(57)【要約】  本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。【図１】2016534091.tif 000049
2016534091.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
にきびを治療するための医薬品の製造における、ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項２】
にきびを治療するための医薬品の製造における、ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種のその薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物の使用。
【請求項３】
患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するための医薬品の製造における、ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項４】
患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するための医薬品の製造における、ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種のその薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物の使用。
【請求項５】
にきびを治療するための医薬品の製造における、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項６】
にきびを治療するための医薬品の製造における、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種のその薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物の使用。
【請求項７】
患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するための医薬品の製造における、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項８】
患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するための医薬品の製造における、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種のその薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害薬またはそのような阻害薬を含有する医薬組成物を使用して、尋常性ざそう（にきび）の進行を治療および／または予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
尋常性ざそうは、面皰、炎症性丘疹、膿疱、結節および嚢胞を含む一連の皮膚病変からなる。この疾患は、病変重症度および解剖学的病変分布に応じて、軽症、中程度または重症と分類される。疾患発生は典型的には、アンドロゲンレベルの上昇が引き金となる皮脂産生の増大により、思春期に生じる。青年の約９０％が、にきびに罹患し、１５％が医学的治療を求め；さらに、この疾患は、若年成人（１８〜２８歳）の２３〜３５％において蔓延し続ける。生物学的には、にきびは、（ａ）過剰な皮脂産生；（ｂ）管閉塞をもたらす異常なケラチン産生細胞の増殖および剥離；（ｃ）アクネ菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ（Ｐ．ａｃｎｅｓ））の増殖；および（ｄ）炎症を含むいくつかの識別可能な特徴を有する毛嚢脂腺管の炎症性疾患と考えられる。これらの因子は、多くの場合に、相互依存的である。例えば、アンドロゲンレベルの上昇は、上皮剥離および濾胞閉塞につながり、さらには、過剰な皮脂産生によって、閉塞した濾胞が脂質で埋まって、面皰を形成することとなる。次いで、この過剰な皮脂は、アクネ菌（Ｐ．ａｃｎｅｓ）のための基質として役立ち、この細菌は、皮脂を代謝して遊離脂肪酸を放出し、その遊離脂肪酸が、細菌複製および炎症をさらに促進する。複数の因子が、この障害の病因に寄与しているが、皮脂がアクネ菌（Ｐ．ａｃｎｅｓ）のための栄養素供給源として役立つので、にきびは、皮脂が存在しなければ起こり得ない（ＳｍｉｔｈおよびＴｈｉｂｏｕｔｏｔ、２００８）。
【０００３】
にきびに関する現行の標準治療は、軽度から中等度の疾患では局所療法を、中等度から重度の疾患では全身療法を含む。これらの現行の療法は、わずかばかり有効であるか、または幅広く使用するための適切な安全性プロファイルを欠いているかのいずれかである。局所にきび治療は、レチノイド、局所抗生物質、過酸化ベンゾイルおよびそれらの組合せを含む。全身治療は、ホルモン療法、経口抗生物質およびイソトレチノイン（Ａｃｃｕｔａｎｅ）を含む（Ｄａｗｓｏｎら）。経口避妊薬およびアンドロゲン受容体遮断薬を含むホルモン療法は、わずかな有効性で、中等度から重度のにきびを治療するために女性患者において使用されている。ドキシサイクリン、ミノシクリン、テトラサイクリンおよびエリスロマイシンを含む経口抗生物質も、特に、アクネ菌（Ｐ．ａｃｎｅｓ）耐性のパターンに対して適合する場合には、にきびを治療する際にわずかに有効であるが；感光性および消化管障害によって、それらの使用は限定される（Ｇａｎｎｏｎ  ２０１１）。イソトレチノインは、いくつかの深刻な有害作用を示す。この薬剤は、胎児危険度分類Ｘの催奇形性警告に該当し、特別な処方注意および日常的な妊娠検査を必要とする。加えて、イソトレチノインは、姑息的ケアで適切に管理されなければ、用量限定的となり得る重度の粘膜皮膚の許容問題（乾燥した皮膚、眼、鼻腔、唇など）の原因となる。イソトレチノイン治療は、有害な血漿脂質変化（ＴＧ、ＬＤＬの増大）および肝毒性（ＡＬＴ／ＡＳＴの上昇）に関連しており、治療前に肝機能検査を必要とする。加えて、イソトレチノイン療法は、筋肉痛（患者の５０％がＣＫレベルの上昇を示す）、靱帯の石灰化および有害な眼作用（夜間視力の喪失、色覚の喪失および眼の乾燥）にも関連している。個別の症例では、イソトレチノインは、うつ病、精神病および自殺の可能性を含む神経学的／心理学的有害作用に関連している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、好ましい有効性／安全性プロファイルでにきびを治療する新規のアプローチの必要性が存在する。本発明は、ＡＣＣ阻害薬の使用を含む、にきびを治療するための新たな治療アプローチを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０００６】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】健常ヒト対象における、皮脂脂質中のパルミタートに対する、および循環脂質（ＶＬＤＬトリグリセリド）に対する新規合成パルミタートの寄与率を経時的に示すグラフである。
【図２】ヒトＳＺ９５脂腺細胞系における、ビヒクルと比較した実施例１（三角形）および実施例３（円形）による新規脂質生成の阻害を示すグラフである。
【図３】ヒトＳＺ９５脂腺細胞系における、ビヒクルと対比しての実施例３による皮脂脂質への１４Ｃ−アセタート組み込みの阻害を示す図である。皮脂脂質種を、薄層クロマトグラフィーによって分離し、オートラジオグラフィーを使用して可視化した。
【図４】ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）を使用して評価した場合の、実施例１（２００ｍｇ  ＢＩＤ）またはプラセボで１４日間処置された健常ヒトボランティアにおける脂質産生を示すグラフである。データは、基線測定値と比較して表されている。
【図５Ａ】実施例１（２００ｍｇ  ＢＩＤ）またはプラセボで１４日間処置された健常ヒトボランティアにおけるトリアシルグリセロールの変化を示すグラフである。個々の対象データについて、実線は、実施例１処置を表し、破線または点線は、プラセボ処置を表す。
【図５Ｂ】実施例１（２００ｍｇ  ＢＩＤ）またはプラセボで１４日間処置された健常ヒトボランティアにおける遊離脂肪酸の変化を示すグラフである。個々の対象データについて、実線は、実施例１処置を表し、破線または点線は、プラセボ処置を表す。
【図５Ｃ】実施例１（２００ｍｇ  ＢＩＤ）またはプラセボで１４日間処置された健常ヒトボランティアにおけるワックス状エステルの変化を示すグラフである。個々の対象データについて、実線は、実施例１処置を表し、破線または点線は、プラセボ処置を表す。
【図６】経口投与ＡＣＣ阻害薬（例８、１００ｍｇ／ｋｇ）および局所投与ＡＣＣ阻害薬（実施例３、１００ｍｇ／ｍｌ）で処置されたＳｙｒｉａｎハムスターにおける耳皮膚マロニル−ＣｏＡレベルの阻害を示すグラフである。
【図７】Ｓｙｒｉａｎハムスターにおける、皮脂および循環脂質（トリグリセリド）に対するＤＮＬの寄与率を経時的に示すグラフである。
【図８】経口投与ＡＣＣ阻害薬（例８、１００ｍｇ／ｋｇ）および局所投与ＡＣＣ阻害薬（実施例３、１００ｍｇ／ｍｌ）で処置された雄のＳｙｒｉａｎ  Ｇｏｌｄハムスターにおける、耳皮膚および肝臓での新規脂質生成の阻害を示すグラフである。
【図９】Ｓｙｒｉａｎハムスターにおける、耳皮膚トリグリセリドレベルに対する経口投与ＡＣＣ阻害薬（例８、３０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルの長期（１９日間）１日１回処置の影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
アセチル−ＣｏＡからマロニル−ＣｏＡへの変換を触媒するＡＣＣは、脂質代謝の調節において重要な役割を果たす。ＡＣＣは、脂肪酸の新規合成において必須の律速ステップであり、長鎖脂肪酸の酸化を調節する。「新規脂質生成」、「ＤＮＬ」および「新規脂肪酸合成」という用語は、非脂質ベースの供給源からの脂肪酸の合成を称するために使用されている。関係の近い２種のアイソフォーム、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２が存在する。ＡＣＣ阻害は、２型糖尿病および肥満を治療する潜在的な機構として関心が持たれてきた（Ｈａｒｗｏｏｄ、２００５；  Ｃｏｒｂｅｔｔ  ２００９）。
【００１２】
ＡＣＣ阻害薬は、皮脂含有率の低下と一致して、ラットおよびイヌにおける皮脂腺の形態学的変化をもたらす。
【００１３】
ラットおよびイヌにおける前臨床ｉｎ  ｖｉｖｏ研究の過程において、複数のＡＣＣ阻害薬が、皮脂腺の脂質／皮脂含有率の低下と一致して、脂腺細胞の顕微鏡形態学的変化を誘発することが発見された。これらの観察に基づき、ＡＣＣ阻害薬は、脂肪酸の新規合成の阻害によって、ラットおよび犬における皮脂脂質産生を低減し得ると仮定された。皮脂は、トリグリセリド（３０〜５０％）、ワックス状エステル（２６％〜３０％）、遊離脂肪酸（１５〜３０％）、スクアレン（１２〜２０％）、コレステロールエステル（３％〜６％）および遊離コレステロール（１．５〜２．５％）からなる脂質の複雑な混合物である（Ｏｔｔａｖｉａｎｉら、２０１０）。これらの脂質クラスのうち、トリグリセリド、ワックス状エステル、遊離脂肪酸およびコレステロールエステルはすべて、脂肪酸を含有するか、またはそれからなる。皮脂産生速度の上昇は、にきびの発生および重症度の両方に関連している（Ｊａｎｉｃｚｅｋ−Ｄｏｌｐｈｉｎら、２０１０）。ヒト皮脂腺が、新規脂肪酸合成可能であることは知られているが（ＤｏｗｎｉｅおよびＫｅａｌｅｙ、１９９８）、皮脂生合成のための、脂腺細胞内でのこの経路と、外因性循環脂肪酸の使用との相対的重要性は知られていない。
【００１４】
ヒトにおける皮脂生合成は、脂腺細胞ＤＮＬに高度に依存している
ヒトにおける皮脂産生に対する新規脂肪酸合成の定量的重要性を明瞭にするために、臨床的同位体標識研究が行われた。質量アイソトポマー分布分析（ＭＩＤＡ）は、生物学的ポリマーの合成を測定するための技術であり、脂質、炭水化物およびタンパク質の合成を測定するために使用されてきた（ＨｅｌｌｅｒｓｔｅｉｎおよびＮｅｅｓｅによる総説、１９９９）。この方法は、安定同位体標識前駆体を導入し、質量分析法を使用して、質量においてのみ異なるポリマー（質量アイソトポマー）の分子種の相対的存在量を定量化することを含む。新規パルミタート合成を、記載（Ｊｏｎｅｓ、１９９６；Ｌｅｅ  ら、１９９４）されたとおりにガスクロマトグラフィー／質量分析法によって測定されたパルミタート脂肪酸メチルエステルへの投与重水素の組み込みから計算する。単離脂質中の重水素標識パルミタートの割合を使用して、総パルミタートプールに対するＤＮＬの寄与分が計算された。
【００１５】
対象は、１８歳から４９歳の間の男性または女性の健常なボランティアであった。全研究期間は、１４日間であった。対象は、体内全水分プールの約１．５％までの濃縮を達成するために、経口負荷量の重水素標識水（２Ｈ２Ｏ）を１日目に投与された。対象は、この濃縮を定常状態に維持するために、１４日目まで１日１回、経口用量の２Ｈ２Ｏを摂取し続けた。皮脂脂質プールに対するＤＮＬの定常状態寄与の概算を可能にするために、４、７、１１および１４日目に、Ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）（Ｋｌｉｇｍａｎら、１９８６）を使用して、対象の顔の額および頬の上の皮膚から、皮脂を収集した。加えて、重水濃縮を測定し、循環脂質（すなわち、ＶＬＤＬ中のパルミタート）に対するＤＮＬの寄与を評価するために、４日目、７日目、１１日目および１４日目に、各対象から、血漿を収集した。皮脂と対比しての循環脂質に対するＤＮＬの寄与の比較を使用して、皮脂腺内の新規脂肪酸合成の重要性を明瞭にした。循環脂肪酸が複雑な脂質生合成のための主要な供給源として使用される場合の脂質プールに対するＤＮＬの寄与は、循環脂肪酸に対するＤＮＬの寄与を映し出すはずである。器官特異的ＤＮＬが有意な役割を果たしている場合には、対照的に、脂質プールに対するＤＮＬの寄与は、循環脂質に対する寄与よりも高いはずである。
【００１６】
他のヒト脂質プールとは対照的に（Ｈｅｌｌｅｒｓｔｅｉｎ、１９９９）、ヒト皮脂産生は、新規脂肪酸合成に高度に依存していることが見出され、皮脂中に含有される脂肪酸の約８０％がこの経路に由来した（図１）。加えて、皮脂脂質に対するＤＮＬの寄与は、循環脂質（ＶＬＤＬ）に対するＤＮＬの寄与よりも著しく高く（図１）、皮脂腺内のＤＮＬは、ヒトにおける皮脂生合成に対する主要な寄与因子であることを実証していた。この観察は、２つの理由によって予想されていなかった。第１に、ＤＮＬは、ヒトにおいて、脂質ホメオスターシスに対する寄与においてわずかな役割しか果たしていないと考えられ（Ｈｅｌｌｅｒｓｔｅｉｎ、１９９９）、第２に、脂腺細胞内でのＤＮＬは、皮脂産生のために最も一般的に使用される前臨床モデルであるＳｙｒｉａｎハムスター耳皮膚モデル（下記参照）において、皮脂生合成についてあまり重要ではない。
【００１７】
ＡＣＣ阻害薬は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト脂腺細胞ＤＮＬを抑制する
増大した皮脂産生速度は、重症の尋常性ざそうとかなり相関している（Ｚｏｕｂｏｕｌｉｓ、２００４）。皮脂産生を抑制する治療は、測定される皮脂の低減に正比例して、にきび病変を低減することが示されている（Ｊａｎｉｃｚｅｋ−Ｄｏｌｐｈｉｎ、２０１０）。皮脂脂質に対するＤＮＬの高い寄与分を実証する新規の生物学データは、ＤＮＬを抑制することができる薬剤は、皮脂生合成を低減し得ることを示唆した。ヒト脂腺細胞においてＤＮＬをモジュレートするＡＣＣ阻害の能力を査定するために、皮脂脂質への１４Ｃ−アセタート組み込みを抑制する複数のＡＣＣ阻害薬の影響を、ＳＺ９５ヒト脂腺細胞において査定した（Ｚｏｕｂｏｕｌｉｓら、１９９９）。実施例１は、細胞、前臨床種および健常ヒトボランティアにおいてＤＮＬを用量依存的に抑制した選択的二重ＡＣＣ１／ＡＣＣ２阻害薬である。図２は、ヒトＳＺ９５脂腺細胞における、ＤＮＬの阻害に対する、ビヒクルと比較した実施例１および実施例３の効果を示している。図３は、ヒトＳＺ９５脂腺細胞における皮脂脂質種への１４Ｃ−アセタートの組み込みの抑制に対する、実施例３対ビヒクルの効果を図示している。脂質種を薄層クロマトグラフィーによって分離した。実施例３は、脂肪酸（コレステロールエステル、トリグリセリド、遊離脂肪酸、ジグリセリド、モノグリセリドおよびリン脂質）を含有するか、またはそれらからなるＳＺ９５細胞脂質種への１４Ｃ−アセタートの組み込みの明らかな阻害をもたらしたが、新規脂肪酸合成に依存しない遊離コレステロールへの１４Ｃ−アセタートの組み込みは改変せず、実施例３（図３）の作用機序の特異性を実証した。
【００１８】
複数の他のＡＣＣ阻害薬を、ＳＺ９５ヒト脂腺細胞系において査定した。表１に、このヒト脂腺細胞系におけるＡＣＣ阻害薬でのＤＮＬの抑制をまとめている。このアッセイは、ｉｎ  ｖｉｖｏで皮脂産生をおそらく阻害するＡＣＣ阻害薬を同定する際に有用性を有し得る。酵素ＩＣ５０と脂腺細胞ＤＮＬ  ＥＣ５０との間の１対１相関は、細胞透過性、タンパク質結合および／または脂質溶解性に影響を及ぼし得る物理的特性の差異によって、必ずしも予測されない。
【００１９】
実施例１は、健常ヒトボランティアにおいて皮脂産生を阻害する
皮脂産生を、実施例１  ２００ｍｇ  ＢＩＤまたはプラセボ（ＰＢＯ）で処置された健常ヒトボランティアにおいて評価した。Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）（Ｃｏｕｒａｇｅ  ＋  Ｋｈａｚａｋａ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ、Ｃｏｌｏｇｎｅ、ドイツ）によって測定すると、この用量の実施例１は、健常なボランティアにおいて、基線（ＰＢＯ調整）から４９％、皮脂の産生を低減した（図４）。Ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）を使用して、基線で、かつ研究の終了時に収集された皮脂からの具体的な脂質クラスの分析によって、皮脂における主要な脂質クラスである皮脂トリグリセリドが、６６％（ＰＢＯ調整）低下したことが実証された（図５）。同じくＤＮＬに依存している皮脂遊離脂肪酸およびワックス状エステルのレベルも、実施例１処置対象において低減した（図５）。対照的に、遊離コレステロール（ＤＮＬに依存しない）は、ＰＢＯと比較して変化を示さなかった（データは図示せず）。同じくＤＮＬに依存しないスクアレンレベルは、ＰＢＯに対して２．６倍の上昇を示した。スクアレンは皮脂の少量成分であるので、Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）によって評価した場合の総皮脂レベルは、スクアレンのこの増大にも関わらず、明らかな低減を示した（図４）。実施例１は、ＤＮＬに高度に依存する脂肪酸種を含有するか、またはそれからなる皮脂脂質のレベルを選択的に抑制するが、ＤＮＬに依存しない皮脂脂質は抑制しないという観察は、皮脂産生を阻害するための機構の特異性を実証している。
【００２０】
ＡＣＣ阻害は、（１）新規合成脂肪酸が、ヒト皮脂脂質中の脂肪酸の約８０％を占め、（２）ヒト皮脂脂質（トリグリセリド、遊離脂肪酸、ワックス状エステルおよびコレステロールエステルを含む）の約７５％〜９５％が、脂肪酸を含有するか、またはそれからなり、（３）ＡＣＣ活性が、脂肪酸の新規合成に必須であり、（４）ＡＣＣ阻害薬が、ヒト由来ＳＺ９５脂腺細胞においてＤＮＬを抑制し、かつ（５）実施例１が、ヒトボランティアにおいて皮脂産生を低減するという観察に基づき、皮脂産生を低減することによって、にきびを治療する新たな機会を提供する。
【００２１】
皮脂産生のために最も一般的に使用される前臨床モデルであるハムスター耳皮膚モデルから、ヒトにおける皮脂産生に対するＡＣＣ阻害の効果は予想されていなかった
Ｓｙｒｉａｎハムスター耳モデル（ＰｌｅｗｉｇおよびＬｕｄｅｒｓｃｈｍｉｄｔ、１９７７）は、皮脂腺に対する薬物効果を測定するために最も一般的に使用されるｉｎ  ｖｉｖｏモデルである。Ｓｙｒｉａｎハムスターの耳垂の腹側が高密度の皮脂腺を有するので、このモデルは、一般に使用されている。さらに、これらの腺は、大きく、漏斗状部、皮脂管、複数の小葉、および下から腺へと進入する毛髪単位を有するヒト皮脂小胞と構造的に類似しているので、このモデルはヒトへと推定的に転換される（ＰｌｅｗｉｇおよびＬｕｄｅｒｓｃｈｍｉｄｔ、１９７７）。このモデルはまた、経口Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）を含む複数の薬剤で、確証されている（Ｇｅｉｇｅｒ、１９９５）。
【００２２】
このモデルにおいて、ＡＣＣ活性を抑制するＡＣＣ阻害薬の能力を評価するために、耳皮膚におけるマロニル−ＣｏＡレベルを阻害する、強制経口投与によって投与される例８、および局所投与される実施例３の効果を、化合物で単回処置してから１時間後に評価した（図６）。マロニル−ＣｏＡは、ＡＣＣの直接的な酵素生成物であり、マロニル−ＣｏＡの測定は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＡＣＣ阻害のバイオマーカーとして使用されてきた（Ｈａｒｗｏｏｄら、２００３；Ｇｌｕｎｄら、２０１２；Ｆｒｅｅｍａｎ−Ｃｏｏｋら、２０１２）。経口投与された例８、および局所投与された実施例３は、ハムスター耳皮膚マロニル−ＣｏＡを、ビヒクル処置動物と比較して７９％および８７％抑制した。これらの観察は、経口投与された例８および局所投与された実施例３はそれぞれ、このモデルにおいて、ＡＣＣ活性を強力に阻害したことを実証している。
【００２３】
このモデルにおける、皮脂脂質生合成のための皮脂腺内でのＤＮＬの重要性を決定するために、２Ｈ２Ｏを、重水素を含む水分プールを濃縮するために投与した。血漿および耳皮膚を、１、４、７、１４および２０日目に収集した。皮脂脂質と対比しての、循環脂質に対するＤＮＬの寄与の比較を使用して、Ｓｙｒｉａｎハムスター皮脂腺内での新規脂肪酸合成の重要性を明瞭にした。循環脂肪酸が複雑な脂質生合成のための主要な供給源として使用される場合の脂質プールに対するＤＮＬの寄与は、循環脂肪酸に対するＤＮＬの寄与を映し出すはずである。器官特異的ＤＮＬが有意な役割を果たしている場合には、対照的に、脂質プールに対するＤＮＬの寄与は、循環脂質に対する寄与よりも高いはずである。定常状態での皮脂脂質に対するＤＮＬの寄与％は、このモデルでは中等度に高かったが（５５〜６０％）、皮脂に対するＤＮＬの寄与は、循環トリグリセリドに対してと同様であり、これは、Ｓｙｒｉａｎハムスター皮脂腺が、ヒト皮脂腺とは対照的に、皮脂生合成のために、脂腺細胞内で合成される脂肪酸ではなく、循環脂肪酸を主に利用していることを示している。
【００２４】
この仮説をさらに調べるために、皮脂へのＤＮＬ由来脂肪酸の組み込みの阻害に対する、経口投与された例８の効果をビヒクルと対比して、および局所投与された実施例３の効果をビヒクルと対比して、Ｓｙｒｉａｎハムスターモデルにおいて検査した。これらの化合物はそれぞれ、試験された用量で、皮膚においてＡＣＣ活性を強力に阻害することが見出された（耳皮膚マロニル−ＣｏＡレベルによって評価した場合）（図６）。局所投与された化合物は、塗布部位でのみＤＮＬを阻害し、全身的には阻害しないと予想されるが、経口投与された化合物は、ＤＮＬを全身的に阻害すると予測される。その結果、皮脂において見出されたＤＮＬ由来脂肪酸が、皮脂腺内で合成されるならば、経口および局所投与された化合物は両方とも、皮脂へのＤＮＬ由来脂肪酸の組み込みを抑制すると予測される。対照的に、ＤＮＬ由来脂肪酸が他の脂質生成臓器（例えば、肝臓）において合成され、循環によって皮脂腺に送達されるならば、経口投与された化合物のみが、皮脂へのＤＮＬ由来脂肪酸の組み込みを低減し、局所塗布された化合物は低減しないと予想される。
