(57)【要約】本発明は、ピペラジン化合物の貯蔵安定性のあるナノ粒子状組成物に関する。癌を含む増殖性疾患の治療および予防に有用なナノ粒子状組成物を含む医薬組成物もまた記載される。
2016515588.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）式（１）の化合物
【化１】
2016515588.tif 000018
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
ＸおよびＹは、独立に、ＮまたはＣ−Ｒ7であり；
可変基Ｒ1とＲ2は、
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンであって、Ｒ2はＦであり；または
Ｒ1はＦであって、Ｒ2は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンである；組み合わせであり、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立に、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルカルボニル、シアノ、ニトロ、またはハロゲンである］
のナノ粒子と；
（ｂ）少なくとも１つの表面安定化剤と、
を含み、
前記ナノ粒子が約１，０００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径（Ｄ５０）を有する、
ことを特徴とする安定した組成物。
【請求項２】
式１の前記化合物は、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１つの表面安定化剤は、少なくとも１つのポリアルキレンオキシドを含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１つの表面安定化剤は、ポリエチレンオキシドとポリプロピレンオキシドとのブロック共重合体を含むことを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つの表面安定化剤は、ポロキサマーを含むことを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１つの表面安定化剤は、ポロキサマー４０７またはポロキサマー３３８を含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
液体懸濁液の形態であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも４週間の貯蔵後も安定していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
乾燥粉末の形態であることを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
少なくとも６カ月間の貯蔵後も安定していることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記有効メジアン粒子径が約５００ｎｍ未満であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
式（１）の前記化合物と表面安定化剤の比（ｗｔ／ｗｔ）が、約１００：１から約５：１であることを特徴とする請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
貯蔵安定性のある組成物を製造する方法であって、
（ａ）式（１）の化合物
【化２】
2016515588.tif 000019
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
ＸおよびＹは、独立に、ＮまたはＣ−Ｒ7であり；
可変基Ｒ1とＲ2は、
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンであって、Ｒ2はＦであり；または
Ｒ1はＦであって、Ｒ2は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンである；組み合わせであり、
Ｒ3はＣ1〜Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立に、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルカルボニル、シアノ、ニトロ、またはハロゲンである］
の粒子と、
（ｂ）少なくとも１つの表面安定化剤と、
の混合物を調製するステップと、
約１，０００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径を有するナノ粒子懸濁液を得るのに十分な条件下で式（１）の化合物の前記粒子の径を縮小するステップと、
を含み、
前記組成物は安定している、
ことを特徴とする方法。
【請求項１４】
前記ナノ粒子懸濁液を、例えば凍結乾燥によって、乾燥させて粉末を形成するステップをさらに含むことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記混合物は、水をさらに含むことを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記混合物は、約５％から約５０％の式１の前記化合物と、約０．１％から約５％の前記表面安定化剤とを含むことを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記粉末は、約７５％から約９０％の式１の前記化合物と、約１０％から約２５％の前記表面安定化剤とを含むことを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
式（１）の前記化合物と表面安定化剤の比が、約１００：１から約５：１であることを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記縮小するステップは、粉砕、均質化、または沈殿を含むことを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記縮小するステップは、湿式粉砕を含むことを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記縮小するステップは、約６００分間の粉砕を含むことを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記縮小するステップは、約３６０分間の粉砕を含むことを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
粒子の径を縮小するステップの後、溶媒を用いて希釈するステップをさらに含むことを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項２４】
式１の前記化合物は、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンであることを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項２５】
前記粒子の径を縮小するステップの後、前記混合物に水を添加するステップをさらに含むことを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項２６】
前記粒子の径を縮小するステップの後、前記混合物にポロキサマー溶液を添加するステップをさらに含むことを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１に記載の組成物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤は、水を含むことを特徴とする請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含むことを特徴とする請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
経口剤形であることを特徴とする請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
非経口剤形であることを特徴とする請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
約０．０１から約２５０ｍｇの式（１）の前記化合物を含むことを特徴とする請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
約０．００１％から約９９．５％の式（１）の前記化合物を含むことを特徴とする請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物を、それを必要としている動物に投与するステップを含むことを特徴とする腫瘍を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性剤がピペラジン化合物であるナノ粒子状組成物、およびナノ粒子状組成物を含む医薬組成物に関する。より詳細には、本発明は、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンを含むナノ粒子状組成物である。本組成物および製剤は、癌を含む増殖性疾患の治療および予防に有用である。
【背景技術】
【０００２】
１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンならびに関連する化合物および誘導体は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれている特許文献１に記載されている。このような化合物は、著しい抗腫瘍活性を有することが示されてきたが、水への溶解度が非常に低い。
【０００３】
ナノ粒子状組成物を製造する方法は、例えば、特許文献２および特許文献３の双方に「Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｇｒｉｎｄｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ」が、特許文献４に「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｇｒｉｎｄｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ」が、ならびに特許文献５に「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ」が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第８，３１４，１００号明細書
