(57)【要約】本発明は、一般式（Ｉ）（式中、Ｒは、水素又はトリチウムであり；Ｆは、フルオロ又は１８フルオロである）で表される化合物又は薬学的に許容し得る酸付加塩に関する。式Ｉの化合物は、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール、３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール及び［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールを含む。本化合物は、タウ凝集体及び関係のあるβ−シート凝集体（さらに他のβ−アミロイド凝集体又はα−シヌクレイン凝集体を含む）の結合及びイメージングのために使用され得る。
2016534979.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化２０】
2016534979.tif 000023
［式中、
Ｒは、水素又はトリチウムであり；
Ｆは、フルオロ又は１８フルオロである］
で表される化合物又は薬学的に許容し得る酸付加塩。
【請求項２】
以下：
２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール、及び
［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
である、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか一項に定義したような式Ｉの化合物の製造プロセスであって、以下：
ａ）式２（Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ）：
【化２１】
2016534979.tif 000024
で表される化合物を、式３：
【化２２】
2016534979.tif 000025
［式中、Ｒ’は、水素又は低級アルキルである］
で表される好適なボロン酸又はボロン酸エステルとカップリングさせて、式Ｉ：
【化２３】
2016534979.tif 000026
［式中、Ｒは、水素である］
で表される化合物を与えること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩又は式Ｉ（式中、Ｒは、トリチウムである）の化合物に変換すること；
又は
ｂ）式４：
【化２４】
2016534979.tif 000027
で表される化合物を、フッ化カリウム又はフッ化テトラブチルアンモニウムから選択される好適なフッ素化試薬とカップリングさせて、式Ｉ：
【化２５】
2016534979.tif 000028
［式中、置換基Ｒは、水素である］
で表される化合物を与えること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩又は式Ｉ（式中、Ｒは、トリチウムである）の化合物に変換すること
ｃ）式Ｉ：
【化２６】
2016534979.tif 000029
［式中、Ｒは、水素である］
で表される化合物を、イリジウム、ルテニウム、ロジウム又はパラジウム触媒の存在下、ジクロロメタン、クロロベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はそれらの混合物から選択される好適な溶媒中でトリチウムガスと反応させて、式Ｉ：
【化２７】
2016534979.tif 000030
［式中、Ｒは、トリチウムである］
で表される化合物を与えること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩に変換すること、又は
ｄ）水性［１８］フッ化物イオンの照射終了前に、式１０：
【化２８】
2016534979.tif 000031
で表される化合物をジメチルスルホキシドに溶解し、超音波処理して、式：
【化２９】
2016534979.tif 000032
で表される化合物にすること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩に変換すること
を含むプロセス。
【請求項４】
タウ凝集体、β−アミロイド凝集体又はα−シヌクレイン凝集体の結合及びイメージングにおける使用のための、請求項１又は２のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
アルツハイマー病患者におけるタウ凝集体の結合及びイメージングにおける使用のための、請求項１又は２のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項６】
タウ結合研究における使用のための、請求項１又は２のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項７】
哺乳動物の脳におけるタウ凝集体の画像診断における使用のための、請求項１又は２のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項８】
請求項１又は２のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬製剤。
【請求項９】
タウ凝集体沈着物をイメージングする方法であって、以下：
−  哺乳動物に検出可能な量の請求項８に記載の調製物を導入すること；
−  式Ｉの化合物がタウ凝集体沈着物と会合するのに十分な時間をおくこと、及び
−  １つ以上のタウ凝集体沈着物と会合した化合物を検出すること
を含む方法。
【請求項１０】
哺乳動物の脳におけるタウ凝集体沈着物の画像診断のための、請求項１又は２のいずれか一項に定義したような化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式：
