(57)【要約】ＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することによって、２型糖尿病を治療し、２型糖尿病の発症を制限し、かつ前糖尿病状態を治療するための方法を本明細書に開示する。対象からの試料中のＧＰＢＰ量を測定し、対照と比較することによって、前糖尿病状態を診断し、かつ２型糖尿病を発症する傾向を診断するための方法も本明細書に開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
２型糖尿病を治療するための方法であって、２型糖尿病を治療するために有効量のグッドパスチャー抗原結合タンパク質（ＧＰＢＰ）阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
２型糖尿病の発症を制限するための方法であって、２型糖尿病の発症を制限するために、有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項３】
前糖尿病状態を治療するための方法であって、前記前糖尿病状態を治療するために有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項４】
対照と比較して、前記対象の循環ＧＰＢＰが増加している、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記対象が前糖尿病状態を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ＧＰＢＰ阻害剤が抗ＧＰＢＰモノクローナル抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＧＰＢＰモノクローナル抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＧＰＢＰ阻害剤が、式：
【化１】
2016534981.tif 000017
（式中、ＲはＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＧＰＢＰ阻害剤が、式：
【化２】
2016534981.tif 000018
（式中、ＲはＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、および−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である）
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＧＰＢＰ阻害剤が、３−［４’’−メトキシ−３，２’−ジメチル−（１，１’；４’，１’’）テルフェニル−２’’−イル］プロピオン酸、３−［２’−メチル−４’’−メトキシ−３−（トリフルオロメチル）−（１，１’；４’，１’’）テルフェニル−２’’−イル］プロピオン酸、それらの組み合わせ、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＧＰＢＰ阻害剤が、３−［４’’−メトキシ−３，２’−ジメチル−（１，１’；４’，１’’）テルフェニル−２’’−イル］プロピオン酸、またはその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＧＰＢＰ阻害剤が、
（ａ）ＧＰＢＰに選択的な抗体またはアプタマー；
（ｃ）ＧＰＢＰのｍＲＮＡに選択的な阻害性核酸；
（ｄ）一般式Ｘ１−ＳＨＣＩＸ２−Ｘ３（配列番号１）のアミノ酸配列を含むペプチド
（式中、Ｘ１は、配列ＡＴＴＡＧＩＬＡＴＬ（配列番号２）の０〜１０個のアミノ酸であり、
Ｘ２は、ＥまたはＱであり、
Ｘ３は、配列ＬＭＶＫＲＥＤＳＷＱ（配列番号３）の０〜１０個のアミノ酸である）；
（ｅ）ＳＨＣＩＥ（配列番号４）、ＳＨＣＩＱ（配列番号５）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号６）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＱＬＭＶＫＲ（配列番号７）、およびＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド；ならびに
（ｆ）Ｉ−２０：
ＲＤＥＶＩＧＩＬＫＡＥＫＭＤＬＡＬＬＥＡＱＹＧＦＶＴＰＫＫＶＬＥＡＬＱＲＤＡＦＱＡＫＳＴＰＷＱＥＤＩＹＥＫＰＭＮＥＬＤＫＶＶＥＫＨＫＥＳＹＲＲＩＬＧＱＬＬＶＡＥＫＳＲＲＱＴＩＬＥＬＥＥＥＫＲＫＨＫＥＹＭＥＫＳＤＥＦＩＣＬＬＥＱＥＣＥＲＬＫＫＬＩＤＱＥＩＫＳＱＥＥＫＥＱＥＫＥＫＲＶＴＴＬＫＥＥＬＴＫＬＫＳＦＡＬＭＶＶＤＥＱＱＲＬＴＡＱＬＴＬＱＲＱＫＩＱＥＬＴＴＮＡＫＥＴＨＴＫＬＡＬＡＥＡＲＶＱＥＥＥＱＫＡＴＲＬＥＫＥＬＱＴＱＴＴＫＦＨＱＤＱＤＴＩＭＡＫＬＴＮＥＤＳＱＮＲＱＬＱＱＫＬＡＡＬＳＲＱＩＤＥＬＥＥＴＮＲＳＬＲＫＡＥＥＥ（配列番号９）
からなる群から選択される１つ以上の阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前糖尿病状態を診断するための方法であって、
（ａ）前糖尿病状態のリスクのある対象からの試料中のＧＰＢＰ量を決定することと、
（ｂ）対照試料中のＧＰＢＰ量と前記試料中のＧＰＢＰ量を比較することと、
を含み、前記対照試料と比較した前記試料中のＧＰＢＰ量の増加が、前記対象における前糖尿病状態の存在を示す方法。
【請求項１４】
２型糖尿病を発症する傾向を診断するための方法であって、
（ａ）２型糖尿病を発症するリスクのある対象からの試料中のＧＰＢＰ量を決定することと、
（ｂ）対照試料中のＧＰＢＰ量と前記試料中のＧＰＢＰ量を比較することと、
を含み、前記対照試料と比較した前記試料中のＧＰＢＰ量の増加が、前記対象において２型糖尿病を発症する傾向を示す方法。
【請求項１５】
前記検出が、
（ａ）前記ＧＰＢＰへの前記ＧＰＢＰ結合分子の選択的結合を促進する条件下で、ＧＰＢＰと結合するＧＰＢＰ結合分子と前記対象からの血漿試料とを接触させることと、
（ｂ）未結合の血漿および／またはＧＰＢＰ結合分子を除去することと、
（ｃ）前記血漿試料中の前記ＧＰＢＰ結合分子と前記ＧＰＢＰとの間の複合体形成を検出することと、
を含み、複合体形成が前記試料中のＧＰＢＰの尺度を提供する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記方法が、ヒト血漿からのネイティブの循環ＧＰＢＰを検出することを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＧＰＢＰ結合分子が抗体を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＧＰＢＰがＧＰＢＰ−１である、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１３年９月２７日出願の米国仮特許出願第６１／８８３７９２号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
基底膜ＩＶ型コラーゲン（α３ＮＣ１）のα３鎖の非コラーゲン性（ＮＣ１）ドメインの立体構造は、部分的にリン酸化に依存する。グッドパスチャー抗原結合タンパク質（ＧＰＢＰ）（ＷＯ  ００／５０６０７；ＷＯ  ０２／０６１４３０）は、その超分子集合体中にα３ＮＣ１ドメインの立体構造異性化を触媒する非従来型の新規タンパク質キナーゼであり、基底膜における複数のα３ＮＣ１立体構造異性体の生成および安定化をもたらす。ＧＰＢＰのレベルの上昇は、グッドパスチャー（ＧＰ）疾患を仲介する自己免疫応答を行う、非寛容化α３ＮＣ１立体構造異性体の生成と関連付けられてきた。ＧＰ患者では、α３ＮＣ１（ＧＰ抗原としても知られている）に対する自己抗体は、急速進行性糸球体腎炎、多くの場合肺出血を引き起こし、これら２つはＧＰ病の主要な臨床徴候である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
ＣＯＬ４Ａ３ＢＰは、細胞内（すなわち、ミオシン）および細胞外（すなわち、ＩＶ型コラーゲン）の構造タンパク質超分子組織の調節のための遺伝子である。一次遺伝子産物ＧＰＢＰ（ＧＰＢＰ−１または７７ｋＤのＧＰＢＰとしても知られている）は、細胞外コンパートメントに主に存在し、循環中に、またはＩＶ型コラーゲンに結合して見られ得る。興味深いことに、この遺伝子は、主に細胞内に存在するアイソフォーム、および細胞質中で可溶性のアイソフォーム（すなわち、ＧＰＢＰΔ２６またはＣＥＲＴとしても知られているＧＰＢＰ−２、）または不溶性のアイソフォーム、ならびに細胞膜および細胞小器官に結合したアイソフォーム（すなわち、９１ｋＤのＧＰＢＰとしても知られているＧＰＢＰ−３）の別々のアイソフォームを発現する（ＷＯ  ００／５０６０７；ＷＯ  ２０１０／００９８５６；Ｒｅｖｅｒｔ−Ｒｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２８６，３５０３０−３５０４３）。
【発明の効果】
【０００４】
一態様において、本発明は、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）を治療するためかまたはＴ２Ｄの発症を制限するための方法であって、Ｔ２Ｄを治療するためかまたはＴ２Ｄの発症を制限するために有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０００５】
別の態様において、本発明は、前糖尿病状態を治療するための方法であって、前糖尿病状態を治療するために、抗ＧＰＢＰ抗体を含むがこれに限定されない有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０００６】
さらなる態様において、本発明は、前糖尿病状態を診断するための方法であって、
（ａ）前糖尿病状態のリスクのある対象からの試料中のＧＰＢＰ量を決定することと、
（ｂ）対照試料中のＧＰＢＰ量と試料中のＧＰＢＰ量を比較することと、
を含み、対照試料と比較した試料中のＧＰＢＰ量の増加が対象における前糖尿病状態の存在を示す方法を提供する。
【０００７】
別の態様において、本発明は、Ｔ２Ｄを発症する傾向を診断するための方法であって、
（ａ）前糖尿病状態を有するリスクのある対象からの試料中のＧＰＢＰ量を決定することと、
（ｂ）対照試料中のＧＰＢＰ量と試料中のＧＰＢＰ量を比較することと、
を含み、対照試料と比較した試料中のＧＰＢＰ量の増加が対象においてＴ２Ｄを発症する傾向を示す方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】細胞外グルコースレベルの増加がＧＰＢＰの発現を誘導する。Ｃ２Ｃ１２細胞を、２％ウマ血清および抗生物質を補充したＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）中で５日間分化させた。培養物をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄し、示した濃度のグルコースを含み、２％ウマ血清を補充したＤＭＥＭでさらに２４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、４℃で３０分間、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のトリトンＸ−１００、１ｍＭのＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリド）、１０ｍｇ／ｍＬのロイペプチンに溶解した。他の場所に示されるように、溶解物を遠心分離（１６０００×ｇ、５分、４℃）により清澄化し、上清の総タンパク質濃度を決定し（Ｂiｏ−Ｒａｄ社）、同様の量の各抽出物（５０μｇ）を、抗ＧＰＢＰモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｎ２７および抗チューブリン（Ｓｉｇｍａ社）でウェスタンブロットによって分析した。
【図２】ＧＰＢＰキナーゼ阻害が、増加した細胞外グルコース濃度下でグルコース消費を高める。Ａ、Ａ５４９細胞を、２４時間、示したグルコース濃度でＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシン中で培養した。次いで、細胞を、３０分間４℃で、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のトリトンＸ−１００、０．１％  ＳＤＳ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍＬのロイペプチン、２０ｍＭのＮａＦに溶解した。溶解物を５分間（４℃）、１６，０００×ｇでの遠心分離により清澄化し、上清のタンパク質濃度を決定した（Ｂiｏ−Ｒａｄ社）。同様の量の各溶解物（５０μｇ）を、Ｓｅｒ３１８がリン酸化されたＡＳ１６０タンパク質（Ｐ Ｓｅｒ ３１８ ＡＳ１６０）、ＧＰＢＰおよびチューブリンを検出するために、それぞれＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Ｆｉｂｒｏｓｔａｔｉｎ ＳＬ社およびＳｉｇｍａ社から入手した一次光体、ならびにＰｒｏｍｅｇａ社製のＨＲＰ結合抗ウサギＩｇＧおよび抗マウスＩｇＧ二次抗体を用いてウェスタンブロットにより分析した。アマシャムＥＣＬプライムウェスタンブロッティング検出試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて現像し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ ４０００ミニ装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で画像取得を行った。Ｂ、Ａ５４９細胞を、示した濃度のＴ１２と共に１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ：Ｆ−１２（３１５ｍｇのグルコース／ｄＬ）中で１４時間培養した。インキュベーション後、細胞をＡと同様に溶解し、上清中のタンパク質濃度を同様に評価した。培地中のグルコース濃度を、Ｇｌｕｃｏｃａｒｄ Ｇ＋メーター（Ａｒｋｒａｙ Ｆａｃｔｏｒｙ社）を用いてインキュベーション期間の開始時および終了時に測定し、細胞によるグルコース取り込みを、正規化の目的に対応する溶解物のタンパク質濃度を用いて計算した。同様の結果を、ドキソルビシン（０．５μΜ）（データは示さず）、異なるＧＰＢＰキナーゼ阻害剤（ＷＯ／２０１４／００６０２０）を用いて取得した。Ｃ、Ａのように、Ａ５４９細胞をＴ１２の非存在下（対照）または存在下（５０μＭ）で、ＤＭＥＭ：Ｆ−１２（３１５ｍｇのグルコース／ｄＬ）＋１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシン中で２０時間インキュベートし、溶解した。Ａのように、同様の量の各溶解物（５０μｇ）を、Ｓｅｒ３１８がリン酸化されたＡＳ１６０タンパク質（Ｐ Ｓｅｒ ３１８ ＡＳ１６０）またはチューブリンの検出のためにウェスタンブロットにより分析した。