【００２５】
Ｓｙｒｉａｎハムスターを、単回用量の経口投与される例８および局所投与される実施例３で処置し、次いで、ＩＰボーラスの１４Ｃ標識アセタートで処置した。皮脂脂質へのＤＮＬ由来脂肪酸の組み込みを抑制する各化合物の効果を比較した。加えて、肝臓におけるＤＮＬに対する化合物の影響も評価した。経口投与された例８は、皮膚および肝臓の両方において、新規合成脂肪酸の組み込みを、それぞれ８４％および８５％抑制した（図８）。対照的に、局所投与された実施例３は、皮膚または肝臓のいずれかにおいて、新規合成脂肪酸の組み込みの阻害に失敗した（図８）。
【００２６】
マロニル−ＣｏＡ産生によって評価した場合に、両方の化合物が、ＡＣＣ活性を皮膚において≧７９％阻害することを示したので、これらの結果は、皮脂脂質における新規由来脂肪酸は、他で合成されて、循環によって皮脂腺に送達されたことを強く暗示している。肝臓においてＤＮＬを阻害する経口投与された例８の能力は、この仮説と一致したが、局所投与された実施例３は一致しなかった。まとめると、これらの観察は、ヒトとは対照的に、Ｓｙｒｉａｎハムスターは、皮脂産生のために、皮脂腺内で合成された脂肪酸ではなく、循環脂肪酸を主に利用するという仮説と一致している。
【００２７】
上記の所見は、Ｓｙｒｉａｎハムスターが、皮脂生合成のための皮脂腺ＤＮＬの重要性における差異の結果として、ＡＣＣ機構についてのヒト皮脂低減有効性を正確には予言しないことを示唆しているであろう。ヒトでは、皮脂脂肪酸の約８０％がＤＮＬに由来し、このＤＮＬは、皮脂腺において多く生じるようであるので、ＡＣＣ阻害薬の経口または局所投与は、皮脂腺におけるＤＮＬを抑制し、皮脂産生の低減につながるであろう。対照的に、皮脂生合成について、皮脂腺で合成される脂肪酸ではなく、循環脂肪酸に依存しているＳｙｒｉａｎハムスターでは、経口または局所ＡＣＣ阻害薬処置のいずれかでのｉｎ  ｖｉｖｏでの脂腺細胞に対する直接的な作用によって、皮脂産生の阻害を示さないであろう。
【００２８】
この仮説を試験するために、Ｓｙｒｉａｎハムスターを、経口投与される例８またはビヒクルで１日１回１９日間処置した。ＡＣＣ阻害薬処置動物またはビヒクル処置動物の間で、耳皮膚トリグリセリドレベルの変化は観察されなかった。この観察は、実施例１で処置されたヒト対象が皮脂トリグリセリドの６６％の低減を示すという観察と対照的である。
【００２９】
皮脂腺内でのＤＮＬの重要性の差異、およびヒトとＳｙｒｉａｎハムスターとの間での皮脂生合成の抑制に対するＡＣＣ阻害薬の影響における顕著な差異は、新規の皮脂低減機構を評価するために最も一般的に使用されている前臨床モデルが、ＡＣＣ阻害の利点を同定していなかったことを説明している。
【００３０】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｉ）
【００３１】
【化１】
2016534091.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立に選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、シアノまたは−Ｃ（＝ＮＨ）（ＯＣＨ３）であり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ４は、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールであり、上記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールはそれぞれ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミド、フェニル、５〜６員ヘテロアリールまたは５〜６員ヘテロシクリルから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい］
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００３２】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００３３】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００３４】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００３５】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００３６】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００３７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００３８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００３９】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００４０】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００４１】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００４２】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００４３】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００４４】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００４５】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００４６】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００４７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００４９】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００５０】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００５１】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００５２】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１’−（１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００５３】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１’−（１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００５４】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１’−（１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００５５】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１’−（１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００５６】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１’−（１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００５７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリルまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００５８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリルまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００５９】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリルまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００６０】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリルまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００６１】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリルまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００６２】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００６３】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００６４】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００６５】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００６６】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００６７】
次の式（Ｉ）の化合物：１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン；１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン；１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１’−（１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン；５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル；および１−イソプロピル−１’−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２８８，４０５において記載されているとおりに調製することができる。
【００６８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩ）
【００６９】
【化２】
2016534091.tif 000004
［式中、
Ｇは、
【００７０】
【化３】
2016534091.tif 000005
であり、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、
Ｒ２は、インドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニルまたはベンゾイミダゾリルであり、各Ｒ２基は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立に選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、Ｌは、直接結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、
Ｘは、直接結合、ＯまたはＳであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクリルであり、上記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクリルは、１〜３個のフルオロまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシで置換されていてもよい］
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００７１】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００７２】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００７３】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００７４】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００７５】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００７６】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００７７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００７８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００７９】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００８０】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【００８１】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００８２】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００８３】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００８４】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００８５】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００８６】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００８７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【００８８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【００８９】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００９０】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【００９１】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００９２】
別の実施形態では、本発明は、にきびを治療するための医薬品の製造における１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩の使用に関する。
【００９３】
別の実施形態では、本発明は、にきびを治療するための医薬品の製造における、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩とその少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物の使用に関する。
【００９４】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するための医薬品の製造における１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩の使用に関する。
【００９５】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するための医薬品の製造における、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩とその少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物の使用に関する。
【００９６】
次の式（ＩＩ）化合物：１−イソプロピル−１’−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン；１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン；および１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２８８，４０５号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６１９号において記載されている手順と同様の手順を使用して調製することができる。
【００９７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩＩ）
【００９８】
【化４】
2016534091.tif 000006
［式中、
Ｇは、
【００９９】
【化５】
2016534091.tif 000007
であり、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、
Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールであり、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルでである］
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１００】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１０１】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１０２】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１０３】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１０４】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１０５】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１０６】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１０７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１０８】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１０９】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（８−メトキシ−２−ナフトイル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１１１】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（８−メトキシ−２−ナフトイル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１１２】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（８−メトキシ−２−ナフトイル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１１３】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（８−メトキシ−２−ナフトイル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１１４】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（８−メトキシ−２−ナフトイル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１１５】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１１６】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１１７】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１１８】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１１９】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１２０】
次の式（ＩＩＩ）の化合物：２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；および２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（８−メトキシ−２−ナフトイル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０１０８６１９号において記載されているとおりに調製することができる。
【０１２１】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＶ）
【０１２２】
【化６】
2016534091.tif 000008
［式中、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、フルオロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはシアノであり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｌは、直接結合または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレンであり、上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレンの１個の炭素は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルによって置き換えられていてもよく、
Ｚは、ＣＨ２またはＯであり、
Ａ１およびＡ２は、それぞれ独立に、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールであり、上記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールは、それぞれ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノおよびアミドから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、上記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノのアルキル部分は、１〜５個のフルオロで置換されていてもよく、Ａ１またはＡ２の１個は、ＣＯ２Ｒ４、（Ｃ１〜Ｃ６）ＣＯ２Ｒ４、テトラゾリルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）テトラゾリルによって置換されており、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルである］
