(57)【要約】  式Ｉの化合物（その塩を含む）、ならびに該化合物を用いる組成物および方法が開示される。該化合物はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に拮抗する活性を有し、ＨＣＶに感染したヒトを治療するのに有用であり得る。
2016505011.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2016505011.tif 000037
［式中：
ｎ、ｍは、独立して、０または１であり；
Ｒ１はメチルであり；
Ｒ２は、０−２個のハロまたはメトキシで独立して置換されるか、またはＷ−Ａｒ１でパラ置換されるフェニルであり；
Ｗは−Ｏ−または−ＮＨ−であり；
Ａｒ１はフェニルまたはパラ−ハロフェニルであり；
Ｒ３は水素、ハロまたはアルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ、アルコキシアルキルオキシ、ＣＯＯＲ１１およびＣＯＮ（Ｒ１２）（Ｒ１３）より独立して選択され；
Ｒ１１は、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有し；
Ｒ１２、Ｒ１３は、各々独立して、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有するか；または
Ｒ１２およびＲ１３は、Ｒ１２とＲ１３から１個ずつ、２個の原子が加わることで環を形成でき；
Ｒ１４は水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有し；
Ｒ７は水素、アルキル、ハロ、Ｎ（Ｒ２１）（Ｒ２２）またはアルキルスルホニルであり；
Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルスルホニルまたはアルキルスルホニルアルキルであるか；
あるいは一緒になって形成されたＮ（Ｒ２１）（Ｒ２２）が、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニルまたはピペラジニルであり、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはヒドロキシより選択される０−２個の置換基で置換されており；
Ｘ、Ｙは、ＣＲ３１Ｒ３２、ＣＯ、Ｏ、ＮＲ３３、ＮＣＮ、Ｓ、ＳＯまたはＳ（Ｏ）２より独立して選択され；
Ｒ３１、Ｒ３２は、各々独立して、アルキルまたはシクロアルキルであり、０−３個の置換基でさらに置換されるか；あるいは
Ｒ３１およびＲ３２は、Ｒ３１とＲ３２から１個ずつ、２個の原子が加わることで環を形成でき；
Ｒ３３は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはＳ（Ｏ）２Ｒ１１であって、ハロ、ハロアルコキシ、ＯＲ１１、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基を有し；
Ｚは、Ｏ、ＮＲ４１、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４１、Ｃ（Ｓ）ＮＲ４１、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４１、ＮＲ４１Ｃ（Ｏ）ＮＲ４２、およびＡｒ２からなる群より選択される０−１２個の基を含有するアルキレンまたはアルケニレン鎖である：ただし、いずれのＯまたはＳ原子も別のＯまたはＳ原子と直接結合することなく、環Ａを１１−２４員とし；さらには、該アルキレンまたはアルケニレン鎖はアルキル、シクロアルキル、ハロ、アルコキシ、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３、ＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、またはＡｒ３より選択される０−６個の置換基で置換され；
Ｒ４１、Ｒ４２は、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ハロアルコキシ、ＯＲ１１、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基を有し；
Ａｒ２は、フェニル、５員のヘテロアリールまたは６員のヘテロアリールであり、シアノ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基で置換され；および
Ａｒ３は、フェニル、５員のヘテロアリールまたは６員のヘテロアリールであり、シアノ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基で置換される］
で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
ｎおよびｍの各々が１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がハロで置換されるフェニルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ハロがフルオロである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６およびＲ７の各々が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＸおよびＹの各々がＮＲ３３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３３が水素またはＳ（Ｏ）２ＣＨ３である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ａが少なくとも１２員の環である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ａが少なくとも１５員の環である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ａが少なくとも１７員の環である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａが少なくとも１９員の環である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
【化２−１】
2016505011.tif 000038
【化２−２】
2016505011.tif 000039
からなる群より選択される、化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１４】
請求項１２に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１５】
治療上有効量の請求項１に記載の化合物の患者への投与を含むことを特徴とする、Ｃ型肝炎感染症の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、参照によりその内容がそのまま組み込まれる、２０１３年１月１０日付け出願の米国仮出願番号６１／７５０，９６７の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に対する活性を有し、ＨＣＶに感染した対象の治療に有用である、新規な化合物（その塩を含む）に関する。本発明はまた、これらの化合物を含有する組成物に、ならびに該化合物を製造および使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は主要なヒト病原体であり、世界中で推定１億７千万人が感染しており、これはヒト免疫不全ウイルス１型による感染数のおよそ５倍である。これらのＨＣＶ感染者のうちのかなりの割合が、肝硬変および肝細胞癌を含む、重篤な進行性肝疾患を発症する（Lauer,G.M.; Walker,B.D. N.Engl.J.Med. 2001, 345, 41-52）。
【０００４】
ＨＣＶはプラス鎖ＲＮＡウイルスである。推定アミノ酸配列の比較および５’非翻訳領域における広範な類似性に基づいて、ＨＣＶはフラビウイルス科の独立した属として分類されている。フラビウイルス科のメンバーはすべて、単一の連続したオープンリーディングフレームの翻訳を介して既知のすべてのウイルス特異的蛋白質をコードするプラス鎖ＲＮＡゲノムを含有するエンベロープビリオンを有する。
