(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）：［式中、Ｒ１〜Ｒ３、Ｘ及びＹは、本明細書及び特許請求の範囲に定義されるとおりである］で表される化合物及びその薬学的に許容し得る塩に関する。式（Ｉ）で表される化合物は、炎症性疾患又は障害の哺乳動物における治療及び／又は予防のための医薬として、特に、一過性受容器電位（ＴＲＰ）チャネルアンタゴニストに使用することができる。
2016503417.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化２８】
2016503417.tif 000031
［式中、
Ｘは、−ＣＨ２−又は酸素であり；
Ｙは、−（ＣＨ２）ｎ−であり；
Ｒ１は、ハロゲンで場合により置換されているフェニルであり；
Ｒ２は、低級アルキルであり；
Ｒ３は、トリフルオロメチル−フェニル、トリフルオロメチル−ピリジニル、トリフルオロメチル−ピリダジニル、トリフルオロメチル−ピリミジニル又はトリフルオロメチル−ピラジニルであり；そして
ｎは、０又は１であるが、但し、Ｘが酸素である場合、ｎは、０ではない］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｘが、−ＣＨ２−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが、酸素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｎが、０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
ｎが、１である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、ハロフェニルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、フルオロ−フェニルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が、メチル、エチル、イソプロピル又はtert−ブチルである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が、メチル、エチル又はイソプロピルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−フェニル又はトリフルオロメチル−ピリジニルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−フェニルである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−ピリジニルである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
以下から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物：
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｓ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｒ）−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｓ）−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；及び
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［４−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド。
【請求項１４】
式（Ｉ）で表される化合物の製造プロセスであって、式（Ａ）：
【化２９】
2016503417.tif 000032
で表される化合物を、式（Ｂ）：
【化３０】
2016503417.tif 000033
［式中、Ｒ１〜Ｒ３は、請求項１〜１２のいずれか一項に定義されるとおりである］
で表される化合物、カップリング剤及び塩基の存在下で反応させることを含むプロセス。
【請求項１５】
請求項１４のプロセスによって製造される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
治療活性物質としての使用のための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
呼吸器障害の処置又は予防における、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
呼吸器障害の処置又は予防のための医薬の調製のための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
呼吸器障害の処置又は予防における使用のための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、アレルギー性鼻炎及び気管支痙攣から選択される呼吸器障害を処置するための方法であって、それを必要とする被検体に治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項２２】
本明細書に上述される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性疾患又は障害の哺乳動物における治療及び／又は予防のために有用な有機化合物、特に、一過性受容器電位（ＴＲＰ）チャネルアンタゴニスト、それらの製造法、及びそれらを含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
本発明は、特に、式（Ｉ）：
【化１】
2016503417.tif 000003
［式中、
Ｘは、−ＣＨ２−又は酸素であり；
Ｙは、−（ＣＨ２）ｎ−であり；
Ｒ１は、ハロゲンで場合により置換されているフェニルであり；
Ｒ２は、低級アルキルであり；
Ｒ３は、トリフルオロメチル−フェニル、トリフルオロメチル−ピリジニル、トリフルオロメチル−ピリダジニル、トリフルオロメチル−ピリミジニル又はトリフルオロメチル−ピラジニルであり；そして
ｎは、０又は１であるが、但し、Ｘが酸素である場合、ｎは、０ではない］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【０００３】
ＴＲＰチャネルは、種々のヒト（及び他の動物）細胞タイプの細胞膜に見いだされるイオンチャネルのクラスである。少なくとも２８個の公知のヒトＴＲＰチャネルがあり、これらは、配列相同性及び機能に基づいて多数のファミリー又はグループに分けられる。ＴＲＰＡ１は、ナトリウム、カリウム及びカルシウムの流動を介して膜電位を調節する、非選択的カチオン透過チャネルである。ＴＲＰＡ１は、ヒトの後根神経節ニューロン及び末梢感覚神経において高度に発現されることが知られている。ヒトでは、ＴＲＰＡ１は、多数の反応性化合物（例えば、アクロレイン、アリルイソチオシアネート、オゾン）並びに非反応性化合物（例えば、ニコチン及びメントール）によって活性化され、したがって、「化学センサー」として作用すると考えられている。公知のＴＲＰＡ１アゴニストの多くは、ヒト及び他の動物において、疼痛、刺激及び神経性炎症を引き起こす刺激物である。そのため、ＴＲＰＡ１チャネル活性化因子の生物学的効果を遮断するＴＲＰＡ１アンタゴニスト又は薬剤は、喘息及びその増悪、慢性咳嗽並びに関連疾病のような疾患の処置において有用であろうし、さらには急性及び慢性疼痛の処置にも有用であろうと期待されている。最近では、組織損傷及び酸化ストレスの産物、例えば、４−ヒドロキシノネナール及び関連化合物が、ＴＲＰＡ１チャネルを活性化することも知られている。この知見は、組織損傷、酸化ストレス及び気管支平滑筋収縮に関連する疾患、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、職業性喘息及びウイルス誘導性肺炎症の処置における、小分子ＴＲＰＡ１アンタゴニストの有用性についてのさらなる理論的根拠を提供する。
