(57)【要約】  本発明の主題は、真性糖尿病に併発する膵臓癌の治療に、ＣＸＣＬ１２（ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２）及びＩＧＦＢ２インヒビターを適用することである。本発明の核心は、慢性的に高いグルコースレベル（慢性過血糖症）が膵臓癌の進行に重要な役割を担っていること、並びにＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢ２インヒビターにより、慢性過血糖症に起因する膵臓癌又は既に進行した膵臓癌の進行を、防止，阻害又は遅延することができることの発見にある。本発明のもう一つの主題は、真性糖尿病に併発する膵臓癌の治療薬として用いるこれらのインヒビター、及びこれらのインヒビターを含む薬剤を製造することである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病又は糖尿病前駆症状により併発される膵臓癌の治療のために使用されるＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビター。
【請求項２】
前記糖尿病前駆症状は、耐糖能異常又は空腹時血糖異常レベルである、請求項１に記載した使用のためのＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビター。
【請求項３】
前記インヒビターは、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の直接インヒビターである、請求項１に記載した使用のためのインヒビター。
【請求項４】
前記インヒビターは、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２受容体のインヒビターである、請求項１に記載した使用のためのインヒビター。
【請求項５】
前記インヒビターは、ＣＸＣＲ４のインヒビターである、請求項４に記載した使用のためのインヒビター。
【請求項６】
前記インヒビターは、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の信号伝達経路のインヒビターである、請求項１〜５のいずれか１項に記載した使用のためのインヒビター。
【請求項７】
糖尿病又は糖尿病前駆症状により併発される膵臓癌の治療のための医薬組成物を製造するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載したインヒビターの使用。
【請求項８】
薬理的に許容される担体賦形剤又は補助剤の１つ以上と組み合せた請求項１〜６のいずれか１項に記載したインヒビターを含む薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真性糖尿病に併発する膵臓癌の治療に適用されるＣＸＣＬ１２（ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２）及びＩＧＦＢＰ２インヒビターに関する。
【背景技術】
【０００２】
１．現在までの技術状況
§１ａ：
真性糖尿病及び膵臓癌
真性糖尿病（ＤＭ）は、心血管疾患の原因となる危険因子であるのみならず、最悪の癌の一つである膵臓癌（ＰａＣ）を始めとして多くのタイプの癌を引き起こすので、公衆衛生上の主要課題でもある。疫学的研究により、ＤＭとＰａＣとの間の関連性が明確に実証された。（非特許文献１−６）
【０００３】
２０１１年に行われた３５コホートのメタ解析研究により、ＤＭが、ＰａＣの原因因子又は結果であると評価された。（非特許文献１）。当該メタ解析研究により、ＤＭが、男女共に、高いリクスでＰａＣを併発することが確認され、１年未満で診断を受けた患者の中に、最高リスクのＰａＣが発見され、さらに、当該メタ・解析研究により、ＤＭが、膵臓癌の初期症状のみならず、病因因子であるということが支持された。
【０００４】
それよりも６年早く（１９０５年）、ハックスレー（Ｈｕｘｌｅｙ）及び彼の共同研究者は、９，２２０例の膵臓癌患者に関する情報を基に、１７の症例対照と１９コホート又はネスティッド症例対照研究に基づくメタ解析研究を行った結果、Ｔ２ＤＭとＰａＣの間に、ある程度の因果関係があることを発見した。（非特許文献４）
【０００５】
ペリン（Ｐｅｒｒｉｎ）とその共同研究者は、１９６４〜１９７６年に生まれた、年齢２８〜４０歳の女性コホート３７，０００人以上における膵臓癌の発症率を調査した。妊娠中のグルコース代謝に関する情報を利用して、妊娠中の妊娠性糖尿病の兆候が表れた時期と、膵臓癌の後期治療を行った時期との間の時間枠が１４〜３５年において、且つ、ＧＤＭに罹っている女性の場合の膵臓癌の治療を行った平均年齢が５８歳において、妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）歴のある女性は、膵臓癌の相対リスクが７．１倍の増加を示すと結論した。（非特許文献７）
【０００６】
後年、イスラエル人が、１８５，０００人の女性を対象に、その内１１，２６４人に対してはＧＤＭの加療を行った母集団を基礎にした病歴コホート疫学研究デザインを使用して、膵臓癌の症例が比較的少なく、且つ、短期間にも係らず、ＰａＣに対しＧＤＭが７．６倍という、前記研究の結果と同じように、高く、且つ、一定の顕著な相対リスクを示すことを確認した。（非特許文献８）
【０００７】
ジー（Ｊｅｅ）及び彼の共同研究者達は、３０〜９５歳の１，２９８，３８５人のアジア人に対する１０年間に亘る経時的疫学研究を行った。彼らは、１０年間、２０，０００人以上の癌による死亡者を追跡調査し、急性血清グルコースレベルの上昇と、糖尿病の治療が、それぞれ独立して、幾つかの主要な癌を誘発するリスク要因であること、及びそのリスクが、急性血清グルコースのレベルの上昇とともに、高くなると結論付けた。癌の部位としては、膵臓癌の場合が、その関連性は最大になり（男女それぞれ、ＨＲ：１．９-２．０５）、そして、膵臓癌による死亡率は、急性血清グルコースレベルが５ｍｍｏｌ／Ｌ以上の女性達の中で、そのリスクは顕著に高くなった（非特許文献９）。この研究の結果は、グルコースレベルが、通常の値の上方範囲に納まっている場合でも、膵臓癌を含む幾つかの癌を併発するリスクが高くなることがあることを示唆している。
【０００８】
李（Ｌｉ）及び彼の共同研究者達は、彼らが参加していた「リスク要因・サーベイランス・システム」（Ｒｉｓｋ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）により、米国合州国において、３９７，７８３名の成人を分析して、糖尿病と癌に関する適切なデータを得た。その結果、彼らは、潜在的交絡因子を調製した後でも、糖尿病に罹患している男性（成人）の膵臓癌に対する調整有病率は高く、４．６倍であったと結論付けた。（非特許文献５）
【０００９】
医学情報により、ＤＭとＰａＣの因果関係は下記の４タイプに確定されたにも係らず、相互に、類似している：
Ｔ２ＤＭ患者（非特許文献１，２，４）又は真性糖尿病（非特許文献５）に罹患している癌患者に関する研究の直接分析に加えて、明らかに異なる２つのタイプの糖尿病から得た結果も、また、因果関係を示している。
これらは、妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）に罹患している女性を研究して得た結果であって、大部分の患者に投与した直後、糖尿病は寛解するが、数年／１０年後、妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）に罹患している女性患者の５０−７０％において、Ｔ２ＤＭが進行している（非特許文献７，８）。
第三番目の証拠として、タイプ−１の真性糖尿病（Ｔ１ＤＭ）に罹患している十代後半の青少年を研究した結果、ＰａＣに対して高いリスクを示した。これは、若い人々に、極めて高い頻度で膵臓癌が発症するからである。この証拠は、ＧＤＭのようなタイプ−１の真性糖尿病が、逆に、膵臓癌に先行していることを示唆している（非特許文献６）。
第４番目のタイプの情報は、１００万人以上の人被験者に対する再調査で、急性血清グルコースレベルを直接評価した研究から得られた。この結果により、急性血清グルコースレベルが高くなると、それ自体で、幾つかの癌のリスク要因になり、癌の部位としては、膵臓癌に対するリスクが最大になることが実証された。また、そのリスクは、急性血清グルコースレベルが高くなるに従って、大きくなる傾向があることが分かった（非特許文献９）。
【００１０】
膵臓癌―その９０％は管状腺癌である―は、依然として未解決の医療課題である。全体の５年間生存率は、僅かに５〜６％である（診断におけるステージによって、６−２３−９−２％：２００２−２００８：それぞれ、米国におけるステージ−小域−大域−距離を表わす）。そして、依然として、大多数の患者が、１年以内に死に至るという事実がある（非特許文献１０）。現在の腫瘍学治療以外に観察された生存率データは、膵臓癌に対しては、より新しい治療法が必要であることを明確に示している。
【００１１】
現在までに、ＤＭと膵臓癌との間の潜在的な因果関係が、多数の生物学的機序（免疫学的機序、ホルモン学的機序、及び代謝学的機序）によって説明されて来た。然しながら、その関係は、現在までに、十分、解明されていない。
【００１２】
§１ｂ：腫瘍に関連する繊維芽細胞―腫瘍微小環境及び膵星細胞-膵臓癌
膵星細胞（ＰＳＣｓ）は、１９８０年代に発見された。１９９８年におけるバヒェム（Ｂａｃｈｅｍ）とアプト（Ａｐｔｅ）による研究の結果、ＰＳＣｓは単離されて、細胞培養にて保存することができることがわかった（非特許文献１１，１２）。健康な膵臓では、ＰＳＣｓは小胞細胞の基底表面に、極近接した箇所に偏在している。ＰＳＣｓが偏在しているので、他の組織（例えば、肺臓）の血管周囲細胞も偏在しがちである。健康な環境では、ＰＳＣｓは休息状態で、細胞質内の液胞を含むレチノイドの存在により表現型に特化している。健康な膵臓の膵星細胞の数は、実質細胞の４−７％である（非特許文献１３）。
【００１３】
大多数の膵臓癌の特徴である間質性、結合織形成（癒着）反応が、腫瘍の進行にＰＳＣｓが関与していることを証明している。
【００１４】
潜在的に、侵襲性で粘液性が低い膵臓癌は、間質性反応を併発する程度が低いということに加えて（非特許文献１４）、日本人の著者による病理観察によれば、アルファ−平滑筋アクチン（ａＳＭＡ）の陽性は、結合織形成（癒着）反応の程度と相関関係にあり、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）の生物学的侵襲性と明らかな相関関係がある。１００名以上のＰＤＡＣ患者の分析に基づくと、ＰＤＡＣの生存率は低いので、切除された膵臓細胞のａＳＭＡは高くなる。（非特許文献１５）
【００１５】
活性化した星細胞が、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質の生産、及び肝臓並びに膵臓のある種の疾患における沈着の主要発生源であるが、他の組織では、繊維芽細胞が主要発生源である。このシステムの活性―即ち、本来、発育因子ベータ（ＴＧＦ−β）の形質転換によって引き起こされる過程―は、他の組織の間に発生して、傷を癒す効果があるとみなされていたが、癌疾患にとっては最悪な要因である。癌が併発する繊維芽細胞は、最近の数年／１０年で、綿密な研究がなされて来た。そして、大多数の著者が、腫瘍が併発する繊維芽細胞が、間質性腫瘍微小環境の特有の細胞要素であること、及び癌の進行と成長にとって必須の役割を持っていることに同意している。（非特許文献１６）
【００１６】
ＰＳＣｓが休止状態から活性状態へトランス−分化する過程は、ＴＧＦ−βの後に誘発されるものと考えられる。ＴＧＦ−βは、他の分子要素に依存する主要な決定要因である。他の分子要素とは、たとえば、ＰＤＧＦ−β，ＴＮＦ−α，ＩＬ１，ＩＬ６，ＩＬ８，アクチビン−Ａ，酸化ストレス（ＲＯＳ），アセトアルデヒド，エタノール（非特許文献１３）−（ある種の分子；例えば、ＰＯＧＦ−βは、ＴＧＦ−β以上に、顕著なＰＳＣ分裂促進効果を有している（非特許文献１７）、一方他の分子刺激の場合、ＥＣＭ生産促進効果又はＰＳＣアポトーシス（プログラム細胞死）に対する阻害効果があるものと考えられる。
【００１７】
ＰＳＣｓの活性／トランス−分化を誘発する要素は、一部は、アプテ（Ａｐｔｅ）と彼の共同研究者による著書を基礎にして「活性化マーカー」を使用して確認される。「活性化マーカー」は、たとえば、細胞分裂、αＳＭＡ状態、リチノイド滴下損失、又はＥＣＭタンパク質生産である。ＰＳＣｓの活性／トランス−分化を誘発する要素を表１に示す。
【００１８】
【表１】
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【００１９】
活性化されたＰＳＣｓは、有糸分裂指数が高いこと、収縮能力（筋線維芽細胞−様）、及びＥＣＭ合成に加えて、種々の受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ，ＴＧＦ−Ｒｓ，ＩＣＡＭ−１）、ＭＭＰ及びＴＩＭ分泌物（ＥＣＭ−腫瘍）、及び向神経性要素／伝播者の分泌物：ＮＧＦ，Ａｃｈ，種々の成長要素、及びサイトカイン（ＰＤＧＦ−β，ＦＧＦ，ＴＧＦβ１，ＣＴＧＦ，ＩＬ−１ｓ，ＩＬ−６，ＩＬ−８，ランテス、ＭＣＰ−１，ＥＴ−１，ＶＥＧＦ，ＳＤＦ−１）の発現が増加することが特徴である。（非特許文献１３）
【００２０】
膵臓星状細胞は、癌細胞の上皮マ−カー損失（たとえば、Ｅ−カドヘリン損失）が特徴のＥＭＴ過程を誘発するので、膵臓腫瘍の進行を促進する。（非特許文献３２）
【００２１】
実験データは、抗腫瘍免疫が、繊維芽細胞の活性タンパク質（ＦＡＰ）−αを発現する間質細胞によって阻害されるということだけではなく、ＦＡＰ−発現細胞（腫瘍小環境の非過多、免疫阻害成分）を標的とする薬剤が、腫瘍に対する免疫反応を覚醒することにより、固体腫瘍及び転位細胞を除去する確率を大きくすることができるということを示唆している。（非特許文献３３）
【００２２】
肝臓と腎臓では、これらＦＡＰ、α−ＳＭＡ発現細胞は、正常な繊維芽細胞ではなく、むしろ活性化された星状細胞である。
【００２３】
何らかの刺激に曝されると、健康な膵臓では休止状態にある星状細胞は、活性化された筋線維芽細胞、即ち膵臓癌及び慢性膵臓炎に似た状態に変形する。（非特許文献１８）
【００２４】
活性ＰＳＣｓが、その細胞質網膜様小滴を失っている間に、その細胞質内に、収縮性要素（例えば、平滑筋アクチン、ＳＭＡ）が発生し、ＰＳＣｓが、増殖及びＥＣＭ成分の分泌物の両者に反応する。
【００２５】
ＥＣＭタンパク質（例えば、タイプ−１及びタイプ−２コラーゲン）の合成に加えて、活性化された星状細胞が種々の成長要素とサイトカインを放出する。これらは、一方においては、それらの活性状態を永続させ、他方においては、膵臓腫瘍細胞の悪性特徴を決定する生物学的特性に対する効果を有する（増殖の促進）。（非特許文献３４−３７）
【００２６】
活性ＰＳＣｓの膵臓癌細胞に対する直接効果に加えて、活性ＰＳＣｓは、腫瘍細胞を、免疫反応から保護し、血管新生を促進し、その結果、腫瘍生存、成長及び転位拡散を増強させる。（非特許文献３４−３７）
【００２７】
癌細胞の増殖に対する膵臓星状細胞の効果は、２つの方法を介して行われる。即ち、細胞−細胞の直接接触、及び微小環境膵臓効果である。この現象は、イン・ビボで、人体で研究するのは難しい。従って、観察者には、ヒト膵臓星状細胞又は一連の不死化星状細胞を使用することが求められている。
【００２８】
