(57)【要約】  ソマトスタチンとその類似体の生物学的半減期を制御するためのキャリア及びヒドロゲルのコンジュゲートが開示される。
2016534064.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表されるコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル：
Ｐ−（Ｌ−Ｄ）ｎ      （１）
式中、Ｐは、キャリア分子又はヒドロゲルであり；
Ｄは、ソマトスタチン又はその類似体であり；
Ｐがキャリア分子である場合、ｎ＝１〜８であり、Ｐがヒドロゲルである場合、ｎは多数であり；かつ、
Ｌは、式（２）で表される部分である：
【化１】
2016534064.tif 000025
式（２）中、
ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は、独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合する窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは、
Ｒ１とＲ２が一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又はそれぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つが、Ｐ又はヒドロゲルに連結されている。
【請求項２】
Ｄがソマトスタチン、オクトレオチド、ランレオチド、又はパシレオチドである、請求項１に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項３】
ソマトスタチン又はその類似体のＮα−アミノ基又はＮε−アミノ基を介して、ＤがＬに結合されている、請求項１に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項４】
１つのＲ５がＰに連結されている、請求項１に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項５】
１つのＲ５がトリアゾールリンケージを介してＰに連結されている、請求項４に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項６】
１つのＲ５がアミドリンケージを介してＰに連結されている、請求項４に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項７】
Ｐがポリエチレングリコール、デキストラン、ヒアルロン酸、タンパク質、アルブミン、又は抗体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
可溶性であり、Ｐがマルチアームポリエチレングリコールである、請求項１〜６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
Ｐがヒドロゲルである、請求項１〜６のいずれか１つに記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
ヒドロゲルが式（２）を有する架橋をさらに含む、請求項９に記載のコンジュゲート：
【化２】
2016534064.tif 000026
式中、
ｍ＝０又は１である；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは、
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又はそれぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つは、ヒドロゲルモノマー単位の１つに連結され、かつ、
【化３】
2016534064.tif 000027
基がヒドロゲルモノマー単位のもう１つに連結されている。
【請求項１１】
式（３）で表される化合物：
【化４】
2016534064.tif 000028
式中、
Ｄは、保護されていてよいソマトスタチン又はソマトスタチン類似体であり；
ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つは、高分子キャリアへの連結を可能にする官能基Ｚをさらに含む。
【請求項１２】
Ｚが、アミン、アジド、カルボン酸、カルボン酸活性エステル、末端アルキン、シクロオクチン、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、１，２，４，６−テトラジン、シクロプロペン、マレイミド、チオール、１，３−ジエン、シクロペンタジエン、フラン、ノルボルネン、アクリレート、アクリルアミド、ビニルスルホン、又はハロゲンである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｚがアジド又はアミンである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｄが、ソマトスタチン又はその類似体のＮα−アミンを介して結合されている、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｄが、ソマトスタチン又はその類似体のＮε−アミンを介して結合されている、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１６】
１つのＲ５が官能基Ｚを含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ２がＨであり；Ｒ１がＣＮ又はＲ３ＳＯ２であり；一方のＲ５がＨでありかつ他方が官能基Ｚをさらに含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１８】
ヒドロゲルがマルチアームポリエチレングリコールを含む、請求項９又は１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
ソマトスタチンの類似体による改善を受けやすい状態の治療方法であって、このような改善を必要とする対象者に、有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に記載のコンジュゲートを投与することを含んでなる方法。
【請求項２０】
前記状態が、成長ホルモン産生腫瘍（先端巨大症及び巨人症）、甲状腺刺激ホルモンを分泌する下垂体腫瘍（チロトロピノーマ（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｏｍａ））、カルチノイド症候群に関連した下痢及び紅潮エピソード、又は血管作動性腸管ペプチド分泌腫瘍（ビポーマ（ＶＩＰｏｍａ））の患者における下痢に関連している、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、半減期を延長するための医薬製剤の分野に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ペプチドホルモンであるソマトスタチンは、内分泌系を調節し、Ｇタンパク質共役受容体との相互作用を介して神経伝達及び細胞増殖に影響を与え、それによりいくつかの二次ホルモンの放出の阻害をもたらす。このような二次ホルモンとしては、下垂体前葉における成長ホルモン及び甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）；胃腸系におけるガストリン、コレシストキニン、モチリン、グルカゴン、セクレチン、膵臓ポリペプチド、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）、エンテログルカゴン、及び血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）；ならびに膵臓におけるインスリン及びグルカゴンが含まれる。
【０００３】
【化１】
2016534064.tif 000003
【０００４】
オクトレオチド、ランレオチド、及びパシレオチドを含むソマトスタチンのいくつかの合成類似体が知られている。
【０００５】
オクトレオチド（Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−システイニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−トレオニル−Ｎ−［２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）プロピル］−Ｌ−システインアミド，環式（２→７）ジスルフィド；［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）］）は、天然ペプチドであるソマトスタチンの合成オクタペプチド模倣化合物である。オクトレオチドは、ガストリン、コレシストキニン、グルカゴン、成長ホルモン、インスリン、セクレチン、膵臓ポリペプチド、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）を含む多くのホルモンの分泌を阻害する。また、オクトレオチドは、胃の運動性を低下させ、胆嚢の収縮を抑制し、腸及び膵臓による体液分泌を減少させ、血管収縮を引き起こし、そして出血性静脈瘤における門脈圧を低下させる。オクトレオチドは、おそらくμオピオイド受容体での活性を介して、鎮痛効果をもたらすことが示されている。その酢酸塩は、先端巨大症、巨人症、チロトロピノーマ（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｏｍａ）、カルチノイド症候群に関連した下痢及び紅潮、ならびにＶＩＰ分泌腫瘍に罹患した患者における下痢を治療するための注射用デポー製剤として米国での使用が承認されている。オクトレオチドは、重度の難治性下痢、スルホニルウレア過剰摂取後の長期の再発性低血糖、膵島細胞症の乳児におけるインスリン分泌過多、非小細胞肺癌に続発する肥大性肺性骨関節症、悪性腸閉塞、及び慢性低血圧を含めて、多くの苦痛を治療するために承認適応症外（ｏｆｆ−ｌａｂｅｌ）で使用されている。
【０００６】
【化２】
2016534064.tif 000004
【０００７】
オクトレオチドは、肥満、膵炎から生じる慢性疼痛、胸腺腫瘍、及び特発性頭蓋内圧亢進の治療に実験的に使用されている。
【０００８】
オクトレオチドは、逆調節ホルモン（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ）であるインスリン、グルカゴン、及び成長ホルモン間のバランスを変化させて、低血糖又は高血糖を引き起こす可能性があると指摘されている。これは、先端巨大症の患者において観察されている（それぞれ３％及び１６％）が、その他の患者集団では１．５％が観察されたにすぎない。
【０００９】
サンドスタチン（Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標））注射液（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）として知られる即時放出製剤は、皮下注射により１日２〜４回自己投与される。各用量は、オクトレオチド酢酸塩の５０、１００、又は５００μｇを含有し、乳酸、マンニトール及び重炭酸ナトリウムと共に水中でｐＨ４．２となるように製剤化されている。５０μｇの初期用量を必要に応じて漸増することができる。１００μｇ用量を注射した後で、５．２ｎｇ／ｍＬのピーク濃度が達成された。オクトレオチドは、皮下投与後に速やかに吸収され、１．７時間の平均半減期で血漿から排出され；作用持続時間は可変的であるが、最大１２時間まで延びる。
【００１０】
サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）デポーとして知られるミクロスフェア製剤は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）グルコーススターポリマー中にカプセル化されたオクトレオチド酢酸塩とマンニトールを含有し、オクトレオチド酢酸塩の容量は１０、２０又は３０ｍｇである。カルボキシメチルセルロースナトリウムとマンニトールの水溶液で乾燥ミクロスフェアを希釈して得られる懸濁液は、１．５〜２インチの１９ゲージ針を用いて月１回の殿内注射として訓練を受けた医療提供者によって投与される。ミクロスフェアはコポリマーマトリックスの加水分解により経時的に分解して、オクトレオチドを放出する。ミクロスフェアは水中で不安定であるので、懸濁液を慎重に調製して、混合後すぐに投与しなければならない。月１回の投薬を複数回行うと、遊離オクトレオチドの定常状態レベルは３回の投与後に得られる。２０ｍｇの投薬は、１．２ｎｇ／ｍＬのトラフ値及び１．６ｎｇ／ｍＬのピーク値をもたらす；３０ｍｇの投薬は、２．１ｎｇ／ｍＬのトラフ値及び２．６ｎｇ／ｍＬのピーク値をもたらす。ポリマー単位によるアミンアシル化が原因で起こるサンドスタチンＬＡＲ（登録商標）中のオクトレオチドの広範な分解が報告されている（Ｇｈａｓｓｅｍら，“ＰＬＧＡミクロスフェアと比較したポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−ヒドロキシメチルグリコリド）からのオクトレオチドの制御放出及びペプチドアシル化の評価”，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２０１２）２９：１１０−１２０）。ＰＬＧＡミクロスフェア内の低ｐＨ環境はペプチドの安定性に有害となるようであり、そのためペプチドの長期送達手段としてのその使用が制限される。
【００１１】
オクトレオチドの液晶相デポー製剤が最近報告されており、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１３／０８３４５９Ａ１及びＢｏｙｄら，“持続放出薬物送達システムとしてのグリセラート界面活性剤から形成されたリオトロピック液晶相”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．（２００６）３０９：２１８−２２６で報告されている。また、ヒドロゲルマトリックス内に非共有結合で捕捉されたオクトレオチドを有する製剤であって、皮下インプラントを介して送達され得る製剤も開示されている（例えば、米国特許第７，８０３，７７３号及び第７，９６０，３３５号）。