【０００４】
本発明はまた、当該化合物を含む医薬組成物、当該化合物を使用する方法及び当該化合物を調製する方法を提供する。
【０００５】
特に指示のない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される以下の特定の用語及び表現は、次のように定義される：
【０００６】
用語「部分」は、別の原子又は分子に１個又は複数の化学結合によって連結されて、それによって分子の一部を形成する、ある原子又は化学的に結合された原子群を指す。例えば、式（Ｉ）の可変部Ｒ１〜Ｒ３は、式（Ｉ）の核構造に共有結合によって連結された部分を指す。
【０００７】
１個又は複数の水素原子を有する特定の部分に関して、用語「置換されている」は、その部分の水素原子の少なくとも１個が別の置換基又は部分に置き換わっていることを指す。例えば、用語「ハロゲンによって置換されている低級アルキル」は、低級アルキル（以下に定義される）の１個又は複数の水素原子が１個又は複数のハロゲン原子に置き換わっていることを指す（例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、クロロメチル等）。
【０００８】
用語「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子を有する、脂肪族の直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素部分を指す。特定の実施態様において、アルキルは、１〜１０個の炭素原子を有する。
【０００９】
用語「低級アルキル」は、１〜７個の炭素原子を有するアルキル部分を指す。特定の実施態様において、低級アルキルは、１〜４個の炭素原子を有し、他の特定の実施態様において、低級アルキルは、１〜３個の炭素原子を有する。低級アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル及びtert−ブチルを含む。低級アルキルの特定の例は、メチル、エチル及びイソプロピルである。
【００１０】
用語「ハロ」、「ハロゲン」及び「ハロゲン化物」は、互換的に使用され得、置換基フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを指す。フルオロは、ハロゲンの特定の例である。
【００１１】
特に指示のない限り、用語「水素」又は「ヒドロ」は、Ｈ２ではなく、水素原子（−Ｈ）の部分を指す。
【００１２】
特に指示のない限り、用語「式で表される化合物（a compound of the formula）」又は「式で表される化合物（a compound of formula）」又は「式で表される化合物（compounds of the formula）」又は「式で表される化合物（compounds of formula）」は、その式によって定義される化合物の属（genus）から選択される任意の化合物（特に断りのない限り、任意のそのような化合物の任意の薬学的に許容し得る塩又はエステルを含む）を指す。
【００１３】
用語「薬学的に許容し得る塩」は、遊離塩基又は遊離酸の生物学的効果及び特性を保持し、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない塩を指す。塩は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等、好ましくは塩酸）及び有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、サリチル酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、Ｎ−アセチルシステイン等）と形成され得る。加えて、塩は、遊離酸への無機塩基又は有機塩基の付加によっても調製され得る。無機塩基から誘導される塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウム塩等を含むが、これらに限定されない。有機塩基から誘導される塩は、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リシン、アルギニン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂等の、第一級、第二級及び第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン並びに塩基性イオン交換樹脂の塩を含むが、これらに限定されない。
【００１４】
本発明の化合物は、薬学的に許容し得る塩の形態で存在することができる。本発明の化合物はまた、薬学的に許容し得るエステル（すなわち、プロドラッグとして使用される式（Ｉ）の酸のメチル及びエチルエステル）の形態で存在することもできる。本発明の化合物はまた、溶媒和、すなわち水和され得る。溶媒和は、製造プロセスの過程で達成され得るか、又はすなわち当初無水であった式（Ｉ）で表される化合物の吸湿性の結果として起こり得る（水和）。
【００１５】
同じ分子式を有するがそれらの原子の結合の性質若しくは順序又はそれらの原子の空間的配列が異なる化合物は「異性体」と呼ばれ、本発明の範囲内である。それらの原子の空間的配列が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。ジアステレオマーは、１個又は複数のキラル中心に反対の立体配置を有する立体異性体であるが、エナンチオマーではない。互いに重ね合わせることができない鏡像である、１個又は複数の不斉中心を有する立体異性体は、「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物が１個の不斉中心を有するとき、例えば、炭素原子が４個の異なる基に結合している場合、１対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは、その不斉中心（１個又は複数）の絶対立体配置によって特徴付けられ得、Cahn、Ingold及びPrelogのＲ及びＳ順位則によって又はその分子が偏光面を回転させる様式によって記載され、右旋性又は左旋性として（すなわち、それぞれ、（＋）−異性体又は（−）−異性体として）表示される。キラル化合物は、個々のエナンチオマー又はそれらの混合物のいずれかとして存在することができる。エナンチオマーを同じ割合で含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【００１６】
化合物の用語「治療有効量」は、疾患の症状を予防、緩和又は改善するために、あるいは処置される被検体の生存期間を延長するために効果的な化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当技術分野における技能の範囲内である。本発明に係る化合物の治療有効量又は投与量は、広い範囲内で変えることができ、当技術分野において公知の様式で決定され得る。そのような投与量は、投与される特定の化合物（１個又は複数）、投与経路、処置される病態及び処置される患者を含む、それぞれの特定の症例における個別の要件に対して調整されるだろう。一般に、およそ７０Kgの体重の成人への経口又は非経口投与の場合、約０．１mg〜約５，０００mg、１mg〜約１，０００mg又は１mg〜１００mgの一日投与量が適切であり得るが、必要であればその下限及び上限を超えてもよい。一日投与量は、単回用量として又は分割用量で投与され得るか、又は非経口投与の場合には、点滴として与えられ得る。
【００１７】
用語「薬学的に許容し得る担体」は、溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤を含む、薬剤の投与と適合性のある任意の及び全ての材料、並びに薬剤の投与と適合性のある他の材料及び化合物を含むことが意図される。任意の慣用の媒体又は薬剤が活性化合物と適合性でない場合を除いて、本発明の組成物におけるそれらの使用が考慮される。また、補助活性化合物を当該組成物中に組み込むこともできる。
