(57)【要約】  本発明は、医学の分野、そして更に特に、腫瘍学及び免疫学に関する。提案されるものは、一般式（１）又は（２）の新規な化合物であり、これは、ＣＤ１６ａに対する親和性を有する。提案されるものは、抗体又は自己抗原から選択されるＣＤ１６ａ受容体に対して活性であり、そして一般式（１）又は（２）の化合物から選択される改変化合物によって複合化された新規な改変されたタンパク質であり、そしてこれは、抗体依存性細胞障害性を向上し、そしてそれに向けられる。新規な改変されたタンパク質（複合体）は、器官中の細胞の特異的な標的基、例えば癌細胞又は自己免疫性リンパ球を破壊するために使用することができる。更に提案されるものは、癌及び自己免疫性疾病の治療のための改変されたタンパク質を含有する複合体、及び医薬組成物並びに薬物を製造するための方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式１の５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Н−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン又は以下の一般式２の５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピンで表される、ＣＤ１６ａ受容体に対する親和性を示す化合物、又は医薬的に受容可能なその塩：
【化１】
2016505629.tif 000031
であって、
式中、Ｒ１は、（ＣＨ３）２Ｎ−、又は以下の式：
【化２】
2016505629.tif 000032
である基から選択され、
Ｒ２は、以下の式：
【化３】
2016505629.tif 000033
である基から選択され、
式中、末端置換基としてのＲ３は、ＮＨ２、
【化４】
2016505629.tif 000034
であり、
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルである、前記化合物。
【請求項２】
Ｒ１が以下の式：
【化５】
2016505629.tif 000035
からなる群から選択され、
Ｒ２は、以下の式：
【化６】
2016505629.tif 000036
からなる群から選択され、
式中、Ｒ４＝Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルである、
請求項１に記載の一般式１の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が（ＣＨ３）２Ｎ−又は以下の式：
【化７】
2016505629.tif 000037
であり、
Ｒ２は、以下の式：
【化８】
2016505629.tif 000038
からなる群から選択される、請求項１に記載の一般式２の化合物。
【請求項４】
以下の化合物からなる群から選択される。請求項１に記載の化合物：
（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
（４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェノキシ）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェニルカルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
３−［８−（３，４−ジメトキシフェニルカルバモイル）−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル］−安息香酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
（４−｛８−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）−プロピルカルバモイル］−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル｝−フェニル）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル、
１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸（２−アミノエチル）−アミド、
１０−｛４−［（２−アミノ−エチルカルバモイル）−メチル］−ベンジル｝−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド、
１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルエステル、
１０−（４−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−ベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド、
Ｎ−［２−（｛Ｎ−（メトキシカルボニル）−Ｎ−［（１，５−ジメトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）カルバモイル］−β−アラニル｝アミノ）エチル］−１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボキシアミド、
Ｎ５−（２−｛［（４−｛［７−｛［［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピル］（フェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，５，１１−トリオキソ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０（１１Ｈ）−イル］メチル｝フェニル）アセチル］−アミノ｝エチル）−Ｎ２−｛［（１，３−ジカルボキシプロピル）アミノ］カルボニル｝グルタミン、
４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ］カルボニル｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド、
４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド、
Ｎ−［４−（５−｛［（３，４−ジメトキシフェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）フェニル］−Ｎ−メチルグリシン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル。
【請求項５】
ＣＤ１６ａ受容体に対して親和性を示し、そして請求項１に記載の一般式１又は２の化合物から選択される改変化合物によって複合化された、抗体又は自己抗原から選択される、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な、改変されたタンパク質。
【請求項６】
抗体がリツキシマブであることで特徴づけられる、請求項５に記載の改変されたタンパク質。
【請求項７】
抗体がトラスツズマブであることで特徴づけられる、請求項５に記載の改変されたタンパク質。
【請求項８】
抗体がセツキシマブであることにおいて特徴づけられる、請求項５に記載の改変されたタンパク質。
【請求項９】
自己抗原がインターフェロンアルファであることにおいて特徴づけられる、請求項５に記載の改変されたタンパク質。
【請求項１０】
自己抗原がミエリン塩基性タンパク質であることにおいて特徴づけられる、請求項５に記載の改変されたタンパク質。
【請求項１１】
自己抗原がＣ１ｑタンパク質であることにおいて特徴づけられる、請求項５に記載の改変されたタンパク質。
【請求項１２】
請求項５に記載の改変されたタンパク質の調製のための方法であって、タンパク質を、有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド）中に溶解された請求項１に記載の一般式１又は２の化合物と１：３から１：１００間のモル比でＰＢＳ溶液中（ｐＨ７．４）で反応させることによる、前記方法。
【請求項１３】
医薬的に受容可能な包装中に入れられ、そして治療的に受容可能な量の請求項５に記載の改変されたタンパク質及び医薬的に受容可能な希釈剤、担体又は賦形剤を含んでなる、錠剤、カプセル又は注射の形態の、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な医薬組成物。
【請求項１４】
医薬的に受容可能な包装中に入れられ、そして病的細胞によって起こされる疾病の治療に用いられる、治療的に受容可能な量の請求項５に記載の改変されたタンパク質又は請求項１３に記載の医薬組成物を含んでなる、錠剤、カプセル又は注射の形態の、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な医薬。
【請求項１５】
ＣＤ１６ａ受容体に対する間接的な作用によって治癒することができる病的細胞によって起こされる疾病の治療のための方法であって、これによれば、治療的に有効な量の請求項５に記載の改変されたタンパク質、又は請求項１３に記載の医薬組成物、或いは請求項１４に記載の医薬が患者に導入される、前記方法。
【請求項１６】
自己免疫性又は腫瘍学的疾病を治療する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
リンパ腫、リンパ性白血病又は乳癌を治療する請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｉ型の自己免疫性多腺性内分泌障害を治療する、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学、特に免疫学及び腫瘍学、ＣＤ１６ａ受容体に結合する新規な化合物、並びにこれによって改変されたタンパク質（複合体）に関し、これは、抗体依存性細胞障害を誘発するために使用され、そしてその結果として特定の標的グループの細胞、例えば癌細胞又は自己免疫性リンパ球を身体から除去する。本発明は、更に、上記の複合体、腫瘍学的及び自己免疫性疾病を治療するために改変されたタンパク質（複合体）を含んでなる医薬組成物及び医薬の調製のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
受容体ＦｃγＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）は、抗体のＦｃ断片の結合の原因である受容体のグループに属する。ＣＤ１６ａは、ＮＫ細胞（キラー）及びマクロファージの表面上に発現し、そして細胞に結合する抗体のＦｃ断片と相互作用する抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の誘発の原因である。ＡＤＣＣは、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）及びアポトーシスと共に、身体中の癌細胞の破壊の主要な機構の一つである。これは、自己抗体仲介の自己免疫性疾患、例えばＩ型の自己免疫性多腺性内分泌障害、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、新生児の溶血性疾患、等の原因である。即ち、抗体依存性細胞障害は、ヒトの身体における病的過程の発生において正又は負のいずれかの役割を演じることができる。
【０００３】
自己免疫性疾患は、器官の健康な組織に対して発生する免疫学的反応の結果として発症し、そしてこれらの組織の損傷をもたらす疾病のグループである。現時点では、免疫系を全体として抑制する免疫抑制剤が自己免疫性疾患を治療するために使用されている。自己免疫性反応の選択的抑制は、治療の副作用の発生率を有意に減少するものである。
【０００４】
抗体は、癌細胞を標的化する破壊のために、かなり以前から使用されている。例は、リツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、及び癌細胞の表面に標的を有し、そして補体依存性細胞障害及び抗体依存性細胞障害を通して作用する多くの他の抗体含む。これは、これらの非抱合型モノクローナル抗体の癌性疾病を治療するための医薬としての、例えば、リツキシマブのＣＤ２０陽性Ｂ細胞性低悪性度又は濾胞性非ホジキンリンパ腫の治療、トラスツズマブの進行した乳癌の治療のための使用を可能にする。これらの医薬の好結果な使用は、その効力だけでなく、更にその顕著な安全特性にも依存する（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  Ａ．−Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２６，１９９９，ｐｐ．６６−７３）。