【特許文献２】米国特許第５，５１８，１８７号明細書
【特許文献３】米国特許第５，８６２，９９９号明細書
【特許文献４】米国特許第５，７１８，３８８号明細書
【特許文献５】米国特許第５，５１０，１１８号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ「Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」：１９th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ，，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ＵＳ，Ｖｏｌ．１，ｐ．１９５（１９９５）
【非特許文献２】Ｊ．Ｃｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｅ．Ｓｉｎｇｅｒ「Ｃａｔｉｏｎｉｃ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」：Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（１９９４）
【非特許文献３】Ｐ．ａｎｄ  Ｄ．Ｒｕｂｉｎｇｈ，Ｅｄ．，「Ｃａｔｉｏｎｉｃ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」：Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（１９９１）
【非特許文献４】Ｊ．Ｒｉｃｈｍｏｎｄ「Ｃａｔｉｏｎｉｃ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ：Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」：Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（１９９０）
【非特許文献５】「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、活性剤としての、本明細書中の他の箇所で記載されるような１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンまたは関連する化合物および誘導体などのピペラジン化合物と、少なくとも１つの表面安定化剤とのナノ粒子状組成物に関する。
【０００７】
本発明は、本発明のナノ粒子状組成物を製造する方法にも関する。このような方法は、ナノ粒子状組成物を得るのに十分な時間および条件下で、ピペラジン化合物の粒子の径を縮小するステップと、その組成物を少なくとも１つの表面安定化剤と接触させるステップとを含む。ピペラジン粒子の径を縮小する前、途中、または後に１または複数の表面安定化剤をピペラジンと接触させることができる。
【０００８】
本発明はまた、本発明のナノ粒子状組成物および薬学的に許容される担体ならびに任意の薬学的に許容される賦形剤の医薬組成物にも関する。
【０００９】
本発明はまた、増殖性疾患または持続性の血管形成と関連する、または、それが引き金となる疾患などの状態を、本発明の医薬組成物を使用して治療する方法にも関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）式（１）の化合物
【００１１】
【化１】
2016515588.tif 000003
【００１２】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
ＸおよびＹは、独立に、ＮまたはＣ−Ｒ7であり；
可変基Ｒ1とＲ2は、
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンであって、Ｒ2はＦであり；または
Ｒ1はＦであって、Ｒ2は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンである；組み合わせであり、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立に、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルカルボニル、シアノ、ニトロ、またはハロゲンである］
のナノ粒子と；
（ｂ）少なくとも１つの表面安定化剤と、
を含み、
ナノ粒子が約１，０００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径（Ｄ５０）を有する、
安定した組成物である。式（１）の化合物は、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンであり得る。少なくとも１つの表面安定化剤は、ポリエチレンオキシドとポリプロピレンオキシドとのブロック共重合体などの少なくとも１つのポリアルキレンオキシドであり得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの表面安定化剤は、ポロキサマー４０７またはポロキサマー３３８などのポロキサマーである。いくつかの実施形態において、組成物は液体懸濁液の形態である。他の実施形態において、組成物は乾燥固体の形態である。いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも４週間の貯蔵後も安定している。他の実施形態において、特に粉末の形態のものは、組成物は少なくとも６カ月間の貯蔵後も安定している。いくつかの実施形態において、有効メジアン粒子径は約５００ｎｍ未満である。組成物中の式（１）の化合物と表面安定化剤の比（ｗｔ／ｗｔ）は、約１００：１から約５：１であり得る。
【００１３】
別の態様において、本発明は、例えば、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの式（１）の化合物、または、薬学的に許容されるその塩および（ｂ）少なくとも１つの表面安定化剤の粒子の混合物を調製するステップと、約１，０００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径を有するナノ粒子懸濁液を得るのに十分な条件下で式（１）の化合物の粒子の径を縮小して安定した組成物を形成するステップとにより、上記の通りの組成物を製造する方法である。この方法は、例えば、凍結した懸濁液を凍結乾燥することによって、ナノ粒子懸濁液を乾燥して粉末を形成するステップさらに含み得る。方法はまた、混合物中に水を含み得る。混合物は、約５％から約５０％の式（１）の化合物と、約０．１％から約５％の表面安定化剤、または、典型的には固体形態で約７５％から約９０％の式（１）の化合物と、約１０％から約２５％の表面安定化剤とを含み得る。式（１）の化合物と表面安定化剤の比は、約１００：１から約５：１であり得る。粒子の径を縮小することは、粉砕、均質化、または沈殿、例えば、湿式粉砕（ｗｅｔ  ｍｉｌｌｉｎｇ）によって実現することができる。粉砕は、所望の径を得るのに適切な任意の時間、例えば、約６００分間、または約３６０分間、またはその間の任意の時間とすることができる。粒子の径を縮小するステップの後、懸濁液を水などの溶媒を用いて希釈することができる。粒子の径を縮小するステップの後、混合物にポロキサマー溶液を添加することもできる。
【００１４】
別の態様において、本発明は、上述のナノ粒子組成物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物である。少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤は、例えば、水またはヒドロキシプロピルメチルセルロースとすることができる。その組成物は、経口剤形または非経口剤形とすることができ、例えば、約０．０１から約２５０ｍｇの式（１）の化合物を含むことができ、例えば、約０．００１％から約９９．５％の式（１）の化合物を含むことができる。
【００１５】
本発明はまた、上述の組成物または医薬組成物を、それを必要としている動物に投与することにより、腫瘍を治療する方法も含む。
【００１６】
さらなる目的および利点、ならびに好ましい実施形態の構造および機能は、明細書、図面、および実施例の検討から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの４００倍の倍率の図である。
【図２】１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの４００倍の倍率、偏光での図である。
【図３】１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの熱重量分析のグラフである。
【図４】１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの示差走査熱量測定サーモグラフによるグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の実施形態を以下に詳述する。実施形態を説明する際、理解しやすいように、特定の専門用語が使用される。しかしながら、本発明は、そのように選択された特定の専門用語に限定されるように意図されていない。特定の例示的実施形態を扱うが、これは、例示の目的にのみ行われることを理解されたい。当業者であれば、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、他の成分および構成を使用することができることを認識するであろう。本明細書で引用されたすべての参考文献は、参照により、それぞれが個別に組み込まれていたかのように、組み込まれている。
【００１９】
式（１）のピペラジン化合物
【００２０】
【化２】
2016515588.tif 000004
【００２１】
［式中、
ＸおよびＹは、独立に、ＮまたはＣ−Ｒ7であり；
可変基Ｒ1とＲ2は、
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンであって、Ｒ2はＦであり；または