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１２３】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１２４】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１２５】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１２６】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１２７】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１２８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｖ）
【０１２９】
【化７】
2016534091.tif 000009
［式中、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、上記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立に選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、シアノまたは−Ｃ（＝ＮＨ）（ＯＣＨ３）であり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ４は、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールであり、上記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールはそれぞれ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミド、フェニル、５〜６員ヘテロアリールまたは５〜６員ヘテロシクリルから独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい］
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。本発明の好ましい実施形態は、Ｒ４が、フェニルもしくはナフチルから選択される（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、ピリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、トリアゾリル、インドリジニル、インダゾリル、ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、ピロロ［３，２−ｂ］ピリジニル、ピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジニル、ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジニル、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジニル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジニル、ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−オニル、１，６−ナフチリジニル、キノキサリニル、キノリン−４−オニルもしくはイソキノリン−１−オニルから選択される５〜１２員ヘテロアリール、または３，４−ジヒドロキノリン−２−オニルもしくはインドリン−２−オニルから選択される８〜１２員縮合複素環式アリールであり、各Ｒ４基が、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミド、フェニル、５〜６員ヘテロアリールまたは５〜６員ヘテロシクリルから独立に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【０１３０】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｖ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１３１】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｖ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１３２】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｖ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１３３】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｖ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１３４】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（Ｖ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１３５】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩ）
【０１３６】
【化８】
2016534091.tif 000010
｛式中、
Ｒ１は、シアノおよびメトキシから独立に選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、テトラヒドロフラニル、ベンジル、ピリジルまたはフェニルであり（好ましくは、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルまたはテトラヒドロフラニル、より好ましくは、エチル、イソプロピルまたはｔ−ブチル、最も好ましくは、ｔ−ブチルである）、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルであり（好ましくは、Ｒ２は、水素またはメチル、より好ましくは水素である）であり、
Ｒ３は、
【０１３７】
【化９】
2016534091.tif 000011
［式中、
Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ−Ｒ３ｃであり（好ましくは、Ｘは、ＯまたはＮ−Ｒ３ｃ、より好ましくは、Ｎ−Ｒ３ｃである）、
Ｙは、ＣＨ２またはＯであり（好ましくは、Ｙは、ＣＨ２である）、
Ｒ３ａは、水素またはメチルであり（Ｒ３ａは、好ましくは水素である）、
Ｒ３ｂは、水素、メチル、エチル、ハロ、メトキシまたはエトキシであり（Ｒ３ｂは、好ましくは、水素、メチル、メトキシ、クロロまたはフルオロであり、より好ましくは、Ｒ３が、式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）または（１ｆ）の化学部分である場合、Ｒ３ｂは、水素、メチルまたはクロロであり、Ｒ３が、式（１ｂ）、（１ｅ）、（１ｇ）、（１ｈ）、（１ｉ）、（１ｊ）、（１ｋ）、（１ｍ）、（１ｎ）、ｏｒ（１ｏ）の化学部分である場合、Ｒ３ｂは、水素である）、
Ｒ３ｃは、水素、メチル、エチルまたは３〜６員シクロアルキルであり（好ましくは、Ｒ３ｃは、水素またはメチルである）、
Ｒ３ｄは、水素、メチルまたはヒドロキシルであり（好ましくは、Ｒ３ｄは、水素である）、
Ｒ３ｅは、水素、メチル、エチル、ハロまたはアミノであり（好ましくは、Ｒ３ｅは、水素またはメチル、より好ましくは、水素である）、
Ｒ３ｆは、水素、メチルまたはメトキシであり（好ましくは、Ｒ３ｆは、水素である）、
Ｒ３ｇは、水素またはメトキシであり（好ましくは、Ｒ３ｇは、水素である）、
Ｒ３ｈは、水素、メチル、メトキシまたはハロであり（好ましくは、Ｒ３ｈは、水素である）、
Ｒ３ｉは、水素、メチルまたはメトキシであり（好ましくは、Ｒ３ｉは、水素である）、
Ｒ３ｊは、水素またはメトキシである（好ましくは、Ｒ３ｉは水素である）］
からなる群から選択される化学部分であり（好ましくは、Ｒ３は、式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）、（１ｆ）、（１ｉ）、（１ｊ）、（１ｋ）、（１ｌ）、（１ｍ）、（１ｎ）、（１ｏ）、（１ｐ）または（１ｑ）、より好ましくは、式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）、（１ｆ）、（１ｊ）または（１ｋ）の化学部分である）｝
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１３８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１３９】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１４０】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１４１】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１４２】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１４３】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１４４】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１４５】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１４６】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１４７】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１４８】
２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンは、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／１４４５５５において記載されている手順を使用して調製することができる。
【０１４９】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩＩ）
【０１５０】
【化１０】
2016534091.tif 000012
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３ハロアルコキシ、Ｃ１〜３アルキルスルホニル−、−ＣＯ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜３アルキルまたはフェニルであり、上記フェニルは、１〜５個のＲ１０で置換されていてもよく、各Ｒ１０は、独立に、ＯＨ、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキルまたはＣ１〜３ハロアルコキシであり、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、Ｈ、ＯＨ、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３ハロアルコキシ、Ｃ１〜３アルキルスルホニル−、−ＣＯ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２またはフェニルであり、上記フェニルは、１〜５個のＲ１０で置換されていてもよく、
Ｒ１１およびＲ１２は、別々に決定され、それぞれ独立に、ＨまたはＣ１〜３アルキルであるか、またはＲ１１およびＲ１２は、それらが結合している窒素と一緒になって、４〜７員ヘテロシクロアルキルを形成しており、
Ｒ４は、Ｈ、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルまたはＣ１〜３ハロアルキルであり、
（ｆ）Ｒ６は、別々に決定され、Ｈ、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキルまたはＣ１〜３ハロアルコキシであり、
Ｒ７は、別々に決定され、Ｈ、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキルまたはＣ１〜３ハロアルコキシであり、
Ｒ５は、別々に決定され、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜３ハロアルキル、またはＣ１〜３で置換されていてもよい４〜７員ヘテロアリールであるか、またはＲ５は、Ｒ６またはＲ７と一緒に、かつＲ５およびＲ６またはＲ７が結合しているフェニルと一緒に、多環式複素環式ラジカルを、少なくとも１個の窒素原子が上記フェニルの炭素原子に結合している窒素含有環と共に形成しており、上記窒素含有環は、シクロヘキセン、５，６−ジヒドロ−ピリジンまたは５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピリジン−２−オンに縮合していてもよく、上記窒素含有環は、１〜２個のオキソ、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３ハロアルコキシ、４〜７員ヘテロアリール、４〜７員ヘテロシクロアルキルまたはフェニルで独立に置換されていてもよく、上記フェニルは、１〜５個のＲ１０で置換されていてもよいが、ただし、Ｒ５は、Ｒ６と一緒にならずに、ベンゾトリアゾリルまたはベンゾオキサジアゾリルを形成しており、Ｒ５は、Ｒ７と一緒にならずに、ベンゾオキサジアゾリルを形成しており、
Ｒ８およびＲ９は、独立に、Ｈ、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキルまたはＣ１〜３ハロアルコキシである］
の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１５１】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１５２】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１５３】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１５４】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１５５】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の式（ＶＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１５６】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩に関する。
【０１５７】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物に関する
【０１５８】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１５９】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を経口投与するステップを含む方法に関する。
【０１６０】
別の実施形態では、本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を局所投与するステップを含む方法に関する。
【０１６１】
本発明は、患者においてにきびを治療および／または予防する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩と少なくとも１種の薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【０１６２】
別の実施形態では、本発明は、患者において皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
【０１６３】
別の実施形態では、本発明は、２種の異なるＡＣＣ阻害薬を含む医薬組合せに関する。
【０１６４】
別の実施形態では、本発明は、ＡＣＣ阻害薬および抗生物質、特に、ドキシサイクリン、ミノシクリン、テトラサイクリンおよびエリスロマイシンなどのアクネ菌（Ｐ．ａｃｎｅｓ）に対する抗生物質を含む医薬組合せに関する。
【０１６５】
別の実施形態では、本発明は、ＡＣＣ阻害薬および１種または複数の抗生物質、特に、ドキシサイクリン、ミノシクリン、テトラサイクリンおよび／またはエリスロマイシンなどのアクネ菌（Ｐ．ａｃｎｅｓ）に対する抗生物質を含む医薬組合せに関する。
【０１６６】
別の実施形態では、本発明は、ＡＣＣ阻害薬および経口避妊薬を含む医薬組合せに関する。
【０１６７】
別の実施形態では、本発明は、ＡＣＣ阻害薬およびアンドロゲン受容体遮断薬を含む医薬組合せに関する。
【０１６８】
別の実施形態では、本発明は、ＡＣＣ阻害薬およびレチノイドを含む医薬組合せに関する。
【０１６９】
別の実施形態では、本発明は、ＡＣＣ阻害薬および過酸化ベンゾイルを含む医薬組合せに関する。
【０１７０】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩、および１種の異なるＡＣＣ阻害薬を含む医薬組合せに関する。
【０１７１】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩、および抗生物質、特に、ドキシサイクリン、ミノシクリン、テトラサイクリンおよびエリスロマイシンなどのアクネ菌（Ｐ．ａｃｎｅｓ）に対する抗生物質を含む医薬組合せに関する。
【０１７２】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩、および経口避妊薬を含む医薬組合せに関する。
【０１７３】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩、およびアンドロゲン受容体遮断薬を含む医薬組合せに関する。
【０１７４】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩、およびレチノイドを含む医薬組合せに関する。
【０１７５】
別の実施形態では、本発明は、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩、および過酸化ベンゾイルを含む医薬組合せに関する。
【０１７６】
本発明は、患者において経口および／または局所投与によってにきびを治療するための、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる次の特許および公開特許出願：ＷＯ０３０７２１９７、ＷＯ１３０９８３７５、ＷＯ１３０９８３７３、ＷＯ１３０９２９７６、米国特許出願公開第２０１３５８００４号、ＷＯ１３０７９６６８、ＷＯ１３０７１１６９、ＷＯ１３０６１９６２、ＷＯ１３０３５８２７、ＷＯ１３０１７６００、ＷＯ１２１０８４７８、ＷＯ１２１０４４２８、ＷＯ１２０９０２１９、ＷＯ１２０７４１２６、米国特許出願公開第２０１２１２９８３３号、ＷＯ１２０５６３７２、ＷＯ１２０３２０１４、ＷＯ１２０２８６７６、ＷＯ１２０１３７１６、ＷＯ１２００１１０７、米国特許出願公開第２０１１２６３５６２号、ＷＯ１１１２９３９９、ドイツ特許第１０２０１０００８６４２号、ドイツ特許第１０２０１０００８６４３号、ＷＯ１１０９８４３３、ＷＯ１１０６７３０６、ＷＯ１０１２７２０８、ＷＯ１０１２７２１２、ＷＯ１００５０４４５、米国特許出願公開第２０１０１１３４７３号、日本特許第２０１００４３０１９号、ＷＯ１０００２０１０、米国特許出願公開第２００９２５３７２５号、日本特許第２００９１９６９６６号、ＷＯ０９０５５６８２、ＷＯ０９０２３０５９、ＷＯ０８１４０８２８、ＷＯ０８１２１５９２、ＷＯ０８１０２７４９、日本特許第２００８１７９６２１号、ＷＯ０８０９０９４４、ＷＯ０８０７９６１０、ＷＯ０８０７２８５０、ＷＯ０８０６９５００、ＷＯ０７１１９８３３、ＷＯ０７０９５６０３、ＷＯ０７０９５６０１、ＷＯ０７０９５６０２、ＷＯ０７０１３６９１、ＷＯ０６１１０７７５、米国特許出願公開第２００６１７８４００号、ＷＯ０６０１７４９４、米国特許出願公開第２００８０２６３６３号、ＷＯ０３０５９８８６、ＷＯ０３０５７２５５、米国特許第６４８５９４１号、ＷＯ０１３４２０２、日本特許第１１１７１８４７号、および日本特許第１１１７１８４８号において開示されているＡＣＣ阻害薬の使用を含む。
【０１７７】
定義
「ＡＣＣ阻害薬」という用語は、本明細書で使用する場合、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の両方を阻害する化合物を意味する。本明細書において開示するＡＣＣ１／ＡＣＣ２アッセイを使用して、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２に対する化合物の阻害活性（ＩＣ５０）を立証することができる。ＡＣＣ１およびＡＣＣ２アッセイにおいて約１０μＭ未満のＩＣ５０を有する化合物が、ＡＣＣ阻害薬と判断される。好ましいＩＣ５０は、両方のアッセイにおいて約１μＭ未満であり、特に好ましいＩＣ５０は、両方のアッセイにおいて約０．１μＭ未満である。加えて、本発明のＡＣＣ阻害薬は、他の酵素、Ｇタンパク質共役受容体またはイオンチャンネルと比較して、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２を選択的に阻害する。本発明によって企図されている化合物は、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２を阻害するために必要な濃度を超える濃度で、他の酵素を阻害するか、または受容体もしくはイオンチャンネルに結合する（Ｋｉ）。好ましいＡＣＣ阻害活性は、他の酵素、受容体またはイオンチャンネルでのＩＣ５０またはＫｉの約２〜１０倍超であり、１０〜１００倍がより好ましく、１００倍超が、特に好ましい。
【０１７８】
「実施例１」という用語は、本明細書で使用する場合、１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンを意味し、互変異性体の１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたはその組合せを含む。実施例１は、米国特許第８，２８８，４０５号において記載されている手法と同様の手法で調製することができる。
【０１７９】
「患者」という用語は、本明細書で使用する場合、ヒトを意味する。
【０１８０】
「薬学的に許容できる塩」という用語は、本明細書で使用する場合、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などを伴うことなく、適正な医学的判断の範囲内で、患者および下位動物の組織と接触させて使用するために適していて、合理的なベネフィット／リスク比に見合う塩を意味する。薬学的に許容できる塩は、当技術分野でよく知られている。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９７７、６６：１〜１９において詳細に、薬学的に許容できる塩を記載している。塩は、本発明の実施例１を最終的に単離および精製する間にその場で、または別に、実施例１の遊離塩基を適切な有機酸または無機酸と反応させることによって調製することができる。代表的な酸付加塩には、これらだけに限定されないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、炭酸水素塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファスルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｆｏｎａｔｅ）、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、半硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホナート、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩が含まれる。