【図３】ＧＰＢＰキナーゼ阻害はまた、生理的な細胞外グルコース濃度下でグルコース消費を高める。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞を、１０日間、２％ウマ血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ中で筋管に分化させ、その後、示した時間、Ｔ１２（５０μΜ）の非存在下または存在下で、１１５ｍｇ／ｄＬの初期グルコース濃度で、ＤＭＥＭプラス０．２５％ウマ血清中でインキュベートした。培地中のグルコース濃度を、Ｇｌｕｃｏｃａｒｄ（商標）Ｇ＋メーター（Ａｒｋｒａｙ Ｆａｃｔｏｒｙ社）を用いて測定した。平均値±ＳＥＭ（ｎ＝２）を示す。ｔ−スチューデント検定分析によると、示したグループ間の差は統計的に有意であった。＊Ｐ＝０．０１５２；＊＊＊Ｐ＝０．０００５。
【図４】Ｉｒｓ２−／−マウスは、ＩＶ型コラーゲン発現の増加を示した。腎臓を、８〜１２週齢の雄の野生型（ＷＴ、ｎ＝９）マウス、正常血糖のＩｒｓ２−／−（Ｉｒｓ２−／−、ｎ＝９）マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−（ｎ＝９）マウスから採取し、ＥＭＤミリポア社製の抗ＩＶ型コラーゲン抗体を用いた切片の免疫組織化学的分析のためにパラフィン包埋した。絶食下での血清グルコースレベルが１２０ｍｇ／ｄＬを超えた場合には、マウスを糖尿病とみなした。複合材料中のＩＶ型コラーゲン発現のレベルを、黒（無発現）および白（発現）の色域で表す。代表的な画像を示す。オリジナル倍率：×４００。
【図５】Ｉｒｓ２−／−マウスは、ＣＯＬ４Ａ３ＢＰ発現の増加を示した。腎臓を、８〜１２週齢の雄の野生型（ＷＴ、ｎ＝９）マウス、正常血糖Ｉｒｓ２−／−（Ｉｒｓ２−／−、ｎ＝９）マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−（ｎ＝９）マウスから採取し、Ｆｉｂｒｏｓｔａｔｉｎ ＳＬ社製の抗ＧＰＢＰ ｍＡｂ Ｎ２６を用いた切片の免疫組織化学的分析のためにパラフィン包埋した。絶食下での血清グルコースレベルが１２０ｍｇ／ｄＬを超える場合に、マウスを糖尿病とみなした。複合材料中のＧＰＢＰ発現のレベルを、黒（無発現）および白（発現）の色域で表す。代表的な画像を示す。オリジナル倍率：×４００。
【図６】循環ＧＰＢＰレベルは、正常血糖Ｉｒｓ２欠損マウスにおいて増強される。ＷＯ  ２０１０／００９８５６に記載されているように、血液試料を、屠殺時（８〜１２週齢）に野生型（ＷＴ、ｎ＝１２）マウス、正常血糖Ｉｒｓ２−／−（Ｉｒｓ２−／−、ｎ＝１２）マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−（ｎ＝１９）マウスから採取し、基本的にプロトタイプサンドイッチＥＬＩＳＡで捕捉抗体としてｍＡｂ Ｎ２６および検出抗体としてｍＡｂ Ｎ２７を用いて循環ＧＰＢＰレベルを測定した。絶食下での血清グルコースレベルが、１２０ｍｇ／ｄＬを超える場合に、マウスを糖尿病とみなした。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図７】１０週齢のマウスにおける血糖に対する抗ＧＰＢＰ治療の効果。異なるグループのマウスに、毎週１μｇ／体重１ｇで抗ＧＰＢＰ  ｍＡｂ  Ｎ２６またはマウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ社）を腹腔内注射し、空腹時血中グルコース（尾静脈）を、毎週グルコメーターを用いて監視した。雄では、治療した野生型（ＷＴ＋ｍＡｂ  Ｎ２６、ｎ＝２）、野生型対照（ＷＴ＋Ｃｏｎｔ  ＩｇＧ、ｎ＝２）、治療したＩｒｓ２−／−（ＫＯ＋ｍＡｂ ２６、ｎ＝２）、ＩＲＳ２−／−対照（ＫＯ＋Ｃｏｎｔ  ＩｇＧ、ｎ＝２）。雌では、治療した野生型（ｎ＝２）、野生型対照（ｎ＝２）、治療したＩｒｓ２−／−（ｎ＝３）、Ｉｒｓ２−／−対照（ｎ＝２）。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
引用される全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本出願内で、特に明記しない限り、利用する技術は、次のようないくつかの周知の参考文献のいずれかに見出すことができる：分子クローニング：実験室マニュアル（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス）、遺伝子発現技術（酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、１８５巻、Ｄ．Ｇｏｅｄｄｅｌ（編）、１９９１、アカデミックプレス、カリフォルニア州サンディエゴ）、酵素学における方法の中の「タンパク質精製のガイド」（Ｍ．Ｐ．Ｄｅｕｔｓｈｃｅｒ（編）、（１９９０）アカデミックプレス社）；ＰＣＲプロトコル：方法と応用に対するガイド（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）（Ｉｎｎｉｓら、１９９０、アカデミックプレス、カリフォルニア州サンディエゴ）、動物細胞の培養：基本技術のマニュアル（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、第２版（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ．１９８７．Ｌｉｓｓ社、ニューヨーク州ニューヨーク）、遺伝子導入および発現プロトコル（Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）、１０９〜１２８ページ、Ｅ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ（編）、Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ社、ニュージャージー州クリフトン、およびＡｍｂｉｏｎ社１９９８カタログ（Ａｍｂｉｏｎ社、テキサス州オースティン）。
【００１０】
文脈に特に明確に指示しない限り、本明細書で使用する単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」および「その」は複数の言及を含む。特に明記しない限り、本明細書で使用する「および」は、「または」と交換可能に使用される。
【００１１】
文脈に特に明確に指示しない限り、本発明の一態様について開示される実施形態は、本発明の他の態様の中で同様に、かつ本発明の他の態様に開示される実施形態と組み合わせて使用できる。
【００１２】
一態様において、本発明は、Ｔ２Ｄを治療するための方法であって、Ｔ２Ｄを治療するための有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。この態様では、対象は、Ｔ２Ｄと診断されたものである。別の態様では、本発明は、Ｔ２Ｄの発症を制限するための方法であって、Ｔ２Ｄの発症を制限するための有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。この態様では、対象は、肥満、座りがちな生活、悪い食習慣（例えば、過剰な脂肪、不十分な線維、あまりにも多くの単純な炭水化物など）、前糖尿病状態および／またはＴ２Ｄの家族歴、５０歳以上、高血圧、高コレステロール、ならびに妊娠性糖尿病の病歴を含むが、これらに限定されないものから選択される１以上の危険因子を有する対象を含むが、これに限定されないＴ２Ｄを発症する危険性がある任意の対象であり得る。
【００１３】
さらなる態様では、本発明は、前糖尿病状態を治療するための方法であって、前糖尿病状態を治療するための有効量のＧＰＢＰ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。この態様では、対象は前糖尿病状態を有するものである。本明細書で使用する「前糖尿病状態」は、糖尿病の診断基準の全てではないがいくつかが満たされる状態である。このように、前糖尿病状態は、１）空腹時耐糖能の障害を有し、それによって、経口グルコースチャレンジ（ＯＧＴ）に対するβ細胞の応答が不十分である状態、または２）空腹時グルコース（ＩＦＧ）が常に上昇しており、真性糖尿病として分類されるほど高くはないが正常レベルと考えられるレベルを上回って空腹時血中グルコースが上昇した状態を含み得る。前糖尿病状態は、インスリン抵抗性および心血管病変のリスク増加と関連し得る。前糖尿病状態を有する個人は、Ｔ２Ｄを発症するリスクが比較的高い。
【００１４】
本明細書で使用する「ＧＰＢＰ」は、任意のＧＰＢＰアイソフォーム、すなわち、ＧＰＢＰ−１（配列番号１０）、ＧＰＢＰ−２（配列番号１１）、およびＧＰＢＰ−３（配列番号１２）を指す。ＧＰＢＰ−１（７７ｋＤのＧＰＢＰとしても知られている）は、細胞外コンパートメントに主に存在し、循環中に、またはＩＶ型コラーゲンに結合して見られ得る。ＧＰＢＰ−２（ＧＰＢＰΔ２６またはＣＥＲＴとしても知られている）は、ｍＲＮＡの選択的エクソンスプライシングによって生成され、主に細胞内および細胞質に存在する５９８残基長のＧＰＢＰ−１変異体である。ＧＰＢＰ−３（９１ｋＤのＧＰＢＰとしても知られている）は、代替の非標準的なｍＲＮＡ翻訳開始点から生じた７０７残基長のＧＰＢＰ−１変異体であり、主に細胞内に、かつ原形質膜および細胞小器官の外側を含む細胞膜に結合して存在する。
【００１５】
本明細書で使用する「ＧＰＢＰ阻害剤」は、全てのもしくは個々のＧＰＢＰアイソフォームの活性または発現を減少させる任意の化合物または分子を指す。
【００１６】
以下の実施例で本発明者らによって実証されるように、ＧＰＢＰ−１は、Ｔ２Ｄの動物モデルにおいて発病を仲介し、ＧＰＢＰ−１活性の阻害は高血糖を遅延させるか、または防ぐ。したがって、ＧＰＢＰ−１発現または活性の阻害剤を用いて、Ｔ２Ｄを治療するか、Ｔ２Ｄの発症を制限するか、または糖尿病もしくは前糖尿病状態を有するものを治療することができる。本発明者らは、最近、ＧＰＢＰ−１がサイクルを通じて関連する少なくとも３つの以下の重要な活動を行うことを発見した（データは示さず）：プロテインキナーゼ（細胞質および最終的には、核および小胞体）、シャペロン（小胞体）ならびに炎症性「サイトカイン」（細胞外コンパートメント）。細胞外ＧＰＢＰ−１が呼び戻され、細胞質に戻るので、細胞外部に向かうサイクルの進行はＧＰＢＰ−３の発現により部分的に調節され（ＷＯ  ２０１０／００９８５６）、完成する。ＧＰＢＰ−２の発現が、インビボでＧＰＢＰ−１欠損を補うことができることを示す証拠もあり（Ｒｅｖｅｒｔ−Ｒｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２８６，３５０３０−３５０４３）、ＧＰＢＰ−２の発現がある程度ＧＰＢＰサイクルの正常な進行に寄与していることを支持する。細胞内および細胞外の段階を有するＧＰＢＰサイクルが存在するということは、細胞質中での活性の増強によって引き起こされる障害が阻害剤化合物によって直接的に干渉されるだけでなく、ＥＲ内での活性の阻害剤または細胞外活性をブロックする抗体のいずれかによっても間接的に干渉され得ること、かつ逆もまた同様に、細胞外活性の増強によって引き起こされる障害はブロッキング抗体によって直接的に干渉され、細胞内活性の阻害剤によって間接的に干渉され得ることを意味する。したがって、ＧＰＢＰサイクルを考慮すると、ＧＰＢＰ（ＧＰＢＰ−１、ＧＰＢＰ−２、および／またはＧＰＢＰ−３）のいずれかのアイソフォームの阻害剤を用いて、Ｔ２Ｄを治療するか、Ｔ２Ｄの発症を制限するか、または糖尿病もしくは前糖尿病状態を有するものを治療することができる。
【００１７】
全ての態様および実施形態において、対象は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、または家畜（ウシ、ヒツジなど）を含むが、これらに限定されない任意の哺乳動物であってよい。最も好ましい実施形態において、対象はヒト対象である。
【００１８】
本明細書で使用する「治療する」または「治療している」は、次の１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度を低下させること；（ｂ）治療している障害（複数可）に特徴的な症状もしくは合併症の発症を制限または予防すること、（ｃ）治療している障害（複数可）に特徴的な症状または合併症の悪化を抑制すること、（ｄ）障害（複数可）の症状を以前に示した患者において症状もしくは合併症の再発を制限または予防すること。
【００１９】
本発明の方法で制限することができるＴ２Ｄの症状および合併症には、高血糖症、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、タンパク尿、糸球体クリアランスの障害、糖尿病循環障害、および腎不全が含まれるが、これらに限定されない。これらの症状／合併症のあらゆる程度の制限は、Ｔ２Ｄを有する対象にとって大きな利点である。
【００２０】
本発明の方法を用いて、例えば、対象における高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管病態の進行を制限する／遅らせること、かつ／または対象のＴ２Ｄへの進行を制限する／遅らせることによって前糖尿病を有する対象を治療することができる。
【００２１】
一実施形態において、対象は、対照と比較して循環ＧＰＢＰが増加している。この実施形態は、治療から最も利益を得ることができる対象を特定するのに役立ち得る。このような「増加」は、対照（正常な対象からの対照試料、または対照集団におけるＧＰＢＰの予め定められた「正常」レベルなど）と比較して、例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％、７５％、１００％、またはそれ以上のＧＰＢＰの任意の量の増加であり得る。一実施形態において、標準曲線用の基準としてＧＰＢＰの正常値は、血漿中では１０ｎｇ／ｍｌ未満である。様々な実施形態において、正常ＧＰＢＰの範囲は、血漿中では約１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌであり得る。したがって、一実施形態において、それらの血漿中のＧＰＢＰが１０ｎｇ／ｍｌを上回ると特定された対象は、本発明の方法に従って治療される。循環ＧＰＢＰ量を決定するための方法は、公知である（ＷＯ  ２０１０／００９８５６および米国特許第７９３５４９２号を参照されたい）。
【００２２】
