(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の可溶性グアニル酸シクラーゼの活性剤および医薬組成物、主として局所的に投与される眼科用組成物におけるそれらの使用に関する。本医薬組成物は哺乳動物種の動物において眼内圧を降下させるために有用である。2016530292.tif 000090
2016530292.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2016530292.tif 000089
［式中、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３およびＦから選択され；
Ｒ４は、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
Ｘは、ＯおよびＣＨ２から選択され；
Ｚは、ＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎは、２または３である。］
の化合物またはその薬学上許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれＨであり；
Ｒ３がＨ、−ＣＨ３およびＦから選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯおよびＣＨ２から選択され；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれハロゲンであり；
Ｒ３がＨ、−ＣＨ３およびＦから選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯおよびＣＨ２から選択され；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれＨであり；
Ｒ３がＨおよび−ＣＨ３から選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯおよびＣＨ２から選択され；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれハロゲンであり；
Ｒ３がＨ、および−ＣＨ３から選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯおよびＣＨ２から選択され；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項３に記載の化合物または塩。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３がＨおよび−ＣＨ３から選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯおよびＣＨ２から選択され；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが２または３である、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３がＨおよび−ＣＨ３から選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＣＨ２であり；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項６に記載の化合物または塩。
【請求項８】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３が−ＣＨ３であり；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＣＨ２であり；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項７に記載の化合物または塩。
【請求項９】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３がＨであり；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＣＨ２であり；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項７に記載の化合物または塩。
【請求項１０】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３がＨおよび−ＣＨ３から選択され；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯであり；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項６に記載の化合物または塩。
【請求項１１】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３が−ＣＨ３であり；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯであり；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項１０に記載の化合物または塩。
【請求項１２】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立にＨおよびハロゲンから選択され；
Ｒ３がＨであり；
Ｒ４が−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
ＸがＯであり；
ＺがＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎが３である、請求項６に記載の化合物または塩。
【請求項１３】
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−モルホリノプロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（２−メトキシエトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（２−フルオロ−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（２−フルオロ−４−（３−メトキシプロポキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−メトキシプロポキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−シアノプロポキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−シアノプロポキシ）−２−メチルベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−メトキシプロポキシ）−２−メチルベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−カルボキシプロポキシ）−２−メチルベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル；
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸イソプロピル；または
１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
である、化合物またはその薬学上許容可能な塩。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩と、１種類以上の薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】
安全かつ有効な量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物における高眼内圧を降下させるための方法。
【請求項１６】
安全かつ有効な量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、緑内障を処置する方法。
【請求項１７】
安全かつ有効な量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、高眼圧症を処置する方法。
【請求項１８】
高眼内圧の処置のための医薬の製造における請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩の使用。
【請求項１９】
緑内障の処置のための医薬の製造における請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩の使用。
【請求項２０】
高眼圧症の処置のための医薬の製造における請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性剤、その薬学上許容可能な塩、医薬組成物、それらの調製のための方法および、医薬、主として局所的に投与される眼科用組成物におけるそれらの使用に関する。本医薬組成物は哺乳動物種の動物において眼内圧（ＩＯＰ）を降下させるために有用である。本発明はまた、緑内障または高眼圧症に起因する高ＩＯＰを含むＩＯＰを降下させるためにそのような医薬組成物を、ヒトを含む哺乳動物種の動物に投与することに関する。
【背景技術】
【０００２】
緑内障は、経時的に視覚機能の不可逆的喪失をもたらす視神経症である。緑内障は世界で失明原因の第２位であると考えられる。２０２０年までに世界的におよそ８０００万人が緑内障に罹患していると予測されている(Quigley and Broman, Br J Ophthalmol 2006)。常ではないが、高頻度で、緑内障は高ＩＯＰと関係があり、高ＩＯＰは緑内障の重要なリスク因子として認識されている。高眼圧症、不可逆的緑内障性損傷を引き起こすまで進行していない高ＩＯＰと関連する状態は、緑内障の最も初期の段階を表していると考えられている。緑内障および高眼圧症の処置のために考案された治療薬は、ＩＯＰを低下させるように設計されてきた。ＩＯＰは依然として疾患の唯一の、実績のある治療可能なリスク因子である。
【０００３】
緑内障および高眼圧症の処置に現在使用される薬剤には、プロスタグランジン類似体（例えば、ラタノプロスト、ビマトプロスト、トラボプロスト、タフルプロスト）、β−アドレナリン作動性遮断薬（例えば、チモロール、ベタキソロール、レボブノロール）、α−アドレナリン作動性アゴニスト（例えば、ブリモニジン、パラアミノクロニジン）、副交感神経作用薬（例えば、ピロカルピン、カルバコール、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤）、交感神経作用薬（例えば、エピネフリン、ジピバリルエピネフリン）、炭酸脱水酵素阻害剤（例えば、ドルゾラミド、ブリンゾラミド）が含まれる。眼内圧（ＩＯＰ）は、眼房水の産生と眼房水の流出のバランスによって決定される。高ＩＯＰは眼房水流出障害の結果であることが一般的に認められている。従って、眼房水の流出を増加させる化合物が、緑内障および高眼圧症の患者においてＩＯＰを降下させるために好ましいと考えられている。プロスタグランジン類似体、交感神経作用薬および副交感神経作用薬は、房水流出を増加させることによってＩＯＰを降下させると考えられているのに対し、β遮断薬、α−アドレナリン作動性アゴニストおよび炭酸脱水酵素阻害剤は、眼房水の産生を減少させることによってＩＯＰを降下させると考えられている。プロスタグランジン類似体は、例えば、結膜充血の増加および虹彩色素過剰などの望ましくない影響を引き起こす。副交感神経作用薬は、視界のぼやけをもたらす望ましくない調節性変化を誘導する。交感神経作用薬はまた、眼房水の産生も刺激し得、この産生により眼房水の流出に与える効果は部分的に打ち消され、その結果、ＩＯＰ調節に対してそれらから得られる効果は制限される。いくつかの抗緑内障薬、例えば、チモロールは、全身的な作用をもたらす。これらの有害事象は、不十分な患者コンプライアンスをもたらす可能性があり、薬物療法の中止を余儀なくさせるかもしれない。
【０００４】
その結果、特に眼からの房水の排水性を高め、好ましくは、より限定された有害事象のプロフィールを有する抗緑内障薬を同定し、開発する必要性が依然として存在する。
【０００５】
眼の２つの主要な房水流出経路のうち、従来の／線維柱帯流出経路は、高眼圧症につながる流出閉塞の部位であるため、より魅力的な標的となる。Ellis (Cell Physiol Biochem 2011)に概説されているように、酸化窒素供与体およびグアニル酸シクラーゼ活性剤は、ヒト、ウサギおよびサルにおいてＩＯＰを低下させることが示されている。酸化窒素は、可溶性グアニル酸シクラーゼ酵素の内因性活性剤であり、次に、この酵素はセカンドメッセンジャー分子としてのサイクリックＧＭＰの生成を触媒する。ＩＯＰ調節における酸化窒素−可溶性グアニル酸シクラーゼ−サイクリックＧＭＰ経路の役割は十分に確立されている(Ellis, Cell Physiol Biochem 2011)。酸化窒素の内因性生成に関与する内皮型および神経型の酸化窒素シンターゼなどのこの経路の成分は、流出経路組織に存在する。よって、ｓＧＣの刺激は、眼房水の排水の強化によるＩＯＰの降下が線維柱帯網もしくはシュレム管細胞の細胞体積(Ellis, Cell Physiol Biochem 2011)の調整によって起こるかまたは線維柱帯網の収縮性(Stumpffand Wiederholt, Ophthalmologica 2000)の調整によって起こるかに関わらず、新規な降眼圧アプローチとなる。線維柱帯流出経路の細胞体積および／または構造の収縮性の調整は、ＩＯＰ調節のための機構原理として提案されていた。
【０００６】
米国特許第５，６５２，２３６号には、グアニル酸シクラーゼ阻害剤の投与により哺乳動物の眼におけるＩＯＰを降下させるための方法が特許請求されている。その状況で、グアニル酸シクラーゼ活性剤もまたＩＯＰを降下させることが見出されたことは驚くべきことであった。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ｓＧＣの２−ピリジンピラゾールカルボン酸またはエステル活性剤である新規な化合物に関する。具体的には、本発明は、式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容可能な塩を対象とし、
【化１】
2016530292.tif 000003
式中、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈおよびハロゲン（好適には、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ；好ましくは、Ｃｌ、Ｆ）から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３およびＦから選択され；
Ｒ４は、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）、および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
Ｘは、ＯおよびＣＨ２から選択され；
Ｚは、ＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎは、２または３である。
【０００８】
本発明の化合物はｓＧＣの活性剤である。従って、本発明は、ｓＧＣを活性化するための方法を対象とし、その方法は、細胞を式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩と接触させることを含んでなる。本発明は、さらに、ｓＧＣ活性を活性化し、本発明の化合物または本発明の化合物を含んでなる医薬組成物を使用してそれと関連する障害を処置する方法を対象とする。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、ｓＧＣ媒介疾患または障害を処置する方法を対象とし、その方法は、治療上有効な量の式（Ｉ）による化合物、またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする患者（ヒトまたは他の哺乳動物、特に、ヒト）に投与することを含んでなる。そのようなｓＧＣ媒介疾患または障害には、眼房水の排水性不良または高眼内圧と関連する疾患または障害が含まれる。そのような疾患または障害としては、限定されるものではないが、緑内障および高眼圧症が挙げられる。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）による本発明の化合物、またはその薬学上許容可能な塩と、薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬組成物を対象とする。特に、本発明は、ｓＧＣ媒介疾患または障害の処置のための医薬組成物を対象とし、その医薬組成物は、式（Ｉ）による化合物、またはその薬学上許容可能な塩と、薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、眼内圧によって引き起こされる眼障害を処置する方法を対象とする。さらに、本発明は、安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物における眼内圧を降下させるための方法を対象とする。さらに、本発明は、安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、緑内障を処置する方法を対象とする。さらに、本発明は、安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、高眼圧症を処置する方法を対象とする。本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、限定されるものではないが、ヒトを包含する。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、療法で使用するための、本明細書に記載される化合物、またはその薬学上許容可能な塩を対象とする。本発明は、療法で使用するための、具体的には、限定されるものではないが、緑内障または高眼圧症を含む、眼内圧の処置で使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を提供する。具体的には、本発明は、療法で使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を提供する。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、眼の疾患または障害の処置で使用するための、本明細書に記載される化合物、またはその薬学上許容可能な塩を対象とする。本発明は、眼の疾患または障害、具体的には、本明細書に列挙される疾患または障害の処置で使用するための、本発明の化合物を提供する。本発明は、眼障害の処置で使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩を提供する。
【００１４】
一実施形態では、本発明は、活性な治療用物質としての、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩の使用を対象とする。より具体的には、本発明は、眼の疾患または障害、具体的には、本明細書に列挙される疾患または障害の処置のための、本明細書に記載される化合物の使用を提供する。従って、本発明は、眼の疾患または障害、具体的には、本明細書に列挙される疾患または障害を有する、それを必要とするヒトの処置における活性な治療用物質としての、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩の使用を提供する。
【００１５】
一実施形態では、本発明は、眼の疾患または障害、例えば、本明細書に列挙される疾患および障害の処置で使用するための医薬の製造における、本明細書に記載される化合物、またはその薬学上許容可能な塩を対象とする。具体的には、本発明はさらに、眼の疾患または障害、例えば、本明細書に列挙される疾患および障害の処置で使用するための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩の使用を提供する。
