(57)【要約】本発明は、魚の孵化液から得た、または得ることができる化粧品組成物、前記組成物を製造する方法、ならびに皮膚への様々な化粧用途において、特に、哺乳動物の皮膚におけるしわ、小じわ、色素過剰、弛み、乾燥肌、鱗屑および／または経表皮水分損失の美容上の外観または出現率を軽減または予防するためのそれらの使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の皮膚におけるしわ、小じわ、色素過剰、弛み、乾燥肌、鱗屑および／または経表皮水分損失の美容上の外観または出現率を軽減または予防するための方法であって、化粧品組成物を前記動物に投与することを含み、前記組成物が、
ａ）サケ科の卵ではない魚卵を最小体積の水中に懸濁させるステップと、
ｂ）好ましくは孵化が胚の８０％超について６時間以内に完了するように、前記卵の同期化した急速な孵化を誘導するステップと、
ｃ）場合によって孵化した卵を濾過して、孵化液を得るステップと、
ｄ）ｂ）またはｃ）の孵化液を濾過して組成物を得るステップであって、前記孵化液を濾過する前記ステップが、
（ｉ）少なくとも５μｍの孔サイズを有するフィルターを用いて前記孵化液を濾過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｉｉ）０．３０〜０．６０μｍの孔サイズを有するフィルターを用いてステップ（ｉ）からの前記ろ液を濾過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）からの前記ろ液中の前記水を、１５ｋＤａ未満の排除サイズを有するフィルターを用いるダイアフィルトレーションを実施することによって薬剤的に許容される緩衝液と交換するステップと、
（ｉｖ）０．１５〜０．３０μｍの孔サイズを有するフィルターを用いてステップ（ｉｉｉ）からの前記溶液を濾過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｖ）ステップ（ｉｖ）からの前記ろ液から前記化粧品組成物を調製するステップと
を少なくとも含むステップと
を少なくとも含む方法によって得ることができる、方法。
【請求項２】
前記方法が、しわおよび／または弛みの前記美容上の外観または出現率を軽減または予防するため、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ａ）ステップ（ｉ）における前記フィルターの前記孔サイズが５〜１５μｍであり、好ましくは、前記孔サイズが７μｍであり、
ｂ）ステップ（ｉｉ）における前記フィルターの前記孔サイズが０．３５〜０．５５μｍであり、好ましくは、前記孔サイズが０．４５μｍであり、かつ／または
ｃ）ステップ（ｖ）における前記フィルターの前記孔サイズが０．２２μｍである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記卵が、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｏｍｏｒｐｈａ、Ｅｌｏｐｏｍｏｒｐｈａ、Ｃｌｕｐｅｏｍｏｒｐｈａ、Ｏｓｔａｒｉｏｐｈｙｓｉ、Ｐｒｏｔａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉ（サケ科由来の魚を除く）、Ｓｔｅｎｏｐｔｅｒｙｇｉｉ、Ｃｙｃｌｏｓｑｕａｍａｔａ、Ｓｃｏｐｅｌｏｍｏｒｐｈａ、Ｌａｍｐｒｉｄｉｏｍｏｒｐｈａ、Ｐｏｌｙｍｙｘｉｏｍｏｒｐｈａ、ＰａｒａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉおよびＡｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉからなるリストから選択されるいずれかの上目の魚から選択される魚由来である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記魚が、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｈｉｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｅｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｌｂｕｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｎｏｔａｃａｎｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｎｇｕｉｌｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｃｃｏｐｈａｒｙｎｇｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｌｕｐｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｎｏｒｙｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｈａｒａｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｙｍｎｏｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｒｇｅｎｔｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｉｆｏｒｍｅｓ（サケ科由来の魚を除く）、Ｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｓｍｅｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｅｌｅｏｐｏｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｏｍｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｕｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｙｃｔｏｐｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌａｍｐｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｏｌｙｍｉｘｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｅｒｃｏｐｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂａｔｒａｃｈｏｉｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌｏｐｈｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｐｈｉｄｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｕｇｉｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｈｅｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｌｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｅｔｏｍｉｍｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｅｐｈａｎｏｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｚｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｂｉｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｓｔｅｒｏｓｔｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｇｎａｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｂｒａｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｔｅｔｒａｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｃｏｒｐａｅｎｉｆｏｒｍｅｓ  ＰｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｆｏｒｍｅｓからなるリストから選択されるいずれかの目由来である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記魚が、Ｃｙｐｒｉｎｉｄａｅ、Ｃｉｃｈｌｉｄａｅ、Ｐａｎｇａｓｉｉｄａｅ、Ｓｃｉａｅｎｉｄａｅ、Ｓｅｒｒａｎｉｄａｅ、Ｃａｒａｎｇｉｄａｅ、Ｓｐａｒｉｄａｅ、Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｃｉｄａｅ、Ｍｏｒｏｎｉｄａｅ、Ｍｕｇｉｌｉｄａｅ、Ｌａｔｉｄａｅ、ＥｌｅｏｔｒｉｄａｅおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｄａｅからなるリストから選択されるいずれかの科由来である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記魚が、ソウギョ（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ  ｉｄｅｌｌａ）、ハクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｍｏｌｉｔｒｉｘ）、キャトラ（Ｃａｔｌａ  ｃａｔｌａ）、コイ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ  ｃａｒｐｉｏ）、コクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ）、ヨーロッパブナ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ  ｃａｒａｓｓｉｕｓ）、ティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）、バサ（Ｐａｎｇａｓ  ｃａｔｆｉｓｈ）（Ｐａｎｇａｓｉｕｓ  ｐａｎｇａｓｉｕｓ）、ロフ（Ｌａｂｅｏ  ｒｏｈｉｔａ）、フウセイ（Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｃｒｏｃｅａ）、ヒトミハタ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ  ｔａｕｖｉｎａ）、ブリ（Ｓｅｒｉｏｌａ  ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ）、ゴウシュウマダイ（Ｓｐａｒｕｓ  ａｕｒａｔａ）、スズキ（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ヨーロピアンシーバス（Ｄｉｃｅｎｔｒａｒｃｈｕｓ  ｌａｂｒａｘ）、ヒラダイ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｒｙｓ  ａｕｒａｔｕｓ）、ボラ（Ｍｕｇｉｌ  ｃｅｐｈａｌｕｓ）、バラマンディ（Ｌａｔｅｓ  ｃａｌｃａｒｉｆｅｒ）、マーブルゴビー（Ｏｘｙｅｌｅｏｔｒｉｓ  ｍａｒｍｏｒａｔａ）、モザンビークティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｍｏｓｓａｍｂｉｃｕｓ）、シベリアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｂａｅｒｉｉ）およびロシアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉｉ）からなるリストから選択される種である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記皮膚が老化した皮膚である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記動物の前記皮膚に潤いを与える、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記化粧品組成物が前記皮膚への局所投与のためのものである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
しわ、小じわ、色素過剰、弛み、乾燥肌、鱗屑の美容上の外観もしくは出現率および／または哺乳動物の皮膚の経表皮水分損失の軽減および予防において使用するための請求項１〜７のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、好ましくは前記皮膚が請求項８に記載の、前記皮膚の前記美容的外観が請求項９に記載の、かつ／または前記投与が請求項１０に記載の化粧品組成物。
【請求項１２】
しわ、小じわ、色素過剰、弛み、乾燥肌、鱗屑の前記美容上の外観もしくは出現率、および／または哺乳動物の皮膚の経表皮水分損失を軽減または予防するための医薬の製造における請求項１〜７のいずれか１項に記載の化粧品組成物の使用であって、好ましくは前記皮膚が請求項８に記載の、前記皮膚の前記美容的外観が請求項９に記載の、かつ／または前記投与が請求項１０に記載の、使用。
【請求項１３】
化粧品組成物を調製する方法であって、
ａ）サケ科の卵でない魚卵を最小体積の水中に懸濁させるステップと、
ｂ）好ましくは孵化が前記胚の８０％超について６時間以内に完了するように、前記卵の同期化した急速な孵化を誘発するステップと、
ｃ）前記孵化した卵を濾過して孵化液を得るステップと、
ｄ）ｃ）の前記孵化液を濾過して前記組成物を得るステップであって、前記孵化液を濾過する前記ステップが、
（ｉ）少なくとも５μｍの孔サイズを有するフィルターを使用して前記孵化液を濾過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）からの前記ろ液を、０．３０〜０．６０μｍの孔サイズを有するフィルターを使用して濾過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）からの前記ろ液中の前記水を、１５ｋＤａ未満の排除サイズを有するフィルターを使用するダイアフィルトレーションを実施することによって薬剤的に許容される緩衝液と交換するステップと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）からの前記溶液を、０．１５〜０．３０μｍの孔サイズを有するフィルターを使用して濾過し、かつ前記ろ液を集めるステップと、
（ｖ）ステップ（ｉｖ）からの前記ろ液から前記化粧品組成物を調製するステップと
を少なくとも含むステップと
を少なくとも含む、方法。
【請求項１４】
孵化が、前記胚の９５％超について２時間以内で完了する、請求項１〜７または１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記化粧品組成物が、製品、材料またはデバイス上にコーティング、含浸または化学的に結合されている、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法、使用または化粧品組成物。
【請求項１６】
請求項１〜７、１３または１４のいずれか１項に記載の方法から得ることができる化粧品組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の組成物でコーティング、含浸または化学的に結合された製品、材料またはデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚の孵化液から誘導できるポリペプチドまたはポリペプチドの部分を含む組成物を調製する方法、および皮膚への様々な適用におけるその使用に関する。特に、組成物は、好ましくは老化した皮膚の美容的外観を変更するため、好ましくは改善するために有用である。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は身体のより脆弱な器官の１つである。皮膚は、直接的または間接的に外的刺激と絶えず相互作用し、しばしば環境要因にさらされ、環境要因によって影響を受ける。実際、皮膚は、外界との最初の接点であるとみなすことができる。この持続的暴露は、皮膚、特に皮膚の美容的外観に対して不快および／または不必要な物理的な目に見える変化をもたらす可能性がある。そのような変化は個体の健康を脅かすものではないが、そのような変化は身体的に不愉快であるかまたは眼に見えて好ましくないものであり得る。実際、皮膚がとても目につきやすいので、皮膚の外観への変化は、精神的ストレスに至る可能性がある。したがって、皮膚の状態を維持、回復または改善するため、特に皮膚の若々しい外観を回復するための有効な治療が必要とされ、要求されている。