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ）とそのグループは、腫瘍細胞と活性癌併発ＰＳＣの間の細胞−細胞の直接接触は、癌細胞の増殖及び腫瘍−間質相互作用に重要な役割を担っていると結論付けた。（非特許文献３８）
【００２９】
ＰＳＣが分泌する可溶性要素の役割も必須である。その理由は、一連の膵臓癌細胞をＰＳＣｓの細胞培地で処理しなかった癌細胞の転移及び侵入の可能性に比べて、一連の膵臓癌細胞を、ＰＳＣｓの細胞培地で処理した場合、ＰＳＣｓの増殖が非常に増加し、細胞の移動アッセイで、劇的に４００％の増加が観察され、浸潤アッセイで、３００％の増加が記録されたからである。癌細胞の増殖、侵入、転移等細胞レベルでの好ましくない効果は、実際には、腫瘍と転移形成の裏に隠れた現象に対応しているからである。これらの現象は、他の疾病に臨床的に使用されているＡＭＤ３１００を使用して、ケモカイン（Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２（ＣＸＣＬ１２、別名：ＳＤＦ−１）の受容体の一つを阻害することにより、一時的に失効させることができる。（非特許文献３９）
【００３０】
これらの現象は、膵臓癌細胞を、生体内（同所性、無胸腺症膵臓癌動物モデル）に接種したとき、結合織形成（癒着）が、一層明確になるだけではなく、原腫瘍の後期のサイズ（約２０倍増加）、及び数、局所及び遠位転移発生率（増加：肝臓：３５％〜８５％、腸間膜：２１％〜５７％−ＲＡ，ダイヤフラム：７％〜３５％）が観察された。さらに、操作の間、癌細胞の接種を、膵臓癌−併発ヒトＰＳＣｓの接種と同時に行うか、星状細胞無で行うことによって転移で影響を受けた組織の数（例えば、腎臓は０％〜５０増加）が確認された。（非特許文献３７）
【００３１】
ヒト（オス）ＰＳＣｓ（一部は、癌を併発）と、ヒト（メス）癌細胞を、一緒に、無胸腺マイス（メス）に施す研究方法（セックス・ミスマッチ）により、転移における染色体Ｙの同定と共に）膵臓癌と星状細胞が、一緒に転移部位に集まっていることが実証された。さらに、転移性細胞小集体の中で、（ＦＩＳＨを使用して）染色体Ｙで同定した細胞の数（従って、接種されたｈＰＳＣｓの数）を、１００個のサイトケラチン陽性細胞（接種された細胞の数）と比較した結果、転移における、転移性癌細胞に対するＰＳＣｓの平均比率は５．６〜１であった。（非特許文献３７）
【００３２】
観察−ヒトＰＳＣｓ（ｈＰＳＣ−ＣＭ）の細胞培地で処理した膵臓癌細胞（ＢｘＰＣ３）内で、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）で誘発されたアポトーシスは減少した：ｈＰＳＣ−ＣＭ処理の結果、アポトーシスに至る癌細胞の比率は３８．９％から９．４％（約１／４）に変化した。このことは、日常の臨床実践の観点から非常に重要である（非特許文献４０）。この現象は、部分的には、ゲムシタビン(Gemzar)に基づいて処理しても、乳管膵臓癌を発生するという説明になり、且つ、ＰＳＣｓが可溶性の物質を放出し、それが、現在の化学療法実験計画に従って処方される薬剤（及び放射線）に対する抵抗力を誘発することを実証している（非特許文献４０）。
【００３３】
現在の技術レベルによっても、上述したＰＳＣｓが放出する可溶性物質の分泌内のグルコース及び／又は慢性過血糖症に対する役割は無いことを強調したい。従って、この方法−現在の技術レベルによる方法−は、真正糖尿病を根治させるものではなく、通常のグルコースレベルが慢性的に高い患者に対するものである。
【００３４】
多くの著者が、膵臓癌の進行は、基本的には、癌幹細胞である腫瘍細胞によって決定される可能性があると表明している。（非特許文献４１〜４３）。膵臓癌の幹細胞の数は、腫瘍細胞の僅か０．２〜０．８％である。特定の表現型マーカ（ＣＤ４４＋，ＣＤ２４＋，ＥＳＡ＋）を有する膵臓癌細胞亜集団の腫瘍原性の潜在率は、非腫瘍原性癌細胞（この群の細胞も、処理に対する抵抗力がある）と比較して、１００倍である。また、上記の細胞の僅か１００個をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに注入するだけで、腫瘍の発育には十分であり、これは、組織学的には、本来のヒト腫瘍と異なるものではない（非特許文献４４）。然しながら、「幹細胞特性」を維持するメカニズムは、いまだ十分には解明されていない。日本人の著者達が、膵臓の星状細胞の活性も、このプロセスに関与していること：膵臓癌細胞をＰＳＣ細胞培地で処理すると、幹細胞−様表現型の成長、癌細胞の類球体―形成力を増強し、癌幹細胞−関連遺伝子（ＡＢＣＧ２，Ｎｅｓｔｉｎ，ＬＩＮ２８）の発現を誘発するということを結論付けた。このことは、ＰＳＣＳが、癌幹細胞ニッチの化成要素であることを示唆している。（非特許文献４５）
【００３５】
この出願以前には、ＰＳＣ活性における慢性の過血糖症の役割は解明されていなかった。３つの研究によって、ヒトではなく、ラットＰＳＣ活性化に対する、高濃度のグルコースの効果が分析された。然しながら、これらの３つの研究の中で、最も長期間でも僅かに３日間であった。このことは、慢性効果の評価としては不十分である。従って、これらの実験は、ヒトＰＳＣｓに対する真正糖尿病の効果の標準としては認められない。さらに、これらの研究のいずれもが、過血糖症（短期間、非慢性ですら）と、我々の特許出願で同定した分子標的との間のラット膵臓星状細胞に関してさえ論究していない。（非特許文献４６〜４８）
【００３６】
§１ｃ：
腫瘍進行及び膵臓癌におけるケモカイン（Ｃ-Ｘ-Ｃモチーフ）リガンド１２（間質誘導要素１）及びインシュリン様成長要素結合タンパク質２
２００６年、アイロナ・クリチェク（Ｉｌｏｎａ  Ｋｒｙｃｚｅｋ）とその共同研究者達は、ケモカインリガンド１２／間質誘導要素（ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１，ＮＣＢＩ  Ｇｅｎ  ＩＤ：６３８７）が、腫瘍発病学上、倍数的に増加することを証明した。
彼らは、下記の通り報告した：
１）ＣＸＣＬ１２は、腫瘍の成長を促進する。
２）ＣＸＣＬ１２は、腫瘍の脈管供給を高める（新血管新生）。
３）ＣＸＣＬ１２は、腫瘍微小環境における免疫阻害ネットワークに寄与する。
４）ＣＸＣＬ１２は、腫瘍細胞の移動、癒着、及び侵入を企図する。
５）ＣＸＣＬ１２は、転移形成を高める。
【００３７】
従って、著者達は、ＣＸＣＬ１２及びその受容体ＣＸＣＲ４は、新規な抗癌治療の展開のための重要な標的である。（非特許文献４６〜４８）
【００３８】
ＣＸＣＬ１２を始めとするケモカインは、小さな化学誘発物質サイトカイン分子で、７−スパン膜貫通受容体と連結している特定のＧ−タンパクに結合している。多くのケモカインは複数の受容体に結合しており、ケモカインＣＸＣＬ１２は、受容体ＣＸＣ、受容体４（ＣＸＣＲ４，ＣＤ１８４）、及びＣＸＣ受容体７に結合している。（非特許文献５０〜５４）
【００３９】
ＣＸＣＬ１２は、代表的な、Ｇ−タンパクに結合した受容体で、ＣＸＣＲ４に対するＣＸＣＬ１２の結合は、走化性、細胞生存及び／又は増殖、細胞内カルシウムの増加、及びある種の遺伝子の複写に関する信号を発する複数の経路を介して細胞内信号伝達を誘発する。ＣＸＣＲ４は、リンパ球、血液生成幹細胞、内皮及び外皮細胞、及び癌細胞を含むタイプの複数の細胞に発現する。ＣＸＣＲ４受容体は、胃腸管（膵臓を組み入れて）の血管成長（血管新生）のために必要である。（非特許文献５５）
【００４０】
ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４は、腫瘍の進行、脈管形成、転移及び生存に関与している。（非特許文献４９、５６）
【００４１】
ＣＸＣＲ７は、系統発生学的には、ケモカイン受容体に極めて似ているが、Ｇ−タンパクと結合することはできない。ＣＸＣＲ７は、ＣＸＣＬ１２のスカベンジャー受容体として機能し、同時に、成長と腫瘍形成における発現ＣＸＣＲ４の活性を変化させる受容体の重要な機能を持っていて、分子内信号（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ）を含むＣＸＣＲ４の独立径路を介する分子内信号伝達が示唆されている。（非特許文献５７）
【００４２】
高グルコースは、血管平滑筋のＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４−軸椎（信号伝達経路）を自己分泌により活性化し、細胞の増殖と化学走性を高める（非特許文献５８）。ある種のヒト癌では、間質繊維芽細胞が、上昇したＣＸＣＬ１２の分泌物を介して腫瘍と脈管形成の成長を促進する。（非特許文献５７）
【００４３】
ＣＸＣＬ１２は、調節性Ｔ細胞を増強し、腫瘍組織の方向への移動（化学走性）を高め、免疫阻害腫瘍微小環境を創出するという報告がある。（非特許文献６０）
【００４４】
ＣＸＣＲ４及びＣＸＣＲ７は、ヒト膵臓癌及び細胞系で、しばしば、共発現する。β−アレスチン−２及びＫ−Ｒａｓ（キルステン・ラット肉腫ウイルス性オンコグネ・ホモログ）に依存している経路が、ＣＸＣＬ１２信号の人工的抗原変換を調整すると、長年言われてきた。ＣＸＣＲ４発現が分解されて、Ｋ−Ｒａｓ活性のレベルを低下させることができるということは重要な観察である。これらの結果に基づいて、著者は、この経路が、ＣＸＣＬ１２細胞内信号伝達を阻害し、膵臓癌の成長を停止させる（リガンドレベルにおける阻害が、両方の受容体を介して、信号伝達を防止する）事実に基づく治療法のための目的となるかも知れないと確認した。（非特許文献６１）
【００４５】
ＣＸＣＲ４受容体は、しばしば、転移膵臓癌細胞内に発現し、細胞の固有運動性と侵入を刺激するだけではなく、癌細胞の生存と増殖を促進する（非特許文献６２）。近年の研究では、悪性度が高い腫瘍の他に、ＣＸＣＲ４の高発現性が、遠隔再発の最も強い予知要素であった。（非特許文献６３）
【００４６】
さらに、大部分の膵臓癌細胞系列は、ＣＸＣＲ４及びＣＸＣＲ７を一緒に発現するということが証明されていた（非特許文献６１）。さらに、ＰＳＣもＣＸＣＲ４を発現するということが証明されていた（非特許文献３９）。他方、ＣＸＣＬ１２は、ヒト膵臓癌細胞では分泌されず、ＰＳＣｓによって分泌される。
【００４７】
ＣＸＣＬ１２タンパクは、ＰＳＣ細胞培地で同定することができる。膵臓癌細胞系列をＰＳＣ−条件付きの培地で処理すると、膵臓癌細胞の増殖、転移、侵入を促進するだけではなく、それらの効果は、ＡＭＤ３１００でブロックすることができる。ＡＭＤ３１００は、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃ）リガンド（ＣＸＣＬ１２，別名ＳＤＦ−１）受容体の一つであるＣＸＣＲ４のインヒビターである。（非特許文献３９）
【００４８】
§１ｄ：インシュリン様成長要素（ＩＧＦ）−結合タンパク（ＩＧＦＢＰｓ）：インシュリン様成長結合タンパク−２（ＩＧＦＢＰ２、遺伝子ＩＤ：３４８５）の役割
インシュリン様成長要素（ＩＧＦ）−結合タンパク（ＩＧＦＢＰｓ）は、インシュリン様成長要素（ＩＧＦｓ）の時空間有効性を調整する。ＩＧＦＢＰｓ及びＩＧＦ活性の刺激及び阻害効果が記載されていて、ＩＧＦＢＰｓは、幾つかのＩＧＦ−独立効果を記載している。幾つかの癌におけるＩＧＦＢＰｓの迷走性効果も記載されている。
【００４９】
インシュリン様成長要素（ＩＧＦ）−結合タンパク−２（ＩＧＦＢＰ２、遺伝子ＩＤ：３４８５）及び過血糖症、真正糖尿病
最近、ジー（Ｚｈｉ）及び彼の共同研究者が、質量分析器と結合した２Ｄ−液体クロママトグラフィーを使用して、タイプ−１の真性糖尿病（Ｔ１ＤＭ）患者の血清変化を、健康体の固体と比較して同定した（非特許文献６４）。Ｔ１ＤＭ患者の血清中のＩＧＦＢＰ２は、年齢、性及び遺伝リスクＩＧＦＢＰ２を較正した後でも、健康体の対照と比較して、ほぼ５倍（４．８７倍）増加していた。そして、当該研究で分析された６個の候補タンパクの全てが、Ｔ１ＤＭ（ＯＲ＝２．０２）の最高リスクを実証した。他の研究では、２０組が、Ｔ１ＤＭの若い患者の血清中のＩＧＦＢＰ２レベルに向かって増加するという顕著ではない傾向を示した。未処理のＴ１ＤＭ患者は、既にインシュリンで処理されたＴ１ＤＭ患者に比べて、ＩＧＦＢＰ２レベルが、顕著に高いという興味ある観察がなされた。（非特許文献６５）
【００５０】
健康な被験者では、インシュリンの食後波動及びグルコース又はグルコース注入で、血清ＩＧＦＢＰ２濃度の顕著な変化を示さない。このことは、グルコース及びインシュリン濃度における急性波動は、ＩＧＦＢＰ２血清レベルの変調に関与していないということを示唆している。さらに、ＩＧＦＢＰが濃度ゼロの場合、急性、短期間の真性糖尿病（例えば、グルコース注入で誘発される過血糖症）に発生する変化をモデルにすることは出来ないということを支持している。（非特許文献６６）
【００５１】
インシュリン様成長要素結合タンパク−２及び膵臓癌
同位体標識（ＩＣＡＴ）技術及びタンデム質量分析法（ＭＳ／ＭＳ）を使用して、チェン（Ｃｈｅｎ）及び彼の共同研究者は、膵臓癌汁のタンパクの質量プロファイリングに成功した。ＥＲＣＰ（内視鏡的逆行性膵胆管造影）の間に生物学的サンプル（膵臓癌汁）を採取した。膵臓腺癌の患者から採取したサンプルと、慢性膵臓炎の患者、又は他の良性膵臓病変の患者、或はこれら（良性状態も含め）の疑いがあると診断された患者から採取したサンプルを比較した（非特許文献６７，６８）。彼等は、正常な膵臓什サンプルと比較して、膵臓癌患者の膵臓癌汁サンプルのＩＧＦＢＰ２レベルが増加（平均増加：４．８倍）していることを証明した。ＩＧＦＢＰ２の増加を、ウェスタン・ブロット法（ＷＢ）で確認し、正常者及び膵臓病変の患者から得た膵臓什にはＩＧＦＢＰ２が検出されなかった。然しながら、ＩＧＦＢＰ２は、膵臓癌患者の全ての膵臓什から検出された。彼等は、ＷＢ：ＩＧＦＢ−２を使用して膵臓組織のサンプルを分析した、その結果、正常では僅か２５％、膵臓炎で５０％が発現していること、これに対して、膵臓癌組織では７／８、即ち、８８％が発現していることを実証した（非特許文献６７）。
【００５２】
前述したように、現在の技術状況から、ヒト膵臓星状細胞による真正糖尿病、ＣＸＣＬ１２、及びＩＧＦＢＰ２が、相互に関連していることは周知であった。本発明の発明者は、前述した事実を発見した。さらに、前述した方法が、過血糖症及び膵臓癌に誘発されること、及びこれらの方法が、悪性腫瘍の特徴として、腫瘍細胞の増殖を促進するということを認識し、さらに、これらの方法が、腫瘍細胞に対する免疫反応を阻害し、腫瘍の血管新生を促し、且つ化学療法及び放射線療法に対する腫瘍の抵抗力を大きくするということを発見した。
本発明の発明者は、グルコースレベルの慢性的な増加（慢性過血糖症）が、膵臓癌の進行に重要な役割を担っているに相違ないこと、及びＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の阻害により、慢性的過血糖症又は既に進行してしまった膵臓癌の成長、進行及び転位形成による膵臓癌の進行を防止／阻害／遅延させることができることを発見した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００５３】
【非特許文献１】ベン・キュー、フー・エム、ニン・チー、リュウー・ジェー、ホン・エス、フアン・ダブリュー等（２０１１）：「真正糖尿病及び膵臓癌のリスク：コホート研究のメタ分析」「Eur J Cancer」、４７（１３）、ＰＰ.１９２８-３７．（Ben Q, Xu M, Liu J, Hong S, Huang W, et al. Diabetes mellitus and risk of pancreatic cancer: A meta-analysis of cohort studies. Eur J Cancer. 2011; 47(13): 1928-37.
