(57)【要約】  本方法は基板（１０）上に液体フィルムを形成する方法であって、以下の段階を含む。・チャンバ（１２）内に基板（１０）を配置し、基板（１０）上に組成物（１４）を置く段階であって、組成物（１４）が水を含む段階、・チャンバ（１２）内部に揮発性液体（１６）を導入する段階、・所定の時間チャンバ（１２）を閉鎖し、この閉鎖段階の間チャンバ（１２）内で揮発性液体（１６）が蒸発する段階。  本方法は、チャンバ（１２）外部への、揮発性液体（１６）の蒸発によって形成される蒸気の、少なくとも部分的な取り出しをさらに含み、この取り出しは基板（１０）上の組成物（１４）のスプレッディングを生じさせ、前記スプレッディングされた組成物（１４）が結果的に基板（１０）上に液体フィルムを形成する。
2016506493.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板（１０）上に液体フィルムを形成する方法であって、
・チャンバ（１２）内に基板（１０）を配置（５０）し、基板（１０）上に組成物（１４）を置く段階であって、組成物（１４）が水を含む段階、
・チャンバ（１２）内部に揮発性液体（１６）を導入する段階（５５）、
・所定の時間チャンバ（１２）を閉鎖する段階（６０）であって、この閉鎖段階（６０）の間チャンバ（１２）内で揮発性液体（１６）が蒸発する段階、
を含み、
・チャンバ（１２）外部への、揮発性液体（１６）の蒸発によって形成される蒸気の、少なくとも部分的な取り出し段階（６５）であって、この取り出し（６５）は基板（１０）上の組成物（１４）のスプレッディングを生じさせ、前記スプレッディングされた組成物（１４）が結果的に基板（１０）上に液体フィルムを形成する段階
をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記所定の時間が、１分から３０分の間に含まれる値、好ましくは５分から２０分の間に含まれる値、さらに好ましくは実質的に１０分に等しい値を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
揮発性液体（１６）を導入する段階（５５）の間、揮発性液体（１６）は組成物（１４）から離れて、揮発性液体（１６）と組成物（１４）との間の接触が無いように位置する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
チャンバ（１２）内部に導入される揮発性液体（１６）が、エタノールなどのアルコールを含む、請求項１から３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
チャンバ（１２）が、ペトリ皿などの箱型容器（２６）であり、箱型容器（２６）は蓋（２８）および開口部（３２）を有する容器（３０）を含み、蓋（２８）は、蓋（２８）が容器の開口部（３２）から離れている開位置と、蓋（２８）が容器の開口部（３２）を閉鎖することができる閉位置との間で移動可能であり、前記閉位置は箱型容器（２６）の密閉に対応し、
閉鎖段階（６０）の間、蓋（２８）は、その開位置からその閉位置に移動され、その後所定の時間閉位置において保持され、取り出し段階（６５）の間、蓋（２８）は、その閉位置からその開位置に移動され、その後開位置に保持される、請求項１から４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
容器（３０）は底部（３１）を含み、揮発性液体（１６）は導入する段階（５５）の間底部（３１）に接触して位置し、箱型容器（２６）は、導入する段階（５５）の間揮発性液体（１６）を組成物（１４）から離れて位置させるために、基板（１０）を底部（３１）から離して保持するための少なくとも１つのシム（３３）をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
組成物（１４）が、粒子（２４）、界面活性剤、および親水性ポリマーをさらに含み、粒子（２４）は好ましくは１０μｍ未満の、より好ましくは１μｍ未満の直径を有し、界面活性剤は好ましくは少なくとも臨界ミセル濃度と等しい濃度を有し、親水性ポリマーは水よりも高い沸点を有し、ポリマーは好ましくは以下の式で規定されるポリエチレングリコールである、請求項１から６の何れか１項に記載の方法：
Ｈ（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）ｎＯＨ
ここでｎはポリマーのオキシエチレンユニットの数を示す。
【請求項８】
組成物（１４）が、０．５μｌから５μｌの間に含まれる値を持つ体積を有する、請求項１から７の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
基板（１０）が、ガラスなど、またはさらにはプラスチック材料などの、親水性材料で作られる、請求項１から８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