【０００３】
皮膚は、個人の体重の約１２〜１６パーセントを占める身体の最大の器官を形成する。皮膚は、バリヤとして、そして外界と我々の身体内の管理された環境との間の調節効果を与えるものとしての両方で、多くのきわめて重要な役割を果たす。
【０００４】
皮膚は、３層、すなわち、表皮、真皮および皮下組織から構成される。表皮は皮膚の最上の上皮層である。表皮は物理的バリヤとして作用し、身体から水分が失われるのを防止し、身体内に物質および生物が侵入するのを防止する。その厚さは、身体の部位によって異なる。
【０００５】
表皮は重層扁平上皮から構成され、すなわち、表皮は扁平細胞の層から構成される。皮膚、毛髪および爪は角質化しており、つまり、ケラチンと呼ばれるタンパク質からできた、死んで硬化した疎水性表面を有する。表皮は、特に表皮の中間層（透明層）中に、ケラチノサイトと結合した細胞外脂質が含まれるために不浸透性になる。（例えば、食道、口咽頭腔（ｏｒａｌ  ｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｖｉｔｙ）、生殖器、およびその他の）粘膜は、大部分は角質化されておらず、湿っている。表皮は３つの主な種類の細胞、すなわち、ケラチノサイト（皮膚細胞）、メラノサイト（色素産生細胞）およびランゲルハンス細胞（免疫細胞）を有する。メルケル細胞は第４の、あまり広く知られていない表皮細胞である。
【０００６】
ケラチノサイトは、それらが外側へ移動するにつれ、ケラチンを蓄積しつつ成熟し、分化する。それらは最終的に落下またははがれ落ちる。それらは４または５の異なる層を形成し、これは、最も浅いものから最も深いものへ向かって、（ｉ）核のない、死んで乾燥した硬い細胞を有する角質層（Ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）、（ｉｉ）好塩基性顆粒を含み、薄い透明層により角質層から外側へ分離されている細胞を有する顆粒層（Ｓｔｒａｔｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ）、（ｉｉｉ）細胞が上へ移動するにつれて次第に扁平になる有棘層（棘層、棘状または有棘細胞層）、および（ｉｖ）円柱状の（長い）再生細胞を有する基底層（Ｓｔｒａｔｕｍ  ｂａｓａｌｅ）である。
【０００７】
表皮のすぐ下には基底膜があり、これは表皮と真皮との間にある特殊構造である。
【０００８】
真皮は、皮膚の線維性結合組織または支持層である。主な繊維はコラーゲン繊維およびエラスチンであり、これらは混交している。
【０００９】
皮下組織は、真皮および表皮のすぐ下の脂肪層である。それは、皮下組織、真皮（ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｓ）または組織層とも呼ばれる。皮下組織は主に、脂肪細胞（含脂肪細胞）、神経および血管から構成される。
【００１０】
新しい上皮細胞は、皮膚の下層である顆粒層で形成される。時間と共に、細胞は皮膚の表面に移動し、より酸性になる。３０日の行程の間に、細胞は死に、ケラチンで飽和される。ケラチンおよび関連する脂質は、外部要素から皮膚を保護するので重要である。
【００１１】
皮膚の美容的外観の劣化には、疾患、損傷、環境因子、年齢、ホルモンレベル、薬物、外部から適用または摂取された物質、遺伝子疾患またはこれらや他の要因の組み合わせをはじめとする多くの要因が関与し得る。皮膚の美容的外観における年齢に関連する劣化、特に光による老化（ｐｈｏｔｏａｇｅｉｎｇ）、すなわち皮膚日射病は普遍的因子である。この劣化は、皮膚における不規則性または異常で見られる可能性があり、これは、例えば乾燥肌、しわ、小じわ、弛みの増加（たるみ）または色素沈着の変化とみなすことができる。
【００１２】
光による老化とは、慢性的ＵＶＡおよびＵＶＢ暴露によって誘導される特徴的な変化について用いられる用語である。代謝的ストレスを管理する生物学的機能および能力の劣化は、老化過程の重大な結果の１つである。老化は複雑な進行性過程であり、これはまた、皮膚の機能的および美的変化にも至る。
【００１３】
光による老化は、自然光または合成光由来であり得る、約２４５〜２９０ｎｍの紫外（ＵＶ）線に皮膚が連続して長期間暴露されることに起因する皮膚の老化過程である。光による老化はしたがって、ＵＶＡおよびＵＶＢ線によって引き起こされる皮膚の老化、特に顔、耳、首および手の老化としても知られる。
【００１４】
乾燥肌および／または鱗屑肌は、老化皮膚の最も一般的な兆候の１つである。乾燥肌および／または鱗屑肌になりやすい人もいるが、乾燥肌および／または鱗屑肌の外観は、年齢、性別、または皮膚の種類に関係なく、だれでもなる可能性がある。
【００１５】
乾燥肌は、皮膚の外層（透明層を有する角質層）が水分を失った場合、すなわち、表皮からの水分損失（ＴＥＷＬ）によって起こる。この層が十分潤うと、皮膚を通した水分損失を最小限に抑え、刺激物、アレルゲン、および細菌を遮断するのに役立つ。しかしながら、角質層が乾燥すると、その保護機能が低下する。これによってさらに多くの水分が失われ、皮膚は環境因子の影響を受けやすくなる。
【００１６】
理想的には、角質層は１０％〜３０％の水分量を有する。この水分は皮膚に、その柔らかく、なめらかで、柔軟なテクスチャー、すなわち、皮膚の若々しい外観に関連する特徴を付与する。水分は、大気、皮膚の下層、および汗に由来する。皮膚腺により産生される油および皮膚細胞によって産生される脂肪性物質は天然の保湿剤として作用し、角質層が水分を閉じ込めるのを可能にする。
【００１７】
身体は蒸発により皮膚の表面から絶えず水分を失っている（ＴＥＷＬ）。通常の条件下では、損失速度は遅く、水分は適切に補給される。乾燥肌に特有の兆候および症状は、水分損失が水分補給を上回り、角質層の水分が１０％より低くなった場合に生じる。
【００１８】
乾燥肌および／または鱗屑肌を改善または解消し、それにより皮膚の美容的外観を改善する保湿剤が非常に望ましい。当該技術分野で多くの保湿剤が公知であるが、有効であるにもかかわらず穏やかな天然製品が依然として必要とされている。
【００１９】
望ましくないかまたは過剰の色素沈着、すなわち、例えば肝斑などの過剰沈着を示す表皮細胞は、老化皮膚の別の一般的兆候である。伝統的には、皮膚の美容的外観に対して有害な表皮細胞を除去するために角質除去（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｏｎ）を使用してもよい。
【００２０】
角質除去は、皮膚の外層を除去して、下にあるより新しい皮膚細胞を露出させる。角質除去は、物理的手段（すなわち皮膚の剥離）または化学的手段によって達成することができる。化学的エクスフォリアン（ｅｘｆｏｌｉａｎｔ）としては、サリチル酸、グリコール酸、果物酵素、クエン酸またはリンゴ酸を含むスクラブが挙げられ、高濃度で皮膚科医が塗布してもよいし、または低濃度の処方箋のいらない製品で塗布してもよい。化学的角質除去は、アルファヒドロキシ酸（ＡＨＡ）もしくはベータヒドロキシ酸（ＢＨＡ）、または細胞間結合点で細胞をまとめる接着剤様物質をほぐすように作用する酵素を含む製品の使用をともなってもよい。この種類の角質除去は、挫創を治療する人々に推奨される。
【００２１】
角質除去に対する最大の不利益は、それを達成するために使用される製品および方法の一部が高額なことある。角質除去は、当初若干皮膚の発赤に至る。ケミカルピーリングの終わり付近で、皮膚は霜がかかったようになり、皮膚表面の色が明るい白色から灰色になる。
【００２２】
したがって、角質除去よりも皮膚にやさしい、皮膚の色素過剰を軽減する有効な方法がそれ故に望ましい。
【００２３】
したがって、皮膚の美的外観を促進するために好適な製品および治療が依然として必要とされている。換言すれば、皮膚の美容的外観を改善する製品および方法が望ましい。特に、老化した皮膚に若々しい外観を回復するため、および／または老化皮膚の兆候に効く製品および方法が必要とされている。
【００２４】
魚の孵化液中で見いだされる分子、すなわちポリペプチドおよびポリペプチドの部分を含む組成物は、驚くべきことに、皮膚の美容的外観の改善、特に老化皮膚に関連する物理的兆候または症状の軽減に著しく有効であることが判明した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
卵生脊椎生物、例えば魚、両生類、鳥類および爬虫類からの胚の孵化は、典型的には孵化酵素として知られる様々な酵素によって促進され、これらは卵殻のタンパク質様部分を部分的または完全に分解することができる。全ての脊椎動物の卵母細胞は、卵黄エンベロープ、卵殻または絨毛膜（本明細書中では交換可能に使用される）として知られる特徴的な細胞外エンベロープを有し、これらは、様々なポリペプチドの架橋によって構成される。様々な特異性を有するプロテアーゼは、絨毛膜に作用して、卵殻を柔軟化、浸食および／または破壊（すなわち分解）して、胚の放出を促進する。したがって、孵化過程の間に卵から放出される流体および／または胚がその中で孵化する流体（すなわち孵化液）は、多数のポリペプチドおよびポリペプチドの部分、すなわち分解生成物を含む。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
サケ科の孵化液由来のタンパク質およびポリペプチドの部分を含む組成物は、驚くべきことに、皮膚の美容的外観に対して顕著な効果を及ぼすことが判明した。理論によって拘束されることを望まないが、実施例は、サケ科の孵化液ポリペプチドおよびポリペプチドの部分を含む組成物が皮膚の若々しい外観を回復できることを証明する。他の魚由来の孵化液は、サケ科（Ｓａｌｍｏｎｉｄａｅ）由来の孵化液で見いだされるポリペプチドと機能的に等価なポリペプチドを含む。本明細書中で定義される組成物中のポリペプチドとポリペプチドの部分との組み合わせは（少なくとも５０の異なるポリペプチドまたはポリペプチドの部分を含むと考えられる）は、皮膚の真皮および表皮中に存在する様々な種類のタンパク質と相互作用し得ると考えられる。ポリペプチドとポリペプチドの部分との組み合わせは相乗的に作用する可能性があり、そしてこれらの相互作用は、少なくとも部分的に皮膚の美容的／美的外観の組成物の効果に寄与し得ると考えられる。
【００２７】
したがって、最も広義には、本発明は、魚の孵化液から誘導できるポリペプチドおよびポリペプチドの部分を含む組成物を提供することであると見なすことができ、この組成物はサケ科の孵化液から得られないかまたは得ることができない。特に、組成物は、皮膚の美的外観の促進、または促進のための方法で使用するためのものである。換言すれば、本明細書中で記載される組成物は、皮膚の美容的外観の改善または改善のための方法で使用するためのものである。特に好ましい態様において、本発明は、老化した皮膚に対して若々しい外観の回復、および／もしくは老化した皮膚の兆候への対抗、またはそのための方法での使用について本明細書中で記載するような、サケ科の孵化液を除く魚の孵化液から誘導できるポリペプチドおよびポリペプチドの部分を含む組成物を提供すると見なすことができる。上述の組成物は、本明細書中では、「孵化液抽出物」とも呼ぶ。ポリペプチドおよびポリペプチドの部分に加えて、前記抽出物は天然の非タンパク質性物質を含み得る。
【００２８】
以下の開示から、サケ科の孵化液から得られないか、または得る（すなわち誘導する）ことができない魚の孵化液から誘導できるポリペプチドおよびポリペプチドの部分を含む組成物は、本明細書中で記載するように、１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤を含む化粧品組成物として提供することができることは明らかである。
【００２９】
したがって、１つの態様において、本発明は、サケ科の孵化液でない魚の孵化液から本明細書中で記載するような化粧品組成物を調製する方法であって、少なくとも：
ａ）サケ科の卵ではない魚卵を最小体積（例えば卵の体積以下）の水中に懸濁させるステップ；
ｂ）前記卵の同期化した急速な孵化を（好ましくは、孵化が胚の８０％超について６時間以内に完了するように）誘導するステップ；
ｃ）場合によって、孵化した卵をろ過して、孵化液を得るステップ；および
ｄ）ｂ）またはｃ）の孵化液をろ過して組成物を得るステップであって、孵化液をろ過するステップが、少なくとも：
（ｉ）少なくとも５μｍの孔サイズ、好ましくは５〜１５μｍ、そして特に好ましくは、７μｍの孔サイズを有するフィルターを用いて孵化液をろ過し、そしてろ液を集めるステップ；
（ｉｉ）０．３０〜０．６０μｍの孔サイズ、好ましくは０．３５〜０．５５μｍ、特に好ましくは、０．４０〜０．５０μｍ、最も好ましくは、０．４５μｍの孔サイズを有するフィルターを用いてステップ（ｉ）からの濾液をろ過し、そして濾液を集めるステップ；
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）からの濾液中の水を薬剤的または美容上許容される緩衝液と交換するステップ；
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）から得られる溶液を、０．１５〜０．３０μｍの孔サイズ、好ましくは０．２２μｍの孔サイズを有するフィルターを用いてろ過し、そしてろ液を集めるステップ；および
（ｖ）ステップ（ｉｖ）からの濾液から前記化粧品組成物を調製するステップ
を含むステップ
を含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明の孵化液組成物で治療された対象の、治療前（ベースライン）、治療の２週間後および１２週間後の写真を示す。老化した皮膚の様々な兆候における軽減は、２週間後および１２週間後の両方で明らかである。提供された値は、３５人の参加者についての平均の変化を示す。
【図２】本発明の孵化液組成物での治療の２週間後および１２週間後で見られる小じわおよびしわの軽減を強調するための図１における対象のクローズアップ写真を示す。
【図３】本発明の孵化液組成物で治療した対象の、治療前（ベースライン）および治療の１２週間後のクローズアップ写真を示す。丸で囲んだ部分は、治療の１２週間後の明らかな軽減を示す。
【図４】顔の両側での触覚／視覚的臨床等級に基づく老化の様々な兆候において改善されたと見なされた対象のパーセンテージを示す棒グラフを示す。
【図５】水、５％グリコール酸、１ｍＵ／ｍｌのブロメラインまたは１％の孵化液組成物で１２時間治療した、再構築されたヒト表皮の走査電子顕微鏡写真（倍率×４００、×５０００および×１５０００）を示す。
【図６】水、５％グリコール酸、１ｍＵ／ｍｌのブロメラインまたは１％の孵化液組成物で４８時治療した、再構築されたヒト表皮の走査電子顕微鏡写真（倍率×４００、×５０００および×１５０００）を示す。
【図７】治療していないか、または５％グリコール酸、１ｍＵ／ｍｌのブロメラインもしくは１％の孵化液組成物で１２もしくは２４時間治療した、再構築されたヒト表皮の部分の光学顕微鏡写真を示す。矢印（Ａ）は細胞増殖および分化を示し、矢印（Ｂ）は高密度顆粒層および高濃度のラメラ顆粒を示す。
【図８】（Ａ）クーマシーで染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルおよび（Ｂ）サケ孵化液から誘導される化粧品組成物の主な構成要素に対して産生された抗体で染色された（Ａ）におけるゲルのウェスタンブロットを示す。レーン１：サケの孵化液、レーン２：メダカの孵化液、およびレーン３：ゼブラフィッシュの孵化液。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本明細書中で記載するように、「孵化液」は、孵化の過程の間に卵から放出される流体であり、粗形態、希釈形態または濾過形態であり得る。粗孵化液は、非希釈、非処理液を指す。希釈孵化液とは、孵化の間または孵化後に、他の流体と混合されていてもよい孵化液を指す。
【００３２】
本発明はまた、本明細書中で記載される方法によって得られるかまたは得ることができる化粧品組成物も提供する。
