(57)【要約】  ＨＤＡＣ６阻害物質（化学式Ｉの化合物）は、Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）に関連した病態を減少させることが示されている。化学式Ｉの化合物の投与は、ＳＬＥ誘導性脾腫、異常なＢ細胞分化、ダブルネガティブ胸腺型Ｔ細胞数の増加、たとえば抗ｄｓＤＮＡ等の自己抗体レベルの増加、免疫複合体介在性糸球体腎炎、及び炎症性サイトカイン産生の増加を特徴とする症状の多くを軽減させた。また、化学式Ｉの化合物を用いた治療は、循環自己抗体を除去しながら、対象の脾臓Ｔｒｅｇ細胞の数を増加させた。ＨＤＡＣ６阻害は、プロＢ細胞及びプレＢ細胞の両方の初期発生分画の細胞の割合を増加させることにより、骨髄Ｂ細胞の分化を変化させた。これらの結果から、化学式Ｉの化合物を用いたＨＤＡＣ６の阻害は、異常なＴ細胞分化及びＢ細胞分化を変化させることにより、ＳＬＥ疾患を治療し得ることが示される。
2016531163.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異常なリンパ球の機能の治療方法であって：
その必要のある対象に対し、化学式Ｉ：
【化１】
2016531163.tif 000015
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグの治療有効量を投与することを含み、
ここで、Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、それら各々は、任意選択的に置換され；
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、もしくは−ＮＨ２であり；または２つのＲＡ基が共に、任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成しても良く；
ｍは、０、１または２であり；及び、
ここで、化学式Ｉの化合物の量は、前記対象の異常なリンパ球の機能の治療に有効である、前記方法。
【請求項２】
前記異常なリンパ球の機能が、アポトーシスの異常を含む、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項３】
前記アポトーシスの異常が、リンパ球の発生を変化させる、請求項２に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項４】
前記変化したリンパ球の発生が、未成熟なリンパ球の数を増加させる、請求項３に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項５】
前記異常なリンパ球の機能が、自己反応性リンパ球を産生する、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項６】
前記異常なリンパ球の機能が、自己免疫性疾患を引き起こす、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項７】
前記自己免疫性疾患が、Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患である、請求項６に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項８】
前記Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患が、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）である、請求項７に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項９】
前記化学式Ｉの化合物が、ＡＣＹ−７３８である、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項１０】
前記化学式Ｉの化合物の投与が、脾腫、異常なＢ細胞分化、ダブルネガティブ胸腺型Ｔ細胞の数の増加、抗ｄｓＤＮＡレベルの増加、免疫複合体介在性糸球体腎炎、及び炎症性サイトカインの産生の増加からなる群から選択される前記対象の症状のうちの少なくとも１つを軽減する、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項１１】
前記化学式Ｉの化合物の投与が、前記対象の脾臓Ｔｒｅｇ細胞の数を増加させる、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項１２】
前記化学式Ｉの化合物の投与が、プロＢ細胞及びプレＢ細胞の両方の初期発生分画における、前記対象の細胞の割合を増加させる、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項１３】
前記化学式Ｉの化合物の投与が、前記対象の自己反応性Ｂ細胞の数を減少させる、請求項１に記載の異常なリンパ球の機能の治療方法。
【請求項１４】
Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患に関連した病態を減少させる方法であって：
その必要のある対象に化学式Ｉ：「
【化２】
2016531163.tif 000016
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグの治療有効量を投与することを含み、
ここで、Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、それら各々は、任意選択的に置換され；
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、もしくは−ＮＨ２であり；または２つのＲＡ基が共に、任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成しても良く；及びｍは、０、１または２であり；及び、
ここで、化学式Ｉの化合物の量は、Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患に関連した前記病態の低下に有効である、前記方法。
【請求項１５】
前記化学式Ｉの化合物は、ＡＣＹ−７３８である、請求項１４に記載のＢ細胞介在性自己免疫性疾患に関連した病態を減少させる方法。
【請求項１６】
前記Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患が、全身性紅斑性狼瘡である、請求項１４に記載のＢ細胞介在性自己免疫性疾患に関連した病態を減少させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、異常なリンパ球の機能に起因する疾患の治療のための、ＨＤＡＣ６阻害剤の投与に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
リシン残基のアセチル化及び脱アセチル化を介したタンパク質の翻訳後修飾は、様々な細胞機能（細胞形態の制御、分化及び増殖を含む）の制御に重要な役割を果たしている。ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）は、ヒストンならびに非ヒストン性のタンパク質のリシン残基の脱アセチル化を触媒する亜鉛結合型加水分解酵素である（Ｈａｂｅｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｅｔ．  ２００９，  １０，  ３２−４２）。１１のＺｎ結合型ヒトＨＤＡＣが同定されている（Ｔａｕｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９６，  ２７２，  ４０８−４１１；  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９９７，  ２７２，  ２８００１−２８００７；  Ｇｒｏｚｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｄ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １９９９，  ９６，  ４８６８−４８７３；  Ｋａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  ２０００，  １４，  ５５−６６．  Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２０００，  ２７５，  １５２５４−１５２６４；  Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ２００１，  ９８，  １０５７２−１０５７７；  Ｖｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００１，  ２９１，  １３０４−１３５１）。これらのメンバーは、４つのファミリーに分類される：クラスＩ（ＨＤＡＣ１、２及び３）、クラスＩＩａ（ＨＤＡＣ４、５、７及び９）、クラスＩＩｂ（ＨＤＡＣ６及び１０）、及びクラスＩＶ（ＨＤＡＣ１１）。
【０００３】
クラスＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１、２及び３）は、ヒストンタンパク質のＮ−アセチル−リシン残基の脱アセチル化及び細胞の核にある他の転写制御物質を介して、遺伝子の発現を調節する（Ｈａｓｓｉｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  １９９７，  １，  ３００−３０８）。
【０００４】
クラスＩＩｂのＨＤＡＣであるＨＤＡＣ６は、ヒトの亜鉛依存性ＨＤＡＣの中でユニークなものである。細胞質に存在する場合、ＨＤＡＣ６は２つの触媒ドメイン及びユビキチン結合ドメインをそのＣ末端領域に有している。ＨＤＡＣ６の基質としては、チューブリン、ペルオキシレドキシン、コルタクチン及びヒートショックタンパク質９０（ｈｓｐ９０）が挙げられ、ヒストンではない。ＨＤＡＣ６は細胞移動及び細胞−細胞の相互作用を含む、微小管動態に重要な役割を果たし、ユビキチン化タンパク質とのアグリソーム形成に必要とされる。
【０００５】
本明細書において、ＨＤＡＣ６の小分子阻害物質の使用方法及び、異常なリンパ球の機能から生じる疾患を治療するための、その医薬組成物が開示される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、化学式Ｉの化合物を用いた、異常なリンパ球の機能に起因する疾患の治療方法を開示する。
【０００７】
１つの実施形態において、本発明は、以下を含む、対象における異常なリンパ球の機能を治療する方法を開示するものである：
化学式Ｉ：
【化１】
2016531163.tif 000003
または、その薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグの化合物の治療有効量を対象に投与することであって、
ここで、当該化学式Ｉの化合物の量は、当該対象の異常なリンパ球の機能の治療に有効である。
【０００８】
１つの実施形態において、当該異常なリンパ球の機能は、アポトーシスの異常を含む。
【０００９】
１つの実施形態において、当該異常なリンパ球の機能は、リンパ球の発達を損なうものでありうる。
【００１０】
他の実施形態において、当該損なわれたリンパ球の機能により、未成熟なリンパ球の数の増加がもたらされ得る。
【００１１】
他の実施形態において、当該損なわれたリンパ球の機能により、自己反応性リンパ球が産生され得る。
【００１２】
１つの実施形態において、当該異常なリンパ球の機能により、たとえば、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）等のＢ細胞介在性自己免疫疾患が生じる。
【００１３】
他の実施形態において、化学式Ｉの化合物は、ＡＣＹ−７３８であっても良く、ここで、ＡＣＹ−７３８は、以下の構造を有している：
【化２】
2016531163.tif 000004
【００１４】
他の実施形態において、ＡＣＹ−７３８の治療有効量は、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８を含有する。
【００１５】
当該対象は、ヒトであっても良い。
【００１６】
他の実施形態において、化学式Ｉの化合物の投与は、対象の脾腫、異常なＢ細胞分化、対象のダブルネガティブ胸腺型Ｔ細胞の増加、血清抗ｄｓＤＮＡレベル、免疫複合体介在性糸球体腎炎、または炎症性サイトカインの産生を低下させる。
【００１７】
さらに他の実施形態において、化学式Ｉの化合物の投与は、対象の自己反応性Ｂ細胞の数を低下させる。
【００１８】
本発明により、以下を含む、Ｂ細胞介在性自己免疫性疾患に関連した病態を低下させる方法が開示される：
化学式Ｉの化合物：
【化３】
2016531163.tif 000005
またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグの治療有効量を、その必要のある対象に投与することであって、
ここで、当該化学式Ｉの化合物の量は、たとえば全身性紅斑性狼瘡等のＢ細胞介在性自己免疫疾患に関連した病態の低下に有効である。
【００１９】
１つの実施形態において、化学式Ｉの化合物は、ＡＣＹ−７３８であり、ここで、ＡＣＹ−７３８は、以下の構造を有している：
【化４】
2016531163.tif 000006
【００２０】
本発明はさらに、化学式Ｉの化合物の治療有効量、及び、Ｂ細胞介在性自己免疫疾患（たとえば、全身性紅斑性狼瘡等）の治療における使用のための説明書を含むキットが開示される。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ＮＺＢ／ＷマウスにおけるプロＢ細胞及びプレＢ細胞のレベルを示す。骨髄（ＢＭ）細胞は、発症前及び発症後のＮＺＢ／Ｗマウスから採取された。プロＢ細胞及びプレＢ細胞に特異的な蛍光標識抗体を用いて標識した後、プロＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋）群及びプレＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−）群を、フローサイトメトリーにより解析した（ｎ＝３；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５）。
【図２】図２は、ＨＤＡＣ６阻害により、骨髄のプロＢ細胞群及びプレＢ細胞群が変化することを示す。ＡＣＹ−７３８処置ＮＺＢ／Ｗマウスから採取された骨髄細胞は、Ｂ２２０及びＣＤ４３で染色された。次いで、プロＢ細胞群（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋）及びプレＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−）群をフローサイトメトリーにより解析した（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５）。
【図３】図３は、ＡＣＹ−７３８を用いたＮＺＢ／Ｗの処置が、低用量もしくは高用量のいずれでも、脾臓Ｂ細胞または末梢Ｂ細胞の割合に対して効果が無かったことを示す（ｎ≧５）。
【図４】図４は、ＡＣＹ−７３８を用いてＮＺＢ／Ｗマウスを処置した後に、ダブルネガティブ（ＤＮ）胸腺型Ｔ細胞の割合が低下することを示す。
【図５】図５は、ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて、特異的ＨＤＡＣ６阻害がＴｒｅｇ表現型を増加させることを示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５）。
【図６】図６は、ＡＣＹ−７３８を用いて処置されたＮＺＢ／Ｗマウスにおける、生存率、体重、タンパク尿、平均脾臓重量、及び全体的な疾患の進行に関する評価を示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５）。
【図７】図７は、ＡＣＹ−７３８治療後の、ＮＺＢＷマウスにおけるＳＬＥ血清バイオマーカーの評価を示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５）。