基板（１０）が透明なスライドガラス（１８）であり、透明なスライドガラス（１８）は、光学検知システム（２２）を用いて、粒子（２４）を含む組成物（１４）の少なくとも１つの画像を取得するために、光源（２０）で照らされることが意図される、請求項１から９の何れか１項に記載の方法。
【請求項１１】
組成物（１４）が粒子（２４）をさらに含み、粒子（２４）は生物学的種であり、例えば細菌などの生きた生物学的種などである、請求項１から１０の何れか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、基板上に液体フィルムを形成する方法に関する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
この形成方法は以下の段階を含む。
・チャンバ内に基板を配置し、基板上に組成物を置く段階であって、組成物が水を含む段階、
・チャンバ内部に揮発性液体を導入する段階、
・所定の時間チャンバを閉鎖し、この閉鎖段階の間チャンバ内で揮発性液体が蒸発する段階。
【０００３】
本発明は、マイクロメータおよびサブマイクロメータサイズの粒子、とりわけ細胞、細菌、またはさらにウィルスなどの生物学的粒子の検知に特に適用される。本発明は、マイクロビーズ形態の粒子の検知にも適用される。結果的に組成物は検知されるべき前記粒子を含み、基板は透明スライドガラスであり、透明スライドガラスは、光学的検知システムを用いて粒子を含む組成物の少なくとも１つの画像を取得するために、光源によって照らされることが意図されている。
【０００４】
大きなサイズのイメージセンサ、すなわち数ｃｍ２または数十ｃｍ２でさえある面積を有するセンサでこれらの粒子の画像を取得するために、また厚みが小さくかつイメージセンサと同等の面積を有するフィルムを形成するために、組成物は透明スライドガラス上で最大限広げられるべきである。厚みが小さいとは、５００μｍ未満の値を有する厚み、好ましくは５０μｍから２００μｍの間に含まれる厚みを意味する。
【０００５】
第１の方法、いわゆるスピンコーティングは、遠心力の働きにより基板上に組成物を広げるために、基板上に組成物を置く段階と、基板に回転を生じる段階とからなる。しかしながら、この第１の方法は、適用するには複雑であり、組成物のスプレッディングは制御が比較的難しい。さらに、組成物が細菌を含む場合、この方法を適用することができる装置内部への組成物の導入により、組成物が汚染される場合がある。
【０００６】
第２の方法、いわゆるディップコーティングは、組成物を含む容器に基板を浸漬する段階と、その後この容器から基板をゆっくりと引き上げる段階とからなる。その後この組成物のフィルムが基板表面に形成される。しかしながら、この方法は前記組成物を大量に、典型的には数十μＬ必要とし、そのような量は必ずしも入手可能ではない。
【０００７】
第３の方法は、２０１２年の「Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」に掲載されたＭａｊｕｍｄｅｒらの「Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ  ｔｈｅ  ‘ｃｏｆｆｅｅ−ｓｔａｉｎ’  ｅｆｆｅｃｔ  ｂｙ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  Ｍａｒａｎｇｏｎｉ−ｆｌｏｗ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｄｒｏｐ−ｄｒｙｉｎｇ」というタイトルの記事に記載される。この第３の方法は、テフロン（登録商標）基板上に一滴の水を置く段階と、この基板を、例えばペトリ皿内部などのエタノールで飽和された雰囲気内に配置する段階とからなる。その後液滴は、エタノールで飽和された雰囲気内に基板が存在する間基板上に広がる。基板は、液滴が適切に広がるのを観察するため、１０００秒のオーダーの時間エタノールで飽和されたこの雰囲気内に配置されるべきである。
【０００８】
しかしながら、この液滴の広がりは最適なものではなく、数ｃｍ２または数十ｃｍ２ですらある面積を有するフィルムを得るために、比較的大量の組成物を必要とする。
【０００９】
それ故、本発明の目的は、基板上に液体フィルムを形成する方法を提案することであり、フィルムは組成物を広げる（スプレッディング）ことによって形成され、本方法は基板上での組成物のスプレッディングにおいて改善を可能にする。
【００１０】
このために、本発明の目的は、上述のタイプの方法であり、本方法は、チャンバ外部への、揮発性液体の蒸発によって形成される蒸気の、少なくとも部分的な取り出しをさらに含み、この取り出しは基板上の組成物のスプレッディングを生じさせ、前記広がった組成物が結果的に基板上に液体フィルムを形成する。
【００１１】
第３の方法に対応する最新の方法とは異なって、チャンバを密閉する段階の間、すなわちチャンバ内部での揮発性液体の蒸発の間、本発明による組成物のスプレッディングは観察されないが、揮発性液体の蒸発により形成される蒸気が少なくとも部分的にチャンバの外側に取り出されるときからのみ観察される。
