(57)【要約】本発明は、対象における炎症促進性サイトカイン及び／又はＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための方法、及び前記阻害剤の有効性が十分であると決定されたという条件で、前記対象を前記阻害剤で治療するための方法に関する。【選択図】  図８【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための方法であって、前記炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−５及びＩＦＮγからなる群から選択され、前記方法が、
（ａ）前記対象から試料を採取するステップと、
（ｂ１）前記試料を、前記試料における炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物と接触させるステップと、
（ｂ２）前記試料を、前記試料における前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤と接触させるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料における前記炎症促進性サイトカインの発現レベルを決定するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ１）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの検出可能な発現レベル又は発現レベルの増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの発現レベルの検出可能な減少が検出された場合、前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤の有効性を十分であると評価するステップと
を含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の、対象におけるＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための方法であって、
（ａ）前記対象から試料を採取するステップと、
（ｂ１）前記試料を、前記試料におけるＢ細胞の産生を誘発することができる化合物と接触させるステップと、
（ｂ２）前記試料を、前記試料における前記Ｂ細胞の前記阻害剤と接触させるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料におけるＢ細胞の数を決定するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ１）の終わりに前記Ｂ細胞の検出可能な数又は数の増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記Ｂ細胞の数の検出可能な減少が検出された場合、前記阻害剤の有効性を十分であると評価するステップと
を含む、好ましくは請求項１に記載の方法。
【請求項３】
以下の自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に及び／又は以下の炎症促進性サイトカインに及び／又は以下のＢ細胞マーカーに適用される、請求項１又は２に記載の方法：
ｉ．ＲＡ及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される及び／又はＢ細胞マーカーがＣＤ２０及び／又はＣＤ１９である、
ｉｉ．別のＲＡ様疾患及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである、
ｉｉｉ．潰瘍性大腸炎及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである、
ｉｖ．クローン病及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される、
ｖ．乾癬及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される、
ｖｉ．ＭＳ及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１β及びＩＬ−１７からなる群から選択される及び／又は細胞マーカーがＣＤ２０及び／又はＣＤ１９である、
ｖｉｉ．喘息及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−５及びＩＦＮγからなる群から選択される、
ｖｉｉｉ．敗血症及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１β及びＩＦＮγからなる群から選択される、
ｉｘ．痛風及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである、
ｘ．ライム病及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１β及びＩＬ−１７からなる群から選択される、
ｘｉ．２型糖尿病及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα及びＩＬ−１βからなる群から選択される。
【請求項４】
ステップ（ｂ１）における前記試料における炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物が、前記自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に特異的である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが、前記炎症促進性サイトカインの量を直接的に定量化することによって及び／又は前記炎症促進性サイトカインをコードする前記ヌクレオチド配列の量を定量化することによって間接的に決定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが少なくとも２０％増加し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが少なくとも１０％減少した場合、炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性が前記十分である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
試料が、対象から採取された流体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
流体が、血液又は脊髄液から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
流体が、血液であり、ＰＢＭＣを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
自己免疫性及び／若しくは炎症性症状又は疾患に罹っていると疑われる対象を治療するための方法であって、請求項１〜９のいずれか一項において定義した対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するステップと、その後前記阻害剤の有効性が申し分ない場合、前記対象を前記阻害剤で治療するステップとを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、診断学及び治療学の分野に関する。本発明は、炎症促進性サイトカインの阻害剤及び／又はＢ細胞の阻害剤の有効性を評価し、それによって自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患並びに／又は症状を有すると疑われる対象のための最良の可能な治療法を選択するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
クローン病及び潰瘍性大腸炎は、腸管の粘膜における調節不全の炎症性反応が病変形成における主要な役割を果たす、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。生理学的条件下では、炎症促進性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１β）と抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−１０又はＴＧＦβ）間のバランスがある。インターロイキン−１βは、生得的な免疫系の最も重要な炎症促進性メディエーターの１つであり、ＩＢＤの病変形成におけるその役割は、広範に明らかにされた（１）。
【０００３】
自食作用は、ＩＬ−１βの分泌を調節する主要なプロセスの１つであり（２）、自食作用遺伝子多形性（例えばＡＴＧ１６Ｌ１、ＩＲＧＭ）は、クローン病と関連していることが示された（３）。最近、本発明者らは、Ｔ３００Ａ  ＡＴＧ１６Ｌ１多形性がＩＬ−１β産生を強く調節し、リスク変異体がサイトカインの増加した合成及び放出と関連していることを実証した（４）。ＩＬ−１βの産生は、インフラマソームと称される細胞内タンパク質プラットフォームによって高度に調節される（５、６）。ＩＬ−１β産生に関連しているインフラマソームは、プロ−ＩＬ−１βの細胞内切断に関して活性化された場合、決定的な酵素であるプロカスパーゼ−１を含有する（７）。本発明者らは、特異的なカスパーゼ−１阻害剤がＩＬ−１βのプロセシング及び放出を遮断することができ、したがってＩＢＤにおける炎症性プロセスに及ぼす有利な効果を有することができるかどうかを評価した。加えて、本発明者らは、カスパーゼ−１阻害剤が、一方でＩＬ−１βの高産生能力を有する個体において、及び他方でＴ３００Ａ  ＡＴＧ１６Ｌ１多形性を有する個体においてより効果的であるかどうかを調査した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
驚くべきことに、本発明者らは、サイトカインを産生する内在性の能力がスクリーニングした対象において異なっており、抗炎症剤の効果がサイトカイン産生に依存することに注目した。それは、前記サイトカインの高、中及び低産生者を区別することができるであろうことを明らかにする。前記サイトカインに関する高産生者は、別のサイトカインに関する高、中又は低産生者であり得る。これらの結果は、サイトカイン産生の個々のプロファイルを同定し、それによって（自己）炎症性疾患を有する個々の患者を、高及び低サイトカイン産生者での患者の層別化に基づいて、いくつかの抗炎症性生物学的療法に対する不十分な応答者と、別の生物学的療法に対する良好な応答者に層別化することが可能であるという考えにつながる。この層別化は、現在使用されている生物学的療法に基づく全ての治療法に適用可能であることが予想される。患者の層別化は、成功的ではなさそうであり、潜在的な重大な副作用を有する治療法を与えられるであろう患者と、かかる個人化手法の実質的な経費節約の態様により、医療制度との両方に非常に重要であり得る。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
評価方法
第１の方法：炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価すること
第１の態様では、本発明は、対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための方法であって、
（ａ）前記対象から試料を採取するステップと、
（ｂ１）前記試料を、前記試料における炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物と接触させるステップと、
（ｂ２）前記試料を、前記試料における前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤と接触させるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料における前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルを決定するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ１）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの検出可能なプロファイル若しくは発現レベル又はプロファイル若しくは発現レベルの増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルの検出可能な減少が検出された場合、前記阻害剤の有効性を十分であると評価するステップと
を含む方法に関する。
【０００６】
炎症促進性サイトカインは、全身性炎症を促進することができるサイトカインである。炎症促進性サイトカインは、本明細書で定義した炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状に好ましくは関与している、又はこれと関連している、又はこれの結果である。炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−１β、ＴＮＦα又はＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−５からなる群から好ましくは選択される。ＩＬ−１βは、好ましい炎症促進性サイトカインである。ＩＬ−１βは、クローン病に関与していることが既知である。
【０００７】
かかる炎症促進性サイトカインの阻害剤は、前記炎症促進性サイトカインの産生を阻害することができる及び／又は前記炎症促進性サイトカインの発現レベルを減少させることができる及び／又は前記炎症促進性サイトカインの活性を減少させることができる及び／又は前記サイトカインの受容体を阻害することができる及び／又はその受容体への前記サイトカインの結合に関して競合することができる化合物とすることができる。かかる阻害剤は、前記サイトカイン受容体の鎖を阻害することができる及び／又はその受容体の１つの鎖を標的とすることによって、その受容体への前記サイトカインの結合に関して競合することができる。かかる阻害剤は、本明細書で後ほど定義した対象又は前記対象の試料におけるこの阻害及び／又は減少を示すことができる。ＩＬ−６の阻害剤は、ＩＬ−６Ｒの阻害剤とすることができる。ＩＬ−６Ｒの阻害剤は、好ましくはＩＬ−６Ｒの１つの鎖の阻害剤、より好ましくはＩＬ−６Ｒのアルファ鎖の阻害剤である。ＩＬ−１７の阻害剤は、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆの阻害剤とすることができる。ＩＬ−１２の阻害剤は、ＩＬ−１２Ｐ４０の阻害剤とすることができる。炎症促進性サイトカインの好ましい阻害剤を、表２において同定する。
【０００８】
炎症促進性サイトカインのいくつかの阻害剤は、既に知られており、開発されており、炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状を治療する、遅延させる、治癒させる、防止するために今なお開発中のものもある。好ましい炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状の例は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、他のＲＡ様疾患、クローン病、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、化膿性汗腺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、サルコイドーシス、痛風、ウェゲナー病（Ｗｅｇｅｎｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、２型糖尿病、アテローム性動脈硬化症、ライム病、敗血症、喘息、潰瘍性大腸炎、強直性脊椎炎を含む。他のＲＡ様疾患は、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎又は若年性関節炎を含む。好ましい炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状を、表１において同定する。
【０００９】
炎症促進性サイトカインの阻害剤の例は、ＩＬ−１βに対して産生されたヒトモノクローナル抗体であるＮｏｖａｒｔｉｓ製のイラリス（Ｉｌａｒｉｓ）（すなわちカナキヌマブ）、Ａｂｂｏｔｔ製のＴＮＦαの阻害剤であるヒュミラ（Ｈｕｍｉｒａ）（すなわちアダリムマブ）又はＷｙｅｔｈ／Ｐｆｉｚｅｒ製のＴＮＦαの別の阻害剤であるエンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（すなわちエタネルセプト）、又はＲｏｃｈｅ製のＩＬ−６Ｒの阻害剤であるトシリズマブのような、炎症促進性サイトカインに対して産生された阻害抗体を含む。カスパーゼ１阻害剤ＶＲＴ（Ｖｅｒｔｅｘ）のような炎症促進性サイトカインを阻害する小分子（又はペプチド模倣物）。阻害抗体又はペプチド模倣物をどのように産出するのかに関して、より多くの情報を、後の節で提供する。カスパーゼ１阻害剤ＶＲＴは、ＩＬ−１βの産生を阻害することが既知であり、前記カスパーゼ１阻害剤は、実験部分で説明するクローン病の治療において既に使用されている。トシリズマブは、クローン及びＲＡの治療において既に使用されている。エンブレルは、ＲＡ、強直性脊椎炎、及び乾癬性関節炎の治療において既に使用されている。
【００１０】
第２の方法：Ｂ細胞の阻害剤の有効性を評価すること
別の態様では、本発明は、対象におけるＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための方法であって、
（ａ）前記対象から試料を採取するステップと、