【化１】
2016534979.tif 000003
［式中、
Ｒは、水素又はトリチウムであり；そして
Ｆは、フルオロ又は１８フルオロである］
で表される化合物又は薬学的に許容し得る酸付加塩に関する。
【０００２】
式Ｉの化合物は、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール、３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール及び［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールを含む。
【０００３】
類似の一般基本構造を持つ化合物が、アルツハイマー病を診断するためのアミロイド沈着物のインビボイメージングのために、ＷＯ２００９／１０２４９８に記載されている。３つのＮ原子を持つ三環式化合物は具体的に記載されていない。
【０００４】
本化合物が、タウ凝集体及び関係のあるβ−シート凝集体（さらに他のβ−アミロイド凝集体又はα−シヌクレイン凝集体を含む）の結合及びイメージングのために、とりわけアルツハイマー病患者におけるタウ凝集体の結合及びイメージングにおける使用のために使用され得ることが示された。
【０００５】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知機能低下、不可逆的な記憶消失、見当識障害及び言語障害によって特徴付けられる進行性の神経変性障害である（Arch. Neurol. 1985, 42(11), 1097-1105）。ＡＤの脳切片の検視は、β−アミロイド（Ａβ）ペプチドからなる大量の老人斑（ＳＰ）及び過剰リン酸化されたタウタンパク質のフィラメントによって形成された多数の神経原線維変化（ＮＦＴ）を明らかにしている。
【０００６】
タウは、微小管関連タンパク質のファミリーに属しており、主にニューロンで発現して、そこで軸索輸送のためのトラックとしてのニューロン微小管ネットワークを構成するための、チューブリン単量体から微小管への構築において重要な役割を担っている（Brain Res. Rev. 2000, 33(1), 95-130）。タウは、第１７染色体上に位置する単一遺伝子から翻訳され、その発現は、ヒト成人脳において６種の異なるアイソフォーム（結合ドメインの数によって区別され得る）を生成する、選択的スプライシング機構によって発生的に調節されている。タウの過剰リン酸化、ミスフォールディング及び凝集を導く基本的な機構は、十分に理解されていないが、タウ凝集体の沈着は、細胞内レベルと脳トポグラフィーのレベルの両方で定型の時空間的経路に従う。
【０００７】
第１７染色体に関係しているパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を導くタウ遺伝子の突然変異の最近の発見は、神経変性障害の病因におけるタウに起因する主要な役割を補強し、異なるニューロン集団において発現される別々のセットのタウアイソフォームが異なる病理を導き得るという事実を明確に示した（Biochim. Biophys. Acta 2005, 1739(2) 240-250）。病的なタウの蓄積によって特徴付けられる神経変性疾患は、「タウオパチー」と呼ばれる（Ann. Rev. Neurosci. 2001, 24, 1121-1159）。ＡＤ及びＦＴＤに加えて、他のタウオパチーは、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、タングル優位型認知症（tangle-predominant dementia）、ピック病、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ダウン症候群などを含む。
【０００８】
新皮質領域の進行性の関与と認知症の重症度の増加との間の直接的相関が確立され、このことは、ＮＦＴなどの病的なタウ凝集体が神経変性プロセスの信頼できる指標であることを示唆している。ＡＤにおけるＮＦＴの関与の程度は、ブラークステージ（Braak stage）によって定義される（Acta Neuropathol. 1991, 82, 239-259）。ＮＦＴの関与が主に脳の内側嗅領域（transentorhinal region）に限定される場合にはブラークステージＩ及びＩＩと定義され、海馬などの辺縁領域が関与する場合にはステージＩＩＩ及びＩＶと診断され、そして、広範囲に及ぶ新皮質関与が認められる場合にはステージＶ及びＶＩと診断される。
【０００９】
現在、タウ凝集体の検出は、生検又は剖検材料の組織学的分析によってのみ可能である。タウ病理のインビボイメージングは、ヒト脳におけるタウ凝集体の沈着への新たな見識を提供するであろうし、そして、タウ病理の程度を非侵襲的に検査すること、タウ沈着の経時変化を定量化すること、認知とのその相関を評価すること、かつ抗タウ療法の有効性を分析することが可能となるであろう。生体脳中のタウ凝集体を検出するための潜在的なリガンドは、血液脳関門を通過し、かつタウ凝集体に対して高い親和性及び特異性を有しなければならない。この目的のために、優れたニューロイメージング放射性トレーサーは、適切な親油性（logD １〜３）及び低分子量（＜４５０）を有し、血液からの速やかなクリアランス及び低い非特異的結合を示さなければならない。
【００１０】
本出願の目的は、アルツハイマー病を発症する可能性のあり得る脳内に過剰のタウ凝集体を有する潜在患者を同定することによって診断法を改善するであろう、イメージングツールを見いだすことである。それはまた、疾患の進行をモニタリングすることにも有用であろう。抗タウ凝集体薬が利用可能になれば、脳内のタウタングルのイメージングは、治療をモリタリングするための重要なツールを提供し得る。