【００１２】
本発明の他の有利な態様によれば、本方法は、別個にまたは技術的に可能な全ての組み合わせに従って選択される、以下の特徴の１つ以上を含む。
・所定の時間とは、１分から３０分の間に含まれる値、好ましくは５分から２０分の間に含まれる値、さらに好ましくは実質的に１０分に等しい値を有する。
・揮発性液体の導入の間、揮発性液体は組成物から離れて、揮発性液体と組成物との間の接触が無いように位置する。
・チャンバ内部に導入される揮発性液体は、エタノールなどのアルコールを含む。
・チャンバはペトリ皿などの箱型容器であり、箱型容器は蓋および開口部を有する容器を含み、蓋は、蓋が容器の開口部から離れている開位置と、蓋が容器の開口部を閉鎖することができる閉位置との間で移動可能であり、前記閉位置は箱型容器の密閉に対応し、閉鎖段階の間、蓋はその開位置から閉位置に移動され、その後所定の時間閉位置に保持され、取り出し段階の間、蓋はその閉位置からその開位置に移動され、その後開位置に保持される。
・容器は底部を含み、揮発性液体は導入段階の間底部に接触して位置し、箱型容器は、導入段階の間揮発性液体を組成物から離れて位置させるために、基板を底部から離して保持するための少なくとも１つのシムをさらに含む。
・組成物は、粒子、界面活性剤、および親水性ポリマーをさらに含み、粒子は好ましくは１０μｍ未満の、より好ましくは１μｍ未満の直径を有し、界面活性剤は好ましくは少なくとも臨界ミセル濃度と等しい濃度を有し、親水性ポリマーは水よりも高い沸点を有し、ポリマーは好ましくは以下の式で規定されるポリエチレングリコールである。
Ｈ（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）ｎＯＨ
ここでｎはポリマーのオキシエチレンユニットの数を示す。
・組成物は、０．５μＬから５μＬの間に含まれる値の体積を有する。
・基板はガラス、または、さらにはプラスチック材料などの、親水性材料で作られる。
・基板は透明なスライドガラスであり、透明なスライドガラスは、光学検知システムを用いて、粒子を含む組成物の少なくとも１つの画像を取得するために、光源で照らされることが意図される。
・組成物は粒子をさらに含み、粒子は生物学的種であり、例えば細菌などの生きた生物学的種などである。
【００１３】
本発明の特徴および利点は、非制限的な例示としてのみ与えられる、添付される図面に従いかつそれを参照して行われる以下の説明を読むことで明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】チャンバ内に配置された基板上に組成物を置いた後に揮発性液体が導入される箱型形状のチャンバの概略的な断面図である。
【図２】本発明によるフィルム形成方法のフローチャートであり、チャンバ内部に揮発性液体を導入する段階、所定の時間チャンバを閉鎖する段階、この閉鎖の間揮発性液体がチャンバ内で蒸発する段階、および揮発性液体の蒸発によって形成された蒸気の、チャンバ外部への少なくとも部分的な取り出しの段階を含む。
【図３】液体の蒸発によって形成された蒸気がチャンバから取り出されるときからの、時間に対する組成物の半径の変化を説明する曲線である。
【図４】光源、組成物がその上に配置される透明スライドガラスとしての基板、および照明が当てられた組成物の画像を取得するための装置を含む、粒子の光学検知のためのシステムの概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
図１において、基板１０はチャンバ１２内に配置され、水並びに粒子２４を含む組成物１４が基板１０上に置かれる。揮発性液体１６がチャンバ１２内に配置され、チャンバ１２は密閉され、チャンバ１２が密閉されるとき揮発性液体１６はチャンバ１２内部で蒸発する。
【００１６】
基板１０は、好ましくはガラスなど、またはさらには親水性にされたプラスチック材料などの、親水性材料で作られる。
【００１７】
基板１０は例えば、図４に示されるように、粒子２４を含む組成物１４の少なくとも１つの画像を光学検知システム２２によって取得するための、光源２０によって照らされることが意図される透明なスライドガラス１８の形態である
【００１８】
例えばチャンバ１２は、ペトリ皿などの箱型容器２６であり、箱型容器２６は蓋２８および底部３１および開口部３２を有する容器３０を含む。蓋２８は、蓋２８が容器の開口部３２から離れている開位置と、蓋２８が容器の開口部３２を閉鎖することができる閉位置との間で移動可能であり、前記閉位置は箱型容器２６の密閉に対応する。
【００１９】
図１の例示的実施形態において、チャンバ１２は円筒形である。チャンバ１２は、例えば、約１０ｃｍの直径および約１．５ｃｍの高さを有する。
【００２０】
さらに、チャンバ１２は、揮発性液体１６を、それがチャンバ１２内部に導入されるとき、組成物１４から離れて位置させるための、基板１０を容器の底部３１から離しておくための少なくとも１つのシム３３を含む。図１の例示的な実施形態において、チャンバ１２は２つの保持シム３３を含む。
