(57)【要約】本願は、Ｂｔｋを阻害する、一般式Ｉで表される化合物について開示する（式中、すべての可変部は、本明細書に記載する通り定義される）。本明細書に開示する化合物は、Ｂｔｋの活性を調節し、そして、過剰のＢｔｋ活性に関係する疾患を処置するために有用である。該化合物は、更に、関節リウマチ等の異常なＢ細胞増殖に関係する炎症性疾患及び自己免疫疾患を処置するために有用である。また、式Ｉで表される化合物と、少なくとも１つの担体、希釈剤、又は賦形剤とを含有する組成物についても開示する。
2016515592.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化６８】
2016515592.tif 000081
（式中、
Ｒ１は、ベンジル又は低級アルキルであり、それぞれ、場合により１つ以上のＲ１’で置換されており；
各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり；
Ｘは、ＣＨ又はＮＲ４であり；
Ｒ４は、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ｎＲ４’であり；
Ｒ４’は、低級アルキル又は低級アルケニルであり；
ｎは、０又は１であり；
----は、単結合又は二重結合のいずれかを表し；
ｍは、０又は１であり；
ｒは、０又は１であり；
Ｙは、ＣＮ（Ｒ３）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、ＣＨ２、又はＮであり；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、Ｃ（＝Ｏ）、又はシクロアルキルであり、それぞれ、場合により１つ以上のＲ２’で置換されており；
各Ｒ２’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであり；そして
Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルである）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｘが、ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙが、Ｃである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３が、Ｈである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、ベンジルであり、場合により１つ以上のＲ１’で置換されている、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、低級アルキルであり、場合により１つ以上のＲ１’で置換されている、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、低級アルケニルであり、場合により１つ以上のＲ２’で置換されている、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が、Ｃ（＝Ｏ）であり、場合により１つ以上のＲ２’で置換されている、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが、ＮＲ４である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｙが、ＣＨ２である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４が、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４’である、請求項９又は１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４’が、低級アルケニルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ４が、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４’である、請求項９又は１０に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ４’が、低級アルキルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
以下からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物：
【表４】
2016515592.tif 000082
2016515592.tif 000083
2016515592.tif 000084
【請求項１６】
炎症性及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１７】
炎症性状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１８】
関節リウマチを処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１９】
喘息を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項２１】
増殖性疾患を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２２】
増殖性疾患が、癌である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
増殖性疾患が、Ｔ細胞増殖性疾患である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
増殖性疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
化学療法剤若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心血管疾患を処置するための剤、糖尿病を処置するための剤、又は免疫不全疾患を処置するための剤から選択される追加の治療剤を投与することを更に含む、請求項１６〜２４のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
化学療法剤若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心血管疾患を処置するための剤、糖尿病を処置するための剤、及び免疫不全疾患を処置するための剤から選択される追加の治療剤を更に含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
炎症性及び／又は自己免疫状態の処置における、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２８】
炎症性及び／又は自己免疫状態を処置する医薬を調製するための、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２９】
炎症性及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３０】
本明細書に記載されるような発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、Ｂｔｋを阻害し、かつ、異常なＢ細胞活性化によって引き起こされる腫瘍性、自己免疫及び炎症性疾患の処置に有用である、新規化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
プロテインキナーゼは、ヒトの酵素の最も大きなファミリーの１つを構成し、そして、リン酸基をタンパク質に付加することによって、多くの異なるシグナル伝達プロセスを調節する（T. Hunter, Cell 1987 50:823-829）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール部分でタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の成長、移動及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫及び炎症性疾患を含む、様々なヒトの疾患に関与している。プロテインキナーゼは、細胞のシグナル伝達の重要な調節因子の１つであるので、これらは、小分子キナーゼ阻害剤で細胞機能をモジュレートするためのターゲットを提供し、そのために良好な薬物設計ターゲットとなる。キナーゼ媒介疾患過程の処置に加えて、選択的かつ効果的なキナーゼ活性阻害剤もまた、細胞のシグナル伝達プロセスの調査及び治療上関心の高いその他の細胞ターゲットの同定に有用である。
【０００３】
Ｂ細胞が、自己免疫及び／又は炎症性疾患の病因において重要な役割を果たしているという確かな証拠がある。リツキサン（Rituxan）などのＢ細胞を枯渇させるタンパク質ベースの治療法は、関節リウマチなどの自己抗体によって生じる炎症性疾患に対して効果的である（Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477）。したがって、Ｂ細胞活性化においてある役割を果たすプロテインキナーゼの阻害剤は、自己抗体産生などのＢ細胞媒介疾患病理に対する有用な治療法であるはずである。
【０００４】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介するシグナル伝達は、成熟した抗体産生細胞への増殖及び分化を含む、広範なＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性に対する重要な調節点であり、そして、異常なシグナル伝達は、無秩序なＢ細胞の増殖及び病原性自己抗体の形成を引き起こし、多数の自己免疫及び／又は炎症性疾患を招く恐れがある。ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、膜近位のＢＣＲのすぐ下流にある、非ＢＣＲ関連キナーゼである。Ｂｔｋの欠如は、ＢＣＲシグナル伝達を遮断することが知られており、したがって、Ｂｔｋの阻害は、Ｂ細胞媒介疾患過程を遮断する有用な治療アプローチであり得る。
【０００５】
Ｂｔｋは、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、初期Ｂ細胞発生ならびに成熟Ｂ細胞活性化及び生存の重要な調節因子であることが知られている（Khan et al. Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611）。ヒトのＢｔｋの突然変異は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）状態を引き起こす（Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431及びLindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200に概説されている）。これらの患者は免疫不全状態であり、そして、Ｂ細胞の成熟障害、免疫グロブリン及び末梢Ｂ細胞レベルの減少、Ｔ細胞非依存性免疫応答の低下ならびにＢＣＲ刺激後のカルシウム動員の減衰を示す。
【０００６】
自己免疫及び炎症性疾患にＢｔｋがある役割を果たしているという証拠が、Ｂｔｋ欠損マウスモデルによって提供された。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルにおいて、Ｂｔｋ欠損マウスは、疾患進行の著しい改善を示す。さらに、Ｂｔｋ欠損マウスは、コラーゲン誘発関節炎に耐性を示す（Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459）。選択的Ｂｔｋ阻害剤は、マウスの関節炎モデルにおいて、用量依存的効果を示すことが実証された（Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61）。
【０００７】
Ｂｔｋはまた、疾患過程に関与し得るＢ細胞以外の細胞によっても発現される。例えば、Ｂｔｋは、肥満細胞によって発現され、そして、Ｂｔｋ欠損骨髄由来の肥満細胞は、抗原誘発脱顆粒障害を示す（Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261）。これは、Ｂｔｋがアレルギー及び喘息などの病的な肥満細胞応答を処置するために有用であり得ることを示す。また、Ｂｔｋ活性が欠如したＸＬＡ患者由来の単球は、刺激後にＴＮＦα産生の低下を示す（Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003）。したがって、ＴＮＦα媒介炎症は、小分子Ｂｔｋ阻害剤によってモジュレートされ得る。また、Ｂｔｋは、アポトーシスにおいてある役割を果たすことが報告されており（Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49）、したがって、Ｂｔｋ阻害剤は、ある種のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用であり得る（Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837）。
【０００８】
発明の概要
本願は、本明細書において以下に記載する通り、式Ｉで表されるＢｔｋ阻害化合物、その使用方法を提供する。
【０００９】
本願は、式Ｉ：
【化１】
2016515592.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、ベンジル又は低級アルキルであり、それぞれ、場合により１つ以上のＲ１’で置換されており；
各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり；
Ｘは、ＣＨ又はＮＲ４であり；
Ｒ４は、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ｎＲ４’であり；
Ｒ４’は、低級アルキル又は低級アルケニルであり；
ｎは、０又は１であり；
----は、単結合又は二重結合のいずれかを表し；
ｍは、０又は１であり；
ｒは、０又は１であり；
Ｙは、ＣＮ（Ｒ３）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、ＣＨ２、又はＮであり；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、Ｃ（＝Ｏ）、又はシクロアルキルであり、それぞれ、場合により１つ以上のＲ２’で置換されており；
各Ｒ２’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであり；そして
Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルである）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００１０】
本願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
本願は、少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉの化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において使用されるように、表現「一つ（「a」又は「an」）の実体」は、一つ以上のその実体を指す；例えば、化合物（a compound）は、一つ以上の化合物又は少なくとも一つの化合物を指す。そのため、用語「a」（又は「an」）、「一つ以上」、及び「少なくとも一つ」は、本明細書では、互換的に使用され得る。
【００１２】
表現「本明細書上記に定義されるような」は、発明の概要又は最も広い特許請求の範囲に与えられるような各基についての最も広い定義を指す。下記に与えられるすべてのその他の実施態様において、各実施態様に存在することができ、かつ明確に定義されていない置換基は、発明の概要に与えられる最も広い定義を保持する。
【００１３】
本明細書において使用されるように、請求項における移行句であるか本文であるかを問わず、用語「含む（comprise(s)）」及び「含む（comprising）」は、オープンエンド（制限のない）の意味を有すると解釈されるべきである。すなわち、これらの用語は、表現「少なくとも〜を有する（having at least）」又は「少なくとも〜を含む（including at least）」と同意的に解釈されるべきである。プロセスに関連して使用する場合、用語「含む（comprising）」は、プロセスが少なくとも記載された工程を含むが、さらなる工程を含み得ることを意味する。化合物又は組成物に関連して使用する場合、用語「含む（comprising）」は、化合物又は組成物が、少なくとも記載された特徴又は成分を含むが、さらなる特徴又は成分も含み得ることを意味する。
【００１４】
本明細書において使用されるように、別段具体的に示さない限り、用語「又は」は、「及び／又は」の「包含的」意味で使用され、「いずれか／又は」の「排他的」意味では使用されない。
【００１５】
用語「独立して」は、本明細書において、同一の化合物内で、同じ又は異なる定義を有する変数の存在又は不在に関わらず、変数が、任意の一つの場合に適用されることを示すことに使用される。したがって、Ｒ"が２回出現し、それが「独立して炭素又は窒素」と定義される化合物においては、両方のＲ"が炭素であることも、両方のＲ"が窒素であることも、又は一方のＲ"が炭素であり、他方が窒素であることもあり得る。
【００１６】
任意の変数が本発明中で使用され又はクレームされている化合物を表し、そして記載している任意の部分又は式中に１回より多く出現する場合、出現ごとのその定義は、すべての他の出現でのその定義とは独立している。同じく、置換基及び／又は変数の組合せは、そのような化合物が安定した化合物に至る場合に限り許容される。
【００１７】
結合の終端部の記号「＊」又は結合を貫いて延伸する「------」は、各々、官能基又は他の化学部分が、その一部である分子の残りに結合する点を指す。したがって、例えば：
【化２】
2016515592.tif 000004
環系中に引かれる結合（明確な頂点で連結されたものと対照をなす）は、結合が適切な環原子のいずれかに結合され得ることを示す。
【００１８】
本明細書において使用されるように、用語「場合による」又は「場合により」は、続いて記載される事象又は状況が起こってもよいが起こる必要もなく、その記載は、その事象又は状況が起こる場合と起こらない場合とを含むことを意味する。例えば「場合により置換されている」は、場合により置換されている部分が、水素原子又は置換基を組み込み得ることを意味する。
【００１９】
「場合により結合」という語句は、結合が存在してもよいし又はしなくてもよく、そしてその記載は単結合、二重結合又は三重結合を含むことを意味する。置換基が「結合」又は「存在しない」ことが示される場合、置換基に結合される原子は、その後直接結合される。
【００２０】
用語「約」は本明細書において、およそ、ほぼ、おおまかに、あたりを意味することに使用される。用語「約」が数値範囲との組み合わせで使用される場合、それは記載される数値の上及び下に境界を拡張することによってその範囲を修飾する。概して、用語「約」は本明細書において、数値を、記載された数値の上及び下に２０％の変動で修飾することに使用される。
【００２１】
式Ｉの特定の化合物は、互変異性を示し得る。互変異性化合物は、２種以上の相互転換可能な種として存在できる。プロトン性（prototropic）互変異性体は、二つの原子間における共有結合した水素原子の移動から生じる。互変異性体は、一般的に、平衡状態で存在し、個々の互変異性体を単離しようとすると、通例、化合物の混合物と変わらない化学的及び物理的性質を有する混合物を生成する。平衡の位置は、分子内の化学的特徴部分に依存する。例えば、アセトアルデヒド等の多くの脂肪族アルデヒド及びケトンでは、ケト型が優位を占める一方、フェノールでは、エノール型が優位を占める。一般的なプロトン性互変異性体は、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）及びアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体を含む。後者二つはヘテロアリール及び複素環において特に一般的であり、本発明は本化合物のすべての互変異性型を含む。
【００２２】
本明細書において用いられる技術及び科学用語は、特に定義されない場合、本発明が関連する技術における当業者によって、一般に理解される意味を有する。当業者に知られた様々な方法論及び材料を、本明細書において引用する。Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001) を含む標準引例は、薬理学の一般的原理を説明するのに役立つ。当業者に知られた任意の適切な材料及び／又は方法を、本発明を実施する際に用いることができる。しかしながら、好ましい材料及び方法が記載されている。以下の説明及び実施例で引用する材料、試薬等は、特に指示のない場合、商業的供給源より入手可能である。