（ｂ１）前記試料を、前記試料におけるＢ細胞の産生を誘発することができる化合物と接触させるステップと、
（ｂ２）前記試料を、前記試料における前記Ｂ細胞の前記阻害剤と接触させるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料におけるＢ細胞の数を決定するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ１）の終わりに前記Ｂ細胞の検出可能な数又は数の増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記Ｂ細胞の数の検出可能な減少が検出された場合、前記阻害剤の有効性を十分であると評価するステップと
を含む方法に関する。
【００１１】
炎症促進性サイトカインのように、Ｂ細胞は、全身性炎症を促進することができ得る。Ｂ細胞は、本明細書で定義した炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状に関与し得る、又はこれと関連し得る、又はこれの結果であり得る。Ｂ細胞は、当業者に既知の技法によりＢ細胞特異的マーカーの存在を評価することによって、試料において同定することができる。マーカーが細胞表面で発現される場合、好ましい技法は、前記マーカーの細胞外ドメイン（の部分）を認識する特異的抗体を使用したＦＡＣＳ（蛍光標示式細胞分取）分析である。好ましいＢ細胞特異的マーカーは、ＣＤ２０又はＣＤ１９である。かかるＦＡＣＳ分析において使用されるＣＤ２０に対する好ましい市販の入手可能な抗体は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製のクローン２Ｈ７であるＡｎｔｉ−ＣＤ２０である。
【００１２】
Ｂ細胞マーカーが、試料中に存在するＢ細胞の数を評価するために、本発明において使用されることは、当業者には明らかである。Ｂ細胞マーカーは、本明細書で同定したＢ細胞の阻害剤の標的でもある。
【００１３】
かかるＢ細胞の阻害剤は、前記Ｂ細胞の産生を阻害することができる及び／又は前記Ｂ細胞の数を減少させることができる及び／又は前記Ｂ細胞の活性を減少させることができる化合物とすることができる。Ｂ細胞の阻害剤は、Ｂ細胞を除去する／捕獲する／不活化することができる及び／又はかかるＢ細胞によって産生される抗体を除去する／捕獲する／不活化することができる化合物と考えることもできる。Ｂ細胞の活性は、ＩＬ−６又はＩＬ−１０のような炎症促進性サイトカインの産生とすることができるか、又はヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１７）などの他の細胞による炎症促進性サイトカインの産生を促進することとすることができる。Ｔｈ１７は、炎症促進性サイトカインとしてのＩＬ−１７を産生することができることが既知である。
【００１４】
Ｂ細胞のいくつかの阻害剤は、既に知られており、開発されており、炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状を治療する、遅延させる、治癒させる、防止するために今なお開発中のものもある。Ｂ細胞の好ましい阻害剤は、より好ましくは表２において同定した、ＣＤ２０の阻害剤：リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＣＨ）、オファツムマブ（ＧＳＫ、ＵＫ）、ベルツズマブ（Ｔａｋｅｄａ、ＪＰ）又はオクレリズマブ（Ｒｏｃｈｅ  ＣＨ）である。Ｂ細胞の別の好ましい阻害剤は、ＣＤ１９の阻害剤である。好ましい阻害剤又はＣＤ１９は、ＧＢＲ  ４０１（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＣＨ）である。
【００１５】
好ましい炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状の例は、本明細書で既に定義した。Ｂ細胞が関与し得る、又は関連し得る、又はかかる疾患又は症状の結果であり得るより好ましい炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状は、関節リウマチ（ＲＡ）及び多発性硬化症（ＭＳ）を含む。好ましい炎症性及び／若しくは自己免疫性疾患又は症状を、表１において同定する。
【００１６】
好ましい実施形態では、第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するもの）及び第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するもの）を、同じ対象に適用する。以下に、第１の方法の各特徴を、さらに定義する。別段の指示がない場合、第１の方法の各特徴は、第２の方法に適用される。
【００１７】
したがって、本発明は、対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための及び／又はＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための方法であって、
（ａ）前記対象から試料を採取するステップと、
（ｂ１）前記試料を、前記試料における炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物と接触させる及び／又は前記試料を、前記試料におけるＢ細胞の産生を誘発することができる化合物と接触させるステップと、
（ｂ２）前記試料を、前記試料における前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤と接触させる及び／又は前記試料を、前記試料における前記Ｂ細胞の前記阻害剤と接触させるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルを決定する及び／又は前記試料におけるＢ細胞の数を決定するステップと、
ステップ（ｄ）：
（ｄ１）ステップ（ｂ１）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの検出可能なプロファイル若しくは発現レベル又はプロファイル若しくは発現レベルの増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルの検出可能な減少が検出された場合、前記炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を十分であると評価するステップ及び／又は
（ｄ２）ステップ（ｂ１）の終わりに前記Ｂ細胞の検出可能な数又は数の増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記Ｂ細胞の数の検出可能な減少が検出された場合、前記Ｂ細胞の阻害剤の有効性を十分であると評価するステップと
を含む方法に関する。
【００１８】
【表１】
2016524697.tif 000002
【表２】
2016524697.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＩＬ−１β産生に及ぼすカスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）の効果を示す図である。ヒトＰＢＭＣを、いくつかのＰＲＲアゴニストに２４ｈの間曝露して、ＩＬ−１β産生を刺激した。ＰＲＲリガンドに加えて、ＰＢＭＣを、カスパーゼ−１阻害剤の存在下でＰＲＲリガンドで刺激した（左上のパネル）。５０人の対象のＰＢＭＣを、これらの実験に含んだ。別個のパネルでは、カスパーゼ−１阻害剤を有する又は有さない種々のＰＰＲアゴニストを示す。ＩＬ−１βは、ＥＬＩＳＡによって決定した。
【図２】ＡＴＧ１６Ｌ１遺伝子型に依存するカスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）の効果を示す図である。５０人の対象を、ＡＴＧ１６Ｌ１遺伝子型に関して遺伝子型を同定し、その後ＩＬ−１β産生を、遺伝子型毎に発現させた。ＭＤＰ、ＬＰＳ並びにＭＤＰ及びＬＰＳの組合せの、３つの異なるＰＲＲリガンドを示した。ＩＬ−１βは、ＥＬＩＳＡによって決定した。左パネル；各対象のＩＬ−１β産生を示す。右パネル；ボックスプロットを示す。
【図３】ＬＰＳ−及びＭＤＰ−誘発ＩＬ−１β産生に依存するカスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）の効果を示す図である。ＬＰＳ又はＭＤＰでの刺激後の高（＞２０００ｐｇ．ｍｌ）、中（１０００〜２０００ｐｇ／ｍｌ）及び低（＜１０００ｐｇ．ｍｌ）ＩＬ−１β産生者での対象の層別化。ビヒクル対照と比較したカスパーゼ−１阻害の効果を、阻害百分率で対象の各群において示す。
【図４】健常な個体におけるＴＮＦα産生を示す図である。１０４の個体からのＰＢＭＣを、標準的なプロトコールに従って単離した。ＴＮＦα産生能力を、１０ｎｇ／ｍｌ  Ｅ．コリＬＰＳ又は１０６ＨＫカンジダ／ｍｌへの２４ｈの曝露によって決定した。その後ＴＮＦαを、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。
【図５】ＬＰＳ−及びカンジダ−誘発ＴＮＦα産生の相関を示す図である。１０４の対象からのＰＢＭＣをＥ．コリＬＰＳ又はＨＫカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）で刺激した。ＴＮＦα産生能力を、１０ｎｇ／ｍｌエシェリキア・コリＬＰＳ又は１０６ＨＫカンジダ・アルビカンス／ｍｌへの２４ｈの曝露によって決定した。その後ＴＮＦαを、ＥＬＩＳＡによって決定した。図は、全ての対象がＬＰＳとカンジダの両方に関して高ＴＮＦα産生者であることを示すわけではないことを示した。
【図６】クローン患者の層別化を示す図である。２３人のＩＢＤ患者から、ＰＢＭＣを単離し、Ｅ．コリＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）又はＰａｍ３ｃｙｓ／ＭＤＰ（１０ｕｇ／ｍｌ及び１０ｕｇ／ｍｌ）で２４ｈの間刺激した。その後ＴＮＦαを、ＥＬＩＳＡによって決定した。ＭＤＰ（ムラミル−ジ−ペプチド）は、細胞内ＮＯＤ２受容体によって認識されることになるので、これは、疾患特異的刺激と考えられる。
【図７】２人のＲＡ患者からのＰＢＭＣを、ＩｇＧ対照（ＩｖＩｇ）又は３つの異なるＴＮＦα阻害剤で３０分間刺激した。その後１０６ＨＫカンジダ／ｍｌを加えた。２４ｈ後、ＩＬ−１β産生を、ＥＬＩＳＡによって測定した。抗ＴＮＦαを、抗ＴＮＦα療法後にＲＡ患者に存在することになる用量である、４ｕｇ／ｍｌの用量で試験した。３つ全てのＴＮＦα遮断薬がＩＬ−１β産生を低下させたことに注目されたい。ＴＮＦαがカンジダ曝露によって引き出されたＰＢＭＣによるＩＬ−１β産生に寄与することは既知である。
【図８】１８８人の痛風患者のＰＢＭＣを、培地（ＲＰＭＩ１６４０）Ｐａｍ３ｃｙｓ、又はＭＳＵ／Ｃ１６．０で２４ｈの間刺激した。その後、ＩＬ−１βを、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。ここで、ＭＳＵ／Ｃ１６．０（痛風特異的）がＩＬ−１βの強力な誘発因子であることが分かる。
【図９】ＭＳ患者の層別化を示す図である。４人のＭＳ患者並びに４人の年齢及び性別が一致した健常対照から単離したＰＢＭＣを、７日間、ＲＰＭＩ、カンジダ・アルビカンス（１．１０６／ｍｌ）、ＭＯＧペプチド（１０μｇ／ｍｌ）、抗ＣＤ３／ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ：０．１μｇ／ｍｌ）及びＭＯＧ／抗ＣＤ３／２８の組合せ（１０μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌ：０．１μｇ／ｍｌ）で刺激した。図９のａは、健常対照と比較した場合、ＭＳ患者のＩＬ−１７Ａ産生がＭＯＧ／抗ＣＤ３／２８への曝露後に強く上方制御されたことを示した。図９のｂは、対照と比較した場合、ＰＢＭＣによるＩＬ−２２産生がカンジダ・アルビカンス及びＭＯＧ／抗ＣＤ３／２８への曝露後にＭＳ患者において上昇することを示した。興味深いことに、ＭＯＧ／抗ＣＤ３／２８刺激後のＩＬ−２２産生は、強く上方制御される。カンジダ・アルビカンス誘発ＩＦＮ−ｇはわずかに高いけれども、大きな違いはＭＳ患者と健常対照間のＩＦＮ−γ産生において注目されなかった（図９のｃ）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の方法（すなわち第１及び／又は第２の方法）は、対象を所与の自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患並びに／又は症状に関して治療する前に行うことができる。かかる治療が開始したやいなや、本発明の方法を行うことも本発明によって包含される。かかる場合では、現在の治療法（すなわち第１の方法における炎症促進性サイトカインの阻害剤及び第２の方法におけるＢ細胞の阻害剤）の有効性を、他の可能な治療法の１つ（すなわち第１の方法における炎症促進性サイトカインの他の阻害剤及び第２の方法におけるＢ細胞の阻害剤）と比較することができる。本発明の方法が、他の治療法の有効性が現在の治療法の１つよりも優れていると予想されることを示す場合、前記対象に行われる治療の型を改変することができ、最良の有効性を有する阻害剤を選択することができる。
【００２１】
本発明の文脈では、対象は、ヒト又は動物とすることができる。方法（すなわち第１及び／又は第２の方法）を、対象に必要な頻度適用することができる。対象がヒトである場合、対象は、例えばその人の遺伝的バックグラウンドにより、自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状を有する又は発症する高いリスクを有すると疑われる人とすることができる。
【００２２】
したがって、好ましい実施形態では、本発明は、自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための方法であって、前記炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−１−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及びＩＦＮγからなる群から選択され、前記方法が、
（ａ）前記対象から試料を採取するステップと、
（ｂ１）前記試料を、前記試料における炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物と接触させるステップと、
（ｂ２）前記試料を、前記試料における前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤と接触させるステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料における前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルを決定するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ１）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの検出可能な発現レベル又は発現レベルの増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの発現レベルの検出可能な減少が検出された場合、前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤の有効性を十分であると評価するステップと
を含む方法を提供する。
【００２３】
表１は、いくつかの自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患並びに／又は症状並びに前記疾患及び／又は症状に関与することが既知である主要な炎症促進性サイトカインの概要を提供する。表１は、Ｂ細胞が関与する又は役割を果たすと疑われる、いくつかの自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患並びに／又は症状の概要も提供する。表２は、いくつかの炎症促進性サイトカインの既知の阻害剤のいくつかの概要を示す。表２は、Ｂ細胞のいくつかの既知の阻害剤の概要も提供する。
【００２４】
一実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価する及び／又はＢ細胞阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、ＲＡ（関節リウマチ）である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される及び／又は
Ｂ細胞阻害剤によって標的とされるＢ細胞マーカーが、ＣＤ２０又はＣＤ１９である
ようなものである。
【００２５】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１２である場合、ＩＬ−１２の阻害剤は、ＩＬ−１２ｐ４０の阻害剤であることが好ましい。かかる好ましい阻害剤は、ウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ、ＢＥ）である。
【００２６】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１７である場合、ＩＬ−１７の阻害剤は、ＩＬ−１７Ａの阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１７Ａの好ましい阻害剤は、ブロダルマブ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）；イキセキズマブ（；Ｌｉｌｌｙ（Ｅｌｉ）、ＵＳＡ）又はセクキヌマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）である。
