(57)【要約】本発明は、ドネペジルを有効成分として含む非経口投与用の組成物及びその製造方法に関する。経口又は経皮投与で使用されてきたドネペジルを生分解性の生体適合性高分子及び放出調節剤を含む微粒子として製造して、非経口投与用の徐放性医薬組成物を提供することによって、生体内で２〜１２週以上の間、持続的に徐放させることを可能とする。その結果、患者への投与回数を減少させて、長期に有効血中濃度を維持することができる。【選択図】なし
2016515612.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドネペジル又はその薬学的に許容できる塩を含むドネペジル微小球であって、
前記微小球は生分解性の生体適合性高分子を含み、
前記ドネペジルの含有量は１５重量％以上であるドネペジル微小球。
【請求項２】
放出調節剤としてドネペジルの難溶性塩を更に含む請求項１に記載のドネペジル微小球。
【請求項３】
前記ドネペジルの難溶性塩は、キシナホ酸塩、ナパジシル酸塩又はパモ酸塩である請求項２に記載のドネペジル微小球。
【請求項４】
前記生分解性の生体適合性高分子は、固有粘度が０．５〜１．９ｄＬ／ｇである請求項１に記載のドネペジル微小球。
【請求項５】
前記生分解性の生体適合性高分子は、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ゼラチン、ヒアルロン酸塩、又はこれらの混合物である請求項１に記載のドネペジル微小球。
【請求項６】
前記生分解性の生体適合性高分子は、ポリグリコリド、ポリラクチド、及びポリグリコリドとポリラクチドの共重合体の少なくとも一つである請求項５に記載のドネペジル微小球。
【請求項７】
前記生分解性の生体適合性高分子は、ポリグリコリドとポリラクチドの共重合体であり、ラクチドのグリコリドに対するモル比は５０：５０〜９０：１０である請求項６に記載のドネペジル微小球。
【請求項８】
前記生分解性の生体適合性高分子は、ポリグリコリドとポリラクチドの共重合体であり、ラクチドのグリコリドに対するモル比は８５：１５である請求項７に記載のドネペジル微小球。
【請求項９】
サイズ（Ｄ５０）が１０〜２００μｍである請求項１に記載のドネペジル微小球。
【請求項１０】
前記微小球中のドネペジルの含有量は１５〜５０重量％である請求項１に記載のドネペジル微小球。
【請求項１１】
前記ドネペジルは２〜１２週以上の間、放出される請求項１に記載のドネペジル微小球。
【請求項１２】
ドネペジル又はその薬学的に許容できる塩及び生分解性の生体適合性高分子を一種以上の溶媒に溶解させる工程と、
前記ドネペジル及び生分解性の生体適合性高分子の溶液を親水性高分子水溶液に添加し、撹拌して、微小球を形成させる工程と、
前記溶媒を除去する工程と、
を含む請求項１に記載のドネペジル微小球の製造方法。
【請求項１３】
前記微小球を洗浄する工程を更に含む請求項１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
請求項１に記載のドネペジル微小球及び薬学的に許容できる担体を含む非経口投与用の医薬組成物。
【請求項１５】
注射剤である請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドネペジルを有効成分として含む非経口投与用の組成物及びその製造方法に関する。本発明は、従来、経口又は経皮投与形態で使用されてきたドネペジルを生分解性の生体適合性高分子及び放出調節剤を含む微粒子として製造して、非経口投与用の徐放性医薬組成物を提供する。その結果、生体内での２〜１２週以上の持続的な放出により、長期に有効血中濃度を維持し、患者への投与回数を減少させる効果が得られる。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢者人口の増加と共に、アルツハイマー型認知症患者が多くなり、患者の介護が深刻な社会問題となっているため、抗認知症薬が急速に開発されている。塩酸ドネペジルは、アセチルコリンエステラーゼに対する抑制効果を有するアルツハイマー病の治療剤として広く使用されており、ほとんどの抗認知症薬は錠剤の形態で経口投与されている。薬物は、疾患又は薬物の特性に応じて適切に選択され、錠剤、カプセル、シロップ、顆粒だけでなく、注射、直腸投与、経皮投与などの形態で患者に投与される。しかし、進行中の認知症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）患者に抗認知症薬を経口投与させることは難しい。
