(57)【要約】本発明は、ゴナドトロピンのための安定な組成物に関する。注入用溶液中での凝集、解離、断片化、及び酸化種変異体の形成を防止しつつ、ゴナドトロピンの安定化に有用な組成物を提供する。即ち、製剤時又は製剤後の凝集又は断片化又は酸化により生じるタンパク質又はポリペプチド分子の不安定化を防止する。また、単回投与形態又は多回投与形態の何れでも、種々の適用の処置において治療に使用できる、ゴナドトロピンの医薬組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
緩衝系中の有効量のゴナドトロピンと、安定剤としてのポリエチレングリコールと、適切な保存料と、任意により他の適切な賦形剤とを含む液体医薬製剤。
【請求項２】
前記緩衝系が、ヒスチジン緩衝剤、アルギニン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、トロメタミン緩衝剤、クエン酸−リン酸緩衝剤等、又はこれらの適切な混合物から選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記緩衝剤が、５ｍＭ〜約１００ｍＭ、好ましくは１０ｍＭ〜５０ｍＭの濃度である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記ポリエチレングリコールが、０．００５％〜１０％の濃度で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
前記保存料が、ヒドロキシベンゼン（フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール等）、パラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、安息香酸ナトリウム、安息香酸ベンジル、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール、又はこれらの混合物から、好ましくは安息香酸ナトリウム又はフェノールから選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
前記保存料が、０．０１％〜１％、好ましくは０．０１％〜０．５％の濃度で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項７】
前記他の適切な賦形剤が、抗酸化剤、他の安定剤、界面活性剤、等張化剤、及びこれらの適切な組合せから選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項８】
前記抗酸化剤が、ＥＤＴＡ、アスコルビン酸、又はこれらの適切な組合せから選択される、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
前記抗酸化剤が、０．００１％〜１％、好ましくは０．０１％〜０．５％の濃度で存在する、請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Tween）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー、及びドデシル硫酸ナトリウム（sodium dodecyl sulphate：ＳＤＳ）から、好ましくはポリソルベート８０又はポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーから選択される、請求項７に記載の製剤。
【請求項１１】
前記界面活性剤が、０．００１％〜約１％の濃度で存在する、請求項７に記載の製剤。
【請求項１２】
前記等張化剤が、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである、請求項７に記載の製剤。
【請求項１３】
前記等張化剤が、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭの量で存在する、請求項７に記載の製剤。
【請求項１４】
前記安定剤が、適切な糖、ポリオール、アミノ酸、及びこれらの適切な組合せから選択される、請求項７に記載の製剤。
【請求項１５】
前記アミノ酸が、アルギニン、グリシン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン、システイン／シスチン、及びこれらの適切な組合せから選択される、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
前記アミノ酸が、０．０１％〜１％の濃度で存在する、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１７】
前記糖が、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、リボース、デオキシリボース、デキストラン、デキストリン、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース、ラフィノース及びこれらの適切な混合物から、好ましくはスクロース又はラフィノース又はトレハロースから選択される、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１８】
