(57)【要約】急性腎損傷及び／またはその続発症を治療または予防するために、αｖβ５またはβ５に特異的に結合する抗体及び抗体フラグメントを使用する方法が開示される。一局面において、急性腎損傷の治療、予防、またはその重症度の軽減を必要とするヒト対象における急性腎損傷を治療する、予防する、またはその重症度を低減するための方法が提供され、この方法は、前記ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性腎損傷の治療、予防、またはその重症度の軽減を必要とするヒト対象における急性腎損傷を治療する、予防する、またはその重症度を低減するための方法であって、前記ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記抗体または前記その抗原結合フラグメントが、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と競合する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項３】
前記抗体または前記その抗原結合フラグメントが、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された前記抗体のＫａｂａｔ定義に従う、重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項４】
前記抗体または前記その抗原結合フラグメントが、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された前記抗体のＫａｂａｔ定義に従う、軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３をさらに含む、請求項３に記載の前記方法。
【請求項５】
前記抗体または前記その抗原結合フラグメントが、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された前記抗体のヒト化形態である、請求項１に記載の前記方法。
【請求項６】
前記抗体または前記その抗原結合フラグメントが、静脈内、皮下、または動脈内投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項７】
前記ヒト対象が、急性腎損傷ネットワーク基準またはリスク／損傷／機能不全／腎機能喪失／末期腎不全基準に基づき急性腎損傷を有すると特定されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項８】
前記ヒト対象が、健常対照対象と比較して、上昇したレベルの血清中クレアチニン、血漿中クレアチニン、尿中クレアチニン、または血中尿素窒素を有すると特定されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項９】
前記ヒト対象が、健常対照対象と比較して、上昇したレベルの血清もしくは尿中好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、血清もしくは尿中インターロイキン−１８、血清もしくは尿中シスタチンＣ、または尿中ＫＩＭ−１を有すると特定されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項１０】
前記急性腎損傷が虚血性急性腎損傷である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項１１】
前記ヒト対象が減少した有効動脈血液量を有すると特定されている、請求項１０に記載の前記方法。
【請求項１２】
前記ヒト対象が血管内容量減少を有すると特定されている、請求項１０に記載の前記方法。
【請求項１３】
前記血管内容量減少が、出血、胃腸機能喪失、腎臓機能喪失、皮膚及び粘膜機能喪失、ネフローゼ症候群、肝硬変、または毛細血管漏出に起因する、請求項１２に記載の前記方法。
【請求項１４】
前記ヒト対象が心拍出量の低下を有すると特定されている、請求項１０に記載の前記方法。
【請求項１５】
前記心拍出量の低下が、心原性ショック、心膜疾患、うっ血性心不全、心臓弁膜症、肺疾患、または敗血症に起因する、請求項１４に記載の前記方法。
【請求項１６】
前記ヒト対象が全身血管拡張を有すると特定されている、請求項１０に記載の前記方法。
【請求項１７】
前記全身血管拡張が、肝硬変、アナフィラキシー、または敗血症によって引き起こされる、請求項１６に記載の前記方法。
【請求項１８】
前記ヒト対象が腎臓血管収縮を有すると特定されている、請求項１０に記載の前記方法。
【請求項１９】
前記腎臓血管収縮が、初期敗血症、肝腎症候群、急性高カルシウム血症、薬物、または放射線造影剤によって引き起こされる、請求項１８に記載の前記方法。
【請求項２０】
前記急性腎損傷が腎毒性急性腎損傷である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２１】
前記ヒト対象が腎毒素に曝露されている、請求項２０に記載の前記方法。
【請求項２２】
前記腎毒素が、抗生物質、化学療法薬、カルシニューリン阻害剤、アムホテリシンＢ、及びＸ線撮影造影剤から成る群から選択される腎毒性薬物である、請求項２１に記載の前記方法。
【請求項２３】
前記腎毒素が違法薬物または重金属である、請求項２１に記載の前記方法。
【請求項２４】
前記ヒト対象が外傷性損傷または圧挫損傷を被っている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２５】
前記ヒト対象が臓器移植手術を受けている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２６】
前記臓器移植手術が腎臓移植手術または心臓移植手術である、請求項２５に記載の前記方法。
【請求項２７】
前記ヒト対象が低灌流を伴う手術を受けている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２８】
前記ヒト対象が心胸郭手術または血管手術を受けている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項２９】
前記ヒト対象が正常な排尿を妨害する薬剤を服用している、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項３０】
前記薬剤が抗コリン薬である、請求項２９に記載の前記方法。
【請求項３１】
前記ヒト対象が前立腺肥大症を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項３２】
前記ヒト対象が癌を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項３３】
前記癌が、前立腺癌、卵巣癌、または大腸癌である、請求項３２に記載の前記方法。
【請求項３４】
前記ヒト対象が腎臓結石を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項３５】
前記ヒト対象が尿路カテーテルの閉塞を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項３６】
前記ヒト対象が、結晶尿を引き起こすか、もしくはもたらす薬物、ミオグロビン尿症を引き起こすか、もしくはもたらす薬物、または膀胱炎を引き起こすか、もしくはもたらす薬物を服用している、請求項１〜９のいずれか一項に記載の前記方法。
【請求項３７】
前記ヒト対象が、αｖβ５インテグリン阻害剤、αｖβ６インテグリン阻害剤、ＣＸＣＲ４拮抗薬、ＩＬ−６阻害剤、ＩＬ−１α阻害剤、ＩＬ−１２阻害剤、ＭＩＰ−１−α阻害剤、ＡＰ２１４、ＴＨＲ−１８４、ＱＰＩ−１００２、ヒトアルカリホスファターゼ、抗アポトーシス剤、抗ネクローシス剤、抗炎症剤、抗敗血症剤、成長因子、血管拡張剤、フリーラジカルスカベンジャー、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、Ｃ５ａ受容体拮抗薬、及びα−メラニン細胞刺激ホルモンから成る群から選択される第２の治療薬を投与される、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１５日に出願された米国特許仮出願第６１／７９２，６８１号、及び２０１３年１１月１日に出願された米国特許仮出願第６１／８９８，８１１号に対する優先権の利益を主張し、これら両方の内容は、参照により本明細書にその全体が組み込まれる。
（技術分野）
【０００２】
本発明は、概して、急性腎損傷の治療または予防のための、アルファｖベータ５（αｖβ５）インテグリンに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
急性腎損傷（以前は急性腎不全として知られていた）は、腎臓の重症の炎症及び損傷であり、時には完全な腎不全をもたらす。急性腎損傷は、腎臓の排泄機能の急速な喪失を特徴とし、典型的に、窒素代謝の最終産生物（尿素及びクレアチニン）の蓄積もしくは尿量の減少、または両方によって診断される。これは、急性に腎臓に影響を及ぼすいくつかの障害の臨床症状である。急性腎損傷を有したことのある患者は、慢性腎臓疾患を発症する危険性が高い。
【０００４】
急性腎損傷は、病院患者において一般的であり、危篤患者において非常に一般的な症状である。院内感染性急性腎損傷は、西側世界でおよそ２百万人の患者が罹患している。よってこれは入院の過程を複雑化させ、入院患者に対してより悪い臨床結果を前兆する、重大な臨床問題を課す。
【０００５】
急性腎損傷診断は、高齢化、腎毒性薬物または病院内感染への曝露の増加、ならびに外科的処置の数の増加を部分的な原因として増加している。腎不全の重症度に応じて、死亡率は、およそ３５％を平均として７％〜最大８０％の範囲である。毎年、欧州、米国、及び日本におけるおよそ７０万人の死は、この疾患に関連する。
【０００６】
したがって、急性腎損傷及びそれに続く合併症を治療または予防することができる治療薬の高い必要性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、αｖβ５及び／またはβ５に特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを使用する方法、ならびに急性腎損傷を治療する、予防する、またはその症状または重症度を低減することにおけるそれらの使用を対象とする。
【０００８】
一態様では、本出願は、急性腎損傷の治療、予防、またはその重症度の軽減を必要とするヒト対象における急性腎損傷またはその合併症を治療する、予防する、またはその重症度を低減するための方法を開示する。本方法は、ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５インテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５拮抗薬である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体はＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と競合し、抗体のエフェクター機能は低減または除去される。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗体はＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と同じエピトープに結合し、抗体のエフェクター機能は低減または除去される。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体の、重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体の、軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３をさらに含む。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体の、ヒト化形態である。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体のヒト化形態であり、抗体のエフェクター機能は低減または除去される。
【００１０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換（すなわち、２、１、または０の置換）を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミ��酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００１１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上の段落に記載されるＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３を含むことに加え、配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３をさらに含む。特定の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上の段落に記載されるＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３を含むことに加え、配列番号２８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２９を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号３０を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３をさらに含む。
【００１２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含むヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２７に示されるアミノ酸��列または２つ以下の置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号２８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２９を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号３０を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含むヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。
【００１３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、ヒト化抗体のエフェクター機能は低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、ヒト化抗体のエフェクター機能は低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＶＤＲ３；配列番号２８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２９を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号３０を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。
【００１４】
他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３、を含むヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、静脈内、皮下、または動脈内投与される。
【００１６】
特定の実施形態では、ヒト対象は、急性腎損傷ネットワーク（ＡＫＩＮ）基準またはリスク／損傷／機能不全／腎機能喪失／末期腎不全（ＲＩＦＬＥ）基準に基づき、急性腎損傷を有すると特定されている。
【００１７】
別の実施形態では、ヒト対象は、健常対照対象と比較して上昇したレベルの、血清中クレアチニン、血漿中クレアチニン、尿中クレアチニン、または血中尿素窒素（ＢＵＮ）を有すると特定されている。
【００１８】
別の実施形態では、ヒト対象は、健常対照対象と比較して上昇したレベルの、血清もしくは尿中好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、血清もしくは尿中インターロイキン−１８、血清もしくは尿中シスタチンＣ、または尿ＫＩＭ−１を有すると特定されている。
【００１９】
いくつかの実施形態では、急性腎損傷は虚血性急性腎損傷である。一実施形態では、ヒト対象は減少した有効動脈血液量を有すると特定されている。一実施形態では、ヒト対象は、血管内容量減少（例えば、出血、胃腸機能喪失、腎臓機能喪失、皮膚及び粘膜機能喪失、ネフローゼ症候群、肝硬変、または毛細血管漏出に起因する）を有すると特定されている。一実施形態では、ヒト対象は、心拍出量の低下（例えば、心原性ショック、心膜疾患、うっ血性心不全、心臓弁膜症、肺疾患、または敗血症に起因する）を有すると特定されている。一実施形態では、ヒト対象は、全身血管拡張（例えば、肝硬変、アナフィラキシー、または敗血症によって引き起こされる）を有すると特定されている。一実施形態では、ヒト対象は、腎臓血管収縮（例えば、初期敗血症、肝腎症候群、急性高カルシウム血症、薬物、または放射線造影剤によって引き起こされる）を有すると特定されている。
【００２０】
いくつかの実施形態では、急性腎損傷は腎毒性急性腎損傷である。一実施形態では、ヒト対象は腎毒素に曝露されている。例えば、腎毒素は、抗生物質（例えばアミノグリコシド）、化学療法薬（例えばシスプラチン）、カルシニューリン阻害剤、アムホテリシンＢ、及びＸ線撮影造影剤から成る群から選択される腎毒性薬物であり得る。別の実施例では、腎毒素は違法薬物または重金属であり得る。
【００２１】
特定の実施形態では、ヒト対象は外傷性損傷または圧挫損傷を被っている。
【００２２】
特定の実施形態では、ヒト対象は臓器移植手術（例えば、腎臓移植手術または心臓移植手術）を受けている。
【００２３】
特定の実施形態では、ヒト対象は低灌流を伴う手術を受けている。
【００２４】
特定の実施形態では、ヒト対象は心胸郭手術または血管手術を受けている。
【００２５】
特定の実施形態では、ヒト対象は正常な排尿を妨害する薬剤（例えば抗コリン薬）を服用している。
【００２６】
特定の実施形態では、ヒト対象は前立腺肥大症または癌（例えば前立腺癌、卵巣癌、または大腸癌）を有する。
【００２７】
特定の実施形態では、ヒト対象は腎臓結石を有する。
【００２８】
特定の実施形態では、ヒト対象は尿路カテーテルの閉塞を有する。
【００２９】
特定の実施形態では、ヒト対象は、結晶尿を引き起こすか、もしくはもたらす薬物、ミオグロビン尿症を引き起こすか、もしくはもたらす薬物、または膀胱炎を引き起こすか、もしくはもたらす薬物を服用している。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ヒト対象は、αｖβ５インテグリン阻害剤、αｖβ６インテグリン阻害剤、ＣＸＣＲ４拮抗薬、ＩＬ−６阻害剤、ＩＬ−１α阻害剤、ＩＬ−１２阻害剤、ＭＩＰ−１−α阻害剤、ＡＰ２１４、ＴＨＲ−１８４、ＱＰＩ−１００２、ヒトアルカリホスファターゼ、抗アポトーシス剤、抗ネクローシス剤、抗炎症剤、抗敗血症剤、成長因子、血管拡張剤、フリーラジカルスカベンジャー、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、Ｃ５ａ受容体拮抗薬、及びα−メラニン細胞刺激ホルモンから成る群から選択される第２の治療薬を投与される。
【００３１】
さらなる態様では、本出願はヒト対象において腎臓を損傷から保護するための方法を開示する。本方法は、ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５インテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはαｖβ５拮抗薬である。特定の実施形態では、損傷は腎臓の上皮のものである。特定の実施形態では、損傷は尿細管上皮障害である。いくつかの実施形態では、ヒト対象は虚血性または腎毒性損傷に曝露されているかまたは曝露され得る。いくつかの実施形態では、ヒト対象は酸化的損傷に曝露されている（例えば、活性酸素または窒素種等のフリーラジカルによって）。
【００３２】
さらに別の態様では、本出願は腎臓の損傷を有するヒト対象を治療するための方法を開示する。本方法は、ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５インテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはαｖβ５拮抗薬である。特定の実施形態では、損傷は腎臓の上皮のものである。特定の実施形態では、損傷は尿細管上皮障害である。いくつかの実施形態では、ヒト対象は虚血性または腎毒性損傷に曝露されているかまたは曝露され得る。いくつかの実施形態では、ヒト対象は酸化的損傷に曝露されている（例えば、活性酸素または窒素種等のフリーラジカルによって）。
【００３３】
別の態様では、本出願はヒト対象における尿流を改善するための方法を開示する。本方法は、ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５インテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはαｖβ５拮抗薬である。
【００３４】
さらなる態様では、本出願は、移植の間にヒト対象の腎臓を急性腎損傷から保護するための方法を開示する。本方法は、腎臓移植の前にまたはそれと同時に、ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５インテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはαｖβ５拮抗薬である。特定の実施形態では、本方法は、腎臓移植の（例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、２４、４８、７２、９６、１６８時間、または１週間、２週間、３週間、または１ヶ月）後に、ヒト対象に、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの１回以上の用量を投与することをさらに含む。
【００３５】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗体はＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と競合し、抗体のエフェクター機能は低減または除去される。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗体はＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体と同じエピトープに結合し、抗体のエフェクター機能は低減または除去される。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体の、重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体の、軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３をさらに含む。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体の、ヒト化形態である。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５８１７として寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体のヒト化形態であり、抗体のエフェクター機能は低減または除去される。
【００３６】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換（すなわち、２、１、または０の置換）を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号��に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００３７】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上の段落に記載されるＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３を含むことに加え、配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３をさらに含む。特定の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上の段落に記載されるＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３を含むことに加え、配列番号２８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２９を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号３０を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３をさらに含む。
【００３８】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含むヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２７に��されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号２８に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号２９を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列または２つ以下の置換を有する配列番号３０を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含むヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。
【００３９】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２１を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２４を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、ヒト化抗体のエフェクター機能は低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２２を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号５を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号６を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号７を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２３を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２６を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２７に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２７を含むまたはそれから成るＶＨ  ＶＤＲ３；配列番号２８に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２８を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号２９を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列または１つの置換を有する配列番号３０を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。
【００４０】
上記の態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ２；及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含むまたはそれから成るＶＬ  ＣＤＲ３、を含むヒト化抗体であり、このヒト化抗体のエフェクター機能は、低減または除去される。
【００４１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、静脈内、皮下、または動脈内投与される。
【００４２】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料が、本発明の実践または試験において使用され得るが、例示的な方法及び材料が下記に記載される。本明細書で言及される、全ての出版物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含め本出願が優先する。材料、方法、及び実施例は、単に例示的であり、限定的であることは意図されない。
【００４３】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明から及び請求項から明白となるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本開示は、αｖβ５インテグリンに結合する抗体が急性腎損傷を治療することにおいて有用であることの発見に、少なくとも部分的に基づく。具体的に、急性腎損傷の動物モデルでは、αｖβ５インテグリンに特異的に結合する抗体は、対象が急性腎損傷を有するか、またはそれを発症する危険性があるかどうかを決定するために一般的に使用される腎臓の健常の重要な指標である、血清中クレアチニンのレベルを低減するということが発見された。したがって、本開示は、αｖβ５インテグリンまたはこのインテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することによって、急性腎損傷を治療または予防する方法を対象とする。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５拮抗薬である（すなわち、それはαｖβ５インテグリン上の利用可能結合部位についてαｖβ５リガンドと競合する）。