発明の詳細な説明
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、Ｔ＝０時点で右眼に１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸、対照化合物（化合物Ａ）またはビヒクルを局所的に投与した後の日本白色種ウサギの眼内圧を示す。
【図２】図２は、Ｔ＝０時点で右眼に１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸、対照化合物（化合物Ａ）またはビヒクルを硝子体内に投与した後の日本白色種ウサギの眼内圧を示す。
【図３】図３は、Ｔ＝０時点で右眼に１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ラタノプロストまたはビヒクルを局所的に投与した後のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの眼内圧を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性剤、およびＩＯＰを降下させるための医薬組成物におけるそれらの使用に関する。特に、本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
2016530292.tif 000004
の化合物またはその薬学上許容可能な塩に関し、
式中、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、−Ｈおよびハロゲンから選択され（好適には、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ；好ましくは、Ｃｌ、Ｆ）；
Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３およびＦから選択され；
Ｒ４は、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は独立に−ＣＮまたは−ＯＣＨ３である）および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択され；
Ｘは、ＯおよびＣＨ２から選択され；
Ｚは、ＨおよびＣ１−４アルキルから選択され；かつ
ｎは、２または３である。
【００１８】
好適には、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈおよびハロゲンから選択される。好適には、そのハロゲンは、塩素、フッ素、臭素およびヨウ素から選択される。本発明の一実施形態では、ハロゲンは、塩素およびフッ素から選択される。
【００１９】
好適には、Ｘは、ＯおよびＣＨ２から選択される。
【００２０】
好適には、Ｒ３は、−Ｈ、−ＣＨ３およびフッ素から選択される。
【００２１】
好適には、Ｒ４は、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、モルホリン、３−（トリフルオロメチル）−１−ピラゾリル、任意に置換されていてもよい５〜６員ヘテロアリール環（ここで、任意の置換基は−ＣＮ、−ＯＣＨ３である）および任意に置換されていてもよい５〜６員複素環式環から選択される。
【００２２】
好適には、ｎは、２〜３の整数である。
【００２３】
一態様において、本発明は、本明細書に記載される化合物、またはその薬学上許容可能な塩：
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−モルホリノプロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（２−メトキシエトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（２−フルオロ−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（２−フルオロ−４−（３−メトキシプロポキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−メトキシプロポキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−シアノプロポキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−シアノプロポキシ）−２−メチルベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−メトキシプロポキシ）−２−メチルベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（（４−（３−カルボキシプロポキシ）−２−メチルベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸；
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル；
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸イソプロピル；および
１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
である。
【００２４】
本発明の特に好ましい化合物は、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸である。
【００２５】
本発明のもう１つの特に好ましい化合物は、１−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸である。
【００２６】
本明細書を通じて提供される式（Ｉ）の様々な基および置換基の代替定義は、特に、本明細書に開示される各化合物種を個別に記載するだけでなく、１種類以上の化合物種のグループを記載することも意図している。本発明の範囲は、これらの基および置換基の定義の任意の組合せを包含する。本発明の化合物は、当業者によって理解されるように、「化学的に安定」であるであると考えられるものだけである。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「１つの化合物(a coumpound)」または「その化合物(the coumpound)」という用語は、本明細書で定義されるように、任意の形態、すなわち、任意の塩形態または非塩形態（例えば、遊離した酸もしくは塩基の形態として、または塩、特に、その薬学上許容可能な塩として）およびその任意の物理的形態（例えば、非固体形態（例えば、液体または半固体の形態）、および固体形態（例えば、非晶形態または結晶形態、特定の多形形態、水和物形態（例えば、一水和物、二水和物および半水和物）を含む溶媒和物形態を含む）で、ならびに様々な形態の混合物での、本発明の１種類以上の化合物、特に、式（Ｉ）の化合物を意味する。当業者は、薬学上許容可能な溶媒和物は、結晶化中に溶媒分子が結晶格子に組み込まれる結晶化合物のために形成され得ることを理解するであろう。溶媒和物は、非水性溶媒、例えば、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、および酢酸エチルなどを含み得、または結晶格子に組み込まれる溶媒として水を含み得る。水が結晶格子に組み込まれた溶媒である溶媒和物は、一般に、「水和物」と呼ばれる。水和物には、化学量論的水和物ならびに可変量の水を含有する組成物が含まれる。本発明は、このような総ての溶媒和物および形態を包含する。
【００２８】
本発明は、化合物だけでなくそれらの薬学上許容可能な塩も包含する。従って、「化合物またはその薬学上許容可能な塩」の文脈での「または」という単語は、化合物もしくはその薬学上許容可能な塩（代替）、または化合物およびその薬学上許容可能な塩（組合せ）のいずれかを意味すると理解される。以下の実施例により本発明を説明する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、むしろ本発明の化合物、組成物、および方法を調製および使用するために当業者に指針を提供するものである。本発明の特定の実施形態が記載されているが、当業者は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく様々な変更および修正を行うことができることを理解するであろう。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「薬学上許容可能な」という用語は、妥当な利益／リスク比に見合う、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を起こすことなくヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに好適である化合物、材料、組成物、および投与形を意味する。当業者は、式（Ｉ）による化合物の薬学上許容可能な塩を調製し得ることを理解するであろう。これらの薬学上許容可能な塩は、それぞれ、その化合物の最終的な単離および精製の間に、または好適な塩基もしくは酸のその遊離酸もしくは遊離塩基形態の精製化合物と別々に反応させることにより、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製し得る。
【００３０】
本発明の化合物は、好適な塩基と反応させることにより薬学上許容可能な塩を形成することができる。好適な塩基としては、例えば、水酸化物、炭酸塩、水素化物、およびＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＨ、カリウム−ｔ−ブトキシド、アンモニウム塩、およびトリスヒドロキシメチルアミノメタン(trishydroxymethyllaminomethane)または２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオールとしてのトリス塩であるトロメタモールを含むアルコキシドが挙げられる。
【００３１】
さらなる態様において、本発明は、本発明の化合物またはその薬学上許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与することを含んでなる、ＩＯＰ上昇によってもたらされる疾患、例えば、緑内障または高眼圧症を処置する方法を提供する。
【００３２】
「アルキル」とは、指定された数の炭素原子を有する飽和、直鎖状または分枝状の炭化水素基を意味する。「（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を含有するアルキル部分を意味する。典型的なアルキルとしては、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル，およびｔ−ブチルが挙げられる。
【００３３】
「アルケニル」とは、少なくとも１つ、最大３つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖状または分枝状の炭化水素基を意味する。例としては、エテニルおよびプロペニルが挙げられる。
【００３４】
「アルコキシ」とは、酸素連結原子を介して結合しているアルキル部分を含有する「アルキル−オキシ−」基を意味する。例えば、「（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ」という用語は、酸素連結原子を介して結合している、少なくとも１個、最大４個の炭素原子を有する飽和、直鎖状または分枝状の炭化水素部分を表す。典型的な「（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ」基としては、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、およびｔ−ブトキシが挙げられる。
【００３５】
炭素環式基は、飽和、部分不飽和（非芳香族）または完全不飽和（芳香族）であり得る、環員の総てが炭素原子である環状基である。「炭素環式」という用語は、シクロアルキルおよびアリール基を包含する。
【００３６】
「シクロアルキル」とは、指定された数の炭素原子を含有する非芳香族、飽和、環状炭化水素基を意味する。例えば、「（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル」という用語は、３〜６個の環炭素原子を有する非芳香族環状炭化水素環を意味する。典型的な「（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル」基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル，およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００３７】
「アリール」とは、５〜１０個の炭素環原子を含有しかつ少なくとも１つの芳香環を有する芳香族、単環式または二環式炭化水素基を含んでなる基または部分を意味する。「アリール」基の例は、フェニル、ナフチル、インデニル、およびジヒドロインデニル（インダニル）である。全体的には、本発明の化合物において、アリールはフェニルである。
【００３８】
複素環式基は、飽和、部分不飽和（非芳香族）または完全不飽和（芳香族）であり得る、環員として、少なくとも２つの異なる元素の原子を有する５〜６員環状基である。「複素環式」または「ヘテロシクリル」という用語は、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリール基を包含する。「複素環式」基の例としては、限定されるものではないが、オキサジアゾロンが挙げられる。
【００３９】
「ヘテロシクロアルキル」とは、独立に、酸素、硫黄、および窒素から選択される１個以上（一般的には１個または２個）のヘテロ原子置換を含む３〜１０個の環原子を含有する飽和、非芳香族、単環式または二環式基を意味する。「ヘテロシクロアルキル」基の例としては、限定されるものではないが、アジリジニル、チイラニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１，４−ジオキサニル、１，４−オキサチオラニル、１，４−オキサチアニル、１，４−ジチアニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ヘキサヒドロ−１Ｈ−１，４−ジアゼピニル、アザビシクロ［３．２．１］オクチル、アザビシクロ［３．３．１］ノニル、アザビシクロ［４．３．０］ノニル、オキサビシクロ［２．２．１］ヘプチル、および１，１−ジオキシドテトラヒドロ−２Ｈ−チオピラニルが挙げられる。
【００４０】
「５〜６員のヘテロシクロアルキル」という用語は、酸素、硫黄、および窒素から独立に選択される１個または２個のヘテロ原子を含む５個または６個の環原子を含有する、飽和の非芳香族、単環式基を意味する。５〜６員のヘテロシクロアルキル基の例示的な例としては、限定されるものではないが、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、モルホリニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。
【００４１】
「ヘテロアリール」とは、独立に、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０個の環原子を含有する芳香族単環式または二環式基を含んでなる基または部分を意味する。この用語はまた、ヘテロシクロアルキル環部分と縮合したアリール環部分またはシクロアルキル環部分と縮合したヘテロアリール環部分のいずれかを含有する二環式複素環式アリール基を包含する。
【００４２】
「５〜６員のヘテロアリール」という用語は、少なくとも１個の炭素原子と、独立に、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子とを含む５個または６個の環原子を含有する芳香族単環式基を意味する。選択された５員のヘテロアリール基は、１個の窒素、酸素、または硫黄の環ヘテロ原子を含有し、かつ１個、２個、または３個の追加の窒素環原子を含有していてもよい。選択された６員のヘテロアリール基は、１個、２個、または３個の窒素環ヘテロ原子を含有する。５員のヘテロアリール基の例としては、フリル（フラニル）、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリルおよびオキソオキサジアゾリルが挙げられる。６員のヘテロアリール基の例としては、ピリジニル、オキソピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニルおよびトリアジニルが挙げられる。
【００４３】
「ハロゲン」および「ハロ」という用語は、クロロ、フルオロ、ブロモ、またはヨード置換基を意味する。「オキソ」とは、二重結合した酸素部分を表し、例えば、炭素原子に直接結合している場合にはカルボニル部分（−Ｃ＝Ｏ）を形成する。「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、−ＯＨ基を意味することを意図する。本明細書で使用される場合、「シアノ」という用語は、−ＣＮ基を意味する。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「任意に置換されていてもよい」という用語は、基（例えば、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、アリール、もしくはヘテロアリール基など）または環または部分（例えば、炭素環式もしくは複素環式環もしくは部分など）が非置換であり得るか、あるいは基、環または部分が、定義された１つ以上の置換基で置換され得ることを示す。基が複数の代替基から選択され得る場合には、選択される基は同一であり得るしまたは異なり得る。
【００４５】
「独立に」という用語は、２つ以上の置換基が複数の可能な置換基から選択される場合、それらの置換基は同一であり得るしまたは異なり得ることを意味する。
【００４６】
治療上「有効な量」は、本明細書で定義されるように、そのような処置を必要とする患者に投与された時に、処置を達成するのに十分である化合物の量を意味することを意図する。従って、例えば、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩の治療上有効な量は、それを必要とするヒトに投与された時に、ｓＧＣの活性を、その活性によって媒介される病状が軽減、緩和または予防されるように、調節および／または阻害するのに十分である本発明の薬剤の量である。そのような量に相当する所与の化合物の量は、特定の化合物（例えば、効力（ｐＩＣ５０）、有効性（ＥＣ５０）、および特定の化合物の生物学的半減期）、病状およびその重篤度、処置を必要とする患者の属性（例えば、年齢、大きさおよび体重）などの因子に応じて変動するが、当業者ならば日常的に決定することができる。同様に、処置の継続期間および化合物の投与期間（投与間の期間および投与のタイミング、例えば、食事の前／間／後）は、処置を必要とする哺乳動物の属性（例えば、体重）、特定の化合物およびその特性（例えば、薬物動態特性）、疾患または障害およびその重篤度ならびに使用される特定の組成物および方法によって変動するが、当業者ならば決定することができる。
【００４７】
「処置すること」または「処置」は、患者における疾患または障害の少なくとも緩和を意味することを意図する。疾患または障害の緩和のための処置の方法には、上述したように、例えば、ｓＧＣ媒介疾患または障害の回避、遅延、予防、治療または治癒のための、任意の慣用的に許容可能な方法での本発明における化合物の使用が含まれる。
【００４８】
本発明の記載において、化学元素は元素の周期表に従って同定される。本明細書で使用される略語および記号は化学および生物学の分野における当業者によるかかる略語および記号の一般的な使用法に従う。具体的には、以下の略語が実施例中で、本明細書を通じて使用され得る：
ｇ（グラム）              ｍｇ（ミリグラム）              ｒｔ（保持時間）
Ｌ（リットル）            ｍＬまたはｍｌ（ミリリットル）  ＥｔＯＨ（エタノール）
μＬ（マイクロリットル）  ｐｓｉ（ポンド毎平方インチ）