【０１８１】
本発明はまた、１種または複数の非毒性の薬学的に許容できる担体と一緒に製剤化されたＡＣＣ阻害薬を含む医薬組成物を提供する。上記医薬組成物は特に、固体もしくは液体形態で経口投与するためにまたは局所塗布のために製剤化することができる。
【０１８２】
「薬学的に許容できる担体」という用語は、本明細書で使用する場合、非毒性で不活性な固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、封入材料または任意の種類の配合補助剤を意味する。薬学的に許容できる担体として役立ち得る材料のいくつかの例は、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；トウモロコシデンプンおよびバレイショデンプンなどのデンプン；カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤ワックスなどの添加剤；ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝溶液であり、さらには、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの他の非毒性適合性滑沢剤、さらには、着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤、防腐剤、および抗酸化剤も、配合者の判断によって、組成物中に存在してよい。本発明は、１種または複数の非毒性の薬学的に許容できる担体と一緒に製剤化されたＡＣＣ阻害薬を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、患者に、経口または局所で（散剤、軟膏剤または滴剤によって）投与することができる。
【０１８３】
非経口注射用の本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる滅菌水性もしくは非水性液剤、分散剤、懸濁剤または乳剤、および滅菌注射用液剤または分散剤に再構成するための滅菌散剤を含む。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、適切なそれらの混合物、植物油（オリーブ油など）、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが含まれる。例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散剤の場合には、必要な粒径を維持することによって、かつ界面活性剤を使用することによって、適正な流動性を維持することができる。
【０１８４】
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの補助剤を含有することもできる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって保証することができる。等張化剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましいこともある。注射用医薬形態の長時間吸収を、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によって生じさせることができる。
【０１８５】
所望の場合に、かつより有効な分布のために、ＡＣＣ阻害薬を、ポリマーマトリックス、リポソームおよびマイクロスフェアなどの持続放出または標的化送達システムに組み込むことができる。これらは、例えば、細菌保留フィルターに通す濾過によって、または使用直前に、滅菌水またはいくつかの他の滅菌注射用媒質に溶かすことができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。
【０１８６】
ＡＣＣ阻害薬は、適切ならば、上述のとおりの１種または複数の薬学的に許容できる担体を含むマイクロカプセル化形態であってもよい。錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティング、放出制御コーティング、および医薬製剤分野においてよく知られている他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。そのような固体剤形では、ＡＣＣ阻害薬を、スクロース、ラクトース，またはデンプンなどの少なくとも１種の不活性な希釈剤と混合することができる。そのような剤形は、通常の実施のとおり、不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースなどの製錠滑沢剤および他の製錠助剤を含んでもよい。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は、緩衝剤を含んでもよい。これらは、不透明化剤を含有してもよく、活性成分のみを、または優先的に、腸管のある特定の部分において遅延して放出するような組成物であってもよい。使用することができる埋込み組成物の例には、ポリマー物質およびワックスが含まれる。
【０１８７】
経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形では、ＡＣＣ阻害薬を、クエン酸ナトリウムまたはリン酸カルシウムなどの少なくとも１種の不活性な薬学的に許容できる担体、および／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびサリチル酸などの充填剤または増量剤；ｂ）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアラビアゴムなどの結合剤；ｃ）グリセロールなどの保湿剤；ｄ）寒天、炭酸カルシウム、バレイショまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤；ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；ｇ）セチルアルコールおよびグリセロールモノステアラートなどの湿潤剤；ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤；ならびにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物などの滑沢剤と混合する。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合には、剤形は、緩衝剤を含んでもよい。
【０１８８】
同様の種類の固体組成物を、ラクトースまたは乳糖、さらには高分子量ポリエチレングリコールなどを使用する軟および硬−充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として用いることもできる。
【０１８９】
錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティング、および医薬製剤分野でよく知られている他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。これらは、不透明化剤を含有してもよく、活性成分のみを、または優先的に、腸管のある特定の部分において遅延して放出するような組成物であってもよい。使用することができる埋込み組成物の例には、ポリマー物質およびワックスが含まれる。
【０１９０】
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容できる乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。ＡＣＣ阻害薬に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの当技術分野で一般に使用される不活性な希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（とりわけ、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などの可溶化剤および乳化剤を含有してもよい。
【０１９１】
不活性な希釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、ならびに芳香剤などの補助剤を含んでもよい。
【０１９２】
本発明の医薬組成物中のＡＣＣ阻害薬の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成物および投与様式について所望の治療応答を達成するために有効な量のＡＣＣ阻害薬が得られるように変動し得る。選択される投薬量レベルは、ＡＣＣ阻害薬の活性、投与経路、治療を受ける状態の重症度、ならびに治療を受けている患者の状態および先行する病歴に依存するはずである。
【０１９３】
患者に投与されるＡＣＣ阻害薬、特に、実施例１の合計１日用量は、０．３〜８００ｍｇである。実施例１でのより好ましい投薬範囲は、３０ｍｇ  ＱＤ〜２００ｍｇ  ＢＩＤである。所望の場合には、有効な１日用量を、投与を目的として複数回用量に、例えば、１日当たり２〜４回の別々の用量に分けることができる。
【実施例】
【０１９４】
（実施例１）
【０１９５】
【化１１】
2016534091.tif 000013
１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【０１９６】
【化１２】
2016534091.tif 000014
ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシラート
メチルビニルケトン（１４６ｍＬ）をテトラヒドロフラン（１８Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシラート（３７５ｇ）の溶液に添加した。反応混合物を−５℃に冷却し、エタノール中の水酸化カリウムの溶液（３Ｎ、０．２４３Ｌ）を１０分かけて滴加した。反応混合物を室温に加温し、１６時間撹拌した。シクロヘキサン（１０Ｌ）を添加し、その溶液を飽和塩化ナトリウム（３×１０Ｌ）で洗浄した。有機層を油状物に濃縮した。この油状物を８０：２０  シクロヘキサン／酢酸エチル２Ｌに溶かし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過して、不溶性物質を除去した。濾液を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（７０：３０  ヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、生成物を油状物として得た。その油状物をヘキサン中で摩砕して、所望の生成物を白色の固体（１３１ｇ、２８％）として得た。
【０１９７】
【化１３】
2016534091.tif 000015
（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシラート
ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシラート（１０１ｇ）およびトリス（ジメチルアミノメタン）（１３３ｍＬ）を、トルエン（８００ｍＬ）に溶かし、１７時間加熱還流した。反応混合物を最小撹拌体積まで濃縮し、酢酸エチル（６００ｍＬ）を添加した。この混合物を加熱還流し、ヘプタン（１．２Ｌ）を２０分かけて添加した。温溶液を３時間かけて室温に冷却した。固体を粗ガラスフリットを通して濾過し、ヘプタン（３００ｍＬ）で洗浄した。得られた固体を、真空炉中、４０℃で３時間乾燥して、所望の生成物を黄色の固体（１０７ｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.48 (s, 1 H), 6.57 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 5.99 (d, J=10.16 Hz, 1
H), 3.32 - 3.51 (m, 4 H), 3.06 (s, 6 H), 2.72 (s, 2 H), 1.57 - 1.66 (m, 2 H),
1.41 - 1.53 (m, 11 H).
【０１９８】
【化１４】
2016534091.tif 000016
ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシラート
（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシラート（１０７ｇ）をトルエン（７００ｍＬ）に入れ、イソプロピルヒドラジン（４４．４ｇ）を添加した。反応物を還流状態で４時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチル（５００ｍＬ）を添加した。反応溶液を、クエン酸（２×３００ｍＬ、１０％水溶液）および水（４００ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空中で濃縮して、Ｉ−１Ａ−１ｃを黄色の固体（１０９ｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.25 (s, 1 H) 6.42 (dd, J=10.05, 0.49 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=9.95
Hz, 1 H) 4.42 - 4.52 (m, 1 H) 3.36 - 3.53 (m, 4 H) 2.62 (s, 2 H) 1.56 - 1.68
(m, 2 H) 1.45 - 1.55 (m, 17 H).
【０１９９】
【化１５】
2016534091.tif 000017
ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシラート
メタノール（１Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシラート（１０９ｇ）の溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６１．４ｇ）を添加した。反応物を１時間撹拌した。反応物をチオ硫酸ナトリウム（水３００ｍＬ中の１０ｇ）でクエンチし、次いで、５００ｍＬの最終体積まで蒸留した。溶液を周囲温度に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（１Ｌ）および水（１００ｍＬ）を添加した。有機層を除去し、水性層を２−メチルテトラヒドロフランで抽出した。有機層を合わせ、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｎ、２５０ｍＬ）、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、オレンジ色油状物に濃縮した。その油状物をテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）に溶かし、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７６．８ｇ）を添加した。その溶液を６０℃に加熱し、１時間撹拌した。塩酸水溶液（１Ｎ、１Ｌ）を添加し、その溶液を３０分間撹拌した。相を分離し、水性層を酢酸エチル（７００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（４００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮して、残渣を得た。その残渣を真空炉中、４０℃で、１６時間乾燥して、標題化合物をオレンジ色ワックス状物（１１７ｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.35 (s, 1 H), 5.32-5.42 (m, 1 H), 3.29 - 3.51 (m, 4 H), 2.73
(s, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.47 - 1.57 (m, 4 H), 1.42 - 1.46 (m, 15 H); +ESI MS
(M+H) = 348.5.
【０２００】
【化１６】
2016534091.tif 000018
１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシラート（２３．５ｇ）を酢酸エチル（２６０ｍＬ）およびメタノール（７０ｍＬ）に懸濁させた。反応溶液を＜２℃に冷却し、塩化アセチル（３３．６ｍＬ）を２０分かけて滴加した。反応物を室温にゆっくり加温し、４時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、沈澱物を濾過した。沈澱物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で洗浄し、真空炉中（４０℃、１０ｍｍ  Ｈｇ）で１６時間乾燥して、標題化合物を薄黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.43 (s, 1 H), 5.32-5.42 (m, 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.89
(s, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.69 - 1.90 (m, 4 H), 1.37 - 1.45 (m, 6 H);  +ESI
MS (M+H) = 248.4.
【０２０１】
【化１７】
2016534091.tif 000019
１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン調製の代替調製
ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシラート（２５０ｇ）およびトリス（ジメチルアミノメタン）（３２５ｍＬ）をトルエン（１．９Ｌ）に溶かし、４時間加熱還流した。混合物を蒸留し、最小撹拌体積まで濃縮し（１１０℃）、次いで、トルエン（１．９Ｌ）を添加した。反応物を、最小撹拌体積まで再蒸留し、室温に冷却した。トルエン（１．８Ｌ）およびイソプロピルヒドラジンヒドロクロリド（１３５ｇ）を添加し、その溶液を５時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、次いで、クエン酸（１０％水溶液、２×１５０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、次いで、有機層を、最小撹拌体積まで蒸留した。メタノール（２Ｌ）を添加し、最小撹拌体積まで蒸留した。これを、メタノールで繰り返した。その溶液をメタノール（２．５Ｌ）に再び溶かし、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１７６ｇ）を一度に添加した。溶液を２３℃で２時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム水溶液（５重量％、０．５Ｌ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を蒸留（４５℃、２１０ｍｍ  Ｈｇ）によって約０．５Ｌまで濃縮し、次いで、２−メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）を添加した。１５分間撹拌した後に、水性層を廃棄した。有機層を約０．２Ｌに濃縮し、テトラヒドロフラン（０．５Ｌ）を添加した。その混合物に、テトラヒドロフラン中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド溶液（１．９Ｌ、１Ｍ溶液）を添加した。その溶液を６０℃に加熱し、１時間撹拌した。室温に冷却した後に、塩酸水溶液（１Ｎ、２．２Ｌ）を２０分かけて添加した。その混合物を室温で２０分間撹拌し、次いで、層を分離した。水性層を除去し、酢酸エチル（１．７５Ｌ）で逆抽出した。合わせた有機層を水（１Ｌ）で洗浄し、有機層を蒸留によって濃縮した（溶媒４Ｌを除去）。酢酸エチル（１．８Ｌ）を添加し、その溶液を最小撹拌体積まで濃縮した。酢酸エチル（３Ｌ）およびメタノール（０．８Ｌ）を添加し、その溶液を０℃に冷却した。塩化アセチル（４０１ｍＬ）を２０分かけて滴加し、その溶液を０℃で４時間撹拌した。沈澱物を窒素下での濾過によって収集した。濾液を酢酸エチル（０．５Ｌ）で洗浄し、真空炉中、４０℃で乾燥して、Ｉ−１Ａ−１ｅをオフホワイト色の固体（２４１ｇ）として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.43 (s, 1 H), 5.32-5.42 (m, 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.89
(s, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.69 - 1.90 (m, 4 H), 1.37 - 1.45 (m, 6 H); +ESI (M+H)
= 248.4
【０２０２】
【化１８】
2016534091.tif 000020
１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（１５ｇ）をテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）に入れ、ジメチルホルムアミド（３２９ｕＬ）および塩化オキサリル（２２．１ｍＬ）を添加した。反応溶液を周囲温度で１６時間撹拌した。その溶液を真空中で濃縮し、残渣をジクロロメタンに入れ、減圧下で濃縮した（×２）。得られた酸塩化物に、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）、１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（２５．９ｇ）およびトリエチルアミン（７１．２ｍＬ）を添加した。その溶液を室温で１６時間撹拌した。その反応物に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）を添加し、その溶液を５分間撹拌した。層を分離し、水性層を１：１  酢酸エチル／テトラヒドロフランで抽出した。有機層を合わせ、酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空中で薄黄色の固体に濃縮した。固体を温メタノール（３００ｍＬ）に溶かし、次いで、加熱還流した。その溶液に、酢酸エチル３５０ｍＬを添加し、溶媒３００ｍＬを蒸留によって除去した。追加の酢酸エチルを、７０℃の内部温度に達するまで、滴加した。その溶液を３時間かけて室温に冷却した。固体を濾過によって収集し、真空炉（４０℃）中で１６時間乾燥して、標題化合物を白色の固体（２０．５ｇ、５９％）として得た：＋ＥＳＩ  ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）４０６．５；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm 12.25 - 12.33 (m, 1 H), 7.35 - 7.51 (m, 3 H), 7.05 - 7.16 (m, 1
H), 5.16 - 5.31 (m, 1 H), 3.32 - 3.58 (m, 4 H), 2.77 (s, 2 H), 2.57 (s, 2 H),
1.40 - 1.52 (m, 4 H), 1.32 (d, J=6.45 Hz, 6 H).