【図８】図８は、ＡＣＹ−７３８治療後の、ＮＺＢＷマウスにおけるサイトカイン産生レベルを示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．０００５）。
【図９】図９は、ＡＣＹ−７３８治療後の、ＮＺＢＷマウスにおける、糸球体ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＧＦ−βのｍＲＮＡレベルを示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５）。
【図１０】図１０は、ＨＤＡＣ６阻害により、糸球体免疫複合体沈着が低下したことを示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５）。
【図１１】図１１は、ＡＣＹ−７３８治療後、ＳＬＥに関連した腎臓の病変が減少したことを示す（ｎ≧５；＊ｐ＜０．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
以下に、本発明を記述するために用いられた様々な用語の定義を列記する。これらの定義は、特定の例において限定されない限り、個々、またはより大きな群の一部としてのいずれでも、本明細書及び請求項全体を通じて用いられているように、当該用語に適用される。
【００２３】
ヒドロカルビル置換基の炭素原子の数は、「Ｃｘ−Ｃｙ」の接頭辞により示されても良く、ここで、ｘは、当該置換基の炭素原子の最小数であり、ｙは、最大数である。同様に、Ｃｘ鎖は、ｘ炭素原子を含有するヒドロカルビル鎖を意味する。
【００２４】
本明細書において、「アルキル」という用語は、飽和した、直鎖または分枝鎖の炭化水素部分を指し、ある実施形態においては、それぞれ、１〜６または１〜８の炭素原子を含有する。Ｃ１−Ｃ６アルキル部分の例としては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル部分が挙げられ；及びＣ１−Ｃ８アルキル部分の例としては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル部分が挙げられる。
【００２５】
本明細書において、「アルケニル」という用語は、炭化水素部分から誘導された一価の基を表し、ある実施形態においては、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、２〜６、または２〜８の炭素原子を含有する。アルケニル基としては、限定されないが、たとえば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、ヘプテニル、オクテニル等が挙げられる。
【００２６】
本明細書において、「アルキニル」という用語は、炭化水素部分から誘導された一価の基を表し、ある実施形態においては、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、２〜６または２〜８の炭素原子を含有する。アルキニル基は、他の基への付着点であっても無くても良い。代表的なアルキニル基としては、限定されないが、たとえばエチニル、１−プロピニル、１−ブチニル、ヘプチニル、オクチニル等が挙げられる。
【００２７】
「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル部分を指す。
【００２８】
本明細書において、「アリール」という用語は、１以上の芳香族環を有し、縮合されている、もしくは縮合されていない、単環式または多環式の炭素環系を指し、限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル等が挙げられる。
【００２９】
本明細書において、「アラルキル」または「アリールアルキル」という用語は、アリール環に付着したアルキル残基を指す。例としては、限定されないが、ベンジル、フェネチル等が挙げられる。
【００３０】
本明細書において、「炭素環式」という用語は、飽和、部分的に不飽和、もしくは完全に不飽和の、単環式または多環式の炭素環式化合物から誘導された一価の基を表す。炭素環式の基の例は、シクロアルキルの定義及びアリールの定義にある基が挙げられる。
【００３１】
本明細書において、「シクロアルキル」という用語は、飽和もしくは部分的に不飽和の、単環式または多環式の炭素環式化合物から誘導された一価の基を表す。Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルの例としては、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル及びシクロオクチルが挙げられ；及びＣ３−Ｃ１２シクロアルキルの例としては、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル及びビシクロ［２．２．２］オクチルが挙げられる。また、１つの水素原子を除去することにより、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、単環式または多環式の炭素環式化合物から誘導される一価の基も予期される。そのような基の例としては、限定されないが、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル等が挙げられる。
【００３２】
本明細書において、「ヘテロアリール」という用語は、単環もしくは多環（たとえば、二環または三環またはそれ以上）の、縮合された、もしくは縮合されていない部分、または少なくとも１つの芳香族環を有する環系を指し、５〜１０の環原子を有し、その１つの環原子は、Ｓ、Ｏ及びＮから選択され；０、１または２の環原子は、Ｓ、Ｏ及びＮから独立して選択される追加のヘテロ原子であり；及び残りの環原子は炭素である。ヘテロアリールとしては、限定されないが、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等が挙げられる。
【００３３】
本明細書において、「ヘテロアラルキル」という用語は、ヘテロアリール環に付着されたアルキル残基を指す。例としては、限定されないが、ピリジニルメチル、ピリミジニルエチル等が挙げられる。
【００３４】
本明細書において、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族系の３−、４−、５−、６−、もしくは７員環、または、縮合系もしくは非縮合系の二環または三環基を指し、（ｉ）各環は、酸素、硫黄及び窒素から独立して選択される１〜３のヘテロ原子を含有し、（ｉｉ）各５員環は、０〜１の二重結合を有し、各６員環は０〜２の二重結合を有し、（ｉｉｉ）窒素及び硫黄ヘテロ原子は、任意選択的に酸化されていても良く、（ｉｖ）窒素ヘテロ原子は、任意選択的に四級化されていても良く、及び（ｉｖ）任意の上述の環は、ベンゼン環に縮合されていても良い。代表的なヘテロシクロアルキル基としては、限定されないが、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル及びテトラヒドロフリルが挙げられる。
【００３５】
「アルキルアミノ」という用語は、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）構造を有する基を指し、Ｃ１−Ｃ１２アルキルは上記に定義されている。
【００３６】
「アシル」という用語は、酸（限定されないが、カルボン酸、カルバミン酸、炭酸、スルホン酸、及び亜リン酸が挙げられる）から誘導された残基を含む。例としては、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族リン酸、及び脂肪族リン酸が挙げられる。脂肪族カルボニルの例としては、限定されないが、アセチル、プロピオニル、２−フルオロアセチル、ブチリル、２−ヒドロキシアセチル等が挙げられる。
【００３７】
本発明に従い、本明細書に記述される、任意のアリール、置換アリール、ヘテロアリール及び置換ヘテロアリールは、任意の芳香族基であっても良い。芳香族基は、置換または非置換であっても良い。
【００３８】
本明細書において、「ハル」、「ハロ」及び「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される原子を指す。
【００３９】
本明細書において、「オキソ」という用語は、炭素に、好ましくは二重結合により付着される酸素を指す（たとえば、カルボニル）。
【００４０】
本明細書において、本発明の化合物は、たとえば、上記に概説されるように、または、本発明の特定の分類、亜分類及び種類により例示されるように、１以上の置換基で任意選択的に置換されていても良い。「任意選択的に置換される」という表現は、「置換または非置換」という表現と相互交換可能に用いられる。概して、「任意選択的に」という用語が先行していようといまいと、「置換」という用語は、所与の構造中の水素ラジカルと、特定の置換基のラジカルの置き換えを指す。他で示されない限り、任意選択的に置換された基は、当該基の各置換可能な位置で置換基を有していても良く、及び、所与の構造中に２以上の位置が、特定の群から選択される２以上の置換基で置換され得る場合は、当該置換基は、すべての位置で同じであっても、異なっていても良い。「任意選択的に置換された」、「任意選択的に置換されたアルキル」、「任意選択的に置換されたアルケニル」、「任意選択的に置換されたアルキニル」、「任意選択的に置換されたシクロアルキル」、「任意選択的に置換されたシクロアルケニル」、「任意選択的に置換されたアリール」、「任意選択的に置換されたヘテロアリール」、「任意選択的に置換されたアラルキル」、「任意選択的に置換されたヘテロアラルキル」、「任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル」、及び、本明細書の任意の他の任意選択的に置換された基という用語は、１、２、または３以上のその水素原子と、置換基（限定されないが、以下が挙げられる）の独立した置き換えにより置換された、または置換されていない基を指す：
【００４１】
アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル（たとえば、−ＣＦ３）、ハロアルコキシ（たとえば、−ＯＣＦ３）、
【００４２】
−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、
【００４３】
−ＯＨ、保護ヒドロキシ、酸素、オキソ、
【００４４】
−ＮＯ２、−ＣＮ、
【００４５】
−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−アリール、−ジアルキルアミノ、−
【００４６】
−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−アリール、
【００４７】
−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、
【００４８】
−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、
【００４９】
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロシクロアルキル、
【００５０】
−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−  −ＣＯＮＨ−アリール、
【００５１】
−ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、
【００５２】
−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、
【００５３】
−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、
【００５４】
−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、または
【００５５】
−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、または−Ｓ−アリール。
【００５６】
ある実施形態において、任意選択的に置換された基としては、以下が挙げられる：Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ１２−アリール、Ｃ３−Ｃ１２−ヘテロシクロアルキル、Ｃ３−Ｃ１２−ヘテロアリール、Ｃ４−Ｃ１２−アリールアルキル、またはＣ２−Ｃ１２−ヘテロアリールアルキル。
【００５７】
当該アリール類、ヘテロアリール類、アルキル類等は、さらに置換され得ることを理解されたい。
【００５８】
本明細書において、「対象」という用語は、哺乳類を指す。それゆえ、対象とは、たとえば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、モルモット等を指す。好ましくは、当該対象は、ヒトである。当該対象がヒトである場合、当該対象は、本明細書において、患者と呼称されても良い。
【００５９】
また、対象は、自己免疫疾患（たとえば、ＳＬＥ）の動物モデルを指しても良い。自然発生型ＳＬＥ動物モデルとしては、Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｂｌａｃｋ（ＮＺＢ）とＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ（ＮＺＷ）系統のＦ１ハイブリッド（ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１）、ならびに、ＭＲＬ／ｌｐｒ、及びＢＸＳＢ／Ｙａａ系統が挙げられる。誘導型ＬＥＰ動物モデルとしては、重金属誘導性自己免疫、プリスチンＴＭＰＤ誘導モデル、薬剤誘導性紅斑性狼瘡、及び慢性移植片対宿主病モデル（ｃＧＶＨＤ）が挙げられる。これらモデルのすべてが、ヒトＳＬＥで観察されるものと類似した症状のサブセット（すなわち、自己抗体の産生、リンパ球の活性化及び過形成、ならびにループス腎炎）を伴う、紅斑性狼瘡様の疾患のそれら自身の反復を表現する。他のＳＬＥの動物モデルは、米国特許第７，２６５，２６１号に記述されている。
【００６０】
「治療する」、「治療すること」及び「治療」とは、異常なリンパ球の機能から生じる疾患を緩和または減弱させる方法を指しても良い。ある実施形態において、自己免疫性疾患は、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）であっても良い。
【００６１】
他の実施形態において、「治療すること」または「治療」という用語は、異常なリンパ球の機能の１以上の臨床症状における任意の改善を指しても良い。
【００６２】
異常なリンパ球の機能の症状としては、脾腫、異常なＢ細胞分化、ダブルネガティブ胸腺型Ｔ細胞数の増加、抗ｄｓＤＮＡレベルの増加、免疫複合体介在性糸球体腎炎、または炎症性サイトカインの産生の増加、対象の脾臓Ｔｒｅｇ細胞数の増加、自己抗体数の増加、ならびに、プロＢ細胞及びプレＢ細胞の両方の初期発生分画における、対象の細胞の割合における増加、が挙げられる。
【００６３】
他の実施形態において、異常なリンパ球の機能の症状の改善としては、限定されないが、関節痛、腫脹及び発赤、低グレードの発熱、皮膚発疹、血管炎、疲労、食欲消失、嘔吐、体重減少、胸痛、紫斑、月経不順、睡眠障害（たとえば、むずむず脚症候群及び睡眠時無呼吸）、目と口の乾燥、脆弱毛または脱毛の低下、急性疾患発作の間の寛解期の増加；急性発作の時間の長さの低下；重度の疾患発病の予防等が挙げられる。また、異常なリンパ球の機能の症状の改善としては、腎機能を含んでも良い（血液尿素、クレアチニン、またはタンパク尿の低下）。
【００６４】
