(57)【要約】  式Ｉによって表される、血管新生の異常増加に抗する化合物およびそれらの中間体が開示されている。上記化合物は、血管新生の異常増加に対する良好な効果を有しており、当該化合物の活性はＶＥＧＦＲ２を抑制することによってもたらされる。上記化合物は、血管新生およびプロテインキナーゼ（例えば、ＶＥＧＦＲ２およびＦＧＦＲ２など）の異常によって引き起こされる疾患（例えば、溢出性黄斑変性症、炎症および悪性腫瘍など）を処置するために使用され得る。【化１】2016515636.tif 000028
2016515636.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2016515636.tif 000025
（ここで、Ｒ１は、Ｈ、アミノ、ヒドロキシまたはスルフィドリルから選択され、Ｒ２は、Ｈ、アミノ、ヒドロキシ、スルフィドリルまたは−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８（ここで、ｎ＝１〜５、Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜３アルキルである）から選択され；Ｒ３は、ＨまたはＣ１〜６アルキルから選択され；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され；Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲンから選択されるか；または、
Ｒ２およびＲ３はそれらと結合している炭素原子とともに、１つまたは２つの異種原子を有する置換または非置換の、５員環または６員環を形成する（ここで、当該異種原子は、Ｎ、ＯまたはＳであり、置換基はＣ１〜６アルキルである））
によって表される化合物、および薬学的に許容可能なそれらの塩もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｒ２は、Ｈ、アミノまたは−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８（ここで、ｎ＝１〜３、Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜２アルキルである）から選択され；Ｒ３は、ＨまたはＣ１〜２アルキルから選択され；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され；Ｒ７は、Ｈまたはハロゲンから選択されるか；または、
Ｒ２およびＲ３はそれらと結合している炭素原子とともに、１つの窒素原子を有する置換または非置換の、５員環または６員環を形成し（ここで、置換基はＣ１〜３アルキルである）、上記ハロゲンは、好ましくはＦまたはＣｌである、請求項１に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグ。
【請求項３】
Ｒ２は、アミノまたは−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８（ここで、ｎ＝１〜３、Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜２アルキルである）から選択されるか；または、Ｒ２およびＲ３はそれらと結合している炭素原子とともに、１つの窒素原子を有する置換または非置換の、５員環または６員環を形成している（ここで、置換基はＣ１〜３アルキルである）、請求項２に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグ。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは、アミノであり、その残りはＨであり；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同じであり、ＦまたはＣｌから選択され；Ｒ７は、Ｈである、請求項２に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグ。
【請求項５】
上記化合物は、以下の化合物
【化２】
2016515636.tif 000026
のうちの１つである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグ。
【請求項６】
血管新生の異常増加を抑制するため、または血管新生の異常増加と関連付けられる疾患を処置するための薬物の調製における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグの、使用。
【請求項７】
血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物がＶＥＧＦＲ２抑制剤である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物が、眼の血管新生に対する薬物であり、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患が、眼の血管新生と関連付けられる疾患である、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物が、脈絡膜の血管新生の抑制剤であり、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患が、脈絡膜の血管新生と関連付けられる疾患である、請求項６に記載の使用。
【請求項１０】
血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物が、溢出性黄斑変性症、糖尿病性網膜症または血管新生緑内障を処置または予防するための薬剤であり、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患が、溢出性黄斑変性症、糖尿病性網膜症または血管新生緑内障である、請求項８または９に記載の使用。
【請求項１１】
プロテインキナーゼ抑制剤薬物または異常なプロテインキナーゼによって引き起こされる疾患を処置するための薬物の調製における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグの、使用。
【請求項１２】
上記プロテインキナーゼは、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＫＩＴ、ＡＵＲＯＲＡ−Ｂ、ＦＧＦＲ２、ＳＲＣ、ＪＡＫ２またはＰ３８−α、好ましくはＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ−βまたはＫＩＴである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグの有効量を含んでいる、薬学的組成物。
【請求項１４】
上記化合物が眼科調製物である、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
式ＩＩ
【化３】
2016515636.tif 000027
（ここで、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲンから選択され；好ましくは、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｃ１〜２アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され、Ｒ７は、Ｈまたはハロゲンから選択され；より好ましくは、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同じであり、ＦまたはＣｌから選択され；Ｒ７は、Ｈである）
によって表される通りの、中間体化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管新生抑制剤および／またはプロテインキナーゼ抑制剤化合物、ならびにそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管新生は、既存の血管から、新しい血管へと生じる過程である。この過程は、血管内皮細胞の移動および増殖にともなって生じる。血管新生は、多くの重篤なヒトの疾患（例えば悪性腫瘍）と関連している。これまでに、眼の血管新生疾患は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症および血管新生緑内障などを包含していることが知られていた。これらの疾患の一般的な特徴は、眼の血管新生の異常増加である（金暁ら、「抗ＶＥＧＦ薬の臨床応用および基本的な機序に対する研究の進展」、中外医療、２０１２年）。
【０００３】
黄斑変性症は、萎縮性および溢出性の２種類に主に分けられ、溢出性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、網膜に侵入する脈絡膜の新生血管、および続いて起こる病理学的変化（例えば、出血、滲出および浮腫など）によって特徴づけられる。溢出性黄斑変性は、萎縮性黄斑変性より重篤な、急速な視力低下を引き起こす。現在、溢出性黄斑変性症の処置における良好な進展がみられる。早期レーザ焼灼止血が、ＶＥＧＦアンタゴニストに取って代わられているが、後者は、その乏しい効果のために、まもなく光線力学療法に取って代わられる。光線力学療法は、向上された効果を有しているが、当該効果は、依然として十分ではない。近年、ヒト由来のＶＥＧＦサブタイプのモノクローナル抗体断片の組換え体である、新たなＶＥＧＦアンタゴニスト−Lucentisが開発されており、Lucentisは、血管新生を低減させ得る。優れた効果を有しているこの薬物は、溢出性黄斑変性症の処置を目的として、２００６年にアメリカＦＤＡによって認可されている一方で、この抗ＶＥＧＦ薬剤はまた、糖尿病性網膜症および血管新生緑内障に治療効果を有しているこが認められた。しかし、Lucentisは、極めて高価な抗体薬剤であるため、世界中に普及され得ない。したがって、優れた有効性および低価格を有している小分子の血管新生抑制剤薬物を開発することは、現在の国際的な製薬工業における極めて強い競争の焦点である。