Ｒ1はＦであって、Ｒ2は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンである；組み合わせであり、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立に、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルカルボニル、シアノ、ニトロ、またはハロゲンである］
は、超増殖性障害の治療に有用であることが示された。例えば、このような化合物は、腫瘍、特に腫瘍（または癌および／またはあらゆる転移）を治療するために使用することができる。式（１）の化合物で治療できる腫瘍としては、乳癌、肺癌、食道、胃、小腸、大腸および直腸癌を含む消化器癌、神経膠腫、骨、軟骨、軟部組織、筋肉、血管およびリンパ管に関与するものなどの肉腫、卵巣癌、骨髄腫、リンパ腫、白血病、子宮頸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、中皮腫、腎臓癌、尿管、膀胱および尿道癌、結腸癌、結腸直腸癌、肝臓癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、ならびに黒色腫である腫瘍が含まれる。式（１）の化合物を用いる有効な治療は、その化合物を腫瘍に送達することができる組成物を必要とする。本発明の化合物を癌細胞株に対してｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験し、癌細胞増殖の抑制において活性があることが示された。例えば、特許文献１は、本発明の化合物が、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（マナッサス、バージニア州）からのヒトＯＶＣＡＲ−３（卵巣）、ＭＣＦ−７（乳房、ホルモン依存性）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳房）、ＰＣ３（前立腺）、ＨｅｐＧ２（肝臓）、Ａ５４９（肺）、Ｃａｋｉ−１（腎臓）、ＨＴ−２９（結腸）、ＨＣＴ１１６（結腸）およびＰＡＮＣ−１（膵臓）；ＤＳＭＺ（ドイツ）からのＭＫＮ−４５（胃）；米国立癌研究所（ベセスダ、メリーランド州）からのＵＭＲＣ２（腎臓）；韓国細胞株バンク（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｂａｎｋ）（ソウル、韓国）からのＨｕｖｅｃ（ヒト臍静脈内皮細胞）、ＨＥＫ２９３（ヒト胚性腎臓）およびＳＫ−ＯＶ−３（卵巣（ｏｖｅｒｙ））に対して活性を示したことを記載している。
【００２２】
式（１）の化合物の一例は、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジン（化合物Ａ）である：
【００２３】
【化３】
2016515588.tif 000005
【００２４】
化合物Ａは水への溶解度が非常に低く０．１μｇ／ｍｌ未満である。この水への溶解度が非常に低いことで、式（１）の化合物および関連する化合物を送達することが困難となり、臨床開発も限られることから、それゆえ臨床使用に適切な製剤の開発に対する要望が生じている。本発明は、約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で化合物の安定した懸濁液を提供することができる適切な製剤、または経口送達され得るか、または、安定した懸濁液を調製するのに使用することができる乾燥製剤を得るという目的で開発された。本発明は主として１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンに関して記載し、例示しているが、本発明は式（１）の他の化合物に適用できることが理解されるべきである。
【００２５】
バイオアベイラビリティを高めるために、本製剤は、試験中に潜在的な毒性干渉を抑えるために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）最小量の賦形剤を使用して懸濁液中のピペラジン化合物のサブミクロン粒子径分布を得るという考えに基づいて開発された。試作製剤の試験対象物は、最高度のクリーンな条件の下で（ｕｎｄｅｒ  ｂｅｓｔ−ｃｌｅａｎ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）スケールアッププロセス（ｓｃａｌｅｄ−ｕｐ  ｐｒｏｃｅｓｓ）から作製される。加えて、残りの懸濁液は、例えば、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの固形の投与製剤を開発する今後の研究用の主成分としての役割を果たすことが意図されている。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「活性剤」、「薬物」、「医薬品有効成分」または「ＡＰＩ」は、式（１）の化合物
【００２７】
【化４】
2016515588.tif 000006
【００２８】
［式中、
ＸおよびＹは、独立に、ＮまたはＣ−Ｒ7であり；
可変基Ｒ1とＲ2は、
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンであって、Ｒ2はＦであり；または
Ｒ1はＦであって、Ｒ2は、水素、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、またはハロゲンである；組み合わせであり、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立に、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルカルボニル、シアノ、ニトロ、またはハロゲンである］
を指す。式（１）の化合物の例示的実施形態は以下のものを含む：
【００２９】
【表１】
2016515588.tif 000007
【００３０】
活性剤は、遊離形態または薬学的に許容される塩形態、それらの可能なエナンチオマー、ジアステレオマー（ｄｉａｓｔｅｒｏｍｅｒｓ）および関係する混合物の形態、多形、無定形、部分的無定形の形態、溶媒和物（水和物を含む）、それらの活性代謝物およびプロドラッグの形態であり得る。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「水難溶性」は、一般に当分野に依る意味を有する。例えば、水難溶性とは、２０℃で１％未満、例えば、０．０１％の重量／容量の水への溶解度を有することを意味し、すなわち、非特許文献１に記載されているように「やや溶けにくいから非常に溶けにくい薬物」を意味し得る。他の同様の一般に認められている定義は、その用語に包含される。
【００３２】
「約１，０００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径」により、ナノ粒子状活性剤粒子の少なくとも５０％が、当業者によく知られている従来の粒子径測定技術により測定して、重量平均粒子径に基づいて決定された場合、約１，０００ｎｍ未満の粒子径を有することを意味する。このような技術は、光散乱法、顕微鏡検査法、ならびに沈降場流動分画、光子相関分光学、光散乱およびディスク遠心分離などの他の従来の技術を含む。理解されるように、他の有効粒子径に関する同様の言い回しは同様の定義を有する。ミーン（ｍｅａｎ）またはアベレージ（ａｖｅｒａｇｅ）の平均粒子径は同様に求めることができる。粒子径の名称および粒子径の他の説明は、当業者によって理解されるであろう。例えば、Ｄ５０、すなわち、メジアンは、ナノ粒子状活性剤粒子の集団を有する組成物であって、その集団のうち半数の直径がこの値未満であることを示す。同様に、Ｄ９０は、分布の９０％の直径がより小さい粒子径を有し、１０％がより大きい粒子径を有する集団を示す。Ｄ１０は、粒子の１０％の直径が既述の値よりも小さく、粒子の９０％が既述の値よりも大きい集団を示す。
【００３３】
本明細書で提供される場合、ナノ粒子製剤または組成物についての用語「有効量」または「薬学的有効量」は、非毒性であるが、所望の応答および相当する治療的効果をもたらすためのナノ粒子製剤または組成物の十分な量で、対象の有効な治療に十分な量を指す。以下に指摘する通り、正確な必要量は、対象の種、年齢および一般的な状態、治療する状態の重症度、投与の様式などに依存して、対象毎に異なる。任意の個々の症例における適切な「有効」量は、日常的な実験を使用して当業者により決定できる。
【００３４】
句「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」は、生物学的にまたは他の点で望ましくないものではない物質を意味し、すなわち、その物質は、何ら望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、またはそれが含有される組成物のいずれの成分とも有害な方法で相互作用することなく、ナノ粒子製剤または組成物と共に個体に投与できる。
【００３５】
本明細書で記載される医薬品有効成分（ＡＰＩ）である、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンならびに関連する化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの試験において潜在的に腸に非常に吸収されやすく、動物モデル試験において良好な経口バイオアベイラビリティを示す固形腫瘍の抗癌治療薬として研究が進められている。１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの低い水溶性により、意図した投与量レベルを達成するために大量の１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジン溶液を投与する必要性を避けるべく、サブミクロン懸濁液の生成が実行可能な経口送達オプションとして開発される必要性があった。
【００３６】
例示的実施形態において、本発明は式（１）の化合物、例えば、約１，０００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径（Ｄ５０）を有する１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジン（化合物Ａ）と、好ましくは少なくとも１つの表面安定化剤との安定したナノ粒子状組成物である製剤である。組成物は、典型的には水中で懸濁液の形態、または乾燥粉末の形態であり得る。乾燥形態での本発明の例示的実施形態において、ナノ粒子状組成物は、再分散される式（１）の化合物の有効メジアン粒子径が約１，０００ｎｍ未満となるように再分散され得る。これは、類似したナノ粒子状の粒子径を有する懸濁液のものと同様の便益をもたらすように、ナノ粒子状組成物を実質的に小さな粒子径にまで再分散させることを可能にする点において重要である。