Ｍ（モル濃度）            ｍＭ（ミリモル濃度）            ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）
ｍｏｌ（モル）            ｍｍｏｌ（ミリモル）
ＲＴ（室温）              ＭｅＯＨ（メタノール）
ｉ−ＰｒＯＨ（イソプロパノール）  ＴＥＡ（トリエチルアミン）
ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）        ＴＦＡＡ（無水トリフルオロ酢酸）
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）      ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
【００４９】
本明細書に記載される反応は、本明細書で定義されるように、種々の異なる置換基（例えば、Ｒ１、Ｒ２など）を有する本発明の化合物の製造に適用可能である。当業者は、特定の置換基が本明細書に記載される合成方法に適合しない場合には、その置換基を反応条件に対して安定な好適な保護基で保護し得ることを理解するであろう。保護基は反応順序の好適な時点で除去して所望の中間体または標的化合物を提供し得る。好適な保護基およびそのような好適な保護基を使用して異なる置換基を保護および脱保護するための方法は当業者に周知であり、それらの例は、T. Greene and P. Wuts, Protecting Groups in Chemical Synthesis(第3版), John Wiley & Sons, NY(1999)において見出し得る。
【００５０】
スキーム
以下のスキームは、本発明の化合物を調製することができる方法を示す。記述される特定の溶媒および反応条件もまた例示であり、限定することを意図していない。記載されていない化合物は、市販されているかまたは入手可能な出発材料を用いて当業者によって容易に調製される。
【００５１】
スキーム１
【化３】
2016530292.tif 000005
条件：（ａ）Ｐ（ＯＥｔ）３；（ｂ）Ｎａ２ＣＯ３、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＤＭＥ／Ｈ２Ｏ、１１０℃；（ｃ）ＮａＨ、ＴＨＦ、ＲＴ；（ｄ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ；（ｅ）Ｈ２ＳＯ４、ＥｔＯＨ、８０℃；（ｆ）ＢＢｒ３、ＣＨ２Ｃｌ２、ＲＴ；（ｇ）Ｂｒ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、Ｃｓ２ＣＯ３、アセトン、６５℃；（ｈ）ＮａＯＨ、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨ、８０℃
【００５２】
スキーム１は、式（Ｉ）による化合物の調製のための一般的スキームを表している。出発材料として示されたボロン酸１およびアルデヒド５は、市販されているかまたは当業者に公知の方法を用いて市販の出発材料から作製される。反応条件はスキームで上に記載した通りである；しかしながら、当業者は、使用される反応条件および／または試薬の特定の変更が可能であることを理解するであろう。
【００５３】
スキーム２
【化４】
2016530292.tif 000006
条件：（ａ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、Ｎａ２ＣＯ３；（ｂ）ＮａＨ；（ｃ）Ｈ２ＳＯ４、ＥｔＯＨ；（ｄ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、Ｈ−キューブ（Ｈ−ｃｕｂｅ）；（ｅ）ＢＢｒ３；（ｆ）Ｂｒ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＴＨＰ、Ｃｓ２ＣＯ３、アセトン；（ｇ）ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）；（ｈ）ＭｓＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、その後Ｎｕｃ−Ｈ、ＮａＨ
【００５４】
スキーム２は、ＸがＣＨ２である式（Ｉ）の化合物の調製のための代替方法を説明している。示された出発材料は、市販されているかまたは当業者に公知の方法を用いて市販の出発材料から作製される。反応条件はスキームで上に記載した通りである；しかしながら、当業者は、使用される反応条件および／または試薬の特定の変更が可能であることを理解するであろう。Ｒ４が複素環である式（Ｉ）の化合物では、適当な求核試薬（Ｎｕｃ）は当業者に公知の方法を用いて選択される。有用な求核試薬のいくつかの例は、モルホリンまたは３置換もしくは４置換ピラゾールまたはトリアゾールである。
【００５５】
スキーム３
【化５】
2016530292.tif 000007
条件：（ａ）Ｃｓ２ＣＯ３、Ｂｒ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４；（ｂ）ＮａＢＨ４；（ｃ）ＰＢｒ３；（ｄ）Ｃｓ２ＣＯ３；（ｅ）ＮａＯＨ
【００５６】
スキーム３は、ＸがＯである式（Ｉ）による化合物の調製のための一般的スキームを表している。出発材料として示されたアルデヒド１２は、市販されているかまたは当業者に公知の方法を用いて市販の出発材料から作製される。反応条件はスキームで上に記載した通りである；しかしながら、当業者は、使用される反応条件および／または試薬の特定の変更が可能であることを理解するであろう。
【００５７】
スキーム４
【化６】
2016530292.tif 000008
条件：（ａ）Ｂｒ−（ＣＨ２）ｎ−Ｂｒ、Ｃｓ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＮ、６０〜８０℃；（ｂ）Ｎｕｃ−Ｈ、Ｃｓ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＮ、６０℃またはＮｕｃ−Ｈ、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ、６０〜１００℃；（ｃ）ＮａＯＨまたはＬｉＯＨ、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ、ＲＴ。
【００５８】
スキーム５
【化７】
2016530292.tif 000009
条件：（ａ）（Ｙ＝ＯＭｓ、ハロゲン）Ｃｓ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＮ、６０〜８０℃；（ｂ）ＮａＯＨまたはＬｉＯＨ、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ、ＲＴ。
【００５９】
スキーム４および５は、中間体９（スキーム１または２に記載の調製物）から出発する、ＸがＣＨ２である式（Ｉ）の化合物の調製のための代替方法を説明している。
【００６０】
スキーム６
【化８】
2016530292.tif 000010
【００６１】
スキーム６は、ＺがＣ１−４アルキルである式（Ｉ）の化合物の調製のための方法を説明している。
【実施例】
【００６２】
以下の実施例により本発明を説明する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、むしろ本発明の化合物、組成物、および方法を調製および使用するために当業者に指針を提供するものである。本発明の特定の実施形態が記載されているが、当業者は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく様々な変更および修正を行うことができることを理解するであろう。
【００６３】
特に断りのない限り、総ての出発材料は商業的供給業者から入手し、それ以上精製せずに使用した。特に指示のない限り、総ての温度は℃（摂氏温度）で表している。特に指示のない限り、総ての反応は不活性雰囲気下、室温で行われる。
【００６４】
実施例１〜１２の化合物をシリカクロマトグラフィーにより精製した。分取ＨＰＬＣとは、材料が高圧液体クロマトグラフィーにより精製された場合の方法を意味する。特に明記しない限り、シリカフラッシュカラムクロマトグラフィーとは、記載の溶媒系を用いるＩＳＣＯ  ｓｑ１６ｘ装置でレディセプ（Ｒｅｄｉｓｅｐ）（商標）プレパックシリカフラッシュカラムを使用した材料の精製を意味する。
【００６５】
実施例１３〜２３の化合物をシリカクロマトグラフィーにより精製した。分取ＨＰＬＣとは、材料が高圧液体クロマトグラフィーにより精製された場合の方法を意味する。使用した分取ＨＰＬＣ機器は以下の通りであった：
Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ機器：ＷＦＣ  ＩＩＩフラクションコレクション(WFC III Fraction Collector)を備えたＷａｔｅｒｓ社製２５４５、２７０７オートサンプラー
方法Ａ：カラム：Ｘ  Ｔｅｒｒａ  Ｃ１８（２５０＊１９ｍｍ）１０μ  移動相、Ａ＝０．１％重炭酸アンモニウム（６３％）およびＢ＝アセトニトリル（３７％）；流速、１８ｍｌ／分；サンプルローディング溶媒  アセトニトリル＋ＭｅＯＨ；分画容量  ２００ｍＬ
方法Ｂ：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１５０＊３０ｍｍ、５μ）；移動相、Ａ＝０．１％ギ酸水溶液、Ｂ＝アセトニトリル  勾配  時間（分）／％Ｂ：０／１０、２／１０、１５／６０、１８／９０；カラム温度℃：周囲温度；流速、３０ｍｌ／分、サンプルローディング溶媒  ＡＣＮ＋ＴＨＦ；分画容量、１５０ｍＬ
方法Ｃ：カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８（１５０＊３０ｍｍ、５μ）；移動相、Ａ＝０．１％ギ酸水溶液、Ｂ＝アセトニトリル  勾配  時間（分）／％Ｂ：０／１０、１／１０、１５／６０；カラム温度℃：周囲温度；流速、３０ｍｌ／分、サンプルローディング溶媒  ＡＣＮ＋メタノール；分画容量、１５０ｍＬ
方法Ｄ：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１５０×３０ｍｍ）５μ；移動相Ａ＝１０ｍｍ重炭酸アンモニウム；Ｂ＝アセトニトリル（４０：６０）；温度、周囲温度；流速、３０ｍｌ／分；サンプルローディング溶媒、アセトニトリル；分画容量、１５０ｍＬ
【００６６】
実施例１〜１２の化合物については、分析ＨＰＬＣを、Ｘ−ｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム（２，５μｍ  ３＊３０ｍｍ内径）において、４０℃の温度で１．１ｍＬ／分の流速にて０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（溶媒Ａ）および１００％アセトニトリル（溶媒Ｂ）で溶出し、以下の溶出勾配：０→４分、５％Ｂ→１００％Ｂ；４→５分、１００％Ｂを用いて行った。質量スペクトル（ＭＳ）を、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社製ＺＱ−ＬＣ質量分析計において、エレクトロスプレー正イオン化モード［ＭＨ＋分子イオンを与えるためのＥＳ＋ｖｅ］またはエレクトロスプレー負イオン化モード［（Ｍ−Ｈ）−分子イオンを与えるためのＥＳ−ｖｅ］を使用して記録した。
【００６７】
実施例１〜１２の化合物については、以下の２つの方法のいずれかを用いて高分解能ＭＳデータを収集した：
（ａ）分析ＨＰＬＣを、ＬＵＮＡ  ３ｕ  Ｃ１８カラム（２，５μｍ  ３０＊３ｍｍ内径）において、４０℃の温度で１．３ｍＬ／分の流速にて０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（溶媒Ａ）および１００％アセトニトリル（溶媒Ｂ）で溶出し、以下の溶出勾配：０→０．５分、５％Ｂ；０．５→３．５分、５％Ｂ→１００％Ｂ；３．５→４分、１００％Ｂ；４→４．５分、１００％Ｂ→５％Ｂ；４．５→５．５分、５％Ｂを用いて行った。質量スペクトル（ＭＳ）を、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社製ＬＣＴ質量分析計において、エレクトロスプレー正イオン化モード［ＭＨ＋分子イオンを与えるためのＥＳ＋ｖｅ］またはエレクトロスプレー負イオン化モード［（Ｍ−Ｈ）−分子イオンを与えるためのＥＳ−ｖｅ］を使用して記録した。
【００６８】
（ｂ）分析ＨＰＬＣを、Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（２，５μｍ  ３０＊３ｍｍ内径）において、４０℃の温度で１．３ｍＬ／分の流速にて０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（溶媒Ａ）および１００％アセトニトリル（溶媒Ｂ）で溶出し、以下の溶出勾配：０→０．５分、５％Ｂ；０．５→３．５分、５％Ｂ→１００％Ｂ；３．５→４分、１００％Ｂ；４→４．５分、１００％Ｂ→５％Ｂ；４．５→５．５分、５％Ｂを用いて行った。質量スペクトル（ＭＳ）を、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社製ＬＣＴ質量分析計において、エレクトロスプレー正イオン化モード［ＭＨ＋分子イオンを与えるためのＥＳ＋ｖｅ］またはエレクトロスプレー負イオン化モード［（Ｍ−Ｈ）−分子イオンを与えるためのＥＳ−ｖｅ］を使用して記録した。
【００６９】
実施例１３〜２３の化合物については、以下の方法の１つを用い、３１００  ＳＱＤ  ＭＳを備えたＬＣＭＳ機器ＷＡＴＥＲＳ社製Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣを使用して高分解能ＭＳデータを収集した：
方法Ａ：カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７μＭ）；移動相：Ａ＝０．１％ギ酸水溶液；Ｂ＝０．１％ギ酸・アセトニトリル溶液  勾配  時間（分）／％Ｂ：０／３、０．４／３、３．２／９８、３．８／９８、４．２／３、４．５／３；カラム温度：３５℃、流速：０．６ｍｌ／分
方法Ｂ：カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、１．７μＭ）；移動相：＝Ａ  ０．１％ギ酸水溶液；Ｂ＝０．１％ギ酸・アセトニトリル溶液  勾配  時間（分）／％Ｂ：０／３、１．５／１００、１．９／１００、２／３。カラム温度：４０℃、流速：１．０ｍｌ／分
方法Ｃ：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（５０×４．６ｍｍ、２．５μＭ）；移動相：Ｃ＝アセトニトリル；Ｄ＝５ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液；勾配  時間（分）／％Ｃ：０／５、０．５／５、１／１５、３．３／９８、５．２／９８、５．５／５、６／５；カラム温度：３５℃、流速：１．３ｍｌ／分
方法Ｄ：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（５０×４．６ｍｍ、２．５μＭ）；移動相：Ａ＝５ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ−１０）；Ｂ＝アセトニトリル；勾配  時間（分）／％Ｄ：０／５、０．５／５、１／１５、３．３／９８、５．２／９８、５．５／５、６／５；カラム温度：３５℃、流速：１．３ｍｌ／分
方法Ｅ：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、２．５μＭ）；移動相：Ｃ＝０．１％ギ酸・アセトニトリル溶液；Ｄ＝０．１％ギ酸水溶液；勾配  時間（分）／％Ｃ：０／５、０．５／５、１／１５、３．３／９８、５．２／９８、５．５／５、６／５；カラム温度：３５℃、流速：１．３ｍｌ／分
方法Ｆ：カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１００ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７μＭ）；移動相：Ａ＝０．１％トリフルオロ酢酸水溶液；Ｂ＝０．１％トリフルオロ酢酸・アセトニトリル溶液；勾配  時間（分）／％Ｂ：０／３、８．５／１００、９．０／１００、９．５／３、１０．０１／３；カラム温度：５０℃、流速：０．５５ｍｌ／分
【００７０】
実施例１〜１２の化合物について、プロトン磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ、Ｂｒｕｃｋｅｒ）スペクトルデータの報告では、化学シフトは、テトラメチルシランを内部標準として使用してｐｐｍ（δ）で報告される。分裂パターンは、ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線として設計されている。
【００７１】
実施例１３〜２３の化合物については、総てのＮＭＲ実験を４００ＭＨｚのＶａｒｉａｎ社製機器により記録した。ＮＭＲ実験を記録するために使用される溶媒はＤＭＳＯ−ｄ６（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＣＩＬ）およびＣＤＣｌ３（ＣＩＬ）である。ＴＭＳを内部標準として使用した。総ての結果をＶＮＭＲＪ  ３．２バージョンを使用して解釈した。
【００７２】
実施例１
【化９】
2016530292.tif 000011
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【００７３】
中間体１：  ２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンジルホスホン酸ジエチル
【化１０】
2016530292.tif 000012
２−（２−（ブロモメチル）フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（２ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）および亜リン酸トリエチル（１．２３ｇ、７．４１ｍｍｏｌ）を６０℃で一晩撹拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈しＨ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、標題化合物を無色の油状物として得た（２．３５ｇ、６．６３ｍｍｏｌ、９９％）。LC/MS rt =3.25分(M+H = 355 m/z)
【００７４】
中間体２：  １−（６−（２−（（ｄｉエトキシホスホリル）メチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化１１】
2016530292.tif 000013
２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンジルホスホン酸ジエチル（１．４６３ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．７２９ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．１９９ｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）、および１−（６−クロロピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１．１ｇ、３．４４ｍｍｏｌ、ＷＯ２００９／０７１５０４に記載の手順に従って製造）を還流下で一晩撹拌した。この反応混合物を真空濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１２ｇ  ＡＩＴシリカ（Ｓｉ）カラムにロードし、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０から９８／２を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を灰白色油状物として得た（１．５５ｇ、３．０３ｍｍｏｌ、８８％）。LC/MS rt = 3.33分, (M+H) = 512.