【００２１】
組成物１４は、例えば、検知される粒子２４および溶液を含み、溶液は水、界面活性剤、および好ましくは親水性ポリマーを含む。言い換えれば、組成物１４は、水、界面活性剤、および親水性ポリマーを含む水溶液への、検知される粒子２４の懸濁液である。
【００２２】
記載される例示的実施形態において、組成物１４の溶液は、水と、界面活性剤と、親水性ポリマーとからなる。結果的に組成物１４は、検知される粒子２４と、水と、界面活性剤と、親水性ポリマーとからなる。
【００２３】
組成物１４は、０．５μＬから５μＬの間に含まれる値を持つ体積を有する。
【００２４】
親水性ポリマーは、水と比較して高い沸点を有する。親水性ポリマーは、例えば、以下の化学式によって規定されるポリエチレングリコールである。
Ｈ（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）ｎＯＨ
ここでｎはポリマーのオキシエチレンユニットの数を示す。
【００２５】
オキシエチレンユニットの数ｎは整数であり、好ましくは１から１８０の間に含まれ、より好ましくは４から１６の間に含まれ、より好ましくは１３に等しい。
【００２６】
ユニットの数ｎは例えば２に等しく、その場合ポリマーはジエチレングリコールと呼ばれ、ＤｉＥＧとも表される。
【００２７】
或いは、オキシエチレンユニットの数ｎは１３に等しく、親水性ポリマーはポリエチレングリコール６００と呼ばれ、ＰＥＧ６００とも表され、ＰＥＧ６００は約６００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。
【００２８】
オキシエチレンユニットの数ｎは１３に等しく、親水性ポリマー、すなわちＰＥＧ６００は、好ましくは０．２％から０．８％の間に含まれる、より好ましくは０．４％から０．６％の間に含まれる質量濃度を有する。
【００２９】
さらに別法として、オキシエチレンユニットの数ｎは１８０に等しく、親水性ポリマーはポリエチレングリコール８０００と呼ばれ、ＰＥＧ８０００とも表され、ＰＥＧ８０００は実質的に８，０００ｇ／ｍｏｌに等しい分子量を有する。
【００３０】
界面活性剤（テンシドとも呼ばれる）は、好ましくは臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）と等しい濃度を有する。界面活性剤は、例えば、ＴＷＥＥＮ２０という商品名でも知られる、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートを含む。
【００３１】
或いは、界面活性剤は、ポロキサマーなどの、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンのコポリマー、例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ−６８の商品名で知られるもの、を含む。さらに別法として、界面活性剤は、ＳＤＳとも呼ばれる、硫酸ドデシルナトリウムを含む。
【００３２】
任意に親水性ポリマーで終端している界面活性剤は、溶液１４の水の蒸発の際、粒子２４を覆うフィルムを形成することが意図される。親水性ポリマーの添加は、このフィルムが粒子２４を覆う時間を延長する可能性を与える。
【００３３】
チャンバ１２内に配置される揮発性液体１６は、エタノールなどのアルコールを含む。説明される例示的実施形態において、揮発性液体１６はこのエタノールなどのアルコールからなる。
【００３４】
或いは、揮発性液体１６はイソプロパノールまたは任意の他の揮発性溶媒である。
【００３５】
しかしながら、粒子２４が生物学的種、より好ましくは生きた生物学的種、とりわけ細菌または任意の他の微生物である場合に適合されるので、好ましくは、揮発性液体１６はエタノールである。これらの特定の状況下で、生物学的種２４に対してさほど強く作用しない揮発性液体１６が実際上好ましい。
【００３６】
透明スライドガラス１８は、図４に示すように、光源２０による組成物１４の照明方向に対応する長手方向Ｘに沿った厚みＥを有する。厚みＥは、例えば１０μｍから１００μｍの間に含まれる値、好ましくは２０μｍから５０μｍの間に含まれる値を有する。
【００３７】
スライドガラス１８は好ましくは親水性であり、組成物１４とスライドガラス１８との間の、図１に示される接触角αが小さな値を持つようにする。親水性スライドガラス１８と組成物１４との間に得られる接触角αの値は２０°未満、好ましくは１０°未満、より好ましくは１°のオーダーである。
【００３８】
スライドガラス１８の親水性は、例えば以下の段階に従ってスライドガラス１８を調製することによって得られる。第１の調製段階は、１０分のオーダーの時間での石けん水中での音波処理である。石けん水は、例えば水および洗浄液を含み、水は好ましくは、Ｍｉｌｌｉ−Ｑの商品名でも知られる、ＩＳＯ３６９６標準によるタイプ１の純水である。第２の段階は、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水などの水、アセトン、およびイソプロパノールでのすすぎ段階である。第３の段階は、例えば窒素での乾燥などの乾燥段階であり、第４の段階は、１５秒を超える時間の、好ましくは３０秒のオーダーの時間の酸素プラズマパスを有する。
