(57)【要約】  本発明は、ＭＥＫ阻害剤（ＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）又はその薬学的に許容可能な塩及びＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤（ＭＥＨＤ７９４５Ａなど）を含む組み合わせを提供する。組み合わせは、がんなどの過剰増殖性疾患を治療するために特に有用である。【選択図】図１３Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
過剰増殖性疾患の治療における同時又は連続使用のための、（ｉ）ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及び（ｉｉ）ＭＥＨＤ７９４５Ａを含む薬学的製品。
【請求項２】
過剰増殖性疾患が、がんである、請求項１に記載の薬学的製品。
【請求項３】
がんが、ＫＲＡＳ変異と関連している、請求項２に記載の薬学的製品。
【請求項４】
がんが、ＡＫＴ変異、過剰発現又は増幅と関連している、請求項２又は３に記載の薬学的製品。
【請求項５】
がんが、ＰＩ３Ｋ変異、過剰発現又は増幅と関連している、請求項２から４の何れか一項に記載の薬学的製品。
【請求項６】
がんが、結腸直腸がん、中皮腫、子宮内膜がん、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、メラノーマ、胃がん、大腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、及び神経膠芽腫から選択される、請求項２から５の何れか一項に記載の薬学的製品。
【請求項７】
ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される、請求項１から６の何れか一項に記載の薬学的製品。
【請求項８】
ＧＤＣ−０６２３又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される、請求項１から６の何れか一項に記載の薬学的製品。
【請求項９】
ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと同時に投与される、請求項１から６の何れか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１０】
ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩、及びＭＥＨＤ７９４５Ａが連続的に投与される、請求項１から６の何れか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１１】
過剰増殖性疾患を有する患者の生活の質を改善するための同時又は連続使用のための併用製剤として、（ｉ）ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及び（ｉｉ）ＭＥＨＤ７９４５Ａを含む薬学的製品。
【請求項１２】
過剰増殖性疾患の治療のための医薬の調製における、（ｉ）ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩を含む第一の組成物；及び（ｉｉ）ＭＥＨＤ７９４５Ａを含む第二の組成物を含む、薬学的製品の使用。
【請求項１３】
過剰増殖性疾患が、がんである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
がんが、ＫＲＡＳ変異と関連している、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
がんが、ＡＫＴ変異、過剰発現又は増幅と関連している、請求項１３又は１４に記載の使用。
【請求項１６】
がんが、ＰＩ３Ｋ変異、過剰発現又は増幅と関連している、請求項１３から１５の何れか一項に記載の使用。
【請求項１７】
がんが、結腸直腸がん、中皮腫、子宮内膜がん、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、メラノーマ、胃がん、大腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、及び神経膠芽腫から選択される、請求項１３から１６の何れか一項に記載の使用。
【請求項１８】
ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される、請求項１２から１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項１９】
ＧＤＣ−０６２３又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される、請求項１２から１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項２０】
ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと同時に投与される、請求項１２から１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項２１】
ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩、及びＭＥＨＤ７９４５Ａが連続的に投与される、請求項１２から１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項２２】
患者における過剰増殖性疾患の治療のための、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａ、容器、並びにＧＤＣ−００６８若しくはＧＤＣ−０９４１、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａの投与を指示する添付文書又はラベルを含むキット。
【請求項２３】
患者における過剰増殖性疾患を治療するための方法であって、（ｉ）ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及び（ｉｉ）ＭＥＨＤ７９４５Ａの治療上有効量を患者に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
過剰増殖性疾患が、がんである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
がんが、ＫＲＡＳ変異と関連している、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
がんが、ＡＫＴ変異、過剰発現又は増幅と関連している、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
がんが、ＰＩ３Ｋ変異、過剰発現又は増幅と関連している、請求項２４から２６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
がんが、結腸直腸がん、中皮腫、子宮内膜がん、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、メラノーマ、胃がん、大腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、及び神経膠芽腫から選択される、請求項２４から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される、請求項２３から２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ＧＤＣ−０６２３又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される、請求項２３から２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩が、ＭＥＨＤ７９４５Ａと同時に投与される、請求項２３から２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩、及びＭＥＨＤ７９４５Ａが連続的に投与される、請求項２３から２８の何れか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一般的に、ＭＥＫ経路を阻害する化合物の、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲを遮断する化合物との組み合わせを含む、がんなどの過剰増殖性疾患に対する活性を有する化合物の薬学的組み合せに関する。本発明はまた、哺乳動物細胞又は関連する病態のインビトロ、インサイツ、及びインビボでの診断又は治療のための組み合わせを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
タンパク質キナーゼ（ＰＫ）は、タンパク質のチロシン、セリン及びトレオニン残基上の水酸基のリン酸化を、ＡＴＰからの末端（ガンマ）リン酸の転移によって触媒する酵素である。シグナル伝達経路を介して、これらの酵素は、細胞増殖、分化、増殖を調節し、即ち、細胞寿命のほぼすべての態様はいろいろな点でＰＫ活性に依存する（Hardie, G. and Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA）。更に、異常なＰＫ活性は、乾癬など比較的非致死的な疾患から神経膠芽腫（脳腫瘍）など極めて悪性の疾患に至るまで疾患の宿主に関連している。プロテインキナーゼは、治療上の調節のための重要な標的クラスである（Cohen, P. (2002) Nature Rev. Drug Discovery 1:309）。
【０００３】
ＭＥＫは、ＥＲＫ１及び２における活性化に必要なチロシン及びスレオニンをリン酸化する二重特異性キナーゼである。
【０００４】
二つの関連遺伝子は、それらのＥＲＫに対する結合において異なるＭＥＫ１及びＭＥＫ２をコードする。ＨＥＲ３は、ニューレグリン及びＮＴＡＫによって結合され活性化されることができる受容体チロシンキナーゼである。ＥＧＦＲは、上皮増殖因子ファミリーのメンバーの受容体である膜貫通糖タンパク質である。
【０００５】
現在、がんなど過剰増殖性疾患を治療するために使用することができる改善された方法及び組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
インビトロ及びビボでがん細胞の増殖を阻害することにおける改善された効果は、ＭＥＫ、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲを阻害することにより達成することができると判断されている。例えば、過剰増殖性疾患の治療的処置のために、インビトロ及びインビボにおいてがん細胞の増殖を阻害することにおける改善された効果は、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩とＭＥＨＤ７９４５Ａとの組み合わせを投与することによって達成することができることが見いだされている。組み合せ及び方法は、がんなどの過剰増殖性疾患の治療に有用であろう。所定の実施態様において、組み合わせの投与は、相乗効果をもたらすことができる。
【０００７】
従って、本発明の所定の実施態様は、構造
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を有する、小分子ＭＥＫ阻害剤ＧＤＣ−０９７３（式Ｉ）、又はその薬学的に許容可能な塩（国際公開第２００７／０４４５１５号を参照）、
又は、構造
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を有する、小分子ＭＥＫ阻害剤ＧＤＣ−０６２３（式ＩＩ）、又はその薬学的に許容可能な塩（国際公開第２００９／０８５９８３号を参照）を含む治療的組み合せを、
２つの同一の抗原結合ドメインを含み、その各々が特異的にＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に結合する、二重作用抗体である、ＭＥＨＤ７９４５Ａ（国際公開第２０１０／１０８１２７号のＤＬ１１ｆ（例えば、図３３）及びSchaefer et al., Cancer Cell, 20, 472-486 (2011)を参照）と組み合わせて提供する。
【０００８】
ＭＥＨＤ７９４５Ａ及びＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３は、２つの別々の薬学的組成物中に又は単一の薬学的組成物中に一緒に存在してもよい。
【０００９】
従って、本発明の所定の実施態様は、過剰増殖性疾患の治療的処置のための、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩とＭＥＨＤ７９４５Ａとの組み合わせを対象とする。
【００１０】
所定の実施態様において、過剰増殖性疾患はがんである。
【００１１】
所定の実施態様において、がんはＫＲＡＳ変異と関連している。
【００１２】
所定の実施態様において、がんは、結腸直腸がん、中皮腫、子宮内膜がん、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、胃がん、大腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、及び神経膠芽腫から選択される。
【００１３】
所定の実施態様において、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容可能な塩は、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される。
【００１４】
所定の実施態様において、ＧＤＣ−０６２３又はその薬学的に許容可能な塩は、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせて投与される。
【００１５】
所定の実施態様において、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩は、ＭＥＨＤ７９４５Ａと同時に投与される。
【００１６】
所定の実施態様において、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩及びＭＥＨＤ７９４５Ａは連続的に投与される。
【００１７】
本発明の所定の実施態様は、過剰増殖性疾患を有する患者の生活の質を改善するための治療的使用のための、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩とＭＥＨＤ７９４５Ａとの組み合わせを対象とする。
【００１８】
本発明の所定の実施態様は、過剰増殖性疾患の治療のための、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせを対象とする。
【００１９】
本発明の特定の実施態様は、患者における過剰増殖性疾患の治療のための医薬の調製における、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせの使用を対象とする。
【００２０】
本発明の特定の実施態様は、過剰増殖性疾患の治療のための、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａ、容器、並びにＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａの投与を指示する添付文書又はラベルを含むキットを対象とする。
【００２１】
本発明の所定の実施態様は、過剰増殖性疾患（例えば、がん）の治療における、別々の、同時又は連続使用のための併用製剤として、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩及びＭＥＨＤ７９４５Ａを含む製品を対象とする。
【００２２】
本発明の所定の実施態様は、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせを患者に投与することを含む、患者において過剰増殖性疾患（例えば、がん）を治療するための方法を対象とする。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、ＭＥＨＤ７９４５ＡはＨＥＲ３−ＥＣＤ及びＥＧＦＲ−ＥＣＤの両方に結合する
【図２】図２Ａ及びＢは、ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２／ＨＥＲ３依存性のシグナル伝達を阻害することを実証するグラフである。
【図３】図３は、ＭＥＨＤ７９４５ＡによってのＦａＤｕがんモデルにおける腫瘍増殖の阻害を示すグラフである。
【図４】図４は、多数のマウス異種移植モデルにおいて、セツキシマブ又は抗ＨＥＲ３と比較した、ＭＥＨＤ７９４５Ａの腫瘍増殖抑制効果の概要である。
【図５】図５は、ＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０６２３は、Ｂ−ＲＡＦ変異腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効であることを実証するグラフである。
【図６】図６は、ＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０６２３は、ＫＲＡＳ変異腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効であることを実証するグラフである。
【図７】図７は、マウス異種移植ＣＲＣ ＫＲＡＳ ＤＬＤ−１（Ａ）及びＬＳ１８０（Ｂ）モデルにおける、ｐＡｋｔ及びｐＥＲＫのレベルに対する単剤及び併用療法の効果を実証するグラフである。
【図８】図８は、ＭＥＨＤ７９４５Ａ、ＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０６２３の単剤並びに併用療法の腫瘍増殖阻害効果を実証するグラフである。
【図９】図９は、コビメチニブにより処置されたＴＧＦ−刺激ＬＳ１８０又はＤＬＤ−１細胞は、ＡＫＴの増加したリン酸化を示したことを実証する。
【図１０】図１０は、ＭＥＨＤ７９４５Ａとコビメチニブとの組み合わせによる、ＫＲＡＳ変異細胞株、ＬＳ１８０の増殖の阻害を実証するグラフである。
【図１１】図１１Ａは、ＣＤ−１ヌードマウスにおけるＬＳ１８０結腸直腸腺癌腫瘍異種移植片における、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせたコメチニブの効果を実証するグラフである；図１１Ｂは、図１１Ａからのデータをまとめた表である。
【図１２】図１２Ａは、Ｃ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤベージュマウスにおけるＫＲＡＳ変異ＤＬＤ−１結腸直腸腺癌腫瘍異種移植片における、ＭＥＨＤ７９４５Ａと組み合わせたコメチニブの効果を実証するグラフである；図１２Ｂは、図１２Ａからのデータをまとめた表である。
【図１３】図１３Ａは、ＮＣＲのヌードマウスにおけるＢｘＰＣ３膵管（Ｄｕｃｔａｌ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）異種移植腫瘍に対するＭＥＨＤ７９４５Ａとの組み合わせたコメチニブの効果を実証するグラフである；図１３Ｂは、この研究についての抗腫瘍活性をまとめた表である；図１３Ｃは、この研究についての腫瘍の進行及び応答までの時間をまとめた表である。
【発明を実施するための形態実施】
【００２４】
定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。
【００２５】
本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」なる単語、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形型は、定めた整数又は整数の群の包含を意味し、任意の他の整数又は整数の群の除外を意味しないと理解される。
【００２６】
本明細書における用語「抗体」は、最も広範な意味で用いられ、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、所望の生物学的活性を示す限りにおいて抗体断片を網羅する。用語「多重特異性抗体」は、最も広い意味で用いられ、ポリエピトープ特異性を有する（すなわち、一の生物学的分子上の二以上の異なるエピトープに特異的に結合することが可能である又は二以上の異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することが可能である）抗原結合ドメインを含む抗体を具体的に網羅する。抗原結合ドメインの一の具体例は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）からなるＶＨＶＬユニットである。かかる多重特異性抗体は、限定されないが、完全長抗体、二以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖなどの抗体断片、ダイアボディ、二重特異性抗体及びトリアボディ、共有結合的又は非共有結合的に連結されている抗体断片を含む。「二重特異性抗体」は、一の生物学的分子上の二つの異なるエピトープに特異的に結合することが可能である又は二つの異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することが可能である抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体である。二重特異性抗体はまた、本明細書において「二重特異性」を有するとして又は「二重特異的」であるとして言及される。