【００７５】
中間体３：  （Ｅ）−１−（６−（２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化１２】
2016530292.tif 000014
室温で、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（（ジエトキシホスホリル）メチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１．５５ｇ、３．０３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＮａＨ（０．２５５ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を１時間撹拌し、４−メトキシ−２−メチルベンズアルデヒド（０．５０１ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で２日間撹拌した。
【００７６】
この反応のＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了し、エステルが酸へと加水分解されていたことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、１ＮのＨＣｌで急冷し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを４０ｇ  ＡＩＴシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０から９８／２を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物（１．２ｇ、２．５ｍｍｏｌ、８３％）を灰白色非晶質固体として得た。LC/MS rt=2.79分, (M-H)=478.
【００７７】
中間体４：  １−（６−（２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化１３】
2016530292.tif 000015
反応物を、Ｈ−キューブ（設定：４５℃、１バール、１ｍＬ／分）および１０％Ｐｄ／Ｃを触媒として用いて水素化した。反応混合物を蒸発させて１．２ｇの灰白色油状物を得た。LC/MS rt =2.87分, (M-H)=480.
【００７８】
中間体５：  １−（６−（２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化１４】
2016530292.tif 000016
１−（６−（２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１．２ｇ、２．５ｍｍｏｌ）および硫酸（１ｍＬ、１８．７６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのエタノール中で合わせ、８０℃で一晩撹拌した。薄層クロマトグラフィーによる反応の評価は、反応が完了したことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、ジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびＨ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを５０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードし、１００％ジクロロメタンを用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、標題化合物（１ｇ、７９％）を黄色油状物として得た。
【００７９】
中間体６：  １−（６−（２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化１５】
2016530292.tif 000017
０℃でジクロロメタン（ＤＣＭ）（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１ｇ、１．９６３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＢｒ３（２３２１μＬ、２．３２１ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を室温で一晩と２日間撹拌した。ＴＬＣによる分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物をＨ２Ｏで急冷し、真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶かした。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを４０ｇ  ＡＩＴシリカ（Ｓｉ）カラムにロードし、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１００：０から８０：２０）で溶出した。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を白色油状物として得、これは固化した（９３０ｍｇ、８１％）。
【００８０】
中間体７：  １−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化１６】
2016530292.tif 000018
アセトン（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（３００ｍｇ、０．６０５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（２９６ｍｇ、０．９０８ｍｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、４−ブロモ−１，１，１−トリフルオロブタン（０．０９９ｍｌ、０．７２７ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を６５℃で一晩加熱した。ＴＬＣによる分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、ジクロロメタンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １００％から８０％を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を黄色油状物として得た。 LC/MS rt = 4.59分, M+H m/z = 606.
【００８１】
最終化合物：  １−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化１７】
2016530292.tif 000019
【００８２】
中間体７  １−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（３５０ｍｇ、０．５７８ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（１．１６ｍＬ、１Ｍ溶液）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中で合わせ、８０℃で一晩撹拌した。ＴＬＣによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応を、１Ｎ  ＨＣｌ（２当量）を加えることにより急冷した。反応混合物を真空濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０から９８／２を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、標題化合物（２６０ｍｇ、６８％）を白色油状物として得、これは固化した。HRMS rt= 2.97分; (M+H) 理論値=578.1878, 実測値=578.1841. 
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.3 (s, 1H), 8.2 (t, 1H), 7.8 (d, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.35 (m, 4H), 6.65 (m, 2H), 6.55 (d, 1H), 4 (m, 2H), 2.8 (m, 2H), 2.6 (m, 2H), 2.4 (m, 2H), 2 (s, 3H), 1.9 (m, 2H).
【００８３】
実施例２
【化１８】
2016530292.tif 000020
１−（６−（２−（４−（３−モルホリノプロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【００８４】
中間体８：  １−（６−（２−ホルミルフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化１９】
2016530292.tif 000021
ＤＭＥ（５０ｍｌ）およびＨ２Ｏ（５ｍｌ）中、１−（６−クロロ−ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．７２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、２−ホルミルフェニルボロン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、１．３ｇ、８．８ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（１．３ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１０℃で４時間加熱した後、冷却し、水に注いだ。ＡｃＯＥｔで抽出した後、有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル（ＣＨ２Ｃｌ２）でのクロマトグラフィーにより精製した。標題化合物を淡褐色粉末として得た（１．４ｇ、収率＝５７．４％）。LC/MS: 390.1 (M+H), rt= 3.43分
1H NMR (CDCl3, ppm) : 10.16 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.09 (m, 2H), 7.75 to 7.69 (m, 4H), 7.62 (m, 1H), 4.39 (q, 2H), 1.40 (t, 3H) 
【００８５】
中間体９：  （Ｅ）−１−（６−（２−（４−メトキシスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化２０】
2016530292.tif 000022
室温で、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１５ｍｌ）中、４−メトキシベンジルホスホン酸ジエチル（１．２５ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＮａＨ（０．１２６ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）を得た。得られた懸濁液を２時間撹拌した後に、氷浴中で冷却した。１−［６−（２−ホルミルフェニル）−２−ピリジニル］−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１．１２１ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣによる反応の分析は、無反応を示した。追加分のＮａＨ（０．１２６ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）を室温で加え、混合物を５０℃で２４時間加熱した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示し、エステルの酸への加水分解を伴っていた。この反応混合物を真空濃縮し、Ｈ２Ｏ＋２ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、２ｇの１−［６−（２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルオキシ）フェニル］エテニル｝フェニル）−２−ピリジニル］−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（２ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、収率１４８％）をダーティブラウンの油状物として得、これは精製しなかった。(LC/MS rt=2.17分; m/z = 466 [M=H]
【００８６】
中間体１０：  １−［６−（２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルオキシ）フェニル］エテニル｝フェニル）−２−ピリジニル］−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２１】
2016530292.tif 000023
１−［６−（２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルオキシ）フェニル］エテニル｝フェニル）−２−ピリジニル］−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（２ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１当量）硫酸（１．０ｍｌ、１８．７６ｍｍｏｌ、１．３７当量）は、８０℃で一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびＨ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１００ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ  １００／０から８０／２０を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、標題化合物を橙色油状物として得た（６００ｍｇ、２８％）。LC/MS rt = 4.27分 m/z 495 [M+H]
【００８７】
中間体１１：  １−（６−（２−（４−メトキシフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２２】
2016530292.tif 000024
１−［６−（２−｛（Ｅ）−２−［４−（メチルオキシ）フェニル］エテニル｝フェニル）−２−ピリジニル］−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６００ｍｇ、１．２１６ｍｍｏｌ）をメタノール（２５０ｍｌ）に溶かし、Ｈ−キューブ（設定：４０℃、１バール、１ｍｌ／分）および１０％Ｐｄ／Ｃを触媒として用いて水素化した。得られた溶液を真空濃縮し、必要な生成物を黄色油状物として得た（４６０ｍｇ、７６％）。LC/MS rt = 4.08分; m/z = 496 [M+H].
【００８８】
中間体１２：  １−（６−（２−（４−ヒドロキシフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２３】
2016530292.tif 000025
０℃でジクロロメタン（ＤＣＭ）（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−メトキシフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（４６０ｍｇ、０．９２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＢｒ３（２３２１μＬ、２．３２１ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を一晩室温で撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物をＨ２Ｏで急冷し、真空濃縮した後、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１２ｇ  ＡＩＴシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １００／０から８０／２０を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を黄色油状物として得た（３５０ｍｇ、７８％）。LC/MS rt = 3.77分; m/z 482 [M+H].
【００８９】
中間体１３：  １−（６−（２−（４−（３−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２４】
2016530292.tif 000026
アセトン（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−ヒドロキシフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１７５ｍｇ、０．３６３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（２３７ｍｇ、０．７２７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、２−（３−ブロモプロポキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（０．０７４ｍｌ、０．４３６ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を６５℃で一晩加熱した。ＴＬＣによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、ＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １００／０から８０／２０で溶出する精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を灰白色油状物として得た（１２０ｍｇ、５２．９％）。LC/MS rt = 4.51分m/z = 540 [M-THP].
【００９０】
中間体１４：  １−（６−（２−（４−（３−ヒドロキシプロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２５】
2016530292.tif 000027
１−（６−（２−（４−（３−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１２０ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）を、少量のＤｏｗｅｘ  Ｈ＋とともに室温で一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この混合物を濾過し、濃縮し、標題化合物を灰白色油状物として得た（９０ｍｇ、８７％）。LC/MS rt = 3.86分; m/z = 540 [M+H].
【００９１】
最終化合物１−（６−（２−（４−（３−モルホリノプロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化２６】
2016530292.tif 000028
【００９２】
中間体１４  １−（６−（２−（４−（３−ヒドロキシプロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（９０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）および塩化メタンスルホニル（０．０４４ｍｌ、０．５００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）中で合わせ、室温で一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が不完全で出発材料の残留を伴うことを示した。
【００９３】
追加分のＮＥｔ３（１当量）および塩化メタンスルホニル（１当量）を加え、この混合物を室温で４時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が不完全で出発材料の残留を伴うことを示した。
【００９４】
追加分のＮＥｔ３（１当量）および塩化メタンスルホニル（１当量）を加え、この混合物を室温で４時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物をＨ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。
【００９５】
メシル酸化合物の形成は見られたが、生成物は単離されなかった。
【００９６】
粗メシル酸塩をＴＨＦ（１０ｍｌ）に希釈し、モルホリン（０．０４４ｍｌ、０．５００ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２日間撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、無反応を示した。ＮａＨ（１３．３４ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、この置換反応は不完全で、エステルの酸への加水分解を伴っていたことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、Ｈ２Ｏで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌで急冷した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。固体残渣をｉＰｒ２Ｏに取り、必要な生成物を白色粉末として得た。LC/MS rt = 2.82分 m/z = 581 [M+H]; HRMS rt = 2.59分、(M+H) 理論値=581.2375, 実測値=581.5404 (Δ=5ppm).
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.35 (s, 1H), 8.25 (m, 1H), 7.8 (m, 2H) 7.35 (m, 4H), 6.75 (m, 4H), 4 (t, 2H), 3.75 (m, 4H), 3.1 (m, 2H), 2.85 (m, 4H), 2.65 (m, 2H), 2.5 (m, 2H), 1.95 (m, 2H)
【００９７】
実施例３
【化２７】
2016530292.tif 000029
１−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【００９８】
中間体１５：  １−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２８】
2016530292.tif 000030
アセトン（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６００ｍｇ、１．２１１ｍｍｏｌ、実施例１に記載の製法）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（５９２ｍｇ、１．８１６ｍｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、２−（３−ブロモプロポキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３２４ｍｇ、１．４５３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６５℃一晩加熱した。ＴＬＣによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物を真空濃縮し、ＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １００／０から８０／２０を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を無色の油状物として得た（７１０ｍｇ、９２％）。LC/MS rt = 4.62分m/z = 554 [M+H]-THP.
【００９９】
中間体１６：  １−（６−（２−（４−（３−ヒドロキシプロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化２９】
2016530292.tif 000031
１−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（７１０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶かし、少量のＤｏｗｅｘ  Ｈ＋とともに室温で一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この混合物を濾過し、濃縮し、標題化合物を淡褐色油状物として得た（５５０ｍｇ、８９％）。LC/MS rt = 3.71分m/z = 554 [M+H].