【０００４】
プロテインキナーゼは、タンパク質のリン酸化を触媒するための酵素であるプロテインホスホキナーゼとしても知られている。プロテインキナーゼは、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）におけるγ−リン酸を、タンパク質分子のアミノ酸残基（例えば、特定のセリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基における水酸基）に転移させ、それによってタンパク質および酵素の高次構造および活性を変化させ得る。タンパク質のリン酸化は、種々のシグナル伝達経路にとって重要であり、細胞内の重要な生命活動過程のほとんどは、タンパク質のリン酸化なしには、進行し得ない。
【０００５】
プロテインキナーゼは、５つの種類：タンパク質セリン／スレオニンキナーゼ、タンパク質チロシンキナーゼ、タンパク質ヒスチジンキナーゼ、タンパク質トリプトファンキナーゼ、およびタンパク質アスパルチル／グルタモイルキナーゼに分けられる。プロテインキナーゼは、細胞過程の調節および維持に重要な役割を果たしている。異常なキナーゼ活性は、多くの疾患の状態（悪性腫瘍、免疫疾患、心臓血管疾患、糖尿病、感染性疾患、関節炎および他の免疫障害、ならびに神経系疾患（例えば、老人性痴呆、アルツハイマー病（ＡＤ）を包含している））症状において、観察される。４００を超えるヒトの疾患が、プロテインキナーゼと関連していることが見出されている。
【０００６】
ＶＥＧＦＲ（血管内皮細胞増殖因子受容体）ファミリーのメンバーは、受容体チロシンキナーゼ（例えば、ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２など）である。これらの受容体は、悪性腫瘍の増殖および転移、ならびに疾患（例えば、血管増殖性疾患（例えば、黄斑変性症および腫瘍））の進行過程において重要な役割を果たしている。
【０００７】
ＰＤＧＦＲ（血小板由来増殖因子受容体）ファミリーのメンバーは、受容体チロシンキナーゼ（例えば、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβ、コロニー刺激因子−１受容体、ならびに幹細胞成長因子受容体ＫＩＴなど）である。これらのキナーゼは、腫瘍の発生および進行と密接に関連していることが見出されている。ＰＤＧＦＲの異常な発現は、黒色腫、髄膜腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、前立腺癌、肺癌および膵臓癌において認められている。ＫＩＴの異常な活性化は、多くの腫瘍の発生および進行の直接的な誘因である。
【０００８】
ＦＧＦＲ（線維芽細胞増殖因子受容体）ファミリーのメンバーは、癌と密接に関連しているＦＧＦＲ１およびＦＧＦＲ２などを含んでいる。例えば、ＦＧＦＲ２の異常な活性化は、子宮体癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌および胃癌において認められている。
【０００９】
ＳＲＣキナーゼファミリーは、チロシンプロテインキナーゼ活性を有するタンパク質を含んでいる。ＳＲＣキナーゼファミリーは、ラウス肉腫ウイルスにおいて、腫瘍遺伝子タンパク質として最初に発見されている。ＳＲＣの抑制は、癌または他の疾患に対する多くの治療効果および改善効果を有している。ｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路は、炎症性反応と密接に関連している、細胞内のストレス応答シグナル経路である。
【００１０】
したがって、新たなプロテインキナーゼ抑制剤を開発する必要が依然としてある。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の目的は、血管新生抑制剤および／またはプロテインキナーゼ抑制剤としての新たな化合物、それらを調製するための中間体化合物、および当該化合物の使用を提供することである。本発明は、式Ｉによって表される通りの化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩またはプロドラッグを提供し、その構造式は、以下の通りである。
【００１２】
【化１】
2016515636.tif 000003
【００１３】
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アミノ、ヒドロキシまたはスルフィドリルから選択され、Ｒ２は、Ｈ、アミノ、ヒドロキシ、スルフィドリルまたは−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８（ここで、ｎ＝１〜５、Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜３アルキルである）から選択され；Ｒ３は、ＨまたはＣ１〜６アルキルから選択され；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され；Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲンから選択されるか；または、
Ｒ２およびＲ３はそれらと結合している炭素原子とともに、１つまたは２つの異種原子を有する置換または非置換の、５員環または６員環を形成する（ここで、当該異種原子は、Ｎ、ＯまたはＳであり、置換基はＣ１〜６アルキルである）。
【００１４】
一実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、アミノまたは−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８（ここで、ｎ＝１〜３、Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜２アルキルである）から選択され；Ｒ３は、ＨまたはＣ１〜２アルキルから選択され；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され；Ｒ７は、Ｈまたはハロゲンから選択されるか；または、
Ｒ２およびＲ３はそれらと結合している炭素原子とともに、１つの窒素原子を有する置換または非置換の、５員環または６員環を形成する（ここで、置換基はＣ１〜３アルキルである）。
【００１５】
他の実施形態において、Ｒ２は、アミノまたは−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８（ここで、ｎ＝１〜３、Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜２アルキルである）から選択されるか；または、Ｒ２およびＲ３はそれらと結合している炭素とともに、１つの窒素原子を有する置換または非置換の、５員環または６員環を形成している（ここで、置換基はＣ１〜３アルキルである）。
【００１６】
他の実施形態において、上記ハロゲンはＦまたはＣｌである。
【００１７】
好ましい実施形態において、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは、アミノであり、その残りはＨであり；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同じであり、ＦまたはＣｌから選択され；Ｒ７は、Ｈである。
【００１８】
好ましくは、上記化合物は
【００１９】
【化２】
2016515636.tif 000004
【００２０】
である。
【００２１】
本発明の化合物を調製する方法は、任意の好適な方法であり得る。好ましい実施形態において、本発明の化合物は、式ＩＩによって表される中間体化合物から調製され得る。
【００２２】
したがって、本発明は、式Ｉの化合物を調製するための、式ＩＩの中間体化合物をさらに提供する。
【００２３】
【化３】
2016515636.tif 000005
【００２４】
ここで、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲンから選択される。
【００２５】
他の実施形態において、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｃ１〜２アルキルまたはハロゲン置換されているアルキルから選択され、Ｒ７は、Ｈまたはハロゲンから選択される。
【００２６】
他の実施形態において、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同じであり、ＦまたはＣｌから選択され；Ｒ７は、Ｈである。
【００２７】
式ＩＩによって表される中間体化合物を調製する方法は、以下の工程：
【００２８】
【化４】
2016515636.tif 000006
【００２９】
を包含している。ここで、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、上述の通りの同じ定義を有する。
【００３０】
好ましい実施形態において、式Ｉの化合物を調製する方法は、以下の工程：
【００３１】
【化５】
2016515636.tif 000007
【００３２】
を包含している。ここで、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上述の通りの同じ定義を有する。
【００３３】
好ましい実施形態において、上記化合物を調製する方法は、以下の反応工程：
（１）式７によって表される中間体化合物の合成：
【００３４】
【化６】
2016515636.tif 000008
【００３５】