【０００５】
ＨＣＶゲノム全体を通して、ヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列内にかなりの異質性が認められる。少なくとも６つの主要な遺伝子型が特徴付けられており、５０種を超えるサブタイプが記載されている。ＨＣＶの主要な遺伝子型は世界中でその分布が異なり、ＨＣＶの遺伝的異質性の臨床的意義は、病理発生および治療に対する遺伝子型の潜在的効果について多数の実験がなされているにも拘わらず、依然として分かりにくいままである。
【０００６】
一本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡゲノムは長さが約９５００個のヌクレオチドであり、約３０００個のアミノ酸の単一の大きなポリ蛋白をコードする単一のオープンリーディングフレーム(ＯＲＦ)を有する。感染細胞において、このポリ蛋白は、細胞およびウイルスプロテアーゼにより複数の部位で切断され、構造蛋白および非構造(ＮＳ)蛋白を産生する。ＨＣＶの場合、成熟非構造蛋白(ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂ)の生成は、２つのウイルスプロテアーゼによりなされる。第１のプロテアーゼがメタロプロテアーゼであると考えられ、ＮＳ２−ＮＳ３接合部を切断し；第２のプロテアーゼがＮＳ３のＮ−末端領域内に含まれるセリンプロテアーゼ（本明細書中でＮＳ３プロテアーゼとも称される）であり、ＮＳ３の下流にある、ＮＳ３−ＮＳ４Ａ切断部位においてシスで、残りのＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ部位についてはトランスにて両方のその後のすべての切断を媒介する。ＮＳ４Ａ蛋白は、ＮＳ３プロテアーゼに対して補助因子として作用し、ことによるとＮＳ３および他のウイルスレプリカーゼ成分の膜局在を助成する、複数の機能に供するようである。ＮＳ３蛋白とＮＳ４Ａとの複合体形成は、そのあらゆる部位での蛋白質分解効率を高める、プロセッシング事象に不可欠であると思われる。ＮＳ３蛋白質もヌクレオシドトリホスファターゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性を示す。ＮＳ５Ｂ（本明細書にてＨＣＶポリメラーゼとも称される）は、ＨＣＶの複製と関連付けられる、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ蛋白が「Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides」（Bressanelli,S.ら、Journal of Virology 2002, 3482-3492；およびDefrancescoおよびRice、Clinics in Liver Disease 2003, 7, 211-242）に記載される。
【０００７】
現在において最も効果的なＨＣＶ療法は、アルファ−インターフェロンとリバビリンとを併用して用いるもので、４０％の患者で効能の持続が得られる（Poynard,T.ら、Lancet 1998, 352, 1426-1432）。近年の臨床結果にて単剤治療薬としてペグ化アルファ−インターフェロンが未修飾のアルファ−インターフェロンよりも優れていることが明らかにされている（Zeuzem,S.ら、N.Engl.J.Med. 2000, 343, 1666-1672）。しかし、ペグ化アルファ−インターフェロンとリバビリンとの併用を含む実験に基づく治療計画であっても、相当な割合の患者で、ウイルス負荷の持続的減少はない。そのため、ＨＣＶ感染を治療するための効果的な療法を開発することについて明確かつ重要な要求がある。
【０００８】
ＨＣＶ−７９６のＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤は、患者におけるＨＣＶ  ＲＮＡレベルを減少させる能力を示す。ウイルスのＲＮＡレベルは一過的に減少し、単一薬剤としてその化合物で治療した場合に投薬の間にリバウンドしたが、インターフェロンとリバビリンの形態である標準的な治療剤と合わせた場合にそのレベルは大きく低下した。この化合物の開発は、併用計画で長期間にわたる投薬の間に肝毒性が観察されたため、中断された。米国特許第７，２６５，１５２号および対応するＰＣＴ特許出願ＷＯ２００４／０４１２０１はＨＣＶ−７９６クラスの化合物を記載する。他の化合物も開示されている；例えば、ＷＯ２００９／１０１０２２ならびにＷＯ２０１２／０５８１２５を参照のこと。
【０００９】
したがって、当該分野において必要とされているものは、Ｃ型肝炎に対して新規で、かつ効果的なさらなる化合物である。また、これらの化合物は、医薬的使用に対して、例えば、１または複数の作用機序、結合性、阻害効果、標的選択性、溶解性、安全特性またはバイオアベイラビリティに関して、有利な点を提供しなければならない。さらには、これらの化合物を利用する新規な製剤および治療方法も必要とされる。
【発明の概要】
【００１０】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2016505011.tif 000003
［式中：
ｎ、ｍは、独立して、０または１であり；
Ｒ１はメチルであり；
Ｒ２は、０−２個のハロまたはメトキシで独立して置換されるか、またはＷ−Ａｒ１でパラ置換されるフェニルであり；
Ｗは−Ｏ−または−ＮＨ−であり；
Ａｒ１はフェニルまたはパラ−ハロフェニルであり；
Ｒ３は水素、ハロまたはアルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ、アルコキシアルキルオキシ、ＣＯＯＲ１１およびＣＯＮ（Ｒ１２）（Ｒ１３）より独立して選択され；
Ｒ１１は、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有し；
Ｒ１２、Ｒ１３は、各々独立して、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有するか；または
Ｒ１２およびＲ１３は、Ｒ１２とＲ１３から１個ずつ、２個の原子が加わることで環を形成でき；
Ｒ１４は水素、アルキルまたはシクロアルキル（ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有する）であり；
Ｒ７は水素、アルキル、ハロ、Ｎ（Ｒ２１）（Ｒ２２）またはアルキルスルホニルであり；
Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルスルホニルまたはアルキルスルホニルアルキルであるか；
あるいは一緒になって形成されたＮ（Ｒ２１）（Ｒ２２）が、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニルまたはピペラジニルであり、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはヒドロキシより選択される０−２個の置換基で置換されており；
Ｘ、Ｙは、ＣＲ３１Ｒ３２、ＣＯ、Ｏ、ＮＲ３３、ＮＣＮ、Ｓ、ＳＯまたはＳ（Ｏ）２より独立して選択され；
Ｒ３１、Ｒ３２は、各々独立して、アルキルまたはシクロアルキルであり、０−３個の置換基でさらに置換されるか；あるいは
Ｒ３１およびＲ３２は、Ｒ３１とＲ３２から１個ずつ、２個の原子が加わることで環を形成でき；
Ｒ３３は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはＳ（Ｏ）２Ｒ１１であって、ハロ、ハロアルコキシ、ＯＲ１１、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基を有し；