【００１８】
本発明の組成物の調製に有用な薬学的担体は、固体、液体又は気体であることができ；したがって、当該組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、粉剤、腸溶性コーティング製剤又は他の保護製剤（例えば、イオン交換樹脂に結合しているか又は脂質−タンパク質小胞に封入されている）、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアロゾル剤等の形態をとることができる。担体は、石油、動物、植物又は合成起源の油を含む様々な油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等から選択され得る。水、生理食塩水、デキストロース水溶液及びグリコールが、特に（血液と等張である場合）注射用液剤のための好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与用の製剤は、固体活性成分（１個又は複数）を水に溶解させて水溶液を生成し、その溶液を滅菌することにより調製される、活性成分（１個又は複数）の無菌水性液剤を含む。好適な薬学的賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、乳糖、タルク、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等を含む。当該組成物には、例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤又は乳化剤、浸透圧調整用の塩、緩衝剤等の慣用の薬学的添加剤が付与され得る。好適な薬学的担体及びそれらの製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin に記載されている。そのような組成物は、いずれにしても、レシピエントへ適切に投与するための適切な投与剤形を調製するために、有効量の活性化合物を好適な担体と共に含有するだろう。
【００１９】
本発明の方法の実施において、有効量の本発明の化合物のいずれか１つ又は本発明の化合物のいずれかの組み合わせ又はその薬学的に許容し得る塩若しくはエステルは、当技術分野において公知の通常の許容し得る方法のいずれかを介して、単独又は組み合わせのいずれかで投与される。したがって、当該化合物又は組成物は、経口（例えば、口腔）、舌下、非経口（例えば、筋肉内、静脈内又は皮下）、直腸（例えば、坐剤又は洗浄剤によって）、経皮（例えば、皮膚エレクトロポレーション）又は吸入（例えば、エアロゾルによって）によって、錠剤及び懸濁剤を含む、固体、液体又は気体の投与剤形で投与され得る。投与は、適宜、持続的治療での単回の単位投与剤形で、又は単回投与治療で実施され得る。当該治療組成物はまた、パモ酸等の脂溶性の塩と併せた油乳剤又は分散剤の形態であっても、皮下又は筋肉内投与用の生物分解性の徐放性組成物の形態であってもよい。
【００２０】
本発明は、特に、以下に関する：
【００２１】
Ｘが、−ＣＨ２−である、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２２】
Ｘが、酸素である、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２３】
ｎが、０である、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２４】
ｎが、１である、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２５】
Ｒ１が、ハロフェニルである、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２６】
Ｒ１が、フルオロ−フェニルである、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２７】
Ｒ２が、メチル、エチル、イソプロピル又はtert−ブチルである、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２８】
Ｒ２が、メチル、エチル又はイソプロピルである、式（Ｉ）で表される化合物；
【００２９】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−フェニル又はトリフルオロメチル−ピリジニルである、式（Ｉ）で表される化合物；
【００３０】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−フェニル又はトリフルオロメチル−ピリジニルである、式（Ｉ）で表される化合物；
【００３１】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−フェニルである、式（Ｉ）で表される化合物；及び
【００３２】
Ｒ３が、トリフルオロメチル−ピリジニルである、式（Ｉ）で表される化合物。
【００３３】
本発明は、さらに、特に、以下から選択される、式（Ｉ）で表される化合物に関する：
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｓ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｒ）−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｓ）−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド；及び
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［４−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド。
【００３４】
本発明はまた、以下に関する：
【００３５】
治療有効量の式（Ｉ）に係る化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物；
【００３６】
治療活性物質としての使用のための、式（Ｉ）に係る化合物；
【００３７】
呼吸器障害の処置又は予防のための、式（Ｉ）で表される化合物の使用；
【００３８】
呼吸器障害の処置又は予防のための医薬の調製のための、式（Ｉ）に係る化合物の使用；
【００３９】
呼吸器障害の処置又は予防における使用のための、式（Ｉ）に係る化合物；及び
【００４０】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、アレルギー性鼻炎及び気管支痙攣から選択される呼吸器障害を処置するための方法であって、それを必要とする被検体に治療有効量の式（Ｉ）に係る化合物を投与する工程を含む方法。
【００４１】
呼吸器障害の例は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、アレルギー性鼻炎及び気管支痙攣である。
【００４２】
これらの化合物を調製する際に使用される出発物質及び試薬は、一般に、販売業者（例えば、Aldrich Chemical Co.）から入手可能であるか、又はFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplementals; and Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40 等の参考文献に記載される手順に従って、当業者に公知の方法によって調製されるかのいずれかである。
【００４３】
以下の合成反応スキームは、本発明の化合物が合成され得るいくつかの方法を単に例示するものであり、これらの合成反応スキームに対して様々な変形を行うことができ、これらは当業者に対して本出願に含まれる開示を参考に示唆されるであろう。
【００４４】
合成反応スキームの出発物質及び中間体は、所望であれば、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィー等を含むが、これらに限定されない慣用の技術を使用して単離及び精製され得る。そのような物質は、物理定数及びスペクトルデータを含む慣用の手段を使用して特徴付けられ得る。