任意の適切なＧＰＢＰ阻害剤は、本発明の方法で用いることができる。一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体などの抗ＧＰＢＰ抗体を含む。本明細書で使用する「抗ＧＰＢＰ抗体」は、抗体が全てまたは個々のＧＰＢＰアイソフォームに結合することを意味する。任意の他の実施形態と組み合わせることができる好適な実施形態において、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体である。本明細書で使用する用語抗体は、本発明のポリペプチド、またはその断片と選択的に反応するその抗体断片を含むことが意図される。抗体は、従来の技術を用いて断片化されるか、または組換えＤＮＡを用いた遺伝子工学により合成することができ、それらの断片は、抗体全体について上記と同様に有用性についてスクリーニングすることができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、ペプシンで抗体を処理することによって生成することができる。生じたＦ（ａｂ’）２断片は、Ｆａｂ断片を生成するために、パパインで処理することができる。モノクローナル抗体断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから本質的になる一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ）２およびＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから本質的になるＦｄ断片；（ｉｖ）ｓｃＦＶ、タンデムｄｉ−ｓｃＦＶ、ダイアボディ、トリ（ア）ボディなどの抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインから本質的になるＦｖ断片；（ｖ）本質的にＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；（ｖｉ）１つ以上の単離されたＣＤＲまたは機能的パラトープが挙げられる。
【００２３】
様々なさらなる実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、以下からなる群から選択される１つ以上の阻害剤を含む：
（ａ）ＧＰＢＰに選択的なアプタマー；
（ｃ）ＧＰＢＰのｍＲＮＡに選択的な阻害性核酸；
（ｄ）一般式Ｘ１−ＳＨＣＩＸ２−Ｘ３（配列番号１）のアミノ酸配列を含むペプチド（式中、Ｘ１は、配列ＡＴＴＡＧＩＬＡＴＬ（配列番号２）の０〜１０個のアミノ酸であり、
Ｘ２は、ＥまたはＱであり、
Ｘ３は、配列ＬＭＶＫＲＥＤＳＷＱ（配列番号３）の０〜１０個のアミノ酸である）、
（ｅ）ＳＨＣＩＥ（配列番号４）、ＳＨＣＩＱ（配列番号５）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号６）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＱＬＭＶＫＲ（配列番号７）、およびＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド；ならびに
（ｆ）Ｉ−２０：
ＲＤＥＶＩＧＩＬＫＡＥＫＭＤＬＡＬＬＥＡＱＹＧＦＶＴＰＫＫＶＬＥＡＬＱＲＤＡＦＱＡＫＳＴＰＷＱＥＤＩＹＥＫＰＭＮＥＬＤＫＶＶＥＫＨＫＥＳＹＲＲＩＬＧＱＬＬＶＡＥＫＳＲＲＱＴＩＬＥＬＥＥＥＫＲＫＨＫＥＹＭＥＫＳＤＥＦＩＣＬＬＥＱＥＣＥＲＬＫＫＬＩＤＱＥＩＫＳＱＥＥＫＥＱＥＫＥＫＲＶＴＴＬＫＥＥＬＴＫＬＫＳＦＡＬＭＶＶＤＥＱＱＲＬＴＡＱＬＴＬＱＲＱＫＩＱＥＬＴＴＮＡＫＥＴＨＴＫＬＡＬＡＥＡＲＶＱＥＥＥＱＫＡＴＲＬＥＫＥＬＱＴＱＴＴＫＦＨＱＤＱＤＴＩＭＡＫＬＴＮＥＤＳＱＮＲＱＬＱＱＫＬＡＡＬＳＲＱＩＤＥＬＥＥＴＮＲＳＬＲＫＡＥＥＥ（配列番号９）。
【００２４】
上記に記載のポリペプチド配列は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第７，３２６，７６８号、同第７，９３５，４９２号、同第６，５７９，９６９号、および同第７，１４７，８５５号を参照されたい。
【００２５】
本明細書に開示される他のＧＰＢＰ阻害剤の合成は、ＷＯ２０１１／０５４５３０中の教示に基づき、当業者が行うことができる。
【００２６】
ペプチドはさらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の添加によって、またはそうでなければ当技術分野で公知のように、半減期の向上をもたらすように誘導体化することができる。ペプチドは、特別な性質を伝えるために、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸（インビボでＬ−アミノ酸特異的プロテアーゼに耐性である）、Ｄ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の組み合わせ、および様々な「デザイナー」アミノ酸（例えば、β−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、およびＮα−メチルアミノ酸など）を含み得る。合成アミノ酸には、リジンについてはオルニチン、およびロイシンまたはイソロイシンについてはノルロイシンが含まれる。
【００２７】
さらに、ペプチドは、新規な性質を有するペプチドを調製するために、エステル結合などのペプチド模倣結合を有することができる。例えば、還元ペプチド結合、すなわち、Ｒ１およびＲ２がアミノ酸残基または配列であるＲ１−ＣＨ２−ＮＨ−Ｒ２を組み入れたペプチドを生成してもよい。還元ペプチド結合は、ジペプチドサブユニットとして導入されてもよい。このようなペプチドは、プロテアーゼ活性に耐性であり、インビボ半減期が延長する。
【００２８】
用語「ペプチド」は、サブユニットアミノ酸、アミノ酸アナログ、またはペプチド模倣体の配列を指すために、その最も広い意味で使用される。ペプチドは、必ずしもペプチド結合によってペプチドに連結されていないさらなる部分を含むことができるが、サブユニットはペプチド結合によって連結されている。例えば、上述したように、ペプチドは、芳香環を含む非アミノ酸分子をさらに含むことができる。
【００２９】
本明細書に記載のペプチドは、化学的に合成するか、または組換え発現させることができる。上述したように、組換え発現は、当技術分野における標準的な方法を用いて達成することができる。このような発現ベクターは、細菌またはウイルスの発現ベクターを含むことができ、そのような宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。
【００３０】
本ペプチド／抗体阻害剤は、薬学的に許容される担体と共に医薬組成物で投与されてもよい。医薬組成物は、本ペプチド／抗体阻害剤に加えて、（ａ）凍結乾燥保護剤、（ｂ）界面活性剤、（ｃ）充填剤、（Ｄ）浸透圧調整剤、（ｅ）安定剤、（ｆ）保存剤および／または（ｇ）緩衝液を含んでもよい。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本医薬組成物中の緩衝液は、トリス緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液または酢酸緩衝液である。本医薬組成物はまた、凍結乾燥保護剤、例えば、スクロース、ソルビトールまたはトレハロースも含むことができる。特定の実施形態において、本医薬組成物は、保存剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、ベンゼトニウム、クロロヘキシジン、フェノール、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、ｏ−クレゾール、p−クレゾール、クロロクレゾール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、安息香酸、およびそれらの様々な混合物を含む。他の実施形態において、本医薬組成物は、グリシンのような充填剤を含む。さらに他の実施形態において、本医薬組成物は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５、ポロキサマー１８８、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタントリラウレート、ソルビタントリステアレート、ソルビタントリオレエート、またはそれらの組み合わせを含む。本医薬組成物はまた、浸透圧調整剤、例えば、製剤をヒトの血液と実質的に等張性または等浸透圧にさせる化合物を含んでよい。例示的な浸透圧調整剤は、スクロース、ソルビトール、グリシン、メチオニン、マンニトール、デキストロース、イノシトール、塩化ナトリウム、アルギニンおよびアルギニン塩酸塩を含む。他の実施形態において、本医薬組成物は、安定剤、例えば、目的のタンパク質と組み合わせた場合に、凍結乾燥形態もしくは液体形態の目的のタンパク質の化学的不安定性および／もしく物理的不安定性を実質的に防止するか、または減少させる分子を含む。例示的な安定剤は、スクロース、ソルビトール、グリシン、イノシトール、塩化ナトリウム、メチオニン、アルギニン、アルギニン塩酸塩を含む。
【００３２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、ＷＯ  ２０１１／０５４５３０に記載されているような式（Ａ）：
【００３３】
【化１】
2016534981.tif 000002
（式中、Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、Ｒ１は水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、存在する場合、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００３４】
式（Ａ）の化合物の別の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２はメチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。
【００３５】
様々なさらなる好ましい実施形態において、Ｒ１は水素であり、かつ／またはＲ４はメチルである。さらに好ましい実施形態において、式（Ａ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、
【００３６】
【化２】
2016534981.tif 000003
からなる群から選択される。
【００３７】
最も好ましい実施形態において、本化合物は、
【００３８】
【化３】
2016534981.tif 000004
またはその薬学的に許容される塩である。
【００３９】
別の好ましい実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｂ）：
【００４０】
【化４】
2016534981.tif 000005
（式中、ＲはＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、または−（ＣＨ２）１−５Ｃ（Ｏ）ＯＨである）
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００４１】
別の実施形態において、式ＢのＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｃ）：
【００４２】
【化５】
2016534981.tif 000006
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００４３】
式（Ｂ）または（Ｃ）のＧＰＢＰ阻害剤の一実施形態において、ＲはＮおよびＣＲ３から選択され、Ｒ３は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）からなる群から選択され、Ｒ１は水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、または−（ＣＨ２）１−５Ｃ（Ｏ）ＯＨである。
【００４４】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式：
【００４５】
【化６】
2016534981.tif 000007
を有する化合物である。
【００４６】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々な実施形態において、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり得る。例えば、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキル、メチル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、フルオロメチル、ジフルオロメチル、ヒドロキシメチル、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり得る。
【００４７】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、メチル、プロピル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、または−（ＣＨ２）１−５Ｃ（Ｏ）ＯＨであり得る。
【００４８】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり得る。
【００４９】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、メチル、またはトリフルオロメチルであり得る。
【００５０】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物のさらなる実施形態において、Ｒ１は水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、存在する場合、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００５１】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の別の実施形態において、Ｒ１は、水素またはメトキシであり、Ｒ２はヒドロキシメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、メチル基またはトリフルオロメチルであり、Ｒ４は、Ｈまたはメチルである。
【００５２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｄ）：
【００５３】
【化７】
2016534981.tif 000008
（式中、ＲはＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００５４】
一実施形態において、式（Ｄ）の化合物は、式：
【００５５】
【化８】
2016534981.tif 000009
の化合物である。
【００５６】
式（Ｄ）の化合物の任意の実施形態の一実施形態において、Ｒ１は水素である。式（Ｄ）の化合物の任意の実施形態の別の実施形態において、ＲはＣＲ３であり、Ｒ３はホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。別の実施形態において、Ｒ３は−ＣＯＨである。様々な実施形態において、Ｒ２は、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（ＯＥｔ）であり得る。様々なさらなる実施形態において、Ｒ４は、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または−ＣＨ２−Ｐｈであり得る。好ましい実施形態において、式Ｄの化合物は、式：
【００５７】
【化９】