【００４５】
インテグリンは、細胞外マトリクスタンパク質に結合し、細胞−細胞及び細胞−細胞外マトリクス相互作用、ならびに細胞−病原体相互作用を媒介する、細胞表面糖タンパク質受容体である。これらの受容体は、明確な細胞及び接着特異性を有する様々なヘテロ二量体タンパク質を与えるために組み合わさる、非共有結合アルファ（α）及びベータ（β）鎖から成る。これらのタンパク質は、細胞表面リガンド、膜貫通タンパク質、可溶性プロテアーゼ、病原体、及び成長因子と相互作用し得る。生物学的プロセスにおけるこれらの受容体の重要性は、インテグリン欠損に続く、及びインテグリンサブユニットノックアウト動物の多くの場合重症の表現型からの、病的後遺症によって強調される。
【００４６】
αｖβ５インテグリンは、β５サブユニットを含む唯一のインテグリンである。αｖβ５は、ＲＧＤペプチド配列を認識してビトロネクチンに結合する（Ｈｙｎｅｓ，Ｃｅｌｌ，６９：１１−２５（１９９２）。αｖβ５は、フィブロネクチン、オステオポンチン、テネイシンｃ、及びアデノウイルスペントンｃ塩基にも結合し得る。αｖβ５は、無傷の細胞骨格及び細胞収縮を必要とする機構によって、ＴＧＦ−βを活性化させ得る。αｖ及びβ５は、両方が配列及び特徴付けされている（それぞれ、上記のＨｙｎｅｓ，１９９２及び米国特許第５，５２７，６７９号）。
【００４７】
β５
ヒトβ５タンパク質のアミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）登録番号ＮＰ＿００２２０４．２）は以下に示す。
ＭＰＲＡＰＡＰＬＹＡ  ＣＬＬＧＬＣＡＬＬＰ  ＲＬＡＧＬＮＩＣＴＳ  ＧＳＡＴＳＣＥＥＣＬ  ＬＩＨＰＫＣＡＷＣＳ  ＫＥＤＦＧＳＰＲＳＩ
ＴＳＲＣＤＬＲＡＮＬ  ＶＫＮＧＣＧＧＥＩＥ  ＳＰＡＳＳＦＨＶＬＲ  ＳＬＰＬＳＳＫＧＳＧ  ＳＡＧＷＤＶＩＱＭＴ  ＰＱＥＩＡＶＮＬＲＰ
ＧＤＫＴＴＦＱＬＱＶ  ＲＱＶＥＤＹＰＶＤＬ  ＹＹＬＭＤＬＳＬＳＭ  ＫＤＤＬＤＮＩＲＳＬ  ＧＴＫＬＡＥＥＭＲＫ  ＬＴＳＮＦＲＬＧＦＧ
ＳＦＶＤＫＤＩＳＰＦ  ＳＹＴＡＰＲＹＱＴＮ  ＰＣＩＧＹＫＬＦＰＮ  ＣＶＰＳＦＧＦＲＨＬ  ＬＰＬＴＤＲＶＤＳＦ  ＮＥＥＶＲＫＱＲＶＳ
ＲＮＲＤＡＰＥＧＧＦ  ＤＡＶＬＱＡＡＶＣＫ  ＥＫＩＧＷＲＫＤＡＬ  ＨＬＬＶＦＴＴＤＤＶ  ＰＨＩＡＬＤＧＫＬＧ  ＧＬＶＱＰＨＤＧＱＣ
ＨＬＮＥＡＮＥＹＴＡ  ＳＮＱＭＤＹＰＳＬＡ  ＬＬＧＥＫＬＡＥＮＮ  ＩＮＬＩＦＡＶＴＫＮ  ＨＹＭＬＹＫＮＦＴＡ  ＬＩＰＧＴＴＶＥＩＬ
ＤＧＤＳＫＮＩＩＱＬ  ＩＩＮＡＹＮＳＩＲＳ  ＫＶＥＬＳＶＷＤＱＰ  ＥＤＬＮＬＦＦＴＡＴ  ＣＱＤＧＶＳＹＰＧＱ  ＲＫＣＥＧＬＫＩＧＤ
ＴＡＳＦＥＶＳＬＥＡ  ＲＳＣＰＳＲＨＴＥＨ  ＶＦＡＬＲＰＶＧＦＲ  ＤＳＬＥＶＧＶＴＹＮ  ＣＴＣＧＣＳＶＧＬＥ  ＰＮＳＡＲＣＮＧＳＧ
ＴＹＶＣＧＬＣＥＣＳ  ＰＧＹＬＧＴＲＣＥＣ  ＱＤＧＥＮＱＳＶＹＱ  ＮＬＣＲＥＡＥＧＫＰ  ＬＣＳＧＲＧＤＣＳＣ  ＮＱＣＳＣＦＥＳＥＦ
ＧＫＩＹＧＰＦＣＥＣ  ＤＮＦＳＣＡＲＮＫＧ  ＶＬＣＳＧＨＧＥＣＨ  ＣＧＥＣＫＣＨＡＧＹ  ＩＧＤＮＣＮＣＳＴＤ  ＩＳＴＣＲＧＲＤＧＱ
ＩＣＳＥＲＧＨＣＬＣ  ＧＱＣＱＣＴＥＰＧＡ  ＦＧＥＭＣＥＫＣＰＴ  ＣＰＤＡＣＳＴＫＲＤ  ＣＶＥＣＬＬＬＨＳＧ  ＫＰＤＮＱＴＣＨＳＬ
ＣＲＤＥＶＩＴＷＶＤ  ＴＩＶＫＤＤＱＥＡＶ  ＬＣＦＹＫＴＡＫＤＣ  ＶＭＭＦＴＹＶＥＬＰ  ＳＧＫＳＮＬＴＶＬＲ  ＥＰＥＣＧＮＴＰＮＡ
ＭＴＩＬＬＡＶＶＧＳ  ＩＬＬＶＧＬＡＬＬＡ  ＩＷＫＬＬＶＴＩＨＤ  ＲＲＥＦＡＫＦＱＳＥ  ＲＳＲＡＲＹＥＭＡＳ  ＮＰＬＹＲＫＰＩＳＴ
ＨＴＶＤＦＴＦＮＫＦ  ＮＫＳＹＮＧＴＶＤ（配列番号１）
【００４８】
マウスβ５タンパク質のアミノ酸配列（Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）登録番号ＮＰ＿００１１３９３５６．１）は以下に示す。
ＭＰＲＶＰＡＴＬＹＡＣＬＬＧＬＣＡＬＶＰ  ＲＬＡＧＬＮＩＣＴＳＧＳＡＴＳＣＥＥＣＬ  ＬＩＨＰＫＣＡＷＣＳ  ＫＥＹＦＧＮＰＲＳＩ
ＴＳＲＣＤＬＫＡＮＬＩＲＮＧＣＥＧＥＩＥ  ＳＰＡＳＳＴＨＶＬＲ  ＮＬＰＬＳＳＫＧＳＳＡＴＧＳＤＶＩＱＭＴ  ＰＱＥＩＡＶＳＬＲＰ
ＧＥＱＴＴＦＱＬＱＶＲＱＶＥＤＹＰＶＤＬＹＹＬＭＤＬＳＬＳＭ  ＫＤＤＬＥＮＩＲＳＬＧＴＫＬＡＥＥＭＲＫ  ＬＴＳＮＦＲＬＧＦＧ
ＳＦＶＤＫＤＩＳＰＦＳＹＴＡＰＲＹＱＴＮＰＣＩＧＹＫＬＦＰＮ  ＣＶＰＳＦＧＦＲＨＬＬＰＬＴＤＲＶＤＳＦＮＥＥＶＲＫＱＲＶＳ
ＲＮＲＤＡＰＥＧＧＦ  ＤＡＶＬＱＡＡＶＣＫＥＫＩＧＷＲＫＤＡＬＨＬＬＶＦＴＴＤＤＶＰＨＩＡＬＤＧＫＬＧＧＬＶＱＰＨＤＧＱＣ
ＨＬＮＥＡＮＥＹＴＡＳＮＱＭＤＹＰＳＬＡＬＬＧＥＫＬＡＥＮＮＩＮＬＩＦＡＶＴＫＮ  ＨＹＭＬＹＫＮＦＴＡＬＩＰＧＴＴＶＥＩＬ
ＨＧＤＳＫＮＩＩＱＬＩＩＮＡＹＳＳＩＲＡ  ＫＶＥＬＳＶＷＤＱＰ  ＥＤＬＮＬＦＦＴＡＴＣＱＤＧＩＳＹＰＧＱＲＫＣＥＧＬＫＩＧＤ
ＴＡＳＦＥＶＳＶＥＡＲＳＣＰＧＲＱＡＡＱ  ＳＦＴＬＲＰＶＧＦＲ  ＤＳＬＱＶＥＶＡＹＮ  ＣＴＣＧＣＳＴＧＬＥ  ＰＮＳＡＲＣＳＧＮＧ
ＴＹＴＣＧＬＣＥＣＤ  ＰＧＹＬＧＴＲＣＥＣ  ＱＥＧＥＮＱＳＧＹＱ  ＮＬＣＲＥＡＥＧＫＰ  ＬＣＳＧＲＧＥＣＳＣ  ＮＱＣＳＣＦＥＳＥＦ
ＧＲＩＹＧＰＦＣＥＣ  ＤＳＦＳＣＡＲＮＫＧ  ＶＬＣＳＧＨＧＥＣＨ  ＣＧＥＣＫＣＨＡＧＹ  ＩＧＤＮＣＮＣＳＴＤ  ＶＳＴＣＲＡＫＤＧＱ
ＩＣＳＤＲＧＲＣＶＣ  ＧＱＣＱＣＴＥＰＧＡ  ＦＧＥＴＣＥＫＣＰＴ  ＣＰＤＡＣＳＳＫＲＤ  ＣＶＥＣＬＬＬＨＱＧ  ＫＰＤＮＱＴＣＨＨＱ
ＣＫＤＥＶＩＴＷＶＤ  ＴＩＶＫＤＤＱＥＡＶ  ＬＣＦＹＫＴＡＫＤＣ  ＶＭＭＦＳＹＴＥＬＰ  ＮＧＲＳＮＬＴＶＬＲ  ＥＰＥＣＧＳＡＰＮＡ
ＭＴＩＬＬＡＶＶＧＳ  ＩＬＬＩＧＭＡＬＬＡ  ＩＷＫＬＬＶＴＩＨＤ  ＲＲＥＦＡＫＦＱＳＥ  ＲＳＲＡＲＹＥＭＡＳ  ＮＰＬＹＲＫＰＩＳＴ
ＨＴＶＤＦＡＦＮＫＦ  ＮＫＳＹＮＧＳＶＤ（配列番号２）
【００４９】
抗αｖβ５抗体
本開示は、急性腎損傷の治療または予防のための、αｖβ５インテグリン及び／またはこのインテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を包括する。特定の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５インテグリン上の利用可能リガンド結合部位についてαｖβ５リガンドと競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、アクセス番号ＰＴＡ−５８１７で２００４年２月１３日にＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマによって産生されたマウスＡＬＵＬＡ抗体のヒト化形態である。
【００５０】
マウスＡＬＵＬＡ抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列のアミノ酸配列は、以下に提供する。
ＥＶＱＶＱＱＳＧＴＶＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＮＳＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＫＬＴＡＶＴＳＰＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＮＥＤＳＡＶＹＹＣＴＴＴＴＹＧＹＤＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号９）
【００５１】
マウスＡＬＵＬＡ抗体のＶＨ核酸をコードする核酸配列は、以下に提供する。
ＧＡＧＧＴＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＴＣＡＣＡＴＣＣＣＣＣＡＡＣＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＡＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＴＡＴＧＧＴＴＡＣＧＡＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ（配列番号１０）
【００５２】
マウスＡＬＵＬＡ抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列のアミノ酸配列は、以下に提供する。
ＮＩＭＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＳＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＨＱＹＬＳＳＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１１）
【００５３】
マウスＡＬＵＬＡ  ＶＬ核酸配列をコードする核酸配列は、以下に提供する。
ＡＡＣＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＧＣＣＡＴＣＡＴＣＴＣＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＡＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＴＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＡＡＧＴＧＴＴＴＴＡＴＡＣＡＧＴＴＣＡＡＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ（配列番号１２）
【００５４】
ＡＬＵＬＡの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３のアミノ酸配列は、以下に提供する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。
【表１】
2016515120.tif 000002
【００５５】
本出願は、本発明の抗体において使用することができる、ＡＬＵＬＡの「代替ＣＤＲ」も開示する。「代替」ＣＤＲは、ＡｂＹｓｉｓからのＣｈｏｔｈｉａ、増強Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭ  ＣＤＲ、または接触定義のうちのいずれか１つに従って定義されるＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を意味する。代替ＣＤＲは、例えばＡｂＹｓｉｓデータベース（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｙｓｉｓ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｉｎｐｕｔ／ｋｅｙ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ／ｋｅｙ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ．ｃｇｉ）を使用して得ることができる。ＡＬＵＬＡの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の「代替」ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列は、以下の表において、Ｋａｂａｔに従って定義されたＣＤＲと比較される。
【表２】
2016515120.tif 000003
【００５６】
特定の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントはヒト化している。一実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはヒト化ＡＬＵＬＡである。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。特定の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列に、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントが重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む場合、抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合し、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＨの、ＣＤＲ１（配列番号３）、ＣＤＲ２（配列番号４）、及びＣＤＲ３（配列番号５）のうちの１つ以上、２つ、または３つ全てを含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。特定の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＬの、ＣＤＲ１（配列番号６）、ＣＤＲ２（配列番号７）、及びＣＤＲ３（配列番号８）のうちの１つ以上、２つ、または３つ全てをさらに含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。特定の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＨのＣＤＲ１（配列番号３）、ＣＤＲ２（配列番号４）、及びＣＤＲ３（配列番号５）、ならびにＡＬＵＬＡのＶＬのＣＤＲ１（配列番号６）、ＣＤＲ２（配列番号７）、及びＣＤＲ３（配列番号８）を含む。別の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、２つ以下の置換を有するＡＬＵＬＡのＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号３）、２つ以下の置換を有するＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号４）、及び２つ以下の置換を有するＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号５）を含む。さらなる実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、２つ以下の置換を有するＡＬＵＬＡのＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号６）、２つ以下の置換を有するＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号７）、２つ以下の置換を有するＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号８）を含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＨの、代替ＣＤＲ１（配列番号２１、２２、または２３）、代替ＣＤＲ２（配列番号２４、２５、または２６）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号５または２７）のうちの１つ以上、２つ、または３つ全てを含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。特定の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＬの代替ＣＤＲ１（配列番号６または２８）、代替ＣＤＲ２（配列番号７または２９）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号８または３０）のうちの１つ以上、２つ、または３つ全てをさらに含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；かつ／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。一実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＨの代替ＣＤＲ１（配列番号２１）、代替ＣＤＲ２（配列番号２４）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号５）、ならびに／またはＡＬＵＬＡのＶＬの代替ＣＤＲ１（配列番号６）、代替ＣＤＲ２（配列番号７）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号８）を含む。別の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＨの代替ＣＤＲ１（配列番号２２）、代替ＣＤＲ２（配列番号２５）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号５）、ならびに／またはＡＬＵＬＡのＶＬの代替ＣＤＲ１（配列番号６）、代替ＣＤＲ２（配列番号７）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号８）を含む。さらなる実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡのＶＨの代替ＣＤＲ１（配列番号２３）、代替ＣＤＲ２（配列番号２６）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号２７）、ならびに／またはＡＬＵＬＡのＶＬの代替ＣＤＲ１（配列番号２８）、代替ＣＤＲ２（配列番号２９）、及び代替ＣＤＲ３（配列番号３０）を含む。別の実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡの、２つ以下（例えば２つ、１つ、または０）の置換を有するＶＨ代替ＣＤＲ１（配列番号２１、２２、または２３）、２つ以下の置換を有するＶＨ代替ＣＤＲ２（配列番号２４、２５、または２６）、及び２つ以下の置換を有するＶＨ代替ＣＤＲ３（配列番号５または２７）を含む。さらなる実施形態では、抗αｖβ５（または抗β５）抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＬＵＬＡの、２つ以下の置換を有するＶＬ代替ＣＤＲ１（配列番号６または２８）、２つ以下の置換を有するＶＬ代替ＣＤＲ２（配列番号７または２９）、及び２つ以下の置換を有するＶＬ代替ＣＤＲ３（配列番号８または３０）を含む。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；及び／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。
【００５９】
本開示は、ＡＬＵＬＡの重鎖可変領域の、フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、もしくは４つ全てにおける６つ以下（例えば、６つ、５つ、４つ、３つ以下、３つ、２つ以下、２つ、もしくは１つ）のアミノ酸置換、及び／または、１つ、２つ、もしくは３つ全てのＣＤＲ（もしくは代替ＣＤＲ）における４つ以下（例えば、４つ、３つ以下、２つ以下、もしくは１つ）のアミノ酸置換を有する、αｖβ５及び／またはβ５に特異的に結合する抗体も含む。本出願は、ＡＬＵＬＡの軽鎖可変領域の、フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、もしくは４つ全てにおける６つ以下（例えば、６つ、５つ、４つ、３つ以下、３つ、２つ以下、２つ、もしくは１つ）のアミノ酸置換、及び／または、１つ、２つ、もしくは３つ全てのＣＤＲ（もしくは代替ＣＤＲ）における４つ以下（例えば４つ、３つ以下、３つ、２つ以下、２つ、もしくは１つ）のアミノ酸置換を有する抗体も含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、αｖβ５（またはβ５サブユニット）に特異的に結合するかかる抗体または抗原結合フラグメントは、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害する；αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害する；及び／またはＴＧＦ−βの活性化を阻害する。
【００６０】
本開示は、急性腎損傷または本明細書に記載される任意の他の兆候の治療または予防のための、αｖβ５インテグリン及び／またはインテグリンのβ５サブユニットに特異的に結合する抗体（例えば、ＡＬＵＬＡまたはＡＬＵＬＡのヒト化形態）と競合する任意の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用も包括する。
【００６１】
特定の実施形態では、ＶＨ及びまたはＶＬ領域は、定常領域（例えば、野生型ヒトＦｃ領域または１つ以上の代替を含むＦｃ領域）に結合され得る。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、定常領域はＣＨ３領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトカッパまたはラムダ配列由来の定常領域を有する。特定の実施形態では、定常領域はヒトサブグループカッパ２配列を含む。定常領域は、ヒトＦｃ領域、例えば野生型Ｆｃ領域、または１つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃ領域であり得る。定常領域は、抗体の特性を改変する（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または低減する）置換を有し得る。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つ以上の残基にて、例えば残基２３４及び２３７（Ｋａｂａｔ番号付けに基づく）のうちの１つ以上にて、変異し得る。抗体は、重鎖のＣＨ２領域において、エフェクター機能、例えばＦｃ受容体結合及び補体活性化を低減または変更する、変異を有し得る。例えば、抗体は、米国特許第５，６２４，８２１号及び同第５，６４８，２６０号に記載されるもの等の変異を有し得る。抗体は、当技術において開示されるＩｇＧ４のヒンジ領域における変異（例えばＡｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３０：１０５−０８（１９９３））等の、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定化させる変異も有し得る。例えば、Ｕ．Ｓ．２００５−００３７０００も参照されたい。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から成る群から選択されるアイソタイプを有する。
【００６２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、急性腎損傷または本明細書に記載される任意の他の兆候を治療または予防するために有用な１つ以上の薬剤に接合され得る。これらの薬剤は、例えば、マイクロＲＮＡ、マイクロＲＮＡミミック、低分子干渉ＲＮＡ、アンタゴマー、アンチセンス核酸、リボザイム、小分子化合物、及び他の化学部分であり得る。かかる抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、αｖβ５を発現する対象の細胞または組織に結合された薬剤（複数可）を送達するために、使用され得る。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５発現細胞に選択的に送達される必要がある薬物に接合され得る（例えば、接合薬物の毒性を低減または防止するため、副作用を低減するため）。
【００６３】
抗体は、以前に既知のαｖβ５抗体よりも、改良された効能である、αｖβ５に対するより高い親和性もしくは結合活性、及び／または低下した免疫原性に基づいて、使用のために選択され得る。抗体の、効能、親和性または結合活性、及び免疫原性を決定する方法は、当業者の技術の範囲内である。
【００６４】
抗αｖβ５抗体を得る方法
抗体、特にヒト抗体を得るために多くの方法が利用可能である。ある例示的な方法は、タンパク質発現ライブラリー、例えばファージまたはリボソームディスプレイライブラリーを、スクリーニングすることを含む。ファージディスプレイは、例えば、Ｕ．Ｓ．５，２２３，４０９；Ｓｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１３１５−１３１７（１９８５）；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；及びＷＯ９０／０２８０９に記載される。ファージ上のＦａｂ′のディスプレイは、米国特許第５，６５８，７２７号、同第５，６６７，９８８号、及び同第５，８８５，７９３号に記載される。
【００６５】
ディスプレイライブラリーの使用に加え、αｖβ５結合抗体を得るために他の方法が使用され得る。例えば、β５タンパク質またはそのペプチドは、非ヒト動物、例えばげっ歯類、例えばマウス、ハムスター、またはラットにおける抗原として使用され得る。さらに、β５をコードするｃＤＮＡで形質導入された細胞が、細胞表面αｖβ５タンパク質に有効に結合する抗体を産生する手段として、非ヒト動物に注入され得る。
【００６６】
一実施形態では、非ヒト動物はヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含む。例えば、マウス抗体産生が不足するマウス系統を、ヒトＩｇ遺伝子座の大フラグメントを用いて操作することが可能である。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する遺伝子由来の抗原特異性モノクローナル抗体が産生及び選択され得る。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標），Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）、Ｕ．Ｓ．２００３−００７０１８５、ＷＯ９６／３４０９６、及びＷＯ９６／３３７３５を参照されたい。
【００６７】
別の実施形態では、モノクローナル抗体は非ヒト動物から得られ、その後改変例えばヒト化または脱免疫化される。Ｗｉｎｔｅｒは、本明細書に記載されるヒト化抗体を調製するために使用され得る例示的なＣＤＲ移植方法を記載する（Ｕ．Ｓ．５，２２５，５３９）。特定のヒト抗体のＣＤＲの全てまたはいくつかは、非ヒト抗体の少なくとも一部と交換され得る。αｖβ５に結合する有用なヒト化抗体に到達するために、結合のために必要とされるＣＤＲまたはかかるＣＤＲの結合決定因子を交換することのみが必須であり得る。
【００６８】
ヒト化抗体は、ヒトＦｖ可変領域からの同等の配列を有する抗原結合に直接含まれないＦｖ可変領域の配列を交換することによって、生成され得る。ヒト化抗体を生成するための一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：１２０２−１２０７（１９８５）によって、Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４（１９８６）によって、ならびにＵＳ５，５８５，０８９；ＵＳ５，６９３，７６１；ＵＳ５，６９３，７６２；ＵＳ５，８５９，２０５；及びＵＳ６，４０７，２１３によって提供される。これらの方法は、重鎖または軽鎖のうちの少なくとも１つからの免疫グロブリンＦｖ可変領域の全てまたは一部をコードする核酸配列を、単離すること、操作すること、及び発現することを含む。かかる核酸の源は当業者に公知であり、例えば、上記のように所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから、生殖系列免疫グロブリン遺伝子から、または合成構築物から、得られ得る。ヒト化抗体をコードする組換えＤＮＡは、その後適切な発現ベクターにクローン化され得る。
【００６９】
ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７７６−７９８（１９９２）；Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１６：２３７−２４２（１９９５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２２７：７９９−８１７（１９９２）；及びＴｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１４：４６２８−４６３８（１９９５）に開示される。Ｖ  ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的ディレクトリを提供する（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫによって編纂）。これらの配列は、例えばフレームワーク領域及びＣＤＲのための、ヒト配列の源として使用され得る。例えば米国特許第６，３００，０６４号に記載されるように、コンセンサスヒトフレームワーク領域も使用され得る。
【００７０】
非ヒトαｖβ５結合抗体は、ヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失によって、またはＷＯ９８／５２９７６及びＷＯ００／３４３１７において開示される方法による「脱免疫化」によっても改変され得る。簡潔に言えば、抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩに結合するペプチドについて分析され得、これらのペプチドは潜在的Ｔ細胞エピトープ（ＷＯ９８／５２９７６及びＷＯ００／３４３１７において定義される）を表す。潜在的Ｔ細胞エピトープの検出には、「ペプチドスレッディング」と呼ばれるコンピュータモデリングアプローチが適用され得、加えて、ＷＯ９８／５２９７６及びＷＯ００／３４３１７に記載されるように、ＶＨ及びＶＬ配列内に存在するモチーフについて、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースが検索され得る。これらのモチーフは、１８の主要ＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲアロタイプのいずれかに結合し、そのようにして潜在的Ｔ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的Ｔ細胞エピトープは、可変領域における少数のアミノ酸残基を置換することによって、または好ましくは単一のアミノ酸置換によって除去され得る。可能な限り、保存的置換がなされる。排他的ではないが、多くの場合、ヒト生殖系列抗体配列における位置に一般的なアミノ酸が使用され得る。脱免疫化の変更が特定された後、ＶＨ及びＶＬをコードする核酸が、変異誘発または他の合成方法（例えば、デノボ合成、カセット交換等）によって構築され得る。変異誘発された可変配列は、任意に、ヒト定常領域、例えばヒトＩｇＧ１またはカッパ定常領域に融合され得る。