【００１２】
ランレオチド（［３−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニル−Ｌ−システイニル−Ｌ−チロシル−Ｄ−トリプトフィル−Ｌ−リシル−Ｌ−バリル−Ｌ−システイニル−Ｌ−トレオニンアミド  環式（３→７）ジスルフィド）は、投与後に比較的長い半減期を有し、２つの製剤として入手可能である：１０〜１４日ごとに筋肉内注射を必要とするソマチュリン（Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ（登録商標））ＬＡ、及び月１回深部皮下に投与されるソマチュリンデポー（Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ｄｅｐｏｔ）（英国ではＳｏｍａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ａｕｔｏｇｅｌ）。ソマチュリンデポーは、過飽和水性半固体製剤中にランレオチド酢酸塩を６０、９０又は１２０ｍｇ含有する。深部筋肉内に注射すると、２３〜３０日の半減期でランレオチドを徐々に放出する、沈殿した薬物のデポーを形成すると考えられる。複数回の投薬後の定常状態では、平均トラフ濃度は６０、９０及び１２０ｍｇの用量で１．８、２．５及び３．８ｎｇ／ｍＬであり、平均ピーク濃度は３．８、５．７及び７．７ｎｇ／ｍＬであった。
【００１３】
【化３】
2016534064.tif 000005
【００１４】
パシレオチド（（２−アミノエチル）カルバミン酸（２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｒ，１７Ｓ，１９ａＳ）−１１−（４−アミノブチル）−５−ベンジル−８−（４−ベンジルオキシベンジル）−１４−（１Ｈ−インドール−３イルメチル）−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキソ−１７−フェニルオクタデカヒドロ−３ａ，６，９，１２，１５，１８−ヘキサアザシクロペンタシクロオクタデセン−２−イルエステル，ジ［（Ｓ）−２−アミノコハク酸］塩）は、外科的治療に失敗したか、又は外科的治療に不適格と判断されたクッシング病患者の治療用として米国及び欧州で承認されたオーファンドラッグである。パシレオチドは、ソマトスタチン受容体５に対する親和性が、他のソマトスタチン類似体よりも４０倍増加している。
【００１５】
【化４】
2016534064.tif 000006
【００１６】
パシレオチドは、０．３、０．６、又は０．９ｍｇのパシレオチド二アスパラギン酸塩、マンニトール、酒石酸、及び水を含有するｐＨ４．２の製剤であるシグニフォル（Ｓｉｇｎｉｆｏｒ（登録商標））（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）として市販されている。これは、皮下投与時に、大きな分布容積（＞１００Ｌ）及び約１２時間の有効半減期を示す。
【００１７】
他の薬物のために使用され、かつ、本発明で解決される課題に関連する製剤が開示されている。例えば、米国特許第８，６４０，３１５号は、薬物が式−Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｄ（ここでＤは薬物である）のリンケージ（ｌｉｎｋａｇｅ）を介してβ脱離のシステムに結合され、該リンカーが薬物を高分子に連結するリンカーが記載されている。
【００１８】
米国特許第８，７５４，１９０号は、薬物を連結するための形態を変更して、式−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｂ）−ＣＨ２−Ｄ（この場合もＤは薬物を表す）とし、ここで薬物はβ脱離リンカーを介して高分子に連結される。
【００１９】
ＷＯ２０１１／１４０３９２は、薬物を固相支持体に結合させるために上記の連結タイプの両方を使用する類似のリンカーを記載している。米国特許第８，７０３，９０７号は、薬物をリンカーを介してデンドリマーに連結するために、両タイプの薬物へのリンケージを使用している。
【００２０】
ＷＯ２０１３／０３６８４７は、リンカーが任意に架橋されたヒドロゲルに連結される、類似のリンケージを記載している。これらの送達システムはどれも、ソマトスタチン又はその類似体の有効量の適切な送達に適応するようには具体的に設計されていない。
【００２１】
しばしば痛みを伴う筋肉内又は深部皮下注射が訓練を受けた医療専門家による投与を必要とすること、ならびにＰＬＧＡミクロスフェア中のペプチド薬物の不安定性から、これらの有用な治療薬を投与するための改善された方法が必要とされている。
【発明の概要】
【００２２】
発明の開示
本発明は、ソマトスタチン及びその類似体の投与に関連した、十分な投与量、十分な製剤の溶解性、及び長期持続投与が達成され得るような放出制御メカニズムに関する問題を解決する。一般的には、ソマトスタチン又はその類似体の十分な投与量を提供するには、該薬物の複数コピーを徐放性製剤に含める必要がある。本発明は、不溶性のデポー形態として提供され得るヒドロゲル中にソマトスタチン又はその類似体の複数コピーを含ませることによって、あるいは、可溶性のマルチアーム型高分子に複数コピーを含ませることによって、これを達成するための手段を提供する。どちらの場合にも、ソマトスタチン又はその類似体は、β脱離反応を利用して放出が制御されるリンカーを介して、該ヒドロゲル又はマルチアーム型ポリマーに連結される。
【００２３】
したがって、本発明は、ソマトスタチン及びその類似体の制御された放出及び改善された投与方法を可能にするコンジュゲートを提供する。本発明のコンジュゲートは、可溶性で、ペプチドの長寿命循環供給源として作用してもよく、あるいは、不溶性で、非循環デポーとして作用してもよい。本発明はまた、これらのコンジュゲートを調製する方法及びそれらを使用する方法を提供する。本発明のコンジュゲートは、ソマトスタチン又はその類似体による治療が有用であるとすでに知られている疾患及び状態の治療において有用性が見出されることが期待される。
【００２４】
本発明の一態様は、放出が制御されたソマトスタチン及びその類似体の可溶性コンジュゲートを提供する。本発明の可溶性コンジュゲートは、式（Ｉ）で表されるものである：
Ｐ−（Ｌ−Ｄ）ｎ      （１）
式中、Ｐはキャリア分子又はヒドロゲルであり、Ｌはβ脱離反応によりＤを放出することが可能な放出型リンカーであり、Ｄはソマトスタチン又はその類似体（即ち、ソマトスタチン又はソマトスタチンの類似体）であり、そしてＰがキャリア分子である場合にｎ＝１〜８であり、Ｐがヒドロゲルである場合にｎは多数（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ）である。
【００２５】
より詳細には、本発明は、式（１）の誘導体化ヒドロゲルを含むコンジュゲートに関する：
Ｐ−（Ｌ−Ｄ）ｎ      （１）
式中、
Ｐは、キャリア分子又はヒドロゲルであり；
Ｄは、ソマトスタチン又はその類似体であり；
Ｐがキャリア分子である場合、ｎ＝１〜８であり、Ｐがヒドロゲルである場合、ｎは多数であり；かつ
Ｌは、式（２）で表される部分（ｍｏｉｅｔｙ）である：
【００２６】
【化５】
2016534064.tif 000007
【００２７】
式（２）中、ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は
ＯＲ９もしくはＮＲ９２、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は
ＳＲ４、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル、
であるか、あるいは、
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、若しくは、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２もしくはＲ５の１つは、Ｐ又はヒドロゲルに連結される。
【００２８】
Ｐがヒドロゲルである場合に「ｎ」によって示される「多数」（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ）は、典型的には、ヒドロゲル中のマクロモノマーの数によって少なくとも部分的に決定される、大きな数である。一実施形態では、各薬物担持マクロモノマーは、少なくとも４コピーの結合されたソマトスタチン又は類似体を含む。ヒドロゲルはさまざまなサイズとなり得るため、結合されたソマトスタチン又は類似体の具体的な数を特定することは意味をなさない。ヒドロゲルの寸法は、例えば、１μｌ又は１００μｌ又はそれより大きくてもよい。したがって、一般的に、ｎは大きな数である。
【００２９】
可溶性コンジュゲートだけでなく、放出が制御されたソマトスタチン又はその類似体の不溶性ヒドロゲルコンジュゲートも包含される。本発明はまた、適切なリンカーに連結されたソマトスタチン又はその類似体を含む化合物などの、本発明の薬物送達システムの前駆体に関する。ヒドロゲルは、β脱離によって切断可能な、同じタイプのリンカーを用いて架橋されてもよい。
【００３０】
本発明はまた、本発明の薬物送達システムを用いた治療方法に関する。したがって、本発明はまた、ヒドロゲルを含む本発明のコンジュゲートの形態でソマトスタチン又はその類似体を投与することによる、ソマトスタチン及びその類似体が有益な疾患を治療する方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、オクトレオチドのα−アミンを介して、４アームＰＥＧに、ＤＢＣＯ誘導トリアゾールを用いて放出可能となるように連結された、本発明の可溶性コンジュゲートを示す。
【図２】図２は、オクトレオチドのε−アミンを介して、４アームＰＥＧに、ＤＢＣＯ誘導トリアゾールを用いて放出可能となるように連結された、本発明の可溶性コンジュゲートを示す。
【図３】図３は、オクトレオチドのα−アミンを介して、４アームＰＥＧに、アミドを用いて放出可能となるように連結された、本発明の可溶性コンジュゲートを示す。
【図４】図４は、リンカーの調製方法を示す。
【図５】図５は、ε結合型アジド−リンカー−オクトレオチドの調製方法を示す。
【図６】図６は、α結合型アジド−リンカー−オクトレオチドの調製方法を示す。
【図７】図７は、オクトレオチドのα−アミンを介して、４アームＰＥＧに、アミドを用いて放出可能となるように連結された、本発明の可溶性コンジュゲートの調製方法を示す。この図では、ＰＥＧはマルチアーム型ＰＥＧを表す。
【図８】図８は、式（１）の可溶性オクトレオチドコンジュゲートの構造を示し、ここで、Ｐは４０ｋＤａの４分岐型ポリエチレングリコールであり；Ｌはリンカーであり、ここで、Ｒ１は、（４−メチルフェニル）ＳＯ２であり、Ｒ２はＨであり、一方のＲ５はＨで、他方は（ＣＨ２）５Ｚであり、ここで、Ｚは、ＢＣＮシクロオクチンとアジドとの反応により形成されたトリアゾールであり；Ｄは、Ｎα結合型オクトレオチドであり；かつ、ｎは１である。４０ｋＤａ  ＰＥＧにおいて、ｍは約１７０（７．５ｋＤａセグメント）であり、ｐは約１１４（５ｋＤａセグメント）である。
【図９】図９は、ｐＨ９．４、３７℃における、図８のコンジュゲートからのオクトレオチドのインビトロ放出カイネティクスを示す。オクトレオチドは４時間の一次半減期でコンジュゲートから放出され、これはｐＨ７．４では４００時間の半減期に相当する。
【図１０】図１０は、ラットに静脈内投与した後に図８のコンジュゲートから放出されたオクトレオチドの薬物動態を示す。
【図１１】図１１は、ソマトスタチン又はペプチド類似体を放出するヒドロゲルの調製方法を示す。この方法では、８アーム型ＰＥＧ−（シクロオクチン）８マクロモノマーを≦４当量のアジド−リンカー−ペプチドと反応させて、８アームＰＥＧマクロモノマーあたり最大４つのリンカー−ペプチドを結合させる。次に、残りのシクロオクチン単位を用いて、アジド含有架橋試薬との反応によりヒドロゲルマトリックスを形成させる。この図では、「Ｃ」はマルチアーム型コアを表す。
【図１２】図１２は、ソマトスタチン又はペプチド類似体を放出するヒドロゲルの２番目の調製方法の第１工程を示す。この方法では、各アーム上に２個の直交型反応性（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｌｙ−ｒｅａｃｔｉｖｅ）の官能基を含む４アーム型ＰＥＧマクロモノマーをリンカー−ペプチド（該リンカーは２個のマクロモノマー官能基の一方と反応する官能基を含む）と反応させる。次に、得られたペプチド負荷マクロモノマーを、ＰＥＧマクロモノマー上の残りの官能基と反応する官能基をもつ架橋試薬と反応させる。図示した第１工程では、ＰＥＧマクロモノマーは、アミノ−リンカー−ソマトスタチン／類似体に連結するためのスクシンイミジルエステル、及び、その後に行うシクロオクチンを含む第２のマクロモノマーとの架橋のためのアジドを含む。この図では、ＰＥＧはマルチアーム型である。
【図１３】図１３は、アジド官能基を有する薬物担持マクロモノマーを、シクロオクチン官能基を有する架橋用マクロモノマーに連結することによる、ヒドロゲルの形成を示す。
【図１４】図１４は、得られたヒドロゲルへの、ソマトスタチン又はその類似体を含むアジド結合デンドリマーの負荷を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
用語「ソマトスタチン類似体」は、ソマトスタチン及びそのペプチド類似体、例えばオクトレオチド、ランレオチド、及びパシレオチドを包含する。したがって、「ソマトスタチン類似体」は言い回しの簡潔さのために時々使用されるが、この用語はソマトスタチン又はその類似体を意味する。
【００３３】
用語「ＰＥＧ」は、放出型リンカーとの共有結合を可能にする官能基Ｚを少なくとも１個含む、平均分子量１０，０００〜１００，０００の直鎖、分枝鎖、又はマルチアーム型のエチレンオキシドのポリマーを包含するものである。適切な官能基Ｚとしては、以下が挙げられる：アミン；アルコキシアミン；ケトン；アルデヒド；カルボキシレート；例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ニトロフェニルエステル、及びペンタハロフェニルエステル等の活性エステル；活性カーボネート及びカルバメート；チオール；マレイミド；アジド；末端アルキン；歪んだ（ｓｔｒａｉｎｅｄ）シクロオクチン；トランス−シクロオクテン；シクロプロペン；ノルボルネン；テトラジン；ニトリルオキシド；シクロペンタジエン；ならびにフラン。
