(57)【要約】  本発明は、インビボイメージング、特に輸送タンパク質（ＴＳＰＯ、正式には末梢ベンゾジアゼピン受容体として公知である）のインビボイメージングに関する。公知のＴＳＰＯ結合放射性トレーサーに関する問題を克服するインドール系インビボイメージング剤が提供される。本発明はまた、本発明のインビボイメージング剤の合成に有用な前駆体化合物、及び前駆体化合物の合成方法を提供する。本発明の他の態様は、本発明のインビボイメージング剤の合成方法であって、本発明の前駆体化合物の使用を含む合成方法、方法を実施するためのキット、及び自動型の方法を実施するためのカセットを含む。加えて、本発明は、本発明のインビボイメージング剤を含む放射性医薬組成物、及びインビボイメージング剤の使用方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造の化合物又はその塩もしくは溶媒和物。
【化１】
2016534145.tif 000015
【請求項２】
請求項１記載の化合物の調製に使用するための前駆体化合物であって、次の式Ｉの前駆体化合物又はその塩もしくは溶媒和物。
【化２】
2016534145.tif 000016
式中、ＬＧは脱離基である。
【請求項３】
ＬＧが、クロロ、ブロモ、ヨード、トシレート（ＯＴｓ）、ノシレート（ＯＮｓ）、メシレート（ＯＭｓ）又はトリフレート（ＯＴｆ）である、請求項２記載の前駆体化合物。
【請求項４】
請求項１記載の化合物を調製するための方法であって、請求項２又は請求項３記載の式Ｉの前駆体化合物を適切な［18Ｆ］フルオリド源と反応させて化合物を得ることを含む、方法。
【請求項５】
自動化されている、請求項４記載の方法。
【請求項６】
請求項５記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項２又は請求項３記載の前駆体化合物を含有する容器と、
（ｉｉ）適切な［18Ｆ］フルオリド源を用いて、工程（ｉ）の容器を溶出する手段と
を含む、カセット。
【請求項７】
（ｉｉｉ）過剰な［18Ｆ］フルオリドを除去するためのイオン交換カートリッジ、及び／又は
（ｉｖ）［18Ｆ］標識反応混合物を精製するための１以上の固相抽出カートリッジ
をさらに含む、請求項６記載のカセット。
【請求項８】
哺乳類への投与に適切な放射性医薬組成物であって、生体適合性担体と共に、請求項１記載の化合物を含む、放射性医薬組成物。
【請求項９】
被験体における輸送タンパク質（ＴＳＰＯ）発現の分布及び／又は程度を決定するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）請求項１記載の化合物を被験体に投与する工程と、
（ｉｉ）化合物を、被験体で発現したＴＳＰＯに結合させる工程と、
（ｉｉｉ）化合物の放射性同位体から発生する信号を、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を用いて検出する工程と、
（ｉｖ）信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する工程と、
（ｖ）被験体におけるＴＳＰＯ発現の分布及び程度を決定する工程であって、ＴＳＰＯの発現が化合物から発生する信号と直接相関する工程と
を含む、インビボイメージング方法。
【請求項１０】
ＴＳＰＯ病態に対処するための薬剤を投与することを含む被験体の治療中に繰り返し実施される、請求項９記載のインビボイメージング方法。
【請求項１１】
請求項９又は請求項１０記載のインビボイメージング方法に使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
請求項９又は請求項１０記載のインビボイメージング方法で用いられる請求項９記載の放射性医薬組成物の製造に使用される請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
ＴＳＰＯがアップレギュレートされた病態の診断方法であって、請求項９記載のインビボイメージング方法を、ＴＳＰＯ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰属させる追加の工程（ｖｉ）と共に含む、診断方法。
【請求項１４】
請求項１３記載の診断方法に使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１３記載の診断方法に用いられる請求項８記載の放射性医薬組成物の製造に使用するための請求項１記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に輸送タンパク質（ＴＳＰＯ、正式には末梢ベンゾジアゼピン受容体として公知である）のインビボイメージングに関する。公知のＴＳＰＯ結合放射性トレーサーに関する問題を克服するインドール系インビボイメージング剤が提供される。本発明はまた、本発明のインビボイメージング剤の合成に有用な前駆体化合物、及び前駆体化合物の合成方法を提供する。本発明の他の態様は、本発明のインビボイメージング剤の合成方法であって、本発明の前駆体化合物の使用を含む合成方法、方法を実施するためのキット、及び自動型の方法を実施するためのカセットを含む。加えて、本発明は、本発明のインビボイメージング剤を含む放射性医薬組成物、及びインビボイメージング剤の使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＴＳＰＯは、末梢組織及びグリア細胞に主に局在することが公知であるが、その生理的機能は依然として解明されていない。細胞内では、ＴＳＰＯは、ミトコンドリア外膜上に局在することが公知であるが、これは、ミトコンドリア機能の調節及び免疫系における潜在的な役割を示している。さらに、ＴＳＰＯは、細胞増殖、ステロイド産生、カルシウム流及び細胞呼吸に関与すると仮説されている。
【０００３】
正常組織及び罹患組織におけるＴＳＰＯ発現を調べる研究において、Ｃｏｓｅｎｚａ−Ｎａｓｈａｔら（２００９  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ；３５（３）：３０６−３２８）は、正常脳におけるＴＳＰＯ発現が最小であることを確認した。同論文では、疾患状態では、実質ミクログリア、マクロファージ及びいくつかの肥大アストロサイトにおいて、ＴＳＰＯの上昇が存在しているが、ＴＳＰＯの分布は、疾患、病期、及び病変への近接度、又は感染との関係に応じて異なることを実証した。罹患脳では、ミクログリア及びマクロファージは、ＴＳＰＯを発現する主要な細胞型であり、ヒトでは、アストロサイトもＴＳＰＯを発現し得る。
【０００４】