2016534981.tif 000010
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００５８】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）：
【００５９】
【化１０】
2016534981.tif 000011
（式中、ＲはＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００６０】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（ＩＩ）：
【００６１】
【化１１】
2016534981.tif 000012
の化合物である。
【００６２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）：
（式中、ＲはＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、および−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である）
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００６３】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）または（ＩＩ）：
（式中、ＲはＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である）
の化合物である。
【００６４】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は式（ＩＩ）の化合物であり、式中、ＲはＮである。これらの化合物は、式（ＩＩＩ）：
【００６５】
【化１２】
2016534981.tif 000013
によって代表され得る。
【００６６】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物であり、式中、ＲはＣＲ５である。これらの化合物は、式（ＩＶ）：
【００６７】
【化１３】
2016534981.tif 000014
によって代表され得る。
【００６８】
一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ１は水素、ヒドロキシ、またはＣ１−Ｃ６アルコキシである。一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ１は水素である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはスルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）である。
【００６９】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。例えば、特定の実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、またはイソプロピルなどのＣ１−Ｃ６アルキルであり得る。他の実施形態において、Ｒ２は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、またはトリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり得る。Ｒ２は、特定の実施形態において、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり得る。例えば、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）は、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、または２−ヒドロキシエチルであり得る。
【００７０】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ２はメチルである。別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。
【００７１】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。例えば、特定の実施形態において、Ｒ３は、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣＨ３）、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）、または−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣ（ＣＨ３）３）であり得る。他の実施形態において、Ｒ３は、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）であり得る。
【００７２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ３は−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。一実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、またはベンジルオキシである。別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ４は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシ（例えば、メトキシ）である。好ましくは、Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルコキシである。より好ましい実施形態において、Ｒ４はメトキシである。
【００７３】
一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）を参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ５は、メチルなどのＣ１−Ｃ６アルキルである。さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）を参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ５は、トリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。
【００７４】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、
式中、Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）チオ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシである。
【００７５】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（ＩＩＩ）のいずれかの化合物であり、
式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）チオ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、またはベンジルオキシである。
【００７６】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｒ４は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００７７】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（ＩＩＩ）のいずれかの化合物であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｒ４は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００７８】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、
式中、Ｒは、存在する場合、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルコキシである。
【００７９】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、
式中、Ｒは、存在する場合、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２はメチルであり、
Ｒ３は−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
Ｒ４はメトキシである。
【００８０】
一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）：
【００８１】
【化１４】
2016534981.tif 000015
（式中、Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００８２】
一実施形態において、式（Ｖ）の化合物は式（ＶＩ）：
【００８３】
【化１５】
2016534981.tif 000016
の化合物である。
【００８４】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物であり、
式中、Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、および−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００８５】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物であり、
式中、Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００８６】
一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ１は水素である。
【００８７】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはスルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００８８】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００８９】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり得る。例えば、特定の実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、またはイソプロピルなどのＣ１−Ｃ６アルキルであり得る。他の実施形態において、Ｒ２は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、またはトリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり得る。Ｒ２は、特定の実施形態において、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり得る。例えば、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）は、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、または２−ヒドロキシエチルであり得る。
【００９０】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ２はメチルである。
【００９１】
一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００９２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかを参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ６は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシ（例えば、メトキシ）である。一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）を参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）を参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ５は、メチルなどのＣ１−Ｃ６アルキルである。さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）を参照して上述したような化合物であり、式中、Ｒ５は、トリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。
【００９３】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかの化合物であり、
式中、Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）チオ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００９４】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかの化合物であり、式中、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、Ｒ６は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３であり、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００９５】
本明細書に開示される他のＧＰＢＰ阻害剤の合成は、ＷＯ２０１１／０５４５３０の教示に基づいて、当業者によって実行され得る。
【００９６】
好ましい一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤は、３−［４’’−メトキシ−３，２’−ジメチル−（１，１’；４’，１’’）テルフェニル−２’’−イル］プロピオン酸、３−［２’−メチル−４’’−メトキシ−３−（トリフルオロメチル）−（１，１’；４’，１’’）テルフェニル−２’’−イル］プロピオン酸、それらの組み合わせ、もしくはそれらの薬学的に許容される塩を含むか、またはそれらからなる。
【００９７】