【００７１】
いくつかの場合では、潜在的Ｔ細胞エピトープは、既知のまたは抗体機能に重要であると予測される、残基を含み得る。例えば、潜在的Ｔ細胞エピトープは、たいていＣＤＲに偏在している。さらに、潜在的Ｔ細胞エピトープは、抗体構造及び結合に重要なフレームワーク残基において生じ得る。これらの潜在的エピトープを除去するための変化は、いくつかの場合では、例えば、この変化を有する鎖及び有さない鎖を作製して試験することによる、より多くの精査を必要とし得る。可能な場合、ＣＤＲに重複する潜在的Ｔ細胞エピトープは、ＣＤＲの外部の置換によって除去され得る。いくつかの場合では、ＣＤＲ内の変更は単に任意であり、よってこの置換を有する及び有さない変形が試験され得る。他の場合では、潜在的Ｔ細胞エピトープを除去するために必要とされる置換は、抗体結合に重要であり得るフレームワーク内の残基位置で起こる。これらの場合では、この置換を有する及び有さない変形が試験される。よって、いくつかの場合では、いくつかの変形脱免疫化重鎖及び軽鎖可変領域が設計され、様々な重鎖／軽鎖の組合せが試験され、最適脱免疫化抗体を特定する。最終脱免疫化抗体の選択は、その後、脱免疫化の程度、特に、可変領域内に残る潜在的Ｔ細胞エピトープの数と合わせて、異なる変形の結合親和性を考慮することによってなされ得る。脱免疫化は、任意の抗体、例えば非ヒト配列を含む抗体、例えば合成抗体、マウス抗体他の非ヒトモノクローナル抗体、またはディスプレイライブラリーから単離された抗体を、改変するために使用され得る。
【００７２】
抗体をヒト化するための他の方法も使用され得る。例えば、他の方法は、抗体の三次元構造、結合決定因子に三次元的近位にあるフレームワーク位置、及び免疫原性ペプチド配列を説明し得る。例えば、ＷＯ９０／０７８６１；米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第６，４０７，２１３号；Ｔｅｍｐｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１を参照されたい。なおも別の方法は「ヒューマニアリング」と呼ばれ、例えば、Ｕ．Ｓ．２００５−００８６２５に記載される。
【００７３】
上記のもののような抗体は、例えば、列挙されるアミノ酸配列をコードする合成遺伝子を調製及び発現することによって作製され得る。抗αｖβ５抗体のうちの任意のものの変形（例えばアミノ酸置換を含む）を生成する方法は、当技術で公知である。これらの方法は、抗体またはその任意の部分（例えば、フレームワーク領域、ＣＤＲ、定常領域）をコードする調製されたＤＮＡ分子の、部位特異的（またはオリゴヌクレオチド媒介）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製を含むが、これらに限定されない。部位特異的変異誘発は当技術で公知である（例えばＣａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：４４３１−４４４３（１９８５）及びＫｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４８８（１９８７）を参照されたい）。ＰＣＲ変異誘発は、開始ポリペプチドのアミノ酸配列変形を作製することにも好適である。ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｐｐ．１７７−１８３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０）におけるＨｉｇｕｃｈｉ；及びＶａｌｌｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７：７２３−７３３（１９８９）を参照されたい。配列変形、カセット変異誘発を調製するための別の方法は、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，３４：３１５−３２３（１９８５）によって記載される技術に基づく。
【００７４】
親和性成熟
一実施形態では、本明細書に記載される抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、改変された抗体のプールを提供するために、例えば変異誘発によって改変される。改変された抗体は、その後、変更された機能特性（例えば、改良された結合、改良された安定性、低下した抗原性、またはインビボでの増加した安定性）を有する１つ以上の抗体を特定するために評価される。一実装では、ディスプレイライブラリー技術が、改変された抗体のプールを選択またはスクリーニングするために使用される。その後、例えば、より高い緊縮性またはより競合的な結合及び洗浄条件を使用することによって、第２のライブラリーからより高い親和性抗体が特定される。他のスクリーニング技術も使用され得る。
【００７５】
いくつかの実装では、変異誘発は、結合インターフェースにあることが既知であるまたはその可能性が高い領域を標的とする。例えば、特定された結合タンパク質が抗体である場合、変異誘発は本明細書に記載される重鎖または軽鎖のＣＤＲ領域（または代替ＣＤＲ領域）に向けられ得る。さらに、変異誘発は、ＣＤＲの付近またはそれに隣接するフレームワーク領域、例えば、特にＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）接合部の１０、５、または３アミノ酸以内のフレームワーク領域に向けられ得る。抗体の場合では、例えば段階的に改良するために、変異誘発はＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）のうちの１つまたはいくつかに限定されることもあり得る。
【００７６】
一実施形態では、変異誘発は、１つ以上の生殖系列配列により類似する抗体を作製するために使用される。ある例示的な生殖系列化方法は、単離された抗体の配列に類似する（例えば特定のデータベースにおいて最も類似する）１つ以上の生殖系列配列を特定することを含み得る。その後、漸進的に、組合せで、または両方のいずれかで、単離された抗体において変異（アミノ酸レベルで）がなされ得る。例えば、いくつかまたは全ての可能な生殖系列変異をコードする配列を含む核酸ライブラリーが作製される。変異抗体はその後、例えば、単離された抗体に対して１つ以上の追加の生殖系列残基を有し、かつなお有用である（例えば機能的活性を有する）抗体を特定するために評価される。一実施形態では、可能な限り多くの生殖系列残基が、単離された抗体に導入される。
【００７７】
一実施形態では、変異誘発は、ＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）領域に１つ以上の生殖系列残基を置換または挿入するために使用される。例えば、生殖系列ＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）残基は、改変されている可変領域に類似する（例えば最も類似する）生殖系列配列からのものであり得る。変異誘発の後、生殖系列残基（単数）または残基（複数）が許容されるかどうかを決定するために、抗体の活性（例えば結合または他の機能的活性）が評価され得る。同様の変異誘発がフレームワーク領域において行われ得る。
【００７８】
生殖系列を選択することは、異なる方法で行われ得る。例えば、生殖系列配列は、それが、選択性または類似性についての所定の基準、例えば、ドナーの非ヒト抗体に対して、少なくとも特定のパーセンテージの同一性、例えば、少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または９９．５％の同一性を満たす場合、選択され得る。選択は、少なくとも２、３、５、または１０の生殖系列配列を使用して行われ得る。ＣＤＲ１及びＣＤＲ２の場合、類似する生殖系列配列を特定することは１つのかかる配列を選択することを含み得る。ＣＤＲ３の場合、類似する生殖系列配列を特定することは１つのかかる配列を選択することを含み得るが、アミノ末端部及びカルボキシ末端部に別個に寄与する２つの生殖系列配列を使用することを含んでよい。他の実装では、１つまたは２つを超える生殖系列配列が、例えばコンセンサス配列を形成するために使用される。
【００７９】
２つの配列間の「配列同一性」の計算は以下のように行われる。配列を最適比較目的のために整列させる（例えば、最適整列のために、第１及び第２のアミノ酸または核酸配列の１つまたは両方に、間隔が導入され得、かつ、非同族配列は比較目的のために無視され得る）。最適整列は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５を有する、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリクスを用いて、ＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを使用してベストスコアとして決定される。その後対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められている場合、これらの分子は、その位置で同一である。２つの配列の間の同一性％は、配列によって共有される同一位置の数の関数である。
【００８０】
他の実施形態では、抗体は、変更されたグリコシル化パターンを有するように改変され得る（すなわち、本来または生来のグリコシル化パターンから変更される）。この文脈で使用される場合、「変更された」は、１つ以上の炭水化物部分が欠失した、及び／または、本来の抗体に１つ以上のグリコシル化部位が加えられたことを意味する。現在開示される抗体へのグリコシル化部位の追加は、アミノ酸配列をグリコシル化部位コンセンサス配列を含むように変更することによって達成され得、かかる技術は当技術で公知である。抗体上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドの、抗体のアミノ酸残基への化学または酵素カップリングによる。これらの方法は、例えば、ＷＯ８７／０５３３０、及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ（１９８１）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９−３０６に記載される。抗体上に存在する任意の炭水化物部分の除去は、当技術において記載されるように、化学的にまたは酵素的に達成され得る（Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２；Ｅｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１；及びＴｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０）。例えば、サルベージ受容体結合エピトープを提供することによって、インビボ半減期を増加させる改変について、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【００８１】
一実施形態では、抗体は、配列番号３、４、５、６、７、及び８のものとは異なる、ＣＤＲ配列（例えばＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ）を有する。本明細書に記載されるヒト化ＡＬＵＬＡ抗体のものとは異なるＣＤＲ配列は、ＣＤＲが５〜７アミノ酸の長さである場合、１、２、３、もしくは４アミノ酸の置換、または、ＣＤＲが１０アミノ酸以上の長さである場合、ＣＤＲの配列における１、２、３、４、５、６、もしくは７アミノ酸の置換等の、アミノ酸変更を含む。置換されるアミノ酸は、類似する電荷、疎水性、または立体化学的特徴を有し得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換（複数可）は保存的置換である。他の実施形態では、アミノ酸置換（複数可）は非保存的置換である。かかる置換は、当業者の通常技術の範囲内である。置換されたＣＤＲを含む抗体またはその抗体フラグメントは、本明細書に記載される特徴（例えば、β５に特異的に結合すること、αｖβ５のビトロネクチンへの結合を阻害すること）の１つ以上を有する抗体を特定するために、スクリーニングされ得る。
【００８２】
ＣＤＲにおいてとは異なり、抗体の結合特徴に逆効果を及ぼすことなく構造フレームワーク領域（ＦＲ）においてより有意な変更がなされ得る。ＦＲへの変更は、非ヒト由来のフレームワークをヒト化すること、または抗原接触のためもしくは結合部位を安定化させるために重要な特定のフレームワーク残基を操作すること、例えば、定常領域のクラスまたはサブクラスを変更すること、Ｆｃ受容体結合等のエフェクター機能を変更し得る特異的アミノ酸残基を変更すること（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．，１４７：２６５７−６２（１９９１）；Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８６：３１９−２４（１９９５））、または定常領域が由来する種を変更することを含むがこれらに限定されない。
【００８３】
抗αｖβ５抗体は、抗αｖβ５抗体、例えばＦａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ｓｃＦｖ、及びｓｃ（Ｆｖ）２の、全長抗体の形態、または低分子量形態（例えば、生物活性抗体フラグメントまたはミニボディ）であり得る。本開示によって包括される他の抗αｖβ５抗体は、ＶＨもしくはＶＬ等の単一可変鎖を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはその生物活性フラグメントを含む。例えば、Ｍｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８５（４９）：３８３４８−３８３６１（２０１０）；Ｈａｒｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，７７（１）：１３−２２（２００７）；Ｕ．Ｓ．２００５／００７９５７４及びＤａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９（６）：５３１−７を参照されたい。抗体全体と同様に、ｓｄＡｂは、特異的な抗原に選択的に結合することができる。ほんの１２〜１５ｋＤａの分子量で、ｓｄＡｂは一般的な抗体よりもはるかに小さく、さらにはＦａｂフラグメント及び単鎖可変フラグメントよりも小さい。
【００８４】
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント及びその１つ以上の酸性変形の混合物を含む組成物が本明細書に提供され、例えば、酸性変形（複数可）の量は、約８０％、７０％、６０％、６０％、５０％、４０％、３０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％未満である。少なくとも１つの脱アミド部位を含む抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物も提供され、この組成物のｐＨは、約５．０〜約６．５であり、よって、例えば、抗αｖβ５抗体の少なくとも約９０％は脱アミドされない（すなわち、抗体の約１０％未満が脱アミドされる）。特定の実施形態では、抗体の約５％、３％、２％、または１％未満が脱アミドされる。ｐＨは５．０〜６．０、例えば５．５または６．０であり得る。特定の実施形態では、この組成物のｐＨは、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。
【００８５】
「酸性変形」は、対象のポリペプチドよりも酸性（例えば陽イオン交換クロマトグラフィによって決定される）である、対象のポリペプチドの変形である。酸性変形の例は脱アミド変形である。
【００８６】
ポリペプチド分子の「脱アミド」変形は、１つ以上のアスパラギン残基（複数可）がアスパラギン酸に転換された、すなわち、中性アミド側鎖が全体的に酸性特徴を有する残基に転換された、ポリペプチドである。
【００８７】
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を参照して本明細書で使用される「混合物」という用語は、所望の抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント及びその１つ以上の酸性変形の両方の存在を意味する。酸性変形は、少量の他の酸性変形（複数可）を有する、優性に脱アミドされた抗αｖβ５抗体を含み得る。
【００８８】
特定の実施形態では、脱アミドを除去するように変異された抗体の、結合親和性（ＫＤ）、オンレート（ＫＤオン）、及び／またはオフレート（ＫＤオフ）は、野生型抗体のものに類似し、例えば約５倍、２倍、１倍（１００％）、５０％、３０％、２０％、１０％、５％、３％、２％、または１％未満の差を有する。
【００８９】
特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその低分子量抗体は、β５に特異的に結合し、αｖβ５のビトロネクチンへの結合を阻害し、αｖβ５のＴＧＦ−βのＬＡＰへの結合を阻害し、ＴＧＦ−βの活性化を阻害し、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害し、かつ／または急性腎損傷を有するヒト患者もしくはその動物モデルに投与されると症状の重症度を低減させる（例えば、Ｈｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１６９：２８６−２９６（２０１１）；Ｈｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．，４（６）：６２９−６４１（２００９）；Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｎ．Ｆａｉｌ．，３３（１０）：１０１３−１０１８（２０１１）；Ｗｅｉ  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３０３（１１）：Ｆ１４８７−９４（２０１２））。一実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその低分子量抗体は、ラット片側腎虚血性クランプモデルにおける疾患の進行を阻害する。抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその低分子量抗体のこれらの特徴は、当技術で既知の方法に従って測定され得る。
【００９０】
抗体フラグメント
αｖβ５結合抗体の抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆａｃｂ、及びＦｖ）は、無傷のαｖβ５抗体のタンパク質消化によって調製され得る。例えば、抗体フラグメントは、抗体全体を、パパイン、ペプシン、またはプラスミン等の酵素で処理することによって得られ得る。抗体全体のパパイン消化はＦ（ａｂ）２またはＦａｂフラグメントを産生し、抗体全体のペプシン消化はＦ（ａｂ′）２またはＦａｂ′を産生し、抗体全体のプラスミン消化はＦａｃｂフラグメントを産生する。
【００９１】
あるいは、抗体フラグメントは組換えで産生され得る。例えば、対象の抗体フラグメントをコードする核酸は、構築され得、発現ベクターに導入され得、好適な宿主細胞において発現され得る。例えば、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：２９６８−２９７６（１９９４）；Ｂｅｔｔｅｒ，Ｍ．ａｎｄ  Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ａ．Ｈ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６−４９６（１９８９）；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６−４９６（１９８９）；Ｌａｍｏｙｉ，Ｅ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：６５２−６６３（１９８９）；Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，（１９８９）１２１：６６３−６６９（１９８９）；及びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２−１３７（１９９１）を参照されたい。）抗体フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現され得そこから分泌され得、よって、大量のこれらのフラグメントの容易な産生を可能にする。抗体フラグメントは、抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ′−ＳＨフラグメントは、Ｅ．Ｃｏｌｉから直接回収され得、化学結合されてＦ（ａｂ）２フラグメントを形成する（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３−１６７（１９９２））。別の方法に従うと、Ｆ（ａｂ′）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養から直接単離され得る。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ′）２フラグメントは、米国特許第５，８６９，０４６号に記載される。
【００９２】
ミニボディ
抗αｖβ５抗体のミニボディは、ダイアボディ、単鎖（ｓｃＦｖ）、及び単鎖（Ｆｖ）２（ｓｃ（Ｆｖ）２）を含む。
【００９３】
「ダイアボディ」は、遺伝子融合によって構築される、二価ミニボディである（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０：６４４４−６４４８（１９９３）；ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照されたい）。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖から成る二量体である。ダイアボディのそれぞれのポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、リンカーによって結合される。リンカーを構成するアミノ酸残基の数は、２〜１２残基の間（例えば、３〜１０残基または５もしくは約５残基）であり得る。ダイアボディにおけるポリペプチドのリンカーは、典型的に、ＶＬ及びＶＨが互いに結合することを可能にするには短すぎる。よって、同じポリペプチド鎖内でコードされるＶＬ及びＶＨは、単鎖可変領域フラグメントを形成することができないが、代わりに、異なる単鎖可変領域フラグメントで二量体を形成する。結果として、ダイアボディは２つの抗原結合部位を有する。
【００９４】
ｓｃＦＶは、ＶＨ及びＶＬをリンカーとつなぐことによって得られる単鎖ポリペプチド抗体である（例えばＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９−５８８３（１９８８）；及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｖｏｌ．１１３，Ｅｄ  Ｒｅｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５，（１９９４）を参照されたい）。つながれるＶＨ及びＶＬの順序は具体的に限定されず、それらは任意の順序で配置されてよい。配置の例には、［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］；または［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］が挙げられる。ｓｃＦｖにおけるＨ鎖Ｖ領域及びＬ鎖Ｖ領域は、本明細書に記載される任意の抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントに由来し得る。
【００９５】
ｓｃ（Ｆｖ）２は、２つのＶＨ及び２つのＶＬがリンカーによってつながれて単鎖を形成する、ミニボディである（Ｈｕｄｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，（１９９９）２３１：１７７−１８９（１９９９））。ｓｃ（Ｆｖ）２は、例えば、ｓｃＦｖをリンカーで接続することによって調製され得る。本発明のｓｃ（Ｆｖ）２は、好ましくは、２つのＶＨ及び２つのＶＬが、単鎖ポリペプチドのＮ末端から始まって、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ、及びＶＬ（［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］）の順序で配置される抗体を含むが、しかしながら、２つのＶＨ及び２つのＶＬの順序は上記の配置に限定されず、それらは任意の順序で配置されてよい。配置の例は以下に記載される。
［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］
［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］
［ＶＨ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＬ］
［ＶＬ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＨ］
［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］
【００９６】
通常、４つの抗体可変領域がつながれる場合３つのリンカーが必要とされ、使用されるリンカーは同一かまたは異なり得る。ミニボディのＶＨ及びＶＬ領域をつなぐリンカーに具体的な限定はない。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。約３〜２５残基（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８）を含む任意の恣意的な単鎖ペプチドが、リンカーとして使用され得る。かかるペプチドリンカーの例には、Ｓｅｒ；Ｇｌｙ  Ｓｅｒ；Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ；Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ；Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（配列番号１３）；Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（配列番号１４）；Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（配列番号１５）；Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（配列番号１６）；Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（配列番号１７）；Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（配列番号１８）；Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（配列番号１９）；Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（配列番号２０）；（Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（配列番号１５）ｎ、式中ｎは１以上の整数；及び（Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（配列番号１６）ｎ、式中ｎは１以上の整数、が挙げられる。
【００９７】
特定の実施形態では、リンカーは合成化合物リンカー（化学架橋剤）である。市場で入手可能な架橋剤の例には、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スベリン酸ジサクシンイミジル（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ３）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオナート）（ＤＳＰ）、ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオナート）（ＤＴＳＳＰ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシナート）（ＥＧＳ）、エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシナート）（スルホ−ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルタータラート（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジルタータラート（スルホ−ＤＳＴ）、ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、及びビス［２−（スルホスクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（スルホ−ＢＳＯＣＯＥＳ）が挙げられる。
【００９８】
ミニボディ内のＶＨまたはＶＬのアミノ酸配列は、置換、欠失、追加、及び／または挿入等の改変を含み得る。例えば、この改変は、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）のうちの１つ以上においてであり得る。特定の実施形態では、この改変は、抗αｖβ５ミニボディのＶＨ及び／またはＶＬドメインの１つ以上のＣＤＲ（もしくは代替ＣＤＲ）及び／またはフレームワーク領域における、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換を含む。かかる置換は、抗αｖβ５ミニボディの、結合、機能活性を改良し、かつ／または免疫原性を低減するためになされる。特定の実施形態では、この置換は、保存的アミノ酸置換である。他の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）の１つ、２つ、または３つのアミノ酸は、ＶＨ及びＶＬが関連付けられるときにαｖβ５結合及び／または機能活性がある限り、欠失または追加されてよい。改変されたミニボディは、αｖβ５がビトロネクチンに結合することを阻害し得、αｖβ５がＴＧＦ−βのＬＡＰに結合することを阻害し得、かつ／またはＴＧＦ−βのシグナル伝達を阻害し得る。
