(57)【要約】  本発明は、ハナスゲから抽出することのできる化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する皮膚の保湿又はシワ改善用の外用剤組成物若しくは化粧料組成物に関する。これによる組成物は皮膚の水分損失を防ぐことで、紫外線によって誘発された皮膚組織の損失を抑制し、皮膚のシワ予防又は緩和効果を有する。【選択図】  【図１】
2016503014.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む皮膚の保湿又はシワ改善用の薬学的組成物。
【化１】
2016503014.tif 000008
【請求項２】
前記化学式で表される化合物が、ハナスゲから抽出されることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記組成物が、皮膚外用剤であることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含む皮膚の保湿又はシワ改善用の化粧料組成物。
【請求項５】
下記化学式で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の皮膚の保湿又はシワ改善用組成物の製造のための用途。
【化２】
2016503014.tif 000009
【請求項６】
下記化学式で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を対象体に投与することを含む皮膚の保湿又はシワ改善の方法。
【化３】
2016503014.tif 000010
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハナスゲから抽出することのできる化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する皮膚の保湿又はシワ改善用の外用剤組成物又は化粧料組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、身体の外側を覆っている一枚の膜であり、様々な外部の刺激、障害、乾燥などの環境要素から身体を保護する多様な生理的機能を遂行し、内部の臓器とその他の体内器官を保護調節する役割を果たす。皮膚を垂直に切り取って組織学的に顕微鏡で観察すると、上皮組織である表皮、結締組織である真皮、皮下組織へと繋がっており、れそぞれの組織は特異的機能を保っており、かつ相互関係を有している。
【０００３】
その中でも、結締組織は主にコラーゲンとエラスチンから構成されており、コラーゲンは皮膚の真皮の構造を維持するのに決定的な役割を果たす。皮膚の真皮層に存在するコラーゲンは、細胞外基質の大部分を占めており、皮膚の機械的堅固性の維持、結合組織の抵抗力及び組織の結合力の強化、細胞接着の支持、細胞分割及び分化の誘導などで知られている。コラーゲンをはじめとする、真皮の細胞外基質を構成するエラスチン、プロテオグリカン、フィブロネクチン、ラミニンなどの糖タンパク質は大部分繊維芽細胞で作られて細胞外に送り出されるが、全ての栄養素と代謝廃棄物は、この細胞外空間を介して運ばれ代謝される。前記糖タンパク質は、数多くの細胞-表面の反応に関与し、多量の水分を細胞外基質に保有させることにより、皮膚に弾力を維持させシワを防止する役割を果たす(非特許文献１、非特許文献２) 
【０００４】
また、皮膚の保湿程度は、化粧品、皮膚科学及び医薬品などの分野において重要な要素であって、角質層の保湿状態は皮膚の外形(皮膚の柔軟性及び粗さの程度)に直接関連しており、健康状態の尺度となる。また、角質層の皮膚の水分含量は、皮膚のコンディション及び透過性に関連する皮膚膜恒常性に影響を与えるため、化粧品又は塗り薬の吸湿度が異なることがあり、皮膚の保湿が重要な要素として作用している(非特許文献３、非特許文献４)。
【０００５】
一方、皮膚の老化は、加齢に伴って自然に発生する内因性老化(ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ａｇｉｎｇ又は自然老化)と光老化(ａｃｔｉｎｉｃ ａｇｉｎｇ)が合わさって現れる。２種類の老化には、シワが生成されて皮膚の免疫細胞であるランゲルハンス細胞と真皮細胞の成分が減るなど、多くの共通点があるが、光老化は皮膚が厚くなり弾力繊維が増加するのに対して、自然老化は皮膚が薄くなるという点が異なる。このような自然老化と光老化が複合的に作用すると、シワが形成される。即ち、皮膚組織の老化に伴って真皮層にある繊維芽細胞(ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ)が老化し、繊維質と基質の生成能力が減少して、基質の量が全体的に減少することによって皮膚が薄くなり、皮膚の弾力を低下させてシワが形成されたり、紫外線への露出によるフリーラジカル(ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ)と活性酸素種(ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ、ＲＯＳ)の生成によって、皮膚をしっとりさせ、ソフトで柔軟に弾力を維持させる膠原質と繊維質を攻撃して、シワの生成を加速化させる。一方、多くの研究の結果、皮膚の老化の大部分は年齢的な自然老化ではなく、日光によってより一層進行するという事実が明らかになった。或る学者においては、シワの８０％以上は日光によって生じるという研究結果を発表している。