【００２７】
所定の実施態様において、本発明の抗体は、その標的ＨＥＲ又はＨＥＲ（複数）に対して、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）を有する。
【００２８】
基本的な４鎖抗体単位は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質である（ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる付加的ポリペプチドと共に５つの基本的なヘテロ四量体単位からなり、従って、１０の抗原結合部位を含み、一方分泌型ＩｇＡ抗体は重合し、Ｊ鎖と共に２つから５つの基本的な４鎖単位を含む多価集合体を形成することができる）。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般的に約１５００００ダルトンである。各Ｌ鎖は一つの共有ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結している一方、２つのＨ鎖はＨ鎖のアイソタイプに応じて一又は複数のジスルフィド結合により互いに連結されている。また各Ｈ及びＬ鎖は、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有している。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）と、これに続くα及びγ鎖それぞれに対しては３つの定常ドメイン（ＣＨ）と、μ及びεアイソタイプに対しては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）と、これに続く定常ドメイン（ＣＬ）をその他端に有する。ＶＬはＶＨに整列しており、ＣＬは重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）に整列している。特定のアミノ酸残基は軽鎖と重鎖の可変ドメインの界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬは対になって単一の抗原結合部位を形成する。異なったクラスの抗体の構造及び特性について、例えば、Basic and Clinical Immunology, ８版、Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow （編）、Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 71頁、6章を参照のこと。
【００２９】
任意の脊椎動物種からのＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる明確に区別される２つのタイプのタイプを割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に基づき、免疫グロブリンは、種々のクラス又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、それぞれ、α、δ、γ、ε及びμと命名された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスがある。γ及びαクラスは更にＣＨ配列及び機能の比較的小さな差異に基づいてサブクラスに分割され、例えばヒトでは、次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。
【００３０】
「可変」なる用語は、可変ドメインの所定のセグメントが抗体間で配列の点で広範囲に相違していることを意味する。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を定める。しかしながら、可変性は可変ドメインの１１０アミノ酸全長にわたって均一に分布しているのではない。その代わりに、Ｖ領域は、「超可変領域」又はＨＶＲと呼ばれる極度の可変性のより短い領域により分離された１５−３０のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる相対的に不変の伸長部からなる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、βシート構造を結合し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する、３つの高頻度可変領域により連結されたβシート配置を主にとる４つのＦＲをそれぞれ含んでいる。各鎖の超可変領域はＦＲによって極く近傍に一緒に保持され、他の鎖からの超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)を参照）。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接は関係しないが、例えば抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）における抗体の関与のような様々なエフェクター機能を示す。
【００３１】
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」は、本明細書で使用される場合、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインのその領域を指す。一般的に、抗体は、６つのＨＶＲ：ＶＨに３つ（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３）、及びＶＬに３つ（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３）を含む。天然型抗体では、Ｈ３及びＬ３は６つのＨＶＲのうちで最も多様性を示し、特にＨ３は抗体に良好な特異性を与えることにおいて特有の役割を果たすと考えられている。例えば、 Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)を参照。実際、天然に生じるラクダ科の重鎖のみからなる抗体は、軽鎖の非存在下で機能的で安定している。例えば、 Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)を参照。
【００３２】
ＨＶＲは、一般に超可変ループから及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は最も高い配列可変性のものであり、及び／又は抗原認識に関与している。多数のＨＶＲの描写が使用され、ここに含まれる。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造的ループの位置に言及している（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ ＨＶＲは、ＫａｂａｔＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用できる複合体結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲの各々からの残基は以下に記される。
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【００３３】
ＨＶＲは、次のような「拡大ＨＶＲ」を含むことができる：ＶＬの２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７又は８９−９６（Ｌ３）と、ＶＨの２６−３５（Ｈ１）、５０−６５又は４７−６５（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２、又は９５−１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基には、これら各々を定義するために、上掲のＫａｂａｔらに従って番号を付した。
【００３４】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００３５】
「Ｋａｂａｔによる可変ドメイン残基番号付け」又は「Ｋａｂａｔに記載のアミノ酸位置の番号付け」なる用語及びその異なる言い回しは、上掲のＫａｂａｔ等の抗体の編集の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＨＶＲ内の短縮又は挿入に相当する２、３のアミノ酸又は付加的なアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインには、重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えばカバットによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）と、Ｈ２の残基５２の後に単一アミノ酸の挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）を含んでもよい。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準の」Ｋａｂａｔ番号付け配列を有する抗体の配列の相同領域でアライメントすることによって、所与の抗体について決定されてもよい。
【００３６】
一般的に、可変ドメインの残基（およそ、軽鎖の残基１−１０７と重鎖の残基１−１１３）を指す場合にはＫａｂａｔ番号付けシステムが用いられる（例として、Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する場合、「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」が、一般的に使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔらに報告されるＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」はヒトＩｇＧ１のＥＵ抗体の残基番号を指す。本明細書中で特に述べない限り、抗体の可変ドメイン内の残基番号の参照は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書中で特に述べない限り、抗体の定常ドメイン内の残基番号の参照は、ＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する（例えば、国際公開第２００６／０７３９４１号）。
【００３７】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当該技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。
【００３８】
「親和成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善を生じさせる、その一又は複数のＨＶＲ又はフレームワークにおいて一又は複数の改変を含むものである。一実施態様では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、更にはピコモル単位の親和性を有する。親和成熟抗体は、当技術分野において既知の所定の手順を用いて生成され得る。例えば、Marks et al.  Bio/Technology 10:779-783 (1992)は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのシャフリングによる親和成熟を記述している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)；及びHawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)に記載されている。
【００３９】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、それらの幾つかは更にサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４０】
用語「患者」（同義的に「個体」及び「被験体」称される）はヒト患者である。患者は「がん患者」、即ちがんの一以上の症状を患っているか又はその危険にさらされている者であってもよい。
【００４１】
用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、治療的処置を指し、ここで、その目的は、がんの増殖、発生又は転移などの所望されない生理学的変化又は障害を予防し又は遅延（軽減）させることである。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果は、限定されないが、検出可能であるか又は検出不能であるかどうかによらず、症状の緩和、疾患の範囲の縮小、疾患の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延又は緩徐化、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的又は全体的かによらない）を含む。
【００４２】
治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して、「治療」はまた、生存期間の延長を意味し得る。治療を必要とする者は、既に病気又は障害を有する者、例えば、がん患者を含む。
【００４３】
「治療上有効量」なる句は、（ｉ）特定の疾患、病気、又は障害を治療し、（ｉｉ）特定の疾患の一以上の症状を軽減、改善、又は除去し、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載される特定の疾患、病気、又は障害の一以上の症状の発症を予防し又は遅延させる量を意味する。がんの場合は、治療上有効量は、がん細胞の数を減少させ；腫瘍の大きさを小さくし；がん細胞の周辺器官への浸潤を阻害し（例えば、ある程度に遅くする、好ましくは停止させる）；腫瘍の転移を阻害（例えば、ある程度に遅くする、好ましくは停止させる）し；腫瘍の増殖をある程度阻害し；及び／又はがんに関連する一又は複数の症状をある程度和らげることが可能である。組み合わせが、既存のがん細胞の増殖を妨げ及び／又は死滅させる範囲において、それは細胞分裂停止性及び／又は細胞障害性である。がん治療において、有効性は、例えば、疾患の進行までの時間（ＴＴＰ）を評価する及び／又は奏効率（ＲＲ）を決定することにより、測定することができる。
【００４４】
用語「がん」及び「がん性」は、無秩序な細胞増殖により典型的特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指す。「腫瘍」は、一以上のがん性細胞を含む。がんの例には、限定するものではないが、癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病又はリンパ性悪性腫瘍が含まれる。このようながんのより具体的な例には、扁平上皮がん（例えば上皮の扁平細胞がん）、小細胞肺がんを含む肺がん、非小細胞肺がん（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞性がん、胃腸がんを含む胃（ｇａｓｔｒｉｃ、ｓｔｏｍａｃｈ）がん、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝細胞がん、乳がん、大腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜ないし子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん又は腎がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝癌、肛門癌、陰茎癌、並びに頭部及び頚部のがんが含まれる。本明細書で使用される場合、胃がんは、胃の任意の部分に発生することができ、胃全体及び他の臓器；特に食道、肺、リンパ節、肝臓に広がる場合がある胃がんを含む。
【００４５】
「化学療法剤」は、作用機序にかかわらずがんの治療に有用な、生物学的（例えば、巨大分子）又は化学的（例えば、小分子）化合物である。
【００４６】
「白金薬剤」は、白金を含む化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンである。
【００４７】
用語「哺乳動物」は、限定されないが、ヒト、マウス、ラット、モルモット、サル、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、及び家禽を含む。一実施態様において、哺乳動物はヒトである。
【００４８】
「添付文書」という用語は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに使用され、このような治療製品の使用に関する、適応症、使用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告についての情報を含む。
【００４９】
「薬学的に許容可能な塩」なる語句は、本明細書中で使用される場合、化合物の薬学的に受容可能な有機若しくは無機の塩をいう。典型的な塩としては、ビスメシレート、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酸性酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（ｐａｍｏａｔｅ）（即ち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート）が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容可能な塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオンなどの別の分子の包含を伴ってもよい。対イオンは、親化合物の電荷を安定化する任意の有機又は無機部分であり得る。更に、薬学的に許容可能な塩は、その構造内に複数の荷電原子を有することができる。複数の荷電原子が薬学的に許容可能な塩の一部である場合、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容可能な塩は、一又は複数の荷電原子及び／又は一又は複数の対イオンを有してもよい。
【００５０】
所望される薬学的に許容可能な塩は、当技術分野で利用可能な任意の適切な方法によって調製することができる。例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸などといった無機酸による遊離塩基の処理、又は酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸、例としてグルクロン酸又はガラクツロン酸、αヒドロキシ酸、例えばクエン酸又は酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸又はニッケイ酸、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸又はエタンスルホン酸などといった有機酸による遊離塩基の処理。一般に塩基性の薬学的化合物からの薬学的に有用又は許容可能な塩の形成に適すると考えられる酸は、例えば、P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1 19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton PA；及びThe Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. ウェブサイト上）で論じられている。これらの開示は、これらを参照によって本明細書に組み込まれる。
【００５１】
「薬学的に許容可能な」なる句は、物質又は組成物が、製剤を含む他の成分及び／又はそれによって治療される患者と化学的及び／又は毒物学的に適合性であることを示す。
