(57)【要約】  テトラスパニン３３（ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ）を発現する活性化Ｂリンパ球に関連する疾病を治療する方法。疾病は、例えば、リンパ腫または免疫疾患であり得る。方法は、疾病を治療するのに有効な量で抗ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ抗体を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。活性化Ｂ細胞を精製する方法並びに活性化および／または病的Ｂ細胞を識別する方法もまた提供される。
2016506411.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＳＰＡＮ３３が上方制御されるリンパ腫または白血病を治療する方法であって、
前記リンパ腫または白血病を治療するのに有効な量で抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記リンパ腫は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆Ｔ細胞白血病／リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫−特記のないもの、結節硬化型のホジキンリンパ腫、または混合細胞質サブタイプのホジキンリンパ腫である、請求項１の方法。
【請求項３】
前記リンパ腫がホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である、請求項２の方法。
【請求項４】
前記投与が、前記患者において低減された数のＴＳＰＡＮ３３＋Ｂ細胞をもたらす、請求項１の方法。
【請求項５】
前記抗ＴＳＰＡＮ３３抗体が、モノクローナル抗体、中和抗体、もしくはヒト化抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項１の方法。
【請求項６】
ＴＳＰＡＮ３３が上方制御される免疫疾患を治療する方法であって、前記免疫疾患を治療するのに有効な量で抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項７】
前記免疫疾患は、アレルギーまたは自己免疫疾患である、請求項６の方法。
【請求項８】
前記疾病は、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変症、潰瘍性大腸炎、クローン病、強皮症、過敏性肺臓炎、自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、強直性脊椎炎、セリアック病、特発性血小板減少性紫斑病、混合性結合組織病、多発性硬化症、多発性骨髄腫、尋常性天疱瘡、側頭動脈炎、白斑、または全身性エリテマトーデスである、請求項６の方法。
【請求項９】
前記疾病は、関節リウマチまたは全身性エリテマトーデスである、請求項８の方法。
【請求項１０】
前記投与が、前記患者において低減された数のＴＳＰＡＮ３３＋Ｂ細胞をもたらす、請求項６の方法。
【請求項１１】
前記抗ＴＳＰＡＮ３３抗体が、モノクローナル抗体、中和抗体、もしくはヒト化抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項６の方法。
【請求項１２】
抗ＴＳＰＡＮ３３抗体をリンパ球含有細胞製剤と混合することと、前記抗体により結合されたリンパ球を分離することとを含む、活性化Ｂリンパ球を精製する方法。
【請求項１３】
前記抗ＴＳＰＡＮ３３抗体が、モノクローナル抗体、中和抗体、もしくはヒト化抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項１２の方法。
【請求項１４】
前記分離が、蛍光標識細胞分取によるものである、請求項１２の方法。
【請求項１５】
前記リンパ球におけるＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現を検出することを含む、活性化および／または病的Ｂリンパ球を識別する、方法。
【請求項１６】
前記検出が、
前記リンパ球のタンパク質を含む試料に抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を添加することと、
ＴＳＰＡＮ３３が前記試料に存在する場合に、前記抗体とＴＳＰＡＮ３３との間の免疫複合体を形成することと、
前記免疫複合体を検出することとを含む、請求項１５の方法。
【請求項１７】
前記検出が、
前記リンパ球のＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
前記ＴＳＰＡＮ３３遺伝子におけるヌクレオチド配列に特異的なプライマーにより前記ｃＤＮＡを増幅すること、または前記ＴＳＰＡＮ３３遺伝子のヌクレオチド配列に対する前記ｃＤＮＡをハイブリダイズすることと、
前記増幅反応の増幅生成物を検出することまたは前記ｃＤＮＡと前記ＴＳＰＡＮ３３ヌクレオチド配列との間のハイブリッドを検出することとを含む、請求項１５の方法。
【請求項１８】
前記リンパ球が患者由来であり、前記方法は、ＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現が検出される場合に、前記患者に抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を投与することをさらに含む、請求項１５の方法。
【請求項１９】
活性化および／または病的Ｂリンパ球を伴うリンパ腫または免疫疾患を診断する方法であって、
請求項１５の方法に従って、前記試料のリンパ球におけるＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現を検出することにより、活性化および／または病的Ｂリンパ球の存在について患者の試料を分析することを含み、
前記患者は、前記活性化および／または病的Ｂリンパ球が検出される場合に、前記リンパ腫または免疫疾患と診断される方法。
【請求項２０】
前記疾病は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、関節リウマチ、または全身性エリテマトーデスである、請求項１９の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、国立衛生研究所から助成金番号Ｒ２１ＡＩ０９６２７８を受けて、政府援助によりなされた。政府は、本発明においてある特定の権利を有する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、活性化Ｂ細胞において発現されるタンパク質ＴＳＰＡＮ３３に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ細胞は、順応性免疫システムの体液性応答を調整するリンパ球である（１）。胸腺で成熟するＴ細胞とは異なり、Ｂ細胞は骨髄で発達し、そこでそれらは、成熟ナイーブＢ細胞に成熟する（１）。Ｂ細胞は、もっぱら、外来抗原を認識する抗体、または自己免疫疾患の場合、自己抗原を分泌する役割を担う。抗体には、粘膜表面の保護に関与するＩｇＡのような、それらの位置および機能の両方を決定するサブタイプのいろいろな形がある。ある特定のタイプのリンパ腫は、Ｂ細胞起源である。Ｂ細胞リンパ腫は、歴史的に、２つの主要なタイプ、すなわちホジキンリンパ腫（ＨＬ）および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に分けられている。ホジキンリンパ腫は、トーマス・ホジキンに因んでおり、１８３２年に最初に記載されたが（２）、リード−ステルンベルグ細胞の存在、脾臓、リンパ節、または身体の他の免疫組織の膨大、並びにリンパ組織を超えて拡がり得る異常な増殖により特徴づけられる。「非ホジキンリンパ腫」という用語は、顕著なＨＬ症状を呈しないすべてのタイプのリンパ腫を記載するために使用されている。現在のリンパ腫分類は、４つの広いカテゴリにおける８０タイプを含むもので、ＨＬまたＮＨＬグループ化システムに取って代わっている（２）。いくつかのＴ細胞リンパ腫は、ＣＤ２０のような、Ｂ細胞抗原を異常に発現することが知られているので（３）、本発明のいくつかの実施形態は、活性化Ｂ細胞もしくはＢ細胞リンパ腫の膜で発現される、新規なバイオマーカーを用いて、特定の病的Ｂ細胞を識別する、またはＢＡＡＭ抗原としても知られる、テトラスパニン３３（ＴＳＰＡＮ３３）を発現する病的Ｂ細胞もしくはＴ細胞リンパ腫の特異的な除去を達成することを伴う。よって、治療標的としてのＢＡＡＭの使用は、リンパ腫タイプにより制限されず、リンパ球細胞の表面でＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ遺伝子によりコードされるタンパク質の存在により制限される。
【０００４】
癌免疫療法は、治療のモノクローナル抗体の開発により変化してきた。これらの抗体標的細胞の表面分子は、特異的に腫瘍細胞で発現される。一度に何千もの遺伝子の発現の集団的なスクリーニングを可能にする、遺伝子アレイのような技術がある。バイオインフォマティクスの適用は、モノクローナル抗体の開発のための標的を示す細胞表面タンパク質をコードする遺伝子を特定するための遺伝子アレイデータの分析を可能にする。これらの抗体は、次いで、腫瘍の成長を遅くするための、または腫瘍細胞を直接死滅させるための治療として使用され得る。抗体標的療法は、パウル・エールリヒが、１９０８年に病原菌または腫瘍に毒素を送達し得る「特効薬」としての抗体を最初に構想して以来（４）、人気が増加した。１９８１年に、Gaffar, S.A., et al.（５）は、ヒト結腸癌異種移植片への、おそらくＤＮＡ損傷の誘導により、特定の細胞毒性（cytoxicity）を送達するためにヒト癌胎児性の抗原（ＣＥＡ）に対する放射標識された抗体を使用した。１９８８年に、DeNardo, et al.（６）は、放射標識された抗体標的療法の投与の後で、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する１０人の患者のうち４人の完全なまたは部分的な寛解を報告した。すぐ後に、他者が、補体媒介細胞毒性（ＣＭＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介する、「裸」（非標識）の抗体の類似の抗腫瘍活性を報告した（７）。
【０００５】
標的分子に対する治療抗体の結合は、通常は標的分子により制御されるシグナルトランスダクション経路の引き金を引き得る。このことは、腫瘍細胞の運命の変更へと導く。それはアポトーシス、ネクローシス、細胞周期休止、増大された増殖、または分化を生じさせ得る。これらの変化された細胞の挙動のいくつかは、癌細胞の場合、特に、増殖の停止または細胞死を導くもの（アポトーシス、ネクローシス）が望ましい。当業者は、所与の抗体が、腫瘍細胞においてこれらの影響のいずれかを誘導するかどうかを測定することが可能である（８〜９）。
【０００６】
マウス細胞から産生されたモノクローナル抗体は、ヒトにおいて使用されるためにそれらの免疫原性を低減させるために、「ヒト化」を必要とする。これを行ういくつかの方法がある。１つは、抗体のマウスの領域（結晶化フラグメントまたはＦｃ）がヒトＦｃ配列により置換される、ヒト化抗体を産生することによる（９）。これは、種々の分子生物学技術を用いて行うことができる（８〜９）。代替的には、抗体が、分子生物学技術を用いて、ヒト免疫グロブリン遺伝子でマウスを置換することにより変化されたそれらの免疫システムを有する、免疫化したトランスジェニックマウスにより産生され得る。いくつかのこのようなマウスが産生されている（７）。
【０００７】
上記のような可能性を考慮して、治療のモノクローナル抗体が、種々の癌を治療するための好ましい方法となっている（１０）。リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）のような、ＦＤＡに認可された抗体による治療が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）並びに関節リウマチ（ＲＡ）のような自己免疫障害の治療のために使用されている（１１）。よって、疾病細胞／組織で発現される固有のバイオマーカーへの抗体標的療法の、ヒト癌または自己免疫障害を治療することにおける有効性が証明された。他の例は、胸部癌細胞におけるＨｅｒ−２抗原を標的とするヒト化モノクローナル抗体であるハーセプチン（１２）、または結腸直腸癌における血管内皮成長因子を標的とするヒト化抗体であるアバスチン（１３）を含む。これらの例は、ある特定のヒト癌で、劇的な（陽性の）治療効果を有する非常に成功的な抗体を示す。
【０００８】
多くのリンパ腫および白血病がＢ細胞抗原を発現するので（１１）、Ｂ細胞を標的とする抗体が治療上重要であることが証明されている。１つの例は、ある特定のヒトリンパ腫で発現されるタンパク質のＣＤ２０を標的とする治療抗体である、リツキシマブ（１４）である。しかしながら、ＣＤ２０は正常なＢ細胞によっても発現され、そのため、ＣＤ２０を標的とする抗体治療が腫瘍細胞のほとんどを排除するが、治療は、ＣＤ２０発現するそれらの正常なＢ細胞も切断する（１５）。このことは、ヒトにおけるリツキシマブの投与の深刻な副作用である。それにもかかわらず、腫瘍細胞を除去することの利益は、ＣＤ２０陽性リンパ腫を有する患者におけるリツキシマブの使用を正当化する（１１）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様において、ＴＳＰＡＮ３３が上方制御されるリンパ腫または白血病を治療する方法が提供される。方法は、リンパ腫または白血病を治療するのに有効な量で抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む。
【００１０】
方法において、
ａ）リンパ腫は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆Ｔ細胞白血病／リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫−特記のないもの、結節硬化型のホジキンリンパ腫、または混合細胞質サブタイプのホジキンリンパ腫であり得、
ｂ）リンパ腫は、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫であり得、
ｃ）投与は、患者においてＴＳＰＡＮ３３＋Ｂ細胞の低減された数をもたらし得、
ｄ）抗ＴＳＰＡＮ３３抗体が、モノクローナル抗体、中和抗体、もしくはヒト化抗体、またはこれらの組み合わせであり得、または
ｅ）ａからｄの組み合わせである。
【００１１】
別の態様において、ＴＳＰＡＮ３３が上方制御される免疫疾患を治療する方法が提供される。方法は、免疫疾患を治療するのに有効な量で抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む。
【００１２】
方法において、
ａ）免疫疾患は、アレルギーまたは自己免疫疾患であり得、
ｂ）疾病は、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変症、潰瘍性大腸炎、クローン病、強皮症、過敏性肺臓炎、自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、強直性脊椎炎、セリアック病、特発性血小板減少性紫斑病、混合性結合組織病、多発性硬化症、多発性骨髄腫、尋常性天疱瘡、側頭動脈炎、白斑、または全身性エリテマトーデスであり得、
ｃ）疾病は、関節リウマチまたは全身性エリテマトーデスであり得、
ｄ）投与が、患者においてＴＳＰＡＮ３３＋Ｂ細胞の低減された数をもたらし得、
ｅ）抗ＴＳＰＡＮ３３抗体が、モノクローナル抗体、中和抗体、もしくはヒト化抗体、またはこれらの組み合わせであり得、または
ｆ）ａからｅのあらゆる組み合わせである。
【００１３】
さらなる態様において、活性化Ｂリンパ球を精製する方法が提供される。方法は、抗ＴＳＰＡＮ３３抗体をリンパ球含有細胞製剤と混合することと、抗体により結合されたリンパ球を分離することとを含む。方法では、抗ＴＳＰＡＮ３３抗体は、モノクローナル抗体、中和抗体、もしくはヒト化抗体、またはこれらの組み合わせであり得、および／または分離は蛍光標識細胞分取によるものであり得る。
【００１４】
別の態様では、活性化および／または病的Ｂリンパ球を識別する方法が提供される。方法は、リンパ球におけるＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現を検出することを含む。
【００１５】
方法において、
ａ）検出は、リンパ球のタンパク質を含む試料に抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を添加することと、ＴＳＰＡＮ３３が試料に存在する場合に、抗体とＴＳＰＡＮ３３との間の免疫複合体を形成することと、免疫複合体を検出することとを含み得、
ｂ）検出は、リンパ球のＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、ＴＳＰＡＮ３３遺伝子におけるヌクレオチド配列に特異的なプライマーによりｃＤＮＡを増幅することまたはＴＳＰＡＮ３３遺伝子のヌクレオチド配列に対するｃＤＮＡをハイブリダイズすることと、および増幅反応の増幅生成物を検出することまたはｃＤＮＡとＴＳＰＡＮ３３ヌクレオチド配列との間のハイブリッドを検出することとを含み得、
ｃ）リンパ球が患者由来であり得、方法は、ＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現が検出される場合に、患者に抗ＴＳＰＡＮ３３抗体を投与することをさらに含み得、または
ｄ）ａ）およびｃ）またはｂ）およびｃ）のあらゆる組み合わせである。
【００１６】
別の態様において、活性化および／または病的Ｂリンパ球を伴うリンパ腫または免疫疾患を診断する方法が提供される。方法は、試料のリンパ球におけるＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現を検出することにより、活性化および／または病的Ｂリンパ球の存在について患者の試料を分析することを含み、患者は、活性化および／または病的Ｂリンパ球が検出される場合に、前記リンパ腫または免疫疾患と診断される。
【００１７】
方法において、
ａ）疾病は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆Ｔ細胞白血病／リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫−特記のないもの、結節硬化型のホジキンリンパ腫、または混合細胞質サブタイプのホジキンリンパ腫であり得、
ｂ）疾病は、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変症、潰瘍性大腸炎、クローン病、強皮症、過敏性肺臓炎、自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、強直性脊椎炎、セリアック病、特発性血小板減少性紫斑病、混合性結合組織病、多発性硬化症、多発性骨髄腫、尋常性天疱瘡、側頭動脈炎、白斑、または全身性エリテマトーデスであり得、
ｃ）疾病は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、関節リウマチ、または全身性エリテマトーデスであり得、
ｄ）試料のリンパ球におけるＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現を検出することが、本明細書に記載されるＴＳＰＡＮ３３の上方制御された発現を検出するあらゆる方法によるものであり得る。
【００１８】
本発明のより完全な理解のために、ここで参照が、添付の図面とあわせて、以下の記載になされる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ヒトＴＳＰＡＮ３３のアミノ酸配である（配列番号１）。
【図２】ヒトＴＳＰＡＮ３３（配列番号ｌ）およびマウスＴＳＰＡＮ３３（配列番号２）のアミノ酸配列の比較である。コンセンサス配列（配列番号３）もまた示される。
【図３】ＴＳＰＡＮ３３発現が、正常なヒト組織において活性化Ｂ細胞に制限されることを示すグラフである。アフィメトリックス遺伝子アレイ（Ｕ１３３ｐｌｕｓ２．０）データは、免疫細胞および正常なヒト組織（ｎ＝８）におけるＴＳＰＡＮ３３発現を観察する遺伝子発現データベースのヒトボディインデックスから収集した。Ｘ軸は、臓器系：ＣＮＳ（中枢神経系）、Ｇｕｔ（胃腸）、Ｓｔｒｕｃｔ（構造）、Ｖａｓｃ（脈管構造）、Ｒｅｓｐ（呼吸）、Ｅｎｄｏ（内分泌）、Ｕｒ（泌尿器）、Ｒｅｐ（生殖）、Ｉｍｍ＿Ｔ（免疫組織）、ＩｍｍＣ（免疫細胞）、およびＤｅｖ（発生）より組織される。
【図４−１】ＴＳＰＡＮ３３発現が、マウスおよびヒトにおいて活性化Ｂ細胞に制限されることを示すパネルである。４Ａ）ヒト骨髄と比較した、ヒト血液から精製された休止および活性化（抗ＣＤ４０＋ＩＬ−４）ヒトＢリンパ球におけるＴＳＰＡＮ３３発現のｑＲＴ−ＰＣＲ、ｎ＝３。４Ｂ）ローディング対照としてアクチンを用いる、ＣｐＧ＋ポークウィードマイトジェン（ＰＷＭ）＋パンソルビン（pansorbin）による、休止および活性化条件下でのＴＳＰＡＮ３３発現についてのＰＢＭＣのもののウエスタンブロット。濃度測定分析についても示される。４Ｃ）抗ＣＤ４０ｍＡｂ＋ＩＬ−４刺激による、ヒト２Ｅ２Ｂ細胞（黒い棒）における経時的なＴＳＰＡＮ３３発現のｑＲＴ−ＰＣＲおよび非刺激、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ、または１２時間のＰＭＡ＋イオノマイシン刺激下でのヒトＪｕｒｋａｔＴ細胞（白い棒）、ｎ＝３。４Ｄ）抗ＣＤ４０ｍＡｂ＋ＩＬ−４による休止対活性化ヒト２Ｅ２Ｂ細胞におけるＴＳＰＡＮ３３発現のウエスタンブロット。濃度測定分析もまた示される。*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１および***ｐ≦０．００１は、スチューデントのｔ検定により統計学的有意性を示す。図４−１及び図４−２のデータは独立した３つの実験を表す。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。