【０００６】
紫外線に慢性的に露出された場合の影響を最も象徴的に表すのが、農夫や漁師の皮膚である。外観的には皮膚が粗く、深いシワがあり、紫外線に露出しやすい首筋の部分に特徴的な菱形のシワが見られる。このような変化を自然な老化と区別して光老化といい、これらの症状が多く現われる部位が常に日光に露出されている顔面部位である。
【０００７】
また、近年、環境汚染によって地表上に到達する紫外線の量が増加しており、レジャー及び野外活動などの増加によって紫外線にさらされる可能性が高まっているのが実情である。したがって、光老化によって皮膚が粗くなり、シワが形成されるるため、これに対するケアがますます重要になっている。
【０００８】
時期的には、秋に、夏のシーズンに行われた多くの野外活動における紫外線などの影響を受けて角質層が厚くなり、皮膚が粗くなって小ジワも多く形成される。このような状態で乾燥した秋の空気に接触すると、皮膚はますます粗くなり、小じわが急激に増えるようになる。また、冬になると気温が急激に下がり、運動量も少なくなるだけでなく、体内の血液が円滑に循環できず、皮膚の新陳代謝の周期が長くなるため、皮膚はさらに粗くなって、小じわが増えるようになる。また、冷たい風に直接当たる皮膚は、皮膚を保護するために、角質層を厚くして皮膚を粗くする。その中でも、外部と直接接触する皮膚は乾燥化がより一層進んで角質が生じたり、皮膚が冷たい風に立ち向かうために厚く堅くなる。
【０００９】
一方、皮膚は約２８日を周期として新しい皮膚細胞を作り出し、古い細胞を角質層へと押し上げる。これを細胞再生の回転周期(Ｃｅｌｌ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ｃｙｃｌｅ)という。女性の年齢が25歳以降からは、様々な理由によって細胞再生の回転周期が長くなり、皮膚のトラブルが発生して皮膚がくすみ、水分保有力が低下するため粗くなり、ついには小ジワが増えて老化が始まる。特に、季節の変わり目には、 皮膚は冷たく乾燥した風に水分を大量に奪われて、粗くカサカサになる。その上、新陳代謝が鈍化し、汗や皮脂の分泌量が急激に減少するため、皮膚がより乾燥し、皮膚の表面に不必要な角質もさらに増加して、乾燥する。
【００１０】
前記のような複合的な原因により、特に25歳以降からは角質層が厚くなり、皮膚が粗くなって小じわが急激に増えるようになる。スキンケアへの関心が爆発的に高まっている現時点においては、このような粗い皮膚と小じわを改善することのできる化粧品に対するニーズもまた切実となっているのが実情である。特に、小ジワ及び粗い皮膚を改善する優れた効果を示しながらも、安全性が立証され、消費者が抵抗なく安心して使用できる化粧料をはじめとする皮膚外用剤が求められている。
【００１１】
そこで、皮膚のシワ改善及び皮膚の保湿強化のために様々な方法が提案されている。例えば、皮膚の老化に対する広範囲の研究が進むにつれて、皮膚内におけるコラーゲンの持つ機能に注目して、皮膚のシワ改善を試み、コラーゲンを適用した化粧品が市販されている。しかし、コラーゲンを配合した化粧品は、コラーゲンを皮膚の表面に塗布するものであり、高分子であるコラーゲンが経皮吸収され、その機能を遂行するのは困難であるため、シワ改善の効果は微々たるものである。
【００１２】
また、コラーゲン合成促進物質として、従来、レチノイン酸、ＴＧＦ(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、がん増殖抑制因子：非特許文献５)、動物胎盤由来のタンパク質(特許文献１)、ベツリン酸(特許文献２)、クロレラ抽出物(特許文献３、特許文献４、繊維芽細胞増殖促進作用)などが知られているが、皮膚に適用する際の刺激と発赤などの安全性の問題により使用量に制限があり、効果が微々たるもので実質的な皮膚の機能改善効果を期待するのは困難であるという欠点がある。したがって、皮膚に適用する際、生体に安全でシワ改善効果に優れた皮膚外用剤の開発が必要とされている。
【００１３】
前述のような背景の下、本発明者らは、皮膚に安全で保湿及びシワ改善効果に優れた物質を研究する中で、ハナスゲ抽出物から得た化学式(１)で表される化合物を動物モデルの皮膚に塗布した結果、皮膚のバリアの損傷を改善し、皮膚の損失を抑制することによってシワの深さ、長さなどを緩和しうることを見出し、本発明を完成するに至った。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】ＪＰ８‐２３１３７０