【０１００】
中間体１７：  １−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（（メチルスルホニル）オキシ）プロポキシ）フェネチル）フェニル）−ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化３０】
2016530292.tif 000032
１−（６−（２−（４−（３−ヒドロキシプロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（５５０ｍｇ、０．９９４ｍｍｏｌ）、塩化メタンスルホニル（２８５ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、０．１９２ｍｌ）およびトリエチルアミン（３０２ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、０．４１５ｍｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）中で合わせ、室温で一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。この反応混合物をＨ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １００／０から７０／３０を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、標題化合物を灰白色油状物として得た（５００ｍｇ、８０％）。LC/MS rt = 4.06分m/z 632 [M+H].
【０１０１】
最終化合物１−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化３１】
2016530292.tif 000033
室温で、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１０ｍｌ）中、中間体１７  １−（６−（２−（２−メチル−４−（３−（（メチルスルホニル）オキシ）プロポキシ）フェネチル）フェニル）−ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２３２ｍｇ、０．３６７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（３０．９ｍｇ、０．７７２ｍｍｏｌ）を得た。懸濁液を３０分撹拌した後、３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール（５０ｍｇ、０．３６７ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣによる反応の分析は、反応が完了したことを示した。２当量の１Ｎ  ＨＣｌを加えた。この反応混合物を真空濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶かし、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。生成物をＩｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎでのクロマトグラフィーにより精製した。サンプルを１０ｇ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカ（Ｓｉ）カラムにロードした後、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０から９８／２を用いて精製を行った。適当な画分を合わせ、真空濃縮し、必要な生成物を灰白色油状物として得た（１８０ｍｇ、７６％）。LC/MS rt =3.25分m/z = 644 [M+H]. HRMS rt = 2.95分, (M+H) 理論値=644.2096; 実測値=644.2130 (Δ=6.5 ppm).
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.3 (s, 1H), 8.2 (t, 1H), 8.0 (m, 1H), 7.8 (d, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.4 (m, 4H), 6.7 (s, 1H), 6.6 (m, 2H), 6.5 (d, 1H), 4.4 (m, 2H), 3.9 (m, 2H), 2.8 (m, 2H), 2.6 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 1.9 (s, 3H). 
【０１０２】
実施例４
【化３２】
2016530292.tif 000034
１−（６−（２−（（４−（２−メトキシエトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【０１０３】
中間体１８：  ４−（２−メトキシエトキシ）ベンズアルデヒド
【化３３】
2016530292.tif 000035
アセトン中、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２．３ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸セシウム（９．２ｇ、２８．２ｍｍｏｌ，１．５当量）を加え、この反応混合物を室温で３０分間撹拌した。１−ブロモ−２−メトキシエタン（２．６１ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を還流下で一晩加熱し、冷却した。不溶性物質の濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、シクロヘキサン／酢酸エチル、９／１で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物（１．２ｇ、３５％）を黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, ppm): 9.91 (s, 1H), 7.85 (d, 2H), 7.05 (d, 2H), 4.23 (t, 2H), 3.81 (t, 2H), 3.48 (s, 3H).
【０１０４】
中間体１９：  （４−（２−メトキシエトキシ）フェニル）メタノール
【化３４】
2016530292.tif 000036
ＥｔＯＨ    中、４−（２−メトキシエトキシ）ベンズアルデヒド（１．２ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（１２６ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ、０．５当量）を少量ずつ加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した後、水に注いだ。この混合物を１Ｎ  ＨＣｌの溶液で酸性化した。酢酸エチルで抽出した後、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、標題化合物（９００ｍｇ、７５％）を無色のオイルとして得た。
【０１０５】
中間体２０：  １−（ブロモメチル）−４−（２−メトキシエトキシ）ベンゼン
【化３５】
2016530292.tif 000037
氷浴中で冷却した無水ＣＨ２Ｃｌ２中、（４−（２−メトキシエトキシ）フェニル）メタノール（９００ｍｇ、４．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＢｒ３（ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、０．５当量）を滴下した。この反応混合物を０℃で３０分間、次いで、室温で２時間撹拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性とした。ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した後、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、標題化合物（１．１２５ｇ、９３％）を黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, ppm): 7.33 (d, 2H), 6.91 (d, 2H), 4.52 (s, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.77 (t, 2H), 3.47 (s, 3H).
【０１０６】
中間体２１：  １−（６−（２−（（４−（２−メトキシエトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化３６】
2016530292.tif 000038
アセトン（５０ｍｌ）中、１−（６−（２−ヒドロキシフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６８０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸セシウム（８８０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、この反応混合物を室温で１０分間撹拌した。１−（ブロモメチル）−４−（２−メトキシエトキシ）ベンゼン（４９０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、この反応混合物を６０℃で４時間加熱した後、冷却した。この反応混合物を濾過して不溶性物質を除去し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をペンタンで摩砕し、得られた沈澱を濾取し、乾燥させ、標題化合物（８４５ｍｇ、８７％）を白色粉末として得た。LC/MS rt= 4.04分, m/z 542.1 [M+H]; 1H NMR (CDCl3, ppm): 8.15 (d+s, 2H), 8.00 (dd, 1H), 7.86 (t, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.3 (d, 2H), 7.12 (t, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.93 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.4 (q, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.78 (t, 2H), 3.48 (s, 3H), 1.41 (t, 3H).
【０１０７】
最終化合物  １−（６−（２−（（４−（２−メトキシエトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化３７】
2016530292.tif 000039
中間体２１  １−（６−（２−（（４−（２−メトキシエトキシ）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（８４０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨおよび１Ｎ  ＮａＯＨ（２当量）に溶かした。この反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮してＥｔＯＨを除去し、混合物を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ約５に酸性化した。酢酸エチルで抽出した後、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をジイソプロピルエーテルで摩砕し、得られた沈澱を濾取し、乾燥させ、標題化合物（６１５ｍｇ、７７％）をクリーム色の粉末として得た。LC-HRMS: C26H22F3N3O5, rt = 2.39分.
理論値: 512.1434 (M-H) 実測値: 512.1475 (M-H);  1H NMR (CDCl3, ppm) : 8.23 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.0 (dd, 1H), 7.88 (t, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.4 (t, 1H), 7.3 (d, 2H), 7.14 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 6.94 (d, 2H), 5.1 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.79 (t, 2H), 3.49 (s, 3H)
【０１０８】
以下の例は、適当なアルデヒドおよび適当であれば臭化アルキルを用い、摩砕に必要な場合はペンタンをジイソプロピルエーテルに置き換え、実施例４に記載されるものと同様の手順を用いて製造した。
【０１０９】
【表１】
2016530292.tif 000040
2016530292.tif 000041
2016530292.tif 000042
【０１１０】
実施例１３
【化３８】
2016530292.tif 000043
１−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【０１１１】
中間体２２：  １−（６−（５−フルオロ−２−ホルミルフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化３９】
2016530292.tif 000044
１，２−ジメトキシエタン（２５ｍｌ）および水（５ｍｌ）中、１−（６−クロロピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１０ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）、（５−フルオロ−２−ホルミルフェニル）ボロン酸（７．８８ｇ、４６．９ｍｍｏｌ、ｃｏｍｂｉ−ｂｌｏｃｋｓ）およびＮａ２ＣＯ３（６．６３ｇ、６２．６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３０分間、アルゴンでパージした後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３．６１ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１１０℃で１６時間加熱した後、冷却し、セライトパッドで濾過した。濾液を水（３０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機相をブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を１０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。回収した画分を減圧下で濃縮し、標題化合物（７．５ｇ、収率５６．１％）を褐色固体として得た。LC/MS: rt=3.23分  m/z= 408.4 [M+H]+
【０１１２】
中間体２３：  （４−メトキシ−２−メチルフェニル）メタノール
【化４０】
2016530292.tif 000045
窒素下０℃で撹拌したテトラヒドロフラン（１．５Ｌ）中、４−メトキシ−２−ｍエチル安息香酸（３０ｇ、１８１ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化リチウムアルミニウム（８．２２ｇ、２１７ｍｍｏｌ）を３０分かけて少量ずつ加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を０℃の２Ｎ  ＮａＯＨ溶液（２５ｍｌ）ゆっくり急冷し、セライトで濾過した。有機層を減圧下で濃縮し、（４−メトキシ−２−メチルフェニル）メタノール（２５ｇ、１６４ｍｍｏｌ、収率９１％）を得た。
1H NMR (CDCl3) δ (ppm): 7.2 (m, 1H), 6.7 (m, 2H), 4.6 (s, 2H), 3.8 (s, 3H), 2.35 (s, 3H).
【０１１３】
中間体２４：  １−（ブロモメチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゼン（Ｎ３２１９０−４２−１）
【化４１】
2016530292.tif 000046
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中、（４−メトキシ−２−メチルフェニル）メタノール（１１．２ｇ、７３．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、０℃で三臭化リン（１３．８８ｍｌ、１４７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、２時間撹拌した。反応混合物を氷冷水（５０ｍｌ）で急冷し、ジクロロメタン（２×２０ｍＬ）で抽出し、ＮａＨＣＯ３溶液（３０ｍｌ）で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮し、１−（ブロモメチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゼン（１１．２ｇ、５２．１ｍｍｏｌ、収率７０．８％）を得た。この化合物をそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
【０１１４】
中間体２５：  ４−メトキシ−２−メチルベンジルホスホン酸ジエチル
【化４２】
2016530292.tif 000047
１，４−ジオキサン（２．５ｍｌ）中、１−（ブロモメチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゼン（１０ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）および亜リン酸トリエチル（１０．１６ｍｌ、５８．１ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃で２０時間加熱した。この反応混合物を水（１０ｍｌ）で急冷し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、４−メトキシ−２−メチルベンジルホスホン酸ジエチル（１０ｇ、３６．７ｍｍｏｌ、収率７９％）を無色の液体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ (ppm): 7.2 (m, 1H), 6.7 (m, 2H), 4 (m, 4H), 3.8 (s, 3H), 3.1 (d, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.2 (m, 6H).
【０１１５】
中間体２６：  １−（６−（５−フルオロ−２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（Ｅ）−エチル
【化４３】
2016530292.tif 000048
窒素下０℃で撹拌したテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中、ＮａＨ（０．９８２ｇ、２４．５５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中、４−メトキシ−２−メチルベンジルホスホン酸ジエチル（５．０１ｇ、１８．４１ｍｍｏｌ）の溶液を５分かけて滴下した後、１−（６−（５−フルオロ−２−ホルミルフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（５ｇ、１２．２８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機相をブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。回収した画分を減圧下で濃縮し、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（Ｅ）−エチル（２．４ｇ、収率３４．５％）を無色の半固体として得た。LC/MS: rt=3.29分  m/z= 526.30 [M+H]+
【０１１６】
中間体２７：  １−（６−（５−フルオロ−２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化４４】
2016530292.tif 000049
室温で撹拌したメタノール（５０ｍｌ）中、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（Ｅ）−エチル（２．４ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール（５０ｍｌ）中、Ｐｄ／Ｃ（０．４８６ｇ、０．４５７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温、水素圧（３０Ｐｓｉ）下で２時間撹拌した。反応混合物をセライトベッドで濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２．１ｇ、３．６８ｍｍｏｌ、収率８０％）を得た。LC/MS: rt=3.24分  m/z= 528.31 [M+H]+. 
【０１１７】
中間体２８：  １−（６−（５−フルオロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化４５】
2016530292.tif 000050
窒素下で撹拌したジクロロメタン（５０ｍｌ）中、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６．６ｇ、１２．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、三臭化ホウ素（１．４１９ｍｌ、１５．０１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で３時間撹拌した後、水（５０ｍｌ）で希釈し、ジクロロメタン（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機相をＮａ２ＣＯ３溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（４ｇ、収率５６．１％）を得た。LC/MS: rt=4.03分  m/z=514.20 [M+H]+
【０１１８】
中間体２９：  １−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化４６】
2016530292.tif 000051
窒素下０℃で撹拌したＤＭＦ（１５ｍｌ）中、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２００ｍｇ、０．３８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１０８ｍｇ、０．７７９ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−１，１，１−トリフルオロブタン（１５６ｍｇ、０．８１８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１００℃で１６時間撹拌した後、冷却し、水（１０ｍｌ）で希釈した。ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した後、有機相をブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、１−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２００ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ、収率７２．５％）を得た。LC/MS: rt= 3.39分  m/z= 624.34 [M+H]+.
【０１１９】
最終化合物  １−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化４７】
2016530292.tif 000052
ＥｔＯＨ（５ｍｌ）および水（０．７ｍｌ）中、中間体２９  １−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２００ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、ＮａＯＨ（３８．５ｍｇ、０．９６２ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残渣を冷水（０．５ｍｌ）に溶かし、飽和クエン酸溶液でｐＨ４まで酸性化した。ジクロロメタン（３×１５ｍｌ）で抽出した後、合わせた有機相を水（２×１５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（方法Ｂ）により精製した。画分を回収し、凍結乾燥させ、１−（６−（５−フルオロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（６６．３ｍｇ、収率３４．７％）を褐色固体として得た。
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm):  13.8 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.21 (t, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.42 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 6.63 (m, 2H), 6.53 (m, 1H), 3.94 (t, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.56 (m, 2H), 2.42- 2.36 (m, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.88 (m, 2H)
LC/MS: rt=3.06分  m/z= 596.17 [M+H]+. 