【図４−２】ＴＳＰＡＮ３３発現が、マウスおよびヒトにおいて活性化Ｂ細胞に制限されることを示すパネルである。４Ｅ）０．１、１、または１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ＋ＩＬ−４による休止および活性化条件下でのＴｓｐａｎ３３Ａ２０−２ＪＢ細胞のｑＲＴ−ＰＣＲ。４Ｆ）１２時間の１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ＋ＩＬ−４によるＣ５７ＢＬ／６脾臓から濃縮された休止または刺激Ｂ細胞のｑＲＴ−ＰＣＲ、ｎ＝３、*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１および***ｐ≦０．００１は、スチューデントのｔ検定により統計学的有意性を示す。図４−１及び図４−２のデータは独立した３つの実験を表す。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。
【図５】ＴＳＰＡＮ３３がヒトホジキンおよび非ホジキンリンパ腫で発現されることを示すパネルである。５Ａ）ｑＲＴ−ＰＣＲが、いくつかのヒトＮＨＬ株で行われ、ＴＳＰＡＮ３３（黒い棒）対ＭＳ４Ａ１／ＣＤ２０（白い棒）発現について測定された。試料は、ＧＡＰＤＨに正規化された。５Ｂ）ＧＡＰＤＨと比較して、ＢａＦ３（マウスプロＢ細胞株）に対するヒトバーキットリンパ腫株Ｒａｊｉ、Ｒａｍｏｓ、およびＤａｕｄｉにおけるＴＳＰＡＮ３３の大きな細胞外ループ３３（ＬＥＬ）に対応するＲＴ‐ＰＣＲ発現分析。５Ｃ）ウサギ抗ＴＳＰＡＮ３３ポリクローナルを用いて、Ｒａｊｉ、Ｒａｍｏｓ、Ｄａｕｄｉ、およびＢａＦ３細胞のＴＳＰＡＮ３３発現のウエスタンブロット分析。データは独立した３つの実験の代表である。
【図６】ＴＳＰＡＮ３３がヒトリンパ腫において発現されることを示すパネルである。リンパ腫バイオプシーが切片にされて、ヘマトキシリン／エオシン（Hematoxilin/Eosin）および抗ＴＳＰＡＮ３３で、その後、アイソタイプまたは抗ウサギＩｇＧ‐ＨＲＰで染色された。白い矢印はリード・シュテルンベルク細胞（Reed-Stenberg cell）を示し、黒い矢印は陽性ＴＳＰＡＮ３３染色細胞を示す。患者から採取したバイオプシーからの代表的な画像は、ＨＬ（ｎ＝６）、ＤＬＢＣＬ（ｎ＝６）、およびマントル細胞リンパ腫（ｎ＝２）を診断した。
【図７−１】ＴＳＰＡＮ３３がＢ細胞関連自己免疫において上方制御されることを示すパネルである。７Ａ）ＣＤ１９発現に対して正規化されたＭＲＬ／ｆａｓｌｐｒ／ｌｐｒマウスから得られた総脾臓細胞のＴｓｐａｎ３３発現のｑＲＴ‐ＰＣＲ。９週齢のマウス（検出可能な病理なし）、２４週齢（軽度の耳障害を有するまたは有しないリンパ節腫脹）、および３６週齢（耳および顔の障害を有するリンパ節腫脹）が、ｎ＝５でＴｓｐａｎ３３発現について比較された。７Ｂ）ｎ＝２、１１．５週齢雌（リンパ節腫脹）および１２．５週齢雄（病理なし）ＭＲＬ／ｆａｓｌｐｒ／ｌｐｒマウス由来のＣＤ１９＋ＣＤ１３８−およびＣＤ１９−ＣＤ１３８＋脾臓細胞におけるＴｓｐａｎ３３発現のｑＲＴ−ＰＣＲ。*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１、***ｐ≦０．００１（スチューデントのｔ検定）。図７−１及び図７−２のデータは、少なくとも３つの独立した実験（Ａ〜Ｃ）の代表である。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。
【図７−２】ＴＳＰＡＮ３３がＢ細胞関連自己免疫において上方制御されることを示すパネルである。７Ｃ）ｎ＝９、ヒトＳＬＥ患者または健康な対照由来のＰＢＭＣのＴＳＰＡＮ３３発現分析のｑＲＴ−ＰＣＲ。７Ｄ）健常者およびＲＡ患者由来の滑膜におけるＴＳＰＡＮ３３対ＭＳ４Ａ１／ＣＤ２０発現のマイクロアレイ分析。滑膜は、記載されるように、対照またＲＡ患者から単離された（H. Soto, P. Hevezi, R.B. Roth, A. Pahuja, D. Alleva, H.M. Acosta, C. Martinez, A. Ortega, A. Lopez, R. Araiza-Casillas, A. Zlotnik, Gene array analysis comparison between rat collagen-induced arthritis and human rheumatoid arthritis, Scand J Immunol, 68 (2008) 43-57）。ＲＮＡが膜から単離されて、アフィメトリックス遺伝子アレイＵ１３３ｐｌｕｓ２．０を用いて、ＭＳ４Ａ１／ＣＤ２０およびＴＳＰＡＮ３３発現について分析された、ｎ＝９健常者およびｎ＝５ＲＡ患者、*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１、***ｐ≦０．００１（スチューデントのｔ検定）。図７−１及び図７−２のデータは、少なくとも３つの独立した実験（Ａ〜Ｃ）の代表である。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。
【図８】ＴＳＰＡＮ３３が、近位、遠位曲尿細管および集合尿細管で発現され、腎糸球体で発現されないことを示す画像のパネルである。腎臓の生検体が組織アレイにおいてＩＨＣについて染色された。試料は、Ｈ＆Ｅおよび抗ＴＳＰＡＮ３３またはウサギＩｇＧアイソタイプ対照、その後、抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰにより染色された。８Ａ）リンパ球（黒い矢印）および神経（白い矢印）を示す４０×倍率。８Ｂ）近位曲尿細管（黒い矢印）および腎糸球体（白い矢印）を示す４０×倍率。８Ｃ）遠位曲尿細管（黒い矢印）および集合尿細管（白い矢印）を示す４０×倍率。８Ｄ）頂端膜側（apical surface）（黒い矢印）および顆粒（白い矢印）を示す近位曲尿細管の１００×倍率。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
２０１２年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／７４０，９４６号に対する優先権が主張され、この仮特許出願は参照により本明細書に組み込まれる。
【００２１】
テトラスパニン３３は、膜タンパク質であるテトラスパニンファミリーの成員であり（１６）、骨髄異形成症候群および急性骨髄性白血病における欠失のホットスポットとなる領域である（１７）、ヒト７番染色体（７ｑ３１．２−ｑ３２）にマッピングされた（１７）。テトラスパニン３３は最初に、赤血球形成に関与する新規のテトラスパニンとして特徴付けられた（１７〜１８）。テトラスパニン３３はまた、Ｐｅｎ遺伝子の標的欠失を有するマウス（Ｐｅｎ-/-）が貧血症および脾腫大を伴って異常でより巨大な好塩基球性ＲＢＣを発達させたことから（１８）、Proerythroblast nu (new) membraneの名をとってペナンブラ（Penumbra）、Ｐｅｎとも命名された（１７）。ペナンブラ発現は、全赤芽球を含むＴＥＲ１１９+画分の中で、マウスの骨髄において最も高いことが分かったが、一方、好中球、休止Ｔ細胞、休止Ｂ細胞、単球、またはナチュラルキラー細胞においては、ペナンブラ発現は低いかまたは検出不可であった（１８）。後者の研究によってＴＥＲ１１９＋Ｂ細胞が骨髄の最も高いＴｓｐａｎ３３発現細胞であることが分かったが、本明細書に含まれる我々のデータは、活性化Ｂ細胞におけるテトラスパニン３３発現が全骨髄における発現よりも４０倍高いことを示している。後者の知見から、活性化Ｂ細胞は人体におけるＴｓｐａｎ３３／ＢＡＡＭの最も高い発現を有する細胞であると結論付けられる。このことから、Ｔｓｐａｎ３３／ＢＡＡＭは、Ｂ細胞が病因に関与するリンパ腫またはある特定のヒト自己免疫疾患を治療するための医療用抗体開発の独特の標的候補となっている。
【００２２】
ヒトテトラスパニン３３（ＴＳＰＡＮ３３にコード）は、９０種を超える様々な組織および器官の遺伝子発現プロファイルの総合データベース（遺伝子発現の身体指標）を用いることで、Ｂ細胞リンパ腫上に存在するバイオマーカーとして同定された（１９）。ヒトテトラスパニン３３は、マウステトラスパニン３３と９７％の相同性を有する、４回膜貫通型スーパーファミリーのメンバーであり、造血に関与している（１８）。マウスおよびヒトのＢＡＡＭ遺伝子間の高レベルの保存は、マウスモデルを、抗体標的療法を含む前臨床試験に適切なものとしている。
【００２３】
ヒトテトラスパニン３３タンパク質配列が図１に提供される。ヒト対マウスのＴＳＰＡＮ３３タンパク質アラインメントが図２に示される。ヒトＴＳＰＡＮ３３ヌクレオチド配列受入番号はＮＭ＿１７８５６２（参照により本明細書に組み込まれる）であり、一方、ヒトＴＳＰＡＮ３３タンパク質配列受入番号はＮＰ＿８４８６５７（参照により本明細書に組み込まれる）である。
【００２４】
人体の１０５種類の組織および細胞におけるＴｓｐａｎ３３の発現をマッピングするために、遺伝子発現の総合データベース（遺伝子発現の身体指標（Body Index of Gene Expression）：ＢＩＧＥ（１９））が用いられた。ＢＩＧＥデータベースは、Ｔｓｐａｎ３３の発現が高度に特異的であり、最も高い発現量が活性化Ｂ細胞内に見られることを示している（図３）。このことから発明者は、この分子を、ヒトにおけるその発現パターンをより良く反映している名称である、ＢＡＡＭ、またはＢ細胞活性化関連分子（B cell Activation Associated Molecule）と新たに命名することを決定した。顕著なＢＡＡＭ発現量を有する別の部位は、腎臓である（図３）。このＢＡＡＭ発現パターンは、ヒトＲＮＡのｑＲＴ−ＰＣＲを用いて確認され（図４）、高レベルのＢＡＡＭ  ｍＲＮＡが腎臓において検出された。一次リンパ器官（骨髄および胸腺）および二次リンパ器官（脾臓）を含む他の全ての組織、並びに休止Ｂ細胞は、ＢＡＡＭ発現について陰性であった。
【００２５】
ＢＡＡＭ発現のリンパ系外の部位の中で、腎臓における発現は、インビボにおける抗ＢＡＡＭ抗体の可能性のある治療用途に対する関心を引き起こした。腎臓におけるＢＡＡＭに対する治療的モノクローナル抗体の遠隔標的化の可能性を評価するために、抗ＢＡＡＭポリクローナル抗体を用いて免疫組織化学を行った（図８）。これらの結果は、ＢＡＡＭは腎臓の近位曲尿細管および遠位曲尿細管において発現されるが、一方で、リンパ球、神経、集合管および糸球体はＢＡＡＭを発現しなかったことを明らかにした。近位曲尿細管および遠位曲尿細管は、尿濾過中のタンパク質、イオン、および有機溶質の分泌および吸収に関与する上皮刷子縁細胞で裏打ちされている。従って、腎臓におけるＢＡＡＭの発現は、Ｂ細胞活性化とは無関係であり、おそらくは、これらの細胞における小胞輸送またはシグナル伝達に関与しているが、これは、テトラスパニンが、ファミリーとして、これらの機能に関連していたためである（１６）。重要なことは、低分子量のタンパク質のみが、血流の輸入管から糸球体間隙を通過して、尿が膀胱に移行するために集められる曲尿細管に進入することができる。従って、抗体はこの間隙に進入しないため、ＢＡＡＭを標的とする治療的モノクローナル抗体は、それらの標的に到達して腎機能に影響を与えることはしないはずである。さらに、腎臓上皮細胞は生物学的細胞傷害性薬物に対して抵抗性であることが報告されており、腎細胞癌がＡＤＣＣに対して抵抗性であることも報告されている（２０）。まとめると、これらのデータは、Ｔｓｐａｎ３３／ＢＡＡＭの腎臓発現が、ヒトにおける抗ＢＡＡＭ抗体の治療用途に対する懸念を引き起こさないはずであることを示している。
【００２６】
ＴＳＰＡＮ３３は高度に保存されており（２１）、活性化Ｂ細胞において高度に発現上昇されているため、Ｂ細胞の活性化に関与していると予測されている。従って、一実施形態では、抗体を用いて、Ｂ細胞活性化が制御され、自己免疫性疾患またはアレルギー性免疫疾患が治療される。「発現上昇された発現」という用語とは、対照と比較して発現が増加されていることを意味する。例えば、ＴＳＰＡＮ３３の発現は対照遺伝子と比較して増加している可能性があり、あるいは、発現は対照細胞における発現と比較して増加されている可能性がある。
【００２７】
Ｂ細胞活性化マーカーのレベルの上昇が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）等の発がんリスクと関連することが示されている（２２〜２３）ことから、Ｂ細胞活性化マーカーは診断ツールとして重要である。この目的のために、発明者は、他のＢ細胞抗原（特に、ＣＤ１９およびＣＤ２０）もこれらの腫瘍において高発現される（２４）ことから、ＢＡＡＭがヒトリンパ腫において発現されると推論した。ＮＨＬにおけるＴＳＰＡＮ３３の発現を評価するために、いくつかのびまん性Ｂ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）に対してＲＴ−ＰＣＲが行われ、その結果は、ＢＡＡＭ発現がＣＤ２０発現と同程度であったこと示している。いくつかのヒトバーキットリンパ腫細胞株（非ホジキンリンパ腫）に対してもＲＴ−ＰＣＲおよびウエスタンブロッティングが行われ、ＴＳＰＡＮ３３は、ｍＲＮＡレベルおよびタンパク質レベルの両方で容易に検出された。さらに、侵攻型ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫（ＮＨＬ）、およびホジキンリンパ腫含有リード・シュテルンベルク細胞を有する患者から得られた生検体に対して、免疫組織化学が行われた。その結果は、後者が高度にＢＡＡＭ陽性であること示している。マントル細胞リンパ腫はＢＡＡＭ陰性であった。ＢＡＡＭ発現は、Ｂ細胞リンパ腫の活性化状態に関連している可能性がある。リード・シュテルンベルク細胞は、不利益な体細胞超変異を獲得した胚中心Ｂ細胞に由来し、アポトーシスを起こすことができないと考えられていることから、リード・シュテルンベルク細胞は、リンパ腫の活性型である（２５）。一方、マントル細胞リンパ腫は、１１ｑ１３上のサイクリンＤ１遺伝子の、１４ｑ３２上の免疫グロブリン重鎖座位のプロモーターへの転座を含有する、成熟ＣＤ５＋Ｂ細胞リンパ腫の一種である（２６）。その細胞は、ナイーブ前胚中心リンパ球（naive, pre-germinal center lymphocyte）に由来すると考えられていることから、非活性化Ｂリンパ球の一形態である（２６）。従って、リンパ腫に対する医療用抗体の標的としてのＴＳＰＡＮ３３の有用性における差異は、それらの活性化状態に関連している可能性がある。
【００２８】
Ｂ細胞活性化のマーカーはある特定の自己免疫疾患にも関連している。例えば、血清免疫グロブリンであるＩＬ−６およびＩＬ−２１のレベルは全て、関節リウマチ（ＲＡ）と新たに診断された患者において有意に上昇している（２７〜２８）。ＲＡにおける活性化Ｂ細胞の役割、およびＲＡの有望なバイオマーカーとしてのＢＡＡＭの発現量をさらに調べるために、９人の健常な人、および再建または置換膝外科手術を受けている５人のＲＡ患者の滑膜の包括的遺伝子発現解析から得られたマイクロアレイデータをそれぞれ用いた（２９）。ＢＡＡＭ（ｐ＝０．００１９）およびＣＤ２０（ｐ＝０．０００８）の両方のｍＲＮＡレベルが、関節リウマチを患う患者から得られた試料において上昇していた。さらに、ＲＡ試料において上昇した上から２５個のプローブセットは、ＲＡにおける活性化Ｂ細胞の役割と一致する、免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子を含む、Ｂ細胞活性化のマーカーを表す（２９）。ＢＡＡＭは、ヒトにおけるＲＡ病変部に存在する活性化Ｂ細胞のバイオマーカーであると結論付けられる。これらのデータは、抗ＢＡＡＭ抗体が活性化Ｂ細胞をこれらの病変部から除去するであろうこと、従ってＲＡ患者における状態を改善するであろうことを示している。これらの知見は、活性化Ｂ細胞が関与する他の自己免疫疾患、例えば（限定はされないが）、乾癬、アトピー性皮膚炎、シェーグレン症候群、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、潰瘍性大腸炎、クローン病、強皮症、過敏性肺臓炎、自己免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroditis）、橋本甲状腺炎、グレーブス病、強直性脊椎炎、セリアック病、特発性血小板減少性紫斑病、混合性結合組織病、多発性硬化症、多発性骨髄腫、尋常性天疱瘡、側頭動脈炎、白斑、および全身性エリテマトーデスに拡張される。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態は、ＢＡＡＭが活性化Ｂ細胞およびある特定の種類のリンパ腫のマーカーであるという知見に基づいている。一態様において、本発明は、活性化Ｂ細胞を伴う、種々のＢＡＡＭ陽性のリンパ腫および白血病、並びに自己免疫疾患等の疾患を治療するための、医療用抗体の新規且つ特定の用途を提供する。別の態様では、本発明は、このタンパク質の存在を伴う、アレルギー、自己免疫疾患、またはリンパ腫の診断のための、Ｂ細胞活性化のバイオマーカーとしてのＢＡＡＭの用途を提供する。従って、本発明のいくつかの実施形態は、当業者によって生産されるＴＳＰＡＮ３３に対する医療用抗体の、活性化Ｂ細胞を伴う、ＴＳＰＡＮ３３陽性リンパ腫または自己免疫疾患を治療するための標的としての、新規且つ特定の用途を提供する。また、本発明のいくつかの実施形態は、活性化Ｂ細胞を伴う、ＴＳＰＡＮ３３陽性リンパ腫、自己免疫疾患、またはアレルギー等の疾患の診断において用いられるための、活性化Ｂ細胞のバイオマーカーとしてのＴＳＰＡＮ３３の用途を提供する。
【００３０】
いくつかの実施形態は、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭの特定および特徴付け、並びにＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭが活性化Ｂリンパ球およびある特定のリンパ腫において発現上昇しているという知見に基づいている。これらの実施形態は、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性であるリンパ腫または自己免疫障害を含むあらゆる疾患を治療するための、「負荷された」または「裸の」治療的モノクローナル抗体の、新規且つ特定の用途を提供する。「負荷された」および「裸の」という語は、抗体が負荷されるものとして知られている放射性医薬品、フリーラジカル、または毒素等の細胞傷害性薬物に、抗体が複合体化されているかどうかを指す。「裸の」という語は、細胞傷害性薬物に複合体化されていない医療用抗体を指す。細胞傷害性薬物の結合が、抗体を自動誘導ミサイルとして用いる特定標的への細胞傷害性薬物の送達を通じて抗体の「作用強度」を増加させることによって、モノクローナル抗体の治療用途を強力に向上させ得ることは、当該技術分野において充分に理解される。
【００３１】
抗ＴＳＰＡＮ３３抗体は、ＴＳＰＡＮ３３を発現している活性化されたおよび／または病的なＢリンパ球を標的とすることができ、補体媒介性細胞傷害（complement mediated cytoxicity：ＣＭＣ）もしくは抗体依存性細胞傷害（antibody dependent cellular cytotoxicity：ＡＤＣＣ）を介した、または、より直接的には、細胞行動を変化させることによる、それらの枯渇を引き起こす。さらに、抗ＴＳＰＡＮ３３抗体は、抗体−薬剤複合体において用いられることで、ＴＳＰＡＮ３３を発現する細胞に対する抗体の殺滅能を増加させることができる。例えば、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるリツキシマブのように、Ｂ細胞を枯渇させるための抗体の使用は、有効な治療法であることが示されている。
【００３２】
マウス細胞から産生されたモノクローナル抗体は、ヒトにおいて使用するために、ヒト化を必要とする。これを行うためのいくつかの方法がある。１つは、抗体のマウス領域（結晶化フラグメントまたはＦｃ）がヒトＦｃ配列で置換されているヒト化抗体を作製することによるものである。これは、当業者による、分子生物学的手法を用いる種々の方法で行うことができる（７〜８）。あるいは、前記抗体は、分子生物学的手法を用いて免疫系をマウスからヒトへ変化させられたマウスを免疫することにより、作製することができる。いくつかのそのようなマウスが作製されている（７）。ある特定の実施形態では、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性病的Ｂ細胞を伴うあらゆる疾患を治療するための医療用抗体の標的としてのＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに対する、負荷されたまたは裸の、ヒト化または完全ヒトモノクローナル抗体の新規且つ特定の用途が、これらの公知の方法を通じて生み出される。
【００３３】
ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性病的Ｂ細胞を伴うあらゆる疾患の治療は、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭが活性化Ｂ細胞およびある特定の種類のリンパ腫のバイオマーカーであると決定されるという知見に基づいている。病的Ｂ細胞は、それぞれ、アレルゲンおよび関節リウマチに対して産生された抗体等における、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性病的Ｂ細胞を伴うアレルギー性免疫関連疾患および自己免疫疾患にまで及ぶことが企図される。
【００３４】