【００９９】
二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、αｖβ５タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のかかる抗体は、αｖβ５結合部位を別のタンパク質（例えば、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ６、αｖβ８）のための結合部位と組み合わせ得る。二重特異性抗体は、全長抗体またはその低分子量形態（例えばＦ（ａｂ′）２二重特異性抗体、ｓｃ（Ｆｖ）２二重特異性抗体、ダイアボディ二重特異性抗体）として調製され得る。
【０１００】
全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づき、ここにおいて２つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。異なる方法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。免疫グロブリン重鎖融合、及び所望であれば免疫グロブリン軽鎖、をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクターに挿入され、好適な宿主細胞に同時形質導入される。これは、３つのポリペプチドフラグメントの割合を調節することにおけるより高い柔軟性を提供する。しかしながら、同等比の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高い産生量をもたらす場合、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖に対するコード配列を単一の発現ベクターに挿入することが可能である。
【０１０１】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチに従うと、抗体分子の対の間のインターフェースは、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にするように操作され得る。好ましいインターフェースは、ＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子のインターフェースからの１つ以上の小アミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）と交換される。大アミノ酸側鎖をより小さいもの（例えばアラニンまたはトレオニン）と交換することによって、大側鎖（複数可）と同一または類似する大きさの代償性の「空洞」が、第２の抗体分子のインターフェース上に作製される。これは、ホモ二量体等の他の望ましくない最終産生物を上回る、ヘテロ二量体の産生量を増加させるための機構を提供する。
【０１０２】
二重特異性抗体は、架橋または「ヘテロ接合」抗体を含む。例えば、ヘテロ接合体における抗体のうちの１つはアビジンに結合され、他方はビオチンに結合され得る。ヘテロ接合抗体は、任意の便利な架橋方法を使用して作製され得る。
【０１０３】
「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替の機構を提供する。フラグメントは、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって、ＶＬに接続されるＶＨを含む。結果的に、あるフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインは、別のフラグメントの相補性ＶＬ及びＶＨドメインと対形成することを強要され、それにより２つの抗原結合部位を形成する。
【０１０４】
多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも早く内部移行（及び／または異化）され得る。本明細書に記載される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば四価抗体）であり得、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含み得る。例示的な二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれから成る）。多価抗体は、３〜約８（例えば４）つの抗原結合部位を含み得る（またはそれから成り得る）。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、少なくとも２つのポリペプチド鎖）を任意に含み、ポリペプチド鎖（複数可）は２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃ、を含み得、式中ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはペプチドスペーサを表し、ｎは０または１である。
【０１０５】
接合抗体
本明細書に開示される抗体は、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧで改変されたポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（ＰＥＩ−ＰＥＧ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー）、ヒアルロン酸、蛍光物質、発光物質、ハプテン、酵素、金属キレート、及び薬物等の、巨大分子物質を含む様々な分子に結合される接合抗体であり得る。
【０１０６】
特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば血液、血清、または他の組織内の循環における、安定性及び／または保持性を、例えば少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍改良する部分で改変される。例えば、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、ポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシド等の実質的無抗原ポリマーと関連付けられ（例えば抱合され）得る。好適なポリマーは、重量によって有意に変化し得る。約２００〜約３５，０００ダルトン（または約１，０００〜約１５，０００、及び２，０００〜約１２，５００）の範囲の分子数平均重量を有するポリマーが使用され得る。例えば、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、水溶性ポリマー、例えば親水性ポリビニルポリマー、例えばポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンに接合され得る。かかるポリマーの例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、Ｃｈａｐｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１７：７８０−７８３（１９９９）を参照されたい）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール等の、ポリアルキレンオキシドホモポリマー、それらのコポリマー、及びブロックコポリマーの水溶性が維持されるならばそれらのブロックコポリマー、を含む。追加の有用なポリマーには、ポリオキシエチレン等のポリオキシアルキレン、ポリオキシプロピレン、及びポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのブロックコポリマー；ポリメタクリレート；カルボマー；ならびに分岐または非分岐多糖類が挙げられる。治療用抗体の効能は、その血清の持続性を増加させることによって改良され得、それによって、より高い循環レベル、より頻度の低い投与、及び用量の減少を可能にする。ＩｇＧの半減期は、新生児受容体ＦｃＲｎへのｐＨ依存性結合に依存する。内皮細胞の表面上に発現されるＦｃＲｎは、ｐＨ依存性様式でＩｇＧに結合し、それを分解から保護する。ｐＨ７．４ではなくｐＨ６．０にて、ＦｃＲｎに選択的に結合するいくつかの抗体は、様々な動物モデルにおいてより高い半減期を示す。特定の実施形態では、本開示の抗体は、ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの間のインターフェースにて、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ及びＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ（番号付けはＥＵインデックスに従う）等の、１つ以上の変異を有し、これらはＦｃＲｎへの結合親和性及びインビボのＩｇＧ１の半減期を増加させる。他の実施形態では、本明細書の抗体は、野生型ヒトＦｃ領域に対する少なくとも１つの改変を含む改変されたＦｃ領域を有し、改変は、４３４Ｓ、２５２Ｙ／４２８Ｌ、２５２Ｙ／４３４Ｓ、及び４２８Ｌ／４３４Ｓから成る群から選択され、番号付けはＥＵインデックスに従う。
【０１０７】
抗体またはその抗原結合フラグメントは、αｖβ５を発現する細胞に、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、または抗ｍｉＲを送達するために、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、または抗ｍｉＲに接合され得る（例えば、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２３（６）：７０９−１７（２００５）；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，１：ｅ４６（２０１２）を参照されたい）。ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡミミック、または抗ｍｉＲは、急性腎損傷に関与する因子（例えばｐ５３）を標的とすることができる。例えば、以下のうちの１つ以上は、ｐ５３を標的とする抗ｍｉｃｒｏＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１７−３ｐ、ｍｉＲ−３６２、ｍｉＲ−６８５、ｍｉＲ−６８７、ｍｉＲ−２０７、ｍｉＲ−４８９、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−４８６、ｍｉＲ−３６２、ｍｉＲ−４６７、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−６６８、ｍｉＲ−６９４、抗ｍｉＲ−１８ａ、抗ｍｉＲ−１３５ｂ、抗ｍｉＲ−２９６、抗ｍｉＲ−１２７、抗ｍｉＲ−３２２、抗ｍｉＲ−３７９、抗ｍｉＲ−４８７ｂ、抗ｍｉＲ−４９１、抗ｍｉＲ−３２４−３ｐ、抗ｍｉＲ−３７９、抗ｍｉＲ−４５５−３ｐ、及び抗ｍｉＲ−２１０、に接合される、αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、αｖβ５発現細胞を標的とし得る。
【０１０８】
上記の接合抗体は、本明細書に記載される抗体またはそのより低い分子量形態に化学改変を行うことによって調製され得る。抗体を改変するための方法は、当技術で公知である（例えば、ＵＳ５０５７３１３及びＵＳ５１５６８４０）
【０１０９】
抗体を産生する方法
本開示の抗αｖβ５抗体（またはその抗体結合フラグメント）は、細菌または真核細胞内で産生され得る。いくつかの抗体、例えばＦａｂ′は、細菌細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞内で産生され得る。抗体は、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）等の真核細胞内でも産生され得る。さらに、抗体（例えばｓｃＦｖ′）は、ピキア（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３−３５（２００１）を参照されたい）、ハンゼヌラ、またはサッカロミセス、等の酵母細胞内で発現され得る。対象の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチドが構築され、発現ベクターに導入され、その後好適な宿主細胞内で発現される。標準分子生物学技術は、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質導入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収するために使用される。
【０１１０】
抗体が細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）内で発現されるべき場合、発現ベクターは細菌細胞内のベクターの増幅を許容する特徴を有するはずである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１−Ｂｌｕｅ等のＥ．ｃｏｌｉが宿主として使用される場合、ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ内で効率的な発現を可能にし得るプロモーター、例えばｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，３４１：５４４−５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターを有さなければならない。かかるベクターの例には、例えば、Ｍ１３シリーズベクター、ｐＵＣ−シリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ−５Ｘ−１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓシステム」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合、宿主は好ましくは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含み得る。Ｅ．ｃｏｌｉの周辺質への産生のために、ＰｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））が、抗体分泌のためのシグナル配列として使用され得る。細菌発現のために、発現ベクターを細菌細胞に導入するために、塩化カルシウム方法または電気穿孔方法が使用され得る。
【０１１１】
抗体が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、２９３、２９３Ｔ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞等の動物細胞内で発現されるべき場合、発現ベクターは、これらの細胞内での発現に必須なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））、ＭＭＬＶ−ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加え、組換え発現ベクターは、宿主細胞内のベクターの複製を規制する配列（例えば複製の起点）等の追加の配列、及び選択可能マーカー遺伝子を運搬し得る。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、及び同第５，１７９，０１７を参照されたい）。例えば、典型的に、選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞上に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサート等の薬物への抵抗性を与える。選択可能マーカーを有するベクターの例には、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ−ＲＳＶ、ｐＢＫ−ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。
【０１１２】
一実施形態では、抗体は哺乳類細胞内で産生される。抗体を発現するための例示的な哺乳類宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１において記載されるように、ＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載される、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ヒト胚腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えばＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびに遺伝子導入動物、例えば遺伝子導入哺乳類からの細胞を含む。例えば、細胞は乳房上皮細胞である。
【０１１３】
抗体発現のための例示的なシステムでは、抗αｖβ５抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターは、リン酸カルシウム媒介形質導入によって、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクターの内部で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は、高いレベルの遺伝子の転写を駆動するために、エンハンサー／プロモーター調節要素（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素等の、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルス等）に、それぞれ作動可能につながれる。組換え発現ベクターは、ＤＨＦＲ遺伝子も運搬し、これは、メトトレキサート選択／増幅を使用して、ベクターで形質導入されたＣＨＯ細胞の選択を可能にする。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖及び軽鎖の発現を可能にするために培養され、この抗体は、培養培地から回収される。
【０１１４】
抗体は、遺伝子導入動物によっても産生され得る。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、遺伝子導入哺乳類の乳腺において抗体を発現する方法を記載する。乳特異性プロモーター、ならびに対象の抗体及び分泌のためのシグナル配列をコードする核酸を含む、導入遺伝子が構築される。かかる遺伝子導入哺乳類の雌によって産生される乳は、そこで分泌される対象の抗体を含む。抗体は乳から精製され得、またはいくつかの用途のために直接使用され得る。本明細書に記載される核酸のうちの１つ以上を含む動物も提供される。
【０１１５】
本開示の抗体は、宿主細胞の内部または外部（培地等）から単離され得、実質的に純粋で同種の抗体として精製され得る。抗体精製に一般的に使用される単離及び生成のための方法は、抗体の単離及び精製のために使用され得、任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィ、ろ過、限外ろ過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析、及び再結晶を、適切に選択及び組み合わせることによって、単離及び精製され得る。クロマトグラフィは、例えば、親和性クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性クロマトグラフィ、ゲルろ過、逆相クロマトグラフィ、及び吸着クロマトグラフィを含む（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ  Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィは、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣ等の液相クロマトグラフィを使用して実行され得る。親和性クロマトグラフィのために使用されるカラムは、タンパク質Ａカラム及びタンパク質Ｇカラムを含む。タンパク質Ａカラムを使用するカラムの例には、ハイパーＤ、ＰＯＲＯＳ、及びセファロースＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示は、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体も含む。
【０１１６】
抗体の特徴付け
本明細書に記載される抗体のαｖβ５結合特性は、任意の標準方法、例えば次の方法：ＯＣＴＥＴ（登録商標）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ＥＩＡ（酵素免疫測定法）、ＲＩＡ（放射免疫測定法）、及び蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）のうちの１つ以上によって測定され得る。
【０１１７】
対象のタンパク質（抗αｖβ５抗体）と標的（例えばβ５）との結合相互作用は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムを使用して分析され得る。この方法では、タンパク質相互作用、結合特異性、及びエピトープマッピングを決定するために、ＦｏｒｔeＢｉｏカンパニーによって製造されるいくつかの様々な器具のうちの１つ（例えばＯＣＴＥＴ（登録商標）ＱＫｅ及びＱＫ）が使用される。ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムは、カスタムチップを走行しその後センサーに戻る偏光における変化を測定することによって、リアルタイム結合を観察する容易な方法を提供する。
【０１１８】
対象のタンパク質（抗αｖβ５抗体）と標的（例えばβ５）との結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析され得る。ＳＰＲまたは生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）は、相互作用物のいずれも標識することなく、リアルタイムで生体分子特異性相互作用を検出する。ＢＩＡチップの結合表面での質量における変化（結合事象を示す）は、表面付近の光の屈折率の変更をもたらす（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学現象）。屈折率における変化は検出可能なシグナルを生成し、これは生体分子間のリアルタイムの反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号；Ｒａｅｔｈｅｒ（１９８８）Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｐｌａｓｍｏｎｓ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ  ａｎｄ  Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ（１９９１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６３：２３３８−２３４５；Ｓｚａｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：６９９−７０５、及びＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ウプサラ、スウェーデン）によって提供されるオンラインリソースに記載される。ＳＰＲからの情報は、生体分子の標的への結合についての、平衡解離定数（Ｋｄ）の正確で定量的な測定、ならびにＫｏｎ及びＫｏｆｆを含む動態パラメータを提供するために使用され得る。
【０１１９】
エピトープは、さらに、ＢＩＡＣＯＲＥクロマトグラフィ技術を使用して、異なる抗体のヒトαｖβ５またはβ５への結合について互いと競合する能力を評価することによって、直接マッピングされ得る（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＢＩＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ”，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ６．３．２，（Ｍａｙ１９９４）；Ｊｏｈｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６０：１９１−１９８もまた参照されたい）。
【０１２０】
酵素免疫測定法を用いる場合、抗体、例えば抗体産生細胞の培養上清または精製された抗体を含有する試料を、抗原をコーティングした板に加える。アルカリホスファターゼ等の酵素で標識される二次抗体を加え、板をインキュベートし、洗浄した後、ｐ−ニトロフェニルリン酸等の酵素基質を加え、抗原結合活性を評価するために吸収度を測定する。
【０１２１】
抗体を評価するための追加の一般的ガイドライン、例えばウェスタンブロット及び免疫沈降測定法は、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｅｄ．ｂｙ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ｐｒｅｓｓ（１９８８））に記載される。
【０１２２】
変更されたエフェクター機能を有する抗体
抗体及び抗体−抗原複合体と免疫システムの細胞との相互作用は、本明細書でエフェクター機能と称される様々な応答を引き起こす。免疫媒介エフェクター機能は、２つの主要な機構：抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を含む。これらの両方は免疫グロブリンタンパク質の定常領域によって媒介される。したがって抗体Ｆｃ領域は、免疫エフェクター機構との相互作用を画定する部分である。
【０１２３】
ＩｇＧ抗体は、細胞表面Ｆｃγ受容体のファミリーのメンバー及び補体システムのＣ１ｑに結合することによって、免疫システムのエフェクター経路を活性化する。クラスター化した抗体によるエフェクタータンパク質の結紮は、炎症性サイトカインの放出、抗原産生の規制、飲食細胞運動、及び細胞死滅を含む、様々な応答を引き起こす。いくつかの臨床的用途では、これらの応答はモノクローナル抗体の効能に決定的である。他の用途では、これらは炎症及び抗原保有細胞の除去等の望ましくない副作用を引き起こす。したがって本発明は、さらに、変更されたエフェクター機能、例えばエフェクター機能の増加または低下を有する抗体を含むαｖβ５結合タンパク質に関する。
【０１２４】
本発明の抗αｖβ５抗体のエフェクター機能は、多くの既知の測定法のうちの１つを使用して決定され得る。抗αｖβ５抗体のエフェクター機能は、第２の抗αｖβ５抗体に対して、増加または低減され得る。いくつかの実施形態では、第２の抗αｖβ５抗体は、αｖβ５に特異的に結合する任意の抗体であり得る。他の実施形態では、対象の抗αｖβ５抗体が、エフェクター機能を増加または低減するように改変された場合、第２の抗αｖβ５抗体は、抗体の未改変または親版であり得る。
【０１２５】
エフェクター機能は、それによって抗体が、細胞毒性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、または細胞死をもたらすマクロファージ上のＦｃ受容体に結合する、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）と、補体カスケードの活性化によって誘導される細胞死である、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）と、を含む（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）；Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２：７７−９４（１９９５）；及びＲａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）において概観される）。かかるエフェクター機能は、概して、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、当技術で既知である標準測定法を使用して評価され得る（例えば、ＷＯ０５／０１８５７２、ＷＯ０５／００３１７５、及びＵ．Ｓ．６，２４２，１９５を参照されたい）。
【０１２６】
エフェクター機能は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′２、または単鎖Ｆｖ等の、Ｆｃドメインを欠如する抗体フラグメントを使用することによって、回避することができる。代替案は、ＦｃγＲＩに結合するがＣ１ｑならびにＦｃγＲＩＩ及びＲＩＩＩには不十分に結合する、ＩｇＧ４サブタイプ抗体を使用することである。ＩｇＧ２サブタイプもまたＦｃ受容体への結合の低下を有するが、ＦｃγＲＩＩａのＨ１３１アロタイプ及びＣ１ｑへの有意な結合を保持する。したがって、全てのＦｃ受容体及びＣ１ｑへの結合を除去するために、Ｆｃ配列における追加の変更が必要とされる。
【０１２７】
ＡＤＣＣを含むいくつかの抗体エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域に結合する、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）によって媒介される。特定のＦｃＲに対する抗体の親和性、及びよって抗体によって媒介されるエフェクター活性は、抗体のＦｃ及び／または定常領域のアミノ酸配列及び／または翻訳後の改変を変更することによって調節され得る。
【０１２８】
ＦｃＲは、免疫グロブリンアイソタイプに対するそれらの特異性によって画定され、ＩｇＧ抗体に対するＦｃ受容体はＦｃγＲ、ＩｇＥに対するＦｃ受容体はＦｃεＲ、ＩｇＡに対するＦｃ受容体はＦｃαＲ等と称される。ＦｃγＲの３つのサブクラスは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）と特定されている。ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩの両方は２つのタイプ：ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）；ならびにＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）を有する。それぞれのＦｃγＲサブクラスは、２つまたは３つの遺伝子によってコードされ、かつ、代替のＲＮＡスプライシングが複数の転写をもたらすため、ＦｃγＲイソ型における幅広い多様性が存在する。例えば、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）は、イソ型ＩＩａ、ＩＩｂ１、ＩＩｂ２  ＩＩｂ３、及びＩＩｃを含む。