【０１２０】
実施例１４
【化４８】
2016530292.tif 000053
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【０１２１】
中間体３０：  ３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−１−オール
【化４９】
2016530292.tif 000054
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中、１Ｈ−ピラゾール（５００ｍｇ、７．３４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、３−ブロモプロパン−１−オール（１５３１ｍｇ、１１．０２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）および炭酸セシウム（４７８６ｍｇ、１４．６９ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃、窒素下で１６時間撹拌した。この反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、ジエチルエーテル（３×２０ｍｌ）で抽出し、ブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−１−オール（４５０ｍｇ、３．５７ｍｍｏｌ、収率４８．６％）を無色の液体として得た。
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm):  7.7 (s, 1H), 7.4 (s, 1H), 6.2 (s, 1H), 4.5 (t, 1H), 4.1 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 1.9 (m, 2H).
【０１２２】
中間体３１：  メタンスルホン酸３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロピル
【化５０】
2016530292.tif 000055
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中、３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン−１−オール（４５０ｍｇ、３．５７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．４９７ｍｌ、３．５７ｍｍｏｌ）および塩化メシル（０．２７８ｍｌ、３．５７ｍｍｏｌ）の溶液を窒素下、室温で２時間撹拌した。この反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、メタンスルホン酸３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロピル（７００ｍｇ、３．４３ｍｍｏｌ、収率９６％）を得た。LC/MS: rt=1.35分  m/z=205.05 [M+H]+
【０１２３】
中間体３２：  １−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化５１】
2016530292.tif 000056
アセトニトリル（１０ｍｌ）中、メタンスルホン酸３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロピル（７００ｍｇ、３．４３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２２３３ｍｇ、６．８５ｍｍｏｌ）および１−（６−（５−フルオロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２．６４ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）の混合物を窒素下で撹拌した。この反応混合物を７０℃で１６時間撹拌した後、水（１０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機相をブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン中１０％のＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。回収した画分を減圧下で濃縮し、１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１８０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、収率６．９４％）を得た。LC/MS: rt=4.28分  m/z=622.22 [M+H]+
【０１２４】
最終化合物  １−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化５２】
2016530292.tif 000057
エタノール（５ｍｌ）中、中間体３２  １−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１８０ｍｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）の溶液に、水（２ｍｌ）中、水酸化リチウム（２０．８０ｍｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、水（１０ｍｌ）で希釈し、クエン酸溶液でｐＨ４まで酸性化した。ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した後、有機相をブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（方法Ｃ）により精製した。画分を回収し、減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、有機相をブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をｎ−ペンタン（３×５ｍｌ）で洗浄し、高真空下で乾燥させ、１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（３８．６ｍｇ、収率２１．７３％）を灰白色固体として得た。LC/MS: rt=2.77分 m/z=594.26 [M+H]+. 
1H NMR (d6-DMSO), δ (ppm): 13.4 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.2 (t, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.24 (m, 2H), 6.61 (m, 2H), 6.5 (m, 1H), 6.22 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 3.83 (t, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.56 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.93 (s, 3H).
【０１２５】
実施例１５
【化５３】
2016530292.tif 000058
１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【０１２６】
中間体３３：  １−（６−（２−（４−（３−ブロモプロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化５４】
2016530292.tif 000059
アセトニトリル（２ｍｌ）中、市販の１，３−ジブロモプロパン（１．９６６ｇ、９．７４ｍｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ）および１−（６−（５−フルオロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１ｇ、１．９４７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．７６１ｇ、２．３３７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を窒素下、室温で１６時間撹拌した。この反応混合物を濃縮し、粗物質を水（５０ｍｌ）に溶かし、生成物をＥｔＯＡｃ（３×３５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。ヘキサン中１０〜１２％ＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−（６−（２−（４−（３−ブロモプロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（８００ｍｇ、０．８７７ｍｍｏｌ、収率４５．０％）を褐色のガムとして得た。LCMS: rt= 4.56分, m/z= 634.12 - 636.13 [M+H]+
【０１２７】
中間体３４：  １−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化５５】
2016530292.tif 000060
アセトニトリル（２０ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−ブロモプロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２５０ｍｇ、０．３９４ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（４４．０ｍｇ、０．４７３ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸セシウム（１９３ｍｇ、０．５９１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を８０℃で１６時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。この残渣にＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加え、沈澱をセライトパッドで濾去し、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣を１２〜１４％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２３０ｍｇ、収率８７％）をガム状生成物として得た。LCMS: rt= 4.29分, m/z= 647.35 [M+H]+
【０１２８】
１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化５６】
2016530292.tif 000061
エタノール（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２３０ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（２８．５ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残渣を冷水（１ｍｌ）に溶かし、飽和クエン酸溶液でｐＨ４までで酸性化した。ジクロロメタン（３×１５ｍｌ）で抽出した後、合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（方法Ｃ）により精製した。これらの画分を減圧下で濃縮して揮発性溶媒を除去し、希酢酸で酸性化し（ｐＨ５）、次いで、酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１６０ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ、収率７２．５％）を得た。LCMS: rt=3.19分, m/z=619.32 [M+H]
1H NMR (CDCl3), δ (ppm):  8.2 (s, 1H), 7.95 (m, 1H), 7.8 (m, 2H), 7.6 (m, 1H), 7.45 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.1 (m, 2H), 6.65 (m, 1H), 6.5 (m, 2H), 4.4 (t, 2H), 3.85 (t, 2H), 2.9 (m, 2H), 2.7 (m, 2H), 2.3 (m, 2H), 2 (s, 3H).
【０１２９】
最終化合物  １−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【化５７】
2016530292.tif 000062
水（５ｍｌ）中、従前に作製した１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（４８ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）の溶液に、水（５ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（３．１０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２０分間撹拌した。次に、この溶液を２０時間凍結乾燥させ、１−（６−（２−（４−（３−（４−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩（４４．３ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ、収率８９％）を灰白色固体（吸湿性）として得た。LCMS: rt=2.77分, m/z=617.37 [M-H]-
1H NMR (d6-DMSO), δ (ppm):  8.6 (s, 1H), 8.1 (t, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.41 (m, 1H), 7.22 (m, 2H), 6.65 (d, 1H), 6.57 (m, 1H), 6.51 (m, 1H), 4.32 (t, 2H), 3.87 (t, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.19 (m, 2H), 1.92 (s, 3H)
【０１３０】
実施例１６
【化５８】
2016530292.tif 000063
１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【０１３１】
中間体３５：  １−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化５９】
2016530292.tif 000064
【０１３２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−ブロモプロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（製造に関しては中間体１２を参照）（２００ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸セシウム（１５４ｍｇ、０．４７３ｍｍｏｌ）および４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール（４６．４ｍｇ、０．４７３ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を７０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、セライトパッドで濾過し、固体をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍｌ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。粗物質を２５〜２６％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６０ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ、収率２１．７９％）をガムとして得た。LC/MS: rt=4.29分, m/z=652.32 [M+H]+
【０１３３】
１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化６０】
2016530292.tif 000065
エタノール（１５ｍｌ）中、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６０ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（７．３７ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残渣を冷水（１ｍｌ）に溶かし、飽和クエン酸溶液でｐＨ４まで酸性化した。ジクロロメタン（３×１５ｍｌ）で抽出した後、合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。２バッチの粗残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（方法Ａ）により精製した。画分を回収し、真空下で蒸発させた。粗物質を希酢酸で酸性化した（ｐＨ５）。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、目的の化合物１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１３０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）を得た。LC/MS: rt=3.17分, m/z= 624.29 [M+H]+ 
1H NMR (CDCl3), δ (ppm):  8.1 (s, 1H), 7.95 (t, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.1 (m, 2H), 6.55 (m, 2H), 6.45 (m, 1H), 4.3 (t, 2H), 3.85 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.95 (m, 2H), 2.75 (m, 2H), 2.2 (m, 2H), 2.05 (s, 3H).
【０１３４】
最終化合物  １−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸トリウム塩
【化６１】
2016530292.tif 000066
【０１３５】
水（５ｍｌ）中、従前に作製した１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１３０ｍｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）の溶液に、水（５ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（８．３４ｍｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２０分間撹拌した。次に、この溶液を凍結乾燥フラスコに移し、２０時間凍結乾燥させ、１−（６−（５−フルオロ−２−（４−（３−（４−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩（１２２ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ、収率８９％）を灰白色固体（吸湿性生成物）として得た。LCMS: rt = 2.75分, m/z = 624.38 [M+H]+
1H NMR (d6-DMSO), δ (ppm): 8.1 (t, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.7 (dd, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.4 (dd, 1H), 7.23 (m, 2H), 7.17 (m, 1H), 6.66 (d, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 4.15 (t, 2H), 3.84 (t, 2H), 3.62 (s, 3H), 2.83 (m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 2.1 (s, 3H).
【０１３６】
実施例１７
【化６２】
2016530292.tif 000067
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【０１３７】
中間体３６：  １−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化６３】
2016530292.tif 000068
ＤＭＦ（３ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−ブロモプロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２５０ｍｇ、０．３９４ｍｍｏｌ）およびトリアゾールナトリウム塩（５３．８ｍｇ、０．５９１ｍｍｏｌ）の混合物を７０℃で２０時間撹拌した後、冷却し、冷水で希釈した。ＥｔＯＡｃ（６×２５ｍｌ）で抽出した後、合わせた有機相を冷水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を６５〜７０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１８０ｍｇ、収率７３．４％）を得た。LC/MS: rt=4.07分, m/z= 623.22 [M+H]+
【０１３８】
１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化６４】
2016530292.tif 000069
水（１ｍｌ）およびＥｔＯＨ（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（３００ｍｇ、０．４８２ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（３８．５ｍｇ、０．９６４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残渣を冷水（１ｍｌ）に溶かし、飽和クエン酸溶液でｐＨ４までで酸性化した。沈澱を濾過し、水（３ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、高真空下で乾燥させ、１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１７０ｍｇ、収率５９．３％）を灰白色固体として得た。LCMS: rt=2.8分, m/z=595.32 [M+H]+
1H NMR (CDCl3), δ (ppm):  8.15 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.95 (t, 1H), 7.6 (dd, 1H), 7.5 (dd, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 7.05 (m, 1H), 6.65 (m, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.45 (m, 1H), 4.45 (t, 2H), 3.8 (t, 2H), 2.95 (m, 2H), 2.7 (m, 2H), 2.3 (m, 2H), 2.05 (s, 3H).
【０１３９】
最終化合物  １−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【化６５】
2016530292.tif 000070
水（５ｍｌ）中、従前に製造した１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１１０ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）の溶液に、水（５ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（７．４０ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２０分間撹拌した。次に、この溶液を凍結乾燥フラスコに移し、２０時間凍結乾燥させ、１−（６−（２−（４−（３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩（９３．８ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ、収率７８％）を灰白色固体（吸湿性生成物）として得た。LCMS: rt =2.79分, m/z=595.2 [M+H]+
1H NMR (d6-DMSO), δ (ppm): 8.52 (s, 1H), 8.1 (t, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.22 (m, 2H), 6.66 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 4.32 (t, 2H), 3.87 (t, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.18 (m, 2H), 1.91 (s, 3H).
【０１４０】
実施例１８
【化６６】
2016530292.tif 000071
１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【０１４１】
中間体３７：  １−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化６７】
2016530292.tif 000072
アセトニトリル（２５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−ブロモプロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（４００ｍｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（７０．４ｍｇ、０．７５７ｍｍｏｌ、Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の溶液に、炭酸セシウム（３０８ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を８０℃で１６時間撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加えた。この混合物をセライトパッドで濾過し、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）ですすいだ。合わせた濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをヘキサン中１２〜１４％ＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製し、１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１８０ｍｇ、０．２７４ｍｍｏｌ、収率４３．５％）をガム状生成物として得た。LCMS: rt=4.28分, m/z=647.41 [M+H]+
【０１４２】
１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【化６８】
2016530292.tif 000073
エタノール（１５ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１８０ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍＬ）中、水酸化ナトリウム（２２．２７ｍｇ、０．５５７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を濃縮により除去し、粗物質を水（２ｍｌ）に溶かし、飽和クエン酸溶液でｐＨ４まで酸性化した。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をＰｒｅｐ−ＨＰＬＣ（方法Ａ）により精製した。画分を回収し、溶媒を濃縮により除去した。粗残渣を希酢酸（ｐＨ４）で酸性化した。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（７８ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ、収率４５．２％）を得た。LC/MS: rt=3.29分, m/z=619.32 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) δ (ppm): 8.15 (s, 1H), 7.95 (t, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.4 (m, 2H), 7.25 (m, 1H), 7.05 (m, 2H), 6.65 (d, 1H), 6.6 (d, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.45 (m, 1H), 4.35 (t, 2H), 3.80 (t, 2H), 2.95 (m, 2H), 2.65 (m, 2H), 2.3 (m, 2H), 2 (s, 3H).