【非特許文献２】ベン・キュー、カイ・キュー、リー・ジー、ユアン・ワイ、ニン・チー、デン・エス等（２０１１）：「新―初期真正糖尿病と膵臓癌のリスク関係：ケース−対照研究」「Eur J Cancer」、４７（２）、ＰＰ．２４８-５４．（Ben Q, Cai Q, Li Z, Yuan Y, Ning X, Deng S, et al. The relationship between new-onset diabetes mellitus and pancreatic cancer risk: a case-control study. Eur J Cancer. ２０１１; ４７(２): ２４８−５４．
【非特許文献３】チャリ・エス・ティ、レイブソン・シー・エル、レイブ・ケー・ジー、ランソン・ジェー、デ・アンドラード・エム、ピーターソン・ジー・エム（２００５）：「糖尿病が併発する膵臓癌の可能性：人口集団基準研究」、「ガストロエントロジー」、１２９（２）：ＰＰ.５０４−１１．２４８-５４．（Chari ST, Leibson CL, Rabe KG, Ransom J, de Andrade M, Peterson GM, Probability of pancreatic cancer following diabetes: a population-based study. Gastroenterology. 2005; 129(2); 504-11.）
【非特許文献４】ハックスレイー  アール、アンザリーモハダム  エー、ベリントン  デ  ゴンザレス  エー、バルジ  エフ、ウッドワード  エム（２００５）：「タイプＩＩ糖尿病と膵臓癌：３６研究のメタ-分析」、「英国ジャーナル・オブ・キャンサー」、９２(１１)：ＰＰ．２０７６−８３：（Huxley R, Ansary-Moghaddam A, Berrington de Gonzalez A, Barzi F, Woodward M. Type-II diabetes and pancreatic cancer: a meta-analysis of ３６ studies. Br J Cancer. ２００５；９２(１１):２０７６−８３．）
【非特許文献５】リー・シー、バルツ・エル・エス、フォード・イー・エス、オコロ・シー・エー、ツァイ・ジェー、ツァオ・ジー（２０１１）：「合衆国の成人における診断された糖尿病と自己報告の癌の関係：２００９年の行動リスク要素調査システムからの発見：「糖尿病ケアー」：３４（６）：ＰＰ．１３６５−８．」
【非特許文献６】スティーブンス・アール・ジェー、ロダム・エー・ダブリュー、ベラル・ブイ・（２００７）「タイプ１の膵臓癌と青年の初期糖尿病：系統的調査とメタ・分析」、「ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー」：９６（３）：ＰＰ．５０７−９．（Stevens RJ, Roddam AW, Beral V. Pancreatic cancer I type 1 and young-onset diabetes: systematic review and meta-analysis. Br J Cancer: 2007; 96(3): 507-9.）
【非特許文献７】ペリン・エム・シー、テリー・エム・ビー、クラインハウス・ケー、ドイッチェエル、ヤーネッツ・アール、タイラム・イー等（２００７）「膵臓癌のリスク要素としての妊娠中糖尿病：予想コホート研究」、「ビー・エム・シー」：５：２５．（Perrin Mc, Terry MB, Kleinhause K, Deutsch L, Yanetz R, Tiram E, et al. Gestational diabetes as a risk factor for pancreatic cancer: a prospective cohort study. BMC Med. 2007; 5:25.)
【非特許文献８】セラ・ティー、コーディック・ジー、バルカーナ・エム、ヘイマン・エー・ディー、ポーラス・エー、コキア・イー等（２０１１）「妊娠中糖尿病及び併発する主要癌：イスラエルにおける系統的大コホート研究」、「キャンサー・コーセズ・コントロール」：２２（１１）：１５１３−２０．（Sella T, Chodick G, Barchana M, Heymann AD, Porath A, Kokia E, et al.Gestational diabetes and risk of incident primary cancer: a large historical cohort study in Israel. Cancer Causes Control. 2011; 22(11): 1513-20.）
【非特許文献９】ジ・エス・エイチ、オー・エイチ、スル・ジェー・ダブリュ、ユン・ジェー・イー、ジ・エム、サメット・ジェー・エム（２００５）「韓国における男女の絶食血清グルコース・レベル及び癌リスク」、「ＪＡＭＡ」；２９３（２）：１９４−２０２。（Jee SH, Ohrr H, Sull JW, Yun JE, Ji M, Samet JM, Fasting serum glucose level and cancer risk in Korean men and women, JAMA. 2005; 293(2): 194-202.）
【非特許文献１０】ソサイアティー・エー・シー、「ガン  事実と図形  ２０１３」、アトランタ：米国癌学会；２０１３．（Society AC, Cancer Facts and Figures 2013. Atlanta: American Cancer Society; 2013. 2013.）
【非特許文献１１】バッケム・エム・ジ、シュナイダー・イー、グロス・エイチ、ワイデンバッハ・エイチ、シュミット・アール・エム、メンケ・エー等（１９９８）「ラット及びヒトの膵臓癌星状細胞の同定、培養、及び特性指摘」、「胃腸病学」：１１５（２）：４２１〜３２．（Bachem MG, Schneider E, Gross H, Weidenbach H, Schmidt RM, Menke A, et al. Identification, culture, and characterization of pancreatic stellate cells in rats and humans. Gastroenterology. 1998; 115(2(: 421-32.)
【非特許文献１２】アプテ・エム・ブイ、ハーバー・ピー・エス、アペレンゲート・ティー・エル、ノートン・アイ・ディー、マッコウハン・ジー・ワブリュー、コルステン・エム・エー等（１９９８）「ラットの膵臓の小房周囲星型細胞：同定、単離、及び培養」「Gut」;４３(１):ＰＰ．１２８-３３．（Apte MV, Haber PS, Applegate TL, Norton ID, McCauhan GW, Korsten MA, et al. Periacinar stellate shaped cells in rat pancreas: identification, isolation, and culture. Gut. 1998;43(1): 128-33.）
【非特許文献１３】エルカン・エム、アドラー・ジー、アプテ・エム・ブイ、バッケム・エム・ジ、ブーホルツ・エム、デトルフセン・エス等（２０１２）「膵臓星型細胞研究の現在のコンセンサス及びディスカッション」、「Gut」;６１(２)：ＰＰ．１７２-８．（Erkan M, Adler G, Apte MV, Bachen MG, Buchholz M, Detlefsen S, et al. Stella TUM: current consensus and discussion on pancreatic stellate cell research. Gut. 2012; 61(2):172-8.）
【非特許文献１４】キムラ・ワブリュー、クロダ・エー、マクウチ・エム（１９９８）「いわゆる膵臓のムチン-生成腫瘍の診断と治療に関する問題点。」「膵臓」、１６（３）：３６３-９．（Kimura M, Kuroda A, Makuuchi M. Problems in the diagnosis and treatment of a so-called mucin-producing tumor of the pancreas. Pancreas. 1998;16(3):363-9.）
【非特許文献１５】フジタ・エイチ、オフチダ・ケー、ミズモト・ケー、ナカタ・ケー、ユ・ジェー、カヤシマ・ティ等（２０１０）「膵臓管腺癌におけるアルファ-平滑筋アクチン発現基質による、攻撃的腫瘍の促進」、「膵臓」。（Fujita H, Ohuchida K, Mizumoto K, Nakata K,  Yu J, Kayashima T, et al. Alpha-Smooth Muscle Actin Expressing Stroma Promoted an Aggressive Tumor Biology in Pancreatic Ductal Adenocarcinoma. Pancreas. 2010.）
【非特許文献１６】シュライバー・エイチ、ローレイ・ディー・エー（２０１０）「癌。覚醒免疫性。」、「科学」、３３０（６００５）：ＰＰ．７６１-２．（Schreiber H, Rowley DA, Cancer. Awakening immunity. Science. 2010; 330(6005):761-2.)
【非特許文献１７】ジェフノスキー・アール、フルスト・ディー、リンガー・ジェー、チェン・ワイ、スコロデル・エー、クリーフジェー等（２００５）「膵臓繊維症のイン・ビトロモデルとしての膵臓星状細胞の固定化：マトリゲル及びＮ−アセチルステインによる不化性化の誘導」、「実験室・研究」、８５（１０）：ＰＰ．１２７６-９１．（Jesnowski R, Furst D, Ringel J, Chen Y, Schrodel A, Kleeff J, et al. Immortalization of pancreatic stellate cells as an in-vitro model of pancreatic fibrosis: deactivation is induced by matrigel and N-acetylstein. Lab. Invest. 2005; 85(10): 1276-91.）
【非特許文献１８】アプテ・エム・ビー、パイロラ・アール・シー、ウイルソン・ジェー・エス（２０１２）「膵臓星状細胞：正常及び疾患膵臓におけるスターリング効果」、「最先端生理学」、３：３４４．（Apte MV, Pirola RC, Wilson JS. Pancreatic stellate cells: a starring role in normal and diseased pancreas. Front Physiol. 2012; 3:344.）
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【非特許文献２０】シュナイダー・イー、シュミット-コーサス・エー、ワイデンバッハ・エイチ、シュミット・アール・エム、メンケ・エー等「増殖を刺激する媒介体の同定及びラット膵臓星状細胞のマトリックス合成」、「アメリカ生理学：細胞生理学会ジャーナル」。２００１；２８１（２）：Ｃ５３２-４３．（Schneider E, Schmid-Kotsas A, Zhao J, Weidenbach H, Schmidt RM, Menke A, et al. Identification of mediators stimulating proliferation and matrix synthesis of rat pancreatic stellate cells. Am J Physiol Cell Physiol. 2001; 281(2): C532-43.）
【非特許文献２１】オーニシ・エヌ、ミヤタ・ティー、オーニシ・エイチ、ヤスダ・エイチ、タマダ・ケー、ウエダ・エヌ等「アクチビン-Ａは、ラット膵臓星型細胞の自己分泌性活性化物質である：ホリスタチンの膵臓繊維症に対する潜在的治療効果」、「Gut」。２００３；５２（１０）：ＰＰ．１４８７-９３．（Ohnishi N, Miyata T, Ohnishi H, Yasuda H, Tamada K, Ueda N, et al. Activin A is an autocrine activator of rat pancreatic stellate cells: potential therapeutic role of follistatin for pancreatic fibrosis. Gut. 2003;52(10):1487-93.）
【非特許文献２２】ミューズ・ピー、フィリップス・ピー、ファミー・アール、コーステン・エム、パイローラ・アール、ウイルソン・ジェー等「炎症促進性サイトカインに反応する膵臓星状細胞：慢性膵臓炎における潜在的役割」、「Gut」。２００２；５０（４）：ＰＰ．５３５-４１．（Mews P, Phillips P, Fahmy R, Korsten M, Pirola R, Wilson J, et al. Pancreatic stellate cells respond to inflammatory cytokines: potential role in chronic pancreatic. Gut. 2002; 50(4)535-41.
