(57)【要約】  本発明は、薬学的活性剤として少なくとも１つの記載された化合物を含む医薬組成物と同様に、一般式（Ｉ）のスチリルキナゾリン誘導体及びその薬学的に許容可能な溶媒和物、水和物、塩、位置異性体及び多形体に関する。化合物は、造血の機能不全及び癌又は特に骨髄性白血病の場合、内部タンデム重複（ＩＴＤ）を含むＦｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に関連する腫瘍性又は過形成性の他の形態の予防及び／又は治療のための新規薬剤候補として確認された。化合物はまた、細菌性感染症の予防及び／又は治療に使用することができる（殺菌又は静菌活性を有する）抗生物質の新規薬剤候補として確認された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物並びにその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、位置異性体及び多形体：
【化Ｉ】
2016529250.tif 000060
式中
Ｒ１はＮ（Ｒ５）（Ｒ６）であり、ここで
Ｒ５及びＲ６は独立して水素、アルキル又はＡＬＫ−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）の群から選択され、
ＡＬＫはアルカンジイル基であり、及び
Ｒ７及びＲ８は独立して水素、アルキル、アルキルカルボニル及びアルコキシカルボニルの群から選択され；又は
Ｒ７及びＲ８は、隣接するＮと一緒に任意にアルキルで置換される飽和複素環を形成し；
又はＲ５及びＲ６は、隣接するＮと一緒に複素環アルキルで任意に置換された複素環又はそれに接合するシクロケタル基を形成することができ；
Ｒ２は水素又はハロゲンであり；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素、ハロゲン、アルコキシ又はニトロ基の群から選択され；
又はＲ３及びＲ４はそれらが結合する炭素原子と一緒にキナゾリン環に縮合したアリールを形成することができ；
Ｑはハロゲン、アルキル、ジアルキルアミン、アルコキシ、アルキルスルファニル、アルキルスルフィニル又はアルキルスルホニルで任意に一置換又は多置換されたアリール基又はヘテロアリール基である。
【請求項２】
請求項１に係る化合物であって、
Ｒ７及びＲ８は、独立して水素、メチル、エチル、メチルカルボニル及びメトキシカルボニルから選択され、又はＲ７及びＲ８はＮと一緒にモルホリン−４−イル又は４−メチルピペラジン−１−イル環を形成する、
上記化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に係る化合物であって、Ｒ５及びＲ６は独立して水素、プロピル、エチル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）、１−プロパ−３−イル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）、ペンタ−１，４−ジイル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、又は
Ｒ５及びＲ６は、Ｎと一緒に１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカ−８−イル又は（ピロリジン−１−イルメチル）ピロリジン−１−イルを形成する、
上記化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに係る化合物であって、Ｒ２は水素又は臭素である、上記化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに係る化合物であって、Ｒ３は水素、塩素、ニトロ又はメトキシである、上記化合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに係る化合物であって、Ｒ４は水素、フッ素、塩素、臭素又はメトキシであって；又は
Ｒ３とＲ４はそれらが結合する炭素原子と一緒にキナゾリン環に縮合したアリールを形成することができる、上記化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに係る化合物であって、Ｑは、フッ素、塩素、メトキシ、ジメチルアミノ、i−プロピル、メチルチオ、メチルスルホニル基で一置換又は多置換されたフェニル又はチエニルである、上記化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに係る化合物であって、
Ｒ１は１−ジメチルアミノ−プロパン−３−イルアミノ、１−ジエチルアミノ−プロパン−３−イルアミノ、３−（モルホリン−４−イル）プロピル−アミノ、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピルアミノ、１−ジメチルアミノ−２−エチルアミノ、１−ジメチルアミノ−２−エチルアミノ、１−ジエチルアミノ−ペンタン−４−イル−アミノ、１−（ターシャリーブチルカルバメート）−プロパン−３−イル−アミノ、１−アミノ−プロパン−３−イル−アミノ、１−アセチルアミノ−プロパン−３−イル−アミノ、１−（ピペリジン−４−オン−エチレンケタル）、２−（ピロリジン−１−イルメチル）ピロリジン−１−イル、プロパン−３−イル−アミノであり；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は請求項４〜６で定義される通りであり；
Ｑは４−メトキシ−フェニル、３−フルオロ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、４−（ジメチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジフルオロフェニル、４−（メチルチオ）フェニル、２−チエニル、４−イソプロピルフェニル又は４−（メチルスルホニル）フェニルである、
上記化合物。
【請求項９】
１又は２以上の通常の薬学的補助材料と一緒に請求項１〜８のいずれかに係る一般式（Ｉ）の１又は２以上の化合物を活性成分として含む医薬組成物。
【請求項１０】
造血の機能不全に関連する疾患及び／又は癌性、腫瘍性又は過形成性疾患の予防及び／又は治療における使用のための請求項１〜８のいずれかに係る化合物。
【請求項１１】
請求項１０に係る使用のための化合物あって、造血の機能不全及び癌又は腫瘍性又は過形成性の他の形態は、内部タンデム重複（ＩＴＤ）を含むＦｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に関連する、上記化合物。
【請求項１２】
細菌性感染症の予防及び／又は治療における使用のための請求項１〜８のいずれかに係る化合物。
【請求項１３】
請求項１２に係る使用のための化合物であって、前記細菌性感染症は、細菌起源の髄膜炎、細菌起源の胃腸炎、大腸菌及びスタフィロッコカス  サプロフィティクス（Staphylococcus saprophyticus）が起こす尿路感染症（ＵＴＩ）、大腸菌、赤痢菌及びカンピロバクターに関連する溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、感染性腹膜炎、感染性乳腺炎、菌血症（細菌が引き起こす敗血症）、大腸菌、クレブシエラ、シュードモナス菌、ビー・フラギリス及び腸球菌が起こす胆嚢炎、及び通常のタイプの肺炎から選択される、上記化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の目的に従って、本明細書で具体的かつ広範に記載されるように、本発明は、少なくとも１つの薬学的活性剤として記載された化合物を含む医薬組成物と同様に、薬学的に許容可能な担体、賦形剤及び／又は希釈剤と一緒に、一般式（Ｉ）のスチリルキナゾリン誘導体、その薬学的に許容可能な溶媒和物、水和物、塩、位置異性体、及び多形体及びそれらの治療又は予防目的で使用、特に癌又は腫瘍性又は過形成性の他の形態を含む。
【０００２】
さらに、本発明は記載された化合物の調製方法を提供する。本発明で開示されたスチリルキナゾリン誘導体は、造血の機能不全及び特に骨髄性白血病の場合、内部タンデム重複（ＩＴＤ）を含むＦｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に関連（依存）する癌又は腫瘍性又は過形成性の他の形態の予防及び／又は治療のための新薬の候補として確認された。したがって、一般式（Ｉ）のスチリルキナゾリン誘導体及びその溶媒和物、水和物、塩、位置異性体及び多形体は、内部タンデム重複（ＩＴＤ）を含むＦｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）の阻害効果を有する。
【０００３】
検討されたスチリルキナゾリン化合物はまた、細菌感染症、例えば、細菌起源の髄膜炎、細菌起源の胃腸炎、大腸菌及びスタフィロコッカス・サプロフィティクス（Staphylococcus saprophyticus）が起こす尿路感染症（ＵＴＩ）、大腸菌、赤痢菌及びカンピロバクターに関連する溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、感染性腹膜炎、感染性乳腺炎、菌血症（細菌が引き起こす敗血症）、大腸菌、クレブシエラ、シュードモナス菌、ビー・フラギリス及び腸球菌が起こす胆嚢炎、及び通常のタイプの肺炎の予防又は治療に使用できる（殺菌又は静菌活性を有する）抗生物質として新薬剤候補として確認された。
【背景技術】
【０００４】
Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、また分化抗原１３５（ＣＤ−１３５）、胎児肝臓キナーゼ−２（Ｆｌｋ２）及び肝細胞チロシンキナーゼ１（ＳＴＫ１）のクラスタとして知られおり、ヒト遺伝子ＦＬＴ３（ＨＦＮＣ  ＩＤ：３７６５）によってコードされたヒトタンパク質（ＵＮＩＰＲＯＴ  ＩＤ：Ｐ３６８８８）である。このタンパク質は、ＦＬＴ３の発現に関連する造血前駆幹細胞であることを停止した後に、造血前駆細胞の表面上に特に現われた。