【０００３】
薬物の服用回数を減らして、患者の利便性及び服薬順守を改善し、薬物の濃度を長期間持続的に維持するためには、徐放性注射剤が非常に有用と考えられている。しかし、抗認知症薬を長期間、例えば４週以上の間、患者に投与する場合、薬物の体内での生物学的活性を維持しながら、薬物を持続的かつ均一に放出させることは難しい。そのため、長期に安定した薬物放出性を有する抗認知症薬の徐放性注射剤に対する要求が高まっている。
【０００４】
現在、市販されている塩酸ドネペジルの経口投与型の処方パターンに関して、通常の処方では、初めに塩酸ドネペジル５ｍｇを就寝前に１日１回投与する。この投与量を４〜６週間使用した後、塩酸ドネペジルを１０ｍｇまで増量して１日１回投与する。このような方法で治療を行う初めての患者では、毎日の経口投与の服薬順守が低いという欠点がある。その結果、徐放性製剤を開発する必要があった。しかし、徐放性注射剤としてのドネペジルの開発に関する報告はない。
【０００５】
徐放性製剤の例として、Ｐｅｎｇｃｈｅｎｇ  Ｚｈａｎｇらは、ドネペジルの徐放性微小粒子を製造して、評価した（非特許文献１）。彼らは、ラクチドとグリコリドの共重合体を用いて、ドネペジルを含む微小球を製造したが、微小球中のドネペジルの含有量は約１３．２％、薬物の封入率（ｌｏａｄｉｎｇ  ｒａｔｅ）は６６％に過ぎず、薬物の損失が多く、患者への実際の適用のためには投与量が非常に多くなるという問題があった。
【０００６】
そのため、多量に投与せずに長期に安定した薬物放出性を有し、血中有効濃度を持続的に維持できるドネペジルの徐放性非経口用の製剤の開発が必要であった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｐｅｎｇｃｈｅｎｇ  Ｚｈａｎｇ，  Ｌｉｎｇｌｉ  Ｃｈｅｎ，  Ｗａｎｇｗｅｎ  Ｇｕ，  Ｚｈｅｎｇｈｏｎｇ  Ｘｕ，  Ｙｕ  Ｇａｏ，  Ｙａｐｉｎｇ  Ｌｉ，  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ−ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，  ２８  （２００７）  １８８２〜１８８８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ドネペジルの服薬順守を改善するためのものである。本発明の目的は、ドネペジルを生分解性の生体適合性高分子及び放出調節剤と共に微小球として製造して、長期に安定した薬物放出性を有する非経口投与用の徐放性製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記目的を達成するために、本発明は、ドネペジル又はその薬学的に許容できる塩を含むドネペジル微小球であって、前記微小球は生分解性の生体適合性高分子を含み、前記ドネペジルの含有量は１５重量％以上であるドネペジル微小球を提供する。
【００１０】
本発明の前記ドネペジル微小球は、放出調節剤としてドネペジルの難溶性塩を更に含んでいてもよい。前記難溶性塩は限定されないが、例えば、キシナホ酸塩、ナパジシル酸塩、パモ酸塩が挙げられる。
【００１１】
本発明の前記ドネペジル微小球内で、前記生分解性の生体適合性高分子は、固有粘度が０．５〜１．９ｄＬ／ｇであってもよい。前記生分解性の生体適合性高分子は限定されないが、例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ゼラチン、ヒアルロン酸塩、又はこれらの混合物であってもよく、ポリグリコリド、ポリラクチド、及びポリグリコリドとポリラクチド共重合体の少なくとも一つであることが好ましい。特に、ポリグリコリドとポリラクチドの共重合体の場合には、ラクチドのグリコリドに対するモル比は、好ましくは５０：５０〜９０：１０、最も好ましくは８５：１５である。
【００１２】
本発明の前記ドネペジル微小球は、サイズ（Ｄ５０）が１０〜２００μｍであってもよい。前記微小球中のドネペジル含有量は１５〜５０重量％が好ましい。微小球中のドネペジル含有量が１５重量％未満であると、微小球の投与量が多くなり、服薬順守が低下するおそれがある。微小球中のドネペジル含有量が５０重量％を超えると、薬物放出が速くなり、十分な徐放性効果が得られないという問題が生じるおそれがある。