【特許文献２】ＪＰ８‐２０８４２４
【特許文献３】ＪＰ９‐４０８２３
【特許文献４】ＪＰ１０‐３６２８３
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】(Ko, J. H., Lee, S. J., aｎd Lim, K. T., Toxicol, iｎ Vitro, 19, 353, 2005
【非特許文献２】Cho, W. G., Kyuｎg K.Y., aｎd Yu, S. M., J. of the KoreaｎChemists, Soc., 26(2), 191, 2009
【非特許文献３】Esposito E,  Drechsler M, Mariaｎi Ρ, Sivieri Ε, Bozzini R, Moｎtesi L, Meｎegatti E, Cortesi R, Iｎt J Cosmet Sci, 29, p39-47, 2007
【非特許文献４】Kastiｎg GB, Barai ＮD, J Pharm Sci, 92, p1624-31, 2003
【非特許文献５】Cardinale G. et al．Adv．Enzymol., 41, p. 425, 1974
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、ハナスゲから抽出した化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む皮膚の保湿又はシワ改善に優れた効果を持つ薬学的組成物又は化粧料組成物を提供することである。
【００１７】
本発明の他の目的は、ハナスゲから抽出した化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の皮膚の保湿又はシワ改善用組成物の製造のための用途、又は治療学的有効量のハナスゲから抽出した化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を必要とする対象体に投与することを含む、皮膚の保湿又はシワ改善の方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
前記課題を解決するために、本発明は、下記化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む皮膚の保湿又はシワ改善用薬学的組成物を提供する。
化学式(１)
【化１】
2016503014.tif 000003
【００１９】
前記薬学的組成物は、皮膚外用剤組成物であることが好ましいが、これに限定されるものではない。
【００２０】
前記化学式(１)で表される化合物は、ハナスゲから抽出されることが好ましい。前記抽出は、当業界に公知の通常の方法によって行うことができる。本発明の一実施例では、下記のような方法によってハナスゲから前記化学式(１)で表される化合物を得た。
【００２１】
ハナスゲをエタノールで３時間ずつ３回にわたり還流冷却抽出し、減圧濃縮してエタノール濃縮液を得た。得られたハナスゲエタノールの濃縮液を、ｎ-ヘキサン、酢酸エチル及びｎ-ブタノールの順序で段階的に分画して、ｎ-ブタノール分画を得た後、前記ｎ-ブタノール分画を水とメタノールの混合溶媒を用いて勾配溶離のカラムクロマトグラフィーで分離して、５つの小分画を得た。この時、水とメタノールは１０：０(ｖ/ｖ)〜７：３(ｖ/ｖ)の割合で使用した。前記５つの小分画のうち４番目の小分画を再び水とメタノールの混合溶媒を使用して勾配溶離逆相クロマトグラフィーを実施して、前記化学式(１)で表される化合物を分離した。この時、水とメタノールを１０：０(ｖ/ｖ)〜５：５(ｖ/ｖ)の割合で使用した。
【００２２】
一方、本発明で使用する用語「ハナスゲ(Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ Ｂｕｎｇｅ)」とは、単子葉植物ユリ目ハスナゲ科の多年草で、普通は根茎を乾燥して薬剤として使用されている。
【００２３】
本発明の一実施例によれば、前記のハナスゲから抽出した化学式１で表される化合物を、動物モデルの皮膚に紫外線を照射しながら塗布した結果、経皮の水分損失を抑制することにより、紫外線で増大したシワの深さを緩和させ、コラーゲン組織の破壊反応を抑制する効果があった。
【００２４】
本発明の化学式(１)で表される化合物は、薬学的に許容される塩の形態で使用することができ、このような塩としては、薬学的に許容される遊離酸(ｆｒｅｅ ａｃｉｄ)によって形成される酸付加塩又は塩基によって形成される金属塩がある。前記遊離酸としては無機酸と有機酸が使用でき、無機酸としては塩酸、硫酸、臭素酸、亜硫酸又はリン酸などが使用でき、有機酸としてはクエン酸、酢酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、メタノールスルホン酸などを使用することができる。前記金属塩としては、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩があり、ナトリウム、カリウム又はカルシウム塩が有用である。