一実施形態では、治療的モノクローナル抗体の標的としてバイオマーカーを用いることによる、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性であるあらゆるリンパ腫または白血病を治療する方法が提供される。これには、この分子を発現するホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫の変種、例えば、ＴＳＰＡＮ３３／Ｂ  ＡＡＭを発現し得るある特定のＴ細胞リンパ腫等のあらゆるリンパ腫型が含まれる。治療のための他のリンパ腫としては、前駆Ｔ細胞性白血病／リンパ腫；濾胞性リンパ腫；びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫；マントル細胞リンパ腫；Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病／リンパ腫；ＭＡＬＴリンパ腫；バーキットリンパ腫；バーキットリンパ腫；非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫；結節硬化型ホジキンリンパ腫；混合細胞亜型ホジキンリンパ腫が挙げられる。別の実施形態では、アレルギーおよび自己免疫疾患を含む、前記バイオマーカーを発現する病的Ｂリンパ球を含有する、あらゆる免疫疾患を治療するための方法が提供される。アレルゲンに対する抗体を有する過敏性アレルギー性Ｂリンパ球は、ＴＳＰＡＮ３３を医療用抗体の標的として用いることで、枯渇され得る。同様に、自己抗原に対する自己抗体を有する自己反応性Ｂリンパ球は、上記のいかなる方法を用いても、同様に枯渇され得る。
【００３５】
別の実施形態では、中和抗体を用いてＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭを遮断することにより、Ｂ細胞の活性化またはＴ細胞への提示を制御するための手段が提供される。これは、ＴＳＡＮ３３／ＢＡＡＭが、ヒトおよびマウスにおいて９７％超保存されていることから、Ｂ細胞の機能、活性化、増殖、または輸送に関与しているであろうという知見に基づいている。従って、当業者による中和抗体の開発は、Ｂ細胞機能を阻止するために用いられ得る。これを利用することで、体液性免疫の免疫応答を調節することもでき得、それにより、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭがこの機能に実際に関与している場合の、Ｂ細胞の活性化または提示を阻害することで、アレルギーまたは自己免疫等の種々の疾患を治療することができ得る。中和抗体がＴＳＰＡＮ３３分子の細胞外大ループ（large extracellular loop：ＬＥＬ）領域に結合するアッセイを用いることにより、中和抗体をスクリーニングすることができる。例えば、可溶性ＬＥＬは、ＴＳＰＡＮ３３のＬＥＬ部分に対応するヌクレオチド配列を発現ベクターにクローニングし、次にそれを適切な宿主細胞に形質移入することにより、発現され得る。抗ＴＳＰＡＮ３３抗体がＬＥＬと結合する能力は、ウエスタンブロットによりアッセイすることができる。
【００３６】
抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ等の免疫性結合因子である。抗体に基づく種々の構築体およびフラグメントを調製および使用する手法は、当該技術分野において周知である。抗体を調製および特徴付けするための手段も当該技術分野において周知である（例えば、Harlow and Lane, "Antibodies: A Laboratory Manual," Cold Spring Harbor Laboratory, 1988を参照されたい、（参照により本明細書に組み込まれる））。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ある特定の利点（例えば、再現性および大量生産）を有すると認識されている。従って、ヒト、マウス、サル、ラット、ハムスター、ウサギ、さらにはニワトリ起源のモノクローナル抗体の使用が企図される。いくつかの実施形態では、抗原結合領域を有する抗体様分子が適切である場合がある。そのような抗体様分子の例としては、限定はされないが、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）等の抗体断片が挙げられる。
【００３７】
ポリクローナル抗体は、広範な動物種において調製することができる。典型的には、抗血清の産生に用いられる動物は、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモットまたはヤギである。免疫原性を増加させるための、アジュバントの使用および、限定はされないが、キーホールリンペットヘモシアニンまたはウシ血清アルブミン等の担体タンパク質への複合体化は、周知の手順である。
【００３８】
モノクローナル抗体は、米国特許第４，１９６，２６５号（参照により本明細書に組み込まれる）に例示されている手法等の、周知の手法を用いることにより、容易に調製することができる。典型的には、この手法は、適切な動物を、選択された免疫原組成物、例えば、精製または部分精製したポリペプチド、ペプチドまたはドメインで免疫することを含む。免疫組成物は抗体産生細胞を刺激するのに効果的な様式で投与される（３１〜３３）。
【００３９】
例えば、数回の免疫の後、マウス血清中の抗ＴＳＰＡＮ３３抗体の存在は、血清を酵素結合免疫吸着検定法（enzyme-linked immunosorbant assay:ELISA）により検査することによって検定され得る。抗ＴＳＰＡＮ３３抗体の存在が所与のマウスの血清中で確認されると、その脾臓は、ＰＥＧにより駆動される融合または電気的手法のようないくつかの手法を用いて、モノクローナル抗体の産生に適した骨髄腫細胞に融合され得る。得られたハイブリドーマは、ＨＡＴ培地中で選抜され、ＥＬＩＳＡにより抗ＴＳＰＡＮ３３抗体の産生のためにスクリーニングされ得る。
【００４０】
ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体は、濾過、遠心分離およびＨＰＬＣまたはアフィニティークロマトグラフィー等の種々のクロマトグラフィー法を用いることで、必要に応じてさらに精製され得る。
【００４１】
ヒト化モノクローナル抗体は、元の抗原特異性を保持しつつ定常領域および／または可変領域フレームワーク配列をヒト配列と置き換えるための遺伝子工学技術を用いて改変された、動物起源の抗体である。そのような抗体は、通常、ヒト抗原に対する特異性を有するげっ歯類抗体に由来する。そのような抗体は、概して、インビボにおける治療適用に有用である。この戦略により、外来抗体に対する宿主応答が低減され、ヒトエフェクター機能の選択が可能となる。従って、ＴＳＰＡＮ３３に対するヒト化抗体は、いくつかの実施形態に含まれ、ヒト定常領域ドメインおよび／またはヒト可変領域ドメインを有するマウス、ラット、または他の種由来のキメラ抗体、二重特異性抗体、組換え型および改変抗体並びにそれらの断片も同様に含まれる。ヒト化免疫グロブリンを作製するための手法は当業者に周知である（３４〜３９）。例えば、米国特許第５，６９３，７６２号では、一つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するヒト化免疫グロブリンの作製法および組成物が開示されている。無傷抗体と組み合わされた場合、ヒト化免疫グロブリンは、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、エピトープを含有するタンパク質または他の化合物等のドナー免疫グロブリンと実質的に同一の、抗原に対する結合性を保持する。この領域における他の教示の例としては、米国特許第．６，０５４，２９７号；同第５，８６１，１５５号；および同第６，０２０，１９２号（全て参照により明確に組み込まれる）が挙げられる。患者の疾患に対し「特別にあつらえた」抗体を開発するための方法は、同様に公知であり、そのような特別にあつらえた抗体も企図される。
【００４２】
抗体の様々な製剤または医薬組成物（無菌の、緩衝化した、徐放性、制御放出性、安定剤、軟膏剤等）が、最適な投与経路に応じて治療的処置に用いられ得る。例えば、Niazi S.K. Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations Informa Healthcare 2012を参照されたい。さらに、前記化合物は、単一製剤戦略において他の治療剤と組み合わせて用いられ得る。薬理学的変種を用いることで、所望の薬物動態学的結果（分泌、半減期、溶解性または排泄経路の最適化）を得ることができる。
【００４３】
抗体の正確な用量は治療の目的に依存し、公知の技術を用いて当業者により確認される。例えば、Ansel, et al, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery; Lieberman (1992) Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3), Dekker, ISBN 0824770846, 082476918X, 0824712692, 0824716981; Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding; and Pickar (1999)を参照されたい。当該技術分野で知られているように、タンパク質分解、全身的対局所的送達（systemic versus localized delivery）、および新規プロテアーゼ合成の速度、並びに年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与時期、薬物相互作用、並びに状態の重症度に対する調整が必要な場合があり、当業者によるいくつかの実験法によって確認される。
【００４４】
種々の薬剤的に許容できる賦形剤が当該技術分野において周知であり、製剤または医薬組成物に含まれ得る。本明細書で使用される場合、「薬剤的に許容できる賦形剤」には、組成物の活性成分と組み合わされた場合に、その成分が、対象の免疫系と破壊的な反応を引き起こすことなく、生物活性を保持することを可能にする物質が含まれる。そのようなものには、安定剤、保存剤、塩または糖の複合体または結晶等が含まれ得る。例えば、Niazi S.K. Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations Informa Healthcare 2012を参照されたい。
【００４５】
製剤または医薬組成物に含まれ得る例示的な薬剤的に許容できる担体には、無菌の、水性または非水性の、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが含まれる。例として、限定はされないが、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルジョン（例えば、油／水エマルジョン）、および種々の湿潤剤等の、標準的な医薬品賦形剤が挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射用有機酸エステルである。水性担体としては、水、アルコール／水溶液、エマルジョンまたは懸濁剤、例えば、食塩水および緩衝化媒質が挙げられる。非経口用ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖加リンゲル液（Ringer's dextrose）、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、体液および栄養分補充液（fluid and nutrient replenisher）、電解質補充液（ブドウ糖加リンゲル液に基づくもの等）等が挙げられる。他の実施形態では、組成物は、徐放性粒子、ガラスビーズ、包帯、眼上挿入物（inserts on the eye）、および局所的形態を含む固体マトリックスに組み込まれる。投与経路には以下が含まれ得る：局所的、全身、静脈内、腹腔内、経呼吸器、経口的、眼、植込、経膣、経肛門、坐剤、徐放性デバイス（devices with control release）等。
【００４６】
本願の他の場所に記載される適応症に対する既存の治療薬を、抗ＴＳＰＡＮＮ３３抗体と組み合わせて、またはそれと順次用いることで、治療成績を最適化することができる。
【００４７】
別の実施形態は、病的Ｂリンパ球のバイオマーカーの存在を検出するアッセイを用いる、病的Ｂリンパ球をスクリーニングするための手段を提供する。例としては、限定はされないが、活性化Ｂリンパ球または病的Ｂリンパ球のバイオマーカーとしてＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭの発現のスクリーニングに用いられ得る、ＥＬＩＳＡ、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）アッセイが挙げられる。ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ発現の「正常」レベルからの超過は、リンパ腫または過活性免疫応答（例えば、アレルギーに見られる）を示し得る。
【００４８】
ＴＳＰＡＮ３３を検出するための免疫検出法には、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲｉＡ）、フルオロイムノアッセイ、化学発光法、生物発光分析法、ウエスタンブロッティング、および免疫組織化学が含まれ得る。これらの方法では、試料が、標的タンパク質に対する親和性を有する一次抗体と接触されて免疫複合体を形成し、次にその免疫複合体が、例えば、一次抗体に結合された標識（放射性標識、蛍光標識または酵素標識等）によって、または一次抗体に対し結合性を有する第二の結合分子（二次抗体等）によって、検出される。前記第二の分子は検出のための標識に連結されていてもよい。
【００４９】
核酸検出法としては、ＰＣＲに基づく方法およびハイブリダイゼーションに基づく方法が挙げられる。ＰＣＲに基づく方法としては、限定はされないが、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、逆転写定量ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）、または標準的ＰＣＲが挙げられる。ＰＣＲに基づく方法では、細胞または組織試料から得られたＲＮＡがｃＤＮＡに逆転写され、次にプライマーを用いて増幅される。ハイブリダイゼーションに基づく方法の例としては、限定はされないが、ＤＮＡマイクロアレイ、ノーザンブロット法、およびインサイツハイブリダイゼーションが挙げられる。ハイブリダイゼーションに基づく方法では、細胞または組織試料から得られたＲＮＡが、標識化ｃＤＮＡ（例えば、蛍光標識された）に逆転写され、それが次に、例えば、ＤＮＡマイクロアレイ、ノーザンブロット、またはインサイツハイブリダイゼーション用に作製された組織切片をプローブするために用いられる。
【００５０】
別の実施形態では、本発明は、バイオマーカーであるＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭを活性化Ｂリンパ球のマーカーとして用いる細胞分離、精製カラム、またはＦＡＣＳソーティングを用いて、活性化Ｂリンパ球を選別または精製するための手段を提供する。
【００５１】
疾患を治療するためのＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに対する抗体標的療法（antibody targeted therapy）の使用
いくつかの実施形態において、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに対する抗体標的療法が、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性リンパ腫に対する治療として用いられ得る。例えば、マントル細胞リンパ腫（ＮＨＬ）、侵攻型非ホジキンリンパ腫、およびリード・シュテルンベルク細胞含有ホジキンリンパ腫を有する患者から生検体を採取した。その組織を切片にし、Ｈ＆Ｅ染色に対する、ＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧを用いてＴＳＰＡＮ３３に対して染色した。ホジキンリンパ腫および侵攻型非ホジキンリンパ腫は活性化Ｂリンパ球に由来すると考えられており（２５）、一方、マントル細胞リンパ腫は、ナイーブ前胚中心Ｂリンパ球（naive, pre-germinal center B lymphocyte）に由来すると考えられており（２６）、そのため、非活性化Ｂリンパ腫の一形態を表す。ホジキンリンパ腫および侵攻型非ホジキンリンパ腫の切片のみが、ＴＳＰＡＮ３３陽性であった。このことから、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭは、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性リンパ腫における治療的モノクローナル抗体の有効な標的であると考えられる。
【００５２】
いくつかの実施形態において、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性および自己抗体分泌性Ｂリンパ球を伴う自己免疫疾患を治療するために、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに対する抗体標的療法が用いられ得る。従って、関節リウマチ、乾癬、シェーグレン症候群およびエリテマトーデスを含むがこれらに限定はされない、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭ陽性および自己抗体産生自己免疫疾患を含む自己免疫疾患の治療が提供される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、病的Ｂリンパ球を伴う免疫疾患を治療するために、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに対する中和抗体が用いられ得る。これらの実施形態は、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭがマウスおよびヒトにおいて９７％超保存されているという知見に基づいている。テトラスパニンファミリーは、脳内、免疫系内、腫瘍上および他の場所における細胞の形態、運動性、浸潤、融合およびシグナル伝達の制御を含む、種々の機能を有する（３０）。従って、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭは、Ｂ細胞のシグナル伝達、活性化、増殖、もしくは提示またはＴ細胞へのそれらのシグナル伝達に関与している可能性がある。従って、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭシグナル伝達を遮断するための中和抗体の使用は、Ｂ細胞調節不全を伴う免疫疾患を治療するのに好都合な様式で、免疫応答を調節ために用いられることが企図される。
【００５４】
スクリーニング手段としてのＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭの使用
いくつかの実施形態において、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭは、診断検査としての、活性化Ｂリンパ球および病的Ｂリンパ球のバイオマーカーとして用いられる。これらの実施形態は、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭが休止Ｂ細胞においては陰性であるが、１２時間後の抗ＣＤ４０＋ＩＬ−４による活性化の後に転写は４０倍超に増加しているという知見に基づいている。例えば、１０6細胞／ｍＬの精製ヒトＢ細胞および２Ｅ２ヒトＢ細胞株を、０．１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ４０（Ｇ２８．５ｍＡｂ）および４ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４で刺激した。これらの細胞を溶解し、Ｑｉａｇｅｎ社製ＲＮｅａｓｙキットを用いてＲＮＡを回収した。５００μｇを用い、Ｑｉａｇｅｎ社製ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｒｅｖ．  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔを用い、ランダムヘキサマーでｃＤＮＡを作製した。ロシュ社製Ｌｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ  ４８０システムを用いて、細胞可溶化液に対してＲＴ−ｑＰＣＲを行った。ｌｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒプライマー設計プログラムを用い、フォワードプライマー５’−ｃａａｃａｔｇｃｔｃｔｔｃｔｇｇｇｔｇａ−３’（配列番号４）およびリバースプライマー５’−ａｔｔａｇｃｃｇａｇｃｇｔａｇａｃａｃｃ−３’（配列番号５）を用い、ＵＰＬプライマー＃９を用いて、Ｔｓｐａｎｎ３３プライマーを開発した。フォワードプライマー５’−ａａｃａａａａｔｃｔｃｔａｃｔｔｔｇａｔｇｇａａｃｔｔ−３’（配列番号６）およびリバースプライマー５’−ｇｃａａｇｇｃｃｔａｃｔｇｃｔｇａｇｔｔ−３’（配列番号７）を用い、ＵＰＬプライマー＃６０を用いて、ＣＤ２０を増幅した。１８ＳおよびＧＡＰＤＨ発現の平均値を用いて、発現を正規化した。このように、当業者によって作製されたＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに結合する抗体またはタンパク質は、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、またはＥＬＩＳＰＯＴを含むがこれらに限定はされないアッセイを用いて、活性化Ｂ細胞または病的Ｂ細胞に対するスクリーニングツールとして用いられることが企図される。いくつかの実施形態は、活性化Ｂ細胞または病的Ｂ細胞の検出のためのスクリーニングツールとしての、ＴＳＰＡＮ３３を検出するためのＲＴ−ＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、またはＰＣＲ等のＰＣＲに基づく方法の使用にまで及ぶ。
【００５５】
病的Ｂリンパ球を単離または特定するための、選別ツールとしてのＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭの使用