【００２７】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−２３である場合、ＩＬ−２３の阻害剤は、ウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ、ＢＥ）であることが好ましい。
【００２８】
炎症促進性サイトカインがＣＤ２０である場合、ＣＤ２０の阻害剤は、リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００２９】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−６である場合、ＩＬ−６の阻害剤は、トシリズマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００３０】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１ｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００３１】
炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである場合、ＴＮＦαの阻害剤は、エンブレル（Ｅｍｂｒｅｌ）（Ａｍｇｅｎ  ａｎｄ  Ｗｈｙｅｔｔ、ＵＳＡ）；ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＵＳＡ）；ゴリムマブ（ＭＳＤ）であることが好ましい。
【００３２】
好ましいＣＤ２０阻害剤は、リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＣＨ）、オファツムマブ（ＧＳＫ、ＵＫ）、ベルツズマブ（Ｔａｋｅｄａ、ＪＰ）又はオクレリズマブ（Ｒｏｃｈｅ  ＣＨ）である。Ｂ細胞の別の好ましい阻害剤は、ＣＤ１９の阻害剤である。好ましい阻害剤又はＣＤ１９は、ＧＢＲ  ４０１（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＣＨ）である。
【００３３】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、別のＲＡ様疾患である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦαである
ようなものである。
【００３４】
炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである場合、ＴＮＦαの阻害剤は、エンブレル（Ａｍｇｅｎ  ａｎｄ  Ｗｈｙｅｔｔ、ＵＳＡ）；ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＵＳＡ）；ゴリムマブ（ＭＳＤ）であることが好ましい。
【００３５】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、潰瘍性大腸炎である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦαである
ようなものである。
【００３６】
炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである場合、ＴＮＦαの阻害剤は、エンブレル（Ａｍｇｅｎ  ａｎｄ  Ｗｈｙｅｔｔ、ＵＳＡ）；ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＵＳＡ）；ゴリムマブ（ＭＳＤ）であることが好ましい。
【００３７】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、クローン病である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される
ようなものである。
【００３８】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１２である場合、ＩＬ−１２の好ましい阻害剤は、ＩＬ−１２ｐ４０の阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１２ｐ４０の好ましい阻害剤は、ウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ、ＢＥ）である。
【００３９】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１７である場合、ＩＬ−１７の好ましい阻害剤は、ＩＬ−１７Ａの阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１７Ａの好ましい阻害剤は、ブロダルマブ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）；イキセキズマブ（；Ｌｉｌｌｙ（Ｅｌｉ）、ＵＳＡ）又はセクキヌマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）である。
【００４０】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−２３である場合、ＩＬ−２３の阻害剤は、ウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ、ＢＥ）であることが好ましい。
【００４１】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１ｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００４２】
炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである場合、ＴＮＦαの阻害剤は、エンブレル（Ａｍｇｅｎ  ａｎｄ  Ｗｈｙｅｔｔ、ＵＳＡ）；ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＵＳＡ）；ゴリムマブ（ＭＳＤ）であることが好ましい。
【００４３】
一実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、乾癬である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦα、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される
ようなものである。
【００４４】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１２である場合、ＩＬ−１２の好ましい阻害剤は、ＩＬ−１２ｐ４０の阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１２ｐ４０の好ましい阻害剤は、ウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ、ＢＥ）である。
【００４５】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１７である場合、ＩＬ−１７の好ましい阻害剤は、ＩＬ−１７Ａの阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１７Ａの好ましい阻害剤は、ブロダルマブ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）；イキセキズマブ（；Ｌｉｌｌｙ（Ｅｌｉ）、ＵＳＡ）又はセクキヌマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）である。
【００４６】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−２３である場合、ＩＬ−２３の阻害剤は、ウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ、ＢＥ）であることが好ましい。
【００４７】
炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである場合、ＴＮＦαの阻害剤は、エンブレル（Ａｍｇｅｎ  ａｎｄ  Ｗｈｙｅｔｔ、ＵＳＡ）；ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＵＳＡ）；ゴリムマブ（ＭＳＤ）であることが好ましい。
【００４８】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価する及び／又はＢ細胞阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、ＭＳ（多発性硬化症）である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−１β、及びＩＬ−１７からなる群から選択される及び／又は
Ｂ細胞阻害剤によって標的とされるＢ細胞マーカーが、ＣＤ２０又はＣＤ１９である
ようなものである。
【００４９】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１７である場合、ＩＬ−１７の好ましい阻害剤は、ＩＬ−１７Ａの阻害剤又はＩＬ−１７Ｆの阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１７Ａの好ましい阻害剤は、ブロダルマブ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）；イキセキズマブ（Ｌｉｌｌｙ（Ｅｌｉ）、ＵＳＡ）又はセクキヌマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）である。
【００５０】
炎症促進性サイトカインがＣＤ２０である場合、ＣＤ２０の阻害剤は、リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００５１】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１ｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００５２】
好ましいＣＤ２０阻害剤は、リツキシマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＣＨ）、オファツムマブ（ＧＳＫ、ＵＫ）、ベルツズマブ（Ｔａｋｅｄａ、ＪＰ）又はオクレリズマブ（Ｒｏｃｈｅ  ＣＨ）である。Ｂ細胞の別の好ましい阻害剤は、ＣＤ１９の阻害剤である。好ましい阻害剤又はＣＤ１９は、ＧＢＲ  ４０１（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＣＨ）である。
【００５３】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、喘息である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−５及びＩＦＮγからなる群から選択される
ようなものである。
【００５４】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−５である場合、ＩＬ−５の阻害剤は、メポリズマブ（ＧＳＫ、ＵＫ）であることが好ましい。
【００５５】
炎症促進性サイトカインがＩＦＮγである場合、ＩＦＮγの阻害剤は、イムキン（Ｉｍｍｕｋｉｎｅ）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、ＤＥ）であることが好ましい。
【００５６】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、敗血症である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−１β及びＩＦＮγからなる群から選択される
ようなものである。
【００５７】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１β）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００５８】
炎症促進性サイトカインがＩＦＮγである場合、ＩＦＮγの阻害剤は、イムキン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、ＤＥ）であることが好ましい。
【００５９】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、痛風である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−１βである
ようなものである。
【００６０】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１β）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００６１】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、ライム病である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−１β及びＩＬ−１７からなる群から選択される
ようなものである。
【００６２】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１７である場合、ＩＬ−１７の好ましい阻害剤は、ＩＬ−１７Ａの阻害剤であることが好ましい。ＩＬ−１７Ａの好ましい阻害剤は、ブロダルマブ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）；イキセキズマブ（；Ｌｉｌｌｙ（Ｅｌｉ）、ＵＳＡ）又はセクキヌマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）である。
【００６３】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１ｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００６４】
別の実施形態では、本明細書で先に定義した本発明の方法（すなわち好ましくは自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に罹っていると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）は、
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状が、２型糖尿病である及び／又は
炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦα及びＩＬ−１βからなる群から選択される
ようなものである。
【００６５】
炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである場合、ＩＬ−１βの阻害剤は、アナキンラ（ＩＬ−１Ｒα）（Ｓｏｂｉ、ＳＥ）；イラリス（抗ＩＬ−１ｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＣＨ）であることが好ましい。
【００６６】
炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである場合、ＴＮＦαの阻害剤は、エンブレル（Ａｍｇｅｎ  ａｎｄ  Ｗｈｙｅｔｔ、ＵＳＡ）；ヒュミラ（Ａｂｂｏｔｔ、ＵＳＡ）；インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＵＳＡ）；ゴリムマブ（ＭＳＤ）であることが好ましい。
【００６７】
したがって、好ましい方法は、以下の自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に及び／又は以下の炎症促進性サイトカインに及び／又は以下のＢ細胞マーカーに適用される：
ｉ．ＲＡ及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される及び／又はＢ細胞マーカーがＣＤ２０及び／又はＣＤ１９である、
ｉｉ．別のＲＡ様疾患及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである、
ｉｉｉ．潰瘍性大腸炎及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦαである、
ｉｖ．クローン病及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される、
ｖ．乾癬及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３からなる群から選択される、
ｖｉ．ＭＳ及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１β及びＩＬ−１７からなる群から選択される及び／又はＢ細胞マーカーがＣＤ２０及び／又はＣＤ１９である、
ｖｉｉ．喘息及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−５及びＩＦＮγからなる群から選択される、
ｖｉｉｉ．敗血症及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１β及びＩＦＮγからなる群から選択される、
ｉｘ．痛風及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１βである、