ＴＳＰＯ選択的リガンド（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５を使用する陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）イメージングは、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症の一般的な指標として広く使用されている。しかしながら、（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５には、高い非特異的結合、低い脳透過性、高い血漿タンパク結合及び合成困難を含む制限がある。さらに、その放射性標識代謝物の役割は不明であり、結合の定量は複雑なモデリングを必要とする。
【０００５】
（Ｒ）−［11Ｃ］ＰＫ１１１９５に伴う問題によって、［18Ｆ］−ＦＥＰＰＡ、［18Ｆ］ＰＢＲ１１１、［11Ｃ］−ＰＢＲ２８、［11Ｃ］−ＤＰＡ７１３、［11Ｃ］−ＤＡＡ１１０６及び［11Ｃ］−ＡＣ−５１２６を含む次世代のＴＳＰＯ結合ＰＥＴトレーサーの開発が促され、より高特異的な信号〜非特異的な信号及びより多い脳取り込みがいくらか実証された（Ｃｈａｕｖｅａｕ  ｅｔ  ａｌ  ２００８  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ；３５：２３０４−２３１９）。しかしながら、より最近では、ＰＥＴ結果の被験体内変動が、この新世代トレーサーにおいて観察されている。これらのトレーサーは、３つの方法の１つで、異なる被験体由来の脳組織におけるＴＳＰＯに結合する。高親和性結合体（ＨＡＢ）及び低親和性結合体（ＬＡＢ）は、それぞれ高親和性又は低親和性のいずれかを有する単一のＴＳＰＯ結合部位を発現する。混合型親和性結合体（ＭＡＢ）は、ほぼ等しい数のＨＡＢ及びＬＡＢ結合部位を発現する（Ｏｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ；５２：２４−３２）。Ｏｗｅｎら（Ｊ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  ２０１２；３２：１−５）は、ＴＳＰＯの多型（Ａｌａ１４７Ｔｈｒ）が、結合に関して観察された被験体内変動の原因であることを実証した。
【０００６】
Ｆｕｊｉｔａら（Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ  ２００８；４０：４３−５２）は、健常志願者において［11Ｃ］ＰＢＲ２８イメージングを行ったところ、イメージングした１２人の被験体の２人に脳活動の経時変化が認められ、これは、ＴＳＰＯの欠如又は遮断によって模倣することができた。これら２人の被験体の全身イメージングは、被験体が［11Ｃ］ＰＢＲ２８の結合部位を欠如するか、又はＴＳＰＯ受容体を欠如すると思われるため、腎臓、肺及び脾臓に対する結合は無視できるものであることを示した。
【０００７】
［11Ｃ］ＰＢＲ２８のインビボイメージングを調べる別の研究（Ｋｒｅｉｓｌ  ｅｔ  ａｌ  ＮｅｕｒｏＩｍａｇｅ  ２０１０；４９：２９２４−２９３２）では、ＴＳＰＯの密度が高い器官における取り込みは、ＬＡＢがＨＡＢよりも５０％〜７５％低いことが示されたのに対して、取り込みにおける［11Ｃ］ＰＫ１１１９５の差は、心臓及び肺においてのみ見られた。インビトロアッセイにおける［3Ｈ］ＰＢＲ２８は、ＬＡＢでは、ＨＡＢよりも１０倍以上低いＴＳＰＯ親和性を示した。サルでは、サルの脳における［11Ｃ］ＰＫ１１１９５インビボ特異的結合は、［11Ｃ］ＰＢＲ２８について報告されたものよりも約８０倍低かった。これらの結果により、ＬＡＢにおける［11Ｃ］ＰＢＲ２８の非結合は低いＴＳＰＯ親和性が原因であり、［11Ｃ］ＰＫ１１１９５の比較的低いインビボ特異的結合は、末梢器官における非結合の検出を曖昧にし得るという結論が裏付けられた。
【０００８】
Ｍｉｚｒａｈｉら（２０１２  Ｊ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂｏｌ；３２：９６８−９７２）は、［18Ｆ］ＦＥＰＰＡが、結合基間においてインビボイメージング特性の明確な差異を示すことを実証した。
【０００９】
信号を容易に解釈することができないため、ＨＡＢ、ＭＡＢ及びＬＡＢの存在は、ＴＳＰＯ放射性リガンドの有用性に関する問題を提起している。この問題を克服する戦略を開発することが望ましいであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１２／０４１９５３号
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ＴＳＰＯに結合する化合物であって、公知のＴＳＰＯ結合化合物と比較して改善された特性を有する化合物を提供する。特に、本発明の化合物は、ＨＡＢ、ＭＡＢ及びＬＡＢの不均一な結合の問題に対処する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
次式の化合物又はその塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１３】
【化１】
2016534145.tif 000002
本発明の適切な塩としては、生理学的に許容し得る酸付加塩、例えば鉱酸、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸に由来するもの、並びに有機酸、例えば酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びパラトルエンスルホン酸に由来するものが挙げられる。
【００１４】
本発明の適切な溶媒としては、エタノール、水、生理食塩水、生理的緩衝液及びグリコールが挙げられる。
【００１５】
本発明の化合物の合成は、Ｏｋｕｂｏ  ｅｔ  ａｌ（Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００４；１２：３５６９−８０）に記載されている方法に基づくものであり得る。以下の実施例２では、本発明の化合物１の非放射性バージョンを得た方法を説明する。国際公開第２０１０／１０９００７号の実施例１３に記載されている方法を使用して、エナンチオマーを分離した。
【００１６】
別の態様では、本発明は、本発明の化合物の調製に使用するための前駆体化合物であって、次の式Ｉの前駆体化合物又はその塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１７】
【化２】
2016534145.tif 000003
式中、ＬＧは脱離基である。
【００１８】