ＦＬＴ３は、それらを機能的な血液細胞に開発するために、特にリンパ球、別名Ｔ細胞及びＢ細胞を適切に開発するためそれらに、成熟プロセスを調節する。造血前駆細胞は多能性細胞であり、そしてそれらの分化プロセスの調節不全は、多くの場合、病的状態をもたらす。ＦＬＴ３は、この細胞の成熟プロセスの１つのもっとも重要なレギュレーターであり、したがってこのタンパク質の突然変異又は過剰発現は、急性骨髄性白血病を含む血液細胞性悪性腫瘍のいくつかのタイプに関連する。癌遺伝子としてのＦＬＴ３の役割について多くの情報が収集されればされるほど、ＦＬＴ３の内部タンデム重複（ＩＴＤ）の突然変異型は、疾患特異的「ドライバ」突然変異として現在、考えられる。ＦＬＴ（ＩＴＤ）は、疾患特異的な方法で、急性骨髄性白血病の開始と進行に向かって分化及び増殖プロセスを動かす重要なターニングポイント様因子である突然変異である。突然変異したタンパク質のユニークな発現パターンは、実際に標的にされる発現する期間及びタンパク質特異的シグナル伝達療法で、高い見込みのある標的となる。
【０００５】
ＦＬＴ３は、受容体チロシンキナーゼクラスＩＩＩのメンバーである。このクラスのドメイン構造は、他のクラスのものとは有意に異なり、そのクラスはわずかな数のメンバーのみを含む。ＦＬＴ３のキナーゼドメインは、主流標的化チロシンキナーゼに比べて相対的に異なる。この事実は、ＦＬＴ３（ＩＴＤ）の強力な阻害剤は、受容体チロシンキナーゼの間でむしろ選択的プロファイル有していることを示す。その有効性と選択性は、インビトロ生化学アッセイ、細胞生存率アッセイ及びワイドキナーゼ選択性パネルを使用して証明されている。
【０００６】
上述したように、本願発明に係るスチリルキナゾリン化合物はまた、細菌感染症、例えば、細菌起源の髄膜炎、細菌起源の胃腸炎、大腸菌及びスタフィロコッカス・サプロフィティクス（Staphylococcus saprophyticus）が起こす尿路感染症（ＵＴＩ）、大腸菌、赤痢菌及びカンピロバクターに関連する溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、感染性腹膜炎、感染性乳腺炎、菌血症（細菌が引き起こす敗血症）、大腸菌、クレブシエラ、シュードモナス菌、ビー・フラギリス及び腸球菌が起こす胆嚢炎、及び通常のタイプの肺炎の予防又は治療に使用できる（殺菌又は静菌活性を有する）抗生物質として適用することができる。
【０００７】
病原性細菌は、ヒトの死や病気の主な原因であり、−上記の病原性状態に基づく炎症を除く−破傷風、腸チフス、ジフテリア、梅毒、コレラ、食中毒、ハンセン病及び結核のような、感染症を引き起こす。細菌感染症は、それらが細菌を殺す殺菌性、又はそれらが単にバクテリアの増殖を防止する場合に静菌性として分類される抗生物質（抗菌剤）で治療することができる。
【０００８】
大腸菌（テオドールエッシェリヒにちなんで名づけられた大腸菌）は、通常吸熱生物の下部腸管に見出されるエシェリキア属のグラム陰性通性嫌気性桿菌である。
【０００９】
ほとんどの大腸菌株は無害であるが、特定の血清型はヒト又は家畜に対して病原性である。大腸菌の毒性株は、髄膜炎、胃腸炎及びＵＴＩ及び起こす可能性が少ないＨＵＳ、腹膜炎、乳腺炎及びグラム陰性肺炎などの様々な疾患の主な原因である。大腸菌の特定の株はまた、例えば、下痢及び他の胃腸症状の原因物質である毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸内病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、細胞侵入性大腸菌（ＥＩＥＣ）、腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡＥＣ）、及び尿路お炎症及び感染症を引き起こす尿路病原性大腸菌（ＵＰＥＣ）など、潜在的に致死性の毒素を生産する。複数のＰＫＳ、コリバクチンと命名された遺伝毒性物質を生産する多酵素性部分をコードするための機能であるポリケチドシンターゼ（ＰＫＳ）ゲノムアイランドを含むいくつかの大腸菌株もある。この物質は、ＤＮＡの損傷による腫瘍形成を促進することができる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
１．本願発明は、一般式（Ｉ）の化合物並びにその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、位置異性体及び多形体に関し：
【化Ｉ】
2016529250.tif 000002
式中
Ｒ１はＮ（Ｒ５）（Ｒ６）であり、ここで
Ｒ５及びＲ６は独立して水素、アルキル又はＡＬＫ−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）の群から選択され、
ＡＬＫはアルカンジイル基であり、及び
Ｒ７及びＲ８は独立して水素、アルキル、アルキルカルボニル及びアルコキシカルボニルの群から選択され；又は
Ｒ７及びＲ８は、隣接するＮと一緒に任意にアルキルで置換される飽和複素環を形成し；
又はＲ５及びＲ６は、隣接するＮと一緒に複素環アルキルで任意に置換された複素環又はそれに接合するシクロケタル基を形成することができ；
Ｒ２は水素又はハロゲンであり；
Ｒ３及びＲ４は独立して水素、ハロゲン、アルコキシ又はニトロ基の群から選択され；
又はＲ３及びＲ４はそれらが結合する炭素原子と一緒にキナゾリン環に縮合したアリールを形成することができ；
Ｑはハロゲン、アルキル、ジアルキルアミン、アルコキシ、アルキルスルファニル、アルキルスルフィニル又はアルキルスルホニルで任意に一置換又は多置換されたアリール基又はヘテロアリール基である。
【００１１】
２．ポイント１に係る化合物であって、
Ｒ７及びＲ８は、独立して水素、メチル、エチル、メチルカルボニル及びメトキシカルボニルから選択され、又はＲ７及びＲ８はＮと一緒にモルホリン−４−イル又は４−メチルピペラジン−１−イル環を形成する、
化合物。
【００１２】
３．ポイント１又は２に係る化合物であって、Ｒ５及びＲ６は独立して水素、プロピル、エチル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）、１−プロパ−３−イル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）、ペンタ−１，４−ジイル−Ｎ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、又は
Ｒ５及びＲ６は、Ｎと一緒に１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカ−８−イル又は（ピロリジン−１−イルメチル）ピロリジン−１−イルを形成する、
化合物。
【００１３】
４．ポイント１〜３のいずれかに係る化合物であって、Ｒ２は水素又は臭素である、化合物。
【００１４】
５．ポイント１〜４のいずれかに係る化合物であって、Ｒ３は水素、塩素、ニトロ又はメトキシである、化合物。
【００１５】
６．ポイント１〜５のいずれかに係る化合物であって、Ｒ４は水素、フッ素、塩素、臭素又はメトキシであって；又は
Ｒ３とＲ４はそれらが結合する炭素原子と一緒にキナゾリン環に縮合したアリールを形成することができる、
化合物。
【００１６】
７．ポイント１〜６のいずれかに係る化合物であって、Ｑは、フッ素、塩素、メトキシ、ジメチルアミノ、i−プロピル、メチルチオ、メチルスルホニル基で置換された一置換又は多置換されたフェニル又はチエニルである、化合物。
【００１７】
８．ポイント１〜７のいずれかに係る化合物であって、
Ｒ１は１−ジメチルアミノ−プロパン−３−イルアミノ、１−ジエチルアミノ−プロパン−３−イルアミノ、３−（モルホリン−４−イル）プロピル−アミノ、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピルアミノ、１−ジメチルアミノ−２−エチルアミノ、１−ジメチルアミノ−２−エチルアミノ、１−ジエチルアミノ−ペンタン−４−イル−アミノ、１−（ターシャリーブチルカルバメート）−プロパン−３−イル−アミノ、１−アミノ−プロパン−３−イル−アミノ、１−アセチルアミノ−プロパン−３−イル−アミノ、１−（ピペリジン−４−オン−エチレンケタル）、２−（ピロリジン−１−イルメチル）ピロリジン−１−イル、プロパン−３−イル−アミノであり；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は４．〜６．で定義される通りであり；
Ｑは４−メトキシ−フェニル、３−フルオロ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、４−（ジメチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジフルオロフェニル、４−（メチルチオ）フェニル、２−チエニル、４−イソプロピルフェニル又は４−（メチルスルホニル）フェニルである、化合物。
【００１８】
９．１又は２以上の通常の薬学的補助材料と一緒にポイント１〜８のいずれかに係る一般式（Ｉ）の１又は２以上の化合物を活性成分として含む医薬組成物。
【００１９】
１０．造血の機能不全に関連する疾患及び／又は癌性、腫瘍性又は過形成性疾患の予防及び／又は治療における使用のためのポイント１〜８のいずれかに係る化合物。
【００２０】
１１．ポイント１０に係る使用のための化合物であって、造血の機能不全及び癌又は腫瘍性又は過形成性の他の形態は、内部タンデム重複（ＩＴＤ）を含むＦｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に関連する、化合物。