【００３７】
例示的実施形態において、懸濁液中の粒子は、最初に調製されたものとして、再分散された固体として、または固体形態のいずれであっても、約１，０００ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、約２５０ｎｍ未満、または約１００ｎｍ未満の有効メジアン粒子径を有し得る。例示的実施形態において、懸濁液中の粒子は、最初に調製された、または、再分散された固体として、または固体形態のいずれであっても、約１，０００ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、約２５０ｎｍ未満、または約１００ｎｍ未満の有効平均粒子径を有し得る。例示的実施形態において、メジアンまたは平均粒子径は、例えば、約１００ｎｍから約１，０００ｎｍ、約１００ｎｍから約５００ｎｍ、約２００ｎｍから約１，０００ｎｍ、約２００ｎｍから約５００ｎｍ、約１００ｎｍから約２００ｎｍ、または約２５０ｎｍから約５００ｎｍであり得る。例示的実施形態において、懸濁液中の粒子は、最初に調製されたものとして、再分散された固体として、または固体形態のいずれであっても、約１００ｎｍ超、約２５０ｎｍ超、または約５００ｎｍ超の有効メジアンまたは平均粒子径を有し得る。
【００３８】
本発明によると、活性剤は、組成物または製剤の乾燥重量で約０．００１％から約９９．５％、約０．１％から約９５％の重量で存在し得る。いくつかの実施形態において、活性剤は、組成物または製剤の乾燥重量で約０．５％から約９０％の量で存在する。いくつかの実施形態において、活性剤は、約５％から約５０％、例えば、約５％から約４０％、約１０％から約３０％、または約１０％から約４０％の量で存在し得る。懸濁液の形態である本発明のいくつかの実施形態において、活性剤は、約５％から約５０％、例えば、約５％から約４０％、約１０％から約３０％、または約１０％から約４０％の量で存在し得る。他の例示的実施形態において、活性剤は、約７５％から約９９％、例えば、約７５％から約９０％、約８０％から約９９％、または約９０％から約９９％の量で存在し得る。乾燥形態の組成物の他の例示的実施形態において、活性剤は、約７５％から約９９％、例えば、約７５％から約９０％、約８０％から約９９％、または約９０％から約９９％の量で存在し得る。乾燥形態の組成物の他の例示的実施形態において、活性剤は、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９９％の量で存在し得る。
【００３９】
ＡＰＩを特徴付ける方法は、比較的低エネルギーのものを含む全ての粉砕プロセスにおいて粒子レベルでの局所加熱を生じさせることができるよう光学的方法のみならず、熱的方法をも含む。温度データ（ｔｈｅｒｍａｌ  ｄａｔａ）は、活性剤が粉砕応力下で粒子径縮小にとって有害となり得る何らかの温度遷移を示しているかどうかを決定するために使用され得る。
【００４０】
最も簡単で最も実用的な径縮小法として、媒体粉砕を選択して試験を開始した。媒体粉砕では、ＡＰＩを粉砕助剤、典型的には界面活性剤と混合して、粉砕媒体、すなわち、硬い不活性物質の球形ビーズとのスラリーを作製する。粒子は、スラリーを撹拌することにより、すなわち、低エネルギー手段、例えば、ローラーミル（ｒｏｌｌｅｒ  ｍｉｌｌ）の容器内でそれを回転させることにより、または高エネルギー手段、例えば、スピンドルミル（ｓｐｉｎｄｌｅ  ｍｉｌｌ）として知られる回転式撹拌機を用いてそれを混合することのいずれかによって、機械的な摩耗を介して粉砕される。
【００４１】
いくつかのＧＲＡＳ粉砕助剤が経口剤形におけるそれらの適合性を理由に選択され、異なるレベルのＡＰＩを用いた異なる濃度でそれらの粉砕有効性を試験した。これらの開発サンプルから、有望な候補を選択し、その後、粒子径安定性を時間を追って観察した。これらから最も有力な候補をスケールアップし、ＧＬＰの最高度のクリーンな条件（ＧＬＰ  ｂｅｓｔ−ｃｌｅａｎ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）の下での毒性試験用にＡＰＩを大量に処理するために使用した。
【００４２】
仮に媒体粉砕が有用ではないことが明らかになった場合、マイクロフルイダイゼーション（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）および核生成（ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ）または沈殿などの径縮小の他の方法が代替となるものとみなされて、本発明の実施形態において使用され得る。マイクロフルイダイゼーションは、ＡＰＩの懸濁液を高圧（最大で２５，０００ｐｓｉ）下で狭い開口を通過させ、それによって生じたせん断力を用いて粒子を粉砕することを含む。沈殿により粒子のサイズを縮小するために、ＡＰＩを好適な溶媒に溶解し、その後、溶液を不安定にする混和性の貧溶媒と組み合わせて、ＡＰＩを沈殿させる。溶媒／貧溶媒の組合せの割合の変化、ならびに分離剤の添加および高エネルギーの崩壊によって、径が縮小された粒子を製造することができる。
【００４３】
本発明において、式（１）の化合物（例として化合物Ａ）を処理するためにローラー粉砕（ｒｏｌｌｅｒ  ｍｉｌｌｉｎｇ）を選択した。それは、それが、たとえ小さな試験バッチでも高い処理収率がもたらされるのみならず、非常に効力のあるＡＰＩへの個人暴露の可能性を最小限にする、粒子径縮小の複雑ではない手順であるからである。微生物汚染の可能性を軽減するために精製水の代わりに注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）を使用した。
表面安定化剤
本発明において用いることができる表面安定化剤は、既知の有機および無機医薬賦形剤を含むが、これらに限定されない。このような賦形剤は種々のポリマー、低分子量オリゴマー、天然産物および界面活性剤を含む。表面安定化剤は、非イオン性タイプ、カオチン性タイプ、アニオン性タイプ、ないし双性イオン性タイプ界面活性剤を含む。非イオン性表面安定化剤の例は、エトキシル化脂肪族アルコール、ポリオキシエチレン界面活性剤、カルボン酸エステル、ポリエチレングリコールエステル、無水ソルビトールエステルおよびそのエトキシル化誘導体、脂肪酸のグリコールエステル、カルボン酸アミド、モノアルカノールアミン縮合物およびポリオキシエチレン脂肪酸アミドを含む。カオチン性表面安定化剤の例は、第四級アンモニウム塩、アミド結合を有するアミン、ポリオキシエチレンアルキルおよび脂環式アミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラキス置換型エチレンジアミン、ならびに２−アルキル１−ヒドロキシエチル２−イミダゾリンを含む。アニオン性表面安定化剤の例は、カルボン酸塩、スルホン酸塩、石油スルホン酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、オレフィンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、硫酸塩、硫酸化天然油脂、硫酸化エステル、硫酸化アルカノールアミドおよびアルキルフェノール、エトキシル化および硫酸化を含む。双性イオン性表面安定化剤の例は、Ｎ−ココ３−アミノプロピオン酸／ナトリウム塩、Ｎ−獣脂３−イミノジプロピオン酸、二ナトリウム塩、Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ジメチル−Ｎ−９オクタデセニル水酸化アンモニウム、およびＮ−ココアミドエチル−Ｎ−ヒドロキシエチルグリシン、ナトリウム塩を含む。
【００４４】
表面安定化剤の代表例は、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドの共重合体であるポロキサマー、ゼラチン、カゼイン、レシチン（フォスファチド）、デキストラン、アカシアゴム、コレステロール、トラガカント、ステアリン酸、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、モノステアリン酸グリセロール、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ワックス、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、マクロゴールエーテル、例えばセトマクロゴール１０００）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ２０（登録商標）およびＴｗｅｅｎ（登録商標）のような、例えば、市販のＴｗｅｅｎｓ（登録商標）（ＩＣＩ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））；ポリエチレングリコール（例えば、Ｃａｒｂｏｗａｘ  ３５５０（登録商標）およびＣａｒｂｏｗａｘ  ９３４（登録商標）（Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ））、ポリオキシエチレンステアレート、コロイド状二酸化ケイ素、ホスフェート、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、非結晶性セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、エチレンオキシドおよびホルムアルデヒドとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェノールポリマー（別名チロキサポール、スペリノンおよびトリトン）；ならびにポロキサミンを含む。
【００４５】