本発明はまた、本明細書に開示される化合物の薬学的に受容可能な塩を含む。本明細書において、「薬学的に受容可能な塩」とは、本開示化合物の誘導体を指し、ここで、元の化合物は、既存の酸または塩基部分を、その塩の形態へと転換させることにより修飾される。薬学的に受容可能な塩の例としては、限定されないが、たとえばアミン等の塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩；たとえばカルボン酸等の酸性残基のアルカリ塩または有機塩等が挙げられる。本発明の薬学的に受容可能な塩としては、たとえば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された、元の化合物の標準的な非毒性の塩が挙げられる。本発明の薬学的に受容可能な塩は、標準的な化学的方法により、塩基性部分または酸性部分を含有する元の化合物から合成されても良い。一般的に、そのような塩は、これら化合物の遊離酸または塩基形態を、水または有機溶媒またはその２つの混合物中で、適切な塩基または酸の化学量論的量と反応させることにより調製することができ；通常、非水性の溶媒（エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリル）が好ましい。適切な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  １９８５，  ｐ．  １４１８、及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ６６，  ２  （１９７７）に見出され、それら各々は、参照によりその全体で本明細書に援用される。
【００６５】
本明細書において、「薬学的に受容可能なエステル」という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解し、ヒトの身体内で容易に分解され、元の化合物またはその塩を生じさせるものを含む、本発明のプロセスにより形成される化合物のエステルを指す。適切なエステル群としては、たとえば、薬学的に受容可能な脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸及びアルカン二酸から誘導されるものが挙げられ、その各アルキルまたはアルケニル部分は、有利に、６以下の炭素原子を有する。特定のエステルの例としては、限定されないが、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、アクリルエステル及びエチルコハク酸エステルが挙げられる。
【００６６】
本明細書において、「薬学的に受容可能なプロドラッグ」という用語は、正しい医学的判断の範囲内で、ヒトの組織と接触する使用に対し適切であり、過度の毒性、炎症、アレルギー反応等を伴う動物を減少させ、合理的な利益／リスク比に釣り合っており、及び意図される用途に対し有効であり、ならびに、もし可能であれば、本発明化合物の両性イオン形態である、本発明方法により形成される化合物のプロドラッグを指す。本明細書において、「プロドラッグ」とは、代謝的手段（たとえば、加水分解）により、ｉｎ  ｖｉｖｏで転換され、本発明の化学式により記述される任意の化合物を生成する化合物を意味する。様々な形態のプロドラッグが当分野に公知であり、たとえば、Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  （ｅｄ．），  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  （１９８５）；  Ｗｉｄｄｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄ．），  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．  ４，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８５）；  Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  （ｅｄ）．  “Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  Ｃｈａｐｔｅｒ  ５，  １１３−１９１  （１９９１）；  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ８：１−３８（１９９２）；  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ７７：２８５  ｅｔ  ｓｅｑ．  （１９８８）；  Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｓｔｅｌｌａ  （ｅｄｓ．）  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  （１９７５）；及びＢｅｒｎａｒｄ  Ｔｅｓｔａ  ＆  Ｊｏａｃｈｉｍ  Ｍａｙｅｒ，  “Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  Ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，”  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｌｔｄ．  （２００２）に検討されている。
【００６７】
本発明により予期される、置換基と可変物の組み合わせは、安定化合物の形成を生じさせるもののみである。本明細書において、「安定」という用語は、製造が十分に可能な安定性を有する化合物を指し、十分な期間、本明細書に詳述される目的（たとえば、対象への治療用投与または予防用投与）に対し有用であるために、当該化合物の完全性を維持している。
【００６８】
本明細書において、「異常なリンパ球の機能」という用語は、ＨＤＡＣ６の活性を阻害することにより治療され得るリンパ球の機能における１以上の異常を指す。
【００６９】
「リンパ球の機能における異常」とは、限定されないが、リンパ球増殖の脱制御、異常なシグナル伝達もしくはサイトカインの分泌、及び／または正常ではないＢリンパ球もしくはＴリンパ球の分化が挙げられる。
【００７０】
他の実施形態において、リンパ球の機能の異常とは、リンパ球分化の間の正常ではないアポトーシスを指しても良い。
【００７１】
他の実施形態において、異常なリンパ球の機能により、自己反応性リンパ球の産生がもたらされ得る。
【００７２】
本明細書において、「自己反応性リンパ球」とは、自己抗原と反応するＢリンパ球またはＴリンパ球を指し得る。
【００７３】
他の実施形態において、異常なリンパ球の機能により、Ｂリンパ球による自己抗体の産生がもたらされ得る。
【００７４】
他の実施形態において、異常なリンパ球の機能により、自己免疫性疾患が生じ得る。
【００７５】
本明細書において、「自己免疫性疾患」とは、限定されないが、急性播種性脳脊髄炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋委縮性側索硬化症（または、ルー・ゲーリック病；運動ニューロン疾患）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、抗シンテターゼ症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫形成不全貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、ｂａｌｏ病／ｂａｌｏ同心性硬化症、バセドウ氏病、ベーチェット病、ベルガー病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水泡性類天疱瘡、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発性神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ−ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触性皮膚炎、頭蓋動脈炎、クレスト症候群、クローン病（特発性炎症性腸疾患「ｉｂｄ」の２つの型のうちの１つ）、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、ｄｅｇｏ病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、びまん性皮膚全身性硬化症、ドレスラー症候群、薬剤誘導性紅斑性狼瘡、円板上紅斑性狼瘡、湿疹、子宮内膜症、腱付着部炎関連関節炎、好酸性筋膜炎、好酸性胃腸炎、好酸性肺炎、後天性表皮水泡症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エヴァンズ症候群、進行性骨化性線維形成異常症、線維化性肺胞炎（または特発性肺線維症）、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（ｇｂｓ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、血管性紫斑病、妊娠性疱疹、別名、妊娠性類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、汗腺膿瘍、Ｈｕｇｈｅｓ−Ｓｔｏｖｉｎ症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症性脱髄性疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（自己免疫性の血小板減少性紫斑病を参照のこと）、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発性神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、別名、若年性リウマチ性関節炎、川崎病、Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ筋無力症候群、白血球は再生脈管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病、ルポイド肝炎、別名、自己免疫性肝炎、紅斑性狼瘡、Ｍａｊｅｅｄ症候群、メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎、ミラー−フィッシャー症候群、混合型結合組織疾患、限局性強皮症、Ｍｕｃｈａ−Ｈａｂｅｒｍａｎｎ病、別名、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（または、デビック病）、神経ミオトニー、眼部瘢痕性類天疱瘡、眼球クローヌスミオクロヌス運動失調、老人性甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌関連小児自己免疫性神経精神疾患）、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ｐｎｈ）、パリーロンベルグ症候群、パーソナージュ−ターナー症候群、扁平部炎、尋常性天疱瘡、致死性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ポエム症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性神経障害、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ脳炎、レーノー現象、再発性多発性軟骨炎、ライター症候群、むずむず脚症候群、後腹膜線維症、リウマチ性関節炎、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スティル病、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎、Ｓｕｓａｃ症候群、Ｓｗｅｅｔ症候群、シデナム舞踏病、交感性眼炎、全身性紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎（または、「巨細胞性動脈炎」としても知られる）、血小板減少症、Ｔｏｌｏｓａ−Ｈｕｎｔ症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎（２つの型の特発性炎症性腸疾患「ｉｂｄ」のうちの１つ）、未分化型結合組織疾患、未分化型脊椎関節症、蕁麻疹様脈管炎、脈管炎、白斑、またはヴェグナー肉芽腫症が挙げられる。
【００７６】
本明細書において、ＨＤＡＣ６阻害とは、ＨＤＡＣ６活性の阻害を指す。ある実施形態において、ＨＤＡＣ６阻害は、以下に記述される化学式Ｉの化合物による、ＨＤＡＣ６活性の阻害を指す。
【００７７】
本発明の化合物
本明細書において、以下の化学式Ｉ：
【化５】
2016531163.tif 000007
の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが開示され、ここで、
【００７８】
Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、それら各々は、任意選択的に置換され；
【００７９】
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または２つのＲＡ基が共に、任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成しても良く；及びｍは、０、１または２である。
【００８０】
１つの実施形態において、Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはテトラヒドロピランを形成する。
【００８１】
他の実施形態において、Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【００８２】
他の実施形態において、ｍは１または２であり、各ＲＡは、独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシルまたはＣＦ３である。
【００８３】
他の実施形態において、ｍは０である。
【００８４】
化学式Ｉの代表的な化合物としては、限定されないが、以下の表１の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステル、もしくはプロドラッグが挙げられる。
【表１】
2016531163.tif 000008
2016531163.tif 000009
【００８５】
ある実施形態において、本発明の化合物は、表２、またはその薬学的に受容可能な塩、エステル、もしくはプロドラッグから選択される：
【表２】
2016531163.tif 000010
【００８６】
特定の実施形態において、化学式Ｉの化合物は、化合物７３（または本明細書において、ＡＣＹ−７３８と呼称される）またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグである：
【化６】
2016531163.tif 000011
【００８７】
他の特定の実施形態において、化学式Ｉの化合物は、化合物１０１（または本明細書において、ＡＣＹ−７７５と呼称される）またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグである：
【化７】
2016531163.tif 000012
【００８８】
他の態様において、本発明により、化学式Ｉ：
【化８】
2016531163.tif 000013
またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを含有する医薬組成物が提示され、ここで、
【００８９】
Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、それら各々は、任意選択的に置換され；
【００９０】
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または２つのＲＡ基が共に、任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成しても良く；及びｍは、０、１または２である。
【００９１】
１つの実施形態において、Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはテトラヒドロピランを形成する。
【００９２】
他の実施形態において、Ｒｘ及びＲｙは、各々が付着される炭素と共に、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【００９３】