【００２３】
本明細書に記載される定義は、例えば、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」等の化学的に関連する組み合わせを形成するために加えられ得る。用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語の後に接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名前を挙げた基から選択される１個〜２個の置換基により置換されている、上記で定義されたようなアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、１〜２個のフェニル置換基を有するアルキル基を指し、したがって、ベンジル、フェニルエチル、及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２個のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」は、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピル等を含む。したがって、本明細書において使用されるように、用語「ヒドロキシアルキル」は、以下に定義されるヘテロアルキル基のサブセットを定義するために用いられる。用語−（ar）アルキルは、非置換アルキル又はアラルキル基のいずれかを指す。用語（ヘテロ）アリール又は（het）アリールは、アリール又はヘテロアリール基のいずれかを指す。
【００２４】
本明細書において使用されるように、用語「スピロシクロアルキル」は、例えば、スピロ［３．３］ヘプタンのようにスピロ環式シクロアルキル基を意味する。本明細書において使用されるように、用語スピロヘテロシクロアルキルは、例えば、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタンのようにスピロ環式ヘテロシクロアルキルを意味する。
【００２５】
本明細書において使用されるように、用語「アシル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を示し、式中、Ｒは、水素又は本明細書で定義されたような低級アルキルである。本明細書において使用されるように、用語「アルキルカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を示し、式中、Ｒは、本明細書において定義されたようなアルキルである。用語Ｃ１−６アシルは、６個の炭素原子を含む基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。本明細書において使用されるように、用語「アリールカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、アリール基である）の基を意味し；本明細書において使用されるように、用語「ベンゾイル」は、「アリールカルボニル」基（ここでＲは、フェニルである）を意味する。
【００２６】
本明細書において使用されるように、用語「エステル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を示し、式中、Ｒは、本明細書において定義されたような低級アルキルである。
【００２７】
本明細書において使用されるように、用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を含む、非分岐又は分岐鎖の飽和一価の炭化水素残基を表す。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐鎖の炭化水素残基を表す。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルキル」は、１〜１０個の炭素からなるアルキルを指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチル（を含む低級アルキル基）、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びオクチルを非限定的に含む。
【００２８】
用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語の後に接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名前を挙げた基から選択される１個〜２個の置換基により置換されている、上記で定義されたようなアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、基Ｒ’Ｒ”−（ここで、Ｒ’は、本明細書で定義されたとおりの、フェニル基であり、Ｒ”は、アルキレン基である）を表し、フェニルアルキル部分の結合点はアルキレン基上であると理解される。アリールアルキル基の例は、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルを非限定的に含む。用語「アリールアルキル」又は「アラルキル」は、Ｒ’がアリール基である以外、同様に解釈される。用語「（het）アリールアルキル」又は「（het）アラルキル」は、Ｒ’が、場合によりアリール又はヘテロアリール基である以外、同様に解釈される。
【００２９】
用語「ハロアルキル」又は「ハロ低級アルキル」又は「低級ハロアルキル」は、１〜６つの炭素原子を含む直鎖又は分枝鎖炭化水素残基を指し、１個以上の炭素原子が１個以上のハロゲン原子で置換される。
【００３０】
本明細書において使用されるように、用語「アルキレン」又は「アルキレニル」は、特に断りない限り、１〜１０個の炭素原子の二価の飽和直鎖炭化水素基（例えば、（ＣＨ２）ｎ）、又は２〜１０個の炭素原子の分岐飽和二価炭化水素基（例えば、−ＣＨＭｅ−又はＣＨ２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ２−）を示す。メチレンの場合を除いて、アルキレン基の開いた原子価は、同じ原子には結合しない。アルキレン基の例は、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１，１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンを非限定的に含む。
【００３１】
本明細書において使用されるように、用語「アルコキシ」は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（これらの異性体を含む）のような、−Ｏ−アルキル基（ここで、アルキルは、上記で定義されたとおりである）を意味する。本明細書で使用される「低級アルコキシ」は、先に定義されたような「低級アルキル」基を有するアルコキシ基を示す。本明細書で使用されるように「Ｃ１−１０アルコキシ」は、アルキルがＣ１−１０である、−Ｏ−アルキルを指す。
【００３２】
用語「ＰＣｙ３」は、３つの環状部で三置換基されたホスフィンを指す。
【００３３】
用語「ハロアルコキシ」又は「ハロ低級アルコキシ」又は「低級ハロアルコキシ」は、低級アルコキシ基を指し、１個以上の炭素原子は、１個以上のハロゲン原子で置換される。
【００３４】
本明細書で使用されるように用語「ヒドロキシアルキル」は、異なる炭素原子上の１〜３個の水素原子が水酸基により置き換えられている、本明細書において定義されたようなアルキル基を表す。
【００３５】
用語「アルキルスルホニル」及び「アリールスルホニル」とは、本明細書で使用するとき、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義する通りである）で表される基を指す。用語「ヘテロアルキルスルホニル」は、本明細書で使用するとき、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、本明細書に定義する通りの「ヘテロアルキル」である）で表される基を示す。
【００３６】
用語「アルキルスルホニルアミノ」及び「アリールスルホニルアミノ」とは、本明細書で使用するとき、式−ＮＲ’Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、Ｒ’は、水素又はＣ１−３アルキルであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義する通りである）で表される基を指す。
【００３７】
用語「シクロアルキル」とは、本明細書で使用するとき、３〜８個の炭素原子を含有する飽和炭素環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチルを指す。「Ｃ３−７シクロアルキル」とは、本明細書で使用するとき、炭素環が３〜７個の炭素原子からなるシクロアルキルを指す。
【００３８】
用語「カルボキシ−アルキル」とは、本明細書で使用するとき、ヘテロアルキル基の結合点が炭素原子を貫くという理解の下で、１つの水素原子がカルボキシルで置換されているアルキル部分を指す。用語「カルボキシ」又は「カルボキシル」とは、−ＣＯ２Ｈ部分を指す。
【００３９】
用語「ヘテロアリール」又は「複素環式芳香族」とは、本明細書で使用するとき、ヘテロアリール基の結合点が芳香環又は部分不飽和環上に存在するという理解の下で、環１つ当たり４〜８個の原子を含有し、１つ以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子が組み込まれ、残りの環原子が炭素である少なくとも１つの芳香環又は部分不飽和環を有する、５〜１２個の環原子の単環式又は二環式の基を意味する。当業者に周知である通り、ヘテロアリール環は、すべてが炭素である対応物よりも低い芳香族特性を有する。したがって、本発明の目的のために、ヘテロアリール基は、ある程度の芳香族特性しか必要としていない。ヘテロアリール部分の例としては、５〜６個の環原子及び１〜３個のヘテロ原子を有する単環式芳香族複素環が挙げられ、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルボニルアミノ、及びアリールカルボニルアミノから選択される１つ以上、好ましくは１又は２つの置換基で場合により置換されていてもよい、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサゾリル、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール、及びオキサジアキソリンが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分の例としては、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンズオキサゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，６］ナフチリジニル、及びベンズイソチアゾールが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分は、いずれかの環において場合により置換されていてもよいが、結合点は、ヘテロ原子を含有する環上に存在する。
【００４０】
用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、又は「複素環」とは、本明細書で使用するとき、環１つ当たり３〜８個の原子を有し、１つ以上の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）０−２から選択される）が組み込まれている１つ以上の環、好ましくは１〜２個の環（スピロ環系を含む）からなり、そして、特に指定しない限り、場合により、独立して、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びこれらのイオン形態から選択される１つ以上、好ましくは１〜２つの置換基で置換されていてもよい、一価飽和環式基を示す。複素環式基の例としては、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル、及びイミダゾリニル、ならびにこれらのイオン形態が挙げられるが、これらに限定されない。また、例は、例えば、３，８−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタン、又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン等の二環式であってもよい。
【００４１】
Ｂｔｋの阻害剤
本願は、式Ｉ：
【化３】
2016515592.tif 000005
（式中、
Ｒ１は、ベンジル又は低級アルキルであり、それぞれ、場合により１つ以上のＲ１’で置換されており；
各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり；
Ｘは、ＣＨ又はＮＲ４であり；
Ｒ４は、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ｎＲ４’であり；
Ｒ４’は、低級アルキル又は低級アルケニルであり；
ｎは、０又は１であり；
----は、単結合又は二重結合のいずれかを表し；
ｍは、０又は１であり；
ｒは、０又は１であり；
Ｙは、ＣＮ（Ｒ３）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、ＣＨ２、又はＮであり；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、Ｃ（＝Ｏ）、又はシクロアルキルであり、それぞれ、場合により１つ以上のＲ２’で置換されており；
各Ｒ２’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであり；そして
Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルである）
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００４２】
本願は、Ｘが、ＣＨである、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００４３】
本願は、Ｙが、Ｃである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４４】
本願は、Ｒ３が、Ｈである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４５】
本願は、Ｒ１が、ベンジルであり、場合により１つ以上のＲ１’で置換されている、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４６】
本願は、Ｒ１が、低級アルキルであり、場合により１つ以上のＲ１’で置換されている、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００４７】
本願は、Ｒ２が、低級アルケニルであり、場合により１つ以上のＲ２’で置換されている、式Ｉで表される上記化合物のいずれかを提供する。
【００４８】
本願は、Ｒ２が、Ｃ（＝Ｏ）であり、場合により１つ以上のＲ２’で置換されている、式Ｉで表される上記化合物のいずれかを提供する。
【００４９】
本願は、Ｘが、ＮＲ４である、式Ｉで表される化合物を提供する。
【００５０】
本願は、Ｙが、ＣＨ２である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５１】
本願は、Ｒ４が、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４’である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５２】
本願は、Ｒ４’が、低級アルケニルである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５３】
あるいは、本願は、Ｒ４が、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４’である、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５４】
本願は、Ｒ４’が、低級アルキルである、式Ｉで表される上記化合物を提供する。
【００５５】
本願は、以下からなる群より選択される、式Ｉで表される化合物を提供する：
【表１】
2016515592.tif 000006
2016515592.tif 000007
2016515592.tif 000008
【００５６】
本願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５７】
本願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５８】
本願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５９】
本願は、式Ｉの化合物を含む、医薬組成物を提供する。
【００６０】
本願は、式Ｉの化合物を少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤との混合物で含む、医薬組成物を提供する。
【００６１】
本願は、増殖性疾患を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６２】
本願は、増殖性疾患が、癌である、上記方法を提供する。
【００６３】
本願は、増殖性疾患が、Ｔ細胞増殖性疾患である、上記方法を提供する。
【００６４】
あるいは、本願は、増殖性疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患である、上記方法を提供する。
【００６５】
本願は、化学療法剤若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心血管疾患を処置するための剤、糖尿病を処置するための剤、又は免疫不全疾患を処置するための剤から選択される追加の治療剤を投与することを更に含む、上記方法のいずれかを提供する。
【００６６】
本願は、化学療法剤若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心血管疾患を処置するための剤、糖尿病を処置するための剤、及び免疫不全疾患を処置するための剤から選択される追加の治療剤を更に含む、上記医薬組成物のいずれかを提供する。
【００６７】
本願は、炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６８】
本願は、自己免疫疾患を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６９】
本願は、関節リウマチを処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００７０】
本願は、喘息を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００７１】
本願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための上記のような化合物の使用を提供する。
【００７２】
本願は、関節リウマチを処置するための上記のような化合物の使用を提供する。
【００７３】
本願は、喘息を処置するための上記のような化合物の使用を提供する。
【００７４】
本願は、本明細書に記載するような化合物、方法、又は組成物を提供する。
【００７５】
化合物および調製
発明に包含され、本発明の範囲内である代表的な化合物の例を、以下の表で提供する。
これらの下記の実施例及び調製例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することを可能とするために提供される。これらは、本発明の範囲を制限するものではなく、本発明の例示及び代表例としてのみ考えられるべきである。
【００７６】
一般に、本願に使用される命名法は、IUPAC系統的命名法の作成のためのBeilstein InstituteコンピュータシステムであるAUTONOMTM v. 4.0に基づく。図示された構造とその構造を示す名称との間に相違がある場合、図示された構造がより重視される。加えて、構造又は構造の一部の立体化学が、例えば太字又は点線によって示されていない場合、その構造又は構造の一部は、その立体異性体のすべてを包含すると解釈すべきである。
【００７７】
表Ｉは、一般式Ｉに係る化合物の例を示す。
【表２】
2016515592.tif 000009
2016515592.tif 000010
2016515592.tif 000011
2016515592.tif 000012
2016515592.tif 000013
2016515592.tif 000014
2016515592.tif 000015
【００７８】
一般的な合成スキーム
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製することができる。これら化合物を合成するのに好適なプロセスは、実施例に提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームにしたがって調製することができる。