【０００５】
これらは、全て新しい種類の療法の可能性を保有している。然し、明白な効力にもかかわらず、約半数の患者は、リツキシマブ療法に反応せず、そして６０％までの患者が治療の回復期に耐性となった。これらの医薬に伴う成功に照らして、非抱合型抗体による治療によって典型的に得られるものより高い特異的抗体活性を得る大きい興味が現時点で存在する。
【０００６】
これは、表面抗原に対する抗体の治療効果を指向する研究の拡大を起こした。抗体の改変の第１の方向は、細胞障害性又は細胞増殖抑制性治療剤の局所供給のための抗体−薬物複合体である改変されたタンパク質（複合体）の開発となり、これは、悪性腫瘍の治療における腫瘍細胞の破壊又は阻害のために既に使用されていた医薬である。［Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２０７−２１２；Ｔｒａｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８−３３７；Ｓｙｒｉｇｏｓ  ａｎｄ  Ｅｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５−６１４；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９９７）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１−１７２；ＵＳ ４，９７５，２７８］。これらの複合体は、抗体の細胞障害性作用に、細胞障害性又は細胞増殖抑制性医薬の抗腫瘍活性を加えて、腫瘍への医薬の標的化した供給及び細胞内のその蓄積を容易にする。このような複合体の例は、トラスツズマブ（ハーセプチン）の強化版であるトラスツズマブ−ＤＭ１（ＷＯ２０１１６９０７４）、及びオーリスタチンＥとの一連の複合体（ＵＳ２０１２０００３２４８）である。
【０００７】
別の方向は、抗体の固有の細胞障害性を、細胞障害性を規定する受容体との相互作用を強化することによって強化することであった。Ｒｏｃｈｅ社は、ＣＤ１６ａ受容体への増加した結合を示すオビヌツズマブ抗体を開発した。効果は、抗体のグリコシル化の操作によって達成された。オビヌツズマブは、１０倍強い抗体依存性細胞障害性を有する。（ＷＯ２００５０４４８５９，ＥＡ０１５００９）。
【０００８】
抗体依存性細胞障害性は−細胞障害性抗体の作用の主要な機構の一つであり、これは、可変領域を経由して標的細胞の表面において抗原に結合し、一方、定常部分は、キラー細胞の表面においてＣＤ１６ａ受容体に結合する。この細胞内接触は、キラーによるパーフォリン及びグランザイムの分泌に導く。最初のものは、標的細胞の細胞膜の細孔を形成し、一方後者は−カスパーゼ及び他のアポトーシスの分子を活性化する。ＣＤ１６ａ受容体は、抗体の定常領域に結合するＦｃ受容体の大きいファミリーのメンバーであり、そして局在化、機能及び定常領域に対する親和性において異なっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＵＳ４，９７５，２７８；
【特許文献２】ＷＯ２０１１６９０７４；
【特許文献３】ＵＳ２０１２０００３２４８；
【特許文献４】ＷＯ２００５０４４８５９；
【特許文献５】ＥＡ０１５００９。
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  Ａ．−Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２６，１９９９，ｐｐ．６６−７３；
【非特許文献２】Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２０７−２１２；
【非特許文献３】Ｔｒａｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８−３３７；
【非特許文献４】Ｓｙｒｉｇｏｓ  ａｎｄ  Ｅｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５−６１４；
【非特許文献５】Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９９７）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１−１７２。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の文脈において、用語は、一般的に以下のとおりに定義される：
“アルキル”は、鎖中に１−１２個の炭素原子を持つ、直鎖又は分枝鎖基の脂肪族炭化水素を意味する。分枝鎖基は、アルキル鎖が、一つ又はそれより多い“低級アルキル”置換基を有することを意味する。アルキル基は、ハロゲン、アルケニルオキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アロイル、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、アルキニルオキシ、アラルコキシ、アリールオキシ、アリールオキシカルボニル、アルキルチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、アリールスルホニル、アルキルスルホニルヘテロアラルキルオキシ、環縮合ヘテロアリールシクロアルケニル、環縮合ヘテロアリールシクロアルキル、環縮合ヘテロアリールヘテロシクレニル、環縮合ヘテロアリールヘテロシクリル、環縮合アリールシクロアルケニル、環縮合アリールシクロアルキル、環縮合アリールヘテロシクレニル、環縮合アリールヘテロシクリル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、ヘテロアラルキルオキシカルボニル又はＲｋａＲｋ＋１ａＮ−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＣ（＝О）−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＣ（＝Ｓ）−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＳＯ２−を含む同一又は異なった構造の、一つ又はそれより多い置換基（“アルキル置換基”）を有することができ、ここにおいて、Ｒｋａ及びＲｋ＋１ａは、互いに独立に、その意味がこの節の他の場所で定義される“アミノ基置換基”、例えば、水素、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであるか、或いはＲｋａ及びＲｋ＋１ａは、これらが接続しているＮ原子と一緒に、Ｒｋａ及びＲｋ＋１ａを経由する４ないし７員のヘテロシクリル又はヘテロシクレニルを形成する。好ましいアルキル基は、メチル、トリフルオロメチル、シクロプロピルメチル、シクロペンチルメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、メトキシエチル、カルボキシメチル、メトキシカルボニルメチル、エトキシカルボニルメチル、ベンジルオキシカルボニルメチル及びピリジルメチルオキシカルボニルメチルである。好ましい“アルキル置換基”は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アラルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、ヘテロアラルキルオキシカルボニル又はＲｋａＲｋ＋１ａＮ−、ＲｋａＲｋ＋１ａＮＣ（＝О）−、環縮合アリールヘテロシクレニル、環縮合アリールヘテロシクリルである。
【００１２】
“アルキルアミノ”は、СｎＨ２ｎ＋１ＮＨ−又は（СｎＨ２ｎ＋１）（СｎＨ２ｎ＋１）Ｎ−基を意味し、ここで、アルキルは、この節で定義される。好ましいアルキルアミノ基は、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソ−プロピルアミノ、及びｎ−ブチルアミノである。
【００１３】
“抗体”は−外来性物質による攻撃に反応して生物体中にＢリンパ球によって合成され、そしてこの物質に対して特異的親和性を有するタンパク質（免疫グロブリン）である。これらは、特異的な体液性免疫の最も重要な因子である。これらは、特異的な体液免疫の最も重要な因子である。抗体は、二つの機能：抗原結合及びエフェクター（一つ又はもう一つの免疫反応を起こす）を達成する。
【００１４】
“自己抗原”は−化合物の遊離分子又は細胞、器官、及び組織の一部である分子であり、これは、ある種の条件下で免疫系によって外来性であると認識され、そしてそれとの関連で、その生物体の一部に細胞性又は体液性免疫反応を起こす。原則的に、これらは、正常なタンパク質又はタンパク質複合体（更にＤＮＡ又はＲＮＡとのタンパク質複合体）であり、これは、自己免疫性疾患を持つ患者において免疫系によって認識される。このような抗原は、通常免疫系によって認識されるべきではないが、しかし遺伝要因又は環境条件のために、このような抗原に対する免疫学的許容性が喪失されることがあり得る。いわゆる天然の自己（ｓｅｌｆ）抗原（隔離された）は、自己（ａｕｔｏ）抗原の特性を有することができる。これらは、その合成が免疫系の成熟後に開始するタンパク質（精子、乳）；組織血液（ｈｉｓｔｏｈｅｍａｔｉｃ）障壁によって免疫系から分離される器官の巨大分子；細胞の核及び細胞質中に存在する巨大分子；内因性（免疫複合体、壊死、炎症）又は外因性（温度、医薬的物質、微生物及びその毒素を含む化学化合物、ウイルス等）因子の作用の結果としての新規な外来性決定因子基を伴う巨大分子；ある種の条件（例えば、腫瘍において）で再開する合成を伴う胚性タンパク質を含む。これらは、自己抗体又は感作化されたＴリンパ球形成及び自己免疫性疾患の発症に導く免疫反応を誘発することができる。その結果として、自己免疫性反応が発生し始める。これらは、殆どの多様化された自己免疫性疾患の発症に導くことができる。これらは、特に、Ｉ型の自己免疫性多腺性内分泌障害、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、新生児の溶血性疾患、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、等を含む。
【００１５】
自己免疫性は−生物体の自己（ｓｅｌｆ）抗原（自己抗原）を認識する免疫系の後天性の能力、及び自己抗体又は自己免疫性Ｔリンパ球を形成することによる、これらに対する反応に関係する過程及び関連する疾病である。自己免疫性過程は−その基本が、自己抗原の自己抗体又は自己免疫性Ｔリンパ球との相互作用の後遺症によって起こされる組織損傷である過程及び関連する疾病である。
【００１６】
“複合体”は−化学化合物、抗原又は抗体によって改変されたタンパク質である。複合体の形成は−酵素的免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）の重要な工程の一つである。複合体の形成において、化学化合物の導入のための最適な方法は、複合体、抗原又は抗体の成分が、その生物学的活性−抗原性及び抗原結合活性をそれぞれ保持するように選択される。外来性化合物及び代謝産物の複合体の反応に入る能力は、これらの分子中の決定された官能基の存在に依存する。
【００１７】
“医薬”は−ヒト及び動物の生理学的機能の修復、改善又は改変、そして更に疾病の治療及び予防、診断、麻酔、避妊、美容術等を意図する、錠剤、カプセル、注射、軟膏及び他の即使用の形態の化合物（又は医薬組成物の形態の化合物の混合物）である。
【００１８】
“受容体”（ラテン語のｒｅｃｉｐｅｒｅから）は、限定された数の生理学的に活性な化合物（リガンド）と特異的に相互作用し、そしてこの相互作用のシグナルを限定的な細胞反応に変換することが可能な、細胞の細胞膜上又は細胞内のいずれかに位置する生物学的巨大分子である。
【００１９】
“溶媒和物”は−溶媒の溶質への付加体である；溶媒和物の特別な場合が−水和物（溶媒は−水）である。溶媒和物は、通常溶液中に形成されるが、しかし時には（溶液が冷却された、又は溶媒が蒸発された、等の場合）、結晶質の形態−結晶質の溶媒和物で調製することができる。
【００２０】