【００３３】
ろ液中の水を交換するステップは、当該技術分野で公知の任意の好適な方法、例えばダイアフィルトレーションまたは透析を用いて実施することができる。特に好ましい実施形態において、このステップは、１５ｋＤａ未満、好ましくは１０ｋＤａ以下、例えば９、８、７、６、５、４、３ｋＤａ以下の排除サイズのフィルターを使用するダイアフィルトレーションを用いて実施される。
【００３４】
ダイアフィルトレーションは、例えば塩または他の不必要もしくは望ましくない微小溶質（ｍｉｃｒｏｓｏｌｕｔｅ）を溶液から除去するため、または溶液の溶媒、例えば緩衝液を交換する方法として限外ろ過膜を使用する。小分子は溶液から分離され、その際、より大きな分子は残余分（フィルターを通過しない物質）中に保持される。微小溶質および溶媒、例えば水は、概して膜を通して容易に洗浄される。典型的には、約３体積のダイアフィルトレーション溶媒（例えばリン酸塩緩衝生理食塩水）は微小溶質の９５％を除去する。したがって、ステップ（ｉｉ）からの上記ろ液をまずダイアフィルトレーションによって処理し、この結果、溶液の一部（孵化液の可溶性不純物／不必要なフラクションを含む）が膜を通過する際に、残余分が濃縮される。残余分を次いで薬剤的に許容される緩衝液、例えば０．５ｍＭのリン酸ナトリウムおよび１ｍＭの塩化ナトリウム、リン酸塩緩衝生理食塩水などで希釈する。希釈された残余分を必要ならば繰り返しダイアフィルトレーションに供してもよい。典型的には、ステップ（ｉｖ）の前に、ステップ（ｉｖ）からの濾液が３０００〜５０００ｍＵ／Ｌ、好ましくは３０００〜４０００ｍＵ／Ｌ、そしてもっとも好ましくは約３４００ｍＵ／Ｌの酵素活性を有するように、残余分を希釈する。ろ液の酵素活性は、ろ液がＸａ因子発色性基質（ＣＨ3ＯＣＯ−Ｄ−ＣＨＡ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ−ＡｃＯＨ、Ｓｉｇｍａ  ａｌｄｒｉｃｈ製品番号：Ｆ３３０１−２５ＭＧ）を切断する能力によって測定することができる。ダイアフィルトレーションのステップの前に、孵化液は、１０〜１５０，０００ｍＵ／Ｌの範囲の酵素活性を含み得る。１単位（１Ｕ）は、１分あたり１μｍｏｌの基質の変換を触媒するために必要な酵素の量と定義することができる。
【００３５】
Ｘａ因子発色性基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）は、孵化液中に存在する酵素によって切断されて、黄色生成物を産生し、これは、４０５ｎｍの波長で分光光度分析を都合よく使用して測定することができる。典型的なアッセイは、前記方法のステップ（ｉｉｉ）から得ることができる１００μｌの孵化液を、１０μｌのＸａ因子発色性基質（ｍｉｌｌｉ−ｑまたは蒸留水中１０ｍｇ／ｍｌ）、７０μｌの０．２Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ８．５および５２０μｌのｄＨ2Ｏを含む６００μｌの基質溶液に添加することを含む。好都合には、吸光度における変化は、５〜２０分（または低酵素活性を有するサンプルについては１時間まで）、典型的には、１０分間測定してもよい。結果に適切な因数、例えば１０（１０分アッセイについて）をかけて、サンプル１ｍｌあたりの酵素活性を得る。他の適切かつ等価な基質を使用して、孵化液の活性を決定することができる。
【００３６】
上述のように、いくつかの実施形態においては、卵孵化のステップを同期させて、精製のために、得られる孵化液の量、特に、孵化液中の所望のポリペプチドまたはその部分の量を最大にすることが有利である可能性がある。同期させた孵化は、当該技術分野で公知の任意の好適な方法によって達成することができる。例えば、ある卵は、フォトマニピュレーションを使用して、例えば卵を光（孵化を抑制する）から光のない状態へ移して、同期させることができる。卵の温度、例えばその中で卵が孵化する溶液の温度の操作、孵化環境の脱酸素化、例えばその中で卵が孵化する溶液の脱酸素化（Ｏｐｐｅｎ−Ｂｅｒｎｔｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９０，  Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，  ８６，  ｐｐ．  ４１７−４３０）、孵化環境中の二酸化炭素の量を増加させること、および電気を用いた卵の刺激も、同期した孵化を引き起こすために使用できる。いくつかの実施形態において、同期した孵化は、胚発生および孵化に影響を及ぼす、すなわち刺激することができるフェロモン、例えばペプチドフェロモンを用いて達成することができる。上述のように、卵を卵の体積以下であってもよい最小体積の水中に懸濁させてもよく、例えば卵１ｍｌにつき１ｍｌ以下、０．７５ｍｌ、０．５ｍｌ、０．２５ｍｌ、例えば０．５〜１ｍｌの懸濁液を使用してもよい。好ましい実施形態において、前記卵の同期化した急速な孵化とは、孵化が６時間以内で８０％を超える胚について完了するようなものである。特に好ましい実施形態において、孵化は５、４、３または２時間以内、例えば０．５〜６時間、１〜５時間、１．５〜４時間、２〜３時間、例えば１〜２時間以内で完了する。さらに、いくつかの実施形態においては、孵化は上記期間以内で、８５％、９０％、または９５％を超える胚、例えば９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９％を超える胚について完了する。
【００３７】
いくつかの実施形態においては、その後の精製ステップを容易にするため、例えば孵化液の粘度を減少させるために、孵化液を希釈することが有利であり得る。したがって、方法は、ステップ（ｄ）の前に孵化液を希釈するさらなるステップを含み得る。好ましくは、ろ液は、少なくとも０．１、０．２、０．５、０．７５、１．０、１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、５０、１００、１０００、５０００または１００００倍希釈してもよい。
【００３８】
上述の化粧品組成物の調製法の結果、ソース材料すなわち単離手順で使用される由来の汚染構成要素、例えば粗孵化液中に含まれるポリペプチドまたはポリペプチドの部分以外の構成要素を実質的に含まない富化調製物が得られる。好ましい実施形態において、組成物を３０、４０、５０または６０％、例えば出発孵化液と比較したポリペプチドおよびポリペプチドの部分のｗ／ｗ（乾燥重量）として評価される純度で、７０、８０もしくは９０％を超える純度まで富化させてもよく、つまり、９０％純度は、調製方法の過程での出発材料（汚染構成要素）が９０％なくなることを意味する。しかしながら、さらに低い純度、例えば出発材料の４０、５０、６０、７０、８０または９０％超を保持する組成物を使用してもよい。
【００３９】
ろ液はそれ自体、化粧品組成物を形成することができるが、場合によって、上記方法から得られるかまたは得ることができる生成物（ステップ（ｉｖ）のろ液）を、化粧品組成物を製造するために、および／または、方法におけるその使用、およびステップ（ｖ）における本発明の使用の前に、適切な濃度に希釈（または濃縮）してもよい。したがって、方法は、組成物を希釈（または濃縮）するさらなるステップを含んでもよい。好ましくは、ろ液を、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、５０、１００、１０００、５０００または１００００倍希釈（または濃縮）してもよい。特に好ましくは、最終組成物は、０．５〜１０％、例えば０．５〜５％、好ましくは、０．５〜３％（例えば１または３％）のステップ（ｉｖ）のろ液を含む。特に好ましい実施形態において、上記方法のステップ（ｉｉｉ）からの溶液を希釈または濃縮して、上記方法によって測定して１０００〜１００００ｍＵ／Ｌの酵素活性を有する溶液を得る。好ましくは、溶液、したがってステップ（ｉｖ）からのろ液は、２０００〜１００００、３０００〜９０００、３０００〜７０００、３０００〜６０００、３０００〜５０００または３０００〜４０００ｍＵ／Ｌの活性を含む。最も好ましくは、溶液は約３４００ｍＵ／Ｌの活性を含む。
【００４０】
場合によって、１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤を前記方法から得られるかまたは得ることができる生成物に添加することができる。したがって、方法は、１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤を組成物に添加するか、または組成物と１以上の薬剤的に許容される賦形剤および／または希釈剤とを組み合わせるさらなるステップを含む。代替または追加の調製法ステップは、溶媒、例えばｐＨ、イオン濃度などを変更または修飾することを含む。
【００４１】
他の薬剤的に許容される構成要素または成分を、前記方法から、例えばステップ（ｇ）の間に得られるかまたは得ることができる生成物に添加することができる。１以上の他の構成要素は、活性な構成要素、すなわち皮膚に対して影響を及ぼす構成要素、好ましくは、皮膚の美的外観の促進または、例えば本明細書中で記載される美容上の適応症において皮膚の美容的外観を改善するようにも作用する構成要素であり得る。したがって、代替的または付加的に、方法は、ステップ（ｖ）において、１以上の薬剤的に許容される活性構成要素を組成物に添加するか、または組成物を１以上の薬剤的に許容される活性構成要素と組み合わせるさらなるステップを含んでもよい。薬剤的に許容される活性構成要素は、以下でさらに詳細に記載されるような、ミネラル、ビタミン、酵素、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、抗酸化剤、多糖、サンスクリーンフィルターとして好適な物質、化学的エクスフォリアン、抽出物およびそれらの混合物を含み得る。
【００４２】
上記方法から得られるかまたは得ることができる化粧品組成物は、本明細書中のどこかほかの場所で記載するような、本発明の方法での使用に好適である。特に、化粧品組成物は哺乳動物において皮膚の美容的外観の改善で使用するためのものである。
【００４３】
本発明は、哺乳動物の皮膚の美容的外観を改善するための方法であって、本明細書中で上記定義の化粧品組成物を前記動物に投与する方法も提供する。
【００４４】
本発明のさらなる態様は、哺乳動物の皮膚の美容的外観を改善するための医薬の製造における上記定義の化粧品組成物の使用である。
【００４５】
「ポリペプチド」は、本明細書中で用いられる場合、好ましくは、５０、１００、１５０、２００もしくは２５０を超える残基および／または５００、４００、３００、２００もしくは１００未満の残基またはそれから選択される範囲の残基を有する分子である。本明細書中で用いられる場合、「部分」は、好ましくは、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０またはそれ以上の、それが由来する配列のアミノ酸を含む。前記部分は、配列の中心またはＮ末端もしくはＣ末端部分から得ることができる。
【００４６】
本明細書中で前記定義の組成物は、サケ科の卵を除く任意の魚卵から得ることができる、すなわち、本発明の組成物は、サケ科の卵、例えばＳａｌｍｏおよびＯｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ亜科、例えばタイセイヨウサケ（Ｓａｌｍｏ  ｓａｌａｒ）またはタイヘイヨウサケ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｍａｓｏｕ）由来の卵から得られないかまたは得ることができない。概して、魚は、卵を産み、この卵は母体内で他の胚発生をほとんどまたは全く経験せず、魚卵はしたがって本発明の化粧品組成物をそれから本明細書中で記載される方法によって得られるかまたは得ることができる有用な孵化液源である。したがって、本発明の方法の出発物質としての卵を提供することができる好適な魚としては、サケ科由来の魚以外の条鰭綱の３つの下綱のうちの１つである真骨区下綱のいずれかの魚が挙げられる。したがって、魚は、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｏｍｏｒｐｈａ、Ｅｌｏｐｏｍｏｒｐｈａ、Ｃｌｕｐｅｏｍｏｒｐｈａ、Ｏｓｔａｒｉｏｐｈｙｓｉ、Ｐｒｏｔａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉ（サケ科由来の魚を除く）、Ｓｔｅｎｏｐｔｅｒｙｇｉｉ、Ｃｙｃｌｏｓｑｕａｍａｔａ、Ｓｃｏｐｅｌｏｍｏｒｐｈａ、Ｌａｍｐｒｉｄｉｏｍｏｒｐｈａ、Ｐｏｌｙｍｙｘｉｏｍｏｒｐｈａ、ＰａｒａｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉおよびＡｃａｎｔｈｏｐｔｅｒｙｇｉｉからなるリストから選択されるいずれかの上目の魚から選択することができる。
【００４７】
いくつかの実施形態において、魚は、Ｏｓｔｅｏｇｌｏｓｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｈｉｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｅｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｌｂｕｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｎｏｔａｃａｎｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｎｇｕｉｌｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｃｃｏｐｈａｒｙｎｇｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｌｕｐｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｎｏｒｙｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｈａｒａｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｙｍｎｏｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｒｇｅｎｔｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｉｆｏｒｍｅｓ（サケ科由来の魚を除く）、Ｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｓｍｅｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｅｌｅｏｐｏｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｏｍｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｕｌｏｐｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｙｃｔｏｐｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌａｍｐｒｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｏｌｙｍｉｘｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｅｒｃｏｐｓｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂａｔｒａｃｈｏｉｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｌｏｐｈｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｄｉｆｏｒｍｅｓ、Ｏｐｈｉｄｉｉｆｏｒｍｅｓ、Ｍｕｇｉｌｉｆｏｒｍｅｓ、Ａｔｈｅｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｌｏｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｅｔｏｍｉｍｉｆｏｒｍｅｓ、Ｃｙｐｒｉｎｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｔｅｐｈａｎｏｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｂｅｒｙｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｚｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇｏｂｉｅｓｏｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｇａｓｔｅｒｏｓｔｅｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｇｎａｔｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｙｎｂｒａｎｃｈｉｆｏｒｍｅｓ、Ｔｅｔｒａｏｄｏｎｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｃｏｒｐａｅｎｉｆｏｒｍｅｓ  ＰｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｆｏｒｍｅｓからなるリストから選択されるいずれかの目の魚から選択することができる。