【００１１】
本発明のさらなる目的は、タウ凝集体沈着物をイメージングする方法であって、
−  哺乳動物に検出可能な量の組成物を導入すること
−  式Ｉの化合物がタウ凝集体沈着物と会合するのに十分な時間をおくこと、及び
−  １つ以上のタウ凝集体沈着物と会合した化合物を検出すること
を含む方法である。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、潜在患者を同定するために使用され得る、式Ｉの化合物と薬学的に許容し得る担体とを含有する医薬組成物である。
【００１３】
本明細書において使用される一般用語の以下の定義は、問題となっている用語が単独で現れるか又は組み合わせで現れるかにかかわらず適用される。
【００１４】
本明細書において使用される場合、用語「低級アルキル」は、１〜７個の炭素原子を有する直鎖又は分岐の炭素鎖を含む、飽和の、すなわち、脂肪族の炭化水素基を示す。「アルキル」の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル及びイソプロピルである。
【００１５】
３Ｈは、トリチウム原子を示す。
【００１６】
Ｆは、フルオロ原子又は１８フルオロ原子を示す。
【００１７】
用語「脱離基」は、ハロゲン又はスルホナートを示す。スルホナートの例は、トシラート、メシラート、トリフラート、ノシラート又はブロシラートである。
【００１８】
用語「薬学的に許容し得る塩」又は「薬学的に許容し得る酸付加塩」は、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタン−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの無機酸及び有機酸との塩を包含する。
【００１９】
式Ｉの化合物が、タウ凝集体及び関係のあるβ−シート凝集体（さらに他のβ−アミロイド凝集体又はα−シヌクレイン凝集体を含む）の結合及びイメージングのために使用され得ることが見いだされた。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図Ａ】図Ａは、ブラークステージＶのＡＤ患者から得られたヒト大脳皮質切片とインキュベートした３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールのオートラジオグラム。放射性リガンド濃度は、３．２nMであった。放射性リガンドは、層状に分散したパターンのタウ凝集体の点状染色である。
【図Ｂ】図Ｂは、図Ｂである。
【００２１】
本発明の１つの実施態様は、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール、３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール及び［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールである、式Ｉの化合物である。
【００２２】
本発明の１つの実施態様は、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールである、Ｒが水素であるさらなる式Ｉの化合物である。
【００２３】
本発明の１つの実施態様は、Ｒがトリチウムであるさらなる式Ｉの化合物、例えば、以下の化合物３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールである。
【００２４】
本発明の１つの実施態様は、Ｆが１８フルオロであるさらなる式Ｉの化合物、例えば［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールである。
【００２５】
式Ｉ中のＲの位置付けは、Ｒがトリチウムである場合が、最も有力である。しかし、トリチウムはまた、分子の他の位置にも少量見いだされ得る。通常、Ｒの１つだけがトリチウムである。
【００２６】
式Ｉの化合物は、タウ凝集体、β−アミロイド凝集体、α−シヌクレイン凝集体又はハンチンチン凝集体の結合及びイメージングにおいて使用され得る。
【００２７】
式Ｉの化合物の好ましい使用は、アルツハイマー病患者におけるタウ凝集体の結合及びイメージングにおける使用である。
【００２８】
さらに、式Ｉの化合物は、タウ結合研究において使用され得る。
【００２９】
式Ｉの化合物は、哺乳動物の脳におけるタウ凝集体の画像診断に好適である。
【００３０】
本発明はまた、哺乳動物の脳におけるタウ凝集体沈着物の画像診断に使用される。
【００３１】
式Ｉ：
【化２】
2016534979.tif 000004
で表される本化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、以下に記載するプロセスによって調製され得、本プロセスは、以下を含む：
ａ）式２（Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ）：
【化３】
2016534979.tif 000005
で表される化合物を、式３：
【化４】
2016534979.tif 000006
［式中、Ｒ’は、水素又は低級アルキルである］
で表される好適なボロン酸又はボロン酸エステルとカップリングさせて、式Ｉ：
【化５】
2016534979.tif 000007
［式中、Ｒは、水素である］
で表される化合物を与えること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩又は式Ｉ（式中、Ｒは、トリチウムである）の化合物に変換すること；