ＧＢＰＢ阻害剤化合物は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、およびアレルギー反応などなく、患者の組織と接触させて使用するのに適し、合理的な利益／リスク比に相応し、それらの使用目的に効果的な本発明の化合物のカルボン酸塩、アミノ酸付加塩、エステル類、アミド類、およびプロドラッグを含むが、これらに限定されない本発明の化合物の薬学的に許容される塩類、エステル類、アミド類、およびプロドラッグ類、ならびに、可能であれば、本発明の化合物の双性イオン形態を含む。用語「塩類」は、本発明の化合物の比較的非毒性で、無機酸付加塩および有機酸付加塩を指す。これらの塩類は、化合物の最終的な単離および精製の間に、または適切な有機酸または無機酸と遊離塩基形態の精製化合物とを別々に反応させ、そのように形成された塩を単離することによってその場で調製することができる。代表的な塩類には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリル硫酸塩などが含まれる。これらには、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウムなどのアルカリ金属ならびにアルカリ土類金属に基づく陽イオン、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、およびエチルアミンなどを含むが、これらに限定されない非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンの陽イオンが含まれ得る（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＢｅｒｇｅ Ｓ．Ｍ．ら、「医薬塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ）」、１９７７、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。
【００９８】
阻害剤の薬学的に許容される非毒性エステル類の例としては、Ｃ１−Ｃ６アルキルエステル類が挙げられ、その中のアルキル基は直鎖状または分岐状の、置換または非置換のＣ５−Ｃ７シクロアルキルエステル類、ならびにベンジルおよびトリフェニルメチルなどのアリールアルキルエステル類である。メチル、エチル、２，２，２−トリクロロエチル、およびｔｅｒｔ−ブチルなどのＣ１−Ｃ４アルキルエステル類が好ましい。本発明の化合物のエステル類は、従来の方法に従って調製することができる。
【００９９】
阻害剤の薬学的に許容される非毒性アミド類の例としては、アンモニアに由来するアミド類、アルキル基が直鎖状または分枝状である第一級Ｃ１−Ｃ６アルキルアミン類、および第二級Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミン類が挙げられる。第二級アミン類の場合には、アミンは、１個の窒素原子を含む５員または６員の複素環の形態であってもよい。アンモニアに由来するアミド類、Ｃ１−Ｃ３アルキル一級アミン類およびＣ１−Ｃ２ジアルキル二級アミン類が好ましい。本発明の化合物のアミド類は、従来の方法に従って調製することができる。
【０１００】
用語「プロドラッグ」は、インビボで急速に変換され、例えば、血液中での加水分解によって、上記式の親化合物を生じさせる化合物を指す。プロドラッグの徹底的な議論は、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａの「新規デリバリーシステムとしてのプロドラッグ」、ＡＣＳシンポジウムシリーズの１４巻、および薬物設計における生体可逆担体、Ｅｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ（編）、米国薬剤師会およびペルガモンプレス、１９８７の中でなされており、両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０１】
本明細書で使用する用語「アルケニル」は、特に指定のない限り、２〜１０個の炭素を含有し、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素を意味する。アルケニルの代表例としては、エテニル、２−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−メチル−１−ヘプテニル、３−デセニル、および３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
本明細書で使用する用語「アルコキシ」は、本明細書で定義されるような、酸素原子を介して親分子部分に付加されたアルキル基を意味する。アルコキシの代表例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、およびヘキシルオキシが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
本明細書で使用する用語「アルキル」は、特に断りのない限り、１〜１０個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素を意味する。アルキルの代表例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシルが挙げられる。「アルキル」基が、２つの他の部分間の連結基である場合には、アルキル基は直鎖または分枝鎖でもあり得る。例としては、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＣ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
用語「アルキレン」は、二価アルキル基を指す。「アルキレン鎖」は、ポリメチレン基、すなわち、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは、好ましくは、１〜６、１〜４、１〜３、１〜２、または２〜３の正の整数である。置換アルキレン鎖は、１つ以上のメチレン水素原子が置換基で置換されているポリメチレン基である。適切な置換基には、置換脂肪族基について以下に記載のものが含まれる。アルキレン鎖はまた、１つ以上の位置で脂肪族基または置換脂肪族基で置換されてもよい。
【０１０５】
本明細書で使用する用語「アルキニル」は、２〜１０個の炭素原子を含み、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味する。アルキニルの代表例としては、アセチレニル、１−プロピニル、２−プロピニル、３−ブチニル、２−ペンチニル、および１−ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
本明細書で使用する用語「アリール」は、フェニル（すなわち、単環式アリール）、または少なくとも１つのフェニル環を含む二環式環系もしくは芳香族二環式環系に炭素原子のみを含む芳香族二環式環を意味する。二環式アリールは、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニル、または単環式ヘテロシクリルに縮合したアズレニル、ナフチル、またはフェニルであり得る。二環式アリールは、二環系のフェニル部分内に含まれる任意の炭素原子、またはナフチル環もしくはアズレニル環を有する任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。二環式アリールの縮合した単環式シクロアルキルまたは単環式ヘテロシクリル部分は、１個もしくは２個のオキソ基および／またはチア基で任意に置換されている。二環式アリールの代表例としては、アズレニル、ナフチル、ジヒドロインデン−１−イル、ジヒドロインデン−２−イル、ジヒドロインデン−３−イル、ジヒドロインデン−４−イル、２，３−ジヒドロインドール−４−イル、２，３−ジヒドロインドール−５−イル、２，３−ジヒドロインドール−６−イル、２，３−ジヒドロインドール−７−イル、インデン−１−イル、インデン−２−イル、インデン−３−イル、インデン−４−イル、ジヒドロナフタレン−２−イル、ジヒドロナフタレン−３−イル、ジヒドロナフタレン−４−イル、ジヒドロナフタレン−１−イル、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル、ベンゾ［ｄ］[１，３]ジオキソール−４−イル、ベンゾ［ｄ］[１，３]ジオキソール−５−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−５−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−６−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−７−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−８−イル、イソインドリン−１，３−ジオン−４−イル、イソインドリン−１，３−ジオン−５−イル、インデン−１−オン−４−イル、インデン−１−オン−５−イル、インデン−１−オン−６−イル、インデン−１−オン−７−イル、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］[１，４]ジオキサン−５−イル、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］[１，４]ジオキサン−６−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］[１，４]オキサジン３（４Ｈ）−オン−５−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］[１，４]オキサジン−３（４Ｈ）−オン−６−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］[１，４]オキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］[１，４]オキサジン３（４Ｈ）−オン−８−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−５−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−６−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−７−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−８−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−５−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−６−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−７−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−８−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−５−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−６−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−７−イル、キ��キサリン−２（１Ｈ）−オン−８−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾ−ル−２（３Ｈ）−オン−４−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾ−ル−２（３Ｈ）−オン−５−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾ−ル−２（３Ｈ）−オン−６−イル、およびベンゾ［ｄ］チアゾ−ル−２（３Ｈ）−オン−７−イルが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、二環式アリールは、（ｉ）ナフチルまたは（ｉｉ）５員または６員の単環式シクロアルキル、５員もしくは６員の単環式シクロアルケニル、または５員もしくは６員の単環式ヘテロシクリルのいずれかに融合したフェニル環であり、縮合したシクロアルキル基、シクロアルケニル基、およびヘテロシクリル基は、独立して、オキソまたはチアである１または２個の基で任意に置換されている。
【０１０７】
本明細書で使用する用語「ハロ」または「ハロゲン」は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉまたは−Ｆを意味する。
【０１０８】
場合によっては、用語「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」および「ハロアルコキシ」は、１つ以上のハロゲン原子で置換されているアルキル基、アルケニル基またはアルコキシ基を指す。
【０１０９】
本明細書で使用する用語「ヘテロアリール」は、単環式ヘテロアリール、または少なくとも１つの芳香族複素環を含む二環式環系を意味する。単環式ヘテロアリールは、５員環または６員環であり得る。５員環は、二つの二重結合および１、２、３または４個の窒素原子、ならびに任意に１個の酸素または硫黄原子からなる。６員環は、３個の二重結合および１、２、３または４個の窒素原子からなる。５員または６員のヘテロアリールは、ヘテロアリール内に含まれる任意の炭素原子または任意の窒素原子を介して親分子部分に連結されている。単環式ヘテロアリールの代表例としては、フリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピロリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、およびトリアジニルが挙げられるが、これらに限定されない。二環式ヘテロアリールは、フェニル、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニル、単環式複素環、または単環式ヘテロアリールに縮合した単環式ヘテロアリールからなる。二環式ヘテロアリール基の縮合シクロアルキルまたはヘテロシクリル部分は、独立して、オキソまたはチアである１または２個の基で任意に置換されている。二環式ヘテロアリールが、縮合シクロアルキル、シクロアルケニル、またはヘテロシクリル環を含む場合には、二環式ヘテロアリール基が、二環式環系の単環式ヘテロアリール部分内に含まれる任意の炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に連結されている。二環式ヘテロアリールがベンゾ環に縮合した単環式ヘテロアリールである場合には、二環式ヘテロアリール基は、二環式環系内の任意の炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に連結されている。二環式ヘテロアリールの代表例としては、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾキサチアジアゾリル（ｂｅｎｚｏｘａｔｈｉａｄｉａｚｏｌｙｌ）、ベンゾチアゾリル、シンノリニル、５，６−ジヒドロキノリン−２−イル、５，６−ジヒドロイソキノリン−１−イル、フロピリジニル、インダゾリル、インドリル、イソキノリニル、ナフチリジニル、キノリニル、プリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−３−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−４−イル、５，６，７，８−テトラヒドロ−１−イル、チエノピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｃ］[１，２，５]オキサジアゾリル、および６，７−ジヒドロベンゾ［ｃ］[１，２，５]オキサジアゾール−４（５Ｈ）−オニルが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、縮合二環式ヘテロアリールは、フェニル環、５員もしくは６員の単環式シクロアルキル、５員もしくは６員の単環式シクロアルケニル、５員もしくは６員の単環式ヘテロシクリル、または５員もしくは６員の単環式ヘテロアリールのいずれかに融合した５員もしくは６員の単環式ヘテロアリール環であり、縮合したシクロアルキル基、シクロアルケニル基、およびヘテロシクリル基は、独立して、オキソまたはチアである１または２個の基��任意に置換されている。