いくつかの実施形態において、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭは、細胞選別における活性化Ｂリンパ球および病的Ｂリンパ球のバイオマーカーとして用いられる。これらの実施形態は、活性化Ｂ細胞がＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭを発現するという本出願の実施例に基づいている。従って、ＴＳＰＡＮ３３／ＢＡＡＭに結合する抗体またはタンパク質は、細胞を精製または標識するための細胞の選別、分離、またはＦＡＣＳ解析に用いられることが企図される。
【００５６】
以下の参考文献は上で参照されるものである、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００５７】
（１）  Ｋａｍｉｎｓｋｉ，  Ｄ．  Ａ．，  Ｗｅｉ，  Ｃ，  Ｑｉａｎ，  Ｙ．，  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  Ａ．  Ｆ．  ａｎｄ  Ｓａｎｚ，  Ｉ．，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．  Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２．  ３：  ３０２．
（２）  Ｖａｒｄｉｍａｎ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｈｙｊｅｋ，  Ｅ．，  Ｗｏｒｌｄ  ｈｅａｌｔｈ  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍ  ｖａｒｉａｎｔｓ．  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｅｄｕｃ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ２０１１．  ２０１１  ：  ２５０−２５６．
（３）  Ｗｅｎｔ，  Ｐ．，  Ａｇｏｓｔｉｎｅｌｌｉ，  Ｃ，  Ｇａｌｌａｍｉｎｉ，  Ａ．，  Ｐｉｃｃａｌｕｇａ，  Ｐ．  Ｐ．，  Ａｓｃａｎｉ，  Ｓ．，  Ｓａｂａｔｔｉｎｉ，  Ｅ．，  Ｂａｃｃｉ，Ｆ．，  Ｆａｌｉｎｉ，  Ｂ．，  Ｍｏｔｔａ，  Ｔ．，  Ｐａｕｌｌｉ，  Ｍ．，  Ａｒｔｕｓｉ，  Ｔ．，  Ｐｉｃｃｉｏｌｉ，  Ｍ．，  Ｚｉｎｚａｎｉ，  Ｐ．  Ｌ．  ａｎｄ  Ｐｉｌｅｒｉ，  Ｓ．  Ａ．，  Ｍａｒｋｅｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：  ａ  ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ−  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｃｏｒｅ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６．  ２４：  ２４７２−２４７９．
（４）  Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  Ｔｈｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ  ｐａｐｅｒｓ  ｏｆ  Ｐａｕｌ  Ｅｈｒｌｉｃｈ  ：  ｗｈｙ  ｗａｓ  ｖｏｌｕｍｅ  ４  ｎｅｖｅｒｐｕｂｌｉｓｈｅｄ？  Ｂｕｌｌ  Ｈｉｓｔ  Ｍｅｄ  ２０）０）２．  ７６：  ３３５−３３９．
（５）  Ｇａｆｆａｒ，  Ｓ．  Ａ．，  Ｐａｎｔ，  Ｋ．  Ｄ．，  Ｓｈｏｃｈａｔ，  Ｄ．，  Ｂｅｎｎｅｔｔ，  Ｓ．  Ｊ．  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，  Ｄ．  Ｍ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｉｘｔｕｒｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  （ＣＥＡ）  ａｎｄ  ｃｏｌｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｐ  （ＣＳＡｐ）．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １９８１．  ２７：  １０１−１０５．
（６）  ＤｅＮａｒｄｏ，  Ｓ．  Ｊ．，  ＤｅＮａｒｄｏ，  Ｇ．  Ｌ．，  Ｏ’Ｇｒａｄｙ，  Ｌ．  Ｆ．，  Ｈｕ，  Ｅ．，  Ｓｙｔｓｍａ，  Ｖ．  Ｍ．，  Ｍｉｌｌｓ，  Ｓ．  Ｌ．，Ｌｅｖｙ，  Ｎ．  Ｂ．，  Ｍａｃｅｙ，  Ｄ．  Ｊ．，  Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｃ．  Ｈ．  ａｎｄ  Ｅｐｓｔｅｉｎ，  Ａ．  Ｌ．，  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ｗｉｔｈ  １３１１  Ｌｙｍ−１  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ  １９８８．  ３：  ９６−１０１．
（７）  Ｎｅｌｓｏｎ，  Ａ．  Ｌ．，  Ｄｈｉｍｏｌｅａ，  Ｅ．  ａｎｄ  Ｒｅｉｃｈｅｒｔ，  Ｊ．  Ｍ．，  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｔｒｅｎｄｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ２０１０．  ９：  ７６７−７７４．
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（１０）  Ｓｈａｒｋｅｙ，  Ｒ．  Ｍ．  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，  Ｄ．  Ｍ．，  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ：  ｎｅｗ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．  ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  ２００６．  ５６：  ２２６−２４３．
（１１）Ｒｏｂａｋ，  Ｔ．  ａｎｄ  Ｒｏｂａｋ，  Ｅ．，  Ｎｅｗ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂ−  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．  ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２０１１．  ２５：  １３−２５．
（１２）  Ｍｕｋｏｈａｒａ，  Ｔ．，  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＨＥＲ２  −Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  Ｐｒａｃｔ  ２０１１．  ２０１１  ：  ７３０３６０．
（１３）  Ｓｔｒｉｃｋｌｅｒ，  Ｊ．  Ｈ．  ａｎｄ  Ｈｕｒｗｉｔｚ，  Ｈ．  Ｉ．，  Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ２０１２．  １７：  ５１３−５２４．
（１４）  Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．  Ｒ．，  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  （ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ａｎｔｉｂｏｄｙ）：  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００３．  ２２：  ７３５９−７３６８．
（１５）  Ｒｅｈｎｂｅｒｇ，  Ｍ．，  Ａｍｕ，  Ｓ．，  Ｔａｒｋｏｗｓｋｉ，  Ａ．，  Ｂｏｋａｒｅｗａ，  Ｍ．  Ｉ．  ａｎｄ  Ｂｒｉｓｓｌｅｒｔ，  Ｍ．，  Ｓｈｏｒｔ−  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｏｎｔｏｇｅｎｙ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  ２００９．  １１  ：  Ｒ１２３．
（１６）  Ｍａｅｃｋｅｒ，  Ｈ．  Ｔ．，  Ｔｏｄｄ，  Ｓ．  Ｃ．  ａｎｄ  Ｌｅｖｙ，  Ｓ．，  Ｔｈｅ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：  ｍｏｌｅｃｕｌａｒｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒｓ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １９９７．  １１  ：  ４２８−４４２．
（１７）  Ｃｈｅｎ，  Ｚ．，  Ｐａｓｑｕｉｎｉ，  Ｍ．，  Ｈｏｎｇ，  Ｂ．，  ＤｅＨａｒｔ，  Ｓ．，  Ｈｅｉｋｅｎｓ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｔｓａｉ，  Ｓ．，  Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎＰｅｎｕｍｂｒａ  ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｍａｐｐｅｄ  ｔｏ  ａ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ７  ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ  ｄｅｌｅｔｅｄ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔ  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ  ２００５．  １６２：  ９５−９８．
（１８）  Ｈｅｉｋｅｎｓ，  Ｍ．  Ｊ．，  Ｃａｏ，  Ｔ．  Ｍ．，  Ｍｏｒｉｔａ，  Ｃ，  Ｄｅｈａｒｔ，  Ｓ．  Ｌ．  ａｎｄ  Ｔｓａｉ，  Ｓ．，  Ｐｅｎｕｍｂｒａ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ｔｈａｔ  ｉｓ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ．  Ｂｌｏｏｄ  ２００７．  １０９：  ３２４４−３２５２．
（１９）  Ｒｏｔｈ，  Ｒ．  Ｂ．，  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｐ．，  Ｌｅｅ，  Ｊ．，  ＷｉＵｈｉｔｅ，  Ｄ．，  Ｌｅｃｈｎｅｒ，  Ｓ．  Ｍ．，  Ｆｏｓｔｅｒ，  Ａ．  Ｃ．  ａｎｄ  Ｚｌｏｔｎｉｋ，Ａ．，  Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ｒｅｖｅａｌ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ａｍｏｎｇ  ２０  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ＣＮＳ．  Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２００６．  ７：  ６７−８０．
（２０）  Ｓｕｒｆｕｓ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｈａｎｋ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｏｏｓｔｅｒｗｉｊｋ，  Ｅ．，  Ｗｅｌｔ，  Ｓ．，  Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，  Ｍ．  Ｊ．，  Ａｌｂｅｒｔｉｎｉ，  Ｍ．  Ｒ．，Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，  Ｊ．  Ｈ．  ａｎｄ  Ｓｏｎｄｅｌ，  Ｐ．  Ｍ．，  Ａｎｔｉ−ｒｅｎａｌ−ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｇ２５０  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｅｍｐｈａｓｉｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９６．  １９：  １８４−１９１．
（２１）  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，  Ａ．  Ｒ．，  Ｓｉｄｈｕ，  Ｓ．，  Ｄｕｂｅｌ，  Ｓ．  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，  Ｊ．，  Ｂｅｙｏｎｄ  ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｔｈｅ  ｐｏｗｅｒ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１１．  ２９：  ２４５−２５４．
（２２）  Ｄｅ  Ｒｏｏｓ，  Ａ．  Ｊ．，  Ｍｉｒｉｃｋ，  Ｄ．  Ｋ．，  Ｅｄｌｅｆｓｅｎ，  Ｋ．  Ｌ．，  ＬａＣｒｏｉｘ，  Ａ．  Ｚ．，  Ｋｏｐｅｃｋｙ，  Ｋ．  Ｊ．，Ｍａｄｅｌｅｉｎｅ，  Ｍ．  Ｍ．，  Ｍａｇｐａｎｔａｙ，  Ｌ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｍａｚａ，  Ｏ．，  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１２．  ７２：  ４７３３−  ４７４３．
（２３）  Ｂｒｅｅｎ，  Ｅ．  Ｃ，  Ｈｕｓｓａｉｎ，  Ｓ．  Ｋ．，  Ｍａｇｐａｎｔａｙ，  Ｌ．，  Ｊａｃｏｂｓｏｎ，  Ｌ．  Ｐ．，  Ｄｅｔｅｌｓ，  Ｒ．，  Ｒａｂｋｉｎ，  Ｃ．  Ｓ．，Ｋａｓｌｏｗ，  Ｒ．  Ａ．，  Ｖａｒｉａｋｏｊｉｓ，  Ｄ．，  Ｂｒｅａｍ，  Ｊ．  Ｈ．，  Ｒｉｎａｌｄｏ，  Ｃ．  Ｒ．，  Ａｍｂｉｎｄｅｒ，  Ｒ．  Ｆ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｍａｚａ，  Ｏ．，  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｓｅｖｅｒａｌ  ｙｅａｒｓ  ｐｒｉｏｒ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ＡＩＤＳ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｎｏｎ−  Ｈｏｄｇｋｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ  ２０１１．  ２０：  １３０３−１３１４．
（２４）  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｋ．  Ｃ，  Ｂａｔｅｓ，  Ｍ．  Ｐ．，  Ｓｌａｕｇｈｅｎｈｏｕｐｔ，  Ｂ．  Ｌ．，  Ｐｉｎｋｕｓ，  Ｇ．  Ｓ．，  Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，  Ｓ．  Ｆ．  ａｎｄ  Ｎａｄｌｅｒ，  Ｌ．  Ｍ．，  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｏｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａｓ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．  Ｂｌｏｏｄ  １９８４．  ６３：  １４２４−１４３３．
（２５）  Ｋｕｐｐｅｒｓ，  Ｒ．，  Ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００９．  ９：  １５−２７．
（２６）  Ｐｅｒｅｚ−Ｇａｌａｎ，  Ｐ．，  Ｄｒｅｙｌｉｎｇ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｗｉｅｓｔｎｅｒ，  Ａ．，  Ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：  ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｅｒａ．  Ｂｌｏｏｄ  ２０１１．  １１７：  ２６−３８．
（２７）  Ｇｏｔｔｅｎｂｅｒｇ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｍｉｃｅｌｉ−Ｒｉｃｈａｒｄ，  Ｃ，  Ｄｕｃｏｔ，  Ｂ．，  Ｇｏｕｐｉｌｌｅ，  Ｐ．，  Ｃｏｍｂｅ，  Ｂ．  ａｎｄ  Ｍａｒｉｅｔｔｅ，Ｘ．，  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＥＳＰＯＩＲ  ｃｏｈｏｒｔ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  ２００９．  １１：  Ｒ１１４．
（２８）  Ｇｏｔｔｅｎｂｅｒｇ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｄａｙｅｒ，  Ｊ．  Ｍ．，  Ｌｕｋａｓ，  Ｃ，  Ｄｕｃｏｔ，  Ｂ．，  Ｃｈｉｏｃｃｈｉａ，  Ｇ．，  Ｃａｎｔａｇｒｅｌ，  Ａ．，Ｓａｒａｕｘ，  Ａ．，  Ｒｏｕｘ−Ｌｏｍｂａｒｄ，  Ｐ．  ａｎｄ  Ｍａｒｉｅｔｔｅ，  Ｘ．，  Ｓｅｒｕｍ  ＩＬ−６  ａｎｄ  ＩＬ−２１  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ＥＳＰＯＩＲ  ｃｏｈｏｒｔ．  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２０１２．  ７１  ：  １２４３−１２４８．
（２９）  Ｓｏｔｏ，  Ｈ．，  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｐ．，  Ｒｏｔｈ，  Ｒ．  Ｂ．，  Ｐａｈｕｊａ，  Ａ．，  Ａｌｌｅｖａ，  Ｄ．，  Ａｃｏｓｔａ，  Ｈ．  Ｍ．，  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，  Ｃ，Ｏｒｔｅｇａ，  Ａ．，  Ｌｏｐｅｚ，  Ａ．，  Ａｒａｉｚａ−Ｃａｓｉｌｌａｓ，  Ｒ．  ａｎｄ  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ａ．，  Ｇｅｎｅ  ａｒｒａｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｒａｔ  ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．  Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００８．  ６８：  ４３−５７．
（３０）  Ｈｅｍｌｅｒ，  Ｍ．  Ｅ．，  Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏ  Ｉ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００５．  ６：  ８０１−８１１．
（３１）  Ｂｕｔｌｅｒ  Ｍ，  Ｍｅｎｅｓｅｓ−Ａｃｏｓｔａ  Ａ  （２０１２）  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９６：  ８８５−８９４；
（３２）  Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ  ＳＫ，  Ｎａｅｓｔｅｄ  Ｈ，  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｃ，  Ｔｏｌｓｔｒｕｐ  ＡＢ，  Ｆｒａｎｄｓｅｎ  ＴＰ  （２０１２）  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｉｘｔｕｒｅｓ：  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｓｔ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．  Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ５２６：  １３９−１４５；
（３３）  ‘Ｍａｒｉｃｈａｌ−Ｇａｌｌａｒｄｏ  ＰＡ，  Ａｌｖａｒｅｚ  ＭＭ  （２０１２）  Ｓｔａｔｅ−ｏｆ−ｔｈｅ−ａｒｔ  ｉｎ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ  ２８：  ８９９−９１６，  ａｌｌ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｈｅｒｅｉｎ．
（３４）  Ｇｌａｓｓｙ  ＭＣ  （１９９３）  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ４：  １５４−１６５；
（３５）  Ｍａｒｉｃｈａｌ−Ｇａｌｌａｒｄｏ  ＰＡ，  Ａｌｖａｒｅｚ  ＭＭ  （２０１２）  Ｓｔａｔｅ−ｏｆ−ｔｈｅ−ａｒｔ  ｉｎ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ  ２８：  ８９９−９１６；