【００７９】
一般的に、スキームに特に記載しない限り、式Ｉの変形例を以下に記載する：
【化４】
2016515592.tif 000016
Ｒ１は、ベンジル又は低級アルキルであってよく、それぞれ、場合により１つ以上のＲ１’で置換されており；各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり；Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、Ｃ（＝Ｏ）、又はシクロアルキルであってよく、それぞれ、場合により１つ以上のＲ２’で置換されており；各Ｒ２’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであってよく；Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルであってよく；Ｘは、ＣＨ又はＮＲ４であってよく；Ｒ４は、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ｎＲ４’であってよく；Ｒ４’は、低級アルキル又は低級アルケニルであってよく；ｎは、０又は１であってよく；----は、単結合又は二重結合のいずれかを表してよく；そして、Ｙは、Ｃ、ＣＨ２、又はＮであってよい。
【００８０】
【化５】
2016515592.tif 000017
【００８１】
スキーム１に示す通り、式１で表される出発物質である５−アミノ−７−アザインドールは、例えば、Goldenbridge Pharma Inc. 814 Fairview Avenue, #A, Arcadia, CA 91007-6600, USA又は他の商業的供給元から市販されている。
【００８２】
適切な塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン）の存在下で、適切な溶媒（典型的に、ＴＨＦ）中にて、アシル化剤（典型的に、酸クロロホルマート）で、化合物１の５位におけるアミノ基を選択的にアシル化して、式２で表されるＮ−アシル化−５アミノ−７−アザインドールを与えることができる。
【００８３】
本発明の調製のために用いられる酸クロロホルマートは、市販されているか、又は当技術分野において公知の方法によって、例えば、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中でアルコールとホスゲンとを反応させることによって調製することができる。式２で表される化合物を、不活性溶媒（典型的に、ジクロロメチル）中でハロゲン化剤（例えば、Ｎ−ヨードスクシンイミド）と反応させて、式３で表される化合物（式中、Ｘは、ハロゲン、例えば、ヨード又はブロモを表す）を与えることができる。
【００８４】
次いで、化合物３のインドール窒素を、アミノ基の保護に一般的に用いられている適切な保護基（例えば、ＢＯＣ又はトシル）で保護する。典型的には、触媒量のＤＭＡＰの存在下で、適切な溶媒（例えば、ＴＨＦ及び／又はＤＣＭ）中にて、ＢＯＣ無水物又は塩化トシルで３を処理して、式４で表される化合物を生成することができる。
【００８５】
触媒量のパラジウム（典型的に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２）と共に、適切な溶媒（典型的に、ＤＭＥ、ＤＭＦ、又はトルエン）中で、塩基（典型的に、炭酸ナトリウムの水溶液）の存在下にて、市販されているアミノ置換アリールボロン酸又はボロン酸エステルと共に式４で表される化合物を加熱して、５（式中、Ａｒは、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールである）を生成することができる。
【００８６】
式５で表される化合物中のアミノ基は、当業者に周知の方法を用いて官能化することができる。例えば、それは、有機又は無機塩基の存在下で、酸塩化物Ｒ２ＣＯＣｌ又はその適切な誘導体（例えば、活性化エステル）と反応して、アミド７を形成し得る。
【００８７】
また、J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1025 (1985)、J. Org. Chem. 59 2437 (1994)又はInt. J. Peptide Protein Res. 37 252 (1991)に記載のものと同様の条件下で、多くの場合塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下にて、アミド結合形成試薬（多くの例が、ペプチド化学において周知である）（例えば、ＢＯＰ、ＰｙＢｒｏＰ、ＥＤＣＩ、及びＨＯＢＴ）の存在下で、式５で表される化合物中のアミノ基をカルボン酸Ｒ２ＣＯ２Ｈと反応させて、式７で表される化合物を形成することもできる。
【００８８】
あるいは、市販されているアミノ置換ボロン酸エステルは、上記のような手順にしたがって式６で表される中間体（式中、Ａｒは、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールであり、そして、Ｒ２は、上に定義した通りである）に変換することもできる。次いで、式６で表される官能化ボロナートは、パラジウム触媒Suzukiカップリング反応を受けて、式７で表される化合物を形成する。
【００８９】
式７で表される化合物中の保護基の切断は、従来の方法を用いて実施してよい。例えば、式７で表される化合物を、およそ室温の温度で不活性溶媒（例えば、ＤＣＭ又はジオキサン）中にて強有機酸（好ましくは、ＴＦＡ又は４N ＨＣｌ）で処理して、ＢＯＣを除去することができる。あるいは、マイクロ波装置内で不活性溶媒（例えば、アセトニトリル／水）中にて高温（例えば、１５０℃）に加熱することによって、式７で表される化合物中のＢＯＣ保護基を除去して、一般式８で表される化合物を与えることができる。
【００９０】
【化６】
2016515592.tif 000018
【００９１】
スキーム２に示す通り、適切な溶媒（典型的に、メタノール又はエタノール）中で好適な塩基（典型的に、ナトリウムメトキシド）の存在下にて、式１で表される出発物質である５−アミノ−７−アザインドールをケトン（例えば、Ｎ−保護４−ピペリドン又は３−ピペリドン）と縮合させて（これらの反応に有用な窒素保護基は、当業者に周知であり、例えば、ＢＯＣ、ベンジル、又はトシルである）、式９で表される化合物（式中、各ｎは、０、１、又は２であってよい）を生成することができる。
【００９２】
あるいは、式１０で表される化合物は、室温又は高温で塩基（例えば、水酸化カリウム）の存在下にて調製することができる。具体的な反応条件の例は、国際公開公報第１９９５／０９１６６号及び同第２０１１／１２８４５５号を含む文献における多くの参照文献に見出すことができる。
【００９３】
【化７】
2016515592.tif 000019
【００９４】
スキーム３に示す通り、適切な塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン又はトリエチルアミン）の存在下で、適切な溶媒（典型的に、ＴＨＦ）中にて、アシル化剤（典型的に、酸クロロホルマート）（本発明の調製に用いられる酸クロロホルマートは、市販されているか、又は当技術分野において公知の方法によって、例えば、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中でアルコールとホスゲンとを反応させることによって調製することができる）を、式９又は１０で表される化合物の５位におけるアミノ基と選択的に反応させて、式１１又は１３で表されるＮ−アシル化−５アミノ−アザインドールを与えることができる。
【００９５】
式１１又は１３で表される化合物中の保護基の除去は、従来の方法を用いて実施してよい。例えば、式１１で表される化合物を、およそ室温の温度で不活性溶媒（例えば、ＤＣＭ又はジオキサン）中にて強有機酸（好ましくは、ＴＦＡ又は４N ＨＣｌ）で処理して、ＢＯＣを除去することができる。
【００９６】
次いで、式１１又は１３で表される化合物中のアミノ基は、当業者に周知の方法を用いて官能化することができる。例えば、それは、有機又は無機塩基の存在下で、酸塩化物Ｒ２ＣＯＣｌ又はその適切な誘導体（例えば、活性化エステル）と反応して、アミド１２又は１６を形成し得る。
【００９７】
また、J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1025 (1985)、J. Org. Chem. 59 2437 (1994)又はInt. J. Peptide Protein Res. 37 252 (1991)に記載のものと同様の条件下で、多くの場合塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下にて、アミド結合形成試薬（多くの例が、ペプチド化学において周知である）（例えば、ＢＯＰ、ＰｙＢｒｏＰ、ＥＤＣＩ又はＥＤＣＩ、及びＨＯＢＴ）の存在下で、式１１又は１３で表される化合物中のアミノ基をカルボン酸Ｒ２ＣＯ２Ｈと反応させて、式１２又は１６で表される化合物を形成することもできる。
【００９８】
好適な溶媒（例えば、メタノール又は酢酸エチル）中で、貴金属触媒（例えば、パラジウム炭素又は酸化パラジウム）で、式１１で表される化合物を水素化して、式１４で表される化合物を与えることができる。記載のような方法によって式１４で表される化合物中の保護基を除去し、そして、アミノ基を官能化することによって、式１５で表される化合物を与える。
【００９９】
医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、多種多様な経口投与用の剤形及び担体で処方してよい。経口投与は、錠剤、コート錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤、シロップ剤又は懸濁剤の形態であり得る。本発明の化合物は、その他の投与経路の中でも、連続的（点滴）局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透促進剤を含み得る）、口腔内、鼻腔内、吸入及び坐剤投与を含む他の投与経路によって投与されたときに効果的である。好ましい投与方法は、一般的に、苦痛の程度及び有効成分に対する患者の反応にしたがって調整され得る慣用の一日用量レジメンを使用する経口である。
【０１００】
本発明の化合物（１つ又は複数）ならびにそれらの薬学的に使用可能な塩は、１つ又は複数の従来の賦形剤、担体又は希釈剤と一緒に、医薬組成物及び単位用量の形態にしてよい。医薬組成物及び単位用量形態は、慣用の成分を慣用の割合で、追加の活性化合物若しくは成分と共に又は無しで含むことができ、単位用量形態は、使用される１日用量の意図される範囲に釣り合う有効成分のあらゆる適切な有効量を含むことができる。医薬組成物は、錠剤若しくは充填カプセル剤、半固形剤、粉末剤、持続性放出製剤のような固形剤として、又は液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤若しくは経口用の充填カプセル剤のような液剤として；又は直腸内若しくは膣内投与用の坐剤の形態；又は非経口的使用の注射用滅菌液剤の形態で使用することができる。典型的な調製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物（１つ又は複数）（w/w）を含有する。用語「調製剤」又は「剤形」は、活性化合物の固体製剤と液体製剤の両方を含むことを意図し、当業者であれば、ターゲット臓器又は組織及び所望の用量及び薬物動態パラメーターに応じて、有効成分が異なる調製剤として存在し得ることが理解されよう。
【０１０１】
本明細書において使用される用語「賦形剤」は、一般的に安全で無毒であり、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない、医薬組成物の調製において有用である化合物を指し、そして、獣医学的使用ならびにヒトへの薬学的使用に許容し得る賦形剤を含む。本発明の化合物は、単独で投与することができるが、一般的に、意図される投与経路及び標準的な薬務に照らして選択される１つ又は複数の適切な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体との混合物で投与される。
【０１０２】
「医薬的に許容し得る」は、それが、一般的に安全であり、非毒性であり、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない医薬組成物を調製する際に有用であることを意味し、獣医学的使用、ならびにヒトの医薬的使用に許容可能であるものを含む。
【０１０３】
有効成分の「薬学的に許容し得る塩」形態は、また、最初に、非塩形態において存在しなかった望ましい薬物動態特性を有効成分に付与することができ、そして、有効成分の薬力学に対して体内でのその治療活性に関して正の影響をさらに与え得る。化合物の「薬学的に許容し得る塩」という表現は、薬学的に許容し得るものであって、親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。このような塩としては、以下が挙げられる：（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸と共に形成される酸付加塩；又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等の有機酸と共に形成される酸付加塩；あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン（例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、又はアルミニウムイオン）によって置換されるか又は有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン等）に配位したときに形成される塩。
【０１０４】
固体製剤は、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、及び分散性顆粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、風味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩解剤又はカプセル化材料としても作用することができる１種以上の物質であってよい。粉末剤では、担体は、一般に、微粉化した有効成分との混合物である微粉化固体である。錠剤では、有効成分は、一般的に、必要な結合能力を有する担体と適切な割合で混合され、所望の形状及び大きさに成形される。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ロウ、ココアバター等を非限定的に含む。固体形態の製剤は、有効成分に加えて、着色料、香味料、安定剤、緩衝剤、人工及び天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含有してもよい。
【０１０５】
液体製剤は、また、経口投与に適しており、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水性液剤、水性懸濁剤を含む液体製剤を含む。これらは、使用直前に液体形態の調製剤に変換することを意図する固体形態の調製剤を含む。乳剤は、溶液中、例えば、プロピレングリコール水溶液中に調製してもよく、又はレシチン、ソルビタンモノオレート若しくはアラビアゴムなどの乳化剤を含有してもよい。水性液剤は、有効成分を水に溶解し、適切な着色剤、風味剤、安定剤及び増粘剤を加えることにより調製できる。水性懸濁剤は、微粉化した有効成分を、天然又は合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他の周知の懸濁剤のような粘性材料と共に水に分散することにより調製できる。
【０１０６】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例としてはボーラス注射（bolus injection）又は持続注入による）のために製剤化することができ、アンプル剤、充填済注射器（pre-filled syringes）、防腐剤を添加した小型注入容器又は多用量容器に単位用量形態で存在できる。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤又は乳剤、例えばポリエチレングリコール水溶液中の液剤のような形態をとることができる。油性又は非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射用有機エステル類（例えば、オレイン酸エチル）を含み、防腐剤、湿潤剤、乳化剤又は懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤のような配合剤を含有してよい。あるいはまた、有効成分は、滅菌固体の無菌分離によるか、又は適切なビヒクル、例えば滅菌した発熱物質を含まない水を用いて、使用前の構成用溶液から凍結乾燥することにより得られる粉末形態であってよい。
【０１０７】
本発明の化合物を、軟膏剤、クリーム剤若しくはローション剤として又は経皮パッチ剤として表皮に局所投与するために製剤化することができる。例えば、軟膏剤及びクリーム剤を、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を加え、水性又は油性基剤を用いて製剤化することができる。ローション剤は、水性又は油性基剤を用いて製剤化することができ、また一般的に、１種以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤又は着色剤も含有する。口腔内の局所投与に適切な製剤は、風味付けした基剤、通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性剤を含むトローチ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアのような不活性基剤中に有効成分を含むパステル剤；ならびに適切な液体担体中に有効成分を含む洗口剤を含む。
【０１０８】
本発明の化合物は坐剤として投与するために製剤化することができる。脂肪酸グリセリド又はココアバターの混合物のような低融点ロウを、最初に溶融して、有効成分を例えば撹拌により均質に分散する。次に均質溶融混合物を、都合のよい大きさの成形型に注ぎ、冷却させ、凝固させる。
【０１０９】
本発明の化合物は膣内投与用に製剤化することができる。有効成分に加えて、当該技術で適切であることが既知である担体を含有するペッサリー剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤又はスプレー剤。
【０１１０】
本発明の化合物は鼻腔内投与用に製剤化することができる。液剤又は懸濁剤を、慣用の方法、例えば、滴瓶、ピペット又はスプレーを用いて直接鼻腔に適用する。製剤は単回投与又は多回投与形態で提供することができる。滴瓶又はピペットの後者の場合、液剤又は懸濁剤の適切で所定の容量を患者が投与することで、それを達成することができる。スプレーの場合、例えば計量噴霧スプレーポンプを用いてこれを達成することができる。
【０１１１】
本発明の化合物は、特に、鼻内投与を含む、気道へのエアゾール投与用に製剤化することができる。化合物は、一般的に、例えばほぼ５ミクロン以下程度の小さい粒径を有する。そのような粒径は、当該技術で既知の方法、例えば微粉砕により得ることができる。有効成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタン、又は二酸化炭素、或いは他の適切なガスのような、適切な噴射剤を用いた加圧パックで提供される。エアロゾルはまた、レシチンのような界面活性剤を都合よく含有することができる。薬剤の用量は、計量弁により制御され得る。あるいはまた、有効成分は、乾燥粉末の形態で、例えば、乳糖、デンプン、デンプン誘導体、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）のような適切な粉末基剤中の化合物の粉末混合物で提供され得る。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセル又はカートリッジ、又はブリスターパックのような単位用量形態で存在してよく、これから粉末剤が吸入器により投与され得る。
【０１１２】
所望であれば、製剤は、有効成分の持続的又は制御的放出投与に適合する腸溶性コーティングを用いて調製できる。例えば本発明の化合物は、経皮又は皮下薬剤送達装置に配合できる。これらの送達系は、化合物の持続放出が必要であり、患者の処置レジメンに対するコンプライアンスが重要である場合に有利である。経皮送達系における化合物は、多くの場合、皮膚付着固体支持体に結合されている。目的の化合物は、また、浸透向上剤、例えばアゾン（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わせることができる。持続的放出送達系は、手術又は注入により皮下層に皮下的に挿入される。皮下インプラントは、脂溶性膜、例えばシリコーンゴム又は生物分解性ポリマー、例えばポリ乳酸で化合物を包み込む。