前記糖が、０．００５％〜１０％の濃度で存在する、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１９】
ゴナドトロピンの濃度は、５μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬ、好ましくは５μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ、より好ましくは５μｇ／ｍＬ〜５０μｇ／ｍＬである、請求項１に記載の製剤。
【請求項２０】
前記製剤のｐＨがｐＨ６〜ｐＨ８、好ましくはｐＨ７である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２１】
前記製剤が、
ａ）５〜２００μｇ／ｍＬのゴナドトロピン、
ｂ）０．００５〜１０％のポリエチレングリコール、
ｃ）ｐＨ６〜８を維持するための緩衝系、
ｄ）０．０１〜１％の保存料、及び
ｅ）任意により、他の適切な賦形剤
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２２】
前記緩衝系が、リン酸又はコハク酸又は酢酸又はクエン酸−リン酸緩衝系であり、前記保存料が、安息香酸ナトリウム又はフェノール又はｍ−クレゾールである、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、それぞれポリソルベート８０及び／又は塩化ナトリウムから選択される界面活性剤及び／又は等張化剤を更に含む、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２４】
前記ゴナドトロピンが、卵胞刺激ホルモン又はその変異体、黄体形成ホルモン又はその変異体、ヒト絨毛性ゴナドトロピンホルモン又はその変異体、及びそれらの組合せから選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項２５】
前記卵胞刺激ホルモンが、ホリトロピンα、ホリトロピンβである、請求項１に記載の製剤。
【請求項２６】
前記製剤が、ＥＤＴＡ、アスコルビン酸、及びそれらの組合せから選択される抗酸化剤を更に含む、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２７】
前記製剤が、
ａ）４４μｇ／ｍＬのホリトロピンα、
ｂ）０．１％のポリエチレングリコール、
ｃ）ｐＨ約７の１０ｍＭリン酸緩衝剤、
ｄ）０．１％のＥＤＴＡ、
ｅ）０．３％の安息香酸ナトリウム、及び
ｆ）１００ｍＭの塩化ナトリウム
を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２８】
ゴナドトロピン、好ましくはＦＳＨの活性が有害な障害を患う患者への非経口投与に適した、請求項１〜２７の何れか一項に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は安定なゴナドトロピンの医薬組成物に関する。製剤時及び製剤後における凝集、解離、断片化、及び酸化種変異体の形成を防止することによる、ゴナドトロピンの安定化に有用な製剤組成物を提供する。また、単回投与形態又は多回投与形態で、種々の適用の処置に治療的に使用しうるゴナドトロピンの医薬組成物も提供する。
【背景技術】
【０００２】
製薬科学者にとって治療タンパク質又はポリペプチドは、その製剤及び送達に関して数々の課題を伴う。タンパク質又はポリペプチド分子の溶液中における物理的及び化学的安定性を維持することは、分子の生物学的に活性な立体配座を維持し、惹いては所望のレベルの効力及び安全性を有する、前記タンパク質又はポリペプチド分子を含む注入用医薬調製物を提供する上で重要である。物理的及び化学的安定性が欠如すると、処理、製造、運送、及び保存の際に、タンパク質又はポリペプチド分子の顕著な分解又は不可逆的修飾を招く場合がある。医薬調製物中におけるタンパク質の凝集又は断片化は、有効性の喪失、薬物動態の変化、安定性の低下、製品の保存可能期間の制限、及び、不所望の免疫原性の誘発の原因となる。医薬調製物におけるタンパク質又はポリペプチド分子の凝集又は解離又は断片化又は酸化は、医薬製品の効力に深刻な影響を与える。斯かる機能上の損傷を受けた分子を含む医薬調製物は、その有効性、生物学的利用能（bioavailability）、組織分布パターン、薬物動態プロファイルが顕著に変化し、免疫原性のリスクも高まる。タンパク質薬製品の医薬調製物には、数々の賦形剤が使用されてきたが、斯かるタンパク質の分解又は修飾の低減という点では、その成果は様々であった。しかし、何れの賦形剤もそれぞれ独自の制約があり、中には、有効性の高いものほど最終製剤への含入には適さない場合もあった。従って、医薬用途のために、所期の適切な不活性成分又は賦形剤の混合物を用いて、損傷を受けやすいタンパク質又はポリペプチド分子の安定な製剤を構成するのは、常に困難な課題である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