【００３９】
基板１０上に液体フィルムを形成し、フィルムが組成物１４のスプレッディングによって形成される方法が、図２を用いて説明される。
【００４０】
初期段階５０の間、基板１０はチャンバ１２内に配置され、組成物１４は基板１０上に置かれ、組成物１４は特に水を含む。
【００４１】
例えば透明スライドガラス１８の形態である基板１０は、チャンバ１２の容器の底部３１から離れて位置するように、好ましくは保持シム３３上に置かれる。
【００４２】
その後段階５５の間揮発性液体１６がチャンバ１２内部に導入される。揮発性液体１６は例えば底部３１に接触して位置する。
【００４３】
揮発性液体１６を導入する際、揮発性液体は組成物１４から離れて位置する。この導入段階の間、結果的に揮発性液体１６および組成物１４は互いに接触しない。
【００４４】
次の段階６０の間、チャンバ１２は所定の時間密閉され、この閉鎖段階の間揮発性液体１６はチャンバ１２内で蒸発する。言い換えれば、この閉鎖段階の間、基板１０は揮発性液体１６の雰囲気の下、例えばエタノール雰囲気の下に置かれる。
【００４５】
所定の時間とは、１分から３０分の間に含まれる値、好ましくは５分から２０分の間に含まれる値、より好ましくは１０分±１分に等しい値を有する。
【００４６】
チャンバ１２が蓋２８および容器３０を含む箱型容器２６の形状を有するとき、この閉鎖段階６０の間、蓋２８は、図１において矢印Ｆで説明されるように、その開位置からその閉位置に移動され、その後蓋２８は所定の時間閉位置において保持される。
【００４７】
最後に、段階６５の間、前記所定の時間の終了後、液体１６の蒸発により形成された蒸気は、少なくとも部分的にチャンバ１２から取り出される。以前に形成された蒸気を少なくとも部分的に取り出すことで、基板１０上での組成物１４のスプレッディングを起こし、この広がった組成物１４が基板１０上で液体フィルムを形成する。
【００４８】
チャンバ１２が蓋２８および容器３０を含む箱型容器２６の形状を有するとき、取り出し段階６５の間、蓋２８は、図１において矢印Ｏによって説明されるように、その閉位置からその開位置に移動され、その後蓋２８は開位置に保持される。
【００４９】
閉鎖段階６０の間、液体１６の蒸気がチャンバ１２内部に閉じ込められるので、箱型容器２６の開口部は、その閉位置からその開位置への（矢印Ｏ）蓋２８の位置変化によって、チャンバ１２の外側へのこの蒸気の少なくとも部分的な取り出しをもたらす。
【００５０】
図３において、曲線６８は、液体の蒸発によって形成された蒸気がチャンバから取り出されるとき、すなわち段階６５の開始からの、長手方向Ｘに垂直な平面における組成物１４の半径の時間に応じた変化を説明する。
【００５１】
曲線６８は、前述したように親水性にされたガラススライド１８で、約１０μｌの体積を有する組成物１４に関して、約１ｍｌのエタノールをチャンバ１２内部に導入して、閉鎖段階６０のための所定の時間を１０分として、得られた。組成物１４は、以下の比：組成物１４の全体積１ｍｌ、０．２％のＴＷＥＥＮ２０界面活性剤４５μｌ、および質量濃度が０．５％に等しいＰＥＧ６００が６００μｌ、で調製された。
【００５２】
結果的に、曲線６８は、時間に応じた組成物１４の半径について非常に迅速な変化、すなわち液体の蒸発により形成される蒸気がチャンバから取り出される瞬間からの基板１０に対する組成物１４の非常に迅速なスプレッディングを示す。図３の例において、組成物１４は、初期に約４ｍｍの半径を有し、半径の値は段階６５の開始から４秒強で２倍になり、段階６５の開始後約１８秒で半径の値は３倍となった。
【００５３】
その結果、段階６０の所定の時間が１０分に等しいとき、本発明による形成方法では、組成物１４の半径の値は、１０分強で３倍になり、一方で、最新の技術の形成方法では、３倍という半径の値は、良くても、約１５００秒後、すなわち２５分後に得られるのみである。
【００５４】
したがって、本発明による方法は、基板１０上の組成物１４のスプレッディングにおいて有意の改良を可能にする。
【００５５】
本発明による方法により基板１０上に液体フィルムを形成した後、液体フィルムは光源２０によって照らされ、図４に示されるように、粒子２４が光学検知システム２２によって検知されるようにする。
【００５６】
透明スライドガラス１８上に位置する組成物１４を照らすために、光源２０は長手方向Ｘに沿って光線７０を放出することができる。
【００５７】
光源２０は、長手方向Ｘに沿って透明スライドガラス１８から第１の距離Ｄ１に位置する。第１の距離Ｄ１は、好ましくは、１ｃｍから３０ｃｍの間に含まれる値、例えば１０ｃｍに等しい値を有する。
【００５８】
図４の例示的実施形態において、光源２０は点状の光源である。光源２０の空間干渉性が、例えば５０μｍから５００μｍの間に含まれる直径を有し、光源２０と接触して配置されるピンホールとカップリングすることによって、さらに改良される。