【００２１】
１２．細菌性感染症の予防及び／又は治療における使用のためのポイント１〜８のいずれかに係る化合物。
【００２２】
１３．ポイント１２に係る使用のための化合物であって、前記細菌性感染症は、細菌起源の髄膜炎、細菌起源の胃腸炎、大腸菌及びスタフィロコッカス・サプロフィティクス（Staphylococcus saprophyticus）が起こす尿路感染症（ＵＴＩ）、大腸菌、赤痢菌及びカンピロバクターに関連する溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、感染性腹膜炎、感染性乳腺炎、菌血症（細菌が引き起こす敗血症）、大腸菌、クレブシエラ、シュードモナス菌、ビー・フラギリス（及び腸球菌が起こす胆嚢炎、及び通常のタイプの肺炎から選択される、化合物。
【００２３】
１４．発明された化合物は、造血機能障害及び／又は癌性、腫瘍性又は過形成性疾患の予防及び／又は治療の方法に適用することができ、ポイント１〜８のいずれかに係る一般式（Ｉ）の化合物は、その必要のある個体に投与される。具体的には、造血性機能不全及び癌又は腫瘍性又は過形成性の任意の他の形態は、内部タンデム重複を含むＦｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に関連する。
【００２４】
１５．発明された化合物は、細菌性感染症の予防及び／又は治療のための方法に適用することができ、ポイント１〜８のいずれかに係る一般式（Ｉ）の化合物は、その必要がある個体に投与される。具体的には、細菌性感染症は、細菌起源の髄膜炎、細菌起源の胃腸炎、大腸菌及びスタフィロコッカス・サプロフィティクス（Staphylococcus saprophyticus）が起こす尿路感染症（ＵＴＩ）、大腸菌、赤痢菌及びカンピロバクターに関連する溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、感染性腹膜炎、感染性乳腺炎、菌血症（細菌が引き起こす敗血症）、大腸菌、クレブシエラ、シュードモナス菌、ビー・フラギリス及び腸球菌が起こす胆嚢炎、及び通常のタイプの肺炎から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
［発明の詳細な説明］
本明細書において、用語「癌」は、腺癌（乳癌、結腸癌、結腸直腸及び結腸直腸腺癌、扁平上皮、肺の気管支肺胞上皮及び肺腺癌）、（子宮頚部、子宮体部、卵巣、膣及び他の女性生殖器、前立腺、睾丸、陰茎及びその他の男性生殖器を含む）生殖系、（食道、胃、小腸、結腸、直腸、肛門、肛門管及び肛門直腸、肝臓及び肝内胆管、胆嚢及び他の胆管、膵臓、他の消化器を含む）消化器系、（喉頭、肺及び気管支、他の呼吸器官を含む）呼吸器系、胸部、（膀胱、腎臓及び腎盂、尿管及び他の泌尿器を含む）泌尿器系、（基底及び扁平上皮を除き；皮膚メラノーマ、他の非上皮皮膚を含む）皮膚、（甲状腺、他の内分泌を含む）内分泌系、（舌、口、咽頭、他の口腔を含む）口腔及び咽頭、脳及び他の神経系、骨髄腫、（心臓を含む）軟組織、骨及び関節、眼及び眼窩の癌性疾患、及び以下の疾患を含む：（ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を含む）リンパ腫、（急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、他の白血病を含む）白血病、特に急性Ｔ細胞白血病、乳癌、結腸、結腸直腸及び結腸直腸腺癌、扁平上皮、肺の気管支肺胞上皮及び肺腺癌、前立腺。
【００２６】
過形成（又は「発育過度性肥大」）は、通常見られるものを越えた器官又は組織内の細胞の増殖に言及する一般的な用語である。過形成は、臓器の全体的な肥大をもたらす結果なることがあり、用語は、良性新生物／良性腫瘍と時々混合される。
【００２７】
新生物は、新生組織形成の結果としての組織の異常な塊である。新生物は、細胞の異常な増殖である。細胞の成長が過度であり、そしてその周囲の正常組織と非協調的である。刺激の停止後でさえ、その成長は、同じ過度な方法で続く。それは通常、しこりや腫瘍を引きこす。新生物は、良性、前癌状態又は悪性であってもよい。
【００２８】
ＦＬＴ３は、未成熟造血（血液細胞を形成する）細胞により当然に発現し、そして幹細胞及び免疫系の正常な発達のために重要である。ＦＬＴ３のリガンドは、幹細胞、前駆細胞、樹上細胞、及びナチュラルキラー細胞の増殖を刺激する他の成長因子と一緒に相乗作用を与える。ＦＬＴ３（我々のケースで検討される主要なＦＬＴ３［ＩＴＤ］）の突然変異は、３０％の急性骨髄性白血病の患者及び急性リンパ性白血病及び骨髄異常形成症候群の少ない数の患者で検出されている。ＦＬＴ３はまた、急性骨髄性白血病の症例の７０％〜１００％の高いレベル及び急性リンパ性白血病の症例の高い割合で、野生型の形で発現する[D. Gary Gilliland and James D. Griffin: The roles of FLT3 in hematopoiesis and leukemia, September 1, 2002; Blood: 100 (5)]。
【００２９】
本明細書では、Ｒ１の意味（すなわち、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８）において、用語「ヘテロシクリル」単独又は組み合わせは、４〜９個の炭素原子とＮ、Ｏ及びＳ（すわわち、Ｎ（窒素）、Ｏ（酸素）又はＳ（硫黄）原子）の群から選択される１〜４個ヘテロ原子と一緒の飽和、部分不飽和又は芳香族環系に由来する群を意味する。好ましい態様において、用語「ヘテロシクリル」単独又は組み合わせは、４〜７個の炭素原子及びＮ、Ｏ及びＳの群から選択される１〜３個のヘテロ原子と一緒の飽和環系を意味する。さらに好ましい態様において、用語「ヘテロシクリル」は、４〜６個の炭素原子及びＮ及びＯの群から選択される１〜２個のヘテロ原子と一緒の飽和環系を意味する。ヘテロシクリルの例（含むがこれらに限定されない）は、モノホリニル、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、インドリル、インダゾリル、１，３−ベンゾジオキソリル、ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル、フラニル、ピロリル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、ピラニル、キサジニル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、プリニルであり、モルホリニル、ピロリジニル、ピペラジニル及びピペリジニルが好ましい。
【００３０】
それらの置換された複素環基はまた、複素環基の置換のための有機化学で通常適用される１又は２以上の置換基を含む範囲内である。そのため、置換された複素環基は、１又は２個以上、好ましくは１〜４個の置換基、例えば、１〜３個又は１〜２個の置換基を持ち、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキルの群から独立して選択される［好ましい置換基は、アルキルであり、さらに好ましくは、メチルである。］
【００３１】
明細書にいて使用される用語「アリール」単独又は組み合わせは、６〜１４個の炭素原子、好ましくは６〜１０個の炭素原子を含む芳香族単環又は多環環系を意味する。適切なアリール基の非限定的な例は、フェニル、ナフチルを含み、フェニルが好ましい態様である。
【００３２】
それらの置換されたアリール基はまた、アリール基の置換のための有機化学で通常適用される１又は２つ以上の置換基を含む範囲内である。そのため、置換アリール基は、１又は２個以上、好ましくは１〜４個、例えば、１〜３個又は１〜２個の置換基を持ち、アルキル、アミド、アクリルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル及びシアノで任意に一又は二置換される、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アミノから独立して選択される。
【００３３】
具体的な態様において、アリールの置換基は、任意に置換されたアルキル（さらに好ましくは、プロピル、例えば、イソプロピル）、ハロゲン（例えば、フルオロ又はクロロ）、アルコキシ（さらに好ましくは、メトキシ）、ジアルキルアミノ（例えば、ジエチルアミノ）、アルキルチオ（例えば、メチルチオ）、アルキルスルホニル（例えば、エチルスルホニル）であることができる。
【００３４】
本明細書において、用語「アルカンジイル」は、Ｃ１〜６アルカン基の異なる炭素原子から２個の水素原子を除くことにより形成されるニ価の基を意味し、すなわち、それは、直鎖状又は分枝状の基、例えば、エタン−１，２−ジイル、プロパン−１，３−ジイル及びペンタン−１，４−ジイル基であることができる。
【００３５】
本明細書において、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。
【００３６】
本明細書において、用語「アルキル」単独又は組み合わせは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル及びペンチルのような１〜６個、好ましくは、１〜５個の炭素原子を含む直鎖又は分枝鎖アルキル基を意味する（すなわち、「Ｃ１〜６」又は「Ｃ１〜５」アルキル基）。特別な場合には、この語句は、１〜４個、又は１〜３個又は１〜２個の炭素原子を含むアルキル基に関連することができる（すなわち、「Ｃ１〜４」、「Ｃ１〜３」又は「Ｃ１〜２」アルキル基）。それらの置換アルキル基はまた、アルキル基の置換のための有機化学で通常適用される１又は２個以上の置換基を含む範囲内である。そおため、置換されたアルキル基は、ハロゲン、アリール、ヒドロキシル、カルボキシル、べンジルオキシ、アルコキシ、ニトロ、サルフェート、アミノ、アクリルアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルシルホニル及びシアノの群から独立して選択される１個以上、好ましくは１個又は２個以上の置換基を有する。