他の実施形態において、ｍは１または２であり、各ＲＡは、独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシルまたはＣＦ３である。
【００９４】
他の実施形態において、ｍは０である。
【００９５】
本明細書に開示される組成物及び医薬組成物を用いて、対象の異常なリンパ球の機能を治療しても良い。
【００９６】
ある実施形態において、当該異常なリンパ球の機能は、アポトーシスの異常、またはリンパ球発生の機能的障害を含有する。
【００９７】
１つの実施形態において、当該異常なリンパ球の機能により、未成熟なリンパ球の数の増加がもたらされても良い。
【００９８】
１つの実施形態において、当該異常なリンパ球の機能により、自己反応性のリンパ球が産生されても良い。
【００９９】
他の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び医薬組成物を用いて、たとえば、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）等のＢ細胞介在性自己免疫疾患をもたらす異常なリンパ球の機能を治療しても良い。
【０１００】
他の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び医薬組成物により、対象の脾腫、異常なＢ細胞分化、対象のダブルネガティブ胸腺型Ｔ細胞の増加、血清抗ｄｓＤＮＡレベル、免疫複合体介在性糸球体腎炎、または炎症性サイトカインの産生を低下させても良い。
【０１０１】
さらに他の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び医薬組成物により、対象の自己反応性Ｂ細胞の数を低下させても良い。
【０１０２】
本発明の他の目的は、本明細書に開示される障害または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、本明細書に開示される化合物の使用である。本発明の他の目的は、本明細書に開示される障害または疾患の治療における使用のための、本明細書に開示される化合物の使用である。
【０１０３】
本発明化合物の合成
本発明化合物の合成は、以下に見出される。
【０１０４】
他の実施形態は、本明細書に記述される反応のいずれか１つ、またはその組み合わせを用いた、化学式Ｉの化合物の作製方法である。当該方法は、本明細書に記述される１以上の中間体または化学試薬の使用を含んでも良い。
【０１０５】
他の態様は、同位体標識された、本明細書に記述される化学式Ｉの化合物である。そのような化合物は、当該化合物に導入される、１以上のアイソトープ原子（放射性であっても無くても良い（たとえば、３Ｈ、２Ｈ、１４Ｃ、１３Ｃ、３５Ｓ、３２Ｐ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉ））を有している。そのような化合物は、薬物代謝実験及び診断及び治療応用に有用である。
【０１０６】
本発明化合物の保護誘導体は、当分野の当業者に公知の手段により作製されても良い。保護基の生成及びそれらの除去に適用可能な技術に関する詳細な記述は、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，  ３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  １９９９、及びその続版に見出される。
【０１０７】
本発明化合物は、本発明方法の間に、溶媒和物（たとえば、水和物）として容易に調製または形成されることができる。本発明化合物の水和物は、たとえばジオキサン、テトラヒドロフラン、またはメタノール等の有機溶媒を用いて、水性／有機溶媒混合物から再結晶化を行うことにより容易に調製されることができる。
【０１０８】
さらに、本発明化合物の一部は、１以上の二重結合、または１以上の不斉中心を有している。そのような化合物は、ラセミ化合物、ラセミ混合物、１つの光学異性体、個々のジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、及び、シスもしくはトランスまたはＥ−もしくはＺ−の二重異性体、ならびに他の立体異性体（（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−、またはアミノ酸に対しては（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−として、絶対立体化学の観点から定義され得る）として存在し得る。これら化合物のそのような異性体はすべて、明示的に本発明に含まれる。光学異性体は、上述の方法により、または、ラセミ混合物の分割により、それら各々の光学的に活性な前駆体から調製されても良い。分割は、分割剤の存在下で、クロマトグラフィーにより、または反復結晶化により、または当分野の当業者に公知のこれら技術の何らかの組み合わせにより、行うことができる。分割に関するさらなる詳細については、Ｊａｃｑｕｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，  Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  １９８１）に見出される。また、本発明化合物は、複合的な互変異性型で表されても良く、そのような例において、本発明は、本明細書に記述される化合物のすべての互変異性型を明示的に含む。本明細書に記述される化合物がオレフィン二重結合または他の幾何学的非対称を含有する場合、及び他で特定されない限り、当該化合物はＥ及びＺ幾何異性体の両方を含むことが意図される。同様に、すべての互変異性型もまた、含有されることが意図される。本明細書にある任意の炭素−炭素二重結合の配置は、簡便性の目的に対してのみ選択されており、文章でそのように述べられていない限り、特定の配置に指定することを意図していない；ゆえに、本明細書においてトランスとして任意に表された炭素−炭素二重結合は、シス、トランス、またはその２つの任意の比率での混合物であっても良い。そのような化合物のすべてのそのような異性体は、本発明に明示的に含有される。本明細書に記述される化合物のすべての結晶形態は、本発明に明示的に含有される。
【０１０９】
合成された化合物は、反応混合物から分離されても良く、及びたとえばカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、または再結晶化等の方法によりさらに精製されても良い。本明細書の化学式の化合物を合成する方法が当業者には明らかであることが、当業者には認識され得るであろう。さらに、所望の化合物を得るために、様々な合成工程を別のシーケンスまたは順序で行っても良い。さらに、本明細書に記述される溶媒、温度、反応時間等は、解説の目的のみであり、当業者であれば、様々な反応条件により、本発明の所望の化合物を作製することができることを認識するであろう。本明細書に記述される化合物の合成に有用な合成化学変換及び保護基の技法（保護及び脱保護）が、当業者に公知であり、たとえば、Ｒ．  Ｌａｒｏｃｋ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  （１９８９）；  Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｄ．  Ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９１）；  Ｌ．  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｆｉｅｓｅｒ，  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９４）；及びＬ．  Ｐａｑｕｅｔｔｅ，  ｅｄ．，  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９５）ならびにそれらの続版に記述されている。
【０１１０】
様々な実施形態において、本発明により、本明細書に記述される化学式の中間体化合物が開示され、及び、１以上の化学的変換（本明細書に開示されるものを含む）で、本明細書の化合物を、１以上の試薬と反応させ、それにより、本明細書の化学式のいずれかの化合物またはその中間体化合物を得ることを含む、そのような化合物を本明細書の化学式の化合物へと転換させる方法（たとえば、本明細書のスキームにおいて）が開示される。
【０１１１】
本明細書に記述される合成方法はまた、最終的に本明細書に記述される化学式の化合物を合成するための、適切な保護基を付加または除去する工程を、いずれかのスキームにおいて記述される任意の工程の前後のいずれかで、さらに含有しても良い。本明細書に記述される方法は、１つの化学式の化合物を、他の化学式の化合物（たとえば、スキームＡ、Ａ１からＡ２；Ａ２からＡ３；Ａ１からＡ３）へと転換することを予期させる。転換方法は、１以上の化学的変換を指し、ｉｎ  ｓｉｔｕで行うことができ、または、中間体化合物の単離と共に行うことができる。転換は、開始化合物または中間体を、本明細書に引用される参照文献中のものを含む当分野公知の技術及びプロトコールを用いて追加の試薬と反応させること、を含んでも良い。中間体は、精製（たとえばろ過、蒸留、昇華、結晶化、破砕、固相抽出及びクロマトグラフィー等）と共に用いられても、精製無く用いられても良い。
スキームＡ
【化９】
2016531163.tif 000014
【０１１２】
本発明化合物は、選択的生物学的特性を増強するために、本明細書に記述される任意の合成手段を介して、様々な官能性を付け加えることにより修飾されても良い。そのような修飾は当分野に公知であり、所与の生物学的システム（たとえば、血液、リンパ系、中枢神経系等）への生物学的浸透を増加させ、経口利用可能性を増加させ、注射による投与を可能とするために溶解度を増加させ、代謝を変え、及び排出率を変えるものが挙げられる。
【０１１３】
本発明化合物は、その化学的構造及び／または化学名により本明細書に定義される。化合物が化学構造及び化学名の両方により言及されており、及び当該化学構造及び化学名が矛盾する場合、当該化学構造が、当該化合物の同一性を決定づける。
【０１１４】
本明細書の、任意の変数の定義における化学基の一覧の列挙は、任意の１つの基または列挙される基の組み合わせとしての、その変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の１つの実施形態として、または任意の他の実施形態もしくはその一部との組み合わせでの、当該実施形態を含む。本明細書の変数に関する実施形態の列挙は、１つの実施形態として、または任意の他の実施形態もしくはその一部との組み合わせでの、当該実施形態を含む。
【０１１５】
本発明の方法
１つの態様において、化学式Ｉの化合物は、異常なリンパ球の機能により引き起こされる疾患、または疾患の症状の治療のために、対象に投与される。
【０１１６】
ある実施形態において、異常なリンパ球の機能により引き起こされる疾患は、自己免疫性疾患（限定されないが、リウマチ性関節炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎、エヴァンズ症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病性ブドウ膜炎、若年型糖尿病または後発性糖尿病、ブドウ膜炎、グレーブス病、乾癬、サルコイドーシス、アトピー性皮膚炎、クローン病、潰瘍性結腸炎、脈管炎、自己抗体介在性疾患、再生不良性貧血、エヴァンズ症候群または自己免疫性溶血性貧血が挙げられる）であっても良い。
【０１１７】
他の実施形態において、異常なリンパ球の機能により引き起こされる疾患は、リンパ球増殖性疾患（限定されないが、リンパ球増加症、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、バーキットＢ細胞またはＴ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胸腺リンパ腫、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｗｉｓｋｏｔｔｏ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、移植後リンパ増殖性疾患、Ｘ連鎖リンパ増殖性疾患または自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）が挙げられる）であっても良い。
【０１１８】
好ましい実施形態において、異常なリンパ球の機能は、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）を引き起こす。
【０１１９】
他の態様において、化学式Ｉの化合物の治療有効量が、全身性紅斑性狼瘡を有する対象へと、腹腔内注射される。体重、タンパク尿、血清抗ｄｓＤＮＡ、Ｉｇアイソタイプ及びサイトカインレベルが測定され、腎疾患が、ＳＬＥの血清マーカー及び尿マーカーを用いて測定される。フローサイトメトリー解析を用いて、胸腺及び脾臓Ｔ細胞のプロファイルならびに骨髄、脾臓及び末梢Ｂ細胞の分化パターンを評価する。
【０１２０】
他の態様において、化学式Ｉの化合物の治療有効量は、リンパ増殖性疾患を有する対象へと腹腔内注射され、ここで、当該化学式Ｉの化合物は、当該リンパ増殖性疾患を治療する。
【０１２１】
他の態様において、化学式Ｉの化合物の治療有効量は、リンパ腫を有する対象へと腹腔内注射され、ここで、当該化学式Ｉの化合物は、当該リンパ腫を治療する。
【０１２２】
化学式Ｉの化合物を用いたＨＤＡＣ６の阻害は、脾腫、免疫複合体介在性糸球体腎炎、血清抗ｄｓＤＮＡレベル、及び炎症性サイトカインの産生を含む、ＳＬＥ疾患の多くの顕著な特徴を低下させても良い。ダブルネガティブ胸腺Ｔ細胞の数もまた低下する一方で、脾臓Ｔｒｅｇ細胞の割合は増加する。ＨＤＡＣ６阻害はまた、プロＢ細胞及びプレＢ細胞の両方の初期発生分画中の細胞の割合を増加させることにより、骨髄Ｂ細胞分化に作用する。
【０１２３】
好ましい実施形態において、化学式Ｉの化合物は、ＡＳＹ−７３８で合っても良い。
【０１２４】
ＨＤＡＣ６阻害は、骨髄Ｂ細胞発生の間の、発生チェックポイントの１以上における異常と相関する。
【０１２５】
正常な対象において、自己反応性のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を発現させたＢ細胞は、３つの方法（受容体編集、削除、及びアナジー）で、ポジティブ選択及びネガティブ選択の両方により、骨髄から除去される（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１，  １９：５９５−６２１；  Ｄｏｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  ｔｈｅｒａｐｙ  ２００９，  １１（５）：２４７）。Ｉｇ遺伝子再構成により骨髄で産生されるレパートリーのうち、およそ５５〜７５％が自己反応性であると推定されている（Ｙｕｒａｓｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００５，  ２０１（５）：７０３−７１１）。これら自己反応性のＢ細胞は、２つのチェックポイントで除去される（Ｄｏｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  ｔｈｅｒａｐｙ  ２０１１，  １３（５）：２４３）。大部分の自己反応性Ｂ細胞は、細胞がまだ未成熟である間に骨髄で除去される（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９９，  １６２（４）：１９３１−１９４０）。骨髄におけるＶ（Ｄ）Ｊ及びクラススイッチ組換えにより、ＤＮＡ二本鎖の切断が生じ、自己反応性Ｂ細胞のアポトーシスがもたらされる（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１，  １９：５９５−６２１）。自己反応性Ｂ細胞の除去に対する、アポトーシス指数及びアポトーシスの比率は、プロ／プレＢ細胞移行のあたりで最も高くなっている（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０００，  １７５：１５８−１７４）。
【０１２６】