【００５９】
光源２０は例えば、ＬＥＤとも呼ばれる発光ダイオードであり、単色であり、空間干渉性であるとみなされるように十分に減少された寸法を有し、発光ダイオードの直径は、この発光ダイオードをスライドガラス１８から離隔する第１の距離Ｄ１の１０分の１未満である。光源２０の発光ダイオードは、例えば、５５５ｎｍに等しい発光波長および１．７Ｗに等しい出力を有する。
【００６０】
その代わりに、光源２０は、レーザダイオード（ＤＬ）、またはさらにはＶＣＳＥＬ（垂直キャビティ面発光レーザ：Ｖｅｒｔｉｃａｌ  Ｃａｖｉｔｙ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｅｍｉｔｔｉｎｇ  Ｌａｓｅｒ）型のレーザダイオードなど、空間的に、または時間的に干渉性の光源である。
【００６１】
光学検知システム２２は、光源２０、画像取得装置７２、透明スライドガラス１８、およびスライドガラス１８上に広げられた組成物１４を含み、組成物１４は検出される粒子２４を含む。
【００６２】
検知システム２２は、組成物１４の蒸発の間、粒子２４を検知することが意図され、この蒸発は、前述の、透明スライドガラス１８上の組成物１４のスプレッディングとは相関しない。
【００６３】
検知される粒子２４は例えば生物学的粒子、すなわち細胞（例えば赤血球、白血球、または血小板）、細胞の構成要素（例えばミトコンドリア）、細菌、ウィルス、または任意の他の分子、または分子集合体、とりわけタンパク質集合体である。
【００６４】
或いは、検知される粒子２４はマイクロビーズである。
【００６５】
検知される粒子２４は、好ましくは１μｍ未満の直径を有し、粒子２４の直径は例えば５０ｎｍから１μｍの間に含まれ、より好ましくは１０ｎｍから１μｍの間に含まれる。
【００６６】
光線７０は、透明スライドガラス１８上に位置する組成物１４を直接照らすことができる。
【００６７】
画像取得装置７２は、図示されていない複数の画素を含む光検出器アレイ７４を含む。光検出器７４の各画素は１０μｍ以下の、または４μｍ以下でさえある寸法を有する。各画素は、例えば正方形の形状を有し、その辺は１０μｍ以下の、または４μｍ以下でさえある値を有する。或いは、各ピクセルは一辺が２．２μｍの正方形形状を有する。
【００６８】
取得装置７２は、長手方向Ｘに沿って透明スライドガラス１８から第２の距離Ｄ２に位置する。第２の距離Ｄ２は、１ｃｍ未満の値、好ましくは１００μｍから２ｍｍの間に含まれる値を有する。
【００６９】
図４の例示的な実施形態において、第２の距離Ｄ２は５００μｍに等しい。取得装置７２と透明スライドガラス１８との間の距離を短く選択することによって、組成物１４に光を当てるとき様々な回折パターンの間の干渉現象を制限することが可能である。
【００７０】
画像取得装置７２は、光線７０によって照らされる組成物１４が配置されるスライドガラス１８によって伝達される放射の画像を取得することができる。伝達された放射とは、組成物１４およびスライドガラス１８を通過する放射を意味し、取得装置７２および光源２０は、透明スライドガラス１８および組成物１４のどちらかの側に配置されるようにする。
【００７１】
光検知器アレイ７４は、２次元のイメージセンサであり、すなわち長手方向の軸Ｘに垂直な平面内にある。光検知器アレイ７４は画素化されたイメージセンサであり、例えばＣＭＯＳ（相補性金属酸化膜半導体：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  Ｍｅｔａｌ  Ｏｘｉｄｅ  Ｓｅｍｉ−ｃｏｎｄｕｃｔｏｒ）センサである。
【００７２】
或いは、光検知器アレイ７４はＣＣＤ（電荷結合素子：Ｃｈａｒｇｅ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｄｅｖｉｃｅ）センサである。
【００７３】
光検知器アレイ７４によって取得された画像は、透明スライドガラス１８と光検知器アレイ７４との間に位置する任意の拡大光学系が存在することなく、光が当てられた組成物１４により直接伝達された放射によって形成される。しかしながらこれは、各々がセンサの対応する画素にカップリングされた、マイクロレンズの存在を排除せず、これらのマイクロレンズは信号をよりよく収集することを可能にする。光検知器アレイ７４はレンズレス画像装置とも呼ばれ、組成物１４の画像を形成することができ、一方で組成物１４からの距離が小さいところに配置される。距離が小さいとは、１ｃｍ未満の距離を意味し、第２の距離Ｄ２は例えば５００μｍのオーダーである。
【００７４】
粒子２４の光学検知に関して、フィルムとして広げられ、粒子２４を含む組成物１４の連続画像が、光学検知システム２２を用いて取得される。フィルムの蒸発の際、粒子２４を覆う膜の形成が観察され、膜は、１０ｎｍから５μｍの間に含まれる値を有する厚みなど、非常に小さな厚みを有する。
【００７５】