ｘ．ライム病及び／又は炎症促進性サイトカインがＩＬ−１β及びＩＬ−１７からなる群から選択される、
ｘｉ．２型糖尿病及び／又は炎症促進性サイトカインがＴＮＦα及びＩＬ−１βからなる群から選択される。
【００６８】
第１及び第２の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価すること及びＢ細胞の阻害剤の有効性を評価すること）のステップ（ａ）では、前記対象からの試料を採取する。したがって、本発明の方法は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ若しくはｅｘ−ｖｉｖｏ方法及び／又は非観血法である。試料は、対象から採取された流体を好ましくは含む又はこれからなる。流体は、尿、血液、脊髄液、唾液、精液、又は肺胞洗浄液を含む又はこれらからなる又はこれらに由来する又はこれらから選択されることがより好ましい。好ましい流体は、血液である、血液を含む、血液からなる、又は血液に由来する。血液は、全血として使用することができる、又はさらに使用する前に希釈又は精製することができる。希釈は、培養培地又は緩衝液における１：４、１：５又は１：６とすることができる。試料は、細胞を含むことができる。好ましい試料は、血液細胞（すなわちＢ細胞及び／又はＴ細胞及び／又はＢ細胞前駆体及び／又はＴ細胞前駆体）を含む。好ましい細胞は、ＰＢＭＣ（末梢血単核球）を含む。好ましい試料は、流体を含み、血液をより好ましくは含み、ＰＢＭＣをさらにより好ましくは含む。試料の独自性に依存して、試料を培養することができる。例えば試料がＰＢＭＣを含む場合、試料を当業者に既知の適した化合物で補充した適した培地において培養することができる。ＰＢＭＣを、実験部分において説明したように培養することが好ましい。
【００６９】
第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）のステップａ）の又はステップａ）において採取された好ましい試料は、炎症促進性サイトカインを含まない又は本明細書で後で説明するように評価された（すなわちＲＴ  ＰＣＲ又はＥＬＩＳＡ）その検出可能な量を含まない。
【００７０】
第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための）のステップａ）の又はステップａ）において採取された好ましい試料は、Ｂ細胞を含まない又は本明細書で説明するように評価された（Ｂ細胞マーカーを使用したＦＡＣＳ分析）その検出可能な数を含まない。特異的なＢ細胞マーカーは、本明細書で既に同定されている（ＣＤ１９又はＣＤ２０）。かかるＦＡＣＳ分析において使用されるＣＤ２０に対する好ましい市販の入手可能な抗体は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製のクローン２Ｈ７であるＡｎｔｉ−ＣＤ２０である。
【００７１】
第１及び第２の方法のそれぞれが本明細書で同定された試料の異なる型を使用することは、本発明によって包含される。しかしながら、試料の同じ型を、各方法において使用することができる。
【００７２】
第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価すること）のステップ（ｂ１）では、ステップ（ａ）において採取された前記試料を、前記試料における炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物と接触させる。本発明の文脈では、炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物を、前記サイトカインの産生を増加させることができる化合物と置き換えることができる。炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる任意の既知の化合物を使用することができる。例えば、ＬＰＳ、ＭＤＰ、ＬＰＳ／ＭＤＰ、Ｐａｍ３ｃｙｓ／ＭＤＰ、ポリＩ：Ｃ、フラゲリン又はＨＫ  Ｅ．コリ（Ｅ．Ｃｏｌｉ）は、ＩＬ−１βの産生を誘発する又は増加させることが既知である（８）。
【００７３】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインの産生を誘発するために使用する化合物は、所与の自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に特異的である。前記化合物は、疾患した細胞又は疾患した対象の細胞に存在する受容体に結合することができることが好ましい。疾患に特異的でない化合物が使用される方法と比較して、かかる化合物の使用が本発明の方法の感受性及び／又は特異性及び／又は予測性を改善することが実証された（特に実施例７の図５を参照されたい）。
【００７４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）又はクローン病に関して、かかる好ましい化合物は、ＭＤＰ（ムラミルジペプチド（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ  ＵＳＡ））である。８〜１２μｇ／ｍｌのＭＤＰを使用することが好ましい。より好ましくは１０μｇ／ｍｌ。ＭＤＰは、よく知られているＮＯＤ２リガンドであり、疾患特異的であると考えられる（実施例３を参照されたい）。
【００７５】
ＭＳに関して、かかる好ましい化合物は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８と組み合わせたミエリン塩基性タンパク質又はＭＯＧペプチドである（実施例７を参照されたい）。好ましい抗ＣＤ３及び好ましい抗ＣＤ２８は、ＭＡＣＳ  ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ｂｉｏｔｅｃ（Ｇｅｒｍａｎｙ）製である。抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８は、少なくとも０．８、０．９、１、１．１、１．２μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ使用する。これらの抗体のそれぞれに関する好ましい濃度は、１μｇ／ｍｌである。ＭＯＧペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。ＭＯＧペプチドは、Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ  Ｎｏ．２５６８）から購入される。
【００７６】
痛風に関して、かかる好ましい化合物は、尿酸ナトリウム（ＭＳＵ）結晶及び脂肪酸（Ｃ１６．０）（実施例６を参照されたい）である。ＭＳＵ／Ｃ１６．０は、（２８０μｇ／ｍｌ、１８０μＭ  Ｃ１６．０）から（２９０μｇ／ｍｌ、１９０μＭ  Ｃ１６．０）（３００μｇ／ｍｌ、２００μＭ  Ｃ１６．０）（３１０μｇ／ｍｌ、２１０μＭ  Ｃ１６．０）にわたる濃度で使用することが好ましい。Ｃ１６．０は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）から購入される。ＭＳＵは、当業者に既知の技法を使用して調製する。
【００７７】
ライム病に関して、かかる化合物は、ボレリア抗原又はボレリア細胞全体又はその部分又はそのライセートとすることができる又はこれらを含むことができる。
【００７８】
敗血症に関して、かかる化合物は、細菌及び／若しくは真菌抗原又は細菌及び／若しくは真菌細胞全体又はその部分又はそのライセートとすることができる又はこれらを含むことができる。
【００７９】
喘息に関して、かかる化合物は、キチン及び／又はアスペルギルス抗原とすることができる。喘息に関して、かかる化合物は、アスペルギルス抗原及び／又はアスペルギルス細胞全体又はその部分又はそのライセートを含むことができる。
【００８０】
第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価すること）のステップ（ｂ１）では、ステップ（ａ）において採取された前記試料を、前記試料におけるＢ細胞の産生を誘発することができる化合物と接触させる。本発明の文脈では、Ｂ細胞の産生を誘発することができる化合物を、Ｂ細胞の数を増加させることができる化合物及び／又はかかるＢ細胞の活性を増加させる又は活性化することができる化合物と置き換えることができる。Ｂ細胞の産生を誘発する又は増加させることができる任意の既知の化合物を使用することができる。例えば、Ｂ細胞の産生を誘発する又は増加させることが既知の化合物は、ＩＬ−５、ＩＬ−６又はＩＬ−７を含む。
【００８１】
好ましい実施形態では、Ｂ細胞の産生を誘発するために使用する化合物は、所与の自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に特異的である。前記化合物は、疾患した細胞又は疾患した対象の細胞に存在する受容体に結合することができることが好ましい。
【００８２】
第１及び第２の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価すること及びＢ細胞の阻害剤の有効性を評価すること）における（ｂ１）接触ステップは、１、２、３、４、５、６、７、８、１２、２４、３０、４８、６０、７０、８０、９０、９３、９６、１００、１１０時間以上の持続時間を有することができる。接触は、４〜９６時間、又は２０〜５０時間、又は２４時間、又は４８時間の持続時間を有することが好ましい。この接触ステップは、ＲＰＭＩ  １６４０などの培養培地における培養ステップとすることができる。
【００８３】
第１及び第２の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価すること及びＢ細胞の阻害剤の有効性を評価すること）のステップ（ｂ２）では、ステップ（ａ）において採取された前記試料を、前記炎症促進性サイトカインの阻害剤（及び／又は第２の方法に関してＢ細胞の阻害剤）と接触させる。前記炎症促進性サイトカインの前記阻害剤の独自性は、本明細書で既に定義した。前記Ｂ細胞の阻害剤の独自性は、本明細書で既に定義した。ステップ（ｂ１）におけるように、接触は、１、２、３、４、５、６、７、８、１２、２４、３０、４８、６０、７０、８０、９０、９３、９６、１００、１１０時間以上の持続時間を有することができる。接触は、４〜９６時間、又は２０〜５０時間、又は２４時間、又は４８時間の持続時間を有することが好ましい。この接触ステップは、ＲＰＭＩ  １６４０などの培養培地における培養ステップとすることができる。通常、ステップ（ａ）の試料は、少なくとも２つの部分、３つの部分、４つの部分に分けられ、これらの部分のそれぞれにおいて、ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）を行う。ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）を、順次又は同時に、好ましくは順次行うことができる。第１及び第２の方法が順次又は同時に行われる場合、（ａ）の試料を、４つの部分に分けることができる：これらの部分の２つに適用される第１の方法、残りの２つの部分における第２の方法。試料の異なる型が第１対第２の方法に使用される場合、各試料を各方法のステップ（ｂ１）及び（ｂ２）を行うための２つのみに分けることができることも本発明によって包含される。
【００８４】
第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価すること）のステップ（ｃ）では、前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルは、ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料において決定される。
【００８５】
本発明の文脈では、「プロファイル」、「発現プロファイル」又は「発現のプロファイル」という表現は、「発現レベル」又は「産生レベル」又は「活性レベル」と置き換えることができる。したがって、炎症促進性サイトカインのプロファイルは、その産生（コード核酸及び／又はタンパク質レベル）レベル及び／又はその活性レベルを表すことができる。
【００８６】
前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルの評価は、タンパク質発現レベル（前記タンパク質の量を定量化すること）及び／又は活性レベル（前記タンパク質の活性を定量化すること）で直接的に及び／又は前記炎症促進性サイトカインをコードするヌクレオチド配列の量を定量化することによって間接的に実現することができる。当業者は、試験する対象又は種に依存して、炎症促進性サイトカインの複数のアイソフォームを単離することが可能であることを理解することになる。
【００８７】
第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価すること）のステップ（ｃ）では、前記Ｂ細胞の数は、ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料において決定される。
【００８８】
Ｂ細胞の数は、前記細胞の活性も表すことができる。
【００８９】
Ｂ細胞の数は、細胞レベル（前記細胞の量を定量化すること）及び／又は活性レベル（前記細胞の活性を定量化すること）で直接的に評価することができる。当業者は、Ｂ細胞の数又は活性を評価する方法を知っている。Ｂ細胞の数は、本明細書で前に説明したＦＡＣＳ技法を使用して評価することができる。Ｂ細胞の活性は、炎症促進性サイトカイン（例えばＩＬ−６）の産生とすることができる又は他の細胞、例えばヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１７）による炎症促進性サイトカインの産生の促進とすることができる。ＩＬ−６のような炎症促進性サイトカインの産生の評価は、第１の方法の文脈で本明細書で説明した。したがって、第２の方法の実施形態では、炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルは、ステップ（ｂ１）及び（ｂ２）の終わりに前記試料において決定される。このプロファイル又は発現レベルは、第１の方法に関して本明細書で記載したものと同じ方法で評価する。ヘルパーＴ細胞１７の数は、ＦＡＣＳ分析を使用してＢ細胞として又はサイトカインフロー表現型検査（ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｆｌｏｗ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）によって評価することができる。サイトカインフロー表現型検査は、前記細胞におけるマーカーの細胞内発現を評価することを可能にする。Ｔｈ１７細胞のマーカーの例は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＣＤ４を含む。これらのマーカーの存在を評価するために使用される化合物の例は、
ＩＬ−１７Ａに関して：ｅＢｉｏ６４ＤＥＣ１７  ＦＩＴＣ
ＩＬ−１７Ｆに関して：ＳＨＬＲ１７  ＰＥ
ＩＬ−２１に関して：ｅＢｉｏ３Ａ３−Ｎ２  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７
ＩＬ−２２に関して：２２ＵＲＴＩ  ＰｅｒＣＰ−ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）７１０
ＣＤ４に関して：ＲＰＡ−Ｔ４  ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）４５０
を含む。
全てｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ製である。
【００９０】
ＩＬ−１βをコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号１を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＬ−１βアミノ酸配列は、配列番号２を含む又はこれからなる。
【００９１】
ＩＬ−６をコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号３を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＬ−６アミノ酸配列は、配列番号４を含む又はこれからなる。
【００９２】
ＩＬ−１７をコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号５を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＬ−１７アミノ酸配列は、配列番号６を含む又はこれからなる。
【００９３】
ＩＬ−２３をコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号７を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＬ−２３アミノ酸配列は、配列番号８を含む又はこれからなる。
【００９４】
ＴＮＦαをコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号９を含む又はこれからなる。好ましい相当するＴＮＦαアミノ酸配列は、配列番号１０を含む又はこれからなる。
【００９５】
ＩＦＮγをコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号１１を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＦＮγアミノ酸配列は、配列番号１２を含む又はこれからなる。
【００９６】