本明細書で使用される用語「相乗的」は、二以上の単一の薬剤の相加効果よりも効果的である治療的組み合わせを指す。相乗的相互作用の決定は、当技術分野で公知のアッセイから得られた結果に基づいていてもよい。これらのアッセイの結果は、コンビネーションインデックス（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ）を得るために、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの組み合わせ法及びＣａｌｃｕＳｙｎソフトウエアを用いた用量効果分析を使用して分析することができる（Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55）。本発明において提供される組み合わせを、抗がん剤間の相乗効果、相加効果、及び拮抗作用を定量化するための標準的プログラムを利用して解析することができる。例示的なプログラムは、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙにより、"New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy," Academic Press, 1987, 2章に記載されている。０．８未満のコンビネーションインデックス値は相乗効果を示し、１．２より大きい値は拮抗作用を示し、０．８から１．２の値は相加効果を示す。併用療法は、「相乗効果」を提供し「相乗的」であることが判明し、即ち、活性成分が共に使用される場合に達成される効果は、別個に化合物を使用することから生じる効果の和よりも大きい。従って、実施態様においては、活性成分の組み合わされた量は、相乗効果を提供するのに有効である（本明細書では、相乗的に有効な量と呼ぶ）。相乗効果は、活性成分が、（１）同時処方され、組み合わされた単位投薬製剤として同時に投与又は送達され；（２）別個の製剤として交互に又は並行して送達される場合；又は（３）ある種の他のレジメンによって、達成することができる。交互療法で送達される場合、相乗効果は、化合物が、例えば別個にシリンジで異なった注射によって連続的に投与され又は送達されるときに達成されうる。一般に、交互治療の間、各活性成分の有効用量は、経時的に、即ち連続的に投与されるが、併用療法では、二つ以上の活性成分の有効用量が一緒に投与される。組み合わせ効果は、ＢＬＩＳＳの独立モデル及び最高の単一薬剤（ＨＳＡ）モデルの両方を用いて評価された（Lehar et al. 2007, Molecular Systems Biology 3:80）。ＢＬＩＳＳスコアは、単一薬剤からの増強の程度を定量化し、正のＢＬＩＳＳスコア（０より大きい）は単純加算よりも大きいことを示唆している。２５０より大きい累積正ＢＬＩＳＳのスコアは、試験された濃度範囲内で観察された強い相乗効果と考えられる。ＨＳＡスコア（０より大きい）は、単一薬剤応答の最大値よりも対応する濃度で大きい組み合わせ効果を示唆している。
【００５２】
所与の過剰増殖性疾患の治療の改善を提供することに加えて、本発明の所定の組み合わせの投与は、異なる治療を受ける同一の患者が経験する生活の質に比べて、患者の生活の質を改善することができる。例えば、患者への組み合わせの投与は、同一患者が、治療として個々の薬剤のうちの１つのみを受けた場合にその患者が経験するであろう生活の質に比べて生活の質の向上を提供することができる。例えば、本明細書に記載される組み合わせによる併用療法は、必要とされる治療剤の用量を低下させることができる。併用療法は、化学療法剤の使用の必要性及び高用量の化学療法剤に関連した副作用（例えば、悪心、嘔吐、脱毛、発疹、食欲不振、体重減少など）減少させるか又は排除し得る。組み合わせはまた、腫瘍量、及び、痛み、臓器不全、体重減少などの関連する有害事象の減少を引き起こす可能性がある。従って、本発明の一態様は、本明細書に記載される薬剤により過剰増殖性疾患の治療を受けた患者の生活の質を改善するための治療的使用のための組み合わせを提供する。
【００５３】
一態様は、患者に、本明細書に記載される組み合せを投与することを含む、がんに罹患している患者における腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）の方法を含む。所定の実施態様において、組み合わせは相乗効果を与える。
【００５４】
所定の実施態様において、組み合わせのＴＧＩは、ＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０６２３又はＭＥＨＤ７９４５Ａ単独の何れかのＴＧＩよりも大きい。特定の実施態様において、組み合わせのＴＧＩは、薬剤単独のＴＧＩよりもおよそ１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０又は７５パーセント大きい。
【００５５】
ＴＧＩを測定する方法は、当該技術分野で知られている。一例の方法では、平均腫瘍体積が決定され、治療前と後で患者から比較した。腫瘍体積は、当該技術分野において任意の方法、例えばＵｌｔｒａＣａｌ ＩＶキャリパー（Ｆｒｅｄ Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用して、又はＰＥＴ（陽電子放射断層撮影法）によって、又は他の方法によって、二次元（長さと幅）で測定することができる。腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５なる式を用いることができる。複数の期間にわたって腫瘍体積の測定を、混合モデリング線形混合効果（ＬＭＥ）のアプローチを用いて行うことができる（Pinheiro et al. 2009）。このアプローチは、反復測定（及び複数の患者）の両方に対処することができる。キュービックスプライン回帰は、各用量レベルで腫瘍体積の経時変化に対する非線形プロファイルに適合するために使用することができる。これらの非線形プロファイルは、その後、混合モデル内での用量に関連することができる。ビヒクルのパーセントとしての腫瘍増殖阻害は、以下の式を用いて、ビヒクルに対する日当たりの近似曲線下面積（ＡＵＣ）のパーセントとして計算することができる。
2016515132.tif 000006
【００５６】
この式を用いて、１００％のＴＧＩ値は腫瘍鬱血を示し、約１％より大きく約１００％未満は腫瘍増殖阻害を示し、約１００％より大きいものは腫瘍退縮を示す。
【００５７】
ＩＩ．ＭＥＫ及びＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤
Ａ．ＭＥＫ阻害剤
本発明は、ＭＥＫ阻害剤並びにＨＥＲ３及びＥＧＦＲ阻害剤による併用療法におけるそれらの使用に関する。ＭＥＫ阻害剤は広く概説されている（S. Price, Putative Allosteric MEK1 and MEK 2 inhibitors, Expert Opin. Ther. Patents, 2008 18(6):603; J.I. Trujillo, MEK Inhibitors: a patent review 2008-2010 Expert Opin. Ther. Patents 2011 21(7):1045。好ましくは、ＭＥＫ阻害剤は、ＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）、ＧＤＣ−０６２３、ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＡＺＤ８３３０、ＢＡＹ ８６−９７６６（レファメチニブ）、ＧＳＫ−１１２０２１２（トラメチニブ）、ＡＲＲＹ−１６２、ＭＳＣ１９３６３６９、ＭＫ１６２、ＴＡＫ７３３及びＰＤ−３２５９０１から選択される。最も好ましくは、ＭＥＫ阻害剤は、ＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）又はＧＤＣ−０６２３である。
【００５８】
ＧＤＣ−０９７３は経口で利用可能で、ＭＥＫ１及びＭＥＫ２の高度に選択的な阻害剤であり、ＲＡＳ／ＲＡＦ経路の中心的な構成要素である。ＧＤＣ−０９７３は、ケミカルアブストラクト登録番号（ＣＡＳ）９３４６６０−９３−２及び次の化学構造を有する：
2016515132.tif 000007
【００５９】
ＧＤＣ−０６２３は、ケミカルアブストラクト登録番号（ＣＡＳ）１１６８０９１−６８−６及び次の化学構造を有する：
2016515132.tif 000008
【００６０】
Ａ．ＭＥＫ阻害剤の調製：ＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０６２３
国際公開第２００７０４４５１５号の実施例２２に記載されるように又は別法で、Rice, et al. (K. D. Rice et al., Novel Carboxamide-Based Allosteric MEK inhibitors: Discovery and Optimization Efforts toward XL518 (GDC-0973, Med. Chem. Lett. 2012 3:416)により記載されるように、ＭＥＫ阻害剤ＧＤＣ−０９７３（式Ｉ）、又はその薬学的に許容可能な塩を調製することができる。
【００６１】
ＭＥＫ阻害剤ＧＤＣ−０６２３（式ＩＩ）、又は薬学的に許容可能な塩は、例えば、国際公開第２００９／０８５９８３号の実施例５に記載されるように、製造することができる。
Ｂ．ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤
本発明は、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、又はＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方を阻害する化合物、及びＭＥＫ阻害剤を用いる併用療法におけるそれらの使用に関する。ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、及び二重ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は、抗体又は他の抗原結合タンパク質、小分子、核酸（ｓｉＲＮＡなど）、又は他の任意のそのような分子であることができる。
【００６２】
一実施態様において、併用療法は、ＨＥＲ３阻害剤に関する。例示的な抗ＨＥＲ３抗体は、国際公開第２０１１０７６６８３号（Ｍａｂ２０５．１０．１，Ｍａｂ２０５．１０．２，Ｍａｂ２０５．１０．３）、米国特許第７８４６４４０号；米国特許第７７０５１３０号及び米国特許第５９６８５１１号に記載される。
【００６３】
一実施態様において、併用療法は、ＥＧＦＲ阻害剤に関する。ＥＧＦＲ阻害剤の例は、ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０８）、ＭＡｂ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ等を参照）及びその変異体、例えばキメラ化２２５（Ｃ２２５又はセツキシマブ；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））及び再形成ヒト２２５（Ｈ２２５）（国際公開第９６／４０２１０号、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．を参照）；ＩＭＣ−１１Ｆ８，完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；タイプＩＩ変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５２１２２９０号）；米国特許第５８９１９９６号に記載されているようなＥＧＦＲに結合するヒト化及びキメラ化抗体；及びＥＧＦＲに結合するヒト抗体、例えばＡＢＸ−ＥＧＦ又はパニツムマブ（国際公開第９８／５０４３３，Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照）；ＥＭＤ５５９００（Stragliotto et al. Eur. J. Cancer 32A:636-640 (1996)）；ＥＭＤ７２００（マツズマブ），ＥＧＦＲ結合についてＥＧＦ及びＴＧＦ−α双方と競合するＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体，ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３及びＥ７．６．３として知られ、米国特許第６２３５８８３号に記載されている完全なヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ）；及びｍＡｂ８０６又はヒト化ｍＡｂ８０６（Johns et al., J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004)）を含む。抗ＥＧＦＲ抗体は細胞傷害剤とコンジュゲートされることができ、よってイムノコンジュゲートを生じる（例えば、欧州特許出願公開第６５９４３９Ａ２号、Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨを参照）。ＥＧＦＲ阻害剤は小分子、例えば米国特許第５６１６５８２号、同第５４５７１０５号、同第５４７５００１号、同第５６５４３０７号、同第５６７９６８３号、同第６０８４０９５号、同第６２６５４１０号、同第６４５５５３４号、同第６５２１６２０号、同第６５９６７２６号、同第６７１３４８４号、同第５７７０５９９号、同第６１４０３３２号、同第５８６６５７２号、同第６３９９６０２号、同第６３４４４５９号、同第６６０２８６３号、同第６３９１８７４号、同第６３４４４５５号、同第５７６００４１号、同第６００２００８号、及び同第５７４７４９８、並びに次のＰＣＴ公報：国際公開第９８／１４４５１号、国際公開第９８／５００３８号、国際公開第９９／０９０１６号、及び国際公開第９９／２４０３７号に記載されている化合物を含む。特定の小分子ＥＧＦＲ阻害剤は、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ，タルセバ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ １８３８０５（ＣＩ １０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−，二塩酸塩，Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡＴＭ）４−（３’−クロロ−４’−��ルオロアニリノ）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチナミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテナミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；及びＡＧ１５７１（ＳＵ ５２７１；Ｐｆｉｚｅｒ）を含む。
【００６４】
一実施態様において、併用療法は、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤に関する。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は二重特異性抗体である。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体である。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は、２つの同一の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、該ドメインの各々はＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合する。このような抗体は、国際公開第２０１０１０８１２７号、米国特許出願公開第２０１００２５５０１０号及びSchaefer et al, Cancer Cell, 20: 472-486 (2011)に記載されている。ＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むそのような特定の二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は、ＭＥＨＤ７９４５Ａとしても知られているＤＬ１１ｆである。ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＥＧＦＲのドメインＩＩＩ及びＨＥＲ３のドメインＩＩＩに結合することができる。ＭＥＨＤ７９４５Ａはまた、Ｆｃγ受容体に結合することができ、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発する可能性がある。ＭＥＨＤ７９４５Ａは、抗ＥＧＦＲ治療に非応答性であるモデルを含む様々な非臨床モデルにおいて強力な抗腫瘍活性を示す。
【００６５】
２つの同一の抗原結合ドメインを含み、その各々がＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合する二重作用抗体ＭＥＨＤ７９４５Ａは、国際公開第２０１０／１０８１２７号（Ｄｌ１１ｆ、例えば図３３を参照）及びSchaefer et al., Cancer Cell, 20, 472-486 (2011)に記載されるように調整されることができる。ＭＥＨＤ７９４５Ａの重鎖可変ドメインについてのアミノ酸配列は、配列番号１として提供され、ＭＥＨＤ７９４５Ａの軽鎖可変ドメインについてのアミノ酸配列は、配列番号２に提供される。
【００６６】
一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列のＨＶＲの一つ、二つ、及び／又は三つを含むＶＨを含む。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列のＨＶＲの一つ、二つ、及び／又は三つを含むＶＨ及び配列番号２のアミノ酸配列のＨＶＲの一つ、二つ、及び／又は三つを含むＶＬを含む。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列の三つ全てのＨＶＲを含むＶＨ及び配列番号２のアミノ酸配列の三つ全てのＨＶＲ含むＶＬを含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲは拡大ＨＶＲである。特定の一実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ１は、アミノ酸配列ＬＳＧＤＷＩＨ（配列番号３）を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、アミノ酸配列ＶＧＥＩＳＡＡＧＧＹＴＤ（配列番号４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、アミノ酸配列ＡＲＥＳＲＶＳＦＥＡＡＭＤＹ（配列番号５）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、アミノ酸配列ＮＩＡＴＤＶＡ（配列番号６）を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、アミノ酸配列ＳＡＳＦ（配列番号７）を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、アミノ酸配列ＳＥＰＥＰＹＴ（配列番号８）を含む。
【００６７】
一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＨを含む。一実施態様において、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＨを含む二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲは、アミノ酸配列ＬＳＧＤＷＩＨ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｈ１、アミノ酸配列ＶＧＥＩＳＡＡＧＧＹＴＤ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びアミノ酸配列ＡＲＥＳＲＶＳＦＥＡＡＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００６８】
一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＬを含む。一実施態様において、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＬを含む二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲは、アミノ酸配列ＮＩＡＴＤＶＡ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＳＡＳＦ（配列番号７）を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びアミノ酸配列ＳＥＰＥＰＹＴ（配列番号８）を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００６９】