そこで、本発明は、タンパク質又はポリペプチド、好ましくはゴナドトロピンの医薬組成物であって、単回投与又は多回投与形態における前記分子の安定な治療用途製剤を供する医薬組成物を提供する。
【０００４】
卵胞刺激ホルモン（follicle-stimulating hormone：ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（luteinizing hormone：ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（human chorionic gonadotropin：ｈＣＧ）等は、天然の糖タンパク質であって、２つのサブユニットα及びβから構成され、これらはタンパク質構造内で非共有結合的な力により結びつけられている。グリコシル化はα及びβサブユニット双方のポリペプチド骨格の特定部位で生じる。αサブユニットは何れのゴナドトロピンでも同一なのに対し、βサブユニットは個々の糖タンパク質によって各々異なる。βユニットはその生物活性の特異性に寄与している。サブユニット単独について知られている生物活性は存在しない。ヘテロダイマーを形成することによって、タンパク質分子の生物活性が発揮される。
【０００５】
本発明は、治療有効量のＦＳＨ又はその変異体の新規組成物であって、単回投与又は多回投与形態におけるＦＳＨ又はその変異体の安定な治療用途製剤を供する医薬組成物を提供することを目的とする。ホリトロピンα（組換ヒト卵胞刺激ホルモン；ホリトロピンα）は、内因性ゴナドトロピンである卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の組換形態である。ホリトロピンβは、組換ＤＮＡ起源のヒト卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の調製物で、非共有結合により連結された２つの異なる糖タンパク質からなる。これらはそれぞれα−及びβ−サブユニットと呼ばれる。α−及びβ−サブユニットは、それぞれ９２及び１１１のアミノ酸からなる。αサブユニットはＡｓｎ５１及びＡｓｎ７８でグリコシル化され、βサブユニットはＡｓｎ７及びＡｓｎ２４でグリコシル化される。
【０００６】
欧州特許出願公開第１９２８４１３号明細書は、ヒト卵胞刺激ホルモン（ｈＦＳＨ）の水性製剤であって、治療有効量のｈＦＳＨと、グリシンと、メチオニンと、非イオン性界面活性剤と、安定剤としてリン酸緩衝剤とを含む製剤を提供する。非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー及びポリソルベートから選択されるが、好ましくはポリソルベートである。
【０００７】
国際公開第２０１１／１０８０１０号は、ヒトゴナドトロピン又はその変異体を、酢酸、乳酸、炭酸、及び重炭酸、又はそれらの組み合わせからなる群より選択される緩衝系と共に含む、ｐＨ範囲６．５〜９．０の製剤を提供する。本製剤は、更に両性電解質、糖、ポリソルベート、抗酸化剤、及び保存料を含有する。
【０００８】
米国特許第５９２９０２８号明細書は、ゴナドトロピンと、安定化作用を発揮する量のポリカルボン酸又はその塩及びチオエーテル化合物とを含むことを特徴とする、液体ゴナドトロピン含有製剤を開示する。
【０００９】
本発明者等は、以下に、所望のタンパク質又はポリペプチド、好ましくはゴナドトロピン、より好ましくはＦＳＨ又はその変異体の種々の製剤を提供する。本製剤において、前記タンパク質又はポリペプチドは、製剤時及び製剤後において、更なる凝集又は解離又は断片化又は酸化又は他の如何なる修飾も受けることなく、十分安定に維持される。以下に開示される製剤は、適切な保存条件下でより長い期間に亘って保存でき、より高い安定性を提供する。
【００１０】
本発明は、治療量のゴナドトロピン、好ましくはＦＳＨ又はその変異体を含む、単回使用又は多回使用の目的の安定な液体製剤を提供する。
【００１１】
一側面として、本発明は、治療量のＦＳＨ又はその適切な変異体と、適切な賦形剤とを含む安定な液体製剤を提供する。ここで賦形剤は、適切な緩衝剤、安定剤、抗酸化剤、保存料、及び他の賦形剤から選択される。他の賦形剤は任意により、適切な界面活性剤、アミノ酸、及び等張化剤から選択される。
【００１２】
別の側面として、本発明は、ＦＳＨ又はその適切な変異体の安定な液体製剤を、適切な緩衝剤、安定剤、抗酸化剤、保存料、及び他の賦形剤を用いて調製する方法を提供する。他の賦形剤は任意により、適切な界面活性剤、アミノ酸、及び等張化剤から選択される。
【００１３】
更なる側面として、斯かる製剤は任意により、凍結乾燥されていてもよい。凍結乾燥は、当業者が本分野で利用可能な技術を用いて実施することが可能である。斯かる技術には、凍結、アニーリング、一次乾燥、二次乾燥等の種々の工程が含まれる。
【００１４】