【０２０３】
本実施例では、この例において用いられる出発原料２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸は、その互変異性型２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−カルボン酸（２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸としても知られている）としても存在し、それぞれ、同じＣＡＳ  Ｎｏ．７０９−１９−３によって指定されていることを理解されたい。本例は、２−メチルベンゾイミダゾリル基について２種の互変異性型の化合物の一方として上記で図示されていること、および１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記のとおりに図示される互変異性型１−イソプロピル−１’−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンと同義であることをさらに理解されたい：
【０２０４】
【化１９】
2016534091.tif 000021
【０２０５】
（実施例２）
【０２０６】
【化２０】
2016534091.tif 000022
１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の７−メトキシ−２−ナフトエ酸（２０２ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）および１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（３２９ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（３０４ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を、次いで、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１４９ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、次いで、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（２１１ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１５時間撹拌した。次いで、混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（２０〜１００％の１：９酢酸エチル中メタノール／ヘプタン、２４ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）Ｇｏｌｄカラム）によって精製して、１−イソプロピル−１’−（７−メトキシ−２−ナフトイル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン３４２ｍｇ（７９％）を無色の泡として得た。＋ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）４３２．３；1H NMR (600 MHz, クロロホルム-d) δppm 1.38 - 1.50 (m, 6 H) 1.53 (br. s.,
1 H) 1.60 (br. s., 1 H) 1.71 (br. s., 2 H) 2.60 (s, 2 H) 2.81 (s, 2 H) 3.47 (d,
J = 14.7 Hz, 2 H) 3.79 (d, J = 14.1 Hz, 1 H) 3.86 (br. s., 1 H) 3.92 (s, 3 H)
5.37 (dt, J = 13.4, 6.5 Hz, 1 H) 7.13 (d, J = 2.4 Hz, 1 H) 7.19 (dd, J = 9.4,
2.4 Hz, 1 H) 7.31 (d, J = 9.4 Hz, 1 H) 7.38 (s, 1 H) 7.74 (d, J = 8.8 Hz, 1 H)
7.76 - 7.79 (m, 2 H)
【０２０７】
（実施例３）
【０２０８】
【化２１】
2016534091.tif 000023
１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【０２０９】
【化２２】
2016534091.tif 000024
１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
標題化合物を、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０２７０８９３号の実施例２５、ステップ１において記載されている方法と同様の方法によって調製した。＋ＡＰＣＩ（Ｍ＋Ｈ）４７４．６；1H NMR (400 MHz, CDCl3, δ):  7.72 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.55 (d, J = 8.2
Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.16 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1 H), 6.59 (d, J = 9.2 Hz,
1 H), 5.36 (五重線, J = 6.6 Hz, 1 H), 3.31 - 3.96 (m, 4
H), 2.79 (s, 2 H), 2.58 (s, 2 H), 1.55 - 1.75 (m, 4 H), 1.52 (s, 9 H), 1.44 (d,
J = 6.4 Hz, 6 H).
【０２１０】
【化２３】
2016534091.tif 000025
１’−［（２−アミノキノリン−７−イル）カルボニル］−１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オントリフルオロ酢酸塩
トリフルオロ酢酸（０．９０ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を、１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を３時間、７０℃に加熱し、次いで、室温に冷却し、終夜撹拌し続けた。反応物を濃縮乾固し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、標題化合物（４１ｍｇ、９３％）を得た。Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  ｄＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μｍ、カラム；移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：４．０分で９５％Ａ／５％Ｂから直線的に５％Ａ／９５％Ｂへ、５％Ａ／９５％Ｂで５分間保持；流速：２．０ｍＬ／分を使用して、ＨＰＬＣ保持時間２．１１分を測定した。＋ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）４１８．２；1H NMR (500 MHz, CD3OD,
δ) 8.36 (d, J=9.27 Hz, 1 H), 7.97 (d, J=8.05 Hz, 1 H),
7.66 (s, 1 H), 7.53 (dd, J=8.17, 1.34 Hz, 1 H), 7.44 (s, 1 H), 7.12 (d, J=9.27
Hz, 1 H), 5.39 (五重線t, J=13.23, 6.68 Hz, 1 H), 3.91 (br.
s., 1 H), 3.76 (br. s., 1 H), 3.46 (br. s., 2 H), 2.92 (s, 2 H), 2.67 (d,
J=7.81 Hz, 2 H), 1.74 (br. s., 2 H), 1.59 (br. s., 2 H), 1.43 (br. s., 6 H).
１’−［（２−アミノキノリン−７−イル）カルボニル］−１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
【０２１１】
（実施例４）
【０２１２】
【化２４】
2016534091.tif 000026
１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
標題化合物を、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０２７０８９３号の実施例２５、ステップ１において記載されている方法と同様の方法によって調製した。＋ＡＰＣＩ（Ｍ＋Ｈ）４７４．６；1H NMR (400 MHz, CDCl3, δ):  7.72 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.55 (d, J = 8.2
Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.16 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1 H), 6.59 (d, J = 9.2 Hz,
1 H), 5.36 (五重線, J = 6.6 Hz, 1 H), 3.31 - 3.96 (m, 4
H), 2.79 (s, 2 H), 2.58 (s, 2 H), 1.55 - 1.75 (m, 4 H), 1.52 (s, 9 H), 1.44 (d,
J = 6.4 Hz, 6 H).
【０２１３】
（実施例５）
【０２１４】
【化２５】
2016534091.tif 000027
１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０１１１０４６号の実施例１０Ａ−１に記載されているとおりに調製することができる。
【０２１５】
（実施例６）
【０２１６】
【化２６】
2016534091.tif 000028
５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル
参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０１１１０４６号の実施例１１Ａ−９において記載されているとおりに調製することができる。
【０２１７】
（実施例７）
【０２１８】
【化２７】
2016534091.tif 000029
２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２／０５６３７２の実施例５５において記載されているとおりに調製することができる。
【０２１９】
（実施例８）
【０２２０】
【化２８】
2016534091.tif 000030
２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／１４４５５４の実施例１．０７４において記載されているとおりに調製することができる。
【０２２１】
（実施例９）
【０２２２】
【化２９】
2016534091.tif 000031
Ｓｏｒａｐｈｅｎ（登録商標）
商業的に購入することができる。
【０２２３】
（実施例１０）
【０２２４】
【化３０】
2016534091.tif 000032
１’−（１−シクロプロピル−４−メトキシ−１Ｈ−インドール−６−カルボニル）−６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スピロ［クロマン−２，４’−ピペリジン］−４−オン
参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００８／０１７１７６１号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２２５】
（実施例１１）
【０２２６】
【化３１】
2016534091.tif 000033
５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル
参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０１１１０４６号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２２７】
（実施例１２）
【０２２８】
【化３２】
2016534091.tif 000034
（Ｓ）−Ｎ−（４−（４−（４−イソプロポキシフェノキシ）フェニル）ブタ−３−イン−２−イル）アセトアミド
参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／０１７８４００号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２２９】
（実施例１３）
【０２３０】
【化３３】
2016534091.tif 000035
Ｎ−（１−（４−（６−（４−プロポキシフェノキシ）ピリジン−３−イル）フェニル）エチル）アセトアミド
参照により本明細書に組み込まれるＢＭＣＬ  ２００９、５８７２、ｃｍｐｄ  １１ａ／１１ｂにおいて記載されているとおりに調製することができる。
【０２３１】
（実施例１４）
【０２３２】
【化３４】
2016534091.tif 000036
４’−（６−（５−カルバモイルピリジン−３−イル）−４−オキソスピロ［クロマン−２，４’−ピペリジン］−１’−カルボニル）−２’，６’−ジエトキシ−［１，１’−ビフェニル］−３−カルボン酸
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／００２０１０において記載されているとおりに調製することができる。
【０２３３】
（実施例１５）
【０２３４】
【化３５】
2016534091.tif 000037
Ｎ−（２−（２−（（６−（シクロプロピルメトキシ）ピリジン−３−イル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）プロピル）アセトアミド
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／０９５６０１において記載されているとおりに調製することができる。
【０２３５】
（実施例１６）
【０２３６】
【化３６】
2016534091.tif 000038
（１Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニルプロピル）−４−（（４−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）シクロヘキサン−１−カルボキサミド
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／０６３７３０６において記載されているとおりに調製することができる。
【０２３７】
（実施例１７）
【０２３８】
【化３７】
2016534091.tif 000039
２，２，２−トリフルオロエチル５−（テトラデシルオキシ）フラン−２−カルボキシラート
米国特許出願公開第２０１２／０２０８８０７号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２３９】
（実施例１８）
【０２４０】
【化３８】
2016534091.tif 000040
イソプロピル５−（テトラデシルオキシ）フラン−２−カルボキシラート
米国特許出願公開第２０１２／０２０８８０７号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２４１】
（実施例１９）
【０２４２】
【化３９】
2016534091.tif 000041
（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソール−４−イル）メチル５−（テトラデシルオキシ）フラン−２−カルボキシラート
米国特許出願公開第２０１２／０２０８８０７号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２４３】
（実施例２０）
【０２４４】
【化４０】
2016534091.tif 000042
１−（３−（２−ブチル−４−オキソ−１，３，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボニル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−エチル尿素
参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００９／０２５３７２５号において記載されているとおりに調製することができる。
【０２４５】
（実施例２１）
【０２４６】
【化４１】
2016534091.tif 000043
（Ｓ）−Ｎ−（１−（３−（２−（４−（シクロプロピルメトキシ）フェノキシ）チアゾール−５−イル）イソオキサゾール−５−イル）エチル）アセトアミド
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／０９５６０２において記載されているとおりに調製することができる。
【０２４７】
（実施例２２）
【０２４８】
【化４２】
2016534091.tif 000044
Ｎ−（１−（４−（２−（４−（シクロプロピルメトキシ）フェノキシ）チアゾール−５−イル）フェニル）エチル）アセトアミド
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／０９５６０３において記載されているとおりに調製することができる。
【０２４９】
（実施例２３）
【０２５０】
【化４３】
2016534091.tif 000045
（Ｓ）−Ｎ−（４−（４−（４−イソプロポキシフェノキシ）フェニル）ブタン−２−イル）アセトアミド
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００８／０７９６１０において記載されているとおりに調製することができる。
【０２５１】
（実施例２４）
【０２５２】
【化４４】
2016534091.tif 000046
３−（４’−（Ｎ−（（１Ｓ，４ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フェニルモルホリン−４−カルボニル）シクロヘキシル）スルファモイル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）プロパン酸