【００４５】
特に指定のない限り、本明細書に記載の反応は、好ましくは、不活性雰囲気下、大気圧で、約−７８℃〜約１５０℃、より好ましくは、約０℃〜約１２５℃の反応温度範囲で、最も好ましくかつ好都合には、ほぼ室温（又は周囲温度）、例えば、約２０℃で実施される。
【００４６】
本発明の化合物は、多数の慣用の手段によって製造され得る。例えば、これらは、スキーム１に概説されるプロセスに従って製造され得る。
【００４７】
【化２】
2016503417.tif 000004
【００４８】
スキーム１に記載されるように、Ｎ−置換グリシンエステル（ｉｉ）は、塩化スルホニル（ｉ）と、トリエチルアミン等の塩基の存在下で反応して、中間体スルホンアミド（ｉｉｉ）（式中、Ｒは、メチル又はエチル基であり得、Ｒ１は、アリール、ヘテロアリール及びハロゲンで置換されているアリールであり得、そして、Ｒ２は、低級アルキル基、例えば、メチル、エチル又はイソプロピル基であり得る）を形成し得る。ＴＨＦ中の水酸化リチウム水溶液等の温和な条件下でのエステル（ｉｉｉ）の加水分解は、所望の中間体カルボン酸（ｉｖ）を提供し得る。
【００４９】
パラジウム触媒条件下での環状アミン（ｖ）と臭化アリール（ｖｉ）とのカップリング反応は、Ｎ−アリール中間体（ｖｉｉ）を提供し得る。Ｒ４は、トリフルオロメチルである。一般的なブッフバルト（Buchwald）アミノ化反応条件を使用して、Ｎ−アリール化反応を達成することができる。詳細な記載は、対応する中間体の調製手順に見いだされ得る。化合物（ｖ）について、ｎの数は、０又は１であり得る（５員又は６員環状アミン）。ｎの数が０である場合、Ｘは（ＣＨ２）である。ｎの数が１である場合、Ｘは（ＣＨ２）又は酸素であり得る。化合物（ｖｉ）について、Ｘ、Ｙ及びＺは、（ＣＨ）又はＮであり得る。（ｖｉｉ）中のブトキシカルボニル基の開裂は、対応する第一級アミン（ｖｉｉｉ）を与え得、これは遊離アミン又は塩酸塩のいずれかとして保存され得る。
【００５０】
最後に、カップリング試薬の存在下でのカルボン酸（ｉｖ）とアミン（ｖｉｉｉ）とのカップリングは、所望の化合物（ｉｘ）を与え得る。アミド形成のためにペプチド化学において使用されるカップリング試薬が使用され得る。詳細な条件は、実施例において見いだされ得る。
【００５１】
したがって、本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物の製造プロセスであって、式（Ａ）：
【化３】
2016503417.tif 000005
で表される化合物を、式（Ｂ）：
【化４】
2016503417.tif 000006
［式中、Ｒ１〜Ｒ３は、上記に定義されるとおりである］
で表される化合物、カップリング剤及び塩基の存在下で反応させることを含むプロセスに関する。
【００５２】
本発明のプロセスにおいて有用なカップリング剤の例は、例えば、ＨＡＴＵのような公知のアミド形成カップリング剤である。
【００５３】
ジイソプロピルエチルアミンが、上記プロセスに好適な塩基の例である。
【００５４】
したがって、本発明はまた、本発明のプロセスによって製造される、式（Ｉ）で表される化合物に関する。
【００５５】
本発明は、以下の実施例により以降説明されるが、これらは限定性を持つものではない。
【００５６】
実施例
本明細書においては、特定の例示的実施態様を記述及び記載しているが、本発明の化合物は、適切な出発物質を使用し、本明細書に一般的に記載される方法に従って、及び／又は当業者に利用可能な方法によって調製され得る。
【００５７】
中間体及び最終化合物は、フラッシュクロマトグラフィー及び／又は逆相分取ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）のいずれかによって精製された。特に断りのない限り、フラッシュクロマトグラフィーは、（１）Biotage SP1（商標）システム及びQuad 12/25 Cartridgeモジュール（Biotage AB 社製）、（２）ISCO CombiFlash（登録商標）クロマトグラフィー装置（Teledyne Isco, Inc. 社製）、又は（３）Analogix（登録商標）IntelliFlash280（商標）クロマトグラフィー装置（Varian Inc. の子会社であるAnalogix Inc. 社製）を使用して実施された。特に断りのない限り、使用したシリカゲルの種類及び孔径は以下であった：（１）KP-SIL（商標）６０Å、粒径：４０〜６０ミクロン（Biotage AB 社製）；（２）シリカゲルＣＡＳ登録番号：63231-67-4、粒径：４７〜６０ミクロン；又は（３）ＺＣＸ（Qingdao Haiyang Chemical Co., Ltd 社製）、孔径：２００〜３００メッシュ若しくは３００〜４００メッシュ。逆相分取ＨＰＬＣは、Waters Corporation 社製のWaters（登録商標）Delta-Prep（商標）3000 HPLCシステムを使用し、以下のカラムの１つ又は複数を使用して実施された：Varian, Inc. 社製のVarian Pursuit（登録商標）C-18カラム（１０μm、２０×１５０mm）、Waters Corporation 社製のXbridge（商標）Prep C18カラム（５μm、OBD（商標）２０×１００mm）、又はWaters Corporation 社製のSunFire（商標）Prep C18カラム（５μm、OBD（商標）３０×１００mm）。
【００５８】
質量分析（ＭＳ）又は高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）は、Waters（登録商標）ZQ（商標）4000（Waters Corporation 社製）、Waters（登録商標）Quattro micro（商標）API（Waters Corporation 社製）、Micromass（登録商標）Platform II（Waters Corporationの一事業部であるMicromass 社製）、４．７テスラ磁石を備えたBruker（登録商標）Apex（登録商標）II FTICR（Bruker Corporation 社製）、Waters（登録商標）Alliance（登録商標）2795-ZQ（商標）2000（Waters Corporation 社製）、又はMDS Sciex（商標）API-2000（商標）n API（MDS Inc. 社製）を使用して実施された。質量スペクトルデータは、一般に、特に指定のない限り親イオンのみを示す。ＭＳ又はＨＲＭＳデータは、示される特定の中間体又は化合物について提供される。
【００５９】
核磁気共鳴分光法（NMR）は、共にVarian Inc. 社製である、Varian（登録商標）Mercury 300 NMR分光計（1H NMRスペクトルについては、300MHzで取得される）及びVarian（登録商標）Inova 400 NMR分光計（1H NMRスペクトルについては、400MHzで取得される）を使用して実施された。ＮＭＲデータは、示される特定の中間体又は化合物について提供される。
【００６０】
空気感受性の試薬が関与する反応は全て、不活性雰囲気下で実施された。試薬は、特に断りのない限り、販売業者から入手したものがそのまま使用された。
【００６１】
絶対立体化学は、帰属されている場合、公知の絶対立体配置のキラルビルディングブロックから調製された類似体との、生物学的効果及び／又はシリカゲルＴＬＣ及びクロマトグラフィー上での相対保持時間の比較に基づく。
【００６２】
中間体
［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−酢酸
【化５】
2016503417.tif 000007