【非特許文献２３】タハラ・エイチ、サトー・ケイ、ヤマザキ・ワイ、オオヤマ・ティー、ホリグチ・エヌ、ハシズメ・エイチ等「転換成長要素-アルファは、膵臓星状細胞を活性化し、マトリックス  メタロプロテナーゼ-１発現増加に関与する」、ラボ・インベトメント。２０１３；９３（６）：７２０-３２．（Tahara H, Sato K, Yamazaki Y, Ohyama T, Horiguchi N, Hashizume H, et al. Transforming growth factor-alpha activates pancreatic stellate cells and may be involved in matrix metalloproteinase-1 upregulation. Lab. Invest. 2013; 93(6): 720-32.）
【非特許文献２４】カーロ・シー、ホラ・ビー、アルムガム・ティー、ウオン・アール、ヤング・ピー等「プロスタグランディンＥ２の、ＥＰ４受容体を介する膵臓星状細胞活性の調整」、２０１３；４２（３）：４６７-７４．（Charo C, Holla V, Arumugam T, Hwang R, Yang P, Dubois RN, et al. Prostaglandin E2 regulates pancreatic stellate cell activity via the EP4 receptor. Pancreas. 2013; 42(3(:467-74.)
【非特許文献２５】ベルナ・エム・ジェー、サイズ・オー、ナスト・ジェー・エフ、ベンテン・ディー、ブレイカー・エム、コッホ・ジェー等「CCK1及びCCK2受容体は、膵臓星状細胞に発現し、コラーゲン生産を誘発する」、「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」２０１０；２８５（５０）：３８９０５-１４．（Berna MJ, Seiz O, Nast JF, Benten D, Blacker M, Koch J, et al. CCK1 and CCK2 receptors are expressed on pancreatic stellate cells and induce collagen production. The Journal of biological chemistry. 2010; 285(50):38905-14）
【非特許文献２６】フィッツナー・ビー、ワルゼル・エイチ、スパルマン・ジー、エミリッヒ・ジェー、リーベ・エス、ジェスター・アール。「ガラクチン-１は、膵臓星状細胞活性を誘発する」、「セル・シグナル」２００５；１７（１０）：１２４０−７．（Fitzner B, Walzel H, Sparmann G, Emmrich J, Liebe S, Jaster R. Galectin-1 is an inductor of pancreatic stellate cell activation. Cell Signal. 2005; 17(10): 1240-7.）
【非特許文献２７】アペテ・エム・ビー、フリップス・ピー・エー、ファミー・アール・ジ、ダービー・エス・ジェー、ロジャーズ・エス・シー、マッコウハン・ジー、ダブリュー等「アルコールは、直接、膵臓の繊維形成を刺激するか？ラット膵臓星状細胞による研究」、「胃腸学」、２０００；１１８（４）：７８９−９４．（Apte MV, Phillips PA, Fahmy RG, Darby SJ, Rodgers SC, McCaugham GW, e al. Does alcohol directly stimulate pancreatic fibrogenesis? Studies with rat pancreatic stellate cells. Gastroenterology. 20005;118(4): 780-94.）
【非特許文献２８】フー・アール、ウオン・ワイ・エル、エダルカウイ・エム、ルーギア・エー、アペテ・エム・ビー、パンド−ル  エス・ジェー「エタノールは、PDGF-誘発NADPHオキシダーゼ活性及びラット膵臓星状細胞の増殖」、「肝胆膵」、２００７；７（４）：３３２−４０．（Hu R, Wang YL, Edderkaoui M, Laugea A, Apte MV, Pandol SJ. Ethanol augments PDGF-induced NADPH oxidase activity and proliferation in rat pancreatic stellate cells. Pancreatology. 2007;7(4):332-40.）
【非特許文献２９】マサムネ・エー、サトー・エー、ワタナベ・ティー、キクタ・ケー、サトー・エム、スズキ・エヌ等「ヒト膵臓星状細胞に対すエタノール及び代謝物の効果」、「Dig Sci」，２０１０；５５（１）：２０４-１１．（Masamune A, Satoh A, Watanabe T, Kikuta K, Satoh M, Suzuki N, et al. Effects of ethanol and its metabolites on human pancreatic stellate cells. Dig Dis Sci. 2010; 55(1): 204-11.）
【非特許文献３０】アサウミ・エイチ、ワタナベ・エス、タグチ・エム、タシロ・エム、オオツキ・エム「外部から適用された圧力は、細胞内反応酸素種により、膵臓星状細胞を活性化する」、「Am j Physiol Gastrointest Liver Physiol」。２００７；２９３(５)：Ｇ９７２−８．（Asaumi H, Watanabe S, Taguchi M, Tashiro M, Otsuki M. Externally applied pressure activities pancreatic stellate cells through the generation of intracellular reactive oxygen species. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007; 293(5):G972-8.）
【非特許文献３１】マサムネ・エー、ワタナベ・ティー、キクタ・ケー、サヨー・ケー、シモセガワ・ティー「NADPHオキシダーゼは、膵臓星状細胞の化性化に決定的な役割を担っている。」、「Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol」,２００８；２９４（１）：Ｇ９９−Ｇ１０８．（Masamune A, Watanabe T, Kikuta K, Satoh K, Shimosegawa T, NADPH oxidase plays a crucial role in the activation of pancreatic stellate cells. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008; 294(1): G99-G108.）.
【非特許文献３２】キクタ・ケー、マサムネ・エー、ワタナベ・ティー、アリガ・エイチ、ハマダ・エス等「膵臓星状細胞は、膵臓癌細胞における上皮-間葉遷移を促進する」、「Biochem Biophys Res Commun」、２０１０；４０３（３−４）：３８０−４（Kikuta K, Masamune A, Watanabe T, Ariga H, Itoh H, Hamada S, et al. Pancreatic stellate cells promote epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer cells. Biochem Biophys Res Commun. 2010; 403(3-4): 380-4.）
【非特許文献３３】クラマン・エム、バンブロ・ピー・ジェー、アーノルド・ジェー・エヌ、ロバート・イー・ダブリュー、マジエラ・エル、ジョーンズ・ジェー・オー等「繊維芽細胞活性タンパクーアルファを発現する間質細胞による抗腫瘍免疫の阻害」、「Science」,２０１０；３３０（６００５）：８２７-３０．Kraman M, Bambrough PJ, Arnold JN, Roberts EW, Magiera L, Jones JO, et al. Suppression of antitumor immunity by stromal cells expressing fibroblast activation protein-alpha. Science. 2010; 330(6005): 827-30.)
【非特許文献３４】レ−・ジェー・エム、ジェスノウスキー・アール、「膵臓星状細胞及び膵臓癌：不快な関係」「JOP」、２００９；１０（４）：４７２−３０．（Lohr JM, Jesnowski R, Pancreatic stellate cells and pancreatic carcinoma: an unholy alliance. JOP. 2009; 10(4): 472-3.）
【非特許文献３５】ボンラウフェン・エー、ジョシ・エス、クー・シー、フィッリプス・ピー・エー、ス・ジー、パーカー・エン・アール等「膵臓星状細胞：膵臓癌細胞の悪い仲間」,「癌研究」、２００８；６８（７）：２０８５−９３．（Vonlaufen a, Joshi S, Qu C, Phillips PA, Xu Z, Parker NR, et al. Pancreatic stellate cells: partners in crime with pancreatic cancer cells. Cancer research. 2008;68(7):2985-93.）
【非特許文献３６】バッハヒェン・エム・ジー、チョウ・エス、バック・ケー、シュナイダーハン・ダブリュー、ジーフ・エム「膵臓星状細胞--膵臓癌における役割」、「Lagenbecks Ａrch Surg」,２００８；３９３（６）：８９１−９００．（Bachen MG, Zhou S, Buck K, Schneiderhan W, Siech M. Pancreatic stellate cells-role in pancreas cancer. Langenbecks Arch Surg. 2008; 393(6): 891-900）.
【非特許文献３７】ス・ジー、ボンラウフェン・エー、フィッリプス・ピー・エー、フィアラービアー・イー、ザン・エクス、ヤン・エル等「膵臓癌転位における膵臓星状細胞の役割」、「Am J Pathol」,２０１０；１７７（５）：２５８５−９６．（Xu Z, Vonlaufen A, Phillips PA, Fiala-Beer E, Zhang X, Yang L, et al. Role of pancreatic stellate cells in pancreatic cancer metastasis. Am J Pathol. 2010; 177(5): 2585-96.）
【非特許文献３８】フジタ・エイチ、オフチダ・ケー、ミズモト・ケー、エガミ・ティー、ミヨシ・ケー、モリヤマ・ティー等「細胞との直接接触による腫瘍―間質相互作用は、ヒト膵臓癌細胞の増殖を高める」、「Cancer Sci.」、２００９；１００（２）：２３０９−１７．（Fujita H, Ohuchida K, Mizumoto K, Egami T, Miyoshi K, Moriyama, et al. Tumor-stromal interactions with direct cell contacts enhance proliferation of human pancreatic carcinoma cells. Cancer Sci. 2009; 100(12): 2309-17.）
【非特許文献３９】ガオ・ジー、ワン・エクス、ウ・ケー、ツァオ・ワイー、フ・ジー「膵臓星状細胞は、間質細胞から誘導された要素１/CXR4axisを介して、ヒト膵臓癌細胞の侵入を増進させる。」、「肝胆膵」２０１０；１０（２−３）：１８６-９３。（Cao Z, Wang X, Wu K, Zhao Y, Hu G. Pancreatic stellate cells increase the invasion of human pancreatic cancer cells through the stromal cell-derived factor-1/CXCR4 axis. Pancreatology. 2010;10(2-3):186-93.）
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【非特許文献４８】コ・エス・エイチ、ホン・オー・ケー、キム・ジェー・ダブリュー、アン・ワイ・ビー、チャ・ビー・ワイ等「高グルコースは、リーニン-アンジオテンシン系を活性化することにより、膵臓星型細胞における細胞外マトリックス生産を増加する」、「Journal of cellular biochemistry」２００６；９８(２)：３４３−５５．（Ko SH, Hong OK, Kim JW, Ahn YB, Song KH, Cha BY, et al. High glucose increases extracellular matrix production in pancreatic stellate cells by activating the renin-angiotensin system. Journal of cellular biochemistry.2006; 98(2): 343-55.）
【非特許文献４９】クリチェク・アイ、ウェイ・エス、ケラー・イー、リユ・アール、ズー・ダブリュー「間質-誘発要素(SDF-１/CXCL１２)及びヒト腫瘍病原論」、「Am J Physiol Cell Physiol」２００７；２９２(３)：Ｃ９８７-９５．(Kryczek I, Wei S, Keller E, Liu R, Zou W, Stroma-derived factor (SDF-1/CXCL12)and human tumor pathogenesis. Am J Physiol Cell Physio.)
【非特許文献５０】バルクウイル・エフ「癌及びケモカインネットワーク」、「ナショナル・レビュー・キャンサー（Nat Rev Cancer）」。２００４；４（７）： ５４０−５０．（Balkwill F. Cancer and the chemokine network. Nat Rev Cancer. 2004; (4）: 540-50.)
【非特許文献５１】ムアドッホ・シー「CXCR4：驚異的ケモカイン受容体」、「Immunol Rev」,２０００；１７７： １７５-８４．（Murdoch C. CXCR4: chemokine receptor extraordinaire. Immunol Rev. 2000; 177: 175-84）
【非特許文献５２】ナガサワ・ティ−、タチバナ・ケー、キシモト・ティー「新規なCXCケモカインPBSF/SDF-1及びその受容体CXCR４：それらの、成長、造血、及びＨＩＶ感染における機能」「Semin Immunol」、1９９８；１０（３）：１７９−８５．(Nagasawa T, Tachibana K, Kishimoto T, A novel CXC chemokine PBSF/SDF-1 and its receptor CXCR$: their functions in development, hematopoiesis and HIV infection. Semin Immunol. 1998; 10(3): 179-85.)