【０１１３】
適切な製剤は、薬学的担体、希釈剤及び賦形剤と共に、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載されている。熟練の製剤科学者であれば、本発明の組成物を不安定にすることなく又はそれらの治療活性を損なうことなく、特定の投与経路のための多くの製剤を提供するために、本明細書の教示の範囲内で製剤を改変することができる。
【０１１４】
水又はその他のビヒクルにより可溶性にするための本化合物の改変は、例えば、小さな改変（塩形成、エステル化など）によって容易に達成することができ、これらは十分に当該分野における通常の技能の範囲内である。また、患者に最大の有益な効果を与えるように本化合物の薬物動態を管理するために、特定の化合物の投与経路及び用量レジメンを改変することも十分に当該分野における通常の技能の範囲内である。
【０１１５】
本明細書において使用される用語「治療有効量」は、個体の疾患の症状を軽減するのに必要な量を意味する。用量は、各特定の症例において、個々の要件に対して調整される。その用量は、多くの要因、例えば、処置される疾患の重症度、患者の年齢及び総体的な健康状態、患者の処置に用いられているその他の医薬、投与経路及び形態、ならびに担当医の選好及び経験などに応じて、広い範囲内で変更することができる。経口投与の場合、単剤療法及び／又は併用療法では、一日あたり約０．０１〜約１０００mg/kg体重の一日用量が適切であろう。好ましい一日用量は、一日当たり約０．１〜約５００mg/kg体重、より好ましくは、０．１〜約１００mg/kg体重、最も好ましくは、１．０〜約１０mg/kg体重である。したがって、７０kgの人への投与では、用量範囲は、一日当たり約７mg〜０．７ｇであろう。一日用量は、単回用量又は分割用量（典型的には、１〜５回の用量／日）で投与することができる。一般的に、処置は、化合物の最適用量より少ない用量から開始する。その後、個々の患者に最適な効果が得られるまで、用量を少量ずつ増やしていく。本明細書に記載される疾患を処置する当業者であれば、必要以上の実験を実施することなく、個人の知識、経験及び本願の開示を頼りに所与の疾患及び患者について本発明の化合物の治療有効量を確定することができるであろう。
【０１１６】
医薬製剤は、好ましくは単位用量形態である。そのような形態では、製剤は、有効成分の適切な量を含有する単位用量に細分化されている。単位用量形態は、パッケージ製剤であることができ、そのパッケージは、パケット錠剤、カプセル剤及びバイアル又はアンプル中の粉末剤のような製剤の別個の分量を含有する。また、単位用量形態は、それ自体カプセル剤、錠剤、カシェ剤又はトローチ剤であることができるか、又はパッケージ形態におけるこれらのうちのいずれかの適切な数であることができる。
【０１１７】
適応及び処置の方法
一般式Ｉで表される化合物は、ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）を阻害する。上流のキナーゼによるＢｔｋの活性化により、ホスホリパーゼ−Ｃγが活性化され、続いて、前炎症性メディエーターの放出が刺激される。式Ｉで表される化合物は、関節炎、ならびに他の抗炎症及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Ｉに係る化合物は、関節炎の処置に有用である。式Ｉで表される化合物は、細胞内のＢｔｋを阻害するため及びＢ細胞の発生を調節するために有用である。本発明は、更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含有する医薬組成物を含む。
【０１１８】
本明細書に記載される化合物は、キナーゼ阻害剤、特に、Ｂｔｋ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳動物において、キナーゼ阻害に応答する１つ又は複数の疾患（Ｂｔｋ阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を含む）を処置するために有用であり得る。いかなる特定の理論に束縛されるものではないが、本発明の化合物とＢｔｋの相互作用がＢｔｋ活性の阻害をもたらすために、これらの化合物が薬学的有用性を有すると考えられる。したがって、本発明は、Ｂｔｋ活性の阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を有する哺乳動物（例えば、ヒト）を処置する方法であって、そのような疾患を有する哺乳動物に、有効量の本明細書に与えられる少なくとも１つの化学物質を投与することを含む方法を含む。有効濃度は、実験的に、例えば、化合物の血中濃度をアッセイすることによって、又は理論的にバイオアベイラビリティを計算することによって確認することができる。Ｂｔｋの他に影響を受け得るその他のキナーゼは、特に限定されないが、その他のチロシンキナーゼ及びセリン／トレオニンキナーゼを含む。
【０１１９】
キナーゼは、増殖、分化及び死（アポトーシス）などの基本的な細胞プロセスを制御するシグナル伝達経路において特筆すべき役割を果たす。異常なキナーゼ活性は、多発性癌、自己免疫及び／又は炎症性疾患ならびに急性炎症反応を含む、広範な疾患に関与している。重要な細胞のシグナル伝達経路におけるキナーゼのこの多面的な役割は、キナーゼ及びシグナル伝達経路をターゲットとする新規薬物を同定する重要な機会を提供する。
【０１２０】
１つの実施態様は、Ｂｔｋ活性及び／又はＢ細胞の増殖の阻害に応答する、自己免疫及び／若しくは炎症性疾患又は急性炎症反応を有する患者を処置する方法を含む。
【０１２１】
本発明に係る化合物及び組成物を使用して影響を及ぼし得る自己免疫及び／又は炎症性疾患は、特に限定されないが、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、シェーグレン病、組織移植片拒絶反応及び移植臓器の超急性拒絶反応、喘息、全身性エリテマトーデス（及び関連する糸球体腎炎）、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、血管炎（ＡＮＣＡ関連及びその他の血管炎）、自己免疫性の溶血及び血小板減少状態、グッドパスチャー症候群（ならびに関連する糸球体腎炎及び肺出血）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血性ショックならびに重症筋無力症を含む。
【０１２２】
本明細書に提供される少なくとも１つの化学物質が抗炎症剤と組み合わせて投与される処置法が本明細書に含まれる。抗炎症剤は、特に限定されないが、ＮＳＡＩＤ、非特異的及びＣＯＸ−２特異的シクロオキシゲナーゼ酵素阻害剤、金化合物、コルチコステロイド、メトトレキサート、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）受容体拮抗剤、免疫抑制剤及びメトトレキサートを含む。
【０１２３】
ＮＳＡＩＤの例は、特に限定されないが、イブプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン及びナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、ジクロフェナクナトリウムとミソプロストールの組み合わせ、スリンダク、オキサプロジン、ジフルニサル、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、ケトプロフェン、ナトリウムナブメトン、スルファサラジン、トルメチンナトリウムならびにヒドロキシクロロキンを含む。ＮＳＡＩＤの例は、また、セレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ及び／又はエトリコキシブなどのＣＯＸ−２特異的阻害剤を含む。
【０１２４】
いくつかの実施態様において、抗炎症剤は、サリチル酸塩である。サリチル酸塩は、アセチルサリチル酸（すなわち、アスピリン）、サリチル酸ナトリウムならびにサリチル酸コリン及びマグネシウムを含むが、これらに限定されない。
【０１２５】
抗炎症剤は、また、コルチコステロイドであり得る。例えば、コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム又はプレドニゾンであり得る。
【０１２６】
追加の実施態様において、抗炎症剤は、金チオリンゴ酸ナトリウム又はオウラノフィンなどの金化合物である。
【０１２７】
本発明は、また、抗炎症剤が、代謝阻害剤、例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤（メトトレキサートなど）、又はジヒドロオロット酸デヒドロゲナーゼ阻害剤（レフルノミドなど）である実施態様を含む。
【０１２８】
本発明の他の実施態様は、少なくとも１つの抗炎症性化合物が、抗Ｃ５モノクローナル抗体（エクリズマブ又はパキセリズマブなど）、ＴＮＦ拮抗剤（エンタネルセプト（entanercept）など）又は抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるインフリキシマブである組み合わせに関する。
【０１２９】
本発明のさらに他の実施態様は、少なくとも１つの活性剤が、メトトレキサート、レフルノミド、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン及びミコフェノール酸モフェチルから選択される免疫抑制化合物などの免疫抑制化合物である組み合わせに関する。
【０１３０】
ＢＴＫを発現するＢ細胞及びＢ細胞前駆体は、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含む）、ヘアリー細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性及び急性骨髄性白血病ならびに慢性及び急性リンパ性白血病を非限定的に含む、Ｂ細胞の悪性腫瘍の病理に関与している。
【０１３１】
ＢＴＫは、Ｂリンパ球系細胞のＦａｓ／ＡＰＯ−１（ＣＤ−９５）死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の阻害剤であることが知られている。白血病／リンパ腫細胞の運命は、ＤＩＳＣにより活性化されるカスパーゼの反対のアポトーシス促進効果とＢＴＫ及び／又はその基質が関わる上流の抗アポトーシス調節メカニズムとの間のバランスに依存し得る（Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656）。
【０１３２】
また、ＢＴＫ阻害剤が、化学療法増感剤として有用であり、したがって、その他の化学療法薬、特に、アポトーシスを誘導する薬物との組み合わせで有用であることが発見された。化学療法増感性のＢＴＫ阻害剤と組み合わせて使用することができるその他の化学療法薬の例は、トポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン又はトポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ダウノマイシン及びエトポシド）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン及びＢＣＮＵ）、チューブリン作用剤（例えば、タキソール及びビンブラスチン）ならびに生物学的作用物質（例えば、抗ＣＤ２０抗体などの抗体、ＩＤＥＣ８、免疫毒素及びサイトカイン）を含む。
【０１３３】
Ｂｔｋ活性は、また、第９及び第２２染色体の一部の転座から生じるｂｃｒ−ａｂｌ融合遺伝子を発現するいくつかの白血病と関連している。この異常は、通常、慢性骨髄性白血病に認められる。Ｂｔｋは、ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼによって構成的にリン酸化され、これが下流の生存シグナルを開始して、ｂｃｒ−ａｂｌ細胞におけるアポトーシスを回避する（N. Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201(11):1837-1852）。
【０１３４】
処置の方法
本願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３５】
本願は、炎症性状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３６】
本願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３７】
本願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、式Ｉの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０１３８】
本願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３９】
本願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４０】
本願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４１】
本願は、Ｂ細胞増殖を阻害する方法であって、それを必要とする患者に、治療的有効量の式Ｉで表されるＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４２】
本願は、Ｂｔｋ活性を阻害する方法であって、式Ｉのいずれか１つで表されるＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含み、前記Ｂｔｋ阻害剤化合物が、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて５０マイクロモル濃度以下のＩＣ５０を示す方法を提供する。
【０１４３】
上記方法の１つの変形例では、Ｂｔｋ阻害剤化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１００ナノモル濃度以下のＩＣ５０を示す。
【０１４４】
上記方法の別の変形例では、該化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１０ナノモル濃度以下のＩＣ５０を示す。
【０１４５】
本願は、炎症性状態を処置する方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉで表されるＢｔｋ阻害剤化合物と組み合わせて抗炎症化合物を治療的有効量同時投与することを含む方法を提供する。
【０１４６】
本願は、関節炎を処置する方法であって、それを必要としている患者に、式Ｉで表されるＢｔｋ阻害剤化合物と組み合わせて抗炎症化合物を治療的有効量同時投与することを含む方法を提供する。
【０１４７】
本願は、リンパ腫又はＢＣＲ−ＡＢＬ１＋白血病細胞を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の式Ｉで表されるＢｔｋ阻害剤化合物を投与することによる方法を提供する。
【０１４８】
本発明は、増殖性疾患を処置する方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の上記化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４９】
本発明は、増殖性疾患が、癌である、上記方法を提供する。
【０１５０】
本発明は、増殖性疾患が、Ｔ細胞増殖性疾患である、上記方法を提供する。
【０１５１】
本発明は、増殖性疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患である、上記方法を提供する。
【０１５２】
本発明は、治療活性物質としての上記のような化合物の使用を提供する。
【０１５３】
本発明は、炎症性及び／又は自己免疫状態の処置における上記のような化合物の使用を提供する。
【０１５４】
本発明は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための医薬を調製するための上記のような化合物の使用を提供する。
【０１５５】
本発明は、炎症性及び／又は自己免疫状態の処置において使用するための上記のような化合物を提供する。
【０１５６】
本発明は、関節リウマチの処置において使用するための上記のような化合物を提供する。
【０１５７】
本発明は、喘息の処置において使用するための上記のような化合物を提供する。
【０１５８】
本発明は、増殖性疾患の処置において使用するための上記のような化合物を提供する。
【０１５９】
本発明は、増殖性疾患が、癌である、上記化合物を提供する。
【０１６０】
本発明は、増殖性疾患が、Ｔ細胞増殖性疾患である、上記化合物を提供する。
【０１６１】
本発明は、増殖性疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患である、上記化合物を提供する。
【０１６２】
本発明は、本明細書に上述されるような発明を提供する。
【０１６３】
実施例
一般的な略記
一般的に用いられる略記としては、以下が挙げられる：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、気圧（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−tert−ブチルピロカーボナート又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ケミカルアブストラクト登録番号（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ジエチルアゾジカルボキシラート（ＤＥＡＤ）、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ）、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）、イソプロピルマグネシウムクロリド（ｉＰｒＭｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチ���モルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ピリジニウムクロロクロマート（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、ピリジニウムジクロマート（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１’−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、sec−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフラート又はＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−又はトシル（Ｔｓ）、ならびにＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。接頭辞ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、二級（sec−）、三級（tert−）、及びネオを含む従来の命名法は、アルキル部分と共に用いられるときの慣習上の意味を有する。(J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.)。
【０１６４】
一般的条件
本発明の化合物は、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって、市販の出発物質で始めて調製することができる。以下の概要は、このような化合物を調製するのに好適な反応スキームである。更なる例示は、具体的な実施例に見出すことができる。
【０１６５】
特定の略記
ＣＤＣｌ３              重水素化クロロホルム
ＣＨ２Ｃｌ２            ジクロロメタン
ＣＨ３ＣＮ              アセトニトリル
ＣＯ２                  二酸化炭素
Ｃｏｎｃ                濃度
Ｃｓ２ＣＯ３              炭酸セシウム
ＤＩＰＥＡ              ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ                  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ                ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ              酢酸エチル
ＥｔＯＨ                エタノール
ＨＣｌ                  塩酸
Ｋ２ＣＯ３                炭酸カリウム
ＬＤＡ                  リチウムジイソプロピルアミド
ＬｉＡｌＨ４            水素化アルミニウムリチウム