【００４８】
好ましい実施形態において、魚は、Ｓａｌｍｏｎｉｆｏｒｍｅｓ（サケ科由来の魚を除く）、Ｃｙｐｒｉｎｉｆｏｒｍｅｓ、Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ、Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ、ＭｕｇｉｌｉｆｏｒｍｅｓおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｆｏｒｍｅｓからなるリストから選択されるいずれかの目の魚から選択することができる。
【００４９】
特に好ましい実施形態において、魚は、Ｃｙｐｒｉｎｉｄａｅ、Ｃｉｃｈｌｉｄａｅ、Ｐａｎｇａｓｉｉｄａｅ、Ｓｃｉａｅｎｉｄａｅ、Ｓｅｒｒａｎｉｄａｅ、Ｃａｒａｎｇｉｄａｅ、Ｓｐａｒｉｄａｅ、Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｃｉｄａｅ、Ｍｏｒｏｎｉｄａｅ、Ｍｕｇｉｌｉｄａｅ、Ｏｒｙｚｉｉｎａｅ、Ｌａｔｉｄａｅ、ＥｌｅｏｔｒｉｄａｅおよびＡｃｉｐｅｎｓｅｒｉｄａｅからなるリストから選択されるいずれかの科の魚から選択することができる。
【００５０】
したがって、いくつかの実施形態において、魚は、ボニータンフィッシュ（ｂｏｎｙ−ｔｏｎｇｕｅｄ  ｆｉｓｈ）、エールワイフ（ｍｏｏｎｅｙｅ）、ウスメバル（ｇｏｌｄｅｙｅ）、カライワシ、ターポン、ソトイワシ、トカゲギス、トゲウナギ、ウナギ（ｔｒｕｅ  ｅｅｌ）、ガルパー、フウセンウナギ、ニシン、カタクチイワシ、サバヒー、バルブ、コイ、ダニオ、キンギョ、ドジョウ、ミノウ、ラスボラ、カラシン、ペンシルフィッシュ、ホウネンエソ、ピラニア、テトラフィッシュ、デンキウナギ、ナイフフィッシュ、ナマズ、デメニギス、セキトリイワシ、キタカワマス、スメルト、ガラクシアス（ｇａｌａｘｉｉｄ）、シャチブリ（ｊｅｌｌｙｎｏｓｅ  ｆｉｓｈ）、ヨコエソ（ｂｒｉｓｔｌｅｍｏｕｔｈ）、イボダイ（ｍａｒｉｎｅ  ｈａｔｃｈｅｔｆｉｓｈ）、テナガミズテング（Ｂｏｍｂａｙ  ｄｕｃｋ  ｆｉｓｈ）、ミズウオ、ハダカイワシ（ｌａｎｔｅｒｎｆｉｓｈ）、リュウグウノツカイ、アカマンボウ、フリソデウオ、ギンメダイ、ドウクツギョ、サケスズキ、アンコウ（ｔｏａｄｆｉｓｈ）、エンゼルフィッシュ、タラ、カクレウオ、シルバーアロワナ、ボラ、トウゴロウイワシ、キュウセン、トビウオ、クジラウオ、胎生魚、キリフィッシュ、カブトウオ、ファンゴトゥース（ｆａｎｇｔｏｏｔｈ）、パインコーンフィッシュ（ｐｉｎｅｃｏｎｅｆｉｓｈ）、マトウダイ、ウバウオ、トゲウオ、ヨウジウオ、タツノオトシゴ、タウナギ、カワハギ、フグ、ヒラメ、カサゴ、カジカ、キノボリウオ、バス、シクリッド、ハゼ、グーラミ、サバ、パーチ、クロホシマンジュウダイ、ホワイティングまたはベラであってよい。
【００５１】
特に好ましい実施形態において、魚は、ソウギョ（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ  ｉｄｅｌｌａ）、ハクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｍｏｌｉｔｒｉｘ）、キャトラ（Ｃａｔｌａ  ｃａｔｌａ）、コイ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ  ｃａｒｐｉｏ）、コクレン（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ）、ヨーロッパブナ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ  ｃａｒａｓｓｉｕｓ）、ティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ  ｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）、バサ（Ｐａｎｇａｓ  ｃａｔｆｉｓｈ）（Ｐａｎｇａｓｉｕｓ  ｐａｎｇａｓｉｕｓ）、ロフ（Ｌａｂｅｏ  ｒｏｈｉｔａ）、フウセイ（Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ  ｃｒｏｃｅａ）、ヒトミハタ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ  ｔａｕｖｉｎａ）、ブリ（Ｓｅｒｉｏｌａ  ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ）、ゴウシュウマダイ（Ｓｐａｒｕｓ  ａｕｒａｔａ）、スズキ（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ヨーロピアンシーバス（Ｄｉｃｅｎｔｒａｒｃｈｕｓ  ｌａｂｒａｘ）、ヒラダイ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｒｙｓ  ａｕｒａｔｕｓ）、ボラ（Ｍｕｇｉｌ  ｃｅｐｈａｌｕｓ）、バラマンディ（Ｌａｔｅｓ  ｃａｌｃａｒｉｆｅｒ）、マーブルゴビー（Ｏｘｙｅｌｅｏｔｒｉｓ  ｍａｒｍｏｒａｔａ）、モザンビークティラピア（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ  ｍｏｓｓａｍｂｉｃｕｓ）、メダカ（Ｏｒｚｙｉａｓ  ｌａｔｉｐｅｓ），  ゼブラフィッシュ（Ｄａｎｉｏ  ｒｅｒｉｏ）、シベリアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｂａｅｒｉｉ）およびロシアチョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ  ｇｕｅｌｄｅｎｓｔａｅｄｔｉｉ）から選択されるいずれかの種であり得る。
【００５２】
いくつかの実施形態において、化粧品組成物は、１種より多い卵から、すなわち１種より多い魚由来の卵からの孵化液から得ることができる。例えば、２種以上の卵から得られる孵化液を本明細書中で記載される方法で使用して、本発明の化粧品組成物を得ることができる。したがって、本発明の方法は、例えばろ過前またはろ過後に、１以上の魚の孵化した卵から集められた孵化液を組み合わせるステップを含んでもよい。したがって、本明細書中で記載される魚由来の卵は、出発材料の天然の生物学的変形と見なすことができる。
【００５３】
本明細書中で記載される化粧品組成物は、本明細書中で議論されるインビボでの使用のためのものである。
【００５４】
「薬剤的に許容される」または「生理学的に許容される」または「美容上許容される」によって、化粧用途および組成物に好適でなければならない成分を意味する。成分はまた、組成物中の他の成分と適合性でなければならず、同様に受容者にとって生理学的に許容されなければならない。
【００５５】
投与のための活性成分、すなわち上述の方法によって得ることができる組成物は、化粧品組成物での使用のために適切に修飾することができる。例えば、本発明にしたがって使用される組成物は、例えば、塩あるいは非電解質、酢酸塩、ＳＤＳ、ＥＤＴＡ、クエン酸塩もしくは酢酸塩緩衝液、マンニトール、グリシン、ＨＳＡまたはポリソルベートなどの適切な添加剤の使用によって、分解に対して安定化させることができる。
【００５６】
本明細書中で記載される方法によって得られる組成物は、化粧用の組成物中に単独活性成分として存在してもよいし、または例えば美容効果（上述の通り）を増強するか、もしくは組成物を消費者にとってより魅力的にするための他の成分、特に他の活性成分と組み合わせてもよい。いくつかの実施形態において、孵化液の異なる供給源由来の、本発明の方法によって得られる組成物を組み合わせてもよい。
【００５７】
上述のように、本明細書中で記載する組成物は、皮膚の美容的外観、特に老化した皮膚、例えば光老化した皮膚の改善に有用な特性を示す。
【００５８】
本明細書中で記載される組成物は、例えば上述の天然源の１つから前記組成物を調製した後に、不純物も含む可能性がある。本明細書中で記載する組成物において、魚の孵化液から誘導できる様々なポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、上記方法にしたがって調製される化粧品組成物の０．０００１〜５０％ｗ／ｗの範囲で（組み合わせで）存在し得る。好ましくは、魚の孵化液から誘導できる前記ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組成物の０．０００１〜１０％ｗ／ｗの範囲（または１０〜４０％まで）、例えば上記方法に従って調製される組成物の０．０００１〜５％、０．０００１〜３％、０．０００１〜２％、０．０００１〜１％、０．０００１〜０．５％、０．０００１〜０．１％ｗ／ｗ（例えば最終ステップで希釈される場合は０．０１〜０．１％ｗ／ｗまたは０．０００１〜０．００１ｗ／ｗ）（組み合わせで）で存在する。したがって、魚の孵化液から誘導できる個々のポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組成物の１×１０-6〜１０の範囲で存在し得る。いくつかの実施形態においては、魚の孵化液から誘導できる前記個々のポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、ステップ（ｉｖ）でさらに希釈されない場合は組成物の１×１０-6〜５％ｗ／ｗの範囲、例えば医薬または化粧品組成物の１×１０-6〜４％、１×１０-6〜３％、１×１０-6〜２％、１×１０-6〜１％、１×１０-6〜０．５％、１×１０-6〜０．１％または１×１０-6〜０．０１％ｗ／ｗで存在してもよく、あるいはステップ（ｖ）で希釈される場合は、例えば１０〜２００、例えば３０〜１００倍減少する可能性がある。
【００５９】
化粧品組成物中の、魚の孵化液から誘導できるポリペプチドまたはポリペプチドの部分の割合は、組成物中の他の溶質、すなわち、例えば水などの溶媒を除いたものに対して定義することができる。したがって、前記ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組み合わせで、組成物の乾燥質量の１〜１００％ｗ／ｗの範囲で存在してもよい。いくつかの実施形態においては、ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組み合わせで、組成物の乾燥質量の１〜９０％ｗ／ｗの範囲、例えば組成物の乾燥質量の５〜８０％、１０〜７０％、２０〜６０％、３０〜５０％ｗ／ｗで存在してもよい。他の実施形態において、ポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組み合わせで、組成物の乾燥質量の１〜４０％、２〜３９％、３〜３８％、４〜３７％などの範囲で存在してもよい。したがって、個々のポリペプチドまたはポリペプチドの部分は、組成物の乾燥質量の０．０００１〜５０％ｗ／ｗの範囲、例えば組成物の乾燥質量の０．０００１〜４０％、０．００１〜３０％、０．０１〜２５％ｗ／ｗで存在してもよい。本明細書中で記載するように、組成物は、ステップ（ｖ）において本発明による使用のために希釈してもよい。
【００６０】
本発明は、皮膚の美容的外観を改善するための方法に関するが、これは、障害、異常または状態の処置を含み得るが、すべての場合で、処置は美容的性質のものである。
【００６１】
本明細書中で用いられる場合、「美容的」とは、疾患または障害を治癒、治療または予防しないが、そのかわりに皮膚の外観、例えば皮膚の色、きめまたは水分量を修正または改善するためのスキンケア製品としての役割を果たす処置を指す。
【００６２】
本明細書中で記載する治療の基本は、本明細書中で開示される化粧品組成物の皮膚アンチエージング効果である。これらの効果は、本明細書中で記載する実施例で示されている。
【００６３】
したがって、化粧品組成物のアンチエージング特性に基づく処置が想定される。
【００６４】
本発明はしたがって、哺乳動物の皮膚の外観を改善する美容的方法であって、本明細書中で前記した化粧品組成物を前記動物に投与する方法を提供する。
【００６５】
特に好ましい実施形態において、皮膚は老化した皮膚である。
【００６６】
「老化した皮膚」とは、老化の１以上の兆候または症状、すなわち、しわ、小じわ、色素過剰、弛み（たるみ）、乾燥肌、鱗屑または経表皮水分損失（ＴＥＷＬ）の外観を示す皮膚を指す。特に、「老化した皮膚」は、正常な最適の皮膚、すなわち、健康で水和した正常な色素沈着の老化していない皮膚に対して判定される。この点に関して、老化した皮膚は対象の年齢に関連している必要はなく、例えば日光への慢性的暴露（光損傷）によって早く老化する場合がある。したがって、「正常な最適皮膚」についての相対的パラメータは、問題の対象と同じかまたは類似した年齢の多くの対象、例えば日光への慢性的暴露を受けていない対象からの老化の上記兆候の平均測定値として判定してもよい。あるいは、「正常な最適皮膚」の相対的パラメータは、問題の対象よりも若い対象からの測定値と見なすことができる。換言すれば、本明細書中で記載される組成物は、より若い年齢での対象の皮膚に対して、皮膚の若々しい外観を回復するために使用できる。
【００６７】
したがって、本発明は、哺乳動物における皮膚日射病の処置のための美容的方法であって、本明細書中で前述した化粧品組成物を前記動物に投与する方法、好ましくは前記組成物を局所投与する方法を提供する。
【００６８】
別の見方では、本発明は、哺乳動物における皮膚日射病の処置で使用するための本明細書中で上述した化粧品組成物を提供し、好ましくは、前記化粧品組成物は前記動物の皮膚へ投与するためのものである。特定の実施形態において、組成物は局所投与用である。
【００６９】
特に好ましい実施形態において、皮膚（例えば老化または光損傷した皮膚）の美容的外観の改善は、しわ、小じわ、色素過剰、弛み、乾燥肌、鱗屑および／または経表皮水分損失の美容上の外観または出現率における軽減または予防を含む。１以上のこれらのパラメータを改善することができる。好ましくは、小じわおよび／またはしわが軽減される。
【００７０】
例えば老化した皮膚または皮膚日射病の兆候または症状の美容上の外観または出現率における軽減または予防は、兆候または症状の数および／または重篤度が軽減されることを意味し得る。例えば、小じわおよびしわの数を減少させることができる、および／またはしわもしくは小じわのサイズ、例えば深さを減少もしくは最小限に抑えることができる。さらに、軽減または予防は、新しい兆候または症状の出現の阻止または減速を含み得る。
【００７１】
「乾燥肌」は、本明細書中で用いられる場合、多くの場合、小じわのパターン、鱗屑、および
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ならびに／または灼熱感によって特徴づけられる、水分または皮脂が欠乏した表皮を指す。乾燥肌は、皮膚状態自体（例えば年齢による）として起こり得るか、または日焼けによる損傷などの皮膚障害もしくは状態の症状であり得る。
【００７２】
この点に関して、乾燥肌、鱗屑、小じわまたは経表皮水分損失の軽減は、上記組成物の保湿効果によって達成することができる。
【００７３】
したがって、本発明は、哺乳動物の皮膚を保湿する美容的方法であって、本明細書中で定義するような化粧品組成物を前記動物に投与する方法を提供すると見なすことができる。
【００７４】