“医薬組成物”は、活性成分（改変されたタンパク質）、並びに医薬的に受容可能な、そして薬理学的に適合性の充填剤、溶媒、希釈剤、担体、補助剤、分散及び感作剤、供給剤、例えば保存剤、安定剤、賦形剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、増粘剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、抗細菌剤、殺真菌剤、潤滑剤、及び延長供給制御物質からなる群から選択される少なくとも一つの成分を含んでなる組成物を意味し、これらの選択及び適した特性は、投与の特質及び経路並びに投与量に依存する。適した懸濁剤の例は、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエテン、ソルビトール及びソルビトールエーテル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカントゴム、並びに同様にこれらの混合物である。微生物の作用に対する保護は、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸、並びに類似の化合物のような各種の抗細菌剤及び抗真菌剤によって得ることができる。組成物は、更に例えば、糖、塩化ナトリウム、及び類似の化合物のような等張剤を含有することもできる。組成物の延長された効果は、活性成分の吸収を減速する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンによって達成することができる。適した担体、溶媒、希釈剤及び供給剤の例は、水、エタノール、ポリアルコール及びこれらの混合物、天然の油（例えばオリーブ油）並びに注射用有機エステル（例えばオレイン酸エチル）を含む。充填剤の例は、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム等である。崩壊剤及び分散剤の例は、デンプン、アルギン酸及びその塩、並びにケイ酸塩である。適した潤滑剤の例は、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク及び高分子量のポリエチレングリコールである。活性成分の経口、舌下、経皮、筋肉内、静脈内、皮下、局所又は直腸投与のために、単独の或いはもう一つの活性化合物との組合せの医薬組成物は、標準的な投与形態で、又は伝統的な医薬的な担体との混合物でヒト及び動物に投与することができる。適した標準的な投与形態は、経口形態、例えば錠剤、ゼラチンカプセル、丸薬、散薬、顆粒、チューインガム及び経口溶液又は懸濁液、舌下及び経頬側投与形態；導入のエアゾール；インプラント；局所、経皮、皮下、筋肉内、静脈内、鼻腔内又は眼内形態、並びに直腸投与形態を含む。医薬組成物は、通常標準的な方法によって、活性化合物を液体又は微細に粉末化された固体の担体と混合することによって調製される。
【００２１】
“医薬的に受容可能な塩”は、本発明中に開示される比較的無毒性の酸及び塩基の有機並びに無機の塩の両方を意味する。塩は、化合物の合成、単離又は精製の過程中のｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができるか、或いは特別に調製することができる。特に、塩基の塩は、開示された化合物の精製された塩基及び適した有機又は無機酸から出発して調製することができる。この方法で調製される塩の例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、マロン酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、スルファミン酸塩等を含む（このような塩の特質の詳細な説明は：Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６：１−１９中に与えられている）。開示される酸の塩も、更に精製された酸の、適した塩基との反応によって特異的に調製することができ；更に金属塩及びアミン塩も合成することができる。金属塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、マグネシウム、リチウム及びアルミニウムの塩であり、ナトリウム及びカリウム塩が好ましい。それから金属塩を調製することができる適した無機塩基は、水酸化、炭酸、重炭酸及び水素化ナトリウム；水酸化、炭酸及び重炭酸カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛である。開示される酸の塩の調製のために適した有機塩基は、その塩基性が、医薬目的の使用に適した安定した塩を製造するために十分に塩基性のアミン及びアミノ酸である（特に、これらは、低い毒性を持たなければならない）。このようなアミンは、アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ベンジルアミン、ジベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、ピペラジン、エチルピペリジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等を含む。一方、塩は、幾つかの水酸化テトラアルキルアンモニウム、例えば、コリン（ｈｏｌｉｎｅ）、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、等を使用して調製することができる。アミノ酸は、主要なアミノ酸−リシン、オルニチン及びアルギニンから選択することができる。
【００２２】
本発明の目的は、新規な化合物を提供し、そしてこれによってＣＤ１６ａ受容体と相互作用することが可能なタンパク質（複合体）を改変することであり、これは、抗体依存性細胞障害性の誘発のために、そしてその結果として身体からの、例えば、癌細胞又は自己免疫性リンパ球のような細胞の標的グループを除去するために使用される。
【００２３】
この目的は、本出願人等によって発見され、そしてＣＤ１６ａ受容体に対して親和性を示し、そしてタンパク質のアミノ基に加えることが可能である活性化された基を含有する新規な化合物、即ち、新しい以下の一般式１の置換された５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Н−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン又は以下の一般式２の５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン、或いは医薬的に受容可能なこれらの塩又は溶媒和物によって達成され、
【００２４】
【化１】
2016505629.tif 000002
【００２５】
式中、Ｒ１は、（ＣＨ３）２Ｎ−、又は以下の式：
【００２６】
【化２】
2016505629.tif 000003
【００２７】
であり、
Ｒ２は、以下の式：
【００２８】
【化３】
2016505629.tif 000004
【００２９】
であり、ここで、末端置換基としてのＲ３は、非置換のアミノアルキル、−ＮＨ２、又は以下の式：
【００３０】
【化４】
2016505629.tif 000005
【００３１】
であり、
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルである。
【００３２】
好ましい化合物は、Ｒ１が以下の式：
【００３３】
【化５】
2016505629.tif 000006
【００３４】
である一般式１の化合物であり、
Ｒ２は、以下の式：
【００３５】
【化６】
2016505629.tif 000007
【００３６】
からなる基から選択され、
ここで、Ｒ４＝Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルである。
【００３７】
好ましい化合物は、更にＲ１が（ＣＨ３）２Ｎ−又は以下の式：
【００３８】
【化７】
2016505629.tif 000008
【００３９】
である一般式２の化合物であり、
Ｒ２は、以下の式：
【００４０】
【化８】
2016505629.tif 000009
【００４１】
である。
【００４２】
更に好ましい化合物は：
（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（１）、
（４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェノキシ）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（２）、
４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェニルカルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（３）、
３−［８−（３，４−ジメトキシフェニルカルバモイル）−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル］−安息香酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（４）、
（４−｛８−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）−プロピルカルバモイル］−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル｝−フェニル）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（５）、
１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸（２−アミノエチル）−アミド  １（６）、
１０−｛４−［（２−アミノ−エチルカルバモイル）−メチル］−ベンジル｝−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド  １（７）、
１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルエステル  １（８）、
１０−（４−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−ベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド  １（９）、
Ｎ−［２−（｛Ｎ−（メトキシカルボニル）−Ｎ−［（１，５−ジメトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）カルバモイル］−β−アラニル｝アミノ）エチル］−１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボキシアミド  １（１０）、
Ｎ５−（２−｛［（４−｛［７−｛［［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピル］（フェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，５，１１−トリオキソ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０（１１Ｈ）−イル］メチル｝フェニル）アセチル］−アミノ｝エチル）−Ｎ２−｛［（１，３−ジカルボキシプロピル）アミノ］カルボニル｝グルタミン  １（１１）、
４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ］カルボニル｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド  ２（１）、
４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド  ２（２）、
Ｎ−［４−（５−｛［（３，４−ジメトキシフェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）フェニル］−Ｎ−メチルグリシン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ２（３）；
である。
【００４３】
本出願人等は、初めて、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な改変されたタンパク質（複合体）を見出した。これが、本発明の主題が、一般式１又は２の化合物から選択される、ＣＤ１６ａ受容体に対する親和性を示す改変化合物によって複合化され、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な、改変されたタンパク質である理由である。
【００４４】
更に好ましいものは、タンパク質と、一般式１又は２の改変化合物との相互の反応によって調製される、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な改変されたタンパク質（複合体）である。
【００４５】