（ここで、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、上述の通りの同じ定義を有する）；
（２）標的化合物の合成：
【００３６】
【化７】
2016515636.tif 000009
【００３７】
（ここで、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上述の通りの同じ定義を有する）
を包含している。
【００３８】
本発明は、血管新生の異常増加を抑制するための薬物の調製における、薬学的に許容可能なその塩またはそのプロドラッグをさらに提供する。
【００３９】
一実施形態において、血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物は、血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）抑制剤である。
【００４０】
他の実施形態において、血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物は、眼の血管新生に対する薬物である。
【００４１】
他の実施形態において、血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物は、脈絡膜の血管新生抑制剤である。
【００４２】
他の実施形態において、血管新生の異常増加を抑制するための上記薬物は、溢出性黄斑変性症、糖尿病性網膜症または血管新生緑内障を処置または予防するための薬剤である。
【００４３】
他の実施形態において、好ましくは、上記薬物は眼科調製物である。
【００４４】
他の実施形態において、上記眼科調製物は、点眼剤、眼軟膏剤または眼科注入剤である。
【００４５】
他の実施形態において、上記眼科注入剤は硝子体内の注入剤である。
【００４６】
本発明は、血管新生の異常増加と関連付けられる疾患を処置するための薬物の調製における、上述の化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩またはプロドラッグをさらに提供する。
【００４７】
一実施形態において、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患は、血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）の異常によって引き起こされる疾患である。
【００４８】
他の実施形態において、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患は、眼の血管新生と関連付けられる疾患である。
【００４９】
他の実施形態において、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患は、脈絡膜の血管新生と関連付けられる疾患である。
【００５０】
他の実施形態において、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患は、溢出性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、または血管新生緑内障と関連付けられる疾患である。
【００５１】
本発明は、血管新生の異常増加を抑制するか、または血管新生の異常増加と関連付けられる疾患を処置する方法をさらに提供する。当該方法は、本発明の化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩もしくはプロドラッグ、または後述する通りの薬学的組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを包含している。
【００５２】
一実施形態において、血管新生の異常増加の抑制は、眼の血管新生の異常増加を抑制することを指し、血管新生の異常増加と関連付けられる上記疾患は、眼の血管新生と関連付けられる疾患である。
【００５３】
一実施形態において、血管新生の異常増加の抑制は、脈絡膜の血管新生の異常増加を抑制することを指し、血管新生の異常増加と関連付けられる疾患は、脈絡膜の血管新生と関連付けられる疾患である。
【００５４】
他の実施形態において、血管新生の異常増加を抑制するか、または血管新生の異常増加と関連付けられる疾患を処置する方法は、溢出性黄斑変性症、糖尿病性網膜症または血管新生緑内障を処置または予防する方法を特に指す。
【００５５】
上記投与とは、眼部に対する直接的な局所投与、または硝子体内注入もしくは結膜下注入を指す。
【００５６】
本発明は、プロテインキナーゼ抑制剤薬物の調製における、上記化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩またはプロドラッグの、使用をさらに提供する。
【００５７】
本発明は、異常なプロテインキナーゼによって引き起こされる疾患を処置するための薬物の調製における、上記化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩またはプロドラッグの、使用をさらに提供する。
【００５８】
本発明は、異常なプロテインキナーゼによって引き起こされる疾患を処置する方法をさらに提供する。当該方法は、本発明の化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩もしくはプロドラッグの有効量、または後述する通りの薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与することを包含している。
【００５９】
上記プロテインキナーゼは、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＫＩＴ、ＡＵＲＯＲＡ−Ｂ、ＦＧＦＲ２、ＳＲＣ、ＪＡＫ２またはＰ３８−α、好ましくはＶＥＧＦＲ２、ＫＩＴまたはＰＤＧＦＲ−βである。
【００６０】
異常なプロテインキナーゼによって引き起こされる疾患は、炎症または悪性腫瘍を指す。
【００６１】
本発明は、上記化合物、薬学的に許容可能なそれらの塩またはプロドラッグの有効量を含んでいる薬学的組成物をさらに提供する。一実施形態において、上記合成物は眼科調製物である。上記眼科調製物は、本発明においてもたらされる上記化合物を除く、類似の治療用途を有する周知の他の薬物をさらに含み得る。
【００６２】
一実施形態において、上記眼科調製物は、点眼剤、眼軟膏剤または眼科注入剤である。
【００６３】
他の実施形態において、上記眼科注入剤は、硝子体内または結膜下の注入剤である。
【００６４】
本発明の化合物の塩は、当該技術において知られている方法によって調製され得る。当該方法は、上記化合物を、酸または好適な陰イオン交換剤（anionite）を用いて処理して塩を形成させることを包含している。本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、上記化合物の塩基性窒素原子を用いた、有機または無機の酸付加塩であり得る。
【００６５】
好ましくは、好適な無機酸としては、ハロゲン酸（例えば塩化水素酸）、硫酸またはリン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
好ましくは、好適な有機酸としては、カルボン酸、リン酸、スルホン酸もしくはアミノカルボン酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸）、アミノ酸（例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸）、マレイン酸、ヒドロキシ酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、桂皮酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−オキシエチルスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、フェニルスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、２−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎ−シクロヘキシルアミノ酢酸、Ｎ−メチル−Ｎ−エチル−Ｎ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機酸（例えばアスコルビン酸）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
さらに、上記塩はまた、分離または精製に使用される薬学的に許容不可能な塩（例えば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩）であり得る。しかし、治療用途に使用される上記塩は、好適な薬物の調製の形態において、薬学的に許容可能な、塩または遊離化合物のみであり得る。
【００６８】
本発明の薬学的に許容可能なプロドラッグは、酵素または非酵素的にインビボにおいて変換された後に活性成分を放出しかつ有効性を発揮する、化学的な構造修飾によって得られる化合物を指す。
【００６９】
一実施形態において、本発明は、上記化合物、薬学的に許容可能なその塩の、同位体標識された化合物を提供する。同位体標識された当該化合物は、本発明の化合物と同じ化合物であるが、本発明の化合物における１つ以上の原子が、天然における一般の同位体と比べて異なる原子数または質量数を有している他の原子によって置換されている化合物を指す。上記化合物に導入され得る同位体は、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｓ（すなわち２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏおよび３５Ｓ）を含んでいる。上述の同位体原子および／または他の同位体原子を含んでいる化合物、およびそれらの立体異性体、ならびに薬学的なそれらの塩および立体異性体は、本発明の範囲に包含される。
