(57)【要約】  提案されるアフィニティークロマトグラフィーに、より詳しくは、血清アルブミン、特にヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）およびその融合タンパク質を精製するためのアフィニティークロマトグラフィーにおける使用に有用な化合物。また、治療薬、特に、治療用ペプチド薬および小分子の半減期を、本明細書に記載の化合物と、投与の際にＨＳＡと結合する治療用ペプチドまたは小分子とのコンジュゲーションなどによって延長させ、それによりその治療薬を持続放出させる方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物またはその塩：
【化１】
2016534984.tif 000037
［上記式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２はＨ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２は、ＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化２】
2016534984.tif 000038
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／またはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化３】
2016534984.tif 000039
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、またはチオアミドのいずれかであり；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない］。
【請求項２】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立にＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
アリールが、置換または非置換フェニル、トリル、キシリル、ナフチル、ベンジル、チエニル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、プリニル、ピラニル、フラニル、チオフェニル、チアゾリル、イミダゾリル、チオイミダゾリル、オキサゾリル、アゼピニル、チオペニル、チアザピニル、キノリニル、オキセピニルまたはオキサジアゾリル基であり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４または５である）であるか、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣまたはＮであり；
ＡおよびＤが独立に、
【化４】
2016534984.tif 000040
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂが、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃが、
【化５】
2016534984.tif 000041
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず；
Ｅが、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚが、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない、
請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
下記に示される式Ｉａの請求項１に記載の化合物またはその塩：
【化６】
2016534984.tif 000042
［上記式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は、−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２は、ＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化７】
2016534984.tif 000043
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない］。
【請求項４】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣであり；
Ｅが、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在しない、
請求項３に記載の化合物、またはその塩。
【請求項５】
下記に示される式Ｉｂの請求項１に記載の化合物またはその塩：
【化８】
2016534984.tif 000044
［上記式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり、かつ、Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、
Ｙ２は、ＣまたはＮである］。
【請求項６】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換または非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；
Ｒ４が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換または非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２が、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ３がＣである、
請求項５に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７】
下記に示される式Ｉｃの請求項１に記載の化合物またはその塩：
【化９】
2016534984.tif 000045
［上記式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換または非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり、かつ、Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＳであるか、またはＥは存在せず；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣまたはＮである］。
【請求項８】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；
Ｒ３が、−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４または５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣまたはＮである、
請求項７に記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
【化１０】
2016534984.tif 000046
から選択される、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
式ＩＩの化合物またはその塩：
【化１１】
2016534984.tif 000047
［上記式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２は、ＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化１２】
2016534984.tif 000048
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／またはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化１３】
2016534984.tif 000049
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない］。
【請求項１１】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり、かつ、Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；アリールが、置換もしくは非置換フェニル、トリル、キシリル、ナフチル、ベンジル、チエニル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、プリニル、ピラニル、フラニル、チオフェニル、チアゾリル、イミダゾリル、チオイミダゾリル、オキサゾリル、アゼピニル、チオペニル、チアザピニル、キノリニル、オキセピニルまたはオキサジアゾリル基であり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣまたはＮであり；
ＡおよびＤが独立に、
【化１４】
2016534984.tif 000050
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂが、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃが、
【化１５】
2016534984.tif 000051
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず；
ＥがＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚが、置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない、
請求項１０に記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
下記に示される式ＩＩａの請求項１０に記載の化合物またはその塩：
【化１６】
2016534984.tif 000052
［上記式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化１７】
2016534984.tif 000053
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない］。
【請求項１３】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣである、
請求項１２に記載の化合物またはその塩。
【請求項１４】
下記に示される式ＩＩｂの請求項１０に記載の化合物またはその塩：
【化１８】
2016534984.tif 000054
［上記式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣまたはＮであり；かつ、
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在しない］。
【請求項１５】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換または非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；
Ｒ４がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換または非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣである、
請求項１４に記載の化合物またはその塩。
【請求項１６】
下記に示される式ＩＩｃの請求項１０に記載の化合物またはその塩：
【化１９】
2016534984.tif 000055
［上記式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳである、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣまたはＮであり；かつ、
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在しない］。