Ｚは、Ｏ、ＮＲ４１、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４１、Ｃ（Ｓ）ＮＲ４１、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４１、ＮＲ４１Ｃ（Ｏ）ＮＲ４２、またはＡｒ２より選択される０−１２個の基を含有するアルキレンまたはアルケニレン鎖である：ただし、いずれのＯまたはＳ原子も別のＯまたはＳ原子と直接結合することなく、環Ａを１１−２４員とし；さらには、該アルキレンまたはアルケニレン鎖はアルキル、シクロアルキル、ハロ、アルコキシ、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３、ＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、およびＡｒ３からなる群より選択される０−６個の置換基で置換され；
Ｒ４１、Ｒ４２は、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ハロアルコキシ、ＯＲ１１、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基を有し；
Ａｒ２は、フェニル、５員のヘテロアリールまたは６員のヘテロアリールであり、シアノ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基で置換され；および
Ａｒ３は、フェニル、５員のヘテロアリールまたは６員のヘテロアリールであり、シアノ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基で置換される］
で示される化合物（その医薬的に許容される塩を含む）を提供する。
【００１１】
本発明はまた、式Ｉの化合物（その医薬的に許容される塩を含む）および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。
【００１２】
さらには、本発明は、治療にて有効量の式Ｉの化合物を患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎感染症を治療する１または複数の方法を提供する。
【００１３】
本発明の一部として、式Ｉの化合物を製造する１または複数の方法も提供される。
【００１４】
本発明は、これらのこと、ならびに下記に示される他の重要な目的を対象とする。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本願においては、特記されない限り、以下の用語が明細書中で使用され、次の意義を有する：「Ｈ」は、重水素などの同位体を含む、水素をいう。「ハロ」はフルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。「アルキル」は１ないし６個の炭素からなる直鎖または分岐鎖のアルキル基を意味する。「アルケニル」は２ないし６個の炭素からなり、少なくとも１個の二重結合を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基を意味する。「シクロアルキル」は、３ないし７個の炭素からなる単環式環系を意味する。「ヒドロキシアルキル」、「アルコキシ」および置換されたアルキル部分を含む他の用語は、そのアルキル部分が１ないし６個の炭素原子からなる直鎖または分岐鎖のアイソマーを包含する。「ハロ」は、ハロで定義される置換基でモノハロ置換ないしペルハロ置換されるすべてのハロゲン化アイソマー、例えば、「ハロアルキル」および「ハロアルコキシ」、「ハロフェニル」、「ハロフェノキシ」を包含する。「アリール」は、６ないし１２個の炭素原子を有する単環式または二環式芳香族炭化水素基を、あるいは一方または両方の環がフェニル基である二環式縮合環系を意味する。二環式縮合環系は４ないし６員の芳香族または非芳香族炭素環式環に縮合したフェニル基からなる。アリール基の代表例として、以下に限定されないが、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニルまたはテトラヒドロナフチルが挙げられる。「ヘテロアリール」は、窒素、酸素または硫黄より独立して選択される１−５個のヘテロ原子を有する５〜７員の単環式あるいは８〜１１員の二環式芳香族環系を意味する。括弧および複数の括弧でくくられた用語は、結合関係を当業者に明確にするために用いることを意図とする。例えば、（（Ｒ）アルキル）などの語は、アルキル置換基が置換基Ｒでさらに置換されることを意味する。多環式環系（例えば、二環式環系）上の可変的位置に結合する化学図表で示される置換基は、それらが付加するように図示される環に結合することを意図とする。
【００１６】
本発明は、該化合物のすべての医薬的に許容される塩の形態を包含する。医薬的に許容される塩は、対イオンが、該化合物の生理活性または毒性に、ならびに薬理学的等価物としての機能それ自体に有意に寄与しない塩である。これらの塩は、市販の試薬を利用する一般的な有機技法に従って製造され得る。ある種のアニオン性塩の形態は、酢酸塩、アシストラート、ベシル酸塩、臭化物塩、カンシラート、塩化物塩、クエン酸塩、フマル酸塩、グロコウロナート（glucouronate）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヨウ化物塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシラート、硝酸塩、パモ酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシラート、およびキシナホ酸塩（xinofoate）を包含する。ある種のカチオン性塩の形態は、アンモニウム塩、アルミニウム塩、ベンザチン塩、ビスマス塩、カルシウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、ジエタノールアミン塩、リチウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、４−フェニルシクロヘキシルアミン塩、ピペラジン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、トロメタミン塩、および亜鉛塩を包含する。
【００１７】
本発明の化合物のいくつかは、不斉炭素原子を有する。本発明は、エナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ体などの立体異性体の混合物を含む、すべての立体異性体の形態を包含する。ある種の立体異性体は当該分野にて既知の方法を用いて製造され得る。該化合物と関連する中間体の立体異性混合物は、当該分野にて周知の方法に従って、個々の異性体に分離され得る。以下のスキームおよび表中で分子構造を図示する際の実線または破線くさび形の使用は、相対的立体化学を表示しようとするに過ぎず、絶対的立体化学帰属を含むものとして解釈されるべきではない。
【００１８】
本発明は、本発明の化合物に存在する原子のすべての同位体を包含することを意図とする。同位体は、原子番号は同じであるが、質量数の異なるそれらの原子を包含する。
限定するものではなく、一般的な例によれば、水素の同位体は重水素およびトリチウムを包含する。炭素の同位体は１３Ｃおよび１４Ｃを包含する。本発明の同位体標識される化合物は、通常、当業者に公知の一般的方法により、あるいはその他では使用される標識されていない試薬の代わりに同位体標識された適切な試薬を用いる本明細書に記載の方法と類似する方法により調製され得る。かかる化合物は、種々の可能性としての用途、例えば生物学的活性の測定における標体、および試薬としての用途を有する。安定した同位体の場合、かかる化合物は、有利には、生物学的、薬理学的または薬物動態的特性を修飾する可能性がある。
【００１９】
上記されるように、本発明は、式Ｉ：
【化２】
2016505011.tif 000004
［式中：
ｎ、ｍは、独立して、０または１であり；
Ｒ１はメチルであり；
Ｒ２は、０−２個のハロまたはメトキシで独立して置換されるか、またはＷ−Ａｒ１でパラ置換されるフェニルであり；
Ｗは−Ｏ−または−ＮＨ−であり；
Ａｒ１はフェニルまたはパラ−ハロフェニルであり；
Ｒ３は水素、ハロまたはアルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ、アルコキシアルキルオキシ、ＣＯＯＲ１１およびＣＯＮ（Ｒ１２）（Ｒ１３）より独立して選択され；
Ｒ１１は、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有し；