更に好ましいものは、抗体及び一般式１又は２の化合物から調製される改変されたタンパク質（複合体）であり、ここで、抗体は、リツキシマブ、トラスツズマブ、又はセツキシマブである。
【００４６】
更に好ましいものは、更に、一般式１又は２の化合物によって改変されたリツキシマブである改変されたタンパク質（複合体）である。
【００４７】
更に好ましいものは、更に、一般式１又は２の化合物によって改変されたトラスツズマブである改変されたタンパク質（複合体）である。
【００４８】
更に好ましいものは、更に、一般式１又は２の化合物によって改変されたセツキシマブである改変されたタンパク質（複合体）である。
【００４９】
更に好ましいものは、更に、自己抗原及び一般式１又は２の化合物から調製される改変されたタンパク質（複合体）であり、ここで、自己抗原は、インターフェロンアルファ又はミエリン塩基性タンパク質、或いは補体Ｃ１ｑタンパク質である。
【００５０】
更に好ましいものは、更に、一般式１又は２の化合物によって改変されたインターフェロンアルファである改変されたタンパク質（複合体）である。
【００５１】
更に好ましいものは、更に、一般式１又は２の化合物によって改変されたミエリン塩基性タンパク質である改変されたタンパク質（複合体）である。
【００５２】
更に好ましいものは、更に、一般式１又は２の化合物によって改変された補体Ｃ１ｑタンパク質ある改変されたタンパク質（複合体）である。
【００５３】
ＣＤ１６ａ受容体に対するタンパク質及びその複合体の比較有効性の研究は、複合体が、その非改変タンパク質との比較において１−３桁多く活性であることを明らかにした。
【００５４】
本発明の主題は、更に、改変されたタンパク質（複合体）の調製のための方法であり、これによれば、タンパク質は、例えば、ジメチルスルホキシドのような有機溶媒中に溶解された一般式１又は２の化合物との、１：３ないし１：１００間のモル比でＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）中で室温において一定に撹拌しながら相互作用にかけられる。
【００５５】
本発明の主題は、更に、治療的に有効な量の改変されたタンパク質（複合体）及び医薬的に受容可能な希釈剤、担体、又は賦形剤を含んでなるＣＤ１６ａ受容体に対して活性な医薬組成物である。
【００５６】
医薬組成物は、医薬的に受容可能な賦形剤を含むことができる。医薬的に受容可能な賦形剤は、薬剤学の分野において適用される希釈剤、補助剤及び／又は担体を意味する。本発明によれば、医薬組成物は、タンパク質の、一般式１又は２の改変化合物との相互作用によって調製される改変されたタンパク質（複合体）、又は医薬的に受容可能な塩或いはその溶媒和物に加えて、他の活性成分、特にインフルエンザ活性を保有するものを含むことができ、但し、これらが所望しない効果をもたらさないことを条件とする。
【００５７】
必要な場合、本発明の医薬組成物を臨床治療において使用するために、これらを伝統的な担体と混合することができる。
【００５８】
本発明によれば、医薬組成物中に使用される担体は、普通に使用される形態、特に経口形態、注射用、局所形態の調製のために薬剤学の分野において使用される担体である。
【００５９】
本発明の主題は、更に、医薬的に受容可能な包装中に入れられた、病的細胞によって起こされた疾病を治療することを意図した、治療的に有効な量の新規な改変されたタンパク質（複合体）又は新規な医薬組成物を含んでなる錠剤、カプセル又は注射の形態のＣＤ１６ａ受容体に対して活性な医薬である。
【００６０】
複合体の形成において、その成分、抗原又は抗体が、その生物学的活性−それぞれ抗原性及び抗原結合活性を保存するために、本発明による複合体は、非複合化モノクローナル抗体が医薬として使用されるものと同じ疾病、例えば低悪性度又は濾胞性非ホジキンリンパ腫、乳癌を治療するために使用することができる。ＣＤ１６ａ受容体に対する抗体活性が、自己免疫性又は腫瘍学的疾病（Ｒ．Ｌ．Ｆｅｒｒｉｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１０，Ｏｃｔ  １，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ  ２８：４３９０−４３９９）、特にリンパ腫（Ｋ．−Ｈ．Ｈｅｉｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１８：４１５９−４１６８）又はリンパ性白血病（Ｊ．Ａ．Ｂｏｗｅｌｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０８：２６４８−２６５４）を治療するために使用されることも更に知られている。
【００６１】
本発明の主題は、ＣＤ１６ａ受容体に対する間接的な作用にある病的細胞によって起こされる疾病を治療するための方法であり、これによれば、治療的に有効な量のＣＤ１６ａ受容体に対して活性な改変されたタンパク質（複合体）又は医薬組成物、或いは医薬が、患者に投与される。
【００６２】
好ましいものは、自己免疫性又は本節において先に定義した腫瘍学的疾病、特にリンパ腫、リンパ性白血病又は乳癌を治療するための方法である。
【００６３】
好ましいものは、Ｉ型の自己免疫性多腺性内分泌障害を治療するための方法である。
【００６４】
医薬は、経口的に又は非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹膜内又は局所）に投与することができる。患者における、ＣＤ１６ａ受容体に対して活性な改変されたタンパク質（複合体）、又は医薬組成物、或いは医薬の臨床投与量は：患者の器官内の活性成分の治療効果及び生体到達度、器官からのその交換及び除去の速度、並びに年齢、性別、及び患者の症状の重篤度によって修正することができる。従って、成人に対する一日の摂取量は、複合体のタンパク質が抗体である場合、通常３００−１２００ｍｇ、好ましくは５００−１０００ｍｇであり、そして複合体のタンパク質が自己抗原である場合、０．０１−１００ｍｇ、好ましくは−０．１−１０ｍｇである。従って、本発明によれば、投与量単位として医薬組成物を調製する場合、上記の有効な投与量を考慮しなければならない。医師又は薬剤師の指示に従い、医薬は規定された時間をかけて数回（好ましくは、１ないし６回）摂取することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
本発明は、以下の図面によって例示される：
【図１】図１は、（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル１（１）のＮＭＲスペクトルである。
【図２】図２は、（４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェノキシ）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル１（２）のＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は、４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェニルカルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル１（３）のＮＭＲスペクトルである。
【図４】図４は、３−［８−（３，４−ジメトキシフェニルカルバモイル）−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル］−安息香酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル１（４）のＬＣＭＳスペクトルである。
【図５】図５は、（４−｛８−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）−プロピルカルバモイル］−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル｝−フェニル）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル１（５）のＮＭＲスペクトルである。
【図６】図６は、１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸（２−アミノエチル）−アミド１（６）のＮＭＲスペクトルである。
【図７】図７は、１０−｛４−［（２−アミノ−エチルカルバモイル）−メチル］−ベンジル｝−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド１（７）のＮＭＲスペクトルである。
【図８】図８は、１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルエステル１（８）のＮＭＲスペクトルである。
【図９】図９は、１０−（４−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−ベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド１（９）のＮＭＲスペクトルである。
【図１０】図１０は、Ｎ−［２−（｛Ｎ−（メトキシカルボニル）−Ｎ−［（１，５−ジメトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）カルバモイル］−β−アラニル｝アミノ）エチル］−１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボキシアミド１（１０）のＮＭＲスペクトルである。
【図１１】図１１は、Ｎ５−（２−｛［（４−｛［７−｛［［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピル］（フェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，５，１１−トリオキソ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０（１１Ｈ）−イル］メチル｝フェニル）アセチル］−アミノ｝エチル）−Ｎ２−｛［（１，３−ジカルボキシプロピル）アミノ］カルボニル｝グルタミン１（１１）のＮＭＲスペクトルである。
【図１２】図１２は、４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド２（１）のＬＣＭＳスペクトルである。
【図１３】図１３は、４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド２（２）のＮＭＲスペクトルである。
【図１４】図１４は、Ｎ−［４−（５−｛［（３，４−ジメトキシフェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）フェニル］−Ｎ−メチルグリシン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２（３）のＬＣＭＳスペクトルである。
【図１５】図１５は、ＴＳＫ  ＧＥＬ  ＳＵＰＥＲ  ＳＷ３０００カラムによる複合体ＣＲ１（１）のクロマトグラムである。
【図１６】図１６は、リツキシマブの複合体のＣＤ１６ａ受容体との結合に対する酵素免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。（ＥＬＩＳＡ）分析に使用された複合体濃度に対する４５０ｎｍにおける光学密度の依存性を示す。
【図１７】図１７は、インターフェロン（Ｉ）及び複合体Ｃ１１（１）のＣＤ１６ａ受容体との結合に対する酵素免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。（ＥＬＩＳＡ）分析に使用された複合体濃度に対する４５０ｎｍにおける光学密度の依存性を示す。
【図１８】図１８は、抗体依存性細胞障害性の試験におけるリツキシマブ（Ｒ）及び複合体ＣＲ１（１）の活性の比較である。
【図１９】図１９は、抗体依存性細胞障害性の試験におけるリツキシマブ（Ｒ）及び複合体ＣＲ１（２）の活性の比較である。
【図２０】図２０は、リツキシマブ（Ｒ）、トラスツズマブ（Ｔ）及びこれらの複合体ＣＲ１（７）、ＣＴ１（７）のＣＤ１６ａ受容体に対する結合に対する酵素免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
以下に与える実施例は、本発明の範囲を例示するが、それを制約するものではない。
【００６７】
実施例１．  （３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（１）を、以下のスキーム１によって調製した。
【００６８】
【化９】
2016505629.tif 000010
【００６９】