【請求項１７】
Ｒ１が、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；
Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；
Ｙ１およびＹ２が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは、１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３である；
Ｙ２はＣである、
請求項１６に記載の化合物またはその塩。
【請求項１８】
【化２０】
2016534984.tif 000056
から選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボキサミド；
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンズアミド；
１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート；
１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート；
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド；
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチル−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）チアゾール−５−カルボキサミド；
２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド；および
２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチルチアゾール−５−カルボキサミド
からなる群から選択される化合物またはその塩。
【請求項２０】
式ＩＩＩまたはＩＶの化合物またはその塩：
【化２１】
2016534984.tif 000057
［上記式中、
各Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＺ４は独立に、ＮおよびＣＲ１から選択され、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＺ４のうち２つまでがＮであり、各Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換または非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換または非置換シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリールから独立に選択され；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、ＣＲ２、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化２２】
2016534984.tif 000058
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化２３】
2016534984.tif 000059
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、またはチオアミドのうちのいずれかであり；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない］。
【請求項２１】
Ｄ、Ｚ（またはＺ０）、Ａ、およびＢのそれぞれは存在しない、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
療法に使用するための請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
治療薬と請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物とを含んでなる医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の医薬組成物で患者を処置する方法。
【請求項２５】
治療薬の半減期を延長させる方法であって、該薬を請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物とコンジュゲートさせること、およびそれを患者に投与することを含んでなる、方法。
【請求項２６】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物を含んでなるアフィニティークロマトグラフィー固相。
【請求項２７】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物を用いて、対象とするタンパク質を精製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アフィニティークロマトグラフィーに使用するための化合物、より詳しくは、血清アルブミン、特にヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のアフィニティー精製に使用するための化合物に関する。本化合物はまた、治療薬、特に、治療用ペプチド薬および小分子の半減期を、投与の際にＨＳＡと結合する治療用ペプチドまたは小分子とのコンジュゲーションなどによって延長させ、それによりその治療薬の持続放出(prolonged release)を提供するためにも有用である。
【背景技術】
【０００２】
ヒト血清アルブミンと結合する小分子は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、抗体および融合タンパク質を含む血清アルブミンなどの生体分子を精製する上で使用するために記載されている（S. Subramanian, Dye-Ligand Affinity Chromatography: The Interaction of Cibacron Blue F3GA(登録商標) With Proteins and Enzymes, CRC Critical Reviews in Biochemistry (1984) vol 16 (2), pp. 169-205;米国特許第４，７２２，８９６号;米国特許第５，８４９，８７４号;およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／０２００８０Ａ２号参照）。同様に、注射により投与された治療薬、特に、治療用ペプチド薬の半減期を延長する上で有用なヒト血清アルブミンと結合する小分子が記載されている（例えば、L. Pollaro and C. Heinis, Strategoes to Prolong the Plasma Residence Time of Peptide Drugs, Med. Chem. Commun. (2010) 1, 319-324参照）。
【０００３】
このような生体分子を、細胞溶解液または他の液体混合物および溶液中に存在する他の生体分子および化合物から精製、分離および／または捕捉するために使用することができるさらなる改良された化合物の必要がある。同様に、対象に投与した際にその対象の循環に入る既存の治療用分子、特に、治療用ペプチド、ポリペプチドおよび小分子の半減期を安全かつ有効に増大させるために使用することができるさらなる化合の必要がある。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の実施態様は、種々の生体分子、例えば、血清アルブミン、特に、ヒト血清アルブミンおよびＨＳＡ−融合タンパク質を含む血漿タンパク質を直接精製するための親和性薬剤として有用な新規化合物を特徴とする。精製可能な他の生体分子としては、免疫グロブリン、フィブリノゲン、α１−酸糖タンパク質など；アミラーゼ、セルラーゼ、ウシ腸アルカリ性ホスファターゼ（ＣＩＡＰ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）などを含む酵素；および親和性タグ付きタンパク質またはドメイン（例えば、６Ｈｉｓ、ＦＬＡＧ、ＧＳＴなど）を含む人工タンパク質またはタンパク質ドメイン、Ｆｃ−融合タンパク質、ドメイン抗体などが含まれる。さらに、このような化合物は、治療薬、特に、ペプチド治療薬とコンジュゲートした場合、投与時に血中の治療薬の半減期の延長に役立つ。本発明の実施態様は、アガロースまたは他の基質に結合される場合など、ＨＳＡ（その断片および変異体を含む）に対して高い親和性および特異性を有する新規な化学型を提供する。さらに、親和性樹脂技術は、ＨＳＡおよびＨＳＡ−融合タンパク質の精製のための市販のリガンドよりも有意に高い選択性を持つ。このより高い選択性は、本発明の化合物とアルブミン上の結合部位との特異的相互作用により達成される。
【０００５】
本発明の実施態様は、式Ｉ
【化１】
2016534984.tif 000002
または式ＩＩ
【化２】
2016534984.tif 000003
の化合物またはその塩であり、
式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、
ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化３】
2016534984.tif 000004
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／またはＤは存在せず、ここで、Ｒ’は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化４】
2016534984.tif 000005
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず、
ここで、Ｒ’および／またはＲ’’はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。
【０００６】
別の面では、本発明は、式ＩＩＩ
【化５】
2016534984.tif 000006
の化合物または式ＩＶ
【化６】
2016534984.tif 000007
の化合物またはその塩を提供し、式中、
各Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＺ４はＮおよびＣＲ１から独立に選択され、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＺ４のうち２つまで(no more than two)がＮであり、かつ、各Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、ＣＲ２、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣであり；
ＡおよびＤは独立に、
【化７】
2016534984.tif 000008
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化８】
2016534984.tif 000009
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであり；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。
【０００７】
本明細書に開示されるように、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩおよび式ＩＶの化合物は、固相に結合させて、対象タンパク質をそのタンパク質および１以上の不純物を含んでなる水溶液から分離するために有用なアフィニティークロマトグラフィー固相を調製してもよい。例えば、固相はアガロースである。対象タンパク質は、例えば、ヒト血清アルブミンを含んでなり得る。水溶液は、細胞溶解液由来、細胞採取物／培養液由来であってよく、体液、例えば血液または他の混合物から単離されてもよい。例えば、本明細書に開示されるように親和性アガロース材料は、種々の生体分子を細胞溶解液および他の混合物から精製、分離または捕捉するために使用可能である。液体／水溶液混合物中の他の生体分子および不純物から精製、分離または捕捉可能な生体分子は、血清アルブミン、免疫グロブリン、フィブリノゲン、α１−酸糖タンパク質などを含む血漿タンパク質；アミラーゼ、セルラーゼ、ウシ腸アルカリ性ホスファターゼ（ＣＩＡＰ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）などを含む酵素；および親和性タグ付きタンパク質またはドメイン（例えば、６Ｈｉｓ、ＦＬＡＧ、ＧＳＴなどによる）、ＨＳＡ−融合タンパク質、Ｆｃ−融合タンパク質、ドメイン抗体などを含む人工タンパク質またはタンパク質ドメインといった生体分子である。