本発明との関連では、「脱離基」は、置換又は置換放射性フッ素化反応中に安定種として置換される原子又は原子群を指す。適切な脱離基の例は、ハロゲンであるクロロ、ブロモ及びヨード、並びにスルホン酸エステルであるメシレート、トシレート、ノシレート及びトリフレートである。一実施形態では、脱離基は、メシレート、トシレート及びトリフレートから選択され、好ましくはメシレートである。
【００１９】
別の態様では、本発明は、本発明の化合物を調製するための方法であって、本明細書で定義される式Ｉの前駆体化合物を適切な［18Ｆ］フルオリド源と反応させて、化合物を得ることを含む方法を提供する。
【００２０】
用語「適切な［18Ｆ］フルオリド源」は、求核置換反応でＬＧを置換する化学形態の［18Ｆ］フルオリドを意味する。［18Ｆ］−フルオリドイオン（18Ｆ-）は、通常、核反応18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆから水溶液として得られ、典型的には、カチオン性対イオンを追加し、続いて水を除去することによって反応性になる。
【００２１】
［18Ｆ］フルオリドの溶解度を維持するために、適切なカチオン性対イオンは、無水反応溶媒内で十分な溶解度を有するべきである。典型的に使用される対イオンとしては、大きいが軟質の金属イオン（例えば、ルビジウム又はセシウム）、クリプタンド（例えば、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）２．２．２（Ｋ２２２））と錯体形成したカリウム、又はテトラアルキルアンモニウム塩が挙げられる。好ましい対イオンは、クリプタンド（例えば、Ｋ２２２）と錯体形成したカリウムであり、その理由は、無水溶媒における溶解度が優れており、［18Ｆ］フルオリドの反応性を増強するからである。
【００２２】
周知の18Ｆ標識技術のより詳細な議論は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」（２００３；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ：Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ  ａｎｄ  Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ，Ｅｄｓ．）の第６章に見られ得る。
【００２３】
好ましい実施形態では、本発明の式Ｉの化合物を調製するための方法は、自動化されている。好都合なことに、［18Ｆ］−放射性トレーサーは、自動放射合成装置によって自動的に調製し得る。Ｔｒａｃｅｒｌａｂ  ＭＸ（商標）及びＦＡＳＴｌａｂ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、ＦＤＧＰｌｕｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｂｉｏｓｃａｎ）並びにＳｙｎｔｈｅｒａ（登録商標）（ＩＢＡ）を含め、このような装置のいくつかの市販例がある。このような装置は、一般的に、放射化学を実施する（多くの場合には使い捨ての）「カセット」（「カートリッジ」と称されることもある）であって、放射性合成を実施するための装置に取り付けられるものを含む。カセットは、通常、流体経路、反応容器、及び試薬バイアルを受け入れるためのポート、並びに放射性合成後のクリーンアップ工程に使用される任意の固相抽出カートリッジを含む。
【００２４】
別の態様では、本発明は、本発明の自動化方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）本明細書で定義される前駆体化合物を含有する容器と、
（ｉｉ）適切な［18Ｆ］フルオリド源を用いて、工程（ｉ）の容器を溶出する手段と
を備えるカセットを提供する。
【００２５】
本発明のカセットは、適宜、
（ｉｉｉ）過剰な［18Ｆ］フルオリドを除去するためのイオン交換カートリッジ、及び／又は
（ｉｖ）［18Ｆ］標識反応混合物を精製するための１以上の固相抽出カートリッジ
をさらに含み得る。
【００２６】
本発明のカセットについて、式Ｉの前駆体化合物及び適切な［18Ｆ］フルオリド源の適切な好ましい実施形態は、本明細書で先に定義したとおりである。
【００２７】
本発明の別の態様は、哺乳類への投与に適切な放射性医薬組成物であって、生体適合性担体と共に、本発明の化合物を含む放射性医薬組成物である。「生体適合性担体」は、組成物が生理的に許容し得る（すなわち、毒性及び過度の不快感を伴わずに哺乳類の体に投与し得る）ように、本発明の化合物が懸濁又は溶解される流体（特に、液体）である。生体適合性担体は、適切には、注入可能な担体液体、例えばパイロジェンフリーの注射用滅菌蒸留水；水溶液、例えば（有利には、注射用最終生成物が等張性又は非低張性であるようにバランスし得る）生理食塩水；１以上の浸透圧調節物質（例えば、血漿カチオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール材料（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性担体はまた、エタノールなどの生体適合性有機溶媒を含み得る。このような有機溶媒は、より親油性の化合物又は製剤を可溶化するのに有用である。好ましくは、生体適合性担体は、パイロジェンフリーの注射用蒸留水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性担体のｐＨは、適切には、４．０〜１０．５の範囲である。
【００２８】
医薬組成物は、緩衝液；薬学的に許容し得る可溶化剤（例えば、シクロデキストリン又は界面活性剤、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質）；薬学的に許容し得る安定剤又は抗酸化剤（例えば、エタノール、アスコルビン酸、ゲンチシン酸又はパラ−アミノ安息香酸）などの追加成分を場合により含有し得る。
【００２９】
放射性医薬組成物は、非経口的に（すなわち、注射によって）投与し得る。本発明の化合物が放射性医薬組成物として提供される場合、化合物の調製方法は、適切には、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝液の追加、及び任意選択的な追加成分を含む工程をさらに含む。非経口投与の場合、放射性医薬組成物が無菌性かつ非発熱性であることを確認するための工程も行う必要がある。
【００３０】
本発明の放射性医薬組成物について、本発明の化合物の適切な好ましい実施形態は、本明細書で定義したとおりである。
【００３１】
本発明の化合物は、優れたＴＳＰＯ結合親和性を有する。したがって、別の態様では、本発明は、被験体におけるＴＳＰＯ発現の分布及び／又は程度を決定するためのインビボイメージング方法であって、
（ｉ）本発明の化合物を被験体に投与する工程と、