発症前対象及びＳＬＥ発症対象の間のプロＢ細胞またはプレＢ細胞の全体的な数に差異は無い一方で、プロＢ細胞及びプレＢ細胞発生分画における細胞の比率は、ＳＬＥの結果として変化する。ＳＬＥの対象は、健常な対象と比較し、後期Ｃ及びＣ´分画ならびに初期プレＢ細胞分画Ｄ及びＥで、プロＢ細胞の数が低下している。また、後期プレＢステージ、分画ＦにおけるＢ細胞の割合において、顕著な増加がある。ＳＬＥを有する対象の骨髄Ｂ細胞は、Ｂ細胞チェックポイントの異常な制御で、早い速度で分化し、それにより、異常Ｂ細胞の除去が行われない。ゆえに、ＳＬＥはプレＢ／プロＢステージでの骨髄分化におけるアポトーシス異常により引き起こされると思われる。
【０１２７】
化学式Ｉの化合物を用いた治療は、プロＢ細胞の総数に対して効果は無かった一方、トータルのプレＢ細胞の割合において、有意な低下が認められる。ＨＤＡＣ６阻害により、分画Ａの初期プロＢ細胞の割合が増加し、及び初期プレＢ細胞発達ステージＤ及びＥにおける細胞の数が増加した。さらに、化学式Ｉの化合物を用いた治療により、分画Ｆの後期プレＢ細胞の割合が低下した。ゆえに、ＨＤＡＣ６阻害により、後期サブセットから初期プロＢ細胞サブセット及びプレＢ細胞サブセットへの遷移と併せ、未成熟Ｂ細胞へと発達する細胞の割合が低下する。ＨＤＡＣ６阻害は、プロ及びプレＢ細胞群に対し最も効果が高かったことから、化学式Ｉの化合物は、ＳＬＥに存在するアポトーシス異常を正すことにより、ＳＬＥを治療すると推測される。
【０１２８】
ＨＤＡＣ６阻害は、末梢または脾臓におけるＢ細胞群の分布に変化をもたらさない。
【０１２９】
ＨＤＡＣ６阻害は、末梢におけるＢ細胞の割合または、脾臓発生段階におけるＢ細胞の分布に影響を与えない。正常な対象では、未成熟なＢ細胞は骨髄を離れた後、第二のリンパ器官（脾臓を含む）で発達を継続させる。未成熟Ｂ細胞は成熟Ｂ細胞へと発達しながら、抗原特異性を獲得する。ゆえに、骨髄分化の間にネガティブ選択を逃れたＢ細胞は、脾臓で成熟し、辺縁層または濾胞細胞となる。ＩｇＭ＋ＩｇＤ＋Ｂ細胞は、移行細胞として骨髄を離れ、脾臓へと入り、そこで濾胞Ｂ細胞または辺縁層Ｂ細胞へと成熟する。ＨＤＡＣ６阻害は、移行、濾胞または辺縁層ステージのＢ細胞の割合を変化させなかったことから、ＨＤＡＣ６阻害物質は、骨髄の初期Ｂ細胞発生の間に作用し、末梢または脾臓Ｂ細胞には作用しないと推測される。このことから、ＨＤＡＣ６阻害は、骨髄Ｂ細胞発生の間のチェックポイント機能を回復させることによりＳＬＥを低下させることがさらに確認される。
【０１３０】
ＨＤＡＣ６阻害により、自己抗体を産生する自己反応性Ｂ細胞が除去される。
【０１３１】
ＳＬＥを有する対象において、自己抗体（抗ｄｓＤＮＡ抗体を含む）の産生（Ｍｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００３，  ５６（７）：４８１−４９０）が増加し、それに対応して、タンパク尿及び糸球体腎炎の増加が生じる。ＳＬＥ対象で産生されたＩｇＧ自己抗体は、免疫複合体を形成し、それが腎糸球体で詰まり、免疫システム及び炎症の活性化の上昇がもたらされる。次いで、損傷を受けた腎臓は、適切にタンパク質をろ過することができず、尿内に漏れ、タンパク尿レベルの上昇が生じる。ゆえに、ＨＤＡＣ６阻害後の血清中のＩｇＧ産生の低下は、糸球体免疫複合体沈着、ＳＬＥ関連腎病態及びタンパク尿の低下と相関する。これは、ＨＤＡＣ６阻害は、末梢Ｂ細胞の数に影響を与えないが、成熟プラズマ細胞の自己抗体産生を変化させることを示す。ゆえに、ＨＤＡＣ６阻害は、自己抗体を産生する自己反応性Ｂ細胞を除去する。
【０１３２】
ＨＤＡＣ６阻害は、Ｔｒｅｇ表現型を増加させる。
【０１３３】
ＳＬＥを有する対象において、Ｔｒｅｇ細胞の数はかなり低下している。これは、抗体産生の増加をもたらすものである。化学式Ｉの化合物でのＳＬＥ治療は、Ｔｒｅｇ細胞の数を増加させ、自己抗体産生レベルを低下させることにより、この傾向を逆転させる。さらに、汎ＨＤＡＣ阻害物質はＴｒｅｇ細胞群を増加させる一方で、クラスＩ特異的ＨＤＡＣ阻害物質は増加させないことから、Ｔｒｅｇプロファイルは、クラスＩＩｂ  ＨＤＡＣ（たとえばＨＤＡＣ６）により直接制御され得ることが推測される。
【０１３４】
ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｆｏｘｐ３発現を促進するＴＧＦ−β刺激の後、Ｔｒｅｇ細胞へと分化する。ＳＬＥを有する対象において、血清ＴＧＦ−βのレベルは低下している。化学式Ｉの化合物を用いたＳＬＥの治療により、用量依存性にＴＧＦ−βの低下が緩和され、Ｔｒｅｇ群の大きさが増加する。逆に、ＨＤＡＣ６治療後の糸球体ＴＧＦ−β  ｍＲＮＡ発現は低下することから、ＳＬＥの発症機序におけるＴＧＦ−βの二重の役割が示唆される。抗炎症性サイトカイン（ＴＧＦ−βを含む）は、たとえば腎臓等の標的器官内の炎症と拮抗するために産生される。抗炎症性サイトカインの産生増加により、細胞外マトリクスの沈着及び線維化が発生する。免疫細胞におけるＴＧＦ−βレベルの上昇と、自己免疫疾患へと至る標的器官におけるＴＧＦ−βの低下は同時に発生する。ＨＤＡＣ６阻害は、ＴＧＦ−βの血清レベルを増加させる一方で、腎糸球体におけるＴＧＦ−βを低下させることにより、この傾向を逆転させる。ＨＤＡＣ６阻害は、ゆえに、ＴＧＦ−β産生の変化を介して、Ｔｒｅｇ群を増加させ得る。
【０１３５】
ＨＤＡＣ６は、ＳＬＥにおけるＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＩＬ−１βサイトカインの産生を低下させる。
ＳＬＥでは、Ｔｈ１サイトカインとＴｈ２サイトカイン産生の間に不均衡が存在する。しかしながら、ＨＤＡＣ６を阻害することにより、ＳＬＥの特徴である、その改変されたＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＩＬ−１βサイトカイン産生の傾向を逆転させる。炎症促進性サイトカインＩＬ−６は、ＳＬＥで上方制御され、ＩｇＧの過剰産生に寄与している。化学式Ｉの化合物を用いた治療の後、ＩＬ−６は、ＳＬＥ対象の腎臓において検出不可能となった。このＩＬ−６の低下は、総ＩｇＧ及び血清中のＩｇＧ２ａアイソタイプレベルの低下と相関している。同様に、炎症促進性サイトカインのＩＬ−１βは、ＳＬＥを含む多くの自己免疫性疾患の病態において重要な役割を果たしており、化学式Ｉの化合物を用いた治療により減少する。ゆえに、ＳＬＥ対象における炎症性サイトカイン産生に関し、ＨＤＡＣ６阻害は、自己抗体の血清レベルを低下させ、ＳＬＥの症状を軽減させる。
【０１３６】
ＨＤＡＣ６阻害は、ＳＬＥを有する対象におけるダブルネガティブ（ＤＮ）Ｔ細胞の数を低下させる。
【０１３７】
ＳＬＥを有する個体において、ＤＮ  Ｔ細胞の数は、多くの場合、上昇している。ＨＤＡＣ６阻害は、ＤＮ  Ｔ細胞の数を低下させる。胸腺細胞は、自己反応性Ｔ細胞または非機能性Ｔ細胞を排除するために、発生の間にポジティブ選択とネガティブ選択の両方を受ける。発生は、前駆Ｔ細胞（ＣＤ４−ＣＤ８−ＣＤ３−）で開始され、ＤＮ  Ｔ細胞（ＣＤ４−ＣＤ８−ＣＤ３＋）が生じる。ＤＮ  Ｔ細胞は、次いで、ＤＰ（ＣＤ４＋ＣＤ８＋ＣＤ３＋）Ｔ細胞へと発達し、成熟ＳＰ  Ｔ細胞の２つのサブセット（ヘルパー（ＣＤ４＋ＣＤ８−ＣＤ３＋）Ｔ細胞または細胞傷害性（ＣＤ４−ＣＤ８＋ＣＤ３＋）Ｔ細胞）へと分化する。ＤＰ胸腺細胞は、ポジティブ選択を受け、反応性と特異性を確保する。ＳＰ  Ｔ細胞はネガティブ選択を受け、自己反応性Ｔ細胞を排除する。ＳＬＥに関連したＤＮ  Ｔ細胞レベルの上昇は、アポトーシスの異常の結果である。さらに、ＳＰ細胞の割合はＳＬＥ患者で低く、このことから、ＤＮ  Ｔ細胞は、アポトーシスメカニズムに対し抵抗性であることが推測される。ＤＮ  Ｔ細胞は、Ｉｇ誘導及び抗ｄｓＤＮＡ自己抗体の産生を介して、ＳＬＥの病態に寄与していると考えられている。化学式Ｉの化合物を用いたＳＬＥの治療により、ＤＮ  Ｔ細胞の数を低下させ、自己抗体産生を低下させることから、ＨＤＡＣ６阻害は、Ｔ細胞発達の制御を介して、ＳＬＥの病態を軽減すると推測される。
【０１３８】
医薬組成物
他の態様において、本発明は、化学式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能なエステル、塩もしくはプロドラッグ、及び薬学的に受容可能な担体を含有する医薬組成物を開示する。この医薬組成物は、異常なリンパ球の機能の治療に用いることができる。
【０１３９】
本発明化合物は、任意の標準的な経路、特に腸内（たとえば、経口）により、たとえば錠剤やカプセル等の形態で、または非経口により、たとえば注射用溶液もしくは懸濁液の形態で、または局所に、ローション、ゲル、軟膏もしくはクリームの形態で、または鼻腔投与もしくは座薬の形態で、医薬組成物と投与されても良い。遊離形態または薬学的に受容可能な塩の形態の本発明化合物と併せて、薬学的に受容可能な担体または希釈剤を少なくとも１つ含有する医薬組成物は、混合、粒状化、コーティングの方法により、標準的な様式で製造されても良い。たとえば、経口組成物は、活性成分と共に、ａ）希釈剤（たとえばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／またはグリシン等）；ｂ）潤滑剤（たとえばシリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、及び／またはポリエチレングリコール）；また錠剤に対しては、ｃ）結合剤（たとえばケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン）；もし所望であれば、ｄ）崩壊剤（たとえばデンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物）；ならびに／または、ｅ）吸収剤、着色剤、香味料、及び甘味料を含有する錠剤またはゼラチンカプセルであっても良い。注射用組成物は、水性等張水溶液または懸濁液であっても良く、座薬は、脂肪性エマルションまたは懸濁液から調製されても良い。組成物は、滅菌されていても良く、ならびに／または、アジュバント（たとえば保存剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤等）、溶解促進剤、浸透圧を制御するための塩、及び／もしくは緩衝剤を含有しても良い。さらにまた、他の治療的に価値のある物質を含有しても良い。経皮応用に対する適切な製剤は、担体と共に本発明化合物の有効量を含む。担体は、宿主皮膚を通過するのを補助する、薬理学的に受容可能な吸収性溶媒が挙げられる。たとえば、経皮デバイスは、裏打ち部材、任意選択的に担体と共に化合物を含有するレゼルボア、制御された規定の速度で長期間にわたり宿主皮膚に化合物を送達させるための速度調節バリア、及びデバイスを皮膚に固定するための手段、を含有する帯具の形態である。マトリクス型経皮製剤を用いても良い。局所応用（たとえば皮膚及び目への適用）のための適切な製剤は、好ましくは、当分野公知の水性溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。可溶化剤、安定化剤、弾力性増強剤、緩衝剤及び保存剤を含有しても良い。
【０１４０】
また、本発明化合物及び医薬組成物を処方し、治療と組み合わせて用いてもよいこと、すなわち、本化合物及び医薬組成物は、１以上の他の望ましい治療もしくは医療処置と同時に、前に、後に、処方され、または投与されても良いことを認識されたい。併用レジメンで用いる療法（治療または処置）の特定の組み合わせは、所望される治療及び／または処置の適合性、ならびに、得られる望ましい治療効果を考慮に入れる。また、用いられる療法は、同じ疾患に対し望ましい効果を得られ得るもの（たとえば、発明化合物は、他の免疫調節剤、抗ガン剤、またはたとえばＳＬＥ等の自己免疫性疾患の治療に有用な剤と同時に投与されても良い）、または異なる効果（たとえば任意の副作用の制御）を得られ得るものであることを認識されたい。
【０１４１】
ある実施形態において、本発明の医薬組成物は、１以上の追加の治療活性のある成分をさらに含有する。本発明の目的に対し、「苦痛緩和」という用語は、疾患の症状及び／または治療レジメンの副作用の軽減に焦点を当てており、治療的ではない処置を指す。たとえば、苦痛緩和処置は、鎮痛剤、抗嘔吐剤、解熱剤、抗吐き気薬を包含する。さらに、化学療法、放射線療法及び外科手術はすべて、苦痛緩和的に用いることができる（すなわち、治療を目的とせず症状を低減させる。たとえば、腫瘍を縮小させ、圧、出血、疼痛及び他の癌の症状を低減させる）。
【０１４２】
本発明の医薬組成物は、１以上の薬学的に受容可能な担体と共に処方された、本発明化合物の治療有効量を含有する。
【０１４３】
本明細書において、「薬学的に受容可能な担体」という用語は、非毒性で、不活性な固体、半固体、もしくは液体の充填材、希釈剤、包埋物質、または任意のタイプの製剤補助物質を意味する。本発明の医薬組成物は、経口、直腸、非経口、嚢内、膣内、腹腔内、局所（粉末、軟膏またはドロップとして）で、口腔内、または経口スプレーもしくは鼻腔スプレーとして、ヒト及び他の動物に投与されても良い。
【０１４４】
経口投与のための液体調剤の形態としては、薬学的に受容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルが挙げられる。活性化合物に加え、液体調剤の形態は、たとえば水または他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤（たとえばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実、ラッカセイ、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、トウゴマ、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの組み合わせ等の、当分野で普遍的に用いられている不活性な希釈物質を含有しても良い。不活性な希釈物質に加え、経口組成物はまた、たとえば湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、香味料、及び香料等のアジュバントを含有しても良い。
【０１４５】
注射用調製物（たとえば、滅菌注射用水性懸濁液または油性懸濁液）は、適切な分散剤または湿潤剤及び懸濁剤を用いて、当分野公知のとおり、製剤化されても良い。滅菌注射用調製物はまた、非毒性の経口的に受容可能な希釈物質または溶媒に溶解した滅菌注射用溶液、懸濁液またはエマルション（たとえば、１，３−ブタンジオールに溶解した溶液）であっても良い。とりわけ、水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張塩化ナトリウム溶液が、用いられ得る受容可能なビヒクル及び溶媒である。さらに、滅菌された固形油が溶媒または懸濁培地として簡便に用いられている。この目的に対し、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無菌性油を用いても良い。さらに、たとえばオレイン酸等の脂肪酸が、注射用物質の調製に用いられる。
【０１４６】
本発明の治療方法に従い、対象（たとえば、ヒトまたは他の動物）において、本発明化合物の治療有効量を、その量で、及び、所望の結果を得るために必要な時間の間、当該対象に投与することにより、疾患が治療または予防される。
【０１４７】
本明細書において、本発明化合物の「治療有効量」という用語は、対象において、異常なリンパ球の機能に起因した症状の１つ以上を減少させるために十分な化合物の量を意味する。たとえば、異常なリンパ球の機能は、全身性紅斑性狼瘡の症状を引き起こし得る。医学分野において理解されているように、本発明化合物の治療有効量は、任意の医学的治療に適用可能な、合理的な利益／リスク率である。
【０１４８】