【０００８】
本明細書に記載の化合物はまた、治療薬、特に、ペプチド、ポリペプチドおよび小分子治療薬の半減期を延長するために使用することができる。一般に、ペプチドは、静脈内投与後、数分以内に血流から排除される。腎臓は５ｋＤａ未満の分子を完全に濾過すると思われるが、それより大きいペプチド（約５０〜７０ｋＤａを超える）は効率的に保持され、循環されると思われる。しかしながら、一部のペプチドの腎クリアランスは接近可能な膜タンパク質または血清タンパク質との結合によって低下し得ることが知られている。循環中の分子の生存期間(life-time)は一般に、循環中の分子の濃度がその系（腎臓など）による排出によって半分まで低下するのに要する時間として定義される血漿半減期として表される。静脈内投与された分子の血液からの排出はほぼ常に二相プロセス（第一相は末梢組織への分布のために急速に減少する）であるので、第二相（腎臓などによる排出による減少）が「血漿半減期」（一般には「消失半減期」とも呼ばれる）という用語に関連する減少の部分である。
【０００９】
よって、本発明の実施態様は、血流中の治療薬の消失半減期または血漿半減期の延長に使用するための、治療薬、特に、ペプチドまたはポリペプチド治療薬にコンジュゲートされる本明細書に記載の式Ｉまたは式ＩＩの化合物を提供する。
【００１０】
本発明の以上の特徴は、添付の図面とともに以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、親和性コンジュゲートアガロースビーズを作製するための、活性化合物アガロースと本明細書に記載の化合物の間の反応の模式図を示す。
【図２】図２は、本明細書に記載の式Ｉの化合物とコンジュゲートされた親和性アガロースビーズが、ＨＳＡを添加した細胞溶解液からＨＳＡを分離／精製するために使用されたミニアガロースゲルを示す。
【図３】図３は、ミメティック・ブルー(Mimetic Blue)（商標）と比べた場合の式Ｉの化合物とコンジュゲートされた親和性アガロース材料の、ＨＳＡ融合ペプチドに対する特異性を示す。
【図４ａ】図４ａは、本明細書に記載の親和性アガロース材料からＨＳＡを溶出するための種々のバッファー溶液の有効性の比較を示す。
【図４ｂ】図４ｂは、図４ａからの結果のグラフを示す。
【図５】図５は、式Ｉの化合物にコンジュゲートされた親和性アガロース材料に対するＨＳＡの結合とミメティック・ブルー（商標）に対する同じ生体分子の結合における熱の効果の比較を示す。
【発明の具体的説明】
【００１２】
定義  本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、以下の用語は、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、示された意味を有するものとする。
ＤＩＰＥＡは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを意味し、ヒューニッヒの塩基とも呼ばれる。
ＤＭＦは、ジメチルホルムアミドを意味する。
ＥＤＴＡは、Ｎ，Ｎ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸を意味する。
ＨＡＴＵは、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェートを意味する。
ｈは、時間を意味する。
ＨＳＡは、ヒト血清アルブミンを意味する。
ミメティック・ブルー（商標）は、(www.prometicbiosciences.com/assets/files/app_notes/Mimetic%20Blue%20SA%20HL%20P6XL%20Appliation%20Note%20-%20Albumin-fusion%20protein%20protein%20(091110)%20v2[1].pdf)、ミメティック・ブルー（商標）ＳＡ  ＨＬに記載のＰｒｏＭｅｔｉｃ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ社製のミメティック・ブルー（商標）ＳＡ  ＨＬ  Ｐ６ＸＬを意味する。
ｍｉｎは、分を意味する。
ＭＳＡは、マウス血清アルブミンを意味する。
ＮＰ４０は、ノニルフェノキシポリエトキシルエタノールとしても知られる洗剤Ｔｅｒｇｉｔｏｌ型ＮＰ−４０を意味する。
ＯＤは、分光光度計を用いて測定される光学密度を意味する。
ＯＤ２８０は、分光光度計を用いて２８０ｎｍで測定される光学密度を意味する。
ＰＢＳは、リン酸緩衝生理食塩水を意味する。
Ｐｉｅｒｃｅ  ＮＨＳ活性化アガロースは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化アガロース、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐ６ＸＬ（Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｃｏｄ  ３１２５）（アプリケーションノート−ミメティック・ブルー（商標）ＳＡ  ＨＬ  Ｐ６ＸＬを用いた組換えアルブミン−融合タンパク質の捕捉および精製）製のものなどを意味する。
ｒｐｍは、回転／分を意味する。
ＲＴまたはｒｔは、室温を意味する。
ＲＳＡは、ラット血清アルブミンを意味する。
ＳＤＳは、ドデシル硫酸ナトリウムを意味する。
ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸を意味する。
【００１３】
本明細書に記載の「アルキル」は、直鎖または分岐鎖または環式炭化水素またはそれらの組合せである、完全に飽和している任意の脂肪族炭化水素置換基を意味する。本明細書で使用する場合、アルキルはまた、一不飽和または多不飽和、またはそれらの組合せである炭化水素も意味し得る。飽和炭化水素置換基の例としては、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、置換シクロヘキシル、その同族体および位置異性体および立体異性体、例えば、置換もしくは非置換ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル置換基などとして知られる置換基が挙げられる。アルキル置換基は、本明細書で使用する場合、１以上の二重結合または三重結合を持ち得るアルキル置換基を含む。
【００１４】
本明細書に記載の「アミノアルキル」は、炭化水素中の１以上の水素がアミノ置換基で置換されたアルキル置換基、例えば、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−Ｎ＝Ｒ、＝ＮＲなどを意味する。
【００１５】
本明細書に記載の「置換もしくは非置換アミノアルキル」は、アミノアルキル置換基が−ＮＨ２（非置換）であり得るか、または−ＮＨＲ、−Ｎ＝Ｒ、＝ＮＲなど（置換）で表されるように、アミノ基中の水素原子１以上が炭素置換基で置換され得ることを意味する。
【００１６】
本明細書に記載の「アリール」は、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、ピレン、ベンゾ［ａ］アントラセン、ベンゾ［ａ］ピレンなど、例えば、フェニル、ナフチル、フェナントリルなどのような任意の芳香族炭化水素置換基を意味する。本明細書で使用する場合、アリールはまた、任意の完全または部分的芳香族複素環式置換基を含む「ヘテロアリール」も含む。例としては、限定されるものではないが、ピロール、ピリジン、ピリミジン、プリン、ピラン、フラン、チオフェン、チアゾール、インドール、イミダゾール、チオイミダゾール、オキサゾール、アゼピン、チオペン、チアザピン、キノリン、オキセピン、オキサジアゾール置換基が挙げられる。
【００１７】
本明細書に記載の「置換もしくは非置換アリール」は、芳香環上に水素以外の置換基を持たない任意のアリール置換基（フェニル、ナフチル、フェナントリルなど）または１以上の水素が炭素（アルキルなど）、アミン（アミノ、アミノアルキル、イミノ、ニトロ、ニトロアルキルなど）、硫黄（チオ、チオアルキル、スルホネート、スルフェートなど）、オキソ（カルボニル、アルデヒド、酸、エステル、エーテルなど）、ハロゲン（クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード）基などのような置換基で置換されているアリール置換基を意味する。例としては、限定されるものではないが、ベンジル置換基、ならびにトルエン、フェノール、アニリン、ベンゾニトリル、アセトフェノン、ベンズアルデヒド、安息香酸、キシレン、およびニトロベンゼン置換基が挙げられる。
【００１８】
本明細書に記載の「置換もしくは非置換ヘテロアリール」は、環炭素上の１以上の水素がＮ、ＯまたはＳで置換されている上記のような任意のヘテロアリール置換基を意味する。
【００１９】
本発明の実施態様は、式Ｉ
【化９】
2016534984.tif 000010
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２は、ＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に
【化１０】
2016534984.tif 000011
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化１１】
2016534984.tif 000012
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであり；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。
【００２０】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；アリールが置換もしくは非置換フェニル、トリル、キシリル、ナフチル、ベンジル、チエニル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、プリニル、ピラニル、フラニル、チオフェニル、チアゾリル、イミダゾリル、チオイミダゾリル、オキサゾリル、アゼピニル、チオペニル、チアザピニル、キノリニル、オキセピニルまたはオキサジアゾリル基であり；
Ｙ１およびＹ３が独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；
Ｙ２がＣまたはＮであり；
ＡおよびＤが独立に
【化１２】
2016534984.tif 000013
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；Ｂが置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；Ｃが
【化１３】
2016534984.tif 000014
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず；ＥがＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；
Ｚが置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない、式Ｉの化合物またはその塩を提供する。
【００２１】
本発明の特定の実施態様は、下記に示される式Ｉａ
【化１４】
2016534984.tif 000015
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；Ｙ２は、ＣまたはＮであり；ＡおよびＤは独立に
【化１５】
2016534984.tif 000016