（ｉｉ）化合物を、被験体で発現したＴＳＰＯに結合させる工程と、
（ｉｉｉ）化合物の放射性同位体から発生する信号を、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を用いて検出する工程と、
（ｉｖ）信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する工程と、
（ｖ）被験体におけるＴＳＰＯ発現の分布及び程度を決定する工程であって、ＴＳＰＯの発現が化合物から発生する信号と直接相関する工程と
を含むインビボイメージング方法を提供する。
【００３２】
本発明の化合物の「投与」は、好ましくは、非経口的に、最も好ましくは静脈内的に行われる。静脈内経路は、インビボイメージング剤を被験体の体全体に送達し、したがって被験体で発現しているＴＳＰＯと接触させるための最も効率的な方法に相当する。さらに、静脈内投与は、実質的な身体的介入及び実質的な健康リスクに相当しない。本発明の化合物は、好ましくは、本明細書で定義される本発明の医薬組成物として投与される。本発明のインビボイメージング方法はまた、本発明のインビボイメージング剤を予め投与した被験体に対して実施される上記工程（ｉｉ）〜（ｖ）を含むと理解し得る。
【００３３】
投与工程の後かつ検出工程の前に、本発明の化合物をＴＳＰＯに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳類である場合、本発明の化合物は、哺乳類の体全体を動的に移動して、その様々な組織と接触する。本発明の化合物がＴＳＰＯと接触すると、ＴＳＰＯを有する組織からの本発明の化合物のクリアランスが、ＴＳＰＯを有しない組織又はより少ないＴＳＰＯを有する組織からよりも長い時間を要するように、特異的な相互反応が起こる。ＴＳＰＯを有する組織に結合した化合物と、ＴＳＰＯを有しない組織又はより少ないＴＳＰＯを有する組織に結合した化合物との間の比の結果として、ＴＳＰＯに特異的に結合した化合物の検出が可能になると、特定の時点に到達するであろう。理想的なこのような比は、約２：１である。
【００３４】
本発明の方法の「検出」工程は、信号に対して感受性の検出器によって、放射性同位体から発生する信号を検出することを含む。この検出工程はまた、信号データの取得と理解し得る。陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）は、本発明の方法に使用するための適切なインビボイメージング手順である。
【００３５】
本発明の方法の「生成」工程は、取得した信号データに再構成アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピュータによって実施される。次いで、このデータセットを操作して、放射性同位体から発生する信号の位置及び／又は量を示す画像を生成する。放出された信号は、生成した画像を評価することによって「決定」工程を行い得るように、ＴＳＰＯの発現と直接相関する。
【００３６】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は、哺乳類である。最も好ましくは、被験体は、インビボのインタクトな哺乳類の体である。特に好ましい一実施形態では、本発明の被験体は、ヒトである。インビボイメージング方法は、健常被験体において、又はＴＳＰＯの異常発現に関連する病態（以下「ＴＳＰＯ病態」）を有することが公知の被験体、もしくはＴＳＰＯ病態を有すると疑われる被験体において、ＴＳＰＯを研究するために使用し得る。好ましくは、方法は、ＴＳＰＯ病態を有することが公知の被験体、又はＴＳＰＯ病態を有すると疑われる被験体のインビボイメージングに関し、したがって病態の診断方法に有用である。
【００３７】
インビボイメージングが有用なこのようなＴＳＰＯ病態の例としては、多発性硬化症、ラスムッセン脳炎、脳血管炎、ヘルペス脳炎、ＡＩＤＳ関連認知症、パーキンソン病、大脳皮質基底核変性症、進行性核上性麻痺、多系統萎縮症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、虚血性脳卒中、末梢神経損傷、癲癇、外傷性脳損傷、急性ストレス、慢性ストレス、神経障害性疼痛、肺炎症、慢性閉塞性肺疾患、喘息、炎症性腸疾患、関節リウマチ、原発性線維筋痛症、神経損傷、アテローム性動脈硬化症、腎炎、虚血再灌流障害、及び癌、特に結腸、前立腺又は乳房の癌が挙げられる。
【００３８】
代替的な実施形態では、本発明のインビボイメージング方法は、ＴＳＰＯ病態に対処するための薬剤を投与することを含む被験体の治療中に繰り返し実施し得る。例えば、本発明のインビボイメージング方法は、ＴＳＰＯ病態に対処するための薬剤による治療の前後途中に実施し得る。この方法では、治療の効果は、経時的にモニタリングし得る。ＰＥＴは、病変の比較的小さな変化さえも経時的に観察し得るような、優れた感受性及び分解能を有し、これは、治療モニタリングに特に有利である。
【００３９】
別の態様では、本発明は、本明細書で定義されるインビボイメージング方法に使用するための本発明の化合物を提供する。
【００４０】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書で定義されるインビボイメージング方法に使用するための本明細書で定義される放射性医薬組成物の製造に使用するための、本明細書で定義される本発明の化合物を提供する。
【００４１】
さらに別の態様では、本発明は、ＴＳＰＯがアップレギュレートされた病態の診断方法であって、ＴＳＰＯ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰属させる追加の工程（ｖｉ）と共に、本明細書で定義されるインビボイメージング方法を含む診断方法を提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、本明細書で定義される診断方法に使用するための、本明細書で定義される本発明の化合物を提供する。
【００４３】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書で定義される診断方法に使用するための本明細書で定義される放射性医薬組成物の製造に使用するための、本明細書で定義される本発明の化合物を提供する。
【００４４】
次に、一連の非限定的な実施例によって、本発明を説明する。
【００４５】
実施例の簡単な説明
実施例１では、本発明の化合物と比較するために使用した従来技術の化合物を説明する。
【００４６】
実施例２では、本発明の非放射性化合物１の合成を説明する。
【００４７】
実施例３では、結合体／非結合体アッセイにおけるラセミ化合物の試験を説明する。
【００４８】