又は
ｂ）式４：
【化６】
2016534979.tif 000008
で表される化合物を、フッ化カリウム又はフッ化テトラブチルアンモニウムから選択される好適なフッ素化試薬とカップリングさせて、式Ｉ：
【化７】
2016534979.tif 000009
［式中、置換基Ｒは、水素である］
で表される化合物を与えること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩又は式Ｉ（式中、Ｒは、トリチウムである）の化合物に変換すること
ｃ）式Ｉ：
【化８】
2016534979.tif 000010
［式中、Ｒは、水素である］
で表される化合物を、触媒、例えばイリジウム、ルテニウム、ロジウム又はパラジウム含有錯体の存在下、好適な溶媒、例えばジクロロメタン、クロロベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はそれらの混合物中でトリチウムガスと反応させて、式Ｉ：
【化９】
2016534979.tif 000011
［式中、Ｒは、トリチウムである］
で表される化合物を与えること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩に変換すること、又は
ｄ）水性［１８］フッ化物イオンの照射終了前に、式：
【化１０】
2016534979.tif 000012
で表される化合物をジメチルスルホキシドに溶解し、超音波処理して、式：
【化１１】
2016534979.tif 000013
で表される化合物にすること、そして所望であれば、得られた化合物を薬学的に許容し得る酸付加塩に変換すること。
【００３２】
以下のスキーム１〜２は、式Ｉの化合物の調製のためのプロセスをより詳細に記載する。出発物質は、公知の化合物であるか、又は当技術分野において公知の方法に従って調製され得る。
【００３３】
本発明の式Ｉの化合物の調製は、逐次又は収束合成経路で実施され得る。本反応及び生じた生成物の精製を実施するのに必要な技能は、当業者に公知である。以下のプロセスの説明において使用される置換基及び指数は、特に反対の記載のない限り、先に本明細書に示した意味を有する。
【００３４】
詳細に述べると、式Ｉの化合物は、以下に示す方法によって、実施例に示す方法によって、又は同様の方法によって製造され得る。個別の反応工程における適切な反応条件は、当業者に公知である。反応シーケンスは、スキーム１〜２に表示したものに限定されず、出発物質及びそれらのそれぞれの反応性に依存して、反応工程のシーケンスは、自由に変更され得る。出発物質は、市販のものであるか、あるいは以下に示す方法と同様の方法によって、本記載若しくは実施例で引用した参考文献に記載されている方法によって、又は当技術分野において公知の方法によって調製され得るかのいずれかである。
【００３５】
【化１２】
2016534979.tif 000014
【００３６】
スキーム１に従って、式Ｉ（式中、Ｒは、水素である）の化合物は、保護４−アミノ−ピリジン５（Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ）及び２，６−ジ−ハロゲン化ピリジンボロン酸６（Ｒ’＝Ｈ、低級アルキル）から開始して調製され得る。ＤＭＦのような好適な溶媒中、例えばＰｄ（ＯＡｃ）２及びＰＰｈ３のような触媒系並びに例えばトリエチルアミンのような塩基を使用した遷移金属触媒クロスカップリング条件は、ビピリジン７を生じる。脱保護及び分子内環化は、ＤＭＦのような好適な溶媒中、例えば炭酸カリウムのような塩基及び例えば１８−クラウン−６のような活性化剤を使用したワンポット手順として実施され得、１，６−ジアザカルバゾール中間体２を与える。式Ｉの化合物への最後の変換は、ＤＭＦのような好適な溶媒中、適切なピリジンボロン酸３、例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２のような触媒及び例えば炭酸カリウムのような塩基を使用した直接的な遷移金属触媒クロスカップリング反応によって達成され得る。あるいは、最初に１，６−ジアザカルバゾール２を、例えばＤＭＦのような好適な溶媒中で、好適な試薬、例えば二炭酸ジ−tert−ブチルと反応させることによって保護中間体８に変換し、続いて、ＤＭＦのような溶媒中、適切なピリジンボロン酸３、例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２のような触媒及び例えば炭酸カリウムのような塩基を使用した遷移金属触媒クロスカップリング反応によって中間体９にする。次いで、脱保護は、式Ｉの化合物へと導く。
【００３７】
【化１３】
2016534979.tif 000015
【００３８】
スキーム２に従って、式Ｉ（式中、Ｒは、水素である）の化合物は、式４（Ｘ＝Ｂｒ、Ｃｌ、ニトロ）の化合物（スキーム１に記載した式Ｉの化合物の合成に従って調製した）を、例えばＤＭＦ又はＤＭＳＯのような好適な溶媒中、例えばフッ化カリウム又はフッ化テトラブチルアンモニウムのような好適なフッ素化試薬で処理することによって調製され得る。
【００３９】
式Ｉ（式中、Ｒはトリチウムであり、又はＦは１８Ｆである）：
【化１４】
2016534979.tif 000016
で表される化合物は、特定の実施例に記載するように従来の方法で調製され得る。式Ｉの化合物は、トリチウムと１８Ｆを同時に含有しない。
【００４０】
化合物の単離及び精製