【００３７】
本明細書において、用語「アルキルカルボニル」は、アルキル−ＣＯ−基を意味する。
【００３８】
本明細書において、用語「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−基を意味し、アルキル基は、前述の通りである。適切なアルコキシ基の非限定的な例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ及びｎ−ブトキシを含む。親部分への結合は、エーテル酸素を介する。アルコキシ基はその後ハロゲンと置換される場合は、ハロアルコキシ基として命名される。
【００３９】
本明細書において、用語「アルコキシカルボニル」は、アルコキシ−ＣＯ−基［すなわち、アルキル−Ｏ（ＣＯ）基］を意味する。
【００４０】
本明細書において、用語「シクロケタル」は、同じ炭素原子に結合した−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−の２価の基を意味し、ｎは１〜４、好ましくは２又は３、さらに好ましくは２である。
【００４１】
本明細書において、Ｑの意味において用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ及びＳの群［すなわち、Ｎ（窒素）、Ｏ（酸素）又はＳ（硫黄）原子の群］から選択される１〜９個の炭素原子及び１〜４個のヘテロ原子と一緒の芳香族環系に由来する基を意味する。好ましい態様において、用語「ヘテロアリール」は、４〜７個の炭素原子及びＮ、Ｏ及びＳの群から選択される１〜３個のヘテロ原子と一緒の芳香族環系を意味する。特定の態様において、ヘテロ原子は、硫黄である。ヘテロアリールの例は、インドリル、イミダゾリル、アザインドリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、チアゾリル、チエニル及びピリミジニルであり、チエニルが好ましい。
【００４２】
用語「塩」は、本発明の１つの態様とイオン性粒子を受け入れ、そのパートナーへ／から酸性又は塩基性分子の間に形成されるイオン性化合物を意味する。第４級アミン塩も含まれる。
【００４３】
薬学的に許容可能な、すなわち、非毒性、生理学的に許容される塩が好まれるが、他の塩はまた有用である。式（Ｉ）の化合物の塩は、例えば、等価量として、凍結乾燥による塩析出物又は水性培地のような培地中で酸又は塩基の量の式（Ｉ）の化合物を反応させることにより形成することができる。
【００４４】
例示的な酸付加塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホナート、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンフレート、カンフルスルホネート、シクロペンタンプロピネート、ジグルコネート、ドデシルスルホネート、エタンスルホネート、フマル酸エステル塩、グルコヘプタノアート、グリセロホスファート、ヘミスルファート、ヘプタノアート、ヘキサノアート、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチネート、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオネート、サリチレート、スクシネート、サルフェート、スルホネート（本明細書に記載のように）、ウンデカノアート等が含まれる。また、塩基性医薬組成物から薬学的に有用な塩の形成に適すると一般的に考えられる酸は、公知である。
【００４５】
用語「溶媒和物」は、溶質（溶媒和）の分子又はイオンと一緒に溶媒分子の組み合わせにより形成される化合物を意味する。溶質は、本発明の形態のいずれかであることができ、溶媒は水（水和物を形成する）又は何らかの有機溶媒であることができる。
【００４６】
位置異性体及び多型形のフレーズは、有機化学において通常適用される一般的な意味を有する（例えば、March’s Advenced Organic Chemistry, John Wiley & Sohns, inc. USA. ISBN 0-471-58589-0参照）。
【００４７】
材料と方法：
合成方法：
【００４８】
ステップＡ：一又は二置換された２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オンの調製
【化１】
2016529250.tif 000003
【００４９】
６−クロロ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
１０ｇ（５８ｍｍｏｌ）の２−アミノ−５−クロロ安息香酸を３５ｍＬの無水酢酸に溶解し、４時間還流温度で撹拌した。その反応混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレートした。その粗生成物をヘキサン／エーテル２：１で洗浄してろ過した。固体６−クロロ−２−メチル−４Ｈ−３，１−ベンゾキサジン−４−オン（５８ｍｍｏｌ）を８０ｍＬの濃縮水酸化アンモニウムに懸濁し、室温で一晩撹拌した。１０％の水酸化ナトリウム溶液を反応混合物に加えると透明な溶液が得られた。ｐＨを酢酸で７に調整した。溶液から沈殿した生成物を、ろ過、水で洗浄し、真空下で一晩乾燥させた。
【００５０】
他の２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン誘導体の調製を同じ方法で行った。
収率: 8.76 g (77 %) 
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.98 (s, 1H); 7,76 (6Hz, d, 1H); 7.57 (9 Hz, d, 1H); 2.34 (s, 3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 195, Rt: 2.43分
【００５１】
６−フルオロ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.29 (bs, NH); 7.74-7.63 (m, 3H); 2.34 (s, 3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 179, Rt: 2.01分
【００５２】
６−ブロモ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.13 (s, 1H); 7.88 (9 Hz, d, 1H); 7.50 (9 Hz, d, 1H); 2.33 (s, 1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 239, Rt: 2.52分
【００５３】
２−メチル−７−ニトロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.40 (bs,1H); 8.29 (d,1H); 8.26 (s,1H); 8.16 (d,1H); 2.40 (s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 206, Rt: 2.34分
【００５４】
６，７−ジメトキシ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.00(bs,1H); 7.39(s,1H); 7.05(s,1H); 3.88(s,3H); 3.85(s.1H); 2.31(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 221, Rt: 0.45 min, 1.78分
【００５５】
２−メチルベンゾ［ｇ］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
出発の３−アミノ−２−ナフトエ酸は８５％純度のみであり、他の立体異性体も含んだ。生成物は右異性体に対して６７％純度だった。精製せずに、次の反応のためにこの生成物を使用した。
LCMS m/z 211 (M + H)+, Rt: 2.40分(所望の化合物), 2.61分(他の異性体)
【００５６】
７−クロロ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.06(d,1H); 7.60(d,1H); 7.46(dd,1H); 3.50(bs,1H); 2.35(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 195, Rt: 2.48分
【００５７】
６，８−ジブロモ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.14(s,1H); 8.09(s,1H); 3.80(bs,1H); 2.32(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 319, Rt: 3.27分
【００５８】
ステップＢ：置換２−［（Ｅ）−２−フェニルビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オンの調製
【化２】
2016529250.tif 000004
【００５９】
６−クロロ−２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