【０１１０】
ＧＰＢＰ阻害剤は、通常、示された投与経路に適する１種以上のアジュバントと組み合わされる。本阻害剤は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩ならびにカルシウム塩、アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／またはポリビニルアルコールと混合され、かつ従来の投与のために錠剤化またはカプセル化され得る。あるいは、本阻害剤は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、トラガカントゴム、および／または様々な緩衝液に溶解されてもよい。他のアジュバントおよび投与様式は医薬分野でよく知られている。担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を、単独で、またはワックス、もしくは当技術分野で周知の他の材料と共に含み得る。
【０１１１】
ＧＰＢＰ阻害剤は、単独の活性薬剤として投与することができるか、またはそれらは、本発明の方法を実行するのに有用な１つ以上の他の化合物と組み合わせて使用することができる。組合せとして投与される場合には、治療剤は、同時または異なる時間に与えられる別々の組成物として製剤化することができるか、または治療剤は単一の組成物として与えることができる。
【０１１２】
ＧＰＢＰ阻害剤は、（顆粒、粉末または坐剤を含む）固体形態または液体形態（例えば、溶液、懸濁液、もしくはエマルジョン）で構成されてよい。
【０１１３】
ＧＰＢＰ阻害剤は、様々な溶液に適用することができ、滅菌などの従来の医薬操作に供することができ、かつ／または保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤などの従来のアジュバントを含んでもよい。
【０１１４】
ＧＰＢＰ阻害剤は、経口投与、局所投与、吸入もしくはスプレーによる非経口投与、または従来の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する投与単位製剤で直腸投与されてもよい。本明細書で使用する用語非経口には、経皮、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内、もしくは髄腔内の注射または注入技術などが含まれる。ＧＰＢＰ阻害剤を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁液、分散性粉末もしくは顆粒、エマルジョン、硬カプセルもしくは軟カプセル、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤として経口使用に適した形態であってよい。
【０１１５】
経口使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造のための、当該分野で公知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、口当たりのよい製剤を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１種以上の薬剤を含んでよい。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合された有効成分を含む。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア、ならびに滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってよい。錠剤は、コーティングされていなくても、または公知の技術によってコーティングされていてもよい。場合によって、このようなコーティングは、胃腸管での崩壊および吸収を遅らせ、それによって長期間にわたって持続作用を提供するために公知の技術により調製することができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を用いてもよい。
【０１１６】
経口使用のための製剤は、有効成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合された硬ゼラチンカプセルとして、または有効成分が水もしくはオイル媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセル剤として提示されてもよい。
【０１１７】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性物質を含む。このような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムであり、分散剤または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンステアレート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、または脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、または脂肪酸および無水ヘキシトール由来の部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。水性懸濁液は、１種以上の保存剤、例えば、エチル、またはｎ−プロピル−p−ヒドロキシベンゾエート、１種以上の着色剤、１種以上の香味剤、およびスクロースまたはサッカリンなどの１種以上の甘味剤を含み得る。
【０１１８】
油性懸濁液は、植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油に、または流動パラフィンなどの鉱物油に本阻害剤を懸濁することによって製剤化されてもよい。油性懸濁液は、増粘剤、例えば、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含んでよい。甘味剤および香味剤は、口当たりのよい経口製剤を提供するために添加されてよい。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって保存され得る。
【０１１９】
水の添加による水性懸濁液の調製に適する分散性粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１種以上の保存剤と混合したＧＰＢＰ阻害剤を提供する。適切な分散剤または湿潤剤または懸濁剤は、既に上述したものによって例示される。追加の賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤および着色剤も存在してよい。
【０１２０】
ＧＰＢＰ阻害剤は、水中油型エマルジョンの形態で投与されてもよい。油相は、植物油もしくは鉱油またはこれらの混合物であってよい。適切な乳化剤は、天然に存在するゴム、例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム、天然に存在するホスファチド、例えば、大豆、レシチン、ならびに脂肪酸およびヘキシトール由来のエステル類または部分エステル類、無水物、例えば、ソルビタンモノオレエート、および前記部分エステル類とエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。エマルジョンは、甘味剤および香味剤も含んでよい。
【０１２１】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、グルコースまたはスクロースを用いて製剤化することができる。このような製剤は、粘滑剤、保存剤、ならびに香味剤および着色剤も含んでよい。ＧＰＢＰ阻害剤組成物は、無菌注射用の水性または油性懸濁液の形態であってよい。この懸濁液は、上述した適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、公知の技術に従って製剤化されてよい。無菌の注射用製剤は、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。使用され得る、許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油は、溶媒または懸濁媒体として従来使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性の固定油が使用されてもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製に使用される。
【０１２２】
ＧＰＢＰ阻害剤を含む組成物は、例えば、薬物の直腸投与のために、坐剤の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、常温では固体であるが、直腸温度では液体であり、したがって、直腸内で融解して薬物を放出するのに適切な非刺激性賦形剤と薬物を混合することによって調製することができる。このような物質には、ココアバターおよびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１２３】
ＧＰＢＰ阻害剤を含む本発明の組成物は、滅菌媒体中で非経口的に投与されてもよい。使用されるビヒクルおよび濃度に応じて、薬物をビヒクル中に懸濁するか、または溶解することができる。都合のよいことに、局所麻酔薬、保存剤および緩衝剤などのアジュバントをビヒクルに溶解することができる。
【０１２４】
１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ、より好ましくは、１日あたり体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜約５０ｍｇのオーダーのＧＰＢＰ阻害剤の投与量レベルは、上記の病状の治療に有用である。単回投与形態を生成するために担体材料と組み合わせることができるＧＰＢＰ阻害剤の量は、治療される宿主および特定の投与様式に依存して変化する。単位剤形は、一般的に、阻害剤を約１ｍｇ〜約５００ｍｇ含む。
【０１２５】
「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、他の問題もしくは合併症もなく、ヒトおよび動物の組織との接触に適するか、または合理的な利益／リスク比に見合うか、またはそうでなければヒトまたは家畜での使用について容認できると米国食品医薬品局によって承認されている化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【０１２６】
本発明の任意の治療態様の方法の一実施形態において、ＧＰＢＰ阻害剤（複数可）は、インスリン、メトホルミン、スルホニル尿素、αグルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジンジオン、グルカゴン様ペプチド−１およびその類似体、ジペプチジルペプチダーゼ−４阻害剤、およびアンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）を含むがこれらに限定されないＴ２Ｄおよび糖尿病合併症を治療するための１つ以上の他の治療剤と同時投与することができる。
【０１２７】
別の態様において、本発明は、前糖尿病状態を診断するための方法であって、
（ａ）前糖尿病状態を有するリスクのある対象の試料中のＧＰＢＰ量を決定することと、
（ｂ）対照試料中のＧＰＢＰ量と試料中のＧＰＢＰ量を比較することと、
を含み、対照試料と比較した試料中のＧＰＢＰ量の増加は、対象における前糖尿病状態の存在を示す方法を提供する。
【０１２８】
以下の実施例に示すように、ＧＰＢＰの循環レベルは、野生型（ＷＴ）と比較して、正常血糖Ｉｒｓ２−／−マウス（Ｔ２Ｄモデル）で大幅に増加した。しかし、糖尿病Ｉｒｓ２−／−マウスにおいて、ＧＰＢＰの循環レベルの著しい減少が観察され、ＧＰＢＰの上方制御が前糖尿病状態で生じ、Ｔ２Ｄの発症が予測されることが示された。したがって、ＧＰＢＰは、インスリン抵抗性およびＴ２Ｄを発症する傾向の早期発見のために臨床的に使用することができる前糖尿病状態のバイオマーカーである。
【０１２９】
本明細書で使用する「前糖尿病状態」は、糖尿病の診断基準の全てではないがいくつかが満たされている状態である。したがって、前糖尿病状態は、１）経口グルコースチャレンジ（ＯＧＴ）に対するベータ細胞の応答が不十分であることによる病状である、空腹時耐糖能の障害を有する状態、または２）空腹時血中グルコースが、正常レベルであるが、真性糖尿病として分類されるほど十分高くない値を上回って上昇している状態である空腹時グルコース（ＩＦＧ）が常に上昇している状態を含んでよい。前糖尿病状態は、インスリン抵抗性および心血管病変のリスクの上昇と関係づけられ得る。前糖尿病状態を有する個人は、Ｔ２Ｄを発症するリスクが比較的高い。さらなる態様において、本発明は、Ｔ２Ｄを発症する傾向を診断するための方法であって、
（ａ）Ｔ２Ｄを発症するリスクのある対象の試料中のＧＰＢＰ量を決定することと、
（ｂ）対照試料中のＧＰＢＰ量と試料中のＧＰＢＰ量を比較することと、
を含み、対照試料と比較した試料中のＧＰＢＰ量の増加は、対象におけるＴ２Ｄを発症する傾向と相関する方法を提供する。
【０１３０】
このような「増加」は、（健常対象の対照試料、または対照集団中のＧＰＢＰの以前に決定された「正常」レベルなどの）対照に対して、例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％、７５％、１００％、またはそれ以上のＧＰＢＰの任意の増加量であり得る。一実施形態において、標準曲線用の基準としてのＧＰＢＰの正常値は、血漿では１０ｎｇ／ｍｌ未満である。様々な実施形態において、正常ＧＰＢＰの範囲は、血漿では約１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌであり得る。したがって、一実施形態において、血漿中のＧＰＢＰが１０ｎｇ／ｍｌを上回ると特定された対象は、本発明の方法に従って治療される。循環ＧＰＢＰ量を決定するための方法は公知である（ＷＯ  ２０１０／００９８５６および米国特許第７９３５４９２号を参照されたい）。