【００３４】
用語「ヒドロゲル」とは、不溶性で、親水性ポリマー鎖が架橋された網状構造を意味する。ヒドロゲルは、ＰＥＧ、ポリアクリルアミド、ヒアルロン酸、デキストラン、又は類似のポリマーを含む合成又は天然ポリマーの１種以上から構成することができる。
【００３５】
用語「コンジュゲート」とは、キャリア分子又は誘導体化ヒドロゲルと、ソマトスタチン又はその類似体との共有結合によって調製された化合物を意味し、ここで、キャリア分子又はヒドロゲルは、ソマトスタチン又はその類似体のインビボでの寿命を延長させる。キャリア分子は、コンジュゲートで治療される状態又は疾患に対して生物学的に不活性であってもよいし、該状態又は該疾患に関連する特定の標的又は組織に治療薬を誘導する働きをしてもよい。
【００３６】
用語「β脱離」とは、部分構造ＣＨ−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ−ＣＸ（ここでｍ＝０〜１）を含む化合物が、Ｈ−Ｘの要素の脱離により部分構造Ｃ＝（Ｃ−Ｃ）ｍ＝Ｃを含む化合物に変換される化学反応を意味する。
【００３７】
用語「置換されている」とは、１個以上の水素原子の代わりに１個以上の置換基を含むアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はヘテロアリール基を意味する。置換基は、一般的には、以下から選択することができる：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含むハロゲン；直鎖、分枝鎖及び環状を含む低級アルキル；低級ハロアルキル、例えば、フルオロアルキル、クロロアルキル、ブロモアルキル、及びヨードアルキル；ＯＨ；直鎖、分枝鎖及び環状を含む低級アルコキシ；ＳＨ；直鎖、分枝鎖及び環状を含む低級アルキルチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ；シリル、例えば、アルキルシリル、アルコキシシリル、及びアリールシリル；ニトロ；シアノ；カルボニル；カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド；アミノカルボニル；アミノアシル；カルバメート；尿素；チオカルバメート；チオ尿素；ケトン；スルホン；スルホンアミド；アリール、例えば、フェニル、ナフチル、及びアントラセニル；ヘテロアリール、例えば、５員ヘテロアリール（ピロール、イミダゾール、フラン、チオフェン、オキサゾール、チアゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、及びテトラゾールなど）、６員ヘテロアリール（ピリジン、ピリミジン、ピラジン）、及び縮合ヘテロアリール（ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサゾール、ベンゾイミダゾール、インドール、ベンゾチアゾール、ベンゾイソオキサゾール、及びベンゾイソチアゾールなど）。
【００３８】
用語「アルキル」、「アルケニル」及び「アルキニル」は、１〜８個の炭素、１〜６個の炭素、又は１〜４個の炭素の、直鎖、分枝鎖、又は環状の炭化水素基を含み、ここで、アルキルは飽和炭化水素であり、アルケニルは１つ以上の炭素−炭素二重結合を含み、そしてアルキニルは１つ以上の炭素−炭素三重結合を含む。特に指定がない限り、これらは１〜６個のＣを含む。
【００３９】
用語「アリール」は、６〜１８個の炭素、好ましくは６〜１０個の炭素の芳香族炭化水素基を含み、例えば、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが含まれる。用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１個のＮ、Ｏ又はＳ原子を含有する３〜１５個の炭素、好ましくは少なくとも１個のＮ、Ｏ又はＳ原子を含有する３〜７個の炭素を含む芳香環を含み、例えば、ピロリル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、キノリル、インドリル、インデニル、及び類似の基が含まれる。
【００４０】
用語「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含む。
【００４１】
用語「マレイミド」は、次式の基である：
【００４２】
【化６】
2016534064.tif 000008
【００４３】
用語「放出型リンカー」とは、コンジュゲートにおいて、ソマトスタチン又はその類似体が、キャリア分子又はヒドロゲルに共有結合で連結した部分（ｍｏｉｅｔｙ）を意味し、該部分は、既定の条件下でキャリア分子又はヒドロゲルから治療分子を放出することが可能である。本発明のコンジュゲートでは、放出型リンカーは、β脱離反応により、ソマトスタチン又はその類似体を放出することができる。よって、本発明の放出型リンカーは、式（２）で表すことができる：
【００４４】
【化７】
2016534064.tif 000009
【００４５】
Ｒ１及びＲ２は、独立して、ＣＮ；ＮＯ２；置換されてもよいアリール；置換されてもよいヘテロアリール；置換されてもよいアルケニル；置換されてもよいアルキニル；ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３（ここで、Ｒ３は、Ｈ；置換されてもよいアルキル；それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、ＯＲ９もしくはＮＲ９２（ここで、各Ｒ９は、独立して、Ｈ若しくは置換されてもよいアルキルであるか、又は、両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成する）である）；又は、ＳＲ４（ここで、Ｒ４は、置換されてもよいアルキル；それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである）であるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が結合して、３〜８員環を形成していてもよい。Ｒ１とＲ２のただ１つは、Ｈであり得るか、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであり得る。
【００４６】
ＰＣＴ公開ＷＯ２００９／１５８６６８Ａ１に記載されるように、Ｒ１及びＲ２の電子特性は、リンカーからの放出速度の一次決定因子である。Ｒ１及びＲ２の該特性は、電子供与性又は電子求引性の置換基の任意の付加によって調整することができる。用語「電子供与基」とは、Ｒ１Ｒ２ＣＨの酸性度を低下させる置換基を意味し；電子供与基は、典型的には、負のハメット（Ｈａｍｍｅｔｔ）定数σ又はタフト（Ｔａｆｔ）定数σ＊と関連づけられ、物理有機化学の分野でよく知られている。（ハメット定数は、アリール／ヘテロアリールの置換基について言及し、タフト定数は非芳香族部分上の置換基について言及する。）適切な電子供与性置換基の例としては、これに限定するものではないが、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、及びシリルが挙げられる。同様に、「電子求引基」とは、Ｒ１Ｒ２ＣＨ基の酸性度を増加させる置換基を意味し；電子求引基は、典型的には、正のハメット定数σ又はタフト定数σ＊と関連づけられ、物理有機化学の分野でよく知られている。適切な電子求引性置換基の例としては、これに限定するものではないが、ハロゲン、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ（＝Ｏ）−ＲＸ（ここで、ＲＸは、Ｈ、低級アルキル、低級アルコキシ、又はアミノである）、又はＳ（Ｏ）ｍＲＹ（ここで、ｍ＝１〜２、ＲＹは、低級アルキル、アリール、又はヘテロアリールである）が挙げられる。当技術分野でよく知られているように、置換基の電子的影響は、その置換基の位置に依存し得る。例えば、アリール環のオルト位又はパラ位にあるアルコキシ置換基は、電子供与性であり、負のハメット定数により特徴づけられる。一方で、アリール環のメタ位にあるアルコキシ置換基は、電子求引性であり、正のハメット定数により特徴づけられる。ハメット定数σ及びタフト定数σ＊の表を以下に示す。
【００４７】
【表１】
2016534064.tif 000010
【００４８】
【表２】
2016534064.tif 000011
【００４９】
本発明の実施形態では、ｍ＝０〜１である。特定の実施形態では、ｍ＝０である。
【００５０】
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、又はヘテロアリールアルキルであり；ここで、一方のＲ５は、高分子キャリアへの連結を可能にする官能基Ｚをさらに含む。
【００５１】
本発明の一態様では、放出が制御された、ソマトスタチン又はソマトスタチン類似体の可溶性コンジュゲートが提供される。本発明の該可溶性コンジュゲートは、式（Ｉ）で表されるものである：
Ｐ−（Ｌ−Ｄ）ｎ      （１）
式中、Ｐは可溶性のキャリア分子であるか、又はヒドロゲルであり、Ｌは上記のようにβ脱離反応によりＤを放出することが可能な放出型リンカーであり、Ｄはソマトスタチン又はその類似体であり、かつ、Ｐがキャリア分子である場合にｎ＝１〜８である。Ｐがヒドロゲルである場合、ｎは該ゲル中の高分子単位の数に依存する大きな数である。
【００５２】
本発明のさまざまな実施形態では、ソマトスタチン又はその類似体Ｄは、Ｄのアミン基へのカルバメートリンケージを介して放出型リンカーＬに連結される。本発明のある特定の実施形態では、ＤはＮ末端のα−ＮＨ２基を介してＬに連結される。本発明の他の実施形態では、Ｄはリシン残基のε−ＮＨ２基を介してＬに連結される。本発明のさらに他の実施形態では、Ｄは２−アミノエチル−カルバメート基のＮＨ２基を介してＬに連結される。
【００５３】
本発明の実施形態では、放出型リンカーＬは、放出型リンカーのＲ１、Ｒ２、又はＲ５の１つにある官能基Ｚ、及びＰにあるコグネイト（ｃｏｇｎａｔｅ）官能基Ｚ＊により、Ｐに連結される。官能基Ｚ／Ｚ＊のコグネイト対の例は、以下の表３に示される。Ｚ及びＺ＊の位置は逆であってもよい。
【００５４】
【表３】
2016534064.tif 000012
【００５５】
Ｐは、上述したように、可逆的リンカーの結合を可能にする少なくとも１個の官能基Ｚ＊（又はＺ）を含む。Ｚ＊（又はＺ）基は、Ｐにもともと存在してもよいし、コンジュゲーションの技術分野で周知の方法を用いて化学的誘導体化により付加されてもよい。
【００５６】
Ｐが可溶性のキャリア分子である場合、Ｐは、合成又は天然のポリマー、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、デキストラン、ヒアルロン酸、又はタンパク質（アルブミン及び抗体を含む）であり得る。本発明の一実施形態では、Ｐは、平均分子量１０，０００〜１００，０００、好ましくは２０，０００〜６０，０００、最も好ましくは約４０，０００のＰＥＧである。Ｐは、直鎖、分枝鎖、又はマルチアームであり得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｐは２〜８本のアームを有するマルチアームＰＥＧであり、各アームは官能基Ｚ＊（又はＺ）で終端する。このようなマルチアームＰＥＧの例として、直鎖（２アーム）の各端部にＺ＊（又はＺ）基を有するもの、及びペンタエリスリトール（４アーム）、ヘキサグリセリン（８アーム）、トリペンタエリスリトール（８アーム）、又は他の同様の分枝コアから出発して形成されるものが挙げられる。
【００５７】
【化８】
2016534064.tif 000013
【００５８】
本発明の具体的な実施形態において、Ｐは４アーム型ＰＥＧであり、Ｌは式（２）で表される放出型リンカーであり、Ｄはソマトスタチン又はその類似体であり、かつ、ｎ＝４である。本発明のより具体的な実施形態では、Ｐは４アーム型ＰＥＧであり、Ｌは式（２）（ここで、ｍ＝０、Ｒ１＝ＣＮ又はＲ３ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、一方のＲ５＝Ｈ、他方のＲ５は官能基Ｚ及びＺ＊を介してＰに連結される）で表される放出型リンカーである。
【００５９】
Ｐがキャリア分子である場合の式（１）のコンジュゲートの具体的な実施形態を、図１、図２、及び図３に示す。図１は、Ｐが、Ｚ＝アジドとＺ＊＝シクロオクチンとの反応によって形成されたトリアゾールリンケージを介してＬに連結された４アーム型ＰＥＧである、コンジュゲートの構造を示し、ここで、オクトレオチドのＮα−アミノ基へのカルバメートの結合を介してＬがＤに連結される。この例で使用される特定のシクロオクチンはジベンゾアザシクロオクチンＤＢＣＯであるが、ビシクロノニン（ｂｉｃｙｃｌｏｎｏｎｙｎｅｓ：ＢＣＮ）及びフッ素化シクロオクチンを含む、他のシクロオクチン類でも同様の機能が得られる。このようなコンジュゲートを調製するために、４アーム型ＰＥＧ−テトラアミンをシクロオクチン試薬（この例ではＤＢＣＯ−コハク酸の活性ＮＨＳエステル）で誘導体化して４アーム型ＰＥＧ−（シクロオクチン）４を得る。オクトレオチドは主に、リシン残基のＮε−アミンで容易にアシル化され、単にアジド−リンカー−スクシンイミジルカーボネートで処理することによって、この位置にリンカーを結合させることができる（ＰＣＴ公開ＷＯ２００９／１５８６６８Ａ１；Ｓａｎｔｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１１）１０９：６２１１−６２１６）。α−アミンを介して連結されたアジド−リンカー−オクトレオチドを調製するには、最初に、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）のような容易に除去できるブロッキング基との反応によって、リシンのε−アミン基を保護する（図６）。次に、Ｎε−ＢＯＣ−オクトレオチドをアジド−リンカー−ＯＳｕと反応させて、残っているＮα−アミノ基をアシル化し、酸で処理してＢＯＣを除去する。その後、得られたアジド−リンカー−オクトレオチドをＰＥＧ−（シクロオクチン）４と反応させることにより、式（１）のコンジュゲートが生成される（ここで、Ｐ＝ＰＥＧ、Ｌ＝放出型リンカー、Ｄ＝Ｎα−アミンを介して連結されたオクトレオチド、ｎ＝４、Ｚ＝アジド、及びＺ＊＝シクロオクチン）。