これらの条件の下で組成物１４が光源２０によって照らされるとき、結果的に膜は粒子２４上に形成される１つまたは複数のマイクロレンズの役割を果たし、これらの粒子の検知を改良することを可能にする。
【００７６】
組成物１４における親水性ポリマーの添加は、組成物１４の蒸発の際、膜が粒子２４と接触したままである時間を延ばすことを可能にする。親水性ポリマーは膜を生じる時間を延ばす可能性を与え、一方でスライドガラス１８上での組成物１４の適切なスプレッディングを保持する。スライドガラス１８と組成物１４との間で得られる接触角αは実際のところ２０°未満、好ましくは１°未満および１０°未満、より好ましくは１°のオーダーである値を有する。
【００７７】
親水性ポリマーは、組成物１４の蒸発の際、得られた膜の厚みの減少も生じさせ、これはより小さなサイズの粒子２４の検知を可能にし、一方で良好な信号対雑音比を保持する。実は、もしも膜の厚みが検知したい粒子２４に対して非常に大きい場合、信号対雑音比は減少する。
【００７８】
界面活性剤が臨界ミセル濃度と少なくとも等しい濃度を有するとき、組成物１４はさらに良好に広げられ、一方で膜の形成を可能にするための十分な蒸発速度を有する。
【００７９】
結果的に、検知システム２２は、例えば２００ｎｍの直径を有する粒子など、非常に小さな値の直径を有する粒子２４の検知を可能にする。
【符号の説明】
【００８０】
１０  基板
１２  チャンバ
１４  組成物
１６  揮発性液体
１８  スライドガラス
２０  光源
２２  光学検知システム
２４  粒子
２６  箱型容器
２８  蓋
３０  容器
３１  底部
３２  開口部
３３  シム
７０  光線
７２  画像取得装置
７４  光検知器アレイ
【図１】
2016506493.tif 000003
【図２】
2016506493.tif 000004
【図３】
2016506493.tif 000005
【図４】
2016506493.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成27年7月28日(2015.7.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板（１０）上に液体フィルムを形成する方法であって、
・チャンバ（１２）内に基板（１０）を配置（５０）し、基板（１０）上に組成物（１４）を置く段階であって、組成物（１４）が水を含む段階、
・チャンバ（１２）内部に揮発性液体（１６）を導入する段階（５５）、
・所定の時間チャンバ（１２）を閉鎖する段階（６０）であって、この閉鎖段階（６０）の間チャンバ（１２）内で揮発性液体（１６）が蒸発する段階、
を含み、
・チャンバ（１２）外部への、揮発性液体（１６）の蒸発によって形成される蒸気の、少なくとも部分的な取り出し段階（６５）であって、この取り出し（６５）は基板（１０）上の組成物（１４）のスプレッディングを生じさせ、前記スプレッディングされた組成物（１４）が結果的に基板（１０）上に液体フィルムを形成する段階
をさらに含む方法。
【請求項２】
前記所定の時間が、１分から３０分の間に含まれる値を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記所定の時間が５分から２０分の間に含まれる値を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記所定の時間が実質的に１０分に等しい値を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
揮発性液体（１６）を導入する段階（５５）の間、揮発性液体（１６）は組成物（１４）から離れて、揮発性液体（１６）と組成物（１４）との間の接触が無いように位置する、請求項１から４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
チャンバ（１２）内部に導入される揮発性液体（１６）がアルコールを含む、請求項１から５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
チャンバ（１２）内部に導入される揮発性液体（１６）がエタノールを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
チャンバ（１２）が箱型容器（２６）であり、箱型容器（２６）は蓋（２８）および開口部（３２）を有する容器（３０）を含み、蓋（２８）は、蓋（２８）が容器の開口部（３２）から離れている開位置と、蓋（２８）が容器の開口部（３２）を閉鎖することができる閉位置との間で移動可能であり、前記閉位置は箱型容器（２６）の密閉に対応し、
閉鎖段階（６０）の間、蓋（２８）は、その開位置からその閉位置に移動され、その後所定の時間閉位置において保持され、取り出し段階（６５）の間、蓋（２８）は、その閉位置からその開位置に移動され、その後開位置に保持される、請求項１から７の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
