頼性の高い仮説によると、薬物耐性は、化学療法剤を代謝し、化学療法剤で生じるＤＮＡ損傷を修復し、次いで化学療法剤で誘導されるアポトーシスを抑制することを「学ぶ」腫瘍細胞の能力から一連の腫瘍細胞の変異を生じることと推測されている。
【０００４】
化学療法耐性の課題を解決するための方法として、異なるタイプの化学療法剤による組み合わせ治療があるが、この場合でも、効果は十分ではなく、様々な化学療法剤に対して驚くほど広範囲で頻繁な複数耐性を生じる。
【０００５】
併用される新しい薬の継続する研究開発にもかかわらず、化学療法耐性の課題は残っており、癌細胞の柔軟な特徴のために不可避であるとも思われている［Fojo T. and Bates S., Cancer Discov; 3(1); 20-3, 2012］。よって、この課題を解決するための大きな必要性が存在している。
【０００６】
ルチン（化学名は、２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−４．５−ジヒドロキシ−３−｛３，４，５−トリヒドロキシ−６−［（３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル）オキシメチル｝オキサン−２−イル］オキシ−クロメン−７−オン）は、二糖ルチノースに結合したアグリコンケルセチン（フラボノールの一種）からなるフラボノイド配糖体である。
【化１】
2016530325.tif 000002
【０００７】
ルチンは、多くの植物、特に、ミカン属（柑橘類）およびダイオウ属（ダイオウ）の植物、ソバ、赤ワイン、アスパラガス、ペパーミント、ユーカリ、多くのベリー、例えば、クランベリー（ヴァシニアム・マクロカーポン）およびマルベリーなどの中に天然に存在する。
【０００８】
毛細血管壁におけるルチンの強化効果および微小循環におけるより一般的なその有益な作用は、痔および血腫の治療に利用されている。
【０００９】
近年の研究により、ルチンの薬理学的特性、特に、血小板におけるその抗凝集活性［Navarro-Nunez et al. (2008); J. Agric. Food Chem. 56 (9): 2970-6］；その抗炎症活性［Guardia et al. (2001); Il Farmaco 56 (9): 683-7; Chan Hun Jung et al. (2007); Arch. Pharmacal Research 30 (12): 1599-1607］；およびその抗酸化活性［Metodiewa et al. (1997); IUBMB Life 41 (5); 1067］が指摘されている。
【００１０】
インビトロ実験により、ルチンが血管上皮増殖因子を阻害することができ、それにより血管形成の阻害因子として作用することが示された［Luo et al. (2008); Nutrition and Cancer 60 (6); 800-9］。
【００１１】
最近、Ｂｏｕｔｏｇａａら［Leukemia Research 35(2011) 1093-1101］は、ルチンを含有するハマダ・スコパリア（Hammada Scoparia）の抽出物が白血病細胞に付着した際にアポトーシスを誘導できる方法を開示している。ＥＰ２１１９４３４は、腫瘍再発の予防のためおよび／または固形転移癌の発生の予防のための急性骨髄性白血病の治療におけるルチンの使用を開示している。化学療法耐性腫瘍細胞におけるルチンの効果は開示されていない。
【００１２】
ＷＯ２００１７８７８３は、ケルセチンおよび薬用植物の多くの抽出物を含む抗腫瘍組成物を開示しているが、化学療法耐性細胞に対する活性については言及していない。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、化学療法耐性腫瘍の治療における化学療法剤のためのアジュバントとしてのルチンの使用に関する。
【００１４】
実際に、ルチンは、耐性腫瘍細胞株の化学療法剤による治療に対する感受性を再度確立することが見出された。
【００１５】
それゆえ、本発明はまた、抗腫瘍活性を有する物質との組み合わせであって、ルチンおよび化学療法剤による別々または連続した治療のために適する形態であるものに関する。
【００１６】
本発明によれば、ルチンは、単独で、または化学療法プロトコール、特に、固形腫瘍の治療と組み合わせて用いられる全ての公知の化学療法剤と組み合わせて用いることができる。このような化学療法剤の例として、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）、タキサン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンが挙げられる。
【００１７】
好ましい態様によれば、本発明は、メギ科およびケシ科に由来するアルカロイド、キク科に由来するリグナン、およびルチンの組み合わせを含有する組成物に関する。
【００１８】