【００６０】
図２は、オクトレオチドのＮε−アミノ基へのカルバメートの結合を介して、ＬがＤに連結された類似のコンジュゲートを示す。この例では、オクトレオチドは、アジド−リンカー−ＯＳｕで直接アシル化され（図５）、得られたＮε結合型アジド−リンカー−オクトレオチドをＰＥＧ−（シクロオクチン）４と反応させると、式（１）のコンジュゲートが生成される（ここで、Ｐ＝ＰＥＧ、Ｌ＝放出型リンカー、Ｄ＝Ｎε−アミンを介して連結されたオクトレオチド、ｎ＝４、Ｚ＝アジド、及びＺ＊＝シクロオクチン）。
【００６１】
図３は、Ｚ＝アミノとＺ＊＝カルボン酸活性エステルとの反応によって形成されたアミドリンケージを介してＬに連結された４アーム型ＰＥＧがＰである、コンジュゲートの構造を示し、ここで、オクトレオチドのＮα−アミノ基へのカルバメートの結合を介してＬがＤに連結されている。このコンジュゲートは、ＰＥＧ−テトラ（活性エステル）、例えばＰＥＧ−（コハク酸スクシンイミジル）４又はＰＥＧ−（グルタル酸スクシンイミジル）４を、非コンジュゲート化アミノ基が適切に保護されたアミノ−リンカー−オクトレオチドと、反応させることによって調製される。このようなアミノ−リンカー−オクトレオチドコンジュゲートの１つを調製する方法を図７に示す。図６のＮε−ＢＯＣ−オクトレオチドを、保護アミノ−リンカーと反応させる（ただし、その保護基はＢＯＣ基の存在下で除去可能である）。１つの適切なこのような保護基は、図４に示すように調製された、モノメチルトリチル（ＭＭＴ）である。ＭＭＴ−リンカー−オクトレオチド（ＢＯＣ）は弱酸を用いて部分的に脱保護し、得られたアミノ−リンカー−オクトレオチドをＰＥＧ−（活性エステル）４と反応させる。その後、トリフルオロ酢酸による最終的な脱ブロッキングにより、最終コンジュゲートが生成される。
【００６２】
他のソマトスタチン類似体をコンジュゲート化することによって、類似のコンジュゲートを同様の方法で調製することができる。さらに、大部分のソマトスタチン類似体は合成ペプチドであるので、リンカーの結合位置もまた、ペプチド合成の間に結合させることによって、コントロールすることができる。
【００６３】
本発明の一実施形態では、Ｐは不溶性のヒドロゲルである。薬物放出及び分解が制御可能なヒドロゲルの調製は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１３／０３６８４７Ａ１に開示されている。上記リンカー−ソマトスタチン／類似体は、可溶性ＰＥＧコンジュゲートに関して上述したものと同様の化学を用いて、このようなヒドロゲルに結合させることができる。
【００６４】
ソマトスタチン／類似体のヒドロゲルコンジュゲートの使用は、特定の状況では、可溶性コンジュゲートの使用よりも好ましいことがある。例えば、コンジュゲーションの位置に応じて、ソマトスタチン／類似体は、コンジュゲート化されたままで、ある程度の生物学的活性を保持し得る。これにより、コンジュゲートの受容体介在性エンドサイトーシスをもたらす可能性がある。ひとたびエンドソーム区画に取り込まれると、コンジュゲートは分解されてキャリア分子を放出することができ；そのキャリア分子がＰＥＧである場合、それはさらなる分解に対して安定であり、かつ、エンドソーム区画に捕捉される。このことは、空胞形成及び関連する毒性につながる可能性がある。ヒドロゲルのような非循環コンジュゲートでは、これは問題にならない。
【００６５】
ヒドロゲルを形成するためには、上述などのリンカー−ソマトスタチン／類似体を第１のマクロモノマーと反応させて、薬物負荷マクロモノマーを形成させる。次に、この薬物負荷マクロモノマーを架橋用マクロモノマーと反応させて、架橋したポリマーゲルを形成させる。あるいは、最初に２つのマクロモノマーを反応させて架橋ポリマーゲルを形成させ、続いてリンカー−ソマトスタチン／類似体を結合させてもよく、又は、３種すべての成分を混合して同時に反応させてもよい。
【００６６】
図１１に示される一実施形態では、８アームＰＥＧ−（シクロオクチン）８をｑモル当量のアジド−リンカー−Ｄと反応させて、中間体ＰＥＧ−（リンカー−Ｄ）ｑ（シクロオクチン）８−ｑ（ここで、ｑ＝マクロモノマーあたりに結合したリンカー−Ｄの平均数）を生成させる。次に、この薬物負荷マクロモノマーを最大（８−ｑ）／ｒモル当量のｒアームＰＥＧ−（リンカー−アジド）ｒと反応させると、ヒドロゲルが生成される。ヒドロゲルの形成はマクロモノマーあたり少なくとも１．６の架橋を必要とするので、ｑは０．０１〜６．４、好ましくは０．１〜６．０、より好ましくは０．１〜４．０となる。よって、本発明の一実施形態では、８アームＰＥＧ−（シクロオクチン）８をｑモル当量のアジド−リンカー−Ｄと反応させて、中間体ＰＥＧ−（リンカー−Ｄ）ｑ（シクロオクチン）８−ｑを生成させる。次に、この薬物負荷マクロモノマーを最大（８−ｑ）／４モル当量の４アームＰＥＧ−（リンカー−アジド）４と反応させてヒドロゲルを生成させる。本発明の好ましい実施形態では、ｑ＝０．１〜４．０を有する薬物負荷マクロモノマーを１モル当量の４アームＰＥＧ−（リンカー−アジド）４と反応させて、マクロモノマーあたり平均４の架橋を有するヒドロゲルを生成する。
【００６７】
本発明の別の実施形態では、４アームＰＥＧを、最初に、２個の直交型反応性の官能基Ｚ及びＹ（すなわち、表３の異なる列から選択され、同じ対のメンバーではない）を含む分子で誘導体化する。次に、このマクロモノマーを、上記のように、官能基Ｚを介してＺ＊−リンカー−Ｄにコンジュゲート化し、第２の官能基Ｙを、Ｙに補完的な官能基Ｙ＊を含む第２のマクロモノマーと反応させる。この例では、最大４つのＤ分子を最初のマクロモノマーあたりに結合させることができ、そしてマクロモノマーあたり４架橋を有するヒドロゲルを得ることができる。
【００６８】
ＰＣＴ公開ＷＯ２０１３／０３６８４７Ａ１に記載されるように、ヒドロゲルは、β脱離によって分解するさらなるリンカーを含むことができ、これにより、ヒドロゲルの滞留時間をコントロールすることができる。ヒドロゲルマトリックスを調製するために使用されるリンカーは、好ましくは、ソマトスタチン又はその類似体をヒドロゲルに連結するために使用されるリンカーよりも２〜１０倍遅い、より好ましくは３〜６倍遅い、β脱離速度を有する。
【００６９】
本発明の可溶性コンジュゲートの医薬製剤は、医薬分野で公知の薬学的に許容される賦形剤を用いて製剤化することができる。本発明の一実施形態では、医薬製剤は本発明の可溶性コンジュゲート及びｐＨ値４〜８、好ましくは４〜７、最も好ましくは約ｐＨ５の水性緩衝液を含有する。該製剤は、必要に応じて、粉末を提供するために凍結乾燥することができ、該粉末はその後、注射用滅菌水を用いて使用前にもどすことができる。
【００７０】
本発明のヒドロゲルは注射に適したミクロスフェアもしくは同様の懸濁粒子として調製することができ、又はマクロモノマーを溶液もしくは用時調製のための粉末として提供することができる；該粉末は、使用直前に適切な比率で混合した場合、液体として注射することができ、該液体はその後所望の区画内で固体のヒドロゲルを形成する。混合は、混合先端部を取り付けたマルチバレル式シリンジで行うことができる。
【００７１】
投与及び使用
本発明のコンジュゲート及びその組成物は、本発明に従って調製されたこれらの類似体を含有するヒドロゲルを含めて、ソマトスタチンとその類似体が現在示されているのと同じ適応症に有用である。本明細書中の段落０００１〜０００３に記載される疾患が特に含められる。
【００７２】
食品医薬品局（ＦＤＡ）は、このペプチドの塩形態であるオクトレオチド酢酸塩を注射可能なデポー製剤として使用することを承認しており、該製剤は、成長ホルモン産生腫瘍（先端巨大症及び巨人症）、甲状腺刺激ホルモンを分泌する下垂体腫瘍（チロトロピノーマ（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｏｍａ））、カルチノイド症候群に関連した下痢及び紅潮エピソード、ならびに血管作動性腸管ペプチド分泌腫瘍（ビポーマ（ＶＩＰｏｍａ））を有する患者における下痢を治療するために使用される。
【００７３】
投与量レベル及び投与方法は、コンジュゲート又はヒドロゲルの性質及び放出の速度、ならびに疾患及び患者に関連するパラメータに依存する。こうした投与量及び投与方法は医師の判断の範囲内である。かくして、本発明の組成物は、注射により、又は適切に製剤化された場合には、経口的、局所的、もしくは座薬などにより、投与することができる。
【００７４】
以下の実施例は、本発明を例示するためのものであり、本発明を限定するものではない。本明細書に引用された全ての文献は、別段の指示がない限り、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００７５】
実施例１
ＭＭＴ−アミノリンカーアルコール
【００７６】
【化９】
2016534064.tif 000014
【００７７】
ＴＨＦ中の１．０Ｍトリメチルホスフィンの溶液（２．１ｍＬ，２．１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ  １．０ｍＬ中の７−アジド−１−（４−メチルフェニルスルホニル）−２−ヘプタノール（３１１ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．１３５ｍＬ，２．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。ガスが発生し、５０分後、水（０．０５ｍＬ，２．８ｍｍｏｌ）を加えた。さらに３０分後、この混合物を蒸発乾固させ、残留物を２×１０ｍＬのエーテルでトリチュレーションした。その残留物を酢酸エチル５ｍＬ及び１Ｎ  ＨＣｌ  ２ｍＬと混合し、水相を回収し、エタノール５ｍＬを添加した後に蒸発させた。得られた粗製のアミン酢酸塩をＣＨ２Ｃｌ２  ５ｍＬ中に溶解し、トリエチルアミン（０．５ｍＬ，３．６ｍｍｏｌ）と塩化モノメチルトリチル（４５０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、０．１Ｍ  ＫＰｉ，ｐＨ６．０で２回洗浄し、続いてブラインで洗浄して、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。粗生成物を、０〜５０％酢酸エチル／ヘキサンの段階的勾配を用いるＳｉＯ２でのクロマトグラフィーにかけると、該生成物が無色のオイル（３１８ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ，６０％）として得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：ｄ  ７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．４５（４Ｈ，ｍ），７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２５（４Ｈ，ｍ），７．１６（２Ｈ，ｍ），７．０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．１２（１Ｈ，ｍ），３．７２（１Ｈ，ｂｒｓ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，１４Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２，１４Ｈｚ），２．４５（３Ｈ，ｓ），２．３０（３Ｈ，ｓ），２．０８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．７−１．５（８Ｈ，ｍ）。
【００７８】
実施例２
ＭＭＴ−アミノリンカースクシンイミジルカーボネート
【００７９】
【化１０】
2016534064.tif 000015
【００８０】
乾燥アセトニトリル２ｍＬ中の実施例１のＭＭＴ−アミノリンカーアルコール（１８０ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）、炭酸ジスクシンイミジル（４２５ｍｇ，１．６６ｍｍｏｌ）、及び４−（ジメチルアミノ）ピリジン（８４ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）の懸濁液を１６時間撹拌した。得られた透明な溶液を酢酸エチルで希釈し、水、次にブラインで洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。生成物を酢酸エチル／ヘキサンの段階的勾配を用いるＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製すると、無色のガラス１９０ｍｇ（８４％）が得られた。
【００８１】
実施例３
Ｎα結合型アジド−リンカー−オクトレオチドの調製
オクトレオチド（Ｂｏｃ）の調製：オクトレオチド（１０．２ｍｇ，１０μｍｏｌ，２０ｍＭ最終濃度）及び二炭酸ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）（９．１μｍｏｌ，１８．２ｍＭ最終濃度）をＤＭＦ  ５００μＬ中で混合した。４時間後、この反応物をＨｉ−Ｑ  ５μ  Ｃ１８カラム（５０×２０ｍｍ  ＩＤ，Ｐｅｅｋ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でのセミ分取ＨＰＬＣにかけて、２０％ＡＣＮ  ０．１％ＴＦＡ〜１００％ＡＣＮ  ０．１％ＴＦＡの勾配を５ｍＬ／分の流速で１５分にわたり用いることによって精製した。各５００μＬ画分を飽和ＮａＨＣＯ３  １５μＬの添加により中和して、真空下で乾燥させた。
【００８２】