更に別の側面として、本発明は、約５μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬのＦＳＨ又はその変異体と、濃度約５ｍＭ〜１００ｍＭの適切な緩衝剤と、濃度約０．００５％〜１０％の適切な安定剤とを含み、更に任意により濃度約０．００１％〜５％の適切な界面活性剤と、濃度約０．００１％〜１％の抗酸化剤と、任意により濃度約０．０１％〜１％の保存料とを含む、単回投与又は多回投与形態の、治療用途の安定な液体製剤を提供する。
【００１５】
別の側面として、本発明は、任意により凍結乾燥形態であってもよい、安定な液体製剤であって、約５μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬのＦＳＨ又はその変異体と、濃度約５ｍＭ〜１００ｍＭの適切な緩衝剤とを含み、更に任意により濃度約０．００５％〜１０％の適切な安定剤と、任意により濃度約０．００１％〜５％の適切な界面活性剤とを含む製剤を提供する。前記凍結乾燥調製物は、治療用途において、好ましくは濃度約０．０１％〜１％の適切な保存料の存在下、単回投与又は多回投与形態として、適切な希釈剤により再構成される。
【００１６】
これらの態様の一つとして、本発明は、ｐＨ５〜９に緩衝された液体製剤を提供する。
【００１７】
別の態様として、本発明は、非経口投与に使用できる液体製剤を提供する。非経口投与には、静脈内、皮下、腹腔内、及び筋肉内の各投与、又は、一般に非経口投与の範囲に属する当業者に周知の他の任意の送達経路が含まれる。
【００１８】
別の態様として、本発明は、製剤時及び製剤後の所望のタンパク質又はポリペプチドの更なる分解を防止することにより、溶液中のタンパク質又はポリペプチド分子を安定化する液体製剤を提供する。一般に、安定な製剤とは、物理的安定性及び化学的安定性、及び／又は、生物活性が、保存時に一定期間に亘って維持される製剤をいう。
【００１９】
更なる態様として、本発明は、関連する適用に治療的に使用しうる、ＦＳＨ又はその変異体の安定な液体製剤を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、任意により凍結乾燥されていてもよい、新規の安定な液体製剤であって、適切な量の治療タンパク質、好ましくはゴナドトロピンを、適切な緩衝剤と、１又は２以上の適切な安定剤と、他の賦形剤とを含む液体製剤を提供する。他の賦形剤は、抗酸化剤、保存料、及び他の任意の賦形剤から選択される。任意の賦形剤は、適切な界面活性剤、アミノ酸、及び等張化剤から選択される。本発明の製剤は、製剤時及び製剤後にゴナドトロピンを安定化すると共に、製剤時及び製剤後にタンパク質又はポリペプチドの活性な生物学的立体配座を維持しつつ、タンパク質又はポリペプチドの任意の更なる分解又は修飾を防止する。斯かる態様において、タンパク質はゴナドトロピンである。斯かる態様において、ゴナドトロピンは尿由来のものでもよく、組換技術で作製したものでもよい。好ましい態様によれば、ゴナドトロピンは、ＦＳＨ、ＬＨ、ｈＣＧ、及びそれらの組合せから選択される。より好ましい態様によれば、ゴナドトロピンはＦＳＨ又はその変異体である。
【００２１】
ある態様によれば、ＦＳＨ又はその変異体は通常、最大２００μｇ／ｍＬの治療量で存在する。好ましい態様によれば、前記治療量は約５μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬである。より好ましい態様によれば、前記治療量は約５μｇ／ｍＬ〜５０μｇ／ｍＬである。
【００２２】
前記液体製剤は、適切な緩衝剤を、医薬調製物を安定化する、医薬的に許容可能な他の賦形剤と共に含有する。使用できる適切な緩衝剤は、本分野で公知のものから選択され、文献の記載から見いだすことができる。ある態様によれば、適切な緩衝剤には、これらに限定されるものではないが、ヒスチジン、アルギニン、クエン酸、コハク酸、酢酸、リン酸、トロメタミン緩衝剤等、又はそれらの適切な混合物、例えばクエン酸−リン酸等が含まれる。
【００２３】
好ましい態様によれば、適切な緩衝剤には、リン酸緩衝剤又はコハク酸緩衝剤が含まれる。
【００２４】
緩衝剤は通常約５ｍＭ〜１００ｍＭの濃度で用いられる。好ましい態様によれば、緩衝剤濃度は約１０ｍＭ〜５０ｍＭである。
【００２５】
ある態様によれば、液体製剤は、使用されるＦＳＨ又はその変異体に応じて、ｐＨ５〜約ｐＨ９の範囲のｐＨ値を有する。好ましい態様によれば、使用される緩衝剤は、前記製剤の約ｐＨ６〜ｐＨ８というｐＨ範囲を維持する。より好ましい態様によれば、ｐＨは〜約ｐＨ７に維持される。
【００２６】