一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＨ、及び配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＬを含む。一実施態様において、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＨ及び配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％，又は９９％配列同一性を有するＶＬを含む二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、アミノ酸配列ＬＳＧＤＷＩＨ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｈ１、アミノ酸配列ＶＧＥＩＳＡＡＧＧＹＴＤ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２、アミノ酸配列ＡＲＥＳＲＶＳＦＥＡＡＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３、アミノ酸配列ＮＩＡＴＤＶＡ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＳＡＳＦ（配列番号７）を含むＨＶＲ−Ｌ２、アミノ酸配列ＳＥＰＥＰＹＴ（配列番号８）を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００７０】
一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００７１】
一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施態様において、二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含み、ここで、該抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００７２】
幾つかの実施態様において、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲに特異的に結合する抗原結合ドメインを含む二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ抗体は、完全長ＩｇＧ１抗体である。
【００７３】
Ｃ．抗体調製
１．抗体親和性
所定の実施態様において、本明細書において与えられる抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）。
【００７４】
一実施態様において、以下のアッセイにより説明されるように、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂ型とその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する（例としてChen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照）。アッセイの条件を決めるために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートして、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）に、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した所望のＦａｂと混合する（例えば、Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間（例えばおよそ６５時間）かかるかもしれない。その後、混合物は、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために捕獲プレートへと移される。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴＴＭγ計測器（Ｐａｃｋａｒｄ）にて１０分間計測する。それぞれ最大結合の２０％以下の濃度のＦａｂを選択して競合結合アッセイに用いる。
【００７５】
別の実施態様によれば、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いる表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化した。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。動力学測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（simple one-to-one Langmuir binding model）（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６Ｍ−１ ｓ−１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えばストップフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される漸増濃度の抗原の存在下、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて測定することができる。
【００７６】
２．抗体断片
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【００７７】
ダイアボディは２価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまた Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【００７８】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。所定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６号（Ｂ１）を参照）。
【００７９】
抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。
【００８０】
３．キメラ及びヒト化抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)に記述されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【００８１】
所定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。幾つかの実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、例えば抗体特異性又は親和性を回復若しくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【００８２】
ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、 Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号及び第７０８７４０９号；Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) （ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記述）； Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) （「リサーフェシング」を記述）； Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) （「ＦＲシャッフリング」を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) （ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。
【００８３】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)）；軽鎖又は重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリースクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。
【００８４】
４．ヒト抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に一般的に記載されている。
【００８５】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するか若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ  技術を記載している、米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）も参照のこと。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変される可能性がある。
【００８６】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して産生されるヒト抗体は、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記述されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) （ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【００８７】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に説明する。
【００８８】
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性又は活性（複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。
【００８９】
所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、又はＦａｂ断片の何れかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に高親和性抗体を提供する。代わりに、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーが、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリーはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の非再配列Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０を含む。
【００９０】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書でヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
【００９１】
６．多重特異性抗体
所定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二つの抗原結合ドメインを含み、各々が異なる標的に対して特異的である従来の二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。所定の実施態様において、結合特異性の一つはＨＥＲ３に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。所定の実施態様において、二重特異性抗体は、ＨＥＲ３の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまたＨＥＲ３を発現する細胞に細胞傷害性薬物を局所化するために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【００９２】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)）、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」工学（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４号（Ａ１））、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号；及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；２重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体フラグメントを作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
【００９３】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号（Ａ１）を参照）。
【００９４】
本明細書中の抗体又は断片はまた、ＨＥＲ３並びにその他の異なる抗原（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。かかる二重特異性ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤が本明細書において記述され、例示的なＤＬ１１ｆ（ＭＥＨＤ７９４５Ａ）抗体を含む。
【００９５】
７．抗体変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるために作成され得る。
【００９６】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
所定の実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型変異誘発の対象となる部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、表１の「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「例示的な置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。
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【００９７】
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ．
【００９８】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【００９９】
置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体など）の一以上の超可変領域残基の置換を含む。一般的には、更なる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。典型的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイベースの親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一つ以上のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１００】
改変（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行うことができる。このような改変は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で（例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）の何れかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーが、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するする別の方法は、幾つかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されたＨＶＲを標的としたアプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、又はモデリングを用いて、特異的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０１０１】
所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限りにおいて、一以上のＨＶＲ内で生じる可能性がある。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の所定の実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又はわずか１個、２個又は３個のアミノ酸置換が含まれているかの何れかである。
【０１０２】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又はグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０１０３】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０１０４】
ｂ）グリコシル化変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、その抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少するように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、一以上のグリコシル化部位が作成又は削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０１０５】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は、一定の改善された特性を有する抗体変異体を作成するために行われ得る。
【０１０６】
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着している全ての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指すが；しかしながら、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流又は下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「非フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。非フコシル化修飾抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ａ１）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２号（Ａ１）、Ａｄａｍｓら、具体的には実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０１０７】
抗体変異体は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖を更に備えている。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１０８】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
所定の実施態様において、一以上のアミノ酸改変を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、一以上のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
【０１０９】