実施例４では、結合体／非結合体アッセイにおける分割エナンチオマーの試験を説明する。
【００４９】
実施例で使用される略語のリスト
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ｈ  時間
ＩＰＡ  イソプロピルアルコール
ＬＣ−ＭＳ  液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＯＨ  メタノール
ＮＭＲ  核磁気共鳴
ＰＥＩ  ポリエーテルイミド
ＲＴ  室温
ＳＦＣ  超臨界流体クロマトグラフィー
【実施例】
【００５０】
実施例１：従来技術の化合物
実施例１（ｉ）：ＰＫ１１１９５
【００５１】
【化３】
2016534145.tif 000004
ＰＫ１１１９５は市販されている。
【００５２】
実施例１（ｉｉ）：Ｎ−（２−メトキシベンジル）−Ｎ−（４−フェノキシピリジン−３−イル）アセトアミド（ＰＢＲ２８）
【００５３】
【化４】
2016534145.tif 000005
非放射性ＰＢＲ２８は市販されている。
【００５４】
実施例１（ｉｉｉ）：非放射性９−（２−フルオロ−エチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミド（「ＧＥ１８０」）
【００５５】
【化５】
2016534145.tif 000006
従来技術の化合物９−（２−フルオロ−エチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミド（「ＧＥ１８０」として公知である）の非放射性バージョンを、Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ（２０１２  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔｓ；２２：１３０８−１３１３）並びに国際公開第２０１０／１０９００７号の実施例２及び１４に記載されている方法に従って試験のために調製した。
【００５６】
実施例２：本発明の非放射性化合物１の合成
実施例２（ｉ）：４−オキソチオクロマン−２−カルボン酸
【００５７】
【化６】
2016534145.tif 000007
ベンゼンチオール（８２．６ｇ、７５０ｍｍｏｌ、７７ｍＬ）及びフラン−２，５−ジオン（７３．５ｇ、０．７５ｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）混合物を５０℃で４０分間撹拌した。すべての材料を溶解した後、温度を７０℃未満に維持しながら、トリエチルアミン（３６３ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ、５００μＬ）のトルエン（１０ｍＬ）溶液を１０分間かけて追加した。７０℃で２０分間撹拌した後、反応混合物を真空中で濃縮した。残留物をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解し、氷冷浴で混合物を冷却した。温度を１０℃未満に維持しながら、三塩化アルミニウム（１５０ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を少しずつ追加した。反応混合物を室温（ＲＴ）に加温し、１．５時間撹拌した。塩化水素ガスの激しい発生が観察された。ジクロロメタン（１５０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、激しく撹拌した氷冷濃塩酸（５００ｍＬ）に徐々に注いだ。ジクロロメタン層を分離し、ＭｇＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮して、褐色の固体を得た。ジエチルエーテルで固体をトリチュレートし、ろ過によって黄色の固体を回収して、６７．７ｇ（４３％）の４−オキソチオクロマン−２−カルボン酸を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH  ２．９５−３．２２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＣＯ2Ｈ），４．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６  ａｎｄ  ５  Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨＣＯ2Ｈ），７．１８−７．５７（３Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＣＨＣＨＣ（Ｓ））ａｎｄ  ７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １．５  Ｈｚ，ＣＨＣＨＣＨＣＨＣ（Ｓ））によって、構造を確認した。
【００５８】
実施例２（ｉｉ）：４−オキソチオクロマン−２−カルボニルクロリド
【００５９】
【化７】
2016534145.tif 000008
反応を触媒するための塩化オキサリル（１８．２ｇ、１４４．０ｍｍｏｌ、１２．６ｍＬ）及び一滴のジメチルホルムアミドと共に、４−オキソチオクロマン−２−カルボン酸（１５ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２１０ｍＬ）溶液を窒素雰囲気下、室温（ＲＴ）で１８時間撹拌した。固体が溶解するにつれて、ガスの激しい発生があった。次いで、反応物を真空中で蒸発させて、ゴム状物質として１６．３ｇ（定量）の４−オキソチオクロマン−２−カルボニルクロリドを得、これを、精製せずに次の工程で使用した。1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δH  ３．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５  ａｎｄ  ３  Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨＣＯ2Ｃｌ），３．３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５  ａｎｄ  ３  Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨＣＯ2Ｃｌ），４．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６  Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨＣＯ2Ｃｌ），７．１８−７．５７（３Ｈ，ｍ，ＣＯＣＣＨＣＨＣＨＣＨ）ａｎｄ  ７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １．５  Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＨＣＨＣＨ）．13Ｃ  ＮＭＲ（７５  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC  ４０．６，５３．０，５５．７，１１１．３，１１３．５，１３１．４，１６０．５，１６１．８，１７１．０  ａｎｄ  １８９．２によって、構造を確認した。