ＭｅＯＨ                メタノール
ＮａＢＨ４              水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＯＨ                水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４              硫酸ナトリウム
ＮａＨ                  水素化ナトリウム
ＮａＮＯ２              亜硝酸ナトリウム
Ｐｄ（ＯＡｃ）２        酢酸パラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４        テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＳＯＣｌ２              塩化チオニル
ＴＨＦ                  テトラヒドロフラン
【０１６６】
一般的な実験の詳細
試薬は、Aldrich、Oakwood、Matrix、又は他の供給業者から購入し、そして、更に精製することなく用いた。加熱のためにマイクロ波照射を用いる反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを用いて実施した。数ミリグラム〜数グラムの規模の精製は、シリカゲルフラッシュカラムによる溶離等の当業者に公知の方法によって実施し；また、場合によっては、数グラムのシリカゲルが充填された使い捨てカラム（RediSep）を使用し、CombiFlash systemで溶離させて分取フラッシュカラム精製を行った。また、Biotage（商標）及びISCO（商標）は、中間体の精製のために本発明で用いることができるフラッシュカラム装置である。
【０１６７】
化合物の同一性及び純度の確認のために、以下のシステムを用いてＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）スペクトルを記録した。質量スペクトルの測定については、システムは、Micromass Platform II分光計：ポジティブモードのＥＳイオン化（質量範囲：１５０〜１２００）からなる。以下のＨＰＬＣシステムを用いて同時クロマトグラフ分離を達成した：ES Industries Chromegabond WR C-18 3u 120Å（３．２×３０mm）カラムカートリッジ；移動相Ａ：水（０．０２％ ＴＦＡ）及び相Ｂ：アセトニトリル（０．０２％ ＴＦＡ）；勾配：３分間で１０％ Ｂから９０％ Ｂ；平衡時間：１分間；流速：２mL/分。
【０１６８】
また、式１で表される多くの化合物は、当業者に周知の方法を用いて逆相ＨＰＬＣによって精製した。場合によっては、Shimadzu分取ＨＰＬＣシステム及びLeap自動注入装置に取り付けられたGilson 215コレクターを制御するPE Sciex 150 EX Mass Specを用いて、分取ＨＰＬＣ精製を実施した。化合物は、陽イオン検出のＬＣ／ＭＳ検出を用いて溶離流から回収した：Ｃ−１８カラム（２．０×１０cm、２０mL/分で溶離）からの化合物の溶離は、１０分間にわたって、溶媒（Ａ）０．０５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ ＴＦＡ／アセトニトリルの適切な線形勾配モードを用いて行った。ＨＰＬＣシステムに注入するために、メタノール、アセトニトリル、及びＤＭＳＯの混合物に粗サンプルを溶解させた。
【０１６９】
１Ｈ−ＮＭＲによる特性評価は、Bruker又はVarian 300若しくは400 MHz NMR分光計を用いて実施した。
【０１７０】
本発明の化合物は、公知の技術にしたがって合成してよい。以下の実施例及び参照文献は、本発明の理解を助けるために提供される。しかし、実施例は、本発明を限定することを意図するものではなく、本発明の真の範囲は、添付の特許請求の範囲に記載される。実施例における最終生成物の名称は、Isis AutoNom 2000を用いて作成した。
【０１７１】
調製例
以下の実施例は、説明目的のものであり、いかなる形であれ本発明を限定するものではない。
【０１７２】
（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化８】
2016515592.tif 000020
ジクロロメタン（３００mL）中の５−アミノ−７−アザインドール（５ｇ、３７．６mmol）とＤＩＰＥＡ（１３mL、７５mmol）の混合物を、室温で撹拌した。クロロギ酸ベンジル（５．８mL、３８．３mmol）を、撹拌しながら滴下した。反応物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次にＥｔＯＡｃに溶解し、そして希釈した（０．２〜０．３N）ＨＣｌ水溶液及びブラインで洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物を少量のＴＨＦに溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ヘキサン中０〜８０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル（７．５５ｇ、収率７５％）を明褐色の固体として与えた。Ｃ１５Ｈ１３Ｎ３Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）２６７、実測値２６８（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７３】
（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化９】
2016515592.tif 000021
上記と同様の方法を用いて、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルを、５−アミノ−７−アザインドール及びクロロギ酸イソプロピルから調製した。Ｃ１１Ｈ１３Ｎ３Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）２１９、実測値２２０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７４】
（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸  ２−クロロ−ベンジルエステルの調製
【化１０】
2016515592.tif 000022
上記と同様の方法を用いて、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルを、５−アミノ−７−アザインドール及び２−クロロ−ベンジルクロロホルマートから調製した。Ｃ１５Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３０１、実測値３０２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７５】
（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルの調製
【化１１】
2016515592.tif 000023
３−シアノベンジルアルコール（２ｇ、１５mmol）を、乾燥ＴＨＦ（５０mL）中のホスゲン（１４．４mL、１９．５mmol、ＴＨＦ中１５％）の溶液に一度に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。粗物質、３−シアノベンジルクロロホルマートを、無色の油状物として得て、これをさらに後処理及び精製することなく次の工程において使用した。
【０１７６】
上記と同様の方法を用いて、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルを、５−アミノ−７−アザインドール及び３−シアノベンジルクロロホルマートから調製した。Ｃ１６Ｈ１２Ｎ４Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）２９２、実測値２９３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７７】
（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルの調製
【化１２】
2016515592.tif 000024
上記と同様の方法を用いて、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルを、５−アミノ−７−アザインドール、（３−フルオロ−フェニル）−メタノール及びホスゲンから調製した。Ｃ１５Ｈ１２ＦＮ３Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）２８５、実測値２８６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７８】
３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化１３】
2016515592.tif 000025
工程１：  ジクロロメタン（３００mL）中の（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル（７．５５ｇ、２８．２mmol）とＮ−ヨードスクシンイミド（８．２６ｇ、３６．７mmol）の混合物を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次にＥｔＯＡｃに溶解し、そして飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びブラインで洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、（３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル（１１．１ｇ、収率１００％）を明褐色の固体として与えた。Ｃ１５Ｈ１２ＩＮ３Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３９３、実測値３９４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７９】
工程２：  （３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル（１１．１ｇ、２８．２mmol）及びＤＭＡＰ（６９０mg、５．６５mmol）を、１：１のＴＨＦ：ジクロロメタン（３００mL）に懸濁した。反応混合物を、ＤＣＭ（１００mL）中のＢＯＣ無水物（６．８５ｇ、３１．１mmol）の溶液で処理した。反応物を室温で１０分間撹拌した。赤色の清澄な溶液を、０．２５N ＨＣｌ水溶液及びブラインで洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ヘキサン中０〜４０％酢酸エチル）が、５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−ヨード−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（１２．４４ｇ、８９％）を明黄色の固体として与えた。Ｃ２０Ｈ２０ＩＮ３Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４９３、実測値４９４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８０】
工程３：  アルゴンを、ＤＭＥ（８mL）中の５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−ヨード−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（１．２ｇ、２．４３mmol）、３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミン（１．３３ｇ、６．０８mmol）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（II）（１７８mg、０．２４mmol）、及び２M炭酸カリウム水溶液（２mL、４mmol）の混合物で泡立てた。反応バイアルを密閉し、６５℃で３時間加熱し、そして次に冷却した。溶媒を除去し、残留物を混合ＭｅＯＨ／ＤＣＭに溶解し、混合物を濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ヘキサン中０〜７０％酢酸エチル）により精製して、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（３９５mg、収率３５％）をピンク色の固体として与えた。Ｃ２６Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５８、実測値４５９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８１】
３−（２−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化１４】
2016515592.tif 000026
上記と同様の方法を用いて、３−（２−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル及び２−アミノフェニルボロン酸から調製した。Ｃ２６Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５８、実測値４５９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８２】
３−（３−アミノ−フェニル）−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化１５】
2016515592.tif 000027
上記と同様の方法を用いて、３−（３−アミノ−フェニル）−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステル及び３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミンから調製した。Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４１０、実測値４１１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８３】
３−（３−アミノ−フェニル）−５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化１６】
2016515592.tif 000028
上記と同様の方法を用いて、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステル及び３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミンから調製した。Ｃ２６Ｈ２５ＣｌＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４９２、実測値４９３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８４】
３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化１７】
2016515592.tif 000029
上記と同様の方法を用いて、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステル及び３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミンから調製した。Ｃ２７Ｈ２５Ｎ５Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４８３、実測値４８４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８５】
３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化１８】
2016515592.tif 000030
上記と同様の方法を用いて、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステル及び３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミンから調製した。Ｃ２６Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４７６、実測値４７７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８６】
（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エン酸 ［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミドの調製
【化１９】
2016515592.tif 000031
ジクロロメタン（１０mL）中の３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（２００mg、０．９１mmol）、（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エン酸塩酸塩（１８１mg、１．１mmol）、１−プロパンホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ）（８１５μL、ＥｔＯＡｃ中５０％、１．３７mmol）及びトリエチルアミン（２５４μL、１．８３mmol）の混合物を、室温で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜２０％ ＭｅＯＨ）により精製して、（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エン酸 ［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミド（１５５mg、５１％）を明黄色の固体として与えた。Ｃ１８Ｈ２７ＢＮ２Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３３０、実測値３３１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８７】
２−シアノ−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アセトアミドの調製
【化２０】
2016515592.tif 000032
上記と同様の方法を用いて、２−シアノ−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アセトアミドを、３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミン及びシアノ−酢酸から調製した。Ｃ１５Ｈ１９ＢＮ２Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）２８６、実測値２８７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８８】
３−メトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−プロピオンアミド及びＮ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アクリルアミドの調製
【化２１】
2016515592.tif 000033
工程１：  ジクロロメタン（１５０mL）中の３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（２ｇ、９．１３mmol）、３−メトキシプロパノイルクロリド（１．１２ｇ、９．１３mmol）及びトリエチルアミン（２．５４mL、１８．３mmol）の混合物を、室温で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ヘキサン中０〜５０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、３−メトキシ−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−プロピオンアミド（２．０３ｇ、７３％）を明黄色の固体として与えた。Ｃ１６Ｈ２４ＢＮＯ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３０５、実測値３０６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８９】