参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／０６３７３０６において記載されているとおりに調製することができる。
【０２５３】
生物学的プロトコル
患者において尋常性ざそうを治療および／または予防する際の本発明の化合物の有用性を、下記のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおける活性によって実証することができる。そのようなアッセイはまた、本発明の化合物の活性を、他の既知の化合物の活性と比較することができる手段を提供する。
【０２５４】
ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の活性の直接的阻害
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性を、標準的な手順に基づく方法によって実証した。本発明の化合物でのＡＣＣ１およびＡＣＣ２活性の直接的阻害を、組換えヒトＡＣＣ１（ｒｈＡＣＣ１）（配列番号１）および組換えヒトＡＣＣ２（ｒｈＡＣＣ２）（配列番号２）の調製物を使用して決定した。
【０２５５】
ｒｈＡＣＣ１の調製
全長ヒトＡＣＣ１  ｃＤＮＡを含有する組換えバキュロウイルスに感染したＳＦ９細胞２リットルを、氷冷溶解緩衝液（２５ｍＭ  トリス、ｐＨ７．５；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；１０％グリセロール；５ｍＭイミダゾール（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪ）；２ｍＭ  ＴＣＥＰ（ＢｉｏＶｅｃｔｒａ；Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｔｏｗｎ、Ｃａｎａｄａ）；ベンゾナーゼヌクレアーゼ（１００００Ｕ／細胞ペースト１００ｇ；Ｎｏｖａｇｅｎ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）；ＥＤＴＡ非含有プロテアーゼ阻害薬カクテル（１ｔａｂ／５０ｍＬ；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に懸濁させた。細胞を、３サイクルの冷凍−解凍によって溶解させ、４０，０００×ｇで４０分（４℃）遠心した。上清を、ＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦ粗製カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）上にそのまま装填し、２０カラム体積（ＣＶ）にわたって、イミダゾール勾配で０．５Ｍまで溶離した。ＡＣＣ１含有画分をプールし、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロールで１：５希釈し、ＣａｐｔｏＱ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムに直接装填し、２０ＣＶにわたって、ＮａＣｌ勾配で１Ｍまで溶離した。ホスファート基を、ラムダホスファターゼ（１００Ｕ／１０μＭ標的タンパク質；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ；Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）と共に４℃で１４時間インキュベーションすることによって、精製ＡＣＣ１から除去し；オカダ酸を添加して（１μＭ最終濃度；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ホスファターゼを阻害した。精製ＡＣＣ１を、４℃での６時間の透析によって、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロール、０．５Ｍ  ＮａＣｌに交換した。アリコートを調製し、−８０℃で冷凍した。
【０２５６】
ｒｈＡＣＣ１阻害の測定
Ｃｏｓｔａｒ  ＃３６７６（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート内で、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用し、５０μＭ  ＡＴＰ反応についての製造者推奨条件を使用して、ｈＡＣＣ１をアッセイした。このアッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭ  クエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰおよび１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。典型的には、１０μｌ反応を、２５℃で１２０分間実行し、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ停止および検出緩衝液１０μｌを添加し、その組合せを、室温でさらに１時間インキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰ汎用デュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用して、データを得た。
【０２５７】
ｒｈＡＣＣ２の調製
ヒトＡＣＣ２阻害を、精製組換えヒトＡＣＣ２（ｈｒＡＣＣ２）を使用して測定した。簡単には、ＡＣＣ２の全長Ｃｙｔｏｍａｘクローンを、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入し、配列決定し、ＰＣＤＮＡ５  ＦＲＴ  ＴＯ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）にサブクローニングした。ＡＣＣ２を、テトラサイクリン誘導によってＣＨＯ細胞において発現させ、グルタミン、ビオチン、ハイグロマイシンおよびブラストサイジンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２  ５リットル中に、１μｇ／ｍＬテトラサイクリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）と共に採取した。次いで、ＡＣＣ２を含有する馴化培地を、Ｓｏｆｔｌｉｎｋ  Ｓｏｆｔ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ａｖｉｄｉｎカラム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に施与し、５ｍＭビオチンで溶離した。ＡＣＣ２  ４ｍｇを、０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度（Ａ２８０によって決定）で、９５％の推定純度（Ａ２８０によって決定）で溶離した。精製ＡＣＣ２を、５０ｍＭトリス、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび５％グリセロール中で透析した。プールしたタンパク質を凍結し、−８０℃で貯蔵したが、解凍の際に、活性が失われることはなかった。ＡＣＣ２活性を測定し、ＡＣＣ２阻害を評価するために、試験化合物をＤＭＳＯに溶かし、ｒｈＡＣＣ２酵素に、１％の最終ＤＭＳＯ濃度を有する５倍ストックとして添加した。
【０２５８】
ヒトＡＣＣ２阻害の測定
Ｃｏｓｔａｒ  ＃３６７６（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート内で、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用し、５０ｕＭ  ＡＴＰ反応についての製造者推奨条件を使用して、ｈＡＣＣ２をアッセイした。このアッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰおよび８ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。典型的には、１０μｌ反応を、２５℃で５０分間実行し、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ停止および検出緩衝液１０μｌを添加し、その組合せを、室温でさらに１時間インキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰ汎用デュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用して、データを得た。
【０２５９】
上記の組換えｈＡＣＣ１および組換えｈＡＣＣ２  Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒアッセイを使用しての結果を、下記の表１にまとめる。
【０２６０】
培養ヒト脂腺細胞における新規脂質生成の阻害
ＳＺ９５脂腺細胞を、ヒト脂腺細胞成長培地（ＨＳＧＭ）（１０％熱不活化ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１ｍＭ塩化カルシウムおよび５ｎｇ／ｍＬ組換えヒト表皮成長因子（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ：  ＰＨＧ０３１１）を補充されたＳｅｂｏｍｅｄ（登録商標）培地（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ：Ｆ８２０５））中で成長させた。集密度９０％で、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次いで、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡで剥離した。細胞を遠心し、１０％チャコール処理血清（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ  ｓｅｒｕｍ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ：１２６７６−０２９）を含有するＨＳＧＭ中に再懸濁した。次いで、細胞を、２４ウェルプレートに０．２５×１０６細胞／ウェルの密度で播種し、培養プレートへの細胞接着を可能にするために終夜インキュベートした。
【０２６１】
細胞を、用量応答の化合物で処理し、各用量を３連でアッセイした。簡潔には、化合物を、ＤＭＳＯストックに溶かし、チャコール処理培地中で１：１０００希釈した。化合物を含まない０．１％ＤＭＳＯを、ビヒクル対照として使用した。化合物またはビヒクルと共に１時間予備インキュベートした後に、０．２５μＣｉ１４Ｃ−酢酸（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ：ＡＲＣ０１５８Ｂ）を各ウェルに添加した。次いで、プレートをさらに２時間インキュベートした。インキュベーション期間の終了時に、細胞をインキュベーターから取り出し、氷上に置き、次いで、氷冷ＰＢＳで２回洗浄して、遊離１４Ｃ−酢酸を除去した。プレートを密封し、分析するまで−２０℃で貯蔵した。
【０２６２】
１２５μｌ哺乳動物タンパク質抽出試薬（ＭＰＥＲ、Ｐｉｅｒｃｅ：７８５０５）を各ウェルに添加した。プレートを室温で１時間振盪して、溶解を誘発した。溶解産物を個々の１．５ｍＬポリプロピレン管に移し、ウェルをＰＢＳ１７５μｌで洗浄し、これを、溶解産物に添加した。次いで、１：１（ｖ／ｖ）クロロホルム：メタノール溶液４５０μｌを各管に添加し、次いで、すべての管を１０秒間ボルテックス処理し、室温で５分間、２０，０００×ｇで遠心して、水性相と有機相とを分離した。２５μｌアリコートを、各試料の下部有機層から取り出し、ＯｐｔｉＰｈａｓｅ  ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ：１２００−４３９）シンチレーション液６ｍＬに添加した。脂質に組み込まれた１４Ｃのカウントを、シンチレーションカウントによって評価した。ＥＣ５０値を決定するために、ＤＮＬ（脂質に組み込まれた１４Ｃのカウント）を、化合物で処置された細胞について、ビヒクル対照で処置された細胞におけるＤＮＬと比較して表した。試験した化合物のサブセットでは、各試料の有機層の第２のアリコート（３×３５μｌ）を取り出し、ＴＬＣレーン（Ａｎａｌｔｅｃｈ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  Ｇ  Ｐｌａｔｅｓ）に施与した。放射標識された脂質を、２溶媒系を使用して分割した。溶媒１は、酢酸エチル：イソプロピルアルコール：ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：０．２５％ＫＣｌの１００：１００：１００：４０：３６混合物を含有し、溶媒２は、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸の７０：２７：３混合物を含有した。ＴＬＣプレートを窒素下で３０分間乾燥し、［１４Ｃ］−較正物質を、空のレーンに添加した。Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒスクリーンに１８〜３６時間曝露した後に、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ’  Ｓｔｏｒｍ  ８６０  ＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒシステムを使用して、バンドを可視化および定量した。
【０２６３】
上記の培養ヒト脂腺細胞における新規脂質生成の阻害についての結果を、下記の表１にまとめ、用量応答曲線（ビヒクル対照に対するパーセントとしてプロットした）を、実施例１および実施例３について図２において示す。脂腺細胞脂質クラスに対する実施例３の効果をビヒクルと対比して、ＴＬＣを使用して可視化したものを図４において示す。
【０２６４】
【表１】
2016534091.tif 000047
【０２６５】
健常ヒトボランティアにおける循環および皮脂脂質に対するＤＮＬの寄与の評価
皮脂および循環脂質に対するＤＮＬの寄与を、無作為化平行研究において評価したが、その際、それぞれ５人の対象からなる４コホートを、手順のタイミングが異なる４アームに無作為化した。対象は、１８歳および５０歳を含む１８〜５０歳の健常な男性または女性ボランディアであった。健常であるとは、詳細な病歴、血圧（ＢＰ）および脈拍数測定、１２−リード心電図（ＥＣＧ）、ならびに臨床検査を含む全理学的検査によって同定される臨床関連異常がないことと定義された。肥満指数は、１８および２８ｋｇ／ｍ２を含む１８〜２８ｋｇ／ｍ２であった。
【０２６６】
エントリー基準を満たした適格な対象を、重水（２Ｈ２Ｏ）の複数回経口負荷用量を投与するために、０日目に、約２４時間、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＣＴＲＣ）に入院させた。ＣＴＲＣに入院滞在している間に、対象は、合計４８０ｍＬの７０％重水負荷用量を、それぞれ６０ｍＬの８用量に分けて投与された。これらのアリコートを、２４時間の期間にわたって３時間ごとに経口投与した。すべての対象が、１日経口重水用量（７０％２Ｈ２Ｏ６０ｍｌ）を１４日目まで摂取し続けた。体水分２Ｈ２Ｏ濃縮を評価するために、２日目に、対象に、唾液試料を得るように頼んだ。
【０２６７】
すべての対象が、外来訪問のために、５回（フォローアップ訪問を含む）ＣＴＲＣに戻った。対象を、４および１４日目、７および１４日目、１１および１４日目または１４日目に行う皮脂収集のために無作為化した。すべての外来訪問の際に、体水分（血漿から）中の重水濃縮を決定するために、かつＶＬＤＬ−脂質を決定するために、血液試料を採取した。血液および皮脂収集のタイミングをずらすことで、１４日間にわたる種々の時点で、脂質生合成に対するＤＮＬの脂肪酸寄与への重水素組み込みを評価することができた。この目的は、脂肪酸への重水素の組み込みを評価するために使用する定常状態を確立することと、脂質生合成に対するＤＮＬの寄与分を評価することであった。各コホートは、この連続したＤＮＬに対するデータポイントを提供したが、ＤＮＬの時間経過は、皮脂腺分泌生成物についてまだ定義されていなかった。
【０２６８】
皮脂収集日に、皮脂脂質を、Ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）を使用して収集した。ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）を適用する前に、皮膚を、石鹸および水で洗浄することによって壊死組織片を落として清浄化し、ヘキサンで飽和させたガーゼパッドで拭うことによって脱脂した。皮膚が乾燥したら、Ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）Ｔｅｓｔ  Ｓｔｒｉｐを、脱脂したピンセットを使用して、その裏紙から剥がし、静かに圧力をかけて、清浄化された表面に貼り付け、適切な接着を確実にした。テープを取り扱う人は、手術用手袋を着用した。３つのパッチを、次の領域に置いた：両頬上に１パッチ（眼の中心線の尾側）および額上に１パッチ（眼の中心線の頭側）。３時間後に、パッチを剥がし、酸で洗浄されたＴｅｆｌｏｎキャップ付きスクリューキャップバイアルに入れた。
【０２６９】
体水分２Ｈ２Ｏ濃縮（前駆体プールの濃縮）を、血漿および唾液試料においてアセチレン法で測定した（Ｐｒｅｖｉｓら、１９９６）。血漿試料をまた、１０℃で、５０．４  Ｔｉ  Ｂｅｃｋｍａｎローター内で３０分間、４０，０００ｒｐｍで超遠心に２回かけて、キロミクロンを除去し、３回目の超遠心ステップ（１０℃で、５０．４  Ｔｉ  Ｂｅｃｋｍａｎローター内、４０，０００ｒｐｍで１８時間）を続けて、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）画分を単離した。次いで、そのＶＬＤＬを、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってリポタンパク質トリグリセリド（ＴＧ）を単離するために使用した。全脂質を皮脂試料から、クロロホルム：メタノールで抽出した。次いで、ＶＬＤＬ−ＴＧ脂肪酸および皮脂全脂肪酸を、ガスクロマトグラフィー／質量分光（ＧＣ／ＭＳ）分析に備えて、脂肪酸メチルエステルにエステル交換した。ＤＢ−１７または同等カラムを、パルミチン酸のＭ０〜Ｍ２アイソトポマーを表す質量／電荷比（ｍ／ｚ）２７０〜２７２の電子衝撃イオン化イオンを用いる脂肪酸メチルエステルの同位体濃縮分析のために使用した。過剰のＭ２（ＥＭ２）および過剰のＭ１（ＥＭ１）試料濃縮を、未標識標準での天然存在量濃縮（並行して実行）を試料濃縮から差し引くことによって決定した。