４−フルオロベンゼン−１−スルホニルクロリド（１.９５ｇ、１０mmol）及び２−（メチルアミノ）酢酸エチル塩酸塩（１.５４ｇ、１０mmol）をジクロロメタン（５０mL）中に懸濁した。氷浴中でトリエチルアミン（４.２mL）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、残渣を酢酸エチル（６０mL）で処理し、水、重炭酸ナトリウム溶液、そして最後に希塩酸溶液で抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣を減圧下で乾燥させ、油状物（２.２７ｇ）を［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−酢酸エチルエステルとして与えた。
【００６３】
２−（４−フルオロ−Ｎ−メチルフェニルスルホンアミド）酢酸エチル（２.２７ｇ）をＴＨＦ（２０mL）に溶解し、０.５N ＬｉＯＨ溶液（２０mL）を加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、残渣を水に溶解し、濾過し、塩酸で酸性化した。白色の固体を濾過して、［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−酢酸（１.６８ｇ）を与えた。ＬＲＭＳ  Ｃ９Ｈ１０ＦＮＯ４Ｓ（ｍ／ｅ）の計算値２４７.０；実測値２４６.１（ＥＳ−）。
【００６４】
［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−酢酸
【化６】
2016503417.tif 000008
この中間体を、［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−酢酸の調製で記載されるのと同様の手順を使用して調製した。ＬＲＭＳ  Ｃ１０Ｈ１２ＦＮＯ４Ｓ（ｍ／ｅ）の計算値２６１.０；実測値２６０.１（ＥＳ−）。
【００６５】
［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−酢酸
【化７】
2016503417.tif 000009
この中間体を、［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−酢酸の調製で記載されるのと同様の手順を使用して調製した。ＬＲＭＳ  Ｃ１１Ｈ１４ＦＮＯ４Ｓ（ｍ／ｅ）の計算値２７５.０；実測値２７４.１（ＥＳ−）。
【００６６】
［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化８】
2016503417.tif 000010
２５℃でトルエン（５mL）中のピペリジン−３−イルメチル−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１.００ｇ、４.６７mmol）、１−ブロモ−４−トリフルオロメチル−ベンゼン（１.１５ｇ、５.１３mmol）、ナトリウムtert−ブトキシド（６７３mg、７.００mmol）、（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（２９１mg、０.４７mmol）、及びトリス（ジベンジリデンアセトン）−ジパラジウム（０）（２１４mg、０.２３mmol）の溶液について、窒素ガスでのパージ及び排気を３回行った。溶液を密閉し、１２０℃に１４時間加熱した。反応混合物を２５℃に冷却し、開封し、水に注いだ。水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過に続いて減圧下で濃縮することにより、粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１.５ｇ、９０％粗製物）を軽油状物として得た。
【００６７】
［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イル］−メチルアミン
【化９】
2016503417.tif 000011
２５℃で酢酸エチル（５mL）中の［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（５００mg、１.４mmol粗製物）の溶液を、１M 塩化水素水溶液（１mL）で処理した。反応混合物を５０℃に２時間加熱した。次いで、反応混合物を２５℃に冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。水層を水酸化アンモニウム水溶液でｐＨ約９〜１０に調整し、酢酸エチルで３回抽出した。次いで、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イル］−メチルアミン（１００mg、２８％、粗製物）を油状物として得た。［ＭＨ］＋＝２５９.０。
【００６８】
［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化１０】
2016503417.tif 000012
２５℃でトルエン（５mL）中のピロリジン−３−イルメチル−カルバミン酸tert−ブチルエステル（０.５０ｇ、２.５０mmol）、１−ブロモ−４−トリフルオロメチル−ベンゼン（０.６２ｇ、２.７５mmol）、ナトリウムtert−ブトキシド（０.３６ｇ、３.４７mmol）、（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（１５５mg、０.２５mmol）、及びトリス（ジベンジリデンアセトン）−ジパラジウム（０）（１１４mg、０.１３mmol）の溶液について、窒素ガスでのパージ及び排気を３回行った。溶液を密閉し、１２０℃に１４時間加熱した。反応混合物を２５℃に冷却し、開封し、水に注いだ。水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（８０／２０ ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（５００mg、５８％）を軽油状物として得た。
【００６９】
［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イル］−メチルアミン
【化１１】
2016503417.tif 000013
２５℃で酢酸エチル（５mL）中の［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（５００mg、１.４５mmol）の溶液を１M 塩化水素水溶液（１mL）で処理した。反応混合物を５０℃に２時間加熱した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。水層を１M 水酸化ナトリウム溶液でｐＨ約９〜１０に調整した。水相を酢酸エチルで３回抽出した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イル］−メチルアミン（１００mg、２８％、粗製物）を油状物として得た。［ＭＨ］＋＝２４５.０。
【００７０】
［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化１２】
2016503417.tif 000014
密閉管内で、無水トルエン １０mL中に、モルホリン−２−イルメチルカルバミン酸tert−ブチル（１.０ｇ、４.６２mmol）、１−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（１.０４ｇ、４.６２mmol）、Ｐｄ（ｄｂａ）２（１３３mg、０.２３mmol）、Ｘ−Ｐｈｏｓ（２２０mg、０.４６mmol）、及びナトリウムtert−ブトキシド（５３３mg、５.５５mol）を混合した。混合物をアルゴンで脱気し、次に１０５℃で４時間撹拌した。混合物を、セライト層を通して濾過し、ＴＨＦですすいだ。溶媒を蒸発させて、残渣を水及び酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ、濃縮した。残渣をISCOフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ５０ｇ、ヘキサン中の酢酸エチル ０％〜８０％）で精製して、所望の化合物（７２７mg、４４％）を与えた。
【００７１】
［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イル］−メチルアミン塩酸塩