（３６）  Ｃｈｏｎ  ＪＨ，  Ｚａｒｂｉｓ−Ｐａｐａｓｔｏｉｔｓｉｓ  Ｇ  （２０１１）  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２８：  ４５８−４６３；
（３７）  Ｄｉ  Ｆｅｄｅ  Ｇ，  Ｂｒｏｎｔｅ  Ｇ，  Ｒｉｚｚｏ  Ｓ，  Ｒｏｌｆｏ  Ｃｅｒｖｅｔｔｏ  Ｃ，  ＣｏｃｏｒｕＵｏ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ：  ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｕｍｏｒｓ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  １１  ：  １４３３−１４４５；
（３８）  Ｃｈｉａｒｅｌｌａ  Ｐ  （２０１１）  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，  ｎｏｖｅｌ  ａｓｓａｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐａｔ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ６：  ２５８−２６７；
（３９）  Ｋａｎｅｋｏ  Ｅ，  Ｎｉｗａ  Ｒ  （２０１１）  Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｗｉｔｈ  Ｆｃ  ｄｏｍａｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．  ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５：  １−１  ｌｂｂ
【実施例】
【００５８】
本発明は付随する実施例を参照することでより深い理解が得られるが、その記載は例証のみを目的としており、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００５９】
実施例１
活性化Ｂ細胞での発現を含む制限発現パターンを有する膜貫通タンパク質をコードする遺伝子Ｔｓｐａｎ３３を特定した。ＴＳＰＡＮ３３はテトラスパニンファミリーに属する。ＴＳＰＡＮ３３は休止Ｂ細胞では発現しないが、活性化後のヒトのプレＢ細胞で強く誘導されている。バーキットリンパ腫由来Ｂ細胞の活性化及び分化のモデルであるヒト２Ｅ２細胞も活性化に伴いＴＳＰＡＮ３３の発現量が増加している。ＴＳＰＡＮ３３はホジキンリンパ腫及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む複数のリンパ腫で発現している。関節リウマチ患者、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、及びＭＲＬ／Ｆａｓlpr/lprマウス（ＳＬＥのモデルマウス）由来の脾臓Ｂ細胞を含む、Ｂ細胞が病態に関与している一部の自己免疫疾患においてもＴＳＰＡＮ３３が発現している。ＴＳＰＡＮ３３を診断的バイオマーカー又は特定のＢ細胞リンパ腫若しくは自己免疫疾患の治療に用いる医療用抗体の標的して利用可能であると結論付ける。
【００６０】
実施例で用いられている略語を示す。ＢＣＭＡ：Ｂ細胞成熟抗原、ＢＩＧＥ：Ｂｏｄｙ  Ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（データベース）、ＴＳＰＡＮ３３：テトラスパニン３３、ＢＬ、バーキットリンパ腫；ＲＡ：関節リウマチ、ＮＨＬ：非ホジキンリンパ腫、ＤＬＢＣＬ：びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ＨＬ：ホジキンリンパ腫、ＳＬＥ：全身性エリテマトーデス。
【００６１】
実施例２
序論
細胞系列特異的なマーカーの発見及び評価は複雑な免疫系の根底にある細胞サブセットの特定に役立っている。ＣＤ３e（全Ｔ細胞マーカー）、ＣＤ４（ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８（細胞障害性Ｔ細胞）及びＢ２２０／ＣＤ４５Ｒ（Ｂ細胞）などの細胞表面のマーカーはリンパ球集団を分化させるために日常的に使用されている［１−２］。フローサイトメトリーの標識技術の進歩により、細胞系列特異的な転写因子の検出に基づいたＣＤ４サブタイプ（Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７及びＴｒｅｇ細胞）の評価が行えるようになった［３］。ＣＤ１ｄhiＣＤ５+であり、ＩＬ−１０を分泌するＢ細胞の小サブセットの特定に基づき、制御性「Ｂ１０細胞」が発見された［４−６］。さらに、細胞系列特異的表面マーカー（例えばＢ細胞マーカーであるＣＤ２０）は、その病原性Ｂ細胞除去能力により種々のリンパ腫のみならず関節リウマチ（ＲＡ1）等の自己免疫疾患に対して有効であることが示された医療用ｍＡｂの開発の標的として有望である［７−８］。
【００６２】
ＴＳＰＡＮ３３は新規のＢ細胞活性化マーカーである
ヒトリンパ球の新規マーカーの特定を目指し、免疫系細胞を含む異なる１０５のヒト臓器におけるヒトの遺伝子発現に関する広範なデータベース（Ｂｏｄｙ  Ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＢＩＧＥ）データベースとして知られている）を解析した［９−１０］。このデータベースは特定の臓器又は細胞に関係する新規遺伝子の特定に有用である［１１］。Ｂ細胞とはこれまで無関係と思われていた膜貫通型タンパク質をコードする遺伝子（Ｔｓｐａｎ３３）を特定した。テトラスパニンスーパーファミリーは高度に保存されたシステイン−システイン−グリシン（ＣＣＧ）モチーフを含むシステインリッチな長い細胞外ループ（ＬＥＬ）からなる保存領域の構造（Ｐｆａｍ００３３５）により定義される［１２］。これらの特徴により、インテグリン又は他のテトラスポニン等その他のタンパク質とより大きな分子複合体を形成しやすくなり、増殖、接着、運動性及び分化を含む様々な機能を仲介する。いくつかのテトラスパニンは成人の組織に広く発現しているが、他（ＣＤ８２、ＣＤ１５１及びＣＤ３７を含む）はより限定的な発現プロファイルを示し、免疫系の細胞系列特異的に高い発現が認められる［１３］。
【００６３】
ＴＳＰＡＮ３３に関するこれまでの報告
ＴＳＰＡＮ３３は当初、マウス骨髄中の赤血球前駆細胞のサブポピュレーション内で検出されたため造血に携わっていると考えられており、これまでＰｅｎｕｍｂｒａ（前赤芽球のｎｕ膜）として報告されている［１４］。マウス骨髄中のＴｓｐａｎ３３の発現は骨髄細胞（赤芽球）のＴＥＲ１１９＋分画で検出され、好中球、Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞又は（休止）Ｂ細胞では検出されていない［１４］。それは実際にマウスｐｒｅ−ＣＦＵ赤血球系細胞及びマウス骨髄中で発現している［１５］。これらの結果は、骨髄総ＲＮＡに対するこれらＴｓｐａｎ３３＋赤血球前駆細胞の寄与が少ないことを示唆している。興味深いことに、Ｈｅｉｋｅｎｓら［１４］が作製したＴｓｐａｎ３３−／−マウスのうちいくつかのマウスで３カ月以内に赤血球形成異常が、１歳で脾腫大が認められた。しかし、ここに示した様に、ヒトの正常骨髄中でのＴＳＰＡＮ３３の発現は非常に低く（図３）、その代わりに活性化Ｂリンパ球において特異的に強発現している。
【００６４】
取り組み
ＴＳＰＡＮ３３の発現をマウスとヒト両方のＢ細胞で確認した。これらの結果をまとめると、ＴＳＰＡＮ３３が活性化Ｂ細胞の新規マーカーであることが示される。休止及び活性化Ｂ細胞のどちらにも存在している他のＢ細胞特異的な抗原（すなわちＣＤ２０、ＣＤ１９）とは対照的に、ＴＳＰＡＮ３３は活性化Ｂ細胞でのみ発現している。次に、ＴＳＰＡＮ３３が、活性化悪性Ｂ細胞が関与するヒトの疾患でも発現しているかを確認することを試みた。そこで、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、様々な種類の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）並びに全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及び関節リウマチ（ＲＡ）の２種類の自己免疫疾患においてＴＳＰＡＮ３３の発現を測定した。
【００６５】
実施例３
方法
マイクロアレイ解析
Ｂｏｄｙ  Ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎデータベース（ＢＩＧＥ）の作成については既に報告されている［９−１０］。簡単に述べると、全ＲＮＡを死後３〜５時間経過した男性４人、女性４人のヒトのドナーから、又は市販のヒト組織のＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）を追加し得た。ゲノムワイドな遺伝子発現データはＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ１３３  Ｐｌｕｓ  ２．０遺伝子アレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を用いて取得し、データの正規化及び要約はＡｒｒａｙ  Ａｓｓｉｓｔソフトウェア（Ｉｏｂｉｏｎ  Ｌａｂｓ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて行った。
【００６６】
ｑＲＴ−ＰＣＲ
製造元の説明書に従いＱｉａｇｅｎＲＮｅａｓｙ（登録商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ、ＣＡ）を用いて、ヒトの細胞株／細胞又は組織からＲＮＡを単離した。ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ（登録商標）  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ（Ｑｉａｇｅｎ、ＣＡ）を用いてＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。Ｒｏｃｈｅ  ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）  ４８０  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲシステムとＴＳＰＡＮ３３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１３８及びＧＡＰＤＨ検出用のプローブ（Ｒｏｃｈｅ、Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）を用いてｑＰＣＲを行った。配列番号４及び５記載の配列を有するＴＳＰＡＮ３３用プライマーを用いた。
【００６７】
ＴＳＰＡＮ３３タンパク質の検出
抗ヒトベータアクチン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）、抗ベータチューブリン（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｓａｎｔａ  Ａｎａ、ＣＡ）及び抗Ｔｓｐａｎ３３／ＴＳＰＡＮ３３（Ａｂｅａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）ポリクローナルウサギ抗体をウエスタンブロッティングに用いた。
【００６８】
細胞株
ヒトＢ細胞株２Ｅ２は既に報告されている［１６］。ヒトＴ細胞株のジャーカットはＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）より入手した。マウス細胞株Ａ２０−２Ｊは既に報告されている［１７］。全てのＤＬＢＣＬ系列はＤａｖｉｄ  Ｆｒｕｍａｎ（ＵＣ  Ｉｒｖｉｎｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）より提供して頂いた。ヒトのドナー由来のＰＢＭＣはフィコール密度勾配法により単離した。マウス脾臓Ｂ細胞はフィコール密度勾配分離法を用いて濃縮し、抗ＣＤ３  ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）及び抗ＣＤ１１ｃ  ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）をコートしたプレート上でパンニングした。簡単には、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ１１ｃを３７℃で２時間、１０ｃｍ組織培養用プレートにコーティングした。フィコール密度勾配分離法により単離した脾細胞をコーティングしたプレートで２時間インキュベートし、回収した非接着細胞を２回目の濃縮過程に供した。
【００６９】
試薬
Ｂ細胞への刺激をＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）＋マウス又はヒトｒＩＬ−４（Ｓｉｇｍａ）、抗ＣＤ４０ｍＡｂクローンＧ３８．５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）＋ｒＩＬ−４又はＣｐＧ＋ヤマゴボウ分裂促進因子（ＰＷＭ）＋パンソルビン（Ｓｉｇｍａ）の何れかを用いて行った。Ｔ細胞への刺激を抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）又はホルボール１２−ミリスチン酸１３−酢酸（ＰＭＡ）＋イオノマイシン（Ｓｉｇｍａ）を用いて行った。
【００７０】
マウス
Ｃ５７Ｂｌ／６ｊ（保存番号０００６６４）及びＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウス（保存番号０００４８５）をＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から取得した。全ての動物実験プロトコールはカリフォルニア大学アーバイン校のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）の承認を受けた。
【００７１】
ヒト由来試料
ヒトＰＢＭＣをループス患者又は健常人の末梢血から静脈穿刺により採取した。本プロトコールはＩＮＮＣＭＳＺのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ（ＩＲＢ）により承認されており、試料はインフォームドコンセントを行った上で取得した。１９８２年にアメリカリウマチ協会が作成したＳＬＥの新基準を４つ以上満たす者をループス患者とした［１８］。臨床的疾患活動性はＳＬＥ疾患活動性インデックス又はＳＬＥＤＡＩを用いてスコア化した［１９］。不活性疾患（ＳＬＥＤＡＩ＜３）を持つ者を対照とし、活性疾患を伴う患者のうち３つ以上のインデックススコアを持つ者を活性疾患患者とした。ｃＤＮＡを製造元の説明書に従い、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素を用いて作製した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）。
【００７２】
組織アレイ
免疫組織化学的検査に用いたヒト組織試料は検死より得られたもので、Ａｎａｔｏｍｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌｏｆ  ｔｈｅ  ＵＡＮＬの記録用試料である。健常ヒト腎臓又はＨＬ患者６名、濾胞性リンパ腫患者６名、ＤＬＢＣＬ患者６名及びマントル細胞リンパ腫患者２名を含むヒトのリンパ腫生検を用いて、既報に従ったプロテアーゼ及び／又は熱処理による抗原賦活化（デマスキング）後に組織アレイを行った［２０］。そして切片を抗ＴＳＰＡＮ３３抗体に続き、抗ウサギＩｇＧロバ２次抗体酵素複合体（Ａｂｃａｍ）を用いて染色した。
【００７３】
統計解析
統計的有意差検定はスチューデントのｔ検定により行った。ｐ＜０．０５の値を統計的有意と判断した。エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を表す。
【００７４】
実施例４
Ｂ細胞におけるＴＳＰＡＮ３３の高度な発現
ＢＩＧＥデータベースの発現解析により、ＴＳＰＡＮ３３をＢ細胞活性化特異的マーカーとして特定した（図３）。その発現プロファイルは特異的且つ制限的な発現を示し、抗ＣＤ４０及びＩＬ−４で活性化後の末梢血液Ｂ細胞、次いで腎臓で最も高い発現が認められた（表ＩにＴｓｐａｎ３３発現が高い上位１０箇所の部位を示す；全リストは補足情報（ＳＩ１）に示す）。ヒトＲＮＡに対してｑＲＴ−ＰＣＲを行い（ＳＩ２Ａ）、ＢＩＧＥデータベースのＴｓｐａｎ３３発現パターンを確認したが、骨髄、胸腺及び脾臓を含む他のほとんどの組織で低い又は検出限界以下の発現量であった。
【表１】
2016506411.tif 000003
【００７５】
マイクロアレイデータを確認するために、ＰＢＭＣから単離した休止又は活性化状態（抗ＣＤ４０＋ＩＬ−４）のヒトＢ細胞及びヒト骨髄を用いてＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡに対するｑＲＴ−ＰＣＲを行った（図４Ａ）。最初、Ｔｓｐａｎ３３はマウス骨髄中の赤血球前駆細胞のサブセットで発現していると確認されていたが［１４］、ヒト骨髄中ではＴｓｐａｎ３３の著しい発現は検出されなかった（図４Ａ）。活性化Ｂ細胞中のＴｓｐａｎ３３レベルは休止状態のＢ細胞（ｐ＝０．０２０４）又は全骨髄の何れかで４０倍を超えていた。Ｔｓｐａｎ３３は最近になって研究が始まったため、入手できる試薬が限られている（抗体を含む）。しかし、我々は抗ＴＳＰＡＮ３３ポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ）を入手し、ウエスタンブロット及び免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）（エピトープ賦活化後）を行ったが、ＦＡＣＳ解析（データ割愛）には用いなかった。この抗体を用いて、活性化ヒトＰＢＭＣでＴＳＰＡＮ３３タンパク質の発現が有意に上昇していることが示された（図４Ｂ）。濃度解析の結果、刺激を行ったＰＢＭＣ試料中のＴＳＰＡＮ３３タンパク質の発現量は非刺激の約５倍の増加を示した。
【００７６】
ヒト２Ｅ２Ｂ細胞株は誘導性Ｂ細胞活性化及び分化のモデルである［１６］。この細胞は非刺激状態ではＩｇＭ及びＩｇＤを発現しており、抗ＣＤ４０ｍＡｂ＋ＩＬ−４の刺激後は活性化誘導シチジンデアミナーゼ（Ａｉｃｄａ）が直ちに増強され、下流のアイソトープのクラススイッチを誘導する（活性化の指標）［２１−２２］。ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて、非刺激の２Ｅ２細胞と比較して抗ＣＤ４０＋ＩＬ−４で１２時間刺激後にはＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡレベルの有意な上昇（ｐ＝０．０１３）が認められ（図４Ｃ）、増加したＴｓｐａｎ３３転写レベルは刺激１２０時間後まで高い状態を保持した。反対に、Ｔｓｐａｎ３３の発現は休止細胞、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８又はＰＭＡ＋イオノマイシン刺激後のジャーカット細胞（ヒトＴ細胞白血病）では検出されなかった。２Ｅ２細胞におけるＴｓｐａｎ３３の発現上昇はウエスタンブロットにより確認され、抗Ｔｓｐａｎ３３ポリクローナル抗体を用いた場合＞３倍の増加（濃度測定法による）を示した（図４Ｄ）。マウス組織中でのＴｓｐａｎ３３発現をｑＲＴ−ＰＣＲを用いて測定した結果（ＳＩ  ２Ｂ）、ヒトの発現プロファイルが確かめられた。さらに、ＬＰＳ＋ＩＬ−４の濃度を増加させて刺激したマウスＢ細胞株Ａ２０−２ＪにてｑＲＴ−ＰＣＲによる解析を行い、用量依存のＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡ発現量の増加を確認した（図４Ｅ）。Ｔｓｐａｎ３３転写はＡ２０−２Ｊにおいて０．１ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋ＩＬ−４刺激により５０倍を超える増加（ｐ＝０．００１４）、１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ＋ＩＬ−４刺激により１００倍を超える増加（ｐ＝０．０１１及びｐ＝０．０４５）を示した。さらに、マウス脾臓Ｂ細胞をフィコール密度勾配分離法により単離し、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ１１ｃによるパンニングにより濃縮した［２３］。濃縮したＢ細胞を１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ＋ＩＬ−４で１２時間刺激し、Ｔｓｐａｎ３３発現をｑＲＴ−ＰＣＲにより解析した。図４Ｆに示すように、休止状態と比べてＬＰＳ刺激後にＴｓｐａｎ３３の転写が約４倍増加していた（ｐ＝０．００００３）。様々な刺激条件下でマウス全脾細胞についてもｑＲＴ−ＰＣＲを行っており、ＣＤ４０Ｌ＋ＩＬ−４又は抗ＩｇＤ＋ＩＬ−４で刺激した脾細胞ではＴｓｐａｎ３３発現の有意な増強が認められたが、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８（Ｔ細胞を刺激する）による刺激では増加しなかった（データ割愛）。これらの結果をまとめると、ＴＳＰＡＮ３３がマウス及びヒトの両方において活性化Ｂ細胞の新規マーカーであることを示している。
【００７７】
悪性Ｂ細胞によるＴＳＰＡＮ３３の発現