例示的な表面安定化剤は、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １０５（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ３５）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １０８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ３８）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １２４（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ４４ＮＦ）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １８４（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ−６４）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８ＮＦ）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ２３７（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ８７ＮＦ）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ２３８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ８８）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ３３８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１０８ＮＦ）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ４０１（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ１２１）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  ４０７（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７ＮＦ）および他のポロキサマー製品などのＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）；プロピレンオキシドおよびエチレンオキシドのエチレンジアミンへの連続的添加に由来する４官能性ブロック共重合体であるＴｅｔｒｏｎｉｃ  ９０４、９０８、１１０７および９０Ｒ４などのＴｅｔｒｏｎｉｃｓ（登録商標）（ＢＡＳＦ  Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．））；Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  １５０８０（Ｔ−１５０８）（ＢＡＳＦ  Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、アルキルアリールポリエーテルスルホネートであるＴｒｉｔｏｎｓ  Ｘ−２０００（Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａａｓ）；ステアリン酸スクロースと二ステアリン酸スクロースとの混合物であるＣｒｏｄｅｓｔａｓ  Ｆ−１００（登録商標）（Ｃｒｏｄａ  Ｉｎｃ．）；ｐ−イソノニルフェノキシポリ−（グリシドール）、別名Ｏｌｉｎ−１０Ｇ（登録商標）またはＳｕｒｆａｃｔａｎｔ  １０−Ｇ（登録商標）（Ｏｌｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．）；Ｃｒｏｄｅｓｔａｓ  ＳＬ−４００（Ｃｒｏｄａ，Ｉｎｃ．）；およびＣ18Ｈ37ＣＨ2（ＣＯＮ（ＣＨ3）−ＣＨ2（ＣＨＯＨ）4（ＣＨ2ＯＨ）2であるＳＡ９ＯＨＣＯ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．）；デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−デシル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ｎ−デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド；ｎ−ドデシル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシド；ヘプタノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−ヘプチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ｎ−ヘプチル−β−Ｄ−チオグルコシド；ｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシド；ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−ノイル−β−Ｄ−グルコピラノシド；オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド；ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；オクチル−β−Ｄ−チオグルコピラノシド；ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−コレステロール、ＰＥＧ−コレステロール誘導体、ＰＥＧ−ビタミンＡ、ＰＥＧ−ビタミンＥ、リゾチーム、ビニルピロリドンと酢酸ビニルとのランダム共重合体などを含む。
【００４６】
有用なカチオン性表面安定化剤の例は、ポリマー、バイオポリマー、多糖類（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）、セルロース誘導体、アルギネート、リン脂質、および非重合化合物、例えば双性イオン性安定化剤、ポリ−ｎ−メチルピリジニウム、アンスリルピリジニウムクロライド（ａｎｔｈｒｙｕｌ  ｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、カチオン性リン脂質、キトサン、ポリリシン、ポリビニルイミダゾール、ポリブレン、ポリメチルメタクリレートトリメチルアンモニウムブロマイド（ＰＭＭＴＭＡＢｒ）、ヘキシルデシルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＨＤＭＡＢ）、およびポリビニルピロリドン−２−ジメチルアミノエチルメタクリレートジメチルスルフェートを含むが、これらに限定されない。このような例示的カチオン性表面安定化剤および他の有用なカチオン性表面安定化剤は、非特許文献２；非特許文献３；および非特許文献４に記載されている。
【００４７】
これらの表面安定化剤のほとんどが既知の医薬賦形剤であり、特に参照により組み込まれる、米国製薬協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）と英国製薬学会（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ）によって共同出版された、非特許文献５に詳細に記載されている。表面安定化剤は市販されているおよび／または当分野で既知の技術により調製できる。
【００４８】
２以上の表面安定化剤の組合せを本発明において使用できる。主たる例示的表面安定化剤は、ポロキサマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ビニルピロリドンと酢酸ビニルとのランダム共重合体またはそれらの組合せを含むが、これらに限定されない。二次的な例示的表面安定化剤は、ラウリル硫酸ナトリウムおよびジオクチルスルホスクシネートを含むが、これらに限定されない。
【００４９】
例示的実施形態において、少なくとも１つの表面安定化剤はポロキサマーである。本発明にとって有用な例示的ポロキサマーは、約９，０００から約２０，０００の分子量を有し得る。本発明において使用することができる具体的な例示的ポロキサマーは、ポロキサマー４０７およびポロキサマー３３８または相当するＰｌｕｒｏｎｉｃｓなどの同等の物質を含む。
【００５０】
少なくとも１つの表面安定化剤の濃度は、活性剤および少なくとも１つの表面安定化剤の他の賦形剤を含まない総組合せ乾燥重量に基づいて、重量で、約０．５％から約９９．９９９％、約５．０％から約９９．９％、約１．０％から約９９．０％、または約１０％から約９９．５％で変わり得る。２つ以上の表面安定化剤の組合せを組成物において用いるとき、少なくとも１つの主たる表面安定化剤の濃度は、活性剤の他の賦形剤を含まない総組合せ乾燥重量に基づいて、重量で、約０．０１％から約９９．５％、約０．１％から約９５％、または約０．５％から約９０％で変わり得る。
【００５１】
いくつかの実施形態において、表面安定化剤は、約０．１％から約５％、例えば、約０．１％から約２．５％、約０．１％から約１％、または約０．２５％から約１％の量で存在し得る。懸濁液の形態である本発明のいくつかの実施形態において、表面安定化剤は、約０．１％から約５％、例えば、約０．１％から約２．５％、約０．１％から約１％、または約０．２５％から約１％の量で存在し得る。懸濁液の形態である本発明のいくつかの実施形態において、表面安定化剤は、約０．１％、約０．０２５％、約１％、約２％、または約２．５％の量で存在し得る。他の例示的実施形態において、表面安定化剤は、約１％から約２０％、例えば、約１０％から約２５％、約１％から約２０％、または約１％から約１０％の量で存在し得る。乾燥形態の組成物の他の例示的実施形態において、表面安定化剤は、約１％から約２０％、例えば、約１０％から約２５％、約１％から約２０％、または約１％から約１０％の量で存在し得る。乾燥形態の組成物の他の例示的実施形態において、表面安定化剤は、約２５％、約２０％、約１０％、約５％、または約１％の量で存在し得る。
【００５２】
本発明の実施形態は、約１００：１から約５：１の範囲の活性剤と表面安定化剤の比を含み得る。いくつかの実施形態において、活性剤と表面安定化剤の比は、約２００：１から約１：１、約１００：１から約１０：１、約２０：１から約５：１または約１５：１から約１０：１である。例示的実施形態において、活性剤と表面安定化剤の比は、約１００：１、約５０：１、約２５：１、約１０：１、約１２．５：１、約５：１である。
ナノ粒子組成物を調製するための方法