所定の実施態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）が不要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；第５８２１３３７号（例えば、Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記述される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は更に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。また、ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定は、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
【０１１０】
エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の二以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
【０１１１】
ＦｃＲへの改善又は減少した結合を持つ特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)）。
【０１１２】
所定の実施態様において、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０１１３】
幾つかの実施態様において、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記述されるように、改変された（即ち、改善され又は減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされる。
【０１１４】
増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ａ１）（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一つ又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基の１以上の置換を有するものが含まれる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）。
【０１１５】
Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０１１６】
ｄ）システイン改変抗体変異体
所定の実施態様において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン改変抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望まれ得る。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で起きる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中で更に記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分又はリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。所定の実施態様において、一以上の以下の残基がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
【０１１７】
ｅ）抗体誘導体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手される追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキソラン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性に起因して製造における利点を有し得る。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、一以上の重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であってよい。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が限定された条件下で治療に使用されるのか等を含む検討事項に基づいて決定することができる。
【０１１８】
その他の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい抗体、及び非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005）。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０１１９】
ｆ）組換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号で説明したように、組換えの方法及び組成物を用いて製造することができる。一実施態様において、本明細書に記載される抗ＨＥＲ３／抗ＥＧＦＲ抗体（二重特異性抗体を含む）をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様において、そのような核酸を含む一以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗体（二重特異性抗体を含む）を作成する方法が提供され、その方法は、上記のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、及び必要に応じて、宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０１２０】
抗体（二重特異性抗体を含む）の組換え生産のために、例えば上述したように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために一以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０１２１】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌で産生することができる。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号及び第５８４０５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体の発現を説明している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照）。発現の後、抗体は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され、更に精製することができる。
【０１２２】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、そのグリコシル化経路が、「ヒト化」されている菌類や酵母菌株を含む抗体をコードするベクターのための、適切なクローニング宿主又は発現宿主であり、部分的又は完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照。
【０１２３】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
【０１２４】
植物細胞培養を宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照。
【０１２５】
脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合した哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株（Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３細胞又は２９３細胞；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスのセルトリ細胞（Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照。
【０１２６】
ＩＩＩ．組成物
本明細書に記載される薬学的組成物又は本発明の製剤は、組み合せを含む。
【０１２７】
本明細書に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、非溶媒和形態、及び水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態で存在してもよく、本発明は溶媒和及び非溶媒和形態の両方を包含することを意図する。
【０１２８】
化合物又はその薬学的に許容可能な塩はまた、異なる互変異性型で存在してもよく、全てのかかる形態が本発明の範囲内に包含される。用語「互変異性体」又は「互変異性形態」は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能である異なるエネルギーの構造異性体を意味する。例えば、（プロトトロピック互変異性体としても知られる）プロトン互変異性体は、ケト−エノール及びイミン−エナミン異性化のようなプロトンの移動を介する相互変換を含む。原子価互変異性体は、結合電子の幾つかの再編成による相互変換を含む。
【０１２９】
薬学的組成物はバルク組成物及び任意の薬学的に不活性な賦形剤、希釈剤、担体、又は流動促進剤と一緒に、複数の（例えば２つ）の薬学的に活性な薬剤で構成される個々の投薬単位の両方を包含する。バルク組成物及び各個々の投薬単位は、上記薬学的に活性な薬剤の固定量を含むことができる。バルク組成物は、まだ個々の投薬単位に形成されていない物質である。例示的な投薬単位は、錠剤、丸剤、カプセル剤などの経口投薬単位である。同様に、本発明の薬学的組成物を投与することにより患者を治療する本明細書に記載される方法はまた、バルク組成物及び個々の投薬単位の投与を包含することを意図している。
【０１３０】
薬学的組成物はまた、一以上の原子が、通常は天然に見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子によって置換されているという事実のために、本明細書に記載されるものと同一である同位体標識化合物を包含する。記述される任意の特定の原子又は元素の全ての同位体は、本発明の化合物及びそれらの使用の範囲内において検討される。化合物に組み込むことができる例示的な同位体は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素及びヨウ素の同位体、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ及び１２５Ｉなどを含む。本発明の同位体標識化合物（例えば、３Ｈ及び１４Ｃで標識されたもの）は、化合物及び／又は基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム（３Ｈ）及び炭素１４（１４Ｃ）同位体は、それらの調製及び検出の容易さのために有用である。更に、重水素（２Ｈ）などのより重い同位体による置換は、より大きな代謝安定性から生じる特定の治療的利点（例えば、インビボ半減期の延長又は必要投与量の減少）を与えることができ、従って、幾つかの状況において好ましい場合がある。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ及び１８Ｆなどの陽電子放出同位体は、基質の受容体占有率を調べる研究陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）のために有用である。
【０１３１】
化合物の薬学的に許容可能な塩は、ヒトを含む哺乳動物（ヒトの男性又は女性など）において、過剰増殖性疾患（例えば、トリプルネガティブ乳がんなどのがん）の治療的処置のための治療的組み合わせにおいて使用のための標準的な薬務に従って処方される。本発明は、一以上の薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤、又は賦形剤に伴って本明細書に記載される組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。
【０１３２】
適当な担体、希釈剤及び賦形剤は当業者に周知であり、炭水化物、ワックス、水溶性及び／又は膨潤性ポリマー、親水性又は疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等の材料を含む。使用される特定の担体、希釈剤又は賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段及び目的に依存するであろう。溶媒は、一般的に哺乳動物に投与することが安全として当業者によって認識される（ＧＲＡＳ）溶媒に基づいて選択される。一般に、安全な溶媒は、水及び水に可溶性又は混和性である他の非毒性溶媒などの非毒性水性溶媒である。適切な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、及びそれらの混合物が挙げられる。製剤は、一又は複数の緩衝液、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、滑剤、乳化剤、懸濁剤、保存料、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色料、甘味料、芳香剤、香味剤、及び薬物（すなわち、本発明の化合物又はその薬学的組成物）を見栄え良く提供するための又は薬学的製品（すなわち、医薬）の製造を補助する他の既知の添加剤を含みうる。
【０１３３】
製剤は、通常の溶解及び混合手順を使用して調製することができる。例えば、バルク薬物物質（すなわち、本発明の化合物又はその化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体又は他の既知の錯化剤との複合体））が、上述の賦形剤のうちの一以上の存在下で適切な溶媒に溶解される。本発明の化合物は、典型的には、容易に制御可能な薬物用量を提供し、かつ処方されたレジメンの患者のコンプライアンスを可能とする薬学的投薬形態へと製剤化される。
【０１３４】
投与のための薬学的組成物（又は製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて様々な方法で包装されてもよい。一般的には、配布用品は、その中に医薬製剤を適切な形態で貯蔵した容器を含む。適切な容器は、当業者によく知られており、ボトル（プラスチック及びガラス）、サシェ、アンプル、ビニール袋、金属シリンダー等の物品を含んでいる。また、容器は、パッケージの内容物への無分別なアクセスを防止するために、不正開封防止用組み合わせ品（ｔａｍｐｅｒ−ｐｒｏｏｆ ａｓｓｅｍｂｌａｇｅ）を含むことができる。更に、容器の内容物を記載するラベルがその上に付着されている。ラベルは適切な警告をも含み得る。
【０１３５】
化合物の薬学的製剤は、様々な経路及び投与タイプに対して調製することができる。例えば、所望の程度の純度を有する本明細書に記述される化合物又は薬学的に許容可能な塩は、任意で凍結乾燥製剤、粉砕した粉末、又は水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤又は安定剤（Remington's Pharmaceutical Sciences (1995) 18th edition, Mack Publ. Co., Easton, PA）と混合され得る。製剤化は、生理学的に許容される担体、すなわち用いられる用量及び濃度でレシピエントに非毒性である担体と共に、適切なｐＨで、かつ所望の程度の純度で、常温で混合して行うことができる。製剤のｐＨは、特定の用途や化合物の濃度に主に依存するが、約３から約８の範囲であり得る。
【０１３６】
薬学的製剤は、好ましくは無菌である。特に、インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。そのような無菌化は滅菌濾過メンブレンによる滅菌によって容易に達成される。
【０１３７】
薬学的製剤は、通常、固体組成物、凍結乾燥製剤として又は水溶液として保存することができる。
【０１３８】
薬学的製剤は、ある様式で、例えば、良好な医療行為と一致した、量、濃度、スケジュール、経過、ビヒクル及び投与経路で服用され、投与されるであろう。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。投与されるべき「治療上有効量」は、このような考慮によって調整され、凝固因子媒介性障害を予防するか、寛解する又は治療するために必要な最小限量である。このような量は、好ましくは、宿主に対して毒性であるか又は宿主を出血に対して有意に一層感受性にする量を下回る。
【０１３９】
許容される希釈剤、担体、賦形剤及び安定剤は、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。また、活性な薬学的成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は、上掲のRemington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, (1995) Mack Publ. Co., Easton, PAに開示されている。
【０１４０】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、化合物又は薬学的に許容可能な塩を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリアクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸及びγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能なマイクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ポリ−（Ｄ）−（−）３−ヒドロキシブチル酸が含まれる。
【０１４１】
薬学的製剤は、本明細書に詳述される投与経路に適したものが挙げられる。製剤は、簡便には単位投薬形態で提供することができ、薬学の分野で周知の任意の方法によって調製することができる。技術及び製剤は、一般的に、Remington's Pharmaceutical Sciences 18th Ed. (1995) Mack Publishing Co., Easton, PAに見いだされる。このような方法は、一以上の補助成分を構成する担体と活性成分とを会合させる工程を含む。一般に、製剤は、活性成分を、液体担体若しくは微粉化固体担体又はその両方と均一かつ密接に会合させ、次いで必要であれば生成物を成形することにより調製される。
【０１４２】
経口投与に適した組み合わせの製剤は、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩；及びＭＥＨＤ７９４５Ａの所定量を含む、丸薬、硬カプセルないしは軟カプセル剤、例えばゼラチンカプセル剤（ｃａｐｓｕｌｅｓ）、カプセル（ｃａｃｈｅｔ）、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性ないしは油性懸濁液、分散可能パウダーないしは顆粒、エマルション、シロップ又はエリキシル剤のような別々の単位として調製されうる。ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩の量は、複合製剤として、丸剤、カプセル、溶液又は懸濁剤に処方され得る。あるいは、組み合わせは、交互に投与のため、丸剤、カプセル、溶液又は懸濁剤に別々に処方され得る。
【０１４３】
製剤は薬学的組成物の製造のために当該分野で知られている任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、口に合う製剤を提供するために、甘味料、香味料、着色剤及び保存剤を含む一又は複数の薬剤を含みうる。圧縮錠は、任意で結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、保存料、界面活性剤又は分散剤と混合せしめて、粉末又は顆粒のような自由に流動する形態で活性成分を適切な機械で圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、適切な機械中で不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末の活性成分の混合物を成形することによって作製し得る。錠剤は場合によっては被覆され又は刻み目を付けてもよく、場合によっては活性成分のそこからの低速放出又は制御放出をもたらすように製剤化される。薬学的製剤の錠剤賦形剤には、錠剤を形成する粉剤のバルク体積を増やすためのフィラー（又は希釈剤）；摂取され、薬剤の迅速溶解及び吸収を促進する場合に、錠剤を小さな断片、理想的には個々の薬剤粒子に破壊する崩壊剤；顆粒及び錠剤が、必要な機械的強度によって形成され、圧縮された後に合わさって錠剤となり、包装、輸送及び慣例的な処理の間にその成分粉に壊れるのを防ぐ結合剤；製造の間に錠剤を形成する粉の流動性を向上させるための流動促進剤；製造の間に錠剤を圧縮するために用いる機材に錠剤化粉末が付着しないようにするための滑沢剤が含まれる。これらは、圧縮を介した粉混合物の流れを向上させ、完成した錠剤が装置から放出されるときに摩擦及び破損を最小化する；流動促進剤と同様の機能を有する抗粘着剤は、錠剤を形成する粉末と製造中に錠剤の形状を打ち抜くために用いられる機械との間の接着を低減する；錠剤に配合される香料は、好ましい味覚を与えるか又は不快な味覚をマスキングし、着色料は認識及び患者の服薬遵守を補助するためである。