【０１２９】
ＦｃγＲに対するヒト及びマウス抗体上の結合部位は、以前、残基２３３〜２３９（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１），Ｗｏｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：３１９−３３０（１９８６）；Ｄｕｎｃａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：５６３（１９８８）；Ｃａｎｆｉｅｌｄ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３−１４９１（１９９１）；Ｃｈａｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：９０３６−９０４０（１９９１）におけるＥＵインデックス番号付け）から成るいわゆる「下部ヒンジ領域」にマッピングされている。残基２３３〜２３９のうち、Ｐ２３８及びＳ２３９は、結合に関与し得ると言及されるものである。ＦｃγＲへの結合に関与し得る他の以前に言及された領域は、ヒトＦｃγＲＩに対するＧ３１６−Ｋ３３８（ヒトＩｇＧ）（Ｗｏｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：３１９−３３０（１９８６））；ヒトＦｃγＲＩＩＩに対するＫ２７４−Ｒ３０１（ヒトＩｇＧ１）（Ｓａｒｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：４３−５１（１９８４））；及びヒトＦｃγＲＩＩＩに対するＹ４０７−Ｒ４１６（ヒトＩｇＧ）（Ｇｅｒｇｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．１２：７３９−７４３（１９８４）及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７６：６５９１−６６０４（２００１），Ｌａｚａｒ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １０３：４００５−４０１０（２００６）である。ＦｃＲ結合に関与するアミノ酸残基のこれら及び他のストレッチまたは領域は、Ｉｇ−ＦｃＲ複合体の結晶構造の試験から当業者に明白であり得る（例えば、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｎａｔｕｒｅ  ４０６（６７９３）：２６７−７３、及びＳｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．３０（４）：４８１−６を参照されたい）。したがって、本発明の抗αｖβ５抗体は、前述の残基の１つ以上の改変（必要に応じてエフェクター機能を増加または低減するための）を含む。
【０１３０】
モノクローナル抗体エフェクター機能を変更するための別のアプローチは、エフェクター結合相互作用に関与するモノクローナル抗体の表面上のアミノ酸を変異させることを含む（Ｌｕｎｄ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２６５７−６２；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４）。
【０１３１】
抗体のエフェクター機能を増加させる方法は、当技術で公知である（例えば、Ｋｅｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，９０１：２７７−９３（２０１２）；Ｎａｔｓｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｔｈｅｒ．，３：７−１６（２００９）；ＵＳ８，１８８，２３１、ＵＳ７，９６０，５１２を参照されたい）。一実施形態では、αｖβ５抗体は、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２７、２２８、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４９、２５５、２５８、２６０、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７８、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８８、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３１３、３１７、３１８、３２０、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、及び３３７から成る群から選択される位置にて、１、２、３、４、５、６、または７つ以上のアミノ酸置換を有し、Ｆｃ領域における残基の番号付けはＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスのものである。特定の実施形態では、αｖβ５抗体は、Ｄ２２１Ｋ、Ｄ２２１Ｙ、Ｋ２２２Ｅ、Ｋ２２２Ｙ、Ｔ２２３Ｅ、Ｔ２２３Ｋ、Ｈ２２４Ｅ、Ｈ２２４Ｙ、Ｔ２２５Ｅ、Ｔ２２５Ｋ、Ｔ２２５Ｗ、Ｐ２２７Ｅ、Ｐ２２７Ｇ、Ｐ２２７Ｋ、Ｐ２２７Ｙ、Ｐ２２８Ｅ、Ｐ２２８Ｇ、Ｐ２２８Ｋ、Ｐ２２８Ｙ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ｅ、Ｐ２３０Ｇ、Ｐ２３０Ｙ、Ａ２３１Ｅ、Ａ２３１Ｇ、Ａ２３１Ｋ、Ａ２３１Ｐ、Ａ２３１Ｙ、Ｐ２３２Ｅ、Ｐ２３２Ｇ、Ｐ２３２Ｋ、Ｐ２３２Ｙ、Ｅ２３３Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｅ２３３Ｆ、Ｅ２３３Ｇ、Ｅ２３３Ｈ、Ｅ２３３Ｉ、Ｅ２３３Ｋ、Ｅ２３３Ｌ、Ｅ２３３Ｍ、Ｅ２３３Ｎ、Ｅ２３３Ｑ、Ｅ２３３Ｒ、Ｅ２３３Ｓ、Ｅ２３３Ｔ、Ｅ２３３Ｖ、Ｅ２３３Ｗ、Ｅ２３３Ｙ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３４Ｈ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３４Ｋ、Ｌ２３４Ｍ、Ｌ２３４Ｎ、Ｌ２３４Ｐ、Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３４Ｒ、Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｗ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ｆ、Ｌ２３５Ｇ、Ｌ２３５Ｈ、Ｌ２３５Ｉ、Ｌ２３５Ｋ、Ｌ２３５Ｍ、Ｌ２３５Ｎ、Ｌ２３５Ｐ、Ｌ２３５Ｑ、Ｌ２３５Ｒ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、Ｌ２３５Ｖ、Ｌ２３５Ｗ、Ｌ２３５Ｙ、Ｇ２３６Ａ、Ｇ２３６Ｄ、Ｇ２３６Ｅ、Ｇ２３６Ｆ、Ｇ２３６Ｈ、Ｇ２３６Ｉ、Ｇ２３６Ｋ、Ｇ２３６Ｌ、Ｇ２３６Ｍ、Ｇ２３６Ｎ、Ｇ２３６Ｐ、Ｇ２３６Ｑ、Ｇ２３６Ｒ、Ｇ２３６Ｓ、Ｇ２３６Ｔ、Ｇ２３６Ｖ、Ｇ２３６Ｗ、Ｇ２３６Ｙ、Ｇ２３７Ｄ、Ｇ２３７Ｅ、Ｇ２３７Ｆ、Ｇ２３７Ｈ、Ｇ２３７Ｉ、Ｇ２３７Ｋ、Ｇ２３７Ｌ、Ｇ２３７Ｍ、Ｇ２３７Ｎ、Ｇ２３７Ｐ、Ｇ２３７Ｑ、Ｇ２３７Ｒ、Ｇ２３７Ｓ、Ｇ２３７Ｔ、Ｇ２３７Ｖ、Ｇ２３７Ｗ、Ｇ２３７Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｐ２３８Ｅ、Ｐ２３８Ｆ、Ｐ２３８Ｇ、Ｐ２３８Ｈ、Ｐ２３８Ｉ、Ｐ２３８Ｋ、Ｐ２３８Ｌ、Ｐ２３８Ｍ、Ｐ２３８Ｎ、Ｐ２３８Ｑ、Ｐ２３８Ｒ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ｔ、Ｐ２３８Ｖ、Ｐ２３８Ｗ、Ｐ２３８Ｙ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｆ、Ｓ２３９Ｇ、Ｓ２３９Ｈ、Ｓ２３９Ｉ、Ｓ２３９Ｋ、Ｓ２３９Ｌ、Ｓ２３９Ｍ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｐ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｒ、Ｓ２３９Ｔ、Ｓ２３９Ｖ、Ｓ２３９Ｗ、Ｓ２３９Ｙ、Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２４０Ｔ、Ｆ２４１Ｄ、Ｆ２４１Ｅ、Ｆ２４１Ｌ、Ｆ２４１Ｒ、Ｆ２４１Ｓ、Ｆ２４１Ｗ、Ｆ２４１Ｙ、Ｆ２４３Ｅ、Ｆ２４３Ｈ、Ｆ２４３Ｌ、Ｆ２４３Ｑ、Ｆ２４３Ｒ、Ｆ２４３Ｗ、Ｆ２４３Ｙ、Ｐ２４４Ｈ、Ｐ２４５Ａ、Ｋ２４６Ｄ、Ｋ２４６Ｅ、Ｋ２４６Ｈ、Ｋ２４６Ｙ、Ｐ２４７Ｇ、Ｐ２４７Ｖ、Ｄ２４９Ｈ、Ｄ２４９Ｑ、Ｄ２４９Ｙ、Ｒ２５５Ｅ、Ｒ２５５Ｙ、Ｅ２５８Ｈ、Ｅ２５８Ｓ、Ｅ２５８Ｙ、Ｔ２６０Ｄ、Ｔ２６０Ｅ、Ｔ２６０Ｈ、Ｔ２６０Ｙ、Ｖ２６２Ａ、Ｖ２６２Ｅ、Ｖ２６２Ｆ、Ｖ２６２Ｉ、Ｖ２６２Ｔ、Ｖ２６３Ａ、Ｖ２６３Ｉ、Ｖ２６３Ｍ、Ｖ２６３Ｔ、Ｖ２６４Ａ、Ｖ２６４Ｄ、Ｖ２６４Ｅ、Ｖ２６４Ｆ、Ｖ２６４Ｇ、Ｖ２６４Ｈ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｋ、Ｖ２６４Ｌ、Ｖ２６４Ｍ、Ｖ２６４Ｎ、Ｖ２６４Ｐ、Ｖ２６４Ｑ、Ｖ２６４Ｒ、Ｖ２６４Ｓ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｗ、Ｖ２６４Ｙ、Ｄ２６５Ｆ、Ｄ２６５Ｇ、Ｄ２６５Ｈ、Ｄ２６５Ｉ、Ｄ２６５Ｋ、Ｄ２６５Ｌ、Ｄ２６５Ｍ、Ｄ２６５Ｎ、Ｄ２６５Ｐ、Ｄ２６５Ｑ、Ｄ２６５Ｒ、Ｄ２６５Ｓ、Ｄ２６５Ｔ、Ｄ２６５Ｖ、Ｄ２６５Ｗ、Ｄ２６５Ｙ、Ｖ２６６Ａ、Ｖ２６６Ｉ、Ｖ２６６Ｍ、Ｖ２６６Ｔ、Ｓ２６７Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｓ２６７Ｆ、Ｓ２６７Ｈ、Ｓ２６７Ｉ、Ｓ２６７Ｋ、Ｓ２６７Ｌ、Ｓ２６７Ｍ、Ｓ２６７Ｎ、Ｓ２６７Ｐ、Ｓ２６７Ｑ、Ｓ２６７Ｒ、Ｓ２６７Ｔ、Ｓ２６７Ｖ、Ｓ２６７Ｗ、Ｓ２６７Ｙ、Ｈ２６８Ｄ、Ｈ２６８Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｈ２６８Ｇ、Ｈ２６８Ｉ、Ｈ２６８Ｋ、Ｈ２６８Ｌ、Ｈ２６８Ｍ、Ｈ２６８Ｐ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｒ、Ｈ２６８Ｔ、Ｈ２６８Ｖ、Ｈ２６８Ｗ、Ｅ２６９Ｆ、Ｅ２６９Ｇ、Ｅ２６９Ｈ、Ｅ２６９Ｉ、Ｅ２６９Ｋ、Ｅ２６９Ｌ、Ｅ２６９Ｍ、Ｅ２６９Ｎ、Ｅ２６９Ｐ、Ｅ２６９Ｒ、Ｅ２６９Ｓ、Ｅ２６９Ｔ、Ｅ２６９Ｖ、Ｅ２６９Ｗ、Ｅ２６９Ｙ、Ｄ２７０Ｆ、Ｄ２７０Ｇ、Ｄ２７０Ｈ、Ｄ２７０Ｉ、Ｄ２７０Ｌ、Ｄ２７０Ｍ、Ｄ２７０Ｐ、Ｄ２７０Ｑ、Ｄ２７０Ｒ、Ｄ２７０Ｓ、Ｄ２７０Ｔ、Ｄ２７０Ｗ、Ｄ２７０Ｙ、Ｐ２７１Ａ、Ｐ２７１Ｄ、Ｐ２７１Ｅ、Ｐ２７１Ｆ、Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２７１Ｈ、Ｐ２７１Ｉ、Ｐ２７１Ｋ、Ｐ２７１Ｌ、Ｐ２７１Ｍ、Ｐ２７１Ｎ、Ｐ２７１Ｑ、Ｐ２７１Ｒ、Ｐ２７１Ｓ、Ｐ２７１Ｔ、Ｐ２７１Ｖ、Ｐ２７１Ｗ、Ｐ２７１Ｙ、Ｅ２７２Ｄ、Ｅ２７２Ｆ、Ｅ２７２Ｇ、Ｅ２７２Ｈ、Ｅ２７２Ｉ、Ｅ２７２Ｋ、Ｅ２７２Ｌ、Ｅ２７２Ｍ、Ｅ２７２Ｐ、Ｅ２７２Ｒ、Ｅ２７２Ｓ、Ｅ２７２Ｔ、Ｅ２７２Ｖ、Ｅ２７２Ｗ、Ｅ２７２Ｙ、Ｖ２７３Ｉ、Ｋ２７４Ｄ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｆ、Ｋ２７４Ｇ、Ｋ２７４Ｈ、Ｋ２７４Ｉ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｍ、Ｋ２７４Ｎ、Ｋ２７４Ｐ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｖ、Ｋ２７４Ｗ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｌ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｄ、Ｎ２７６Ｅ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｇ、Ｎ２７６Ｈ、Ｎ２７６Ｉ、Ｎ２７６Ｌ、Ｎ２７６Ｍ、Ｎ２７６Ｐ、Ｎ２７６Ｒ、Ｎ２７６Ｓ、Ｎ２７６Ｔ、Ｎ２７６Ｖ、Ｎ２７６Ｗ、Ｎ２７６Ｙ、Ｙ２７８Ｄ、Ｙ２７８Ｅ、Ｙ２７８Ｇ、Ｙ２７８Ｈ、Ｙ２７８Ｉ、Ｙ２７８Ｋ、Ｙ２７８Ｌ、Ｙ２７８Ｍ、Ｙ２７８Ｎ、Ｙ２７８Ｐ、Ｙ２７８Ｑ、Ｙ２７８Ｒ、Ｙ２７８Ｓ、Ｙ２７８Ｔ、Ｙ２７８Ｖ、Ｙ２７８Ｗ、Ｄ２８０Ｇ、Ｄ２８０Ｋ、Ｄ２８０Ｌ、Ｄ２８０Ｐ、Ｄ２８０Ｗ、Ｇ２８１Ｄ、Ｇ２８１Ｅ、Ｇ２８１Ｋ、Ｇ２８１Ｎ、Ｇ２８１Ｐ、Ｇ２８１Ｑ、Ｇ２８１Ｙ、Ｖ２８２Ｅ、Ｖ２８２Ｇ、Ｖ２８２Ｋ、Ｖ２８２Ｐ、Ｖ２８２Ｙ、Ｅ２８３Ｇ、Ｅ２８３Ｈ、Ｅ２８３Ｋ、Ｅ２８３Ｌ、Ｅ２８３Ｐ、Ｅ２８３Ｒ、Ｅ２８３Ｙ、Ｖ２８４Ｄ、Ｖ２８４Ｅ、Ｖ２８４Ｌ、Ｖ２８４Ｎ、Ｖ２８４Ｑ、Ｖ２８４Ｔ、Ｖ２８４Ｙ、Ｈ２８５Ｄ、Ｈ２８５Ｅ、Ｈ２８５Ｋ、Ｈ２８５Ｑ、Ｈ２８５Ｗ、Ｈ２８５Ｙ、Ｎ２８６Ｅ、Ｎ２８６Ｇ、Ｎ２８６Ｐ、Ｎ２８６Ｙ、Ｋ２８８Ｄ、Ｋ２８８Ｅ、Ｋ２８８Ｙ、Ｋ２９０Ｄ、Ｋ２９０Ｈ、Ｋ２９０Ｌ、Ｋ２９０Ｎ、Ｋ２９０Ｗ、Ｐ２９１Ｄ、Ｐ２９１Ｅ、Ｐ２９１Ｇ、Ｐ２９１Ｈ、Ｐ２９１Ｉ、Ｐ２９１Ｑ、Ｐ２９１Ｔ、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｔ、Ｒ２９２Ｙ、Ｅ２９３Ｆ、Ｅ２９３Ｇ、Ｅ２９３Ｈ、Ｅ２９３Ｉ、Ｅ２９３Ｌ、Ｅ２９３Ｍ、Ｅ２９３Ｎ、Ｅ２９３Ｐ、Ｅ２９３Ｒ、Ｅ２９３Ｓ、Ｅ２９３Ｔ、Ｅ２９３Ｖ、Ｅ２９３Ｗ、Ｅ２９３Ｙ、Ｅ２９４Ｆ、Ｅ２９４Ｇ、Ｅ２９４Ｈ、Ｅ２９４Ｉ、Ｅ２９４Ｋ、Ｅ２９４Ｌ、Ｅ２９４Ｍ、Ｅ２９４Ｐ、Ｅ２９４Ｒ、Ｅ２９４Ｓ、Ｅ２９４Ｔ、Ｅ２９４Ｖ、Ｅ２９４Ｗ、Ｅ２９４Ｙ、Ｑ２９５Ｄ、Ｑ２９５Ｅ、Ｑ２９５Ｆ、Ｑ２９５Ｇ、Ｑ２９５Ｈ、Ｑ２９５Ｉ、Ｑ２９５Ｍ、Ｑ２９５Ｎ、Ｑ２９５Ｐ、Ｑ２９５Ｒ、Ｑ２９５Ｓ、Ｑ２９５Ｔ、Ｑ２９５Ｖ、Ｑ２９５Ｗ、Ｑ２９５Ｙ、Ｙ２９６Ａ、Ｙ２９６Ｄ、Ｙ２９６Ｅ、Ｙ２９６Ｇ、Ｙ２９６Ｈ、Ｙ２９６Ｉ、Ｙ２９６Ｋ、Ｙ２９６Ｌ、Ｙ２９６Ｍ、Ｙ２９６Ｎ、Ｙ２９６Ｑ、Ｙ２９６Ｒ、Ｙ２９６Ｓ、Ｙ２９６Ｔ、Ｙ２９６Ｖ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｅ、Ｎ２９７Ｆ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｈ、Ｎ２９７Ｉ、Ｎ２９７Ｋ、Ｎ２９７Ｌ、Ｎ２９７Ｍ、Ｎ２９７Ｐ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｒ、Ｎ２９７Ｓ、Ｎ２９７Ｔ、Ｎ２９７Ｖ、Ｎ２９７Ｗ、Ｎ２９７Ｙ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｅ、Ｓ２９８Ｆ、Ｓ２９８Ｈ、Ｓ２９８Ｉ、Ｓ２９８Ｋ、Ｓ２９８Ｍ、Ｓ２９８Ｎ、Ｓ２９８Ｑ、Ｓ２９８Ｒ、Ｓ２９８Ｔ、Ｓ２９８Ｗ、Ｓ２９８Ｙ、Ｔ２９９Ａ、Ｔ２９９Ｄ、Ｔ２９９Ｅ、Ｔ２９９Ｆ、Ｔ２９９Ｇ、Ｔ２９９Ｈ、Ｔ２９９Ｉ、Ｔ２９９Ｋ、Ｔ２９９Ｌ、Ｔ２９９Ｍ、Ｔ２９９Ｎ、Ｔ２９９Ｐ、Ｔ２９９Ｑ、Ｔ２９９Ｒ、Ｔ２９９Ｓ、Ｔ２９９Ｖ、Ｔ２９９Ｗ、Ｔ２９９Ｙ、Ｙ３００Ａ、Ｙ３００Ｄ、Ｙ３００Ｅ、Ｙ３００Ｇ、Ｙ３００Ｈ、Ｙ３００Ｋ、Ｙ３００Ｍ、Ｙ３００Ｎ、Ｙ３００Ｐ、Ｙ３００Ｑ、Ｙ３００Ｒ、Ｙ３００Ｓ、Ｙ３００Ｔ、Ｙ３００Ｖ、Ｙ３００Ｗ、Ｒ３０１Ｄ、Ｒ３０１Ｅ、Ｒ３０１Ｈ、Ｒ３０１Ｙ、Ｖ３０２Ｉ、Ｖ３０３Ｄ、Ｖ３０３Ｅ、Ｖ３０３Ｙ、Ｓ３０４Ｄ、Ｓ３０４Ｈ、Ｓ３０４Ｌ、Ｓ３０４Ｎ、Ｓ３０４Ｔ、Ｖ３０５Ｅ、Ｖ３０５Ｔ、Ｖ３０５Ｙ、Ｗ３１３Ｆ、Ｋ３１７Ｅ、Ｋ３１７Ｑ、Ｅ３１８Ｈ、Ｅ３１８Ｌ、Ｅ３１８Ｑ、Ｅ３１８Ｒ、Ｅ３１８Ｙ、Ｋ３２０Ｄ、Ｋ３２０Ｆ、Ｋ３２０Ｇ、Ｋ３２０Ｈ、Ｋ３２０Ｉ、Ｋ３２０Ｌ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｐ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｔ、Ｋ３２０Ｖ、Ｋ３２０Ｗ、Ｋ３２０Ｙ、Ｋ３２２Ｄ、Ｋ３２２Ｆ、Ｋ３２２Ｇ、Ｋ３２２Ｈ、Ｋ３２２Ｉ、Ｋ３２２Ｐ、Ｋ３２２Ｓ、Ｋ３２２Ｔ、Ｋ３２２Ｖ、Ｋ３２２Ｗ、Ｋ３２２Ｙ、Ｖ３２３Ｉ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｆ、Ｓ３２４Ｇ、Ｓ３２４Ｈ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｌ、Ｓ３２４Ｍ、Ｓ３２４Ｐ、Ｓ３２４Ｒ、Ｓ３２４Ｔ、Ｓ３２４Ｖ、Ｓ３２４Ｗ、Ｓ３２４Ｙ、Ｎ３２５Ａ、Ｎ３２５Ｄ、Ｎ３２５Ｅ、Ｎ３２５Ｆ、Ｎ３２５Ｇ、Ｎ３２５Ｈ、Ｎ３２５Ｉ、Ｎ３２５Ｋ、Ｎ３２５Ｌ、Ｎ３２５Ｍ、Ｎ３２５Ｐ、Ｎ３２５Ｑ、Ｎ３２５Ｒ、Ｎ３２５Ｓ、Ｎ３２５Ｔ、Ｎ３２５Ｖ、Ｎ３２５Ｗ、Ｎ３２５Ｙ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｌ、Ｋ３２６Ｐ、Ｋ３２６Ｔ、Ａ３２７Ｄ、Ａ３２７Ｅ、Ａ３２７Ｆ、Ａ３２７Ｈ、Ａ３２７Ｉ、Ａ３２７Ｋ、Ａ３２７Ｌ、Ａ３２７Ｍ、Ａ３２７Ｎ、Ａ３２７Ｐ、Ａ３２７Ｒ、Ａ３２７Ｓ、Ａ３２７Ｔ、Ａ３２７Ｖ、Ａ３２７Ｗ、Ａ３２７Ｙ、Ｌ３２８Ａ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｌ３２８Ｇ、Ｌ３２８Ｈ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｋ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｎ、Ｌ３２８Ｐ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｒ、Ｌ３２８Ｓ、Ｌ３２８Ｔ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｗ、Ｌ３２８Ｙ、Ｐ３２９Ｄ、Ｐ３２９Ｅ、Ｐ３２９Ｆ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｈ、Ｐ３２９Ｉ、Ｐ３２９Ｋ、Ｐ３２９Ｌ、Ｐ３２９Ｍ、Ｐ３２９Ｎ、Ｐ３２９Ｑ、Ｐ３２９Ｒ、Ｐ３２９Ｓ、Ｐ３２９Ｔ、Ｐ３２９Ｖ、Ｐ３２９Ｗ、Ｐ３２９Ｙ、Ａ３３０Ｅ、Ａ３３０Ｆ、Ａ３３０Ｇ、Ａ３３０Ｈ、Ａ３３０Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｍ、Ａ３３０Ｎ、Ａ３３０Ｐ、Ａ３３０Ｒ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３０Ｔ、Ａ３３０Ｖ、Ａ３３０Ｗ、Ａ３３０Ｙ、Ｐ３３１Ｄ、Ｐ３３１Ｆ、Ｐ３３１Ｈ、Ｐ３３１Ｉ、Ｐ３３１Ｌ、Ｐ３３１Ｍ、Ｐ３３１Ｑ、Ｐ３３１Ｒ、Ｐ３３１Ｔ、Ｐ３３１Ｖ、Ｐ３３１Ｗ、Ｐ３３１Ｙ、Ｉ３３２Ａ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｆ、Ｉ３３２Ｈ、Ｉ３３２Ｋ、Ｉ３３２Ｌ、Ｉ３３２Ｍ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｐ、Ｉ３３２Ｑ、Ｉ３３２Ｒ、Ｉ３３２Ｓ、Ｉ３３２Ｔ、Ｉ３３２Ｖ、Ｉ３３２Ｗ、Ｉ３３２Ｙ、Ｅ３３３Ｆ、Ｅ３３３Ｈ、Ｅ３３３Ｉ、Ｅ３３３Ｌ、Ｅ３３３Ｍ、Ｅ３３３Ｐ、Ｅ３３３Ｔ、Ｅ３３３Ｙ
、Ｋ３３４Ｆ、Ｋ３３４Ｉ、Ｋ３３４Ｌ、Ｋ３３４Ｐ、Ｋ３３４Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｆ、Ｔ３３５Ｇ、Ｔ３３５Ｈ、Ｔ３３５Ｉ、Ｔ３３５Ｌ、Ｔ３３５Ｍ、Ｔ３３５Ｎ、Ｔ３３５Ｐ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｓ、Ｔ３３５Ｖ、Ｔ３３５Ｗ、Ｔ３３５Ｙ、Ｉ３３６Ｅ、Ｉ３３６Ｋ、Ｉ３３６Ｙ、Ｓ３３７Ｅ、Ｓ３３７Ｈ、及びＳ３３７Ｎから成る群から選択されるアミノ酸置換の１、２、３、４、５、６、または７つ以上を有し、Ｆｃ領域における残基の番号付けはＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスのものである。特定の実施形態では、αｖβ５抗体は、次の変異：Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａ、Ｓ２９８Ａ、Ａ３３０Ｌ  Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、及びＫ３３４Ａのうちの、１、２、または３つを含む。
【０１３２】
オリゴ糖、具体的には、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインにおけるアスパラギン−２９７でのＮ結合型オリゴ糖の存在は、ＦｃγＲならびにＣ１ｑへの結合のために重要である。抗体のフコース含量を低減することは、エフェクター機能を改良する（例えばＵＳ８，１６３，５５１を参照されたい）。特定の実施形態では、αｖβ５抗体は、フコシル化の低減と、エフェクター機能を増加させるアミノ酸置換（例えば、次の変異：Ｓ２９８Ａ；Ｅ３３３Ａ、及びＫ３３４Ａのうちの１、２、または３つ）と、を有する。エフェクター機能は、約６０〜２００ｎｇ／ｍＬ（例えば６０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍｌ）の阻害剤の濃度の、αマンノシダーゼＩ阻害剤（例えばキフネンシン）の存在下で、本明細書に記載される抗αｖβ５抗体を調製及び発現することによっても達成され得る。αマンノシダーゼＩ阻害剤の存在下で発現される抗体は主にオリゴマンノース型グリカンを含み、概して、ＡＤＣＣ活性及びＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性の増加を示すが、Ｃ１ｑ結合の低下を示す。
【０１３３】
エフェクター機能の増加を有する本開示の抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗αｖβ５抗体に対して１つ以上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に対する結合親和性の増加を有する抗体を含む。したがって、ＦｃＲ結合親和性の増加を有する抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗αｖβ５抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体への結合親和性において１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、または５倍以上の増加を示す抗αｖβ５抗体を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター機能の増加を有する抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗体に対して約１０倍高い親和性でＦｃＲに結合する。他の実施形態では、エフェクター機能の増加を有する抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗体に対して、約１５倍高い親和性で、または約２０倍高い親和性で、ＦｃＲに結合する。ＦｃＲ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ、ならびにそれらのイソ型、ならびにＦｃεＲ、ＦｃμＲ、ＦｃδＲ、及び／またはＦｃαＲのうちの１つ以上であり得る。特定の実施形態では、エフェクター機能の増加を有する抗αｖβ５抗体は、ＦｃγＲＩＩａへの結合親和性において１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、または５倍以上の増加を示す。
【０１３４】
エフェクター機能を低下させるために、異なるサブタイプ配列セグメントの組合せ（例えばＩｇＧ２とＩｇＧ４との組合せ）を使用して、いずれかのサブタイプ単独よりもＦｃγ受容体への結合における大きい低下を与えることができる（Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９：２６１３−１６２４（１９９９）；Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４０：５８５−５９３（２００３））。さらに、Ｎ結合型グリコシル化の部位は、エフェクター機能の低下の手段として除去され得る。いくつかまたは全てのＦｃ受容体サブタイプに対する（及びよってエフェクター機能に対する）親和性の変更及び／または低下を有する、多数のＦｃ変形は当技術で既知である。例えば、ＵＳ２００７／０２２４１８８；ＵＳ２００７／０１４８１７１；ＵＳ２００７／００４８３００；ＵＳ２００７／００４１９６６；ＵＳ２００７／０００９５２３；ＵＳ２００７／００３６７９９；ＵＳ２００６／０２７５２８３；ＵＳ２００６／０２３５２０８；ＵＳ２００６／０１９３８５６；ＵＳ２００６／０１６０９９６；ＵＳ２００６／０１３４１０５；ＵＳ２００６／００２４２９８；ＵＳ２００５／０２４４４０３；ＵＳ２００５／０２３３３８２；ＵＳ２００５／０２１５７６８；ＵＳ２００５／０１１８１７４；ＵＳ２００５／００５４８３２；ＵＳ２００４／０２２８８５６；ＵＳ２００４／１３２１０１；ＵＳ２００３／１５８３８９；を参照されたく、ＵＳ７，１８３，３８７；６，７３７，０５６；６，５３８，１２４；６，５２８，６２４；６，１９４，５５１；５，６２４，８２１；５，６４８，２６０もまた参照されたい。特定の実施形態では、位置２３２、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６４、２６５、２６７、２６９、２７０、２９９、３２５、３２８、３２９、及び３３０（Ｋａｂａｔに従って番号付けされる）のアミノ酸は、エフェクター機能を低下させるために置換される。エフェクター機能を低下させる置換の非限定的な例には、Ｋ３２２Ａ；Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；Ｇ２３６Ｔ；Ｇ２３６Ｒ；Ｇ２３６Ｑ；Ｈ２６８Ａ；Ｈ２６８Ｑ；Ｖ３０９Ｌ；Ａ３３０Ｓ；Ｐ３３１Ｓ；Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ；Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６Ｑ＋Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ；及びＬ２３５Ｅ＋Ｅ３１８Ａ／Ｋ３２０Ａ／Ｋ３２２Ａのうちの１つ以上が挙げられる。
【０１３５】
エフェクター機能の低下を有する本発明の抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗αｖβ５抗体に対して、１つ以上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に対する結合親和性の低下を有する抗体を含む。したがって、ＦｃＲ結合親和性の低下を有する抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗αｖβ５抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体への結合親和性における、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、または５倍以上の低下を示す抗αｖβ５抗体を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター機能の低下を有する抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗体に対して約１０倍低い親和性でＦｃＲに結合する。他の実施形態では、エフェクター機能の低下を有する抗αｖβ５抗体は、親または非変形抗体に対して、約１５倍低い親和性または約２０倍低い親和性で、ＦｃＲに結合する。ＦｃＲ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ、ならびにそれらのイソ型、ならびにＦｃεＲ、ＦｃμＲ、ＦｃδＲ、及び／またはＦｃαＲのうちの１つ以上であり得る。特定の実施形態では、エフェクター機能の低下を有する抗αｖβ５抗体は、ＦｃγＲＩＩａへの結合親和性における１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、または５倍以上の低下を示す。
【０１３６】
ＣＤＣでは、抗体−抗原複合体は補体を結合させ、補体カスケードの活性化及び膜侵襲複合体の生成をもたらす。古典的な補体経路の活性化は、補体システムの第１の要素（Ｃ１ｑ）を、抗体の同族抗原に結合される抗体（適切なサブクラスの）に結合することによって開始され、よって、補体カスケードの活性化は、免疫グロブリンのＣ１ｑタンパク質への結合親和性によって部分的に規制される。補体カスケードを活性化するために、Ｃ１ｑが、抗原性標的に付着する、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３の少なくとも２つの分子に結合すること、しかしＩｇＭの１つのみの分子に結合することが必須である（Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２：７７−９４（１９９５）ｐ．８０）。補体活性化を評価するために、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）において記載される、ＣＤＣ測定法が行われ得る。
【０１３７】
ＩｇＧ分子の様々な残基は、ＣＨ２ドメイン上のＧｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、及びＬｙｓ３２２残基；同一ベータストランドに極めて接近するターン上に位置するアミノ酸残基３３１；下部ヒンジ領域内に位置するＬｙｓ２３５及びＧｌｙ２３７残基；ならびにＣＨ２ドメインのＮ末端領域内に位置する残基２３１〜２３８；を含み、Ｃ１ｑへの結合に関与する。（例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：１５２Ａ（Ａｂｓｔｒａｃｔ）（１９９３），ＷＯ９４／２９３５１；Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７８：６６１−６６７（１９９３）；Ｂｒｅｋｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．，２４：２５４２−４７（１９９４）；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ；Ｎａｔｕｒｅ，２８８：３３８−３４４（１９８０）；Ｄｕｎｃａｎ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：７３８−４０（１９８８）；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：４１７８−４１８４（２０００）；Ｕ．Ｓ．５，６４８，２６０、及びＵ．Ｓ．５，６２４，８２１を参照されたい）。