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリール、またはＢは存在せず；Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；Ｚは、置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。
【００２２】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒもしくは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；Ｒ４がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；かつ、Ｙ１およびＹ３が独立にＣ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２がＣまたはＮである、上記のような式Ｉａの化合物またはその塩を提供する。
【００２３】
本発明のさらに他の実施態様は、下記に示される式Ｉｂ
【化１６】
2016534984.tif 000017
に従う化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり、かつ、Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２は、ＣまたはＮである。
【００２４】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒもしくは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；Ｒ４がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；Ｙ１およびＹ３が独立にＣ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２がＣまたはＮである、上記のような式Ｉｂの化合物またはその塩を提供する。
【００２５】
他の実施態様は、下記に示される式Ｉｃ
【化１７】
2016534984.tif 000018
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり、かつ、Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２はＣまたはＮである。
【００２６】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、またはＣ（ＣＨ３）３であり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；かつ、Ｙ１およびＹ３が独立にＣ、Ｏ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２がＣまたはＮである、上記のような式Ｉｃの化合物またはその塩を提供する。
【００２７】
さらに他の関連の実施態様は、
【化１８】
2016534984.tif 000019
から選択される式Ｉの化合物またはその塩を提供する。
【００２８】
本発明の他の実施態様は、式ＩＩ
【化１９】
2016534984.tif 000020
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２は、ＣまたはＮであり；
ＡおよびＤは独立に
【化２０】
2016534984.tif 000021
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化２１】
2016534984.tif 000022
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。
【００２９】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；アリールが置換もしくは非置換フェニル、トリル、キシリル、ナフチル、ベンジル、チエニル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、プリニル、ピラニル、フラニル、チオフェニル、チアゾリル、イミダゾリル、チオイミダゾリル、オキサゾリル、アゼピニル、チオペニル、チアザピニル、キノリニル、オキセピニルまたはオキサジアゾリル基であり；Ｙ１およびＹ３が独立にＣ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；かつ、Ｙ２がＣまたはＮであり；ＡおよびＤが独立に
【化２２】
2016534984.tif 000023
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；Ｂが置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；Ｃが
【化２３】
2016534984.tif 000024
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであるか、またはＣは存在せず；ＥがＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；Ｚが置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない、式ＩＩの化合物またはその塩を提供する。
【００３０】
他の実施態様は、下記に示される式ＩＩａ
【化２４】
2016534984.tif 000025
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２は、ＣまたはＮであり；ＡおよびＤは独立に
【化２５】
2016534984.tif 000026
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、ＳもしくはＯを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；Ｚは、置換もしくは非置換アリール、またはＮ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。
【００３１】
さらに他の実施態様は、下記に示される式ＩＩｂ
【化２６】
2016534984.tif 000027
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｙ１およびＹ３は独立にＣ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２はＣまたはＮであり；Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在しない。
【００３２】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒまたは−Ｉであり；Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；Ｙ１およびＹ３が独立にＣ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２がＣまたはＮである、上記のような式ＩＩｂの化合物(compounds or formula IIb)またはその塩を提供する。
【００３３】
他の関連の実施態様は、下記に示される式ＩＩｃ
【化２７】
2016534984.tif 000028
の化合物またはその塩を提供し、式中、Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；かつ、Ｙ２は、ＣまたはＮであり；Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在しない。
【００３４】
関連の実施態様は、Ｒ１がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒもしくは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ３が−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎが０〜１２の任意の整数であり；Ｒ４がＨ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒもしくは−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；Ｙ１およびＹ３が独立にＣ、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２がＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ）ｎＣＨ３（ここで、ｎは１、２、３、４もしくは５である）、または−Ｃ（ＣＨ３）３であり；かつ、Ｙ２がＣまたはＮ  Ｓである、式ＩＩｃの化合物またはその塩を提供する。
【００３５】
さらに他の関連の実施態様は、
【化２８】
2016534984.tif 000029
から選択される上記のような式ＩＩの化合物またはその塩を提供する。
【００３６】
式ＩまたはＩＩの上記化合物の特定の実施態様では、Ｄ、Ｚ、Ａ、およびＢのそれぞれは存在しない。
【００３７】
他の実施態様は、
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボキサミド；
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンズアミド；
１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート(1-(4-(1H-benzo[d]imidazol-2-yl)benzoyl)piperidin-4-yl (3-((2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)ethyl)carbamoyl)phenyl)carbamate)；
１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート(1-(2-phenyl-1H-benzo[d]imidazole-6-carbonyl)piperidin-4-yl (3-((2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)ethyl)carbamoyl)phenyl)carbamate)；
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド；
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチル−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）チアゾール−５−カルボキサミド；
２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド；および
２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチルチアゾール−５−カルボキサミド
からなる群から選択される化合物、またはその塩を提供する。
【００３８】
別の面では、本発明は、式ＩＩＩ
【化２９】
2016534984.tif 000030
または式ＩＶ
【化３０】
2016534984.tif 000031
の化合物またはその塩を提供し、式中、
各Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＺ４は、ＮおよびＣＲ１から独立に選択され、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＺ４のうち２つまでがＮであり、かつ、各Ｒ１は、Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ３は−［（ＣＨ２）２Ｅ］ｎ（ＣＨ２）２ＮＲ’Ｒ”であり、かつ、ｎは０〜３０の任意の整数であり、ここで、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、または置換もしくは非置換シクロアルキルであり；
アリールは、任意の置換もしくは非置換の、完全もしくは部分的芳香族炭化水素置換基またはヘテロアリール置換基であり；