Ｎα結合型アジド−リンカー−オクトレオチドの調製：オクトレオチド（Ｂｏｃ）（３６０ｎｍｏｌ，３．６ｍＭ最終濃度）及び７−アジド−１−（４−メチルフェニルスルホニル）−２−ヘプチルスクシンイミジルカーボネート（１．１μｍｏｌ，１１ｍＭ最終濃度）をＤＭＦ  ０．１ｍＬ中で混合した。５時間後、この反応をＨＰＬＣ（７．３分から９．３分へのピークシフト）により完了させ、上記のようにＨＰＬＣで精製した。精製した画分を真空下で乾燥させ、ジクロロメタン中の５０％ＴＦＡ  ２００μＬに取り上げてＢｏｃ保護基を除去した。精製した生成物に、１ｍＬの５０％ＴＦＡ／ジクロロメタンを添加した。１時間後、ＨＰＬＣで反応の完了を分析した。ＤＣＭ／ＴＦＡを真空下で除去した。生成物Ｎ３−（α−アミン）オクトレオチドをＭＳＭＳにより検証した。
【００８３】
実施例４
Ｎε結合型アジド−リンカー−オクトレオチドの調製
オクトレオチド（６．７μｍｏｌ，２２ｍＭ最終濃度）及び７−アジド−１−（４−メチルフェニルスルホニル）−２−ヘプチルスクシンイミジルカーボネート（８μｍｏｌ，２６．４ｍＭ最終濃度）をＤＭＦ  ０．３ｍＬ中で混合した。３時間後、この反応物をＨｉ−Ｑ  ５μ  Ｃ１８カラム（５０×２０ｍｍ  ＩＤ，Ｐｅｅｋ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でのセミ分取ＨＰＬＣにかけて、２０％ＡＣＮ  ０．１％ＴＦＡ〜１００％ＡＣＮ  ０．１％ＴＦＡの勾配を５ｍＬ／分の流速で１５分かけて用いることにより精製した。画分を真空下で乾燥させ、ＭＳ及びＭＳＭＳ分析により同定した。ＤＭＦ中のオクトレオチドのアシル化は、ＭＳ及びＭＳＭＳ分析により同定されたモノアシル（ε−アミン）オクトレオチド（ＨＰＬＣピーク面積２８０ｎｍにより約９１％）とビスアシルオクトレオチド（９％）の形成をもたらした。Ｃ１８カラムでの精製により、ＨＰＬＣで目立った汚染のないモノアシル（ε−アミン）オクトレオチドの最終収率７５％が得られた。
【００８４】
実施例５
可溶性ＰＥＧ−リンカー−オクトレオチドの調製
４アームＰＥＧ４０ｋＤａ−（ＢＣＮ）４の調製：４アームＰＥＧ４０ｋＤａアミン（ＮＯＦ  ＰＴＥ４００ＰＡ）（１００ｍｇ，２．５μｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８．８μｍｏｌ）を含有するＤＭＦ  １ｍＬ中でＢＣＮ−ＯＰＮＰ（ＳｙｎＡｆｆｉｘ社，４ｍｇ，１２．５μｍｏｌ）と混合した。室温で２時間後、この反応物をＨ２Ｏで２．５ｍＬに希釈し、１２ｋＤａ透析膜を用いて１ＬのＨ２Ｏに対して透析した。透析緩衝液を４時間後に変えて、一晩放置した。その透析緩衝液を１ＬのＭｅＯＨに変えて、４時間後に取り換えた。生成物を蒸発により乾燥させ、ＴＨＦ  １．５ｍＬ中に溶解した。その生成物を１５ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルに撹拌しながら滴下して沈殿させた。３０分後、沈殿物を遠心分離によりペレット化し、デカントし、ＭＴＢＥ  ３ｍＬで２回洗浄した。得られた粉末を真空下で乾燥させた。ＴＮＢＳアッセイを実施して、残りの遊離アミンを定量した。
【００８５】
コンジュゲートの調製：実施例４からのＮε結合型アジド−リンカー−オクトレオチド（４．４μｍｏｌ，０．７ｍＭ最終濃度）を、ＤＭＦ  ６００μＬ中で４アームＰＥＧ４０ｋＤａ−ＢＣＮ４（４μｍｏｌ  ＢＣＮ，０．６４ｍＭ最終濃度）と混合した。反応の進行（オクトレオチドの消費）は、サイズ排除カラム（ＢｉｏＳｅｐ（商標）ＳＥＣ  ２０００  ３００×７．８ｍｍ  ＨＰＬＣカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社））でのＨＰＬＣにより、１ｍＬ／分の５０％ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ  ０．０１％ＴＦＡのアイソクラチックフロー（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ  ｆｌｏｗ）で、ダイオードアレイ検出器を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ（商標）Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＨＰＬＣを用いて追跡した。１９時間後、この反応物を５ｍＬの１０ｍＭトリエタノールアミンｐＨ７．０で希釈した。２つの同等の体積にて、反応物を、１０ｍＭ  ＮａＯＡｃ  ｐＨ５．０（ｐＩ約９）で平衡化した１ｍＬ  ＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＦＦイオン交換カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）社）にかけて精製した。カラムを１０ｍＭ  ＮａＯＡｃ  ｐＨ５．０（緩衝液）６ｍＬで洗浄し、続いて５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び５００ｍＭ  ＮａＣｌを含有する緩衝液６ｍＬで洗浄した。各溶出画分の吸光度スペクトルを測定し、ペプチドの吸収を含む画分をＨＰＬＣ  ＳＥＣで正体（上記参照）について分析した。フロースルー画分と緩衝液洗浄画分を合わせて、１０ｋＤａ  ＭＷＣＯスピンコンセントレータ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いる遠心分離により約５００μＬに濃縮し、続いて１０ｍＭ  ＮａＯＡｃ  ｐＨ５．０を用いて５ｍＬに希釈した。緩衝液交換を完了させるために、濃縮／希釈を４回繰り返した。この生成物は図２に概略的に示される。
【００８６】
Ｒ１Ｒ２ＣＨが存在しない安定した（すなわち、非放出型）コンジュゲートは、放出速度論の実験で対照として使用するために、同様に調製した。
【００８７】
実施例６
４アームＰＥＧ４０ｋＤａ（ε結合型）ＭｅＰｈＳＯ２オクトレオチドの排出速度論
５０μＭ  アジド−ＰＥＧ−ＤＮＰ内部標準を含有する１００ｍＭ緩衝液（ホウ酸Ｎａ，ｐＨ９．４）中の実施例５の２０μＭ  ４アームＰＥＧ４０ｋＤａ（ε結合型）オクトレオチドコンジュゲート（Ｒ１＝４−メチルフェニル−ＳＯ２）を含む反応速度論アッセイは、３７℃でインキュベートした。５半減期にわたる間隔で、２５μＬアリコートを取り出し、４Ｍ  ＨＯＡｃ  ５μＬでクエンチし、分析するまで−２０℃で保存した。サンプルは、Ｊｕｐｉｔｅｒ  ５μ  Ｃ１８  ３００Å  １５０×４．６ｍｍ  ＨＰＬＣカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）社）で、１ｍＬ／分の２０〜１００％ＡＣＮ−０．１％ＴＦＡの線形勾配を用いて、フォトダイオードアレイ検出器を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ（商標）Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＨＰＬＣで分析した。放出速度（ｋｏｂｓｄ）は、％反応ｖｓ時間を一次速度式にフィッティングすることにより算出した。ｐＨ９．４、３７℃での該コンジュゲートの排出ｔ１／２の測定は４時間であった（ｐＨ７．４、３７℃では４００時間に外挿）。図９を参照されたい。
【００８８】
実施例７
インビボ薬物動態
実施例５のコンジュゲートのＰＫアッセイは、カニューレを挿入したＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットで実施した。ＩＶ注射は、１０ｍＭ  ＮａＯＡｃ  ｐＨ５．０中３４８ｍＭ（１３．９ｍｇ／ｋｇのコンジュゲート、０．３５ｍｇ／ｋｇのオクトレオチド）の安定したコンジュゲートを用いて１ｍＬ／ｋｇ体重で、又は６９７ｍＭ（５６ｍｇ／ｋｇのコンジュゲート、１．４ｍｇ／ｋｇのオクトレオチド）の放出型コンジュゲート（実施例６）を用いて２ｍＬ／ｋｇ体重で行った。血液サンプルを０、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２、及び１２０時間に採取した。各時点で、ｐＨを低下させかつ凝固因子を除去して血漿を得るために、３００μＬの血液サンプルを３０μＬの１Ｍクエン酸／０．１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８溶液ｐＨ４．５に加えた。
【００８９】
血漿サンプルの一部を３部のアセトニトリルの添加により沈殿させ、１６０００×ｇで１０分間遠心分離した。サンプルをＨＰＬＣでＰＥＧ−ペプチドコンジュゲート及びＰＥＧ残留濃度について分析した。濃度はピーク面積を標準曲線と比較することにより算出した。
【００９０】
放出型の血漿サンプルの一部をＬＣ／ＭＳＭＳで遊離オクトレオチドについて分析した（ＭｅｄＰａｃｅ社）。遊離オクトレオチドの血漿サンプル濃度ｖｓ時間データを図１０に示す。
【００９１】
ＰＫ解析用ソフトウェアを用いて個別に分析した場合、安定したコンジュゲートは、３５時間のｔ１／２を有すると算出され、約４０時間の安定したＰＥＧ−ペプチドコンジュゲートの以前の測定値と一致した。分布容積（１００ｍＬ／ｋｇ）もまた、ラットのおおよその血液量（７０ｍＬ／ｋｇ）で一般的に測定された、以前のＰＥＧコンジュゲートと一致する。遊離オクトレオチドは５０時間の算出された排出ｔ１／２を有していた。
【００９２】
実施例８
トリアゾール連結型オクトレオチドヒドロゲルの調製
ＤＭＦ中の４０−ｋＤａ  ８アーム型ＰＥＧ−（ＢＣＮ）８（ヒドロゲルペーパー参照）の２００ｍｇ／ｍＬ（４０ｍＭシクロオクチン）溶液（２５０μＬ，１０μｍｏｌシクロオクチン）を、ＤＭＦ中のε結合型アジド−リンカー−オクトレオチド（モジュレータ＝ＣＨ３ＳＯ２）の５３．２ｍＭ溶液（７５．２μＬ，４．０μｍｏｌアジド）及びメタノール中の３０ｍＭアジド−フルオレセイン（５μＬ，０．１５μｍｏｌアジド）と混合し、３７℃で１時間放置した。ＤＭＦ（５４４．８μＬ）を添加し、続いてＤＭＦ中の２０−ｋＤａ  ４アーム型ＰＥＧ−（ＮＨ（ＣＯ）−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ２ＳＯ２ＮＥｔ２）（ＣＨ２）５Ｎ３の２００ｍｇ／ｍＬ（４０ｍＭアジド）溶液（１２５μＬ，５μｍｏｌアジド）を添加した。このゲル混合物を、シラン処理したガラススライド上の１６の円形ゴムのゲルモールド（９ｍｍ直径×１ｍｍ深さ）に、モールドあたり６０μＬを用いて、ピペットで分注し、１時間固まらせた。次に、このゲルをモールドから取り出し、１×１０ｍＬの水で１時間、１×１０ｍＬの１００ｍＭ酢酸塩緩衝液ｐＨ５．０で１時間、最後に１×１０ｍＬの１０ｍＭ酢酸塩ｐＨ５．０、０．１％アジ化ナトリウムで４℃にて一晩洗浄した。ゲルを７０％エタノール１０ｍＬ中に２４時間浸漬して滅菌し、その後３×１０ｍＬの滅菌ろ過水で洗浄した。
【００９３】
ε結合型アジド−リンカー−オクトレオチド（モジュレータ＝（４−メチルフェニル）−ＳＯ２）を含むゲルは、アジド−リンカー−オクトレオチド原料の濃度の違いを考慮するために、添加されるペプチド（ＤＭＦ中８４．４ｍＭ；４７．４μＬ，４．０μｍｏｌアジド）及びＤＭＦ（５７２．６μＬ）の量を調整することによって、同様に調製した。
【００９４】
α結合型アジド−リンカー−オクトレオチド（モジュレータ＝（４−メチルフェニル）−ＳＯ２）を含むゲルは、２００ｍｇ／ｍＬの４０−ｋＤａ  ＰＥＧ−（ＢＣＮ）８（６２．５μＬ，２．５μｍｏｌシクロオクチン）及びα結合型アジド−リンカー−オクトレオチド（モジュレータ＝４−（メチルフェニル）−ＳＯ２；３０μＬ，０．９１μｍｏｌアジド）を混合し、３７℃で３０分間放置し、次にＤＭＦ（１２６．２μＬ）及びＤＭＦ中の２００ｍｇ／ｍＬ  ２０−ｋＤａ  ＰＥＧ（−ＮＨ（ＣＯ）−Ｏ−（ＣＨ２）６Ｎ３（３１．３μＬ，１．２５μｍｏｌアジド）を添加して、このゲル混合物６０μＬを４つの９×１ｍｍ円形ゴムモールドのそれぞれにピペットで分注することにより、同様に調製した。一晩放置した後、ゲルを上記のように洗浄した。この生成物は図１１に概略的に示される。
【００９５】
実施例９
異なった官能基を有するヒドロゲルマクロモノマーの調製
【００９６】
【化１１】
2016534064.tif 000016
【００９７】
Ｎ３−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＳｕ：（Ｓ）−２−アジド−グルタル酸５−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ジシクロヘキシルアンモニウム）塩（１９５ｍｇ，４７４μｍｏｌ）を酢酸エチル２０ｍＬに溶解し、その後６％リン酸（２×１０ｍＬ）、水（２×１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、回転蒸発により濃縮して（Ｓ）−２−アジド−グルタル酸５−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ，４３５μｍｏｌ）を得た。得られた無色のオイルをそれ以上精製することなく使用した。アセトニトリル２ｍＬ中の（Ｓ）−２−アジド−グルタル酸５−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ，４３５μｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（７５ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）及びＥＤＡＣ（１２５ｍｇ，０．６５１ｍｍｏｌ）を連続して添加した。この反応混合物を周囲温度で一晩撹拌し、４０ｍＬの酢酸エチル：ＫＨＳＯ４（５％水溶液）１：１に分配した。層を分離させ、有機相を水、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）、水、及びブライン（各１×２０ｍＬ）で順次洗浄した。その後、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗製濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ピペットカラム）にかけ、ジクロロメタン：ヘキサン（３：７その後７：３、各３ｍＬ）、続いて３ｍＬのジクロロメタン、最後にアセトン：ジクロロメタン（１：３）で溶出して精製した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー工程（約１０分）の間に加水分解が観察された。生成物含有画分を合わせて、ジクロロメタン５ｍＬで希釈した。加水分解副生成物は、ジクロロメタン溶液をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）、水、及びブライン（各１×３ｍＬ）で順次洗浄することにより除去した。その後、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮すると、表題化合物３４ｍｇ（２４％）が黄褐色のオイルとして得られた。