本発明のナノ粒子状組成物は、例えば、粉砕、均質化または沈殿技術を使用して製造できる。
【００５３】
ＡＰＩ形態は、光学顕微鏡検査（例えば、Ｃｌｅｍｅｘ  ＪＳ−２０００コントローラ付きのＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５１顕微鏡）によって特徴付けることができる。示差走査熱量測定（例えば、Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＳＣ  １）および熱重量分析（例えば、Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  ＴＧＡ／ＤＳＣ  １）を使用して、物質の熱特性を測定することができる。粒子径測定は、界面活性剤が試験サンプル中に存在している場合には水中に、他の分散剤が存在しなかった場合にはポロキサマーの希釈溶液中に、物質を分散させることによって、例えば、レーザー回折（例えば、Ｈｏｒｉｂａ  ＬＡ−９５０Ｖ２）により、隈なく行うことができる。
【００５４】
試作製剤は、直径０．５ｍｍのイットリア安定化ジルコニアセラミック粉砕媒体（例えば、Ｔｏｓｏｈから入手）のスラリーを使用して、ローラーミル（Ｕ．Ｓ．  Ｓｔｏｎｅｗａｒｅ）上のガラスサンプルバイアル（ｇｌａｓｓ  ｓａｍｐｌｅ  ｖｉａｌｓ）内で処理する。ＧＬＰ粉砕は、タイプ１ホウケイ酸ガラスの２Ｌメディアボトル内で行う。試験対象物質の調製は、すべての接触する物質および器具を７０％イソプロパノールの塗布またはオートクレーブ処理のいずれかによって滅菌した「最高度のクリーンな（ｂｅｓｔ−ｃｌｅａｎ）」条件の下で行う。このようなすべての調製を、無菌技術を用いて滅菌ラミナーフローフード（ｓａｎｉｔｉｚｅｄ  ｌａｍｉｎａｒ  ｆｌｏｗ  ｈｏｏｄ）（Ａｉｒｃｌｅａｎ  ６００）内で行う。
【００５５】
ナノ粒子状分散を得るための活性剤の粉砕は、活性剤の粒子を、その活性剤が難溶性である液体分散媒へ分散させること、次いで、活性剤の粒子径を所望の有効平均粒子径に縮小するために粉砕媒体の存在下で機械的手段を適用することを含む。本分散媒は、例えば、水、エタノール、ｔ−ブタノール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヘキサンまたはグリコールであり得る。
【００５６】
実施形態において、活性剤の水性ナノ粉砕は、表面安定化剤のうち親水性安定化剤の存在下で行う。例えば、活性剤粒子は、少なくとも１つの表面安定化剤の存在下で径を縮小することができる。あるいは、活性剤粒子を摩擦の後、１または複数の表面安定化剤と接触させてよい。希釈剤のような他の化合物を活性剤／表面安定化剤組成物に、径縮小プロセスの前、途中または後に添加してよい。分散は連続的にまたはバッチモードで製造することができる。
【００５７】
他の実施形態において、ナノ粒子状組成物はミクロ沈殿により調製する。これは、１または複数の表面安定化剤および１または複数のコロイド状安定性増強界面活性剤の存在下、極微量の毒性溶媒または可溶性重金属不純物が一切存在せずに、難溶性活性剤の安定した分散を調製する方法である。このような方法は、例えば、（１）適当な溶媒へ活性剤を溶解するステップ；（２）ステップ（１）からの製剤を少なくとも１つの表面安定化剤を含む溶液へ添加するステップ；および（３）ステップ（２）からの製剤を適当な非溶媒または抗溶媒を使用して沈殿させるステップを含む。本方法は、存在するのであれば、任意の形成された塩の透析またはダイアフィルトレーションによる除去、および従来の手段による分散の濃縮が続く場合がある。
【００５８】
さらに他の実施形態において、ナノ粒子組成物は、均質化法により調製する。このような方法は、活性剤粒子を液体分散媒に分散させ、続いて活性剤の粒子径を所望の有効平均粒子径にまで縮小するために分散を均質化に付するステップを含む。活性剤粒子は少なくとも１つの表面安定化剤の存在下で径を縮小してよい。あるいは、活性剤粒子を摩擦の前または後に１または複数の表面安定化剤と接触させてよい。希釈剤のような他の化合物を活性剤／表面安定化剤組成物に、径縮小プロセスの前、途中または後に添加してよい。分散は連続的にまたはバッチモードで製造してよい。
【００５９】
本発明による組成物は、懸濁液の形態または乾燥粉末として調製され得る。懸濁液の調製に関して、前述の技術のうちの１つを用いて活性剤の径を縮小する。径縮小は、活性剤単独、溶媒、例えば水、または、上述の別の溶媒に分散された活性剤、表面安定化剤と組み合わせた活性剤または活性剤と溶媒と表面安定化剤との組合せを用いることによって実現することができる。径縮小は、活性剤の所望の粒子径が実現されるまで続けられる。追加の表面安定化剤を添加して最終的な所望の濃度を実現することができる。さらに、望まれる場合、懸濁液を好適な溶媒で希釈して活性剤の所望の濃度を得ることができる。径縮小の際に溶媒が存在する場合、径縮小の際に使用される溶媒と同じまたは異なり得る追加の溶媒を添加することにより希釈が実現され得る。本明細書で使用される場合、用語溶媒は、単一の溶媒または溶媒の混合物を含む。上述したように、径縮小プロセス中に追加の成分が存在してもよいし、または望まれる場合、後から添加されてもよい。
【００６０】
例示的実施形態において、懸濁液は、適切な容器内で界面活性剤、例えばポロキサマー４０７またはポロキサマー３３８などのポロキサマーを、精製水などの溶媒の最終的な量のおよそ３分の１に溶解させることによって調製する。活性剤、例えば、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンは、界面活性剤の溶液中に懸濁させる。粉砕媒体を容器内に添加する。所望の粒子径が得られるまで懸濁液を径縮小に付す。例えば、レーザー回折などで測定された粒子径分布のＤ５０またはＤ９０が１，０００ｎｍ未満となるまで懸濁液を粉砕する。その後、懸濁液を粉砕媒体から除去する。媒体をリンスし、懸濁液を溶媒で希釈して、所望の最終的な濃度、例えば１０％の活性剤を得る。調製後、粒子径および濃度が所望のレベルであることを確認するために、懸濁液を分析してもよい。
【００６１】
乾燥製剤は、懸濁液から溶媒を除去することによって得ることができる。溶媒除去は、径縮小直後またはさらなる希釈後のいずれかに得られる懸濁液において行うことができる。安定した製剤をもたらす任意の適切な乾燥の方法を用いてもよい。乾燥の例示的方法は、噴霧乾燥、超臨界乾燥、ドラム乾燥、誘電乾燥、通風乾燥（ｎａｔｕｒａｌ  ａｉｒ  ｄｒｙｉｎｇ）、Ｒｅｆｒａｃｔａｎｃｅ  Ｗｉｎｄｏｗ（商標）乾燥、Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｚｏｎｅ  Ｄｒｙｉｎｇ（商標）および凍結乾燥（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））を含む。乾燥の例示的方法において、懸濁液を液体窒素を用いて予備凍結させることにより凍結乾燥させ、予備冷却させた棚上で大量に凍結乾燥させて乾燥粉末を生成する。
安定性
本発明による製剤および組成物は安定的であり、特に貯蔵時において安定している。本文脈において、安定した製剤または組成物は、貯蔵時に活性剤が劣化しないまたは分解しない、および粒子径分布が大幅に変化しない製剤または組成物である。貯蔵時にメジアン粒子径が１，０００ｎｍ超まで増加しない場合、粒子径は大幅に変化しない。例示的実施形態において、メジアン粒子径は、貯蔵時に、９００ｎｍ超、８００ｎｍ超、７００ｎｍ超、６００ｎｍ超、または５００ｎｍ超まで増加しない。本明細書で使用される場合、貯蔵後に当初存在していた活性剤の少なくとも９５％が残存する場合、活性剤は貯蔵時に劣化または分解しない。例示的実施形態において、貯蔵後に当初の量の活性剤の少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が存在している。
【００６２】
安定性試験のための貯蔵条件は変更され得、試験は典型的な貯蔵条件下または過酷な（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ）貯蔵条件下で実施される場合がある。本明細書で使用される場合、貯蔵条件下で安定している、または「貯蔵安定性のある（ｓｔｏｒａｇｅ  ｓｔａｂｌｅ）」は、５℃で１週間貯蔵した場合、組成物が安定していることを意味する。本発明のいくつかの実施形態は、さらに長い期間、例えば５℃で２週間、３週間または４週間貯蔵後であっても貯蔵安定性がある。乾燥製剤を含有するカプセルは、さらに長い期間、例えば１カ月まで、２カ月まで、３カ月まで、４カ月まで、５カ月まで、６カ月まで、またはさらにより長い期間、安定し得る。
医薬組成物および治療方法
本発明の医薬組成物はまた、１または複数の賦形剤も含む。賦形剤は、集合的に担体と呼ぶ、生理学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含む。本組成物は固体または液体形態で経口投与用などに製剤され得る。
【００６３】