化合物４（２５ｇ）を、水（１７０ｍｌ）とＫＯＨ（３１．８ｇ）の溶液に分割して加え、その溶解後、化合物３（３０ｇ）を加え、そして得られた混合物を６０℃で１５時間撹拌した。次いで反応混合物を冷却し、ＨＣｌ（１０％）でｐＨ＝３に酸性化し、濾過し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより化合物５を、７０％収率で得た。化合物５（５０ｇ）を、アンモニア水溶液（５００ｍｌ）中に溶解し、そして亜ジチオン酸塩（８０ｇ）を分割して加え、その後、反応混合物を１時間還流し、冷却し、アンモニアを回転蒸発機で蒸発し、そして水溶液を濃ＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化し、１時間撹拌し、固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物６を、収率６０％で得た。化合物６（４５ｇ）を、ポリリン酸（２００ｍｌ）に５０℃で分割して加え、次いで反応混合物を１０時間９０℃で撹拌し、冷却し、そして氷（５００ｍｌ）上に注ぎ、固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物７を、収率６０％で得た。化合物７（３０ｇ）を酢酸（５００ｍｌ）中に溶解し、３３％の過酸化水素（７０ｍｌ）を加え、撹拌を一晩７０℃で続けた。冷却した後、酢酸を回転蒸発機で蒸発し、そして水（６００ｍｌ）を残渣に加えた。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして濾過した。これにより、化合物８を、収率７０％で得た。化合物８（２２ｇ）のエタノール（３００ｍｌ）中の溶液に、塩化チオニル（８ｍｌ）を１０℃で滴下し、次いで混合物を５時間還流し、冷却し、回転蒸発機で蒸発し、その後、水（３００ｍｌ）を加えた。沈殿した固体を、濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物９を、収率９０％で得た。化合物９（８．２ｇ）のＤＭＦ（８０ｍｌ）中の溶液に、今度は炭酸カリウム（７ｇ）及び塩化ｍ−クロロベンジル（５．２ｇ）を加えた。反応混合物を一晩５０℃で撹拌し、回転蒸発機で蒸発し、水（２００ｍｌ）を残渣に加えた。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、視して乾燥した。これにより、化合物１０を、収率９０％で得た。化合物１０（１１ｇ）の５０％水のエタノール（１５０ｍｌ）中の溶液に、ＫＯＨ（２．７ｇ）を加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。次いでエタノールを回転蒸発機で蒸発し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物１１を、収率８０％で得た。化合物１１（１．８ｇ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中で撹拌された溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．４８ｇ）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（０．８７ｇ）を加えた。反応混合物を一晩室温で撹拌し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、残渣をシリカのクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物１（１）を、収率５０％で得た。化合物１（１）のＮＭＲスペクトルを図１に与える。
【００７０】
実施例２．  （４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェノキシ）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（２）を、以下に与えるスキーム２によって調製した。
【００７１】
【化１０】
2016505629.tif 000011
【００７２】
ｐ−ニトロフェノール  １２（１５ｇ）を、炭酸カリウム（３０ｇ）のアセトニトリル（２００ｍｌ）中の懸濁液に加え、１時間撹拌し、これに続きブロモ酢酸エチルエステル（１９．８ｇ）を滴下した。得られた混合物を一晩６０℃で撹拌し、濾過し、そして回転蒸発機で蒸発した。得られた化合物１３を精製せずに更に使用した。化合物１３（１４．３ｇ）の酢酸の５０％水溶液（２００ｍｌ）中の７０℃の溶液に、粉末の鉄（１０ｇ）を、溶液が沸騰しないような速さで少量ずつ加えた。次いで反応混合物を更に１５分間還流し、冷却し、そして水（５００ｍｌ）を加えた。混合物を酢酸エチル（３×１５０ｍｌ）で抽出し、混合した抽出物をＮａＨＣＯ３の濃厚溶液で洗浄し、乾燥し、溶媒を回転蒸発機で蒸発した。これにより、化合物１４を、収率７５％で得た。化合物１１（１．９ｇ）及び化合物１４（０．８７ｇ）を、ジオキサン（５０ｍｌ）中で１時間撹拌し、次いでトリエチルアミン（１．２ｍｌ）及びオキシ塩化リン（０．８９ｇ）を加え、そして３時間５０℃で撹拌した。次いで水（１５０ｍｌ）を加え、沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物１５を、収率６０％で得た。化合物１５（２．７ｇ）の５０％エタノール水溶液（２０ｍｌ）中の溶液に、ＬｉＯＨ（０．９３ｇ）を加え、そして反応混合物を一晩室温で撹拌した。次いでエタノールを回転蒸発機で蒸発し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。粗製の生成物をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−１０：１：１のクロロホルム：メタノール：トリエチルアミンで精製した。これにより、化合物１６を、収率１１％で得た。化合物１６（２９０ｍｇ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の撹拌された溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（５８ｇ）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（１０４ｍｇ）を加えた。混合物を一晩室温で撹拌し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、残渣をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物１（２）を、収率５０％で得た。化合物１（２）のＮＭＲスペクトルを、図２に与える。
【００７３】
実施例３．  ４−｛［１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボニル］−アミノ｝−フェニルカルボン酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（３）を、以下に与えるスキーム３によって調製した。
【００７４】
【化１１】
2016505629.tif 000012
【００７５】
ｐ−アミノ安息香酸（１当量）のｔｅｒｔ−ブチルアルコール中の溶液に、ＥＤＣ（１．１当量）を加えた。反応混合物を１８時間還流した。０℃に冷却した後、水を加え、そして得られた混合物をジエチルエーテルで抽出した。蒸発した有機層を精製せずに次の段階で使用した。これにより、化合物１７を、収率６０％で得た。化合物１１（２．２ｇ）、ｐ−アミノ安息香酸のｔｅｒｔ−ブチルエステル１７（０．８５ｇ）及びジオキサン（５０ｍｌ）を、１時間一緒に撹拌し、次いでトリエチルアミン（１．４ｍｌ）及びオキシ塩化リン（１．０ｇ）を加えた。反応混合物を３時間５０℃で撹拌し、水（１５０ｍｌ）を加え、沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物１８を、収率６０％で得た。化合物１８をトリフルオロ酢酸中に溶解し、そして一晩５０℃で撹拌した。次いで反応混合物を乾燥状態まで蒸発した。これにより、化合物１９を、収率８８％で得て、これを精製せずに次の段階で使用した。化合物１９（７６０ｍｇ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の撹拌された溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１６０ｍｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（２８７ｍｇ）を加えた。混合物を一晩室温で撹拌し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、そしてシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物１（４）を、収率５０％で得た。化合物１（４）のＮＭＲスペクトルを図３に与える。
【００７６】
実施例４．  ３−［８−（３，４−ジメトキシフェニルカルバモイル）−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル］−安息香酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（４）を、以下に与えるスキーム４によって調製した。
【００７７】
【化１２−１】
2016505629.tif 000013
【００７８】
【化１２−２】
2016505629.tif 000014
【００７９】
トルエン（１５０ｍｌ）中の、２，４−ジメトキシベンズアルデヒド（１０ｇ）及び３，４−ジメトキシアニリン（９．２ｇ）を、ディーンスタークトラップで、水が分離しなくなるまで還流した。冷却した後、トルエンを回転蒸発機で蒸発し、得られた化合物２０を精製せずに更に使用した。化合物２０のメタノール（１００ｍｌ）中の撹拌された溶液に、ＮａＢＨ４（２．８ｇ）を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌し、メタノールを回転蒸発機で蒸発し、水（１００ｍｌ）を加え、ＫＯＨの１０％溶液でｐＨ＝９のアルカリ性にし、塩化メチレンで抽出し、乾燥し、蒸発した。これにより、化合物２１を、収率８０％で得た。化合物９（２．２ｇ）及び化合物２１（３．０ｇ）のジオキサン（５０ｍｌ）中の懸濁液を１時間撹拌した後、トリエチルアミン（５．５ｍｌ）及びオキシ塩化リン（２．０ｇ）を加えた。得られた混合物を３時間５０℃で撹拌し、水（１５０ｍｌ）を加え、沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物２２を、収率６０％で得た。化合物２２（３．０ｇ）のＤＭＦ（３０ｍｌ）中の溶液に、炭酸カリウム（１．７ｇ）及び３−ブロモメチル安息香酸エチル（１．３ｇ）を加えた。混合物を５０℃で一晩撹拌し、ＤＭＦを真空中で蒸発し、水（７０ｍｌ）を残渣に加えた。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物２３を、収率９０％で得た。化合物２３（３．０ｇ）の塩化メチレン（４０ｍｌ）中の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．４ｇ）を加え、混合物を一晩還流した。その後反応混合物をＮａＨＣＯ３の濃厚溶液で洗浄し、乾燥し、塩化メチレンを蒸発した。生成物をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−４０：１のクロロホルム：メタノールで精製した。これにより、化合物２４（０．９ｇ）を、収率３０％で得た。ＬｉＯＨ（０．２５ｇ）を、化合物２４（０．９ｇ）の５０％エタノール水溶液（２０ｍｌ）中の溶液に加え、そして混合物を一晩室温で撹拌した。エタノールを回転蒸発機で蒸発した後、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。生成物をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−１０：１：１のクロロホルム：メタノール：トリエチルアミンで精製した。これにより、化合物２５を、収率２０％で得た。化合物２５（１４０ｍｇ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の撹拌された溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４２ｍｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（７６ｍｇ）を加えた。混合物を一晩室温で撹拌し、次いで沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物１（４）を、収率５０％で得た。化合物１（４）：（Ｍ＋１＝６７０）のＬＣＭＳスペクトルを、図４に示す。