Ｒ１２、Ｒ１３は、各々独立して、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有するか；または
Ｒ１２およびＲ１３は、Ｒ１２とＲ１３から１個ずつ、２個の原子が加わることで環を形成でき；
Ｒ１４は水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシまたはハロアルコキシより選択される０−３個の置換基を有し；
Ｒ７は水素、アルキル、ハロ、Ｎ（Ｒ２１）（Ｒ２２）またはアルキルスルホニルであり；
Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルスルホニルまたはアルキルスルホニルアルキルであるか；
あるいは一緒になって形成されたＮ（Ｒ２１）（Ｒ２２）が、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニルまたはピペラジニルであり、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはヒドロキシより選択される０−２個の置換基で置換されており；
Ｘ、Ｙは、ＣＲ３１Ｒ３２、ＣＯ、Ｏ、ＮＲ３３、ＮＣＮ、Ｓ、ＳＯまたはＳ（Ｏ）２より独立して選択され；
Ｒ３１、Ｒ３２は、各々独立して、アルキルまたはシクロアルキルであり、０−３個の置換基でさらに置換されるか；あるいは
Ｒ３１およびＲ３２は、Ｒ３１とＲ３２から１個ずつ、２個の原子が加わることで環を形成でき；
Ｒ３３は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはＳ（Ｏ）２Ｒ１１であって、ハロ、ハロアルコキシ、ＯＲ１１、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基を有し；
Ｚは、Ｏ、ＮＲ４１、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４１、Ｃ（Ｓ）ＮＲ４１、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４１、ＮＲ４１Ｃ（Ｏ）ＮＲ４２、およびＡｒ２より選択される０−１２個の基を含有するアルキレンまたはアルケニレン鎖である：ただし、いずれのＯまたはＳ原子も別のＯまたはＳ原子と直接結合することなく、環Ａを１１−２４員とし；さらには、該アルキレンまたはアルケニレン鎖はアルキル、シクロアルキル、ハロ、アルコキシ、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３、ＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、またはＡｒ３より選択される０−６個の置換基で置換され；
Ｒ４１、Ｒ４２は、水素、アルキルまたはシクロアルキルであって、ハロ、ハロアルコキシ、ＯＲ１１、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３、またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基を有し；
Ａｒ２は、フェニル、５員のヘテロアリールまたは６員のヘテロアリールであり、シアノ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３、またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基で置換されており；および
Ａｒ３は、フェニル、５員のヘテロアリールまたは６員のヘテロアリールであり、シアノ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ＯＨ、ＯＲ１１、ハロアルコキシ、ＮＨ２、ＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯＯＲ１１、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１２Ｒ１３、またはＮＲ１４ＣＯＮＲ１２Ｒ１３より選択される０−３個の置換基で置換される］
で示される１または複数の化合物（その医薬的に許容される塩を含む）を対象とする。
【００２０】
本発明の好ましい実施態様において、ｎおよびｍは、各々、１である。
【００２１】
Ｒ２がハロで置換されるフェニルも好ましく、フルオロまたはＦで置換されるフェニルがより一層好ましい。
【００２２】
また、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６およびＲ７が、各々、水素またはＨであることも好ましい。
【００２３】
ある実施態様において、Ｒ５がＣＯＮＲ１２Ｒ１３であることも好ましい。
【００２４】
ＸおよびＹが、各々、ＮＲ３３であることも好ましい。
【００２５】
Ｒ３３が水素であるか、Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３である実施態様がさらに好ましい。
【００２６】
Ａが１２員またはそれ以上の環であることも好ましい。他の実施態様において、Ａが１５員またはそれ以上の環であることが好ましい。他の実施態様において、Ａが１７員またはそれ以上の環であることが好ましい。さらに別の実施態様において、Ａが１９員またはそれ以上の環であることが好ましい。限定例としてではなく、Ａが１５員環である本発明の化合物は次のように表すことができる（説明のために、環番号を用いて示される）：
【化３】
2016505011.tif 000005
【００２７】
【化４−１】
2016505011.tif 000006
【化４−２】
2016505011.tif 000007
【化４−３】
2016505011.tif 000008
からなる群より選択される、式Ｉの化合物（その医薬的に許容される塩を含む）も好ましい。
【００２８】
医薬組成物および治療方法
本明細書に記載の種々の実施態様による化合物は、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂに対する活性を示し、ＨＣＶおよびＨＣＶ感染症を治療するのに有用であり得る。従って、別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【００２９】
別の態様において、本発明は抗ＨＣＶ活性を有するさらなる化合物をさらに含む組成物を提供する。
【００３０】
別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する化合物がインターフェロンまたはリバビリンである組成物を提供する。もう一つ別の態様は、本発明はインターフェロンがインターフェロンアルファ２Ｂ、ペグ化インターフェロンアルファ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンアルファ２Ａ、インターフェロンラムダ、およびリンパ芽球インターフェロンタウより選択されるところのものを提供する。
【００３１】
別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する化合物がサイクロスポリンであるところの組成物を提供する。もう一つ別の態様において、本発明は、サイクロスポリンがサイクロスポリンＡである組成物を提供する。
【００３２】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を強化する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン５’−モノホスファートデヒドロゲナーゼ阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンからなる群より選択されるところの組成物を提供する。
【００３３】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＮＳ４Ｂ蛋白、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶエグレス、ＨＣＶ  ＮＳ５Ａ蛋白、ＩＭＰＤＨ、およびＨＣＶ感染の治療のためのヌクレオシドアナログより選択される標的の機能を阻害するのに効果的である、組成物を提供する。
【００３４】