【００１３】
本発明の前記ドネペジル微小球は、ドネペジルの放出が２〜１２週以上の間、持続してもよい。
【００１４】
他の目的を達成するために、本発明は、
ドネペジル又はその薬学的に許容できる塩及び生分解性の生体適合性高分子を一種以上の溶媒に溶解させる工程と、
前記ドネペジル及び生分解性の生体適合性高分子の溶液を親水性高分子水溶液に添加し、撹拌して、微小球を形成させる工程と、
前記溶媒を除去する工程と、
を含む微小球の製造方法を提供する。
【００１５】
本発明の前記ドネペジル微小球の製造方法は、必要に応じて、微小球をエタノールなどの溶媒で洗浄する工程を更に含んでいてもよい。これにより、ドネペジルの初期破裂放出（ｉｎｉｔｉａｌ  ｂｕｒｓｔ  ｒｅｌｅａｓｅ）が抑制され得る。
【００１６】
更に、本発明は、ドネペジル又はその薬学的に許容できる塩を含むドネペジル微小球及び薬学的に許容できる担体を含む非経口投与用の医薬組成物を提供する。特に、非経口投与用の医薬組成物は、注射剤であることが好ましい。
【００１７】
本発明の前記ドネペジル又はその薬学的に許容できる塩を含む医薬組成物は、アルツハイマー型認知症の治療剤として使用することができる。投与量は、患者の年齢、症状、投与形態などにより多様に調節可能である。ドネペジルは２．０〜１５．０ｍｇ／日、好ましくは５．０〜１０．０ｍｇ／日の量で投与することができる。
【００１８】
本発明の前記ドネペジル微小球は、最終投与時に注射可能な懸濁溶剤に懸濁して投与する製剤として提供されてもよい。注射可能な懸濁溶剤は、水溶性の有機担体であり、例えば、等張化剤、増粘剤、界面活性剤、緩衝剤などを含んでいてもよい。使用可能な等張化剤は限定されないが、マンニトール、スクロース、ソルビトール、トレハロース、ラクトース、塩化ナトリウム、又は糖類などの水溶性賦形剤が挙げられる。増粘剤は限定されないが、カルメロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、又はポビドンが挙げられる。界面活性剤は限定されないが、ポリソルベート８０若しくはポリソルベート２０などのポリオキシエチレンソルビタン、又はスパン８０若しくはスパン２０などのソルビタンエステルが挙げられる。また、緩衝剤は限定されないが、リン酸一水素ナトリウム、無水クエン酸、水酸化ナトリウム、又は塩化ナトリウムが挙げられる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に係るドネペジル微小球は、長期に安定した薬物放出性を有し、２〜１２週以上の間、ドネペジルは血中有効濃度を維持できる。その結果、注射剤等の非経口投与用の製剤を製造する場合、安全、且つ持続的な効果を示すため、患者の服薬順守が向上する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１ａ】図１ａは、実施例１のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｂ】図１ｂは、実施例１−１のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｃ】図１ｃは、実施例２のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｄ】図１ｄは、実施例３のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｅ】図１ｅは、実施例４のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｆ】図１ｆは、実施例５のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｇ】図１ｇは、実施例６のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｈ】図１ｈは、実施例７のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｉ】図１ｉは、実施例２−１のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｊ】図１ｊは、実施例８のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｋ】図１ｋは、実施例８−１のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｌ】図１ｌは、実施例９のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図１ｍ】図１ｍは、実施例９−１のドネペジル微小球の形態のＳＥＭ分析結果を示す写真である。