【００８０】
実施例５．  （４−｛８−［３−（４−ベンジルピペイジン−１−イル）−プロピルカルバモイル］−５，５，１１−トリオキソ−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０−イルメチル｝−フェニル）−酢酸の２，５−ジオキソピロリジン−１−イルエステル  １（５）を、以下のスキーム５によって調製した。
【００８１】
トルエン（１００ｍｌ）中の、２，４−ジメトキシベンズアルデヒド（３．８ｇ）及び化合物２６（５．３ｇ）を、ディーンスタークトラップで水が分離されなくなるまで還流した。冷却した後、トルエンを回転蒸発機で蒸発した。得られた化合物２７を精製せずに更に使用した。化合物２７のメタノール（５０ｍｌ）中の撹拌された溶液に、ＮａＢＨ４（１．３ｇ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌し、メタノールを回転蒸発機で蒸発し、水（５０ｍｌ）を加え、ＫＯＨの１０％溶液でｐＨ＝９のアルカリ性にし、塩化メチレンで抽出し、乾燥し、蒸発した。これにより、化合物２８を、収率８０％で得た。化合物９（２．４ｇ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の撹拌された溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１．０ｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（１．１ｇ）を加えた。混合物を一晩撹拌し、その後、化合物２８（３ｇ）を加え、そして混合物を６時間６０℃で撹拌した。沈殿した固体を濾過して除去し、母液を回転蒸発機で蒸発した。残渣をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−１９：１のクロロホルム：メタノールで精製した。これにより、化合物２９を、収率７０％で得た。ｐ−トリル酢酸（１０．０ｇ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１３．０ｇ）及び２，２’−アザビスイソブチロニトリル（０．１ｇ）の、四塩化炭素（６０ｍｌ）中の混合物を、４時間還流した。混合物を室温に冷却し、水（１００ｍｌ）上に注ぎ、沈殿した固体を濾過して取出し、そして乾燥した。上記の固体のエタノール（５０ｍｌ）中の０℃の溶液に、ＳＯＣｌ２（３．７ｍｌ）を加え、混合物を一晩室温で撹拌し、溶媒を蒸発した。
【００８２】
【化１３−１】
2016505629.tif 000015
【００８３】
【化１３−２】
2016505629.tif 000016
【００８４】
【化１３−３】
2016505629.tif 000017
【００８５】
これにより、化合物３０を、収率５０％で得た。得られた生成物を試製せずに更に使用した。炭酸カリウム（２．２ｇ）及びｐ−ブロモメチルフェニル酢酸のエチルエステル３０（２．０ｇ）を、化合物２９（４．５ｇ）のＤＭＦ（５０ｍｌ）中の溶液に次々に加えた。混合物を５０℃で一晩撹拌し、ＤＭＦを回転蒸発機で蒸発し、水（１００ｍｌ）を残渣に加えた。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物３１を、収率８０％で得た。トリフルオロ酢酸（２．０ｇ）を、化合物３１（３．５ｇ）の塩化メチレン（４０ｍｌ）中の溶液に加え、得られた混合物を一晩還流した。混合物をＮａＨＣＯ３の濃厚溶液と共に数回振盪した後、乾燥し、塩化メチレンを回転蒸発機で蒸発した。生成物をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−４０：１のクロロホルム：メタノールで精製した。これにより、化合物３２を、収率５５％で得た。ＬｉＯＨ（０．２９ｇ）を、化合物３２（１．６ｇ）の５０％エタノール水溶液（２０ｍｌ）中の溶液に加え、そして室温で一晩撹拌した。次いでエタノールを回転蒸発機で蒸発し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。生成物をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−１０：１：１のクロロホルム：メタノール：トリエチルアミンで精製した。これにより、化合物３３を、収率１５％で得た。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４７ｍｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（８４ｍｇ）を化合物３３（１８０ｍｇ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の、そして撹拌された溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物１（５）を、収率５０％で得た。化合物１（５）のＮＭＲスペクトルを図５に与える。
【００８６】
実施例６．  １０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸（２−アミノエチル）−アミド  １（６）を、以下に与えるスキーム６によって調製した。
【００８７】
【化１４】
2016505629.tif 000018
【００８８】
ＣＤＩ（１．１当量）を、化合物１１のクロロホルム中の溶液に加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次いでＢｏｃ−エチレンジアミンを加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。水で洗浄し、有機層を蒸発した。生成物をカラムクロマトグラフィーによって、溶出剤−２０：１のクロロホルム：メタノールで精製した。これにより、化合物３４を、収率７０％で得た。
【００８９】
化合物３４をＨＣｌで飽和されたジオキサン中で室温で１時間撹拌し、沈殿した固体を濾過して取出した。これにより、化合物１（６）を、収率７８％で得た。化合物１（６）のＮＭＲスペクトルを、図６に与える。
【００９０】
実施例７．  １０−｛４−［（２−アミノ−エチルカルバモイル）−メチル］−ベンジル｝−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド  １（７）を、以下に与えるスキーム７によって調製した。
【００９１】
【化１５】
2016505629.tif 000019
【００９２】
ＣＤＩ（１．１当量）を、化合物３５のクロロホルム中の溶液に加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次いでＢｏｃ−エチレンジアミンを加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。水で洗浄し、有機層を蒸発した。生成物をカラムクロマトグラフィーによって、クロロホルム：メタノール（２０：１）で精製した。これにより、化合物３６を、収率７０％で得た。化合物３６を、ＨＣｌで飽和されたジオキサン中で室温で１時間撹拌し、沈殿した固体を濾過して取出した。これにより、化合物１（７）を、収率７８％で得た。化合物１（７）のＮＭＲスペクトルを、図７に与える。
【００９３】
実施例８．  １０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルエステル  １（８）を、以下に与えるスキーム８によって調製した。
【００９４】
【化１６】
2016505629.tif 000020
【００９５】
ジシクロヘキシルカルボジイミド（１当量）及びＥｔ３Ｎ（１当量）を、１：１の比の化合物３７及び１１のＴＨＦ中の溶液に撹拌しながら加えた。混合物を一晩５０℃で撹拌し、冷却し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をＨＰＬＣ法によって精製した。これにより、化合物１（８）を、収率１０％で得た。化合物１（８）のＮＭＲスペクトルを、図８に与える。
【００９６】
実施例９．  １０−（４−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−ベンジル）−  ５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−８−カルボン酸［３−（４−ベンジル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−アミド  １（９）を、以下に与えるスキーム９によって調製した。
【００９７】
ジシクロヘキシルカルボジイミド（１当量）及びＥｔ３Ｎ（１当量）を、１：１の比の化合物３５及び３７のＴＨＦ中の溶液に撹拌しながら加えた。混合物を一晩５０℃で撹拌し、冷却し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をＨＰＬＣ法によって精製した。これにより、化合物１（９）を、収率１０％で得た。化合物１（９）のＮＭＲスペクトルを、図９に与える。
【００９８】
【化１７】
2016505629.tif 000021
【００９９】
実施例１０．  Ｎ−［２−（｛Ｎ−（メトキシカルボニル）−Ｎ−［（１，５−ジメトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）カルバモイル］−β−アラニル｝アミノ）エチル］−１０−（３−クロロベンジル）−５，５，１１−トリオキソ−１０，１１−ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−７−カルボキシアミド  １（１０）を、以下に与えるスキーム１０によって調製した。
【０１００】
【化１８−１】
2016505629.tif 000022
【０１０１】
【化１８−２】
2016505629.tif 000023
【０１０２】
化合物３８（１１ｇ、０．０３８ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１２．６ｇ、０．０９８ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の溶液を、トリホスゲン（４．２ｇ、０．０１４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の懸濁液に０℃でゆっくりと滴下した。混合物を３０分間０℃で撹拌し、次いで化合物３９（８．１ｇ、０．０３８ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０．８ｇ、０．０８４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の溶液を一度に加えた。反応混合物を１５分間更に撹拌し、有機層を分離し、水で洗浄し、そして溶出剤−ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）のシリカのクロマトグラフィーにかけた。これにより、化合物４０を、収率５３％で得た。化合物４０（６ｇ）の酢酸エチル中の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．６ｇ）を加えた。混合物を２気圧のオートクレーブ中で１７時間水素化した。触媒を濾過して除去し、濾液を蒸発した。これにより、５ｇの化合物４１を得て、これを更なる精製をせずに次の段階で使用した。ＣＤＩ（２．６ｇ、０．０１６ｍｏｌ）を、化合物４１（４．８ｇ、０．０１３ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の室温の溶液に加え、そして２時間内にＢｏｃ−エチレンジアミン（２．２ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を加えた。混合物を１８時間撹拌し、水で希釈し、生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、そして溶出剤−ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９９：１）のシリカのクロマトグラフィーにかけた。これにより、４．４ｇの化合物４２を、収率６６％で得た。ジオキサン中の３ＮのＨＣｌ（５当量）を、化合物４２（４．４ｇ）のジオキサン中の溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、そして乾燥状態まで蒸発した。これにより、化合物４３を、収率９０％で得た。化合物４３（０．８ｇ、０．００２ｍｏｌ）、化合物１１（０．８５ｇ、０．００２ｍｏｌ）、ＮＥｔ３（０．４ｇ、０．００４ｍｏｌ）及びＮ−（ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．４ｇ、０．００２ｍｏｌ）を、ＴＨＦ中で一緒に混合した。反応混合物を６０℃で２日間撹拌した。次いでＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．５ｇ、０．０１２ｍｏｌ）及び水（２ｍｌ）を加えた。２４時間内に、酢酸（０．７２ｇ、０．０１２ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を蒸発し、そして生成物をＨＰＬＣ法によって精製した。これにより、化合物４４を、収率７％で得た。化合物１（１０）のＮＭＲスペクトルを、図１０に示す。塩酸塩１（１０）＊ＨＣｌを、ＨＣｌの飽和酢酸エチル溶液の、化合物１（１０）への添加によって調製した。沈殿した固体を濾過して取出し、乾燥し、そして結晶化によって精製した。その調製が実施例１−９及び１１−１４に記載される化合物の塩酸塩は、類似の方法で得られた。