もう一つ別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、インターフェロンおよびリバビリンを含む組成物を提供する。
【００３５】
もう一つ別の態様において、本発明は、ＨＣＶレプリコンを、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩と接触させることを含む、ＨＣＶレプリコンの機能を阻害する方法を提供する。
【００３６】
もう一つ別の態様において、本発明は、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ蛋白を、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩と接触させることを含む、ＨＣＶＮＳ５Ｂ蛋白の機能を阻害する方法を提供する。
【００３７】
もう一つ別の態様において、本発明は、患者でのＨＣＶ感染症を治療する方法であって、治療上有効量の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩を、該患者に投与することを含む、方法が提供される。もう一つ別の実施態様において、該化合物はＨＣＶレプリコンの機能を阻害するのに効果的である。もう一つ別の実施態様において。該化合物はＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ蛋白の機能を阻害するのに効果的である。
【００３８】
もう一つ別の態様において、本発明は、患者でのＨＣＶ感染症を治療する方法であって、治療上有効量の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩を、抗ＨＣＶ活性を有するもう一つ別の化合物と（その前に、後で、もしくは同時に）組み合わせて、該患者に投与することを含む、方法が提供される。
【００３９】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する他の化合物がインターフェロンまたはリバビリンであるところの方法を提供する。
【００４０】
もう一つ別の態様において、本発明は、インターフェロンが、インターフェロンアルファ２Ｂ、ペグ化インターフェロンアルファ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンアルファ２Ａ、インターフェロンラムダ、およびリンパ芽球インターフェロンタウより選択されるところの方法を提供する。
【００４１】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する他の化合物がサイクロスポリンであるところの方法を提供する。
【００４２】
もう一つ別の態様において、本発明は、サイクロスポリンがサイクロスポリンＡであるところの方法を提供する。
【００４３】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する他の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を強化する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン５’−モノホスファートデヒドロゲナーゼ阻害剤、アマンタジン、またはリマンタジンより選択されるところの方法を提供する。
【００４４】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する他の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＮＳ４Ｂ蛋白、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶエグレス、ＨＣＶ  ＮＳ５Ａ蛋白、ＩＭＰＤＨ、およびＨＣＶ感染の治療のためのヌクレオシドアナログからなる群より選択される標的の機能を阻害するのに効果的であるところの方法を提供する。
【００４５】
もう一つ別の態様において、本発明は、抗ＨＣＶ活性を有する他の化合物が、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ蛋白以外のＨＣＶの生活環における標的の機能を阻害するのに効果的であるところの方法を提供する。
【００４６】
「治療上有効」なる語は、肝炎およびＨＣＶ感染症の分野の熟練者により理解されるように、患者に有意義な利益を提供するのに必要とされる薬剤の量を意味する。
【００４７】
「患者」は、肝炎およびＨＣＶ感染症の分野の熟練者により理解されるように、ＨＣＶウイルスに感染し、療法に適する人々を意味する。
【００４８】
「治療」、「療法」、「治療計画」、「ＨＣＶ感染症」および関連する用語は、肝炎およびＨＣＶ感染症の分野の熟練者により理解されるように、使用される。
【００４９】
本発明の化合物は、治療上有効量の化合物またはその医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体とからなり、慣用的な賦形剤を含有してもよい、医薬組成物として一般に付与される。医薬的に許容される担体は、許容される安全性を有するそれらの周知の担体である。組成物は、例えば、カプセル、錠剤、トローチおよび散剤、ならびに液状懸濁液、シロップ、エリキシルおよび液剤を含む、固形状および液状のすべての一般的な形態を包含する。組成物は、一般的な製剤技法を用いて製造され、組成物の製造に慣用される賦形剤（結合剤および湿潤剤など）およびベヒクル（水およびアルコールなど）が一般に使用される。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA、第17版, 1985を参照のこと。
【００５０】
固形組成物は、一般には、投与単位に処方され、用量当たり約１ないし１０００ｍｇの活性成分を付与する組成物が好ましい。用量のいくつかの例が１ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇおよび１０００ｍｇである。一般に、他の剤は、臨床的に使用されるそのクラスの剤と同様の範囲の単位用量で配合されるであろう。典型的には、この用量は０.２５−１０００ｍｇ／単位である。
【００５１】
液体組成物は用量単位の範囲にあるのが普通である。一般に、液体組成物は１−１００ｍｇ／ｍＬの単位用量の範囲にあるであろう。用量のいくつかの例が、１ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、および１００ｍｇ／ｍＬである。一般に、他の剤は、臨床的に使用されるそのクラスの剤と同様の範囲の単位用量で配合されるであろう。典型的には、この用量は１−１００ｍｇ／ｍＬである。
【００５２】
本発明は、慣用されるすべての投与方法を包含する；経口および非経口が好ましい。一般に、投与計画は、臨床的に使用される他の剤と同様なものとなるであろう。典型的には、日用量は、一日当たり体重１ｋｇに付き１−１００ｍｇであろう。一般に、経口では、より多くの化合物が必要とされ、非経口では、その量はより少なくなる。しかしながら、具体的な投与計画は、医学的に正常な判断に従って、医師により決定されるであろう。
【００５３】
本発明はまた、該化合物を併用療法で付与する方法も包含する。すなわち、該化合物は、別々ではあるが、肝炎およびＨＣＶ感染症の治療に有用な他の薬剤と併せて使用され得る。これらの併用方法において、化合物は、一般に、他の薬剤と併せて一日当たり１−１００ｍｇ／ｋｇ体重の日用量で投与されるであろう。他の薬剤は一般に治療上使用される量で投与されるであろう。しかしながら、具体的な投与計画は、医学的に正常な判断に従って、医師により決定されるであろう。
【００５４】
本発明の組成物および方法に適する化合物のいくつかの例を表１に列挙する。
【表１−１】
2016505011.tif 000009
【表１−２】
2016505011.tif 000010
【表１−３】
2016505011.tif 000011
【表１−４】
2016505011.tif 000012
【表１−５】
2016505011.tif 000013
【表１−６】
2016505011.tif 000014
【表１−７】
2016505011.tif 000015
【００５５】