【００７０】
本発明において、重要な中間体および化合物の分離および精製は、有機化学における一般的な分離および精製の方法によって実施される。これらの方法の例は、濾過、抽出、乾燥、遠心脱水、および種々のクロマトグラフィーを包含している。代替的に、上記中間体は、精製せずに次の反応に送られ得る。
【００７１】
本発明の化合物は、血管新生の異常増加に対して優れた効果を有しており、この種の化合物は、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲとも称される）を抑制することによって活性を生じる。上記化合物は、血管新生の異常増加およびプロテインキナーゼ（例えば、ＶＥＧＦＲ２およびＦＧＦＲ２など）の異常によって引き起こされる疾患（例えば、溢出性黄斑変性症、炎症および悪性腫瘍など）を処置するために使用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】化合物２−１の質量スペクトルである。
【図２】化合物２−２の質量スペクトルである。
【図３】化合物２−２のＮＭＲスペクトルでる。
【図４】化合物２−３の質量スペクトルである。
【図５】化合物２−４の質量スペクトルである。
【図６】化合物２−５の質量スペクトルである。
【図７】ゼブラフィッシュの脊椎の血管成長の蛍光顕微鏡写真であり、図７Ａは、ゼブラフィッシュの脊椎の通常の血管成長（陰性対照）の蛍光顕微鏡写真を示しており、図７Ｂは、１ｕＭの化合物２−２を用いた処理後における、ゼブラフィッシュの脊椎の抑制された（１００％）血管成長の蛍光顕微鏡写真を示している。
【図８】本発明の化合物２−１、２−２および２−４の、ＶＥＧＦＲ２に対するインビトロ抑制（すなわち、図８のＫＤＲ２）を示す結果の図面である。
【図９】脈絡膜の血管新生を抑制しているZeissの蛍光顕微鏡写真であり、図９Ａは、１ｕＭの濃度における化合物２−２によって脈絡膜の血管新生を明らかに抑制しているZeissの蛍光顕微鏡写真であり、図９Ｂは、陰性対照としてＰＢＳを用いたZeissの蛍光顕微鏡写真である。
【図１０】本発明の化合物の投与量効果曲線であり、図１０Ａは、スタウロスポリンの陽性対照に関しており、図１０Ｂは、化合物２−１に関しており、図１０Ｃは、化合物２−２に関している。
【図１１】マウスの眼の角膜の血管新生に対する、化合物２−２の影響を示す写真であり、図１１Ａは、化合物２−２を用いて処理したマウスの右眼を示しており、図１１Ｂは、対照としてＰＢＳを用いて処理したマウスの左眼を示している。
【図１２】ウサギの眼の角膜の血管新生に対する、化合物２−２の影響を示す写真であり、図１２Ａは、化合物２−２を用いて処理した眼を示しており、図１２Ｂは、対照としてＰＢＳを用いて処理した眼を示しており、図１２Ｃは、化合物２−１を用いて処理した眼を示している。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
〔実施例１  中間生成物７の調製〕
【００７４】
【化８】
2016515636.tif 000010
【００７５】
手順１：
０℃、窒素雰囲気下で、エチルビニルエーテル（５０ｇ、０．６９ｍｏｌ）をゆっくりと塩化オキサリル（１３２．３ｇ、１．０４ｍｏｌ）と混合した。混合物を０℃で２時間撹拌し、その後室温まで熱して１２時間保持した。余剰の塩化オキサリルは蒸留により除去した。残留物を１２０℃で３０分間加熱し、減圧蒸留により精製し、淡黄色の油状物として、精製した化合物１（４９ｇ、収率：５３％）を得た。
【００７６】
手順２：
化合物２（５０ｇ、０．３６５ｍｏｌ）のメタノール（１Ｌ）溶液に塩化チオニル（６６ｍＬ、０．９１ｍｏｌ）を、０℃で撹拌しながら加えた。その後、反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル（ＰＥ／ＥＡ）＝１：１）を介して観察した。反応完了後、上記混合物を蒸発させ、残留物にＮａ２ＣＯ３を加えてｐＨ８に調節し、酢酸エチル（ＥＡ）で抽出した。有機相を、飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮することで、褐色固体として化合物３（５１．７ｇ、収率：９３．８％）を得た。化合物３を更なる精製をせずに直接次の手順に用いた。
【００７７】
手順３：
０℃、窒素雰囲気下で、化合物３（１０ｇ、６６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ、１００ｍＬ）溶液に、ピリジン（９．０６ｇ、１１９ｍｍｏｌ）および化合物１（１５ｇ、１１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を室温まで熱して２．５時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。反応完了後、混合物を水で、その後にブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥、濃縮して粗生成物を得た。上記粗成生物をクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１で溶出）によって精製し、精製された化合物４（９．６７ｇ、収率：５９％）を白色固体として得た。
【００７８】
手順４：
０℃で、１７５ｍＬの濃Ｈ２ＳＯ４に、化合物４（９．６７ｇ、０．０３９ｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合物を室温にて６時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。反応完了後、上記混合物を氷水中に注いだ。沈殿物は濾過し、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）で洗浄し、エタノールで再結晶し、ベージュ色の固体として化合物５（２ｇ、収率：２５％）を得た。
【００７９】
手順５：
０℃で撹拌しながら、化合物５（２．０ｇ、９．８５ｍｍｏｌ）のメタノール（ＭｅＯＨ、２０ｍＬ）溶液に、２ＮのＮａＯＨ（２４．６ｍＬ、４９、２５ｍｍｏｌ）を滴下した。その後、反応混合物を一晩室温で撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１５：１）を介して観察した。反応完了後、上記混合物を蒸発させ、残留物に、１ＮのＨＣｌを加えることによって酸性にし、ｐＨ２にした。沈殿物が形成され、この沈殿物を濾過によって収集し、乾燥して、精製された化合物６（０．８ｇ、４３％）を白色固体として得た。
【００８０】
手順６：
化合物６（０．８ｇ、４．２２ｍｍｏｌ）、３−（トリフルオロメチル）アニリン（０．７５ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（Ｃ１０Ｈ１５Ｆ６Ｎ６ＯＰ、１．９２ｇ、５．０６ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、１．６４ｇ、１２．６６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中で混合し、混合物を常温、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、反応混合物を水で希釈し、ＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって乾燥し、精製された化合物７（０．８５ｇ、収率：６０．６％）を黄色固体として得た。
【００８１】
〔実施例２  化合物２−１（以下、series２−１とも呼ぶ）の調製〕
【００８２】
【化９】
2016515636.tif 000011
【００８３】
化合物８の調製：
【００８４】
【化１０】
2016515636.tif 000012
【００８５】
化合物８Ａ（２０ｇ、０．１５ｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．９ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、７５０ｍＬ）に加え撹拌した。この溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｂｏｃ）２Ｏ、７５ｇ、０．３４ｍｏｌ）を滴下した。その後、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝３：１）を介して観察した。反応完了後、上記反応混合物を濃縮し、ＰＥ／ＥＡ混合溶媒（１０：１、２００ｍＬ）に再懸濁し、濾過して、精製された化合物８（５０ｇ、１００％）を白色固体として得た。
【００８６】
化合物９の調製：
窒素雰囲気下で、化合物７（３０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（５８．６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、１ｍＬ）に混合し、混合物を室温で１．５時間撹拌し、その後、化合物８（３２．８ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を加えた。生成した反応混合物を１８時間撹拌し、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１５：１）を介して観察したが、反応は完了しなかった。上記反応混合物を８０℃でさらに５時間撹拌し、その後水で希釈し、ＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣで精製して、精製された化合物９（１０ｍｇ、収率：１７．８％）を黄色固体として得た。