【００６０】
実施例２（ｉｉｉ）：Ｎ，Ｎ−ジエチル−４−オキソチオクロマン−２−カルボキサミド
【００６１】
【化８】
2016534145.tif 000009
４−オキソチオクロマン−２−カルボニルクロリド（１６．３ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）を、０℃に冷却したジクロロメタン（２１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ジエチルアミン（１０．８ｇ、１４７．４ｍｍｏｌ、１５ｍＬ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液を１時間かけて滴下した。反応物を１時間かけて室温（ＲＴ）に加温した。５％炭酸カリウム水溶液（１００ｍＬ）で反応混合物をクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で脱水し、真空中で濃縮して、暗緑色のゴム状物質を得た。次いで、酢酸エチルでゴム状物質をトリチュレートし、固体を回収した。酢酸エチル及び石油エーテルから高温再結晶によって精製した後、褐色の結晶として１６ｇ（８４％）のＮ，Ｎ−ジエチル−４−オキソチオクロマン−２−カルボキサミドを得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δH  １．０７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６  Ｈｚ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）a），１．２４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６  Ｈｚ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）b），３．０２−３．５４（６Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＣＯ  ａｎｄ  Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），４．２４−４．２８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＣＯ），７．１８−７．５７（３Ｈ，ｍ，ＣＯＣＣＨＣＨＣＨＣＨ）ａｎｄ  ７．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １．５  Ｈｚ，ＣＯＣＣＨＣＨＣＨＣＨ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC  １２．７，１４．６，３９．９，４０．６，４２．１，１２５．６，１２７．１，１２８．６，１３０．７，１３７．８，１６７．７  ａｎｄ  １９２．９によって、構造を確認した。
【００６２】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ17ＮＯ2Ｓの計算値２６３．１；実測値２６４．０（Ｍ＋Ｈ）+。
【００６３】
実施例２（ｉｖ）：Ｎ，Ｎ−ジエチル−９−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド及びＮ，Ｎ−ジエチル−７−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド
【００６４】
【化９】
2016534145.tif 000010
Ｎ，Ｎ−ジエチル−４−オキソチオクロマン−２−カルボキサミド（３．３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）及び３−メトキシフェニルヒドラジンヒドロクロリド（３．３ｇ、１２．６ｍｍｏｌのエタノール（１０．５ｍＬ）及び濃硫酸（１．９ｍＬ、３４．７ｍｍｏｌ）を一晩還流した。冷却後、反応混合物をろ過した；エタノールで固体を洗浄して、淡白色の固体として３．２ｇ（６９％）のＮ，Ｎ−ジエチル−９−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド及びＮ，Ｎ−ジエチル−７−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド混合物を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH  ０．９０−１．００（３Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）a），１．２０−１．３５（３Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）b），３．１０−３．３０（２Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）a），３．５０・３．６０（２Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）b），３．８０（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），５．５６  ａｎｄ  ５．５８（１Ｈ，２  ｘ  ｓ，ＣＨＣＯＮＥｔ2），６．４５−７．３０（６Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．６８−７．７６（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），１１．５０（１Ｈ，ｂｒ  ｓ，ＮＨ）ａｎｄ  １１．６２（１Ｈ，ｂｒ  ｓ，ＮＨ）によって、構造を確認した。
【００６５】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ21Ｈ22Ｎ2Ｏ2Ｓ  ３６６．１；ｆｏｕｎｄ，３６７．０（Ｍ＋Ｈ）+。
【００６６】
実施例２（ｖ）：Ｎ，Ｎ−ジエチル−１１−（２−フルオロエチル）−９−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド及びＮ，Ｎ−ジエチル−１１−（２−フルオロエチル）−７−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド
【００６７】
【化１０】
2016534145.tif 000011
混合異性体の溶液（Ｎ，Ｎ−ジエチル−９−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド及びＮ，Ｎ−ジエチル−７−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミド（１．０ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液）に、２−フルオロエチルトシレート（１．２ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を窒素下で追加し、続いて、水素化ナトリウム（鉱油中、６０％分散液１３１ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）を追加した。反応混合物を８０℃で１時間加熱した。冷却後、溶媒を真空中で除去し、水（３０ｍＬ）で残留物をクエンチし、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶媒を真空中で除去した。
【００６８】
ＤＣＭ（Ａ）及び酢酸エチル（Ｂ）（５−１０％Ｂ、８０ｇ、５．０ＣＶ、６０ｍＬ／分）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色の泡状物質として１．０ｇ（８９％）の異性体混合物を得た。次いで、水（Ａ）及びメタノール（Ｂ）（Ｇｅｍｉｎｉ  ５μ  Ｃ１８、１１０Ａ、１５０×２１ｍｍ、７０〜９５％Ｂ、２０分間、２１ｍＬ／分）で溶出する半分取ＨＰＬＣによって混合物（４００ｍｇ）を再精製して、黄色の固体として２４０ｍｇ（５９％）のＮ，Ｎ−ジエチル−１１−（２−フルオロエチル）−９−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミドを得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．１２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７  Ｈｚ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）a），１．３５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７  Ｈｚ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）b），３．２９−３．６５（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），３．８８（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．４６−５．０３（４Ｈ，ｍ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ），  ５．０９（１Ｈ，ｓ，ＣＨＣＯＮＥｔ2），６．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９  ａｎｄ  ２  Ｈｚ，８−ＣＨ），６．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２  Ｈｚ，１０−ＣＨ），７．１４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １  Ｈｚ，ＡｒＨ），７．２６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １  Ｈｚ，ＡｒＨ），７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９  Ｈｚ，７−ＣＨ），７．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １  Ｈｚ，ＡｒＨ）ａｎｄ  ７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８  Ｈｚ，ＡｒＨ）；19Ｆ  ＮＭＲ（２８３  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δF   −２１９．５によって、構造を確認した。
【００６９】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ25ＦＮ2Ｏ2Ｓの計算値４１２．２；実測値４１３．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【００７０】
さらに溶出して、白色の固体として１００ｍｇ（２５％）のＮ，Ｎ−ジエチル−１１−（２−フルオロエチル）−７−メトキシ−６，１１−ジヒドロチオクロメノ［４，３−ｂ］インドール−６−カルボキサミドを得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δH １．０４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７  Ｈｚ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）a），１．４０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７  Ｈｚ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）b），３．２３−３．７１（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），３．８８（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．４５−５．００（４Ｈ，ｍ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ），５．５３（１Ｈ，ｓ，ＣＨＣＯＮＥｔ2），６．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８  Ｈｚ，８−ＣＨ），７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８  Ｈｚ，１０−ＣＨ），７．１０−７．１７（２Ｈ，ｍ，９−ＣＨ  ａｎｄ  ＡｒＨ），７．２５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １  Ｈｚ，ＡｒＨ），７．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８  ａｎｄ  １  Ｈｚ，ＡｒＨ）ａｎｄ  ７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８  Ｈｚ，ＡｒＨ）；  19Ｆ  ＮＭＲ（２８３  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δF−２２０．０によって、構造を確認した。