【化１３】
2016503417.tif 000015
（４−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン−２−イル）メチルカルバミン酸tert−ブチル（７２０mg）をジクロロメタン（４mL）に溶解し、ＴＦＡ（３mL）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣をジクロロメタン及びトルエンで処理した。溶媒を蒸発させた。残渣をジクロロメタン（１０mL）に溶解し、エーテル中の１N 塩化水素（１０mL）を加えた。溶媒を蒸発させて、残渣を無水エーテルで粉砕し、濾過して、所望の塩酸塩（４８５mg、８２％）を与えた。［ＭＨ］＋＝２６１。
【００７２】
［４−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−モルホリン−２−イルメチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化１４】
2016503417.tif 000016
トルエン（１０mL）中に、モルホリン−２−イルメチルカルバミン酸tert−ブチル（１.０ｇ、４.６２mmol）、２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（８３９mg、４.６２mmol）、Ｐｄ（ｄｂａ）２（１３３mg、０.２３mmol）、ナトリウムtert−ブトキシド（５３３mg、５.５５mmol）、及びＸ−Ｐｈｏｓ（２２０mg、０.４６mmol）を混合した。混合物を窒素で５分間脱気し、密閉した。得られた混合物を１００℃で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、ＴＨＦですすいだ。溶媒を蒸発させて、残渣をISCOフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の酢酸エチル ０％〜３５％）で精製して、所望の化合物を明褐色のロウ状物質（３５０mg、２１％）として与えた。［ＭＨ］＋＝３６２.１。
【００７３】
［４−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−モルホリン−２−イル］−メチルアミン塩酸塩
【化１５】
2016503417.tif 000017
（４−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）モルホリン−２−イル）メチルカルバミン酸tert−ブチル（３５０mg）をジクロロメタン ３mLに溶解し、ＴＦＡ １.５mLを加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、残渣を乾燥させた。残渣をジクロロメタンに再溶解し、エーテル中の１N 塩酸（６mL）を加えた。混合物を濃縮し、乾燥させた。残渣を無水エーテル中に懸濁し、最上層をデカントした。固形物を減圧下で乾燥させて、所望の塩酸塩（３１２mg、９７％）を与えた。［ＭＨ］＋＝２６２.１。
【００７４】
実施例１
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド
【化１６】
2016503417.tif 000018
２５℃でジクロロメタン（５mL）中の粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イル］−メチルアミン（３０.０mg、０.１２mmol、粗製物）及び［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−酢酸（３０.０mg、０.１２mmol）の溶液を、ＨＡＴＵ（４３.７mg、０.１２mmol）で処理した。この溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９.７mg、０.２３mmol）を加えた。反応混合物を２時間撹拌した。次いで、反応混合物を０.２M ＫＨＳＯ４水溶液に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を水で３回及び食塩水で１回洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（５０／５０ ヘキサン／酢酸エチル）により、２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド（１０.２mg、１８％）を白色の固体として得た。［ＭＨ］＋＝５０２.０。
【００７５】
実施例２
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド
【化１７】
2016503417.tif 000019
２５℃でジクロロメタン（５mL）中の粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イル］−メチルアミン（４７.０mg、０.１８mmol、粗製物）及び［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−酢酸（５０.０mg、０.１８mmol）の溶液を、ＨＡＴＵ（６９.１mg、０.１８mmol）で処理した。この溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４６.９mg、０.３６mmol）を加えた。反応混合物を２時間撹拌した。次いで、反応混合物を０.２M ＫＨＳＯ４水溶液に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を水で３回及び食塩水で１回洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（５０／５０ ヘキサン／酢酸エチル）により、２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド（５０.０mg、５３％）を白色の固体として得た。［ＭＨ］＋＝５１６.２。
【００７６】
実施例３
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド
【化１８】
2016503417.tif 000020
２５℃でジクロロメタン（５mL）中の粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イル］−メチルアミン（２８.０mg、０.１２mmol、粗製物）及び［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−酢酸（３０.０mg、０.１２mmol）の溶液を、ＨＡＴＵ（４３.７mg、０.１２mmol）で処理した。この溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９.７mg、０.２３mmol）を加えた。反応混合物を２時間撹拌した。次いで、反応混合物を０.２M ＫＨＳＯ４水溶液に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を水で３回及び食塩水で１回洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（５０／５０ ヘキサン／酢酸エチル）により、２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド（９.０mg、１６％）を白色の固体として得た。［ＭＨ］＋＝４８８.０。
【００７７】
実施例４
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド
【化１９】
2016503417.tif 000021