【００８７】
化合物２−１の調製：
化合物９（１０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、０．２ｍＬ）の混合物を窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１）を介して観察した。反応完了後、反応生成物を炭酸ナトリウムでアルカリ化し、ＤＣＭで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣで精製し、精製された化合物２−１（４．３ｍｇ、収率：５３．７５％）を黄色固体として得た。図１にその質量スペクトルを示す。
【００８８】
〔実施例３  化合物２−２（以下、series２−２とも呼ぶ）の調製〕
【００８９】
【化１１】
2016515636.tif 000013
【００９０】
化合物１０の調製：
【００９１】
【化１２】
2016515636.tif 000014
【００９２】
化合物１０Ｂの調製：
化合物１０Ａ（５．０ｇ、４５ｍｍｏｌ）のピリジン（２００ｍＬ）撹拌溶液に、（Ｂｏｃ）２Ｏ（１４．７ｇ、６７．５ｍｍｏｌ）を６５℃で滴下した。その後、この反応物を８５℃で４時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物を、０℃に冷却し、濃ＨＣｌ（１００ｍＬ）を加え、その後水（５０ｍＬ）を加えた。ＥＡで抽出した後に、有機相を、ＮａＨＣＯ３溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して黄色油状物を得た。上記黄色油状物をＥｔ２Ｏ中に懸濁し、固形物を濾過によって収集して、化合物１０Ｂ（４．３ｇ、収率４５．２％）を白色固体として得た。
【００９３】
化合物１０Ｃの調製：
化合物１０Ｂ（２．４ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（６．６ｍＬ）のＤＣＭ（８４ｍＬ）溶液に、オキシ塩化燐（３．２ｍＬ、３４．２ｍｍｏｌ）を０℃、窒素雰囲気下で滴下によって添加した。添加の完了後に、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝２：１）を介して観察した。反応完了後、その反応混合物を氷水に注ぎ、その後、水相から有機相を分離した。上記有機相を、ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物１０Ｃ（１．８ｇ、収率：７０％）を白色固体として得た。
【００９４】
化合物１０の調製：
化合物１０Ｃ（１００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解した。この混合物に、（Ｂｏｃ）２Ｏ（１２４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。その後、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。反応完了後、この混合物を水で希釈し、ＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣで精製し、精製した化合物１０（７０ｍｇ、収率：４４．８％）を白色固体として得た。
【００９５】
化合物１１の調製：
化合物７（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６２．２ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（３ｍＬ）に溶解し、室温、窒素雰囲気下で０．５時間撹拌し、その後、化合物１０（１４８．４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を加えた。生成した反応混合物を、５時間撹拌し、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１）を介して観察した。反応が完了した後、この反応混合物を、水で希釈し、ＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣで精製し、精製された化合物１１（３１ｍｇ、収率：３３％）を白色固体として得た。
【００９６】
化合物２−２の調製：
化合物１１（２５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（０．２ｍＬ）に加え、室温、窒素雰囲気下で０．５時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１）を介して観察した。反応完了後、反応生成物を、炭酸ナトリウムでアルカリ化し、ＤＣＭで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣで精製し、精製された化合物２−２（１７ｍｇ、収率：８５．３％）を白色固体として得た。図２および図３はその１Ｈ−ＮＭＲスペクトラムおよび質量スペクトルである。
【００９７】
〔実施例４  化合物２−３（以下、series２−３とも呼ぶ）の調製〕
【００９８】
【化１３】
2016515636.tif 000015
【００９９】
化合物１２Ｂの調製：
化合物１２Ａ（５０ｇ、０．４７ｍｏｌ）をＤＣＭ（６００ｍＬ）中、０℃、窒素雰囲気下で撹拌した。溶解した後、ＴＥＡ（９４ｇ、０．９３ｍｏｌ）を加え、その後ブロモ酢酸エチル（９４ｇ、０．５６ｍｏｌ）を滴下した。生成した反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。反応完了後、反応混合物を濾過し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２０：１〜１０：１〜５：１で溶出、精製）によって濾液を濃縮および精製し、精製された化合物１２Ｂ（４６ｇ、収率：５１％）を黄色油状物質として得た。
【０１００】
化合物１２Ｃの調製：
化合物１２Ｂ（３８ｇ、１９６．６５ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２９．９ｇ、２９５ｍｍｏｌ）をトルエン（８００ｍＬ）中で、９５℃で熱しながら撹拌し、その後４−ブロモ酪酸エチル（７２．９ｇ、３７３．６５ｍｍｏｌ）を滴下した。その後、反応混合物を一晩還流させて熱した。反応はＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝５：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２０：１〜５：１で溶出）によって濃縮および精製し、精製された化合物１２Ｃ（３２ｇ、収率５３％）を黄色油状物として得た。
【０１０１】
化合物１２Ｄの調製：
化合物１２Ｃ（３２ｇ、１０４．３ｍｍｏｌ）のトルエン（３００ｍＬ）溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５１．２ｇ、４５６．３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。その後、この反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝５：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物を２ＮのＨＣｌを加えることでｐＨ＝６に調節し、その後ＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、化合物Ｄの粗生成物（１７ｇ、収率：６２．５％）を暗黄色油状物として得た。上記粗生成物は、更なる精製をせずに直接次の手順に用いた。
【０１０２】
化合物１２Ｅの調製：
ナトリウムメトキシド（ＭｅＯＮａ、１１ｇ、１６１．６５ｍｍｏｌ）をメタノール（２８０ｍＬ）に溶解し、５℃まで冷却し、その後ホルムアミジン酢酸塩（３．０ｇ、２９．１５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０．５時間撹拌し、その後、化合物１２Ｄ（１７ｇ、６５．１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物を室温まで冷却し、蒸発させて溶媒のほとんどを取り除いた。得られた残留物をＥＡで抽出した。有機相はブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、精製された化合物１２Ｅ（２．５ｇ、収率：１６％）を淡黄色固体として得た。
【０１０３】
化合物１２Ｆの調製：
化合物１２Ｅ（２．５ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）および（Ｂｏｃ）２Ｏ（２．７ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）に混合し、水素雰囲気下（圧力：０．５Ｍｐａ）で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、精製された化合物１２Ｆ（２．６ｇ、１００％）を黄色固体として得た。
【０１０４】
化合物１２の調製：
化合物１２Ｆ（１．６ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（３．３３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）およびテトラクロロメタン（２．９３ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を、１，２−ジクロロメタン（１，２−ＤＣＥ、６４ｍＬ）に混合し、７０℃に熱して１時間保持した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィーによって濃縮および精製し、精製された化合物１２（１．３８ｇ、収率：８１％）を淡黄色固体として得た。