言い換えれば、本発明は、哺乳動物の皮膚の保湿において使用するための本明細書中で記載する化粧品組成物を提供する。（組成物は別法として、その目的のための美容的薬剤として調製することもできる。）
【００７５】
「保湿」とは、本明細書中で用いられる場合、皮膚からの水分の損失（例えばＴＥＷＬ）を防止する保湿剤ならびに皮膚に塗布された場合、水を引きつけ、保持する保湿剤（保水剤）および皮膚軟化剤（不良な落屑を改善する）を対象とする。
【００７６】
上述のように、そのような保湿特性は、皮膚の美容的外観を改善するために有利である。特に好ましい実施形態において、皮膚は、顔、耳、首、手の皮膚または頭皮である。
【００７７】
「しわ」は、皮膚におけるひだ、突起または折り目である。皮膚のしわは、老化過程の結果として典型的に現れる。この点に関して、真皮は、皮膚に強度を与えるコラーゲン、皮膚にはりを与えるグリコサミノグリカン、および皮膚に弾力性または復元力を与えるエラスチン線維を包含する、多くの皮膚の構造要素を含む。
【００７８】
皮膚が老化するにつれ、真皮層は薄くなり、また皮膚が産生するコラーゲンも少なくなる。さらに、弾力性をもたらすエラスチン線維が摩耗する。皮膚の足場におけるこれらの変化は、皮膚の皴と弛みの原因となる。真皮−表皮接合部の乳頭間突起が平坦化して、皮膚がさらにもろくなると、皮膚がさらに容易に切れやすくなる。この過程はまた、真皮と接触する表面積を減少させることによって表皮が利用可能な栄養の量も減少させ、さらに皮膚の正常な修復過程を妨害する。
【００７９】
皮下層において、脂肪細胞は年齢とともに小さくなる。このことは、脂肪細胞が他の層から損傷を「埋める」ことができないので、さらに目立ったしわおよびたるみ（弛み）につながる。
【００８０】
ＵＶＡおよびＵＶＢ線、すなわち日光への暴露によって、コラーゲンが実年齢の老化よりも速い速度で分解する。日光はコラーゲン繊維に損傷を与え、異常なエラスチンの蓄積の原因となる。この日光によって誘導されるエラスチンが蓄積すると、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）が大量に産生される。通常、メタロプロテアーゼは、コラーゲンを産生し、再形成することによって、日光で損傷を受けた皮膚を再構築する。しかしながら、この過程は、必ずしも充分に機能するとは限らず、メタロプロテアーゼの一部は実際にコラーゲンを分解する。この結果、日射瘢痕（ｓｏｌａｒ  ｓｃａｒ）と呼ばれる無秩序なコラーゲン繊維の形成に至る。この不完全な復元／再生過程の繰り返しがしわを発生させ、皮膚をたるませる。
【００８１】
さらなる好ましい態様において、美容的に治療または予防される皮膚の状態は、色素沈着状態、障害または異常である。
【００８２】
皮膚の色素沈着障害または異常、すなわち色素過剰は、加齢の結果として起こり得るか、または日焼けによる時期尚早の老化から起こり得る。色素沈着の変化は、メラノサイトの局所的過剰もしくはメラノサイト活性の増加、またはその両者から起こり得る。色素沈着障害としては、肝斑、日焼けもしくは加齢によるしみ（日焼黒子）およびそばかすなどの他のシミが挙げられる。
【００８３】
本明細書中で用いられる場合、皮膚の美容的外観の「改善」は、正常な最適皮膚、すなわち、健常で水和し、正常な色素沈着の老化していない皮膚に対して判定される。したがって、老化した皮膚に関して、老化の１以上の兆候または症状を実施例で記載するようにして測定し、好ましくは改善が老化の１以上の兆候または症状における減少である場合、実際上または生理学的に若い皮膚の同じ兆候と比較する。
【００８４】
好ましい態様において、美容上の使用は、皮膚への局所投与によって達成される。
【００８５】
本明細書中で用いられる場合、「治療する」とは、皮膚が前記状態もしくは障害にかかっておらず、前記治療を受けていない前記個体の身体の異なる部分、または前記治療を受けていない対応する正常な個体において存在する症状または効果と比較して、前記状態または障害の１以上の美容上の症状または効果、例えば乾燥肌の存在もしくは程度、色素沈着の程度もしくは面積などを、好ましくは正常なレベルまで減少、軽減または除去することを指す。
【００８６】
「予防する」または「軽減する」とは、完全な予防、あるいは症状または効果の程度または発症の時期の減少または軽減（例えば遅延）を指す。例えば、乾燥し、異常に色素沈着した、しわのある皮膚を典型とする状態は、そのような状態が出現する前に、本明細書中に記載する化粧品組成物を定期的に適用することによって予防することができる。
【００８７】
本発明による美容的治療または予防法は、有利には、障害もしくは状態の治療もしくは予防において、および／または、例えば保湿を達成するために有効な１以上の活性成分の投与と組み合わせてもよい。したがって、本明細書中に記載する化粧品組成物は、１以上のそのような活性成分をさらに含んでもよい。
【００８８】
本発明のさらに別の態様にしたがって、我々は、本明細書中で定義するような組成物および、場合によって１以上のさらなる活性成分を、本明細書中で記載するような、ヒトまたはほ乳動物療法での同時、個別または連続使用のための複合製剤として提供する。
【００８９】
本明細書中で記載する組成物は、通常の方法で、１以上の生理学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤と、容易に入手可能な成分を用いる当該技術分野で周知の技術にしたがって処方することができる。組成物は、例えば、ｐＨ３．５〜１１、好ましくはｐＨ５．５〜９にて、水性、グリセリン系、アルコール（２０％まで）系、アクリレート系油／水エマルジョン、キサンタンガム系油／水エマルジョンまたは水／油エマルジョンとして提供できる。
【００９０】
したがって、組成物を、場合によって、複合製剤として他の活性物質と一緒に、１以上の通常の担体、希釈剤および／または賦形剤とともに組み入れて、例えば粉末剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液（注入液）、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中）、軟膏、滅菌包装粉末剤などの通常のガレヌス製剤を製造することができる。組成物は、凍結乾燥、過冷却またはパーマザイムの使用によって安定化させてもよい。そのような組成物は、本発明の組成物を形成する（すなわち、ステップ（ｖ）にしたがって調製される）。
【００９１】
好適な賦形剤、担体または希釈剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、乳糖カルシウム、コーンスターチ、アグリネート（ａｇｌｉｎａｔｅ）、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、水、水／エタノール、水／グリコール、水／ポリエチレン、グリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ミネラルオイルもしくは硬質脂肪（ｈａｒｄ  ｆａｔ）などの脂肪性物質またはそれらの好適な混合物である。徐放性製剤を得るための薬剤、例えばカルボキシポリメチレン、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、またはポリ酢酸ビニルも使用してもよい。
【００９２】
組成物は、潤滑剤、湿潤剤、乳化剤、増粘剤、造粒剤、崩壊剤、結合剤、浸透活性剤（ｏｓｍｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、懸濁剤、保存剤、甘味剤、香味添加剤、吸着促進剤（例えば表面浸透剤、例えば胆汁酸塩、レシチン、界面活性剤、脂肪酸、キレート剤）、褐色化剤、有機溶媒、抗酸化剤、安定化剤、皮膚軟化剤、シリコーン、アルファ−ヒドロキシ酸、粘滑剤、消泡剤、保湿剤、ビタミン、芳香剤、イオン性または非イオン性増粘剤、界面活性剤、フィラー、イオン性または非イオン性増粘剤、金属イオン封鎖剤、ポリマー、プロペラント、アルカリ化または酸性化剤、乳白剤、着色剤および脂肪族化合物などをさらに含んでもよい。これらの構成要素のいくつかをさらに詳細に後述する。
【００９３】
化粧品組成物中の他の活性成分または構成要素は、ミネラル、ビタミン、酵素、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、多糖、サンスクリーンフィルターとして好適な物質、化学的エクスフォリアン、抽出物、皮膚コンディショニング剤、抗酸化剤およびそれらの混合物のいずれか１以上から選択することができる。
【００９４】
本発明の組成物中に含まれ得るタンパク質の例としては、コラーゲンおよび／またはその誘導体（例えば前記定義のその部分）、細胞成長を促進できるタンパク質またはペプチド、グリコプロテイン１、グリコプロテイン２およびラミニンが挙げられる。
【００９５】
本発明の組成物に、限定されるものではないが、果物酵素（例えばブロメライン）、スーパーオキシドジスムターゼペルオキシダーゼ、ヒアルロニダーゼおよびムコポリサッカリダーゼ（ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄａｓｅ）のいずれか１以上を含む酵素を提供することができる。
【００９６】
ペプチドは、限定されるものではないが、Ｄ，Ｌ−カルノシン、Ｄ−カルノシン、Ｌ−カルノシン、アンセリンおよびマトリキシル（Ｍａｔｒｉｘｙｌ）（ペンタペチド（ｐｅｎｔａｐｅｔｉｄｅ）誘導体）の１以上から選択することができる。
【００９７】
アミノ酸は、これらに限定されるものではないが、Ｌ−アラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−システイン、Ｌ−シスチン、グリシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、およびＬ−バリンならびに、表１で定義されるような天然に存在しないアミノ酸を含むそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。抗酸化剤として特に好ましいアミノ酸は、グリシン、リジン、アルギニン、システイン、シスチン、ヒスチジン、チロシンおよびトリプトファンのいずれか１以上から選択することができる。
【００９８】
【表１】
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【００９９】
化粧品組成物は、脂肪、油、ワックスなどを含む１以上の脂質を含み得る。好適な極性油は、例えば、レシチンおよび脂肪酸トリグリセリド、すなわち８〜２４，特に、１２〜１８炭素原子の鎖長を有する飽和および／または不飽和、分枝および／または非分枝アルカンカルボン酸のトリグリセロールエステルの群から選択されるものである。脂肪酸トリグリセリドは、例えば有利には、合成、半合成および天然油の群、例えば、オリーブ油、ヒマワリ油、ダイズ油、ピーナッツ油、ナタネ油、アーモンド油、ヤシ油、ココナッツ油、ヒマシ油、小麦胚芽油、ブドウ種子油、アザミ油、ツキミソウ油、マカダミアナッツ油などから選択することができる。
【０１００】
代替的または付加的に、油は、揮発性油、不揮発性油またはそれらの混合物から選択することができる。不揮発性油としては、以下の定義の少なくとも１つを満たす油が挙げられる：（ａ）油は、２５℃および１気圧で０．２ｍｍＨｇ以下の蒸気圧を示す；（ｂ）油は１気圧で少なくとも３００℃の沸点を有する。揮発性油は、前記定義のような「不揮発性」でない物質を含む。
【０１０１】
不揮発性油は、不揮発性シリコーン油、不揮発性炭化水素油およびそれらの混合物から選択することができる。好適な不揮発性シリコーン油には線状ポリメチルシロキサンが含まれ、好ましくは、不揮発性シリコーン油は高分子量ジメチコーンである。市販の線状ポリメチルシロキサンの例としては、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから得られるＤＣ２００  ＦＬＵＩＤ  ２０Ｃｓｔ、ＤＣ２００  ＦＬＵＩＤ  １００Ｃｓｔ、ＤＣ２００  ＦＬＵＩＤ  ３５０Ｃｓｔが挙げられる。
【０１０２】
好適な不揮発性炭化水素油としては、ジグリセリンもしくはトリグリセリンの分枝エステルまたはエステルまたは１，２，３，４ブタントリオールまたはエリスリトール、ジエリスリトールもしくはトリエリスリトールが挙げられる。好ましくは、不揮発性炭化水素油は、トリエチルヘキサン酸エリスリチル（日清オイリオからＳａｌａｃｏｓ  Ｅ−３８として入手可能）およびポリグリセリル−２トリイソステアレート（日清オイリオからＣｏｓｍｏｌ  ４３Ｖとして入手可能）、炭酸ジエチルヘキシル（ＤｅｇｕｓｓａからＴｅｇｏｓｏｆｔ  ＤＥＣとして入手可能）、ジカプリルエーテル（Ｃｏｇｎｉｓ  ＡＧからＣｅｔｉｏｌ  ＯＥとして入手可能）、炭酸ジカプリル（Ｃｏｇｎｉｓ  ＡＧからＣｅｔｉｏｌ  ＣＣとして入手可能）、イソノナン酸イソノニル（ＳｅｐｐｉｃからＬａｎｏｌ  ９９として提供）、ネオペンタン酸トリデシル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ  ＰｔｏｄｕｃｔｓからＣｅｒａｐｈｙｌ  ５５として提供）、またはそれらの混合物を含む。
【０１０３】
揮発性油は、揮発性シリコーン油（官能化および非官能化の両方）、揮発性炭化水素油およびそれらの混合物から選択することができる。本発明で有用な揮発性油は、飽和もしくは不飽和であり得るか、直鎖もしくは分枝鎖または環状構造を有し得るか、あるいはこれらの特徴のいずれか１以上を有し得る。
【０１０４】
揮発性炭化水素油の例としては、ポリデカン、例えばイソドデカンおよびイソデカン（例えば、Ｐｒｅｓｐｅｒｓｅ  Ｉｎｃ．から入手可能なＰｅｒｍｅｔｈｙｌ−９９Ａ）ならびにＣ７〜Ｃ１５イソパラフィン（例えば、Ｅｘｘｏｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから入手可能なＩｓｏｐａｒ  Ｓｅｒｉｅｓ）が挙げられる。
【０１０５】
揮発性シリコーン油は、シクロペンタシロキサン、シクロヘキサシロキサンまたはそれらの混合物から選択することができる。市販の揮発性環状シリコーン油の例としては、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．からのＤＣ  ２４４、ＤＣ  ２４５、ＤＣ  ３４４、およびＤＣ  ３４５；Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＭａｔｅｒｉａｌｓからのＳＦ−１２０４およびＳＦ−１２０２  Ｓｉｌｉｃｏｎｅ  Ｆｌｕｉｄｓ；Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｃｏ．からのＧＥ  ７２０７および７１５８）；ならびに、ＳＷＳ  Ｓｉｌｉｃｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．からのＳＷＳ−０３３１４が挙げられる。
【０１０６】
直鎖揮発性シリコーン油は、直鎖ポリメチルシロキサンであり得る。市販の直鎖ポリメチルシロキサンの一例には、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．からのＤＣ  ２００  ＦＬＵＩＤ、５Ｃｓｔが含まれる。
【０１０７】
本発明の化粧品組成物は、限定されるものではないが、アニオン性多糖（例えば、アルギン酸、ペクチン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、アラビアガム、カラヤガム、トラガカントガム、カルボキシメチル−キチン、セルロースガム、グリコサミノグリカン）、カチオン性多糖（例えば、キトサン、アセチル化キトサン、カチオン性グアーガム、カチオン性ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ））、ノニオン性多糖（例えば、デンプン、デキストリン、グアーガム、セルロースエーテル、例えばヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロースおよびニトロセルロース）、両性多糖（例えば、カルボキシメチルキトサン、Ｎ−ヒドロキシ−ジカルボキシエチル−キトサン、修飾ジャガイモデンプン）ならびに疎水性多糖（例えば、セチルヒドロキシエチルセルロース、ポリクオタニウム２４）のいずれか１以上から選択される１以上の多糖をさらに含んでもよい。
【０１０８】