Ｙ１およびＹ３は独立に、Ｃ、ＣＲ２、Ｏ、Ｎ、ＮＲ２またはＳであり、ここで、Ｒ２は、Ｈ、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｙ２はＣであり；
ＡおよびＤは独立に
【化３１】
2016534984.tif 000032
アミジン、チオアミドであるか、またはＡおよび／もしくはＤは存在せず；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−シクロアルキル、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換Ｃ４−Ｃ９−ヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＢは存在せず；
Ｃは、
【化３２】
2016534984.tif 000033
、アリール、ヘテロアリール、アミジン、チオアミドのいずれかであり；
Ｅは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨもしくはＳであるか、またはＥは存在せず；かつ、
Ｚは、置換もしくは非置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアルキル、またはＮ、Ｏ、Ｓを含んでなる置換もしくは非置換ヘテロアリールであるか、またはＺは存在しない。なおさらなる実施態様では、本発明は、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、アリール、Ｃ、Ｂ、Ａ、Ｚ０（Ｚ）、Ｄ、Ｒ３および／またはＥはいずれも式Ｉおよび／またはＩＩの化合物を記載する前述の実施態様のいずれかに定義される上記の式ＩＩＩおよび式ＩＶの化合物を提供する。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物のこのような１つの実施態様では、Ｄ、Ｚ（またはＺ０）、Ａ、およびＢのそれぞれは存在しない。
【００３９】
合成方法
本明細書に記載の化合物は、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）を使用して所望の出発化合物上のカルボン酸から活性エステルを生成し、次いで、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、ヒューニッヒの塩基としても知られる）で処理してアミド結合を形成することにより作製される。反応に有用な溶媒としては、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）および他の極性有機溶媒が含まれる。
【００４０】
アフィニティークロマトグラフィー
アフィニティークロマトグラフィーは、タンパク質と１以上の不純物を含んでなる溶液から対象タンパク質を、固相（クロマトグラフィーカラム、樹脂、マトリックス、ビーズ、ゲルなど：互換的に使用）に共有結合されたリガンドに対するそのタンパク質の親和性に基づいて分離するために使用される。溶液中の、リガンドに対して親和性の弱い、または親和性のないタンパク質は、妨害されずに固相を通り抜け、当該タンパク質が固相に結合されて残る。その後、タンパク質を、リガンドに対するタンパク質の親和性を低下させることによって固相から溶出させることができる。リガンドは、本明細書に記載の化合物を含んでなる。
【００４１】
アフィニティークロマトグラフィーリガンドは、固相に固定することができる。「固相」とは、本明細書にさらに記載されるように、リガンドを結合させることができる非水性マトリックス（例えば、カラム、樹脂、マトリックス、ビーズ、ゲルなど）を意味する。リガンドアフィニティークロマトグラフィーのための、当技術分野で公知の例示的な材料および方法は、例えば、ＷＯ２０１１／０１２７１５に記載のとおりであり、その内容は総て、引用することにより本明細書の一部とされる。固相は一般に、例えば、ガラス、シリカ、アガロースまたはポリスチレン表面を含んでなるものである。固相は精製カラムまたはばらばらの粒子(discrete particles)の不連続相であり得る。固相は定孔ガラス(a controlled pore glass)カラムまたはケイ酸カラムであり得る。固相は、固相への不純物の非特異的結合を防ぐことが意図される試薬（例えば、グリセロール）でコーティングされてもよい。例えば、親和性固相はアガロースであり得る。
【００４２】
一般に、親和性マトリックスとして使用される材料は、標的分子が見られる系で不溶性である。常にではないが通常、不溶性マトリックスは固体である。アガロース、セルロース、デキストラン、ポリアクリルアミド、ラテックス、定孔ガラスを含め、何百という物質が記載され、親和性マトリックスとして使用されている。有用な親和性支持体は、高い表面積／容量比、リガンドの共有結合のために容易に修飾される化学基、最小の非特異的結合特性、良好な流動特性ならびに機械的および化学的安定性を有するものである。多孔性支持体（樹脂またはゲルとも呼ばれる）は一般に、タンパク質のアフィニティー精製に最も有用な特性を提供する。これらのタイプの支持体は通常、糖またはアクリルアミドに基づくポリマー樹脂は５０〜１５０μｍ径のビーズとして溶液中で生成（すなわち、水和）される。ビーズ状の形式は、容易に分注して、いずれのサイズの樹脂ベッドを有するカラムでも充填および「パック」することができる湿潤スラリーとしてのこれらの樹脂の供給を可能とする。ビーズは、生体分子（タンパク質など）がビーズ表面の間および周囲を流動可能なのと同様にビーズ内へおよびビーズを通って自由に流動できるように十分な有孔性および大きさである。親和性リガンドは種々の手段によりビーズポリマー（外表および内表）に共有結合される。この結果、サンプル分子が固定化リガンドの大きな表面積を自由に通過可能なルーズなマトリックスとなる。タンパク質アフィニティー精製技術に最も広く使用されているマトリックスの１つが、架橋ビーズ状アガロース（例えば、４％および６％濃度で利用可能）である。１ｍＬの樹脂ベッドは、９０容量％を超える水を含む。ビーズ状アガロースは通常の適用には良好であるが、砕けやすく、それを重力流動，低速遠心分離、および低圧手順に好適なものとする。ビーズ状アガロース樹脂のさらなる架橋および／または化学的強化によりその高圧耐力は上がり得るが、結合能が低下する結果となることもある。また、ポリアクリルアミドに基づく樹脂もカラムアフィニティークロマトグラフィーの支持体として使用される。このようなポリアクリルアミド樹脂は、蠕動ポンプを用いた中圧適用またはその他の液体クロマトグラフィー系で使用可能である。アガロース支持体およびポリアクリルアミド支持体はどちらも、非特異的結合特性が低い。
【００４３】
磁気粒子は、親和性支持体としてビーズ状アガロースおよびその他の多孔性樹脂とは全く異なるタイプのものである。磁気粒子はかなり小さく（一般に１〜４μｍ径）および固体（非有孔性）である。サイズが小さいことで、有効なリガンド固定化およびアフィニティー精製に必要とされる十分な表面積／容量比が得られる。磁性ビーズは、シラン誘導体で共有結合的にコーティングされた超常磁性酸化鉄粒子として作製される。このコーティングはビーズを不活性とし（すなわち、非特異的結合を最小化する）、親和性リガンドを結合させるために必要とされる特定の化学基を提供する。磁気粒子を用いたアフィニティー精製は好ましくは、カラム内では行わない。代わりに、数マイクロリットルのビーズを数百マイクロリットルのサンプルと、ルーズなスラリーとして混合する。混合中、ビーズはサンプル溶液中に懸濁状態で留まり、固定化されたリガンドとの親和性相互作用を起こすことが可能となる。結合に十分な時間を与えた後、強力な磁石を用いてサンプルからビーズを回収し、分離する。一般に、微小遠沈管内で単純なベンチトップ手順を行い、磁性ビーズを好適な磁石で遠沈管の底部または側面の定位置に保持しながらピペットまたはデカンテーションを用いてサンプル（または洗浄溶液など）を除去する。多孔性樹脂に優る磁気粒子の利点としては、磁性ビーズは多孔性支持体よりも低い非特異的結合を示すこと、磁性ビーズは細胞分離手順に使用可能であること、および磁性ビーズはハイスループット自動化に好適であることが挙げられる。精密かつ強力なサンプルハンドリング装置が磁気分離を用いたアッセイおよび精製手順の実施に利用可能である。
【００４４】
また、親和性リガンドは、ポリマー、磁気粒子、ラテックスビーズ、ナノ粒子、マクロビーズ、膜、マイクロプレート、アレイ表面、デップスティックおよび特定の生体分子の捕捉を助ける多くの他のデバイス(devices)に結合させてもよい。
【００４５】
潜在的リガンド結合を作り出す化学反応は当技術分野で公知であり、十分に特徴付けられている。これらの反応は、それらの一般の化学基を介して生体分子の結合を助ける。一般に結合に使用される官能基のタイプとしては、第一級アミン、スルフヒドリル、アルデヒド、およびカルボン酸などの容易に反応する成分が含まれる。通常、まず、固相マトリックスをこれらの官能基のうち１以上に対して反応性のある化合物で活性化させる。次に、活性化した複合体はリガンドと支持体の間で共有結合を生じ、リガンドの固定化が起こり得る。
【００４６】
例えば、いくつかの有効なビーズ状アガロース、ビーズ状アクリルアミドおよび磁性ビーズ親和性支持体が、多くの異なるタイプのリガンドと結合させるためにそのまま使用できる活性化形態で市販されている。これらの活性化化学およびプロトコールは、優れた結合収率を確保するためおよび固定化されたリガンドを容易に漏出しない安定な共有結合の生成のために最適化されたものである。
【００４７】
分子を固定化するための１つの一般的な官能性標的はアミン基（−ＮＨ２）である。例えば、ＮＨＳエステルは、カルボン酸分子のＥＤＣ活性化により形成される反応性基である。ＮＨＳエステル活性化樹脂は、弱アルカリ性条件（ｐＨ７．２〜８．５）で第一級アミンと反応して安定なアミド結合を生じる。固定化反応は通常、ｐＨ７．２〜８．０のリン酸バッファー中、室温または４℃で０．５〜４時間行われる。Ｔｒｉｓ（ＴＢＳ）などの第一級アミンバッファーは、反応に関して教護するために適合しないが、手順によっては、コンジュゲーション手順の終了時に反応を急冷する（停止させる）ためにＴｒｉｓまたはグリシンバッファーを加えることが有用である。アミン含有化合物をビーズ状アガロース樹脂に結合させる別法は、還元的アミノ化と呼ばれる化学法を含む。リガンド化合物上のアミンは、アガロース多糖マトリックスの緩やかな酸化によって生じる支持体のアルデヒド基とコンジュゲートする。還元的アミノ化を用いた固定化反応は、アルデヒド基とアミン基の間の最初のシッフ塩基の形成を含み、これは次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）の添加によって第二級アミンへと還元される。存在するリガンドのタイプと量によって、還元的アミノ化を用いたカップリング反応は８５％を超える固定化収率を達成し得る。固定化に使用可能な別のアミン反応性戦略は、アズラクトン環である。これはアクリルアミドとアズラクトンの共重合により形成される独特な耐久性のあるポリアクリルアミド様樹脂である。第一級アミンは、５原子スペーサーの終端にアミド結合を生じる開環プロセスにおいてアズラクトン基と反応する。この基はアミンと自発的反応性があり、この結合プロセスを誘導するために添加剤または触媒の必要はない。一定量の支持体を、アミン含有分子を含有するサンプルに添加すれば１時間以内に固定化が起こる。アミン含有親和性リガンドを固定化するための別法は、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を使用したアガロース支持体上のヒドロキシルの活性化による反応性イミダゾールカルバメートの形成である。この反応性基は有機溶媒中で支持体上に形成され、加水分解を防ぐためにアセトン懸濁液として保存される。水性カップリングバッファー中の支持体の第一級アミン含有リガンドとの反応により、イミダゾール基の喪失とカルバミン酸結合の形成が起こる。このカップリングプロセスは塩基性ｐＨ（８．５〜１０）で起こるが、還元的アミノ化またはアズラクトンカップリングよりもタンパク質との反応が遅い。ＣＤＩ活性化樹脂はペプチドおよび小有機分子の固定化に特に有用である。この反応もまた、水不溶性リガンドのカップリングを可能とするために有機溶媒中で行うことができる。