【０２７０】
肝臓新規脂質生成に由来する（すなわち、アセチル−ＣｏＡ前駆体から「新たに」生じた）組織パルミタートの割合を、質量アイソトポマー分布分析（ＭＩＤＡ）を使用して、ＫｉｎｅＭｅｄ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）によって計算した。簡潔には、ＥＭ１を、実験データから決定した。次いで、これを使用して、既知のｎ（ポリマーにおける繰り返しサブユニットの数、パルミタートでは２２）および測定されたｐによって、ｐとＥＭ１との間の既知の関係を使用して、すべてのパルミタートが新たに合成された場合の漸近線（Ａ＊）または最大可能パルミタート濃縮を計算することができた。次いで、実際の濃縮を漸近線と比較することによって、パルミタートの合成分を決定する：
パルミタートＤＮＬ分＝ＥＭ１／Ａ＊またはＤＮＬ（％）＝ＥＭ１／Ａ＊×１００
【０２７１】
データを、皮脂脂質および循環脂質（ＶＬＤＬトリグリセリド）に対する新規合成パルミタートの寄与率として経時的に表すが、定常状態の値またはそれに近似した値は、脂質プールに対するＤＮＬ由来パルミタートの寄与率を反映する。データを図１に示す。
【０２７２】
健常ヒトボランティアにおける皮脂レベルに対する実施例１の効果
他の点では健常な過体重または肥満の対象を、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに入院させ、実施例１（２００ｍｇ  ＢＩＤ）またはプラセボを連続して１４日間経口投与した。処置の２日前ならびに研究の１３および１４日目（処置後）に、皮脂産生を、Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）測定によって評価し、皮脂を、脂質成分の同定および定量化のために収集した。Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）測定および皮脂収集を行う皮膚領域を準備するために、その皮膚表面を、あらゆる脂質および壊死組織片から清浄化すべきである。額および頬上の標的領域を、油吸収性の組織またはガーゼを使用して優しく吸い取る。吸い取った後に、７０％エタノール溶液中に予浸しておいたワイプまたはガーゼパッドを、額および頬を拭くために使用した。清浄化の後に、皮膚を乾燥させ、皮脂測定を、清潔な較正されたＳｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）ＳＭ  ８１５（Ｃｏｕｒａｇｅ  ＋  Ｋｈａｚａｋａ、Ｋｏｌｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、製造者の指示に従って、清浄化後５分目および３時間目に行った。Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ（登録商標）によって決定された皮脂レベルを、プラセボおよび実施例１で処理した対象での処置前基線からの相対変化として表し、図４に示す。
【０２７３】
ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）技術を、皮脂収集のために使用した。ほぼ午前９時に、顔を清浄化し、清浄化後５分目にＳｅｂｕｍｅｔｅｒ測定をした後に、４枚のＳｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）ストリップを施与した。２枚のパッチを左右に、眼の中心線の頭側の額の上に置き、２枚のパッチを、眼の中心線の尾側の頬の上に置いた。Ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）を、脱脂したピンセットを使用して、その裏紙から剥がし、静かに圧力をかけて、表面に貼り付け、適切な接着を確実にした。テープを取り扱う人は、手術用手袋を着用した。１時間後に、４枚のパッチを剥がした。左の２枚のパッチおよび右の２枚のパッチを、酸で洗浄されたＴｅｆｌｏｎキャップ付きスクリューキャップバイアルに入れた。
【０２７４】
皮脂脂質種を、Ｍｅｔａｂｏｌｏｎによって、それらのＴｒｕｅＭａｓｓ（登録商標）技術プラットホームを使用して、Ｓｅｂｕｔａｐｅ（登録商標）試料から定量化した。これらの皮脂試料の分析によって、個別の皮脂脂質クラスに対する実施例１の効果をプラセボと対比して評価することが可能であった。これらのデータを、プラセボおよび実施例１で処置された対象での処置前基線からの相対変化として表す。個別の対象レベル、および信頼区間と共に平均を示しているボックスプロットを、皮脂トリグリセリド、ワックス状エステルおよび遊離脂肪酸について示す（図５）。
【０２７５】
Ｓｙｒｉａｎハムスターにおけるマロニル−ＣｏＡレベルに対するＡＣＣｉの影響の評価
約１０週齢の雄のＳｙｒｉａｎゴールドハムスターを、標準的なハムスター飼料および水を自由に摂らせて飼育した。局所送達のための実施例３を、７０：３０（エタノール：プロピレングリコール）からなるビヒクル中の溶液として１００ｍｇ／ｍｌの濃度で調製した。単回用量（５ｕｌ／耳）の局所投与をハムスターの耳に、ピペット（２〜１０ｕｌ）の先端を投与順序に従って２分間隔で付着させて施与した。投与のタイミングによって、製剤を約１平方ｃｍ面積全体に均一に展開させ、ケージに動物を戻す前に、吸収／乾燥させることができた。経口投与についても同様に、明サイクルに入って２時間目に、１０ｍＬ／ｋｇの用量体積を投与して、例８またはビヒクル（２０ｍＭトリス  ｐＨ７．４中の１％ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナート）１００ｍｇ／ｋｇを単回強制経口投与として、各ハムスターに２分間隔で送達した。用量投与の１時間後に、動物を、ＣＯ２窒息によって屠殺した。
【０２７６】
簡潔には、耳皮膚試料を、次の手法でマロニル−ＣｏＡ分析のために調製した。１つの８ｍｍ遠位生検パンチ（８ｍｍ直径のＳｋｌａｒ  Ｔｒｕ−ｐｕｎｃｈ−Ｓｋｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用）（動物１匹当たり２つ）を、試料面積を正規化するために、耳軟骨内の解剖学的「Ｖ」のすぐ上で採取した。次いで、パンチを、２層に分割した（前方および後方）。前方（前）表面を、急速冷凍（−８０℃）し、分析のために保持した。
【０２７７】
冷凍した組織を、ポリトロンを使用し、２ｍＬポリプロピレン製遠心管内で、５％氷冷トリクロロ酢酸１ｍＬ中で均質化した。中間体内部標準溶液の１０μＬアリコートを、各ホモジネートおよび最終較正溶液にスパイクし、短時間ボルテックス処理した。ホモジネートを、４℃で５分間、１４，０００ｒｐｍで遠心した。固相抽出の前に、Ｗａｔｅｒｓガラス真空マニホールドを使用して、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ１８  Ｏａｓｉｓ（３０ｍｇ）固相抽出カートリッジを、メタノール１ｍＬ、続いて、水１ｍＬで整えた。上清および較正溶液を、固相抽出カートリッジに装填し、続いて、水２．５ｍＬで洗浄し、メタノール１ｍＬで、１３×１００ｍｍガラス製試験管に溶離した。メタノール上清を、１ｍＬ９６ウェルポリプロピレンプレート上に装填し、３０℃、窒素下で蒸発させた。試料を、１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム（ｐＨ９．５）１００μＬで再構成し、９６ウェルプレートを密封した後に、プレートボルテクサー（ｐｌａｔｅ  ｖｏｒｔｅｘｅｒ）内で、２分間ボルテックス処理した。組織マロニル−ＣｏＡレベルは、Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓａｎｆｏｒｄ−Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｏｒｌａｎｄｏ、Ｆｌ）がＬＣＭＳによって決定した。ハムスター耳皮膚マロニル−ＣｏＡレベルを、ビヒクル対照に対するパーセントとして表し、図６においてプロットする。
【０２７８】
Ｓｙｒｉａｎハムスターにおける循環および皮脂脂質に対するＤＮＬの寄与の評価
体重１５０〜２００ｇの雄のＳｙｒｉａｎゴールドハムスター（２２〜２３週齢）を、標準的なハムスター飼料を自由に摂らせ、１２時間明暗サイクルで飼育した。２Ｈ２Ｏ標識の開始時に、動物に、３．５ｍｌ／ｋｇの８％２Ｈ２Ｏ溶液を午前中に腹腔内注射し、その後、８％２Ｈ２Ｏを自由に摂らせて、１、４、７、１４または２０日間のいずれかにわたり飼育した（各日数ｎ＝６）。適切な標識期間の完了後に、ＣＯ２窒息によって、ハムスターを屠殺し、組織を除去し、液体窒素で急速冷凍した。血液約４〜５ｍｌを、心臓スティック（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｉｃｋ）を介して心嚢で得て、次いで、ＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｋ２ＥＤＴＡ管（ｃａｔ＃３６８５８９）に移した。血漿を、室温で１０分間、１３００ＲＣＦで遠心することによって血液から分離し、ただちに、別の管に移し、ドライアイス上で冷凍した。ハムスター耳介（耳）を、パンチ生検（８ｍｍ直径Ｓｋｌａｒ  Ｔｒｕ−ｐｕｎｃｈ−Ｓｋｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用）によって切除した。パンチ生検を、試料収集面積を標準化するために、各耳の耳軟骨内の解剖学的「Ｖ」のすぐ上で採取した。次いで、パンチを、２層に分割した（前方および後方）。前方（前）表面を、分析のために保持した。肝臓試料では、２分枝の中葉（ｂｉｆｕｒｃａｔｅｄ  ｍｅｄｉａｌ  ｌｏｂｅ）を切除し、生理食塩水ですすぎ、滅菌吸収紙の上に葉の切断末端を置き、毛管現象を使用することによって、血液を排出させた。次いで、肝臓葉を、液体窒素中で急速冷凍した。質量アイソトポマー分布分析（ＭＩＤＡ）（Ｈｅｌｌｅｒｓｔｅｉｎ、１９９９）を使用して、皮脂および循環脂質に対するＤＮＬの寄与率を決定するために、組織および血漿をＫｉｎｅＭｅｄ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）に送付した。データを、皮脂脂質および循環脂質（血漿トリグリセリド）に対する新規合成パルミタートの寄与率として経時的に表すが、定常状態の値またはそれに近似した値は、脂質プールに対するＤＮＬ由来パルミタートの寄与率を反映している。データを図７において示す。
【０２７９】
ＳｙｒｉａｎハムスターにおけるＤＮＬに対する経口および局所ＡＣＣｉの効果
約１０週齢の雄のＳｙｒｉａｎゴールドハムスターを、標準的なハムスター飼料および水を自由に摂らせて飼育した。実験日に、明サイクルに入って２時間目に、１０ｍＬ／ｋｇの用量体積を投与して、例８または対のビヒクル（２０ｍＭトリス  ｐＨ７．４中の１％ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナート）１００ｍｇ／ｋｇを単回強制経口投与として、各ハムスターに、２分間隔で送達した。局所送達のための実施例３を、７０：３０（エタノール：プロピレングリコール）からなるビヒクル中の溶液として１００ｍｇ／ｍｌの濃度で調製した。単回用量（５ｕｌ／耳）の局所投与をハムスターの耳に、ピペット（２〜１０ｕｌ）の先端を投与順序に従って２分間隔で付着させて施与した。投与のタイミングによって、製剤を約１平方ｃｍ面積全体に均一に展開させ、ケージに動物を戻す前に、吸収／乾燥させることができた。ＡＣＣｉ投与から１時間後に、２分間隔のタイミングフォーマットに従って、各動物に、１４Ｃ標識アセタート（生理食塩水中で希釈したＡＲＣ０１５８Ｂ）の腹腔内注射を投与した。各動物に、体重に基づき個別に計算した量の１４Ｃアセタート（０．１μＣｉ／２μｌの投与体積におけるｇ／ｇ）を投与した。１時間後に、１４Ｃアセタート注射動物を、ＣＯ２窒息によって屠殺した。
【０２８０】
新規脂質生成決定（脂質への１４Ｃの組み込み）のために、肝臓および耳皮膚を収集した。簡単には、合計で肝臓約４００ｍｇの２つの肝臓パンチを、各動物の２分枝の中葉から収集し（８ｍｍ直径Ｓｋｌａｒ  Ｔｒｕ−ｐｕｎｃｈ−Ｓｋｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用）、生理食塩水ですすぎ、吸い取って乾燥させた。組織を、ＮａＯＨ（２．５Ｍの１．５ｍＬ）を含有する、予め計量しておいたガラス製管（ＰＴＦＥライニング付きキャップを備えたＰｙｒｅｘ９８２６  −  １６×１２５ｍｍ）に入れた。
【０２８１】
耳皮膚試料を、次の手法で分析のために調製した。１つの８ｍｍ遠位生検パンチ（８ｍｍ直径のＳｋｌａｒ  Ｔｒｕ−ｐｕｎｃｈ−Ｓｋｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを使用）（動物１匹当たり２つ）を、試料収集面積を標準化するために、耳軟骨内の解剖学的「Ｖ」のすぐ上で採取した。次いで、パンチを、２層に分割した（前方および後方）。前方（前）表面を、分析のために保持した。前方皮膚を、ＮａＯＨ（２．５Ｍの１．５ｍＬ）を含有する、予め計量しておいたガラス製管（ＰＴＦＥライニング付きキャップを備えたＰｙｒｅｘ９８２６  −  １６×１２５ｍｍ）に入れた。
【０２８２】
研究が完了した後に、ＮａＯＨ中の肝臓および耳皮膚試料を計量し、この重量を、収集された組織の質量を計算するために使用した。組織が完全に分解するまで（約４〜６時間、加熱の間、穏やかなボルテックス処理を２〜３時間）、キャップを締めた管を、乾燥炉（約６０℃）内で加熱した。分解および冷却の後に、無水エタノール（２．５ｍＬ）を各試料に添加した。管のキャップを再び締め、６０秒間、激しく混合し（ボルテックス処理）、室温で終夜沈降させた。石油エーテル（４．８ｍＬ）を各管に添加し、キャップを再び締め、試料を激しく混合した（６０秒）。試料をＳｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００（１５００×ｇで５分間）内で遠心して、有機相および水性相を分離した。得られた上部有機相を、穏やかに吸引して除去し、廃棄した。濃ＨＣｌ（１２Ｍの０．６ｍＬ）を、各試料の残りの水性相（界面物質を含む）に添加し、キャップを締め、６０秒間激しくボルテックス処理した。酸性化水性相を、石油エーテル（４．８ｍＬ）で抽出し、次いで、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００（１５００×ｇで５分間）内で遠心して、有機相および水性相を分離した。上部有機相を２０ｍＬシンチレーションバイアルに除去／収集し、キャップを締めた。残りの水性相（界面物質を含む）を、石油エーテル（４．８ｍＬ）で再び抽出した。６０秒の激しいボルテックス処理の後に、試料を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００（１５００×ｇで５分間）内で遠心して、有機相および水性相を分離した。上部有機相を除去し、先行する抽出物と共に、２０ｍｌシンチレーションバイアル内にプールした。プールした有機抽出物を、Ｎ２の穏やかなフロー（約２時間）下、室温で、蒸発乾固した。Ａｑｕａｓｏｌ−２シンチレーション液（１０ｍＬ）（または他の適合するシンチレーション液）を各バイアルに添加し、ボルテックス処理の後に、試料を、適切なシンチレーションカウンター（例えば、Ｗａｌｌａｃ  Ｒａｃｋ−Ｂｅｔａ  １４０９  ＬＳＣ）内でカウントした。
【０２８３】
抽出後の有機相に存在する１４Ｃアセタートから１４Ｃカウントへの変換は、ＤＮＬを表した。データを、ビヒクル対照に対するパーセントして表し、図８においてプロットする。
【０２８４】
Ｓｙｒｉａｎハムスターにおけるハムスター耳トリグリセリド含有率に対するＡＣＣ阻害の効果の評価
体重１５０〜２００ｇの雄のＳｙｒｉａｎゴールドハムスター（２２〜２３週齢）を、標準的なハムスター飼料を自由に摂らせ、１２時間明暗サイクルで飼育した。ハムスターを、例８またはビヒクル（２０ｍＭトリスｐＨ７．４中の１％ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナート）３０ｍｇ／ｋｇで、1日１回１９日間処置した。研究期間の終了時に、動物を、ＣＯ２窒息によって安楽死させた。ハムスター耳介（耳）を、パンチ生検（８ｍｍ直径Ｓｋｌａｒ  Ｔｒｕ−ｐｕｎｃｈ−Ｓｋｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用）によって切除した。パンチ生検を、試料収集面積を標準化するために、各耳の耳軟骨内の解剖学的「Ｖ」のすぐ上で採取した。次いで、パンチを、２層に分割した（前方および後方）。前方（前）表面を、分析のために保持した。肝臓試料では、２分枝の中葉を切除し、生理食塩水ですすぎ、滅菌吸収紙の上に葉の切断末端を置き、毛管現象を使用することによって、血液を排出させた。次いで、肝臓葉を、液体窒素中で急速冷凍した。２つのＱｉａｇｅｎ  ３ｍｍ  Ｔｕｎｇｓｔｅｎビーズを、ハムスター耳皮膚の個別の前方生検を含有する管に、均質化緩衝液（メタノール：水  １：１ｖ／ｖ）５００ｕｌと共に添加した。試料を、Ｑｉａｇｅｎ  Ｔｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒで２５の振動数で５分間均質化した。耳皮膚トリグリセリド含有率を、ＡＢ  ＳＣＩＥＸ  Ｑｔｒａｐ  ５５００で、ＬＣ−ＭＳによって決定した。均質化の後に、脂質をホモジネートから、２００ｎＭの濃度で次の内部標準：グリセリルトリヘプタデカノアート、１，２−ジノナデカノイン、コレステリルヘプタデカノアート、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−ヘプタデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよびパルミトイル−Ｌ−カルニチン−（Ｎ−メチル−ｄ３）ヒドロクロリドを含有するジクロロメタン：イソプロパノール：メタノール（２５：１０：６５、ｖ／ｖ／ｖ）で抽出した。次いで、脂質抽出物を、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ＱＴＲＡＰ  ５５００質量分析計に連結されたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣを使用してＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。脂質クラスを、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ３００  Ｃ４カラム、１．７ｕｍ、２．１×５０ｍｍでの逆相クロマトグラフィーによって分離した。次いで、脂質種を、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードで陽イオンエレクトロスプレーイオン化を使用する質量分析計で分析した。ＬＣクロマトグラムピークの集積を、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ＭｕｌｔｉＱｕａｎｔソフトウェアで行った。ハムスター耳皮膚トリグリセリドレベル（ｍｇ／ｇ組織）を、ビヒクルおよび例８について、図９においてプロットした。