【図２ａ】図２ａは、各実施例のドネペジル微小球の溶出率を経時的に示すグラフである。
【図２ｂ】図２ｂは、各実施例のドネペジル微小球の溶出率を経時的に示すグラフである。
【図２ｃ】図２ｃは、各実施例のドネペジル微小球の溶出率を経時的に示すグラフである。
【図２ｄ】図２ｄは、各実施例のドネペジル微小球の溶出率を経時的に示すグラフである。
【図３ａ】図３ａは、各実施例のドネペジル微小球の懸濁液を体内に投与したときの血中薬物濃度を経時的に示すグラフである。
【図３ｂ】図３ｂは、各実施例のドネペジル微小球の懸濁液を体内に投与したときの血中薬物濃度を経時的に示すグラフである。
【図３ｃ】図３ｃは、各実施例のドネペジル微小球の懸濁液を体内に投与したときの血中薬物濃度を経時的に示すグラフである。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳しく説明する。但し、以下の実施例は、本発明をの理解を容易にするだけのものであり、本発明の範囲は下記の実施例によって制限されない。
【００２２】
実施例１：ドネペジル微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）１．４ｇとドネペジルベース（メガファイン（Ｍｅｇａｆｉｎｅ、インド）０．６ｇに塩化メチレン（メルク）１２．６ｇを添加し、その混合物を撹拌により完全に溶解して分散液を得た。
【００２３】
微小球製造反応器に０．５％ポリビニルアルコール（Ｍｎ＝３０，０００〜７０，０００、シグマ）水溶液５００ｍＬを加え、その温度を１０℃に設定して、３，０００ｒｐｍで撹拌しながら、注射器を用いて、得られた分散液をゆっくり添加して、微小球を製造した。次に、その温度を上げて２時間かけて有機溶媒を揮発させた後、１０℃まで１時間かけて冷却した。
【００２４】
得られた微小球を注射用水で数回洗浄した後、２５μｍと１５０μｍの寸法の篩で湿式ろ過を行った。その生成物を６４時間、凍結乾燥した。
【００２５】
実施例１−１：微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ７５７Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）を用いたこと以外は実施例１と同様にして微小球を製造した。
【００２６】
実施例１−２：微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）０．８ｇとドネペジルベース（メガファイン、インド）１．２ｇに、塩化メチレン（メルク）１２．６ｇを添加して、撹拌により完全に溶解して分散液を得たこと以外は実施例１と同様にして微小球を製造した。
【００２７】
実施例２〜７：放出調節剤（キシナホ酸）の割合に応じた微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）１．２ｇとドネペジルベース（メガファイン、インド）０．８ｇと、放出調節剤として１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（ｎａｐｈｔｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）（キシナホ酸、シグマ  アルドリッチ）をドネペジルに対して０．１〜１．０当量添加し、次いで塩化メチレン（メルク）１０．８ｇを添加した。その混合物を完全に溶解して分散液を得た。
【００２８】
微小球を製造するために、微小球製造反応器に０．５％ポリビニルアルコール（Ｍｎ＝３０，０００〜７０，０００、シグマ）水溶液５００ｍＬを加え、その温度を１０℃に設定して、３，０００ｒｐｍで撹拌しながら、注射器を用いて、得られた分散液をゆっくり添加して、微小球を製造した。次に、その温度を上げて２時間かけて有機溶媒を揮発させた後、１０℃まで１時間かけて冷却した。