【０１３１】
本明細書で使用する「Ｔ２Ｄを発症する傾向」は、対象が一般集団と比較してＴ２Ｄを発症するリスクが高いことを意味する。
【０１３２】
これらの実施形態において、本明細書に開示されるように、血清試料を含むがこれに限定されない対象の任意の適切な試料が用いられ得る。
【０１３３】
前糖尿病状態のリスクのある対象および／またはＴ２Ｄを発症するリスクのある対象には、肥満、座りがちな生活、悪い食習慣（例えば、過剰な脂肪、不十分な線維、あまりにも多くの単純な炭水化物など）、前糖尿病状態および／またはＴ２Ｄの家族歴、５０歳以上、高血圧、高コレステロール、ならびに妊娠性糖尿病の病歴を含むが、これらに限定されない、選択される１以上の危険因子を有する対象が含まれるが、これに限定されない。
【０１３４】
一実施形態において、検出は、
（ａ）ＧＰＢＰへのＧＰＢＰ結合分子の選択的結合を促進する条件下でＧＰＢＰと結合するＧＰＢＰ結合分子と対象からの血漿試料とを接触させることと、
（ｂ）未結合の血漿および／またはＧＰＢＰ結合分子を除去することと、
（ｃ）血漿試料中のＧＰＢＰ結合分子とＧＰＢＰとの間の複合体形成を検出することと、
を含み、複合体形成は試料中のＧＰＢＰの尺度を提供する。
【０１３５】
「ＧＰＢＰ結合分子」は、１つ以上の他の生体分子、構造、細胞、組織などとは対照的に、ＧＰＢＰに選択的に結合するペプチドまたは核酸分子である。このようなＧＰＢＰ結合分子の例示的な実施形態は、抗体、アプタマーまたは基質を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用する「ＧＰＢＰ基質」は、ＧＰＢＰに結合するＧＰＢＰ生物活性の標的、またはＧＰＢＰ結合活性を保持するその断片である。このようなＧＰＢＰ基質には、Ｉ−２０（配列番号９）、ＧＰＢＰ相互作用タンパク質（ＧＩＰ）（配列番号１４〜１８）、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）およびそれらの誘導体（配列番号１９〜２２）、プリオンタンパク質（ＰｒＰ）（配列番号２３）、α３ＮＣ１（配列番号２４）、およびアルツハイマー病のβペプチド（Αβ１−４２）（配列番号２５）が含まれるが、これらに限定されない。これらの基質のＧＰＢＰ結合を示す代表的な参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，５７９，９６９号、同第７，１４７，８５５号、および同第７，３２６，７６８号で見つけることができる。
【０１３６】
「血漿試料」とは、血漿、血液の液体成分を意味し、例えば、血液細胞を除去するために、全血を遠心分離することにより調製される。本明細書で使用する血漿試料には、血液凝固因子が除去された血清試料も含まれる。
【０１３７】
血漿試料は、任意の適切な対象から、好ましくはヒト、イヌ、ネコ、ウマ、または家畜（ウシ、ヒツジなど）を含むが、これらに限定されないＴ２Ｄまたは前糖尿病のリスクのある哺乳動物から取得され得る。最も好ましい実施形態において、血漿試料はヒト対象から取得される。
【０１３８】
抗体は、モノクローナル抗体が好ましいが、上記のようなポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナルの任意の選択的ＧＰＢＰ抗体であり得る。
【０１３９】
血漿試料中のＧＰＢＰに対する抗体、アプタマーまたは基質などのＧＰＢＰ結合分子の結合を促進するのに適する条件は、本明細書の教示および下記の実施例に基づいて当業者が決定することができる。例えば、抗体−抗原結合は、多くの場合、疎水性相互作用（いわゆる疎水結合）に依存し、したがって、モル範囲などの高塩濃度を用いて、非特異的結合を減少させ、特異的抗原−抗体結合を増加させることができる。必要に応じて、非結合ＧＰＢＰおよび／もしくはＧＰＢＰ結合分子、または非結合もしくは弱く結合した血清タンパク質、高濃度の血清タンパク質の結合を低減するための非特異的結合の阻害剤、ＧＰＢＰを含むことが知られている対照試料および／もしくはＧＰＢＰと結合しないことが知られている陰性対照、ならびに／またはＧＰＢＰを所有しないことが知られている（例えば、ＧＰＢＰを欠失した）血漿試料の含有物を除去するための１回以上の洗浄工程を含むがこれらに限定されない、選択性および特異性を促進するための追加ステップが含まれ得る。
【０１４０】
本方法は、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光、およびクロマトグラフィー（例えば、血漿中のＧＰＢＰへの抗体の結合を可能にするのに適する条件下で、抗体が表面上に固定され、血漿タンパク質が標識され、表面上を流れるのを可能にするラテラルフローアッセイ）を含むが、これらに限定されない標準的な技術により血漿試料中のＧＰＢＰの存在について試験することができる。一実施形態において、フローサイトメトリーと結び付けられる機能性ビーズ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を使用し、この技術は、生体液または細胞／組織抽出物中のタンパク質のレベルを測定するための新興方法である。具体的には、蛍光マトリックスから作られたビーズを、１つ以上のＧＰＢＰ特異的抗体でコーティングし、血漿試料と混合し、さらに、フィコエリトリンで標識された検出用ＧＰＢＰ抗体とインキュベートする。最後に、ビーズをマトリックス蛍光発光およびフィコエリトリン発光を介した分析物のレベルの測定に従ってビーズを選択するフローサイトメトリープログラムにより分析する。サイトメーターが同時に検出し、判別できるビーズは最大３０種類ある。別の実施形態において、フローサイトメトリーまたはＣＣＤ画像ベースの技術（多重プラットフォーム）と結び付けられるミクロスフェア（ｘ ＭＡＰ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）が使用される。具体的には、ポリスチレン製で、赤色および赤外線フルオロフォアで内部染色されたミクロスフェアを、１つ以上のＧＰＢＰ特異的抗体でコーティングし、血漿試料と混合し、さらにビオチンで標識した検出用ＧＰＢＰ抗体とインキュベートし、最終的に複合体を、フィコエリトリンで標識したストレプトアビジンで検出する。ビーズを、その後、蛍光発光およびフィコエリトリン発光を介した分析物のレベルの測定に従ってビーズを選択する多重化プラットフォームにより分析する。多重化プラットフォームが同時に検出し、判別できるミクロスフェアには、最大５００の異なる種類がある。特定の機能ビーズまたはＧＰＢＰ−特異的抗体でコーティングされたミクロスフェアは、他の分析物に対する結合ペプチド（すなわち、自己抗体）でコーティングされた別々のビーズの種類と混合し、同時に測定することができるので、これらの方法は、高い感度および性能と汎用性を結び付ける。様々な検体の測定は、ＧＰＢＰ決定の可能性を高めることができる。一実施形態において、これらの技術は、ＧＰＢＰの存在下または非存在下でのみ決定され得る。あるいは、これらの技術は定量的であり、試料中のＧＰＢＰの相対量についての情報を提供し得る。定量的な目的では、ＥＬＩＳＡが好ましい。
【０１４１】
免疫複合体形成の検出は、標準的な検出技術によって達成することができる。例えば、免疫複合体の検出は、標識された抗体または二次抗体を使用することによって達成することができる。ラベルの選択を含むこのような方法は、当業者に知られている。あるいは、抗体は、検出可能な物質に結合させることができる。用語「結合」は、検出可能な物質が抗体に物理的に結合されていることを意味するために使用される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる。適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる。発光物質の例としてはルミノールが挙げられる。適切な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０１４２】
本方法は、「正常」レベルのＧＰＢＰを有するか、または血漿が得られた対象の血漿中のＧＰＢＰが以前に決定された正常値を有することが知られている血漿試料からの対照などの対照と、試験血漿試料中で検出されたＧＰＢＰレベルを比較することを含む。様々な実施形態において、対照は、組換えＧＰＢＰまたは基準値を用いて標準曲線を提供する。血漿試料中のＧＰＢＰ量の対照との比較において、対照に対する血漿試料中のＧＰＢＰの増加は、前糖尿病状態の存在および／またはＴ２Ｄを発症する傾向を示す。
【０１４３】
一実施形態において、本方法は、ヒト血漿からのネイティブの循環ＧＰＢＰを検出することを含む。別の実施形態において、ＧＰＢＰ結合分子は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体などの抗体を含む。
【０１４４】
実施例
ＧＰＢＰは、その特定のキナーゼ活性が低分子量の凝集体の活性よりもはるかに高い巨大多量体凝集体を形成する（ＷＯ  ２０００／５０６０７）。５残基長のモチ−フ２６０ＳＨＣＩＥ２６４（配列番号４）は、重要な安定化ネイティブＧＰＢＰ多量体アセンブリである領域のコアである。２６０ＳＨＣＩＥ２６４（配列番号４）を表す単離ペプチド（Ｑ２）および隣接領域（ＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ）（配列番号８）は、効率的にＧＰＢＰキナーゼ活性を阻害した（ＷＯ  ２００４／０７００２５）。Ｑ２を模倣する有機化合物は、ＧＰＢＰキナーゼ活性を阻害することが示されている（ＷＯ  ２０１１／０５４５３０および米国特許第８，５８６，７７６号）。抗癌剤ドキソルビシンも、ＧＰＢＰキナーゼ活性を阻害することが示されている（ＷＯ  ２０１４／００６０２０）。抗ＧＰＢＰモノクローナル抗体も、ＧＰＢＰ活性を阻害することが示されている（ＷＯ  ２０１２／１１３７８５）。
【０１４５】
Ｔ２Ｄは、インスリン抵抗性およびβ細胞不全と関連している。インスリンおよびＩＧＦ−Ｉは、インスリン受容体基質（ＩＲＳ）タンパク質（Ｂｕｒｋｓ ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ、２００１）のリン酸化および活性化を介してそれらの生物学的活性を発揮する。マウスにおけるＩｒｓ２の欠失は、末梢インスリン抵抗性およびβ細胞量の減少をもたらし、糖尿病につながる（Ｗｉｔｈｅｒｓら、１９９８）。雄のＩｒｓ２−ヌルマウスは、約８週齢で高血糖を発症し、１６週齢前に糖尿病の合併症でほとんどが死滅する。ＩＲＳ２が存在しないと、雌マウスにおいて中程度の肥満を引き起こす（Ｂｕｒｋｓら、２０００）。糖尿病の表現型は、雌がよりゆっくりと糖尿病を発症するように性的二型を示し、多くが生後６ヶ月まで生存する（Ｇａｒｃｉａ−Ｂａｒｒａｄｏら、２０１１）。
【０１４６】
実験方法
図１．細胞外グルコースレベルの増加がＧＰＢＰの発現を誘導する。Ｃ２Ｃ１２細胞を、２％ウマ血清および抗生物質を補充したＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）中で５日間分化させた。培養物をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄し、示した濃度のグルコースを含み、２％ウマ血清を補充したＤＭＥＭでさらに２４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、４℃で３０分間、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のトリトンＸ−１００、１ｍＭのＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリド）、１０ｍｇ／ｍＬのロイペプチンに溶解した。他の場所に示されるように、溶解物を遠心分離（１６０００×ｇ、５分、４℃）により清澄化し、上清の総タンパク質濃度を決定し（Ｂiｏ−Ｒａｄ社）、同様の量の各抽出物（５０μｇ）を、抗ＧＰＢＰモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｎ２７および抗チューブリン（Ｓｉｇｍａ社）でウェスタンブロットによって分析した。
【０１４７】
図２．ＧＰＢＰキナーゼ阻害が、増加した細胞外グルコース濃度下でグルコース消費を高める。Ａ、Ａ５４９細胞を、２４時間、示したグルコース濃度でＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシン中で培養した。次いで、細胞を、３０分間４℃で、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のトリトンＸ−１００、０．１％  ＳＤＳ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍＬのロイペプチン、２０ｍＭのＮａＦに溶解した。溶解物を５分間（４℃）、１６，０００×ｇでの遠心分離により清澄化し、上清のタンパク質濃度を決定した（Ｂiｏ−Ｒａｄ社）。同様の量の各溶解物（５０μｇ）を、Ｓｅｒ３１８がリン酸化されたＡＳ１６０タンパク質（Ｐ Ｓｅｒ ３１８ ＡＳ１６０）、ＧＰＢＰおよびチューブリンを検出するために、それぞれＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Ｆｉｂｒｏｓｔａｔｉｎ ＳＬ社およびＳｉｇｍａ社から入手した一次光体、ならびにＰｒｏｍｅｇａ社製のＨＲＰ結合抗ウサギＩｇＧおよび抗マウスＩｇＧ二次抗体を用いてウェスタンブロットにより分析した。アマシャムＥＣＬプライムウェスタンブロッティング検出試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて現像し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ ４０００ミニ装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で画像取得を行った。Ｂ、Ａ５４９細胞を、示した濃度のＴ１２と共に１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ：Ｆ−１２（３１５ｍｇのグルコース／ｄＬ）中で１４時間培養した。インキュベーション後、細胞をＡと同様に溶解し、上清中のタンパク質濃度を同様に評価した。培地中のグルコース濃度を、Ｇｌｕｃｏｃａｒｄ Ｇ＋メーター（Ａｒｋｒａｙ Ｆａｃｔｏｒｙ社）を用いてインキュベーション期間の開始時および終了時に測定し、細胞によるグルコース取り込みを、正規化の目的に対応する溶解物のタンパク質濃度を用いて計算した。同様の結果を、ドキソルビシン（０．５μΜ）（データは示さず）、異なるＧＰＢＰキナーゼ阻害剤（ＷＯ／２０１４／００６０２０）を用いて取得した。Ｃ、Ａのように、Ａ５４９細胞をＴ１２の非存在下（対照）または存在下（５０μＭ）で、ＤＭＥＭ：Ｆ−１２（３１５ｍｇのグルコース／ｄＬ）＋１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシン中で２０時間インキュベートし、溶解した。Ａのように、同様の量の各溶解物（５０μｇ）を、Ｓｅｒ３１８がリン酸化されたＡＳ１６０タンパク質（Ｐ Ｓｅｒ ３１８ ＡＳ１６０）またはチューブリンの検出のためにウェスタンブロットにより分析した。