前記液体製剤は更に、適切な界面活性剤を含む。これらは、製剤時及び製剤後に種々のストレス条件、例えば攪拌、剪断、高温への暴露等からタンパク質製剤を保護し、例えば液気界面又は液固界面等の表面相互作用を低減するのに使用される、医薬的に許容可能な賦形剤である。適切な界面活性剤としては、これらに限定されるものではないが、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Tween）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばBrij）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（例えばTriton-X）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（例えばポロキサマー、Pluronic）、オクタン酸（caprylate）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）等が含まれる。好ましい態様によれば、適切な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Tweens）である。より好ましい態様によれば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルは、ポリソルベート２０、（販売商標名Tween 20（登録商標））及びポリソルベート８０（販売商標名Tween 80（登録商標））。別の好ましい態様によれば、適切な界面活性剤は、ポリエチレン−ポリプロピレンコポリマー、市販商品名Pluronic(R) F68又はポロキサマー１８８（登録商標）。別の好ましい態様によれば、適切な界面活性剤は、アルキルフェノールポリオキシエチレンエステル、市販商品名Triton-Xである。
【００２７】
界面活性剤は一般に約０．００１％〜５％の濃度で使用される。好ましい態様によれば、界面活性剤の濃度は約０．０１％〜１％である。
【００２８】
液体製剤は更に、１又は２以上の医薬的に許容可能な又は適切な安定剤を含む。この安定剤により、活性医薬成分が処理、製造、運送、保存、及び使用時の化学的及び／又は物理的分解から保護される。ある態様によれば、安定剤としては、これらに限定されるものではないが、適切な糖、アミノ酸、ポリオール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンイミン、シクロデキストリン等、又はこれらの適切な誘導体又は混合物が挙げられる。
【００２９】
斯かる態様の一つによれば、糖は単糖又はオリゴ糖である。単糖としては、これらに限定されるものではないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、リボース、デオキシリボース、デキストラン、デキストリン等、又はアミノ糖、例えばノイラミン酸又はＮ−アセチルグルコサミン等が挙げられる。オリゴ糖としては、これらに限定されるものではないが、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース、及びラフィノース等、又はこれらの適切な混合物が挙げられる。
【００３０】
別の態様として、安定剤として使用可能なポリオールとしては、これらに限定されるものではないが、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、アラビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等、又はこれらの適切な組み合わせが挙げられる。好ましい態様によれば、適切なポリオールは、ソルビトール又はマンニトールである。
【００３１】
別の態様として、ポリエチレンイミンも安定剤として使用できる。別の好ましい態様によれば、安定剤は、グリコール、ポリオール、及びこれらの適切な組合せから選択される。ある態様によれば、安定剤は、約０．００５％〜約１０％の量で存在する。
【００３２】
より好ましい態様によれば、安定剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミンである。本発明では、分子量範囲２００ダルトン〜４０，０００ダルトンのポリエチレングリコールが使用できる。好ましい態様によれば、本発明に係る製剤は、分子量範囲２００ダルトン〜１０，０００ダルトンのポリエチレングリコールを含む。好ましい態様によれば、ポリエチレングリコールは、約０．００５％〜約１０％の量で存在する。
【００３３】
別の態様として、安定剤として使用できるシクロデキストリン又はその誘導体としては、これらに限定されるものではないが、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、或いはそれらのヒドロキシプロピル化、ヒドロキシエチル化、エチル化又はメチル化誘導体、又はスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（Sulfobutyl ether beta-cyclodextrin：ＳＢＥ−β−ＣＤ）又は分岐シクロデキストリン又はシクロデキストリンポリマー、又はこれらの適切な混合物が挙げられる。好ましい態様によれば、適切なシクロデキストリン変異体は、ヒドロキシプロピル化シクロβ−デキストリン（hydroxypropylated cyclo beta-dextrin：ＨＰ−β−ＣＤ）である。
【００３４】