【００４８】
親和性リガンドはまた、アミン単独以外の官能基によって固定化してもよい。特に、チオール基（−ＳＨ）を用いて、特定のタンパク質分子上の活性中心または結合部位から離れたカップリング反応を指示することができる。チオール基（スルフヒドリル）は親和性リガンド分子内に固有のものであってよく、または当技術分野で公知の合成化学法によって付加してもよい。
【００４９】
チオール基含有リガンドを結合させるための方法は当技術分野で公知である。例えば、マレイミド活性化試薬は、中性付近の条件（ｐＨ６．５〜７．５）でスルフヒドリル基（−ＳＨ）と特異的に反応して安定なチオエーテル結合を形成する。マレイミド化学は、スルフヒドリル基のコンジュゲーションのために設計されたほとんどの架橋剤および標識試薬に基づく。この方法は、例えば、プレート表面をリガンドで効果的にコーティングするために、チオール含有リガンドとマレイミド活性化ポリスチレンマイクロプレートのカップリングに特に有用である。ヨードアセチル活性化支持体（例えば、長いスペーサーアームの終端にヨードアセチル基を有するビーズ状アガロースまたはアクリルアミド）を用いて、生理学的条件〜アルカリ性条件（ｐＨ７．２〜９）で親和性リガンドのスルフヒドリル基と反応させて安定なチオエーテル結合を得ることができる。スルフヒドリルの固定化は、ヨウ素原子の置換によって起こる。加えて、ピリジルジスルフィド含有支持体を用いて、広範なｐＨ域で親和性リガンドスルフヒドリル基と反応させてジスルフィド結合を形成することができる。従って、この化学法を用いて作製されたコンジュゲートは、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）などの典型的なジスルフィド還元剤で切断可能である。この適用のために、アミン活性化樹脂を、可逆的スルフヒドリル固定化用の活性化樹脂を作製するために架橋剤で修飾することができる。
【００５０】
親和性リガンド化合物はまた、カルボニルケトンまたはアルデヒドをそれらの本来の状態で含み得るか、または含むように修飾することができる。例えば、糖タンパク質または糖脂質については、複合糖質は、隣接する炭素原子にヒドロキシルを有する糖残基を含むものを作出することができ、これらのシス−ジオールを過ヨウ素酸ナトリウムで酸化して、共有結合的固定化のための部位としてのアルデヒドを作出することができる。ヒドラジド活性化樹脂および化合物は、ｐＨ５〜７で酸化炭水化物（糖）のカルボニルとコンジュゲートすると、ヒドラゾン結合が形成される。ヒドラジド化学は、グリコシル化部位を介した複合糖質の標識、固定化またはコンジュゲーションに有用である。
【００５１】
親和性リガンド化合物はまたカルボキシル基も含み得るか、またはカルボジイミド媒介反応の使用によるカルボキシル基を介してカップリングを可能とするように修飾することができる。カルボン酸基と自発的反応性のある反応性基を含む活性化支持体はないが、アミン（またはヒドラジド）を含有するクロマトグラフィー支持体を用いて、水溶性カルボジイミド架橋剤で活性化されたカルボン酸基とアミド結合を形成させることができる。カルボキシルとアミンを架橋するＥＤＣのためのＥＤＣカルボジイミド架橋剤およびその他のカルボジイミドはゼロ長架橋剤であり、それらは標的分子間の最終的な架橋（アミド結合）の一部とならずに、カルボン酸基（−ＣＯＯＨ）と第一級アミン（−ＮＨ２）の直接的コンジュゲーションを起こす。リガンドの固定化は、この反応に関して第一級アミンとしてのジアミノジプロピルアミン（ＤＡＤＰＡ）アガロース樹脂を用いて達成され得る。
【００５２】
カップリングはまた、反応性水素化学を介しても達成され得る。小有機リガンド親和性分子は、固定化のために利用可能なケミカルハンドルを含まない構造を持つ場合がある。他には反応性が低いかまたは立体障害のある官能基を有する分子もある。しかしながら、これらの化合物には、マンニッヒ(Mannich)反応を用いてホルムアルデヒドとアミンを縮合させることができる活性な（または置換可能な）水素を有するものがある。形式上、マンニッヒ反応は、ホルムアルデヒド（または別のアルデヒド）とアンモニアおよび活性水素を含有する別の化合物との縮合からなる。アンモニアを使用する代わりに、この反応は、第一級または第二級アミンを用いてまたはアミドを用いても行うことができる。リガンド固定化は、この反応に関してジアミノジプロピルアミン（ＤＡＤＰＡ）アガロース樹脂を第一級アミンとして用いた場合に起こる。アフィニティークロマトグラフィーリガンド固相は、対象とするタンパク質とリガンド固相の間の特異性の高い結合相互作用に基づいてタンパク質サンプルの分離を可能とする。よって、固相は、対象タンパク質がバッファー条件によって可逆的に付着可能なリガンドを含んでなる。
【００５３】
親和性リガンドはまた、エーテル（チオエーテルを含む）結合およびアミド結合などの他の既知の共有結合を介して固定化されてもよい。
【００５４】
対象タンパク質のリガンド固相への結合はカラムクロマトグラフィーを介してもよい。例えば、リガンド固相をカラム内に形成させ、対象タンパク質を含有するサンプルをカラムに流し、カラムを１以上の洗浄溶液で洗浄した後、溶出バッファーを用いて対象タンパク質をカラムから溶出させる。
【００５５】
対象タンパク質は、血清アルブミン（特に、ヒトＨＳＡ）、免疫グロブリン、フィブリノゲン、α１−酸糖タンパク質等を含む血漿タンパク質；アミラーゼ、セルラーゼ、ウシ腸アルカリ性ホスファターゼ（ＣＩＡＰ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）などを含む酵素；および人工タンパク質またはタンパク質ドメイン、特に、血清アルブミン融合タンパク質、特に、ＨＳＡ融合タンパク質（例えば、アルビグルチドなどのＨＳＡ−ＧＬＰ１融合物）を含んでなり得るだけでなく、アルブミンを含んでなる、親和性タグ付きタンパク質またはドメイン（例えば、６Ｈｉｓ、ＦＬＡＧ、ＧＳＴなど）、Ｆｃ−融合タンパク質、ドメイン抗体なども含む。例えば、対象タンパク質は、ヒト血清アルブミンを含んでなり得る。本明細書に記載の化合物は、ヒト血清アルブミンとの特異的結合、およびラットまたはマウス血清アルブミンとの非特異的結合を示し得る。
【００５６】
「不純物」とは、アフィニティークロマトグラフィー前のサンプル中またはアフィニティークロマトグラフィー後にサンプル溶出液中に存在するいずれの外来または所望でない分子も意味する。「プロセス不純物」も存在し得る。これらは対象タンパク質が産生されるプロセスの結果として存在する不純物である。例えば、これらは、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、ＲＮＡ、およびＤＮＡ（例えば、ウイルス）を含む。「ＨＣＰ」とは、細胞内および／または分泌タンパク質を含む、細胞培養中または発酵中に宿主細胞により産生される対象タンパク質に関連のないタンパク質を意味する。宿主細胞タンパク質の一例として、精製中および精製後になお存在する場合には、対象タンパク質に損傷を起こし得るプロテアーゼがある。例えば、プロテアーゼが対象タンパク質を含んでなるサンプル中に残っている場合、それは元々存在していなかった生成物に関連する物質または不純物を作り出すことがある。プロテアーゼの存在は、精製プロセス中に、および／または最終的な製剤中で経時的に対象タンパク質の減衰を引き起こし得る。定義によるＨＣＰの除去またはＨＣＰレベルの低減は、プロテアーゼの除去または低減に等しい。
【００５７】
プロセス不純物にはまた、細胞増殖のためまたは対象タンパク質の発現確保に使用される成分、例えば、溶媒（例えば、酵母細胞の培養のために使用されるメタノール）、抗生物質、メトトレキサート（ＭＴＸ）、培地成分、凝集剤なども含まれる。また、前工程中にサンプル中に漏出する可能性のあるアフィニティークロマトグラフィーリガンド固相の一部としての分子も含まれる。
【００５８】
不純物にはまた、それらの活性を保持しているが構造は異なるタンパク質を含む「生成物に関連する物質」、およびそれらの構造の違いのために活性を失ったタンパク質を含む「生成物に関連する物質」も含まれる。これらの生成物に関連する変異体には、例えば、高分子量種（ＨＭＷ）、低分子量種（ＬＭＷ）、凝集タンパク質、前駆体、分解タンパク質、不適切に折り畳まれたタンパク質、ジスルフィド結合の不十分な(underdisulfide-bounded)タンパク質、断片、および脱アミド化種が含まれる。
【００５９】
治療薬のための半減期延長剤としての式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの化合物
本明細書に記載の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物は、共有結合的または非共有結合的相互作用を介して、プチドおよびポリペプチド治療薬を含む治療薬にコンジュゲートさせることができる。
【００６０】
本明細書で使用する場合、「治療薬」とは、個体内の生体標的分子と結合し、かつ／またはその機能を変更することを介して有益な治療効果または診断効果をもたらすために個体に投与することができるいずれの薬物（例えば、小有機分子、核酸、ポリペプチド）も意味する。可能性がある治療薬としては、エキセンディン、インスリン、プロテアーゼ阻害剤、ホルモン、バソプレシン、免疫グロブリン、ブセレリン、９−デスグリシンアミド、８−アルギニンバソプレシン（ＤＧＡＶＰ）、ＡＬ−１０８、フィロマー(phylomers)、オステオカルシン、Ｄ−４Ｆを含むＡｐｏＡ１ミメティクスなどのペプチド模倣化合物、抗体および抗体フラグメントに基づく治療薬、本明細書における化合物とコンジュゲートさせることができる他の任意のペプチド、ポリペプチドまたは小分子化合物が含まれる。好適なコンジュゲーション材料および方法は当技術分野で公知であり、さらにＷＯ２００３／０８４４６９、ＷＯ２０１２／１４０６４７、およびＷＯ２０１４／１０６５８３に記載されており、これらの内容は総て、引用することにより本明細書の一部とされる。好適な治療薬は、経口、静脈内、鼻腔、腹腔内、皮下、および経口を含むいずれの好適な投与経路によって式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物とともに投与してもよい。その後、治療薬と式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物は血中の血漿タンパク質と会合し、その結果、生じた複合体は治療薬の血漿半減期を延長する働きをする。血中の血漿タンパク質はアルブミンであり得る。例えば、血漿タンパク質はヒト血清アルブミンであり得る。本明細書に記載の化合物は、ヒト血清アルブミンとの特異的結合、およびラットまたはマウス血清アルブミンとの非特異的結合を示し得る。
【００６１】
「半減期」（「ｔ１／２」）および「血清半減期」という句は、本開示のコンジュゲートされた治療薬の血清（または血漿）濃度が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、例えば、治療薬の分解および／もしくはクリアランスまたは天然の機序による抗原結合タンパク質の隔離によって５０％低下するのにかかる時間を意味する。
【００６２】
半減期の測定
半減期（ｔ１／２）：コンジュゲートされた治療薬の濃度がその元の値の半分に達するのに要する時間を意味する。タンパク質の血清半減期は、薬物動態研究によって測定することができる。
【００６３】
クリアランス（ＣＬ）：単位時間当たりにタンパク質が不可逆的に排除される血漿の容量を意味する。クリアランスは、用量／ＡＵＣ（ＡＵＣ：曲線下面積または血漿薬物濃度時間曲線下面積）として計算される。クリアランスはまた、薬物排出速度をコンジュゲートされた治療薬の血漿濃度で割った商（排出速度＝ＣＬ＊濃度）によって計算することもできる。
【００６４】
平均滞留時間（ＭＲＴ）：コンジュゲートされた治療薬が不可逆的に排除されるまで体内に留まる平均時間。ＭＲＴ＝ＡＵＭＣ／ＡＵＣとして計算される。
【００６５】
定常状態濃度：定常状態濃度（Ｃｓｓ）は、薬物排出速度が継続薬物投与の結果として薬物投与速度に等しくなった時に達成される濃度である。Ｃｓｓはピークレベルとトラフレベルの間で変動し、マイクログラム／ｍｌで測定される。「平均定常状態トラフ濃度」とは、ある時点での患者集団におけるトラフレベルの平均値を意味する。
【実施例】
【００６６】