【０１３８】
Ｃ１ｑ結合の改良を有する抗αｖβ５抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のアミノ酸位置３２６、３２７、３３３、及び３３４のうちの１、２、３、または４つにおけるアミノ酸置換を含み得、ＩｇＧ  Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスのものである。一実施形態では、抗αｖβ５抗体は次のアミノ酸置換：Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓを含み、これらは、ＩｇＧ１抗体のＣ１ｑへの結合を増加させることが既知である（Ｓｔｅｕｒｅｒ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５（３）：１１６５−７４（１９９５））。
【０１３９】
Ｃ１ｑ結合の低下を有する抗αｖβ５抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２９、及び３３１のうちの１つ、２つ、３つ、または４つにおけるアミノ酸置換を含み得、ＩｇＧ  Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスのものである。ＩｇＧ１の一例として、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインのＣＯＯＨ末端領域における２つの変異、Ｋ３２２Ａ及びＰ３２９Ａは、ＣＤＣ経路を活性化せず、Ｃ１ｑ結合における１００倍を超える低下をもたらすことが示された（ＵＳ６，２４２，１９５）。
【０１４０】
したがって、特定の実施形態では、本発明の抗αｖβ５抗体は、第２の抗αｖβ５抗体に対する、補体タンパク質への結合の増加または低下を示す。特定の実施形態では、本発明の抗αｖβ５抗体は、第２の抗αｖβ５抗体に対して、Ｃ１ｑへの結合の、約１．５倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、または約１５倍以上の倍率での増加または低下を示す。
【０１４１】
よって、本発明の特定の実施形態では、本明細書で提供される抗αｖβ５抗体のＣＤＣ活性を増加または低下させるために、これらの残基のうちの１つ以上が、改変、置換、または除去され得、または１つ以上のアミノ酸残基が挿入され得る。
【０１４２】
特定の他の実施形態では、本発明は、１つ以上のＦｃＲ受容体への結合の低下を示すが、補体を結合させる能力を維持する（例えば、生来の、非変形、もしくは親抗αｖβ５抗体と同等、またはいくつかの実施形態ではより低い程度に）抗αｖβ５抗体を提供する。したがって、本発明の抗αｖβ５抗体は、ＦｃＲ、例えばＦｃγＲＩＩａ（例えば血小板上で発現されるＦｃγＲＩＩａ）等への結合の低下を示す一方で、補体に結合してそれを活性化させ得る。ＦｃγＲＩＩａ（例えば血小板上で発現されるＦｃγＲＩＩ等）への結合の低下を有するか、または結合を有さないが、少なくともある程度Ｃ１ｑに結合して補体カスケードを活性化することができるかかる抗体は、おそらく所望であるエフェクター機能を維持する一方で、血栓塞栓症の危険性を低下させ得る。代替の実施形態では、本発明の抗αｖβ５抗体は、１つ以上のＦｃＲへの結合の低下を示すが、１つ以上の他のＦｃＲに結合する能力は維持する。例えば、ＵＳ２００７−０００９５２３、２００６−０１９４２９０、２００５−０２３３３８２、２００４−０２２８８５６、及び２００４−０１９１２４４を参照されたく、これらはＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ、及び／またはＦｃＲＩＩＩへの結合の低下を有する抗体を生成する様々なアミノ酸改変、ならびに、あるＦｃＲへの結合の増加をもたらすが、別のＦｃＲへの結合の低下をもたらすアミノ酸置換を記載する。
【０１４３】
したがって、抗αｖβ抗体の定常領域を含むエフェクター機能は、定常領域及び特にＦｃ領域の特性を変更することによって調節され得る。特定の実施形態では、エフェクター機能の増加または低下を有する抗αｖβ５抗体は、エフェクター機能を有する第２の抗体と比較され、第２の抗体は、エフェクター機能を媒介する生来の定常領域またはＦｃ領域を含む、非変形、生来、または親抗体であり得る。
【０１４４】
生来配列Ｆｃまたは定常領域は、自然に見つけられるＦｃまたは定常鎖領域のアミノ酸配列と同一なアミノ酸配列を含む。好ましくは、相対的エフェクター機能を評価するために使用される対照分子は、試験または変形抗体と同じタイプ／サブタイプのＦｃ領域を含む。変形または変更されたＦｃまたは定常領域は、少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば翻訳後の改変、アミノ酸置換、挿入、または欠失等）によって生来配列重鎖領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。したがって、変形定常領域は、例えば、変更されたグリコシル化パターンを含む変更された翻訳後の改変をもたらす、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含み得る。親抗体またはＦｃ領域は、例えば、エフェクター機能の変更、例えば増加を有する定常領域（すなわちＦｃ）を構築するために使用される通常のエフェクター機能を有する変形である。
【０１４５】
エフェクター機能（複数可）の変更（例えば増加）を有する抗体は、変形定常、Ｆｃ、または重鎖領域を有する抗体を、操作または産生することによって生成され得る。組換えＤＮＡ技術ならびに／または細胞培養及び発現条件は、変更された機能及び／または活性を有する抗体を産生するために使用され得る。例えば、組換えＤＮＡ技術は、エフェクター機能を含む抗体機能に影響を及ぼす、領域（例えばＦｃまたは定常領域等）における１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を操作するために使用され得る。あるいは、例えばグリコシル化パターン等の、翻訳後の改変における変更は、宿主細胞ならびに抗体が産生される細胞培養及び発現条件を操作することによって達成され得る。
【０１４６】
本発明の特定の実施形態は、配列番号３のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号４のＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号５のＶＨ  ＣＤＲ３から選択される１つ以上（すなわち１、２、もしくは３つ）の重鎖ＣＤＲ配列；または、配列番号２１のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２４のＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号５のＶＨ  ＣＤＲ３；もしくは、配列番号２２のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２５のＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号５のＶＨ  ＣＤＲ３；もしくは、配列番号２３のＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２６のＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号７のＶＨ  ＣＤＲ３；から選択される１つ以上（すなわち１、２、もしくは３つ）の重鎖代替ＣＤＲ配列を含む、抗αｖβ５抗体に関し、この抗体は、生来または親Ｆｃ領域と比較してエフェクター機能の増加または低下を与える変形Ｆｃ領域をさらに含む。さらなる実施形態では、抗αｖβ５抗体は、ＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）のうちの少なくとも２つを含み、他の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）配列のうちの３つ全てを含む。これらの抗αｖβ５抗体は、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害し、αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害し、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害し、ＴＧＦ−β活性化を阻害し、かつ／またはαｖβ５とそのＲＧＤモチーフ含有リガンドとの間の相互作用を阻害する。
【０１４７】
本発明の他の実施形態は、配列番号６のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号７のＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号８のＶＬ  ＣＤＲ３から選択される１つ以上（すなわち１、２、もしくは３つ）の軽鎖ＣＤＲ配列；または、配列番号２８のＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号２９のＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号３０のＶＬ  ＣＤＲ３から選択される１つ以上（すなわち１、２、もしくは３つ）の軽鎖代替ＣＤＲ配列を含む、抗αｖβ５抗体に関し、この抗体は、生来または親Ｆｃ領域と比較してエフェクター機能の増加または低下を与える変形Ｆｃ領域をさらに含む。さらなる実施形態では、抗αｖβ５抗体は、軽鎖ＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）のうちの少なくとも２つを含み、他の実施形態では、この抗体は、軽鎖ＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）配列の３つ全てを含む。これらの抗αｖβ５抗体は、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害し、αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害し、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害し、ＴＧＦ−β活性化を阻害し、かつ／またはαｖβ５とそのＲＧＤモチーフ含有リガンドとの間の相互作用を阻害する。
【０１４８】
本発明のさらなる実施形態では、エフェクター機能の増加または低下を有する抗αｖβ５抗体は、３つ全ての軽鎖ＣＤＲ配列（ＣＤＲ１、２、及び３）または配列番号１１の３つ全ての軽鎖代替ＣＤＲを含み、かつ、３つ全ての重鎖ＣＤＲ配列（ＣＤＲ１、２、及び３）または配列番号９の３つ全ての重鎖代替ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、エフェクター機能の増加または低下を有する抗αｖβ５抗体は、配列番号９の１、２、または３つのＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）における、３つ以下、２つ以下、または１つのアミノ酸置換、及び、配列番号１１の１、２、または３つのＣＤＲ（または代替ＣＤＲ）における、３つ以下、２つ以下、または１つのアミノ酸置換を含む。これらの抗αｖβ５抗体は、αｖβ５とビトロネクチンとの間の相互作用を阻害し、αｖβ５とＴＧＦ−βのＬＡＰとの間の相互作用を阻害し、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害し、ＴＧＦ−β活性化を阻害し、かつ／またはαｖβ５とそのＲＧＤモチーフ含有リガンドとの間の相互作用を阻害する。
【０１４９】
変更されたグリコシル化を有する抗αｖβ５抗体
グリカン除去は、種をわたるＦｃ受容体ファミリーの全てのメンバーへの結合を大幅に低下させるべき構造変化を産生する。抗αｖβ５抗体を含むグリコシル化抗体において、Ｆｃ二量体のＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ結合型部位に付着するグリカン（オリゴ糖）は、ＣＨ２ドメイン間に封入され、糖残基は対向するＣＨ２ドメイン上の特異的なアミノ酸残基と接触する。異なるグリコシル化パターンは、抗体の異なる生体特性に関連付けられる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，１９９７，Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６５：１１１−１２８；Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５：２６−３２）。ある特異的な糖型は、潜在的に有利な生体特性を与える。グリカンの喪失は、ドメイン間の間隔を変化させ、互いに対するそれらの移動度を増加させ、Ｆｃ受容体ファミリーの全てのメンバーの結合に阻害効果を有することが期待される。例えば、様々なグリコシル化抗体を用いたインビトロ研究は、ＣＨ２グリカンの除去は、Ｆｃ受容体及び補体タンパク質Ｃ１Ｑに結合する抗体が大幅に減少されるように、Ｆｃ構造を変更することを実証している。エフェクター機能を低下させるための別の既知のアプローチは、ＦｃのＣＨ２ドメインにおける位置２９７（ＥＵ番号付け）におけるＮ結合型グリカンの産生を阻害するかまたはそれを除去することである（Ｎｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３  ＰＮＡＳ  ８０：６６３２；Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：４０７；Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：２５９５；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：１１４５；Ｄｏｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １０：２１１；Ｈａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５：１６５；Ｌｅａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７２：４８１；Ｐｏｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：２３３；Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１）。異なる糖型は、薬物動態、薬力学、受容体相互作用、及び組織特異性標的を含む治療特性に大きな影響を及ぼし得る（Ｇｒａｄｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２８５−２９７）。特に、抗体については、オリゴ糖構造は、抗体のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣを誘導する補体複合体Ｃ１への結合、及びＡＤＣＣ経路の調節の原因となるＦｃγＲ受容体への結合）に加え、プロテアーゼ抵抗性に関する特性、ＦｃＲｎ受容体によって媒介される抗体の血清半減期、貪食、及び抗体フィードバックに影響を及ぼし得る（Ｎｏｓｅ  ａｎｄ  Ｗｉｇｚｅｌｌ，１９８３；Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ  ａｎｄ  Ｄｗｅｋ，１９８３；Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５；Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ，８９：４２８５−４２８９）。
【０１５０】
したがって、抗体のエフェクター機能を調節する別の手段は抗体定常領域のグリコシル化を変更することを含む。変更されたグリコシル化は、例えばグリコシル化残基の数における減少または増加、グリコシル化残基のパターンまたは位置における変化、ならびに糖構造（複数可）における変化を含む。ヒトＩｇＧ上で見られるオリゴ糖はそれらのエフェクター機能の程度に影響を及ぼす（Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｒｉｌ  ２００３．４４−５３）；ヒトＩｇＧオリゴ糖の微小不均一性は、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ、様々なＦｃ受容体への結合、ならびにＣ１ｑタンパク質への結合等の生体機能に影響を及ぼし得る（Ｗｒｉｇｈｔ  Ａ．＆  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １９９７，１５  ２６−３２；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１  ２７６（９）：６５９１−６０４；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２；２７７（３０）：２６７３３−４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００３  ２７８（５）：３４６６−７３；Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９  Ｆｅｂ；１７（２）：１７６−８０）。例えば、ＩｇＧがＣ１ｑに結合して補体カスケードを活性化する能力は、２つのＣＨ２ドメイン間に位置する炭水化物部分（通常Ａｓｎ２９７に固定される）の存在、不在、または改変に依存し得る（Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２：７７−９４（１９９５）。
【０１５１】
Ｆｃ含有ポリペプチド、例えばＩｇＧ抗体等の抗体におけるグリコシル化部位は、標準技術によって特定され得る。グリコシル化部位の特定は、実験的であり得または配列分析もしくはモデリングデータに基づき得る。コンセンサスモチーフ、つまり様々なグリコシルトランスフェラーゼによって認識されるアミノ酸配列は説明されている。例えば、Ｎ結合型グリコシル化モチーフに対するコンセンサスモチーフは、多くの場合ＮＸＴまたはＮＸＳであり、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸であり得る。潜在的グリコシル化モチーフを位置付けるためのいくつかのアルゴリズムもまた説明されている。したがって、抗体またはＦｃ含有フラグメントの内部で潜在的グリコシル化部位を特定するために、抗体の配列は、ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓによって提供されるウェブサイト等の一般に利用可能なデータベースを使用することによって試験される（Ｎ結合型グリコシル化部位の予測についてはＮｅｔＮＧｌｙｃサービス、及びＯ結合型グリコシル化部位の予測についてはＮｅｔＯＧｌｙｃサービスを参照されたい）。
【０１５２】
インビボでの研究は、アグリコシル抗体のエフェクター機能における低下を確認している。例えば、アグリコシル抗ＣＤ８抗体は、マウスにおけるＣＤ８保有細胞を減少させることができず（Ｉｓａａｃｓ，１９９２  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：３０６２）、アグリコシル抗ＣＤ３抗体はマウスまたは人におけるサイトカイン放出症候群を誘導しない（Ｂｏｙｄ，１９９５  上記；Ｆｒｉｅｎｄ，１９９９  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６８：１６３２）。
【０１５３】
重要なことに、ＣＨ２ドメインにおけるグリカンの除去がエフェクター機能に有意な効果を有するように見える一方で、抗体の他の機能的及び物理的特性は変更されないままである。具体的には、グリカンの除去は血清半減期及び抗原への結合への効果をほとんどから全く有さないことが示されている（Ｎｏｓｅ，１９８３  上記；Ｔａｏ，１９８９  上記；Ｄｏｒａｉ，１９９１  上記；Ｈａｎｄ，１９９２  上記；Ｈｏｂｂｓ，１９９２  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：９４９）。
【０１５４】
アグリコシルアプローチのインビボ検証があるものの、アグリコシルｍＡｂを有する残留エフェクター機能の報告がある（例えばＰｏｕｎｄ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（３）：２３３−４１；Ｄｏｒａｉ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １０（２）：２１１−７を参照されたい）。Ａｒｍｏｕｒらは、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂタンパク質への残留結合を示す（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−１６２４；Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４０（２００３）５８５−５９３）。よって、エフェクター機能特に補体活性化におけるさらなる低下は、いくつかの場合では、活性の完全な消失を保証するために重要であり得る。この理由から、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４ならびにＧ１／Ｇ４ハイブリッドのアグリコシル形態は、エフェクター機能の低下を有する本発明の方法及び抗体組成物において有用であるとして想定される。
【０１５５】
本発明の抗αｖβ５抗体は、Ｆｃ部分の他の有益な属性を最適に保持しながらエフェクター機能（複数可）の低下（第２のαｖβ５特異性抗体と比較して）を引き出すために、改変または変更され得る。
【０１５６】
したがって、特定の実施形態では、本発明は、エフェクター機能の低下を有するアグリコシル抗αｖβ５抗体に関し、これらは、抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ結合型部位での改変を特徴とする。Ｆｃ二量体のＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ結合型部位の改変は、アグリコシル抗αｖβ５抗体をもたらし得る。かかる改変の例には、Ｆｃ二量体のＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ結合型部位の変異、ＣＨ２ドメインにおけるＮ結合型部位に付着するグリカンの除去、及びグリコシル化の防止が挙げられる。例えば、アグリコシル抗αｖβ５抗体は、重鎖ＣＨ２ドメインにおける正準Ｎ結合型Ａｓｎ部位をＧｌｎ残基に変更することによって、作製され得る（例えば、ＷＯ０５／０３１７５及びＵＳ２００６−０１９３８５６を参照されたい）。
【０１５７】
本発明の一実施形態では、改変は、重鎖グリコシル化部位でのグリコシル化を防止するために、重鎖グリコシル化部位での変異を含む。よって、本発明の一実施形態では、アグリコシル抗αｖβ５抗体は、重鎖グリコシル化部位の変異、すなわち、Ｎ２９８Ｑの変異（Ｋａｂａｔ  ＥＵ番号付けを使用してＮ２９７）によって調製され、適切な宿主細胞において発現される。例えば、この変異は、Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（登録商標）（米国ニュージャージー州ピスカタウェイ）の特異部位変異誘発キットについての、製造業者の推奨プロトコルに従うことによって達成され得る。
【０１５８】
変異抗体は、宿主細胞（例えばＮＳＯまたはＣＨＯ細胞）において安定的に発現され得、その後精製され得る。一例として、精製は、タンパク質Ａ及びゲルろ過クロマトグラフィを使用して実行され得る。当業者には、発現及び精製の追加の方法も使用され得ることが明白であろう。
【０１５９】
本発明の別の実施形態では、アグリコシル抗αｖβ５抗体は、エフェクター機能の低下を有し、前記抗体または抗体誘導体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ結合型部位での改変は、ＣＨ２ドメイングリカンの除去すなわち脱グリコシル化を含む。これらのアグリコシル抗αｖβ５抗体は、従来の方法によって生成され得、その後酵素的に脱グリコシル化され得る。抗体の酵素的脱グリコシル化の方法は、当業者に公知である（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，１９７３；Ｗｉｎｋｅｌｈａｋｅ  ＆  Ｎｉｃｏｌｓｏｎ，１９７６  Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２５１：１０７４−８０．）。
【０１６０】
本発明の別の実施形態では、脱グリコシル化は、ツニカマイシン等のグリコシル化阻害剤を含む培養培地において抗体を産生する宿主細胞を成長させることによって達成され得る（Ｎｏｓｅ  ＆  Ｗｉｇｚｅｌｌ，１９８３）。つまり、改変は、抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける保存されたＮ結合型部位でのグリコシル化の低減または防止である。
【０１６１】
本発明の他の実施形態では、組換えＸポリペプチド（またはかかるポリペプチドを含む細胞もしくは細胞膜）は、抗αｖβ５抗体または抗体誘導体を生成するための抗原として使用され得、これらはその後脱グリコシル化され得る。
【０１６２】
代替の実施形態では、アグリコシル抗αｖβ５抗体またはグリコシル化の低下を有する抗αｖβ５抗体は、Ｔａｙｌｏｒら（ＷＯ０５／１８５７２及びＵＳ２００７−００４８３００）において記載される方法によって産生され得る。例えば、一実施形態では、抗αｖβ５アグリコシル抗体は、第１のアミノ酸残基を変更する（例えば、置換、挿入、欠失によって、または化学的改変によって）ことによって産生され得、変更された第１のアミノ酸残基は、立体障害もしくは電荷または両方によって、第２の残基のグリコシル化を阻害する。特定の実施形態では、第１のアミノ酸残基は、アミノ酸置換によって改変される。さらなる実施形態では、このアミノ酸置換は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓから成る群から選択される。他の実施形態では、このアミノ酸置換は、非伝統的アミノ酸残基である。第２のアミノ酸残基は、グリコシル化モチーフ、例えばアミノ酸配列ＮＸＴまたはＮＸＳを含むＮ結合型グリコシル化モチーフの、付近またはその内部にあり得る。ある例示的な実施形態では、Ｋａｂａｔ番号付けに従い、第１のアミノ酸残基はアミノ酸２９９であり、第２のアミノ酸残基はアミノ酸２９７である。例えば、Ｋａｂａｔ番号付けに従い、第１のアミノ酸置換は、Ｔ２９９Ａ、Ｔ２９９Ｎ、Ｔ２９９Ｇ、Ｔ２９９Ｙ、Ｔ２９９Ｃ、Ｔ２９９Ｈ、Ｔ２９９Ｅ、Ｔ２９９Ｄ、Ｔ２９９Ｋ、Ｔ２９９Ｒ、Ｔ２９９Ｇ、Ｔ２９９Ｉ、Ｔ２９９Ｌ、Ｔ２９９Ｍ、Ｔ２９９Ｆ、Ｔ２９９Ｐ、Ｔ２９９Ｗ、及びＴ２９９Ｖであり得る。特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、Ｔ２９９Ｃである。
【０１６３】
エフェクター機能は、抗体が阻止部分を含むように本発明の抗体を改変することによっても低減され得る。例示的な阻止部分は、例えばポリペプチドをグリコシル化するグリコシダーゼの能力を阻止することによって、グリコシル化が低下するように、十分な立体容積及び／または電荷の部分を含む。阻止部分は、追加でまたは代替で、例えば受容体または補体タンパク質に結合するＦｃ領域の能力を阻害することによって、エフェクター機能を低下させ得る。いくつかの実施形態では、本発明は、変形Ｆｃ領域を含むαｖβ５結合タンパク質、例えば抗αｖβ５抗体に関し、変形Ｆｃ領域は、第１のアミノ酸残基及びＮ−グリコシル化部位を含み、第１のアミノ酸残基は、改変されていない第１のアミノ酸残基と比較して立体容積の増加または静電荷の増加に到達するために、側鎖化学で改変され、それにより、Ｎ−グリコシル化部位でのグリコシル化のレベルを低下させるかまたは別様でグリコシル化を変更する。これらの実施形態のうちの特定のものでは、変形Ｆｃ領域は、対照の非変形Ｆｃ領域と比較して、低下したエフェクター機能を与える。さらなる実施形態では、立体容積の増加を有する側鎖は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、及びＴｙｒから成る群から選択されるアミノ酸残基の側鎖である。なおもさらなる実施形態では、正電荷の増加を有する側鎖化学は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓから成る群から選択されるアミノ酸残基の側鎖である。
【０１６４】
したがって、一実施形態では、グリコシル化及びＦｃ結合は、Ｔ２９９を、Ｄ、Ｅ、Ｋ、またはＲ等の荷電側鎖化学と置換することによって、調節され得る。得られる抗体は、望ましくない静電相互作用に起因する、グリコシル化の低下ならびにＦｃ受容体へのＦｃ結合親和性の低下を有し得る。
【０１６５】
別の実施形態では、アグリコシル化しておりかつシステイン付加体を形成することができるＴ２９９Ｃ変形抗体は、そのアグリコシル化抗体対応物と比較してより低いエフェクター機能（例えばＦｃγＲＩ結合）を示し得る（例えば、ＷＯ０５／１８５７２を参照されたい）。したがって、グリコシル化モチーフに近位の第１のアミノ酸の変更は、第２のアミノ酸残基での抗体のグリコシル化を阻害し得、第１のアミノ酸がシステイン残基である場合、抗体はエフェクター機能のさらに大きい低下を示し得る。さらに、ＩｇＧ４サブタイプの抗体のグリコシル化の阻害は、他のサブタイプにおけるアグリコシル化の効果と比較して、ＦｃγＲＩ結合により大きな効果を有し得る。
【０１６６】