賦形剤は、１または複数の結合剤、充填剤、滑剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、発泡剤および他の賦形剤を含み得る。このような賦形剤は当分野において既知である。充填剤の例は、ラクトース一水和物、ラクトース無水物、微結晶性セルロース、例えばＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１およびＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０２、微結晶性セルロースおよびケイ化微結晶性セルロース（ＰｒｏＳｏｌｖ  ＳＭＣＣ（登録商標）、および種々のデンプンを含む；結合剤の例は、種々のセルロースおよび架橋ポリビニルピロリドンである。圧縮すべき粉末の流動性に対して作用する薬剤を含む好適な滑剤は、コロイド状二酸化ケイ素、例えばＡｅｒｏｓｉｌ（登録商標）２００、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびシリカゲルを含む。甘味剤は、例えばスクロース、キシリトール、サッカリンナトリウム、シクラメート、アスパルテーム、スクラロース、マルチトールおよびアセスルファムのような任意の天然および人工甘味剤であり得る。香味剤の例は、Ｍａｇｎａｓｗｅｅｔ（登録商標）（ＭＡＦＣＯの商標）、バブルガムフレーバー、および果実フレーバーなどを含む。防腐剤の例は、ソルビン酸カリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸およびその塩、パラヒドロキシ安息香酸の他のエステル、例えばブチルパラベン；エチルまたはベンジルアルコールのようなアルコールを含む。好適な希釈剤は、薬学的に許容される不活性充填剤、例えば微結晶性セルロース、ラクトース、二塩基性リン酸カルシウム、サッカライドおよび／または前記の任意の混合物を含む。希釈剤の例は、微結晶性セルロース、例えばＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１およびＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１  ０２；ラクトース、例えばラクトース一水和物、ラクトース無水物、およびＰｈａｒｍａｔｏｓｅ（登録商標）ＤＣＬ２１；二塩基性リン酸カルシウム、例えばＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓ（登録商標）；マンニトール；デンプン；ソルビトール；スクロース；およびグルコースを含む。好適な崩壊剤は、軽く（ｌｉｇｈｔｌｙ）架橋したポリビニルピロリドン、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、および加工デンプン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウムおよびそれらの混合物を含む。発泡剤の例は、有機酸と炭酸塩または重炭酸塩のような発泡性カップルである。好適な有機酸は、例えば、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、コハク酸およびアルギン酸および無水物および酸塩を含む。好適な炭酸塩および重炭酸塩は、例えば、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸マグネシウム、グリシン炭酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｇｌｙｃｉｎｅ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、炭酸Ｌ−リシンおよび炭酸アルギニンを含む。あるいは、発泡性カップルの重炭酸ナトリウム成分のみが存在し得る。
【００６４】
本発明のナノ粒子状組成物は、経口および非経口を含む任意の従来の手段を介して対象に投与できる。本明細書で使用される場合、用語「対象」は、ヒトまたは非ヒトを含む動物、好ましくは哺乳動物を意味するために用いられる。用語患者および対象は互換可能に使用できる。
【００６５】
経口投与用固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を含むが、これらに限定されない。このような固体剤形において、本ナノ粒子組成物は、（ａ）１または複数の不活性賦形剤（または担体）、例えばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム；（ｂ）充填剤または増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸；（ｃ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシア；（ｄ）保湿剤、例えばグリセロール；（ｅ）崩壊剤、例えば架橋デンプン、ポリビニルピロリドンＸＬ、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種の複合シリケートおよび炭酸ナトリウム；（ｆ）溶解遅延剤、例えばパラフィン；（ｇ）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物；（ｈ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール；（ｉ）吸着剤、例えばカオリンおよびベントナイト；および（ｊ）滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムまたはそれらの混合物のうちの少なくとも１つと混合され得る。カプセル剤、錠剤および丸剤について、剤形は緩衝剤も含み得る。
【００６６】
経口投与用液体ナノ粒子状剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを含む。本ナノ粒子組成物に加えて、液体剤形は、当分野において一般的に使用される不活性希釈剤、例えば水または他の溶媒、共溶媒、可溶化剤および乳化剤などの賦形剤を含み得る。溶媒および共溶媒の非限定的例は、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、例えば綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコールおよびジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物などを含む。本組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤および芳香剤のようなアジュバントも含み得る。
【００６７】
投与単位組成物は、一日分の用量を構成するのに用いられ得るような分量を含有してもよい。任意の投与量が、経口送達用の医薬組成物に存在してもよい。例えば、経口送達用の固体剤形は、例えば約０．１ｍｇから約５００ｍｇの活性剤、約１ｍｇから約５００ｍｇの活性剤、約１０ｍｇから約２５０ｍｇの活性剤、または任意の他の適切な、または、所望の量を含んでもよい。経口および非経口送達用の溶液または懸濁液形態は、溶液または懸濁液中に例えば約１％から約５０％の活性剤、約５％から約３０％の活性剤、約１０％から約２０％の活性剤、または任意の他の適切な、または、所望の量を含んでもよい。しかしながら、任意の特定の患者のための具体的な用量レベルは、様々な因子：達成すべき細胞性または生理学的応答のタイプおよび程度；用いる具体的な薬剤または組成物の活性；用いる具体的な薬剤または組成物；患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別および食習慣；投与時間、薬剤の投与経路および排泄速度；治療の期間；具体的な薬剤と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；および医学分野でよく知られている同様な因子に左右されることは理解されよう。
【００６８】
本発明の医薬組成物は、増殖性疾患または持続性の血管形成と関連する、または、引き金となる疾患の治療に有用である。増殖性疾患は主として腫瘍疾患（または癌）（および／またはあらゆる転移）である。本発明の組成物は、乳癌、肺癌、食道、胃、小腸、大腸および直腸癌を含む消化器癌、神経膠腫、骨、軟骨、軟部組織、筋肉、血管およびリンパ管に関与するものなどの肉腫、卵巣癌、骨髄腫、リンパ腫、白血病、女性の子宮頸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、中皮腫、腎臓癌、尿管、膀胱および尿道癌、結腸癌、結腸直腸癌、肝臓癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌および黒色腫である腫瘍の治療に特に有用である。本発明の化合物は、特に、卵巣癌、ホルモン依存性乳癌を含む乳癌、前立腺、肝臓、肺、腎臓、結腸、膵臓、胃および内皮癌に関して有効性が示された。本発明の医薬組成物は、腫瘍を治療するために他の化学療法剤と組み合わせることができ、または多剤耐性のために他の化学療法剤での治療に難治性の腫瘍の治療に有用である。
【００６９】
以下の非限定例は本発明を説明するために与えられる。しかしながら、本発明がこれらの実施例に記載されている特異的な条件または詳細に限定されないことは理解されたい。
【実施例】
【００７０】
（実施例１）
１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの古典的な製剤
１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンは水への溶解度が非常に低く０．１μｇ／ｍｌ未満であり、その溶解度をいくつかの共溶媒中で試験した。ほとんどの場合において、当初の透明な溶液は、希釈スケジュールの異なる時点において様々な量の沈殿を示した。したがって、これらの古典的な製剤は、臨床前試験のいくつかの限られた目的において使用され得るが、臨床使用においては有用ではない。
【００７１】
【表２】
2016515588.tif 000008
【００７２】
（実施例２）
ナノ製剤の調製
２．１  １−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの特徴付け
１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンは、実質的に水に不溶の流動性のオフホワイトの粉末であった。粒子は結晶質で不規則の形状であった。図１は、４００倍の倍率での１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの粒子を示す。図２は、偏光において４００倍の倍率での１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンを示す。
【００７３】
化学的構造に基づいて、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンの屈折率を１．６３７であると予測した。粒子径測定について、屈折率の虚部部分（ｔｈｅ  ｉｍａｇｉｎａｒｙ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ  ｉｎｄｅｘ）すなわちｉ−値（レーザー回折アルゴリズムにおいて用いられる、粒子による光の吸収に相当する単位が付けられない要素（ｕｎｉｔｌｅｓｓ  ｆａｃｔｏｒ））が０．１であると特定された。粉砕されていない１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンは（Ａｅｒｏｓｏｌ  ＯＴ）の水溶液中に容易に分散した。メジアン粒子径（Ｄ５０）は１３μｍで測定された。
【００７４】