好ましい態様によれば、シクロデキストリン又はその誘導体は、約０．２％〜約１０％の量で存在する。別の斯かる態様によれば、安定剤として使用できるアミノ酸又は抗酸化剤としては、これらに限定されるものではないが、アルギニン、グリシン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン、システイン／シスチン等、又はこれらの適切な組み合わせが挙げられる。好ましい態様によれば、適切なアミノ酸は、メチオニン又はシステイン又はグリシン又はトリプトファン又はこれらの組み合わせである。
【００３５】
ある態様によれば、アミノ酸は、約０．０１％〜１０％の量で存在する。
【００３６】
ここで、当業者であれば、アスコルビン酸又はＥＤＴＡ又はそれらの組み合わせを、抗酸化剤として単独で、或いは他の抗酸化剤との組合せにおいて、前記製剤に用いることもできる。本発明に係る抗酸化剤は、０．００１％〜１％、好ましくは０．０１％〜０．５％の濃度範囲で存在する。
【００３７】
これらの態様の一つとして、安定な液体製剤は、ヒドロキシベンゼン（フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール等）、パラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、安息香酸ナトリウム、安息香酸ベンジル、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール、またはこれらの混合物から選択される保存料を含む。好ましい態様によれば、前記保存料は、フェノール、パラベン、安息香酸ナトリウム、安息香酸ベンジル、及びこれらの混合物から選択される。
【００３８】
好ましい態様によれば、前記保存料は、約０．０１％〜１％の量で存在する。より好ましい態様によれば、前記保存料は、０．０１％〜０．５％の量で存在する。
【００３９】
別の態様として、前記液体製剤は任意により、塩化ナトリウム又は塩化カリウム等の等張化剤を含んでいてもよい。好ましい態様によれば、前記等張化剤は塩化ナトリウムであり、その存在量は約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭである。
【００４０】
リン酸又は水酸化ナトリウムを適量用いて、製剤を所望のｐＨに調節してもよい。
【００４１】
前記製剤は、更に加えて、１又は２以上の適切な他の賦形剤を含んでいてもよい。斯かる賦形剤は、当業者には周知である。
【００４２】
ある態様によれば、前記液体製剤は、当初と比較して更なるタンパク質の分解又は修飾を生じさせないという点で、保存安定性を維持する。
【００４３】
ある態様によれば、前記液体製剤は、製剤のプロセスに亘って安定性を維持する。
【００４４】
これらの態様の一つとして、前記の賦形剤を含有する安定な液体製剤は、ＦＳＨとＬＨ、又はＦＳＨとｈＣＧ、又はＬＨとｈＣＧの組み合わせについて調製することが可能である。
【００４５】
レベルの高分子量化学種又は凝集体、及び、低分子量又は分解された化学種のレベルを推算するために、分析的ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。酸化種変異体、又は、所望のタンパク質の純度を分析するために、当業者であれば逆相ＨＰＬＣを使用することができる。インビボ（in-vivo）又はインビトロ（in-vitro）の生物学的アッセイを実施して、所望のタンパク質の生物活性を調べることもできる。当業者であれば、本分野で公知の他の分析ツール／技術を用いて、所望のタンパク質の物理化学的及び生物学的性質を調べることもできる。
【００４６】
本発明において使用される前記の分析法は当業者に周知である。それらの簡単な説明を以下に示すが、これらはあくまでも参考のために過ぎない。
【実施例】
【００４７】
ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィー（HP-Size exclusion chromatography：ＨＰ−ＳＥＣ）：
TSK gel G3000 SWXL カラム（７．８ｍｍＩ．Ｄ．×３０ｃｍＬ）を用いたＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）により、高分子量化学種又は凝集体、及び、低分子量又は分解された化学種の量を推算することにより、試料を分析した。試料をロードし、リン酸ナトリウム緩衝剤を用い、流速０．５ｍＬ／分で定組成で（isocratically）溶離した。溶離をＵＶ２１５ｎｍでモニターした。
【００４８】
以下の非限定的な実施例は、本発明に従い調製できる異なる製剤について説明するものである。当然ながら、これらの製剤に他の賦形剤を加えてもよく、それらも当業者の理解する範囲内である。
【００４９】
以下の実施例を通じて本発明を更に説明する。これらはあくまでも説明の目的のために示すものにすぎず、本発明の範囲を限定するものと解してはならない。
【００５０】
実施例１
【表Ａ１】
2016534061.tif 000002
【００５１】