追加の実施形態では、本発明は、１つ以上のＦｃＲ受容体への結合の低下を示し、かつ任意に１つ以上のＦｃ受容体及び／または補体への通常の結合またはその増加も示す、変更されたグリコシル化を有する抗αｖβ５抗体、例えば、生来の対照抗αｖβ５抗体と、１つ以上のＦｃ受容体及び／または補体への同一または同様の結合親和性を少なくとも維持する、変更されたグリコシル化を有する抗体に関する。例えば、存在するグリカン構造として、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２Ｎ−グリカンを優性に有する（例えばＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２Ｎ−グリカン構造が、Ｉｇ組成物の次に優性のグリカン構造よりも、少なくとも約５モル％高いレベルで存在する）抗αｖβ５抗体は、抗αｖβ５抗体集合と比較して変更されたエフェクター機能を示し得、ここにおいてＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２Ｎ−グリカン構造は優性でない。このグリカン構造を優性に有する抗体は、ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂへの結合の低下、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂへの結合の増加、ならびに、Ｃ１複合体のＣ１ｑサブユニットへの結合の増加を示す（ＵＳ２００６−０２５７３９９を参照されたい）。このグリカン構造は、それが優性グリカン構造である場合、ＡＤＣＣの増加、ＣＤＣの低下、血清半減期の増加、Ｂ細胞の抗体産生の増加、及びマクロファージによる貪食の低下を与える。
【０１６７】
概して、糖タンパク質上のグリコシル化構造は、発現宿主及び培養条件に依存して変化し得る（Ｒａｊｕ，ＴＳ．ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｒｉｌ  ２００３．４４−５３）。かかる違いは、エフェクター機能及び薬物動態の両方における変化をもたらし得る（Ｉｓｒａｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９６；８９（４）：５７３−５７８；Ｎｅｗｋｉｒｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｐ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．，１９９６；１０６（２）：２５９−６４）。例えば、ガラクトシル化は細胞培養条件と共に変化し得、これは、それらの特異的ガラクトースパターンに依存して、免疫原性の何らかの免疫グロブリン組成物を与え得る（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２８５：８３９−８４５）。非ヒト哺乳類細胞によって産生された糖タンパク質のオリゴ糖構造は、ヒト糖タンパク質のものに、より密接に関連する傾向がある。さらに、タンパク質発現宿主システムは、優性Ｉｇ糖型を発現するように操作もしくは選択され得、または、別法として、優性グリカン構造を有する糖タンパク質を自然に産生し得る。優性の糖型を有する糖タンパク質を産生する、操作されたタンパク質発現宿主システムの例には、遺伝子ノックアウト／変異（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，ＪＢＣ，２７７：２６７３３−２６７４０）；（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：１７６−１８０）における遺伝子操作、または両方の組合せを含む。あるいは、特定の細胞、例えば、ニワトリ、ヒト、及びウシは優性糖型を自然に発現する（Ｒａｊｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０：４７７−４８６）。よって、変更されたグリコシル化（例えば、優性に１つの特異的なグリカン構造）を有する抗αｖβ５抗体または抗体組成物の発現は、多くの発現宿主システムのうちの少なくとも１つを選択することによって、当業者によって得られ得る。本発明の抗αｖβ５抗体を産生するために使用され得るタンパク質発現宿主システムは、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、細菌細胞等を含む。例えば、ＵＳ２００７−００６５９０９、２００７−００２０７２５、及び２００５−０１７０４６４は、細菌細胞におけるアグリコシル化免疫グロブリン分子の産生を記載する。さらなる例として、Ｗｒｉｇｈｔ及びＭｏｒｒｉｓｏｎは、グリコシル化が不足するＣＨＯ細胞株において抗体を産生し、（１９９４  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８０：１０８７−１０９６）この細胞株において産生された抗体は補体媒介の細胞崩壊をすることができないということを示した。糖タンパク質の産生のために当技術において見られる発現宿主システムの他の例には、：ＣＨＯ細胞：ＲａｊｕのＷＯ９９／２２７６４及びＰｒｅｓｔａのＷＯ０３／３５８３５；ハイブリドーマ細胞：Ｔｒｅｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２３０：５９−７０；昆虫細胞：Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ＪＢＣ，２７２：９０６２−９７０、及び植物細胞：Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ０４／７４４９９が挙げられる。所与の細胞または抽出物が所与のモチーフのグリコシル化をもたらしている限り、例えばゲ���電気泳動及び／または質量分析を使用して、そのモチーフがグリコシル化されたかどうかを決定するための当技術において認識される技術が利用可能である。
【０１６８】
抗体のグリコシル化部位を変更するための追加の方法は、例えば、ＵＳ６，３５０，８６１及びＵＳ５，７１４，３５０、ＷＯ０５／１８５７２及びＷＯ０５／０３１７５において記載され、これらの方法は、変更された、低減された、または無グリコシル化を有する本発明の抗αｖβ５抗体を産生するために使用され得る。
【０１６９】
低下したエフェクター機能を有するアグリコシル抗αｖβ５抗体は、改変を含むまたは機能部分を含むように接合され得る抗体であり得る。かかる部分は、阻止部分（例えばＰＥＧ部分、システイン付加体等）、検出可能部分（例えば、診断部分を含む、蛍光部分、放射性同位元素部分、放射線不透過性部分等）、治療部分（例えば、細胞毒性剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗感染剤、抗癌剤、抗神経変性剤、放射性核種等）、及び／または結合部分もしくはベイト（例えば、抗体が腫瘍に事前標的しその後第２の分子に結合することを可能にするものであり、相補性結合部分またはプレイ、及び上記の通りの検出可能部分または治療部分で構成される）を含む。
【０１７０】
兆候
本明細書に記載される抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、急性腎損傷の治療、予防、またはその症状もしくは重症度の軽減を必要とする対象（例えばヒト対象）における急性腎損傷を治療する、予防する、またはその症状もしくは重症度を軽減することができる。これらの抗体及び抗体フラグメントは、慢性腎臓疾患の進行の防止を必要とする対象における慢性腎疾患の進行を防止することにおいても有用である。特定の実施形態では、抗体及び抗体フラグメントは、急性腎損傷を引き起こし得るまたは引き起こす損傷の後に、慢性腎臓疾患の進行の防止を必要とする対象における慢性腎臓疾患の進行を防止することにおいて有用である。さらに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、急性または慢性腎損傷からの腎臓の保護を必要とする対象における急性または慢性腎損傷から腎臓を保護するための方法において使用され得る。さらに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、薬物または化学品の使用に少なくとも部分的に帰属する腎機能不全または腎不全を有する患者を治療するための方法において使用され得る。
【０１７１】
急性腎損傷は、一般的に、損傷の種類に基づいて２つの主要なカテゴリーに分割される。１つ目のカテゴリーは虚血性急性腎損傷（あるいは腎臓低灌流と称される）であり、２つ目のカテゴリーは腎毒性急性腎損傷である。前者は、血流不全（腎臓低灌流）及び腎臓への酸素送達不全から生じ、一方で、後者は腎臓への毒性損傷から生じる。これらの損傷のカテゴリーの両方は、急性尿細管ネクローシス（ＡＴＮ）と呼ばれる二次状態をもたらし得る。
【０１７２】
虚血性急性腎損傷の最も一般的な原因は、血管内容量減少、心拍出量の低下、全身血管拡張、及び腎臓血管収縮である。血管内容量減少は、出血（例えば手術、出産後、または外傷に続く）；胃腸機能喪失（例えば、下痢、嘔吐、鼻腔胃機能喪失）；腎臓機能喪失（例えば利尿剤、浸透圧利尿、尿崩症によって引き起こされる）；皮膚及び粘膜機能喪失（例えば火傷、高熱症）；ネフローゼ症候群；肝硬変；または毛細血管漏出、によって引き起こされ得る。心拍出量の低下は、心原性ショック、心膜疾患（例えば拘束性、収縮性、タンポナーデ）、うっ血性心不全、心臓弁膜症、肺疾患（例えば肺高血圧、肺塞栓）、または敗血症に起因し得る。全身血管拡張は、肝硬変、アナフィラキシー、または敗血症の結果であり得る。最後に、腎臓血管収縮は、初期敗血症、肝腎症候群、急性高カルシウム血症、薬物関連（例えば、ノルエピネフリン、バソプレシン、非ステロイド性抗炎症薬物、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、カルシニューリン阻害剤）または放射線造影剤の使用によって引き起こされ得る。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血性急性腎損傷の上記の原因のいずれかによって引き起こされる急性腎損傷または任意の他の腎損傷の、症状または重症度を治療または低減するために使用され得る。さらに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血性急性腎損傷の上記の原因への曝露の後の急性腎損傷または任意の他の腎損傷の進行を防止するために使用され得る。
【０１７３】
腎毒性急性腎損傷は、多くの場合腎毒性薬物等の腎毒素への曝露に関連付けられる。腎毒性薬物の例には、抗生物質（例えばゲンタマイシン等のアミノグリコシド）、化学療法薬（例えばシスプラチン）、カルシニューリン阻害剤（例えばタクロリムス、シクロスポリン）、セファロリジン等のセファロスポリン、シクロスポリン、駆除剤（例えばパラコート）、環境汚染物質（例えばトリクロロエチレン、ジクロロアセチレン）、アムホテリシンＢ、ピューロムサイン（ｐｕｒｏｍｃｙｉｎ）、アミノヌクレオシド（ＰＡＮ）、Ｘ線撮影造影剤（例えばアセトリゾエート、ジアトリゾエート、ヨーダミド、イオグリケート、イオタラメート、イオキシタラメート、メトリゾエート、メトリザミド、イオヘキソール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、及びイオベルソール）、非ステロイド性抗炎症剤、抗レトロウイルス剤、免疫抑制剤、腫瘍薬物、またはＡＣＥ阻害剤が挙げられる。腎毒素は、例えば、外傷性損傷、圧挫損傷、違法薬物、鎮痛剤の乱用、銃創、または重金属であり得る。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、腎毒性急性腎損傷の上記の原因のいずれかによって引き起こされる急性腎損傷または任意の他の腎損傷の症状または重症度を治療または低減するために使用され得る。さらに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、腎毒性急性腎損傷の上記の原因への曝露の後の急性腎損傷または任意の他の腎損傷の進行を防止するために使用され得る。
【０１７４】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血性または腎毒素／腎毒性薬物等の損傷への曝露の後のＡＴＮの進行を防止するために使用され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血または腎毒素／腎毒性薬物への曝露の後のＡＴＮの症状または重症度を治療または低減するために使用され得る。
【０１７５】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血または腎毒素／腎毒性薬物への曝露の後の糸球体ろ過における減少を防止するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血または腎毒素／腎毒性薬物への曝露の後の尿細管上皮損傷及び／またはネクローシスを予防するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、微小血管透過性を低下させ、血管緊張を改良し、かつ／または内皮細胞の炎症を低減するために使用され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、虚血または腎毒素／腎毒性薬物への曝露の後の腎臓における血流を回収するために使用され得る。さらなる実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、慢性腎不全を予防するために使用される。
【０１７６】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、低灌流を伴う手術から生じる急性腎損傷を治療または予防するためにも使用され得る。ある特定の実施形態では、手術は、心臓手術、主要な血管手術、主要な外傷、または銃創の治療に関連する手術のうちの１つである。一実施形態では、心臓手術は、冠動脈バイパス術（ＣＡＢＧ）である。別の実施形態では、心臓手術は、弁手術である。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、腎臓移植または心臓移植等の臓器移植の後の急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、減少した有効動脈血液量及び腎臓低灌流の後の急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、正常な排尿を妨害する薬剤（例えば抗コリン薬）を服用している対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、尿路カテーテルの閉塞を有する対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、結晶尿を引き起こす薬物を服用している対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、ミオグロビン尿症を引き起こすまたはもたらす薬物を服用している対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、膀胱炎を引き起こすまたはもたらす薬物を服用している対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、前立腺肥大症または前立腺癌を有する対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、腎臓結石を有する対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、腹部悪性腫瘍（例えば卵巣癌、大腸癌）を有する対象における急性腎損傷を治療または予防するために使用され得る。
【０１８３】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、急性腎損傷を治療または予防するために使用され得、ここにおいて敗血症は急性腎損傷を引き起こさないまたはもたらさない。
【０１８４】
急性腎損傷は、典型的に元来の損傷（例えば、虚血または腎毒素損傷）の後数時間から数日間以内に生じる。よって、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、損傷の前か、または損傷（例えば本明細書に記載される手術または腎毒素損傷）の後１時間〜３０日間（例えば０．５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１５日間、２０日間、２５日間、２８日間、または３０日間）以内に投与され得る。
【０１８５】
対象は、例えば、リスク／損傷／機能不全／腎機能喪失／末期腎不全（ＲＩＦＬＥ）基準または急性腎損傷ネットワーク基準に基づき、急性腎損傷を有するか、またはそれを発症する危険性があると決定され得る（Ｂａｇｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，２３（５）：１５６９−１５７４（２００８）；Ｌｏｐｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｊ．，６（１）：８−１４（２０１３））。
【０１８６】
特定の実施形態では、本開示の方法は、対象が急性腎損傷を有するか、またはそれを発症する危険性があるかどうかを評価するために、健常対照対象と比較した、血清中、血漿中、もしくは尿中クレアチニン、または血中尿素窒素（ＢＵＮ）のうちの１つ以上のレベルを測定すること；血清中もしくは尿中好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、血清中もしくは尿中インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、血清中もしくは尿中シスタチンＣ、または尿中ＫＩＭ−１、のレベルを測定することを含む。
【０１８７】
本発明の抗体の効能は、様々な動物モデルにおいて評価され得る。急性腎損傷のための動物モデルは、例えば、Ｈｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，１６９：２８６−２９６（２０１１）；Ｈｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．，４（６）：６２９−６４１（２００９）；Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｎ．Ｆａｉｌ．，３３（１０）：１０１３−１０１８（２０１１）；Ｗｅｉ  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３０３（１１）：Ｆ１４８７−９４（２０１２）において開示されるものを含む。
【０１８８】
治療の効能は、身体検査、血液検査、全身及び毛細血管の血圧の測定、タンパク尿（例えばアルブミン尿）、顕微鏡的及び肉眼的血尿、血清中クレアチニンレベルの評価、糸球体ろ過量の評価、腎生検の組織学的評価、尿中アルブミンクレアチニン比、アルブミン排出量、クレアチニンクリアランス率、２４時間尿中タンパク質分泌、及び腎臓撮像（例えばＭＲＩ、超音波）を含む多数の利用可能な診断器具によって測定され得る。
【０１８９】
薬学的組成物
本明細書に記載される抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば本明細書に記載される障害を治療するために、対象への投与のための薬学的組成物として製剤化され得る。典型的に、薬学的組成物は、薬学的に許容されるキャリアを含む。本明細書で使用される場合「薬学的に許容されるキャリア」は、生理学的に適合性の、任意かつ全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤等を含む。この組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含み得る（例えばＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。
【０１９０】
薬学的製剤は、十分に確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；及びＫｉｂｂｅ（ｅｄ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄ  ｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに記載される。
【０１９１】
薬学的組成物は、様々な形態であり得る。これらは、例えば、液体溶液（例えば注射可能及び不溶解性溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソーム、及び坐薬等の、液体、半固体、及び固体の剤形を含む。好ましい形態は、投与及び治療応用の意図される様式に依存し得る。典型的に、本明細書に記載される薬剤のための組成物は、注射可能または不溶解性溶液の形態である。
【０１９２】
一実施形態では、本明細書に記載される抗αｖβ５抗体は、クエン酸ナトリウム、二塩基性リン酸七水和物ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ−８０、及び安定化剤等の、賦形剤物質を用いて製剤化される。これは、例えば好適な濃度の緩衝液内に提供され、２〜８℃で保存され得る。いくつかの他の実施形態では、組成物のｐＨは、約５．５〜７．５の間（例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５）である。
【０１９３】
薬学的組成物は、製剤化されるとαｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントの凝集を低減する薬剤も含み得る。凝集低減剤の例は、メチオニン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グリシン、及びグルタミン酸から成る群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む。これらのアミノ酸は、約０．５ｍＭ〜約１４５ｍＭ（例えば、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ）の濃度までこの製剤に加えられ得る。薬学的組成物は、糖（例えば、スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、もしくはキシリトール）、及び／または浸透圧調節剤（例えば塩化ナトリウム、マンニトール、もしくはソルビトール）、及び／または界面活性剤（例えばポリソルベート−２０もしくはポリソルベート−８０）も含み得る。
【０１９４】
かかる組成物は、非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）によって投与され得る。本明細書で使用される場合「非経口投与」及び「非経口投与される」という句は、たいてい注射による、経腸及び局所投与以外の投与の様式を意味し、限定することなく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入を含む。一実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントの組成物は、皮下投与される。一実施形態では、抗αｖβ５または抗体またはその抗原結合フラグメントの組成物は、静脈内投与される。一実施形態では、抗αｖβ５または抗体またはその抗原結合フラグメントの組成物は、動脈内投与される。
【０１９５】
組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高濃度での安定保存に好適な他の秩序構造として製剤化され得る。滅菌注射剤は、必要な量の本明細書に記載される薬剤を、必要に応じて、上記に列挙された成分のうちの１つまたはその組合せを有する適切な溶媒中に組み込み、続いてろ過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、本明細書に記載される薬剤を、塩基性の分散媒及び上記に列挙されたものから必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射剤の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、本明細書に記載される薬剤の粉末に加え、事前に滅菌ろ過されたその溶液から任意の追加の所望の成分を産生する、真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散液の場合は所望の粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンを含むことによって、もたらすことができる。
【０１９６】
特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、移植片を含む制御放出製剤、及びマイクロカプセル化送達システム等の、急速な放出から化合物を保護し得るキャリアを用いて調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の、生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製のための多くの方法が特許申請されているかまたは一般に既知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７８）を参照されたい。
【０１９７】
一実施形態では、薬学的製剤は、薬学的に許容されるキャリアを用いて製剤化された、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ）の濃度の抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、滅菌蒸留水またはリン酸緩衝食塩水内で製剤化される。薬学的製剤のｐＨは、５．５〜７．５の間（例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２  ６．３、６．４  ６．５、６．６  ６．７、６．８、６．９  ７．０、７．１、７．３、７．４、７．５）であり得る。
【０１９８】
投与
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、対象、例えばそれを必要とする対象、例えばヒト対象に、様々な方法で投与され得る。多くの応用について、投与の経路は、静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、動脈内、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射のうちの１つである。吸入送達を使用することも可能である。非経口投与の他の様式も使用され得る。かかる様式の例には、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び硬膜外、及び胸骨内注射が挙げられる。いくつかの場合では投与は経口であり得る。
【０１９９】
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与の経路及び／または様式は、個々の場合のために整えることもできる。
【０２００】
抗体またはその抗原結合フラグメントは、固定用量としてまたはｍｇ／ｋｇ用量で投与され得る。用量は、抗αｖβ５抗体に対する抗体の産生を低減または回避するように選択することもできる。投薬計画は、所望の応答、例えば治療応答または組み合わせの治療効果を提供するように調節される。概して、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント（及び任意に第２の薬剤）の用量は、生物学的に利用可能な量の薬剤を対象に提供するために使用され得る。例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。他の用量もまた使用され得る。特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを用いた治療を必要とする対象は、１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの用量で抗体を投与される。いくつかの実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを用いた治療を必要とする対象は、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ  １０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇの用量で抗体を投与される。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与される。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは４ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。
【０２０１】
組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌ、または約５０〜２５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００〜１５０ｍｇ／ｍｌ、または約１００〜２５０ｍｇ／ｍｌの、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。特定の実施形態では、組成物内の抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、優性に単量体形態、例えば、少なくとも約９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、９８．５％または９９％が単量体形態である。特定の抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント組成物は、例えばＡ２８０ｎｍのＵＶによって検出される、約５、４、３、２、１、０．５、０．３、または０．１％未満の凝集体を含み得る。特定の抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント組成物は、例えばＡ２８０ｎｍのＵＶによって検出される、約５、４、３、２、１、０．５、０．３、０．２、または０．１％未満のフラグメントを含む。
【０２０２】
本明細書で使用される場合、単位剤形または「固定用量」は、治療される対象に対する単位投薬量として適する物理的に離散的な単位を指し、それぞれの単位は、所望の薬学的キャリアとの関連で、及び任意に他の薬剤との関連で、所望の治療効果を産生するように計算された、所定の量の抗αｖβ５抗体を含有する。単一または複数の投薬量が与えられ得る。あるいは、またはさらに、抗体は連続注入によって投与され得る。
【０２０３】