【００２５】
また、本発明は、ハナスゲから抽出される化学式(1)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の他に、皮膚の保湿又はシワ改善効能がある物質、例えばレチノール、レチニルパルミテート、アデノシン、ポリエトキシル化レチンアミド、コラーゲン、ＴＧＦ又は動物胎盤由来のタンパク質をさらに含んでもよいが、これらに限定されるものではない。
【００２６】
本発明の組成物は、投与のために、前記記載の有効成分の他に、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤を含むことができる。前記担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油が挙げられる。
【００２７】
本発明の組成物は、それぞれ通常の方法によって散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型の剤形、外用剤、坐剤又は滅菌注射用液の形態に剤形化して使用することができる。詳細には、剤形化する場合、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて製造してもよい。経口投与のための固形製剤としては錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などを含むが、これに限定されるものではない。これらの固形製剤は、前記化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて製造してもよい。また、単純な賦形剤の他に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤を使用してもよい。経口用の液状物、流動パラフィンの他に、様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などを添加して製造することができる。非経口投与のための製剤は、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤及び座剤を含む。非水性溶剤及び懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどを使用してもよい。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール、マクロゴール、ツイン61、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを使用してもよい。
【００２８】
本発明の組成物の適切な投与量(治療学的有効量)は、患者(対象体)の状態及び体重、病気の程度、薬物形態、時間によって異なるが、当業者によって適宜選択されうる。前記化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の１日の投与量は、好ましくは、１ｍｇ/ｋｇ〜５００ｍｇ/ｋｇであり、必要に応じて１日１回から数回に分けて投与することができる。
【００２９】
また、本発明は、前記の薬学的組成物を含む皮膚の保湿、又はシワ改善用の化粧料組成物を提供する。
【００３０】
本発明の組成物は、前記有効成分の他に、通常利用される成分を含むことができ、例えば抗酸化剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料及び香料などの通常の補助剤、そして担体を含んでもよい。
【００３１】
本発明の組成物は、当業界で通常に製造されるいかなる剤形にも製造可能であり、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、石鹸、界面活性剤含有のクレンジング、オイル、パウダーファンデーション、乳濁液ファンデーション、ワックスファンデーション及びスプレーなどに剤形化されてもよいが、これに限定されるものではない。より詳細には、柔軟化粧水(スキンローション)、栄養化粧水(ミルクローション)、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、スプレー又はパウダーの剤形に製造することができる。
【００３２】
本発明の剤形がペースト、クリーム又はゲルである場合には、担体成分として、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、又は酸化亜鉛などを使用することができる。
【００３３】
本発明の剤形がパウダー又はスプレーである場合には、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、ケイ酸カルシウム、又はポリアミドパウダーを用いることができ、特に、スプレーの場合には、さらにクロロフルオロヒドロカーボン、プロパン/ブタン又はジメチルエーテルなどの推進剤を含むことができる。