化粧品組成物は、サンスクリーンフィルター、例えば有機サンスクリーンとして好適な物質、例えば桂皮酸誘導体をさらに含み得る。有機サンスクリーン活性剤は、親水性有機サンスクリーン、疎水性有機サンスクリーン、またはその混合物から選択することができる。サンスクリーンの好適な例は、ｔｈｅ  ＣＴＦＡ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  ７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ｖｏｌｕｍｅ  ２，  ｐｐ．１６７２，  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗｅｎｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｃ  Ｅｗｅｎ（Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，  Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，  ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．  １９９７）で見出すことができる。
【０１０９】
有機サンスクリーンは、アルキルβ，β−ジフェニルアクリレート誘導体、α−シアノβ，β−ジフェニルアクリレート誘導体、アントラニレート誘導体、ベンゾフェノン誘導体、カンファー誘導体、ジベンゾイルメタン誘導体、ｐ−アミノ安息香酸誘導体、サリチル酸誘導体、トリアジン誘導体、またはその混合物から選択することができる。例えば、疎水性有機サンスクリーンは、４−（１，１−ジメチルエチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタン；４−イソプロピルジベンゾイルメタン；４−（１，１−ジメチルエチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタン、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート、またはそれらの混合物から選択することができる。
【０１１０】
ブチルメトキシジベンゾイルメタンまたはＡｖｏｂｅｎｚｏｎｅとしても知られる市販の４−（１，１−ジメチルエチル）−４’−メトキシジベンゾイルメタンの一例には、Ｇｉｖａｕｄａｎ  Ｒｏｕｒｅ  Ｓ．  Ａ．からのＰａｒｓｏｌ  ＴＭ  １７８９およびＭｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，  Ｉｎｃ．からのＥｕｓｏｌｅｘ  ＴＭ  ９０２０が含まれる。イソプロピルジベンゾイルメタンとしても知られる市販の４−イソプロピルジベンゾイルメタンの一例には、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，  Ｉｎｃ．からのＥｕｓｏｌｅｘ  ＴＭ  ８０２０が含まれる。Ｏｃｔｏｃｒｙｌｅｎｅとしても知られる市販の２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレートの例としては、ＢＡＳＦから得られるＵｖｉｎｕｌ  Ｎ５３９  ＳＧ；およびＲｏｎａ／Ｍｅｒｃｋから得られるＥｕｓｏｌｅｘ  ＯＣＲが挙げられる。
【０１１１】
いくつかの実施形態においては、親水性有機サンスクリーンは２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸であってよい。ＰＢＳＡとしても知られる市販の２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸の一例とには、Ｒｏｎａ／Ｍｅｒｃｋから得られるＥｕｓｏｌｅｘ  ２３２が含まれる。
【０１１２】
桂皮酸誘導体サンスクリーンの好適な例は、ｔｈｅ  ＣＴＦＡ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  ７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ｖｏｌｕｍｅ  ２，  ｐｐ．１６７２，  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗｅｎｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｃ  Ｅｗｅｎ  （Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，  Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，  ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．  １９９７）で見出すことができる。桂皮酸誘導体は、２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート、ジエタノールアミンメトキシシンナメート、２−エトキシエチル−ｐ−メトキシシンナメート、またはそれらの混合物から選択することができる。例えば、桂皮酸誘導体は２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメートであり得る。
【０１１３】
化粧品組成物は、限定されるものではないが、アルファヒドロキシ酸（ＡＨＡ）、ベータヒドロキシ酸（ＢＨＡ）またはポリ−ヒドロキシ酸、例えばサリチル酸、グリコール酸、クエン酸およびリンゴ酸のいずれか１以上から選択される化学的エクスフォリアンを含んでもよい。
【０１１４】
化粧品組成物中に組み入れてもよい抽出物としては、限定されるものではないが、フェノール化合物、例えば、フラボノイド（例えば、グリコシルルチン、フェルラ酸、コーヒー酸）、フルフリリデングルシトール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ノルジヒドログアイアレティック樹脂酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ｒｅｓｉｎ  ａｃｉｄ）、ノルジヒドログアイアレティック酸（ｎｏｒｄｉ−ｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、トリヒドロキシブチロフェノンおよびそれらの誘導体を含み得る植物抽出物が挙げられる。本発明の組成物で使用するための特定の植物抽出物としては、アロエ抽出物、朝鮮人参抽出物およびトクサ抽出物が挙げられる。
【０１１５】
朝鮮人参抽出物は、親水性溶媒（特に、水、エタノール、グリコール、またはそれらの任意の混合物）でオタネニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）の根を抽出することによって得ることができる。抽出物は、サポニン、ステロール、炭水化物、ペクチン、ビタミン、ミネラルおよび脂質を含む。
【０１１６】
トクサ抽出物は、親水性溶媒（例えば、水、エタノール、グリコール、またはそれらの任意の混合物）でＥｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅの草本全体を抽出することによって得ることができる。抽出物は、シリケート、フラビノイド（ｆｌａｖｉｎｏｉｄ）、サポノシド、コーヒー酸およびフェルラ酸を含む。
【０１１７】
化粧品組成物は皮膚コンディショニング剤をさらに含んでもよい。皮膚コンディショニング剤は、保水剤、エクスフォリアン、皮膚軟化剤またはその混合物から選択することができる。保水剤としては、多価アルコール、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、ヒドロキシプロピルソルビトール、ヘキシレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２，６−ヘキサントリオール、エトキシル化グリセリン、プロポキシル化グリセリンまたはその混合物が挙げられる。
【０１１８】
本発明の組成物中に提供され得る抗酸化剤の例としては、限定されるものではないが、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、カロテノイド、ペプチド、チオール、スルホキシイミン化合物、キレート剤、不飽和脂肪酸、フェノール化合物、植物抽出物、スチルベン、尿酸、マンノース、クロロゲン酸、イミダゾール（例えばウロカニン酸）、フルフリリデンソルビトール、ユビキノン、ユビキノール、プラストキノン、フィトステロールおよびそれらの誘導体（例えば塩、エステル、エーテル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび／または脂質誘導体）が挙げられ、そのいくつかは上述されている。
【０１１９】
ビタミンは、限定されるものではないが、ビタミンＡおよびそれらの誘導体（例えばレチノイドまたはレチノールまたはそれらの誘導体、例えばパルミチン酸レチニルまたはプロピオン酸レチニル）、ビオチン、葉酸、パントテン酸カルシウム、ニコチンアミド、ピリドキシンＨＣｌ、ピリドキサルＨＣｌ、リボフラビン、チアミンＨＣｌ、チミジン、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ３（例えばナイアシンアミド）、ビタミンＢ５（例えばパンテノール）、ビタミンＣおよびそれらの誘導体（例えば、パルミチン酸アスコルビル、Ｍｇリン酸アスコルビル、酢酸アスコルビル）、トコフェロールおよび誘導体（例えば酢酸ビタミンＥ）のいずれか１以上から選択することができる。
【０１２０】
ミネラルは、限定されるものではないが、モリブデン酸塩（例えば（ＮＨ4）ＯＭｏ7Ｏ24）アルミニウム塩（例えばＡｌＣｌ3）、カルシウム塩（例えばＣａＣｌ2）、コバルト塩（例えばＣｏＣｌ2）、クロム塩（例えばＣｒＫ（ＳＯ4））、銅塩（例えばＣｕＳＯ4）、鉄塩（例えばＦｅ（ＮＯ3）3、ＦｅＳＯ4）、カリウム塩（例えばＫＣｌ）、マグネシウム（例えばＭｇＣｌ2）、マンガン塩（例えばＭｎＣＩ2、ＭｎＳＯ4）、リン酸塩（例えばＮａ2ＨＰＯ4、ＮａＨ2ＰＯ4）、炭酸塩（例えばＮａＨＣＯ3）、ケイ酸塩（例えばＮａ2ＳｉＯ3）、ナトリウム塩（例えばＮａＣｌ）、バナジウム酸塩（例えばＮＨ4ＶＯ3）、ニッケル塩（例えばＮｉＣｌ2）、スズ塩（例えばＳｎＣｌ2）、亜鉛塩（例えば、ＺｎＯ、ＺｎＳＯ4）、セレン塩（例えばセレノメチオニン、エブセレン、Ｈ2ＳｅＯ3、Ｎａ2ＳｅＯ3）、硫酸塩および硝酸塩のいずれか１以上の塩から選択することができる。
【０１２１】
カロテノイドは、限定されるものではないが、カロテン、例えばα−カロテン、β−カロテン、ψ−リコピン、フィトエンなどおよびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１２２】
チオールは、限定されるものではないが、アウロチオグルコース、プロピルチオウラシル、チオレドキシン、リポ酸、グルタチオン、システイン、シスチン、シスタミンならびにそれらのグリコシル、Ｎ−アセチル、メチル、エチル、プロピル、アミル、ブチルおよびラウリル、パルミトイル、オレイル、γ−リノレイル、コレステリルおよびグリセリルエステルおよびそれらの塩、チオジプロピオン酸ジラウリル、チオジプロピオン酸ジステアリル、チオジプロピオン酸およびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１２３】
スルホキシイミン化合物は、限定されるものではないが、ホモシステインスルホキシイミン、ブチオニンスルホン、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタチオニンスルホキシイミンのいずれか１以上から選択することができ、これらは、非常に低用量（例えばｐｍｏｌ〜μｍｏｌ／ｋｇ）で提供されるように組成物中に含めることができる。
【０１２４】
キレート剤は、限定されるものではないが、アポフェリチン、デスフェラール（ｄｅｓｆｅｒｒａｌ）、ラクトフェリン、α−ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、α−ヒドロキシ酸（例えばクエン酸、乳酸、リンゴ酸）、フミン酸、胆汁酸、胆汁抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１２５】
不飽和脂肪酸は、限定されるものではないが、γ−リノレン酸、リノール酸、オレイン酸およびそれらの誘導体のいずれか１以上から選択することができる。
【０１２６】
スチルベンおよびそれらの誘導体としては、例えば、スチルベン酸化物およびトランス−スチルベン酸化物が挙げられる。
【０１２７】
様々なさらなる任意の活性成分を本発明の化粧品組成物中に組み入れることができる。これらのさらなる成分の非限定的例としては、さらなるスキンケア活性剤、たとえば、ファルネソール、ビサボロール、フィタントリオール、尿素、グアニジン（例えばアミノグアニジン）；ヘキサミニジン（ｈｅｘａｍｉｎｉｄｉｎｅ）化合物、それらの塩または誘導体；糖アミン；セルフタンニング剤（例えばデヒドロキシアセトン）；構造化剤（ｓｔｒｕｃｔｕｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）；親水性ゲル化剤；抗挫創薬（レゾルシノールサリチル酸など）；皮膚スムージングおよびヒーリング剤、例えばアラントインなど；ならびにエッセンシャルオイル、芳香剤、皮膚感覚惹起剤（ｓｅｎｓａｔｅ）、乳白剤、芳香族化合物（例えばクローブ油、メントール、カンファー、ユーカリ油、およびオイゲノール）などの美的目的に好適な薬剤が挙げられる。本明細書中で記載する組成物は、当該技術分野で周知の技術を用いて身体に投与後に活性成分の即時放出、持続放出または遅延放出を提供するように処方することができる。
【０１２８】
組成物は、特定の細胞または組織を標的とする送達を可能にする適切な投与形態、例えば、エマルジョンとして、または活性成分が吸収、吸着、取り込みまたは結合され得るリポソーム、ニオソーム、ミクロスフィア、ナノ粒子中などであってよい。これは、製品を不溶性形態に効果的に変えることができる。これらの粒状形態は、安定性（例えば分解）および送達の両問題を克服することができる。
【０１２９】
溶液、懸濁液、ゲルおよびエマルジョンの使用が好ましく、例えば活性成分を水、ガス、水性液体、油、ゲル、エマルジョン、水中油もしくは油中水エマルジョン、分散液またはそれらの混合物中に担持させてもよい。
【０１３０】
乳化剤は、ノニオン性乳化剤、アニオン性乳化剤、カチオン性乳化剤、双性イオン性乳化剤、両性乳化剤またはその混合物から選択することができる。乳化剤は当該技術分野で公知である。例えば、ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ，  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ，  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （１９８６），  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ａｌｌｕｒｅｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎを参照のこと。
【０１３１】
美容上許容される担体がシリコーン中水エマルジョンである場合、乳化剤は、好ましくは、ポリオキシアルキレンコポリマー、ポリグリセリルコポリマーまたはその混合物から選択される。シリコーンポリエーテルとしても知られるポリオキシアルキレンコポリマーは、米国特許第４，２６８，４９９号で詳細に記載されている。市販のポリオキシアルキレンコポリマーの一例としては、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．からのＤＣ５２２５ＣまたはＤＣ２−５１８５Ｃ（シクロペンタシロキサンとのブレンドとして入手可能なＰＥＧ／ＰＰＧ−１８／１８ジメチコーン）；および信越化学工業株式会社からのＫＦ６０１７またはＫＦ６０２８（ＰＥＧ−９ジメチコーン）が挙げられる。市販のポリグリセリル乳化剤の例としては、信越化学工業株式会社からのＫＦ６１００およびＫＦ６１０４が挙げられる。
【０１３２】
組成物は好ましくは、局所（すなわち、皮膚への）投与用である。
【０１３３】
局所組成物としては、ゲル、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、スプレー、ローション、軟膏（ｓａｌｖｅ）、スティック、セッケン、粉末剤、フィルム、エアロゾル、滴剤、フォーム、溶液、エマルジョン、懸濁液、分散液、例えば非イオン性ベシクル分散液、ミルクおよび当該技術分野で通常の任意の他の化粧品形態が挙げられる。