３ｇ（１５ｍｍｏｌ）の６−クロロ−２−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オンを３．０６ｇ（２２．５ｍｍｏｌ）の４−メトキシベンズアルデヒドと混合し、１滴の濃縮硫酸をこの混合物に加えた。反応は１９０℃でマイクロ波で行った。反応時間は２時間だった。粗生成物を５％炭酸水素ナトリウムで洗浄し、ろ過した。生成物をジメチルジメチルホルムアミドから結晶化し、真空下で乾燥した。
収率: 4.58 g (95 %)
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.02(d, 1H); 7.92(d,1H); 7.81(d,1H); 7.66(d,1H); 7.66(d,1H); 7.61(d,2H); 7.03(d,2H); 6.85(d,1H); 3.81(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 313, Rt: 4.07分
【００６０】
他の２−［（Ｅ）−２−フェニルビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン誘導体の調製を同じ方法で実施した。
【００６１】
６−クロロ−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン―（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.47(bs,1H); 8.04(d,1H); 7.95(d,1H); 7.83(dd,1H); 7.72(m,3H); 7.30(t,2H); 6.95(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 301, Rt: 4.13分
【００６２】
６−クロロ−２［（Ｅ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.48(bs,1H); 8.03(s,1H); 7.90(d,1H); 7.79(m,2H); 7.68(d,1H); 7.53(m,2H); 6.99(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 319, Rt: 4.21分
【００６３】
６−クロロ−２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルチオ）フェニル］ビニル｝キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.40(bs,1H); 8.02(s,1H); 7.91(d,1H); 7.80(d,1H); 7.67(d,1H); 7.59(d,2H); 7.33(d,2H); 6.95(d,1H); 2.52(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 329, Rt: 4.38分
【００６４】
６−フルオロ−２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン-４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.35(bs,1H); 7.90(d,1H); 7.71(m,3H); 7.61(d,2H); 7.03(d,2H); 6.84(d,1H); 3.81(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 297, Rt: 3.70分
【００６５】
６−フルオロ−２−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.42(bs,1H); 7.93(d,1H); 7.72(m,5H); 7.30(t,2H); 6.95(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 285, Rt: 3.79分
【００６６】
６−フルオロ−２−［（Ｅ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.44(bs,1H); 7.88(d,1H); 7.65(m,4H); 7.51(bs,2H); 6.98(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 303, Rt: 3.90分
【００６７】
６−ブロモ−２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.39(bs,1H); 8.16(s,1H); 7.95(s,1H); 7.94(d,1H); 7.61(bs,3H); 7.03(d,2H); 8.85(d,1H); 3.82(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 357, Rt: 4.15分
【００６８】
６−ブロモ−２−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.47(bs,1H); 8.18(d,1H); 7.95(d,1H); 7.92(s,1H); 7.73(m,2H); 7.62(d.1H); 7.30(t,2H); 6.95(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 345, Rt: 4.22分
【００６９】
６−ブロモ−２−［（Ｅ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.47(bs,1H); 8.18(s,1H); 7.91(d,1H); 7.93(s,1H); 7.78(t,1H); 7.61(d,1H); 7.52(bs,2H); 6.99(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 363, Rt: 4.30分
【００７０】
２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］−７−ニトロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.56(bs,1H); 8.30(s,1H); 8.29(d,1H); 8.13(d,1H); 7.98(d,1H); 7.62(d,2H); 7.03(d,2H); 6.86(d,1H);  3.82(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 324, Rt: 3.96分
【００７１】
２−［（Ｅ）−（４−フルオロフェニル）ビニル］−７−ニトロキナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.65(bs,1H); 8.33(d,1H); 8.30(s,1H); 8.17(dd,1H); 8.02(d,1H); 7.74(m,2H); 7.32(t,2  H); 6.97(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 312, Rt: 4.01分
【００７２】
６，７−ジメトキシ−２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.17(t,1H); 8.06(dd,1H); 7.87(d,1H); 7.74(m,3H); 7.64(dt,1H); 7.25(t,2H); 7.08(d,1H); 3.67(q,2H); 3.57(t,4H); 2.40(m,6H); 1.86(m,2H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 339, Rt: 3.26分
【００７３】
６，７−ジメトキシ−２−［（Ｅ）−２（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.45(bs,1H); 7.88(d,1H); 7.69(m,2H); 7.45(s,1H); 7.30(t,2H); 7.14(s,1H); 6.91(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 327, Rt: 3.40分
【００７４】
６，７−ジメトキシ−２−［（Ｅ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm  LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 345, Rt: 3.52分
【００７５】
２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］ベンゾ［ｇ］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.(bs,1H); 8.80(s,1H); 8.19(bs,2H); 8.08(d,1H); 7.95(d,1H); 7.64(d,2H); 7.58(t,2 H); 7.04(d,2H); 6.89(d,1H); 3.82(s,3H) . LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 329, Rt: 4.03分
【００７６】
２−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］ベンゾ［ｇ］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.5(bs,1H); 8.82(s,1H); 8.31(s,1H); 8.13(d,1H); 8.10(d,1H); 7.92(d,1H); 7.75(m,2H); 7.67(t,1H); 7.60(t,1H); 7.32(t,2H); 7.01(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 317, Rt: 4.18分