工程２：  水素化ナトリウム（７９mg、１．９７mmol）を、無水ＴＨＦ（３mL）に懸濁し、室温で５分間撹拌し、その後、ＴＨＦ（２mL）中の３−メトキシ−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−プロピオンアミド（３００mg、０．９８mmol）の溶液を加えた。反応物を室温で２０分間撹拌し、次にヨウ化メチル（２７９mg、１２３μL、１．９７mmol）を滴下した。反応物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃと水に分配した。水相を１N ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃで再抽出した。有機抽出物を合わせ、濃縮した。油状物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ヘキサン中０〜６０％ ＥｔＯＡｃ）により精製した。集めた生成物を濃縮し、次に凍結乾燥して、３−メトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−プロピオンアミドとＮ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アクリルアミドの１：１混合物（１１０mg、１８％）を明褐色の粉末として与えた。それを、さらに精製することなく次の工程においてそのまま使用した。３−メトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−プロピオンアミド  Ｃ１７Ｈ２６ＢＮＯ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３１９、実測値３２０（Ｍ＋Ｈ）；Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アクリルアミド  Ｃ１６Ｈ２２ＢＮＯ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）２８７、実測値２８８（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９０】
４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２２】
2016515592.tif 000034
５−アミノ−７−アザインドール（２．９ｇ、２１．８mmol）を、メタノール（８０mL）に溶解した。１−ＢＯＣ−４−ピペリドン（５．９５ｇ、２９．８mmol）及びナトリウムメトキシド（１１．８ｇ、１２．５mL、５４．４mmol）を加えた。反応混合物を８０℃で２時間加熱した。反応物を濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄し、乾燥させ、そして濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中０〜８％ ＭｅＯＨ）により精製して、４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（６．１３ｇ、９０％）を明黄色の固体として与えた。Ｃ１７Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３１４、実測値３１５（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９１】
５−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２３】
2016515592.tif 000035
上記と同様の方法を用いて、５−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、５−アミノ−７−アザインドール及び１−ＢＯＣ−３−ピペリドンから調製した。Ｃ１７Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３１４、実測値３１５（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９２】
４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２４】
2016515592.tif 000036
混合溶媒ＭｅＯＨ：ＥｔＯＡｃ（１：１）（２０mL）中の４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（２００mg、０．６３６mmol）、酸化パラジウム（６５mg、９３μmol）及び酢酸（０．１mL、１．７５mmol）の懸濁液を、水素１atm下、室温で１時間撹拌した。反応物をセライトパッドで濾過し、濾液を濃縮した。粗４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを得、次にさらに精製することなく次の工程において使用した。
【０１９３】
３−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシ−アゼチジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２５】
2016515592.tif 000037
５−アミノ−７−アザインドール（１．０ｇ、７．５１mmol）を、メタノール（３０mL）に溶解した。１−ＢＯＣ−３−アゼチジノン（１．５４ｇ、９．０１mmol）及び水酸化カリウム（０．５２ｇ、９．２９mmol）を加えた。反応混合物を７５℃で３日間加熱した。反応物を濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中５〜８％ ＭｅＯＨ）により精製して、３−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシ−アゼチジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（０．７９ｇ、３５％）を明黄色の固体として与えた。Ｃ１５Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）の計算値３０４、実測値３０５（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９４】
４−［５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２６】
2016515592.tif 000038
ＴＨＦ（５mL）中の４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（０．３５ｇ、１．１１mmol）及びトリエチルアミン（１６９mg、１．６７mmol）の混合物を、０℃に冷却した。ＴＨＦ（２mL）中の２−クロロベンジルクロロホルマート（２２８mg、１．１１mmol）の溶液を滴下した。反応混合物を室温まで温め、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次にＥｔＯＡｃに溶解し、そして水及びブラインで洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中０％〜５％ ＭｅＯＨ）により精製して、４−［５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（０．３５ｇ、６５％）をオフホワイトの固体として与えた。Ｃ２５Ｈ２７ＣｌＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４８３、実測値４８４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９５】
４−［５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２７】
2016515592.tif 000039
３−フルオロフェニル−メタノール（１ｇ、７．９３mmol）を、乾燥ＴＨＦ（２５mL）中のホスゲン（５．７mL、１０．３mmol、ＴＨＦ中２０％）の溶液に一度に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。粗物質、３−フルオロ−ベンジルクロロホルマートを得た。これをさらに後処理及び精製することなく次の工程において使用した。
【０１９６】
上記と同様の方法を用いて、４−［５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び３−フルオロベンジルクロロホルマートから調製した。Ｃ２５Ｈ２７ＦＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４６６、実測値４６７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９７】
４−［５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２８】
2016515592.tif 000040
上記と同様の方法を用いて、４−［５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル、３−シアノベンジルアルコール及びホスゲンから調製した。  Ｃ２６Ｈ２７Ｎ５Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４７３、実測値４７４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９８】
４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化２９】
2016515592.tif 000041
上記と同様の方法を用いて、４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。Ｃ２５Ｈ２８Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４４８、実測値４４９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９９】
５−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化３０】
2016515592.tif 000042
上記と同様の方法を用いて、５−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、５−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。Ｃ２５Ｈ２８Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４４８、実測値４４９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２００】
４−（５−イソプロポキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化３１】
2016515592.tif 000043
上記と同様の方法を用いて、４−（５−イソプロポキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸イソプロピルから調製した。Ｃ２１Ｈ３０Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４０２、実測値４０３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０１】
４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化３２】
2016515592.tif 000044
上記と同様の方法を用いて、４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、４−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。Ｃ２５Ｈ３０Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５０、実測値４５１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０２】
３−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製
【化３３】
2016515592.tif 000045
上記と同様の方法を用いて、３−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを、３−（５−アミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシ−アゼチジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。Ｃ２３Ｈ２６Ｎ４Ｏ５についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４３８、実測値４３９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０３】
実施例１
｛３−［３−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化３４】
2016515592.tif 000046
ジクロロメタン（３mL）中の３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（６０mg、０．１３mmol）、（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エン酸（３４mg、０．２６mmol）、１−プロパンホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ）（１１７μL、ＥｔＯＡｃ中５０％、０．２mmol）及びトリエチルアミン（３７μL、０．２６mmol）の混合物を、室温で３０分間撹拌した。
【０２０４】
反応混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中５〜１５％ ＭｅＯＨ）により精製して、５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−［３−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを白色の固体として与えた。
【０２０５】
次に、この白色の固体を、アセトニトリル／水（４：１）（３mL）に懸濁し、マイクロ波中で１５０℃で３０分間加熱して、ＢＯＣ保護基を除去した。反応混合物を冷却し、凍結乾燥して、｛３−［３−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを白色の粉末として与えた（３７mg、２工程の収率６０％）。Ｃ２７Ｈ２７Ｎ５Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４６９、実測値４７０（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０６】
実施例２
［３−（３−アクリロイルアミノ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化３５】
2016515592.tif 000047
上記と同様の方法を用いて、［３−（３−アクリロイルアミノ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ２４Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４１２、実測値４１３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０７】
実施例３
［３−（３−アクリロイルアミノ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化３６】
2016515592.tif 000048
上記と同様の方法を用いて、［３−（３−アクリロイルアミノ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸イソプロピルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ２０Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３６４、実測値３６５（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０８】
実施例４
｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化３７】
2016515592.tif 000049
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソブタン酸から調製した。Ｃ２５Ｈ２２Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４４２、実測値４４３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０９】
実施例５
｛３−［３−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化３８】
2016515592.tif 000050
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルを、３−ヨード−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エン酸 ［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミドから調製した。Ｃ２３Ｈ２７Ｎ５Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４２１、実測値４２２（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１０】
実施例６
｛３−［３−（アクリロイル−メチル−アミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化３９】
2016515592.tif 000051
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（アクリロイル−メチル−アミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルを、３−ヨード−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びＮ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アクリルアミドから調製した。Ｃ２１Ｈ２２Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３７８、実測値３７９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１１】
実施例７
（３−｛３−［（３−メトキシ−プロピオニル）−メチル−アミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化４０】
2016515592.tif 000052
上記と同様の方法を用いて、（３−｛３−［（３−メトキシ−プロピオニル）−メチル−アミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸イソプロピルエステルを、３−ヨード−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び３−メトキシ−Ｎ−メチル−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−プロピオンアミドから調製した。Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４１０、実測値４１１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１２】
実施例８
｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化４１】
2016515592.tif 000053
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソブタン酸から調製した。Ｃ２１Ｈ２２Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３９４、実測値３９５（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１３】
実施例９
｛３−［３−（２−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化４２】
2016515592.tif 000054