【０１４３】
最終化合物  １−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
【化６９】
2016530292.tif 000074
水（５ｍｌ）中、従前に製造した化合物、１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（７８ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）の溶液に、水（５ｍｌ）中、重炭酸ナトリウム（１０．５９ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２０分間撹拌した。次に、この溶液を凍結乾燥フラスコに移し、２０時間凍結乾燥させ、１−（６−（２−（４−（３−（３−シアノ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロポキシ）−２−メチルフェネチル）−５−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩（５３．７ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ、収率６６．０％）を灰白色固体（吸湿性生成物）として得た。LCMS: rt=2.84分, m/z=619.34 [M+H]+.
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.11 (t, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.7 (dd, 1H), 7.55 (dd, 1H), 7.41 (m, 1H), 7.21 (m, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.65 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.51 (dd, 1H), 4.37 (t, 2H), 3.85 (t, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.2 (m, 2H), 1.92 (s, 3H).
【０１４４】
実施例１９
【化７０】
2016530292.tif 000075
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）中、１−（６−（２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（中間体６参照）（１ｇ、２．０１８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．５５８ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−１，１，１−トリフルオロブタン（０．７７１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）の混合物を窒素下、１００℃で１６時間撹拌した。この反応混合物を室温まで冷却し、セライトパッドで濾過し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）ですすいだ。合わせた濾液を減圧下で濃縮して粗生成物（１．５ｇ）を得た。粗物質をまず、ヘキサン中１５〜１８％ＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して淡黄色ガム（７００ｍｇ）を得、次に、方法Ａを用いるＰｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製した。画分を回収し、凍結乾燥させ、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２６０ｍｇ、０．４２９ｍｍｏｌ、収率２１．２５％）を白色固体として得た。LCMS: rt=4.49分, m/z=606.22 [M+H]+
1H NMR (CDCl3), δ (ppm): 8.3 (s, 1H), 7.93 (t, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.37(m, 2H), 7.3 (m, 2H), 6.72 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 4.38 (q, 2H), 3.96 (t, 2H), 2.93 (m, 2H), 2.7 (m, 2H), 2.29 (m, 2H), 2.02 (m, 5H), 1.37 (t, 3H).
【０１４５】
実施例２０
【化７１】
2016530292.tif 000076
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アンモニア塩
エタノール（５ｍｌ）および水（０．５ｍｌ）中、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（２ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で水酸化ナトリウム（０．３９６ｇ、９．９１ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を室温で１６時間撹拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮した。粗物質を冷水（１０ｍｌ）に溶かし、飽和クエン酸溶液でｐＨ４まで酸性化した。生成物をジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水（２×１５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物（１．６ｇ）を得た。１ｇの精製は、方法Ｄを用いるＰｒｅｐ−ＨＰＬＣによった。画分を回収し、凍結乾燥させ、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アンモニア塩（６００ｍｇ、１．０２３ｍｍｏｌ、収率３１％）を灰白色固体として得た。LCMS: rt=3.05分, m/z=578.28 [M+H]+
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.12 (t, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.7 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.38(m, 4H), 6.68 (d, 1H), 6.61 (dd, 1H), 6.54 (dd, 1H), 3.94 (t, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.57 (m, 2H), 2.38 (m, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.88 (m, 2H).
【０１４６】
実施例２１
【化７２】
2016530292.tif 000077
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩
水（１０ｍｌ）中、実施例１に従って作製した１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（２００ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化ナトリウム（１３．８５ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、この反応混合物を室温で１時間撹拌した。この反応混合物を凍結乾燥させ、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸ナトリウム塩（１５０ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ、収率７２．１％）を灰白色固体として得た。LCMS: rt=3.05分, m/z=578.28 [M+H]+
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.11 (t, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.38 (m, 4H), 6.69 (d, 1H), 6.61 (dd, 1H), 6.54 (dd, 1H), 3.94 (t, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.58 (m, 2H), 2.38 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.88 (m, 2H).
【０１４７】
実施例２２
【化７３】
2016530292.tif 000078
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸イソプロピル
塩化チオニル（０．７３０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）中、実施例１に従って作製した１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（４５０ｍｇ、０．７７９ｍｍｏｌ）の溶液を７５℃で１時間加熱した。揮発性成分を真空濃縮により除去した。粗物質を０℃に冷却し、イソプロパノール（５ｍｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌した。この反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×１０ｍｌ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗物質を、方法Ｃ条件を用いるＰｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製した。画分を回収し、凍結乾燥させ、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸イソプロピル（１１０ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ、収率２１．９９％）を褐色ガムとして得た。LCMS: rt=3.89分, m/z=620.33 [M+H]+
1H NMR (d6-DMSO) δ (ppm): 8.35 (s, 1H), 8.2 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.38 (m, 4H), 6.64 (d, 1H), 6.62 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.13 (m, 1H), 3.94 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.59 (m, 2H), 2.38 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.88 (m, 2H), 1.30 (d, 6H).
【０１４８】
実施例２３
【化７４】
2016530292.tif 000079
１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
【０１４９】
中間体３８：  １−（６−（３−クロロ−２−ホルミルフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化７５】
2016530292.tif 000080
１，２−ジメトキシエタン（１５ｍｌ）および水（２ｍｌ）中、１−（６−クロロピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１０ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）、（３−クロロ−２−ホルミルフェニル）ボロン酸（８．６５ｇ、４６．９ｍｍｏｌ、Ｃｈｅｍｂｌｏｃｋｓ）の溶液に、炭酸ナトリウム（６．６３ｇ、６２．６ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を窒素下、室温で撹拌した。この反応混合物をアルゴンで３０分間パージし、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３．６１ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を１１０℃で１６時間加熱した。この反応混合物をセライトベッド濾過した後、濾液を水（３０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出し、ブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これをヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。回収した画分を減圧下で濃縮し、１−（６−（３−クロロ−２−ホルミルフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（６ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ、収率４２．０％）を灰白色固体として得た。LCMS:  rt=3.21分, m/z=423.9 [M+H]+.
【０１５０】
中間体３９：  （４−メトキシ−２−メチルベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド
【化７６】
2016530292.tif 000081
窒素下、トルエン（５０ｍｌ）中、１−（ブロモメチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゼン（８ｇ、３７．２ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（９．７６ｇ、３７．２ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃で１６時間撹拌した。この反応混合物を濾過し、固体をトルエン（５０ｍｌ）で洗浄し、（４−メトキシ−２−メチルベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド（１２ｇ、２４．１７ｍｍｏｌ、収率６５％）を灰白色固体として得た。LCMS: rt=2.39分, m/z=397.2 (質量-臭素).
【０１５１】
中間体４０：  １−（６−（３−クロロ−２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（Ｅ）−エチル
【化７７】
2016530292.tif 000082
窒素下、０℃で撹拌したテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６６２ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中、（４−メトキシ−２−メチルベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミド（２．２５３ｇ、４．７２ｍｍｏｌ）の溶液を５分かけて少量ずつ加え、この反応物を１０分間撹拌した。次に、１−（６−（３−クロロ−２−ホルミルフェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１ｇ、２．３６０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍｌ）で急冷し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出し、ブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これをヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。回収した画分を減圧下で濃縮し、１−（６−（３−クロロ−２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（Ｅ）−エチル（８５０ｍｇ、１．０３１ｍｍｏｌ、収率４３．７％）を灰白色固体として得た。LCMS: rt=3.31分, m/z=542.24 [M+H]+
【０１５２】
中間体４１：  １−（６−（３−クロロ−２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化７８】
2016530292.tif 000083
メタノール（２５ｍｌ）中、１−（６−（３−クロロ−２−（４−メトキシ−２−メチルスチリル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（Ｅ）−エチル（６５０ｍｇ、１．１９９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１２８ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温、水素雰囲気（１５ｐｓｉ）下で２時間撹拌した。この反応混合物をセライトベッドで濾過し、メタノール（２０ｍｌ）で洗浄した後、濾液を濃縮し、１−（６−（３−クロロ−２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（５９０ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、収率４９．７％）をガム状の液体として得た。LCMS: rt=3.32分, m/z=544.18 [M+H]+
【０１５３】
中間体４２：  １−（６−（３−クロロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化７９】
2016530292.tif 000084
窒素下、０℃で、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中、１−（６−（３−クロロ−２−（４−メトキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（５９０ｍｇ、１．０８５ｍｍｏｌ）の溶液に、５分かけて三臭化ホウ素（０．１０３ｍｌ、１．０８５ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温で２時間撹拌した。この反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）で洗浄した後、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出し、ブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗物質を得、これを、方法Ａ条件を用いるｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製した。画分を回収し、真空濃縮した。残渣を水（２５ｍｌ）に取り、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出し、ブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、１−（６−（３−クロロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（３２０ｍｇ、０．５９５ｍｍｏｌ、収率５４．８％）を無色のガム状の液体として得た。LCMS: rt=2.99分, m/z=530.25 [M+H]+
【０１５４】
中間体４３：  １−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル
【化８０】
2016530292.tif 000085
０℃、窒素下、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）中、１−（６−（３−クロロ−２−（４−ヒドロキシ−２−メチルフェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（１００ｍｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）、および４−ブロモ−１，１，１−トリフルオロブタン（７６ｍｇ、０．３９６ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（５２．２ｍｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１００℃で１６時間撹拌した。反応は完了しなかった。０．５当量の４−ブロモ−１，１，１−トリフルオロブタン（１７ｍｇ）を加えた。この反応混合物を１００℃でさらに２０時間撹拌した。反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出し、ブライン溶液（２５ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを、方法Ａ条件を用いるＰｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製した。画分を回収し、減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）に溶かした。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で濃縮し、１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（３５ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、収率２７．５％）を無色の液体として得た。LCMS: rt = 3.50分, m/z=640.36 [M+H]+
【０１５５】
実施例２３
【化８１】
2016530292.tif 000086
１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
エタノール（３ｍｌ）中、１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチル（３５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（３．２８ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を水（１０ｍｌ）で希釈し、酢酸を用いてｐＨ５に調整し、ジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽出した。次に、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗物質を得た。粗物質をｎ−ペンタンで洗浄し、減圧下で乾燥させ、１−（６−（３−クロロ−２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（２１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、収率６１．８％）を灰白色ガムとして得た。LCMS: rt=3.14分, m/z=610.36 [M+H]+
1H NMR (d6-DMSO), δ (ppm): 13.5 (brs, 1H), 8.31 (brs,1H), 8.21 (t, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.6 (dd, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.34 (dd, 1H), 6.6 (brs, 1H), 6.5 (m, 2H), 3.94 (t, 2H), 2.86 (m, 2H), 2.63 (m, 2H), 2.35 (m, 2H), 1.92 (s, 3H), 1.88 (m, 2H).