【００７７】
２−［（Ｅ）−２−（４−クロロフェニル）ビニル］ベンゾ［ｇ］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,5(bs,1H); 8.82(s,1H); 8.24(s,1H); 8.19(d,1H); 8.10(d,1H); 7.99(d,1H); 7.70(m,3H); 7.55(m,3H); 7.6(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 333, Rt: 4.53分
【００７８】
２−［（Ｅ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）ビニル］ベンゾ［ｇ］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.5(bs,1H); 8.84(s,1H); 8,32(m,2H); 8.10(m,1H); 7.94(d,1H); 7.82(m,1H); 7.62(m,4H); 7.06(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 335, Rt: 4.28分
【００７９】
７−クロロ−２−［（Ｅ）−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.37(bs,1H); 8.09(d,1H); 7.92(d,1H); 7.68(d,1H); 7.62(d,2H); 7.48(dd,1H); 7.03(d,2H); 6.85(d,1H); 3.82(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 313, Rt: 4.14分
【００８０】
７−クロロ−２−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,46(bs,1H); 8.9(d,1H); 7.96(d,1H); 7.73(m,3H); 7.51(dd,1H); 7.31(t,2H); 6.94(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 301, Rt: 4.22分
【００８１】
７−クロロ−２−｛（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］ビニル｝キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.23(s,1H); 8.06(d,1H); 7.87(d,1H); 7.63(s,1H); 7.45(m,3H); 6.72(m,3H); 2.99(s,6H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 301, Rt: 4.22分
【００８２】
６，８−ジブロモ−２−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.5(bs,1H); 8.21(bs,1H); 8.13(bs,1H); 7.92(d,1H); 7.73(bs,2H); 7.28(t,2H); 6.93(t,2H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 423, Rt: 4.93分
【００８３】
２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.25(bs, NH); 8.09(d, 1H); 7.90(d, 1H); 7.79(t, 1H); 7.66(m, 3H); 7.45(t, 1H); 7.02(d, 2H); 6.87(d, 1H); 3.78(s, 3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 279, Rt: 3.42分
【００８４】
２−［（Ｅ）−２−（４−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.33(bs,1H); 8.11(d,1H); 7.95(d,1H); 7,72(m,4H); 7.48(t,1H); 7.30(t,2H); 6.99(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 267, Rt: 3.57分
【００８５】
２−［（Ｅ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.3(bs,1H); 8.12(d,1H); 7.92(d,1H); 7.80(m,2H); 7.68(d,1H); 7.512(m,3H); 7.04(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 285, Rt: 3.69分
【００８６】
２−［（Ｅ）−２−（３−フルオロフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.(bs,1H); 8.12(d,1H); 7.97(d,1H); 7.83(t,1H); 7.71(d,1H); 7.50(m,4H); 7.26(t,1H); 7.10(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 267, Rt: 3.61分
【００８７】
２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルチオ）フェニル］ビニル｝キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.27(bs,1H); 8.13(d,1H); 7.90(d,1H); 7.79(t,1H); 7.63(m,3H); 7.38 (t,1H); 7.13(d,2H); 6.92(d,1H); 2.51(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 295, Rt: 3.82分
【００８８】
２−［（Ｅ）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.24(bs,1H); 8.10(d,1H); 7.90(d,1H); 7.80(t,1H); 7.65(d,1H); 7.47(t,1H); 7.03(d,1H); 7.00(bs,2H) 3.85(s,6H); 3.71(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 339, Rt: 3.30分
【００８９】
２−［（Ｅ）−２−（４−イソプロピルフェニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.32(bs,1H); 8.10(d,1H); 7.93(d,1H); 7.80(t,1H); 7.67(d,1H); 7.59(d,2H); 7.47(t,1H); 7.34(d,2H);  7.00(d,1H); 2.90(m,1H); 1.23(d,6H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 291, Rt: 4.31分
【００９０】
２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルスルホニル）フェニル］ビニル｝キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.42(bs,1H); 8.15(d,1H); 8.14-7.13(m, 5H); 7.83(t,1H); 7.71(d,1H); 7.52(t,1H); 7.19(d,1H); 3.26(s,3H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 327, Rt: 2.96分
【００９１】
２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.30(bs,1H); 8.12(d,1H); 8.10(s,1H); 7.79(t,1H); 7.66(m,2H); 7.46(m,2H); 7.16(bs,1H); 6.78(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 255, Rt: 3.36分
【００９２】
６−クロロ−２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.40(bs,1H); 8.12(d,1H); 8.02(s,1H); 7.81(d,1H); 7.68(m,2H); 7.49(bs,1H); 7.16(bs,1H); 6.72(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 289, Rt: 3.99分
【００９３】
６−ブロモ−２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.41(bs,1H); 8.13(d,1H); 8.15(s,1H); 7.92(d,1H); 7.70(d,1H); 7.59(d,1H); 7.49(d,1H); 7.16(dd,1H);  6.72(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 333, Rt: 4.08分
【００９４】
２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］ベンゾ［ｇ］キナゾリン−４（３Ｈ）−オン