【００３４】
本発明の剤形が溶液又は乳濁液である場合には、担体成分として、溶媒、溶解化剤又は乳濁化剤を使用することができ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１,３‐ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール又はソルビタンの脂肪酸エステルがある。
【００３５】
本発明の剤形が懸濁液である場合には、担体成分として、水、エタノール又はプロピレングリコールなどの液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル及びポリオキシエチレンソルビタンエステルなどの懸濁剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天又はトラガントなどを使用することができる。
【００３６】
本発明の剤形が界面活性剤含有クレンジングである場合には、担体成分として、脂肪族アルコールサルフェート、脂肪族アルコールエーテルサルフェート、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体又はエトキシ化グリセロール脂肪酸エステルなどを使用することができる。
【発明の効果】
【００３７】
本発明によるハナスゲから抽出した化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、皮膚の保湿又はシワ改善効果、特に皮膚の水分の損失を防止することで、紫外線によって誘発された皮膚組織の損傷を抑制してシワの予防又は緩和効果がある。
【００３８】
したがって、前記組成物は、皮膚の保湿又はシワ改善効果を有する皮膚外用剤又は化粧料に有用に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】本発明の一実施例による模写板（ｒｅｐｌｉｃａ）を用いた無毛ラットの皮膚のシワ形成程度の画像を示したものである。
【図２】本発明の一実施例による無毛ラットの皮膚のシワの長さの変化の結果を示したものである。
【図３】本発明の一実施例による無毛ラットの皮膚のシワの深さの変化の結果を示したものである。
【図４】本発明の一実施例による無毛ラットの皮膚組織のＨＥ染色による角質層の厚さの測定結果を示したものである。
【図５】本発明の一実施例による無毛ラットの皮膚組織のマッソントリクローム(Ｍａｓｓｏｎ'ｓ ｔｒｉｃｈｏｍｅ)染色によるコラーゲン繊維の観察結果を示したものである。
【図６】本発明の一実施例によるＨＥ染色処理された無毛ラットの皮膚組織の表皮の厚さの測定結果を示したものである。
【図７】本発明の一実施例による無毛ラットの皮膚組織の経皮水分損失量の測定結果のグラフを示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
以下、下記製造例及び実施例により、本発明をより詳細に説明する。ただし、下記製造例及び実施例は、単に本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４１】
実施例１：ハナスゲから化学式(１)で表される化合物の抽出
ハナスゲはオムニハーブ社から購入し、温度５．５±０．３℃、湿度５５±５％に維持された薬剤保管用の冷蔵庫に保管した。ハナスゲ３ｋｇにその１０倍量(容積)に該当する７０％エタノールを用いて3時間ずつ3回還流冷却抽出して抽出物を製造した。濾紙を用いて得られた濾液を減圧濃縮器を用いて溶媒を除去した後、ハナスゲエタノール抽出物を製造した。前記ハナスゲエタノール抽出物をｎ-ヘキサン、酢酸エチル及びｎ-ブタノールを段階的に処理して、ｎ-ブタノール分画を得た。得られたｎ-ブタノール分画をdiaioｎ HP-20樹脂を用いて、水とメタノール混合溶液で、勾配溶離カラムクロマトグラフィーにより５つの小画分を分離した。この時、水とメタノールを１０：０(ｖ/ｖ)から７：３(ｖ/ｖ)の割合で使用した。５つの小分画のうち４番目の小分画を再びＲＰ-１８逆相樹脂(ＬｉＣｈｒｏｐｏｒｅｐ)を用いて、水とメタノールの混合溶液で勾配溶離逆相クロマトグラフィーを実施し、化学式(１)で表される化合物を分離した。この時、水とメタノールは１０：０(ｖ/ｖ)〜５：５(ｖ/ｖ)の割合で使用した。
【００４２】
1ＮMR(400 MHz, Pyridiｎe-d5) δ：0.83(3Η, s, H-18), 0.98 (3H, s, H-19), 1.09 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-21), 1.17 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-27), 3.39 (1H, d, J = 10.8 Hz, Η-26β), 4.94 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-l'), 5.31 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-l"). 