本明細書に記載される化合物及び中間体の単離及び精製は、所望であれば、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、厚層クロマトグラフィー、分取低圧若しくは高圧液体クロマトグラフィー又はこれらの手順の組み合わせなどの任意の好適な分離又は精製手順によって実施され得る。好適な分離及び単離手順の具体的例示については、本明細書の以下の調製及び実施例を参照することによって得られ得る。しかし、当然ながら、他の等価な分離又は単離手順も使用され得る。式Ｉのキラル化合物のラセミ混合物は、キラルＨＰＬＣを使用して分離され得る。
【００４１】
式Ｉの化合物の塩
式Ｉの化合物は、塩基性であり、対応する酸付加塩に変換され得る。この変換は、少なくとも化学量論量の適切な酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、及び有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など）で処理することによって達成される。典型的には、遊離塩基を、ジエチルエーテル、酢酸エチル、クロロホルム、エタノール又はメタノールなどの不活性有機溶媒に溶解し、類似の溶媒中の酸を加える。温度は、０℃〜５０℃で維持される。得られた塩は、自然に沈殿するか、又はより極性の小さい溶媒の添加によって沈殿し得る。
【００４２】
式Ｉの塩基性化合物の酸付加塩は、少なくとも化学量論当量の好適な塩基（例えば、水酸化ナトリウム又はカリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニアなど）で処理することによって、対応する遊離塩基に変換され得る。
【００４３】
本化合物を、本明細書の以下に示す試験に従って調べた。
【００４４】
タウ放射性リガンド−インビトロ置換アッセイ
このインビトロ結合アッセイは、天然のタウ凝集体に対する化合物の親和性を評価する。本化合物を、十分に確立されているタウ特異的放射性リガンド［３Ｈ］Ｔ８０８と共インキュベートし、ヒトアルツハイマー病（ＡＤ）脳切片を使用したインビトロオートラジオグラフィーによって化合物の［３Ｈ］Ｔ８０８結合の置換効力を決定する（図Ｂを参照のこと）。
【００４５】
材料
ＡＤヒト脳は、Banner Sun Health Research Institute（Sun City, AZ, USA）から購入する。ＡＤの病理診断は、神経病理学データに基づいた標準的なNIA-Reagan Institute基準に従ってなされる。放射性リガンド［３Ｈ］Ｔ８０８は、社内で合成された（［３Ｈ］−２−［４−（２−フルオロ−エチル）−ピペリジン−１−イル］−ベンゾ［４，５］イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン、放射化学的純度９９．０％）。参照として、非放射性Ｔ８０８（２−［４−（２−フルオロ−エチル）−ピペリジン−１−イル］−ベンゾ［４，５］イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン）が使用される。オートラジオグラフィーのために、FujiFilm Imaging Plates（BAS-IP TR 2025）を切片に曝露させて、FujiFilm IP reader（BAS-5000）で読み取る。
【００４６】
方法
クライオスタット（Leica CM3050）にて、−１７℃のチャンバー温度及び−１５℃の対象物温度で１０μm厚のヒトＡＤ脳切片を作製する。切片をHistobond＋顕微鏡スライド（Marienfeld Laboratory Glasware）に移す。室温で３時間乾燥させた後、切片を−２０℃で保存する。切片を放射性リガンド（１０nM）及びそれぞれの非放射性化合物（様々な濃度で）と５０mMトリス緩衝液（ｐＨ７．４）中、室温で３０分間インキュベートする。５０mMトリス緩衝液（ｐＨ７．４）中４℃で３×１０分間洗浄し、蒸留Ｈ２Ｏ中４℃で３回素早く浸漬させた後、切片を４℃で３時間乾燥させる。切片をFujiFilm Cassette（BAS 2025）中に入れ、Imaging Plateで５日間曝露させ、その後、１画素あたり２５μMの解像度で走査する。
【００４７】
データ解析
オートラジオグラムの関心領域（ＲＯＩ）中のシグナル強度（Ｄｅｎｓ−ＰＳＬ／ｍｍ２）を、ソフトウェアＭＣＩＤ解析（version 7.0, Imaging Research Inc.）で定量化する。白質中の非特異的結合シグナルを減算することによって、化合物の非存在下又は存在下での［３Ｈ］Ｔ８０８結合の特異的結合（ＳＢ）を計算し、それによってＳＢ［３Ｈ］Ｔ８０８ ｏｎｌｙ及びＳＢｃｏｍｐｕｎｄを得る。様々な化合物による置換％を以下のように計算する：
置換％＝１００−（ＳＢｃｏｍｐｕｎｄ／ＳＢ［３Ｈ］Ｔ８０８ ｏｎｌｙ）＊１００。
【００４８】
検証データ
各実験で、非放射性Ｔ８０８を陽性内部対照として使用する。等モル量の放射性Ｔ８０８及び非放射性Ｔ８０８の共インキュベーションは、特異的結合をおそよ５０％低下させることが期待される。
【００４９】
参考文献
A.K. Szardenings et al. ‘Imaging agents for detecting neurological disorders’. US Patent Application US20110182812
W. Zhang et al., ‘A highly selective and specific PET tracer for imaging of tau pathologies’. Journal of Alzheimer’s Disease 31 (2012) 601-612
【００５０】
【表１】
2016534979.tif 000017
【００５１】
図Ａ：