【０１４４】
錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容可能な賦形剤と混合せしめられて活性成分を含む錠剤が許容可能である。これらの賦形剤は、例えば不活性な希釈剤、例えば炭酸カルシウム又はナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はナトリウム；顆粒化及び崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、又はアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチン又はアカシア；及び潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクでありうる。錠剤は非被覆でも、又は胃腸管中での崩壊と吸着を遅延させるマイクロカプセル化を含む既知の方法によって被覆してもよく、それによって長時間にわたる持続作用をもたらす。例えば、時間遅延物質、例えばモノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルを単独で又はロウと共に用いることができる。
【０１４５】
眼又は他の外部組織、例えば口及び皮膚の治療には、製剤は、好ましくは、例えば０．０７５から２０％ｗ／ｗの量で活性成分を含む局所用軟膏又はクリームとして塗布される。軟膏に製剤される場合、活性成分はパラフィン系又は水混和性軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、活性成分は水中油クリーム基剤を用いてクリームに製剤化することができる。
【０１４６】
所望される場合、クリーム基剤の水性相は多価アルコール、すなわち、例えばプロピレングリコール、ブタン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）及びその混合物のような二又はそれ以上のヒドロキシル基を有するアルコールを含みうる。局所用製剤は、好ましくは、皮膚又は他の患部領域を通しての活性成分の吸収又は浸透を向上させる化合物を含みうる。そのような皮膚浸透向上剤の例はジメチルスルホキシド及び関連類似体を含む。
【０１４７】
エマルションの油性相は、脂肪又は油との、あるいは脂肪と油の双方との少なくとも一の乳化剤の混合物を含む、周知の方法で既知の成分から構成することができる。好ましくは、親水性乳化剤が、安定化剤として作用する親油性乳化剤と共に含有せしめられる。併せて、安定化剤を含み又は安定化剤を含まない乳化剤は乳化ロウを構成し、油及び脂肪と共にロウはクリーム製剤の油性分散相を形成する乳化軟膏基剤を含む。製剤に使用するのに適した乳化剤及びエマルション安定化剤には、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標））６０、スパン（Ｓｐａｎ（登録商標））８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノ−ステアリン酸グリセリル及びラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。
【０１４８】
薬学的製剤の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合せしめられた活性物質を含む。そのような賦形剤には、懸濁剤、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、クロスカルメローゼ、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガム、及び分散又は湿潤剤、例えば天然に生じるホスファチド（例えばレシチン）、脂肪酸とのアルキレンオキシドの縮合産物（例えばポリオキシエチレンステアレート）、長鎖脂肪族アルコールとのエチレンオキシドの縮合産物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとのエチレンオキシドの縮合産物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）が含まれる。水性懸濁液はまた一又は複数の保存料、例えばエチル又はｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ−ベンゾエート、一又は複数の着色剤、一又は複数の香味剤及び一又は複数の甘味料、例えばスクロース又はサッカリンを含みうる。
【０１４９】
薬学的組成物は滅菌された注射用製剤の形態、例えば滅菌注射用水性又は油性懸濁液であってもよい。この懸濁液は上に述べた好適な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて周知技術に従って製剤化することができる。滅菌された注射用製剤はまた１，３−ブタン−ジオール溶液又は凍結乾燥粉末から調製されたもののように、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の溶液又は懸濁液であってもよい。用いることができる許容可能なビヒクル及び溶媒は水、リンガー液及び等張塩化ナトリウム溶液である。また、滅菌固定化油を溶媒又は懸濁媒質として便宜的に用いることができる。この目的に対して、合成のモノ−又はジグリセリドを含む任意のブランドの固定化油を用いることができる。また、オレイン酸のような脂肪酸も同様に注射剤の調製に使用することができる。
【０１５０】
単回投薬形態をつくるために担体物質と混合されうる活性成分の量は治療されるホストと特定の投与形式に応じて変わり得る。例えば、ヒトへの経口投与のための時間放出製剤は、全組成物の約５から約９５％（重量：重量）と変わりうる適切で簡便な量の担体物質と共に配合されておよそ１から１０００ｍｇの活性物質を含みうる。薬学的組成物は投与のために容易に測定可能な量をもたらすように調製することができる。例えば、静脈点滴のための水溶液は、約３０ｍＬ／ｈｒの速度で適した体積の点滴が生じうるようにするために溶液１ミリリットル当たり約３から５００μｇの活性成分を含みうる。
【０１５１】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤及び意図したレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含みうる水性及び非水性滅菌注射用溶液；及び懸濁剤及び増粘剤を含みうる水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。
【０１５２】
また、眼への局所投与に適した製剤には、好適な担体、特に活性成分のための水性溶媒に活性成分が溶解又は懸濁させられた点眼液が含まれる。活性成分はそのような製剤中に好ましくは０．５から２０％、例えば０．５から１０％、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【０１５３】
口への局所投与に適した製剤には、香味基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアのような不活性基剤に活性成分を含むパスティユ；及び適切な液体担体に活性成分を含むうがい薬が含まれる。
【０１５４】
直腸投与のための製剤は、例えばココアバター又はサリチラートを含む好適な基剤を用いて座薬として提供することができる。
【０１５５】
肺内又は経鼻投与に適した製剤は、例えば０．１から５００ミクロン（例えば０．５、１、３０ミクロン、３５ミクロン等々のような増分ミクロンで０．１から５００ミクロンの範囲の粒子径を含む）の範囲の粒子径を有し、これが鼻経路を通る迅速な吸入又は肺胞嚢に達するように口からの吸入によって投与される。好適な製剤には、活性成分の水性又は油性溶液が含まれる。エアゾール又は乾燥粉末投与に適した製剤は常法によって調製することができ、以下に記載されるような疾患の治療又は予防にこれまで使用されている化合物のような他の治療剤と共に送達されうる。
【０１５６】
膣投与に適した製剤は、活性成分に加えて、当該分野で適切であることが知られているような担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー製剤として提供することができる。
【０１５７】
製剤は、単位投薬又は複数投薬容器、例えば密封されたアンプル及びバイアルに包装することができ、使用直前に注射用の滅菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件で保存することができる。即時混合注射溶液及び懸濁液は既に記載された種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好適な単位投薬製剤は、活性成分の、上に記載されたような毎日の投薬又は毎日の部分用量単位、又はその適切な画分を含むものである。
【０１５８】
本発明は更に、獣医学的担体と一緒に本明細書に記載される組み合わせを含む獣医学的組成物を提供する。獣医学的担体は該組成物を投与する目的に有用な物質であり、不活性であるか獣医学分野で許容可能であり活性成分と相容性のある固形、液体又はガス状物質でありうる。これらの動物用医薬組成物は非経口的、経口的又は任意の他の所望の経路で投与されうる。
【０１５９】
ＩＶ．併用療法
本発明の一態様は、患者におけるがんの治療のための併用療法を提供し、ここで該併用療法は、患者へのＭＥＫ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、及びＨＥＲ３の阻害剤の投与を含む。
【０１６０】
一実施態様において、併用療法のＭＥＫ阻害剤は、ＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３のどちらかである。ＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０６２３は、ＥＲＫ１／２を活性化するキナーゼである、ＭＥＫ１／２の強力かつ高度に選択的な小分子アロステリック阻害剤である。ＭＥＫの１／２の阻害は、ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の異常なシグナル伝達に依存する腫瘍の増殖を制御するための有望な戦略である。前臨床研究は、両方の阻害剤が、多くの腫瘍のタイプに関連するＢ−ＲＡＦ変異を有する活性化腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効であり、ＧＤＣ−０９７３は、このモデルにおいてより高い活性を示すことを実証している。図５前臨床研究は、両方の阻害剤が、多くの腫瘍のタイプに関連するＲａｓ変異を有する活性化腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効であり、ＧＤＣ−０６２３は、このモデルにおいてより高い活性を示すことを実証している。図６。
【０１６１】
一実施態様において、ＨＥＲ３阻害剤及びＥＧＦＲ阻害剤の機能は、同じ分子、例えば、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に結合でき、その生物学的活性を阻害する二重特異性抗体に存在する。一実施態様において、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲ阻害剤は、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合する二重特異性抗体である。一実施態様において、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲ阻害剤は、２つの同一の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体であって、該ドメインの各々はＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合する。
【０１６２】
一実施態様において、２つの同一の抗原結合ドメインを含み、該ドメインの各々はＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的に結合するＨＥＲ３及びＥＧＦＲ二重特異性抗体は、抗体ＭＥＨＤ７９４５Ａである。ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ３の標的へのリガンド結合を遮断する。ＭＥＨＤ７９４５Ａ抗体は、約１．９ｎＭのＫｄでＥＧＦＲに結合し、約０．４ｍＭのＫｄでＨＥＲ３に結合する。（国際公開第２０１０／１０８１２７号及びSchaefer, et al. Cancer Cell, 20: 472-486 (2011)を参照）。ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２／ＨＥＲ３依存性シグナル伝達を阻害する更にＭＥＨＤ７９４５Ａは、単剤として、ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋシグナル伝達を阻害する。
【０１６３】
ＨＥＲ３及びＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）とのＭＥＫ阻害剤の組み合わせは、ＲＡＳ／ＭＥＫ及びＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の両方を阻害する方法を提供し、従ってより効果的な抗がん治療を提供する。併用療法は、ＭＥＫ阻害により観察されたＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の活性化に起因する固有の又は獲得耐性を防ぎ又は遅延させ、かつＲＡＳ経路の活性化を介して媒介される固有の又は獲得耐性を防ぎ又は遅延させるのに役立つであろう。また、併用療法は、二つの確立されたＥＧＦＲ耐性機序−ＫＲＡＳ変異及びＨＥＲ３活性化を遮断するために役立つであろう。
【０１６４】
ＭＥＫ阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤及びＥＧＦＲ阻害剤は、単一の薬学的組成物に処方することができる。また、組み合わせは、２つの薬学的組成物として存在しても良く、ここで、第一の薬学的組成物は、ＭＥＫ阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤及びＥＧＦＲ阻害剤の何れか一を含み、かつ第二の薬学的組成物はＭＥＫ阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤又はＥＧＦＲ阻害剤のうちの二つを含み、ここで、ＭＥＫ阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤及びＥＧＦＲ阻害剤は、第一の薬学的組成物及び第二の薬学的組成物の両方には存在しない。実施態様において、組み合わせは、２つの薬学的組成物として存在しても良く、ここで、第一の薬学的組成物は、ＭＥＫ阻害剤を含み、第二の薬学的組成物は、ＨＥＲ３阻害剤及びＥＧＦＲ阻害剤を含む。実施態様において、組み合せは、三つの薬学的組成物として存在してもよく、ここで、三つの薬学的組成物の各々は、ＭＥＫ阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤又はＥＧＦＲ阻害剤のうちの一を含む。
【０１６５】
組み合わせが、ＭＥＨＤ７９４５Ａなどの二重ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤を含む場合、ＭＥＫ阻害剤及び二重ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は、単一の薬学的組成物中に製剤化することができ、又はＭＥＫ阻害剤は、第一の薬学的組成物に製剤化することができ、かつ二重ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤は、第二の薬学的組成物に製剤化することができる。
【０１６６】
実施例に示すように、ＭＥＨＤ７９４５Ａ及びコビメチニブ（ＧＤＣ−０９７３）の組み合わせは、インビトロ及びインビボで強固な活性をもたらす。結腸直腸細胞株におけるインビトロでのシグナル伝達の研究は、ＡＫＴ及びＥＲＫシグナル伝達の阻害においてＭＥＨＤ７９４５Ａとコビメチニブの組み合わせの効果は、単剤の活性と比較して優れていることを実証している。増殖の阻害はまた、組み合わせの群で増強された。結腸がんのＫＲＡＳ変異体異種移植モデルにおける単剤群と比較した場合、組み合せ群において、インビボでの増加した有効性が実証され、シグナル伝達受容体のＥＧＦＲ及びＨＥＲ３の組み合わせ阻害及びＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ経路の同時阻害は、代償的経路の活性化を防止し、それによって効力を増強するために必要であるとする仮説を支持している。膵臓の野生型ＫＲＡＳ異種移植片モデルにおける単剤治療と比較した場合、インビボでの増加した有効性が見られ、ＭＥＨＤ７９４５Ａとコビメチニブの組み合わせはまた、膵臓がんに有益であることを示唆している。
【０１６７】
組み合わせは、前悪性及び非腫瘍性又は非悪性の過剰増殖性疾患と共に、腫瘍、がん、及び腫瘍性組織を含めた過剰増殖性疾患又は障害の治療のために、化学療法剤と組み合わせて用いられてもよい。所定の実施態様において、組み合わせは、抗過剰増殖特性を有する又は過剰増殖性疾患の治療において有用である別の化合物と、併用療法として投与レジメンで組み合わされる。投与レジメンの付加的化合物は、互いに悪影響を与えないように、好ましくは組み合わせに対して相補的活性を有する。このような化合物は、意図する目的に有効な量で投与され得る。一実施態様では、治療的組み合わせは投与レジメンによって管理され、ここで、ＭＥＫ阻害剤化合物（ＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）又はその薬学的に許容可能な塩の治療上有効量は、１日２回から３週間に１回（ｑ３ｗｋ）の範囲で投与され、治療上有効量のＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（ＭＥＨＤ７９４５Ａなど）は、１日２回から３週間に１回の範囲で投与される。
【０１６８】
併用療法では、同時又は連続した投与レジメンとして投与されてもよい。連続投与される場合、組み合わせは、２回以上の投与で投与されてもよい。併用投与には、別個の製剤を使用する同時投与、及び任意の順序での連続投与が含まれ、その際、両方の（又は全ての）活性剤がそれらの生物学的活性を同時に発揮する期間があることが好ましい。
【０１６９】
本発明の特異的な一態様において、ＭＥＫ阻害剤化合物（例えばＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）、又はその薬学的に許容可能な塩は、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａなど）の投与開始後に、約１日から約１０日の期間にわたって投与することができる。本発明の別の特異的な態様において、ＭＥＫ阻害剤化合物（例えばＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）、又はその薬学的に許容可能な塩は、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａなど）の投与開始前に、約１日から１０日の期間にわたって投与することができる。本発明の別の特異的な態様において、ＭＥＫ阻害剤化合物（例えばＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）、又はその薬学的に許容可能な塩の投与、及びＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａなど）の投与は同一日に開始する。
【０１７０】