【００７１】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ23Ｈ25ＦＮ2Ｏ2Ｓ  ４１２．２；ｆｏｕｎｄ，４１３．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【００７２】
以下の条件を使用してＳ−エナンチオマーを分離するために、ＳＦＣキラル分離を使用した：
【００７３】
【表１】
2016534145.tif 000012
Ｓ−エナンチオマー：保持時間：７，３分、純度９５％
Ｒ−エナンチオマー：保持時間：９，１分、純度９９％。
【００７４】
実施例３：ラセミ化合物の結合体／非結合体アッセイ
４つのドナー全血サンプルから得られたヒト血小板から、膜タンパク質を調製した。ＰＢＲ２８結合親和性に基づいて、これらのドナーサンプルの２つは、高親和性を有することを予め特定し、２つは、低親和性を有することを予め特定した。１０ｍｌの緩衝液１（０．３２ｍＭスクロース、５ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、１ｍＭ  ＭｇＣｌ2、ｐＨ７．４、４℃）中で、血小板ペレットをホモジナイズした。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｊ２−ＭＣ遠心分離機において、ホモジネートを４℃、４８，０００×ｇで１５分間遠心分離した。上清を除去し、ペレットを少なくとも１０ｍｌの緩衝液２（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、１ｍＭ  ＭｇＣｌ2、ｐＨ７．４、４℃）に再懸濁し、緩衝液２中、４℃、４８，０００×ｇで１５分間遠心分離することによって洗浄した。膜を２ｍｌの緩衝液２に懸濁し、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  ＩＩ（Ｂｉｏ  Ｒａｄ  ｃａｔ  ＃５００−０００２）を使用して、タンパク質濃度を決定した。使用するまで、アリコートを−８０℃で保存した。
【００７５】
膜懸濁液のアリコートを解凍し、アッセイ緩衝液３（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、５ｍＭ  ＫＣｌ、１．５ｍＭ  ＣａＣｌ2、ｐＨ７．４、３７℃）でホモジナイズした。競合結合実験の場合、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００ワークステーションによって、１００μＭ〜１ｎＭの範囲の１１系列希釈で、非標識ＰＢＲ２８（ＡＢＸ  ｃａｔ  ＃１６５３）又はＰＫ１１１９５を希釈し、５ｎＭ［3Ｈ］ＰＫ１１１９５（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｃａｔ  ＃ＮＥＴ８８５００１ＭＣ）を含有する非結合９６ウェルマイクロプレートに追加した。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００ワークステーションによって、１μＭ〜０．０１ｎＭの範囲の１１系列希釈で、化合物１を希釈した。１００μＭ〜１ｎＭの範囲の１１系列希釈で、ＧＥ１８０を希釈した。全結合及び非特異的結合の評価も実施した。３０μｇ／ｍＬに希釈した血小板膜１６０μＬを最終容量２００μＬ／ウェルでアッセイプレートに追加した。アッセイプレートを３７℃で少なくとも１時間インキュベートし、０．１％ＰＥＩ生理食塩水に６０分間予め浸漬したＧＦ／Ｂガラス繊維プレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；ｃａｔ  ＃  ６００５１７７）に対してろ過することによって、インキュベーションを終了した。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  １９６によって、氷冷緩衝液４（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、１．４ｍＭ  ＭｇＣｌ2、ｐＨ７．４、４℃）でアッセイプレートを５〜６回リンスした。次いで、プレートを乾燥し、底部を密封し、５０μＬのＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ  ２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ｃａｔ  ＃６０１３６２１）を各ウェルに追加した。上部を密封した後、プレートを少なくとも３０分間平衡化し、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＴＸによって捕捉した放射能をカウントした。化合物１をラセミ化合物として使用した。［3Ｈ］ＰＫ１１１９５競合結合アッセイでは、化合物を３回反復で試験し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０を使用してデータを分析することによって、化合物の親和性を決定し、低親和性：高親和性の比を計算した。
【００７６】
【表２】
2016534145.tif 000013
実施例４：分割エナンチオマーの結合体／非結合体アッセイ
実施例２に記載されているように、化合物１をエナンチオマーに分割し、４つのヒトドナー全血サンプルから単離した血小板を使用して、競合結合アッセイを実施した。競合結合アッセイは、実施例３と同じアッセイ手順に従っており、化合物ＰＫ１１１９５、ＰＢＲ２８、ＧＥ１８０及び化合物１のエナンチオマーを、１００μＭ〜１ｎＭの範囲の１１系列希釈で使用した。［3Ｈ］ＰＫ１１１９５競合結合アッセイでは、すべての化合物を３回反復で試験し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０を使用してデータを分析することによって、化合物の親和性を決定し、低親和性：高親和性の比を計算した。
【００７７】
【表３】
2016534145.tif 000014
【国際調査報告】
2016534145.tif 000017
2016534145.tif 000018
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