【０１０５】
化合物１３の調製：
化合物７（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６２．２ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、室温、窒素雰囲気下で１．５時間撹拌し、その後、化合物１２（１２１．４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を加えた。生成した反応混合物を１．５時間撹拌し、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１）を介して観察した。反応完了後、上記反応混合物を、水で希釈し、ＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣによって精製し、精製された化合物１３（１０ｍｇ、収率：１２．２％）を白色固体として得た。
【０１０６】
化合物２−３の調製：
化合物１３（１０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．１ｍＬ）を混合し、室温、窒素雰囲気下で０．５時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物を、炭酸ナトリウムでアルカリ化し、ＤＣＭで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣで精製し、精製された化合物２−３（３ｍｇ、収率：３５．７％）を白色固体として得た。図４は化合物２−３の質量スペクトルを示す。
【０１０７】
〔実施例５  化合物２−４（以下、ＫＤＲ２とも呼ぶ）の調製〕
【０１０８】
【化１４】
2016515636.tif 000016
【０１０９】
手順１：
エチルビニルエーテル（５０ｇ、０．６９ｍｏｌ）を、０℃、窒素雰囲気下で、ゆっくりと塩化オキサリル（１３２．３ｇ、１．０４ｍｏｌ）に加えた。混合物を、０℃で２時間撹拌し、室温まで加熱して１２時間保持した。余剰の塩化オキサリルは蒸留により除去した。残留物を、１２０℃で３０分間加熱し、減圧蒸留により精製し、精製された化合物１（４９ｇ、収率：５３％）を淡黄色油状物として得た。
【０１１０】
手順２：
化合物２（５０ｇ、０．３６５ｍｏｌ）のメタノール（１Ｌ）溶液に、塩化チオニル（６６ｍＬ、０．９１ｍｏｌ）を０℃で撹拌しながら加えた。その後、反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。この混合物を蒸発させた。残留物にＮａ２ＣＯ３を加えることによりｐＨ８にアルカリ化し、ＥＡで抽出した。有機相を、飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、化合物３（５１．７ｇ、収率：９３．８％）を褐色固体として得た。化合物３は、更なる精製をせずに直接次の手順に用いた。
【０１１１】
手順３：
化合物３（１０ｇ、６６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１００ｍＬに溶解した。ピリジン（９．０６ｇ、１１９ｍｍｏｌ）および化合物１（１５ｇ、１１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液を、０℃、窒素雰囲気下で加えた。混合物を、室温まで加熱し、２．５時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。反応完了後、この混合物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を、クロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１で溶出）で精製し、精製された化合物４（９．６７ｇ、収率：５９％）を白色固体として得た。
【０１１２】
手順４：
０℃において、１７５ｍＬの濃Ｈ２ＳＯ４に、化合物４（９．６７ｇ、０．０３９ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応はＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１：１）を介して観察した。この混合物を氷水に注いだ。沈殿物を濾過してＥｔ２Ｏで洗浄し、固形物をエタノールで再結晶し、化合物５（２ｇ、収率：２５％）をベージュ色の固体として得た。
【０１１３】
手順５：
化合物５（０．５０４ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（０．６８６ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）を加えた。０．５時間後、化合物６（０．７６８ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、１００℃まで熱し、窒素雰囲気下で一晩保持した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物を、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を、飽和ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を、クロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５：１〜２：１で溶出）で精製し、精製された化合物７（０．６８３ｇ、収率：６５％）を淡黄色固体として得た。
【０１１４】
手順６：
化合物７（０．６８３ｇ、１．６ｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、２Ｎの水酸化リチウム（１．６ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。この混合物を、室温まで加熱し、一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、この反応混合物を、蒸発させてＴＨＦを除去し、残留物を、水で希釈し、ＥＡで抽出して不純物を除去した。水相を、２ＮのＨＣｌを加えることにより酸性化し、ｐＨ３に調節した。白色沈殿を、濾過によって収集し、乾燥して、精製された化合物８（４００ｍｇ、収率：６１％）を白色固体として得た。
【０１１５】
手順７：
化合物８（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）および化合物９（４７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１３９ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（９５ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この反応混合物を、窒素雰囲気下で４０℃まで熱し、一晩撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、この混合物を、ＥＡで希釈し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物をプレＴＬＣにより精製し、６０ｍｇの化合物１０（６０ｍｇ、収率：４５％）を淡黄色固体として得た。
【０１１６】
手順８：
化合物１０（１０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．１ｍＬ）の混合物を室温で３時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、ＴＦＡを蒸発させ、残留物をＮａ２ＣＯ３水溶液によりアルカリ化し、ＤＣＭで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をプレＴＬＣにより精製し、精製された化合物２−４（５ｍｇ、収率：６２％）を黄色固体として得た。図５は化合物２−４の構造同定のデータを示す。
【０１１７】
〔実施例５  化合物２−５（以下、series２−５とも呼ぶ）の調製〕
【０１１８】
【化１５】
2016515636.tif 000017
【０１１９】
化合物１４Ｃの調製：
化合物１４Ａ（１００ｇ、０．７１６ｍｏｌ）およびエタノール（１．０Ｌ）を、メカニカルスターラーおよび塩化カルシウムチューブを備えた３Ｌフラスコ中に充填した。混合物を２０分間撹拌し、その後トリエチルアミン（ＴＥＡ、７２．５ｇ、０．７１６ｍｏｌ）を滴下した。生成した混合物を１０分間撹拌し、その後、アクリル酸エチル（６１．６ｇ、０．７１６ｍｏｌ）を上記混合物に加えた。この反応混合物を室温で１７時間撹拌した。（Ｂｏｃ）２Ｏ（２３４．５ｇ、１．０８ｍｏｌ）を室温で滴下した。その後、この反応混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物を濃縮し、エタノールの大半を除去した。残留物を、水（３Ｌ）に溶解し、Ｅｔ２Ｏ（１Ｌ×３）で抽出し、その後、水、塩化アンモニウム（５００ｍＬ×３）溶液、およびブライン（５００ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、粗製化合物１４Ｃ（３００ｇ、９２％）を黄色油状物として得た。粗製化合物１４Ｃは、更なる精製をせずに直接次の手順に用いた。
【０１２０】
化合物１４Ｄの調製：