【００９８】
【化１２】
2016534064.tif 000017
【００９９】
［Ｎ３−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）］４−ＰＥＧ２０ｋＤａ：アセトニトリル０．５ｍＬ中のＮ３−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＳｕ（２０ｍｇ，６１μｍｏｌ）の溶液を、アセトニトリル２．７５ｍＬ中の２０ｋＤａ  ＰＥＧアミン・ＨＣｌ（２７５ｍｇ，１３．８μｍｏｌ  ＰＥＧ，５５．０μｍｏｌアミン）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。周囲温度で１．５時間撹拌した後、ＴＮＢＳアッセイ（ＬＯＱ＝０．５％）は、初期遊離アミンの０．８％が反応混合物中に残っていることを示した。次に、未反応アミンをキャップするために、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）と無水酢酸（５．２μＬ，５５μｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を周囲温度で３０分以上撹拌した後、約１ｍＬにまで濃縮した。この生成物を、激しく撹拌したｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル１５ｍＬに滴下することによって沈殿させた。反応バイアルをアセトニトリル０．３ｍＬで洗浄し、その洗浄液を沈殿混合物に加えた。３０分間撹拌した後、その混合物を真空ろ過した。固体生成物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３×５ｍＬ）でトリチュレーションし、次にアセトニトリル３ｍＬ中に溶解し、アセトニトリル６００ｍＬに対して６０時間透析（１２−１４００  ＭＷＣＯ）した。保持液を濃縮すると、表題化合物２３８ｍｇ（８３％）が白色フィルムとして得られた。
【０１００】
【化１３】
2016534064.tif 000018
【０１０１】
［Ｎ３−Ｇｌｕ］４−ＰＥＧ２０ｋＤａ：トリフルオロ酢酸（２．４ｍＬ）をジクロロメタン２．４ｍＬ中の［Ｎ３−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）］４−ＰＥＧ２０ｋＤａ（２３８ｍｇ，１１．４μｍｏｌ）の溶液に加えた。周囲温度で３．５時間撹拌した後、ＨＰＬＣ分析で判定すると、反応は完了した。その反応混合物を濃縮して乾燥させ、得られたオイルを、白色の沈殿物が形成するまで、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１５ｍＬ）でトリチュレーションした。その懸濁液を真空ろ過した。固体をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３×５ｍＬ）で洗浄してから真空下で乾燥させると、表題化合物２１１ｍｇ（８９％）が白色の粉末として得られた。
【０１０２】
得られた生成物は、図１２において「コンジュゲート」と指定される。
【０１０３】
【化１４】
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【０１０４】
［Ｎ３−Ｇｌｕ（ＯＳｕ）］４−ＰＥＧ２０ｋＤａ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（９．２ｍｇ，８０μｍｏｌ）及びＥＤＡＣ（１５ｍｇ，７８μｍｏｌ）を、アセトニトリル２．５ｍＬ中の［Ｎ３−Ｇｌｕ］４−ＰＥＧ２０ｋＤａ（２１１ｍｇ，１０．２μｍｏｌ）の溶液に順次添加した。この反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した後、さらにＮ−ヒドロキシスクシンイミド（９．２ｍｇ，８０μｍｏｌ）及びＥＤＡＣ（１５ｍｇ，７８μｍｏｌ）を添加した。再び周囲温度で一晩撹拌した後（合計４４時間）、反応混合物をアセトニトリル（８００ｍＬ，１８時間；その後５００ｍＬ，２４時間）に対して透析（１２−１４０００  ＭＷＣＯ）した。保持液を約１．５ｍＬに濃縮し、激しく撹拌したｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１７ｍＬ）に添加することにより生成物を沈殿させた。その混合物を周囲温度で１時間撹拌し、その後真空ろ過した。固体をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３×３ｍＬ）で洗浄してから真空下で乾燥させると、表題化合物１５４ｍｇ（７２％）が白色の粉末として得られた。得られた生成物は図１２に示される。
【０１０５】
実施例１０
アミノ−リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ）の調製
Ｎα結合型ＭＴＴ−アミノ−リンカー−オクトレオチドの調製：オクトレオチド（Ｂｏｃ）（ＤＭＳＯ中２８．５ｍＭ；３５０μＬ，１０μｍｏｌ）の溶液と７−（モノメチル−トリチルアミノ）−１−（４−メチルフェニルスルホニル）−２−ヘプチルスクシンイミジルカーボネート（ＴＨＦ中１４０ｍＭ；１４０μＬ，１９．６μｍｏｌ）の溶液を混合した。１６時間後、この反応をＨＰＬＣ（７．１分から９．５分へのピークシフト）により完了させ、上記のようにＨＰＬＣで精製した。精製した画分を合わせて、炭酸水素ナトリウムで中和し、真空下で乾燥させると、モジュレータ基Ｒ１が４−メチルフェニルスルホニルであるアミノ−リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ）が得られた。ＭＳは予測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６８７．２を示した。同様に、モジュレータ基Ｒ１がＣＮ（［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５５７．７）及びＭｅＳＯ２（［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６１１．２）であるアミノ−リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ）を調製した。ＭＴＴ基はクロロホルム中の１％ＣＦ３ＣＯ２Ｈを用いて選択的に除去した。ＭＳ分析：Ｒ１＝４−メチルフェニルスルホニル，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４３０．３；Ｒ１＝ＭｅＳＯ２，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３５４．６；Ｒ１＝ＣＮ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３０１．６。図７に示される、得られたリンカーは、その後、図７の可溶性コンジュゲートを形成するために、ＰＥＧ−（ＣＯ２Ｓｕ）４／ＴＦＡと反応させる。
【０１０６】
実施例１１
アミド結合型ヒドロゲルの調製
アミノ−リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ）（実施例１０）を［Ｎ３−Ｇｌｕ（ＯＳｕ）］４−ＰＥＧ（実施例９）の溶液と反応させてアミド結合型［Ｎ３−Ｇｌｕ（リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ））］４−ＰＥＧを生成させ、これをＣＦ３ＣＯ２Ｈで脱保護すると薬物負荷マクロモノマー［Ｎ３−Ｇｌｕ（リンカー−オクトレオチド）］４−ＰＥＧが得られる。その後、この薬物負荷マクロモノマーの溶液を、Ａｓｈｌｅｙ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｗｉｔｈ  ｐｒｅｄｉｃｔａｂｌｅ  ａｎｄ  ｔｕｎａｂｌｅ  ｄｒｕｇ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｒａｔｅｓ（予測可能かつ調整可能な薬物放出・分解速度を有するヒドロゲル薬物送達システム），”  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１３）１１０：２３１８−２３２３に記載される条件と同様の条件下でＰＥＧ−（シクロオクチン）４の溶液と混合すると、制御された速度でオクトレオチドを放出する分解性ヒドロゲルが得られる。
【０１０７】
この一般的な手順に従って、アセトニトリル１．３ｍＬ中に［Ｎ３−Ｇｌｕ（ＯＳｕ）］４−ＰＥＧ２０ｋＤａ（４．１６μｍｏｌ  ＰＥＧ，１６．６４μｍｏｌ  Ｎ３，１５．５μｍｏｌ  ＮＨＳ，約９２％ＮＨＳ負荷）を含有する溶液を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３１．６μｍｏｌ）を含むアセトニトリル０．７ｍＬ中のＮε５−Ｂｏｃ  Ｎα−アミノ−リンカー−オクトレオチド（ここでＲ１＝ＭｅＳＯ２）（１５．８μｍｏｌ，２１．４ｍｇ）と混合した。反応の進行をサイズ排除ＨＰＬＣで追跡した。完了時に、ＨＰＬＣトレースはオクトレオチドを含む２つのＰＥＧ種を示した：７５％  ＰＥＧ−［オクトレオチド］４（ＲＶ  ７．９ｍＬ）及び２５％  ＰＥＧ−［オクトレオチド］３（ＲＶ  ７．８ｍＬ）。総Ａ２８０の９％に相当する未反応のオクトレオチドも存在した。未反応のＮＨＳは１６．５μｍｏｌのエタノールアミンの添加によりキャップした。１０分後、塩基に不安定なリンカーを保護するために、０．１％ＴＦＡを含有する水２．５ｍＬで希釈することによって反応のｐＨを約３．５に低下させた。この反応物をＭｅＯＨに対して透析したが、その間透析液を１回変えた。保持液を真空下で乾燥させ、４×１５ｍＬのＭＴＢＥでトリチュレーションした。沈殿した生成物を真空下で乾燥させると、表題化合物１００．０ｍｇが収率９３％、サイズ排除ＨＰＬＣによる純度＞９９％（７５％［オクトレオチド］４と［オクトレオチド］３の混合物）で得られた。
【０１０８】
この薬物負荷マクロモノマーの溶液をＰＥＧ−（ＢＣＮ）４の溶液と混合してヒドロゲルを形成させた。
【０１０９】
実施例１２
アミド結合型可溶性多価コンジュゲートの調製
アミノ−リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ）（実施例１０）を４アーム型ＰＥＧ−（スクシンイミジルエステル）４の溶液と反応させて、アミド結合型ＰＥＧ−（リンカー−オクトレオチド（Ｂｏｃ））４を生成し、これをＣＦ３ＣＯ２Ｈで脱保護すると、薬物負荷された４アーム型ＰＥＧ−（リンカー−オクトレオチド）４コンジュゲートが得られる。
【０１１０】
実施例１３
デンドリマーコネクターの調製
工程１：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３
【０１１１】
【化１５】
2016534064.tif 000020
【０１１２】
ＣＨ２Ｃｌ２  ２０ｍＬ中のＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ（２．２５ｇ，５．１ｍｍｏｌ；Ａｌｄｒｉｃｈ社）と１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカン−１−アミン（１．０ｇ，４．６ｍｍｏｌ；ＴＣＩ社）の混合物を周囲温度で２時間撹拌した。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水、５％ＫＨＳＯ４、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過して蒸発させた。０〜５０％アセトン／ヘキサンの勾配を用いてＳｉＯ２のクロマトグラフィーにかけると、生成物が無色のオイル（２．３ｇ，４．２ｍｍｏｌ，９１％）として得られた。ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ検出）は単一のピークを示した；ＭＳ  ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５４７．４。
【０１１３】
工程２：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ［Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３
【０１１４】
【化１６】
2016534064.tif 000021
【０１１５】
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３（５５０ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２／ＣＦ３ＣＯ２Ｈ  １：１中に溶解し、１０分間撹拌して蒸発させた。その油性残留物を２×１０ｍＬのエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて中間体ジアミンを無色のガラス（６５５ｍｇ）として得た。ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ検出）は単一のピークを示した；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４７．２。
【０１１６】