【００４３】
13C ＮMR(100 MHz, Pyridiｎe-d5) δ：110.0 (C-22)，106.5 (C-l"), 102.9 (C- 1'), 82.2 (C-2'), 81.7 (C-16，78.7 (C-5") (78.3 (C-3"), 77.3a (C-2"), 76.9 (C-5')，75.8a (C-3), 75.5a (C-3')，72.0 (C-4"), 70.2 (C-4'), 65.4 (C-26), 63.3 (C-17)，63.1 (C-6")，62.5 (C-6'), 56.8 (C-14), 42.8 (C-20)，41.2 (C-13)， 40.6b (C-12), 40.5b (C-9)，37.3 (C-5)，35.8c (C-10), 35.6c (C-8)，32.5 (C-15), 31.3 (C-l及びC-4), 27.9 (C-25) , 27.3 (C-2), 27.1 (C-6 及び C-7), 26.7 (C-23), 26.5 (C-24), 24.3 (C-19), 21.5 (C-11), 16.9 (C-18), 16.6 (027)，15.2 (C-21)。 
【００４４】
実験例：保湿及びシワ改善効果の分析
前記実施例で製造した化学式(１)で表される化合物を無毛ラットの皮膚に塗布して保湿及びシワ改善効果を確認した。
【００４５】
1)  実験動物及び試料投与
実験動物は、7週齢の雄無毛ラット(ｍａｌｅ ＨＲ-１、ｈａｉｒｌｅｓｓ mｉｃｅ、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ、Ｉｎｃ.)を中央実験動物社から購入して1週間順応させた後使用した。順応期間中、通常の状態を観察して、健康な状態の動物を試験に使用した。飼育環境は、温度２３±３℃、湿度５０±５％、明暗周期１２時間(７：００-１９：００/照明時間)に維持した。試験期間中の実験動物は、ポリカーボネートケージ(２００×３２０×１４５ｍｍ、Ｔｈｒｅｅ-ｓｈｉｎｅ Ｃｏ., Ｄａｅｊｅｏｎ, Ｋｏｒｅａ)に実験群あたり7匹で飼育し、飼料は、マウス専用飼料5L79(Ｃｈａｒｌｅｓ ｒｉｖｅｒ、ＵＳＡ)を自由給餌し、飲み水は紫外線で消毒した上水道の水を自由給餌した。
【００４６】
試料投与は対照群(ＣＯＮ)、紫外線処理群(ＵＶ)、賦形剤処理群(Ｖｅｈｉｃｌｅ)及び前記実施例で製造した化学式(１)で表される化合物処理群(ＴＭ)に分けて実験を行った。試料投与は、皮膚塗布によって12週間実施した。化合物処理群(ＴＭ)は、化合物をＤＭＳ０(Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ)に溶かした後、プロピレングリコール、エタノール、ポリエチレングリコールの１：１：１混合溶液に溶かした剤形(化合物の最終濃度は、０．２５％(ｗ/ｖ))を皮膚面積６ｃｍ2あたり４０ｕＬの用量で１日１回ずつ１週間に5日間皮膚に塗布し、賦形剤処理群(Ｖｅｈｉｃｌｅ)は、化合物を省略したこと以外は、前記化合物処理群(ＴＭ)と同様に実施した。
【００４７】
紫外線照射は、ＵＶＢランプ(Ｍｉｎｅｒａｌｉｇｈｔ ＵＶ Ｄｉｓｐｌａｙ ｌａｍｐ、ＵＶＰ、ＵＳＡ)を使用し、対照群を除いた残りの実験群に8週間の間週３回実施した。紫外線の照射量は、１-２週間は、６０ ｍJ/ｃｍ2、３‐５週は９０ｍＪ/ｃｍ2、６‐８週は１２０ｍＪ/ｃｍ2で、８週間照射し、紫外線照射量は、光測定器(Ｄｅｌｔａ ＯＨＭ、Ｉｔａｌｙ)を利用して光量を測定した後、照射時間で調節した。下記表１に、実験群別紫外線照射及び試料容量を示した。
【００４８】
【表１】
2016503014.tif 000004
【００４９】
２)  皮膚のシワの測定
各実験群の無毛ラットの背中の皮膚部位にシリコンゴムで模写板を製作してシワの形成程度を測定した。模写版製作はＲｅｐｌｉｆｌｏ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｋｉｔ(ＣｕＤｅｒｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ, ＵＳＡ)を使用し、背中部分に薄く伸ばして塗って完全に乾かしてから、円盤を注意深く切りとって転写板を作製した。模写板の製作は、温度２０〜２２℃、湿度４０〜５０％の恒温恒湿状態で実施した。その後、特別な光源が通過するように設計されたカートリッジに、製作された転写板を挟み、光源を入射角35度で通過させて模写板の厚さに応じて生成される影の明暗映像をＣＣＤカメラを用いてファイル化した後、コンピュータ映像分析システムであるＳｋｉｎ Ｖｉｓｉｏｍｅｔｅｒ ＶＬ ６５０のソフトウェアを用いて、シワの深さと長さを測定し、図１〜図３に結果を示した。