ホリトロピンαを本分野で公知の技術により精製した。本実施例では、精製されたホリトロピンαを、ポリエチレングリコール、ＥＤＴＡ、及び安息香酸ナトリウムを上述のような所望の濃度で含むリン酸ナトリウム緩衝剤により製剤化した。製剤用媒体のｐＨは約ｐＨ７．０で維持された。必要であれば、製剤のｐＨをＯ−リン酸又は水酸化ナトリウムを用いて調整してもよい。賦形剤をそれぞれ対応するストック溶液からタンパク質溶液に加え、最終濃度及び体積を所望のレベルまで調整した。製剤化されたバルクを適切な容器施栓系（バイアル、カートリッジ、シリンジ等）に分注して保存した。同様に、当業者であればホリトロピンβ用の組成物も製剤化することができる。製剤化に際して、試料における高分子量化学種又は凝集体の存在、及び、分解された又は断片化された変異化学種の存在を、ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）で分析した。当業者であれば、前記のパラメーターを種々の温度条件で、例えばリアルタイム保存条件（＋２℃〜＋８℃の間）、加速保存条件（約＋２５℃）又はストレス下条件（より高い温度）で分析することができる。
【００５２】
実施例２
【表Ａ２】
2016534061.tif 000003
【００５３】
本分野で公知の技術によりホリトロピンαを精製した。本実施例では、精製されたホリトロピンαを、アルギニン、ポリエチレングリコール、ＥＤＴＡ、及び安息香酸ナトリウムを上述のような所望の濃度で含むリン酸ナトリウム緩衝剤により製剤化した。製剤用媒体のｐＨは約ｐＨ７．０で維持された。必要であれば、製剤のｐＨをＯ−リン酸又は水酸化ナトリウムを用いて調整してもよい。賦形剤をそれぞれ対応するストック溶液からタンパク質溶液に加え、最終濃度及び体積を所望のレベルまで調整した。製剤化されたバルクを適切な容器施栓系（バイアル、カートリッジ、シリンジ等）に分注して保存した。同様に、当業者であればホリトロピンβ用の組成物も製剤化することができる。製剤化に際して、試料中の高分子量化学種又は凝集体の存在、及び、分解された又は断片化された変異化学種の存在を、ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。当業者であれば、前記のパラメーターを種々の温度条件で、例えばリアルタイム保存条件（＋２℃〜＋８℃の間）、加速保存条件（約＋２５℃）又はストレス下条件（より高い温度）で分析することができる。
【００５４】
実施例３
【表Ａ３】
2016534061.tif 000004
【００５５】
本分野で公知の技術によりホリトロピンαを精製した。本実施例では、精製されたホリトロピンαを、メチオニン、ポリエチレングリコール、ＥＤＴＡ、及び安息香酸ナトリウムを上述のような所望の濃度で含むリン酸ナトリウム緩衝剤により製剤化した。製剤用媒体のｐＨは約ｐＨ７．０で維持された。必要であれば、製剤のｐＨをＯ−リン酸又は水酸化ナトリウムを用いて調整してもよい。賦形剤をそれぞれ対応するストック溶液からタンパク質溶液に加え、最終濃度及び体積を所望のレベルまで調整した。製剤化されたバルクを適切な容器施栓系（バイアル、カートリッジ、シリンジ等）に分注して保存した。同様に、当業者であればホリトロピンβ用の組成物も製剤化することができる。製剤化に際して、試料中の高分子量化学種又は凝集体の存在、及び、分解された又は断片化された変異化学種の存在を、ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。当業者であれば、前記のパラメーターを種々の温度条件で、例えばリアルタイム保存条件（＋２℃〜＋８℃の間）、加速保存条件（約＋２５℃）又はストレス下条件（より高い温度）で分析することができる。
【００５６】
実施例４
【表Ａ４】
2016534061.tif 000005
【００５７】
本分野で公知の技術によりホリトロピンαを精製した。本実施例では、精製されたホリトロピンαを、更にスクロース、メチオニン、ポリエチレングリコール、ＥＤＴＡ、及びフェノールを上述のような所望の濃度で含むリン酸ナトリウム緩衝剤により製剤化した。製剤用媒体のｐＨは約ｐＨ７．０で維持された。必要であれば、製剤のｐＨをＯ−リン酸又は水酸化ナトリウムを用いて調整してもよい。賦形剤をそれぞれ対応するストック溶液からタンパク質溶液に加え、最終濃度及び体積を所望のレベルまで調整した。製剤化されたバルクを適切な容器施栓系（バイアル、カートリッジ、シリンジ等）に分注して保存した。同様に、当業者であればホリトロピンβ用の組成物も製剤化することができる。製剤化に際して、試料中の高分子量化学種又は凝集体の存在、及び、分解された又は断片化された変異化学種の存在を、ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。当業者であれば、前記のパラメーターを種々の温度条件で、例えばリアルタイム保存条件（＋２℃〜＋８℃の間）、加速保存条件（約＋２５℃）又はストレス下条件（より高い温度）で分析することができる。
【００５８】
実施例５
【表Ａ５】
2016534061.tif 000006
【００５９】