本発明の特異的な一態様において、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａなど）は、ＭＥＫ阻害剤化合物（例えばＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）又はその薬学的に許容可能な塩の投与開始後に、約１日から約１０日の期間にわたって投与することができる。本発明の別の特異的な態様において、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａなど）は、ＭＥＫ阻害剤化合物（例えばＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）又はその薬学的に許容可能な塩の投与開始前に、約１日から１０日の期間にわたって投与することができる。本発明の別の特異的な態様において、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ阻害剤又は阻害剤（複数）（例えばＭＥＨＤ７９４５Ａなど）の投与、及びＭＥＫ阻害剤化合物（例えばＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３など）又はその薬学的に許容可能な塩の投与は同一日に開始する。
【０１７１】
上記の同時投与される任意の薬剤の好適な投与量は、現在使用されているものであり、例えば、治療指数を増加させ、又は毒性若しくは他の副作用又は結果を緩和するための、新たに同定される薬剤及び他の化学療法剤又は治療の複合作用（相乗効果）により減じられる可能性がある。
【０１７２】
抗がん治療の特定の実施態様において、治療的組み合わせは、外科療法及び放射線療法と組み合わせてもよい。組み合わせの量並びに投与の相対的タイミングは、所望の併用治療効果が得られるように選択されることになる。
【０１７３】
Ｖ．併用療法のための投与レジメン
ヒト患者を治療するための、式Ｉ又はＩＩのＭＥＫ阻害剤化合物又はその薬学的に許容可能な塩の投与量は、約２０ｍｇから約１６００ｍｇの化合物の範囲であり得る。典型的な投与量は、約５０ｍｇから約８００ｍｇの化合物とすることができる。特定の化合物の吸収、分布、代謝及び排出を含む、薬物動態的（ＰＫ）及び薬力学的（ＰＤ）特性に応じて、１日に１度（ＱＤ）、１日に２度（ＢＩＤ）、又はより頻繁に投与することができる。更に毒性要因は、投与量及び投与レジメンに影響を与え得る。経口的に投与される場合、指定された期間、一日二回、毎日又はより少ない頻度で、例えば、毎週、又は二ないし三週間に１回、丸薬、カプセル又は錠剤を摂取可能である計画は多くの治療サイクルで、繰り返すことができる。
【０１７４】
ＭＥＨＤ７９４５Ａなどの抗体によるヒト患者を治療するための投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。このように、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ．ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ，又は３０ｍｇ／ｋｇの一又は複数（又はその何れかの組み合わせ）の投与量が、患者に投与されうる。かかる投与量は、例えば、毎週、２週毎、３週毎など、間欠的に投与することができる。
【０１７５】
特定の一の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及びＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の毎日（ＱＤ）経口による４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及びＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及びＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及びＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及びＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。これらの特定の実施態様において、患者は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇを投与され；ＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）は、２１日間連続して投与され、７日間の休止が続く。
【０１７６】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１７７】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１７８】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１７９】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８０】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８１】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、Ｑ２Ｗ、ＩＶによるＭＥＨＤ７９４５Ａの１１００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８２】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、週１回（ＱＷ）にＩＶ（静注）によって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週１回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８３】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週２回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８４】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週３回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８５】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週４回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８６】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週５回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８７】
別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）の４０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による５０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による６０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による７０ｍｇである。別の特定の実施態様において、ヒト患者に対する投与量は、ＱＷ、ＩＶによって投与されるＭＥＨＤ７９４５Ａの４００ｍｇ、及び週６回、経口で投与されるＧＤＣ−０９７３（コビメチニブ）のＱＤ、経口による８０ｍｇである。
【０１８８】
ＶＩ．治療の方法
本明細書で提供される治療的組み合わせは、限定されないが、患者においてＡＫＴキナーゼにより調節されるものを含む、疾患、病気及び／又は障害を治療するために有用である。本発明の方法に従って治療することができるがんは、限定されないが、結腸直腸がん、中皮腫、子宮内膜、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、メラノーマ、胃がん、結腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、及び神経膠芽腫を含む。
【０１８９】
本発明の組み合わせは、特定のがんの表現型に対して改善された効果を提供し得る。例えば、本発明の特定の組み合わせは、ＲＡＳ変異（ＫＲＡＳ変異など）、ＥＧＦＲ変異（Ｔ７９０Ｍなど）、ＰＴＥＮ変異（低いか又は欠損状態）、ＡＫＴ変異（又は高いｐＡＫＴ発現レベル若しくは増幅レベル）、ＰＩ３Ｋの変異、又は上記の組み合わせと関連したがんに対して改善された効果を提供し得る。一実施態様において、がんは位置１２又は１３でＫＲＡＳ変異を含む。所定の実施態様において、ＫＲＡＳ変異は、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｃ、又はＧ１３Ｄである。
【０１９０】
従って、本明細書に記載される特定の組み合わせは、これらのタイプのがんに対して特に有用であり得る。ＧＤＣ−０９７３は、結腸、膵臓及び肺腫瘍において一般的である、ＫＲＡＳ駆動型腫瘍に対する改善された有効性を有することが示されている。
2016515132.tif 000010
【０１９１】
ＰＴＥＮ欠損（又は低い）状態は、当技術分野で知られている任意の適切な手段によって測定することができる。一例では、ＩＨＣが使用される。別法として、ウエスタンブロット分析を用いることができる。ＰＴＥＮに対するする抗体は市販されている（Cell Signaling Technology, Beverly, MA, Cascade Biosciences, Winchester, MA）。ＰＴＥＮの状態についてのＩＨＣ及びウェスタンブロット分析の手順の例は、Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001)及びPerren, A., et. al. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999に記載されている。更に、ＡＫＴ変異に、又はＰＩ３Ｋ変異に関連しているがんは、当技術分野で知られている技術を用いて同定することができる。
【０１９２】
与えられた試料において、非活性化又は非リン酸化ＡＫＴのレベルと比較した、ＡＫＴの活性化又はリン酸化（ｐＡＫＴ）のレベルは、当技術分野で公知の方法により測定することができる。ｐＡＫＴの状態は比率（例えば、腫瘍細胞におけるｐＡＫＴ量を同じタイプの非腫瘍性細胞におけるｐＡＫＴの量で割る）又は減算（例えば、腫瘍細胞におけるｐＡＫＴ量から同じタイプの非腫瘍性細胞におけるｐＡＫＴの量を引く）を単位として表すことができる。ｐＡＫＴプロファイルはまた、ＡＫＴリン酸化の下流標的（例えば、ｐＧＳＫ又はＰＲＡＳ４０）の量を測定することによって経路の活性化のレベルを単位として表現することができる。高いｐＡＫＴは、ベースライン値よりも高い試料の全体的なＡＫＴの活性化又はリン酸化レベルを意味する。一実施例では、ベースライン値は、任意の細胞タイプのｐＡＫＴの基礎レベルである。別の例では、ベースライン値は、例えば、非がん性又は細胞について、試料細胞の特定の集団におけるｐＡＫＴの普通のレベル又は平均レベルである。別の例では、高ｐＡＫＴは、同じ哺乳動物又は患者集団の何れかに由来する同じタイプの正常で健常な（例えば、非腫瘍）細胞の平均と比較した場合、細胞内でリン酸化又は活性化ＡＫＴを過剰発現するか又は過剰に増幅された腫瘍細胞を指す。ｐＡｋｔプロファイルは、特定のＰＩ３Ｋ／ＡＫＴキナーゼ経路阻害剤の有効性を予測するための、他のマーカー、例えば、ＦＯＸＯ３ａの局在化プロファイルと組み合わせて使用することができる。ＰＩ３Ｋ、ＫＲＡＳ及びＡＫＴ変異の存在を検査するためのキットは、市販されている（Ｑｉａｇｅｎ）。
【０１９３】
特定の位置態様において、本発明は、ＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はそれらの組み合わせと関連するがんを有する患者を、患者へ本発明の組み合わせを投与することを含み、治療するための方法を提供する。別の態様において、本発明は、患者のがんがＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はそれらの組み合わせと関連するかを決定することを含む、本発明の組み合わせで治療することができるがんを有する患者を同定するための方法を提供し、ここで、ＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はそれらの組み合わせと患者のがんとの関連は、本発明の組み合わせで治療することができるがんを示す。更なる態様において、本発明は、本発明の組み合わせで識別された患者を治療することを更に含む方法を提供する。一実施態様において、がんは、卵巣がん、乳がん、メラノーマ、結腸がん、頭頸部がん、又は非小細胞肺がんである。
【０１９４】
ＶＩＩ．製造品
本発明の別の実施態様において、上記の疾患及び障害の治療に有用な組み合わせを含む製造品又はキットが提供される。一実施態様において、キットは、容器及び本明細書に記載の組み合せを含む。
【０１９５】
キットは、容器上又はそれに付随したラベル又は添付文書を更に含む。用語「添付文書」は、このような治療用製品の使用に関する指示、使用法、用量、投与、禁忌、及び／又は警告についての情報を含む、治療用製品の市販パッケージに常套的に含まれる指示書を指すために使用される。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ブリスター包装等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、病気を治療するのに有効である組み合わせ、又はその製剤を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。ラベル又は添付文書は、組成物ががんのような選択した症状の治療のために使用されることを示している。一実施態様において、ラベル又は添付文書は、組み合わせを含む組成物が、異常な細胞増殖に起因する疾患を治療するために使用されることが可能であることを示している。また、ラベル又は添付文書は、組成物が他の疾患の治療に使用されることが可能であることも示している。代替的に、又は付加的に、製造品は、製薬的に許容可能な緩衝液、例えば注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液及びデキストロース溶液を収容する第２の容器を更に具備していてもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含み得る。
【０１９６】
キットは、組み合わせ、及び、存在する場合、第二の薬学的製剤の投与のための説明書を更に含むことができる。例えば、キットがＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３又はその薬学的に許容可能な塩を含む第一の組成物、及びＭＥＨＤ７９４５Ａを含む第二の薬学的製剤を含む場合、キットは、第一及び第二の薬学的組成物を必要とする患者に、それらを同時投与、連続投与又は個別投与するための説明書を更に含むことができる。
【０１９７】
別の実施態様では、キットは、錠剤又はカプセル剤などの、組み合わせの固体経口形態の送達に適している。このようなキットは、好ましくは、多数の単位投薬量を含む。このようなキットは、それらの意図した使用の順に配された投薬量を有するカードを含みうる。このようなキットの一例は「ブリスターパック」である。ブリスターパックは、包装産業においてよく知られており、薬学的単位投薬形態の包装に広く使用されている。所望される場合、例えば数字、文字、又は他のマークの形態で、又は該用量が投与されうる治療スケジュールにおける日を指定するカレンダー挿入物を用いて、記憶の補助を提供することができる。
【０１９８】
一実施態様によれば、キットは、（ａ）その中に収容されるＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又は薬学的に許容可能な塩を含む第一の容器；（ｂ）ＭＥＨＤ７９４５Ａを含む第二の容器及び（ｃ）その中に収容される第三の薬学的製剤を含む第三の容器を含んでも良く、ここで第三の薬学的製剤は、抗過剰増殖活性を有する別の化合物を含む。代替的に、又は付加的に、キットは、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液及びデキストロース溶液を収容する第３の容器を更に具備していてもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む商業的及び使用者の見地から望ましい他の材料を更に含んでもよい。
【０１９９】
キットは、ＧＤＣ−０９７３若しくはＧＤＣ−０６２３、又はその薬学的に許容可能な塩及びＭＥＨＤ７９４５Ａの組成物を含む場合、キットは、別々の組成物を含有するための容器、例えば、分割式ボトル又は分割式ホイルパケットなどを含んでいてもよいが、別々の組成物はまた、単一の分割されていない容器内に含まれてもよい。典型的に、キットは別々の成分の投与のための説明書を含む。キット形態は、別々の成分が好ましくは異なる投与形態（例えば、経口及び非経口）で投与され、異なる投与間隔で投与される場合、又は組み合せの個々の成分の用量設定が処方医師によって望まれる場合、特に有利である。
【実施例】
【０２００】
本発明を説明するために、以下の実施例が含まれる。しかしながら、これらの実施例は本発明を限定せず、単に本発明を実施する方法を示唆することを意味するに過ぎないことは理解されるべきである。
【０２０１】
実施例１
ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＨＥＲ３及びＥＧＦＲの両方に特異的である。
ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ３の両方に対する結合特異性を有する抗原結合領域を含む抗体である。国際公開第２０１０／１０８１２７号及びSchaefer, et al. Cancer Cell, 20: 472-486 (2011)。典型的には、二重標的性薬剤は、各モジュールがただ一つの抗原に結合することができる２つの異なる抗原結合モジュールを連結することにより構成される。対照的に、ＭＥＨＤ７９４５Ａにおいては、各モジュール（Ｆａｂ）は、２つの抗原のどちらかに結合することができ、従って、結合活性効果から高められた結合親和性を引き出す可性を有する。ＭＥＨＤ７９４５Ａの２つの同一のＦａｂの各々が、ＥＧＦＲ又はＨＥＲ３の何れかに結合できることを確認するために、競合結合アッセイが行われた。固定化ＨＥＲ３−ＥＣＤへのＭＥＨＤ７９４５Ａの結合は、ＥＧＦＲ−ＥＣＤの量の増加に伴って、用量依存的に減少した。逆に、ＭＥＨＤ７９４５Ａは、可溶性ＨＥＲ３−ＥＣＤタンパク質により、固定化ＥＧＦＲ−ＥＣＤから競合させられた。予想されるように、それらの相対的な結合定数を仮定すると、可溶性ＥＧＦＲ−ＥＣＤのより高い濃度は、固定化ＨＥＲ３−ＥＣＤへのＭＥＨＤ７９４５Ａの結合と競合するために必要とされた（図１）。図１の結果は、ＭＥＨＤ７９４５Ａの濃度対ＯＤとして表される。アッセイは、示された可溶性の競合相手の存在下で、示されるように、固定化ＨＥＲ３−ＥＣＤ又はＥＧＦＲ−ＥＣＤへのＭＥＨＤ７９４５Ａの結合を調べた：１×＝０．０２μｇ／ｍｌ、１０×＝０．２μｇ／ｍｌ、１００×＝２μｇ／ｍｌ、１０００×＝２０μｇ／ｍｌ。図１の結果は、ＤＬ１１ｆの濃度対ＯＤとして表される。
【０２０２】
実施例２
ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２／ＨＥＲ３依存性シグナル伝達を阻害する
細胞シグナル伝達アッセイにおけるＭＥＨＤ７９４５Ａの二重の活性が測定された。ＮＲＧ処置が強力に活性化するＨＥＲ３、ＭＣＦ−７細胞における阻害機能を評価するために、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３経路が使用された。ＮＲＧ刺激の前のＭＥＨＤ７９４５Ａによる処置は、用量依存性様式でＨＥＲ３のリン酸化を強力に阻害し、かつＡＫＴ及びＥＲＫ１／２のリン酸化を著しく減少させた（図２Ａ）。ＭＥＨＤ７９４５Ａは、０．０５μｇ／ｍｌのＩＣ５０でＨＥＲ３のリン酸化を、０．１９μｇ／ｍｌのＩＣ５０値でＡＫＴのリン酸化を、及び１．１３／ｍｌのＩＣ５０値でＥＲＫ１／２のリン酸化を阻害した。ＨＥＲ３に対する単一特異的抗体を用いた処置として、ＨＥＲ３に匹敵する結合親和性を有する抗ＨＥＲ３は同様の結果を達成した。抗ＨＥＲ３は、０．１２μｇ／ｍｌのＩＣ５０でＨＥＲ３のリン酸化を、０．７４μｇ／ｍｌのＩＣ５０値でＡＫＴのリン酸化を、及び１．８３／ｍｌのＩＣ５０値でＥＲＫ１／２のリン酸化を阻害した。リガンド刺激の前に、ＥＧＦＲ−ＮＲ６細胞はＭＥＨＤ７９４５Ａにより前処置され、ＤＬ１１ｆは、ＥＧＦＲ及びＥＲＫ１／２のリン酸化を、それぞれ０．０３及び０．１６μｇ／ｍｌのＩＣ５０値で阻害することが判明した（図２Ｂ）。単一特異性のＥＧＦＲ抗体セツキシマブは、ＥＧＦＲのリン酸化の阻害、及び下流のシグナル伝達分子の阻害においてより効果的であり、それはＥＧＦＲに対する高い結合親和性に起因する可能性が高かった。更に、ベータセルリン−及びアンフィレギュリン誘導性のＥＧＦＲリン酸化はまたＭＥＨＤ７９４５Ａによって阻害された。ＭＥＨＤ７９４５Ａは、Ａ４３１及びＢｘＰＣ３細胞における抗ＨＥＲ３とセツキシマブとの組み合わせと同様に強力にＥＲＫ１／２及びＡＫＴ経路を阻害した。