【００２９】
得られた微小球を注射用水で数回洗浄した後、２５μｍと１５０μｍの寸法の篩で湿式ろ過を行った。その生成物を６４時間、凍結乾燥した。
【００３０】
表１は、実施例２〜７で用いた、キシナホ酸のドネペジルベースに対する当量を示す。
【００３１】
【表１】
2016515612.tif 000003
【００３２】
実施例２−１：微小球の製造
放出調節剤を使用しないこと以外は、実施例２と同様にして微小球を製造した。
【００３３】
実施例８：ドネペジルキシナホ酸塩を用いた微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）１．０ｇとドネペジルキシナホ酸塩（ドネペジルベースとして固形分全重量に対して３３．３％（ｗ／ｗ））１．０ｇに、塩化メチレン（メルク）９．０ｇを添加し、その混合物を撹拌により完全に溶解して分散液を得た。
【００３４】
微小球製造反応器に０．５％ポリビニルアルコール（Ｍｎ＝３０，０００〜７０，０００、シグマ）水溶液５００ｍＬを加え、その温度を１０℃に設定して、３，０００ｒｐｍで撹拌しながら、注射器を用いて、得られた分散液をゆっくり添加して、微小球を製造した。次に、その温度を上げて２時間かけて有機溶媒を揮発させた後、１０℃まで１時間かけて冷却した。
【００３５】
得られた微小球を注射用水で数回洗浄した後、２５μｍと１５０μｍの寸法の篩で湿式ろ過を行った。その生成物を６４時間、凍結乾燥した。
【００３６】
実施例８−１：微小球の製造
放出調節剤であるキシナホ酸をドネペジルベースに対して１．０当量添加したこと以外は実施例８と同様にして微小球を製造した。
【００３７】
実施例８−２：ドネペジルパモ酸塩を用いた微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）０．６５ｇとドネペジルパモ酸塩（ドネペジルベースとして固形分全重量に対して３３．３％（ｗ／ｗ））１．３５ｇに、塩化メチレン（メルク）９．０ｇを添加して、その混合物を撹拌により完全に溶解して分散液を得た。
【００３８】
微小球製造反応器に０．５％ポリビニルアルコール（Ｍｎ＝３０，０００〜７０，０００、シグマ）水溶液５００ｍＬを加え、その温度を１０℃に設定して、３，０００ｒｐｍで撹拌しながら、注射器を用いて、得られた分散液をゆっくり添加して、微小球を製造した。次に、その温度を上げて２時間かけて有機溶媒を揮発させた後、１０℃まで１時間かけて冷却した。
【００３９】
得られた微小球を注射用水で数回洗浄した後、２５μｍと１５０μｍの寸法の篩で湿式ろ過を行った。その生成物を６４時間、凍結乾燥した。
【００４０】
実施例８−３：ドネペジルナパジシル酸塩を用いた微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）０．８３ｇとドネペジルナパジシル酸塩（ドネペジルベースとして固形分全重量に対して３３．３％（ｗ／ｗ））１．１７ｇに、塩化メチレン（メルク）９．０ｇを添加して、その混合物を撹拌により完全に溶解して分散液を得た。
【００４１】
微小球を製造するために、微小球製造反応器に０．５％ポリビニルアルコール（Ｍｎ＝３０，０００〜７０，０００、シグマ）水溶液５００ｍＬを加え、その温度を１０℃に設定して、３，０００ｒｐｍで撹拌しながら、注射器を用いて、得られた分散液をゆっくり添加して、微小球を製造した。次に、その温度を上げて２時間かけて有機溶媒を揮発させた後、１０℃まで１時間かけて冷却した。
【００４２】
得られた微小球を注射用水で数回洗浄した後、２５μｍと１５０μｍの寸法の篩で湿式ろ過を行った。その生成物を６４時間、凍結乾燥した。
【００４３】
実施例９：初期破裂放出の抑制のための微小球の製造
生体適合性高分子（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＲＧ  ８５８Ｓ、ベーリンガーインゲルハイム）２．８５ｇとドネペジルベース（メガファイン、インド）２．１５ｇと、放出遅延剤として１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（ｎａｐｈｔｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）（キシナホ酸、シグマ  アルドリッチ）をドネペジルに対して０．６当量（６４４ｍｇ）を加え、次いで、そこに塩化メチレン（メルク）２５．６５ｇを添加した。その混合物を撹拌により完全に溶解して分散液を得た。