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−トリフルオロメチル−アクリル酸から調製した。Ｃ２５Ｈ１９Ｆ３Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４８０、実測値４８１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１４】
実施例１０
｛３−［３−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化４３】
2016515592.tif 000055
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び３，３−ジメチル−２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２７Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４７０、実測値４７１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１５】
実施例１１
｛３−［３−（３−メチル−２−オキソ−ペンタノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化４４】
2016515592.tif 000056
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（３−メチル−２−オキソ−ペンタノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び３−メチル−２−オキソ−ペンタン酸から調製した。Ｃ２７Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４７０、実測値４７１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１６】
実施例１２
｛３−［３−（４−メチル−２−オキソ−ペンタノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化４５】
2016515592.tif 000057
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（４−メチル−２−オキソ−ペンタノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び４−メチル−２−オキソ−ペンタン酸から調製した。Ｃ２７Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４７０、実測値４７１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１７】
実施例１３
｛３−［３−（２−オキソ−２−フェニル−アセチルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化４６】
2016515592.tif 000058
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−２−フェニル−アセチルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びオキソ−フェニル−酢酸から調製した。Ｃ２９Ｈ２２Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４９０、実測値４９１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１８】
実施例１４
｛３−［３−（２−オキソ−プロピオニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルの調製
【化４７】
2016515592.tif 000059
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−プロピオニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−プロピオン酸から調製した。Ｃ２４Ｈ１９ＣｌＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４６２、実測値４６３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１９】
実施例１５
｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルの調製
【化４８】
2016515592.tif 000060
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２５Ｈ２１ＣｌＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４７６、実測値４７７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２０】
実施例１６
｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルの調製
【化４９】
2016515592.tif 000061
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２５Ｈ２１ＦＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４６０、実測値４６１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２１】
実施例１７
｛３−［３−（２−オキソ−プロピオニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルの調製
【化５０】
2016515592.tif 000062
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−プロピオニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−プロピオン酸から調製した。Ｃ２４Ｈ１９ＦＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４４６、実測値４４７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２２】
実施例１８
｛３−［３−（２−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルの調製
【化５１】
2016515592.tif 000063
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−トリフルオロメチル−アクリル酸から調製した。Ｃ２５Ｈ１８Ｆ４Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４９８、実測値４９９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２３】
実施例１９
｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸  ３−シアノ−ベンジルエステルの調製
【化５２】
2016515592.tif 000064
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−ブチリルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２６Ｈ２１Ｎ５Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）値４６７、実測値４６８（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２４】
実施例２０
｛３−［３−（２−オキソ−プロピオニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルの調製
【化５３】
2016515592.tif 000065
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−オキソ−プロピオニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ピロロ［２，３ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−プロピオン酸から調製した。Ｃ２５Ｈ１９Ｎ５Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５３、実測値４５４（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２５】
実施例２１
（３−｛３−［（１−シアノ−シクロプロパンカルボニル）−アミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化５４】
2016515592.tif 000066
上記と同様の方法を用いて、（３−｛３−［（１−シアノ−シクロプロパンカルボニル）−アミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（３−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び１−シアノ−シクロプロパンカルボン酸から調製した。Ｃ２６Ｈ２１Ｎ５Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５１、実測値４５２（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２６】
実施例２２
｛３−［３−（２−シアノ−アセチルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化５５】
2016515592.tif 000067
上記と同様の方法を用いて、｛３−［３−（２−シアノ−アセチルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸イソプロピルエステルを、３−ヨード−５−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−シアノ−Ｎ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アセトアミドから調製した。Ｃ２０Ｈ１９Ｎ５Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３７７、実測値３７８（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２７】
実施例２３
｛３−［２−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化５６】
2016515592.tif 000068
上記と同様の方法を用いて、｛３−［２−（（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−ブタ−２−エノイルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（２−アミノ−フェニル）−５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エン酸から調製した。Ｃ２７Ｈ２７Ｎ５Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４６９、実測値４７０（Ｍ＋Ｈ）。
【０２２８】
実施例２４
｛３−［１−（２−オキソ−プロピオニル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸  ２−クロロ−ベンジルエステルの調製
【化５７】
2016515592.tif 000069
４−［５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（０．３３ｇ、０．６８mmol）を、ＤＣＭ（５mL）に溶解した。ＴＦＡ（１．５６ｇ、１３．７mmol、当量：２０）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応物を濃縮した。
【０２２９】
残留物を、酢酸エチルと飽和ＮａＨＣＯ３に分配した。２層間に形成された固体を集め、乾燥させて、［３−（１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステル（０．１８mg、６９％）を白色の固体として与えた。Ｃ２０Ｈ１９ＣｌＮ４Ｏ２についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３８２、実測値３８３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３０】
［３−（１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステル（３５mg、９１μmol）を、ＤＣＭ（２mL）に溶解した。トリエチルアミン（１８mg、２５μL、１８２μmol）、２−オキソプロパン酸（１０mg、１１０μmol）及びＴ３Ｐ（８７mg、８２μl、ＥｔＯＡｃ中５０％、１３７μmol）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。
【０２３１】
残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ中０〜８％ ＭｅＯＨ）により精製して、｛３−［１−（２−オキソ−プロピオニル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステル（２８mg、６８％）を明黄色の固体として与えた。
Ｃ２３Ｈ２１ＣｌＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５２、実測値４５３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３２】
実施例２５
｛３−［１−（２−オキソ−ブチリル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルの調製
【化５８】
2016515592.tif 000070
上記と同様の方法を用いて、｛３−［１−（２−オキソ−ブチリル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ２−クロロ−ベンジルエステルを、４−［５−（２−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２４Ｈ２３ＣｌＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４６６、実測値４６７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３３】
実施例２６
｛３−［１−（２−オキソ−ブチリル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸  ３−フルオロ−ベンジルエステルの調製
【化５９】
2016515592.tif 000071
上記と同様の方法を用いて、｛３−［１−（２−オキソ−ブチリル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルを、４−［５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２４Ｈ２３ＦＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４５０、実測値４５１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３４】
実施例２７
｛３−［１−（２−オキソ−ブチリル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化６０】
2016515592.tif 000072
上記と同様の方法を用いて、｛３−［１−（２−オキソ−ブチリル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸ベンジルエステルを、４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−酪酸から調製した。Ｃ２４Ｈ２４Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４３２、実測値４３３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３５】
実施例２８
｛３−［１−（２−オキソ−プロピオニル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸  ３−フルオロ−ベンジルエステルの調製
【化６１】
2016515592.tif 000073
上記と同様の方法を用いて、｛３−［１−（２−オキソ−プロピオニル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−フルオロ−ベンジルエステルを、４−［５−（３−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−プロパン酸から調製した。Ｃ２３Ｈ２１ＦＮ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４３６、実測値４３７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３６】
実施例２９
｛３−［１−（２−オキソ−プロピオニル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルの調製
【化６２】
2016515592.tif 000074
上記と同様の方法を用いて、｛３−［１−（２−オキソ−プロピオニル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−カルバミン酸 ３−シアノ−ベンジルエステルを、４−［５−（３−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及び２−オキソ−プロパン酸から調製した。Ｃ２４Ｈ２１Ｎ５Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４４３、実測値４４４（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３７】
実施例３０
［３−（１−アクリロイル−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化６３】
2016515592.tif 000075
上記と同様の方法を用いて、［３−（１−アクリロイル−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルを、４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ２３Ｈ２２Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４０２、実測値４０３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３８】
実施例３１
［３−（１−アクリロイル−ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化６４】
2016515592.tif 000076
上記と同様の方法を用いて、［３−（１−アクリロイル−ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルを、４−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ２３Ｈ２４Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４０４、実測値４０５（Ｍ＋Ｈ）。
【０２３９】
実施例３２
［３−（１−アクリロイル−ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
【化６５】
2016515592.tif 000077
上記と同様の方法を用いて、［３−（１−アクリロイル−ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸イソプロピルエステルを、４−（５−イソプロポキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ１９Ｈ２４Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３５６、実測値３５７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４０】