【０１４８】
図３．ＧＰＢＰキナーゼ阻害はまた、生理的な細胞外グルコース濃度下でグルコース消費を高める。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞を、１０日間、２％ウマ血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ中で筋管に分化させ、その後、示した時間、Ｔ１２（５０μΜ）の非存在下または存在下で、１１５ｍｇ／ｄＬの初期グルコース濃度で、ＤＭＥＭプラス０．２５％ウマ血清中でインキュベートした。培地中のグルコース濃度を、Ｇｌｕｃｏｃａｒｄ（商標）Ｇ＋メーター（Ａｒｋｒａｙ Ｆａｃｔｏｒｙ社）を用いて測定した。平均値±ＳＥＭ（ｎ＝２）を示す。ｔ−スチューデント検定分析によると、示したグループ間の差は統計的に有意であった。＊Ｐ＝０．０１５２；＊＊＊Ｐ＝０．０００５。
【０１４９】
図４．Ｉｒｓ２−／−マウスは、ＩＶ型コラーゲン発現の増加を示した。腎臓を、生後８〜１２週齢の雄の野生型（ＷＴ、ｎ＝９）マウス、正常血糖のＩｒｓ２−／−（Ｉｒｓ２−／−、ｎ＝９）マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−（ｎ＝９）マウスから採取し、ＥＭＤミリポア社製の抗ＩＶ型コラーゲン抗体を用いた切片の免疫組織化学的分析のためにパラフィン包埋した。絶食下での血清グルコースレベルが１２０ｍｇ／ｄＬを超えた場合には、マウスを糖尿病とみなした。複合材料中のＩＶ型コラーゲン発現のレベルを、黒（無発現）および白（発現）の色域で表す。代表的な画像を示す。オリジナル倍率：×４００。
【０１５０】
図５．Ｉｒｓ２−／−マウスは、ＣＯＬ４Ａ３ＢＰ発現の増加を示した。腎臓を、８〜１２週齢の雄の野生型（ＷＴ、ｎ＝９）マウス、正常血糖Ｉｒｓ２−／−（Ｉｒｓ２−／−、ｎ＝９）マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−（ｎ＝９）マウスから採取し、Ｆｉｂｒｏｓｔａｔｉｎ ＳＬ社製の抗ＧＰＢＰ ｍＡｂ Ｎ２６を用いた切片の免疫組織化学的分析のためにパラフィン包埋した。絶食下での血清グルコースレベルが１２０ｍｇ／ｄＬを超える場合に、マウスを糖尿病とみなした。複合材料中のＧＰＢＰ発現のレベルを、黒（無発現）および白（発現）の色域で表す。代表的な画像を示す。オリジナル倍率：×４００。
【０１５１】
図６．循環ＧＰＢＰレベルは、正常血糖Ｉｒｓ２欠損マウスにおいて増強される。ＷＯ  ２０１０／００９８５６に記載されているように、血液試料を、屠殺時（８〜１２週齢）に野生型（ＷＴ、ｎ＝１２）マウス、正常血糖Ｉｒｓ２−／−（Ｉｒｓ２−／−、ｎ＝１２）マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−（ｎ＝１９）マウスから採取し、基本的にプロトタイプサンドイッチＥＬＩＳＡで捕捉抗体としてｍＡｂ Ｎ２６および検出抗体としてｍＡｂ Ｎ２７を用いて循環ＧＰＢＰレベルを測定した。絶食下での血清グルコースレベルが、１２０ｍｇ／ｄＬを超える場合に、マウスを糖尿病とみなした。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【０１５２】
図７．１０週齢のマウスにおける血糖に対する抗ＧＰＢＰ治療の効果。異なるグループのマウスに、毎週１μｇ／体重１ｇで抗ＧＰＢＰ  ｍＡｂ  Ｎ２６またはマウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ社）を腹腔内注射し、空腹時血中グルコース（尾静脈）を、毎週グルコメーターを用いて監視した。雄では、治療した野生型（ＷＴ＋ｍＡｂ  Ｎ２６、ｎ＝２）、野生型対照（ＷＴ＋Ｃｏｎｔ  ＩｇＧ、ｎ＝２）、治療したＩｒｓ２−／−（ＫＯ＋ｍＡｂ ２６、ｎ＝２）、ＩＲＳ２−／−対照（ＫＯ＋Ｃｏｎｔ  ＩｇＧ、ｎ＝２）。雌では、治療した野生型（ｎ＝２）、野生型対照（ｎ＝２）、治療したＩｒｓ２−／−（ｎ＝３）、Ｉｒｓ２−／−対照（ｎ＝２）。
【０１５３】
結果と考察
分化した筋芽細胞では、Ａｋｔの活性化の増加と関連するＧＰＢＰ発現の下方制御（すなわち、ＧＰＢＰ−／−）（Ｒｅｖｅｒｔ−Ｒｏｓら、２０１１）は、細胞質ＧＰＢＰがＡｋｔ活性化を下方制御し、インスリンに応答する細胞のグルコース取り込み能を低下させること（インスリン抵抗性）を明らかにした。一貫して、分化した筋芽細胞において、細胞外グルコース濃度の増加がＧＰＢＰ発現を誘導すること（図１）は、おそらく、細胞内グルコース濃度の増加の有害な影響を防止するための細胞の試みで、細胞外グルコース濃度の増加に応答してＧＰＢＰの細胞内レベルが上昇すること（高血糖症）が示唆される。したがって、濃度の増加した細胞外グルコースにＡ５４９培養物を曝すと、グルコース取り込みの誘導の顕著な特徴である、Ａｋｔ−基質１６０（ＡＳ１６０）のリン酸化状態の低下と関連するＧＰＢＰ発現の漸進的増加が観察された（図２Ａ）。さらに、ＧＰＢＰキナーゼ阻害剤化合物のＴ１２（３−[４''−メトキシ−３，２'−ジメチル−（１，１'；４'，１''）テルフェニル−２''−イル]プロピオン酸の濃度の増加（ＷＯ  ２０１１／０５４５３０および米国特許第８，５８６，７７６号）；Ｔ２Ｄの高血糖状態を表す条件下で培養したＡ５４９細胞におけるグルコース取り込みの漸進的増強（図２Ｂ）が観察された。これらの全てによって、化合物Ｔ１２による細胞質ＧＰＢＰキナーゼ阻害がＡｋｔの脱抑制を介してグルコース取り込みを、およびその後のＡＳ１６０のリン酸化を誘導することが示唆された。したがって、ウェスタンブロットによる対応する細胞培養物の溶解物分析は、化合物Ｔ１２がＡＳ１６０のリン酸化を誘導し（図２Ｃ）、順に、細胞膜へのグルコース輸送体ＧＬＵＴ１／ＧＬＵＴ４のトランスロケーションおよびグルコース取り込みを促進することが期待される（Ｓａｎｏら、２００３）。まとめると、この証拠によって、高血糖に関連するＧＰＢＰの細胞質キナーゼ活性の増強が少なくとも部分的に末梢インスリン抵抗性を仲介することが示唆される。構造的に無関係のさらなるＧＰＢＰキナーゼ阻害剤のドキソルビシン（０．５μΜ）で細胞培養物を処理した場合（データ示さず）にも、同様の結論が得られた（ＷＯ２０１４／００６０２０）。さらに、ＧＰＢＰキナーゼ活性の役割を生理学的グルコース濃度で評価したところ、化合物Ｔ１２は、濃度依存的に細胞外グルコースレベルも低下させたことが示され（図３）、細胞質ＧＰＢＰキナーゼ活性が、正常血統状態と糖尿病状態の両方においてインスリン依存的なシグナル伝達を下方制御することが示唆された。
【０１５４】
Ｔ２ＤにおけるＧＰＢＰの役割を調べるために、発明者らは、最初に、Ｉｒｓ２−／−マウスの腎臓におけるＧＰＢＰとＩＶ型コラーゲンの両方の発現を分析した。糖尿病性腎症は、メサンギウム基質の蓄積および糸球体における基底膜の肥厚ならびに腎尿細管肥大によって特徴付けられる。これらの異常は、ＩＶ型コラーゲンなどの細胞外マトリックスタンパク質の腎臓過剰産生に関連している。これと一致し、臨床研究は、糖尿病患者における尿中ＩＶ型コラーゲン排泄の漸進的増加を報告している（Ｃａｗｏｏｄら、２０１０）。結果として、尿中の高レベルのＩＶ型コラーゲンは、早期糖尿病性腎症の発症および進行のマーカーとして提案されている。Ｉｒｓ２−／−マウスモデルにおける糖尿病の評価では、発明者らはヒトと同じグルコースレベルの基準を適用する；空腹時レベルが１２０ｍｇ／ｄＬを超える場合は、糖尿病と考える。重度の高血糖症を患うマウスが蛋白尿（＞１００ｍｇ／ｄＬ）を示す場合が多いことが観察され、高グルコースレベルに関連した腎機能の低下が示唆される。したがって、発明者らは免疫組織化学を使用して、野生型（ＷＴ）Ｉｒｓ２＋／＋マウス、正常血糖Ｉｒｓ２−／−マウスおよび糖尿病Ｉｒｓ２−／−マウスから得られた腎臓におけるＩＶ型コラーゲン発現を評価した。ＩＶ型コラーゲンの発現は、ＷＴ対照の腎臓と比較してＩｒｓ２−／−マウスの両群で増加したが、糖尿病Ｉｒｓ２−／−マウスよりも正常血糖マウスにおける発現が高かったことが観察された（図４）。過剰発現させた場合（Ｒｅｖｅｒｔら、２００７）、ＩＶ型コラーゲンの超分子構造の調整および糸球体硬化症の誘発におけるＧＰＢＰの役割を考慮して、発明者らは、対照マウスおよびＩｒｓ２−／−マウスの腎臓切片におけるＧＰＢＰ発現を調べた。興味深いことに、ＧＰＢＰ発現はＩＶ型コラーゲン発現に匹敵し、したがって、ＧＰＢＰは、ＷＴ対照と比較してＩｒｓ２−／−マウスの腎臓において過剰発現し、糖尿病Ｉｒｓ２−／−マウスよりも正常血糖マウスにおける発現がなおも高かった（図５）。したがって、これらの知見から、Ｉｒｓ２−／−マウスにおける前糖尿病状態と関連する炎症性サイトカインが、顕性糖尿病（炎症期）を患うマウスにおいてＧＰＢＰ発現を上方制御し得、次いで、これは基礎レベルまで低下することが示唆される。これらの結果は、ＧＰＢＰがＩｒｓ２−／−マウスモデルのＴ２Ｄでも役割を果たすプレ−プロ循環炎症性因子（ＷＯ  ２０１２／１１３７８５）であることと一致している。
【０１５５】
この可能性をさらに評価するために、以前に関発した循環ＧＰＢＰの検出のためのＥＬＩＳＡ（ＷＯ  ２０１０／００９８５６および米国特許第７，９３５，４９２号）を用いて、対照マウスおよびＩｒｓ２−／−マウスの２群（正常血糖および糖尿病）から得た血清試料中のＧＰＢＰレベルを測定した。免疫染色の結果と一致して、ＧＰＢＰの循環レベルは、ＷＴと比較して正常血糖Ｉｒｓ２−／−マウスにおいて有意に増加した（図６）。しかし、糖尿病Ｉｒｓ２−／−マウスでは、ＧＰＢＰの循環レベルの顕著な低下が観察された。これらの結果から、ＧＰＢＰの上方制御が前糖尿病状態において炎症性サイトカインと同時に生じやすいことが示唆される。それゆえに、血清中のＧＰＢＰを検出するための高感度ＥＬＩＳＡの有用性を考慮して、Ｉｒｓ２−／−モデルにおける発明者らの観察は、ＧＰＢＰが、インスリン抵抗性および糖尿病の早期発見のために臨床的に使用することができる前糖尿病状態の潜在的な新規バイオマーカーであることを示す。
【０１５６】
Ｉｒｓ２の欠損は、末梢インスリン抵抗性および膵臓β細胞量の減少（Ｗｉｔｈｅｒｓら、１９９８）によりマウスに糖尿病をもたらす。しかし、この糖尿病の表現型は性的二型が示し、雄のＩｒｓ２−／−マウスは１２週齢までに糖尿病の合併症で死亡する場合が多いが、雌のＩｒｓ２−／−マウスは糖尿病の軽症型を発症し、多くは６ヶ月まで生存する（Ｇａｒｃｉａ−Ｂａｒｒａｄｏ、２０１１）。その上、雌のＩｒｓ２−／−マウスは、対照マウスよりも痩せる場合が多い雄のＩｒｓ２−／−マウスとは対照的に、高レプチン血症を示し、中程度の肥満を発症する（Ｂｕｒｋｓら、２０００）。
【０１５７】
正常血糖Ｉｒｓ２−／−マウスにおいてＧＰＢＰおよびＩＶ型コラーゲンが上方制御されるという発明者らの観察から、このキナーゼが前糖尿病状態から糖尿病状態への進行に関与し得ることが示唆される。実際ＧＰＢＰがこの病理において役割を果たしている場合には、ＧＰＢＰの阻害は、前糖尿病モデルにおける糖尿病の発症を遅延させるか、または予防することが期待される。この可能性を試験するために、正常血糖Ｉｒｓ２−／−マウスを、ＩＶ型コラーゲンのα３ＮＣ１ドメインへのＧＰＢＰの結合を阻害するＧＰＢＰ特異的抗体であるＮ２６（ＷＯ  ２０１２／１１３７８５）で治療した。次いで、グルコースレベルを、代謝状態の指標として監視した。この糖尿病モデルに存在する性的二型を考慮して、雄と雌の両方における抗ＧＰＢＰを評価した。この研究では、マウスが１０週齢の時に治療を開始し、腹腔内注射によって週１回、１μｇ／体重１ｇでＮ２６を投与した。抗ＧＰＢＰで治療したＷＴの雌および雄の空腹時グルコースレベルは、対照ＩｇＧで治療したものと同様であり、抗ＧＰＢＰ治療が、基底グルコースレベルを変化させなかったことを実証した（図７）。治療は、治療開始後１週間の時点でＩｒｓ２−／−雄において正常レベルで血糖を維持することができたが、マウスがＮ２６の注射を受けたか否かに関わらず、第２週の間に高血糖が急速に進行し、同様の値に達し、したがって、全てのＩｒｓ２−／−雄は、研究開始の１ヶ月以内に糖尿病の合併症で死亡した。これとは対照的に、抗ＧＰＢＰ療法で治療した雌のＩｒｓ２−／−は、正常なグルコースレベルで最大７ヶ月間生存したが、対照ＩｇＧで治療した雌のＩｒｓ２−／−は高血糖を漸進的に発症した。
【０１５８】
まとめると、このデータは、プレ−プロ炎症性細胞外ＧＰＢＰ（ＷＯ  ２０１２／１１３７８５）がＩｒｓ２−／−モデルにおいてＴ２Ｄの発症を仲介することを支持する。これはまた、ＧＰＢＰの循環レベルの増加が高血糖およびＴ２Ｄを仲介する炎症の発症の診断に役立つという考えを支持する。したがって、ＧＰＢＰ遮断抗体の早期投与（前糖尿病）は、雄において高血糖の発症を遅延させ、雌では高血糖を防いだ。したがって、発明者らは、細胞外ＧＰＢＰが、前糖尿病段階の検出のための新しい潜在的なバイオマーカーであること、かつＴ２Ｄの治療のための新しい潜在的な治療標的であることを明らかにした。さらに、抗ＧＰＢＰ抗体は、Ｔ２Ｄを発症するＴ２Ｄ検出患者に対する両刃の剣として、およびこれらの患者を治療するための生物学的薬剤として現れる。
【０１５９】
特に興味深いのは、異なる実験モデル（すなわち、筋細胞、肺腺癌Ａ５４９細胞株およびＩｒｓ２−／−マウス）においてＧＰＢＰの３つの無関係な下方制御因子（すなわち、Ｔ１２、ドキソルビシンおよびＮ２６）の個々の投与が細胞外グルコース濃度を減少させることが観察されたことである。細胞外グルコースの減少は、細胞質タンパク質ＡＳ１６０のリン酸化を介して少なくとも部分的に達成され、グルコース取り込みの増強をもたらすという証拠も支持する。この観察は、Ｔ２ＤのＩｒｓ２−／−マウスモデルにおいて病因を仲介する細胞内ＧＰＢＰの活性を調節する細胞外ＧＰＢＰのさらなる独立した証拠を提供する。
【０１６０】
参考文献
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Ｗｉｔｈｅｒｓ ＤＪ，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ ＪＳ，Ｔｏｗｅｒｙ Ｈ，Ｂｕｒｋｓ ＤＪ，Ｒｅｎ ＪＭ，Ｐｒｅｖｉｓ Ｓ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，Ｂｅｒｎａｌ Ｄ，Ｐｏｎｓ Ｓ，Ｓｈｕｌｍａｎ ＧＩ，Ｂｏｎｎｅｒ−Ｗｅｉｒ Ｓ，Ｗｈｉｔｅ ＭＦ．１９９８．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＩＲＳ−２ ｃａｕｓｅｓ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．３９１：９００−４．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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