【非特許文献５３】ミアオ・ジー、ルカー・ケー・イー、サマーズ・ビー・シー、ベラホビッチ・アール、ボジャニ・エム・エス、ベヘムツラ・エー等「CXCR7(RDC1)は、イン・ビボにおける乳房及び肺腫瘍の成長を促進し、腫瘍が併発する血管系に発現する」、「Proc Nat Acad Sci  USA」,２００７；１０４(４０)：１５７３５-４０．（Miao Z, Luker KE, Summers BC, Berahovich MS, Rehemtulla A, et al. CXCR7 (RDC1) promotes breast and lung tumor growth in vivo and is expressed on tumor-associated vasculature. Proc Natl Acad Sci USA. 2007; 104(40): 15735-40.）
【非特許文献５４】バラバニアン・ケー、レーガン・ビー、インファンティーノ・エス、チョウ・ケー・ワイ、ハリアグ・ジェー、モエプス・ビー等「ケモカインSDF-1/CXCR12は、Ｔ-リンパ球の孤立受容体RDCLに結合し、且つ、Ｔ-リンパ球の孤立受容体RDCLを介して、信号伝達する」、「The Journal of biological chemistry」,２００５；２８０（４２）：３５７６０-６．（Balabanian K, Lagane B, Infantino S, Chow KY, Harriague J, Moepps B, et al. The chemokine SDF-1/CXCL12 binds to and signals through the orphan receptor RDC1 in T-lymphocytes. The Journal of biological chemistry. 2005; 280(42): 35760-6.）
【非特許文献５５】タチバナ・ケー、ヒロタ・エス、イイザワ・エイチ、ヨシダ・エイチ、カワバタ・ケー、カタオカ・ワイ等「ケモカイン受容体CXCR４は、胃腸径路の血管新生にとって必須である。「Nature」、１９９８；３９３(６６８５)：５９１−４．（Tachibana K, Hirota S, Iizawa H, Yoshida H, Kawabata K, Kataoka Y, et al. The chemokine receptor CXCR4 is essential for vascularization of the gastrointestinal tract. Nature. 1998; 394(6685): 591-4.）
【非特許文献５６】タイチャー・ビー・エー、フリッカー・エス・ピー、「癌におけるCXCL12(SDF-1)/CXCR4経路。」、「Clin Cancer Res.」、２０１０；１６≪１１≫：２９２７−３１．（Teicher BA, Fricker SP. CXCL12 (SDF-1)/CXCR4 pathway in cancer. 2010; 16(11): 2927-31.）
【非特許文献５７】ナウマン・ユー、カメロニ・イー、プロイエンスター・エム、マッハベイレシュワー・エイチ、ラズ・イー、ザーベス・エイチ・ジー等「CXCL７は、CXCL12及びCXCL11のスカベンジャーとして機能する。」「Plos one」、２０１０；５（２）：e９１７５．（Naumann U, Cameroni E, Pruenster M, Mahabaleshwar  H, Raz E, Zerwes HG, et al. CXCR7 functions as a scavenger for CXCL12 and CXCL11. PloS one. 2010; 5(2): e9175.）
【非特許文献５８】ジー・ダブリュー、ワン・ス、ツァン・ワイ、グオ・ジェー、クアン・ディー、ツー・ピー等「SDF-1 アルファ/CXCR4axisは、ラットの血管平滑筋細胞におけるグルコース-強化増殖及び化学走性に関与する。」、「International journal of experimental pathology.」２０１０；９１(５)：４３６-４４．（Jie W, Wang X, Zhang Y, Guo J, Kuang D, Zhu P et al. SDF-1 alpha/CXCR4 axi is involved in glucose-potentiated proliferation and chemotaxis in rat vascular smooth muscle cells. International journal of experimental pathology. 2010; 91(5): 436-44.）
【非特許文献５９】オリモ・エー、グプタ・ピー・ビー、スグロイ・ディー・シー、アレンザナ-セイスデスドス・エフ、デラウネイ・ティ、ナエム・ア−ル等「侵入型ヒト乳房腫瘍中の間質繊維芽細胞は、増加したSDF-1/CXCL12の分泌物を介して、腫瘍の成長と脈管形成を促進する。」、「Cell」,２００５；１２１(３)：３３５−４８．（Orimo A, Gupta PB, Sgroi DC, Arenzana-Seisdedos F, Delaunay T, Naeem R, et al. Stromal fibroblasts present in invasive human breast carcinomas promote tumor growth and angiogenesis through elevated SDF-1/CXCL12 secretion. Cell. 2005; 121(3): 335-48.）
【非特許文献６０】ヅール・シー、ファイファー・ディー、クラウス・アール、シュミット-グラーエフ・エー、ゲラッハ・ユー。ビー、グレーザー・アール等「CXCL12は、同種異形間の造血細胞の移植後、リンパ種微小環境における免疫阻害を調整する。」、「Cancer research」、２０１０；７０（２４）：１０１７０−８１．（Durr C, Pfeifer D, Claus R, Schmitt-Graeff A, Gerlach UV, Graeser R, et al. CXCL12 mediates immunosuppression in the lymphoma micro environment after allogeneic transplantation of hematopoietic cells. Cancer research. ２０１０；７０（２４）：１０１７０−８１．）
【非特許文献６１】ハインリッヒ・イー・エルー、リー・ダブリュー、ローイー・エー・エム、キム・ジェー「ケモカインCXCL12は、膵臓癌細胞のCXCR4及びCXCL12-調整された信号伝達経路を活性化する。「J. Transl Med.」２０１２；１０：６８．（Heinrich EL, Lee W, Lu J, Lowy AM, Kim J, Chemokine CXCL12 activates dual CXCR4 and CXCR7-mentioned signaling pathways in pancreatic cancer cells. J TranslMed. 2012; 10:68.）.
【非特許文献６２】マルケシ・エフ、モンティ・ピー、レオン・ビー・イー、ゼルビー・エー、ピエモンティ・エル等「機能性CXCL4を発現する転移性ヒト膵臓腫瘍細胞における増長された生存、増殖、及び移動」「Cancer research」２００４；６４（２２）：８４２０-７．（Marchesi F, Monti P, Leone BE, Zerbi A, Vecchi A, Piemonti L, et al. Increased survival, proliferation and migration in metastatic human pancreatic tumor cells expressing functional CXCR4. Cancer research. 2004; 64(22): 8420-7.）
【非特許文献６３】バチェット・ジェー・ビー、マルカル・アール、ディメッター・ピー、ボネテイン・エフ、クーブランド・エー、スブレック・エム等「予想される疾病進行パターンにおけるCXCR4及びSMAD4の貢献、及び切除した膵臓腺癌に対する補助薬化学療法の利益」、「Ann Oncol」。２０１２；２３（９）：２３２７-３５．（Bachet JB, Marechal R, Demetter P, Bonnetain F, Couveland A, Svrcek M, et al. Contribution of CXCR4 and SMAD4 in predicting disease progression pattern and benefit from adjuvant chemotherapy in resected pancreatic adenocarcinoma. Ann Oncol. 2012; 23(9): 2327-35.）
【非特許文献６４】ジー・ダブリュー、シャルマ・エー、プロヒット・エス、ミラー・イー、ボデ・ビー、アンダーソン・エス・ダブリュー等「高処理量の２次元液体クロマトグラフィーマススペクトロメター及び免疫分析を使用したタイプ１の糖尿病患者における、血清タンパクの発見及び有効性」、Molecular & cellular proteomics: MCP.2011; 10(11): M111012203. (Zhi W, Sharma A, Purohit S, Miller E, Bode B, Anderson SW, et al. Discovery and validation of serum protein changes in type1 diabetes patients using high throughput two dimensional liquid chromatography-mass spectrometry and immunoassays. Molecular & cellular proteomics: MCP. 2011; 10(11): M111012203.)
【非特許文献６５】ストレッサー-ボーゲル・ビー、ブルーム・ダブリュー・エフ、パスト・アール、ケッセラー・ユー、ヘフリッヒ・エー、マイラー・ビー等「真性糖尿病に罹患している青少年における、インシュリン様成長要素（IGF）-１及び２及びIGF-結合タンパク-１、２及び３の変化の発見及びその有効性：代謝調整と高達成との相関関係」、「The Journal of clinical endocrinology and metabolism」１９９５；８０（４）：１２０７−１３．（Strasser-Vogel B, Blum WF, Past R, Kessler U, Hoeflich A, Meiler B et al. Insulin-like growth factor (IGF)-1 and 2 and IGF-binding proteins-1, -2, and -3 in children and adolescents with diabetes mellitus: correlation with metabolic control and height attainment. The journal of clinical endocrinology and metabolism. 1995; 80(4): 1207-13）.
【非特許文献６６】クレモンス・ディー・アール、スナイダー・ダブリュー・エイチ、ジュニア「正常ヒト被験者におけるインシュリン様成長要素結合タンパク-２の分泌を調整する因子」、「The Journal of clinical endocrinology and metabolism」１９９１；７３(４)：７２７-３３．（Clemmons DR, Snyder DK, Busby WH, Jr, Variables controlling the secretion of insulin-like growth factor binding protein-2 in normal human subjects. The journal of clinical endocrinology and metabolism. 1991; 73(4):727-33.）
【非特許文献６７】チェン・アール、パン・エス、イ・イー・シー、ドノホー・エス、ブロナー・エム・ピー、ポッター・ジェー・ディ等「膵臓癌汁の定量的タンパク解析」、「Proteomics」、２００６；６(１３)：３８７１−９．（Chen R, Yi EC, Donohoe S,Bronner MP, Potter JD, et al. Quantitative proteomic profiling of pancreatic cancer juice. Proteomics. 2006; 6(13): 3871-9.）
【非特許文献６８】チェン・アール、ブレントナール・ティー・エー、パン・エス、クック・ケー、モイヤ・ケー・ダブリュー、レーン・ジー等「定量的タンパク分析の結果、慢性膵臓炎で、多様に初現するタンパクは、しばしば、膵臓癌に関与していることが明らかである」2007; 6(8): 1331-42.(Chen R, Brentnall TA, Pan S, Cooke K, Moyes KW, Lane Z, et al. Quantitative proteomics analysis reveals that proteins differentially expressed in chronic pancreatitis are also frequently involved in pancreatic cancer. Molecular & cellular proteomics; MCP. 2007; 6(8): 1331-42.)
【非特許文献６９】プルースト・ピー、ストルイフ・エム、ルーシ・ティー、グーイー・エム、シュティサー・イー、コーニングス・アール等「炎症性サイトカインの相乗作用による、間葉細胞におけるCXCL１０及びCD２６の共発現及び相互作用：CXCL8及びCXCL10は、自動免疫関節炎に対する判別マーカーである」、「Arthritis Res Ther」２００６；８(４)：Ｒ１０７．（Proost P, Struyf S, Loos T, Gouwy M, Schutyser E, Conings R, et al. Coexpression and interaction of CXCL10 and CD26 in mesenchymal cells by synergizing inflammatory cytokines: CXCL8 and CXCL1o are discriminative markers for autoimmune arthropathies. Arthritis Res Ther. 2006; 8(4): R107.）
【非特許文献７０】ナウック・エム、スミス・ユー「インクレチン-基礎治療：インクレチン模倣物及びDPP-4インヒビターを、どのようにしてタイプ２の糖尿病患者に適用するか？」「Best Pract Res Clin Ebdocrinol Metab」２０９；２３（４）：５１３−２３．（Nauck M, Smith U. Incretin-based therapy: how do incretin mimetics and DPP-4 inhibitors fit into treatment algorithms for type 2 diabetic patients? Best Pract Res Clin Endocrinol Metab. 2009; 23(4): 513-23.）
【非特許文献７１】バッジョ・エル・エル、ドラッカー・ディー・ジェー「インクレチンの生物学：GLP-1及びGIP。」、「Gastroenterology」2007; 132(6): 513-23.(Baggio LL, Drucker DJ. Biology of incretins: GLP-1 and GIP. Gatroenterology. 2007; 132(6): 2131-57.)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００５４】
本発明が解決しようとする課題は、真性糖尿病に併発する膵臓癌を治療することである。
【００５５】