ブラークステージＶのＡＤ患者から得られたヒト大脳皮質切片とインキュベートした３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールのオートラジオグラム。放射性リガンド濃度は、３．２nMであった。放射性リガンドは、層状に分散したパターンのタウ凝集体の点状染色を示す。
【００５２】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、医薬製剤の形態で使用され得る。医薬製剤は、注射用液剤の形態で投与され得る。
【００５３】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、医薬製剤の製造ため、薬学的に不活性な無機又は有機の担体と共に加工され得る。液剤及びシロップ剤の製造に好適な担体は、例えば、水、ポリオール、ショ糖、転化糖、グルコースなどである。アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油などの佐剤は、式Ｉの化合物の水溶性塩の水性注射用液剤に使用され得るが、原則として必要ではない。坐剤のための好適な担体は、例えば、天然又は硬化油、ロウ、脂肪、半液体又は液体ポリオールなどである。
【００５４】
加えて、医薬製剤は、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香料、浸透圧を変動させるための塩、緩衝剤、マスキング剤又は酸化防止剤を含有することができる。これらはまた、さらに他の治療有用物質を含有することができる。
【００５５】
用量は、広い範囲内で変更され得、当然ながら、各々の特定の症例における個別の要件に適合されるだろう。
【００５６】
実験項：
実施例１
２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
【化１５】
2016534979.tif 000018
【００５７】
工程１：Ｎ−［３−（２，６−ジクロロ−３−ピリジル）−４−ピリジル］カルバミン酸tert−ブチル
予熱したフラスコで排気とアルゴンの再充填を数回行って、アルゴン雰囲気下、３−ヨードピリジン−４−イルカルバミン酸tert−ブチル（４．５６ｇ、１４．２mmol）、２，６−ジクロロピリジン−３−イルボロン酸（５．４６ｇ、２８．４mmol）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（３２０mg、１．４２mmol）及びトリフェニルホスフィン（３７１mg、１．４１mmol）を投入した。ＤＭＦ（１３７mL）中のトリエチルアミン（４．３２ｇ、５．９４mL、４２．７mmol）を加え、反応混合物を１００℃に加熱し、３時間撹拌した。溶媒をほぼ完全に蒸発させた。水を加え、粗生成物の懸濁液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を水（３×）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。ジクロロメタンによる粗生成物のトリチュレーションは、所望の生成物１．９２ｇを与えた。ジクロロメタン相を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル及び酢酸エチル／ヘプタン勾配を使用する）によって精製して、Ｎ−［３−（２，６−ジクロロ−３−ピリジル）−４−ピリジル］カルバミン酸tert−ブチルを合計３．３９ｇ（純度約９０％、収率６３％）で明黄色の固体として生成した。
ＭＳ：  ｍ／ｚ  ＝３４０．１  （Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５８】
工程２：２−クロロ−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
ＤＭＦ（１５．８mL）中のＮ−［３−（２，６−ジクロロ−３−ピリジル）−４−ピリジル］カルバミン酸tert−ブチル（２６４mg、７７６μmol）、炭酸カリウム（２１５mg、１．５５mmol）及び１８−クラウン−６（２２６mg、８５４μmol）の懸濁液を１００℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で３時間撹拌した。水を加え、粗生成物の懸濁液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を、水（２回）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。少量のメタノールによる粗生成物のトリチュレーションは、２−クロロ−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール（１０５mg、収率６３％）を明黄色の固体として与えた。
ＭＳ：  ｍ／ｚ  ＝  ２０４．３  （Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５９】
工程３：２−クロロ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステル
脱水ＤＭＦ（１．５mL）中の水素化ナトリウム（２６．５mg、６０７μmol）の懸濁液を０℃に冷却し、アルゴン下、脱水ＤＭＦ（３．０mL）中の２−クロロ−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール（１０３mg、５０６μmol）の溶液を加えた。撹拌を０℃で１０分間、室温で３０分間続けた。０℃に冷却した後、脱水ＤＭＦ（０．７５mL）中の二炭酸ジ−tert−ブチル（１３２mg、１４１μL）を加え、撹拌を室温で一晩続けた。水を加え、反応混合物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を水（２回）及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル及びメタノール／ジクロロメタン勾配を使用する）によって精製した後に、２−クロロ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステルをオフホワイトの固体として得た（１１３mg、７３．５％）。