アセトニトリル５ｍＬ中の該ジアミン（２８０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ（４８０ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．４２ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で２時間撹拌した。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水、５％ＫＨＳＯ４、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過して蒸発させた。０〜１００％アセトン／ヘキサンの勾配を用いてＳｉＯ２のクロマトグラフィーにかけると、生成物が白色の発泡体（３１５ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ，６２％）として得られた。ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ検出）は単一のピークを示した。
【０１１７】
工程３：ｐｙｒ−Ｌｙｓ（ｐｙｒ）−Ｌｙｓ（ｐｙｒ−Ｌｙｓ（ｐｙｒ））−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３
【０１１８】
【化１７】
2016534064.tif 000022
【０１１９】
２ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２／ＣＦ３ＣＯ２Ｈ  １：１中のＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ［Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３（１００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間撹拌して蒸発させた。その油性残留物を２×１０ｍＬのエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて中間体Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（Ｌｙｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３テトラ（トリフルオロ酢酸塩）を無色のガラスとして得た。ＬＣ−ＭＳ  ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６０３．４。
【０１２０】
ＤＭＦ  ２ｍＬ中のＬｙｓ−Ｌｙｓ（Ｌｙｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３テトラ（トリフルオロ酢酸塩）（０．１ｍｍｏｌ）の溶液を、４−ニトロフェニル  ２，２−ジエトキシプロピオネート（ＬａＭａｔｔｉｎａ  ａｎｄ  Ｍｕｓｅ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９８７）５２：３４７９−３４８１）（１５０ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２０ｍＬ，１．１５ｍｍｏｌ）を用いて周囲温度で１６時間処理した。この混合物を水１０ｍＬで希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２  １０ｍＬで４回抽出した。有機抽出物を合わせ、０．５Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３、水、及びブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて透明なガラスを得た。これをＣＨ２Ｃｌ２  ２ｍＬに溶解し、１ｍＬのＣＦ３ＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏ  ５０：５０で３時間処理した。その後、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、及びブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させると、テトラ−ピルブアミド（ｐｙｒｕｖａｍｉｄｅ）デンドリマー１１９ｍｇが透明なガラスとして得られた。
【０１２１】
実施例１４
アミノオキシ−リンカー−オクトレオチドの調製
【０１２２】
【化１８】
2016534064.tif 000023
【０１２３】
アミノリンカーアルコール（実施例１）をＣＨ２Ｃｌ２中で２−（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸スクシンイミジルエステル（１．２当量）及びＤＩＰＥＡ（２当量）により処理して、中間体Ｂｏｃ−アミノオキシ−アセトアミドリンカーアルコールを生成する。これを標準的な手法によりスクシンイミジルカーボネートに変換するにあたって、最初に、トリホスゲン／ピリジンを用いてクロロホルメートに変換し、その後Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド／ピリジンを用いてスクシンイミジルカーボネートに変換する（Ｓａｎｔｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１１）１０９：６２１１−６２１６）。このカーボネートを用いて、実施例３及び実施例４と同様にしてＢｏｃ保護オクトレオチドを誘導体化する。ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＦ３ＣＯ２Ｈ  １：１で最終的に処理すると、アミノオキシ−リンカー−オクトレオチドがビス（トリフルオロ酢酸）塩として得られる。
【０１２４】
実施例１５
デンドリマーコネクターテトラ（オクトレオチド）の調製
【０１２５】
【化１９】
2016534064.tif 000024
【０１２６】
アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ３．６）２：１中のデンドリマーコネクターテトラ−ピルブアミド（実施例１３，１当量）及びアミノオキシ−リンカー−オクトレオチド（実施例１４，５当量）の混合物を、オキシムの形成が完了するまで放置する。
【０１２７】
実施例１６
デンドリマーオクトレオチド負荷分解性ヒドロゲルの調製
工程１：マクロモノマーの調製：ヒドロゲルマクロモノマーを調製する方法は、以下の２つの化合物を用いて例示される。
【０１２８】
ａ．［Ｎａ−［７−アジド−１−（Ｎ，Ｎ−ビス（２−メトキシエチル）アミノスルホニル）−２−ヘプチルオキシ］カルボニル−Ｌ−リシル］４−ＰＥＧ２０ｋＤａの調製：ピリジン（０．８０ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ  ５０ｍＬ中の７−アジド−１−（Ｎ，Ｎ−ビス（２−メトキシエチル）−アミノスルホニル）−２−ヘプタノール（１．７５ｇ，５．０ｍｍｏｌ；Ｓａｎｔｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１１）１０９：６２１１−６２１６に記載の方法に従って調製した）及びトリホスゲン（２．５ｇ，８．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。１０分後、沈殿物をろ過により除去し、ろ液を減圧下で蒸発させた。得られたオイルをＴＨＦ  ５０ｍＬに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１．１５ｇ，１０ｍｍｏｌ）及びピリジン（１．２５ｍＬ，１５ｍｍｏｌ）で処理した。１０分後、この混合物を酢酸エチルで希釈し、水、５％ＫＨＳＯ４、及びブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させると、粗製のスクシンイミジルカーボネートがオイルとして得られた。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、精製されたスクシンイミジルカーボネート（１．７６ｇ，７１％）を得た。これをアセトニトリル５０ｍＬに溶解し、０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３  ５０ｍＬ中のＮε−Ｂｏｃ−Ｌ−リシン（１．２３ｇ，５．０ｍｍｏｌ）の溶液に激しく撹拌しながら加えた。３０分後に透明な溶液が得られ、これを半量になるまで濃縮し、水で希釈し、酢酸エチルで洗浄した。水相を６Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、粗製のＮε−Ｂｏｃ−Ｎａ−［７−アジド−１−（Ｎ，Ｎ−ビス（２−メトキシエチル）−アミノスルホニル）−２−ヘプチルオキシ］カルボニル−Ｌ−リシンを得た。アセトン／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、精製されたリシン誘導体（１．４ｇ，５０％）を得た。これをＴＨＦ  ２５ｍＬに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．２７ｇ，２．３５ｍｍｏｌ）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（０．５０ｇ，２．４２ｍｍｏｌ）を用いて４℃で２４時間処理した。得られた懸濁液をろ過すると、ＴＨＦ中のＮＨＳエステルの溶液が得られ、その一部（１２．５ｍＬ，１．１２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル４０ｍＬ中の２０−ｋＤａ  ４アーム型ＰＥＧ−テトラアミン四塩酸塩（５．００ｇ，１．０ｍｍｏｌ  アミン；ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及びＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。２時間後、トリニトロベンゼンスルホン酸アッセイは、＜１％の遊離アミンが残っていることを示した。この混合物を濃縮し、ＴＨＦに再溶解し、撹拌したメチルｔ−ブチルエーテル２００ｍＬに徐々に添加して沈殿させた。沈殿物を回収し、真空下で乾燥させてＢｏｃ保護マクロモノマー５．４６ｇ（９８％）を得た。この物質をＣＨ２Ｃｌ２  ２５ｍＬに溶解し、氷上で冷却して、ＣＦ３ＣＯ２Ｈ  ２５ｍＬで処理した。周囲温度に温めた後、その混合物をさらに３０分保持し、次いで濃縮し、ＴＨＦで希釈し、エーテル２０��ｍＬに徐々に添加して沈殿させた。沈殿物を回収し、エーテルとＭＴＢＥで洗浄し、その後真空下で乾燥させると、マクロモノマー５．２ｇが得られた。
【０１２９】
ｂ．ＰＥＧ２０ｋＤａ−（ＭＦＣＯ）４の調製：アセトニトリル６ｍＬ中の２０−ｋＤａ  ４アーム型ＰＥＧ−テトラアミン四塩酸塩（１．７ｇ，０．３４ｍｍｏｌ  アミン；ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ，０．６９ｍｍｏｌ）、及びペンタフルオロフェニル３−フルオロシクロオクチン−３−カルボキシレート（アセトニトリル中の１Ｍ溶液０．４０ｍＬ，０．４０ｍｍｏｌ）の混合物を２０時間保持した。次いで、未反応のアミンを無水酢酸３２μＬの添加によりキャップした。この混合物を濃縮し、ＴＨＦ  １０ｍＬに再溶解し、撹拌したメチルｔ−ブチルエーテル１００ｍＬに徐々に添加して沈殿させた。沈殿物を回収し、ＭＴＢＥで洗浄し、真空下で乾燥させて第２のマクロモノマー（１．７ｇ）を得た。
【０１３０】
工程２：アミノ−ヒドロゲルミクロスフェアの調製：上記からの２つのマクロモノマーの溶液を、１０ｍＭの反応性基の濃度で、１０ｍＭ酢酸塩ｐＨ５中に調製した。フローフォーカシングマイクロ流体デバイス（Ｄｏｌｏｍｉｔｅ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ社）を、２％ｗ／ｖのＦＳＡ（ＲＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）界面活性剤を含有するＨＦＥ−７５００（３Ｍ  Ｎｏｖｅｃ）の連続的な不混和相と共に使用して、２つのマクロモノマー溶液を１：１の比で混合した。得られたミクロスフェア懸濁液を遠心分離により濃縮し、生じたペーストを水中の０．１％ＮａＮ３とＨＦＥ−７５００中の１０％ｗ／ｖパーフルオロオクタノールの溶液とに分配して界面活性剤を除去した。ミクロスフェアを遠心分離により回収した。この工程を繰り返し、その後ミクロスフェアをＨＦＥ−７５００で３回、続いて水で４回洗浄した。
【０１３１】
工程２：アミン誘導体化：アセトニトリル中のアミノミクロスフェアのスラリー（３１ｍｇの乾燥ミクロスフェア／ｇスラリー，６７５ｍｇスラリー，２．０μｍｏｌ  ＮＨ２）を、風袋の重さを量った５ｍＬ  ＢＤルアーロックシリンジに添加する。次に、ＤＩＰＥＡ（１．７μＬ，１０μｍｏｌ）及びペンタフルオロフェニル３−フルオロシクロオクチン−１−カルボキシレート（アセトニトリル中２０ｍＭ（質量），０．２０ｍＬ，４．０μｍｏｌ）を順次添加する。シリンジにキャップをつけてから、オービタルシェーカー上で周囲温度にて一晩撹拌する。未反応のアミンをキャップするためにＡｃ２Ｏ（１．９μＬ，２０μｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．７μＬ，１０μｍｏｌ）を添加する。１時間後、シリンジを遠心分離（約３０００×ｇ，１０分）にかけて誘導体化ミクロスフェアをペレット化し、上清をインラインフィルター付きの針を通して除去する。ミクロスフェアをアセトニトリル４ｍＬで希釈し、その懸濁液を１０分間インキュベートする。シリンジを遠心分離し、上清を除去した。洗浄を上記のように３回繰り返す（合計４回の洗浄×４ｍＬ，各１０分）。その後、ミクロスフェアをＨ２Ｏ（４×４  ｍＬ，各１０分）で同様に洗浄すると、ＭＦＣＯ誘導体化ミクロスフェアのゆるく充填されたスラリーが得られる。
【０１３２】
工程３：負荷：ＭＦＣＯ誘導体化ＰＥＧミクロスフェアと実施例１５のアジド−デンドリマーのスラリーを２４時間振盪し、次いでミクロスフェアを遠心分離により回収し、アセトニトリルで洗浄して未反応のアジド−デンドリマーを除去する。
【図１】
2016534064.tif 000029
【図２】
2016534064.tif 000030
【図３】
2016534064.tif 000031
【図４】
2016534064.tif 000032
【図５】
2016534064.tif 000033
【図６】
2016534064.tif 000034
【図７】