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントの一用量は、例えば、少なくとも２用量、３用量、５用量、１０用量またはそれ以上を包括するのに十分な一定の期間（治療の過程）をわたり周期的な間隔で、例えば、毎日１回、２回、もしくは３回、または週に１〜６、７、８、９、もしくは１０回、または週に１回、２週間に１回（２週間毎）、３週間毎、または毎月、投与され得る。好ましくは、用量（複数可）は、ＡＫＩをもたらす損傷（例えば虚血性腎毒性）の、０．５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、１日間、２日間、３日間、５日間、７日間、１２日間、１５日間、２０日間、２５日間、または３０日間以内に投与される。対象を有効に治療するために必要とされる投薬量及び計時に影響を及ぼし得る因子は、例えば、疾患もしくは障害の重症度、製剤、送達の経路、事前の治療、対象の全身の健康状態及び／または年齢、ならびに存在する他の疾患を含む。さらに、治療的有効量の化合物を用いた対象の治療は、単一の治療を含み得、または好ましくは一連の治療を含み得る。
【０２０４】
対象に本明細書に記載される障害を発症する危険性がある場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、この障害が完全に発症する前に、例えば予防的手段として投与され得る。かかる予防的治療の継続期間は、抗体またはその抗原結合フラグメントの単一投薬量であり得、または治療は、継続し得る（例えば複数の投薬量）。例えば、この障害の危険性があるか、またはこの障害の素因を有する対象は、この障害が生じるまたは激化することを予防するために、数時間、数日間、数週間、または１ヶ月間、この抗体またはその抗原結合フラグメントで治療され得る。例えば、急性腎損傷をもたらし得る損傷（例えば虚血性または腎毒性）に曝露されることが予測される対象には、この損傷の、１ヶ月、１週間、６日間、５日間、４日間、３日間、２日間、１日間、０．５時間、０．４時間、０．３時間、０．２時間、０．１時間前、またはそれとほぼ同時に、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントが投与され得る。
【０２０５】
薬学的組成物は、「治療的有効量」の本明細書に記載される薬剤を含み得る。かかる有効量は、投与される薬剤の効果、または１つを超える薬剤が使用される場合薬剤の組合せの効果に基づいて決定され得る。薬剤の治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに化合物の個体における所望の応答、例えば少なくとも１つの障害パラメータの改良、または障害の少なくとも１つの症状の改良を引き出す能力等の因子に従ってもまた変化し得る。治療的有効量は、組成物の任意の毒性または有害効果に治療的有益効果が勝る量でもある。
【０２０６】
特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２２５ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、２７５ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３２５ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ）の濃度で皮下投与される。一実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で皮下投与される。別の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬの濃度で静脈内投与される。特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で静脈内投与される。
【０２０７】
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、第２の治療薬との組合せで、それを必要とする患者（例えば、急性腎損傷を有するか、またはそれを発症する危険性のある患者）に投与され得る。例えば、第２の治療薬は、１つ以上の：他のインテグリン受容体（例えば、αｖβ５、αｖβ６、α１β１、α４β１、αｖβ８、αｖβ１等）；サイトカイン（例えばＩＬ−１α、ＩＬ−６、ＩＬ−１２）；ケモカイン（例えばＣＸＣＲ４、ＭＩＰ−１α）；急性腎損傷の治療または予防に有用であると考えられる化学部分（例えば、ＡＰ２１４、ＴＨＲ−１８４、ＱＰＩ−１００２、ＵＳ２００３／００１７１５０において開示される芳香族陽イオンペプチド）の、拮抗薬（例えば、抗体、ポリペプチド拮抗薬、及び／または小分子拮抗薬）であり得る。特定の実施形態では、第２の治療薬は、抗アポトーシス／ネクローシス剤（例えばカスパーゼ阻害剤（例えば、非選択性カスパーゼ阻害剤、選択性カスパーゼ３及び７阻害剤、選択性カスパーゼ１阻害剤）、ミノサイクリン、グアノシン、ピフィスリン−α、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ阻害剤（ＰＡＲＰ）阻害剤）；抗炎症剤（例えば、スフィンゴシン１リン酸類似体、アデノシン２Ａ作用薬、α−ＭＳＨ、ＩＬ−１０、フィブラート、ＰＰＡＲ−γ作用薬、ミノサイクリン、活性化タンパク質Ｃ、ｉＮＯＳ阻害剤）；抗敗血症剤（例えば、インシュリン、活性化タンパク質Ｃ、ピルビン酸エチル）；成長因子（例えば組換えエリスロポエチン、肝細胞成長因子）；血管拡張剤（例えば一酸化炭素放出化合物及びビリルビン、エンドセリン拮抗薬、フェノルドパム、及びＡＮＰ）；フリーラジカルスカベンジャー（例えばデフェロキサミン）；または、好中球ゼラチナーゼ関連リポカプリン、ＩＬ−６、Ｃ５ａ拮抗薬、ＩＬ−１０、及びα−メラニン形成細胞刺激ホルモン等の化合物である。
【０２０８】
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント及び第２の治療薬は、同時にまたは連続的に投与され得る。特定の実施形態では、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント及び第２の治療薬は、それぞれ治療量以下の用量または治療的用量のいずれかで投与され得る。
【０２０９】
治療用のデバイス及びキット
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬学的組成物は、医療デバイスで投与され得る。デバイスは、医療設備及び他の医療器具から取り外されて、救急の状況で、例えば訓練を受けていない対象またはその分野の救急隊員が使用することができるように、携帯性、室温保存、使用の容易性等の特徴を伴って設計され得る。デバイスは、例えば抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬学的調製物を保存するための１つ以上のハウジングを含み得、この抗体の１つ以上の単位用量を送達するように構成され得る。デバイスは、これも抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを含む単一の薬学的組成物として、または２つの別個の薬学的組成物として、のいずれかで、第２の治療薬を投与するようにさらに構成され得る。
【０２１０】
薬学的組成物は、注射器で投与され得る。薬学的組成物は、ＵＳ５，３９９，１６３；５，３８３，８５１；５，３１２，３３５；５，０６４，４１３；４，９４１，８８０；４，７９０，８２４；または４，５９６，５５６において開示されるデバイス等の、無針皮下注射デバイスでも投与され得る。公知の移植及びモジュールの例には、制御速度で薬剤を投与するための移植可能マイクロ注入ポンプを開示するＵＳ４，４８７，６０３；皮膚を通して薬剤を投与するための治療デバイスを開示するＵＳ４，４８６，１９４；正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示するＵＳ４，４４７，２３３；継続的薬物送達のための変流量移植可能注入装置を開示するＵＳ４，４４７，２２４；複室コンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示するＵＳ４，４３９，１９６；及び浸透圧薬物送達システムを開示するＵＳ４，４７５，１９６が挙げられる。多くの他のデバイス、移植、送達システム、及びモジュールも既知である。
【０２１１】
抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントはキット内に提供され得る。一実施形態では、このキットは、（ａ）抗αｖβ５抗体を含む組成物を含む容器、及び任意に（ｂ）情報資料を含む。情報資料は、説明的、指示的、営業的、または、本明細書に記載される方法及び／もしくは治療効果のための薬剤の使用に関する他の資料であり得る。
【０２１２】
一実施形態では、キットは急性腎損傷を治療または予防するための第２の治療薬も含む。例えば、キットは、抗αｖβ５抗体を含む組成物を含む第１の容器、及び第２の治療薬を含む第２の容器を含む。
【０２１３】
キットの情報資料はその形態に関して限定されない。一実施形態では、情報資料は、化合物の産生、化合物の分子量、濃度、有効期限日、バッチまたは産生場所情報等についての情報を含み得る。一実施形態では、情報資料は、本明細書に記載される免疫障害を有しているか、またはその危険性のある対象を治療するために、抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメントを、例えば好適な用量、剤形、または投与の様式（例えば本明細書に記載される用量、剤形、または投与の様式）で投与する方法に関する。情報は、活字、コンピュータ可読資料、ビデオ録画、もしくは音声録音、または例えばインターネット上の本質的な資料へのリンクもしくはアドレスを提供する情報を含む、様々な型式で提供され得る。
【０２１４】
抗体に加え、キット内の組成物は、溶媒もしくは緩衝剤、安定化剤、または保存料等の他の成分を含み得る。抗体は、任意の形態、例えば液体、乾燥、または凍結乾燥形態で提供され得、好ましくは実質的に純粋かつ／または滅菌である。薬剤が液体溶液内に提供される場合、液体溶液は好ましくは水溶液である。特定の実施形態では、液体溶液内の抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ（例えば４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ）の濃度である。抗体または抗原結合フラグメントが凍結乾燥産生物として提供される場合、この抗体または抗原結合フラグメントは、約７５ｍｇ／バイアル〜約２００ｍｇ／バイアル（例えば１００ｍｇ／バイアル、１０８．５ｍｇ／バイアル、１２５ｍｇ／バイアル、１５０ｍｇ／バイアル）である。凍結乾燥粉末は、概して好適な溶媒の追加によって再構成される。溶媒、例えば、滅菌水または緩衝剤（例えばＰＢＳ）は、任意にキット内に提供され得る。特定の実施形態では、凍結乾燥産生物は１０８．５ｍｇ／バイアルであり、７５ｍｇ／ｍＬの濃度の液体溶液に再構成される。
【０２１５】
キットは、薬剤を含む組成物（単数）または組成物（複数）のための１つ以上の容器を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、組成物及び情報資料のための、別個の容器、仕切板、またはコンパートメントを含む。例えば、組成物は、ビン、バイアル、または注射器内に含まれ得、情報資料はプラスチックスリーブまたはパケット内に含まれ得る。他の実施形態では、キットの別個の要素は単一の分割されていない容器内に含まれる。例えば、組成物は、ラベルの形式で取り付けられた情報資料を有する、ビン、バイアル、または注射器内に含まれる。いくつかの実施形態では、キットは、それぞれが薬剤の１つ以上の単位剤形（例えば本明細書に記載される剤形）を含む、個々の容器を複数（例えばパックで）含む。容器は、組合せ単位投与量、例えば抗αｖβ５抗体またはその抗原結合フラグメント及び第２の薬剤の両方を例えば所望の比で含む単位を、含み得る。例えば、キットは、例えば、それぞれが単一の組合せ単位用量を含む、複数の注射器、アンプル、箔パケット、ブリスター包装、または医療デバイスを含む。キットの容器は、密閉、防水（例えば湿気または蒸発における変化に不透過性）、及び／または遮光であり得る。
【０２１６】
キットは、組成物の投与に好適なデバイス、例えば注射器または他の好適な送達デバイスを任意に含む。デバイスは、薬剤のうちの１つまたは両方で事前充填されて提供され得、または空であるが充填に好適であり得る。
【実施例】
【０２１７】
次の実施例は、請求される発明をより良好に例示するために提供され、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。特定の物質が言及される限り、それは例示のみを目的とし、本発明を限定することは意図しない。当業者は、発明能力の行使を伴わずにかつ本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段または反応物質を開発することができる。
【０２１８】
実施例１：ラット片側腎虚血性クランプモデルにおける抗インテグリンαｖβ５抗体の効能
目的：
ラット腎臓片側性虚血性クランプモデルにおけるＡＬＵＬＡの用量応答効能を、クランプ解除の１８時間前及び３０時間後に皮下注射投与の後で決定した。
【０２１９】
片側腎クランプ虚血性モデルプロトコル
動物を、５％は誘導のために及び１〜２％は麻酔の維持のために、イソフルオラン／Ｏ２混合物で麻酔した。誘導のために誘導室を使用し、麻酔回路を手術の間使用した。腹部をクリッパーで剃り、殺菌石鹸及び水で洗浄し、タオル乾燥して、Ｂｅｔａｄｉｎｅを綿棒塗布した。動物を、直腸検温器によって温度制御される温暖パッドに被せた滅菌使い捨て吸収性タオル上に配置した。動物を、心拍、酸素測定、呼吸数、及び血圧について、継続的に観察した。腹部を、３ｃｍの正中切開を使用して開いた。それぞれの腎臓を単離し、腎臓動脈及び静脈の周りの脂肪及び結合組織は、滅菌綿棒を使用して切り離した。右側腎臓を除去し、その腎臓動脈及び静脈を縫合して離した。
【０２２０】
左側腎臓の虚血は、腎臓動脈及び静脈を、それぞれの腎茎上で非外傷性クランプを使用して、３０分間クランプすることによって開始した。偽手術については、腎臓を上記のように単離したがクランプしなかった。切開は、虚血性期間の間、滅菌食塩水浸透ガーゼスポンジで覆った。
【０２２１】
虚血性期間の最後に、クランプを除去し、腎臓が血流の急速な再確立を保証することが観察された。動物を、腹腔に導入した２ｃｃの滅菌食塩水で再水和した。筋肉層は３−０絹糸で密閉し、皮膚は外科用３−０絹糸で密閉した。
【０２２２】
ＡＬＵＬＡ抗体または対照抗体（アイソタイプネガティブｍＡＢ−１Ｅ６）は、３００μｌの注射容積で、クランプの１８時間前及びクランプの３０時間後に、皮下注射によって投与した。調査Ｉには次の用量のＡＬＵＬＡを使用した：１０ｍｇ／ｋｇ／体重；３ｍｇ／ｋｇ／体重；及び１ｍｇ／ｋｇ／体重。調査ＩＩには次の用量のＡＬＵＬＡを使用した：１０ｍｇ／ｋｇ／体重；３ｍｇ／ｋｇ／体重；１ｍｇ／ｋｇ／体重；０．３ｍｇ／ｋｇ／体重；及び０．１ｍｇ／ｋｇ／体重。
【０２２３】
血清中クレアチニンを手術の０、２４、及び７２時間後に測定し、結果を１デシリットル当たりのｍｇ単位で報告した。
【表３】
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【０２２４】
血液採取
０．１５ｍＬの静脈血試料を、基線クレアチニン測定のために調査開始の際に、及び病理学的血清中クレアチニンレベル評価のために、手術の０、２４、及び７２時間後に、抽出した。
【０２２５】
調査終了
手術の７２時間後、調査を終了し、ペントバルビタールを過量投与しその後頸椎脱臼させることによってラットを安楽死させた。
【０２２６】
組織採取
安楽死の後、それぞれの個々のラットの左側腎臓を収集し、２つの縦部分に薄切りした。１つの部分を、病理形態学的評価のために、標準手順に従って、１０％緩衝ホルマリン内で固定し、パラフィン包埋のために処理した。それぞれの腎臓の２つ目の部分を液体窒素内で即座に凍結させた。
【０２２７】
クレアチニン測定
全てのラットの血清中クレアチニンを、基線で、ならびにクランプの後１、２、及び３日目に測定した。０．１５ｍｌの静脈血試料を抽出し遠心分離した。血清を除去し、＋４℃で保存し、分析のために保管した。クレアチニン濃度を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｃ．からのＣｒｅａｔｉｎｉｎｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ２で測定した。この機械を既知の対照で標準化し、試料をピクリン酸反応を使用して流した。
【０２２８】
病理形態試験方法
腎臓組織試料を、標準手順に従いパラフィン包埋のために処理し、５マイクロメートルの断片を調製し顕微鏡スライドガラス状に載せる。断片を、ヘマトキシリン−エオシンで着色する。
【０２２９】
病理学者に動物の治療が分からないように、スライドガラスに無作為に番号付けする。
【０２３０】
腎皮質及び髄質について、別個に、３つの病理形態特徴：尿細管ネクローシス、尿細管拡張、及び尿細管「円柱」（尿細管ルーメン内の壊死性残屑）の存在を評価する。病理変化の等級付けは、確立された採点システムに従って行われる（Ｋ．Ｊ．Ｋｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０８：１２９１−１２９８（２００１）；Ｗｅｉ  Ｑ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，２５（５）：４９１−９（２００５））：
等級０＝病理変化なし
等級１＝特徴が面積の１〜１０％を含む
等級２＝特徴が面積の１０〜２５％を含む
等級３＝特徴が面積の２５〜７５％を含む
等級４＝特徴が面積の７５％よりも多くを含む
【０２３１】
結果
調査Ｉの基線、手術の２４時間、４８時間、及び７２時間後のクレアチニン測定（ｍｇ／ｄＬ単位）を以下の表にまとめる。未治療虚血性ラットにおける２４時間後の２．５〜３．０の値は一般的である。このモデルは急速な回復期を有し、４８〜７２時間後の時間に統計的有意性に到達することを困難にする。
【表４−１】
2016515120.tif 000005
【表４−２】
2016515120.tif 000006
【０２３２】
調査ＩＩの基線、手術の２４時間、４８時間、及び７２時間後のクレアチニン測定（ｍｇ／ｄＬ単位）を以下の表にまとめる。
【表５−１】
2016515120.tif 000007
【表５−２】
2016515120.tif 000008
【表５−３】
2016515120.tif 000009
【０２３３】
調査Ｉ及び調査ＩＩの両方からのデータは、対照抗体と比較して、試験された最低の用量でさえ、クレアチニンレベルを低下させることを示す。
【０２３４】
実施例２：ラット片側腎虚血性クランプモデルにおける損傷前の抗インテグリンαｖβ５抗体の単一投与の効能
目的
クランプの１８、１２、または６時間前の１回の皮下注射の後のラット腎臓片側性虚血性クランプモデルにおける、モノクローナル抗αｖβ５抗体、ＡＬＵＬＡの用量応答効能を確立すること。
【０２３５】
方法
片側腎クランプ虚血性モデルプロトコル
動物を、５％は誘導のために及び１〜２％は麻酔の維持のために、イソフルオラン／Ｏ２混合物で麻酔した。誘導のために誘導室を使用し、麻酔回路を手術の間使用した。腹部をクリッパーで剃り、殺菌石鹸及び水で洗浄し、タオル乾燥して、Ｂｅｔａｄｉｎｅを綿棒塗布した。動物を、直腸検温器によって温度制御される温暖パッドに被せた滅菌使い捨て吸収性タオル上に配置した。動物を、心拍、酸素測定、呼吸数、及び血圧について、継続的に観察した。腹部を、３ｃｍの正中切開を使用して開いた。それぞれの腎臓を単離し、腎臓動脈及び静脈の周りの脂肪及び結合組織は、滅菌綿棒を使用して切り離した。右側腎臓を除去し、その腎臓動脈及び静脈を縫合して離した。
【０２３６】
ＡＬＵＬＡ抗体または対照抗体（アイソタイプネガティブｍＡＢ−１Ｅ６）を、３００μｌの注射容積で、クランプの１８、１２、または６時間前に、皮下注射によって投与した。この調査では、ＡＬＵＬＡ及び対照抗体を３ｍｇ／ｋｇ／体重の用量で使用した。
【０２３７】
左側腎臓の虚血は、腎臓動脈及び静脈を、それぞれの腎茎上で非外傷性クランプを使用して、３０分間クランプすることによって開始した。偽手術については、腎臓を上記のように単離したがクランプしなかった。切開は、虚血性期間の間、滅菌食塩水浸透ガーゼスポンジで覆った。
【０２３８】
虚血性期間の最後に、クランプを除去し、腎臓が血流の急速な再確立を保証することが観察された。動物を、腹腔に導入した２ｃｃの滅菌食塩水で再水和した。筋肉層は３−０絹糸で密閉し、皮膚は外科用３−０絹糸で密閉した。
【０２３９】
血清中クレアチニンを手術の０、２４、４８、及び７２時間後に測定し、結果を１デシリットル当たりのｍｇ単位で報告した。
【表６】
2016515120.tif 000010
【０２４０】
血液採取
０．１５ｍＬの静脈血試料を、基線クレアチニン測定のために調査開始の際に、及び病理学的血清中クレアチニンレベル評価のために、手術の０、２４、４８、及び７２時間後に、抽出した。
【０２４１】
調査終了
手術の７２時間後、調査を終了し、ペントバルビタールを過量投与しその後頸椎脱臼させることによってラットを安楽死させた。
【０２４２】
クレアチニン測定
全てのラットの血清中クレアチニンを、基線で、ならびにクランプの後１、２、及び３日目に測定した。０．１５ｍｌの静脈血試料を抽出し遠心分離した。血清を除去し、＋４℃で保存し、分析のために保管した。クレアチニン濃度を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｃ．からのＣｒｅａｔｉｎｉｎｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ２で測定した。この機械を既知の対照で標準化し、試料をピクリン酸反応を使用して流した。
【０２４３】
結果
本調査の基線、手術の２４時間、４８時間、及び７２時間後のクレアチニン測定（ｍｇ／ｄＬ単位）を以下の表にまとめる。未治療虚血性ラットにおける２４時間後の２．５〜３．０の値は一般的である。このモデルは急速な回復期を有し、４８〜７２時間後の時間に統計的有意性に到達することを困難にする。
【表７−１】
2016515120.tif 000011
【表７−２】
2016515120.tif 000012
【０２４４】
これらのデータは、ＡＬＵＬＡが、抗体のたった１回の用量が損傷の前に投与される場合、クレアチニンレベルを低下させる（対照抗体と比較して）ことを示す。
【０２４５】
実施例３：ラット片側腎虚血性クランプモデルにおける損傷後の抗インテグリンαｖβ５抗体の単一投与の効能
目的
クランプ解除の１２、８、または４時間後の１回の皮下注射の後のラット腎臓片側性虚血性クランプモデルにおける、モノクローナル抗αｖβ５抗体、ＡＬＵＬＡの用量応答効能を確立すること。
【０２４６】
方法
片側腎クランプ虚血性モデルプロトコル
動物を、５％は誘導のために及び１〜２％は麻酔の維持のために、イソフルオラン／Ｏ２混合物で麻酔した。誘導のために誘導室を使用し、麻酔回路を手術の間使用した。腹部をクリッパーで剃り、殺菌石鹸及び水で洗浄し、タオル乾燥して、Ｂｅｔａｄｉｎｅを綿棒塗布した。動物を、直腸検温器によって温度制御される温暖パッドに被せた滅菌使い捨て吸収性タオル上に配置した。動物を、心拍、酸素測定、呼吸数、及び血圧について、継続的に観察した。腹部を、３ｃｍの正中切開を使用して開いた。それぞれの腎臓を単離し、腎臓動脈及び静脈の周りの脂肪及び結合組織は、滅菌綿棒を使用して切り離した。右側腎臓を除去し、その腎臓動脈及び静脈を縫合して離した。
【０２４７】
左側腎臓の虚血は、腎臓動脈及び静脈を、それぞれの腎茎上で非外傷性クランプを使用して、３０分間クランプすることによって開始した。偽手術については、腎臓を上記のように単離したがクランプしなかった。切開は、虚血性期間の間、滅菌食塩水浸透ガーゼスポンジで覆った。
【０２４８】
虚血性期間の最後に、クランプを除去し、腎臓が血流の急速な再確立を保証することが観察された。動物を、腹腔に導入した２ｃｃの滅菌食塩水で再水和した。筋肉層は３−０絹糸で密閉し、皮膚は外科用３−０絹糸で密閉した。
【０２４９】
ＡＬＵＬＡ抗体または対照抗体（アイソタイプネガティブｍＡＢ−１Ｅ６）を、３００μｌの注射容積で、クランプ解除の１２、８、または４時間後に、皮下注射によって投与した。この調査では、ＡＬＵＬＡ及び対照抗体を３ｍｇ／ｋｇ／体重の用量で使用した。
【０２５０】
血清中クレアチニンを手術の０、２４、４８、及び７２時間後に測定し、結果を１デシリットル当たりのｍｇ単位で報告した。
【表８】
2016515120.tif 000013
【０２５１】
血液採取
０．１５ｍＬの静脈血試料を、基線クレアチニン測定のために調査開始の際に、及び病理学的血清中クレアチニンレベル評価のために、手術の０、２４、４８、及び７２時間後に、抽出した。
【０２５２】
調査終了
手術の７２時間後、調査を終了し、ペントバルビタールを過量投与しその後頸椎脱臼させることによってラットを安楽死させた。
【０２５３】
クレアチニン測定
全てのラットの血清中クレアチニンを、基線で、ならびにクランプの後１、２、及び３日目に測定した。０．１５ｍｌの静脈血試料を抽出し遠心分離した。血清を除去し、＋４℃で保存し、分析のために保管した。クレアチニン濃度を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｃ．からのＣｒｅａｔｉｎｉｎｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ２で測定した。この機械を既知の対照で標準化し、試料をピクリン酸反応を使用して流した。
【０２５４】
結果
本調査の基線、手術の２４時間、４８時間、及び７２時間後のクレアチニン測定（ｍｇ／ｄＬ単位）を以下の表にまとめる。未治療虚血性ラットにおける２４時間後の２．５〜３．０の値は一般的である。このモデルは急速な回復期を有し、４８〜７２時間後の時間に統計的有意性に到達することを困難にする。
【表９−１】
2016515120.tif 000014
【表９−２】
2016515120.tif 000015
【０２５５】
これらのデータは、ＡＬＵＬＡが、抗体のたった１回の用量が損傷の後に投与される場合、クレアチニンレベルを驚くほど低下させる（対照抗体と比較して）ことを示す。
【０２５６】
実施例４：クランプ前治療を有するラット片側腎虚血性クランプモデルにおける腎虚血の治療におけるＡＬＵＬＡの効能の時間経過分析
目的：
クランプの６時間前のＡＬＵＬＡまたはアイソタイプ対照ｍＡｂの１回の投与での皮下（ＳＱ）注射の後、ならびにクランプの２４時間及び７２時間後の動物の屠殺後の、ラット腎臓片側性虚血性クランプモデルにおけるモノクローナル抗体ＡＬＵＬＡの効能を評価すること。
【０２５７】
方法：
本研究において使用される方法は、実施例３において使用されるものと実質的に同じであった。
【表１０】
2016515120.tif 000016
【０２５８】
ＡＬＵＬＡ抗体または対照抗体を、３００μｌの注射容積で、クランプの６時間前に、皮下注射によって投与した。０．１５ｍＬの静脈血試料を、基線クレアチニン測定のために調査開始の際に、及び病理学的血清中クレアチニンレベル評価のために、手術の２４、４８、及び７２時間後に、抽出した。
【０２５９】
結果：
本調査の基線、手術の２４時間、４８時間、及び７２時間後のクレアチニン測定（ｍｇ／ｄＬ単位）を以下の表にまとめる。未治療虚血性ラットにおける２４時間後の２．５〜３．０の値は一般的である。
【表１１−１】
2016515120.tif 000017
【表１１−２】
2016515120.tif 000018
【０２６０】
これらのデータは、ＡＬＵＬＡが、抗体のたった１回の用量が損傷の６時間前に投与される場合、損傷の２４時間後という早期にクレアチニンレベルを低下させる（対照抗体と比較して）ことを示す。
【０２６１】
実施例５：クランプ前治療を有するラット片側腎虚血性モデルにおける腎虚血の予防におけるヒト化ＡＬＵＬＡの異なるＦｃ版の効能
目的：
本調査は、クランプ解除の６時間前の皮下（ＳＱ）注射投与後のラット腎臓片側性虚血性クランプモデルにおけるマウスＡＬＵＬＡ  ｍＡｂ（マウス  ＩｇＧ２ｂ）またはアイソタイプ対照ｍＡｂと比較した、２つの異なるマウスＦｃ尾部（ＩｇＧ２ａまたはアグリＩｇＧ１）を有するキメラｍＡｂとして発現されるヒト化ＡＬＵＬＡ（マウスＡＬＵＬＡの６つ全てのＣＤＲを含む）の効能を試験した。本調査は、ヒト化ＡＬＵＬＡアグリＩｇＧ１ｍＡｂの活性を、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ尾部（マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃはラットにおける完全エフェクター機能を有すると予測される）を含むヒト化ＡＬＵＬＡ抗体と比較した。本来のマウスＡＬＵＬＡは対照として含まれた。
【０２６２】
方法：
本研究において使用される方法は、実施例３において使用されるものと実質的に同じであった。
【表１２】
2016515120.tif 000019
【０２６３】
ＡＬＵＬＡ抗体または対照抗体を、３００μｌの注射容積で、クランプの６時間前に、皮下注射によって投与した。０．１５ｍＬの静脈血試料を、基線クレアチニン測定のために調査開始の際に、及び病理学的血清中クレアチニンレベル評価のために、手術の２４、４８、及び７２時間後に、抽出した。
【０２６４】
結果：
本調査の基線、手術の２４時間、４８時間、及び７２時間後のクレアチニン測定（ｍｇ／ｄＬ単位）を以下の表にまとめる。未治療虚血性ラットにおける２４時間後の２．５〜３．０の値は一般的である。
【表１３−１】
2016515120.tif 000020
【表１３−２】
2016515120.tif 000021
【０２６５】
上記の血清中クレアチニンデータは、ｍＡｂ  ＡＬＵＬＡの３つの版全てを比較した場合、効能に差がないことを示す。エフェクター機能を除去した後で活性の喪失が無いという事実は、エフェクター機能が、効能を産生する動作の機構の一部として必要とされないということを示唆する。
【０２６６】
他の実施形態
本発明はその詳細な説明と合わせて説明されてきたが、前述の説明は例示することを意図しており本発明の範囲を限定することは意図せず、本発明の範囲は添付の請求項の範囲によって定義される。他の態様、利点、及び修正は、次の請求項の範囲内である。
【配列表】
2016515120000001.app
【国際調査報告】
2016515120.tif 000022
2016515120.tif 000023
2016515120.tif 000024
2016515120.tif 000025
2016515120.tif 000026