【０１３４】
軟膏、ゲルおよびクリームは、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性基剤で処方することができる。ローションは、水性または油性基剤で処方することができ、一般に、１以上の乳化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤または着色剤も含む。粉末剤は、任意の好適な粉末基剤を利用して形成することができる。滴剤および溶液は、１以上の分散剤、可溶化剤または懸濁剤も含む水性または非水性基剤で処方することができる。エアロゾルスプレーは、好適なプロペラントを使用して加圧パックから都合よく送達される。
【０１３５】
いくつかの実施形態においては、本明細書中で記載する化粧品組成物は、ポリペプチドまたは組成物を塗布、含浸または化学的に結合させた製品、デバイスまたは材料を介して皮膚に局所投与することができる。このために、包帯、膏薬（例えば接着パッチ）、ガーゼ、サージカルテープ、綿棒または他の吸収材料、例えばパフ、フリース、もしくはスポンジ、または支持マトリックスを、本明細書中で記載する組成物でコーティング、含浸または化学的に結合させてもよい。例えば、当該技術分野で、例えば参照により本明細書中に組み込まれる米国特許出願第２００８／００３８３００号、米国特許出願第２００９／００４３２３６号、国際公開第２００５／０６７４９９号および国際公開第２００９／０８５３０２号で充分に記載されている皮膚パッチを用いて多くの組成物を皮膚に適用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書中で記載される組成物を含む材料は、例えば治療される対象が着用することができるデバイスの形態であってよい。例えば、本明細書中で記載するような組成物は、おむつ、手袋、靴下などの全部または一部を形成する材料または支持マトリックスに塗布、含浸または化学的に結合させることができる。
【０１３６】
化粧または医薬組成物は、容器、パック、またはディスペンサー中に投与用の使用説明書とともに含めることができる。
【０１３７】
したがって、本発明のさらなる態様は、本明細書中で記載する組成物でコーティング、含浸または化学的に結合させた製品、材料またはデバイスを提供することを含む。本発明はまた、本明細書中で記載する使用のためのそのような製品、材料またはデバイスにも及ぶ。好ましくは、前記製品は、包帯、膏薬（例えば接着パッチ）、ガーゼ、サージカルテープもしくは綿棒であるか、または前記デバイスはおむつ、手袋もしくは靴下である。
【０１３８】
本明細書中で記載される組成物中の活性成分の濃度は、組成物源（すなわち、上述の方法の出発物質）、投与様式、治療過程、患者の年齢および体重、美容上の適応症、治療される身体または身体部分に左右される可能性があり、選択にしたがって変更または調節され得る。しかしながら一般的には、ステップ（ｉｖ）後に本発明にしたがって調製される組成物をステップ（ｖ）で０．００１、０．００５、０．０１または０．１〜５０％、例えば０．００５〜４０％、例えば０．１〜２５％、例えば０．１または０．５〜５、例えば１〜５％（ｗ／ｗもしくはｖ／ｖ）に希釈して、投与用、特に局所投与用の最終製剤を、例えばステップ（ｉｖ）後に組成物の１％または３％溶液を提供する。
【０１３９】
さらなる構成要素、例えば本明細書中で記載される追加の保湿剤が上記方法によって作製される組成物に添加される場合、さらなる構成要素は、０．０００１、０．０００５、０．００１または０．０１〜５０％、例えば０．０００５〜４０％、例えば０．０１〜２５％、例えば０．１または０．５〜５、例えば１〜５％（投与、特に局所投与用の最終製剤のｗ／ｗ）の量で存在し得る。組成物の有効な単回投与量は、局所適用する場合、治療される哺乳動物に応じて、単回用量として見なして、０．０００１〜１００ｍｇ／ｃｍ2／日（組成物中の全タンパク質）、例えば０．１〜１００ｍｇ／ｃｍ2／日、好ましくは０．０００１〜１０ｍｇ／ｃｍ2／日、例えば０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ2／日の範囲内にあり得る。
【０１４０】
好ましくは、液体溶液、クリームまたは懸濁液は、局所投与のために用いられる。
【０１４１】
組成物を適用または投与することができる動物は、哺乳動物に限定される。好ましくは、哺乳動物は霊長類、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ、ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ）および実験動物である。好ましい哺乳動物としては、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ネコ、イヌ、サル、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジおよびウマが挙げられる。特に好ましくは、組成物はヒトに適用、または投与される。
【０１４２】
以下の実施例は、例示のためだけに提示し、ここで参照される図面は次のとおりである。
［図面の簡単な説明］
【０１４３】
［図１］本発明の孵化液組成物で治療された対象の、治療前（ベースライン）、治療の２週間後および１２週間後の写真を示す。老化した皮膚の様々な兆候における軽減は、２週間後および１２週間後の両方で明らかである。提供された値は、３５人の参加者についての平均の変化を示す。
［図２］本発明の孵化液組成物での治療の２週間後および１２週間後で見られる小じわおよびしわの軽減を強調するための図１における対象のクローズアップ写真を示す。
［図３］本発明の孵化液組成物で治療した対象の、治療前（ベースライン）および治療の１２週間後のクローズアップ写真を示す。丸で囲んだ部分は、治療の１２週間後の明らかな軽減を示す。
［図４］顔の両側での触覚／視覚的臨床等級に基づく老化の様々な兆候において改善されたと見なされた対象のパーセンテージを示す棒グラフを示す。
［図５］水、５％グリコール酸、１ｍＵ／ｍｌのブロメラインまたは１％の孵化液組成物で１２時間治療した、再構築されたヒト表皮の走査電子顕微鏡写真（倍率×４００、×５０００および×１５０００）を示す。
［図６］水、５％グリコール酸、１ｍＵ／ｍｌのブロメラインまたは１％の孵化液組成物で４８時治療した、再構築されたヒト表皮の走査電子顕微鏡写真（倍率×４００、×５０００および×１５０００）を示す。
［図７］治療していないか、または５％グリコール酸、１ｍＵ／ｍｌのブロメラインもしくは１％の孵化液組成物で１２もしくは２４時間治療した、再構築されたヒト表皮の部分の光学顕微鏡写真を示す。矢印（Ａ）は細胞増殖および分化を示し、矢印（Ｂ）は高密度顆粒層および高濃度のラメラ顆粒を示す。
［図８］（Ａ）クーマシーで染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルおよび（Ｂ）サケ孵化液から誘導される化粧品組成物の主な構成要素に対して産生された抗体で染色された（Ａ）におけるゲルのウェスタンブロットを示す。レーン１：サケの孵化液、レーン２：メダカの孵化液、およびレーン３：ゼブラフィッシュの孵化液。
【０１４４】
実施例１：組成物の調製
組成物をサケ孵化液から調製した。孵化液のタンパク質濃度を改善するために、サケの卵を孵化前に最小体積の水に移した。高度に同期した孵化は、高温（室温）によって、または脱酸素化によって誘導することができ（Ｏｐｐｅｎ−Ｂｅｒｎｔｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９０，  Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，  ８６，  ｐｐ．  ４１７−４３０）、これによって粗ポリペプチドおよびポリペプチドの部分の少量の高度に濃縮された調製物を得る。孵化は９５％を超える胚について２時間以内に完了しなければならない。
【０１４５】
７μｍの孔サイズを有する標準的フィルターを用いて孵化液をろ過して、その後のろ過ステップでフィルターを詰まらせる可能性のある物質を除去した。このろ液（処理した孵化液）は、解凍してさらなるタンパク質生成のために用いられるまで、著しく分解することなく数年間凍結することができる。この事実によりは、孵化液組成物の調製用出発物質の製造は非常に簡単になる。
【０１４６】
処理した孵化液を、０．４５μｍの孔サイズを有するフィルターを使用して濾過し、ろ液を集めた。ろ液を次いで８ｋＤａのフィルター排除サイズでダイアフィルトレーションに供して、孵化液の水を緩衝液と交換した。この場合、緩衝液は０．５ｍＭのリン酸塩および１ｍＭのＮａＣｌを含んでいたが、他の緩衝液も同等に好適である。例えば、中性付近または弱アルカリ性（ｐＨ７．５〜８．５）のミリモル濃度のＴｒｉｓ（例えば１０ｍＭ）を含み、５ｍＭのＮａＣｌを含むリン酸塩緩衝生理食塩水または緩衝液が好適である。ダイアフィルトレーションステップからの残余分を集め、前記定義のようなろ液の酵素活性が３４００ｍＵ／リットルに等しくなるように緩衝液を添加することによって希釈した。
【０１４７】
最後に、ろ液を、０．２２μｍの孔サイズを有するフィルターを通して濾過し、最終ろ液を集めた。このろ液は、粗孵化液で見られるポリペプチドおよびポリペプチドの部分の富化調製物である。
【０１４８】
実施例２：老化した皮膚に対する孵化液組成物のインビボ効果
孵化液組成物を実施例１で記載したようにして調製した。組成物を、試験の２つの活性スキンローションである１％および３％スキンローション［ｖ／ｖ］（ローションの単位体積あたりの組成物の合計体積）として調製し、活性構成要素、すなわち孵化液組成物を含まない対照スキンローションと比較した。スキンローションは水中油（Ｏ／Ｗ）エマルジョンであった。油相は全組成物の９％であり、水素化レシチンで乳化した。
【０１４９】
二重盲検プラセボ対照臨床試験を実施して、顔の皮膚が軽度〜中度に日光で損傷された、すなわち老化した女性における局所皮膚治療の有効性および耐容性を評価した。この試験の期間は１２週間であり、ベースライン、第２週、第６週および第１２週で受診させた。視覚的等級、器具類、デジタルＶＩＳＩＡ  ＣＲ写真および対象の自己評価アンケートを用いて有効性を評価した。
【０１５０】
対象の数
１０１人の女性対象が実験に完全参加した（３種の治療、すなわち１つのプラセボおよび孵化液構成要素を異なる濃度で含む２種の組成物についてＮ＞３０）。
【０１５１】
対象集団および同定
対象は年齢４０〜６５歳の健常な女性であり、３桁の数字を割り当て、これは臨床試験番号と組み合わせて使用する場合に試験中の各対象を一意的に特定した。この数字は試験の間中ずっと対象につけて、実験の匿名性を維持した。
【０１５２】
適格基準
試験対象者基準
１．健康および適格アンケートによって判定して、概して良好な健康状態にある年齢４０〜６５歳（両端を含む）の女性。
２．試験期間中、試験要件にしたがうことによって協力し、参加し、そして有害な症状を直ちに報告する。
３．３〜７のスコアの修正グリフィス評価尺度に対応して顔面に臨床的に判定された軽度から中度の日光で損傷を受けている（小じわ、しわ、色素過剰、弛みおよび粗さ）。
４．試験に参加することによって、試験部位の評価を損なう可能性があるかまたは対象の健康上のリスクを増大させる可能性のある、疾患状態または物理的な身体的顔面皮膚状態（例えば、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、脂漏性皮膚炎）がない。
５．試験期間中、長時間日光にさらされることを回避し、タンニングベッドのすべての使用を控える。サングラスをはじめとする保護衣を着用し、午前１０時から午後４時まで日光への暴露を回避するように特別の注意を払わなければならない。
６．試験期間中、全ての通常のブランドのカラー化粧品、クレンザー、トナー（該当する場合）およびメーク落としの使用を継続する。個人は、割り当てられた試験物質以外のアンチエージング製品または皮膚美白製品の使用を控えなくてはならなかった。
７．指定された各外来受診の少なくとも２０分前にすべてのメーキャップを除去する意志があること。試験調査が完了するまで、顔または眼の部分に他の局所製品をつけてはならなかった。対象者がすべてのメーキャップを除去しないで来た場合は、診療所で残りのメーキャップを除去し、処置前に少なくとも２０分間待機しなければならなかった。
８．受胎調節のためにホルモン補充療法またはホルモンを摂取していた人は試験開始前に少なくとも１ヶ月安定なレジメンを実践していなければならず、試験期間中この薬物治療を継続し、変更してはならなかった。試験開始時にＨＲＴまたはホルモンを受けていなかった人は、試験の過程で使用を開始してはならなかった。
９．試験要件にしたがうことによって協力し、参加し、そして有害な症状を直ちに報告しなければならない。
【０１５３】
排除基準
１．いずれかのパーソナルケア製品に対して不寛容またはアレルギーの病歴を有する人。
２．試験登録前３０日以内にいずれかの処方薬またはＯＴＣ美白製品を使用していた人。
３．検査した調査員が参加に不適切とみなした皮膚の状態および／または疾患を有していた人。
４．試験期間中に授乳中、妊娠中、または妊娠を計画していた人。
５．試験登録前３０日以内にいずれかのアンチエージング、抗しわ、局所抗酸化剤を日常的に使用していた人。
６．試験開始６か月以内に酵素による顔の皮膚の治療を受けていた人。
７．Ｒｅｔｉｎ−Ａ（登録商標）、Ｒｅｔｉｎ−Ａ  Ｍｉｃｒｏ（登録商標）、Ｒｅｎｏｖａ（登録商標）、Ａｖｉｔａ（登録商標）、Ｔａｚｏｒａｃ（登録商標）、Ａｖａｇｅ（登録商標）もしくはＤｉｆｆｅｒｉｎ（登録商標）または他の局所レチノイドを試験開始の３ヶ月以内に使用するか、または過去６か月以内にＡｃｃｕｔａｎｅもしくは経口レチノイドを摂取していた。
８．アルファ−、ベータ−またはポリ−ヒドロキシ酸（サリチル酸およびＬａｃｈｙｄｒｉｎを含む）、レチノールもしくはレチノールの誘導体を含む製品または他の「アンチエージング」製品を試験開始の３０日以内に顔に日常的に使用。
９．治療の３か月以内または試験中に顔の皮膚切除術（ｄｅｒｍａｂｒａｔｉｏｎ）またはケミカルピーリング処置を受けた人。
１０．治療６か月以内または試験中に、治療部分で光ＲＦ、または他のデバイスでの治療を受けた人。
１１．治療の９か月以内または試験中に治療部分において、ボトックス、コラーゲン、脂肪注入または物質を注入もしくは移植する他の増強法を受けた人。
１２．この試験の開始前１２か月以内にリサーフェシング処置、フェイスリフトまたは眼もしくは瞼の手術を受けた人。
１３．顔に既存および／または潜伏皮膚疾患（例えば、白斑、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、湿疹、脂漏性皮膚炎、重度の表皮剥離など）または調査員の意見によると試験のアウトカムを妨げる可能性がある医学的状態／疾患を有していた人。
１４．免疫抑制／免疫不全障害（（ＨＩＶ感染すなわちＡＩＤＳを含む）の病歴があるかまたは免疫抑制薬を現在使用している人。
１５．他の臨床使用試験に参加していた人（パッチ試験は許容される）。
１６．糖尿病、高血圧、甲状腺機能亢進症または甲状腺機能低下症などの非制御疾患にかかっていた人。複合的な健康状態を有していた人は、その状態が食事、薬物などによって管理されていたとしても、参加から除外した。
１７．試験参加前２８以内にいずれかの臨床試験に参加した人。
【０１５４】
個人は、試験前の面接および検査の知見に基づいて調査員または指定の者の判断で試験参加を認められた。
【０１５５】
試験設計
二重盲検プラセボ対照臨床試験を、軽度から中度の光損傷、すなわち老化した顔の皮膚を有する女性における局所皮膚治療の有効性を評価するために実施した。この試験期間は１２週間であり、ベースライン、第２週、第６週および第１２週で来院が指定されていた。有効性は、視覚的等級、器具類、デジタルＶＩＳＩＡ  ＣＲ写真および対象の自己評価アンケートを用いて評価した。
【０１５６】
１群あたりＮ＞３０の３つの群が試験を完了した。対象は活性な皮膚治療薬、すなわち、上述の孵化液組成物、または対照（水）を受け取り、顔に１２週間塗布した。対象をあらかじめ決められた無作為化にしたがって無作為に３群に分けた。
【０１５７】
【表２】
2016503774.tif 000005
【０１５８】
有効性および耐容性評価
熟練した臨床採点者が以下に示すパラメータについて顔の右側および左側を評価した。０＝なし、１〜３＝軽度、４〜６＝中度および７〜９＝重度の修正グリフィススケールを使用した。皮膚状態をより良好に記載するために必要な場合は小数値を使用した。