特に、本発明の組成物は、好ましくは、リグナンとして、アルクチゲニンおよびアルクチインを含有し、アルカロイドとして、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリン（chelerythrine）を含有し、ルチンを含有する。
【００１９】
本発明の組成物は、特に、腫瘍の予防および／または治療に、ならびに発育抑制剤（antiblastics）に対する化学療法耐性および／または放射線治療に対する放射線耐性の予防／抑制に有用である。
【００２０】
キク科に属する植物（ゴボウ（Arctium lappa）、クニカスベネディクタス（Cnicus benedictus）、水母雪蓮花（Saussurea medusa）、またはトウヒレン属の他の種）は、抗腫瘍作用がすでに知られているアルクチゲニンおよびアルクチインを含有することによって特徴付けられる。癌の治療および予防におけるゴボウの抽出物の使用は、例えば、ＣＮ１５６０２６５に開示される。トウヒレン属の抗腫瘍薬としての使用は、例えば、特許出願ＷＯ２００６０３２３８０に開示される。水母雪蓮花の芽に由来するリグナン抽出物の抗腫瘍活性は、Cancer Letters, New York, USA, vol. 158, No. 1, 2000.1.1, pages 53-59に開示される。
【００２１】
メギ科に属する植物（セイヨウメギ（Berberis vulgaris）、ベルベリスアリスタタ（Berberis aristata）、メギ属の他の種、およびヒイラギナンテン（Mahonia aquifolium））は、ベルベリンおよびベルバミンなどの活性物質を含有する。最初のものは、化学療法耐性および放射線耐性、血管新生およびテロメラーゼを阻害し、高コレステロール血症の抑制、抗糖尿病、および心臓保護効果を有する。しかしながら、これは、ＭＤＲ（複数薬耐性）を引き起こす可能性のある深刻な欠点を有する。この望ましくない効果に対抗するために、ベルベリンについてすでに記載されている心臓保護効果を超えた、ＭＤＲに対する特異的な抗腫瘍および抗不整脈効果を示すベルバミンを使用することができる。Alternative and Complementary Therapies, Mary and Ann Liebert, Larchmont, New York, USA. Vol. 8, No. 6, 2002.12.1, pages 336-340に公開された成果（ＭＤＲに対抗するためのベルバミンを含有する植物の使用についての知識を総説する）も参照のこと。セイヨウメギの果物の細胞傷害性効果は、Int. J. Cancer Res. (Vol 2, No. 1, 2006, pages 1-9)に記載されている。
【００２２】
ケシ科に属する植物（ハナビシソウ（Eschscholzia californica）、タケニグサ（Macleaya cordata）またはボッコニア・フルテセンス（Bocconia frutescens））は、チェレリスリンおよびサンギナリンを含有する。チェレリスリンは、ＴＮＦ−アルファ産生の阻害効果を有し：この効果は、初期段階の腫瘍に適さないにもかかわらず、前末期および末期の癌患者の典型である食欲不振、悪液質、および痛覚過敏を抑制するため、前末期および末期で価値を有する。さらに、チェレリスリンは、腫瘍細胞のミトコンドリアですでに少なくなることが公知であるミトコンドリア呼吸を減少させる。サンギナリンは、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１の両方を阻害し［Biochem. Pharmacol. 2004 Sep 15; 68(6): 1101-11］：これらは、通常、抗腫瘍発育抑制剤または電離放射線に対する曝露の結果として活性化される静止因子である。チェレリスリンを含有するタケニグサまたはクサノオウ（Chelidonium majus）（食品添加物として認可されていない植物）の抗腫瘍抽出物の製造は、ＣＮ１４７０５１３に開示される。ベンゾフェナントリジンアルカロイド（例えば、チェレリスリンおよびサンギナリン）およびプロトベルベリンアルカロイド（例えば、ベルベリン）の抗腫瘍活性はまた、Planta Medica, Vol. 69(2), 2003.2.1, pages 97-108に開示される。
【００２３】
それゆえ、本発明は、アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリン、およびルチンを、適する賦形剤と混合して含有する組成物に関する。
【００２４】
有効成分は、ルチンとは別に、キク科に属する植物、メギ科に属する植物、ケシ科に属する植物の実質的に純粋で単離された形態、または少なくとも３つの異なる植物の抽出物の形態で存在しうる。
【００２５】
キク科に属する植物は、好ましくは、ゴボウ、クニカスベネディクタス、および水母雪蓮花である。
【００２６】
メギ科に属する植物は、好ましくは、セイヨウメギ、ベルベリスアリスタタおよびヒイラギナンテンである。
【００２７】
ケシ科に属する植物は、好ましくは、ハナビシソウ、タケニグサまたはボッコニア・フルテセンスを含む群から選択されるものである。