上記課題を解決すべく本発明者は、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃ  モチーフ）リガンド１２（ＣＸＣＬ１２）及びインシュリン様成長因子−結合タンパク（ＩＧＦＢＰ２）インヒビターが、真正糖尿病に罹患している膵臓癌の治療に適用することができることを発見した。さらに、研究を続けた結果、ヒト膵臓星状細胞による真正糖尿病、ＣＸＣＬ１２、及びＩＧＦＢＰ２が、相互に関連していること、グルコースレベルの慢性的な増加（慢性過血糖症）が、膵臓癌の進行に重要な役割を担っているに相違ないこと、及びＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の阻害により、慢性的過血糖症又は既に進行してしまった膵臓癌の成長、進行及び転位形成による膵臓癌の進行を防止／阻害／遅延させることができることを発見した。
【００５６】
かくて、上記課題は、下記のいずれか１項に記載した手段により解決される。
１．糖尿病又は糖尿病前駆症状により併発される膵臓癌の治療のために、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビターを使用する。
２．前記第１項において、糖尿病前駆症状は、耐糖能異常又は空腹時血糖異常レベルである。
３．前記第１項において、インヒビターは、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の直接インヒビターである。
４．前記第１項において、インヒビターは、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２受容体インヒビターである。
５．前記第４項において、インヒビターは、ＣＸＣＲ４インヒビターである。
６．前記１〜５のいずれか１項において、インヒビターは、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の信号伝達経路のインヒビターである。
７．前記１〜６のいずれか１項に記載したインヒビターを使用して、糖尿病又は糖尿病前駆症状により併発された膵臓癌の治療のための医薬組成物を製造する。
８．前記１〜６のいずれか１項に記載したインヒビターと、薬理的に許容される担体賦形剤又は補助剤の１つ以上とを組み合せて薬剤とする。
【発明の効果】
【００５７】
本発明により、グルコースレベルの慢性的な増加（慢性過血糖症）が、膵臓癌の進行に重要な役割を担っている事実を背景にして、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビターにより、慢性的過血糖症又は既に進行してしまった膵臓癌の成長、進行及び転位形成による膵臓癌の進行を防止／阻害／遅延させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】ＳＶ４０大Ｔ抗原及びヒトテロメラーゼ（ｈＴＥＲＴ）の触媒性サブユニットを伴うトランスフェクションによって創生されたヒトＰＳＣ細胞系（ＲＬＴ−ＰＳＣ）を示す模式図。
【図２】ＲＬＴ−ＰＳＣヒト細胞系の処理実験計画：慢性過血糖症及びＴＧＦ−β１処理を示す表。
【図３】通常のグルコース濃度に維持された細胞か、又は真正糖尿病をモデルとするために他の処理をしない慢性過血糖症−慢性疾患−にさらされた細胞を分離したＰＳＣｓにおける１００個の遺伝子のヒートマップ（可視化グラフ）。
【図４】選択された１０個の遺伝子のｍＲＮＡレベルにおける遺伝子発現の変化を表すグラフ。
【図５】ヒト膵臓星状細胞におけるタイプ１とタイプ２グルコ−スのトランスポ−タを表わす図。
【図６】膵臓星状細胞の想像図。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本発明で使用する用語「阻害（インヒビション）」は、何ら制限なく、以下に例示する意味で使用される：Ｐ１３Ｋ（ホスホイノシトール  ３−キナーゼ）の阻害、ＦＡＫ（病巣吸着キナーゼ）の阻害、ＳＲＣ（ｖ−癌遺伝子−肉腫（Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｒｕｐｐｉｎ  Ａ−２）ウイルス性腫瘍形成相同物（鳥類））の阻害、マイトゲン−活性化タンパクキナーゼ（ＭＥＫ，ＭＡＰＫ）の阻害、細胞外信号制御キナーゼ１及び２（ＥＲＫ１／２）の阻害、ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ７−ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＮＦＫＢ信号伝達経路の阻害、ワクチン注射及びＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＦＢ２の阻害を発生させる他の全ての方法によるＩＧＦＢＰ２の阻害を含むＣＸＣＬ１２およびＩＧＦＢＰ２の直接阻害、ＣＸＣＲ４の直接阻害、ＣＸＣＬ１２の受容体、ＣＸＣＬ１２信号変換（受容体後の）径路の阻害。
【００６０】
本発明におけるインヒビターを下記に例示する。但し、本発明では、これらのインヒビターに制約されるものではない：
ＣＸＣＬ１２インヒビター
ＮＯＸ−Ａ１２：
製造業者：ノクソン・ファルマシア・アクチエンゲゼルシャフト（Ｎｏｘｘｏｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ａｇ）
標的分子：ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド（ＣＸＣＬ１２）
効果：拮抗剤
剤：４０ｋＤａポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子に結合している４５−ヌクレオチド長オリゴヌクレオチド
剤構造：シュピーゲルマー
【００６１】
ＣＸＣＲ４のＣＸＣＬ１２インヒビター（ＣＸＣＬ１２の受容体）
１）Ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ（ＡＭＤ３１００）
製造業者：ゲンザイム・コーポレーション（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）
別名：Ｍｏｚｏｂｉｌ，１１００７８−４６−１，ｂｉｃｉｋｌａｍ  ＪＭ−２９８７，ＪＭ３１００，ＳＩＤ７９１，１５５１４８−３１−５
標的分子：タイプ４Ｃ−Ｘ―Ｃケモカイン受容体（ＣＸＣＲ４）
効果：拮抗剤
ＩＵＰＡＣ名：１、１’‐［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１、４、８、１１−テトラアザシクロテトラデカン］
適用方法：皮下注射
ＣＡＳ番号：１５５１４８−３１−５３３
ＡＴＣコード：Ｌ０３ＡＸ１６
ＰｕｂＣｈｅｍ：  ＣＩＤ  ６５０１５
ＩＵＰＨＡＲ：リガンダム（ｌｉｇａｎｄｕｍ）：８４４
ＤｒｕｇＢａｎｋ：  ＤＢ０６８０９
【００６２】
２）抗ＣＸＣＲ４（ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８）
製造業者：ブリストルーマイヤーズ・スクイブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）
標的分子：タイプ４Ｃ−Ｘ―Ｃケモカイン受容体（ＣＸＣＲ４）
効果：拮抗剤
剤：完全ヒトモノクロナール抗ＣＸＣＲ４抗体
【００６３】
ＩＧＦＢＰ２−ワクチン：
ＩＧＦＢＰ２アミノ酸１−１６３を符号化するＤＮＡプラスミド−基ワクチン
（ｐＵＭＶＣ３−ｈＩＧＦＢＰ−２マルチ−エピトードプラスミドＤＮＡワクチン）
製造業者：フレド・ハッチンソン・癌研究センター／ワシントン大学癌協会（Ｆｒｅｄ  Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ／Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ）
【００６４】
ＩＧＦＢＰ２−（ＲＧＤドメイン・認識）受容体：インテグリン受容体インヒビター
ＭＥＤＩ−５２２（アバーグリン（Ａｂｅｒｇｒｉｎ））
抗ヒトαＶβ３インテグリンヒト化モノクロナール抗体：
製造業者：ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ  ＬＬＣ
【００６５】
インテツママブ（Ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ（ＣＮＴＯ  ９５））
抗ヒトα・Ｖ・インテグリン・サブユニット・ヒト化モノクロナール抗体：
製造業者：Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，  Ｉｎｃ．
【００６６】
ＥＭＤ５２５７９７
抗ヒトα・Ｖインテグリン・サブユニット・キメラモノクロナール抗体：
製造業者：Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ
【００６７】
シレンジタイド（Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）
インテグリン・インヒビター
製造業者：Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ
【００６８】
ＣＸＣＬ１２信号伝達（後受容体）経路の更なるインヒビター：
ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４−ＰＩ３Ｋ−マーク−ＥＲＫ、及びＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４−ＰＩ３Ｋ−ＦＡＫ−ＳＲＣ−ＥＲＫ経路のインヒビター：
ＣＸＣＬ１２は、その受容体ＣＸＣＲ４に結合して、Ｇ−タンパクに依存した方法で細胞中のＰ１３Ｋを活性化する。
１）ＢＡＹ８０−６９４６
製造業者：バイエル（Ｂａｙｅｒ）３４
２）ＢＫＭ１２０
製造業者：ＣｈｅｍＳｃｅｎｅ  ＬＬＣ
３）ＰＸ−８６６
製造業者：Ｏｎｃｏｔｈｙｒｅｏｎ  Ｉｎｃ．
【００６９】
ＦＡＫ（病巣吸着キナーゼ）インヒビター
１）ＧＳＫ２２５６０９８
製造業者：  グラクソ・スミス・クライン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）
２）  ＰＦ−００５６２２７１
製造業者：  ファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）（Ｖｅｒａｓｔｅｍ，  Ｉｎｃ．）
３）ＰＦ−０４５５４８７８
製造業者：  ファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）
４）  ＶＳ−４７１８，
製造業者：  （Ｖｅｒａｓｔｅｍ，  Ｉｎｃ．）
【００７０】
ＳＲＣ（ｖ−肉腫（Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｒｕｐｐｉｎ  Ａ−２）ウイルス性腫瘍遺伝子類似（鳥類）、第一腫瘍遺伝子チロシン−タンパクキナーゼ、ラウス（Ｒｏｕｓ）−肉腫）インヒビター
１）ＡＺＤ０４２４
製造業者：  アストラ・ゼネカ（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）
２）  Ｄａｓａｔｉｎｉｂ  （ＢＭＳ−３５４８２５，Ｓｐｒｙｃｅｌ）
（経口マルチ−ＢＣＲ／ＡＢＬ；Ｓｒｃ−ファミリーキナーゼ  インヒビター）
ＩＵＰＡＣ名：Ｎ−（２−クローリンー６−メチルフェニル）２−［［６−［４−（２−ヒドキシエチル）−１−ピペラジニール］−２−メチルー４−ピリミジニル］アミノ］−５−チアゾールカルボキシアミド  モノハイドレート。
製造業者：Ｂｉｓｔｒｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ
３）ＫＸ２−３９１
ＣＡＳ  Ｎｏ．  ８９７０１６−８２−９
４）  Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ  （ＡＺＤ０５３０）
製造業者：  アストラ・ゼネカ（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）
【００７１】
マイトゲン―活性タンパクキナーゼ（ＭＥＫ，ＭＡＰＫ）インヒビター
１）インヒビター：ＡＲＲＹ−１４２８８６
製造業者：  Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ
２）  ＢＡＹ  ８６−９７６６
製造業者：バイエル（Ｂａｙｅｒ）
３）Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ  （ＧＳＫ１１２０２１２）
製造業者：グラクソ・スミス・クライン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）
４）  Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ  （ＡＺＤ６２４４）
製造業者：  アストラ・ゼネカ（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）
【００７２】
細胞外−信号−調整キナーゼ１及び２（ＥＲＫ１２）インヒビター
ＥＲＫは、ＭＡＰＫ経路複写プログラミングにおける最後の連結点である。
１）インヒビター：ＳＣＨ７７２９８４
ＣＡＳ  ＮＯ．  ９４１８３−８０−４
化学名：（３Ｒ）−１−［２−オキソ−２−［４−［４−（２−ピリミジニル）−フェニル］−１−［ピペラジニル］エチル］−Ｎ−［３−（４−ピリジニル）−１Ｈ−イミダゾル−５−イル］−３−ピロリデン−カルボキシアミド。
２）  インヒビター：ＢＶＤ−５２３
製造業者：ＢｉｏＭｅｄ  Ｖａｌｌｅｙ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．
【００７３】
ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ７−ＪＡＫ−ＳＴＡＲＴ信号伝達経路インヒビター：
１）Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ
製造業者：  Ｎｏｖａｒｔｉｓ，  Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
２）  ＳＡＲ３０２５０３  （ＴＧ１０１３４８）
ＩＵＰＡＣ名：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−｛５−メチル−２−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イルーアミノ｝−ベンゼンスルホアミド。
ＣＡＳ  Ｎｏ．  ９３６０９１−２６−８．
３）  ＩＳＩＳ−ＳＴＡＴ３Ｒｘ  （ＩＳＩＳ  ４８１４６４）
製造業者：Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．
ＳＴＡＴ３アンティセンス・オリゴヌクレオチド・インヒビター。
４）ＯＰＢ−３１１２１
ＳＴＡＴ３インヒビター。
製造業者：  Ｏｔｓｕｋａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ＆Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．及び
Ｍ．  Ｄ．  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ？）
臨床試験政府同定番号：ＮＣＴ０００９５５８１２
本願は、真性糖尿病に併発する膵臓癌の治療に用いるＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビターの製造も目的とする。
【００７４】
本発明は、薬理学的に許容される添加剤、補助剤、又は基本賦形剤と組み合せたＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビターを含む薬剤をも包含する。
【００７５】
本発明におけるインヒビターは、従来の混合、溶解、造粒化、錠剤被覆、湿潤粉剤への粉砕、ｅｍｕｌｇｅａｔｉｎｇ、カプセル化、融合、又は凍結乾燥等によって、製造される。本発明の薬剤は、インヒビターから薬理学的に適用可能な剤形にするために、従来の方法により、１種以上の生理学的に許容される賦形剤、希釈剤、または助剤と共に調剤される。適当な薬剤の剤形は、治療を行うプロフェッショナルスラッシュ専門家が選択する適用方法によって決定される。
【００７６】