ナトリウム（２７．６ｇ、０．７６５ｍｏｌ）を無水エタノール（１．５Ｌ）に段階的に加えた。固形物が完全に消失したとき、化合物１４Ｃ（３００ｇ、１．０４ｍｏｌ）をこの溶液に加えた。ＴＣＬ（ＰＥ／ＥＡ＝４：１）で観察しながら、出発物質が完全に消費されるまで、反応混合物を一晩還流した。この反応混合物を蒸発させ、溶媒の大半を除去した。残留物を、水（１Ｌ）に溶解し、クエン酸でｐＨ６に酸性化した。この混合物をＥＡ（１Ｌ×３）で抽出した。得られた複数の抽出液を、混合し、ブライン（１Ｌ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させ、化合物１４Ｄ（１６９ｇ、６３．４％）を褐色油状物として得た。粗生成物は、更なる精製をせずに直接次の手順に用いた。
【０１２１】
化合物１４Ｅの調製：
ＭｅＯＮａ（２．６ｇ、４８．５８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を５℃に冷却し、ホルムアミジン酢酸塩（３．０ｇ、２９．１５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０．５時間撹拌し、その後、化合物１４Ｄ（５．０ｇ、１９．４３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を一晩撹拌して還流した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、反応混合物を室温に冷却し、蒸発によって溶媒の大半を除去した。残留物をＥＡで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、精製された化合物１４Ｅ（６８０ｍｇ、収率：１４．７％）を淡黄色固体として得た。
【０１２２】
化合物１４の調製：
化合物１４Ｅ（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（０．２８ｍＬ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液に、オキシ塩化燐（１７４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）を、０℃、窒素雰囲気下で撹拌しながら加えた。添加が完了した後、反応混合物を、固体の炭酸ナトリウムが加えられた氷水に注ぎ、ＤＣＭで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣによって精製し、精製された化合物１４（６０ｍｇ、５５．６％）を白色固体として得た。
【０１２３】
化合物１５の調製：
化合物７（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（６２．２ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、室温、窒素雰囲気下で１．５時間撹拌し、その後、化合物１４（１１５．４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を加え、さらに１．５時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝２０：１）が反応の完了を示した。反応完了後、反応混合物を、水で希釈し、ＥＡで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。上記粗生成物をＴＬＣによって精製し、精製された化合物１５（１４ｍｇ、収率：１６．７％）を白色固体として得た。
【０１２４】
化合物２−５の調製：
化合物１５（１４ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．２ｍＬ）の混合物を室温、窒素雰囲気下で０．５時間撹拌した。反応を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／メタノール＝１０：１）を介して観察した。反応完了後、反応混合物を、炭酸ナトリウムでアルカリ化し、ＤＣＭで抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を、ＴＬＣによって精製し、精製された化合物２−５（２．７ｍｇ、収率：２４．５％）を白色固体として得た。図６は化合物２−５の質量スペクトルである。
【０１２５】
本発明の有益な効果は、以下の試験例を通して詳細に例示されている。
【０１２６】
〔試験例１  ゼブラフィッシュの血管成長に対する抑制試験〕
Danio rerio（ゼブラフィッシュとも呼ばれる）は、コイ科（Cyprinidae）におけるダニオ属（Danio）の硬骨魚であり、その遺伝子は、ヒト遺伝子と８５％までの類似性を有している。雌の魚は、２００〜３００の卵を産卵し得、受精および胚発生の過程は、インビトロにおいて行われる。卵は、２４時間以内に成長し得、胚は透明であり、体内の器官および組織の変化を観察するために適している。これらの特徴は、ゼブラフィッシュを、国際標準化機構によって承認されている５つの魚類実験動物の１つにしている。現在、ゼブラフィッシュは、ヒト疾患の研究に広く用いられており、特に心臓血管系の研究に用いられている。ゼブラフィッシュは、小分子化合物の血管新生に対する影響をスクリーニングするために使用され得る。
【０１２７】
実験方法：
本実験は、血管新生に対する化合物の影響をスクリーニングするために一般的に用いられる動物モデルとして、ＦＬＫ１−ＧＦＰを遺伝子導入したゼブラフィッシュを使用する。血管は、蛍光顕微鏡下においてインビボにおいて観察され得る（Suk-Won Jin, 2005, Development）。ＦＬＫ１−ＧＦＰを遺伝子導入した生後のゼブラフィッシュの選択された胚を、培養ディッシュに入れ、２８℃のインキュベータにおいて３〜５日間にわたってインキュベートした。本発明の化合物およびパゾパニブ（Pazopanib、１３０Ｂ、陽性対照）を、３〜５日間にわたってインキュベートされたゼブラフィッシュの培養液に対して直接に、表１に示されている濃度において加え；４０ｕＭのＤＭＳＯを陰性対照として使用した。２４時間後に脊椎の血管の成長状態を調べ、蛍光顕微鏡によって写真を撮影した。脊椎の血管の発生に対する上記化合物の抑制率について表１を参照すればよい。陰性対照群の血管成長の状態を０％に設定し、血管成長の完全にない状態を１００％に設定した。図７Ａおよび図７Ｂは、陰性対照群において４０ｕＭのＤＭＳＯを用いて処理されたゼブラフィッシュ、および１ｕＭの化合物２−２を用いて処理したゼブラフィッシュの蛍光顕微鏡写真をそれぞれ示しており、陰性対照群におけるゼブラフィッシュの脊椎の血管成長が通常であるのに対して、化合物２−２を用いて処理したゼブラフィッシュの脊椎の血管成長は１００％抑制されていることが明らかである。
【０１２８】
【表１】
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【０１２９】
本発明の化合物２−１、２−２、２−３、２−４および２−５の全てが、ゼブラフィッシュの血管成長に抑制効果を有しており、化合物２−１および２−２が明らかにより好ましい活性を有していることが、表１および図７から明らかである。
【０１３０】
〔試験例２  ＶＥＧＦＲ２に対する本発明の化合物のインビトロ抑制試験〕
ＶＥＧＦＲ２キナーゼに対する、本発明の化合物の抑制を検出する実験的方法は、以下の通りである：
１）初代培養したヒト鎖臍帯静脈内細胞（ＨＵＶＥＣ）  Ｐ３−Ｐ５を、ウェルごとに２×１０５細胞において、６ウェルプレートに移した；
２）本発明の化合物２−１、２−２および２−４（濃度は各化合物について１０ｎＭ、１００ｎＭおよび１μＭである）を、細胞が７０〜８０％まで増殖したときに加え、ＶＥＧＦを対照にした、３０分間のインキュベーション；
３）５０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ（cell Signaling company, US）を加え、１０分間にわたって刺激した；
４）非変性の溶解緩衝液を、加えて反応を終了させ、細胞溶解緩衝液を、回収してタンパク質の定量化を実施した；
５）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動、ニトロセルロース膜への転写、膜を切り取り、５％のスキムミルクに基づいて調合されたリン酸化ｔｗｅｅｎ緩衝液、ＴＴＢＳ緩衝液（０．０１％のTween20のTris緩衝化生理食塩水、ＰＨ８．０、cell Signaling company, US, PH8.0）において２時間にわたって密閉した；
６）膜を洗浄し、抗リン酸化ＶＥＧＦＲ２抗体（１：１０００希釈、cell Signaling company, US）を使用して一晩にわたって４℃において密閉した；
７）膜を洗浄した翌日に、ホースラディッシュペルオキダーゼによって標識したヤギ抗ウサギ二次抗体（cell Signaling company, US）を、１時間にわたって室温において膜とともにインキュベートした；
８）膜を洗浄した後に、化学発光キット（Millipore company）を用いて現像し、写真を撮影した。
【０１３１】
試験結果を図８に示す。化合物２−１、２−２および２−４の全てが、ＶＥＧＦＲ２を抑制し得ること、化合物２−２がより良好な効果を有することが、図８から明らかである。
【０１３２】
〔試験例３  脈絡膜血管新生における本発明の化合物の抑制作用〕
マウスはｃ５７／ＢＬ（Jax Lab, US）であり、実験を、レーザによって誘導された脈絡膜の血管新生（ＣＮＶ）動物モデルによって行った。このモデルは、滲出性黄斑変性症のＣＮＶ生成に対する薬物の影響を研究するために用いられる、広く使用されている動物モデルである。全てのマウスは、２〜３カ月齢であり、Avertinを用いて麻酔され；１％のトロピカミド（Alcon）を用いて散瞳を生じさせ；４つの光凝固熱傷点を、IRIDEX OcuLight GL532nmレーザ光凝固術（IRIDEX）およびスリットランプ送達システムを用いて、それぞれの眼に作り、そのパラメーターは以下の通りである：出力１２０ｍＷ、スポットサイズ７５μｍ、および持続時間０．１秒。ｃ５７／ＢＬマウス（網膜ごとに４つのレーザ点）を、レーザ光凝固させて、レーザＣＮＶ生成を誘導した。ブルック膜の破損を示している気泡として観察されるレーザ点のみを、試験すべきとみなした。レーザ照射直後に注入：右眼に、１ｕＭの化合物２−２を注入し、左眼に、薬物と同じ体積を有しているＰＢＳを対照として注入した。注入の５日後に、動物を殺し、眼球を得る。前部、硝子体および網膜を除去した後に、脈絡膜の平坦な標本を調製し、同時にイソレクチンを用いて染色する。Zeiss蛍光顕微鏡システムによって写真を撮影し、ＣＮＶ面積を測定する。結果を、図９Ａおよび９Ｂに示す。