実施例３３
［３−（１−アクリロイル−１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化６６】
2016515592.tif 000078
上記と同様の方法を用いて、［３−（１−アクリロイル−１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルを、５−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ２３Ｈ２２Ｎ４Ｏ３についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）４０２、実測値４０３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４１】
実施例３４
［３−（１−アクリロイル−３−ヒドロキシ−アゼチジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
【化６７】
2016515592.tif 000079
上記と同様の方法を用いて、［３−（１−アクリロイル−３−ヒドロキシ−アゼチジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−カルバミン酸ベンジルエステルを、３−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。Ｃ２１Ｈ２０Ｎ４Ｏ４についてのＬＣＭＳ計算値（ｍ／ｅ）３９２、実測値３９３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４２】
生物学的実施例
ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴｋ）阻害アッセイ
このアッセイでは、濾過を通して放射性３３Ｐリン酸化生成物を捕捉する。ＢＴｋ、ビオチン化ＳＨ２ペプチド基質（Ｓｒｃ相同）、及びＡＴＰの相互作用により、ペプチド基質がリン酸化される。ビオチン化生成物を、ストレプトアビジンセファロースビーズに結合させる。すべての結合している放射標識生成物をシンチレーションカウンターで検出する。
【０２４３】
アッセイするプレートは、９６ウェルポリプロピレン（Greiner）及び９６ウェル１．２μm親水性ＰＶＤＦフィルタープレート（Millipore）である。本明細書に報告する濃度は、最終アッセイ濃度である：ＤＭＳＯ（Burdick and Jackson）中１０〜１００μM 化合物、５〜１０nM ＢＴｋ酵素（Ｈｉｓタグ付き、完全長）、３０μM ペプチド基質（ビオチン−Ａｃａ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ−ＮＨ２）、１００μM ＡＴＰ（Sigma）、８mMイミダゾール（Sigma、pH７．２）、８mM グリセロール−２−リン酸（Sigma）、２００μM ＥＧＴＡ（Roche Diagnostics）、１mM ＭｎＣｌ２（Sigma）、２０mM ＭｇＣｌ２（Sigma）、０．１mg/mL ＢＳＡ（Sigma）、２mM ＤＴＴ（Sigma)、1μCi ３３Ｐ ＡＴＰ（Amersham）、２０％ストレプトアビジンセファロースビーズ（Amersham）、５０mM ＥＤＴＡ（Gibco）、２M ＮａＣｌ（Gibco）、２M ＮａＣｌ w/１％リン酸（Gibco）、microscint−２０（Perkin Elmer）。
【０２４４】
ＩＣ５０の決定は、標準的な９６ウェルプレートアッセイテンプレートから得られたデータを利用して、１化合物当たり１０個のデータ点から計算する。１つの対照化合物及び７つの未知阻害剤を各プレートにおいて試験し、そして、各プレートで２回測定した。典型的に、化合物は、１００μMで始まり、そして、３nMで終わるように半対数（half-log）希釈を行った。対照化合物は、スタウロスポリンであった。バックグラウンドは、ペプチド基質の非存在下で計数した。総活性は、ペプチド基質の存在下で決定した。以下のプロトコールを用いて、ＢＴｋ阻害を決定した。
【０２４５】
サンプルの調製：試験化合物をアッセイバッファ（イミダゾール、グリセロール−２−リン酸、ＥＧＴＡ、ＭｎＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＢＳＡ）によって半対数増分で希釈した。
【０２４６】
ビーズの調製
１）  ５００ｇで遠心分離することによってビーズをすすぐ。
２）  該ビーズをＰＢＳ及びＥＤＴＡで再構成して２０％ビーズスラリーを生成する。
３）  ３０℃で１５分間、基質を含まない反応ミックス（アッセイバッファ、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ  ＡＴＰ）及び基質を含むミックス（アッセイバッファ、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ  ＡＴＰ、ペプチド基質）をプレインキュベートする。
４）  アッセイを開始するために、酵素バッファ（イミダゾール、グリセロール−２−リン酸、ＢＳＡ）中ＢＴｋ １０μL及び試験化合物 １０μLを室温で１０分間プレインキュベートする。
５）  基質を含まないか又は含む反応混合物 ３０μLをＢＴｋ及び化合物に添加する。
６）  全アッセイミックス ５０μLを３０℃で３０分間インキュベートする。
７）  アッセイ ４０μLをフィルタープレート中のビーズスラリー １５０μLに移して、反応を停止させる。
８）  ３０分後、以下の工程を用いてフィルタープレートを洗浄する
３×ＮａＣｌ ２５０μL
３×１％リン酸を含有するＮａＣｌ ２５０μL
１×Ｈ２Ｏ ２５０μL。
９）  ６５℃で１時間又は室温で一晩プレートを乾燥させる。
１０）  microscint−２０ ５０μLを添加し、そして、シンチレーションカウンターで３３Ｐ（cpm）を計数する。
生データ（cpm）から活性率（％）を計算する。
活性率＝（サンプル−ｂｋｇ）／（総活性−ｂｋｇ）×１００
１サイト用量反応シグモイドモデルを用いて、活性率からＩＣ５０を計算する。
ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）Ｄ））））
ｘ＝化合物の濃度、ｙ＝活性率（％）、Ａ＝最低、Ｂ＝最高、Ｃ＝ＩＣ５０、Ｄ＝１（ヒル勾配）
【０２４７】
ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害のＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイ
このＢＴＫ競合アッセイでは、ＦＲＥＴ（フェルスター／蛍光共鳴エネルギー転移）技術を用いて、ブルトンチロシンキナーゼの不活化状態についての化合物の効力（ＩＣ５０）を測定する。ＢＴＫ−Ｅｕ複合体を氷上で１時間インキュベートした後、５０nM BTK-Bioease（商標）：１０nM Ｅｕ−ストレプトアビジン（Perkin-Elmer  カタログ番号ＡＤ００６２）の開始濃度で用いた。アッセイバッファは、２０mM ＨＥＰＥＳ（pH７．１５）、０．１mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ２、３％キナーゼ安定剤（Fremont Biosolutions、カタログ番号ＳＴＢ−Ｋ０２）を含む０．５mg/mL ＢＳＡからなっていた。１時間後、上記で得られた反応混合物をアッセイバッファで１０倍希釈して、５nM ＢＴＫ：１nM Ｅｕ−ストレプトアビジン複合体（ドナーフルオロフォア）を作製した。次いで、０．１１nM ＢＴＫ−Ｅｕ及び０．１１nM キナーゼトレーサー１７８（Invitrogen、カタログ番号ＰＶ５５９３）の混合物 １８μLを、非ネガティブコントロールとしてのＢＴＫ−Ｅｕのみと共に、３８４ウェル平底プレート（Greiner、７８４０７６）に分配した。アッセイにおいて試験する化合物は、１０倍濃縮物として調製し、そして、１０点曲線を作成するために半対数増分でＤＭＳＯによって連続希釈した。ＦＲＥＴ反応を開始させるために、１０倍ＤＭＳＯ原液として調製した化合物をプレートに添加し、該プレートを１４℃で１８〜２４時間インキュベートした。
【０２４８】
インキュベートした後、プレートをBMG Pherastar蛍光プレートリーダー（又は等価物）で読み取り、そして、ユウロピウムドナーフルオロフォア（６２０nm 発光）及びＦＲＥＴ（６６５nm 発光）からの発光エネルギーを測定するために用いた。ネガティブコントロールのウェルの値を平均して平均最低を得た。「阻害剤を含まない」ポジティブコントロールのウェルを平均して、平均最高を得た。最高ＦＲＥＴ率（％）を以下の等式を用いて計算した：
最高ＦＲＥＴ（％）＝１００×［（ＦＳＲ化合物−ＦＳＲ平均最低）／（ＦＳＲ平均最高−ＦＳＲ平均最低）］
（式中、ＦＳＲ＝ＦＲＥＴシグナル比）。最高ＦＲＥＴ（％）曲線をActivity Base（Excel）にプロットし、そして、ＩＣ５０（％）、ヒル勾配、ｚ’、及びＣＶ（％）を決定した。Microsoft Excelを用いて二連曲線（２つの独立な希釈液から得た１本の阻害曲線）から平均ＩＣ５０及び標準偏差を得る。
【０２４９】
このアッセイについての代表的な化合物のデータを以下の表ＩＩに列挙する。
【表３】
2016515592.tif 000080
【０２５０】
ＣＤ６９の発現によって測定した全血におけるＢ細胞活性化の阻害
ヒト血液におけるＢ細胞のＢ細胞受容体媒介活性化を抑制するＢＴｋ阻害剤の能力を試験するための手順は、以下の通りである。
【０２５１】
２４時間薬物を服用していない非喫煙者という制限条件で、健常ボランティアからヒト全血（ＨＷＢ）を得る。ナトリウムヘパリンで抗凝固処理したVacutainerチューブに静脈穿刺によって血液を収集する。試験化合物を、ＰＢＳ（２０×）で所望の出発薬物濃度に１０倍希釈し、次いで、ＰＢＳ中１０％ ＤＭＳＯで３倍連続希釈して、９点用量反応曲線を作成する。各化合物希釈液 ５．５μLを９６ウェルＶ底プレート（Analytical Sales and Services、＃５９６２３−２３）２mLに二連で添加し；ＰＢＳ中１０％ ＤＭＳＯ ５．５μLを対照及び非刺激ウェルに添加する。ＨＷＢ（１００μL）を各ウェルに添加し、そして、混合した後、プレートを５％ ＣＯ２、湿度１００％、３７℃で３０分間インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Southern Biotech、＃２０２２−１４）（５００μg/mL溶液 １０μL、最終濃度５０μg/mL）を混合しながら各ウェル（非刺激ウェルを除く）に添加し、そして、プレートを更に２０時間インキュベートする。
【０２５２】
２０時間のインキュベートの最後に、５％ ＣＯ２、湿度１００％、３７℃で３０分間、蛍光プローブ標識抗体（ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０ １５μL、BD Pharmingen、＃５５５６２３及び／又はＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９ ２０μL、BD Pharmingen、＃５５５５３３）と共にサンプルをインキュベートする。補償調整及び初期電圧設定のために、誘導された対照、未染色、及び単回染色を含める。次いで、１×Pharmingen Lyse Buffer（BD Pharmingen  ＃５５５８９９）１mLでサンプルを溶解させ、そして、プレートを１８００rpmで５分間遠心分離する。吸引を介して上清を除去し、そして、残りのペレットを別の１×Pharmingen Lyse Buffer １mLで再度溶解させ、そして、プレートを上記の通りスピンダウンする。上清を吸引し、そして、残りのペレットをＦＡＣｓバッファ（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）で洗浄する。最後のスピンの後、上清を除去し、そして、ペレットをＦＡＣｓバッファ １８０μLに再懸濁させる。BD LSR IIフローサイトメーターにおけるHTS９６ウェルシステムで測定するのに好適な９６ウェルプレートにサンプルを移す。
【０２５３】
用いるフルオロフォアに適切な励起及び発光波長を用いて、データを取得し、そして、Cell Questソフトウェアを用いて陽性細胞率の値を得る。結果は、まず、FACS解析ソフトウェア（Flow Jo）によって解析する。試験化合物のＩＣ５０は、抗ＩｇＭによる刺激後にＣＤ２０陽性でもあるＣＤ６９陽性細胞の割合が５０％低下する濃度として定義される（非刺激バックグラウンドの８つのウェルの平均を減じた後の８つの対照ウェルの平均）。ＩＣ５０値は、XLfitソフトウェア、バージョン３、式２０１を用いて計算する。
【０２５４】
Ｂ細胞活性化の阻害−Ramos細胞におけるＢ細胞FLIPRアッセイ
本発明の化合物によるＢ細胞活性化の阻害を、抗ＩｇＭで刺激されたＢ細胞の応答に対する試験化合物の効果を決定することによって示す。
【０２５５】
Ｂ細胞ＦＬＩＰＲアッセイは、抗ＩｇＭ抗体による刺激から細胞内のカルシウム増加の潜在的阻害剤の効果を決定する、細胞に基づく機能的方法である。Ramos細胞（ヒトバーキットリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）を成長培地（下記）で培養した。アッセイの１日前、Ramos細胞を新鮮成長培地（上記と同じ）に再懸濁させ、そして、組織培養フラスコ内において０．５×１０６/mLの濃度に設定した。アッセイ当日、細胞を計数し、そして、組織培養フラスコ内においてFLUO-3AM（TefLabsカタログ番号０１１６、無水ＤＭＳＯ及び１０％プルロニック酸中で調製）１μMを添加した成長培地中１×１０６/mLの濃度に設定し、そして、３７℃（４％ＣＯ２）で１時間インキュベートする。細胞外色素を除去するため、遠心分離（５分間、１０００rpm）によって細胞を回収し、１×１０６細胞/mLでＦＬＩＰＲバッファ（下記）に再懸濁させ、次いで、１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンでコーティングされた黒色／透明プレート（ＢＤカタログ番号３５６６９２）に分配する。試験化合物を、１００μM〜０．０３μMの様々な濃度（７濃度、詳細は後述）で添加し、そして、室温で３０分間細胞と共にインキュベートする。１０μg/mL 抗ＩｇＭ（Southern Biotech、カタログ番号２０２０−０１）を添加することによってRamos細胞のＣａ２＋シグナル伝達を刺激し、そして、FLIPR（Molecular Devices、４８０nM励起のアルゴンレーザーを備えるＣＣＤカメラを用いて９６ウェルプレートの画像を捕捉）で測定する。
【０２５６】
培地／バッファ：
成長培地：Ｌ−グルタミン（Invitrogen、カタログ番号６１８７０−０１０）、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ、Summit Biotechnology、カタログ番号ＦＰ−１００−０５）；１mM ピルビン酸ナトリウム（Invitrogen、カタログ番号１１３６０−０７０）を含むＲＰＭＩ１６４０培地。
【０２５７】
FLIPRバッファ：ＨＢＳＳ（Invitrogen、カタログ番号１４１１７５−０７９）、２mM ＣａＣｌ２（Sigma、カタログ番号Ｃ−４９０１）、ＨＥＰＥＳ（Invitrogen、カタログ番号１５６３０−０８０）、２．５mM プロベネシド（Sigma、カタログ番号Ｐ−８７６１）、０．１％ ＢＳＡ（Sigma、カタログ番号Ａ−７９０６）、１１mM グルコース（Sigma、カタログ番号Ｇ−７５２８）。
【０２５８】
化合物の希釈の詳細：
１００μLの最高最終アッセイ濃度を達成するために、１０mM 化合物原液（ＤＭＳＯで作製）２４μLをFLIPRバッファ ５７６μLに直接添加する。（Biomek2000ロボットピペッターを用いて）試験化合物をFLIPRバッファで希釈し、以下の希釈スキームを得る：ビヒクル、１．００×１０−４M、１．００×１０−５、３．１６×１０−６、１．００×１０−６、３．１６×１０−７、１．００×１０−７、３．１６×１０−８。
【０２５９】
アッセイ及び分析：
カルシウムの細胞内増加は、最高−最低統計値（Molecular DevicesのFLIPRコントロール及び統計値エクスポートソフトウェアを用いて刺激性抗体の添加によって引き起こされるピークから静止ベースラインを減じる）を用いて報告した。非線形曲線当てはめ（GraphPad Prismソフトウェア）を用いてＩＣ５０を決定した。
【０２６０】
マウスコラーゲン誘発関節炎（ｍＣＩＡ）
０日目に、完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）中ＩＩ型コラーゲンのエマルションをマウスの尾の付け根又は背中の数ヶ所に注射する（i.d.）。コラーゲン免疫後、動物は、約２１〜３５日で関節炎を発現する。関節炎の発症は、２１日目に不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ；i.d.）中コラーゲンを全身投与することによって同期（追加免疫）される。追加免疫に対するシグナルである軽度の関節炎（スコア１又は２；以下のスコアの説明を参照）の任意の発症について、２０日後から毎日動物を検査する。追加免疫後、マウスにスコアをつけ、規定の期間（典型的に、２〜３週間）及び投与頻度（１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で候補治療剤を投与する。
【０２６１】
ラットコラーゲン誘発関節炎（ｒＣＩＡ）
０日目に、不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）中ウシＩＩ型コラーゲンのエマルションをラットの背中の数ヶ所に皮内（i.d.）注射する。約７日目、尾の付け根又は背中の別の部位にコラーゲンエマルションの追加免疫注射（i.d.）を行う。関節炎は、一般的に、最初のコラーゲン注射の１２〜１４日後に観察される。１４日目以降、下記（関節炎の評価）の通り関節炎の発現について動物を評価してよい。２回目の抗原曝露時から始めて、規定の期間（典型的に、２〜３週間）及び投与頻度（１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で、動物に候補治療剤を予防的に投与する。
【０２６２】
関節炎の評価：
両モデルにおいて、下記基準にしたがって４本の足を評価することを含む採点システムを用いて、足及び肢関節の炎症発現を定量する。
【０２６３】
採点：  １＝足又は１本の指の腫脹及び／又は発赤
２＝２つ以上の関節における腫脹
３＝２つ超の関節を含む、肉眼で見える足の腫脹
４＝足及び指全体の重篤な関節炎
【０２６４】
ベースライン測定については０日目に評価を行い、最初の徴候又は腫脹から再度始めて、実験の最後まで１週間に３回以下行う。個々の足の４つのスコアを足すことによって各マウスの関節炎指数を得、動物１匹当たり最高１６のスコアを与える。
【０２６５】
ラットインビボ喘息モデル
雄のBrown-Norwayラットを、ミョウバン ０．２mL中ＯＡ（オボアルブミン） １００μgで３週間にわたって週１回（０、７、及び１４日目）i.p.感作する。２１日目（最後の感作の１週間後）に、ＯＡエアゾールで抗原曝露（１％ＯＡで４５分間）する０．５時間前に、ラットにビヒクル又は化合物調合剤のいずれかを１日１回皮下投与し、そして、抗原曝露の４又は２４時間後に終了する。殺処分時に、それぞれ血清検査及びＰＫのためにすべての動物から血清及び血漿を回収する。気管カニューレを挿入し、そして、肺をＰＢＳで３回洗浄する。ＢＡＬ液を全白血球数及び白血球分画について分析する。細胞のアリコート（２０〜１００μL）中の全白血球数は、Coulter Counterで測定する。白血球分画については、サンプル ５０〜２００μLをCytospinで遠心分離し、そして、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を用いて光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球、及びリンパ球の比率を計数し、そして、百分率として表す。ＢＴｋの代表的な阻害剤は、対照レベルと比較して、ＯＡ感作及び抗原曝露したラットのＢＡＬにおいて全白血球数の減少を示す。
【０２６６】
前述の発明は、明確性及び理解のために、説明及び実施例を通して詳細に記載した。添付の特許請求の範囲の範囲内で変更及び修正を行い得ることが当業者には明らかである。したがって、上記記載は、例示を意図するものであって、限定を意図するものではないことが理解される。したがって、本発明の範囲は、上記記載を参照して決定されるべきではなく、特許請求の範囲が権利を与える等価物の全範囲と共に、以下の添付の特許請求の範囲を参照して決定されるべきである。
【０２６７】
本願に引用するすべての特許、特許出願、及び刊行物は、各個々の特許、特許出願、又は刊行物が個々に表されているのと同程度に、すべての目的のために参照により全文が本明細書に組み入れられる。
【国際調査報告】
2016515592.tif 000085
2016515592.tif 000086
2016515592.tif 000087