【０２０３】
以下のようにアッセイを行った。ＭＥＨＤ７９４５Ａ又は抗ＨＥＲ３の示された濃度で処置されたＭＣＦ−７細胞が、１０分間、０．５ｎＭのＮＲＧで刺激された。細胞溶解物は、ｐＨＥＲ３（Ｔｙｒ１２８９）、ｐＡｋｔ（Ｓｅｒ４７３）、ｐＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）、及び総ＨＥＲ３を検出するために、イムノブロットされた。図２Ａ。ＥＧＦＲ−ＮＲ６細胞は、１０分間の５ｎＭのＴＧＦ−αによる刺激前に１時間、示された濃度のＭＥＨＤ７９４５Ａ又はセツキシマブで処置された。細胞溶解物は、ｐＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）、総ＥＧＦＲ及びリン酸化ＥＧＦＲを検出するためのイムノブロッティングに供された。ＥＧＦＲ−ＮＲ６細胞のみが、ＥＧＦＲを発現しているので、ＥＧＦＲの全ての潜在的リン酸化部位はｐＴｙｒ抗体を用いて検出された。
【０２０４】
実施例３
ＭＥＨＤ７９４５Ａは、多くのがんモデルにおいて活性である
ＦａＤｕ異種移植片モデル、頭頸部扁平上皮癌モデルにおけるインビボ活性
ＭＥＨＤ７９４５Ａ、市販の抗ＥＧＦＲ抗体及び抗ＨＥＲ３抗体は、Ｆａｄｕ細胞由来の確立された腫瘍を有するマウスにおいて試験された（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−４３，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．）。５×１０６のＦａＤｕ細胞がＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに皮下接種された。以下のように同様のサイズの腫瘍を有する動物が治療コホート（ｎ＝９／群）に無作為化された：ビヒクル（ＭＥＨＤ７９４５Ａ製剤緩衝液）、抗ＥＧＦＲ抗体（２５ｍｇ／ｋｇ）、抗ＨＥＲ３抗体（５０ｍｇ／ｋｇ）、及びＭＥＨＤ７９４５Ａ（２５ｍｇ／ｋｇ）。処置は腹腔内に投与され、無作為化の日に２倍の負荷用量で始まり（それぞれ５０又は１００ｍｇ／ｋｇ）合計４回の処置のために毎週継続する。図３に示すように、ＭＥＨＤ７９４５Ａは、ＦａＤｕ頭頸部がんモデルにおいて活性であり、抗ＥＧＦＲ特異的又は抗ＨＥＲ３特異的抗体の何れかよりも、腫瘍増殖の阻害においてより効果的である。
【０２０５】
ＭＥＨＤ７９４５Ａは、さらなるがんのタイプにおいて活性である
図４は、幾つかのさらなるがんのタイプの概要を提供し、ここでＭＥＨＤ７９４５Ａは、がんのタイプに対するセツキシマブ又は単一特異性抗ＨＥＲ３抗体の活性並びに相対的活性を示す。この概要を作成するために使用されるアッセイの詳細は国際公開第２０１０／１０８１２７号に提供される。簡潔には、マウスは、２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａ、２５ｍｇ／ｋｇのセツキシマブ、５０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３又は２５ｍｇのセツキシマブ＋５０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３の組み合わせにより週１回４サイクルによって処置された。ＭＡＸＦ４４９、ＯＶＸＦ５５０及びＬＸ９８３は、３０ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａ、３０ｍｇ／ｋｇのセツキシマブ、６０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３又は３０ｍｇのセツキシマブ＋６０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ３の組み合わせにより週１回４サイクルによって処置された。初回投与量は、全ての処置において２倍の負荷用量であった。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）のパーセントは、マウスの大部分がビヒクル群に残っていた試験の最終日に基づいて、各試験について計算された。２５％未満のＴＧＩは−と示され、２５〜５０％の間のＴＧＩは＋と示され、５１〜７５％の間のＴＧＩは＋＋と示され、７６％以上のＴＧＩは＋＋＋と示される。ＮＳＣＬＣ＝非小細胞肺がん、ＨＮＳＳＣ＝頭頸部扁平上皮癌、ＣＲＣ＝結腸直腸がん、ｎ／ａ＝適用できない。ＯＶＸＦ５５０、ＭＡＸＦ４４９及びＬＸＦ９８３モデルは、ヒト患者由来の移植モデルである。
【０２０６】
実施例４
ＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３の何れかとＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせは、単剤療法によって提供されるｐＥＲＫの抑制よりも優れているｐＥＲＫの抑制を生じる。
単剤としてのＭＥＫ阻害剤のどちらかを用いた処置は、ｐＡｋｔレベルの増加をもたらし、一方併用療法は、ベースラインレベルまでｐＡｋｔレベルを減少させた。更に、ＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３の何れかとＭＥＨＤ７９４５Ａとの組み合わせは、単剤療法よりも良好にＫｒａｓ変異体モデルにおけるｐＥＲＫの抑制をもたらす。図７。このアッセイにおいて、ＭＥＨＤ７９４５Ａは１０μｇ／ｍｌ、ＧＤＣ−０９７３は１μＭ、ＧＤＣ−０６２３はμＭ、及びヘレグリン（ＨＲＧ）は１０ｎＭで存在していた。
【０２０７】
実施例５
ＭＥＨＤ７９４５ＡとＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３の何れかとの併用療法は、ＣＲＣ ＫＲＡＳ変異型がんの前臨床モデルにおいて単剤療法よりも優れていた。
ＫＲＡＳ変異結腸直腸がんのマウスＬＳ１８０異種移植腫瘍モデルは、単剤としてＭＥＨＤ７９４５Ａ、ＧＤＣ−０９７３とＧＤＣ−０６２３により、並びにＧＤＣ−０９７３とＭＥＨＤ７９４５Ａ及びＧＤＣ−０６２３とＭＥＨＤ７９４５Ａからなる組み合わせで処置された。処置群は以下の通りであった：０１−ビヒクル対照；０３−ＧＤＣ−０９７３（１０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）；０４−ＧＤＣ−０６２３（５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）；０６−ＭＥＨＤ７９４５Ａ（２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＱＷ）；０８−ＧＤＣ−０９７３（１０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）＋ＭＥＨＤ７９４５Ａ（２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＱＷ）；０９−ＧＤＣ−０６２３（５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）＋ＭＥＨＤ７９４５Ａ（２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ＱＷ）。腫瘍体積は、処置の過程にわたって測定され、その結果は図８に示される。図８に示すように、ＧＤＣ−０９７３又はＧＤＣ−０６２３の何れかとＭＥＨＤ７９４５Ａとの組み合わせは、単剤治療よりも優れていた。
【０２０８】
実施例６
ＫＲＡＳ変異結腸直腸細胞株におけるＭＥＨＤ７９４５ＡとＧＤＣ−０９７３との組み合わせのインビトロ効果
ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ及びＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の阻害は、ＫＲＡＳ変異結腸直腸細胞株において、ＭＥＨＤ７９４５Ａとコビメチニブ、又は両方の薬剤の組み合わせを用いてインビトロで調べられた。二つのＫＲＡＳ変異結腸直腸細胞株が、負のフィードバックループの阻害に起因するコビメチニブによるリン酸化ＡＫＴ（ｐＡｋｔ）の潜在的な上方制御を評価するために選択された。ＭＥＫ阻害時のｐＡｋｔの上方制御が幾つかの細胞系において記載されている（Mirzoeva et al. 2009; Diep et al 2011; Turke et al. 2012）。また我々は、コビメチニブ処置に対するＭＥＨＤ７９４５Ａの追加がｐＡｋｔ及びｐＥＲＫ１／２の阻害を高めることができるかどうか検討した。ＬＳ１８０細胞が、１２分間の５ｎＭのＴＧＦαによる刺激の前に１時間、１０μｇ／ｍＬのＭＥＨＤ７９４５Ａ、０．０５μＭのコビメチニブ、又はそれらの組み合わせにより前処置された。ＤＬＤ−１細胞が、１２分間の５ｎＭのＴＧＦαによる刺激の前に１時間、１０μｇ／ｍＬのＭＥＨＤ７９４５Ａ、０．０２５μＭのコビメチニブ、又はそれらの組み合わせにより前処置された。細胞溶解物は、ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ１０６８）のリン酸化、ＡＫＴ（ｐＡＫＴＳ４７３）のリン酸化、及びＥＲＫ１／２（ｐＥＲＫ１／２ Ｔ２０２／Ｙ２０４）のリン酸化、並びにＥＧＦＲ、ＡＫＴ、又はＥＲＫ１／２の総タンパク質レベルを検出するためにイムノブロットされた。結果を図９に示す（左パネル＝ＬＳ１８０細胞、右パネル＝ＤＬＤ−１細胞）（ＥＧＦＲ＝上皮増殖因子受容体；ＥＲＫ＝細胞外シグナル調節キナーゼ；ｐ＝リン酸化；ＴＧＦα＝トランスフォーミング増殖因子α）
コビメチニブで処置されたＴＧＦα−刺激ＬＳ１８０又はＤＬＤ−１細胞は、ＡＫＴのリン酸化の増加を示した（図９、対照溶解物（レーン２）と比較したレーン４はＭＥＫ阻害剤誘導性フィードバックループの存在を示唆している（Mirzoeva et al. 2009; Diep et al 2011; Turke et al. 2012）。
【０２０９】
低用量のコビメチニブによるＥＲＫ１／２リン酸化の部分的阻害のみが達成された（ＬＳ１８０細胞に対して０．０５μＭ及びＤＬＤ−１細胞に対して０．０２５μＭ（図９の左右のパネルそれぞれを参照）。しかし、コビメチニブプラスＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせの低用量は、両方の細胞株においてｐＥＲＫ及びｐＡｋｔの強力は下方制御を生じた（図９のレーン５を参照）。図９において、左のパネルは、１２分間の５ｎＭのＴＧＦαによる刺激の前に１時間、１０μｇ／ｍＬのＭＥＨＤ７９４５Ａ、０．０５μＭのコビメチニブ、又はそれらの組み合わせにより前処置されたＬＳ１８０細胞を示す。右のパネルは、１２分間の５ｎＭのＴＧＦαによる刺激の前に１時間、１０μｇ／ｍＬのＭＥＨＤ７９４５Ａ、０．０２５μＭのコビメチニブ、又はそれらの組み合わせにより前処置されたＤＬＤ−１細胞を示す。細胞溶解物は、ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ１０６８）のリン酸化、ＡＫＴ（ｐＡＫＴＳ４７３）のリン酸化、及びＥＲＫ１／２（ｐＥＲＫ１／２ Ｔ２０２／Ｙ２０４）のリン酸化、並びにＥＧＦＲ、ＡＫＴ、又はＥＲＫ１／２の総タンパク質レベルを検出するためにイムノブロットされた。
【０２１０】
ＫＲＡＳ変異体細胞株においてＭＥＫ１／２及びＥＧＦＲ／ＨＥＲ３の組み合わされた阻害の抗増殖効果を試験するために、ＬＳ１８０細胞が、５μｇ／ｍＬのＭＥＨＤ７９４５Ａの存在下又は非存在下でコビメチニブの濃度を増加させて（０．１７−１０，０００ｎＭ）処置された。ＭＥＨＤ７９４５Ａとコビメチニブの組み合わせは、コビメチニブ単独の抗増殖効果と比較した場合、細胞生存率のより強力な減少をもたらした。結果は図１０に示される（結果は、ＳＭＩ（小分子阻害剤）の濃度に対してプロットされたＲＦＵ（相対的蛍光単位）として表される。データ分析のために、４つのパラメーターの曲線フィッティングプログラムを使用した。データは、３つの独立した実験を代表するものである。
【０２１１】
実施例７
ＬＳ１８０及びＤＬＤ−１異種移植モデルにおけるコビメチニブとＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせ試験
ＭＥＨＤ７９４５Ａとコビメチニブの組み合わせ試験が、ＫＲＡＳ変異結腸直腸異種移植モデルのＬＳ１８０及びＤＬＤ−１で行われた。これらのモデルの両方が、それらのＫＲＡＳ変異状態及びそれらのＥＧＦＲ及びＨＥＲ３の発現を理由として選択された。コビメチニブは、２１日間、一日一回、３又は１０ｍｇ／ｍＬで経口で水溶液として投与された。２１日目に達するまで、ＭＥＨＤ７９４５Ａは週一回静脈内（ＩＶ）投与された。腫瘍サイズ及び体重が研究の過程で週二回記録された。マウスは、腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えた場合、又は体重の減少がそれらの開始重量の≧２０％となった場合、速やかに安楽死させられた。
【０２１２】
時間をかけた同一動物からの腫瘍体積の反復測定を分析するために、混合モデリング手法が使用された（Pinheiro et al. 2009）。このアプローチは、繰り返し測定及び試験終了前の動物の未治療関連終了に起因した控えめなドロップアウト率の両方に対処した。この分析は、ビヒクルの割合（％ＴＧＩ）又は腫瘍進行までの時間（ＴＴＰ）として腫瘍増殖阻害を決定するために使用された。
【０２１３】
ＬＳ１８０モデル
無作為化後、ＬＳ１８０腫瘍を有するマウスは、２１日間、１日１回（ＱＤ）、０（ビヒクル）、３、又は１０ｍｇ／ｋｇのコビメチニブ（遊離塩基当量として表される）の経口（ＰＯ）強制投与量が与えられた。マウスに２５ｍｇのＭＥＨＤ７９４５Ａが、合計３回の注射について週一回（ＱＷ）静脈内（ＩＶ）ボーラス注射を介して与えられた。両薬剤を投与される群では、コビメチニブが最初に投与され、直ちにＭＥＨＤ７９４５Ａが続いた。
【０２１４】
３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのコビメチニブ又は２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａの投与は、それぞれ２８％、６３％、及び４４％のＴＧＩをもたらした。コビメチニブとＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせは、単剤の活性と比較してより強い抗腫瘍活性を有していた。２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａを伴う３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのコビメチニブの投与は、それぞれ４８％及び７９％のＴＧＩをもたらした。データは、図１１Ａに示されており、試験は図１１Ｂに要約される。図１１において、ＣＩ＝信頼区間；ＨＢ＃８＝ヒスチジン緩衝液８；ＭＣＴ＝０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース、０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０；ＴＧＩ＝腫瘍増殖阻害；ｗ／ｖ＝体積あたりの重量。
【０２１５】
ＤＬＤ−１
無作為化後、ＤＬＤ−１腫瘍を有するマウスは、２１日間、１日１回（ＱＤ）、０（ビヒクル）、３、又は１０ｍｇ／ｋｇのコビメチニブ（遊離塩基当量として表される）の経口（ＰＯ）強制投与量が与えられた。マウスに２５ｍｇのＭＥＨＤ７９４５Ａが、合計３回の注射について週一回（ＱＷ）静脈内（ＩＶ）ボーラス注射を介して投与された。両薬剤を投与される群では、コビメチニブが最初に投与され、直ちにＭＥＨＤ７９４５Ａが続いた。
【０２１６】
３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇのコビメチニブ並びに２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａの投与は、それぞれ３９％、６２％、及び６２％のＴＧＩをもたらした。しかし、２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａを伴う３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのコビメチニブの投与は、９０％及び１０８％のＴＧＩをもたらした。データは、図１２Ａに示されており、試験は図１２Ｂに要約される。
【０２１７】
実施例８
膵臓のＢｘＰＣ３異種移植モデルにおけるコビメチニブとＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせ試験
無作為化後、ＤＬＤ−１腫瘍を有するマウスは、２１日間、１日１回（ＱＤ）、０（ビヒクル）、１、又は５ｍｇ／ｋｇのコビメチニブ（遊離塩基当量として表される）の経口（ＰＯ）強制投与量が与えられた。マウスに２５ｍｇのＭＥＨＤ７９４５Ａが、合計３回の注射について週一回（ＱＷ）静脈内（ＩＶ）ボーラス注射を介して与えられた。両薬剤を投与される群では、コビメチニブが最初に投与され、直ちにＭＥＨＤ７９４５Ａが続いた。
【０２１８】
１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇのコビメチニブ並びに２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａの投与は、それぞれ８８％、１０９％、及び１０７％のＴＧＩをもたらした。２５ｍｇ／ｋｇのＭＥＨＤ７９４５Ａを伴う１ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのコビメチニブの投与は、それぞれ１１３％及び１１４％のＴＧＩをもたらした。データは、図１３Ａに示されており、試験は図１３Ｂに要約される。投与の２１日後、２倍（２ｘ）の初期腫瘍体積までの腫瘍進行に至る時間（ＴＴＰ）が各グループについて監視された（図１３Ｃを参照）。ビヒクルコントロール群では、ＴＴＰ２Ｘは４．５日であった。単剤のコメチニブによるマウスの処置は、ＴＴＰ ２ｘを、１ｍｇ／ｋｇで２２日まで及び５ｍｇ／ｋｇで３３日まで延長させた。単剤のＭＥＨＤ７９４５Ａによるマウスの処置は、ＴＴＰ ２ｘを３９．５日まで延長させた。１ｍｇ／ｋｇでのコビメチニブプラスＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせは、ＴＰＰ２ｘを５０．５日まで延長させた。同様に、５ｍｇ／ｋｇでのコビメチニブプラスＭＥＨＤ７９４５Ａの組み合わせは、ＴＰＰ２ｘを５６日まで延長させた。完全寛解（ＣＲ）として定義される腫瘍体積の１００％の減少が、５ｍｇ／ｋｇのコビメチニブプラスＭＥＨＤ７９４５Ａの群内の３匹の動物において見られたが。他の処置群においては見られなかった（図１３Ｃ参照）。図１３において、ＣＩ＝信頼区間；ＣＲ＝完全寛解（腫瘍体積の１００％の減少）；ＨＢ＃８＝ヒスチジン緩衝液；ＭＣＴ＝０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース、０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０；ＮＡ＝達成されない；ＰＲ＝部分的応答（腫瘍体積の≧５０−９９％の減少）；ＴＴＰ＝２倍（２ｘ）又は５倍（５ｘ）の初期腫瘍体積までの腫瘍進行に至る時間であって日単位の群の平均を表す。
【０２１９】
本明細書で引用した全ての文献は、参照により援用される。本発明の特定の実施態様が記載され、多くの詳細が説明の目的で述べられているが、詳細の一部は、本発明の基本原理から逸脱することなく変更することができる。多くの修正及び変更が当業者には容易に明らかになるであろうゆえ、本明細書に記載されるように示される厳密な構成及びプロセスに本発明を限定することは望ましくない。従って、全ての適切な修正及び均等物は、添付の特許請求の範囲によって定義される範囲内にあると考えることができる。
【０２２０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
2016515132.tif 000022
【図１３Ａ】
2016515132.tif 000023
【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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