・小じわ
・しわ
・色素過剰
・弛み
・くすみ（Ｄｕｌｌ／Ｍａｔｔｅ）（透明性）
・粗い触感（Ｔａｃｔｉｌｅ  Ｒｏｕｇｈｎｅｓｓ）
【０１５９】
熟練した臨床採点者が以下に示すパラメータについて顔の右側および左側を評価した。  ０＝なし、２＝軽度、３＝中度、および４＝重度の４段階評価を使用した。皮膚状態をよりよく説明するために必要な場合は小数値を使用した。
・紅斑
・乾燥肌／鱗屑
・灼熱感／刺痛感
・
2016503774.tif 000006
・絞扼感／乾燥感
【０１６０】
デジタルＶＩＳＩＡ  ＣＲ写真撮影
ＶＩＳＩＡ−ＣＲ画像を顔の右側および左側で撮影した。対象は、毛髪を後ろでまとめ、宝石類は外し、目を閉じて、対象がフレームの中央になり、自然な表情になるように撮影した。
【０１６１】
経表皮水分損失（ＴＥＷＬ）
計器測定の前に、対象を診療所の周囲条件に少なくとも２０分間平衡化させた。周囲条件を試験のための受診の間、１時間ごとに記録した。この時間中に、対象は評価を受け、アンケートを完成し、および／またはＶＩＳＩＡ  ＣＲ画像撮影を実施した。
【０１６２】
テヴァメーター（Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ）を使用して、すべての受診時に経表皮水分損失（ＴＥＷＬ）測定をおこなった。測定は、右頬および左頬上で目尻から下ろした線および鼻の下を水平に横切る線の交点でおこなった。
【０１６３】
テヴァメーターは、開放チャンバーシステムを利用してＴＥＷＬを測定する。皮膚表面上に置かれた携帯型プローブは、表面上の２点で相対湿度をサンプリングし、水分損失速度を測定された湿度勾配から算出することが可能になった。
【０１６４】
キュートメーターＭＰＡ５８０
すべての対象はすべての受診時にキュートメーター測定をおこなった。キュートメーターを使用して、皮膚の粘弾性特性（すなわち、伸展性および弾力性）を評価した。器具により皮膚の小さな部分に真空を適用し、光学技術によって皮膚の弾性応答（皮膚が開口部を出入りする動き）を測定した。
【０１６５】
この試験のために、２ｍｍのプローブを使用し、３００ｍｂａｒの真空を適用し、吸引・解放を２サイクル実施した。サイクル時間は５秒オン、１０秒オフであった。
【０１６６】
測定は、右頬および左頬上で目尻から下ろした線と鼻の下を水平に横切る線との交点、またはそれに代わる顎付近の場所でおこなった。
【０１６７】
皮膚評価および自己評価アンケート
対象は、自身が顔の皮膚の外観ならびに顔の右側および左側の状態をどのように感じるかを説明する質問を含む皮膚の自己評価アンケートを完成した。
【０１６８】
結果
小じわ
第２週で、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療された対象は、プラセボ（４．５８％）と比較して、小じわの軽減（例えば５．５９％（１％溶液）および５．６５％（３％溶液）のパーセンテージ変化）を示した。小じわの軽減は、第６週（例えば１４．３４％（１％溶液）、１４．８６％（３％溶液）および８．９８％（プラセボ））ならびに第１２週（例えば２３．４３％（１％溶液）、２５．９９％（３％溶液）および１４．６８％（プラセボ））で持続した。図１および２は、小じわが２８％軽減した対象を示す。
【０１６９】
しわ
第２週で、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は、プラセボ（０．７０％）と比較して、しわの軽減（例えば２．１５％（１％溶液）および１．７５％（３％溶液）のパーセンテージ変化）を示した。しわの軽減は、第６週（例えば６．１３％（１％溶液）、７．３２％（３％溶液）および３．７０％（プラセボ））ならびに第１２週（例えば１４．７２％（１％溶液）、１５．１５％（３％溶液）および９．５７％（プラセボ））で持続した。図１は、しわが１２．５％軽減した対象を示す。図３はしわが２６．３２％軽減した対象を示す。
【０１７０】
色素過剰
第２週で、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は、プラセボ（０．４０％）と比較して、色素過剰の軽減（例えば２．１１％（１％溶液）および２．６８％（３％溶液）のパーセンテージ変化）を示した。色素過剰の軽減は第６週（例えば５．６１％（１％溶液）、７．９１％（３％溶液）および３．１６％（プラセボ））ならびに第１２週（例えば１０．５３％（１％溶液）、１５．３５％（３％溶液）および５．７３％（プラセボ））で持続した。図１は、１２週間後の年齢によるシミの色素沈着が１５％軽減した対象を示す。
【０１７１】
弛み
第２週に、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は、プラセボ（０．８７％）と比較して弛みの軽減（例えば２．６４％（１％溶液）および１．６２％（３％溶液）のパーセンテージ変化）を示した。弛みの軽減は、第６週（例えば６．３３％（１％溶液）および６．６１％（３％溶液）、２．５１％（プラセボ））ならびに第１２週（例えば１０．５５％（１％溶液）および１１．３３％（３％溶液）、５．１８％（プラセボ））で継続した。図１は、１２週間後に弛み（たるみ）が７．６９％軽減した対象を示す。
【０１７２】
くすみ（透明性）
第２週で、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は、プラセボ（１０．６７％）と比較して、皮膚透明性において改善（例えば１２．９５％（１％溶液）および１６．００％（３％溶液）のパーセンテージ変化）を示した。改善は、第６週（例えば２９．２６％（１％溶液）、２８．５０％（３％溶液）および１９．０７％（プラセボ））ならびに第１２週（例えば３７．１７％（１％溶液）、３９．１８％（３％溶液）および２６．７２％（プラセボ））で継続した。図１は３３．３３％のくすみの軽減を示した対象を示す。
【０１７３】
触感の粗さ
第２週で、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象はプラセボ（１３．３８％）と比較して、皮膚の触感の粗さの軽減（例えば１６．５１％（１％溶液）および２０．２４％（３％溶液）のパーセンテージ変化）を示した。改善は、第６週（例えば２４．７７％（１％溶液）、２６．６５％（３％溶液）および１６．７９％（プラセボ））で継続したが、第１２週でさらなる軽減はなかった（例えば２６．６１％（１％溶液）、２９．１９％（３％溶液）、および１５．７９％（プラセボ））。図１は、１２．５％の触感の粗さの軽減を示した対象を示す。
【０１７４】
乾燥肌／鱗屑
第２週で、活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は、プラセボ（６４．７１％）と比較して皮膚の乾燥肌／鱗屑（例えば７２．０９％（１％溶液）および１００．００％（３％溶液）のパーセンテージ変化）の軽減を示した。しかしながら、第６週（例えば８６．０５％（１％溶液）、８４．６２％（３％溶液）および１００．００％（プラセボ））、ならびに第１２週で、プラセボと比較した場合、さらなる軽減はなかった（例えば９０．７０％（１％溶液）、１００．００％（３％溶液）および８９．４７％（プラセボ））。
【０１７５】
ＴＥＷＬ
活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は第２週でＴＥＷＬの軽減を示したが、これはプラセボ（１７．２６％）と比較してプラセボと明確には異ならなかった（例えば１５．３５％（１％溶液）および１４．５３％（３％溶液）のパーセンテージ変化）。しかしながら、第６週（例えば２９．４６％（１％溶液）、２６．６６％（３％溶液）および２２．９６％（プラセボ））、および第１２週で、プラセボよりも大きなさらなる軽減はなかった（例えば３７．４６％（１％溶液）、４０．０４％（３％溶液）、および３４．２１％（プラセボ））。
【０１７６】
伸展性
活性組成物の１つを含むスキンローションで治療した対象は第２週で皮膚の伸展性の改善を示したが、これはプラセボ（１０．８２％）と比較してプラセボとほとんど差はなかった（例えば１６．１８％（１％溶液）および１７．２１％（３％溶液）のパーセンテージ変化）。第６週で、３種の治療間で明確な差はなかった（例えば１８．０４％（１％溶液）、１７．１８％（３％溶液）および１９．９０％（プラセボ））が、第１２週で、活性構成要素を含む組成物での皮膚治療についてさらなる改善があり、これはプラセボよりも大きかった（例えば３１．８４％（１％溶液）、３３．５７％（３％溶液）、および１６．４８％（プラセボ））。
【０１７７】
試験開始時（ベースライン）および治療の１２週間後で実施した顔の両側での触覚／視覚的臨床等級の比較により、すべての対象が、本発明の孵化液組成物での治療後の皮膚のくすみおよび粗さで改善を示し、対象の大部分が小じわ（対象の９７％）、しわ（対象の９１％）、色素過剰（対象の８７％）およびたるみ（対象の８０％）で改善を示したことがわかる（図４）。
【０１７８】
アンケートにより、６週間の使用から、プラセボと本発明の孵化液組成物を含む化粧品組成物との間に全体的な外観、全体的な感触、なめらかさ、柔軟性、透明性および弾力性についての意見の平均スコアについて統計的に有意な差が見られたことが明らかになる。
【０１７９】
したがって、上記結果から、孵化液抽出物組成物は、プラセボと比較して老化した皮膚の各態様に対する影響を示したことは明らかである。
【０１８０】
実施例３：公知美容的皮膚治療に対して、再構築されたヒト表皮に対する孵化液組成物の効果のインビトロ試験の比較
インビトロで再構築されたヒトの表皮は、化学的に定義された媒体中、気液界面で不活性ポリカーボネートフィルター上で培養された正常なヒトケラチノサイトから構成される。このインビトロモデルは、インビボのヒト表皮と組織学的に類似している。
【０１８１】
再構築されたヒト表皮（ＳｋｉｎＥｔｈｉｃ）を１２時間、２４時間または４８時間、２００μｌの以下の溶液のうちの１つに角質層側で暴露した：
１％の孵化液組成物；
５％のグリコール酸（ＡＨＡ）；
１ｍＵ／ｍｌのブロメライン（果物酵素）；または
ｄＨ2Ｏ（対照）。
【０１８２】
暴露後、培養物を４℃にてＰＢＳ中４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒド中で固定し、そして走査電子または光学顕微鏡術により分析した。
【０１８３】
１２時間後の、治療され再構成されたヒト表皮の走査電子顕微鏡写真（図５）の評価は、グリコール酸の５％溶液での処置の結果、損傷を受けた角質層および皮膚腐食が得られることを示す。ブロメラインでの処置の結果、細胞エンベロープの消化により落屑が生じる。対照的に、本発明の孵化液組成物での処置の結果、細胞結合部位のみが分解したので、無傷角質細胞の脱落により落屑が生じる。したがって、孵化液溶液は皮膚の穏やかなミクロ角質除去を提供する。
【０１８４】
４８時間暴露した後、再構成されたヒト表皮の走査電子顕微鏡写真（図６）は、グリコール酸が皮膚をひどく損傷することを示し、この場合、細胞エンベロープは分解し、細胞骨格が明らかに見える。ブロメラインでの処置の結果、かなりなめらかな皮膚表面が得られるが、依然として粗い斑点の兆候がある。しかしながら、本発明の孵化液組成物での処置の結果、対照（すなわち、未治療）皮膚よりも良好な、きわめてなめらかな皮膚表面が得られる。したがって、孵化液組成物は皮膚をなめらかにする効果を提供するとみなすことができる。
【０１８５】
再構築されたヒト表皮片の光学顕微鏡術（図７）は、グリコール酸に２４時間暴露されると、基底層からの表皮幹細胞を含む生きた細胞が破壊されることを示す。グリコール酸での処置後に残っているのは、わずかな濃縮した核（クロマチンが不可逆的に濃縮されている）および無核細胞（ａｎｕｃｌｅａｔｅｄ  ｃｅｌｌ）だけである。ブロメラインに２４時間暴露されると、基底層および有棘層に対する変化は最小限である。対照的に、本発明の孵化液組成物に２４時間暴露後、再構築された皮膚は細胞増殖および分化の兆候を示す（図７の矢印Ａを参照のこと）。孵化液組成物に４８時間暴露後、皮膚はより高密度の顆粒層およびより高濃度のラメラ顆粒の兆候を示す（図７の矢印Ｂを参照のこと）。したがって、本発明の孵化液組成物は、皮膚若返り効果を有し、皮膚バリヤ機能の改善をもたらす。
【０１８６】
実施例４：非サケ科の孵化液の分析
非サケ科の魚種由来の孵化液を分析して、サケ科の孵化液から誘導される化粧品組成物中で見いだされるポリペプチドと等価なポリペプチドを含むかどうかを判定した。
【０１８７】
実施例１〜３で記載する孵化液組成物の主なポリペプチド構成要素に対する抗体を産生した。抗体を使用して、類似のポリペプチドがメダカ（Ｏｒｙｚｉａｓ  ｌａｔｉｐｅｓ）およびゼブラフィッシュ（Ｄａｎｉｏ  ｒｅｒｉｏ）由来の孵化液中に存在するかどうかを判定した。
【０１８８】
サケの孵化液を実施例１で記載した方法にしたがって入手した。
【０１８９】
メダカおよびゼブラフィッシュ由来の孵化液をベルゲン大学生物学部のゼブラフィッシュ実験室で入手した。この点に関して、ゼブラフィッシュの孵化液のサンプル（３０ｍＬ）は、その中で約１００個の胚が孵化した水から得られた。メダカの孵化液のサンプル（１４ｍＬ）は、その中で約１４個の胚が孵化した水から得られた。水槽からの水をブランク対照として使用した。
【０１９０】
サンプルを分析前に４８時間凍結乾燥することによって濃縮した（約１０倍）。濃縮したサンプルのタンパク質濃度をＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒでＡ２８０ｎｍにて測定した。サンプルの吸光度は次のとおりであった：サケＡ２８０＝５．６；メダカＡ２８０＝１．６；およびゼブラフィッシュＡ２８０＝０．１。
【０１９１】
濃縮ポリペプチドサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。結果としてのゲルは、サケの孵化液組成物の主な構成要素に対する前記抗体を使用して、クーマシーブルーで染色するか、またはウェスタンブロッティングによって分析した。
【０１９２】
図８Ａ中のクーマシーで染色したゲルは、メダカサンプルについて複数の明確なバンド（レーン２）を示し、これはサケサンプル中で観察されるバンド（レーン１）に匹敵した。ブランクサンプル（不掲載）またはゼブラフィッシュサンプル（レーン３）では眼に見えるバンドは観察されなかった。しかしながら、ゼブラフィッシュサンプル中に眼に見えるバンドがないことは、ゼブラフィッシュサンプル中のタンパク質の濃度が比較的低いことによって説明することができる。同様に、サケサンプル中にさらなるバンドが存在することは、サケサンプル中のタンパク質濃度が高いことによって説明することができ、このことは、それほど多くないタンパク質も眼に見えることを意味する。
【０１９３】
図８Ｂは、抗体が、サケサンプル中の１つのバンドと特異的に反応し、メダカサンプルおよびゼブラフィッシュサンプル両方のタンパク質と交差反応することを示すウェスタンブロットを示す。ここでも、バンドの強度の差は、これらのサンプル中のタンパク質の濃度が異なることによって説明することができる。
【０１９４】
サケサンプル中で特定されるポリペプチドは約２５ｋＤａであった（レーン１）。メダカサンプル中の交差反応性ポリペプチドはゼブラフィッシュサンプル（レーン３）中では約３５ｋＤａ（レーン２）および約２７ｋＤａであった。ブランクサンプルでは抗体によってポリペプチドが検出されなかった（不掲載）。理論によって拘束されることを望まないが、サケ、メダカおよびゼブラフィッシュ由来のポリペプチドのサイズの差は種間変異に起因する可能性があり、例えば、糖化などの様々な翻訳後修飾のために、例えば機能的に等価なポリペプチドとって異なる種でサイズの変動は滅多におこらない。
【０１９５】
これらの結果は、各種からの孵化液が類似した一連のポリペプチドを含み、非サケ科魚種が実施例１〜３で記載した化粧品組成物中のポリペプチドと構造的に類似するポリペプチドを含むことを意味する。非サケ科の孵化液中のポリペプチドは、サケの孵化液から誘導される化粧品組成物中のポリペプチドと同じ機能的特性を有することが期待できた。したがって、非サケ科魚由来の孵化液は、本明細書中で記載される方法における好適な出発物質であり、本発明による有効な化粧品組成物をもたらすことが予想される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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