本分野で公知の技術によりホリトロピンαを精製した。本実施例では、精製されたホリトロピンαを、更にポリエチレングリコール、塩化ナトリウム、ＥＤＴＡ、及び安息香酸ナトリウムを上述のような所望の濃度で含むリン酸ナトリウム緩衝剤により製剤化した。製剤用媒体のｐＨは約ｐＨ７．０で維持された。必要であれば、製剤のｐＨをＯ−リン酸又は水酸化ナトリウムを用いて調整してもよい。賦形剤をそれぞれ対応するストック溶液からタンパク質溶液に加え、最終濃度及び体積を所望のレベルまで調整した。製剤化されたバルクを適切な容器施栓系（バイアル、カートリッジ、シリンジ等）に分注して保存した。同様に、当業者であればホリトロピンβ用の組成物も製剤化することができる。製剤化に際して、試料中の高分子量化学種又は凝集体の存在、及び、分解された又は断片化された変異化学種の存在を、ＨＰ−サイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。当業者であれば、前記のパラメーターを種々の温度条件で、例えばリアルタイム保存条件（＋２℃〜＋８℃の間）、加速保存条件（約＋２５℃）又はストレス下条件（より高い温度）で分析することができる。
【００６０】
ホリトロピンαを上述のように異なる組成物に製剤化し、より高い温度に暴露することにより、経時的な分解を検討する。異なる試料について得られたＨＰ−ＳＥＣ分析の結果を下記の表１に示す。ホリトロピンαを上述の異なる実施例に記載したような製剤組成物としてより高い温度に暴露したところ、高分子量化学種（high molecular weight：ＨＭＷ）又は凝集体、及び、低分子量（low molecular weight：ＬＭＷ）又は分解化学種の何れについても、時間と共に顕著な上昇は見られなかった。
【００６１】
【表Ｂ１】
2016534061.tif 000007
【００６２】
上記の記載及び実施例にて言及した種々の組成物は、ＦＳＨ又はその変異タンパク質についても、同様のプロセスを用いて調製することができる。本発明で記載した異なる組成物を用いて製剤化したＦＳＨタンパク質も、＋２℃〜＋８℃の間の温度で、適切な容器施栓系（バイアル、カートリッジ、シリンジ等）で長期保存することが可能である。
【００６３】
【表Ｂ２】
2016534061.tif 000008
【００６４】
＋２℃〜＋８℃の間で保存した異なる試料について得られたＨＰ−ＳＥＣ分析の結果を下記表３に示す。ホリトロピンを表２に例示した異なる製剤組成物を用いて＋２℃ to ＋８℃で保存したところ、高分子量化学種（high molecular weight：ＨＭＷ）又は凝集体、及び、低分子量（low molecular weight：ＬＭＷ）又は分解化学種の何れについても、時間と共に顕著な上昇は見られなかった。
【００６５】
【表Ｂ３−Ａ】
2016534061.tif 000009
【００６６】
同様に、当業者であれば、ＬＨ又はＨＣＧ等の他のゴナドトロピンについても、本発明に従って製剤化することができる。
【００６７】
本明細書に開示の賦形剤を用いて、以上の実施例に述べるのと同様のプロセスにより、種々の組成物を調製することができる。ＦＳＨ又はその変異タンパク質の安定化に利用可能な他の適切な組成物を以下の表３に示す。
【００６８】
【表Ｂ３−Ｂ１】
2016534061.tif 000010
【００６９】
【表Ｂ３−Ｂ２】
2016534061.tif 000011
【００７０】
【表Ｂ３−Ｂ３】
2016534061.tif 000012
【００７１】
【表Ｂ３−Ｂ４】
2016534061.tif 000013
【００７２】
【表Ｂ３−Ｂ５】
2016534061.tif 000014
【００７３】
同様の製剤を、ｐＨ範囲約ｐＨ５．０〜ｐＨ９．０の５〜１００ｍＭの酢酸緩衝剤（酢酸ナトリウム−酢酸）又はコハク酸緩衝剤又はクエン酸緩衝剤（ナトリウム クエン酸−クエン酸）又はリン酸緩衝化食塩水又はアルギニン緩衝剤又はクエン酸−リン酸緩衝剤又はヒスチジン緩衝剤等を用いて調製することもできる。
【００７４】
同様の製剤を、０．０１％〜１０％のラフィノース又はトレハロース又はソルビトール又はデキストラン又はシクロデキストリン又はマンニトールを用いて調製することもできる。
【００７５】
同様の製剤を、０．００１％〜５％のpluronics（ポロキサマー）を単独で用い、或いはポリエチレングリコール又はポリソルベートと組み合わせて用いて調製することもできる。
【００７６】
同様の製剤を、適切な濃度のアスコルビン酸を用いて調製することもできる。
【００７７】
同様の製剤を、適切な濃度の等張化剤を用いて調製することもできる。
【００７８】
同様の製剤を、他のゴナドトロピン、例えばＬＨ又はその変異体、ｈＣＧ又はその変異体、或いはこれらの組み合わせ等について調製することもできる。当業者であれば、同様の製剤を、ＬＨ又はその変異体とＦＳＨ又はその変異体との組み合わせ、並びに、ｈＣＧ又はその変異体とＦＳＨ又はその変異体との組み合わせから選択される、複数のゴナドトロピンの組み合わせについて調製することもできる。
【００７９】
本発明の製剤はゴナドトロピンの活性が有害な処置に使用できる。
【国際調査報告】
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