2016534064.tif 000035
【図８】
2016534064.tif 000036
【図９】
2016534064.tif 000037
【図１０】
2016534064.tif 000038
【図１１】
2016534064.tif 000039
【図１２】
2016534064.tif 000040
【図１３】
2016534064.tif 000041
【図１４】
2016534064.tif 000042
【手続補正書】
【提出日】平成28年6月28日(2016.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表されるコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル：
Ｐ−（Ｌ−Ｄ）ｎ      （１）
式中、Ｐは、キャリア分子又はヒドロゲルであり；
Ｄは、ソマトスタチン又はその類似体であり；
Ｐがキャリア分子である場合、ｎ＝１〜８であり、Ｐがヒドロゲルである場合、ｎは多数であり；かつ、
Ｌは、式（２）で表される部分である：
【化１】
2016534064.tif 000043
式（２）中、
ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は、独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合する窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは、
Ｒ１とＲ２が一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又はそれぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つが、Ｐ又はヒドロゲルに連結されている。
【請求項２】
Ｄがソマトスタチン、オクトレオチド、ランレオチド、又はパシレオチドであり、かつ／あるいは、ソマトスタチン又はその類似体のＮα−アミノ基又はＮε−アミノ基を介して、ＤがＬに結合されている、請求項１に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項３】
１つのＲ５がＰに連結されている、請求項１又は２に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項４】
１つのＲ５がトリアゾールリンケージを介してＰに連結されているか、又は、１つのＲ５がアミドリンケージを介してＰに連結されている、請求項３に記載のコンジュゲート又はヒドロゲル。
【請求項５】
Ｐがポリエチレングリコール、デキストラン、ヒアルロン酸、タンパク質、アルブミン、又は抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
可溶性であり、Ｐがマルチアームポリエチレングリコールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
Ｐがヒドロゲルである、請求項１〜６のいずれか１つに記載のコンジュゲート。
【請求項８】
ヒドロゲルがマルチアームポリエチレングリコールを含む、請求項７に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
ヒドロゲルが式（２）を有する架橋をさらに含む、請求項７に記載のコンジュゲート：
【化２】
2016534064.tif 000044
式中、
ｍ＝０又は１である；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは、
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又はそれぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つは、ヒドロゲルモノマー単位の１つに連結され、かつ、
【化３】
2016534064.tif 000045
基がヒドロゲルモノマー単位のもう１つに連結されている。
【請求項１０】
式（３）で表される化合物：
【化４】
2016534064.tif 000046
式中、
Ｄは、保護されていてよいソマトスタチン又はソマトスタチン類似体であり；
ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つは、高分子キャリアへの連結を可能にする官能基Ｚをさらに含む。
【請求項１１】
Ｚが、アミン、アジド、カルボン酸、カルボン酸活性エステル、末端アルキン、シクロオクチン、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、１，２，４，６−テトラジン、シクロプロペン、マレイミド、チオール、１，３−ジエン、シクロペンタジエン、フラン、ノルボルネン、アクリレート、アクリルアミド、ビニルスルホン、又はハロゲンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｄが、ソマトスタチン又はその類似体のＮα−アミンを介して結合されているか、Ｄが、ソマトスタチン又はその類似体のＮε−アミンを介して結合されており、かつ／あるいは、１つのＲ５が官能基Ｚを含む、請求項１０又は１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２がＨであり；Ｒ１がＣＮ又はＲ３ＳＯ２であり；Ｒ５の一方がＨでありかつ他方が官能基Ｚをさらに含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
ソマトスタチンの類似体による改善を受けやすい状態を治療する方法において使用するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
前記状態が、成長ホルモン産生腫瘍（先端巨大症及び巨人症）、甲状腺刺激ホルモンを分泌する下垂体腫瘍（チロトロピノーマ（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｏｍａ））、カルチノイド症候群に関連した下痢及び紅潮エピソード、又は血管作動性腸管ペプチド分泌腫瘍（ビポーマ（ＶＩＰｏｍａ））の患者における下痢に関連している、請求項１４に記載のコンジュゲート。
【手続補正書】
【提出日】平成28年8月10日(2016.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表されるコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル：
Ｐ−（Ｌ−Ｄ）ｎ      （１）
式中、Ｐは、キャリア分子又はヒドロゲルであり；
Ｄは、ソマトスタチン又はその類似体であり；
Ｐがキャリア分子である場合、ｎ＝１〜８であり、Ｐがヒドロゲルである場合、ｎは多数であり；かつ、
Ｌは、式（２）で表される部分である：
【化１】
2016534064.tif 000047
式（２）中、
ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は、独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合する窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは、
Ｒ１とＲ２が一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又はそれぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つが、Ｐ又はヒドロゲルに連結されている。
【請求項２】
Ｄがソマトスタチン、オクトレオチド、ランレオチド、又はパシレオチドであり、かつ／あるいは、ソマトスタチン又はその類似体のＮα−アミノ基又はＮε−アミノ基を介して、ＤがＬに結合されている、請求項１に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項３】
１つのＲ５がＰに連結されている、請求項１又は２に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項４】
１つのＲ５がトリアゾールリンケージを介してＰに連結されているか、又は、１つのＲ５がアミドリンケージを介してＰに連結されている、請求項３に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項５】
Ｐがポリエチレングリコール、デキストラン、ヒアルロン酸、タンパク質、アルブミン、又は抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項６】
可溶性であり、Ｐがマルチアームポリエチレングリコールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項７】
Ｐがヒドロゲルである、請求項１〜６のいずれか１つに記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項８】
ヒドロゲルがマルチアームポリエチレングリコールを含む、請求項７に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項９】
ヒドロゲルが式（２）を有する架橋をさらに含む、請求項７に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル：
【化２】
2016534064.tif 000048
式中、
ｍ＝０又は１である；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは、
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又はそれぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つは、ヒドロゲルモノマー単位の１つに連結され、かつ、
【化３】
2016534064.tif 000049
基がヒドロゲルモノマー単位のもう１つに連結されている。
【請求項１０】
式（３）で表される化合物：
【化４】
2016534064.tif 000050
式中、
Ｄは、保護されていてよいソマトスタチン又はソマトスタチン類似体であり；
ｍ＝０又は１であり；
Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方又は両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ２；
置換されてもよいアリール；
置換されてもよいヘテロアリール；
置換されてもよいアルケニル；
置換されてもよいアルキニル；
ＣＯＲ３、ＳＯＲ３、又はＳＯ２Ｒ３、
ここでＲ３は、
Ｈもしくは置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；又は、
ＯＲ９もしくはＮＲ９２であり、
ここで、各Ｒ９は独立して、
Ｈ又は置換されてもよいアルキルであるか、
両方のＲ９基が結合している窒素と一緒になって、複素環を形成し；又は、
ＳＲ４であるか、
ここでＲ４は、
置換されてもよいアルキル；
それぞれ置換されてもよい、アリールもしくはアリールアルキル；又は、
それぞれ置換されてもよい、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；あるいは
Ｒ１とＲ２は、一緒に結合して、３〜８員環を形成し；かつ、
Ｒ１とＲ２の１つのみが、Ｈであってもよく、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；かつ、
各Ｒ５は、独立して、Ｈであるか、又は、それぞれ置換されてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ（ここでｐ＝１〜１０００である）、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロアリールアルキルであり；かつ、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ５の１つは、高分子キャリアへの連結を可能にする官能基Ｚをさらに含む。
【請求項１１】
Ｚが、アミン、アジド、カルボン酸、カルボン酸活性エステル、末端アルキン、シクロオクチン、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、１，２，４，６−テトラジン、シクロプロペン、マレイミド、チオール、１，３−ジエン、シクロペンタジエン、フラン、ノルボルネン、アクリレート、アクリルアミド、ビニルスルホン、又はハロゲンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｄが、ソマトスタチン又はその類似体のＮα−アミンを介して結合されているか、Ｄが、ソマトスタチン又はその類似体のＮε−アミンを介して結合されており、かつ／あるいは、１つのＲ５が官能基Ｚを含む、請求項１０又は１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２がＨであり；Ｒ１がＣＮ又はＲ３ＳＯ２であり；Ｒ５の一方がＨでありかつ他方が官能基Ｚをさらに含む、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１４】
ソマトスタチンの類似体による改善を受けやすい状態を治療する方法において使用するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【請求項１５】
前記状態が、成長ホルモン産生腫瘍（先端巨大症及び巨人症）、甲状腺刺激ホルモンを分泌する下垂体腫瘍（チロトロピノーマ（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｏｍａ））、カルチノイド症候群に関連した下痢及び紅潮エピソード、又は血管作動性腸管ペプチド分泌腫瘍（ビポーマ（ＶＩＰｏｍａ））の患者における下痢に関連している、請求項１４に記載のコンジュゲート又は誘導体化ヒドロゲル。
【国際調査報告】
2016534064.tif 000051
2016534064.tif 000052