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.06(bs.1H); 8.80(s,1H); 8,14(m,4H); 7.67(m,2H); 7.56(t,1H); 7.50(bs,1H); 7.16(t,1H); 6.77(d,1H). LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 305, Rt: 4.04分
【００９５】
ステップＣ：置換４−クロロ−２−［（Ｅ）−２−フェニルビニル］キナゾリンと４−クロロ−２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］キナゾリンの調製
【化３】
2016529250.tif 000005
【００９６】
出発物質をオキシ塩化リンに溶解し、９０℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、オキシ塩化リンを蒸発させた。粗生成物をクロロホルムに溶解し、冷却水と１０％炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を１時間、硫酸マグネシウムで撹拌し、蒸発させ、真空下で乾燥させた。中間体の不安定性のため、純度をＴＬＣのみで確認した。
【００９７】
ステップＤ：置換２−［（Ｅ）−２−フェニルビニル］キナゾリン−４−アミンと２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］キナゾリン−４−アミンの調製
【化４】
2016529250.tif 000006
【００９８】
Ｎ'−｛６−クロロ−２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリン−４−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン
０．８７ｇ（２．６２ｍｍｏｌ）の４，６−ジクロロ−２−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）ビニル］キナゾリンを１０ｍＬのabsジオキサンに溶解した。０．４５ｍＬ（２．６２ｍｍｏｌ）のジイソプロピル−エチルアミンと０．３６ｍＬ（２．８８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミンをこの溶液に加えた。反応を１２時間、アルゴン雰囲気下、８０℃で撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、生成物をカラムクロマトグラフィー又は分取ＴＬＣで精製した。生成物をシュウ酸塩として調製した。
他の２−［（Ｅ）−２−フェニルビニル］キナゾリン−４−アミンと２−［（Ｅ）−２−（２−チエニル）ビニル］キナゾリン−４−アミン誘導体を同じ方法で調製した。
収率：0.35 g (27 %)
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm. LC-MS (ESI): m/z (M+H)+ 397, Rt: 0.46 分, 1.95 分, 2.13分
【００９９】
【表１−１】
2016529250.tif 000007
【表１−２】
2016529250.tif 000008
【表１−３】
2016529250.tif 000009
【表１−４】
2016529250.tif 000010
【表１−５】
2016529250.tif 000011
【表１−６】
2016529250.tif 000012
【表１−７】
2016529250.tif 000013
【表１−８】
2016529250.tif 000014
【表１−９】
2016529250.tif 000015
【表１−１０】
2016529250.tif 000016
【表１−１１】
2016529250.tif 000017
【表１−１２】
2016529250.tif 000018
【表１−１３】
2016529250.tif 000019
【表１−１４】
2016529250.tif 000020
【表１−１５】
2016529250.tif 000021
【表１−１６】
2016529250.tif 000022
【表１−１７】
2016529250.tif 000023
【表１−１８】
2016529250.tif 000024
【表１−１９】
2016529250.tif 000025
【表１−２０】
2016529250.tif 000026
【０１００】
・解析評価
全ての調製された化合物は、２つの独立した分析方法により特徴付けられた。
【０１０１】
ＮＭＲ
３００ＭＨｚの１Ｈ−ＮＭＲ分析は、２５℃でBruker AVANCE-300型の装置で実施され、正確な周波数は300.14MHzであった。一般的にDMSO-d6は、例外として与えられた溶媒として使用された。化学シフトは、ＴＭＳ（δ = 0.00 ppm）を基準に百万（δ）当たりの程度で与えられる。
【０１０２】
ＬＣＭＳ
ＬＣＭＳ分析は、以下のパラメーターを使用して液体クロマトグラフ質量分析計ウォーターズクロマトグラフを用いて行った：
ウォーターズＨＰＬＣ／ＭＳ：
ＭＳ検出器：ウォーターズＳＱＤ
ＵＶ検出器：ウォーターズ９９６ＤＡＤ
分離モジュール：ウォーターズアライアンス２７９５
ＨＰＬＣ：
カラム：ウォーターズXBridge C18, 50 mm x 4.6 mm, 3.5 μm
溶媒Ｉ：水／０．１％ＨＣＯＯＨ
溶媒ＩＩ： ＡｃＣＮ
アセトニトリル：Riedel-deHaen; G Chromasolv (34998)
水：Mili-Q Academic
ギ酸：Riedel-deHaen; extra pure (27001)
流量：２ｍＬ／分
注入：５μｇ
【０１０３】
勾配：
【表Ａ】
2016529250.tif 000027
【０１０４】
ＭＳ：
イオン化：ES+/ES-
ソースブロック温度：１１０℃
脱溶媒温度：２５０℃
脱溶媒ガス：５００Ｌ／時間
コーンガス：８０Ｌ／時間
キャピラリー電圧：３０００Ｖ
コーン電圧：３０Ｖ
エクストラクター電圧：６Ｖ
Ｒｆレンズ電圧：０．１Ｖ
スキャン：１秒で８０〜１０００ｍ／ｚ
インタースキャン遅延：０．１秒
【０１０５】
【表２−１】
2016529250.tif 000028
【表２−２】
2016529250.tif 000029
【表２−３】
2016529250.tif 000030
【表２−４】
2016529250.tif 000031
【表２−５】
2016529250.tif 000032
【表２−６】
2016529250.tif 000033
【表２−７】
2016529250.tif 000034
【表２−８】
2016529250.tif 000035
【表２−９】
2016529250.tif 000036
【表２−１０】
2016529250.tif 000037
【表２−１１】
2016529250.tif 000038
【表２−１２】
2016529250.tif 000039
【表２−１３】
2016529250.tif 000040
【表２−１４】
2016529250.tif 000041
【表２−１５】
2016529250.tif 000042
【０１０６】
生物学的方法
生化学的活性アッセイ
ＦＬＴ３（ＩＴＤ）生化学的アッセイは、Transcreener（登録商標）ADPアッセイＦＰ法（BellBrook Labs社、マディソン、ＷＩ、米国）とIMAP（登録商標）FP生化学的活性アッセイ（Molecular Devices、カリフォルニア州サニーベール、米国）を使用して、２つの異なるアッセイシステムプラットフォーム上で実施された。
【０１０７】
それぞれの場合において、アッセイを低たんぱく質結合、黒、丸底３８４ウェルプレートタイプ３６７６（コーニング、ワンリバーフロトプラザ、ニューヨーク州、米国）で実施した。キナーゼ阻害剤化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解し５ｍＭにし、ＩＣ５０値を決定するために、連続希釈物を調製した。
【０１０８】
TranScreener（登録商標）ＦＬＴ３（ＩＴＤ）アッセイにおいて、反応のために、以下の材料、以下の最終濃度を使用した：基質として、８ｎＭのＦＬＴ３（ＩＴＤ）（ProQinase社、フライブルク、ドイツ）、０．０５ｍｇ／ｍＬのポリGlu-Tyrタンパク質（Sigma-Aldrich社、ブダペスト、ハンガリー）、洗浄剤として、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５(Sigma-Aldrich)、１ｍＭのＤＴＴ(Sigma-Aldrich)、３ｍＭのＭｇＣｌ２(Sigma-Aldrich)、３ｍＭのＭｎＣｌ２(Sigma-Aldrich)、及び ０．０１Ｖ%ＶのＴｗｅｅｎ２０(Sigma-Aldrich)。キナーゼ反応は、２μｌの５×酵素の添加により開始し、その反応は、室温で１時間１０μlの用量で進行した。反応を１０μlのTranscreener（登録商標）停止及び検出溶液の添加により停止し、さらに１時間インキュベートした。溶液は、全てのケースで、２０ｍＭのHEPES  pH 7.5、４０ｍＭのEDTA、０．０２Ｖ/Ｖ%のBrij35及び3nMのADP Alexa633 Tracerを含んだ。ＡＤＰ抗体の濃度は、１μＭであるKmapp値に従い、２．０８μｇ／ｍｌであった。次いで、蛍光偏光及び蛍光強度をアナリストＧＴマルチモードリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて測定した。
【０１０９】