【００４４】
得られた分散液を、インラインユニットを用いて１０℃に設定したＬ４Ｒミキサー（シルバーソン、イギリス）内で３，０００ｒｐｍの撹拌下で、０．５％ポリビニルアルコール（Ｍｎ＝３０，０００〜７０，０００、シグマ）水溶液に、ゆっくり添加して、微小球を製造した。次に、有機溶媒を揮発するために３時間かけて温度を上げた後、１０℃まで１時間かけて冷却した。
【００４５】
製造された微小球を注射用水で数回洗浄した後、２５μｍの寸法の篩で１回目の湿式ろ過を行った。得られた微小球を２５％（ｗ／ｗ）エタノール水溶液を用いて２０℃で１０分間、洗浄した後、２５μｍと１５０μｍの寸法の篩で２回目の湿式ろ過を行った。その生成物を６４時間、凍結乾燥した。
【００４６】
実施例９−１：微小球の製造
エタノール洗浄工程以外は実施例９と同様にして微小球を製造した。
【００４７】
実験例１：微小球の形態の観察
微小球の表面を観察するために、微小球約１０ｍｇをアルミニウムスタブ（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｓｔｕｂ）に固定し、真空度０．１ｔｏｒｒ及び高電圧（１０ｋＶ）下で３分間、白金をコーティングした。その微小球を走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（日立Ｓ−４８００  ＦＥ―ＳＥＭ）に設置して、画像解析プログラムを用いて微小球の表面を観察した。
【００４８】
図１は、各実施例のドネペジル微小球の形態に関するＳＥＭ分析結果を示す写真である。図１ａは実施例１において製造した微小球のＳＥＭ写真であり、それぞれ、図１ｂは実施例１−１の結果、図１ｃ〜１ｈは実施例２〜７の結果、図１ｉは実施例２−１の結果、図１ｊ、１ｋは実施例８、８−１の結果、図１ｌ、１ｍは実施例９、９−１の結果である。
【００４９】
図１ａ〜１ｍから確認されるように、実施例で製造したドネペジル微小球のサイズは１０〜２００μｍの範囲内であり、球形であった。
【００５０】
実験例２：ドネペジルの含有量及び封入率の測定
微小球約５０ｍｇを移動相内で完全に溶解し、０．４５μｍ注射器フィルタでろ過して試験液を得た。ＨＰＬＣを用いて、微小球内に封入（ｌｏａｄｅｄ）されているドネペジルの含有量を下記の条件で測定した。
カラム：イナートシルＯＤＳ―２、Ｃ１８  ５μｍ、４．５×１５０ｍｍ
注入量：２０μＬ
検出波長：２７１ｎｍ
移動相：リン酸緩衝生理食塩水：アセトニトリル＝６０：４０（ｐＨ５．０）
【００５１】
その結果を表２に示す。
【００５２】
【表２】
2016515612.tif 000004
【００５３】
表２から理解できるように、実施例で製造した全てのドネペジル微小球において、微小球中のドネペジル含有量は１５重量％以上であった。この結果より、最初の添加量に対して約８５％以上のドネペジルが微小球内に十分に封入されていることが分かる。
【００５４】
実験例３：微小球の生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）長期溶出試験
実施例で製造した微小球約２０ｍｇを２００ｍＬ試験管に入れた後、そこへＨＥＰＥＳ溶液（ｐＨ７．４）を加え、３７．０℃の水槽中でインキュベートした。一定間隔で上清を採取し、ＨＰＬＣを用いてドネペジルの溶出量を測定した。表３及び図２は、ドネペジル微小球の溶出率を経時的に示す。
【００５５】
【表３】
2016515612.tif 000005
【００５６】
表３及び図２から理解できるように、実施例１、１−１で製造した微小球の場合、高分子の粘度とラクチドの比率が高いとき、薬物の放出率が低下することが分かる。従って、ポリグリコリドとポリラクチドの共重合体中のラクチドのグリコリドに対する割合を調節することによって、薬物の放出率を調節することができる。一方、薬物含有量が５７．１％と高い実施例１−２で製造した微小球の場合には、薬物の溶出が速いことが確認された。
【００５７】
更に、実施例２〜７、２−１の結果から、キシナホ酸の濃度が増加するにつれて薬物の溶出率が抑制されることが分かる。合成したドネペジルキシナホ酸塩を用いて製造した微小球（実施例８）の薬物の溶出率は、ドネペジルベースにキシナホ酸を添加して製造した微小球（実施例８−１）の薬物の溶出率と、ほぼ同じである。また、ドネペジルの難溶性塩としてパモ酸塩とナパジシル酸塩を用いて製造した微小球（実施例８−２、８−３）の場合にも、持続的な放出が確認された。