ＩＬ−１２をコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号２５を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＬ−１２アミノ酸配列は、配列番号２６を含む又はこれからなる。
【００９７】
ＩＬ−５をコードする好ましいヌクレオチド酸配列は、配列番号２９を含む又はこれからなる。好ましい相当するＩＬ−５アミノ酸配列は、配列番号３０を含む又はこれからなる。
【００９８】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−１βを含む又はこれからなる。ＩＬ−１βは、
配列番号２との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号１との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【００９９】
別の好ましい実施形態では、ＩＬ−１βをコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号１との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号２によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＬ−１βのアミノ酸配列をコードする。
【０１００】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−６を含む又はこれからなる。ＩＬ−６は、
配列番号４との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号３との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１０１】
別の好ましい実施形態では、ＩＬ−６をコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号３との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号４によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＬ−６のアミノ酸配列をコードする。
【０１０２】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−１７を含む又はこれからなる。ＩＬ−１７は、
配列番号６との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号５との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１０３】
別の好ましい実施形態では、ＩＬ−１７をコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号５との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号６によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＬ−１７のアミノ酸配列をコードする。
【０１０４】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−２３を含む又はこれからなる。ＩＬ−２３は、
配列番号８との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号７との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１０５】
別の好ましい実施形態では、ＩＬ−２３をコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号７との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号８によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＬ−２３のアミノ酸配列をコードする。
【０１０６】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＴＮＦαを含む又はこれからなる。ＴＮＦαは、
配列番号１０との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号９との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１０７】
別の好ましい実施形態では、ＴＮＦαをコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号９との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号１０によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＴＮＦαのアミノ酸配列をコードする。
【０１０８】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＦＮγを含む又はこれからなる。ＩＦＮγは、
配列番号１２との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号１１との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１０９】
別の好ましい実施形態では、ＩＦＮγをコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号１１との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号１２によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＦＮγのアミノ酸配列をコードする。
【０１１０】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−１２を含む又はこれからなる。ＩＬ−１２は、
配列番号２６との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号２５との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１１１】
別の好ましい実施形態では、ＩＬ−１２をコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号２５との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号２６によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＬ−１２のアミノ酸配列をコードする。
【０１１２】
好ましい実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−５を含む又はこれからなる。ＩＬ−５は、
配列番号３０との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を含むアミノ酸配列によって表される及び／又は
配列番号２９との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するヌクレオチド酸配列によってコードされる
ことがより好ましい。
【０１１３】
別の好ましい実施形態では、ＩＬ−１２をコードするヌクレオチド酸配列は、
配列番号２９との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有する及び／又は
配列番号３０によってコードされるアミノ酸配列との少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％の同一性を有するＩＬ−１２のアミノ酸配列をコードする。
【０１１４】
同一性は、本明細書で後で定義する。炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードするヌクレオチド配列の量の定量化は、（リアルタイム）ＰＣＲ、アレイ又はノーザン分析などの古典的な分子生物学技法を使用して好ましくは行う。この実施形態では、本明細書に記載の前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードするヌクレオチド配列は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を意味する。代わりに、別の好ましい実施形態によれば、方法では、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルは、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の量を定量化することによって、直接的に決定される。ポリペプチド量を定量化することは、任意の既知の技法によって行うことができる。ポリペプチド量は、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）に特異的に結合する分子を使用して定量化することが好ましい。好ましい結合性分子は、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）を認識するために特異的に産生された抗体、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）に特異的に結合することが既知である任意の他の分子から選択される。かかる抗体は、ウエスタンブロット法、又はラテックスビーズを使用したＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）若しくはＦＡＣＳ（蛍光標示式細胞分取法）などの当業者に既知の任意のイムノアッセイにおいて使用される。抗体の調製は、当業者に既知である。ＩＬ−１βのような炎症促進性サイトカインの存在は、実験データにおいて行ったように評価するのが好ましい。抗体を調製するために使用する方法の簡潔な説明は、本明細書で後で提供する。本発明の文脈では、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）に結合することが既知の任意の他の分子は、核酸、例えばＤＮＡ調節領域、ポリペプチド、代謝産物、基質、調節エレメント、構造性成分、シャペロン（輸送）分子、ペプチド模倣体、非ペプチド模倣体、又はリガンドの任意の他の型とすることができる。ペプチド模倣体は、本明細書で後で定義する。前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）に結合することが既知である分子の例は、ＩＬ−１β受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−２３受容体、ＴＮＦα受容体及び／又はＩＦＮ−γ受容体���前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）に向けられた抗体などの前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の受容体を含む。第２の結合性分子への前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の結合は、当業者に既知の任意の標準的な方法によって検出することができる。適した方法は、アフィニティークロマトグラフィー共電気泳動（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｃｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）（ＡＣＥ）アッセイ及びＥＬＩＳＡを含む。当業者は、前記炎症促進性サイトカインをコードする核酸配列及び／又は相当するポリペプチド（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の定量化の代わりに又はこれと組み合わせて、特定のアッセイを使用した、相当するポリペプチドの基質又は相当するポリペプチドの機能若しくは活性と関連していることが既知の任意の化合物の定量化又は相当するポリペプチドの機能若しくは活性の定量化が本発明の方法の範囲内に包含されることを理解することになる。例えば、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）又は前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）に結合することができる分子による標的遺伝子のトランス活性化は、例えば、標的遺伝子のプロモーターがレポーター遺伝子、例えば、Ｐ−ガラクトシダーゼ又はルシフェラーゼに連結している一過性のトランスフェクションアッセイにおいて、決定する及び定量化することができる。かかる評価は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏで行うことができる。
【０１１５】
炎症促進性サイトカインをコードするヌクレオチド配列の検出のための好ましいプライマーを、以下に提供する。
【０１１６】
ＩＬ−１β  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＣＡＧＣＴＡＣＧＡＡＴＣＴＣＣＧＡＣＣＡＣ（配列番号１３）；及び
逆方向プライマー  ＧＧＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＧＣＡＴＣＴＴＣ（配列番号１４）
であると同定される。
【０１１７】
ＩＬ−６  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＡＡＴＴＣＧＧＴＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＧ（配列番号１５）；及び
逆方向プライマー  ＧＧＴＴＧＴＴＴＴＣＴＧＣＣＡＧＴＧＣＣＴ（配列番号１６）
であると同定される。
【０１１８】
ＩＬ−１７  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＴＣＣＣＡＣＧＡＡＡＴＣＣＡＧＧＡＴＧＣ（配列番号１７）；及び
逆方向プライマー  ＧＧＡＴＧＴＴＣＡＧＧＴＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣ（配列番号１８）
であると同定される。
【０１１９】
ＩＬ−２３  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＣＴＣＡＧＧＧＡＣＡＡＣＡＧＴＣＡＧＴＴＣ（配列番号１９）；及び
逆方向プライマー  ＡＣＡＧＧＧＣＴＡＴＣＡＧＧＧＡＧＣＡ−（配列番号２０）
であると同定される。
【０１２０】
ＴＮＦα  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＧＴＣＡＧＡ（配列番号２１）；及び
逆方向プライマー  ＧＧＴＴＴＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡ（配列番号２２）
であると同定される。
【０１２１】
ＩＦＮγ  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＴＣＧＧＴＡＡＣＴＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＴＣＣＡ（配列番号２３）；及び
逆方向プライマー  ＴＣＣＴＴＴＴＴＣＧＣＴＴＣＣＣＴＧＴＴＴＴ（配列番号２４）
であると同定される。
【０１２２】
ＩＬ−１２  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＣＣＴＴＧＣＡＣＴＴＣＴＧＡＡＧＡＧＡＴＴＧＡ（配列番号２７）；及び
逆方向プライマー  ＡＣＡＧＧＧＣＣＡＴＣＡＴＡＡＡＡＧＡＧＧＴ（配列番号２８）
であると同定される。
【０１２３】
ＩＬ−５  ＰＣＲに使用する好ましいプライマーは、
順方向プライマー  ＣＣＴＴＧＣＡＣＴＴＣＴＧＡＡＧＡＧＡＴＴＧＡ（配列番号３１）；及び
逆方向プライマー  ＡＣＡＧＧＧＣＣＡＴＣＡＴＡＡＡＡＧＡＧＧＴ（配列番号３２）
であると同定される。
【０１２４】
任意選択で、本発明の第１の方法では、ステップ（ｃ）において決定された炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルを、前記発現レベル又はプロファイルに関する基準値と比較することができ、基準値は、好ましくは対照試料における前記発現レベル又はプロファイルに関する平均値である。
【０１２５】
本発明の文脈では、前記炎症促進性サイトカインのプロファイル又は発現レベルに関する「基準値」は、好ましくは対照試料における前記発現レベル又はプロファイルに関する平均値である。
【０１２６】
同じことが第２の方法にも当てはまり、ここでＢ細胞の数が基準、好ましくは対照試料に関するＢ細胞の数と比較される。本発明の文脈では、Ｂ細胞の数に関する「基準値」は、好ましくは対照試料におけるＢ細胞の平均数である。
【０１２７】
好ましい対照試料の２つの型は、本明細書で後で定義する：ステップ（ｂ１）に関するもの及びステップ（ｂ２）に関するもの。
【０１２８】