Ｂ細胞活性化マーカーは診断ツールとして重要である。なぜなら、これら分子の一部、例えばｓＣＤ２３、ｓＣＤ２７、ｓＣＤ３０、ｓＣＤ４４、ＣＸＣＬ１３、ＩＬ−６及びＩＬ−１０の血清中濃度の増加［２４−２５］が、癌（例えば、ＮＨＬ）と関連していると報告されているからである。その他の既知のＢ細胞抗原（すなわちＣＤ１９及びＣＤ２０）もＮＨＬで高く発現している［２６］。よって、ＴＳＰＡＮ３３はヒトリンパ腫においても発現していると仮定した。その検証のため、Ｔｓｐａｎ３３発現についてｑＲＴ−ＰＣＲを行い、ＤＬＢＣＬ（ＯＣＩ−ＬＹ１、ＯＣＩ−ＬＹ７、ＯＣＩ−ＬＹ８、ＲＣ−Ｋ８、ＳＵ−ＤＨＬ−２、ＳＵ−ＤＨＬ４、ＳＵ−ＤＨＬ−５、ＳＵ−ＤＨＬ−６、ＳＵ−ＤＨＬ−７並びにＳＵ−ＤＨＬ−８及びＶＡＬ）として特徴づけられるＮＨＬ細胞株を含む１１細胞株並びに非刺激又は刺激（抗ＣＤ４０ｍＡｂ＋ＩＬ−４）２Ｅ２細胞についてｍｓ４ａｌ（ＣＤ２０）と比較した（図５Ａ）。ＤＬＢＣＬは侵攻性ＮＨＬの最も一般的な種類で、通常のリンパ球の核の２倍以上の大きさの核を持つびまん性大型Ｂ細胞の増殖を共通の特徴として有する種々のリンパ腫のグループである［２７］。ＤＬＢＣＬは中心芽細胞、免疫芽細胞又は未分化変異体（ＨＬの高度に活性化されたリード・シュテルンベルク細胞に類似）を含んでおり、増殖係数は＞９０％である［２８］。これらのリンパ腫細胞株において、ｍｓ４ａｌ／ＣＤ２０ｍＲＮＡレベルも測定し、Ｔｓｐａｎ３３の発現量と比較した。ｍｓ４ａｌ／ＣＤ２０及びＴｓｐａｎ３３は全てのＤＬＢＣＬ細胞株で検出された。実際に、ＤＬＢＣＬにおいてＴｓｐａｎ３３の発現量はＣＤ２０と同等であった。
【００７８】
ＤＬＢＣＬとは対照的に、バーキットリンパ腫（ＢＬ）はＣＤ１０+、ＢＣＬ６+及びＢＣＬ２+の明確な表現型を含む胚中心表現型を示し［２１］、丸型で中型サイズの形態で、増殖係数が１００％［２９］でありＣＤ２０を発現している場合もある［２８］。バーキットリンパ腫におけるＴＳＰＡＮ３３の発現を調べるため、Ｒａｊｉ、Ｒａｍｏｓ及びＤａｕｄｉ細胞株を含む複数のバーキットリンパ腫細胞と共に対照のマウスＢａｆ３細胞（ＰｒｏＢ細胞株）株においてＲＴ−ＰＣＲ及びウエスタンブロットを行った（図５Ｂ及び５Ｃ）。ＴＳＰＡＮ３３発現はｍＲＮＡ及びタンパク質レベルの何れについても全てのバーキットリンパ腫細胞株で検出できたが、Ｂａｆ３細胞では検出できなかった。よって、ＴＳＰＡＮ３３はヒトバーキットリンパ腫においても発現していると結論づけた。
【００７９】
更に、他のＢ細胞リンパ腫におけるＴＳＰＡＮ３３発現を特徴づけするため、ＤＬＢＣＬ（ｎ＝６）、マントル細胞リンパ腫（別の種類のＮＨＬ、ｎ＝２）、濾胞性リンパ腫（２番目に頻度の高い低悪性度のＮＨＬ、ｎ＝６）及びＨＬ（ｎ＝６）と診断された患者の生検から作製された組織アレイについて免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）を行うことにした。表２及び図６にＨＬ、ＤＬＢＣＬ又はマントル細胞リンパ腫患者のリンパ節の典型的なイメージを示す。Ｔｓｐａｎ３３はＨＬのリード・シュテルンベルク細胞（ホジキンリンパ腫に特徴的な細胞）において高度に発現しており、ＤＬＢＣＬにおいても均一にＴＳＰＡＮ３３で陽性染色され、図５に示したｑＰＣＲデータの結果と一致した。マントル細胞リンパ腫のＴＳＰＡＮ３３染色は陰性であった。リード・シュテルンベルク細胞は体細胞超変異を経たためアポトーシスを起こさなかった胚中心Ｂ細胞由来であると考えられており、活性型リンパ腫の形態を示している可能性がある［３０］。ＤＬＢＣＬについては前述の通りである。一方マントル細胞リンパ腫は、成熟ＣＤ５+Ｂ細胞リンパ腫の一種で無感作の前胚中心リンパ球由来であると考えられ、非活性型Ｂリンパ球の形態を示している可能性がある［３１］。これらＴＳＰＡＮ３３レベルの差異は各Ｂ細胞リンパ腫の活性化又は分化状態を反映しているのかもしれない。一方、各リンパ腫におけるＴＳＰＡＮ３３の発現量はそれが各リンパ腫の侵攻度を反映する別のバイオマーカーとなる可能性、又は予後因子としての利用可能性を示唆している［３２−３３］。
【表２】
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【００８０】
全身性エリテマトーデス及び関節リウマチ病変におけるＴＳＰＡＮ３３の発現
Ｂ細胞活性化マーカーはいくつかの自己免疫疾患とも関連している。例えば、臨床ＳＬＥにおいては、ＣＤ２５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ３８及びＢＬｙＳは全て増加しており、自己抗体産生と関連している［３４−３５］。新たにＲＡと診断された患者において、血清免疫グロブリン量及びＢ細胞関連のサイトカインＩＬ−６、ＩＬ−２１及びＢＬｙＳは全て有意に上昇している［３６−３８］。ＢＬｙＳを阻害するとＭＲＫＬ／ｆａｓlpr/lprマウス（可溶性ＴＡＣＩ）において病徴が削減され［３９］、ヒトにおいても治療的に有益な効果が得られている（ａｎｔｉ−ＢＬｙＳｍＡｂ：Ｂｅｎｌｙｓｔａ）［４０］。自己免疫疾患におけるＴｓｐａｎ３３の役割を明らかにするため、ＳＬＥ患者のＰＢＭＣ、ＲＡの滑膜病変又はＳＬＥのモデルマウス中のＴｓｐａｎ３３のｍＲＮＡ発現量を測定した。
【００８１】
ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスは調節機能不全のＢ細胞活性化、抗体及び自己抗体産生の上昇、炎症、並びに致死的な糸球体腎炎へと移行する免疫複合体の腎臓への沈着を含む、ヒトＳＬＥ及びＲＡと多くの特徴が類似する自発性且つ進行性の全身性自己免疫疾患を発症する［３９−４０］。ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウス及びヒトＳＬＥにおけるＢ細胞の異常な活性化はＡｉｃｄａの発現上昇を引き起こし、組織及び臓器損傷を仲介する病原性のクラススイッチ及び超変異型抗体をもたらす［３９、４１］。ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスは高力価の抗体を産生し、１６週齢までに重度の腎損傷を発症する［４２］。よって、Ｂ細胞は抗体依存的及び抗体非依存的なメカニズムの両方において、ループスの発病に重要な役割を担っている［４３］。
【００８２】
９、２４及び３６週齢のＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスの脾細胞におけるＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡの発現量を測定し、Ｂ細胞の寄与を明らかにするためＣＤ１９に対して正規化した（図７Ａ）。皮膚損傷、自己抗体及び腎性の病態を含む広範なループス症状を既に発症している２４週齢ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスでは、明確な病態の徴候が認められない対照の９週齢のマウスと比較してＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡの発現が約１０倍増加していた（ｐ＝０．０１６）、（しかし、一部のＢ細胞は９週で既に活性化している可能性があり、ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprの死亡率は３０週齢では９０％になり、生き残った少数のマウスでは特に調節機能不全レベルのサイトカイン及びケモカインを産生している）［４２］。３６週齢のＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスにおけるＴｓｐａｎ３３転写発現量はさらに増加していたが（２４週齢のマウスと比較して）、この増加は統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．０６２）。これらの結果をまとめると、ＴＳＰＡＮ３３がＳＬＥの発病に重要な役割を担っていることを強く示唆する。
【００８３】
ループス発症にＢ細胞は単独で関わっているわけではないので、ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスのループス病態におけるＴＳＰＡＮ３３の増強が血漿中の細胞と関連があるか調べることにした。そのために、１２週齢のオス及びメスのＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウス由来の、FACSソート脾細胞をＣＤ１９+１３８-Ｂ細胞及びＣＤ１９-ＣＤ１３８+血漿細胞にフローサイトメトリーにより分離し、Ｔｓｐａｎ３３の発現量をｑＲＴ−ＰＣＲで解析した（図７Ｂ）。１２週齢のメスのＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスでは対照のオスに比べてＣＤ１９+Ｂ細胞にてＴｓｐａｎ３３発現量が有意に増加していた（ｐ＝０．００４）（ヒトの病態に類似、ＭＲＬ／ｆａｓlpr/lprマウスではオスよりもメスの方がループス様病態を起こしやすく発症も早い）。さらに、Ｔｓｐａｎ３３はＣＤ１３８+細胞では発現しておらず、その発現は活性化Ｂ細胞に限定されていて、末期に分化したＢ細胞（血漿細胞）には引き継がれていないことが示された。ＢＩＧＥデータベース中の血漿細胞特異的マーカーの発現量も同様にこの結論を支持する。例えば、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は血漿細胞が発現するＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬのレセプターである［４４］。ＢＩＧＥデータベース中では、ＢＣＭＡはヒト扁桃腺、気管支及び気管で強く発現しており、これらの組織が血漿細胞を多く含んでいることを示唆しており（データ割愛）、対照的にこれらの組織ではＴＳＰＡＮ３３の発現は低い又は欠損している（図１１及びＳＩ１）。よって、ＴＳＰＡＮ３３が血漿細胞で発現している可能性は低いと結論した。これは血漿／記憶細胞に分化する過程で減少する他のＢ細胞活性化マーカーについても同様である［４５−４７］。
【００８４】
ヒトＳＬＥにおけるＴＳＰＡＮ３３の活性化が果し得る役割を検証するため、健常者９名又はＳＬＥ患者９名のＰＢＭＣ中のＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡの発現量をｑＲＴ−ＰＣＲで測定した（図７Ｃ）。ＳＬＥ患者のＰＢＭＣではＴｓｐａｎ３３ｍＲＮＡの発現が＞３倍増加していた（ｐ＝０．０３８）。これらの結果より、ＴＳＰＡＮ３３はヒトＳＬＥにおいて上昇していることを示唆する。
【００８５】
次に活性化Ｂ細胞がＲＡにおいて果し得る役割を調べることにした。その目的のために、ＲＡ患者の滑膜中から作成したＲＡマイクロアレイデータベースにてＴＳＰＡＮ３３ｍＲＮＡ発現量を解析した［４８］。ＴＳＰＡＮ３３（ｐ＝０．００１９）及びＣＤ２０（ｐ＝０．０００８）転写物のレベルは何れもＲＡ患者で上昇していた（図７Ｄ）。ＲＡ滑膜関節にて特に上昇していると報告されている遺伝子には免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖遺伝子を含む多数のＢ細胞活性化マーカー、と同様にＢＬｙＳ及びＣＸＣＬ１３のようにＢ細胞を標的とする遺伝子も含まれる［４８］。これらの所見はＲＡ病変の活性化Ｂ細胞の役割についてまとめた以前の報告［４９−５０］ならびに抗ＣＤ２０（リツキサン）がＲＡ治療に有効であるという事実［５１−５２］とも一致する。
【００８６】
腎臓中のＴＳＰＡＮ３３発現
図３及びＳＩ２Ａに示すように、マイクロアレイ及びｑＰＣＲの何れで解析を行ってもＴＳＰＡＮ３３ｍＲＮＡは腎臓においても検出される。腎臓の生理学的に重要な役割を考慮し、腎臓中でのＴＳＰＡＮ３３の発現部位を特定することにした。そこで、ＴＳＰＡＮ３３を検出するため、リンパ球浸潤が起こっている腎組織切片（図８Ａ）を含む健常者の腎臓切片を用いて免疫組織化学的検査を行った（図８Ａ−８Ｄ）。近位曲尿細管、遠位曲尿細管及び集合曲尿細管においてＴＳＰＡＮ３３染色が検出された（図８Ｂ−８Ｃ）が、浸潤性のリンパ球（これまでの実験結果と一致）又は糸球体では検出されなかった。より高い倍率の解析により、ＴＳＰＡＮ３３は頂端膜及び近位曲尿細管の上皮刷子縁細胞の顆粒で発現していることが分かった（図８Ｄ）。通常これらの部位に抗体は入り込めないので、これらの結果よりＴＳＰＡＮ３３が治療用の抗体開発の標的して支持される。
【００８７】
考察
概要
我々はテトラスパニンファミリーに属する分子（ＴＳＰＡＮ３３）が活性化Ｂ細胞で強く発現しており、複数のリンパ腫及び病原性Ｂ細胞が関わる自己免疫疾患（ＳＬＥ及びＲＡを含む）でも発現していることから、本分子が活性化Ｂ細胞のマーカーであることを発見した。
【００８８】
新規のＢ細胞活性化バイオマーカーとしてのＴＳＰＡＮ３３
現在、Ｂ細胞の同定及び追跡のために、ＣＤ７２、ＣＤ２０、ＣＤ１９及びＣＤ２４を含む多くのマーカーが使用されている［５３］。活性化胚中心Ｂ細胞はＧＬ７［５４］、ＣＤ１０及びＢＣＬ６［５５］を含む様々な遺伝子を発現していると報告されている。ＭＵＭ１／ＩＲＦ４及びＦＯＸＰ１、ならびにＣＤ２３やＣＤ６９等の他のＢ細胞活性化マーカー並びに全身性Ｂ細胞活性化マーカーであるＣＸＣＬ１３、ｓＣＤ２３、ｓＣＤ２７、ｓＣＤ３０、ｓＣＤ４４がマーカーとしてＮＨＬ及びＲＡの診断並びにリスク評価に用いられている［２５、３２、５６］。重要なことは、これらの活性化マーカーは全て末梢において別の免疫細胞種と関わりがあるため、活性化Ｂ細胞でのみ発現しているマーカーが存在しないことである。よって、ＴＳＰＡＮ３３はＢ細胞特異的な活性化マーカーであり、Ｂ細胞の活性化が関与する疾患の診断ツールとして活用できる可能性がある。リンパ腫及び自己免疫疾患双方の予後バイオマーカーの候補としてのＴＳＰＡＮ３３発現量の使用可能性はさらに研究が必要となる［５７−５９］。
【００８９】
悪性Ｂ細胞に対する医療用ｍＡｂの標的してのＴＳＰＡＮ３３
ＴＳＰＡＮ３３のＢ細胞活性化マーカーとしての利用に加えて、ＴＳＰＡＮ３３は、３３番目のテトラスパニンファミリーの分子で（ＴＳＰＡＮ３３）であるため、膜貫通タンパク質である。よって、ＴＳＰＡＮ３３は治療目的の抗ＴＳＰＡＮ３３ｍＡｂを作製するのにふさわしい候補である。ＣＤ２０は近縁のタンパク質であり現在はｍｅｍｂｒａｎｅ−ｓｐａｎｎｉｎｇ  ４−ｄｏｍａｉｎｓ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ（ＭＳ４Ａ１）に分類されているが、ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及びＲＡを含む特定の自己免疫疾患等の悪性Ｂ細胞の治療に効果的であると証明されている医療用モノクローナル抗体生産の重要なターゲットの一例である［５１−５２、６０］。しかし、ＣＤ２０は休止及び活性化Ｂ細胞の両方で発現しているため、抗ＣＤ２０ｍＡｂ治療の結果、骨髄では７０％のＢ細胞が、末梢血液中では全Ｂ細胞が消失する［２５、３６、６１］。そこで、ＴＳＰＡＮ３３のような活性化Ｂ細胞に限定されたＢ細胞マーカーの特定はＢ細胞関連病態を治療するための「第二世代」ｍＡｂ開発の代替戦略となりえる［３２］。別のテトラスパニン（ＣＤ１５１）は有望な治療抗体の標的として研究されている［６２］。我々のデータから抗ＴＳＰＡＮ３３医療用ｍＡｂは治療を受ける患者の大部分の休止Ｂ細胞を消失させずにすむという大きな優位性を持つことが示唆される。
【００９０】
他のＴＳＰＡＮ３３発現部位
ＴＳＰＡＮ３３は当初、骨髄中の赤血球前駆細胞の小集団内で発現している分子として特定されたので、これまでＰｅｎｕｍｂｒａ（前赤芽球のｎｕ膜）として報告されてきた［１４］。この様な発現パターンから、造血に関与していると報告された。また、Ｔｓｐａｎ３３-/-マウスの一部が３カ月齢で異常な赤血球を産生したと報告されている［１４］。ここで認められた真性赤血球無形成は、赤血球を欠く病気及び原因によっては自己治癒するヒトにおける病態と類似している［６３］。これらの結果、ヒトにおけるＴＳＰＡＮ３３の一時的な阻害による副作用は限定的又は対処が容易である可能性が示唆された。
【００９１】
抗ＴＳＡＰＡＮ３３ｍＡｂをヒトの治療に使用する際、別の問題となりうるのが腎臓での発現である。しかし、Ｔｓｐａｎ３３が糸球体で発現していない（図８Ｂ）かわりに近位及び遠位曲尿細管（図８Ｂ−８Ｃ）の上皮細胞で発現しているため、腎臓での発現パターンは大きな障害にはならないと考えられる。これらの部位への抗体の侵入は通常、分子サイズにより排除されるため不可能であるが、分子量がより小さいタンパク質（例えばアルブミン〜６７ＫＤ又はヘモグロビン〜６８ＫＤ）のみが糸球体障壁を通過可能である［６４］。ＴＳＰＡＮ３３タンパク質の発現は頂端膜及び腎臓の上皮細胞の顆粒中で認められ、これらの細胞は小さなタンパク質、イオン並びに有機溶質（グルコース及びアミノ酸）の分泌並びに吸収に関わっており、ＴＳＰＡＮ３３が小胞輸送及び／又は尿濾過関連のシグナル伝達に関わっている可能性が示唆された［１２］。さらに、腎臓上皮細胞は生物由来の細胞傷害性薬物にたいして耐性があると報告されており、腎細胞癌もＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）に対して抵抗性である［６５］。さらに、Ｔｓｐａｎ３３-/-マウスは生存可能で繁殖性であると報告されており［１４］、Ｔｓｐａｎ３３欠損が腎臓機能に対して与える生理学的な影響は僅かであることを示している。
【００９２】
Ｂ細胞活性化におけるＴｓｐａｎ３３の役割
Ｂ細胞中でのＴｓｐａｎ３３の機能は現在不明であるが、Ｂ細胞活性化に伴いＴｓｐａｎ３３の発現が強く誘導されることから、Ｂ細胞のシグナル伝達／活性化（すなわち、ＣＤ９及びＣＤ８１）、成熟化／生存（すなわちＣＤ３７）又は抗原提示（すなわちＣＤ６３）に関与していることが強く示唆される。なぜなら、他のＢ細胞で発現しているテトラスパニンがこれらの過程に寄与していることが知られているからである［６６−６９］。
【００９３】
要約
ＴＳＰＡＮ３３は活性化及び悪性Ｂ細胞の重要なバイオマーカー候補であると同時に、複数種のＢ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ、ＢＬ、ＨＬ）と活性化Ｂ細胞の表現型を呈する病原性Ｂ細胞と関連する一部の自己免疫疾患（ＳＬＥ及びＲＡ）の治療に用いる医療用ｍＡｂ開発の標的候補である。
【００９４】
実施例５
実施例中に参照した以下の出版物は参照することで本願に組み込まれる：
［１］  Ｅ．Ｖ．  Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ，  Ｊ．Ｅ．  Ｍｏｏｒｅ，  Ｍ．Ａ．  Ｙｕｉ，  Ｌａｕｎｃｈｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｔ−ｃｅｌｌ−ｌｉｎｅａｇｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ８  （２００８）  ９−２１．
［２］  Ｒ．Ｒ．  Ｈａｒｄｙ，  Ｋ．  Ｈａｙａｋａｗａ，  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙｓ，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １９  （２００１）  ５９５−６２１．
［３］  Ｊ．  Ｚｈｕ，  Ｈ．  Ｙａｍａｎｅ，  Ｗ．Ｅ．  Ｐａｕｌ，  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  （＊），  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２８  （２０１０）  ４４５−４８９．
［４］  Ｔ．  Ｓｕｄａ，  Ａ．  Ｏ’Ｇａｒｒａ，  Ｉ．  ＭａｃＮｅｉｌ，  Ｍ．  Ｆｉｓｃｈｅｒ，  Ｍ．Ｗ．  Ｂｏｎｄ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １２９  （１９９０）  ２２８−２４０．
［５］  Ｊ．Ｄ．  Ｂｏｕａｚｉｚ，  Ｋ．  Ｙａｎａｂａ，  Ｔ．Ｆ．  Ｔｅｄｄｅｒ，  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ，  ２２４  （２００８）  ２０１−２１４．
［６］  Ｓ．Ｉ．  Ｋａｔｚ，  Ｄ．  Ｐａｒｋｅｒ，  Ｊ．Ｌ．  Ｔｕｒｋ，  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５１  （１９７４）  ５５０−５５１．
［７］  Ｒ．  Ｋｏｒｈｏｎｅｎ，  Ｅ．  Ｍｏｉｌａｎｅｎ，  Ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ，  １０６  （２０１０）  １３−２１．
［８］  Ｍ．Ｄ．  Ｐｅｓｃｏｖｉｔｚ，  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，  ａｎ  ａｎｔｉ−ｃｄ２０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：  ｈｉｓｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ，  Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，  ６  （２００６）  ８５９−８６６．
［９］  Ｊ．  Ｌｅｅ，  Ａ．  Ｈｅｖｅｒ，  Ｄ．  Ｗｉｌｌｈｉｔｅ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ｐ．  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ  ｔｉｓｓｕｅｓ，  ＦＡＳＥＢ  Ｊ，  １９  （２００５）  １３５６−１３５８．
［１０］  Ｒ．Ｂ．  Ｒｏｔｈ，  Ｐ．  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｊ．  Ｌｅｅ，  Ｄ．  Ｗｉｌｌｈｉｔｅ，  Ｓ．Ｍ．  Ｌｅｃｈｎｅｒ，  Ａ．Ｃ．  Ｆｏｓｔｅｒ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ｒｅｖｅａｌ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ａｍｏｎｇ  ２０  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ＣＮＳ，  Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，  ７  （２００６）  ６７−８０．