箱型容器（２６）がペトリ皿である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
容器（３０）は底部（３１）を含み、揮発性液体（１６）は導入する段階（５５）の間底部（３１）に接触して位置し、箱型容器（２６）は、導入する段階（５５）の間揮発性液体（１６）を組成物（１４）から離れて位置させるために、基板（１０）を底部（３１）から離して保持するための少なくとも１つのシム（３３）をさらに含む、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
組成物（１４）が、粒子（２４）、界面活性剤、および親水性ポリマーをさらに含み、親水性ポリマーは水よりも高い沸点を有する、請求項１から１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
粒子（２４）が１０μｍ未満の直径を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
粒子（２４）が１μｍ未満の直径を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
界面活性剤が少なくとも臨界ミセル濃度と等しい濃度を有する、請求項１１から１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ポリマーが以下の式で規定されるポリエチレングリコールである、請求項１１から１４の何れか１項に記載の方法：
Ｈ（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）ｎＯＨ
ここでｎはポリマーのオキシエチレンユニットの数を示す。
【請求項１６】
組成物（１４）が、０．５μｌから５μｌの間に含まれる値を持つ体積を有する、請求項１から１５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１７】
基板（１０）が親水性材料で作られる、請求項１から１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
基板（１０）がガラスで作られる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
基板（１０）がプラスチック材料で作られる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
基板（１０）が透明なスライドガラス（１８）であり、透明なスライドガラス（１８）は、光学検知システム（２２）を用いて、粒子（２４）を含む組成物（１４）の少なくとも１つの画像を取得するために、光源（２０）で照らされることが意図される、請求項１から１９の何れか１項に記載の方法。
【請求項２１】
組成物（１４）が粒子（２４）をさらに含み、粒子（２４）は生物学的種である、請求項１から２０の何れか１項に記載の方法。
【請求項２２】
生物学的種が生きた生物学的種である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
生きた生物学的種が細菌である、請求項２２に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
任意に親水性ポリマーで終端している界面活性剤は、溶液１４の水の蒸発の際、粒子２４を覆うフィルムを形成することが意図される。親水性ポリマーの添加は、このフィルムが粒子２４を覆う時間、または持続時間を延長する可能性を与える。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
スライドガラス１８の親水性は、例えば以下の段階に従ってスライドガラス１８を調製することによって得られる。第１の調製段階は、１０分のオーダーの時間、または持続期間での石けん水中での音波処理である。石けん水は、例えば水および洗浄液を含み、水は好ましくは、Ｍｉｌｌｉ−Ｑの商品名でも知られる、ＩＳＯ３６９６標準によるタイプ１の純水である。第２の段階は、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水などの水、アセトン、およびイソプロパノールでのすすぎ段階である。第３の段階は、例えば窒素での乾燥などの乾燥段階であり、第４の段階は、１５秒を超える時間、または持続期間の、好ましくは３０秒のオーダーの時間、または持続期間の酸素プラズマパスを有する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
次の段階６０の間、チャンバ１２は所定の時間、または所定の持続期間密閉され、この閉鎖段階の間揮発性液体１６はチャンバ１２内で蒸発する。言い換えれば、この閉鎖段階の間、基板１０は揮発性液体１６の雰囲気の下、例えばエタノール雰囲気の下に置かれる。
【国際調査報告】
2016506493.tif 000007
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