ＩＭＡＰ  ＦＰアッセイにおいて、反応条件は以下の通りであった：１６〜４５ｎＭの ＦＬＴ３(ＩＴＤ)(ProQinase)、基質として４００ｎＭの5TAMRA-GEEPLYWSFPAKKK-NH2染めペプチド(Genecust、デュドランジュ、ルクセンブルグ)、２０ｍＭのHEPES  pH 8、１ｍＭのＤＴＴ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＭｎＣｌ２、及び０．０１Ｖ%ＶのBrij35洗浄剤(Sigma-Aldrich)。ＡＴＰ濃度は、５．１μＭであった。キナーゼ反応は２μｌの５×酵素の添加により開始し、その反応は、室温で１時間１０μｌの容量で進行し、次いで１０μｌのＩＭＡＰ検出混合物を添加することにより停止した。蛍光偏光及び蛍光強度を室温でインキュベーションの１．５時間後にアナリストＧＴマルチモードリーダー（Molecular Devices）を使用して測定した。
【０１１０】
細胞株及び細胞生存率アッセイ
使用される細胞株は、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection、マナッサス、バージニア州、米国）から入手した、ＭＶ４−１１であった。それは、ＦＬＴ３の突然変異型、上記ＦＬＴ３（ＩＴＤ）をもっぱら発現する混合型Ｂ骨髄単球性白血病マクロファージ細胞株である。ＭＶ４−１１細胞株を用いて、ＩＣ５０値を決定するために、キナーゼ阻害剤を連続希釈液中で、5V/V% CO2雰囲気中、37oC/98.6oFで７２時間細胞と一緒にインキュベートした、細胞生存率アッセイを実施した。生き残った細胞の割合の検出のために、CellTiter Glo（登録商標）発光細胞性生存率アッセイ（Promega社、マディソン、ＷＩ、米国）を使用した。アッセイを使用される容量を除いて、製造業者の指示に従い実施した：処理された細胞を含む66.6μlの培地に33.3μlのCellTiter Glo（登録商標）試薬を加えた。発光をアナリストＧＴマルチモードリーダー（Molecular Devices）を用いて測定した。
【０１１１】
生化学及び細胞アッセイの全てのケースで、データ処理のためMicrosoft Excel（マイクロソフト社、レドモンド、ワシントン州、米国）を使用し、及びＩＣ５０曲線を生成するために、Microsoft Office Excel用のＸＬフィットカーブフィッティングアドインソフトウェア（ギルフォード、英国）を使用した。
【０１１２】
生物学的結果
酵素アッセイは、TranScreener（登録商標）（BellBrookラボ）のIMAP FP（登録商標）（Molecular Devices）生化学酵素活性アッセイ系を用いて行った。化合物は、Vichem Chemie Research社により製造されるオリジナルの分子であり、上記に詳細した。一次スクリーニングを化合物の１つの濃度（１０μＭ）で実施した。ヒットは、その後、化合物特異的ＩＣ５０値を決定するために、１２点連続希釈セットで測定した。アッセイ条件は、上述した。それぞれのケースで、同様に広域スペクトルキナーゼ阻害剤と公知のＦＬＴ３阻害剤である、ファイザー社によってSutent（登録商標）として販売されるスニチニブを使用した。Ｚプライム値が＞０．５のとき、キナーゼアッセイは許容可能と考えられた。それぞれのケースで、平行測定の平均値を示す。
【０１１３】
【表３−１】
2016529250.tif 000043
【表３−２】
2016529250.tif 000044
【０１１４】
細胞生存率アッセイは、上記の条件を除き、供給者の指示に従ってPromegaのCellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ法を使用して、ＭＶ４−１１細胞株で実施した。一次スクリーニングは、化合物の１つの濃度（１０μＭ）で実施した。ヒットは、その後、化合物特異的ＩＣ５０値を決定するため、１０点連続希釈セットで測定した。
【０１１５】
【表４−１】
2016529250.tif 000045
【表４−２】
2016529250.tif 000046
【０１１６】
本発明において含まれるスチリルキナゾリン誘導体の選択性プロファイルを定義するために、構造的及び生物活性な両方の代表的な化合物を選択する（例１１）。測定をディスカバー社（フリーモント、ＣＡ、米国）により行った。化合物を８０％以上のヒトタンパク質キノームをカバーするscanMAX（登録商標）キナーゼアッセイパネルで試験した。それは、５μＭの濃度で化合物を使用して試験された４５６キナーゼにおける活性化状態特異的アッセイである。結果は、化合物により引き起こされる活性喪失の割合として、ここに表される。
【０１１７】
【表５−１】
2016529250.tif 000047
【表５−２】
2016529250.tif 000048
【表５−３】
2016529250.tif 000049
【表５−４】
2016529250.tif 000050
【表５−５】
2016529250.tif 000051
【表５−６】
2016529250.tif 000052
【表５−７】
2016529250.tif 000053
【表５−８】
2016529250.tif 000054
【表５−９】
2016529250.tif 000055
【表５−１０】
2016529250.tif 000056
【表５−１１】
2016529250.tif 000057
【表５−１２】
2016529250.tif 000058
【０１１８】
我々の測定及び科学文献に基づいて、提示されたスチリルキナゾリン誘導体は、シグナル伝達癌治療、特にＡＭＬ患者にとって、さらなる開発の候補であると結論付ける。化合物は、ＦＬＴ３突然変異に対して高い選択性であり、それらがインビトロＦＬＴ３（ＩＴＤ）生化学アッセイ及びＭＶ１１−４細胞生存率アッセイで、かなり良いＩＣ５０値を有する。ｐ５３腫瘍抑制タンパク質上のスチリルキナゾリンの公知の効果と一緒に示されたデータは、ＦＬＴ３（ＩＴＤ）突然変異及び白血病患者の間でかなり一般的である他のＦＬＴ３突然変異の場合に、選択的かつ高度な標的化された治療を開発するための強力な候補であることを示す。
【０１１９】
抗菌活性の決定
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）
抗菌感受性試験のための欧州委員会（ＥＵＣＡＳＴ）は、定義されるインビトロ条件下で、細菌摂取の成長を阻害する抗生物質の最も低い濃度として、最小阻止濃度（ＭＩＣ）を定義する。ＭＩＣは、大腸菌株ＬＭＣ５００(F-, araD139, D(argF-lac)U169deoC1, flbB5301, ptsF25, rbsR, relA1, rpslL150, lysA1)及びBW25113(F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del):rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514  ΔAcrA ΔAcrB ΔtolC)に対して決定される。前者の株は、野生型大腸菌Ｋ１２株であり、後者の株は、TolCの多剤排出ポンプを生産できないように変更されたものである。したがって、そうでなければ無視することができる阻害剤に対してより感受性があることが期待される。使用される定義された培地は、１０ｇ／Ｌのトリプトン（バクト）、５ｇ／Ｌの酵母抽出物（バクト）及び５ｇ／ＬのＮａＣｌからなるトリプトン酵母抽出物（ＴＹ）培地である。
【０１２０】
化合物をMilliQ限外ろ過蒸留水（以下、MilliQという）中及びＤＭＳＯ中及びMilliQとＤＭＳＯの様々な組成物混合物中、１０２４μｇ／ｍｌのストック溶液に希釈した。溶解度を目視検査によって試験し、不十分な溶解の混合物を混合物中、ＤＭＳＯのより高い濃度中で溶解したが、５０％より高くなく、それ自体の懸濁液形態により細菌増殖に悪影響を防止する。ＭＩＣ試験にとって、第一の化合物は、MilliQ中で256μg/mlに希釈し、MilliQ中での２倍の連続希釈は、７５μｌの最終容量の９６ウェルプレートで、ウェルＡからＤ又はＥからＨで調製された。摂取材料を分光光度計（バイオクロムリブラＳ２２）を用いて、０．００１（直径でキュベット１ｃｍ、ＶＷＲ）の６００ｎｍの波長（OD600）で、光学密度に合致する２×ＴＹ培地中、対数的に増殖する細菌培養物を懸濁することにより調製した。この懸濁液の７５μlは、次いでウェルに加え、ウェルＡからＤとＥからＨで１２８〜１６μｇ／ｍｌの範囲の抗生物質最終濃度が得られた。抗生物質を含まないが対照としてＤＭＳＯ濃度の群又はそれぞれ、陽性対象と陰性対照を果たす細菌を含まない群。９６ウェルプレートを３７℃で一晩インキュベートし、ＯＤ６００値を１０分ごとに測定する間、プレートリーダー（SYNERGY BIOTEK）を振とうした。次の日、増殖データを分析し、ＭＩＣ値を決定した。摂取材料をＴＹ寒天プレート上でＰＢＳ（10-2〜10-7）中、１０倍連続希釈をプレーティグすることにより定量し、３７℃で一晩、インキュベートした。次の日、コロニーを計数し、ＣＦＵ／ウェル値を計算した。全てのＭＩＣ実験を２回実施した。１６μｇ／ｍｌ未満のＭＩＣを示したそれらの化合物について、アッセイを１２８〜０．１２５μｇ／ｍｌの抗生物質の最終濃度で繰り返した。
【０１２１】
・最終殺菌濃度（ＭＢＣ）
最小殺菌濃度（ＭＢＣ）は、定義されたインビトロ条件は９９．９％までバクテリアの数を減らすことという下で、抗生物質の最低濃度として定義される。増殖減少を示す化合物での全てのＭＩＣ実験は、ＭＢＣ試験のために選択された。ＭＢＣ試験をＴＹ寒天上で、９６ウェルプレートから終了した液体ＭＩＣ試験の１０μｌをプレーティングすることにより実施した。次の日、ＭＢＣを１０未満のコロニーが成長した最低濃度として決定した（摂取剤材料の＞９９．９％の減少）。全てのＭＢＣ実験を２度実施した。
【０１２２】
【表６】
2016529250.tif 000059
【国際調査報告】
2016529250.tif 000061
2016529250.tif 000062
2016529250.tif 000063
2016529250.tif 000064
2016529250.tif 000065