ＭＳ：  ｍ／ｚ  ＝  ３０４．１  （Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６０】
工程４：２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステル
マイクロ波容器に、アルゴン雰囲気下、２−クロロ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステル（１００mg、３２９μmol）、２−フルオロ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（１４７mg、６５８μmol）、炭酸カリウム（１３７mg、９８８μmol）及び１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１０．８mg、１３．２μmol）を投入し、容器を密閉し、排気して、アルゴンを再充填した。ＤＭＦ（７mL）を加え、反応混合物を９０℃に加熱し、１７時間撹拌した。反応混合物を濾過した。濾液に水を加え、反応混合物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を水（３×）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。少量のメタノールによる粗生成物混合物のトリチュレーションは、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール（ｍ／ｚ  ＝  ２６５．１  （Ｍ＋Ｈ）＋）を明赤色の固体として与えた（２３mg、純度８０％、２１％）。液体を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル及びメタノール／ジクロロメタン勾配を使用する）によって精製して、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステルをオフホワイトの固体として与えた（１２mg、１０％）。
ＭＳ：  ｍ／ｚ  ＝  ３６５．２  （Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６１】
工程５：２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
ジクロロメタン（０．５mL）中の２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステル（２２mg、６０．４μmol）及びトリフルオ酢酸ロ（３３．３μL、４３２μmol）の明黄色の溶液を室温で一晩撹拌した。０℃に冷却した後、トリエチルアミン（７０μL、５０３μmol）を加え、揮発性物質を全て除去した。粗物質を分取ＨＰＬＣ（Gemini C18カラム及び０．１％トリエチルアミンを含有する水／アセトニトリル勾配を使用する）によって精製して、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールをオフホワイトの固体として与えた（１４mg、８８％）。
ＭＳ：  ｍ／ｚ  ＝  ２６５．１  （Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６２】
実施例２
３Ｈ−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
【化１６】
2016534979.tif 000019
２mlのトリチウム化フラスコ中、２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール（２．０mg、７．６μmol；実施例１）及びクラブトリー触媒（９．１４mg、１１．４μmol）をジクロロメタン（０．８mL）及びＤＭＦ（０．２mL）に溶解した。フラスコをトリチウムマニホールド（RC-TRITEC）に取り付け、凍結脱気によって脱気した。トリチウムガスを導入し、明橙色の溶液を、トリチウム雰囲気中、４５０mbarで４時間激しく撹拌した。溶液を液体窒素によって冷却し、反応容器中の過剰のトリチウムガスを、廃棄トリチウム用のウラニウムトラップ上に再吸収させた。溶媒を凍結乾燥により取り除き（lyophilized off）、エタノールと水の９：１混合物（３×１mL）及びトルエン（２×１mL）を用いて不安定なトリチウムを凍結乾燥によって除去した。残っている茶色がかった油状物をエタノール（１．５mL）に溶解し、ＳＣＸ−２陽イオン交換体上に移した。残っている触媒をＭｅＯＨ（１０mL）により溶出させて、廃棄し、生成物をＭｅＯＨ中のＮＨ３（３．５Ｎ、１０mL）により溶出させて、別々に回収し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、溶出剤としてアセトニトリル、水及びｐＨ７緩衝液を使用し、分取ＨＰＬＣ（XBridge Prep、５μm、１０×２５０mm）によって精製した。３７MBq（１mCi)の標記化合物が得られ、ＭＳ分析法によって９９％の放射化学的純度及び９３６GBq/mmol（２５．３Ci/mmol）の比放射能が決定された。この化合物をｐＨ７緩衝液／ＤＭＳＯ溶液として保存した。