本発明の化合物は、下記の方法を含め、当該分野で知られる方法により製造され得る。ある試薬および中間体は当該分野で公知である。他の試薬および中間体は、市販の材料を用い、当該分野で公知の方法により製造され得る。該化合物の合成を記載するのに使用される可変基（例えば、番号の付された「Ｒ」置換基）は、製造の仕方を説明することだけを意図として使用され、特許請求の範囲に、または本明細書の他のセクションに使用される可変基と混同すべきではない。スキーム中で使用される略語は、当該分野で用いられる慣例に従うものである。
【００５６】
スキームで用いる略語は、概ね、当該技術分野の慣例に従う。本明細書および実施例で用いる化学的略語は、以下のように定義する：「ＮａＨＭＤＳ」がナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドに；「ＤＭＦ」がＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに；「ＭｅＯＨ」がメタノールに；「ＮＢＳ」がＮ−ブロモコハク酸イミドに；「Ａｒ」がアリールに；「ＴＦＡ」がトリフルオロ酢酸に；「ＬＡＨ」が水素化アルミニウムリチウムに；「ＤＭＳＯ」がジメチルスルホキシドに；「ｈ」が時間に；「ｒｔ」が室温に、または保持時間に（文脈で示す）；「ｍｉｎ」が分に；「ＥｔＯＡｃ」が酢酸エチルに；「ＴＨＦ」がテトラヒドロフランに；「ＥＤＴＡ」がエチレンジアミンテトラ酢酸；「Ｅｔ２Ｏ」がジエチルエーテルに；「ＤＭＡＰ」が４−ジメチルアミノピリジンに；「ＤＣＥ」が１，２−ジクロロエタンに；「ＡＣＮ」がアセトニトリルに；「ＤＭＥ」が１，２−ジメトキシエタンに；「ＨＯＢｔ」が１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物に；「ＤＩＥＡ」がジイソプロピルエチルアミンについて定義される。
【００５７】
００００シリーズの化合物を区別するのに、ＳＰＤ−１０ＡＶまたはＳＰＤ−２０Ａ  ＵＶ−Ｖｉｓ検出器を用いて島津製ＬＣ−１０ＡＳまたはＬＣ−２０ＡＳ液体クロマトグラフにすべての液体クロマトグラフィー（ＬＣ）データを記録し、電子噴射モードのＬＣ用マイクロマスプラットホーム（Micromass Platform）を用いて質量分析（Mass Spectrometry）（ＭＳ）データを測定した。
【００５８】
ＨＰＬＣ法（すなわち、化合物の単離）
プレパラティブＨＰＬＣで精製する化合物をメタノール（１.２ｍＬ）に希釈し、島津製ＬＣ−８ＡＳまたはＬＣ−１０ＡＳ、ダイオネクス製ＡＰＳ−３０００、またはウォーターズ製Ａｃｑｕｉｔｙ（登録商標）自動プレパラティブＨＰＬＣシステムを用いて精製した。
【００５９】
実施例：
中間体、化合物３および化合物４の調製：
【化５】
2016505011.tif 000016
【００６０】
工程１：２−（４−フルオロフェニル）−３−（メチルカルバモイル）−６−ニトロベンゾフラン−５−イル  トリフルオロメタンスルホナート（４００ｍｇ）、（３−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−ニトロフェニル）ボロン酸（３４５ｍｇ）およびＣｓ２ＣＯ３（８４６ｍｇ）のジオキサン（８ｍＬ）および水（１.５ｍＬ）中混合物に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１５０ｍｇ）を添加した。該混合物に窒素を流し、９９℃で１６時間加熱した。該混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３：１）に付して精製し、５−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−ニトロフェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチル−６−ニトロベンゾフラン−３−カルボキサミド  ２（３５０ｍｇ）を得た。
【００６１】
【表２】
2016505011.tif 000017
【００６２】
工程２：５−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−ニトロフェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチル−６−ニトロベンゾフラン−３−カルボキサミド（３５０ｍｇ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に、パラジウム炭素（６９.７ｍｇ）を添加した。該混合物をバルーンを用いて水素下で１６時間攪拌した。Ｐｄ／Ｃを濾過により除去し、濾液を濃縮して６−アミノ−５−（３−アミノ−５−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）フェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルベンゾフラン−３−カルボキサミド  ３（２００ｍｇ）を得た。
【００６３】
【表３】
2016505011.tif 000018
【００６４】
工程３：６−アミノ−５−（３−アミノ−５−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）フェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルベンゾフラン−３−カルボキサミド（１００ｍｇ）およびピリジン（０.１７０ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中溶液に、メタンスルホニルクロリド（７２.４ｍｇ）を０℃でゆっくりと添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌した。反応物をＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を濃縮し、残渣をプレパラティブＨＰＬＣに付して精製し、５−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−（メチルスルホンアミド）フェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチル−６−（メチルスルホンアミド）ベンゾフラン−３−カルボキサミド  ４（９２ｍｇ）を得た。
【００６５】
【表４】
2016505011.tif 000019
【００６６】
化合物１００１−１００６を調製するための一般的操作：
【化６】
2016505011.tif 000020
【００６７】
５−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−（メチルスルホンアミド）フェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチル−６−（メチルスルホンアミド）ベンゾフラン−３−カルボキサミド  ４（１０ｍｇ、１当量）、１，４−ジブロミド（１当量）およびＫ２ＣＯ３（８.７７ｍｇ、４当量）のアセトニトリル（５ｍＬ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）中混合物を８０℃で１６時間加熱した。すべての溶媒を減圧下で除去した。残渣をプレパラティブＨＰＬＣに付して精製した。
【００６８】
【表５】
2016505011.tif 000021
【００６９】
【表６−１】
2016505011.tif 000022
【表６−２】
2016505011.tif 000023
【００７０】
化合物１０５１−１０５８を調製するための一般的操作：
【化７】
2016505011.tif 000024
【００７１】
６−アミノ−５−（３−アミノ−５−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）フェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルベンゾフラン−３−カルボキサミド  ３（１０ｍｇ、１当量）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中溶液に、ジアシルクロリド、ジカルボノクロリダートまたはジイソチオシアナート（０.８当量）およびＤＩＰＥＡ（０.０２２ｍＬ、６当量）を添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌した。すべての溶媒を減圧下で除去した。残渣をＤＭＦ（１.５ｍＬ）に溶かし、プレパラティブＨＰＬＣに付して精製した。