２５℃でジクロロメタン（５mL）中の粗［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イル］−メチルアミン（２６.６mg、０.１１mmol、粗製物）及び［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−酢酸（３０.０mg、０.１１mmol）の溶液を、ＨＡＴＵ（４１.４mg、０.１１mmol）で処理した。この溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８.２mg、０.２２mmol）を加えた。反応混合物を２時間撹拌した。次いで、反応混合物を０.２M ＫＨＳＯ４水溶液に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を水で３回及び食塩水で１回洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（５０／５０ ヘキサン／酢酸エチル）により、２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−アセトアミド（２４.２mg、４４％）を白色の固体として得た。［ＭＨ］＋＝５０２.１。
【００７８】
実施例５
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｓ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド
【化２０】
2016503417.tif 000022
キラルカラム（Chiral Technologies製のIAカラム、３×２５cm、二酸化炭素中のメタノール）を使用して、（実施例２の）対応するラセミ体のＳＦＣ分離を行うことにより上記化合物を得た。２番目の画分を濃縮して、（Ｓ）−異性体と帰属した。［ＭＨ］＋５１５.９。
【００７９】
実施例６
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピペリジン−３−イルメチル］−アセトアミド
【化２１】
2016503417.tif 000023
実施例５に記載のキラルカラムを使用して、（実施例２の）対応するラセミ体のＳＦＣ分離を行うことにより上記化合物を得た。最初の画分を濃縮して、（Ｒ）−異性体と帰属した。［ＭＨ］＋５１５.９。
【００８０】
実施例７
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド
【化２２】
2016503417.tif 000024
ジクロロメタン ５mL中に、（４−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン−２−イル）メチルアミン塩酸塩（９９mg、０.３４mmol）、２−（４−フルオロ−Ｎ−メチルフェニルスルホンアミド）酢酸（８２.５mg、０.３４mmol）、ＢＯＰ試薬（１４８mg、０.３４mmol）及びＴＥＡ（０.２mL）を混合した。混合物を一晩撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣をISCOフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １１ｇ、ヘキサン中の酢酸エチル ０％〜８０％）で精製して、所望の化合物を白色の固体（１４０mg、８６％）として与えた。［ＭＨ］＋＝４８９.９。
【００８１】
実施例８
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド
【化２３】
2016503417.tif 000025
ジクロロメタン ５mL中に、（４−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン−２−イル）メチルアミン塩酸塩（９９mg、０.３４mmol）、２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−酢酸（９６mg、０.３５mmol）、ＢＯＰ試薬（１５４mg、０.３５mmol）及びＴＥＡ（０.２mL）を混合した。混合物を一晩撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣をISCOフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １１ｇ、ヘキサン中の酢酸エチル ０％〜５０％）で精製して、所望の化合物を白色の固体（１３３mg、７４％）として与えた。［ＭＨ］＋＝５１７.９。
【００８２】
実施例９
２−［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−Ｎ−［４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド
【化２４】
2016503417.tif 000026
ジクロロメタン ５mL中に、（４−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）モルホリン−２−イル）メチルアミン塩酸塩（９９mg、０.３４mmol）、［エチル−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−酢酸（８７.２mg、０.３４mmol）、ＢＯＰ試薬（１４８mg、０.３４mmol）及びＴＥＡ（０.２mL）を混合した。混合物を一晩撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣をISCOフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １１ｇ、ヘキサン中の酢酸エチル ０％〜６０％）で精製して、所望の化合物を白色の固体（１２５mg、７４％）として与えた。［ＭＨ］＋＝５０４.０。
【００８３】
実施例１０
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｒ）−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド
【化２５】
2016503417.tif 000027
キラルカラム（Diacel IA ３.０×２５cm、ＣＯ２中の４０％メタノール）を使用して、（実施例８の）対応するラセミ体のＳＦＣ分離を行うことにより上記化合物を得た。最初の画分を濃縮して、（Ｒ）−異性体と帰属した。［ＭＨ］＋５１７.９。
【００８４】
実施例１１
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［（Ｓ）−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド
【化２６】
2016503417.tif 000028
キラルカラム（Diacel IA ３.０×２５cm、ＣＯ２中の４０％メタノール）を使用して、（実施例８の）対応するラセミ体のＳＦＣ分離を行うことにより上記化合物を得た。２番目の画分を濃縮して、（Ｓ）−異性体と帰属した。［ＭＨ］＋５１７.９。
【００８５】
実施例１２
２−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−イソプロピル−アミノ］−Ｎ−［４−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−モルホリン−２−イルメチル］−アセトアミド
【化２７】
2016503417.tif 000029
ジクロロメタン（６mL）中に、２−（４−フルオロ−Ｎ−イソプロピルフェニルスルホンアミド）酢酸（１０８mg、０.３９mmol）、（４−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）モルホリン−２−イル）メチルアミン二塩酸塩（１３１mg、０.３９mmol）、及びＴＥＡ（０.２２mL）を混合した。この攪拌溶液に、ＢＯＰ試薬（１７４mg、０.３９mmol）を加えた。混合物を室温で６時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、残渣を酢酸エチル及び水で抽出し、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させた。残渣をISCOフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の酢酸エチル  ０％〜１００％）で精製して、白色の粉末（１６０mg、７９％）を与えた。［ＭＨ］＋＝５１９.０。