概して、本発明化合物は、当分野公知の普遍的で受容可能な方法のいずれかを介して、単独で、または１以上の治療剤と組み合わせてのいずれかで、治療有効量で投与される。治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢及び相対的な健康状態、用いられる化合物の効能、及び他の因子によって、広範に変化し得る。概して、十分な結果は、約０．０３〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重（０．０５〜４．５ｍｇ／ｍ２）の１日投与量で、全身的に得られることが示唆される。大きな哺乳類（たとえばヒト）における、適用される１日投与量は、約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲であり、たとえば、１日４回までの分割量で、または制御放出された形態で、簡便に投与される。経口投与に対する、適切な単位用量形態は、約１〜５０ｍｇの活性成分を含有する。
【０１４９】
ある実施形態において、本発明化合物の治療量または投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ（約０．１８ｍｇ／ｍ２〜約９００ｍｇ／ｍ２）、あるいは約１〜約５０ｍｇ／ｋｇ（約１．８〜約９０ｍｇ／ｍ２）の範囲であっても良い。概して、本発明に従う治療レジメンは、本発明の化合物（複数含む）を１日当たり、単回投与または複数回投与で、約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、その治療の必要のある患者に投与することを含む。治療量または投与量はまた、投与経路ならびに、他の剤を併用する可能性により変化する。
【０１５０】
対象の状態が改善した時点で、必要であれば、本発明化合物、組成物または組み合わせの維持用量が投与されても良い。次いで、投与量または頻度、またはその両方を、症状に応じて、当該改善された状態が維持されるレベルにまで減少させても良く、症状が所望されるレベルまで軽減されたときには、治療は停止するべきである。しかしながら、対象は、異常なリンパ球の機能から生じる症状のいずれかの再発を理由として、長期間の断続的な治療を必要としても良い。
【０１５１】
しかしながら、本発明化合物及び組成物の総合的な毎日の使用量は、正しい医学的判断の範囲内で、臨床医と共に決定されることを理解されたい。任意の特定の患者に対する、特定の阻害用量は、様々な因子（治療される疾患、疾患の重症度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食事；用いられる特定の化合物の投与時間、投与経路、及び排出率；治療期間；用いられる特定の化合物と組み合わせて、または同時に用いられる薬剤；及び医学分野で周知の類似の因子を含む）に依存する。
【０１５２】
キット
本明細書において、対象の異常なリンパ球の機能を治療するための、化学式Ｉの化合物の異なる用量を有するパッケージ単位を含有する、キット形式が開示される。ある実施形態において、当該化学式Ｉの化合物は、ＡＣＹ−７３８である。
【０１５３】
当該キットはまた、以下の品目の１つ以上を含有しても良い：処方に関する情報、投与量に関する情報、保管に関する情報等を含む、使用に関する説明書、ならびに滅菌生理食塩水、針、シリンジ、カテーテル、及び、たとえば包帯等の応急処置物。キットは、本明細書に開示される方法を実行するために、適切な比率で共に混合された試薬の容器を含有しても良い。試薬容器は、好ましくは、本方法を実行する際に計測工程を行わなくても済むように、単位量で試薬を含有する。
【０１５４】
パッケージのラベルは、たとえば、自己免疫性疾患の治療に化学式Ｉの化合物を用いるための説明を含有しても良い。他の実施形態において、パッケージのラベルは、全身性紅斑性狼瘡を治療するための説明を含有する。
【０１５５】
また、化学式Ｉの化合物（たとえば、ＡＣＹ−７３８）の治療有効量及び薬学的に受容可能な担体または希釈物質、ならびに、たとえば全身性紅斑性狼瘡等の自己免疫性疾患の治療方法に関する説明書を含有する、パッケージ化された組成物が開示される。
【０１５６】
本明細書に特定されているすべての特許、特許出願、公開文献、または他の開示物は、参照によりその全体で本明細書に援用される。本明細書に参照により援用されると述べられたが、既存の定義、記述、または本明細書に記述される他の開示物質と矛盾する、任意の物質またはその一部は、当該援用物質と、本開示物質の間に矛盾が生じない範囲でのみ援用される。
【実施例】
【０１５７】
本発明化合物及び方法は、以下の実施例と関連づけられ、より良く理解され、それらは、本発明の解説のみを意図しており、本発明範囲の限定は意図されない。開示される実施形態に対する、様々な変更及び修飾が、当業者には明らかであり、そのような変更及び修飾（限定されないが、本発明の化学構造、置換基、誘導体、製剤、及び／または方法に関連するものが挙げられる）は、本発明の主旨及び添付の請求項の範囲から逸脱することなく実行され得る。本明細書のスキーム中の構造式における変数の定義は、本明細書に記述される化学式の対応する位置のものと等しい。
【０１５８】
本発明化合物の合成は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１（参照によりその全体で本明細書に援用される）に提示されている。
【０１５９】
実施例１：Ｂ細胞の骨髄分化は、発症したＮＺＢ／Ｗマウスにおいて変化する
Ｂ細胞は、骨髄の多能性造血幹細胞に由来する。Ｂ細胞経路が選択された時点で、Ｂ細胞の発生及び分化が、一連のステージで起こり、プロＢ細胞から、プレＢ細胞、未成熟Ｂ細胞へと進行する（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１，  １９：５９５−６２１）。プロＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋）は、重鎖Ｄ−Ｊ及びＶ（Ｄ）Ｊ再構成を受けながら、４つの発達段階を経る：Ａ（ＣＤ２４−ＢＰ１−）、Ｂ（ＣＤ２４＋ＢＰ１−）、Ｃ（ＣＤ２４ｌｏＢＰ１＋）、及びＣ´（ＣＤ２４ｈｉＢＰ１＋）（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９９１，  １７３（５）：１２１３−１２２５；  Ａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １９８４，  ３（６）：１２０９−１２１９）。ＩｇＧ重鎖再構成が成功した後、ＣＤ４３発現が下方制御され、細胞はプレＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−）段階へと進む。プレＢ細胞は３つの分画を経る：Ｄ（ＩｇＭ−ＩｇＤ−）、Ｅ（ＩｇＭ＋ＩｇＤ−）、及びＦ（ＩｇＭ＋ＩｇＤ＋）（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９９１，  １７３（５）：１２１３−１２２５）。分画Ｄ細胞は、Ｉｇ軽鎖を再構成し、ＩｇＭを発現し始め、及び、分画Ｅまたは未成熟Ｂ細胞へと分化する（Ｅｈｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌ  １９９３，  ７２（５）：６９５−７０４）。分画Ｅ細胞は骨髄を出て、脾臓で成熟を続ける。ＩｇＭ＋未成熟Ｂ細胞はＩｇＤを発現し始め、分画Ｆまたは成熟Ｂ細胞へと進む。
【０１６０】
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）は、身体のほぼすべての器官に影響を与え得る自己免疫性疾患である。紅斑性狼瘡の特徴的な性質は、Ｂ細胞の脱制御であり、それにより自己抗体が産生され、免疫複合体介在性糸球体腎炎が発生する。高反応性Ｂ細胞は、ＣＤ４＋ＴヘルパーＴ細胞を誘導し、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を阻害し、炎症促進性サイトカインを分泌し、及び自己抗体を産生することによりＳＬＥの病態に寄与する。Ｔｒｅｇ細胞の数と機能が低下することは、活動期ＳＬＥの間に報告されており、免疫の脱制御と自己寛容の欠落に寄与している。
【０１６１】
メスのＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｂｌａｃｋ／Ｗｈｉｔｅ（ＮＺＢ／Ｗ）マウスは、数種の方法でヒトの疾患を模倣し、それゆえに、ＳＬＥのマウスモデルとして容認され、供されている。ＮＺＢ／Ｗマウスは、Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｂｌａｃｋ／ＢｉｎＪ（ＮＺＢ）マウスとＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ／ＬａｃＪ（ＮＺＷ）マウスの交配から作製され、自発性紅斑性狼瘡様の疾患を発症する（Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００７，  ２９２（２）：Ｒ７３６−７４２；  Ｂｕｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｘｐ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００４，  ５６（１−２）：３７−４４）。活動期ＳＬＥを有するＮＺＢ／Ｗマウスとヒトの両方が、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）及びヒストンに対する自己抗体を産生し、免疫複合体介在性の糸球体腎炎を発症する（Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０，  １８４（９）：４７８９−４８００；  Ｅｂｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  １９８９，  ５（１）：７９−９５；  Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９８５，  ３７：２６９−３９０）。
【０１６２】
Ｂ細胞の発達が、紅斑性狼瘡の傾向があるＮＺＢ／Ｗマウスの骨髄において変化しているかを測定するため、プロＢ細胞分化及びプレＢ細胞分化を最初に、発症前及び発症後ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて評価した。
【０１６３】
マウス
メスのＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１マウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＭＥ，  ＵＳＡ）から購入した。すべてのマウスは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｔｅｃｈ）に従い用いられ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ−Ｍａｒｙｌａｎｄ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＶＭＲＣＶＭ，  Ｂｌａｃｋｓｂｕｒｇ，  ＶＡ，  ＵＳＡ）にて、動物施設内で飼育された。
【０１６４】
骨髄からのＢ細胞単離
安楽死させた後、メスのＮＺＢ／Ｗマウスから骨髄細胞をＰＢＳ（１％ＢＳＡ含有）でフラッシュした。赤血球細胞（ＲＢＣ）を、塩化カリウムアンモニウム（ＡＣＫ）溶解液を用いて溶解させた。次いで、単一細胞懸濁液を洗浄し、Ａｌｌｏ−Ｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ（ＡＰＣ）結合Ｂ２２及びＦｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎ  Ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＦＩＴＣ）結合ＣＤ４３抗マウスｍＡｂを用いて染色し、プロＢ細胞（Ｂ２２０＋  ＣＤ４３＋）及びプレＢ細胞（Ｂ２２０＋  ＣＤ４３−）群を特定した。プロＢ細胞群をさらにＰｈｙｃｏｅｒｙｔｈｉｒｎ（ＰＥ）結合ＢＰ１とＰＥＣｙ５またはＰｅｒｉｄｉｎｉｎ−クロロフィルタンパク質（ＰｅｒＣＰ）結合ＣＤ２４抗マウスｍＡｂを用いて染色し、分画Ａ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４−ＢＰ１−）、Ｂ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４＋ＢＰ１−）、Ｃ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４ｌｏ  ＢＰ１＋）、及びＣ´（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４ｈｉ  ＢＰ１＋）を特定した。プレＢ細胞分画はさらに、ＰＥ結合ＩｇＤ、及びＰＥＣｙ５結合ＩｇＭ抗マウスｍＡｂを用いて染色し、分画Ｄ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−ＩｇＭ−ＩｇＤ−）、Ｅ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−ＩｇＭ＋ＩｇＤ−）及びＦ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−ＩｇＭ＋ＩｇＤ＋）を特定した。分画は、フローサイトメトリー解析により測定した。すべての抗体は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）から購入した。フローサイトメトリーは、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，  ＮＪ，  ＵＳＡ）を用いて、Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｃｏｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙで行った。フローサイトメトリーのデータは、ＦｌｏｗＪｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，  Ａｓｈｌａｎｄ，  ＯＲ，  ＵＳＡ）を用いて分析した。
【０１６５】
ＮＺＢ／ＷマウスにおけるプロＢ細胞及びプレＢ細胞の評価
骨髄細胞は、発症前及び発症後ＮＺＢ／Ｗマウスから採取し、プロＢ細胞及びプレＢ細胞に特異的な蛍光タグ化抗体で標識した。
【０１６６】
骨髄細胞は、８週齢（発症前）または３８週齢（発症後）で、ＮＺＢ／Ｗマウスから採取され、プロＢ細胞（ＣＤ４３＋Ｂ２２０＋）及びプレＢ細胞（ＣＤ４３−Ｂ２２０＋）群へとソートされた（図１Ａ〜Ｂ）。図１Ａは、ＣＤ４３及びＢ２２０で標識されたＢ細胞の代表的な画像を示す。図１Ｂは、発症後及び発症前のＮＺＢ／Ｗマウスの間で、プロＢ細胞とプレＢ細胞の割合に有意差が無かったことを示す（図１Ｂ）。
【０１６７】
さらにＢ細胞の発生を解析するために、プロＢ細胞を、発生分画Ａ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４−ＢＰ１−）、Ｂ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４＋ＢＰ１−）、Ｃ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４ｌｏ  ＢＰ１＋）、及びＣ´（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋ＣＤ２４ｈｉ  ＢＰ１＋）へ分けた（図１Ｃ〜Ｄ）。図１Ｃは、発症前及び発症後ＮＺＢ／ＷマウスからのプロＢ細胞分画Ａ、Ｂ、Ｃ及びＣ´の代表的なフローサイトメトリー画像を示す。発症後ＮＺＢ／Ｗマウスは、発症前マウスと比較し、Ｃ及びＣ´の分画において、有意に少ない細胞を有していた（図１Ｄ）。
【０１６８】
プレＢ細胞はさらに、分画Ｄ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−ＩｇＭ−ＩｇＤ−）、Ｅ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−ＩｇＭ＋ＩｇＤ−）、及びＦ（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−ＩｇＭ＋ＩｇＤ＋）へと分けた（図１Ｅ〜Ｆ）。発症後ＮＺＢ／Ｗマウスは、分画Ｄ及びＥにおいて、非常に少ない細胞を有していたが、分画Ｆにおいて、細胞の割合は有意に増加していた（図１Ｆ参照）。
【０１６９】
結論