【０１３３】
化合物２−２（１ｕＭ）が、脈絡膜の血管新生を明らかに抑制し、したがって滲出性黄斑変性症を有効に処置し得るか、または軽減し得ることは、図９から明らかである。
【０１３４】
結論：
本発明の化合物は、血管新生の異常増加に対して優れた効果を有しており、この種の化合物は、ＶＥＧＦＲ２を抑制することによって活性を生じさせることが、上述の試験例から明らかである。この種の化合物は、血管新生の異常によって引き起こされる疾患（例えば、溢出性黄斑変性症など）を処置するために用いられ得る。
【０１３５】
〔試験例４  本発明の化合物の、キナーゼに対する影響〕
１）抑制の用量効果に対する研究
化合物２−１および２−２を、それぞれ１００％のＤＭＳＯ溶媒に溶解させ、３つの群の濃度に希釈し、ＤＭＳＯは、試験した各化合物において１％の濃度であった。化合物の最高の濃度は、５０ｕＭであった。非選択的なプロテインキナーゼの活性抑制剤であるスタウロスポリン（sigma company, US）を、基準として使用し、その最高の濃度は１ｕＭであった。試験条件の詳細について表２を、試験結果について表３Ａを、ＩＣ５０値の算出した結果について表３Ｂおよび図１０を、参照すればよい。図１０Ａは、陽性対照群の結果を示しており、図１０Ｂは、化合物２−１の群の結果を示しており、図１０Ｃは、化合物２−２の群の結果を示している。
【０１３６】
【表２】
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【０１３７】
【表３】
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【０１３８】
【表４】
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【０１３９】
本発明の化合物２−１および２−２は、ＫＤＲおよびＰＤＧＦＲ−βに対する優れた抑制活性を有しており、化合物２−２の効果は、陽性対照のスタウロスポリンより優れていることが、結果から明らかである。
【０１４０】
２）抑制の特異性に対する研究
この実験において、２２のキナーゼに対する活性抑制の試験を、５０００ｎＭの試験濃度において２回にわたって繰り返して、化合物２−１および２−２について行った。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯにまず溶解させた。溶解濃度は、最終的な試験濃度の１００倍であり、したがって全ての最終的な試験において試験される溶液におけるＤＭＳＯの濃度は、１％である。ＳＢ−２０２１９１を、Ｐ３８−αにとっての対照として使用し、ウォルトマンニンを、ＰＩ３Ｋ−αにとっての対照として使用し、非選択的なプロテインキナーゼの活性抑制剤であるスタウロスポリンを、他のプロテインキナーゼにとっての対照として使用した。試験するときの濃度は１０ｕＭである。
【０１４１】
表４は、特異的な試験方法および試薬を示している。
【０１４２】
【表５】
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【０１４３】
【表６】
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【０１４４】
【表７】
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【０１４５】
化合物２−１および２−２の両方が、選択的かつ効率的にプロテインキナーゼＫＤＥを抑制し得ることが、上述の結果から明らかであり、化合物２−１の抑制率は９７％を超えており、化合物２−２の抑制率は１００％に達する。さらに、これらの化合物はまた、炎症および腫瘍などの疾患と関連付けられているいくつかの他のプロテインキナーゼに対して、一定の抑制効果を有しており、ここで化合物２−１は、ＫＩＴに対する約７２％、ＰＤＧＦＲ−βに対する約７１％の抑制率を有しており；さらに、化合物２−１はまた、ＡＵＲＯＲＡ−Ｂ（約３１％の抑制率を有している）、ＦＧＦＲ２（約３６％）、ＳＲＣ（約２１％）およびＪＡＫ２（約２１％）をある程度まで抑制し、他のキナーゼの抑制率のほとんどは５％未満である。化合物２−２は、ＦＧＦＲ２に対する６１％を超える、ＰＤＧＦＲ−βに対する約９７％の、ＫＩＴの約９２％の、Ｐ３８−αに対する約８０％の、ＳＲＣに対する約６５％の、抑制率を有しているが、残りのキナーゼの抑制率のほとんどは５％未満である。
【０１４６】
研究されており、かつ開発されている既存の小分子キナーゼ抑制剤と比べて、本発明の化合物は、ＫＤＲにおいてより高い特異的かつ効率的な抑制効果を有しており、また腫瘍および炎症と密接に関連付けられているプロテインキナーゼ（例えば、ＦＧＦＲ２およびＰＤＧＦＲ−βなど）に一定の抑制効果を有することが明らかである。これは、化合物２−１および２−２の両方が、いくつかの異常な活性化されたプロテインキナーゼ（例えば、ＫＤＲおよびＦＧＦＲ２など）と関連付けられている疾患（例えば、腫瘍、炎症および黄斑変性症など）に対する、潜在的な治療活性を有していることを示している。
【０１４７】
〔試験例５  眼角膜血管新生における抑制作用の研究〕
角膜炎、種々の化学的な火傷、傷害および外科的創傷などが、病理学的な血管新生を引き起こし得、角膜の血管新生は、深刻な視覚性の障害を引き起こし得る。化学的な角膜障害の動物モデルは、疾患に対する薬力学的研究のために広く使用されているモデルである。
【０１４８】
Ａ：マウスの角膜の化学的な火傷モデル
この試験は、２〜３カ月齢の合計で５匹のマウスを試験した。マウスは、ｃ５７／ＢＬ（Jax Lab, US）であった。角膜中央において、７５％の硝酸銀および２５％の硝酸カリウムをともなっている棒を使用して、化学的な火傷のモデル化を生じさせた。０．０２ｍＬの化合物２−２（１００ｕＭの濃度）を、化学的な火傷の直後に、右眼に対して結膜下に注入し、それから０．２ｍＬの化合物２−２を、日に２回（１００ｕＭの濃度）にわたって滴下し；ＰＢＳを、対照として左眼に使用し、左眼を右眼と同様に処理した。７日後に比較のために角膜の写真を撮影した。結果について図１１を参照すればよい。図１１は、化合物２−２によって処理した結果を示しており、図１１Ｂは、陰性対照としてＰＢＳによって処理した結果を示している。
【０１４９】
化合物２−２の処理は、血管新生および出血を明らかに減少させていることが、図１１から明らかである。
【０１５０】
Ｂ：ウサギの角膜の化学的な火傷モデル
この試験は、５〜６カ月齢の合計で５匹のウサギを試験した。麻酔後に、角膜中央において、右眼を、０．１ＭのＮａＯＨに浸した６ｍｍ直径の円形の濾紙を用いて処理して、３分間にわたって化学的な火傷モデル化を生じさせた。０．１ｍＬの１００ｕＭの化合物２−２を、化学的な火傷の直後に、右眼に対して、結膜下に注入し、それから０．５ｍＬの１００ｕＭの化合物２−２を、日に２回にわたって滴下し；ＰＢＳを、化学的なモデル化の後に、対照として左眼に使用し、左眼を右眼と同様に処理した。７日後に、比較のために角膜の写真を撮影した。結果については図１２を参照すればよい。図１２Ａは、化合物２−２によって処理した結果を示しており、図１２Ｂは、陰性対照としてＰＢＳによって処理した結果を示しており、図１２Ｃは、化合物２−１によって処理した結果を示している。化合物２−１および２−２の両方の処理が、角膜の血管新生を明らかに減少させていることが、図１２から明らかである。
【０１５１】
以上をまとめると、本発明の化合物は、血管新生の異常増加増殖に対する優れた効果を有しており、この種の化合物は、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲとも呼ばれる）を抑制することによって活性を生じさせる。この種の化合物は、血管新生の異常増加およびプロテインキナーゼ（例えば、ＶＥＧＦＲ２およびＦＧＦＲ２など）の異常によって引き起こされる疾患（例えば、滲出性黄斑変性症、炎症および悪性腫瘍など）を処置するために使用され得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2016515636.tif 000033
【図６】
2016515636.tif 000034
【図７Ａ】
2016515636.tif 000035
【図７Ｂ】
2016515636.tif 000036
【図９Ａ】
2016515636.tif 000037
【図９Ｂ】
2016515636.tif 000038
【図１０Ａ】
2016515636.tif 000039
【図１０Ｂ】
2016515636.tif 000040
【図１０Ｃ】
2016515636.tif 000041
【図１１】
2016515636.tif 000042
【図１２Ａ】
2016515636.tif 000043
【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図８】
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【国際調査報告】
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2016515636.tif 000049
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