【００８６】
実施例１３
ＩＣ５０の決定
用量反応アッセイ：ChanTest ｈＴＲＰＡ１−ＣＨＯ安定トランスフェクト細胞株
細胞培養及びアッセイ試薬：
Ham's F12                                     （GIBCO #11765-047）
テトラサイクリン不含ウシ胎仔血清        （ClonTech#631106, Lot A301097018）
ブラストサイジン（10 mg/ml原液）              （GIBCO #A11139-02）
Zeocin（100 mg/ml原液）                       （GIBCO #R250-01）
ドキシサイクリン                              （SIGMA #D9891）
ペニシリン−スプレプトマイシン（Spreptomycin）溶液（100X）（GIBCO #15140-122）
GlutaMAX（100X）                              （GIBCO #35050）
トリプシン−ＥＤＴＡ                          （GIBCO #25200-056）
ＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムを含まない）（GIBCO #14190）
ＨＢＳＳ                                      （GIBCO #14025）
Ｈｅｐｅｓ                                    （GIBCO #15630）
ＢＳＡ（脂肪酸不含、低エンドトキシン）        （SIGMA #A8806-5G）
ＤＭＳＯ                                      （SIGMA #D2650）
ＡＰ−１８                                    （SIGMA #A7232）
シンナムアルデヒド                            （SIGMA #W228613）
ＡＴＰ                                        （SIGMA #A-6419）
ジフェニルボリン酸２−アミノエチル            （SIGMA #D9754）
メントール                                    （Sigma #M2772）
ＦＬＩＰＲカルシウム３アッセイキット          （Molecular Devices #R8108）
プロベネシド                                  （INVITROGEN #36400）
プレート                                      （BD#35-3962）
【００８７】
ＣＨＯ−Ｋ１  Tet-On HOMSA  ＴＲＰＡ１クローン２０
チャイニーズハムスター卵巣細胞、誘導性発現
クローン＃２０、継代＃２６で受領
この細胞株のチャネル発現は、少なくとも８０継代安定であることが証明されている
マイコアラートキット（MycoAlert Kit）でマイコプラズマ不含を検証
増殖及び保存した細胞株
【００８８】
増殖条件：
ＣＨＯ−Ｋ１  Tet-On HOMSA  ＴＲＰＡ１クローン２０の増殖培地
１０％テトラサイクリン不含ＦＢＳを含むHam's F-12
１×ペニシリン−ストレプトマイシン
１×glutamax
０．０１mg/mlブラストサイジン
０．４０mg/ml Zeocin
【００８９】
細胞株倍加速度は、約１５時間であった。培養プレートは、８０％の密集度を超えなかった。
【００９０】
発現を誘導するために、ブラストサイジン／Zeocin不含培地に１ug/mlの最終濃度でテトラサイクリンを加えた。実験は誘導の２４時間後に行った。
【００９１】
播種条件ＣＨＯＫ１／ＴＲＰＡ１細胞：
０．０２５％トリプシン／ＥＤＴＡで細胞を採取。
【００９２】
選択抗生物質を含まない増殖培地に細胞を再懸濁。
【００９３】
細胞密度を測定及び１ug/mlドキシサイクリンを含有する培地に２．４×１０５細胞/mlに希釈し、３８４ウェル黒色／透明組織培養処理プレートに２５ul/ウェルで播種。
【００９４】
３７℃で一晩インキュベート。
【００９５】
カルシウム流束アッセイ：
アッセイ当日：
試薬：
置換緩衝液：ハンクス平衡塩類溶液、２０mM ＨＥＰＥＳ（０．００５％  ＢＳＡ及び２×プロベネシドを伴う）
色素ローディング緩衝液：Cal-3 NWカルシウム色素は、１バイアルの内容物を、２０mM   ＨＥＰＥＳを含有するハンクス平衡塩類溶液５００mlで溶解することにより調製した。
【００９６】
−ＣＨＯＫ１／ＴＲＰＡ１細胞の対照化合物：
ＡＰ−１８、原液１０mM、複合緩衝液（ＨＢＳＳ／２０mM  ＨＥＰＥＳ／０．００５％  ＢＳＡ）中に３．５×化合物希釈物を調製−最終濃度１０uM。
【００９７】
シンナムアルデヒドの調製（アゴニスト添加）：
ＦＷ＝１３２．１６
比重＝１．０４６gm/cc
１．３２gm/１．０４６gm/cc＝原液１．２６ml
ＤＭＳＯ  １．７４mlの添加＝３．３Ｍ原液
使用溶液４．５×（複合緩衝液（ＨＢＳＳ／２０mM  ＨＥＰＥＳ／０．００５％  ＢＳＡ）中に最終１００uM）
【００９８】
化合物希釈物は、５又は１０mM原液から調製した（１００％  ＤＭＳＯ）：
【００９９】
容量及び濃度の調整を、所望の最終アッセイ濃度を反映させるために滴定時に行った。
【０１００】
２０μM（３倍希釈系列、１１段階）又は３０μM（２倍希釈系列、１１段階）のいずれかで化合物を試験した。
【０１０１】
希釈化合物３μlを、二重反復でWeidmann３８４ウェルプレートに移した。
【０１０２】
化合物プレートを、ＨＢＳＳ／２０mM  ＨＥＰＥＳ／０．００５％  ＢＳＡ緩衝液（複合緩衝液）１００ulで再懸濁した：
カラム１Ａ−Ｈ：緩衝液／ＤＭＳＯ（ブランク）
カラム２Ａ−Ｈ：ＡＰ−１８（ＣＨＯＫ１  ＴＲＰＡ１細胞の対照アンタゴニスト）
カラム１Ｉ−Ｐ：ＡＴＰ（ＣＨＯＫ１  teton細胞の対照）
カラム２Ｉ−Ｐ：２ＡＰＢ（ＣＨＯＫ１／ＴＲＰＭ８細胞の対照アンタゴニスト）。
【０１０３】
増殖培地を、細胞プレートから除去（２０ul）して、置換緩衝液２０ulを加え、続いて希釈色素２５ulを加えた。全３工程は、PlateWasher BioTek 407を用いて実行した。次にプレートを室温で３０分間インキュベートした。
【０１０４】
インキュベーション後、細胞及び化合物プレートの両方をＦＬＩＰＲに持っていき、希釈化合物／アンタゴニスト／ブランク ２０ulをＦＬＩＰＲにより細胞プレートに移した。次に、プレートを室温で３０分間インキュベートした。３０分のインキュベーション後、プレートをＦＬＩＰＲに戻して、４．５×シンナムアルデヒド２０ulを細胞プレートに加えた。化合物添加並びにアゴニスト添加の間、蛍光読み取りを、細胞プレートの３８４ウェル全部から１．５秒毎に同時に行った。５回の読み取りを、安定な基準値を確定するために行い、次に試料２０ulを急速（３０ul／秒）かつ同時に細胞プレートの各ウェルに加えた。蛍光は、試料／アゴニスト添加の前、最中及び後に、総経過時間１００秒間（化合物添加）及び１２０秒間（アゴニスト添加）連続測定した。アゴニスト添加後の各ウェルの応答（蛍光ピークの上昇）を測定した。リガンド刺激に先立つ各ウェルからの初期蛍光読み取りを、そのウェルからのデータのゼロ基準値として使用した。応答を以下の表１に示されるとおり阻害剤対照の阻害％として表した：
【０１０５】
【表１】
2016503417.tif 000030
【０１０６】
特定の実施態様の変更を行ってもよく、これが依然として添付の特許請求の範囲の範囲内にあることから、本発明は上述した本発明の特定の実施態様に限定されないことを理解されたい。
【国際調査報告】
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