発症後ＮＺＢ／Ｗマウスは、骨髄Ｂ細胞分化の間の細胞の生存率が増加しており、それにより、後期プレＢ細胞分画Ｆの細胞が蓄積している。これらの結果から、ＳＬＥ発症の間、発生段階を通じて骨髄Ｂ細胞の発達がより急速に進み、異常なＢ細胞の適切な除去が為されず、それにより、骨髄を離れる自己反応性Ｂ細胞の数が増加したと示唆される。
【０１７０】
実施例２：ＡＣＹ−７３８を用いた発症後ＮＺＢ／Ｗマウスの治療により、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける骨髄Ｂ細胞分化が変化する。
ＮＺＢ／Ｗマウスを、ＨＤＡＣ６阻害剤で処置し、実施例１において観察されたＢ細胞分化プロファイルが変化したかどうかを測定した。
【０１７１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ処置
ＮＺＢ／Ｗマウスは、２２週齢から開始し、３８週齢で安楽死させるまで、５日／週、ビヒクル対照（ＤＭＳＯ）、ＡＣＹ−７３８処置（５ｍｇ／ｋｇ、低用量）またはＡＣＹ−７３８処置（２０ｍｇ／ｋｇ、高用量）が、腹腔内に注射された。すべての実験における使用に対し、ＡＣＹ−７３８は、Ａｃｅｔｙｌｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから受領した。タンパク尿及び体重を、２週毎に測定し、血清解析のために血液が４週毎に採取された。タンパク尿は、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｕｒｉｓｔｉｘ  ｄｉｐｓｔｉｃｋｓ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）を用いた、標準的な半定量テストにより測定された。結果は、メーカーの説明書に従い定量され、以下のようにスコア化された：計深棒の読み取り、０ｍｇ／ｄＬ＝０、微量＝１、３０−１００ｍｇ／ｄＬ＝２、１００−３００ｍｇ／ｄＬ＝３、３００−２０００ｍｇ／ｄＬ＝４、及び、２０００＋ｍｇ／ｄＬ＝５。
【０１７２】
ＨＤＡＣ６阻害により、骨髄のプロＢ細胞及びプレＢ細胞群が変化した。
ＡＣＹ−７３８を用いた処置の後、採取された骨髄細胞を、Ｂ２２０及びＣＤ４３を用いて染色し、プロＢ細胞とプレＢ細胞の割合を、フローサイトメトリー解析を用いて測定した。図２Ａは、プロＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３＋）及びプレＢ細胞（Ｂ２２０＋ＣＤ４３−）群の代表的なフローサイトメトリー画像を示す。図２Ｂは、ＨＤＡＣ６阻害後、プロＢ細胞の割合が有意に変化しなかったことを示す。
【０１７３】
図２Ｃは、プロＢ細胞分画（Ａ、Ｂ、Ｃ及びＣ´）の代表的なフローダイアグラムを示す。図２Ｄは、ＡＣＹ−７３８の処置により、分画Ａ及びＣにおけるプロＢ細胞の割合が有意に増加したことを示す。対照的に、ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて、ＨＤＡＣ６阻害の後、プレＢ細胞群は用量依存性に有意に低下した（図２Ａ及び２Ｅを参照のこと）。
【０１７４】
図２Ｆは、プレＢ細胞分画Ｄ、Ｅ及びＦの代表的なフローサイトメトリー画像を示す。発達中のプレＢ細胞のステージもまた、有意に変化した。ＡＣＹ−７３８の高用量及び低用量の両方で、分画Ｆの細胞の低下と対応して、分画Ｄ及びＥの細胞の割合が有意に増加した（図２Ｇを参照のこと）。
【０１７５】
結論
ＨＤＡＣ６阻害は、骨髄分化を生き残る細胞の数を低下させることができ、それにより、末梢において発達を継続するＢ細胞の数が減少する。
【０１７６】
実施例３：脾臓Ｂ細胞群及び末梢Ｂ細胞群は、ＨＤＡＣ６阻害により有意に変化しなかった。
従前の研究において、移行ステージ及びＭＺ発達ステージにある異常な数の脾臓Ｂ細胞がＳＬＥ患者から示されている（Ｗｉｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０００，  ９４（１）：５１−６３；  Ｇｒｉｍａｌｄｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１，  １６７（４）：１８８６−１８９０）。さらに、ＳＬＥ患者と健常対照の間の、末梢Ｂ細胞における主な違いもまた、報告されている（Ｋｏｒｇａｎｏｗ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１０，  ３４（４）：４２６−４３４；  Ｏｄｅｎｄａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０００，  １６５（１０）：５９７０−５９７９）。
【０１７７】
ゆえに、ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、ＳＬＥにおいて見られる、異常な脾臓Ｂ細胞群及び末梢Ｂ細胞群を、ＨＤＡＣ６阻害により矯正することができるかどうかを測定した。
【０１７８】
脾臓Ｂ細胞の単離
安楽死の後、脾臓を取り出し、脾臓細胞の単一細胞懸濁液を、ＰｅｒＣＰ７１０結合ＩｇＭ、ＦＩＴＣ結合ＡＡ４．１、ＰＥ結合ＣＤ２３、及びＡＰＣ結合ＣＤ２１抗マウスｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）と共にインキュベートした。ＩｇＭ＋細胞を、ＡＡ４．１、ＣＤ２３及びＣＤ２１の発現に対して解析し、フローサイトメトリーを用いて、以下の発達ステージへと分けた：Ｔ１（ＩｇＭ＋ＣＤ２３−ＡＡ４．１＋ＣＤ２１−）、Ｔ２（ＩｇＭｈｉＣＤ２３＋ＡＡ４．１＋ＣＤ２１＋）、Ｔ３（ＩｇＭｌｏＣＤ２３＋ＡＡ４．１＋ＣＤ２１＋）、Ｆ０（ＩｇＭ＋ＣＤ２３＋ＡＡ４．１−ＣＤ２１−）、ＭＺ（ＩｇＭ＋ＣＤ２３−ＡＡ４．１−ＣＤ２１＋）またはＢ１（ＩｇＭ＋ＣＤ２３−ＡＡ４．１−ＣＤ２１−）。フローサイトメトリーのデータは、ＦｌｏｗＪｏを用いて解析した。
【０１７９】
末梢Ｂ細胞の単離
後眼窩静脈叢の出血を用いて、安楽死の前に血液を採取した。末梢血からのＲＢＣを溶解し、単一細胞懸濁液を、ＦＩＴＣ結合Ｂ２２０及びＰｅｒＣｅｐ７１０結合ＩｇＭ抗マウスｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を用いて標識した。成熟Ｂ細胞は、ＩｇＭ＋Ｂ２２０＋細胞として特定された。フローサイトメトリーのデータは、ＦｌｏｗＪｏを用いて解析した。
【０１８０】
脾臓Ｂ細胞群及び末梢Ｂ細胞群は、ＨＤＡＣ６阻害により有意に変化しなかった。
ＰｅｒＣＰ７１０結合ＩｇＭ、ＦＩＴＣ結合ＡＡ４．１、ＰＥ結合ＣＤ２３、及びＡＰＣ結合ＣＤ２１抗マウスｍＡｂで染色した後、脾臓細胞の単一細胞懸濁液を、発達ステージのＴ１（ＩｇＭ＋ＣＤ２３−ＡＡ４．１＋ＣＤ２１−）、Ｔ２（ＩｇＭｈｉＣＤ２３＋ＡＡ４．１＋ＣＤ２１＋）、Ｔ３（ＩｇＭｌｏＣＤ２３＋ＡＡ４．１−ＣＤ２１＋）、Ｆ０（ＩｇＭ＋ＣＤ２３＋ＡＡ４．１−ＣＤ２１−）、ＭＺ（ＩｇＭ＋ＣＤ２３−ＡＡ４．１−ＣＤ２１＋）、及びＢ１（ＩｇＭ＋ＣＤ２３−ＡＡ４．１−ＣＤ２１−）へ分けた。ＡＣＹ−７３８を用いた処置は、低用量または高用量のいずれでも、これらＢ細胞群に対し有意に影響を与えなかった（図３Ａ）。
【０１８１】
同様に、末梢Ｂ細胞の単一細胞懸濁液を、３８週齢のＮＺＢ／Ｗマウスの血液から得て、ＩｇＭ及びＢ２２０に対して染色した。図３Ｂは、末梢Ｂ細胞（ＩｇＭ＋Ｂ２２０＋）の代表的なフローサイトメトリーダイアグラムを示す。ＡＣＹ−７３８を用いた処置は、低用量または高用量のＨＤＡＣ６ｉのいずれでも、３８週齢のＮＺＢ／Ｗマウスの末梢Ｂ細胞（ＩｇＭ＋Ｂ２２０＋）の割合に対し、影響を与えなかった（図３Ｃ）。
【０１８２】
結論
脾臓Ｂ細胞群及び末梢Ｂ細胞群は、ＨＤＡＣ６阻害により有意に変化しなかった。
【０１８３】
実施例４：ＨＤＡＣ６阻害により胸腺Ｔ細胞の発達が変化する。
ＳＬＥ患者及び紅斑性狼瘡の傾向を有するげっ歯類モデルは、Ｔ細胞の異常発現を有していることが報告されている（Ｔｓｏｋｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １９８３，  ２６（２）：２６７−２７６；  Ｃｒｉｓｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００８，  １８１（１２）：８７６１−８７６６；  Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９３，  １７８（６）：２２２５−２２３０）。
【０１８４】
ゆえに、ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、ＨＤＡＣ６阻害は、ＤＮ（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８−）Ｔ細胞の割合を変化させることにより、Ｔリンパ球の発達に影響を与え得るかどうかを測定した。
【０１８５】
Ｔ細胞の単離
単一細胞懸濁液を、３８週齢の処置ＮＺＢ／Ｗマウスの胸腺及び脾臓から得た。簡潔に述べると、胸腺を各ＮＺＢ／Ｗマウスから採取し、氷冷ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するペトリ皿中で、滅菌金網を通して分離させた。ＲＢＣは、ＲＢＣ溶解緩衝液を用いて溶解させ、細胞を沈殿させ、ＰＢＳで洗浄した。脾臓細胞は、ＡＰＣ結合ＣＤ３、ＦＩＴＣ結合ＣＤ４、ｅＦｌｕｏｒ４５０（ｅＦ４５０）結合ＣＤ８ａ、ＰｅｒＣＰ−ＣＹ５．５結合ＣＤ２５、及びＰＥ結合Ｆｏｘｐ３で染色した。胸腺細胞は、ＡＰＣ−ＣＤ３、ＦＩＴＣ−ＣＤ４及びＰＥ−ＣＤ８抗マウスｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を用いて染色した。蛍光は、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーターを用いて測定し、データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアにより解析した。
【０１８６】
ＤＮ胸腺Ｔ細胞の割合は、ＨＤＡＣ６阻害の後に低下する。
図４Ａは、ＣＤ３でゲートされ、ＣＤ４とＣＤ８で標識された胸腺細胞の代表的なフローサイトメトリー画像を示す。図４Ｂは、ＡＣＹ−７３８処置により、用量依存性にＤＮ  Ｔ細胞の割合が低下したことを示す。ＨＤＡＣ６阻害はまた、ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋（図４Ｃ）及びＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋のシングルポジティブ（ＳＰ）Ｔ細胞（図４Ｄ）の割合をかなり低下させた。ダブルポジティブ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋）胸腺Ｔ細胞の数は、ＡＣＹ−７３８処置の１６週後に、用量依存性に増加した（図４Ｅ）。
【０１８７】
結論
ＨＤＡＣ６阻害により、ダブルポジティブ（ＤＰ）（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８＋）Ｔ細胞の有意な増加と併せて、ダブルネガティブ（ＤＮ）ＣＤ４−ＣＤ８−Ｔ細胞が著しく低下した。
【０１８８】
実施例５：ＨＤＡＣ６阻害により、脾臓における制御性Ｔ細胞の数が増加した。
ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、ＨＤＡＣ６阻害により、紅斑性狼瘡の傾向があるＮＺＢ／ＷマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の全体的な数及び機能が変化するか否かを測定した。
【０１８９】
特異的ＨＤＡＣ６阻害により、ＮＺＢ／ＷマウスにおいてＴｒｅｇ表現型が増加した。
脾臓細胞を３８週齢のＮＺＢ／Ｗマウスから得て、ＣＤ４、ＣＤ２５、及びＦｏｘｐ３で染色した。図５Ａは、ＣＤ４でゲートされ、Ｆｏｘｐ３及びＣＤ２５で標識された脾臓細胞の代表的なフローサイトメトリーのダイアグラムを示す。図５Ｂは、ＡＣＹ−７３８が、ビヒクル対照のみで処置されたマウスと比較し、両方の用量で、Ｔｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋）の割合を有意に増加させたことを示す（図５Ａ〜Ｂ）。
【０１９０】
実施例６：ＨＤＡＣ６阻害により、ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて、生存期間が延長し、ＳＬＥの尿マーカー及び脾腫が低下した。
ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて、ＨＤＡＣ６阻害を、ＳＬＥの疾患マーカーの低下、及び生存期間延長における有効性に対し評価した。
【０１９１】
ＮＺＢ／Ｗマウスにおける、生存率及び疾患進行の評価
高用量及び低用量のＡＣＹ−７３８のいずれかを投与されたすべてのマウスが、実験の終了まで生存した。しかしながら、ビヒクル対照のみを投与されたＮＺＢ／Ｗマウスの半分は、３８週齢の実験終了前に死亡した（図６Ａ）。ＡＣＹ−７３８を用いた処置の後、ＮＺＢ／Ｗマウスは加齢につれ、体重が増加した。ビヒクル対照を処置されたＮＺＢ／Ｗマウスは、タンパク尿が上昇すると同時に、体重が減少した（図６Ｂ）。
【０１９２】
処置期間を通じて、ＮＺＢ／Ｗマウスはタンパク尿及び体重の変化をモニターされた。図６Ｂは、２２〜３８週齢の、ＡＣＹ−７３８（５ｍｇ／ｋｇ、ＤＭＳＯ）、ＡＣＹ−７３８（２０ｍｇ／ｋｇ、ＤＭＳＯ）、またはビヒクル対照（ＤＭＳＯ）で処置されたＮＺＢ／Ｗマウスの、２週毎のタンパク尿の測定結果を示す。ビヒクル対照または低用量のＡＣＹ−７３８で処置されたＮＺＢ／Ｗマウスは加齢するにつれ、タンパク尿が徐々に上昇した。しかしながら、高用量のＡＣＹ−７３８で処置されたＮＺＢ／Ｗマウスは、タンパク尿が上昇しなかった。２０ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８処置により、ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１マウスにおいて、タンパク尿の重症度が有意に軽減された（図６Ｃ）。
【０１９３】
ＳＬＥは脾臓の肥大により特徴付けられるため、脾臓：体重の比率と共に脾臓の総重量を測定することにより、安楽死後のマウスにおける脾腫を評価した。脾臓重量及び脾臓：体重の比率の両方が、用量依存性に、ＨＤＡＣ６阻害の後に低下した（図６Ｄ〜Ｅ）。
【０１９４】
実施例７：ＡＣＹ−７３８を用いた処置により、血清抗ｄｓＤＮＡが低下し、Ｉｇアイソタイプのレベルが変化した。
ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、ＨＤＡＣ６阻害により、Ｉｇアイソタイプのレベル及び血清抗ｄｓＤＮＡ  Ｉｇアイソタイプのレベルが低下するか否かを測定した。
【０１９５】
自己抗体の測定
２２週齢で処置を開始する前、及び、安楽死までの４週毎に血清を採取した。マウスはイソフルラン（Ｐｉｒａｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  Ｍｕｍｂａｉ，  Ｍａｈａｒａｓｈｔｒａ，  Ｉｎｄｉａ）を用いて安楽死させ、後眼窩静脈叢から採血した。血液を２時間凝固させ、次いで、１５分間、１０，０００ｘｇで遠心した。ｄｓＤＮＡに対する血清抗体のレベルは、ＥＬＩＳＡにより測定した。血清試料を、１：１００の希釈でプレートに添加し、２倍連続希釈を行った。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ３４０ＰＣマイクロプレート分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，  Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）上で、３８０ｎｍでプレートを読み取った。最終希釈は１：８００と報告された。
【０１９６】