【０１０３】
実施例１１．  Ｎ５−（２−｛［（４−｛［７−｛［［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピル］（フェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，５，１１−トリオキソ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］チアゼピン−１０（１１Ｈ）−イル］メチル｝フェニル）アセチル］−アミノ｝エチル）−Ｎ２−｛［（１，３−ジカルボキシプロピル）アミノ］カルボニル｝グルタミン  １（１１）を、以下に与えるスキーム１１によって調製した。
【０１０４】
酸３５（１．６ｇ、０．００２４ｍｏｌ）、エステル４３（１ｇ、０．００２４ｍｏｌ）、ＮＥｔ３（０．５ｇ、０．００４８ｍｏｌ）及びＮ−（ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．４５ｇ、０．００２４ｍｏｌ）を、ＴＨＦ中で一緒に混合した。反応混合物を６０℃で２日間撹拌した。次いで、化合物４５を単離せずに、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．６ｇ、０．０１４４ｍｏｌ）及び水（２ｍｌ）を加えた。２４時間内に、酢酸（０．８６ｇ、０．００１４ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を蒸発し、そして生成物をＨＰＬＣ法によって精製した。これにより、化合物１（１１）を、収率１０％で得た。化合物１（１１）のＮＭＲスペクトルを、図１１に示す。
【０１０５】
【化１９】
2016505629.tif 000024
【０１０６】
実施例１２．  ４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ］カルボニル｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド  ２（１）を、以下に与えるスキーム１２によって調製した。
【０１０７】
【化２０】
2016505629.tif 000025
【０１０８】
化合物４６（３．０ｇ）及び４−ジメチルアミノベンズアルデヒド（１．７ｇ）のエタノール（４０ｍｌ）中の混合物を、１０時間還流し、室温に冷却し、沈殿した固体を濾過して取出した。沈殿物を水（５０ｍｌ）中に溶解し、そして１０％ＫＯＨでｐＨ＝１０のアルカリ性にした。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物４７を、収率３５％で得た。化合物４７（０．６ｇ）及び４−イソシアナト安息香酸エチル（０．３２ｇ）のジオキサン（３０ｍｌ）中の溶液を室温で一晩撹拌した。沈殿した固体を濾過して取出した。これにより、化合物４８を、収率３０％で得た。ＬｉＯＨ（３２ｍｇ）を化合物４８（１４０ｍｇ）の５０％エタノール水溶液（５ｍｌ）中の溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。エタノールを回転蒸発機で蒸発し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物４９を、収率６０％で得た。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２２ｍｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（３９ｍｇ）を、化合物４９（８０ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の撹拌された溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物２（１）を、収率５０％で得た。化合物１（１２）のＬＣＭＳスペクトルを、図１２に示す（Ｍ＋１）＝６２４。
【０１０９】
実施例１３．  ４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ−（４−｛２−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（６Ｈ）−カルボキシアミド  ２（２）を、以下に与えるスキーム１３によって調製した。
【０１１０】
【化２１】
2016505629.tif 000026
【０１１１】
化合物５０（０．８ｇ）及び化合物４７（０．５ｇ）を、ジオキサン（３０ｍｌ）中に溶解し、そして一晩室温で撹拌した。溶媒を蒸発し、残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製した。溶出剤−３９：１のクロロホルム：メタノール。これにより、化合物５１を、収率５％で得た。ＬｉＯＨ（１４ｍｇ）を、化合物５１（６ｍｇ）の５０％エタノール水溶液（５ｍｌ）中の溶液に加え、そして得られた混合物を室温で一晩撹拌した。その後、エタノールを回転蒸発機で蒸発し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物５２を、収率６０％で得た。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１０ｍｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（１９ｍｇ）を、化合物５２（５０ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中のアルゴン雰囲気中の撹拌された溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物１（１３）を、収率５０％で得た。化合物２（２）のＮＭＲスペクトルを図１３に示す。
【０１１２】
実施例１４．  Ｎ−［４−（５−｛［（３，４−ジメトキシフェニル）アミノ］−カルボニル｝−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−４Ｈ−［１］ベンゾチエノ［３，２−ｆ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−４−イル）フェニル］−Ｎ−メチルグリシン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ２（３）を、以下に与えるスキーム１４によって調製した。
【０１１３】
【化２２】
2016505629.tif 000027
【０１１４】
化合物４６（１．６８ｇ）及び化合物５３（１．４５ｇ）のエタノール（２５ｍｌ）中の混合物を、１０時間還流し、室温に冷却し、沈殿した固体を濾過して取出し、そして水（５０ｍｌ）中に溶解し、そして１０％ＫＯＨでｐＨ１０のアルカリ性にした。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物５４を、収率１９％で得た。化合物５４（０．５４ｇ）及びジメトキシアニリン（０．２９ｇ）のジオキサン（１０ｍｌ）中の溶液を一晩室温で撹拌した。次いで溶媒を蒸発し、残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製した。溶出剤−３９：１のクロロホルム：メタノール。これにより、化合物５５を、収率６５％で得た。ＬｉＯＨ（３２ｍｇ）を、化合物５５（５００ｍｇ）の５０％エタノール水溶液（５ｍｌ）中の溶液に加え、そして得られた混合物を一晩室温で撹拌した。エタノールを回転蒸発機で蒸発し、水溶液を１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。沈殿した固体を濾過して取出し、水で洗浄し、そして乾燥した。これにより、化合物５６を、収率６０％で得た。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（７１ｍｇ）及びジクロロヘキシルカルボジイミド（１２７ｍｇ）を、化合物５６（３６０ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中の撹拌され、そしてアルゴン雰囲気中の溶液に加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで沈殿した固体を濾過して除去し、母液を蒸発し、生成物をシリカのフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤−酢酸エチル）によって精製した。これにより、化合物２（３）を、収率５０％で得た。化合物２（３）のＬＣＭＳスペクトルを図１４に与える。（Ｍ＋１）＝６８４。
【０１１５】
実施例１５．  改変されたタンパク質（複合体）の調製のための一般的方法。
【０１１６】
タンパク質を、一般式１又は２の化合物によって１：１ないし１：１００のモル比で改変した。ＤＭＳＯ（５０ｍｃｌ）中に溶解されたある重量の一般式１又は２の化合物に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）及びＰＢＳ中のタンパク質の溶液をゆっくりと加えた。反応混合物中の最終タンパク質濃度は、１ｍｇ／ｍｌであった。反応を、室温で２０時間一定に撹拌しながら行った。反応混合物を遠心し、濾液をＳｕｐｅｒｄｅｘゲル７５（ＧＥ，ＵＳＡ）に適用した；カラム支持体の高さ−２３ｃｍ；移動相−ＰＢＳ；流速−５７．３ｃｍ／時；注入体積−担体の体積の２．２％。複合体の純度を、Ｂｉｏ−Ｍｏｎｏｌｉｔｈ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ，ＣＩＩＩＡ）アフィニティーカラムを使用するＨＰＬＣ法によって決定した。
【０１１７】
この方法によって、特に以下の複合体を得た：
ＣＲ１（１）−１：１０の比のリツキシマブ（Ｒ）と化合物１（１）、
ＣＲ１（２）−１：１００の比のリツキシマブ（Ｒ）と化合物１（２）、
ＣＲ１（３）−１：１００の比のリツキシマブ（Ｒ）と化合物１（３）、
ＣＲ１（４）−１：１００の比のリツキシマブ（Ｒ）と化合物１（４）、
ＣＲ１（５）−１：１０の比のリツキシマブ（Ｒ）と化合物１（５）、
ＣＲ２（１）−１：１００の比のリツキシマブ（Ｒ）と化合物２（１）、
ＣＣ１（１）−１：１０の比のセツキシマブ（Ｃ）と化合物１（１）、
ＣＩ１（１）−１：１０の比のインターフェロンアルファ（Ｉ）と化合物１（１）、
ＣＭ１（１）−１：１０の比のミエリンタンパク質（Ｍ）と化合物１（１）、
ＣＣ１（１）−１：１０の比の補体Ｃ１ｑタンパク質（Ｃ）と化合物１（１）。
【０１１８】
例として、図１５は、複合体ＣＲ１（１）のクロマトグラムを示し、９８％より大きい分析パーセントを示す。
【０１１９】
実施例１６．  ＣＤ１６ａ受容体に対する複合体の活性の決定。
【０１２０】