本発明におけるインヒビターは、文献に記載されているように、溶液、懸濁液等局所投与用に調剤される。
【００７７】
系統的な投与を意図する薬剤としては、注射、例えば、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内投与、及び経皮投与、経粘膜投与、又は経口投与が例示される。
【００７８】
本発明のインヒビターは、Ｈａｎｋ−溶液、Ｒｉｎｇｅｒ−溶液又は薬理的食塩水のような、溶液、薬理的に適合性があるｐｕｆｆｅｒｓのような注射剤としても調剤される。これらの溶液は、調剤用補助物質、たとえば、懸濁性、安定性、及び／又は分散性物質を含んでいてもよい。
【００７９】
本発明のインヒビターは、使用する前に、無菌、非発熱性の水のような適当な賦形剤と一緒の紛体の形状でも投与される。
【００８０】
経粘膜投与用に調剤するバリヤーに従って、浸透を促進する物質を併用してもよい。
【００８１】
経口投与用としては、本発明のインヒビターは、文献に公知の薬理的に許容される賦形剤と一緒に適用することができる。これらの賦形剤を使用することにより、本発明のインヒビターを、錠剤、ピル、ｄｒａｇｅｅｓ、カプセル、液剤、シロップ、懸濁液等に調剤して、治療を受けている患者が、経口服用し易くすることができる。粉剤、カプセル、錠剤等経口投与剤形の場合、適当な添加賦形剤としては、例えば、ラクトース、サッカロース、マニトール及びソルビトール等糖類；コーン・スターチ、小麦・スターチ、ライス・スターチ、ポテト・スターチ、ゼラチン、タグラカンタ・ガム、メチル・セルロース、ヒドロキシルーメチルーセルロース、ナトリウムーメチルーセルロース、造粒剤、及び結合剤等のセルロースが例示される。必要ならば、ポリビニル・ピロリドン、アーガー、又はアルギン酸或はアルギン酸ナトリウム等その塩などの崩壊剤を添加してもよい。必要ならば、標準的な方法を使用して、固体の表面に、糖コーチング又は腸内溶解性コーチングを均一に施すこともできる。
【００８２】
水、グリコール、オイル、アルコールは、例えば、懸濁液、エリキシル剤、溶液剤等経口投与液剤に適した補助賦形剤、添加剤、溶解剤に属する。更に、香料、防腐剤、着色剤を使用してもよい。
【００８３】
経口−経粘膜（頬面）投与用剤形は、錠剤、吸収型錠剤等の剤形に調剤するこができる。
【００８４】
前述した薬剤調剤に加えて、本発明の阻害剤は、デポ剤として調剤することもできる。デポ剤は、挿入法（例えば、皮下挿入、又は筋肉内挿入或いは胆管及び膵臓−薬剤溶出−ステント又は筋肉内注射）により投与される。このようなデポ剤を製造するには、本発明の阻害剤を、適当なポリマー又は疎水性物質（たとえば、許容されるオイル内エマルション）又はイオン−交換樹脂或いは弱性溶解塩と一緒に使用する。
【００８５】
さらに、リポソーム、エマルションのような公知の薬剤−放出薬理作用システムを使用することもできる。また、例えば、ジメチル−スルホキシドのような有機溶媒を使用することもできる。本発明のインヒビターは、治療薬剤を含有した固体ポリマーの半透過性マトリックスのような長期放出システムで使用することもできる。このような長期放出システムを提供する種々の材料は製造されていて、当業者には周知である。長期放出カプセルの化学構造に依存するが、化合物は、数週間又は１００日以上にわたって放出される。
【００８６】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖が薬分子に共有結合している場合、治療用化合物の化学構造及び生物学的安定性に応じて、ペグ化を含む、薬を安定化するためのさらなる方法を用いることができる。
【００８７】
さらに、薬剤放出システムとして、薬剤−溶出胆汁ダクト及び膵臓ステントを使用することもできる。これらは、腫瘍が発生している箇所で、インヒビターを直接放出し、高い抗腫瘍予防／治療効果を奏功する。このようなステントを配置する適当な箇所（例えば、内視鏡的逆行性膵管胆管造影法による場合）は、当業者に周知である。
【実施例】
【００８８】
以下、実施例を掲げて本発明を具体的に説明する。尚、実施例は、本発明を、何ら、制限するものではない。
§２ａ：膵臓星状細胞
実験には、ヒトＰＳＣ系（ＲＬＴ−ＰＳＣ）を使用した。慢性膵臓炎に罹患している患者から単離したＰＳＣｓを、ＳＶ４０大Ｔ抗原の形質導入によって固定化した。ヒト・テロメラーゼ（ｈＴＥＲＴ）の触媒的サブユニットを使用して、細胞線を創出した（非特許文献１７）。（図１）。ＲＬＴ−ＰＳＣ細胞連鎖は、ＰＳＣｓの活性と病理学の試験管内研究、及び膵臓内の組織繊維症を導出する病理学的過程を標準化するのに優れた道具である。また、この細胞線を使用して、膵臓癌−併発性表現型及びＰＳＣｓの分泌プロファイルを研究することができる。図１は、アルファ−平滑筋アクチン（ａＳＭＡ）のタンパク発現が、ＲＬＴ−ＰＳＣ細胞連鎖の細胞のほぼ１００％検知可能であったことを表わしている（非特許文献１７）。
【００８９】
§２ｂ：細胞の培養
１０％の胎児牛血清（ＦＢＳ）を含み、且つ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００ｍｉｃｒｉｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び１％のＬ−グルタミンを補充したＧｉｂｃｏ（登録商標）ＤＭＥＭ（５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度のＤｕｌｂｅｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して、湿度１００％及びＣＯ２濃度５％を含む環境で温度３７℃にて、細胞を培養した。トリプシンＥＤＴＡを使用して、８５−９０％の集塊で細胞を通過させた。細胞を、下記の実験計画に従って処理した：
【００９０】
§２ｃ：処理実験計画−慢性過血糖状態への露出及びＴＧＦ−ベータ１による処理：
図２は、種々の治療群における、ＲＬＴ−ＰＳＣ細胞系の処理実験計画−慢性過血糖状態への露出及びＴＧＦ−ベータ１による処理を示している。
上述した方法によって、対照（Ｃｎｔｒｌ）群の細胞を、５．５ｍｍｏｌ／Ｌの高グルコース濃度のＧｉｂｃｏ（登録商標）ＤＭＥＭを使用して培養した。
上述した方法によって、１５．３ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度のＧｉｂｃｏ（登録商標）ＤＭＥＭを使用して高グルコース群の細胞を培養した。両群における細胞を３週間（２１日）培養した。３週間（２１日）に設定した理由は、この時間フレームが、慢性過血糖症（真性糖尿病、空腹時血中ブドウ糖不良、空腹時ブドウ糖耐毒性）を特徴とする疾病を標準化するのに適していること、及び実験により、この長時間フレームで、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク生産の変化に最高の反応を示したことによる。次いで、細胞を、ＦＢＳ−不存在の培地で２４時間培養し、その後ＴＧＦ−ベータ１（ｃｃ＝５ｎｇ／ｍＬ）を含む又は含まない培養培地で４８時間培養した（図２）。それぞれのレジメンに対して、４つの平行ウェルを使用した。
培養後、細胞を採取して、ＲＮＡ及びタンパクを分析した。免疫細胞化学のために、細胞をＬａｂ−Ｔｅｋ  （Ｎｕｎｃ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．  ＫＧ  ウイスバーデン  ドイツ）プレートの上で成長させた。実験を３回繰り返した。
【００９１】
３  種々の処理をした後のＲＬＴ−ＰＳＣ結合培地の分析：
△ｍＲＮＡレベルにおける遺伝子発現プロファイル変化の解析：
§３ａ：遺伝子発現Ｃｈｉｐ（Ａｒｒａｙ）
ＴＧＦＢ−１ＲＮＡの存在又は不存在における刺激の４８時間後、ＲＮｅａｓｙ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，ドイツ）を使用してＲＮＡを単離した。バイオラド・バイオアナライザー（ＢｉｏＲａｄ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ）を使用して、単離したＲＮＡの終結性を分析して、総ての単離したＲＮＡサンプルのＲＩＮが７以上（平均値ＲＩＮ＝９．２±ＳＤ０．４）であることを実証した。
【００９２】
２つの生物学的複製を各グループ内でプールし、２つの技術的複製を、それぞれプールしたサンプルグループから、ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）ＰｒｉｍｅＶｉｅｗ（登録商標）ヒト遺伝子発現アレイにハイブリッド形成した。ビオチン化ａＲＮＡプローブを、２００ｎｇの総ＲＮＡから合成し、製造業者の指示（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ，ＵＳＡ−ｈｔｔｐ：／／ｍｅｄｉａ．ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ．ｃｏｍ／ｓｕｐｐｏｒｔ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ｍａｎｕａｌｓ／３＿ｉｖｔ＿ｅｘｐｒｅｓｓ＿ｋｉｔ＿ｍａｎｕａｌ．ｐｄｆ）に従って、３’ＩＶＴ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｋｉｔを使用して細分化した。
【００９３】
細分化したａＲＮＡサンプル１０μｇを、それぞれ、ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）ＰｒｉｍｅＶｉｅｗ（登録商標）ヒト遺伝子発現配列（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）内で、４５℃、６０ｒｐｍで１６時間かけてハイブリッド化した。ハイブリッド化したマイクロアレイを洗浄し、ＦＳ４５０＿００１−流体力  学スクリプトとＦｌｕｉｄｉｃｓ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ４５０（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）装置を適用する抗体増幅染色法を使用して染色した。次いで、製造業者に指示に従って、スキャナー３０００（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）で、蛍光信号を検知した。
【００９４】
Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒソフトウェア（バージョン２．１１）パッケージを備えた”Ｒ”（ソフトウエアーバージョン２．１５）面を使用して、ＣＥＬファイルから、データを抽出した。ＲＭＡ標準化を行って、データをＬｏｇ２符号化に変換し、”ｌｉｍｍａ”及び”ｓａｍｔｏｏｌｓ”パッケージを使用して、線形モデルとＳＡＭ（マイクロアレイの重要分析（Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ））により、特徴選択を行った。
【００９５】
遺伝子（ｍＲＮＡ）発現値を、予め、通常のグルコ−ス濃度（５．５ｍｍｏｌ／Ｌ）（対照）で３週間培養した非処理の対照群のＰＳＣ細胞から単離したサンプルと比較した差次的発現変動上に配列した。
【００９６】
目視実証のための階段的クラスタリングを使用して、対照と観察された条件を明確に区別した２組の遺伝子を選択した：一方は１００個の遺伝子を含み、他方は３００個の遺伝子を含んでいた。これを、図３にヒートマップ（可視化グラフ）として示して可視化した。すべてトップの３００（１００）の差次的に発現した遺伝子は、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ−ソフトウェア−（バージョン１０．０）及びｐ−値１０−４に片側−スチュ−デント検定を使用した対照とは明らかに異なっていた。然しながら、差次的に変動発現した遺伝子のフォールド・チェンジ（ｆｏｌｄ−ｃｈａｎｇｅ）発現値の総てが、製造業者が示唆した発現限界値に達していたわけではなかった。
【００９７】
重要な信号伝達経路、ネットワーク、及び潜在的疾病を同定し、且つ分類するために、ＫＥＧＧ径路及びＷＩＫＩ径路自由データベースを使用した。差次的変動発現に基づく、種々の処理によって変化した径路をランク付けし、且つ、生物学的妥当性を考慮した後で、リアルタイムＲＴＰＣＲ法を使用して、更なる検証のため、一群の種々の差次的遺伝子を選択した：ＤＵＳＰ１，ＤＵＳＰ１０，ＴＸＮＩＰ，ＣＸＣＬ１２，ＤＰＰ４，ＶＣＡＮ，ＦＯＳ，ＬＴＢＰ２，ＥＧＲ１，ＣＯＬ５ａ１，ＴＨＢＳ１，ＰＰＡＲｇ，ＲＮＤ３，ＭＭＰ１，ＢＭＰ２，ＣＴＧＦ（本発明者は、ウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖから利用できる正式の遺伝子名略記法を使用した。）。図３に、ＰＳＣｓにおける差次的発現した上位１００個の遺伝子のヒートマップ（可視化グラフ）を示した。尚、図３には、通常のグルコース濃度で保存された細胞、又は、慢性的過血糖状態に曝されている細胞と、真正糖尿病―慢性疾患を標準化するために処理していない細胞とを明確に分離して示してある。前記ヒートマップ（可視化グラフ）のラベルの説明は、以下の通りである：０１＿１Ｋ１Ａ＿０１＿１Ｋ１Ｂ＿０１Ａ＿１Ｋ２Ｂ＿０１Ａ＿１Ｋ２ＡのＰＳＣサンプル；通常濃度（５．５ｍｍｏｌ／Ｌ  グルコースｃｃ）からの４個の平行ラン；及び高グルコース濃度（１５．３ｍｍｏｌ／Ｌ）に曝された治療群０６＿２Ｋ２Ａ＿０６２Ｋ１Ａ＿０６２Ｋ１Ｂ）。
【００９８】
§３ｂ：リアル−タイムＲＴ−ポリメラーゼ連鎖反応（確認）
Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）を適用するＲＴ−ＰＣＲキットとしてのスパー・スクリプト−第一ストランド・合成システム（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）（インビトロゲン・カールスルーヘ・ジャーマニー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用して、製造業者が推奨する条件下で、デオキシリボヌクレアーゼ１−増幅グレード（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．  Ｌｏｉｕｓ，ＭＯ）で、ＤＮａｓｅを消化した後で、１μｇのＲＮＡから第一ストランドｃＤＮＡを合成した。製造業者が推奨する条件下で、ＡＢＩ７０００配列検知システム（ＡＢＩ７０００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）において、ＴａｑＭａｎ（登録商標）評価を備えた遺伝子発現分析（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）を使用して、１６個の遺伝子それぞれに、ｃＤＮＡリアル−タイムＰＣＲ評価を行った。得た結果を、１８ＳｒＲＮＡに標準化した。各遺伝子の遺伝子発現を、３ＲＴ−ＰＣＲランに記録した。各遺伝子の遺伝子発現は、サイクル限界値（ＣＴ）を基礎にした参照遺伝子に対する第１標準化であった：ΔＣＴ［検査済み遺伝子］＝ＣＴ［検査済み遺伝子］−ＣＴ［参照遺伝子］；次いで、相対的遺伝子発現値を、倍変動として計算した。これは、２−ΔΔＣＴに等しい。ここで、ΔΔＣＴ＝ΔＣＴ［観察したサンプル］−ΔＣＴ［対照サンプル］。
【００９９】
対照サンプルは、５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で保存され、その後成長要素（ＴＧＦ−ベータ）で処理しなかったＰＳＣ培養から単離したサンプルに対応し、図の対照サンプルは、ラベル「１０００Ｋ」で示した。選択した１０個の遺伝子のｍＲＮＡレベルにおける遺伝子の平均フォールド・チェンジ（ｆｏｌｄ−ｃｈａｎｇｅを図４に示した；ＣＸＣＬ１２及びＤＰＰ４の遺伝子発現の変動は、別のセクションでも示してある）。異なる処理をしたサンプルは、以下の通りに標識を付けた：
１０００Ｋ＝ＰＳＣｓから単離したサンプルを５．５ｍｍｏ／Ｌグルコース濃度で培養し、次いでＴＧＦ−ベータ１で処理しなかった。
２７５０Ｋ＝慢性過血糖状態に曝し（１５．３ｍｍｏ；／Ｌ−３週間）、次いで、何ら処理せず。
１０００ＴＧＦ＝５．５ｍｍｏ／Ｌグルコース濃度，次いでＴＧＦ−ベータ１で処理（ｃｃ＝５ｎｇ／ｍＬ，４８時間）。
２７５０ＴＧＦ＝慢性過血糖状態に曝し（１５．３ｍｍｏ；／Ｌ−３週間）、次いで、ＴＧＦ−ベータ１で処理（ｃｃ＝５ｎｇ／ｍＬ，４８時間）。