実施例１：Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンズアミド（化合物４）およびＮ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボキサミド（化合物５）の製造
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）中、所望のカルボン酸（１．０当量、０．２０１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（９２ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．１０６ｍＬ、０．６０４ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。次に、この溶液に（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．０４８ｍＬ、０．２０１ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）（１００ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固させた。
【００６７】
室温で、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（３ｍＬ）中、ＢＯＣ保護材料（１．０当量、０．２０１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（０．４６５ｍｌ、６．０３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で１時間撹拌した。溶媒および過剰なＴＦＡを減圧条件下で除去し、得られた残渣をＤＣＭとともに２回共沸した。得られた材料をＤＭＦに溶かした後、分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００６８】
以下のスキーム１は、（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１）および４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）安息香酸（２）および２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボン酸（３）からのＮ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンズアミド（化合物４）およびＮ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボキサミド（化合物５）の製造を示す。
【化３３】
2016534984.tif 000034
【００６９】
実施例２：１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（化合物１０）および１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（化合物１１）の製造
【００７０】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）中、所望のカルボン酸（１．０当量、０．４２０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１６０ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．２２０ｍＬ、１．２５９ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。次に、この溶液に、３−（（（ピペリジン−４−イルオキシ）カルボニル）アミノ）安息香酸メチル（化合物７）、０．１１２ｍＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固させた。
【００７１】
得られた生成物をそのまま使用し、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）に溶かした。この溶液に水（１ｍＬ）中ＬｉＯＨ（０．０３０ｇ、１．２６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、完全な変換を示した。各反応物に１Ｎ  ＨＣｌ（５ｍＬ）を加えた後、溶媒を蒸発させ乾固させた。この材料を次の工程にそのまま送った。
【００７２】
次に、室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）中、得られたカルボン酸（１．０当量、０．４２０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１９２ｍｇ、０．５０４ｍｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（０．２２０ｍＬ、１．２６０ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。その後、この溶液に（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物１）（０．１００ｍＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固させた。
【００７３】
室温で、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（３ｍＬ）中、得られたＢＯＣ保護材料（１．０当量、０．３６０ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（０．９６９ｍＬ、１２．５８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。溶媒および過剰なＴＦＡを減圧条件下で除去し、得られた残渣をＤＣＭとともに２回共沸した。得られた材料をＤＭＦに溶かした後、分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００７４】
以下のスキーム２は、（２）４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）安息香酸、（３）２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボン酸および（７）３−（（（ピペリジン−４−イルオキシ）カルボニル）アミノ）安息香酸メチルからの１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（化合物８）および１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（化合物９）の製造を示す。次に、３−（（（（１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）安息香酸（１０）と３−（（（（１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）安息香酸（１１）の混合物を作製するために記載されたように、化合物（８）と（９）の反応混合物をＬｉＯＨで処理した。その後、生成物のこの混合物を、上記のように（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル、（１）１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）で処理した後に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で処理して生成物１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（１０）および１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（１１）を生成した。
【００７５】
以下のスキーム２は、それぞれ酸２および３からの二段階でのカルボキシレート８および９の製造を示す。次に、化合物８および９を二段階で所望の最終生成物１−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバミン酸（１０）および１−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）ピペリジン−４−イル  （３−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）カルバメート（１１）に変換した。
【化３４】
2016534984.tif 000035
【００７６】
実施例３：Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド（化合物１９）；Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチル−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（化合物２０）；２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド（化合物２１）；および２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチルチアゾール−５−カルボキサミド（化合物２２）の製造
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）中、所望のカルボン酸（例えば、化合物２および３）（１．０当量、０．４２０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１６０ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．２２０ｍＬ、１．２５９ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。次に、この溶液に［４，４’−ビピペリジン］−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１２）（０．１０８ｍＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固させた。Ｂｏｃ保護粗材料を材料ジクロロメタン（ＤＣＭ）（３ｍＬ）に溶かした。この溶液にＴＦＡ（０．９７１ｍＬ、１２．６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒および過剰なＴＦＡを減圧条件下で除去し、得られた残渣をＤＣＭとともに２回共沸し、化合物１３および１４を定量的収量で得た。
【００７７】
１７および１８などの化合物は下記のように製造した。室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）中、所望のカルボン酸（例えば、化合物１５および１６）（１．０当量、０．４２０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．１９２ｇ、０．５０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．２２０ｍＬ、１．２６０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を１０分間撹拌した。次に、この反応混合物に、（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１）（０．１００ｍＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相（化合物１７および１８を含有）をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固させた。