【００２８】
好ましい態様によれば、本発明の組成物は、ルチンとは別に、
ａ）ゴボウ（特に、その種子に由来するもの）；
ｂ）セイヨウメギ；
ｃ）ハナビシソウ
に由来する抽出物を含有する。
【００２９】
好ましい態様によれば、異なる科に属する各植物に由来する抽出物は、２０％〜６０％の割合で存在する。
【００３０】
前記抽出物から単離された化合物の１日の投薬量は、通常、下記の範囲に含まれる：
アルクチゲニンおよびアルクチイン：０．１−１．０ｇ／日（die）
ベルベリンおよびベルバミン：０．１−１．０ｇ／日
サンギナリンおよびチェレリスリン：０．０１−０．２５０ｇ／日、好ましくは、０．０２０−０．１５０ｇ／日
ルチン：０．１−０．２ｇ／日。
【００３１】
本発明によれば、用いられる植物の抽出物は、油冷浸物（oily macerate）、アルコール抽出物、乾燥抽出物（エタノールもしくはメタノールまたは超臨界ＣＯ２による抽出によって取得）、液体抽出物、またはマザーチンクチャー（mother tincture）の形態でありうる。
【００３２】
本発明の組成物は、経口投与のために適切に製剤化された食品添加物として用いることができ、それらの最終的な用途に許容される賦形剤、希釈剤、充填剤、固化防止剤を用いて、医薬分野で周知の従来の方法（例えば、"Remington’s Pharmaceutical Handbook", Mack Publishing Co., N.Y., USAに記載）に従って調製される。食品添加物の製剤化の例は、軟カプセル剤（密封された液体含有カプセル）または半固形もしくは硬カプセル剤（粉末または顆粒剤を含有する二部コーティングを有する)、トローチ剤、錠剤、ワッフル（waffles）、顆粒剤、単一用量粉末袋、シロップ剤、およびビアロイド（vialoids）である。
【００３３】
本発明は、さらに、腫瘍の治療のため、ならびに発育抑制剤に対する化学療法耐性および／または放射線治療に対する放射線耐性の予防／抑制のための組成物を調製するための、アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリン、およびルチンの組み合わせに関する。
【００３４】
ルチンと合成化学療法剤（シクロホスファミド）の組み合わせ、およびルチンとアルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、チェレリスリン（錠剤中の用語「抽出物」と称される）の組み合わせの活性を、化学療法感受性腫瘍細胞株および細胞株と比較して、腺癌および癌の耐性細胞株について研究した。
【００３５】
特に、化学療法耐性ヒト腫瘍細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳腺癌）、ＥＣＶ−３０４（膀胱癌）、ＨｕＨ−７（肝細胞癌）およびＨＴＢ−４３（咽頭扁平上皮癌）、化学療法感受性腫瘍細胞ＭＣＦ−７（乳腺癌）および非腫瘍の健全なヒト哺乳類線維芽細胞（ＨＭＦ）を用いた。
【００３６】
表１〜３に示される結果は、化学療法剤に対する腫瘍細胞の耐性と抽出物および／またはルチンを組み合わせた化学療法剤の有効性との間に直線関係ではなく正比例を示す。
表１
【表１】
2016530325.tif 000003
表２
【表２】
2016530325.tif 000004
表３
【表３】
2016530325.tif 000005
【００３７】
下記の表４は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ケルセチン（すなわち、ルチンアグリコン）単独で、またはシクロホスファミドと組み合わせて処理して得られたデータを示す。ルチンで得られた結果と比較して、相乗効果が生じていないことは明らかである。
表４
【表４】
2016530325.tif 000006
【００３８】
本発明で用いられる抽出物の製造の例、および本発明の組成物の例が下記に開示される。
【実施例１】
【００３９】
実施例１−新鮮な植物からのアルコール抽出物の製造
３種類の植物からなる５３０グラム（各々、２０％〜６０％の割合）を１１００ｍｌのエタノール／水混合液（４０％〜９０％のエタノール）中に入れ、ミキサーで細かくした。その全てを、細かくした植物が該溶液下に沈んでいるように注意しながら、４〜８日間「休息」させる。この期間後、該液体部分を取り出し、植物部分を圧縮し、該液体を収集し、濾過する。これにより得られた抽出物は、茶色がかっている濃い緑色である。
【実施例２】
【００４０】
実施例２−乾燥植物からのアルコール抽出物の製造
３７０〜４５０グラムの乾燥植物の量を１２００ｍｌの含水アルコール溶液（４０％〜９０％のエタノール）に用いる。その全てを約２週間「休息」させる。該溶媒の含浸／染色後、液体部分を取り出し、植物部分を圧縮し、該液体を収集し、濾過する。
【国際調査報告】
2016530325.tif 000007
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