【０１００】
§３ｃ：慢性過血糖状態に曝したＰＳＣｓ中のｍＲＮＡレベルにおけるＣＸＣＬ１２遺伝子発現のリアル−タイムＲＴ−ＰＣＲ（評価）。
製造業者の実験計画及び推奨［Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＴｓｑＭａｎｒ（登録商標），遺伝子発現カタログ＃４３３１１８２  ヒト・スピーシズ評価分析（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃａｔ．＃４３３１１８２  Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）］及びＦＡＭ染料とアンプリコン長７７ｂｐを使用して、ケモカインリガンド（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２ｍＲＮＡ発現を定量解析した。§３ｂに記載したようにして、結果を計算し、ＰＳＣｓを異なる処理をした後の結果を表２に示した。
【表２】
2016529278.tif 000003
【０１０１】
ラベルの説明：
１０００Ｋ＝ＰＳＣｓから単離したサンプルを５．５ｍｍｏ／Ｌグルコース濃度で培養し、次いでＴＧＦ−ベータ１で処理しなかった。
２７５０Ｋ＝慢性過血糖状態に曝し（１５．３ｍｍｏ；／Ｌ−３週間）、次いで、何ら処理せず。
１０００ＴＧＦ＝５．５ｍｍｏ／Ｌグルコース濃度，次いでＴＧＦ−ベータ１で処理（ｃｃ＝５ｎｇ／ｍＬ，４８時間）。
２７５０ＴＧＦ＝慢性過血糖状態に曝し（１５．３ｍｍｏ；／Ｌ−３週間）、次いで、ＴＧＦ−ベータ１で処理（ｃｃ＝５ｎｇ／ｍＬ，４８時間）。
【０１０２】
§４ａ：膵臓星状細胞におけるグルコース・トランポータ（グルコース輸送体）の同定
従来、膵臓星状細胞におけるグルコース・トランポータは、同定されていなかった。どのグルコース・トランポータがＰＳＣに存在しているのか、免疫細胞化学／免疫蛍光分析を行った。メタノールで細胞を固定した。固定、透過及び非特定のタンパク−タンパク相互作用（２％ＢＳＡで２２℃、３０分間）遮断の後、一次抗体で細胞を、＋４℃で、一晩培養した。
【０１０３】
Ａｌｅｘ  Ｆｌｕｏｒ５６８（赤）に結合されたポリクロナール山羊抗ラビット（Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ０ｒａｂｉｔ）ＩＦＧ（Ｈ＋Ｌ）を１／１０００稀釈して、二次抗体として、１時間使用した。細胞をＤＡＰ１（ブルー）で対比染色した。図５は、免疫細胞化学を使用したＲＬＴ−ＰＳＣ細胞及びウェスタン・ブロットの、ヒト膵臓星状細胞におけるタイプ１とタイプ２グルコース・トランスポータの同定を示している。この実験で使用した抗体を表３に示した。
【表３】
2016529278.tif 000004
【０１０４】
§４ｂ：慢性過血糖状態に曝した後の膵臓星状細胞の活性化（トランス・分化）及びコラーゲン−１の生産
慢性過血糖症のために、ＰＳＣｓがトランス・分化（活性化）を受けることを実証するために、細胞質の中のアルファ−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）の繊維構造を解析した。さらに、膵臓中のコラーゲンタイプ１及び３のような活性化されたＰＳＣｓが、種々の疾病における細胞外マトリックスタンパク（ＥＣＭ）の主要源なので、免疫細胞化学の手法を利用して、細胞内コラーゲン−１を分析した。
【０１０５】
メタノールで細胞を固定し、表４に記載した一次抗体を使用して、§４ａに記載した実験計画に従って処理し、その代表的な実験の結果を図６に示した。図６は、膵臓星状細胞の活性化と、慢性過血糖症またはＴＧＦ−ベータ処理するとタイプ−１のコラーゲンが生産されることを示している。
【表４】
2016529278.tif 000005
【０１０６】
図６は、膵臓の星状細胞の写真である。図６において、左側の２枚は通常のグルコース濃度の培地に３週間保持した「未処理（対照＝Ｃｏｎｔｒｏｌ）細胞」である；中央の２枚の写真は、ＴＧＦ−ベータ１（濃度＝５ｎｇ／ｍｌ）で４８時間処理した「ＴＧＦβ１」；右側の２枚の写真は、過血糖状態（グルコース濃度＝１５．３ｍｍｏｌ／Ｌ）に３週間曝した細胞の写真である。実験は、ヒト膵臓星状細胞系（ＲＬＴ−ＰＳＣ）の膵臓星状細胞を使用して行った。ヒト膵臓星状細胞系（ＲＬＴ−ＰＳＣ）は、ヒト膵臓から抽出し、ＳＶ４０ラージＴ抗原及びヒトテロメラーゼ（ｈＴＥＲＴ）のトランスフェクションにより固定して製造した。（非特許文献１７）
【０１０７】
細胞質内−アルファ−平滑筋（α−ＳＭＡ）の量の増加が観察された。すなわち免疫細胞化学を利用した繊維質構造の形成と、タイプ−１コラーゲンの量の増加を、慢性過血糖状態に曝した反応として、活性化された状態で観察することができた。成長要素−ＴＧＦ−べ−タ−１の活性化過程に対する関与は周知であった。
【０１０８】
§５ａ：膵臓星状細胞を慢性過血糖症状態に曝すことによって、同定した標的分子のタンパクレベルの評価：
ＣＸＣＬ１２
既に報告した３つの生物学的サンプルのヒトＣＸＣＬ１２タンパクの量を測定した。各サンプルは、製造業者（Ｈｕｍａｎ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号：ＤＳＡ００）が指定した条件を使用して、ウェル当たり固相サンドイッチ（Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓａｎｄｗｉｃｈ）ＥＬＩＳＡと、１０ｕＬの培養上澄み液を使用した技術的複製を備えていた：製造業者が提供した溶液と、標準（公知）ＣＸＣＬ１２濃度を使用する標準カーブのＲ２値＝０．９９８３）．ＰＳＣｓによって分泌されたヒトＣＸＣＬ１２タンパクの量を、処理群に従って、表５に示した。ＥＬＩＳＡ測定を使用した、同定した標的分子ＣＸＣＬ１２の、定量的変化を表５に示した。慢性過血糖症状態に曝した（グルコース濃度＝１５．３ｍｍｏ；／Ｌ−３週間）後における、ヒト膵臓星状細胞は、そのＣＸＣＬ１２分泌＊を増加させた。
【０１０９】
【表５】
2016529278.tif 000006
＊）＊を付けた変化は、一元配置ＡＮＯＶＡを使用した重要な変化である。
【０１１０】
ＩＧＦＢＰ２
既に報告した３つの生物学的サンプルのヒトＩＧＦＢＰ−２タンパクの量を測定した。各サンプルは、製造業者（Ｈｕｍａｎ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号：ＧＢ２００）が指定した条件を使用して、ウェル当たり固相サンドイッチ（Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓａｎｄｗｉｃｈ）ＥＬＩＳＡと、５０ｕＬの培養上澄み液を使用した技術的複製を備えていた：製造業者が提供した溶液と、標準（公知）ＩＧＦＢＰ−２濃度を使用する標準カーブのＲ２値＝０．９６４）．ＰＳＣｓによって分泌されたヒトＩＧＦＢＰ２タンパクの量を、処理群に従って、表６に示した。
表６：［ＥＬＩＳＡ測定を使用した、同定した標的分子ＩＧＦＢＰ２の定量的変化におけるタンパクの変化。慢性過血糖症状態に曝した（グルコース濃度＝１５．３ｍｍｏ；／Ｌ−３週間）後における、ヒト膵臓星状細胞は、そのＩＧＦＢＰ２分泌＊を増加させた］
【０１１１】
【表６】
2016529278.tif 000007
＊）＊を付けた変化は、一元配置ＡＮＯＶＡを使用した重要な変化である。
【０１１２】
本発明では、下記のラベルを使用して、表５及び表６の種々の処理群からのＰＳＣｓのサンプルを示した。
１０００Ｋ＝５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で、３週間培養した後、ＴＧＦ−ベータ１で処理しなかったＰＳＣｓから単離した対照サンプル。
１０００ＴＧＦ＝５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で、３週間培養した後、ＴＧＦ−ベータ１（ＣＣ＝５ｎｇ／ｍＬ；４８時間）処理したＰＳＣｓ培養から単離したサンプル。
２７５０Ｋ＝過血糖症状態に曝した（ＣＣ＝１５．３ｍｍｏｌ／ｍＬ−３週間）ＰＳＣｓからのサンプル。
２７５０ＴＧＦ＝過血糖症状態に曝した（１５．３ｍｍｏｌ／ｍＬ−３週間）後、ＴＧＦ−ベータ１（ＣＣ＝５ｎｇ／ｍＬ；４８時間）処理したＰＳＣｓからのサンプル。
【０１１３】
６．ジフェニル−ペプチターゼ４（ＤＰＰ４，遺伝子ＩＤ：１８０３）及び種々の処理をした膵臓星状細胞系：
ジフェニル−ペプチターゼ４（ＤＰＰ４，  遺伝子ＩＤ：１８０３）タンパクには、２つの形がある：膜結合形と可溶形である。ＤＰＰ４の酵素的活性は、２量化状態のとき、多くのタンパク分子からＮＨ２−末端において、２個のアミノ酸を放出し、ＣＸＣＬ１２を含む重要な生物学的機能を奏功する。重要な生物学的機能を奏功する多くのタンパクは、例えば；インクレチンホルモン又はＤＰＰ４処理（ＮＨ２−末端残基の開裂）の結果として、それらの生物学的活性のＣＸＣＬ１０ルース（ｌｏｏｓｅ）がある。従って、変異−ｍＲＮＡ発現及びＤＰＰ４ｍＲＮＡ発現のＣＸＣＬ１２変化のタンパクレベルをもたらす処理が、ｍＲＮＡ発現配列におけるＤＰＰ４又は細胞培養培地におけるＤＰＰ４の酵素的活性に強い影響を及ぼすことを解析することが極めて重要である。
【０１１４】
［方法及び結果］
ＤＰＰ４ｍＲＮＡ発現を、発現配列から計算し、得た結果を表７に示した。
【表７】
2016529278.tif 000008
【０１１５】
次いで、製造業者が指定したＴＡＱＭａｎ  （ＡＢＩ，カタログ番号＃４３３１１８２）定量法を使用し、（§３ｂに記載した）リアル−タイム・ＲＴ−ポリメラーゼ連鎖反応（Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）において、ｍＲＮＡレベルにおけるＤＰＰ４の遺伝子発現を実証した。得た結果を表８に示した。
【表８】
2016529278.tif 000009
【０１１６】
本発明では、下記のラベルを使用して、表７及び表８の種々の処理群からのＰＳＣｓのサンプルを示した。
１０００Ｋ＝５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で、３週間培養した後、ＴＧＦ−ベータ１で処理しなかったＰＳＣｓから単離した対照サンプル。
１０００ＴＧＦ＝５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で、３週間培養した後、ＴＧＦ−ベータ１（ＣＣ＝５ｎｇ／ｍＬ；４８時間）処理したＰＳＣｓ培養から単離したサンプル。
２７５０Ｋ＝過血糖症状態に曝した（ＣＣ＝１５．３ｍｍｏｌ／ｍＬ−３週間）ＰＳＣｓからのサンプル。
２７５０ＴＧＦ＝過血糖症状態に曝した（１５．３ｍｍｏｌ／ｍＬ−３週間）後、ＴＧＦ−ベータ１（ＣＣ＝５ｎｇ／ｍＬ；４８時間）処理したＰＳＣｓからのサンプル。
【０１１７】
ＰＳＣ培養上澄み液のＤＰＰ４酵素的活性の測定
総て異なる処理群及び対照群における培養したヒト固定化ＰＳＣ細胞連鎖の上澄み液において、ＤＰＰ４酵素的活性を測定した。測定は、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ  Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，米合衆国）読取器に設置された反応速度アッセイに基づく連続モニター・マイクロプレート（コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ））を使用し、３７℃で行った。１００ｕＬＰＳＣ上澄み液を除去し、反応は、Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ（１００ｍＭ，ｐＨ：７．６）バッファーと、最終濃度３ｍＭ中の基質としてＨ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ＊ｐ−ｔｏｓｙｌａｔｅ（Ｂａｃｈｅｍ，  ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，  スイス、カタログ番号：Ｌ−１２９５０１００）を使用し、総反応量１２５ｕＬで終了した。ＧｌｙＰｒｏ−ｐ−ニトロアニリドからのｐ−ニトロアニリドのＤＰＰ４−タンパク分解酵素放出による、４０５ｎｍ（ＯＤ４０５）におけるＵＶ吸収の増加を３０分間モニターした。ＧｌｙＰｒｏ−ｐ−ニトロアニリドを添加する前の反応混合物のＯＤ４０５値を、３０分間で得た値から差し引き、且つ、２つの空試験（ＰＳＣ上澄み液を含まない試験のＯＤ４０５の平均を差し引いて、タンパク分解活性の測定値として、ＯＤ４０５値の実際の増加分を表わした。ファクターを計算した後、得た結果をリッター当たり単位（Ｕ／Ｌ）で表した。ＤＰＰ４酵素的活性値を表９に示した。
【表９】
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【０１１８】
下記に、本実施例で使用した表９に示した異なる処理群からのＰＳＣｓのサンプルを示した。
１０００Ｋ＝５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で、３週間培養した後、ＴＧＦ−ベータ１で処理しなかったＰＳＣｓから単離した対照サンプル。
１０００ＴＧＦ＝５．５ｍｍｏｌ／Ｌグルコース濃度で、３週間培養した後、ＴＧＦ−ベータ１（ＣＣ＝５ｎｇ／ｍＬ；４８時間）処理したＰＳＣｓ培養から単離したサンプル。
２７５０Ｋ＝過血糖症状態に曝した（ＣＣ＝１５．３ｍｍｏｌ／ｍＬ−３週間）ＰＳＣｓからのサンプル。
２７５０ＴＧＦ＝過血糖症状態に曝した（１５．３ｍｍｏｌ／ｍＬ−３週間）後、ＴＧＦ−ベータ１（ＣＣ＝５ｎｇ／ｍＬ；４８時間）処理したＰＳＣｓからのサンプル。
【０１１９】
ＤＰＰ４ｍＲＮＡ発現と酵素的活性測定から得た結果の説明。
リアル−タイムＲＴ−ＰＣＥ結果に基づいて、膵臓星状細胞の慢性過血糖症状態に曝した後、ＤＰＰ４ｍＲＮＡ発現を下方調整した。然しながら、これらの変化は、発現配列に傾向として僅かに観察されに過ぎなかった。培養したＰＳＣｓの上澄み液には、慢性過血糖症状態に曝した後で、ＤＰＰ４酵素的活性には、顕著な変化は観察されなかった。
【０１２０】
従って、慢性過血糖症状態に曝したＰＳＣｓの上澄み液におけるＣＸＣＬ１２タンパクレベルの増加は、ＣＸＣＬ１２分子のＮ−末端基の２個のアミノ酸を放出するＤＰＰ４酵素的活性の増加を伴うものではない。対照的に、ｍＲＮＡレベルでのＤＰＰ４遺伝子発現は、むしろ、下方制御された。実施例は、ＤＰＰ４によるＣＸＣＬ１２の開裂は、確かに増加していないので、慢性過血糖症状態に曝した結果として、ＰＳＣｓの細胞培養培地に発生する過剰のＣＸＣＬ１２タンパクは、ＤＰＰＰ４酵素による増加した減成を随伴するものではないということを実証した。
【０１２１】
従来の技術レベルでは、真正糖尿病と、ヒト膵臓星状細胞によるＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の分泌物の増加に関係があるということは知られていなかった。過血糖症、真正糖尿病の特徴により誘導された反応、及び膵臓腫瘍細胞の悪質性を決定する生物学的特質に影響を与える反応が、腫瘍細胞に対抗する免疫反応を弱化する増殖を加速し、さらに、血管新生を促進し、化学及び放射線治療に対する腫瘍の抵抗を誘起する。従来の技術レベルでは、ヒト膵臓星状細胞によるＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２の分泌物の増加が、グルコースレベルが、通常のグルコースレベルより慢性的に高いことが特徴の真性糖尿病に関係があるとは認識されていなかったので、本発明は、この重大な偏見を克服したものである。
【産業上の利用可能性】
【０１２２】
本発明は、グルコースレベルの慢性的な増加（慢性過血糖症）が、膵臓癌の進行に重要な役割を担っている事実を背景にして、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビターにより、慢性的過血糖症又は既に進行してしまった膵臓癌の成長、進行及び転位形成による膵臓癌の進行を防止／阻害／遅延させることを要旨とする。従って、ＣＸＣＬ１２及びＩＧＦＢＰ２インヒビターを活性成分とする膵臓癌の化学治療薬の開発に資する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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