［１１］  Ｐ．Ａ．  Ｇｅｒｂｅｒ，  Ｐ．Ａ．  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｂ．Ａ．  Ｂｕｈｒｅｎ，  Ｃ．  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，  Ｈ．  Ｓｃｈｒｕｍｐｆ，  Ｍ．  Ｇａｓｉｓ，  Ｓ．Ｇｒｅｔｈｅｒ−Ｂｅｃｋ，  Ｊ．  Ｋｒｕｔｍａｎｎ，  Ｂ．  Ｈｏｍｅｙ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ＰＩＯＳ  ＯＮＥ，  Ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ  （２０１３）．
［１２］  Ｈ．Ｔ．  Ｍａｅｃｋｅｒ，  Ｓ．Ｃ．  Ｔｏｄｄ，  Ｓ．  Ｌｅｖｙ，  Ｔｈｅ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒｓ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ，  １１  （１９９７）  ４２８−４４２．
［１３］  Ａ．Ｂ．  ｖａｎ  Ｓｐｒｉｅｌ，  Ｋ．Ｌ．  Ｐｕｉｓ，  Ｍ．  Ｓｏｆｉ，  Ｄ．  Ｐｏｕｎｉｏｔｉｓ，  Ｈ．  Ｈｏｃｈｒｅｉｎ，  Ｚ．  Ｏｒｉｎｓｋａ，  Ｋ．Ｐ．Ｋｎｏｂｅｌｏｃｈ，  Ｍ．  Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ，  Ｍ．Ｄ．  Ｗｒｉｇｈｔ，  Ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＣＤ３７  ｉｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １７２  （２００４）  ２９５３−２９６１．
［１４］  Ｍ．Ｊ．  Ｈｅｉｋｅｎｓ，  Ｔ．Ｍ．  Ｃａｏ，  Ｃ．  Ｍｏｒｉｔａ，  Ｓ．Ｌ．  Ｄｅｈａｒｔ，  Ｓ．  Ｔｓａｉ，  Ｐｅｎｕｍｂｒａ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ｔｈａｔ  ｉｓ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ，  Ｂｌｏｏｄ，  １０９  （２００７）  ３２４４−３２５２．
［１５］  Ｊ．  Ｓｅｉｔａ，  Ｄ．  Ｓａｈｏｏ，  Ｄ．Ｊ．  Ｒｏｓｓｉ，  Ｄ．  Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ，  Ｔ．  Ｓｅｒｗｏｌｄ，  Ｍ．Ａ．  Ｉｎｌａｙ，  Ｌ．Ｉ．  Ｅｈｒｌｉｃｈ，  Ｊ．Ｗ．  Ｆａｔｈｍａｎ，  Ｄ．Ｌ．  Ｄｉｌｌ，  Ｉ．Ｌ．  Ｗｅｉｓｓｍａｎ，  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃｏｍｍｏｎｓ：  ａｎ  ｏｐｅｎ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，  ＰＩＯＳ  ＯＮＥ，  ７  （２０１２）  ｅ４０３２１．
［１６］  Ｚ．  Ｘｕ，  Ｚ．  Ｆｕｌｏｐ，  Ｇ．  Ｗｕ，  Ｅ．Ｊ．  Ｐｏｎｅ，  Ｊ．  Ｚｈａｎｇ，  Ｔ．  Ｍａｉ，  Ｌ．Ｍ．  Ｔｈｏｍａｓ，  Ａ．  Ａｌ−Ｑａｈｔａｎｉ，  Ｃ．Ａ．  Ｗｈｉｔｅ，  Ｓ．Ｒ．  Ｐａｒｋ，  Ｐ．  Ｓｔｅｉｎａｃｋｅｒ，  Ｚ．  Ｌｉ，  Ｊ．  Ｙａｔｅｓ，  ３ｒｄ，  Ｂ．  Ｈｅｒｒｏｎ，  Ｍ．  Ｏｔｔｏ，  Ｈ．  Ｚａｎ，  Ｈ．  Ｆｕ，  Ｐ．  Ｃａｓａｌｉ，  １４−３−３  ａｄａｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｒｅｃｒｕｉｔ  ＡＩＤ  ｔｏ  ５’−ＡＧＣＴ−３’−ｒｉｃｈ  ｓｗｉｔｃｈ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃｌａｓｓ  ｓｗｉｔｃｈ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  １７  （２０１０）  １１２４−１１３５．
［１７］  Ｋ．Ｊ．  Ｋｉｍ，  Ｃ．  Ｋａｎｅｌｌｏｐｏｕｌｏｓ−Ｌａｎｇｅｖｉｎ，  Ｒ．Ｍ．  Ｍｅｒｗｉｎ，  Ｄ．Ｈ．  Ｓａｃｈｓ，  Ｒ．  Ａｓｏｆｓｋｙ，Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＡＬＢ／ｃ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｌｉｎｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １２２  （１９７９）  ５４９−５５４．
［１８］  Ｅ．Ｍ．  Ｔａｎ，  Ａ．Ｓ．  Ｃｏｈｅｎ，  Ｊ．Ｆ．  Ｆｒｉｅｓ，  Ａ．Ｔ．  Ｍａｓｉ，  Ｄ．Ｊ．  ＭｃＳｈａｎｅ，  Ｎ．Ｆ．  Ｒｏｔｈｆｉｅｌｄ，  Ｊ．Ｇ．Ｓｃｈａｌｌｅｒ，  Ｎ．  Ｔａｌａｌ，  Ｒ．Ｊ．  Ｗｉｎｃｈｅｓｔｅｒ，  Ｔｈｅ  １９８２  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，  ２５  （１９８２）  １２７１−１２７７．
［１９］  Ｃ．  Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒ，  Ｄ．Ｄ．  Ｇｌａｄｍａｎ，  Ｍ．Ｂ．  Ｕｒｏｗｉｔｚ，  Ｄ．  Ｃａｒｏｎ，  Ｃ．Ｈ．  Ｃｈａｎｇ，  Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＳＬＥＤＡＩ．  Ａ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ  ｆｏｒ  ｌｕｐｕｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ＳＬＥ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，  ３５  （１９９２）  ６３０−６４０．
［２０］  Ａ．Ｍ．  Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ，  Ｋ．Ｐ．  Ｔａｉ，  Ｊ．Ｐ．  Ｆｌｏｒｅｓ−Ｇｕｉｔｅｒｒｅｚ，  Ｎ．  Ｖｉｌｃｈｅｓ−Ｃｉｓｎｅｒｏｓ，  Ｋ．  Ｋａｍｄａｒ，  Ｏ．  Ｂａｒｂｏｓａ−Ｑｕｉｎｔａｎａ，  Ｒ．  Ｖａｌｌｅ−Ｒｉｏｓ，  Ｐ．Ａ．  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｊ．  Ｚｕｎｉｇａ，  Ｍ．  Ｓｅｌｍａｎ，  Ａ．Ｊ．  Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  ＣＸＣＬ１７  ｉｓ  ａ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｈａｔ  ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｂｒｏａｄ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １８８  （２０１２）  ６３９９−６４０６．
［２１］  Ａ．  Ｓｃｈａｆｆｅｒ，  Ａ．  Ｃｅｒｕｔｔｉ，  Ｓ．  Ｓｈａｈ，  Ｈ．  Ｚａｎ，  Ｐ．  Ｃａｓａｌｉ，  Ｔｈｅ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ｉｇ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  Ｓ  ｇａｍｍａ  ３  ｒｅｇｉｏｎ  ｉｓ  ａｎ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ：  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ａｎｄ  ＩＬ−４  ｖｉａ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ＮＦ−ｋａｐｐａ  Ｂ  ａｎｄ  ＳＴＡＴ−６  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １６２  （１９９９）  ５３２７−５３３６．
［２２］  Ｓ．Ｒ．  Ｐａｒｋ，  Ｈ．  Ｚａｎ，  Ｚ．  Ｐａｌ，  Ｊ．  Ｚｈａｎｇ，  Ａ．  Ａｌ−Ｑａｈｔａｎｉ，  Ｅ．Ｊ．  Ｐｏｎｅ，  Ｚ．  Ｘｕ，  Ｔ．  Ｍａｉ，  Ｐ．  Ｃａｓａｌｉ，  ＨｏｘＣ４  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｉｄｉｎｅ  ｄｅａｍｉｎａｓｅ  ＡＩＤ  ｇｅｎｅ  ｔｏ  ｉｎｄｕｃｅ  ＡＩＤ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ｃｌａｓｓ−ｓｗｉｔｃｈ  ＤＮＡ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １０  （２００９）  ５４０−５５０．
［２３］  Ｊ．Ｌ．  Ｍａｒａｖｉｌｌａｓ−Ｍｏｎｔｅｒｏ，  Ｐ．Ｇ．  Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ，  Ｇ．  Ｐａｔｉｎｏ−Ｌｏｐｅｚ，  Ｓ．  Ｓｈａｗ，  Ｌ．  Ｓａｎｔｏｓ−Ａｒｇｕｍｅｄｏ，  Ｍｙｏｓｉｎ  ｌｃ  ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓ  ｉｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ，  ｉｓ  ｒｅｃｒｕｉｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｙｎａｐｓｅ，  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １８７  （２０１１）  ３０５３−３０６３．
［２４］  Ｅ．Ｃ．  Ｂｒｅｅｎ，  Ｓ．Ｋ．  Ｈｕｓｓａｉｎ，  Ｌ．  Ｍａｇｐａｎｔａｙ，  Ｌ．Ｐ．  Ｊａｃｏｂｓｏｎ，  Ｒ．  Ｄｅｔｅｌｓ，  Ｃ．Ｓ．  Ｒａｂｋｉｎ，  Ｒ．Ａ．  Ｋａｓｌｏｗ，  Ｄ．  Ｖａｒｉａｋｏｊｉｓ，  Ｊ．Ｈ．  Ｂｒｅａｍ，  Ｃ．Ｒ．  Ｒｉｎａｌｄｏ，  Ｒ．Ｆ．  Ａｍｂｉｎｄｅｒ，  Ｏ．  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｍａｚａ，  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｓｅｖｅｒａｌ  ｙｅａｒｓ  ｐｒｉｏｒ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ＡＩＤＳ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ，  ＣａｎｃｅｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ，  ２０  （２０１１）  １３０３−１３１４．
［２５］  Ａ．Ｊ．  Ｄｅ  Ｒｏｏｓ，  Ｄ．Ｋ．  Ｍｉｒｉｃｋ，  Ｋ．Ｌ．  Ｅｄｌｅｆｓｅｎ，  Ａ．Ｚ．  ＬａＣｒｏｉｘ，  Ｋ．Ｊ．  Ｋｏｐｅｃｋｙ，  Ｍ．Ｍ．Ｍａｄｅｌｅｉｎｅ，  Ｌ．  Ｍａｇｐａｎｔａｙ，  Ｏ．  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｍａｚａ，  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ７２  （２０１２）  ４７３３−４７４３．
［２６］  Ｋ．Ｃ．  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｍ．Ｐ．  Ｂａｔｅｓ，  Ｂ．Ｌ．  Ｓｌａｕｇｈｅｎｈｏｕｐｔ，  Ｇ．Ｓ．  Ｐｉｎｋｕｓ，  Ｓ．Ｆ．  Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，  Ｌ．Ｍ．  Ｎａｄｌｅｒ，  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｏｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａｓ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，  Ｂｌｏｏｄ，  ６３  （１９８４）  １４２４−１４３３．
［２７］  Ｓ．  Ｇｕｒｂｕｘａｎｉ，  Ｊ．  Ａｎａｓｔａｓｉ，  Ｅ．  Ｈｙｊｅｋ，  Ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ−ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ  ａ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ：  ａｎ  ｅｎｔｉｔｙ  ｉｎ  ｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  ａ  ｍｅａｎｉｎｇｆｕｌ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  Ａｒｃｈ  Ｐａｔｈｏｌ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ，  １３３  （２００９）  １１２１−１１３４．
［２８］  Ｐ．  ＭｃＧｏｗａｎ，  Ｎ．  Ｎｅｌｌｅｓ，  Ｊ．  Ｗｉｍｍｅｒ，  Ｄ．  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｊ．  Ｗｅｎ，  Ｍ．  Ｌｉ，  Ａ．  Ｅｗｔｏｎ，  Ｃ．  Ｃｕｒｒｙ，  Ｙ．  Ｚｕ，  Ａ．  Ｓｈｅｅｈａｎ，  Ｃ．Ｃ．  Ｃｈａｎｇ，  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｂｕｒｋｉｔｔ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ａｎｄ  ＣＤ  １０＋  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｕｓｅｄ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ｃｅｌｌ  ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ，  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ，  １３７  （２０１２）  ６６５−６７０．
［２９］  Ｎ．  Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｈ．  Ｎａｋａｍｉｎｅ，  Ｊ．  Ｔａｍａｒｕ，  Ｓ．  Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｔ．  Ｙｏｓｈｉｎｏ，  Ｋ．  Ｏｈｓｈｉｍａ，  Ｍ．  Ａｂｅ，  Ｔｈｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｂｕｒｋｉｔｔ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−Ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｗｉｔｈ  ｃ−ｍｙｃ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ，  Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ，  １５  （２００２）  ７７１−７７６．
［３０］  Ｒ．  Ｋｕｐｐｅｒｓ，  Ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，  ９  （２００９）  １５−２７．
［３１］  Ｐ．  Ｐｅｒｅｚ−Ｇａｌａｎ，  Ｍ．  Ｄｒｅｙｌｉｎｇ，  Ａ．  Ｗｉｅｓｔｎｅｒ，  Ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：  ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｅｒａ，  Ｂｌｏｏｄ，  １１７  （２０１１）  ２６−３８．
［３２］  Ｈ．  Ｎｙｍａｎ，  Ｍ．  Ｊｅｒｋｅｍａｎ，  Ｍ．Ｌ．  Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ−Ｌｉｎｄｓｂｅｒｇ，  Ａ．Ｈ．  Ｂａｎｈａｍ，  Ｓ．  Ｌｅｐｐａ，  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｆｏｃｕｓｅｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｒ−ＣＨＯＰ，  Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ，  ２２  （２００９）  １０９４−１１０１．
［３３］  Ｙ．  Ｓｕｚｕｋｉ，  Ｔ．  Ｙｏｓｈｉｄａ，  Ｇ．  Ｗａｎｇ，  Ｔ．  Ｔｏｇａｎｏ，  Ｓ．  Ｍｉｙａｍｏｔｏ，  Ｋ．  Ｍｉｙａｚａｋｉ，  Ｋ．  Ｉｗａｂｕｃｈｉ，  Ｍ．  Ｎａｋａｙａｍａ，  Ｒ．  Ｈｏｒｉｅ，  Ｎ．  Ｎｉｉｔｓｕ，  Ｙ．  Ｓａｔｏ，  Ｎ．  Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ２０  ｌｅｖｅｌｓ  ｗｉｔｈ  ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＤＬＢＣＬ，  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ，  ９１  （２０１２）  ９９７−１００５．
［３４］  Ｔ．  Ｄｏｒｎｅｒ，  Ｃ．  Ｇｉｅｓｅｃｋｅ，  Ｐ．Ｅ．  Ｌｉｐｓｋｙ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ＳＬＥ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ，  １３  （２０１１）  ２４３．
［３５］  Ｐ．Ｅ．  Ｓｐｒｏｎｋ，  Ｂ．Ｔ．  ｖｄ  Ｇｕｎ，  Ｐ．Ｃ．  Ｌｉｍｂｕｒｇ，  Ｃ．Ｇ．  Ｋａｌｌｅｎｂｅｒｇ，  Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  （ＳＬＥ）  ｉｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ，  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｔｏ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｄｓＤＮＡ，  ｎｏｒ  ｔｏ  ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ９３  （１９９３）  ３９−４４．
［３６］  Ｊ．Ｅ．  Ｇｏｔｔｅｎｂｅｒｇ，  Ｃ．  Ｍｉｃｅｌｉ−Ｒｉｃｈａｒｄ，  Ｂ．  Ｄｕｃｏｔ，  Ｐ．  Ｇｏｕｐｉｌｌｅ，  Ｂ．  Ｃｏｍｂｅ，  Ｘ．  Ｍａｒｉｅｔｔｅ，  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＥＳＰＯＩＲ  ｃｏｈｏｒｔ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ，  １１  （２００９）  Ｒ１１４．
［３７］  Ｊ．Ｅ．  Ｇｏｔｔｅｎｂｅｒｇ，  Ｊ．Ｍ．  Ｄａｙｅｒ，  Ｃ．  Ｌｕｋａｓ，  Ｂ．  Ｄｕｃｏｔ，  Ｇ．  Ｃｈｉｏｃｃｈｉａ，  Ａ．  Ｃａｎｔａｇｒｅｌ，  Ａ．  Ｓａｒａｕｘ，  Ｐ．  Ｒｏｕｘ−Ｌｏｍｂａｒｄ，  Ｘ．  Ｍａｒｉｅｔｔｅ，  Ｓｅｒｕｍ  ＩＬ−６  ａｎｄ  ＩＬ−２１  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ＥＳＰＯＩＲ  ｃｏｈｏｒｔ，  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ，  ７１  （２０１２）  １２４３−１２４８．
［３８］  Ｔ．Ｍ．  Ｓｅｙｌｅｒ，  Ｙ．Ｗ．  Ｐａｒｋ，  Ｓ．  Ｔａｋｅｍｕｒａ，  Ｒ．Ｊ．  Ｂｒａｍ，  Ｐ．Ｊ．  Ｋｕｒｔｉｎ，  Ｊ．Ｊ．  Ｇｏｒｏｎｚｙ，  ＣＭ．Ｗｅｙａｎｄ，  ＢＬｙＳ  ａｎｄ  ＡＰＲＩＬ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，  １１５  （２００５）  ３０８３−３０９２．
［３９］  Ｃ．Ａ．  Ｗｈｉｔｅ，  Ｊ．  Ｓｅｔｈ  Ｈａｗｋｉｎｓ，  Ｅ．Ｊ．  Ｐｏｎｅ，  Ｅ．Ｓ．  Ｙｕ，  Ａ．  Ａｌ−Ｑａｈｔａｎｉ，  Ｔ．  Ｍａｉ，  Ｈ．  Ｚａｎ，  Ｐ．  Ｃａｓａｌｉ，  ＡＩＤ  ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｕｐｕｓ−ｐｒｏｎｅ  ＭＲＬ／Ｆａｓ（ｌｐｒ／ｌｐｒ）  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｃｌａｓｓ  ｓｗｉｔｃｈ  ＤＮＡ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｃ−Ｍｙｃ／ＩｇＨ  ｌｏｃｉ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｓ：  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＨｏｘＣ４，  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，  ４４  （２０１１）  ５８５−５９８．