実験は、標準的な酵素免疫アッセイの物質及び機器を使用する。９６ウェルプレートのウェルに、ＣＤ１６ａを、ＰＢＳ中の３．３μｇ／ｍｌの溶液から７５μｌ／ウェルの体積で吸着させた。吸着は４℃で１６時間行った。ＣＤ１６ａ溶液を、プレートから除去し、ウェルを、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のＰＢＳ−ｐ中の２％溶液で満たした（１５０μｌ／ウェル）。プレートを、３７℃で２時間インキュベートし、そしてＰＢＳ−ｐで３回洗浄した（毎回３００μｌ／ウェルによって）。次いでウェルを、ＰＢＳ−Ｐ中の複合体の溶液で、５０μｌ／ウェルの０．２５から２５６μｇ／ｍｌまでの希釈液で満たした。複合体のそれぞれの希釈液に対して、プレート中の三つのウェルが対応した。試料の非特異的吸着を制御するために、幾つかのウェルを２％のＢＳＡ溶液で満たした。プレートを、１時間３７℃で、ＥＬＩＳＡの振盪機中でインキュベートした（回転速度は１８０ｒｐｍであった）。プレートを、３００μｌ／ウェルのＰＢＳ−ｐで５回洗浄し、そしてホースラディッシュペルオキシダーゼで改変されたタンパク質の溶液で満たした（免疫複合体の説明中に与えられた作業希釈度である７５μｌ／ウェルによる）。プレートを、３０分間インキュベートし、３００μｌ／ウェルのＰＢＳ−ｐで５回洗浄し、そしてＴＭＢの溶液（１００μｌ／ウェル）で満たした。酵素的反応の程度は、視覚的に推定し、これを、硫酸の５００ｍＭ溶液の５０μｌ／ウェルによる添加によって停止した。プレートのウェルの光学密度を４５０ｎｍで室温で測定した。実験結果の解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０プログラムを使用して行った。
【０１２１】
図１６は、ＣＤ１６ａ受容体に対する幾つかの複合体の結合のプロットを示し、これから、複合体のＣＤ１６ａとの複合物の解離定数（表１）を計算した（ＣＤ１６ａ受容体に対する複合体活性−Ｋｄ）。表から知ることができるように、リツキシマブ複合体の活性は、非複合化リツキシマブの活性より１０−１００倍高い。
【０１２２】
【表１】
2016505629.tif 000028
【０１２３】
図１７は、インターフェロンアルファ及び化合物１（１）とのその複合体の、ＣＤ１６ａとの結合の依存性を示す。複合体濃度に対する４５０ｎｍにおける光学密度の依存性をＩＦＡに使用した。表２から知ることができるように、インターフェロン複合体の活性は、非複合化インターフェロンアルファの活性を超える。
【０１２４】
【表２】
2016505629.tif 000029
【０１２５】
実施例１７．  抗体依存性（リツキシマブ依存性）細胞障害性に対する試験における複合体の有効性。
【０１２６】
リツキシマブ複合体の有効性を、非複合化リツキシマブの有効性と比較して、抗体依存性細胞障害性に対する試験で推定した。Ｄａｕｄｉ系のＣＤ２０陽性細胞を、標的細胞として使用した（Ｂ細胞バーキットリンパ腫）。５人の健康なドナーから標準的なプロトコルによって単離されたプールされた末梢単核血液細胞を、エフェクター細胞として使用した。
【０１２７】
調査される複合体及びリツキシマブの希釈液を、ＲＰＭＩ１６４０培地中で調製した。５０μｌの調査される複合体及びリツキシマブの溶液を、９６ウェルの丸底プレートのウェルに入れた。Ｄａｕｄｉ系の細胞を、ＲＰＭＩ１６４０培地中に８×１０５細胞／ｍｌの濃度まで再懸濁した。７５μｌまでのこの細胞懸濁液を、プレート中のリツキシマブの調製された溶液に加えた。プレートを、３７℃のサーモスタットで５０分間インキュベートした。７５μｌの細胞懸濁液のＰＢＭＣ（実験の直前に解凍）を、ウェルのＤａｕｄｉ細胞に５０：１（ＰＢＭＣ：Ｄａｕｄｉ細胞）の比で加えた。対照溶液として、ＲＰＭＩ１６４０培地（エフェクター細胞のみを含有する負の対照）、並びにＴｒｉｔｏｎＸ−１００の４％溶液（標的細胞のみを含有する正の対照）を加えた。プレートを３分間５００ｒｐｍで遠心した。プレートを８時間３７℃のサーモスタットでインキュベートした。
【０１２８】
インキュベーション後、試料を１２００ｒｐｍで１０分間の遠心によって沈殿させた。５０μｌの上清を、新しいプレートに移し、ここで、これらを、５０μｌの反応混合物（乳酸デヒドロゲナーゼの検出のためのセット、Ｐｒｏｍｅｇａ（ＵＳＡ），カタログ番号Ｇ１７８０）と混合した。得られた混合物を、室温で２５分間インキュベートし、次いで、反応を停止した。吸収を、４９０ｎｍの波長のスポット分光光度計で測定した。
【０１２９】
細胞障害性を、式によって計算した（全ての値は吸光度単位で与えられる）：
細胞障害性、％＝１００×（Ａ−（ＳＥ−ＳＴ））／（ＨＥ−ＳＴ）、
式中、Ａは−エフェクター及び標的細胞の混合物中のシグナルのレベル；
ＳＥは−エフェクター細胞のシグナルレベル；
ＳＴは−標的細胞のシグナルレベル；
ＨＥは−標的細胞の最大溶解に対応するシグナルである。
【０１３０】
調製された複合体の有効性の測定結果は、複合体ＣＲ１（１）（図１８）ＣＯＮ４５６４の例によって示された。調製された複合体は、標的細胞（Ｄａｕｄｉ）に対する増加した細胞障害性効果を示した。特に、細胞の約３５％の溶解が、約１μｇ／ｍｌのリツキシマブ濃度で達成され、同時に、複合体ＣＲ１（１）ＣＯＮ４５６４の類似の細胞障害性が、約０．００１μｇ／ｍｌの濃度で達成されている。類似の依存性は、複合体ＣＲ１（２）の場合に観察された（図１９）。従って、リツキシマブ複合体の活性は、リツキシマブ自体のそれより２−３桁高い。
【０１３１】
実施例１８．  複合体リツキシマブ  ＣＲ１（７）及びトラスツズマブ  ＣＴ１（７）の調製。
【０１３２】
１０ｍＭの酢酸ナトリウム、２００ｍＭの塩化ナトリウムのｐＨ５．５の溶液中の１．５ｇの抗体の糖部分に、２．０ｇの過ヨウ素酸ナトリウムを加え、得られた混合物を、３０分間室温の暗所で撹拌しながらインキュベートした。化合物１（７）（１２００ｍｇ）をＤＭＳＯ（４ｍｌ）中に溶解した。炭酸水素ナトリウム（８．４ｇ）を、抗体の溶液に加え、次いでＤＭＳＯ（１２３０μｌ）中に溶解された化合物１（７）を滴下により加え、そして得られた混合物を２時間インキュベートした。
【０１３３】
精製を、段階的勾配のＮａＣｌを使用するＳＰ−セファローズ（ＸＫ２６ＧＥカラム）で行った（緩衝液１：２５ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ４．５。緩衝液２：２５ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ約１０、２７０ｍＭ）。抗体複合体を、ミリポア膜（ＮＭＷＬ  ３００００，ｃａｔ．＃ＰＬＴＫ０７６１０）を通してアミコン細胞中の１０ｍｇ／ｍｌの最終複合体濃度まで濃縮した。濾過後、ポリソルベート８０を、複合体ＣＲ１（７）又はＣＴ１（７）の０．０１％の最終濃度まで複合体に加えた。
【０１３４】
実施例１９．  ＣＤ１６ａ受容体に対するリツキシマブ（Ｒ）及びトラスツズマブ（Ｔ）並びにこれらの複合体ＣＲ１（７）、ＣＴ１（７）の比較有効性。
【０１３５】
得られたトラスツズマブ及びリツキシマブ複合体のＣＤ１６ａ受容体との結合の調査を、実施例１７に記載したものと同一の方法で行った。
【０１３６】
抗体依存性細胞障害性の試験におけるリツキシマブ（Ｒ）、トラスツズマブ（Ｔ）及びこれらの複合体ＫＰ１（７）、ＫＴ１（７）のＣＤ１６ａ受容体に対する比較有効性及び活性（Ｋｄ）を図２０に示す。
【０１３７】
データから知ることができるように、ＣＤ１６ａ受容体に対する複合体ＣＲ１（７）、ＣＴ１（７）の得られた活性は、非改変のリツキシマブ（Ｒ）、及びトラスツズマブ（Ｔ）の活性より１−２桁高い（表３）。
【０１３８】
【表３】
2016505629.tif 000030
【産業上の利用可能性】
【０１３９】
本発明は、医学、獣医学、生化学において使用することができる。
【図１】
2016505629.tif 000039
【図２】
2016505629.tif 000040
【図３】
2016505629.tif 000041
【図４】
2016505629.tif 000042
【図５】
2016505629.tif 000043
【図６】
2016505629.tif 000044
【図７】
2016505629.tif 000045
【図８】
2016505629.tif 000046
【図９】
2016505629.tif 000047
【図１０】
2016505629.tif 000048
【図１１】
2016505629.tif 000049
【図１２】
2016505629.tif 000050
【図１３】
2016505629.tif 000051
【図１４】
2016505629.tif 000052
【図１５】
2016505629.tif 000053
【図１６】
2016505629.tif 000054
【図１７】
2016505629.tif 000055
【図１８】
2016505629.tif 000056
【図１９】
2016505629.tif 000057
【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年11月12日(2015.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
【化９】
2016505629.tif 000059
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
化合物３８（１１ｇ、０．０３８ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１２．６ｇ、０．０９８ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の溶液を、トリホスゲン（４．２ｇ、０．０１４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の懸濁液に０℃でゆっくりと滴下した。混合物を３０分間０℃で撹拌し、次いで化合物３９（８．１ｇ、０．０３８ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０．８ｇ、０．０８４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の溶液を一度に加えた。反応混合物を１５分間更に撹拌し、有機層を分離し、水で洗浄し、そして溶出剤−ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）のシリカのクロマトグラフィーにかけた。これにより、化合物４０を、収率５３％で得た。化合物４０（６ｇ）の酢酸エチル中の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．６ｇ）を加えた。混合物を２気圧のオートクレーブ中で１７時間水素化した。触媒を濾過して除去し、濾液を蒸発した。これにより、５ｇの化合物４１を得て、これを更なる精製をせずに次の段階で使用した。ＣＤＩ（２．６ｇ、０．０１６ｍｏｌ）を、化合物４１（４．８ｇ、０．０１３ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中の室温の溶液に加え、そして２時間内にＢｏｃ−エチレンジアミン（２．２ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を加えた。混合物を１８時間撹拌し、水で希釈し、生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、そして溶出剤−ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９９：１）のシリカのクロマトグラフィーにかけた。これにより、４．４ｇの化合物４２を、収率６６％で得た。ジオキサン中の３ＮのＨＣｌ（５当量）を、化合物４２（４．４ｇ）のジオキサン中の溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、そして乾燥状態まで蒸発した。これにより、化合物４３を、収率９０％で得た。化合物４３（０．８ｇ、０．００２ｍｏｌ）、化合物１１（０．８５ｇ、０．００２ｍｏｌ）、ＮＥｔ３（０．４ｇ、０．００４ｍｏｌ）及びＮ−（ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．４ｇ、０．００２ｍｏｌ）を、ＴＨＦ中で一緒に混合した。反応混合物を６０℃で２日間撹拌した。次いでＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．５ｇ、０．０１２ｍｏｌ）及び水（２ｍｌ）を加えた。２４時間内に、酢酸（０．７２ｇ、０．０１２ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を蒸発し、そして生成物をＨＰＬＣ法によって精製した。これにより、化合物４４を、収率７％で得た。化合物１（１０）のＮＭＲスペクトルを、図１０に示す。塩酸塩１（１０）＊ＨＣｌを、ＨＣｌの飽和ジオキサン溶液の、酢酸エチル中に溶解させた化合物１（１０）への添加によって調製した。沈殿した固体を濾過して取出し、乾燥し、そして結晶化によって精製した。その調製が実施例１−９及び１１−１４に記載される化合物の塩酸塩は、類似の方法で得られた。
【国際調査報告】
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