【００５０】
図１に示されるように、紫外線照射群(ＵＶ)は、対照群(ＣＯＮ)に比べて太く深く刻み込まれたシワと小じわが誘発され、化学式(１)で表される化合物処理群(ＴＭ)は、紫外線照射群(ＵＶ)に比べて太いシワが緩和されたことが確認できた。
【００５１】
図２に示されるように、紫外線照射群(ＵＶ)は、対照群(ＣＯＮ)に比べてシワの長さが増大することが確認できた(ｐ<０．０００１)。これに対して、化学式(１)で表される化合物処理群(ＴＭ)は、紫外線照射群(ＵＶ)と賦形剤処理群(Ｖｅｈｉｃｌｅ)に比べてシワの平均長さが有意に減少したことが確認された(ｐ<０．０００１)。
【００５２】
また、図3に示されるように、紫外線照射群(ＵＶ)は、対照群(ＣＯＮ)に比べてシワの深さが増大し、(ｐ<０．０００１)、化学式(１)で表される化合物処理群(ＴＭ)は、紫外線照射群(ＵＶ)に比べてシワの深さが有意に減少することが確認された(ｐ<０．０００１)。
【００５３】
前記の結果により、実施例において製造された化学式(１)で表される化合物を処理することで、紫外線によって増加したシワの長さ及び深さを有意に減少させることができることを確認した。したがって、前記化学式(１)で表される化合物が皮膚のシワ改善に効果的であり、特に紫外線によって生じたシワを緩和させる効果があることが確認された。
【００５４】
３)  皮膚の組織学的観察
シワ抑制効能を確認するために、各実験群の無毛ラットなどの皮膚組織を摘出し、１０％中性ホルマリン溶液に固定した後、通常の方法で水洗い、脱水、透明、浸透過程を経てから、パラフィンで包埋し、４μｍの厚さに切片を作製した後、ヘマトキシリン・エオジン(ＨＥ)染色及びマッソントリクローム(Ｍａｓｓｏｎ's ｔｒｉｃｈｏｍｅ)染色を実施した。結果を図４及び図５に示した。
【００５５】
図４に示されるように、ＨＥ染色を実施した結果、紫外線照射群(ＵＶ)と賦形剤処理群(Ｖｅｈｉｃｌｅ)は対照群(ＣＯＮ)に比べて角質層が起き上がり、表皮の厚さも増加したことが確認された。一方、化学式(１)で表される化合物処理群(ＴＭ)は、紫外線照射群(ＵＶ)と賦形剤処理群(Ｖｅｈｉｃｌｅ)に比べて角質層が緩和され、表皮の厚さも減少したことが確認できた。これは、前記化学式(１)で表される化合物が角質層の緩和及び表皮の厚さの減少効果があることを示すものと考えられる。
【００５６】
また、図5に示されるように、マッソントリクローム染色の結果、対照群(ＣＯＮ)は、組織のほとんどが真皮層にコラーゲン部位が均一に分布していることを観察することができたが、紫外線照射群(ＵＶ)と賦形剤処理群(Ｖｅｈｉｃｌｅ)はコラーゲン繊維があまり観察されなかった。一方、化学式(１)で表される化合物処理群(ＴＭ)は、コラーゲン繊維が紫外線照射群(ＵＶ)に比べて増加したことが確認できた。したがって、前記化学式(１)で表される化合物が紫外線によるコラーゲン組織の破壊反応を抑制する効果があるものと見受けられる。
【００５７】
４)  表皮の厚さの変化によるシワ抑制効果の分析
前記実験例3)のH&M染色を実施した組織のケラチン層で表皮細胞基底膜(ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ)までの厚さを顕微鏡に装着された物差しを用いて測定し、図6に結果を示した。
【００５８】
図6に示されるように、紫外線照射群(ＵＶ)において確認できるように紫外線によって表皮の厚さが増加することを確認した(ｐ<０．０００１)。また、化学式(1)で表される化合物処理群(ＴＭ)において表皮の厚さが有意に減少することが確認できた(ｐ<０．０５)。
【００５９】
5)  経皮水分損失量(ＴＥＷＬ：ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｗａｔｅｒ ｌｏｓｓ)の分析
保湿効果を確認するために、各実験群の無毛ラットの背中の皮膚で経皮水分損失量の分析を実施した。経皮の水分損失量の数値は、皮膚から発散される水分量であって、数値が高いほど、皮膚の保湿機能が低下していることを意味し、皮膚固有のバリア機能が損傷していることを示す。経皮水分蒸発量は、恒温、恒湿条件(23°C、相対湿度：５０％)でテヴァメーター(Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ Ｃｏｕｒａｇｅ & Ｋｈａｚａｋａ、Ｇｅｒｍａｎｙ)を用いて、皮膚から蒸発する水分の量を面積と時間に基づいて計算し、蒸発する水分の量(g/m2/hr)を保湿電子センサーで読み取り、これを数値化して皮膚の保湿力を測定た。結果を図7に示した。
【００６０】
図7に示されるように、紫外線照射により皮膚のバリアが損傷して、皮膚の保湿機能が低下していることが確認でき(ｐ<０．０００１)、化学式(１)で表される化合物処理により、紫外線によって誘発された皮膚の水分損失を有意に防止することが確認された(ｐ<０．０１)。したがって、前記化学式(１)で表される化合物が、皮膚の保湿効果があることを確認することができた。