ＭＳ：  ｍ／ｚ  ＝  ２６５．１  ［Ｍ＋Ｈ］＋、２６７．１  ［Ｍ（３Ｈ１）＋Ｈ］＋、２６９．１  ［Ｍ（３Ｈ２）＋Ｈ］＋。
【００６３】
実施例３
［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
【化１７】
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【００６４】
ａ）２−（６−ニトロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
【化１８】
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５０mLのフラスコ（蒸発させて、Ａｒでパージした）中、２−クロロ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール−９−カルボン酸tert−ブチルエステル（２８５mg、９３８μmol）、２−ニトロピリジン−５−ボロン酸ピナコールエステル（４６９mg、１．８８mmol）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（３４．５mg、４２．２μmol）及びＫ２ＣＯ３（３８９mg、２．８１mmol）を合わせた。ＤＭＦ（２４mL）を加え、管を密閉し、蒸発させて、Ａｒでパージした。反応混合物を９０℃に加熱し、１８時間撹拌した。セライト、その後、小さいシリカゲルパッド（中性、６０Ａ、３２〜６３メッシュ）に通して濾過し、続いて、十分なＤＭＦですすいで、蒸発乾固させた。褐色の固体をＤＭＦ（２０mL）に溶解し、ほぼ透明な溶液が生じるまでＤＭＳＯを加えた。濾過後、溶媒をほぼ蒸発乾固させた。分取ＨＰＬＣによる精製は、標記化合物（３７mg、１３％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ  ｍ／ｚ：  ２９２．２  ［Ｍ＋Ｈ］  ＋。
【００６５】
ｂ）［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロール
【化１９】
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照射終了（ＥＯＢ）前に、前駆体（０．７±０．３mg）をジメチルスルホキシド４００μLに溶解し、超音波処理した。ＥＯＢ時に、［１８Ｏ］濃縮水のプロトン照射によって生成した水性［１８Ｆ］フッ化物イオンをイオン交換カラム上に捕捉した。Krytpofix 2.2.2／炭酸カリウムのストック溶液（アセトニトリル：水（１：１）６００μLに溶解した、Kryptofix 2.2.2 ４８mg及び炭酸カリウム１０mg）１５０μL、続いて、アセトニトリル２５０μLでイオン交換カラムから反応バイアル中へと溶出させた。窒素流を通してフッ化物溶液を１１０℃で蒸発乾固させ、さらにアセトニトリル（各２５０μL）の２回の添加によって共沸乾燥させた。反応バイアルをマイクロ波キャビティ（Resonance Instruments）に遠隔移送し（remotely transferred）、圧縮空気で２分間冷却した。前駆体を加え、次いで、５０ワットで２４０秒間マイクロ波処理した後、溶液を水１mLでクエンチした。
【００６６】
反応溶液をトリエチルアミン（ＴＥＡ）緩衝液（ｐＨ７．２）３mLで希釈し、次いで、セミ分取ＨＰＬＣカラム（XBridge Cl8、１０μm、１０×１５０mm）上に注入し、メタノール：ＴＥＡ（１５：８５）緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて１５mL/分で溶出させた。
【００６７】
ＨＰＬＣ溶出を２５４nmにてインライン放射能検出器でモニタリングした。セミ分取クロマトグラムを観察して、［１８Ｆ］生成物のピークを水５０mL中に回収し、自動ＳＰＥモジュールを使用してこれを再構築した。生成物溶液をWaters C-18 SepPak Plusに通して溶出させ、Milli-Q水１０mLで洗浄し、次いで、無水エタノール１mL、続いて、生理食塩水１０mLを用いて、０．２２μmのMillipore FG滅菌フィルターを通して、最終生成物バイアル中に溶出させた。
【００６８】
品質管理分析用に最終ボトルからアリコートを取り出した。分析ＨＰＬＣ（XBridge C18、３．５μm、４．６×１００mm）（メタノール：ＴＥＡ（４０：６０）緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて２mL／分で溶出させ、３５０nmでモニタリングする）を実施して、放射化学的純度及び化学的純度、比放射能並びに化学的同一性を決定した。
【００６９】
５７分の［１８Ｆ］−２−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−９Ｈ−ジピリド［２，３−ｂ；３’，４’−ｄ］ピロールの放射合成法は、３３０．５mCiの平均的な最終生成物を生成し、非崩壊補正収率は２６．１％（ｎ＝２）であった。最終生成物は、２４，６８４mCi/μmoleの平均比放射能及び９９％の放射化学的純度を有していた。
【図Ａ】
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【図Ｂ】
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【国際調査報告】
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2016534979.tif 000036