抗ｄｓＤＮＡ、ＩｇＧ２ａ、及び総ＩｇＧレベルは、マウスが加齢するにつれ徐々に増加した（図７Ａ〜Ｃ）。図７Ａは、２２週齢（処置前）及び３８週齢（処置の１６週後）での、ＮＺＢ／Ｗマウスにおける血清抗ｄｓＤＮＡの測定結果を示す。処置開始前、抗ｄｓＤＮＡレベルに有意差は無かった。加齢するにつれ、ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて抗ｄｓＤＮＡは増加したが、高用量のＡＣＹ−７３８で処置することにより、マウス加齢に伴う抗ｄｓＤＮＡの増加が阻害された。５ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８を投与されたＮＺＢ／Ｗマウスでさえ、ビヒクル対照処置マウスと比較し、加齢に伴う抗ｄｓＤＮＡ産生が有意に低下した（ｐ＜０．０５）。２０ｍｇ／ｋｇ用量での処置後の自己抗体産生の低下は、低用量またはビヒクル対照のみを投与されたＮＺＢ／Ｗマウスと比較し、より明白であった（図７Ａ）。
【０１９７】
図７Ｂは、２２週での血清ＩｇＭレベルに有意差は無かったが、ＡＣＹ−７３８処置は、用量依存性にＩｇＧのレベルを有意に低下させたことを示す。
【０１９８】
図７Ｃは、抗ｄｓＤＮＡレベルは経時的に増加したが、ＡＣＹ−７３８処置により、ＩｇＧ２ａレベルが用量依存性に有意に低下したことを示す。
【０１９９】
図７Ｄは、３８週齢で、ＡＣＹ−７３８処置により、有意にＩｇＧ２ｂが増加したことを示す。
【０２００】
図７Ｅは、３８週齢で、ＡＣＹ−７３８を投与されたマウスにおいて、総ＩｇＭがやや増加したことを示す。
【０２０１】
結論
ＡＣＹ−７３８を用いたＮＺＢ／Ｗマウスの処置により、ＩｇＧ２ａ及び総ＩｇＧのレベルが有意に低下したが、用量依存性にＩｇＧ２ｂのレベルは増加した（図７Ｂ〜Ｄ）。ＨＤＡＣ６阻害は、３８週齢で、マウスのＩｇＭレベルに効果が無かった（図７Ｅ）。
【０２０２】
実施例８：ＨＤＡＣ６阻害により、ＮＺＢ／Ｗマウスの加齢に伴うＴＧＦ−β及びＩＬ−１β産生の変化が阻害された。
ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、紅斑性狼瘡様の症状の発現と共に見られるＴＧＦ−β及びＩＬ−１βレベルにおける変化が、ＨＤＡＣ６阻害により減弱されるか否かを測定した。
【０２０３】
ＥＬＩＳＡ
メーカー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）のプロトコールに従い、ＥＬＩＳＡにより、ＩＬ−１β及びＴＧＦ−βのレベルを血清から測定した。プレートは、マイクロプレート分光光度計で、４５０ｎｍで読み取った。
【０２０４】
紅斑性狼瘡の傾向があるマウスにおけるサイトカインの産生
ＮＺＢ／Ｗマウスの血清におけるＩＬ−１β及びＴＧＦ−βのレベルを、２２週から開始し、３８週齢で安楽死させるまで、４週毎に測定した（図８Ａ〜Ｂ）。２２週齢では、３群の間に、サイトカインレベルの有意差は無かった。ＮＺＢ／Ｗマウスが加齢するにつれ、ＴＧＦ−βの血清レベルは低下した一方、ＩＬ−１βのレベルは増加した（図８Ａ〜Ｂ）。
【０２０５】
図８Ａは、ビヒクル対照で処置したマウスにおいては、ＴＧＦ−βのレベルは有意に低下したが、ＡＣＹ−７３８で処置した場合は、用量依存性にこの傾向を逆転させることができたことを示す。ＩＬ−１βのレベルは、３８週齢のＮＺＢ／Ｗマウスにおいて上昇していたが、ＡＣＹ−７３８の処置で、血清ＩＬ−１βは有意に低下した。
【０２０６】
結論
ＡＣＹ−７３８を用いたＨＤＡＣ６阻害により、用量依存性に、マウスの加齢に伴うＴＧＦ−βの産生低下が減弱した。低用量及び高用量の両方のＡＣＹ−７３８の処置により、血清ＩＬ−１β産生の増加もまた減弱した。
【０２０７】
実施例９：ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＨＤＡＣ阻害の後、糸球体ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、及びＩＬ−６のｍＲＮＡ発現は低下する。
ＮＺＢ／Ｗマウスはおよそ２０週齢で腎疾患を発症し、３６週齢までに重度の糸球体腎炎に進行する（Ｄｉｘｏｎ  ＦＪ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  １９８２，  １７（３）：６３−７３）。糸球体のｍＲＮＡ発現が変化することにより、線維症及び不可逆的な糸球体損傷が生じ得る（ＭｃＭｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １９９７，  ８４（３）：２６０−２６８）。Ｔｈ１サイトカインとＴｈ２サイトカインのバランスは、免疫応答及び自己免疫性疾患の発症機序に重要な役割を果たす。ＩＬ−１０は、ＳＬＥで上昇していること、及びＢ細胞の生存、分化及びＩｇ分泌に重要な役割を果たすことが報告されている。ＴＧＦ−βは、ＳＬＥの発症機序で二重の役割を果たすことが示されている。ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて、ＴＧＦ−βは、自己抗体産生から生じた炎症を無効化するために腎臓で産生される（Ｓａｘｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００８，  １８０（３）：１９０３−１９１２）。ＩＬ−６は、ＳＬＥの間、ポリクローナルＢ細胞の活性化と、自己抗体の産生を誘導する。また、実験により、紅斑性狼瘡の腎臓において、炎症促進性サイトカインであるＩＬ−６の発現が増加していたことが示されている（Ａｒｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｕｐｕｓ  ２００５，  １４（１）：１３−１８）。
【０２０８】
ＨＤＡＣ６阻害が糸球体のｍＲＮＡ発現を変えるか否かを測定するために、ＡＣＹ−７３８をＮＺＢ／Ｗマウスに投与し、糸球体ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、及びＩＬ−６のｍＲＮＡ発現を測定した。
【０２０９】
ＲＮＡの単離
ＲＮＡは、メーカー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）のプロトコールに従い、ｍｉｒＶａｎａ  ｍｉＲＮＡ単離キットを用いて単離した。溶出物は、分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ，  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ，  ＵＳＡ）で定量した。分注物を作製し、リアルタイムＲＴ-ＰＣＲのために１ｎｇ／μＬに希釈した。溶出ＲＮＡは、−８０℃で保存した。
【０２１０】
リアルタイムＲＴ-ＰＣＲ
ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＧＦ−βのｍＲＮＡ発現は、ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を用いて測定した。ΔΔＣＴは、内因性対照のＧＡＰＤＨを用いて算出し、次いで、ΔＣＴは、ＡＣＹ−７３８で処置したＮＺＢ／Ｗマウスと、ＤＭＳＯ処置対照の間の発現における倍数変化を算出することにより決定した。すべての試料は、三重で測定された。
【０２１１】
糸球体の単離
各マウスの１つの腎臓から皮質組織を単離し、治療群によりプールされた。簡潔に述べると、皮質組織は、粒度こし器を押し通され、２０分間、３７℃で、７５０Ｕ／ｍＬのＷｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎＩ型コラーゲンに再懸濁された。糸球体細胞を沈殿させ、ＲＮＡｌａｔｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）に再懸濁させ、ＲＮＡ単離まで−２０℃で保存した。
【０２１２】
３８週齢のＮＺＢ／Ｗマウスにおける、糸球体のｍＲＮＡレベル
安楽死の後、糸球体を腎臓から単離し、ＲＮＡを抽出した。ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、及びＩＬ−６の糸球体ｍＲＮＡの相対発現を、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いて測定した。
【０２１３】
ＡＣＹ−７３８（５ｍｇ／ｋｇ）の投与により、５０％未満まで糸球体ＩＬ−６、及びＩＬ−１０のｍＲＮＡのレベルを有意に低下させることができた一方で、２０ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８の処置では、検出不可能なレベルにまでＩＬ−６及びＩＬ−１０  ｍＲＮＡが低下した（図９Ａ）。さらに、糸球体のＴＧＦ−β  ｍＲＮＡは、ＡＣＹ−７３８の阻害後、用量依存性に低下した（図９Ａ）。
【０２１４】
結論
これらの結果をまとめると、ＡＣＹ−７３８によるＨＤＡＣ６阻害は、ＳＬＥ関連サイトカインのｍＲＮＡ産生を低下させることが示唆される。
【０２１５】
実施例１０：ＨＤＡＣ６阻害の後、糸球体免疫複合体沈着が低下する。
ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、ＨＤＡＣ６阻害が、腎組織における免疫複合体沈着及び補体活性化を低下させるか否かを測定した。
【０２１６】
病理
安楽死の時点で、腎臓を採取し、半分に切断した。各マウスからの腎臓の半分をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、切片化して、過ヨウ素酸−Ｓｃｈｉｆｆ（ＰＡＳ）を用いて染色した。盲検化し、病理学者のＤｒ．Ｄａｖｉｄ  Ｃａｕｄｅｌｌにより、糸球体増幅、炎症、半月体形成、ネクローシスに対して、腎切片をスコア化（０〜４）した。
【０２１７】
免疫蛍光染色
各腎臓の半分はＯＣＴ培地に置き、ドライアイスと２−メチルブタンを含有するスラリー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｈａｍｐｔｏｎ，  ＮＨ，  ＵＳＡ）中で急速凍結させた。凍結腎切片を３μＭの切片にカットし、１：１００に希釈したＦＩＴＣ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ）、または１：１００に希釈したヤギ抗マウスＣ３−ＦＩＴＣ（Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｗａｌｔｈａｍ，  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，  ＵＳＡ）で染色した。腎切片を、蛍光顕微鏡により検査した。盲検化し、病理学者により免疫複合体沈着に対して切片をスコア化（０〜４）した。
【０２１８】
ＨＤＡＣ６阻害により、糸球体免疫複合体沈着が低下した。
５μＭの腎切片を、ＦＩＴＣ結合Ｃ３またはＩｇＧで染色し、蛍光強度に対して評価した（図１０Ａ及び１０Ｂを参照のこと）。ＩｇＧ及びＣ３沈着レベルの両方が、ＡＣＹ−７３８処置の１６週後、有意に低下した。
【０２１９】
高用量のＡＣＹ−７３８処置は、Ｃ３及びＩｇＧ沈着を伴う糸球体の数、ならびに各糸球体内の沈着の全体的なレベルを両方とも低下させることができた（図１０Ａ）。５ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８を投与されたマウスは、Ｃ３及びＩｇＧ沈着がわずかに低下した（データは示さず）。
【０２２０】
２０ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８を用いた処置により、ビヒクル対照処置マウスと比較し、ＩｇＧ及びＣ３染色が低下した（図１０Ｂ）。各腎臓は、盲検化され、蛍光強度に対してスコア化された。
【０２２１】
ビヒクル対照及び高用量ＡＣＹ−７３８で処置されたＮＺＢ／ＷマウスにおけるＣ３及びＩｇＧの両方の糸球体沈着の代表的な画像を図１０Ｃ及び１０Ｄに示す。ＩｇＧ及びＣ３沈着は、盲検化され、病理学者により評価され、蛍光レベル及び頻度に対してスコア化（０〜４）された。２０ｍｇ／ｋｇ用量の処置により、ＩｇＧ及びＣ３沈着が有意に低下したが、５ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８は、ビヒクル対照のみを投与されたマウスと比較し、ＩｇＧ及びＣ３沈着に有意な影響を与えなかったことが示された。
【０２２２】
実施例１１：ＳＬＥに関連した腎臓の症状は、ＡＣＹ−７３８治療の後、減少した。
ＮＺＢ／ＷマウスをＡＣＹ−７３８で処置し、ＨＤＡＣ６阻害がＳＬＥに関連した腎臓の症状を逆転させるか否かを測定した。
【０２２３】
腎疾患を評価するために、腎切片をパラフィンに包埋し、ＰＡＳにより染色した。ＮＺＢ／Ｗマウスは、３２週齢までに重度の腎疾患を発症していることが示された。ＤＭＳＯのみを処置されたＮＺＢ／Ｗマウスは、肥厚した、不規則な糸球体基底膜を有し、細胞充実度、線維化、及び半月体形成が増加した（図１１Ａを参照のこと）。５ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８を用いた処置は、腎臓の症状を有意に変化させなかった。しかしながら、２０ｍｇ／ｋｇのＡＣＹ−７３８で処置されたマウスの腎臓は、ＳＬＥの腎臓の症状が有意に低下し、線維化及び半月体が無かった（図１１Ｂ）。切片は、糸球体増殖、炎症、糸球体当たりの核の数、半月体形成、及び線維化に対し、盲検化された病理学者により評価され、糸球体スコア（０〜４）が割り当てられた。ビヒクル対照のみで処置されたＮＺＢ／Ｗマウスは、平均スコアが４であったことと比較し、高用量のＡＣＹ−７３８を投与されたマウスは平均スコアが２であった（図１１Ｃ）。
【０２２４】
すべての統計的解析は、対応の無いスチューデントｔ検定（両側）を用いて行われた。線形回帰解析を用いて、ＡＣＹ−７３８処置後の加齢とサイトカイン産生の間の関連性を決定した。０．０５未満のＰ値で統計的に有意であるとみなした。
【図１Ａ】
2016531163.tif 000017
【図１Ｂ】
2016531163.tif 000018
【図１Ｃ】
2016531163.tif 000019
【図１Ｄ】
2016531163.tif 000020
【図１Ｅ】
2016531163.tif 000021
【図１Ｆ】
2016531163.tif 000022
【図２Ａ】
2016531163.tif 000023
【図２Ｂ】
2016531163.tif 000024
【図２Ｃ】
2016531163.tif 000025
【図２Ｄ】
2016531163.tif 000026
【図２Ｅ】
2016531163.tif 000027
【図２Ｆ】
2016531163.tif 000028
【図２Ｇ】
2016531163.tif 000029
【図３Ａ】
2016531163.tif 000030
【図３Ｂ】
2016531163.tif 000031
【図３Ｃ】
2016531163.tif 000032
【図４Ａ】
2016531163.tif 000033
【図４Ｂ】
2016531163.tif 000034
【図４Ｃ】
2016531163.tif 000035
【図４Ｄ】
2016531163.tif 000036
【図４Ｅ】
2016531163.tif 000037
【図５Ａ】
2016531163.tif 000038
【図５Ｂ】
2016531163.tif 000039
【図６Ａ】
2016531163.tif 000040
【図６Ｂ】
2016531163.tif 000041
【図６Ｃ】
2016531163.tif 000042
【図６Ｄ】
2016531163.tif 000043
【図６Ｅ】
2016531163.tif 000044
【図７Ａ】
2016531163.tif 000045
【図７Ｂ】
2016531163.tif 000046
【図７Ｃ】
2016531163.tif 000047
【図７Ｄ】
2016531163.tif 000048
【図７Ｅ】
2016531163.tif 000049
【図８Ａ】
2016531163.tif 000050
【図８Ｂ】
2016531163.tif 000051
【図９】
2016531163.tif 000052
【図１０Ａ−Ｂ】
2016531163.tif 000053
【図１０Ｃ】
2016531163.tif 000054
【図１０Ｄ】
2016531163.tif 000055
【図１１Ａ−Ｂ】
2016531163.tif 000056
【図１１Ｃ】
2016531163.tif 000057
【国際調査報告】
2016531163.tif 000058