【００６１】
前記すべての実験の結果値は一元配置分散分析とスチューデントのt検定を用いて、対照群と実験群との間の有意性を検定した(ｐ<０．０５)。
【００６２】
以下、本発明の前記化学式(１)の化合物を含む化粧料組成物の剤形例を説明するが、これらの剤形例は、単に例示であり、本発明の化粧料組成物の剤形が、これに限定されるものではない。
【００６３】
剤形例1.  柔軟化粧水（スキンローション）の製造
本発明の化学式(１)の化合物を含有した化粧料のうち、柔軟化粧水（スキンローソン）の製造例を表２に示した。
【００６４】
【表２】
2016503014.tif 000005
【００６５】
前記表２において、原料物質11に２、３、４、及び８を順に投入して撹拌して溶解させた後、５を６０℃程度に加熱して溶解させた後、１０を投入し、撹拌したものを、前記11(２、３、４、及び８が投入された)に投入する。最終的に１と６、７、及び９を前記11に投入して充分に撹拌した後、マイクロフルダイザー(Ｍｉｃｒｏｆｌｕｄｉｚｅｒ)を通過させた後、熟成させる。
【００６６】
剤形例２.  栄養化粧水（ミルクローション）の製造
本発明の化学式(１)の化合物を含有した化粧料のうち、栄養化粧水（ミルクローション）の製造例を表３に示した。
【００６７】
【表３】
2016503014.tif 000006
【００６８】
前記表３において、原料物質２、３、４及び５を一定の温度で均質化し、これを非イオン系両親媒性脂質と称する。前記非イオン系両親媒性脂質と原料物質1と６、７、及び１３を混合し、一定の温度で均質化してマイクロフルダイザーを通過させ、次いで８を一定の温度で徐々に添加して均質化した後、再びマイクロフルダイザーに通過させる。そして９、１０、１１、及び１２を投入することによって分散させ、安定化して熟成させる。
【００６９】
剤形例3.  栄養クリームの製造
本発明の化学式(１)の化合物を含有した化粧料のうち、栄養クリームの製造例を表４に示した。
【表４】
2016503014.tif 000007
【００７０】
前記表４において、原料物質２、３、４及び５を一定の温度で均質化し、これを非イオン系両親媒性脂質と称する。前記非イオン系両親媒性脂質と原料物質１、６、７、及び１３を混合し、一定の温度で均質化してマイクロフルダイザーを通過させ、次いで８を一定の温度で徐々に添加して均質化した後、マイクロフルダイザー再度通過させる。そして９、１０、１１と１２を投入することによって分散させ、安定化して熟成させる。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明によるハナスゲから抽出した化学式(１)で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む組成物は、皮膚の保湿又はシワ改善効果、特に、皮膚の水分の損失を防止することで、紫外線によって誘発された皮膚組織の損傷を抑制し、シワの予防又は緩和効果がある。
【００７２】
したがって、前記組成物は、皮膚の保湿又はシワ改善効果を有する皮膚外用剤若しくは化粧料に有用に適用することができる。
【図１】
2016503014.tif 000011
【図２】
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【図３】
2016503014.tif 000013
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年8月5日(2015.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む皮膚の保湿又はシワ改善用の薬学的組成物。
【化１】
2016503014.tif 000018
【請求項２】
前記化学式で表される化合物が、ハナスゲから抽出されることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記組成物が、皮膚外用剤であることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
下記化学式で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む皮膚の保湿又はシワ改善用の化粧料組成物。
【化２】
2016503014.tif 000019
【請求項５】
下記化学式で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を対象体に投与することを含む皮膚の保湿又はシワ改善の方法。
【化３】
2016503014.tif 000020
【国際調査報告】
2016503014.tif 000021
2016503014.tif 000022
2016503014.tif 000023
2016503014.tif 000024
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