熱重量分析（図３参照）は、開始温度１０５℃で、水分の減少（ｌｏｓｓ）に見合った５．８％という大幅な減少（ｍａｓｓ  ｌｏｓｓ）を示した。２２０℃以降の大幅な減少は、熱劣化（ｔｈｅｒｍａｌ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）に起因する可能性がある。
【００７５】
示差走査熱量測定（図４参照）は、１０８℃での当初の大幅な減少に関連する吸熱を確認した。１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンは１６３℃を起点として融解し、２２３℃まで分解の徴候を示さず、ＴＧＡ分析において漸進的な大幅な減少が確認された。
【００７６】
これらのデータは、物質の熱安定性が高いことを示唆した。これらの結果から、粉砕プロセスにとって好ましくない影響を与え得る熱現象（ｔｈｅｒｍａｌ  ｐｈｅｎｏｍｅｎａ）は特定されなかった。
２．２  粒子径縮小の評価
径縮小試験用に選択された粉砕助剤は、ポロキサマー４０７、ポロキサマー３３８、ラウリル硫酸ナトリウム、およびナトリウムカルボキシルメチルセルロースであった。それぞれを重量で０．２５％と１％の両方で試験した。これらの試験溶液のそれぞれを用いて、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジン（ＡＰＩ）を重量で１２．５％と２５％の両方で粉砕した。サンプルを回転させ、粒子径縮小についての確認した進捗に応じて間隔を置いて試験した。データを表１に示す。短時間の粉砕（１２０分）において、ポロキサマーは、より少ないＡＰＩを用いてより高い濃度でより良好な働きをし、一方、ラウリル硫酸ナトリウムは、より多いＡＰＩを用いてより低い濃度でより良好な働きをするように思われたが、より長時間の粉砕（２４０分および３００分）においてより少ないＡＰＩを用いた場合、ナトリウムカルボキシルメチルセルロースがＡＰＩにとって有効な粉砕助剤であることは実証されなかった。３６０分間の粉砕後、２つの最も有望な候補は、１２．５％ＡＰＩでの１％ポロキサマー４０７と、１２．５％ＡＰＩでの１％ポロキサマー３３８であった。他のすべてについては、有効性の減衰を示したか、はっきりと認められるほどの有効性を示さなかったか、または、過粉砕によって引き起こされる凝集、または、熟成（ｒｉｐｅｎｉｎｇ）のいずれかを原因とする粒子径の増加を示した。（当分野において理解されるように、細かい結晶または粒子が溶解して、より大きな結晶または粒子に再び沈着する際に熟成が生じる。）２つのポロキサマー調製物について、それらの粒子径安定性の非正式な評価として、周囲条件と５℃の両方で維持した。表２に示す通り、４週間にわたって測定値はほとんど変わらなかった。
【００７７】
【表３】
2016515588.tif 000009
【００７８】
【表４】
2016515588.tif 000010
【００７９】
０．２５％ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）中の２５％ＡＰＩの懸濁液が試験条件下で当初有望性を示したが、粉砕中に（例えば熟成による）最終的な粒子径増加という結果となった。過粉砕による粒子融着の可能性を排除するために、全体でわずか１２０分間だけ粉砕することによって第２の調製物を作製し、その後、粒子径を観察した。１週間後、調製物は、表３に示すように熟成の事実を示した：
【００８０】
【表５】
2016515588.tif 000011
【００８１】
２．３  試作製剤の製造
粉砕助剤としての両方のポロキサマーの同等の性能をふまえた上で、より好ましい毒性プロファイルを理由に試作製剤用にポロキサマー３３８の代わりにポロキサマー４０７を選んだ。試験に必要な試験対象物の量の粉砕を容易にするために、３０％ＡＰＩでの試験バッチをポロキサマー４０７の正比例の増加に合わせて２．４％に作成した。メジアン粒子径は、追加的な粉砕時間によりサブミクロンの範囲まで首尾よく縮小された：
【００８２】
【表６】
2016515588.tif 000012
【００８３】
濃縮された懸濁液を脱イオン水を用いて１０％ＡＰＩの目標濃度まで希釈し、その希釈液を周囲条件で安定性に関して観察した。粒子径分布は４週間安定していた：
【００８４】
【表７】
2016515588.tif 000013
【００８５】
これらのデータから、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンナノ懸濁液について試作製剤を以下の通り調製した：
１．適切な粉砕容器内に精製水のおよそ３分の１にポロキサマー４０７を溶解する。
【００８６】
２．ポロキサマー４０７溶液中に１−（３，５−ジメトキシフェニル）−４−［（６−フルオロ−２−メトキシキノキサリン−３−イル）アミノカルボニル］ピペラジンを懸濁させる。
【００８７】
３．十分な粉砕媒体を添加して容器のおよそ半分まで充填する。
【００８８】
４．レーザー回折法で測定したＤ９０の粒子径分布が１ミクロン未満となるまでローラーミルの容器を回転させる（屈折率  １．６３７／ｉ−値  ０．１）。
【００８９】
５．粉砕媒体から懸濁液を抽出する。
【００９０】
６．余った水の一部で媒体をリンスし、リンスした液を抽出した懸濁液に移す。
【００９１】
７．懸濁液を分析する。
【００９２】
８．測定された分析値に基づき、最終的な懸濁液を余った水を用いて１０％の濃度まで希釈する。
【００９３】
９．確認のために懸濁液を分析する。
【００９４】
より詳細には、ＡＰＩを、滅菌水中のポロキサマー４０７の２．４％ｗ／ｗ溶液中に３００ｍｇ／ｇで懸濁させた。０．５ｍｍＹＴＺセラミック粉砕媒体（Ｎｉｋｋａｔｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手したイットリア安定化ジルコニア媒体）を添加し、レーザー回折で測定した粒子径（Ｄ９０）が２ミクロンを上回らず、メジアン粒子径（Ｄ５０）が５００ｎｍを上回らないようになるまで、ローラーミルを用いて懸濁液を粉砕した。粉砕後、懸濁液を滅菌水を用いて１００ｍｇ／ｇ  ＡＰＩまで希釈した。
【００９５】
【表８】
2016515588.tif 000014
【００９６】
２．４  ＧＬＰ試験用の試作品製造
詳細には、４７２．９グラムのＡＰＩを３つの別個のバッチにおいて、それぞれ３０％の濃度で粉砕した。各バッチから余った水の一部で粉砕媒体を抽出し、すべての抽出物を混ぜ合わせた。製造過程の懸濁液の分析値は、２０１ｍｇ／ｇ（２０．１％）という測定値であった。この値に基づき、懸濁液を注射用滅菌水および追加のポロキサマー４０７を用いて薬物物質１０％の最終濃度まで希釈し、全体のポロキサマー濃度を２．０５％にした。最終的な懸濁液の正味収率は、４，５２８グラムであり；１０３ｍｇ／ｇの分析値で、総ＡＰＩ収率は４６６．４グラム、すなわち、ＡＰＩの当初の量の９８．６％であった。
【００９７】
（実施例３）
医薬品
ナノ懸濁液を液体窒素を用いて予備凍結させて、予備冷却させた棚の上で大量に凍結乾燥させて乾燥粉末を生成した。計量漏斗（ｗｅｉｇｈｅｄ  ｆｕｎｎｅｌ）内に乾燥粉末を手作業で量り入れ、次いで、ヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセル殻（サイズ０）内に移し、５ｇの乾燥剤パック入りの３０ｍｌ高密度ポリエチレンプラスチックボトル１個につき１０カプセルの数量で包装した。医薬品有効成分６０ｍｇを含有するカプセルを調製した。カプセル１個につきＡＰＩの凍結乾燥粉末６０ｍｌを充填したものは、以下の組成（表７）およびバッチ調製方法（表８）を有する。
【００９８】
【表９】
2016515588.tif 000015
【００９９】
【表１０】
2016515588.tif 000016
【０１００】
（実施例４）
医薬品の安定性
（５０ｍｌのＡＰＩを送達するための）サイズ０ヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセル中の６０ｍｌの凍結乾燥粉末ＡＰＩを、乾燥剤パックおよび導入剤（ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）を入れた褐色ボトル内に貯蔵し密封した。カプセルを５℃または２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）で貯蔵し、カプセル中のＡＰＩと水含量、ＡＰＩの粒子径を分析した。データを表９に示す。
【０１０１】
【表１１】
2016515588.tif 000017
【０１０２】
表９に示す通り、医薬品を２５℃／６０％ＲＨで６カ月貯蔵すると、粒子径の増加およびＡＰＩ含量の減少という結果となった。５℃で６カ月貯蔵した場合、粒子径の増加およびＡＰＩ含量の減少はみられなかった。表９の安定性データをふまえると、医薬品の貯蔵には５℃が選択された。
【０１０３】
実施例からの結論
ローラー粉砕が、それを使ってＡＰＩの粒子径を縮小するのに簡単で、有効な手段であることが分かった。粉砕助剤としてポロキサマーを用いて処理する場合、ＡＰＩ３０％もの高濃度においても、融着、熟成、退色または他の好ましくない物理的現象が認められなかった。ラウリル硫酸ナトリウムは、非常に低い濃度で粒子径を縮小することが示されたが、おそらくＡＰＩとの共溶媒効果（ｃｏｓｏｌｖｅｎｃｙ  ｅｆｆｅｃｔ）によるものと思われる熟成を引き起こした。製造過程で分析を行いながら濃縮された懸濁液を使用することで、複数のバッチを処理し、混ぜ合わせ、毒性試験にとって所望の濃度まで希釈させることが可能となった。これは、実験室規模の装置を用いて４７０グラム超のＡＰＩを９９％近くの回収率で処理することを可能にした。
【０１０４】
本明細書において説明し、扱った実施形態は、本発明を作製し使用するために、本発明者らにとっては既知の最良の方法を当業者に教示するためにのみ意図されている。本明細書中のいずれも本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。提示されたすべての実施例は、代表的であり、非限定的である。本発明の上述の実施形態は、上記の教示に照らし合わせて当業者によって認識されるように、本発明から逸脱することなく修正または変更することができる。したがって、特許請求の範囲およびその等価物の範囲内で、本発明は具体的に記載されたものとは異なる方法で実施することができることを理解されたい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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