【００５８】
一方、実施例９では、薬物の初期破裂放出を抑制するために、微小球のエタノール洗浄を行った。その結果、エタノール洗浄をしていない実施例９−１と比較して、薬物の初期破裂放出は大幅に抑制されたことが確認された。
【００５９】
実験例４：微小球の残留溶媒試験
微小球約１００ｍｇをＧＣバイアルに入れた後、内部標準液１０ｍＬを添加して溶解した。次に、ＧＣを用いて残留溶媒を測定した。内径２５ｍ×０．３２ｍｍ、フィルム厚さ０．５μｍの測定用カラムにＧ２５型をチャージし、注入量１μＬ、フレームイオン化検出器を用いて２５０℃で測定した。
【００６０】
表４は、各実施例で製造したドネペジル微小球の残留溶媒量を測定した結果を示す。
【００６１】
【表４】
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【００６２】
表４から理解できるように、本発明に従って製造したドネペジル微小球は、塩化メチレンが６００ｐｐｍ以下、エタノールが５，０００ｐｐｍ以下であり、残留溶媒量が基準値以下であることを確認できた。
【００６３】
実験例５：血中薬物濃度分析
各実施例で製造した微小球と市販の製剤を懸濁溶液０．５ｍＬで希釈して、ドネペジル（９００μｇ／ｋｇ）をラットに筋肉注射（Ｉ．Ｍ．）で注入した。所定の時間に血液試料約０．５ｍＬを採取して、前処理後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いてドネペジルの濃度を分析した。測定結果を図３に示す。
【００６４】
図３は、各実施例のドネペジル微小球の懸濁液を体内に投与したときの血中薬物濃度を経時的に示すグラフである。
【００６５】
図３ａから、実施例１、１−１で製造した微小球の場合、高分子の粘度とラクチドの割合が高いとき、薬物の放出率が低下し、血中濃度が安定して維持されていたことが確認できた。また、図３ｂから理解できるように、ドネペジルベースに対するキシナホ酸の濃度が実施例６の２倍程度である実施例７の微小球では、ドネペジルの溶出を抑制することにより、血中濃度が安定して維持されていることが分かる。図３ｃより、微小球のエタノール洗浄を行った実施例９の微小球では、初期血中濃度が低く維持されていたことが確認できる。
【００６６】
製造例１：注射剤の製造
希釈液の調製：マンニトール５００ｍｇ、カルボキシメチルセルロースナトリウム５０ｍｇ、およびポリソルベート８０  １０ｍｇを注射剤用の水に溶かし１０ｍＬにして、その後、水酸化ナトリウムを添加しｐＨ７．０に調整した。
【００６７】
患者への投与時には、ドネペジル１５０〜４５０ｍｇが入ったバイアルに上記希釈液を２ｍＬ添加し、注射用に懸濁した。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図１ｅ】
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【図１ｆ】
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【図１ｇ】
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【図１ｈ】
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【図１ｉ】
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【図１ｊ】
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【図１ｋ】
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【図１ｌ】
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【図１ｍ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【国際調査報告】
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