【００７２】
【表７】
2016505011.tif 000025
【００７３】
【表８−１】
2016505011.tif 000026
【表８−２】
2016505011.tif 000027
【００７４】
化合物２００１の調製：
【化８】
2016505011.tif 000028
【００７５】
工程１：Ｃｓ２ＣＯ３（７０５ｍｇ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６２ｍｇ）を、２−（４−フルオロフェニル）−３−（メチルカルバモイル）−６−ニトロベンゾフラン−５−イル  トリフルオロメタンスルホナート（５００ｍｇ）および３−（６−メチル−４，８−ジオキソ−１，３，６，２−ジオキソアザボロカン−２−イル）安息香酸（３６０ｍｇ）のジオキサン（９ｍＬ）および水（３ｍＬ）中溶液に添加した。該反応物を９０℃で４時間加熱した。室温に冷却した後、該混合物を氷水中に注ぎ、それを２Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ３に調整した。化合物１０１を褐色固体として形成し、濾過を介して単離した。
【００７６】
【表９】
2016505011.tif 000029
【００７７】
工程２：ｉＰｒ２ＮＥｔ（８９ｍｇ）を、３−（２−（４−フルオロフェニル）−３−（メチルカルバモイル）−６−ニトロベンゾフラン−５−イル）安息香酸（１５０ｍｇ）、２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール（３７ｍｇ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート（１７１ｍｇ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に添加した。反応液を室温で１６時間攪拌し、次にＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を加えた。有機層を水（２ｘ１０ｍＬ）、食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。濾過した後、溶媒を減圧下で除去して残渣を得、それをそのまま用いた。
【００７８】
【表１０】
2016505011.tif 000030
【００７９】
工程３：２−（４−フルオロフェニル）−５−（３−（（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）カルバモイル）フェニル）−Ｎ−メチル−６−ニトロベンゾフラン−３−カルボキサミド（１０８ｍｇ）のエチルエーテル（４ｍＬ）中溶液に、パラジウム炭素（１.１３７ｍｇ）を添加した。該混合物をバルーンを用いて水素下で１６時間攪拌した。Ｐｄ／Ｃを濾過により除去し、濾液を濃縮し、６−アミノ−２−（４−フルオロフェニル）−５−（３−（（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）カルバモイル）フェニル）−Ｎ−メチルベンゾフラン−３−カルボキサミド  １０３（９５ｍｇ）を得た。
【００８０】
【表１１】
2016505011.tif 000031
【００８１】
工程４：ＮａＨ（３.７１ｍｇ）を、６−アミノ−２−（４−フルオロフェニル）−５−（３−（（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）カルバモイル）フェニル）−Ｎ−メチルベンゾフラン−３−カルボキサミド（１４.７ｍｇ）および３−クロロ−２−（クロロメチル）プロパ−１−エン（３.８６ｍｇ）のＤＭＦ中溶液に添加した。反応液を室温で２４時間攪拌し、次にＭｅＯＨでクエンチした。化合物２００１をプレパラティブＨＰＬＣに付して単離した。
【００８２】
【表１２】
2016505011.tif 000032
【００８３】
生物学的方法
化合物は、次のＨＣＶ  ＲｄＲｐアッセイにて測定されるように、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂに拮抗する活性を示した。
【００８４】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲｄＲｐのクローニング、発現および精製
ＨＣＶのＮＳ５Ｂ蛋白をコードするｃＤＮＡ、遺伝子型１ｂをｐＥＴ２１ａ発現ベクターにクローンした。Ｃ末端で１８個のアミノ酸をトランケートして蛋白を発現させ、溶解性を向上させた。イー・コリのコンピテント細胞系ＢＬ２１（ＤＥ３）を該細胞の発現に用いた。培養物の光学濃度が６００ｎｍで２．０に達するまで、約４時間、該培養物を３７℃で培養した。該培養物を２０℃に冷却し、１ｍＭ  ＩＰＴＧと一緒に誘導させた。新たなアンピシリンを５０μｇ／ｍＬの最終濃度まで添加し、細胞を２０℃で終夜増殖させた。
【００８５】
細胞ペレット（３Ｌ）を精製のために溶菌させ、１５−２４ｍｇの精製されたＮＳ５Ｂを得た。溶菌バッファーは、２０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７.４、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、０.５％トリトンＸ−１００、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０％グリセロール、０.５ｍｇ／ｍｌリゾチーム、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１５μｇ／ｍｌデオキシリボヌクレアーゼＩ、およびコンプリートＴＭプロテアーゼ阻害剤の錠剤（ロシュ（Roche））を含んだ。溶菌バッファーを添加した後、組織ホモジナイザーを用いて凍結した細胞ペレットを再懸濁させた。サンプルの粘度を下げるのに、ブランソン（Branson）ソニケーターに取り付けたマイクロチップを用いて、溶菌液のアリコートを氷上で超音波処理に付した。その超音波処理に付した溶菌液を４℃で３０分間１００，０００ｘｇで遠心分離に供し、０.２μｍの濾過装置（Corning）を通して濾過した。
【００８６】
該蛋白を２種の連続するクロマトグラフィー工程：ヘパリンセファロースＣＬ−６ＢおよびポリＵセファロース４Ｂを用いて精製した。クロマトグラフィーバッファーは溶菌バッファーと同じであるが、リゾチーム、デオキシリボヌクレアーゼＩ、ＭｇＣｌ２、またはプロテアーゼ阻害剤を含有せず、そのバッファーのＮａＣｌ濃度は蛋白をカラムに充填する際の要求に応じて調整された。各カラムを、そのカラムの型に応じて、長さで５−５０倍の容量で変化するＮａＣｌの勾配で溶出した。最終のクロマトグラフィー工程に供した後、得られた酵素の純度はＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によれば＞９０％である。該酵素をアリコートに付し、−８０℃で貯蔵した。
【００８７】
標準的なＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲｄＲｐ酵素アッセイ
９６ウェルプレート（コスター（Costar）３９１２）において、６０μｌの最終容量でＨＣＶ  ＲｄＲｐ遺伝子型１ｂアッセイを行った。アッセイバッファーは、２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７.５、２.５ｍＭ  ＫＣｌ、２.５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、１.６Ｕ  ＲＮＡｓｅ阻害剤（プロメガ（Promega）Ｎ２５１５）、０.１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ（プロメガＲ３９６１）および２％グリセロールを含んだ。すべての化合物をＤＭＳＯ中で連続して希釈し（３倍）、該アッセイでのＤＭＳＯの最終濃度が２％となるようにさらに水中に希釈した。ＨＣＶ  ＲｄＲｐ遺伝子型１ｂ酵素を２８ｎＭの最終濃度で用いた。ポリＡテンプレートを６ｎＭで用い、ビオチニル化オリゴ−ｄＴ１２プライマーを１８０ｎＭの最終濃度で用いた。テンプレートは商業的に入手した（アメルシャム（Amersham）２７−４１１０）。ビオチニル化プライマーをシグマ・ゲノシス（Sigma Genosys）により調製した。３Ｈ−ＵＴＰを０.６ｍＣｉ（０.２９ｍＭの全ＵＴＰ）で用いた。酵素を添加して反応を開始させ、３０℃で６０分間インキュベートし、ＳＰＡビーズ含有の５０ｍＭ  ＥＤＴＡ（２５μＬ）（４μｇ／μＬ、アメルシャムＲＰＮＱ０００７）を添加することで反応を停止させた。室温で１時間より多くインキュベートした後、プレートをパッカード・トップ・カウントＮＸＴで読み取った。