第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）の好ましい実施形態では、接触ステップ（ｂ１）及び／又は（ｂ２）の終わりに、上清を遠心分離によって単離し、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）のタンパク質を既知の方法を使用して当業者によって決定する。遠心分離は、１２００ｒｐｍで４℃とすることができる。代わりに、ステップ（ｂ１）及び／又は（ｂ２）の終わりに界面活性剤を試料に加えることができる。トリトンＸ０．１％などのいくつかの界面活性剤が使用される。界面活性剤を加えることは、遠心分離ステップが必要ではないことが予想されるので、魅力的である。細胞ライセートとも称される、前記界面活性剤を含む試料における前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルを決定することができる。
【０１２９】
第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための）の好ましい実施形態では、接触ステップ（ｂ１）及び／又は（ｂ２）の終わりに、Ｂ細胞を、本明細書で先に定義した特異的なＢ細胞マーカーを使用することによって単離する。
【０１３０】
第１又は第２の方法のステップ（ｄ）では、前記阻害剤の有効性を評価する。
【０１３１】
第１の方法では、ステップ（ｂ１）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの検出可能な発現レベル又は発現レベルの増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記炎症促進性サイトカインの発現レベルの検出可能な減少が検出された場合、前記炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性は、十分であると好ましくは言われる。
【０１３２】
第２の方法では、ステップ（ｂ１）の終わりに前記Ｂ細胞の検出可能な数又は数の増加が検出され、ステップ（ｂ２）の終わりに前記Ｂ細胞の数の検出可能な減少が検出された場合、前記Ｂ細胞の阻害剤の有効性は、十分であると好ましくは言われる。
【０１３３】
第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）のステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）では、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）及び／又はそれらの相当するヌクレオチド配列（又は前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の定常症状レベル）の検出可能な発現レベル若しくはプロファイル又は発現レベルの増加又はその生物学的活性におけるその任意の検出可能な活性若しくは検出可能な変化）は、対照における前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）及び／又は相当するヌクレオチド配列（又は相当するコードされた炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の定常状態レベル）の発現プロファイルと比較して、前に定義した方法を使用して評価する。好ましい対照は、同じ対象からの同様の試料であり、前記対照試料は、炎症促進性サイトカインの産生を誘発することができる化合物と接触していない。通常、前記対照では、炎症促進性サイトカインの発現レベルは、低い又は検出不可能である。好ましい実施形態によれば、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の活性の検出又は増加又は変化は、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードする遺伝子／ヌクレオチド配列に関する特定のｍＲＮＡアッセイを使用して、定量化する。
【０１３４】
前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードするヌクレオチド配列の発現レベルの増加は、ＰＣＲを使用した前記ヌクレオチド配列の発現レベルの少なくとも５％の増加を意味することが好ましい。
【０１３５】
ヌクレオチド配列の発現レベルの増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の増加を意味することがより好ましい。
【０１３６】
炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の低い又は検出不可能なプロファイル又は発現レベルは、前記Ｔリンパ球増殖因子（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードするヌクレオチド配列の発現レベルがＰＣＲを使用して検出可能ではない、又はＣｔ値が３５以上であることを好ましくは意味する。
【０１３７】
前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルの増加は、ウエスタンブロット法を使用した及び／又はＥＬＩＳＡ又は適したアッセイを使用した、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルの少なくとも５％の増加を意味することが好ましい。前記ポリペプチドの発現レベルの増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の増加を意味することがより好ましい。
【０１３８】
前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の活性の増加は、適したアッセイを使用した、ポリペプチド活性の少なくとも５％の増加を意味することが好ましい。ポリペプチド活性の増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の増加を意味することがより好ましい。
【０１３９】
第１の方法（すなわち炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するための）のステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）では、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）及び／又はそれらの相当するヌクレオチド配列（又は前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の定常状態レベル）の発現レベルの検出可能な減少又はその生物学的活性におけるその任意の検出可能な活性又は検出可能な変化）は、対照における前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）及び／又は相当するヌクレオチド配列（又は相当するコードされた炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の定常状態レベル）の発現プロファイル又はレベルと比較して、前に定義した方法を使用して評価する。好ましい対照は、同じ対象からの同様の試料であり、前記対照試料は、前記炎症促進性サイトカインの阻害剤と接触していない。好ましい実施形態によれば、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルの減少又は活性の変化は、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードする遺伝子／ヌクレオチド配列に関する特定のｍＲＮＡアッセイを使用して、定量化する。
【０１４０】
前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）をコードするヌクレオチド配列の発現レベルの減少は、ＰＣＲを使用した前記ヌクレオチド配列の発現レベルの少なくとも５％の減少を意味することが好ましい。
【０１４１】
ヌクレオチド配列の発現レベルの減少は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の減少を意味することがより好ましい。
【０１４２】
前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルの減少は、ウエスタンブロット法を使用した及び／又はＥＬＩＳＡ又は適したアッセイを使用した、前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の発現レベルの少なくとも５％の減少を意味することが好ましい。前記ポリペプチドの発現レベルの減少は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の減少を意味することがより好ましい。
【０１４３】
前記炎症促進性サイトカイン（好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、ＩＬ−５、ＴＮＦα及び／又はＩＦＮ−γ）の活性の減少は、適したアッセイを使用した、ポリペプチド活性の少なくとも５％の減少を意味することが好ましい。ポリペプチド活性の減少は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の減少を意味することがより好ましい。
【０１４４】
好ましい方法では、ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが増加し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが減少した場合、炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性は、前記十分である。
【０１４５】
より好ましい方法では、ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％減少し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された前記炎症促進性サイトカインの発現レベルが少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％減少した場合、炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性は、前記十分である。この増加及び減少は、好ましくは本明細書で先に記載したＥＬＩＳＡを使用して評価する。
【０１４６】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも３０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも３０％であることがさらにより好ましい。
【０１４７】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも４０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも４０％であることがさらにより好ましい。
【０１４８】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも５０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも５０％であることがさらにより好ましい。
【０１４９】
第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための）のステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）では、前記Ｂ細胞の検出可能な数又は検出された数の増加（又はその生物学的活性におけるその任意の検出可能な活性又は検出可能な変化）は、対照におけるＢ細胞と比較して、先に定義した方法を使用して評価する。好ましい対照は、同じ対照からの同様の試料であり、前記対照試料は、Ｂ細胞の産生を誘発することができる化合物と接触していない。通常、前記対照では、Ｂ細胞の数は、低い又は検出不可能である。好ましい実施形態によれば、Ｂ細胞は、本明細書で先に説明したＦＡＣＳ又はＰＣＲを使用して検出する。代わりに、Ｂ細胞の活性の増加又は変化は、ＩＬ−６又はＩＬ−１０のような炎症促進性サイトカインの産生とすることができる又はヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１７）などの他の細胞による炎症促進性サイトカインの産生を促進することとすることができる。Ｔｈ１７は、炎症促進性サイトカインとしてのＩＬ−１７を産生することができることが既知である。
【０１５０】
Ｂ細胞の数の増加は、より好ましくはＦＡＣＳ又はＰＣＲを使用した、Ｂ細胞の数の少なくとも５％の増加を意味することが好ましい。
【０１５１】
Ｂ細胞の数の増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の増加を意味することがより好ましい。
【０１５２】
Ｂ細胞の低い又は検出不可能な数は、ＰＣＲを使用してＢ細胞が検出されない、又はＣｔ値が３５以上であることを好ましくは意味する。
【０１５３】
Ｂ細胞の活性の増加は、適したアッセイを使用した、活性の少なくとも５％の増加を意味することが好ましい。前記活性の増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の増加を意味することがより好ましい。この文脈におけるより好ましい活性は、ヘルパーＴ細胞１７を経由したＩＬ−６、ＩＬ−１０の産生又はＩＬ−１７の産生である。
【０１５４】
代わりに、Ｂ細胞の活性の増加は、より好ましくはＦＡＣＳ又はＰＣＲを使用した、Ｔｈ１７細胞の数の少なくとも５％の増加を意味する。
【０１５５】
Ｔｈ１７細胞の数の増加は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の増加を意味することがより好ましい。
【０１５６】
第２の方法（すなわちＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するための）のステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）では、検出された前記Ｂ細胞の数及び／又はその任意の検出可能な活性の検出可能な減少又はその生物学的活性における検出可能な変化）は、対照におけるＢ細胞の数及び／又は相当する活性と比較して、先に定義した方法を使用して評価する。好ましい対照は、同じ対象からの同様の試料であり、前記対照試料は、前記Ｂ細胞の阻害剤と接触していない。好ましい実施形態によれば、Ｂ細胞の数の減少又は前記Ｂ細胞の活性の変化は、本明細書で先に同定したように定量化する。
【０１５７】
Ｂ細胞の数の減少は、ＦＡＣＳを使用した、前記ヌクレオチド配列の発現レベルの少なくとも５％の減少を意味することが好ましい。
【０１５８】
Ｂ細胞の数の減少は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の減少を意味することがより好ましい。
【０１５９】
前記Ｂ細胞の活性の減少は、適したアッセイを使用した、前記活性の少なくとも５％の減少を意味することが好ましい。前記活性の減少は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の減少を意味することがより好ましい。
【０１６０】
この文脈におけるより好ましい活性は、ヘルパーＴ細胞１７を経由したＩＬ−６、ＩＬ−１０の産生又はＩＬ−１７の産生である。
【０１６１】
代わりに、Ｂ細胞の活性の減少は、より好ましくはＦＡＣＳ又はＰＣＲを使用した、Ｔｈ１７細胞の数の少なくとも５％の減少を意味する。
【０１６２】
Ｔｈ１７細胞の数の減少は、少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも１５０％以上の減少を意味することがより好ましい。
【０１６３】
好ましい第２の方法では、ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の数が増加し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の数が減少した場合、Ｂ細胞の阻害剤の有効性は、前記十分である。
【０１６４】
より好ましい第２の方法では、ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の数が少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％増加し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の数が少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％減少した場合、Ｂ細胞の阻害剤の有効性は、前記十分である。この増加及び減少は、好ましくは本明細書で先に記載したＦＡＣＳ又はＰＣＲを使用して評価する。
【０１６５】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも３０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも３０％であることがさらにより好ましい。
【０１６６】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも４０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも４０％であることがさらにより好ましい。
【０１６７】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも５０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも５０％であることがさらにより好ましい。
【０１６８】