【０１５６】
化合物、例えば、本明細書に開示されるｓＧＣを活性化する薬剤は、医薬として使用することができ、または本明細書に開示される有用性の１つ以上を有する医薬組成物を処方するために使用することができる。それらは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養細胞に、ｉｎ  ｖｉｖｏで身体内の細胞に、またはｅｘ  ｖｉｖｏで、後に同じもしくは別の個体の身体に戻すことができる個体の外側にある細胞に投与することができる。そのような細胞は解離させることができ、または固体組織として提供することができる。
【０１５７】
化合物、例えば、本明細書に開示されるｓＧＣを活性化する薬剤は、医薬または他の医薬組成物を製造するために使用することができる。薬学上許容可能な担体をさらに含んでなるｓＧＣ活性化薬剤、および個体に組成物を送達するのに有用な成分をさらに含んでなる組成物の使用は、当技術分野で公知である。本明細書に開示される薬剤へのそのような担体および他の成分の添加は十分に当技術分野の技術水準の範囲内である。加えて、薬学上許容可能な賦形剤を記載し、好適な薬学上許容可能な賦形剤を選択するのに有用であり得る、当業者が利用可能な複数のリソースがある。例としては、Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited)、およびThe Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)が挙げられる。
【０１５８】
活性化合物に加えて、そのような組成物は、薬学上許容可能な担体、および投与を促進しかつ／または取り込みを増強することが知られている他の成分（例えば、生理食塩水、ジメチルスルホキシド、脂質、ポリマー、親和性に基づく細胞特異的ターゲティング系）を含有することができる。組成物は、ゲル、スポンジ、または他の浸透性マトリックス（例えば、ペレットまたはディスクとして形成されたもの）に組み込み、持続的局所放出のために内皮に近接して配置することができる。組成物は、単回投与で、または異なる時間間隔で投与される複数回投与で投与することができる。
【０１５９】
本発明の化合物は、局所点眼剤として投与することができる。本発明の化合物は、毎日より長い投与間隔を必要とする結膜下、前房内または硝子体内経路を介して投与することができる。
【０１６０】
本明細書で使用される「薬学上許容可能な担体」という表現は、１つの器官または身体部分から、別の器官または身体部分への対象薬剤の運搬または輸送に関与する、薬学上許容可能な材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料などを意味する。各担体は、処方物の他の成分と適合するという意味で「許容され」なければならず、例えば、担体は、処置に及ぼす薬剤の影響を減少させない。言い換えれば、担体は薬学上不活性である。
【０１６１】
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の技術および方法を用いて調製される。当技術分野で一般的に使用される方法のいくつかは、Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)に記載されている。従って、本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物を１種類以上の薬学上許容可能な賦形剤と混合する工程を含んでなる、医薬組成物を調製する方法である。
【０１６２】
本明細書に記載される疾患または障害の処置は、本発明の化合物を、単剤療法として、または二重もしくは複数の併用療法で用いて達成することができる。式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容可能な塩は、単独でまたは他の治療薬と組み合わせて使用し得る。従って、本発明による併用療法は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩と、少なくとも１つの他の治療上活性な薬剤との投与を含んでなる。好ましくは、本発明による併用療法は、１つの式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩と、少なくとも１つの他の治療上活性な薬剤との投与を含んでなる。式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容可能な塩と、他の治療上活性な薬剤は、単一の医薬組成物で一緒にまたは別個に投与し得、別個に投与する場合、これは同時にまたは任意の順序で逐次に行われ得る。式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容可能な塩と、他の治療上活性な薬剤の量、ならびに投与の相対的なタイミングは、所望の併用治療効果を達成するように選択される。
【０１６３】
本発明の文脈において、併用療法には、他のＩＯＰ低下薬、例えば、プロスタグランジン類似体（例えば、ラタノプロスト、ビマトプロスト、トラボプロスト、タフルプロスト）；β−アドレナリン作動性遮断薬（例えば、チモロール、ベタキソロール、レボブノロール）；α−アドレナリン作動性アゴニスト（例えば、ブリモニジン、パラアミノクロニジン）；副交感神経作用薬（例えば、ピロカルピン、カルバコール、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤）；交感神経作用薬（例えば、エピネフリン、ジピバリルエピネフリン）；および炭酸脱水酵素阻害剤（例えば、ドルゾラミド、ブリンゾラミド）が含まれる。一実施形態では、本発明の化合物は、プロスタグランジン類似体（例えば、ラタノプロスト、ビマトプロスト、トラボプロスト、またはタフルプロスト）と組み合わせて投与される。別の実施形態では、本発明の化合物は、β−アドレナリン作動性遮断薬（例えば、チモロール、ベタキソロール、レボブノロール）と組み合わせて投与される。さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、α−アドレナリン作動性アゴニスト（例えば、ブリモニジン、パラアミノクロニジン）と組み合わせて投与される。さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、炭酸脱水酵素阻害剤（例えば、ドルゾラミド、ブリンゾラミド）と組み合わせて投与される。
【０１６４】
局所投与に適した医薬処方物は、軟膏、クリーム、エマルション、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾールまたは油として処方し得る。
【０１６５】
眼または他の外部組織、例えば、口および皮膚の処置については、処方物は局所用軟膏またはクリームとして適用し得る。軟膏に処方する場合、有効成分はパラフィン系または水混和性の軟膏基剤とともに使用し得る。あるいは、有効成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤とともにクリームに処方し得る。
【０１６６】
眼への局所投与に適した医薬処方物には、有効成分が好適な担体、特に、水性溶媒中に溶解または懸濁されている点眼剤が含まれる。眼に投与される処方物は眼科的に適合するｐＨおよびモル浸透圧濃度を有することになる。１種類以上の眼科的に許容可能なｐＨ調整剤および／または緩衝剤を本発明の組成物中に含めることができ、それらには、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および乳酸ナトリウムなどの塩基；およびクエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの緩衝液が含まれる。そのような酸、塩基、および緩衝液は、組成物のｐＨを眼科的に許容可能な範囲内に維持するのに必要な量で含めることができる。１種類以上の眼科的に許容可能な塩は、組成物のモル浸透圧濃度を眼科的に許容可能な範囲にするのに十分な量で組成物中に含めることができる。そのような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムの陽イオン、および塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸または重亜硫酸の陰イオンを有するものが挙げられる。
【０１６７】
眼送達デバイスは、複数の所定放出速度および持続的投与動態および透過性で１種類以上の治療薬を放出制御するように設計し得る。放出制御は、生分解性／生体腐食性ポリマー（例えば、ポリ（エチレンビニル）アセテート（ＥＶＡ）、超加水分解ＰＶＡ）、ヒドロキシアルキルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリカプロラクトン、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸）、ポリ無水物、ポリマー分子量、ポリマー結晶度、コポリマー比率、加工処理条件、表面仕上げ、形状、賦形剤添加ならびに薬物の拡散、侵食、溶解および浸透を促進するポリマーコーティングの異なる選択および特性を組み込んだポリマーマトリックスの設計によって得られ得る。
【０１６８】
眼用デバイスを用いた薬物送達のための処方物は、１種類以上の活性な薬剤と、示された投与経路に適当な助剤を組み合わせ得る。例えば、活性な薬剤は、任意の薬学上許容可能な賦形剤、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、アラビアガム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、ならびに／またはポリビニルアルコールと混合し、従来の投与用に打錠または封入し得る。あるいは、それらの化合物は、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガカントガム、および／または様々な緩衝液に溶解し得る。それらの化合物はまた、生分解性および非生分解性の両方のポリマーの組成物、および時間遅延特性を有する担体または希釈剤と混合し得る。生分解性組成物の代表的な例としては、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）およびポリ（オルトエステル）ならびにそれらの混合物を含むことができる。非生分解性ポリマーの代表的な例としては、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴムおよびポリ（メチルアクリレート）、ならびにそれらの混合物を含むことができる。
【０１６９】
眼送達のための医薬組成物にはまた、ｉｎ  ｓｉｔｕでゲル化可能な水性組成物が含まれる。そのような組成物は、ゲル化剤を、眼または涙液と接触した際にゲル化を促進するのに効果的な濃度で含んでなる。好適なゲル化剤としては、限定されるものではないが、熱硬化性ポリマーが挙げられる。本明細書で使用される「ｉｎ  ｓｉｔｕでゲル化可能な」という用語は、眼または涙液と接触した際にゲルを形成する低粘度の液体を含むだけでなく、眼に投与した際に粘度またはゲル剛性の実質的な増加を示す半流動体およびチキソトロピックゲルなどのより粘稠な液体も含む。例えば、眼への薬物送達で使用するためのポリマーの例を教示する目的で引用することにより本明細書の一部とされる、Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595-639を参照。
【０１７０】
生物学的実施例
本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏデータを用いて実証されている。日本白色種ウサギにおいて、ＩＯＰを、圧平眼圧測定を使用して、ベースライン時（試験物質の投与直前）および薬物、ビヒクルまたは生理食塩水を含有する眼用処方物の局所投与（図１）または硝子体内投与（図２）後の所定の時点（１時間、２時間、３時間、５時間、７時間、９時間、２４時間；追加の時点は硝子体内投与の３０時間および４８時間後であった）に測定した。試験物質は、局所的に、右眼に５０マイクロリットル容量で、反対側の左眼に生理食塩水を５０マイクロリットル容量で投与した。硝子体内投与では、投与容量は代わりに２０マイクロリットルであった。各動物について、右眼ＩＯＰと左眼ＩＯＰとの間での差をΔＩＯＰとして算出した。局所投与後、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸は、図１に示されるように、用量依存的かつ効果的にＩＯＰを降下させた。硝子体内投与後、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸は、図２に示されるように、少なくとも４８時間、長く持続しかつ効果的なＩＯＰの低減をもたらした。
【０１７１】
加えて、正常マウスでのＩＯＰに対する効果も評価した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスでは、ＩＯＰを、トノラボ（ＴｏｎｏＬａｂ）を使用して、ベースライン時（試験物質の投与直前）および薬物、ビヒクルまたは生理食塩水を含有する眼用処方物の局所投与後の所定の時点（１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、２４時間）に測定した。試験物質は、右眼に４マイクロリットル容量で、反対側の左眼に生理食塩水を４マイクロリットル容量で投与した。各動物について、右眼ＩＯＰと左眼ＩＯＰとの間での差をΔＩＯＰとして算出した。下の図３に示されるように、１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸は、ラタノプロストと類似した効力で初期に高圧スパイクを生じることなくＩＯＰを低下させた。
【０１７２】
生物学的酵素アッセイ
可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性は、蛍光標識したｃＧＭＰの蛍光偏光（ＦＰ）シグナルの測定に基づくアッセイにより試験した。ＦＰは、分子の運動性が低下する抗ｃＧＭＰ抗体との相互作用により増加した。新たに産生されたｃＧＭＰは、その相互作用に取って代わり、酵素活性に等しい偏光およびＦＰシグナルの減少を生じさせた。化合物は、ヒトｓＧＣ、抗ｃＧＭＰ抗体、ＧＴＰ基質および蛍光標識したｃＧＭＰとともにインキュベートした。１時間後、ＥＤＴＡの添加によりアッセイを停止し、さらに１時間後にアッセイを読み取った。
【０１７３】
ヒトｓＧＣを解凍し、アッセイバッファー（１００ｍＭ  ＴＲＩＳ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２ｍＭ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、ｐＨ７．４、ヒツジ抗ｃＧＭＰの１：１００希釈溶液を含有する）中に再懸濁し、ウェル中終濃度１ｎＭを得た。基質溶液を、脱イオン水中にＧＴＰおよび８−ｆｌｕｏ−ｃＧＭＰを含めて調製し、それぞれ、終濃度２５μＭおよび５０ｎＭとした。様々な試験化合物と、９６ウェルプレート全体に６点の４倍希釈液として標準的なアゴニスト（５０μＭ〜５０ｎＭ）の１％ＤＭＳＯ溶液の５μＬを含むアッセイプレートをアッセイに使用した。プレートには、高度対照と、ＦＰデータをｃＧＭＰ濃度に変換するためのｃＧＭＰ標準曲線（１４ｎＭ〜１０μＭ）とを作成するためにＤＭＳＯ（１％）の６ウェルも含めた。上述した、酵素ミックス２５μＬおよび基質ミックス２０μｌをプレートの各ウェルに添加した。サンプルをオービタルシェーカー上で混合し、次いで、室温で１時間インキュベートした。このインキュベーション時間の後、０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ５μｌを総てのウェルに添加し、プレートを室温でさらに１時間インキュベートした後、適当なリーダーでＦＰシグナルを読み取った。データ処理では、ＦＰデータをｃＧＭＰ濃度に変換し、次いで、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウエアを使用してフィッティングした。試験化合物の活性は、基礎ｃＧＭＰを５倍増加することができる濃度であるｐＥＣ５００値として決定した。
【０１７４】
１−（６−（２−（２−メチル−４−（４，４，４−トリフルオロブトキシ）フェネチル）フェニル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸のｐＥＣ５００は、このアッセイにより６．９５として決定された。
【０１７５】
本発明の範囲内に入る他の化合物のｐＥＣ５００スコアは以下に見出される。
【０１７６】
【表２】
2016530292.tif 000087
【０１７７】
生物学的細胞アッセイ
可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性を、ラット大動脈平滑筋細胞におけるプロテインキナーゼＧ（ＰＫＧ）基質の血管拡張因子刺激リンタンパク質（ＶＡＳＰ）のリン酸化の測定に基づくアッセイにより試験した。初代ラット大動脈平滑筋細胞を、１０μＭ  １Ｈ−［１，２，４］オキサジアゾロ［４，３−ａ］キノキサリン−１−オン（ＯＤＱ）、高度選択的かつ不可逆的なｓＧＣヘム鉄酸化剤の存在下、３７℃で１０分間インキュベートした。その後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ビヒクルおよび種々の濃度の被験化合物を添加した。３７℃での３０分のインキュベーション後、培地を吸引し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗い流し、ＰＢＳ中４％ホルムアルデヒドを用いて室温で２０分間インキュベートすることにより固定した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中０．１％ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を用いて１０分間透過処理を施した。ＰＢＳで洗い流した後、ブロッキングバッファーを用いて室温で９０分間細胞をブロッキングした。バッファーを吸引し、細胞を、ブロッキングバッファーで１：５００希釈した一次抗体（ｐＳｅｒ２３９−ＶＡＳＰ、ウサギポリクローナルＡｂ）で４℃一晩処理した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄した後、細胞を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むブロッキングバッファーで１：２５００希釈した蛍光標識二次抗体（ＩＲＤｙｅ（登録商標）８００ＣＷロバ抗ウサギＩｇＧ）で室温で１時間処理した。ＰＢＳで２回洗浄した後、赤外蛍光を、Ｏｄｙｓｓｅｙ近赤外蛍光イメージングシステムを使用して測定した。試験化合物の活性は、リン酸化ＶＡＳＰの蛍光シグナルを５０％（Ｂｍａｘに対して）増加することができる濃度であるｐＥＣ５０値として決定した。Front. Pharmacol., 2012年7月5日|doi:10.3389/fphar.2012.00128, 第3巻 2012年7月, 論文番号128。
【０１７８】
本発明の範囲内に入る化合物のｐＥＣ５０値は以下に見出される。
【０１７９】
【表３】
2016530292.tif 000088
【図１】
2016530292.tif 000091
【図２】
2016530292.tif 000092
【図３】
2016530292.tif 000093
【国際調査報告】
2016530292.tif 000094
2016530292.tif 000095