【０２８５】
薬物動態学的薬物相互作用
７種の主要なＰ４５０アイソフォーム（ＣＹＰ３Ａ、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９およびＣＹＰ２Ｄ６）を阻害する実施例１の能力を、患者の肝臓ミクロソームおよびプローブ基質を使用して調査した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究から決定された＞３０μＭのＩＣ５０値に基づき、実施例１は、ＣＹＰ３Ａ、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９またはＣＹＰ２Ｄ６がクリアランスの一次機構を構成する化合物との競合的薬物動態学的薬物相互作用を実証するとは予測されない。
【０２８６】
ヒト研究の考察
実施例１を、１８０人の対象に投与すると、安全で、一般に忍容性が良好であることが見出された。８００ｍｇまでの単回経口用量（分割用量）を、健常な痩身の対象および過体重の対象に投与し、１４日間までで４００ｍｇ（２００ｍｇ  ＢＩＤとして投与）までの繰り返し用量を、健常な対象ならびに２型糖尿病で過体重および肥満の対象に投与した。観察された有害事象の頻度において、用量−または期間関連の増大はなく、最大許容用量は確立されなかった。実施例１の経口吸収は急速であり、中央Ｔｍａｘは、絶食状態では投与の約１〜２時間後に、かつ摂食状態では約３〜４時間後に生じた。食物は、その速度をやや低下させたが、食物のタイミングに関わらず、実施例１の吸収の規模を低下させることはなく、投与を支援した。実施例１での終末相半減期は、約１０〜１３時間であった。曝露（ＡＵＣおよびＣｍａｘ）は、６００ｍｇまでの単回投与では、用量に比例して増大した。
【０２８７】
超低密度リポタンパク質トリグリセリド（ＶＬＤＬ−ＴＧ）および皮脂を含む様々な脂質プールに対するＤＮＬの相対的寄与を査定するために、方法研究を健常な対象で行った。研究によって、患者の皮脂は、他の脂質プールと比較して、限局性ＤＮＬに非常に依存していることが明らかになった。
【０２８８】
実施例１は、プラセボと比較して、処置対象において、基線から皮脂レベルを＞４９％低下させた。具体的な脂質クラスをさらに分析することによって、皮脂における主な脂質クラスである皮脂トリグリセリドが、プラセボと比較して６６％低下したことが実証された。同じくＤＮＬに依存している皮脂遊離脂肪酸およびワックス状エステルのレベルが、プラセボ処置対象と比較して、実施例１処置対象では、それぞれ、約４９％および５３％低減した。
【０２８９】
まとめると、実施例１は、健常ヒトボランティアにおけるＤＮＬを８０％まで用量依存的に抑制して、基線と比較して皮脂の産生を４９％低減する二重ＡＣＣ１／ＡＣＣ２阻害薬である（図４）。具体的な脂質クラスの分析によって、皮脂における主要な脂質クラスである皮脂トリグリセリドが６６％低下したことが実証された（図５）。同じくＤＮＬに依存している皮脂遊離脂肪酸およびワックス状エステルのレベルも、プラセボ処置対象と比較して、実施例１処置対象において低減した（図５）。対照的に、ＤＮＬに依存していない遊離コレステロールは、プラセボと比較して、変化を示さなかった。同じくＤＮＬに依存していないスクアレンレベルは、プラセボと比較して、２．６倍の増大を示した。
【０２９０】
放射ＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害アッセイの説明
ＡＣＣ阻害研究のために、試験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かし、１０μＭ〜０．３ｎＭの範囲の最終化合物濃度を用いる１１ポイント用量応答で実行するために、ＤＭＳＯ中で連続希釈した。１μＬのアリコートを、反復試験で９６ウェルプレートに添加し、同体積のＤＭＳＯを対照ウェルに添加した。酵素溶液を、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭクエン酸三カリウム、６ｍＭ  ＤＴＴ、０．７５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡおよび０．８μｇ／ｍＬ  ＡＣＣを含有する緩衝液中で、３７℃で３０分間活性化させた。１０分間の酵素−化合物プレインキュベーションの後に、室温で、ドラフトチャンバー内で、基質溶液（２．４ｍＭアセチル−ＣｏＡ、３８．４ｍＭ  ＫＨＣＯ３、１．６ｍＭ  ＮａＨ［１４Ｃ］Ｏ３および８．０ｍＭ  ＡＴＰを含有）を添加することによって、反応を開始した。１ウェル当たり１００μＬの最終アッセイ体積は、４６ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、７．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２．８ｍＭ  ＤＴＴ、０．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、２．０ｍＭ  ＡＴＰ、６００μＭアセチル−ＣｏＡ三リチウム塩、９．６ｍＭ炭酸水素カリウム、０．６μｇ／ｍＬ  ｈＡＣＣ１または２および０．４ｍＭ  ＮａＨ［１４Ｃ］Ｏ３（５８ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）からなった。２０分後に、３Ｎ塩酸（ＨＣｌ）を添加することによって、反応を停止させたが、その際、未反応のＮａＨＣＯ３がＣＯ２として随伴して遊離した。プレートを、５０℃で終夜乾燥して、［１４Ｃ］Ｏ２を完全に遊離させた。翌日、水３０μＬを、［１４Ｃ］マロニル−ＣｏＡを含有する乾燥ウェルに添加し、続いて、ＯｐｔｉＰｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ液体シンチレーション液９５μＬを添加した。プレートを激しく振盪し、密封し、Ｍｉｃｒｂｅｔａ  ＬＳＣルミネセンスカウンターに移して、各アッセイウェル中の１４Ｃの量を定量化した。
【０２９１】
放射アッセイの結果を、表２において示す。
【０２９２】
【表２】
2016534091.tif 000048
【０２９３】
1.  Corbett JW.「最新アセチル−CoAカルボキシラーゼ阻害薬特許:mid-2007-2008の総説（Review of recent acetyl-CoA carboxylase inhibitor patents:
mid-2007-2008）」Expert Opin Ther Pat. 2009;19:943-56.
2.  Dawson AL,
Dellavalle RP. 「尋常性ざそう（Acne vulgaris）」BMJ. 2013; 346:f2634.
3.  Downie MM,
Kealey T. 「ヒト皮脂腺における脂質生成：グリコーゲンおよびグリセロホスファートは皮脂脂質を合成するための基質である（Lipogenesis in the human sebaceous gland: glycogen and
glycerophosphate are substrates for the synthesis of sebum lipids）」J Invest Dermatol. 1998; 111:199-205.
4.  Freeman-Cook KD,
Amor P, Bader S, Buzon LM, Coffey SB, Corbett JW, Dirico KJ, Doran SD, Elliott
RL, Esler W, Guzman-Perez A, Henegar KE, Houser JA, Jones CS, Limberakis C,
Loomis K, McPherson K, Murdande S, Nelson KL, Phillion D, Pierce BS, Song W,
Sugarman E, Tapley S, Tu M, Zhao Z. 「親油性効率の最大化：アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの阻害薬の設計におけるFree-Wilson分析の使用（Maximizing lipophilic
efficiency: the use of Free-Wilson analysis in the design of inhibitors of
acetyl-CoA carboxylase）」J Med Chem. 2012; 55:935-42
5.  Gannon M,
Underhill M, Wellik KE. J. Family Pract. 2011; 60:290-92.
6.  Geiger JM. 「レチノイドおよび皮脂腺活性（Retinoids and sebaceous gland activity）」Dermatology.
1995; 191:305-10.
7.  Glund S, Schoelch C,
Thomas L, Niessen HG, Stiller D, Roth GJ, Neubauer H.  「アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ２の阻害は、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて骨格筋脂肪酸酸化を増強し、全身グルコースホメオスターシスを向上させる（Inhibition of acetyl-CoA carboxylase 2 enhances skeletal muscle fatty
acid oxidation and improves whole-body glucose homeostasis in db/db mice）」 Diabetologia. 2012; 55:2044-53
8.  Harwood HJ Jr.「代謝症候群の治療：アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害（Treating the metabolic syndrome: acetyl-CoA carboxylase inhibition）」Expert Opin Ther Targets. 2005; 9:267-81.
9.  Harwood HJ Jr, Petras
SF, Shelly LD, Zaccaro LM, Perry DA, Makowski MR, Hargrove DM, Martin KA,
Tracey WR, Chapman JG, Magee WP, Dalvie DK, Soliman VF, Martin WH, Mularski CJ,
Eisenbeis SA.「アイソザイム非選択的Ｎ置換ビピペリジルカルボキサミドアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害薬は、培養細胞および実験動物において、組織マロニル−ＣｏＡ濃度を低下させ、脂肪酸合成を阻害し、脂肪酸酸化を増大させる（Isozyme-nonselective N-substituted bipiperidylcarboxamide acetyl-CoA
carboxylase inhibitors reduce tissue malonyl-CoA concentrations, inhibit fatty
acid synthesis, and increase fatty acid oxidation in cultured cells and in
experimental animals）」J Biol Chem. 2003; 278:37099-111.
10.  Hellerstein MK, Neese
RA. 「８年目での質量アイソトポマー分布分析：理論的、分析的および実験的考察（Mass isotopomer
distribution analysis at eight years: theoretical, analytic, and experimental
considerations）」Am J Physiol. 1999; 276:E1146-70.
11.  Hellerstein MK.「ヒトにおける新規脂質生成：代謝および調節態様（De novo lipogenesis in humans: metabolic and regulatory aspects）」
Eur J Clin Nutr. 1999; 53 Suppl 1:S53-65.
12.  Janiczek-Dolphin N,
Cook J, Thiboutot J, Clucas A.「皮脂の低減によって、にきびの出現を予測できるか（Can
Sebum reduction predict acne outcome?）」 Br J Dermatol.
2010; 163:683-688. 
13.  Jones PJ.「重水を使用してのヒトにおける脂質生成の追跡（Tracing lipogenesis in humans using deuterated water）」Can J Physiol Pharmacol. 1996; 75: 755-60. 
14.  Kligman AM, Miller
DL, McGinley KJ. 「Sebutape（登録商標）：ヒト皮脂分泌を可視化および測定するためのデバイス（Sebutape(R): A device for visualizing and measuring human sebaceous
secretion）」 J Soc Cosmet Chem. 1986; 37:369-74. 
15.  Lee WN, Bassilian S,
Ajie HO, Schoeller DA, Edmond J, Bergner EA, Byerley LO.「Ｄ２Ｏおよび質量アイソトポマー分析を使用しての脂肪酸およびコレステロール合成のｉｎ  ｖｉｖｏ測定（In vivo measurement of fatty acids and cholesterol synthesis using D2O
and mass isotopomer analysis）」Am J Physiol 1994; 266:
E600-E708. 
16.  Ottaviani M, Camera
E, Picardo M.「にきびにおける脂質メディエーター（Lipid mediators in acne）」 Mediators of Inflammation． 2010.
doi:10.1155/2010/858176
17.  Plewig G,
Luderschmidt C.「皮脂腺のためのハムスター耳モデル（Hamster ear model for
sebaceous glands）」J Invest Dermatol. 1977; 68:171-6.
18.  Zouboulis CC,
Seltmann H, Neitzel H, Orfanos CE.「不死化ヒト皮脂腺細胞系（ＳＺ９５）の樹立および特徴づけ（Establishment and characterization of an immortalized human sebaceous
gland cell line (SZ95)）」J Invest Dermatol. 1999;
113:1011-20.
19.  Zouboulis CC.「にきびおよび皮脂腺機能（Acne and sebaceous gland function）」Clin. Dermatol.
2004; 22:360-66.
【図１】
2016534091.tif 000050
【図２】
2016534091.tif 000051
【図３】
2016534091.tif 000052
【図４】
2016534091.tif 000053
【図５−１】
2016534091.tif 000054
【図５−２】
2016534091.tif 000055
【図５−３】
2016534091.tif 000056
【図６】
2016534091.tif 000057
【図７】
2016534091.tif 000058
【図８】
2016534091.tif 000059
【図９】
2016534091.tif 000060
【配列表】
2016534091000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月27日(2016.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
にきびを治療するために用いられる、ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物。
【請求項２】
皮脂トリグリセリド、皮脂遊離脂肪酸、コレステロールエステルおよび皮脂ワックス状エステルを低減するために用いられる、ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物。
【請求項３】
ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩が、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩である、請求項１の組成物。
【請求項４】
ＡＣＣ阻害薬または薬学的に許容できるその塩が、１’−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンまたは薬学的に許容できるその塩である、請求項１の組成物。
【国際調査報告】
2016534091.tif 000061
2016534091.tif 000062
2016534091.tif 000063