別の好ましい第２の方法では、ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の活性が増加し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の活性が減少した場合、Ｂ細胞の阻害剤の有効性は、前記十分である。
【０１６９】
より好ましい第２の方法では、ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の活性が少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％増加し、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価されたＢ細胞の活性が少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％減少した場合、Ｂ細胞の阻害剤の有効性は、前記十分である。この増加及び減少は、好ましくは本明細書で先に記載したＦＡＣＳ又はＰＣＲ又はＥＬＩＳＡを使用して評価する。
【０１７０】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも３０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも３０％であることがさらにより好ましい。
【０１７１】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも４０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも４０％であることがさらにより好ましい。
【０１７２】
ステップ（ｂ１）の後のステップ（ｄ）において評価された増加が少なくとも５０％であり、ステップ（ｂ２）の後のステップ（ｄ）において評価された減少が少なくとも５０％であることがさらにより好ましい。
【０１７３】
炎症性及び／若しくは自己免疫性症状又は疾患を有すると疑われる対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価する及び／又はＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するためのこの手法は、現在使用されている生物学的療法に基づく全ての治療法に適用可能であり得る。この手法は、成功的ではなさそうであり、潜在的な重大な副作用を有する治療法を与えられるであろう患者と、かかる個人化手法の実質的な経費節約の態様により、医療制度との両方に非常に重要であり得る。
【０１７４】
治療のための方法
さらなる態様では、本発明は、自己免疫性及び／若しくは炎症性症状又は疾患に罹っていると疑われる対象を治療するための方法であって、本明細書で先に定義した対象における炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価するステップ及び／又はＢ細胞の阻害剤の有効性を評価するステップと、その後前記阻害剤の有効性が申し分ない場合、前記対象を前記阻害剤で治療するステップとを含む方法に関する。
【０１７５】
炎症促進性サイトカインの阻害剤の有効性を評価する及び／又はＢ細胞の阻害剤の有効性を評価する方法は、本発明の第１の態様専用の節において広範に説明した。
【０１７６】
自己免疫性及び／若しくは炎症性疾患又は症状に対する治療法は、本明細書で先に言及した炎症促進性サイトカインの阻害剤の１つ及び／又はＢ細胞の阻害剤の１つの長期投与とすることができる。
【０１７７】
かかる治療法は、治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月後に、前記対象の症状又はパラメーターを治癒させる又は慢性的に抑制する又は緩和することが意図されている。かかるパラメーターは、本明細書で先に定義した炎症促進性サイトカイン及び／又はＢ細胞の数の発現レベル又はプロファイルである。かかる発現レベル又はプロファイルは、治療の開始時に前記対象において測定された値よりも低い値に向かって標準化することができる。この文脈では、「よりも低い」は、５％低い、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％以上低いことを意味することができる。
【０１７８】
配列同一性
「配列同一性」は、配列を比較することによって決定される、２つ以上のアミノ酸（ポリペプチド又はタンパク質）配列又は２つ以上の核酸（ポリヌクレオチド）配列間の関係として本明細書で定義される。２つのアミノ酸又は２つの核酸配列間の同一性は、本明細書で同定された配列番号全体又はその部分内でそれらの同一性を評価することによって好ましくは定義される。その部分は、配列番号の長さの少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％を意味することができる。
【０１７９】
当技術分野では、「同一性」も、場合によっては、かかる配列の紐間のマッチによって決定される、アミノ酸又は核酸配列間の配列関連性の程度を意味する。２つのアミノ酸配列間の「類似性」は、１つのポリペプチドのアミノ酸配列及びその保存アミノ酸置換を第２のポリペプチドの配列と比較することによって決定される。「同一性」及び「類似性」は、（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１；及びＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．、４８：１０７３（１９８８）において報告されているものを含むがこれらに限定されない、既知の方法によって容易に計算することができる。
【０１８０】
同一性を決定するための好ましい方法は、試験する配列間の最も大きいマッチを示すように設計されている。同一性及び類似性を決定するための方法は、公的に入手可能なコンピュータープログラムで成文化されている。２つの配列間の同一性及び類似性を決定するための好ましいコンピュータープログラム方法は、例えばＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（１）：３８７（１９８４））、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）を含む。ＢＬＡＳＴ  Ｘプログラムは、ＮＣＢＩ及び他の供給源から公的に入手可能である（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ  ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）。よく知られているＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも、同一性を決定するために使用することができる。
【０１８１】
ポリペプチド配列比較に関する好ましいパラメーターは、以下のものを含む：アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）；比較マトリックス：Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）からのＢＬＯＳＳＵＭ６２；ギャップペナルティ：１２；及びギャップ長さペナルティ：４。これらのパラメーターで有用なプログラムは、ウィスコンシン州マディソンにあるＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐから「Ｏｇａｐ」プログラムとして公的に入手可能である。上記のパラメーターは、アミノ酸比較に関するデフォルトパラメーター（末端ギャップに関するペナルティなし）である。
【０１８２】
核酸比較に関する好ましいパラメーターは、以下のものを含む：アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）；比較マトリックス：マッチ＝＋１０、ミスマッチ＝０；ギャップペナルティ：５０；ギャップ長さペナルティ：３。ウィスコンシン州マディソンにあるＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐからギャッププログラムとして入手可能。核酸比較に関するデフォルトパラメーターを上記で提供した。
【０１８３】
任意選択で、アミノ酸類似性の程度を決定することにおいて、当業者は、当業者には明らかであろうように、いわゆる「保存的」アミノ酸置換も考慮に入れることができる。保存的アミノ酸置換は、同様の側鎖を有する残基の互換性を表す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンであり；脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリン及びトレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギン及びグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リシン、アルギニン、及びヒスチジンであり；硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、及びアスパラギン−グルタミンである。本明細書で開示したアミノ酸配列の置換変異体は、開示した配列における少なくとも１つの残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入されたものである。アミノ酸変化は、保存的であることが好ましい。自然発生のアミノ酸のそれぞれに関する好ましい保存的置換は、以下の通りである：ＡｌａからＳｅｒ；ＡｒｇからＬｙｓ；ＡｓｎからＧｌｎ又はＨｉｓ；ＡｓｐからＧｌｕ；ＣｙｓからＳｅｒ又はＡｌａ；ＧｌｎからＡｓｎ；ＧｌｕからＡｓｐ；ＧｌｙからＰｒｏ；ＨｉｓからＡｓｎ又はＧｌｎ；ＩｌｅからＬｅｕ又はＶａｌ；ＬｅｕからＩｌｅ又はＶａｌ；ＬｙｓからＡｒｇ、Ｇｌｎ又はＧｌｕ；ＭｅｔからＬｅｕ又はＩｌｅ；ＰｈｅからＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＴｙｒ；ＳｅｒからＴｈｒ；ＴｈｒからＳｅｒ；ＴｒｐからＴｙｒ；ＴｙｒからＴｒｐ又はＰｈｅ；及びＶａｌからＩｌｅ又はＬｅｕ。
抗体
【０１８４】
本発明のいくつかの態様は、炎症促進性サイトカインに特異的に結合する抗体又は抗体断片の使用に関する。かかるポリペプチドに特異的に結合する抗体又は抗体断片を産出するための方法は、例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）及び国際公開第９１／１９８１８号パンフレット；国際公開第９１／１８９８９号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第９２／０６２０４号パンフレット；国際公開第９２／１８６１９号パンフレット；及び米国特許第６，４２０，１１３号及びそこで引用された参考文献において報告されている。本明細書では、「特異的な結合」という用語は、低及び高親和性の特異的結合の両方を含む。特異的結合は、例えば、少なくとも約１０−４ＭのＫｄを有する低親和性抗体又は抗体断片によって、示すことができる。特異的結合は、高親和性抗体又は抗体断片、例えば、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０ＭのＫｄを有する又は少なくとも約１０−１１Ｍ又は１０−１２Ｍ以上のＫｄを有することができる抗体又は抗体断片によっても示すことができる。
ペプチド模倣物
【０１８５】
本明細書で定義した炎症促進性サイトカイン又はその受容体ポリペプチドに特異的に結合し、本明細書で定義した本発明の方法（炎症促進性サイトカインの発現レベルを評価するための）に適用することができるペプチド様分子（ペプチド模倣物と称される）又は非ペプチド分子は、例えば参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，１８０，０８４号において詳細に報告されている、それ自体当技術分野で既知の方法を使用して同定することができる。かかる方法は、例えば、ペプチド模倣物、ペプチド、ＤＮＡ又はｃＤＮＡ発現ライブラリー、コンビナトリアルケミストリー及び、特に有用な、ファージディスプレイライブラリーのライブラリーをスクリーニングすることを含む。これらのライブラリーを、ライブラリーを実質的に精製された炎症促進性サイトカイン、その断片又はその構造性類似体と接触させることによって、炎症促進性サイトカインのかかるペプチド模倣物を求めてスクリーニングすることができる。
一般
【０１８６】
本文書及びその特許請求の範囲では、「含む（ｔｏ  ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という動詞及びその活用は、その語句に続く項目が含まれるが、特に言及されていない項目が除外されないことを意味するその非限定的な意味で使用される。加えて、「からなる（ｔｏ  ｃｏｎｓｉｓｔ）」という動詞は、本明細書で定義した方法が特に同定したものに加えて追加のステップ（複数可）を含むことができることを意味する「から本質的になる（ｔｏ  ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」と置き換えることができ、前記追加のステップ（複数可）は、本発明のユニークな特徴を改変しない。加えて、不定冠詞「ａ（１つ）」又は「ａｎ（１つ）」によるエレメントへの参照は、状況が１つ及び１つのみのエレメントがあることをはっきりと要求しない限り、１つを超えるエレメントが存在する可能性を排除しない。したがって、不定冠詞「ａ（１つ）」又は「ａｎ（１つ）」は、「少なくとも１つ（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」を通常意味する。
【０１８７】
本明細書で引用した全ての特許及び参考文献は、参照によりその全体がここに組み込まれている。以下の例は、例示的目的のみに提供し、決して本発明の範囲を限定することを意図していない。
【実施例】
【０１８８】
実施例１
材料及び方法
ヒト末梢血単核球の単離及びｉｎ−ｖｉｔｒｏサイトカイン産生。静脈血を、健常なボランティア又はＣＧＤを有する患者の肘脈から１０ｍｌ  ＥＤＴＡ管（Ｍｏｎｏｊｅｃｔ、Ｃｏｖｉｄｉｅｎ、Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）中に取り出した。単核細胞画分を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、ＵＳＡ）上でのパイロジェンを含まない生理食塩水で１：１に希釈した血液の密度遠心分離によって採取した。細胞を、生理食塩水において２回洗浄し、ゲンタマイシン１０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−グルタミン１０ｍＭ及びピルビン酸１０ｍＭで補充した培養培地（ＲＰＭＩ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）に懸濁した。細胞を、コールターカウンター（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、Ｂｒｅａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）において計数し、数を５×１０６細胞／ｍｌに調整した。
【０１８９】
１００μｌ体積中の合計５×１０５の単核細胞を丸底９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｍｏｎｒｏｅ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ、ＵＳＡ）に加え、１００μｌの培養培地（負の対照）、又はＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（１０μｇ／ｍｌ、ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ、Ｔｕｂｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、フラゲリン（ＴＬＲ５リガンド）、ＭＤＰ（１０μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ．ＭＯ、ＵＳＡ）でインキュベートした。２４時間後、上清を採取し、アッセイされるまで−２０℃で保管した。５０人の健常ドナーの群からのＰＢＭＣを、明確に定義されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）リガンドのパネルで刺激した。ドナー血液をＳａｎｑｕｉｎ血液銀行、Ｎｉｊｍｅｇｅｎ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから得た。ＩＬ−１βを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用して、２４時間のインキュベーション後に測定した。
【０１９０】
ＡＴＧ１６Ｌ１  Ｔｈｒ３００Ａｌａ多形性に関する遺伝子型同定。ＤＮＡを、製造業者のプロトコールに従って、単離キットＰｕｒｅｇｅｎｅ（Ｇｅｎｔｒａ  Ｓｙｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用することによって、全血から単離した。ＡＴＧ１６Ｌ１  Ｔｈｒ３００Ａｌａ多形性の存在に関する遺伝子型同定を、７３００  ＡＢＩリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）上でＴａｑＭａｎ一塩基多形（ＳＮＰ）アッセイＣ＿９０９５５７７＿２０を適用することによって行った。
【０１９１】
結果