【００８８】
修飾ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲｄＲｐ酵素アッセイ
また、ビーズ上の固相均一アッセイを用いてＮＳ５Ｂ阻害剤を評価した（WangY-K、Rigat K, Roberts S、およびGao M（2006）Anal Biochem, 359：106-111）。このアッセイは上記の標準アッセイを修飾したもので、９６ウェルまたは３８４ウェルのフォーマットでなされた。ビオチニル化オリゴｄＴ１２プライマーは、プライマーとビーズをバッファー中で混合し、室温で３時間インキュベートすることによりストレプトアビジン連結ビーズ（ＳＰＡビーズ（ＧＥ、ＲＰＮＱ０００７））または画像化ビーズ（ＧＥ、ＲＰＮＱ０２６１）上に捕獲された。未結合のプライマーを遠心分離で除去した。プライマー結合ビーズを３ｘ反応バッファー（４０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓバッファー、ｐＨ７.５、７.５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７.５ｍＭ  ＫＣｌ、ｄＴプライマー結合ビーズ、ポリＡテンプレート、３Ｈ−ＵＴＰ、およびＲＮＡｓｅ阻害剤（プロメガＮ２５１５））に再懸濁させた。化合物をＤＭＳＯ中に１：３で連続して希釈し、アッセイプレートにアリコートに供した。等容量（９６ウェルアッセイでは２０μＬ、３８４ウェルアッセイでは１０μＬ）の水、３ｘ反応混合物、および酵素（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓバッファー、ｐＨ７.５、０.１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ中）をアッセイプレート上の希釈した化合物に添加した。９６ウェルアッセイでの成分の最終濃度は：０.３６ｎＭ  テンプレート、１５ｎＭプライマー、０.４３μＭ（１μＣｉ）３Ｈ−ＵＴＰ、０.０８Ｕ／μＬ  ＲＮＡｓｅ阻害剤、７ｎＭ  ＮＳ５Ｂ酵素、０.０３３ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、および２μｇ／μＬビーズ、２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓバッファー、ｐＨ７.５、２.５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２.５ｍＭ  ＫＣｌ、２％ＤＭＳＯである。３８４ウェルアッセイでの成分の最終濃度は：０.２ｎＭ  テンプレート、１５ｎＭ  プライマー、０.２９μＭ  ３Ｈ−ＵＴＰ（０.３μＣｉ）、０.０８Ｕ／μＬ  ＲＮＡｓｅ阻害剤、７ｎＭ  ＮＳ５Ｂ酵素、０.０３３ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、および０.３３μｇ／μＬビーズ、２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓバッファー、ｐＨ７.５、２.５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２.５ｍＭ  ＫＣｌ、２％ＤＭＳＯである。
【００８９】
反応を３０℃で４時間進行させ、５０ｍＭ  ＥＤＴＡ（１０μＬ）を添加することで停止させた。少なくとも１５分間インキュベートした後、パッカードＮＸＴトップカウント（Packard NXT Topcount）またはアメルシャムＬＥＡＤシーカー（Amersham LEADseeker）多様式画像システム上でプレートを読み取った。
【００９０】
細胞系
化合物を評価するのに使用される細胞系は、ウミシイタケルシフェラーゼレポータ遺伝子を含有する遺伝子型１ａまたは１ｂＨＣＶレプリコンを構造的に発現するヒト肝細胞誘導の細胞系（Ｈｕｈ−７）を含んで成る。これらの細胞を１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬ  ペニシリン／ストレプトマイシンおよび１．０ｍｇ／ｍＬ  Ｇ４１８を含有するダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）に維持した。
【００９１】
ＨＣＶレプリコンルシフェラーゼアッセイ
化合物の効能を評価するのに、ＨＣＶレプリコン細胞を、９６ウェルのプレートにて、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭに１０４／ウェルの細胞密度で播種した。３７℃で終夜インキュベートした後、ＤＭＳＯ中に連続的に希釈した化合物を細胞プレートに加えた。別法として、滴定される化合物を滅菌処理した３８４ウェルの組織培養プレートに移し、そのプレートに５０μＬの細胞を４％ＦＣＳ含有のＤＭＥＭにて２．４ｘ１０３細胞／ウェルの密度で播種した（最終ＤＭＳＯ濃度、０．５％）。３７℃で３日間インキュベートした後、メーカーの指示に従って、エンデュレン（EnduRen）基質（プロメガ（Promega）カタログ番号６４８５）を用いて、細胞をウミシイタケルシフェラーゼ活性について分析した。簡単に言えば、エンデュレン基質をＤＭＥＭ中に希釈し、次にプレートに７．５μＭの最終濃度で加えた。該プレートを少なくとも１時間３７℃でインキュベートし、次にルミネセンスプログラムを用いて、トップカウントＮＸＴマイクロプレート・シンチレーションおよびルミネッセンス・カウンター（パッカード）上で、またはビューラックス・イメージャー（Viewlux Imager）（パーキンエルマー（PerkinElmer））でプレートを読み取った。５０％有効濃度（ＥＣ５０）は、指数形式の半有効濃度式：
ＥＣ５０＝１００−［（δＦｉｎｈ／δＦｃｏｎ）ｘ１００］
を用いて計算した。
【００９２】
化合物の細胞傷害性を評価するのに、セル・タイター−ブルー（Cell Titer-Blue）（プロメガ（Promega））をエンデュレン（EnduRen）含有のプレートに加え、３７℃で少なくとも４時間インキュベートした。各ウェルからの蛍光シグナルをサイトフロー（Cytoflour）４００（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）またはビューラックス・イメージャーを用いて読み取った。
【００９３】
化合物のＥＣ５０データを、Ａ：＜１００ｎＭ；Ｂ＝１００−１０００ｎＭ；Ｃ＞１０００ｎＭ）で示す。化合物の代表的なデータを表２に報告する。
【００９４】
【表１３−１】
2016505011.tif 000033
【表１３−２】
2016505011.tif 000034
【表１３−３】
2016505011.tif 000035
【表１３−４】
2016505011.tif 000036
【００９５】
本開示が、上記した実施例に限定されるものでなく、その本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形態にて具現化され得ることは当業者に明らかであろう。従って、実施例は、あらゆる点で例示であり、それに限定されるものではなく、上記の実施例に対するよりもむしろ添付した特許請求の範囲に対して言及するものであり、かくして特許請求の範囲の意義および均等の範囲内にあるすべての変形は本開示に含まれることを意図とすると捕らえることが望ましい。
【国際調査報告】
2016505011.tif 000040
2016505011.tif 000041
2016505011.tif 000042
2016505011.tif 000043