［４０］  Ｐ．Ｌ．  Ｃｏｈｅｎ，  Ｒ．Ａ．  Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，  Ｌｐｒ  ａｎｄ  ｇｌｄ：  ｓｉｎｇｌｅ  ｇｅｎｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ９  （１９９１）  ２４３−２６９．
［４１］  Ｈ．  Ｚａｎ，  Ｊ．  Ｚｈａｎｇ，  Ｓ．  Ａｒｄｅｓｈｎａ，  Ｚ．  Ｘｕ，  Ｓ．Ｒ．  Ｐａｒｋ，  Ｐ．  Ｃａｓａｌｉ，  Ｌｕｐｕｓ−ｐｒｏｎｅ  ＭＲＬ／ｆａｓｌｐｒ／ｌｐｒ  ｍｉｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ＡＩＤ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ＤＮＡ  ｌｅｓｉｏｎｓ，  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ，  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｌｏｃｕｓ：  ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓ  ｓｗｉｔｃｈ  ＤＮＡ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，  ４２  （２００９）  ８９−１０３．
［４２］  Ｊ．  Ｌｉｕ，  Ｇ．  Ｋａｒｙｐｉｓ，  Ｋ．Ｌ．  Ｈｉｐｐｅｎ，  Ａ．Ｌ．  Ｖｅｇｏｅ，  Ｐ．  Ｒｕｉｚ，  Ｇ．Ｓ．  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｔ．Ｗ．  Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｇｅｎｏｍｉｃ  ｖｉｅｗ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ＭＲＬｌｐｒ  ｍｉｃｅ，  Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ，  ７  （２００６）  １５６−１６８．
［４３］  Ｏ．Ｔ．  Ｃｈａｎ，  Ｌ．Ｇ．  Ｈａｎｎｕｍ，  Ａ．Ｍ．  Ｈａｂｅｒｍａｎ，  Ｍ．Ｐ．  Ｍａｄａｉｏ，  Ｍ．Ｊ．  Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ，  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｕｓｅ  ｗｉｔｈ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｓｅｒｕｍ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  １８９  （１９９９）  １６３９−１６４８．
［４４］  ＣＭ．  Ｃｏｑｕｅｒｙ，  Ｌ．Ｄ．  Ｅｒｉｃｋｓｏｎ，  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＢＣＭＡ，  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ３２  （２０１２）  ２８７−３０５．
［４５］  Ａ．Ｌ．  Ｓｈａｆｆｅｒ，  Ｋ．Ｉ．  Ｌｉｎ，  Ｔ．Ｃ  Ｋｕｏ，  Ｘ．  Ｙｕ，  Ｅ．Ｍ．  Ｈｕｒｔ，  Ａ．  Ｒｏｓｅｎｗａｌｄ，  Ｊ．Ｍ．  Ｇｉｌｔｎａｎｅ，  Ｌ．  Ｙａｎｇ，  Ｈ．  Ｚｈａｏ，  Ｋ．  Ｃａｌａｍｅ，  Ｌ．Ｍ．  Ｓｔａｕｄｔ，  Ｂｌｉｍｐ−  １  ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅｓ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｘｔｉｎｇｕｉｓｈｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍａｔｕｒｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｇｒａｍ，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １７  （２００２）  ５１−６２．
［４６］  Ｍ．  Ｊｏｕｒｄａｎ，  Ａ．  Ｃａｒａｕｘ，  Ｊ．  Ｄｅ  Ｖｏｓ，  Ｇ．  Ｆｉｏｌ，  Ｍ．  Ｌａｒｒｏｑｕｅ，  Ｃ．  Ｃｏｇｎｏｔ，  Ｃ．  Ｂｒｅｔ，  Ｃ．Ｄｕｐｅｒｒａｙ，  Ｄ．  Ｈｏｓｅ，  Ｂ．  Ｋｌｅｉｎ，  Ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｔｏ  ｐｌａｓｍａｂｌａｓｔｓ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｄｅｔａｉｌｅｄ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，  Ｂｌｏｏｄ，  １１４  （２００９）  ５１７３−５１８１．
［４７］  Ｋ．Ａ．  Ｆａｉｒｆａｘ，  Ａ．  Ｒａｌｌｉｅｓ，  Ｓ．Ｌ．  Ｎｕｔｔ，  Ｄ．Ｍ．  Ｔａｒｌｉｎｔｏｎ，  Ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｆｒｏｍ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｔｏ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｎｉｃｈｅｓ，  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２０  （２００８）  ４９−５８．
［４８］  Ｈ．  Ｓｏｔｏ，  Ｐ．  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｒ．Ｂ．  Ｒｏｔｈ，  Ａ．  Ｐａｈｕｊａ，  Ｄ．  Ａｌｌｅｖａ，  Ｈ．Ｍ．  Ａｃｏｓｔａ，  Ｃ．  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，  Ａ．Ｏｒｔｅｇａ，  Ａ．  Ｌｏｐｅｚ，  Ｒ．  Ａｒａｉｚａ−Ｃａｓｉｌｌａｓ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ｇｅｎｅ  ａｒｒａｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｒａｔ  ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ６８  （２００８）
４３−５７．
［４９］  Ｇ．Ｊ．  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，  Ｄ．Ａ．  Ｃａｒｓｏｎ，  Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ，  ５  Ｓｕｐｐｌ  ４  （２００３）  Ｓｌ−６．
［５０］  Ｌ．  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｇａｍｂｏａ，  Ｈ．Ｐ．  Ｂｒｅｚｉｎｓｃｈｅｋ，  Ｇ．Ｒ．  Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ，  Ｔ．  Ｄｏｒｎｅｒ，  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ，  ５  （２００６）  ４３７−４４２．
［５１］  Ｓ．  Ｂｌｕｍｌ，  Ｋ．  ＭｃＫｅｅｖｅｒ，  Ｒ．  Ｅｔｔｉｎｇｅｒ，  Ｊ．  Ｓｍｏｌｅｎ，  Ｒ．  Ｈｅｒｂｓｔ，  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ，  １５  Ｓｕｐｐｌ  １  （２０１３）  Ｓ４．
［５２］  Ａ．  Ｖａｎｃｓａ，  Ｚ．  Ｓｚａｂｏ，  Ｓ．  Ｓｚａｍｏｓｉ，  Ｎ．  Ｂｏｄｎａｒ，  Ｅ．  Ｖｅｇｈ，  Ｌ．  Ｇｅｒｇｅｌｙ，  Ｇ．  Ｓｚｕｃｓ，  Ｓ．  Ｓｚａｎｔｏ，  Ｚ．  Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，  Ｌｏｎｇｔｅｒｍ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｏｎ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ｆｏｒ  Ｍｏｒｅ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ，  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，  ４０  （２０１３）  ５６５−５７１．
［５３］  Ｔ．Ｗ．  ＬｅＢｉｅｎ，  Ｔ．Ｆ．  Ｔｅｄｄｅｒ，  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ：  ｈｏｗ  ｔｈｅｙ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，  Ｂｌｏｏｄ，  １１２  （２００８）  １５７０−１５８０．
［５４］  Ｙ．  Ｎａｉｔｏ，  Ｈ．  Ｔａｋｅｍａｔｓｕ，  Ｓ．  Ｋｏｙａｍａ，  Ｓ．  Ｍｉｙａｋｅ，  Ｈ．  Ｙａｍａｍｏｔｏ，  Ｒ．  Ｆｕｊｉｎａｗａ，  Ｍ．  Ｓｕｇａｉ，  Ｙ．  Ｏｋｕｎｏ，  Ｇ．  Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ，  Ｔ．  Ｙａｍａｊｉ，  Ｙ．  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  Ｓ．  Ｉｔｏｈａｒａ，  Ｔ．  Ｋａｗａｓａｋｉ，  Ａ．  Ｓｕｚｕｋｉ，  Ｙ．  Ｋｏｚｕｔｓｕｍｉ，  Ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｍａｒｋｅｒ  ＧＬ７  ｐｒｏｂｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｎ−ｇｌｙｃｏｌｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ  ａｃｉｄ，  ａ  ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，  ２７  （２００７）  ３００８−３０２２．
［５５］  Ｇ．  Ｇｏｔｅｒｉ，  Ｇ．  Ｌｕｃａｒｉｎｉ，  Ａ．  Ｚｉｚｚｉ，  Ａ．  Ｃｏｓｔａｇｌｉｏｌａ，  Ｆ．  Ｇｉａｎｔｏｍａｓｓｉ，  Ｄ．  Ｓｔｒａｍａｚｚｏｔｔｉ，  Ｃ．  Ｒｕｂｉｎｉ，  Ｐ．  Ｌｅｏｎｉ，  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｍａｒｋｅｒｓ  ＣＤ  １０，  ＢＣＬ６  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  （ＨＧＡＬ）  ｉｎ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，  Ｄｉａｇｎ  Ｐａｔｈｏｌ，  ６  （２０１１）  ９７．
［５６］  Ｍ．  Ｅｒｌａｎｓｏｎ，  Ｅ．  Ｇｒｏｎｌｕｎｄ，  Ｅ．  Ｌｏｆｖｅｎｂｅｒｇ，  Ｇ．  Ｒｏｏｓ，  Ｊ．  Ｌｉｎｄｈ，  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍａｒｋｅｒｓ  ＣＤ２３  ａｎｄ  ＣＤ６９  ｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ，  ６０  （１９９８）  １２５−１３２．
［５７］  Ｊ．Ｗ．  Ｇｒｅｇｅｒｓｅｎ，  Ｄ．Ｒ．  Ｊａｙｎｅ，  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｕｐｕｓ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｐｈｒｏｌ，  ８  （２０１２）  ５０５−５１４．
［５８］  Ｅ．  Ｃｈｏｙ，  Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｄｙｎａｍｉｃｓ：  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （Ｏｘｆｏｒｄ），  ５１  Ｓｕｐｐｌ  ５  （２０１２）  ｖ３−ｌ  １．
［５９］  Ｄ．  Ｃｏｒｎｅｃ，  Ｖ．  Ｄｅｖａｕｃｈｅｌｌｅ−Ｐｅｎｓｅｃ，  Ｇ．Ｊ．  Ｔｏｂｏｎ，  Ｊ．Ｏ．  Ｐｅｒｓ，  Ｓ．  Ｊｏｕｓｓｅ−Ｊｏｕｌｉｎ，  Ａ．  Ｓａｒａｕｘ，  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：  ｆｒｏｍ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，  Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ，  ３９  （２０１２）  １６１−１６７．
［６０］  Ｍ．Ｒ．  Ｓｍｉｔｈ，  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  （ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ａｎｔｉｂｏｄｙ）：  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  ２２  （２００３）  ７３５９−７３６８．
［６１］  Ｍ．  Ｒｅｈｎｂｅｒｇ，  Ｓ．  Ａｍｕ，  Ａ．  Ｔａｒｋｏｗｓｋｉ，  Ｍ．Ｉ．  Ｂｏｋａｒｅｗａ，  Ｍ．  Ｂｒｉｓｓｌｅｒｔ，  Ｓｈｏｒｔ−  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｏｎｔｏｇｅｎｙ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ，  １１  （２００９）  Ｒ１２３．
［６２］  Ｊ．Ｆ．  Ｈａｅｕｗ，  Ｌ．  Ｇｏｅｔｓｃｈ，  Ｃ．  Ｂａｉｌｌｙ，  Ｎ．  Ｃｏｒｖａｉａ，  Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ＣＤ  １５１  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ，  ３９  （２０１１）  ５５３−５５８．
［６３］  Ｋ．  Ｓａｗａｄａ，  Ｍ．  Ｈｉｒｏｋａｗａ，  Ｎ．  Ｆｕｊｉｓｈｉｍａ，  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｐｕｒｅ  ｒｅｄ  ｃｅｌｌ  ａｐｌａｓｉａ，  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ，  ２３  （２００９）  ２４９−２５９．
［６４］  Ｂ．  Ｈａｒａｌｄｓｓｏｎ，  Ｊ．  Ｎｙｓｔｒｏｍ，  Ｗ．Ｍ．  Ｄｅｅｎ，  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｂａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｕｒｉａ，  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ，  ８８  （２００８）  ４５１−４８７．
［６５］  Ｊ．Ｅ．  Ｓｕｒｆｕｓ，  Ｊ．Ａ．  Ｈａｎｋ，  Ｅ．  Ｏｏｓｔｅｒｗｉｊｋ，  Ｓ．  Ｗｅｌｔ，  Ｍ．Ｊ．  Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，  Ｍ．Ｒ．  Ａｌｂｅｒｔｉｎｉ，  Ｊ．Ｈ．  Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，  Ｐ．Ｍ．  Ｓｏｎｄｅｌ，  Ａｎｔｉ−ｒｅｎａｌ−ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｇ２５０  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｅｍｐｈａｓｉｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １９  （１９９６）  １８４−１９１．
［６６］  Ａ．Ｂ．  ｖａｎ  Ｓｐｒｉｅｌ，  Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍｏｒａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ，  ３９  （２０１１）  ５１２−５１７．
［６７］  Ｐ．Ｋ．  Ｍａｔｔｉｌａ，  Ｃ．  Ｆｅｅｓｔ，  Ｄ．  Ｄｅｐｏｉｌ，  Ｂ．  Ｔｒｅａｎｏｒ，  Ｂ．  Ｍｏｎｔａｎｅｒ，  Ｋ．Ｌ．  Ｏｔｉｐｏｂｙ，  Ｒ．  Ｃａｒｔｅｒ，  Ｌ．Ｂ．  Ｊｕｓｔｅｍｅｎｔ，  Ａ．  Ｂｒｕｃｋｂａｕｅｒ，  Ｆ．Ｄ．  Ｂａｔｉｓｔａ，  Ｔｈｅ  ａｃｔｉｎ  ａｎｄ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ  ｏｒｇａｎｉｚｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｎａｎｏｃｌｕｓｔｅｒｓ  ｔｏ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  ３８  （２０１３）  ４６１−４７４．
［６８］  Ａ．Ｂ．  ｖａｎ  Ｓｐｒｉｅｌ，  Ｓ．  ｄｅ  Ｋｅｉｊｚｅｒ，  Ａ．  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｓｃｈａａｆ，  Ｋ．Ｈ．  Ｇａｒｔｌａｎ，  Ｍ．  Ｓｏｆｉ，  Ａ．  Ｌｉｇｈｔ，  Ｐ．Ｃ．  Ｌｉｎｓｓｅｎ，  Ｊ．Ｂ．  Ｂｏｅｚｅｍａｎ，  Ｍ．  Ｚｕｉｄｓｃｈｅｒｗｏｕｄｅ，  Ｉ．  Ｒｅｉｎｉｅｒｅｎ−Ｂｅｅｒｅｎ，  Ａ．  Ｃａｍｂｉ，  Ｆ．  Ｍａｃｋａｙ，Ｄ．Ｍ．  Ｔａｒｌｉｎｔｏｎ，  Ｃ．Ｇ．  Ｆｉｇｄｏｒ，  Ｍ．Ｄ．  Ｗｒｉｇｈｔ，  Ｔｈｅ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ＣＤ３７  ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅｓ  ｔｈｅ  ａｌｐｈａ（４）ｂｅｔａ（ｌ）  ｉｎｔｅｇｒｉｎ−Ａｋｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｘｉｓ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｏｒｔｓ  ｌｏｎｇ−ｌｉｖｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ，  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ，  ５  （２０１２）  ｒａ８２．
［６９］  Ｓ．Ｈ．  Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，  Ｅ．  Ｏｄｉｎｔｓｏｖａ，  Ｔ．Ａ．  Ｈａｉｇｈ，  Ａ．Ｂ．  Ｒｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｇ．Ｓ．  Ｔａｙｌｏｒ，  Ｆ．  Ｂｅｒｄｉｔｃｈｅｖｓｋｉ，  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ  ＣＤ６３  ｉｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｖｉａ  ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ４１  （２０１１）  ２５５６−２５６１．
【００９５】
単数形の名詞は請求項及び明細書の何れで用いた場合も特筆しないかぎり、複数形の意味も含める。
【００９６】
本発明は好ましい実施例を用いて説明を行ったが、本発明の原理及び範囲から外れることなく当業者が容易に理解可能な修正及び変更を用いることができることが理解されるものとする。従って、そのような修正は本発明及び以下の請求項の範囲内で実施され得る。
【図１】
2016506411.tif 000005
【図２】
2016506411.tif 000006
【図３】
2016506411.tif 000007
【図４−１】
2016506411.tif 000008
【図４−２】
2016506411.tif 000009
【図５】
2016506411.tif 000010
【図６】
2016506411.tif 000011
【図７−１】
2016506411.tif 000012
【図７−２】
2016506411.tif 000013
【図８】
2016506411.tif 000014
【配列表】
2016506411000001.app
【国際調査報告】
2016506411.tif 000015