【００７８】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）中、得られたＢＯＣ保護カルボン酸（化合物１７および１８）（１．０当量、０．２１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ、０．３１５ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この溶液に所望のアミン（例えば、化合物１３および１４）（１．０当量、０．２１０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８０℃で一晩加熱した。反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（２×５０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相（ＢＯＣ保護生成物１９、２０、２１、２２を含有）をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固させた。この生成物は精製の必要なく、次の工程に送った。室温で、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（３ｍＬ）中、所望のＢＯＣ保護材料（例えば、ＢＯＣ保護化合物１９、２０、２１および２２）（１．０当量）の溶液に、ＴＦＡ（０．８０９ｍＬ、１０．５０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒および過剰なＴＦＡを減圧条件下で除去し、得られた残渣をＤＣＭとともに２回共沸した。最終生成物（例えば、化合物１９、２０、２１および２２）を分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００７９】
スキーム３（以下）は、三部合成における化合物１９、２０、２１および２２の製造を表す。まず、化合物１３および１４を化合物１２と酸２および３のカップリングから製造し、次に、ＴＦＡでＢＯＣの脱保護を行って化合物（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）（［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）メタノン（１３）および［４，４’−ビピペリジン］−１−イル（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−イル）メタノン（１４）を定量的収量で得た。
【００８０】
化合物１７および１８を、一保護ジアミン１とそれぞれ化合物１５（２−クロロベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボン酸）および化合物１６（２−クロロ−４−エチルチアゾール−５−カルボン酸）のカップリングにより製造した。
【００８１】
次に、化合物１３および１４を化合物１７および１８と反応させて（塩基および加熱の存在下）ＢＯＣで保護された最終生成物を得、これをＴＦＡで処理すると、所望の化合物Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド（１９）；Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチル−２−（１’−（２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（２０）；２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボキサミド（２１）；および２−（１’−（４−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）ベンゾイル）−［４，４’−ビピペリジン］−１−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−エチルチアゾール−５−カルボキサミド（２２）が良好な収量で得られた。
【００８２】
【化３５】
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【００８３】
親和性例
実施例４：親和性アガロース材料の製造
Ｐｉｅｒｃｅ  ＮＨＳ活性化アガロース（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化アガロース）（２６ｍｇ）を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．５中、本明細書に記載の式Ｉまたは式ＩＩの化合物の１００μＭ溶液４００μＬと室温で１時間合わせた後、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ８．０を室温で３０分間加えた。得られた混合物はおよそ２００  μＬの化合物コンジュゲートアガロースであった。図１は、反応スキームおよび得られるコンジュゲートアガロースビーズを示す。
【００８４】
実施例５：生体分子のアフィニティー精製／捕捉
Ａ．ヒト血清アルブミンを添加した細胞溶解液
ＰＢＳバッファー中でＭＣＦ７細胞に音波処理を行うことで細胞溶解液を調製し、１０７細胞を５００μＬのＰＢＳに懸濁させ、氷上でＢｒａｎｓｏｎ  Ｓｏｎｉｆｉｅｒ  ４５０（アウトプット＝４；デューティーサイクル＝３０％で１分）にてマイクロソニケーションチップを用いて音波処理を行った。溶液が透明になったところで、それを１３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して残渣を除去し、その後、７００μｇの得られた溶解液タンパク質（ＯＤ２８０）に１００μＬのＰＢＳバッファー中、１０μｇのＨＳＡを添加し、次にこの混合物を実施例４で調製したような５μＬの親和性アガロースビーズにロード(load)した。図２に示されるように、細胞溶解液＋ＨＳＡをロードした親和性アガロースビーズは細胞溶解液からＨＳＡを効果的に分離／捕捉した（レーン６および７（輪郭線）とすぐ右の、本明細書に記載の化合物とコンジュゲートされていないアガロースにロードしたＨＳＡ、およびコンジュゲート親和性アガロースビーズにロードした細胞溶解液不在のＨＳＡを表すレーン８および９を比較）。
【００８５】
Ｂ．ミメティック・ブルー（商標）と比較した親和性アガロース材料を用いたＨＳＡのアフィニティー精製／捕捉
図３は、ＨＳＡに関するミメティック・ブルー（商標）と比較した場合の、本明細書に記載の式Ｉの化合物とコンジュゲートされた親和性アガロース材料の、ＨＳＡに対するより優れた特異性を示す（注：標識Ａビーズのレーン４および７と標識ミメティックの５および８の比較）。
【００８６】
Ｃ．精製／捕捉したＨＳＡ融合ペプチドの溶出
別の実験で、種々のバッファーおよび溶液の、実施例４に記載の式Ｉの化合物とコンジュゲートした親和性アガロース材料から捕捉されたＨＳＡを溶出させる能力を比較した。この実験では、６つのｐｈｙｎｅｘｕｓチップに５μＬの本明細書に記載の親和性アガロース材料を充填した。各チップにインプットとして２０μｇのＨＳＡを添加した。ＨＳＡを室温で３０分間、親和性アガロース材料に結合させ、その後、代表的なフロースルーを回収した。
【００８７】
各チップを５０μＬの洗浄バッファー（ＰＢＳ／Ｈ２Ｏ比１００／０；８０／２０；６０／４０；４０／６０；２０／８０；および０／１００）で各洗浄につき１０分間、２回洗浄した。次に、洗浄溶液を回収し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。（レーン２および３ではそれぞれ２％インプットおよび回収画分をゲルにロードし、レーン４〜１５では１３％をゲルにロードした。）
【００８８】
各ゲルバンドのＨＳＡの量をＦｌｕｏｅＣｈｅｍソフトウエアで定量した。図４ａのレーン１４および１５で見て取れるように、溶出バッファーとしてＨ２Ｏのみを用いた２回の洗浄で６０％の溶出が達成された（チップ６）。一般に、本明細書に記載の親和性アガロース材料からのＨＳＡの溶出パーセントは、溶出バッファーのイオン強度が低下するとともに上昇した（図４ａのチップ１、レーン４〜５；チップ２、レーン６〜７；チップ３、レーン８〜９；チップ４、レーン１０〜１１；チップ５、レーン１２〜１３；およびチップ６、レーン１４〜１５を比較；図４ｂにグラフで示した結果も参照、洗液１と２を合わせ、レーンＰＢＳからＨ２Ｏのそれぞれで、それぞれ濃い網掛けおよび薄い網掛けで示す）。
【００８９】
Ｄ．ミメティック・ブルー（商標）と比較した場合の親和性アガロース材料のＨＳＡ融合ペプチド捕捉能に及ぼす熱の影響
別の実験を、実施例４に記載の式Ｉの化合物とコンジュゲートした親和性アガロース材料と上記のＨＳＡ融合ペプチドに曝したミメティック・ブルー（商標）とを比較して行ったところ、その結果、最大結合能が達成され、その後、親和性アガロース材料と生体分子、またはミメティック・ブルー（商標）と生体分子の混合物をＰＢＳ（洗剤なし）中、９５℃で１０分間加熱した。熱処理後、ＨＳＡ融合ペプチドを親和性アガロース／生体分子混合物またはミメティック・ブルー（商標）／生体分子混合物から溶出させ、「溶出」画分を分析し、「結合」と表記した。
【００９０】
図５に見られるように、親和性アガロース材料に対する生体分子の会合は熱により切断可能であるが、ミメティック・ブルー（商標）に対する生体分子の会合はそうでなはないという点で、実施例４に記載の式Ｉの化合物とコンジュゲートした親和性アガロース材料は、ミメティック・ブルー（商標）とは異なる作用／結合機序を持つと思われる（親和性結合レーン７とミメティック・ブルー（商標）結合レーン１０を比較）。
【００９１】
実施例５Ａ〜５Ｄで使用したバッファー溶液中の、生体分子添加細胞溶解液または生体分子混合物は、ＰＢＳ（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｎａ２ＰＯ４、１０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４  ｐＨ７．４）またはＲＩＰＡバッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％ＮＰ４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＳＤＳ  ｐＨ８．０）または他の低イオン強度バッファーで溶出させることができる。図４ａおよび４ｂに例示されるように、生体分子は、このような低イオン強度／低塩バッファーを用いて親和性アガロース材料から同様に溶出させることができ、水でさえも溶出させることができる。
【００９２】
半減期の延長
実施例６：治療用分子のための半減期延長剤としての式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶの化合物
本明細書に記載の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物は、ペプチドおよびポリペプチド治療薬およびオリゴヌクレオチド治療薬を含む、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物とのコンジュゲート能がある官能性部分を有する治療薬、特に、小分子治療薬との共有結合的または非共有結合的相互作用を介してコンジュゲート可能である。
【００９３】
特定の実施態様では、式Ｉ〜ＩＶの化合物は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの血中の血漿タンパク質と会合して、二元親和性化合物／血清タンパク質コンジュゲートを形成し、この二元親和性化合物／血清タンパク質コンジュゲートは次に例えば経口または静脈内投与された治療薬と、ひと度その治療薬が循環中に入れば相互作用して三元複合体を形成し、これにより、生じた三元複合体は治療薬の血漿半減期を効果的に延長する(prolong)働きをする。
【００９４】
上記の本発明の実施態様は単に例示を意図したものであり、多くの変形形態および改変が当業者には自明である。このような変形形態および改変は総て、添付の特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内にあることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５】
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【国際調査報告】
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