初代ヒト細胞におけるＥｘ−ｖｉｖｏ研究。ＩＬ−１β産生を減少させるカスパーゼ−１阻害剤の能力を、対象において比較した。５０人の健常な血液ドナーの群からのＰＢＭＣを、腸内炎症に関連しているパターン認識受容体リガンド（例えばＬＰＳ−ＴＬＲ４リガンド、Ｐａｍ３Ｃｙｓ−ＴＬＲ２リガンド、フラゲリン−ＴＬＲ５リガンド、ＭＤＰ−ＮＯＤ２リガンド、及びこれらのリガンドのいくつかの組合せ）の明確に定義されたセットで刺激した。図１のａは、ＬＰＳ、Ｐａｍ３ｃｙｓ及びＭＤＰがヒトＰＢＭＣによるＩＬ−１β産生の強い誘発因子であることを示した。フラゲリン（ＴＬＲ５リガンド）は、ＩＬ−１β産生の弱い誘発因子であることが見出された。ＬＰＳ又はＰａｍ３ｃｙｓをＭＤＰと組み合わせた場合、ＩＬ−１β産生の強い上方制御が注目された（図１のａ）。熱殺菌されたＥ．コリは、おそらく微生物全体に存在する複数のＴＬＲ／ＮＬＲリガンドにより、ＩＬ−１βの強力な誘発因子であることが明らかになった。
【０１９２】
カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）は、精製ＴＬＲリガンド、ペプチドグリカンのムラミルジペプチド成分（ＮＯＤ２アゴニスト）、及びエシェリキア・コリなどのグラム陰性腸内細菌全体を含めた、刺激の多数のアレイによって、ＩＬ−１β刺激に及ぼす著しい阻害効果を示した（図１）。ＭＤＰは、ＩＬ−１βの弱い誘発因子であるけれども、カスパーゼ−１阻害は、それでもＩＬ−１β産生を有意に（ｐ＜０．０３）低下させた。興味深いことに、ＩＬ−１β産生がＬＰＳ、ＬＰＳ／ＭＤＰ、Ｐａｍ３ｃｙｓ／ＭＤＰ又はＨＫ  Ｅ．コリによって強く上昇された場合、カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）によるＩＬ−１β産生の阻害は、より明白であった（図１）。
【０１９３】
ＡＴＧ１６Ｌ１遺伝子型に依存した、カスパーゼ−１阻害剤の効果。増強されたＩＬ−１β産生が非機能性の自食作用機構に関連していたという事実により、カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）の効果がＡＴＧ１６Ｌ１遺伝子型に依存しているかどうかの評価を包含する分析の次のセットを行った。ＡＴＧ１６Ｌ１遺伝子型に関して、いくつかのリガンドでの刺激後のＩＬ−１β産生における違いはなかった（図２）。カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）は、自食作用遺伝子ＡＴＧ１６Ｌ１におけるそれらの遺伝子型とは関係なく、個体の全ての副集団において等しく効果的であった（図２）。
【０１９４】
カスパーゼ−１阻害剤の効果は、ＩＬ−１β産生能力に依存する。実験の次のセットでは、カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）の効果が高、中、又は低ＩＬ−１β量を産生する個体の能力に依存し得るという概念を評価した。図３に示したように、カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）がＬＰＳによって誘発されたＩＬ−１β産生の８０％より多くを阻害した一方、クローン−特異的刺激ＭＤＰによって誘発されたＩＬ−１βの阻害は、最初の産生に強く依存した：高−産生者における８５％の阻害、低−産生者における７０％の阻害、及び低産生者における３４％のみの阻害。
考察
【０１９５】
カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）は、クローン病などのＩＬ−１β−依存性疾患の将来の治療に関して期待できるＩＬ−１β産生の強い阻害剤である。この特定のカスパーゼ−１阻害剤は、ヒト初代細胞におけるＩＬ−１βのｅｘ−ｖｉｖｏ阻害に関して非常に強力であった。
【０１９６】
カスパーゼ−１阻害剤での療法から最も利益を得そうな患者を同定するために、様々なＴ３００Ａ  ＡＴＧ１６Ｌ１遺伝子型を有する個体においてＩＬ−１βを阻害するその能力を調査した（４）。この研究において使用したカスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）は、Ｔ３００Ａ  ＡＴＧ１６Ｌ１多形性とは関係なく、ＩＬ−１βを非常に強力に阻害することができた。以前報告された（４）、様々な遺伝子型間のＩＬ−１β放出における違いは、本研究において再現されなかった。これらの研究において使用した種々のＭＤＰバッチが理由の１つであり得るけれども、これに関する理由は、不明である。ＭＤＰを低量のＬＰＳと混合して、市販の生成物の可能性のあるコンタミネーションを模倣した追加の実験も、遺伝子型間のＩＬ−１β産生における違いを提供しなかった（示さず）。
【０１９７】
個人化医療に関する第２の手法は、カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）が、ＬＰＳでの、又はクローン病に特に関連している刺激であるＮＯＤ２アゴニストＭＤＰでの非特異的刺激に応答してＩＬ−１βを産生する、高、中、又は低能力を示す個体において等しく効果的であるかどうかを評価することであった。興味深いことに、カスパーゼ−１阻害剤（ＶＲＴ）が、強力な非特異的刺激ＬＰＳによって誘発されたＩＬ−１β産生を強く阻害した一方、クローン−特異的刺激ＭＤＰによって誘発されたＩＬ−１βの阻害は、最初の産生に強く依存していた：高−産生者におけるカスパーゼ−１阻害剤によって誘発された８５％の阻害、低−産生者における７０％の阻害、及び低産生者における３４％のみの阻害。これは、カスパーゼ−１阻害剤が、ＭＤＰでの刺激時にＩＬ−１βの高量を放出する高−及び中−応答者個体において最も効果的であり得ることを強く示唆している。したがって、個々の患者のＩＬ−１β産生状況に基づいた、カスパーゼ−１阻害剤での個人化治療手法は、クローン病の治療における将来の有望さを保持しているように見える。
【０１９８】
高及び低サイトカイン産生者で（自己）炎症性疾患を有する患者コホートを層別化するこの手法は、現在使用されている生物学的療法に基づく全ての治療法に適用可能であり得る。患者の層別化は、成功的ではなさそうであり、潜在的な重大な副作用を有する治療法を与えられるであろう患者と、かかる個人化手法の実質的な経費節約の態様により、医療制度との両方に非常に重要であり得る。
【０１９９】
実施例２
材料及び方法
健常な個体の層別化。１０４の個体のＰＢＭＣを、実施例１に記載したように単離した。１００μｌ体積中の合計５×１０５の単核細胞を丸底９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、Ｍｏｎｒｏｅ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ、ＵＳＡ）に加え、１００μｌの培養培地（負の対照）、又はＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）、又はＨＫカンジダ・アルビカンス（１０６／ｍｌ）でインキュベートした。２４時間後、上清を採取し、アッセイされるまで−２０℃で保管した。ＴＮＦαを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用して、２４時間のインキュベーション後に測定した。
【０２００】
結果
各個体のＴＮＦα産生を評価した。ＴＮＦαを産生する内在性の能力に基づいて、健常な個体を、低、中及び高ＴＮＦα産生者として分類した（図４を参照されたい）。ＰＢＭＣをＬＰＳに曝露した後、多数の３７の個体を低ＴＮＦα産生者、４０を中産生者、２７を高産生者として分類した（図４のａ）。各カテゴリーの平均ＴＮＦα産生は、それぞれ、３６３ｎｇ／ｍｌ、１１２０ｐｇ／ｍｌ及び１８３８ｐｇ／ｍｌであった。図４のｂは、熱殺菌した（ＨＫ）カンジダ・アルビカンスへの２４ｈの曝露後のヒトＰＢＭＣのＴＮＦα産生を示した。個体を、ＬＰＳ刺激に関するものと同様の群に分類した。各カテゴリーの平均ＴＮＦａ産生は、それぞれ、１０．１８２ｎｇ／ｍｌ、１９．７６１ｐｇ／ｍｌ及び２９．５２４ｐｇ／ｍｌであった。
【０２０１】
対象が、刺激に依存せずにＴＮＦαの高濃度を常に産生するかどうかを調べるために、ＬＰＳ及びカンジダ・アルビカンス誘発ＴＮＦα産生を関連づけた。図５は、Ｒが、ＬＰＳ又はＨＫカンジダ・アルビカンスへの曝露後に全ての対象が高ＴＮＦαを産生するわけではないことを示す０．５１１１であったことを示した。
【０２０２】
考察
多数の個体を使用して、各対象を、ＴＮＦα産生に基づいて、低、中及び高産生者に層別化することができることが明らかになった。興味深いことに、カンジダ・アルビカンス又はＬＰＳへの曝露後に、個体が常に高ＴＮＦαを産生するわけではないと考えられ得る。
【０２０３】
実施例３
材料及び方法
クローンの患者の層別化。クローン病を有する２４人の患者を、それらのサイトカインプロファイル（ＴＮＦα）に関してスクリーニングした。ＰＢＭＣを、実施例１に記載したように単離した。ＰＢＭＣを、疾患関連刺激ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）、Ｐａｍ３ｃｙｓ（１０μｇ／ｍｌ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）（１０μｇ／ｍｌ）及びＰａｍ３ｃｙｓ／ＭＤＰに曝露した。ＭＤＰは、よく知られているＮＯＤ２リガンドであり、疾患特異的と考えられる。
【０２０４】
結果
ＬＰＳ曝露時□□にＴＮＦαを産生する能力に基づいて、ＩＢＤ患者を低（２５０ｐｇ／ｍｌ未満）、中（＞２５０と＜５００ｐｇ／ｍｌの間）及び高（＞５００ｐｇ／ｍｌ）ＴＮＦα産生者として分類した。図６のａは、ＬＰＳへの曝露後のＰＢＭＣのＴＮＦα産生を示した。ＴＮＦαの濃度に依存して、ＩＢＤ患者を低、中及び高ＴＮＦα産生者として分類した。図６のｂは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ／ＭＤＰへの曝露後のＰＢＭＣのＴＮＦα産生を示した。ＬＰＳに関するのと同様に、ＩＢＤ患者を３つの群に分けた。低（２５０ｐｇ／ｍｌ未満）、中（＞２５０と＜５００ｐｇ／ｍｌの間）及び高（＞５００ｐｇ／ｍｌ）。
【０２０５】
考察
多数の個々のＩＢＤ患者を使用して、各対象が異なる濃度のＴＮＦαを産生し、それによって低、中及び高産生者に層別化されることが明らかになった。ＬＰＳは、ＴＬＲ４のみを活性化すると仮定されている一方、ＭＤＰ／Ｐａｍ３Ｃｙｓは、ＴＬＲ２及びＮＯＤ２経路の両方を活性化すると考えられている。ＴＬＲ２及びＮＯＤ２経路は、強い相乗作用を示した。両方の経路は、疾患に関連している。
【０２０６】
興味深いことに、疾患関連トリガーＰａｍ３ｃｙｓ／ＭＤＰを、ＩＢＤ患者の層別化に使用することができる。ＲＡ患者に関して見られるように、ＬＰＳへの曝露後の個体のＴＮＦα産生は、Ｐａｍ３ｃｙｓ刺激後のＴＮＦα産生と強く関連していない。
【０２０７】
実施例４
材料及び方法
ＲＡ患者の層別化。ＲＡ患者を、生物学的製剤での治療を開始する前に、基本的なサイトカインプロファイルに関してスクリーニングした。ＰＢＭＣを、実施例１に示したように単離した。ＰＢＭＣを、ＬＰＳ、Ｐａｍ３ｃｙｓ、及びカンジダ・アルビカンスを含めた刺激の幅で刺激した。加えて、いくつかの生物学的製剤（４μｇ／ｍｌの全てＳａｎｑｕｉｎ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、ＩｇＩＶ（Ｎａｎｏｇａｍ）製のヒュミラ、エタネルセプト又はゴリムマブ）を培養系に加えて、ｅｘ−ｖｉｖｏサイトカイン産生に及ぼす特定の生物学的製剤の効果を調査した。ＲＡ患者からのＰＢＭＣを、ＩｇＧ対照（ＩｖＩｇ）又は上記で同定した３つの異なるＴＮＦα阻害剤で３０分間インキュベートした。その後１０６ＨＫカンジダ／ｍｌを加えた。２４ｈ後、ＩＬ−１β産生をＥＬＩＳＡによって測定した。抗ＴＮＦαを、抗ＴＮＦα療法後にＲＡ患者に存在することになる用量である、４μｇ／ｍｌの用量で試験した。
【０２０８】
結果
図７に示したように、ＲＡ患者からのＰＢＭＣを、それらのＩＬ−１βの産生に基づいて層別化する。３つのＴＮＦα遮断薬全てがＩＬ−１β産生を低下させたことに注目されたい。ＴＮＦαがカンジダ・アルビカンス曝露によって引き出されたＰＢＭＣによるＩＬ−１β産生に寄与することは、既知である。
【０２０９】
考察
ＴＮＦαは、ＴＮＦα産生に基づいて、ＨＫカンジダ・アルビカンスでの刺激後の免疫細胞によるＩＬ−１β産生に寄与する。ＴＮＦαを中和する戦略を使用することによって、ｅｘ−ｖｉｖｏ産生ＴＮＦαの生物活性が調節される。興味深いことに、最初の結果は、試験した抗ＴＮＦモダリティーの中和能力に違いがあることを示した。
【０２１０】
実施例５
材料及び方法
ＭＳ患者の層別化。ＰＢＭＣを、実施例１に記載したように単離した。ＭＳ患者及び年齢／性別対照からのＰＢＭＣを、カンジダ・アルビカンス（１．１０６／ｍｌ）、抗ＣＤ３／ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ）、ＭＯＧ（ＭＳ関連ペプチド、１０μｇ／ｍｌ）及びＭＯＧ／抗ＣＤ３／ＣＤ２８の組合せに７日間曝露した。サイトカインを、７日後に測定した。ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２２及びＩＦＮ−γを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２１１】
結果
図９は、ＭＳ患者から単離されたＰＢＭＣが、カンジダ・アルビカンスでの刺激後に、対照と比較してより多くのＩＬ−１７Ａを産生することを示した。ＰＢＭＣをＭＯＧペプチド又は抗ＣＤ３／ＣＤ２８単独に曝露した場合、増強されたＩＬ−１７Ａが注目された。しかしながら、抗ＣＤ３／ＣＤ２８及びＭＯＧペプチドへの曝露後、ＭＳ患者は、強く増強されたＩＬ−１７Ａ濃度を産生する。ＩＬ−１７Ａと一致して、ＩＬ−２２（Ｔｈ１７関連サイトカイン）の濃度は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８／ＭＯＧペプチドに曝露した場合、ＭＳ患者からのＰＢＭＣにおいて増強されることが明らかになった。興味深いことに、ＩＦＮγ産生は、ＭＯＧペプチド、抗ＣＤ３／ＣＤ２８又はこれらの２つの刺激の組合せに曝露した場合、ＭＳ患者及び健常な個体からのＰＢＭＣ間で同様であった。
考察
【０２１２】
結果は、ＭＳ患者のＰＢＭＣが疾患特異的刺激（ＭＯＧペプチド及び抗ＣＤ３／ＣＤ２８／ＭＯＧペプチド）に対して明らかに異なって応答することを示した。ＰＢＭＣによるＩＬ−１７及びＩＬ−２２産生を、ＩＦＮ−γと対照的に、ＭＳ患者の層別化に使用することができる。
【０２１３】
実施例６
材料及び方法
痛風患者の層別化。１８８人の痛風患者を、それらの内在性のサイトカイン産生能力に関して分析した。痛風はＩＬ−１疾患であるため、ＰＢＭＣのＩＬ−１β産生を疾患特異的刺激（尿酸ナトリウム（ＭＳＵ）結晶及び脂肪酸（Ｃ１６．０））への曝露後に決定した。ＭＳＵを、当業者に既知の技法に従って、本発明者らの実験室で調製した。Ｃ１６．０をＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）から購入した。ＰＢＭＣをＭＳＵ／Ｃ１６．０（３００μｇ／ｍｌ、２００μＭ  Ｃ１６．０）又はＰａｍ３ｃｙｓ（１０μｇ／ｍｌ）に２４ｈの間曝露した。その後ＩＬ−１βをＥＬＩＳＡによって決定した。
【０２１４】
結果
図９に示したように、痛風患者からのＰＢＭＣを、ＭＳＵ／Ｃ１６．０への曝露後のそれらのＩＬ−１βの産生に基づいて層別化した。ＭＳＵ及びＣ１６．０（パルミチン酸）の組合せがＩＬ−１βの産生に必須であることが示された。（１０）。ＭＳＵ単独は、ＩＬ−１βの放出を刺激せず、Ｃ１６．０も刺激しない。非常に興味深いことに、ＭＳＵ／Ｃ１６．０の相乗作用は、ヒトＰＢＭＣによるＴＮＦαの産生に関して見出されなかった。合計で、１８８人の痛風患者の群を、低（＜３５０ｐｇ／ｍｌ）、中（＞３５０  ＜２０００ｐｇ／ｍｌ）及び高（＞２０００ｐｇ／ｍｌ）ＩＬ−１β産生者に層別化した。ＰＢＭＣのＰａｍ３ｃｙｓ曝露後に、ＩＬ−１β産生を痛風患者の分類に使用した場合、Ｐａｍ３ｃｙｓ誘発ＩＬ−１β産生がＭＳＵ／Ｃ１６．０産生と関連していなかったことが明らかになる。この後者は、ＭＳＵ／Ｃ１６．０を層別化のための痛風患者に関する疾患特異的刺激として使用することができることを示した。
【０２１５】
考察
結果は、痛風患者のＰＢＭＣが疾患特異的刺激（ＭＳＵ／Ｃ１６．０）に対して明らかに異なって応答することを示した。以前示されたように（９）、痛風に関与している古典的なサイトカインであるＩＬ−１βの濃度が痛風患者において増強された。ＰＢＭＣによるＩＬ−１βの産生を、痛風患者の層別化に使用することができる。
【０２１６】
実施例７
図５は、図４のａ及びｂのデータから作成する。１０４人の対象からのＰＢＭＣをＥ．コリＬＰＳ又はＨＫカンジダ・アルビカンスで刺激した。ＴＮＦα産生能力を、１０ｎｇ／ｍｌ  Ｅ．コリＬＰＳ又は１０６ＨＫカンジダ・アルビカンス／ｍｌへの２４ｈの曝露によって決定した。その後ＴＮＦαをＥＬＩＳＡによって決定した。図は、全ての対象がＬＰＳとカンジダの両方に関して高ＴＮＦα産生者であることを示すわけではないことを示した。
【０２１７】
相関をＧｒａｐｈｐａｄソフトウェアによって計算し、図に示す。図５から、サイトカイン応答が、カンジダと比較してＬＰＳと異なると考えることができる。これは、ＴＬＲ４及びデクチン−１／ＭＲ−１の経路が各個体において異なることを意味している。
【０２１８】
［参考文献］
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【図１】
2016524697.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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